TWI582112B - 新穎結合劑－藥物接合物（ＡＤＣｓ）及其用途（二） - Google Patents

新穎結合劑－藥物接合物（ＡＤＣｓ）及其用途（二） Download PDF

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Description

新穎結合劑-藥物接合物(ADCs)及其用途(二)
本申請書係關於針對標靶C4.4a之N,N-二烷基奧利他汀的結合劑-藥物接合物(ADCs)、這些ADC之活性代謝物、製備這些ADCs之方法、這些ADCs於治療及/或預防疾病之用途，以及這些ADCs於製造醫藥品供治療及/或預防疾病，特別是過度增生及/或血管新生疾病，例如癌症疾病之用途。此等治療可以單一治療或另外與其他的醫藥品或另外的治療方法合併來施行。
癌症疾病為不受控制的細胞在各種組織中生長之結果。於許多情況下這些新細胞穿過現存的組織(侵入性生長)，或其轉移至遠端器官。癌症疾病發生於廣泛的各種器官中，且疾病通常係以組織特異性的方式推進。因此“癌症疾病”名稱為一通稱，係描述一大群不同器官、組織及細胞類型之該定義疾病。
早期的腫瘤能以手術及放射線治療法來移除。轉移之腫瘤一般僅可藉由化療劑給藥減緩性治療。該情況下之目的係欲達到改善生活品質及延長剩餘生命期之最適組合。
目前以非經腸給藥之大部分的化療劑於腫瘤組織或腫瘤細胞通常不是靶向性，但取而代之，因為其全身性給藥係非特定性分佈於身體中，因此包括不希望暴露於該藥物之部位，例如健康的細胞、組織及器官。此可導致不欲的副作用及甚至嚴重的泛毒性效應，其然後常常限制該藥物的治療上有效劑量範圍或必須完全停止醫療。
這些化療劑於腫瘤細胞或緊鄰組織之改良及選擇性可利用性，及一方面有關增進效用，且另外一方面將有毒副作用降至最低，因此已為多年來開發新化療劑的焦點。至今已做了許多嘗試來開發將藥物導入目標細胞之有效方法。例如，對相鄰細胞，最適化地連接藥物及細胞內目標及最小化細胞間的藥物分佈，仍然持續為困難的問題。
單株抗體，例如係適合用於腫瘤組織及腫瘤細胞之靶向定址。以此等藥物如曲妥珠單抗(trastuzumab)(Herceptin)、利妥昔單抗(rituximab)(美羅華(Rituxan))、西妥昔單抗(cetuximab)(Erbitux)及貝伐單抗(bevacizumab)(Avastin)之活性為基礎，其因已核准用於個別、特定的腫瘤疾病治療，此等抗體對臨床癌症疾病治療之重要性在近幾年來已大大提升[參見，例如G.P.Adams和L.M.Weiner，Nat.Biotechnol.23，1147-1157(2005)]。因此，在所謂的免疫接合物之利益上亦顯著增加，例如前述的ADC，其中係將一針對腫瘤相關抗原之內化抗體經由一連接單位(連接子)與細胞毒性劑共價接合。在ADC導入腫瘤細胞後且隨即將接合物裂解，將細胞毒性劑本身或由細胞毒性所形成的另外具細胞毒性活性之代謝物，於細胞內釋放，其中其能直接或選擇性產生其效用。相較於習用的癌症化療法，於此方法中，能大大地盡量限制對正常細胞的傷害[參見，例如J.M.Lambert，Curr.Opin.Pharmacol.5，543-549(2005)；A.M.Wu和P.D.Senter，Nat.Biotechnol.23，1137-1146(2005)；P.D.Senter，Curr.Opin.Chem.Biol.13，235-244(2009)；L.Ducry和B.Stump，Bioconjugate Chem.21，5-13(2010)]。
替代抗體上，亦可用來自小分子藥物球之結合物作為選擇性與特定位置(標靶)結合之結合物，例如受體，例如[參見，例如E.Ruoslahti等人，Science 279，377-380(1998)；D.Karkan等人，PLoS ONE 3(6)，e2469(June 25，2008)]。又已知細胞毒性藥物及定址配體其在配體及藥物間具有一經定義的裂解點供釋放藥物。此類之“預定的斷裂點”，例如可存在於胜肽鏈內，其可選擇性於特定位置被作用位置上的特定酵素裂解[參見，例如R.A.Firestone和L.A.Telan，US Patent Application US 2002/0147138]。
腫瘤組織及腫瘤細胞之尤其適當的靶向性定址係直接針對抗原C4.4a之單株抗體。C4.4a(基因：LYPD3)最早係以與轉移相關，於老鼠胰腺腫瘤細胞之細胞表面蛋白質來說明(Rösel M.等人，Oncogene 1998，17(15)：1989-2002)。人類C4.4a係由其胎盤cDNA基因庫中單離出來(Würfel,J.等人，Gene 2001,262：35-41)。C4.4a係與uPA受體屬結構性同源且含有兩個LY6結構區，其展示典型的三維(three-finger folding)型式且係經由9個雙硫橋來連接(Jacobsen B.& Ploug M.，Current Medicinal Chemistry 2008，15：2559-2573)。C4.4a係經由糖磷脂醯肌醇(GPI)而固定在細胞中。該蛋白質係經高度糖化且含有多種N-及O-糖化位置。C4.4a於肺癌，大腸癌，乳癌，卵巢癌，胰腺癌，腎臟癌，頭及頸部腫瘤及黑色素瘤之腫瘤細胞展示強烈的表現。RNA分析顯示出C4.4a表現於~50%原發性肺腫瘤及~75%肺癌轉移，雖然於健康肺組織上未檢測出表現(Würfel J.等人，Gene 2001，262：35-41)。C4.4a可於非小細胞肺癌上用作為預後標記-高濃度之C4.4a表現相關於不良預後(Hansen L.等人，Lung Cancer 2007，58：260-266)。此等於大腸癌時亦為真。C4.4a係由腫瘤細胞表面裂離且可用作為預後血清標記(K.Konishi等人，Cancer Science 2010)。黑色素瘤之詳細表現分析顯示出C4.4a係表現於~60%原發性惡性黑色素瘤及於100%淋巴結及皮膚轉移(Seiter S.等人，J Invest Dermatol.2001，116(2)：344-347)。C4.4a基因表現之上調可於與相鄰的正常組織相比較時於乳癌組織上觀察到(Fletcher G.C.，Br.J.Cancer 2003，88(4)：579-585)。C4.4a為腫瘤治療法中理想的標靶蛋白質，由於C4.4a於健康組織上之表現係限制於皮膚角質及食道血管內皮細胞，以及於胎盤細胞(Würfel J.等人，Gene 2001，262：35-41)。WO01/23553係說明C4.4a抑制劑(如一抗-C4.4抗體)之用途，其於癌症治療法上可以抑制C4.4a表現或活性。
C4.4a之確切功能仍未知。於傷口癒合之過程中，於角質細胞之遷移係上調(Hansen L.等人，Biochem J.2004，380：845-857)。C4.4a被認為於腫瘤細胞之侵襲上扮演一角色，推測係經由與細胞外基質之交互作用(Rösel M.等人，Oncogene 1998，17(15)：1989-2002；Paret C.等人，British Journal of Cancer 2007，97：1146-1156)。可能之配體為板素(laminin)1及5，以及半乳糖凝集素3(Paret C.，Int.J.Cancer 2005，115；724-733)。
奧瑞他汀E(Auristatin E)(AE)及單甲基奧瑞他汀E(MMAE)為多拉司他汀(dolastatin)之合成的類似物，多拉司他汀為一特異性的直鏈偽胜肽，其首先係由海洋來源分離出，且在某些情況下對於腫瘤細胞具有非常強大的細胞毒性活性[其論述請參見，例如G.R.Pettit，Prog.Chem.Org.Nat.Prod.70，1-79(1997)；G.R.Pettit等人，Anti-Cancer Drug Design 10，529-544(1995)；G.R.Pettit等人，Anti-Cancer Drug Design 13，243-277(1998)]。
然而，MMAE具有相當高之全身毒性的缺點。對於改善腫瘤選擇性，MMAE更特別是與酵素性可裂解纈胺酸-瓜胺酸連接子一起用於ADC設置來供更多的標靶腫瘤治療[WO 2005/081711-A2；S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.17，114-124(2006)]。在蛋白裂解後，MMAE較佳係由對應的ADC於細胞內釋出。
然而當使用結合劑-藥物接合物(ADC)形式時，MMAE與不具有酵素性可裂解的預定斷裂點之抗體及藥物間的連接單位(連接子)並不相容[S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.17，114-124(2006)]。
單甲基奧瑞他汀F(MMAF)為具有C-端苯丙胺酸單元之奧瑞他汀衍生物，相較於MMAE，其僅具中度的抗增生活性。此項事實非常可能係由於游離的羧酸基團，其極性及電荷對於此化合物進入細胞之能力有不利的影響。就此，MMAF之甲酯(MMAF-OMe)已描述為具有進入細胞能力之中性-電荷前藥衍生物，相較於MMAF，其對於各種增加許多數量級之癌細胞株具有活體外細胞毒性[S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.17，114-124(2006)]。可假設此效用係因MMAF本身所致，在前藥攝入細胞後，其藉由胞內酯水解快速地釋出。
然而，以簡單酯衍生為主的藥物化合物，由於與所希望的作用位置無關的非專一性酯水解，例如藉由存在於血漿中的酯酶，一般易有化學不穩定的風險；此非專一性的水解可能大大地限制此等化合物於治療上的有效性。
單甲基奧瑞他汀F(MMAF)及其各種酯衍生物及醯胺衍生物已揭示於WO 2005/081711-A2中。其他具有C-端經醯胺取代苯丙胺酸單元之奧瑞他汀類似物係描述於WO 01/18032-A2中。WO 02/088172-A2及WO 2007/008603-A1 係申請MMAF類似物，其係關於苯丙胺酸之側鏈修飾作用，而WO 2007/008848-A2係申請其中苯丙胺酸之羧基基團經修飾之化合物。經由C-端連接之奧瑞他汀接合物最近已描述於WO 2009/117531-A1中[亦參見S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.19，1960-1963(2008)]。
再者，奧瑞他汀衍生物例如MMAE及MMAF亦為許多腫瘤細胞所表現之轉運蛋白質的基質，且其可能導致發展出對這些藥物之抗藥性。
本發明所提出的問題為提供新的結合劑-藥物接合物(ADCs)，經由新的N,N-二烷基奧瑞他汀衍生物與創新的、適當連接子及結合劑之組合，其展現非常引人注目的活性性質，例如就其特定的腫瘤效應及/或降低胞內形成代謝物作為轉運蛋白質相關基質之潛在性，且其因此適合用於治療及/或預防過度增生及/或血管新生疾病，例如癌症疾病。
本發明係提供通式(Ia)之結合劑-藥物接合物 其中n為由1至50之數字， AK為結合劑，§-G-L1 -B-L2 -§§基團為連接子，其中§係標示與AK基團之連接位置，及§§係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫或甲基，R2 為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯基乙基、二苯甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中 #4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，且R3 為氫或甲基，R4 為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯基乙基、二苯甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中 #7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R8 及R9 與其相鍵接的氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R10 為苄醯基，R11 為苄基，其可在苯基基團中經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團 其中#9 係標示與-CHC(R26 )-T2 之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代， R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R26 為氫或羥基，T2 為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R35 為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明化合物為式(Ia)及(I)化合物及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物，與下式相同之化合物並涵蓋式(Ia)及(I)及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物，以及與下文實例相同之化合物並涵蓋式(Ia)及(I)及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物，與下文相同並涵蓋式(Ia)及(I)化合物尚未為其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
依照其等之結構，本發明化合物可以不同的立體異構物形式存在，亦即構型異構物或其他，若適合，為構象異構物(鏡像異構物及/或非對映異構物，包括該等阻轉異構物之案例)。本發明因此涵蓋鏡像異構物及非對映異構物及其各別的混合物。立體異構上同質的組成份可由此等鏡像異構物及/或非對映異構物中以已知的方法加以分離；為此目的，其最好係於非對掌或對掌相上使用色層分離法，更特別的，HPLC色層分離法。
當本發明化合物可發生互變異構物形式時，本發明係涵蓋所有的互變異構型。
本發明亦涵蓋本發明化合物之所有適當同位素變體。請了解，本發明化合物之同位素變體於本處係指一化合物，其中至少一個本發明化合物中的原子與另外一個相同原子數 但原子量與自然界正常或主要發生的原子量不同的原子交換。可併入本發明化合物之同位素之實例為該等氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴及碘之同位素，例如2 H(氘)、3 H(氚)、13 C、14 C、15 N、17 O、18 O、32 P、33 P、33 S、34 S、35 S、36 S、18 F、36 Cl、82 Br、123 I、124 I、129 I及131 I。本發明化合物特別的同位素變體，例如，更特別的，該等其中併入一個或多個放射性同位素者，可能有利於，例如作用機制或藥物於身體內的分佈之研究；由於製備且偵測較容易，以3 H或14 C同位素標定之化合物特別適合這些目的。再者，併入同位素，例如氘，可造成某些治療上的利益，因化合物較大的代謝穩定性，例如延長在身體內的半衰期或降低所需的有效劑量；本發明化合物之此等修飾作用因此，若適當，亦構成本發明之較佳具體例。本發明化合物之同位素變體可以熟悉本項技藝者已知的方法來製備，例如依照稍後於下文中所述之方法及實例中的生產製程，使用個別試劑及/或起始化合物之對應的同位素修飾作用。
本發明內文中較佳的鹽類為本發明化合物之生理上可接受的鹽類。亦涵蓋雖然本身不適合醫藥應用，然而可用於，例如分離、純化本發明化合物之鹽類。
本發明化合物之生理上可接受的鹽類涵蓋無機酸、羧酸及磺酸之酸加成鹽，實例為鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘二磺酸、醋酸、三氟醋酸、丙酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、延胡索酸、馬來酸及苯甲酸之鹽類。
本發明化合物之生理上可接受的鹽類亦涵蓋習用鹼之鹽 類，例如及較佳為鹼金屬鹽類(例如鈉及鉀鹽)、鹼土金屬鹽類(例如鈣及鎂鹽)或衍生自氨或有機胺具有1至16個C原子之銨鹽，例如及較佳為乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二異丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環己胺、二甲基胺基乙醇、普卡因、二苯甲基胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎福啉、精胺酸、離胺酸及1,2-乙二胺。
本發明內文中之溶劑合物為該等經由與溶劑分子配位，形成固體或液體狀態絡合物之本發明化合物形式。水合物為一種特定的溶劑合物形式，其中係與水進行配位。於本發明內文中較佳的溶劑合物為水合物。
再者，本發明亦涵蓋本發明化合物之前藥。本處術語“前藥”係指本身為生物上活化或非活化，但於其停留在體內期間轉變為本發明化合物(例如，藉由代謝或水解)化合物。
於本發明內文中，除非另外有說明，否則取代基係具有下列意義：於本發明內文中，(C1 -C4 )-烷基為具有1至4個碳原子之直鏈或支鏈烷基。可提及作為實例及較佳為下列者：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、1-甲基丙基及第三丁基。
於本發明內文中，亞烷基為具有所指之特定碳原子數之直鏈α,ω-二價烷基。可提及作為實例及較佳為下列：伸甲基、乙烷-1,2-二基(1,2-伸乙基)、丙烷-1,3-二基(1,3-伸丙基)、丁-1,4-二基(1,4-伸丁基)、戊烷-1,5-二基(1,5-伸戊基)、己烷-1,6-二基(1,6-伸己基)、庚-1,7-二基(1,7-伸庚基)、辛-1,8-二 基(1,8-伸辛基)、壬-1,9-二基(1,9-伸壬基)、癸-1,10-二基(1,10-伸癸基)。
於本發明內文中(C3 -C7 )-環烷基及3-至7-員碳環分別為具有3至7個碳原子之單環、飽和環烷基基團。可提及作為實例及較佳者為下列：環丙基、環丁基、環戊基、環己基及環庚基。
於R19 定義中之α-胺基的側基不僅涵蓋天然生成的α-胺基酸側基，亦包括這些α-胺基的類似物及異構物之側基。本處α-胺基酸可為L和D構型或另外可以L型和D型之混合物存在。可提出之側基的實例如下列者：甲基(丙胺酸)、丙-2-基(纈胺酸)、丙-1-基(正纈胺酸)、2-甲基丙-1-基(白胺酸)、1-甲基丙-1-基(異白胺酸)、丁-1-基(正白胺酸)、第三丁基(2-第三丁基甘胺酸)、苯基(2-苯基甘胺酸)、苯甲基(苯丙胺酸)、對羥基苯甲基(酪胺酸)、吲哚-3-基甲基(色胺酸)、咪唑-4-基甲基(組胺酸)、羥甲基(絲胺酸)、2-羥基乙基(高絲胺酸)、1-羥基乙基(蘇胺酸)、巰基甲基(半胱胺酸)、甲基硫基甲基(S-甲基半胱胺酸)、2-巰基乙基(高半胱胺酸)、2-甲基硫基乙基(甲硫胺酸)、胺甲醯基甲基(天門冬醯胺酸)、2-胺甲醯基乙基(麩醯胺酸)、羧甲基(天門冬胺酸)、2-羧乙基(麩胺酸)、4-胺基丁-1-基(離胺酸)、4-胺基-3-羥基丁-1-基(羥基離胺酸)、3-胺基丙-1-基(鳥胺酸)、2-胺基乙基(2,4-二胺基丁酸)、胺基甲基(2,3-二胺基丙酸)、3-胍基丙-1-基(精胺酸)、3-脲基丙-1-基(瓜胺酸)。於R19 定義中，較佳的α-胺基酸側基為甲基(丙胺酸)、丙-2-基(纈胺酸)、2-甲基丙-1-基(白胺酸)、苯甲基(苯 丙胺酸)、咪唑-4-基甲基(組胺酸)、羥甲基(絲胺酸)、1-羥基乙基(蘇胺酸)、4-胺基丁-1-基(離胺酸)、3-胺基丙-1-基(鳥胺酸)、2-胺基乙基(2,4-二胺基丁酸)、胺甲基(2,3-二胺基丙酸)、3-胍基丙-1-基(精胺酸)。各例中以L構型為較佳。
於本發明內文中4-至7-員雜環為具有總計4至7個環原子之單環、飽和雜環，其係含有一個或二個來自N、O、S、SO及/或SO2 系列的雜原子並經由一環碳原子或視需要環氮原子相連接。較佳者係指具有一個或二個來自N、O及/或S系列的環雜原子之5-至7-員雜環，更佳地具有一個或二個來自N及/或O系列的環雜原子之5-至6-員雜環。可提及作為實例為下列：氮雜環丁二烯基、氧雜環丁烷基、吡咯啶基、吡唑啶基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、哌啶基、哌基、四氫哌喃基、四氫噻哌喃基、嗎福啉基、噻嗎福啉基、六氫氮呯基和六氫-1,4-二氮呯基。較佳者係指吡咯啶基、四氫呋喃基、哌啶基、哌基、四氫哌喃基和嗎福啉基。
可分別以A、B、D、G、L1 、L2 、L4 、R1 、R2 、R3 、R4 及R5 表示之基團的化學式中，於各案中#6 、＊ 、＊＊ 、#3 、#1 、#2 、##1 、##2 、##3 、##4 、##5 、##6 、##7 、##8 、＊＊＊ 、＊＊＊＊ 、#4 、#5 、#6 、#7 、#8 或#9 符號所在的直線端點並非碳原子或CH2 基團，而是為與所分派的原子相鍵接之部分，於此位與A、B、D、G、L1 、L2 、L4 、R1 、R2 、R3 、R4 或R5 相鍵接。
於本發明內文中，所有出現多次的基團具有其各自獨立的定義。若本發明化合物上的基團係經取代，除非另外有說 明，否則該等基團可經一次或多次取代。經一個或多個相同或不同的取代基取代為較佳。特佳係經一個取代基取代。
於本發明內文中，所用的術語除非另外有說明，否則具有下列定義：術語“連接子”於最廣泛的概念下係理解為包括一共價鍵或一系列連接結合劑及藥物之原子的化學單元。術語“連接子”請了解於本發明概念下較佳為共價連接結合劑和藥物之一系列原子。再者，連接子可例如以二價化學單元表示，例如亞烷基、亞芳基、亞雜芳基、亞雜環基、二羰酸酯、二羰酸醯胺。
術語“結合劑”於最廣泛的概念下係理解為與存在特定目標細胞族群中之標靶分子相結合，以結合劑-藥物接合物提出之分子。術語“結合劑”應以最廣泛的解釋來理解並涵蓋，例如卵磷酯、能與特定糖鏈結合的蛋白質或磷脂質結合劑蛋白質。此等結合劑包括，例如高分子量蛋白質(結合劑蛋白質)、多肽或胜肽(結合胜肽)、非胜肽(例如適體(aptamer)論述文獻(US5,270,163)Keefe AD.等人之回顧文獻，Nat.Rev.Drug Discov.2010；9：537-550)，或維生素)及所有其他細胞結合分子或物質。結合劑蛋白質為，例如抗體和抗體片段或抗體模擬物，例如親和體(affibody)、adnectin、抗運載蛋白(anticalin)、DARPin、高親和多聚體(avimer)、奈米抗體(nanobodies)(論述文獻Gebauer M.等人，Curr.Opinion in Chem.Biol.2009；13：245-255；Nuttall S.D.等人，Curr.Opinion in Pharmacology 2008；8：608-617)。結合胜肽有， 例如配體-受體對之配體，例如配體-受體對VEGF/KDR之VEGF，例如配體-受體對運鐵蛋白/運鐵蛋白受體之運鐵蛋白，或細胞激素/細胞激素受體，例如配體-受體對TNFα/TNFα受體之配體TNFα。
依照本發明，較佳的結合劑(更特別為人類，單株抗體)為與C4.4a結合之抗體或抗原結合抗體片段。於抗-C4.4a抗體之案例中，換言之每個抗體分子之帶毒體(toxophore)分子數目較佳係在由1至10個，更佳地2至8個之範圍內。
“標靶分子”於最廣泛的概念下係理解為存在目標細胞族群中並可為蛋白質(例如生長因子之受體)之分子或非胜肽分子(例如糖或磷脂質)。較佳其為一受體或抗原。
術語“胞外”標靶分子係描述與細胞相連及位於細胞外之標靶分子或位於細胞外之標靶分子部分，亦即結合劑可與完整細胞於胞外的標靶分子結合。胞外標靶分子可固定在細胞膜中或可為細胞膜之部分。熟悉技藝者已了解辨識胞外標靶分子之方法。對於蛋白質，此可經由測定跨膜區和此蛋白質在膜中之定向來進行。此資料一般係記錄在蛋白質資料庫中(例如SwissProt)。
術語“癌標靶分子”係描述，相較於相同組織類型之非癌細胞，其係多重存在一種或多種癌細胞類型上之標靶分子。相較於相同組織類型之非癌細胞，癌症標靶分子較佳係選擇性存在一種或多種癌細胞類型上，其中“選擇性”，相較於相同組織類型之非癌細胞，係描述至少二倍堆積在癌細胞上(選擇型癌標靶分子)。使用癌標靶分子得以用本發明接合物 進行選擇性癌細胞治療。
結合劑可經由一鍵與連接子連接。由文獻已知各種有機分子與抗體共價結合(接合)之可能性。結合劑之連接可藉由結合劑之雜原子來進行。可用於連接之本發明結合劑之雜原子有硫(於一個具體例中係經由結合劑的巰基基團)、氧(依照本發明係藉由結合劑的羧基或羥基基團)和氮(於一個具體例中係經由結合劑的一級或二級胺基團或醯胺基團)。依照本發明較佳的為帶毒體與抗體經由抗體的半胱胺酸殘基之硫原子，及/或經由一個或多個抗體的離胺酸殘基之NH基團接合。這些雜原子可存在天然的結合劑中或可藉由化學或分子生物之方法來導入。依照本發明，結合劑與帶毒體之連接對於結合劑與標靶分子之結合活性僅有極少的影響。於一較佳的具體例中，此連接對於結合劑與標靶分子之結合活性並無影響。
依照本發明，術語“抗體”係以最廣泛的概念理解並涵蓋免疫球蛋白分子，實例為完整或經修飾單株抗體、多株抗體或多專一性抗體(例如雙專一性抗體)。免疫球蛋白較佳係包括具有四條多肽鏈，二條重鏈(H鏈)和二條輕鏈(L鏈)之分子，其典型地係以雙硫橋連接。各重鏈包括一重鏈可變區(縮寫VH)和一重鏈恆定區。重鏈恆定區可涵蓋，例如CH1、CH2和CH3三個區。各輕鏈包括一可變區(縮寫VL)和一恆定區。輕鏈之恆定區包括一個區(縮寫CL)。VH和VL區可進一步細分為具有超變異性之區域，亦稱為互補決定區(縮寫CDR)及具有低序列變異性之區域(“架構區”，縮寫為FR)。各VH 和VL區典型地係由三個CDR和至高四個FR所組成。例如，以下列胺基端至羧基端之順序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。抗體可由任何適合用作抗體之物種來製得，例如兔、羊駝、駱駝、小鼠或大鼠。於一個具體例中該抗體為人類或鼠科來源。抗體，例如可為人類、人源化或嵌合的。
術語“單株”抗體係指由一群實質上均質性抗體得來之抗體，亦即該群族的個別抗體為相同，但是少數可能發生天然的突變。單株抗體以高專一性辨識單一抗原結合位。術語“單株抗體”並非指特殊的製造方法。
術語“全(intact)”抗體係指不僅包括一抗原結合區亦包括輕鏈及重鏈恆定區之抗體。恆定區可為天然生成的區域或其中一種或多種胺基酸位置經改變之其變體。
術語“經修飾全”抗體係指經由其胺基端或羧基端，藉由共價鍵(例如胜肽連接鏈)與另外非源自抗體的多肽或蛋白質融合之全抗體。再者，抗體可藉由於定義位置導入反應性半胱胺酸加以修飾，以便於促使與帶毒體結合(參見Junutula 等人Nat Biotechnol.2008 Aug；26(8)：925-32)。
術語“人類”抗體為可得自人類之抗體或為合成的人類抗體。“合成的”人類抗體為其部分或整體可由合成的序列經電腦模擬，以人類抗體序列分析為基準所得來之抗體。人類抗體可，例如由人類來源之抗體序列庫分離出的核酸所編碼。此等抗體之一實例可參見Söderlind等人，Nature Biotech.2000，18：853-856。
術語“人源化”或“嵌合”抗體係描述由非人類和人類序列組成份所組成的抗體。在這些抗體中，部分的人類免疫球蛋白序列(受體)被非人類免疫球蛋白之序列組成份(供體)所取代。在許多案例中，供體為鼠科免疫球蛋白。就人源化抗體，受體CDR之胺基酸係被供體之胺基酸取代。在某些案例中，架構之胺基酸亦被對應的供體胺基酸取代。在某些案例中，人源化抗體含有並非存在受體或供體之胺基酸且其係於抗體最適化期間插入。就嵌和抗體之情況，例如，供體免疫球蛋白之可變區，或整個Fab片段，易言之VL-CL及VH+CH1，係與人類抗體之恆定區融合。
如本處所用，術語互補決定區(CDR)係指抗體可變區中與抗原結合所必須的胺基酸。每個可變區典型地具有三個CDR區，經鑑定為CDR1、CDR2及CDR3。各CDR區可包括根據Kabat定義之胺基酸及/或根據Chotia所定義之超變異環的胺基酸。Kabat之定義係涵蓋，例如輕鏈可變區之大約24-34(CDR1)、50-56(CDR2)和89-97(CDR3)胺基位置及重鏈可變區之31-35(CDR1)、50-65(CDR2)和95-102(CDR3)之區域(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immulological Interest，5th Ed.Public Health Service，National Institutes的Health，Bethesda，MD.(1991))。Chotia之定義係涵蓋，例如輕鏈可變區之大約26-32(CDR1)、50-56(CDR2)和91-96(CDR3)胺基位置及重鏈可變區之26-32(CDR1)、53-55(CDR2)和96-101(CDR3)之區域(Chothia和Lesk；J Mol Biol 196：901-917(1987))。在某 些案例中，CDR可包括來自Kabat和Chotia所定義的一CDR區之胺基酸。
依照重鏈恆定區之胺基酸序列，抗體可分成不同的種類。有五種主要的全抗體：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中許多可再分成另外的亞種(同型物)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。對應不同種類之重鏈恆定區經鑑定為[alpha/α]、[delta/δ]、[epsilon/ε]、[gamma/γ]和[mu/μ]。抗體三元結構和亞單位結構已為所知。
術語抗體/免疫球蛋白之“功能性片段”或“抗原結合抗體片段”係定義為抗體/免疫球蛋白之片段(例如IgG之可變區)，其進一步涵蓋抗體/免疫球蛋白之抗原結合區。抗體之“抗原結合區”典型地係涵蓋一個或多個抗體之超變異區列如CDR1、CDR2及/或CDR3區。然而，抗體之“架構”或“骨架”區亦可參與有關抗體與抗原之結合。架構區形成CDR之骨架。抗原結合區較佳係涵蓋至少4至103輕鏈可變區之胺基酸和5至109個鏈可變區之胺基酸，更佳地，3至107輕鏈可變區之胺基酸和4至111個重鏈可變區之胺基酸，特佳者係指完整的輕鏈及重鏈可變區，亦即VL之1-109和VH之1至113胺基酸(編號係根據WO97/08320)。
本發明之“功能性片段”或“抗原結合片段”係涵蓋(非決定性)Fab、Fab’、F(ab’)2 和Fv片段、雙抗體、單區抗體(DAb)、直鏈抗體、抗體的個別鏈(單鏈Fv，縮寫為ScFv)；和多專一性抗體，例如雙和三專一性抗體，例如由抗體片段C.A.K Borrebaeck，editor(1995)Antibody Engineering (Breakthroughs in Molecular Biology)，Oxford University Press；R.Kontermann & S.Duebel，editors(2001)Antibody Engineering(Springer Laboratory Manual)，Springer Verlag)所形成。“多專一性”或“多功能性”抗體以外的抗體為該等具有相同結合位之抗體。多專一性抗體可對不同的抗原表位具專一性，或可對一個以上的抗原之表位具專一性(參見，例如WO 93/17715；WO 92/08802；WO 91/00360；WO 92/05793；Tutt，等人，1991，J.Immunol.147：6069；美國專利第4,474,893；第4,7 14,68 1號；第4,925,648號；第5,573,920號；第5,601,819；或Kostelny等人，1992，J.Immunol.148：1547 1553)。F(ab’)2 或Fab分子可建構成使發生在Ch1和CL區問的分子內雙硫鍵相互作用之數目降低或另外完全防止。
“功能性片段”或“抗原結合抗體片段”可與非源自抗體之另外的多肽或蛋白質經由其胺基端或羧基端，藉由共價鍵(例如胜肽連接鏈)融合。再者，抗體和抗原結合片段可藉由於定義位置導入反應性半胱胺酸加以修飾，以便於促使與帶毒體結合(參見Junutula等人Nat Biotechnol.2008 Aug；26(8)：925-32)。
多株抗體可以本項技術之一般技藝者已知的方法來製備。單株抗體可以本項技術之一般技藝者已知的方法來製備(Köhler及Milstein，Nature，256，495-497，1975)。人類和人源化單株抗體可以本項技術之一般技藝者已知的方法來製備(Olsson等人，Meth Enzymol.92，3-16或Cabilly等人US 4,816,567或Boss等人US 4,816,397)。
本項技術之一般技藝者已知各種用來製備人類抗體及其片段之方法，例如藉由基因轉殖小鼠(N Lonberg及D Huszar，Int Rev Immunol.1995；13(1)：65-93)或噬菌體表現技術(Clackson等人，Nature.1991 Aug 15；352(6336)：624-8)。本發明之抗體可得自藉由匯集大量健康自願者之大量抗體的胺基酸序列所組成之重組的抗體庫。抗體亦可藉由已知之重組DNA技術來製造。抗體之核酸序列可以慣用的定序來取得或可得自公共資料庫。
“分離的”抗體或結合劑係經純化以移除其他的細胞組成份。可能干擾診斷或治療效用之沾染的細胞組成份有，例如酵素、荷爾蒙或其他細胞之胜肽和非胜肽性組成份。較佳的抗體或結合劑，相對於抗體或結合劑為已純化至95%以上程度者(例如以Lowry法，UV-Vis光譜或以SDS毛細管電泳測定)，其等之純化係如此使得其可能測定至少15個胺基端或內部胺基酸序列之胺基酸程度，或經純化至均質性，該均質性係以SDS-PAGE於還原或非還原條件所測(偵測可藉由馬考斯藍染色(Coomassie Blau staining)或較佳以銀著色)。然而，抗體一般係以一個或多個純化步驟來製備。
術語“專一性結合”係指與預定的抗原/標靶分子結合之抗體或結合劑。抗體或結合劑之專一性結合典型地係具有至少10-7 M之親和力(為Kd值；亦即，較佳具有小於10-7 M之Kd值)，其中該抗體或結合劑對於預定的抗原/標靶分子具有至少比對非專一性抗原/標靶分子(例如牛血清白蛋白或酪蛋白)高二倍的親和力，其中非專一性抗原/標靶分子並非預定的抗原/標靶分子或密切相關之抗原/標靶分子。
專一性抗癌細胞抗原之抗體較佳由本項技術之一般技藝者藉由他或她所熟悉的方法來製備(例如重組表現)或可由市售取得(例如來自得過默克公司(Merck KGaA))。用於癌症治療之已知的市售抗體之實例為Erbitux® (西妥昔單抗，Merck KGaA)、Avastin® (貝伐單抗，Roche)及Herceptin® (曲妥珠單抗，Genentech)。曲妥珠單抗為IgG1κ型之重組的人源化單株抗體，其在細胞分析中(Kd=5 nM)係以高親和力與人類表皮生長因子之胞外區結合。該抗體係於CHO細胞中以重組來產生。
式(I)化合物代表式(Ia)化合物之亞群。
本發明較佳的主題為通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至50之數字，AK為AK1 或AK2
其中AK1 為結合劑，(較佳為抗-C4.4a抗體)其係經由結合劑之硫原子與G基團鍵接，AK2 為結合劑，(較佳為抗-C4.4a抗體)其係經由結合劑之氮原子與G基團鍵接，G於當K=AK1 時，為下式之基團，
其中#1 係標示與結合劑之硫原子連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，或G於當AK=AK2 時，為羰基，L1 為一鍵、直鏈(C1 -C10 )-亞烷基、下式之基團
其中m為由2至6之數字，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，L1A 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基，B1 為下式之基團
其中##5 係標示與L1A 基團之連接位置，##6 係標示與L1B 基團之連接位置，L5 為一鍵或(C2 -C4 )-亞烷基，L6 為一鍵或下式之基團
其中##7 係標示與羰基基團之連接位置，##8 係標示與L1B 之連接位置，R33 為氫、(C1 -C4 )-烷基羰基、第三丁基氧基羰基或苄氧基羰基，R34 為氫或甲基，R29 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R30 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R29 及R30 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R31 為氫或(C1 -C4 )-烷基， R32 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R31 及R32 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，L1B 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基，且其中(C1 -C10 )-亞烷基可經1至4個各自獨立選自包含甲基、羥基及苄基之基團的取代基取代，且其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，P為O或NH，L3 為一鍵或(C2 -C4 )-亞烷基，L4 為一鍵或下式之基團，
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為氫或甲基，R28 為氫、(C1 -C4 )-烷基羰基、第三丁基氧基羰基或苄氧基羰基，Q1 為4-至7-員雜環，Q2 為3-至7-員碳環或4-至7-員雜環，R14 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R15 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R14 及R15 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R16 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R17 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環， R18 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R19 為氫或天然α-胺基酸或其類似物或異構物之側基，R20 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R19 及R20 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶基環，R21 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R22 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R21 及R22 與其相鍵接之原子一起形成一3-至7-員碳環，R23 為(C1 -C4 )-烷基，R24 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R27 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R36 為氫、(C1 -C4 )-烷基羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基，R37 為氫或甲基，或R36 及R37 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶環，L2 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，其中(C2 -C10 )-亞烷基可經1至4個各自獨立選自由甲基、羥基及苄基組成之群組的取代基取代， 且其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫或甲基，R2 為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中 #4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫或甲基，R4 為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中 #7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R8 及R9 與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R10 為苄醯基，R11 為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHC(R26 )-T2 之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代， R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R26 為氫或羥基，T2 為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R35 為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明較佳的主題為通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至50之數字，AK為AK1 或AK2 ，其中AK1 為結合劑(宜為一抗C4.4a抗體)，其係經由結合劑之硫原子與G基團鍵接，AK2 為結合劑(宜為一抗C4.4a抗體)，其係經由結合劑之氮原子與G基團鍵接，G於當AK=AK1 時，為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之硫原子的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置， 或G於當AK=AK2 時，為羰基，L1 為一鍵、直鏈(C1 -C10 )-亞烷基、下式之基團
其中m為由2至6之數字，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，L1A 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基，B1 為下式之基團，
其中##5 係標示與L1A 基團之連接位置，##6 係標示與L1B 基團之連接位置，L5 為一鍵或(C2 -C4 )-亞烷基，L6 為一鍵或下式之基團
其中##7 係標示與羰基基團之連接位置，##8 係標示與L1B 之連接位置，R33 為氫、(C1 -C4 )-烷基羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基，R34 為氫或甲基，R29 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R30 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R29 及R30 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R31 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R32 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R31 及R32 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，L1B 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基，且其中(C1 -C10 )-亞烷基可經1至4個各自獨立選自由甲基、羥基及苄基組成之群組的取代基取代，且其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，P為O或NH，L3 為一鍵或(C2 -C4 )-亞烷基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為氫或甲基，R28 為氫、(C1 -C4 )-烷基羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基 羰基，Q1 為4-至7-員雜環，Q2 為3-至7-員碳環或4-至7-員雜環，R14 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R15 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R14 及R15 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R16 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R17 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R18 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R19 為氫或天然α-胺基酸或其類似物或異構物之側基，R20 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R19 及R20 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶基環，R21 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R22 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R21 及R22 與其相鍵接之原子一起形成一3-至7-員碳環，R23 為(C1 -C4 )-烷基，R24 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R27 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R36 為氫、(C1 -C4 )-烷基羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基 羰基，R37 為氫或甲基，或R36 及R37 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶環，L2 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，其中(C2 -C10 )-亞烷基可經1至4個各自獨立選自由甲基、羥基及苄基組成之群組的取代基取代，及其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置， R1 為氫或甲基，R2 為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯基乙基、二苯甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基， R3 為氫或甲基，R4 為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯基乙基、二苯甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R8 及R9 與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環， R10 為苄醯基，R11 為苄基，其可於苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHC(R26 )-T2 之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R26 為氫或羥基，T2 為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R35 為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明較佳的主題為通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至20之數字，AK為AK1 或AK2 ，其中AK1 為與C4.4a結合及經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接之抗體或抗原結合抗體片段， AK2 為與C4.4a結合及經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接之抗體或抗原結合抗體片段，G於當AK=AK1 時，為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，或G於當AK=AK2 時，為羰基，L1 為一鍵、直鏈(C2 -C6 )-亞烷基、下式之基團
其中m為由2至6之數字，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，L1A 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基，B1 為下式之基團
其中##5 係標示與L1A 基團之連接位置，##6 係標示與L1B 基團之連接位置，L5 為一鍵，L6 為一鍵或下式之基團
其中##7 係標示與羰基基團之連接位置，##8 係標示與L1B 之連接位置，R33 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R34 為氫或甲基，R29 氫，R30 氫，R31 氫或甲基，R32 氫或甲基，L1B 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基，且 其中(C2 -C6 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為氫或甲基， R28 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，Q1 為一4-至7-員雜環，R14 為氫，R15 為氫，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環，R18 為氫，R19 為氫、甲基、丙-2-基、2-甲基丙-1-基或1-甲基丙-1-基，R20 為氫或甲基，或R19 及R20 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶基環，R21 為氫或甲基，R22 為氫或甲基，或R21 及R22 與其相鍵接之原子一起形成環丙基環，R23 為甲基，R24 為氫或甲基，R27 為氫，R36 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R37 為氫或甲基，或 R36 及R37 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶環，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，其中(C2 -C10 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為1-羥基乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫，R4 為1-羥基乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R8 及R9 與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R10 為苄醯基，R11 為苄基，其在苯基基團上可經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHC(R26 )-T2 之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R26 為氫或羥基，T2 為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R35 為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明中較佳的主題為如上所示之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至20之數字，AK為AK1 或AK2 ，其中AK1 為與C4.4a結合及經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接之抗體或抗原結合抗體片段，AK2 為與C4.4a結合及經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接之抗體或抗原結合抗體片段，G於當AK=AK1 時，為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，或G於當AK=AK2 時，為羰基，L1 為一鍵、直鏈(C2 -C6 )-亞烷基、下式之基團
其中m為由2至6之數字，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，L1A 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基，B1 為下式之基團
其中 ##5 係標示與L1A 基團之連接位置，##6 係標示與L1B 基團之連接位置，L5 為一鍵，L6 為一鍵或下式之基團
其中##7 係標示與羰基基團之連接位置，##8 係標示與L1B 之連接位置，R33 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R34 為氫或甲基，R29 為氫，R30 為氫，R31 為氫或甲基，R32 為氫或甲基，L1B 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基，且其中(C2 -C6 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為氫或甲基，R28 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，Q1 為4-至7-員雜環， R14 為氫，R15 為氫，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環，R18 為氫，R19 為氫、甲基、丙-2-基、2-甲基丙-1-基或1-甲基丙-1-基，R20 為氫或甲基，或R19 及R20 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶基環，R21 為氫或甲基，R22 為氫或甲基，或R21 及R22 與其相鍵接之原子一起形成一環丙基環，R23 為甲基，R24 為氫或甲基，R27 為氫，R36 為氫、(C1 -C4 )-烷基羰基，第三-丁氧羰基，或苄氧基羰基，R37 為氫或甲基，或L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，其中(C2 -C10 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為1-羥基乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫，R4 為1-羥基乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置， #8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R8 及R9 與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R10 為苄醯基，R11 為苄基，其可於苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHC(R26 )-T2 之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代， R26 為氫或羥基，T2 為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R35 為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明較佳的主題為通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至10之數字，AK為AK1 或AK2 ，其中AK1 為一抗體，其包括六個B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6抗體之CDR序列，B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接，AK2 為一抗體，其包括六個B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6抗體之CDR序列，B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接，G於當AK=AK1 時，為下式之基團
其中 #1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，或G於當AK=AK2 ，為羰基，L1 為一鍵、直鏈(C2 -C6 )-亞烷基、下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C2 -C6 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為甲基，R28 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，Q1 為哌啶-1,4-二基，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環，R21 為氫或甲基，R22 為氫或甲基，或R21 及R22 與其相鍵接之原子一起形成一環丙基環，R23 為甲基，R24 為氫，R36 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基， R37 為氫或甲基，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團，
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為1-羥基乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基之基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫，R4 為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 或-CH2 -O-R11 之基團
其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，R11 為苄基，其可在苯基上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHCH2 苯基之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R35 為甲基或羥基， 以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明較佳的主題為如上所示之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至10之數字，AK為AK1 或AK2
其中AK1 為一抗體，其包括六個B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之CDR序列、B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接，AK2 為一抗體，其包括六個B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之CDR序列、B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接，G於當AK=AK1 時，為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，或 G於當AK=AK2 時，為羰基，L1 為一鍵、直鏈(C2 -C6 )-亞烷基、下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C2 -C6 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 基團之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為甲基，R28 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，Q1 為哌啶-1,4-二基，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環，R21 為氫或甲基，R22 為氫或甲基，或R21 及R22 與其相鍵接之原子一起形成一環丙基環，R23 為甲基，R24 為氫，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為1-羥基乙基、苄基、1-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫，R4 為苄基、1-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基， R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，R11 為苄基，其可在苯基上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHCH2 苯基之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R35 為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明較佳的主題為如上所示之通式(Ia)的結合劑-藥物接合物，其中n為由1至10之數字，AK為AK2 ，其中AK2 為一抗體，為一抗體，其包括六個B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之CDR序列、B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接， G為羰基，L1 為一鍵，B為一鍵，L2 為直鏈(C3 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R3 為氫，R4 為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中 #7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 或-C(=O)-NR8 R9 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫，R9 為氫或苄基，R35 為甲基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明較佳的主題為如上所示之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至10之數字，AK為AK2 ，其中AK2 為一抗體，其包括六個B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之CDR序列、B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接，G為羰基，L1 為一鍵，B為一鍵，L2 為直鏈(C3 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置， #5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R3 為氫，R4 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 或-C(=O)-NR8 R9 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基， R8 為氫，R9 為氫或苄基，R35 為甲基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明較佳的主題為如上所示之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至10之數字，AK為AK1 ，其中AK1 為一抗體，其包括六個B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之CDR序列、B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接，G為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，L1 為一鍵、直鏈(C3 -C5 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C3 -C5 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為甲基，R28 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或 R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環，L2 為直鏈(C3 -C5 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R3 為氫，R4 為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 或-C(=O)-NR8 R9 之基團，其中 R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫，R9 為氫或苄基，R35 為甲基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明較佳的主題為如上所示之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至10之數字，AK為AK1 ，其中AK1 為一抗體，其包括六個B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之CDR序列、B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接，G為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置， L1 為一鍵、直鏈(C3 -C5 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C3 -C5 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為甲基，R28 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基， R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環，L2 為直鏈(C3 -C5 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R3 為氫，R4 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中 #7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 或-C(=O)-NR8 R9 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫，R9 為氫或苄基，R35 為甲基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明另外亦提供式(XXXa)化合物 其中Cys為經由側基之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵接之半胱胺酸殘基，L1 為一鍵、直鏈(C1 -C10 )-亞烷基、下式之基團
其中m為由2至6之數字， ##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，L1A 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基，B1 為下式之基團
其中##5 係標示與L1A 基團之連接位置，##6 係標示與L1B 基團之連接位置，L5 為一鍵或(C2 -C4 )-亞烷基，L6 為一鍵，R29 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R30 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R29 及R30 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R31 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R32 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R31 及R32 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，L1B 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基，其其中(C1 -C10 )-亞烷基可經1至4個各自獨立選自由甲基、羥基及苄基組成之群組的取代基取代，且 其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，P為O或NH，L3 為一鍵或(C2 -C4 )-亞烷基，L4 為一鍵，Q1 為4-至7-員雜環，Q2 為3-至7-員碳環或4-至7-員雜環，R14 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R15 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R14 及R15 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R16 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R17 為氫或(C1 -C4 )-烷基， 或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R18 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R19 為氫或天然α-胺基酸或其類似物或異構物之側基，R20 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R19 及R20 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶基環，R21 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R22 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R21 及R22 與其相鍵接之原子一起形成一3-至7-員碳環，R23 為(C1 -C4 )-烷基，R24 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R27 為氫或(C1 -C4 )-烷基，L2 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，其中(C2 -C10 )-亞烷基可經1至4個各自獨立選自包含甲基、羥基及苄基之基團的取代基取代，及 其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫或甲基，R2 為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯基乙基、二苯甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置， #5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取 代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫或甲基，R4 為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯基乙基、二苯甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置， #8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R8 及R9 與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R10 為苄醯基，R11 為苄基，其可在苯基上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHC(R26 )-T2 之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R26 為氫或羥基， T2 為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R35 為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明中較佳的主題為如上所示之式(XXXa)化合物，其中Cys為經由側基之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵接之半胱胺酸殘基，L1 為一鍵、直鏈(C2 -C6 )-亞烷基、下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，L1A 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基，B1 為下式之基團
其中##5 係標示與L1A 基團之連接位置，##6 係標示與L1B 基團之連接位置，L5 為一鍵，L6 為一鍵，R29 為氫， R30 為氫，R31 為氫或甲基，R32 為氫或甲基，L1B 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基，及其中(C2 -C6 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵，R14 為氫，R15 為氫，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環， R23 為甲基，R24 為氫或甲基，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為1-羥基乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團，
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫，R4 為1-羥基乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團，
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R8 及R9 與其相鍵接之原子一起形成一4-至7-員雜環，R10 為苄醯基，R11 為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHCH2 苯基之連接位置， R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R35 為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明中較佳的主題為如上所示之式(XXXa)化合物，其中Cys為經由側基之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵接之半胱胺酸殘基，L1 為一鍵或直鏈(C2 -C6 )-亞烷基，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵，L4 為一鍵，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中 p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團，
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R3 為氫，R4 為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團，
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 或-C(=O)-NR8 R9 之基團，其中R7 為氫，R8 為氫，R9 為氫，R35 為甲基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
較佳的本發明之主題為上文所示之式(XXXa)化合物，其中Cys為經由側基之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵接之半胱胺酸殘基，L1 為一鍵或直鏈(C2 -C6 )-亞烷基，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵，L4 為一鍵，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中 #6 係標示與羰基基團之連接位置，R3 為氫，R4 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團，
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 或-C(=O)-NR8 R9 之基團，其中R7 為氫，R8 為氫，R9 為氫，R35 為甲基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明另外係提供式(XXXI)化合物 其中L1 為一鍵、直鏈(C1 -C10 )-亞烷基、下式之基團
其中m為2至6之數字，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，L1A 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基，B1 為下式之基團
其中##5 係標示與L1A 基團之連接位置，##6 係標示與L1B 基團之連接位置，L5 為一鍵或(C2 -C4 )-亞烷基，L6 為一鍵，R29 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R30 為氫或(C1 -C4 )-烷基， 或R29 及R30 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R31 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R32 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R31 及R32 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，L1B 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基，及其中(C1 -C10 )-亞烷基可經1至4個各自獨立選自由甲基、羥基及苄基組成之群組的取代基取代，及其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 基團之連接位置，P為O或NH，Q1 為4-至7-員雜環，Q2 為3-至7-員碳環或4-至7-員雜環，R18 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R19 為氫或天然α-胺基酸或其類似物或異構物之側基，R20 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R19 及R20 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶基環，R21 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R22 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R21 及R22 與其相鍵接之原子一起形成一3-至7-員碳環，R27 為氫或(C1 -C4 )-烷基，L2 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，其中(C2 -C10 )-亞烷基可經1至4個各自獨立選自包含甲基、羥基及苄基之基團的取代基取代，且 其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫或甲基，R2 為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯基乙基、二苯甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置， #5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫，羥基或苄氧基，R3 為氫或甲基，R4 為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯基乙基、二苯甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置， #8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R8 及R9 與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R10 為苄醯基，R11 為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHC(R26 )-T2 之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代， R26 為氫或羥基，T2 為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R35 為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明中較佳的主題為如上所示之式(XXXI)化合物，其中L1 為一鍵、直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C2 -C6 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置， R18 為氫，R19 為甲基、丙-2-基、2-甲基丙-1-基或1-甲基丙-1-基，R20 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R19 及R20 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶基環，R21 為氫或甲基，R22 為氫或甲基，或R21 及R22 與其相鍵接之原子一起形成一環丙基環，R27 為氫或甲基，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，其中(C2 -C10 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，且其中亞烷基鏈相互為1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一苯基環，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為1-羥基乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫，R4 為1-羥基乙基、苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環 丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛 烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R8 及R9 與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R10 為苄醯基，R11 為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHCH2 苯基之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R35 為甲基或羥基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明中較佳的主題為如上示之式(XXXI)化合物，其中L1 為一鍵，B為一鍵，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中 p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫，R4 為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 或-C(=O)-NR8 R9 之基團，其中R7 為氫，R8 為氫，R9 為氫，R35 為甲基， 以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明中較佳的主題為如上所示之式(XXXI)化合物，其中L1 為一鍵，B為一鍵，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫，R4 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 或-C(=O)-NR8 R9 之基團，其中R7 為氫，R8 為氫，R9 為氫，R35 為甲基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明中較佳的主題為選自下列基團之式(XXXa)及(XXXI)化合物：N-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧乙基]巰基}-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺，N-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧乙基]巰基}-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺， N-(6-{[(5S)-5-胺基-5-羧基戊基]胺基}-6-側氧基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽，N-(6-{[(5S)-5-胺基-5-羧基戊基]胺基}-6-側氧基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明另外係提供通式(I)之結合劑-藥物接合物 其中n為由1至50之數字，AK為結合劑，§-G-L1 -B-L2 -§§基團為連接子，其中§係標示與AK基團之連接位置，且 §§係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為1-羥基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫，R4 為1-羥基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團， 其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R8 及R9 與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R10 為苄醯基，R11 為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHC(R26 )-T2 之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R26 為氫或羥基，T2 為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明之較佳的主題為通式(I)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至50之數字，AK為AK1 或AK2
其中AK1 為結合劑，其係經由結合劑之硫原子與G基團鍵接，AK2 為結合劑，其係經由結合劑之氮原子與G基團鍵接，G於當AK=AK1 時，為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之硫原子的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，或G於當AK=AK2 時，為羰基，L1 為一鍵、直鏈(C1 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中m為由2至6之數字，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C1 -C10 )-亞烷基可經1至4個甲基取代基取代， 且其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，P為O或NH，L3 為一鍵或(C2 -C4 )-亞烷基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為氫或甲基，Q1 為4-至7-員雜環，Q2 為3-至7-員碳環或4-至7-員雜環，R14 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R15 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R14 及R15 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R16 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R17 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R18 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R19 為氫或天然α-胺基酸或其類似物或異構物之側基，R20 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R19 及R20 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶基環，R21 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R22 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R21 及R22 與其相鍵接之原子一起形成一3-至7-員碳環，R23 為(C1 -C4 )-烷基， R24 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R27 為氫或(C1 -C4 )-烷基，L2 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由為2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，其中(C2 -C10 )-亞烷基可經1至4個甲基取代基取代，及其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，D具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明中較佳的主題為通式(I)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至50之數字，AK為AK1 或AK2
其中AK1 為抗體或抗原結合抗體片段且係經由硫原子與G基團鍵接，AK2 為抗體或抗原結合抗體片段且係經由氮原子與G基 團鍵接，G、L1 、B、L2 和D具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明中較佳的主題為通式(I)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至20之數字，AK為AK1 或AK2
其中AK1 為與C4.4a結合及經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接之抗體或抗原結合抗體片段，AK2 為與C4.4a結合及經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接之抗體或抗原結合抗體片段，G於當AK=AK1 時，為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與T1 基團之連接位置，或G於當AK=AK2 時，為羰基，L1 為一鍵、直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中m為由2至6之數字，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C2 -C6 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，P為O或NH，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置， R25 為甲基，Q1 為4-至6-員碳環或哌啶-1,4-二基，Q2 為環戊基或環己基，R14 為氫，R15 為氫，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環，R18 為氫，R19 為氫、甲基、丙-2-基、2-甲基丙-1-基或1-甲基丙-1-基，R20 為氫或甲基，或R19 及R20 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶基環，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與鄰氮原子之連接位置，其中(C2 -C6 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為1-羥基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫，R4 為1-羥基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛 烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R8 及R9 與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R10 為苄醯基，R11 為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHC(R26 )-T2 之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R26 為氫或羥基，T2 為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明中特佳的主題為通式(I)之結合劑-藥物接合物， 其中n為由1至10之數字，AK為AK1 或AK2
其中AK1 為一抗體，其包括六個列於表2之抗體之CDR序列、列於表2之抗體之可變輕鏈及可變重鏈或列於表2之抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接，AK2 為一抗體，其包括六個列於表2之抗體之CDR序列、列於表2之抗體之可變輕鏈及可變重鏈或列於表2之抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接，G於當AK=AK1 時，為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，或G於當AK=AK2 時，為羰基，L1 為一鍵、直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C2 -C6 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為甲基，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環， L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為1-羥基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫，R4 為苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基， R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，R11 為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫或下式之基團
其中#9 係標示與-CHC(R26 )苯基之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明中特佳的主題為通式(I)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至10之數字，AK為AK1 或AK2
其中AK1 為一抗體，其包括六個B01-3，B01-10或D02-6抗體之CDR序列、B01-3，B01-10或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3，B01-10或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接，AK2 為一抗體，其包括六個B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之CDR序列、B01-3，B01-10，M31-B01 或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接，G於當AK=AK1 時，為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，或G於當AK=AK2 時，為羰基，L1 為一鍵、直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C2 -C6 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為甲基，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為1-羥基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基， R3 為氫，R4 為苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，R11 為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫或下式之基團
其中#9 係標示與-CHC(R26 )苯基之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
本發明另外亦提供式(XXX)化合物 其中Cys為經由側基之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵接之半胱胺酸殘基，L1 為一鍵、直鏈(C1 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中m為由2至6之數字，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C1 -C10 )-亞烷基可經1至4個甲基取代基取代，及 其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，P為O或NH，L3 為一鍵或(C2 -C4 )-亞烷基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為氫或甲基，Q1 為3-至7-員碳環或4-至7-員氮雜雜環，Q2 為3-至7-員碳環或4-至7-員氮雜雜環，R14 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R15 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R14 及R15 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R16 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R17 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R18 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R19 為氫或天然α-胺基酸或其類似物或異構物之側基，R20 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R19 及R20 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶基環，R21 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R22 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R21 及R22 與其相鍵接之原子一起形成一3-至7-員碳環，R23 為(C1 -C4 )-烷基， R24 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R27 為氫或(C1 -C4 )-烷基，L2 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，其中(C2 -C10 )-亞烷基可經1至4個甲基取代基取代，且其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為1-羥基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基， 或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫，R4 為1-羥基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或 R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團，其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R8 及R9 與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R10 為苄醯基，R11 為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHC(R26 )-T2 之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R26 為氫或羥基，T2 為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中另外特佳的亦為式(XXX)化合物，其中Cys為經由側基之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵接之半胱胺酸殘基，L1 為一鍵、直鏈(C1 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中m為由2至6之數字，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C2 -C6 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代， B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵，R14 為氫，R15 為氫，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環，R23 為甲基，R24 為氫或甲基，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為1-羥基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置， A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫，R4 為苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團，其中 R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，R10 為苄醯基，R11 為苄基，其可在苯基基團上經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫或下式之基團
其中#9 係標示與-CHC(R26 )苯基之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)化合物，其中n=1-20，更佳地n=1-10及非常佳地n=2-8。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)化合物，其中AK為AK1
其中AK1 為與C4.4a結合及經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接之抗體或抗原結合抗體片段，G為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，及n、L1 、B、L2 、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)化合物，其中AK為AK2
其中AK2 為與C4.4a結合及經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接之抗體或抗原結合抗體片段，G為羰基，且n、L1 、B、L2 、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦係指式(Ia)化合物，其中AK為AK1
其中AK1 為一抗體，其包括六個B01-3，B01-10或D02-6抗體之CDR序列、B01-3，B01-10或D02-6抗體之可 變輕鏈及可變重鏈或B01-3，B01-10或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接，G為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，且n、L1 、B、L2 、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦係指式(Ia)化合物，其中AK為AK2
其中AK2 為一抗體，其包括六個B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之CDR序列、B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接，G為羰基， 且n、L1 、B、L2 、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦係指式(Ia)化合物，其中AK為AK2
其中AK2 為一抗體，其包括六個B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之CDR序列、B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3，B01-10，M31-B01或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接，G為羰基，L1 為一鍵，B為一鍵，L2 為直鏈(C3 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，n、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦係指式(Ia)化合物，其中 AK為AK1
其中 AK1 為一抗體，其包括六個B01-3，B01-10或D02-6抗 體之CDR序列、B01-3，B01-10或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3，B01-10或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，且係經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團相連結，G為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，L1 為一鍵、直鏈(C3 -C5 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C3 -C5 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為甲基，R28 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環，L2 為直鏈(C3 -C5 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3， ##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，且n、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)、(XXXa)及(XXXI)化合物，其中L1 為一鍵，B為一鍵，L2 為直鏈(C3 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，且n、AK、Cys、G、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)化合物，其中L1 為直鏈(C1 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中 m為由2至6之數字，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C1 -C10 )-亞烷基可經1至4個各自獨立選自包含甲基、羥基及苄基之基團的取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或(C2 -C4 )-亞烷基，L4 為下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為氫或甲基， R28 為氫、(C1 -C4 )-烷基羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基，Q1 為4-至7-員雜環，R16 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R17 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R23 為(C1 -C4 )-烷基，R24 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R36 為氫、(C1 -C4 )-烷基羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基，R37 為氫或甲基，或R36 及R37 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶環，L2 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，其中(C2 -C10 )-亞烷基可經1至4個各自獨立選自包含甲基、羥基及苄基之基團的取代基取代，且 n、AK、G、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)化合物，其中L1 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為氫或甲基，R28 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環，R36 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，R37 為氫或甲基，或R36 及R37 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶環，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，且n、AK、G、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)及(XXXa)化合物，其中G為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，L1 為一直鏈(C3 -C5 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C3 -C5 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵，L2 為直鏈(C3 -C5 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，且n，AK1 ，Cys，D，R16 及R17 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)及(XXXa)化合物，其中B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵，n，AK1 ，Cys，G，L1 ，L2 ，D，R16 ，R17 及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)，(XXXa)及(XXXI)化 合物，其中L1 為一鍵，直鏈(C3 -C5 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C3 -C5 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵，L4 為一鍵，R16 為氫，R17 為氫，L2 為直鏈(C3 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3， ##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，n、AK、Cys、G、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)、(XXXa)及(XXXI)化合物，其中L1 為一鍵，B為一鍵，L2 為直鏈(C3 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，n、AK、Cys、G、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)、(XXXa)及(XXXI)化合物，其中L1 為直鏈(C3 -C5 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3， ##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C3 -C5 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵，L4 為一鍵，R16 為氫，R17 為氫，L2 為直鏈(C3 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，n、AK、Cys、G、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)化合物，其中 n為由2至8之數字，較佳為2至5，AK為AK1 或AK2 ，其中AK1 為與C4.4a結合及經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接之抗體或抗原結合抗體片段，AK2 為與C4.4a結合及經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接之抗體或抗原結合抗體片段，G於當AK=AK1 時，為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，或G於當AK=AK2 時，為羰基，L1 為一鍵，直鏈(C3 -C5 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置， 其中(C3 -C5 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵，L4 為一鍵，R16 為氫，R17 為氫，L2 為直鏈(C3 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，且D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)化合物，其中n為由2至8之數字，較佳為2至5，AK為AK1 或AK2 ， 其中AK1 為與C4.4a結合及經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫 原子與G基團鍵接之抗體或抗原結合抗體片段，AK2 為與C4.4a結合及經由結合劑之離胺酸殘基的NH 側基與G基團鍵接之抗體或抗原結合抗體片段，G於當AK=AK1 時，為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，或G於當AK=AK2 時，為羰基，L1 為一鍵，B為一鍵，L2 為直鏈(C3 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D及R35 具有如上所示之定義， 以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)化合物，其中n為由2至8之數字，較佳為2至5，AK為AK1 ，其中AK1 為與C4.4a結合及經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接之抗體或抗原結合抗體片段，G為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，L1 為直鏈(C3 -C5 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C3 -C5 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵，L4 為一鍵，R16 為氫，R17 為氫，L2 為直鏈(C3 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中，較佳者亦為式(Ia)化合物，其中L1 為一鍵、直鏈(C3 -C5 )-亞烷基、下式之基團
其中m為數字2或3， ##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，L1A 為直鏈(C3 -C6 )-亞烷基，B1 為下式之基團
其中##5 係標示與L1A 基團之連接位置，##6 係標示與L1B 基團之連接位置，L5 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L6 為一鍵或下式之基團
其中##7 係標示與羰基基團之連接位置，##8 係標示與L1B 之連接位置，R33 為氫、(C1 -C4 )-烷基羰基或第三丁氧基羰基，R34 為氫或甲基，R29 為氫或甲基，R30 為氫或甲基， R31 為氫或甲基，R32 為氫或甲基，L1B 為直鏈(C3 -C6 )-亞烷基，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，P為O，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為氫或甲基，R28 為氫，(C1 -C4 )-烷基羰基或第三丁氧基羰基，Q1 為4-至7-員雜環，Q2 為3-至7-員碳環或4-至7-員雜環，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，R23 為(C1 -C4 )-烷基，R24 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R36 為氫，(C1 -C4 )-烷基羰基或第三丁氧基羰基，R37 為氫或甲基，或R36 及R37 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶環，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)化合物，其中L1 為直鏈(C3 -C5 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，B為下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為甲基，R28 為氫，甲基羰基或第三丁氧基羰基，Q1 為哌啶-1,4-二基，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，R23 為甲基，R24 為氫，R36 為氫、甲基羰基或第三丁氧羰基，R37 為氫或甲基，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為數字2或3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)、(XXXa)及(XXXI)化合物，其中D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫或甲基，R2 為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯基乙基、二苯甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，R3 為氫或甲基，R4 為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯基乙基、二苯甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3 及R4 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#7 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8 係標示與T1 基團之連接位置，T1 為式-C(=O)-OR7 、-C(=O)-NR8 R9 、-C(=O)-NH-NH-R10 或-CH2 -O-R11 之基團， 其中R7 為氫、甲基、乙基、正丙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基、乙基、正丙基或苄基，或R8 及R9 與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R10 為苄醯基，R11 為苄基，其在苯基基團上可經甲氧基羰基或羧基取代，R5 為氫、甲基或下式之基團
其中#9 係標示與-CHC(R26 )-T2 之連接位置，R12 為苯基，其可經甲氧基羰基、羧基取代或式-S(O)2 OH之基團取代，R13 為苯基，其可經甲氧基羰基或羧基取代，R26 為氫，T2 為苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，及 n、AK、Cys、G、L1 、B、L2 、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)、(XXXa)及(XXXI)化合物，其中D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，A環與存於其中之N-O基為下式之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R3 為氫，R4 為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基， T1 為式-C(=O)-OR7 或-C(=O)-NR8 R9 之基團，其中R7 為氫，R8 為氫，R9 為氫，n、AK、Cys、G、L1 、B、L2 、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)、(XXXa)及(XXXI)化合物，其中D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，A環與存於其中之N-O基為下式之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R3 為氫，R4 為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，T1 為式-C(=O)-NR8 R9 之基團，其中R8 為氫，R9 為氫，n、AK、Cys、G、L1 、B、L2 、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)、(XXXa)及(XXXI)化合物，其中D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，A環與存於其中之N-O基為下式之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R3 為氫，R4 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，T1 為式-C(=O)-NR8 R9 之基團，其中R8 為氫，R9 為氫，n、AK、Cys、G、L1 、B、L2 、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)、(XXXa)及(XXXI)化合物，其中D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R3 為氫，R4 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，T1 為式-C(=O)-OR7 或-C(=O)-NR8 R9 之基團， 其中R7 為氫，R8 為氫，R9 為氫，n、AK、Cys、G、L1 、B、L2 、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)、(XXXa)及(XXXI)化合物，其中D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R3 為氫，R4 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，T1 為式-C(=O)-NR8 R9 之基團，其中R8 為氫，R9 為氫，n、AK、Cys、G、L1 、B、L2 、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)、(XXXa)及(XXXI)化 合物，其中D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫或甲基，R2 為異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、苯基、苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、4-羥基-3-硝基苄基、4-羥基-3-胺基苄基、1-苯基乙基、二苯甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取 代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，且n、AK、Cys、G、L1 、B、L2 及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)、(XXXa)及(XXXI)化合物，其中D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基， 或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，且n、AK、Cys、G、L1 、B、L2 及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)、(XXXa)及(XXXI)化合物，其中R35 為羥基， 且n、AK、Cys、G、L1 、B、L2 、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(Ia)、(XXXa)及(XXXI)化合物，其中R35 為甲基，且n、AK、Cys、G、L1 、B、L2 、D及R35 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中特佳的亦為式(XXXa)化合物，其中Cys為經由側基之硫原子經由琥珀醯亞胺之碳原子鍵接之L-半胱胺酸殘基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為式(I)及(XXX)化合物，其中D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫， R2 為苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R6 為氫、羥基或苄氧基，n、AK、Cys、G、L1 、L2 及B具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中特佳的亦為式(I)及(XXX)化合物，其中D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1 及R2 與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團
其中#4 係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5 係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之雜環
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置， n、AK、Cys、G、L1 、L2 及B具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明中其他特佳的主題為式(I)化合物，其中D為下式之基團
其中T1 為-C(=O)-OH或-C(=O)-NH2 且n，AK，G，L1 ，B，L2 ，#3 ，R3 及R4 具有如上所示之定義。
於本發明內文中較佳者亦為式(I)化合物，其中n=1-20，更佳地n=1-10且非常佳地n=2-8。
於本發明內文中較佳者亦為式(I)及(XXX)化合物，其中B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵，n、AK、Cys、G、L1 、L2 、D、R16 及R17 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中特佳的亦為式(I)及(XXX)化合物，其中B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 及L4 為一鍵，n、AK、Cys、G、L1 、L2 、D、R16 及R17 具有如上所示之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為通式(I)之結合劑-藥物接合物，其中AK為AK1 ，其中AK1 為結合劑，其係經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接，G為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置， #2 係標示與L1 基團之連接位置，L1 為一鍵、直鏈(C1 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中m為由2至6之數字，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C1 -C10 )-亞烷基可經1至4個甲基取代基取代，及其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或(C2 -C4 )-亞烷基， L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為氫或甲基，Q1 為4-至7-員雜環，R14 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R15 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R14 及R15 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，R16 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R17 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一5-或6-員雜環，L2 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置， 其中(C2 -C10 )-亞烷基可經1至4個甲基取代基取代及其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中較佳者亦為通式(I)之結合劑-藥物接合物，其中AK為AK2 ，其中AK2 為結合劑，其係經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接，G為羰基，L1 為一鍵、直鏈(C1 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中m為由2至6之數字，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C1 -C10 )-亞烷基可經1至4個甲基取代基取代，且其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環 烷基環或苯基環，B為一鍵或下式之基團 其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，P為O或NH，Q2 為3-至7-員碳環或4-至7-員雜環，R18 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R19 為氫或或天然α-胺基酸或其類似物或異構物之側基，R20 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R19 及R20 與其相鍵接之原子一起形成一吡咯啶基環，R21 為氫或(C1 -C4 )-烷基，R22 為氫或(C1 -C4 )-烷基，或R21 及R22 與其相鍵接之原子一起形成一3-至7-員碳環， R23 為(C1 -C4 )-烷基，R24 為氫或(C1 -C4 )-烷基，L2 為直鏈(C2 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，其中(C2 -C10 )-亞烷基可經1至4個甲基取代基取代，及其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中特佳的亦為通式(I)之結合劑-藥物接合物，其中n為由2至8之數字，AK為AK1 或AK2 ，其中AK1 為與C4.4a結合及經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接之人類或人源化抗體或抗原結合抗體片段，AK2 為與C4.4a結合及經由結合劑之離胺酸殘基的NH 側基與G基團鍵接之人類或人源化抗體或抗原結合抗體片段，G於當AK=AK1 時，為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，或G於當AK=AK2 時，為羰基，L1 為一鍵、直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中m為數字2或3，##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C2 -C6 )-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵或下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵或乙烷-1,2-二基，L4 為一鍵或下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為甲基，R28 為氫、甲基羰基或第三丁氧基羰基，Q1 為哌啶-1,4-二基，R16 為氫或甲基，R17 為氫或甲基，或R16 及R17 與其相鍵接之原子一起形成一哌基環， R21 為氫或甲基，R22 為氫或甲基，或R21 及R22 與其相鍵接之原子一起形成一環丙基環，R23 為甲基，R24 為氫，L2 為直鏈(C2 -C6 )-亞烷基或下式之基團
其中p為由2至6之數字，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，A環與存於其中之N-O基為
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R3 為氫，R4 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，T1 為式-C(=O)-NR8 R9 之基團，R8 為氫或甲基，R9 為氫、甲基或乙基，R35 為甲基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中特佳者為通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由2至8之數字，較佳為2至5，AK為AK1 ，其中AK1 為與C4.4a結合及經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接之人類或人源化抗體或抗原結合抗體片段，G為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，L1 為戊烷-1,5-二基，B為下式之基團
其中＊ 係標示與L1 之連接位置，＊＊ 係標示與L2 之連接位置，L3 為一鍵，L4 為一鍵，R16 為氫，R17 為氫，L2 為丙烷-1,3-二基，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫， R2 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，A環與存於其中之N-O基為
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R3 為氫，R4 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，T1 為式-C(=O)-NR8 R9 之基團，R8 為氫，R9 為氫，R35 為甲基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中特佳者為式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由2至8之數字，較佳為2至5，AK為AK1 ，其中AK1 為與C4.4a結合及經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接之人類或人源化抗體或抗原結合抗體片段，G為下式之基團
其中#1 係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2 係標示與L1 基團之連接位置，L1 為一鍵，B為一鍵，L2 為己烷-1,6-二基，且D具有如上所述之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中特佳者為式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由2至8之數字，較佳為2至5，AK為AK2 ，其中AK2 為與C4.4a結合及經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接之人類或人源化抗體或抗原結合抗體片段，G為羰基，L1 為一鍵，B為一鍵，L2 為戊烷-1,5-二基，D為下式之基團
其中#3 係標示與氮原子之連接位置，R1 為氫，R2 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，A環與存於其中之N-O基為
其中#6 係標示與羰基基團之連接位置，R3 為氫，R4 為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，T1 為式-C(=O)-NR8 R9 之基團，R8 為氫，R9 為氫，R35 為甲基，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中特佳者為式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由2至8之數字，較佳為2至5， AK為AK2 ，其中AK2 為與C4.4a結合及經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接之人類或人源化抗體或抗原結合抗體片段，G為羰基，L1 為一鍵，B為一鍵，L2 為下式之基團
其中p為數字3，##3 係標示與B基團之連接位置，##4 係標示與氮原子之連接位置，且D具有如上所述之定義，以及其鹽類、溶劑合物及鹽類之溶劑合物。
於本發明內文中特佳者亦為選自下列化合物之藥物-結合劑接合物：
其中，在各例中n為由2至8之數字，較佳為2至5，AK1 為與C4.4a結合及經由結合劑之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團鍵接之人類或人源化抗體或抗原結合抗體片段，且AK2 為與C4.4a結合及經由結合劑之離胺酸殘基的NH側基與G基團鍵接之人類或人源化抗體或抗原結合抗體片段。
於本發明內文中更特佳的亦為選自下列化合物之結合劑-藥物接合物：
其中，在各例中n為由2至8之數字，較佳為2至5，AK為與C4.4a結合之人類或人源化抗體或抗原結合抗體片段。
於這些式子中，AK1F ，AK1B 及AK2B 可被其他人類或人源化抗-C4.4a抗體所代替。
於本發明內文中更特佳的為選自下列化合物之結合劑-藥物接合物：
其中n為由2至8之數字，較佳為2至5，且AK1 為與C4.4a結合及經由半胱胺酸殘基與帶毒體-連接子單位鍵接之人類或人源化抗體或抗原結合抗 體片段，AK2 為與C4.4a結合及經由離胺酸殘基與帶毒體-連接子單位鍵接之人類或人源化抗體或抗原結合抗體片段。
於本發明內文中更特佳者為選自下列化合物之結合劑-藥物接合物：
其中n為由2至8之數字，較佳為2至5，且AK1B 及AK2B 為B01-3。
於各別的基團組合或較佳的組合中個別所指之基團定義亦可任意以其他組合，所指之獨立的各別基團組合來取代。
尤其佳者為二或多種上述較佳範圍之組合。
本發明另外亦提供製備式(Ia)之本發明化合物的方法，其特徵在於將結合劑溶液(宜於緩衝液，例如PBS緩衝液中)[A]與適當還原劑，例如二硫蘇糖醇或叁(2-羧乙基)膦鹽酸鹽掺合，隨即與式(IIa)化合物反應 其中D、L1 、B、L2 及R35 各自具有如上所示之定義，得到式(I-A)化合物 其中n、AK2 、D、L1 、B、L2 及R35 各自具有如上所示之定義，或[B]與式(IIIa)化合物反應 其中D、L1 、B、L2 及R35 各自具有如上所示之定義，得到式(Ia-B)化合物 其中n、AK2 、D、L1 、B、L2 及R35 各自具有如上所示之定義。
本發明另外亦提供製備式(I)之本發明化合物的方法，其特徵在於將溶解於PBS緩衝液之結合劑溶液[A]與適當還原劑，例如二硫蘇糖醇或叁(2-羧乙基)膦鹽酸鹽掺合，隨即與式(II)化合物反應 其中D、L1 、B和L2 各自具有如上所示之定義，得到式(I-A)化合物 其中n、AK1 、D、L1 、B和L2 各自具有如上所示之定義，或[B]與式(III)化合物反應 (III)，其中D、L1 、B及L2 各自具有如上所示之定義，得到式(I-B)化合物 其中n、AK2 、D、L1 、B及L2 各自具有如上所示之定義。
半胱胺酸偶合：
抗體的部分還原以及隨即將(部分)還原之抗體與式(II)或(IIa)化合物接合係依照熟悉技藝者已知之方法來進行，例如，參見，如Ducry等人，Bioconj.Chem.2010，21，5和此文中之參考文獻，Klussman等人，Bioconj.Chem.2004，15(4)，765-773。此抗體緩和的還原反應較佳的係藉由加入2-6當量TCEP至抗體中，該TCEP係存在於適合緩衝溶液中，較佳為磷酸緩衝液，並在介於15及40℃的溫度，較佳於室溫下藉由攪拌30-180分鐘來進行。接著，將含式(II)或(IIa)化合物於DMSO、乙腈或DMF之溶液添加至含(部分)還原抗體於PBS緩衝液之溶液中，且隨即於0℃至+40℃的溫度下，更特別為+10℃至+30℃，反應30分鐘至6小時期間，更特別為1至2小時，進行接合。
離胺酸偶合：
首先，以習用的胜肽化學法製備式(III)或(IIa)化合物或相當的活化羧基組成份。然後將其置於惰性溶劑例如DMSO或DMF中處理，並加至抗體中，抗體較佳係存在中性pH之磷酸緩衝液中。將溶液於介於15至40℃之溫度，較佳為RT下，攪拌1-16小時。
上述製備方法係藉由實例使用下列流程(流程1及2)來說明：
[a)：1. AK(抗體)，TCEP，PBS緩衝液，RT；2.加入於DMSO中之馬來醯亞胺衍生物、RT]。
流程2
[a)：AK(抗體)，PBS緩衝液，RT與連接子-藥物組成份之活化的羧基衍生物掺合]。
式(II)化合物，其中L1 及B為一鍵，其製法係藉由將式(IV)化合物 其中D具有如上所示之定義，於惰性溶劑中與式(V)化合物進行還原性胺化作用 其中L2A 具有L2 之如上定義，但在烷基鏈長度上少一個碳原子，PG1 為胺基-保護基團，例如(9H-茀-9-基甲氧基)羰基、第三丁氧基羰基或苄氧基羰基，而得到式(VI)化合物 其中D、L2 及PG1 具有如上所示之定義，藉由熟悉技藝者所已知之方法由該化合物移除PG1 保護基團，並將去保護之化合物於惰性溶劑中，於適當鹼之存在下與2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯反應，而得到式(II-A)化合物 其中D及L2 各自具有如上所示之定義。
式(II)化合物，其中B為式(B1 )之基團 其中＊ 、＊＊ 、R14 及R15 各自具有如上所示之定義，可藉由熟悉技藝者所已知之方法由式(VI)化合物移除PG1 保護基團，並將去保護之化合物於惰性溶劑中，於適當鹼之存在下與式(VII)化合物反應 其中L1 具有如上所示之定義，而得到式(II-B)化合物 其中D、L1 及L2 各自具有如上所示之定義。
式(II)化合物，其中B為式(B2 )之基團 其中＊ 、＊＊ 、L3 、R16 及R17 各自具有如上所示之定義，其製備係藉由將式(IV)化合物於惰性溶劑中與式(VIII)化合物進行還原性胺化作用 其中L2A 具有L2 如上所示之定義，但在烷基鏈長度上少一個碳原子，而得到式(IX)化合物 其中D及L2 具有如上所示之定義，並將此化合物於惰性溶劑中，於適當偶合劑及適當鹼之存在下與式(X)化合物反應 其中L1 及L3 各自具有如上所示之定義，而得到式(II-C)化合物 其中D、L1 、L2 及L3 各自具有如上所示之定義。
式(II)化合物，其中B為式(B3 )之基團 其中＊ 、＊＊ 、L3 、R16 及R17 各自具有如上所示之定義且L4A 為下式之基團
其中＊＊＊ 係標示與羰基基團之連接位置，＊＊＊＊ 係標示與L2 之連接位置，R25 為氫或甲基，係藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適當鹼及適當偶合劑之存在下與式(XI-A)或(XI-B)化合物反應來製備， 其中R25 及PG1 各自具有如上所示之定義，且PG2 為適當羧基-保護基團，更特別為苄基，而得到式(XII-A)或(XII-B)化合物 或 其中D、PG1 、PG2 及L2 具有如上所示之定義，隨即用熟悉技藝者所已知之方法由該化合物移除PG2 保護基團，並將去保護之化合物於惰性溶劑中，於適當偶合劑及適當鹼之存在下與式(X)化合物反應，且最後以熟悉技藝者所已知之方法由該化合物移除PG1 保護基團，而得到式(II-D-A)或(II-D-B)化合物 或 其中D、L1 、L2 及L3 具有如上所示之定義。
式(II)化合物，其中B為式(B4 )之基團 其中＊ 、＊＊ 各自具有如上所示之定義，且Q1A 為N-連接的4-至7-員雜環，可藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適當鹼及適當偶合劑之存在下與式(XXI)化合物反應來製備， 其中PG1 及Q1A 各自具有如上所示之定義，而得到式(XXII)化合物 其中PG1 、Q1A 、D及L2 具有如上所示之定義，藉由熟悉技藝者所已知之方法由該化合物移除PG1 保護基團且隨即將去保護之化合物於惰性溶劑中，於適當偶合劑及適當鹼之存在下與式(XXIII)化合物反應 其中L1 具有如上所示之定義，而得到式(II-D)化合物 其中Q1A 、D、L1 及L2 具有如上所示之定義。
式(III)化合物，其中L1 及B為一鍵，可藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適當偶合劑及適當鹼之存在下與N-羥基琥珀醯亞胺反應來製備，而得到式(III-A)化合物 其中D及L2 各自具有如上所示之定義。
式(III)化合物，其中L1 為一鍵且B為式(B5A )之基團 其中＊ 、＊＊ 及P各自具有如上所示之定義，且Q2A 為3-至7-員碳環，可藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適當偶合劑及適當鹼之存在下與式(XIII)化合物反應來製備 其中P、Q2A 及PG2 各自具有如上所示之定義，而得到式(XIV)化合物 其中D、P、Q2A 、L2 及PG2 各自具有如上所示之定義，藉由熟悉技藝者所已知之方法由該化合物移除PG2 保護基團，且隨即將去保護之化合物於惰性溶劑中，於適當鹼之存在下與N-羥基琥珀醯亞胺反應，而得到式(III-B)化合物 其中D、P、Q2A 及L2 各自具有如上所示之定義。
式(III)化合物，其中L1 為一鍵且B為式(B6 )之基團 其中＊ 、＊＊ 、R18 、R19 及R20 各自具有如上所示之定義，可藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適當偶合劑及適當鹼之存在下與式(XV)化合物反應來製備 其中R18 、R19 、R20 及PG2 各自具有如上所示之定義，而得到式(XVI)化合物 其中D、R18 、R19 、R20 、L2 及PG2 各自具有如上所示之定義，藉由熟悉技藝者所已知之方法由該化合物移除PG2 保護基團，且隨即將去保護之化合物於惰性溶劑中，於適當偶合劑及適當鹼之存在下與N-羥基琥珀醯亞胺反應，而得到式(III-C)化合物 其中D、R18 、R19 、R20 及L2 各自具有如上所示之定義。
式(III)化合物，其中L1 為一鍵且B為式(B7 )之基團 其中＊ 、＊＊ 、R21 及R22 各自具有如上所示之定義，可藉由熟悉技藝者所已知之方法由式(VI)化合物移除PG1 保護基團並將所產生的去保護化合物於惰性溶劑中，於適當鹼之存在下與式(XVII)化合物反應來製備 其中R21 及R22 各自具有如上所示之定義，而得到式(III-D)化合物 其中D、R21 、R22 及L2 各自具有如上所示之定義。
式(III)化合物，其中B為式(B8 )之基團 其中＊ 、＊＊ 、R23 及R24 各自具有如上所示之定義，可藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適當偶合劑及 適當鹼之存在下與式(XVIII)反應來製備 其中R23 、R24 及PG1 各自具有如上所示之定義，而得到式(XIX)化合物 其中D、R23 、R24 、L2 及PG1 各自具有如上所示之定義，藉由熟悉技藝者所已知之方法由該化合物移除PG1 保護基團，且隨即將去保護之化合物於惰性溶劑中，於適當偶合劑及適當鹼之存在下與式(XX)化合物反應 其中L1A 為直鏈(C1 -C10 )-亞烷基或下式之基團
其中m為由2至6之數字， ##1 係標示與G基團之連接位置，##2 係標示與B基團之連接位置，其中(C1 -C10 )-亞烷基可經1至4個甲基取代基取代，及其中亞烷基鏈相互為1,2、1,3或1,4關係的二個碳原子，連同任何在其間的碳原子可經橋聯，形成一(C3 -C6 )-環烷基環或苯基環，而得到式(III-E)化合物 其中D、R23 、R24 、L1A 及L2 各自具有如上所示之定義。
式(III)化合物，其中B為式(B5B )之基團 其中＊ 及＊＊ 各自具有如上所示之定義，且Q2B 為N-連接的4-至7-員雜環，可藉由將式(IX)化合物於惰性溶劑中，於適當鹼及適當偶合劑之存在下與式(XXIV)化合物反應來製備 其中PG1 及Q2B 各自具有如上所示之定義，而得到式(XXV)化合物 其中PG1 、Q2B 、D及L2 具有如上所示之定義，藉由熟悉技藝者所已知之方法由該化合物移除PG1 保護基團，且隨即將去保護之化合物於惰性溶劑中，於適當鹼之存在下與式(XX)化合物轉變為式(III-F)化合物 其中Q2B 、D、L1A 及L2 各自具有如上所示之定義。
(IV)+(V)→(VI)及(IV)+(VIII)→(IX)之反應係在習用於還原性胺化作用及於反應條件下為惰性的溶劑中，任意的在酸 及/或脫水劑作為催化劑之存在下來進行。此等溶劑包括，例如醇類如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇或第三丁醇，醚類如四氫呋喃、1,4-二烷、1,2-二甲氧基乙烷或二(2-甲氧基乙基)醚，或其他溶劑例如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、N,N-二甲基甲醯胺或水。亦可使用這些溶劑之混合物。較佳係使用1,4-二烷/水混合物作為溶劑，添加醋酸或稀鹽酸作為催化劑。
適用於此反應之還原劑，特言之，為絡合之氫硼化物，例如氫硼化鈉、氰基氫硼化鈉、三乙醯氧基氫硼化鈉、四正丁基氫硼化銨或硼烷-吡啶絡合物。較佳係使用氰基氫硼化鈉或硼烷-吡啶絡合物。
(IV)+(V)→(VI)及(IV)+(VIII)→(IX)之反應一般係在0℃至+120℃之溫度範圍內，較佳於+50℃至+100℃下進行。反應可於大氣壓、升高或降低的壓力(例如0.5至5巴)下進行；通常係於大氣壓下操作。
上述偶合反應(IX)+(X)→(II-C)、(XII-A)或(XII-B)+(X)→(II-D-A)或(II-D-B)、(IX)+(XIII)→(XIV)、(IX)+(XV)→(XVI)及(XXII)+(XXIII)→(II-D)(分別由胺組成份及羧酸組成份形成醯胺)係以標準胜肽化學法來進行[參見，例如M.Bodanszky，Principles of peptide Synthesis，Springer-Verlag，Berlin，1993；M.Bodanszky及A.Bodanszky，The Practice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，Berlin，1984；H.-D.Jakubke及H.Jeschkeit，aminosäuren，peptide，Proteine，Verlag Chemie，Weinheim， 1982]。
用於這些偶合反應之惰性溶劑的實例為醚類，例如乙醚、異丙醚、第三丁基甲基醚、四氫呋喃、1,4-二烷、1,2-二甲氧基乙烷或二(2-甲氧基乙基)醚，烴類例如苯、甲苯、二甲苯、戊烷、己烷、庚烷、環己烷或石油餾份，鹵化烴類例如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1,2-二氯乙烷、三氯乙烷或氯苯，或偶極性-非質子溶劑例如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、醋酸乙酯、吡啶、二甲亞碸(DMSO)、N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、N,N-二甲基乙醯胺(DMA)、N,N'-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯啶酮(NMP)。亦可使用這些溶劑之混合物。較佳係使用N,N-二甲基甲醯胺。
用於這些偶合反應之適當活化/縮合劑包括碳化二亞胺例如N,N'-二乙基-、N,N'-二丙基-、N,N'-二異丙基-、N,N'-二環己基碳化二亞胺(DCC)或N-(3-二甲基胺基異丙基)-N'-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)、光氣衍生物例如N,N'-羰基二咪唑(CDI)或氯甲酸異丁酯、1,2-唑鎓化合物例如2-乙基-5-苯基-1,2-唑鎓3-硫酸鹽或2-第三丁基-5-甲基異唑鎓過氯酸鹽、醯基胺基化合物例如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氫喹啉，磷化合物例如丙烷膦酸酐、氰基磷酸二乙酯、雙(2-側氧基-3-唑啶基)磷醯氯、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基胺基)六氟磷酸鏻或苯并三唑-1-基氧基三(吡咯啶并)六氟磷酸鏻(PyBOP)或化合物例如O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基四氟硼酸(TBTU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HBTU)、2-(2-側氧基-1-(2H)-吡啶 基)-1,1,3,3-四甲基四氟硼酸(TPTU)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)或O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基四氟硼酸(TCTU)，視需要與其他佐劑例如1-羥基苯并三唑(HOBt)或N-羥基琥珀醯亞胺(HOSu)組合，以及和鹼、鹼金屬碳酸鹽，例如碳酸鈉或鉀，或四級胺鹼例如三乙胺、N-甲基嗎福啉、N-甲基哌啶、N,N-二異丙基乙胺、吡啶或4-N,N-二甲基胺基吡啶組合。
於本發明內文中，用於此等偶合反應之活化/縮合劑較佳係使用N-(3-二甲基胺基異丙基)-N'-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)與1-羥基苯并三唑(HOBt)及N,N-二異丙基乙胺之組合，或O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)同樣與N,N-二異丙基乙胺組合。
偶合反應(IX)+(X)→(II-C)、(XII-A)或(XII-B)+(X)→(II-D-A)或(II-D-B)、(IX)+(XIII)→(XIV)、(IX)+(XV)→(XVI)及(XXII)+(XXIII)→(II-D)一般係於-20℃至+60℃的溫度範圍內進行，較佳為0℃至+40℃。此等反應可於大氣壓、升高或降低的壓力下進行(例如0.5至5巴)；其通常係於大氣壓下操作。
酯化作用(IX)+(XVIII)→(XII)及(IX)+(XI-A)或(XI-B)→(XII-A)或(XII-B)、(IX)+(XXIV)→(XXV)以及(IX)+(XXI)→(XXII)同樣地係於上述醯胺偶合反應中進行。這些反應較佳係於二氯甲烷中，使用N-(3-二甲基胺基異丙基)-N'-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及4-二甲基胺基吡啶，於+50℃至100℃的溫度，在大氣壓下進行。
視需要存在於化合物中之官能性基團-例如，特別是胺基、羥基和羧基基團-如果有用或需要，於上述處理步驟期間可以暫時性保護之形式存在。在這些情況下，此等保護基團可依照胜肽化學已知之習用方法來導入及移除[參見，例如T.W.Greene and P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，Wiley，New York，1999；M.Bodanszky及A.Bodanszky，The Practice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，Berlin，1984]。當有二或多個保護基團存在時，其可視需要同時於一單一容器反應中再次釋放，或另外以分開的反應再次釋出。
較佳係使用第三丁氧基羰基(Boc)、苄氧基羰基(Z)或(9H-茀-9-基甲氧基)羰基(Fmoc)作為PG1 胺基-保護基團；就羥基或羧基功能基，較佳係使用第三丁基或苄基作為PG2 保護基團。移除第三丁基或第三丁氧基羰基基團典型地係以強酸，例如鹽酸、氫溴酸或三氟醋酸，於惰性溶劑例如乙醚、1,4-二烷、二氯甲烷或醋酸中處理來進行；此反應視需要亦可於未添加惰性溶劑下進行。在以苄基或苄氧基羰基作為保護基團的情況下，此基團較佳係以氫解作用，於適當鈀催化劑例如披鈀活性碳之存在下移除。(9H-茀-9-基甲氧基)羰基基團一般係使用二級胺鹼例如二乙胺或哌啶來移除。
(VI)→(II-A)反應係於其在反應條件下為惰性之溶劑中進行，例如醚類如四氫呋喃、1,4-二烷、1,2-二甲氧基乙烷或二(2-甲氧基乙基)醚，醇類如甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇或第三丁醇，或偶極性-非質子溶劑例如丙酮、甲基乙基酮、 乙腈、醋酸乙酯、吡啶、二甲亞碸(DMSO)、N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、N,N-二甲基乙醯胺(DMA)、N,N'-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯啶酮(NMP)或水。亦可使用這些溶劑之混合物。較佳係使用1,4-二烷和水之混合物。
用於(VI)→(II-A)反應之適當鹼為，例如鹼金屬碳酸鹽例如碳酸鉀、碳酸鈉或碳酸鋰，鹼金屬碳酸氫鹽例如碳酸氫鈉或碳酸氫鉀，或鹼金屬烷醇類例如甲醇鈉、乙醇鈉或第三丁醇鉀。較佳係使用碳酸氫鈉。
(VI)→(II-A)反應係於0℃至+50℃的溫度範圍內進行，較佳為+10℃至+30℃。此等反應可於大氣壓、升高或降低的壓力下進行(例如0.5至5巴)；其通常係於大氣壓下操作。
(VI)+(VII)→(II-B)反應係在其於反應條件下為惰性之溶劑中進行，例如醚類如四氫呋喃、1,4-二烷、1,2-二甲氧基乙烷或二(2-甲氧基乙基)醚，醇類如甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇或第三丁醇，或偶極性-非質子溶劑例如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、醋酸乙酯、吡啶、二甲亞碸(DMSO)、N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、N,N-二甲基乙醯胺(DMA)、N,N'-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯啶酮(NMP)或水。亦可使用這些溶劑之混合物。較佳係使用DMF。
用於(VI)+(VII)→(II-B)之適當鹼為，例如四級胺鹼例如三乙胺、N-甲基嗎福啉、N-甲基哌啶、N,N-二異丙基乙胺、吡啶或4-N,N-二甲基胺基吡啶。較佳係使用N,N-二異丙基乙胺。
(VI)+(VII)→(II-B)反應係於0℃至+50℃的溫度範圍內 進行，較佳為+10℃至+30℃。此反應可於大氣壓、升高或降低的壓力下進行(例如0.5至5巴)；其通常係於大氣壓下操作。
(IX)→(III-A)、(XIV)→(III-B)及(XVI)→(III-C)，以及(VI)+(XVII)→(III-D)、(XIX)+(XX)→(III-E)及(XXV)+(XX)→(III-F)反應係在其於反應條件下為惰性之溶劑中進行。適當溶劑之實例為醚類，例如乙醚、異丙醚、第三丁基甲基醚、四氫呋喃醚、1,4-二烷醚、1,2-二甲氧基乙烷或二(2-甲氧基乙基)醚，烴類例如苯、甲苯、二甲苯、戊烷、己烷、庚烷、環己烷或石油餾份，鹵化烴類例如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1,2-二氯乙烷、三氯乙烷或氯苯，或偶極性-非質子溶劑例如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、醋酸乙酯、吡啶、二甲亞碸(DMSO)、N,N-二甲基甲醯胺(DMF)、N,N-二甲基乙醯胺(DMA)、N,N'-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯啶酮(NMP)。亦可使用這些溶劑之混合物。較佳係使用N,N-二甲基甲醯胺。
用於這些反應之適當鹼為，例如四級胺例如三乙胺、N-甲基嗎福啉、N-甲基哌啶、N,N-二異丙基乙胺、吡啶或4-N,N-二甲基胺基吡啶。較佳係使用N,N-二異丙基乙胺，視需要添加4-N,N-二甲基胺基吡啶。
(IX)→(III-A)、(XIV)→(III-B)及(XVI)→(III-C)，以及(VI)+(XVII)→(III-D)及(XIX)+(XX)→(III-E)反應係於0℃至+50℃的溫度範圍內進行，較佳為+10℃至+30℃。此等反應可於大氣壓、升高或降低的壓力下進行(例如0.5至5巴)； 其通常係於大氣壓下操作。
式(II)、(III)、(I-A)及(I-B)化合物分別為式(IIa)、(IIIa)、(Ia-A)及(Ia-B)化合物之次分量，其中R35 為甲基。式(IIa)及(IIIa)化合物之製備係類似如上述式(II)及(III)化合物之製備來進行。
上述方法係藉由下列合成流程(流程3至13、18)來舉例說明：
[a)：1.水/二烷、1N HCl、100℃；2. H2 、Pd/C、甲醇、RT；b)：NaHCO3 、H2 O、二烷、RT]。
[a)：二異丙基乙胺、DMF、RT]。
[a)：水/二烷、1N HCl、100℃；b)：HATU，二異丙胺、DMF、RT]。
[a)：1. EDCI、DMAP、二氯甲烷、RT；2. H2 、甲醇、RT；b)：1. EDCI、HOBt、二異丙胺、DMF、RT；2.二氯甲烷、RT]。
[a)：1. EDCI、DMAP、二氯甲烷、RT；2. H2 、甲醇、RT；b)：HATU、二異丙胺、DMF、RT]。
[a)：EDCI、二氯甲烷、RT]。
[a)：HATU、二異丙基乙胺、DMF、RT；2. H2 、甲醇、RT；b)：EDCI、DMAP、二氯甲烷、RT]。
[a)：1. HATU、二異丙基乙胺、DMF、RT；2.二氯甲烷、RT；b)：EDCI、DMAP、二氯甲烷、RT]。
[a)：二異丙基乙胺、DMF、RT]。
[a)：1. EDCI、DMAP、二氯甲烷、RT；2.二氯甲烷、RT；b)：二異丙胺、DMAP、二氯甲烷、RT]。
[a)：DMAP、二異丙胺、二氯甲烷、RT]。
[a)：1.水/二烷、1N HCl、100℃；2. H2 、Pd/C、甲醇、RT；b)：HATU、二異丙基乙胺、RT]。
式(IV)化合物可由市售胺基酸構件(building block)或該等已知於文獻中者(參見，例如Pettit等人，Synthesis 1996，719；Shioiri等人，Tetrahedron Lett.1991，32，931；Shioiri等人，Tetrahedron 1993，49，1913；Koga等人，Tetrahedron Lett.1991，32，2395；Vidal等人，Tetrahedron 2004，60，9715；Poncet等人，Tetrahedron 1994，50，5345.Pettit等人，J.Org.Chem.1994，59，1796)以類似於文獻中之已知方法，依照胜肽化學之習用方法及本發明實驗部分所述者來製備。下列之合成流程(流程14至16)係舉例來說明製備法。
[a)：羥基胺鹽酸鹽、KOH、MeOH、0℃→RT；b)：BrCH2 (CH2 )2 CH2 Br、K2 CO3 、丙酮、回流]。
[a)：1.二異丙基乙胺、BEP、二氯甲烷、-10℃→RT；2. MeOH]。
[a)：1.二異丙基乙胺、BEP、DMF、RT；2.二氯甲烷；b)：1. HATU、二異丙基乙胺、DMF、RT；2.二氯甲烷、RT；c)：1. HATU、二異丙基乙胺、DMF、RT；2.哌啶、DMF、RT]。
式(XI)、(XIII)、(XV)、(XVII)及(XXI)化合物包括，若適當其對掌或非對映異構物形式，可由文獻得知，或可藉由熟悉技藝者顯見之途徑，依類似文獻中公開的方法來製備。在實驗章節、製備起始化合物及中間體有關的章節中亦係指許 多製備起始物質之廣泛的教導以及文獻資料。
式(V)、(VII)、(VIII)、(X)、(XVIII)、(XX)及(XXIII)包括，若適當其對掌或非對映異構物形式，為市售或描述於文獻中，或其可藉由熟悉技藝者顯見之途徑，依類似文獻中公開的方法來製備。在實驗章節、製備起始化合物和中間體有關的章節中亦提出許多製備起始物質之廣泛的教導以及文獻資料。
另外，製備程序之個別步驟可依不同順序來進行。此項方式係於下列合成流程中舉例來說明(流程17、19及20)。
[a)：硼烷-吡啶絡合物、醋酸、MeOH；b)：1. HOBt、EDCI、 二異丙基乙胺、DMF、RT；2. TFA、二氯甲烷、RT；c)：HATU、二異丙基乙胺、DMF、RT；d)：1. Pd/C、MeOH、RT；2. NaHCO3 、二烷、水]。
[a)：1. HATU、二異丙基乙胺、DMF、RT；2. TFA、二氯甲烷、RT；3.((H3 C)3 C(C=O))2 O、DMF、二異丙基乙胺； b)：二異丙基乙胺、BEP、DMF、RT；c)：1. H2 、Pd/C(10%)、甲醇、RT；2. HATU、二異丙基乙胺、DMF、RT；3. TFA、二氯甲烷、RT]。
[a)：硼烷-吡啶絡合物、醋酸、MeOH；b)：1. HOBt、EDCI、二異丙基乙胺、DMF、RT；2. TFA、二氯甲烷、RT；c)：1. H2 、Pd/C、MeOH、RT；2. NaHCO3 、二烷、水；d)：HATU、二異丙基乙胺、DMF、RT；]。
於一個具體例中，結合劑係結合至存在於癌細胞上的標靶分子。於一個較佳具體例中，該結合劑係結合至癌標靶分子。
於另外較佳的具體例中，該標靶分子為選擇性癌標靶分子。
於特佳的一個具體例中，該標靶分子為蛋白質。
於一個具體例中，該標靶分子為胞外標靶分子。於較佳的一個具體例中，該胞外標靶分子為蛋白質。
癌標靶分子為熟悉技藝者所已知。其實例列出如下。
癌標靶分子之實例如下：
(1)EGF受體(NCBI參考序列NP_005219.2)
序列(1210個胺基酸)：>gi|29725609|ref|NP_005219.2|表皮生長因子受體異構型一前驅物[智人]
MRPSGTAGAALLALLAALCPASRALEEKKVCQGTSNKLTQLGTFEDHFLSLQRMFNNCEVVLGNLEITYVQRNYDLSFLKTIQEVAGYVLIALNTVERIPLENLQIIRGNMYYENSYALAVLSNYDANKTGLKELPMRNLQEILHGAVRFSNNPALCNVESIQWRDIVSSDFLSNMSMDFQNHLGSCQKCDPSCPNGSCWGAGEENCQKLTKIICAQQCSGRCRGKSPSDCCHNQCAAGCTGPRESDCLVCRKFRDEATCKDTCPPLMLYNPTTYQMDVNPEGKYSFGATCVKKCPRNYVVTDHGSCVRACGADSYEMEEDGVRKCKKCEGPCRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAV VSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPS IATGMVGALLLLLVVALGIGLFMRRRHIVRKRTLRRLLQERELVEPLTPSGEAPNQALLRILKETEFKKIKVLGSGAFGTVYKGLWIPEGEKVKIPVAIKELREATSPKANKEILDEAYVMASVDNPHVCRLLGICLTSTVQLITQLMPFGCLLDYVREHKDNIGSQYLLNWCVQIAKGMNYLEDRRLVHRDLAARNVLVKTPQHVKITDFGLAKLLGAEEKEYHAEGGKVPIKWMALESILHRIYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGSKPYDGIPASEISSILEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDADSRPKFRELIIEFSKMARDPQRYLVIQGDERMHLPSPTDSNFYRALMDEEDMDDVVDADEYLIPQQGFFSSPSTSRTPLLSSLSATSNNSTVACIDRNGLQSCPIKEDSFLQRYSSDPTGALTEDSIDDTFLPVPEYINQSVPKRPAGSVQNPVYHNQPLNPAPSRDPHYQDPHSTAVGNPEYLNTVQPTCVNSTFDSPAHWAQKGSHQISLDNPDYQQDFFPKEAKPNGIFKGSTAENAEYLRVAPQSSEFIGA
胞外區係以底線標示。
(2)間皮素(SwissProt參照號Q13421-3)
序列(622個胺基酸)：>sp|Q13421-3|MSLN_HUMAN間皮素之第2異構型OS=智人GN=MSLN
MALPTARPLLGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRTLAGETGQEAAPLDGVLANPPNISSLSPRQLLGFPCAEVSGLSTERVRELAVALAQKNVKLSTEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPLDLLLFLNPDAFSGPQACTRFFSRITKANVDLLPRGAPERQRLLPAALACWGVRGSLLSEADVRALGGLACDLPGRFVAESAEVLLPRLVSCPGPLDQDQQEAARAALQGGGPPYGPPSTWSVSTMDALRGLLPVLGQPIIRSIPQGIVAAWRQRSSRDPSWRQPERTILRPRFRREVEKTACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDELY PQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQVATLIDRFVKGRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDPRQLDVLYPKARLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRTDAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKAEERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLVLDLSMQEALSGTPCLLGPGPVLTVLALLLASTLA
間皮素係由胺基酸296-598所編碼。胺基酸37-286碼為“巨核細胞促進因子”。間皮素係被GPI錨固定在細胞膜中並侷限在胞外。
(3)碳酸酐酶IX(SwissProt參照號Q16790)
序列(459個胺基酸)：>sp|Q16790|CAH9_HUMAN碳酸酐酶9 OS=智人GN=CA9 PE=1 SV=2
MAPLCPSPWLPLLIPAPAPGLTVQLLLSLLLLVPVHPQRLPRMQEDSPLGGGSSGEDDPLGEEDLPSEEDSPREEDPPGEEDLPGEEDLPGEEDLPEVKPKSEEEGSLKLEDLPTVEAPGDPQEPQNNAHRDKEGDDQSHWRYGGDPPWPRVSPACAGRFQSPVDIRPQLAAFCPALRPLELLGFQLPPLPELRLRNNGHSVQLTLPPGLEMALGPGREYRALQLHLHWGAAGRPGSEHTVEGHRFPAEIHVVHLSTAFARVDEALGRPGGLAVLAAFLEEGPEENSAYEQLLSRLEEIAEEGSETQVPGLDISALLPSDFSRYFQYEGSLTTPPCAQGVIWTVFNQTVMLSAKQLHTLSDTLWGPGDSRLQLNFRATQPLNGRVIEASFPAGVDSSPRAAEPVQLNSCLAAGD ILALVFGLLFAVTSVAFLVQMRRQHRRGTKGGVSYRPAEVAETGA
胞外區係以底線標示。
(4)C4.4a(NCBI參考序列NP_055215.2；Synonym LYPD3)
序列(346個胺基酸)： >gi|93004088|ref|NP_055215.2|含ly6/PLAUR區域蛋白質3前驅物[智人]
MDPARKAGAQAMIWTAGWLLLLLLRGGAQALECYSCVQKADDGCSPNKMKTVKCAPGVDVCTEAVGAVETIHGQFSLAVRGCGSGLPGKNDRGLDLHGLLAFIQLQQCAQDRCNAKLNLTSRALDPAGNESAYPPNGVECYSCVGLSREACQGTSPPVVSCYNASDHVYKGCFDGNVTLTAANVTVSLPVRGCVQDEFCTRDGVTGPGFTLSGSCCQGSRCNSDLRNKTYFSPRIPPLVRLPPPEPTTVASTTSVTTSTSAPVRPTSTTKPMPAPTSQTPRQGVEHEASRDEEPRLTGGAAGHQDRSNSGQYPAKGGPQQPHNKGC VAPTAGLAALLLAVAAGVLL
成熟的胞外區係以底線標示。(SEQ ID NO：1).
(5)CD52(NCBI參考序列NP_001794.2)
>gi|68342030|ref|NP_001794.2|CAMPATH-1抗原前驅物[智人]
MKRFLFLLLTISLLVMVQIQTGLSGQNDTSQTSSPSASSNISGGIFLFFVANAIIHLFCFS
(6)Her2(NCBI參考序列NP_004439.2)
>gi|54792096|ref|NP_004439.2|受體酪胺酸-蛋白質激酶erbB-2異構型[智人]
MELAALCRWGLLLALLPPGAASTQVCTGTDMKLRLPASPETHLDMLRHLYQGCQVVQGNLELTYLPTNASLSFLQDIQEVQGYVLIAHNQVRQVPLQRLRIVRGTQLFEDNYALAVLDNGDPLNNTTPVTGASPGGLRELQLRSLTEILKGGVLIQRNPQLCYQDTILWKDIFHKNNQLALTLIDTNRSRACHPCSPMCKGSRCWGESSEDCQSLTRTVCAGGCARCKGPLPTDCCHEQCAAGCTGPKHSDCLACLHFNHSGICELHCPALVTYNTDTFESMPNPEGRYTFGASCVTACPYNYLSTDVGSCTLVCPLHNQEVTAEDGTQRCEKCSKPCARVCYGLGMEHLREVRAVTSANIQEFAGCKKIFGSLAFLPESFDGDPASNTAPLQPEQLQVFETLEEITGYLYISAWPDSLPDLSVFQNLQVIRGRILHNGAYSLTLQGLGISWLGLRSLRELGSGLALIHHNTHLCFVHTVPWDQLFRNPHQALLHTANRPEDECVGEGLACHQLCARGHCWGPGPTQCVNCSQFLRGQECVEECRVLQGLPREYVNARHCLP CHPECQPQNGSVTCFGPEADQCVACAHYKDPPFCVARCPSGVKPDLSYMPIWKFPDEEGACQPCPINCTHSCVDLDDKGCPAEQRASPLTSIISAVVGILLVVVLGVVFGILIKRRQQKIRKYTMRRLLQETELVEPLTPSGAMPNQAQMRILKETELRKVKVLGSGAFGTVYKGIWIPDGENVKIPVAIKVLRENTSPKANKEILDEAYVMAGVGSPYVSRLLGICLTSTVQLVTQLMPYGCLLDHVRENRGRLGSQDLLNWCMQIAKGMSYLEDVRLVHRDLAARNVLVKSPNHVKITDFGLARLLDIDETEYHADGGKVPIKWMALESILRRRFTHQSDVWSYGVTVWELMTFGAKPYDGIPAREIPDLLEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDSECRPRFRELVSEFSRMARDPQRFVVIQNEDLGPASPLDSTFYRSLLEDDDMGDLVDAEEYLVPQQGFFCPDPAPGAGGMVHHRHRSSSTRSGGGDLTLGLEPSEEEAPRSPLAPSEGAGSDVFDGDLGMGAAKGLQSLPTHDPSPLQRYSEDPTVPLPSETDGYVAPLTCSPQPEYVNQPDVRPQPPSPREGPLPAARPAGATLERPKTLSPGKNGVVKDVFAFGGAVENPEYLTPQGGAAPQPHPPPAFSPAFDNLYYWDQDPPERGAPPSTFKGTPTAENPEYLGLDVPV
(7)CD20(NCBI參考序列NP_068769.2)
>gi|23110987|ref|NP_068769.2|B-淋巴細胞抗原CD20[智人]
MTTPRNSVNGTFPAEPMKGPIAMQSGPKPLFRRMSSLVGPTQSFFMRESKTLGAVQIMNGLFHIALGGLLMIPAGIYAPICVTVWYPLWGGIMYIISGSLLAATEKNSRKCLVKGKMIMNSLSLFAAISGMILSIMDILNIKISHFLKMESLNFIRAHTPYINIYNCEPANPSEKNSPSTQYCYSIQSLFLGILSVMLIFAFFQELVIAGIVENEWKRTCSRPKSNIVLLSAEEKKEQTIEIKEEVVGLTETSSQPKNEEDIEIIPIQEEEEEETETNFPEPPQDQESSPIENDSSP
(8)淋巴細胞活化抗原CD30(SwissProt ID P28908)
>gi|68348711|ref|NP_001234.2|腫瘤凋亡因子受體超家族成員8異構型1前驅物[智人]
MRVLLAALGLLFLGALRAFPQDRPFEDTCHGNPSHYYDKAVRRCCYRCPMGLFPTQQCPQRPTDCRKQCEPDYYLDEADRCTACVTCSRDDLVEKTPCAWNSSRVCECRPGMFCSTSAVNSCA RCFFHSVCPAGMIVKFPGTAQKNTVCEPASPGVSPACASPENCKEPSSGTIPQAKPTPVSPATSSASTMPVRGGTRLAQEAASKLTRAPDSPSSVGRPSSDPGLSPTQPCPEGSGDCRKQCEPDYYLDEAGRCTACVSCSRDDLVEKTPCAWNSSRTCECRPGMICATSATNSRARCVPYPICAAETVTKPQDMAEKDTTFEAPPLGTQPDCNPTPENGEAPASTSPTQSLLVDSQASKTLPIPTSAPVALSSTGKPVLDAGPVLFWVILVLVVVVGSSAFLLCHRRACRKRIRQKLHLCYPVQTSQPKLELVDSRPRRSSTQLRSGASVTEPVAEERGLMSQPLMETCHSVGAAYLESLPLQDASPAGGPSSPRDLPEPRVSTEHTNNKIEKIYIMKADTVIVGTVKAELPEGRGLAGPAEPELEEELEADHTPHYPEQETEPPLGSCSDVMLSVEEEGKEDPLPTAASGK
(9)淋巴細胞黏附分子CD22(SwissProt ID P20273)
>gi|157168355|ref|NP_001762.2|B-細胞受體CD22異構型1前驅物[智人]
MHLLGPWLLLLVLEYLAFSDSSKWVFEHPETLYAWEGACVWIPCTYRALDGDLESFILFHNPEYNKNTSKFDGTRLYESTKDGKVPSEQKRVQFLGDKNKNCTLSIHPVHLNDSGQLGLRMESKTEKWMERIHLNVSERPFPPHIQLPPEIQESQEVTLTCLLNFSCYGYPIQLQWLLEGVPMRQAAVTSTSLTIKSVFTRSELKFSPQWSHHGKIVTCQLQDADGKFLSNDTVQLNVKHTPKLEIKVTPSDAIVREGDSVTMTCEVSSSNPEYTTVSWLKDGTSLKKQNTFTLNLREVTKDQSGKYCCQVSNDVGPGRSEEVFLQVQYAPEPSTVQILHSPAVEGSQVEFLCMSLANPLPTNYTWYHNGKEMQGRTEEKVHIPKILPWHAGTYSCVAENILGTGQRGPGAELDVQYPPKKVTTVIQNPMPIREGDTVTLSCNYNSSNPSVTRYEWKPHGAWEEPSLGVLKIQNVGWDNTTIACAACNSWCSWASPVALNVQYAPRDVRVRKIKPLSEIHSGNSVSLQCDFSSSHPKEVQFFWEKNGRLLGKESQLNFDSISPEDAGSYSCWVNNSIGQTASKAWTLEVLYAPRRLRVSMSPGDQVMEGKSATLTCESDANPPVSHYTWFDWNNQSLPYHSQKLRLEPVKVQHSGAYWCQGTNSVGKGRSPLSTLTVYYSPETIGRRVAVGLGSCLAILILAICGLKLQRRWKRTQSQQGLQENSSGQSFFVRNKKVRRAPLSEGPHSL GCYNPMMEDGISYTTLRFPEMNIPRTGDAESSEMQRPPPDCDDTVTYSALHKRQVGDYENVIPDFPEDEGIHYSELIQFGVGERPQAQENVDYVILKH
(10)骨髓細胞表面抗原CD33(SwissProt IDP20138 )
>gi|130979981|ref|NP_001763.3|骨髓細胞表面抗原CD33異構型1前驅物[智人]
MPLLLLLPLLWAGALAMDPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYWFREGAIISRDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMERGSTKYSYKSPQLSVHVTDLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHGAIGGAGVTALLALCLCLIFFIVKTHRRKAARTAVGRNDTHPTTGSASPKHQKKSKLHGPTETSSCSGAAPTVEMDEELHYASLNFHGMNPSKDTSTEYSEVRTQ
(11)跨膜糖蛋白NMB(SwissProt ID Q14956)
>gi|52694752|ref|NP_001005340.1|跨膜糖蛋白NMB異構型前驅物[智人]
MECLYYFLGFLLLAARLPLDAAKRFHDVLGNERPSAYMREHNQLNGWSSDENDWNEKLYPVWKRGDMRWKNSWKGGRVQAVLTSDSPALVGSNITFAVNLIFPRCQKEDANGNIVYEKNCRNEAGLSADPYVYNWTAWSEDSDGENGTGQSHHNVFPDGKPFPHHPGWRRWNFIYVFHTLGQYFQKLGRCSVRVSVNTANVTLGPQLMEVTVYRRHGRAYVPIAQVKDVYVVTDQIPVFVTMFQKNDRNSSDETFLKDLPIMFDVLIHDPSHFLNYSTINYKWSFGDNTGLFVSTNHTVNHTYVLNGTFSLNLTVKAAAPGPCPPPPPPPRPSKPTPSLATTLKSYDSNTPGPAGDNPLELSRIPDENCQINRYGHFQATITIVEGILEVNIIQMTDVLMPVPWPESSLIDFVVTCQGSIPTEVCTIISDPTCEITQNTVCSPVDVDEMCLLTVRRTFNGSGTYCVNLTLGDDTSLALTSTLISVPDRDPASPLRMANSALISVGCLAIFVTVISLLVYKKHKEYNPIENSPGNVVRSKGLSVFLNRAKAVFFPGNQEKDPLLKNQEFKGVS
(12)黏附分子CD56(SwissProt ID P13591)
>gi|94420689|ref|NP_000606.3|中性細胞黏附分子1異構型1[智人]
MLQTKDLIWTLFFLGTAVSLQVDIVPSQGEISVGESKFFLCQVAGDAKDKDISWFSPNGEKLTPNQQRISVVWNDDSSSTLTIYNANIDDAGIYKCVVTGEDGSESEATVNVKIFQKLMFKNAPTPQEFREGEDAVIVCDVVSSLPPTIIWKHKGRDVILKKDVRFIVLSNNYLQIRGIKKTDEGTYRCEGRILARGEINFKDIQVIVNVPPTIQARQNIVNATANLGQSVTLVCDAEGFPEPTMSWTKDGEQIEQEEDDEKYIFSDDSSQLTIKKVDKNDEAEYICIAENKAGEQDATIHLKVFAKPKITYVENQTAMELEEQVTLTCEASGDPIPSITWRTSTRNISSEEKTLDGHMVVRSHARVSSLTLKSIQYTDAGEYICTASNTIGQDSQSMYLEVQYAPKLQGPVAVYTWEGN
QVNITCEVFAYPSATISWFRDGQLLPSSNYSNIKIYNTPSASYLEVTPDSENDFGNYNCTAVNRIGQESLEFILVQADTPSSPSIDQVEPYSSTAQVQFDEPEATGGVPILKYKAEWRAVGEEVWHSKWYDAKEASMEGIVTIVGLKPETTYAVRLAALNGKGLGEISAASEFKTQPVQGEPSAPKLEGQMGEDGNSIKVNLIKQDDGGSPIRHYLVRYRALSSEWKPEIRLPSGSDHVMLKSLDWNAEYEVYVVAENQQGKSKAAHFVFRTSAQPTAIPANGSPTSGLSTGAIVGILIVIFVLLLVVVDITCYFLNKCGLFMCIAVNLCGKAGPGAKGKDMEEGKAAFSKDESKEPIVEVRTEEERTPNHDGGKHTEPNETTPLTEPEKGPVEAKPECQETETKPAPAEVKTVPNDATQTKENESKA
(13)表面分子CD70(SwissProt ID P32970)
>gi|4507605|ref|NP_001243.1|CD70抗原[智人]
MPEEGSGCSVRRRPYGCVLRAALVPLVAGLVICLVVCIQRFAQAQQQLPLESLGWDVAELQLNHTGPQQDPRLYWQGGPALGRSFLHGPELDKGQLRIHRDGIYMVHIQVTLAICSSTTASRHHPTTLAVGICSPASRSISLLRLSFHQGCTIASQRLTPLARGDTLCTNLTGTLLPSRNTDETFFGVQWVRP
(14)表面分子CD74(SwissProt ID P04233)
>gi|10835071|ref|NP_004346.1|HLA第II類組織相容性抗原γ鏈異構 型b[智人]
MHRRRSRSCREDQKPVMDDQRDLISNNEQLPMLGRRPGAPESKCSRGALYTGFSILVTLLLAGQATTAYFLYQQQGRLDKLTVTSQNLQLENLRMKLPKPPKPVSKMRMATPLLMQALPMGALPQGPMQNATKYGNMTEDHVMHLLQNADPLKVYPPLKGSFPENLRHLKNTMETIDWKVFESWMHHWLLFEMSRHSLEQKPTDAPPKESLELEDPSSGLGVTKQDLGPVPM
(15)B-淋巴細胞抗原CD19(SwissProt ID P15391)
>gi|296010921|ref|NP_001171569.1|B-淋巴細胞抗原CD19異構型1前驅物[智人]
MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLRRKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLGRAQRWAAGLGGTAPSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFYENDSNLGQDQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSPHGSAWDPSREATSLAGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPDGPDPAWGGGGRMGTWSTR
(16)表面蛋白質黏蛋白-1(mucin-1)(SwissProt ID P15941)
>gi|65301117|ref|NP_002447.4|黏蛋白-1異構型1前驅物[智人]
MTPGTQSPFFLLLLLTVLTVVTGSGHASSTPGGEKETSATQRSSVPSSTEKNALSTGVSFFFLSFHISNLQFNSSLEDPSTDYYQELQRDISEMFLQIYKQGGFLGLSNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGAGVPGWGIALLVLVCVLVALAIVYLIALAVCQCRRKNYGQLDIFPARDTYHPMSEYPTYHTHGRYVPPSSTDRSPYEKVSAGNGGSSLSYTNPAVAATSANL
(17)表面蛋白質CD138(SwissProt ID P18827)
>gi|29568086|ref|NP_002988.3|syndecan-1前驅物[智人]
MRRAALWLWLCALALSLQPALPQIVATNLPPEDQDGSGDDSDNFSGSGAGALQDITLSQQTPSTWKDTQLLTAIPTSPEPTGLEATAASTSTLPAGEGPKEGEAVVLPEVEPGLTAREQEATPRPRETTQLPTTHQASTTTATTAQEPATSHPHRDMQPGHHETSTPAGPSQADLHTPHTEDGGPSATERAAEDGASSQLPAAEGSGEQDFTFETSGENTAVVAVEPDRRNQSPVDQGATGASQGLLDRKEVLGGVIAGGLVGLIFAVCLVGFMLYRMKKKDEGSYSLEEPKQANGGAYQKPTKQEEFYA
(18)整合素αV(Genbank登錄號：NP_002201.1)
>gi|4504763|ref|NP_002201.1|整合素α-V異構型1前驅物[智人]
MAFPPRRRLRLGPRGLPLLLSGLLLPLCRAFNLDVDSPAEYSGPEGSYFGFAVDFFVPSASSRMFLLVGAPKANTTQPGIVEGGQVLKCDWSSTRRCQPIEFDATGNRDYAKDDPLEFKSHQWFGASVRSKQDKILACAPLYHWRTEMKQEREPVGTCFLQDGTKTVEYAPCRSQDIDADGQGFCQGGFSIDFTKADRVLLGGPGSFYWQGQLISDQVAEIVSKYDPNVYSIKYNNQLATRTAQAIFDDSYLGYSVAVGDFNGDGIDDFVSGVPRAARTLGMVYIYDGKNMSSLYNFTGEQMAAYFGFSVAATDINGDDYADVFIGAPLFMDRGSDGKLQEVGQVSVSLQRASGDFQTTKLNGFEVFARFGSAIAPLGDLDQDGFNDIAIAAPYGGEDKKGIVYIFNGRSTGLNAVPSQILEGQWAARSMPPSFGYSMKGATDIDKNGYPDLIVGAFGVDRAILYRARPVITVNAGLEVYPSILNQDNKTCSLPGTALKVSCFNVRFCLKADGKGVLPRKLNFQVELLLDKLKQKGAIRRALFLYSRSPSHSKNMTISRGGLMQCEELIAYLRDESEFRDKLTPITIFMEYRLDYRTAADTTGLQPILNQFTPANISRQAHILLDCGEDNVCKPKLEVSVDSDQKKIYIGDDNPLTLIVKAQNQGEGAYEAELIVSIPLQADFIGVVRNNEALARLSCAFKTENQTRQVVCDLGNPMKAGTQLLAGLRFSVHQQSEMDTSVKFDLQIQSSNLFDKVSPVVSHKVDLAVLAAVEIRGVSSPDHIFLPIPNWEHKENPETEEDVGPVVQHIYELRNNGPSSFSKAMLHLQWPYKYNNNTLLYILHYDIDGPMNCTSDMEINPLRIKISSLQTTEKNDTVAGQGERDHLITKRDLALSEGDIHTLGCGVAQCLKIVCQVGRLDRGKSAILYVKSLLWTETFMN KENQNHSYSLKSSASFNVIEFPYKNLPIEDITNSTLVTTNVTWGIQPAPMPVPVWVIILAVLAGLLLLAVLVFVMYRMGFFKRVRPPQEEQEREQLQPHENGEGNSET
(19)畸胎瘤衍生生長因子1蛋白質TDGF1(Genbank登錄號：NP_003203.1)
>gi|4507425|ref|NP_003203.1|畸胎瘤衍生生長因子1異構型1前驅物[智人]
MDCRKMARFSYSVIWIMAISKVFELGLVAGLGHQEFARPSRGYLAFRDDSIWPQEEPAIRPRSSQRVPPMGIQHSKELNRTCCLNGGTCMLGSFCACPPSFYGRNCEHDVRKENCGSVPHDTWLPKKCSLCKCWHGQLRCFPQAFLPGCDGLVMDEHLVASRTPELPPSARTTTFMLVGICLSIQSYY
(20)前列腺專一性膜抗原PSMA(Swiss Prot ID：Q04609)
>gi|4758398|ref|NP_004467.1|麩醯胺酸羧基肽酶2異構型1[智人]
MWNLLHETDSAVATARRPRWLCAGALVLAGGFFLLGFLFGWFIKSSNEATNITPKHNMKAFLDELKAENIKKFLYNFTQIPHLAGTEQNFQLAKQIQSQWKEFGLDSVELAHYDVLLSYPNKTHPNYISIINEDGNEIFNTSLFEPPPPGYENVSDIVPPFSAFSPQGMPEGDLVYVNYARTEDFFKLEFDMKINCSGKIVIARYGKVFRGNKVKNAQLAGAKGVILYSDPADYFAPGVKSYPDGWNLPGGGVQRGNILNLNGAGDPLTPGYPANEYAYRRGIAEAVGLPSIPVHPIGYYDAQKLLEKMGGSAPPDSSWRGSLKVPYNVGPGFTGNFSTQKVKMHIHSTNEVTRIYNVIGTLRGAVEPDRYVILGGHRDSWVFGGIDPQSGAAVVHEIVRSFGTLKKEGWRPRRTILFASWDAEEFGLLGSTEWAEENSRLLQERGVAYINADSSIEGNYTLRVDCTPLMYSLVHNLTKELKSPDEGFEGKSLYESWTKKSPSPEFSGMPRISKLGSGNDFEVFFQRLGIASGRARYTKNWETNKFSGYPLYHSVYETYELVEKFYDPMFKYHLTVAQVRGGMVFELANSIVLPFDCRDYAVVLRKYADKIYSISMKHPQEMKTYSVSFDSLFSAVKNFTEIASKFSERLQDFDKSNPIVLRMMNDQLMFLERAFIDPLGLPDRPFYRHVIYAPSSHNKYAGESFPGIYDALFDIESKVDPSKAWGEVKRQIYVAAFTVQAAAETLSEVA
(21)酪胺酸蛋白質激酶EPHA2(Swiss Prot ID：P29317)
>gi|32967311|ref|NP_004422.2|A型ephrin受體2前驅物[智人]
MELQAARACFALLWGCALAAAAAAQGKEVVLLDFAAAGGELGWLTHPYGKGWDLMQNIMNDMPIYMYSVCNVMSGDQDNWLRTNWVYRGEAERIFIELKFTVRDCNSFPGGASSCKETFNLYYAESDLDYGTNFQKRLFTKIDTIAPDEITVSSDFEARHVKLNVEERSVGPLTRKGFYLAFQDIGACVALLSVRVYYKKCPELLQGLAHFPETIAGSDAPSLATVAGTCVDHAVVPPGGEEPRMHCAVDGEWLVPIGQCLCQAGYEKVEDACQACSPGFFKFEASESPCLECPEHTLPSPEGATSCECEEGFFRAPQDPASMPCTRPPSAPHYLTAVGMGAKVELRWTPPQDSGGREDIVYSVTCEQCWPESGECGPCEASVRYSEPPHGLTRTSVTVSDLEPHMNYTFTVEARNGVSGLVTSRSFRTASVSINQTEPPKVRLEGRSTTSLSVSWSIPPPQQSRVWKYEVTYRKKGDSNSYNVRRTEGFSVTLDDLAPDTTYLVQVQALTQEGQGAGSKVHEFQTLSPEGSGNLAVIGGVAVGVVLLLVLAGVGFFIHRRRKNQRARQSPEDVYFSKSEQLKPLKTYVDPHTYEDPNQAVLKFTTEIHPSCVTRQKVIGAGEFGEVYKGMLKTSSGKKEVPVAIKTLKAGYTEKQRVDFLGEAGIMGQFSHHNIIRLEGVISKYKPMMIITEYMENGALDKFLREKDGEFSVLQLVGMLRGIAAGMKYLANMNYVHRDLAARNILVNSNLVCKVSDFGLSRVLEDDPEATYTTSGGKIPIRWTAPEAISYRKFTSASDVWSFGIVMWEVMTYGERPYWELSNHEVMKAINDGFRLPTPMDCPSAIYQLMMQCWQQERARRPKFADIVSILDKLIRAPDSLKTLADFDPRVSIRLPSTSGSEGVPFRTVSEWLESIKMQQYTEHFMAAGYTAIEKVVQMTNDDIKRIGVRLPGHQKRIAYSLLGLKDQVNTVGIPI
(22)表面蛋白質SLC44A4(Genbank Accession No：NP_001171515)
>gi|295849282|ref|NP_001171515.1|類膽鹼轉運子蛋白質4異構型2[智人]
MGGKQRDEDDEAYGKPVKYDPSFRGPIKNRSCTDVICCVLFLLFILGYIVVGIVAWLYGDPRQVLYPRNSTGAYCGMGENKDKPYLLYFNIFSCILSSNIISVAENGLQCPTPQTVITSLQQELCPSFLLPSAPALGRCFPWTNVTPPALPGITNDTTIQQGISGLIDSLNARDISVKIFEDFAQSWYWILVA LGVALVLSLLFILLLRLVAGPLVLVLILGVLGVLAYGIYYCWEEYRVLRDKGASISQLGFTTNLSAYQSVQETWLAALIVLAVLEAILLLMLIFLRQRIRIAIALLKEASKAVGQMMSTMFYPLVTFVLLLICIAYWAMTALYLATSGQPQYVLWASNISSPGCEKVPINTSCNPTAHLVNSSCPGLMCVFQGYSSKGLIQRSVFNLQIYGVLGLFWTLNWVLALGQCVLAGAFASFYWAFHKPQDIPTFPLISAFIRTLRYHTGSLAFGALILTLVQIARVILEYIDHKLRGVQNPVARCIMCCFKCCLWCLEKFIKFLNRNAYIMIAIYGKNFCVSAKNAFMLLMRNIVRVVVLDKVTDLLLFFGKLLVVGGVGVLSFFFFSGRIPGLGKDFKSPHLNYYWLPIMTSILGAYVIASGFFSVFGMCVDTLFLCFLEDLERNNGSLDRPYYMSKSLLKILGKKNEAPPDNKKRKK
(23)表面蛋白質BMPR1 B(SwissProt：O00238)
(24)轉運蛋白質SLC7A5(SwissProt：Q01650)
(25)上皮前列腺抗原STEAP1(SwissProt：Q9UHE8)
(26)卵巢癌抗原MUC16(SwissProt：Q8WXI7)
(27)轉運蛋白質SLC34A2(SwissProt：O95436)
(28)表面蛋白質質SEMA5b(SwissProt：Q9P283)
(29)表面蛋白質LYPD1(SwissProt：Q8N2G4)
(30)內皮受體B型EDNRB(SwissProt：P24530)
(31)環指蛋白質RNF43(SwissProt：Q68DV7)
(32)前列腺癌連結蛋白質STEAP2(SwissProt：Q8NFT2)
(33)陽離子通道TRPM4(SwissProt：Q8TD43)
(34)補體受體CD21(SwissProt：P20023)
(35)B-細胞抗原受體絡合物連結蛋白質CD79b(SwissProt：P40259)
(36)細胞黏附抗原CEACAM6(SwissProt：P40199)
(37)雙肽酶DPEP1(SwissProt：P16444)
(38)介白素受體IL2 0Ralpha(SwissProt：Q9UHF4)
(39)蛋白多糖BCAN(SwissProt：Q96GW7)
(40)ephrin受體EPHB2(SwissProt：P29323)
(41)前列腺幹細胞連結蛋白質PSCA(Genbank登錄號：NP_005663.2)
(42)表面蛋白質LHFPL3 (SwissProt：Q86UP9)
(43)受體蛋白質TNFRSF13C(SwissProt：Q96RJ3)
(44)B-細胞抗原受體絡合物連結蛋白質CD79a(SwissProt：P11912)
(45)受體蛋白質CXCR5(SwissProt：P32302)
(46)離子通道P2X5(SwissProt：Q93086)
(47)淋巴細胞抗原CD180(SwissProt：Q99467)
(48)受體蛋白質FCRL1(SwissProt：Q96LA6)
(49)受體蛋白質FCRL5(SwissProt：Q96RD9)
(50)MHC第II類分子Ia抗原HLA-DOB(Genbank登錄號：NP_002111.1)
(51)T-細胞蛋白質VTCN1(SwissProt：Q7Z7D3)。
於本發明較佳的一個主題中，癌標靶分子係由包含癌標靶分子(1)-(51)之群中選出。
在另外本發明特佳的主題中，結合劑係與由包含癌標靶分子(1)-(51)之群中選出之胞外癌標靶分子結合。
在另外本發明特佳的主題中，結合劑係專一性與由包含癌標靶分子(1)-(51)之群中選出之胞外癌標靶分子結合。
於本發明特佳的一個主題中，癌標靶分子係由包含下列 之群中選出：EGF受體(NP_005219.2)、間皮素(Q13421-3)、C4.4a(NP_055215.2)及羧酸酐酶IX(CA IX；NP_001207.2)，更特別為C4.4a(NP_055215.2)。
在另外本發明特佳的主題中，結合劑係與由包含下列之群中選出之胞外癌標靶分子結合：EGF受體(NP_005219.2)、間皮素(Q13421-3)、C4.4a(NP_055215.2)和羧酸酐酶IX(CA IX；Q16790)，更特別為C4.4a(NP_055215.2)。
在另外本發明特佳的主題中，結合劑係專一性與由包含下列之群中選出之胞外癌標靶分子結合：EGF受體(NP_005219.2)、間皮素(Q13421-3)、C4.4a(NP_055215.2)及羧酸酐酶IX(CA IX；Q16790)，更特別為C4.4a(NP_055215.2)。
於較佳的一個具體例中，結合劑在與其目標細胞上的胞外標靶分子結合後，因結合而被內化。此效應為結合劑-藥物接合物，其可為免疫接合物或ADC，被目標細胞吸收。
於一個具體例中，此結合劑為結合劑蛋白質。於較佳的一個具體例中，此結合劑為抗體、抗原結合抗體片段、多專一性抗體或抗體模擬物。
較佳的抗體模擬物有親和體(affibody)、adnectin、抗運載蛋白質(anticalin)、DARPin、高親和多聚體(avimer)。或奈米抗體(nanobodies)。較佳的多專一性抗體為雙專一性和三專一性抗體。
於較佳的一個具體例中，該結合劑為抗體、抗原結合抗體片段，更佳地分離的抗體或分離的抗原結合抗體片段。
較佳的抗原結合抗體片段為Fab、Fab’、F(ab’)2 及Fv片段、雙抗體、DAb、直鏈抗體及scFv。特佳地為Fab、雙抗體和scFv。
於特佳的一個具體例中，該結合劑為抗體。特佳地為單株抗體或其抗原結合抗體片段。另外特佳的為人類、人源化或嵌合抗體或其抗原結合抗體片段。
與癌標靶分子結合之抗體或抗原結合抗體片段可由本項技術之一般技藝者使用已知的方法，例如化學合成或重組表現來製備。癌標靶分子之結合劑可由市面取得或可由本項技術之一般技藝者，使用已知的方法，例如化學合成或重組表現來製備。另外製備抗體或抗原結合抗體片段之方法係描述於WO 2007/070538(參見第22頁“抗體”)。熟悉本項技術者已知如何匯集例如噬菌體表現庫(例如Morphosys HuCAL Gold)之方法及用於尋找抗體或抗原結合抗體片段(參見WO 2007/070538，第24頁ff及第70頁之實例，第72頁之實例2)。使用B細胞之DNA庫製備抗體之另外的方法係描述於，例如26頁(WO 2007/070538)。人源化抗體之方法係描述於WO2007070538之第30-32頁和詳細描述於Queen，等人，Pros.Natl.Acad.Sci.USA 86：10029-10033，1989或於WO 90/0786中。再者，用於一般蛋白質和特定抗體的重組表現方法已為熟悉本項技術者所知(參見，例如Berger和Kimrnel(Guide to Molecular Cloning Techniques，Methods in Enzymology，Vo1.152，Academic Press,Inc.)；Sambrook，等人，(Molecular Cloning：A Laboratory Manual，(Second Edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press；Cold Spring Harbor，N.Y.；1989)Vol.1-3)；Current Protocols in Molecular Biolony，(F.M.Ausabel等人[Eds.]，Current Protocols，Green Publishing Associates，Inc./John Wiley & Sons,Inc.)；Harlow等人，(MonocIonal Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press(19881，Paul[Ed.])；Fundamental Immunology，(Lippincott Williams & Wilkins(1998))；及Harlow，等人，(Using Antibodies：A Laboratory Manual，2007/070538(1998))。熟悉本項技藝者知道用於表現蛋白質/抗體所須之對應的載體、啟動子和訊息胜肽。一般性的方法亦描述於WO 2007/070538的第41-45頁。製備抗體之方法係描述於，例如WO 2007/070538之第74頁ff的實例6中。可於抗體與其抗原結合後，測量抗體內化之方法已為熟悉本項技藝者所了解並描述於例如WO 2007/070538之第80頁。熟悉本項技藝者能使用已用於製備碳酸酐酶IX(Mn)抗體之WO 2007/070538中所述的方法，來製備具有不同標靶分子專一性之抗體。
EGFR抗體
與癌標靶分子EGFR結合之抗體的實例為西妥昔單抗(cetuximab)(INN編號7906)、帕尼單抗(panitumumab)(INN編號8499)和尼妥珠單抗(nimotuzumab)(INN編號8545)。西妥昔單抗(藥物銀行登錄號DB00002)為於SP2/0小鼠骨髓瘤細胞中產生的嵌合抗-EGFR1 抗體並由ImClone Systems公司/Merck KgaA/Bristol-Myers Squibb公司所販售。西妥昔單 抗適於治療帶有野生型K-Ras基因之轉移性、EGFR表現的大腸直腸癌。其具有10-10 M之親和力。
序列：西妥昔單抗輕鏈(κ)：DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
西妥昔單抗重鏈：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
帕尼單抗(INN編號8499)(藥物銀行登錄號DB01269)為專一性與人類EGF受體1結合之重組的單株人類IgG2抗體，並由Abgenix/Amgen公司所販售。帕尼單抗係源自基因 轉殖小鼠(XenoMouse)之免疫接種。這些小鼠能製造人類免疫球蛋白(輕鏈及重鏈)。選擇產生抗EGFR抗體之專一性B-細胞選殖株，並將此選殖株以CHO細胞(中國倉鼠子宮細胞)無限增殖。將這些細胞用於製造100%人類抗體。帕尼抗體適用於治療對氟嘧啶(fluoropyrimidine)、奧沙利鉑(oxaliplatin)和伊立替康(irinotecan)之化學治療具抗藥性的EGFR-表現、轉移性大腸直腸癌。其具有10-11M之親和力。
序列：帕尼單抗輕鏈(kappa)：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYFCQHFDHLPLAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
帕尼單抗重鏈：QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGDYYWTWIRQSPGKGLEWIGHIYYSGNTNYNPSLKSRLTISIDTSKTQFSLKLSSVTAADTAIYYCVRDRVTGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
尼妥珠單抗(INN編號8545)(EP 00586002，EP 00712863) 為與人類EGF受體結合之人源化單株IgG1抗體並由YM BioScienecs公司(加拿大密西沙加)所販售。其係於非分泌性 NSO細胞(哺乳動物細胞)中所產生。尼妥珠單抗係核准用於 治療頭頸腫瘤、高度惡性星形細胞瘤和多型性神經膠母細胞 瘤(EU和US未核准)和胰臟癌(罕用藥物，EMA)。其具有 10-8 M之親和力。
EGFR抗體之其他具體例如下：
˙扎魯木單抗(Zalutumumab)/2F8/HuMax-EGFr，來自Genmab A/S(WO 02/100348，WO 2004/056847，INN編號8605)
˙萘昔木單抗(Necitumumab)/11F8，ImClone/IMC-11F8，來自ImClone Systems公司[Eli Lilly & Co](WO 2005/090407(EP 01735348-A1，US 2007/0264253-A1，US 7,598,350，WO 2005/090407-A1)，INN編號9083)
˙馬妥珠單抗(Matuzumab)/抗-EGFR MAb，Merck KGaA/抗-EGFR MAb，Takeda/EMD 72000/EMD-6200/EMD-72000和EMD-55900/MAb 425/單株抗體425，來自Merck KGaA/Takeda(WO 92/15683，INN編號8103(Matuzumab))
˙RG-7160/GA-201/GA201/R-7160/R7 160/RG7160/RO-4858696/RO-5083945/RO4858696/RO5083945，來自Glycart Biotechnology AG(Roche Holding AG)(WO 2010/112413-A1，WO 2010/115554)
˙GT-MAB 5.2-GEX/CetuGEX，來自Glycotope GmbH(WO 2008/028686-A2(EP 01900750-A1，EP 01911766-A1，EP 02073842-A2，US 2010/0028947-A1)
˙ISU-101，來自Isu Abxis Inc(ISU Chemical Co Ltd)/Scancell(WO 2008/004834-A1)
˙ABT-806/mAb-806/ch-806/抗-EGFR單株抗體806，來自Ludwig Institute for Cancer Research/Abbott/Life Science Pharmaceuticals(WO 02/092771，WO 2005/081854和WO 2009/023265)
˙SYM-004(含有二種嵌合IgG1抗體(992和1024))，來自Symphogen A/S(WO 2010/022736-A2)
˙MR1 -1/MR1 -1KDEL，來自IVAX Corp(Teva Pharmaceutical Industries Ltd)(Duke University)，(Patent：WO2001/062931-A2)
˙抗缺失突變體抗體，EGFRvIII，來自Amgen/Abgenix(WO 2005/010151，US 7,628,986)
˙SC-100，來自Scancell Ltd(WO 01/088138-A1)
˙MDX-447/EMD 82633/BAB-447/H 447/MAb，EGFR，Medarex/Merck KgaA，來自Bristol-Myers Squibb (US)/Merck KGaA(DE)/Takeda(JP)，(WO 91/05871，WO 92/15683)
˙Anti-EGFR-Mab，來自Xencor(WO 2005/056606)
˙DXL-1218/抗-EGFR單株抗體(癌)，InNexus，來自InNexus Biotechnology Inc.，Pharmaprojects PH048638。
於較佳的一個包含具體例中，抗-EGFR抗體係選自包含下列之群：西妥昔單抗、帕尼單抗、尼妥珠單抗、扎魯木單抗、萘昔木單抗、馬妥珠單抗、RG-716、GT-MAB 5.2-GEX、ISU-101、ABT-806、SYM-004、MR1 -1、SC-100、MDX-447和DXL-1218。
於特佳的一個具體例中，抗-EGFR抗體係選自包含下列之群：西妥昔單抗、扎魯木單抗、萘昔木單抗和馬妥珠單抗。
熟悉技藝者，由上述抗體之CDR區，藉由序列變化，了解可用於製備另外的抗體之方法，這些另外的抗體對標靶分子具有類似或更佳的親和力及/或專一性。
於另外的一個具體例中，該抗-EGFR抗體或抗原結合抗體片段係選自包含下列之群：包含任一下列抗體之三個輕鏈CDR區和三個重鏈CDR區的抗體或抗原結合抗體片段：西妥昔單抗、帕尼單抗、尼妥珠單抗、扎魯木單抗、萘昔木單抗、馬妥珠單抗、RG-716、GT-MAB 5.2-GEX、ISU-101、ABT-806、SYM-004、MR1 -1、SC-100、MDX-447和DXL-1218。
於另外一個具體例中，抗-EGFR抗體或抗原結合抗體片段係選自由下列組成之群組： 包含任一下列抗體之三個輕鏈CDR區和三個重鏈CDR區的抗體或抗原結合抗體片段：西妥昔單抗、帕尼單抗、尼妥珠單抗、扎魯木單抗、萘昔木單抗、馬妥珠單抗。
碳酸酐酶IX抗體
與癌標靶分子碳酸酐酶IX結合之抗體的實例係描述於WO 2007/070538-A2中(例如，申請專利範圍第1-16項)。
於較佳的一個具體例中，抗-碳酸酐酶IX抗體或抗原結合抗體片段係由下列抗-碳酸酐酶IX抗體或抗原結合抗體片段組成之群中選出：3ee9(WO 2007/070538-A2之申請專利範圍第4項(a))、3ef2(WO 2007/070538-A2之申請專利範圍第4項(b))、1e4(WO 2007/070538-A2之申請專利範圍第4項(c))、3a4(WO 2007/070538-A2之申請專利範圍第4項(d))、3ab4(WO 2007/070538-A2之申請專利範圍第4項(e))、3ah10(WO 2007/070538-A2之申請專利範圍第4項(f))、3bb2(WO 2007/070538-A2之申請專利範圍第4項(g))、1aa1(WO 2007/070538-A2之申請專利範圍第4項(h))、5a6(WO 2007/070538-A2之申請專利範圍第4項(i))和5aa3(WO 2007/070538-A2之申請專利範圍第4項(j))。
於較佳的一個具體例中，抗-碳酸酐酶IX抗體或抗原結合抗體片段係選自包含下列之群：包括3ee9抗體之三個輕鏈CDR區序列和三個重鏈CDR區序列的抗-碳酸酐酶IX抗體或其抗原結合抗體片段(來自WO 2007/070538-A2)，包括3ef2抗體之三個輕鏈CDR區序列和三個重鏈CDR區 序列的抗-碳酸酐酶IX抗體或其抗原結合抗體片段(來自WO 2007/070538-A2)，包括1e4抗體之三個輕鏈CDR區序列和三個重鏈CDR區序列的抗-碳酸酐酶IX抗體或其抗原結合抗體片段(來自WO 2007/070538-A2)，包括3a4抗體之三個輕鏈CDR區序列和三個重鏈CDR區序列的抗-碳酸酐酶IX抗體或其抗原結合抗體片段(來自WO 2007/070538-A2)，包括3ab4抗體之三個輕鏈CDR區序列和三個重鏈CDR區序列的抗-碳酸酐酶IX抗體或其抗原結合抗體片段(來自WO 2007/070538-A2)，包括3ah10抗體之三個輕鏈CDR區序列和三個重鏈CDR區序列的抗-碳酸酐酶IX抗體或其抗原結合抗體片段(來自WO 2007/070538-A2)，包括3bb2抗體之三個輕鏈CDR區序列和三個重鏈CDR區序列的抗-碳酸酐酶IX抗體或其抗原結合抗體片段(來自WO 2007/070538-A2)，包括1aa1抗體之三個輕鏈CDR區序列和三個重鏈CDR區序列的抗-碳酸酐酶IX抗體或其抗原結合抗體片段(來自WO 2007/070538-A2)，包括5a6抗體之三個輕鏈CDR區序列和三個重鏈CDR區序列的抗-碳酸酐酶IX抗體或其抗原結合抗體片段(來自WO 2007/070538-A2)及包括5aa3抗體之三個輕鏈CDR區序列和三個重鏈CDR區 序列的抗-碳酸酐酶IX抗體或其抗原結合抗體片段(來自WO 2007/070538-A2)。
本處所指之CDR區序列係揭示於WO 2007/070538-A2第128-130頁的圖2a-2c中。
於較佳的一個具體例中，抗-碳酸酐酶IX抗體或抗原結合抗體片段係選自由下列組成之群組：包括3ee9抗體之可變輕鏈及可變重鏈之胺基酸序列的抗體或抗原結合抗體片段，係如WO 2007/070538-A2第137頁圖4b中所示，包括3ef2抗體之可變輕鏈及可變重鏈之胺基酸序列的抗體或抗原結合抗體片段，如WO 2007/070538-A2第138頁圖4c和第137頁圖4b中所示，包括1e4抗體之可變輕鏈及可變重鏈之胺基酸序列的抗體或抗原結合抗體片段，如WO 2007/070538-A2第136頁的圖4a中所示，包括3a4抗體之可變輕鏈及可變重鏈之胺基酸序列的抗體或抗原結合抗體片段，如WO 2007/070538-A2第136頁的圖4a中所示，包括3ab4抗體之可變輕鏈及可變重鏈之胺基酸序列的抗體或抗原結合抗體片段，如WO 2007/070538-A2第136頁的圖4a中所示，包括3ah10抗體之可變輕鏈及可變重鏈之胺基酸序列的抗體或抗原結合抗體片段，如WO 2007/070538-A2第136頁的圖4a中所示，包括3bb2抗體之可變輕鏈及可變重鏈之胺基酸序列的抗體 或抗原結合抗體片段，如WO 2007/070538-A2第137頁的圖4b中所示，包括1aa1抗體之可變輕鏈及可變重鏈之胺基酸序列的抗體或抗原結合抗體片段，如WO 2007/070538-A2第136頁的圖4a中所示，包括5a6抗體之可變輕鏈及可變重鏈之胺基酸序列的抗體或抗原結合抗體片段，如WO 2007/070538-A2第137頁的圖4b中所示，及包括5aa3抗體之可變輕鏈及可變重鏈之胺基酸序列的抗體或抗原結合抗體片段，如WO 2007/070538-A2第137頁的圖4b中所示。
於特佳的一個具體例中，抗-碳酸酐酶IX抗體為來自WO 2007/070538-A2之3ee9抗體片段。
於特佳的一個具體例中，抗-碳酸酐酶IX抗體或抗原結合抗體片段係包括3ee9抗體之可變重鏈CDR區的胺基酸序列(VH3-CDR1：GFTFSSYGMS；VH3-CDR2：GISSLGSTTYYADSVKG；VH3-CDR3：TGSPGTFMHGDH，參見WO 2007/070538-A2第128頁的圖2a)和3ee9抗體之可變輕鏈CDR區的胺基酸序列(VLk1-CDR1：RASQDINNYLS；VLk1-CDR2：YGASNLQS；VLk1-CDR3：QQYYGRPT，參見WO 2007/070538-A2第129頁的圖2b)。
於特佳的一個具體例中，抗-碳酸酐酶IX抗體或抗原結合抗體片段係包括3ee9抗體之可變重鏈的胺基酸序列(VH3：ELVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSW VRQAPGKGLEWVSGISSLGSTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTGSPGTFMHGDHWGQGTLVTVSS，參見WO 2007/070538-A2第137頁的圖4b)和3ee9抗體之可變輕鏈的胺基酸序列(VLk1：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRaSQDINNYLSWYQQKPGKAPKLLIYGASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQYYGRPTTFGQGTKVEIKRT，參見WO 2007/070538-A2第137頁的圖4b)。
於較佳的一個具體例中，抗-碳酸酐酶IX抗體3ee9為一IgG抗體。
於特佳的一個具體例中，抗-碳酸酐酶IX抗體3ee9為一IgG1抗體(3ee9-IgG1)，其中重鏈之胺基酸序列係包括下列序列：QVELVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVSGISSLGSTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTGSPGTFMHGDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 及輕鏈之胺基酸序列係包括下列序列：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINNYLSWYQQKPGKAPKLLIYGASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQYYGRPTTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
抗-碳酸酐酶IX抗體3ee9-IgG1：
本發明另外一方面係提供抗-碳酸酐酶IX抗體3ee9-IgG1。
C4.4a抗體：
根據本發明特別佳之結合劑為抗-C4.4a抗體，更特別為人類或人源化抗-C4.4a抗體。該抗體宜具有至少10-7 M之親和力(為Kd值；易言之，較佳為那些Kd值小於10-7 M者)，較佳為至少10-8 M，更佳為由10-9 M至10-11 M之範圍。該Kd值可藉由例如表面等離子體共振光譜法來測定。
本發明之抗體-藥物結合劑亦具有此等範圍之親和力。該親和力較佳為實質上不會被藥物之共軛所影響(通常，該親和力係降低少於一個量級，換言之，例如，最多為由10-8 M至10-7 M)。
根據本發明所使用之該抗體亦為顯著，較佳為高選擇性。當本發明之抗體展現對標靶蛋白質之親和力時，存在有高選擇性，其係數較佳為至少2，係數較佳為5或更佳為10，相較於其他無關之抗原，如人類血清蛋白(該親和力，例如，可藉由表面等離子體共振光譜法來測定)。
再者，本發明所使用之該抗體較佳為交叉反應性。為了能促進及更好的闡釋臨床前研究，例如毒理學或活性研究(如於異種移植小鼠)，有利之處為倘若根據本發明所使用之抗體不僅結合人類標靶蛋白質亦結合研究中所使用之物種的標靶蛋白質。於一個具體例中，該根據本發明所使用之抗體，除了人類標靶蛋白質，對至少一個其他物種之標靶蛋白質有交叉反應。於毒理學及活性研究時，其較佳為使用囓齒類，狗及非人類靈長類動物家族物種。較佳之囓齒類物種為老鼠及大鼠。非人類靈長類動物較佳為獼猴，黑猩猩及長尾獼猴。
於一個具體例中，該根據本發明所使用之抗體，除了人類標靶蛋白質，為至少一種選自包括老鼠，大鼠及長尾彌猴(Macaca fascicularis)物種之其他物種的標靶蛋白質有交叉反應。尤其佳者為根據本發明所使用之抗體，其除了人類標靶蛋白質，至少為對於老鼠標靶蛋白質有交叉反應。較佳者為交叉反應性抗體，其他非-人類物種之標靶蛋白質的親和力，與人類標靶蛋白質之親和力相較時不同之處在於係數不大於50，更特別為係數不大於10。
抗-C4.4a抗體係說明於WO 01/23553或WO 201107008之實例中。這些抗體可根據本發明來使用。
C4.4a抗體和抗原結合抗體片段之實例係描述於下。抗體之序列係如表1所示，其中各列分別產生第1欄所列的抗體之個別可變輕鏈及可變重鏈的CDR胺基酸序列。亦指出各例中，第1欄所示的抗體之可變輕鏈及可變重鏈的CDR胺 基酸序列和核酸序列。
於一個具體例中，抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段係與C4.4a之S1區S1(SEQ ID NO：1之胺基酸位置1-85)結合。
於一個具體例中，抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段係與人類C4.4a(SEQ ID NO：1)及小鼠C4.4a(SEQ ID NO：2)交叉反應。
於一個具體例中，抗-C4.4a抗體或其抗原結合抗體片段，在與表現C4.4a之細胞結合後，被細胞所內化。
於另外的具體例中，抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段係與M31-B01抗體及/或M20-D02-S-A抗體競爭和C4.4a結合。M31-B01和M20-D02-S-A抗體係競爭與C4.4a之結合。B01-1至B01-12抗體係藉由親和力成熟由M31-B01而製備，並與M31-B01競爭和C4.4a之結合。D02-1至D02-13抗體係係藉由親和力成熟由M20-D02-S-A而製備，並與M20-D02-S-A競爭和C4.4a之結合。
於另外的具體例中，抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包括至少一、二或三個表1或表2中所給的CDR胺基酸序列。
於另外的具體例中，抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包括至少一、二或三個表1或表2中所給的抗體之CDR胺基酸序列。
於另外的一個具體例中，抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包括表1或表2中所給的抗體之至少一、二或三個可變輕鏈的CDR胺基酸序列及至少一、二或三個可變重鏈的CDR胺基酸序列。
於另外的具體例中，抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包括與表1或表2中可變輕鏈之CDR胺基酸序列和可變重鏈之CDR胺基酸序列具有至少50%、60%、70%、80%、90%或95%一致性。
於另外的具體例中，抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段之CDR序列包含：符合CDR序列SEQ ID NO：297(CDR H1)、SEQ ID NO：298(CDR H2)和SEQ ID NO：299(CDR H3)之重鏈CDR序列，及符合CDR序列SEQ ID NO：300(CDR L1)、SEQ ID NO：22(CDR L2)和SEQ ID NO：301(CDR L3)之輕鏈CDR序列，或符合CDR序列SEQ ID NO：302(CDR H1)、SEQ ID NO：303(CDR H2)和SEQ ID NO：304(CDR H3)之重鏈CDR序列，及符合CDR序列SEQ ID NO：305(CDR L1)、SEQ ID NO：306(CDR L2)和SEQ ID NO：307(CDR L3)之輕鏈CDR序列。
於另外的具體例中，抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包括與表1或表2中所給的抗體之可變輕鏈及可變重鏈具有至少50%、60%、70%、80%、90%或95%一致性。
於另外的具體例中，抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包括表1或表2中所給的抗體之三個可變輕鏈CDR胺基酸序列和三個可變重鏈CDR胺基酸序列。
於另外的具體例中，抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包括表1或表2中所給的抗體之一可變輕鏈及/或一可變重鏈。
於另外的具體例中，抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包括表1或表2中所給的抗體之可變輕鏈及可變重鏈。
於較佳的一個具體例中，C4.4a抗體和抗原結合抗體片段係選自由下列組成之群組：包括以SEQ ID NO：75-77序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：78-80序列表示之可變輕鏈CDR序列的抗體(B01-10)，包括以SEQ ID NO：5、9及13序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：17、21及25序列表示之可變輕鏈CDR序列的抗體(M31-B01)，包括以SEQ ID NO：6、10及14序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：18、22及26序列表示之可變輕鏈CDR序列的抗體(M20-D02-S-A)，包括以SEQ ID NO：7、11及15序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：19、23和27序列表示之可變輕鏈CDR序列的抗體(M60-G03)，包括以SEQ ID NO：8、12及16序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：20、24及28序列表示之可變輕鏈CDR序列的抗體(36-H02)，包括以SEQ ID NO：45-47序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：48-50序列表示之可變輕鏈CDR序列的抗體(B01-3)，包括以SEQ ID NO：55-57序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：58-60序列表示之可變輕鏈CDR序列 的抗體(B01-5)，包括以SEQ ID NO：65-67序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：68-70序列表示之可變輕鏈CDR序列的抗體(B01-7)，包括以SEQ ID NO：85-87序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：88-90序列表示之可變輕鏈CDR序列的抗體(B01-12)，包括以SEQ ID NO：95-97序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：98-100序列表示之可變輕鏈CDR序列的抗體(D02-4)，包括以SEQ ID NO：105-107序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：108-110序列表示之可變輕鏈CDR序列的抗體(D02-6)，包括以SEQ ID NO：115-117序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：118-120序到表示之可變輕鏈CDR序列的抗體(D02-7)，包括以SEQ ID NO：125-127序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：128-130序列表示之可變輕鏈CDR序列的抗體(D02-11)，包括以SEQ ID NO：135-137序列表示之可變重鏈CDR序列，且包括以SEQ ID NO：138-140序列表示之可變輕鏈CDR序列的抗體(D02-13)，於較佳的一個具體例中，抗-C4.4a抗體和抗原結合抗體片段係選自由下列組成之群組： 包括以SEQ ID NO：81序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：82序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(B01-7)，包括以SEQ ID NO：33序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：29序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(M31-B01)，包括以SEQ ID NO：34序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：30序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(M20-D02 S-A)，包括以SEQ ID NO：35序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：31序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(M60-G03)，包括以SEQ ID NO：36序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：32序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(M36-H02)，包括以SEQ ID NO：51序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：52序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(B01-3)，包括以SEQ ID NO：61序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：62序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(B01-5)，包括以SEQ ID NO：71序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：72序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(B01-7)， 包括以SEQ ID NO：91序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：92序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(B01-12)，包括以SEQ ID NO：101序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：102序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(D02-4)，包括以SEQ ID NO：111序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：112序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(D02-6)，包括以SEQ ID NO：121序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：122序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(D02-7)，包括以SEQ ID NO：131序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：132序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(D02-11)，包括以SEQ ID NO：141序列表示之可變重鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：142序列表示之可變輕鏈的胺基酸序列之抗體(D02-13)。
於另外的具體例中，抗-C4.4a抗體係包括表2所給的抗體之輕鏈及重鏈。
於較佳的一個具體例中，抗-C4.4a抗體係包括表2所給的抗體之輕鏈及重鏈。
於特佳的一個具體例中，C4.4a抗體係選自由下列組成之群組： 包括以SEQ ID NO：346序列表示之輕鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：347序列表示之重鏈的胺基酸序列之抗體(M31-B01)，包括以SEQ ID NO：352序列表示之輕鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：353序列表示之重鏈的胺基酸序列之抗體(B01-3)，包括以SEQ ID NO：364序列表示之輕鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：365序列表示之重鏈的胺基酸序列之抗體(B01-10)，及包括以SEQ ID NO：382序列表示之輕鏈的胺基酸序列，且包括以SEQ ID NO：383序列表示之重鏈的胺基酸序列之抗體(D02-6)。
抗-C4.4a抗體IgG：
本發明另外一方面係提供抗-C4.4a抗體IgG，其包括表2所給的抗體之輕鏈及重鏈的胺基酸序列。
間皮素抗體
本發明另外一方面係提供新的抗間皮素抗體(MF-Ta)，其胺基酸序列包括以SEQ ID NO：398(HCDR1)、SEQ ID NO：399(HCDR2)和SEQ ID NO：400(HCDR3)序列表示之可變重鏈的CDR序列，及以SEQ ID NO：401(LCDR1)、SEQ ID NO：402(LCDR2)和SEQ ID NO：403(LCDR3)序列表示之可變輕鏈的CDR序列。
於一較佳的具體例中，抗間皮素抗體MF-Ta或抗原結合抗體片段之胺基酸序列包括以SEQ ID NO：404序列表示之可變重鏈的序列，及以SEQ ID NO：405序列表示之可變輕鏈的序列。於一較佳的具體例中，抗間皮素抗體MF-Ta或抗原結合抗體片段之胺基酸序列包括由SEQ ID NO：406之核酸序列所編碼之可變重鏈的序列，及由SEQ ID NO：407核酸序列所編碼之可變輕鏈的序列。
於一特佳的具體例中，抗間皮素抗體MF-Ta之胺基酸序列係包括以SEQ ID NO：408序列表示之重鏈序列，及以SEQ ID NO：409序列表示之輕鏈的序列。
於一特佳的具體例中，抗間皮素抗體MF-Ta之胺基酸序列係包括由SEQ ID NO：410核酸序列所編碼的重鏈序列，及由SEQ ID NO：411核酸序列所編碼的輕鏈序列。
與癌標靶分子間皮素結合的抗體之實例已為熟悉技藝者所知並描述於例如WO 2009/068204中，且可用於本發明之結合劑-藥物接合物。
於一結合劑-藥物接合物之具體例中，結合劑為抗間皮素抗體或抗原結合抗體片段，其中該抗體係與間皮素結合並具有不變的結合。
於一結合劑-藥物接合物之具體例中，抗間皮素抗體或抗原結合抗體片段係包括WO 2009/068204-A1(表7；第61-63頁)中所描述的抗體之三個輕鏈CDR區的胺基酸序列，及三個重鏈CDR區的胺基酸序列。
於一較佳的具體例中，抗間皮素抗體或抗原結合抗體片段係選自由下列組成之群組：包括MF-Ta抗體之三個輕鏈CDR區的胺基酸序列，及三個重鏈CDR區的胺基酸序列之抗間皮素抗體或其抗原結合抗體片段，包括MF-J抗體(WO 2009068204-A1；表7；第61頁)之三個輕鏈CDR區序列，及三個重鏈CDR區序列之抗間皮素抗體或其抗原結合抗體片段，包括MOR06640抗體(WO2009/068204-A1；表7；第61頁)之三個輕鏈CDR區序列，及三個重鏈CDR區序列之抗間皮素抗體或其抗原結合抗體片段， 包括MF-226抗體(WO2009/068204-A1；表7；第61頁)之三個輕鏈CDR區序列，及三個重鏈CDR區序列之抗間皮素抗體或其抗原結合抗體片段，及包括MOR06626抗體(WO2009/068204-A1；表7；第61頁)之三個輕鏈CDR區序列，及三個重鏈CDR區序列之抗間皮素抗體或其抗原結合抗體片段。
於一特佳的具體例中，抗間皮素抗體或抗原結合抗體片段係選自包含下列之群：包括MF-Ta抗體之可變輕鏈序列及可變重鏈序列的抗間皮素抗體或其抗原結合抗體片段，包括MF-J抗體(WO2009/068204-A1；表7；第61頁)之可變輕鏈序列及可變重鏈序列的抗間皮素抗體或其抗原結合抗體片段，包括MOR06640抗體(WO2009/068204-A1；表7；第61頁)之可變輕鏈序列及可變重鏈序列的抗間皮素抗體或其抗原結合抗體片段，包括MF-226抗體(WO 2009/068204-A1；表7；第61頁)之可變輕鏈序列及可變重鏈序列的抗間皮素抗體或其抗原結合抗體片段，包括MOR06626(WO 2009/068204-A1；表7；第61頁)抗體之可變輕鏈序列及可變重鏈序列的抗間皮素抗體或其抗原結合抗體片段。
其他抗體：
與癌標靶分子Her2結合之一抗體的實例為曲妥珠單抗 (Genentech)。曲妥珠單抗為用於治療(尤其是)乳癌之人源化抗體。與癌標靶分子CD20結合之一抗體的實例為利妥昔單抗(Genentech)。利妥昔單抗(CAS編號：174722-31-7)為用於治療非何杰金氏淋巴瘤之嵌合抗體。與癌標靶分子CD52結合之一抗體的實例為阿來組單抗(alemtuzumab)(Genzyme)。阿來組單抗(CAS編號：216503-57-0)為用於治療慢性淋巴性白血病之人源化抗體。
除了曲妥珠單抗(INN 7637，CAS No：RN：180288-69-1)和帕妥珠單抗(pertuzumab)(Cas No：380610-27-5)，其他與HER2結合之抗體的實例係如揭示於WO 2009/123894-A2、WO 200/8140603-A2或WO 2011/044368-A2中之抗體。抗-HER2接合物之實例為曲妥珠單抗-艾得辛(trastuzumab-emtansine)(INN No.9295)。
與癌標靶分子CD30結合並可用於治療癌症，例如何杰金氏淋巴癌之抗體的實例為布妥昔單抗(brentuximab)、伊妥木單抗(iratumumab)及揭示於WO 2008/092117、WO 2008/036688或WO 2006/089232中之抗體。抗-CD30接合物之實例為布妥昔單抗-維多汀(brentuximab vedotine)(INN No.9144)。
與癌標靶分子CD22結合並可用於治療癌症，淋巴癌之抗體的實例為英妥珠單抗(inotuzumab)或伊帕珠單抗(epratuzumab)。抗-CD22接合物之實例為英妥珠單抗-奧唑米星(inotuzumab ozagamycin)(INN No.8574)，或抗-CD22-MMAE及抗-CD22-MC-MMAE(CAS RN：139504-50-0 及474645-27-7)。
與癌標靶分子CD33結合並可用於治療癌症，例如淋巴癌之抗體的實例為吉妥單抗(gemtuzumab)或林妥珠單抗(lintuzumab)(INN 7580)。抗-CD33接合物之實例為吉妥單抗-奧唑米星。
與癌標靶分子NMB結合並可用於治療癌症，例如黑色素瘤或乳癌之抗體的實例為格巴單抗(glembatumumab)(INN 9199)。抗-NMB接合物之實例為格巴單抗-維多汀(glembatumumab vedotine)(CAS RN：474645-27-7)。
與癌標靶分子CD56結合並可用於治療癌症，例如多發性骨髓瘤、小細胞肺癌MCC或卵巢癌之抗體的實例為羅佛單抗(lorvotuzumab)。抗-CD56接合物之實例為羅佛單抗-美登素(lorvotuzumab mertansine)(CAS RN：139504-50-0)。
與癌標靶分子CD70結合並可用於治療癌症，例如非何杰金氏淋巴癌或腎細胞癌之抗體的實例係揭示於WO 2007/038637-A2或WO 2008/070593-A2中。抗-CD70接合物之實例為SGN-75(CD70 MMAF)。
與癌標靶分子CD74結合並可用於治療癌症，例如多發髓瘤之抗體的實例為米拉珠單抗(milatuzumab)。抗-CD74接合物之實例為米拉珠單抗-多柔比星(milatuzumab-doxorubicin)(CAS RN：23214-92-8)。
與癌標靶分子CD19結合並可用於治療癌症，例如非何杰金氏淋巴癌之抗體的實例係揭示於WO 2008/031056-A2中。另外的抗體或抗-CD19接合物(SAR3419)之實例係揭示 於WO 2008/047242-A2。
與癌標靶分子黏蛋白-1(mucin-1)結合並可用於治療癌症，例如非何杰金氏淋巴癌之抗體的實例為克利伐單抗(clivatuzumab)或揭示於WO 2003/106495-A2、WO 2008/028686-A2中之抗體。抗-黏蛋白接合物之實例係揭示於WO 2005/009369-A2。
可用於治療癌症，例如多發髓瘤之與癌標靶分子CD138的抗體實例及其接合物係揭示於WO 2009/080829-A1、WO 2009/080830-A1中。
與癌標靶分子整合素αV結合並可用於治療癌症，例如骨髓瘤、肉瘤或惡性腫瘤之抗體的實例為英妥木單抗(intetumumab)(Cas RN：725735-28-4)、阿昔單抗(abciximab)(Cas-RN：143653-53-6)、伊瑞西珠單抗(etaracizumab)(Cas-RN：892553-42-3)或揭示於US 7,465,449、EP 19859-A1、WO 2002/012501-A1或WO 2006/062779-A2中之抗體。抗-接合物之實例為英妥木單抗-DM4和揭示於WO 2007/024536-A2中之其他ADC。
與癌標靶分子TDGF1結合並可用於治療癌症之抗體的實例係揭示於WO 02/077033-A1、US 7,318,924、WO 2003/083041-A2和WO 2002/088170-A2中。抗-TDGF1接合物之實例係揭示於WO 2002/088170-A2中。
與癌標靶分子PSMA結合並可用於治療癌症，例如前列腺癌之抗體的實例係揭示於WO 97/35616-A1、WO 99/47554-A1和WO 01/009192-A1中。抗-PSMA接合物之實 例係揭示於WO 2009/026274-A1中。
與癌標靶分子EPHA2結合，可用於製備接合物及可用於治療癌症之抗體的實例係揭示於WO 2004/091375-A2中。
與癌標靶分子SLC44A4結合，可用於製備接合物並可用於治療癌症，例如胰臟癌或前列腺癌之抗體的實例係揭示於WO 2009/033094-A2及US 2009/0175796-A1中。
與癌標靶分子HLA-DOB結合之抗體的實例為lym-1抗體(Cas-RN：301344-99-0)，其可用於治療癌症，例如非何杰金氏淋巴癌。抗-HLA-DOB接合物之實例係揭示於，例如WO 2005/081711-A2中。
與癌標靶分子VTCN1結合，可用於製備接合物及並可用於治療癌症，例如卵巢癌之抗體的實例係揭示於WO 2006/074418-A2中。
本發明化合物具有珍貴的藥理特性並可用於預防和治療人類及動物之疾病。
如基於本發明實驗部分(C-1.至C-6.)所提出的分析所示，式(Ia)之本發明結合劑-藥物接合物(ADC)對於腫瘤細胞具有高度和專一性細胞毒殺活性。對式(Ia)之本發明結合物-藥物(ADC)接合物此高度和專一性細胞毒殺活性部分，係經由適當的新N,N-二烷基奧瑞他汀衍生物和結合劑與不僅具有酵素性、水解性或還原性可裂解預定斷裂點，供釋放帶毒體，以及無此斷裂點之連接子的組合來達成。更特別的，經由使用不具酵素性、水解性或還原性可裂解預定斷裂點，供釋放帶毒體之穩定的連接子，及於將ADC吸入腫瘤細胞後和 抗體之完全的細胞內、酵素性裂解後，仍保留完整或部分完整，該活性係非常特異地侷限於腫瘤細胞。ACD和穩定的連接子間之相容性係預先假定，其中胞內所形成的代謝物可形成足夠效力，能到達其標靶並能於該處以足夠的效力對標靶產生抗增生活性，而無需事先再次以轉運蛋白質施行腫瘤細胞。胞內所形成的代謝物，於吸入本發明式(Ia)化合物之後，展現還原成為轉運蛋白質基質之可能性，藉此抑制其再分配進入全身循環，及因而觸發帶毒體本身的潛在副作用。
ADC與穩定的連接子化學和所指的標靶之相容性，結合代表相當低度的轉運蛋白質基質之代謝物，加大了治療窗口。
更特別的，本發明式(Ia)之結合劑-藥物接合物對於表現C4.4a之腫瘤細胞具有高度和專一性細胞毒殺活性。同時，對於非表現C4.4a之活性明顯地為較弱。
基於此特徵性質，通常，因此本發明化合物特定程度上係適合用於治療人類和哺乳動物之過度增生性疾病。此化合物於一方面能抑制、阻斷、降低或減低細胞增生及細胞分裂，於另外一方面能增加細胞凋亡。
可使用本發明化合物治療之過度增生疾病包括，特別是癌症和腫瘤疾病之群。於本發明內文中。這些應理解為係指，特別是下列疾病(但不限於此)：乳腺癌和乳腺腫瘤(乳管和小葉形式，亦為原位)、呼吸道腫瘤(小細胞和非小細胞癌、支氣管癌)、腦腫瘤(例如腦幹和下視丘之腫瘤、星細胞瘤、髓母細胞瘤、室管膜瘤和神經上皮細胞瘤及松果體腫瘤)、消化器官之腫瘤(食道、胃、膽、小腸、大腸、直腸)、肝腫 瘤(包括肝細胞癌、膽管細胞癌和混合肝細胞及膽管細胞癌)、頭頸區之腫瘤(喉頭、下咽、鼻咽、口咽、嘴唇和口腔)、皮膚腫瘤(鱗狀上皮癌、卡波西氏肉瘤、惡性黑素瘤、梅克爾細胞皮膚癌和非黑色素皮膚癌)、軟組織之腫瘤(包括軟組織癌、骨肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、淋巴肉瘤和橫紋肌肉瘤)、眼腈之腫瘤(包括眼內黑色素瘤和視網膜母細胞瘤)、內分泌和外分泌腺之腫瘤(例如甲狀腺和副甲狀腺、胰臟和唾腺之腫瘤)、泌尿道之腫瘤(膀胱、陰莖、腎、腎盂和輸尿管之腫瘤)和生殖器官之腫瘤(女性的子宮內膜、子宮頸、卵巢、陰道、外陰和子宮之腫瘤，及男性前列腺和睪丸之腫瘤)。這些亦包括實體形式之增生性血液疾病和循環血液細胞，例如淋巴瘤、白血病和骨髓增生性疾病，例如急性骨髓性、急性淋巴母細胞性、慢性淋巴細胞性、慢性粒細胞性和髮細胞白血病，以及AIDS-相關的淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、皮膚T-細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和中樞神經系統之淋巴瘤。
抗-CA9結合劑-藥物接合物之較佳的過度增生性疾病
較宜應用本發明化合物治療之過度增生性疾病為CA9-過度表現之腫瘤、乳腺癌和乳腺腫瘤(乳管和小葉形式，亦為原位)、呼吸道腫瘤(小細胞和非小細胞癌、支氣管癌)，包括較佳為非小細胞肺癌；腦腫瘤(例如腦幹和下視丘之腫瘤、星細胞瘤、髓母細胞瘤、室管膜瘤及/或神經上皮細胞瘤及松果體腫瘤)、消化器官之腫瘤(食道、胃、膽、小腸、大腸、直腸)，包括更佳地胃腫瘤和小腸腫瘤；肝腫瘤(包括 肝細胞癌、膽管細胞癌和混合的肝細胞及膽管係胞癌)、頭頸區之腫瘤(例如，喉頭、下咽、鼻咽、口咽、嘴唇、口腔、舌和食道)、泌尿道之腫瘤(膀胱、陰莖、腎、腎盂和輸尿管之腫瘤)，包括更佳地腎和膀胱之腫瘤；及/或生殖器官之腫瘤(女性的子宮內膜、子宮頸、卵巢、陰道、外陰和子宮之腫瘤，及/或男性前列腺和睪丸之腫瘤)，包括更佳地子宮頸和子宮之腫瘤。
抗-EGFR結合劑-藥物接合物之較佳的過度增生性疾病
較宜應用本發明化合物治療之過度增生性疾病為EGFR-過度表現之腫瘤、呼吸道腫瘤(小細胞和非小細胞癌、支氣管癌)，包括較佳為非小細胞肺癌；消化器官之腫瘤(食道、胃、膽、小腸、大腸、直腸)，包括特別是小腸腫瘤；內分泌和外分泌腺之腫瘤(例如甲狀腺和副甲狀腺、胰臟和唾腺之腫瘤)，包括較佳為胰臟；頭頸區之腫瘤(例如，喉頭、下咽、鼻咽、口咽、嘴唇、口腔、舌和食道)；及/或膠質瘤。
抗-間皮素結合劑-藥物接合物之較佳的過度增生性疾病
較宜應用本發明化合物治療之過度增生性疾病為間皮素-過度表現之腫瘤、生殖器官之腫瘤(女性的子宮內膜、子宮頸、卵巢、陰道、外陰和子宮之腫瘤，及/或男性前列腺和睪丸之腫瘤)，包括較佳為卵巢癌；內分泌和外分泌腺之腫瘤(例如甲狀腺和副甲狀腺、胰臟和唾腺之腫瘤)，包括較佳為胰臟；呼吸道腫瘤(小細胞和非小細胞癌、支氣管癌)，包括較佳為非小細胞肺癌；及/或間皮瘤。
抗-C4.4a結合劑-藥物接合物之較佳的過度增生性疾病
較宜應用本發明化合物治療之過度增生性疾病為C4.4a過度表現之腫瘤、鱗狀上皮瘤(例如子宮頸、外陰、陰道之腫瘤、肛管之腫瘤、子宮內膜、輸卵管、陰莖、食道之腫瘤、乳房、膀胱之腫瘤、膽管之腫瘤、子宮內膜、子宮和卵巢)；乳腺癌和乳腺腫瘤(乳管和小葉形式，亦為原位)、呼吸道腫瘤(小細胞和非小細胞癌、支氣管癌)，包括較佳為非小細胞肺癌、肺鱗狀上皮癌和肺腺癌；頭頸區之腫瘤(例如，喉頭、下咽、鼻咽、口咽、嘴唇、口腔、舌和食道、頭頸區之鱗狀上皮癌)；泌尿道之腫瘤(膀胱、陰莖、腎、腎盂和輸尿管之腫瘤、膀胱之鱗狀上皮癌)，包括更佳地腎和膀胱之腫瘤；皮膚腫瘤(鱗狀上皮癌、卡波西氏肉瘤、惡性黑素瘤、梅克爾細胞皮膚癌和非黑色素皮膚癌)，包括更佳地黑色素瘤；內分泌和外分泌腺之腫瘤(例如甲狀腺和副甲狀腺、胰臟和唾腺之腫瘤)，包括較佳為胰臟；消化器官之腫瘤(食道、胃、膽、小腸、大腸、直腸)，包括特別是大腸直腸癌；及/或生殖器官之腫瘤(女性的子宮內膜、子宮頸、卵巢、陰道、外陰和子宮之腫瘤，及/或男性前列腺和睪丸之腫瘤)，包括更佳地子宮頸癌。
這些於人類中完整記述之疾病亦可以類似病因發生於其他哺乳動物並可用本發明化合物來治療。
於本發明內文中，依傳統意象及意義，所使用之術語“治療(treatment或treat)”係意味或係指照顧及護理患者以對抗，減輕，衰減或緩解疾病或健康異常並改善因這個疾病，例如，癌症疾病，受損之生存條件。
本發明另外係提供本發明化合物於治療及/或預防疾病，特別是上述疾病之用途。
本發明另外係提供本發明化合物於製備醫藥品供治療及/或預防疾病，特別是上述疾病之用途。
本發明另外係提供本發明化合物於治療及/或預防疾病，特別是上述疾病之方法中之用途。
本發明另外係提供使用一有效量之至少一種本發明化合物，供治療及/或預防疾病，特別是上述疾病之方法。
本發明之抗-C4.4a結合劑-藥物接合物較佳係用於治療病患之癌症，其中所欲治療的病患之癌細胞係具有C4.4a表現。更佳地該治療係投予其癌細胞中C4.4a表現高於健康細胞之病患。
一種鑑定對治療癌症之抗-C4.4a結合劑-藥物接合物具有利反應之病患之方法，係包括測定病患的癌細胞C4.4a之表現。於一個具體例中，C4.4a表現係以C4.4a基因表現分析來測定。熟悉技藝者了解用於基因表現分析之方法，例如RNA偵測、定量或定性聚合酶連鎖反應或原位螢光雜交(FISH)。於另外較佳的具體例中，C4.4a表現係藉由免疫組織化學以抗-C4.4a抗體來測定。免疫組織化學較佳係於經甲醛-固定的組織上進行。用於免疫組織化學之抗體係與用於接合物中為相同之抗體。用於免疫組織化學之抗體為第二抗體-較佳為專一性辨識C4.4a標靶蛋白質。
本發明化合物可以其本身來使用，或若需要與一種或多種其他的藥理活性物質組合，只要此組合不會導致不欲的及 不可接受的副作用。本發明因此另外係提供包括至少一種本發明化合物和一種或多種另外的藥物之醫藥品，特別是供治療及/或預防上述疾病。
例如，本發明化合物可與已知的抗過度增生、細胞生長抑制或細胞毒性物質組合，用於治療癌症。可提及的適合用於組合之藥物例如下列：阿地白介素(aldesleukin)、阿侖磷酸(alendronic acid)、阿法干擾素(alfaferone)、阿利維甲酸(litretinoin)、安樂普利諾(allopurinol)、安樂匹(aloprim)、安洛西(aloxi)、六甲蜜胺(altretamine)、胺基格魯米特(glutethimide)、胺磷汀(amifostine)、胺柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine、阿那曲唑(anastrozole)、安澤美(anzmet)、安然愛斯普(aranesp)、阿加來必(arglabin)、三氧化砷(arsenic trioxide)、諾曼癌素(aromasin)、5-氮胞啶(5-azacytidine)、硫唑嘌呤(azathioprine)、BCG或tice-BCG、烏苯美司(bestatin)、倍他米松醋酸鹽(betamethasone acetate)、倍氯米松磷酸鈉(betamethasone sodium phosphate)、貝沙羅汀(bexarotene)、博來黴素硫酸鹽(bleomycin sulphate)、溴尿苷(broxuridine)、硼替佐米(bortezomib)、白消安(busulfan)、降鈣素(calcitonin)、卡帕什(campath)、卡培他濱(capecitabine)、卡鉑(carboplatin)、可蘇多(casodex)、西非松(cefesone)、西莫白介素(celmoleukin)、柔紅黴素(cerubidin)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、順鉑(cisplatin)、克拉屈濱(cladribin)、唑來膦酸(clodronic acid)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、阿糖胞 苷(cytarabine)、達卡巴嗪(dacarbazine)、放線菌素(dactinomycin)、柔紅黴素脂質體(daunoxome)、立克樂(decadron)、立克樂磷酸鹽(decadron phosphate)、戊酸雌二醇(delestrogen)、地尼白介素融合二毒素(denileukin diftitox)、甲潑尼龍(depomedrol)、地洛瑞林(deslorelin)、右雷佐生(dexrazoxane)、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、泰復肯(diflucan)、多西它賽(docetaxel)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、多柔比星、屈大麻酚(dronabinol)、DW-166HC、艾裡咖(eligard)、埃立特(elitek)、艾倫斯(ellence)、阿瑞吡坦(emend)、表柔比星(epirubicin)、阿法依泊汀(epoetin-alfa)、益比奧(epogen)、依鉑(eptaplatin)、左旋咪唑(ergamisol)、依絲翠(estrace)、雌二醇(estradiol)、雌莫司汀磷酸鈉(estramustine sodium phosphate)、炔雌醇(ethinylestradiol)、氨磷汀(ethyol)、羥乙二磷酸、依託泊甙(etopophos)、依託泊苷(etoposide)、法倔唑(fadrozole)、法司通(farstone)、非格司亭(filgrastim)、非那雄胺(finasteride)、來格司亭(fligrastim)、氟尿苷(floxuridine)、氟康唑(fluconazole)、氟達拉濱(fludarabin)、5-氟去氧尿苷單磷酸鹽(5-fluorodeoxyuridine monophosphate)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)(5-FU)、富美特龍(fluoxymesterone)、氟他胺(flutamide)、福美坦(formestane)、福斯替濱(fosteabine)、福莫司汀(fotemustine)、氟維司群(fulvestrant)、gammagard、吉西他濱(gemcitabine)、吉妥單抗(gemtuzumab)、gleevec、格立得(gliadel)、戈舍瑞林(goserelin)、格拉司瓊鹽酸鹽(granisetron鹽酸鹽)、組胺瑞 林(histrelin)、氫考酮(hycamtin)、氫化可的松(hydrocortone)、赤-羥基壬基腺嘌呤、羥基尿素、替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)、伊達比星(idarubicin)、異環磷醯胺(ifosfamide)、干擾素-α、干擾素-α-2、干擾素-α-2α、干擾素-α-2β、干擾素-α-n1、干擾素-α-n3、干擾素-β、干擾素-γ-1α、介白素-2、內含子A、艾瑞莎(iressa)、伊立替康、康你適(kytril)、香菇多醣硫酸鹽(lentinan sulphate)、曲來唑(letrozole)、亞葉酸(leucovorin)、亮丙瑞林(leuprolide)、亮丙瑞林醋酸鹽(leuprolide acetate)、左旋咪唑(levamisole)、左亞葉酸鈣鹽(levofolic acid calcium salt)、左甲狀腺素(levothroid)、左微思(levoxyl)、洛莫司汀(lomustine)、氯尼達明(lonidamine)、屈大麻酚(marinol)、氮芥(mechlorethamine)、甲鈷胺(mecobalamin)、美加米星醋酸鹽(medroxyprogesterone acetate)、甲地孕酮醋酸鹽(megestrol acetate)、美法侖(melphalan)、曼尼司(menest)、6-巰基嘌呤、美司鈉(mesna)、甲胺喋呤(methotrexate)、米唑維(metvix)、米替福新(miltefosine)、四環素(minocycline)、絲裂黴素C(mitomycin C)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、幕崔納(modrenal)、邁歐喜(myocet)、奈達鉑(nedaplatin)、紐拉塔(neulasta)、紐米佳(neumega)、紐波津(neupogen)、尼魯米特(nilutamide)、諾瓦得士(nolvadex)、NSC-631570、OCT-43、奧曲肽(octreotide)、奧丹亞龍鹽酸鹽(ondansetron鹽酸鹽)、orapred、益樂鉑(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、pediapred、培門冬酶(pegaspargase)、皮嘎耶(pegasys)、噴司 他汀(pentostatin)、必醫你舒(picibanil)、毛果芸香鹼鹽酸鹽(pilocarpine鹽酸鹽)、吡柔比星(pirarubicin)、普卡黴素(plicamycin)、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、潑尼莫司汀(prednimustine)、潑尼松龍(prednisolone)、潑尼松(prednisone)、倍美力(premarin)、丙卡巴肼(procarbazine)、procrit、雷替曲塞(raltitrexed)、立比扶(rebif)、錸-186依替膦酸鹽、利妥昔單抗、roferon-A、羅莫肽(romurtide)、舒樂津(salagen)、善得定(sandostatin)、沙格司亭(sargramostim)、司莫司汀(semustine)、西佐喃(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、舒汝美卓佑(solu-medrol)、鏈佐星(streptozocin)、氯化鍶-89、(synthroid)、他莫昔芬(tamoxifen)、坦洛新(tamsulosin)、他索納明(tasonermin)、睾內酯(tastolactone)、剋癌易(taxoter)、替西白介素(teceleukin)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、睪酮丙酸鹽(testosterone propionate)、惕思川(testred)、硫鳥嘌呤(thioguanine)、塞替派(thiotepa)、促甲狀腺素(thyrotropin)、替魯膦酸(tiludronic acid)、托泊替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifen)、托西莫單抗(tositumomab)、曲司珠單抗(tastuzumab)、曲奧舒凡(teosulfan)、維甲酸(tretinoin)、trexall、三甲基三聚氰胺、三甲曲沙(trimetrexate)、曲普瑞林醋酸鹽(triptorelin acetate)、曲普瑞林羥萘酸鹽(triptorelin pamoate)、UFT、尿苷(uridine)、戊柔比星(valrubicin)、維司力農(vesnarinone)、長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、長春地辛 (vindesine)、長春瑞濱(vinorelbine)、微鹵辛(virulizin)、卓弗蘭(zinecard)、淨司他丁斯酯(zinostatin-stimalamer)、卓弗蘭(zofran)；ABI-007、阿考比芬(acolbifen)、干擾素-γ-1b(actimmune)、阿芬尼它(affinitak)、胺蝶呤(aminopterin)、阿佐昔芬(arzoxifen)、阿索立尼(asoprisnil)、阿他美坦(atamestane)、阿曲森坦(atrasentan)、安維汀(avastin)、BAY 43-9006、索拉非尼(sorafenib)、CCI-779、CDC-501、塞來昔布(celebrex)、西妥昔單抗(cetuximab)、克雷斯托(crisnatol)、環丙氯地孕酮醋酸鹽(cyproterone acetate)、地西他濱(decitabine)、DN-101、多柔比星-MTC、dSLIM、度他雄胺(dutasteride)、艾特哢林(edotecarin)、依氟鳥氨酸(eflornithine)、依沙替康(exatecan)、維甲醯酚胺(fenretinide)、組織胺二鹽酸鹽、組胺瑞林水凝膠植入物(histrelin hydrogel implant)、鈥-166 DOTMP、伊班膦酸(ibandronic acid)、干擾素-γ、內含子-PEG、易莎平(ixabepilone)、鑰孔蟲戚血藍蛋白(keyhole limpet hemocyanine)、L-651582、蘭瑞肽(lanreotide)、拉索昔芬(lasofoxifen)、里布拉(libra)、洛那法尼(lonafarnib)、米普昔芬(miproxifen)、米諾膦酸(minodronate)、MS-209、微質體MTP-PE、MX-6、諾拉曲特(nafarelin)、奈莫柔比(nemorubicin)、諾司達(neovastat)、諾拉曲特(nolatrexed)、奧利默森(oblimersen)、onko-TCS、歐斯定(osidem)、太平洋紫杉醇聚麩胺酸鹽(paclitaxel polyglutamate)、帕米德諾內二鈉(pamidronate disodium)、PN-401、QS-21、誇西泮 (quazepam)、R-1549、雷洛昔芬(raloxifen)、豹蛙酶(ranpirnas)、13-順式-retic acid、沙鉑(satraplatin)、西奧骨化醇(seocalcitol)、T-138067、特羅凱(tarceva)、二十二碳六烯酸紫杉醇(taxoprexin)、胸腺肽(thymosin)-α-1、噻唑羧胺核苷(tiazofurin)、替吡法尼(tipifarnib)、替拉紮明(tirapazamine)、TLK-286、托瑞米芬(toremifen)、反MID-107R、伐司撲達(valspodar)、伐普肽(vapreotide)、瓦他拉尼(vatalanib)、維替泊芬(verteporfin)、長春氟寧(vinflunin)、Z-100、唑來磷酸(zoledronic acid)及這些之組合。
於較佳的具體例中，本發明化合物可與抗過度增生劑組合，例如-此列表並非為決定性的，如下所示：胺基格魯米特、L-天門冬醯胺酶、硫唑嘌呤、5-氮胞啶、博來黴素、白消安、卡鉑、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、順鉑、左旋門冬醯胺酶(colaspase)、環磷醯胺、阿糖胞苷、達卡巴嗪、放線菌素、柔紅黴素(daunorubicin)、己烯雌酚、2',2'-二氟去氧胞苷、多西它賽、多柔比星(阿黴素(adriamycin))、表柔比星、伊波希隆(epothilone)和其衍生物、赤-羥基壬基腺嘌呤、炔雌醇、依託泊苷、氟達拉濱磷酸鹽、5-氟去氧尿苷、5-氟去氧尿苷單磷酸鹽、5-氟尿嘧啶、富美特龍、氟他胺、六甲基三聚氰胺、羥基尿素、羥孕酮己酸酯、伊達比星、異環磷醯胺、干擾素、伊立替康、亞葉酸、洛莫司汀、氮芥、美加米星醋酸鹽、甲地孕酮醋酸鹽、美法侖、6-巰基嘌呤、美司鈉、甲胺喋呤、絲裂黴素C、米托坦、米托蒽醌、太平洋紫杉醇、噴司他汀、N-磷醯乙醯L-天門冬胺酸鹽 (PALA)、普卡黴素、潑尼松龍、潑尼松、丙卡巴肼、雷洛昔芬、司莫司汀、鏈佐星、他莫昔芬、替尼泊苷、睪酮丙酸鹽、硫鳥嘌呤、塞替派、托泊替康、三甲基三聚氰胺、尿苷、長春鹼、長春新鹼、長春地辛及長春瑞濱。
本發明化合物亦可以非常有前景的方式與生物治療劑例如抗體(例如安維汀(avastin)、美羅華(rituxan)、爾必得舒(erbitux)、賀賽汀(herceptin))。本發明化合物亦可以針對血管新生作用之治療組合達到正向效用，例如以安維汀、阿西替尼(axitinib)、西地尼布(recentin)、瑞戈非尼(regorafenib)、索拉菲尼(sorafenib)或舒尼替尼(sunitinib)。與蛋白酶體和mTOR之抑制劑以及與抗荷爾蒙和類固醇代謝酵素抑制劑組合，同樣的特別適合，因為其較有利的副作用性質。
通常，可以本發明化合物與其他具有細胞抑制或細胞毒性作用之藥劑的組合實行下列目標：˙相較於以個別的藥物治療，對減緩腫瘤生長、降低其大小或甚至完全消除具改良活性；˙比單一治療，使用較低劑量化療劑之可能性；˙相較於個別給藥，具極少副作用之更耐受治療的可能性；˙可能治療更廣泛的腫瘤疾病；˙對治療達到較高的反應率；˙相較於目前標準治療，病患存活時間更長。
本發明化合物再者亦可與放射性治療及/或外科手術組合使用。
本發明另外亦提供包括至少一種本發明化合物與習用上一種或多種惰性、無毒、醫藥上可接受賦形劑之醫藥品，及其用於上述目地之用途。
本發明化合物可全身性及/或局部作用。其可以適合此目的之方式來給藥，例如經口，非經腸胃，經肺，經鼻，經舌下，經舌，經頰，經直腸，經真皮，經皮，經結膜，經耳或為植入物或支架。
本發明化合物可以適合這些給藥途徑之給藥形式來投予。
根據已知技藝作動，快速釋放本發明化合物及/或以修正方式且含有以結晶及/或無定型及/或溶解型式之本發明化合物的給藥型式係適用來作為口服給藥，如錠劑(非包埋或包埋錠劑，例如含有對胃液具抗性之包埋層或以一延遲方式溶解或為不溶並控制本發明化合物之釋放)，膜/米紙或錠劑，其於口腔中迅速的崩解，膜/凍乾物，膠囊(例如硬或軟明膠膠囊)，膜衣錠劑，顆粒，小球丸，粉末，乳化液，懸浮液，氣溶膠或溶液。
非經腸胃給藥可以吸收步驟之分流(例如靜脈內、動脈內、心內、脊椎內或腰內)或包括吸收(例如肌肉內、皮下、皮內、經皮或腹膜內)來進行。適合非經腸胃投予之給藥形式包括溶液、懸浮液、乳液，凍乾物或無菌粉末形式之注射和輸液調配物。
於其他給藥途徑，如吸入藥物型式時(包括粉末吸入器，噴霧器)，適當的為鼻滴劑，溶液或噴霧劑，錠劑，膜/米紙或膠囊供舌，舌下或經頰給藥，栓劑，耳或眼製劑，陰道膠 囊，水性懸浮液(乳液，振盪混合物)，脂溶性懸浮液，油膏，藥膏，經皮治療系統(如貼布)，乳類，糊漿，泡沫，噴灑式粉末，植入物或支架。
較佳為口服及非經腸胃給藥，特別為經口及經靜脈給藥。
本發明化合物可轉化為所提及之給藥型式。此可依本身已知之方法藉由與惰性，無毒性，製藥上適當的賦形劑混合而奏效。這些賦形劑包括尤其是載體物質(例如微晶纖維素，乳糖，甘露糖醇)，溶劑(如液態聚乙二醇)，乳化劑及分散或濕潤劑(例如十二烷基硫酸鈉，聚山梨糖醇酐油酸酯)，結合劑(例如聚乙烯吡咯烷酮)，合成及天然聚合物(例如蛋白)，安定劑(如抗氧化劑，例如，抗壞血酸)，染劑(如無機染料，例如，氧化鐵)及味道及/或氣味矯正劑。
一般，已證明有利於非經腸給藥之情況下，係指由約0.001至1毫克/公斤體重，較佳為由0.01至0.5毫克/公斤體重之量，以便達到效果。於口服給藥之情況時，該劑量以體重計約為0.01至100毫克/公斤，較佳為約0.01至20毫克/公斤且非常特別佳為0.1至10毫克/公斤。
然而可能須偏離所提及之量，且特別是依體重、給藥途徑、個體對活性化合物之取向、調配物的性質及給藥時間點或間隔而定。因此，於某些情況下以低於上述最小量即足夠，而於其他情況下則必須超過所提及之上限。於相當大量給藥的情況下，適合將這些量分成數個個別劑量分散於一天中。
下列實例係闡明本發明。本發明不限於該實例。
除非另外有說明，下列試驗及實例中的百分比數字為重 量百分比；分量為重量份。於各案例中，液體/液體溶液之溶劑比例、稀釋比例及濃度數據係指體積。
 A.實例 縮寫和首字母縮寫：
HPLC及LC-MS法： 方法1(LC-MS)：
儀器：Waters Acquity SQD UPLC System；管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50毫米x 1毫米；洗提液A：1升水+0.25毫升99%濃甲酸，洗提液B：1升乙腈+0.25毫升99%濃甲酸；梯度：0.0分鐘90% A→1.2分鐘5% A→2.0分鐘5% A；流速：0.40毫升/分鐘；烘箱：50℃；UV偵測：210-400 nm。
方法2(LC-MS)：
儀器：Micromass QuattroPremier配有Waters UPLC Acquity；管柱：Thermo Hypersil GOLD 1.9μ 50毫米x 1毫米；洗提液A：1升水+0.5毫升50%濃甲酸，洗提液B：1升乙腈+0.5毫升50%濃甲酸；梯度：0.0分鐘90% A→0.1分鐘90% A→1.5分鐘10% A→2.2分鐘10% A；流速：0.33毫升/分鐘；烘箱：50℃；UV偵測：210 nm。
方法3(LC-MS)：
儀器：Micromass Quattro Micro MS配有HPLC Agilent Series 1100；管柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20毫米x 4毫米；洗提液A：1升水+0.5毫升50%濃甲酸，洗提液B：1升乙腈+0.5毫升50%濃甲酸；梯度：0.0分鐘100% A→3.0分鐘10% A→4.0分鐘10% A→4.01分鐘100% A(流速2.5毫升/分鐘)→5.00分鐘100% A；烘箱：50℃；流速：2毫升/分鐘；UV偵測：210 nm。
方法4(LC-MS)：
MS儀器：Micromass ZQ；HPLC儀器：HP 1100 Series；UV DAD；管柱：Phenomenex Gemini 3μ 30毫米x 3.00毫米；洗提液A：1升水+0.5毫升50%濃甲酸，洗提液B：1升乙腈+0.5毫升50%濃甲酸；梯度：0.0分鐘90% A→2.5分鐘30% A→3.0分鐘5% A→4.5分鐘5% A；流速：0.0分鐘1毫升/分鐘→2.5分鐘/3.0分鐘/4.5分鐘2毫升/分鐘；烘箱：50℃；UV偵測：210 nm。
方法5(HPLC)：
儀器：HP 1090 Series II；管柱：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e，50毫米x 4.6毫米；預備管柱：Merck Chromolith Guard Cartridge套組RP-18e，5毫米x 4.6毫米；注射量：5微升；洗提液A：70% HClO4 之水溶液(4毫升/公升)，洗提液B：乙腈；梯度：0.00分鐘20% B→0.50分鐘20% B→3.00分鐘90% B→3.50分鐘90% B→3.51分鐘20% B→4.00分鐘20% B；流速：5毫升/分鐘；管柱溫度：40℃。
方法6(HPLC)：
儀器：Waters 2695配有DAD 996；管柱：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e，50毫米x 4.6毫米；Ord.No.：1.51450.0001，預備管柱：Merck Chromolith Guard Cartridge套組RP-18e，5毫米x 4.6毫米；訂購編號：1.51470.0001，洗提液A：70% HClO4 之水溶液(4毫升/公升)，洗提液B：乙腈；梯度：0.00分鐘5% B→0.50分鐘5% B→3.00分鐘95% B→4.00分鐘95% B；流速：5毫升/分鐘。
方法7(LC-MS)：
MS儀器：Waters ZQ；HPLC儀器：Agilent 1100 Series；UV DAD；管柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20毫米x 4毫米；洗提液A：1升水+0.5毫升50%濃甲酸，洗提液B：1升乙腈+0.5毫升50%濃甲酸；梯度：0.0分鐘100% A→3.0分鐘10% A→4.0分鐘10% A→4.1分鐘100% A(流速2.5毫升/分鐘)；烘箱：55℃；流速：2毫升/分鐘；UV偵測：210 nm。
方法8(LC-MS)：
MS儀器：Waters ZQ；HPLC儀器：Agilent 1100 Series； UV DAD；管柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20毫米x 4毫米；洗提液A：1升水+0.5毫升50%濃甲酸，洗提液B：1升乙腈+0.5毫升50%濃甲酸；梯度：0.0分鐘100% A→2.0分鐘60% A→2.3分鐘40% A→3.0分鐘20% A→4.0分鐘10% A→4.2分鐘100% A(流速2.5毫升/分鐘)；烘箱：55℃；流速：2毫升/分鐘；UV偵測：210 nm。
方法9(LC-MS)：
儀器：Waters Acquity SQD UPLC System；管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50毫米x 1毫米；洗提液A：1升水+0.25毫升99%濃甲酸，洗提液B：1升乙腈+0.25毫升99%濃甲酸；梯度：0.0分鐘95% A→6.0分鐘5% A→7.5分鐘5% A；烘箱：50℃；流速：0.35毫升/分鐘；UV偵測：210-400 nm。
方法10(HPLC)：
儀器：Agilent 1200 Series；管柱：Agilent Eclipse XDB-C18 5μ 4.6毫米x 150毫米；預備管柱：Phenomenex KrudKatcher可拋棄式預備-管柱；注射量：5微升；洗提液A：1升水+0.01%三氟醋酸；洗提液B：1升乙腈+0.01%三氟醋酸；梯度：0.00分鐘10% B→1.00分鐘10% B→1.50分鐘90% B→5.5分鐘10% B；流速：2毫升/分鐘；管柱溫度：30℃。
對於所有的反應物或試劑，其製備並未明確地描述於下文中，係由市售一般可取得的來源所獲得。對於其他的反應物或試劑，其製備法同樣地並未描述於下文中，且並非市售或由非一般性可取得的來源所獲得者，係提出其中描述其製 備法之公開文獻作為參考。
方法11(LC-MS)：
儀器：Waters ACQUITY SQD UPLC系統；管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 30 x 2毫米；洗提液A：1升水+0.25毫升99%濃甲酸，洗提液B：1升乙腈+0.25毫升99%濃甲酸；梯度：0.0分鐘90% A→1.2分鐘5% A→2.0分鐘5% A烘箱：50℃；流速：0.60毫升/分鐘；UV偵測：208-400 nm。
方法12(HPLC)：
儀器：Agilent 1200 Series配有管柱、烘箱和DAD；管柱：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e，50毫米x 4.6毫米；Ord.No.：1.51450.0001；預備管柱：Merck Chromolith Guard Cartridge套組RP-18e，5毫米x 4.6毫米；Ord.No.：1.51470.0001；洗提液A：70% HClO4 之水溶液(4毫升/公升)，洗提液B：乙腈；梯度：0.00分鐘5% B→0.50分鐘5% B→3.00分鐘95% B→4.00分鐘95% B；流速：5毫升/分鐘；管柱溫度：30℃。
方法13(LC-MS)：
MS儀器：Waters(Micromass)Quattro Micro；儀器HPLC：Agilent 1100 Series；管柱：YMC-Triart C18 3 μ 50 x 3毫米；洗提液A：1升水+0.01莫耳碳酸銨，洗提液B：1升乙腈；梯度：0.0分鐘100% A→2.75分鐘5% A→4.5分鐘5% A；烘箱：40℃；流速：1.25毫升/分鐘；UV偵測：210 nm。
起始化合物及中間體： 起始化合物1 (2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(Boc-dolaproine)
標的化合物可根據文獻方法以各種方式來製備；參見，例如Pettit等人，Synthesis 1996，719；Shioiri等人，Tetrahedron Lett.1991，32，931；Shioiri等人，Tetrahedron 1993，49，1913；Koga等人，Tetrahedron Lett.1991，32，2395；Vidal等人，Tetrahedron 2004，60，9715；Poncet等人，Tetrahedron 1994，50，5345。其係以游離酸或以含二環己胺之1：1鹽製備。
起始化合物2a (3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基胺基)庚酸第三丁酯鹽酸鹽(dolaisoleucine-OtBu x HCl)
標的化合物可根據文獻方法以各種方式來製備；參見，例如Pettit等人，J.Org.Chem.1994，59，1796；Koga等人，Tetrahedron Lett.1991，32，2395；Shioiri等人，Tetrahedron Lett.1991，32，931；Shioiri等人，Tetrahedron 1993，49，1913。
起始化合物2b (3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基胺基)庚酸第三丁酯(dolaisoleucine-OtBu)
標的化合物係類似起始化合物2a而製備，但氫化反應係於未添加1N鹽酸時進行。
起始化合物3 Nα -(第三丁氧基羰基)-N-羥基-L-苯基丙胺醯胺
標的化合物係以文獻方法來製備(A.Ritter等人，J.Org.Chem.1994，59，4602)。
產率：750毫克(理論值之75%)。
LC-MS(方法3)：Rt =1.67分鐘；MS(ESIpos)：m/z=281(M+H)+ 。
起始化合物4 1,2-唑啶鹽酸鹽
標的化合物係以文獻方法來製備(參見，例如H.King，J.Chem.Soc.1942，432)；其亦為市售可得。
起始化合物5 1,2-烷鹽酸鹽
標的化合物係以文獻方法來製備(參見，例如H.King，J.Chem.Soc.1942，432)。
起始化合物6 2-氧雜-3-氮雜雙環[2.2.2]辛-5-烯
標的化合物可藉由文獻方法製備成Boc-保護形式(參見，例如C.Johnson等人，Tetrahedron Lett.1998，39，2059)；去保護係以習用方式藉由以三氟醋酸處理且隨即中和來進行。
產率：149毫克(理論值之89%)
起始化合物7 (1S,2R)-1-(羥基胺甲醯基)-2-苯基環丙基胺基甲酸第三丁酯
標的化合物係由市售(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙烷羧酸以文獻方法(A.Ritter等人，J.Org.Chem.1994，59，4602)處理來製備(C.Cativiela等人，Chirality 1999，11，583)。
產率：339毫克(理論值之59%)
LC-MS(方法1)：Rt =0.82分鐘；MS(ESIpos)：m/z=293(M+H)+ 。
中間體1 (3R,4S,5S)-4-[{N-[(苄氧基)羰基]-L-纈胺醯基}(甲基)胺基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸第三丁酯
將10.65克(41.058毫莫耳)(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基胺基)庚酸第三丁酯(起始化合物2b)置於250毫升二氯甲烷中處理並將溶液冷卻至-10℃。然後，於攪拌下加入10.317克(41.058毫莫耳)N-[(苄氧基)羰基]-L-纈胺酸、16.866克(61.586毫莫耳)2-溴-1-乙基四氟硼酸吡錠(BEP)及28.6毫 升N,N-二異丙基乙胺，並隨即將混合物於RT攪拌20 h。然後將反應混合物用二氯甲烷稀釋並以飽和氯化鈉溶液振盪二次，於硫酸鈉上乾燥，過濾並濃縮。將殘質以閃蒸色層分離法於矽膠上用4：1石油醚/醋酸乙酯作為洗提液予以純化。將對應的餾份濃縮並將殘質於高度真空中乾燥過夜。得到10.22克(理論值之51%)之標的化合物為淡黃色油狀物。
HPLC(方法5)：Rt =2.3分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.59分鐘；MS(ESIpos)：m/z=493(M+H)+ 。
中間體2 (3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-纈胺醯基)胺基]庚酸第三丁酯
將500毫克(1毫莫耳)(3R,4S,5S)-4-[{N-[(苄氧基)羰基]-L-纈胺醯基}(甲基)胺基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸第三丁酯(中間體1)溶解於50毫升甲醇中，及添加100毫克10%披鈀活性碳後，於標準氫氣壓、RT下氫化1 h。然後將催化劑濾出並於減壓下將溶劑移除。得到370毫克(quant.)實質上呈無色油狀物之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.59分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.74分鐘；MS(ESIpos)：m/z=359 (M+H)+ 。
中間體3 N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-第三丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將4.64克(13.13毫莫耳)N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺酸溶解於20毫升DMF並連續與4.28克(11.94毫莫耳)(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-纈胺醯基)胺基]庚酸第三丁酯(中間體2)、2.75克(14.33毫莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽及2.2克(14.33毫莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物掺合。將混合物於RT攪拌過夜。然後將反應混合物倒入半飽和氯化銨水溶液及醋酸乙酯之混合物中。將有機相移出，連續以飽和碳酸氫鈉溶液及飽和氯化鈉溶液清洗，於硫酸鎂上乾燥，過濾和濃縮。殘質直接用於下個步驟，未經進一步純化。
產率：9.1克(定量，60%純度)
HPLC(方法5)：Rt =2.7分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.99分鐘；MS(ESIpos)：m/z=694(M+H)+ 。
中間體4 N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將9.1克粗產物N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-第三丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體3)置於56.6毫升二氯甲烷中處理，加入56.6毫升三氟醋酸，並將混合物於RT攪拌2 h。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮並將剩餘的殘質以閃蒸色層分離法，使用二氯甲烷、3：1二氯甲烷/醋酸乙酯及15：5：0.5二氯甲烷/醋酸乙酯/甲醇作為洗提液予以純化。將對應的餾份予以純化並濃縮後，得到5.8克(理論值之86%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =2.2分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.3分鐘；MS(ESIpos)：m/z=638(M+H)+ 。
中間體5 (2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基胺基甲酸第三丁酯
將500毫克(1.9毫莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-L-苯基丙胺酸溶解於10毫升DMF且連續與466毫克(3.8毫莫耳)1,2-烷鹽酸鹽(起始化合物5)、433毫克(2.3毫莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、382毫克(2.8毫莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物及731毫克(5.7毫莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌過夜。然後將反應混合物倒入半飽和氯化銨水溶液和醋酸乙酯之混合物中。將有機相移出，連續以飽和碳酸氫鈉溶液及飽和氯化鈉溶液清洗，於硫酸鎂上乾燥，過濾並濃縮。得到620毫克(理論值之98%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.62分鐘；MS(ESIpos)：m/z=235(M-C4 H8 -CO2 +H)+ 。
中間體6 (2S)-2-胺基-1-(1,2-烷-2-基)-3-苯基丙-1-酮三氟醋酸鹽
將620毫克(1.85毫莫耳)(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基胺基甲酸第三丁酯(中間體5)置於5毫升二氯甲烷中處理，加入10毫升三氟醋酸並將混合物於RT攪拌30分鐘。將反應混合物於減壓下濃縮並將剩剩餘的殘質由水/乙腈中冷凍乾燥。於此方式，得到779毫克(理論值之91%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =0.45分鐘；LC-MS(方法3)：Rt =1.09分鐘；MS(ESIpos)：m/z=235(M+H)+ 。
中間體7 (2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟醋酸鹽
將360毫克(1.25毫莫耳)(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基 羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)置於10毫升DMF中處理，並連續與579.2毫克(1.25毫莫耳)(2S)-2-胺基-1-(1,2-烷-2-基)-3-苯基丙-1-酮三氟醋酸鹽(中間體6)、714.5毫克(1.88毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)及655微升N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌16 h。然後將反應混合物濃縮，並將殘質置於醋酸乙酯中處理及先以5%檸檬酸水溶液振盪萃取，然後以5%碳酸氫鈉溶液且隨即用飽和氯化鈉溶液萃取。將有機相濃縮並將殘質以閃蒸色層分離法於矽膠上用16：4二氯甲烷/甲醇作為洗提液予以純化。將對應的餾份合併並於減壓下將溶劑移除。將殘質真空乾燥後，得到503.5毫克(理論值之74%)經Boc保護之中間體(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-羧基第三丁酯。
HPLC(方法12)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.12分鐘；MS(ESIpos)：m/z=504(M+H)+ 。
將503毫克(1毫莫耳)此中間體置於20毫升二氯甲烷中處理，加入10毫升三氟醋酸，並將混合物於RT攪拌30分鐘。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮並用二氯甲烷再蒸餾。將剩餘的殘質用正丙烷由醋酸乙酯中沉澱，並將溶劑傾析出來。將得到的殘質溶解於水並以醋酸乙酯振盪萃取，且隨即將含水相冷凍乾燥。由此法得到462毫克(理論值之89%) 呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.53分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.57分鐘；MS(ESIpos)：m/z=404(M+H)+ 。
中間體8 N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將51毫克(0.08毫莫耳)N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體4)溶解於10毫升DMF，並加入0.5毫升哌啶。於RT攪拌10分鐘後，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘質與乙醚攪拌。將不可溶的組成份濾出並重複以乙醚清洗。然後將過濾之殘質置於5毫升二烷/水中處理，並將溶液以1N氫氧化鈉溶液調整至pH 11。於超音波下處理，分成數次加入總計349毫克(1.6毫莫耳)二碳酸二-第三丁酯，於此期間將溶液的pH維持於11。反應結束後，蒸發二烷並以檸檬酸將水溶液調整至pH 2-3。將混合物各以50毫升醋酸乙酯萃取二次。將有機相合併，於硫酸鎂上乾燥，並於減壓下濃縮。將殘質置於乙醚中處理，並以丙烷沉澱標的化合物。以傾析將溶劑移除。將殘質以戊烷再 消化數次且最後於高度真空中乾燥。如此得到40毫克(理論值之97%)標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =2.2分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.32分鐘；MS(ESIpos)：m/z=516(M+H)+ 。
中間體9 (2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-羧酸第三丁酯
標的化合物係類似於中間體5、6和7之合成，於三階段藉由將市售(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙烷羧酸與1,2-烷鹽酸鹽(起始化合物5)偶合，隨即用三氟醋酸去保護並與起始化合物1偶合來製備。將最終產物藉由製備性HPLC予以純化。
HPLC(方法5)：Rt =2.12分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.25分鐘；MS(ESIpos)：m/z=516(M+H)+ 。
中間體10 N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將315毫克(0.494毫莫耳)N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體4)溶解於12毫升DMF並與104毫克(0.543毫莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽及83毫克(0.543毫莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物掺合，及將混合物於RT攪拌90分鐘。隨即，加入112微升N,N-二異丙基乙胺及149毫克(0.494毫莫耳)先前由起始化合物1藉由三氟醋酸移除Boc保護基團所製備之(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙酸三氟醋酸鹽。將混合物於RT攪拌2 h且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化二次。得到140毫克(理論值之35%)呈無色泡沫型式之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =2.40分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.38分鐘；MS(ESIpos)：m/z=807 (M+H)+ 。
中間體11 N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-蘇胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，藉由於醋酸乙酯中處理及以5%硫酸溶液振盪萃取，將N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-蘇胺酸由其237毫克(0.887毫莫耳)二環己基胺鹽中釋放出來。將有機相於硫酸鎂上乾燥，過濾並濃縮。將殘質置於16毫升DMF中處理並連續與365毫克(1毫莫耳)(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-纈胺醯基)胺基]庚酸第三丁酯(中間體2)、185毫克(0.967毫莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽及148毫克(0.967毫莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物掺合。將混合物於RT攪拌2 h。然後將反應混合物倒入半飽和氯化銨水溶液及醋酸乙酯之混合物中。將有機相移出，連續以飽和碳酸氫鈉溶液及飽和氯化鈉溶液清洗，於硫酸鎂上乾燥，過濾並濃縮。將殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到283毫克(理論值之53%)第三丁酯中間體N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-蘇胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-第三丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
HPLC(方法5)：Rt =2.17分鐘。
將283毫克(0.466毫莫耳)此中間體置於5毫升二氯甲烷中處理，加入5毫升無水三氟醋酸並將混合物於RT攪拌2 h。隨即，將反應混合物於高度真空中濃縮並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到156毫克(理論值之61%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.50分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.09分鐘；MS(ESIpos)：m/z=552(M+H)+ 。
中間體12 N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-苯丙胺酸苄酯三氟醋酸鹽
於第1步驟中，藉由將600毫克(1.28毫莫耳)對應的二環己基銨鹽溶解於100毫升醋酸乙酯且先以50毫升0.5%硫酸而然後以飽和氯化鈉溶液萃取振盪，將起始化合物由此鹽中釋放出來。然後將有機相於硫酸鎂上乾燥，過濾，濃縮並與苯丙胺酸苄酯依類似於中間體7之合成法立即反應，然後去保護。
產率：650毫克(94%於2階段中)
HPLC(方法6)：Rt =1.76分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.68分鐘；MS(ESIpos)：m/z=425 (M+H)+ 。
中間體13 (βS)-N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-β-甲基-L-苯丙胺酸苄酯三氟醋酸鹽
首先，藉由於醋酸乙酯中處理並以5%硫酸氫鉀水溶液振盪萃取，而將(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸由351毫克(0.75毫莫耳)二環己基胺鹽(起始化合物1)中釋放出來。將有機相於硫酸鎂上乾燥，過濾並濃縮。將殘質置於10毫升DMF中處理，並連續與373毫克(0.75毫莫耳)(βS)-β-甲基-L-苯丙胺酸苄酯三氟醋酸鹽[由市售(βS)-N-(第三丁氧基羰基)-β-甲基-L-苯基丙胺酸以EDC/DMAP-媒介的酯化作用與苄基醇，隨即用三氟醋酸分離Boc保護基團來製備]、428毫克(1.125毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)及392微升N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌20 h。然後將反應混合物倒入半飽和氯化銨水溶液和醋酸乙酯之混合物中。將有機相移出，連續以飽和碳酸氫鈉溶液及飽和氯化鈉溶液清洗，且隨即濃縮。將殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到230毫克(理論值之57%)經Boc保護之中間體(βS)-N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2- 基]-3-甲氧基-2-甲基丙醯基}-β-甲基-L-苯丙胺酸苄酯。
HPLC(方法6)：Rt =2.3分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.36分鐘；MS(ESIpos)：m/z=539(M+H)+ 。
將230毫克(0.42毫莫耳)此中間體置於5毫升二氯甲烷中處理，加入5毫升三氟醋酸，並將混合物於RT攪拌30分鐘。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮。將剩餘的殘質進一步於減壓下乾燥且然後由乙腈/水中冷凍乾燥。由此法得到230毫克(quant.)標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.6分鐘。
中間體14 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將143毫克(0.223毫莫耳)N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體4)置於15毫升 DMF中處理，並連續與141毫克(0.22毫莫耳)(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟醋酸鹽(中間體7)、102毫克(0.27毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲四甲基六氟磷酸(HATU)及128微升(0.74毫莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌3 h。然後將混合物倒入半飽和氯化銨水溶液及醋酸乙酯之混合物中。將有機相移出，連續以飽和碳酸氫鈉溶液及飽和氯化鈉溶液清洗，於硫酸鎂上乾燥，過濾並濃縮。如此得到275毫克(quant.)Fmoc-保護的中間體N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
HPLC(方法5)：Rt =2.73分鐘；LC-MS(方法4)：Rt =3.19分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1023(M+H)+ 。
將46毫克(0.045毫莫耳)此中間體溶解於4毫升DMF。 加入1毫升哌啶後，將反應混合物於RT攪拌1 h。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化(洗提液：乙腈+0.01% TFA/水+0.01% TFA)。得到22毫克(理論值之54%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.68分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.03分鐘；MS(ESIpos)：m/z=801 (M+H)+
1 H NMR(600 MHz，DMSO-d6 )：δ=8.8(m,2H),8.7(m,1H),8.42和8.15(2d,1H),7.3-7.1(m,5H),5.12和4.95(2m,1H),4.70和4.62(2m,1H),4.62和4.50(2t,1H),4.1-3.9(m,3H),3.85(m,1H),3.75-3.6(m,2H),3.23,3.18,3.17,3.14,3.02和2.96(6s,9H),3.1-2.9和2.75(2m,2H),2.46(m,3H),2.4-2.1(m,2H),2.05(br.m,2H),1.85-1.55(br.m,6H),1.5-1.2(br.m,3H),1.1-0.8(m,18H),0.75(t,3H)[更多的訊號隱藏於H2 O波峰下]。
中間體15 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將126毫克(0.198毫莫耳)N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體4)置於10毫升DMF中處理並連續與105毫克(0.198毫莫耳)(2R,3R)-3-甲 氧基-2-甲基-N-[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟醋酸鹽(中間體17)、41.6毫克(0.217毫莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、33毫克(0.217毫莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物及79微升(0.454毫莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌過夜。然後將反應混合物倒入半飽和氯化銨水溶液及醋酸乙酯之混合物中。將有機相移出，連續以飽和碳酸氫鈉溶液及飽和氯化鈉溶液清洗，於硫酸鎂上乾燥，過濾並濃縮。如此得到220毫克(quant.)Fmoc-保護的中間體N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
HPLC(方法5)：Rt =2.77分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.5分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1037(M+H)+ 。
將220毫克(0.212毫莫耳)此中間體溶解於5毫升DMF。加入1毫升哌啶後，將反應混合物於RT攪拌1 h。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。(洗提液：乙腈+0.01% TFA/水+0.01% TFA)。得到91毫克(理論值之46%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.71分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.9分鐘；MS(ESIpos)：m/z=815 (M+H)+
1 H NMR(600 MHz，DMSO-d6 )：δ=8.87和8.80(2d,2H),8.75(m,1H),8.40和7.98(2d,1H),7.3-7.1(m,5H),5.45和5.2(2t,1H),4.78和4.62(2m,1H),4.73和4.58(2t,1H),4.2-4.0(m,3H),3.7-3.6(m,1H),3.35,3.20,3.18,3.14,3.12和3.00(6s,9H),3.1和2.95(2m,2H),2.46(m,3H),2.4-2.0(m,4H),1.9-1.6(m,4H),1.6-1.2(m,5H),1.1-0.75(m,21H),0.80(t,3H)[更多的訊號隱藏於H2 O波峰下]。
中間體16 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將617毫克(1.2毫莫耳)(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-羧酸第三丁酯(中間體24)置於44毫升二氯甲烷中處理，加入4.4毫升三氟醋酸並將混合物於RT攪拌30分鐘。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮並將 剩餘的殘質由二烷/水中冷凍乾燥。得到702毫克(quant.)去保護之化合物(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟醋酸鹽為粗產物，其未經進一步純化即用於下個階段。
將470毫克(0.74毫莫耳)N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體4)置於57毫升DMF中處理並連續與390毫克(約0.74毫莫耳)上述(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟醋酸鹽、336毫克(0.88毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)及423微升(2.4毫莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌2 h。然後將反應混合物倒入半飽和氯化銨水溶液及醋酸乙酯之混合物。將有機相移出，連續以飽和碳酸氫鈉溶液及飽和氯化鈉溶液清洗，於硫酸鎂上乾燥，過濾並濃縮。將殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到453毫克(理論值之59%)Fmoc-保護的中間體N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
HPLC(方法5)：Rt =2.58分鐘； LC-MS(方法1)：Rt =3.10分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1035(M+H)+ 。
將453毫克(0.438毫莫耳)此中間體溶解於24毫升DMF。加入2.4毫升哌啶後，將反應混合物於RT攪拌30分鐘。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化(洗提液：乙腈/0.1% TFA之水中溶液)。得到260毫克(理論值之64%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.64分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.86分鐘；MS(ESIpos)：m/z=813(M+H)+
1 H NMR(400 MHz，DMSO-d6 )：δ=8.8(m,2H),8.65(m,2H),7.3-7.1(m,5H),4.8-4.05(m,2H),4.0和3.82(2m,2H),3.8-3.5(m,8H),3.32,3.29,3.20,3.19,3.12和3.00(6s,9H),2.65(t,1H),2.5-2.45(m,3H),2.4-1.3(m,15H),1.15-0.85(m,18H),0.8和0.75(2d,3H)[更多的訊號隱藏於H2 O波峰下]。
中間體17 N-苄基-N-甲基-L-苯基丙胺醯胺三氟醋酸鹽
將1000毫克(3.77毫莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-L-苯基丙胺酸溶解於10毫升DMF並與457毫克(3.77毫莫耳)N-甲基苄基胺、2150毫克(5.65毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1- 基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及657微升N,N-二異丙基乙胺掺合。將反應混合物於RT攪拌30分鐘且然後於減壓下濃縮。將殘質置於二氯甲烷中處理並以水振盪萃取三次。將有機相於硫酸鎂上乾燥及濃縮。將殘質以閃蒸色層分離法於矽膠上用3：1石油醚/醋酸乙酯作為洗提液予以純化。將產物餾份濃縮並將殘質於高度真空中乾燥。如此得到1110毫克(理論值之75%)經Boc保護之中間體N-苄基-Nα -(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-苯基丙胺醯胺。
HPLC(方法6)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.14分鐘；MS(ESIpos)：m/z=369(M+H)+ 。
將1108毫克(3,007毫莫耳)此中間體置於30毫升二氯甲烷中處理，加入10毫升三氟醋酸並將混合物於RT攪拌30分鐘。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮，將剩餘的殘質與二氯甲烷攪拌並將溶劑蒸餾出來。將殘質與戊烷再攪拌兩次，每次均將溶劑傾析出來且最後將標的化合物於高度真空中乾燥。如此得到1075毫克(理論值之93%)呈一樹脂之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.6分鐘；MS(ESIpos)：m/z=269(M+H)+ 。
中間體18 N-苄基-Nα -{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-N-甲基-L-苯基丙胺醯胺三氟醋酸鹽
首先，藉由於醋酸乙酯中處理及以5%硫酸水溶液振盪萃取，將(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)由其141毫克(0.491毫莫耳)二環己基胺鹽中釋放出來。將有機相於硫酸鎂上乾燥，過濾並濃縮。將殘質置於10毫升DMF中處理並加入187.6毫克(0.49毫莫耳)N-苄基-N-甲基-L-苯基丙胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體9)、190.3毫克(1.47毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)和256微升N,N-二異丙基乙胺。將混合物於RT攪拌1 h。然後將反應混合物濃縮，將殘質置於醋酸乙酯中處理並隨即連續以半飽和氯化銨溶液、飽和碳酸氫鈉溶液和水振盪萃取。將有機相於硫酸鎂上乾燥及濃縮。將殘質以閃蒸色層分離法於矽膠上用30：1乙腈/水作為洗提液予以純化。將產物餾份濃縮並將殘質於高度真空中乾燥。如此得到168毫克(理論值之64%)經Boc保護之中間體(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)胺基]-1-側氧基-3-苯基丙-2-基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-羧酸第三丁酯。
HPLC(方法6)：Rt =2.2分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.22分鐘；MS(ESIpos)：m/z=538(M+H)+ 。
將168毫克(0.312毫莫耳)此中間體置於15毫升二氯甲烷中處理，加入3毫升三氟醋酸並將混合物於RT攪拌30分鐘。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮。首先將剩餘的殘質與二氯甲烷攪拌，然後與乙醚攪拌，每次均將溶劑蒸餾出來。於高度真空中乾燥後，得到170毫克(理論值之99%)呈一樹脂之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.73分鐘；MS(ESIpos)：m/z=438(M+H)+ 。
中間體19 N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-苯丙胺酸甲酯三氟醋酸鹽
標的化合物係類似於中間體18之合成，處理由二環己基胺鹽中釋放出來之(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)和L-苯丙胺酸甲酯鹽酸鹽來製備。
HPLC(方法5)：Rt =0.6分鐘；LC-MS(方法3)：Rt =1.17分鐘；MS(ESIpos)：m/z=349(M+H)+ 。
中間體20 N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-色胺酸苄酯三氟醋酸鹽
標的化合物係類似於中間體18之合成，由二環己基胺鹽中釋放出來之(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)和L-色胺酸苄酯開始來製備。
HPLC(方法6)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.8分鐘；MS(ESIpos)：m/z=464(M+H)+ 。
中間體21 (1S,2R)-1-({(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}胺基)-2-苯基環丙烷羧酸苄酯三氟醋酸鹽
標的化合物係類似於中間體18之合成，由二環己基胺鹽中釋放出來之(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2- 基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)及(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸苄酯開始來製備。(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸苄酯係預先以標準方法，藉由將市售(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙羧酸以苄基醇酯化且隨即用三氟醋酸分離Boc來製備。
HPLC(方法5)：Rt =1.5分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =0.93分鐘；MS(ESIpos)：m/z=437(M+H)+ 。
中間體22 6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N'-甲基己烷肼三氟醋酸鹽
將100毫克(473微莫耳)6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸溶解於71微升DMF且然後與139毫克(947微莫耳)1-甲基肼羧酸第三丁酯、182毫克(947微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽及145毫克(947微莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物掺合。將混合物於RT攪拌過夜且然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。由二烷/水中冷凍乾燥後，得到129毫克(理論值之80%)呈無色泡沫之保護的中間體。
隨即，將129毫克(380微莫耳)用2毫升三氟醋酸於8毫升二氯甲烷中去保護。將混合物於RT攪拌1 h後，將反應 混合物於減壓下濃縮。將殘質由乙腈/水中冷凍乾燥，留下125毫克(理論值之83%)呈無色泡沫之標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.38分鐘；MS(ESIpos)：m/z=240(M+H)+
中間體23 N-(2-胺基乙基)-4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丁醯胺三氟醋酸鹽
首先，將35毫克(164微莫耳)2-(甲基胺基)乙基胺基甲酸第三丁酯鹽酸鹽三氟醋酸鹽、30毫克(164微莫耳)4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁酸、75毫克(197微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及57微升N,N-二異丙基乙胺與5毫升DMF混合並於RT攪拌過夜。隨即，於減壓下將溶劑移除並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份濃縮並由二烷/水中冷凍乾燥，得到35毫克(理論值之63%)保護的中間體。
HPLC(方法12)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.71分鐘；MS(ESIpos)：m/z=340(M+H)+ 。
隨即，將保護之中間體整份用1毫升三氟醋酸於5毫升二氯甲烷中去保護，得到28毫克(理論值之77%)標的化合物。
LC-MS(方法3)：Rt =0.75分鐘；MS(ESIpos)：m/z=240(M+H)+ 。
中間體24 4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-[2-(甲基胺基)乙基]丁醯胺三氟醋酸鹽
首先，將35毫克(164微莫耳)(2-胺基乙基)甲基胺基甲酸第三丁酯鹽酸鹽三氟醋酸鹽、30毫克(164微莫耳)4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁酸、75毫克(197微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及57微升N,N-二異丙基乙胺於5毫升DMF中合併，且於RT攪拌。隨即，於減壓下將溶劑移除並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份濃縮並由二烷/水中冷凍乾燥，得到51毫克(理論值之91%)保護的中間體。
HPLC(方法12)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.77分鐘；MS(ESIpos)：m/z=340(M+H)+ 。
隨即，將整份用1毫升三氟醋酸於5毫升二氯甲烷中去保護，得到45毫克(理論值之69%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.19分鐘；MS(ESIpos)：m/z=240 (M+H)+ 。
中間體25 (2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙酸苄酯三氟醋酸鹽
首先，藉由於醋酸乙酯中處理及以100毫升5%硫酸水溶液振盪萃取，將(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸由其1.82克(388毫莫耳)二環己基胺鹽中釋放出來。將有機相於硫酸鎂上乾燥，過濾並濃縮。將殘質置於10毫升二烷及10毫升水中處理，加入1517毫克(4.66毫莫耳)碳酸銫，並將混合物以超音波浴處理5分鐘，及於減壓下濃縮且以DMF再蒸餾一次。然後將殘質於15毫升二氯甲烷中處理，並加入1990毫克(11.64毫莫耳)苄基溴。將混合物以超音波浴處理15分鐘，且然後於減壓下濃縮。將殘質於醋酸乙酯及水之間分佈，並將有機相移出，且以飽和氯化鈉溶液振盪萃取且然後濃縮。然後將殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到1170毫克(理論值之80%)經Boc保護之中間體。
隨即，立刻將這些1170毫克用5毫升三氟醋酸於15毫升二氯甲烷中去保護。於RT攪拌15分鐘後，將反應混合物於減壓下濃縮。將殘質由二烷中冷凍乾燥。於高度真空中 乾燥後，剩餘1333毫克(理論值之84%)呈黃色油狀物之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.5分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.59分鐘；MS(ESIpos)：m/z=278(M+H)+ 。
中間體26 N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將1200毫克(2.33毫莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體5)與910.8毫克(2.33毫莫耳)(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙酸苄酯三氟醋酸鹽(中間體14)、1327毫克(3.49毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及2027微升N,N-二異丙基乙胺於50毫升DMF中合併，並將混合物於RT攪拌5分鐘。之後，於減壓下將溶劑移除。將剩餘的殘質置於醋酸乙酯中處理並連續以5%檸檬酸水溶液及飽和碳酸氫鈉溶液振盪萃取。將有機相移出並濃縮。將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將產物餾份合併及濃縮，並將殘質於高度 真空中乾燥。如此得到1000毫克(理論值之55%)呈一樹脂之苄酯中間體N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-(苄氧基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
LC-MS(方法1)：Rt =1.56分鐘；MS(ESIpos)：m/z=775(M+H)+ 。
將所得到之此中間體整份置於25毫升甲醇和二氯甲烷(20：1)混合物中處理，以氫化作用於標準氫氣壓下以10%披鈀活性碳作為催化劑移除苄酯基團。於RT攪拌30分鐘後，將催化劑濾出並將濾液於減壓下濃縮。如此得到803毫克(理論值之91%)呈白色固體之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.24分鐘；MS(ESIpos)：m/z=685(M+H)+ 。
中間體27 (1S,2R)-1-胺基-2-苯基-正丙基環丙烷甲醯胺三氟醋酸鹽
標的化合物係藉由將市售(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙烷羧酸以正丙胺於O-(7-氮雜苯并三唑-1- 基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)之存在下偶合，且隨即用三氟醋酸分離Boc來製備(產率：於二階段中理論值之85%)。
HPLC(方法6)：Rt =1.2分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.52分鐘；MS(ESIpos)：m/z=219(M+H)+ 。
中間體28 (1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸乙酯三氟醋酸鹽
標的化合物係以標準方法，藉由將市售(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙烷羧酸以乙醇酯化，且隨即用三氟醋酸分離Boc來製備。
LC-MS(方法1)：Rt =0.50分鐘；MS(ESIpos)：m/z=206(M+H)+ 。
中間體29 4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁酸
於含1.39克(8.95毫莫耳)N-甲氧基羰基馬來酸之44毫升飽和碳酸氫鈉溶液中，於0℃加入1.5克(8.95毫莫耳)4-胺基-2,2-二甲基丁酸，並將混合物攪拌40分鐘。隨即，移除冷卻浴並將反應混合物再攪拌1 h。然後於以冰冷卻下，將反應混合物藉由加入硫酸調整至pH 3，並以醋酸乙酯萃取。將合併之有機相於硫酸鎂上乾燥及濃縮。得到1.17克(79%純度，理論值之49%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.64分鐘；m/z=212(M+H)+ 。
中間體30 2-[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁醯基]肼羧酸第三丁酯
於含50毫克(237微莫耳)4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁酸之2毫升THF溶液中，於0℃先加入26微升(237微莫耳)4-甲基嗎福啉且然後加入31微升(237微莫耳)氯甲酸異丁酯。移除冷卻浴及於RT再攪拌1 h後，加入31.3毫克(237微莫耳)第三丁氧基羰基肼。將反應混合物攪拌過夜且然後濃縮。將殘質藉由製備性HPLC予以純化。得到50.8毫克(理論值之66%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.71分鐘；m/z=324(M-H)- 。
中間體31 4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁烷肼三氟醋酸鹽
將50毫克(154毫莫耳)2-[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁醯基]肼羧酸第三丁酯溶解於2毫升二氯甲烷並加入0.4毫升三氟醋酸。將反應混合物於RT攪拌30分鐘且然後濃縮。得到55.2毫克(93%純度，理論值之99%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.36分鐘；m/z=226(M+H)+ 。
中間體32 N-(第三丁氧基羰基)-L-苯丙胺酸金剛烷-1-基甲酯
於含500毫克(1.89毫莫耳)N-Boc-L-苯丙胺酸之25毫升二氯甲烷溶液中，於RT加入1192毫克(6.2毫莫耳)EDC、578微升(4.1毫莫耳)三乙胺、345毫克(2.8毫莫耳)DMAP及345毫克(2.1毫莫耳)1-金剛烷基甲醇。將反應混合物攪拌過夜，然後以50毫升二氯甲烷稀釋，並連續以10%檸檬酸水 溶液和飽和氯化鈉溶液清洗。將有機相於硫酸鎂上乾燥，然後濃縮，並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。得到769毫克(理論值之90%)標的化合物。
LC-MS(方法2)：Rt =1.84分鐘；m/z=414(M+H)+ 。
中間體33 L-苯丙胺酸金剛烷-1-基甲酯鹽酸鹽
將769毫克(1.86毫莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-L-苯丙胺酸金剛烷-1-基甲酯(中間體13)溶解於25毫升4 N鹽酸之二烷溶液中並於RT攪拌1 h。隨即，將反應混合物濃縮並將殘質於減壓下乾燥。得到619毫克(理論值之95%)標的化合物。LC-MS(方法1)：Rt =0.82分鐘；m/z=314(M+H)+ 。
中間體34 N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金剛烷-1-基甲氧基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
於含20毫克(29微莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之1毫升DMF溶液中，於RT加入15.3微升(88微莫耳)N,N-二異丙基乙胺、6.7毫克(44微莫耳)HOBt及6.7毫克(35微莫耳)EDC，並將混合物攪拌30分鐘。隨即，加入10.1毫克(32微莫耳)L-苯丙胺酸金剛烷-1-基酯鹽酸鹽。攪拌過夜後，將反應混合物藉由製備性HPLC直接分離為其組成份。得到27.5毫克(理論值之93%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =1.70分鐘；m/z=980(M+H)+ 。
中間體35 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金剛烷-1-基甲氧基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將27.5毫克(28微莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金剛烷-1-基甲氧基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於1.8毫升二氯甲烷中，並加入361微升TFA。將反應混合物攪拌30分鐘且然後濃縮。將殘質置於水中處理並冷凍乾燥。得到22.7毫克(理論值之81%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =1.14分鐘；m/z=880(M+H)+ 。
中間體36 (2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基胺基甲酸第三丁酯
於氬氣壓下，將500毫克(1.99毫莫耳)N-Boc-L-苯丙胺醇溶解於5毫升DMF並冷卻至0℃。隨即，加入159毫克(3.98毫莫耳)60%含氫化鈉於石蠟油之懸浮液。攪拌反應混合物直到氣體蒸發結束且然後加入260微升(2.19毫莫耳)苄基溴。移除冷卻浴並將反應混合物於RT攪拌2 h。之後，將反應混合物濃縮，將殘質置於冰水中處理並用二氯甲烷萃取混合物。將有機相以飽和氯化鈉溶液清洗，於硫酸鎂上乾燥及濃縮。將殘質藉由製備性HPLC予以純化。得到226毫克(理 論值之33%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =1.28分鐘；m/z=342(M+H)+ 。
中間體37 (2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-胺鹽酸鹽
將220毫克(644微莫耳)(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基胺基甲酸第三丁酯溶解於11毫升4 N含鹽酸之二烷溶液，並於RT攪拌1 h。然後將反應混合物濃縮及將殘質於減壓下乾燥。得到138毫克(理論值之77%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.65分鐘；m/z=242(M+H)+ 。
中間體38 N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
於含20毫克(29微莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧 基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之1毫升DMF溶液中，於RT加入15.3微升(88微莫耳)N,N-二異丙基乙胺、6.7毫克(44微莫耳)HOBt及6.7毫克(35微莫耳)EDC，並將混合物攪拌30分鐘。隨即，加入7.8毫克(32微莫耳)(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-胺鹽酸鹽。攪拌過夜後，將反應混合物經由製備性HPLC直接分離為其組成份。得到26毫克(理論值之98%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =1.51分鐘；m/z=909(M+H)+ 。
中間體39 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將26毫克(29微莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於1.8毫升二氯甲烷並加入370微升TFA。將反應混合物於RT攪拌30分鐘且然後濃縮。將殘質置於水中處 理並冷凍乾燥。得到26.4毫克(quant.)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.97分鐘；m/z=809(M+H)+ 。
中間體40 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將含50毫克(70微莫耳)中間體26和11毫克(70微莫耳)(1S,2R)-2-胺基-1-苯基丙-1-醇之10毫升DMF溶液與42毫克(0.11微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及25微升N,N-二異丙基乙胺掺合，並將反應混合物於RT攪拌5分鐘。接著濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份合併，濃縮及於高度真空中乾燥後，得到49毫克(81%)保護的中間體。隨即，藉由已知條件用三氟醋酸於二氯甲烷中去保護。接著將標的化合物藉由製備性HPLC予以純化而濃縮，並得到26毫克(52%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.65分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.77分鐘；MS(ESIpos)：m/z=718(M+H)+ 。
中間體41 3-{2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸三氟醋酸鹽
將150毫克(541微莫耳)3-{2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸第三丁酯溶解於3毫升二氯甲烷，加入1.5毫升三氟醋酸並將反應混合物於RT攪拌1 h，然後濃縮。
181毫克(理論值之100%)標的化合物。
MS(EI)：m/z 222(M+H)+
中間體42 3-(2-{2-[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酸
將186毫克(555微莫耳)3-{2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸三氟醋酸鹽溶解於2.6毫升飽和碳酸氫鈉溶液並於0℃與86毫克(555微莫耳)N-甲氧基羰基馬來醯亞胺掺合。將反應混合物於0℃攪拌40分鐘及於RT攪拌1 h，然後再次冷卻至0℃，以硫酸調整至pH 3並以3x 25毫升醋酸 乙酯萃取。將合併之有機相於硫酸鎂上乾燥並濃縮。
126毫克(理論值之75%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.53分鐘；m/z=302(M+H)+ 。
中間體43 15-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-4-側氧基-7,10,13-三氧-2,3-二氮十五烷-1-酸第三丁酯
將125毫克(417微莫耳)3-(2-{2-[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酸於0℃溶解於2.1毫升THF並與46微升(417毫莫耳)4-甲基嗎福啉及54.5微升(417微莫耳)氯甲酸異丁酯掺合。移除冰浴並將反應混合物於RT攪拌30分鐘。隨即，於0℃加入55毫克(417微莫耳)第三丁氧基羰基肼。將反應混合物回暖至RT過夜，濃縮並藉由製備性HPLC予以純化。
得到60毫克(理論值之33%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.66分鐘；m/z=416(M+H)+ 。
中間體44 3-(2-{2-[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙烷肼三氟醋酸鹽
60毫克(145微莫耳)15-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-4-側氧基-7,10,13-三氧-2,3-二氮十五烷-1-酸第三丁酯溶解於1毫升二氯甲烷並加入0.2毫升三氟醋酸。將反應混合物於RT攪拌30分鐘且然後濃縮。
得到62毫克(理論值之100%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.35分鐘；m/z=316(M+H)+ 。
中間體45 (1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸苄酯三氟醋酸鹽
標的化合物係以標準方法，藉由將市售(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙烷羧酸以苄基醇酯化且隨即用三氟醋酸進行Boc分離而製備。
LC-MS(方法1)：Rt =0.72分鐘；MS(ESIpos)：m/z=268(M+H)+ 。
中間體46 N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將383毫克(0.743毫莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體8)與485毫克(0.743毫莫耳)N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-苯丙胺酸苄酯三氟醋酸鹽(中間體12)、424毫克(1.114毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及388微升N,N-二異丙基乙胺於15毫升DMF中合併，並將混合物於RT攪拌10分鐘。隨即，於減壓下將溶劑移除。將剩餘的殘質置於醋酸乙酯中處理並連續以5%檸檬酸水溶液和飽和碳酸氫鈉溶液振盪萃取。將有機相移出並濃縮，及將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將產物餾份合併，濃縮並將殘質於高度真空中乾燥後。得到335毫克(理論值之48%)呈泡沫之苄酯中間體。
LC-MS(方法1)：Rt =1.49分鐘；MS(ESIpos)：m/z=922(M+H)+ 。
將100毫克(0.11毫莫耳)此中間體置於15毫升甲醇中處理及於標準氫氣壓下以10%披鈀活性碳作為催化劑以氫化作用移除苄酯基團。於RT攪拌1 h後，將催化劑濾出並將濾液於減壓下濃縮。由二烷中冷凍乾燥後，得到85毫克(理論值之94%)呈固體之標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.4分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.24分鐘；MS(ESIpos)：m/z=832(M+H)+ 。
中間體47 N-苄基-L-色胺醯胺三氟醋酸鹽
將202毫克(0.5毫莫耳)2,5-二側氧基吡咯啶-1-基N-(第三丁氧基羰基)-L-色胺酸酯和45毫克(0.42毫莫耳)苄基胺溶解於10毫升DMF並加入110微升(630微莫耳)N,N-二異丙基乙胺。將反應混合物於RT攪拌3 h。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘質以閃蒸色層分離法於矽膠上(洗提液：20：0.5：0.05二氯甲烷/甲醇/17%氨水)予以純化。將對應的餾份合併及濃縮。將產生的殘質用乙醚處理且然後於高度真空中乾燥。隨即，將此殘質置於10毫升二氯甲烷中處理並加入3毫升無水三氟醋酸。於RT攪拌45分鐘後，將混 合物濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。於高度真空中乾燥後，得到117毫克(於二階段中理論值之57%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.66分鐘；MS(ESIpos)：m/z=294(M+H)+ 。
中間體48 (1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷甲醯胺三氟醋酸鹽
將50毫克(180微莫耳)市售(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙羧酸溶解於5毫升DMF並加入94微升(541微莫耳)N,N-二異丙基乙胺、31毫克(270微莫耳)N-羥基琥珀醯亞胺和41.5毫克(216微莫耳)EDC，且然後將混合物於RT攪拌過夜。然後將反應混合物濃縮，將殘質置於二烷中處理，加入71毫克(901微莫耳)碳酸氫銨且然後將反應混合物置於RT下3天。將反應混合物以1：1的醋酸乙酯和水之混合物稀釋。將有機相移出，於硫酸鎂上乾燥並濃縮。隨即將產生的殘質置於3毫升二氯甲烷中處理，並加入3毫升無水三氟醋酸。於RT攪拌1 h接著濃縮。將殘質與戊烷攪拌，以空吸法過濾並由二烷中冷凍乾燥。由此法得到32毫克(於二階段中理論值之62%)標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =0.38分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.20分鐘；MS(ESIpos)：m/z=177(M+H)+ 。
中間體49 Nα -{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-色胺醯胺三氟醋酸鹽
標的化合物係依類似於中間體13之合成，由起始化合物1和L-色胺醯胺鹽酸鹽而製備。
HPLC(方法5)：Rt =1.4分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.92分鐘；MS(ESIpos)：m/z=473(M+H)+ 。
中間體50 2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基胺基甲酸4-硝基苯酯
將813毫克(3.1毫莫耳)三苯基膦溶解於25毫升THF並於氬氣下冷卻至-70℃。逐滴加入627毫克(3.1毫莫耳)疊氮二羧酸二異丙酯後，將混合物攪拌5分鐘。隨即，逐滴加入溶解於5毫升THF之500毫克(3.1毫莫耳)2-胺基乙胺基甲酸第三丁酯，並將反應混合物於-70℃再攪拌5分鐘。然後加入溶解於1毫升THF之136.6毫克(1.55毫莫耳)2,2-二甲基-1-丙醇和301毫克(3.1毫莫耳)馬來醯亞胺，將反應混合物於-70℃再攪拌10分鐘且然後讓混合物升至RT。於RT再攪拌16 h後，於減壓下將溶劑移除並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。得到463毫克(62%)保護的中間體。
於標準條件下移除Boc保護基後，得到652毫克1-(2-胺基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮為三氟醋酸鹽。
將112.9毫克(543微莫耳)氯甲酸硝基苯酯溶解於30毫升THF且，於加入100毫克(271.6微莫耳)1-(2-胺基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮三氟醋酸鹽後，將混合物於RT攪拌30分鐘。將混合物過濾並將濾液濃縮至乾，且然後以乙醚形成漿狀。空吸過濾和乾燥後，得到60毫克(理論值之95%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =0.65分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.74分鐘；MS(ESIpos)：m/z=306(M+H)+ 。
中間體51 (1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙胺三氟醋酸鹽
首先將200毫克(0.75毫莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-L-苯基丙胺酸於0℃加至5.5毫升二氯甲烷中，並加入128毫克(0.79毫莫耳)1,1'-羰基二咪唑。30分鐘後，加入103毫克(0.75毫莫耳)苄醯肼。於0℃再45分鐘後，最後加入500毫克(1.5毫莫耳)四溴化碳和395毫克(1.5毫莫耳)三苯基膦。將反應混合物先於0℃攪拌2 h且然後於RT攪拌過夜。隨即將混合物於旋轉蒸發器上濃縮並將殘質於高度真空中乾燥。將如此得到的粗產物藉由製備性HPLC予以純化。得到217毫克(理論值之78%)經Boc保護之中間體(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙胺基甲酸第三丁酯。
LC-MS(方法12)：Rt =1.15分鐘；MS(ESIpos)：m/z=366(M+H)+ 。
將217毫克(0.59毫莫耳)此中間體置於3毫升二氯甲烷中處理，加入0.6毫升三氟醋酸並將混合物於RT攪拌30分鐘。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮。將反應混合物進一步於減壓下乾燥且然後由二烷中冷凍乾燥成剩餘的殘質。依此法，得到214毫克(理論值之90%)標的化合物。
LC-MS(方法11)：Rt =0.62分鐘；MS(ESIpos)：m/z=266(M+H)+ 。
中間體52 (1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙胺三氟醋酸鹽
首先將200毫克(0.75毫莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-D-苯基丙胺酸於0℃加至5.5毫升二氯甲烷中，並加入128.3毫克(0.79毫莫耳)1,1'-羰基二咪唑。30分鐘後，加入103毫克(0.75毫莫耳)苄醯肼。於0℃再45分鐘後，最後加入500毫克(1.5毫莫耳)四溴化碳和395毫克(1.5毫莫耳)三苯基膦。將反應混合物先於0℃攪拌2 h且然後於RT攪拌過夜。隨即將混合物於旋轉蒸發器上濃縮並將殘質於高度真空中乾燥。將如此得到的粗產物藉由製備性HPLC予以純化。得到219毫克(理論值之80%)經Boc保護之中間體(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙胺基甲酸第三丁酯。
LC-MS(方法2)：Rt =1.36分鐘；MS(ESIpos)：m/z=366(M+H)+
將219毫克(0.6毫莫耳)此中間體置於3毫升二氯甲烷中處理，加入0.6毫升三氟醋酸並將混合物於RT攪拌30分鐘。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮。將反應混合物進一步於減壓下乾燥且然後由二烷中冷凍乾燥成剩餘的殘質。依此法，得到196毫克(理論值之86%)呈固體之標的化合物。
HPLC(方法10)：Rt =2.41分鐘
中間體53 (2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-胺
首先將200毫克(1.13毫莫耳)(4S)-4-苄基-1,3-唑啶-2-酮加至3毫升第三丁醇中並加入280毫克(2.26毫莫耳)苄基硫醇。隨即將混合物加熱回流2天。之後，將反應混合物於旋轉蒸發器上濃縮並將生成的(2S)-1-(苄基巰基)-3-苯基丙-2-胺中間體直接進一步轉化，無後續處理。
HPLC(方法10)：Rt =2.63分鐘
LC-MS(方法1)：Rt =0.67分鐘；MS(ESIpos)：m/z=258(M+H)+
將如上所得到的粗中間體溶解於2毫升30%過氧化氫溶液及5毫升甲酸中並將混合物於RT攪拌12 h。且然後將反應混合物加到飽和硫酸鈉溶液並以醋酸乙酯萃取三次。將有機相於硫酸鎂上乾燥並於減壓下濃縮。將得到的粗產物藉由製備性HPLC予以純化。如此得到343毫克(理論值之61%)標的化合物。
HPLC(方法10)：Rt =2.40分鐘；LC-MS(方法12)：Rt =0.65分鐘；MS(ESIpos)：m/z=290(M+H)+
中間體54 (2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-胺
將552.7毫克(9.85毫莫耳)氫氧化鉀溶解於甲醇，吸附至1.1克的中性氧化鋁上且然後於高度真空中乾燥。於一含240毫克(0.82毫莫耳)(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-胺及1.56克如上製得之於氧化鋁上之氫氧化鉀於6.2毫升正丁醇之溶液中，於5-10℃逐滴加入307微升(3.3毫莫耳)二溴二氟甲烷。將反應混合物於RT攪拌2 h，然後通過矽藻土並將殘質用二氯甲烷徹底清洗。將濾液濃縮並將所產生的殘質於減壓下乾燥。將如此得到的粗產物藉由製備性HPLC予以純化。得到98毫克(理論值之35%)E/Z非對映異構物比例為4：1之標的化合物。
HPLC(方法10)：Rt =2.46分鐘；LC-MS(方法12)：Rt =0.75分鐘；MS(ESIpos)：m/z=224(M+H)+
將如上得到的E/Z非對映異構物溶解於2毫升乙醇及0.2毫升N,N-二異丙基乙胺，並以HPLC於對掌相分離[管柱：Daicel Chiralpak AD-H，5 μm 250毫米x 20毫米，洗提液：己烷/(乙醇+0.2%二乙胺)50：50 v/v；UV偵測：220 nm；溫度：30℃]。將適當的餾份於旋轉蒸發器上濃縮並將殘質於減壓下乾燥。得到45毫克標的化合物。
1 H NMR(400 MHz，DMSO-d6 )δ[ppm]=2.62-2.83(m,2 H)3.52-3.71(m,1 H)6.18-6.30(m,1 H)6.34-6.46(m,1 H) 6.98-7.57(m,10 H)[更多的訊號隱藏於H2 O波峰下]。
中間體55 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將20毫克(29微莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於1毫升DMF，加入13.3毫克(35微莫耳)HATU和15.3微升(88微莫耳)N,N-二異丙基乙胺，並將混合物於RT攪拌30分鐘。隨即，加入12.2毫克(32微莫耳)(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙胺三氟醋酸鹽。將反應混合物於RT攪拌過夜且然後藉由製備性HPLC分離。如此得到22毫克(理論值之81%)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶 -1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
LC-MS(方法12)：Rt =1.45分鐘；MS(ESIpos)：m/z=933(M+H)+
隨即用三氟醋酸將BOC保護基分離，然後得到22.4毫克(理論值之98%)標的化合物。
LC-MS(方法11)：Rt =0.85分鐘；MS(ESIpos)：m/z=833(M+H)+
中間體56 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺係依類似於中間體55之合成，藉由將20 毫克(29微莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺與12.2毫克(32微莫耳)(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙胺三氟醋酸鹽反應而製備。
產率：17毫克(理論值之64%)
HPLC(方法10)：Rt =3.74分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.45分鐘；MS(ESIpos)：m/z=933(M+H)+
隨即用三氟醋酸將BOC保護基分離，然後得到17.1毫克(理論值之99%)標的化合物。
HPLC(方法10)：Rt =2.55分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.85分鐘；MS(ESIpos)：m/z=833(M+H)+
中間體57 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺係依類似於中間體55之合成，藉由將20毫克(29微莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺與9.3毫克(20微莫耳)(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-胺反應而製備。
產率：19.2毫克(理論值之68%)
HPLC(方法10)：Rt =3.5分鐘；LC-MS(方法12)：Rt =1.41分鐘；MS(ESIpos)：m/z=957(M+H)+
隨即用三氟醋酸將BOC保護基分離，然後得到19.3毫克(理論值之99%)標的化合物。
HPLC(方法10)：Rt =2.52分鐘； LC-MS(方法1)：Rt =0.86分鐘；MS(ESIpos)：m/z=857(M+H)+
中間體58 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺係依類似於中間體55之合成，藉由將20毫克(29微莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺與7.1毫克(32微莫耳)(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-胺反應而製備。
產率：15.1毫克(理論值之58%)
HPLC(方法10)：Rt =4.2分鐘；LC-MS(方法12)：Rt =1.51分鐘；MS(ESIpos)：m/z=891(M+H)+
隨即用三氟醋酸將BOC保護基分離，然後得到15.7毫克(理論值之99%)標的化合物。
HPLC(方法10)：Rt =2.62分鐘；LC-MS(方法12)：Rt =0.97分鐘；MS(ESIpos)：m/z=791(M+H)+
中間體61 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將50毫克(0.054毫莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺 基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體16)溶解於8毫升二烷/水中並加入70毫升(0.108毫莫耳)15% 4-側氧基丁酸之水溶液。隨即將反應混合物於100℃攪拌1 h。冷卻至RT後，加入3.7毫克(0.059毫莫耳)氰基氫硼化鈉並於混合物中加入約300微升0.1 N鹽酸調整至pH 3。然後將反應混合物於100℃再攪拌2 h。冷卻後，另外加入70毫升(0.108毫莫耳)15% 4-側氧基丁酸溶液並將反應混合物再次於100℃攪拌1 h。然後再加入3.7毫克(0.059毫莫耳)氰基氫硼化鈉，且隨即使用約300微升0.1 N鹽酸將pH調整回3。然後將反應混合物於100℃再攪拌2 h。在轉化仍未完全之情況下，重複此步驟第三次。最後將反應混合物濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。於此法得到32毫克(理論值之65%)呈無色泡沫型式之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.64分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.76分鐘；MS(ESIpos)：m/z=899(M+H)+
1 H NMR(500 MHz，DMSO-d6 )：δ=8.95和8.8(2m,1H),8.88和8.65(2s,1H),7.4-7.1(m,5H),5.0,4.78,4.65和4.55(4m,2H),4.1-3.7(m,5H),3.32,3.29,3.20,3.12,3.1和3.0(6s,9H),2.75(m,2H),2.63(t,1H),2.4-2.2(m,4H),2.1-1.2(m,12H),1.2-0.8(m,16H),0.75(m,3H)[更多的訊號隱藏於H2 O和DMSO波峰下]。
中間體62 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
標的化合物係依類似於中間體61之合成，藉由將50毫克N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體14)與4-側氧基丁酸反應而製備。
產率：34毫克(理論值之70%)
HPLC(方法5)：Rt =1.64分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.77分鐘；MS(ESIpos)：m/z=887(M+H)+ 。
中間體63 N-(4-羧基苄基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯 啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
標的化合物係依類似於中間體61之合成，藉由將15毫克N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體16)與4-甲醯苯甲酸之反應而製備。
產率：7.5毫克(理論值之48%)
HPLC(方法5)：Rt =1.75分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.97分鐘；MS(ESIpos)：m/z=947(M+H)+ 。
中間體64 N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將10毫克(0.011毫莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體16)溶解於2毫升二烷/水中，並加入2.8毫克(0.022毫莫耳)6-側氧基己酸。隨即將反應混合物於100℃攪拌1 h。冷卻至RT後，加入0.75毫克(0.012毫莫耳)氰基氫硼化鈉並將混合物加入0.1 N鹽酸調整至pH 3。然後將反應混合物於100℃再攪拌1小時。冷卻後，另外加入2.8毫克(0.022毫莫耳)6-側氧基己酸並將反應混合物再次於100℃攪拌1 h。再加入0.75毫克(0.012毫莫耳)氰基氫硼化鈉，且隨即使用約0.1 N鹽酸將pH調整回到3。然後將反應混合物於100℃再攪拌1 h。然後重複此步驟第三次。最後將反應混合物濃縮並將粗產物藉由製備性HPLC予以純化。如此得到6.4毫克(理論值之64%)呈無色泡沫型式之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.68分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.86分鐘；MS(ESIpos)：m/z=927(M+H)+ 。
中間體65 N-(2-胺基乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺雙三氟醋酸鹽
標的化合物係以68毫克N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體14)與2-側氧基乙胺基甲酸第三丁酯之反應而製備，且隨即用三氟醋酸將BOC保護基分離。
產率：49毫克(於二階段中理論值之62%)
HPLC(方法5)：Rt =1.58分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.05分鐘；MS(ESIpos)：m/z=844(M+H)+
1 H NMR(600 MHz，DMSO-d6 )：δ=8.25(m,1H),8.45和8.15 (2d,1H),7.65-7.55(m,3H),7.23-7.1(m,5H),5.12和4.95(2m,1H),4.72和4.62(2m,1H),4.6和4.52(2t,1H),4.2-3.8(m,4H),3.7(d,1H),3.23,3.20,3.19,3.18,3.03和2.98(6s,9H),3.0-2.7(m,6H),2.4-1.2(m,15H),1.05,1.0,0.88和0.82(4d,6H),0.92(m,6H),0.73(m,6H)[更多的訊號隱藏於H2 O波峰下]。
中間體66 N-(3-胺基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
標的化合物係依類似於中間體66之合成，藉由將25毫克(0.027毫莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體16)與3-側氧基丙基胺基甲酸苄酯之反應而 製備，且隨即用氫解作用將Z保護基分離(以10%披鈀活性碳作為催化劑，以乙醇作為溶劑)。
產率：11毫克(於二階段中理論值之41%)
HPLC(方法5)：Rt =1.53分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.72分鐘；MS(ESIpos)：m/z=870(M+H)+ 。
中間體67 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金剛烷-1-基甲氧基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將26毫克(26微莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金剛烷-1-基甲氧基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽和33.9微升15%琥珀半醛酸水溶液(53微莫耳)溶解於957微升1：1-二烷/水混合物並加熱至100℃達1 h。短暫冷卻後，加入1.81毫克(29微莫耳)氰基氫硼化鈉。將反應混合物加入0.1 N鹽酸調整至pH 3並將混合物再加熱至100℃達2 h。再次加入相同量之 琥珀半醛酸溶液、氰基氫硼化鈉及鹽酸，將混合物再次加熱至100℃達2 h。然後將反應混合物藉由製備性HPLC直接分離為其組成份。如此得到18.5毫克(理論值之73%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =1.17分鐘；m/z=967(M+H)+ 。
中間體68 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將24毫克(26微莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽及33.7微升15%琥珀半醛酸水溶液(52微莫耳)溶解於953微升1：1-二烷/水混合物並加熱至100℃達1 h。短暫冷卻後，加入1.81毫克(29微莫耳)氰基氫硼化鈉。將反應混合物加入0.1 N鹽酸調整至pH 3並將混合物再加熱至100℃達2 h。再次加入相同量的琥珀半醛酸溶液、氰基氫硼化鈉及鹽酸，將混合物再次加熱至100℃達2 h。然後將反應混合物藉由製備性HPLC直接分離為其組成份。如此 得到15.2毫克(理論值之65%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =1.01分鐘；m/z=895(M+H)+
中間體69 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將53毫克(84微莫耳)N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體4)及45毫克(84微莫耳)N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-苯丙胺酸苄酯三氟醋酸鹽(中間體12)置於2毫升DMF中處理，加入19微升N,N-二異丙基乙胺、14毫克(92微莫耳)HOBt和17.6毫克(92微莫耳)EDC且然後將混合物於RT攪拌過夜。隨即，將反應混合物濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到59毫克(理論值之68%)Fmoc-保護的中間體N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
LC-MS(方法1)：Rt =1.55分鐘；m/z=1044(M+H)+ 。
將57毫克(0.055毫莫耳)此中間體用1.2毫升哌啶於5毫升DMF中處理以分離Fmoc保護基。濃縮及藉由製備性HPLC予以純化後，得到39毫克(理論值之76%)游離胺中間體N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.01分鐘；m/z=822(M+H)+ 。
將37毫克(0.045毫莫耳)此中間體溶解於5毫升二烷/水，且類似於中間體66中化合物的製備，與15% 4-側氧基丁酸水溶液，於氰基氫硼化鈉之存在下反應。得到16毫克(理論值之39%)呈無色泡沫型式之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.01分鐘；MS(ESIpos)：m/z=908(M+H)+ 。
中間體70 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體14中所述之合成法，由中間體4及26開始，製得胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
將30毫克(0.032毫莫耳)此化合物溶解於6毫升二烷/水中，並加入41微升(0.063毫莫耳)15% 4-側氧基丁酸水溶液。隨即將反應混合物於100℃攪拌1 h。冷卻至RT後，加入2.2毫克(0.035毫莫耳)氰基氫硼化鈉並將混合物加入約300微升0.1 N鹽酸調整至pH 3。然後將反應混合物於100℃再攪拌2 h。冷卻後，再加入41微升(0.063毫莫耳)15% 4-側氧基丁酸溶液，並將反應混合物於100℃再攪拌1 h。然後再加入2.2毫克(0.035毫莫耳)氰基氫硼化鈉且隨即使用約300微升0.1 N鹽酸將pH調整回3。將反應混合物於100℃再攪拌2 h。如轉化仍未完全時，重複此步驟第三次。最後將反應混合物濃縮並將粗產物藉由製備性HPLC予以純化。如此得到24毫克(理論值之82%)呈無色泡沫型式之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘； LC-MS(方法9)：Rt =5.15分鐘；MS(ESIpos)：m/z=922(M+H)+ 。
中間體71 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體14中所述之合成法，由中間體4及39開始，製得胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。然後使用7毫克(0.009毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61中之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到2毫克(理論值之22%)呈無色泡沫型式之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.06分鐘；MS(ESIpos)：m/z=832(M+H)+ 。
中間體72 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將212毫克(411微莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體8)及237毫克(411微莫耳)苄基-N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-色胺酸酯三氟醋酸鹽(中間體20)置於30毫升DMF中處理，並加入188毫克(493微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及215微升N,N-二異丙基乙胺。將反應混合物於RT攪拌20 h，然後於減壓下濃縮，並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將產物餾份合併且濃縮，並將殘質於高度真空中乾燥。如此得到315毫克(理論值之80%)呈無色泡沫之經Boc保護之中間體N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1- 基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
LC-MS(方法1)：Rt =1.45分鐘；m/z=961(M+H)+ 。
將50毫克(52微莫耳)此中間體用1毫升三氟醋酸於9毫升二氯甲烷中處理以分離Boc保護基。濃縮及藉由製備性HPLC予以純化後，得到29毫克(理論值之57%)游離胺中間體N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。
LC-MS(方法1)：Rt =0.99分鐘；m/z=861(M+H)+ 。
將29毫克(0.03毫莫耳)此中間體溶解於6毫升二烷/水並加入39微升(0.059毫莫耳)15% 4-側氧基丁酸水溶液。隨即將反應混合物於100℃攪拌1 h。冷卻至RT後，加入2毫克(0.033毫莫耳)氰基氫硼化鈉並將混合物加入約300微升0.1 N鹽酸調整至pH 3。然後將反應混合物於100℃再攪拌2 h。冷卻後，再加入39微升(0.059毫莫耳)15% 4-側氧基丁酸溶液，並將反應混合物於100℃再攪拌1 h。然後再加入2毫克(0.033毫莫耳)氰基氫硼化鈉且隨即使用約300微升0.1 N鹽酸將pH調整回到3。然後將混合物於100℃再攪拌2 h。之後，將反應混合物倒至1：1半飽和氯化銨水溶液及醋酸乙酯之混合物中。將有機相移出，以飽和氯化鈉溶液清洗，於硫酸鎂上乾燥及濃縮。將殘質由水/乙腈中冷凍乾燥。 如此得到27毫克(理論值之94%)呈無色泡沫型式之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =2.2分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =5.04分鐘；MS(ESIpos)：m/z=947(M+H)+ 。
中間體73 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)胺基]-1-側氧基-3-苯基丙-2-基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體14中所述之合成法，由中間體4及38開始，製得胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)胺基]-1-側氧基-3-苯基丙-2-基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。然後使用25毫克(0.026毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到13毫克(理論值之54%)呈無色泡沫型式之標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.2分鐘； LC-MS(方法9)：Rt =5.01分鐘；MS(ESIpos)：m/z=921(M+H)+ 。
中間體74 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基環丙基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將50毫克(73微莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)及28毫克(73微莫耳)(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸苄酯三氟醋酸鹽(中間體45)置於5毫升DMF中處理，並加入42毫克(110微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及38微升N,N-二異丙基乙胺。將反應混合物於RT攪拌5 h，然後於減壓下濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將產物餾份合併及濃縮。由二烷/水中冷凍乾燥後，得到35毫克(理論值之51%)呈無色泡沫之經Boc保護之中間體N-(第三丁氧基羰基)-N- 甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基環丙基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
LC-MS(方法1)：Rt =1.52分鐘；m/z=934(M+H)+ 。
將35毫克此中間體以1毫升三氟醋酸於5毫升二氯甲烷中處理以分離Boc保護基。濃縮並由二烷/水中冷凍乾燥後，得到34毫克(理論值之97%)游離胺中間體N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基環丙基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。
LC-MS(方法1)：Rt =0.91分鐘；m/z=834(M+H)+ 。
然後使用11毫克(0.011毫莫耳)此中間體，依類似於中間體66之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到2.5毫克(理論值之24%)呈無色泡沫型式之標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.2分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =5.1分鐘；MS(ESIpos)：m/z=920(M+H)+ 。
中間體75 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S,2R)-2-苯基-1-(丙基胺甲醯基)環丙基]胺基}丙基]吡咯啶-1- 基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體14中所述之合成法，藉由N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)及(1S,2R)-1-胺基-2-苯基-正丙基環丙甲醯胺三氟醋酸鹽(中間體27)於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，且隨即用三氟醋酸分離Boc保護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S,2R)-2-苯基-1-(丙基胺甲醯基)環丙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。然後使用14毫克(0.016毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61中之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到11.3毫克(理論值之83%)標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.27分鐘；MS(ESIpos)：m/z=871(M+H)+ 。
中間體76 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，藉由將中間體46(N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺)與中間體48((1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸乙酯三氟醋酸鹽)在O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，且隨即分離Boc，製備起始化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽。然後使用70毫克(0.079毫莫耳)此起始物質，類似於中間體61，藉由與4-側氧基丁酸反應，得到46毫克(理論值之68%)標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.9分鐘； LC-MS(方法2)：Rt =1.28分鐘；MS(ESIpos)：m/z=858(M+H)+
中間體77 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體75中所述之合成法，藉由將N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)及L-苯基丙胺醯胺鹽酸鹽於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，隨即用三氟醋酸分離Boc保護基，製得胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。然後使用47毫克(0.049毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61之製備法，藉由與4-側氧基丁酸 於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到39毫克(理論值之96%)標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.44分鐘；MS(ESIpos)：m/z=817(M+H)+
1 H NMR(500 MHz，DMSO-d6 )：δ=8.95和8.8(2m,1H),8.25和8.0(2d,1H),7.45,7.35和7.0(3s,broad,2H),7.3-7.1(m,5H),4.8-4.4(2m,3H),3.95(m,1H),3.82(m,1H),3.72(d,1H),3.22,3.18,3.15,3.05和3.00(5s,9H),2.85-2.7(m,4H),2.45-1.6(m,12H),1.5-1.2(m,3H),1.1-0.7(m,21H)[更多的訊號隱藏於溶劑波峰下]。
中間體78 N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係類似於中間體66於2階段，由20毫克(16微莫耳)來自中間體14之化合物及6-側氧基己基胺基甲酸苄酯開始，並以甲醇作為溶劑進行氫化而製備。
產率：7.6毫克(於二階段中理論值之55%)
HPLC(方法6)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.7分鐘；MS(ESIpos)：m/z=901(M+H)+ 。
中間體79 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將36毫克(43微莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體46)及4.6毫克(43微莫耳)苄基胺置於5毫升DMF中處理，加入7.5微升(88微莫耳)N,N-二異丙基乙胺、10毫克(65微莫耳)HOBt及和10毫克(52微莫耳)EDC，且然後將混合物於RT攪拌過夜。隨即，將反應混合物濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。得到29毫克(理論值之73%)經Boc保護之中間體N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧 基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
LC-MS(方法1)：Rt =1.43分鐘；m/z=921(M+H)+ 。
將29毫克此中間體用1毫升三氟醋酸於6毫升二氯甲烷中處理以分離Boc保護基。濃縮並由二烷/水中冷凍乾燥後，得到30毫克(quant.)呈三氟醋酸鹽之游離胺中間體N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
LC-MS(方法1)：Rt =0.95分鐘；m/z=821(M+H)+ 。
然後使用17毫克(0.018毫莫耳)此中間體，依類似於中間體61之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到13毫克(理論值之80%)呈無色泡沫型式之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.97分鐘；MS(ESIpos)：m/z=907(M+H)+ 。
中間體80 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體74中所述之合成法，藉由將N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)及N-苄基-L-色胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體47)於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，且隨即用三氟醋酸分離Boc保護基，製得胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。使用10毫克(0.01毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到2.5毫克(理論值之26%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.13分鐘；MS(ESIpos)：m/z=946(M+H)+ 。
中間體81 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)- 2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-胺甲醯基-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體74中所述之合成法，藉由將N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)及(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙甲醯胺三氟醋酸鹽(中間體48)於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，且隨即用三氟醋酸分離Boc保護基，製得胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-胺甲醯基-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。使用14毫克(0.0163毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到8毫克(理論值之57%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.64分鐘；MS(ESIpos)：m/z=829 (M+H)+ 。
中間體82 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體69中所述之合成法，藉由將N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體4)及和Nα-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-色胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體49)在O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，並隨即用哌啶分離Fmoc保護基，製得胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。然後使用78毫克(0.088毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之 存在下反應，得到68毫克(理論值之90%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.49分鐘；MS(ESIpos)：m/z=856(M+H)+ 。
中間體83 N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係類似於中間體82中之化合物，由20毫克(26微莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽開始，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之存在下反應而製備。
產率：5毫克(理論值之25%)。
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.72分鐘；MS(ESIpos)：m/z=884 (M+H)+ 。
中間體84 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(嗎福啉-4-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體79中所述之合成法，藉由將N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體46)及嗎福啉，於EDC及HOBT之存在下偶合，且隨即用三氟醋酸分離Boc保護基，製得胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(嗎福啉-4-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。然後使用30毫克(0.033毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到22 毫克(理論值之76%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.58分鐘；MS(ESIpos)：m/z=887(M+H)+ 。
中間體85 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(苄基胺基)-3-羥基-1-側氧基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體79中所述之合成法，藉由將N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體46)及N-苄基-L-蘇胺醯胺三氟醋酸鹽，於HATU之存在下偶合，且隨即用三氟醋酸分離Boc保護基，製得胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(苄基胺基)-3-羥基-1-側氧基丁-2-基]胺基}-1- 甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。然後使用21毫克(0.024毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到20毫克(理論值之97%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.54分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.49分鐘；MS(ESIpos)：m/z=861(M+H)+ 。
中間體86 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體74中所述之合成法，藉由將N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)及第三丁基-L-苯丙胺酸酯鹽酸鹽，於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存 在下偶合，且隨即用三氟醋酸分離Boc保護基，得到第三丁酯(與三氟醋酸於二氯甲烷中攪拌40分鐘)，製得胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。然後使用22毫克(0.02毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到16毫克(理論值之94%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =5.05分鐘；MS(ESIpos)：m/z=874(M+H)+ 。
中間體87 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基}N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物，係依類似於中間體86中所述之合成法，由230毫克(336微莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯 基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)及第三丁基-L-色胺酸酯鹽酸鹽開始於3階段而製備。
產率：95毫克(於三階段中理論值之31%)
HPLC(方法5)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =5.05分鐘；MS(ESIpos)：m/z=913(M+H)+ 。
中間體88 N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體69中所述之合成法，藉由將N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體4)和Nα-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-色胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體49)於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷 酸之存在下偶合，且隨即用哌啶分離Fmoc保護基，製得胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。然後使用30毫克(0.03毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61之化合物的製備法，藉由與6-側氧基己基胺基甲酸苄酯(其係事先將6-羥基己基胺基甲酸苄酯氧化而得到)於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到17毫克(理論值之45%)Z-保護化合物。隨即，在甲醇中於10%鈀/活性碳上氫解，得到標的化合物。
產率：14毫克(理論值之95%)
HPLC(方法5)：Rt =1.5分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.73分鐘；MS(ESIpos)：m/z=869(M+H)+ 。
中間體89 N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體86中所述之合成法，藉由將N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)和第三丁基-L-色胺酸酯鹽酸鹽，於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，且隨即用三氟醋酸分離Boc保護基，得到第三丁酯(與1：10三氟醋酸/二氯甲烷攪拌30分鐘)，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。然後使用71毫克(0.075毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61之製備法，藉由與6-側氧基己基胺基甲酸苄酯(其係事先將6-羥基己基胺基甲酸苄酯氧化所得來)於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到35毫克(理論值之44%)Z-保護化合物。隨即，在甲醇中於10%鈀/活性碳上氫解，得到標的化合物。
產率：30毫克(理論值之98%)
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘； LC-MS(方法1)：Rt =0.77分鐘；MS(ESIpos)：m/z=926(M+H)+ 。
中間體90 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體74中所述之合成法，藉由將N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)和2-(1H-吲哚-3-基)乙胺，於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，且隨即用三氟醋酸分離Boc保護基，製得胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。然後使用100毫克(0.119毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉 之存在下反應，得到50毫克(理論值之49%)標的化合物。將標的化合物於本處以閃蒸色層分離法於矽膠上用二氯甲烷/甲醇/17%氨水作為洗提液予以純化，在此期間，混合比例由最初的15/2/02換成15/4/0.5。
HPLC(方法6)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.87分鐘；MS(ESIpos)：m/z=813(M+H)+ 。
中間體91 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-{(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-[(2-苯基乙基)胺基]丙基}吡咯啶-1-基]-5-甲基-1-側氧基庚-4-基}-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體74中所述之合成法，藉由將N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)和苯乙胺，於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，且隨即用三氟醋酸分離Boc保護基，製得呈三氟醋酸鹽之胺化合物N- 甲基-L-纈胺醯基-N-{(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-[(2-苯基乙基)胺基]丙基}吡咯啶-1-基]-5-甲基-1-側氧基庚-4-基}-N-甲基-L-纈胺醯胺。然後使用57毫克(0.071毫莫耳)此化合物，依類似於中間體61之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到44毫克(理論值之80%)標的化合物。標的化合物亦可以閃蒸色層分離法於矽膠上用二氯甲烷/甲醇/17%氨水作為洗提液(15/2/02->15/4/0.5)予以純化。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.64分鐘；MS(ESIpos)：m/z=774(M+H)+ 。
中間體92 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
使用100毫克(0.139毫莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺 (中間體40)，依類似於中間體61之製備法，藉由與4-側氧基丁酸於氰基氫硼化鈉之存在下反應，得到94毫克(理論值之84%)標的化合物。將標的化合物藉由製備性HPLC予以純化。
HPLC(方法5)：Rt =1.5分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.46分鐘；MS(ESIpos)：m/z=804(M+H)+ 。
中間體93 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將22.4毫克(24微莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽溶解於1.4毫升二烷/水，且依類似於中間體61之製備法，與15%4-側氧基丁酸水溶液於氰基氫硼化鈉之存在下反應。由二烷中冷凍乾燥後，得 到8.2毫克(理論值之38%)呈白色固體型式之標的化合物。
HPLC(方法10)：Rt =2.54分鐘
LC-MS(方法12)：Rt =0.94分鐘；MS(ESIpos)：m/z=919(M+H)+
中間體94 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將17.1毫克(18微莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽溶解於1.1毫升二烷/水，且依類似於中間體61之製備法，與15%4-側氧基丁酸水溶液於氰基氫硼化鈉之存在下反應。由二烷中冷凍乾燥後，得到14.8毫克(理論值之89%)呈白色固體形式之標的化合物。
HPLC(方法10)：Rt =2.54分鐘；LC-MS(方法12)：Rt =0.92分鐘；MS(ESIpos)：m/z=919 (M+H)+
中間體95 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將19.3毫克(20微莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽溶解於1.2毫升二烷/水，且依類似於中間體61之製備法，與15%4-側氧基丁酸水溶液於氰基氫硼化鈉之存在下反應。由二烷中冷凍乾燥後，得到8.6毫克(理論值之45%)呈白色固體形式之標的化合物。
LC-MS(方法11)：Rt =0.85分鐘；MS(ESIpos)：m/z=943(M+H)+
中間體96 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將15.5毫克(10微莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽溶解於1.0毫升二烷/水中，且依類似於中間體61之製備法，與15%4-側氧基丁酸水溶液於氰基氫硼化鈉之存在下反應。由二烷中冷凍乾燥後，得到10.3毫克(理論值之68%)呈白色固體形式之標的化合物。
HPLC(方法10)：Rt =2.59分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.94分鐘；MS(ESIpos)：m/z=877(M+H)+
中間體97 N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
標的化合物係依類似於中間體66之合成，藉由將200毫克(0.108毫莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體16)與6-側氧基己基胺基甲酸苄酯反應，且隨即將Z保護基氫解分離(以5%披鈀活性碳作為催化劑，以甲醇作為溶劑)而製備。
產率：69毫克(於二階段中理論值之65%)
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.76分鐘；MS(ESIpos)：m/z=912(M+H)+ 。
中間體98 N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物，係依類似於中間體80中所述之合成法而製備。藉由製備性HPLC予以純化。
產率：40毫克(於三階段中理論值之29%)
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.92分鐘；MS(ESIpos)：m/z=974(M+H)+ 。
中間體99 (2S)-2-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)丙-1-酮三氟醋酸鹽
將324毫克(0.81毫莫耳)2,5-二側氧基吡咯啶-1-基N-(第三丁氧基羰基)-L-色胺酸酯溶解於20毫升DMF，並加入200毫克(1.62毫莫耳)1,2-烷鹽酸鹽(起始化合物5)及850微升N,N-二異丙基乙胺。將反應混合物於50℃攪拌過夜且然後於減壓下濃縮。將殘質置於二氯甲烷中處理並以水萃取。將有機相於硫酸鎂上乾燥並濃縮。將殘質以閃蒸色層分離法於矽膠上用4：1二氯甲烷/醋酸乙酯作為洗提液予以純化。將產物餾份濃縮並將殘質於高度真空中乾燥。如此得到147.5毫克(理論值之48%)經Boc保護之中間體。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.03分鐘；MS(ESIpos)：m/z=374(M+H)+ 。
使用166毫克(444.5微莫耳)此中間體，於標準條件下用3毫升三氟醋酸於20毫升二氯甲烷中將Boc保護基分離，以HPLC予以純化後，得到155毫克(理論值之86%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.43分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.56分鐘；MS(ESIpos)：m/z=274(M+H)+ 。
中間體100 N-(6-{[(苄氧基)羰基]胺基}己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將177毫克(260微莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)及100毫克(260微莫耳)(2S)-2-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)丙-1-酮三氟醋酸鹽(中間體99)置於15毫升DMF中處理，並加入118毫克(310微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N,N',N'-四甲基六氟磷酸及140微升N,N-二異丙基乙胺。將反應混合物於RT攪拌30分鐘，然後於減壓下濃縮，並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將產物餾份合併及濃縮。由二烷中冷凍乾燥後，得到170毫克(理論值之68%)經Boc保護之中間體。
LC-MS(方法1)：Rt =1.36分鐘；m/z=940(M+H)+ 。
將170毫克此中間體用3毫升三氟醋酸於30毫升二氯甲烷中處理以分離Boc保護基。然後將反應混合物於減壓下濃 縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化，得到155毫克(理論值之86%)去保護之N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺中間體。
HPLC(方法12)：Rt =1.85分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.86分鐘；MS(ESIpos)：m/z=840(M+H)+ 。
然後使用50毫克(0.052毫莫耳)此中間體，依類似於中間體97之製備法，與6-側氧基己基胺基甲酸苄酯於氰基氫硼化鈉之存在下，且隨即將Z保護基氫解分離(以5%披鈀活性碳作為催化劑，以甲醇作為溶劑)，製備標的化合物。
產率：21毫克(理論值之37%)
HPLC(方法12)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.02分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1073(M+H)+ 。
中間體101 N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將26.7毫克(24.87微莫耳)中間體100溶解於10毫升甲醇並於鈀/活性碳(5%)上，於標準氫氣壓下氫化30分鐘。將催化劑濾出並於減壓下將溶劑蒸發。將殘質於高度真空中乾燥後，得到22.5毫克(理論值之96%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.76分鐘；MS(ESIpos)：m/z=939(M+H)+ 。
中間體102
N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(嗎福啉-4-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物，係依類似於中間體157中所述之合成法，由N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(嗎福啉-4- 基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺及市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼而製備。
產率：8毫克(理論值之71%)
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.87分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1094(M+H)+ 。
中間體103 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(苄基胺基)-3-羥基-1-側氧基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物，係依類似於中間體157中所述之合成法，由N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(苄基胺基)-3-羥基-1-側氧基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺及市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼而製備。產率：3毫克(理論值之22%)
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.78分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1069(M+H)+ 。
中間體104 N-{4-[(反式-4-{[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]羰基}環己基)胺基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，由反式-4-胺基環己烷羧酸藉由導入Boc保護基且隨即用習用的胜肽化學法分離Boc保護基，製備反式-4-胺基環己烷羧酸苄酯三氟醋酸鹽。
然後將15毫克(18微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於5毫升二甲基甲醯胺且隨即與13毫克(35微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、9微升N,N-二異丙基乙胺及與15毫克(44微莫耳)反式-4-胺基環己烷羧酸苄酯三氟醋酸鹽掺合。將 混合物於RT攪拌1 h且然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。將產物餾份合併且於減壓下將溶劑蒸發。將殘質於高度真空中乾燥後，得到14.7毫克(理論值之78%)呈無色泡沫型式之保護的中間體。
HPLC(方法6)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.95分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1072(M+H)+ 。
由此保護的中間體，先將苄酯藉由氫解法移除並得到一定產率之游離羧基組成份。將14毫克(14微莫耳；1 equiv.)去保護化合物置於5毫升DMF中處理並與3.3毫克(29微莫耳；2.1 equiv.)N-羥基琥珀醯亞胺在4.1毫克(21微莫耳；1.5 equiv.)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、7.5微升(44微莫耳；3.1 equiv.)N,N-二異丙基乙胺及0.9毫克(7微莫耳；0.5 equiv.)4-二甲基胺基吡啶之存在下掺合，及將混合物於RT攪拌過夜。然後另外加入10當量N-羥基琥珀醯亞胺、5當量1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、5當量N,N-二異丙基乙胺及0.5當量4-二甲基胺基吡啶，並將反應混合物以超音波浴處理5 h。隨即，將溶劑蒸發，將殘質藉由製備性HPLC予以純化並將對應的餾份合併且濃縮，將殘質由二烷中冷凍乾燥後，得到9.7毫克(理論值之62%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.77分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1078(M+H)+ 。
中間體105 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物之製備，係依類似於中間體157中所述之合成法，由4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基](甲基)胺基}-3-甲基丁-2-基]胺基}-3-甲基-1-側氧基丁-2-基](甲基)胺基}丁酸及市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼開始而製備。得到42%產率之酯中間體。在第二步驟中，將6毫克(6微莫耳)此中間體以三氟醋酸裂解第三丁酯。以HPLC予以純化後，得到3.4毫克(理論值之48%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.66分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.04分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1025(M+H)+ 。
中間體106 N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將14毫克(16微莫耳)N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體88)置於750微升二烷中處理並與1.5毫升飽和碳酸氫鈉溶液且然後與3.2毫克(21微莫耳)2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯掺合。將反應混合物於RT攪拌1 h且然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。冷凍乾燥後，得到5.5毫克(理論值之36%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.84分鐘；MS(ESIpos)：m/z=949(M+H)+ 。
中間體107 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將38毫克(47微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於37毫升DMF，且然後與71毫克(187微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及33微升N,N-二異丙基乙胺及與37毫克(140微莫耳)市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼掺合。將混合物於RT攪拌1 h。接著於高度真空中濃縮並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到12.2毫克(理論值之26%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.85分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1020(M+H)+ 。
中間體108 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-{(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-[(2-苯基乙基)胺基]丙基}吡咯啶-1-基]-5-甲基-1-側氧基庚-4-基}-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物，係類似於中間體107而製備。
產率：2.5毫克(理論值之30%)
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.9分鐘；MS(ESIpos)：m/z=981(M+H)+ 。
中間體109 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物，係類似於中間體107，由中間體92中之化合物而製備。
產率：35毫克(理論值之65%)
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.76分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1011(M+H)+ 。
中間體110 N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物，係類似於中間體147，由中間體83中之化合物而製備。
產率：2.4毫克(理論值之24%)
HPLC(方法6)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.87分鐘；MS(ESIpos)：m/z=981(M+H)+ 。
中間體111 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-1-甲基肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物，係類似於中間體140，由中間體82和中間體22而製備。
產率：6.5毫克(理論值之51%)
HPLC(方法6)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =4.71分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1077(M+H)+ 。
中間體112 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-胺甲醯基-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物，係類似於中間體157，由中間體81中之化合物而製備。
產率：5.7毫克(理論值之57%)
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.87分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1036(M+H)+ 。
中間體113 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將95毫克(104微莫耳)4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基](甲基)胺 基}-3-甲基丁-2-基]胺基}-3-甲基-1-側氧基丁-2-基](甲基)胺基}丁酸溶解於DMF，且然後與79.5毫克(209微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、73微升N,N-二異丙基乙胺及與68毫克(261微莫耳)市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼掺合。將混合物於RT攪拌2 h。接著於高度真空中濃縮並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到104毫克(理論值之9%)呈無色泡沫之標的化合物的第三丁酯。
HPLC(方法5)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.93分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1121(M+H)+ 。
將中間體置於33.4毫升二氯甲烷中處理，加入17毫升三氟醋酸並將混合物於RT攪拌1 h。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。
如此得到61毫克(理論值之62%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.86分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1064(M+H)+ 。
中間體114 N-[6-({[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]胺甲醯基}胺基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧 基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將5毫克(5微莫耳)N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺置於885微升DMF中處理，並與5.3毫克(8微莫耳)4-硝基苯基2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙胺基甲酸酯及2.8微升N,N-二異丙基乙胺掺合。將反應混合物於RT攪拌2 h且然後濃縮至乾。將殘質藉由製備性HPLC予以純化。
產率：0.58毫克(理論值之11%)無色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.83分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1035(M+H)+ 。
中間體115 N-{4-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯 基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物之製備，係依類似於中間體147中之化合物，由8毫克(9微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺開始來進行。濃縮後，將活化酯藉由製備性HPLC予以純化，於減壓下將溶劑移除後，立即與抗體反應。
產率：3毫克(理論值之27%)(水解-敏感性)
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.87分鐘；MS(ESIpos)：m/z=996(M+H)+ 。
中間體116 N-{4-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物之製備，係依類似於中間體147中之化合物，由5毫克(6微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺開始來進行。濃縮後，將活化酯藉由製備性HPLC予以純化，於減壓下將溶劑移除後，立即與抗體反應。
產率：3.2毫克(理論值之43%)(水解-靈敏性)
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.92分鐘；MS(ESIpos)：m/z=984(M+H)+ 。
中間體117 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物，係類似於中間體157，由中間體86中之化合物而製備。
產率：7毫克(理論值之42%)
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.94分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1081(M+H)+ 。
中間體118 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2R)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
標的化合物，係類似於中間體157，由7毫克(7.8微莫耳)中間體68之化合物而製備。
產率：6.3毫克(理論值之53%)
LC-MS(方法1)：Rt =1.00分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1102(M+H)+ 。
中間體119 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將7.4毫克(8.1毫莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺及6.3毫克(24.2毫莫耳)6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼鹽酸鹽偶合並類似於中間體157操作。得到1.6毫克(理論值之13%)呈固體之標的化合物。
LC-MS(方法11)：Rt =0.89分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1126(M+H)+
中間體120 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1R)-2- 苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將12.8毫克(13.9毫莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺及10.9毫克(41.8毫莫耳)6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼鹽酸鹽偶合並類似於中間體157操作。得到10.8毫克(理論值之59%)呈固體之標的化合物。
LC-MS(方法11)：Rt =0.90分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1126(M+H)+
中間體121 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將7.4毫克(7.9毫莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺醯基)-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和6.2毫克(23.5毫莫耳)6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼鹽酸鹽偶合並類似於中間體157操作。得到6.9毫克(理論值之74%)呈固體之標的化合物。
LC-MS(方法11)：Rt =0.87分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1150(M+H)+
中間體122 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將8毫克(9.1毫莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-二苯基丁-3-烯-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺和7.2毫克(27.4毫莫耳)6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼鹽酸鹽偶合並類似於中間體157操作。得到8.2毫克(理論值之82%)呈白色固體之標的化合物。
LC-MS(方法11)：Rt =0.95分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1083(M+H)+
中間體123 N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將30毫克(30微莫耳)中間體89置於2毫升1,4-二烷中處理並與4毫升飽和碳酸氫鈉溶液掺合，且然後與7.5毫克(50微莫耳)2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯掺合。將反應混合物於RT攪拌1 h且然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。冷凍乾燥後，得到 24毫克(理論值之74%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =2.2分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.01分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1006(M+H)+ 。
中間體124 N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將22毫克(20微莫耳)中間體123與4毫升三氟醋酸於8毫升二氯甲烷中在RT下反應1 h，之後將反應混合物於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。冷凍乾燥後，得到11毫克(理論值之54%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.85分鐘；MS(ESIpos)：m/z=950(M+H)+ 。
中間體125 N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H- 吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將22.5毫克(20微莫耳)中間體101置於2毫升1：1二烷/水中處理，且然後與5.6毫克(40微莫耳)2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯及與0.25毫升飽和碳酸氫鈉溶液掺合。將反應混合物於RT攪拌30分鐘。然後另外加入0.25毫升飽和碳酸氫鈉溶液並將反應混合物於RT再攪拌15分鐘且然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。冷凍乾燥後，得到12.8毫克(理論值之50%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.95分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1019(M+H)+ 。
中間體126 N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將64毫克(70微莫耳)N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體97)置於3毫升1：1二烷/水中處理，然後用4毫升飽和碳酸氫鈉溶液調整至pH 9，且隨即與16.3毫克(110微莫耳)2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯掺合。將反應混合物於RT攪拌1 h且然後於減壓下濃縮。然後另外加入8毫克(55微莫耳)2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯，並將反應混合物再次調整至pH 9及於RT再攪拌1小時。接著濃縮且藉由製備性HPLC將剩餘的殘質予以純化。首先得到31毫克尚未環化的中間體。將27毫克此中間體再次置於2毫升1：1二烷/水中處理，且然後與250微升飽和碳酸氫鈉溶液掺合。於RT攪拌2 h後，將反應混合物濃縮且將殘質藉由製備性HPLC予以純化。冷凍乾燥後，得到20毫克(理論值之29%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.96分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.97分鐘；MS(ESIpos)：m/z=992(M+H)+ 。
中間體127 N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將17毫克(18微莫耳)N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體98)溶解於2.8毫升二氯甲烷並與20毫克(174毫莫耳)1-羥基吡咯啶-2,5-二酮掺合，且然後與10毫克(52微莫耳)1-(3二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽及0.21毫克(0.17微莫耳)DMAP掺合。於RT攪拌4 h後，將反應混合物於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。冷凍乾燥後，得到8.2毫克(理論值之43%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.98分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1071(M+H)+ 。
中間體128 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將5毫克(5.6微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於845微升DMF且然後與3.2毫克(17微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、2.6毫克(17微莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物、1.96微升N,N-二異丙基乙胺及與5.9毫克(22.5微莫耳)市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼掺合。將混合物於RT攪拌過夜且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到2.2毫克(理論值之36%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.88分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1094(M+H)+ 。
中間體129 N-(6-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-6-側氧基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將4毫克(4.3微莫耳)N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於646微升DMF且然後與2.5毫克(13微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、2.0毫克(13微莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物、2.25微升N,N-二異丙基乙胺及與4.5毫克(17微莫耳)市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼掺合。將混合物於RT攪拌3 h且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到1.9毫克(理論值之39%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.9分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1134 (M+H)+ 。
中間體130 N-(4-{[(2R)-1-({5-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-5-側氧基戊醯基}胺基)丙-2-基]氧基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將10.5毫克(11.7微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於3.7毫升二氯甲烷，且然後與6.7毫克(35微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、0.7毫克(5.8微莫耳)4-二甲基胺基吡啶及與8.2毫克(47微莫耳)市售(2R)-2-羥基丙基胺基甲酸第三丁酯掺合。將混合物於RT攪拌過夜，且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到7.5毫克(理論值之61%)經Boc保護之呈無色泡沫之中間體。
HPLC(方法5)：Rt =2.0分鐘； LC-MS(方法1)：Rt =1.03分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1056(M+H)+ 。
隨即，將Boc保護基用三氟醋酸分離。然後將4.9毫克(0.005毫莫耳)去保護之粗產物於未純化下置於1.8毫升二氯甲烷中處理並與3.7毫克(0.011毫莫耳)1,1'-[(1,5-二側氧基戊烷-1,5-二基)雙(氧基)]二吡咯啶-2,5-二酮、2.4微升(0.014毫莫耳)N,N-二異丙基乙胺及0.6毫克(5微莫耳)4-二甲基胺基吡啶掺合。將混合物於RT攪拌2 h，且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到0.77毫克(理論值之15%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.93分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1167(M+H)+ 。
中間體131 N-{4-[(1-{5-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-5-側氧基戊醯基}哌啶-4-基)氧基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將10毫克(11微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於2毫升二氯甲烷且然後與4.3毫克(22微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、0.88毫克(6微莫耳)4-二甲基胺基吡啶且與5.2毫克(22微莫耳)市售4-羥基哌啶-1-羧酸苄酯掺合。將混合物於RT攪拌過夜，且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到5毫克(理論值之40%)Z-保護之呈無色泡沫的中間體。
HPLC(方法5)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.04分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1116(M+H)+ 。
隨即，將Z保護基以氫解法於乙醇中於鈀/活性碳上分離。然後將4.6毫克(0.005毫莫耳)去保護之粗產物，未經進一步純化下，置於1.8毫升二氯甲烷中處理並與3.8毫克(0.012毫莫耳)1,1'-[(1,5-二側氧基戊烷-1,5-二基)雙(氧基)]二吡咯啶-2,5-二酮、0.8微升(0.005毫莫耳)N,N-二異丙基乙胺及0.6毫克(5微莫耳)4-二甲基胺基吡啶掺合。將混合物於RT攪拌過夜，且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到0.96毫克(理論值之16%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.8分鐘； LC-MS(方法1)：Rt =0.94分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1193(M+H)+ 。
中間體132 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將15毫克(16.7微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於2500微升DMF且然後與9.6毫克(50微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、7.6毫克(50微莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物、5.8微升N,N-二異丙基乙胺及與17.4毫克(67微莫耳)市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼掺合。將混合物於RT攪拌過夜，且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到11.2毫克(理論值 之52%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.09分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1106(M+H)+ 。
中間體133 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將5.8毫克(6.3微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於943微升DMF且然後與3.6毫克(19微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、2.9毫克(19微莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物、2.2微升N,N-二異丙基乙胺及與6.6毫克(25微莫耳)市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼掺合。將混合物於RT攪拌過 夜，且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到4.5毫克(理論值之64%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.03分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1129(M+H)+ 。
中間體134 N-[3-({[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]胺甲醯基}胺基)丙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙胺基甲酸4-硝基苯酯之製備係於標準條件下，由市售1-(2-胺基乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮三氟醋酸鹽及氯碳酸4-硝基苯酯開始來進行。
將5毫克(6微莫耳)N-(3-胺基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺 基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於1000微升DMF且然後與2微升N,N-二異丙基乙胺及與2.2毫克(9微莫耳)2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙胺基甲酸4-硝基苯酯掺合。將混合物於RT攪拌1 h，且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到1.6毫克(理論值之23%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.09分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1036(M+H)+ 。
中間體135 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將10毫克(11微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙 基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於4000微升DMF且然後與6.3毫克(33微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、4.5毫克(33微莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物、5.7微升N,N-二異丙基乙胺及與11.5毫克(44微莫耳)市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼掺合。將混合物於RT攪拌過夜，且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到2.6毫克(理論值之14%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.01分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1115(M+H)+ 。
中間體136 N-(4-{4-[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基]哌-1-基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，1-[4-側氧基-4-(哌-1-基)丁基]-1H-吡咯-2,5-二酮三氟醋酸鹽之製備係於標準條件下，由哌-1-羧酸第三丁酯及4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁酸開始於二階段來進行。
將5毫克(5.6微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於1000微升DMF且然後與2.1毫克(11微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、1.7毫克(11微莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物、2微升N,N-二異丙基乙胺及與3.5毫克(5.6微莫耳)1-[4-側氧基-4-(哌-1-基)丁基]-1H-吡咯-2,5-二酮三氟醋酸鹽掺合。將混合物於RT攪拌過夜。然後加入2.1毫克(5.6微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸並將反應混合物於RT另外攪拌3 h。隨即，於減壓下將溶劑移除並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份，由水中冷凍乾燥後，得到0.6毫克(理論值之10%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.9分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1132(M+H)+ 。
中間體137 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-1- 甲基肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N'-甲基己烷肼三氟醋酸鹽之製備係於標準條件下，由市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸和1-甲基肼羧酸第三丁酯開始於2階段來進行。
將6.9毫克(8微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於2540微升DMF且然後與3.6毫克(9微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、3微升N,N-二異丙基乙胺及與4.1毫克(12微莫耳)6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N'-甲基己烷肼三氟醋酸鹽掺合。將混合物於RT攪拌過夜。隨即，於減壓下將溶劑蒸發並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到3.9毫克(理論值之45%)呈無色泡沫之標的化 合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.93分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1108(M+H)+ 。
中間體138 N-{4-[(2-{[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基](甲基)胺基}乙基)(甲基)胺基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
由2-(甲基胺基)乙基胺基甲酸第三丁基甲酯及4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁酸開始，於二階段，先製備4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基-N-[2-(甲基胺基)乙基]丁醯胺三氟醋酸鹽。
將6.6毫克(7.3微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於2000微升DMF且然後與5.6 毫克(14.7微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、2.6微升N,N-二異丙基乙胺及與4.1毫克(9微莫耳)4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基-N-[2-(甲基胺基)乙基]丁醯胺三氟醋酸鹽掺合。於RT攪拌3 h後，再次加入相同量的HATU及N,N-二異丙基乙胺，且然後將反應混合物於RT攪拌過夜。隨即，於減壓下將溶劑蒸發並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到4毫克(理論值之44%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.91分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1134(M+H)+ 。
中間體139 (2R,3S)-3-胺基-4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁-2-基(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7,10-二異丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧基乙基)-5,11-二甲基-6,9-二側氧基-2-氧-5,8,11-三氮十五烷-15-酸酯
將13毫克(14.7微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2- 甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於10毫升二氯甲烷且然後與8.4毫克(44微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、5.4毫克(44微莫耳)4-二甲基胺基吡啶及與9毫克(29.3微莫耳)市售N-(第三丁氧基羰基)-L-蘇胺酸苄酯掺合。將混合物於RT攪拌5 h。隨即，將反應混合物以水振盪萃取二次並將有機相於硫酸鎂上乾燥及於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。由二烷/水中冷凍乾燥後，得到14毫克(理論值之81%)呈無色泡沫之保護的中間體。
HPLC(方法12)：Rt =2.3分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.13分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1178(M+H)+ 。
隨即，將Z保護基以氫解法於甲醇中於10%鈀/活性碳上分離。然後將9.5毫克(0.0087毫莫耳)去保護之粗產物，未經進一步純化下，置於5毫升DMF中處理並與5毫克(26.2微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、4毫克(26.2微莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物、54.6微升N,N-二異丙基乙胺及與9.1毫克(34.9微莫耳)市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼掺合。將混合物於RT攪拌1 h，且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。由二烷中冷凍乾燥後，得到9.5毫克(理論值之84%)經Boc保護之中間體。
HPLC(方法12)：Rt =2.1分鐘； LC-MS(方法1)：Rt =0.97分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1295(M+H)+ 。
隨即，將9.5毫克(7.3微莫耳)用0.5毫升三氟醋酸於2毫升二氯甲烷中將經Boc保護之中間體去保護，由二烷中冷凍乾燥後，得到9毫克(理論值之82%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.84分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1195(M+H)+ 。
中間體140 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-1-甲基肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將4.1毫克(12微莫耳)6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N'-甲基己烷肼三氟醋酸鹽(中間體22)及6.9毫克(8微莫耳)來自中間體61之化合物一起溶解於2.5毫升DMF中，且然後與3.5毫克(9微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1- 基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及3微升N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌過夜，且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。由二烷中冷凍乾燥後，得到2.6毫克(理論值之30%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.90和0.91分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1120(M+H)+ 。
中間體141 N-[4-({1-[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基]哌啶-4-基}氧基)-4-側氧基丁基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將44毫克(49微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於2毫升二氯甲烷且然後與18.8毫克(98微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽 酸鹽、3.8毫克(24微莫耳)4-二甲基胺基吡啶及與23毫克(98微莫耳)市售4-羥基哌啶-1-羧酸苄酯掺合。將混合物於RT攪拌過夜，且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到22毫克(理論值之40%)呈無色泡沫之Z-保護的中間體。
HPLC(方法5)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.04分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1116(M+H)+ 。
隨即，將Z保護基以氫解法於乙醇中於鈀/活性碳上分離。
然後將19毫克(19微莫耳)去保護之粗產物，未經進一步純化下，置於4毫升DMF中處理並與7毫克(39微莫耳)4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁酸、11毫克(29微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及5微升N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌1 h，且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。由二烷中冷凍乾燥後，得到7.5毫克(理論值之34%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.94分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1147(M+H)+ 。
中間體142 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1- 側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將9毫克(9.5微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體72)溶解於1000微升DMF且然後與10毫克(38微莫耳)市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼、7.2毫克(19微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及8微升N,N-二異丙基乙胺掺合，並將反應混合物於RT攪拌1 h。隨即，於減壓下將溶劑蒸發並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份濃縮並冷凍乾燥，得到6.4毫克(理論值之58%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.99分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1154(M+H)+ 。
中間體143 N-(4-{2-[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將6毫克(6.7微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體61)及3毫克(8.7微莫耳)4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁烷肼三氟醋酸鹽，類似於中間體142反應，得到2毫克(理論值之27%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法3)：Rt =1.92分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1106(M+H)+ 。
中間體144 N-(4-{2-[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
於含5毫克(5.6微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺於1毫升DMF之溶液中加入7.65毫克(22.5微莫耳)4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁烷肼三氟醋酸鹽、3.2毫克(16.9微莫耳)EDC、1.96微升(11.3微莫耳)二異丙基乙胺及2.6毫克(16.9微莫耳)HOBT。將反應混合物於RT攪拌3 h。隨即，另外加入0.95毫克(2.8微莫耳)4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基丁烷肼三氟醋酸鹽。攪拌過夜後，將反應混合物濃縮且藉由製備性HPLC予以純化。得到3.5毫克(85%純度，理論值之48%)標的化合物。
LC-MS(方法3)：Rt =1.86分鐘；m/z=1094(M+H)+ 。
中間體145 N-[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將12毫克(14微莫耳)N-(3-胺基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體66)置於750微升二烷中處理並與1.5毫升飽和碳酸氫鈉溶液且然後與3.2毫克(21微莫耳)2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯掺合。將反應混合物於RT攪拌1 h，且然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。冷凍乾燥後，得到4.2毫克(理論值之32%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘； LC-MS(方法1)：Rt =0.94分鐘；MS(ESIpos)：m/z=950(M+H)+ 。
中間體146 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)胺基]-1-側氧基-3-苯基丙-2-基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將9毫克(9.8微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)胺基]-1-側氧基-3-苯基丙-2-基}胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體73)，類似於中間體133，與10毫克(39微莫耳)6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼反應，得到1.8毫克(理論值之15%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.2分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =5.11分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1128(M+H)+ 。
中間體147 N-{4-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將16毫克(17微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體70)溶解於2毫升二氯甲烷並與2.6毫克(23毫莫耳)1-羥基吡咯啶-2,5-二酮且然後與4毫克(21微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽掺合。於RT攪拌2 h後，再次加入相同量的1-羥基吡咯啶-2,5-二酮及1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。然後於RT攪拌過夜，將反應混合物於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。冷凍乾燥後，得到10毫克(理論值之56%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =2.0分鐘；
中間體148 N-{4-[(2-{[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基](甲基)胺基}乙基)胺基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將6毫克(7微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體61)與2.8毫克(8微莫耳)N-(2-胺基乙基)-4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丁醯胺三氟醋酸鹽、10.1毫克(27微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及5微升N,N-二異丙基乙胺於2毫升DMF中合併，並於RT攪拌過夜。然後再加入5毫克(23.5微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及3微升N,N-二異丙基乙胺。於RT攪拌5 h後，於減壓下將溶劑移除並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份濃縮，由二烷中冷凍乾燥後，得到1.3毫克(理論值之15%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.21分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1120(M+H)+ 。
中間體149 N-{4-[(2-{[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基]胺基}乙基)(甲基)胺基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將6毫克(7微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體61)與3.1毫克(9微莫耳)4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-[2-(甲基胺基)乙基]丁醯胺三氟醋酸鹽、10.1毫克(27微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸及5微升N,N-二異丙基乙胺於2毫升DMF中合併，並將混合物於RT攪拌4 h。然後於減壓下將溶劑移除並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份濃縮，由二烷中冷凍乾燥後，得到1毫克(理論值之13.4%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.89分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1121(M+H)+ 。
中間體150 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S,2R)-2-苯基-1-(丙基胺甲醯基)環丙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將7.9毫克(9微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S,2R)-2-苯基-1-(丙基胺甲醯基)環丙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於3毫升DMF且然後與10.4毫克(54微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、8.3毫克(54微莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物、9微升N,N-二異丙基乙胺及與9.5毫克(36微莫耳)市售6-(2,5-二側氧基-2,5- 二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼掺合。將混合物於RT攪拌過夜，且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到4.3毫克(理論值之22%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.93分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1078(M+H)+ 。
中間體151 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-胺甲醯基-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物之製備係類似於中間體150，由中間體81中之化合物來進行。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.87分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1036(M+H)+ 。
中間體152 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼 基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將10毫克(12微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於3毫升DMF且然後與8.9毫克(23微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、10微升N,N-二異丙基乙胺及與12毫克(47微莫耳)市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼掺合。將混合物於RT攪拌1 h。接著於高度真空中濃縮並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到5.8毫克(理論值之37%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.99分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1066(M+H)+ 。
中間體153 N-[1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-12,15-二側氧基 -3,6,9-三氧-13,14-二氮十八烷-18-基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
於含5毫克(5.6微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之1毫升DMF溶液中加入9.7毫克(22.5微莫耳)3-(2-{2-[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙烷肼三氟醋酸鹽、3.2毫克(16.9微莫耳)EDC、1.96微升(11.3微莫耳)N,N-二異丙基乙胺及2.6毫克(16.9微莫耳)HOBT。將反應混合物於RT攪拌3 h。隨即，再加入1.2毫克(2.8微莫耳)3-(2-{2-[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙烷肼三氟醋酸鹽。將反應混合物於RT攪拌過夜且然後藉由製備性HPLC予以純化。
3.6毫克(理論值之51%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.90分鐘；m/z=1185(M+H)+ 。
中間體154 (2R,3S)-3-胺基-4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁-2-基(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7,10-二異丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧基乙基)-5,11-二甲基-6,9-二側氧基-2-氧-5,8,11-三氮十五烷-15-酸酯
將15毫克(17微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S)-1-(1,2-烷-2-基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於10毫升二氯甲烷且然後與12.8毫克(67微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、10毫克(83微莫耳)4-二甲基胺基吡啶及與10.3毫克(33微莫耳)市售N-(第三丁氧基羰基)-L-蘇胺酸苄酯掺合。將混合物加熱回流4 h。然後再次加入相同量的偶合劑及4-二甲基胺基吡啶，並將反應混合物加熱回流過夜。隨即，將反應混合物用二氯甲烷稀釋並以水振盪萃取一次，將有機相移除並於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到7.7毫克(理論值之37%)呈無色泡沫之保護的中間體。
HPLC(方法12)：Rt =2.5分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.13分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1190(M+H)+ 。
隨即，以氫化作用，於標準氫氣壓下，於甲醇中於10%鈀/活性碳上移除苄酯保護基，如中間體151中所述，將如此得到的酸與6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼掺合。在最後步驟，以三氟醋酸分離Boc保護基。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到0.22毫克(於三階段中理論值之2.5%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.81分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1207(M+H)+ 。
中間體155 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係依類似於中間體152中所述之合成法，由N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺 基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺及市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼而製備。
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.82分鐘；MS(ESI+)：m/z=1024(M+H)+ 。
中間體156 N-(3-{[(1-{[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]羰基}環丙基)羰基]胺基}丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係依類似於中間體131最後階段中所述之合成法，由N-(3-胺基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺及1,1'-[環丙烷-1,1-二基雙(羰基氧基)]二吡咯啶-2,5-二酮(事先由對應之羧酸製得)而製備。
HPLC(方法12)：Rt =2.0分鐘； LC-MS(方法1)：Rt =0.92分鐘；MS(ESI+)：m/z=1080(M+H)+ 。
中間體157 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將15毫克(18微莫耳)(N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於3.8毫升DMF且然後與27毫克(70微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、12微升N,N-二異丙基乙胺及與14毫克(53微莫耳)市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼掺合。將反應混合物於RT攪拌1 h。接著於高度真空中濃縮並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到6.2毫克(理論值之33%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘； LC-MS(方法1)：Rt =0.85分鐘；MS(ESI+)：m/z=1063(M+H)+ 。
1 H-NMR(500 MHz，DMSO-d6 ，特徵訊號)：δ=10.8(d,1H),9.8-9.7(m,2H),9.6和9.4(2m,1H),8.9,8.88,8.78和8.75(4d,1H),8.08和7.85(2d,1H),7.6-6.9(m,9H),4.7-4.4(m,3H),3.4(t,2H),3.23,3.2,3.18,3.0，和2.99(5s,9H),2.8(m,3H),2.1(t,2H),1.06和1.01(2d,3H),0.95-0.8(m,15H),0.8-0.75(dd,3H)。
中間體158 N-[4-({(2R)-1-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-4-甲基-1-側氧基戊-2-基}胺基)-4-側氧基丁基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將13毫克(14.7微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於4毫升二甲基甲醯胺且然後與9.4毫 克(25微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、6微升N,N-二異丙基乙胺及與7毫克(31微莫耳)市售D-白胺酸第三丁酯鹽酸鹽掺合。將混合物於RT攪拌5 h且然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。由二烷/水中冷凍乾燥後，得到6.5毫克(理論值之49%)呈無色泡沫之保護的中間體。
HPLC(方法5)：Rt =2.2分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.21分鐘；MS(ESI+)：m/z=1076(M+H)+ 。
首先使用於二氯甲烷中之三氟醋酸將Boc保護基由此保護的中間體中分離，得到6.2毫克(理論值之99%)去保護之化合物。將5.2毫克(5微莫耳)此中間體置於1.5毫升二氯甲烷中處理並與0.8毫克(7微莫耳)N-羥基琥珀醯亞胺於1.2毫克(6微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽及0.16毫克(1微莫耳)4-二甲基胺基吡啶之存在下反應。於RT攪拌2 h後，將反應混合物濃縮並藉由製備性HPLC予以純化。得到1.3毫克標的化合物，將其中某些水解成反應物。
中間體159 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係依類似於中間體157中所述之合成法，由N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺及市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼而製備。
產率：6毫克(理論值之53%)
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.94分鐘；MS(ESI+)：m/z=1114(M+H)+ 。
中間體160 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係依類似於中間體157中所述之合成法，由20毫克(21微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺及市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼而製備。
產率：13毫克(理論值之52%)
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.92分鐘；MS(ESI+)：m/z=1153(M+H)+ 。
中間體161 N-(6-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-6-側氧基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係依類似於中間體157中所述之合成法，由N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺及市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼而製備。
產率：0.8毫克(理論值之16%)
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.78分鐘；MS(ESI+)：m/z=1092(M+H)+ 。
中間體162 N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將18毫克(20微莫耳)N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體64)溶解於3.2毫升二氯甲烷且然後與22毫克(190毫莫耳)1-羥基吡咯啶-2,5-二酮掺合，且然後與11毫克(60微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽及0.24毫克(0.17微莫耳)DMAP掺合。於RT攪拌2 h後，另外加入22毫克(190毫莫耳)1-羥基吡咯啶-2,5-二酮、11毫克(60微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽及0.24毫克(0.17微莫耳)DMAP並將反應混合物於RT另外攪拌1小時。接著於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。冷凍乾燥後，得到8.2毫克(理論值之41%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.9分鐘；MS(ESI+)：m/z=1024(M+H)+ 。
中間體163 [(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙基](1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基)甲酮三氟醋酸鹽
首先，由265毫克(0.82毫莫耳)(1S,2R)-1-(羥基胺甲醯基)-2-苯基環丙基胺基甲酸第三丁酯(起始化合物7)開始，藉由與1,2-雙(溴甲基)苯，以類似文獻方法(參見H.King，J.Chem.Soc.1942，432)反應，製備經Boc保護之(1S,2R)-1-(1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基羰基)-2-苯基環丙基胺基甲酸第三丁酯中間體。
產率：108毫克(理論值之34%)
LC-MS(方法2)：Rt =1.3分鐘；MS(ESI+)：m/z=395(M+H)+ 。
將108毫克(0.27毫莫耳)此中間體置於3.7毫升二氯甲烷中處理，加入1.8毫升三氟醋酸並將混合物於RT攪拌15分鐘。接著於減壓下濃縮並將剩餘的殘質由二烷中冷凍乾燥。得到定量產率的112毫克呈無色泡沫之標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.7分鐘；MS(ESI+)：m/z=295(M+H)+ 。
中間體164 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將166毫克(0.196毫莫耳)N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體10)置於40毫升DMF中處理且連續與80毫克(0.196毫莫耳)[(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙基](1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基)甲酮三氟醋酸鹽(中間體163)、112毫克(0.294毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)及682微升(3.9毫莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物隨即於RT攪拌過夜。然後將反應混合物於減壓下濃縮，將殘質置於醋酸乙酯中處理並以飽和氯化鈉水溶液清洗溶液。將有機相於硫酸鎂 上乾燥，過濾並濃縮。最後將殘質藉由製備性HPLC予以純化。依此法，得到19毫克(理論值之9%)Fmoc-保護的中間體N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R}3-{[(1S,2R)-1-(1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
HPLC(方法5)：Rt =1.68分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.51分鐘；MS(ESI+)：m/z=1083(M+H)+ 。
將19毫克(0.015毫莫耳)此中間體溶解於4毫升DMF。加入817微升哌啶後，將反應混合物於RT攪拌5分鐘。接著於減壓下濃縮，並將殘質用乙醚處理且然後藉由製備性HPLC予以純化(洗提液：乙腈+0.1% TFA/0.1% aq.TFA)。將對應的餾份合併，於減壓下將溶劑移除且然後將殘質由二烷/水中冷凍乾燥。得到12毫克(理論值之92%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.94分鐘；MS(ESI+)：m/z=861(M+H)+ 。
中間體165 N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡 咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
使用20毫克(0.021毫莫耳)中間體164，依類似於中間體97之製備法，用6-側氧基己基胺基甲酸苄酯，於氰基氫硼化鈉之存在下，隨即用氫解分離Z保護基(以5%披鈀活性碳作為催化劑，以甲醇作為溶劑)，而製備標的化合物。
產率：4.5毫克(於二階段中理論值之23%)
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.9分鐘；MS(ESI+)：m/z=960(M+H)+ 。
中間體166 N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-二氫-3H-2,3-苯并-3-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將4.4毫克(4.5微莫耳)中間體165置於1毫升1：1二烷/水中處理且然後與1毫克(6.8微莫耳)2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯及與50微升飽和碳酸氫鈉水溶液掺合。將反應混合物於RT攪拌30分鐘。然後另外加入50微升飽和碳酸氫鈉水溶液並將反應混合物於RT另外攪拌15分鐘，且然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。冷凍乾燥後，得到1毫克(理論值之21%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.08分鐘；MS(ESI+)：m/z=1040(M+H)+ 。
中間體167 3-{2-[2-(2-側氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸苄酯
標的化合物係由6克(21.55毫莫耳)市售3-{2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸於標準條件下，先以苄基氯及碳 酸銫酯化，且隨即用三氧化硫-吡啶絡合物氧化而製備。
產率：611毫克(於二階段中理論值之10%)
LC-MS(方法2)：Rt =1.69分鐘；MS(ESI+)：m/z=311(M+H)+ 。
中間體168 N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體69中所述之合成法，藉由將N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體4)及Nα-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-色胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體49)，於O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，且隨即用哌啶分離Fmoc保護基，製備呈三氟醋酸鹽之胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧 基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
將25毫克(0.028毫莫耳)此化合物及17.5毫克(0.06毫莫耳)中間體167於2毫升甲醇中合併，且與12.6毫克(0.14毫莫耳)硼烷-吡啶絡合物和2.5毫升醋酸掺合。將反應混合物於RT攪拌過夜。然後再次加入相同量的硼烷-吡啶絡合物及醋酸並將反應混合物於RT另外攪拌24 h。接著於減壓下濃縮，並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份濃縮並由1：1二烷/水中冷凍乾燥後，得到26.5毫克(理論值之88%)Z-保護的標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.04分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.97分鐘；MS(ESI+)：m/z=1064(M+H)+ 。
將25毫克(0.024毫莫耳)此中間體置於10毫升甲醇中處理並於10%披鈀活性碳在標準氫氣壓下，於RT氫化45分鐘。然後將催化劑濾出並於減壓下將溶劑移除。由二烷中冷凍乾燥後，得到19.7毫克(理論值之85%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.83分鐘；MS(ESI+)：m/z=974(M+H)+ 。
中間體169 N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧基丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-纈胺醯基 -N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將10毫克(10微莫耳)中間體168溶解於3毫升DMF並與3.5毫克(30毫莫耳)1-羥基吡咯啶-2,5-二酮掺合，且然後與2.4毫克(10微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽及5微升N,N-二異丙基乙胺掺合。於RT攪拌20 h後，加入8毫克(0.02毫莫耳)HATU並將反應混合物再次於RT攪拌過夜，且然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。由二烷中冷凍乾燥後，得到8.6毫克(理論值之64%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.81分鐘；MS(ESI+)：m/z=1071(M+H)+ 。
中間體170 N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L- 纈胺醯胺
此化合物係類似於中間體101於2階段，由26毫克(0.028毫莫耳)中間體15開始而製備。
產率：16.7毫克(於二階段中理論值之63%)
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.81分鐘；MS(ESI+)：m/z=914(M+H)+ 。
中間體171 N-(6-{[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基]胺基}己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將6.7毫克(7.3微莫耳)由中間體170所形成的化合物 及3毫克(14.7微莫耳)市售4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁酸置於2毫升DMF中處理並與5.6毫克(14.7微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)及2微升N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌30分鐘。將反應混合物濃縮及將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份合併，且然後將殘質由二烷中冷凍乾燥。如此得到4.5毫克(理論值之56%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.12分鐘；MS(ESI+)：m/z=1079(M+H)+ 。
中間體172 2-{2-[2-(2-側氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基胺基甲酸苄酯
標的化合物係由市售2-{2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙醇於標準條件下，首先導入Z保護基且然後以三氧化硫-吡啶絡合物氧化而製備。
HPLC(方法12)：Rt =1.4分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.65分鐘；MS(ESI+)：m/z=326(M+H)+ 。
中間體173 {2-[2-(2-側氧基乙氧基)乙氧基]乙基胺基甲酸苄酯
標的化合物係類似於中間體172，由市售2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙醇於標準條件下，首先導入Z保護基且然後以三氧化硫-吡啶絡合物氧化而製備。
HPLC(方法12)：Rt =1.3分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.68分鐘；MS(ESI+)：m/z=282(M+H)+ 。
中間體174 N-(2-{2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將47毫克(0.05毫莫耳)中間體16依類似於中間體167 之製備法，與2-{2-[2-(2-側氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基胺基甲酸苄酯，在硼烷-吡啶絡合物之存在下進行還原性胺化。隨即，以氫解法以5%披鈀活性碳作為催化劑及以甲醇作為溶劑移除Z保護基，製備38毫克(於二階段中理論值之66%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.8分鐘；MS(ESI+)：m/z=988(M+H)+ 。
中間體175 N-[2-(2-{2-[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此製備法係類似於中間體166，由34毫克(0.03毫莫耳)中間體174開始來進行。
產率：8.3毫克(理論值之23%)
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘； LC-MS(方法1)：Rt =0.97分鐘；MS(ESI+)：m/z=1068(M+H)+ 。
中間體176 N-(2-{2-[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此製備法係類似於中間體174及175，由中間體16及中間體173之還原性胺化作用開始，隨即去保護及形成馬來醯亞胺來進行。
HPLC(方法12)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.8分鐘；MS(ESI+)：m/z=981(M+H)+ 。
中間體177 N-[2-(2-{2-[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側 氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此製備法係類似於中間體174和175，由中間體16及中間體172之還原性胺化作用開始，隨即去保護及形成馬來醯亞胺來進行。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.86分鐘；MS(ESI+)：m/z=1025(M+H)+ 。
中間體178 N-{4-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此製備法係類似於中間體162，由6毫克中間體82開始來進行。
LC-MS(方法1)：Rt =0.82分鐘；MS(ESI+)：m/z=953(M+H)+ 。
中間體179 4-[(1E,3S)-3-胺基-4-苯基丁-1-烯-1-基]苯磺酸三氟醋酸鹽
將含13.6毫克(0.06毫莫耳)醋酸鈀(II)、469毫克(1.46毫莫耳)4-碘苯磺酸鉀、300毫克(1.21毫莫耳)(S)-第三丁基1-苯基丁-3-烯-2-基胺基甲酸酯、16.5毫克(0.12毫莫耳)苯基尿素及167.6毫克(1.21毫莫耳)碳酸鉀於7.5毫升DMF中之混合物以微波加熱至160℃達15分鐘。隨即將粗產物直接藉由製備性HPLC予以純化。得到312毫克31%Boc-保護化合物及69%游離胺之混合物。
隨即將混合物置於30毫升二氯甲烷中處理，與1毫升三氟醋酸掺和並於RT攪拌20 h。於減壓下濃縮後，將殘質與乙醚攪拌，並將形成的沉澱空吸過濾出來並以乙醚清洗。如此得到200毫克(理論值之62%)標的化合物。
LC-MS(方法11)：Rt =0.44分鐘；MS(ESI+)：m/z=304(M+H)+ 。
中間體180 4-[(3R)-3-胺基-4-苯基丁基]苯磺酸
將100毫克(0.25毫莫耳)4-[(1E,3S)-3-胺基-4-苯基丁-1-烯-1-基]苯磺酸三氟醋酸鹽懸浮於10毫升醋酸及數滴DMF及水中，與70毫克(0.07毫莫耳)披鈀木碳(10%)掺合，且於2.2巴氫氣壓下氫化24 h。將溶液過濾並藉由製備性HPLC予以純化濾液。
29毫克(76%純度，理論值之21%)產物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.46分鐘；MS(ESI+)：m/z=306(M+H)+ 。
中間體181 N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
於含90毫克(0.13毫莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之4毫升DMF溶液中加入60毫克(0.16毫莫耳)HATU及69微升(0.39毫莫耳)Hünig鹼。將反應混合物於RT攪拌30 h且然後與60毫克(0.15毫莫耳)60.3毫克(0.13毫莫耳)4-[(1E,3S)-3-胺基-4-苯基丁-1-烯-1-基]苯磺酸三氟醋酸鹽掺合。攪拌過夜後，將反應混合物藉由製備性HPLC予以純化。如此得到127毫克標的化合物及已去保護胺之44：56混合物。
LC-MS(方法1)：Rt =1.21分鐘；MS(ESI+)：m/z=971(M+H)+ ；Rt =0.84分鐘；MS(ESI+)：m/z=871(M+H)+ 去保護之化合物。
中間體182 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將90毫克中間體180溶解於4.6毫升二氯甲烷並加入0.92毫升三氟醋酸。將反應混合物於RT攪拌30分鐘且然後濃縮。將得到的粗產物藉由製備性HPLC予以純化。
得到91毫克(理論值之98%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.85分鐘；MS(ESI+)：m/z=871(M+H)+
中間體183 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先將16.7微升(0.03毫莫耳)15%琥珀醛水溶液加至943微升甲醇中並與17毫克(0.02毫莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4- 基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體181)及1.1微升(0.02毫莫耳)醋酸掺合。將反應混合物於RT攪拌5分鐘，且然後加入2.9微升(0.02毫莫耳)硼烷-吡啶絡合物。1 h後，另外加入各2當量之琥珀醛、醋酸和硼烷-吡啶絡合物，並將混合物於RT攪拌20 h。然後將反應混合物藉由製備性HPLC予以純化。
如此得到20毫克(83%純度，理論值之80%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.87分鐘；MS(ESI+)：m/z=957(M+H)+
中間體184 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將8毫克(7.5微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基 -2-甲基-3-側氧基-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺、2.8毫克(8.2微莫耳)6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼三氟醋酸鹽、3.4毫克(9微莫耳)HATU及3.9微升Hünig鹼於0.77毫升DMF中於RT攪拌20 h。隨即，將反應混合物藉由製備性HPLC予以純化。
得到3毫克(理論值之31%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.90分鐘；MS(ESI+)：m/z=1164(M+H)+
中間體185 N-{4-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
於含8毫克(7.5微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧 基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2S,3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺於2毫升DMF之溶液中加入8.6毫克(74.8微莫耳)N-羥基琥珀醯亞胺、8.5毫克(22.4微莫耳)EDCI及0.1毫克(0.75微莫耳)DMAP。將反應混合物於RT攪拌20 h。隨即，加入1.3微升(7.5微莫耳)Hünig鹼並將混合物於RT攪拌1 h。然後將反應混合物藉由製備性HPLC予以純化。得到2.6毫克(72%純度，理論值之21%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.89分鐘；MS(ESI+)：m/z=1054(M+H)+
中間體186 N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
於含43毫克(0.06毫莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺於1.9毫升DMF之溶液中加入29毫克(0.07毫莫耳)HATU及33微升(0.19毫莫耳)Hünig鹼。將反應混合物於RT攪拌30分鐘且然後與29毫克(0.07毫莫耳)4-[(3R)-3-胺基-4-苯基丁基]苯磺酸三氟醋酸鹽掺合。於RT攪拌過夜後，將反應混合物藉由製備性HPLC予以純化。如此得到58毫克標的化合物及已去保護胺之45：55混合物。
LC-MS(方法1)：Rt =1.09分鐘；MS(ESI+)：m/z=973(M+H)+ ；Rt =0.87分鐘；MS(ESI+)：m/z=873(M+H)+ 去保護之化合物。
中間體187 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將58毫克中間體186溶解於4.1毫升二氯甲烷，加入0.41毫升三氟醋酸並將混合物於RT攪拌30分鐘。於減壓下濃縮後，將粗產物藉由製備性HPLC予以純化。
得到50毫克(90%純度，理論值之85%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.87分鐘；MS(ESI+)：m/z=873(M+H)+
中間體188 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先將171微升(0.26毫莫耳)15%琥珀醛水溶液加至2.5毫升甲醇中並與50毫克(0.05毫莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽及11.6微升(0.2毫莫耳)醋酸掺 合。將反應混合物於RT攪拌5分鐘且然後加入30微升(0.24毫莫耳)硼烷-吡啶絡合物。攪拌24小時後，另外加入一當量的硼烷-吡啶絡合物並將混合物再攪拌2 h。然後將反應混合物藉由製備性HPLC予以純化。
得到40毫克(90%純度，理論值之66%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.91分鐘；MS(ESI+)：m/z=959(M+H)+
中間體189 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將10毫克(9.3微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺、3.5毫克(10.3微莫耳)6-(2,5-二側氧基-2,5- 二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼三氟醋酸鹽、4.3毫克(11.2微莫耳)HATU及4.9微升(28微莫耳)Hünig鹼於1毫升DMF中於RT攪拌20 h。隨即，將反應混合物藉由製備性HPLC予以純化。
4.2毫克(92%純度，理論值之33%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.91分鐘；MS(ESI+)：m/z=1166(M+H)+
中間體190 N-{4-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
於含10毫克(9.3微莫耳)N-(3-羰基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N- 甲基-L-纈胺醯胺於2.5毫升DMF之溶液中加入10.7毫克(93微莫耳)N-羥基琥珀醯亞胺、10.6毫克(28微莫耳)EDCI及0.12毫克(0.9微莫耳)DMAP。將反應混合物於RT攪拌20 h且然後藉由製備性HPLC予以純化。
得到3.8毫克(72%純度，理論值之25%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.90分鐘；MS(ESI+)：m/z=1055(M+H)+
中間體191 (2R,3R)-N-[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟醋酸鹽
標的化合物類似於中間體7之合成法於2階段，由起始化合物1及(2S)-2-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)丙-1-同三氟醋酸鹽(中間體99)而製備。
產率於2階段：62毫克(理論值之67%)
HPLC(方法6)：Rt =1.65分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.7分鐘；MS(ESI+)：m/z=443(M+H)+ 。
中間體192 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將1015毫克(1.59毫莫耳)N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體4)置於50毫升DMF中處理，與654毫克(2.39毫莫耳)2-溴-1-乙基四氟硼酸吡錠(BEP)及2.8毫升N,N-二異丙基乙胺掺合，並於RT攪拌10分鐘。然後加入1083毫克(1.75毫莫耳)(2R,3R)-N-[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟醋酸鹽(中間體191)且然後將混合物於RT以超音波浴處理30分鐘。然後將反應混合物於減壓下濃縮並將殘質置於300毫升醋酸乙酯中處理。將有機相連續以5%檸檬酸水溶液及5%碳酸氫鈉水溶液振盪清洗，於硫酸鎂上乾燥，過濾並濃縮。將如此得到的粗產物(1684毫克)， 未經進一步純化下，置於20毫升乙腈中處理，加入2毫升哌啶且然後將反應混合物於RT攪拌10分鐘。然後將混合物於減壓下濃縮並將殘質與乙醚掺合。再次藉由蒸發將溶劑濃縮並將殘質以閃蒸色層分離法於矽膠上予以純化(洗提液：15：1：0.1->15：2：0.2二氯甲烷/甲醇/17%氨水溶液)。將對應的餾份合併，於減壓下將溶劑移除並將殘質由乙腈/水中冷凍乾燥後。如此得到895毫克(67%於2階段)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.84分鐘；MS(ESI+)：m/z=840(M+H)+ 。
1 H NMR(500 MHz，DMSO-d6 )：δ=10.8(d,1H),8.3和8.05(2d,1H),8.0(d,1H),7.5(m,1H),7.3(m,1H),7.15和7.08(2s,1H)7.05-6.9(m,2H),5.12和4.95(2m,1H),4.65(m,1H),4.55(m,1H),4.1-3.8(m,4H),3.75(d,1H),3.23,3.18,3.17,3.12,2.95和2.88(6s,9H),3.1-3.0和2.85(2m,2H),2.65(d,1H),2.4-2.2(m,3H),2.15(m,3H),1.95(br.m,2H),1.85-0.8(br.m,11H),1.08和1.04(2d,3H),0.9-0.75(m,15H),0.75-0.65(dd,3H)[更多的訊號隱藏於H2 O波峰下]。
中間體193 N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基 -2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將50毫克(0.052毫莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體192)及204微升15%4-側氧基丁酸水溶液於2毫升甲醇中掺合，並與23.4毫克(0.252毫莫耳)硼烷-吡啶絡合物及6微升醋酸掺合。將反應混合物於RT攪拌過夜。接著於減壓下濃縮，並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份濃縮後，得到38毫克(理論值之78%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法9)：Rt =4.7分鐘；MS(ESI+)：m/z=926(M+H)+ 。
中間體194 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基 -2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係類似於中間體157中所述之合成法，由10毫克(11微莫耳)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺及市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼而製備。
產率：4.4毫克(理論值之35%)
HPLC(方法5)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.90分鐘；MS(ESI+)：m/z=1133(M+H)+ 。
中間體195 N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係類似於中間體166，由9毫克(0.010毫莫耳)中間體170開始而製備。
產率：1.1毫克(理論值之10%)
HPLC(方法12)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.99分鐘；MS(ESI+)：m/z=994(M+H)+ 。
中間體196 (2S)-2-胺基-1-(2-氧-3-氮雜雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-3-苯基丙-1-酮三氟醋酸鹽
將41毫克(0.37毫莫耳)2,5-二側氧基吡咯啶-1-基N-(第三丁氧基羰基)-L-苯丙胺酸酯置於10毫升DMF中處理並與149毫克(0.41毫莫耳)2-氧-3-氮雜雙環[2.2.2]辛-5-烯(起始化合物6)和72微升(0.41毫莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌1 h。於減壓下將溶劑移除並將殘質置於醋酸乙酯中處理，以5%檸檬酸水溶液且然後以5% 碳酸氫鈉水溶液振盪萃取。將有機相濃縮並將殘質以閃蒸色層分離法於矽膠上用10：1甲苯/乙醇作為洗提液予以純化。將對應的餾份合併並於減壓下將溶劑移除。將殘質於高度真空中乾燥後，得到69毫克(理論值之47%)經Boc保護之中間體(2S)-1-(2-氧-3-氮雜雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基胺基甲酸第三丁酯為非對映異構物混合物。
LC-MS(方法1)：Rt =1.1分鐘；MS(ESI+)：m/z=359(M+H)+ 。
將64毫克(0.18毫莫耳)此中間體置於10毫升二氯甲烷中處理，加入1毫升三氟醋酸並將混合物於RT攪拌30分鐘。接著於減壓下濃縮並將剩餘的殘質由水/二烷中冷凍乾燥。由此法得到66毫克(quant.)呈泡沫之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.45分鐘；LC-MS(方法3)：Rt =1.12分鐘；MS(ESI+)：m/z=259(M+H)+ 。
中間體197 (2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(2-氧-3-氮雜雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟醋酸鹽
首先，藉由於醋酸乙酯中處理及以5%硫酸氫鉀水溶液振盪萃取，將(2R,3R)-3-[(2S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)由其83毫克(0.18毫莫耳)二環己基胺鹽中釋放出來。將有機相於硫酸鎂上乾燥，過濾並濃縮。將殘質置於10毫升DMF中處理，並連續與66毫克(0.18毫莫耳)(2S)-2-胺基-1-(2-氧-3-氮雜雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-3-苯基丙-1-酮三氟醋酸鹽(中間體196)、101毫克(0.266毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)及93微升(0.53毫莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌30分鐘。然後將反應混合物濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到52毫克(理論值之56%)經Boc保護之中間體(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧-3-氮雜雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-羧酸第三丁酯。
HPLC(方法6)：Rt =2.13分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.13分鐘；MS(ESI+)：m/z=528(M+H)+ 。
將52毫克(0.1毫莫耳)此中間體置於10毫升二氯甲烷 中處理，加入1毫升三氟醋酸並將混合物於RT攪拌20分鐘。接著於減壓下濃縮並將剩餘的殘質與20毫升乙醚攪拌。10分鐘後，將混合物過濾並將濾液於高度真空中乾燥。由此法得到39毫克(理論值之72%)標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.62分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.68分鐘；MS(ESI+)：m/z=428(M+H)+ 。
中間體198 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧-3-氮雜雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將44.5毫克(0.071毫莫耳)N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體4)置於10毫升DMF中處理並連續與38.6毫克(0.071毫莫耳)(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(2-氧-3-氮雜雙環 [2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯胺三氟醋酸鹽(中間體197)、32.5毫克(0.086毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)及41微升(0.235毫莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌1 h。然後將反應混合物於減壓下濃縮並將殘質置於醋酸乙酯中處理。將有機相連續以5%檸檬酸水溶液及5%碳酸氫鈉水溶液清洗，於硫酸鎂上乾燥，過濾並濃縮。如此得到73毫克(理論值之98%)Fmoc-保護的中間體N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧-3-氮雜雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
HPLC(方法6)：Rt =2.78分鐘；LC-MS(方法3)：Rt =2.96分鐘；MS(ESI+)：m/z=1047(M+H)+ 。
將73毫克(0.071毫莫耳)此中間體溶解於5毫升DMF。加入0.5毫升哌啶後，將反應混合物於RT攪拌10分鐘，接著於減壓下濃縮，並將殘質重複用乙醚處理。將乙醚傾析出來後，將殘質藉由製備性HPLC予以純化(洗提液：乙腈/0.1% aq.TFA)。得到16毫克(理論值之26%)呈泡沫之標的化合物。
HPLC(方法6)：Rt =1.94分鐘； LC-MS(方法3)：Rt =1.71分鐘；MS(ESI+)：m/z=825(M+H)+
1 H NMR(400 MHz，DMSO-d6 )：δ=8.9-8.6(m,3H),8.4,8.3,8.1和8.0(4d,1H),7.3-7.1(m,5H),6.7-6.5(m,2H),5.2-4.8(m,3H),4.75-4.55(m,3H),4.05-3.95(m,1H),3.7-3.4(m,4H),3.22,3.17,3.15,3.05,3.02和2.95(6s,9H),3.0和2.7(2br.m,2H),2.46(m,3H),2.4-1.2(br.m,13H),1.1-0.85(m,18H),0.75(m,3H)[更多的訊號隱藏於H2 O波峰下]。
中間體199 N-(4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧-3-氮雜雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
標的化合物係類似於中間體193及194，由23毫克(24微莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧-3-氮雜雙環[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺 基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體198)開始而製備。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =2.1分鐘；MS(ESI+)：m/z=1118(M+H)+ 。
中間體200 N-[2-(2-{2-[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此製備法係類似於中間體174及175，以中間體192及中間體172之還原性烷化作用開始，隨即去保護及形成馬來醯亞胺來進行。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.86分鐘；MS(ESI+)：m/z=1025(M+H)+ 。
中間體201 N-{6-[(溴乙醯基)胺基]己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將22毫克(0.023毫莫耳)N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體101)溶解於9.5毫升THF並於0℃與4.2微升三乙胺掺合。逐滴加入溴乙醯氯之THF溶液並將反應混合物於0℃攪拌30分鐘。將反應混合物濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到6.9毫克(理論值之26%)呈泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.9分鐘；MS(ESI+)：m/z=1059和1061(M+H)+ 。
中間體202 N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧基丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此製備首先係類似於中間體168，由中間體192與中間體167之還原性烷化作用開始，且隨即氫解性裂解N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之苄酯來進行。
將13毫克(10微莫耳)此中間體溶解於5毫升DMF並與2.1毫克(20毫莫耳)1-羥基吡咯啶-2,5-二酮、6.5微升N,N-二異丙基乙胺及7.1毫克(0.02毫莫耳)HATU掺合。將反應混合物於RT攪拌過夜且然後於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。由乙腈/水中冷凍乾燥 後，得到9.2毫克(理論值之62%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =2.1分鐘；MS(ESI+)：m/z=1141(M+H)+ 。
中間體203 6-肼基-6-側氧基己基胺基甲酸第三丁酯
此化合物係以標準胜肽化學法，藉由將6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己酸與苄基肼羧酸酯在EDCI及HOBT之存在下偶合，且隨即氫解性裂解苄氧基羰基保護基而製備。
LC-MS(方法11)：Rt =0.59分鐘；MS(ESI+)：m/z=246(M+H)+ 。
中間體204 N-{4-[2-(6-胺基己醯基)肼基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將146毫克(50微莫耳)(N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺溶解於5毫升DMF且然後與30.6毫克(80微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸、19微升N,N-二異丙基乙胺及與22.4毫克(60微莫耳)6-肼基-6-側氧基己基胺基甲酸第三丁酯掺合。將反應混合物於RT攪拌1.5 h。接著於高度真空中濃縮並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到43毫克(理論值之68%)保護的中間體，然後將其置於10毫升二氯甲烷中處理並用1毫升三氟醋酸去保護。將反應混合物濃縮並將殘質與二氯甲烷攪拌，再次於減壓下將溶劑移除。如此得到45毫克(理論值之68%於2階段)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.66分鐘；MS(ESI+)：m/z=983(M+H)+ 。
中間體205 N-(4-{2-[6-({[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]胺甲醯基}胺基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1- 側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係類似於中間體114，由中間體50和204開始而製備。
產率：4毫克(理論值之78%)
HPLC(方法12)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.73分鐘；MS(ESI+)：m/z=1149(M+H)+ 。
中間體206 N-(6-{[3-({3-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧基丙基}二巰基)丙醯基]胺基}己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將8毫克(10微莫耳)中間體101溶解於2毫升DMF並與8.6毫克(20微莫耳)1,1'-{二對胺苯磺醯基雙[(1-側氧基丙-3,1-二基)氧基]}二吡咯啶-2,5-二酮及3.7微升N,N-二異 丙基乙胺掺合。將反應混合物於RT攪拌2 h且然後於減壓下將溶劑蒸發並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。得到7.2毫克(理論值之68%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.94分鐘；MS(ESI+)：m/z=615[½(M+2H+ ]
中間體207 (1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸三氟醋酸鹽
將210毫克(0.76毫莫耳)市售(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-苯基環丙羧酸用三氟醋酸去保護，得到定量產率之標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.23分鐘；MS(ESI+)：m/z=178(M+H)+ 。
中間體208 9H-茀-9-基甲基6-側氧基己基胺基甲酸酯
標的化合物係由1克(2.95毫莫耳)市售9H-茀-9-基甲基6-羥基己基胺基甲酸酯於標準條件下，以三氧化硫-吡啶絡合物氧化而製備。得到840毫克(理論值之85%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.1分鐘；MS(ESI+)：m/z=338(M+H)+ 。
中間體209 N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羧基-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，依類似於中間體75中所述之合成法，藉由將N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)及(1S,2R)-1-胺基-2-苯基環丙烷羧酸三氟醋酸鹽(中間體207)於O-(7-氮雜苯并三唑-1- 基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，隨即用三氟醋酸分離Boc保護基，製備胺化合物N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羧基-2-苯基環丙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺為三氟醋酸鹽。
然後於含22毫克(0.026毫莫耳)此化合物之10毫升甲醇中加入17毫克(0.05毫莫耳)9H-茀-9-基甲基6-側氧基己基胺基甲酸酯(中間體208)及2.3毫克醋酸以及11.4毫克(0.12毫莫耳)硼烷-吡啶絡合物。將反應混合物於RT攪拌過夜。然後再次加入相同量之硼烷-吡啶絡合物及醋酸以及8毫克茀-9-基甲基6-側氧基己基胺基甲酸酯，並將反應混合物於RT再攪拌24 h小時。接著於減壓下濃縮，並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份濃縮後，立即將此產物用於下個階段。
將33毫克仍帶有雜質之中間體置於5毫升DMF中處理，並加入1毫升哌啶。於RT攪拌15分鐘後，將反應混合物濃縮並將生成的殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到11毫克(於二階段中理論值之55%)胺基羧酸中間體。
HPLC(方法12)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.7分鐘；MS(ESI+)：m/z=843(M+H)+ 。
將6毫克(7.12微莫耳)此中間體置於1毫升二烷中處 理且然後與6.6毫克(42.7微莫耳)2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯及與5微升飽和碳酸氫鈉水溶液掺合。將反應混合物於RT攪拌1 h。然後加入另外3份各50微升飽和碳酸氫鈉水溶液並將反應混合物於RT再攪拌30分鐘。然後將反應混合物以三氟醋酸予以酸化至pH 2，且隨即於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。由乙腈/水中冷凍乾燥後，得到4毫克(理論值之60%)呈泡沫之標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.88分鐘；MS(ESI+)：m/z=923(M+H)+ 。
中間體210 N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，以文獻方法製備6-側氧基己酸(J.Org.Chem. 58，1993，2196-2200)。
將80毫克(0.08毫莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體192)及65.4毫克(0.5毫莫耳)6-側氧基己酸於9毫升甲醇中合併，並與10微升醋酸及37.4毫克(0.4毫莫耳)硼烷-吡啶絡合物掺合。將反應混合物於RT攪拌過夜。接著於減壓下濃縮並將殘質置於1：1乙腈/水中處理，及以三氟醋酸調整至pH 2。將反應混合物再次濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份濃縮後，得到70毫克(理論值之86%)呈三氟醋酸鹽之N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.87分鐘；MS(ESI+)：m/z=955(M+H)+ 。
1 H NMR(500 MHz，DMSO-d6 ，特徵訊號)：δ=12.0(br.M,1H),10.8(s,1H),9.4(m,1H),8.9和8.8(2d,1H),8.3和8.02(2d,1H),7.5(m,1H),7.3(m,1H),7.15和7.1(2s,1H)7.05-6.9(m,2H),5.12和4.95(2m,1H),4.7-4.5(m,2H), 4.1-3.8(m,4H),3.75(d,1H),3.25,3.2,3.18,3.13,2.98和2.88(6s,9H),2.8(m,3H),1.08和1.04(2d,3H),0.95-0.8(m,15H),0.8-0.65(dd,3H)。
將22毫克(23微莫耳)此中間體溶解於1.8毫升二氯甲烷並與13.2毫克(70微莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽、26.5毫克(230微莫耳)1-羥基吡咯啶-2,5-二酮和0.28毫克(2微莫耳)二甲基胺基吡啶掺合，並將反應混合物於RT攪拌2 h。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。由乙腈/水中冷凍乾燥後，得到21.3毫克(理論值之88%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.94分鐘；MS(ESI+)：m/z=1052(M+H)+ 。
中間體211 N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
類似於中間體210，將15毫克(20微莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽(中間體15)用6-側氧基己酸進行還原性烷化作用。
產率：9.2毫克(理論值之61%)
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.87分鐘；MS(ESI+)：m/z=929(M+H)+ 。
將9毫克(10微莫耳)此中間體溶解於3毫升DMF並與5.6毫克(48微莫耳)1-羥基吡咯啶-2,5-二酮、5微升N,N-二異丙基乙胺及5.5毫克(0.015毫莫耳)HATU掺合，及將反應混合物於超音波浴中處理6 h。在此期間，每小時加入5.5毫克HATU。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮，並將殘質置於乙腈/水中處理並以三氟醋酸調整至pH。再次於減壓下濃縮後，將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。由乙腈/水中冷凍乾燥後，得到5.8毫克(理論值之57%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.95分鐘；MS(ESI+)：m/z=1027(M+H)+ 。
中間體212 N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧基 丙基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此製備法首先係類似於中間體168，由中間體15與中間體167之還原性烷化作用開始，且隨即氫解性裂解N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基-3-苯基丁-2-基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺之苄酯來進行。
將8.4毫克(8微莫耳)此中間體溶解於3毫升DMF並與9.5毫克(80微莫耳)1-羥基吡咯啶-2,5-二酮、10微升N,N-二異丙基乙胺及9.4毫克(25微莫耳)HATU掺合，並將反應混合物於RT攪拌過夜且然後於減壓下濃縮。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘質置於乙腈/水中處理並以三氟醋酸調整至pH 2。再次於減壓下濃縮後，將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。由乙腈/水中冷凍乾 燥後，得到4毫克(理論值之32%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.96分鐘；MS(ESI+)：m/z=1117(M+H)+ 。
中間體213 N-{6-[(反式-4-{[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]羰基}環己基)胺基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係類似於中間體104，由N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(其合成係描述於中間體210中)開始而製備。得到9.3毫克(於3階段中理論值之37%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.9分鐘；MS(ESI+)：m/z=1177 (M+H)+ 。
中間體214 N-{4-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-4-側氧基丁基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係類似於中間體210，藉由將中間體92轉變為活性酯而製備。
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.82分鐘；MS(ESI+)：m/z=901(M+H)+ 。
中間體215 N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，類似於中間體183，係使用中間體40及硼烷-吡啶絡合物來製備N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。由此化合物，類似於中間體210，產生活性酯。得到34毫克(於二階段中理論值之36%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.85分鐘；MS(ESI+)：m/z=930(M+H)+ 。
中間體216 N-(4-{[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]羰基}苄基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，類似於中間體183之製備法，將中間體192與4-甲醯基苯甲酸及硼烷-吡啶絡合物反應，得到N-(4-羧基苄基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。然後使用此化合物，類似於中間體210，產生11毫克(理論值之68%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.13分鐘；MS(ESI+)：m/z=1072(M+H)+ 。
中間體217 N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將53毫克(84微莫耳)N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體4)及45毫克(84微莫耳)N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙醯基}-L-苯丙胺酸苄酯三氟醋酸鹽(中間體12)置於2毫升DMF中處理，並加入19微升N,N-二異丙基乙胺、14毫克(92微莫耳)HOBt及17.6毫克(92微莫耳)EDC，且然後將混合物於RT攪拌過夜。隨即，將反應混合物濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到59毫克(理論值之68%)Fmoc-保護的中間體N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
LC-MS(方法1)：Rt =1.55分鐘；m/z=1044(M+H)+ 。
將57毫克(0.055毫莫耳)此中間體以1.2毫升哌啶於5毫升DMF中處理，以分離Fmoc保護基。濃縮且藉由製備性HPLC予以純化後，得到39毫克(理論值之76%)呈三氟醋酸鹽之游離胺中間體N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1- 側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺。
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.01分鐘；m/z=822(M+H)+ 。
將60毫克(0.06毫莫耳)此中間體，類似於中間體210，與6-側氧基己酸於硼烷-吡啶絡合物之存在下反應。得到45毫克(理論值之75%)呈泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.97分鐘；MS(ESI+)：m/z=9936(M+H)+ 。
中間體218 N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係藉由將42毫克(0.05毫莫耳)中間體217轉變為活性酯而製備。
產率：26毫克(54%)
HPLC(方法5)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.01分鐘；MS(ESI+)：m/z=1034(M+H)+ 。
中間體219 N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將20毫克(0.02莫耳)來自中間體218之化合物置於2.4毫升甲醇中處理並於5%披鈀活性碳上於標準氫氣壓下，在RT氫化30分鐘。然後將催化劑濾出並於減壓下將溶劑移除。將殘質由1：1乙腈/水中冷凍乾燥。如此得到14毫克(理論值之92%)呈無色泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.86分鐘；MS(ESI+)：m/z=944(M+H)+ 。
中間體220 N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3- 基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將於10毫升二氯甲烷中之0.5克(1.01毫莫耳)中間體與1毫升三氟醋酸掺合。以超音波浴處理30分鐘後，將混合物濃縮並首先用DCM再蒸餾，且然後用乙醚再蒸發，並於高度真空中乾燥。油狀殘質未經進一步純化即用於下個階段。
將500毫克此中間體溶解於20毫升DMF並與466毫克(3.8毫莫耳)中間體191、382毫克(1.01毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)及440微升(2.5毫莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌1 h且然後濃縮。將殘質置於二氯甲烷中處理並先以5%檸檬酸水溶液振盪萃取且然後以飽和碳酸氫鈉水溶液振盪萃取。將有機相濃縮並將殘質以閃蒸色層分離法於矽膠上用95：5二氯甲烷/甲醇作為洗提液予以純化。將對應的餾份合併且於減壓下將溶劑移除。將殘質於高度真空中乾燥後，得到562毫克(於二階段中理論值之65%)Z-保護的中間體。
將562毫克(0.57毫莫耳)此中間體置於50毫升甲醇中 處理並以155毫克10%披鈀活性碳於標準氫氣壓下於RT氫化20分鐘。然後將催化劑濾出並於減壓下將溶劑移除。將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份合併，於減壓下將溶劑蒸發並將殘質由二烷中冷凍乾燥。如此得到361毫克(理論值之87%)呈泡沫之標的化合物。
HPLC(方法5)：雙波峰於Rt =1.75和1.86分鐘；LC-MS(方法1)：雙波峰於Rt =0.84分鐘和0.91分鐘具相同質量；MS(ESI+)：m/z=944(M+H)+ 。
中間體221 N-{(2S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-苯基丙基}-N-甲基-L-纈胺酸
將100毫克(0.76毫莫耳)市售N-甲基-L-纈胺酸及285毫克(1.14毫莫耳)市售(2S)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基胺基甲酸第三丁酯於22毫升甲醇中合併，並與340毫克(3.66毫莫耳)硼烷-吡啶絡合物及70微升醋酸掺合。將反應混合物於RT攪拌過夜。接著於減壓下濃縮並將殘質以閃蒸色層分離法於矽膠上用二氯甲烷/甲醇/17%氨水溶液作為洗提液予以純化。將對應的餾份濃縮並由1：1二烷/水中冷凍乾燥後，得到259毫克(理論值之93%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.76分鐘；MS(ESI+)：m/z=365(M+H)+ 。
中間體222 N-[(2S)-2-胺基-3-苯基丙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將40毫克(0.11毫莫耳)N-{(2S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-苯基丙基}-N-甲基-L-纈胺酸(中間體221)溶解於5毫升DMF並與80毫克(0.11毫莫耳)N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體220)、50毫克(0.13毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)及57微升(2.5毫莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌1 h且然後濃縮。將殘質置於醋酸乙酯中處理， 並先以5%檸檬酸水溶液且然後以水清洗。將有機相濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份合併及於減壓下將溶劑移除。由二烷中冷凍乾燥後，得到60毫克(理論值之50%)保護的中間體。
HPLC(方法12)：Rt =2.2分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.17分鐘；MS(ESI+)：m/z=1073(M+H)+ 。
將60毫克(0.05毫莫耳)此中間體置於10毫升二氯甲烷中處理，加入2毫升三氟醋酸並將反應混合物於RT攪拌1.5 h。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份合併，於減壓下將溶劑移除並將殘質由二烷中冷凍乾燥。由此得到25毫克(理論值之42%)呈泡沫之標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.95分鐘；MS(ESI+)：m/z=974(M+H)+ 。
中間體223 N-[(2S)-2-({[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]胺甲醯基}胺基)-3-苯基丙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此製備法係類似於中間體134，由5毫克(4.6微莫耳)中間體222開始來進行。得到3.4毫克(理論值之65%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.99分鐘；MS(ESI+)：m/z=1140(M+H)+ 。
中間體224 N-[(2S)-2-({[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]胺甲醯基}胺基)丙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此製備法係類似於中間體223之合成來進行。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘； LC-MS(方法1)：Rt =0.92分鐘；MS(ESI+)：m/z=1064(M+H)+ 。
中間體225 N-(2-胺基乙基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將100毫克(0.76毫莫耳)市售N-甲基-L-纈胺酸及182毫克(1.14毫莫耳)市售2-側氧基乙基胺基甲酸第三丁酯於20毫升甲醇中合併，並與340毫克(3.66毫莫耳)硼烷-吡啶絡合物和65微升醋酸掺合。將反應混合物於RT攪拌過夜。接著於減壓下濃縮並將殘質以閃蒸色層分離法於矽膠上用二氯甲烷/甲醇/17%氨水溶液作為洗提液予以純化。將對應的餾份濃縮及以1：1二烷/水中冷凍乾燥後，得到190毫克、39%純度(理論值之35%)中間體，將其未經進一步純化而再次轉化。
將50毫克(0.07毫莫耳)此中間體溶解於10毫升DMF並與52毫克(0.07毫莫耳)N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2- 基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體220)、32毫克(0.09毫莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)及37微升(0.2毫莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將混合物於RT攪拌過夜且然後濃縮。將殘質置於醋酸乙酯中處理並以5%檸檬酸水溶液且然後以水振盪萃取。將有機相濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份合併及於減壓下將溶劑移除。由二烷中冷凍乾燥後，得到53毫克(理論值之76%)保護的中間體。
HPLC(方法12)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.02分鐘；MS(ESI+)：m/z=984(M+H)+ 。
將53毫克(0.05毫莫耳)此中間體置於10毫升二氯甲烷中處理，加入2毫升三氟醋酸並將反應混合物於RT攪拌30分鐘。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮並將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份合併，於減壓下將溶劑移除並將殘質由二烷/水中冷凍乾燥。如此得到21毫克(理論值之40%)標的化合物，純度65%。
HPLC(方法12)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.87分鐘；MS(ESI+)：m/z=884(M+H)+ 。
中間體226 N-[2-({[2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]胺 甲醯基}胺基)乙基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此製備法係類似於中間體134之合成，由中間體225開始來進行。得到11.6毫克(理論值之59%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.90分鐘；MS(ESI+)：m/z=1050(M+H)+ 。
中間體227 N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係類似於中間體218，藉由轉化為活性酯而製備。
產率：18毫克(理論值之51%)
HPLC(方法5)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.98分鐘；MS(ESI+)：m/z=1073(M+H)+ 。
中間體228 (2R,3S)-3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁-2-基(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7,10-二異丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧基乙基)-5,11-二甲基-6,9-二側氧基-2-氧-5,8,11-三氮十五烷-15-酸酯
標的化合物係藉由將中間體154合成法中所得到的 Boc-保護中間體，與市售6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己烷肼偶合而製備。
HPLC(方法12)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.97分鐘；MS(ESI+)：m/z=1308(M+H)+ 。
中間體229 (2R,3S)-3-乙醯胺基-4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁-2-基(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7,10-二異丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧基乙基)-5,11-二甲基-6,9-二側氧基-2-氧-5,8,11-三氮十五烷-15-酸酯
標的化合物係由7.5毫克(2.5微莫耳)中間體154，藉由用2.3微升醋酸酐於1毫升DMF中，在0.4微升N,N-二異丙基乙胺之存在下乙醯化而製備。
產率：1.4毫克(理論值之40%)
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.86分鐘；MS(ESI+)：m/z=1250(M+H)+ 。
中間體230 (2R,3S)-3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁-2-基(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧基乙基)-7,10-二異丙基-5,11-二甲基-6,9-二側氧基-2-氧-5,8,11-三氮十五烷-15-酸酯
此化合物係類似於中間體228，由中間體193開始而製備。得到16毫克(於三階段中理論值之30%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =2.0分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.02分鐘；MS(ESI+)：m/z=1335(M+H)+ 。
中間體231 (2R,3S)-3-乙醯胺基-4-{2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁-2-基(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧基乙基)-7,10-二異丙基-5,11-二甲基-6,9-二側 氧基-2-氧-5,8,11-三氮十五烷-15-酸酯
此化合物係由8毫克(6微莫耳)中間體230，先用三氟醋酸去保護，且隨即用醋酸酐於DMF中，在N,N-二異丙基乙胺之存在下乙醯化而製備。得到2毫克(於二階段中理論值之37%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.88分鐘；MS(ESI+)：m/z=1277(M+H)+ 。
中間體232 N-[(4-硝基苯氧基)羰基]-β-丙胺酸苄酯
將200毫克(0.57毫莫耳)市售4-甲基苯磺酸-苄基β-丙胺酸酯及229毫克(1.14毫莫耳)氯碳酸4-硝基苯酯置於15毫升四氫呋喃中處理，然後將反應混合物加熱回流30分鐘。隨即，將反應混合物於減壓下濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份濃縮並將殘質於高度真空中乾燥後，得到86毫克(理論值之44%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.8分鐘； LC-MS(方法1)：Rt =1.07分鐘；MS(ESI+)：m/z=345(M+H)+ 。
中間體233 N-{2-[({3-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-3-側氧基丙基}胺甲醯基)胺基]乙基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將13毫克(10微莫耳)中間體225及6.7毫克(20微莫耳)中間體232溶解於3毫升DMF且然後加入7微升N,N-二異丙基乙胺。將混合物於RT攪拌過夜且然後於高度真空中濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。將對應的餾份濃縮及將殘質於高度真空中乾燥後，得到5.4毫克(理論值之38%)保護的中間體。
HPLC(方法5)：Rt =2.1分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.6in；MS(ESI+)：m/z=1089(M+H)+ 。
將5.4毫克(5微莫耳)此中間體溶解於5毫升甲醇及加入2毫克10%披鈀活性碳後，於標準氫氣壓下於RT氫化 20分鐘。然後將催化劑濾出並於減壓下將溶劑移除。將殘質於高度真空中乾燥後，得到5毫克(quant.)酸中間體。
HPLC(方法12)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.84分鐘；MS(ESI+)：m/z=999(M+H)+ 。
將5毫克(10微莫耳)此中間體溶解於1毫升DMF並與5.8毫克(50毫莫耳)1-羥基吡咯啶-2,5-二酮且然後與2.6微升N,N-二異丙基乙胺及3.8毫克(10微莫耳)HATU掺合。於RT攪拌20 h後，將反應混合物於減壓下濃縮。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。由1：1二烷/水中冷凍乾燥後，得到1.1毫克(理論值之20%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.87分鐘；MS(ESI+)：m/z=1096(M+H)+ 。
中間體234 N-(6-{[(苄氧基)羰基]胺基}己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將25毫克(30微莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體55)及45毫克(180微莫耳)6-側氧基己基胺基甲酸苄酯置於3毫升甲醇中處理並用醋酸予以酸化。隨即於室溫加入15微升(144微莫耳；9.4M)硼烷-吡啶絡合物。隨即將混合物於RT攪拌24 h，並於8 h後再次加入醋酸及15微升(144微莫耳；9.4M)硼烷-吡啶絡合物。隨即將反應混合物以TFA調整至pH 2並藉由製備性HPLC予以純化。將產物餾份合併及濃縮，並將殘質於高度真空中乾燥。如此得到15毫克(理論值之46%)呈泡沫之標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =1.03分鐘；m/z=1066(M+H)+ 。
中間體235 N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將15毫克(14微莫耳)N-(6-{[(苄氧基)羰基]胺基}己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體234)置於3毫升甲醇中處理並加入1.8毫克披鈀木碳(5%)。隨即將反應混合物於標準氫氣壓下於RT氫化2 h。然後將催化劑濾出並於減壓下將溶劑移除。將殘質由1：1乙腈/水中冷凍乾燥。得到11毫克(理論值之86%)呈泡沫之標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.81分鐘；m/z=932(M+H)+ 。
中間體236 N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將11毫克(12微莫耳)N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧 基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體235)置於500微升1：1二烷/水中處理並與253微升1M碳酸氫鈉水溶液且然後與2.8毫克(18微莫耳)2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-羧酸甲酯掺合。將反應混合物於RT攪拌30分鐘且然後用三氟醋酸予以酸化。將反應混合物藉由製備性HPLC予以純化。冷凍乾燥後，得到0.8毫克(理論值之7%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =1.01分鐘；m/z=1012(M+H)+ 。
中間體237 N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將25毫克(30微莫耳)N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2- 基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體55)及23毫克(180微莫耳)6-側氧基己酸置於3毫升甲醇中處理並用醋酸予以酸化。隨即於室溫加入15微升(144微莫耳；9.4M)硼烷-吡啶絡合物。隨即將反應混合物於RT攪拌20 h，且於8 h後再次加入醋酸及15微升(144微莫耳；9.4M)硼烷-吡啶絡合物。隨即將反應混合物以三氟醋酸調整至pH 2並藉由製備性HPLC予以純化。將產物餾份合併及濃縮，並將殘質冷凍乾燥。如此得到21毫克(理論值之74%)呈泡沫之標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.91分鐘；m/z=947(M+H)+ 。
中間體238 N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1,3,4-二唑-2-基)乙基]胺基}丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將21毫克(22微莫耳)中間體237溶解於1毫升DMF並與38毫克(333微莫耳)1-羥基吡咯啶-2,5-二酮且然後與 2.4毫克(10微莫耳)O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸(HATU)及19微升N,N-二異丙基乙胺掺合。於RT攪拌2 h後，將反應混合物藉由製備性HPLC予以純化。由二烷中冷凍乾燥後，得到22毫克(理論值之96%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.95分鐘；m/z=1044(M+H)+ 。
中間體239 N-甲基-L-蘇胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
首先，藉由於醋酸乙酯中處理及以5%硫酸水溶液振盪萃取，將N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-蘇胺酸由其237毫克(0.887毫莫耳)二環己基胺鹽中釋放出來。將有機相於硫酸鎂上乾燥，過濾並濃縮。將14.7毫克(0.055毫莫耳)N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-蘇胺酸置於3毫升DMF中處理並連續與40毫克(0.055毫莫耳)中間體220、12.7毫克(0.066毫莫耳)1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽 及10毫克(0.066毫莫耳)1-羥基-1H-苯并三唑水合物掺合。將混合物隨即於RT攪拌2 h。於減壓下將溶劑移除並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到29毫克(理論值之54%)Z-保護中間體。
LC-MS(方法1)：Rt =1.15分鐘；MS(ESI+)：m/z=976(M+H)+ 。
將29毫克(0.003毫莫耳)此中間體溶解於5毫升甲醇並於5毫克5%鈀/活性碳上於RT和標準氫氣壓下氫化1 h。隨即將催化劑濾出並將溶劑蒸發。將剩餘的殘質藉由製備性HPLC予以純化。得到17毫克(理論值之54%)標的化合物。
LC-MS(方法1)：Rt =0.77分鐘；MS(ESI+)：m/z=842(M+H)+ 。
中間體240 N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-蘇胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此化合物係類似於中間體210，由15.6毫克(0.016毫莫耳)中間體239而製備。得到10.8毫克(於二階段中理論值之67%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.85分鐘；MS(ESI+)：m/z=1053(M+H)+ 。
中間體241 N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
首先，類似於中間體5，製備三氟醋酸-(2S)-2-胺基-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)丙-1-酮(1：1)。然後使用此試劑，依類似於中間體75中所述之合成法，藉由與N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)，在O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基 六氟磷酸之存在下偶合，且隨即用三氟醋酸分離Boc保護基，製備標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.85分鐘；MS(ESI+)：m/z=817(M+H)+ 。
中間體242 N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將50毫克(0.05毫莫耳)中間體241，類似於中間體210，與6-側氧基己酸於硼烷-吡啶絡合物之存在下反應。隨即，將22.5毫克(0.02毫莫耳)所生成的酸轉變為活化酯。得到13.5毫克(於二階段中理論值之36%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.86分鐘；MS(ESI+)：m/z=1028(M+H)+ 。
中間體243 N-(6-胺基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此製備法係類似於中間體78，藉由中間體241與6-側氧基己基胺基甲酸苄酯和硼烷-吡啶絡合物之還原性烷化作用，且隨即用甲醇作為溶劑之氫化作用來進行。
產率：17.5毫克(於二階段中理論值之34%)
HPLC(方法12)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.63分鐘；MS(ESI+)：m/z=916(M+H)+ 。
中間體244 N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
此製備法係類似於中間體166，由中間體243開始來進行。
產率：1.3毫克(理論值之12%)
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.89分鐘；MS(ESI+)：m/z=996(M+H)+ 。
中間體245 2,5-二側氧基吡咯啶-1-基O-[(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-2-側氧基乙基)-7,10-二異丙基-5,11-二甲基-6,9,15-三側氧基-2-氧-5,8,11-三氮十五烷-15-基]-N-(第三丁氧基羰基)-L-蘇胺醯基-β-丙胺酸酯
首先，將中間體193，如中間體154所述，與N-(第三丁氧基羰基)-L-蘇胺酸苄酯反應，且然後以氫解作用移除苄酯。然後將如此得到的30毫克(0.027毫莫 耳)N-[4-({(1S,2R)-1-[(第三丁氧基羰基)胺基]-1-羧基丙-2-基}氧基)-4-側氧基丁基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺與4-甲基苯磺酸-苄基β-丙胺酸酯於HATU之存在下偶合，並以氫解作用移除苄酯(產率：24毫克(於二階段中理論值之71%))。最後，將10毫克(0.008毫莫耳)所生成的酸轉變為活化酯。以HPLC予以純化後，得到2.7毫克(理論值之23%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =1.01分鐘；MS(ESI+)：m/z=1295(M+H)+
中間體246a (2S)-2-胺基-1-(4-羥基-1,2-唑啶-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙-1-酮三氟醋酸鹽(非對映異構物1)
將1.6克(3.982毫莫耳)N-(第三丁氧基羰基)-L-色胺酸 2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯溶解於15毫升DMF並與500毫克(3.982毫莫耳)1,2-唑啶-4-醇及100微升N,N-二異丙基乙胺掺合。將反應混合物於RT攪拌過夜。然後再加入100微升N,N-二異丙基乙胺，並將混合物先以超音波浴處理5 h，然後於RT攪拌過夜，且隨即於減壓下濃縮。將剩餘的殘質置於醋酸乙酯中處理並先以5%檸檬酸水溶液萃取二次，然後以飽和碳酸氫鈉水溶液，最後以水萃取。將有機相濃縮並將殘質以閃蒸色層分離法於矽膠上用95：5二氯甲烷/甲醇作為洗提液分離成非對映異構物。將二種非對映異構物之對應的餾份合併並於減壓下將溶劑移除。將殘質於高度真空中乾燥後，得到272毫克(理論值之18%)非對映異構物1(Rf =0.18(95：5二氯甲烷/甲醇)及236毫克(理論值之16%)非對映異構物2(Rf =0.13(95：5二氯甲烷/甲醇)，以及333毫克(理論值之22%)經Boc保護之中間體之混合餾份。
於標準條件下，使用含5毫升三氟醋酸之20毫升二氯甲烷，由272毫克(725微莫耳)此中間體的非對映異構物1分離Boc保護基，由二烷/水中冷凍乾燥後，得到290毫克(quant.)標的化合物，75%純度且未經進一步純化即用於下個階段。
HPLC(方法12)：Rt =1.1分鐘；LC-MS(方法13)：Rt =1.80分鐘；MS(ESI+)：m/z=276(M+H)+
中間體246b (2S)-2-胺基-1-(4-羥基-1,2-唑啶-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙-1-酮三氟醋酸鹽(非對映異構物2)
於標準條件下，使用含5毫升三氟醋酸之20毫升二氯甲烷，由236毫克(630微莫耳)246a中所述的中間體之非對映異構物2，分離Boc保護基，並濃縮，與乙醚攪拌且將殘質於高度真空中乾燥後，得到214毫克(76%)標的化合物。
LC-MS(方法13)：Rt =1.84分鐘；MS(ESI+)：m/z=276(M+H)+
中間體247a N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(4-羥基-1,2-唑啶-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(非對映異構物1)
首先如中間體74所述，進行中間體26及246a之偶合，隨即分離Boc保護基，以合成此化合物。隨即，與6-側氧基己酸於硼烷-吡啶絡合物之存在下進行烷化反應，且隨即如中間體210所述，將酸轉變為活性酯。標的化合物藉由製備性HPLC予以純化。
HPLC(方法12)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.86分鐘；MS(ESI+)：m/z=1053(M+H)+
中間體247b N-{6-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-6-側氧基己基}-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(4-羥基-1,2-唑啶-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(非對映異構物2)
首先如中間體74所述，進行中間體26及246b之偶合，隨即分離Boc保護基，以合成此化合物。隨即，與6-側氧基己酸於硼烷-吡啶絡合物之存在下進行烷化反應，且隨即如中間體210所述，將酸轉變為活性酯。標的化合物藉由製備性HPLC予以純化。
HPLC(方法12)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.86分鐘；MS(ESI+)：m/z=1053(M+H)+
中間體248 N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-第三丁氧基-3-(4-羥基苯基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
首先，類似於中間體86中所述之合成法，藉由將N-(第三丁氧基羰基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺(中間體26)及L-酪胺酸第三丁酯，於O-(7-氮 雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟磷酸之存在下偶合，且隨即用三氟醋酸分離Boc保護基，得到第三丁酯(以三氟醋酸於二氯甲烷中攪拌40分鐘)，製得呈三氟醋酸鹽之胺化合物N-[(2R,3R)-3-甲氧基-3-{(2S)-1-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基{(2S)-3-甲基-2-[(N-甲基-L-纈胺醯基)胺基]丁基}胺基)庚醯基]吡咯啶-2-基}-2-甲基丙醯基]-L-酪胺酸第三丁酯。然後使用38毫克(0.04毫莫耳)此化合物，類似於中間體210之製備法，藉由與6-側氧基己酸於硼烷-吡啶絡合物之存在下反應，得到31毫克(理論值之99%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.88分鐘；MS(ESI+)：m/z=918(M+H)+ 。
B：製備抗體-藥物接合物(ADCs) B-1.產生抗-C4.4a抗體之通用方法：
於表1及表2中藉由序列說明之該抗-C4.4a抗體係藉由篩選重組體人類C4.4a SEQ ID NO：1及小鼠C4.4a SEQ ID NO：2及細胞表現C4.4a之噬菌體展示庫而產生。該以此方式得到之抗體係重新格式化至人類IgG1格式及用於本文說明之實例中。
B-2.於哺乳類細胞中表現抗-C4.4a抗體之通用方法
該抗體，例如M31-B01(輕鏈SEQ ID NO：346及重鏈SEQ ID NO：347)或表2中之其他抗體係於哺乳類細胞培 養中生成。為此目的，係將HEK293 6E細胞用適當的CMV啟動子根據表現載體瞬間轉染。該抗體之重鏈及輕鏈係一起克隆至單載體系統，或分別至一兩載體系統。該細胞培養規模至多為-於振盪燒瓶中1.5升或-於“波浪包”中10升。表現係於37℃於補充有含1%“FCS超低IgG”(Invitrogen)及0.5mM丙戊酸之Tryptone TN1(Organotechnie)的F17 Medium(Invitrogen)中發生達5-6天。該表現產率係介於100及600毫克/升。
B-3.由細胞上層清液分離抗體之通用方法
該抗體，例如M31-B01(輕鏈SEQ ID NO：346及重鏈SEQ ID NO：347)或表2中之其他抗體係由細胞培養上層清液中獲得。將細胞上層清液藉由離心法移除細胞而澄清。隨即將該細胞上層清液藉由親和性色層分離法於MabSelect Sure(GE Healthcare)色層分離管柱上予以純化。為此目的，該管柱係於DPBS pH 7.4(Sigma/Aldrich)中平衡，施予細胞上層清液，並將管柱用約10管柱體積之DPBS pH 7.4+500 mM氯化鈉清洗。將抗體於50 mM醋酸鈉pH 3.5+500 mM氯化鈉中洗提且隨即進一步藉由凝膠過濾色層分離法於Superdex 200管柱(GE Healthcare)於DPBS pH 7.4上予以純化。
B-4.偶合至半胱胺酸側鏈之通用方法
使用於偶合反應中之抗體為如下者： 抗-C4.4a M31-B01
抗-C4.4a B01-3
抗-C4.4a B01-10
抗-C4.4a B01-7
抗-C4.4a D02-4
抗-C4.4a D02-6
抗-C4.4a D02-7
將3當量三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)溶解於PBS緩衝液之溶液，加到濃度範圍介於1毫克/毫升和15毫克/毫升之對應的抗體於PBS緩衝液之溶液中，並將混合物於RT攪拌1小時。隨即，依照所欲的載量，加入介於2至10當量供偶合用的馬來醯亞胺前驅物化合物或鹵化物前驅物化合物(中間體102、103、105-109、111-114、117-126、128、129、132-146、148-155、157、159-161、166、171、175-177、184、189、194-195、199-201、205、209、223-224、226、228-231、236和244)之DMSO溶液。此處DMSO的量不應超過總體積之10%。將該批次於RT攪拌60-120分鐘且然後施予至經PBS平衡之PD10管柱(Sephadex® G-25，GE Healthcare)，並以PBS緩衝液溶離。任意的，另外藉由超離心法進行濃縮程序。若需要，為了更有效移除低分子量組成份，以PBS緩衝液再稀釋後，重複進行超過濾濃縮。
通常，除非另外有指明，係使用5毫克對應抗體之PBS緩衝液進行還原及隨即之偶合。經由PD10管柱予以純化後，如此得到，各例對應ADC溶解於3.5毫升PBS緩衝液之溶液。然後測定這些溶液之所指的特定蛋白質濃度。 再者，依照下述之方法測定抗體的載量(藥物/mAb比率)。
此方法係用於製備實例1-3、5-30、32-36、38-59、61-66、68-70、80、82-85、87、88、92-95、97、98、107、109-114、119及122中所代表的免疫接合物。
於所闡明之結構式中，AK1A -AK1G 之定義係如下： AK1A =抗-C4.4a抗體M31-B01(部分還原)-S§1
AK1B =抗-C4.4a抗體B01-3(部分還原)-S§1
AK1C =抗-C4.4a抗體B01-10(部分還原)-S§1
AK1D =抗-C4.4a抗體B01-7(部分還原)-S§1
AK1E =抗-C4.4a抗體D02-4(部分還原)-S§1
AK1F =抗-C4.4a抗體D02-6(部分還原)-S§1
AK1G =抗-C4.4a抗體D02-7(部分還原)-S§1 其中§1 係指與琥珀醯亞胺基之連接，且S係代表部分還原抗體之半胱胺酸殘基的硫原子。
B-5.偶合至離胺酸側鏈之通用製程
於偶合反應中使用之抗體係如下者： 抗-C4.4a抗體M31-B01
抗-C4.4a抗體B01-3
依照所欲的載量，將介於2及5當量的偶合前驅化合物(中間體104、110、115、116、127、130、131、147、156、158、162、169、178、185、190、202、206、210-216、218、219、227、233、238、240、242、245、247a及247b) 之DMSO溶液，加到濃度範圍介於1毫克/毫升和15毫克/毫升之含對應抗體之PBS緩衝液的溶液中。於RT攪拌30分鐘後，再次加入相同量的前驅化合物之DMSO溶液。或者，可一次加入4-10當量的偶合前驅化合物。此處DMSO的量不應超過總體積之10%。於RT再攪拌30分鐘後，將該批次施予至經PBS平衡之PD10管柱(Sephadex® G-25，GE Healthcare)，並以PBS緩衝液溶離。任意的，另外藉由超離心法進行濃縮程序。若需要，為了更有效移除低分子量組成份，以PBS緩衝液再稀釋後，重複進行超過濾濃縮。
通常，除非另外有指明，係使用5毫克對應抗體之PBS緩衝液進行偶合。經由PD10管柱予以純化後，如此得到各例對應ADC溶解於3.5毫升PBS緩衝液之溶液。然後測定這些溶液之所指的特定蛋白質濃度並依照下述之方法測定抗體的載量(藥物/mAb比率)。
此方法係用於製備實例4、31、37、60、67、81、86、89-91、96、99-106、108、118、120、121及123-125中所代表的免疫接合物。
於所示之結構式中，AK2A 及AK2B 之定義係如下 AK2A =抗-C4.4a抗體M31-B01-NH§2
AK2B =抗-C4.4a抗體B01-3-NH§2
其中§2 係代表與羰基基團之連接，且 NH係代表抗體之離胺酸殘基的側鏈胺基基團。
B-6.製備半胱胺酸加合物之通用方法：
將10微莫耳上述馬來醯亞胺前驅化合物置於3毫升DMF中處理並與2.1毫克(20微莫耳)L-半胱胺酸掺合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓下濃縮且隨即藉由製備性HPLC予以純化。
於所示之結構式中，Cys之定義係如下 其中§3 係指與連接子-帶毒體單元之連接。
本發明接合物之進一步純化及定性
反應發生後，於特定案例中係將反應混合物，例如以超過濾濃縮，且然後脫鹽並以色層分離法予以純化，例如使用Sephadex® G-25。例如以磷酸-緩衝食鹽水(PBS)來進行溶離。隨即將該溶液進行無菌過濾並冷凍。另外一種選擇係將接合物冷凍乾燥。
B-7.帶毒體(toxophore)載量之測定
實例中所述接合物之結果溶液的帶毒體載量，於PBS緩衝液中，係如下測量：離胺酸連接的ADC之帶毒體載量係以質譜測定個別接合物種類之分子量來測量。在此案例中，開始係以PNGaseF將抗體接合物去糖基化，並將樣本酸化，接著HPLC分離， 以質譜使用ESI-MicroTofQ(Bruker Daltonik)分析。所有的光譜係經由TIC(總離子色層分離圖)的訊號加入，且各種接合物之分子量係以MaxEnt解摺積(MaxEnt Deconvolution)為基準來計算。將不同種類的訊號整合後，然後計算DAR(藥物/抗體比率)。
於蛋白質鑑定時，除了分子量測定外，係在去糖基化及/或變性後進行胰蛋白酶消化，且此消化，係在變性、還原及衍生化後，以所偵測的胰蛋白酶胜肽為基礎，確認蛋白質的特性。
半胱胺酸-連接的接合物之帶毒體載量係經由還原及變性的ADC之逆相色層分離法來測定。將ADC溶液(1毫克/毫升，50微升)與鈲鹽酸鹽(GuHCl)(28.6毫克)及與DL-二硫蘇糖醇(DTT)(500mM，3微升)溶液掺合。將混合物於55℃培養1小時並以HPLC分析。
HPLC分析係於Agilent 1260 HPLC系統上以220 nm偵測來進行。所用的管柱為Polymer Laboratories PLRP-S聚合逆相管柱(型號PL1912-3802)(2.1×150毫米，8 μm粒徑，1000 Å)以1毫升/分鐘之流速，使用下列梯度：0分鐘，25% B；3分鐘，25% B；28分鐘，50% B。洗提液A係由0.05%三氟醋酸(TFA)之水溶液組成，洗提液B由0.05%三氟醋酸之乙腈溶液組成。
將偵測到的波峰與接合物抗體之輕鏈(L0)和重鏈(H0)相比較，以滯留時間來分配。於接合物樣本中單獨偵測到的波峰分派至輕鏈，含一帶毒體(L1)，而重鏈含一、二和 三個帶毒體(H1、H2、H3)。
抗體含帶毒體之平均載量係如下計算：首先，由波峰面積計算輕鏈載量-以積分來測定-屬於輕鏈之L0和L1波峰，為L0和L1之帶毒體數加權積分結果之總和，除以L0和L1之奇異加權積分結果之總和。以同樣的方法，由波鋒面積計算重鏈載量-以積分來測定-屬於重鏈之H0、H1、H2和H3波峰，為H0、H1、H2和H3之帶毒體數加權積分結果之總和，除以H0、H1、H2和H3之奇異加權積分結果之總和。DAR係以輕鏈載量和重鏈載量來表示，為輕鏈載量和重鏈載量之二倍總和。倍數2係考量抗體乃由二條輕鏈及二條重鏈所組成之事實。於特定之個別案例中，由於特定波峰之共析(co-elution)，可能無法精確地測出帶毒體載量。
B-8.ADC之抗原結合試驗
結合劑與標靶分子之結合能力係於結合發生後進行試驗。熟悉技藝者知道各種用於進行此試驗之方法，例如接合物之親和力可以ELISA技術或表面電漿共振分析(BIAcoreTM 測量)來試驗。接合物濃度可由熟悉技藝者使用一般的方法，例如對於抗體接合物，係藉由蛋白質測定(亦參見Doronina等人；Nature Biotechnol.2003；21：778-784和Polson等人，Blood 2007；1102：616-623)來測量。
實例-免疫接合物 實例1
於此例中，係使用70毫克抗-C4.4a M31-B01於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：12.2毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.5
實例2
蛋白質濃度：0.87毫克/毫升
藥物/mAb比率：5.8
實例3
蛋白質濃度：1.16毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.1
實例4
蛋白質濃度：1.24毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.6
實例5
蛋白質濃度：0.88毫克/毫升
藥物/mAb比率：6.9
實例6
蛋白質濃度：1.2毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.8
實例7
蛋白質濃度：0.9毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.9
實例8
蛋白質濃度：0.52毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.6
實例9
蛋白質濃度：0.47毫克/毫升
藥物/mAb比率：6.6
實例10
蛋白質濃度：0.77毫克/毫升
藥物/mAb比率：6.9
實例11
蛋白質濃度：0.47毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.0
實例12
蛋白質濃度：1.46毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.5
實例13
蛋白質濃度：0.45毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.3
實例14
蛋白質濃度：0.98毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.6
實例15
此處係使用70毫克抗-C4.4a M31-B01於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：9.42毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.1
實例16
蛋白質濃度：0.65毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.8
實例17
蛋白質濃度：1.07毫克/毫升
藥物/mAb比率：無法測出
實例18
蛋白質濃度：0.47毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.4
實例19
蛋白質濃度：0.43毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.8
實例20
蛋白質濃度：1.01毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.6
實例21
蛋白質濃度：0.53毫克/毫升
藥物/mAb比率：0.6
實例22
蛋白質濃度：0.55毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.3
實例23
蛋白質濃度：0.65毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.1
實例24
蛋白質濃度：1.04
藥物/mAb比率：3.5
實例25
蛋白質濃度：0.62毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.4
實例26
此處係使用90毫克抗-C4.4a M31-B01於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：11.2毫克/毫升
藥物/mAb-比率：2.3
實例27
蛋白質濃度：1.11毫克/毫升
藥物/mAb-比率：2.4
實例28
此處係使用70毫克抗-C4.4a M31-B01於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：10.7毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.2
實例29
蛋白質濃度：0.87毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.8
實例30
蛋白質濃度：1.3毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.1
實例31
蛋白質濃度：1.3毫克/毫升
藥物/mAb比率：0.3
實例32
此處係使用70毫克抗-C4.4a M31-B01於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：12.0毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.2
實例33
此處係使用90毫克抗-C4.4a M31-B01於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：10.2毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.3
實例34
蛋白質濃度：1.37毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.6
實例35
蛋白質濃度：1.14毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.0
實例36
蛋白質濃度：1.07毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.5
實例37
蛋白質濃度：1.14毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.9
實例38
蛋白質濃度：1.22毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.3
實例39
蛋白質濃度：1.3毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.2
實例40
蛋白質濃度：1.23毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.3
實例41
蛋白質濃度：1.64毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.8
實例42
蛋白質濃度：1.07毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.1
實例43
蛋白質濃度：1.14毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.3
實例44
蛋白質濃度：1.23毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.4
實例45
蛋白質濃度：1.22毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.5
實例46
蛋白質濃度：1.22毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.4
實例47
蛋白質濃度：1.32毫克/毫升
藥物/mAb比率：無法測出
實例48
蛋白質濃度：1.44毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.3
實例49
此處係使用250毫克抗-C4.4a B01-10於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：12.8毫克/毫升
藥物/mAb比率：5.2
實例50
蛋白質濃度：0.9毫克/毫升
藥物/mAb比率：2
實例51
此處係使用250毫克抗-C4.4a B01-3於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：8.0毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.5
實例52
此處係使用250毫克抗-C4.4a B01-10於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：12.3毫克/毫升
藥物/mAb比率：5.2
實例53
此處係使用250毫克抗-C4.4a B01-10於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：10.2毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.4
實例54
此處係使用50毫克抗-C4.4a B01-3於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：11.5毫克/毫升
藥物/mAb比率：5.2
實例55
此處係使用250毫克抗-C4.4a D02-6於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：13毫克/毫升
藥物/mAb比率：5.2
實例56
此處係使用250毫克抗-C4.4a B01-3於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：10.3毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.9
實例57
蛋白質濃度：0.88毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.2
實例58
蛋白質濃度：1.18毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.4
實例59
蛋白質濃度：1.23毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.0
實例60
蛋白質濃度：1.3毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.3
實例61
蛋白質濃度：1.11毫克/毫升
藥物/mAb比率：無法測出
實例62
蛋白質濃度：1.25毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.4
實例63
蛋白質濃度：0.88毫克/毫升
藥物/mAb比率：5.0
實例64
蛋白質濃度：1.23毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.3
實例65
蛋白質濃度：0.93毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.8
實例66
蛋白質濃度：0.85毫克/毫升
藥物/mAb比率：5.3
實例67
蛋白質濃度：1.51毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.4
實例68
此處係使用150毫克抗-C4.4a B01-3於DPBS pH 7.4進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：11.0毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.5
實例69
蛋白質濃度：1.2毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.3
實例70
蛋白質濃度：1.25毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.1
實例71 N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧乙基]巰基}-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將10毫克(10微莫耳)中間體157置於5.2毫升DMF中處理並與2.28毫克(20微莫耳)L-半胱胺酸掺合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓下濃縮且隨即藉由製備性HPLC予以純化。如此得到5.8毫克(理論值之48%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.45分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.74分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1184(M+H)+ 。
實例72 N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧乙基]巰基}-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將10毫克(10微莫耳)中間體113置於5.2毫升DMF中處理並與2.28毫克(20微莫耳)L-半胱胺酸掺合。將反應 混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓下濃縮且隨即藉由製備性HPLC予以純化。如此得到6毫克(理論值之54%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.5分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.77分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1185(M+H)+ 。
實例73 N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧乙基]巰基}-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將9毫克(8.3微莫耳)中間體132置於4毫升DMF中處理並與3毫克(24.4微莫耳)L-半胱胺酸掺合。將反應混合物於RT攪拌過夜，然後於減壓下濃縮且隨後藉由製備性HPLC予以純化。如此得到6.8毫克(理論值之68%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.8分鐘； LC-MS(方法1)：Rt =0.78分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1227(M+H)+ 。
實例74 N-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧乙基]巰基}-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-胺基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將10毫克(10微莫耳)中間體106置於5.8毫升DMF中處理並與2.5毫克(20微莫耳)L-半胱胺酸掺合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓下濃縮且隨即藉由製備性HPLC予以純化。如此得到5.2毫克(理論值之46%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.5分鐘；LC-MS(方法11)：Rt =0.71分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1070(M+H)+ 。
實例75 N-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧乙基]巰基}-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)- 2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將10毫克(10微莫耳)中間體124置於4毫升DMF中處理並與2.5毫克(20微莫耳)L-半胱胺酸掺合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓下濃縮且隨即藉由製備性HPLC予以純化。如此得到7.2毫克(理論值之64%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.8分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1071(M+H)+ 。
實例76 N-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧乙基]巰基}-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將10毫克(10微莫耳)中間體125置於4毫升DMF中處理並與2.4毫克(20微莫耳)L-半胱胺酸掺合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓下濃縮且隨即藉由製備性HPLC予以純化。如此得到7.7毫克(理論值之69%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法2)：Rt =1.91分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1140(M+H)+ 。
實例77 N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧乙基]巰基}-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將10毫克(10微莫耳)中間體160置於3毫升DMF中處理並與2.1毫克(20微莫耳)L-半胱胺酸掺合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓下濃縮且隨即藉由製備性HPLC予以純化。如此得到8.1毫克(理論值之73%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.86分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1274(M+H)+ 。
實例78 N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧乙基]巰基}-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)己醯基]肼基}-4-側氧基丁基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將3.5毫克(3微莫耳)中間體159置於1毫升DMF中處理並與0.76毫克(6微莫耳)L-半胱胺酸掺合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓下濃縮且隨即藉由製備性HPLC予以純化。如此得到2.6毫克(理論值之65%) 標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.75分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.85分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1235(M+H)+ 。
實例79 N-(6-{2-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧乙基]巰基}-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)己醯基]肼基}-6-側氧基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-烷-2-基羰基)-2-苯基環丙基]胺基}-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將3.6毫克(3微莫耳)中間體129置於1毫升DMF中處理並與0.77毫克(6微莫耳)L-半胱胺酸掺合。將反應混合物於RT攪拌2小時，然後於減壓下濃縮且隨即藉由製備性HPLC予以純化。如此得到1.55毫克(理論值之39%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.6分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.87分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1255(M+H)+ 。
實例80
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：0.83毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.6
實例81
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.59毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.1
藥物/mAb比率：2.9
實例82
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.25毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.0
實例83
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.27毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.6
實例84
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.54毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.7
實例85
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.73毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.7
實例86
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.66毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.3
實例87
蛋白質濃度：2.11毫克/毫升
藥物/mAb比率：5.5
實例88
蛋白質濃度：1.53毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.4
實例89
蛋白質濃度：1.5毫克/毫升
藥物/mAb比率：0.2
實例90
蛋白質濃度：1.32毫克/毫升
藥物/mAb比率：0.1
實例91
此處係使用80毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮，並用PBS再稀釋及再次濃縮。
蛋白質濃度：10.3毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.1
實例92
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.09毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.8
實例93
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.52毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.2
實例94
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.1毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.3
實例95
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.43毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.8
實例96
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮，用PBS再稀釋並再次濃縮。
蛋白質濃度：1.36毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.6
實例97
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.33毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.0
實例98
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.33毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.6
實例99
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.47毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.6
實例100
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.49毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.5
實例101
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.29毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.3
實例102
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.74毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.5
實例103
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.09毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.2
實例104
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.63毫克/毫升
藥物/mAb比率：0.2
實例105
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.41毫克/毫升
藥物/mAb比率：7.6
實例106
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：2.0毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.6
實例107
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.67毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.8
實例108
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.91毫克/毫升
藥物/mAb比率：5.3
實例109
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.82毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.6
實例110
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.9毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.2
實例111
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.89毫克/毫升
藥物/mAb-比率：2.7
實例112
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.73毫克/毫升
藥物/mAb-比率：2.3
實例113
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.71毫克/毫升
藥物/mAb-比率：3.3
實例114
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.47毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.9
實例115 N-(6-{[(5S)-5-胺基-5-羧基戊基]胺基}-6-側氧基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將15.5毫克(15微莫耳)中間體210置於5毫升DMF中處理並與4.4毫克(18微莫耳)N2 -(第三丁氧基羰基)-L- 離胺酸以及7.7微升(44微莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將反應混合物於RT攪拌過夜，且然後於減壓下濃縮。隨即將殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到14毫克(理論值之81%)標的化合物之保護的中間體，隨即將其置於1毫升二氯甲烷中處理，並用1毫升三氟醋酸去保護。將該批次濃縮，並將殘質由乙腈/水1：1中冷凍乾燥後，得到15毫克(理論值之97%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.8分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.79分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1083(M+H)+ 。
實例116 N-(6-{[(5S)-5-胺基-5-羧基戊基]胺基}-6-側氧基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺
將40毫克(40微莫耳)中間體227置於5毫升DMF中處理並與11.5毫克(40微莫耳)N2 -[(苄氧基)羰基]-L-離胺酸以及13微升(80微莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將反應混合物於RT攪拌過夜，然後於減壓下濃縮且隨即藉由 製備性HPLC予以純化。如此得到32.5毫克(理論值之70%)標的化合物之保護的中間物。
將32.5毫克此中間體溶解於10毫升甲醇中並加入2毫克10%披鈀活性碳後，於標準氫氣壓下於RT氫化30分鐘。以過濾移除催化劑並於減壓下將溶劑移除。將殘質由二烷/水1：1中冷凍乾燥後，得到26毫克(理論值之99%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.76分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1014(M+H)+ 。
實例117 N-[(18S)-18-胺基-18-羧基-12-側氧基-3,6,9-三氧-13-氮雜十八烷-1-基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將3.5毫克(3微莫耳)中間體202置於2毫升DMF中處理並與0.8毫克(3微莫耳)N2 -(第三丁氧基羰基)-L-離胺酸以及1.6微升(10微莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將反 應混合物於RT攪拌過夜，且然後於減壓下濃縮。將殘質置於乙腈/水：1：1中處理，以三氟醋酸使pH達到2且然後以製備式HPLC予以純化。如此得到1毫克(理論值之25%)標的化合物之保護的中間物，隨後將其置於500微升二氯甲烷中處理並用500微升三氟醋酸去保護。將該批次濃縮，將殘質由乙腈/水1：1中冷凍乾燥後，得到1毫克(理論值之89%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.9分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.82分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1173(M+H)+ 。
實例118
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮。
蛋白質濃度：0.89毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.8
實例119
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：0.57毫克/毫升
藥物/mAb比率：1.5
實例120
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3進行偶合，並於Sephadex予以純化後將反應混合物藉由超離心來濃縮並用PBS再稀釋。
蛋白質濃度：1.39毫克/毫升
藥物/mAb比率：7.1
實例121
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3進行偶合，並於Sephadex予以純化後將反應混合物藉由超離心法來濃縮並用PBS再稀釋。
蛋白質濃度：1.54毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.4
實例122
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.48毫克/毫升
藥物/mAb比率：2.4
實例123
此處係使用5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並再稀釋。
蛋白質濃度：1.43毫克/毫升
藥物/mAb-比率：3.6
實例124非對映立體異構物1
此處係使用中間體247a及5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並用PBS再稀釋。
蛋白質濃度：1.45毫克/毫升
藥物/mAb比率：3.8
實例125非對映立體異構物2
此處係使用中間體247a及5毫克抗-C4.4a B01-3於PBS進行偶合，並於Sephadex予以純化後將該批次藉由超離心法來濃縮並用PBS再稀釋。
蛋白質濃度：1.42毫克/毫升
藥物/mAb比率：4.0
實例126 N-(6-{[(5S)-5-胺基-5-羧基戊基]胺基}-6-側氧基己基)-N-甲基-L-蘇胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將8.6毫克(8微莫耳)中間體240置於5毫升DMF中處理並與4.0毫克(16微莫耳)N2 -(第三丁氧基羰基)-L-離 胺酸以及2微升(16微莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將反應混合物於RT攪拌4小時，然後再次與相同量之N2 -(第三丁氧基羰基)-L-離胺酸及N,N-二異丙基乙胺掺合，並於RT攪拌過夜。隨即將此反應混合物於減壓下濃縮。將殘質藉由製備性HPLC予以純化。如此得到7毫克(理論值之72%)標的化合物之保護的中間體，將其置於1毫升二氯甲烷中處理並用0.5毫升三氟醋酸去保護。將反應混合物濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。於高度真空中乾燥，得到3.3毫克(理論值之47%)標的化合物。
HPLC(方法5)：Rt =1.5分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.8分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1084(M+H)+ 。
實例127 N-(6-{[(5S)-5-胺基-5-羧基戊基]胺基}-6-側氧基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-羥基苯基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
將8毫克(8微莫耳)中間體242置於3毫升DMF中處理並與2.9毫克(12微莫耳)N2 -(第三丁氧基羰基)-L-離胺酸以及2.7微升(16微莫耳)N,N-二異丙基乙胺掺合。將反應混合物於RT攪拌過夜，然後再次與相同量之N2 -(第三丁氧基羰基)-L-離胺酸及N,N-二異丙基乙胺掺合並於RT再攪拌4小時。隨即將反應混合物於減壓下濃縮。將殘質藉由製備性HPLC予以純化。由乙腈/水中冷凍乾燥後，得到6.5毫克(理論值之72%)標的化合物之保護的中間體，將其置於5毫升二氯甲烷中處理並用0.75毫升三氟醋酸去保護。將此批次濃縮並將殘質由二烷/水中冷凍乾燥後，得到5毫克(理論值之76%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.7分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.69分鐘；MS(ESIpos)：m/z=1059(M+H)+ 。
實例128 N-(6-{[(5S)-5-胺基-5-羧基戊基]胺基}-6-側氧基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(4-羥基苯基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽
首先將38毫克(41微莫耳)中間體248轉變為N-羥基琥珀醯亞胺酯。將得到之72毫克粗產物置於5毫升DMF中處理並與24毫克(100微莫耳)N2 -(第三丁氧基羰基)-L-離胺酸及23微升N,N-二異丙基乙胺掺合。將反應混合物於RT攪拌過夜，且然後再次與16毫克N2 -(第三丁氧基羰基)-L-離胺酸及12微升N,N-二異丙基乙胺掺合，及隨後於超音波浴中再處理2小時。然後將此批次於減壓下濃縮並將殘質藉由製備性HPLC予以純化。由乙腈/水中冷凍乾燥，得到20毫克(理論值之50%)標的化合物之保護的中間物。
隨即將15毫克(12微莫耳)此中間體置於3毫升二氯甲烷中處理並與1毫升三氟醋酸掺合。於RT攪拌40分鐘後，再加入1.5毫升三氟醋酸並將此批次於超音波浴中另外再處理1小時。之後將此反應混合物濃縮，將殘質由二烷/水中冷凍乾燥，得到13毫克(理論值之90%)標的化合物。
HPLC(方法12)：Rt =1.5分鐘；LC-MS(方法1)：Rt =0.68分鐘；MS(ESIpos)：m/z=990(M+H)+ 。
C：生物活性之評估：
本發明化合物之生物效用係藉下述分析來驗證：
C-1. ADC針對C4.4a細胞毒性效應之分析
抗-C4.4a ADC之細胞毒性效應係於不同細胞株中分 析：
- A549(CCL-185，ATCC)，用完整C4.4a受體序列轉染，
- A549，Mock轉染
- A549 Wildtype(DSMZ，lot 11)
- NCI-H292，內源性C4.4a表現肺癌細胞株(CRL-1848，ATCC)
- SCC-4內源性C4.4a表現鱗狀上皮癌細胞株(CRL-1624，ATCC)
- SCC-9內源性C4.4a表現鱗狀上皮癌細胞株(CRL-1629，ATCC)
- HCT-116內源性C4.4a表現大腸癌細胞株(CCL-247，ATCC)
- HCT-116/VM46，HCT-116用VM46轉染
- A431NS(CRL-2592，ATCC)
將細胞藉由標準方法培養，如於American Tissue Type Collection(ATCC)為了各別之細胞株所指出者。至於其過程，係將細胞用含有胰蛋白酶(0.05%)及EDTA(0.02%)於PBS之溶液(Biochrom AG #L2143)予以分離，造粒，再次懸浮於培養基中，計數並用白基底(white base)(Costar #3610)接種至96-孔培養盤(2500細胞於100微升/孔)且於37℃培養箱中用5%二氧化碳培養。24小時後，將含抗體-藥物結合物之100微升培養基以10-7 M至10-11 M之濃度(二重複值)施用在細胞上，且於37℃培養箱中用5%二氧化碳培養。72小時後，用Cell Titer Glow Luminescent Cell Viability Assay(Promega #G7573及#G7571)測量細胞存活率。為此目的，將100微升該物質添加至每個細胞批次中，並隨即將平盤用鋁箔覆蓋，以180 rpm於平盤振盪器上振盪2分鐘，置於實驗室工作台上8分鐘，且然後用Victor X2(Perkin Elmer)測量。檢驗物質活細胞之ATP含量，產生一發冷光訊號，其程度與細胞之生命力直接成正比。所測量之數據係用Graph Pad Prism Laboratory軟體來計算IC50 。
表3係列出此分析之代表性實例的IC50 值1 )：
C-2.微管蛋白聚合效應之測定
癌細胞為變性細胞，其由於細胞分裂增加，常導致腫瘤形成。微管形成紡錘體之紡錘絲並且為細胞週期之必要組成。微管規則性的建構和破壞使子代細胞中染色體得以精確的分裂，及構成持續的動態流程。中斷此動態流程導致不正確的細胞分裂及最後細胞死亡。然而，癌細胞之細 胞分裂增加亦使其對紡錘絲毒素(構成化療之固定組成份)特別敏感。紡錘絲毒素，例如太平洋紫杉醇或伊波希隆導致微管之聚合率劇烈增加，而長春鹼或其他單甲基奧瑞他汀E(MMAE)則導致微管的聚合率劇烈降低。在這二種情況下，此必要的細胞週期動態性被嚴重地打斷。本發明內文中所研究的化合物係使微管的聚合率下降。
使用Cytoskeleton公司(Denver，Colorado，USA；訂購編號：BK011)之“螢光微管聚合化分析套組”評估微管蛋白聚合化。以此分析，將GTP加到未聚合的微管蛋白使聚合化自發性發生。此分析係以螢光團4',6-二甲脒基-2-苯基吲哚(DAPI)與微管蛋白之結合為基礎。游離和結合的DAPI可基於不同的發射光譜來區分。因為相較於未聚合的微管蛋白，DAPI對於聚合的微管蛋白具有相當高的親和力，所以微管蛋白聚合可經由結合的DAPI螢光團之增加的螢光來追蹤。
於施行此分析時，係將本發明化合物之DMSO溶液由起初的濃度10mM以水稀釋至1 μM。除了緩衝液對照組外，亦另外進行具增加聚合效應之太平洋紫杉醇，及具抑制聚合化效應之長春鹼(vinblastin)作為分析對照組。測量係使用帶有一半基底區之96-孔盤來進行。微管蛋白聚合之動力學係以螢光計(Fluorimeter)於37℃監測1小時。激發光波長為355 nm，而發射光係於460 nm監測。在前10分鐘內線性增加之區域，計算每分鐘螢光的變化(△F/分鐘)，其代表微管之聚合率。試驗物質之效力係以其個別的 聚合下降率為基準來定量。
MMAF於1 μM濃度之抑制值係設定為100%。
表4係給與代表性實例之微管蛋白聚合抑制作用之數據。
MMAF帶毒體及實例係以其濃度之函數抑制微管蛋白聚合。100 μM MMAF，微管蛋白聚合完全被抑制。實例115於1 μM時，抑制微管蛋白聚合率為1 μM MMAF測量值之45%。
C-3.活體外細胞通透性之測定
物質的細胞通透性可藉由活體外試驗以通量分析使用Caco-2細胞來評估[M.D.Troutman和D.R.Thakker，Pharm.Res.20(8)，1210-1224(2003)]。為此目的，將細胞置於24-孔過濾盤上培養15-16天。就滲透作用之測定，係將實例於HEPES緩衝液中以頂端(A)或基部(B)施用於細胞，並培養2小時。0小時及2小時後，將樣本由順槽及反槽取出。將樣本以HPLC(Agilent 1200，Böblingen，Germany)使用逆相管柱分離。HPLC系統係經由Turbo離子噴霧界面與Triple Quadropol質譜儀API 4000(Applied Biosystems Applera，Darmstadt，Germany)結合。通透性係以Papp 值為基準加以評估，該值係使用Schwab等人[D.Schwab等人，J.Med.Chem.46，1716-1725(2003)]所發表的公式來計算。
對於胞內釋放帶毒體非常重要的為由B到A之通透性[Papp (B-A)]：通透性越低，則實例在胞內釋放後停留在細胞的時間越長，而因此可與生化標靶(於本案例中為：微管蛋白)作用的時間亦越長。
下表5係說明本分析之代表性實例的通透性數據：
實例具有低的B至A之通透性[Papp (B-A)，而因此具有長時間留在CaCo-2細胞中。比較起來，單甲基奧瑞他汀E(MMAE)和單甲基奧瑞他汀F(MMAF)在此試驗中具有73 nm/s之Papp (B-A)值，且因此具有明顯較短時間停留在Caco-2細胞中。
C-4.測定P-糖蛋白質(P-gp)之物質性質的活體外試驗
許多腫瘤細胞對藥物表現轉運蛋白質，且此項通常伴隨對細胞抑制劑產生抗藥性。非此等轉運蛋白質之物質， 例如P-糖蛋白質(P-gp)或BCRP，因此可能具有改良的活性性質。
P-gp(ABCB1)物質之基質性質係藉由通量分析使用表現P-gp之LLC-PK1細胞(L-MDR1細胞)來測定[A.H.Schinkel等人，J.Clin.Invest.96，1698-1705(1995)]。為此目的，係將LLC-PK1細胞或L-MDR1細胞於96-孔過濾盤上培養3-4天。就滲透性之測量，係將個別的試驗物質單獨或在抑制劑(例如伊維菌素(Ivermectin)或維拉帕米(Verapamil))之存在下於HEPES緩衝液中以頂端(A)或基部(B)施用於細胞並培養2小時。0小時及2小時後，將樣本由順槽和反槽取出。將樣本以HPLC使用逆相管柱分離。HPLC系統係經由Turbo離子噴霧界面與Triple Quadropol質譜儀API 3000(Applied Biosystems Applera，Darmstadt，Germany)結合。通透性係以Papp 值為基準加以評估，該值係使用Schwab等人[D.Schwab等人，J.Med.Chem.46，1716-1725(2003)]所發表的公式來計算。
對於胞內釋放帶毒體非常重要的為由B到A之通透性[Papp (B-A)]：通透性越低，則實例在胞內釋放後停留在細胞的時間越長，而因此可與生化標靶(於本案例中為：微管蛋白)作用的時間亦越長。
下表6係說明本分析(其係於L-MDR1細胞中進行)之代表性實例的通透性數據：
實例具有低的B至A之通透性[Papp (B-A)，而因此具有長時間留在L-MDR1細胞中。
C-5.活體內之活性試驗
本發明接合物之活性係於活體內，以例如異種移植模式來試驗。熟悉技藝者已知先前技術中用於試驗本發明接合物活性之方法(參見，例如WO 2005/081711；Polson等人，Cancer Res.2009 Mar 15；69(6)：2358-64)。為此目的，例如將囓齒類(例如小鼠)植入表現結合劑標靶分子之腫瘤細胞株。隨即將此等長腫瘤的囓齒類投予本發明接合物或對照組抗體接合物，或等張鹽溶液。給藥可單一或更頻繁地進行。藉助於游標尺每週測量兩次腫瘤生長。於腫瘤生 長數週後，將接合物治療動物的腫瘤大小與對照組者作比較。接合物治療動物顯示顯著較小的腫瘤尺寸。
C-5a.於老鼠實驗腫瘤中測試ADCs
該小鼠異種移植腫瘤模式之預測力量，相關於免疫毒素治療情況之臨床狀況，經常的，一方面被治療之小鼠品種抗體的缺陷交叉反應來限制，而另外一方面被於人體內抗-藥物抗體(ADAs)於給藥以鼠類或嵌合抗體之發病率而限制。為了使用特定C4.4a表現之全部潛力以供癌症治療，供免疫偶聯途徑，例如，因高親和性之人類抗體需要，其係選擇性的並展現物種之交叉反應，宜為根據本發明所採用之種類。以此等抗體，小鼠異種移植腫瘤模式相對於臨床情況得到有意義的發現。
將表現C4.4a之人類腫瘤細胞以皮下注射接種至免疫抑制小鼠，例如裸小鼠或SCID小鼠的側腹。由細胞培養中分離一百萬-一千萬個細胞，離心及以100微升培養基或50%培養基/50%基質膠(Matrigel)再懸浮。將細胞懸浮液注射至小鼠的皮膚下。
於數天內，腫瘤生長。在腫瘤大小達25毫米2之後才開始治療。
ADC之治療係經由靜脈途徑進入小鼠尾靜脈來進行。將ADC溶解於PBS並以10毫升/公斤之量給藥。
治療流程係以抗體的藥物動力學來管控。作為標準，該治療係每隔三天進行三次。然而，治療亦可持續進行，或於以後的某時間點接著第二輪的三天治療。
每個治療組係使用8隻動物作為基準。若於腫瘤生長或預期的治療後有特別大的波動，則此數量可較高。如同接受活性物質之組別，一組作為對照組之組別，係依照相同的流程僅以緩衝劑治療。
在實驗期間，定期地使用二維(長/寬)游標尺測量腫瘤面積。
於實驗終止時，移出腫瘤且稱重。治療組(T)與對照組(C)之腫瘤平均重量的比率係以T/C表示。雖然控制組與治療組係於不同時間終止，該T/C值係根據所有治療組與控制組之最後聯結測量之腫瘤面積來計算。
將一百萬個SCC-4細胞依皮下注射接種至雌性NMRI裸小鼠的側腹。
於平均腫瘤大小為30-35毫米2 時，建議用ADC進行靜脈注射治療。當控制組達到最大允許大小時，終止該實驗並移出腫瘤並稱重。所有的ADC測試出標靶C4.4a可依劑量-依賴方式抑制腫瘤生長。於劑量30毫克/公斤時，實例54，實例49，實例51及實例53各自達到T/C<0.1。於實例49，52，53，54及56中，與控制組相較，於劑量低至15毫克/公斤時，達到顯著的抗腫瘤活性，達到T/C值0.29。
將一百萬個NCI-H292細胞依皮下注射接種至雌性NMRI裸小鼠的側腹。
腫瘤平均大小為30-35毫米2 時，建議用ADC靜脈注射治療。當達到最大可允許腫瘤大小時，控制組及治療組 各自終止。依此方式，於治療之終點後，腫瘤之額外生長的差異可歸因於ADC之其他特性。因此，與控制組相較時(T/C)，該於測量時間之最後聯結點的腫瘤面積係使用來測定抗-腫瘤活性。與控制組相較時，於所使用之NCI-H292老鼠模式，其係顯示所有測試的ADC降低了腫瘤生長劑量-依賴。顯著的抗-腫瘤功效，於實例54中以低至1.9毫克/公斤之劑量得到，且於實例49中以低至3.75毫克/公斤之劑量得到。該於此模式中得到之最低T/C值，於實例54以30毫克/公斤時為T/C 0.16，於實例49以30毫克/公斤時為T/C 0.17，於實例53以30毫克/公斤時為T/C 0.16，於實例51以15毫克/公斤時為T/C 0.17，且於實例70以3.75毫克/公斤時為T/C 0.19。於ADC以固定劑量7.5毫克/公斤作比較給藥時，其可能達到，於各實例49及54時為T/C 0.20，於實例51時為T/C 0.27，於實例52時為T/C 0.22，於實例53時為T/C 0.23，於實例55時為T/C 0.24，於實例56時為T/C 0.21且於實例70時為T/C 0.17。
C-6. C4.4a-轉染及非轉染的A549細胞之A549腫瘤模式中的藥物動力學
於靜脈內給藥7-30毫克/公斤之各種ADC後，測量ADC之血漿濃度及腫瘤濃度以及可能的代謝物，並計算藥物動力學參數例如廓清率(CL)，曲線下面積(AUC)及半衰期(t1/2 )。
可能之代謝物的定量分析
於血漿和腫瘤中化合物之測量係於用甲醇沉澱蛋白質 後，以高壓液相色層分離法(HPLC)結合串聯質譜儀(MS)來進行。
於處理100微升血漿時，係將其與400微升甲醇及10微升內標(ISTD，50毫微克/毫升之甲醇溶液)掺合，並振盪10秒。以16 000克離心5分鐘後，將250微升上層清液轉置於自動取樣瓶中，將其加入250微升醋酸銨緩衝液(AAC，10mM，pH 6.8)並再次振盪。
於處理腫瘤時，係將其與4倍量的甲醇掺合。於組織研磨機Tissuelyser II(Quiagen)中，將樣本以每分鐘30次撞擊粉碎達6分鐘，且然後以16 000克離心5分鐘。將50微升上層清液轉置於自動取樣瓶中並加入50微升醋酸銨緩衝液(10mM，pH 6.8)及5微升ISTD。再次振盪後，腫瘤樣本備妥可供測量。
最後，兩種基質樣本之測量係於HPLC-結合大氣壓游離/串聯質譜儀，以Turbo離子噴霧界面(TISP)在SCIEX之API4000儀器上進行。
HPLC/LC-MSMS(TISP)分析係於配備有Gemini管柱(5 μm C18 110 A，50×3毫米，Phenomenex)之HP1100幫浦(Agilent)上進行。
於校正時，係將血漿樣本與0.5-2000微克/升之濃度掺合。偵測極限(LOQ)為約2微克/升。直線範圍係由2至1000微克/升。
於校正腫瘤樣本時，係將未處理的腫瘤上層清液與0.5-200微克/升之濃度掺合。偵測極限為5微克/升。直線範 圍係由5至200微克/升。
有效試驗之質性對照組含有5和50微克/升，附加500微克/升於血漿中。發現這些樣本的濃度與所欲的值(數據未附)偏離至高20%。
D.醫藥組成物之實例
本發明化合物可如下轉變為醫藥製劑：
i.v.溶液：
將本發明化合物以低於飽和溶解度之濃度溶解於生理上可耐受的溶劑中(例如等張的食鹽水溶液、D-PBS，或帶有甘油和氯化鈉溶解於檸檬酸緩衝液中添加山梨糖醇酯80之調配物)。將溶液進行無菌過濾並分散於無菌和無病原之注射容器中。
i.v.溶液：
本發明化合物可轉變為所述的給藥形式。其可以已知的方法，藉由“混合”或“溶解”於惰性、無毒的製藥上適當賦形劑(例如緩衝劑物質、安定劑、增溶劑、防腐劑)中來進行。例如可存有下列物質：胺基酸(甘胺酸、組胺酸、甲硫胺酸、精胺酸、離胺酸、白胺酸、異白胺酸、蘇胺酸、麩胺酸、苯丙胺酸及其他)、糖及相關化合物(葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、海藻糖、蔗糖、甘露糖、乳糖、山梨糖醇)、甘油、鈉鹽、鉀、銨鹽和鈣鹽(例如氯化鈉、氯化鉀或磷酸氫二鈉及許多其他)、醋酸鹽/醋酸緩衝系統、磷酸緩衝系統、檸檬酸和檸檬酸緩衝系統、胺丁三醇(trometamol) (TRIS和TRIS鹽)、聚山梨糖醇酯(例如Polysorbate 80和Polysorbate 20)、泊洛沙姆(Poloxamer)(例如泊洛沙姆188和泊洛沙姆171)、聚乙二醇(Macrogol)(PEG，例如3350)、Triton X-100、EDTA鹽、麩胱甘肽、白蛋白(例如人類)、苄基醇、酚、氯甲酚、間甲酚、苯札氯銨(benzalkonium chloride)及許多其他者。
於後續轉變中成為i.v.、s.c.或i.m.溶液之凍乾物：
另外，本發明化合物可轉變為穩定的凍乾物(可在上述賦形劑之幫助下)，及在給藥前，以適當溶劑(例如注射級水、等張食鹽水溶液)重組並給藥。
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> C4.4a結合劑
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 237
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
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<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 240
<210> 241
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 241
<210> 242
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 242
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<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 244
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 247
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 249
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 250
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<211> 15
<212> PRT
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<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 251
<210> 252
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 252
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 254
<210> 255
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 255
<210> 256
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 256
<210> 257
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 257
<210> 258
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 258
<210> 259
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 259
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 260
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 261
<210> 262
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 262
<210> 263
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 263
<210> 264
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 264
<210> 265
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 265
<210> 266
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 266
<210> 267
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 267
<210> 268
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 268
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 269
<210> 270
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 270
<210> 271
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 271
<210> 272
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 272
<210> 273
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 273
<210> 274
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 274
<210> 275
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 275
<210> 276
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 276
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 277
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 278
<210> 279
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 279
<210> 280
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 280
<210> 281
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 281
<210> 282
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 282
<210> 283
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 283
<210> 284
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 284
<210> 285
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 285
<210> 286
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 286
<210> 287
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 287
<210> 288
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 288
<210> 289
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 289
<210> 290
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 290
<210> 291
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 291
<210> 292
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 292
<210> 293
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 293
<210> 294
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 294
<210> 295
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 295
<210> 296
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 296
<210> 297
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 由M20 D02 S-A CDR H1衍生之一致序列
<220>
<221> 變體
<222> (3)..(3)
<223> X=D或S
<400> 297
<210> 298
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 由M20 D02 S-A CDR H2衍生之一致序列
<220>
<221> 變體
<222> (4)..(4)
<223> X=V或I
<220>
<221> 變體
<222> (9)..(9)
<223> X=A或G
<220>
<221> 變體
<222> (10)..(10)
<223> X=R或S
<400> 298
<210> 299
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 由M20 D02 S-A CDRH3衍生之一致序列
<220>
<221> 變體
<222> (9)..(9)
<223> X=S,K，或R
<220>
<221> 變體
<222> (10)..(10)
<223> X=A,S或R
<220>
<221> 變體
<222> (14)..(14)
<223> X=D,K,E或R
<220>
<221> 變體
<222> (15)..(15)
<223> X=S或Y
<400> 299
<210> 300
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 由M20 D02 S-A CDR L1衍生之一致序列
<220>
<221> 變體
<222> (7)..(7)
<223> X=V或I
<400> 300
<210> 301
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 由M20 D02 S-A CDR L3衍生之一致序列
<220>
<221> 變體
<222> (3)..(3)
<223> X=A,Q或R
<220>
<221> 變體
<222> (5)..(5)
<223> X=D或G
<220>
<221> 變體
<222> (7)..(7)
<223> X=R或S
<220>
<221> 變體
<222> (9)..(9)
<223> X=N,W或S
<220>
<221> 變體
<222> (12)..(12)
<223> X=V,A或G
<400> 301
<210> 302
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 由M31 B01 CDR H1衍生之一致序列
<220>
<221> 變體
<222> (3)..(3)
<223> X=N或S
<220>
<221> 變體
<222> (4)..(4)
<223> X=A或Y
<400> 302
<210> 303
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 由M31 B01 CDR H2衍生之一致序列
<220>
<221> 變體
<222> (10)..(10)
<223> X=T或S
<220>
<221> 變體
<222> (11)..(11)
<223> X=I或T
<400> 303
<210> 304
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 由M31 B01 CDR H3衍生之一致序列
<220>
<221> 變體
<222> (10)..(10)
<223> X=Y,K,G,W或N
<400> 304
<210> 305
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 由M31 B01 CDR L1衍生之一致序列
<220>
<221> 變體
<222> (1)..(1)
<223> X=T或S
<400> 305
<210> 306
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 由M31 B01 CDR L2衍生之一致序列
<220>
<221> 變體
<222> (4)..(4)
<223> X=K或Q
<400> 306
<210> 307
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 由M31 B01 CDR L3衍生之一致序列
<220>
<221> 變體
<222> (4)..(4)
<223> X=W,E,F或Y
<220>
<221> 變體
<222> (7)..(7)
<223> X=R,S或M
<220>
<221> 變體
<222> (9)..(9)
<223> X=N,K或S
<220>
<221> 變體
<222> (10)..(10)
<223> X=G或R
<220>
<221> 變體
<222> (11)..(11)
<223> X=P或A
<400> 307
<210> 308
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 308
<210> 309
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 309
<210> 310
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 310
<210> 311
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 311
<210> 312
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 312
<210> 313
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 313
<210> 314
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 314
<210> 315
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 315
<210> 316
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 316
<210> 317
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 317
<210> 318
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 318
<210> 319
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
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<210> 320
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 320
<210> 321
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 321
<210> 322
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
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<210> 323
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
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<210> 324
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
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<210> 325
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 325
<210> 326
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 326
<210> 327
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 327
<210> 328
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 328
<210> 329
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a
<400> 329
<210> 330
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 330
<210> 331
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 331
<210> 332
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 332
<210> 333
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 333
<210> 334
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 334
<210> 335
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 335
<210> 336
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 336
<210> 337
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 337
<210> 338
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 338
<210> 339
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 339
<210> 340
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 340
<210> 341
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 341
<210> 342
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 342
<210> 343
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 343
<210> 344
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
<400> 344
<210> 345
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> C4.4a結合劑
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<400> 410
<210> 411
<211> 654
<212> DNA
<213> 智人
<400> 411

Claims (54)

  1. 一種通式(Ia)之結合劑-藥物接合物， 其中n為由1至50之數字，§-G-L1-B-L2-§§基團為一連接子，其中§係標示與AK基團之連接位置，且§§係標示與氮原子之連接位置，AK為AK1或AK2其中AK1為抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段，其係經由該抗體或抗原結合抗體片段之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團相連接，AK2為抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段，其係經由該抗體或抗原結合抗體片段之半胱胺酸殘基的氮原子與G基團相連接，其中該抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包含選自下列組成群組之可變重鏈及可變輕鏈的六個CDR序列：a)SEQ ID NO：75-77與SEQ ID NO：78-80 (B01-10)，b)SEQ ID NO：5、9及13與SEQ ID NO：17、21及25(M31-B01)，c)SEQ ID NO：6、10及14與SEQ ID NO：18、22及26(M20-D02-S-A)，d)SEQ ID NO：7、11及15與SEQ ID NO：19、23和27(M60-G03)，e)SEQ ID NO：8、12及16與SEQ ID NO：20、24及28(36-H02)，f)SEQ ID NO：45-47與SEQ ID NO：48-50(B01-3)，g)SEQ ID NO：55-57與SEQ ID NO：58-60(B01-5)，h)SEQ ID NO：65-67與SEQ ID NO：68-70(B01-7)，i)SEQ ID NO：85-87與SEQ ID NO：88-90(B01-12)，j)SEQ ID NO：95-97與SEQ ID NO：98-100(D02-4)，k)SEQ ID NO：105-107與SEQ ID NO：108-110(D02-6)，l)SEQ ID NO：115-117與SEQ ID NO：118-120(D02-7)，m)SEQ ID NO：125-127與SEQ ID NO：128-130(D02-11)，及n)SEQ ID NO：135-137與SEQ ID NO：138-140(D02-13)；G於當AK=AK1時，為下式之基團 其中#1係標示與結合劑之硫原子的連接位置，#2係標示與L1基團之連接位置，或當AK=AK2時，G為羰基，L1為一鍵結或直鏈(C1-C10)-亞烷基其中(C1-C10)-亞烷基可經1至4個各自獨立選自由甲基、羥基及苄基組成之群組的取代基取代，且B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1基團之連接位置，**係標示與L2基團之連接位置，L3為一鍵結或(C2-C4)-亞烷基， L4為一鍵結R16為氫或(C1-C4)-烷基，R17為氫或(C1-C4)-烷基，L2為直鏈(C2-C10)-亞烷基或下式之基團 其中p為由2至6之數字，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，其中(C2-C10)-亞烷基可經1至4個各自獨立選自由甲基、羥基及苄基組成之群組的取代基取代，且D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或 R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R6為氫或羥基，R3為氫，R4為苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團其中R7為氫、乙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8為氫或甲基，R9為氫、正丙基或苄基，或R8及R9與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R5為氫、甲基或下式之基團 其中#9係標示與-CHC(R26)-T2之連接位置，R12為苯基，其可經式-S(O)2OH之基團取代， R13為苯基，R26為氫或羥基，T2為苯基或1H-吲哚-3-基，R35為甲基或羥基，以及其鹽類。
  2. 如申請專利範圍第1項之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至20之數字，L1為一鍵結、或鏈(C2-C6)-亞烷基，其中(C2-C6)-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1之連接位置，**係標示與L2之連接位置，L3為一鍵結或乙烷-1,2-二基，L4為一鍵結R16為氫或甲基，R17為氫或甲基，L2為直鏈(C2-C6)-亞烷基或下式之基團 其中p為由2至6之數字，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，其中(C2-C10)-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，以及其鹽類。
  3. 如申請專利範圍第1或2項之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至10之數字，其中該抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包含選自下列組成群組之可變重鏈及可變輕鏈的六個CDR序列：a)SEQ ID NO：75-77及SEQ ID NO：78-80(B01-10)，b)SEQ ID NO：5、9及13與SEQ ID NO：17、21及25(M31-B01)，c)SEQ ID NO：45-47與SEQ ID NO：48-50(B01-3)，及d)SEQ ID NO：105-107與SEQ ID NO：108-110(D02-6)；其中(C2-C6)-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1之連接位置，**係標示與L2之連接位置，L3為一鍵結或乙烷-1,2-二基，L4為一鍵結R16為氫或甲基，R17為氫或甲基，L2為直鏈(C2-C6)-亞烷基或下式之基團 其中p為由2至6之數字，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基， 或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R6為氫或羥基，R3為氫，R4為苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團，其中R7為氫、乙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8為氫或甲基，R9為氫、正丙基或苄基，R5為氫、甲基或下式之基團 其中#9係標示與-CHCH2苯基之連接位置，R12為苯基，其可經式-S(O)2OH之基團取代，R13為苯基，R35為甲基或羥基，以及其鹽類。
  4. 如申請專利範圍第1或2項之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至10之數字， AK為AK2其中該抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包含選自下列組成群組之可變重鏈及可變輕鏈的六個CDR序列：a)SEQ ID NO：75-77與SEQ ID NO：78-80(B01-10)，b)SEQ ID NO：5、9及13與SEQ ID NO：17、21及25(M31-B01)，c)SEQ ID NO：45-47與SEQ ID NO：48-50(B01-3)，及d)SEQ ID NO：105-107與SEQ ID NO：108-110(D02-6)；G為羰基，L1為一鍵結，B為一鍵結，L2為直鏈(C3-C6)-亞烷基或下式之基團 其中p為數字2或3，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中 #6係標示與羰基基團之連接位置，R3為氫，R4為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團其中R7為氫、乙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8為氫，R9為氫或苄基，R35為甲基，以及其鹽類。
  5. 如申請專利範圍第1或2項之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至10之數字，AK為AK1， 其中該抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包含選自下列組成群組之可變重鏈及可變輕鏈的六個CDR序列：a)SEQ ID NO：75-77與SEQ ID NO：78-80(B01-10)，b)SEQ ID NO：5、9及13與SEQ ID NO：17、21及25(M31-B01)，c)SEQ ID NO：45-47與SEQ ID NO：48-50(B01-3)，及d)SEQ ID NO：105-107與SEQ ID NO：108-110(D02-6)；G為下式之基團 其中#1係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2係標示與L1基團之連接位置，L1為一鍵結或直鏈(C3-C5)-亞烷基B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1之連接位置， **係標示與L2之連接位置，L3為一鍵結或乙烷-1,2-二基，L4為一鍵結R16為氫或甲基，R17為氫或甲基，或L2為直鏈(C3-C5)-亞烷基或下式之基團 其中p為數字2或3，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之 (1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R3為氫，R4為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T1為下式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團，其中R7為氫、乙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8為氫，R9為氫或苄基，R35為甲基，以及其鹽類。
  6. 一種式(XXXa)化合物， 其中Cys為半胱胺酸殘基，其係經由側鏈之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵接，L1為一鍵結或直鏈(C1-C10)-亞烷基其中(C1-C10)-亞烷基可經1至4個各自獨立選自由甲基、羥基及苄基組成之群組的取代基取代，B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1之連接位置，**係標示與L2之連接位置，L3為一鍵結或(C2-C4)-亞烷基，L4為一鍵結，R16為氫或(C1-C4)-烷基，R17為氫或(C1-C4)-烷基，L2為直鏈(C2-C10)-亞烷基或下式之基團 其中p為由2至6之數字，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，其中(C2-C10)-亞烷基可經1至4個各自獨立選自由甲基、羥基及苄基組成之群組的取代基取代，且D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R6為氫或羥基，R3為氫，R4為苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團，其中R7為氫、乙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8為氫或甲基， R9為氫、正丙基或苄基，或R8及R9與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R5為氫、甲基或下式之基團 其中#9係標示與-CHC(R26)-T2之連接位置，R12為苯基，其可經式-S(O)2OH之基團取代，R13為苯基，R26為氫或羥基，T2為苯基或1H-吲哚-3-基，R35為甲基或羥基，以及其鹽類。
  7. 一種式(XXXa)化合物， 其中 Cys為半胱胺酸殘基，其係經由側鏈之硫原子經由琥珀醯亞胺之碳原子相鍵接，L1為一鍵結或直鏈(C2-C6)-亞烷基B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1之連接位置，**係標示與L2之連接位置，L3為一鍵結或乙烷-1,2-二基，L4為一鍵結，R16為氫或甲基，R17為氫或甲基，L2為直鏈(C2-C6)-亞烷基或下式之基團 其中p為數字2或3，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R6為氫或羥基，R3為氫，R4為1-羥基乙基、苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團，其中R7為氫、乙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8為氫或甲基， R9為氫、正丙基或苄基，或R8及R9與其相鍵接之原子一起形成一4-至7-員雜環，R5為氫、甲基或下式之基團 其中#9係標示與-CHCH2苯基之連接位置，R12為苯基，其可經式-S(O)2OH之基團取代，R13為苯基，R35為甲基或羥基，以及其鹽類。
  8. 如申請專利範圍第6或7項之式(XXXa)化合物，其中Cys為半胱胺酸殘基，其係經由側鏈之硫原子經由琥珀醯亞胺之碳原子相鍵接，L1為一鍵結或直鏈(C2-C6)-亞烷基，B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1之連接位置，**係標示與L2之連接位置，L3為一鍵結， L4為一鍵結，R16為氫或甲基，R17為氫或甲基，L2為直鏈(C2-C6)-亞烷基或下式之基團 其中p為數字2或3，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R3為氫，R4為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中 #7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團，其中R7為氫，R8為氫，R9為氫，R35為甲基，以及其鹽類。
  9. 一種式(XXXI)化合物， 其中L1為一鍵結或直鏈(C1-C10)-亞烷基其中(C1-C10)-亞烷基可經1至4個各自獨立選自由甲基、羥基及苄基組成之群組的取代基取代，B為一鍵結L2為直鏈(C2-C10)-亞烷基或下式之基團 其中 p為由2至6之數字，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，其中(C2-C10)-亞烷基可經1至4個各自獨立選自由甲基、羥基及苄基組成之群組的取代基取代，D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置， #5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R6為氫、羥基或苄氧基，R3為氫，R4為苄基、1-羥基乙基、4-羥基苄基、或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團， 其中R7為氫、乙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8為氫或甲基，R9為氫、正丙基或苄基，或R8及R9與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R5為氫、甲基或下式之基團 #9係標示與-CHC(R26)-T2之連接位置，R12為苯基，其可經式-S(O)2OH之基團取代，R13為苯基，R26為氫或羥基，T2為苯基或1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，R35為甲基或羥基，以及其鹽類。
  10. 如申請專利範圍第9項之式(XXXI)化合物，其中L1為一鍵結或直鏈(C2-C6)-亞烷基其中(C2-C6)-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵結 L2為直鏈(C2-C6)-亞烷基或下式之基團 其中p為數字2或3，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，其中(C2-C6)-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，且D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R6為氫或羥基，R3為氫，R4為1-羥基乙基、苄基、4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團，其中R7為氫、乙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8為氫或甲基，R9為氫、正丙基或苄基，或R8及R9與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R5為氫、甲基或下式之基團 其中#9係標示與-CHCH2苯基之連接位置，R12為苯基，其可經式-S(O)2OH之基團取代，R13為苯基，R35為甲基或羥基，以及其鹽類。
  11. 如申請專利範圍第9或10項之式(XXXI)化合物，其中L1為一鍵結，B為一鍵結，L2為直鏈(C2-C6)-亞烷基或下式之基團 其中p為數字2或3，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R3為氫，R4為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中 #7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團，其中R7為氫，R8為氫，R9為氫，R35為甲基，以及其鹽類。
  12. 如申請專利範圍第6項之式(XXXa)化合物及如申請專利範圍第9項之式(XXXI)化合物，其中該化合物係選自下列群組：N-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧乙基]巰基}-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺，N-[6-(3-{[(2R)-2-胺基-2-羧乙基]巰基}-2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)己基]-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺， N-(6-{[(5S)-5-胺基-5-羧基戊基]胺基}-6-側氧基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1,2-烷-2-基)-1-側氧基丙-2-基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺三氟醋酸鹽，N-(6-{[(5S)-5-胺基-5-羧基戊基]胺基}-6-側氧基己基)-N-甲基-L-纈胺醯基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]胺基}-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基]吡咯啶-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-側氧基庚-4-基]-N-甲基-L-纈胺醯胺，以及其鹽類。
  13. 如申請專利範圍第1或2項之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物或如申請專利範圍第6、7、9或10項中任一項之化合物，其中L1為一鍵結，B為一鍵結，L2為直鏈(C2-C6)-亞烷基或下式之基團 其中p為2或3之數字，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置， 以及其鹽類。
  14. 如申請專利範圍第1或2項之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中G為下式之基團 其中#1係標示與結合劑之半胱胺酸殘基的連接位置，#2係標示與L1基團之連接位置，L1為直鏈(C3-C5)-亞烷基其中(C3-C5)-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1之連接位置，**係標示與L2之連接位置，L3為一鍵結或乙烷-1,2-二基，L4為一鍵結，L2為直鏈(C3-C5)-亞烷基或下式之基團 其中p為2或3之數字，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，以及其鹽類。
  15. 如申請專利範圍第1或2項之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中L1為直鏈(C3-C5)-亞烷基其中(C3-C5)-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為下式之基團 其中*係標示與L1之連接位置，**係標示與L2之連接位置，L3為一鍵結，L4為一鍵結，R16為氫，R17為氫，L2為直鏈(C3-C6)-亞烷基或下式之基團 其中p為2或3之數字， ##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，以及其鹽類。
  16. 如申請專利範圍第1或2項之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物、或如申請專利範圍第6、7、9或10項之化合物、或如申請專利範圍第13至15項中任一項之接合物或化合物，其中D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R3為氫，R4為4-羥基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團，其中R7為氫，R8為氫，R9為氫，以及其鹽類。
  17. 如申請專利範圍第1或2項之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物、或如申請專利範圍第6、7、9或10項之化合物，其中D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R6為氫或羥基，以及其鹽類。
  18. 如申請專利範圍第1或2項之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物、或如申請專利範圍第6、7、9或10項之化合物，其中D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基、4-羥基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，以及其鹽類。
  19. 一種通式(I)之結合劑-藥物接合物， 其中n為由1至50之數字，AK為AK1或AK2其中 AK1為抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段，其係經由該抗體或抗原結合抗體片段之半胱胺酸殘基的硫原子與G基團相連接，AK2為抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段，其係經由該抗體或抗原結合抗體片段之離胺酸殘基的氮原子與G基團相連接，其中該抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包含選自下列組成群組之可變重鏈及可變輕鏈的六個CDR序列：a)SEQ ID NO：75-77與SEQ ID NO：78-80(B01-10)，b)SEQ ID NO：5、9及13與SEQ ID NO：17、21及25(M31-B01)，c)SEQ ID NO：6、10及14與SEQ ID NO：18、22及26(M20-D02-S-A)，d)SEQ ID NO：7、11及15與SEQ ID NO：19、23和27(M60-G03)，e)SEQ ID NO：8、12及16與SEQ ID NO：20、24及28(36-H02)，f) SEQ ID NO：45-47與SEQ ID NO：48-50(B01-3)，g)SEQ ID NO：55-57與SEQ ID NO：58-60(B01-5)，h)SEQ ID NO：65-67與SEQ ID NO：68-70(B01-7)，i)SEQ ID NO：85-87與SEQ ID NO：88-90(B01-12)，j)SEQ ID NO：95-97與SEQ ID NO：98-100 (D02-4)，k)SEQ ID NO：105-107與SEQ ID NO：108-110(D02-6)，l)SEQ ID NO：115-117與SEQ ID NO：118-120(D02-7)，m)SEQ ID NO：125-127與SEQ ID NO：128-130(D02-11)，及n)SEQ ID NO：135-137與SEQ ID NO：138-140(D02-13)；G於當AK=AK1時，為下式之基團 其中#1係標示與結合劑之硫原子的連接位置，#2係標示與L1基團之連接位置，或當AK=AK2時，G為羰基，L1為一鍵結或直鏈(C1-C10)-亞烷基其中(C1-C10)-亞烷基可經1至4個甲基取代基取代，B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1之連接位置，**係標示與L2之連接位置，L3為一鍵結或(C2-C4)-亞烷基，L4為一鍵結R16為氫或(C1-C4)-烷基，R17為氫或(C1-C4)-烷基，L2為直鏈(C2-C10)-亞烷基或下式之基團 其中p為由2至6之數字，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，其中(C2-C10)-亞烷基可經1至4個甲基取代基取代，D為下式之基團 #3係標示與氮原子之連接位置， R1為氫，R2為苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R6為氫或羥基，R3為氫，R4為1-羥基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基， 或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團其中R7為氫、乙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8為氫或甲基，R9為氫、正丙基或苄基，或R8及R9與其相鍵接之氮原子一起形成4-至7-員雜環，R5為氫、甲基或下式之基團 其中#9係標示與-CHC(R26)-T2之連接位置，R12為苯基，其可經式-S(O)2OH之基團取代，R13為苯基，R26為氫或羥基，T2為苯基或或1H-吲哚-3-基，以及其鹽類。
  20. 如申請專利範圍第19項之通式(I)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至20之數字，L1為一鍵結或直鏈(C2-C6)-亞烷基其中(C2-C6)-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1之連接位置，**係標示與L2之連接位置，L3為一鍵結或乙烷-1,2-二基，L4為一鍵結R16為氫或甲基，R17為氫或甲基，L2為直鏈(C2-C6)-亞烷基或下式之基團 其中p為由2至6之數字，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，其中(C2-C6)-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置， A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R6為氫、羥基或苄氧基，R3為氫，R4為1-羥基乙基、苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團，其中R7為氫、乙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基， R8為氫或甲基，R9為氫、正丙基或苄基，或R8及R9與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R5為氫、甲基或下式之基團 其中#9係標示與-CHC(R26)-T2之連接位置，R12為苯基，其可經式-S(O)2OH之基團取代，R13為苯基，R26為氫或羥基，T2為苯基或1H-吲哚-3-基，以及其鹽類。
  21. 如申請專利範圍第19或20項之通式(I)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至10之數字，其中該抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包含選自下列組成群組之可變重鏈及可變輕鏈的六個CDR序列：a)SEQ ID NO：75-77與SEQ ID NO：78-80 (B01-10)，b)SEQ ID NO：5、9及13與SEQ ID NO：17、21及25(M31-B01)，c)SEQ ID NO：45-47與SEQ ID NO：48-50(B01-3)，及d)SEQ ID NO：105-107與SEQ ID NO：108-110(D02-6)；L1為一鍵結或直鏈(C2-C6)-亞烷基其中(C2-C6)-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1之連接位置，**係標示與L2之連接位置，L3為一鍵結或乙烷-1,2-二基，L4為一鍵結R16為氫或甲基，R17為氫或甲基，L2為直鏈(C2-C6)-亞烷基，D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R6為氫或羥基，R3為氫，R4為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團，其中R7為氫、乙基、苄基或金剛烷基甲基，R8為氫或甲基，R9為氫、正丙基或苄基，R5為氫或下式之基團 其中 #9係標示與-CHCH2苯基之連接位置，R12為苯基，其可經式-S(O)2OH之基團取代，R13為苯基，以及其鹽類。
  22. 一種製備如申請專利範圍第19或20項中任一項之本發明通式(I)化合物的方法，其特徵為將結合劑於緩衝液中之溶液[A]與適當還原劑掺合，且隨即與式(II)化合物反應 其中D、L1、B及L2各自具有如申請專利範圍第19或20項中所示之定義，而得到式(I-A)化合物 其中n、AK1、D、L1、B及L2各自具有如申請專利範圍第19或20項中所示之定義，或 [B]與式(III)化合物反應 其中D、L1、B及L2各自具有如申請專利範圍第19或20項所示之定義，而得到式(I-B)化合物 其中n、AK2、D、L1、B和L2各自具有如申請專利範圍第19或20項中所示之定義。
  23. 一種藉由申請專利範圍第22項之方法所製備之化合物，其中AK1及AK2為一抗體，其包括六個B01-3、B01-10或D02-6抗體之CDR序列，B01-3、B01-10或D02-6抗體之可變輕鏈及可變重鏈或B01-3、B01-10或D02-6抗體之輕鏈及重鏈，以及其鹽類。
  24. 一種式(XXX)化合物， 其中Cys為經由側鏈之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵接之半胱胺酸殘基，L1為一鍵結或直鏈(C1-C10)-亞烷基其中(C1-C10)-亞烷基可經1至4個甲基取代基取代，且B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1之連接位置，**係標示與L2之連接位置，P為O或NH，L3為一鍵結或(C2-C4)-亞烷基，L4為一鍵結R16為氫或(C1-C4)-烷基，R17為氫或(C1-C4)-烷基，L2為直鏈(C2-C10)-亞烷基或下式之基團 其中p為由2至6之數字，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，其中(C2-C10)-亞烷基可經1至4個甲基取代基取代，且D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R6為氫、羥基或苄氧基，R3為氫，R4為1-羥基乙基、苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置， T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團，其中R7為氫、乙基、第三丁基、苄基或金剛烷基甲基，R8為氫或甲基，R9為氫、正丙基或苄基，或R8及R9與其相鍵接之氮原子一起形成一4-至7-員雜環，R5為氫、甲基或下式之基團 其中#9係標示與-CHC(R26)-T2之連接位置，R12為苯基，其可經式-S(O)2OH之基團取代，R13為苯基，R26為氫或羥基，T2為苯基或1H-吲哚-3-基，以及其鹽類。
  25. 如申請專利範圍第24項之式(XXX)化合物，其中Cys為經由側鏈之硫原子與琥珀醯亞胺之碳原子相鍵接之半胱胺酸殘基， L1為一鍵結或直鏈(C2-C6)-亞烷基其中(C2-C6)-亞烷基可經1或2個甲基取代基取代，B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1之連接位置，**係標示與L2之連接位置，L3為一鍵結或乙烷-1,2-二基，L4為一鍵結，R16為氫或甲基，R17為氫或甲基，L2為直鏈(C2-C6)-亞烷基或下式之基團 其中p為數字2或3，##3係標示與B基團之連接位置，##4係標示與氮原子之連接位置，D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為1-羥基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之單-或雙環、任意經取代之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，R6為氫、羥基或苄氧基，R3為氫，R4為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R3及R4與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#7係標示與相鄰氮原子之連接位置，#8係標示與T1基團之連接位置，T1為式-C(=O)-OR7或-C(=O)-NR8R9之基團，其中R7為氫、乙基、苄基或金剛烷基甲基，R8為氫或甲基，R9為氫、正丙基或苄基， R5為氫或下式之基團 其中#9係標示與-CHCH2苯基之連接位置，R12為苯基，其可經式-S(O)2OH之基團取代，R13為苯基，以及其鹽類。
  26. 如申請專利範圍第19或20項之通式(Ia)之結合劑-藥物接合物或如申請專利範圍第24或25項之化合物，其中D為下式之基團 其中#3係標示與氮原子之連接位置，R1為氫，R2為苄基或1H-吲哚-3-基甲基，或R1及R2與其相鍵接之碳原子一起形成下式之(1S,2R)-2-苯基環丙烷-1,1-二基基團 其中#4係標示與相鄰氮原子之連接位置，#5係標示與羰基基團之連接位置，A環與存於其中之N-O基為下式之雜環 其中#6係標示與羰基基團之連接位置，以及其鹽類。
  27. 如申請專利範圍第19或20項之通式(I)之結合劑-藥物接合物或如申請專利範圍第24或25項之化合物，其中D為下式之基團 其中T1為-C(=O)-OH或-C(=O)-NH2，以及其鹽類。
  28. 如申請專利範圍第19或20項之通式(I)之結合劑-藥物接 合物或如申請專利範圍第24或25項之化合物，其中B為一鍵結或下式之基團 其中*係標示與L1基團之連接位置，**係標示與L2基團之連接位置，P為O或NH，L3及L4為一鍵結，以及其鹽類。
  29. 如申請專利範圍第1、2、19或20項中任一項之通式(I)或(Ia)之結合劑-藥物接合物，其中n為由1至10。
  30. 一種化合物，其具有下列結構之一： 或 以及其鹽類。
  31. 如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49或50項中任一項之結合劑-藥物接合物，其中該抗體或抗原結合抗體片段係與胞外標靶分子結合。
  32. 如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49或50項中任一項之結合劑-藥物接合物，其中該抗體或抗原結合抗體片段在與胞外標靶分子結合後被表現標靶分子之細胞 所內化。
  33. 如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49或50項中任一項之結合劑-藥物接合物，其中該抗體或抗原結合抗體片段為一單株抗體。
  34. 如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49或50項中任一項之結合劑-藥物接合物，其中該抗體或抗原結合抗體片段為人類、人源化或嵌合抗體。
  35. 如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49或50項中任一項之結合劑-藥物接合物，其中該抗體或抗原結合抗體片段為全抗體或經修飾的全抗體。
  36. 如申請專利範圍第1、1、19、20、48、49或50項中任一項之結合劑-藥物接合物，其中該抗體或抗原結合抗體片段為IgG類之抗體。
  37. 如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49或50項中任一項之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑為抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段，其係與抗體M31-B01及/或與抗體M20-D02-S-A競爭以結合至C4.4a。
  38. 如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49或50項中任一項之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑為抗C4.4a抗體或抗原結合抗體片段，其係包含選自由下列組成之群組的可變重鏈及可變輕鏈之胺基酸序列：a)SEQ ID NO：81與SEQ ID NO：82(B01-7)，b)SEQ ID NO：33與SEQ ID NO：29(M31-B01)，c)SEQ ID NO：34與SEQ ID NO：30(M20-D02 S-A)， d)SEQ ID NO：35與SEQ ID NO：31(M60-G03)，e)SEQ ID NO：36與SEQ ID NO：32(M36-H02)，f) SEQ ID NO：51與SEQ ID NO：52(B01-3)，g)SEQ ID NO：61與SEQ ID NO：62(B01-5)，h)SEQ ID NO：71與SEQ ID NO：72(B01-7)，i)SEQ ID NO：91與SEQ ID NO：92(B01-12)，j)SEQ ID NO：101與SEQ ID NO：102(D02-4)，k)SEQ ID NO：111與SEQ ID NO：112(D02-6)，l)SEQ ID NO：121與SEQ ID NO：122(D02-7)，m)SEQ ID NO：131與SEQ ID NO：132(D02-11)，及n)SEQ ID NO：141與SEQ ID NO：142(D02-13)。
  39. 如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49或50項中任一項之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑為抗C4.4a抗體或抗原結合抗體片段，其係選自由下列組成之群組：抗體，其包含SEQ ID NO：346序列表示之輕鏈的胺基酸序列且其包含SEQ ID NO：347序列表示之重鏈的胺基酸序列(M31-B01)，抗體，其包含SEQ ID NO：352序列表示之輕鏈的胺基酸序列且其包含SEQ ID NO：353序列表示之重鏈的胺基酸序列(B01-3)，抗體，其包含SEQ ID NO：364序列表示之輕鏈的胺基酸序列且其包含SEQ ID NO：365序列表示之重鏈 的胺基酸序列(B01-10)，及抗體，其包含SEQ ID NO：382序列表示之輕鏈的胺基酸序列且其包含SEQ ID NO：383序列表示之重鏈的胺基酸序列(D02-6)。
  40. 如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49或50項中任一項之結合劑-藥物接合物或化合物，其係用於治療及/或預防疾病之方法中。
  41. 如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49或50項中任一項之結合劑-藥物接合物或化合物，其係用於治療及/或預防過度增生及/或血管新生疾病之方法中。
  42. 如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49或50項中任一項之結合劑-藥物接合物或化合物，其係用來製備用於治療及/或預防過度增生及/或血管新生疾病之醫藥品。
  43. 一種醫藥品，其係包含如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49或60項中任一項之結合劑-藥物接合物或化合物，結合一惰性、無毒之醫藥上適當的賦形劑。
  44. 一種醫藥品，其係包含如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49或60項中任一項之結合劑-藥物接合物或化合物，結合一種或多種抗-過度增生、細胞生長抑制或細胞毒性物質。
  45. 如申請專利範圍第43項之醫藥品，其係用來治療及/或預防過度增生及/或血管新生疾病之方法中。
  46. 一種製備如申請專利範圍第1或2項之本發明通式(Ia) 化合物之方法，其特徵在於將含結合劑於緩衝液中之溶液[A]與適當還原劑掺合，且隨即與式(IIa)化合物反應 其中，D、L1、B、L2及R35各自具有如申請專利範圍第1或2項中所示之定義，而得到式(Ia-A)化合物 其中，n、AK1、D、L1、B、L2及R35各自具有如申請專利範圍第1或2項中所示之定義，或[B]與式(IIIa)化合物反應 (IIIa)，其中D、L1、B、L2及R35各自具有如申請專利範圍第1或2項中所示之定義，而得到式(Ia-B)化合物 其中，n、AK2、D、L1、B、L2及R35各自具有如申請專利範圍第1或2項中所示之定義。
  47. 如申請專利範圍第22項之方法，其中該還原劑係選自由二硫蘇糖醇或叁(2-羧乙基)膦鹽酸鹽組成之群組。
  48. 一種選自下列化合物之結合劑-藥物接合物： 及 其中，在個情況中n為由2至8之數字，且AK1為經由半胱胺酸殘基與帶毒體連接單位 (toxophor-linker unit)鍵接之抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段，及AK2為經由離胺酸殘基與帶毒體連接單位鍵接之抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段，其中該抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包含選自下列組成群組之可變重鏈及可變輕鏈的六個CDR序列：a)SEQ ID NO：75-77與SEQ ID NO：78-80(B01-10)，b)SEQ ID NO：5、9及13與SEQ ID NO：17、21及25(M31-B01)，c)SEQ ID NO：6、10及14與SEQ ID NO：18、22及26(M20-D02-S-A)，d)SEQ ID NO：7、11及15與SEQ ID NO：19、23和27(M60-G03)，e)SEQ ID NO：8、12及16與SEQ ID NO：20、24及28(36-H02)，f) SEQ ID NO：45-47與SEQ ID NO：48-50(B01-3)，g)SEQ ID NO：55-57與SEQ ID NO：58-60(B01-5)，h)SEQ ID NO：65-67與SEQ ID NO：68-70(B01-7)，i)SEQ ID NO：85-87與SEQ ID NO：88-90 (B01-12)，j)SEQ ID NO：95-97與SEQ ID NO：98-100(D02-4)，k)SEQ ID NO：105-107與SEQ ID NO：108-110(D02-6)，l)SEQ ID NO：115-117與SEQ ID NO：118-120(D02-7)，m)SEQ ID NO：125-127與SEQ ID NO：128-130(D02-11)，及n)SEQ ID NO：135-137與SEQ ID NO：138-140(D02-13)。
  49. 一種選自下列化合物之結合劑-藥物接合物： 及 其中，在個情況中 n為由2至8之數字，且AK1B為經由半胱胺酸殘基與帶毒體連接單位鍵接之抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段，及AK2B為經由離胺酸殘基與帶毒體連接單位鍵接之抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段，其中該抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包含選自下列組成群組之可變重鏈及可變輕鏈的六個CDR序列：a)SEQ ID NO：75-77與SEQ ID NO：78-80(B01-10)，b)SEQ ID NO：5、9及13與SEQ ID NO：17、21及25(M31-B01)，c)SEQ ID NO：6、10及14與SEQ ID NO：18、22及26(M20-D02-S-A)，d)SEQ ID NO：7、11及15與SEQ ID NO：19、23和27(M60-G03)，e)SEQ ID NO：8、12及16與SEQ ID NO：20、24及28(36-H02)，f) SEQ ID NO：45-47與SEQ ID NO：48-50(B01-3)，g)SEQ ID NO：55-57與SEQ ID NO：58-60(B01-5)，h)SEQ ID NO：65-67與SEQ ID NO：68-70 (B01-7)，i)SEQ ID NO：85-87與SEQ ID NO：88-90(B01-12)，j)SEQ ID NO：95-97與SEQ ID NO：98-100(D02-4)，k)SEQ ID NO：105-107與SEQ ID NO：108-110(D02-6)，l)SEQ ID NO：115-117與SEQ ID NO：118-120(D02-7)，m)SEQ ID NO：125-127與SEQ ID NO：128-130(D02-11)，及n)SEQ ID NO：135-137與SEQ ID NO：138-140(D02-13)。
  50. 一種選自下列化合物之結合劑-藥物接合物： 及 其中，在個情況中n為由2至8之數字，且AK1B為經由半胱胺酸殘基與帶毒體連接單位鍵接之抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段，及AK2B為經由離胺酸殘基與帶毒體連接單位鍵接之抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段，其中該抗-C4.4a抗體或抗原結合抗體片段包含SEQ ID NO：45-47與SEQ ID NO：48-50(B01-3)所示之可變重鏈及可變輕鏈的六個CDR序列。
  51. 一種如申請專利範圍第1、2、19、20、48、49及50項中任一項之結合劑-藥物接合物或化合物之用途，其係用來製造用於治療及/或預防人類及動物之過度增生及/或血管新生疾病的醫藥品。
  52. 一種由如申請專利範圍第46項之方法製得之化合物，其中AK1與AK2為一抗體，其包含抗體B01-3、B01-10或D02-6之六個CDR序列、抗體B01-3、B01-10或D02-6之可變輕鏈及可變重鏈或抗體B01-3、B01-10或D02-6之輕鏈及重鏈，及其鹽類。
  53. 如申請專利範圍第44項之醫藥品，其係用來治療及/或預防過度增生及/或血管新生疾病之方法中。
  54. 如申請專利範圍第46項之方法，其中該還原劑係選自由二硫蘇糖醇或叁(2-羧乙基)膦鹽酸鹽組成之群組。
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