KR101402951B1 - 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 조성물 및 그의 용도 - Google Patents

죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 조성물 및 그의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 심혈관계 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 심혈관계 질환 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 및 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 비만의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 체중감소, 지방조직 중량 감소, 혈중 중성지방수준 감소, 혈중 저밀도콜레스테롤수준 감소 및 항응혈효과를 나타내므로, 혈액순환 장애로 인한 다양한 심혈관계 질환의 예방 및 치료를 위한 약학적 조성물 또는 건강기능성 식품 뿐만 아니라 체지방 감소용 건강기능성 식품의 개발에도 널리 활용될 수 있을 것이다.

Description

죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 조성물 및 그의 용도{Compositon comprising extract of bamboo leaf and renus mume and use thereof}
본 발명은 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 조성물 및 그의 용도에 관한 것으로, 보다 구체적으로 본 발명은 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 심혈관계 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 심혈관계 질환 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 및 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 비만의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품에 관한 것이다.
최근 풍부하고 다양한 식생활 및 생활양식의 변화로 영양섭취는 불균형 상태로 되기 쉬우며 기계화된 현대 생활은 운동 부족을 초래하게 되었다. 그 결과 고혈압과 같은 만성 질환의 이환율이 증가하고, 질병의 형태도 선진국형으로 변화하고 있다. 그 중 허혈성 심장 질환의 주원인인 동맥경화의 위험인자 및 유발인자로서 유전적인 소인 외에 연령, 성별, 흡연, 비만, 운동부족, 스트레스, 식이 및 이와 연관된 질병 등 다양한 요인들이 지목되고 있는데, 특히 혈중내 지질 성분의 변화가 가장 중요한 원인이 되고 있다.
특히, 혈중 총 콜레스테롤 및 LDL(low-density lipoprotein) 콜레스테롤 증가와 HDL 콜레스테롤의 감소 현상이 주요한 원인으로 알려져 있으며, 특히 산화된 LDL(oxidized LDL)이 관상동맥질환의 중요한 원인으로서 알려져 있다. 지금까지 연구된 바에 의하면, 산화된 LDL은 스캐벤저(scavenger) 수용체를 통해 탐식세포와 결합함으로써 빠르게 혈관 내벽에 침투하고, 이러한 과정은 기존의 혈중 지질 농도로 조절이 되지 않으며 혈액 내로 재이동하지 못하므로 내막에서 산화된 LDL 농도는 급속히 증가하게 된다. 이런 과정에서 형성된 포말 세포(foam cell)는 지방반(fatty streak), 섬유반(fibrous plaque), 복합병변(complicated lesion)의 단계를 거쳐 죽상 경화 병변을 생성하며 대혈관 합병증을 야기시키는데, 이는 고혈압, 당뇨환자에서 높은 빈도로 나타나고 있으며, 높은 사망률과 관계가 깊다고 보고되었다.
한편, 고밀도 지단백질(HDL)은 혈중에 있는 콜레스테롤을 간으로 이동시켜 저장하는 역할을 하는데 혈중 HDL 의 농도는 심장병 및 죽상경화증, 관상동맥질환 등과 밀접한 관계가 있다. 저밀도 지단백질(LDL)은 간에 저장된 콜레스테롤을 혈관이나 조직에 공급해 주는 역할을 하며 HDL과는 상호 경쟁적으로 작용한다. 혈중의 HDL 농도가 낮고 LDL 농도가 높은 경우 심장병 및 죽상경화증, 관상동맥질환 등의 위험성이 높아진다. 따라서 이 두 가지의 혈중농도 조절은 상기에 언급한 여러 질환들에 대한 예방이나 치료의 중요한 전략이 될 수 있다.
이러한 혈중 콜레스테롤 농도는 콜레스테롤 섭취량에 따라 생합성이 조절되어 일정하게 유지되나 과량으로 섭취 시 여러 가지 대사성 질환을 유발한다. 고지방의 과도한 섭취는 가장 먼저 고지혈증으로 이어져 동맥경화 등과 같은 다양한 심혈관계 질환을 유발하게 된다. 상기 고지혈증(hyperlipedemia)은 혈액중의 콜레스테롤, 중성지방(트리글리세라이드), 인지질 및 유리지방산 등의 농도가 비정상적으로 증가한 상태로서 가장 직접적으로 영향을 미치는 인자는 혈중 콜레스테롤과 저밀도지단백(LDL)-콜레스테롤을 들 수 있으며, 다양한 심혈관계 질환 중에서도 죽상동맥경화증(atherosclerosis) 등의 동맥경화증을 유발하는 것으로 알려져 있다.
상기 죽상동맥경화증은 혈관벽을 따라 지질이 두껍게 쌓여 혈류를 감소시켜 허혈성 심장질환과 협심증, 심근경색의 원인이 되므로 임상적으로 중요한 문제가 되고 있다. 동맥경화란 동맥내벽에 지방질 및 섬유조직 쌓여 혈관벽이 좁아지거나 막히게 되는 것으로, 고혈압, 고지혈증 및 흡연은 동맥경화 발생을 촉진시키는 3대 위험 요소이며, 이외에도 운동부족, 당뇨병, 비만증, 스트레스 등에 의해 발생률이 높아진다. 동맥경화가 가벼우면 활동에 지장은 없으나 동맥경화로 관상조직 50~70%이상 좁아지거나 막히면 동맥경화성 심장병이 야기된다. 동맥 경화증은 심한 경우 동맥의 파열이 일어나는 것으로 여러 순환계 질환, 즉 고혈압, 협심증, 뇌혈관질환(뇌일혈)등의 주요 원인이 되고 있다.
이러한 심혈관계 질환을 극복하기 위하여 다양한 치료제가 개발되어 일부는 상용화되었다. 그러나, 지금까지 개발된 다양한 치료제는 정도의 차이가 있으나 부작용이 보고되었으므로, 부작용이 없는 천연물로부터 유래된 치료제를 개발하려는 연구가 지속되고 있다.
예를 들어, 대한민국 등록특허 제528565호에는 고지혈증을 유발한 실험동물에서 매실농축액을 보충 섭취 한 경우 혈중 지질수준이 유의하게 감소되고 지질 과산화물 생선이 감소하는 경향을 보이며 또한 항산화 효과를 증가시킬 수 있음이 개시되어 있고, 미국 등록특허 제8,084,065호에는 대나무 잎으로 부터 얻은 플라본, 피토스테롤 및 피토스타놀, 프로시아니딘 및 베타-글루칸을 포함하는 조성물의 고지혈증 치료 및 예방효과가 개시되어 있다. 그러나, 이들 천연물로부터 유래된 동맥경화 예방, 개선, 경감 등의 효과를 나타내는 조성물은 안전성이 확보된 대신에, 치료효과가 우수하지 못하다는 단점이 알려져 있고, 이러한 단점을 극복하기 위한 연구가 계속되고 있으며, 상술한 용도를 나타내기 위한 죽엽 추출물과 오매 추출물을 동시에 포함하는 조성물에 대하여는 지금까지 보고되지 않았다.
이러한 배경하에서, 본 발명자들은 천연물로부터 유래되어 안전성을 나타내면서도 동맥경화증에 대한 치료효과가 우수한 치료제를 개발하기 위하여 예의 연구노력한 결과, 죽엽 추출물과 오매 추출물을 포함하는 조성물이 안전하면서도 우수한 동맥경화증 치료효과를 나타냄을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 하나의 목적은 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 심혈관계 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 심혈관계 질환 예방 또는 개선용 건강기능성 식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 비만의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위한 일 실시양태로서, 본 발명은 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 심혈관계 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "추출물"은, 죽엽 및 오매로부터 액체의 용매를 사용하여 추출된 특정 성분을 의미한다. 상기 용매로는 물, C1-4 알코올, 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있다. 유효성분을 효율적으로 추출하기 위하여 메탄올, 에탄올 또는 이들과 물의 혼합물로 추출하는 것이 바람직하다. 추출방식으로는 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출, 초음파 추출 및 증기 추출로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나를 사용할 수 있다.
본 발명의 용어 "죽엽"이란, 대나무과의 왕대, 솜대, 조릿대 등의 잎사귀를 의미하는데, 한방에서는 열을 내리고 번조(煩躁)를 제거하며 진액(津液)을 생성하고 이뇨(利尿)하는 효능을 나타낸다고 알려져 있다.
본 발명의 용어 "오매"란, 장미과의 매실나무(Prunus mume Sieb. et Zucc.)의 덜 익은 열매를 매연으로 훈증시킨 약재를 의미하는데, 한방에서는 폐기를 수렴시켜 기침과 해수를 멎게하고 설사를 그치게 하며 진액 부족으로 인한 갈증에 사용하고 회충으로 인한 구토와 복통을 낳게 하고, 소화불량과 식용부진에도 효과가 있다고 알려져 있다.
본 발명의 용어 "심혈관계 질환"이란, 동맥 내층(內層)의 비후(肥厚)로 인한 혈관벽의 탄력성 감소, 혈전 형성에 의한 혈류에 대하여 저항성 증가, 혈중 지질농도의 증가에 의한 혈압상승 등의 원인에 의하여 발생하는 질환을 통칭하는 표현을 의미하는데, 상기 심혈관계 질환의 예로는 뇌졸중, 심근경색증, 협심증, 관상동맥경화증, 죽상동맥경화증 등이 될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 용어 "예방"이란, 본 발명에서 제공하는 약학적 조성물의 투여에 의해 심혈관계 질환을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어 "치료"란, 본 발명에서 제공하는 약학적 조성물의 투여에 의해 심혈관계 질환에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
상기 조성물에 포함된 오매 추출물과 죽엽 추출물의 혼합비는 특별히 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 1:0.1 내지 1:10(w/w), 보다 바람직하게는 1:0.5 내지 1:4(w/w), 가장 바람직하게는 1:0.5 내지 1:2(w/w)가 될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 죽엽 및 오매를 각각 에탄올 추출하고, 여과 및 감압농축하여 각각의 추출물을 수득한 다음 일정 혼합비로 혼합하여 각각의 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 다양한 복합 추출물을 제조하고(실시예 3), 이들의 효과를 검증한 결과, 혈청내 중성지방 수준과 저밀도콜레스테롤의 수준을 저하시킬 수 있고(도 5 및 6), 혈전동물모델에서 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 단독으로 투여할 경우보다도 더 우수한 항응혈율을 나타내며(도 8), 이러한 항응혈효과는 용량의존적으로 증가함을 확인하였다(도 9).
따라서, 본 발명의 조성물은 혈액순환이 원활하지 못하여 뇌졸중, 심근경색증, 협심증, 관상동맥경화증, 죽상동맥경화증 등의 심혈관계 질환이 발병될 가능성이 있거나 또는 발병된 개체에게 투여함으로써 상기 심혈관계 질환을 예방 또는 치료하는데 활용될 수 있다.
본 발명의 용어, "개체"란 심혈관계 질환이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미한다. 이때, 상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 목적하는 바에 따라 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
상기 본 발명의 조성물은 약학적으로 허용 가능한 희석제, 부형제 또는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 상기 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있다.
상기 본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 본 발명의 용어 "약학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.
아울러, 본 발명의 조성물은 심혈관계 질환의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 수술, 호로몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 다른 실시양태로서, 본 발명은 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어 "비만"이란, 일반적으로 체내에 지방조직이 과다한 상태이거나 또는 신체비만지수(체질량지수, Body mass index: 체중(kg)을 신장(m)의 제곱으로 나눈 값)가 25 이상인 경우를 의미한다. 비만증상이 발생한 개체에서는 통상적으로 혈장으로부터 지방세포로 유입된 지방산과 포도당이 에스테르화하여 주로 중성지방의 형태로 축적된다고 알려져 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 오매와 죽엽(왕대 잎, 솜대 잎 또는 조릿대 잎)을 각각 에탄올 추출하고 여과 및 감압농축하여 각각의 추출물을 수득한 다음, 오매와 다양한 죽엽을 포함하는 각각의 복합 추출물을 제조하고, 이들의 항비만 및 항고지혈 효과를 검증한 결과, 체중증가량 및 식이효율을 감소시킬 수 있고(표 1), 체중의 증가를 억제할 수 있으며(도 1), 혈청내 중성지방과 저밀도콜레스테롤의 수준증가를 억제할 수 있음을 확인하였다(도 2 및 3).
아울러, 죽엽 및 오매를 각각 에탄올 추출하고, 여과 및 감압농축하여 각각의 추출물을 수득한 다음 다양한 혼합비로 혼합하여 각각의 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 복합 추출물을 제조하고(표 2), 이들의 효과를 측정한 결과, 1일 체중증가량 및 식이효율을 감소시킬 수 있고(표 3), 체중의 증가를 억제할 수 있으며(도 4), 혈청내 중성지방과 저밀도콜레스테롤의 수준증가를 억제할 수 있고(도 5 및 6), 지방조직의 수준 역시 저하시킴을 확인하였으므로(도 7), 비만의 효과적인 예방 또는 치료에 이용될 수 있음을 알 수 있었다.
따라서, 본 발명의 조성물은 비만증상이 발생할 가능성이 있거나 또는 발생된 개체에게 투여함으로써 비만을 억제하는데 활용될 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 실시양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 심혈관계 질환 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 또는 비만의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품을 제공한다.
상기 본 발명의 조성물을 혈액순환 개선, 비만 예방 또는 개선을 목적으로 식품에 첨가하여 다양한 형태의 건강기능성 식품을 제조할 수 있는데, 상기 건강기능성 식품은 특별히 이에 제한되지 않으나, 건강 기능성 식품, 영양 보조제, 영양제, 파머푸드(pharmafood), 건강 식품, 뉴트라슈티칼(nutraceutical), 디자이너 푸드, 식품 첨가제 등의 모든 형태의 식품이 될 수 있는데, 바람직하게는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 될 수 있다. 이때, 첨가하는 방법은 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용되고, 첨가량은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 본 발명의 건강기능성 식품은 상기 조성물 이외의 다양한 성분을 추가로 포함할 수도 있는데, 이들 다양한 성분은 특별히 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 될 수 있다. 뿐만 아니라, 기호성 및/또는 기능성을 부가하기 위하여 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있으며, 이들 성분들은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 체중감소, 지방조직 중량 감소, 혈중 중성지방수준 감소, 혈중 저밀도콜레스테롤수준 감소 및 항응혈효과를 나타내므로, 혈액순환 장애로 인한 다양한 심혈관계 질환의 예방 및 치료를 위한 약학적 조성물 또는 건강기능성 식품 뿐만 아니라 체지방 감소용 건강기능성 식품의 개발에도 널리 활용될 수 있을 것이다.
도 1은 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 체중변화 수준을 나타내는 그래프이다.
도 2는 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 혈청내 중성지방의 수준을 나타내는 그래프이다.
도 3은 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 혈청내 저밀도콜레스테롤의 수준을 나타내는 그래프이다.
도 4는 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 체중변화 수준을 나타내는 그래프이다.
도 5는 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 혈청내 중성지방의 수준을 나타내는 그래프이다.
도 6은 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 혈청내 저밀도콜레스테롤의 수준을 나타내는 그래프이다.
도 7은 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 지방조직의 수준을 나타내는 그래프이다.
도 8은 혈전동물모델에서 생약 추출물에 따른 항응혈율의 수준을 나타내는 그래프이다.
도 9는 혈전동물모델에서 MFBL12의 항응혈효과 평가결과를 나타내는 그래프이다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 생약 추출물의 제조
각각 1kg의 오매, 왕대 잎, 솜대 잎 또는 조릿대 잎을 각각 15ℓ의 70% 에탄올에 1주일간 침지시키고, 70℃에서 5시간 동안 추출 및 여과하여 각각의 추출용액을 수득하였다. 상기 각 추출용액 1.5ℓ를 감압 농축하여 오매 추출물(MF) 18.2g, 왕대 잎 추출물(BL1) 8.5g, 솜대 잎 추출물(BL2) 8.4g 및 조릿대 잎 추출물(BL3) 8.1g을 수득하였다. 또한, 상기 오매 추출물 0.5ℓ와 각각의 죽엽 추출물 1.5ℓ를 혼합 및 감압건조하여 오매와 왕대 잎 복합 추출물(MFBL1) 14.6g, 오매와 솜대 잎 복합 추출물(MFBL2) 14.5g 및 오매와 조릿대 잎 복합 추출물(MLBL3) 14.1g을 제조하였다(표 1).
생약 추출물의 구성성분
시료명 오매 왕대 잎 솜대 잎 조릿대 잎 건조중량(g)
MF
BL1
BL2
BL3
MFBL1
MFBL2
MFBL3		 1.5
-
-
-
0.5
0.5
0.5		 -
1.5
-
-
1.5
-
-		 -
-
1.5
-
-
1.5
-		 -
-
-
1.5
-
-
1.5		 18.2
8.5
8.4
8.1
14.6
14.5
14.2
실시예 2: 오매와 죽엽 복합 추출물의 고지방식이 비만/고지혈증 병태모델에 서의 항비만 및 항고지혈 효과
고지방식이에 의해 비만이 유도된 비만/고지혈증 병태모델을 대상으로 오매 및 죽엽 복합 추출물들의 항비만 및 항고지혈증 효과를 검증하고자 정상대조군(ND), 비만대조군(고지방식이군, HFD) 및 양성대조군(Omega-3)군과 생약 추출물군들을 비교 검증하였다. 이를 위하여 고지방식이로 유도한 비만/고지혈증 병태모델을 다음과 같이 제작하였다:
7 주령의 수컷 C57bl/6 생쥐(미국 Jackson Lab.)를 항온(25±2℃), 항습(50±5%) 및 12시간 간격의 광주기(light on 07:00 ~ 19:00)로 조절되는 SPF환경에서 1 주간 기본사료(AIN-76A diet)와 물을 자유롭게 공급하면서 적응시킨 후, 8 주령부터 고지방식이(# D12492 60 kcal fat, Research Diets Inc., USA)를 투여하여 비만/고지혈증 병태모델을 제작하였다.
상기 비만/고지혈증 병태모델의 10주령기에 고지방식이와 상기 실시예 1에서 제조한 각 생약 추출물을 5주간 병행투여하였다. 이때, 생약 추출물들은 300 mg/kg/day 용량을 1일 2회로 나누어 투여 하였다.
식이섭취량 및 체중은 매주 1회 일정한 시간에 측정하여 기록하고, 사육이 끝난 시험동물은 희생시키고 각각의 혈청을 수집하여 혈청내 중성지방의 수준 및 저밀도 콜레스테롤의 수준을 측정하였다(도 1 내지 3 및 표 1).
비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 식이효율
실험군 사료섭취량(g/1일) 체중증가량(g/1일) 식이효율(FER, %)
비만대조군(HFD)
양성대조군(Omega-3)
BL1
MF
MFBL1
BL2
MFBL2
BL3
MFBL3		 2.82
2.63
2.45
2.49
2.50
2.58
2.67
2.62
2.48		 0.389±0.02
0.317±0.04
0.209±0.04
0.274±0.05
0.143±0.01
0.251±0.01
0.177±0.01
0.214±0.01
0.131±0.01		 13.80±0.69
11.10±1.56
7.30±1.32
9.60±1.85
5.00±0.42
9.75±0.38
6.63±0.55
8.18±0.34
5.18±0.50
상기 표 2에서 보듯이, 1일 체중증가량의 측면에서 볼 때, 양성대조군의 경우 비만대조군에 비하여 체중증가량이 약 81%로 감소하였고, 다양한 죽엽 추출물은 비만대조군에 비하여 약 54 내지 65%로 감소하였으며, 오매 추출물은 비만대조군에 비하여 약 70%로 감소한 반면, 오매 추출물과 다양한 죽엽 추출물을 포함하는 복합 추출물은 약 34 내지 46% 수준으로 감소하였다. 특히, 오매 추출물과 조릿대 잎 추출물을 포함하는 복합 추출물은 비만대조군의 약 34% 수준으로 체중증가량이 감소되었으므로, 고지방식이에 의한 체중증가 유도를 효율적으로 억제할 수 있음을 알 수 있었다.
다음으로, 식이효율의 측면에서 볼 때, 양성대조군의 경우 비만대조군에 비하여 식이효율이 약 80%로 감소하였고, 다양한 죽엽 추출물은 비만대조군에 비하여 약 53 내지 71%로 감소하였으며, 오매 추출물은 비만대조군에 비하여 약 70%로 감소한 반면, 오매 추출물과 다양한 죽엽 추출물을 포함하는 복합 추출물은 약 36 내지 48% 수준으로 감소하였다. 특히, 오매 추출물과 조릿대 잎 추출물을 포함하는 복합 추출물은 비만대조군의 약 36% 수준으로 식이효율이 감소되었으므로, 고지방식이에 의한 체중증가 유도를 효율적으로 억제할 수 있음을 알 수 있었다.
한편, 도 1은 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 체중변화 수준을 나타내는 그래프이다. 도 1에서 보듯이, 비만대조군은 높은 수준의 체중증가를 나타내었으나, 양성대조군, 다양한 죽엽 추출물 투여군, 오매 추출물 투여군 및 상기 죽엽과 오매의 복합 추출물 투여군의 경우에는 비만대조군에 비하여 통계적으로 유의성 있게 감소하였다. 그 중에서도, 죽엽과 오매의 복합 추출물 투여군이 상대적으로 낮은 수준의 혈청내 중성지방 수준을 나타내었고, 특히 조릿대 잎 추출물과 오매 추출물을 포함하는 복합 추출물 투여군이 가장 낮은 수준의 혈청내 중성지방 수준을 나타냄을 확인하였다.
다음으로, 도 2는 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 혈청내 중성지방의 수준을 나타내는 그래프이다. 도 2에서 보듯이, 정상대조군은 혈청내 중성지방이 극히 낮은 수준을 나타내었고, 비만대조군은 혈청내 중성지방이 높은 수준을 나타내었으나, 양성대조군, 다양한 죽엽 추출물 투여군, 오매 추출물 투여군 및 상기 죽엽과 오매의 복합 추출물 투여군의 경우에는 비만대조군에 비하여 혈청내 중성지방의 수준이 감소하였다. 그 중에서도, 죽엽과 오매의 복합 추출물 투여군이 상대적으로 낮은 수준의 혈청내 중성지방 수준을 나타내었고, 특히 조릿대 잎 추출물과 오매 추출물을 포함하는 복합 추출물 투여군이 가장 낮은 수준의 혈청내 중성지방 수준을 나타냄을 확인하였다.
끝으로, 도 3은 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 혈청내 저밀도콜레스테롤의 수준을 나타내는 그래프이다. 도 3에서 보듯이, 정상대조군은 혈청내 저밀도콜레스테롤이 극히 낮은 수준을 나타내었고, 비만대조군은 혈청내 저밀도콜레스테롤이 높은 수준을 나타내었으나, 양성대조군, 다양한 죽엽 추출물 투여군, 오매 추출물 투여군 및 상기 죽엽과 오매의 복합 추출물 투여군의 경우에는 비만대조군에 비하여 혈청내 저밀도콜레스테롤의 수준이 감소하였다. 그 중에서도, 죽엽과 오매의 복합 추출물 투여군이 상대적으로 낮은 수준의 혈청내 저밀도콜레스테롤 수준을 나타내었고, 특히 왕대 잎 추출물과 오매 추출물을 포함하는 복합 추출물 투여군이 가장 낮은 수준의 혈청내 저밀도콜레스테롤 수준을 나타냄을 확인하였다.
실시예 3: 다양한 조성비의 복합 추출물의 제조
상기 실시예 2의 결과에서 보듯이 다양한 죽엽과 오매의 복합 추출물 투여군이 상대적으로 우수한 효과를 나타내었으므로, 상기 복합 추출물에 포함된 죽엽 추출물과 오매 추출물의 최적의 혼합비율을 알아보기 위하여 다양한 비율의 오매 추출물과 죽엽 추출물을 포함하는 다양한 복합 추출물을 제조하였다.
구체적으로, 각 1 kg의 오매, 매실 또는 맹종죽 잎을 20ℓ의 80% 에탄올에 1일동안 침지하고, 80℃에서 3시간동안 추출한 다음, 여과 및 감압농축하여 오매 추출물(MF) 192g, 매실 추출물(MS) 35g 및 죽엽 추출물(BL) 89.5g을 제조하였다(표 3).
복합 추출물의 혼합비
시료명 오매 추출물 죽엽 추출물 매실 추출물
MFBL11
MFBL12
MFBL14
MFBL21
MSBL12		 1
1
1
2
-		 1
2
4
1
2		 -
-
-
-
1
실시예 4: 복합 추출물의 항비만 및 혈액순환개선 효과
상기 실시예 2의 방법으로 제작된 비만/고지혈증 병태모델을 이용하여 상기 실시예 3에서 제조한 각 복합 추출물의 항비만 및 항고지혈증 효과를 검증하고자 하였다. 즉, 생약 추출물군으로서 실시예 3에서 제조한 각 복합 추출물을 사용하고, 투여기간을 6주로 하며, 투여량을 200 mg/kg/day로 하는 것을 제외하고는, 상기 실시예 2와 동일한 방법을 수행하여, 상기 복합 추출물의 항비만 및 항고지혈증 효과를 검증하였다(도 4 내지 7 및 표 4).
고지방식이 비만/고지혈증 동물모델에서의 식이효율
실험군 사료섭취량(g/1일) 체중증가량(g/1일) 식이효율(FER, %)
정상대조군(ND)
비만대조군(HFD)
양성대조군(Omega-3)
BL
MFBL11
MFBL12
MF
MFBL14
MSBL12
MFBL21		 3.33
2.88
2.57
2.72
2.45
2.37
2.53
2.59
3.16
2.37		 0.171±0.01
0.483±0.03
0.303±0.03
0.309±0.05
0.234±0.03
0.226±0.04
0.257±0.02
0.209±0.02
0.234±0.04
0.197±0.03		 5.15±0.36
16.77±1.06
11.78±1.10
11.34±1.96
9.56±1.17
9.52±1.76
10.20±0.78
8.05±0.87
7.41±1.38
8.32±1.26
상기 표 4에서 보듯이, 1일 체중증가량의 측면에서 볼 때, 양성대조군의 경우 비만대조군에 비하여 체중증가량이 약 63%로 감소하였고, 죽엽 추출물은 비만대조군에 비하여 약 64%로 감소하였으며, 오매 추출물은 비만대조군에 비하여 약 53%로 감소한 반면, 다양한 혼합비의 오매 추출물과 죽엽 추출물을 포함하는 복합 추출물은 약 41 내지 48% 수준으로 감소하였고, 매실 추출물과 죽엽 추출물을 포함하는 복합 추출물은 약 48%의 수준으로 감소하였다. 특히, 오매 추출물과 죽엽 추출물이 2:1(w/w)로 혼합된 복합 추출물은 비만대조군의 약 41% 수준으로 체중증가량이 감소되었으므로, 고지방식이에 의한 체중증가 유도를 효율적으로 억제할 수 있음을 알 수 있었다.
다음으로, 식이효율의 측면에서 볼 때, 양성대조군의 경우 비만대조군에 비하여 식이효율이 약 70%로 감소하였고, 죽엽 추출물은 비만대조군에 비하여 약 68%로 감소하였으며, 오매 추출물은 비만대조군에 비하여 약 61%로 감소한 반면, 다양한 혼합비의 오매 추출물과 죽엽 추출물을 포함하는 복합 추출물은 약 48 내지 57% 수준으로 감소하였고, 매실 추출물과 죽엽 추출물을 포함하는 복합 추출물은 약 44%의 수준으로 감소하였다. 특히, 매실 추출물과 죽엽 추출물이 1:2(w/w)로 혼합된 복합 추출물은 비만대조군의 약 44% 수준으로 식이효율이 감소되었으므로, 고지방식이에 의한 체중증가 유도를 효율적으로 억제할 수 있음을 알 수 있었다.
한편, 도 4는 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 체중변화 수준을 나타내는 그래프이다. 도 4에서 보듯이, 다양한 조성비의 복합 추출물을 처리한 경우에는 양성대조군으로 사용된 Omega-3 투여군의 결과와 유사하거나 또는 낮은 수준의 체중을 나타냄을 확인할 수 있었고, 오매 추출물과 죽엽 추출물이 1:4(w/w)로 혼합된 복합 추출물 투여군의 경우에 가장 낮은 수준의 체중을 나타냄을 확인할 수 있었다.
다음으로, 도 5는 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 혈청내 중성지방의 수준을 나타내는 그래프이다. 도 5에서 보듯이, 정상대조군은 혈청내 중성지방이 극히 낮은 수준을 나타내었고, 비만대조군은 혈청내 중성지방이 높은 수준을 나타내었으나, 양성대조군, 오매 추출물 투여군, 죽엽 추출물 투여군 및 다양한 조성비의 복합 추출물 투여군의 경우에는 비만대조군에 비하여 혈청내 중성지방의 수준이 감소하였다. 그 중에서도, 다양한 조성비의 복합 추출물 투여군이 상대적으로 낮은 수준의 혈청내 중성지방 수준을 나타내었고, 특히 오매 추출물과 죽엽 추출물이 1:1(w/w)로 혼합된 복합 추출물 투여군의 경우에 가장 낮은 수준의 혈청내 중성지방 수준을 나타냄을 확인하였다.
또한, 도 6은 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 혈청내 저밀도콜레스테롤의 수준을 나타내는 그래프이다. 도 6에서 보듯이, 정상대조군은 혈청내 저밀도콜레스테롤이 극히 낮은 수준을 나타내었고, 비만대조군은 혈청내 저밀도콜레스테롤이 높은 수준을 나타내었으나, 양성대조군, 오매 추출물 투여군, 죽엽 추출물 투여군 및 다양한 조성비의 복합 추출물 투여군의 경우에는 비만대조군에 비하여 혈청내 저밀도콜레스테롤의 수준이 감소하였다. 그 중에서도, 다양한 조성비의 복합 추출물 투여군이 상대적으로 낮은 수준의 혈청내 저밀도콜레스테롤 수준을 나타내었고, 특히 매실 추출물과 죽엽 추출물이 1:2(w/w)로 혼합된 복합 추출물 투여군의 경우에 가장 낮은 수준의 혈청내 저밀도콜레스테롤 수준을 나타냄을 확인하였다.
끝으로, 도 7은 비만/고지혈증 병태모델에서 생약 추출물에 따른 지방조직의 수준을 나타내는 그래프이다. 도 7에서 보듯이, 정상대조군은 지방조직이 극히 낮은 수준을 나타내었고, 비만대조군은 지방조직이 높은 수준을 나타내었으나, 양성대조군, 오매 추출물 투여군, 죽엽 추출물 투여군 및 다양한 조성비의 복합 추출물 투여군의 경우에는 비만대조군에 비하여 지방조직의 수준이 감소함을 확인하였다. 특히, 오매 추출물과 죽엽 추출물이 1:4(w/w)로 혼합된 복합 추출물 투여군의 경우에는 가장 낮은 수준의 지방조직의 수준을 나타냄을 확인하였다.
실시예 5: 오매와 죽엽 복합 추출물의 혈액순환개선 효과
Factor Xa 는 외적(extrinsic) 자극과 내적(intrinsic) 자극에 의해 생성되는 트롬빈 생성과정에 모두 관여하는 혈액 응고 인자로서 알려져 있는데, 혈액응고 단계에서 각 단계에서 세린 프로테아제(serine protease) 들이 증폭되는 기작을 가지고 있으므로, 상위 단계에 위치하는 Factor Xa를 조절하는 것이 하위단계의 트롬빈을 직접적으로 조절하는 것보다 훨씬 효과적일 것이라고 예상하였다.
이에, 응혈작용에 직접관여 하는 트롬빈의 상위단계에서 트롬빈을 조절하는 Factor Xa(FXa)억제제를 시험하기위한 혈전동물모델인 Arterio-Venous(A-V) Shunt SD rat model에 약물 투여(16시간 절식상태) 2시간 전에 혈액순환개선 후보물질로서 죽엽 추출물(BL), 오매 추출물(MF) 또는 오매 추출물과 죽엽 추출물이 1:2(w/w)로 혼합된 복합 추출물(MFBL12) 400mg/kg/day을 1일 2회로 나누어 각각 경구 투여하였다. 1시간 후 SD rat의 복강에 2ml 씩 urethane 1.25g/kg을 주사하여 마취시키고, 마취가 끝나면 Left carotid artery와 Right jugular vein에 polyethylene catheters (PE50; Becton Dickinson, MD, USA)로 cannulation 시켰다. 그런 다음, 5cm silicon tube에 cotton thread을 넣고 saline을 채운 후 artery와 vein에 연결된 tube로 혈액을 흐르게 하여 shear-stress를 유도하여 15분간 thrombus를 생성시킨다. 생성된 thrombus를 건조시켜 무게를 측정하여 항응혈효과를 평가하였다(도 8). 도 8은 혈전동물모델에서 생약 추출물에 따른 항응혈율의 수준을 나타내는 그래프이다. 도 8에서 보듯이, 죽엽 추출물(BL) 투여군보다는 오매 추출물(MF) 투여군이 상대적으로 높은 항응혈율을 나타내고, 오매 추출물과 죽엽 추출물을 포함하는 복합 추출물(MFBL) 투여군이 오매 추출물(MF) 투여군보다도 더 우수한 항응혈율을 나타냄을 알 수 있었다.
실시예 6: 오매와 죽엽 복합 추출물 농도별 혈액순환개선 효과
상기 실시예 5에서 보듯이, 오매 추출물과 죽엽 추출물을 포함하는 복합 추출물(MFBL12) 투여군이 가장 우수한 항응혈효과를 나타내었으므로, 이러한 효과가 상기 복합 추출물의 처리농도에 비례하는지의 여부를 확인하고자 하였다. 즉, 상기 복합 추출물(MFBL12)을 50, 100 또는 200mg/kg/day의 용량으로 투여하고, 대조군으로서 항응혈효과를 나타내는 것으로 알려진 레바록사반(Revaroxaban)을 5mg/kg/day의 용량으로 투여하는 것을 제외하고는, 상기 실시예 5와 동일한 방법을 사용하여 항응혈효과를 평가하였다(도 9). 도 9는 혈전동물모델에서 MFBL12의 항응혈효과 평가결과를 나타내는 그래프이다. 도 9에서 보듯이, 혈전동물모델에서 MFBL12의 항응혈효과는 용량의존적으로 증가하는 양상을 나타내었으나, 용량이 증가할수록 항응혈효과가 점차 둔화되는 양상을 나타내었다.

Claims (9)

  1. 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 심혈관계 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 죽엽 추출물 및 오매 추출물은 각각 죽엽 및 오매를 물, C1 -4 알코올, 또는 이들의 혼합물로 추출한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 죽엽 추출물 및 오매 추출물의 함량비는 1:0.1 내지 1:10(w/w)인 것인 약학적 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    약학적으로 허용 가능한 희석제, 부형제 또는 담체를 추가로 포함하는 것인 약학적 조성물.
  6. 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 심혈관계 질환 예방 또는 개선용 건강기능성 식품.
  7. 죽엽 추출물 및 오매 추출물을 포함하는 비만의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서,
    상기 죽엽 추출물 및 오매 추출물은 각각 죽엽 및 오매를 물, C1 -4 알코올, 또는 이들의 혼합물로 추출한 것을 특징으로 하는 건강기능성 식품.
  9. 제6항 또는 제7항에 있어서,
    상기 죽엽 추출물 및 오매 추출물의 함량비는 1:0.1 내지 1:10(w/w)인 것인 건강기능성 식품.

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