KR20140122649A - 신규 결합제-약물 콘주게이트 (ADCs) 및 그의 용도 - Google Patents

신규 결합제-약물 콘주게이트 (ADCs) 및 그의 용도 Download PDF

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한스-게오르크 레르헨
셰리프 엘 셰이크
루돌프 바이에르
산드라 브루더
비아트리크 슈텔테-루드비크
한나 외리센
크리스토프 마레르트
시모네 그레벤
하이케 페트룰
요아힘 슈마허
라르스 린덴
외르크 빌루다
카르오테 크리스틴 코피쯔
슈벤 골피에르
이링 하이슬러
악셀 하르렌가
카를-하인쯔 티에라우흐
산드라 보르코브스키
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Abstract

본원은 표적 표피 성장 인자 수용체 (EGFR, 유전자 번호 1956)에 대항하여 지향된 N,N-디알킬아우리스타틴의 신규 결합제-약물 콘주게이트 (ADC), 이들 ADC의 활성형 대사물, 이들 ADC를 제조하는 방법, 병을 치료 및/또는 예방하기 위한 이들 ADC의 용도, 및 또한 병, 더욱 특히 과증식 및/또는 혈관신생 질환 예를 들면, 암 질환의 치료 및/또는 예방하기 위한 약제를 생산하기 위한 이들 ADC의 용도에 관한 것이다. 그와 같은 치료는 단일요법으로서 또는 그 밖에 다른 약제 또는 추가 치료법과 병용하여 실시될 수 있다.

Description

신규 결합제-약물 콘주게이트 (ADCs) 및 그의 용도 {NOVEL BINDER-DRUG CONJUGATES (ADCS) AND THEIR USE}
본원은 N,N-디알킬아우리스타틴의 신규 결합제-약물 콘주게이트 (항체-약물 콘주케이트, ADC), 특히 표적 표피 성장 인자 수용체 (EGFR, 유전자 번호 1956)에 대항하여 지향된 것, 이들 ADC의 활성형 대사물, 이들 ADC를 제조하는 방법, 병을 치료 및/또는 예방하기 위한 이들 ADC의 용도, 및 또한 병, 더욱 특히 과증식 및/또는 혈관신생 질환 예를 들면, 암 질환의 치료 및/또는 예방하기 위한 약제를 생산하기 위한 이들 ADC의 용도에 관한 것이다. 그와 같은 치료는 단일요법으로서 또는 그 밖에 다른 약제 또는 추가 치료법과 병용하여 실시될 수 있다.
암 질환은 다양한 조직에서 제어되지 않는 세포 성장의 결과이다. 많은 경우에 신규 세포는 현존하는 조직 (침입성 성장)에 침투하거나, 떨어진 기관에 전이된다. 암 질환은 다양한 기관에서 생기고, 병은 조직-특이적 방식으로 종종 진행한다. 따라서 명칭 "암 질환"은 일반 용어로서 따라서 상이한 기관, 조직 및 세포 유형의 규정된 질환의 큰 그룹을 묘사한다.
초기 단계 종양은 수술 및 방사선치료법에 의해 제거될 수 있다. 전이된 종양은 일반적으로 단지 화학요법제에 의한 주어진 완화 요법일 수 있다. 그 경우의 목적은 삶의 질을 개선하고 잔여 수명을 연장하는 최적의 조합을 달성하는 것이다.
현재 비경구로 투여된 대다수의 화학요법제는 종종 종양 조직 또는 종양 세포에서 표적 지향적이지 않지만, 대신에, 그것의 전신 투여의 경과로서, 신체 내에 비-특이적으로 분포되고, 따라서 건강한 세포, 조직 및 기관에서 바람직하지 않는 노출 위치를 포함하고, 예를 들면 이는 원치않는 부작용 및 심지어 일반적인 독성의 심각한 효과가 생길 수 있는데, 그 다음 이것은 약물의 치료적으로 유용한 용량 범위를 크게 제한하거나, 약물처치의 완전한 중단을 필요로 하게 된다.
한편으로 종양 세포 또는 즉각적으로 주변 조직에서 이들 화학요법에의 개선된 및 선택적 이용가능성, 및 효과의 연관된 증가, 및 다른 한편으로 독성 부작용의 최소화는 따라서 신규 화학요법제의 발달에서 여러 해 동안 초점이었다. 많은 시도가 약물을 표적 세포에서 도입하는 효율적인 방법을 개발하기 위해 현재까지 행해졌다. 예를 들면 약물 및 세포내 표적 사이의 회합 및 약물의 인접한 세포로의 세포간 분포의 최소화는, 예를 들면, 그럼에도 불구하고 계속 어려운 문제로 되어 있다.
모노클로날 항체는, 예를 들면, 종양 조직 및 종양 세포의 표적-지향적 어드레싱에 적당하다. 암 질환의 임상 치료에 대한 그와 같은 항체의 유의성은 트라스투주맙 (헤르셉틴), 리툭시맙 (리툭산), 세툭시맙 (에르비툭스) 및 베바시주맙 (아바스틴)와 같은 제제의 활성을 기반으로 하여 최근에 상당한 일반적인 증가를 보여주었고, 그 제제들은 개별적인, 특이적 종양 질환에 요법에 대해 줄곧 승인되었다 [참조 예를 들면 G. P. Adams 및 L. M. Weiner, Nat . Biotechnol . 23, 1147-1157 (2005)]. 결과적으로 또한 소위 면역콘주게이트 예를 들면, 상기 언급된 ADC에서 관심이 현저히 증가되었고, 여기서 종양-연관 항원에 대항하는 관련 내재화 항체는 세포독성 약물에 대한 결합 단위("링커")를 통해 공유결합된다. ADC의 종양 세포로의 도입 및 콘주게이트의 차후의 절단 다음에, 세포독성 약물 자체 또는 세포독성 약물로부터 형성된 세포 독성을 활성을 갖는 또 하나의 대사물은 종양 세포 내에 방출되고, 여기서 직접적으로 및 선택적으로 그것의 효과를 발달시킬 수 있다. 이런 식으로 암 질환의 종래의 화학요법과 비교하여 정상 조직에 대한 손상이 유의미하게 더 근접한 제한 내에 유지될 수 있다 [참조 예를 들면 J. M. Lam-bert, Curr . Opin . Pharma - col . 5, 543-549 (2005); A. M. Wu 및 P. D. Senter, Nat . Biotechnol . 23, 1137-1146 (2005); P. D. Senter, Curr . Opin . Chem . Biol. 13, 235-244 (2009); L. Ducry 및 B. Stump, Bioconjugate Chem . 21, 5-13 (2010)].
항체 대신에, 또한 소분자 약물 구체로부의 결합제가 특이적 표적 위치 ("표적"), 예컨대 수용체에 선택적으로 결합하는 결합제로서 사용될 수 있다 [참조 예를 들면 E. Ruoslahti 등, Science 279, 377-380 (1998); D. Karkan 등, PLoS ONE 3 (6), e2469 (June 25, 2008)]. 약물의 방출에 대해 리간드와 약물 사이의 규정된 절단 지점을 나타내는 세포독성 약물 및 관련 리간드의 콘주게이트가 또한 공지되어 있다. 이러한 종류의 "예정된 중단점"은, 예를 들면, 작용 위치에서 특이적 효소에 의해 특정한 부위에서 선택적으로 절단될 수 있는 펩타이드 사슬 내에 존재할 수 있다 [참조 예를 들면 R. A. Firestone 및 L. A. Telan, US 특허 출원 US 2002/0147138].
모노클로날 항체는 종양 조직 및 종양 세포, 특히 표적 EGFR에 대항하여 지향된 것들의 표적화된 어드레스에 대해 특히 적당하다. "표피 성장 인자 수용체" (EGFR, 유전자번호 1956)는 티로신 키나제 서브패밀리에 속하는 막통과 당단백질 (170 kDa)이다. EGF 수용체가 많은 정상 세포에서 발현되지만, 큰 및 작은 창자의 암, 두경부, 췌장암 및 신경아교종의 암종을 포함하는 많은 형태의 인간 암에서 과발현된다. 이러한 과발현의 정도는 형편없는 예측과 관련되어 있다 (Galizia, G. 등, Ann . Surg. Oncol., June 2006, 13(6):823-35).
리간드 EGF의 EGF 수용체에의 결합으로 수용체의 이량체화 및 세포내 키나아제 도메인의 활성화로 된다. 이들 키나아제 도메인은 자가인산화를 경험하고 따라서 프로-증식성 신호 캐스케이드 (미토겐-활성화된 단백질 키나제 (MAPK) 및 Art를 통한 것들 포함)를 활성화한다. 이들 신호 캐스케이드는 세포 성장 및 세포 생존, 운동성 및 증식에 관여된 전사를 조절한다.
EGF 수용체의 신호 변환으로 또한 야생형 KRAS 유전자거 활성화되지만, 암 세포 내의 KRAS 유전자에서 활성화 체세포 돌연변이의 존재로 인해 신호 경로의 조절장애 및 EGFR 억제 치료에 대한 내성으로 된다 (Allegra 등, J. Clin . Oncol., 20 April 2009, 27(12):2091-6).
ADC 접근법에서, 부가적 항종양 효과는 리간드와 수용체 사이의 상호작용을 억제하는 것에 추가하여 부착된 세포독성 약물에 의해 달성될 수 있다.
하기 공보는 EGF 수용체 및 항-EGFR 항체를 일반적으로 기재하고 있다: WO　00069459 A1, WO 2010145796 A2, WO 02100348 A2, EP-00979246 B1, EP-00531472 B1, Mendelsohn, J., Baselga, J., Oncogene (2000) 19, 6550-6565; M. L. Janmaat 및 G. Giaccone, Drug of Today, Vol. 39, Suppl. C, 2003, 페이지 61-80; Normanno. N., 등, Gene, Jan　17, 2006, 366(1):2-16, 암에서 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 신호전달.
아우리스타틴 E (AE) 및 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE)은 돌라스타틴의 합성 유사체이고, 그의 선형 유사펩타이드의 특정 그룹은 해양 공급원으로부터 본래 단리되고 그것의 일부는 종양 세포에 대해 아주 강력한 세포독성 활성을 갖는다 [검토를 통해 예를 들면 G. R. Pettit, Prog . Chem . Org . Nat . Prod . 70, 1-79 (1997); G. R. Pettit 등, Anti - Cancer Drug Design 10, 529-544 (1995); G. R. Pettit 등, Anti - Cancer Drug Design 13, 243-277 (1998)를 참고한다].
Figure pct00001
아우리스타틴 E (AE): R = CH3
모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE): R = H
그러나, MMAE는 비교적으로 높은 전신 독성의 불리한 점을 갖는다. 종양 선택도를 개선하기 위해, MMAE는 더 표적화된 종양 요법에 대한 ADC 설정에서 더욱 특히 효소적으로 절단가능 발린-시트룰린 링커와 함께 사용된다 [WO2005081711-A2; S. O. Doro-nina 등, Bio - conjugate Chem . 17, 114-124 (2006)]. 단백분해 절단 다음에, MMAE는 상응하는 ADC로부터 바람직하게는 세포내로 방출된다.
항체-약물 콘주게이트 (ADC)의 형태로 이용될 때, 그러나, MMAE는 효소적으로 절단가능 예정된 중단점을 갖지 않는 항체와 약물 사이의 결합 단위 (링커)와 상용성이 없다 [S. O. Doro-nina 등, Bioconjugate Chem . 17, 114-124 (2006)].
모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF)은 MMAE와 비교하여 항증식성 활성을 단지 조절하는 C-말단 페닐알라닌 단위르르 갖는 아우리스타틴 유도체이다. 이 사실은 유리 카복실 그룹이 원인일 가능성이 높고, 그의 극성 및 전하는 세포에 접근하기 위해 이 화합물의 용량에 불리하게 작용한다. 이와 관련하여, MMAF의 메틸 에스테르 (MMAF-OMe)는, MMAF와 비교하여, 수많은 자릿수까지 증가된 다양한 암종 세포주에 대해 시험관내 세포독성을 갖는 세포 접근성을 갖는 중성 전하를 띤 전구약물 유도체로서 기재되었다 [S. O. Doro-nina 등, Bioconjugate Chem . 17, 114-124 (2006)]. 이 효과는, 전구약물의 세포에 섭취 다음에 세포내 에스테르 가수분해에 의해 빠르게 방출되는 MMAF 자체에 의해 생기는 것으로 추정될 수 있다.
Figure pct00002
모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF): R = H
모노메틸 아우리스타틴 F 메틸에스테르 (MMAF-OMe): R = CH3
그러나, 단순한 에스테르 유도체를 기반으로 하는 약물 화합물은, 예를 들면 혈장에 존재하는 에스테라아제에 의해 의도된 작용 부위에 독립적인 비-특이적 에스테르 가수분해 때문에 화학 불안정성의 위험이 일반적으로 있고; 이러한 비-특이적 가수분해는 요법에서 그와 같은 화합물의 유용성을 유의미하게 제한할 수 있다.
모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF) 및 또한 다양한 에스테르 유도체 및 아마이드 그의 유도체는 WO2005081711-A2에서 개시되었다. C-말단, 아미드로 치환된 페닐알라닌 단위를 갖는 추가의 아우리스타틴 유사체는 WO200118032-A2에서 기재되어 있다. WO02088172-A2 및 WO2007008603-A1는 페닐알라닌의 측쇄 변형에 관한 MMAF 유사체를 청구하고, 한편 WO2007008848-A2는, 페닐알라닌의 카복실 그룹이 변형된 것을 청구한다. C-말단을 통해 연결된 아우리스타틴 콘주게이트는 WO2009117531-A1에서 최근 기재되었다 [참고 또한 S. O. Doro-nina 등, Bio - conjugate Chem . 19, 1960-1963 (2008)].
더욱이, 아우리스타틴 유도체 예컨대 MMAE 및 MMAF는 또한 많은 종양 세포에 의해 발현된 수송체 단백질에 대한 기질이고, 이것으로 이들 약물에 대한 내성이 발달될 수 있다.
본 발명에 따른 문제는, 신규 N,N-디알킬아우리스타틴 유도체와 획기적인, 적당한 링커 및 결합제와의 조합을 통해, 예를 들면, 수송체 단백질에 대해 기질인 것으로 세포내로 형성된 새대사물의 그의 특이적 종양 효과 및/또는 감소된 포텐셜에 관하여 매우 매력적인 활성 프로파일을 나타내고, 따라서 과증식 및/또는 혈관신생 질환의 치료 및/또는 예방, 예컨대 암 질환에 적당한 신규 결합제-약물 콘주게이트 (ADC)를 제공하는 것이다.
본 발명은 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물을 제공한다.
Figure pct00003
여기서
n은 1 내지 50의 수이고,
AK는 결합제, 바람직하게 키메라 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
그룹 §-G-L1-B-L2-§§는 링커이고,
여기서
§은 그룹 AK와의 연결 부위를 표시하고,
§§은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00004
또는
Figure pct00005
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00006
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
또는
Figure pct00008
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3는 수소 또는 메틸이고,
R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00009
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert -부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00010
Figure pct00011
또는
Figure pct00012
여기서
#9는 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 화합물은, 이하에서 확인되고 식 (I)에 의해 포함되는 화합물은 이미 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 아닌 정도로 식 (I)의 화합물 및 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물, 이하에서 확인되고 식 (I)에 의해 포함되는 식의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물, 및 또한 실시예에서와 같이 이하에서 확인되고 식 (I)에 의해 포함되는 식의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
그것의 구조에 따라, 본 발명의 화합물은 상이한 입체이성질체 형태, 즉 배위 이성질체의 형태로 그렇지 않으면 적절한 경우 형태 이성질체 (거울상이성질체들 및/또는 부분입체이성질체, 이는 회전장애이성질체의 경우의 것 포함)로서 존재할 수 있다. 따라서 본 발명은 거울상이성질체들 및 부분입체이성질체 및 그것의 각각 혼합물을 포함한다. 입체이성질체적으로 동질인 성분은 거울상이성질체들 및/또는 부분입체이성질체의 그와 같은 혼합물로부터 공지된 방식으로 단리될 수 있고; 이를 위해 크로마토그래피 공정, 더욱 특히 아키랄 또는 키랄 상 HPLC 크로마토그래피를 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 화합물이 호변체 형태로 존재하는 경우, 본 발명은 모든 호변체 형태를 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물의 모든 적당한 동위원소 변형을 포함한다. 본 발명의 화합물의 동위원소 변형은, 본 발명의 화합물 내의 적어도 하나의 원자가 통상적으로 또는 주로 사실상 존재하지만 원자 질량으로부터 상이한 원자 질량을 갖는 동일한 원자 번호의 또 하나의 원자를 위해 교환되는 화합물을 의미하는 것으로 본 명세서에서 이해된다. 본 발명의 화합물에 통합될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 불소, 염소, 브롬 및 요오드 예컨대 2H (중수소), 3H (트리튬), 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 32P, 33P, 33S, 34S, 35S, 36S, 18F, 36Cl, 82Br, 123I, 124I, 129I 및 131I의 것이다. 본 발명의 화합물의 특정한 동위원소 변형, 예컨대 더욱 특히 1 또는 그 초과의 방사선 동위원소가 통합되는 것은, 예를 들면, 신체 내 약물의 작용 기전 또는 분포를 조사하기 위해 이점일 수 있고; 제조 및 검출가능성의 비교 용이성으로 인해, 3H 또는 14C 동위원소로 표시된 화합물은 이들 목적에 특이 적당하다.뿐만 아니라, 동위원소, 예컨대 중수소의 통합은, 예를 들면, 화합물의 더 큰 대사 안정성, 예컨대 신체 중 반감기에 대한 확대 또는 필요한 활성 용량의 감소의 결과로서 어떤 치료 이점이 생길 수 있고; 본 발명의 화합물의 그와 같은 변형은 따라서, 적절한 경우, 본 발명의 바람직한 구현예를 또한 구성할 수 있다. 본 발명의 화합물의 동위원소 변형은, 예를 들면 각각 시약 및/또는 개시 화합물의 상응하는 동위원소 변형을 사용하여 이하에서 나중에 기재된 방법 및 실시예에서 재생산된 절차에 따라 숙련가에게 공지된 공정으로 제조될 수 있다.
본 발명의 문맥에서 바람직한 염은 본 발명의 화합물의 생리적으로 허용가능한 염이다. 약제학적 적용에 그 자체가 적당하지 않을 지라도 그럼에도 불구하고 예를 들면 본 발명의 화합물을 단리 또는 분리하기 위해 사용될 수 있는 염이 또한 포함된다.
본 발명의 화합물의 생리적으로 허용가능한 염은 무기산, 카복실산 및 설폰산의 산 부가 염을 포함하고, 그 예는, 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, 톨루엔설폰산, 나프탈렌디설폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 락트산, 타르타르산, 말산, 시트르산, 푸마르산, 말레산 및 벤조산의 염이다.
본 발명의 화합물의 생리적으로 허용가능한 염은 또한 하기를 포함한다: 관례적 염기의 염기, 예컨대, 예로써, 및 바람직하게는, 알칼리 금속 염 (예를 들면 나트륨 및 칼륨 염), 알칼리 토금속 염 (예를 들면 칼슘 및 마그네슘 염) 및 암모니아로부터 유래된 암모늄 염 또는 1 내지 16개의 C 원자를 갖는 유기 염기, 예컨대, 예로써, 및 바람직하게는, 에틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 에틸-디이소-프로필-아민, 모노에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 디사이클로헥실아민, 디메틸아미노에탄올, 프로카인, 디벤질아민, N-메틸-피페리딘, N-메틸-모폴린, 아르기닌, 라이신 및 1,2-에틸렌디아민.
본 발명의 맥락에서 용매화물은 용매 분자와의 배위에도 불구하고 고체 또는 액체 상태에서 착물을 형성하는 본 발명의 화합물의 형태이다. 수화물은 용매화물의 하나의 구체적인 형태이고, 여기서 상기 배위는 물과 함께 일어난다. 바람직한 용매화물은 본 발명의 문맥에서 수화물이다.
뿐만 아니라, 본 발명은 또한 본 발명의 화합물의 전구약물을 포함한다. 용어 "전구약물"는 본원에서 자체로 생물학적 활성 또는 불활성일 수 있지만 신체 내의 그것의 잔류 동안에 본 발명의 화합물로 전환될 수 있는 화합물을 확인한다 (예를 들면 대사 또는 가수분해에 의해).
본 발명의 문맥에서 치환체의 정의는, 달리 구체화되지 않으면, 하기와 같다:
본 발명의 맥락에서 ( C 1 - C 4 )- 알킬은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형 알킬 라디칼이다. 예로써, 및 바람직하게는, 하기가 언급될 수 있다: 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 1-메틸프로필 및 tert -부틸.
본 발명의 맥락에서 알칸디일은 표시된 특정한 수의 탄소 원자를 갖는 선형, α,ω-2가 알킬 라디칼이다. 예로써, 및 바람직하게는, 하기가 언급될 수 있다: 메틸렌, 에탄-1,2-디일 (1,2-에틸렌), 프로판-1,3-디일 (1,3-프로필렌), 부탄-1,4-디일 (1,4-부틸렌), 펜탄-1,5-디일 (1,5-펜틸렌), 헥산-1,6-디일 (1,6-헥실렌), 헵탄-1,7-디일 (1,7-헥실렌), 옥탄-1,8-디일 (1,8-옥틸렌), 노난-1,9-디일 (1,9-노닐렌), 데칸-1,10-디일 (1,10-데실렌).
본 발명의 맥락에서 ( C 3 - C 7 )- 사이클로알킬 및 3- 내지 7-원 카보사이클 각각은 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖는 모노사이클릭, 포화된 사이클로알킬 그룹이다. 예로써, 및 바람직하게는, 하기가 언급될 수 있다: 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로-펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로헵틸.
정의 R19 중 α-아미노산의 측면 그룹은 천연 생성 α-아미노산의 측면 그룹뿐만 아니라 이들 α-아미노산의 동족체 및 이성질체의 측면 그룹을 포함한다. α-아미노산은 본원에서 L 또는 D 배치로 있을 수 있고 그렇지 않으면 L 및 D 형태의 혼합물로서 존재할 수 있다. 주어진 측면 그룹의 예는 하기와 같다: 메틸 (알라닌), 프로판-2-일 (발린), 프로판-1-일 (노르발린), 2-메틸프로판-1-일 (류신), 1-메틸프로판-1-일 (이소류신), 부탄-1-일 (노르류신), tert -부틸 (2-tert -부틸-글리신), 페닐 (2-페닐글리신), 벤질 (페닐알라닌), p-하이드록시-벤질 (티로신), 인돌-3-일-메틸 (트립토판), 이미다졸-4-일-메틸 (히스티딘), 하이드록시메틸 (세린), 2-하이드록시에틸 (호모세린), 1-하이드록시에틸 (트레오닌), 머캅토메틸 (시스테인), 메틸-티오메틸 (S-메틸-시스테인), 2-머캅토에틸 (호모시스테인), 2-메틸-티오에틸 (메티오닌), 카바모일-메틸 (아스파라긴), 2-카바모일-에틸 (글루타민), 카복시메틸 (아스파르트산), 2-카복시에틸 (글루탐산), 4-아미노부탄-1-일 (라이신), 4-아미노-3-하이드록시-부탄-1-일 (하이드록시리신), 3-아미노-프로판-1-일 (오르니틴), 2-아미노에틸 (2,4-디아미노부티르산), 아미노메틸 (2,3-디아미노-프로피온산), 3-구아니디노프로판-1-일 (아르기닌), 3-우레이도-프로판-1-일 (시트룰린). 정의 R19 중 바람직한 α-아미노산 측면 그룹은 하기이다: 메틸 (알라닌), 프로판-2-일 (발린), 2-메틸프로판-1-일 (류신), 벤질 (페닐알라닌), 이미다졸-4-일-메틸 (히스티딘), 하이드록시-메틸 (세린), 1-하이드록시에틸 (트레오닌), 4-아미노부탄-1-일 (라이신), 3-아미노-프로판-1-일 (오르니틴), 2-아미노에틸 (2,4-디아미노-부티르산), 아미노메틸 (2,3-디아미노-프로피온산), 3-구아니디노프로판-1-일 (아르기닌). L 배치가 각 경우에 바람직하다.
본 발명의 맥락에서 4- 내지 7-원 헤테로사이클은 총 4 내지 7개의 고리 원자를 갖는 모노사이클릭, 포화된 헤테로사이클이고, 이는 시리즈 N, O, S, SO 및/또는 SO2로부터 하나 또는 2개의 고리 헤테로원자를 함유하고 고리 탄소 원자 또는 임의로 고리 질소 원자를 통해 연결된다. 선호되는 것은 시리즈 N, O 및/또는 S로부터 하나 또는 2개의 고리 헤테로원자를 갖는 5- 내지 7-원 헤테로사이클, 더 바람직하게는 시리즈 N 및/또는 O로부터 하나 또는 2개의 고리 헤테로원자를 갖는 5- 또는 6-원 헤테로사이클이다. 예로써, 하기가 언급될 수 있다: 아제티딜, 옥세타닐, 피롤리디닐, 피라졸리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 티올라닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라하이드로피라닐, 테트라하이드로티오피라닐, 모폴리닐, 티오모폴리닐, 헥사하이드로아제피닐 및 헥사하이드로-1,4-디아제피닐. 선호되는 것은 피롤리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라하이드로피라닐 및 모폴리닐.
A, B, D, G, L1, L2, L4, R1, R2, R3, R4 및 R5, 각각으로 나타낼 수 있는 그룹의 식에서, 기호 #6, *, **, ###3, ###1, ###2, ####1, ####2, ####3, ####4, ***, ****, ###4, ###5, ###6, ###7, ###8 또는 #9가 위치한 선의 종점은 탄소 원자 또는 CH2 그룹이 아니지만, 대신에 A, B, D, G, L1, L2, L4, R1, R2, R3, R4 또는 R5가 결합된, 각 경우에 지정된 원자에 대한 결합의 일부이다.
본 발명의 문맥에서, 다중으로 존재하는 모든 라디칼은 그것의 정의를 서로 독립적으로 갖는다. 본 발명의 화합물 중 라디칼이 치환되면, 라디칼은, 달리 구체화되지 않으면, 1회 이상 치환될 수 있다. 하나 또는 2개의 동일한 또는 상이한 치환체(들)에 의한 치환이 바람직하다. 하나의 치환체에 의한 치환이 특이 바람직하다.
본 발명의 문맥에서 사용된 용어들은, 달리 구체화되지 않으면, 하기 정의를 갖는다:
용어 "링커"는 공유 결합을 포함하는 화학 단위 또는 결합제를 약물에 공유적으로 연결하는 일련의 원자로서 가장 넓은 의미로 이해된다. 용어 "링커"는 본 발명의 의미에서 결합제를 약물에 공유적으로 연결하는 일련의 원자로 바람직하게는 이해된다.뿐만 아니라, 링커는, 예를 들면, 2가 화학 단위, 예컨대 알킬디일, 아릴디일, 헤테로아릴디일, 헤테로사이클릴디일, 디카보닐 산 에스테르, 디카보닐 산 아마이드에 의해 나타낼 수 있다.
용어 "결합제"는 결합제-약물 콘주게이트에 관한 특정한 표적 세포 집단 상에 존재하는 표적 분자에 결합하는 분자로서 가장 넓은 의미로 이해된다. 용어 "결합제"는 가장 넓은 해석으로 이해되어야 하고, 예를 들면, 렉틴, 특정한 당 사슬에 결합할 수 있는 단백질, 또는 인지질-결합 단백질을 포함한다. 그와 같은 결합제는, 예를 들면, 고분자량 단백질 (결합 단백질), 폴리펩타이드 또는 펩타이드 (결합 펩타이드), 비-펩타이드 (예를 들면 압타머 (US5,270,163) (Keefe AD., 등에 의한 논문 검토, Nat. Rev. Drug Discov. 2010; 9:537-550), 또는 비타민) 및 모든 다른 세포-결합 분자 또는 물질을 포함한다. 결합 단백질은, 예를 들면, 항체 및 항체 단편 또는 항체 모방체 예를 들면, 어피바디, 아드넥틴, 안티칼린, DARPins, 아비머, 나노바디 (Gebauer M. 등에 의한 논문 검토, Curr. Opinion in Chem. Biol. 2009; 13:245-255; Nuttall S.D. 등, Curr. Opinion in Pharmacology 2008; 8:608-617)이다. 결합 펩타이드는, 예를 들면, 리간드-수용체 쌍의 리간드, 예컨대 리간드-수용체 쌍 VEGF/KDR 중 VEGF, 예컨대 리간드-수용체 쌍 트랜스페린/트랜스페린 수용체의 트랜스페린, 또는 시토카인/시토카인 수용체, 예컨대 리간드 수용체 쌍 TNF알파/TNF알파 수용체 중 TNF알파이다.
본 발명에 따른 바람직한 결합제는 EGFR에 결합하는 항체 (더욱 특히 인간 또는 인간화된 모노클로날) 또는 항원 결합 항체 단편이다. 항-EGFR 항체와 같은 항체의 경우에, n (즉, 독성기 분자의 수/항체 분자)은 바람직하게는 1 내지 10, 더 바람직하게는 2 내지 8의 범위이다.
"표적 분자"는 가장 넓은 의미로 표적 세포 집단에 존재하는 분자인 것으로 이해되고, 단백질 (예를 들면 성장 인자의 수용체) 또는 비-펩타이드 분자 (예를 들면 당 또는 인지질)일 수 있다. 바람직하게는 그것은 수용체 또는 항원이다.
용어 "세포외" 표적 분자는 세포에 부착되고 세포의 외부에 위치하는 표적 분자 또는 세포의 외부에 위치하는 표적 분자의 일부를 묘사하고, 즉 결합제는 그것의 세포외 표적 분자에서 무손상 세포에 결합할 수 있다. 세포외 표적 분자는 세포막에서 고정될 수 있거나 세포막의 일부일 수 있다. 숙련가는 세포외 표적 분자를 확인하는 방법을 알고 있다. 단백질에 대해 이것은 막에서 단백질의 막통과 도메인(들) 및 배향의 결정을 통해 행해질 수 있다. 이 데이타는 일반적으로 단백질 데이터베이스로 기록된다 (예를 들면 SwissProt).
용어 "암 표적 분자"는 동일한 조직 유형의 비-암 세포와 비교하여 1 또는 그 초과의 암 세포 유형으로 다중으로 존재하는 표적 분자를 묘사한다. 암 표적 분자는 바람직하게는 동일한 조직 유형의 비-암 세포와 비교하여 1 또는 그 초과의 암 세포 유형으로 선택적으로 존재하고, "선택적으로"는 동일한 조직 유형의 비-암 세포와 비교하여 암 세포 상의 적어도 2배의 축정을 묘사한다 ("선택적 암 표적 분자"). 암 표적 분자의 사용은 본 발명의 콘주게이트와 함께 암 세포이 선택적 요법을 허용한다.
결합제는 링커에 결합을 통해 결합될 수 있다. 유기 분자의 항체에의 공유 결합 (콘주게이션)의 다양한 가능성은 문헌으로부터 공지되어 있다. 결합제의 결합은 결합제의 헤테로원자에 의해 일어날 수 있다. 결합을 위해 사용될 수 있는 결합제의 독창적인 헤테로원자는 황 (일 구현예에서 결합제의 설프히드릴 그룹을 통해), 산소 (결합제의 카복실 또는 하이드록시 그룹에 의해 본 발명에 따라) 및 질소 (일 구현예에서 결합제의 일차 또는 2차 아민 그룹 또는 아마이드 그룹을 통해)이다. 항체의 시스테인 잔기의 1 또는 그 초과의 황 원자 및/또는 항체의 라이신 잔기의 1 또는 그 초과의 NH 그룹을 통해 독성기의 항체의 콘주케이션이 본 발명에 따라 바람직하다. 이들 헤테로원자는 천연 결합제에서 존재할 수 있거나 화학 또는 분자 생물학의 방법으로 도입될 수 있다. 본 발명에 따라 결합제의 독성기에의 결합은 결합제의 표적 분자에의 결합 활성에 거의 영향을 미치지 않는다. 바람직한 구현예에서 결합은 표적 분자 결합제의 표적 분자에의 결합 활성에 영향을 미치지 않는다.
용어 "항체"는 본 발명에 따라 그것의 가장 넓은 의미에서 이해되고 면역글로불린 분자를 포함하고, 그 예는 온전한 또는 변형된 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체 또는 다중특이적 항체 (예를 들면 이중특이적 항체)이다. 면역글로불린 분자는 바람직하게는 4개의 폴리펩타이드 사슬, 2개의 중쇄 (H 사슬) 및 2개의 경쇄 (L 사슬)를 갖는 분자를 포함하고, 이들은 전형적으로 디설파이드 브릿지에 연결된다. 각 중쇄는 중쇄 (VH로 약칭)의 가변 도메인 및 중쇄의 불변 도메인을 포함한다. 중쇄의 불변 도메인은 예를 들면, 3개의 도메인 CH1, CH2 및 CH3을 포함할 수 있다. 각 경쇄는 가변 도메인 (VL로 약칭) 및 불변 도메인을 포함한다. 경쇄의 불변 도메인은 하나의 도메인 (CL로 약칭)을 포함한다. VH 및 VL 도메인은 추가로 고도가변성을 갖는 영역, 소위 상보성 결정 영역 (CDR로 약칭), 및 낮은 서열 가변성을 갖는 영역 ("틀 영역", FR로 약칭)으로 나눌 수 있다. 각 VH 및 VL 영역은 전형적으로 3개의 CDRs 및 최대 4개의 FRs로 구성된다. 예를 들면, 하기 순서로 아미노 말단으로부터 카복시 말단으로: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 항체는 항체에 적당한 임의의 종, 예를 들면, 토끼, 라마, 낙타, 마우스 또는 랫트로부터 수득될 수 있다. 일 구현예에서 항체는 인간 또는 쥣과 기원이다. 항체는 예를 들면 인간, 인간화 또는 키메라일 수 있다.
용어 "모노클로날" 항체는 실질적으로 동질인 항체의 모집단으로부터 수득한 항체를 확인하고, 즉 모집단의 개별적인 항체는 작은 수로 생기는 천연 생성 돌연변이는 제외하고 동일하다. 모노클로날 항체는 고 특이성을 갖는 단일 항원성 결합 부위를 인식한다. 용어 "모노클로날 항체"는 특정한 생산 방법을 의미하지는 않는다.
용어 "온전한" 항체는 항원-결합 도메인뿐만 아니라 경쇄 및 중쇄의 불변 도메인을 포함하는 항체를 의미한다. 불변 도메인은 천연 생성 도메인, 또는 그의 변이체일 수 있고여기서 1 또는 그 초과 아미노산 위치는 변경되었다.
용어 "변형된 온전한" 항체는 그의 아미노 말단 또는 카복실 말단을 통해, 공유 결합 (예를 들면 펩타이드 결합)에 의해 항체로부터 기원하지 않는 또 하나의 폴리펩타이드 또는 단백질과 융합된 온전한 항체를 의미한다.뿐만 아니라, 항체는 독성기에 대한 커플링을 용이하게 하기 위해 규정된 위치에서 반응성 시스테인을 도입하여 변형될 수 있다 (참고 Junutula 등 Nat Biotechnol. 2008 Aug;26(8):925-32).
용어 "인간" 항체는 인간으로부터 수득될 수 있거나 합성 인간 항체인 항체를 확인한다. "합성" 인간 항체는 인간 항체 서열의 분석을 기반으로 한 합성 순서로부터 인실리코로 부분적으로 또는 일률적으로 얻을 수 있는 항체이다. 인간 항체는, 예를 들면, 인간 기원인 항체 서열의 라이브러리부터 단리된 핵산에 의해 인코딩될 수 있다. 그와 같은 항체의 하나의 예는 하기에서 발견될 수 있다: Soederlind 등, Nature Biotech. 2000, 18:853-856.
용어 "인간화" 또는 "키메라" 항체는 비-인간 및 인간 서열 성분으로 이루어진 항체를 묘사한다. 이들 항체에서, 인간 면역글로불린 (수령체)의 서열의 일부는 비-인간 면역글로불린 (공여체)의 서열 성분에 의해 대체된다. 많은 경우에 공여체는 쥣과 면역글로불린이다. 인간화 항체에 의해, 수령체 중 CDR의 아미노산은 공여체의 아미노산에 의해 대체된다. 일부 경우에서, 뼈대의 아미노산은 또한 상응하는 공여체의 아미노산에 의해 대체된다. 많은 경우에서 인간화 항체는 수령체에도 공여체에도 존재하지 않고 항체의 최적화 동안에 삽입된 아미노산을 함유한다. 키메라 항체에서, 공여체 면역글로불린의 가변 도메인은 인간 항체의 불변 영역과 융합된다.
용어 상보성 결정 영역 (CDR)은, 본원에서 사용된 바와 같이, 항원에 결합하는데 필요한 가변 항체 도메인에서 아미노산을 의미한다. 모든 가변 영역은 전형적으로 CDR1, CDR2 및 CDR3으로서 확인된 바와 같이 3개의 CDR 영역을 갖는다. 각 CDR 영역은 코티아에 따라 규정된, 고도가변 루프의 카밧 및/또는 아미노산의 정의에 따라 아미노산을 포함할 수 있다. 카밧에 따른 정의는 예를 들면 하기를 포함한다: 가변 경쇄의 대략 아미노산 위치 24 - 34 (CDR1), 50 - 56 (CDR2) 및 89 - 97 (CDR3) 및 가변 중쇄의 31 - 35 (CDR1), 50 - 65 (CDR2) 및 95 - 102 (CDR3)의 영역 (카밧 등, Sequences of Proteins of Immulological Interest, 5판 공중 보건 서비스, 미국 국립 보건원, Bethesda, MD. (1991)). 코티아에 따른 정의는 예를 들면 하기를 포함한다: 가변 경쇄의 대략 아미노산 위치 26 - 32 (CDR1), 50 - 52 (CDR2) 및 91 - 96 (CDR3) 및 가변 중쇄의 26 - 32 (CDR1), 53 - 55 (CDR2) 및 96 - 101 (CDR3)의 영역 (Chothia 및 Lesk; J Mol Biol 196: 901-917 (1987). 일부 경우에서 CDR는 카밧 및 코티아에 의해 규정된 바와 같이 하나의 CDR 영역으로부터 아미모산을 포함할 수 있다.
중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 항체는 상이한 클래스로 나누어질 수 있다. 5 주요 클래스의 온전한 항체가 있다: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM, 및 수많은 것들은 추가 서브클래스 (아이소타입), 예를 들면 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2으로 나누어질 수 있다. 상이한 클래스에 상응하는 중쇄의 불변 도메인은 [알파/α], [델타/δ], [엡실론/ε], [감마/γ] 및 [뮤/μ]로서 확인된다. 항체의 3차원 구조 및 서브유닛 구조 모두는 공지되어 있다.
항체/면역글로불린의 용어 "기능적 단편" 또는 "항원 결합 항체 단편"은 항체/면역글로불린의 항원 결합 도메인을 추가로 포함하는 항체/면역글로불린의 단편 (예를 들면 IgG의 가변 도메인)으로서 규정된다. 항체의 "항원 결합 도메인"은 전형적으로 항체의 1 또는 그 초과의 고도가변 영역, 예를 들면 CDR, CDR2 및/또는 CDR3 영역을 포함한다. 그러나, 항체의 "뼈대" 또는 "스캐폴드" 영역은 또한 항체의 항원에의 결합과 관련하여 부분적으로 역할을 할 수 있다. 틀 영역은 CDR에 대한 스캐폴드를 형성한다. 항원-결합 도메인은 바람직하게는 가변 경쇄의 적어도 아미노산 4 내지 103 및 가변 중쇄의 아미노산 5 내지 109, 더 바람직하게는 가변 경쇄의 아미노산 3 내지 107 및 가변 중쇄의 4 내지 111을 포함하고, 완전한 가변 경쇄 및 중쇄, 즉 VL의 아미노산 1 - 109 및 VH의 1 내지 113가 특히 바람직하다 (WO97/08320에 따른 넘버링).
본 발명의 "기능적 단편" 또는 "항원 결합 항체 단편"은 비-확정적으로 하기를 포함한다: Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편, 디아바디, 단일 도메인 항체 (DAbs), 선형 항체, 항체의 개별적인 사슬 (단일-사슬 Fv, ScFv로 약칭); 및 다중특이적 항체, 예컨대 항체 단편으로부터 형성된 이중 및 삼중-특이적 항체 C. A. K Borrebaeck, editor (1995) Antibody Engineering (Breakthroughs in Molecular Biology), Oxford University Press; R. Kontermann & S. Duebel, editors (2001) Antibody Engineering (Springer Laboratory Manual), Springer Verlag). "다중특이적" 또는 "다기능성" 항체 이외의 항체는 동일한 결합 부위를 갖는 것이다. 다중특이적 항체는 항원의 상이한 에피토프에 대해 특이적이고 또는 하나 초과의 항원의 에피토프에 대해 특이적일 수 있다 (참고, 예를 들면 WO93/17715; WO09208802; WO09100360; WO09205793; Tutt, 등, 1991, J. Immunol. 147:60 69; 미국 특허 번호 4,474,893; 4,7 14,68 1; 4,925,648; 5,573,920; 5,601,8 19; 또는 Kostelny 등, 1992, J. Immunol. 148: 1547 1553). F(ab')2 또는 Fab 분자는 구축될 수 있고 이로써 Ch1 및 CL 도메인 사이에 생기는 분자간 디설파이드 상호작용의 수는 감소될 수 있고 그렇지 않으면 완전히 방지된다.
"기능적 단편" 또는 "항원 결합 항체 단편"은 그의 아미노 말단 또는 카복실 말단을 통해, 공유 결합 (예를 들면 펩타이드 결합)에 의해 항체로부터 기원하지 않는 또 하나의 폴리펩타이드 또는 단백질과 융합될 수 있다.뿐만 아니라, 항체 및 항원 결합 단편은 독성기에 대한 커플링을 용이하게 하게 위해 규정된 위치에서 반응성 시스테인을 도입하여 변형될 수 있다 (참고 Junutula 등 Nat Biotechnol. 2008 Aug;26(8):925-32).
폴리클로날 항체는 당해분야의 숙련가에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 모노클로날 항체는 당해분야의 숙련가에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다 (Koehler 및 Milstein, Nature, 256, 495-497, 1975). 인간 및 인간화 모노클로날 항체는 당해분야의 숙련가에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다 (Olsson 등, Meth Enzymol. 92, 3-16 또는 Cabilly 등 US 4,816,567 또는 Boss 등 US 4,816,397).
당해분야의 숙련가는, 예를 들면, 이식유전자 마우스 (N Lonberg 및 D Huszar, Int Rev Immunol. 1995;13(1):65-93) 또는 파아지 디스클레이 기술 (Clackson 등, Nature. 1991 Aug 15;352(6336):624-8)에 의해 인간 항체 및 그의 단편을 제조하는 다양한 방법을 알고 있다. 본 발명의 항체는 예를 들면 다수의 건강한 지원자로부터 엮은 다수의 항체의 아미노산 서열로 이루어진 재조합 항체 라이브러리로부터 수득될 수 있다. 항체는 공지된 재조합 DNA 기술에 의해 또한 생산될 수 있다. 항체의 핵산 서열은 일상적인 서열분석에 의해 수득될 수 있거나 공적으로 접근가능한 데이터베이스로부터 이용가능하다.
"단리된" 항체 또는 결합제는 세포의 다른 성분을 제거하기 위해 정제되었다. 진단 또는 치료 사용을 방해하는 세포의 오염 성분은, 예를 들면, 효소, 호르몬, 또는 세포의 다른 펩타이드 또는 비-펩타이드 성분이다. 항체 또는 결합제는 항체 및/또는 결합제에 대해 95% 초과로 정제되었다 (예를 들면 Lowry 방법, UV-Vis 분광계 또는 SDS 모세혈관 겔 전기영동에 의해 결정됨). 더욱이, 아미노 말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 아미노산이 결정될 수 있는 정도로 정제되거나 동질성이 환원 또는 비-환원 조건 하에서 SDS-PAGE에 의해 결정되는 동질성의 지점(검출은 쿠마씨 블루 염색 또는 바람직하게는 은 염색에 의해 수행될 수 있다)까지 정제된 항체가 사용될 수 있다. 그러나, 항체는 정상적으로 적어도 하나의 정제 단계로 합성된다.
용어 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하는"은 예정된 항원/표적 분자에 결합하는 항체 또는 결합제를 의미한다. 항체 또는 결합제의 특이적 결합은은 전형적으로 적어도 10-7 M의 친화도 (Kd 값으로서; 즉 바람직하게는 10-7 M보다 더 작은 Kd 값을 갖는 것)을 갖는 항체 또는 결합제를 묘사하고, 상기 항체 또는 결합제는 예정된 항원/표적 분자 또는 밀접하게 관련된 항원/표적 분자가 아닌 비-특이적 항원/표적 분자에 대해서보다 예정된 항원/표적 분자에 대해서 적어도 2배 더 높은 친화도를 갖는다 (예를 들면 소혈청 알부민, 또는 카세인).
암 세포 항원에 대해 특이적인 항체는 사람들에게 친숙한 방법 (예컨대 재조합 발현, 예를 들면)에 의해 당해분야의 숙련자에 의해 제조될 수 있거나 상업적으로 획득될 수 있다 (예를 들면 Merck KGaA, Germany). 암 치료에서 공지된 상업적으로 이용가능한 항체의 예는 Erbitux® (세툭시맙, Merck KGaA), Avastin® (베바시주맙, Roche) 및 Herceptin® (트라스투주맙, Genentech)이다. 트라스투주맙은, 세포 기반 검정 (Kd = 5 nM)에서 고 친화도를 갖는 인간 표피 성장 수용체의 세포외 도메인에 결합하는 IgG1카파 유형의 재조합 인간화 모노클로날 항체이다. 항체는 CHO 세포에서 재조합으로 생산된다.
식 (I)의 화합물은 식 (Ia)의 화합물의 하위그룹을 나타낸다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n은 1 내지 50의 수이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고
여기서
AK1은 결합제의 황 원자에 의해 그룹 G에 결합되는 결합제 (바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체)를 나타내고,
AK2는 결합제의 질소 원자에 의해 그룹 G에 결합되는 결합제 (바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체)를 나타내고,
AK =AK1일 때, G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00013
또는
Figure pct00014
여기서
#1은 결합제의 황 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
또는
AK =AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일, 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00015
또는
Figure pct00016
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
L1A는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
B1은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00017
또는
Figure pct00018
여기서
## 5은 그룹 L1A와의 연결 부위를 표시하고,
## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 표시하고,
L5은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L6는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00019
또는
Figure pct00020
여기서
## 7은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
## 8은 L1B와의 연결 부위를 표시하고,
R33은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시-카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
R34는 수소 또는 메틸이고,
R29은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R30은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R29 및 R30는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R31은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R32은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R31 및 R32는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00021
Figure pct00022
또는
Figure pct00023
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
P는 O 또는 NH이고,
L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00024
또는
Figure pct00025
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25는 수소 또는 메틸이고,
R28은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
Q2은 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R14은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R15은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R14 및 R15는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R16은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R17은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R18은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R19는 수소 또는 천연 α-아미노산 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 측면 그룹이고,
R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R19 및 R20는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R22은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
R23은 (C1-C4)-알킬이고,
R24은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R27은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R36은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
R37는 수소 또는 메틸이고,
또는
R36 및 R37는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00026
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00027
또는
Figure pct00028
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1는 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00029
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00030
또는
Figure pct00031
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3는 수소 또는 메틸이고,
R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00032
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert -부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00033
Figure pct00034
또는
Figure pct00035
여기서
#9는 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물,
여기서
n은 1 내지 50의 정수이고,
AK는 결합제, 바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
그룹 §-G-L1-B-§§는 링커를 나타내고,
여기서
§는 그룹 AK에 대한 연결 부위를 나타내고
§§는 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00036
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00037
또는
Figure pct00038
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1는 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00039
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00040
또는
Figure pct00041
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3는 수소 또는 메틸이고,
R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00042
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert -부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00043
Figure pct00044
또는
Figure pct00045
여기서
#9는 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 주어진 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그의 염 및 용매화물뿐만 아니라 그 염의 용매화물에 관한 것이다:
n은 1 내지 50의 수이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1는 결합제의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합된 결합제 (바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체)를 나타내고,
AK2는 결합제의 질소 원자를 통해 그룹 G에 결합된 결합제 (바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체)를 나타내고,
AK =AK1일 때, G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00046
또는
Figure pct00047
여기서
#1은 결합제의 황 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
또는
AK =AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일, 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00048
또는
Figure pct00049
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
L1A는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
B1은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00050
또는
Figure pct00051
여기서
## 5은 그룹 L1A와의 연결 부위를 표시하고,
## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 표시하고,
L5은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L6는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00052
또는
Figure pct00053
여기서
## 7은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
## 8은 L1B와의 연결 부위를 표시하고,
R33은 수소 (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
R34는 수소 또는 메틸이고,
R29은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R30은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R29 및 R30는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R31은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R32은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R31 및 R32는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00054
Figure pct00055
또는
Figure pct00056
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
P는 O 또는 NH이고,
L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00057
또는
Figure pct00058
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25는 수소 또는 메틸이고,
R28은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
Q2은 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R14은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R15은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R14 및 R15는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R16은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R17은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R18은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R19는 수소 또는 천연 α-아미노산 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 측면 그룹이고,
R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R19 및 R20는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R22은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
R23은 (C1-C4)-알킬이고,
R24은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R27은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R36은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
R37는 수소 또는 메틸이고,
또는
R36 및 R37는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00059
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00060
또는
Figure pct00061
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1는 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00062
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00063
또는
Figure pct00064
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3는 수소 또는 메틸이고,
R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00065
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert -부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00066
Figure pct00067
또는
Figure pct00068
여기서
#9은 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n은 1 내지 20의 수이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고
여기서
AK1는 EGFR에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고,
AK2는 EGFR에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고,
AK =AK1일 때, G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00069
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
또는
AK =AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00070
또는
Figure pct00071
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
L1A는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
B1은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00072
또는
Figure pct00073
여기서
## 5은 그룹 L1A와의 연결 부위를 표시하고,
## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 표시하고,
L5는 결합이고,
L6는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00074
또는
Figure pct00075
여기서
## 7은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
## 8은 L1B와의 연결 부위를 표시하고,
R33은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R34는 수소 또는 메틸이고,
R29은 수소이고,
R30은 수소이고,
R31는 수소 또는 메틸이고,
R32는 수소 또는 메틸이고,
L1B는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
및
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00076
Figure pct00077
또는
Figure pct00078
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00079
또는
Figure pct00080
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25는 수소 또는 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R14은 수소이고,
R15은 수소이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R18은 수소이고,
R19은 수소이고, 메틸, 프로판-2-일, 2-메틸프로판-1-일 또는 1-메틸프로판-1-일이고,
R20는 수소 또는 메틸이고,
또는
R19 및 R20는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21는 수소 또는 메틸이고,
R22는 수소 또는 메틸이고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
R23은 메틸이고,
R24는 수소 또는 메틸이고,
R27은 수소이고,
R36은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R37는 수소 또는 메틸이고,
또는
R36 및 R37는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00081
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00082
또는
Figure pct00083
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00084
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00085
또는
Figure pct00086
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00087
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00088
Figure pct00089
또는
Figure pct00090
여기서
#9는 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 지시된 바와 같은 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n은 1 내지 20의 수이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1는 EGFR에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고,
AK2는 EGFR에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고,
AK =AK1일 때, G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00091
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
또는
AK =AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00092
또는
Figure pct00093
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
L1A는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
B1은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00094
또는
Figure pct00095
여기서
## 5은 그룹 L1A와의 연결 부위를 표시하고,
## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 표시하고,
L5는 결합이고,
L6는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00096
또는
Figure pct00097
여기서
## 7은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
## 8은 L1B와의 연결 부위를 표시하고,
R33은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R34는 수소 또는 메틸이고,
R29은 수소이고,
R30은 수소이고,
R31는 수소 또는 메틸이고,
R32는 수소 또는 메틸이고,
L1B는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00098
Figure pct00099
또는
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00101
또는
Figure pct00102
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25는 수소 또는 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R14은 수소이고,
R15은 수소이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R18은 수소이고,
R19은 수소이고, 메틸, 프로판-2-일, 2-메틸프로판-1-일 또는 1-메틸프로판-1-일이고,
R20는 수소 또는 메틸이고,
또는
R19 및 R20는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21는 수소 또는 메틸이고,
R22는 수소 또는 메틸이고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
R23은 메틸이고,
R24는 수소 또는 메틸이고,
R27은 수소이고,
R36은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐, 또는 벤질옥시카보닐이고,
R37는 수소 또는 메틸이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00103
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00104
또는
Figure pct00105
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00106
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00107
또는
Figure pct00108
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00109
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00110
Figure pct00111
또는
Figure pct00112
여기서
#9는 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n은 1 내지 10의 수이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1은 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
AK2는 결합제의 라이신 라디칼의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
AK =AK1일 때, G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00113
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
또는
AK =AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00114
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00115
Figure pct00116
또는
Figure pct00117
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00118
또는
Figure pct00119
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25은 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
Q1은 피페리딘-1,4-디일이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R21는 수소 또는 메틸이고,
R22는 수소 또는 메틸이고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
R23은 메틸이고,
R24은 수소이고,
R36은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R37는 수소 또는 메틸이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00120
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00121
또는
Figure pct00122
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00123
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00124
또는
Figure pct00125
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00126
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00127
또는
Figure pct00128
여기서
#9는 -CHCH2페닐과의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 바람직한 요지는, 상기에서 지시된 바와 같이, 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n은 1 내지 10의 수이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1은 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
AK2는 결합제의 라이신 라디칼의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
AK =AK1일 때, G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00129
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
또는
AK =AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00130
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00131
Figure pct00132
또는
Figure pct00133
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00134
또는
Figure pct00135
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25은 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
Q1은 피페리딘-1,4-디일이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R21는 수소 또는 메틸이고,
R22는 수소 또는 메틸이고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
R23은 메틸이고,
R24은 수소이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00136
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00137
또는
Figure pct00138
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00139
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00140
또는
Figure pct00141
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 1-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00142
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00143
또는
Figure pct00144
여기서
#9는 -CHCH2페닐과의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 지시된 바와 같은 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n은 1 내지 10의 수이고,
AK는 AK2 이고,
여기서
AK2는 결합제의 라이신 라디칼의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
G는 카보닐이고,
L1는 결합이고,
B는 결합이고,
L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00145
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00146
또는
Figure pct00147
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00148
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00149
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00150
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소이고,
R9는 수소 또는 벤질이고,
R35은 메틸이다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 지시된 바와 같은 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n은 1 내지 10의 수이고,
AK는 AK2,
여기서
AK2는 결합제의 라이신 라디칼의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
G는 카보닐이고,
L1는 결합이고,
B는 결합이고,
L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00151
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00152
또는
Figure pct00153
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00154
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00155
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00156
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소이고,
R9는 수소 또는 벤질이고,
R35은 메틸이다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 지시된 바와 같은 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n은 1 내지 10의 수이고,
AK는 AK1이고,
여기서
AK1은 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00157
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
L1은 결합, 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00158
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C3-C5)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00159
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00160
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25은 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C3-C5)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00161
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00162
또는
Figure pct00163
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00164
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00165
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00166
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소이고,
R9는 수소 또는 벤질이고,
R35은 메틸이다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 지시된 바와 같은 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n은 1 내지 10의 수이고,
AK는 AK1이고,
여기서
AK1은 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00167
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
L1은 결합, 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00168
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C3-C5)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00169
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00170
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25은 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C3-C5)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00171
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00172
또는
Figure pct00173
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00174
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00175
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00176
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소이고,
R9는 수소 또는 벤질이고,
R35은 메틸이다.
식 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명에 의해 부가적으로 제공된다.
Figure pct00177
여기서
Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자에 결합된 시스테인 잔기이고,
L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일, 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00178
또는
Figure pct00179
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
L1A는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
B1은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00180
또는
Figure pct00181
여기서
## 5은 그룹 L1A와의 연결 부위를 표시하고,
## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 표시하고,
L5은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L6는 결합이고,
R29은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R30은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R29 및 R30는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R31은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R32은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R31 및 R32는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00182
Figure pct00183
또는
Figure pct00184
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
P는 O 또는 NH이고,
L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L4는 결합이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
Q2은 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R14은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R15은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R14 및 R15는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R16은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R17은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R18은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R19는 수소 또는 천연 α-아미노산 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 측면 그룹이고,
R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R19 및 R20는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R22은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
R23은 (C1-C4)-알킬이고,
R24은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R27은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00185
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00186
또는
Figure pct00187
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1는 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00188
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00189
또는
Figure pct00190
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소 또는 메틸이고,
R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00191
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00192
Figure pct00193
또는
Figure pct00194
여기서
#9는 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 지시된 바와 같이 식 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자를 통해 결합된 시스테인 잔기이고,
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00195
또는
Figure pct00196
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
L1A는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
B1은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00197
또는
Figure pct00198
여기서
## 5은 그룹 L1A와의 연결 부위를 표시하고,
## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 표시하고,
L5는 결합이고,
L6는 결합이고,
R29은 수소이고,
R30은 수소이고,
R31는 수소 또는 메틸이고,
R32는 수소 또는 메틸이고,
L1B는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00199
또는
Figure pct00200
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합이고,
R14은 수소이고,
R15은 수소이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R23은 메틸이고,
R24는 수소 또는 메틸이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00201
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00202
또는
Figure pct00203
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00204
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00205
또는
Figure pct00206
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00207
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00208
또는
Figure pct00209
여기서
#9는 -CHCH2페닐과의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 지시된 바와 같이 식 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자를 통해 결합된 시스테인 잔기이고,
L1은 결합 또는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00210
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3는 결합이고,
L4는 결합이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00211
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00212
또는
Figure pct00213
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00214
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00215
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00216
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소이고,
R8은 수소이고,
R9은 수소이고,
R35은 메틸이다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 지시된 바와 같이 식 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자를 통해 결합된 시스테인 잔기이고,
L1은 결합 또는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00217
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3는 결합이고,
L4는 결합이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00218
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00219
또는
Figure pct00220
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00221
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00222
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00223
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소이고,
R8은 수소이고,
R9은 수소이고,
R35은 메틸이다.
본 발명은 식 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물을 추가적으로 제공한다.
Figure pct00224
여기서
L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일, 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00225
또는
Figure pct00226
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
L1A는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
B1은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00227
또는
Figure pct00228
여기서
## 5은 그룹 L1A와의 연결 부위를 표시하고,
## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 표시하고,
L5은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L6는 결합이고,
R29은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R30은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R29 및 R30는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R31은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R32은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R31 및 R32는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00229
Figure pct00230
또는
Figure pct00231
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
P는 O 또는 NH이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
Q2은 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R18은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R19는 수소 또는 천연 α-아미노산 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 측면 그룹이고,
R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R19 및 R20는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R22은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
R27은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00232
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00233
또는
Figure pct00234
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1는 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00235
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00236
또는
Figure pct00237
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소 또는 메틸이고,
R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00238
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00239
Figure pct00240
또는
Figure pct00241
여기서
#9는 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 지시된 바와 같이 식 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00242
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00243
Figure pct00244
또는
Figure pct00245
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R18은 수소이고,
R19은 메틸이고, 프로판-2-일, 2-메틸프로판-1-일 또는 1-메틸프로판-1-일이고,
R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R19 및 R20는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21는 수소 또는 메틸이고,
R22는 수소 또는 메틸이고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
R27는 수소 또는 메틸이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00246
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00247
또는
Figure pct00248
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00249
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00250
또는
Figure pct00251
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00252
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00253
또는
Figure pct00254
여기서
#9는 -CHCH2페닐과의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 지시된 바와 같은 식 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
L1는 결합이고,
B는 결합이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00255
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 식의 그룹이고,
Figure pct00256
또는
Figure pct00257
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00258
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00259
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00260
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소이고,
R8은 수소이고,
R9은 수소이고,
R35은 메틸이다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 지시된 바와 같이 식 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
L1는 결합이고,
B는 결합이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00261
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00262
또는
Figure pct00263
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00264
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00265
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00266
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소이고,
R8은 수소이고,
R9은 수소이고,
R35은 메틸이다.
본 발명의 바람직한 요지는 하기 그룹으로부터 선택된 식 (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다:
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드,
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드,
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트,
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드.
본 발명의 또 하나의 바람직한 요지는 추가적으로 일반식 (I)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화에 관한 것이다.
Figure pct00267
여기서
n은 1 내지 50의 수이고,
AK는 결합제, 바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
그룹 §-G-L1-B-L2-§§는 링커이고,
여기서
§은 그룹 AK와의 연결 부위를 표시하고,
§§은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00268
또는
Figure pct00269
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00270
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00271
또는
Figure pct00272
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00273
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00274
Figure pct00275
또는
Figure pct00276
여기서
#9는 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (I)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n은 1 내지 50의 수이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1는 질소 원자에 의해 그룹 G에 결합된 결합제, 바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
AK2는 결합제의 질소 원자에 의해 그룹 G에 결합된 결합제, 바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
AK =AK1일 때, G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00277
또는
Figure pct00278
여기서
#1은 결합제의 황 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
또는
AK =AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00279
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 1 내지 4개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00280
Figure pct00281
또는
Figure pct00282
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
P는 O 또는 NH이고,
L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00283
또는
Figure pct00284
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25는 수소 또는 메틸이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
Q2은 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R14은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R15은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R14 및 R15는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R16은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R17은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R18은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R19는 수소 또는 천연 α-아미노산 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 측면 그룹이고,
R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R19 및 R20는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R22은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
R23은 (C1-C4)-알킬이고,
R24은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R27은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00285
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 내지 4개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (I)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n은 1 내지 50의 수이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1은 항체 또는 항원 결합 항체 단편을 나타내고 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되고, 바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
AK2는 항체 또는 항원 결합 항체 단편을 나타내고 질소 원자를 통해 그룹 G에 결합되고, 바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
G, L1, B, L2 및D는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (I)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n은 1 내지 20의 수이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1는 EGFR에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고,
AK2는 EGFR에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고,
AK =AK1일 때, G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00286
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
또는
AK =AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00287
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00288
,
Figure pct00289
또는
Figure pct00290
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
P는 O 또는 NH이고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00291
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25은 메틸이고,
Q2는 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R18은 수소이고,
R19은 수소이고, 메틸, 프로판-2-일, 2-메틸프로판-1-일 또는 1-메틸프로판-1-일이고,
R20는 수소 또는 메틸이고,
또는
R19 및 R20는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고, 여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00292
또는
Figure pct00293
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00294
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00295
또는
Figure pct00296
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00297
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00298
Figure pct00299
또는
Figure pct00300
여기서
#9는 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이다.
특히 본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (I)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n은 1 내지 10의 수이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1은 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
AK2는 결합제의 라이신 라디칼의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
AK =AK1일 때, G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00301
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
또는
AK =AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00302
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00303
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00304
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25은 메틸이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00305
또는
Figure pct00306
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00307
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00308
또는
Figure pct00309
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00310
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00311
또는
Figure pct00312
여기서
#9는 -CHC(R26)페닐과의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이다.
본 발명은 추가적으로 식 (XXX)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물을 제공한다.
Figure pct00313
여기서
Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자에 결합된 시스테인 잔기이고.
L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00314
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 1 내지 4개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00315
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
P는 O 또는 NH이고,
L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00316
또는
Figure pct00317
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25는 수소 또는 메틸
Q1은 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 아자 헤테로사이클이고,
Q2은 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 아자 헤테로사이클이고,
R14은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R15은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R14 및 R15는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R16은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R17은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R18은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R19는 수소 또는 천연 α-아미노산 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 측면 그룹이고,
R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R19 및 R20는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R22은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
R23은 (C1-C4)-알킬이고,
R24은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00318
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 내지 4개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00319
또는
Figure pct00320
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00321
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00322
또는
Figure pct00323
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00324
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00325
Figure pct00326
또는
Figure pct00327
여기서
#9는 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이다.
본 발명의 문맥에서 식 (XXX)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 특히 바람직하다.
여기서
Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자를 통해 결합된 시스테인 잔기이고,
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00328
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00329
또는
Figure pct00330
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합이고,
R14은 수소이고,
R15은 수소이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R23은 메틸이고,
R24는 수소 또는 메틸이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00331
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00332
또는
Figure pct00333
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00334
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00335
또는
Figure pct00336
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00337
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00338
또는
Figure pct00339
여기서
#9는 -CHC(R26)페닐과의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
n = 1-20, 더 바람직하게는 n = 1-10 및 아주 바람직하게는 n = 2-8이다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
AK는 AK1 이고,
여기서
AK1는 EGFR에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고,
G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00340
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
n, L1, B, L2, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
AK는 AK2 이고,
여기서
AK2는 EGFR에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고,
G는 카보닐이고,
n, L1, B, L2, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물에 대해 주어진 것이 선호된다.
여기서
AK는 AK1 이고,
여기서
AK1은 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00341
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
n, L1, B, L2, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 가지며,
본 발명의 문맥에서 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물에 대해 주어진 것이 또한 선호된다.
여기서
AK는 AK2이고,
여기서
AK2는 결합제의 라이신 라디칼의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
G는 카보닐이고,
n, L1, B, L2, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 일반식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물에 대해 주어진 것이 또한 선호된다.
여기서
AK는 AK2 이고,
여기서
AK2는 결합제의 라이신 라디칼의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
G는 카보닐이고,
L1는 결합이고,
B는 결합이고,
L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00342
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
n, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 일반식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물에 대해 주어진 것이 또한 선호된다.
여기서
AK는 AK1 이고,
여기서
AK1은 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00343
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
L1은 결합, 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00344
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C3-C5)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00345
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00346
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25은 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C3-C5)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00347
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
n, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
L1는 결합이고,
B는 결합이고,
L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00348
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
n, AK, Cys, G, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
L1는 선형 (C1-C10)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00349
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록실 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00350
Figure pct00351
또는
Figure pct00352
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L4은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00353
또는
Figure pct00354
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25는 수소 또는 메틸이고,
R28은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R16은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R17은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R23은 (C1-C4)-알킬이고,
R24은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R36은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
R37는 수소 또는 메틸이고,
또는
R36 및 R37는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00355
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록실 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
n, AK, G, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
L1는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00356
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00357
또는
Figure pct00358
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00359
또는
Figure pct00360
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25는 수소 또는 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R36은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R37는 수소 또는 메틸이고,
또는
R36 및 R37는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00361
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
n, AK, G, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia) 및 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00362
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
L1는 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00363
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C3-C5)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00364
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합이고,
L2는 선형 (C3-C5)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00365
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
n, AK1, Cys, D, R16 및 R17는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia) 및 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00366
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합이고,
n, AK, Cys, G, L1, L2, D, R16, R17 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
L1은 결합, 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00367
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C3-C5)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00368
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3는 결합이고,
L4는 결합이고,
R16은 수소이고,
R17은 수소이고,
L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00369
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
n, AK, Cys, G, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
L1는 결합이고,
B는 결합이고,
L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00370
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
n, AK, Cys, G, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
L1는 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00371
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C3-C5)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00372
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3는 결합이고,
L4는 결합이고,
R16은 수소이고,
R17은 수소이고,
L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00373
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
n, AK, Cys, G, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
n는 수 2 내지 8이고, 바람직하게는 2 내지 5이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1는 EGFR에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고,
AK2는 EGFR에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고,
AK =AK1일 때, G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00374
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
또는
AK =AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00375
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C3-C5)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00376
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3는 결합이고,
L4는 결합이고,
R16은 수소이고,
R17은 수소이고,
L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00377
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
n는 수 2 내지 8이고, 바람직하게는 2 내지 5이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1는 EGFR에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고,
AK2는 EGFR에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고,
AK =AK1일 때, G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00378
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
또는
AK =AK2일 때, 카보닐이고,
L1는 결합이고,
B는 결합이고,
L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00379
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
n는 수 2 내지 8이고, 바람직하게는 2 내지 5이고,
AK는 AK1이고,
여기서
AK1는 EGFR에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고,
G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00380
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
L1는 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00381
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C3-C5)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00382
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3는 결합이고,
L4는 결합이고,
R16은 수소이고,
R17은 수소이고,
L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00383
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
L1은 결합, 선형 (C3-C5)-알칸디일, 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00384
또는
Figure pct00385
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
L1A는 선형 (C3-C6)-알칸디일이고,
B1은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00386
또는
Figure pct00387
여기서
##5은 그룹 L1A와의 연결 부위를 표시하고,
##6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 표시하고,
L5은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L6는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00388
또는
Figure pct00389
여기서
##7은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
##8은 L1B와의 연결 부위를 표시하고,
R33은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R34는 수소 또는 메틸이고,
R29는 수소 또는 메틸이고,
R30는 수소 또는 메틸이고,
R31는 수소 또는 메틸이고,
R32는 수소 또는 메틸이고,
L1B는 선형 (C3-C6)-알칸디일이고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00390
또는
Figure pct00391
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
P는 O이고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00392
또는
Figure pct00393
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25는 수소 또는 메틸이고,
R28은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
Q2은 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
R23은 (C1-C4)-알킬이고,
R24은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R36은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R37는 수소 또는 메틸이고,
또는
R36 및 R37는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00394
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시한다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
L1는 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00395
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
B는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00396
또는
Figure pct00397
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00398
또는
Figure pct00399
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25은 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
Q1은 피페리딘-1,4-디일이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
R23은 메틸이고,
R24은 수소이고,
R36은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R37는 수소 또는 메틸이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00400
여기서
p는 수 2 또는 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시한다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00401
또는
Figure pct00402
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1는 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00403
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00404
또는
Figure pct00405
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소 또는 메틸이고,
R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00406
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#8은 그룹 T1와의 연결 부위를 표시하고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페놀 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00407
Figure pct00408
또는
Figure pct00409
여기서
#9는 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 표시하고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00410
또는
Figure pct00411
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 헤테로사이클이고,
Figure pct00412
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소이고,
R8은 수소이고,
R9은 수소이고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00413
또는
Figure pct00414
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 헤테로사이클이고,
Figure pct00415
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
T1은 식 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R8은 수소이고,
R9은 수소이고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00416
또는
Figure pct00417
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 헤테로사이클이고,
Figure pct00418
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
T1은 식 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R8은 수소이고,
R9은 수소이고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00419
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소이고,
R8은 수소이고,
R9은 수소이고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00420
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
T1은 식 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R8은 수소이고,
R9은 수소이고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00421
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1는 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00422
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00423
또는
Figure pct00424
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00425
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00426
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00427
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
R35는 하이드록실이고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
R35은 메틸이고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2, D 및 R35는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 특히 바람직하다.
여기서
Cys는 L-측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자를 통해 결합된 시스테인 잔기이다.
본 발명의 문맥에서 식 (I) 및 (XXX)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00428
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00429
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의 치환된 헤테로사이클이고
Figure pct00430
또는
Figure pct00431
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
n, AK, Cys, G, L1, L2 및 B는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (I) 및 (XXX)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 특히 바람직하다.
여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00432
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00433
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 헤테로사이클이고,
Figure pct00434
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
n, AK, Cys, G, L1, L2 및 B는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 추가 특히 바람직한 요지는 식 (I)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이고,
여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00435
여기서
T1은 -C(=O)-OH 또는 -C(=O)-NH2이고,
n, AK, G, L1, B, L2, ###3, R3 및 R4는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (I)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 바람직하다.
여기서
n = 1-20, 더 바람직하게는 n = 1-10 및 아주 바람직하게는 n = 2-8이다.
본 발명의 문맥에서 식 (I) 및 (XXX)의 화합물이 또한 바람직하고, 여기서
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00436
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합이고,
n, AK, Cys, G, L1, L2, D, R16 및 R17는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 문맥에서 식 (I) 및 (XXX)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 특히 바람직하다.
여기서
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00437
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3 및 L4는 결합이고,
n, AK, Cys, G, L1, L2, D, R16 및 R17는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 바람직한 문맥에서 또한 일반식 (I)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
AK는 AK1이고,
여기서
AK1는 결합제의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합된 결합제, 바람직하게는 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게는 항-EGFR 항체를 나타내고,
G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00438
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00439
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 1 내지 4개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00440
또는
Figure pct00441
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00442
또는
Figure pct00443
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25는 수소 또는 메틸이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R14은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R15은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R14 및 R15는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R16은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R17은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00444
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 내지 4개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있다.
본 발명의 바람직한 문맥에서 또한 일반식 (I)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
AK는 AK2 이고,
여기서
AK2은 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
G는 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00445
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 1 내지 4개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00446
또는
Figure pct00447
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
P는 O 또는 NH이고,
Q2은 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R18은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R19는 수소 또는 천연 α-아미노산 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 측면 그룹이고,
R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R19 및 R20는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R22은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
R23은 (C1-C4)-알킬이고,
R24은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00448
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 내지 4개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 표시된 일반 식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염 및 용매화물뿐만 아니라 그 염의 용매화물이고,
n은 1 내지 20의 수를 나타내고,
AK는 AK1 또는 AK2를 나타내고,
여기서
AK1는 결합제의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합된 결합제, 바람직하게는 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게는 항-EGFR 항체를 나타내고,
AK2는 결합제의 질소 원자를 통해 그룹 G에 결합된 결합제, 바람직하게는 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게는 항-EGFR 항체를 나타내고,
AK =AK1인 경우, G는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00449
여기서
#1는 결합제의 시스테인 라디칼에 대한 연결을 나타내고,
#2는 그룹 L1에 대한 연결을 나타내고,
또는
AK =AK2인 경우, G는 카보닐을 나타내고,
L1는 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00450
또는
Figure pct00451
여기서
m은 2 내지 6의 수를 나타내고,
##1는 그룹 G에 대한 연결을 나타내고,
##2는 그룹 B에 대한 연결을 나타내고,
L1A는 선형 (C2-C6)-알칸디일을 나타내고,
B1은 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00452
또는
Figure pct00453
여기서
##5는 그룹 L1A에 대한 연결을 나타내고,
##6는 그룹 L1B에 대한 연결을 나타내고,
L5는 결합을 나타내고,
L6은 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00454
또는
Figure pct00455
여기서
##7는 카보닐 그룹에 대한 연결을 나타내고,
##8는 L1B에 대한 연결을 나타내고,
R33은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐을 나타내고,
R34은 수소 또는 메틸을 나타내고,
R29은 수소를 나타내고,
R30은 수소를 나타내고,
R31은 수소 또는 메틸을 나타내고,
R32은 수소 또는 메틸을 나타내고,
L1B는 선형 (C2-C6)-알칸디일을 나타내고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00456
또는
Figure pct00457
여기서
*는 L1에 대한 연결을 나타내고,
**는 L2에 대한 연결을 나타내고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일을 나타내고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00458
또는
Figure pct00459
여기서
***는 카보닐 그룹에 대한 연결을 나타내고,
****는 L2에 대한 연결을 나타내고,
R25은 수소 또는 메틸을 나타내고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐을 나타내고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 나타내고,
R14은 수소를 나타내고,
R15은 수소를 나타내고,
R16은 수소 또는 메틸을 나타내고,
R17은 수소 또는 메틸을 나타내고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R18은 수소를 나타내고,
R19은 수소, 메틸, 프로판-2-일, 2-메틸프로판-1-일 또는 1-메틸-프로판-1-일을 나타내고,
R20은 수소 또는 메틸을 나타내고,
또는
R19 및 R20는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 메틸을 나타내고,
R22은 수소 또는 메틸을 나타내고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
R23은 메틸을 나타내고,
R24은 수소 또는 메틸을 나타내고,
R27은 수소를 나타내고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00460
여기서
p는 2 내지 6의 수를 나타내고,
##3는 그룹 B에 대한 연결을 나타내고,
##4는 수소 원자에 대한 연결을 나타내고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
D은 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00461
또는
Figure pct00462
여기서
#3는 수소 원자에 대한 연결을 나타내고,
R1은 수소를 나타내고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌--3-일-메틸을 나타내고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2- 페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00463
여기서
#4는 인접 질소 원자에 대한 연결을 나타내고,
#5는 카보닐 그룹에 대한 연결을 나타내고,
N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
Figure pct00464
또는
Figure pct00465
여기서
#6는 카보닐 그룹에 대한 연결을 나타내고,
R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
R3은 수소를 나타내고,
R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌--3-일메틸을 나타내고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00466
여기서
#7는 인접 질소 원자에 대한 연결을 나타내고,
#8는 그룹 T1에 대한 연결을 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
또는
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10은 벤조일을 나타내고,
R11은 페닐에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00467
Figure pct00468
Figure pct00469
또는
여기서
#9는 -CHC(R26)-T2에 대한 연결을 나타내고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
R13는 메톡시카보닐 또는 카복실의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
R26은 수소 또는 하이드록실을 나타내고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
R35는 메틸 또는 하이드록실을 나타낸다.
본 발명의 바람직한 요지는 상기에서 표시된 일반 식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염 및 용매화물뿐만 아니라 그 염의 용매화물이고,
여기서
n은 1 내지 10의 수를 나타내고,
AK는 AK1 또는 AK2를 나타내고,
여기서
AK1는 결합제의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합된 결합제를 나타내고,
AK2는 결합제의 질소 원자를 통해 그룹 G에 결합된 결합제를 나타내고,
AK =AK1일 때, G는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00470
여기서
#1는 결합제의 시스테인 라디칼에 대한 연결을 나타내고,
#2는 그룹 L1에 대한 연결을 나타내고,
또는
AK =AK2일 때, G는 카보닐을 나타내고,
L1는 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00471
여기서
m은 2 또는 3의 수를 나타내고,
##1는 그룹 G에 대한 연결을 나타내고,
##2는 그룹 B에 대한 연결을 나타내고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00472
Figure pct00473
또는
Figure pct00474
여기서
*는 L1에 대한 연결을 나타내고,
**는 L2에 대한 연결을 나타내고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일을 나타내고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00475
또는
Figure pct00476
여기서
***는 카보닐 그룹에 대한 연결을 나타내고,
****는 L2에 대한 연결을 나타내고,
R25은 메틸을 나타내고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐을 나타내고,
Q1는 피페리딘-1,4-디일을 나타내고,
R16은 수소 또는 메틸을 나타내고,
R17은 수소 또는 메틸을 나타내고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 메틸을 나타내고,
R22은 수소 또는 메틸을 나타내고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
R23은 메틸을 나타내고,
R24은 수소를 나타내고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00477
여기서
p는 2 내지 6의 수를 나타내고,
##3는 그룹 B에 대한 연결을 나타내고,
##4는 수소 원자에 대한 연결을 나타내고,
D은 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00478
또는
Figure pct00479
여기서
#3는 수소 원자에 대한 연결을 나타내고,
R1은 수소를 나타내고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-하이드록시벤질, 1-페닐에틸, 또는 1H-인돌--3-일메틸을 나타내고,
또는
R1 및 R2는, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2- 페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00480
여기서
#4는 인접 질소 원자에 대한 연결을 나타내고,
#5는 카보닐 그룹에 대한 연결을 나타내고,
N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
Figure pct00481
또는
Figure pct00482
여기서
#6는 카보닐 그룹에 대한 연결을 나타내고,
R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
R3은 수소를 나타내고,
R4는 벤질, 1-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
또는
R3 및 R4는, 이들이 부착된 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2- 페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00483
여기서
#7는 인접 질소 원자에 대한 연결을 나타내고,
#8는 그룹 T1에 대한 연결을 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
R11은 페닐에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00484
또는
Figure pct00485
여기서
#9는 -CHCH2-페닐에 대한 연결을 나타내고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
R13는 메톡시카보닐 또는 카복실의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
R35는 메틸 또는 하이드록실을 나타낸다.
일반 식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 범위 내에서 특히 바람직하다.
여기서
n는 수 1 내지 8이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1은 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G를 통해 결합된 결합제를 나타내고, 바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
AK2는 결합제의 라이신 라디칼의 질소 원자를 통해 그룹 G에 결합된 결합제를 나타내고, 바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
AK =AK1일 때, G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00486
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
또는
AK =AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00487
여기서
m은 수 2 또는 3이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00488
Figure pct00489
또는
Figure pct00490
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00491
또는
Figure pct00492
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25은 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
Q1은 피페리딘-1,4-디일이고,
R16는 수소 또는 메틸이고,
R17는 수소 또는 메틸이고,
또는
R16 및 R17는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R21는 수소 또는 메틸이고,
R22는 수소 또는 메틸이고,
또는
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
R23은 메틸이고,
R24은 수소이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00493
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00494
또는
Figure pct00495
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기이고:
Figure pct00496
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
T1은 식 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9은 수소이고, 메틸, 또는 에틸,
R35은 메틸이다.
본 발명의 문맥에서 식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 특히 바람직하다.
여기서
n는 수 2 내지 8이고, 바람직하게는 2 내지 5이고,
AK는 AK1 이고,
여기서
AK1은 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G를 통해 결합된 결합제를 나타내고, 바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00497
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
L1은 펜탄-1,5-디일이고,
B는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00498
여기서
*은 L1와의 연결 부위를 표시하고,
**은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
L3는 결합이고,
L4는 결합이고,
R16은 수소이고,
R17은 수소이고,
L2은 프로판-1,3-디일이고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00499
또는
Figure pct00500
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기이고:
Figure pct00501
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
T1은 식 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
R8은 수소이고,
R9은 수소이고,
R35은 메틸이다.
본 발명의 범위 내의 특히 바람직한 것은 식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물뿐만 아니라 그것의 염 및 용매화물뿐만 아니
여기서
n는 수 2 내지 8이고, 바람직하게는 2 내지 5이고,
AK는 AK1이고,
여기서
AK1은 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G를 통해 결합된 결합제를 나타내고, 바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
G는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00502
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 표시하고,
#2은 그룹 L1와의 연결 부위를 표시하고,
L1는 결합이고,
B는 결합이고,
L2는 헥산-1,6-디일이다.
D는 상기 표시된 정의를 갖는다.
본 발명의 범위 내의 특히 바람직한 것은 식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물뿐만 아니라 그것의 염 및 용매화물뿐만 아니
여기서
n는 수 2 내지 8이고, 바람직하게는 2 내지 5이고,
AK는 AK2 이고,
여기서
AK2는 결합제의 질소 원자를 통해 그룹 G에 결합된 결합제를 나타내고, 바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
G는 카보닐이고,
L1는 결합이고,
B는 결합이고,
L2은 펜탄-1,5-디일이고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00503
또는
Figure pct00504
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
여기에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기이고:
Figure pct00505
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
T1은 식 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
R8은 수소이고,
R9은 수소이고,
R35은 메틸이다.
본 발명의 특히 바람직한 범위는 식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다.
여기서
n는 수 2 내지 8이고, 바람직하게는 2 내지 5이고,
AK는 AK2 이고,
여기서
AK2는 결합제의 라이신 라디칼의 질소 원자를 통해 그룹 G에 결합된 결합제를 나타내고, 바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
G는 카보닐이고,
L1는 결합이고,
B는 결합이고,
L2은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00506
여기서
p는 수 3이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 표시하고,
D는 상기 표시된 의미를 갖는다.
본 발명에 따라, 약물-결합제 콘주게이트는 바람직하게는 하기 화합물을 포함하고, 여기서 n은 2 내지 8, 바람직하게는 2 내지 5를 나타내고, AK는 키메라, 인간 또는 인간화 항체 또는 항원 결합 항체 단편을 나타내며, 이들은 메소텔린, C4.4a 또는 EGFR에 결합한다.
Figure pct00507
Figure pct00508
또한, 본 발명에 따라, 약물-결합제 콘주게이트는 하기 화합물로부터 선택되는 것이 특히 바람직하다:
Figure pct00509
Figure pct00510
여기서
n은 2 내지 8, 바람직하게 2 내지 5를 나타내고,
AK1A, AK1B, AK2A, AK3 및 AK4은 표시된 항체를 나타낸다.
AK
하기 식 Ia의 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염 및 용매화물뿐만 아니라 상기 염의 용매화물:
Figure pct00511
여기서
n은 수 2 내지 8을 나타내고;
AK는 AK1 또는 AK2를 나타내고,
여기서
AK1는 메소텔린, EGFR 또는 C4.4a에 결합되고 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 키메라, 인간 또는 인간화 항체 또는 항원 결합 항체 단편을 나타내고,
AK2는 메소텔린, EGFR 또는 C4.4a에 결합되고 결합제의 라이신 라디칼의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 키메라, 인간 또는 인간화 항체 또는 항원 결합 항체 단편을 나타내고,
R35는 메틸을 나타내고;
D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00512
또는
Figure pct00513
여기서
#3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
R1는 수소를 나타내고,
R2는 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기를 나타낸다:
Figure pct00514
여기서
#6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
R3는 수소를 나타내고,
R4는 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
T1은의 그룹을 나타내고, 식 -C(=O)-NR8R9,
R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
R9는 수소를 나타내고, 메틸 또는 에틸,
그룹 §-G-L1-B-L2-§§는 링커를 나타내고,
여기서
§는 그룹 AK에 대한 연결 부위를 나타내고
§§는 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
AK = AK1 인 경우, G는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00515
여기서
#1은 결합제의 시스테인 라디칼에 대한 연결 부위를 나타내고,
#2은 그룹 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
또는
AK = AK2인 경우, G는 카보닐을 나타내고,
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00516
여기서
m은 2 또는 3의 수를 나타내고,
##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00517
Figure pct00518
또는
Figure pct00519
여기서
*은 L1 에 대한 연결 부위를 나타내고,
**은 L2 에 대한 연결 부위를 나타내고,
L3는 결합 또는 에탄-1,2-디일을 나타내고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
Figure pct00520
또는
Figure pct00521
여기서
***는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
****은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
R25은 메틸을 나타내고,
R28는 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐을 나타내고,
Q1은 피페리딘-1,4-디일을 나타내고,
R16은 수소 또는 메틸을 나타내고,
R17은 수소 또는 메틸을 나타내고,
또는
R16 및 R17 은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 메틸을 나타내고,
R22은 수소 또는 메틸을 나타내고,
또는
R21 및 R22은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 나타내고,
R23은 메틸을 나타내고,
R24는 수소를 나타내고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
Figure pct00522
여기서
p는 2 내지 6의 수를 나타내고,
##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타낸다.
하기 식의 콘주케이트가 특히 바람직하다:
Figure pct00523
여기서
n은 2 내지 8, 바람직하게 2 내지 5를 나타내고;
AK는 메소텔린, EGFR 또는 C4.4a에 결합되고 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 인간 또는 인간화 항체 또는 항원 결합 항체 단편을 나타내고,
X1은 NH2 또는
Figure pct00524
을 나타내고,
X2는 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타낸다.
독성기가 항체의 시스테인 라디칼에 결합될 때,
링커
Figure pct00525
는 예를 들면
링커
Figure pct00526
에 의해 치환될 수 있다.
독성기가 항체의 라이신 라디칼의 NH 그룹에 결합될 때, 링커는 하기에 의해 치환될 수 있다:
Figure pct00527
본 발명에 따라 약물-결합제 콘주게이트는 특히 하기 화합물로 구성되고, 여기서 n은 2 내지 8, 바람직하게 2 내지 5를 나타내고, AK는 메소텔린, EGFR 또는 C4.4a에 결합하는 키메라, 인간 또는 인간화 항체 또는 항원 결합 항체 단편을 나타낸다:
Figure pct00528
Figure pct00529
이들 식에서, AK1F, AK1B 및 AK2B는 다른 키메라, 인간 또는 인간화 항-C4.4a 항체, 항-EGFR 항체 또는 항-메소텔린 항체에 의해 치환될 수 있다.
라디칼의 각각 조합 및 바람직한 조합에서 별도로 표시된 라디칼의 정의는 다른 조합, 독립적으로 표시된 라디칼의 각각 조합의 라디칼 정의에 의해 임의로 또한 대체된다.
상기 언급된 선호 범위의 2개 이상의 조합이 특히 바람직하다.
본 발명의 식 (Ia)의 화합물의 제조하는 방법이 본 발명에 의해 추가로 제공되고, PBS 완충액 중 결합제의 용액은 하기를 특징으로 한다:
[A] 적당한 환원제, 예를 들면, 디티오트레이톨 또는 트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드와 혼합되고, 차후에 식 (IIa)의 화합물:
Figure pct00530
(여기서 D, L1, B, L2 및 R35 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
과 반응되어 식 (I-A)의 화합물을 얻는다:
Figure pct00531
(여기서 n, AK2, D, L1, B, L2 및 R35 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다),
또는
[B] 식 (IIIa)의 화합물:
Figure pct00532
(여기서 D, L1, B, L2 및 R35 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
과 반응되어 식 (Ia-B)의 화합물을 얻는다:
Figure pct00533
(여기서 n, AK2, D, L1, B, L2 및 R35 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다).
본 발명의 식 (I)의 화합물을 제조하는 방법이 본 발명에 의해 추가로 제공되고, PBS 완충액 중 결합제이 용액은 하기인 것이 특징이다:
[A] 적당한 환원제, 예를 들면, 디티오트레이톨 또는 트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드와 혼합되고, 식 (II)의 화합물:
Figure pct00534
(여기서 D, L1, B 및 L2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
과 반응되어 식 (I-A)의 화합물을 얻는다:
Figure pct00535
(여기서 n, AK1, D, L1, B 및 L2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
또는
[B] 식 (III)의 화합물
Figure pct00536
(여기서 D, L1, B 및 L2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
과 반응되어 식 (I-B)의 화합물을 얻는다:
Figure pct00537
(여기서 n, AK2, D, L1, B 및 L2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다).
시스테인 커플링:
항체의 부분 감소 및 또한 (부분적으로) 감소된 항체와 식 (II) 또는 (IIa)의 화합물와의 차후의 콘주게이션은 숙련가에게 공지된 방법에 따라 일어난다, 참고 예를 들면 Ducry et. al., Bioconj. Chem. 2010, 21, 5 및 본원의 참조, Klussman et. al., Bioconj. Chem. 2004, 15(4), 765-773. 항체의 완만한 감소는 적당한 완충액, 바람직하게는 포스페이트 완충액에 존재하는 2-6 당량의 TCEP의 항체에의 부가에 의해 및 30-180 분 동안 15 내지 40 ℃의 온도에서, 바람직하게는 실온에서 교반하여 바람직하게 달성된다. 그 다음 DMSO, 아세토니트릴 또는 DMF 중 식 (II) 또는 (IIa)의 화합물의 용액 또는 PBS 완충액 (부분적으로) 감소된 항체의 용액의 부가에 의해 콘주게이션이 뒤따르고, 차후에 0 ℃ 내지 +40 ℃, 더욱 특히 +10 ℃ 내지 +30 ℃의 온도, 30 분 내지 6 시간, 더욱 특히 1 내지 2 시간의 기간 동안 반응이 일어난다.
라이신 커플링:
무엇보다도 식 (III) 또는 (IIa)의 화합물 또는 필적하는 활성화된 카복실 성분은 펩타이드 화학의 종래의 방법에 의해 준비된다. 그 다음 T 불활성 용매 예컨대 DMSO 또는 DMF에서 취해지고 중성 pH에서 포스페이트 완충액에서 바람직하게 존재하는 항체에 부가된다. 용액은 1-16 시간 동안 15 내지 40 ℃의 온도, 바람직하게는 RT에서 교반된다.
상기 기재된 제조 공정은 하기 도식 (도식 1 및 2)를 사용하여 예로써 설명된다:
도식 1
Figure pct00538
[a): 1.AK (항체), TCEP, PBS 완충액, 실온; 2. DMSO 중 말레이마이드 유도체의 부가, 실온].
도식 2
Figure pct00539
[a):AK (항체), PBS 완충액, 링커-약물 성분의 활성화된 카복실 유도체와 실온에서 혼합].
L1 및 B가 결합인 식 (II)의 화합물은 하기에 의해 제조될 수 있다:
식 (IV)의 화합물:
Figure pct00540
(여기서D는 상기 표시된 정의를 갖는다)
에 대해 식 (V)의 화합물:
Figure pct00541
(여기서
L2A는 L2의 상기 한정된 정의를 갖지만, 알킬 사슬 길이에서 하나의 탄소 원자에 의해 단축되고,
PG1은 아미노-보호 그룹 예를 들면, (9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐, tert-부톡시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이다)
에 의한, 불활성 용매에서 환원 아미노화가 수행되어 식 (VI)의 화합물:
Figure pct00542
(여기서 D, L2 및 PG1는 상기 표시된 정의를 갖는다)
을 얻는 단계,
보호 그룹 PG1을 숙련가에게 공지된 방법으로 상기 화합물로부터 제거하는 단계, 및 적당한 염기의 존재에서 불활성 용매에서 상기 탈보호된 화합물을 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트와 반응시켜서 식 (II-A)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00543
(여기서 D 및 L2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다).
B가 하기 식 (B1):
Figure pct00544
(여기서 *, **, R14 및 R15 각각은 상기 표시된 조건을 갖는다)
의 그룹인 식 (II)의 화합물은 하기에 의해 제조될 수 있다:
보호 그룹 PG1을 숙련가에게 공지된 방법에 의해 식 (VI)의 화합물로부터 제거하는 단계, 및
적당한 염기의 존재에서 불활성 용매에서 상기 탈보호된 화합물을 식 (VII)의 화합물:
Figure pct00545
(여기서 L1은 상기 표시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (II-B)의 화합물:
Figure pct00546
(여기서 D, L1 및 L2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
을 얻는 단계.
B가 하기 식 (B2):
Figure pct00547
(여기서 *, **, L3, R16 및 R17 각각은 상기 표시된 조건을 갖는다)
의 그룹인 식 (II)의 화합물은 하기에 의해 제조될 수 있다:
식 (IV)의 화합물에 대해 식 (VIII)의 화합물:
Figure pct00548
(여기서 L2A는 L2의 상기 한정된 정의를 가지지만, 알킬 사슬 길이에서 하나의 탄소 원자에 의해 단축된다)
에 의한 불활성 용매에서의 환원 아미노화가 수행되어
식 (IX)의 화합물:
Figure pct00549
(여기서 D 및 L2는 상기 표시된 정의를 갖는다)
을 얻는 단계 및 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 불활성 용매에서 상기 화합물을 식 (X)의 화합물:
Figure pct00550
(여기서 L1 및 L3 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (II-C)의 화합물:
Figure pct00551
(여기서 D, L1, L2 및 L3 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
을 얻는 단계.
B가 식 (B3):
Figure pct00552
(여기서 *, **, L3, R16 및 R17 각각은 조건 표시된 상기 표시된 조건을 가지며 L4A은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00553
또는
Figure pct00554
여기서
***은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 표시하고,
****은 L2와의 연결 부위를 표시하고,
R25는 수소 또는 메틸이다)
의 그룹인 식 (II)의 화합물은 하기에 의해 제조될 수 있다:
불활성 용매에서 적당한 염기 및 적당한 커플링 시약의 존재에서 식 (IX)의 화합물을 식 (XI-A) 또는 (XI-B)의 화합물:
Figure pct00555
또는
Figure pct00556
(여기서 R25 및 PG1 각각은 상기 표시된 정의를 갖고, PG2는 적당한 카복실-보호 그룹, 더욱 특히 벤질이다)
과 반응시켜 화합물 (XII-A) 또는 (XII-B)을 얻는 단계:
Figure pct00557
또는
Figure pct00558
(여기서 D, PG1, PG2 및 L2는 상기 표시된 정의를 갖는다),
보호 그룹 PG2을 숙련가에게 공지된 방법으로 차후에 상기 화합물로부터 제거하는 단계, 및 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 상기 탈보호된 화합물을 식 (X)의 화합물과 반응시키는 단계, 및 마지막으로, 보호 그룹 PG1을 숙련가에게 공지된 방법으로 상기 화합물을 제거하여 식 (II-D-A) 또는 (II-D-B)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00559
또는
Figure pct00560
(여기서 D, L1, L2 및 L3는 상기 표시된 정의를 갖는다).
B가 하기 식 (B4):
Figure pct00561
(여기서 *, ** 각각은 상기 표시된 조건을 가지며 Q1A은 N-연결된 4- 내지 7-원 헤테로사이클이다)
인 식 (II)의 화합물은 하기로 제조될 수 있다:
불활성 용매에서 적당한 염기 및 적당한 커플링 시약의 존재에서 식 (IX)의 화합물을 식 (XXI)의 화합물:
Figure pct00562
(여기서 PG1 및 Q1A 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (XXII)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00563
(여기서 PG1, Q1A, D 및 L2는 상기 표시된 정의를 갖는다)
보호 그룹 PG1을 숙련가에게 공지된 방법으로 상기 화합물을 제거하는 단계, 및 차후에 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 상기 탈보호된 화합물을 식 (XXIII)의 화합물:
Figure pct00564
(여기서 L1는 상기 표시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (II-D)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00565
(여기서 Q1A, D, L1 및 L2는 상기 표시된 정의를 갖는다).
L1 및 B가 결합인 식 (III)의 화합물은 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 식 (IX)의 화합물을 N-하이드록시석신이마이드와 반응시켜 식 (III-A)의 화합물:
Figure pct00566
(여기서 D 및 L2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
을 얻어서 제조될 수 있다.
L1은 결합이고 B는 하기 식 (B5A):
Figure pct00567
(여기서 *, ** 및 P 각각은 상기 표시된 정의를 가지며 Q2A은 3- 내지 7-원 카보사이클이다)
인 식 (III)의 화합물은 하기로 제조될 수 있다:
불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 식 (IX)의 화합물을 식 (XIII)의 화합물:
Figure pct00568
(여기서 P, Q2A 및 PG2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (XIV)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00569
(여기서 D, P, Q2A, L2 및 PG2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
보호 그룹 PG2를 숙련가에게 공지된 방법으로 상기 화합물로부터 제거하는 단계, 및 차후에 불활성 용매에서 적당한 염기의 존재에서 상기 탈보호된 화합물을 N-하이드록시석신이마이드와 반응시켜 식 (III-B)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00570
(여기서 D, P, Q2A 및 L2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다).
L1은 결합이고 B는 하기 식 (B6):
Figure pct00571
(여기서 *, **, R18, R19 및 R20 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
의 그룹인 식 (III)의 화합물은 하기로 제조될 수 있다:
불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 식 (IX)의 화합물을 식 (XV)의 화합물:
Figure pct00572
(여기서 R18, R19, R20 및 PG2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (XVI)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00573
(여기서 D, R18, R19, R20, L2 및 PG2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
보호 그룹 PG2를 숙련가에게 공지된 방법으로 상기 화합물로부터 제거하는 단계, 및 차후에 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 상기 탈보호된 화합물을 N-하이드록시석신이마이드와 반응시켜 식 (III-C)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00574
(여기서 D, R18, R19, R20 및 L2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다).
L1은 결합이고 B는 하기 식 (B7):
Figure pct00575
(여기서 *, **, R21 및 R22 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
의 그룹인 식 (III)의 화합물은 하기로 제조될 수 있다:
보호 그룹 PG1를 숙련가에게 공지된 방법으로 식 (VI)의 화합물로부터 제거하는 단계, 및 불활성 용매에서 적당한 염기의 존재에서 그에 따른 탈보호된 화합물을 식 (XVII)의 화합물:
Figure pct00576
(여기서 R21 및 R22 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (III-D)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00577
(여기서 D, R21, R22 및 L2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다).
B는 하기 식 (B8):
Figure pct00578
(여기서 *, **, R23 및 R24 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
의 그룹인 식 (III)의 화합물은 하기로 제조될 수 있다:
불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 식 (IX)의 화합물을 식 (XVIII)의 화합물:
Figure pct00579
(여기서 R23, R24 및 PG1 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (XIX)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00580
(여기서 D, R23, R24, L2 및 PG1 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다)
보호 그룹 PG1를 숙련가에게 공지된 방법으로 상기 화합물로부터 제거하는 단계, 및 차후에 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 상기 탈보호된 화합물을 식 (XX)의 화합물:
Figure pct00581
(여기서
L1A는 선형 (C1-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00582
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 표시하고,
##2은 그룹 B와의 연결 부위를 표시하고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 1 내지 4개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 관련된 1,2, 1,3 또는 1,4 중 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자의 포함과 함께, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있다)
과 반응시켜 식 (III-E)의 화합물을 얻는 단계)
Figure pct00583
(여기서 D, R23, R24, L1A 및 L2 각각은 상기 표시된 정의를 갖는다).
B는 하기 식 (B5B):
Figure pct00584
(여기서 * 및 ** 각각은 상기 표시된 정의를 가지며
Q2B는 N-연결된 4- 내지 7-원 헤테로사이클이다)
의 그룹인 식 (III)의 화합물은 하기로 제조될 수 있다:
불활성 용매에서 적당한 염기 및 적당한 커플링 시약의 존재에서 식 (IX)의 화합물을 식 (XXIV)의 화합물:
Figure pct00585
여기서 PG1 및 Q2B 각각은 상기 표시된 정의를 가지며,
과 반응시켜 식 (XXV)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00586
(여기서 PG1, Q2B, D 및 L2는 상기 표시된 정의를 갖는다)
보호 그룹 PG1을 숙련가에게 공지된 방법으로 상기 화합물로부터 제거하는 단계, 및
차후에 상기 탈보호된 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 염기의 존재에서 식 (XX)의 화합물과 함께 식 (III-F)의 화합물로 전환시키는 단계:
Figure pct00587
(여기서 Q2B, D, L1A 및 L2는 상기 표시된 정의를 갖는다).
반응 (IV) + (V) → (VI) 및 (IV) + (VIII) → (IX)는, 환원 아미노화에 대해 관례적이고, 촉매로서 임의로 산 및/또는 물-제거제의 존재에서 반응 조건 하에서 불활성인 용매에서 일어난다. 그와 같은 용매는 예를 들면 하기를 포함한다: 알코올 예컨대 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올 또는 tert-부탄올, 에테르 예컨대 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 1,2-디메톡시에탄 또는 비스(2-메톡시에틸) 에테르, 또는 다른 용매 예컨대 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, N,N-디메틸포름아마이드 그렇지 않으면 물. 이들 용매의 혼합물을 또한 사용할 수 있다. 촉매로서 아세트산 또는 묽은 염산의 부가와 함께 1,4-디옥산/물 혼합물을 사용하는 것이 용매로서 바람직하다,.
상기 반응에 적당한 환원제는 특히 하기이다: 복합 보로하이드라이드, 예를 들면, 나트륨 보로하이드라이드, 나트륨 시아노보로하이드라이드, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드, 테트라-n-부틸암모늄 보로하이드라이드 또는 보란-피리딘 복합물. 나트륨 시아노보로하이드라이드 또는 보란-피리딘 복합물을 사용하는 것이 바람직하다.
반응 (IV) + (V) → (VI) 및 (IV) + (VIII) → (IX)는 일반적으로 0 ℃ 내지 +120 ℃ 범위의 온도에서, 바람직하게는 +50 ℃ +100 ℃에서 일어난다. 반응은 대기압, 증가된 또는 감소된 압력 (예를 들면 0.5 내지 5 bar) 하에서 수행될 수 있고; 대기압에서 조작하는 것이 통상적이다.
상기 기재된 커플링 반응 (IX) + (X) → (II-C), (XII-A) 또는 (XII-B) + (X) → (II-D-A) 또는 (II-D-B), (IX) + (XIII) → (XIV), (IX) + (XV) → (XVI) 및 (XXII) + (XXIII) → (II-D) (아민 성분 및 카복실산 성분 각각으로부터 아마이드 형성)은 펩타이드 화학의 표준 방법으로 수행된다 [참조 예를 들면 M. Bodanszky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1993; M. Bodanszky 및 A. Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1984; H.-D. Jakubke 및 H. Jeschkeit, Aminosaeuren, Peptide, Proteine, Verlag Chemie, Weinheim, 1982].
이들 커플링 반응에 대한 불활성 용매의 예는 하기이다: 에테르 예컨대 디에틸 에테르, 디이소프로필 에테르, tert-부틸 메틸 에테르, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 1,2-디메톡시에탄 또는 비스(2-메톡시에틸) 에테르, 탄화수소 예컨대 벤젠, 톨루엔, 자일렌, 펜탄, 헥산, 헵탄, 사이클로헥산 또는 석유 분획, 할로겐화 탄화수소 예컨대 디클로로메탄, 트리클로로메탄, 테트라클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 트리클로로에틸렌 또는 클로로벤젠, 또는 쌍극성-비양성자성 용매 예컨대 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 아세토니트릴, 에틸 아세테이트, 피리딘, 디메틸 설폭사이드 (DMSO), N,N-디메틸포름아마이드 (DMF), N,N-디메틸아세트아마이드 (DMA), N,N'-디메틸프로필렌우레아 (DMPU) 또는 N-메틸피롤리디논 (NMP). 그와 같은 용매의 혼합물을 또한 사용할 수 있다. 선호되는 것은 N,N-디메틸포름아마이드를 사용하는 것이다.
이들 커플링에 대한 적당한 활성제/축합제의 예는 카보디이마이드 예컨대 N,N'-디에틸-, N,N'-디프로필-, N,N'-디이소프로필-, N,N'-디사이클로헥실카보디이마이드 (DCC) 또는 N-(3-디메틸아미노이소프로필)-N'-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 (EDC), 포스겐 유도체 예컨대 N,N'-카보닐디이미다졸 (CDI) 또는 이소부틸 클로로포르메이트, 1,2-옥사졸륨 화합물 예컨대 2-에틸-5-페닐-1,2-옥사졸륨 3-설페이트 또는 2-tert-부틸-5-메틸이속사졸륨 퍼클로레이트, 아실아미노 화합물 예컨대 2-에톡시-1-에톡시카보닐-1,2-디하이드로퀴놀린, 인 화합물 예컨대 프로판포스포닉 무수물, 디에틸 시아노포스포네이트, 비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스포릴 클로라이드, 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 또는 벤조트리아졸-1-일-옥시트리스(피롤리디노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBOP), 또는 우로늄 화합물 예컨대 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU), O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU), 2-(2-옥소-1-(2H)-피리딜)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TPTU), O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 또는 O-(1H-6-클로로벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄-테트라플루오로보레이트 (TCTU)를, 임의로 추가 보조물 예컨대 1-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt) 또는 N-하이드록시석신이마이드 (HOSu), 및 또한, 염기로서, 알칼리 금속 카보네이트, 예를 들면 나트륨 또는 탄산칼륨, 또는 3차 아민 염기 예컨대 트리에틸아민, N-메틸모폴린, N-메틸피페리딘, N,N-디이소프로필에틸아민, 피리딘 또는 4-N,N-디메틸아미노피리딘과 조합하여 포함한다.
본 발명의 문맥에서, 그와 같은 커플링 반응에 대한 활성제 /축합제로서, N-(3-디메틸아미노이소프로필)-N'-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 (EDC)을 1-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt) 및 N,N-디이소프로필에틸아민과 함께, 또는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU)을, N,N-디이소프로필에틸아민과 함께 사용하는 것이 바람직하다.
커플링 반응 (IX) + (X) → (II-C), (XII-A) 또는 (XII-B) + (X) → (II-D-A) 또는 (II-D-B), (IX) + (XIII) → (XIV), (IX) + (XV) → (XVI) 및 (XXII) + (XXIII) → (II-D)은 일반적으로 -20 ℃ 내지 +60 ℃ 범위의 온도에서, 바람직하게는 0 ℃ 내지 +40 ℃에서 수행된다. 반응은 대기압, 증가된 또는 감소된 압력 (예를 들면 0.5 내지 5 bar) 하에서 일어날 수 있고; 대기압 하에서 조작하는 것이 통상적이다.
에스테르화 (IX) + (XVIII) → (XII) 및 (IX) + (XI-A) 또는 (XI-B) → (XII-A) 또는 (XII-B), (IX) + (XXIV) → (XXV) 및 또한 (IX) + (XXI) → (XXII)은 상기 기재된 아마이드 커플링 반응과 유사하게 일어난다. 이들 반응은 바람직하게는, N-(3-디메틸아미노이소프로필)-N'-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 (EDC) 및 4-디메틸아미노피리딘을 +50 ℃ 내지 100 ℃의 온도에서 대기압 하에서 사용하여 디클로로메탄에서 일어난다.
화합물에 임의로 존재하는 작용 그룹 - 예컨대 아미노, 하이드록실 및 카복실 그룹은 특히 - 유용하거나 필요하다면, 상기 기재된 공정 단계 동안에 일시적으로 보호된 형태로 또한 존재할 수 있다. 이들 경우에, 그와 같은 보호 그룹은 펩타이드 화학으로부터 공지된 관례적 방법에 따라 도입되고 제거된다 [참조, 예를 들면, T.W. Greene 및 P.G.M. Wuts, in Protective Synthesis, Wiley, New York, 1999; M. Bodanszky 및 A. Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1984]. 2개 이상 보호된 그룹이 존재하는 경우, 원포드(One-Pot) 반응에서 임의로 동시에 다시 자유로울 수 있고, 그렇지 않으면 별개의 반응 단계에서 다시 자유로울 수 있다.
아미노-보호 그룹 PG1으로서 tert-부톡시카보닐 (Boc), 벤질옥시카보닐 (Z) 또는 (9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐 (Fmoc)를 사용하는 것이 바람직하고; 하이드록실 또는 카복실 작용기에 대해 보호 그룹 PG2으로서 tert-부틸 또는 벤질을 사용하는 것이 바람직하다. tert-부틸 또는 tert-부톡시카보닐 그룹의 제거는 불활성 용매 예컨대 디에틸 에테르, 1,4-디옥산, 디클로로메탄 또는 아세트산에서 강한 산, 예컨대 염화수소, 브롬화수소 또는 트리플루오로아세트산에 의한 처리에 의해 전형적으로 달성되고; 이 반응은 불활성 용매의 부가 없이 또한 임의로 수행될 수 있다. 보호 그룹으로서 벤질 또는 벤질옥시카보닐의 경우에, 이 그룹은 적당한 팔라듐 촉매, 예컨대 활성탄 상 팔라듐의 존재에서 수소첨가분해에 의해 바람직하게 제거되고, 예를 들면 (9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐 그룹은 2차 아민 염기 예컨대 디에틸아민 또는 피페리딘을 사용하여 일반적으로 없앤다.
반응 (VI) → (II-A)은 반응 조건 하에서 불활성인 용매, 예를 들면, 에테르 예컨대 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 1,2-디메톡시에탄 또는 비스(2-메톡시에틸) 에테르, 알코올 예컨대 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, n-부탄올 또는 tert-부탄올, 또는 쌍극성-비양성자성 용매 예컨대 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 아세토니트릴, 에틸 아세테이트, 피리딘, 디메틸 설폭사이드 (DMSO), N,N-디메틸포름아마이드 (DMF), N,N-디메틸아세트아마이드 (DMA), N,N'-디메틸프로필렌우레아 (DMPU) 또는 N-메틸피롤리디논 (NMP) 또는 물에서 일어난다. 그와 같은 용매의 혼합물을 또한 사용할 수 있다. 선호되는 것은 1,4-디옥산 및 물의 혼합물을 사용하는 것이다.
반응 (VI) → (II-A)에 대한 적당한 염기는, 예를 들면, 알칼리 금속 카보네이트 예컨대 탄산칼륨, 나트륨 카보네이트 또는 리튬 카보네이트, 알칼리 금속 수소카보네이트 예컨대 나트륨 또는 칼륨 수소카보네이트 또는 알칼리 금속 알콕사이드 예컨대 나트륨 메톡사이드, 나트륨 에톡사이드 또는 칼륨 tert-부톡사이드이다. 나트륨 수소카보네이트를 사용하는 것이 바람직하다.
반응 (VI) → (II-A)은 0 ℃ 내지 +50 ℃ 범위의 온도에서, 바람직하게는 +10 ℃ 내지 +30 ℃에서 일어난다. 반응은 대기압, 고압 또는 감압 (예를 들면 0.5 내지 5 bar) 하에서 일어날 수 있고; 대기압 하에서 조작하는 것이 통상적이다.
반응 (VI) + (VII) → (II-B)은 반응 조건 하에서 불활성인 용매, 예를 들면, 에테르 예컨대 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 1,2-디메톡시에탄 또는 비스(2-메톡시에틸) 에테르, 알코올 예컨대 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, n-부탄올 또는 tert-부탄올, 또는 쌍극성-비양성자성 용매 예컨대 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 아세토니트릴, 에틸 아세테이트, 피리딘, 디메틸 설폭사이드 (DMSO), N,N-디메틸포름아마이드 (DMF), N,N-디메틸아세트아마이드 (DMA), N,N'-디메틸프로필렌우레아 (DMPU) 또는 N-메틸피롤리디논 (NMP) 또는 물에서 일어난다. 그와 같은 용매의 혼합물을 또한 사용할 수 있다. 선호되는 것은 DMF를 사용하는 것이다.
반응 (VI) + (VII) → (II-B)에 대한 적당한 염기는, 예를 들면, 3차 아민 염기 예컨대 트리에틸아민, N-메틸모폴린, N-메틸피페리딘, N,N-디이소프로필에틸아민, 피리딘 또는 4-N,N-디메틸아미노피리딘이다. 선호되는 것은 N,N-디이소프로필에틸아민을 사용하는 것이다.
반응 (VI) + (VII) → (II-B)은 0 ℃ 내지 +50 ℃ 범위의 온도에서, 바람직하게는 +10 ℃ 내지 +30 ℃에서 일어난다. 반응은 대기압, 고압 또는 감압 (예를 들면 0.5 내지 5 bar) 하에서 일어날 수 있고; 대기압 하에서 조작하는 것이 일반적이다.
반응 (IX) → (III-A), (XIV) → (III-B) 및 (XVI) → (III-C) 및 또한 (VI) + (XVII) → (III-D), (XIX) + (XX) → (III-E) 및 (XXV) + (XX) → (III-F)는 반응 조건 하에서 불활성인 용매에서 일어난다. 적당한 용매의 용매의 예는 에테르 예컨대 디에틸 에테르, 디이소프로필 에테르, tert-부틸 메틸 에테르, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 1,2-디메톡시에탄 또는 비스(2-메톡시에틸) 에테르, 탄화수소 예컨대 벤젠, 톨루엔, 자일렌, 펜탄, 헥산, 헵탄, 사이클로헥산 또는 석유 분획, 할로겐화 탄화수소 예컨대 디클로로메탄, 트리클로로메탄, 테트라클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 트리클로로에틸렌 또는 클로로벤젠, 또는 쌍극성-비양성자성 용매 예컨대 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 아세토니트릴, 에틸 아세테이트, 피리딘, 디메틸 설폭사이드 (DMSO), N,N-디메틸포름아마이드 (DMF), N,N-디메틸아세트아마이드 (DMA), N,N'-디메틸프로필렌우레아 (DMPU) 또는 N-메틸피롤리디논 (NMP)이다. 그와 같은 용매의 혼합물을 또한 사용할 수 있다. 선호되는 것은 N,N-디메틸포름아마이드를 사용하는 것이다.
이들 반응에 대한 적당한 염기는, 예를 들면, 3차 아민 예컨대 트리에틸아민, N-메틸모폴린, N-메틸피페리딘, N,N-디이소프로필에틸아민, 피리딘 또는 4-N,N-디메틸아미노피리딘이다. 선호되는 것은, 임의로 4-N,N-디메틸아미노피리딘의 부가와 함께 N,N-디이소프로필에틸아민를 사용하는 것이다.
반응 (IX) → (III-A), (XIV) → (III-B) 및 (XVI) → (III-C) 및 또한 (VI) + (XVII) → (III-D) 및 (XIX) + (XX) → (III-E)는 0 ℃ 내지 +50 ℃ 범위의 온도에서, 바람직하게는 +10 ℃ 내지 +30 ℃에서 일어난다. 반응은 대기압, 고압 또는 감압 (예를 들면 0.5 내지 5 bar) 하에서 일어날 수 있고; 대기압 하에서 조작하는 것이 일반적이다.
식 (II), (III), (I-A) 및 (I-B)의 화합물은 식 (IIa), (IIIa), (Ia-A) 및 (Ia-B)의 화합물 각각의 양 이하이고, 여기서 R35는 메틸이다. 화합물 (IIa) 및 (IIIa)이 제조는 상기에서 기재된 바와 같이 식 (II) 및 (III)의 화합물의 제조와 유사하게 일어난다.
상기 기재된 공정은 하기 합성 도식 (도식 3 내지 13, 18)에 의해 예로써 설명된다:
도식 3
Figure pct00588
[a): 1. 물/디옥산, 1N HCl, 100 ℃; 2. H2, Pd/C, 메탄올, 실온; b): NaHCO3, H2O, 디옥산, 실온].
도식 4
Figure pct00589
[a): 디이소프로필에틸아민, DMF, 실온].
도식 5
Figure pct00590
[a): 물/디옥산, 1N HCl, 100 ℃; b): HATU, 디이소프로필아민, DMF, 실온].
도식 6
Figure pct00591
[a): 1. EDCI, DMAP, 디클로로메탄, 실온; 2. H2, 메탄올, RT ; b): 1. EDCI, HOBt, 디이소프로필아민, DMF, 실온; 2. 디클로로메탄, 실온].
도식 7
Figure pct00592
[a): 1. EDCI, DMAP, 디클로로메탄, 실온; 2. H2, 메탄올, RT ; b): HATU, 디이소프로필아민, DMF, 실온].
도식 8
Figure pct00593
[a): EDCI, 디클로로메탄, 실온].
도식 9
Figure pct00594
[a): HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, 실온; 2. H2, 메탄올, 실온; b): EDCI, DMAP, 디클로로메탄, 실온].
도식 10
Figure pct00595
[a): 1. HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, 실온; 2. 디클로로메탄, 실온; b): EDCI, DMAP, 디클로로메탄, 실온].
도식 11
Figure pct00596
[a): 디이소프로필에틸아민, DMF, 실온].
도식 12
Figure pct00597
[a): 1. EDCI, DMAP, 디클로로메탄, 실온; 2. 디클로로메탄, 실온; b): 디이소프로필아민, DMAP, 디클로로메탄, 실온].
도식 13
Figure pct00598
[a): DMAP, 디이소프로필아민, 디클로로메탄, 실온].
도식 18
Figure pct00599
[a): 1. 물/디옥산, 1N HCl, 100 ℃; 2. H2, Pd/C, 메탄올, 실온; b): HATU, 디이소프로필에틸아민, 실온].
식 (IV)의 화합물은 상업적으로 이용가능한 아미노산 빌딩 블록 또는 문헌 (참고, 예를 들면, Pettit 등, Synthesis 1996, 719; Shioiri 등, Tetrahedron Lett. 1991, 32, 931; Shioiri 등, Tetrahedron 1993, 49, 1913; Koga 등, Tetrahedron Lett. 1991, 32, 2395; Vidal 등, Tetrahedron 2004, 60, 9715; Poncet 등, Tetrahedron 1994, 50, 5345. Pettit 등, J. Org. Chem. 1994, 59, 1796)으로부터 공지된 것으로부터 문헌으로부터 공지된 공정과 유사하게, 펩타이드 화학의 관례적 방법에 따라, 및 본 실험 섹션에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 이하의 합성 도식 (도식 14 내지 16)은 예로써 제조를 설명한다.
도식 14
Figure pct00600
[a): 하이드록실아민 하이드로클로라이드, KOH, MeOH, 0 ℃ → RT; b): BrCH2(CH2)2CH2Br, K2CO3, 아세톤, 환류].
도식 15
Figure pct00601
[a): 1. 디이소프로필에틸아민, BEP, 디클로로메탄, -10 ℃ → RT; 2. MeOH].
도식 16
Figure pct00602
[a): 1. 디이소프로필에틸아민, BEP, DMF, 실온; 2. 디클로로메탄; b): 1. HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, 실온; 2. 디클로로메탄, 실온; c): 1. HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, 실온; 2. 피페리딘, DMF, 실온].
그의 적절한, 키랄 또는 부분입체이성질체 형태를 포함하는 식 (XI), (XIII), (XV), (XVII) 및 (XXI)의 화합물은 상업적으로 이용가능하거나 문헌에 있는 대로 기재되거나 문헌에 공개된 방법과 유사하게 숙련가에게 분명한 경로에 의해 제조될 수 있다. 개시 물질의 제조에 대한 수많은 포괄적인 지침 및 또한 문헌 정보는 개시 화합물 및 중간체의 제조와 관련된 섹션에서 실험 섹션에서 또한 주어진다.
그의 적절한, 키랄 또는 부분입체이성질체 형태를 포함하는 식 (V), (VII), (VIII), (X), (XVIII), (XX) 및 (XXIII)의 화합물은 문헌으로부터 공지되어 있거나 문헌에 공개된 방법과 유사하게 숙련가에게 분명한 경로에 의해 제조될 수 있다. 개시 물질의 제조에 대한 수많은 포괄적인 지침 및 또한 문헌 정보는 개시 화합물 및 중간체의 제조와 관련된 섹션에서 실험 섹션에서 또한 주어진다.
대안적으로, 제조 순서의 개별적인 단계는 상이한 순서로 수행될 수 있다. 이 접근법은 이하의 합성 도식 (도식 17, 19 및 20)에서 예로써 설명된다.
도식 17
Figure pct00603
[a): 보란-피리딘 복합물, 아세트산, MeOH; b): 1. HOBt, EDCI, 디이소프로필에틸아민, DMF, 실온; 2. TFA, 디클로로메탄, 실온; c): HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, 실온; d): 1. Pd/C, MeOH, 실온; 2. NaHCO3, 디옥산, 물].
도식 19
Figure pct00604
[a): 1. HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, 실온; 2. TFA, 디클로로메탄, 실온; 3. (H3C)3C(C=O))2O, DMF, 디이소프로필에틸아민; b): 디이소프로필에틸아민, BEP, DMF, 실온; c): 1. H2, Pd/C (10%), 메탄올, 실온; 2. HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, 실온; 3. TFA, 디클로로메탄, 실온].
도식 20
Figure pct00605
[a): 보란-피리딘 복합물, 아세트산, MeOH; b): 1. HOBt, EDCI, 디이소프로필에틸아민, DMF, 실온; 2. TFA, 디클로로메탄, 실온; c): 1. H2, Pd/C, MeOH, 실온; 2. NaHCO3, 디옥산, 물; d): HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, 실온;].
일 구현예에서 결합제는 암 세포에 존재하는 표적 분자에 결합한다. 하나의 바람직한 구현예에서 결합제는 암 표적 분자에 결합한다.
또 하나의 바람직한 구현예에서 표적 분자는 선택적 암 표적 분자이다.
하나의 특히 바람직한 구현예에서 표적 분자는 단백질이다.
일 구현예에서 표적 분자는 세포외 표적 분자이다. 하나의 바람직한 구현예에서 세포외 표적 분자는 단백질이다.
암 표적 분자는 숙련가에게 공지되어 있다. 그의 예들은 이하에 열거되어 있다.
암 표적 분자의 예는 하기와 같다:
(1) EGF 수용체 (NCBI 참조 서열 NP_005219.2)
서열 (1210 아미노산):
>gi|29725609|ref|NP_005219.2| 표피 성장 인자 수용체 동형체 a 전구체 [호모사피엔스]
Figure pct00606
세포외 도메인은 밑줄 친 것으로 표시된다.
(2) 메소텔린 (SwissProt 참조 Q13421-3)
서열 (622 아미노산):
> 메소텔린의sp|Q13421-3|MSLN_인간 동형체 OS=호모사피엔스 GN=MSLN
Figure pct00607
Figure pct00608
메소텔린은 아미노산 296-598에 의해 인코딩된다. 아미노산 37-286은 "거핵구 세포 강화 인자"를 코딩한다. 메소텔린은 GPI 앵커에 의해 세포막에서 고정되고 세포외로 국한된다.
(3) 카보안하이드라제 IX (SwissProt 참조 Q16790)
서열 (459 아미노산):
>sp|Q16790|CAH9_인간 탄산탈수소효소 9 OS=호모사피엔스 GN=CA9 PE=1 SV=2
Figure pct00609
세포외 도메인은 밑줄 친 것으로 표시된다.
(4) C4.4a (NCBI 참조 서열 NP_055215.2; 동의어 LYPD3)
서열 (346 아미노산):
>gi|93004088|ref|NP_055215.2| ly6/PLAUR 도메인-함유 단백질 3 전구체 [호모사피엔스]
Figure pct00610
성숙한, 세포외 도메인은 밑줄로 쳐서 표시한다 (서열번호:1).
(5) CD52 (NCBI 참조 서열 NP_001794.2 )
>gi|68342030|ref|NP_001794.2| 캄파쓰-1 항원 전구체 [호모사피엔스]
Figure pct00611
(6) Her2 (NCBI 참조 서열 NP_004439.2)
>gi|54792096|ref|NP_004439.2| 수용체 티로신-단백질 키나아제 erbB-2 동형체 a [호모사피엔스]
Figure pct00612
Figure pct00613
(7) CD20 (NCBI 참조 서열 NP_068769.2)
>gi|23110987|ref|NP_068769.2| B-림프구 항원 CD20 [호모사피엔스]
Figure pct00614
(8) 림프구-활성화 항원 CD30 (SwissProt ID P28908)
>gi|68348711|ref|NP_001234.2| 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 8 동형체 1 전구체 [호모사피엔스]
Figure pct00615
(9) 림프구 접합 부착 CD22 (SwissProt ID P20273)
>gi|157168355|ref|NP_001762.2| B-세포 수용체 CD22 동형체 1 전구체 [호모사피엔스]
Figure pct00616
Figure pct00617
(10) 골수 세포 표면 항원 CD33 (SwissProt ID P20138)
>gi|130979981|ref|NP_001763.3| 골수 세포 표면 항원 CD33 동형체 1 전구체 [호모사피엔스]
Figure pct00618
(11) 막통과 당단백질 NMB (SwissProt ID Q14956)
>gi|52694752|ref|NP_001005340.1| 막통과 당단백질 NMB 동형체 a 전구체 [호모사피엔스]
Figure pct00619
(12) 접합 부착 CD56 (SwissProt ID P13591)
>gi|94420689|ref|NP_000606.3| 신경 세포 접합 부착 1 동형체 1 [호모사피엔스]
Figure pct00620
(13) 표면 분자 CD70 (SwissProt ID P32970)
>gi|4507605|ref|NP_001243.1| CD70 항원 [호모사피엔스]
Figure pct00621
(14) 표면 분자 CD74 (SwissProt ID P04233)
>gi|10835071|ref|NP_004346.1| HLA 클래스 II 조직적합성 항원 감마 사슬 동형체 b [호모사피엔스]
Figure pct00622
(15) B-림프구 항원 CD19 (SwissProt ID P15391)
>gi|296010921|ref|NP_001171569.1| B-림프구 항원 CD19 동형체 1 전구체 [호모사피엔스]
Figure pct00623
(16) 표면 단백질 뮤신-1 (SwissProt ID P15941)
>gi|65301117|ref|NP_002447.4| 뮤신-1 동형체 1 전구체 [호모사피엔스]
Figure pct00624
(17) 표면 단백질 CD138 (SwissProt ID P18827)
>gi|29568086|ref|NP_002988.3| syn데칸-1 전구체 [호모사피엔스]
Figure pct00625
(18) 인테그린 알파V (유전자은행 승인 번호: NP_002201.1)
>gi|4504763|ref|NP_002201.1| 인테그린 알파-V 동형체 1 전구체 [호모사피엔스]
Figure pct00626
Figure pct00627
(19) 기형암종-유래 성장 인자 1 단백질 TDGF1 (유전자은행 승인 번호: NP_003203.1)
>gi|4507425|ref|NP_003203.1| 기형암종-유래 성장 인자 1 동형체 1 전구체 [호모사피엔스]
Figure pct00628
(20) 전립선-특이적 막 항원 PSMA (Swiss Prot ID: Q04609)
>gi|4758398|ref|NP_004467.1| 글루타메이트 카복시펩티다제 2 동형체 1 [호모사피엔스]
Figure pct00629
(21) 티로신 단백질 키나아제 EPHA2 (Swiss Prot ID: P29317)
>gi|32967311|ref|NP_004422.2| 에프린 유형-A 수용체 2 전구체 [호모사피엔스]
Figure pct00630
(22) 표면 단백질 SLC44A4 (유전자은행 승인 번호: NP_001171515)
>gi|295849282|ref|NP_001171515.1| 콜린 수송체-유사 단백질 4 동형체 2 [호모사피엔스]
Figure pct00631
(23) 표면 단백질 BMPR1B (SwissProt: O00238)
(24) 수송 단백질 SLC7A5 (SwissProt: Q01650)
(25) 상피 전립선 항원 STEAP1 (SwissProt: Q9UHE8)
(26) 난소 암종 항원 MUC16 (SwissProt: Q8WXI7)
(27) 수송 단백질 SLC34A2 (SwissProt: O95436)
(28) 표면 단백질 SEMA5b (SwissProt: Q9P283)
(29) 표면 단백질 LYPD1 (SwissProt: Q8N2G4)
(30) 엔도텔린 수용체 유형 B EDNRB (SwissProt: P24530)
(31) 링 핑커 단백질 RNF43 (SwissProt: Q68DV7)
(32) 전립선 암종-연관된 단백질 STEAP2 (SwissProt: Q8NFT2)
(33) 양이온 통로 TRPM4 (SwissProt: Q8TD43)
(34) 보체 수용체 CD21 (SwissProt: P20023)
(35) B-세포 항원 수용체 복합체-연관된 단백질 CD79b (SwissProt: P40259)
(36) 세포 부착 항원 CEACAM6 (SwissProt: P40199)
(37) 디펩티다제 DPEP1 (SwissProt: P16444)
(38) 인터루킨 수용체 IL20R알파 (SwissProt: Q9UHF4)
(39) 프로테오글리칸 BCAN (SwissProt: Q96GW7)
(40) 에프린 수용체 EPHB2 (SwissProt: P29323)
(41) 전립선 줄기세포-연관된 단백질 PSCA (유전자은행 승인 번호: NP_005663.2 )
(42) 표면 단백질 LHFPL3 (SwissProt: Q86UP9)
(43) 수용체 단백질 TNFRSF13C (SwissProt: Q96RJ3)
(44) B-세포 항원 수용체 복합체-연관된 단백질 CD79a (SwissProt: P11912)
(45) 수용체 단백질 CXCR5 (SwissProt: P32302)
(46) 이온 통로 P2X5 (SwissProt: Q93086)
(47) 림프구 항원 CD180 (SwissProt: Q99467)
(48) 수용체 단백질 FCRL1 (SwissProt: Q96LA6)
(49) 수용체 단백질 FCRL5 (SwissProt: Q96RD9)
(50) MHC 클래스 II 분자 Ia 항원 HLA-DOB (유전자은행 승인 번호: NP_002111.1)
(51) T-세포 단백질 VTCN1 (SwissProt: Q7Z7D3).
(52) 단일-통과 유형-I 막 단백질 "프로그램된 세포 사멸 1 리간드 1"
(동의어: CD274, B7H1, PDCD1L1, PDCD1LG1, PDL1) (SwissProt: Q9NZQ7) - 모두는 동형체이다
>sp|Q9NZQ7|PD1L1_인간 프로그램된 세포 사멸 1 리간드 1 OS=호모사피엔스 GN=CD274 PE=1 SV=1
Figure pct00632
(53) 단일-통과 유형 I 막 단백질 "ICOSLG" (동의어: B7H2, B7RP1, ICOSL, KIAA0653, CD275) - (SwissProt: O75144), 모두는 동형체이다
>sp|O75144|ICOSL_인간 ICOS 리간드 OS=호모사피엔스 GN=ICOSLG PE=1 SV=2
Figure pct00633
(54) 티로신 키나제 "섬유아세포 성장 인자 수용체 3" (FGFR-3, EC=2.7.10.1, CD333, JTK4), (SwissProt: P22607) - 4 개의 동형체 (대안적인 스플라이싱)
>sp|P22607|FGFR3_인간 섬유아세포 성장 인자 수용체 3 OS=호모사피엔스 GN=FGFR3 PE=1 SV=1
Figure pct00634
Figure pct00635
(55) 단일-통과 유형-I 막 단백질 "TYRP1" (CAS2, TYRP, TYRRP, DHICA 옥시다제, 5,6-디하이드록시인돌-2-카복실산 옥시다제, 카탈라제 B, 당단백질 75, 흑색종 항원 gp75, 티로시나제-관련 단백질 1), (SwissProt: P17643)
>sp|P17643|TYRP1_인간 5,6-디하이드록시인돌-2-카복실산 옥시다제 OS=호모사피엔스 GN=TYRP1 PE=1 SV=2
Figure pct00636
(56) 분비된 글리피칸-3으로 절단된 세포막 단백질 (GPC3, OCI5, GTR2-2, 장 단백질 OCI-5, MXR7), (SwissProt: P51654)
>sp|P51654|GPC3_인간 글리피칸-3 OS=호모사피엔스 GN=GPC3 PE=1 SV=1
Figure pct00637
본 발명의 하나의 바람직한 요지에서 암 표적 분자는 암 표적 분자 (1) - (56)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 특히 바람직한 요지에서 결합제는 암 표적 분자 (1) - (56)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 세포외 암 표적 분자에 결합한다.
본 발명의 또 하나의 특히 바람직한 요지에서 결합제는 암 표적 분자 (1) - (56)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 세포외 암 표적 분자에 특이적으로 결합한다.
본 발명의 하나의 특히 바람직한 요지에서 암 표적 분자는 EGF 수용체 (NP_005219.2), 메소텔린 (Q13421-3), C4.4a (NP_055215.2), 카보안하이드라제 IX (CA IX; Q16790, NP_001207.2), HER2, 글리피칸-3, TYRP1, 섬유아세포 성장 인자 수용체 3, 단일-통과 유형 I 막 단백질 ICOSLG 및 프로그램된 세포 사멸 1 리간드 1로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명의 또 하나의 특히 바람직한 요지에서 결합제는 하기 EGF 수용체 (NP_005219.2), 메소텔린 (Q13421-3), C4.4a (NP_055215.2), 카보안하이드라제 IX (CA IX; Q16790, NP_001207.2), HER2, 글리피칸-3, TYRP1, 섬유아세포 성장 인자 수용체 3, 단일-통과 유형 I 막 단백질 ICOSLG 및 프로그램된 세포 사멸 1 리간드 1로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 세포외 암 표적 분자에 결합한다.
본 발명의 또 하나의 특히 바람직한 요지에서 결합제는 EGF 수용체 (NP_005219.2), 메소텔린 (Q13421-3), C4.4a (NP_055215.2), 카보안하이드라제 IX (CA IX; Q16790), NP_001207.2), HER2, 글리피칸-3, TYRP1, 섬유아세포 성장 인자 수용체 3, 단일-통과 유형 I 막 단백질 ICOSLG 및 프로그램된 세포 사멸 1 리간드 1로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 세포외 암 표적 분자에 특이적으로 결합한다.
하나의 바람직한 구현예에서 결합제는, 표적 세포 상의 그의 세포외 표적 분자에 결합한 후, 결합의 결과로서 표적 세포에 의해 내면화된다. 이것의 효과는, 면역콘주게이트 또는 ADC일 수 있는 결합제-약물 콘주게이트가, 표적 세포에 의해 취해진다는 것이다.
일 구현예에서 결합제는 결합 단백질이다. 하나의 바람직한 구현예에서 결합제는 항체, 항원 결합 항체 단편, 다중특이적 항체 또는 항체 모방체이다.
바람직한 항체 모방체는 어피바디, 아드넥틴, 안티칼린, DARPins, 아비머, 또는 나노바디이다. 바람직한 다중특이적 항체는 이중특이적 및 삼중특이적 항체이다.
하나의 바람직한 구현예에서 결합제는 항체 또는 항원 결합 항체 단편, 더 바람직하게는 단리된 항체 또는 단리된 항원 결합 항체 단편이다.
바람직한 항원 결합 항체 단편은 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편, 디아바디, DAbs, 선형 항체 및 scFv이다. 특히 바람직한 것은 Fab, 디아바디 및 scFv이다.
하나의 특히 바람직한 구현예에서 결합제는 항체. 특히 바람직한 것은 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편이다. 추가 특히 바람직한 것은 인간, 인간화 또는 키메라 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편이다.
암 표적 분자에 결합하는 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 공지된 공정, 예를 들면, 화학 합성 또는 재조합 발현을 사용하여 당해분야의 숙련가에 의해 제조될 수 있다. 암 표적 분자에 대한 결합제는 상업적으로 얻을 수 있거나 공지된 공정, 예를 들면, 화학 합성 또는 재조합 발현을 사용하여 당해분야의 숙련가에 의해 제조될 수 있다. 항체 또는 항원 결합 항체 단편을 제조하는 추가 공정은 WO2007070538에 기재되어 있다 (참고 페이지 22 "Antibodies"). 숙련가는, 공정 예컨대 파아지 디스클레이 라이브러리 (예를 들면 Morphosys HuCAL Gold)이 어떻게 편집되고 항체 또는 항원 결합 항체 단편를 발견하기 위해 사용될 수 있는 지를 안다 (참고 WO2007070538, 페이지 24 ff 및 페이지 70의 실시예 1, 페이지 72의 실시예 2). B-세포로부터 DNA 라이브러리를 사용하는 항체를 제조하는 추가 공정은 예를 들면 페이지 26에 기재되어 있다 (WO2007070538). 항체를 인간화하는 공정은 WO2007070538의 페이지 30-32 및 Queen, 등, Pros. Natl. Acad. Sci. USA 86:10029-10033, 1989 또는 WO900786에서 상세히 기재되어 있다.뿐만 아니라, 일반적으로 단백질 및 특히 항체의 제조합 발현의 공정은 숙련가에게 공지되어 있다 (참고, 예를 들면, Berger and Kimrnel (Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymology, Vo1. 152, Academic Press, Inc.); Sambrook, et al., (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Cold Spring Harbor, N.Y.; 1989) Vol. 1-3); Current Protocols in Molecular Biolony, (F.M. Ausabel et al. [Eds.], Current Protocols, Green Publishing Associates, Inc./John Wiley & Sons, Inc.); Harlow et al., (MonocIonal Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (19881, Paul [Ed.]); Fundamental Immunology, (Lippincott Williams & Wilkins (1998)); and Harlow, et al., (Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1998)). 숙련가는 단백질/항체의 발현에 필요한 상응하는 벡터, 프로모터 및 신호 펩타이드를 알고 있다. 아주 흔한 공정은 WO2007070538의 페이지 41-45에 또한 기재되어 있다. IgG1 항체를 제조하는 공정은 예를 들면 WO2007070538의 페이지 74 ff의 실시예 6에 기재되어 있다. 그의 항원에 결합한 후 항체의 내면화의 결정을 허용하는 공정은 숙련가에게 공지되어 있고 기재된 예를 들면 WO2007070538의 페이지 80에 기재되어 있다. 숙련가는 상이한 표적 분자 특이성을 갖는 항체의 제조와 유사하게 카보안하이드라제 IX (Mn) 항체를 제조하기 위해 사용된 WO2007070538에 기재된 공정을 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 특히 바람직한 결합제는 항체 특히 인간 또는 인간화 항체. 항체는 바람직하게 적어도 10-7　M (Kd 값으로서; 즉, 바람직하게 10-7 M보다 더 작은 Kd 값을 갖는 것), 바람직하게 적어도 10-8　M, 특히 바람직하게 범위 10-9 M 내지 10-11 M의 친화도를 갖는다. 범위 이들 Kd 값은, 예를 들면, 표면 플라즈몬 공명 분광계에 의해 측정될 수 있다.
본 발명에 따른 항체-약물 콘주게이트는 이들 범위의 친화도를 또한 갖는다. 활성 성분의 콘주게이션을 통해, 친화도는 바람직하게 유의미하게 영향을 받지 않는다 (친화도는 보통 한 자릿수 미만, 예를 들면, 최대 10-8　M 내지 10-7　M까지 감소된다).
본 발명에 따라 사용된 항체는 높은 선택성을 특징으로 하는 것이 또한 바람직하다. 선택성은, 본 발명에 따른 항체가 또 하나의 독립적인 항원, 예를 들면, 인간 혈청 알부민에 대해서보다 표적 단백질에 대해 더 나은 친화도를 가질 때 높고, 상기 친화도는 2의 인자, 5의 인자, 10의 인자 또는 특히 바람직하게 100의 인자까지 더 낫다 (친화도는, 예를 들면, 표면 플라즈몬 공명 분광계에 의해 측정될 수 있다).
더욱이, 본 발명에 따라 사용된 항체는 바람직하게 교차 반응성이다. 전임상시험, 예를 들면, 독물학적 연구 또는 효능 연구 (예를 들면, 이종이식 마우스에서)을 용이하게 하고 그것을 더 잘 해석할 수 있기 위해, 본 발명에 따라 사용될 항체가 인간 표적 단백질에 결합할뿐만 아니라 이들 연구에서 사용된 종에서 종 표적 단백질에 결합한다면 유리하다. 일 구현예에서, 본 발명에 따라 사용된 항체는 본 발명에 따라 사용된 항체와 교차반응성이지만 적어도 하나 부가적 종의 인간 표적 단백질과 또한 교차반응성이다. 독물학적 연구 및 효능 연구를 위해, 설치류, 개 및 비-인간 영장류 패밀리의 종이 특이 바람직하다. 바람직한 설치류 종은 마우스 및 랫트를 포함한다. 바람직한 비-인간 영장류는 붉은털원숭이, 침팬지 및 긴꼬리 마카크를 포함한다.
일 구현예에서, 본 발명에 따라 사용된 항체는 인간 표적 단백질과의 교차반응성 외에 적어도 하나의 부가적 종의 표적 단백질과 또한 교차반응성이고, 상기 부가적 종은 마우스, 랫트 및 긴꼬리 마카크 (마카카 파스시컬라리스)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 본 발명에 따라 사용되고 인간 표적 단백질과의 교차반응성인 것 외에 마무스 표적 단백질과 적어도 교차반응성인 항체가 특히 바람직하다. 부가적 비-인간 종의 표적 단백질에 대한 친화도가 50의 인자 초과, 특히 10의 인자 미만까기 인간 표적 단백질에 대한 친화도와 상잉한 교차반응성 항체가 바람직하다.
EGFR 항체
암 표적 분자 EGFR에 결합하는 항체의 예는 세툭시맙 (INN 번호 7906), 파니투무맙 (INN 번호 8499) 및 니모투주맙 (INN 번호 8545)이다. 세툭시맙 (Drug Bank 승인 번호 DB00002)은 SP2/0 마우스 골수 세포에서 생산되고 ImClone Systems Inc/Merck KgaA/Bristol-Myers Squibb Co에 의해 판매되는 키메라 항-EGFR1 항체이다. 세툭시맙은 전이, EGFR 발현, 야생형 K-Ras 유전자를 갖는 결직장 암종의 치료를 위해 표시된다. 10-10M의 친화도를 갖는다.
서열:
세툭시맙 경쇄 (카파):
Figure pct00638
Figure pct00639
세툭시맙 중쇄:
Figure pct00640
파니투무맙 (INN 번호 8499) (Drug Bank 승인 번호 DB01269)은 인간 EGF 수용체 1에 특이적으로 결합하고 Abgenix/Amgen에 의해 판매되는 재조합 모노클로날 인간 IgG2 항체이다. 파니투무맙은 이식유전자 마우스 (XenoMouse)의 면역화로부터 유래한다. 이들 마우스는 인간 면역글로불린 (경쇄 및 중쇄)를 생산할 수 있다. EGFR에 대항하여 항체를 생산하는 특이적 B-세포 클론이 선택되었고 이 클론은 CHO 세포 (차이니즈 햄스터 난소 세포)로 불멸화되었다. 이들 세포는 100% 인간 항체의 생산에 이제 사용된다. 파니투무맙은 EGFR-발현, 전이 결직장 암종의 치료를 위해 표시되고, 상기 암종은 플루오로피리미딘, 옥살리플라틴 및 이리노테칸에 의한 화학치료적 처리에 내성이 있다. 10-11M의 친화도를 갖는다.
서열:
파니투무맙 경쇄 (카파):
Figure pct00641
파니투무맙 중쇄:
Figure pct00642
니모투주맙 (INN 번호 8545) (EP-00586002, EP-00712863)은 인간 EGF 수용체 1에 특이적으로 결합하고 YM BioScienecs Inc. (Mississauga Canada)에 의해 시판되는 인간화 모노클로날 IgG1 항체이다. 비-분비 NSO 세포 (포유동물 세포주)에서 생산된다. 니모투주맙은 두경부 종양, 매우 악성 별아교세포종 및 교모세포종 다중형태 (EU 및 US에서는 아님) 및 췌장 암종 (Orphan drug, EMA)의 치료를 위해 승인되었다. 10-8 M의 친화도를 갖는다.
EGFR 항체의 추가 구현예는 하기와 같다:
ㆍ잘루투무맙 / 2F8 / HuMax-EGFr, Genmab A/S (WO02100348, WO2004056847, INN 번호 8605)
ㆍ네시투무맙 / 11F8, ImClone / IMC-11F8, ImClone Systems Inc. [Eli Lilly & Co] (WO2005090407 (EP-01735348-A1, US20070264253-A1, US07598350, WO2005090407-A1), INN 번호 9083)
ㆍ마투주맙 / 항-EGFR MAb, Merck KGaA / 항-EGFR MAb, Takeda / EMD 72000 / EMD-6200 / EMD-72000 및 EMD-55900 / MAb 425 / 모노클로날 항체 425, Merck KGaA / Takeda (WO09215683, INN 번호 8103 (마투주맙))
ㆍRG-7160 / GA-201 / GA201 / R-7160 / R7160 / RG7160 / RO-4858696 / RO-5083945 / RO4858696 / RO5083945, Glycart Bioetchnology AG (Roche Holding AG) (WO2010112413-A1, WO2010115554)
ㆍGT-MAB 5.2-GEX / CetuGEX, Glycotope GmbH (WO2008028686-A2 (EP-01900750-A1, EP-01911766-A1, EP-02073842-A2, US20100028947-A1)
ㆍISU-101, Isu Abxis Inc (ISU CHEMICAL Co Ltd) / Scancell (WO2008004834-A1)
ㆍABT-806 / mAb-806 / ch-806 / 항-EGFR monoc. antibody 806, Ludwig Institute for Cancer Research / Abbott / Life Science Pharmaceuticals (WO02092771, WO2005081854 및 WO2009023265)
ㆍSYM-004 (2개의 키메라 IgG1 항체 (992 및 1024)로 구성됨), Symphogen A/S (WO2010022736-A2)
ㆍMR1-1 /MR1-1KDEL, IVAX Corp (Teva Pharmaceutical Industries Ltd) (Duke University), (특허: WO2001062931-A2)
ㆍ결실 돌연변이체에 대항하는 항체, EGFRvIII, Amgen/Abgenix (WO2005010151, US07628986)
ㆍSC-100, Scancell Ltd (WO2001088138-A1)
ㆍMDX-447 / EMD 82633 / BAB-447 / H 447 / MAb, EGFR, Medarex/Merck KgaA, Bristol-Myers Squibb (US) / Merck KGaA (DE) / Takeda (JP), (WO09105871, WO09215683)
ㆍ항-EGFR-Mab, Xencor (WO2005056606)
ㆍDXL-1218 / 항-EGFR 모노클로날 항체 (암), InNexus (InNexus Biotechnology Inc., Pharmaprojects PH048638)
하나의 바람직한 구현예에서 항-EGFR 항체는 세툭시맙, 파니투무맙, 니모투주맙, 잘루투무맙, 네시투무맙, 마투주맙, RG-716, GT-MAB 5.2-GEX, ISU-101, ABT-806, SYM-004, MR1-1, SC-100, MDX-447, 및 DXL-1218로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
하나의 특히 바람직한 구현예에서 항-EGFR 항체는 세툭시맙, 파니투무맙, 니모투주맙, 잘루투무맙, 네시투무맙 및 마투주맙으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
숙련가는 서열 변화에 의해 상기 언급된 항체의 CDR 영역으로부터 추가 항체를 제조하기 위해 사용될 수 있는 공정을 알고 있고, 이들 추가 항체는 표적 분자에 대해 유사한 또는 더 나은 친화도 및/또는 특이성을 갖는다.
추가 구현예에서, 항-EGFR 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 하기 항체 중 하나의 경쇄의 3개의 CDR 영역 및 중쇄의 3개의 CDR 영역을 포함하는 항체 또는 항원 결합 항체 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다: 세툭시맙, 파니투무맙, 니모투주맙, 잘루투무맙, 네시투무맙, 마투주맙, RG-716, GT-MAB 5.2-GEX, ISU-101, ABT-806, SYM-004, MR1-1, SC-100, MDX-447, 및 DXL-1218.
또 하나의 구현예에서 항-EGFR 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 하기 항체 중 하나의 경쇄의 3개의 CDR 영역 및 중쇄의 3개의 CDR 영역을 포함하는 항체 또는 항원 결합 항체 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다: 세툭시맙, 파니투무맙, 니모투주맙, 잘루투무맙, 네시투무맙, 마투주맙.
카보안하이드라제 IX 항체
본 발명에 따른 특히 바람직한 결합제는 항-CAIX 항체, 특히 인간 또는 인간화 항-CAIX 항체를 포함한다. 항체는 바람직하게 적어도 10-7　M (Kd 값으로서; 즉, 바람직하게 10-7 M보다 더 작은 Kd 값을 갖는 것), 바람직하게 적어도 10-8　M, 특히 바람직하게 범위 10-9 M 내지 10-11 M의 친화도를 갖는다. 범위 이들 Kd 값은, 예를 들면, 표면 플라즈몬 공명 분광계에 의해 측정될 수 있다.
본 발명에 따른 항체-약물 콘주게이트는 이들 범위의 친화도를 또한 갖는다. 친화도는 바람직하게 활성 성분의 콘주게이션에 의해 유의미하게 영향을 받지 않는다 (친화도는 보통 한 자릿수 미만, 예를 들면, 최대 10-8　M 내지 10-7　M까지 감소된다).
본 발명에 따라 사용된 항체는 높은 선택성을 특징으로 하는 것이 또한 바람직하다. 높은 선택성은, 본 발명에 따른 항체가 또 하나의 독립적인 항원, 예를 들면, 인간 혈청 알부민에 대한 친화도보다 적어도 2의 인자, 5의 인자, 10의 인자 또는 특히 바람직하게 100의 인자 까지 표적 단백질에 대한 더 나은 친화도를 가질 때 생긴다(친화도는, 예를 들면, 표면 플라즈몬 공명 분광계에 의해 측정될 수 있다).
더욱이, 본 발명에 따라 사용된 항체는 바람직하게 교차반응성이다. 전임상시험, 예를 들면, 독물학적 또는 효능 연구 (예를 들면, 이종이식 마우스에서)를 용이하게 하고, 그것을 다 낫게 해석하기 위해, 본 발명에 따라 사용된 항체가 인간 표적 단백질에 결합할뿐만 아니라 연구에 사용된 종에서 종 표적 단백질에 또한 결합한다면 유리하다. 일 구현예에서, 본 발명에 따라 사용된 항체는 인간 표적 단백질 외에 적어도 하나의 종의 표적 단백질과 교차반응성이다. 독물학적 연구 및 효능 연구를 위해, 사용에 바람직한 종은 설치류, 개 및 비-인간 영장류 패밀리의 종이다. 바람직한 설치류 종은 마우스 및 랫트를 포함한다. 바람직한 비-인간 영장류는 붉은털원숭이, 침팬지 및 긴꼬리 마카크를 포함한다.
일 구현예에서, 본 발명에 따라 사용된 항체는 인간 표적 단백질과의 교차반응성 외에 마우스, 랫트 및 긴꼬리 마카크 (마카카 파스시컬라리스)로 이루어진 종의 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 부가적 종의 표적 단백질과의 교차반응성이다. 본 발명에 따라 사용될 수 있고 인간 표적 단백질과의 교차반응성 외에 마우스 표적 단백질과 적어도 교차반응성인 항체가 특히 바람직하다. 바람직한 교차반응성 항체는, 부가적 비-인간 종의 표적 단백질에 대한 친화도가 50 초과의 인자, 특히 10 이하의 인자까지 인간 표적 단백질에 대한 친화도와 상이하지 않는 것이다. 항-CAIX 항체는 예를 들면 WO 2007/070538 A2에 기재된 것을 포함한다. 이들 항체는 본 발명에 따라 사용될 수 있다.
암 표적 분자 카보안하이드라제 IX에 결합하는 항체의 예는 WO2007/070538-A2 (예를 들면 청구항 1 내지 16)에 기재되어 있다.
하나의 바람직한 구현예에서 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다: 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 항원 결합 항체 단편 3ee9 (WO2007070538-A2의 청구항 4 (a)), 3ef2 (WO2007070538-A2의 청구항 4 (b)), 1e4 (WO2007070538-A2의 청구항 4 (c)), 3a4 (WO2007070538-A2의 청구항 4 (d)), 3ab4 (WO2007070538-A2의 청구항 4 (e)), 3ah10 (WO2007070538-A2의 청구항 4 (f)), 3bb2 (WO2007070538-A2의 청구항 4 (g)), 1aa1 (WO2007070538-A2의 청구항 4 (h)), 5a6 (WO2007070538-A2의 청구항 4 (i)) 및 5aa3 (WO2007070538-A2의 청구항 4 (j)).
하나의 바람직한 구현예에서 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
항체 3ee9의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2007070538-A2로부터),
항체 3ef2의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2007070538-A2로부터),
항체 1e4의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2007070538-A2로부터),
항체 3a4의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2007070538-A2로부터),
항체 3ab4의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2007070538-A2로부터),
항체 3ah10의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2007070538-A2로부터),
항체 3bb2의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2007070538-A2로부터),
항체 1aa1의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2007070538-A2로부터),
항체 5a6의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2007070538-A2로부터), 및
항체 5aa3의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2007070538-A2로부터).
CDR 영역의 본 명세서에 표시된 서열은 도 2a - 2c에 개시되어 있다 (WO2007070538-A2의 페이지 128-130).
하나의 바람직한 구현예에서 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
항체 3ee9의 가변 경쇄 및 가변 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편 (WO2007070538-A2, 페이지 137의 도 4b),
항체 3ef2의 가변 경쇄 및 가변 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편 (WO2007070538-A2, 페이지 138의 도 4c 및 페이지 137의 도 4b),
항체 1e4의 가변 경쇄 및 가변 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편 (WO2007070538-A2, 페이지 136의 도 4a),
항체 3a4의 가변 경쇄 및 가변 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편 (WO2007070538-A2, 페이지 136의 도 4a),
항체 3ab4의 가변 경쇄 및 가변 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편 (WO2007070538-A2, 페이지 136의 도 4a),
항체 3ah10의 가변 경쇄 및 가변 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편 (WO2007070538-A2, 페이지 136의 도 4a),
항체 3bb2의 가변 경쇄 및 가변 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편 (WO2007070538-A2, 페이지 137의 도 4b),
항체 1aa1의 가변 경쇄 및 가변 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편 (WO2007070538-A2, 페이지 136의 도 4a),
항체 5a6의 가변 경쇄 및 가변 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편 (WO2007070538-A2, 페이지 137의 도 4b), 및
항체 5aa3의 가변 경쇄 및 가변 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편 (WO2007070538-A2, 페이지 137의 도 4b).
하나의 특히 바람직한 구현예에서 항-카보안하이드라제 IX 항체는 항체 3ee9이다 (WO2007070538-A2).
하나의 특히 바람직한 구현예에서 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 하기를 포함한다: 항체 3ee9의 가변 중쇄의 CDR 영역의 아미노산 서열 (VH3-CDR1: GFTFSSYGMS; VH3-CDR2: GISSLGSTTYYADSVKG; VH3-CDR3: TGSPGTFMHGDH, 참고 도 2a, 페이지 128, WO2007070538-A2) 및 항체 3ee9의 가변 중쇄의 CDR 영역의 아미노산 서열 (VLk1-CDR1: RASQDINNYLS; VLk1-CDR2: YGASNLQS; VLk1-CDR3: QQYYGRPT, 참고 도 2b, 페이지 129, WO2007070538-A2).
하나의 특히 바람직한 구현예에서 항-카보안하이드라제 IX 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 하기를 포함한다: 항체 3ee9의 아미노산 가변 중쇄의 서열
(VH3:ELVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVSGISSLGSTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTGSPGTFMHGDHWGQGTLVTVSS, 참고 도 4b, 페이지 137, WO 2007070538-A2) 및 항체 3ee9의 가변 경쇄의 아미노산 서열
(VLk1:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRaSQDINNYLSWYQQKPGKAPKLLIYGASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQYYGRPTTFGQGTKVEIKRT, 참고 도 4b, 페이지 137, WO 2007070538-A2).
하나의 바람직한 구현예에서 항-카보안하이드라제 IX 항체 3ee9는 IgG 항체이다.
하나의 특히 바람직한 구현예에서 항-카보안하이드라제 IX 항체 3ee9는 IgG1 항체 (3ee9-IgG1)이고,
여기서 상기 중쇄의 아미노산 서열은 하기 서열을 포함한다:
Figure pct00643
경쇄의 아미노산 서열은 하기 서열을 포함한다:
Figure pct00644
항-카보안하이드라제 IX 항체 3ee9-IgG1:
본 발명의 추가 측면은 항-카보안하이드라제 IX 항체 3ee9-IgG1의 제공이다.
C4.4a 항체:
본 발명에 따라 특히 바람직한 결합제는 항-C4.4a 항체, 더욱 특히 인간 또는 인간화 항-C4.4a 항체이다. 항체는 바람직하게는 적어도 10-7 M (Kd 값으로서; 환언하면 바람직하게는 10-7 M보다 더 작은 Kd 값을 갖는 것), 바람직하게는 적어도 10-8 M, 더 바람직하게는 10-9 M 내지 10-11 M 범위의 친화도를 갖는다. Kd 값은 예를 들면, 표면 플라즈몬 공명 분광계에 의해 결정될 수 있다.
본 발명의 항체-약물 콘주게이트는 마찬가지로 이들 범위의 친화도를 나타낸다. 친화도는 바람직하게는 실질적으로 약물의 콘주게이션에 의해 영향을 받지 않는다 (일반적으로, 친화도는 한 자릿수 미만, 환언하면, 예를 들면, 많아야 10-8 M 내지 10-7 M까지 감소된다).
본 발명에 따라 사용되는 항체는 바람직하게는 고선택도에 대해 또한 현저하다. 고선택도는, 본 발명의 항체가 독립적 다른 항원, 예를 들면 인간 혈청 알부민에 대해서보다 적어도 2의 인자, 바람직하게는 5의 인자 또는 더 바람직하게는 10의 인자까지 더 많은 표적 단백질에 대한 친화도를 나타낼 때 나타낸다 (친화도는, 예를 들면, 표면 플라즈몬 공명 분광계에 의해 결정될 수 있다).
더욱이, 사용된 본 발명의 항체는 바람직하게는 교차-반응성이다. 전임상 연구, 예를 들면 독물학적 또는 활성 연구 (예를 들면 이종이식 마우스에서)를 용이하게 하고 더 잘 해석할 수 있기 위해, 본 발명에 따라 사용되는 항체가 인간 표적 단백질에 결합할뿐만 아니라 연구에 사용된 종에서 종 표적 단백질에 결합한다면 유리하다. 일 구현예에서 인간 표적 단백질에 부가하여 본 발명에 따라 사용된 항체는 적어도 하나의 추가 종의 표적 단백질에 대해 교차-반응성이다. 독물학적 및 활성 연구에 대해 설치류, 개 및 비-인간 영장류의 패밀리의 종을 사용하는 것이 바람직하다. 바람직한 설치류 종은 마우스 및 랫트이다. 바람직한 비-인간 영장류는 붉은털원숭이, 침팬지 및 긴 꼬리 마카크이다.
일 구현예에서 인간 표적 단백질에 부가하여 본 발명에 따라 사용된 항체는 마우스, 랫트 및 긴 꼬리 마카크 (마카카 파스시컬라리스)로 이루어진 종의 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 종의 표적 단백질에 대해 교차-반응성이다. 특히 바람직한 것은, 인간 표적 단백질에 부가하여 마우스 표적 단백질에 대해 적어도 교차-반응성인 본 발명에 따라 사용되는 항체이다. 선호되는 것은, 추가 비-인간 종의 표적 단백질에 대한 친화도가 인간 표적 단백질에 대한 친화도로부터 50 이하의 인자, 더욱 특히 10 이하의 인자까지 상이한 교차-반응성 항체이다.
항-C4.4a 항체는 예를 들면 WO200123553 또는 WO 2011070088에서 기재되어 있다. 이들 항체는 본 발명에 따라 사용될 수 있다.
C4.4a 항체 및 항원 결합 단편의 예는 이하에 기재되어 있다. 항체의 서열은 표 1에서 표시되고, 각 라인은 칼럼 1에서 열거된 항체의 각 가변 경쇄 및 가변 중쇄의 각 CDR 아미노산 서열을 재생산한다. 가변 경쇄 및 가변 중쇄의 아미노산 서열, 및 칼럼 1에서 표시된 항체의 핵산 서열은 각 경우에, 또한 표시된다.
일 구현예에서 항-C4.4a 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 C4.4a의 S1 도메인 S1 (서열번호: 1의 아미노산 위치 1-85)에 결합한다.
일 구현예에서 항-C4.4a 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 인간 C4.4a (서열번호:1) 및 쥣과 C4.4a (서열번호:2)와 교차-반응성이다.
일 구현예에서 항-C4.4a 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편은, C4.4a를 발현시키는 세포에 결합한 후, 세포에 의해 내면화된다.
또 하나의 구현예에서 항-C4.4a 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 C4.4a에 결합하기 위해 항체 M31-B01 및/또는 항체 M20-D02-S-A와 경쟁한다. 항체 M31-B01 및 M20-D02-S-A는 C4.4a에 결합하기 위해 경쟁한다. 항체 B01-1 내지 B01-12는 친화도 성숙에 의해 M31-B01로부터 제조되었고 C4.4a에 결합하기 위해 M31-B01와 경쟁한다. 항체 D02-1 내지 D02-13는 친화도 성숙에 의해 M20-D02-S-A로부터 제조되었고 C4.4a에 결합하기 위해 M20-D02-S-A와 경쟁한다.
추가 구현예에서 항-C4.4a 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 표 1 또는 표 2에서 주어진 CDR 아미노산 서열의 적어도 하나, 2 또는 3개를 포함한다.
또 하나의 구현예에서 항-C4.4a 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 표 1 또는 표 2에서 주어진 항체의 CDR 아미노산 서열의 적어도 하나, 2 또는 3개를 포함한다.
추가 구현예에서 항-C4.4a 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 표 1 또는 표 2에서 주어진 항체의 가변 경쇄의 CDR 아미노산 서열의 적어도 하나, 2 또는 3개 및 가변 중쇄의 CDR 아미노산 서열의 적어도 하나, 2 또는 3개를 포함한다.
또 하나의 구현예에서 항-C4.4a 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 표 1 또는 표 2에서 주어진 항체의 가변 경쇄의 CDR 아미노산 서열 및 가변 중쇄의 CDR 아미노산 서열과 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 동일한 것을 포함한다.
또 하나의 구현예에서 항-C4.4a 항체 또는 항원 결합 항체 단편의 CDR 서열은 하기를 포함한다:
CDR 서열번호: 297 (CDR H1), 서열번호: 298 (CDR H2) 및 서열번호: 299 (CDR H3)와 일치하는 중쇄의 CDR 서열 및 CDR 서열번호: 300 (CDR L1), 서열번호: 22 (CDR L2) 및 서열번호: 301 (CDR L3)와 일치하는 경쇄의 CDR 서열, 또는
CDR 서열번호: 302 (CDR H1), 서열번호: 303 (CDR H2) 및 서열번호: 304 (CDR H3)와 일치하는 중쇄의 CDR 서열 및 CDR 서열번호: 305 (CDR L1), 서열번호: 306 (CDR L2) 및 서열번호: 307 (CDR L3)와 일치하는 경쇄의 CDR 서열.
또 하나의 구현예에서 항-C4.4a 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 표 1 또는 표 2에서 주어진 항체의 가변 경쇄 및 가변 중쇄와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 동일한 것을 포함한다.
또 하나의 구현예에서 항-C4.4a 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 표 1 또는 표 2에서 주어진 항체의 가변 경쇄의 3개의 CDR 아미노산 서열 및 가변 중쇄의 3개의 CDR 아미노산 서열을 포함한다.
또 하나의 구현예에서 항-C4.4a 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 표 1 또는 표 2에서 주어진 항체의 가변 경쇄 및/또는 가변 중쇄를 포함한다.
또 하나의 구현예에서 항-C4.4a 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 표 1 또는 표 2에서 주어진 항체의 가변 경쇄 및 가변 중쇄를 포함한다.
하나의 바람직한 구현예에서 C4.4a 항체 및 항원 결합 항체 단편은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
서열번호: 75-77로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 78-80으로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (B01-10),
서열번호: 5, 9 및 13으로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 17, 21 및 25로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (M31-B01),
서열번호: 6, 10 및 14로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 18, 22 및 26으로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (M20-D02-S-A),
서열번호: 7, 11 및 15로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 19, 23 및 27로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (M60-G03),
서열번호: 8, 12 및 16으로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 20, 24 및 28로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (36-H02),
서열번호: 45-47로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 48-50으로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (B01-3),
서열번호: 55-57로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 58-60로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (B01-5),
서열번호: 65-67로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 68-70으로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (B01-7),
서열번호: 85-87로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 88-90로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (B01-12),
서열번호: 95-97로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 98-100으로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (D02-4),
서열번호: 105-107로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 108-110으로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (D02-6),
서열번호: 115-117로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 118-120로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (D02-7),
서열번호: 125-127로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 128-130으로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (D02-11),
및 서열번호: 135-137로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호: 138-140으로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 항체 (D02-13).
하나의 바람직한 구현예에서 C4.4a 항체 및 항원 결합 항체 단편은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
서열번호: 81로 나타낸 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 82로 나타낸 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (B01-7), 서열번호: 33으로 나타내는 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 29로 나타내는 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (M31-B01), 서열번호: 34로 나타내는 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 30으로 나타낸 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (M20-D02 S-A), 서열번호: 35로 나타내는 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 31로 나타내는 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (M60-G03), 서열번호: 36으로 나타내는 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 32로 나타내는 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (M36-H02), 서열번호: 51로 나타내는 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 52로 나타내는 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (B01-3), 서열번호: 61로 나타내는 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 62로 나타내는 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (B01-5), 서열번호: 71로 나타내는 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 72로 나타내는 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (B01-7), 서열번호: 91로 나타내는 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 92로 나타내는 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (B01-12), 서열번호: 101로 나타내는 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 102로 나타내는 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (D02-4), 서열번호: 111로 나타내는 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 112로 나타내는 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (D02-6), 서열번호: 121로 나타내는 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 122로 나타내는 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (D02-7), 서열번호: 131로 나타내는 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 132로 나타내는 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (D02-11), 및 서열번호: 141로 나타내는 가변 중쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 142로 나타내는 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (D02-13).
또 하나의 구현예에서 항-C4.4a 항체는 표 2에서 주어진 항체의 경쇄 및 중쇄를 포함한다.
하나의 바람직한 구현예에서 항-C4.4a 항체는 표 2에서 주어진 항체의 경쇄 및 중쇄를 포함한다.
하나의 특히 바람직한 구현예에서 C4.4a 항체는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
서열번호: 346으로 나타낸 경쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 347로 나타내는 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (M31-B01),
서열번호: 352로 나타내는 경쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 353으로 나타내는 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (B01-3),
서열번호: 364로 나타내는 경쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 365로 나타내는 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (B01-10), 및
서열번호: 382로 나타내는 경쇄의 아미노산 서열 및 서열번호: 383으로 나타내는 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체 (D02-6).
표 1: C4 .4a 항체의 서열
Figure pct00645
Figure pct00646

표 2: 경쇄 및 중쇄의 C4 .4a 항체의 서열
Figure pct00647
항-C4.4a 항체 IgG:
본 발명의 추가 측면은 표 2에서 주어진 항체의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항-C4.4a IgG1 항체를 제공한다.
암 표적 분자 HER2에 결합하는 항체의 일 예는 트라스투주맙 (Genentech)이다. 트라스투주맙은 다른 것들 중에서 유방암의 치료 사용된 인간화 항체이다. 암 표적 분자 CD20에 결합하는 항체의 예는 리툭시맙 (Genentech)이다. 리툭시맙 (CAS 번호 174722-31-7)는 비-호지킨 림프종을 치료하기 위해 사용된 키메라 항체이다. 암 표적 분자 CD52에 결합하는 항체의 일 예는 알렘투주맙 (G효소)이다. 알렘투주맙 (CAS 번호 216503-57-0)는 만성 림프성 백혈병의 치료에 사용된 인간화 항체이다.
메소텔린 항체
본 발명에 따라 특히 바람직한 결합제는 항-메소텔린 항체, 특히 인간 또는 인간화 항-메소텔린 항체이다. 항체는 바람직하게, 적어도 10-7 M (Kd 값으로서, 즉, 바람직하게 Kd 값 미만 10-7　M을 갖는 것), 바람직하게 적어도 10-8 M, 특히 바람직하게 10-9 M 내지 10-11　M 범위의 친화도를 갖는다. Kd 값은 표면 플라즈몬 공명 분광계에 의해 측정될 수 있다.
본 발명에 따른 항체-약물 콘주게이트는 이들 범위의 친화도를 또한 갖는다. 활성 성분의 콘주게이션을 통해, 친화도는 바람직하게 유의미하게 영향을 받지 않는다 (친화도는 보통 한 자릿수 미만, 예를 들면, 최대 10-8 M 내지 10-7　M까지 감소된다).
본 발명에 따라 사용된 항체는 높은 선택성을 특징으로 하는 것이 또한 바람직하다. 높은 선택성은, 본 발명에 따른 항체가 적어도 2의 인자, 바람직하게 5의 인자 또는 특히 바람직하게 10의 인자까지 또 하나의 독립적인 항원, 예를 들면, 인간 혈청 알부민에 대해서보다 표적 단백질에 대해서 더 낮은 친화도를 가질 때 생긴다 (친화도는 예를 들면 표면 플라즈몬 공명 분광계에 의해 측정될 수 있다).
더욱이, 본 발명에 따라 사용된 항체는 바람직하게 교차반응성이다. 전임상시험, 예를 들면, 독물학적 또는 효능 연구 (예를 들면, 이종이식 마우스에서)를 용이하게 하고, 그것을 다 낫게 해석하기 위해, 본 발명에 따라 사용된 항체가 인간 표적 단백질에 결합할뿐만 아니라 이들 연구에 사용된 종에서 종 표적 단백질에 또한 결합한다면 유리하다. 일 구현예에서, 본 발명에 따라 사용된 항체는 본 발명에 따라 사용된 항체와 교차반응성일뿐만 아니라 적어도 하나 부가적 종의 인간 표적 단백질과의 교차반응성이다. 독물학적 연구 및 효능 연구를 위해, 설치류, 개 및 비-인간 영장류 패밀리의 종이 특히 바람직하다. 바람직한 설치류 종은 마우스 및 랫트를 포함한다. 바람직한 비-인간 영장류는 붉은털원숭이, 침팬지 및 긴꼬리 마카크를 포함한다.
일 구현예에서, 본 발명에 따라 사용된 항체는 인간 표적 단백질과의 교차반응성 외에 적어도 하나의 부가적 종의 표적 단백질과 또한 교차반응성이고, 상기 부가적 종은 마우스, 랫트 및 긴꼬리 마카크 (마카카 파스시컬라리스)로 이루이진 종의 그룹으로부터 선택된다. 바람직한 항체는 특히, 본 발명에 따라 사용되고 인간 표적 단백질과의 교차반응성 외에 마우스 표적 단백질과 적어도 교차반응성인 것이다. 바람직한 교차반응성 항체는, 부가적 비-인간 종의 표적 단백질에 대한 친화도가 인간 표적 단백질에 대한 친화도 by 50 초과의 인자, 특히 10 이하의 인자까지 인간 표적 단백질에 대한 친화도와 상이한 것이다.
본 발명에 따라 사용된 항체는 부가적으로 바람직하게 메소텔린에 대한 불변결합을 특징으로 한다. 불변의 결합은, 예를 들면, 본 발명에 따라 사용된 항체가 또 하나의 세포외 단백질에 의해 마스킹될 수 있는 메소텔린의 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 한다. 그와 같은 부가적 세포외 단백질은, 예를 들면, 난소암 항원 125 단백질 (CA125)이다. 사용된 항체는 바람직하게, 메소텔린에 대한 결합이 CA125에 의해 차단되지 않는 것을 특징으로 한다.
항-메소텔린 항체는 예를 들면 WO 2009/068204에서 기재되어 있다. 이들 항체는 본 발명에 따라 사용될 수 있다.
본 발명의 추가 측면은, 아미노산 서열이 서열번호:398 (HCDR1), 서열번호:399 (HCDR2) 및 서열번호:400 (HCDR3)로 나타낸 가변 중쇄의 CDR 서열 및 서열번호:401 (LCDR1), 서열번호:402 (LCDR2) 및 서열번호:403 (LCDR3)로 나타낸 가변 경쇄의 CDR 서열을 포함하는 신규 항-메소텔린 항체 (MF-Ta)을 제공한다.
하나의 바람직한 구현예에서 항-메소텔린 항체 MF-Ta의 아미노산 서열 또는 항원 결합 항체 단편은 서열번호:404로 나타낸 가변 중쇄의 서열 및 서열번호:405로 나타낸 가변 경쇄의 서열을 포함한다. 하나의 바람직한 구현예에서 항-메소텔린 항체 MF-Ta의 아미노산 서열 또는 항원 결합 항체 단편은 핵산 서열번호:406에 의해 인코딩된 가변 중쇄의 서열, 및 핵산 서열번호:407에 의해 인코딩된 가변 경쇄의 서열을 포함한다.
하나의 특히 바람직한 구현예에서 항-메소텔린 항체 MF-Ta의 아미노산 서열은 서열번호:408로 나타낸 중쇄의 서열 및 서열번호:409로 나타낸 경쇄의 서열을 포함한다.
하나의 특히 바람직한 구현예에서 항-메소텔린 항체 MF-Ta의 아미노산 서열은 핵산 서열번호:410으로 인코딩된 중쇄의 서열, 및 핵산 서열번호: 411로 인코딩된 경쇄의 서열을 포함한다.
암 표적 분자 메소텔린에 결합하는 항체의 추가 예는 숙련가에게 공지되어 있고 예를 들면 WO2009068204에서 기재되어 있고 본 발명의 결합제-약물 콘주게이트를 위해 사용될 수 있다.
결합제-약물 콘주게이트의 일 구현예에서, 결합제는 항-메소텔린 항체 또는 항원 결합 항체 단편이고, 여기서 상기 항체는 메소텔린에 결합하고 불변 결합을 나타낸다.
결합제-약물 콘주게이트의 일 구현예에서, 항-메소텔린 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 WOv2009/068204-A1 (표 7; 페이지 61 - 63)에서 기재된 항체의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 아미노산 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 아미노산 서열을 포함한다.
하나의 바람직한 구현예에서 메소텔린 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
항체 MF-Ta의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-메소텔린 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편,
항체 MF-J의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-메소텔린 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2009068204-A1; 표 7; 페이지 61),
항체 MOR06640의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-메소텔린 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2009068204-A1; 표 7; 페이지 61),
항체 MF-226의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-메소텔린 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2009068204-A1; 표 7; 페이지 61) 및
항체 MOR06626의 경쇄의 3개의 CDR 영역의 서열 및 중쇄의 3개의 CDR 영역의 서열을 포함하는 항-메소텔린 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2009068204-A1; 표 7; 페이지 61).
하나의 특히 바람직한 구현예에서 메소텔린 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다:
항체 MF-Ta의 가변 경쇄의 서열 및 가변 중쇄의 서열을 포함하는 항-메소텔린 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편,
항체 MF-J의 가변 경쇄의 서열 및 가변 중쇄의 서열을 포함하는 항-메소텔린 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2009068204-A1; 표 7; 페이지 61),
항체 MOR06640의 가변 경쇄의 서열 및 가변 중쇄의 서열을 포함하는 항-메소텔린 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2009068204-A1; 표 7; 페이지 61),
항체 MF-226의 가변 경쇄의 서열 및 가변 중쇄의 서열을 포함하는 항-메소텔린 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2009068204-A1; 표 7; 페이지 61),
항체 MOR06626의 가변 경쇄의 서열 및 가변 중쇄의 서열을 포함하는 항-메소텔린 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편 (WO2009068204-A1; 표 7; 페이지 61).
추가 항체:
암 표적 분자 Her2에 결합하는 항체의 예는 트라스투주맙 (Genentech)이다. 트라스투주맙은 그 중에서도 유방암의 치료에 사용되는 인간화 항체이다. 암 표적 분자 CD20에 결합하는 항체의 일 예는 리툭시맙 (Genentech)이다. 리툭시맙 (CAS 번호: 174722-31-7)은 비-호지킨 림프종의 치료에 사용되는 키메라 항체이다. 암 표적 분자 CD52에 결합하는 항체의 일 예는 알렘투주맙 (Genzyme)이다. 알렘투주맙 (CAS 번호: 216503-57-0)은 만성 림프성 백혈병의 치료에 사용되는 인간화 항체이다.
트라스투주맙 (INN 7637, CAS No: RN: 180288-69-1) 및 페르투주맙 (Cas No: 380610-27-5) 외에 HER2에 결합하는 항체의 다른 예는 WO2009123894-A2, WO 200/8140603-A2, 또는 WO 2011/044368-A2에서 개시된 항체이다. 항-HER2 콘주게이트의 예는 트라스투주맙-엠탄신 (INN No. 9295)이다.
암 표적 분자 CD30에 결합하고 암, 예를 들면 호지킨 림프종의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는 WO2008092117, WO2008036688 또는 WO2006089232에서 개시된 바와 같은 브렌툭시맙, 이라투무맙 및 항체이다. 항-CD30 콘주게이트의 예는 브렌툭시맙 베도틴 (INN No. 9144)이다.
암 표적 분자 CD22에 결합하고 암, 예를 들면 림프종의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는 이노투주맙 또는 에프라투주맙이다. 항-CD22 콘주게이트의 예는 이노투주맙 오자가마이신 (INN No. 8574), 또는 항-CD22-MMAE 및 항-CD22-MC-MMAE (CAS RN: 139504-50-0 및 474645-27-7)이다.
암 표적 분자 CD33에 결합하고 암, 예를 들면 백혈병의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는 젬투주맙 또는 린투주맙 (INN 7580)이다. 항-CD33 콘주게이트의 예는 젬투주맙-오자가마이신이다.
암 표적 분자 NMB에 결합하고 암, 예를 들면 흑색종 또는 유방암의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는 글렘바투무맙 (INN 9199)이다. 항-NMB 콘주게이트의 예는 글렘바투무맙 베도틴 (CAS RN: 474645-27-7)이다.
암 표적 분자 CD56에 결합하고 암, 예를 들면 다발성 골수종, 폐의 소세포 암종, MCC 또는 난소 암종의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는 로르보투주맙이다. 항-CD56 콘주게이트의 예는 로르보투주맙 메르탄신 (CAS RN: 139504-50-0)이다.
암 표적 분자 CD70에 결합하고 암, 예를 들면 비-호지킨 림프종 또는 신장 세포암의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는 WO2007038637-A2 또는 WO2008070593-A2에 개시되어 있다. 항-CD70 콘주게이트의 예는 SGN-75 (CD70 MMAF)이다.
암 표적 분자 CD74에 결합하고 암, 예를 들면 다발성 골수종의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는 밀라투주맙. 항-CD74 콘주게이트의 예는 밀라투주맙-독소루비신 (CAS RN: 23214-92-8)이다.
암 표적 분자 CD19에 결합하고 암, 예를 들면 비-호지킨 림프종의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는 WO2008031056-A2에 개시되어 있다. 항-CD19 콘주게이트 (SAR3419)의 추가 항체 및 예는 WO2008047242-A2에 개시되어 있다.
암 표적 분자 뮤신-1에 결합하고 암, 예를 들면 비-호지킨 림프종의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는 클리바투주맙 또는 항체이고, 이것은 WO2003106495-A2, WO2008028686-A2에서 개시되어 있다. 항-뮤신 콘주게이트의 예는 WO2005009369-A2에 개시되어 있다.
암, 예를 들면 다발성 골수종의 치료에 사용될 수 있는 암 표적 분자 CD138 및 그의 콘주게이트에 결합하는 항체의 예는 WO2009080829-A1, WO2009080830-A1에서 개시되어 있다.
암 표적 분자 인테그린 알파V에 결합하고 암, 예를 들면 흑색종, 육종 또는 암종의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는 인테투무맙 (Cas RN: 725735-28-4), 압식시맙 (Cas-RN: 143653-53-6), 에타라시주맙 (Cas-RN: 892553-42-3) 또는 항체이고, 이것은 US 7,465,449, EP-19859-A1, WO2002012501-A1 또는 WO2006062779-A2에서 개시되어 있다. 항-인테그린 알파V 콘주게이트의 예는 WO2007024536-A2에서 개시된 다른 ADC 및 인테투무맙-DM4이다.
암 표적 분자 TDGF1에 결합하고 암의 치료에 사용될 수 있는 항체의 WO02077033-A1, US 7,318,924, WO2003083041-A2 및 WO2002088170-A2에서 개시된 항체이다. 항-TDGF1 콘주게이트의 예는 WO2002088170-A2에서 개시되어 있다.
암 표적 분자 PSMA에 결합하고 암, 예를 들면 전립선 암종의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는, WO199735616-A1, WO199947554-A1, 및 WO2001009192-A1에서 개시된 항체이다. 항-PSMA 콘주게이트의 예는 WO2009026274-A1에서 개시되어 있다.
암 표적 분자 EPHA2에 결합하고, 콘주게이트의 제조에 사용될 수 있고 암의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는 WO2004091375-A2에서 개시되어 있다.
암 표적 분자 SLC44A4에 결합하고, 콘주게이트의 제조에 사용될 수 있고 암, 예를 들면 췌장 또는 전립선 암종의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는 WO2009033094-A2 및 US20090175796-A1에서 개시되어 있다.
암 표적 분자 HLA-DOB에 결합하는 항체의 예는 항체 lym-1 (Cas-RN: 301344-99-0)이고, 이것은 암, 예를 들면 비-호지킨 림프종의 치료에 사용될 수 있다. 항-HLA-DOB 콘주게이트의 예는 예를 들면 WO2005081711-A2에 개시되어 있다.
암 표적 분자 VTCN1에 결합하고, 콘주게이트를 제조하기 위해 사용될 수 있고 암, 예를 들면 난소 암종, 췌장, 폐 또는 유방암의 치료에 사용될 수 있는 항체의 예는 WO2006074418-A2에서 개시되어 있다.
암 표적 분자 PDL1에 결합하기 위해 사용될 수 있는 항체의 예는 특허 WO 2007005874 A2로부터의 항체 3G10이다. 항체 3G10은, 예를 들면, 인간 IgG1 포맷에서 및 예시적인 구현예에서 사용된 항-PDL1로서 사용될 수 있고, 여기서 상기 항체는 하기 서열을 포함한다;
경쇄:
Figure pct00648
중쇄:
Figure pct00649
암 표적 분자 ICOSLG에 결합하는 항체의 예는 WO 2007011941 A2로부터의 항체 16H (서열번호: 70 및 45)이다. 항-ICOSLG 항체 16H는 인간 IgG1 포맷에서 및 하기 서열을 포함하는 예시적인 구현예에서 사용된 항-ICOSLG로서 사용될 수 있다:
경쇄:
Figure pct00650
중쇄:
Figure pct00651
Figure pct00652
표적 분자 FGFR3에 결합하는 항체의 일 예는 WO 2010002862 A2로부터의 항체 15D8 (중쇄에 대한 서열번호: 74 및 경쇄에 대한 서열번호: 76)이다. 항-FGFR3 항체 15D8는 예를 들면 인간 IgG1 포맷에서, 및 예시적인 구현예에서 사용된 항-FGFR3로서 사용될 수 있고, 이러한 항체는 하기 서열을 포함한다:
경쇄:
Figure pct00653
중쇄:
Figure pct00654
표적 암 분자 5,6-디하이드록시인돌-2-카복실산 옥시다제 (TYRP1)에 결합하는 항체의 일 예는 특허 WO 2009114585 A1로부터의 항체 20D7S (서열번호: 30 및 32)이다. 예시적인 구현예에서, 항-TYRP1 항체 20D7S는 예를 들면 인간 IgG1 포맷에서 사용될 수 있고, 항-TYRP1으로서 사용될 때, 상기 항체는 하기 서열을 포함한다:
경쇄
Figure pct00655
중쇄:
Figure pct00656
암 표적 분자 글리피칸-3에 결합하는 항체의 일 예는 특허 US 07776329 B2로부터 공지되고 아미노산 서열 서열번호: 84 및 92 (인간 마우스 키메라)를 포함하는 항체이다. 상기 기재된 항-글리피칸-3 항체는 예를 들면 인간 IgG1 포맷에서, 및 예시적인 구현예에서 사용된 항-글리피칸-3으로서 사용될 수 있고, 이러한 항체는 하기 서열을 갖는다:
경쇄:
Figure pct00657
중쇄:
Figure pct00658
Figure pct00659
본 발명의 화합물은 귀중한 약리적 특성을 가지며 인간 및 동물에서 질환의 예방 및 치료에 사용될 수 있다.
식 (Ia)의, 본 발명의 결합제-약물 콘주게이트 (ADC)은 본 실험 섹션 (C-1. 내지 C-7e)에서 제시된 검정을 기반으로 하여 보여줄 수 있는 바와 같이, 종양 세포에 대해 높은 및 특이적 세포독성 활성을 나타낸다. 식 (Ia)의, 본 발명의 결합제-약물 콘주게이트 (ADC)의 부분에 대한 이러한 높은 및 특이적 세포독성 활성은 신규 N,N-디알킬아우리스타틴 유도체 및 결합제와, 독성기의 방출을 위해 효소적으로, 또는 환원적으로 절단가능 예정된 중단점을 나타낼 더욱이, 그와 같은 예정된 중단점을 나타내는 링커와의 적절한 조합을 통해 달성된다. 더욱 특히, 독성기의 방출을 위해 효소적으로, 가수분해로 또는 환원적으로 절단가능 예정된 중단점을 갖지 않고, ADC의 종양 세포로의 섭취 다음에 그리고 항체의 완전한 세포내, 효소 파손 다음에, 여전히 전체적으로 또는 부분적 온전한 채로 남아 있는 안정한 링커의 사용을 통해, 활성은 아주 특이적으로 종양 세포로 국한된다. ADC 및 안정한 링커 사이의 양립가능성은, 다른 것들 중에서, 세포내로 형성된 대사물은 충분한 효능과 함께 형성될 수 있고, 그것의 표적에 도달할 수 있고 수송체 단백질에 의해 미리 또 종양 세포 없이 충분한 효능과 함께 표적 상에서 그것의 항-증식성 활성을 발달시킬 수 있다는 것을 예상한다. 식 (Ia)의 본 발명의 화합물 후 세포내로 형성된 대사물은 수송체 단백질에 대해 기질로서 감소된 포텐셜을 나타내도록 취해졌고, 이로써 체순환으로의 그것의 재분포를 억제하고 따라서 포텐셜측의 유발은 독성기 자체에 영향을 미친다. 또한 모노메틸아우리스타틴 펩타이드의 아미노 말단에서의 기본적인 특징은 신규 N-알킬 결합에 의해 보존된다. 특히 본 발명에 따른 식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 (ADC)로, 항체의 총 충전은 독성기-링커 충전의 수와는 무관하게 일정하게 유지된다.
ADC와, 안정된 링커 화학 및 문제의 표적과의 양립가능성은, 비교적 낮은 정도로 수송체 단백질에 대한 기질을 나타내는 대사물과 함께, 확대된 치료 가능시기를 제공한다.
특성의 이 프로파일을 기반으로, 따라서 본 발명의 화합물 일반적으로 특정한 정도로 인간 및 포유동물에서 과증식 질환의 치료에 적당하다 일반적으로. 화합물은 세포 증식 및 세포 분열을 억제, 차단, 감소 또는 저하시킬 수 있고, 다른 한편으로 세포자멸사를 증가시킬 수 있다.
본 발명의 화합물이 이용될 수 있는 치료를 위한 과증식 질환은 특히 암 및 종양 질환의 그룹을 포함한다. 본 발명의 문맥에서, 이들은 특히, 하기 질환을 의미하지만 그것들에 제한되지 않는 것으로 이해된다: 유선 암종 및 유선 종양 (도관 및 소엽 형태, 또한 원위치에), 기도의 종양 (소세포 및 비-소세포 암종, 기관지 암종), 뇌 종양 (예를 들면 뇌간 및 시상하부, 별아교세포종, 수모세포종, 뇌실막종 및 신경외배엽성 및 송과체 종양), 소화 기관 (식도, 위, 담낭, 작은 창자, 큰 창자, 직장)의 종양, 간 종양 (간세포 암종, 담관세포 암종 및 혼합된 간세포 및 담관세포 암종 포함), 두경부 영역 (후두, 하인두, 비인두, 구인두, 입술 및 구강)의 종양, 피부 종양 (편평상피 상피 암종, 카포시 육종, 악성 흑색종, 메르켈 세포 피부암 및 비-흑색종 피부암), 연조직의 종양 (연조직 육종, 골육종, 악성 섬유질 조직구종, 림프육종 및 횡문근육종 포함), 눈의 종양 (안구내 흑색종 및 망막모세포종 포함), 내분비 및 외분비샘 (예를 들면 갑상선 및 부갑상선, 췌장 및 타액샘)의 종양, 요로의 종양 (방광, 음경, 신장, 신장 골반 및 수뇨관의 종양) 및 생식 기관의 종양 (여성의 자궁내막, 자궁경부, 난소, 질, 외음부 및 자궁의 암종 및 남성의 전립선 및 고환의 암종). 이들은 또한 증식성 혈액 질환을 고형으로 및 순환 혈액 세포, 예컨대 림프종, 백혈병 및 골수증식성 질환, 예를 들면 급성 골수, 급성 림프모구, 만성 림프구성, 만성 골수성 및 모발 세포 백혈병으로서, 및 또한 중추 신경계의 AIDS-상관된 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 피부 T-세포 림프종, 버킷 림프종 및 림프종으로을 포함한다.
항-CA9 결합제-약물 콘주게이트를 위한 바람직한 과증식 질환
본 발명의 화합물이 바람직하게 이용될 수 있는 치료를 위한 과증식 질환은 하기이다: CA9-과발현 종양, 유선 암종 및 유선 종양 (예를 들면 도관 및 소엽 형태, 또한 원위치에); 폐의 비-소세포 암종을 바람직하게 포함하는 기도의 종양 (예를 들면 소세포 및 비-소세포 암종, 기관지 암종); 뇌 종양 (예를 들면 뇌간 종양 및 시상하부, 별아교세포종, 수모세포종, 뇌실막종 및/또는 신경외배엽성 및 송과체 종양); 위 종양 및 장 종양을 더 바람직하게 포함하는 소화 기관의 종양 (식도, 위, 담낭, 작은 창자, 큰 창자, 직장); 간 종양 (간세포 암종, 담관세포 암종 및 혼합된 간세포 및 담관세포 암종 포함); 두경부 영역 (예를 들면 후두, 하인두, 비인두, 구인두, 입술, 구강, 혀 및 식도)의 종양; 신장 및 방광의 종양을 더 바람직하게 포함하는 요로의 종양 (방광, 음경, 신장, 신장 골반 및 수뇨관의 종양); 및/또는 자궁경부 및 자궁의 암종을 더 바람직하게 포함하는 생식 기관의 종양 (여성의 자궁내막, 자궁경부, 난소, 질, 외음부 및 자궁의 암종 및/또는 남성의 전립선 및 고환의 암종).
항- EGFR 결합제-약물 콘주게이트를 위한 바람직한 과증식 질환
본 발명의 화합물이 바람직하게 이용될 수 있는 치료를 위한 과증식 질환은 하기이다: EGFR-과발현 종양, 폐의 비-소세포 암종을 바람직하게 포함하는 기도 종양 (예를 들면 소세포 및 비-소세포 암종, 기관지 암종); 특히 장 종양을 포함하는 소화 기관의 종양 (예를 들면 식도, 위, 담낭, 작은 창자, 큰 창자, 직장); 췌장을 바람직하게 포함하는 내분비 및 외분비샘 (예를 들면 갑상선 및 부갑상선, 췌장 및 타액샘)의 종양; 두경부 영역 (예를 들면 후두, 하인두, 비인두, 구인두, 입술, 구강, 혀 및 식도)의 종양; 및/또는 신경아교종.
항-메소텔린 결합제-약물 콘주게이트를 위한 바람직한 과증식 질환
본 발명의 화합물이 바람직하게 이용될 수 있는 치료를 위한 과증식 질환은 하기이다: 메소텔린-과발현 종양, 난소 암종을 바람직하게 포함하는 생식 기관의 종양 (여성의 자궁내막, 자궁경부, 난소, 질, 외음부 및 자궁의 암종 및/또는 남성의 전립선 및 고환의 암종); 췌장을 바람직하게 포함하는 내분비 및 외분비샘 (예를 들면 갑상선 및 부갑상선, 췌장 및 타액샘)의 종양; 폐의 비-소세포 암종을 바람직하게 포함하는 기도 종양 (예를 들면 소세포 및 비-소세포 암종, 기관지 암종); 및/또는 중피종.
항-C4.4a 결합제-약물 콘주게이를 위한 바람직한 과증식 질환
본 발명의 화합물이 바람직하게 이용될 수 있는 치료를 위한 과증식 질환은 하기이다: C4.4a-과발현 종양, 편평상피 상피 암종 (예를 들면 자궁경부, 외음부, 질, 항문관, 자궁내막, 나팔관, 음경, 음낭, 식도, 유방, 방광, 담관, 자궁내막, 자궁 및 난소 암종); 유선 암종 및 유선 종양 (예를 들면 도관 및 소엽 형태, 또한 원위치에); 폐의 비-소세포 암종, 편평상피 상피 암종 및 선암종을 바람직하게 포함하는 기도의 종양 (예를 들면 소세포 및 비-소세포 암종, 기관지 암종); 두경부 영역의 종양 (예를 들면 후두, 하인두, 비인두, 구인두, 입술, 구강, 혀 및 식도 종양, 두경부 영역의 편평상피 상피 암종); 신장 및 방광의 종양을 더 바람직하게 포함하는 요로의 종양 (방광, 음경, 신장, 신장 골반 및 수뇨관의 종양, 방광의 편평상피 상피 암종); 흑색종을 더 바람직하게 포함하는 피부 종양 (편평상피 상피 암종, 카포시 육종, 악성 흑색종, 메르켈 세포 피부암 및 비-흑색종 피부암); 췌장을 바람직하게 포함하는 내분비 및 외분비샘 (예를 들면 갑상선 및 부갑상선, 췌장 및 타액샘)의 종양; 특히 결직장 암종을 포함한는 소화 기관의 종양 (예를 들면 식도, 위, 담낭, 작은 창자, 큰 창자, 직장); 및/또는 자궁 암종을 더 바람직하게 포함하는 생식 기관의 종양 (여성의 자궁내막, 자궁경부, 난소, 질, 외음부 및 자궁의 암종 및/또는 남성의 전립선 및 고환의 암종).
인간의 이들 잘 기재된 질환은 다른 포유동물에서 비교가능 병인과 함께 또한 생길 수 있고 본 발명의 화합물로 거기에서 치료될 수 있다.
본 발명의 문맥에서 용어 "치료" 또는 "치료하는"은 종래의 의미로 사용되고 병 또는 건강 비정상과 싸우고, 그것을 감소, 감쇠 또는 완화시키고 이 병, 예를 들면, 암 질환에 의해 손상된 생활 상태를 개선하기 위해 환자를 돌보고, 캐어하고 간호하는 것을 의미한다.
본 발명은 또한 질환, 특히 상기 언급된 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 질환, 특히 상기 언급된 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
본 발명은 질환, 특히 상기 언급된 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 방법에서 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 유효량의 본 발명의 화합물의 적어도 하나를 사용하여 질환, 특히 상기 언급된 질환의 치료 및/또는 예방하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 결합제-약물 콘주게이트는 바람직하게는 환자의 암을 치료하기 위해 사용되고, 여기서 상기 치료될 환자의 암 세포는 비-종양 조직에서보다 이 표적의 더 큰 발현을 갖는 표적 (바람직하게는 EGFR, CA9, 메소텔린 또는 C4.4a)을 발현시킨다.
암의 치료를 위해 항-표적 결합제-약물 콘주게이트에 유익하게 반응하는 환자를 확인하는 하나의 방법은 환자의 암 세포의 표적 발현을 측정하는 것을 포함한다. 일 구현예에서 표적 발현은 표적 유전자 발현 분석에 의해 측정된다. 숙련가는 유전자 발현 분석용 방법 예를 들면, RNA 검출, 정량적 또는 정성적 폴리머라제 사슬 반응 또는 형광 원위치 하이브리드화 (FISH)을 알고 있다. 또 하나의 바람직한 구현예에서 표적 발현은 항-표적 항체에 의한 면역조직화학에 의해 측정된다. 면역조직화학은 바람직하게는 포름알데하이드-고정된 조직 상에서 수행된다. 면역조직화학에 사용하기 위한 항체는 콘주게이트에서도 사용되는 동일한 항체이다. 항 면역조직화학에서 사용하기 위한 항체는 바람직하게는 특이적으로 표적 단백질/표적을 인식하는 제2 항체이다.
본 발명에 따른 화합물은 자체로 또는, 필요하다면, 또는 그 초과 다른 약리적으로 활성 물질과 병용하여 이용될 수 있고, 단, 이 조합으로 바람직하지 않는 및 허용가능하지 않는 부작용이 생기지 않아야 한다. 더욱 따라서 본 발명은, 특히 상기 언급된 질환의 치료 및/또는 예방을 위해 본 발명의 화합물 및 1 또는 그 초과의 추가 약물의 적어도 하나를 포함하는 약제를 제공한다.
예를 들면, 본 발명의 화합물은 암 질환의 치료를 위해 공지된 항과증식성, 세포정지성 또는 세포독성 물질과 병용될 수 있다. 예로써 언급될 수 있는 병용한 적당한 약물은, 하기와 같다:
알데스류킨, 알렌드론산, 알파페론, 알리트레티노인, 알로퓨리놀, 알로프림, 알록시, 알트레타민, 아미노글루테티마이드, 아미포스틴, 암루비신, 암사크린, 아나스트로졸, 안즈메트, 아라네스프, 아르글라빈, 삼산화 비소, 아로마신, 5-아자시티딘, 아자티오프린, BCG 또는 tice-BCG, 베스타틴, 베타메타손 아세테이트, 베타메타손 나트륨 포스페이트, 벡사로텐, 블레오마이신 설페이트, 브록수리딘, 보르테조밉, 부설판, 칼시토닌, 캄파쓰, 카페시타빈, 카보플라틴, 카소덱스, 세페손, 셀모류킨, 세루비딘, 클로르암부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 클로드론산, 사이클로포스파마이드, 사이타라빈, 다카르바진, 닥티노마이신, 다우녹솜, 데카드론, 데카드론 포스페이트, 델레스트로겐, 데닐류킨 디프티톡스, 데포메드롤, 데슬로렐린, 덱스라족산, 디에틸스틸베스트롤, 디플루칸, 도세탁셀, 독시플루리딘, 독소루비신, 드로나비놀, DW-166HC, 엘리가드, 엘리텍, 엘렌세, 에멘드, 에피루비신, 에포에틴-알파, 에포겐, 엡타플라틴, 에르가미솔, 에스트라세, 에스트라디올, 에스트라무스틴 나트륨 포스페이트, 에티닐에스트라디올, 에티올, 에티드론산, 에토포포스, 에토포사이드, 파드로졸, 파르스톤, 필그라스팀, 피나스테라이드, 필그라스팀, 플록수리딘, 플루코나졸, 플루다라빈, 5-플루오로데옥시우리딘 모노포스페이트, 5-플루오로우라실 (5-FU), 플루옥시메스테론, 플루타마이드, 포르메스탄, 포스테아빈, 포테무스틴, 풀베스트란트, 감마가드, 젬시타빈, 젬투주맙, 글리벡, 글라이아델, 고세렐린, 그라니세트론 하이드로클로라이드, 히스트렐린, 하이캄틴, 하이드로코르톤, 에리트로-하이드록시노닐아데닌, 하이드록시우레아, 이브리투모맙 티욱세탄, 아이다루비신, 이포스파마이드, 인터페론-알파, 인터페론-알파-2, 인터페론-알파-2α, 인터페론-알파-2β, 인터페론-알파-n1, 인터페론-알파-n3, 인터페론-베타, 인터페론-감마-1α, 인터루킨-2, 인트론 A, 이레싸, 이리노테칸, 카이트릴, 렌티난 설페이트, 레트로졸, 류코보린, 류프롤라이드, 류프롤라이드 아세테이트, 레바미솔, 레보폴산 칼슘 염, 레보트로이드, 레복실, 로무스틴, 로니다민, 마리놀, 메클로레타민, 메코발라민, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란, 메네스트, 6-머캅토퓨린, 메스나, 메토트렉세이트, 메트빅스, 밀테포신, 미노사이클린, 미토마이신 C, 미토탄, 미톡산트론, 모드레날, 마이오세트, 네다플라틴, 뉴라스타, 뉴메가, 뉴포겐, 닐루타마이드, 놀바덱스, NSC-631570, 옥트-43, 옥트레오타이드, 온단세트론 하이드로클로라이드, 또는아프레드, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 페디아프레드, 페가스파르가스, 페가시스, 펜토스타틴, 피시바닐, 필로카르핀 하이드로클로라이드, 피라루비신, 필리카마이신, 리보프린 나트륨, 프레드니무스틴, 프레드니솔론, 프레드니손, 프레마린, 프로카르바진, 프로크리트, 랄티트렉세드, 레비프, 레늄-186 에티드로네이트, 리툭시맙, 로페론-A, 로무르타이드, 살라겐, 산도스타틴, 사르그라모스팀, 세무스틴, 시조피란, 소부족산, 솔루-멘드롤, 스트렙토조신, 스트론튬-89 클로라이드, 신트로이드, 타목시펜, 탐설로신, 타소네르민, 타스토락톤, 탁소테르, 테셀류킨, 테모졸로마이드, 테니포사이드, 테스토스테론 프로피오네이트, 테스트레드, 티오구아닌, 티오테파, 타이로트로핀, 틸루드론산, 토포테칸, 토레미펜, 모시투모맙, 타스투주맙, 테오설판, 트레티노인, 트렉살, 트리메틸멜라민, 트리메트렉세이트, 트리프토렐린 아세테이트, 트리프토렐린 파모네이트, UFT, 우리딘, 발루비신, 베스나리논, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈, 빌루리진, 지네카드, 지노스타틴-스티말라머, 조프란; ABI-007, 아콜비펜, 악티뮨, 아피니탁, 아미노프테린, 아르족시펜, 아소프리스닐, 아타메스탄, 아트라센탄, 아바스틴, BAY 43-9006 (소라페닙), CCI-779, CDC-501, 셀레브렉스, 세툭시맙, 크리스나톨, 사이프로테론 아세테이트, 데시타빈, DN-101, 독소루비신-MTC, dSLIM, 두타스테라이드, 에도테카린, 에플로르니틴, 엑사테칸, 펜레티나이드, 히스타민 디하이드로클로라이드, 히스트렐린 하이드로겔 임플란트, 홀뮴-166 DOTMP, 이반드론산, 인터페론-감마, 인트론-PEG, 익사베필론, 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌, L-651582, 란레오타이드, 라소폭시펜, 리브라, 로나파르닙, 미프록시펜, 미노드로네이트, MS-209, 리포솜 MTP-PE, MX-6, 나파렐린, 네모루비신, 네오바스타트, 놀라트렉세드, 오블리메르센, onko-TCS, 오시뎀, 파클리탁셀 폴리글루타메이트, 팔미드로네이트 디나트륨, PN-401, QS-21, 쿠아제팜, R-1549, 랄옥시펜, 란피르나스, 13-시스-렉트산, 사트라플라틴, 세오칼시톨, T-138067, 타르세바, 탁소프렉신, 티모신-알파-1, 티아조퓨린, 티피파르닙, 티라파자민, TLK-286, 토레미펜, transMID-107R, 발스포다르, 바프레오타이드, 바탈라닙, 베르테포르핀, 빈플루닌, Z-100, 졸레드론산 및 이들의 조합.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 화합물은, 예로써 이들 목록이 확정적이지 않은 항과증식성 제제와 병용될 수 있다:
아미노글루테티마이드, L-아스파라기나제, 아자티오프린, 5-아자시티딘, 블레오마이신, 부설판, 카보플라틴, 카르무스틴, 클로르암부실, 시스플라틴, 콜라스파제, 사이클로포스파마이드, 사이타라빈, 다카르바진, 닥티노마이신, 다우노루비신, 디에틸스틸베스트롤, 2',2'-디플루오로데옥시시티딘, 도세탁셀, 독소루비신 (아드리아마이신), 에피루비신, 에포틸론 및 그의 유도체, 에리트로-하이드록시노닐아데닌, 에티닐-에스트라디올, 에토포사이드, 플루다라빈 포스페이트, 5-플루오로데옥시우리딘, 5-플루오로데옥시우리딘 모노-포스페이트, 5-플루오로우라실, 플루옥시메스테론, 플루타마이드, 헥사메틸멜라민, 하이드록시우레아, 하이드록시프로게스테론 카프로에이트, 아이다루비신, 이포스파마이드, 인터페론, 이리노테칸, 류코보린, 로무스틴, 메클로레타민, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란, 6-머캅토퓨린, 메스나, 메토트렉세이트, 미토마이신 C, 미토탄, 미톡산트론, 파클리탁셀, 펜토스타틴, N-포스포노아세틸 L-아스파르테이트 (PALA), 필리카마이신, 프레드니솔론, 프레드니손, 프로카르바진, 랄옥시펜, 세무스틴, 스트렙토조신, 타목시펜, 테니포사이드, 테스토스테론 프로피오네이트, 티오구아닌, 티오테파, 토포테칸, 트리메틸멜라민, 우리딘, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신 및 비노렐빈.
본 발명의 화합물은 생물학적 치료제 예컨대 항체 (예를 들면 아바스틴, 리툭산, 에르비툭스, 헤르셉틴)와 매우 유망한 방식으로 또한 병용될 수 있다. 본 발명의 화합물은 신생혈관형성에 대항하는 요법, 예를 들면, 아바스틴, 악시티닙, 레센틴, 레고라페닙, 소라페닙 또는 선니티닙과 병용하여 긍정적인 효과를 또한 달성할 수 있다. 프로테아솜 및 mTOR의 억제제 및 또한 항호르몬제 및 스테로이드 대사 효소 억제제와의 병용이 마찬가지로 특히 적당한 것은, 부작용의 그것의 호의적인 프로파일 때문이다.
일반적으로, 하기 목적은 본 발명의 화합물과 세포정지성 또는 세포독성 작용을 가즌 다른 제제와의 병용에 의해 추구될 수 있다:
ㆍ개별적인 약물에 의한 치료와 비교된, 종양의 성장을 느리게 하고, 그의 크기를 감소시키거나 또는 심지어 그것을 완전히 제거하는 개선된 활성;
ㆍ단일요법에서보다 더 낮은 복용량으로 사용된 화학치료를 이용하는 가능성;
ㆍ개별적인 투여와 비교된 더 적은 부작용을 갖는 더 참을 수 있는 요법의 가능성;
ㆍ더 넓은 스펙트럼의 종양 질환의 치료 가능성;
ㆍ요법에 대한 더 높은 비율의 반응의 달성;
ㆍ오늘날의 표준 요법과 비교된 환자의 더 긴 생존 시간.
또한, 본 발명에 따른 화합물은 방사선요법 및/또는 수술 개입과 병용하여 또한 이용될 수 있다.
본 발명의 추가 요지는 본 발명에 따른 적어도 하나의 화합물을, 통상 적어도 하나의 불활성 비독성 약제학적으로 적용가능한 부형제와 함께 함유하는 약제학적 약물뿐만 아니라 상기 목적의 용도이다.
본 발명에 따른 화합물은 전신으로 및/또는 국소로 작용할 수 있다. 이를 위해 적당한 방식으로 예컨대, 예를 들면, 경구로 또는 비경구로 적용된다. 본 발명에 따른 화합물은 전신으로 및/또는 국소로 작용할 수 있다. 이를 위해 적당한 방식으로 예를 들면, 비경구로, 아마 흡입에 의해 또는 임플란트 및/또는 스텐트로서 적용된다.
이들 적용 방법을 위해, 본 발명의 화합물은 이들 투여 경로를 위해 적당한 투여 형태로 투여될 수 있다.
비경구 투여는 흡수 단계의 우회 (예를 들면 정맥내로, 동맥내로, 심장내로, 척수내로 또는 요추내로) 또는 흡수의 포함 (예를 들면 근육내로, 피하, 피부내로, 경피적으로 또는 복강내로)에 의해 수행될 수 있다. 비경구 투여에 적당한 투여 형태는 주입 및 주사 제형을 용액, 서스펜션, 에멀젼, 또는 리오필제이트의 형태로 포함한다.
비경구 투여 특히 정맥내 투여가 바람직하다.
i.v. 용액:
본 발명에 따른 화합물은 지적된 투여 형태로 전환될 수 있다. 이것은 불활성, 비-독성, 약제학적으로 적당한 부형제 (예를 들면, 완충액 물질, 안정제, 가용화제, 보존제)"와 혼합하고" 및/또는 "그것에서 용해시켜서" 공지된 방식으로 행해질 수 있다. 이들 부형제는 예를 들면 하기를 포함한다: 아미노산 (글리신, 히스티딘, 메티오닌, 아르기닌, 리신, 류신, 이소류신, 트로오닌, 글루탐산, 페닐알라닌 및 기타), 당 및 관련된 물질 (글루코스, 사카로오스, 만니톨, 트레할로오스, 스크로오스, 만노스, 락토스, 소르비톨), 글리세롤, 나트륨, 칼륨, 암모늄 및 칼슘 염 (예를 들면, NaCl, KCl 또는 Na2HPO4, 및 더 많은 것), 아세테이트/아세트산 완충액 시스템, 인산염 완충액 시스템, 시트르산 및 시트레이트 완충액 시스템, 트로메타몰 (TRIS 및 TRIS 염), 폴리소르베이트 (예를 들면, 폴리소르베이트 80 및 폴리소르베이트 20), 폴록사머 (예를 들면, 폴록사머 188 및 폴록사머 171), 매크로골 (PET 유도체, 예를 들면 3350), Triton X-100, EDTA 염, 글루타티온, 알부민 (예를 들면, 인간), 우레아, 벤질 알콜, 페놀, 클로로크레졸, 메타크레졸, 벤즈알코늄 클로라이드 및 많은 다른 것들.
일반적으로, 효과적인 결과를 달성하기 위해 약 0.001 내지 1 mg/kg, 바람직하게는 약 0.01 내지 0.5 mg/kg의 체중의 양을 비경구 투여의 경우에 유리한 것으로 증명되었다.
그럼에도 불구하고 언급된 양으로부터, 및 특히 체중, 투여 경로, 활성 화합물을 향한 개별적인 거동, 제형의 본성 및 투여가 일어나는 시점 또는 간격에 따라 벗어나는 것이 필요할 수 있다. 따라서 일부 경우에서 상기 언급된 최소량 미만으로 이용하는 것이 충분할 수 있고, 한편 다른 경우에 언급된 상한은 배제되어야 한다. 상대적 다량이 투여된 경우, 하루에 걸쳐 이들을 몇 개의 개별적인 용량으로 나누는 것이 권할만 할 수 있다.
하기 실시예는 본 발명을 설명한다. 본 발명은 실시예로 제한되지 않는다.
하기 시험 및 실시예에서 백분율 수치는 중량 백분율이고, 달리 언급되지 않으면; 부는 중량부이다. 용매 비, 희석 비 및 액체/액체 용액의 농도 데이타는 각 경우에 용적에 관한 것이다.
A. 실시예
약어 및 머리글자:
Figure pct00660
Figure pct00661
Figure pct00662
Figure pct00663
HPLC 및 LC-MS 방법:
방법 1 (LC-MS):
기기: Water Acquity SQD UPLC 시스템; 칼럼: Water Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50 mm × 1 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.25 ml 99% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.25 ml 99% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 90% A → 1.2 분 5% A → 2.0 분 5% A; 유속: 0.40 ml/분; 오븐: 50 ℃; UV 검출: 210-400 nm.
방법 2 (LC-MS):
기기: Micromass QuattroPremier Waters UPLC Acquity; 칼럼: Thermo Hypersil GOLD 1.9μ 50 mm × 1 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.5 ml 50% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.5 ml 50% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 90% A → 0.1 분 90% A → 1.5 분 10% A → 2.2 분 10% A; 유속: 0.33 ml/분; 오븐: 50 ℃; UV 검출: 210 nm.
방법 3 (LC-MS):
기기: Micromass Quattro Micro MS HPLC Agilent 시리즈 1100; 칼럼: Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm × 4 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.5 ml 50% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.5 ml 50% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 100% A → 3.0 분 10% A → 4.0 분 10% A → 4.01 분 100% (유속 2.5 ml/분) → 5.00 분 100% A; 오븐: 50 ℃; 유속: 2 ml/분; UV 검출: 210 nm.
방법 4 (LC-MS):
MS 기기: Micromass ZQ; HPLC 기기: HP 1100 시리즈; UV DAD; 칼럼: Phenomenex Gemini 3μ 30 mm × 3.00 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.5 ml 50% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.5 ml 50% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 90% A → 2.5 분 30% A → 3.0 분 5% A → 4.5 분 5% A; 유속: 0.0 분 1 ml/분 → 2.5 분/3.0 분/4.5 분 2 ml/분; 오븐: 50 ℃; UV 검출: 210 nm.
방법 5 (HPLC):
기기: HP 1090 시리즈 II; 칼럼: Merck Chromolith SpeedROD RP-18e, 50 mm × 4.6 mm; 예비 칼럼: Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP-18e, 5 mm × 4.6 mm; 주사 용적: 5 μl; 용출물 A: 물 중 70% HClO4 (4 ml/리터), 용출물 B: 아세토니트릴; 구배: 0.00 분 20% B → 0.50 분 20% B → 3.00 분 90% B → 3.50 분 90% B → 3.51 분 20% B → 4.00 분 20% B; 유속: 5 ml/분; 칼럼 온도: 40 ℃.
방법 6 (HPLC):
기기: 물 2695 DAD 996; 칼럼: Merck Chromolith SpeedROD RP-18e, 50 mm × 4.6 mm; Ord. 번호: 1.51450.0001, 예비 칼럼: Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP-18e, 5 mm × 4.6 mm; Ord. 번호: 1.51470.0001, 용출물 A: 물 중 70% HClO4 (4 ml/리터), 용출물 B: 아세토니트릴; 구배: 0.00 분 5% B → 0.50 분 5% B → 3.00 분 95% B → 4.00 분 95% B; 유속: 5 ml/분.
방법 7 (LC-MS):
MS 기기: 물 ZQ; HPLC 기기: Agilent 1100 시리즈; UV DAD; 칼럼: Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm × 4 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.5 ml 50% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.5 ml 50% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 100% A → 3.0 분 10% A → 4.0 분 10% A → 4.1 분 100% (유속 2.5 ml/분); 오븐: 55 ℃; 유속: 2 ml/분; UV 검출: 210 nm.
방법 8 (LC-MS):
MS 기기: 물 ZQ; HPLC 기기: Agilent 1100 시리즈; UV DAD; 칼럼: Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm × 4 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.5 ml 50% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.5 ml 50% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 100% A → 2.0 분 60% A → 2.3 분 40% A → 3.0 분 20% A → 4.0 분 10% A → 4.2 분 100% (유속 2.5 ml/분); 오븐: 55 ℃; 유속: 2 ml/분; UV 검출: 210 nm.
방법 9 (LC-MS):
기기: Water Acquity SQD UPLC 시스템; 칼럼: Water Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50 mm × 1 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.25 ml 99% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.25 ml 99% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 95% A → 6.0 분 5% A → 7.5 분 5% A; 오븐: 50 ℃; 유속: 0.35 ml/분; UV 검출: 210-400 nm.
방법 10 (HPLC):
기기: Agilent 1200 시리즈; 칼럼: Agilent Eclipse XDB-C18 5μ 4.6 mm × 150 mm; 예비 칼럼: Phenomenex KrudKatcher Disposable Pre-Column; 주사 용적: 5 μl; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.01% 트리플루오로아세트산; 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.01% 트리플루오로아세트산; 구배: 0.00 분 10% B → 1.00 분 10% B → 1.50 분 90% B → 5.5 분 10% B; 유속: 2 ml/분; 칼럼 온도: 30 ℃.
제조가 하기에 명백히 기재되어 있지 않은 모든 반응물 또는 시약에 대해, 일반적으로 이용가능한 공급원으로부터 상업적으로 수득되었다. 제조가 이하에 마찬가지로 기재되어 있지 않고 상업적으로 이용가능하지 않거나 일반적으로 이용가능하지 않은 공급원으로부터 수득된 모든 다른 반응물 또는 반응물에 대해, 그것의 제조가 기재된 공개된 문헌을 참조한다.
방법 11 (LC-MS):
기기: Waters ACQUITY SQD UPLC 시스템; 칼럼: Water Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 30 × 2 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.25 ml 99% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.25 ml 99% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 90% A → 1.2 분 5% A → 2.0 분 5% A 오븐: 50 ℃; 유속: 0.60 ml/분; UV 검출: 208 - 400 nm.
방법 12 (HPLC):
기기: 칼럼 오븐 및 DAD이 있는 Agilent 1200 시리즈; 칼럼: Merck Chromolith SpeedROD RP-18e, 50 mm × 4.6 mm; Ord. 번호: 1.51450.0001; 예비 칼럼: Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP-18e, 5 mm × 4.6 mm; Ord. 번호: 1.51470.0001; 용출물 A: 물 중 70% HClO4 (4 ml/리터), 용출물 B: 아세토니트릴; 구배: 0.00 분 5% B → 0.50 분 5% B → 3.00 분 95% B → 4.00 분 95% B; 유속: 5 ml/분; 칼럼 온도: 30 ℃.
방법 13 (LC-MS):
MS 기기: 물 (Micromass) Quattro Micro; 기기 HPLC: Agilent 1100 시리즈; 칼럼: YMC-트리art C18 3 μ 50 × 3 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.01 mol 암모늄 카보네이트, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴; 구배: 0.0 분 100% A → 2.75 분 5% A → 4.5 분 5% A; 오븐: 40 ℃; 유속: 1.25 ml/분; UV 검출: 210 nm.
개시 화합물 및 중간체:
개시 화합물 1
(2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (Boc-돌라프로인)
Figure pct00664
표제 화합물은 문헌 방법에 따라 다양한 방식으로 제조될 수 있다; 참고, 예를 들면, Pettit 등, 합성 1996, 719; Shioiri 등, Tetrahedron Lett. 1991, 32, 931; Shioiri 등, Tetrahedron 1993, 49, 1913; Koga 등, Tetrahedron Lett. 1991, 32, 2395; Vidal 등, Tetrahedron 2004, 60, 9715; Poncet 등, Tetrahedron 1994, 50, 5345. 유리 산으로서 또는 디사이클로헥실아민을 갖는 1:1 염으로서 제조되었다.
개시 화합물 2a
tert-부틸 (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-(메틸아미노)헵타노에이트 하이드로클로라이드 (돌라이소류신-OtBu x HCl)
Figure pct00665
표제 화합물은 문헌 방법에 따라 다양한 방식으로 제조될 수 있다; 참고, 예를 들면, Pettit 등, J. Org. Chem. 1994, 59, 1796; Koga 등, Tetrahedron Lett. 1991, 32, 2395; Shioiri 등, Tetrahedron Lett. 1991, 32, 931; Shioiri 등, Tetrahedron 1993, 49, 1913.
개시 화합물 2b
tert-부틸 (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-(메틸아미노)헵타노에이트
(돌라이소류신-OtBu)
Figure pct00666
화합물을 개시 화합물 2a와 유사하게 제조했고, 단, 상기 수소화를 1N 염산의 부가 없이 수행했다.
개시 화합물 3
Nα-(tert-부톡시카보닐)-N-하이드록시-L-페닐알라닌아마이드
Figure pct00667
표제 화합물은 문헌 방법에 의해 제조된다 (A. Ritter 등, J. Org. Chem. 1994, 59, 4602).
수율: 750 mg (75%, 이론적)
LC-MS (방법 3): Rt = 1.67 분; MS (ESIpos): m/z = 281 (M+H)+.
개시 화합물 4
1,2-옥사졸리딘 하이드로클로라이드
Figure pct00668
표제 화합물은 문헌 방법에 의해 제조될 수 있다 (참고, 예를 들면, H. King, J. Chem. Soc. 1942, 432); 또한 상업적으로 이용가능하다.
개시 화합물 5
1,2-옥사지난 하이드로클로라이드
Figure pct00669
표제 화합물은 문헌 방법에 의해 제조될 수 있다 (참고, 예를 들면, H. King, J. Chem. Soc. 1942, 432).
개시 화합물 6
2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔
Figure pct00670
표제 화합물은 문헌 방법에 의해 Boc-보호된 형태로 제조될 수 있다 (참고, 예를 들면, C. Johnson 등, Tetrahedron Lett. 1998, 39, 2059); 탈보호는 트리플루오로아세트산 및 차후의 중화에 의한 처리에 의해 관례적 방식으로 영향을 받았다.
수율: 149 mg (89%, 이론적)
개시 화합물 7
tert-부틸 (1S,2R)-1-(하이드록시카바모일)-2-페닐사이클로프로필 카바메이트
Figure pct00671
표제 화합물을, 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산 (C. Cativiela 등, Chirality 1999, 11, 583)로부터 진행하여 문헌 방법 (A. Ritter 등, J. Org. Chem. 1994, 59, 4602)으로 제조했다.
수율: 339 mg (59%, 이론적)
LC-MS (방법 1): Rt = 0.82 분; MS (ESIpos): m/z = 293 (M+H)+.
중간체 1
tert-부틸 (3R,4S,5S)-4-[{N-[(벤질옥시)카보닐]-L-발릴}(메틸)아미노]-3-메톡시-5-메틸헵타노에이트
Figure pct00672
10.65 g (41.058 mmol)의 tert-부틸 (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-(메틸아미노)헵타노에이트 (개시 화합물 2b)을 250 mL의 디클로로메탄에서 취하고 용액을 -10 ℃로 냉각했다. 그 다음, 한편 교반, 10.317 g (41.058 mmol)의 N-[(벤질옥시)카보닐]-L-발린, 16.866 g (61.586 mmol)의 2-브로모-1-에틸피리디늄 테트라플루오로보레이트 (BEP) 및 28.6 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가하고, 혼합물을 차후에 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 포화된 나트륨 클로라이드 용액과 함께 2회 흔들고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 용출물로서 4:1 석유 에테르/에틸 아세테이트를 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획을 농축하고 잔여물을 고진공 하에서 밤새 건조했다. 10.22 g (51%, 이론적)의 표제 화합물을 황색을 띤 오일로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.3 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.59 분; MS (ESIpos): m/z = 493 (M+H)+.
중간체 2
tert-부틸 (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-[메틸(L-발릴)아미노]헵타노에이트
Figure pct00673
500 mg (1 mmol)의 tert-부틸 (3R,4S,5S)-4-[{N-[(벤질옥시)카보닐]-L-발릴}(메틸)아미노]-3-메톡시-5-메틸헵타노에이트 (중간체 1)을 50 mL의 메탄올에서 용해시키고, 100 mg의 10% 활성탄 상 팔라듐의 부가 후, 표준 수소 압력 하에서 실온에서 1시간 동안 수소부가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 제거했다. 이로써 370 mg (quant.)의 표제 화합물을 사실상 무색 오일로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.59 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.74 분; MS (ESIpos): m/z = 359 (M+H)+.
중간체 3
N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-tert-부톡시-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00674
4.64 g (13.13 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발린을 20 mL의 DMF에서 용해시키고 4.28 g (11.94 mmol)의 tert-부틸 (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-[메틸(L-발릴)아미노]헵타노에이트 (중간체 2), 2.75 g (14.33 mmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 2.2 g (14.33 mmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트과 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 암모늄 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액 및 포화된 나트륨 클로라이드 용액으로 연속적으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
수율: 9.1 g (quant., 60% 순도)
HPLC (방법 5): Rt = 2.7 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.99 분; MS (ESIpos): m/z = 694 (M+H)+.
중간체 4
N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00675
9.1 g의 조 생성물 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-tert-부톡시-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 3)을 56.6 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 56.6 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 디클로로메탄, 3:1 디클로로메탄/에틸 아세테이트 및 15:5:0.5 디클로로메탄/에틸 아세테이트/메탄올을 용출물로서 사용하는 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획의 정제 및 농축 후, 5.8 g (86%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.3 분; MS (ESIpos): m/z = 638 (M+H)+.
중간체 5
tert-부틸 (2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일 카바메이트
Figure pct00676
500 mg (1.9 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라닌을 10 mL의 DMF에서 용해시키고 466 mg (3.8 mmol)의 1,2-옥사지난 하이드로클로라이드 (개시 화합물 5), 433 mg (2.3 mmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 382 mg (2.8 mmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트 및 731 mg (5.7 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 암모늄 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액 및 포화된 나트륨 클로라이드 용액으로 연속적으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 620 mg (98%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.62 분; MS (ESIpos): m/z = 235 (M-C4H8-CO2+H)+.
중간체 6
(2S)-2-아미노-1-(1,2-옥사지난-2-일)-3-페닐프로판-1-온 트리플루오로아세테이트
Figure pct00677
620 mg (1.85 mmol)의 tert-부틸 (2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일 카바메이트 (중간체 5)을 5 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 10 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 물/아세토니트릴로부터 동결건조했다. 이런 식으로, 779 mg (91%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 0.45 분;
LC-MS (방법 3): Rt = 1.09 분; MS (ESIpos): m/z = 235 (M+H)+.
중간체 7
(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00678
360 mg (1.25 mmol)의 (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (개시 화합물 1)을 10 mL의 DMF에서 취하고 579.2 mg (1.25 mmol)의 (2S)-2-아미노-1-(1,2-옥사지난-2-일)-3-페닐프로판-1-온 트리플루오로아세테이트 (중간체 6), 714.5 mg (1.88 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 655 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 농축하고, 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 먼저 5% 수성 시트르산 용액, 그 다음 5% 수성 나트륨 수소카보네이트 용액 및 차후에 포화된 나트륨 클로라이드 용액과 함께 흔들어서 추출했다. 유기 상을 농축하고 잔여물을 16:4 디클로로메탄/메탄올을 용출물로서 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 503.5 mg (74%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체 tert-부틸 (2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-카복실레이트를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.12 분; MS (ESIpos): m/z = 504 (M+H)+.
503 mg (1 mmol)의 이러한 중간체를 20 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 10 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 디클로로메탄과 함께 재증류시켰다. 잔류 잔여물을 에틸 아세테이트로부터 n-펜탄으로 침전시키고, 용매를 데칸트로 제거했다. 이렇게 수득한 잔여물을 물에서 용해시키고 에틸 아세테이트와 함께 흔들어서 추출하고, 수성 상을 차후에 동결건조시켰다. 이런 식으로, 462 mg (89%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.53 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.57 분; MS (ESIpos): m/z = 404 (M+H)+.
중간체 8
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00679
51 mg (0.08 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 10 mL의 DMF에서 용해시키고, 0.5 mL의 피페리딘을 부가했다. 실온에서 10 분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 디에틸 에테르와 함께 교반했다. 불용성 성분을 여과 제거하고 반복적으로 디에틸 에테르로 세정했다. 그 다음 필터 잔여물을 5 mL의 디옥산/물에서 취하고 용액을 1 N 나트륨 하이드록사이드 용액으로 pH 11로 조정했다. 초음파 처리 하에서, 총 349 mg (1.6 mmol)의 디-tert-부틸 디카보네이트를 몇 개의 부분으로 부가하고, 이 과정에서 용액의 pH는 11에서 유지되었다. 반응이 완료된 후, 디옥산을 증류 제거하고 수용액을 시트르산으로 pH 2-3으로 조정했다. 혼합물을 매번 50 ml의 에틸 아세테이트로 2회 추출했다. 유기 상을 조합하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 디에틸 에테르에서 취하고 표제 화합물을 펜탄으로 침전시켰다. 용매를 기울여 따르기로 제거했다. 잔여물을 펜탄으로 몇 번 더 소화시키고 마지막으로 고진공 하에서 건조했다. 40 mg (97%, 이론적)의 표제 화합물을 이렇게 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.32 분; MS (ESIpos): m/z = 516 (M+H)+.
중간체 9
tert-부틸 (2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-카복실레이트
Figure pct00680
표제 화합물을, 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 1,2-옥사지난 하이드로클로라이드 (개시 화합물 5)와 커플링시키고, 차후에 트리플루오로아세트산으로 탈보호하고 개시 화합물 1과 커플링시켜 3 단계에 걸쳐 중간체 5, 6 및 7의 합성과 유사하게 제조했다. 최종 생성물을 분취 HPLC로 정제했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.12 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.25 분; MS (ESIpos): m/z = 516 (M+H)+.
중간체 10
N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00681
315 mg (0.494 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 12 mL의 DMF에서 용해시키고, 104 mg (0.543 mmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 83 mg (0.543 mmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트과 혼합시키고, 혼합물을 실온에서 90 분 동안 교반했다. 차후에, 112 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 149 mg (0.494 mmol)의 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판산 트리플루오로아세테이트는 트리플루오로아세트산으로 Boc 보호 그룹의 제거에 의해 개시 화합물 1로부터 미리 제조되었고, 그것을 부가했다. 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 2회 정제했다. 140 mg (35%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.40 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.38 분; MS (ESIpos): m/z = 807 (M+H)+.
중간체 11
N-[(벤질옥시)카보닐]-N-메틸-L-트레오닐-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00682
먼저, N-[(벤질옥시)카보닐]-N-메틸-L-트레오닌을, 에틸 아세테이트에서 취해서 237 mg (0.887 mmol)의 그의 디사이클로헥실아민 염으로부터 방출하고 5% 수성 황산으로 추출성 흔들기를 했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 16 mL의 DMF에서 취하고 365 mg (1 mmol)의 tert-부틸 (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-[메틸(L-발릴)아미노]헵타노에이트 (중간체 2), 185 mg (0.967 mmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 148 mg (0.967 mmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트와 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 암모늄 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액 및 포화된 나트륨 클로라이드 용액으로 연속적으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 283 mg (53%, 이론적)의 tert-부틸 에스테르 중간체 N-[(벤질옥시)카보닐]-N-메틸-L-트레오닐-N-[(3R,4S,5S)-1-tert-부톡시-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 이렇게 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.17 분.
283 mg (0.466 mmol)의 이러한 중간체를 5 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 5 mL의 무수 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 농축된 고진공 하에서 및 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 156 mg (61%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.50 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.09 분; MS (ESIpos): m/z = 552 (M+H)+.
중간체 12
벤질 N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00683
제1 단계에서, 개시 화합물 1을 100 mL의 에틸 아세테이트에서 염을 용해시켜서 600 mg (1.28 mmol)의 상응하는 디사이클로헥실암모늄 염으로부터 방출하고 먼저 50 mL의 0.5% 황산 및 그 다음 포화된 나트륨 클로라이드 용액과 함께 추출성 흔들기를 했다. 그 다음 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하고 중간체 7의 합성과 유사하게 벤질 L-페닐알라니네이트과 즉각적으로 반응시키소, 및 그 다음 탈보호했다.
수율: 650 mg (94%, 2 단계로)
HPLC (방법 6): Rt = 1.76 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.68 분; MS (ESIpos): m/z = 425 (M+H)+.
중간체 13
벤질 (βS)-N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-β-메틸-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00684
먼저, (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산을 에틸 아세테이트에서 취해서 351 mg (0.75 mmol)의 디사이클로헥실아민 염 (개시 화합물 1)으로부터 방출하고 수성 5% 칼륨 수소설페이트 용액과 함께 추출성 흔들기를 했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 10 mL의 DMF에서 취하고 373 mg (0.75 mmol)의 벤질 (βS)-β-메틸-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트 [벤질 알코올과의 EDC/DMAP-매개된 에스테르화 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해 상업적으로 이용가능한 (βS)-N-(tert-부톡시카보닐)-β-메틸-L-페닐알라닌로부터 제조], 428 mg (1.125 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 392 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 암모늄 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물 상에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액 및 포화된 나트륨 클로라이드 용액으로 연속적으로 세정하고, 차후에 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 230 mg (57%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체 벤질 (βS)-N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로파노일}-β-메틸-L-페닐알라니네이트를 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.3 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.36 분; MS (ESIpos): m/z = 539 (M+H)+.
230 mg (0.42 mmol)의 이러한 중간체를 5 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 5 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 반응 혼합물 감압 하에서 추가로 건조시키고 그 다음 아세토니트릴/물로부터 동결건조시켰다. 이런 식으로, 230 mg (quant.)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.6 분.
중간체 14
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00685
143 mg (0.223 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 15 mL의 DMF에서 취하고 141 mg (0.22 mmol)의 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 7), 102 mg (0.27 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 128 μl (0.74 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 암모늄 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액 및 포화된 나트륨 클로라이드 용액으로 연속적으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 이로써 275 mg (quant.)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.73 분;
LC-MS (방법 4): Rt = 3.19 분; MS (ESIpos): m/z = 1023 (M+H)+.
46 mg (0.045 mmol)의 이러한 중간체를 4 mL의 DMF에서 용해시켰다. 1 mL의 피페리딘을 부가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC (용출물: 아세토니트릴 + 0.01% TFA / 물 + 0.01% TFA)로 정제했다. 22 mg (54%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.68 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.03 분; MS (ESIpos): m/z = 801 (M+H)+
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ = 8.8 (m, 2H), 8.7 (m, 1H), 8.42 및 8.15 (2d, 1H), 7.3-7.1 (m, 5H), 5.12 및 4.95 (2m, 1H), 4.70 및 4.62 (2m, 1H), 4.62 및 4.50 (2t, 1H), 4.1-3.9 (m, 3H), 3.85 (m, 1H), 3.75-3.6 (m, 2H), 3.23, 3.18, 3.17, 3.14, 3.02 및 2.96 (6s, 9H), 3.1-2.9 및 2.75 (2m, 2H), 2.46 (m, 3H), 2.4-2.1 (m, 2H), 2.05 (br. m, 2H), 1.85-1.55 (br. m, 6H), 1.5-1.2 (br. m, 3H), 1.1-0.8 (m, 18H), 0.75 (t, 3H) [H2O 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 15
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00686
126 mg (0.198 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 10 mL의 DMF에서 취하고 105 mg (0.198 mmol)의 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 17), 41.6 mg (0.217 mmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 33 mg (0.217 mmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트 및 79 μl (0.454 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 암모늄 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액 및 포화된 나트륨 클로라이드 용액으로 연속적으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 이로써 220 mg (quant.)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.77 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.5 분; MS (ESIpos): m/z = 1037 (M+H)+.
220 mg (0.212 mmol)의 이러한 중간체를 5 mL의 DMF에서 용해시켰다. 1 mL의 피페리딘을 부가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC (용출물: 아세토니트릴 + 0.01% TFA / 물 + 0.01% TFA)로 정제했다. 91 mg (46%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.71 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 815 (M+H)+
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ = 8.87 및 8.80 (2d, 2H), 8.75 (m, 1H), 8.40 및 7.98 (2d, 1H), 7.3-7.1 (m, 5H), 5.45 및 5.2 (2t, 1H), 4.78 및 4.62 (2m, 1H), 4.73 및 4.58 (2t, 1H), 4.2-4.0 (m, 3H), 3.7-3.6 (m, 1H), 3.35, 3.20, 3.18, 3.14, 3.12 및 3.00 (6s, 9H), 3.1 및 2.95 (2m, 2H), 2.46 (m, 3H), 2.4-2.0 (m, 4H), 1.9-1.6 (m, 4H), 1.6-1.2 (m, 5H), 1.1-0.75 (m, 21H), 0.80 (t, 3H) [H2O 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 16
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00687
617 mg (1.2 mmol)의 tert-부틸 (2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-카복실레이트 (중간체 24)을 44 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 4.4 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 디옥산/물으로부터 동결건조했다. 702 mg (quant.)의 탈보호된 화합물 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트를 조 생성물로서 얻었고, 이것을 추가 정제 없이 하기 단계에서 사용했다.
470 mg (0.74 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 57 mL의 DMF에서 취하고 390 mg (대략 0.74 mmol)의 상기-수득한 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트, 336 mg (0.88 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 423 μl (2.4 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민와 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 암모늄 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액 및 포화된 나트륨 클로라이드 용액으로 연속적으로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 453 mg (59%, 이론적)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.58 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 3.10 분; MS (ESIpos): m/z = 1035 (M+H)+.
453 mg (0.438 mmol)의 이러한 중간체를 24 mL의 DMF에서 용해시켰다. 2.4 mL의 피페리딘을 부가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC (용출물: 물 중 아세토니트릴 / 0.1% TFA)로 정제했다. 260 mg (64%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.64 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 813 (M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.8 (m, 2H), 8.65 (m, 2H), 7.3-7.1 (m, 5H), 4.8-4.05 (m, 2H), 4.0 및 3.82 (2m, 2H), 3.8-3.5 (m, 8H), 3.32, 3.29, 3.20, 3.19, 3.12 및 3.00 (6s, 9H), 2.65 (t, 1H), 2.5-2.45 (m, 3H), 2.4-1.3 (m, 15H), 1.15-0.85 (m, 18H), 0.8 및 0.75 (2d, 3H) [H2O 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 17
N-벤질-N-메틸-L-페닐알라닌아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00688
1000 mg (3.77 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라닌을 10 mL의 DMF에서 용해시키고 457 mg (3.77 mmol)의 N-메틸벤질아민, 2150 mg (5.65 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 657 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 디클로로메탄에서 취하고 물과 함께 3회 흔들어서 추출했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다. 잔여물을 3:1 석유 에테르/에틸 아세테이트를 용출물로서 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 생성물 분획을 농축하고 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이로써 1110 mg (75%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체 N-벤질-Nα -(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-페닐알라닌아마이드를 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.14 분; MS (ESIpos): m/z = 369 (M+H)+.
1108 mg (3,007 mmol)의 이러한 중간체를 30 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 10 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔류 잔여물을 디클로로메탄과 함께 교반하고 용매를 증류 제거했다. 잔여물을 펜탄과 함께 2회 더 교반하고, 용매를 매번 다시 경사따르기하고 표제 화합물을 마지막으로 고진공 하에서 건조했다. 1075 mg (93%, 이론적)의 표제 화합물을 이렇게 수지로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.6 분; MS (ESIpos): m/z = 269 (M+H)+.
중간체 18
N-벤질-Nα -{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-N-메틸-L-페닐알라닌아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00689
먼저, (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (개시 화합물 1)을 에틸 아세테이트에서 취해서 141 mg (0.491 mmol)의 그의 디사이클로헥실아민 염으로부터 방출하고 5% 수성 황산으로 추출성 흔들기를 했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 10 mL의 DMF에서 취하고 187.6 mg (0.49 mmol)의 N-벤질-N-메틸-L-페닐알라닌아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 9), 190.3 mg (1.47 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 256 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 농축하고, 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 용액을 차후에 포화된 암모늄 클로라이드 용액, 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액 및 물과 연속적으로 흔들어서 추출했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다. 잔여물을 30:1 아세토니트릴/물을 용출물로서 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 생성물 분획을 농축하고 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이로써 168 mg (64%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체 tert-부틸 (2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[벤질(메틸)아미노]-1-옥소-3-페닐프로판-2-일}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-카복실레이트를 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.22 분; MS (ESIpos): m/z = 538 (M+H)+.
168 mg (0.312 mmol)의 이러한 중간체를 15 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 3 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 먼저 디클로로메탄, 그 다음 디에틸 에테르와 함께 교반하고, 용매를 매번 다시 증류 제거했다. 고진공 하에서 건조한 후, 170 mg (99%, 이론적)의 표제 화합물을 수지로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.73 분; MS (ESIpos): m/z = 438 (M+H)+.
중간체 19
메틸 N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00690
표제 화합물을, 디사이클로헥실아민 염로부터 방출된 (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (개시 화합물 1), 및 메틸 L-페닐알라니네이트 하이드로클로라이드로부터 진행하면서 중간체 18의 합성과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 0.6 분;
LC-MS (방법 3): Rt = 1.17 분; MS (ESIpos): m/z = 349 (M+H)+.
중간체 20
벤질 N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-트립토파네이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00691
표제 화합물을, 디사이클로헥실아민 염로부터 방출된 (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (개시 화합물 1) 및 벤질 L-트립토파네이트로부터 진행하면서 중간체 18의 합성과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.8 분; MS (ESIpos): m/z = 464 (M+H)+.
중간체 21
벤질 (1S,2R)-1-({(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}아미노)-2-페닐사이클로프로판카복실레이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00692
표제 화합물을, 디사이클로헥실아민 염로부터 방출된 (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (개시 화합물 1), 및 벤질 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실레이트로부터 진행하면서 중간체 18의 합성과 유사하게 제조했다. 벤질 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실레이트는 표준 방법에 의해, 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 벤질 알코올로 에스테르화하고 트리플루오로아세트산에 의한 차후의 Boc 분리로 미리 제조되었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 0.93 분; MS (ESIpos): m/z = 437 (M+H)+.
중간체 22
6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N'-메틸헥산하이드라자이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00693
100 mg (473 μmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산산을 71 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 139 mg (947 μmol)의 tert-부틸 1-메틸하이드라진카복실레이트, 182 mg (947 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 145 mg (947 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 129 mg (80%, 이론적)의 보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
차후에, 129 mg (380 μmol)을 8 mL의 디클로로메탄 중 2 mL의 트리플루오로아세트산로 탈차단했다. 실온에서 1 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 아세토니트릴/물로부터 동결건조하고, 이로써 125 mg (83%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.38 분; MS (ESIpos): m/z = 240 (M+H)+
중간체 23
N-(2-아미노에틸)-4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N-메틸부탄아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00694
먼저, 35 mg (164 μmol)의 tert-부틸 2-(메틸아미노)에틸 카바메이트 하이드로클로라이드 트리플루오로아세테이트, 30 mg (164 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄산, 75 mg (197 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 57 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 5 mL의 DMF에서 조합시키고 실온에서 밤새 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 디옥산/물으로부터 동결건조로 농축하고, 35 mg (63%, 이론적)의 보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.71 분; MS (ESIpos): m/z = 340 (M+H)+.
차후에, 보호된 중간체의 전체의 양을 5 mL의 디클로로메탄 중 1 mL의 트리플루오로아세트산으로 탈차단하여 28 mg (77%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 3): Rt = 0.75 분; MS (ESIpos): m/z = 240 (M+H)+.
중간체 24
4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N-[2-(메틸아미노)에틸]부탄아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00695
먼저, 35 mg (164 μmol)의 tert-부틸 (2-아미노에틸)메틸 카바메이트 하이드로클로라이드 트리플루오로아세테이트, 30 mg (164 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄산, 75 mg (197 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 57 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 5 mL의 DMF에서 조합시키고 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 디옥산/물으로부터 동결건조로 농축하고, 51 mg (91%, 이론적)의 보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.77 분; MS (ESIpos): m/z = 340 (M+H)+.
차후에, 전체의 양을 5 mL의 디클로로메탄 중 1 mL의 트리플루오로아세트산로 탈보호하여 45 mg (69%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.19 분; MS (ESIpos): m/z = 240 (M+H)+.
중간체 25
벤질 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노에이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00696
먼저, (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산을 에틸 아세테이트에서 취해서 1.82 g (388 mmol)의 그의 디사이클로헥실아민 염으로부터 방출하고 100 mL의 0.5% 황산과 함께 추출성 흔들기하였다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 10 mL의 디옥산 및 10 mL의 물에서 취하고, 1517 mg (4.66 mmol)의 세슘 카보네이트를 부가하고, 혼합물을 초음파 배쓰에서 5 분 동안 처리하고 감압 하에서 농축하고 DMF로 한번 재증류했다. 그 다음 잔여물을 15 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 1990 mg (11.64 mmol)의 벤질 브로마이드를 부가했다. 혼합물을 초음파 배쓰에서 15 분 동안 처리하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분할하고, 유기 상을 제거하고 포화된 나트륨 클로라이드 용액과 함께 흔들어서 추출하고 그 다음 농축했다. 그 다음 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 1170 mg (80%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체를 수득했다.
차후에, 이들 1170 mg을 15 mL의 디클로로메탄 중 5 mL의 트리플루오로아세트산으로 즉각적으로 탈보호했다. 실온에서 15 분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 디옥산으로 동결건조했다. 고진공 하에서 건조한 후, 1333 mg (84%, 이론적)의 표제 화합물이 황색 오일로서 남아 있었다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.5 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.59 분; MS (ESIpos): m/z = 278 (M+H)+.
중간체 26
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00697
1200 mg (2.33 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 5)을 50 mL의 DMF 중 910.8 mg (2.33 mmol)의 벤질 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노에이트 트리플루오로아세테이트 (중간체 14), 1327 mg (3.49 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 2027 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민와 조합하고, 혼합물을 실온에서 5 분 동안 교반했다. 그 후에, 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔류 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 5% 수성 시트르산 용액 및 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액과 함께 연속적으로 흔들어서 추출했다. 유기 상을 제거하고 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축하고, 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이로써 1000 mg (55%, 이론적)의 벤질 에스테르 중간체 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-(벤질옥시)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수지로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.56 분; MS (ESIpos): m/z = 775 (M+H)+.
수득한 이러한 중간체이 전체의 양을 메탄올 및 디클로로메탄 (20:1)의 25 mL의 혼합물에서 취하고 벤질 에스테르 그룹을 10% 활성탄 상 팔라듐을 촉매로서 사용하여 수소화로 표준 수소 압력 하에서 제거했다. 실온에서 30 분 동안 교반한 후, 촉매를 여과 제거하고 여과물을 감압 하에서 농축했다. 이로써 803 mg (91%, 이론적)의 표제 화합물을 백색 고형물로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.24 분; MS (ESIpos): m/z = 685 (M+H)+.
중간체 27
(1S,2R)-1-아미노-2-페닐-N-프로필사이클로프로판카복사마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00698
표제 화합물을 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU)의 존재에서 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 n-프로필아민으로과 커플링하고 트리플루오로아세트산에 의한 차후의 Boc 분리로 제조했다 (수율: 단계 모두에 걸쳐 이론의 85%).
HPLC (방법 6): Rt = 1.2 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.52 분; MS (ESIpos): m/z = 219 (M+H)+.
중간체 28
에틸 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실레이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00699
표제 화합물을, 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 에탄올로 에스테르화하고 트리플루오로아세트산에 의한 차후의 Boc 분리로 표준 방법으로 제조했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.50 분; MS (ESIpos): m/z = 206 (M+H)+.
중간체 29
4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부탄산
Figure pct00700
44 mL의 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액 중 1.39 g (8.95 mmol)의 N-메톡시카보닐말레이마이드의 용액에, 0 ℃에서, 1.5 g (8.95 mmol)의 4-아미노-2,2-디메틸부티르산을 부가하고, 혼합물을 40 분 동안 교반했다. 차후에, 냉각 배쓰를 제거하고 반응 혼합물을 추가 1 시간 동안 교반했다. 얼음으로 냉각하면서, 그 다음 반응 혼합물을 황산을 부가하여 pH 3으로 조정하고, 에틸 아세테이트로 추출했다. 조합된 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다. 1.17 g (79% 순도, 49%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.64 분; m/z = 212 (M+H)+.
중간체 30
tert-부틸 2-[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부타노일]하이드라진카복실레이트
Figure pct00701
2 mL의 THF 중 50 mg (237 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부탄산의 용액에, 0 ℃에서, 먼저 26 μl (237 μmol)의 4-메틸모폴린 및 그 다음 31 μl (237 μmol)의 이소부틸 클로로포르메이트를 부가했다. 냉각 배쓰를 제거하고 실온에서 추가 15 분 동안 교반한 후, 31.3 mg (237 μmol)의 tert-부틸옥시카보닐 하이드라자이드를 부가했다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 그 다음 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 50.8 mg (66%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.71 분; m/z = 324 (M-H)-.
중간체 31
4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부탄하이드라자이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00702
50 mg (154 mmol)의 tert-부틸 2-[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부타노일]하이드라진카복실레이트를 2 mL의 디클로로메탄에서 용해시키고, 0.4 mL의 트리플루오로아세트산을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 55.2 mg (93% 순도, 99%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.36 분; m/z = 226 (M+H)+.
중간체 32
아다만탄-1-일메틸 N-(tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라니네이트
Figure pct00703
25 mL의 디클로로메탄 중 500 mg (1.89 mmol)의 N-Boc-L-페닐알라닌의 용액에, 실온에서, 1192 mg (6.2 mmol)의 EDC, 578 μl (4.1 mmol)의 트리에틸아민, 345 mg (2.8 mmol)의 DMAP 및 345 mg (2.1 mmol)의 1-아다만틸메탄올을 부가했다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 그 다음 50 mL의 디클로로메탄으로 희석하고, 10% 수성 시트르산 용액, 물 및 포화된 나트륨 클로라이드 용액으로 연속적으로 세정했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 그 다음 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 769 mg (90%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 2): Rt = 1.84 분; m/z = 414 (M+H)+.
중간체 33
아다만탄-1-일메틸 L-페닐알라니네이트 하이드로클로라이드
Figure pct00704
769 mg (1.86 mmol)의 아다만탄-1-일메틸 N-(tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라니네이트 (중간체 13)을 디옥산 중 염화수소의 25 mL의 4 N 용액에서 용해시키고 실온에서 1시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 감압 하에서 건조했다. 619 mg (95%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.82 분; m/z = 314 (M+H)+.
중간체 34
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(아다만탄-1-일메톡시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00705
1 mL의 DMF 중 20 mg (29 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에, 실온에서, 15.3 μl (88 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민, 6.7 mg (44 μmol)의 HOBt 및 6.7 mg (35 μmol)의 EDC를 부가하고, 혼합물을 30분 동안 교반했다. 차후에, 10.1 mg (32 μmol)의 아다만탄-1-일 L-페닐알라니네이트 하이드로클로라이드를 부가했다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC를 통해 그의 성분으로 직접적으로 분리했다. 27.5 mg (93%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.70 분; m/z = 980 (M+H)+.
중간체 35
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(아다만탄-1-일메톡시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00706
27.5 mg (28 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(아다만탄-1-일메톡시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 1.8 mL의 디클로로메탄에서 용해시키고, 361 μl의 TFA를 부가했다. 반응 혼합물을 30 분 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 잔여물을 물에서 취하고 동결건조시켰다. 22.7 mg (81%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.14 분; m/z = 880 (M+H)+.
중간체 36
tert-부틸 (2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일 카바메이트
Figure pct00707
아르곤 분위기 하에서, 500 mg (1.99 mmol)의 N-Boc-L-페닐알라니놀을 5 mL의 DMF에서 용해시키고 0 ℃로 냉각시켰다. 차후에, 파라핀 오일 중 수소화나트륨의 159 mg (3.98 mmol)의 60% 서스펜션을 부가했다. 반응 혼합물을 가스의 진전이 완료될 때까지 교반하고 그 다음 260 μl (2.19 mmol)의 벤질 브로마이드를 부가했다. 냉각 배쓰를 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 그 후에, 반응 혼합물을 농축하고, 잔여물을 빙수에서 취하고 혼합물을 디클로로메탄로 추출했다 유기 상을 포화된 나트륨 클로라이드 용액으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 226 mg (33%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.28 분; m/z = 342 (M+H)+.
중간체 37
(2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-아민 하이드로클로라이드
Figure pct00708
220 mg (644 μmol)의 tert-부틸 (2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일 카바메이트를 디옥산 중 염화수소의 11 mL의 4 N 용액에서 용해시키고 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 감압 하에서 건조했다. 138 mg (77%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.65 분; m/z = 242 (M+H)+.
중간체 38
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00709
1 mL의 DMF 중 20 mg (29 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에, 실온에서, 15.3 μl (88 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민, 6.7 mg (44 μmol)의 HOBt 및 6.7 mg (35 μmol)의 EDC을 부가하고, 혼합물을 30분 동안 교반했다. 차후에, 7.8 mg (32 μmol)의 (2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-아민 하이드로클로라이드를 부가했다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC를 통해 그의 성분으로 직접적으로 분리했다. 26 mg (98%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.51 분; m/z = 909 (M+H)+.
중간체 39
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00710
26 mg (29 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 1.8 mL의 디클로로메탄에서 용해시키고, 370 μl의 TFA를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 잔여물을 물에서 취하고 동결건조시켰다. 26.4 mg (quant.)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; m/z = 809 (M+H)+.
중간체 40
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00711
10 mL의 DMF 중 50 mg (70 μmol)의 중간체 26 및 11 mg (70 μmol)의 (1S, 2R)-2-아미노-1-페닐프로판-1-올을 42 mg (0.11 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 25 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합하고, 반응 혼합물을 실온에서 5 분 동안 교반했다. 그 다음 이것을 농축 분취 HPLC로 잔여물을 정제했다. 상응하는 분획을 조합시키고, 농축하고 고진공 하에서 건조시킨 후, 49 mg (81%)의 보호된 중간체를 수득했다. 차후에, Boc 그룹을 디클로로메탄 중 트리플루오로아세트산으로 공지된 조건으로 분리시켰다. 농축 그 다음 분취 HPLC로 표제 화합물을 정제하고, 26 mg (52%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.65 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.77 분; MS (ESIpos): m/z = 718 (M+H)+.
중간체 41
3-{2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시}프로판산 트리플루오로아세테이트
Figure pct00712
150 mg (541 μmol)의 tert-부틸 3-{2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시}프로파노에이트를 3 mL의 디클로로메탄에서 용해시키고, 1.5 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 그 다음 농축했다.
181 mg (100%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
MS (EI): m/z 222 (M+H)+
중간체 42
3-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)프로판산
Figure pct00713
186 mg (555 μmol)의 3-{2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시}프로판산 트리플루오로아세테이트를 2.6 mL의 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액에서 용해시키고 0 ℃에서 86 mg (555 μmol)의 N-메톡시카보닐말레이마이드와 혼합했다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 40 분 동안 및 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 0 ℃로 다시 냉각하고, 황산으로 pH 3으로 조정하고 25 mL의 에틸 아세테이트로 3회 추출했다. 조합된 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다.
126 mg (75%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.53 분; m/z = 302 (M+H)+.
중간체 43
tert-부틸 15-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-4-옥소-7,10,13-트리옥사-2,3-디아자펜타데칸-1-오에이트
Figure pct00714
125 mg (417 μmol)의 3-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시) 프로판산을 0 ℃에서 2.1 mL의 THF에서 용해시키고 46 μl (417 mmol)의 4-메틸모폴린 및 54.5 μl (417 μmol)의 이소부틸 클로로포르메이트와 혼합했다. 빙욕을 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 0 ℃에서, 55 mg (417 μmol)의 tert-부틸옥시카보닐 하이드라자이드를 부가했다. 반응 혼합물을 밤새 실온으로 따뜻하게 하고, 농축하고 분취 HPLC로 정제했다.
60 mg (33%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.66 분; m/z = 416 (M+H)+.
중간체 44
3-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)프로판하이드라자이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00715
60 mg (145 μmol)의 tert-부틸 15-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-4-옥소-7,10,13-트리옥사-2,3-디아자펜타데칸-1-오에이트를 1 mL의 디클로로메탄에서 용해시키고, 0.2 mL의 트리플루오로아세트산을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 농축했다.
62 mg (100%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.35 분; m/z = 316 (M+H)+.
중간체 45
벤질 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실레이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00716
표제 화합물을 표준 방법으로, 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 벤질 알코올로 에스테르화하고 트리플루오로아세트산에 의한 차후의 Boc 분리로 제조했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.72 분; MS (ESIpos): m/z = 268 (M+H)+.
중간체 46
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00717
383 mg (0.743 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 8)을 15 mL의 DMF 중 485 mg (0.743 mmol)의 벤질 N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트 (중간체 12), 424 mg (1.114 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 388 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민와 조합하고, 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔류 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 5% 수성 시트르산 용액 및 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액과 연속적으로 흔들어서 추출했다. 유기 상을 제거하고 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축하고, 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 335 mg (48%, 이론적)의 벤질 에스테르 중간체를 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.49 분; MS (ESIpos): m/z = 922 (M+H)+.
100 mg (0.11 mmol)의 이러한 중간체를 15 mL의 메탄올에서 취하고 벤질 에스테르 그룹을 수소화로 표준 수소 압력 하에서 촉매로서 10% 활성탄 상 팔라듐으로 제거했다. 실온에서 1 시간 동안 교반한 후, 촉매를 여과 제거하고 여과물을 감압 하에서 농축했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 85 mg (94%, 이론적)의 표제 화합물을 고형물로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.4 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.24 분; MS (ESIpos): m/z = 832 (M+H)+.
중간체 47
N-벤질-L-트립토판아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00718
202 mg (0.5 mmol)의 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 N-(tert-부톡시카보닐)-L-트립토파네이트 및 45 mg (0.42 mmol)의 벤질아민을 10 mL의 DMF에서 용해시키고, 110 μl (630 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다 (용출물: 20:0.5:0.05 디클로로메탄/메탄올/17% aq. 암모니아). 상응하는 분획을 조합하고, 농축했다. 수득한 잔여물을 디에틸 에테르로 소화시키고 그 다음 고진공 하에서 건조했다. 차후에, 이 잔여물을 10 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 3 mL의 무수 트리플루오로아세트산을 부가했다. 실온에서 45 분 동안 교반한 후, 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 고진공 하에서 건조한 후, 117 mg (단계 모두에 걸쳐 이론의 57%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.66 분; MS (ESIpos): m/z = 294 (M+H)+.
중간체 48
(1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복사마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00719
50 mg (180 μmol)의 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 5 mL의 DMF에서 용해시키고, 94 μl (541 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민, 31 mg (270 μmol)의 N-하이드록시석신이마이드 및 41.5 mg (216 μmol)의 EDC를 부가하고, 그 다음 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 농축하고, 잔여물을 디옥산에서 부가하고, 71 mg (901 μmol)의 암모늄 수소카보네이트를 부가하고, 그 다음 반응 혼합물을 실온에서 3 일 동안 정치했다. 그 다음 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물의 1:1 혼합물로 희석했다. 유기 상을 제거하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다. 수득한 잔여물을 차후에 3 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 3 mL의 무수 트리플루오로아세트산을 부가했다. 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 잔여물을 펜탄과 함께 교반하고, 흡입으로 여과 제거하고, 디옥산으로 동결건조했다. 이런 식으로, 32 mg (단계에 모두에 걸쳐 이론의 62%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 0.38 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.20 분; MS (ESIpos): m/z = 177 (M+H)+.
중간체 49
Nα -{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-트립토판아마이드 트리플루오로아세테이트
표제 화합물을 개시 화합물 1 및 L-트립토판아마이드 하이드로클로라이드로부터 중간체 13의 합성과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.4 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 473 (M+H)+.
중간체 50
4-니트로페닐 2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸 카바메이트
Figure pct00721
813 mg (3.1 mmol)의 트리페닐포스핀을 25 mL의 THF에서 용해시키고 -70 ℃로 아르곤 하에서 냉각시켰다. 627 mg (3.1 mmol)의 디이소프로필 아조디카복실레이트를 적가한 후, 혼합물을 5 분 동안 교반했다. 차후에, 5 mL의 THF에서 용해된 500 mg (3.1 mmol)의 tert-부틸 2-아미노에틸 카바메이트를 적가하고, 반응 혼합물을 교반된 -70 ℃에서 추가 5 분 동안 교반했다. 그 다음 136.6 mg (1.55 mmol)의 2,2-디메틸-1-프로판올 1 mL의 THF에서 용해시키고 301 mg (3.1 mmol)의 말레이마이드를 부가하고, 반응 혼합물을 -70 ℃에서 추가 10 분 동안 교반하고 그 다음 혼합물을 실온으로 따뜻하게 했다. 실온에서 추가 16 시간 동안 교반한 후, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 463 mg (62%)의 보호된 중간체를 수득했다.
Boc 보호 그룹을 표준 조건 하에서 제거한 후, 652 mg의 1-(2-아미노에틸)-1H-피롤-2,5-디온을 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
112.9 mg (543 μmol)의 니트로페닐 클로로포르메이트를 30 mL의 THF에서 용해시키고, 100 mg (271.6 μmol)의 1-(2-아미노에틸)-1H-피롤-2,5-디온 트리플루오로아세테이트의 부가 후, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축 건조하고 그 다음 디에틸 에테르와 함께 슬러리화했다. 흡입 여과 및 건조 후, 60 mg (95%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 0.65 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.74 분; MS (ESIpos): m/z = 306 (M+H)+.
중간체 51
(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에탄아민 트리플루오로아세테이트
Figure pct00722
200 mg (0.75 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라닌을 0 ℃에서 5.5 mL의 디클로로메탄에서 초기에 충전하고, 128 mg (0.79 mmol)의 1,1'-카보닐디이미다졸을 부가했다. 30 분 후, 103 mg (0.75 mmol)의 벤조일 하이드라자이드를 부가했다. 0 ℃에서 추가 45 분 후, 500 mg (1.5 mmol)의 탄소 테트라브로마이드 및 395 mg (1.5 mmol)의 트리페닐포스핀을 마지막으로 부가했다. 반응 혼합물을 먼저 0 ℃에서 2 시간 동안 및 그 다음 실온에서 밤새 교반했다. 혼합물을 차후에 회전식 증발기 상에서 농축하고, 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이렇게 수득한 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다. 217 mg (78%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체 tert-부틸 (1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸 카바메이트를 수득했다.
LC-MS (방법 12): Rt = 1.15 분; MS (ESIpos): m/z = 366 (M+H) +
217 mg (0.59 mmol)의 이러한 중간체를 3 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 0.6 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 반응 혼합물 감압 하에서 추가로 건조시키고 그 다음 디옥산으로 동결건조했다. 이런 식으로, 214 mg (90%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.62 분; MS (ESIpos): m/z = 266 (M+H) +
중간체 52
(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에탄아민 트리플루오로아세테이트
Figure pct00723
200 mg (0.75 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-D-페닐알라닌을 0 ℃에서 5.5 mL의 디클로로메탄에서 초기에 충전하고, 128.3 mg (0.79 mmol)의 1,1'-카보닐디이미다졸을 부가했다. 30 분 후, 103 mg (0.75 mmol)의 벤조일 하이드라자이드를 부가했다. 0 ℃에서 추가 45 분 후, 500 mg (1.5 mmol)의 탄소 테트라브로마이드 및 395 mg (1.5 mmol)의 트리페닐포스핀을 마지막으로 부가했다. 반응 혼합물을 먼저 0 ℃에서 2 시간 동안 및 그 다음 실온에서 밤새 교반했다. 혼합물을 차후에 회전식 증발기 상에서 농축하고, 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이렇게 수득한 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다. 219 mg (80%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체 tert-부틸 (1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸 카바메이트를 수득했다.
LC-MS (방법 2): Rt = 1.36 분; MS (ESIpos): m/z = 366 (M+H) +
219 mg (0.6 mmol)의 이러한 중간체를 3 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 0.6 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 반응 혼합물 감압 하에서 추가로 건조시키고 그 다음 디옥산으로 동결건조했다. 이런 식으로, 196 mg (86%, 이론적)의 표제 화합물을 고형물로서 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.41 분
중간체 53
(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-아민
Figure pct00724
200 mg (1.13 mmol)의 (4S)-4-벤질-1,3-옥사졸리딘-2-온을 초기에 3 mL의 tert-부탄올에서 충전하고, 280 mg (2.26 mmol)의 벤질 메르캅탄을 부가했다. 혼합물을 차후에 환류 하에서 2 일 동안 가열했다. 그 후에, 반응 혼합물을 회전식 증발기 상에서 농축하고 수득한 (2S)-1-(벤질설파닐)-3-페닐프로판-2-아민 중간체를 워크업없이 추가로 직접적으로 전환했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.63 분
LC-MS (방법 1): Rt = 0.67 분; MS (ESIpos): m/z = 258 (M+H) +
상기 수득한 조 중간체를 2 mL의 30% 과산화수소 및 5 mL의 포름산의 용액에서 용해시키고, 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 포화된 나트륨 설페이트 용액에 부가하고 에틸 아세테이트로 3회 추출했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축했다. 수득한 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다. 343 mg (61%, 이론적)의 표제 화합물을 이렇게 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.40 분;
LC-MS (방법 12): Rt = 0.65 분; MS (ESIpos): m/z = 290 (M+H) +
중간체 54
(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-아민
Figure pct00725
552.7 mg (9.85 mmol)의 칼륨 하이드록사이드를 메탄올에서 용해시키고, 1.1 g의 중성 산화알루미늄 상에 흡착시키고 그 다음 고진공 하에서 건조했다. 6.2 mL의 n-부탄올 중 이렇게 제조된 산화알루미늄 상의 240 mg (0.82 mmol)의 (2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-아민 및 1.56 g의 칼륨 하이드록사이드를, 5-10 ℃에서, 307 μl (3.3 mmol)의 디브로모디플루오로메탄을 적가했다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 그 다음 셀라이트를 통해 여과하고, 잔여물을 디클로로메탄으로 철저히 세정했다. 여과물을 농축하고 수득한 잔여물을 감압 하에서 건조했다. 이렇게 수득한 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다. 98 mg (35%, 이론적)의 표제 화합물을 4:1의 E/Z 부분입체이성질체 비로 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.46 분;
LC-MS (방법 12): Rt = 0.75 분; MS (ESIpos): m/z = 224 (M+H) +
상기 수득한 E/Z 부분입체이성질체 혼합물을 2 mL의 에탄올 및 0.2 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민에서 용해시키고, 키랄상 HPLC로 분리했다 [칼럼: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm 250 mm × 20 mm, 용출물: 헥산/(에탄올 + 0.2% 디에틸아민) 50:50 v/v; UV 검출: 220 nm; 온도: 30 ℃]. 적절한 분획을 회전식 증발기 상에서 농축하고, 잔여물을 감압 하에서 건조했다. 45 mg의 표제 화합물을 수득했다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm] = 2.62 - 2.83 (m, 2 H) 3.52 - 3.71 (m, 1 H) 6.18 - 6.30 (m, 1 H) 6.34 - 6.46 (m, 1 H) 6.98 - 7.57 (m, 10 H) [용매 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 55
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00726
20 mg (29 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 1 mL의 DMF에서 용해시키고, 13.3 mg (35 μmol)의 HATU 및 15.3 μl (88 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 12.2 mg (32 μmol)의 (1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에탄아민 트리플루오로아세테이트를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 분취 HPLC로 분리했다. 이로써 22 mg (81%, 이론적)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
LC-MS (방법 12): Rt = 1.45 분; MS (ESIpos): m/z = 933 (M+H)+
차후에 BOC 보호 그룹을 트리플루오로아세트산으로 분리하여, 22.4 mg (98%, 이론적)의 표제 화합물을 그 다음 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 833 (M+H)+
중간체 56
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00727
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를, 20 mg (29 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드와 12.2 mg (32 μmol)의 (1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에탄아민 트리플루오로아세테이트와의 반응으로 중간체 55의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 17 mg (64%, 이론적)
HPLC (방법 10): Rt = 3.74 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.45 분; MS (ESIpos): m/z = 933 (M+H) +
차후에 BOC 보호 그룹을 트리플루오로아세트산으로 분리하여, 17.1 mg (99%, 이론적)의 표제 화합물을 그 다음 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.55 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 833 (M+H) +
중간체 57
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00728
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를, 20 mg (29 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 9.3 mg (20 μmol)의 (2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-아민과 반응시켜 중간체 55의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 19.2 mg (68 %, 이론적)
HPLC (방법 10): Rt = 3.5 분;
LC-MS (방법 12): Rt = 1.41 분; MS (ESIpos): m/z = 957 (M+H) +
차후에 BOC 보호 그룹을 트리플루오로아세트산으로 분리하여, 19.3 mg (99%, 이론적)의 표제 화합물을 그 다음 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.52 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 857 (M+H) +
중간체 58
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00729
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를, 20 mg (29 μmol) N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 7.1 mg (32 μmol)의 (2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-아민과 반응시켜 중간체 55의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 15.1 mg (58 %, 이론적)
HPLC (방법 10): Rt = 4.2 분;
LC-MS (방법 12): Rt = 1.51 분; MS (ESIpos): m/z = 891 (M+H) +
차후에 BOC 보호 그룹을 트리플루오로아세트산으로 분리하여, 15.7 mg (99%, 이론적)의 표제 화합물을 그 다음 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.62 분;
LC-MS (방법 12): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 791 (M+H) +
중간체 61
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00730
50 mg (0.054 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 16)을 8 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 물 중 4-옥소부탄산의 70 ml (0.108 mmol)의 15% 용액을 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 100 ℃에서 1시간 동안 교반했다. 실온으로 냉각한 후, 3.7 mg (0.059 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 혼합물을 약 300 μl의 0.1 N 염산의 부가로 pH 3으로 조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 2 시간 동안 교반했다. 냉각 후, 또 하나의 70 ml (0.108 mmol)의 15% 4-옥소부탄산 용액을 부가하고 반응 혼합물을 100 ℃에서 1시간 동안 다시 교반했다. 그 다음 추가 3.7 mg (0.059 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 약 300 μl의 0.1 N 염산을 차후에 사용하여 pH를 3으로 역조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 2 시간 동안 교반했다. 전환이 불완전할 때, 이 절차를 3회 반복했다. 반응 혼합물을 마지막으로 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이런 식으로, 32 mg (65%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.64 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.76 분; MS (ESIpos): m/z = 899 (M+H)+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 8.95 및 8.8 (2m, 1H), 8.88 및 8.65 (2s, 1H), 7.4-7.1 (m, 5H), 5.0, 4.78, 4.65 및 4.55 (4m, 2H), 4.1-3.7 (m, 5H), 3.32, 3.29, 3.20, 3.12, 3.1 및 3.0 (6s, 9H), 2.75 (m, 2H), 2.63 (t, 1H), 2.4-2.2 (m, 4H), 2.1-1.2 (m, 12H), 1.2-0.8 (m, 16H), 0.75 (m, 3H) [하에서 숨겨진 추가 신호 H2O 및 DMSO 피크].
중간체 62
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00731
표제 화합물을, 50 mg의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 14)을 4-옥소부탄산과의 반응으로 중간체 61의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 34 mg (70%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.64 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.77 분; MS (ESIpos): m/z = 887 (M+H)+.
중간체 63
N-(4-카복시벤질)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00732
표제 화합물을, 15 mg의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 16)를 4-포르밀벤조산과의 반응으로 중간체 61의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 7.5 mg (48%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.75 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 947 (M+H)+.
중간체 64
N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00733
10 mg (0.011 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 16)을 2 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 2.8 mg (0.022 mmol)의 6-옥소헥산산을 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 100 ℃에서 1시간 동안 교반했다. 실온으로 냉각한 후, 0.75 mg (0.012 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 혼합물을 0.1 N 염산을 부가하여 pH 3으로 조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 시간 동안 교반했다. 냉각 후, 또 하나의 2.8 mg (0.022 mmol)의 6-옥소헥산산을 부가하고 반응 혼합물을 100 ℃에서 1시간 동안 다시 교반했다. A 추가 0.75 mg (0.012 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 0.1 N 염산을 차후에 사용하여 pH를 3으로 역조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 1 시간 동안 교반했다. 그 다음 이 절차를 3회 반복했다. 반응 혼합물을 마지막으로 농축하고 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 6.4 mg (64%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.68 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.86 분; MS (ESIpos): m/z = 927 (M+H)+.
중간체 65
N-(2-아미노에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 비스트리플루오로아세테이트
Figure pct00734
표제 화합물을, 68 mg의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 14)와 tert-부틸 2-옥소에틸 카바메이트와의 반응 및 Boc 보호 그룹의 트리플루오로아세트산으로의 차후의 분리로 제조했다.
수율: 49 mg (이론의 62%, 2 단계에 걸쳐)
HPLC (방법 5): Rt = 1.58 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.05 분; MS (ESIpos): m/z = 844 (M+H)+
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ = 8.25 (m, 1H), 8.45 및 8.15 (2d, 1H), 7.65-7.55 (m, 3H), 7.23-7.1 (m, 5H), 5.12 및 4.95 (2m, 1H), 4.72 및 4.62 (2m, 1H), 4.6 및 4.52 (2t, 1H), 4.2-3.8 (m, 4H), 3.7 (d, 1H), 3.23, 3.20, 3.19, 3.18, 3.03 및 2.98 (6s, 9H), 3.0-2.7 (m, 6H), 2.4-1.2 (m, 15H), 1.05, 1.0, 0.88 및 0.82 (4d, 6H), 0.92 (m, 6H), 0.73 (m, 6H) [하에서 숨겨진 추가 신호 H2O 피크].
중간체 66
N-(3-아미노프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00735
표제 화합물을, 25 mg (0.027 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 16)와 벤질 3-옥소프로필 카바메이트와의 반응 및 Z 보호 그룹의 차후의 수소첨가분해 분리 (촉매로서 10% 목탄상 팔라듐에 의해, 용매로서 에탄올 중)으로 중간체 65의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 11 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 41%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.53 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.72 분; MS (ESIpos): m/z = 870 (M+H)+.
중간체 67
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(아다만탄-1-일메톡시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00736
26 mg (26 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(아다만탄-1-일메톡시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 및 33.9 μl의 15% 수성 석신알데히드산 용액 (53 μmol)을 957 μl의 1:1-디옥산/물 혼합물에서 용해시키고 100 ℃로 1시간 동안 가열했다. 간단한 냉각 후, 1.81 mg (29 μmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가했다. 반응 혼합물을 0.1 N 염산의 부가로 pH 3으로 조정하고 혼합물을 100 ℃로 추가 2 시간 동안 가열했다. 동일한 양의 석신알데히드산 용액, 나트륨 시아노보로하이드라이드 및 염산을 다시 부가한 후, 혼합물을 2시간 동안 100 ℃로 다시 한번 가열했다. 그 다음 반응 혼합물을 분취 HPLC로 그의 성분으로 직접적으로 분리했다. 18.5 mg (73%, 이론적)의 표제 화합물을 이렇게 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.17 분; m/z = 967 (M+H)+.
중간체 68
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00737
24 mg (26 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 및 33.7 μl의 15% 수성 석신알데히드산 용액 (52 μmol)을 953 μl의 1:1-디옥산/물 혼합물에서 용해시키고 100 ℃로 1시간 동안 가열했다. 간단한 냉각 후, 1.80 mg (29 μmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가했다. 반응 혼합물을 0.1 N 염산의 부가로 pH 3으로 조정하고 혼합물을 100 ℃로 추가 2 시간 동안 가열했다. 동일한 양의 석신알데히드산 용액, 나트륨 시아노보로하이드라이드 및 염산을 다시 부가한 후, 혼합물을 2시간 동안 100 ℃로 다시 한번 가열했다. 그 다음 반응 혼합물을 분취 HPLC로 그의 성분으로 직접적으로 분리했다. 15.2 mg (65%, 이론적)의 표제 화합물을 이렇게 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; m/z = 895 (M+H)+
중간체 69
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00738
53 mg (84 μmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4) 및 45 mg (84 μmol)의 벤질 N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트 (중간체 12)을 2 mL의 DMF에서 취하고, 19 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민, 14 mg (92 μmol)의 HOBt 및 17.6 mg (92 μmol)의 EDC를 부가하고 그 다음 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 59 mg (68%, 이론적)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.55 분; m/z = 1044 (M+H)+.
57 mg (0.055 mmol)의 이러한 중간체를 5 mL의 DMF 중 1.2 mL의 피페리딘으로 처리하여 Fmoc 보호 그룹을 분리했다. 농축 및 분취 HPLC에 의한 정제 후, 39 mg (76%, 이론적)의 유리 아민 중간체 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; m/z = 822 (M+H)+.
37 mg (0.045 mmol)의 이러한 중간체를 5 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 중간체 66에서의 화합물의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산의 15% 수용액과 반응시켰다. 16 mg (39%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; MS (ESIpos): m/z = 908 (M+H)+.
중간체 70
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00739
먼저, 중간체 4 및 26으로부터 진행하는 중간체 14에서 기재된 합성과 유사하게, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 제조했다.
30 mg (0.032 mmol)의 이 화합물을 6 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 41 μl (0.063 mmol)의 4-옥소부탄산의 15% 수용액을 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 100 ℃에서 1시간 동안 교반했다. 실온으로 냉각한 후, 2.2 mg (0.035 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 혼합물을 약 300 μl의 0.1 N 염산의 부가로 pH 3으로 조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 2 시간 동안 교반했다. 냉각 후, 또 하나의 41 μl (0.063 mmol)의 15% 4-옥소부탄산 용액을 부가하고 반응 혼합물을 100 ℃에서 1시간 동안 다시 교반했다. 그 다음 추가 2.2 mg (0.035 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 약 300 μl의 0.1 N 염산을 차후에 사용하여 pH를 3으로 역조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 2 시간 동안 교반했다. 전환이 불완전할 때, 이 절차를 3회 반복했다. 반응 혼합물을 마지막으로 농축하고 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 24 mg (82%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.15 분; MS (ESIpos): m/z = 922 (M+H)+.
중간체 71
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-3-{[(2S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00740
먼저, 중간체 4 및 39로부터 진행하는 중간체 14에서 기재된 합성과 유사하게, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-3-{[(2S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 제조했다. 그 다음 7 mg (0.009 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 2 mg (22%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.06 분; MS (ESIpos): m/z = 832 (M+H)+.
중간체 72
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00741
212 mg (411 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 8) 및 237 mg (411 μmol)의 벤질-N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-트립토파네이트 트리플루오로아세테이트 (중간체 20)을 30 mL의 DMF에서 취하고, 188 mg (493 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 215 μl N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 20 시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축하고, 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이로써 315 mg (80%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 무색 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.45 분; m/z = 961 (M+H)+.
50 mg (52 μmol)의 이러한 중간체를 9 mL의 디클로로메탄 중 1 mL의 트리플루오로아세트산으로 처리하여 Boc 보호 그룹을 분리했다. 농축 및 분취 HPLC에 의한 정제 후, 29 mg (57%, 이론적)의 유리 아민 중간체 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.99 분; m/z = 861 (M+H)+.
29 mg (0.03 mmol)의 이러한 중간체를 6 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 39 μl (0.059 mmol)의 4-옥소부탄산의 15% 수용액을 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 100 ℃에서 1시간 동안 교반했다. 실온으로 냉각한 후, 2 mg (0.033 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 혼합물을 약 300 μl의 0.1 N 염산의 부가로 pH 3으로 조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 2 시간 동안 교반했다. 냉각 후, 또 하나의 39 μl (0.059 mmol)의 15% 4-옥소부탄산 용액을 부가하고 반응 혼합물을 100 ℃에서 1시간 동안 다시 교반했다. 그 다음 추가 2 mg (0.033 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 약 300 μl의 0.1 N 염산을 차후에 사용하여 pH를 3으로 역조정했다. 그 다음 혼합물을 100 ℃에서 추가 2 시간 동안 교반했다. 그 후에, 반응 혼합물을 반포화된 수성 암모늄 클로라이드 용액 및 에틸 아세테이트의 1:1 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 나트륨 클로라이드 용액으로 세정하고, 나트륨 설페이트 상에서 건조시키고 농축했다. 잔여물을 물/ 아세토니트릴로부터 냉동건조시켰다. 이로써 27 mg (94%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.04 분; MS (ESIpos): m/z = 947 (M+H)+.
중간체 73
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[벤질(메틸)아미노]-1-옥소-3-페닐프로판-2-일}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00742
먼저, 중간체 4 및 38로부터 진행하는 중간체 14에서 기재된 합성과 유사하게, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[벤질(메틸)아미노]-1-옥소-3-페닐프로판-2-일}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 제조했다. 그 다음 25 mg (0.026 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 13 mg (54%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.01 분; MS (ESIpos): m/z = 921 (M+H)+.
중간체 74
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(벤질옥시)카보닐]-2-페닐사이클로프로필}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00743
50 mg (73 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 28 mg (73 μmol)의 벤질 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실레이트 트리플루오로아세테이트 (중간체 45)을 5 mL의 DMF에서 취하고, 42 mg (110 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 38 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 5 시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축했다. 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 35 mg (51%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(벤질옥시)카보닐]-2-페닐사이클로프로필}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 무색 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.52 분; m/z = 934 (M+H)+.
35 mg의 이러한 중간체를 5 mL의 디클로로메탄 중 1 mL의 트리플루오로아세트산으로 처리하여 Boc 보호 그룹을 분리했다. 농축 및 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 34 mg (97%, 이론적)의 유리 아민 중간체 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(벤질옥시)카보닐]-2-페닐사이클로프로필}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.91 분; m/z = 834 (M+H)+.
그 다음 11 mg (0.011 mmol)의 이러한 중간체를, 중간체 66의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 2.5 mg (24%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.1 분; MS (ESIpos): m/z = 920 (M+H)+.
중간체 75
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S,2R)-2-페닐-1-(프로필카바모일)사이클로프로필]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00744
먼저, 중간체 74에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐-N-프로필사이클로프로판카복사마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 27)의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S,2R)-2-페닐-1-(프로필카바모일)사이클로프로필]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 14 mg (0.016 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 11.3 mg (83%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.27 분; MS (ESIpos): m/z = 871 (M+H)+.
중간체 76
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(에톡시카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00745
먼저, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 중간체 46 (N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드)와 중간체 48 (에틸 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실레이트 트리플루오로아세테이트)와의 커플링 및 차후의 Boc 분리하여, 개시 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(에톡시카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트를 제조했다. 그 다음 70 mg (0.079 mmol)의 이 개시 물질을, 4-옥소부탄산과의 반응으로, 중간체 61과 유사하게, 사용하여 46 mg (68%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.28 분; MS (ESIpos): m/z = 858 (M+H)+
중간체 77
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00746
먼저, 중간체 75에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N -(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 L-페닐알라닌아마이드 하이드로클로라이드의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리로, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 47 mg (0.049 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 39 mg (96%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.44 분; MS (ESIpos): m/z = 817 (M+H)+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 8.95 및 8.8 (2m, 1H), 8.25 및 8.0 (2d, 1H), 7.45, 7.35 및 7.0 (3s, broad, 2H), 7.3-7.1 (m, 5H), 4.8-4.4 (2m, 3H), 3.95 (m, 1H), 3.82 (m, 1H), 3.72 (d, 1H), 3.22, 3.18, 3.15, 3.05 및 3.00 (5s, 9H), 2.85-2.7 (m, 4H), 2.45-1.6 (m, 12H), 1.5-1.2 (m, 3H), 1.1-0.7 (m, 21H) [용매 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 78
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00747
이 화합물을 중간체 14로부터의 20 mg (16 μmol)의 화합물 및 벤질 6-옥소헥실 카바메이트로부터 진행하는 2 단계에 걸쳐 중간체 66과 유사하게 제조했고, 수소화를 용매로서 메탄올에서 수행했다.
수율: 7.6 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 55%)
HPLC (방법 6): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.7 분; MS (ESIpos): m/z = 901 (M+H)+.
중간체 79
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00748
36 mg (43 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 46) 및 4.6 mg (43 μmol)의 벤질아민을 5 mL의 DMF에서 취하고, 7.5 μl (88 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민, 10 mg (65 μmol)의 HOBt 및 10 mg (52 μmol)의 EDC를 부가하고, 그 다음 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 29 mg (73%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.43 분; m/z = 921 (M+H)+.
29 mg의 이러한 중간체를 6 mL의 디클로로메탄에서 1 mL의 트리플루오로아세트산으로 처리하여 to detach Boc 보호 그룹을 분리했다. 농축 및 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 30 mg (quant.)의 유리 아민 중간체 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.95 분; m/z = 821 (M+H)+.
그 다음 17 mg (0.018 mmol)의 이러한 중간체를, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 13 mg (80%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.97 분; MS (ESIpos): m/z = 907 (M+H)+.
중간체 80
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00749
먼저, 중간체 74에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 N-벤질-L-트립토판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 47)의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리로, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 10 mg (0.01 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 2.5 mg (26%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.13 분; MS (ESIpos): m/z = 946 (M+H)+.
중간체 81
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-카바모일-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00750
먼저, 중간체 74에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복사마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 48)의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-카바모일-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 14 mg (0.0163 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 8 mg (57%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.64 분; MS (ESIpos): m/z = 829 (M+H)+.
중간체 82
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00751
먼저, 중간체 69에 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4) 및 Nα -{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-트립토판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 49)의 커플링 및 피페리딘에 의한 Fmoc 보호 그룹의 차후의 분리로, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 78 mg (0.088 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 68 mg (90%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.49 분; MS (ESIpos): m/z = 856 (M+H)+.
중간체 83
N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00752
이 화합물을 20 mg (26 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트로부터 진행하는 중간체 82에서의 화합물과 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 제조했다.
수율: 5 mg (25%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.72 분; MS (ESIpos): m/z = 884 (M+H)+.
중간체 84
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(모폴린-4-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00753
먼저, 중간체 79에서 기재된 합성과 유사하게, EDC 및 HOBT의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 46) 및 모폴린의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(모폴린-4-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 30 mg (0.033 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 22 mg (76%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.58 분; MS (ESIpos): m/z = 887 (M+H)+.
중간체 85
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(벤질아미노)-3-하이드록시-1-옥소부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00754
먼저, 중간체 79에서 기재된 합성과 유사하게, HATU의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 46) 및 N-벤질-L-트레오닌아마이드 트리플루오로아세테이트의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(벤질아미노)-3-하이드록시-1-옥소부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 21 mg (0.024 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 20 mg (97%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.54 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.49 분; MS (ESIpos): m/z = 861 (M+H)+.
중간체 86
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
먼저, 중간체 74에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 tert-부틸-L-페닐알라니네이트 하이드로클로라이드의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리로 tert-부틸 에스테르 (디클로로메탄 중 트리플루오로아세트산과 40분 동안 교반)를 얻고, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 22 mg (0.02 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 16 mg (94%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.05 분; MS (ESIpos): m/z = 874 (M+H)+.
중간체 87
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
이 화합물을 3 단계에 걸처 230 mg (336 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 tert-부틸-L-트립토파네이트 하이드로클로라이드로부터 진행하는 중간체 86에서 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 95 mg (3 단계에 걸쳐 이론의 31%)
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.05 분; MS (ESIpos): m/z = 913 (M+H)+.
중간체 88
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00757
먼저, 중간체 69에 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4) 및 Nα -{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-트립토판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 49)의 커플링 및 피페리딘에 의한 Fmoc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 30 mg (0.03 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 화합물의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 벤질 6-하이드록시헥실 카바메이트의 산화에 의해 미리 수득한 벤질 6-옥소헥실 카바메이트과 반응시켜 사용하여, 17 mg (45%, 이론적)의 Z-보호된 화합물을 얻엇다. 차후에, 10% 팔라듐/활성탄 상에서 메탄올 중 수소첨가분해로 표제 화합물을 수득했다.
수율: 14 mg (95%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.73 분; MS (ESIpos): m/z = 869 (M+H)+.
중간체 89
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00758
먼저, 중간체 86에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 tert-부틸-L-트립토파네이트 하이드로클로라이드의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리로 tert-부틸 에스테르 (30 분 동안 1:10 트리플루오로아세트산/디클로로메탄과 함께 교반)로 얻고, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 71 mg (0.075 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 화합물의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 벤질 6-하이드록시헥실 카바메이트의 산화로 미리 수득한 벤질 6-옥소헥실 카바메이트와의 반응으로 사용하여, 35 mg (44%, 이론적)의 Z-보호된 화합물을 수득했다. 차후에, 10% 팔라듐/활성탄 상에서 메탄올 중 수소첨가분해로 표제 화합물을 수득했다.
수율: 30 mg (98%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.77 분; MS (ESIpos): m/z = 926 (M+H)+.
중간체 90
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00759
먼저, 중간체 74에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 2-(1H-인돌-3-일)에탄아민의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 100 mg (0.119 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 50 mg (49%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다. 표제 화합물을 용출물로서 디클로로메탄/메탄올/17% 암모니아를 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 여기에서 정제하고, 이 과정에서 혼합 비는 초기에 15/2/02로부터 15/4/0.5로 교환되었다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 813 (M+H)+.
중간체 91
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-{(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-[(2-페닐에틸)아미노]프로필}피롤리딘-1-일]-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일}-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00760
먼저, 중간체 74에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 페닐에틸아민의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-{(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-[(2-페닐에틸)아미노]프로필}피롤리딘-1-일]-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일}-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 57 mg (0.071 mmol)의 이 화합물을 used, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 44 mg (80%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다. 표제 화합물은 용출물로서 디클로로메탄/메탄올/17% 암모니아을 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 여기에서 또한 정제될 수 있다 (15/2/02 → 15/4/0.5).
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.64 분; MS (ESIpos): m/z = 774 (M+H)+.
중간체 92
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00761
100 mg (0.139 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 40)을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 94 mg (84%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다. 표제 화합물을 분취 HPLC로 정제했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.46 분; MS (ESIpos): m/z = 804 (M+H)+.
중간체 93
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00762
22.4 mg (24 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트를 1.4 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산의 15% 수용액과 반응시켰다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 8.2 mg (38%, 이론적)의 표제 화합물을 백색 고형물 형태로 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.54 분
LC-MS (방법 12): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 919 (M+H)+
중간체 94
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00763
17.1 mg (18 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트를 1.1 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산의 15% 수용액과 반응시켰다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 14.8 mg (89%, 이론적)의 표제 화합물을 백색 고형물 형태로 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.54 분;
LC-MS (방법 12): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 919 (M+H) +
중간체 95
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00764
19.3 mg (20 μmol) N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트를 1.2 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산의 15% 수용액과 반응시켰다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 8.6 mg (45%, 이론적)의 표제 화합물을 고형물 형태로 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 943 (M+H) +
중간체 96
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00765
15.5 mg (10 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트를 1.0 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산의 15% 수용액과 반응시켰다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 10.3 mg (68%, 이론적)의 표제 화합물을 백색 고형물 형태로 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.59 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 877 (M+H) +
중간체 97
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00766
표제 화합물을, 200 mg (0.108 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 16)와 벤질 6-옥소헥실 카바메이트와의 반응 및 (용매로서 메탄올 중 촉매로서 5% 목탄상 팔라듐을 갖는) Z 보호 그룹의 차후의 수소첨가분해 분리로 중간체 66의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 69 mg (2 단계에 걸처 이론의 65%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.76 분; MS (ESIpos): m/z = 912 (M+H)+.
중간체 98
N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00767
이 화합물을 중간체 80에서 기재된 합성과 유사하게 제조했다. 정제를 분취 HPLC에 의해 효과가 생겼다.
수율: 40 mg (3 단계에 걸쳐 이론의 29%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 974 (M+H)+.
중간체 99
(2S)-2-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)프로판-1-온 트리플루오로아세테이트
Figure pct00768
324 mg (0.81 mmol)의 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 N-(tert-부톡시카보닐)-L-트립토파네이트를 20 mL의 DMF에서 용해시키고, 200 mg (1.62 mmol)의 1,2-옥사지난 하이드로클로라이드 (개시 화합물 5) 및 850 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 반응 혼합물을 교반된 at 50 ℃ 밤새 및 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 디클로로메탄에서 취하고 추출된 물로. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다. 잔여물을 4:1 디클로로메탄/에틸 아세테이트를 용출물로서 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 생성물 분획을 농축하고 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이로써 147.5 mg (48%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.03 분; MS (ESIpos): m/z = 374 (M+H)+.
166 mg (444.5 μmol)의 이러한 중간체를, 표준 조건 하에서 20 mL의 디클로로메탄 중 3 mL의 트리플루오로아세트산과 함께 사용하여, Boc 보호 그룹을 분리하고, HPLC 정제 후, 155 mg (86%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.43 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.56 분; MS (ESIpos): m/z = 274 (M+H)+.
중간체 100
N-(6-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00769
177 mg (260 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 100 mg (260 μmol)의 (2S)-2-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)프로판-1-온 트리플루오로아세테이트 (중간체 99)을 15 ml의 DMF에서 취하고 118 mg (310 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 140 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 170 mg (68%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체를 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.36 분; m/z = 940 (M+H)+.
170 mg의 이러한 중간체를 treated 30 ml의 디클로로메탄 중 3 ml의 트리플루오로아세트산으로 30 분 동안 처리하여 to detach Boc 보호 그룹을 분리했다. 그 다음 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제하여 155 mg (86%, 이론적)의 탈보호된 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.85 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 840 (M+H)+.
그 다음 50 mg (0.052 mmol)의 이러한 중간체를, 중간체 97의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 벤질 6-옥소헥실 카바메이트와 함께 사용하고 (용매로서 메탄올 중 촉매로서 5% 목탄상 팔라듐을 갖는) Z 보호 그룹의 차후의 수소첨가분해 분리하여, 표제 화합물을 제조했다.
수율: 21 mg (37%, 이론적)
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.02 분; MS (ESIpos): m/z = 1073 (M+H)+.
중간체 101
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00770
26.7 mg (24.87 μmol)의 중간체 100을 10 ml의 메탄올에서 용해시키고 팔라듐/활성탄 (5%) 상에서 표준 수소 압력 하에서 30분 동안 수소부가했다 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 증발 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 22.5 mg (96%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.76 분; MS (ESIpos): m/z = 939 (M+H)+.
중간체 102
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(모폴린-4-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00771
이 화합물을 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(모폴린-4-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 8 mg (71%, 이론적)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 1094 (M+H)+.
중간체 103
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(벤질아미노)-3-하이드록시-1-옥소부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00772
이 화합물을 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(벤질아미노)-3-하이드록시-1-옥소부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 3 mg (22%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.78 분; MS (ESIpos): m/z = 1069 (M+H)+.
중간체 104
N-{4-[(트랜스-4-{[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]카보닐}사이클로헥실)아미노]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00773
먼저, 벤질 트랜스-4-아미노사이클로헥산카복실레이트 트리플루오로아세테이트를 Boc 보호 그룹, 그 다음 벤질 에스테르 보호 그룹을 도입하고 차후에 종래의 펩타이드 화학 방법으로 Boc 보호 그룹을 분리하여 트랜스-4-아미노사이클로헥산카복실산으로부터 제조했다.
그 다음 15 mg (18 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 5 ml의 디메틸포름아마이드에서 용해시키고 차후에 13 mg (35 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 9 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 15 mg (44 μmol)의 벤질 트랜스-4-아미노사이클로헥산카복실레이트 트리플루오로아세테이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 증발 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 14.7 mg (78%, 이론적)의 보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.95 분; MS (ESIpos): m/z = 1072 (M+H)+.
이 보호된 중간체로부터, 벤질 에스테르를 먼저 수소첨가분해 수단으로 제거하고 유리 카복실 성분을 정량적 수율로 수득했다. 14 mg (14 μmol; 1 당량)의 상기 탈보호된 화합물을 5 ml의 DMF에서 취하고 4.1 mg (21 μmol; 1.5 당량)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 7.5 μl (44 μmol; 3.1 당량)의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 0.9 mg (7 μmol; 0.5 당량)의 4-디메틸아미노피리딘의 존재에서 3.3 mg (29 μmol; 2.1 당량)의 N-하이드록시석신이마이드과 혼합하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 또 하나의 10 당량의 N-하이드록시석신이마이드, 5 당량의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 5 당량의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 0.5 당량의 4-디메틸아미노피리딘을 부가하고 반응 혼합물을 초음파 배쓰에서 5시간 동안 처리하고. 차후에, 용매를 증발 제거하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제하고 상응하는 분획을 조합하고, 농축했다. 디옥산으로부터 잔여물의 동결건조 후, 9.7 mg (62%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.77 분; MS (ESIpos): m/z = 1078 (M+H)+.
중간체 105
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00774
이 화합물을, 4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)아미노}-3-메틸부탄-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일](메틸)아미노}부탄산 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 진행하여 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다. 에스테르 중간체를 42% 수율로 수득했다. 제2 단계에서, 6 mg (6 μmol)의 이러한 중간체를 트리플루오로아세트산 및 tert-부틸 에스테르로 절단했다. HPLC 정제 후, 3.4 mg (48%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.66 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.04 분; MS (ESIpos): m/z = 1025 (M+H)+.
중간체 106
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00775
14 mg (16 μmol)의 N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 88)을 750 μl의 디옥산에서 취하고 1.5 ml의 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액 및 그 다음 3.2 mg (21 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 5.5 mg (36%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.84 분; MS (ESIpos): m/z = 949 (M+H)+.
중간체 107
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00776
38 mg (47 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 37 ml의 DMF에서 용해시키고 그 다음 71 mg (187 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 33 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 37 mg (140 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 고진공 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 12.2 mg (26%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 1020 (M+H)+.
중간체 108
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-{(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-[(2-페닐에틸) 아미노]프로필}피롤리딘-1-일]-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일}-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00777
화합물을 중간체 107와 유사하게 제조했다.
수율: 2.5 mg (30%, 이론적)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 981 (M+H)+.
중간체 109
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00778
화합물을 중간체 92의 화합물로부터 중간체 107과 유사하게 제조했다.
수율: 35 mg (65%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.76 분; MS (ESIpos): m/z = 1011 (M+H)+.
중간체 110
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00779
이 화합물을 중간체 83의 화합물로부터 중간체 147과 유사하게 제조했다.
수율: 2.4 mg (24%, 이론적)
HPLC (방법 6): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 981 (M+H)+.
중간체 111
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-1-메틸히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00780
이 화합물을 중간체 82 및 중간체 22로부터 중간체 140과 유사하게 제조했다.
수율: 6.5 mg (51%, 이론적)
HPLC (방법 6): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 4.71 분; MS (ESIpos): m/z = 1077 (M+H)+.
중간체 112
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-카바모일-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00781
이 화합물을 중간체 81의 화합물로부터 중간체 157과 유사하게 제조했다.
수율: 5.7 mg (57 %, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 1036 (M+H)+.
중간체 113
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00782
95 mg (104 μmol)의 4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)아미노}-3-메틸부탄-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일](메틸)아미노}부탄산을 DMF에서 용해시키고 그 다음 79.5 mg (209 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 73 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 68 mg (261 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 고진공 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 표제 화합물의 104 mg (89%, 이론적)의 tert-부틸 에스테르을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.93 분; MS (ESIpos): m/z = 1121 (M+H)+.
중간체를 33.4 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 17 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다.
따라서, 61 mg (62 %, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1064 (M+H)+.
중간체 114
N-[6-({[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸]카바모일}아미노)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00783
5 mg (5 μmol)의 N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 885 μl의 DMF에서 취하고 5.3 mg (8 μmol)의 4-니트로페닐 2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸 카바메이트 및 2.8 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고 그 다음 농축 건조했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다.
수율: 0.58 mg (11%, 이론적)의 무색 폼
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.83 분; MS (ESIpos): m/z = 1035 (M+H)+.
중간체 115
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00784
이 화합물을 8 mg (9 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드로부터 진행하여 중간체 147의 화합물과 유사하게 제조했다. 농축 후, 활성화된 에스테르를 분취 HPLC로 정제하고, 용매 감압 하에서 용매의 제거 후, 항체와 즉각적으로 반응시켰다.
수율: 3 mg (27%, 이론적) (가수분해-민감성)
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 996 (M+H)+.
중간체 116
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00785
이 화합물을 5 mg (6 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드로부터 진행하여 중간체 147의 화합물과 유사하게 제조했다. 농축 후, 활성화된 에스테르를 분취 HPLC로 정제하고, 용매 감압 하에서 용매의 제거 후, 항체와 즉각적으로 반응시켰다.
수율: 3.2 mg (43%, 이론적) (가수분해-민감성)
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 984 (M+H)+.
중간체 117
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00786
이 화합물을 중간체 86의 화합물로부터 중간체 157과 유사하게 제조했다.
수율: 7 mg (42%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 1081 (M+H)+.
중간체 118
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2R)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00787
표적 화합물을 중간체 68의 7 mg (7.8 μmol)의 화합물로부터 중간체 157과 유사하게 제조했다. 수율: 6.3 mg (53%, 이론적)
LC-MS (방법 1): Rt = 1.00 분; MS (ESIpos): m/z = 1102 (M+H)+.
중간체 119
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00788
7.4 mg (8.1 mmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 6.3 mg (24.2 mmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드 하이드로클로라이드를 커플링하고 중간체 157와 유사하게 워크업했다. 1.6 mg (13%, 이론적)의 표제 화합물을 고형물로서 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.89 분; MS (ESIpos): m/z = 1126 (M+H) +
중간체 120
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00789
12.8 mg (13.9 mmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 10.9 mg (41.8 mmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드 하이드로클로라이드를 커플링하고 중간체 157와 유사하게 워크업했다. 10.8 mg (59%, 이론적)의 표제 화합물을 고형물로서 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.90 분; MS (ESIpos): m/z = 1126 (M+H) +
중간체 121
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00790
7.4 mg (7.9 mmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 6.2 mg (23.5 mmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드 하이드로클로라이드를 커플링하고 중간체 157와 유사하게 워크업했다. 6.9 mg (74%, 이론적)의 표제 화합물을 고형물로서 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 1150 (M+H) +
중간체 122
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3 E )-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00791
8 mg (9.1 mmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 7.2 mg (27.4 mmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드 하이드로클로라이드를 커플링하고 중간체 157와 유사하게 워크업했다. 8.2 mg (82%, 이론적)의 표제 화합물을 백색 고형물로서 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.95 분; MS (ESIpos): m/z = 1083 (M+H) +
중간체 123
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00792
30 mg (30 μmol)의 중간체 89를 2 ml의 1,4-디옥산에서 취하고 4 ml의 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액 및 그 다음 7.5 mg (50 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 24 mg (74%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; MS (ESIpos): m/z = 1006 (M+H)+.
중간체 124
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00793
22 mg (20 μmol)의 중간체 123을 실온에서 1시간 동안 8 ml의 디클로로메탄 중 4 ml의 트리플루오로아세트산과 반응시켰다. 그 후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 11 mg (54%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 950 (M+H)+.
중간체 125
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00794
22.5 mg (20 μmol)의 중간체 101을 2 ml의 1:1 디옥산/물에서 취하고 그 다음 5.6 mg (40 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트 및 0.25 ml의 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 그 다음 또 하나의 0.25 ml의 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액을 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 15 분 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 12.8 mg (50%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.95 분; MS (ESIpos): m/z = 1019 (M+H)+.
중간체 126
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00795
64 mg (70 μmol)의 N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 97)을 3 ml의 1:1 디옥산/물에서 취하고, 그 다음 4 ml의 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액으로 pH 9로 조정하고 차후에 16.3 mg (110 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 그 다음 또 하나의 8 mg (55 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트를 부가하고, 반응 혼합물을 pH 9로 조정하고 실온에서 추가 시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 먼저, 31 mg의 아직 고리화되지 않은 중간체를 수득했다. 27 mg의 이러한 중간체를 t2 ml의 1:1 디옥산/물에서 취하고 그 다음 250 μl의 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액과 혼합했다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 20 mg (29%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.96 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 992 (M+H)+.
중간체 127
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00796
17 mg (18 μmol)의 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 98)을 2.8 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 20 mg (174 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 그 다음 10 mg (52 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 0.21 mg (0.17 μmol)의 DMAP와 혼합했다. 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 8.2 mg (43%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.98 분; MS (ESIpos): m/z = 1071 (M+H)+.
중간체 128
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00797
5 mg (5.6 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 845 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 3.2 mg (17 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 2.6 mg (17 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 1.96 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 5.9 mg (22.5 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 2.2 mg (36%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.88 분; MS (ESIpos): m/z = 1094 (M+H)+.
중간체 129
N-(6-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00798
4 mg (4.3 μmol)의 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 646 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 2.5 mg (13 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 2.0 mg (13 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 2.25 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 4.5 mg (17 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 1.9 mg (39%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.9 분; MS (ESIpos): m/z = 1134 (M+H)+.
중간체 130
N-(4-{[(2R)-1-({5-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-5-옥소펜타노일}아미노)프로판-2-일]옥시}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00799
10.5 mg (11.7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 3.7 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 그 다음 6.7 mg (35 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 0.7 mg (5.8 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘 및 8.2 mg (47 μmol)의 상업적으로 이용가능한 tert-부틸 (2R)-2-하이드록시프로필 카바메이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 7.5 mg (61%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.03 분; MS (ESIpos): m/z = 1056 (M+H)+.
차후에, Boc 보호 그룹을 트리플루오로아세트산으로 분리했다. 그 다음 4.9 mg (0.005 mmol)의 탈보호된 조 생성물을, 추가 정제없이, 1.8 ml의 디클로로메탄에서 취하고 3.7 mg (0.011 mmol)의 1,1'-[(1,5-디옥소펜탄-1,5-디일)비스(옥시)]디피롤리딘-2,5-디온, 2.4 μl (0.014 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 0.6 mg (5 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 0.77 mg (15%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.93 분; MS (ESIpos): m/z = 1167 (M+H)+.
중간체 131
N-{4-[(1-{5-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-5-옥소펜타노일}피페리딘-4-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00800
10 mg (11 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 2 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 그 다음 4.3 mg (22 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 0.88 mg (6 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘 및 5.2 mg (22 μmol)의 상업적으로 이용가능한 벤질 4-하이드록시피페리딘-1-카복실레이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 5 mg (40%, 이론적)의 Z-보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.04 분; MS (ESIpos): m/z = 1116 (M+H)+.
차후에, Z 보호 그룹을 팔라듐/활성탄 상에서 에탄올 중 수소첨가분해 수단으로 분리했다. 그 다음 4.6 mg (0.005 mmol)의 탈보호된 조 생성물을, 추가 정제없이, 1.8 ml의 디클로로메탄에서 취하고 3.8 mg (0.012 mmol)의 1,1'-[(1,5-디옥소펜탄-1,5-디일)비스(옥시)]디피롤리딘-2,5-디온, 0.8 μl (0.005 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 0.6 mg (5 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 0.96 mg (16%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 1193 (M+H)+.
중간체 132
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지닐}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00801
15 mg (16.7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 2500 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 9.6 mg (50 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 7.6 mg (50 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 5.8 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 17.4 mg (67 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 11.2 mg (52%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.09 분; MS (ESIpos): m/z = 1106 (M+H)+.
중간체 133
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지닐}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00802
5.8 mg (6.3 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 943 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 3.6 mg (19 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 2.9 mg (19 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 2.2 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 6.6 mg (25 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 4.5 mg (64%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.03 분; MS (ESIpos): m/z = 1129 (M+H)+.
중간체 134
N-[3-({[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸]카바모일}아미노)프로필]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00803
먼저, 4-니트로페닐 2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸 카바메이트를 상업적으로 이용가능한 1-(2-아미노에틸)-1H-피롤-2,5-디온 트리플루오로아세테이트 및 4-니트로페닐 클로로카보네이트로부터 진행하여 표준 조건 하에서 제조했다.
5 mg (6 μmol)의 N-(3-아미노프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 1000 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 2 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 2.2 mg (9 μmol)의 4-니트로페닐 2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸 카바메이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 1.6 mg (23%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.09 분; MS (ESIpos): m/z = 1036 (M+H)+.
중간체 135
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00804
10 mg (11 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 4000 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 6.3 mg (33 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 4.5 mg (33 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 5.7 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 11.5 mg (44 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 2.6 mg (14%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; MS (ESIpos): m/z = 1115 (M+H)+.
중간체 136
N-(4-{4-[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부타노일]피페라진-1-일}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00805
먼저, 1-[4-옥소-4-(피페라진-1-일)부틸]-1H-피롤-2,5-디온 트리플루오로아세테이트를 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 및 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄산로부터 진행하여 표준 조건 하에서 2 단계에 걸쳐 제조했다.
5 mg (5.6 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 1000 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 2.1 mg (11 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 1.7 mg (11 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 2 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 3.5 mg (5.6 μmol)의 1-[4-옥소-4-(피페라진-1-일)부틸]-1H-피롤-2,5-디온 트리플루오로아세테이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 2.1 mg (5.6 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트를 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 3 시간 동안 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 농축하고, 물로부터 동결건조하여, 0.6 mg (10%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 1132 (M+H)+.
중간체 137
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-1-메틸히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00806
먼저, 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N'-메틸헥산하이드라자이드 트리플루오로아세테이트를 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산산 및 tert-부틸 1-메틸하이드라진카복실레이트로부터 진행하여 표준 조건 하에서 2 단계에 걸쳐 제조했다.
6.9 mg (8 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 2540 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 3.6 mg (9 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 3 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 4.1 mg (12 μmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N'-메틸헥산하이드라자이드 트리플루오로아세테이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 3.9 mg (45%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.93 분; MS (ESIpos): m/z = 1108 (M+H)+.
중간체 138
N-{4-[(2-{[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부타노일](메틸)아미노}에틸)(메틸) 아미노]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00807
tert-부틸메틸 2-(메틸아미노)에틸 카바메이트 및 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄산으로부터, 2 단계에 걸쳐, 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N-메틸-N-[2-(메틸아미노)에틸]부탄아마이드 트리플루오로아세테이트를 먼저 제조했다.
6.6 mg (7.3 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 2000 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 5.6 mg (14.7 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 2.6 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 4.1 mg (9 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N-메틸-N-[2-(메틸아미노)에틸]부탄아마이드 트리플루오로아세테이트와 혼합했다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 동일한 양의 HATU 및 N,N-디이소프로필에틸아민을 다시 한번 부가하고, 그 다음 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 4 mg (44%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.91 분; MS (ESIpos): m/z = 1134 (M+H)+.
중간체 139
(2R,3S)-3-아미노-4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부탄-2-일 (3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-7,10-디이소프로필-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오에이트
Figure pct00808
13 mg (14.7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 10 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 그 다음 8.4 mg (44 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 5.4 mg (44 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘 및 9 mg (29.3 μmol)의 상업적으로 이용가능한 벤질 N-(tert-부톡시카보닐)-L-트레오니네이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 물과 함께 흔들어서 2회 추출하고 유기 상을 나트륨 설페이트 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 14 mg (81%, 이론적)의 보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.3 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.13 분; MS (ESIpos): m/z = 1178 (M+H)+.
차후에, Z 보호 그룹을 10% 팔라듐/활성탄 상에서 메탄올 중 수소첨가분해 수단으로 분리했다. 그 다음 9.5 mg (0.0087 mmol)의 탈보호된 조 생성물을, 추가 정제없이, 5 ml의 DMF에서 취하고, 5 mg (26.2 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 4 mg (26.2 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 54.6 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 9.1 mg (34.9 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 9.5 mg (84%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 1295 (M+H)+.
차후에, 9.5 mg (7.3 μmol)을 Boc-보호된 중간체의 2 ml의 디클로로메탄 중 0.5 ml의 트리플루오로아세트산으로 탈보호하고, 디옥산으로부터 동결건조한 후, 9 mg (82%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.84 분; MS (ESIpos): m/z = 1195 (M+H)+.
중간체 140
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-1-메틸히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00809
4.1 mg (12 μmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N'-메틸헥산하이드라자이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 22)을 2.5 ml의 DMF에서 중간체 61로부터의 6.9 mg (8 μmol)의 화합물과 함께 용해시키고 그 다음 3.5 mg (9 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 3 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 2.6 mg (30%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.90 및 0.91 분; MS (ESIpos): m/z = 1120 (M+H)+.
중간체 141
N-[4-({1-[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부타노일]피페리딘-4-일}옥시)-4-옥소부틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00810
44 mg (49 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 2 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 그 다음 18.8 mg (98 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 3.8 mg (24 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘 및 23 mg (98 μmol)의 상업적으로 이용가능한 벤질 4-하이드록시피페리딘-1-카복실레이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 22 mg (40%, 이론적)의 Z-보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.04 분; MS (ESIpos): m/z = 1116 (M+H)+.
차후에, Z 보호 그룹을 팔라듐/활성탄 상에서 에탄올 중 수소첨가분해 수단으로 분리했다.
그 다음 19 mg (19 μmol)의 탈보호된 조 생성물을, 추가 정제없이, 4 ml의 DMF에서 취하고 7 mg (39 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄산, 11 mg (29 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 5 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 7.5 mg (34%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 1147 (M+H)+.
중간체 142
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00811
9 mg (9.5 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 72)을 1000 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 10 mg (38 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드, 7.2 mg (19 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 8 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 농축하고, 동결건조하여, 6.4 mg (58%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.99 분; MS (ESIpos): m/z = 1154 (M+H)+.
중간체 143
N-(4-{2-[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부타노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00812
6 mg (6.7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 61)을 중간체 142와 유사하게 3 mg (8.7 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부탄하이드라자이드 트리플루오로아세테이트와 반응시켜서 to give 2 mg (27%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 3): Rt = 1.92 분; MS (ESIpos): m/z = 1106 (M+H)+.
중간체 144
N-(4-{2-[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부타노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00813
1 ml의 DMF 중 5 mg (5.6 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에 7.65 mg (22.5 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부탄하이드라자이드 트리플루오로아세테이트, 3.2 mg (16.9 μmol)의 EDC, 1.96 μl (11.3 μmol)의 디이소프로필에틸아민 및 2.6 mg (16.9 μmol)의 HOBT을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 차후에, 추가 0.95 mg (2.8 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부탄하이드라자이드 트리플루오로아세테이트를 부가했다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 농축하고 분취 HPLC로 정제했다. 3.5 mg (85% 순도, 48%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 3): Rt = 1.86 분; m/z = 1094 (M+H)+.
중간체 145
N-[3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로필]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐 사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00814
12 mg (14 μmol)의 N-(3-아미노프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 66)을 750 μl의 디옥산에서 취하고 1.5 ml의 포화된 나트륨 수소카보네이트 용액 및 그 다음 3.2 mg (21 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 4.2 mg (32%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 950 (M+H)+.
중간체 146
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[벤질(메틸)아미노]-1-옥소-3-페닐프로판-2-일}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00815
9 mg (9.8 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[벤질(메틸)아미노]-1-옥소-3-페닐프로판-2-일}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 73)을 중간체 133과 유사하게 10 mg (39 μmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 반응시켜 to give 1.8 mg (15%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.11 분; MS (ESIpos): m/z = 1128 (M+H)+.
중간체 147
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00816
16 mg (17 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 70)을 2 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 2.6 mg (23 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 그 다음 4 mg (21 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드와 혼합했다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 동일한 양의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드를 다시 한번 부가했다. 그 다음 실온에서 밤새 교반하고, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 10 mg (56%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
중간체 148
N-{4-[(2-{[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부타노일](메틸)아미노}에틸)아미노]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00817
6 mg (7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 61)을 2 ml의 DMF 중 2.8 mg (8 μmol)의 N-(2-아미노에틸)-4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N-메틸부탄아마이드 트리플루오로아세테이트, 10.1 mg (27 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 5 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 조합시키고 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 또 하나의 5 mg (23.5 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 3 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 실온에서 추가 5 시간 동안 교반한 후, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 농축하고, 디옥산으로부터 동결건조하여, 1.3 mg (15%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.21 분; MS (ESIpos): m/z = 1120 (M+H)+.
중간체 149
N-{4-[(2-{[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부타노일]아미노}에틸)(메틸)아미노]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00818
6 mg (7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 61)을 2 ml의 DMF 중 3.1 mg (9 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N-[2-(메틸아미노)에틸]부탄아마이드 트리플루오로아세테이트, 10.1 mg (27 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 5 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 조합시키고, 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반했다. 그 다음 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 농축하고, 디옥산으로부터 동결건조하여, 1 mg (13.4%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.89 분; MS (ESIpos): m/z = 1121 (M+H)+.
중간체 150
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S,2R)-2-페닐-1-(프로필카바모일)사이클로프로필]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00819
7.9 mg (9 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S,2R)-2-페닐-1-(프로필카바모일)사이클로프로필] 아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 3 ml의 DMF에서 용해시키고 그 다음 10.4 mg (54 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 8.3 mg (54 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 9 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 9.5 mg (36 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 4.3 mg (22%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.93 분; MS (ESIpos): m/z = 1078 (M+H)+.
중간체 151
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-카바모일-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00820
화합물을, 중간체 81의 화합물로부터 진행하여 중간체 150과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 1036 (M+H)+.
중간체 152
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(에톡시카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00821
10 mg (12 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(에톡시카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 3 ml의 DMF에서 용해시키고 그 다음 8.9 mg (23 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 10 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 12 mg (47 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 고진공 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 5.8 mg (37 %, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.99 분; MS (ESIpos): m/z = 1066 (M+H)+.
중간체 153
N-[1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-12,15-디옥소-3,6,9-트리옥사-13,14-디아자옥타데칸-18-일]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00822
1 ml의 DMF 중 5 mg (5.6 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에 9.7 mg (22.5 μmol)의 3-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)프로판하이드라자이드 트리플루오로아세테이트, 3.2 mg (16.9 μmol)의 EDC, 1.96 μl (11.3 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 2.6 mg (16.9 μmol)의 HOBT을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 차후에, 추가 1.2 mg (2.8 μmol)의 3-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)프로판하이드라자이드 트리플루오로아세테이트를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다.
3.6 mg (51%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.90 분; m/z = 1185 (M+H)+.
중간체 154
(2R,3S)-3-아미노-4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부탄-2-일 (3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-7,10-디이소프로필-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오에이트
Figure pct00823
15 mg (17 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 10 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 그 다음 12.8 mg (67 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 10 mg (83 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘 및 10.3 mg (33 μmol)의 상업적으로 이용가능한 벤질 N-(tert-부톡시카보닐)-L-트레오니네이트와 혼합했다. 혼합물을 4시간 동안 가열 환류했다. 그 다음 동일한 양의 커플링 시약 및 4-디메틸아미노피리딘을 다시 부가하고 반응 혼합물을 환류 하에서 밤새 가열했다. 차후에, 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 물로 한번 흔들어서 추출하고, 유기 상을 제거하고 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 7.7 mg (37%, 이론적)의 보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.5 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.13 분; MS (ESIpos): m/z = 1190 (M+H)+.
차후에, 벤질 에스테르 보호 그룹을 10% 팔라듐/활성탄 상에서 메탄올 중 표준 수소 압력 하에서 수소화로 제거하고, 이렇게 수득한 산을, 중간체 151에서 기재된 바와 같이, 내지 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드과 결합시켰다. 마지막 단계에서, Boc 보호 그룹을 트리플루오로아세트산으로 분리했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 0.22 mg (3 단계에 걸쳐 이론의 2.5%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.81 분; MS (ESIpos): m/z = 1207 (M+H)+.
중간체 155
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00824
이 화합물을 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 152에서 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.82 분; MS (ESIpos): m/z = 1024 (M+H)+.
중간체 156
N-(3-{[(1-{[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]카보닐}사이클로프로필)카보닐]아미노}프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00825
이 화합물을 N-(3-아미노프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상응하는 디카복실산으로부터 미리 수득한 1,1'-[사이클로프로판-1,1-디일비스(카보닐옥시)]디피롤리딘-2,5-디온로부터 중간체 131의 마지막 단계에서 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 1080 (M+H)+.
중간체 157
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00826
15 mg (18 μmol)의 (N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 3.8 ml의 DMF에서 용해시키고 그 다음 27 mg (70 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 12 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 14 mg (53 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 고진공 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 6.2 mg (33%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 1063 (M+H)+.
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, 특징적인 신호): δ = 10.8 (d, 1H), 9.8-9.7 (m, 2H), 9.6 및 9.4 (2m, 1H), 8.9, 8.88, 8.78 및 8.75 (4d, 1H), 8.08 및 7.85 (2d, 1H), 7.6-6.9 (m, 9H), 4.7-4.4 (m, 3H), 3.4 (t, 2H), 3.23, 3.2, 3.18, 3.0, 및 2.99 (5s, 9H), 2.8 (m, 3H), 2.1 (t, 2H), 1.06 및 1.01 (2d, 3H), 0.95-0.8 (m, 15H), 0.8-0.75 (dd, 3H).
중간체 158
N-[4-({(2R)-1-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-메틸-1-옥소펜타n-2-일}아미노)-4-옥소부틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00827
13 mg (14.7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 4 ml의 디메틸포름아마이드에서 용해시키고 그 다음 9.4 mg (25 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 6 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 7 mg (31 μmol)의 상업적으로 이용가능한 tert-부틸 D-류시네이트 하이드로클로라이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 5 시간 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 6.5 mg (49%, 이론적)의 보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.21 분; MS (ESIpos): m/z = 1076 (M+H)+.
디클로로메탄 중 트리플루오로아세트산을 먼저 사용하여 Boc 보호 그룹을 이 보호된 중간체로부터 분리하여, 6.2 mg (99%, 이론적)의 탈보호된 화합물을 얻었다. 5.2 mg (5 μmol)의 이러한 중간체를 1.5 ml의 디클로로메탄에서 취하고 1.2 mg (6 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 0.16 mg (1 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘의 존재에서0.8 mg (7 μmol)의 N-하이드록시석신이마이드와 반응시켰다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축하고 분취 HPLC로 정제했다. 1.3 mg의 표제 화합물을 수득했고, 이것의 일부는 반응물로 가수분해되었다.
중간체 159
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00828
이 화합물을 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 6 mg (53%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 1114 (M+H)+.
중간체 160
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00829
이 화합물을 20 mg (21 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 13 mg (52%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 1153 (M+H)+.
중간체 161
N-(6-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00830
이 화합물을 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 0.8 mg (16%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.78 분; MS (ESIpos): m/z = 1092 (M+H)+.
중간체 162
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00831
18 mg (20 μmol)의 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 64)을 3.2 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 22 mg (190 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 그 다음 11 mg (60 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 0.24 mg (0.17 μmol)의 DMAP와 혼합했다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 또 하나의 22 mg (190 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온, 11 mg (60 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 0.24 mg (0.17 μmol)의 DMAP를 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 8.2 mg (41%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 1024 (M+H)+.
중간체 163
[(1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로필](1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일)메타논 트리플루오로아세테이트
Figure pct00832
먼저, 문헌 방법 (참고 H. King, J. Chem. Soc. 1942, 432)과 유사하게1,2-바이(브로모메틸)벤젠와 반응으로265 mg (0.82 mmol)의 tert-부틸 (1S,2R)-1-(하이드록시카바모일)-2-페닐사이클로프로필 카바메이트 (개시 화합물 7)로부터 진행하여, Boc-보호된 tert-부틸 (1S,2R)-1-(1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필 카바메이트 중간체를 제조했다.
수율: 108 mg (34%, 이론적)
LC-MS (방법 2): Rt = 1.3 분; MS (ESIpos): m/z = 395 (M+H)+.
108 mg (0.27 mmol)의 이러한 중간체를 3.7 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 1.8 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 15 분 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고 디옥산으로부터 잔여 잔류물을 동결건조했다. 112 mg의 표제 화합물을 무색 폼으로서 정량적 수율로 얻었다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.7 분; MS (ESIpos): m/z = 295 (M+H)+.
중간체 164
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00833
166 mg (0.196 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 10)을 40 ml의 DMF에서 취하고 연속적으로 80 mg (0.196 mmol)의 [(1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로필](1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일)메타논 트리플루오로아세테이트 (중간체 163), 112 mg (0.294 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 682 μl (3.9 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 차후에 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 용액을 포화된 수성 나트륨 클로라이드 용액으로 세정했다 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 마지막으로 분취 HPLC로 정제했다. 이런 식으로, 19 mg (9%, 이론적)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.68 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.51 분; MS (ESIpos): m/z = 1083 (M+H)+.
19 mg (0.015 mmol)의 이러한 중간체를 4 ml의 DMF에서 용해시켰다. 817 μl의 피페리딘이 부가된 후, 반응 혼합물을 실온에서 5 분 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 먼저 디에틸 에테르로 소화시키고 그 다음 분취 HPLC (용출물: 아세토니트릴 + 0.1% TFA / 0.1% aq. TFA)로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거하고 그 다음 잔여물을 디옥산/물으로부터 동결건조했다. 12 mg (92%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 861 (M+H)+.
중간체 165
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00834
20 mg (0.021 mmol)의 중간체 164를, 중간체 97의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 벤질 6-옥소헥실 카바메이트와 함께 사용하고 (용매로서 메탄올 중 촉매로서 5% 목탄상 팔라듐을 갖는) Z 보호 그룹의 차후의 수소첨가분해 분리하여, 표제 화합물을 제조했다.
수율: 4.5 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 23%)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 960 (M+H)+.
중간체 166
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00835
4.4 mg (4.5 μmol)의 중간체 165를 1 ml의 1:1 디옥산/물에서 취하고 그 다음 1 mg (6.8 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트 및 50 μl의 포화된 수성 나트륨 수소카보네이트 용액과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 그 다음 또 하나의 50 μl의 포화된 수성 나트륨 수소카보네이트 용액을 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 15 분 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 1 mg (21%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.08 분; MS (ESIpos): m/z = 1040 (M+H)+.
중간체 167
벤질 3-{2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시}프로파노에이트
Figure pct00836
표제 화합물을, 먼저 벤질 클로라이드 및 세슘 카보네이트에 의한 에스테르화로 및 황 트리옥사이드-피리딘 복합물에 의한 차후의 산화로6 g (21.55 mmol)의 상업적으로 이용가능한 3-{2-[2-(2-하이드록시에톡시)에톡시]에톡시}프로판산으로부터 표준 조건 하에서 제조했다.
수율: 611 mg (이론의 10%, 2 단계에 걸쳐)
LC-MS (방법 2): Rt = 1.69 분; MS (ESIpos): m/z = 311 (M+H)+.
중간체 168
N-(2-{2-[2-(2-카복시에톡시)에톡시]에톡시}에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00837
먼저, 중간체 69에 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4) 및 Nα -{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-트립토판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 49)의 커플링 및 피페리딘에 의한 Fmoc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다.
25 mg (0.028 mmol)의 이 화합물 및 17.5 mg (0.06 mmol)의 중간체 167을 2 ml의 메탄올에서 조합시키고 12.6 mg (0.14 mmol)의 보란-피리딘 복합물 및 2.5 ml의 아세트산과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 동일한 양의 보란-피리딘 복합물 및 아세트산을 다시 한번 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 24 시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 및 1:1 디옥산/물로부터 동결건조 후, 26.5 mg (88%, 이론적)의 Z-보호된 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.04 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 1064 (M+H)+.
25 mg (0.024 mmol)의 이러한 중간체를 10 ml의 메탄올에서 취하고 10% 활성탄 상 팔라듐 상에서 표준 수소 압력 하에서 실온에서 45 분 동안 수소부가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 제거했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 19.7 mg (85%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.83 분; MS (ESIpos): m/z = 974 (M+H)+.
중간체 169
N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로폭시}에톡시)에톡시]에틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00838
10 mg (10 μmol)의 중간체 168을 3 ml의 DMF에서 용해시키고 3.5 mg (30 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 그 다음 2.4 mg (10 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 5 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 실온에서 20 시간 동안 교반한 후, 8 mg (0.02 mmol)의 HATU를 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 다시 한번 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 8.6 mg (64%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.81 분; MS (ESIpos): m/z = 1071 (M+H)+.
중간체 170
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00839
이 화합물을 26 mg (0.028 mmol)의 중간체 15로부터 진행하여 중간체 101과 유사하게 2 단계에 걸쳐 제조했다.
수율: 16.7 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 63%)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.81 분; MS (ESIpos): m/z = 914 (M+H)+.
중간체 171
N-(6-{[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부타노일]아미노}헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00840
중간체 170로부터 형성된 6.7 mg (7.3 μmol)의 화합물 및 3 mg (14.7 μmol)의 상업적으로 이용가능한 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄산을 2 ml의 DMF에서 취하고 5.6 mg (14.7 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 2 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거하고 그 다음 잔여물을 디옥산으로 동결건조했다. 따라서, 4.5 mg (56%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.12 분; MS (ESIpos): m/z = 1079 (M+H)+.
중간체 172
벤질 2-{2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시}에틸 카바메이트
Figure pct00841
표제 화합물을, 먼저 Z 보호 그룹을 도입하고 그 다음 황 트리옥사이드-피리딘 복합물에 의한 산화로 표준 조건 하에서 상업적으로 이용가능한 2-{2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시}에탄올로부터 제조했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.4 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.65 분; MS (ESIpos): m/z = 326 (M+H)+.
중간체 173
벤질 {2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에틸 카바메이트
Figure pct00842
표제 화합물을, 먼저 Z 보호 그룹을 도입하고 그 다음 황 트리옥사이드-피리딘 복합물에 의한 산화로 표준 조건 하에서 상업적으로 이용가능한 2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에탄올로부터 중간체 172와 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.3 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.68 분; MS (ESIpos): m/z = 282 (M+H)+.
중간체 174
N-(2-{2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시}에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐 사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00843
47 mg (0.05 mmol)의 중간체 16을 중간체 167의 제조와 유사하게 보란-피리딘 복합물의 존재에서 벤질 2-{2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시}에틸 카바메이트에 의해 환원적으로 아민화했다. 차후에, Z 보호 그룹을 촉매로서 5% 목탄상 팔라듐으로 및 용매로서 메탄올 중 수소첨가분해 수단으로 제거하고, 38 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 66%)의 표제 화합물을 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.8 분; MS (ESIpos): m/z = 988 (M+H)+.
중간체 175
N-[2-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)에틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00844
제조는 34 mg (0.03 mmol)의 중간체 174로부터 진행하여 중간제 166과 유사하게 영향을 받았다.
수율: 8.3 mg (23%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 1068 (M+H)+.
중간체 176
N-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00845
제조는 중간체 173에 의한 중간체 16의 환원 아미노화로 시작하고, 말레이마이드의 차후의 탈보호 및 형성으로 중간체 174 및 175와 유사하게 영향을 받았다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.8 분; MS (ESIpos): m/z = 981 (M+H)+.
중간체 177
N-[2-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)에틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00846
제조는 중간체 172에 의한 중간체 16의 환원 아미노화로 시작하고, 말레이마이드의 차후의 탈보호 및 형성으로 중간체 174 및 175와 유사하게 영향을 받았다
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1025 (M+H)+.
중간체 178
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00847
제조는 6 mg의 중간체 82로부터 진행하여 중간체 162와 유사하게 영향을 받았다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.82 분; MS (ESIpos): m/z = 953 (M+H)+.
중간체 179
4-[(1E,3S)-3-아미노-4-페닐부트-1-엔-1-일]벤젠설폰산 트리플루오로아세테이트
Figure pct00848
7.5 ml의 DMF 중 13.6 mg (0.06 mmol)의 팔라듐(II) 아세테이트, 469 mg (1.46 mmol)의 칼륨 4-아이오도벤젠설포네이트, 300 mg (1.21 mmol)의 (S)-tert-부틸 1-페닐부트-3-엔-2-일 카바메이트, 16.5 mg (0.12 mmol)의 페닐우레아 및 167.6 mg (1.21 mmol)의 칼륨 카보네이트의 혼합물을 160 ℃로 마이크로웨이브에서 15 분 동안 가열했다. 조 생성물을 차후에 분취 HPLC로 직접적으로 정제했다. 이로써 31%의 Boc-보호된 화합물 및 69%의 유리 아민의 312 mg의 혼합물을 얻었다.
이 혼합물을 차후에 30 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 1 ml의 트리플루오로아세트산과 혼합하고 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 감압 하에서 농축한 후, 잔여물을 디에틸 에테르와 함께 교반하고, 형성된 침전물을 흡입으로 여과 제거하고, 디에틸 에테르로 세정했다. 이로써 200 mg (62%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.44 분; MS (ESIpos): m/z = 304 (M+H)+.
중간체 180
4-[(3R)-3-아미노-4-페닐부틸]벤젠설폰산
Figure pct00849
100 mg (0.25 mmol)의 4-[(1E,3S)-3-아미노-4-페닐부트-1-엔-1-일]벤젠설폰산 트리플루오로아세테이트를 10 ml의 아세트산 및 몇 방울의 DMF 및 물에서 현탁하고, 70 mg (0.07 mmol)의 목탄상 팔라듐 (10%)과 혼합하고 수소 압력 2.2 bar에서 24시간 동안 수소부가했다. 용액을 여과하고, 여과물을 분취 HPLC로 정제했다.
29 mg (76% 순도, 21%, 이론적)의 생성물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.46 분; MS (ESIpos): m/z = 306 (M+H)+.
중간체 181
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00850
4 ml의 DMF 중 90 mg (0.13 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에 60 mg (0.16 mmol)의 HATU 및 69 μl의 (0.39 mmol) 휘니그 염기를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 60 mg (0.15 mmol) 60.3 mg (0.13 mmol)의 4-[(1E,3S)-3-아미노-4-페닐부트-1-엔-1-일]벤젠설폰산 트리플루오로아세테이트와 혼합했다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 표제 화합물 및 이미 탈보호된 아민의 127 mg의 44:56 혼합물을 얻었다.
LC-MS (방법 1): 상기 탈보호된 화합물에 대한 Rt = 1.21 분; MS (ESIpos): m/z = 971 (M+H)+; Rt = 0.84 분; MS (ESIpos): m/z = 871 (M+H)+.
중간체 182
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00851
90 mg의 중간체 180을 4.6 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고, 0.92 ml의 트리플루오로아세트산을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 수득한 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다.
91 mg (98%, 이론적)의 표적 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 871 (M+H)+
중간체 183
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00852
16.7 μl (0.03 mmol)의 15% 수성 석신알데하이드 용액을 943 μl의 메탄올에서 초기에 충전하고 17 mg (0.02 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 181) 및 1.1 μl (0.02 mmol)의 아세트산과 혼합했다. 반응 혼합물을 5 분 동안 실온에서 교반하고 그 다음 2.9 μl (0.02 mmol)의 보란-피리딘 복합물을 부가했다. 1시간 후, 추가 2 당량의 각각의 석신알데하이드, 아세트산 및 보란-피리딘 복합물을 부가하고 혼합물을 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다.
이로써 20 mg (83% 순도, 80%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 957 (M+H)+
중간체 184
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00853
8 mg (7.5 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드, 2.8 mg (8.2 μmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드 트리플루오로아세테이트, 3.4 mg (9 μmol)의 HATU 및 3.9 μl의 휘니그 염기를 0.77 ml의 DMF에서 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다.
3 mg (31%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.90 분; MS (ESIpos): m/z = 1164 (M+H)+
중간체 185
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00854
2 ml의 DMF 중 8 mg (7.5 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에 8.6 mg (74.8 μmol)의 N-하이드록시석신이마이드, 8.5 mg (22.4 μmol)의 EDCI 및 0.1 mg (0.75 μmol)의 DMAP를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 차후에, 1.3 μl (7.5 μmol)의 휘니그 염기를 부가하고 혼합물을 1시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다. 2.6 mg (72% 순도, 21%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.89 분; MS (ESIpos): m/z = 1054 (M+H)+
중간체 186
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00855
1.9 ml의 DMF 중 43 mg (0.06 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에 29 mg (0.07 mmol)의 HATU 및 33 μl (0.19 mmol)의 휘니그 염기를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 29 mg (0.07 mmol)의 4-[(3R)-3-아미노-4-페닐부틸]벤젠설폰산 트리플루오로아세테이트와 혼합했다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 58 mg의 표제 화합물 및 이미 탈보호된 아민의 45:55 혼합물을 얻었다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.09 분; MS (ESIpos): m/z = 973 (M+H)+; Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): 상기 탈보호된 화합물에 대한 m/z = 873 (M+H)+.
중간체 187
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00856
58 mg의 중간체 186을 4.1 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고, 0.41 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 감압 하에서 농축 후, 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다.
50 mg (90% 순도, 85%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 873 (M+H)+
중간체 188
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00857
171 μl (0.26 mmol)의 15% 수성 석신알데하이드 용액을 2.5 ml의 메탄올에서 초기에 충전하고 50 mg (0.05 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 및 11.6 μl (0.2 mmol)의 아세트산과 혼합했다. 반응 혼합물을 5 분 동안 실온에서 교반하고 그 다음 30 μl (0.24 mmol)의 보란-피리딘 복합물을 부가했다. 24시간 동안 교반 후, 추가 동등물의 보란-피리딘 복합물을 부가하고 혼합물을 추가 2 시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다.
40 mg (90% 순도, 66%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.91 분; MS (ESIpos): m/z = 959 (M+H)+
중간체 189
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00858
10 mg (9.3 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드, 3.5 mg (10.3 μmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드 트리플루오로아세테이트, 4.3 mg (11.2 μmol)의 HATU 및 4.9 μl (28 μmol)의 휘니그 염기를 1 ml의 DMF에서 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다.
4.2 mg (92% 순도, 33%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.91 분; MS (ESIpos): m/z = 1166 (M+H)+
중간체 190
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00859
2.5 ml의 DMF 중 10 mg (9.3 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에 10.7 mg (93 μmol)의 N-하이드록시석신이마이드, 10.6 mg (28 μmol)의 EDCI 및 0.12 mg (0.9 μmol)의 DMAP를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 20 시간 동안 교반하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다.
3.8 mg (72% 순도, 25%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.90 분; MS (ESIpos): m/z = 1055 (M+H)+
중간체 191
(2R,3R)-N-[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00860
표제 화합물을 개시 화합물 1 및 (2S)-2-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)프로판-1-온 트리플루오로아세테이트 (중간체 99)로부터 2 단계에 걸쳐 중간체 7의 합성과 유사하게 제조했다.
Yield 2 단계에 걸쳐: 62 mg (67%, 이론적)
HPLC (방법 6): Rt = 1.65 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.7 분; MS (ESIpos): m/z = 443 (M+H)+.
중간체 192
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00861
1015 mg (1.59 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 50 ml의 DMF에서 취하고, 654 mg (2.39 mmol)의 2-브로모-1-에틸피리디늄 테트라플루오로보레이트 (BEP) 및 2.8 ml의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합하고, 실온에서 10분 동안 교반했다. 그 다음 1083 mg (1.75 mmol)의 (2R,3R)-N-[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 191)을 부가하고 그 다음 혼합물을 초음파 배쓰에서 실온에서 30분 동안 처리했다. 그 다음 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 300 ml의 에틸 아세테이트에서 처리했다. 유기 상을 연속적으로 5% 수성 시트르산 용액 및 5% 수성 나트륨 수소카보네이트 용액으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 이렇게 수득한 조 생성물 (1684 mg)을, 추가 정제없이, 20 ml의 아세토니트릴에서 취하고, 2 ml의 피페리딘을 부가하고 그 다음 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반했다. 그 다음 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 디에틸 에테르와 혼합했다. 용매를 다시 증바로 농축하고 잔여물을 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다 (용출물: 15:1:0.1 → 15:2:0.2 디클로로메탄/메탄올/17% 암모니아수 용액). 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔여물을 아세토니트릴/물로부터 동결건조시켰다. 따라서, 895 mg (67%, 2 단계로)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.84 분; MS (ESIpos): m/z = 840 (M+H)+.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 10.8 (d, 1H), 8.3 및 8.05 (2d, 1H), 8.0 (d, 1H), 7.5 (m, 1H), 7.3 (m, 1H), 7.15 및 7.08 (2s, 1H) 7.05-6.9 (m, 2H), 5.12 및 4.95 (2m, 1H), 4.65 (m, 1H), 4.55 (m, 1H), 4.1-3.8 (m, 4H), 3.75 (d, 1H), 3.23, 3.18, 3.17, 3.12, 2.95 및 2.88 (6s, 9H), 3.1-3.0 및 2.85 (2m, 2H), 2.65 (d, 1H), 2.4-2.2 (m, 3H), 2.15 (m, 3H), 1.95 (br. m, 2H), 1.85-0.8 (br. m, 11H), 1.08 및 1.04 (2d, 3H), 0.9-0.75 (m, 15H), 0.75-0.65 (dd, 3H) [H2O 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 193
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
50 mg (0.052 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 192) 및 204 μl의 4-옥소부탄산의 15% 수용액을 2 ml의 메탄올에서 조합시키고 23.4 mg (0.252 mmol)의 보란-피리딘 복합물 및 6 μl의 아세트산과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 후, 38 mg (78%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.7 분; MS (ESIpos): m/z = 926 (M+H)+.
중간체 194
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00863
이 화합물을 10 mg (11 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 4.4 mg (35%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.90 분; MS (ESIpos): m/z = 1133 (M+H)+.
중간체 195
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00864
이 화합물을 9 mg (0.010 mmol)의 중간체 170로부터 진행하여 중간체 166과 유사하게 제조했다.
수율: 1.1 mg (10%, 이론적)
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.99 분; MS (ESIpos): m/z = 994 (M+H)+.
중간체 196
(2S)-2-아미노-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-3-페닐프로판-1-온 트리플루오로아세테이트
Figure pct00865
41 mg (0.37 mmol)의 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 N-(tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라니네이트를 10 ml의 DMF에서 취하고 149 mg (0.41 mmol)의 2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔 (개시 화합물 6) 및 72 μl (0.41 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 5% 수성 시트르산 용액 그 다음 5% 수성 나트륨 수소카보네이트 용액과 함께 흔들어서 추출하고. 유기 상을 농축하고 잔여물을 용출물로서 10:1 톨루엔/에탄올을 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 69 mg (47%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체 tert-부틸 (2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일 카바메이트를 부분입체이성질체 혼합물로서 따라서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.1 분; MS (ESIpos): m/z = 359 (M+H)+.
64 mg (0.18 mmol)의 이러한 중간체를 10 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 1 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고 물/디옥산로부터 잔류 잔여물을 동결건조했다. 이런 식으로, 66 mg (quant.)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.45 분;
LC-MS (방법 3): Rt = 1.12 분; MS (ESIpos): m/z = 259 (M+H)+.
중간체 197
(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00866
먼저, (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (개시 화합물 1)을 에틸 아세테이트에서 취해고 5% 수성 칼륨 수소설페이트 용액과 함께 추출성 흔들기로 83 mg (0.18 mmol)의 그의 디사이클로헥실아민 염으로부터 방출했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 10 ml의 DMF에서 취하고 연속적으로 66 mg (0.18 mmol)의 (2S)-2-아미노-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-3-페닐프로판-1-온 트리플루오로아세테이트 (중간체 196), 101 mg (0.266 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 93 μl (0.53 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 52 mg (56%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체 tert-부틸 (2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-카복실레이트를 얻었다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.13 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.13 분; MS (ESIpos): m/z = 528 (M+H)+.
52 mg (0.1 mmol)의 이러한 중간체를 10 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 1 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 20 분 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고 잔여 잔류물을 20 ml의 디에틸 에테르와 함께 교반했다. 10분 후, 혼합물을 여과하고, 필터 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이런 식으로, 39 mg (72%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.62 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.68 분; MS (ESIpos): m/z = 428 (M+H)+.
중간체 198
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00867
44.5 mg (0.071 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 10 ml의 DMF에서 취하고 연속적으로 38.6 mg (0.071 mmol)의 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 197), 32.5 mg (0.086 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 41 μl (0.235 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취했다. 유기 상을 연속적으로 5% 수성 시트르산 용액 및 5% 수성 나트륨 수소카보네이트 용액과 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 이로써 73 mg (98%, 이론적)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.78 분;
LC-MS (방법 3): Rt = 2.96 분; MS (ESIpos): m/z = 1047 (M+H)+.
73 mg (0.071 mmol)의 이러한 중간체를 5 ml의 DMF에서 용해시켰다. 0.5 ml의 피페리딘이 부가된 후, 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 디에틸 에테르로 반복적으로 소화시켰다. 디에틸 에테르가 데칸트된 후, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다 (용출물: 아세토니트릴 / 0.1% aq. TFA). 16 mg (26%, 이론적)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.94 분;
LC-MS (방법 3): Rt = 1.71 분; MS (ESIpos): m/z = 825 (M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.9-8.6 (m, 3H), 8.4, 8.3, 8.1 및 8.0 (4d, 1H), 7.3-7.1 (m, 5H), 6.7-6.5 (m, 2H), 5.2-4.8 (m, 3H), 4.75-4.55 (m, 3H), 4.05-3.95 (m, 1H), 3.7-3.4 (m, 4H), 3.22, 3.17, 3.15, 3.05, 3.02 및 2.95 (6s, 9H), 3.0 및 2.7 (2 br. m, 2H), 2.46 (m, 3H), 2.4-1.2 (br. m, 13H), 1.1-0.85 (m, 18H), 0.75 (m, 3H) [H2O 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 199
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
표제 화합물을 23 mg (24 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 198)로부터 진행하여 중간체 193 및 194와 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 2.1 분; MS (ESIpos): m/z = 1118 (M+H)+.
중간체 200
N-[2-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)에틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00869
제조는 중간체 174 및 175과 유사하게, 중간체 172에 의한 중간체 192의 환원 알킬화로 개시하여 영향을 받고, 말레이마이드가 차후에 탈보호 및 형성된다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1025 (M+H)+.
중간체 201
N-{6-[(브로모아세틸)아미노]헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00870
22 mg (0.023 mmol)의 N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 101)을 9.5 ml의 THF에서 용해시키고 0 ℃에서 4.2 μl의 트리에틸아민과 혼합했다. THF 중 브로모아세틸 클로라이드의 용액을 적가하고 반응 혼합물을 0 ℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 6.9 mg (26%, 이론적)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 1059 및 1061 (M+H)+.
중간체 202
N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로폭시}에톡시)에톡시]에틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00871
제조는 먼저 중간체 168과 유사하게, 중간체 167에 의한 중간체 192의 환원 알킬화 및 N-(2-{2-[2-(2-카복시에톡시)에톡시]에톡시}에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 벤질 에스테르의 차후의 수소첨가분해 절단로 개시하여 영향을 받았다.
13 mg (10 μmol)의 이러한 중간체를 5 ml의 DMF에서 용해시키고 2.1 mg (20 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온, 6.5 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 7.1 mg (0.02 mmol)의 HATU와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조한 후, 9.2 mg (62%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 2.1 분; MS (ESIpos): m/z = 1141 (M+H)+.
중간체 203
tert-부틸 6-히드라지노-6-옥소헥실 카바메이트
Figure pct00872
이 화합물을, 표준 펩타이드 화학 방법으로, EDCI 및 HOBT의 존재에서 6-[(tert-부톡시카보닐)아미노]헥산산과 벤질 하이드라진카복실레이트와의 커플링으로, 및 벤질옥시카보닐 보호 그룹의 차후의 수소첨가분해 절단으로 제조했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.59 분; MS (ESIpos): m/z = 246 (M+H)+.
중간체 204
N-{4-[2-(6-아미노헥사노일)히드라지노]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00873
146 mg (50 μmol)의 (N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 5 ml의 DMF에서 용해시키고 그 다음 30.6 mg (80 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 19 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 22.4 mg (60 μmol)의 tert-부틸 6-히드라지노-6-옥소헥실 카바메이트와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5 시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 고진공 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 43 mg (68%, 이론적)의 보호된 중간체를 수득하고, 그 다음 이것을 10 ml의 디클로로메탄에서 취하고 1 ml의 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 디클로로메탄과 함께 교반하고, 용매를 감압 하에서 다시 제거했다. 따라서, 45 mg (이론의 68%, 2 단계에 걸쳐)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.66 분; MS (ESIpos): m/z = 983 (M+H)+.
중간체 205
N-(4-{2-[6-({[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸]카바모일}아미노)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00874
이 화합물을 중간체 50 및 204로부터 진행하여 중간체 114와 유사하게 제조했다.
수율: 4 mg (78%, 이론적)
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.73 분; MS (ESIpos): m/z = 1149 (M+H)+.
중간체 206
N-(6-{[3-({3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로필}디설파닐)프로파노일]아미노}헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00875
8 mg (10 μmol)의 중간체 101을 2 ml의 DMF에서 용해시키고 8.6 mg (20 μmol)의 1,1'-{디설판디일비스[(1-옥소프로판-3,1-디일)옥시]}디피롤리딘-2,5-디온 및 3.7 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고 그 다음 용매를 감압 하에서 증발 제거하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 7.2 mg (68%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 615 [½(M+2H+]
중간체 207
(1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실산 트리플루오로아세테이트
Figure pct00876
표제 화합물을, 탈보호된 210 mg (0.76 mmol)의 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 트리플루오로아세트산으로 탈보호하여 정량적 수율로 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.23 분; MS (ESIpos): m/z = 178 (M+H)+.
중간체 208
9H-플루오렌-9-일메틸 6-옥소헥실 카바메이트
Figure pct00877
표제 화합물을, 표준 조건 하에서, 황 트리옥사이드-피리딘 복합물에 의한 산화로 1 g (2.95 mmol)의 상업적으로 이용가능한 9H-플루오렌-9-일메틸 6-하이드록시헥실 카바메이트로부터 제조했다. 840 mg (85%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.1 분; MS (ESIpos): m/z = 338 (M+H)+.
중간체 209
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-카복시-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00878
먼저, 중간체 75에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실산 트리플루오로아세테이트 (중간체 207)의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-카복시-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다.
그 다음 10 ml의 메탄올 중 22 mg (0.026 mmol)의 이 화합물에 17 mg (0.05 mmol)의 9H-플루오렌-9-일메틸 6-옥소헥실 카바메이트 (중간체 208) 및 2.3 mg의 아세트산, 및 또한 11.4 mg (0.12 mmol)의 보란-피리딘 복합물을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 동일한 양의 보란-피리딘 복합물 및 아세트산, 및 또한 8 mg의 플루오렌-9-일메틸 6-옥소헥실 카바메이트를 다시 한번 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 24 시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 후, 생성물을 다음 단계에서 즉각적으로 사용했다.
33 mg의 더욱 오염된 중간체를 5 ml의 DMF에서 취하고, 1 ml의 피페리딘을 부가했다. 실온에서 15 분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축하고 수득한 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 11 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 55%)의 아미노카복실산 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.7 분; MS (ESIpos): m/z = 843 (M+H)+.
6 mg (7.12 μmol)의 이러한 중간체를 1 ml의 디옥산에서 취하고 그 다음 6.6 mg (42.7 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트 및 5 μl의 포화된 수성 나트륨 수소카보네이트 용액과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 또 하나의 3 부분의 각각의 50 μl의 포화된 수성 나트륨 수소카보네이트 용액을 부가하고 반응 혼합물을 추가 30 분 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 트리플루오로아세트산으로 pH 2로 산성화하고 차후에 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조한 후, 4 mg (60%, 이론적)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.88 분; MS (ESIpos): m/z = 923 (M+H)+.
중간체 210
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00879
먼저, 6-옥소헥산산을 문헌 방법으로 제조했다 (J. Org. Chem. 58, 1993, 2196-2200).
80 mg (0.08 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 192) 및 65.4 mg (0.5 mmol)의 6-옥소헥산산을 9 ml의 메탄올에서 조합시키고 10 μl의 아세트산 및 37.4 mg (0.4 mmol)의 보란-피리딘 복합물과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 1:1 아세토니트릴/물에서 취하고 트리플루오로아세트산으로 pH 2로 조정했다. 반응 혼합물을 다시 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 후, 70 mg (86%, 이론적)의 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 955 (M+H)+.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 특징적인 신호): δ = 12.0 (br. M, 1H), 10.8 (s, 1H), 9.4 (m, 1H), 8.9 및 8.8 (2d, 1H), 8.3 및 8.02 (2d, 1H), 7.5 (m, 1H), 7.3 (m, 1H), 7.15 및 7.1 (2s, 1H) 7.05-6.9 (m, 2H), 5.12 및 4.95 (2m, 1H), 4.7-4.5 (m, 2H), 4.1-3.8 (m, 4H), 3.75 (d, 1H), 3.25, 3.2, 3.18, 3.13, 2.98 및 2.88 (6s, 9H), 2.8 (m, 3H), 1.08 및 1.04 (2d, 3H), 0.95-0.8 (m, 15H), 0.8-0.65 (dd, 3H).
22 mg (23 μmol)의 이러한 중간체를 1.8 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 13.2 mg (70 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 26.5 mg (230 μmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 0.28 mg (2 μmol)의 디메틸아미노피리딘과 혼합하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조한 후, 21.3 mg (88%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 1052 (M+H)+.
중간체 211
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00880
15 mg (20 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 15)을 중간체 210과 유사하게6-옥소헥산산으로 환원적으로 알킬화했다.
수율: 9.2 mg (61%, 이론적)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 929 (M+H)+.
9 mg (10 μmol)의 이러한 중간체를 3 ml의 DMF에서 용해시키고 5.6 mg (48 μmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온, 5 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 5.5 mg (0.015 mmol)의 HATU과 혼합하고, 반응 혼합물을 초음파 배쓰에서 6시간 동안 처리했다. 이 과정에서, 5.5 mg의 HATU를 매 시간 부가했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 아세토니트릴/물에서 취하고 트리플루오로아세트산으로 pH 2로 조정했다. 감압 하에서 다시 농축한 후, 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조한 후, 5.8 mg (57%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.95 분; MS (ESIpos): m/z = 1027 (M+H)+.
중간체 212
N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로폭시}에톡시)에톡시]에틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00881
제조는 먼저 중간체 168과 유사하게, 중간체 167에 의한 중간체 15의 환원 알킬화 및 N-(2-{2-[2-(2-카복시에톡시)에톡시]에톡시}에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 벤질 에스테르의 차후의 수소첨가분해 절단으로 개시하여 영향을 받았다.
8.4 mg (8 μmol)의 이러한 중간체를 3 ml의 DMF에서 용해시키고 9.5 mg (80 μmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온, 10 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 9.4 mg (25 μmol)의 HATU와 혼합하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 아세토니트릴/물에서 취하고 트리플루오로아세트산으로 pH 2로 조정했다. 감압 하에서 다시 농축한 후, 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조한 후, 4 mg (32%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.96 분; MS (ESIpos): m/z = 1117 (M+H)+.
중간체 213
N-{6-[(트랜스-4-{[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]카보닐}사이클로헥실)아미노]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00882
이 화합물을 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드로부터 진행하여 중간체 104와 유사하게 제조했고, 그것의 합성은 중간체 210 하에서 기재되었다. 9.3 mg의 표제 화합물 (3 단계에 걸처 이론의 37%)을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 1177 (M+H)+.
중간체 214
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00883
이 화합물을, 중간체 92의 활성 에스테르로의 전환으로 중간체 210과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.82 분; MS (ESIpos): m/z = 901 (M+H)+.
중간체 215
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00884
먼저, 중간체 40을, 중간체 183과 유사하게, 보란-피리딘 복합물과 함께 사용하여 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 제조했다. 이 화합물로부터, 중간체 210과 유사하게, 그 다음 활성 에스테르를 얻었다. 34 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 36%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 930 (M+H)+.
중간체 216
N-(4-{[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]카보닐}벤질)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00885
먼저, 중간체 183의 제조와 유사하게, 중간체 192를 4-포르밀벤조산와 보란-피리딘 복합물과 함께 반응시켜 N-(4-카복시벤질)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다. 그 다음 이 화합물을 중간체 210과 유사하게 사용하여, 11 mg (68%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.13 분; MS (ESIpos): m/z = 1072 (M+H)+.
중간체 217
N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00886
53 mg (84 μmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4) 및 45 mg (84 μmol)의 벤질 N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트 (중간체 12)을 2 ml의 DMF에서 취하고, 19 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민, 14 mg (92 μmol)의 HOBt 및 17.6 mg (92 μmol)의 EDC를 부가하고 그 다음 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 59 mg (68%, 이론적)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.55 분; m/z = 1044 (M+H)+.
57 mg (0.055 mmol)의 이러한 중간체를 5 ml의 DMF 중 1.2 ml의 피페리딘으로 처리하여 Fmoc 보호 그룹을 분리했다. 농축 및 분취 HPLC에 의한 정제 후, 39 mg (76%, 이론적)의 유리 아민 중간체 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; m/z = 822 (M+H)+.
60 mg (0.06 mmol)의 이러한 중간체를, 중간체 210과 유사하게, 보란-피리딘 복합물의 존재에서6-옥소헥산산과 반응시켰다. 45 mg (75%, 이론적)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 9936 (M+H)+.
중간체 218
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00887
이 화합물을 42 mg (0.05 mmol)의 중간체 217의 활성 에스테르로의 전환으로 제조했다.
수율: 26 mg (54%)
HPLC (방법 5): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; MS (ESIpos): m/z = 1034 (M+H)+.
중간체 219
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00888
중간체 218로부터 20 mg (0.02 mol)의 화합물을 2.4 ml의 메탄올에서 취하고 5% 활성탄 상 팔라듐 상에서 표준 수소 압력 하에서 실온에서 30분 동안 수소부가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 1:1 아세토니트릴/물로부터 동결건조했다. 이로써 14 mg (92%, 이론적)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 944 (M+H)+.
중간체 220
N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00889
10 ml의 디클로로메탄 중 0.5 g (1.01 mmol)의 중간체 1을 1 ml의 트리플루오로아세트산와 혼합했다. 초음파 배쓰에서 30 분 동안 처리한 후, 혼합물을 농축하고 먼저 DCM 및 그 다음 디에틸 에테르로 재증류하고, 고진공 하에서 건조했다. 오일성 잔여물을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
500 mg의 이러한 중간체를 20 ml의 DMF에서 용해시키고 466 mg (3.8 mmol)의 중간체 191, 382 mg (1.01 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 440 μl (2.5 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 잔여물을 디클로로메탄에서 취하고 먼저 5% 수성 시트르산 용액으로 2회 및 그 다음 포화된 수성 나트륨 수소카보네이트 용액으과 함께 흔들어서 추출했다. 유기 상을 농축하고 잔여물을 용출물로서 95:5 디클로로메탄/메탄올을 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 562 mg (두 단계 모두에 걸쳐 이론의 65%)의 Z-보호된 중간체를 수득했다.
562 mg (0.57 mmol)의 이러한 중간체를 50 ml의 메탄올에서 취하고 155 mg의 10% 활성탄 상 팔라듐으로 표준 수소 압력 하에서 실온에서 20 분 동안 수소부가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 증발 제거하고 잔여물을 디옥산으로 동결건조했다. 이로써 361 mg (87%, 이론적)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.75 및 1.86 분를 갖는 이중피크;
LC-MS (방법 1): 동일한 질량과 함께 실온에서 이중 피크 = 0.84 분 및 0.91 분; MS (ESIpos): m/z = 944 (M+H)+.
중간체 221
N-{(2S)-2-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-3-페닐프로필}-N-메틸-L-발린
Figure pct00890
100 mg (0.76 mmol)의 상업적으로 이용가능한 N-메틸-L-발린 및 285 mg (1.14 mmol)의 상업적으로 이용가능한 tert-부틸 (2S)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일 카바메이트를 22 ml의 메탄올에서 조합하고 340 mg (3.66 mmol)의 보란-피리딘 복합물 및 70 μl의 아세트산과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 용출물로서 디클로로메탄/메탄올/17% 암모니아수 용액을 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 및 1:1 디옥산/물로부터 동결건조 후, 259 mg (93%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.76 분; MS (ESIpos): m/z = 365 (M+H)+.
중간체 222
N-[(2S)-2-아미노-3-페닐프로필]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00891
40 mg (0.11 mmol)의 N-{(2S)-2-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-3-페닐프로필}-N-메틸-L-발린 (중간체 221)을 5 ml의 DMF에서 용해시키고 80 mg (0.11 mmol)의 N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 220), 50 mg (0.13 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 57 μl (2.5 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 먼저 5% 수성 시트르산 용액 및 그 다음 물로 세정했다. 유기 상을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 60 mg (50%, 이론적)의 보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.17 분; MS (ESIpos): m/z = 1073 (M+H)+.
60 mg (0.05 mmol)의 이러한 중간체를 10 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 2 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1.5 시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔여물을 디옥산/물으로부터 동결건조했다. 이런 식으로, 25 mg (42%, 이론적)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.95 분; MS (ESIpos): m/z = 974 (M+H)+.
중간체 223
N-[(2S)-2-({[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸]카바모일}아미노)-3-페닐프로필]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00892
제조는 5 mg (4.6 μmol)의 중간체로부터 진행하여 중간체 134와 유사하게 영향을 받아 222. 3.4 mg (65%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.99 분; MS (ESIpos): m/z = 1140 (M+H)+.
중간체 224
N-[(2S)-2-({[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸]카바모일}아미노)프로필]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00893
제조는 중간체 223의 합성과 유사하게 영향을 받았다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 1064 (M+H)+.
중간체 225
N-(2-아미노에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00894
100 mg (0.76 mmol)의 상업적으로 이용가능한 N-메틸-L-발린 및 182 mg (1.14 mmol)의 상업적으로 이용가능한 tert-부틸 2-옥소에틸 카바메이트를 20 ml의 메탄올에서 조합하고 340 mg (3.66 mmol)의 보란-피리딘 복합물 및 65 μl의 아세트산과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 용출물로서 디클로로메탄/메탄올/17% 암모니아수 용액 (15/4/0.5)를 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 및 1:1 디옥산/물로부터 동결건조 후, 39% 순도 (35%, 이론적)로 190 mg의 중간체를 수득했고, 이것을 추가 정제없이 전환했다.
50 mg (0.07 mmol)의 이러한 중간체를 10 ml의 DMF에서 용해시키고 52 mg (0.07 mmol)의 N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 220), 32 mg (0.09 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 37 μl (0.2 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 농축했다. 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 먼저 5% 수성 시트르산 용액 및 그 다음 물과 함께 흔들어서 추출했다. 유기 상을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 53 mg (76%, 이론적)의 보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.02 분; MS (ESIpos): m/z = 984 (M+H)+.
53 mg (0.05 mmol)의 이러한 중간체를 10 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 2 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔여물을 디옥산/물으로부터 동결건조했다. 이런 식으로, 21 mg (40%, 이론적)의 표제 화합물을 65% 순도로 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 884 (M+H)+.
중간체 226
N-[2-({[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸]카바모일}아미노)에틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00895
제조는 중간체 134의 합성과 유사하게 중간체 225로부터 진행하여 영향을 받았다. 11.6 mg (59%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.90 분; MS (ESIpos): m/z = 1050 (M+H)+.
중간체 227
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00896
이 화합물을 활성 에스테르로 전환하여 중간체 218과 유사하게 제조했다.
수율: 18 mg (51%, 이론적)
HPLC (방법 5): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.98 분; MS (ESIpos): m/z = 1073 (M+H)+.
중간체 228
(2R,3S)-3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부탄-2-일(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-7,10-디이소프로필-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오에이트
Figure pct00897
표제 화합물을, 커플링 중간체 154의 합성에서 수득한 Boc-보호된 중간체를 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 커플링하여 제조했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 1308 (M+H)+.
중간체 229
(2R,3S)-3-아세트아미도-4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부탄-2-일 (3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-7,10-디이소프로필-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오에이트
Figure pct00898
표제 화합물을, 0.4 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재에서 1 ml의 DMF 중 2.3 μl의 아세트산 무수물에 의해 아세틸화로7.5 mg (2.5 μmol)의 중간체 154로부터 제조했다.
수율: 1.4 mg (40%, 이론적)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1250 (M+H)+.
중간체 230
(2R,3S)-3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부탄-2-일 (3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-7,10-디이소프로필-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오에이트
Figure pct00899
이 화합물을 중간체 193으로부터 진행하여 중간체 228와 유사하게 제조했다. 16 mg (3 단계에 걸쳐 이론의 30%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.02 분; MS (ESIpos): m/z = 1335 (M+H)+.
중간체 231
(2R,3S)-3-아세트아미도-4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부탄-2-일 (3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-7,10-디이소프로필-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오에이트
Figure pct00900
이 화합물을, 먼저 트리플루오로아세트산에 의한 탈보호 및 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재에서 DMF 중 아세트산 무수물에 의한 차후의 아세틸화로8 mg (6 μmol)의 중간체 230로부터 제조했다. 2 mg (이론의 37%, 2 단계에 걸쳐)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.88 분; MS (ESIpos): m/z = 1277 (M+H)+.
중간체 232
벤질 N-[(4-니트로페녹시)카보닐]-베타-알라니네이트
Figure pct00901
200 mg (0.57 mmol)의 상업적으로 이용가능한 4-메틸벤젠설폰산-벤질 베타-알라니네이트 및 229 mg (1.14 mmol)의 4-니트로페닐 클로로카보네이트를 15 ml의 테트라하이드로푸란에서 취하고 그 다음 반응 혼합물을 30분 동안 가열 환류했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 및 고진공 하에서 잔여물의 건조 후, 86 mg (44%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.07 분; MS (ESIpos): m/z = 345 (M+H)+.
중간체 233
N-{2-[({3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로필}카바모일)아미노]에틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00902
13 mg (10 μmol)의 중간체 225 및 6.7 mg (20 μmol)의 중간체 232을 3 ml의 DMF에서 용해시키고 그 다음 7 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 및 고진공 하에서 잔여물의 건조 후, 5.4 mg (38%, 이론적)의 보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0. 6in; MS (ESIpos): m/z = 1089 (M+H)+.
5.4 mg (5 μmol)의 이러한 중간체를 5 ml의 메탄올에서 용해시키고, 2 mg의 10% 활성탄 상 팔라듐의 부가 후, 표준 수소 압력 하에서 실온에서 20 분 동안 수소부가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 5 mg (quant.)의 산 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.84 분; MS (ESIpos): m/z = 999 (M+H)+.
5 mg (10 μmol)의 이러한 중간체를 1 ml의 DMF에서 용해시키고 5.8 mg (50 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 그 다음 2.6 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 3.8 mg (10 μmol)의 HATU와 혼합했다. 실온에서 20 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 1:1 디옥산/물로부터 동결건조 후, 1.1 mg (20%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 1096 (M+H)+.
중간체 234
N-(6-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00903
25 mg (30 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 55) 및 45 mg (180 μmol)의 벤질 6-옥소헥실 카바메이트를 3 ml의 메탄올에서 취하고 아세트산으로 산성화했다. 실온에서, 15 μl (144 μmol; 9.4M)의 보란-피리딘 복합물을 차후에 부가했다. 혼합물을 차후에 실온에서 24 시간 동안 교반하고, 아세트산 및 15 μl (144 μmol; 9.4M)의 보란-피리딘 복합물을 8 시간 후 다시 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 TFA로 pH 2로 조정하고 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축하고, 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이로써 15 mg (46%, 이론적)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.03 분; m/z = 1066 (M+H)+.
중간체 235
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00904
15 mg (14 μmol)의 N-(6-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 234)을 3 ml의 메탄올에서 취하고, 1.8 mg의 목탄상 팔라듐 (5%)을 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 표준 수소 압력 하에서 실온에서 2시간 동안 수소부가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 1:1 아세토니트릴/물로부터 동결건조했다. 11 mg (86%, 이론적)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.81 분; m/z = 932 (M+H)+.
중간체 236
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00905
11 mg (12 μmol)의 N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 235)을 500 μl의 1:1 디옥산/물에서 취하고 253 μl의 1M 수성 나트륨 수소카보네이트 용액 및 그 다음 2.8 mg (18 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 트리플루오로아세트산으로 산성화했다. 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 0.8 mg (7%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; m/z = 1012 (M+H)+.
중간체 237
N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00906
25 mg (30 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 55) 및 23 mg (180 μmol)의 6-옥소헥산산을 3 ml의 메탄올에서 취하고 아세트산으로 산성화했다. 실온에서, 15 μl (144 μmol; 9.4M)의 보란-피리딘 복합물을 차후에 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 실온에서 20 시간 동안 교반하고, 아세트산 및 15 μl (144 μmol; 9.4M)의 보란-피리딘 복합물을 8 시간 후 다시 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 트리플루오로아세트산으로 pH 2로 조정하고 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축하고, 잔여물을 동결건조시켰다. 21 mg (74%, 이론적)의 표제 화합물을 이렇게 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.91 분; m/z = 947 (M+H)+.
중간체 238
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00907
21 mg (22 μmol)의 중간체 237을 1 ml의 DMF에서 용해시키고 38 mg (333 μmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 그 다음 2.4 mg (10 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 19 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 22 mg (96%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.95 분; m/z = 1044 (M+H)+.
중간체 239
N-메틸-L-트레오닐-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00908
먼저, N-[(벤질옥시)카보닐]-N-메틸-L-트레오닌을, 에틸 아세테이트에서 취해서 5% 수성 황산으로 추출성 흔들기를 하여237 mg (0.887 mmol)의 그의 디사이클로헥실아민 염으로부터. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 14.7 mg (0.055 mmol)의 N-[(벤질옥시)카보닐]-N-메틸-L-트레오닌을 3 ml의 DMF에서 취하고 연속적으로 40 mg (0.055 mmol)의 중간체 220, 12.7 mg (0.066 mmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 10 mg (0.066 mmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트와 혼합했다. 혼합물을 차후에 실온에서 2시간 동안 교반했다. 용매를 그 다음 감압 하에서 제거하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 29 mg (54%, 이론적)의 Z-보호된 중간체를 이렇게 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.15 분; MS (ESIpos): m/z = 976 (M+H)+.
29 mg (0.003 mmol)의 이러한 중간체를 5 ml의 메탄올에서 용해시키고 5 mg의 5% 팔라듐/목탄 상에서 실온에서 및 표준 압력 1시간 동안 수소부가했다. 촉매를 차후에 여과 제거하고 용매를 증발 제거했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 17 mg (54%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.77 분; MS (ESIpos): m/z = 842 (M+H)+.
중간체 240
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-트레오닐-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00909
이 화합물을 15.6 mg (0.016 mmol)의 중간체 239로부터 중간체 210과 유사하게 제조했다. 10.8 mg (이론의 67%, 2 단계에 걸쳐)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 1053 (M+H)+.
중간체 241
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00910
먼저, 중간체 5와 유사하게, 트리플루오로아세트산-(2S)-2-아미노-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)프로판-1-온 (1:1)을 제조했다. 그 다음 이 시약을, 중간체 75에서 기재된 합성과 유사하게 사용하고, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N -(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26)에 의한 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 표제 화합물을 제조했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 817 (M+H)+.
중간체 242
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00911
50 mg (0.05 mmol)의 중간체 241을, 중간체 210과 유사하게, 보란-피리딘 복합물의 존재에서 6-옥소헥산산과 반응시켰다. 차후에, 22.5 mg (0.02 mmol)의 수득한 산을 활성화된 에스테르로 전환시켰다. 13.5 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 36%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1028 (M+H)+.
중간체 243
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00912
제조는 중간체 241 벤질 6-옥소헥실 카바메이트와 함께 및 보란-피리딘 복합물의 환원 알킬화 및 용매로서 메탄올에서 차후의 수소화에 의해 중간체 78과 유사하게 영향을 받았다.
수율: 17.5 mg (이론의 34%, 2 단계에 걸쳐)
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.63 분; MS (ESIpos): m/z = 916 (M+H)+.
중간체 244
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00913
제조는 중간체 243으로부터 진행하여 중간체 166과 유사하게 영향을 받았다.
수율: 1.3 mg (12%, 이론적)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.89 분; MS (ESIpos): m/z = 996 (M+H)+.
중간체 245
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 O-[(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-7,10-디이소프로필-5,11-디메틸-6,9,15-트리옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-일]-N-(tert-부톡시카보닐)-L-트레오닐-베타-알라니네이트
Figure pct00914
먼저, 중간체 193을, 중간체 154에 대해 기재된 바와 같이, 벤질 N-(tert-부톡시카보닐)-L-트레오니네이트와 반응시키고 그 다음 벤질 에스테르를 수소첨가분해로 제거했다. 그 다음 이렇게 수득한 30 mg (0.027 mmol)의 N-[4-({(1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-1-카복시프로판-2-일}옥시)-4-옥소부틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 HATU의 존재에서 4-메틸벤젠설폰산-벤질 베타-알라니네이트과 커플링하고 벤질 에스테르를 수소첨가분해로 다시 제거했다 (수율: 24 mg (이론의 71%, 2 단계에 걸쳐)). 마지막으로, 10 mg (0.008 mmol)의 수득한 산을 활성화된 에스테르로 전환시켰다. HPLC 정제 후, 2.7 mg (23%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; MS (ESIpos): m/z = 1295 (M+H)+
중간체 246a
(2S)-2-아미노-1-(4-하이드록시-1,2-옥사졸리딘-2-일)-3-(1H-인돌-3-일)프로판-1-온 트리플루오로아세테이트 (부분입체이성질체 1)
Figure pct00915
1.6 g (3.982 mmol)의 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 N-(tert-부톡시카보닐)-L-트립토파네이트를 15 ml의 DMF에서 용해시키고 500 mg (3.982 mmol)의 1,2-옥사졸리딘-4-올 및 100 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 또 하나의 100 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가하고, 혼합물을 먼저 초음파 배쓰에서 5 시간 동안 처리하고, 그 다음 실온에서 밤새 교반하고, 차후에 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 먼저 5% 수성 시트르산 용액으로 2회, 그 다음 포화된 수성 나트륨 수소카보네이트 용액 및 마지막으로 물로 추출했다. 유기 상을 농축하고 잔여물을 용출물로서 95:5 디클로로메탄/메탄올을 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 부분입체이성질체로 분리했다. 둘 모두의 부분입체이성질체의 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 272 mg (18%, 이론적)의 부분입체이성질체 1 (Rf = 0.18 (95:5 디클로로메탄/메탄올) 및 236 mg (16%, 이론적)의 부분입체이성질체 2 (Rf = 0.13 (95:5 디클로로메탄/메탄올), 및 또한 333 mg (22%, 이론적)의 Boc-보호된 중간체의 혼합된 분획을 수득했다.
표준 조건 하에서, 20 ml의 디클로로메탄 중 5 ml의 트리플루오로아세트산을 사용하여 Boc 보호 그룹을 272 mg (725 μmol)의 이러한 중간체의 부분입체이성질체 1로부터 분리하고, 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 290 mg (quant)의 표제 화합물을 75% 순도로 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.1 분;
LC-MS (방법 13): Rt = 1.80 분; MS (ESIpos): m/z = 276 (M+H)+
중간체 246b
(2S)-2-아미노-1-(4-하이드록시-1,2-옥사졸리딘-2-일)-3-(1H-인돌-3-일)프로판-1-온 트리플루오로아세테이트 (부분입체이성질체 2)
Figure pct00916
표준 조건 하에서, 20 ml의 디클로로메탄 중 5 ml의 트리플루오로아세트산을 사용하여 Boc 보호 그룹을 236 mg (630 μmol)의 246a에서 기재된 중간체의 부분입체이성질체 2로부터 분리하고, 농축 후, 디에틸 에테르와 함께 교반하고 고진공 하에서 잔여물을 건조시키고, 214 mg (76%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 13): Rt = 1.84 분; MS (ESIpos): m/z = 276 (M+H)+
중간체 247a
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(4-하이드록시-1,2-옥사졸리딘-2-일)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (부분입체이성질체 1)
Figure pct00917
이 화합물을 합성하기 위해, 중간체 26 및 246a와 Boc 보호 그룹의 차후의 분리와의 커플링을 먼저 중간체 74에 기재된 바와 같이 수행했다. 차후에, 보란-피리딘 복합물의 존재에서 6-옥소헥산산에 의한 알킬화 및 산의 활성 에스테르로의 차후의 전환을 중간체 210에 대해 기재된 바와 같이 수행했다. 표제 화합물을 분취 HPLC로 정제했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1053 (M+H)+
중간체 247b
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(4-하이드록시-1,2-옥사졸리딘-2-일)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (부분입체이성질체 2)
Figure pct00918
이 화합물을 합성하기 위해, 중간체 26 및 246b와 Boc 보호 그룹의 차후의 분리와의 커플링을 먼저 중간체 74에 대해 기재된 바와 같이 수행했다. 차후에, 보란-피리딘 복합물의 존재에서 6-옥소헥산산에 의한 알킬화 및 산의 활성 에스테르로의 차후의 전환을 중간체 210에 대해 기재된 바와 같이 수행했다. 표제 화합물을 분취 HPLC로 정제했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1053 (M+H)+
중간체 248
N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-3-(4-하이드록시페닐)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00919
먼저, 중간체 86에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 tert-부틸 L-타이로시네이트의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리하여 tert-부틸 에스테르 (40 분 동안 디클로로메탄 중 트리플루오로아세트산과 함께 교반하면서)를 얻고, 아민 화합물 tert-부틸 N-[(2R,3R)-3-메톡시-3-{(2S)-1-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-(메틸{(2S)-3-메틸-2-[(N-메틸-L-발릴)아미노]부틸}아미노)헵타노일]피롤리딘-2-일}-2-메틸프로파노일]-L-타이로시네이트를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 38 mg (0.04 mmol)의 그 다음 이 화합물을 중간체 210의 제조와 유사하게 사용하고, 보란-피리딘 복합물의 존재에서 6-옥소헥산산과의 반응으로, 31 mg (99%, 이론적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.88 분; MS (ESIpos): m/z = 918 (M+H)+.
예시적인 구현예 :
사용된 항- EGFR1 항체
세툭시맙 ( INN 번호 7906)
부가 명칭: IMC-225, C225, EMR-62202, BMS-564717, Fab C225
세툭시맙 (약물 은행 승인 번호. DB00002)는 SP2/0 마우스 골수 세포에서 생산되고 ImClone 시스템 Inc./Merck KGaA/Bristol-Myers Squibb Co에 의해 분배된 키메라 항-EGFR1-항체이다.
세툭시맙은 야생형 K-Ras 유전자를 갖는 전이성 EGFR 발현 결직장 암종의 치료에 대해 표시된다. 10-10 M의 친화도를 갖는다.
서열:
경쇄 (카파):
Figure pct00920
중쇄:
Figure pct00921
파니투무맙 ( INN 번호 8499)
파니투무맙 (부가 명칭: ABX-EGF, E7.6.3) (약물 은행 승인 번호. DB01269)는 인간 EGF 수용체 1에 특이적으로 결합하고 Abgenix / Amgen에 의해 분배된 재조합 모노클로날 인간 IgG2 항체이다.
파니투무맙은 이식유전자 마우스 (XenoMouse)의 면역화로부터 유래한다. 이들 마우스 are capable of producing 인간 면역글로불린 (경쇄 및 중쇄). 특별한 B 세포 클론인 선택되었고, 그 클론은 EGFR에 대한 항체를 생산하고 CHO 세포 (차이니즈 햄스터 난소 세포)로 불멸화된다. 이들 세포는 100% 인간 항체의 생산에 이제 사용된다.
파니투무맙는 플루오로피리미딘, 옥살리플라틴 및 이리노테칸에 의한 화학치료적 처리에 대해 난치인 EGFR 발현 전이성 결직장 암종의 치료를 위해 표시된다. 10-11 M의 친화도를 갖는다.
서열:
경쇄 (카파):
Figure pct00922
중쇄:
Figure pct00923
니모투주맙 ( INN 번호 8545)
니모투주맙 (부가 명칭: TheraCIM-h-R3; h-R3; Theraloc; BioMAb; BIOMAb-EGFR; Vecthix; KI-0501) (특허 EP 00586002, EP 00712863)는 인간 EGF 수용체 1에 특이적으로 결합하고 YM BioSciences Inc. (Mississauga, Canada)에 의해 생산된 인간화 모노클로날 IgG1 항체이다. 비-분비 NSO 세포 (포유동물 계통)에서 생산된다.
니모투주맙은 두경부 종양, 크게 악성 별아교세포종 및 교모세포종 다중형태 (EU 및 US에서는 아님) 및 췌장암 (고아 약물, EMA)의 치료를 위해 승인되었다. 10-8 M의 친화도를 갖는다.
B. ADC 의 생산
상기에 기술된 중간체들은 항-EGF 수용체 항체 세툭시맙, 니모투주맙 또는 파니투무맙뿐만 아니라, 예를 들어, 하기 열거된 부가적인 항체에 연결될 수 있으며, 이러한 결합은 임의로 하기 기술된 방법에 따른 항체 단백질의 시스테인 또는 라이신 측쇄를 경유할 수 있다.
B-1.1 콘주게이션 전 EGFR 항체의 워크업
에르비툭스 상업적 제품(에르비툭스® 5 mg/mL 주입 용액 100 mL, PZN 0493540, N1, 500 mg, Merck), 벡티빅스(Vectibix) 상업적 제품(Vectibix® 주입 용액을 제조하기 위한 20 mg/mL 농축물, 구멍을 뚫을 수 있는 하나의 바이알(N1) 100 mg, 20 mL, PZN 6078606, Amgen) 또는 CIMAher 상업적 제품(CIMAher® 50 mg AMP 4 × 10 mL, 쿠바로부터 수입됨, YM BioSciences Inc. (Mississauga, Canada)을 약국으로부터 상업적으로 수득하였다.
제형 내에 함유된 폴리소르베이트 80을 제거하기 위해, 이를 단백질 A(MabSelectSure)에 결합시키고 15% 이소프로판올로 세척하였다. 산성 아세테이트 완충액으로 용출시킨 후에, 상기 혼합물을 D-PBS 상에서 겔 여과 후 재완충시키고, 얻어진 물질을 각 독성기에 결합시켰다.
B-1.2 포유동물 세포에서 항체를 발현시키기 위한 일반적인 절차
항체, 예를 들어, 항-PDL1 또는 다양한 표적에 대한 다른 항체들은 HEK293 6E 세포를 적합한 CMV 프로모터-기반의 발현 플라스미드로 일시적으로 형질감염시킴으로써 포유동물 세포 배양에서 생산된다. 항체의 경쇄 및 중쇄를 단일-벡터 시스템에 함께 또는 2-벡터 시스템에 별개로 클로닝하였다. 세포 배양 표준은 교반 플라스크에서 최대 1.5 L 또는 "웨이브 백(Wave Bag)"에서 10 L였다. 1% "FCS ultra-low IgG"(Invitrogen) 및 0.5 mM 발프로산을 갖는 트립톤 TN1(Organotechnie)으로 보충된 F17 배지(Invitrogen)에서 5-6일간 37℃에서 발현이 일어났다. 발현 수율은 7 내지 310 mg/L였다.
B-1.3 세포 상청액으로부터 항체를 정제하기 위한 일반적인 방법
항체, 예를 들어, PDL1 또는 다양한 표적에 대한 다른 항체들을 세포 배양 상청액으로부터 수득하였다. 세포를 원심분리하여 세포 배양 상청액을 청징하였다. 그리고 나서, 상청액을 MabSelectSure(GE Healthcare) 크로마토그래피 칼럼 상에서의 친화성 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 칼럼을 DPBS, pH 7.4(Sigma/Aldrich)에서 평형화시키고, 세포 상청액을 적용하고, 칼럼을 대략 10 칼럼 부피의 DPBS, pH 7.4 + 500 mM 염화나트륨으로 세척하였다. 50 mM 나트륨 아세테이트, pH 3.5 + 500 mM 염화나트륨으로 항체를 용출시킨 다음, DPBS, pH 7.4 중에서 수퍼덱스(Superdex) 200 칼럼(GE Healthcare) 상에서의 겔 여과 크로마토그래피에 의해 추가 정제하였다.
B-1.4 시스테인 측쇄에 결합하기 위한 일반적인 방법
하기 항체들을 결합 반응에 사용하였다:
항- EGFR1 항체들:
세툭시맙
니모투주맙
파니투무맙
다른 항체들:
항-PDL1
항-ICOSLG
항-FGFR3
헤르셉틴
항-TYRP1
항-글리피칸-3
1 mg/ml 내지 10 mg/ml의 농도 범위에서 PBS 완충액 중 상응하는 항체의 용액에 PBS 완충액 중 용액 중 3 당량의 트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드 (TCEP)을 부가했고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 차후에, 원하는 부하에 따라, 중간체 102, 103, 105-109, 111-114, 117-126, 128, 129, 132-146, 148-155, 157, 159-161, 166, 171, 175-177, 184, 189, 194-195,, 199-201, 205, 209, 223-224, 226, 228-231, 236 및 244을 커플링하기 위한 2 내지 12 당량의 말레이마이드 전구체 화합물 또는 할라이드 전구체 화합물을 DMSO 중 용액으로 부가했다.여기서 DMSO의 양은 전체 용적의 10%를 초과하지 않도록 했다. 배치를 실온에서 60-120 분 동안 교반했고 그 다음 PBS로 평형을 이룬 PD 10 칼럼 (Sephadex® G-25, GE Healthcare)에 적용하고, PBS 완충액으로 용출했다. 필요하면, 농도는 초원심분리로 부가적으로 증가되었다.
달리 지적되지 않으면, PBS 완충액 중 5 mg의 상응하는 항체를, 감소 및 차후의 커플링를 위해 사용했다. PD10 칼럼을 통한 정제 다음에, 이것으로, 각 경우에, 3.5 ml의 PBS 완충액 중 상응하는 ADC의 용액을 얻었다. 그 다음 표시된 특정한 단백질 농도를 이들 용액을 위해 측정했다. 더욱이, 항체의 부하 (약물/mAb 비)를 이하에서 기재된 방법에 따라 측정했다.
이 방법에 따라, 실시예 1-34, 36-37, 39-41, 43-44, 52-53, 55, 338-339, 341-344, 349, 351-352, 354, 356-358 및 374에서 합성된 면역콘주게이트를 제조하였다.
제시된 구조식에서, AK1A-AK1J는 하기 의미를 갖는다:
AK1A=세툭시맙(부분적으로 감소됨)-S§1
AK1B=니모투주맙(부분적으로 감소됨)-S§1
AK1C=파니투무맙(부분적으로 감소됨)-S§1
AK1D=항-PDL1(부분적으로 감소됨)- S§1
AK1E=항-ICOSLG (부분적으로 감소됨)- S§1
AK1F=항-FGFR3(부분적으로 감소됨)- S§1
AK1G=헤르셉틴(부분적으로 감소됨)- S§1
AK1H=항-TYRP1(부분적으로 감소됨)- S§1
AK1J=항-글리피칸-3(부분적으로 감소됨)- S§1
상기 식에서,
§1은 석신이미드기에 대한 결합을 가리키고,
S는 부분적으로 감소된 항체의 시스테인 라디칼의 황 원자를 나타낸다.
B-1.5 라이신 측쇄에 결합하기 위한 일반적인 방법
하기 항체들을 결합 반응에 사용하였다:
항- EGFR1 항체들:
세툭시맙
니모투주맙
파니투무맙
다른 항체들:
항-PDL1
항-ICOSLG
항-FGFR3
헤르셉틴
항-TYRP1 hIgG1-kapp
항-글리피칸-3
1 mg/ml 내지 10 mg/ml의 농도 범위로 PBS 완충액 중 상응하는 항체의 용액에, 원하는 부하에 따라, DMSO 중 용액으로서 중간체 104, 110, 115, 116, 127, 130, 131, 147, 156, 158, 162, 169, 178, 185, 190, 202, 206, 210-216, 218, 219, 227, 233, 238, 240, 242, 245, 247a 및 247b을 커플링하기 위한 2 내지 5 당량의 전구체 화합물을 부가했다. 실온에서 교반 30분 후, DMSO 중 동일한 양의 전구체 화합물을 다시 부가했다. DMSO의 양은 전체 용적의 10%를 초과하지 않도록했다. 교반 실온에서 추가 30 분 후, 배치를 PD 10 칼럼 (Sephadex® G-25)에 적용하고, PBS 완충액으로 용출했다. 임의로 농축 절차를 초원심분리로 부가적으로 수행했다. 필요하면, 저분자량 성분의 더 효과적인 제거를 위해, 한외여과에 의한 농축을 PBS 완충액으로 재희석한 후 반복했다.
달리 지적되지 않으면, PBS 완충액 중 5 mg의 상응하는 항체를 커플링을 위해 사용했다. PD10 칼럼를 통해 정제한 다음, 이것으로, 각 경우에, 3.5 ml의 PBS 완충액 중 상응하는 ADC의 용액을 얻었다. 그 다음 표시된 특정한 단백질 농도를 이들 용액을 위해 측정했다. 더욱이, 항체의 부하 (약물/mAb 비)를 이하에서 기재된 방법에 따라 측정했다.
이 방법에 따라, 실시예 35, 38, 42, 54, 337, 340, 345-348, 350, 353, 355, 359, 363, 375 및 376에서 기재된 면역콘주게이트를 제조했다.
여기에 나타낸 구조식에서, AK2A, AK2B, AK2C, AK2D, AK2E, AK2F, AK2G, AK2H 및 AK2J는 하기 의미를 갖는다:
AK2A=세툭시맙-NH§2
AK2B=니모투주맙-NH§2
AK2C=파니투무맙-NH§2
AK2D = 항-PDL1-NH§2
AK1E = 항-ICOSLG-NH§2
AK2F = 항-FGFR3-NH§2
AK2G = 헤르셉틴-NH§2
AK2H = 항-TYRP1-NH§2
AK2J = 항-글리피칸-3-NH§2
상기 식에서,
§2는 카보닐기에 대한 결합을 가리키고,
NH는 항체의 라이신 라디칼의 측쇄 아미노기를 나타낸다.
B-1.6a 시스테인 부가물을 제조하기 위한 일반적인 방법
상기 기술된 10 μmol의 말레이미드 전구체 화합물을 3 mL DMF에 넣고 2.1 mg(20 μmol) L-시스테인과 혼합하였다. 상기 배치(batch)를 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 진공농축하고, 다음으로 분취 HPLC에 의해 정제하였다.
여기에 나타낸 구조식에서, Cys는 하기 의미를 갖는다:
Figure pct00924
상기 식에서,
§3은 링커 독성기 단위에 대한 결합을 가리킨다.
B-1.6b 라이신 부가물을 제조하기 위한 일반적인 방법:
상기 기술된 10 μmol의 활성 에스테르 전구체 화합물을 5 mL DMF에 넣고 30 μmol N,N-디이소프로필에틸아민의 존재 하에 α-아미노-보호된 L-라이신과 혼합하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 진공농축하고, 다음으로 분취 HPLC에 의해 정제하였다. 그리고 나서, 공지된 방법에 의해 보호기를 제거하였다.
본 발명에 따른 콘주게이트의 추가 정제 및 특성규명
반응이 성공한 후, 일부 경우 반응 혼합물을, 예를 들어 초원심분리에 의해 농축한 다음, 예를 들어 탈염하고 세파덱스® G-25 칼럼을 이용한 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 예를 들어 포스페이트-완충 식염수 용액(PBS)을 이용하여 용출을 수행하였다. 그리고 나서, 상기 용액을 멸균 여과하고 냉동하였다. 대안적으로, 콘주게이트를 동결건조할 수 있다.
B-1.7 독성기 부하의 측정
PBS 완충액 중 실시예에서 기재된 콘주게이트의 수득한 용액의 독성기 부하는 하기와 같이 측정되었다:
라이신-연결된 ADC의 독성기 부하는 개별적인 콘주게이트 종의 분자량의 질량 분광분석 측정에 의해 측정되었다. 이 경우에, 우선, 항체 콘주게이트를 PNGaseF로 탈글리코실레이트화시키고, 샘플을 산성화하고, HPLC 분리 다음에, ESI-MicroTofQ (Bruker Daltonik)를 사용하여 질량 분광분석으로 분석했다. 모든 스펙트럼을 TIC (총 이온 크로마토그램)에서 신호를 통해 부가하고, 다양한 콘주게이트 종의 분자량을 MaxEnt Deconvolution을 기반으로 계산했다. 상이한 종의 신호 통합 다음에, DAR (약물/항체 비)을 계산했다.
단백질 확인에 대해, 분자량 결정 외에, 트립신 소화를 탈글리코실화 및/또는 변성 후에 수행하고, 이 소화는, 변성, 감소 및 유도체화 후에, 검출된 트립신분해 펩타이드를 기반으로 단백질의 동일성을 확인했다.
시스테인-연결된 콘주게이트의 독성기 부하를 감소된 및 변성된 ADC의 역상 크로마토그래피를 통해 측정했다. ADC 용액 (1 mg/mL, 50 μL)을 구아니디늄 하이드로클로라이드 (GuHCl) (28.6 mg) 및 DL-디티오트레이톨 (DTT) (500 mM, 3 μL)의 용액과 혼합했다. 혼합물을 55 ℃에서 1 시간 동안 인큐베이팅하고 HPLC로 분석했다.
HPLC 분석을 220 nm에서 검출과 함께 Agilent 1260 HPLC 시스템 상에서 수행했다. 사용된 칼럼은 하기인 Polymer Laboratories PLRP-S 폴리머 역상 칼럼 (카탈로그 번호 PL1912-3802) (2.1 × 150 mm, 8 μm 입자 크기, 1000 Å)였다: 유속 1 mL/분, 하기 구배: 0 분, 25% B; 3 분, 25 % B; 28 분, 50% B를 사용. 물 중 0.05% 트리플루오로아세트산 (TFA)로 이루어진 용출물 A, 아세토니트릴 중 0.05% 트리플루오로아세트산으로 이루어진 용출물 B.
검출된 피크를 비콘주게이트화 항체의 경쇄 (L0) 및 중쇄 (H0)과의 체류 시간 비교에 의해 할당했다. 콘주게이트화 샘플에서 독점적으로 검출된 피크를 독성기 (L1)를 갖는 경쇄로, 및 1, 2 및 3개의 독성기 (H1, H2, H3)를 갖는 중쇄로 할당했다.
항체의 평균 독성기 부하는, 모든 피크의 적분 결과의 합에 2를 곱하여 적분에 의해 측정된 피크 면적으로부너 계산되고, 독성기의 수에 의해 무게를 재고, 간단히 무게를 재면서 모든 피크의 총 적분 결과로 나눈다. 어떤 개별적인 경우에 독성기 부하가 어떤 피크의 공-용출로 인해 정확하게 측정될 수 없는 일이 일어날 수 있다.
B-1.8 ADC 의 항원 결합의 시험
성공적인 결합 이후 표적 분자에 결합하는 결합제의 능력을 시험하였다. 당해분야의 숙련가는 이를 수행하는 다양한 방법을 잘 알고 있으며, 예를 들어 ELISA 기술 또는 표면 플라즈몬 공명 분석(BIAcoreTM 측정)에 의해 콘주게이트의 친화도를 시험할 수 있다. 숙련가는 종래의 방법, 예를 들어, 항체 콘주게이트를 위한 단백질 분석을 이용하여 콘주게이트 농도를 측정할 수 있다(Doronina 등, Nature Biotechnol. 2003; 21:778-784 및 Polson 등, Blood 2007, 1102:616-623 참고).
B-2 항체-약물 콘주게이트(ADC)의 생산
예를 들어 하기 기술된 방법을 이용하여 항체 단백질의 시스테인 또는 라이신 측쇄를 통해 임의로 발생하는 결합을 이용하여, 상기 기술된 중간체를 항-메소텔린 항체 MF-Ta에 연결하였다. 항-메소텔린 항체 MF-Ta를 WO 2009/068204 A1에 기술된 바와 같은 방법에 의해 생산하였다. 항체 MF-Ta를 원핵 CHO 세포(안정한 세포주)에서 발현시키고, 단백질 A 및 겔 여과에 의해 정제한 다음, DPBS 완충액 중에서 콘주게이션시켰다.
B-2.1 일반적인 작업 절차 1(시스테인을 통한 결합):
1 mg/mL 내지 10 mg/mL 농도 범위의 PBS 완충액 중의 상응하는 항체의 용액에, PBS 완충액에 용해된 3 당량의 트리스-(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드(TCEP)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 다음으로, 원하는 부하에 따라, 결합될 2 내지 10 당량의 말레이미드 전구체 화합물 또는 할로겐화물 전구체 화합물(중간체 128, 129, 132-146, 148-155, 157, 159-161, 171, 175-177, 184, 189, 194-195, 199-201, 205, 209, 223-224, 226, 228-231, 236 및 244)을 DMSO 중의 용액으로서 첨가하였다. DMSO의 양은 총 부피의 10%를 넘지 않아야 한다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 60-120분간 교반한 다음, PD10 칼럼(세파덱스® G-25)에 적용하고 PBS 완충액으로 용출시켰다. 그리고 나서, 상기 용액을 한외여과에 의해 임의로 농축시켰다. 저-분자 성분을 더 잘 분리하기 위해, PBS 완충액으로 다시 희석한 후, 필요한 경우 한외여과에 의한 농축을 반복하였다.
달리 표시하지 않는 한, 감소 및 이후 결합을 위해 PBS 완충액 중의 5 mg의 상응하는 항체를 일반적으로 사용하였다. PD10 칼럼으로 정제한 후, 3.5 mL PBS 완충액 중의 상응하는 ADC의 용액을 얻었다. 그리고 나서, 이들 용액 각각에 대해 각각의 단백질 농도를 결정하였다. 또한, 항체 부하(약물/mAb 비율)를 B-4에 기술된 방법에 의해 결정하였다.
실시예 56, 57, 60-74, 76-83, 85, 86, 88-92, 94-101, 103, 106-112, 114, 115, 126, 128-131, 133-135, 137-139, 141-142, 151, 153-154, 366 및 377에서 합성된 면역콘주게이트를 이 방법에 의해 제조하였다
제시된 구조식에서, AK3은 하기 의미를 갖는다:
AK3 = MF-Ta (부분적으로 감소됨)-S§1
상기 식에서,
§1은 석신이미드기에 대한 결합을 가리키고,
MF-Ta(부분적으로 감소됨)는 부분적으로 감소된 MF-Ta 항체(중쇄 서열번호: 408 및 경쇄 서열번호: 409)를 나타내며,
S는 부분적으로 감소된 항체의 시스테인 라디칼의 황 원자를 나타낸다.
B-2.2 일반적인 작업 절차 2(라이신 측쇄를 통한 결합):
결합될 2 내지 5 당량의 전구체 화합물중간체 104, 110, 115, 116, 127, 130, 131, 147, 156, 158, 162, 169, 178, 185, 190, 202, 206, 210-216, 218, 219, 227, 233, 2338, 240, 242, 245, 247a 및 247b)을 DMSO 중의 용액으로서, 원하는 부하에 따라, 1 mg/mL 내지 10 mg/mL 농도 범위의 PBS 완충액 중의 상응하는 항체의 용액에 첨가하였다. 실온에서 30분간 교반한 후, DMSO 중의 동일한 양의 전구체 화합물을 첨가하였다. 상기 DMSO의 양은 총 부피의 10%를 넘지 않아야 한다. 실온에서 30분간 더 교반한 후, 상기 배치(batch)를 PD10 칼럼(Sephadex® G-25)에 붓고 PBS 완충액으로 용출시켰다. 또한, 한외여과에 의한 추가 농축을 임의로 수행하였다. 저-분자 성분의 분리를 개선하기 위해, PBS 완충액으로 다시 희석한 후, 필요한 경우, 한외여과에 의한 농축을 반복하였다.
달리 나타내지 않는 한, PBS 완충액 중의 5 mg의 상응하는 항체를 일반적으로 결합에 사용하였다. PD10 칼럼에서 정제한 후, 3.5 mL PBS 완충액 중의 상응하는 ADC의 용액을 얻었다. 그리고 나서, 이들 용액에 대해 표시된 단백질 농도를 결정하고, 항체의 부하(약물/mAb 비율)를 B-4에 기술된 방법에 의해 결정하였다.
이 방법 후, 실시예 58, 59, 75, 84, 87, 93, 102, 104, 105, 113, 116, 127, 132, 136, 140, 143- 150, 152, 367-369 및 378-380에서 합성된 면역콘주게이트를 제조하였다.
제시된 구조식에서, AK4는 하기 의미를 갖는다:
AK4 = MF-Ta-NH§2
상기 식에서,
§2는 카보닐기에 대한 결합을 가리키고,
MF-Ta는 감소되지 않은 MF-Ta 항체(중쇄 서열번호: 408 및 경쇄 서열번호: 409)를 나타내고,
NH는 항체의 라이신 라디칼의 측쇄 아미노기를 나타낸다.
B-2.3a 시스테인 부가물을 합성하기 위한 일반적인 방법:
전술한 10 μmol의 말레이미드 전구체 화합물을 3 mL DMF에 용해시키고, 2.1 mg(10 μmol) L-시스테인과 혼합하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 진공농축하고, 분취 HPLC에 의해 정제하였다.
제시된 구조식에서 Cys는 하기 의미를 갖는다
Figure pct00925
상기 식에서,
§3은 링커 독성기 단위에 대한 결합을 가리킨다.
B-2.3b 라이신 부가물을 제조하기 위한 일반적인 방법:
전술한 10 μmol의 활성 에스테르 전구체 화합물을 5 mL DMF에 넣고, 30 μmol N,N-디이소프로필에틸아민의 존재 하에 α-아미노-보호된 L-라이신과 혼합하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 진공농축하고 다음으로 분취 HPLC에 의해 정제하였다. 그리고 나서, 보호기를 공지된 방법에 의해 제거하였다.
본 발명에 따른 콘주게이트의 추가 정제 및 특성규명
성공적인 반응 후, 반응 혼합물을, 일부 경우 예를 들어, 초원심분리에 의해 농축한 다음, 탈염하고, 예를 들어 세파덱스® G-25 칼럼을 이용한 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 예를 들어 포스페이트-완충 식염수 용액(PBS)을 이용하여 용출을 수행하였다. 그리고 나서, 상기 용액을 멸균 여과하고, 냉동시켰다. 대안적으로, 콘주게이트를 동결건조시킬 수 있다.
B-2.4 독성기 부하의 결정
예시적인 구현예에 기재된 바와 같이 얻어진 PBS 완충액 중의 콘주게이트 용액 상에서 하기와 같이 독성기 부하를 결정하였다:
라이신-연결된 ADC의 독성기 부하를 각각의 콘주게이트된 종의 분자량의 질량 분광분석 결정에 의해 결정하였다. 먼저, 항체 콘주게이트를 PNGaseF에 의해 탈글리코실화한 다음, 샘플을 산성화하고, 다음으로, HPLC 분리 후, 샘플을 ESI MicroTofQ(Bruker Daltonik)을 이용한 질량 분광분석법에 의해 분석하였다. TIC에서의 신호에 대한 모든 스펙트럼(총 이온 크로마토그램)을 합산하고, 다양한 콘주게이트 종의 분자량을 MaxEnt 디컨볼루션에 기초하여 계산하였다. 다양한 종의 신호 통합 후 DAR(약물/항체 비율)을 계산하였다.
단백질 확인을 위해, 탈글리코실화 및/또는 변성 후, 분자량 결정 외에도 트립신 분해를 수행하였고, 변성, 감소 및 유도체화 후 확인된 트립신분해 펩타이드에 기초하여 단백질의 신원을 확인하였다.
시스테인-연결된 콘주게이트의 독성기 부하를 감소 및 변성된 ADC의 역상 크로마토그래피에 의해 결정하였다. 구아니디늄 하이드로클로라이드(GuHCl, 28.6 mg) 및 DL-디티오트레이톨(DTT, 500 mM, 3 μL) 용액을 ADC 용액(1 mg/mL, 50 μL)에 첨가하였다. 그리고 나서, 상기 혼합물을 55℃에서 1시간 동안 배양하고 HPLC에 의해 분석하였다.
하기 구배를 갖는 1 mL/분의 유속으로 Polymer Laboratories PLRP-S 폴리머 역상 칼럼(카달로그 번호 PL1912-3802)(2.1×150 mm, 8 μm 입자 크기, 1000 Å)을 이용하여, 220 nm에서 검출하는 아쥬번트 1260 HPLC 시스템 상에서 HPLC 분석을 수행하였다: 0분, 25% B; 3분, 25% B; 28분, 50% B. 용리액 A는 물 중의 0.05% 트리플루오로아세트산(TFA)이었고, 용리액 B는 아세토니트릴 중의 0.05% 트리플루오로아세트산이었다.
검출된 피크를 콘주게이트되지 않은 항체의 경쇄(L0) 및 중쇄(H0)와의 체류 시간의 비교에 근거하여 할당하였다. 콘주게이트된 샘플 내에만 검출된 피크는 하나의 독성기(L1)를 갖는 경쇄 및 하나, 둘 및 세개의 독성기(H1, H2, H3)를 갖는 중쇄로 할당하였다. .
항체의 평균 독성기 부하는, 단순 가중치로 모든 피크의 통합 결과의 합계로 나눈, 독성기의 수에 의해 가중된, 모든 피크의 통합 결과의 합의 두 배로서 통합에 의해 결정된 피크 면적으로부터 계산하였다. 드문 경우, 독성기 부하가 일부 피크들의 공동-용출로 인해 정확하게 결정되지 않을 수 있다.
B-2.5 ADC 의 항원 결합의 시험
성공적인 결합 이후, 표적 분자에 결합하는 결합제의 능력을 시험하였다. 당해분야의 숙련가는 이를 수행하기 위한 다양한 방법을 잘 알고 있으며, 예를 들어, ELISA 기술 또는 표면 플라즈몬 공명 분석(BIAcoreTM 측정)에 의해 콘주게이트의 친화도를 시험할 수 있다. 숙련가는 종래의 방법, 예를 들어, 항체 콘주게이트를 위한 단백질 분석을 이용하여 콘주게이트 농도를 측정할 수 있다(Doronina 등, Nature Biotechnol. 2003; 21:778-784 및 Polson 등, Blood 2007, 1102:616-623 참고).
B3 항체-약물 콘주게이트(ADC)의 합성
B-3.1 항- C4 .4a 항체를 생성하기 위한 일반적인 방법
표 1 및 표 2의 서열에 의해 기재된 항-C4.4a 항체는 재조합 인간 C4.4a 서열번호: 1 및 쥣과 C4.4a 서열번호: 2 및 C4.4a를 발현시키는 세포에 대해 파아지 디스클레이 라이브러리를 스크리닝하여 산출되었다. 이런 식으로 수득된 항체는 인간 IgG1 포맷으로 재포맷되었고 본원에 기재된 실시예를 위해 사용되었다.
B-3.2 포유동물 세포에서 항- C4 .4a 항체를 발현시키기 위한 일반적인 방법정
항체, 예를 들면 M31-B01 (경쇄 서열번호: 346 및 중쇄 서열번호: 347) 또는 표 2의 추가 항체는 포유동물 세포 배양에서 생산되었다. 이를 위해, HEK293 6E 세포는 적당한 CMV 프로모터 기반 발현 플라스미드로 일시적으로 전달감염되었다. 항체의 중쇄 및 경쇄는 함께 1-벡터 시스템로, 또는 별도로 2-벡터 시스템으로 클로닝되었다. 세포 배양 규모는 진탕 플라스크에서 최대 1.5 L 또는 "웨이브-백"에서 10 L였다. 발현은 37 ℃에서 5-6 일 동안 1% "FCS 초저 IgG" (Invitrogen) 및 0.5 mM 발프로산과 함께 Tryptone TN1 (Organotechnie)로 보충된 F17 배지 (Invitrogen)에서 일어났다. 발현 수율은 100 내지 600 mg/l였다.
B-3.3 세포 상청액으로부터 항체를 정제하기 위한 일반적인 방법
항체, 예를 들면 M31-B01 (경쇄 서열번호: 346 및 중쇄 서열번호: 347) 또는 표 2의 추가 항체는 세포 배양 상청액으로부터 얻었다. 세포 상청액은 원심분리에 의해 정화되어 세포를 제거했다. 차후에 세포 상청액은 MabSelect Sure (GE Healthcare) 크로마토그래피 칼럼상 친화성 크로마토그래피로 정제되었다. 이를 위해 칼럼은 DPBS pH 7.4 (Sigma/Aldrich)에서 평형을 이루었고, 세포 상청액이 적용되었고, 칼럼은 약 10 칼럼 용적의 DPBS pH 7.4 + 500 mM 나트륨 클로라이드로 세정되었다. 항체는 50 mM 나트륨 아세테이트 pH 3.5 + 500 mM 나트륨 클로라이드에서 용출되었고 차후에 DPBS pH 7.4 중 Superdex 200 칼럼 (GE Healthcare)상 겔 여과 크로마토그래피로 추가로 정제되었다.
B-3.4 시스테인 측쇄에 커플링하기 위한 일반적인 방법
커플링 반응에서 사용된 항체는 하기와 같았다:
항-C4.4a M31-B01
항-C4.4a B01-3
항-C4.4a B01-10
항-C4.4a B01-7
항-C4.4a D02-4
항-C4.4a D02-6
항-C4.4a D02-7
1 mg/ml 내지 10 mg/ml의 농도 범위에서 PBS 완충액 중 상응하는 항체의 용액에 PBS 완충액 중 용액 중 3 당량의 트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드 (TCEP)을 부가했고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 차후에, 원하는 부하에 따라, 중간체 102, 103, 105-109, 111-114, 117-126, 128, 129, 132-146, 148-155, 157, 159-161, 166, 171, 175-177, 184, 189, 194-195,, 199-201, 205, 209, 223-224, 226, 228-231, 236 및 244을 커플링하기 위한 2 내지 12 당량의 말레이마이드 전구체 화합물 또는 할라이드 전구체 화합물을 DMSO 중 용액으로 부가했다.여기서 DMSO의 양은 전체 용적의 10%를 초과하지 않도록했다. 배치를 실온에서 60-120 분 동안 교반했고 그 다음 PBS로 평형을 이룬 PD 10 칼럼 (Sephadex® G-25, GE Healthcare)에 적용하고, PBS 완충액으로 용출했다. 임의로 농축 절차를 초원심분리로 부가적으로 수행했다. 필요하면, 저분자량 성분의 더 효과적인 제거를 위해, 한외여과에 의한 농축을, PBS 완충액으로 재희석후 반복했다.
달리 지적되지 않으면, PBS 완충액 중 5 mg의 상응하는 항체를, 감소 및 차후의 커플링를 위해 사용했다. PD10 칼럼을 통한 정제 다음에, 이것으로, 각 경우에, 3.5 ml의 PBS 완충액 중 상응하는 ADC의 용액을 얻었다. 그 다음 표시된 특정한 단백질 농도를 이들 용액을 위해 측정했다. 더욱이, 항체의 부하 (약물/mAb 비)를 이하에서 기재된 방법에 따라 측정했다.
이 과정을 사용하여 실시예 1-3, 5-30, 32-36, 38-59, 61-66, 68-70, 80, 82-85, 87, 88, 92-95, 97, 98, 107, 109-114, 119 및 122에서 나타낸 면역콘주게이트를 제조했다.
설명된 구조 식에서, 정의AK1A-AK1G는 하기와 같다
AK1A = 항-C4.4a 항체 M31-B01 (부분적으로 감소된)- S§1
AK1B = 항-C4.4a 항체 B01-3 (부분적으로 감소된)- S§1
AK1C = 항-C4.4a 항체 B01-10 (부분적으로 감소된)- S§1
AK1D = 항-C4.4a 항체 B01-7 (부분적으로 감소된)-S§1
AK1E = 항-C4.4a 항체 D02-4 (부분적으로 감소된)- S§1
AK1F = 항-C4.4a 항체 D02-6 (부분적으로 감소된)- S§1
AK1G = 항-C4.4a 항체 D02-7 (부분적으로 감소된)- S§1
여기서
§1은 석신이마이드 그룹과의 결합을 나타내고,
S는 부분적으로 감소된 항체의 시스테인 잔기의 황 원자를 나타낸다.
B-3.5 라이신 측쇄에 커플링하기 위한 일반적인 방법
커플링 반응에서 사용된 항체는 하기와 같았다:
항-C4.4a 항체 M31-B01
항-C4.4a 항체 B01-3
1 mg/ml 내지 10 mg/ml의 농도 범위로 PBS 완충액 중 상응하는 항체의 용액에, 원하는 부하에 따라, DMSO 중 용액으로서 중간체 104, 110, 115, 116, 127, 130, 131, 147, 156, 158, 162, 169, 178, 185, 190, 202, 206, 210-216, 218, 219, 227, 233, 2338, 240, 242, 245, 247a 및 247b을 커플링하기 위한 2 내지 5 당량의 전구체 화합물을 부가했다. 실온에서 교반 30분 후, DMSO 중 동일한 양의 전구체 화합물을 다시 부가했다. 대안적으로 한꺼번에 커플링하기 위해 4-12 당량의 전구체 화합물을 부가할 수 있었다.여기서 DMSO의 양은 전체 용적의 10%를 초과하지 않도록했다. 교반 실온에서 추가 30 분 후, 배치를 PBS로 균형을 이룬 PD 10 칼럼 (Sephadex® G-25, GE Healthcare)에 적용하고, PBS 완충액으로 용출했다. 임의로 농축 절차를 초원심분리로 부가적으로 수행했다. 필요하면, 저분자량 성분의 더 효과적인 제거를 위해, 한외여과에 의한 농축을 PBS 완충액으로 재희석한 후 반복했다.
달리 지적되지 않으면, PBS 완충액 중 5 mg의 상응하는 항체를 커플링을 위해 사용했다. PD10 칼럼를 통해 정제한 다음, 이것으로, 각 경우에, 3.5 ml의 PBS 완충액 중 상응하는 ADC의 용액을 얻었다. 그 다음 표시된 특정한 단백질 농도를 이들 용액을 위해 측정했다. 더욱이, 항체의 부하 (약물/mAb 비)를 이하에서 기재된 방법에 따라 측정했다.
이 과정을, 실시예 4, 31, 37, 60, 67, 81, 86, 89-91, 96, 99-106, 108, 118, 120, 121 및 123-125에서 나타낸 면역콘주게이트를 제조하기 위해 사용했다.
설명된 구조 식에서, 정의 AK2A 및 A2B는 하기와 같다:
AK2A = 항-C4.4a 항체 M31-B01-NH§2
AK2B = 항-C4.4a 항체 B01-3-NH§2
여기서
§2는 카보닐 그룹과의 결합을 나타내고,
NH는 항체의 라이신 잔기의 측쇄 아미노 그룹을 의미한다.
B-3.6 시스테인 첨가생성물을 제조하기 위한 일반적인 방법:
10 μmol의 상기 기재된 말레이마이드 전구체 화합물을 3 ml의 DMF에서 취하고 2.1 mg (20 μmol)의 L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축하고 차후에 분취 HPLC로 정제했다.
설명된 구조 식에서, 정의 Cys는 하기와 같다:
Figure pct00926
여기서
§3은 링커-독성기 단위와의 결합을 나타낸다.
본 발명의 콘주게이트의 추가 정제 및 특성화
반응이 일어난 후, 어떤 경우에 반응 혼합물을 예를 들면 한외여과로 농축하고, 그 다음 탈염하고 Sephadex® G-25를 사용하여 크로마토그래피로 정제했다. 용출은, 예를 들면, 포스페이트-완충 식염수 (PBS)로 일어났다. 용액에 대해 차후에 멸균 여과 및 냉동을 수행했다. 대안적인 선택은 콘주게이트를 동결건조하는 것이다.
B-3.7 독성기 부하의 측정
PBS 완충액 중 실시예에서 기재된 콘주게이트의 수득한 용액의 독성기 부하는 하기와 같이 측정되었다:
라이신-연결된 ADC의 독성기 부하는 개별적인 콘주게이트 종의 분자량의 질량 분광분석 측정에 의해 측정되었다. 이 경우에, 우선, 항체 콘주게이트를 PNGaseF로 탈글리코실레이트화시키고, 샘플을 산성화하고, HPLC 분리 다음에, ESI-MicroTofQ (Bruker Daltonik)를 사용하여 질량 분광분석으로 분석했다. 모든 스펙트럼을 TIC (총 이온 크로마토그램)에서 신호를 통해 부가하고, 다양한 콘주게이트 종의 분자량을 MaxEnt Deconvolution을 기반으로 계산했다. 상이한 종의 신호 통합 다음에, DAR (약물/항체 비)을 계산했다.
단백질 확인에 대해, 분자량 결정 외에, 트립신 소화를 탈글리코실화 및/또는 변성 후에 수행하고, 이 소화는, 변성, 감소 및 유도체화 후에, 검출된 트립신분해 펩타이드를 기반으로 단백질의 동일성을 확인했다.
시스테인-연결된 콘주게이트의 독성기 부하를 감소된 및 변성된 ADC의 역상 크로마토그래피를 통해 측정했다. ADC 용액 (1 mg/mL, 50 μL)을 구아니디늄 하이드로클로라이드 (GuHCl) (28.6 mg) 및 DL-디티오트레이톨 (DTT) (500 mM, 3 μL)의 용액과 혼합했다. 혼합물을 55 ℃에서 1 시간 동안 인큐베이팅하고 HPLC로 분석했다.
HPLC 분석을 220 nm에서 검출과 함께 Agilent 1260 HPLC 시스템 상에서 수행했다. 사용된 칼럼은 하기인 Polymer Laboratories PLRP-S 폴리머 역상 칼럼 (카탈로그 번호 PL1912-3802) (2.1 × 150 mm, 8 μm 입자 크기, 1000 Å)였다: 유속 1 mL/분, 하기 구배: 0 분, 25% B; 3 분, 25 % B; 28 분, 50% B를 사용. 물 중 0.05% 트리플루오로아세트산 (TFA)로 이루어진 용출물 A, 아세토니트릴 중 0.05% 트리플루오로아세트산으로 이루어진 용출물 B.
검출된 피크를 비콘주게이트화 항체의 경쇄 (L0) 및 중쇄 (H0)과의 체류 시간 비교에 의해 할당했다. 콘주게이트화 샘플에서 독점적으로 검출된 피크를 독성기 (L1)를 갖는 경쇄로, 및 1, 2 및 3개의 독성기 (H1, H2, H3)를 갖는 중쇄로 할당했다.
독성기를 갖는 항체의 평균 부하는 하기와 같이 계산되었다: 무엇보다도, 경쇄 부하는 L0 및 L1의 특이 가중 적분의 합에 의해 나누어진 L0 및 L1의 독성기 수 가중 적분의 합으로서 경쇄에 속하는 피크 L0 및 L1의 - 통합에 의해 측정된 - 피크 면적으로부터 계산되었다. 동일한 방식으로 중쇄 부하는 H0, H1, H2 및 H3의 특이 가중 적분의 합에 의해 나누어진 H0, H1, H2 및 H3의 독성기 수 가중 적분의 합으로서 중쇄에 속하는 피크 H0, H1, H2 및 H3의 - 통합에 의해 측정된 - 피크 면적으로부터 계산되었다. DAR는 경쇄 부하 및 중쇄 부하의 2배 합으로서 경쇄 부하 및 중쇄 부하에 의해 주어진다. 인자 2는, 항체가 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄로 이루어져 있다는 것을 고려한다. 어떤 개별적인 경우에 어떤 피크의 공-용출로 인해 독성기 부하를 정확하게 측정하는 것은 불가능할 수 있다.
B-3.8 ADC 의 항원 결합의 시험
결합제의 표적 분자에의 결합능을 커플링이 일어난 후 시험했다. 숙련가는 이것을 달성하는 다양한 방법을 알고 있다 - 예를 들면, 콘주게이트의 친화도는 ELISA 기술 또는 표면 플라즈몬 공명 분석 (BIAcoreTM 측정)으로 시험될 수 있다. 콘주게이트 농도는 예를 들면, 단백질 결정에 의해 항체 콘주게이트에 대해 통상적인 방법을 사용하여 숙련가에 의해 측정될 수 있다 (참고 또한 Doronina 등; Nature Biotechnol. 2003; 21:778-784 및 Polson 등, Blood 2007; 1102:616-623).
B4 항체-약물 콘주게이트(ADC)의 생산
전술한 중간체들을, 예를 들어, 하기 기술된 방법을 이용하여 항체 단백질의 시스테인 또는 라이신 측쇄를 통해 임의로 발생하는 결합을 이용하여, 항-CA9 항체(3ee9)에 연결하였다.
B-4.1 항- CA9 항체를 생성하기 위한 일반적인 방법
재조합 항원을 위한 HuCAL GOLD 파아지 디스플레이 라이브러리를 패닝함으로써 CA9에 대한 항체, 예컨대 항체 3ee9를 수득하였다. 이렇게 분리된 Fab 항체 단편을 IgG format에 재클로닝하였다(WO 2007/070538 A2).
B-4.2 포유동물 세포에서의 항- CA9 항체의 발현 및 정제를 위한 일반적인 방법
항-CA9 IgG 항체, 예컨대 3ee9를 HEK 293의 일시적인 형질감염에 의해 발현시키고 당해분야의 숙련가에게 잘 알려진 방법에 의해 이들의 세포 상청액으로부터 정제하였다. 이들 방법은 WO 2007/070538 A2에 기술되어 있다.
B-4.3 시스테인 측쇄에 결합하기 위한 일반적인 방법
예를 들어, 1 mg/mL 내지 10 mg/mL의 농도범위로 PBS 완충액 또는 Tris 완충액에 존재할 수 있는, 상응하는 항-CA9 항체, 예컨대 3ee9의 용액에, PBS 완충액에 용해된 3 당량의 트리스-(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드(TCEP)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 그리고 나서, 원하는 부하에 따라, 결합될 중간체 102, 103, 105-109, 111-114, 117-126, 128, 129, 132-146, 148-155, 157, 159-161, 166, 171, 175-177, 184, 189, 194-195, 199-201, 205, 209, 223224, 226, 228-231, 236 및 244로부터의 2 내지 10 당량의 말레이미드 전구체 화합물 또는 할로겐화물 전구체 화합물을 DMSO 중의 용액으로서 첨가하였다. DMSO의 양은 총 부피의 10%를 넘지 않아야 한다. 상기 배치(batch)를 실온에서 60-120분 동안 교반한 다음, PD10 칼럼(세파덱스® G-25, GE Healthcare)에 적용하고 PBS 완충액으로 용출시켰다. 초원심분리에 의해 추가 농축을 임의로 수행하였다. 필요한 경우, 저-분자 성분을 더 잘 분리하기 위해, PBS 완충액으로 다시 희석한 후, 한외여과에 의한 농축 단계를 반복하였다.
달리 나타내지 않는 한, 감소 및 이후의 결합을 위해, 5 mg의 상응하는 항체를 일반적으로 사용하였다. PD10 칼럼 상에서 정제한 후, 3.5 mL PBS 완충액 중의 상응하는 ADC의 용액을 얻었다. 그리고 나서, 각각의 이들 용액에 대해 세지된 각각의 단백질 농도를 결정하였다. 또한, 항체 부하(약물/mAb 비율)를 하기 기재된 방법에 의해 결정하였다.
이 방법에 따라, 실시예 280-289, 291-302, 304-305, 313, 315-318, 320-321, 324-325, 327-328 및 330-331에서 합성된 면역콘주게이트를 제조하였다.
나타낸 구조식에서, AK1은 하기 의미를 갖는다:
AK7 = 3ee9(부분적으로 감소됨)-S§1
상기 식에서,
§1은 석신이미드기에 대한 결합을 가리키고,
3ee9(부분적으로 감소됨)는 부분적으로 감소된 항-CA9 3ee9 항체를 나타내고,
S는 부분적으로 감소된 항체의 시스테인 라디칼의 황 원자를 나타낸다.
B-4.4 라이신 측쇄에 결합하기 위한 일반적인 방법
1 mg/mL 내지 10 mg/mL의 농도 범위의 PBS 완충액 중의 상응하는 항-CA 항체 3ee9의 용액에, 원하는 부하에 따라, 결합될 2 내지 5 당량의 중간체 104, 110, 115, 116, 127, 130, 131, 147, 156, 158, 162, 169, 178, 185, 190, 202, 206, 210-216, 218, 219, 227, 233, 238, 240, 242, 245, 247a 및 247b의 전구체 화합물을 DMSO 중의 용액으로서 첨가하였다. 실온에서 30분간 교반한 후, DMSO 중의 동일한 양의 전구체 화합물을 다시 첨가하였다. DMSO의 양은 총 부피의 10%를 넘지 않아야 한다. 실온에서 30분간 더 교반 후, 상기 배치(batch)를 PD10 칼럼(세파덱스® G-25)에 적용하고 PBS 완충액으로 용출시켰다. 한외여과에 의한 추가 농축 단계를 임의로 수행하였다. 필요한 경우, 저-분자 성분의 더 잘 분리하기 위해, PBS 완충액으로 다시 희석한 후, 한외여과에 의한 농축을 반복하였다. .
달리 나타내지 않는 한, PBS 완충액 중의 5 mg의 상응하는 항체를 일반적으로 결합에 사용하였다. PD10 칼럼 상에서 정제한 후, 3.5 mL PBS 완충액 중의 상응하는 ADC의 용액을 얻었다. 그리고 나서, 각각의 이들 용액에 대해 표시된 각 단백질 농도를 결정하고, 하기 기술된 방법에 의해 항체 부하(약물/mAb 비율)를 결정하였다.
이 방법에 따라, 실시예 290, 303, 306, 314, 319, 322-323, 326, 329, 332-333 및 384에서 합성된 면역콘주게이트를 제조하였다.
제시진 구조식에서, AK2는 하기 의미를 갖는다:
AK8 = 항-CA9- NH§2
상기 식에서,
§2는 카보닐기에 대한 결합을 가리키고,
항-CA9는 감소되지 않은 CA9 항체 3ee9를 나타내고,
NH는 항체의 라이신 라디칼의 측쇄 아미노기를 나타낸다.
B-4.5a 시스테인 부가물을 합성하기 위한 일반적인 방법
전술한 10 μmol의 말레이미드 전구체 화합물을 3 mL DMF에 넣고 2.1 mg(20 μmol) L-시스테인과 혼합하였다. 상기 배치(batch)를 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 진공농축하고 분취 HPLC에 의해 정제하였다.
제시진 구조식에서 Cys는 하기 의미를 갖는다:
Figure pct00927
상기 식에서,
§3은 링커 독성기 단위에 대한 결합을 나타낸다.
B-4.5b 라이신 부가물을 합성하기 위한 일반적인 방법:
전술한 10 μmol의 활성 에스테르 전구체 화합물을 5 mL DMF에 넣고 30 μmol N,N-디이소프로필에틸아민의 존재 하에 α-아미노-보호된 L-라이신과 혼합하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 진공농축하고, 다음으로 분취 HPLC에 의해 정제하였다. 그리고 나서, 보호기를 공지된 방법들에 의해 제거하였다.
본 발명에 따른 콘주게이트의 추가 정제 및 특성화
성공적인 반응 후, 일부 경우, 예를 들어, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축한 다음 탈염하고, 예를 들어 세파덱스® G-25 칼럼을 이용한 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 예를 들어, 인산-완충 식염수 용액(PBS)을 이용하여 용출을 수행하였다. 그리고 나서, 상기 용액을 멸균 여과하고, 냉동시켰다. 대안적으로, 콘주게이트를 동결건조시킬 수 있다.
B-4.6 독성기 부하의 결정
예시적인 구현예에 기재된 바와 같이 얻어진 PBS 완충액 중의 콘주게이트의 용액 상에서 하기와 같이 독성기 부하를 결정하였다:
라이신-연결된 ADC의 독성기 부하를 각각의 콘주게이트된 종의 분자량의 질량 분광분석 결정에 의해 결정하였다. 항체 콘주게이트를 우선 PNGaseF에 의해 탈글리코실화한 다음, 샘플을 산성화하고, 다음으로, HPLC 분리 후, 샘플을 ESI MicroTofQ(Bruker Daltonik)을 이용한 질량 분광분석법에 의해 분석하였다. TIC에서의 신호에 대한 모든 스펙트럼(총 이온 크로마토그램)을 합산하고, 다양한 콘주게이트 종의 분자량을 MaxEnt 디컨볼루션에 기초하여 계산하였다. 다양한 종의 신호 통합 후 DAR(약물/항체 비율)을 계산하였다.
단백질 확인을 위해, 탈글리코실화 및/또는 변성 후, 분자량 결정 외에도 트립신 분해를 수행하고, 변성, 감소 및 유도체화 후 확인된 트립신분해 펩타이드에 기초하여 단백질의 신원을 확인하였다.
시스테인-연결된 콘주게이트의 독성기 부하를 감소 및 변성된 ADC의 역상 크로마토그래피에 의해 결정하였다. 구아니디늄 하이드로클로라이드(GuHCl, 28.6 mg) 및 DL-디티오트레이톨(DTT, 500 mM, 3 μL) 용액을 ADC 용액(1 mg/mL, 50 μL)에 첨가하였다. 그리고 나서, 상기 혼합물을 55℃에서 1시간 동안 배양하고 HPLC에 의해 분석하였다.
하기 구배를 갖는 1 mL/분의 유속으로 Polymer Laboratories PLRP-S 폴리머 역상 칼럼(카달로그 번호 PL1912-3802)(2.1×150 mm, 8 μm 입자 크기, 1000 Å)을 이용하여, 220 nm에서 검출하는 아쥬번트 1260 HPLC 시스템 상에서 HPLC 분석을 수행하였다: 0분, 25% B; 3분, 25% B; 28분, 50% B. 용리액 A는 물 중의 0.05% 트리플루오로아세트산(TFA)이었고, 용리액 B는 아세토니트릴 중의 0.05% 트리플루오로아세트산이었다.
검출된 피크를 콘주게이트되지 않은 항체의 경쇄(L0) 및 중쇄(H0)와의 체류 시간의 비교에 근거하여 할당하였다. 콘주게이트된 샘플 내에만 검출된 피크들은 하나의 독성기(L1)를 갖는 경쇄 및 하나, 둘 및 세 개의 독성기(H1, H2, H3)를 갖는 중쇄로 할당하였다.
항체의 평균 독성기 부하는, 단순 가중치로 모든 피크의 통합 결과의 합계로 나눈, 독성기의 수에 의해 가중된, 모든 피크의 통합 결과의 합의 두 배로서 통합에 의해 결정된 피크 면적으로부터 계산하였다. 드문 경우, 독성기 부하가 일부 피크들의 공동-용출로 인해 정확하게 결정되지 않을 수 있다.
B-4.7 ADC 의 항원 결합의 시험
성공적인 결합 이후 표적 분자에 결합하는 결합제의 능력을 시험하였다. 당해분야의 숙련가는 이를 수행하는 다양한 방법을 잘 알고 있으며, 예를 들어 ELISA 기술 또는 표면 플라즈몬 공명 분석(BIAcoreTM 측정)에 의해 콘주게이트의 친화도를 시험할 수 있다. 숙련가는 종래의 방법, 예를 들어, 항체 콘주게이트를 위한 단백질 분석을 이용하여 콘주게이트 농도를 측정할 수 있다(Doronina 등, Nature Biotechnol. 2003; 21:778-784 및 Polson 등, Blood 2007, 1102:616-623 참고).
구현예
실시예 1
Figure pct00928
단백질 농도: 1.27 mg/ml
약물/mAb 비: 1.5
실시예 2
Figure pct00929
단백질 농도: 0.64 mg/ml
약물/mAb 비: 3.3
실시예 3
Figure pct00930
단백질 농도: 0.61 mg/ml
약물/mAb 비: 5.1
실시예 4
Figure pct00931
단백질 농도: 0.61 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 5
Figure pct00932
단백질 농도: 1.37 mg/ml
약물/mAb 비: 1.9
실시예 6
Figure pct00933
단백질 농도: 1.12 mg/ml
약물/mAb 비: 1.3
실시예 7
Figure pct00934
PBS 중 270 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 10.46 mg/ml
약물/mAb 비: 2.8
실시예 8
Figure pct00935
단백질 농도: 1.86 mg/ml
약물/mAb 비: 2.4
실시예 9
Figure pct00936
단백질 농도: 1.39 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 10
Figure pct00937
단백질 농도: 0.66 mg/ml
약물/mAb 비: 2.4
실시예 11
Figure pct00938
단백질 농도: 0.66 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 12
Figure pct00939
단백질 농도: 0.9 mg/ml
약물/mAb 비: 1.1
실시예 13
Figure pct00940
단백질 농도: 1.52 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 14
Figure pct00941
단백질 농도: 1.44 mg/ml
약물/mAb 비: 3.2
실시예 15
Figure pct00942
단백질 농도: 1.23 mg/ml
약물/mAb 비: 2.7
실시예 16
Figure pct00943
단백질 농도: 1.27 mg/ml
약물/mAb 비: 1.3
실시예 17
Figure pct00944
단백질 농도: 1.61 mg/ml
약물/mAb 비: 4.7
실시예 18
Figure pct00945
단백질 농도: 1.24 mg/ml
약물/mAb 비: 2.4
실시예 19
Figure pct00946
단백질 농도: 1.49 mg/ml
약물/mAb 비: 1.9
실시예 20
Figure pct00947
단백질 농도: 1.49 mg/ml
약물/mAb 비: 2.0
실시예 21
Figure pct00948
단백질 농도: 1.46 mg/ml
약물/mAb 비: >0.9
실시예 22
Figure pct00949
단백질 농도: 1.28 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 23
Figure pct00950
단백질 농도: 1.33 mg/ml
약물/mAb 비: 1.8
실시예 24
Figure pct00951
단백질 농도: 1.39 mg/ml
약물/mAb 비: >0.8
실시예 25
Figure pct00952
단백질 농도: 1.26 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 26
Figure pct00953
단백질 농도: 1.51 mg/ml
약물/mAb 비: 1.8
실시예 27
Figure pct00954
단백질 농도: 1.6 mg/ml
약물/mAb 비: 1.8
실시예 28
Figure pct00955
단백질 농도: 1.21 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 29
Figure pct00956
단백질 농도: 1.53 mg/ml
약물/mAb 비: 2.7
실시예 30
Figure pct00957
단백질 농도: 1.4 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 31
Figure pct00958
단백질 농도: 1.66 mg/ml
약물/mAb 비: 2.2
실시예 32
Figure pct00959
단백질 농도: 1.21 mg/ml
약물/mAb 비: 2.2
실시예 33
Figure pct00960
단백질 농도: 1.46 mg/ml
약물/mAb 비: 2
실시예 34
Figure pct00961
단백질 농도: 1.2 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 35
Figure pct00962
단백질 농도: 1.66 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 36
Figure pct00963
단백질 농도: 1.48 mg/ml
약물/mAb 비: 2.2
실시예 37
Figure pct00964
단백질 농도: 1.45 mg/ml
약물/mAb 비: 2.7
실시예 38
Figure pct00965
단백질 농도: 1.5 mg/ml
약물/mAb 비: 0.15
실시예 39
Figure pct00966
단백질 농도: 1.5 mg/ml
약물/mAb 비: 2.1
실시예 40
Figure pct00967
단백질 농도: 1.54 mg/ml
약물/mAb 비: >0.9
실시예 41
Figure pct00968
단백질 농도: 1.39 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 42
Figure pct00969
단백질 농도: 1.52 mg/ml
약물/mAb 비: 1.5
실시예 43
Figure pct00970
단백질 농도: 1.44 mg/ml
약물/mAb 비: 2.6
실시예 44
Figure pct00971
단백질 농도: 1.45 mg/ml
약물/mAb 비: 1.9
시스테인 첨가생성물의 예
실시예 45
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00972
10 mg (10μmol)의 중간체 113을 5.2 ml DMF에서 취하고 2.28 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 배치를 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 6 mg (이론의 54%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.77 min; MS (ESIpos): m/z = 1185 (M+H)+.
실시예 46
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00973
9 mg (8.3 μmol)의 중간체 132를 4 ml DMF에서 취하고 3 mg (24.4 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 배치를 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 6.8 mg (이론의 68%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.78 min; MS (ESIpos): m/z = 1227 (M+H)+.
실시예 47
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일] 아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00974
10 mg (10 μmol)의 중간체 106을 5.8 ml DMF에서 취하고 2.5 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 배치를 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 5.2 mg (이론의 46%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 min;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.71 min; MS (ESIpos): m/z = 1070 (M+H)+.
실시예 48
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00975
10 mg (10 μmol)의 중간체 124를 4 ml DMF에서 취하고 2.5 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 배치를 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 7.2 mg (이론의 64%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.8 min; MS (ESIpos): m/z = 1071 (M+H)+.
실시예 49
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00976
10 mg (10 μmol)의 중간체 125를 4 ml DMF에서 취하고 2.4 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 배치를 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 7.7 mg (이론의 69%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 min;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.91 min; MS (ESIpos): m/z = 1140 (M+H)+.
실시예 50
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00977
10 mg (10 μmol)의 중간체 160을 3 ml DMF에서 취하고 2.1 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 배치를 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 8.1 mg (이론의 73%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 min; MS (ESIpos): m/z = 1274 (M+H)+.
실시예 51
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00978
10 mg (10μmol)의 중간체 157을 5.2 ml DMF에서 취하고 2.28 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 배치를 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 5.8 mg (이론의 48%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.45 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.74 min; MS (ESIpos): m/z = 1184 (M+H)+.
실시예 52
Figure pct00979
PBS 중 5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.73 mg/ml
약물/mAb 비: 2.8
실시예 53
Figure pct00980
PBS 중 5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 0.86 mg/ml
약물/mAb 비: 4.9
실시예 54
Figure pct00981
PBS 중 5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.64 mg/ml
약물/mAb 비: 0.7
실시예 55
Figure pct00982
PBS 중 5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.43 mg/ml
약물/mAb 비: 3.2
실시예 56
Figure pct00983
단백질 농도: 0.96 mg/ml
약물/mAb 비: 3.1
실시예 57
Figure pct00984
단백질 농도: 0.44 mg/ml
약물/mAb 비: 4.6
실시예 58
Figure pct00985
단백질 농도: 1.09 mg/ml
약물/mAb 비: 2.1
실시예 59
Figure pct00986
단백질 농도: 0.87 mg/ml
약물/mAb 비: 3.8
실시예 60
Figure pct00987
단백질 농도: 0.45 mg/ml
약물/mAb 비: 6.5
실시예 61
Figure pct00988
단백질 농도: 0.15 mg/ml
약물/mAb 비: 3.1
실시예 62
Figure pct00989
단백질 농도: 0.94 mg/ml
약물/mAb 비: 2.8
실시예 63
Figure pct00990
단백질 농도: 0.45 mg/ml
약물/mAb 비: 0.9
실시예 64
Figure pct00991
단백질 농도: 0.51 mg/ml
약물/mAb 비: 6.6
실시예 65
Figure pct00992
단백질 농도: 0.47 mg/ml
약물/mAb 비: 4.2
실시예 66
Figure pct00993
단백질 농도: 0.45 mg/ml
약물/mAb 비: 5.9
실시예 67
Figure pct00994
단백질 농도: 0.47 mg/ml
약물/mAb 비: 3.3
실시예 68
Figure pct00995
단백질 농도: 0.53 mg/ml
약물/mAb 비: 2.8
실시예 69
Figure pct00996
단백질 농도: 0.92 mg/ml
약물/mAb 비: 3.5
실시예 70
Figure pct00997
단백질 농도: 0.09 mg/ml
약물/mAb 비: nd
실시예 71
Figure pct00998
단백질 농도: 0.62 mg/ml
약물/mAb 비: 1.8
실시예 72
Figure pct00999
단백질 농도: 0.55 mg/ml
약물/mAb 비: 3.8
실시예 73
Figure pct01000
단백질 농도: 0.54 mg/ml
약물/mAb 비: 4.4
실시예 74
Figure pct01001
단백질 농도: 0.56 mg/ml
약물/mAb 비: 4.0
실시예 75
Figure pct01002
단백질 농도: 1.1 mg/ml
약물/mAb 비: 0.3
실시예 76
Figure pct01003
단백질 농도: 0.61 mg/ml
약물/mAb 비: 0.9
실시예 77
Figure pct01004
단백질 농도: 0.57 mg/ml
약물/mAb 비: 1.2
실시예 78
Figure pct01005
PBS 중 100 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 11.2 mg/ml
약물/mAb 비: 3.4
실시예 79
Figure pct01006
단백질 농도: 1.56 mg/ml
약물/mAb 비: 2.8
실시예 80
Figure pct01007
단백질 농도: 0.60 mg/ml
약물/mAb 비: 2.4
실시예 81
Figure pct01008
단백질 농도: 0.584 mg/ml
약물/mAb 비: 2.6
실시예 82
Figure pct01009
단백질 농도: 0.39 mg/ml
약물/mAb 비: 0.8
실시예 83
Figure pct01010
PBS 중 100 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 13.2 mg/ml
약물/mAb 비: 4.6
실시예 84
Figure pct01011
단백질 농도: 0.98ml
약물/mAb 비: 1.1
실시예 85
Figure pct01012
단백질 농도: 0.55 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 86
Figure pct01013
PBS 중 40 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 10.6 mg/ml
약물/mAb 비: 4.1
실시예 87
Figure pct01014
단백질 농도: 0.96 mg/ml
약물/mAb 비: 0.4
실시예 88
Figure pct01015
PBS 중 70 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 12.7 mg/ml
약물/mAb 비: 3.6
실시예 89
Figure pct01016
단백질 농도: 1.1 mg/ml
약물/mAb 비: 2.7
실시예 90
Figure pct01017
단백질 농도: 1.24 mg/ml
약물/mAb 비: 2.6
실시예 91
Figure pct01018
단백질 농도: 0.99 mg/ml
약물/mAb 비: 2.3
실시예 92
Figure pct01019
단백질 농도: 1.22 mg/ml
약물/mAb 비: 3.3
실시예 93
Figure pct01020
단백질 농도: 1.34 mg/ml
약물/mAb 비: 1.2
실시예 94
Figure pct01021
단백질 농도: 1.28 mg/ml
약물/mAb 비: 3.2
실시예 95
Figure pct01022
PBS 중 70 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 10.9 mg/ml
약물/mAb 비: 5.1
실시예 96
Figure pct01023
PBS 중 100 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 10.3 mg/ml
약물/mAb 비: 4.3
실시예 97
Figure pct01024
단백질 농도: 1.08 mg/ml
약물/mAb 비: 2.8
실시예 98
Figure pct01025
단백질 농도: 1.24 mg/ml
약물/mAb 비: 2.8
실시예 99
Figure pct01026
단백질 농도: 1.28 mg/ml
약물/mAb 비: 3.8
실시예 100
Figure pct01027
단백질 농도: 1.07 mg/ml
약물/mAb 비: 3.0
실시예 101
Figure pct01028
단백질 농도: 1.35 mg/ml
약물/mAb 비: 4.0
실시예 102
Figure pct01029
PBS 중 100 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 12.2 mg/ml
약물/mAb 비: 5.6
실시예 103
Figure pct01030
단백질 농도: 1.32 mg/ml
약물/mAb 비: 3.2
실시예 104
Figure pct01031
단백질 농도: 1.01 mg/ml
약물/mAb 비: 0.9
실시예 105
Figure pct01032
단백질 농도: 1.03 mg/ml
약물/mAb 비: 0.3
실시예 106
Figure pct01033
단백질 농도: 0.62 mg/ml
약물/mAb 비: 3.1
이러한 ADC를 Vivaspin 원심분리로 농축하고 다시 희석하고, 그 다음 또 하나의 농축 및 희석을 수행했다.
실시예 107
Figure pct01034
단백질 농도: 1.26 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 108
Figure pct01035
단백질 농도: 1.55 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 109
Figure pct01036
단백질 농도: 1.23 mg/ml
약물/mAb 비: 3.5
실시예 110
Figure pct01037
단백질 농도: 1.44 mg/ml
약물/mAb 비: 4.1
실시예 111
Figure pct01038
단백질 농도: 0.92 mg/ml
약물/mAb 비: 3.5
실시예 112
Figure pct01039
PBS 중 5 mg MF-T를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 0.77 mg/ml
약물/mAb 비: >1.5 (정확하게 검출되지 않음)
실시예 113
Figure pct01040
단백질 농도: 1.3 mg/ml
약물/mAb 비: 2.0
실시예 114
Figure pct01041
PBS 중 500 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 11.2 mg/ml
약물/mAb 비: 3.7
실시예 115
Figure pct01042
PBS 중 100 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 11.4 mg/ml
약물/mAb 비: 3.9
실시예 116
Figure pct01043
PBS 중 60 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 10.5 mg/ml
약물/mAb 비: 4.4
실시예 117
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01044
10 mg (10 μmol)의 중간체 157을 5.2 ml DMF에서 취하고 2.28 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 5.8 mg (이론의 48%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.45 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.74 min; MS (ESIpos): m/z = 1184 (M+H)+.
실시예 118
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01045
10 mg (10 μmol)의 중간체 113을 5.2 ml DMF에서 취하고 2.28 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 6 mg (이론의 54%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.77 min; MS (ESIpos): m/z = 1185 (M+H)+.
실시예 119
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01046
9 mg (8.3 μmol)의 중간체 132를 4 ml DMF에서 취하고 3 mg (24.4 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 6.8 mg (이론의 68%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.78 min; MS (ESIpos): m/z = 1227 (M+H)+.
실시예 120
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일] 아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01047
10 mg (10 μmol)의 중간체 106을 5.8 ml DMF에서 취하고 2.5 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 5.2 mg (이론의 46%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 min;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.71 min; MS (ESIpos): m/z = 1070 (M+H)+.
실시예 121
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01048
10 mg (10 μmol)의 중간체 124를 4 ml DMF에서 취하고 2.5 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 7.2 mg (이론의 64%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.8 min; MS (ESIpos): m/z = 1071 (M+H)+.
실시예 122
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01049
10 mg (10 μmol)의 중간체 125를 4 ml DMF에서 취하고 2.4 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 7.7 mg (이론의 69%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 min;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.91 min; MS (ESIpos): m/z = 1140 (M+H)+.
실시예 123
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01050
10 mg (10 μmol)의 중간체 160을 3 ml DMF에서 취하고 2.1 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 8.1 mg (이론의 73%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 min; MS (ESIpos): m/z = 1274 (M+H)+.
실시예 124
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01051
3.5 mg (3 μmol)의 중간체 159을 1 ml DMF에서 취하고 0.76 mg (6 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 2.6 mg (이론의 65%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.75 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 min; MS (ESIpos): m/z = 1235 (M+H)+.
실시예 125
N-(6-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01052
3.6 mg (3 μmol)의 중간체 129을 1 ml DMF에서 취하고 0.77 mg (6 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 1.55 mg (이론의 39%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 min; MS (ESIpos): m/z = 1255 (M+H)+.
실시예 126
Figure pct01053
PBS 중 5 mg MF-T[a]를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 0.9 mg/ml
약물/mAb 비: 1
실시예 127
Figure pct01054
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.86 mg/ml
약물/mAb 비: 2.9
실시예 128
Figure pct01055
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.05 mg/ml
약물/mAb 비: 4.4
실시예 129
Figure pct01056
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.13 mg/ml
약물/mAb 비: 2.8
실시예 130
Figure pct01057
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.41 mg/ml
약물/mAb 비: 3.9
실시예 131
Figure pct01058
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.38 mg/ml
약물/mAb 비: 4.3
실시예 132
Figure pct01059
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.32 mg/ml
약물/mAb 비: 1
실시예 133
Figure pct01060
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.14 mg/ml
약물/mAb 비: 5.3
실시예 134
Figure pct01061
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.25 mg/ml
약물/mAb 비: 4.8
실시예 135
Figure pct01062
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.12 mg/ml
약물/mAb 비: 1.7
실시예 136
Figure pct01063
PBS 중 150 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고, PBS로 다시 희석하고 다시 농축했다.
단백질 농도: 12.2 mg/ml
약물/mAb 비: 4.1
실시예 137
Figure pct01064
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 0.86 mg/ml
약물/mAb 비: 3.4
실시예 138
Figure pct01065
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.43 mg/ml
약물/mAb 비: 3.7
실시예 139
Figure pct01066
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 0.8 mg/ml
약물/mAb 비: 0.7
실시예 140
Figure pct01067
PBS 중 50 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고, PBS로 다시 희석하고 재농축했다.
단백질 농도: 9.5 mg/ml
약물/mAb 비: 2.9
실시예 141
Figure pct01068
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.52 mg/ml
약물/mAb 비: 3.2
실시예 142
Figure pct01069
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.25 mg/ml
약물/mAb 비: 4.6
실시예 143
Figure pct01070
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.47 mg/ml
약물/mAb 비: 1.6
실시예 144
Figure pct01071
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 0.99 mg/ml
약물/mAb 비: 5.5
실시예 145
Figure pct01072
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.02 mg/ml
약물/mAb 비: 4.0
실시예 146
Figure pct01073
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.63 mg/ml
약물/mAb 비: 3.8
실시예 147
Figure pct01074
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.27 mg/ml
약물/mAb 비: 3.0
실시예 148
Figure pct01075
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.58 mg/ml
약물/mAb 비: 0.6
실시예 149
Figure pct01076
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.31 mg/ml
약물/mAb 비: 6.6
실시예 150
Figure pct01077
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.75 mg/ml
약물/mAb 비: 1.8
실시예 151
Figure pct01078
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.44 mg/ml
약물/mAb 비: 2.5
실시예 152
Figure pct01079
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.96 mg/ml
약물/mAb 비: 5.6
실시예 153
Figure pct01080
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.58 mg/ml
약물/mAb 비: 4.2
실시예 154
Figure pct01081
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.48 mg/ml
약물/mAb 비: 4.6
실시예 155
Figure pct01082
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.5 mg/ml
약물/mAb 비: 3.1
실시예 156
Figure pct01083
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: mg/ml
약물/mAb 비:
실시예 157
Figure pct01084
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.62 mg/ml
약물/mAb 비: 2.2
실시예 158
Figure pct01085
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.37 mg/ml
약물/mAb 비: 2.8
실시예 159
Figure pct01086
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.43 mg/ml
약물/mAb 비: 4.0
실시예 160 **
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct01087
15.5 mg (15 μmol)의 중간체 210을 5 ml DMF에서 취하고 4.4 mg (18 μmol) N2-(tert .-부톡시카보닐)-L-일신 및 7.7 μL (44 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 14 mg (이론의 81%)의 표제 화합물의 보호된 중간체였고, 그 다음 이것을 1 ml 디클로로메탄에서 취하고 1 ml 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 반응 혼합물을 농축하고, 아세토니트릴/물 1:1로부터 잔여물을 동결건조한 후, 15 mg (이론의 97%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.79 min; MS (ESIpos): m/z = 1083 (M+H)+.
실시예 161
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01088
40 mg (40 μmol)의 중간체 226을 5 ml DMF에서 취하고 11.5 mg (40 μmol) N2-[(벤질옥시)카보닐]-L-일신 및 13 μl (80 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 32.5 mg (이론의 70%)의 표제 화합물의 보호된 중간체였다.
이들 32.5 mg의 중간체를 10 ml 메탄올에서 용해시키고, 2 mg 10% 팔라듐/활성탄을 부가한 후, 30 분 동안 실온에서 표준 수소 압력 하에서 수소첨가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 진공에서 제거했다. 디옥산/물 1:1로부터 잔여물을 동결건조한 후, 26　mg (이론의 99%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.76 min; MS (ESIpos): m/z = 1014 (M+H)+.
실시예 162
N-[(18S)-18-아미노-18-카복시-12-옥소-3,6,9-트리옥사-13-아자옥타덱-1-일]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct01089
3.5 mg (3 μmol)의 중간체 202를 2 ml DMF에서 취하고 0.8 mg (3 μmol) N2-(tert-부톡시카보닐)-L-일신 및 1.6 μl (10 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 실온에서 및 그 다음 진공에서 농축했다. 잔여물을 아세토니트릴/물 1:1에서 취하고, 트리플루오로아세트산으로 pH 2로 조정하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 1 mg (이론의 25%)의 표제 화합물의 보호된 중간체였고 그 다음 이것을 500 μl 디클로로메탄에서 취하고 500 μl 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 반응 혼합물을 농축하고, 아세토니트릴/물 1:1로부터 잔여물의 동결건조 후, 1 mg (이론의 89%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.82 min; MS (ESIpos): m/z = 1173 (M+H)+.
실시예 163
Figure pct01090
DPBS 중 70 mg 항-C4.4a M31-B01 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 12.2 mg/ml
약물/mAb 비: 1.5
실시예 164
Figure pct01091
단백질 농도: 0.87 mg/ml
약물/mAb 비: 5.8
실시예 165
Figure pct01092
단백질 농도: 1.16 mg/ml
약물/mAb 비: 3.1
실시예 166
Figure pct01093
단백질 농도: 1.24 mg/ml
약물/mAb 비: 1.6
실시예 167
Figure pct01094
단백질 농도: 0.88 mg/ml
약물/mAb 비: 6.9
실시예 168
Figure pct01095
단백질 농도: 1.2 mg/ml
약물/mAb 비: 2.8
실시예 169
Figure pct01096
단백질 농도: 0.9 mg/ml
약물/mAb 비: 3.9
실시예 170
Figure pct01097
단백질 농도: 0.52 mg/ml
약물/mAb 비: 1.6
실시예 171
Figure pct01098
단백질 농도: 0.47 mg/ml
약물/mAb 비: 6.6
실시예 172
Figure pct01099
단백질 농도: 0.77 mg/ml
약물/mAb 비: 6.9
실시예 173
Figure pct01100
단백질 농도: 0.47 mg/ml
약물/mAb 비: 4.0
실시예 174
Figure pct01101
단백질 농도: 1.46 mg/ml
약물/mAb 비: 2.5
실시예 175
Figure pct01102
단백질 농도: 0.45 mg/ml
약물/mAb 비: 3.3
실시예 176
Figure pct01103
단백질 농도: 0.98 mg/ml
약물/mAb 비: 3.6
실시예 177
Figure pct01104
DPBS 중 70 mg 항-C4.4a M31-B01 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 9.42 mg/ml
약물/mAb 비: 4.1
실시예 178
Figure pct01105
단백질 농도: 0.65 mg/ml
약물/mAb 비: 1.8
실시예 179
Figure pct01106
단백질 농도: 1.07 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 180
Figure pct01107
단백질 농도: 0.47 mg/ml
약물/mAb 비: 4.4
실시예 181
Figure pct01108
단백질 농도: 0.43 mg/ml
약물/mAb 비: 4.8
실시예 182
Figure pct01109
단백질 농도: 1.01 mg/ml
약물/mAb 비: 2.6
실시예 183
Figure pct01110
단백질 농도: 0.53 mg/ml
약물/mAb 비: 0.6
실시예 184
Figure pct01111
단백질 농도: 0.55 mg/ml
약물/mAb 비: 1.3
실시예 185
Figure pct01112
단백질 농도: 0.65 mg/ml
약물/mAb 비: 1.1
실시예 186
Figure pct01113
단백질 농도: 1.04
약물/mAb 비: 3.5
실시예 187
Figure pct01114
단백질 농도: 0.62 mg/ml
약물/mAb 비: 2.4
실시예 188
Figure pct01115
DPBS 중 90 mg 항-C4.4a M31-B01 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 11.2 mg/ml
약물/mAb-비: 2.3
실시예 189
Figure pct01116
단백질 농도: 1.11 mg/ml
약물/mAb-비: 2.4
실시예 190
Figure pct01117
DPBS 중 70 mg 항-C4.4a M31-B01 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 10.7 mg/ml
약물/mAb 비: 2.2
실시예 191
Figure pct01118
단백질 농도: 0.87 mg/ml
약물/mAb 비: 1.8
실시예 192
Figure pct01119
단백질 농도: 1.3 mg/ml
약물/mAb 비: 2.1
실시예 193
Figure pct01120
단백질 농도: 1.3 mg/ml
약물/mAb 비: 0.3
실시예 194
Figure pct01121
DPBS 중 70 mg 항-C4.4a M31-B01 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 12.0 mg/ml
약물/mAb 비: 3.2
실시예 195
Figure pct01122
DPBS 중 90 mg 항-C4.4a M31-B01 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 10.2 mg/ml
약물/mAb 비: 4.3
실시예 196
Figure pct01123
단백질 농도: 1.37 mg/ml
약물/mAb 비: 2.6
실시예 197
Figure pct01124
단백질 농도: 1.14 mg/ml
약물/mAb 비: 2.0
실시예 198
Figure pct01125
단백질 농도: 1.07 mg/ml
약물/mAb 비: 3.5
실시예 199
Figure pct01126
단백질 농도: 1.14 mg/ml
약물/mAb 비: 1.9
실시예 200
Figure pct01127
단백질 농도: 1.22 mg/ml
약물/mAb 비: 3.3
실시예 201
Figure pct01128
단백질 농도: 1.3 mg/ml
약물/mAb 비: 3.2
실시예 202
Figure pct01129
단백질 농도: 1.23 mg/ml
약물/mAb 비: 3.3
실시예 203
Figure pct01130
단백질 농도: 1.64 mg/ml
약물/mAb 비: 1.8
실시예 204
Figure pct01131
단백질 농도: 1.07 mg/ml
약물/mAb 비: 3.1
실시예 205
Figure pct01132
단백질 농도: 1.14 mg/ml
약물/mAb 비: 2.3
실시예 206
Figure pct01133
단백질 농도: 1.23 mg/ml
약물/mAb 비: 3.4
실시예 207
Figure pct01134
단백질 농도: 1.22 mg/ml
약물/mAb 비: 2.5
실시예 208
Figure pct01135
단백질 농도: 1.22 mg/ml
약물/mAb 비: 2.4
실시예 209
Figure pct01136
단백질 농도: 1.32 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 210
Figure pct01137
단백질 농도: 1.44 mg/ml
약물/mAb 비: 2.3
실시예 211
Figure pct01138
DPBS 중 250 mg 항-C4.4a B01-10 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 12.8 mg/ml
약물/mAb 비: 5.2
실시예 212
Figure pct01139
단백질 농도: 0.9 mg/ml
약물/mAb 비: 2
실시예 213
Figure pct01140
DPBS 중 250 mg 항-C4.4a B01-3 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 8.0 mg/ml
약물/mAb 비: 4.5
실시예 214
Figure pct01141
DPBS 중 250 mg 항-C4.4a B01-10 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 12.3 mg/ml
약물/mAb 비: 5.2
실시예 215
Figure pct01142
DPBS 중 250 mg 항-C4.4a B01-10 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 10.2 mg/ml
약물/mAb 비: 4.4
실시예 216
Figure pct01143
DPBS 중 50 mg 항-C4.4a B01-3 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 11.5 mg/ml
약물/mAb 비: 5.2
실시예 217
Figure pct01144
DPBS 중 250 mg 항-C4.4a D02-6 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 13 mg/ml
약물/mAb 비: 5.2
실시예 218
Figure pct01145
DPBS 중 250 mg 항-C4.4a B01-3 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 10.3 mg/ml
약물/mAb 비: 4.9
실시예 219
Figure pct01146
단백질 농도: 0.88 mg/ml
약물/mAb 비: 3.2
실시예 220
Figure pct01147
단백질 농도: 1.18 mg/ml
약물/mAb 비: 3.4
실시예 221
Figure pct01148
단백질 농도: 1.23 mg/ml
약물/mAb 비: 3.0
실시예 222
Figure pct01149
단백질 농도: 1.3 mg/ml
약물/mAb 비: 3.3
실시예 223
Figure pct01150
단백질 농도: 1.11 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 224
Figure pct01151
단백질 농도: 1.25 mg/ml
약물/mAb 비: 2.4
실시예 225
Figure pct01152
단백질 농도: 0.88 mg/ml
약물/mAb 비: 5.0
실시예 226
Figure pct01153
단백질 농도: 1.23 mg/ml
약물/mAb 비: 3.3
실시예 227
Figure pct01154
단백질 농도: 0.93 mg/ml
약물/mAb 비: 1.8
실시예 228
Figure pct01155
단백질 농도: 0.85 mg/ml
약물/mAb 비: 5.3
실시예 229
Figure pct01156
단백질 농도: 1.51 mg/ml
약물/mAb 비: 1.4
실시예 230
Figure pct01157
1DPBS 중 50 mg 항-C4.4a B01-3 (pH 7.4)을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 11.0 mg/ml
약물/mAb 비: 4.5
실시예 231
Figure pct01158
단백질 농도: 1.2 mg/ml
약물/mAb 비: 3.3
실시예 232
Figure pct01159
단백질 농도: 1.25 mg/ml
약물/mAb 비: 3.1
실시예 233
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01160
10 mg (10 μmol)의 중간체 157을 5.2 ml DMF에서 취하고 2.28 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 5.8 mg (이론의 48%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.45 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.74 min; MS (ESIpos): m/z = 1184 (M+H)+.
실시예 234
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01161
10 mg (10 μmol)의 중간체 113을 5.2 ml DMF에서 취하고 2.28 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 6 mg (이론의 54%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.77 min; MS (ESIpos): m/z = 1185 (M+H)+.
실시예 235
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01162
9 mg (8.3 μmol)의 중간체 132를 4 ml DMF에서 취하고 3 mg (24.4 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 6.8 mg (이론의 68%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.78 min; MS (ESIpos): m/z = 1227 (M+H)+.
실시예 236
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01163
10 mg (10 μmol)의 중간체 106을 5.8 ml DMF에서 취하고 2.5 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 5.2 mg (이론의 46%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 min;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.71 min; MS (ESIpos): m/z = 1070 (M+H)+.
실시예 237
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01164
10 mg (10 μmol)의 중간체 124를 4 ml DMF에서 취하고 2.5 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 7.2 mg (이론의 64%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.8 min; MS (ESIpos): m/z = 1071 (M+H)+.
실시예 238
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01165
10 mg (10 μmol)의 중간체 125를 4 ml DMF에서 취하고 2.4 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 7.7 mg (이론의 69%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 min;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.91 min; MS (ESIpos): m/z = 1140 (M+H)+.
실시예 239
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01166
10 mg (10 μmol)의 중간체 160을 3 ml DMF에서 취하고 2.1 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 8.1 mg (이론의 73%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 min; MS (ESIpos): m/z = 1274 (M+H)+.
실시예 240
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01167
3.5 mg (3 μmol)의 중간체 159을 1 ml DMF에서 취하고 0.76 mg (6 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 2.6 mg (이론의 65%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.75 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 min; MS (ESIpos): m/z = 1235 (M+H)+.
실시예 241
N-(6-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01168
3.6 mg (3 μmol)의 중간체 129을 1 ml DMF에서 취하고 0.77 mg (6 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 1.55 mg (이론의 39%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 min; MS (ESIpos): m/z = 1255 (M+H)+.
실시예 242
Figure pct01169
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 0.83 mg/ml
약물/mAb 비: 1.6
실시예 243
Figure pct01170
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.59 mg/ml
약물/mAb 비: 3.1
약물/mAb 비: 2.9
실시예 244
Figure pct01171
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.25 mg/ml
약물/mAb 비: 4.0
실시예 245
Figure pct01172
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.27 mg/ml
약물/mAb 비: 3.6
실시예 246
Figure pct01173
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.54 mg/ml
약물/mAb 비: 4.7
실시예 247
Figure pct01174
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.73 mg/ml
약물/mAb 비: 4.7
실시예 248
Figure pct01175
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 반응 혼합물을 초원심분리로 농축하고 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.66 mg/ml
약물/mAb 비: 1.3
실시예 249
Figure pct01176
단백질 농도: 2.11 mg/ml
약물/mAb 비: 5.5
실시예 250
Figure pct01177
단백질 농도: 1.53 mg/ml
약물/mAb 비: 3.4
실시예 251
Figure pct01178
단백질 농도: 1.5 mg/ml
약물/mAb 비: 0.2
실시예 252
Figure pct01179
단백질 농도: 1.32 mg/ml
약물/mAb 비: 0.1
실시예 253
Figure pct01180
PBS 중 80 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다., PBS로 다시 희석하고 재농축했다.
단백질 농도: 10.3 mg/ml
약물/mAb 비: 3.1
실시예 254
Figure pct01181
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.09 mg/ml
약물/mAb 비: 1.8
실시예 255
Figure pct01182
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.52 mg/ml
약물/mAb 비: 4.2
실시예 256
Figure pct01183
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.1 mg/ml
약물/mAb 비: 3.3
실시예 257
Figure pct01184
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.43 mg/ml
약물/mAb 비: 4.8
실시예 258
Figure pct01185
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다. PBS로 다시 희석하고 재농축했다.
단백질 농도: 1.36 mg/ml
약물/mAb 비: 4.6
실시예 259
Figure pct01186
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.33 mg/ml
약물/mAb 비: 4.0
실시예 260
Figure pct01187
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.33 mg/ml
약물/mAb 비: 4.6
실시예 261
Figure pct01188
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.47 mg/ml
약물/mAb 비: 1.6
실시예 262
Figure pct01189
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.49 mg/ml
약물/mAb 비: 4.5
실시예 263
Figure pct01190
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.29 mg/ml
약물/mAb 비: 3.3
실시예 264
Figure pct01191
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.74 mg/ml
약물/mAb 비: 3.5
실시예 265
Figure pct01192
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.09 mg/ml
약물/mAb 비: 3.2
실시예 266
Figure pct01193
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.63 mg/ml
약물/mAb 비: 0.2
실시예 267
Figure pct01194
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.41 mg/ml
약물/mAb 비: 7.6
실시예 268
Figure pct01195
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 2.0 mg/ml
약물/mAb 비: 1.6
실시예 269
Figure pct01196
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.67 mg/ml
약물/mAb 비: 2.8
실시예 270
Figure pct01197
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.91 mg/ml
약물/mAb 비: 5.3
실시예 271
Figure pct01198
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.82 mg/ml
약물/mAb 비: 4.6
실시예 272
Figure pct01199
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.9 mg/ml
약물/mAb 비: 4.2
실시예 273
Figure pct01200
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.89 mg/ml
약물/mAb-비: 2.7
실시예 274
Figure pct01201
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.73 mg/ml
약물/mAb-비: 2.3
실시예 275
Figure pct01202
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.71 mg/ml
약물/mAb-비: 3.3
실시예 276
Figure pct01203
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.47 mg/ml
약물/mAb 비: 3.9
실시예 277
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct01204
15.5 mg (15 μmol)의 중간체 210을 5 ml DMF에서 취하고 혼합된 with 4.4 mg (18 μmol) N2-(tert.-부톡시카보닐)-L-일신뿐만 아니라 7.7 μL (44 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 실온에서 및 그 다음 진공에서 농축했다. 다음으로, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 14 mg (이론의 81%)의 표제 화합물의 보호된 중간체였고, 이것을 차후에 1 ml 디클로로메탄에서 취하고 1 ml 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 배치를 농축하고, 아세토니트릴/물 (1:1)로부터 잔여물의 동결건조 후, 15 mg (이론의 97%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.79 min; MS (ESIpos): m/z = 1083 (M+H)+.
실시예 278
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01205
40 mg (40 μmol)의 중간체 227을 5 ml DMF에서 취하고 혼합된 with 11.5 mg (40 μmol) N2-[(벤질옥시)카보닐]-L-일신뿐만 아니라 13 μl (80 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 32.5 mg (이론의 70%)의 표제 화합물의 보호된 중간체였다.
이들 32.5 mg의 중간체를 10 ml 메탄올에서 용해시키고, 2 mg 10% 팔라듐/활성탄을 부가한 후, 30 분 동안 실온에서 표준 수소 압력 하에서 수소첨가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 진공에서 제거했다. 디옥산/물 1:1로부터 잔여물을 동결건조한 후, 26　mg (이론의 99%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.76 min; MS (ESIpos): m/z = 1014 (M+H)+.
실시예 279
N-[(18S)-18-아미노-18-카복시-12-옥소-3,6,9-트리옥사-13-아자옥타덱-1-일]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct01206
3.5 mg (3 μmol)의 중간체 202를 2 ml DMF에서 취하고 혼합된 with 0.8 mg (3 μmol) N2-(tert. 부톡시카보닐)-L-일신뿐만 아니라 1.6 μl (10 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 실온에서 및 그 다음 진공에서 농축했다. 다음으로, 잔여물을 아세토니트릴/물 (1:1)에서 취하고, 2 with 트리플루오로아스트산으로 pH로 조정하고, 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 1 mg (이론의 25%)의 표제 화합물의 보호된 중간체였고, 이것을 차후에 500 μl 디클로로메탄에서 취하고 500 μl 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 배치를 농축하고, 아세토니트릴/물 (1:1)로부터 잔여물의 동결건조 후, 1 mg (이론의 89%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.82 min; MS (ESIpos): m/z = 1173 (M+H)+.
실시예 280
Figure pct01207
단백질 농도: 0.9 mg/ml
약물/mAb 비: 2.8
실시예 281
Figure pct01208
단백질 농도: 1.08 mg/ml
약물/mAb 비: 1.1
실시예 282
Figure pct01209
단백질 농도: 0.98 mg/ml
약물/mAb 비: 2.4
실시예 283
Figure pct01210
단백질 농도: 1.23 mg/ml
약물/mAb 비: 4.6
실시예 284
Figure pct01211
100 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다. 그 다음 용액을 다시 희석하고, 재농축하고, 이 과정을 한번 더 반복했다.
단백질 농도: 9.2 mg/ml
약물/mAb 비: 3.2
실시예 285
Figure pct01212
단백질 농도: 1.21 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 286
Figure pct01213
단백질 농도: 1.26 mg/ml
약물/mAb 비: 4.2
실시예 287
Figure pct01214
단백질 농도: 1.01 mg/ml
약물/mAb 비: 3.0
실시예 288
Figure pct01215
단백질 농도: 1.28 mg/ml
약물/mAb 비: 2.3
실시예 289
Figure pct01216
단백질 농도: 1.12 mg/ml
약물/mAb 비: 2.6
실시예 290
Figure pct01217
단백질 농도: 1.4 mg/ml
약물/mAb 비: 3.3
실시예 291
Figure pct01218
단백질 농도: 1.3 mg/ml
약물/mAb 비: 2.5
실시예 292
Figure pct01219
단백질 농도: 1.27 mg/ml
약물/mAb 비: 2.6
실시예 293
Figure pct01220
단백질 농도: 1.55 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 294
Figure pct01221
100 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 11.8 mg/ml
약물/mAb 비: 4.4
실시예 295
Figure pct01222
100 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 12.29 mg/ml
약물/mAb 비: 3.8
실시예 296
Figure pct01223
단백질 농도: 1.1 mg/ml
약물/mAb 비: 1.6
실시예 297
Figure pct01224
단백질 농도: 1.00 mg/ml
약물/mAb 비: 1.9
실시예 298
Figure pct01225
100 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 11.5 mg/ml
약물/mAb 비: 4.9
실시예 299
Figure pct01226
단백질 농도: 0.98 mg/ml
약물/mAb 비: 2.5
실시예 300
Figure pct01227
단백질 농도: 0.99 mg/ml
약물/mAb 비: 2.0
실시예 301
Figure pct01228
단백질 농도: 0.87 mg/ml
약물/mAb 비: 2.1
실시예 302
Figure pct01229
100 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 12.2 mg/ml
약물/mAb 비: 4.6
실시예 303
Figure pct01230
단백질 농도: 1.58 mg/ml
약물/mAb 비: 1.9
실시예 304
Figure pct01231
70 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 11.5 mg/ml
약물/mAb 비: 3.9
실시예 305
Figure pct01232
60 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 11.6 mg/ml
약물/mAb 비: 3.9
실시예 306
Figure pct01233
60 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축했다.
단백질 농도: 10 mg/ml
실시예 307
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01234
10 mg (10μmol)의 중간체 113을 5.2 ml DMF에서 취하고 2.28 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 배치를 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 6 mg (이론의 54%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.77 min; MS (ESIpos): m/z = 1185 (M+H)+.
실시예 308
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01235
9 mg (8.3 μmol)의 중간체 132를 4 ml DMF에서 취하고 3 mg (24.4 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 배치를 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 6.8 mg (이론의 68%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.78 min; MS (ESIpos): m/z = 1227 (M+H)+.
실시예 309
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01236
10 mg (10 μmol)의 중간체 106을 5.8 ml DMF에서 취하고 2.5 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 배치를 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 5.2 mg (이론의 46%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 min;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.71 min; MS (ESIpos): m/z = 1070 (M+H)+.
실시예 310
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01237
10 mg (10 μmol)의 중간체 124를 4 ml DMF에서 취하고 2.5 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 배치를 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 7.2 mg (이론의 64%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.8 min; MS (ESIpos): m/z = 1071 (M+H)+.
실시예 311
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01238
10 mg (10 μmol)의 중간체 125를 4 ml DMF에서 취하고 2.4 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 배치를 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 7.7 mg (이론의 69%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 min;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.91 min; MS (ESIpos): m/z = 1140 (M+H)+.
실시예 312
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01239
10 mg (10 μmol)의 중간체 160을 3 ml DMF에서 취하고 2.1 mg (20 μmol) L-시스테인과 혼합했다. 배치를 2시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 8.1 mg (이론의 73%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 min; MS (ESIpos): m/z = 1274 (M+H)+.
실시예 313
Figure pct01240
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.23 mg/ml
약물/mAb 비: ~1-1.5
실시예 314
Figure pct01241
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.98 mg/ml
약물/mAb 비: 2.8
실시예 315
Figure pct01242
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.0 mg/ml
약물/mAb 비: 3
실시예 316
Figure pct01243
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.59 mg/ml
약물/mAb 비: 3.1
실시예 317
Figure pct01244
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.75 mg/ml
약물/mAb 비: 3.3
실시예 318
Figure pct01245
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.54 mg/ml
약물/mAb 비: 3.5
실시예 319
Figure pct01246
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 2 mg/ml
약물/mAb 비: 1.1
실시예 320
Figure pct01247
단백질 농도: 1.66 mg/ml
약물/mAb 비: 4.9
실시예 321
Figure pct01248
단백질 농도: 1.7 mg/ml
약물/mAb 비: 3.0
실시예 322
Figure pct01249
단백질 농도: 1.08 mg/ml
약물/mAb 비: 1.9
실시예 323
Figure pct01250
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.57 mg/ml
약물/mAb 비: 2.9
실시예 324
Figure pct01251
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.7 mg/ml
약물/mAb 비: 1.4
실시예 325
Figure pct01252
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.53 mg/ml
약물/mAb 비: 3.6
실시예 326
Figure pct01253
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.77 mg/ml
약물/mAb 비: 6.1
실시예 327
Figure pct01254
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.14 mg/ml
약물/mAb 비: 2.5
실시예 328
Figure pct01255
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.57 mg/ml
약물/mAb 비: 3.8
실시예 329
Figure pct01256
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.72 mg/ml
약물/mAb 비: 3.9
실시예 330
Figure pct01257
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.56 mg/ml
약물/mAb 비: 2.9
실시예 331
Figure pct01258
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.81 mg/ml
약물/mAb 비: 3.5
실시예 332
Figure pct01259
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.54 mg/ml
약물/mAb 비: 1.3
실시예 333
Figure pct01260
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.72 mg/ml
약물/mAb 비: 4.0
실시예 334
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct01261
15.5 mg (15 μmol)의 중간체 210을 5 ml DMF에서 취하고 혼합된 with 4.4 mg (18 μmol) N2-(tert.-부톡시카보닐)-L-일신뿐만 아니라 7.7 μl (44 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 실온에서 및 그 다음 진공에서 농축했다. 다음으로, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 14 mg (이론의 81%)의 표제 화합물의 보호된 중간체를 수득하고, 그 다음 이것을 1 ml 디클로로메탄에서 취하고 1 ml 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 반응 혼합물을 농축하고, 아세토니트릴/물 (1:1)로부터 잔여물의 동결건조 후, 15 mg (이론의 97%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.79 min; MS (ESIpos): m/z = 1083 (M+H)+.
실시예 335
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01262
40 mg (40 μmol)의 중간체 227을 5 ml DMF에서 취하고 혼합된 with 11.5 mg (40 μmol) N2-[(벤질옥시)카보닐]-L-일신뿐만 아니라 13 μl (80 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 32.5 mg (이론의 70%)의 표제 화합물의 보호된 중간체였다.
32.5 mg의 이러한 중가체를 10 ml 메탄올에서 용해시키고, 2 mg 10% 팔라듐/활성탄을 부가한 후, 30 분 동안 실온에서 표준 수소 압력 하에서 수소첨가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 진공에서 제거했다. 디옥산/물 (1:1)로부터 잔여물의 동결건조 후, 산출물은 26　mg (이론의 99%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.76 min; MS (ESIpos): m/z = 1014 (M+H)+.
실시예 336
N-[(18S)-18-아미노-18-카복시-12-옥소-3,6,9-트리옥사-13-아자옥타덱-1-일]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct01263
3.5 mg (3 μmol)의 중간체 202를 2 ml DMF에서 취하고 0.8 mg (3 μmol) N2-(tert.-부톡시카보닐)-L-일신뿐만 아니라 1.6 μl (10 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 실온에서 및 그 다음 진공에서 농축했다. 다음으로, 잔여물을 아세토니트릴/물 (1:1)에서 취하고, 트리플루오로아세트산으로 pH 2로 조정하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 1 mg (이론의 25%)의 표제 화합물의 보호된 중간체를 수득하고, 이것을 차후에 500 μl 디클로로메탄에서 취하고 500 μl 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 반응 혼합물을 농축하고, 아세토니트릴/물 (1:1)로부터 잔여물의 동결건조 후, 산출물은 1 mg (이론의 89%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.82 min; MS (ESIpos): m/z = 1173 (M+H)+.
실시예 337
Figure pct01264
PBS 중 5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.57 mg/ml
약물/mAb 비: 4.6
실시예 338
Figure pct01265
5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.48 mg/ml
약물/mAb 비: 3.4
실시예 339
Figure pct01266
PBS 중 5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.21 mg/ml
약물/mAb 비: 2.4
실시예 340
Figure pct01267
PBS 중 5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.75 mg/ml
약물/mAb 비: 3.4
실시예 341
Figure pct01268
PBS 중 5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.69 mg/ml
약물/mAb 비: 2.9
실시예 342
Figure pct01269
5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.27 mg/ml
약물/mAb 비: 2.9
실시예 343
Figure pct01270
PBS 중 5 mg 파니투무맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.27 mg/ml
약물/mAb 비: 검출불가능
실시예 344
Figure pct01271
5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.55 mg/ml
약물/mAb 비: 3.1
실시예 345
Figure pct01272
PBS 중 5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.67 mg/ml
약물/mAb 비: 3.5
실시예 346
Figure pct01273
PBS 중 5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.44 mg/ml
약물/mAb 비: 2.5
실시예 347
Figure pct01274
PBS 중 5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.73 mg/ml
약물/mAb 비: 1.2
실시예 348
Figure pct01275
PBS 중 2 mg 항-PDL1을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.04 mg/ml
약물/mAb 비: 4.8
실시예 349
Figure pct01276
PBS 중 3 mg 항-PDL1을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.7 mg/ml
약물/mAb 비: 2.3
실시예 350
Figure pct01277
PBS 중 2 mg 항-ICOSLG를 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.77 mg/ml
약물/mAb 비: 3.7
실시예 351
Figure pct01278
PBS 중 4 mg 항-FGFR3을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.41 mg/ml
약물/mAb 비: 1.8
실시예 352
Figure pct01279
PBS 중 3 mg 헤르셉틴을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.49 mg/ml
약물/mAb 비: 2.3
실시예 353
Figure pct01280
PBS 중 5 mg 헤르셉틴을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.62 mg/ml
약물/mAb 비: 5.0
실시예 354
Figure pct01281
PBS 중 5 mg 헤르셉틴을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.63 mg/ml
약물/mAb 비: 2.4
실시예 355
Figure pct01282
PBS 중 5 mg 헤르셉틴을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.65 mg/ml
약물/mAb 비: 3.9
실시예 356
Figure pct01283
PBS 중 5 mg 헤르셉틴을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.78 mg/ml
약물/mAb 비: 3.1
실시예 357
Figure pct01284
PBS 중 5 mg 헤르셉틴을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.72 mg/ml
약물/mAb 비: 3.2
실시예 358
Figure pct01285
PBS 중 5 mg 헤르셉틴을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질농도: 1.95 mg/ml
약물/mAb-비: ~3.7
실시예 359
Figure pct01286
PBS 중 5 mg 헤르셉틴을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.79 mg/ml
약물/mAb 비: 9.1
실시예 360
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct01287
15.5 mg (15 μmol)의 중간체 210을 5 ml DMF에서 취하고 4.4 mg (18 μmol) N2-(tert.-부톡시카보닐)-L-일신뿐만 아니라 7.7 μl (44 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 14 mg (이론의 81%)의 표제 화합물의 보호된 중간체를 수득하고, 그 다음 이것을 1 ml 디클로로메탄에서 취하고 1 ml 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 배치를 농축하고, 아세토니트릴/물 (1:1)로부터 잔여물의 동결건조 후, 산출물은 15 mg (이론의 97%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.79 min; MS (ESIpos): m/z = 1083 (M+H)+.
실시예 361
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct01288
40 mg (40 μmol)의 중간체 227을 5 ml DMF에서 취하고 11.5 mg (40 μmol) N2-[(벤질옥시)카보닐]-L-일신뿐만 아니라 13 μl (80 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 32.5 mg (이론의 70%)의 표제 화합물의 보호된 중간체였다.
32.5 mg의 이러한 중간체를 10 ml 메탄올에서 취하고, 2 mg 10% 팔라듐/활성탄을 부가한 후, 실온에서 수소 정상 압력 하에서 수소첨가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 진공에서 제거했다. 디옥산/물 (1:1)로부터 잔여물의 동결건조 후, 산출물은 26　mg (이론의 99%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.76 min; MS (ESIpos): m/z = 1014 (M+H)+.
실시예 362
N-[(18S)-18-아미노-18-카복시-12-옥소-3,6,9-트리옥사-13-아자옥타덱-1-일]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct01289
3.5 mg (3 μmol)의 중간체 202를 2 ml DMF에서 취하고 0.8 mg (3 μmol) N2-(tert.-부톡시카보닐)-L-일신뿐만 아니라 1.6 μl (10 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 진공에서 농축했다. 잔여물을 아세토니트릴/물 (1:1)에서 취하고, 트리플루오로아세트산으로 pH 2로 조정하고, 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 1 mg (이론의 25%)의 표제 화합물의 보호된 중간체였고, 이것을 차후에 500 μl 디클로로메탄에서 취하고 500μl 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 배치를 농축하고, 아세토니트릴/물 (1:1)로부터 잔여물의 동결건조 후, 산출물은 1 mg (이론의 89%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.82 min; MS (ESIpos): m/z = 1173 (M+H)+.
실시예 363
Figure pct01290
PBS 중 2.2 mg 항-TYRP1을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.14 mg/ml
약물/mAb 비: 4.1
실시예 364
Figure pct01291
3 mg 항-글리피칸-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.17 mg/ml
약물/mAb 비: 3.0
실시예 365
Figure pct01292
PBS 중 3 mg 항-글리피칸-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.25 mg/ml
약물/mAb 비: 2.9
실시예 366
Figure pct01293
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 0.81 mg/ml
약물/mAb 비: 2.5
실시예 367
Figure pct01294
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.06 mg/ml
약물/mAb 비: 1.8
실시예 368
Figure pct01295
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.36 mg/ml
약물/mAb 비: 7.2
실시예 369
Figure pct01296
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.57 mg/ml
약물/mAb 비: 2.9
실시예 370
Figure pct01297
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 0.89 mg/ml
약물/mAb 비: 1.8
실시예 371
Figure pct01298
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 0.57 mg/ml
약물/mAb 비: 1.5
실시예 372
Figure pct01299
5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.39 mg/ml
약물/mAb 비: 7.1
실시예 373
Figure pct01300
5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.54 mg/ml
약물/mAb 비: 2.4
실시예 374
Figure pct01301
PBS 중 5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.55 mg/ml
약물/mAb-비: 1.8
실시예 375
Figure pct01302
5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.36 mg/ml
약물/mAb 비: 1.9
실시예 376
Figure pct01303
PBS 중 5 mg 세툭시맙을 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.73 mg/ml
약물/mAb-비: 3.7
실시예 377
Figure pct01304
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.44 mg/ml
약물/mAb 비: 2.5
실시예 378
Figure pct01305
PBS 중 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.74 mg/ml
약물/mAb-비: 3.6
실시예 379 (부분입체이성질체 1)
Figure pct01306
PBS 중 중간체 247a 및 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.57 mg/ml
약물/mAb 비: 4.2
실시예 380 (부분입체이성질체 2)
Figure pct01307
PBS 중 중간체 247a 및 5 mg MF-Ta를 커플링을 위해 현재 사용하고, 그 다음 Sephadex 칼럼 상에서 정제하고, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.42 mg/ml
약물/mAb 비: 4.0
실시예 381
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-트레오닐-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct01308
8.6 mg (8 μmol)의 중간체 240을 5 ml DMF에서 취하고 4.0 mg (16 μmol) N2-(tert.-부톡시카보닐)-L-일신뿐만 아니라 2 μl (16 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반하고, 그 다음 동일한 양의 N2-(tert.-부톡시카보닐)-L-일신 및 N,N-디이소프로필에틸아민과 다시 혼합하고, 밤새 교반하고, 실온에서. 그 다음 배치를 진공에서 농축했다. 다음으로, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 산출물은 7 mg (이론의 72%)의 표제 화합물의 보호된 중간체였고, 그 다음 이것을 1 ml의 디클로로메탄에서 취하고 0.5 ml 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 배치를 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 고진공 하에서 건조한 후, 산출물은 3.3 mg (47% of 이론)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.8 min; MS (ESIpos): m/z = 1084 (M+H)+.
실시예 382
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct01309
8 mg (8 μmol)의 중간체 242을 3 ml DMF에서 취하고 2.9 mg (12 μmol) N2-(tert.-부톡시카보닐)-L-일신뿐만 아니라 2.7 μl (16 μmol) N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 동일한 양의 N2-(tert.-부톡시카보닐)-L-일신 및 N,N-디이소프로필에틸아민과 다시 혼합하고, 그 다음 추가 4 시간 동안 실온에서 교반했다. 그 다음 배치를 진공에서 농축했다. 다음으로, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조한 다음, 산출물은 6.5 mg (이론의 72%)의 표제 화합물의 보호된 중간체였고, 그 다음 이것을 5 ml 디클로로메탄에서 취하고 0.75 ml 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 배치를 농축하고, 디옥산/물로부터 잔여물의 동결건조 후, 산출물은 5 mg (이론의 76%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.69 min; MS (ESIpos): m/z = 1059 (M+H)+.
실시예 383
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(4-하이드록시페닐)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct01310
38 mg (41 μmol)의 중간체 248을 먼조 N-하이드록시석신이마이드 에스테르로 전환시켰다. 72 mg의 수득한 미가공 생성물을 5 ml DMF에서 취하고 24 mg (100 μmol) N2-(tert.-부톡시카보닐)-L-일신뿐만 아니라 23 μl N,N-디이소프로필에틸아민와 혼합했다. 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 그 다음 16 mg N2-(tert.-부톡시카보닐)-L-일신 및 12 μl N,N-디이소프로필에틸아민와 다시 혼합하고 마지막으로 추가 2 시간 동안 초음파 배쓰에서 처리했다. 그 다음 배치를 진공에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조 후, 산출물은 20 mg (이론의 50%)의 표제 화합물의 보호된 중간체였다.
15 mg (12 μmol)의 이러한 중간체를 3 ml 디클로로메탄에서 취하고 1 ml 트리플루오로아세트산으로 혼합했다. 40 분 동안 실온에서 교반한 후, 추가 1.5 ml 트리플루오로아세트산을 부가하고, 배치를 1 시간 동안 초음파 배쓰에서 처리했다. 그 다음 배치를 농축하고, 디옥산/물로부터 잔여물의 동결건조 후, 산출물은 13 mg (이론의 90%)의 표제 화합물이었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.5 min;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.68 min; MS (ESIpos): m/z = 990 (M+H)+.
실시예 384
Figure pct01311
PBS 중 5 mg 항-CA9를 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.4 mg/ml
약물/mAb 비: 3.0
실시예 385
Figure pct01312
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.48 mg/ml
약물/mAb 비: 2.4
실시예 386
Figure pct01313
PBS 중 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고, 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.43 mg/ml
약물/mAb-비: 3.6
실시예 387 부분입체이성질체 1
Figure pct01314
PBS 중 중간체 247a 및 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.45 mg/ml
약물/mAb 비: 3.8
실시예 388 부분입체이성질체 2
Figure pct01315
PBS 중 중간체 247a 및 5 mg 항-C4.4a B01-3을 커플링을 위해 현재 사용하고, Sephadex 칼럼 상에서 정제한 후, 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 다시 희석했다.
단백질 농도: 1.42 mg/ml
약물/mAb 비: 4.0
C. 생물학적 효능의 평가
본 발명에 따른 화합물의 생물학적 활성은 당해분야의 숙련자가 잘 알고 있는 것과 같은, 시험관내 및 생체내 시험에 의해 입증될 수 있다.
본 발명의 화합물의 생물학적 효과는 하기에 기재된 검정에서 실증되었다
C-1.1 시험관내 세포 증식 시험
인간 EGFR-발현 종양 세포가 항-EGFR ADC의 효능을 시험하는데 사용된다. 상기 세포는, 예를 들어, 발현이 높은 NCI-H292 또는 A431일 수 있다. HT29와 같이 EGFR 발현이 낮은 세포 또는 NCI-H520과 같이 거의 EGFR을 발현하지 않은 세포가 EGFR-의존적 세포독성을 위한 대조군으로서 사용된다.
실험의 설명
1일: 세포를 96-웰 플레이트(Perkin Elmer, white, catalog 6005680)에 100 μL/웰로 배지에 플레이팅한다. 영점 시간을 결정하기 위한 세포를 평행 플레이트에 플레이팅한다. 모든 플레이트를 37℃에서 밤새 배양한다.
2일: 배지 중의 시험 물질의 3배 희석 시리즈를 준비하고, 상기 100 μL의 3배 희석물을 플레이트에 각 웰로 피펫팅한다. 플레이트를 배양기 내에서 37℃에서 96시간 동안 배양한다. 영점 시간 플레이트를 측정한다: 상응하는 웰 내로 100 μL/웰 CTG 용액(Promega Cell Titer Glo 용액(catalog 번호 G755B 및 G756B))을 피펫팅하고 진탕기에서 2분간 그리고 암실에서 +10분간 배양한다. 다음으로, VICTOR V 기기(Perkin Elmer)를 이용하여 발광을 측정한다.
6일: 모든 다른 배치의 측정: 상응하는 웰 내로 100 μL/웰 CTG 용액(Promega Cell Titer Glo 용액(catalog 번호 G755B 및 G756B))을 피펫팅하고 진탕기에서 2분간 그리고 암실에서 +10분간 배양한다. 그리고 나서, VICTOR V 기기(Perkin Elmer)를 이용하여 발광을 측정한다.
발광은 살아있는 세포의 수에 대한 마커로서 사용된다.
영점 시간 플레이트의 측정값을 0으로 하고, 활성 성분 없는 배지에서만 배양된 세포의 측정값을 100%로 한다. 결과는 에스자형 용량-효과 곡선이며, 이로부터 IC50가 결정될 수 있다(그래프패드 프리즘 소프트웨어).
A431: 2500 세포/웰, 배지: DMEM Hams, Biochrom, #FG4815 + 10% FCS
NCI-H292: 2500 세포/웰, 배지: RPMI1640; Biochrom, #FG1215 + 10% FCS
HT29L 2500 세포/웰, 배지: DMEM Hams; Biochrom, #FG4815 + 10% FCS
<1×10-7M에서 세포 증식을 억제하는 물질은 효과적인 것으로 분류된다.
<1×10-9M에서 세포 증식을 억제하는 물질을 특히 효과적인 것으로 분류된다.
하기 표 3은 이 분석으로부터의 대표적인 예시적인 구현예의 IC50 값1 )을 열거한다.
표 3
Figure pct01316
1) 주어진 효능 데이타는 본 명세서의 구체적인 용어들에 기재된 ADC 배치를 기반으로 하고 상이한 약물/항체 비를 갖는 다른 배치에서 벗어날 수 있다.
C-1.2 짧은 물질 배양(펄스 분석)을 이용한 증식 분석의 프로토콜
프로토콜은 전술한 바와 같이 수행되지만 물질은 시험 물질과 함께 4시간 배양 후 흡입에 의해 제거되고 신선한 배지로 대체된다. 분석은 전술한 바와 같이 총 96 시간 이후에 수행된다.
하기 표 4는 이 분석으로부터의 대표적인 예시적인 구현예의 IC50 값1 ,2)을 열거한다.
표 4
Figure pct01317
Figure pct01318
1) 주어진 효능 데이타는 본 명세서의 구체적인 용어들에 기재된 ADC 배치를 기반으로 하고 상이한 약물/항체 비를 갖는 다른 배치에서 벗어날 수 있다.
2) 이것은 2 개의 실험 (A431) 또는 3 개의 (NCI-H292) 실험의 평균을 보여준다.
C-1.3 튜불린 중합에 대한 효과의 측정
암 세포는 증가된 세포 분열의 결과로서 종양이 또한 빈번히 형성되는 변성된 세포이다. 미세소관은 스핀들 장치의 스핀들 섬유를 형성하고 세포 주기의 필수적인 성분이다. 미세소관의 조절된 구성 및 파손은 딸 세포 중에서 염색체의 정확한 분할을 허용하고, 연속적인 동적 과정을 구성한다. 이 동적 과정에 대한 붕괴로 부정확한 세포 분열이 있고 결국 세포 사멸이 생긴다. 그러나 암 세포의 증가된 세포 분열은, 또한 세포를 화학요법의 고정된 성분을 구성하는 스핀들 섬유 독을 향해 특히 민감하게 만든다. 스핀들 섬유 독 예컨대 파클리탁셀 또는 에포틸론은 미세소관의 빈틈없이 증가된 중합 속도로 되고, 한편 빈카 알카로이드 그렇지 않으면 모노메틸-아우리스타틴 E (MMAE)은 미세소관의 빈틈없이 감소된 중합 속도로 된다. 둘 경우에, 세포 주기의 필요한 활력은 비판적으로 파열된다. 본 발명의 문맥에서 조사된 화합물은 미세소관의 중합 속도를 감소시킨다.
튜불린 중합은 세포골격으로부터 "형광-기반 미세소관 중합 검정 키트"를 사용하여 조사되었다 (Denver, Colorado, USA; 주문 번호: BK011). 이 검정과 함께, GTP는 비중합화된 튜불린에 부가되는데, 이는 중합이 동시에 일어나는 것을 허용한다. 검정은 형광단 4',6-디-아미디노-2-페닐인돌 (DAPI)의 튜불린에의 결합을 기반으로 한다. 유리 및 결합된 DAPI는 상이한 방출 스펙트럼을 기반으로 분화될 수 있다. DAPI가 비-중합화된 튜불린과 비교하여 중합화된 튜불린에 대해 유의미하게 높은 친화도를 나타내기 때문에, 튜불린 중합은 결합된 DAPI 형광단의 형광의 증가를 통해 뒤따를 수 있다.
이 검정의 실행에 대해, DMSO에서 용해된 시험 물질은 물 중 그것의 초기 농도 10 mM 내지 1 μm로부터 희석되었다. 완충액 조절 외에, 중합 증가 효과를 갖는 파클리탁셀, 및 중합 억제 효과를 갖는 빈블라스틴은 검정 대조군으로서 부가적으로 시행된다. 측정은 기준 면적의 반을 갖는 96-웰 플레이트를 사용하여 수행되었다. 튜불린 중합의 동력학은 형광계에서 37 ℃에서 1시간 동안 모니터링되었다. 여기 파장은 355 nm이고 방출은 에서 모니터링되었다. 첫 번째 10 분 내에 선형 증가의 영역에 대해, 분당 형광 변화 (ΔF/분)을 계산했는데, 이것는 미세소관의 중합 속도를 나타낸다. 시험 물질의 효능은 중합 속도의 그것의 각 감소을 기반으로 정량화되었다.
1 μm의 농도에서 MMAF의 억제 값은 100%인 것으로 설정된다.
표 5는 대표적인 예에 의해 튜불린 중합의 억제에 대한 데이터를 보여준다.
표 5
Figure pct01319
MMAF 독성기 및 실시예는 그것의 농도의 함수로서 튜불린 중합을 억제한다. 100 μm MMAF에서, 튜불린 중합은 완전히 억제된다. 실시예 115는 1 μm MMAF에 대해 측정된 값의 45%로 1 μm에서 튜불린 중합을 억제한다.
C-1.4 생체내 효능 시험
본 발명에 따른 콘주게이트의 효능을 생체내에서, 예를 들어 이종이식 모델에 의해 시험하였다. 당해분야의 숙련가는 본 발명에 따른 콘주게이트의 효능을 시험하기 위한 최신 방법을 잘 알고 있다(예를 들어, WO 2005081711; Polson 등, Cancer Res. March 15, 2009, 69(6):2358-64 참고). 예를 들어, 결합제의 표적 분자를 발현하는 종양 세포주가 설치류(예컨대, 마우스)에 이식될 것이다. 그리고 나서, 본 발명에 따른 콘주게이트 또는 대조군 항체 또는 등장 식염수 용액이 이식 동물에게 투여될 것이다. 상기 물질은 1회 이상 투여될 것이다. 며칠의 배양 시간 이후, 콘주게이트로 처리된 동물과 대조군으로 처리된 동물을 비교하여 종양 크기가 결정될 것이다.
C-1.4a 마우스에서의 실험 종양의 성장 억제/퇴화
ADC에 대한 항원을 발현하는 인간 종양 세포를 접종을 위해 면역억제된 마우스, 예를 들어, 누드 마우스 또는 SCID 마우스의 옆구리 내로 피하주입한다. 세포 배양물 중에서, 100-1000만 개의 세포를 분리하고, 원심분리하여, 배지 또는 배지/마트리겔로 재현탁한다. 그리고 나서, 세포 현탁액을 마우스 내로 피하 주입한다.
이후, 며칠 내에 종양이 성장할 것이다. 20 mm2의 종양 크기에서 종양이 확립된 후 치료를 시작한다. 더 큰 종양의 효과를 조사하기 위해, 종양 크기가 50-100 mm2에 도달될 때에만 치료를 시작할 수도 있다.
ADC를 이용한 치료는 마우스의 미정맥 내로의 정맥내 경로를 통해 수행된다. ADC는 5 mL/kg의 부피로 투여된다.
치료 계획은 항체의 약동학에 좌우된다. 표준 치료는 사흘 걸러 3회 치료로 구성된다. 그러나, 치료는 또한 더 계속되거나 나중에 3일의 2 사이클 치료가 또한 뒤따를 수 있다.
표준으로서 치료군 당 8마리의 동물이 사용된다. 이 수는 종양 성장에서 또는 치료에 따라 특히 큰 변동이 예상되는 경우 증가될 수 있다. 활성 물질을 투여받는 군 외에도, 대조군으로서의 하나의 군은 동일한 계획에 따른 완충액으로만 치료된다.
이 실험의 경우, 종양의 면적은 2차원(길이/폭)으로 캘리퍼를 이용하여 정기적으로 측정된다. 종양의 면적은 길이×폭에 의해 결정된다.
실험 말기에, 종양이 절제되고 무게가 측정된다. 대조군과 치료군의 평균 종양 중량의 비교가 T/C로서 보고된다.
C-1.4b BxPC3 췌장 암종 종양 모델에서의 효능
200만 BxPC3 세포를 접종을 위해 암컷 NMRI 누드 마우스의 옆구리 내로 피하 주입한다.
15일째에 40 mm2의 종양 세포에서, 10 mg/kg의 정맥내 용량으로 치료가 개시된다(15일, 19일, 22일). 치료 후, 77일까지 종양 성장이 추적된다. 대조군의 동물은 큰 종양 때문에 수의학적 이유로 50일째에 희생되어야 한다.
네이키드(naked) 항-EGFR 항체는 대략 14일에 지연된 종양 성장을 나타낸다.
항-EGFR ADC(실시예 7 및 실시예 10)로 치료된 동물은 77일째의 실험 말기까지 어떠한 추가 종양 성장을 나타내지 않았다.
C-1.4c NCI - H292NSCLC 종양 모델에서의 효능
500만 NCI-H292 세포를 접종을 위해 암컷 NMRI 누드 마우스의 옆구리 내로 피하 주입한다.
15일째에 100 mm2의 종양 크기에서, 3 mg/kg(15일, 19일, 23일)의 정맥내 용량으로 치료를 개시하였다. 치료 후 27일까지 종양 성장을 추적하였다. 실험 말기에, 종양을 절제하고 무게를 측정하였다. 대조군 동물이 큰 종양 때문에 안락사되어야 하기 때문에 27일째에 실험을 종료하였다. 네이키드 항-EGFR 항체로 치료된 동물은 억제된 종양 성장을 나타내었다. 항-EGFR ADC로 치료된 동물은 종양의 퇴화를 나타낸다. 며칠의 배양시간 후, 콘주게이트-처리된 동물을 대조군과 비교하여(T/C) 종양 크기를 결정하였다. 콘주게이트로 치료된 동물은 더 작은 크기의 종양을 가지고 있었다.
ADC에 대한 T/C 비율은 0.05(실시예 10) 내지 0.1(실시예 7)인 반면, 네이키드 항-EGFR 항체는 0.3이다.
C-2.1 시험관내 세포 증식 시험
결합제의 표적 분자를 내인성으로 또는 재조합으로 발현하는 포유동물 세포를 본 발명에 따른 콘주게이트와 함께 배양함으로써 본 발명에 따른 콘주게이트의 세포독성 효과를 시험관내 세포 증식 시험으로 시험하였다. 몇 시간 내지 며칠의 배양 시간 후, 콘주게이트가 부가되지 않은 대조군과 비교한 세포수에 기초하여 세포 증식을 결정하였다. 콘주게이트되지 않은 독성기 단독이 부가적인 대조군으로서 추가될 수 있고/거나 결합제의 표적 분자를 발현하지 않는 세포가 사용될 수 있다. 당해분야의 숙련가가 잘 알고 있는 방법에 의해, 예를 들어, 계수에 의해 또는 ATP 측정에 기초하여 세포수를 결정할 수 있는 시험 키트(예를 들어, ATPliteTM, Perkin Elmer)를 이용하여 세포수를 결정하였다. 본 발명에 따른 콘주게이트의 IC50값을 이 방식으로 결정하였다. 콘주게이트의 선택성은 결합제의 표적 분자를 갖는 세포 및 상기 분자를 갖지 않는 세포 상에서의 측정시 콘주게이트의 IC50값을 비교함으로써 결정될 수 있다.
C-2.2 인간 결장 암종 세포주 HT29 상에서의 항- 메소텔린 ADC 의 항증식 효과의 결정
정해진 세포수의 인간 결장 암종 세포주 HT29wt(2500 c/웰, 야생형)를 전체 배지(10% FCS RPMI) 중의 96-웰 MTP에 접종하고 37℃, 5% 이산화탄소에서 밤새 배양하였다. 이와 병행하여, 안정하게 메소텔린을 발현하는 형질감염된 HT29 세포를 전체 배지 중의 96-웰 MTP에 플레이팅하고 밤새 배양하였다(2500 c/웰, 37℃, 5% 이산화탄소).
18시간 후, 접종 배지를 10% FCS를 갖는 신선한 배지로 대체하였다. 본 발명에 따른 화합물을 첨가하여 치료를 개시하였다. 형질감염된 세포 및 HT29wt 세포를 동일하게 처리하였다.
시험될 물질 중에서, 10-5 M 내지 1014M(1:10 희석 시리즈)의 농도 범위에서 용량-효과 곡선을 결정하였다.
48-96 시간의 배양 시간을 선택하였다.
MTT 분석(ATCC, Manassas, Virginia, USA, 카달로그 번호 30-1010K)의 도움으로 증식을 결정하였다. 선택된 시간이 경과한 후, HT29wt 세포를 MTT와 함께 4시간 동안 배양한 다음, 세제를 첨가하여 밤새 세포의 용해를 수행하였다.
형성된 다이(dye)를 570 nm에서 검출하였다.
100% 값을 시험 물질만 없을 뿐 그외에는 동일하게 처리된 세포의 증식으로서 정의 하였다. 이 시험으로부터 얻은 데이터는 삼중 결정을 대표하며, 적어도 2개의 독립적인 실험을 수행하였다.
하기 표 6은 이 분석의 대표적인 예시적인 구현예의 IC50 값1 )을 열거한다:
표 6
Figure pct01320
Figure pct01321
1) 여기에 열거된 효능 데이타는 지시된 약물/mAb 비를 갖닌 본 실험 섹션에서 기재된 예시적인 구현예를 기준으로 한다. 이 값은 상이한 약물/mAb 비로 벗어날 수 있다.
C-2.3 메소텔린 -형질감염된 HT29 세포 및 형질감염되지 않은 세포를 갖는 HT29 종양 모델에서의 약동학
실시예 60으로부터의 16 mg/kg의 정맥내 투여 후, 예를 들어, 실시예 119의 것과 같은 잠재적으로 발생하는 대사물과 함께, 실시예 60의 혈장 및 종양 농도를 측정하였다. 메소텔린-형질감염된 종양을 갖는 동물의 혈장에서의 실시예 119로부터의 화합물의 곡선하면적(AUC)은 대략 0.50 mg·h/L였고, 종양에서, 실시예 119로부터의 화합물의 노출은 대략 400배 더 높았다(AUC = 203 mg·h/L). 형질감염되지 않은 종양을 갖는 동물에서, 실시예 119에서의 혈장에서의 노출은 형질감염된 종양을 갖는 동물의 혈장에서의 노출과 동일하였다. 그러나, 형질감염되지 않은 동물의 종양에서의 AUC는 형질감염된 동물에서보다 대략 8배 더 낮았다. 이는 항원의 존재하에 종양에서의 확실한 표적 효과를 나타낸다.
실시예 119 로부터의 화합물의 정량화를 위한 분석
메탄올로 단백질을 침전시킨 후, 탠덤 질량 분광분석기(MS)에 결합된 고압력 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 혈장 및 종양에서의 실시예 119로부터의 화합물을 측정하였다.
100 μL 혈장의 워크업을 위해, 이를 400 μL 메탄올 및 10 μL 내부 표준(ISTD, 50 ng/mL 메탄올)과 혼합하고 10초간 교반하였다. 16,000 g에서 5분간 원심분리한 후, 250 μL 상청액을 자동시료주입기 바이알로 이동시키고, 250 μL 암모늄 아세테이트 완충액(AAC, 10 mM, pH 6.8)을 첨가하고, 다시 교반하였다.
종양의 워크업에서, 이를 4배량의 메탄올과 혼합하였다. 상기 샘플을 Tissuelyser II(Quiagen)에서 분당 30 비트로 6분간 분쇄한 다음, 16,000 g에서 5분간 원심분리하였다. 50 μL의 상청액을 자동시료주입기 바이알로 이동시키고, 50 μL 암모늄 아세테이트 완충액(10 mM, pH 6.8) 및 5 μL ISTD을 첨가하였다. 다시 교반한 후, 종양 샘플을 측정을 위해 준비하였다.
마지막으로, SCIEX사의 API 4000 기기 상에서 터보 이온 스프레이 인터페이스(turbo ion spray interface(TISP))에 의해 HPLC 결합된 대기압 이온화/탠덤 질량 분광분석기 상에서 두 가지 매트릭스 샘플의 측정을 수행하였다. 하기 m/z 전이가 측정되었다:
실시예 119 (quantifier) 614.652 → 570.9
실시예 119 (qualifier 1) 614.652 → 555.0
실시예 119 (qualifier 2) 614.652 → 500.4
내부 표준 (ISTD) 726.665 → 694.5
Gemini 칼럼(5 μL C18 110 A, 50×3 mm, Phenomenex)을 이용하여 HP1100 펌프(Agilent) 상에서 하기 구배 조건 하에 HPLC/LC MSMS (TISP) 분석을 수행하였다; ; 유속 0.4 mL/분; 구배: 0.0분 내지 1.0분 10% 아세토니트릴/90% AAC, 1.0분 내지 3.0분 10% 아세토니트릴/90% AAC → 50% 아세토니트릴/50% AAC, 3.0분 내지 5.5분 50% 아세토니트릴/50% AAC, 5.5분 내지 5.6분 50% 아세토니트릴/50% AAC → 10% 아세토니트릴/90% AAC, 5.6분 내지 6.0분 10% 아세토니트릴/90% AAC.
보정을 위해, 0.5-2000 μg/L의 농도를 갖는 혈장 샘플을 혼합하였다. 정량화(LOQ) 한계는 2 μg/L였다. 선형 범위는 2 내지 1000 μg/L였다.
종양 샘플의 보정을 위해, 0.5 내지 200 μg/L를 갖는 처리되지 않은 종양의 상청액을 혼합하였다. 정량화의 한계는 5 μg/L였다. 선형 범위는 5 내지 200 μg/L였다.
유효성 검정을 위한 품질 대조군은 혈장 내에 부가적인 500 μg/L과 함께, 5 및 50 μg/L를 함유하였다. 이들 샘플에 대해 결정된 농도는 이상적인 값으로부터 20% 정도 벗어났다(데이타 미포함).
C-2.4 생체내 효능 시험
본 발명에 따른 콘주게이트의 효능을, 예를 들어 이종이식 모델에 의해 생체내에서 험하였다. 당해분야의 숙련가는 본 발명에 따른 콘주게이트의 효능을 시험하기 위한 최신 방법을 잘 알고 있다(예를 들어, WO 2005081711; Polson 등, Cancer Res. March 15, 2009, 69(6):2358-64 참고). 예를 들어, 결합제의 표적 분자를 발현하는 종양 세포주가 설치류(예컨대, 마우스)에 이식될 것이다. 그리고 나서, 본 발명에 따른 콘주게이트 또는 대조군 항체 또는 등장 식염수 용액이 이식 동물에게 투여될 것이다. 상기 물질은 1회 이상 투여될 것이다. 며칠의 배양 시간 이후, 콘주게이트로 처리된 동물과 대조군으로 처리된 동물을 비교하여 종양 크기가 결정될 것이다. 종양 크기는 콘주게이트로 처리된 동물에서 더 작았다.
C-2.4a 마우스 내 실험 종양에서의 항- 메소텔린 ADC 의 시험
인간 메소텔린-발현 종양 세포를 접종을 위해 면역억제된 마우스, 예를 들어, 누드 마우스 또는 SCID 마우스의 옆구리 내로 피하주입한다. 세포 배양물 중에서, 100-1000만 개의 세포를 분리하고, 원심분리하여, 100 μL 배지 또는 1:1 배지/마트리겔에 재현탁한다. 그리고 나서, 세포 현탁액을 마우스 내로 피하주입한다.
이후, 며칠 내에 종양이 성장할 것이다. 20 mm2의 종양 크기에서 종양이 확립된 후 치료를 시작한다. 더 큰 종양의 효과를 조사하기 위해, 종양 크기가 50-100 mm2에 도달될 때에만 치료를 시작할 수도 있다.
ADC를 이용한 치료는 마우스의 미정맥 내로의 정맥내 경로를 통해 수행된다. ADC는 PBS에 용해되어 5 mL/kg의 부피로 투여된다.
치료 계획은 항체의 약동학에 좌우된다. 표준 치료는 사흘 걸러 3회 치료로 구성된다. 그러나, 치료는 또한 더 계속되거나 나중에 3일의 2 사이클 치료가 또한 뒤따를 수 있다.
표준으로서 치료군 당 8마리의 동물이 사용된다. 이 수는 종양 성장에서 또는 치료에 따라 특히 큰 변동이 예상되는 경우 증가될 수 있다. 활성 물질을 투여받는 군 외에도, 대조군으로서의 하나의 군이 동일한 계획에 따른 완충액으로만 치료된다.
이 실험에서, 종양의 면적은 2차원(길이/폭)으로 캘리퍼를 이용하여 정기적으로 측정된다. 종양의 면적은 길이×폭에 의해 결정된다.
실험 말기에, 종양이 절제되고 무게가 측정된다. 대조군(C)과 치료군(T)의 평균 종양 중량의 비교가 T/C로서 보고된다.
C-2.4b 메소텔린 -형질감염된 HT29 세포를 갖는 HT29 결장 암종 종양 모델에서의 효능
100만 HT29 세포(메소텔린을 이용한 안정한 형질감염)를 접종을 위해 NMRI 누드 마우스의 옆구리로 피하 주입하였다. 6일째에 20-30 mm2의 종양 크기에서, 정맥내 치료를 시작한다(6일, 10일, 14일). 치료 후, 48일까지 종양 성장을 추적하였다.
C-2.4c Ovcar3 난소 암종 종양 모델에서의 효능
700만 Ovcar3 세포를 접종을 위해 NMRI 누드 마우스의 옆구리로 피하 주입하였다.
31일째에 25-30 mm2의 종양 크기에서, 5-30 mg/kg의 용량 범위에서 정맥내 치료를 개시하였다(31일, 35일, 39일). 치료 후, 94일까지 종양 성장을 추적하였다. 실험 말기에, 종양을 절제하고 무게를 측정하였다.
C-3.1 C4 .4a에 대한 ADC 의 세포독성 효과의 분석
항-C4.4a ADC의 세포독성 효과는 상이한 세포주에서 분석된다:
- 완전한 C4.4a 수용체에 대해 서열로 전달감염된 A549 (CCL-185, ATCC),
- 모의 전달감염된 A549,
- A549 야생형 (DSMZ, 로트 11)
- NCI-H292, C4.4a 내인성 발현 폐 암 세포주 (CRL-1848, ATCC)
- SCC-4, C4.4a 내인성 발현 편평상피 상피 암종 세포주 (CRL-1624, ATCC)
- SCC-9, C4.4a 내인성 발현 편평상피 상피 암종 세포주 (CRL-1629, ATCC)
- HCT-116, C4.4a 내인성 발현 결장 암종 세포주 (CCL-247, ATCC)
- HCT-116/VM46, VM46으로 전달감염된 HCT-116
- A431NS (CRL-2592, ATCC)
세포는 각 세포주에 대해 American Tissue Type Collection (ATCC)에서 표시된 바와 같이 표준 방법에 의해 배양된다. 절차에 대해, 세포는 PBS (Biochrom AG #L2143) 중 트립신 (0.05%) 및 EDTA (0.02%)의 용액을 사용하여 떼어내고, 펠렛화되고, 배양 배지에서 재현탁되고, 카운팅되고, 백색 염기 (Costar #3610)로 96-웰 배양판으로 씨딩되고 (100 μl/웰 중 2500개의 세포), 5% 이산화탄소와 함께 37 ℃에서 인큐베이터에서 배양된다. 24시간 후, 100 μl의 배양 배지 중 항체-약물 콘주게이트는 10-7 M 내지 10-11 M의 농도 (중복 값)에서 세포에 적용되고 5% 이산화탄소와 함께 37 ℃에서 인큐베이터에서 배양되었다. 72 시간 후, 세포 생존력은 Cell Titer Glow 발광 세포 생존력 검정 (Promega #G7573 및 #G7571)을 사용하여 측정된다. 이를 위해, 100 μl의 기질은 세포 배치 당 부가되고, 플레이트는 차후에 알루미늄 포일로 덮이고, 180 rpm에서 플레이트 진탕기에서 2 분 동안 진탕되고, 실험실 벤치 상에 8 분 동안 정치되고, 그 다음 Victor X2 (Perkin Elmer)를 사용하여 측정된다. 기질은 살아 있는 세포의 ATP 함량을 검출하고, 이는 세포의 활력에 직접적으로 비례하는 정도의 발광 신호를 생성한다. 측정된 데이타는 Graph Pad Prism 실험실 소프트웨어를 사용하여 IC50를 계산하기 위해 사용된다.
표 7은 이 검정으로부터 대표적인 예시적인 구현예의 IC50 값1 )을 보여준다:
표 7
Figure pct01322
Figure pct01323
1) 여기에 열거된 효능 데이타는 지시된 약물/mAb 비를 갖닌 본 실험 섹션에서 기재된 예시적인 구현예를 기준으로 한다. 이 값은 상이한 약물/mAb 비로 벗어날 수 있다.
C-3.3 세포 투과도를 측정하기 위한 시험관내 시험
물질의 세포 투과도는 Caco-2 세포를 사용하여 유동 검정으로 시험관내 시험에 의해 조사되었다 [M.D. Troutman 및 D.R. Thakker, Pharm. Res. 20 (8), 1210-1224 (2003)]. 이를 위해, 세포는 24-웰 필터 플레이트 상에서 15-16 일 동안 배양되었다. 투과의 측정에 대해, 각 실시예는 HEPES 완충액에서 정점으로 (A) 또는 바닥으로 (B) 세포에 적용되었고 2시간 동안 배양되었다. 0 시간 및 2시간 후, 샘플은 시스 및 트랜스 칸막이로부터 취했다. 샘플은 역상 칼럼을 사용하여 HPLC (Agilent 1200, Boeblingen, Germany)에 의해 분리되었다. HPLC 시스템은 Turbo Ion Spray Interface를 통해 Triple Qua-dro-pol 질량 분광분석기 API 4000 (Applied Biosystems Applesra, Darmstadt, Germany)에 커플링되었다. 투과도는 Papp 값을 기반으로 계산되었고, 이것은 Schwab 등에 의해 공개된 식을 사용하여 계산되었다 [D. Schwab 등, J. Med. Chem . 46, 1716-1725 (2003)]. Papp(B-A) 대 Papp(A-B)의 비율이 >2 또는 <0.5일 때, 물질을 능동 수송을 가지고 있는 것으로 분류하였다.
세포내로 방출되는 독성기에 대해 B로부터 [Papp (B-A)]로의 투과도가 대단히 중요하다: 이 투과도가 더 낮을수록, 세포내 방출 다음에 세포에서 실시예의 체류 시간은 더 길어지고, 따라서 또한 생화학적 표적과의 상호작용을 위해 이용가능한 시간이 더 길어진다 (이 경우에: 튜불린).
이하의 표 8은 이 검정으로부터 대표적인 실시예에 대해 투과도 데이터를 설정한다:
표 8
Figure pct01324
모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)과 비교하여 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF)은 이 시험에서 73 nm/s의 Papp (B-A) 값을 갖는다.
C-3.4 P-당단백질 (P- gp )에 대한 기질 특성을 측정하기 위함 시험관내 시험
많은 종양 세포는 약물에 대해 수송체 단백질을 발현시키고. 이것은 세포정지성을 향한 내성의 발달을 빈번히 동반한다. 그와 같은 수송체 단백질, 예컨대 P-당단백질 (P-gp) 또는 BCRP의 기질이 아닌 물질은 따라서 개선된 활성 프로파일을 나타낼 수 있다.
P-gp (ABCB1)에 대한 물질의 기질 특성은 P-gp (L-MDR1 세포)를 과발현시키는 LLC-PK1 세포를 사용하여 유동 검정에 의해 측정되었다 [A.H. Schinkel 등, J. Clin. Invest. 96, 1698-1705 (1995)]. 이를 위해, LLC-PK1 세포 또는 L-MDR1 세포는 96-웰 필터 플레이트 상에서 3-4 일 동안 배양되었다. 투과의 측정에 대해, 각 시험 물질은, 단독으로 억제제 (예컨대 이베르멕틴 또는 베라파밀, 예를 들면)의 존재에서, HEPES 완충액에서 정점으로 (A) 또는 바닥으로 (B) 세포에 적용되었고 2시간 동안 배양되었다. 0 시간 및 2시간 후, 샘플은 시스 및 트랜스 칸막이로부터 취했다. 샘플은 역상 칼럼을 사용하여 HPLC (Agilent 1200, Boeblingen, Germany)에 의해 분리되었다. HPLC 시스템은 Turbo Ion Spray Interface를 통해 Triple Qua-dro-pol 질량 분광분석기 API 4000 (Applied Biosystems Applesra, Darmstadt, Germany)에 커플링되었다. 투과도는 Papp 값을 기반으로 계산되었고, 이것은 Schwab 등에 의해 공개된 식을 사용하여 계산되었다 [D. Schwab 등, J. Med . Chem . 46, 1716-1725 (2003)]. 유출 비율 Papp(B-A) 대 Papp(A-B)가 >2이면 물질을 P-gp 기질인 것으로 분류하였다.
L-MDR1 및 LLC-PK1 세포에서의 유출 비율 또는 억제제의 존재 또는 부재하에 유출 비율은 P-gp 기질 특성을 평가하기 위한 부가적 기준으로서 비교될 수 있다. 만약 이들 값이 2배 넘게 차이가 나는 경우, 각 물질은 P-gp 기질인 것으로 간주된다.
표 9
Figure pct01325
다시 이 검정에서, 여기에 언급된 B의 예시들의 투과성은 낮고, 즉 세포에서의 독성기의 체류 시간은 길다.
C-3.5 생체내 효능 시험
본 발명의 콘주게이트의 활성은, 예를 들면, 이종이식 모델에 의해 생체내애서 시험되었다. 숙련가는 본 발명의 콘주게이트의 활성을 시험하기 위해 선행기술의 방법을 알고 있다 (참고, 예를 들면, WO2005081711; Polson 등, Cancer Res. 2009 Mar 15;69(6):2358-64). 이를 위해, 예를 들면, 설치류 (예를 들면 마우스)는 결합제의 표적 분자를 발현시키는 종양 세포주가 이식되었다. 이들 종양-보유 설치류는 본 발명의 콘주게이트 또는 대조군 항체 콘주게이트, 또는 등장 염 용액이 차후에 투여되었다. 투여는 종종 단회 이상 일어난다. 종양 성장은 슬라이딩 캘리퍼의 도음으로 매주 2회 측정되었다. 몇 주 동안 종양 성장 후, 콘주게이트-처리된 동물의 종양 크기는 대조군 그룹의 크기와 비교되었다. 콘주게이트-처리된 동물은 유의미하게 더 낮은 종양 크기를 보여주었다.
C-3.5a 마우스 내 실험 종양에서의 ADC 의 시험
ADC에 대한 항원을 발현하는 인간 종양 세포를 접종을 위해 면역억제된 마우스, 예를 들어, 누드 마우스 또는 SCID 마우스의 옆구리로 피하 주입한다. 세포 배양물 중, 100-1000만 개의 세포를 분리하고, 원심분리하여, 100 μL 배지 또는 50% 배지/50% 마트리겔에 재현탁한다. 그리고 나서, 상기 세포 현탁액을 마우스 내로 피하 주입한다.
이후, 며칠 내에 종양이 성장할 것이다. 25 mm2의 종양 크기에서 종양이 확립된 후 치료를 시작한다.
ADC를 이용한 치료는 마우스의 미정맥 내로의 정맥내 경로를 통해 수행된다. ADC는 PBS에 용해되어 10 mL/kg의 부피로 투여된다.
치료 계획은 항체의 약동학에 좌우된다. 표준 치료는 사흘 걸러 3회 치료로 구성된다. 그러나, 치료는 또한 더 계속되거나 나중에 3일의 2 사이클 치료가 또한 뒤따를 수 있다.
표준으로서 치료군 당 8마리의 동물이 사용된다. 이 수는 종양 성장에서 또는 치료에 따라 특히 큰 변동이 예상되는 경우 증가될 수 있다. 활성 물질을 투여받는 군 외에도, 대조군으로서의 하나의 군이 동일한 계획에 따른 완충액으로만 치료된다.
이 실험의 경우, 종양의 면적은 2차원(길이/폭)으로 캘리퍼를 이용하여 정기적으로 측정된다. 종양의 면적은 길이×폭에 의해 결정된다.
실험 말기에, 종양이 절제되고 무게가 측정된다. 대조군(C)과 치료군(T)의 평균 종양 중량의 비교가 T/C로서 보고된다. 만약 대조군과 치료군이 상이한 시점에 종료되면, T/C 값은 모든 치료군 및 대조군의 마지막 공동 측정의 종양 면적에 기초하여 계산된다.
100만 SCC-4 세포를 접종을 위해 암컷 NMRI 누드 마우스의 옆구리 내로 피하 주입한다.
ADC를 이용한 정맥내 치료는 평균 종양 크기가 30-35 mm2에 도달하면 시작한다. 대조군이 최대 허용된 크기에 도달하면, 시험을 종료하고 종양을 절제하여 무게를 측정한다. 시험된 모든 C-4.4a 표적화 ADC는 용량 의존적 비율로 종양 성장을 억제하는 것으로 확인되었다. 30 mg/kg의 용량에서, 모든 시험된 ADC는 <0.1의 T/C 비율을 달성하였다(실시예 216, 실시예 211, 실시예 215, 실시예 213). 15 mg/kg의 용량에 이르기까지 시험된 모든 ADC에 대해 대조군과 비교하여 현저한 항종양 효과가 달성되었다.
100만 NCI-H292 세포를 접종을 위해 암컷 NMRI 누드 마우스의 옆구리 내로 피하 주입한다.
30-35 mm2의 평균 종양 크기에서 ADC를 이용한 정맥내 치료를 개시하였다. 최대 허용된 종양 크기에 도달되면, 대조군 및 치료군을 종료하였다. 따라서, 치료 말기 후 종양의 차후의 성장 차이가 ADC의 추가 특성규명에 기여할 수 있다. 따라서, 마지막 공동 측정시간에서의 종양 면적을 대조군(T/C)과 비교하여 항종양 효과를 결정하는데 사용하였다. 이 실험에 사용된 NCI-H292 마우스 모델에서, 시험된 모든 ADC가 대조군과 비교하여 용량 의존적 방식으로 종양 성장을 감소시킬 수 있었음이 입증된다. 실시예 216의 경우, 1.9 mg/kg의 용량에 이르기까지 현저한 항종양 효과가 달성되었고, 실시예 211의 경우, 3.75 mg/kg의 용량에 이르기까지 현저한 항종양 효과가 달성되었다. 이 모델에서 달성된 최소 T/C 값은 실시예 216에 대한 30 mg/kg에서의 0.16의 T/C; 실시예 211에 대한 30 mg/kg에서의 0.17의 T/C, 실시예 215에 대한 30 mg/kg에서의 0.16의 T/C 및 실시예 213에 대한 15 mg/kg에서의 0.17의 T/C를 포함한다.
C-6. C4 .4a-형질감염된 그리고 형질감염되지 않은 A549 세포를 갖는 A549 종양 모델에서의 약동학
7-30 mg/kg의 다양한 ADC를 정맥내 투여한 후, ADC와 발생할지 모르는 임의의 잠재적인 대사물의 혈장 및 종양 농도를 측정하고, 소거(CL), 곡선하면적(AUC) 및 반감기(t1 /2)와 같은 약력학적 파라미터를 계산하였다.
잠재적으로 대사물을 정량화하기 위한 분석
혈장 및 종양 중 화합물은 측정은 탠덤 질량 분광분석기 (MS)와 커플링된 고-압력 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 메탄올에 의한 단백질의 침전 다음에 일어났다.
100 μl의 혈장의 가공에 대해, 400 μl의 메탄올 및 10 μl의 내부 표준 (ISTD, 메탄올 중 50 ng/mL)와 혼합되었고 10 초 동한 진탕했다. 5분 동안 at 16 000 g에서 원심분리한 후, 250 μl의 상청액은 250 μl의 암모늄 아세테이트 완충액 (AAC, 10 mM, pH 6.8)으로 만들어진 자동시료주입기 바이알로 이동되었고, 다시 진탕되었다.
종양의 가공을 위해, 4배의 양의 메탄올과 혼합되었다. Tissuelyser II (Quiagen)에서, 샘플은 6 분 동안 분당 30회의 충격으로 분쇄되었고 그 다음 16 000 g에서 5분 동안 원심분리되었다. 50 μl의 상청액은 자동시료주입기 바이알로 이동되었고, 이 바이알은 50 μl의 암모늄 아세테이트 완충액 (10 mM, pH 6.8) 및 5 μl의 ISTD로 만들어졌다. 다시 진탕한 후, 종양 샘플은 측정 준비가 되었다.
매트릭스 샘플 둘 모두의 측정은 API4000 기기 (SCIEX) 상에서 Turbo Ion Spray Interface (TISP)에 의해 HPLC-커플링된, 대기압 이온화/탠덤 질량 분광분석기 상에서 마지막으로 일어났다.
HPLC/LC-MSMS (TISP) 분석은 Gemini 칼럼 (5 μm C18 110 A, 50 × 3 mm, Phenomenex)을 갖는 HP1100 펌프 (Agilent) 상에서 실행되었다.
보정을 위해, 혈장 샘플은 0.5 - 2000 μg/L의 농축물과 혼합되었다. 검출 한계 (LOQ)는 약 2 μg/L였다. 선형 범위는 2로부터 1000 μg/L로 연장했다
종양 샘플의 보정을 위해, 미처리된 종양의 상청액은 0.5 - 200 μg/L의 농축물과 혼합되었다. 검출 한계는 5 μg/L였다. 선형 범위는 5로부터 200 μg/L로 연장했다.
유효성 시험을 위한 품질 조절은 혈장 중 부가적 500 μg/L와 함께 5 및 50 μg/L를 함유했다. 이들 샘플에 대해 발견된 농도는 의도된 값으로부터 최대 20% 까지 이탈된다 (데이터 미부착).
C-4.1 시험관내 세포 증식 시험
내인성으로 또는 재조합으로 결합제의 표적 분자를 발현하는 포유동물 세포를 본 발명에 따른 콘주게이트와 함께 배양함으로써, 본 발명에 따른 콘주게이트의 세포독성 효과를 시험관내 세포 증식 시험으로 시험하였다. 몇 시간 내지 며칠의 배양 시간 후, 콘주게이트가 부가되지 않은 대조군과 비교한 세포수에 기초하여 세포 증식을 결정하였다. 콘주게이트되지 않은 독성기 단독이 부가적인 대조군으로서 추가될 수 있고/거나 결합제의 표적 분자를 발현하지 않는 세포가 사용될 수 있다. 당해분야의 숙련가가 잘 알고 있는 방법에 의해, 예를 들어, 계수에 의해 또는 ATP 측정에 기초하여 세포수를 결정할 수 있는 시험 키트(예를 들어, ATPliteTM, Perkin Elmer)를 이용하여 세포수를 결정하였다. 본 발명에 따른 콘주게이트의 IC50값을 이 방식으로 결정하였다. 결합제의 표적 분자를 갖는 세포 및 상기 분자를 갖지 않는 세포 상에서의 측정시 콘주게이트의 IC50값을 비교함으로써 콘주게이트의 선택성을 결정하였다.
C-4.2 세포주 HT29 , DLD -1 및 SNU -5에서의 시험관내 세포독성
내인성으로 CAIX-양성 또는 CAIX-음성인 종양 세포에 대한 CA9 선택적, 세포독성 효과를 시험하기 위해, 인간 결장 암종 세포주 HT29(CA9-양성) 및 DLD-1(CA9-음성)뿐만 아니라 위 암종 세포주 SNU-5(CA9-양성)를 사용하였다. 정해진 세포수의 세포주 HT29(5000 c/웰)를 전체 배지(DMEM / HAM's F12, 10% FCS 열 불활성화)에서의 발광을 위해 96-웰 MTP에 접종하고 37℃, 5% CO2에서 밤새 배양하였다. 배지가 ISCOVE's + 10% FCS(열 불활성화)인 것을 제외하고, SNU-5 세포주를 이용하여 유사한 과정을 수행하였다. 동시에 항원-음성 세포주 DLD-1을 전체 배지(RPMI 1640, 10% FCS, 열 불활성화)에서의 발광을 위해 96-웰 MTP에 플레이팅하고, 밤새 배양하였다(5000 c/웰, 37℃, 5% CO2).
24시간 후, 시험될 물질을 RPMI / 5% FCS에서 3회 농축하여 제조하였다. 세포에 시험될 물질 및/또는 ADC를 첨가하여 치료를 시작하였다. HT29, SNU-5 및 DLD-1 세포를 동일하게 처리하였다.
시험될 물질 중에, 3×10-7 M 내지 10-12M의 농도 범위에서 용량-효과 곡선을 결정하였다.
2 내지 96 시간의 배양 시간을 선택하였다.
Cell Titer Glo Luminescent Cell Viability 분석(PROMEGA 카달로그 번호 #G7571)의 도움으로 증식을 검출하였다. 선택된 배양 시간이 경과한 후, Cell Titer Glo 시약을 세포와 20분간 배양한 다음, 발광 판독기 VICTOR Light(Perkin Elmer)로 발광을 측정하였다.
100% 값을 시험 물질만 없을 뿐 그외에는 동일하게 처리된 세포의 증식으로서 정의하였다. 이 시험으로부터 얻은 데이터는 삼중 결정을 대표하며, 적어도 2개의 독립적인 실험을 수행하였다.
하기 표는 이 분석으로부터의 대표적인 예시적인 구현예의 IC50 값을 열거한다:
표 10
Figure pct01326
Figure pct01327
C-4.3 인간 췌장 암종 세포주 MIAPaCa 2 및 결장 암종 세포주 HT29 에 대한 항-CAIX ADC 의 항증식 효과의 결정
정해진 세포수의 인간 췌장 암종 세포주 MIAPaCa 2(2500 c/웰, 야생형)를 전체 배지(DMEM, 10% FCS, 2.5% 말 혈청)로 96-웰 MTP에 접종하고 37℃, 5% CO2에서 밤새 배양하였다. CAIX를 안정하게 발현하는 형질감염된 MIAPaCa 2 세포(MIAPaCaMSL)를 전체 배지로 96-웰 MTP에 플레이팅하고 밤새 배양하였다(2500 c/웰, 37℃, 5% CO2).
내인성으로 CAIX를 발현하는 세포에 대한 세포독성 효과를 시험하기 위해, 결장 암종 세포주 HT29를 사용하였다. 상기 세포(2500 c/웰, 야생형)를 또한 96-웰 MTP에 접종하고 전체 배지(RPMI, 10% FCS)에서 밤새 배양하였다.
18시간 후, 접종 배지를 혈청을 갖는 신선한 배지로 대체하였다. 시험될 물질 및/또는 ADC를 첨가하여 치료를 개시하였다. 상기 형질감염된 세포 및 MIAPaCa2 세포뿐만 아니라 HT29 세포를 동일하게 처리하였다.
시험될 물질 중에서, 10-5 M 내지 10-14 M(1:10 희석 시리즈)의 농도 범위에서 용량-효과 곡선을 결정하였다.
48-96 시간의 배양 시간을 선택하였다.
MTT 분석(ATCC, Manassas, Virginia, USA, 카달로그 번호 30-1010K)의 도움으로 증식을 검출하였다. 선택된 배양 시간의 종료 후, MTT 시약을 세포와 함께 4시간 동안 배양한 후, 세제를 첨가하여 밤새 세포를 용해시켰다.
형성된 다이(dye)를 570 nm에서 검출하였다.
시험 물질만 없을 뿐 그외에는 동일하게 처리된 세포의 증식을 100%로 정의하였다. 이 시험으로부터 얻은 데이터는 삼중 결정을 대표하며, 적어도 2개의 독립적인 실험을 수행하였다.
하기 표는 이 분석으로부터의 대표적인 예시적인 구현예의 IC50 값을 열거한다:
표 11
Figure pct01328
C-4.4 생체내 효능 시험
본 발명에 따른 콘주게이트의 효능을, 예를 들어 이종이식 모델에 의해 생체내에서 험하였다. 당해분야의 숙련가는 본 발명에 따른 콘주게이트의 효능을 시험하기 위한 최신 방법을 잘 알고 있다(예를 들어, WO 2005081711; Polson 등, Cancer Res. March 15, 2009, 69(6):2358-64 참고). 예를 들어, 결합제의 표적 분자를 발현하는 종양 세포주가 설치류(예컨대, 마우스)에 이식될 것이다. 그리고 나서, 본 발명에 따른 콘주게이트 또는 대조군 항체 또는 등장 식염수 용액이 이식 동물에게 투여될 것이다. 상기 물질은 1회 이상 투여될 것이다. 며칠의 배양 시간 이후, 콘주게이트로 처리된 동물과 대조군으로 처리된 동물을 비교하여 종양 크기가 결정될 것이다.
C-4.4a 마우스 내 실험 종양에서의 항- CA9 ADC 의 효능 시험
인간 CD9-발현 종양 세포를 접종을 위해 면역억제된 마우스, 예를 들어, 누드 또는 SCID 마우스의 옆구리로 피하 주입한다. 세포 배양물 중, 100-1000만 개의 세포를 분리하고, 원심분리하여, 100 μL 배지 또는 배지/마트리겔에 재현탁한다. 그리고 나서, 상기 세포 현탁액을 마우스 내로 피하 주입한다.
이후, 며칠 내에 종양이 성장할 것이다. 20 mm2의 종양 크기에서 종양이 확립된 후 치료를 시작한다. 더 큰 종양의 효과를 조사하기 위해, 종양 크기가 50-100 mm2에 도달될 때만 치료가 시작될 수 있다.
ADC를 이용한 치료는 마우스의 미정맥 내로의 정맥내 경로를 통해 수행된다. ADC는 PBS에 용해되어 5 mL/kg의 부피로 투여된다.
치료 계획은 항체의 약동학에 좌우된다. 표준 치료는 사흘 걸러 3회 치료로 구성된다. 그러나, 치료는 또한 더 계속되거나 나중에 3일의 2 사이클 치료가 또한 뒤따를 수 있다.
표준으로서 치료군 당 8마리의 동물이 사용된다. 이 수는 종양 성장에서 또는 치료에 따라 특히 큰 변동이 예상되는 경우 증가될 수 있다. 활성 물질을 투여받는 군 외에도, 대조군으로서의 하나의 군이 동일한 계획에 따른 완충액으로만 치료된다.
이 실험의 경우, 종양의 면적은 2차원(길이/폭)으로 캘리퍼를 이용하여 정기적으로 측정된다.
실험 말기에, 종양이 절제되고 무게가 측정된다. 대조군(C)과 치료군(T)의 평균 종양 중량의 몫이 T/C로서 제시된다. 만약 대조군과 치료군이 상이한 일자에 종료되면, 모든 군이 여전히 실험중이었던 마지막 측정 시점에서의 종양 면적을 T/C를 계산하는데 사용하였다.
C-4.4b SNU -5 위 암종 종양 모델에서의 효능
300만 SNU-5 세포를 접종을 위해 nodSCID 마우스의 옆구리 내로 피하 주입하였다.
15일째에 30-40 mm2의 종양 크기에서, 5 내지 30 mg/kg(15일, 19일, 23일) 범위의 용량을 정맥내 주사하여 치료를 개시한다. 치료 후 모든 군의 종양 성장을 추적하였다. 종양이 최대 허용된 종양 크기에 도달하면 대조군을 종료하였다. 모든 군을 이 시점에서 함께 종료하고, 종양을 절제하여 무게를 측정하고, 종양 중량에 기초하여 T/C 값을 형성하거나, 치료군을 종양의 추가 성장과 관련하여 관찰하였다. 후자의 경우, 마지막 공동 관찰 시간에서의 종양 면적에 기초하여 T/C 값을 계산하였다. 항-CA9 ADC로 처리된 동물은 억제된 종양 성장을 나타내었다.
C-4.4c HT29 모델
nu/nu 유전자를 갖는 암컷 무흉선 누드 마우스를 마우스의 인간 이종이식 연구에 사용하였다. 18 내지 21g의 체중을 갖는 근친교배한 마우스(NMRI background)를 Taconic, Denmark로부터 수득하였다. 인간 HT29 결장 암종 세포를 ATCC 프로토콜에 따라 10% 우아 혈청(FCS)을 갖는 추천된 배지에서 배양하였다. 세포를 서브컨플루언트 상태(80% 컨플루언스)로 이식을 위해 수확하였다. 0일에, 마우스에 50% 마트리겔/50% 배양 배지(FCS 없음) 중의 1×106 HT29 세포의 피하(s.c.) 주사에 의해 종양을 개시하였다. 이식 부피는 100 μL였고, 이식 부위는 왼쪽 옆구리였다. 캘리퍼에 의해 종양의 면적(계산: 최장 직경×상기 직경에 수직인 길이)을 측정하여 종양 성장을 결정하였다. 대상의 상태에 따라, 최대 20-30 또는 40-50 mm2의 미리 정해진 크기의 종양을 사용하였다. 이 시점에, 동물을 무작위추출하고 개별적인 시험군 - 대조군 및 치료군으로 할당하였다. ADC를 이용한 치료를 사흘 걸러 총 3회 동안(Q4D×3) 투여하였다. 치료 형태는 미정맥내로의 정맥내(i.v.) 주사였다. 각 동물의 치료는 개별적인 체중에 기초하였고, 치료 부피는 5-10 mL/kg 체중이었다. 종양의 면적 및 동물의 체중을 2주마다 결정하여, 치료-연관된 독성의 측정값으로서 체중을 관찰하였다. 독성 징후가 발생되거나 종양이 150 mm2의 크기에 도달하거나 또는 종양이 괴사되면 동물을 안락사시켰다. 한 군의 종료 시점에, 동물을 안락사시키고 종양을 절제하고 각 종양 습중량을 결정하였다. 종양 면적 또는 적절한 경우 최종 종양 중량에 기초하여 대조군에 대한 치료의 비율로서 치료에 대한 반응을 계산하였다.
D. 약제학적 조성물에 대한 예시적인 구현예
본 발명의 화합물은 약제학적 제제로 하기와 같이 전환될 수 있다:
i.v. 용액:
본 발명의 화합물은 생리적으로 용인된 용매 (예를 들면 등장 식염수 용액, D-PBS, 또는 폴리소르베이트 80의 부가를 갖는 시트레이트 완충액 중 글리신 및 나트륨 클로라이드를 갖는 제형)에서 포화 용해도 미만의 농도에서 용해된다. 용액에 대해 멸균 여과가 수행되고 멸균 및 발열물질-없는 주사 용기로 분배된다.
i.v. 용액:
본 발명의 화합물은 인용된 투여 형태로 전환될 수 있다. 이것은 불활성, 비-독성, 약제학적으로 적당한 부형제 (예를 들면 완충액 물질, 안정제, 가용화제, 보존제)와 "혼합하여" 또는 그것에서 "용해시켜서" 공지된 방식으로 달성될 수 있다. 하기가, 예를 들면, 존재할 수 있다: 아미노산 (글리신, 히스티딘, 메티오닌, 아르기닌, 라이신, 류신, 이소류신, 트레오닌, 글루탐산, 페닐알라닌 및 다른 것들), 당류 및 관련 화합물 (글루코오스, 사카로오스, 만니톨, 트레할로오스, 수크로오스, 만노스, 락토오스, 소르비톨), 글리세롤, 나트륨 염, 칼륨, 암모늄 염 및 칼슘 염 (예를 들면 나트륨 클로라이드, 칼륨 클로라이드 또는 디나트륨수소포스페이트 및 많은 다른 것들), 아세테이트/아세트산 완충계, 포스페이트 완충계, 시트르산 및 시트레이트 완충계, 트로메타몰 (TRIS 및 TRIS 염), 폴리소르베이트 (예를 들면 폴리소르베이트 80 및 폴리소르베이트 20), 폴록사머 (예를 들면 폴록사머 188 및 폴록사머 171), 매크로골 (PEG 유도체, 예를 들면 3350), Triton X-100, EDTA 염, 글루타티온, 알부민 (예를 들면 인간), 우레아, 벤질 알코올, 페놀, 클로로크레졸, 메타크레졸, 벤즈알코늄 클로라이드 및 많은 다른 것들.
i.v., s.c. 또는 i.m. 용액으로의 차후의 전환을 위한 리오필리제이트:
대안적으로 본 발명의 화합물은 안정한 리오필리제이트 (가능하면 상기 언급된 부형제의 도움과 함께)로 전환될 수 있고, 투여되기 전에, 재구성된 적당한 용매 (예를 들면 주사-등급 물, 등장 식염수 용액)로 재구성되고 투여될 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> Bayer Pharma AG Bayer Intellectual Property GmbH <120> Neue Binder-Wirkstoff-Konjugate (ADCs) und ihre Verwendung <130> BHC 11 1 012 <160> 411 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 278 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 1 Leu Glu Cys Tyr Ser Cys Val Gln Lys Ala Asp Asp Gly Cys Ser Pro 1 5 10 15 Asn Lys Met Lys Thr Val Lys Cys Ala Pro Gly Val Asp Val Cys Thr 20 25 30 Glu Ala Val Gly Ala Val Glu Thr Ile His Gly Gln Phe Ser Leu Ala 35 40 45 Val Arg Gly Cys Gly Ser Gly Leu Pro Gly Lys Asn Asp Arg Gly Leu 50 55 60 Asp Leu His Gly Leu Leu Ala Phe Ile Gln Leu Gln Gln Cys Ala Gln 65 70 75 80 Asp Arg Cys Asn Ala Lys Leu Asn Leu Thr Ser Arg Ala Leu Asp Pro 85 90 95 Ala Gly Asn Glu Ser Ala Tyr Pro Pro Asn Gly Val Glu Cys Tyr Ser 100 105 110 Cys Val Gly Leu Ser Arg Glu Ala Cys Gln Gly Thr Ser Pro Pro Val 115 120 125 Val Ser Cys Tyr Asn Ala Ser Asp His Val Tyr Lys Gly Cys Phe Asp 130 135 140 Gly Asn Val Thr Leu Thr Ala Ala Asn Val Thr Val Ser Leu Pro Val 145 150 155 160 Arg Gly Cys Val Gln Asp Glu Phe Cys Thr Arg Asp Gly Val Thr Gly 165 170 175 Pro Gly Phe Thr Leu Ser Gly Ser Cys Cys Gln Gly Ser Arg Cys Asn 180 185 190 Ser Asp Leu Arg Asn Lys Thr Tyr Phe Ser Pro Arg Ile Pro Pro Leu 195 200 205 Val Arg Leu Pro Pro Pro Glu Pro Thr Thr Val Ala Ser Thr Thr Ser 210 215 220 Val Thr Thr Ser Thr Ser Ala Pro Val Arg Pro Thr Ser Thr Thr Lys 225 230 235 240 Pro Met Pro Ala Pro Thr Ser Gln Thr Pro Arg Gln Gly Val Glu His 245 250 255 Glu Ala Ser Arg Asp Glu Glu Pro Arg Leu Thr Gly Gly Ala Ala Gly 260 265 270 His Gln Asp Arg Ser Asn 275 <210> 2 <211> 293 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Leu Glu Cys Tyr Ser Cys Val Gln Lys Ala Asp Asp Gly Cys Ser Pro 1 5 10 15 His Arg Met Lys Thr Val Lys Cys Gly Pro Gly Val Asp Val Cys Thr 20 25 30 Glu Ala Val Gly Ala Val Glu Thr Ile His Gly Gln Phe Ser Val Ala 35 40 45 Val Arg Gly Cys Gly Ser Gly Ile Pro Gly Lys Asn Asp Arg Gly Leu 50 55 60 Asp Leu His Gly Leu Leu Ala Phe Phe Gln Leu Gln Gln Cys Ser Glu 65 70 75 80 Asp Arg Cys Asn Ala Lys Leu Asn Leu Thr Leu Arg Gly Leu Asn Pro 85 90 95 Ala Gly Asn Glu Ser Ala Tyr Glu Pro Asn Gly Ala Glu Cys Tyr Ser 100 105 110 Cys Val Gly Leu Ser Arg Glu Lys Cys Gln Gly Ser Met Pro Pro Val 115 120 125 Val Asn Cys Tyr Asn Ala Ser Gly Arg Val Tyr Lys Gly Cys Phe Asp 130 135 140 Gly Asn Val Thr Leu Thr Ala Ala Asn Val Thr Val Ser Leu Pro Val 145 150 155 160 Arg Gly Cys Val Gln Asp Glu Thr Cys Thr Arg Asp Gly Val Thr Gly 165 170 175 Pro Gly Phe Thr Leu Ser Gly Ser Cys Cys Gln Gly Pro Arg Cys Asn 180 185 190 Ala Asp Leu Arg Asn Lys Thr Tyr Phe Ser Pro Arg Ile Pro Pro Leu 195 200 205 Val Leu Leu Pro Pro Pro Thr Thr Ala Ala Pro Ser Thr Arg Ala Gln 210 215 220 Asn Ser Ser Ser Thr Thr Ser Thr Ala Ala Pro Thr Thr Thr Thr Ser 225 230 235 240 Ile Ile Lys Pro Thr Thr Ala Gln Ala Ser His Thr Ser Pro His Glu 245 250 255 Met Asp Leu Glu Val Ile Gln Glu Glu Gly Ala Ser Leu Ser Gly Gly 260 265 270 Ala Ala Gly His Gly Gly Thr Ala Gly His Gly Gly Ala Ala Gly His 275 280 285 Gln Asp Arg Ser Asn 290 <210> 3 <211> 346 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 3 Met Asp Pro Ala Arg Lys Ala Gly Ala Gln Ala Met Ile Trp Thr Ala 1 5 10 15 Gly Trp Leu Leu Leu Leu Leu Leu Arg Gly Gly Ala Gln Ala Leu Glu 20 25 30 Cys Tyr Ser Cys Val Gln Lys Ala Asp Asp Gly Cys Ser Pro Asn Lys 35 40 45 Met Lys Thr Val Lys Cys Ala Pro Gly Val Asp Val Cys Thr Glu Ala 50 55 60 Val Gly Ala Val Glu Thr Ile His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Arg 65 70 75 80 Gly Cys Gly Ser Gly Leu Pro Gly Lys Asn Asp Arg Gly Leu Asp Leu 85 90 95 His Gly Leu Leu Ala Phe Ile Gln Leu Gln Gln Cys Ala Gln Asp Arg 100 105 110 Cys Asn Ala Lys Leu Asn Leu Thr Ser Arg Ala Leu Asp Pro Ala Gly 115 120 125 Asn Glu Ser Ala Tyr Pro Pro Asn Gly Val Glu Cys Tyr Ser Cys Val 130 135 140 Gly Leu Ser Arg Glu Ala Cys Gln Gly Thr Ser Pro Pro Val Val Ser 145 150 155 160 Cys Tyr Asn Ala Ser Asp His Val Tyr Lys Gly Cys Phe Asp Gly Asn 165 170 175 Val Thr Leu Thr Ala Ala Asn Val Thr Val Ser Leu Pro Val Arg Gly 180 185 190 Cys Val Gln Asp Glu Phe Cys Thr Arg Asp Gly Val Thr Gly Pro Gly 195 200 205 Phe Thr Leu Ser Gly Ser Cys Cys Gln Gly Ser Arg Cys Asn Ser Asp 210 215 220 Leu Arg Asn Lys Thr Tyr Phe Ser Pro Arg Ile Pro Pro Leu Val Arg 225 230 235 240 Leu Pro Pro Pro Glu Pro Thr Thr Val Ala Ser Thr Thr Ser Val Thr 245 250 255 Thr Ser Thr Ser Ala Pro Val Arg Pro Thr Ser Thr Thr Lys Pro Met 260 265 270 Pro Ala Pro Thr Ser Gln Thr Pro Arg Gln Gly Val Glu His Glu Ala 275 280 285 Ser Arg Asp Glu Glu Pro Arg Leu Thr Gly Gly Ala Ala Gly His Gln 290 295 300 Asp Arg Ser Asn Ser Gly Gln Tyr Pro Ala Lys Gly Gly Pro Gln Gln 305 310 315 320 Pro His Asn Lys Gly Cys Val Ala Pro Thr Ala Gly Leu Ala Ala Leu 325 330 335 Leu Leu Ala Val Ala Ala Gly Val Leu Leu 340 345 <210> 4 <211> 363 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Met Asp Ala Ala Arg Arg Gly Asp Thr Gln Pro Val Met Trp Thr Thr 1 5 10 15 Gly Trp Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Cys Glu Gly Ala Gln Ala 20 25 30 Leu Glu Cys Tyr Ser Cys Val Gln Lys Ala Asp Asp Gly Cys Ser Pro 35 40 45 His Arg Met Lys Thr Val Lys Cys Gly Pro Gly Val Asp Val Cys Thr 50 55 60 Glu Ala Val Gly Ala Val Glu Thr Ile His Gly Gln Phe Ser Val Ala 65 70 75 80 Val Arg Gly Cys Gly Ser Gly Ile Pro Gly Lys Asn Asp Arg Gly Leu 85 90 95 Asp Leu His Gly Leu Leu Ala Phe Phe Gln Leu Gln Gln Cys Ser Glu 100 105 110 Asp Arg Cys Asn Ala Lys Leu Asn Leu Thr Leu Arg Gly Leu Asn Pro 115 120 125 Ala Gly Asn Glu Ser Ala Tyr Glu Pro Asn Gly Ala Glu Cys Tyr Ser 130 135 140 Cys Val Gly Leu Ser Arg Glu Lys Cys Gln Gly Ser Met Pro Pro Val 145 150 155 160 Val Asn Cys Tyr Asn Ala Ser Gly Arg Val Tyr Lys Gly Cys Phe Asp 165 170 175 Gly Asn Val Thr Leu Thr Ala Ala Asn Val Thr Val Ser Leu Pro Val 180 185 190 Arg Gly Cys Val Gln Asp Glu Thr Cys Thr Arg Asp Gly Val Thr Gly 195 200 205 Pro Gly Phe Thr Leu Ser Gly Ser Cys Cys Gln Gly Pro Arg Cys Asn 210 215 220 Ala Asp Leu Arg Asn Lys Thr Tyr Phe Ser Pro Arg Ile Pro Pro Leu 225 230 235 240 Val Leu Leu Pro Pro Pro Thr Thr Ala Ala Pro Ser Thr Arg Ala Gln 245 250 255 Asn Ser Ser Ser Thr Thr Ser Thr Ala Ala Pro Thr Thr Thr Thr Ser 260 265 270 Ile Ile Lys Pro Thr Thr Ala Gln Ala Ser His Thr Ser Pro His Glu 275 280 285 Met Asp Leu Glu Val Ile Gln Glu Glu Gly Ala Ser Leu Ser Gly Gly 290 295 300 Ala Ala Gly His Gly Gly Thr Ala Gly His Gly Gly Ala Ala Gly His 305 310 315 320 Gln Asp Arg Ser Asn Met Glu Lys Tyr Pro Gly Lys Gly Gly Ala Gln 325 330 335 Ile Pro Ala Lys Gly Gly Ser Gly Thr Leu Gly Ser Trp Leu Ser Ala 340 345 350 Val Leu Leu Thr Val Val Ala Gly Ala Met Leu 355 360 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 5 Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 6 Phe Ser Asp Tyr Gln Met Thr Trp Ile 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 7 Phe Gly His Tyr Tyr Met Phe Trp Ile 1 5 <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 8 Phe Ser Ser Asn Tyr Met Ser Trp 1 5 <210> 9 <211> 20 <212> 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tatgataaca accagcgccc gagcggggtg 180 ccggatcgct ttagcgggag caaaagcggg accagcgcga gcctggcgat tagcgggctg 240 cgcagcgagg atgaggcgga ttattattgc gcggcgtatg atgatagcct gaacgggccg 300 gtgtttgggg gggggaccaa actgaccgtg ctggggcag 339 <210> 318 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 318 gaggtgcagc tgctggagag cggggggggg ctggtgcagc cgggggggag cctgcgcctg 60 agctgcgcgg cgagcgggtt tacctttagc agcgcgtgga tgagctgggt gcgccaggcg 120 ccggggaaag ggctggagtg ggtgagctat attagcagca gcgggagcag cacctattat 180 gcggatagcg tgaaagggcg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgcggaggat accgcggtgt attattgcgc gcgcgagggg 300 ctgtgggcgt ttgattattg ggggcagggg accctggtga ccgtgagcag c 351 <210> 319 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 319 gagagcgtgc tgacccagcc gccgagcgcg agcgggaccc cggggcagcg cgtgaccatt 60 agctgcagcg ggagcagcag caacattggg gcggggtatg tggtgcattg gtatcagcag 120 ctgccgggga ccgcgccgaa actgctgatt tatgataaca accagcgccc gagcggggtg 180 ccggatcgct ttagcgggag caaaagcggg accagcgcga gcctggcgat tagcgggctg 240 cgcagcgagg atgaggcgga ttattattgc gcggcgtggg atgatcgcct gaacgggccg 300 gtgtttgggg gggggaccaa actgaccgtg ctggggcag 339 <210> 320 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 320 gaggtgcagc tgctggagag cggggggggg ctggtgcagc cgggggggag cctgcgcctg 60 agctgcgcgg cgagcgggtt tacctttagc aacgcgtgga tgagctgggt gcgccaggcg 120 ccggggaaag ggctggagtg ggtgagctat attagcagca gcgggagcac catttattat 180 gcggatagcg tgaaagggcg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgcggaggat accgcggtgt attattgcgc gcgcgagggg 300 ctgtgggcgt ttgattattg ggggcagggg accctggtga ccgtgagcag c 351 <210> 321 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 321 gagagcgtgc tgacccagcc gccgagcgtg agcggggcgc cggggcagcg cgtgaccatt 60 agctgcaccg ggagcagcag caacattggg gcggggtatg tggtgcattg gtatcagcag 120 ctgccgggga ccgcgccgaa actgctgatt tatgataaca acaaacgccc gagcggggtg 180 ccggatcgct ttagcgggag caaaagcggg accagcgcga gcctggcgat tagcgggctg 240 cgcagcgagg atgaggcgga ttattattgc gcggcgtatg atgatcgcct gaacgggccg 300 gtgtttgggg gggggaccaa actgaccgtg ctggggcag 339 <210> 322 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 322 gaggtgcagc tgctggagag cggggggggg ctggtgcagc cgggggggag cctgcgcctg 60 agctgcgcgg cgagcgggtt tacctttagc agcgcgtgga tgagctgggt gcgccaggcg 120 ccggggaaag ggctggagtg ggtgagctat attagcagca gcgggagcag cacctattat 180 gcggatagcg tgaaagggcg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgcggaggat accgcggtgt attattgcgc gcgcgagggg 300 ctgtgggcgt ttgatgggtg ggggcagggg accctggtga ccgtgagcag c 351 <210> 323 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 323 cagagcgtgc tgacccagcc gccgagcgcg agcgggaccc cggggcagcg cgtgaccatt 60 agctgcagcg ggagcagcag caacattggg gcggggtatg tggtgcattg gtatcagcag 120 ctgccgggga ccgcgccgaa actgctgatt tatgataaca accagcgccc gagcggggtg 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ccggatcgct ttagcgggag caaaagcggg accagcgcga gcctggcgat tagcgggctg 240 cgcagcgagg atgaggcgga ttattattgc gcggcgtttg atgatagcct gaacgggccg 300 gtgtttgggg gggggaccaa actgaccgtg ctggggcag 339 <210> 326 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 326 gaggtgcagc tgctggagag cggggggggg ctggtgcagc cgggggggag cctgcgcctg 60 agctgcgcgg cgagcgggtt tacctttagc agcgcgtgga tgagctgggt gcgccaggcg 120 ccggggaaag ggctggagtg ggtgagctat attagcagca gcgggagcag cacctattat 180 gcggatagcg tgaaagggcg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgcggaggat accgcggtgt attattgcgc gcgcgagggg 300 ctgtgggcgt ttgataaatg ggggcagggg accctggtga ccgtgaccag c 351 <210> 327 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 327 cagagcgtgc tgacccagcc gccgagcgcg agcgggaccc cggggcagcg cgtgaccatt 60 agctgcaccg ggagcagcag caacattggg gcggggtatg tggtgcattg gtatcagcag 120 ctgccgggga ccgcgccgaa actgctgatt tatgataaca acaaacgccc gagcggggtg 180 ccggatcgct ttagcgggag caaaagcggg accagcgcga gcctggcgat tagcgggctg 240 cgcagcgagg atgaggcgga ttattattgc gcggcgtttg atgatagcct gaacgggccg 300 gtgtttgggg gggggaccaa actgaccgtg ctggggcag 339 <210> 328 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 328 gaggtgcagc tgctggagag cggggggggg ctggtgcagc cgggggggag cctgcgcctg 60 agctgcgcgg cgagcgggtt tacctttagc agcgcgtgga tgagctgggt gcgccaggcg 120 ccggggaaag ggctggagtg ggtgagctat attagcagca gcgggagcag cacctattat 180 gcggatagcg tgaaagggcg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgcggaggat accgcggtgt attattgcgc gcgcgagggg 300 ctgtgggcgt ttgataaatg ggggcagggg accctggtga ccgtgagcag c 351 <210> 329 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a <400> 329 cagagcgtgc tgacccagcc gccgagcgcg agcgggaccc cggggcagcg cgtgaccatt 60 agctgcagcg ggagcagcag caacattggg gcggggtatg tggtgcattg gtatcagcag 120 ctgccgggga ccgcgccgaa actgctgatt tatgataaca accagcgccc gagcggggtg 180 ccggatcgct ttagcgggag caaaagcggg accagcgcga gcctggcgat tagcgggctg 240 cgcagcgagg atgaggcgga ttattattgc gcggcgtttg atgatagcct gaacgggccg 300 gtgtttgggg gggggaccaa actgaccgtg ctggggcag 339 <210> 330 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 330 gaggtgcagc tgctggagag cggggggggg ctggtgcagc cgggggggag cctgcgcctg 60 agctgcgcgg cgagcgggtt tacctttagc agcgcgtgga tgagctgggt gcgccaggcg 120 ccggggaaag ggctggagtg ggtgagctat attagcagca gcgggagcag cacctattat 180 gcggatagcg tgaaagggcg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgcggaggat accgcggtgt attattgcgc gcgcgagggg 300 ctgtgggcgt ttgataaatg ggggcagggg accctggtga ccgtgagcag c 351 <210> 331 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 331 cagagcgtgc tgacccagcc gccgagcgcg agcgggaccc cggggcagcg cgtgaccatt 60 agctgcagcg ggagcagcag caacattggg gcggggtatg tggtgcattg gtatcagcag 120 ctgccgggga ccgcgccgaa actgctgatt tatgataaca accagcgccc gagcggggtg 180 ccggatcgct ttagcgggag caaaagcggg accagcgcga gcctggcgat tagcgggctg 240 cgcagcgagg atgaggcgga ttattattgc gcggcgtttg atgatcgcct gagcgggccg 300 gtgtttgggg gggggaccaa actgaccgtg ctggggcag 339 <210> 332 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 332 gaggtgcagc tgctggagag cggggggggg ctggtgcagc cgggggggag cctgcgcctg 60 agctgcgcgg cgagcgggtt tacctttagc gattatcaga tgacctggat tcgccagacc 120 ccggggaaag ggctggagtg ggtgagcggg gtgagctgga acggggcgcg cacccattat 180 gcggatagcg tgaaagggcg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgcggaggat accgcggtgt attattgcgc gaaaggggat 300 tatctggtgt atagcagcta ttattttaaa agctgggggc aggggaccct ggtgaccgtg 360 accagc 366 <210> 333 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 333 cagagcgtgc tgacccagcc gccgagcgcg agcgggaccc cggggcagcg cgtgaccatt 60 agctgcagcg ggagcagcag caacgtgggg agcaacccgg tgaactggta tcagcagctg 120 ccggggaccg cgccgaaact gctgatttat cgcaacaacc agcgcccgag cggggtgccg 180 gatcgcttta gcgggagcaa aagcgggacc agcgcgagcc tggcgattag cgggctgcgc 240 agcgaggatg aggcggatta ttattgcgcg gcgtgggatg atcgcctgaa cgggtggggg 300 tttggggggg ggaccaaact gaccgtgctg gggcag 336 <210> 334 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 334 gagcagctgc tggagagcgg gggggggctg gtgcagccgg gggggagcct gcgcctgagc 60 tgcgcggcga gcgggtttac ctttagcagc tatcagatga cctggattcg ccagaccccg 120 gggaaagggc tggagtgggt gagcgggatt agctggaacg gggggagcac ccattatgcg 180 gatagcgtga aagggcgctt taccattagc cgcgataaca gcaaaaacac cctgtatctg 240 cagatgaaca gcctgcgcgc ggaggatacc gcggtgtatt attgcgcgaa aggggattat 300 ctggtgtata gcgcgtatta ttttgatagc tgggggcagg ggaccctggt gaccgtgagc 360 agc 363 <210> 335 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 335 caggtgctga cccagccgcc gagcgcgagc gggaccccgg ggcagcgcgt gaccattagc 60 tgcagcggga gcagcagcaa cattgggagc aacccggtga actggtatca gcagctgccg 120 gggaccgcgc cgaaactgct gatttatcgc aacaaccagc gcccgagcgg ggtgccggat 180 cgctttagcg ggagcaaaag cgggaccagc gcgagcctgg cgattagcgg gctgcgcagc 240 gaggatgagg cggattatta ttgcgcggcg tgggatgatc gcctgaacgg gtgggggttt 300 ggggggggga ccaaactgac cgtgctgggg cag 333 <210> 336 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 336 gaggtgcagc tgctggagag cggggggggg ctggtgcagc cgggggggag cctgcgcctg 60 agctgcgcgg cgagcgggtt tacctttagc gattatcaga tgacctggat tcgccagacc 120 ccggggaaag ggctggagtg ggtgagcggg attagctgga acggggggag cacccattat 180 gcggatagcg tgaaagggcg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgcggaggat accgcggtgt attattgcgc gaaaggggat 300 tatctggtgt atagcagcta ttattttaaa tattgggggc aggggaccct ggtgaccgtg 360 agcagc 366 <210> 337 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 337 cagagcgtgc tgacccagcc gccgagcgcg agcgggaccc cggggcagcg cgtgaccatt 60 agctgcagcg ggagcagcag caacattggg agcaacccgg tgaactggta tcagcagctg 120 ccggggaccg cgccgaaact gctgatttat cgcaacaacc agcgcccgag cggggtgccg 180 gatcgcttta gcgggagcaa aagcgggacc agcgcgagcc tggcgattag cgggctgcgc 240 agcgaggatg aggcggatta ttattgcgcg gcgtgggatg atcgcctgaa cgggtgggcg 300 tttggggggg ggaccaaact gaccgtgctg gggcag 336 <210> 338 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 338 gaggtgcagc tgctggagag cggggggggg ctggtgcagc cgggggggag cctgcgcctg 60 agctgcgcgg cgagcgggtt tacctttagc gattatcaga tgacctggat tcgccagacc 120 ccggggaaag ggctggagtg ggtgagcggg attagctgga acggggggag cacccattat 180 gcggatagcg tgaaagggcg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgcggaggat accgcggtgt attattgcgc gaaaggggat 300 tatctggtgt atagcagcta ttattttaaa agctgggggc aggggaccct ggtgaccgtg 360 agcagc 366 <210> 339 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 339 cagagcgtgc tgacccagcc gccgagcgcg agcgggaccc cggggcagcg cgtgaccatt 60 agctgcagcg ggagcagcag caacattggg agcaacccgg tgaactggta tcagcagctg 120 ccggggaccg cgccgaaact gctgatttat cgcaacaacc agcgcccgag cggggtgccg 180 gatcgcttta gcgggagcaa aagcgggacc agcgcgagcc tggcgattag cgggctgcgc 240 agcgaggatg aggcggatta ttattgcgcg gcgtgggatg atagcctgaa cgggtggggg 300 tttggggggg ggaccaaact gaccgtgctg gggcag 336 <210> 340 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 340 gaggtgcagc tgctggagag cggggggggg ctggtgcagc cgggggggag cctgcgcctg 60 agctgcgcgg cgagcgggtt tacctttagc gattatcaga tgacctggat tcgccagacc 120 ccggggaaag ggctggagtg ggtgagcggg attagctgga acggggggag cacccattat 180 gcggatagcg tgaaagggcg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgcggaggat accgcggtgt attattgcgc gaaaggggat 300 tatctggtgt ataaaagcta ttattttaaa agctgggggc aggggaccct ggtgaccgtg 360 agcagc 366 <210> 341 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 341 cagagcgtgc tgacccagcc gccgagcgcg agcgggaccc cggggcagcg cgtgaccatt 60 agctgcagcg ggagcagcag caacattggg agcaacccgg tgaactggta tcagcagctg 120 ccggggaccg cgccgaaact gctgatttat cgcaacaacc agcgcccgag cggggtgccg 180 gatcgcttta gcgggagcaa aagcgggacc agcgcgagcc tggcgattag cgggctgcgc 240 agcgaggatg aggcggatta ttattgcgcg gcgtgggatg atcgcctgag cgggtggggg 300 tttggggggg ggaccaaact gaccgtgctg gggcag 336 <210> 342 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 342 gaggtgcagc tgctggagag cggggggggg ctggtgcagc cgggggggag cctgcgcctg 60 agctgcgcgg cgagcgggtt tacctttagc gattatcaga tgacctggat tcgccagacc 120 ccggggaaag ggctggagtg ggtgagcggg attagctgga acggggggag cacccattat 180 gcggatagcg tgaaagggcg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgcggaggat accgcggtgt attattgcgc gaaaggggat 300 tatctggtgt atagcagcta ttattttaaa agctgggggc aggggaccct ggtgaccgtg 360 agcagc 366 <210> 343 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 343 cagagcgtgc tgacccagcc gccgagcgcg agcgggaccc cggggcagcg cgtgaccatt 60 agctgcagcg ggagcagcag caacattggg agcaacccgg tgaactggta tcagcagctg 120 ccggggaccg cgccgaaact gctgatttat cgcaacaacc agcgcccgag cggggtgccg 180 gatcgcttta gcgggagcaa aagcgggacc agcgcgagcc tggcgattag cgggctgcgc 240 agcgaggatg aggcggatta ttattgcgcg gcgtgggatg atcgcctgag cgggtggggg 300 tttggggggg ggaccaaact gaccgtgctg gggcag 336 <210> 344 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 344 gaggtgcagc tgctggagag cggggggggg ctggtgcagc cgggggggag cctgcgcctg 60 agctgcgcgg cgagcgggtt tacctttagc gattatcaga tgacctggat tcgccagacc 120 ccggggaaag ggctggagtg ggtgagcggg attagctgga acggggggag cacccattat 180 gcggatagcg tgaaagggcg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgcggaggat accgcggtgt attattgcgc gaaaggggat 300 tatctggtgt ataaaagcta ttattttaaa agctgggggc aggggaccct ggtgaccgtg 360 agcagc 366 <210> 345 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4.4a binder <400> 345 cagagcgtgc tgacccagcc gccgagcgcg agcgggaccc cggggcagcg cgtgaccatt 60 agctgcagcg ggagcagcag caacattggg agcaacccgg tgaactggta tcagcagctg 120 ccggggaccg cgccgaaact gctgatttat cgcaacaacc agcgcccgag cggggtgccg 180 gatcgcttta gcgggagcaa aagcgggacc agcgcgagcc tggcgattag cgggctgcgc 240 agcgaggatg aggcggatta ttattgcgcg gcgtgggatg atagcctgaa cgggtggggg 300 tttggggggg ggaccaaact gaccgtgctg gggcag 336 <210> 346 <211> 217 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 346 Asp Ile Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly 20 25 30 Tyr Val Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Arg 85 90 95 Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe 130 135 140 Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Gly Asp 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435 440 445 Ser Pro Gly 450 <210> 396 <211> 216 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 396 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Trp Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr 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Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly 450 <210> 398 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 398 Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 399 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 399 Trp Met Gly Ile Ile Asp Pro Gly Asp Ser Arg Thr Arg Tyr Ser Pro 1 5 10 15 Ser Phe Gln Gly 20 <210> 400 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 400 Gly Gln Leu Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Asp Gly 1 5 10 <210> 401 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 401 Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr Asn Ser Val Ser 1 5 10 <210> 402 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 402 Leu Met Ile Tyr Gly Val Asn Asn Arg Pro Ser 1 5 10 <210> 403 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 403 Ser Ser Tyr Asp Ile Glu Ser Ala Thr Pro 1 5 10 <210> 404 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 404 Gln Val Glu Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asp Pro Gly Asp Ser Arg Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gln Leu Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Asp Gly Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 405 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 405 Asp Ile Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Gly Val Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Asp Ile Glu 85 90 95 Ser Ala Thr Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 Gln <210> 406 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 406 caggtggaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgaaag cctgaaaatt 60 agctgcaaag gttccggata ttcctttact tcttattgga ttggttgggt gcgccaggcc 120 cctgggaagg gtctcgagtg gatgggcatt atcgatccgg gtgatagccg tacccgttat 180 tctccgagct ttcagggcca ggtgaccatt agcgcggata aaagcattag caccgcgtat 240 cttcaatgga gcagcctgaa agcgagcgat acggccatgt attattgcgc gcgtggtcag 300 ctttatggtg gtacttatat ggatggttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca 360 <210> 407 <211> 339 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 407 gatatcgcac tgacccagcc agcttcagtg agcggctcac caggtcagag cattaccatc 60 tcgtgtacgg gtactagcag cgatattggt ggttataatt ctgtgtcttg gtaccagcag 120 catcccggga aggcgccgaa acttatgatt tatggtgtta ataatcgtcc ctcaggcgtg 180 agcaaccgtt ttagcggatc caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccat tagcggcctg 240 caagcggaag acgaagcgga ttattattgc tcttcttatg atattgagtc tgctactcct 300 gtgtttggcg gcggcacgaa gttaaccgtc ctaggtcag 339 <210> 408 <211> 450 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 408 Gln Val Glu Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asp Pro Gly Asp Ser Arg Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gln Leu Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Asp Gly Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 409 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 409 Asp Ile Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Gly Val Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Asp Ile Glu 85 90 95 Ser Ala Thr Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe 130 135 140 Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Gly Asp Ser Ser Pro Val 145 150 155 160 Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys 165 170 175 Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser 180 185 190 His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 195 200 205 Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 410 <211> 1353 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 410 caggtggaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgaaag cctgaaaatt 60 agctgcaaag gttccggata ttcctttact tcttattgga ttggttgggt gcgccaggcc 120 cctgggaagg gtctcgagtg gatgggcatt atcgatccgg gtgatagccg tacccgttat 180 tctccgagct ttcagggcca ggtgaccatt agcgcggata aaagcattag caccgcgtat 240 cttcaatgga gcagcctgaa agcgagcgat acggccatgt attattgcgc gcgtggtcag 300 ctttatggtg gtacttatat ggatggttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca 360 gcctccacca agggtccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 660 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900 agcacgtacc gggtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1080 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa tga 1353 <210> 411 <211> 654 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 411 gatatcgcac tgacccagcc agcttcagtg agcggctcac caggtcagag cattaccatc 60 tcgtgtacgg gtactagcag cgatattggt ggttataatt ctgtgtcttg gtaccagcag 120 catcccggga aggcgccgaa acttatgatt tatggtgtta ataatcgtcc ctcaggcgtg 180 agcaaccgtt ttagcggatc caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccat tagcggcctg 240 caagcggaag acgaagcgga ttattattgc tcttcttatg atattgagtc tgctactcct 300 gtgtttggcg gcggcacgaa gttaaccgtc ctaggtcagc ccaaggctgc cccctcggtc 360 actctgttcc cgccctcctc tgaggagctt caagccaaca aggccacact ggtgtgtctc 420 ataagtgact tctacccggg agccgtgaca gtggcctgga agggagatag cagccccgtc 480 aaggcgggag tggagaccac cacaccctcc aaacaaagca acaacaagta cgcggccagc 540 agctatctga gcctgacgcc tgagcagtgg aagtcccaca gaagctacag ctgccaggtc 600 acgcatgaag ggagcaccgt ggagaagaca gtggccccta cagaatgttc atag 654

Claims (53)

  1. 일반 식 (Ia)의 결합제-약물 성분 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Figure pct01329

    여기서
    n은 1 내지 50의 수를 나타내고,
    AK는 결합제 바람직하게 키메라 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체를 나타내고,
    그룹 §-G-L1-B-L2-§§는 링커를 나타내고,
    여기서
    §는 그룹 AK에 대한 연결 부위를 나타내고
    §§는 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01330
    또는
    Figure pct01331

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R2는 이소프로필, 이소부틸, sec -부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일-메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01332

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01333
    또는
    Figure pct01334

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R4는 이소프로필, 이소부틸, sec -부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01335

    여기서
    #7은 인접 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    또는
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10은 벤조일을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01336

    Figure pct01337
    또는
    Figure pct01338

    여기서
    #9는 -CHC(R26)-T2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R26은 수소 또는 하이드록실을 나타내고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    R35는 메틸 또는 하이드록실을 나타낸다.
  2. 청구항 1에 있어서, 일반 식 (Ia)로 표시되는 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    n은 1 내지 50의 수를 나타내고,
    AK는 AK1 또는 AK2를 나타내고,
    여기서
    AK1은 결합제의 황 원자에 의해 그룹 G에 결합되는 결합제 (바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체)를 나타내고,
    AK2는 결합제의 질소 원자에 의해 그룹 G에 결합되는 결합제 (바람직하게 키메라, 인간화 또는 인간 항체, 특히 바람직하게 항-EGFR 항체)를 나타내고,
    AK =AK1인 경우, G는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01339

    또는
    Figure pct01340

    여기서
    #1은 결합제의 황 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #2은 그룹 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    또는
    AK =AK2인 경우, G는 카보닐을 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일, 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01341
    또는
    Figure pct01342

    여기서
    m은 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L1A는 선형 (C2-C10)-알칸디일을 나타내고,
    B1은 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01343

    또는
    Figure pct01344

    여기서
    ##5은 그룹 L1A에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##6은 그룹 L1B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L5는 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일을 나타내고,
    L6는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01345
    또는
    Figure pct01346

    여기서
    ##7는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##8은 L1B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R33은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert -부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐을 나타내고,
    R34은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R29는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R30는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R29 및 R30은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R31는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R32는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R31 및 R32은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일을 나타내고,
    여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록실 및 벤질을 포함하는 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체로 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4- 관계에 있는 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는 다리걸쳐서 상기 2개의 탄소 원자 사이에 임의로 위치한 탄소 원자를 포함하는 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01347

    Figure pct01348

    또는
    Figure pct01349

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    P는 O 또는 NH를 나타내고,
    L3는 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일을 나타내고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01350
    또는
    Figure pct01351

    여기서
    ***는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ****은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R25은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R28은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert -부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐을 나타내고,
    Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 나타내고,
    Q2는 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 나타내고,
    R14는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R15는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R14 및 R15은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R16는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R17는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R18는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R19는 수소 또는 천연 α-아미노산 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 측면 그룹을 나타내고,
    R20는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    R21는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R22는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R21 및 R22은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
    R23은 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R24는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R27는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R36은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert -부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐을 나타내고,
    R37은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R36 및 R37은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
    L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01352

    여기서
    p는 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록실 및 벤질을 포함하는 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체로 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4- 관계에 있는 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는 다리걸쳐서 상기 2개의 탄소 원자 사이에 임의로 존재하는 탄소 원자를 포함하는 (C3-C6) 사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01353
    또는
    Figure pct01354

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R2는 이소프로필, 이소부틸, sec -부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일-메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01355

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01356
    또는
    Figure pct01357

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R4는 이소프로필, 이소부틸, sec -부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01358

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    또는
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10은 벤조일을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01359

    Figure pct01360
    또는
    Figure pct01361

    여기서
    #9는 -CHC(R26)-T2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R26은 수소 또는 하이드록실을 나타내고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    R35는 메틸 또는 하이드록실을 나타낸다.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 일반 식 (Ia)로 나타내는 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    n은 1 내지 20의 수를 나타내고,
    AK는 AK1 또는 AK2를 나타내고,
    여기서
    AK1은 EGFR에 결합하고 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원-결합 항체 단편을 나타내고,
    AK2는 EGFR에 결합하고 결합제의 라이신 라디칼의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원-결합 항체 단편을 나타내고,
    AK =AK1인 경우, G는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01362

    여기서
    #1은 결합제의 시스테인 라디칼에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #2은 그룹 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    또는
    AK =AK2인 경우, G는 카보닐을 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01363
    또는
    Figure pct01364

    여기서
    m은 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L1A는 선형 (C2-C6)-알칸디일을 나타내고,
    B1은 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01365

    또는
    Figure pct01366

    여기서
    ##5은 그룹 L1A에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##6은 그룹 L1B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L5는 결합을 나타내고,
    L6는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01367
    또는
    Figure pct01368

    여기서
    ##7는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##8은 L1B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R33은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐을 나타내고,
    R34은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R29는 수소를 나타내고,
    R30는 수소를 나타내고,
    R31은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R32은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    L1B는 선형 (C2-C6)-알칸디일을 나타내고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 내지 2개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01369

    Figure pct01370
    또는
    Figure pct01371

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L3는 결합 또는 에탄-1,2-디일을 나타내고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01372
    또는
    Figure pct01373

    여기서
    ***는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ****은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R25은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R28는 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐을 나타내고,
    Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 나타내고,
    R14는 수소를 나타내고,
    R15는 수소를 나타내고,
    R16은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R17은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
    R18는 수소를 나타내고,
    R19는 수소, 메틸, 프로판-2-일, 2-메틸프로판-1-일 또는 1-메틸프로판-1-일을 나타내고,
    R20은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    R21은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R22은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R21 및 R22은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 나타내고,
    R23은 메틸을 나타내고,
    R24은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R27는 수소를 나타내고,
    R36는 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐을 나타내고,
    R37은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R36 및 R37은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01374

    여기서
    p는 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고.
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01375
    또는
    Figure pct01376

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성할 수 있고,
    Figure pct01377

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01378
    또는
    Figure pct01379

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성할 수 있고,
    Figure pct01380

    여기서
    #7은 인접 질소에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    또는
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성할 수 있고,
    R10은 벤조일을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01381

    Figure pct01382
    또는
    Figure pct01383

    여기서
    #9는 -CHC(R26)-T2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R26은 수소 또는 하이드록실을 나타내고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    R35는 메틸 또는 하이드록실을 나타낸다.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 일반 식 (Ia)으로 나타내는 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    n은 1 내지 10의 수를 나타내고,
    AK는 AK1 또는 AK2를 나타내고,
    여기서
    AK1은 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
    AK2는 결합제의 라이신 라디칼의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
    AK =AK1인 경우, G는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01384

    여기서
    #1은 결합제의 시스테인 라디칼에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #2은 그룹 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    또는
    AK =AK2인 경우, G는 카보닐을 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01385

    여기서
    m은 2 또는 3의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01386

    Figure pct01387
    또는
    Figure pct01388

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L3는 결합 또는 에탄-1,2-디일을 나타내고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01389
    또는
    Figure pct01390

    여기서
    ***는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ****은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R25은 메틸을 나타내고,
    R28는 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐을 나타내고,
    Q1은 피페리딘-1,4-디일을 나타내고,
    R16은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R17은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
    R21은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R22은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R21 및 R22은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 나타내고,
    R23은 메틸을 나타내고,
    R24는 수소를 나타내고,
    R36는 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐을 나타내고,
    R37은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01391

    여기서
    p는 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01392
    또는
    Figure pct01393

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01394

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01395
    또는
    Figure pct01396

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01397

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01398
    또는
    Figure pct01399

    여기서
    #9는 -CHCH2페닐에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R35는 메틸 또는 하이드록실을 나타낸다.
  5. 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, 일반 식 (Ia)으로 나타내는 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    n은 1 내지 10의 수를 나타내고,
    AK는 AK2를 나타내고,
    여기서
    AK2는 결합제의 라이신 라디칼의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
    G는 카보닐을 나타내고,
    L1는 결합을 나타내고,
    B는 결합을 나타내고,
    L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01400

    여기서
    p는 2 또는 3의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01401
    또는
    Figure pct01402

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01403

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01404

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01405

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8는 수소를 나타내고,
    R9는 수소 또는 벤질을 나타내고,
    R35은 메틸을 나타낸다.
  6. 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, 일반 식 (Ia)으로 나타내는 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    n은 1 내지 10의 수를 나타내고,
    AK는 AK1를 나타내고,
    여기서
    AK1은 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
    G은 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01406

    여기서
    #1은 결합제의 시스테인 라디칼에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #2은 그룹 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01407

    여기서
    m은 2 또는 3의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C3-C5)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01408

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L3는 결합 또는 에탄-1,2-디일을 나타내고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01409

    여기서
    ***는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ****은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R25은 메틸을 나타내고,
    R28는 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐을 나타내고,
    R16은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R17은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
    L2는 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01410

    여기서
    p는 2 또는 3의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01411
    또는
    Figure pct01412

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01413

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01414

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01415

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8는 수소를 나타내고,
    R9는 수소 또는 벤질을 나타내고,
    R35은 메틸을 나타낸다.
  7. 식 (XXXa)의 화합물뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Figure pct01416

    여기서
    Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자에 결합된 시스테인 라디칼을 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일, 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01417
    또는
    Figure pct01418

    여기서
    m은 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L1A는 선형 (C2-C10)-알칸디일을 나타내고,
    B1은 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01419
    또는
    Figure pct01420

    여기서
    ##5은 그룹 L1A에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##6은 그룹 L1B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L5는 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일을 나타내고,
    L6는 결합을 나타내고,
    R29는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R30는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R29 및 R30은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R31는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R32는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R31 및 R32은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일을 나타내고,
    여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록실 및 벤질을 포함하는 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체로 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4- 관계에 있는 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는 다리걸쳐서 상기 2개의 탄소 원자 사이에 임의로 위치한 탄소 원자를 포함하는 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01421

    Figure pct01422
    또는
    Figure pct01423

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    P는 O 또는 NH를 나타내고,
    L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일을 나타내고,
    L4는 결합을 나타내고,
    Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 나타내고,
    Q2는 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 나타내고,
    R14는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R15는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R14 및 R15은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R16는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R17는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R18는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R19는 수소 또는 천연 α-아미노산 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 측면 그룹을 나타내고,
    R20는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    R21는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R22는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R21 및 R22은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
    R23은 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R24는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R27는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01424

    여기서
    p는 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록실 및 벤질을 포함하는 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체로 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4- 관계에 있는 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는 다리걸쳐서 상기 2개의 탄소 원자 사이에 임의로 존재하는 (C3-C6) 사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01425
    또는
    Figure pct01426

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R2는 이소프로필, 이소부틸, sec -부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노-벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일-메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2- 페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01427

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01428
    또는
    Figure pct01429

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R4는 이소프로필, 이소부틸, sec -부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01430

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    또는
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10은 벤조일을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01431

    Figure pct01432
    또는
    Figure pct01433

    여기서
    #9는 -CHC(R26)-T2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R26은 수소 또는 하이드록실을 나타내고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    R35는 메틸 또는 하이드록실을 나타낸다.
  8. 청구항 7에 있어서, 식 (XXXa)로 표시되는 화합물뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자에 결합된 시스테인 라디칼을 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01434
    또는
    Figure pct01435

    여기서
    m은 2 또는 3의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L1A는 선형 (C2-C6)-알칸디일을 나타내고,
    B1은 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01436
    또는
    Figure pct01437

    여기서
    ##5은 그룹 L1A에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##6은 그룹 L1B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L5는 결합을 나타내고,
    L6는 결합을 나타내고,
    R29는 수소를 나타내고,
    R30는 수소를 나타내고,
    R31은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R32은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    L1B는 선형 (C2-C6)-알칸디일을 나타내고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 내지 2개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01438

    또는
    Figure pct01439

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L3는 결합 또는 에탄-1,2-디일을 나타내고,
    L4는 결합을 나타내고,
    R14는 수소를 나타내고,
    R15는 수소를 나타내고,
    R16은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R17은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
    R23은 메틸을 나타내고,
    R24은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01440

    여기서
    p는 2 또는 3의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01441
    또는
    Figure pct01442

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2- 페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01443

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01444
    또는
    Figure pct01445

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01446

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    또는
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10은 벤조일을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01447
    또는
    Figure pct01448

    여기서
    #9는 -CHCH2페닐에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R35는 메틸 또는 하이드록실을 나타낸다.
  9. 청구항 7 또는 8에 있어서, 식 (XXXa)로 표시되는 화합물뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자에 결합된 시스테인 라디칼을 나타내고,
    L1는 결합 또는 선형 (C2-C6)-알칸디일을 나타내고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01449

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L3는 결합을 나타내고,
    L4는 결합을 나타내고,
    R16은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R17은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01450

    여기서
    p는 2 또는 3의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    또는
    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    Figure pct01451
    또는
    Figure pct01452

    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2- 페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01453

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01454

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01455

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7는 수소를 나타내고,
    R8는 수소를 나타내고,
    R9는 수소를 나타내고,
    R35은 메틸을 나타낸다.
  10. 식 (XXXI)의 화합물뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Figure pct01456

    여기서
    L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일, 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01457
    또는
    Figure pct01458

    여기서
    m은 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L1A는 선형 (C2-C10)-알칸디일을 나타내고,
    B1은 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01459
    또는
    Figure pct01460

    여기서
    ##5은 그룹 L1A에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##6은 그룹 L1B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L5는 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일을 나타내고,
    L6는 결합을 나타내고,
    R29는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R30는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R29 및 R30은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R31는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R32는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R31 및 R32은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일을 나타내고,
    여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록실 및 벤질을 포함하는 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체로 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4- 관계에 있는 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는 다리걸쳐서 상기 2개의 탄소 원자 사이에 임의로 위치한 탄소 원자를 포함하는 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01461

    Figure pct01462
    또는
    Figure pct01463

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    P는 O 또는 NH를 나타내고,
    Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 나타내고,
    Q2는 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 나타내고,
    R18는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R19는 수소 또는 천연 α-아미노산 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 측면 그룹을 나타내고,
    R20는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    R21는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R22는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R21 및 R22은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
    R27는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01464

    여기서
    p는 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록실 및 벤질을 포함하는 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체로 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4- 관계에 있는 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는 다리걸쳐서 상기 2개의 탄소 원자 사이에 임의로 존재하는 (C3-C6) 사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01465
    또는
    Figure pct01466

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R2는 이소프로필, 이소부틸, sec -부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노-벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일-메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2- 페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01467

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01468
    또는
    Figure pct01469

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R4는 이소프로필, 이소부틸, sec -부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01470

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    또는
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10은 벤조일을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01471

    Figure pct01472
    또는
    Figure pct01473

    여기서
    #9는 -CHC(R26)-T2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R26은 수소 또는 하이드록실을 나타내고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    R35는 메틸 또는 하이드록실을 나타낸다.
  11. 청구항 10에 있어서, 식 (XXXI)로 표시되는 화합물뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01474

    여기서
    m은 2 또는 3의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01475

    Figure pct01476
    또는
    Figure pct01477

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R18는 수소를 나타내고,
    R19는 수소, 메틸, 프로판-2-일, 2-메틸프로판-1-일 또는 1-메틸프로판-1-일을 나타내고,
    R20는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    R21은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R22은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R21 및 R22은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 나타내고,
    R27은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01478

    여기서
    p는 2 또는 3의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,4- 관계에 있는 알칸디일 사슬의 2개의 탄소 원자는 상기 2개의 탄소 원자 사이에 임의로 위치한 탄소 원자를 포함하면서 다리걸쳐서 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01479
    또는
    Figure pct01480

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2- 페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01481

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01482
    또는
    Figure pct01483

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01484

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    또는
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10은 벤조일을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01485
    또는
    Figure pct01486

    여기서
    #9는 -CHCH2페닐에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R35는 메틸 또는 하이드록실을 나타낸다.
  12. 청구항 10 또는 11에 있어서, 식 (XXXI)로 표시되는 화합물뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    L1는 결합을 나타내고,
    B는 결합을 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01487

    여기서
    p는 2 또는 3의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01488
    또는
    Figure pct01489

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2- 페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01490

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01491

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01492

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7는 수소를 나타내고,
    R8는 수소를 나타내고,
    R9는 수소를 나타내고,
    R35은 메틸을 나타낸다.
  13. 하기 그룹으로부터 선택되는 식 (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드,
    N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드,
    N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트,
    N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드.
  14. 일반 식 (I)의 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Figure pct01493

    여기서
    n은 1 내지 50의 수를 나타내고,
    AK는 결합을 나타내고,
    그룹 §-G-L1-B-L2-§§는 링커를 나타내고,
    여기서
    §는 그룹 AK에 대한 연결 부위를 나타내고
    §§은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01494
    또는
    Figure pct01495

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01497
    또는
    Figure pct01498

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01499

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    또는
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10은 벤조일을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01500

    Figure pct01501
    또는
    Figure pct01502

    여기서
    #9는 -CHC(R26)-T2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R26은 수소 또는 하이드록실을 나타내고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타낸다.
  15. 청구항 14에 있어서, 일반 식 (I)로 표시되는 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    여기서
    n은 1 내지 50의 수를 나타내고,
    AK는 AK1 또는 AK2를 나타내고,
    여기서
    AK1은 결합제의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제를 나타내고,
    AK2는 결합제의 질소 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제를 나타내고,
    AK =AK1인 경우, G는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01503
    또는
    Figure pct01504

    여기서
    #1은 결합제의 황 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #2은 그룹 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    또는
    AK =AK2인 경우, G는 카보닐을 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01505

    여기서
    m은 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C1-C10)-알칸디일은 1 내지 4 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4- 관계에 있는 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고 이 고리는 상기 2개의 탄소 원자 사이에 임의로 위치한 탄소 원자를 포함하고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01506

    Figure pct01507
    또는
    Figure pct01508

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    P는 O 또는 NH를 나타내고,
    L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일을 나타내고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01509
    또는
    Figure pct01510

    여기서
    ***는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ****은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R25은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 나타내고,
    Q2는 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 나타내고,
    R14는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R15는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R14 및 R15은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R16는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R17는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R18는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R19는 수소 또는 천연 α-아미노산 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 측면 그룹을 나타내고,
    R20는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    R21는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R22는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R21 및 R22은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
    R23은 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R24는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R27는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01511

    여기서
    p는 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 내지 4 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4- 관계에 있는 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는 다리 걸쳐서 상기 2개의 탄소 원자 사이에 임의로 위치한 탄소 원자를 포함하는 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    D는 청구항 14에 기재된 의미를 갖는다.
  16. 청구항 14 또는 15에 있어서, 일반 식 (I)로 표시되는 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    여기서
    n은 1 내지 50의 수를 나타내고,
    AK는 AK1 또는 AK2를 나타내고,
    여기서
    AK1는 항체 또는 항원-결합 항체 단편을 나타내고 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되고,
    AK2는 항체 또는 항원-결합 항체 단편을 나타내고 질소 원자를 통해 그룹 G에 결합되고,
    n, G, L1, B, L2 및D는 청구항 14 또는 15에서 주어진 의미를 갖는다.
  17. 청구항 14 내지 16 중 어느 한 항에 있어서, 일반 식 (I)로 표시되는 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    n은 1 내지 20의 수를 나타내고,
    AK는 AK1 또는 AK2를 나타내고,
    여기서
    AK1은 EGFR에 결합하고 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원-결합 항체 단편을 나타내고,
    AK2는 EGFR에 결합하고 결합제의 라이신 라디칼의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원-결합 항체 단편을 나타내고,
    AK =AK1인 경우, G는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01512

    여기서
    #1은 결합제의 시스테인 라디칼에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #2은 그룹 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    또는
    AK =AK2인 경우, G는 카보닐을 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01513

    여기서
    m은 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01514
    또는
    Figure pct01515

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    P는 O 또는 NH를 나타내고,
    L3는 결합 또는 에탄-1,2-디일을 나타내고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01516

    여기서
    ***는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ****은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R25은 메틸을 나타내고,
    Q2는 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실을 나타내고,
    R16은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R17은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
    R18는 수소를 나타내고,
    R19는 수소, 메틸, 프로판-2-일, 2-메틸프로판-1-일 또는 1-메틸프로판-1-일을 나타내고,
    R20은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일을 나타내고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01517
    또는
    Figure pct01518

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01519

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01520
    또는
    Figure pct01521

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01522

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 T1에 대한 연결 부위를 나타내고 그룹,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    또는
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10은 벤조일을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01523

    Figure pct01524
    또는
    Figure pct01525

    여기서
    #9는 -CHC(R26)-T2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R26은 수소 또는 하이드록실을 나타내고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타낸다.
  18. 청구항 14 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 일반 식 (I)로 표시되는 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    n은 1 내지 10의 수를 나타내고,
    AK는 AK1 또는 AK2를 나타내고,
    여기서
    AK1은 결합제의 시스테인 라디칼의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
    AK2는 결합제의 라이신 라디칼의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내고,
    AK =AK1인 경우, G는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01526

    여기서
    #1은 결합제의 시스테인 라디칼에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #2은 그룹 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    또는
    AK =AK2인 경우, G는 카보닐을 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01527

    여기서
    m은 2 또는 3의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01528

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L3는 결합 또는 에탄-1,2-디일을 나타내고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01529
    또는
    Figure pct01530

    여기서
    ***는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ****은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R25은 메틸을 나타내고,
    R16은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R17은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일을 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01531
    또는
    Figure pct01532

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01533

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01534
    또는
    Figure pct01535

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01536

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, 벤질 또는 아다만틸메틸,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01537
    또는
    Figure pct01538

    여기서
    #9는 -CHC(R26)페닐에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타낸다.
  19. 청구항 14 내지 18 중 어느 한 항에서 규정된 식 (I)의 독창적인 화합물의 제조 방법으로서, 완충액 중 결합제의 용액은 하기인 것을 특징으로 하는 방법:
    [A] 적당한 환원제 예컨대, 예를 들면, 디티오트레이톨 또는 트리스 -(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드와 혼합되고 그 다음 식 (II)의 화합물:
    Figure pct01539

    (여기서 D, L1, B 및 L2는 청구항 14 내지 18에서 주어진 의미를 갖는다)
    과 반응되어 식 (I-A)의 화합물을 형성함:
    Figure pct01540

    (여기서 n, AK1, D, L1, B 및 L2 각각은 청구항 14 내지 18에서 주어진 의미를 갖는다),
    또는
    [B] 상기 화합물을 식 (III)의 화합물:
    Figure pct01541

    (여기서 D, L1, B 및 L2 각각은 청구항 14 내지 18에서 주어진 의미를 갖는다),
    과 반응시켜 식 (I-B)의 화합물을 형성함:
    Figure pct01542

    (여기서 n, AK2, D, L1, B 및 L2 각각은 청구항 14 내지 18에서 주어진 의미를 갖는다),
  20. 청구항 19 또는 51에 의해 생산된 화합물뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물로서, 여기서 AK1 및AK2은 세툭시맙, 판티투무맙, 니무투주맙을 나타내는 화합물.
  21. 식 (XXX)의 화합물:
    Figure pct01543

    여기서
    Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자에 결합된 시스테인 라디칼을 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01544

    여기서
    m은 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C1-C10)-알칸디일은 1 내지 4 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4- 관계에 있는 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는 다리 걸쳐서 상기 2개의 탄소 원자 사이에 임의로 위치한 탄소 원자를 포함하는 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01545

    Figure pct01546
    또는
    Figure pct01547

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    P는 O 또는 NH를 나타내고,
    L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일을 나타내고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01548
    또는
    Figure pct01549

    여기서
    ***는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ****은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R25은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    Q1은 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 아자헤테로사이클을 나타내고,
    Q2은 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 아자헤테로사이클을 나타내고,
    R14는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R15는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R14 및 R15은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R16는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R17는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R18는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R19는 수소 또는 천연 α-아미노산 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 측면 그룹을 나타내고,
    R20는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    R21는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R22는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    또는
    R21 및 R22은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
    R23은 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R24는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    R27는 수소 또는 (C1-C4)-알킬을 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01550

    여기서
    p는 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 내지 4 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4- 관계에 있는 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는 다리 걸쳐서 상기 2개의 탄소 원자 사이에 임의로 위치한 탄소 원자를 포함하는 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01551
    또는
    Figure pct01552

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01553

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01554
    또는
    Figure pct01555

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01556

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    또는
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10은 벤조일을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01557

    Figure pct01558
    또는
    Figure pct01559

    여기서
    #9는 -CHC(R26)-T2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R26은 수소 또는 하이드록실을 나타내고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물.
  22. 청구항 21에 있어서, 식 (XXX)로 표시되는 화합물뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자에 결합된 시스테인 라디칼을 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01560

    여기서
    m은 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01561

    또는
    Figure pct01562

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L3는 결합 또는 에탄-1,2-디일을 나타내고,
    L4는 결합을 나타내고,
    R14는 수소를 나타내고,
    R15는 수소를 나타내고,
    R16은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R17은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
    R23은 메틸을 나타내고,
    R24은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01563

    여기서
    p는 2 또는 3의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01564
    또는
    Figure pct01565

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01566

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01567
    또는
    Figure pct01568

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01569

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, 벤질 또는 아다만틸메틸,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    R10은 벤조일을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01570
    또는
    Figure pct01571

    여기서
    #9는 -CHC(R26)페닐에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타낸다.
  23. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합제는 암 표적 분자에 결합하는 결합제-약물 콘주게이트.
  24. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 23, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합제는 세포외 표적 분자에 결합하는 결합제-약물 콘주게이트.
  25. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 23, 24, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합제는 세포외 암 표적 분자에 결합하는 결합제-약물 콘주게이트.
  26. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 23, 24, 25, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 분자, 세포외 표적 분자, 암 표적 분자 또는 세포외 암 표적 분자는 단백질인 결합제-약물 콘주게이트.
  27. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 23, 24, 25, 26, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합제는, 세포외 표적 분자에 결합한 후, 표적 분자를 발현시키는 세포에 의해 내면화되는 결합제-약물 콘주게이트.
  28. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 23, 24, 25, 26, 27, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합제는 결합 단백질인 결합제-약물 콘주게이트.
  29. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합제는 항체 또는 이의 항원-결합 항체 단편 또는 항체 모방체인 결합제-약물 콘주게이트.
  30. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 모노클로날 항체인 결합제-약물 콘주게이트.
  31. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간, 인간화 또는 키메라 항체인 결합제-약물 콘주게이트.
  32. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 온전한 또는 변형된 온전한 항체인 결합제-약물 콘주게이트.
  33. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 또는 32, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG 부류의 항체인 결합제-약물 콘주게이트.
  34. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합제는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 세포외 암 표적 분자에 결합하는 결합제-약물 콘주게이트: EGF 수용체 (NP_005219.2), 메소텔린 (Q13421-3), C4.4a (NP_055215.2), 카보안하이드라제 IX (CA IX; NP_001207.2)), Her2, 글리피칸-3, TYRP1, 섬유아세포 성장 인자 수용체 3, 단일-통과 유형 I 막 단백질 ICOSLG, 및 프로그램된 세포 사멸 1 리간드 1.
  35. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 또는 34, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합제는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 세포외 암 표적 분자에 특이적으로 결합하는 결합제-약물 콘주게이트: EGF 수용체 (NP_005219.2), 메소텔린 (Q13421-3), C4.4a (NP_055215.2), 카보안하이드라제 IX (CA IX; NP_001207.2)), 글리피칸-3, TYRP1, 섬유아세포 성장 인자 수용체 3, 단일-통과 유형 I 막 단백질 ICOSLG, 및 프로그램된 세포 사멸 1 리간드 1.
  36. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 EGFR에 결합하는 결합제-약물 콘주게이트.
  37. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18 또는 23 내지 36, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 EGFR에 특이적으로 결합하는 결합제-약물 콘주게이트.
  38. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18 또는 23 내지 37, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-EGFR 항체는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 결합제-약물 콘주게이트: 세툭시맙, 파니투무맙, 니모투주맙, 잘루투무맙, 네시투무맙, 마투주맙, RG-716, GT-MAB 5.2-GEX, ISU-101, ABT-806, SYM-004, MR1-1, SC-100, MDX-447, 및 DXL-1218.
  39. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18 또는 23 내지 38, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-EGFR 항체는 하기 항체 중 하나의 6 개의 CDR 서열을 포함하는 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 결합제-약물 콘주게이트: 세툭시맙, 파니투무맙, 니모투주맙, 잘루투무맙, 네시투무맙, 마투주맙, RG-716, GT-MAB 5.2-GEX, ISU-101, ABT-806, SYM-004, MR1-1, SC-100, MDX-447, 및 DXL-1218.
  40. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18 또는 23 내지 39에 있어서, 상기 항-EGFR 항체는 하기 항체 중 하나의 가변 경쇄 및 가변 중쇄의 아미노산 서열을 포함하는 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 결합제-약물 콘주게이트: 세툭시맙, 파니투무맙, 니모투주맙, 잘루투무맙, 네시투무맙, 마투주맙, RG-716, GT-MAB 5.2-GEX, ISU-101, ABT-806, SYM-004, MR1-1, SC-100, MDX-447, 및 DXL-1218.
  41. 청구항 1 내지 6, 14 내지 18 또는 23 내지 40, 49 또는 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-EGFR 항체는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 결합제-약물 콘주게이트: 세툭시맙, 파니투무맙, 니모투주맙, 잘루투무맙, 네시투무맙 및 마투주맙.
  42. 질환의 치료 및/또는 예방을 위한, 청구항 1 내지 18 또는 23 내지 41, 49 또는 50 중 어느 한 항에 따른 결합제-약물 콘주게이트 또는 화합물.
  43. 과증식 및/또는 혈관신생 질환의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한, 청구항 1 내지 18 또는 23 내지 41, 49 또는 50 중 어느 한 항에 따른 결합제-약물 콘주게이트 또는 화합물.
  44. 과증식 및/또는 혈관신생 질환의 치료 및/또는 예방용 약물을 제조하기 위한, 청구항 1 내지 18 또는 23 내지 41, 49 또는 50 중 어느 한 항에 따른 결합제-약물 콘주게이트 또는 화합물.
  45. 청구항 1 내지 18 또는 23 내지 41, 49 또는 50 중 어느 한 항에 따른 결합제-약물 콘주게이트 또는 화합물을, 불활성 비독성 약제학적으로 적당한 부형제와 조합하여 함유하는 약제학적 약물.
  46. 청구항 1 내지 18 또는 23 내지 41, 49 또는 50 중 어느 한 항에 따른 결합제-약물 콘주게이트 또는 화합물을, 하나 이상의 항-과증식, 세포정지성 또는 세포독성 물질과 조합하여 함유하는 약제학적 약물.
  47. 과증식 및/또는 혈관신생 질환의 치료 및/또는 예방을 위한, 청구항 44 내지 46 중 어느 한 항에 따른 약제학적 약물.
  48. 유효량의 적어도 하나의, 청구항 1 내지 18 또는 23 내지 41, 49 또는 50 중 어느 한 항에 따른 결합제-약물 콘주게이트 또는 화합물, 또는 청구항 44 내지 46 중 어느 한 항에 따른 약제학적 약물을 사용하는, 인간 및 동물의 과증식 및/또는 혈관신생 질환의 치료 및/또는 예방 방법.
  49. 청구항 1에 있어서, 일반 식 (Ia)으로 나타내는 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    n은 1 내지 20의 수를 나타내고,
    AK는 AK1 또는 AK2를 나타내고,
    여기서
    AK1은 결합제의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제를 나타내고,
    AK2는 결합제의 질소 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제를 나타내고,
    AK =AK1인 경우, G는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01572

    여기서
    #1은 결합제의 시스테인 라디칼에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #2은 그룹 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    또는
    AK =AK2인 경우, G는 카보닐을 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01573
    또는
    Figure pct01574

    여기서
    m은 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L1A는 선형 (C2-C6)-알칸디일을 나타내고,
    B1은 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01575

    또는
    Figure pct01576

    여기서
    ##5은 L1A에 대한 연결 부위를 나타내고 그룹,
    ##6은 그룹 L1B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L5는 결합을 나타내고,
    L6는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01577
    또는
    Figure pct01578

    여기서
    ##7는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##8은 L1B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R33는 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐을 나타내고,
    R34은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R29는 수소를 나타내고,
    R30는 수소를 나타내고,
    R31은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R32은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일을 나타내고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 내지 2개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01579

    또는
    Figure pct01580

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L3는 결합 또는 에탄-1,2-디일을 나타내고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01581
    또는
    Figure pct01582

    여기서
    ***는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ****은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R25은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R28는 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐을 나타내고,
    Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 나타내고,
    R14는 수소를 나타내고,
    R15는 수소를 나타내고,
    R16은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R17은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
    R18는 수소를 나타내고,
    R19는 수소, 메틸, 프로판-2-일, 2-메틸프로판-1-일 또는 1-메틸프로판-1-일을 나타내고,
    R20은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    R21은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R22은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R21 및 R22은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 나타내고,
    R23은 메틸을 나타내고,
    R24은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R27는 수소를 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01583

    여기서
    p는 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01584
    또는
    Figure pct01585

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2- 페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01586

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01587
    또는
    Figure pct01588

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01589

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    또는
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10은 벤조일을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01590

    Figure pct01591
    또는
    Figure pct01592

    여기서
    #9는 -CHC(R26)-T2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R26은 수소 또는 하이드록실을 나타내고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    R35는 메틸 또는 하이드록실을 나타낸다.
  50. 청구항 1에 있어서, 일반 식 (Ia)으로 나타내는 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    n은 1 내지 10의 수를 나타내고,
    AK는 AK1 또는 AK2를 나타내고,
    여기서
    AK1은 결합제의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제를 나타내고,
    AK2는 결합제의 질소 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제를 나타내고,
    AK =AK1인 경우, G는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01593

    여기서
    #1은 결합제의 시스테인 라디칼에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #2은 그룹 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    또는
    AK =AK2인 경우, G는 카보닐을 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01594

    여기서
    m은 2 또는 3의 수를 나타내고,
    ##1은 그룹 G에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##2은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체로 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01595

    Figure pct01596
    또는
    Figure pct01597

    여기서
    *은 L1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    **은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L3는 결합 또는 에탄-1,2-디일을 나타내고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01598
    또는
    Figure pct01599

    여기서
    ***는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ****은 L2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R25은 메틸을 나타내고,
    R28는 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐을 나타내고,
    Q1은 피페리딘-1,4-디일을 나타내고,
    R16은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R17은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
    R21은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R22은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    또는
    R21 및 R22은, 이들이 결합되는 원자와 함께, 사이클로프로필 고리를 나타내고,
    R23은 메틸을 나타내고,
    R24는 수소를 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01600

    여기서
    p는 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01601
    또는
    Figure pct01602

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1는 수소를 나타내고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 1-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2- 페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01603

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01604
    또는
    Figure pct01605

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3는 수소를 나타내고,
    R4는 벤질, 1-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01606

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01607
    또는
    Figure pct01608

    여기서
    #9는 -CHCH2페닐에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R35는 메틸 또는 하이드록실을 나타낸다.
  51. 일반 식 (Ia)의, 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 따른 독창적인 화합물을 생산하는 방법으로서, 완충액 중 결합제의 용액이 하기인 것을 특징으로 하는 방법:
    [A] 적당한 환원제 예컨대, 예를 들면, 디티오트레이톨 또는 트리스 -(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드와 혼합되고 그 다음 (IIa)의 화합물:
    Figure pct01609

    (여기서 D, L1, B, L2 및 R35 각각은 청구항 1 내지 6에서 주어진 의미를 갖는다)
    과 반응되어 식 (Ia-A)의 화합물의 형성함:
    Figure pct01610

    (여기서 n, AK1, D, L1, B, L2 및 R35 각각은 청구항 1 내지 6에서 주어진 의미를 갖는다)
    또는
    [B] 식 (IIIa)의 화합물:
    Figure pct01611

    (여기서 D, L1, B, L2 및 R35 각각은 청구항 1 내지 6에서 주어진 의미를 갖는다)
    과 반응시켜 식 (Ia-B)의 화합물을 형성함:
    Figure pct01612

    (여기서 n, AK2, D, L1, B, L2 및 R35 각각은 청구항 1 내지 6에서 주어진 의미를 갖는다)
  52. AK1 및AK2은 세툭시맙, 판티투무맙 또는 니무투주맙을 나타내는, 청구항 51의 방법으로 생산된 화합물뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물.
  53. 청구항 1에 있어서, 일반 식 (Ia)으로 나타내는 결합제-약물 콘주게이트뿐만 아니라 그것의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    n은 1 내지 50의 수를 나타내고,
    AK는 결합을 나타내고,
    그룹 §-G-L1-B-§§는 링커를 나타내고,
    여기서
    §는 그룹 AK에 대한 연결 부위를 나타내고
    §§은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹을 나타내고:
    Figure pct01613

    여기서
    p는 2 내지 6의 수를 나타내고,
    ##3은 그룹 B에 대한 연결 부위를 나타내고,
    ##4은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록실 및 벤질을 포함하는 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환체로 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4- 관계에 있는 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는 다리 걸쳐서 상기 2개의 탄소 원자 사이에 임의로 위치한 탄소 원자를 포함하는 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01614
    또는
    Figure pct01615

    여기서
    #3은 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R2는 이소프로필, 이소부틸, sec -부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일-메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R1 및 R2는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01616

    여기서
    #4는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    N-O 그룹을 함유하는 고리 A는 하기 식의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭, 임의로 치환된 헤테로사이클을 나타내고,
    Figure pct01617
    또는
    Figure pct01618

    여기서
    #6는 카보닐 그룹에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록실 또는 벤질옥시를 나타내고,
    R3은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R4는 이소프로필, 이소부틸, sec -부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    또는
    R3 및 R4는, 이들이 부착되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct01619

    여기서
    #7는 인접 질소 원자에 대한 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1에 대한 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹을 나타내고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸을 나타내고,
    R8은 수소 또는 메틸을 나타내고,
    R9는 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질을 나타내고,
    또는
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10은 벤조일을 나타내고,
    R11은 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 벤질을 나타내고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹을 나타내고,
    Figure pct01620

    Figure pct01621
    또는
    Figure pct01622

    여기서
    #9는 -CHC(R26)-T2에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹으로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실로 치환될 수 있는 페닐을 나타내고,
    R26은 수소 또는 하이드록실을 나타내고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸을 나타내고,
    R35는 메틸 또는 하이드록실을 나타낸다.
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