KR20140114826A - Fgfr 항체 약물 콘주게이트 (adcs) 및 그의 용도 - Google Patents

Fgfr 항체 약물 콘주게이트 (adcs) 및 그의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20140114826A
KR20140114826A KR1020147019085A KR20147019085A KR20140114826A KR 20140114826 A KR20140114826 A KR 20140114826A KR 1020147019085 A KR1020147019085 A KR 1020147019085A KR 20147019085 A KR20147019085 A KR 20147019085A KR 20140114826 A KR20140114826 A KR 20140114826A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
group
hydrogen
formula
methyl
here
Prior art date
Application number
KR1020147019085A
Other languages
English (en)
Inventor
한스-게오르그 레르켄
스테파니 함머
악셀 하렝가
샤를롯테 크리스틴 코피츠
칼 프리드리히 니싱
아넷트 솜머
베아트릭스 슈텔테-루드비히
크리스토프 말러트
요아킴 슈마허
스벤 골피어
시몬 그레벤
산드라 브루더
Original Assignee
시애틀 지네틱스, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 시애틀 지네틱스, 인크. filed Critical 시애틀 지네틱스, 인크.
Publication of KR20140114826A publication Critical patent/KR20140114826A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

본원은 표적 FGFR2에 대항하여 지향된 N,N-디알킬아우리스타틴의 신규 항체 약물 콘주게이트 (ADC), 상기 ADC의 약물 대사물, 상기 ADC를 생산하는 방법, 병을 치료 및/또는 예방하기 위한 이들 ADC의 용도, 및 또한 병, 더욱 특히 과증식 및/또는 혈관신생 질환 예컨대 암종의 치료 및/또는 예방하기 위한 약제를 생산하기 위한 상기 ADC의 용도에 관한 것이다. 그와 같은 치료는 단일요법으로서 또는 그 밖에 다른 약제 또는 추가 치료법과 병용하여 실시될 수 있다.

Description

FGFR 항체 약물 콘주게이트 (ADCS) 및 그의 용도 {FGFR ANTIBODY DRUG CONJUGATES (ADCS) AND THE USE THEREOF}
본원은 표적 섬유아세포 성장 인자 수용체 2 (FGFR2)를 겨냥하는 N,N-디알킬아우리스타틴의 신규한 결합제-약물 콘주게이트 (ADC), 이들 ADC의 활성 대사물, 이들 ADC의 제조 방법, 병의 치료 및/또는 예방을 위한 이들 ADC의 용도, 및 또한 병, 더 상세하게는 과증식 및/또는 혈관신생 질환 예컨대, 암 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약제를 생산하기 위한 이들 ADC의 용도에 관한 것이다. 그와 같은 치료는 단일요법으로서 아니면 다른 약제 또는 추가 치료법과 조합하여 실시될 수 있다.
암 질환은 다양한 조직에서 조절되지 않는 세포 성장의 결과이다. 다수의 사례에서, 신규한 세포는 현존하는 조직을 침투하거나 (침입성 성장), 또는 그들은 원격 기관으로 전이된다. 암 질환은 다양한 기관에서 발생하며, 상기 병은 종종 조직-특이적 방식으로 진행된다. 따라서 일반 용어로서 명칭 "암 질환"은 상이한 기관, 조직 및 세포 유형의 거대 그룹의 규정된 질환을 기재한다.
초기 단계 종양은 수술 및 방사선치료 조치에 의해 제거될 수 있다. 전이된 종양은 일반적으로 화학요법제에 의한 완화 치료만 제공될 수 있다. 그 경우에 목적은 삶의 질을 증진시키고 잔여 수명을 연장하는 최적의 조합을 달성하기 위한 것이다.
현재 비경구로 투여되는 대다수의 화학요법제는 종종 종양 조직 또는 종양 세포에 표적-지향되지 않지만, 대신에, 그의 전신 투여의 결과로서 체내에, 따라서 약물의 노출이 바람직하지 않은 위치, 예컨대, 건강한 세포, 조직 및 기관을 포함하는 체내에 비-특이적으로 분배된다. 이것은 원치않는 부작용 및 심지어 일반 독성의 심각한 효과를 유도할 수 있으며, 그때 약물의 치료적으로 유용한 투여량 범위를 종종 크게 제한하거나 약물치료의 완전한 중단을 필요로 할 수 있다.
따라서, 종양 세포 또는 바로 접한 인근 조직에서 이들 화학요법제의 개선된 및 선택적 이용가능성, 및 한편으로 효과에서의 연관된 증가, 다른 한편으로 독성 부작용의 최소화는 신규한 화학요법제의 개발에서 수년간 초점이 되어왔다. 표적 세포 내로 약물을 도입시키는 효율적인 방법을 개발하기 위해 다수의 시도가 현재까지 이루어졌다. 그럼에도 불구하고, 약물과 세포내 표적 사이의 회합을 최적화하고 예를 들면 인접한 세포에 대한 약물의 세포간 분포를 최소화하는 것이 계속해서 난관이 되고 있다.
예를 들면, 모노클로날 항체는 종양 조직 및 종양 세포의 표적-지향된 어드레싱 (addressing)에 적당하다. 암 질환의 임상 치료를 위한 그와 같은 항체의 유의성은 그 후 개별적인, 특이적 종양 질환의 치료에 승인된 트라스투주맙 (Herceptin®), 리툭시맙 (Rituxan®), 세툭시맙 (Erbitux®) 및 베바시주맙 (Avastin®)과 같은 제제의 활성을 기반으로 하여, 최근에 상당한 일반적 증가를 보여주었다 [예를 들면 G. P. Adams and L. M. Weiner, Nat . Biotechnol . 23, 1147-1157 (2005) 참조]. 결과적으로 소위 면역콘주게이트 예컨대, 종양-연관된 항원을 겨냥하는 내재화된 항체가 세포독성 약물에 결합 단위 ("링커")를 통해 공유 연결된 상기 언급된 ADC에 대한 관심이 또한 뚜렷하게 증가했다. 종양 세포 내의 ADC의 도입 및 차후의 콘주게이트 절단 이후에, 세포독성 약물 자체 또는 세포독성 약물로부터 형성된 세포독성 활성을 갖는 또 하나의 대사물은 종양 세포 내로 방출되며, 여기서 그것은 직접적으로 및 선택적으로 그것의 효과를 발현시킬 수 있다. 이런 식으로 그것은 암 질환의 종래의 화학요법과 비교하여 유의미하게 더 근접한 한계 내에서 정상 조직에 대한 손상을 유지할 수 있을 것이다 [예를 들면 J.　M. Lambert, Curr . Opin . Pharmacol . 5, 543-549 (2005); A.　M. Wu and P.　D. Senter, Nat . Biotechnol . 23, 1137-1146 (2005); P.　D. Senter, Curr . Opin . Chem . Biol . 13, 235-244 (2009); L.　Ducry and B. Stump, Bioconjugate Chem . 21, 5-13 (2010) 참조].
항체 대신에, 특이적 표적 위치 ("표적") 예컨대, 수용체에 선택적으로 결합하는 결합제로서 사용되는 소분자 약물 구형체로부터의 결합제가 또한 가능하다 [예를 들면 E. Ruoslahti 등, Science 279, 377-380 (1998); D. Karkan 등, PLoS ONE 3　(6), e2469 (June 25, 2008) 참조]. 또한 세포독성 약물, 및 약물의 방출을 위한 리간드와 약물 사이의 규정된 절단 지점을 나타내는 어드레싱 리간드의 콘주게이트가 공지되어 있다. 이러한 종류의 "예정된 중단점"은, 예를 들면, 작용 위치에서 특이적 효소에 의해 특정한 부위에서 선택적으로 절단될 수 있는 펩타이드 사슬 내에 존재할 수 있다 [예를 들면 R. A. Firestone and L. A. Telan, US 특허 출원 US 2002/0147138 참조].
모노클로날 항체의 활성은 다양한 유형의 암에서 실증된다. 따라서 Herceptin® 및 Erbitux®가 각각 HER2-양성 유방암 및 EGFR-양성 결장직장암의 치료에 성공적으로 사용된다.
항체에 대한 세포독성 화합물의 커플링은 추가로 증대된 암 치료의 확장된 가능성을 형성하며, 이는 이들 콘주게이트가 종양-특이적 독성기 축적을 가능하게 하고 동시에 전신 독성을 감소시키기 때문이다. 활성 및 내성에 대하여, 호지킨 림프종에서의 브렌툭시맙 베도틴으로의 임상적 연구 및 유방암에서의 트라스투주맙-DM1로의 임상적 연구가 매우 유망한 결과를 산출했으며, 이는 다른 종양 항원에 대한 신규한 항체 및 신규한 ADC의 개발을 지지한다.
항체-기반 치료는 고체 종양을 포함하는 다양한 암종의 치료에 매우 강력함을 입증한다. 따라서, 예를 들면 Herceptin®는 유방암의 치료에 성공적으로 활용되었으며, Rituxan®은 B 세포와 연관된 암종의 형태에 강력하다. 성공적인 항체-기반 치료 개발의 초점은 바람직하게는 종양 세포에서 발현되는 세포 표면 단백질에 대한 항체의 단리이다.
섬유아세포 성장 인자 수용체는 티로신 수용체 키나제 (RTK)이며, 이것 중 4개는 포유동물 (FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4)에서 공지되어 있다. 리간드로서, 22 인간 섬유아세포 성장 인자 (FGF)가 확인되었다 (Eswarakumar and Schlessinger, Cytokine & Growth Factor Reviews 2005, 16:139-149; Shimada 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001, 98:6500-6505). FGFRs는 3개의 세포외 면역글로불린 (Ig)-유사 도메인, 즉 D1-D3 (도메인 2 및 3은 리간드 결합에 필요하다), 및 또한 개별적인 막통과 도메인 및 세포질 도메인으로 이루어지며, 이는 단백질 티로신 키나제의 촉매적 중심을 함유한다 (도식적 실례는 도 1에 주어진다).
FGFR2 구조의 도식적 실례. 알파 (서열번호: 1) 및 베타 (서열번호: 2) 스플라이스 변이체가 서로 비교된다. 상기 실례는 3개의 Ig-유사 도메인 (D1, D2 및 D3), 막통과 도메인 (TM) 및 세포내 키나아제 도메인을 보여준다. 헤파린 결합 부위 (HBS), 산성 박스 (AB), 및 대안적인 IIIb/IIIc 도메인이 마찬가지로 라벨링된다. 아미노 말단은 N으로 표시되며, 카복시 말단은 C로 표시된다.
세포외 구성요소는 추가로 산성 박스 (AB) 및 헤파린 결합 부위 (HBS)를 지닌다 (도 1 참고). RTKs의 FGFR 패밀리의 중요한 특징은 상이한, 대안적인 스플라이싱된 변이체가 존재한다는 것이다. 전체길이 FGFR은 FGFR 알파 (서열번호: 1)로서 확인되며, 반면 D1이 누락된 동형체는 FGFR 베타 (서열번호: 2)로서 확인된다 (도 1). 도메인 3에서의 대안적인 스플라이싱은 2개의 상이한 변이체, 즉 엑손 7 및 8에 의해 인코딩된 FGFR2 IIIb, 및 엑손 7 및 9에 의해 인코딩된 FGFR2 IIIc를 유도한다 (도 1). 후자의 스플라이싱은 리간드 결합에 영향을 주어, 특이적 패턴을 유도한다. FGFR2 IIIc는 주로 간엽 세포에 의해 발현되며, FGFR2 IIIb는 본질적으로 상피 세포에 의해 발현된다. FGF7은 케라틴생성세포 성장 인자 (KGF)로도 공지되며, FGFR2 IIIb에만 결합되고, 따라서 또한 KGFR로 불린다. FGF가 그의 수용체와 결합하는 경우, 차후의 FGFRs의 이량체화 및 인산화, 및 FRS-GRB2 도킹 단백질 복합체를 통한 RAS-MAPK 신호 전달 캐스케이드 및 PI3K-AKT 신호 전달 캐스케이드로의 다운스트림 시그널링이 나타난다. 전자의 신호 전달 캐스케이드는 세포 성장 및 세포 분화에 연루되며, 반면에 후자는 세포의 생존 및 세포 운명의 결정에 연루된다 (Katoh und Katoh, Int. J. Oncol. 2006, 29:163-168).
배아발생 동안 정확한 기관발생을 위하여, 모든 4개의 수용체 (FGFR1 내지 FGFR4) 및 그의 스플라이싱 변이체의 상이한 FGF를 통한 조직된 신호 전달이 필요하다 (Ornitz 등, Genome Biol 2001, 2:3005). FGFR2의 경우에, 모든 FGFR2 변이체의 부재는 태반 및 팔다리싹 형성시 결함을 유도하고, 따라서 E10.5 스테이지에서의 치사를 유도한다. 마우스에서의 FGFR2 IIIb의 특이적 넉아웃도 마찬가지로 폐, 하수체 전엽, 갑상선, 치아 및 팔다리의 무발생과 함께 (P0에서) 치사를 유도하며, 반면에 FGFR2 IIIc 파손 변이체는 지연성 골화, 균형성 왜소증 및 두개골 기저의 골유합증의 발생과 함께 생존 가능하다 (Eswarakumar and Schlessinger, 2005). 생식 계열에서 FGFR2 돌연변이를 활성화시키면 배아발생 동안 심각한 기형, 예컨대 인간에서 아페르 증후군 또는 파이퍼 증후군의 경우에 관상 골유합증 및 두개 골유합증을 유도한다 (Robin 등, in Gene Reviews, NCBI Bookshelf Washington, edited by Pagon 등, 1993). 성인에서, FGFR2 신호 전달은 상처 치유, 상피 복구 및 피부 및 점막의 세포 보호와 연루되며 (Braun 등, Phil. Trans. R. Soc. Lond. B 2004, 359:753-757), 간 손상의 경우에는 재생과 연루된다 (Steiling 등, Oncogene 2003, 22:4380-4388; Bohm, dissertation, Eidgenossische Technische Hochschule Zurich, 2009). 따라서, 경색에 따른 EPDC (심외막 유도된 세포)의 심장으로의 이동에서 FGFR2 신호 전달의 역할이 논의중이며, 이는 배아발생 동안 FGF10-FGFR2 신호 전달이 심장의 발달에 필요한 과정인 EPDC의 치밀 심근으로의 이동에 필요하기 때문이다 (Vega-Hernandez 등, Development 2011:3331-3340; Winter and De Groot, Cell Mol. Life Sci. 2007, 64:692-703). FGFR2에 의해 행해진 이들 모든 역할은 현실적으로 재생되며, 조직 항상성 파손의 결과로서 비-생리적 조건하에서만 명백히 필수적으로 중요하다. FGFR2를 통한 증가된 체세포 신호 전달은 다양한 병적 상태 예컨대 여드름 (Katoh, J. of Invest. Dermatol. 2009, 129:1861-1867), 건선 (Finch 등, Am. J. Pathol. 1997, 151:1619-1628; Xu 등, J. Invest. Dermatol. 2011:131:1521-1529) 및 암 (하기 참고)과 연루된다.
암 환자에서 FGFR2 발현과 부정적인 결과의 강력한 관련성을 보여주는 수많은 연구가 공개되었다:
FGFR2 및/또는 KGF의 과발현은 위 암종의 확장적인 성장 및 환자의 생존 단축이 동반된다 (Matsunobu 등, Int. J. Cancer 2006, 28:307-314; Toyokawa 등, Oncol. Reports 2009, 21:875-880). FGFR2의 과발현은 시험된 모든 위 암종 샘플 중의 31-36.5%에서 검출되었다 (Matsunobu 등, Int. J. Cancer 2006, 28:307-314; Toyokawa 등, Oncol. Reports 2009, 21:875-880). 선암종 (모든 위 암종 중의 70%)은 추가로 2 가지의 상이한 병적 유형, 즉 장형 및 미만형의 위암으로 세분된다. 흥미롭게도, 제1 덜 공격성 유형은 활성화된 ErbB2 신호 경로와 연관되며, 반면에, 후자의 더 공격성 유형의 경우에는, 비정상이 FGFR2/PI3K 신호 경로에서 발생한다 (Yamashita 등, Surg. Today 2011, 41:24-38). FGFR2 과발현은 미만성 종류의 위암의 모든 샘플 중 53%에서 발생한다 (Yamashita 등, Surg. Today 2011, 41:24-38). 모든 데이타를 종합하면, HER2 발현 및 FGFR2 발현은 2개의 상이한 환자 모집단에서 발생하는 것으로 보인다. 어느 정도까지 아마, FGFR2의 발현은 유전자 증폭의 결과이며, 이는 FGFR2의 증폭이 모든 일차 위 암종 중의 대략 7-10%에서 발견되기 때문이다 (Kunii 등, Cancer Res. 2008, 68:23-40-2348). 게다가, FGFR2 발현은 전이에서 발견될 뿐만 아니라, 사실상 일차 종양에서보다 전이에서 훨씬 더 컸다 (Yamashita 등, Surg. Today 2011, 41:24-38).
유방암의 경우에, FGFR2 IIIb 발현은 종양 샘플 중의 57%에서 발견되었지만, 건강한 조직에서는 거의 발견되지 않았다 (Tamaru 등, 2004, 84:1460-1471). KGF (FGF7)는 일반적으로 FGFR2 IIIb와 함께 랜덤 샘플 중의 45%에서 발생했다. FGF7 및 그의 단일 수용체 FGFR2 IIIb의 공-발현은 일차 유방 암종과 비교하여 일차 종양 내의 유의미하게 감소된 수의 세포자멸적 세포와 연관되었으며, 여기서 FGF7도 FGFR2 IIIb도 발현되지 않았다 (Tamaru 등, 2004, 84:1460-1471). 위암의 경우에서와 같이, 유전자 증폭은 유방암에서 또한 발견되었으며, 또한 삼중 음성 유방 암종 (TNBC) 중의 4%에서 발견되었다 (Turner 등, Oncogene 2010, 29:2013-2023). 유방암에서, 유방암의 위험 증가와 연관된 개별적인 뉴클레오타이드에서의 수많은 변화 (단일 뉴클레오타이드 다형성, SNP)가 확인되었다 (Hunter 등, Nature Genetics 2007, 6:870-874). SNP가 인트론 2 내에 국한된다면, 이것은 FGFR2의 전사 상향 조절을 유도한다 (Katoh, Expert Reviews 2010, 10:1375-1379). 흥미롭게도, FGFR1은 에스트로겐 수용체 (ER) 양성 유방 암종의 경우에 우선적으로 상향조절되며, 반면에 FGFR2는 ER-음성 유방 암종의 경우에 상향조절된다 (Katoh, Expert Reviews 2010, 10:1375-1379).
췌장 암종의 경우에, FGFR2 IIIb 및/또는 FGF7의 과발현은 정맥 침입 (Cho 등, Am. J. Pathol. 170:1964-1974), 종양 세포에서 발견되지만 종양 세포와 인접한 기질 세포에서 더욱 더 자주 발생하는 FGFR2 및 FGF7의 공-발현과 매우 관련된다 (Ishiwata 등, Am. J. Pathol. 1998, 153:213-222). 상피 난소 암의 경우에, 사례 중 80%가 정상 조직과 비교하여 FGRF2의 상향조절을 보였으며, 70%에서 복수액 중에 FGF7이 있었다 (Steele 등, Oncogene 20:5878-5887). FGFR2 단백질은 종양의 침입성 전두부에서의 강력한 발현과 함께 모든 시험된 침입성 자궁경부 암종에서 발견되었다 (Kawase 등, Int. J. Oncol. 2010, 36:331-340).
폐 선암종의 경우에, FGF7 및 FGFR2의 공-발현은 사례 중 51.6%에서 발생하며, 낮은 정도의 분화, 높은 증식률, 림프절 전이, 및 단축된 5-년 생존율과 관련된다 (Yamayoshi 등, J. Pathol. 2004, 204:110-118).
자궁내막암종의 경우에, FGFR2 돌연변이의 활성화는 사례 중 대략 16%에서 발생한다 (Pollock 등, Oncogene 2007, 26:7158-7162).
식도암 (OC)의 경우에, 암 세포에서 FGF7 및 FGFR2의 공-발현은 환자 중 26%에서 발견되었으며, 단축된 생존 기간에 대한 추세와 관련되었다 (Yoshino 등, Int. J. Oncol. 2007, 31:721-728).
간 세포 암종의 경우에, FGFR2의 발현은 저조하게 분화된 종양에서 4.7배 더 강하게 상향조절되었다. 이러한 발현은 문맥 침입의 발생정도 및 낮은 무병 생존 기관과 관련된다 (Harimoto 등, Oncology 2010, 78:361-368).
시험관내 및 생체내 실험 데이타를 포함하는 수많은 공보는 변경된 FGFR2 신호 전달 및 종양 성장 사이의 인과 관계를 보여준다.
위암 (Takeda 등, Clin. Cancer Res. 2007; 13:3051-3057; Kunii 등, Cancer Res. 2008; 68:2340-2348), 유방암 (Turner 등, Oncogene 2010, 29:2013-2023), 난소암 (Cole 등, Cancer Biol. Ther. 2010, 10:495-504) 및 두경부의 편평상피 암종 (Marshall 등, Clin. Cancer Res. 2011, 17:5016-5025)의 세포에서 FGFR2의 넉다운 또는 억제는 종양 세포의 증식 감소 또는 세포자멸사 증가를 유도했다. 종양 이종기관이식에서도 또한, FGFR2를 과발현시키는 종양 세포주에서 FGFR2의 넉다운 및 FGFR2의 억제가 위암 세포주 (Takeda 등, Clin. Cancer Res. 2007; 13:3051-3057) 및 난소암 세포주 (Cole 등, Cancer Biol. Ther. 2010, 10:495-504)에서 성장 억제를 유발하는 것으로 관찰되었다. 게다가, FGFR2를 배타적으로 활성화시키는 FGF7은 시험관내 및 생체내에서 위암 세포주 (Shin 등, J. Cancer Res. Clin. Oncol. 2002, 128:596-602), 유방암 세포주 (Zhang 등, Anticancer Res. 1998, 18:2541-2546) 및 난소암 세포주 (Cole 등, Cancer Biol. Ther. 2010, 10:495-504)의 증식을 증가시킨다. 더욱이, 활성화 돌연변이와 함께 FGFR2를 함유하는 자궁내막암 세포주에서의 FGFR2의 넉다운은 마찬가지로 세포 주기의 정지 및 세포사의 유도를 야기했다 (Byron 등, Cancer Res. 2008, 68:6902-6907).
FGFR2 신호 전달은 위암 세포주 (Shin 등, J. Cancer Res. Clin. Oncol. 2002, 128:596-602), 유방암 세포주 (Zhang 등, Anticancer Res. 1998, 18:2541-2546) 및 시험관내에서 췌장암 세포주 (Nomura 등, Br. J. Cancer 2008, 99:305-313; Niu 등, J. Biol. Chem. 2007, 282:6601-6011)의 이동 및 침입을 촉진한다.
식도암의 경우에, FGFR2는 종양-연관된 섬유아세포에서 가장 크게 상향조절된 유전자이다. 단리된 종양-연관된 섬유아세포는 식도암 세포의 증식을 촉진시키는 가용성 인자를 방출했으며 (Zhang 등, hum. Cancer Biol. 2009, 15:4017-4022), 그에 의해 기질 세포에 의해 발현된 FGFR2가 또한 종양 진행을 촉진시킬 수 있음을 실증한다.
항-FGFR2 항체에 대한 단지 몇몇 보고만이 존재한다. Fortin 등 (J. Neurosci. 2005, 25: 7470-7479)은 항-FGFR2 항체의 차단을 기재한다. Wei 등 (Hybridoma 2006, 25: 115-124)은 KGF-유도된 세포 증식을 억제하는, FGFR2 IIIb에 배타적인 특이성을 갖는 항체를 보여주었다. WO2007/144893은 FGFR2 및 FGFR3과 결합하는 항체의 억제를 기재한다. WO2010/054265 및 Zhao 등 (Clin. Cancer Res. 2010,16:5750-5758)에서는, 예를 들면 GAL-FR21 및 GAL-FR22를 포함하는, FGF 결합을 억제하는 항체가 기재되어 있다. Bai 등 (Cancer Res. 2010, 70:7630-7639)은 FGFR2 IIIb에 특이성을 갖는 항체를 기재한다. R&D 시스템즈는 제조자의 검정에서 활성-중화 효과를 갖는 항-FGFR2 항체를 시판한다. WO2005/066211은 FGFR2를 포함하는, 다양한 세포-표면 FGFR을 겨냥한 항체를 기재한다. WO2009/100105는 효과기 분자에 공유 연결될 수 있는 동형체-특이적 항-FGFR2 항체를 기재한다. WO2007/134210은 항-FGFR2 항체 또는 면역콘주게이트를 사용하여 결장직장암을 치료하는 방법을 기재한다. WO2007/144893은 리간드-의존적 및 항시적 리간드-독립적인 FGFR2 수용체 활성화를 차단하는, 추가의 FGFR에 대한 결합 친화도를 갖는 FGFR2 항체를 기재한다.
아우리스타틴 E (AE) 및 모노메틸아우리스타틴 E (MMAE)는 본래 해양 공급원으로부터 단리되고 일부 경우에 종양 세포에 대해 매우 강력한 세포독성 활성을 갖는 선형 유사펩타이드의 특이적 그룹인, 돌라스타틴의 합성 유사체이다 [검토를 위해 예를 들면 G.　R. Pettit, Prog . Chem . Org . Nat . Prod . 70, 1-79 (1997); G.　R. Pettit 등, Anti - Cancer Drug Design 10, 529-544 (1995); G.　R. Pettit 등, Anti -Cancer Drug Design 13, 243-277 (1998)을 참고한다].
Figure pct00001
아우리스타틴 E (AE): R = CH3
모노메틸아우리스타틴 E (MMAE): R = H
그러나, MMAE는 비교적 높은 전신 독성을 갖는 약점을 지닌다. 종양 선택성을 증대시키기 위해, MMAE는 더 상세하게는 더 표적화된 종양 치료를 위한 ADC 세팅에서 효소적으로 절단가능한 발린-시트룰린 링커와 함께 사용된다 [WO 2005/081711-A2; S.　O. Doronina 등, Bioconjugate Chem . 17, 114-124 (2006)]. 단백분해 절단 후에, MMAE는 바람직하게는 상응하는 ADC로부터 세포내로 방출된다.
모노메틸아우리스타틴 F (MMAF)는 MMAE와 비교하여 단지 보통의 항증식성 활성만을 나타내는 C-말단 페닐알라닌 단위를 갖는 아우리스타틴 유도체이다. 이러한 사실은 매우 대개는 유리 카복실 그룹에 기인하며, 상기 그룹의 극성 및 전하는 세포에 접근하는 이 화합물의 능력에 부정적으로 영향을 미친다. 이와 관련하여, MMAF의 메틸 에스테르(MMAF-OMe)는 MMAF와 비교하여 수만 배 증가된 다양한 암종 세포주에 대한 시험관내 세포독성을 갖는, 세포 접근 능력을 갖는 중성 전하를 띤 전구약물 유도체로서 기재되었다 [S.　O. Doronina 등, Bioconjugate Chem . 17, 114-124 (2006)]. 이러한 효과는, 전구약물의 세포 내로의 흡수 후에, 세포내 에스테르 가수분해에 의해 빠르게 방출되는, MMAF 자체에 의해 유발되는 것으로 추정될 수 있다.
Figure pct00002
모노메틸아우리스타틴 F (MMAF): R = H
모노메틸아우리스타틴 F 메틸 에스테르(MMAF-OMe): R = CH3
그러나, 단순한 에스테르 유도체를 기반으로 하는 약물 화합물은, 예를 들면, 혈당에 존재하는 에스테라제에 의해, 의도된 작용 부위와 관계없이, 비-특이적 에스테르 가수분해 때문에 일반적으로 화학적 불안정성의 위험을 겪게 되며; 이러한 비-특이적 가수분해는 치료에서 그와 같은 화합물의 유용성을 유의미하게 제한할 수 있다.
모노메틸아우리스타틴 F (MMAF) 및 또한 다양한 에스테르 유도체 및 그의 아마이드 유도체는 WO 2005/081711-A2에 개시되어 있다. C-말단, 아미드로 치환된 페닐알라닌 단위를 갖는 추가의 아우리스타틴 유사체는 WO 01/18032-A2에 기재되어 있다. WO 02/088172-A2 및 WO 2007/008603-A1은 페닐알라닌의 측쇄 변형과 관련된 MMAF 유사체를 청구하며, 반면에 WO 2007/008848-A2는 페닐알라닌의 카복실 그룹이 변형된 것들을 청구한다. C-말단을 통해 연결된 아우리스타틴 콘주게이트는 최근에 WO 2009/117531-A1에 기재되었다 [또한 S.　O. Doronina 등, Bioconjugate Chem . 19, 1960-1963 (2008) 참조].
본 발명에 다뤄지는 문제는, 신규한 N,N-디알킬아우리스타틴 유도체의 획기적인, 적당한 링커 및 결합제와의 조합을 통해, 매우 매력적인 활성 프로파일, 예컨대, 그의 특이적 종양 효과 및/또는 수송체 단백질에 대해 기질이 될 세포내로 형성된 대사물의 포텐셜 감소라는 면에서 매우 매력적인 활성 프로파일을 나타내고, 따라서, 과증식 및/또는 혈관신생 질환의 치료 및/또는 예방, 예컨대, 암 질환의 치료 및/또는 예방에 적당한, 신규한 결합제-약물 콘주게이트 (ADC)를 제공하는 것이었다.
본 발명은 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물을 제공한다:
Figure pct00003
여기서
n은 1 내지 50의 수이고,
AK는 FGFR2에 결합하는 결합제이고,
그룹 §-G-L1-B-§§는 링커이고,
여기서
§는 그룹 AK와의 연결 부위를 나타내고,
§§는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00004
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00005
또는
Figure pct00006
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00007
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00008
또는
Figure pct00009
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3 은 수소 또는 메틸이고,
R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00010
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10는 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00011
Figure pct00012
또는
Figure pct00013
여기서
#9은 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 나타내고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 화합물은 식 (I)의 화합물 및 그의 염, 용매화물 및 상기 염의 용매화물, 하기 확인되고 식 (I)을 포함하는 식의 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 상기 염의 용매화물, 및 또한 실시예로서 하기 확인되고 식 (I)을 포함하는 화합물, 및 그의 염, 용매화물 및 상기 염의 용매화물을 하기 확인되고 식 (I)을 포함하는 화합물이 이미 염, 용매화물 및 상기 염의 용매화물이 아닌 정도까지 포함한다.
그의 구조에 따라, 본 발명의 화합물은 상이한 입체이성질체 형태, 즉 배치 이성질체의 형태로 그렇지 않으면 적절한 경우 형태적 이성질체 (거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체, 회전장애이성질체의 경우에 이것들을 포함)로서 존재할 수 있다. 따라서, 본 발명은 거울상이성질체 및 부분입체이성질체 및 그의 각 혼합물을 포함한다. 입체이성질체적으로 균질한 구성요소는 거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체의 그와 같은 혼합물로부터 공지된 방식으로 단리될 수 있으며; 이를 위해 크로마토그래피 공정, 더 상세하게는 아키랄상 또는 키랄상에서의 HPLC 크로마토그래피를 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 화합물이 호변체 형태로 일어날 수 있는 경우, 본 발명은 모든 호변체 형태를 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물의 모든 적당한 동위원소 변이체를 포함한다. 본 발명의 화합물의 동위원소 변이체는, 본 발명의 화합물 내의 적어도 하나의 원자가 동일한 원자 번호의 또 하나의 원자로 교환되지만 자연에서 통상적으로 또는 주로 발생하는 원자 질량과 상이한 원자 질량을 갖는 동일한 원자 번호의 또 하나의 원자로 교환되는 화합물을 의미하는 것으로 본원에서 이해된다. 본 발명의 화합물에 포함될 수 있는 동위원소의 예로는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 불소, 염소, 브롬 및 요오드 예컨대 2H (중수소), 3H (트리튬), 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 32P, 33P, 33S, 34S, 35S, 36S, 18F, 36Cl, 82Br, 123I, 124I, 129I 및 131I의 것들이다. 본 발명의 화합물의 특정한 동위원소 변이체, 예컨대 더 상세하게는 1 이상의 방사성 동위원소가 포함되는 것들은, 예를 들면, 체내에서 약물의 작용 기전 또는 분포를 조사하는데 유리할 수 있으며; 제조 및 검출가능성의 상대적 용이성으로 인해, 3H 또는 14C 동위원소로 라벨링된 화합물이 이들 목적에 특히 적당하다. 더욱이, 동위원소, 예컨대, 중수소의 혼입은 화합물의 더 큰 대사 안정성의 결과로서 특정 치료적 이점, 예컨대, 체내에서 반감기의 연장 또는 필요한 활성 용량의 감소를 유도할 수 있으며; 따라서, 본 발명의 화합물의 그와 같은 변형은, 적절한 경우, 또한 본 발명의 바람직한 구현예를 구성한다. 본 발명의 화합물의 동위원소 변이체는, 예를 들면, 하기에 이후 기재된 방법에 따라서 숙련가에게 공지된 방법 및 실시예에 재현된 절차에 의해 각 시약 및/또는 개시 화합물의 상응하는 동위원소 변형을 사용함으로써 제조될 수 있다.
본 발명의 맥락에서 바람직한 염은 본 발명의 화합물의 생리학적으로 허용가능한 염이다. 또한, 그 자체가 약제학적 적용에 적당하지 않더라도, 그럼에도 불구하고, 예를 들면, 본 발명의 화합물의 단리 또는 정제에 사용될 수 있는 염을 포함한다.
본 발명의 화합물의 생리학적으로 허용가능한 염은 무기산, 카복실산 및 설폰산의 산 부가 염, 예를 들면, 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, 톨루엔설폰산, 나프탈렌디설폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 락트산, 타르타르산, 말산, 시트르산, 푸마르산, 말레산 및 벤조산의 염을 포함한다.
본 발명의 화합물의 생리학적으로 허용가능한 염은 또한 관례적 염기의 염, 예컨대, 예로써 및 바람직하게는, 알칼리 금속 염 (예를 들면 나트륨 및 칼륨 염), 알칼리토금속 염 (예를 들면 칼슘 및 마그네슘 염), 및 암모니아 또는 1 내지 16 C 원자를 갖는 유기 아민으로부터 유도된 암모늄 염, 예컨대, 예로써 및 바람직하게는, 에틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 에틸디이소프로필아민, 모노에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 디사이클로헥실아민, 디메틸아미노에탄올, 프로카인, 디벤질아민, N-메틸-피페리딘, N-메틸모폴린, 아르기닌, 라이신 및 1,2-에틸렌디아민을 포함한다.
본 발명의 맥락에서 용매화물은 용매 분자와의 배위를 통해 고체 또는 액체 상태에서 복합체를 형성하는 본 발명의 화합물의 형태이다. 수화물은 용매화물의 하나의 특이적 형태이며, 여기서 배위는 물과 함께 일어난다. 본 발명의 맥락에서 바람직한 용매화물은 수화물이다.
더욱이, 본 발명 또한 본 발명의 화합물의 전구약물을 포함한다. 용어 "전구약물"은 그 자체로 생물학적 활성 또는 불활성일 수 있지만 체내에서 그의 체류 동안 (예를 들면, 대사 또는 가수분해에 의해) 본 발명의 화합물로 전환되는 화합물로 본원에서 확인된다.
본 발명의 맥락에서 치환체의 정의는, 달리 구체화되지 않으면, 하기와 같다:
본 발명의 맥락에서 ( C 1 - C 4 )- 알킬은 1 내지 4 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분기형 알킬 라디칼이다. 예로써 및 바람직하게는, 하기와 같이 언급될 수 있다: 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 1-메틸프로필 및 tert -부틸.
본 발명의 맥락에서 알칸디일은 명시된 특정 수의 탄소 원자를 갖는 선형, α,ω-2가 알킬 라디칼이다. 예로써 및 바람직하게는, 하기와 같이 언급될 수 있다: 메틸렌, 에탄-1,2-디일 (1,2-에틸렌), 프로판-1,3-디일 (1,3-프로필렌), 부탄-1,4-디일 (1,4-부틸렌), 펜탄-1,5-디일 (1,5-펜틸렌), 헥산-1,6-디일 (1,6-헥실렌), 헵탄-1,7-디일 (1,7-헥실렌), 옥탄-1,8-디일 (1,8-옥틸렌), 노난-1,9-디일 (1,9-노닐렌), 데칸-1,10-디일 (1,10-데실렌).
본 발명의 맥락에서 각각 ( C 3 - C 7 )- 사이클로알킬 및 3- 내지 7-원 카보사이클은 3 내지 7 탄소 원자를 갖는 모노사이클릭, 포화된 사이클로알킬 그룹이다. 예로써 및 바람직하게는, 하기와 같이 언급될 수 있다: 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로헵틸.
R19의 정의에서 α-아미노산의 측면 그룹은 자연 발생 α-아미노산의 측면 그룹 뿐만 아니라 이들 α-아미노산의 동족체 및 이성질체의 측면 그룹을 포함한다. α-아미노산은 본원에서 L 또는 D 배치일 수 있거나 그렇지 않으면 L 및 D 형태의 혼합물로서 존재할 수 있다. 주어질 수 있는 측면 그룹의 예는 하기와 같다: 메틸 (알라닌), 프로판-2-일 (발린), 프로판-1-일 (노르발린), 2-메틸프로판-1-일 (류신), 1-메틸프로판-1-일 (이소류신), 부탄-1-일 (노르류신), tert -부틸 (2-tert -부틸글리신), 페닐 (2-페닐글리신), 벤질 (페닐알라닌), p-하이드록시벤질 (티로신), 인돌-3-일메틸 (트립토판), 이미다졸-4-일메틸 (히스티딘), 하이드록시메틸 (세린), 2-하이드록시에틸 (호모세린), 1-하이드록시에틸 (트레오닌), 머캅토메틸 (시스테인), 메틸티오메틸 (S-메틸시스테인), 2-머캅토에틸 (호모시스테인), 2-메틸티오에틸 (메티오닌), 카바모일메틸 (아스파라긴), 2-카바모일에틸 (글루타민), 카복시메틸 (아스파르트산), 2-카복시에틸 (글루탐산), 4-아미노부탄-1-일 (라이신), 4-아미노-3-하이드록시부탄-1-일 (하이드록시리신), 3-아미노프로판-1-일 (오르니틴), 2-아미노에틸 (2,4-디아미노부티르산), 아미노메틸 (2,3-디아미노프로피온산), 3-구아니디노프로판-1-일 (아르기닌), 3-우레이도프로판-1-일 (시트룰린). R19의 정의에서 바람직한 α-아미노산 측면 그룹은 메틸 (알라닌), 프로판-2-일 (발린), 2-메틸프로판-1-일 (류신), 벤질 (페닐알라닌), 이미다졸-4-일메틸 (히스티딘), 하이드록시메틸 (세린), 1-하이드록시에틸 (트레오닌), 4-아미노부탄-1-일 (라이신), 3-아미노프로판-1-일 (오르니틴), 2-아미노에틸 (2,4-디아미노부티르산), 아미노메틸 (2,3-디아미노프로피온산), 3-구아니디노프로판-1-일 (아르기닌)이다. L 배치는 각 경우에 바람직하다.
본 발명의 맥락에서 4- 내지 7-원 헤테로사이클은, 시리즈 N, O, S, SO 및/또는 SO2로부터의 1 또는 2 고리 헤테로원자를 함유하고 고리 탄소 원자 또는 선택적으로 고리 질소 원자를 통해 연결된, 총 4 내지 7 고리 원자를 갖는 모노사이클릭, 포화된 헤테로사이클이다. 시리즈 N, O 및/또는 S로부터의 1 또는 2 고리 헤테로원자를 갖는 5- 내지 7-원 헤테로사이클이 바람직하며, 시리즈 N 및/또는 O로부터의 1 또는 2 고리 헤테로원자를 갖는 5- 또는 6-원 헤테로사이클이 더 바람직하다. 예로써, 하기와 같이 언급될 수 있다: 아제티딜, 옥세타닐, 피롤리디닐, 피라졸리디닐, 테트라하이드로퓨라닐, 티올라닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라하이드로피라닐, 테트라하이드로티오피라닐, 모폴리닐, 티오모폴리닐, 헥사하이드로아제피닐 및 헥사하이드로-1,4-디아제피닐. 피롤리디닐, 테트라하이드로퓨라닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라하이드로피라닐 및 모폴리닐이 바람직하다.
각각 A, B, D, G, L1, L2, L4, R1, R2, R3, R4 및 R5로 나타낼 수 있는 그룹의 식에서, 기호 #6,*,**, #3, #1, #2, ##1, ##2, ##3, ##4,***,****, #4, #5, #6, #7, #8 또는 #9가 위치한 라인의 종점이 탄소 원자 또는 CH2 그룹은 아니지만, 대신에 각 경우에 지정된 원자에 대한 결합의 일부이며, 여기서, A, B, D, G, L1, L2, L4, R1, R2, R3, R4 또는 R5는 결합되어 있다.
본 발명의 맥락에서, 여러 번 발생하는 모든 라디칼은 서로 관계없이 그의 정의를 갖는다. 본 발명의 화합물에서 라디칼이 치환되는 경우, 라디칼은, 달리 구체화되지 않으면, 1회 이상 치환될 수 있다. 1회 또는 2회 동일한 또는 상이한 치환체(들)에 의한 치환이 바람직하다. 하나의 치환체에 의한 치환이 특히 바람직하다.
본 발명의 맥락에서 사용된 용어들은, 달리 구체화되지 않으면, 하기 정의를 갖는다:
용어 "링커"는 약물에 결합제를 공유적으로 연결하는 공유 결합 또는 일련의 원자를 포함하는 화학적 단위로서 가장 광범위한 의미로 이해된다. 용어 "링커"는 본 발명의 의미에서 약물에 결합제를 공유적으로 연결하는 일련의 원자로서 바람직하게 이해된다. 더욱이, 링커는, 예를 들면, 2가 화학적 단위, 예컨대 알킬디일, 아릴디일, 헤테로아릴디일, 헤테로시클릴디일, 디카보닐산 에스테르, 디카보닐산 아마이드로 나타낼 수 있다.
용어 "결합제"는 결합제-약물 콘주게이트로 다뤄지는 특정한 표적 세포 집단 상에 존재하는 표적 분자에 결합하는 분자로서 가장 광범위한 의미로 이해된다. 용어 "결합제"는 그의 가장 광범위한 해석에서 이해되어야 하며, 예를 들면, 렉틴, 특정한 당 사슬과 결합할 수 있는 단백질, 또는 인지질-결합 단백질을 포함한다. 그와 같은 결합제는, 예를 들면, 고분자량 단백질 (결합 단백질), 폴리펩타이드 또는 펩타이드 (결합 펩타이드), 비-펩타이드 (예를 들면, 압타머 (US5,270,163) Keefe AD., 등의 검토 논문 (Keefe AD., 등, Nat. Rev. Drug Discov. 2010; 9:537-550), 또는 비타민) 및 모든 다른 세포-결합 분자 또는 물질을 포함한다. 결합 단백질은, 예를 들면, 항체 및 항체 단편 또는 항체 모방체 예컨대, 아피바디 (affibody), 아드넥틴, 안티칼린, DARPins, 아비머, 나노바디 (검토 논문: Gebauer M. 등, Curr. Opinion in Chem. Biol. 2009; 13:245-255; Nuttall S.D. 등, Curr. Opinion in Pharmacology 2008; 8:608-617)이다. 결합 펩타이드는, 예를 들면, 리간드-수용체 쌍 중의 리간드, 예컨대 리간드-수용체 쌍 VEGF/KDR에서의 VEGF, 예컨대 리간드-수용체 쌍 트랜스페린/트랜스페린 수용체 중의 트랜스페린, 또는 사이토카인/사이토카인 수용체, 예컨대 리간드 수용체 쌍 TNF알파/TNF알파 수용체에서의 TNF알파이다.
본원에서 사용된 바와 같이 용어 "에피토프"는 면역글로불린 또는 T-세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 단백질의 임의 결정요인을 포함한다. 그와 같은 결정요인은, 통상적으로 특이적 3차원 구조 및 또한 규정된 전하 특성을 갖는, 분자 예컨대, 아미노산, 탄수화물 또는 이들의 조합의 화학적으로 활성인 표면 배열로 통상적으로 이루어진다. 2개의 항체는, 경쟁적 결합 검정 포맷에서 제1 항체가 제2 항체와 경쟁하는 것으로 보여지는 경우 동일한 에피토프에 결합한다. 이러한 종류의 결합 검정은 숙련가에게 공지된다.
"표적 분자"는 표적 세포 집단에 존재하는 분자인 것으로 가장 광범위한 의미로 이해되며, 단백질 (예를 들면 성장 인자의 수용체) 또는 비-펩타이드 분자 (예를 들면 당 또는 인지질)일 수 있다. 바람직하게는 수용체 또는 항원이다.
용어 "세포외" 표적 분자는 세포에 부착되고 세포의 외부 상에 또는 세포의 외부에 위치한 표적 분자의 일부 상에 위치한 표적 분자를 기재하며, 즉 결합제는 그것의 세포외 표적 분자에서 무손상 세포에 결합할 수 있다. 세포외 표적 분자는 세포막에 고정될 수 있거나 세포막의 일부일 수 있다. 숙련가는 세포외 표적 분자를 확인하는 방법을 알고 있다. 단백질의 경우에 이것은 막통과 도메인(들)의 결정 및 막에서의 단백질의 배향을 통해 수행될 수 있다. 이러한 데이타는 일반적으로 단백질 데이타베이스 (예를 들면 SwissProt)에 기록된다.
용어 "암 표적 분자"는 동일한 조직 유형의 비-암 세포와 비교하여 1 이상의 암 세포 유형 상에 복합적으로 존재하는 표적 분자를 기재한다. 암 표적 분자는 바람직하게는 동일한 조직 유형의 비-암 세포와 비교하여 1 이상의 암 세포 유형 상에 선택적으로 존재하며, 여기서 "선택적으로"는 동일한 조직 유형의 비-암 세포와 비교하여 암 세포 상에서 적어도 2배 축적을 기재한다 ("선택적 암 표적 분자"). 암 표적 분자의 사용은 본 발명의 콘주게이트와 함께 암 세포의 선택적 치료를 가능하게 한다.
결합제는 결합을 통해 링커에 연결될 수 있다. 결합제의 연결은 결합제의 헤테로원자에 의해 일어날 수 있다. 연결에 사용될 수 있는 본 발명의 결합제의 헤테로원자는 황 (일 구현예에서 결합제의 설프하이드릴 그룹을 통해), 산소 (결합제의 카복실 또는 하이드록시 그룹에 의해 본 발명에 따라) 및 질소 (일 구현예에서 결합제의 일차 또는 2차 아민 그룹 또는 아마이드 그룹을 통해)이다. 이들 헤테로원자는 자연 결합제로 존재할 수 있거나 화학 또는 분자 생물학의 방법에 의해 도입될 수 있다. 본 발명에 따라, 독성기에 결합제의 연결은 표적 분자에 대한 결합제의 결합 활성에 대해 거의 영향을 주지 않는다. 바람직한 구현예에서, 연결은 표적 분자에 대한 결합제의 결합 활성에 있어서 전혀 영향을 주지 않는다.
용어 "항체"는 본 발명에 따라 그의 가장 광범위한 의미로 이해되며, 면역글로불린 분자, 예를 들면, 온전한 또는 변형된 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체 또는 다중특이적 항체 (예를 들면 이중특이적 항체)를 포함한다. 면역글로불린 분자는 바람직하게는, 전형적으로 디설파이드 브릿지로 연결된, 4개의 폴리펩타이드 사슬, 2개의 중쇄 (H 사슬) 및 2개의 경쇄 (L 사슬)를 갖는 분자를 포함한다. 각 중쇄는 중쇄의 가변 도메인 (VH로 약칭됨) 및 중쇄의 불변 도메인을 포함한다. 중쇄의 불변 도메인은, 예를 들면, 3개의 도메인 CH1, CH2 및 CH3을 포함할 수 있다. 각 경쇄는 가변 도메인 (VL로 약칭됨) 및 불변 도메인을 포함한다. 경쇄의 불변 도메인은 1개의 도메인 (CL로 약칭됨)을 포함한다. VH 및 VL 도메인은 초가변성을 갖는 영역, 또한 소위 상보성-결정 영역 (CDR로 약칭됨), 및 낮은 서열 가변성 ("뼈대 영역", FR로 약칭됨)을 갖는 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각 VH 및 VL 영역은 전형적으로 3개의 CDR 및 최대 4개의 FR로 구성된다. 예를 들면, 아미노 말단에서 카복시 말단까지 하기 순서로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 항체는 항체에 적당한 임의 종, 예컨대, 토끼, 라마, 낙타, 마우스 또는 랫트로부터 수득될 수 있다. 일 구현예에서, 항체는 인간 또는 쥣과 기원이다. 항체는 예를 들면 인간이거나, 인간화되거나 키메라일 수 있다.
용어 "모노클로날" 항체는 실질적으로 균질한 항체의 모집단으로부터 수득된 항체로 확인되며, 즉 모집단의 개별적인 항체는 소수로 발생할 수 있는 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 높은 특이성을 갖는 단일 항원성 결합 부위를 인식한다. 용어 "모노클로날 항체"는 특정한 생산 방법을 나타내지 않는다.
용어 "온전한" 항체는 항원-결합 도메인 뿐만 아니라 경쇄 및 중쇄의 불변 도메인을 포함하는 항체를 나타낸다. 불변 도메인은 자연 발생 도메인, 또는 복수의 아미노산 위치가 변경된 그것의 변이체일 수 있다.
용어 "변형된 온전한" 항체는 항체로부터 기원하지 않은 또 하나의 폴리펩타이드 또는 단백질과 그것의 아미노 말단 또는 카복시 말단을 통해 공유 결합 (예를 들면 펩타이드 연결)에 의해 융합된 온전한 항체를 나타낸다. 더욱이, 항체는 독성기로의 커플링을 용이하게 하기 위해 규정된 위치에서 반응성 시스테인을 도입함으로써 변형될 수 있다 (Junutula 등, Nat Biotechnol. 2008 Aug;26(8):925-32 참고).
용어 "인간" 항체는 인간으로부터 수득될 수 있거나 합성 인간 항체인 항체로 확인된다. "합성" 인간 항체는 인간 항체 서열의 분석을 기반으로 하는 합성 서열 인실리코로부터 부분적으로 또는 전체로서 수득가능한 항체이다. 인간 항체는, 예를 들면, 인간 기원인 항체 서열의 라이브러리로부터 단리된 핵산에 의해 인코딩될 수 있다. 그와 같은 항체의 일례는 Soderlind 등, Nature Biotech. 2000, 18:853-856에서 발견될 수 있다.
용어 "인간화된" 또는 "키메라" 항체는 비-인간 및 인간 서열 구성요소로 이루어진 항체를 기재한다. 이들 항체에서, 인간 면역글로불린 (수령체)의 서열의 일부는 비-인간 면역글로불린 (공여체)의 서열 구성요소에 의해 대체된다. 다수의 사례에서, 공여체는 쥣과 면역글로불린이다. 인간화된 항체의 경우, 수령체에서의 CDR의 아미노산은 공여체의 아미노산으로 대체된다. 일부 경우에서, 뼈대 아미노산 또한 공여체의 상응하는 아미노산으로 대체된다. 일부 경우에서, 인간화된 항체는 수령체에도 공여체에도 존재하지 않고 항체의 최적화 동안 삽입되었던 아미노산을 함유한다. 키메라 항체의 경우에, 공여체 면역글로불린의 가변 도메인은 인간 항체의 불변 영역과 융합된다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 상보성-결정 영역 (CDR)은 항원에 결합하는데 필요한 가변 항체 도메인에서의 아미노산을 나타낸다. 모든 가변 영역은 전형적으로 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 확인된 3개의 CDR 영역을 갖는다. 각 CDR 영역은 카밧 (Kabat)의 정의에 따르는 아미노산 및/또는 초티아 (Chotia)에 따라 규정된, 초가변 루프의 아미노산을 포함할 수 있다. 카밧에 따르는 정의는, 예를 들면, 대략 아미노산 위치 24 - 34 (CDR1), 50 - 56 (CDR2) 및 89 - 97 (CDR3) 영역의 가변 경쇄 및 31 - 35 (CDR1), 50 - 65 (CDR2) 및 95 - 102 (CDR3) 영역의 가변 중쇄를 포함한다 (Kabat 등, Sequences of Proteins of Immulological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). 초티아에 따르는 정의는, 예를 들면, 대략 아미노산 위치 26 - 32 (CDR1), 50 - 52 (CDR2) 및 91 - 96 (CDR3) 영역의 가변 경쇄 및 26 - 32 (CDR1), 53 - 55 (CDR2) 및 96 - 101 (CDR3) 영역의 가변 중쇄를 포함한다 (Chothia and Lesk; J Mol Biol 196: 901-917 (1987)). 일부 경우에서, CDR은 카밧 및 초티아에 의해 규정된 바와 같이 하나의 CDR 영역으로부터의 아미노산을 포함할 수 있다.
중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 항체는 상이한 클래스로 구분될 수 있다. 5개의 온전한 항체의 주요 클래스: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 있으며; 그들 중 다수는 추가의 서브클래스 (아이소타입), 예를 들면 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 세분될 수 있다. 상이한 클래스에 상응하는 중쇄의 불변 도메인은 [알파/α], [델타/δ], [엡실론/ε], [감마/ν] 및 [mu/μ]로서 확인된다. 항체의 3차원 구조 및 서브유닛 구조 둘 모두는 공지되어 있다.
용어 항체/면역글로불린의 "기능적 단편" 또는 "항원-결합 항체 단편"은 항체/면역글로불린의 항원 결합 도메인을 추가로 포함하는 항체/면역글로불린의 단편 (예를 들면 IgG의 가변 도메인)으로서 규정된다. 항체의 "항원 결합 도메인"은 전형적으로 하나 이상의 항체의 초가변 영역, 예를 들면 CDR, CDR2 및/또는 CDR3 영역을 포함한다. 그러나, 항체의 "뼈대" 또는 "스캐폴드" 영역도 또한 항체의 항원에 대한 결합에 관해서 일부 역할을 할 수 있다. 뼈대 영역은 CDR에 대해 스캐폴드를 형성한다. 항원-결합 도메인은 바람직하게는 적어도 아미노산 4 내지 103의 가변 경쇄 및 아미노산 5 내지 109의 가변 중쇄, 더 바람직하게는 아미노산 3 내지 107의 가변 경쇄 및 4 내지 111의 가변 중쇄를 포함하며, 완전한 가변 경쇄 및 중쇄, 즉 아미노산 1 - 109의 VL 및 1 내지 113의 VH가 특히 바람직하다 (WO97/08320에 따라 넘버링).
본 발명의 "기능적 단편" 또는 "항원-결합 한체 단편"은, 비-확정적으로, Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편, 디아바디 (diabody), 단일 도메인 항체 (DAbs), 선형 항체, 항체의 개별적인 사슬 (단일-사슬 Fv, ScFv로 약칭됨); 및 다중특이적 항체, 예컨대, 항체 단편들로부터 형성된 이중- 및 삼중-특이적 항체를 포함한다 (C. A. K Borrebaeck, editor (1995) Antibody Engineering (Breakthroughs in Molecular Biology), Oxford University Press; R. Kontermann & S. Duebel, editors (2001) Antibody Engineering (Springer Laboratory Manual), Springer Verlag). "다중특이적" 또는 "다기능성" 항체 이외의 항체는 동일한 결합 부위를 갖는 것들이다. 다중특이적 항체는 항원의 상이한 에피토프에 대해 특이적일 수 있거나 1 초과의 항원의 에피토프에 대해 특이적일 수 있다 (예를 들면 WO 93/17715; WO 92/08802; WO 91/00360; WO 92/05793; Tutt, 등, 1991, J. Immunol. 147:60 69; U. S. Pat. Nos. 4,474,893; 4,7 14,68 1; 4,925,648; 5,573,920; 5,601,8 19; or Kostelny 등, 1992, J. Immunol. 148: 1547 1553 참고). F(ab')2 또는 Fab 분자는 Ch1 및 CL 도메인 사이에 발생하는 분자간 디설파이드 상호작용의 수가 감소되거나 그렇지 않으면 완전히 방지될 수 있도록 구성될 수 있다.
"기능적 단편" 또는 "항원-결합 항체 단편"은 항체로부터 기원하지 않은 또 하나의 폴리펩타이드 또는 단백질과 그것의 아미노 말단 또는 카복실 말단을 통해 공유 결합 (예를 들면 펩타이드 연결)에 의해 융합될 수 있다. 더욱이, 항체 및 항원-결합 단편은 독성기로의 커플링을 용이하게 하기 위하여 규정된 위치에서 반응성 시스테인을 도입함으로써 변형될 수 있다 (Junutula 등, Nat Biotechnol. 2008 Aug;26(8):925-32 참고).
폴리클로날 항체는 당해분야의 숙련가에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 모노클로날 항체는 당해분야의 숙련가에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다 (Kohler and Milstein, Nature, 256, 495-497, 1975). 인간 및 인간화된 모노클로날 항체는 당해분야의 숙련가에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다 (Olsson 등, Meth Enzymol. 92, 3-16 or Cabilly et al US 4,816,567 or Boss et al US 4,816,397)
당해분야의 숙련가는 예컨대, 이식유전자 마우스 (N Lonberg and D　Huszar, Int Rev Immunol. 1995;13(1):65-93) 또는 파아지 디스플레이 기술 (Clackson 등, Nature. 1991 Aug 15;352(6336):624-8)을 사용하여 인간 항체 및 그의 단편을 제조하는 다양한 방법을 알고 있다. 본 발명의 항체는 예를 들면 다수의 건강한 지원자로부터 만들어진 다수의 항체의 아미노산 서열로 이루어진 재조합 항체 라이브러리로부터 수득될 수 있다. 항체는 또한 공지된 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 수 있다. 항체의 핵산 서열은 일상적인 서열분석에 의해 수득될 수 있거나 공공연히 접근가능한 데이타베이스로부터 이용가능하다.
"단리된" 항체 또는 결합제는 세포의 다른 구성요소를 제거하기 위해 정제되었다. 진단적 사용 또는 치료적 사용을 방해할 수 있는 세포의 오염 구성요소는, 예를 들면, 효소, 호르몬, 또는 세포의 다른 펩타이드 또는 비-펩타이드 구성요소이다. 바람직한 항체 또는 결합제는 (예를 들면 로리법 (Lowry method), UV-Vis 분광계 또는 모세관 겔 전기이동에 의해 결정되는 경우) 항체 또는 결합제에 비해 95% 초과의 정도로 정제된 것이다. 더욱이 항체는, 아미노 말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15 아미노산을 결정하는 것이 가능하거나, 또는 균질하게 정제되는 그와 같은 정도까지 정제되었으며, 상기 균질성은 환원 또는 비-환원 조건 하에서 SDS-PAGE에 의해 결정된다 (검출은 쿠마씨 블루 염색 또는 바람직하게는 은 착색에 의해 결정될 수 있다). 그러나, 항체는 정상적으로 1 이상의 정제 단계에 의해 제조된다.
용어 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하다"는 예정된 항원/표적 분자에 결합하는 항체 또는 결합제를 나타낸다. 항체 또는 결합제의 특이적 결합은 전형적으로 적어도 10-7 M의 친화도를 갖는 항체 또는 결합제를 기재하며, 여기서 상기 항체 또는 결합제는 예정된 항원/표적 분자 또는 밀접하게 관련된 항원/표적 분자가 아닌 비-특이적 항원/표적 분자 (소 혈청 알부민, 또는 카세인)보다 예정된 항원/표적 분자에 대해 적어도 2배 더 높은 친화도를 갖는다.
암 세포 항원에 대해 특이적인 항체는 당해분야의 숙련가가 익숙한 방법 (예컨대, 재조합 발현)에 의해 그들에 의해 제조될 수 있거나 (예를 들면 Merck KGaA, Germany로부터) 상업적으로 입수될 수 있다. 암 치료에서 공지된 상업적으로 이용가능한 항체의 예로는 Erbitux® (세툭시맙, Merck KGaA), Avastin® (베바시주맙, Roche) 및 Herceptin® (트라스투주맙, Genentech)이다. 트라스투주맙은 세포 기반 검정 (Kd = 5 nM)에서 높은 친화도로 인간 표피 성장 수용체의 세포외 도메인과 결합하는, IgG1카파 유형의 재조합 인간화된 모노클로날 항체이다. 항체는 CHO 세포에서 재조합으로 생산된다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이고,
여기서
n은 1 내지 50의 수이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1은 FGFR2에 결합하는 결합제이고 결합제의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되고,
AK2는 FGFR2에 결합하는 결합제이고 결합제의 질소 원자를 통해 그룹 G에 결합되고,
G는, AK = AK1일 때, 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00014
또는
Figure pct00015
여기서
#1은 결합제의 황 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#2는 그룹 L1과의 연결 부위를 나타내거나,
AK = AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일, 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00016
또는
Figure pct00017
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
L1A는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
B1은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00018
또는
Figure pct00019
여기서
## 5는 그룹 L1A와의 연결 부위를 나타내고,
## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
L5는 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L6은 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00020
또는
Figure pct00021
여기서
## 7은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
## 8은 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
R33은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
R34는 수소 또는 메틸이고,
R29은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R30은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R29 및 R30은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R31은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R32는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R31 및 R32는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 1,2, 1,3 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00022
Figure pct00023
또는
Figure pct00024
여기서
*는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
**는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
P는 O 또는 NH이고,
L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00025
또는
Figure pct00026
여기서
***는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
****는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
R25는 수소 또는 메틸이고,
R28은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
Q2는 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R14는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R15는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R14 및 R15는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R16은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R17은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R18은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R19은 수소 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 천연 α-아미노산의 측면 그룹이고,
R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R22는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
R23은 (C1-C4)-알킬이고,
R24는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R27은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R36은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
R37은 수소 또는 메틸이거나,
R36 및 R37은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00027
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 1,2, 1,3 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00028
또는
Figure pct00029
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00030
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00031
또는
Figure pct00032
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소 또는 메틸이고,
R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00033
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10는 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00034
Figure pct00035
또는
Figure pct00036
여기서
#9은 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 나타내고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이고, 여기서
n은 1 내지 20의 수이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1은 FGFR2에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
AK2는 FGFR2에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
G는, AK = AK1일 때, 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00037
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 나타내고,
#2는 그룹 L1와의 연결 부위를 나타내거나,
AK = AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00038
또는
Figure pct00039
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
L1A는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
B1은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00040
또는
Figure pct00041
여기서
## 5는 그룹 L1A와의 연결 부위를 나타내고,
## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
L5는 결합이고,
L6은 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00042
또는
Figure pct00043
여기서
## 7은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
## 8은 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
R33은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R34는 수소 또는 메틸이고,
R29은 수소이고,
R30은 수소이고,
R31은 수소 또는 메틸이고,
R32는 수소 또는 메틸이고,
L1B는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00044
Figure pct00045
또는
Figure pct00046
여기서
*는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
**는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00047
또는
Figure pct00048
여기서
***는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
****는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
R25는 수소 또는 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R14는 수소이고,
R15는 수소이고,
R16은 수소 또는 메틸이고,
R17은 수소 또는 메틸이거나,
R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R18은 수소이고,
R19은 수소, 메틸, 프로판-2-일, 2-메틸프로판-1-일 또는 1-메틸프로판-1-일이고,
R20은 수소 또는 메틸이거나,
R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 메틸이고,
R22는 수소 또는 메틸이거나,
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
R23은 메틸이고,
R24는 수소 또는 메틸이고,
R27은 수소이고,
R36은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R37은 수소 또는 메틸이거나,
R36 및 R37은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00049
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00050
또는
Figure pct00051
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00052
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00053
또는
Figure pct00054
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00055
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10는 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00056
Figure pct00057
또는
Figure pct00058
여기서
#9은 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 나타내고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이고, 여기서
n은 1 내지 10의 수이고,
AK는 AK1 또는 AK2이고,
여기서
AK1은 FGFR2에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
AK2는 FGFR2에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
G는, AK = AK1일 때, 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00059
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 나타내고,
#2는 그룹 L1과의 연결 부위를 나타내거나,
AK = AK2일 때, 카보닐이고,
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00060
여기서
m은 2 또는 3의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00061
Figure pct00062
또는
Figure pct00063
여기서
*는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
**는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00064
또는
Figure pct00065
여기서
***는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
****는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
R25는 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
Q1은 피페리딘-1,4-디일이고,
R16은 수소 또는 메틸이고,
R17은 수소 또는 메틸이거나,
R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 메틸이고,
R22는 수소 또는 메틸이거나,
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
R23은 메틸이고,
R24는 수소이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00066
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00067
또는
Figure pct00068
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00069
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00070
또는
Figure pct00071
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00072
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00073
또는
Figure pct00074
여기서
#9은 -CHCH2페닐과의 연결 부위를 나타내고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이고, 여기서
n은 1 내지 10의 수이고,
AK는 AK2이고,
여기서
AK2는 FGFR2에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
G는 카보닐이고,
L1은 결합이고,
B는 결합이고,
L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00075
여기서
p는 2 또는 3의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00076
또는
Figure pct00077
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00078
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00079
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00080
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소이고,
R9은 수소 또는 벤질이고,
R35는 메틸이다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이고, 여기서
n은 1 내지 10의 수이고,
AK는 AK1이고,
여기서
AK1은 FGFR2에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
G은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00081
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 나타내고,
#2는 그룹 L1과의 연결 부위를 나타내고,
L1은 결합, 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00082
여기서
m은 2 또는 3의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C3-C5)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00083
여기서
*는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
**는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00084
여기서
***는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
****는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
R25는 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R16은 수소 또는 메틸이고,
R17은 수소 또는 메틸이거나,
R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C3-C5)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00085
여기서
p는 2 또는 3의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00086
또는
Figure pct00087
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00088
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00089
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00090
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소이고,
R9은 수소 또는 벤질이고,
R35는 메틸이다.
상기에서 기재된 바와 같은 결합제-약물 콘주게이트가 본 발명에 의해 추가 바람직하게 제공되고, 여기서 결합제는 서열번호: 14 (Vl) 및 서열번호: 13 (Vh)에서 재생산된 항체 M048-D01-hIgG1-b의 가변 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열,
서열번호: 9 (경쇄) 및 서열번호: 10 (중쇄)에서 재생산된 항체 M048-D01-hIgG1-b의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열을 포함한다.
식 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명에 의해 추가로 제공된다:
Figure pct00091
여기서
Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자에 결합된 시스테인 잔기이고,
L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일, 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00092
또는
Figure pct00093
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
L1A는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
B1은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00094
또는
Figure pct00095
여기서
## 5는 그룹 L1A와의 연결 부위를 나타내고,
## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
L5는 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L6은 결합이고,
R29은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R30은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R29 및 R30은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R31은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R32는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R31 및 R32는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 1,2, 1,3 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00096
Figure pct00097
또는
Figure pct00098
여기서
*는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
**는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
P는 O 또는 NH이고,
L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L4는 결합이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
Q2는 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R14는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R15는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R14 및 R15는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R16은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R17은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R18은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R19은 수소 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 천연 α-아미노산의 측면 그룹이고,
R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R22는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
R23은 (C1-C4)-알킬이고,
R24는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R27은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00099
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 1,2, 1,3 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00100
또는
Figure pct00101
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00102
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00103
또는
Figure pct00104
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소 또는 메틸이고,
R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00105
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10는 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00106
Figure pct00107
또는
여기서
#9은 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 나타내고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다
식 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 본 발명의 문맥에서 또한 바람직하고, 여기서
Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자에 결합된 시스테인 잔기이고,
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00109
또는
Figure pct00110
여기서
m은 2 또는 3의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
L1A는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
B1은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00111
또는
Figure pct00112
여기서
## 5는 그룹 L1A와의 연결 부위를 나타내고,
## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
L5는 결합이고,
L6은 결합이고,
R29은 수소이고,
R30은 수소이고,
R31은 수소 또는 메틸이고,
R32는 수소 또는 메틸이고,
L1B는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00113
또는
Figure pct00114
여기서
*는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
**는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합이고,
R14는 수소이고,
R15는 수소이고,
R16은 수소 또는 메틸이고,
R17은 수소 또는 메틸이거나,
R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R23은 메틸이고,
R24는 수소 또는 메틸이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00115
여기서
p는 2 또는 3의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00116
또는
Figure pct00117
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00118
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00119
또는
Figure pct00120
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00121
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10는 벤조일이고,
R11는 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00122
또는
Figure pct00123
여기서
#9은 -CHCH2페닐과의 연결 부위를 나타내고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
식 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 추가로 또한, 본 발명의 문맥에서 특히 바람직하고, 여기서
Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자에 결합된 시스테인 잔기이고,
L1는 결합 또는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00124
여기서
*는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
**는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
L3은 결합이고,
L4는 결합이고,
R16은 수소 또는 메틸이고,
R17은 수소 또는 메틸이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00125
여기서
p는 2 또는 3의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00126
또는
Figure pct00127
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00128
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00129
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00130
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소이고,
R8은 수소이고,
R9은 수소이고
R35는 메틸이다.
본 발명은 추가로, 식 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물을 제공한다:
Figure pct00131
여기서
L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일, 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00132
또는
Figure pct00133
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
L1A는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
B1은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00134
또는
Figure pct00135
여기서
## 5는 그룹 L1A와의 연결 부위를 나타내고,
## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
L5는 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L6은 결합이고,
R29은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R30은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R29 및 R30은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R31은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R32는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R31 및 R32는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 1,2, 1,3 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00136
Figure pct00137
또는
Figure pct00138
여기서
*는 L1와의 연결 부위를 나타내고,
**는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
P는 O 또는 NH이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
Q2는 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R18은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R19은 수소 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 천연 α-아미노산의 측면 그룹이고,
R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R22는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
R27은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00139
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 1,2, 1,3 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00140
또는
Figure pct00141
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00142
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00143
또는
Figure pct00144
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소 또는 메틸이고,
R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00145
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10는 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00146
Figure pct00147
또는
Figure pct00148
여기서
#9은 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 나타내고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소 또는 하이드록시이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이고,
및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물.
식 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 또한 본 발명의 문맥에서 바람직하고, 여기서
L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00149
여기서
m은 2 또는 3의 수이고,
## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00150
Figure pct00151
또는
Figure pct00152
여기서
*는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
**는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
R18은 수소이고,
R19은 메틸이고, 프로판-2-일, 2-메틸프로판-1-일 또는 1-메틸프로판-1-일이고,
R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
R21은 수소 또는 메틸이고,
R22는 수소 또는 메틸이거나,
R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
R27은 수소 또는 메틸이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00153
여기서
p는 2 또는 3의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00154
또는
Figure pct00155
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소이고,
R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00156
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00157
또는
Figure pct00158
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00159
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10는 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00160
또는
Figure pct00161
여기서
#9은 -CHCH2페닐과의 연결 부위를 나타내고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
또한 식 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 특히 바람직하고, 여기서
L1은 결합이고,
B는 결합이고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00162
여기서
p는 2 또는 3의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00163
또는
Figure pct00164
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00165
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00166
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소이고,
R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00167
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
여기서
R7은 수소이고,
R8은 수소이고,
R9은 수소이고,
R35는 메틸이다.
또한 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 바람직하고, 여기서
AK는 AK1이고,
여기서
AK1은 FGFR2에 결합되고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원-결합 항체 단편이고,
G은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00168
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 나타내고,
#2는 그룹 L1과의 연결 부위를 나타내고,
n, L1, B, L2, D 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 바람직하고, 여기서
AK는 AK2이고,
여기서
AK2는 FGFR2에 결합되고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 항체 또는 항원-결합 항체 단편이고,
G는 카보닐이고,
n, L1, B, L2, D 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 선호되고, 여기서
AK는 AK1이고, 여기서
AK1은 FGFR2에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
G은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00169
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 나타내고,
#2는 그룹 L1과의 연결 부위를 나타내고,
n, L1, B, L2, D 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 선호되고,
여기서
AK는 AK2이고,
여기서
AK2는 FGFR2에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
G는 카보닐이고,
n, L1, B, L2, D 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 일반식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 선호되고, 여기서
AK는 AK2이고,
여기서
AK2는 FGFR2에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
G는 카보닐이고,
L1은 결합이고,
B는 결합이고,
L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00170
여기서
p는 2 또는 3의 수이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
n, D 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 일반식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 선호되고, 여기서
AK는 AK1이고, 여기서
AK1은 FGFR2에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
G은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00171
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 나타내고,
#2는 그룹 L1과의 연결 부위를 나타내고,
L1은 결합, 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00172
여기서
m은 2 또는 3의 수이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C3-C5)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00173
여기서
*는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
**는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00174
여기서
***는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
****는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
R25는 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R16은 수소 또는 메틸이고,
R17은 수소 또는 메틸이거나,
R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C3-C5)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00175
여기서
p는 2 또는 3의 수이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
n, D 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 바람직하고, 여기서
L1은 결합이고,
B는 결합이고,
L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00176
여기서
p는 2 또는 3의 수이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
n, AK, Cys, G, D 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 바람직하고, 여기서
L1는 선형 (C1-C10)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00177
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록실 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체로 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00178
Figure pct00179
또는
Figure pct00180
여기서
*는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
**는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
L4는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00181
또는
Figure pct00182
여기서
***는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
****는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
R25는 수소 또는 메틸이고,
R28은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
R16은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R17은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
R23은 (C1-C4)-알킬이고,
R24는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
R36은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
R37은 수소 또는 메틸이거나,
R36 및 R37은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00183
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록실 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체로 치환될 수 있고,
n, AK, G, D 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 식 (Ia)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 바람직하고, 여기서
L1는 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00184
여기서
m은 2 또는 3의 수이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00185
또는
Figure pct00186
여기서
*는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
**는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00187
또는
Figure pct00188
여기서
***는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
****는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
R25는 수소 또는 메틸이고,
R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R16은 수소 또는 메틸이고,
R17은 수소 또는 메틸이거나,
R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
R36은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
R37은 수소 또는 메틸이거나,
R36 및 R37은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00189
여기서
p는 2 또는 3의 수이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
n, AK, G, D 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 식 (Ia) 및 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 바람직하고, 여기서
G은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00190
여기서
#1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 나타내고,
#2는 그룹 L1과의 연결 부위를 나타내고,
L1는 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00191
여기서
m은 2 또는 3의 수이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C3-C5)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
Figure pct00192
여기서
*는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
**는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
L4는 결합이고,
L2는 선형 (C3-C5)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00193
여기서
p는 2 또는 3의 수이고,
##3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
n, AK1, Cys, D, R16 및 R17은 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 바람직하고, 여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00194
또는
Figure pct00195
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00196
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00197
또는
Figure pct00198
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
R3은 수소 또는 메틸이고,
R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00199
여기서
#7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
여기서
R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
R8은 수소 또는 메틸이고,
R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
R10는 벤조일이고,
R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고
R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00200
Figure pct00201
또는
Figure pct00202
여기서
#9은 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 나타내고,
R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
R26은 수소이고,
T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2, D 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 바람직하고, 여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00203
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소 또는 메틸이고,
R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐에틸, 디페닐메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00204
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00205
또는
Figure pct00206
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 바람직하고, 여기서
D는 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00207
여기서
#3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
R1은 수소이고,
R2는 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
Figure pct00208
여기서
#4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
#5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
Figure pct00209
여기서
#6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 바람직하고, 여기서
R35는 하이드록실이고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2, D 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
또한 식 (Ia), (XXXa) 및 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 본 발명의 문맥에서 바람직하고, 여기서
R35는 메틸이고,
n, AK, Cys, G, L1, B, L2, D 및 R35는 상기에서 명시된 정의를 갖는다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이고, 여기서 D는 하기 구조를 가질 수 있고 *는 질소 원자와의 연결 부위를 나타낸다:
Figure pct00210
Figure pct00211
또는
Figure pct00212
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이고, 여기서 D는 본 발명의 중간체 중의 하나에 의해 개시된 구조를 가지며; 링커 단위 §-G-L1-B-L2-§§ 및 또한 모든 다른 변수는 본 발명에 따라 규정된다. AK는 바람직하게는 항-FGFR2 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이고, 여기서 링커-약물 단위는 본 발명의 중간체 또는 실시예 중 하나에 의해 개시된 구조를 갖는다. AK는 바람직하게는 항-FGFR2 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
본 발명의 바람직한 요지는 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이고, 여기서 링커-약물 단위는 본 발명의 실시예 중 하나에 의해 개시된 구조를 갖는다. AK는 바람직하게는 항-FGFR2 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
본 발명의 특히 바람직한 요지는 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다:
Figure pct00213
여기서
n은 1 내지 50의 수이고,
AK는 FGFR2에 결합하는 결합제이고,
그룹 §-G-L1-B-§§는 링커이고,
여기서
§는 그룹 AK와의 연결 부위를 나타내고,
§§는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00214
여기서
p는 2 내지 6의 수이고,
## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록실 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 1,2, 1,3 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
D는 하기 식의 그룹이고, 여기서 *는 질소 원자에 대한 연결 부위이다:
Figure pct00215
본 발명의 특히 바람직한 요지는 하기 식의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다:
Figure pct00216
여기서 AK는 FGFR2에 결합하는 결합제이고, n은 1 내지 10의 수이다. 결합제가 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 링커-독성기 단위에 결합된다면 바람직하다.
본 발명의 특히 바람직한 요지는 하기 식의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물이다:
Figure pct00217
여기서 AK는 FGFR2에 결합하는 항체 또는 항체 단편이고, n은 1 내지 10의 수이다. 항체 또는 항체 단편이 항체 또는 항체 단편의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 링커-독성기 단위에 결합된다면 바람직하다.
본 발명의 특히 바람직한 요지는 하기 식의 화합물 및 또한 염, 용매화물 및 그의 염의 용매화물이다:
Figure pct00218
여기서 AK2A는 M048-D01-hIgG1이고 n은 1 내지 10의 수이다.
추가 본 발명의 특히 바람직한 요지는 하기 식의 화합물 및 또한 염, 용매화물 및 그의 염의 용매화물이다:
Figure pct00219
여기서 AK2B는 M048-D01-hIgG1-b이고 n은 1 내지 10의 수이다.
라디칼의 각 조합 및 바람직한 조합에서 개별적으로 명시된 라디칼의 정의는 명시된 라디칼의 각 조합과는 독립적으로, 다른 조합의 라디칼 정의에 의해 임의로 또한 치환된다.
상기언급된 선호 범위의 2 이상의 조합이 특히 바람직하다.
본 발명의 식 (Ia)의 화합물을 제조하는 방법이 본 발명에 의해 추가로 제공되고, PBS 완충액 중 결합제의 용액은 하기인 것을 특징으로 한다.
[A] 적당한 환원제, 예를 들면, 디티오트레이톨 또는 트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드와 혼합되고, 차후에 식 (IIa)의 화합물:
Figure pct00220
(여기서 D, L1, B, L2 및 R35 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
과 반응하여 식 (I-A)의 화합물:
Figure pct00221
(여기서 n, AK1, D, L1, B, L2 및 R35 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)를 얻음,
또는
[B] 식 (IIIa)의 화합물:
Figure pct00222
(여기서 D, L1, B, L2 및 R35 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
과 반응하여 식 (Ia-B)의 화합물:
Figure pct00223
(여기서 n, AK2, D, L1, B, L2 및 R35 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)을 얻음.
시스테인 커플링:
항체의 부분 환원 및 또한 식 (IIa)의 화합물에 의한 (부분적으로) 환원된 항체의 차후의 콘주게이션은 하기의 예에서 보는 바와 같이 숙련가에게 공지된 방법에 따라 일어난다: Ducry 등, Bioconj. Chem. 2010, 21, 5 및 본원의 참조문헌, Klussman 등, Bioconj. Chem. 2004, 15(4), 765-773. 항체의 완만한 환원은 2-6 당량의 TCEP의, 적당한 완충액, 바람직하게는 포스페이트 완충액에 존재하는 항체에의 부가에 의해, 그리고 30 내지 180 분 동안 15 내지 40 ℃의 온도에서, 바람직하게는 실온에서 교반함으로써 바람직하게 달성된다. 이것 다음에 콘주게이션, DMSO 중 식 (IIa)의 화합물의 용액, 아세토니트릴 또는 DMF의, PBS 완충액 중 (부분적으로) 환원된 항체의 용액에의 부가, 및 0 ℃ 내지 +40 ℃, 더 상세하게는 +10 ℃ 내지 +30 ℃의 온도에서, 30 분 내지 6 시간, 더 상세하게는 1 내지 2 시간의 기간 동안의 차후의 반응이 뒤따른다.
라이신 커플링:
무엇보다도 식 (IIIa)의 화합물 또는 비교할만한 활성화된 카복실 성분은 펩타이드 화학의 종래의 방법에 의해 제조된다. 그 다음 상기 성분은 예를 들면 불활성 용매에서 예컨대 DMSO 또는 DMF에서 취해지고, 중성 pH에서 바람직하게는 포스페이트 완충액에서 존재하는 항체에 부가된다. 용액은 1 내지 16 시간 동안 15 내지 40 ℃의 온도, 바람직하게는 RT에서 교반된다.
상기에서 기재된 제조 공정은 이하의 도식을 사용하여 예로서 설명된다 (도식 1 및 2):
도식 1
Figure pct00224
[a): 1. AK (항체), TCEP, PBS 완충액, RT; 2. DMSO 중 말레이마이드 유도체의 부가, RT].
72
도식 2
Figure pct00225
[a): AK (항체), PBS 완충액, 링커-약물 성분의 활성화된 카복실 유도체와의 RT에서의 혼합].
식 (II)의 화합물 (여기서 L1 및 B는 결합이다)은, 식 (IV)의 화합물:
Figure pct00226
(여기서 D는 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
에 대 식 (V)의 화합물:
Figure pct00227
(여기서
L2A는 L2의 상기-규정된 정의를 갖지만, 알킬 사슬 길이에서 하나의 탄소 원자에 의해 단축되고,
PG1은 아미노-보호 그룹 예를 들면, (9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐, tert-부톡시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이다)
로 불활성 용매에서 환원성 아미노화를 수행하여 식 (VI)의 화합물:
Figure pct00228
(여기서 D, L2 및 PG1는 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻고,
보호 그룹 PG1을 이 화합물로부터 숙련가에게 공지된 방법으로 제거하고, 탈보호된 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 염기의 존재에서 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트과 반응시켜 식 (II-A)의 화합물:
Figure pct00229
(여기서 D 및 L2 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻음으로써 제조될 수 있다.
식 (II)의 화합물 (여기서 B는 하기 식 (B1)의 그룹이다):
Figure pct00230
(여기서 *, **, R14 및 R15 각각은 상기에서 명시된 조건을 갖는다)
은, 보호 그룹 PG1을 식 (VI)의 화합물로부터 숙련가에게 공지된 방법으로 제거하고, 탈보호된 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 염기의 존재에서 식 (VII)의 화합물:
Figure pct00231
(여기서 L1는 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (II-B)의 화합물:
Figure pct00232
(여기서 D, L1 및 L2 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻음으로써 제조될 수 있다.
식 (II)의 화합물 (여기서 B는 하기 식 (B2)의 그룹이다):
Figure pct00233
(여기서 *, **, L3, R16 및 R17 각각은 상기에서 명시된 조건을 가질 수 있다)
은, 식 (IV)의 화합물에 대해, 식 (VIII)의 화합물:
Figure pct00234
(여기서 L2A는 L2의 상기-규정된 정의를 갖지만, 알킬 사슬 길이에서 하나의 탄소 원자에 의해 단축된다)
로 불활성 용매에서 환원성 아미노화를 수행하여 식 (IX)의 화합물:
Figure pct00235
(여기서 D 및 L2는 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻고
이 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 식 (X)의 화합물:
Figure pct00236
(여기서 L1 및 L3 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (II-C)의 화합물:
Figure pct00237
(여기서 D, L1, L2 및 L3 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻음으로써 제조될 수 있다.
식 (II)의 화합물 (여기서 B는 하기 식 (B3)의 그룹이다):
Figure pct00238
(여기서 *, **, L3, R16 및 R17 각각은 상기에서 명시된 조건을 가지며,
L4A은 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00239
또는
Figure pct00240
여기서
***는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
****는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
R25는 수소 또는 메틸이다)
식 (IX)의 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 염기 및 적당한 커플링 시약의 존재에서 식 (XI-A) 또는 (XI-B)의 화합물:
Figure pct00241
또는
Figure pct00242
(여기서 R25 및 PG1 각각은 상기에서 명시된 정의를 가지며
PG2는 적당한 카복실-보호 그룹, 더 상세하게는 벤질이다)
과 반응시켜 화합물 (XII-A) 또는 (XII-B):
Figure pct00243
또는
Figure pct00244
(여기서 D, PG1, PG2 및 L2는 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻고,
차후에 보호 그룹 PG2을 이 화합물로부터 숙련가에게 공지된 방법으로 제거하고, 탈보호된 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 식 (X)의 화합물과 반응시키고, 마지막으로, 보호 그룹 PG1을 이 화합물로부터 숙련가에게 공지된 방법으로 제거하여 식 (II-D-A) 또는 (II-D-B)의 화합물:
Figure pct00245
또는
Figure pct00246
(여기서 D, L1, L2 및 L3은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻음으로써 제조될 수 있다.
식 (II)의 화합물 (여기서 B는 하기 식 (B4)의 그룹이다):
Figure pct00247
(여기서 *, ** 각각은 상기에서 명시된 조건을 가지며
Q1A는 N-연결된 4- 내지 7-원 헤테로사이클이다)
은, 식 (IX)의 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 염기 및 적당한 커플링 시약의 존재에서 식 (XXI)의 화합물:
Figure pct00248
(여기서 PG1 및 Q1A 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (XXII)의 화합물:
Figure pct00249
(여기서 PG1, Q1A, D 및 L2는 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻고, 보호 그룹 PG1을 이 화합물로부터, 숙련가에게 공지된 방법으로 제거하고, 차후에 탈보호된 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 식 (XXIII)의 화합물:
Figure pct00250
(여기서 L1는 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (II-D)의 화합물:
Figure pct00251
(여기서 Q1A, D, L1 및 L2는 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻음으로써 제조될 수 있다.
식 (III)의 화합물 (여기서 L1 및 B는 결합이다)은, 식 (IX)의 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 N-하이드록시석신이마이드와 반응시켜 식 (III-A)의 화합물:
Figure pct00252
(여기서 D 및 L2 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻음으로써 제조될 수 있다.
식 (III)의 화합물 (여기서 L1은 결합이고 B는 하기 식 (B5A)의 그룹이다):
Figure pct00253
(여기서 *, ** 및 P 각각은 상기에서 명시된 정의를 가지며,
Q2A는 3- 내지 7-원 카보사이클이다)
은, 식 (IX)의 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 식 (XIII)의 화합물:
Figure pct00254
(여기서 P, Q2A 및 PG2 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (XIV)의 화합물:
Figure pct00255
(여기서 D, P, Q2A, L2 및 PG2 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻고, 보호 그룹 PG2을 이 화합물로부터 숙련가에게 공지된 방법으로 제거하고, 차후에 탈보호된 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 염기의 존재에서 N-하이드록시석신이마이드과 반응시켜 식 (III-B)의 화합물:
Figure pct00256
(여기서 D, P, Q2A 및 L2 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻음으로써 제조될 수 있다.
식 (III)의 화합물 (여기서 L1은 결합이고 B는 하기 식 (B6)의 그룹이다):
Figure pct00257
(여기서 *, **, R18, R19 및 R20 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
은, 식 (IX)의 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 식 (XV)의 화합물:
Figure pct00258
(여기서 R18, R19, R20 및 PG2 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (XVI)의 화합물:
Figure pct00259
(여기서 D, R18, R19, R20, L2 및 PG2 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻고, 보호 그룹 PG2을 이 화합물로부터 숙련가에게 공지된 방법으로 제거하고, 차후에 탈보호된 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 N-하이드록시석신이마이드와 반응시켜 식 (III-C)의 화합물:
Figure pct00260
(여기서 D, R18, R19, R20 및 L2 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻음으로써 제조될 수 있다.
식 (III)의 화합물 (여기서 L1은 결합이고 B는 하기 식 (B7)의 그룹이다):
Figure pct00261
(여기서 *, **, R21 및 R22 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
은, 보호 그룹 PG1을 식 (VI)의 화합물로부터 숙련가에게 공지된 방법으로 제거하고, 그 결과로 생긴 탈보호된 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 염기의 존재에서 식 (XVII)의 화합물:
Figure pct00262
(여기서 R21 및 R22 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (III-D)의 화합물:
Figure pct00263
(여기서 D, R21, R22 및 L2 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻음으로써 제조될 수 있다.
식 (III)의 화합물 (여기서 B는 하기 식 (B8)의 그룹이다):
Figure pct00264
(여기서 *, **, R23 및 R24 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
은, 식 (IX)의 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 식 (XVIII)의 화합물:
Figure pct00265
(여기서 R23, R24 및 PG1 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (XIX)의 화합물:
Figure pct00266
(여기서 D, R23, R24, L2 및 PG1 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻고, 보호 그룹 PG1을 이 화합물로부터 숙련가에게 공지된 방법으로 제거하고, 차후에 탈보호된 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 커플링 시약 및 적당한 염기의 존재에서 식 (XX)의 화합물:
Figure pct00267
(여기서
L1A는 선형 (C1-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
Figure pct00268
여기서
m은 2 내지 6의 수이고,
##1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
여기서 (C1-C10)-알칸디일은 1 내지 4 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
여기서 서로 1,2, 1,3 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있다)
과 반응시켜 식 (III-E)의 화합물:
Figure pct00269
(여기서 D, R23, R24, L1A 및 L2 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻음으로써 제조될 수 있다.
식 (III)의 화합물 (여기서 B는 하기 식 (B5B)의 그룹이다):
Figure pct00270
(여기서 * 및 ** 각각은 상기에서 명시된 정의를 가지며
Q2B는 N-연결된 4- 내지 7-원 헤테로사이클이다)
은, 식 (IX)의 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 염기 및 적당한 커플링 시약의 존재에서 식 (XXIV)의 화합물:
Figure pct00271
(여기서 PG1 및 Q2B 각각은 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
과 반응시켜 식 (XXV)의 화합물:
Figure pct00272
(여기서 PG1, Q2B, D 및 L2는 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
을 얻고, 보호 그룹 PG1을 이 화합물로부터 숙련가에게 공지된 방법으로 제거하고, 차후에 탈보호된 화합물을, 불활성 용매에서 적당한 염기의 존재에서 식 (XX)의 화합물로 식 (III-F)의 화합물:
Figure pct00273
(여기서 Q2B, D, L1A 및 L2는 상기에서 명시된 정의를 갖는다)
로 전환시킴으로써 제조될 수 있다.
반응 (IV) + (V) → (VI) 및 (IV) + (VIII) → (IX)는 환원성 아미노화에 대해 관례적이고 반응 조건 하에서, 선택적으로 촉매로서 산 및/또는 수-제거제의 존재에서 불활성인 용맥에서 일어난다. 그와 같은 용매는 예를 들면 하기를 포함한다: 알코올 예컨대 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올 또는 tert-부탄올, 에테르 예컨대 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 1,2-디메톡시에탄 또는 비스(2-메톡시에틸) 에테르, 또는 다른 용매 예컨대 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, N,N-디메틸포름아미드 그렇지 않으면 물. 또한 이들 용매의 혼합물을 사용할 수 있다. 용매로서 촉매로서 아세트산 또는 희석 염산의 부가와 함께, 1,4-디옥산/물 혼합물을 사용하는 것이 바라직하다.
이러한 반응에 적당한 환원제는, 특히, 착물 보로하이드라이드, 예를 들면, 나트륨 보로하이드라이드, 나트륨 시아노보로하이드라이드, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드, 테트라-n-부틸암모늄 보로하이드라이드 또는 보란-피리딘 복합물이다. 나트륨 시아노보로하이드라이드 또는 보란-피리딘 착물을 사용하는 것이 바람직하다.
반응 (IV) + (V) → (VI) 및 (IV) + (VIII) → (IX)는 일반적으로 0 ℃ 내지 +120 ℃, 바람직하게는 +50 ℃ 내지 +100 ℃의 온도에서 일어난다. 반응은 대기압, 증가된 또는 감소된 압력 (예를 들면 0.5 내지 5 bar) 하에서 수행될 수 있고; 대기압에서 조작하는 것이 일반적이다.
상기-기재된 커플링 반응 (IX) + (X) → (II-C), (XII-A) 또는 (XII-B) + (X) → (II-D-A) 또는 (II-D-B), (IX) + (XIII) → (XIV), (IX) + (XV) → (XVI) 및 (XXII) + (XXIII) → (II-D) (아민 성분 및 카복실산 성분 각각으로부터 아마이드 형성)은 펩타이드 화학의 표준 방법에 의해 수행될 수 있다 [참조 예를 들면 M.　Bodanszky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1993; M.　Bodanszky and A.　Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1984; H.-D. Jakubke and H.　Jeschkeit, Aminosaeren , Peptide , Proteine, Verlag Chemie, Weinheim, 1982].
이들 커플링 반응을 위한 불활성 용매의 예는 하기이다: 에테르 예컨대 디에틸 에테르, 디이소프로필 에테르, tert -부틸 메틸 에테르, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 1,2-디메톡시에탄 또는 비스(2-메톡시에틸) 에테르, 탄화수소 예컨대 벤젠, 톨루엔, 자일렌, 펜탄, 헥산, 헵탄, 사이클로헥산 또는 석유 분획, 할로겐화된 탄화수소 예컨대 디클로로메탄, 트리클로로메탄, 테트라클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 트리클로로에틸렌 또는 클로로벤젠, 또는 쌍극성-비양성자성 용매 예컨대 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 아세토니트릴, 에틸 아세테이트, 피리딘, 디메틸 설폭사이드 (DMSO), N,N-디메틸포름아미드 (DMF), N,N-디메틸아세트아마이드 (DMA), N,N'-디메틸프로필렌우레아 (DMPU) 또는 N-메틸피롤리디논 (NMP). 그와 같은 용매의 혼합물을 사용하는 것이 또한 가능하다. N,N-디메틸포름아미드를 사용하는 것이 선호된다.
이들 커플링을 위한 적당한 활성화제/축합제의 예는, 카보디이마이드 예컨대 N,N'-디에틸-, N,N'-디프로필-, N,N'-디이소프로필-, N,N'-디사이클로헥실카보디이마이드 (DCC) 또는 N-(3-디메틸아미노이소프로필)-N'-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 (EDC), 포스겐 유도체 예컨대 N,N'-카보닐디이미다졸 (CDI) 또는 이소부틸 클로로포르메이트, 1,2-옥사졸륨 화합물 예컨대 2-에틸-5-페닐-1,2-옥사졸륨 3-설페이트 또는 2-tert -부틸-5-메틸is옥사졸륨 퍼클로레이트, 아실아미노 화합물 예컨대 2-에톡시-1-에톡시카보닐-1,2-디하이드로퀴놀린, 인 화합물 예컨대 프로판포스폰 무수물, 디에틸 시아노포스포네이트, 비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스포릴 클로라이드, 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 또는 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(피롤리디노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBOP), 또는 우로늄 화합물 예컨대 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU), O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU), 2-(2-옥소-1-(2H)-피리딜)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TPTU), O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 또는 O-(1H-6-클로로벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄-테트라플루오로보레이트 (TCTU)을, 선택적으로 추가 보조물 예컨대 1-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt) 또는 N-하이드록시석신이마이드 (HOSu), 및 또한, 염기로서, 알칼리 금속 카보네이트, 예를 들면 나트륨 또는 칼륨 카보네이트, 또는 3차 아민 염기 예컨대 트리에틸아민, N-메틸모폴린, N-메틸피페리딘, N,N-디이소프로필에틸아민, 피리딘 또는 4-N,N-디메틸아미노피리딘과 조합하여 포함한다.
본 발명의 문맥에서, 그와 같은 커플링 반응을 위한 활성화제/축합제로서, N-(3-디메틸아미노이소프로필)-N'-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 (EDC)을, 1-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt) 및 N,N-디이소프로필에틸아민, 또는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU)와 함께, 마찬가지로 N,N-디이소프로필에틸아민과 함께 사용하는 것이 바람직하다.
커플링 반응 (IX) + (X) → (II-C), (XII-A) 또는 (XII-B) + (X) → (II-D-A) 또는 (II-D-B), (IX) + (XIII) → (XIV), (IX) + (XV) → (XVI) 및 (XXII) + (XXIII) → (II-D)은 일반적으로 -20 ℃ 내지 +60 ℃, 바람직하게는 0 ℃ 내지 +40 ℃의 온도에서 수행된다. 반응은 대기압 하에서, 증가된 또는 감압 (예를 들면 0.5 내지 5 bar)에서 일어날 수 있고; 대기압 하에서 조작시키는 것이 일반적이다.
에스테르화 (IX) + (XVIII) → (XII) 및 (IX) + (XI-A) 또는 (XI-B) → (XII-A) 또는 (XII-B), (IX) + (XXIV) → (XXV) 및 또한 (IX) + (XXI) → (XXII)는 상기-기재된 아마이드 커플링 반응과 유사하게 일어난다. 이들 반응은 바람직하게는, N-(3-디메틸아미노이소프로필)-N'-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 (EDC) 및 4-디메틸아미노-피리딘을 사용하여 디클로로메탄에서, +50 ℃ 내지 100 ℃의 온도에서 대기압 하에서 일어난다.
화합물에 존재하는 관능 그룹 - 특히 예컨대 아미노, 하이드록실 및 카복실 그룹 - 은, 유용하거나 필요하다면, 상기-기재된 공정 단계 동안에 일시적으로 보호된 형태로 또한 존재할 수 있다. 이들 경우에, 그와 같은 보호 그룹은 도입되고 펩타이드 화학으로부터 공지된 관례적 방법에 따라 제거된다 [참조, 예를 들면, T.W.　Greene and P.G.M.　Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1999; M.　Bodanszky and A.　Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1984]. 2 이상의 보호된 그룹이 존재하는 경우, 원포드(One-Pot) 반응에서 선택적으로 동시에 다시 자유롭고, 그렇지 않으면 별개의 반응 단계에서 다시 자유로울 수 있다.
아미노-보호 그룹 PG1으로서 tert-부톡시카보닐 (Boc), 벤질옥시카보닐 (Z) 또는 (9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐 (Fmoc)을 사용하는 것이 바람직하고; 하이드록실 또는 카복실 관능기에 대해 tert -부틸 또는 벤질을 보호 그룹 PG2로서 사용하는 것이 바람직하다. tert -부틸 또는 tert-부톡시카보닐 그룹의 제거는 강산, 예컨대 염화수소, 브롬화수소 또는 트리플루오로아세트산으로, 불활성 용매 예컨대 디에틸 에테르, 1,4-디옥산, 디클로로메탄 또는 아세트산에서 처리함으로써 전형적으로 달성되고; 이러한 반응은 선택적으로 또한, 불활성 용매의 부가 없이 수행될 수 있다. 보호 그룹으로서 벤질 또는 벤질옥시카보닐의 경우에, 이러한 그룹은 예를 들면 적당한 팔라듐 촉매, 예컨대 활성탄상 팔라듐의 존재에서 수소첨가분해에 의해 바람직하게 제거된다. (9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐 그룹은 2차 아민 염기 예컨대 디에틸아민 또는 피페리딘을 사용하여 일반적으로 제거된다.
반응 (VI) → (II-A)는 반응 조건 하에서 불활성인 용매, 예를 들면, 에테르 예컨대 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 1,2-디메톡시에탄 또는 비스(2-메톡시에틸) 에테르, 알코올 예컨대 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, n-부탄올 또는 tert-부탄올, 또는 쌍극성-비양성자성 용매 예컨대 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 아세토니트릴, 에틸 아세테이트, 피리딘, 디메틸 설폭사이드 (DMSO), N,N-디메틸포름아미드 (DMF), N,N-디메틸아세트아마이드 (DMA), N,N'-디메틸프로필렌우레아 (DMPU) 또는 N-메틸피롤리디논 (NMP) 또는 물에서 일어난다. 그와 같은 용매의 혼합물을 사용하는 것이 또한 가능하다. 1,4-디옥산 및 물의 혼합물을 사용하는 것이 선호된다.
반응 (VI) → (II-A)에 대한 적당한 염기는, 예를 들면, 알칼리 금속 카보네이트 예컨대 칼륨 카보네이트, 나트륨 카보네이트 또는 리튬 카보네이트, 알칼리 금속 수소카보네이트 예컨대 나트륨 또는 칼륨 수소카보네이트 또는 알칼리 금속 알콕사이드 예컨대 나트륨 메톡사이드, 나트륨 에톡사이드 또는 칼륨 tert-부톡사이드이다. 탄산수소나트륨을 사용하는 것이 바람직하다.
반응 (VI) → (II-A)는 0 ℃ 내지 +50 ℃, 바람직하게는 +10 ℃ 내지 +30 ℃의 온도 범위에서 일어난다. 반응은 대기압 하에서, 상승된 또는 감압 (예를 들면 0.5 내지 5 bar) 하에서 일어날 수 있고; 대기압 하에서 조작시키는 것이 일반적이다.
반응 (VI) + (VII) → (II-B)는 반응 조건 하에서 불활성인 용매, 예를 들면, 에테르 예컨대 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 1,2-디메톡시에탄 또는 비스(2-메톡시에틸) 에테르, 알코올 예컨대 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, n-부탄올 또는 tert-부탄올, 또는 쌍극성-비양성자성 용매 예컨대 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 아세토니트릴, 에틸 아세테이트, 피리딘, 디메틸 설폭사이드 (DMSO), N,N-디메틸포름아미드 (DMF), N,N-디메틸아세트아마이드 (DMA), N,N'-디메틸프로필렌우레아 (DMPU) 또는 N-메틸피롤리디논 (NMP) 또는 물에서 일어난다. 그와 같은 용매의 혼합물을 사용하는 것이 또한 가능하다. DMF을 사용하는 것이 선호된다.
반응 (VI) + (VII) → (II-B) 에 대한 적당한 염기는, 예를 들면, 3차 아민 염기 예컨대 트리에틸아민, N-메틸모폴린, N-메틸피페리딘, N,N-디이소프로필에틸아민, 피리딘 또는 4-N,N-디메틸아미노피리딘이다. N,N-디이소프로필에틸아민을 사용하는 것이 선호된다.
반응 (VI) + (VII) → (II-B)는 0 ℃ 내지 +50 ℃, 바람직하게는 +10 ℃ 내지 +30 ℃의 온도 범위에서 일어난다. 반응은 대기압 하에서, 상승된 또는 감압 (예를 들면 0.5 내지 5 bar) 하에서 일어날 수 있고; 대기압 하에서 조작시키는 것이 일반적이다.
반응 (IX) → (III-A), (XIV) → (III-B) 및 (XVI) → (III-C) 및 또한 (VI) + (XVII) → (III-D), (XIX) + (XX) → (III-E) 및 (XXV) + (XX) → (III-F)는 반응 조건 하에서 불활성인 용매에서 일어난다. 적당한 용매의 예는 하기이다: 에테르 예컨대 디에틸 에테르, 디이소프로필 에테르, tert -부틸 메틸 에테르, 테트라하이드로푸란, 1,4-디옥산, 1,2-디메톡시에탄 또는 비스(2-메톡시에틸) 에테르, 탄화수소 예컨대 벤젠, 톨루엔, 자일렌, 펜탄, 헥산, 헵탄, 사이클로헥산 또는 석유 분획, 할로겐화된 탄화수소 예컨대 디클로로메탄, 트리클로로메탄, 테트라클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 트리클로로에틸렌 또는 클로로벤젠, 또는 쌍극성-비양성자성 용매 예컨대 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 아세토니트릴, 에틸 아세테이트, 피리딘, 디메틸 설폭사이드 (DMSO), N,N-디메틸포름아미드 (DMF), N,N-디메틸아세트아마이드 (DMA), N,N'-디메틸프로필렌우레아 (DMPU) 또는 N-메틸피롤리디논 (NMP). 그와 같은 용매의 혼합물을 사용하는 것이 또한 가능하다. N,N-디메틸포름아미드를 사용하는 것이 선호된다.
이들 반응 에 대한 적당한 염기는 예를 들면 하기이다: 3차 아민 예컨대 트리에틸아민, N-메틸모폴린, N-메틸피페리딘, N,N-디이소프로필에틸아민, 피리딘 또는 4-N,N-디메틸아미노피리딘. N,N-디이소프로필에틸아민을, 선택적으로 4-N,N-디메틸아미노피리딘의 부가와 함께 사용하는 것이 선호된다.
반응 (IX) → (III-A), (XIV) → (III-B) 및 (XVI) → (III-C) 및 또한 (VI) + (XVII) → (III-D) 및 (XIX) + (XX) → (III-E)는 0 ℃ 내지 +50 ℃, 바람직하게는 +10 ℃ 내지 +30 ℃의 온도 범위에서 일어난다. 반응은 대기압 하에서, 상승된 또는 감압 (예를 들면 0.5 내지 5 bar) 하에서 일어날 수 있고; 대기압 하에서 조작시키는 것이 일반적이다.
식 (II) 및 (III)의 화합물은 식 (IIa) 및 (IIIa) 각각의 양 아래이고, 여기서 R35는 메틸이다. 화합물 (IIa) 및 (IIIa)의 제조는 상기에서 기재된 바와 같이 식 (II) 및 (III)의 화합물과 유사하게 일어난다.
상기-기재된 과정은 하기 합성 도식에 의해 예로써 실증된다 (도식 3 내지 13, 18):
도식 3
Figure pct00274
[a): 1. 물/디옥산, 1N HCl, 100 ℃; 2. H2, Pd/C, 메탄올, RT; b): NaHCO3, H2O, 디옥산, RT].
도식 4
Figure pct00275
[a): 디이소프로필에틸아민, DMF, RT].
도식 5
Figure pct00276
[a): 물/디옥산, 1N HCl, 100 ℃; b): HATU, 디이소프로필아민, DMF, RT].
도식 6
Figure pct00277
[a): 1. EDCI, DMAP, 디클로로메탄, RT; 2. H2, 메탄올, RT; b): 1. EDCI, HOBt, 디이소프로필아민, DMF, RT; 2. 디클로로메탄, RT].
도식 7
Figure pct00278
[a): 1. EDCI, DMAP, 디클로로메탄, RT; 2. H2, 메탄올, RT; b): HATU, 디이소프로필아민, DMF, RT].
도식 8
Figure pct00279
[a): EDCI, 디클로로메탄, RT].
도식 9
Figure pct00280
[a): HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, RT; 2. H2, 메탄올, RT; b): EDCI, DMAP, 디클로로메탄, RT].
도식 10
Figure pct00281
[a): 1. HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, RT; 2. 디클로로메탄, RT; b): EDCI, DMAP, 디클로로메탄, RT].
도식 11
Figure pct00282
[a): 디이소프로필에틸아민, DMF, RT].
도식 12
Figure pct00283
[a): 1. EDCI, DMAP, 디클로로메탄, RT; 2. 디클로로메탄, RT; b): 디이소프로필아민, DMAP, 디클로로메탄, RT].
도식 13
Figure pct00284
[a): DMAP, 디이소프로필아민, 디클로로메탄, RT].
도식 18
Figure pct00285
[a): 1. 물/디옥산, 1N HCl, 100 ℃; 2. H2, Pd/C, 메탄올, RT; b): HATU, 디이소프로필에틸아민, RT].
식 (IV)의 화합물은 하기 문헌으로부터 공지된 공정과 유사하게, 펩타이드 화학의 관례적 방법에 따라, 및 본 실험 섹션에서 기재된 바와 같이, 상업적으로 이용가능한 아미노산 빌딩 블록 또는 문헌으로부터 공지된 것으로부터 제조될 수 있다 (참고, 예를 들면, Pettit 등, Synthesis 1996, 719; Shioiri 등, Tetrahedron Lett . 1991, 32, 931; Shioiri 등, Tetrahedron 1993, 49, 1913; Koga 등, Tetrahedron Lett . 1991, 32, 2395; Vidal 등, Tetrahedron 2004, 60, 9715; Poncet 등, Tetrahedron 1994, 50, 5345. Pettit 등, J. Org . Chem . 1994, 59, 1796). 이하의 합성 도식 (도식 14 내지 16)은 예로써 제조를 설명한다.
도식 14
Figure pct00286
[ a): 하이드록실아민 하이드로클로라이드, KOH, MeOH, 0 ℃ → RT; b): BrCH2(CH2)2CH2Br, K2CO3, 아세톤, 환류].
도식 15
Figure pct00287
[a): 1. 디이소프로필에틸아민, BEP, 디클로로메탄, -10 ℃ → RT; 2. MeOH].
도식 16
Figure pct00288
[ a): 1. 디이소프로필에틸아민, BEP, DMF, RT; 2. 디클로로메탄; b): 1. HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, RT; 2. 디클로로메탄, RT; c): 1. HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, RT; 2. 피페리딘, DMF, RT].
적절한 경우, 그의 키랄 또는 부분입체이성질체 형태를 포함하는 식 (XI), (XIII), (XV), (XVII) 및 (XXI)의 화합물은 상업적으로 이용가능하거나 문헌에서와 같이 기재되거나, 문헌에서 공개된 방법과 유사하게 숙련가에게 분명한 경로에 의해 제조될 수 있다. 개시 물질의 제조에 대한 수많은 포괄적인 설명 및 또한 문헌 정보는, 개시 화합물 및 중간체의 제조와 관련된 섹션에서, 실험 섹션에서 또한 주어진다.
적절한 경우, 그의 키랄 또는 부분입체이성질체 형태를 포함하는 식 (V), (VII), (VIII), (X), (XVIII), (XX) 및 (XXIII)의 화합물은 문헌으로부터 공지되거나, 문헌에서 공개된 방법과 유사하게, 숙련가에게 분명한 경로에 의해 제조될 수 있다. 개시 물질의 제조에 대한 수많은 포괄적인 설명 및 또한 문헌 정보는, 개시 화합물 및 중간체의 제조와 관련된 섹션에서, 실험 섹션에서 또한 주어진다.
대안적으로, 제조 순서의 개별적인 단계는 상이한 순서로 또는 다른 보호 그룹 조합과 함께 수행될 수 있다. 이러한 접근법은 이하의 합성 도식에서 예로써 실증된다 (도식 17, 19, 20 및 21).
도식 17
Figure pct00289
[ a): 보란-피리딘 복합물, 아세트산, MeOH; b): 1. HOBt, EDCI, 디이소프로필에틸아민, DMF, RT; 2. TFA, 디클로로메탄, RT; c): HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, RT; d): 1. Pd/C, MeOH, RT; 2. NaHCO3, 디옥산, 물].
도식 19
Figure pct00290
[ a): 1. HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, RT; 2. TFA, 디클로로메탄, RT; 3. ((H3C)3C(C=O))2O, DMF, 디이소프로필에틸아민; b): 디이소프로필에틸아민, BEP, DMF, RT; c): 1. H2, Pd/C (10%), 메탄올, RT; 2. HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, RT; 3. TFA, 디클로로메탄, RT].
도식 20
Figure pct00291
[a): 보란-피리딘 복합물, 아세트산, MeOH; b): 1. HOBt, EDCI, 디이소프로필에틸아민, DMF, RT; 2. TFA, 디클로로메탄, RT; 3. H2, Pd/C, MeOH, RT c): 1. NaHCO3, 디옥산, 물; d): HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, RT].
도식 21
Figure pct00292
[a): 1. HOBt, EDCI, 디이소프로필에틸아민, DMF, RT; b) H2, Pd/C, MeOH, RT; c) 보란-피리딘 복합물, 아세트산, MeOH; d) TFA, 디클로로메탄, RT; e): HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, RT; f): HATU, 디이소프로필에틸아민, DMF, RT; g) H2, Pd/C, MeOH, RT].
본 발명의 결합제의 FGFR2 암 표적 분자는 숙련가에게 공지되어 있다. 전체길이 FGFR2는 FGFR2 알파 (서열번호: 1)로서 확인되고, 한편 D1 도메인이 없는 동형체는 FGFR2 베타 (서열번호: 2)로서 확인된다 (참고 도 1). 도메인 3 중 대안적인 스플라이싱으로 2 개의 상이한 변이체, 즉 엑손 7 및 8에 의해 인코딩된 FGFR2 IIIb, 및 엑손 7 및 9에 의해 인코딩된 FGFR2 IIIc로 이어진다 (참고 도 1).
본 발명의 일 구현예에서 결합제는 - 바람직하게는 특이적으로 - FGFR2에 결합한다. 본 발명의 추가 요지에서, 결합제는 - 바람직하게는 특이적으로 - 표적 분자 FGFR2의 세포외 도메인에 결합한다 (참고 도 1).
본 발명의 추가 구현예에서, 결합제는 - 바람직하게는 특이적으로 - 인간 FGFR2 폴리펩타이드의 하나 이상의 형태에 결합한다. 본 발명의 추가 요지에서, 결합제는 - 바람직하게는 특이적으로 - FGFR2의 모든 동형체 및 스플라이스 변이체에 결합한다. 이하의 문맥에서, FGFR2의 상이한 "형태"의 개념은, 비제한적으로, 상이한 동형체, 상이한 스플라이스 변이체, 상이한 글리코형 또는 FGFR2 폴리펩타이드를 포함하고, 이들은 상이한 번역 및 번역후 변형을 경험한다.
본 발명의 추가 구현예에서, 결합제는 - 바람직하게는 특이적으로 - 암 표적 분자 FGFR2의 N-말단 도메인에 결합한다. 본 발명의 추가 요지에서, 결합제는 - 바람직하게는 특이적으로 - t FGFR2의 세포외 N-말단 에피토프 (1RPSFSLVEDTTLEPE15)에 결합한다 (서열번호: 23).
본 발명의 추가 구현예에서, 결합제는 또한 - 바람직하게는 특이적으로 - 상이한 종의 FGFR2에 결합한다. 이러한 효과는, 본 발명의 콘주게이트는 이들 종에서 약리적으로 더 쉽게 조사될 수 있다는 것이다. 바람직한 종은 설치류, 더 상세하게는 마우스 또는 랫트, 뿐만 아니라 개, 돼지 및 비-인간 영장류이다.
하나의 바람직한 구현예에서 결합제는, 표적 세포 상의 FGFR2에 결합한 후, 결합의 결과로서 표적 세포에 의해 내면화된다. 이러한 효과는, 면역콘주게이트 또는 ADC일 수 있는 결합제-약물 콘주게이트는 표적 세포에 의해 취해질 수 있다는 것이다.
일 구현예에서 결합제는 결합 단백질이다. 하나의 바람직한 구현예에서 결합제는 항체, 항원-결합 항체 단편, 다중특이적 항체 또는 항체 모방체이다.
바람직한 항체 모방체는 어피바디, 아드넥틴, 안티칼린, DARPins, 아비머, 또는 나노바디이다. 바람직한 다중특이적 항체는 이중특이적 및 삼중특이적 항체이다.
하나의 바람직한 구현예에서 결합제는 항체 또는 항원-결합 항체 단편, 더 바람직하게는 단리된 항체 또는 단리된 항원-결합 항체 단편이다.
바람직한 항원-결합 항체 단편은 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편, 디아바디, DAbs, 선형 항체 및 scFv이다. Fab, 디아바디 및 scFv가 특히 바람직하다.
하나의 특히 바람직한 구현예에서 결합제는 항체이다. 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 항체 단편이 특히 바람직하다. 인간, 인간화된 또는 키메라 항체 또는 그의 항원-결합 항체 단편이 추가로 특히 바람직하다.
하나의 바람직한 구현예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항체 M048-D01-hIgG1의 가변 경쇄 및 중쇄의 CDR 서열의 아미노산 서열을 포함한다.
추가의 바람직한 구현에에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 15 (H-CDR1), 서열번호: 16 (H-CDR2), 서열번호: 17 (H-CDR3), 서열번호: 18 (L-CDR1), 서열번호: 19 (L-CDR2) 및 서열번호: 20 (L-CDR3)에서 제시된 항체 M048-D01-hIgG1의 가변 경쇄 및 중쇄의 CDR 서열의 아미노산 서열을 포함한다.
추가의 바람직한 구현에에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항체 M048-D01-hIgG1의 가변 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열 또는 M048-D01-hIgG1-b를 포함한다.
추가의 바람직한 구현에에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 12 (Vl) 및 서열번호: 11 (Vh)에서 제시된 항체 M048-D01-hIgG1의 가변 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열, 또는 서열번호: 14 (Vl) 및 서열번호: 13 (Vh)에서 제시된 항체 M048-D01-hIgG1의 가변 경쇄 및 중쇄-b의 아미노산 서열을 포함한다.
추가 특히 바람직한 구현예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 14 (Vl) 및 서열번호: 13 (Vh)에서 제시된 항체 M048-D01- hIgG1-b의 가변 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열을 포함한다.
추가 특히 바람직한 구현예에서, 항체는 서열번호: 9 (경쇄) 및 서열번호: 10 (중쇄)에서 제시된 항체 M048-D01-hIgG1-b의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열을 포함한다.
추가 특히 바람직한 구현예에서, 항체는 서열번호: 7 (경쇄) 및 서열번호: 8 (중쇄)에서 제시된 항체 M048-D01-hIgG1 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열을 포함한다.
추가 FGFR2 항체의 예는 본 발명에서 기재된 GAL-FR21-mIgG1 (서열번호: 3 및 서열번호: 4) 및 GAL-FR22-mIgG2a (서열번호: 5 및 서열번호: 6) 항체이다. 2 개의 마지막 언급된 항체는 항체 GAL-FR21 (WO2010/054265로부터 서열번호: 1 및 서열번호: 4) 및 GAL-FR22 (WO2010/054265로부터 서열번호: 7 및 서열번호: 8)의 가벼운 (Vl) 및 무거운 (Vh) 사슬의, 본원에서 기재된 가변 영역으로부터 WO2010/054265를 기반으로 구성되고, GAL-FR21의 가변 영역은 mIgG1 포맷으로 재포맷팅되었고, 한편 GAL-FR22의 가변 영역은 mIgG2a 포맷으로 재포맷팅되었다.
암 표적 분자에 결합하는 항체 또는 항원-결합 항체 단편은 공지된 공정, 예를 들면, 화학적 합성 또는 재조합 발현을 사용하여 당해분야의 숙련가에 의해 제조될 수 있다. 암 표적 분자용 결합제는 상업적으로 얻을 수 있거나 공지된 공정, 예를 들면, 화학적 합성 또는 재조합 발현을 사용하여 당해분야의 숙련가에 의해 제조될 수 있다. 항체 또는 항원-결합 항체 단편를 제조하는 추가 공정은 WO2007070538 (참고 페이지 22 "Antibodies"에서 기재되어 있다. 숙련가는, 공정 예컨대 파아지 디스클레이 라이브러리 (예를 들면 Morphosys HuCAL Gold)이 항체 또는 항원-결합 항체 단편을 발견하기 위해 어떻게 편집되고 사용될 수 있는지를 알고 있다 (참고 WO2007070538, 페이지 24 ff 및 페이지 70의 실시예 1, 페이지 72의 실시예 2). B-세포로부터 DNA 라이브러리를 사용하는 항체를 제조하기 위한 추가 공정은 예를 들면 페이지 26에 기재되어 있다 (WO2007070538). 항체를 인간화하는 공정은 WO2007070538의 페이지 30-32에 및 Queen, 등, Pros. Natl. Acad. Sci. USA 86:10029-10033, 1989 또는 WO90/0786에서 상세히 기재되어 있다. 더욱이, 일반적으로 단백질 그리고 특히 항체의 재조합 발현 공정은 숙련가에게 공지되어 있다 (참고, 예를 들면, Berger 및 Kimrnel (Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymology, Vo1. 152, Academic Press, Inc.); Sambrook, 등, (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (제2판, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Cold Spring Harbor, N.Y.; 1989) Vol. 1-3); Current Protocols in Molecular Biolony, (F.M. Ausabel 등 [Eds.], Current Protocols, Green Publishing Associates, Inc./John Wiley & Sons, Inc.); Harlow 등, (MonocIonal Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (19881, Paul [Ed.]); Fundamental Immunology, (Lippincott Williams & Wilkins (1998)); 및 Harlow, 등, (Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1998)). 숙련가는 단백질/항체의 발현에 필요한 상응하는 벡터, 프로모터 및 신호 펩타이드를 알고 있다. 아주 흔한 공정은 WO2007070538 (페이지 41-45)에서 또한 기재되어 있다. IgG1 항체를 제조하는 공정은 예를 들면 하기에서 기재되어 있다: WO2007070538 (페이지 74 ff의 실시예 6). 항원에 결합한 후 항체의 내면화의 결정을 허용하는 공정은 숙련가에게 공지되어 있고 예를 들면 하기에 기재되어 있다: WO2007070538 (페이지 80). 숙련가는 상이한 표적 분자 특이성을 갖는 항체를 제조와 유사하게 카보안하이드라제 IX (Mn) 항체를 제조하기 위해 사용되었던 WO2007070538에서 기재된 공정을 사용할 수 있다.
FGFR2 결합제의 추가 예는 WO2007144893에서 기재된 단일 사슬 Fv 항체 단편 프로-007 (고친화도를 갖는 FGFR2에 결합함) 및 프로-001 (고친화도를 갖는 FGFR3 및 저친화도를 갖는 FGFR2에 결합함)이다.
본 발명의 화합물은 귀중한 약리적 특성을 가지며 인간 및 동물의 질환의 예방 및 치료에 사용될 수 있다.
식 (Ia)의, 본 발명의 결합제-약물 콘주게이트 (ADC)는, 본 실험 섹션 (섹션 C)에서 제시된 검정을을 기준으로 보여질 수 있는 바와 같이, 종양 세포에 대해 높은 및 특이적 세포독성 활성을 나타낸다. 식 (Ia)의, 본 발명의 결합제-약물 콘주게이트 (ADC)의 부분에 대한 이러한 높은 및 특이적 세포독성 활성은 신규 N,N-디알킬아우리스타틴 유도체 및 결합제와 링커와의 적절한 조합을 통해 달성되고, 이 조합은 독성기의 방출을 위해 효소적으로, 가수분해적으로 또는 환원적으로 절단가능 예정된 중단점을 나타낼 뿐만 아니라 그와 같은 예정된 중단점을 나타내지 않는다. 더 상세하게는, 독성기의 방출을 위해 효소적으로, 가수분해적으로 또는 환원적으로 절단가능 예정된 중단점을 갖지 않고, ADC의 종양 세포로의 흡수 다음에 및 항체의 완전한 세포내, 효소 파손 다음에, 전체적으로 또는 부분적으로 온전한 채로 여전이 남아 있는 안전한 링커의 사용을 통해, 활성은 종양 세포에 대해 아주 특이적으로 국한된다. ADC 및 안정한 링커 사이의 양립가능성은, 다른 것들 중에서, 세포내로 형성된 대사물이 충분한 효능과 함께 형성될 수 있고, 그의 표적에 도달할 수 있으며 수송체 단백질에 의해 미리 다시 종양 세포에서 운반되지 않으면서 충분한 효능과 함께 표적에 대한 그의 항-증식성 활성을 발달시킬 수 있다는 것을 예상한다. ADC와 안정된 링커 화학과의 및 문제의 표적와의 그와 같은 양립가능성은 확대된 치료 가능시기를 제공한다 (참고, 예를 들면, L. Ducry, Bionconjugate Chem. 2010, 21-5; A.G. Polson, Cancer Res. 2009, 69, 2358).
더 상세하게는, 식 (Ia)의, 본 발명의 결합제-약물 콘주게이트, FGFR2를 발현시키는 종양 세포에 대해 높은 및 특이적 세포독성 활성을 나타낸다. FGFR2를 발현시키지 않는 종양 세포에 대한 활성은 유의미하게 동시에 더 약화된다.
특성의 이러한 프로파일을 기반으로, 따라서 본 발명의 화합물은, 일반적으로 인간 및 포유동물의 과증식 질환의 치료를 위해 특정한 정도에 대해 적당하다. 본 화합물은, 한편으로 세포 증식 및 세포 분열을 억제, 차단, 감소 및 저하시킬 수 있고, 다른 한편으로 세포자멸사를 증가시킬 수 있다.
본 발명의 화합물이 이용될 수 있는 치료를 위한 과증식 질환은 특히 암 및 종양 질환의 그룹을 포함한다. 본 발명의 문맥에서, 이들은, 특히, 하기 질환을 비제한적으로 의미하는 것으로 이해된다: 유선 암종 및 유선 종양 (도관 및 소엽 형태, 또한 원위치에, 삼중-음성, HER2-음성), 기도의 종양 (소세포 및 비-소세포 암종, 기관지 암종), 뇌 종양 (예를 들면 뇌간 및 시상하부의 뇌종양, 별아교세포종, 수모세포종, 뇌실막세포종 및 신경-외배엽 및 송과체 종양), 소화 기관의 종양 (식도, 식도위 접합 (=EGJ), 위 (미만 및 장 형태), 담낭, 소장, 큰창자, 직장의 암종), 간 종양 (간세포 암종, 담관세포 암종 및 혼합된 간세포 및 담관세포 암종 포함), 두경부 영역 (후두, 하인두, 비인두, 구인두, 입술 및 구강)의 종양, 피부 종양 (편평상피 상피 암종, 카포시 육종, 악성 흑색종, 메르켈 세포 피부암 및 비-흑색종 피부암), 연조직의 종양 (연조직 육종, 골육종, 악성 섬유질 조직구종, 림프육종 및 횡문근육종 포함), 눈의 종양 (안구내 흑색종 및 망막모세포종 포함), 내분비 및 외분비샘 (예를 들면 갑상선 및 부갑상선, 췌장 및 타액샘)의 종양, 요로의 종양 (방광, 음경, 신장, 신장 골반 및 수뇨관의 종양) 및 생식 기관의 종양 (여성의 자궁내막, 자궁경부, 난소, 질, 외음부 및 자궁의 암정 및 남성의 전립선 및 고환의 암종). 이들은 또한 증식성 혈액 질환을 고체 형태로 및 순환 혈구, 예컨대 림프종, 백혈병 및 골수증식성 질환, 예를 들면 급성 골수, 급성 림프모구, 만성 림프구성, 만성 골수성 및 모발 세포 백혈병, 및 또한 중추신경계의 AIDS-상관된 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 피부 T-세포 림프종, 버킷 림프종 및 림프종으로서 포함한다.
항- FGFR2 결합제-약물 콘주게이트에 대한 바람직한 과증식 질환
본 발명의 화합물이 바람직하게 이용될 수 있는 치료에 대한 과증식 질환은 하기이다: FGFR2-발현 종양, 예를 들면, 위 암종 (장 및 미만 유형), 인환 암종, 특히 미만형 인환 암종, 식도암, 식도위 접합 (EGJ)의 암, 유방암, 큰창자의 암, 결직장 암종, 직장 암종, 전립선암, 신장암, 두경부 영역의 암종, 췌장암, 간암, 자궁경부 암종, 난소 암종, 자궁내막암종, 더 상세하게는 자궁내막모양 형태, 유두상 장액 형태, 또는 투명 세포 하위유형의 자궁내막암종, 폐암, 더 상세하게는 비-소세포 폐 암종 (NSCLC), 선암종, 편평상피 암종 및 췌장 암종.
인간의 이들 잘 기재된 질환은 다른 포유동물에서 비교할만한 병인학과 함께 또한 일어날 수 있고 본 발명의 화합물로 거기에서 치료될 수 있다.
본 발명의 문맥에서, 용어 "치료 " 또는 "치료하는"은 종래에 사용되고 질환 또는 건강 결함에 싸우고, 줄이고, 약화시키거나 완화시키고 암 질환의 경우와 같은 이러한 질환에 의해 부정적으로 침범된 생활 상태를개선하는 목적과 함께 환자의 케어, 관리 및 지지를 의미한다.
따라서 본 발명은 추가로, 특히 상기언급된 질환의 치료 및/또는 예방을 위한, 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
본 발명은 더욱이, 특히 상기언급된 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조를 위한, 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
본 발명은 더욱이, 특히 상기언급된 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 방법에서의, 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
본 발명은 더욱이, 효과적인 양의 본 발명의 적어도 하나의 화합물을 사용하여 특히 상기언급된 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 방법을 제공한다..
본 발명에 따른 화합물은 자체로, 또는 필요하다면, 1 이상 다른 약리적으로 활성 물질과 함께 이용될 수 있고, 단, 이러한 조합이 바람직하지 않은 및 허용가능하지 않은 부작용을 일으키지 않아야 한다. 따라서 본 발명은 더욱이, 특히 상기언급된 질환의 치료 및/또는 예방을 위해 본 발명의 적어도 하나의 화합물 및 하나 이상의 추가 약물을 포함하는 약제를 제공한다.
예를 들면, 본 발명의 화합물은 암 질환을 치료하기 위해 공지된 항과증식, 세포정지성 또는 세포독성 물질과 함께 조합될 수 있다. 예로써 언급될 수 있는 조합한 적당한 약물은 하기와 같다:
알데스류킨, 알렌드론산, 알파페론, 알리트레티노인, 알로퓨리놀, 알로프림, 알록시, 알트레타민, 아미노-글루테티마이드, 아미포스틴, 암루비신, 암사크린, 아나스트로졸, 안즈메트, 아라네스프, 아르글라빈, 삼산화 비소, 아로마신, 5-아자시티딘, 아자티오프린, BCG 또는 tice-BCG, 베스타틴, 베타메타손 아세테이트, 베타메타손 나트륨 포스페이트, 벡사로텐, 블레오마이신 설페이트, 브록수리딘, 보르테조밉, 부설판, 칼시토닌, 캄파쓰, 카페시타빈, 카보플라틴, 카소덱스, 세페손, 셀모류킨, 세루비딘, 클로르암부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 클로드론산, 사이클로포스파마이드, 사이타라빈, 다카르바진, 닥티노마이신, 다우녹솜, 데카드론, 데카드론 포스페이트, 델레스트로겐, 데닐류킨 디프티톡스, 데포메드롤, 데슬로렐린, 덱스라족산, 디에틸스틸베스트롤, 디플루칸, 도세탁셀, 독시플루리딘, 독소루비신, 드로나비놀, DW-166HC, 엘리가드, 엘리텍, 엘렌세, 에멘드, 에피루비신, 에포에틴-알파, 에포젠, 엡타플라틴, 에르가미솔, 에스트라세, 에스트라디올, 에스트라무스틴 나트륨 포스페이트, 에티닐에스트라디올, 에티올, 에티드론산, 에토포포스, 에토포사이드, 파드로졸, 파르스톤, 필그라스팀, 피나스테라이드, 필그라스팀, 플록수리딘, 플루코나졸, 플루다라빈, 5-플루오로데옥시우리딘 일인산, 5-플루오로우라실 (5-FU), 플루옥시메스테론, 플루타마이드, 포르메스탄, 포스테아빈, 포테무스틴, 풀베스트란트, 감마가드, 젬시타빈, 젬투주맙, 글리벡, 글라이아델, 고세렐린, 그라니세트론 하이드로클로라이드, 히스트렐린, 하이캄틴, 하이드로코르톤, 에리트로-하이드록시노닐아데닌, 하이드록시우레아, 이브리투모맙 티욱세탄, 아이다루비신, 이포스파마이드, 인터페론-알파, 인터페론-알파-2, 인터페론-알파-2α, 인터페론-알파-2β, 인터페론-알파-n1, 인터페론-알파-n3, 인터페론-베타, 인터페론-감마-1α, 인터루킨-2, 인트론 A, 이레싸, 이리노테칸, 카이트릴, 렌티난 설페이트, 레트로졸, 류코보린, 류프롤라이드, 류프롤라이드 아세테이트, 레바미솔, 레보폴산 칼슘 염, 레보트로이드, 레복실, 로무스틴, 로니다민, 마리놀, 메클로레타민, 메코발라민, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란, 메네스트, 6-머캅토퓨린, 메스나, 메토트렉세이트, 메트빅스, 밀테포신, 미노사이클린, 미토마이신 C, 미토탄, 미톡산트론, 모드레날, 마이오세트, 네다플라틴, 뉴라스타, 뉴메가, 뉴포겐, 닐루타마이드, 놀바덱스, NSC-631570, 옥트-43, 옥트레오타이드, 온단세트론 하이드로클로라이드, 오라프레드, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 페디아프레드, 페가스파르가스, 페가시스, 펜토스타틴, 피시바닐, 필로카르핀 하이드로클로라이드, 피라루비신, 필리카마이신, 리보프린 나트륨, 프레드니무스틴, 프레드니솔론, 프레드니손, 프레마린, 프로카바진, 프로크리트, 랄티트렉세드, 레비프, 레늄-186 에티드로네이트, 리툭시맙, 로페론-A, 로무르타이드, 살라겐, 샌도스타틴, 사르그라모스팀, 세무스틴, 시조피란, 소부족산, 솔루-멘드롤, 스트렙토조신, 스트론튬-89 클로라이드, 신트로이드, 타목시펜, 탐설로신, 타소네르민, 타스토락톤, 탁소테르, 테셀류킨, 테모졸로마이드, 테니포사이드, 테스토스테론 프로피오네이트, 테스트레드, 티오구아닌, 티오테파, 타이로트로핀, 틸루드론산, 토포테칸, 토레미펜, 토시투모맙, 타스투주맙, 테오설판, 트레티노인, 트렉살, 트리메틸멜라민, 트리메트렉세이트, 트리프토렐린 아세테이트, 트리프토렐린 파모네이트, UFT, 우리딘, 발루비신, 베스나리논, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈, 빌루리진, 지네카드, 지노스타틴-스티말라머, 조프란; A바이-007, 아콜비펜, 악티뮨, 아피니탁, 아미노프테린, 아르족시펜, 아소프리스닐, 아타메스탄, 아트라센탄, 아바스틴, BAY 43-9006 (소라페닙), CCI-779, CDC-501, 셀레브렉스, 세툭시맙, 크리스나톨, 사이프로테론 아세테이트, 데시타빈, DN-101, 독소루비신-MTC, dSLIM, 두타스테라이드, 에도테카린, 에플로르니틴, 엑사테칸, 펜레티나이드, 히스타민 디하이드로클로라이드, 히스트렐린 하이드로겔 임플란트, 홀뮴-166 DOTMP, 이반드론산, 인터페론-감마, 인트론-PEG, 익사베필론, 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌, L-651582, 란레오타이드, 라소폭시펜, 리브라, 로나파르닙, 미프록시펜, 미노드로네이트, MS-209, 리포좀 MTP-PE, MX-6, 나파렐린, 네모루비신, 네오바스타트, 놀라트렉세드, 오블리메르센, onko-TCS, 오시뎀, 파클리탁셀 폴리글루타메이트, 팔미드로네이트 디나트륨, PN-401, QS-21, 쿠아제팜, R-1549, 랄록시펜, 란피르나스, 13-시스 -레트산, 사트라플라틴, 세오칼시톨, T-138067, 타르세바, 탁소프렉신, 티모신-알파-1, 티아조퓨린, 티피파르닙, 티라파자민, TLK-286, 토레미펜, 트랜스MID-107R, 발스포다르, 바프레오타이드, 바탈라닙, 베르테포르핀, 빈플루닌, Z-100, 졸레드론산 및 조합 of 이들.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 화합물은 하기와 같이 비확정적으로 예로 들 수 있는 항과증식제와 조합될 수 있다:
아미노글루테티마이드, L-아스파라기나제, 아자티오프린, 5-아자시티딘, 블레오마이신, 부설판, 카보플라틴, 카르무스틴, 클로르암부실, 시스플라틴, 콜라스파제, 사이클로포스파마이드, 사이타라빈, 다카르바진, 닥티노마이신, 다우노루비신, 디에틸스틸베스트롤, 2',2'-디플루오로데옥시시티딘, 도세탁셀, 독소루비신 (아드리아마이신), 에피루비신, 에포틸론 및 그의 유도체, 에리트로-하이드록시노닐아데닌, 에티닐-에스트라디올, 에토포사이드, 플루다라빈 포스페이트, 5-플루오로데옥시우리딘, 5-플루오로데옥시우리딘 일인산, 5-플루오로우라실, 플루옥시메스테론, 플루타마이드, 헥사메틸멜라민, 하이드록시우레아, 하이드록시프로게스테론 카프로에이트, 아이다루비신, 이포스파마이드, 인터페론, 이리노테칸, 류코보린, 로무스틴, 메클로레타민, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란, 6-머캅토퓨린, 메스나, 메토트렉세이트, 미토마이신 C, 미토탄, 미톡산트론, 파클리탁셀, 펜토스타틴, N-포스포노아세틸 L-아스파르테이트 (PALA), 필리카마이신, 프레드니솔론, 프레드니손, 프로카바진, 랄록시펜, 세무스틴, 스트렙토조신, 타목시펜, 테니포사이드, 테스토스테론 프로피오네이트, 티오구아닌, 티오테파, 토포테칸, 트리메틸멜라민, 우리딘, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신 및 비노렐빈.
본 발명의 화합물은 또한 생물학적 치료제 예컨대 항체 (예를 들면 아바스틴, 리툭산, 어비툭스, 헤르셉틴)과 함께 매우 유망한 방식으로 조합될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 신생혈관형성을 겨냥한 치료, 예컨대, 아바스틴, 악시티닙, 레센틴, 레고라페닙, 소라페닙 또는 선니티닙과 조합하여 긍정적인 효과를 달성할 수 있다. 프로테아솜 억제제 및 mTOR 억제제 및 또한 항호르몬제 및 스테로이드 대사 효소 억제제와의 조합도 마찬가지로 그의 호의적인 부작용 프로파일 때문에 특히 적당하다.
일반적으로, 하기 목적은 본 발명의 화합물의 세포정지성 또는 세포독성 작용을 갖는 다른 제제와의 조합으로 추구될 수 있다:
ㆍ종양의 성장을 늦추거나, 그것의 크기를 감소시키거나 또는 심지어 개별적인 약물로의 치료와 비교할 때 그것의 완전한 제거에 있어서의 증대된 활성;
ㆍ단일요법보다 더 낮은 복용량으로 사용된 화학치료제의 이용 가능성;
ㆍ개별적인 투여와 비교하여 더 적은 부작용을 갖는 더 내성이 있는 치료의 가능성;
ㆍ종양 질환의 더 광범위한 스펙트럼의 치료 가능성;
ㆍ치료에 대한 더 높은 반응 속도의 달성;
ㆍ오늘날의 표준 치료와 비교하여 환자의 더 긴 생존 기간.
더욱이, 본 발명에 따르는 화합물은 또한 방사선요법 및/또는 외과적 요법 (surgical intervention)과 조합하여 이용될 수 있다.
더욱이 본 발명은 1 이상의 불활성, 비-독성, 약제학적으로 적당한 부형제와 관례적으로 함께 적어도 1의 본 발명의 화합물을 포함하는 약제, 및 상기 언급된 목적을 위한 그의 용도를 제공한다.
본 발명의 화합물은 전신으로 및/또는 국소로 작용할 수 있다. 그들은 이러한 목적을 위해 적당한 방식으로, 예컨대 예를 들면 비경구로, 가능하게는 흡입에 의해, 또는 임플란트 또는 스텐트로서 투여될 수 있다.
본 발명의 화합물은 이들 투여 경로에 적당한 투여 형태로 투여될 수 있다.
비경구 투여는 흡수 단계를 우회하여 (예를 들면 정맥내로, 동맥내로, 심장내로, 척수내로 또는 요추내로) 또는 흡수를 포함하여 (예를 들면 근육내로, 피하로, 피부내로, 피부를 통하게 또는 복강내로) 수행될 수 있다. 비경구 투여에 적당한 투여 형태는 용액, 서스펜션, 에멀젼 또는 리오필리제이트 형태의 주사 및 주입 제형을 포함한다. 비경구 투여가 바람직하며, 특히 정맥내 투여가 바람직하다.
일반적으로, 비경구 투여의 경우에 효과적인 결과를 달성하기 위해 약 0.001 내지 1 mg/kg, 바람직하게는 약 0.01 내지 0.5 mg/kg 체중의 양을 투여하는 것이 유리한 것으로 입증되었다.
그럼에도 불구하고, 언급된 양에서 벗어나는 것이 필요할 수 있으며, 특히 체중, 투여 경로, 활성 화합물에 대한 개별적인 거동, 제형의 특성 및 투여되는 시점 또는 간격에 따라 달라지는 것이 필요할 수 있다. 따라서 일부 경우에서 상기 언급된 최소 양 미만으로 취급하기에 충분할 수 있으며, 반면에 다른 사례에서는 언급된 상한이 초과되어야 한다. 비교적 다량이 투여되는 경우에, 이들 양을 하루에 걸쳐 몇 개의 개별적인 용량으로 분배하는 것이 권할 만할 수 있다.
하기 실시예는 본 발명을 예증한다. 본 발명은 실시예에 제한되지 않는다.
하기 시험 및 실시예에서 백분율 수치는 달리 언급되지 않으면 중량 기준 백분율이며; 부는 중량부이다. 각 경우에 액체/액체 용액의 용매 비, 희석 비 및 농도 데이타는 용적과 관련된다.
A. 실시예
약어 및 머리글자:
Figure pct00293
Figure pct00294
Figure pct00295
Figure pct00296
Figure pct00297
HPLC 및 LC - MS 방법:
방법 1 ( LC - MS ):
기기: Water Acquity SQD UPLC 시스템; 칼럼: Water Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50 mm × 1 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.25 ml 99% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.25 ml 99% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 90% A → 1.2 분 5% A → 2.0 분 5% A; 유속: 0.40 ml/분; 오븐: 50 ℃; UV 검출: 210-400 nm.
방법 2 ( LC - MS ):
기기: Micromass QuattroPremier Waters UPLC Acquity; 칼럼: Thermo Hypersil GOLD 1.9μ 50 mm × 1 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.5 ml 50% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.5 ml 50% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 90% A → 0.1 분 90% A → 1.5 분 10% A → 2.2 분 10% A; 유속: 0.33 ml/분; 오븐: 50 ℃; UV 검출: 210 nm.
방법 3 ( LC - MS ):
기기: Micromass Quattro Micro MS HPLC Agilent 시리즈 1100; 칼럼: Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm × 4 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.5 ml 50% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.5 ml 50% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 100% A → 3.0 분 10% A → 4.0 분 10% A → 4.01 분 100% (유속 2.5 ml/분) → 5.00 분 100% A; 오븐: 50 ℃; 유속: 2 ml/분; UV 검출: 210 nm.
방법 4 ( LC - MS ):
MS 기기: Micromass ZQ; HPLC 기기: HP 1100 시리즈; UV DAD; 칼럼: Phenomenex Gemini 3μ 30 mm × 3.00 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.5 ml 50% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.5 ml 50% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 90% A → 2.5 분 30% A → 3.0 분 5% A → 4.5 분 5% A; 유속: 0.0 분 1 ml/분 → 2.5 분/3.0 분/4.5 분 2 ml/분; 오븐: 50 ℃; UV 검출: 210 nm.
방법 5 ( HPLC ):
기기: HP 1090 시리즈 II; 칼럼: Merck Chromolith SpeedROD RP-18e, 50 mm × 4.6 mm; 예비 칼럼: Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP-18e, 5 mm × 4.6 mm; 주사 용적: 5 μl; 용출물 A: 물 중 70% HClO4 (4 ml/리터), 용출물 B: 아세토니트릴; 구배: 0.00 분 20% B → 0.50 분 20% B → 3.00 분 90% B → 3.50 분 90% B → 3.51 분 20% B → 4.00 분 20% B; 유속: 5 ml/분; 칼럼 온도: 40 ℃.
방법 6 ( HPLC ):
기기: 물 2695 DAD 996; 칼럼: Merck Chromolith SpeedROD RP-18e, 50 mm × 4.6 mm; Ord. 번호: 1.51450.0001, 예비 칼럼: Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP-18e, 5 mm × 4.6 mm; Ord. 번호: 1.51470.0001, 용출물 A: 물 중 70% HClO4 (4 ml/리터), 용출물 B: 아세토니트릴; 구배: 0.00 분 5% B → 0.50 분 5% B → 3.00 분 95% B → 4.00 분 95% B; 유속: 5 ml/분.
방법 7 ( LC - MS ):
MS 기기: 물 ZQ; HPLC 기기: Agilent 1100 시리즈; UV DAD; 칼럼: Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm × 4 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.5 ml 50% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.5 ml 50% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 100% A → 3.0 분 10% A → 4.0 분 10% A → 4.1 분 100% (유속 2.5 ml/분); 오븐: 55 ℃; 유속: 2 ml/분; UV 검출: 210 nm.
방법 8 ( LC - MS ):
MS 기기: 물 ZQ; HPLC 기기: Agilent 1100 시리즈; UV DAD; 칼럼: Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm × 4 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.5 ml 50% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.5 ml 50% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 100% A → 2.0 분 60% A → 2.3 분 40% A → 3.0 분 20% A → 4.0 분 10% A → 4.2 분 100% (유속 2.5 ml/분); 오븐: 55 ℃; 유속: 2 ml/분; UV 검출: 210 nm.
방법 9 ( LC - MS ):
기기: Water Acquity SQD UPLC 시스템; 칼럼: Water Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50 mm × 1 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.25 ml 99% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.25 ml 99% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 95% A → 6.0 분 5% A → 7.5 분 5% A; 오븐: 50 ℃; 유속: 0.35 ml/분; UV 검출: 210-400 nm.
방법 10 ( HPLC ):
기기: Agilent 1200 시리즈; 칼럼: Agilent Eclipse XDB-C18 5μ 4.6 mm × 150 mm; 예비 칼럼: Phenomenex KrudKatcher Disposable Pre-Column; 주사 용적: 5 μl; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.01% 트리플루오로아세트산; 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.01% 트리플루오로아세트산; 구배: 0.00 분 10% B → 1.00 분 10% B → 1.50 분 90% B → 5.5 분 10% B; 유속: 2 ml/분; 칼럼 온도: 30 ℃.
제조가 하기에 명백히 기재되어 있지 않은 모든 반응물 또는 시약에 대해, 일반적으로 이용가능한 공급원으로부터 상업적으로 수득되었다. 제조가 이하에 마찬가지로 기재되어 있지 않고 상업적으로 이용가능하지 않거나 일반적으로 이용가능하지 않은 공급원으로부터 수득된 모든 다른 반응물 또는 반응물에 대해, 그것의 제조가 기재된 공개된 문헌을 참조한다.
방법 11 ( LC - MS ):
기기: Waters ACQUITY SQD UPLC 시스템; 칼럼: Water Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 30 × 2 mm; 용출물 A: 1 ℓ 물 + 0.25 ml 99% 강도 포름산, 용출물 B: 1 ℓ 아세토니트릴 + 0.25 ml 99% 강도 포름산; 구배: 0.0 분 90% A → 1.2 분 5% A → 2.0 분 5% A 오븐: 50 ℃; 유속: 0.60 ml/분; UV 검출: 208 - 400 nm.
방법 12 ( HPLC ):
기기: 칼럼 오븐 및 DAD이 있는 Agilent 1200 시리즈; 칼럼: Merck Chromolith SpeedROD RP-18e, 50 mm × 4.6 mm; Ord. 번호: 1.51450.0001; 예비 칼럼: Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP-18e, 5 mm × 4.6 mm; Ord. 번호: 1.51470.0001; 용출물 A: 물 중 70% HClO4 (4 ml/리터), 용출물 B: 아세토니트릴; 구배: 0.00 분 5% B → 0.50 분 5% B → 3.00 분 95% B → 4.00 분 95% B; 유속: 5 ml/분; 칼럼 온도: 30 ℃.
개시 화합물 및 중간체:
개시 화합물 1
(2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (Boc-돌라프로인)
Figure pct00298
표제 화합물은 문헌 방법에 따라 다양한 방식으로 제조될 수 있다; 참고, 예를 들면, Pettit 등, Synthesis 1996, 719; Shioiri 등, Tetrahedron Lett . 1991, 32, 931; Shioiri 등, Tetrahedron 1993, 49, 1913; Koga 등, Tetrahedron Lett . 1991, 32, 2395; Vidal 등, Tetrahedron 2004, 60, 9715; Poncet 등, Tetrahedron 1994, 50, 5345. 유리 산으로서 또는 디사이클로헥실아민을 갖는 1:1 염으로서 제조되었다.
개시 화합물 2a
tert -부틸 (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-(메틸아미노)헵타노에이트 하이드로클로라이드 (돌라이소류신-OtBu x HCl)
Figure pct00299
표제 화합물은 문헌 방법에 따라 다양한 방식으로 제조될 수 있다; 참고, 예를 들면, Pettit 등, J. Org . Chem . 1994, 59, 1796; Koga 등, Tetrahedron Lett . 1991, 32, 2395; Shioiri 등, Tetrahedron Lett . 1991, 32, 931; Shioiri 등, Tetrahedron 1993, 49, 1913.
개시 화합물 2b
tert -부틸 (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-(메틸아미노)헵타노에이트
(돌라이소류신-OtBu)
Figure pct00300
화합물을 개시 화합물 2a와 유사하게 제조했고, 단, 상기 수소화를 1N 염산의 부가 없이 수행했다.
개시 화합물 3
Nα-(tert-부톡시카보닐)-N-하이드록시-L-페닐알라닌아마이드
Figure pct00301
표제 화합물은 문헌 방법에 의해 제조된다 (A. Ritter 등, J. Org . Chem . 1994, 59, 4602).
수율: 750 mg (이론의 이론의 75%)
LC-MS (방법 3): Rt = 1.67 분; MS (ESIpos): m/z = 281 (M+H)+.
개시 화합물 4
1,2-옥사졸리딘 하이드로클로라이드
Figure pct00302
표제 화합물은 문헌 방법에 의해 제조될 수 있다 (참고, 예를 들면, H. King, J. Chem . Soc . 1942, 432); 또한 상업적으로 이용가능하다.
개시 화합물 5
1,2-옥사지난 하이드로클로라이드
Figure pct00303
표제 화합물은 문헌 방법에 의해 제조될 수 있다 (참고, 예를 들면, H. King, J. Chem . Soc . 1942, 432).
개시 화합물 6
2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔
Figure pct00304
표제 화합물은 문헌 방법에 의해 Boc-보호된 형태로 제조될 수 있다 (참고, 예를 들면, C. Johnson 등, Tetrahedron Lett . 1998, 39, 2059); 탈보호는 트리플루오로아세트산 및 차후의 중화에 의한 처리에 의해 관례적 방식으로 영향을 받았다.
수율: 149 mg (이론의 89%)
개시 화합물 7
tert -부틸 (1S,2R)-1-(하이드록시카바모일)-2-페닐사이클로프로필 카바메이트
Figure pct00305
표제 화합물을, 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산 (C. Cativiela 등, Chirality 1999, 11, 583)로부터 진행하여 문헌 방법 (A. Ritter 등, J. Org . Chem . 1994, 59, 4602)으로 제조했다.
수율: 339 mg (이론의 59%)
LC-MS (방법 1): Rt = 0.82 분; MS (ESIpos): m/z = 293 (M+H)+.
중간체 1
tert -부틸 (3R,4S,5S)-4-[{N-[(벤질옥시)카보닐]-L-발릴}(메틸)아미노]-3-메톡시-5-메틸헵타노에이트
Figure pct00306
10.65 g (41.058 mmol)의 tert -부틸 (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-(메틸아미노)헵타노에이트 (개시 화합물 2b)을 250 mL의 디클로로메탄에서 취하고 용액을 -10 ℃로 냉각했다. 그 다음, 한편 교반, 10.317 g (41.058 mmol)의 N-[(벤질옥시)카보닐]-L-발린, 16.866 g (61.586 mmol)의 2-브로모-1-에틸피리디늄 테트라플루오로보레이트 (BEP) 및 28.6 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가하고, 혼합물을 차후에 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 포화된 염화나트륨 용액과 함께 2회 흔들고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 용출물로서 4:1 석유 에테르/에틸 아세테이트를 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획을 농축하고 잔여물을 고진공 하에서 밤새 건조했다. 10.22 g (이론의 51%)의 표제 화합물을 황색을 띤 오일로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.3 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.59 분; MS (ESIpos): m/z = 493 (M+H)+.
중간체 2
tert -부틸 (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-[메틸(L-발릴)아미노]헵타노에이트
Figure pct00307
500 mg (1 mmol)의 tert -부틸 (3R,4S,5S)-4-[{N-[(벤질옥시)카보닐]-L-발릴}(메틸)아미노]-3-메톡시-5-메틸헵타노에이트 (중간체 1)을 50 mL의 메탄올에서 용해시키고, 100 mg의 10% 활성탄 상 팔라듐의 부가 후, 표준 수소 압력 하에서 실온에서 1시간 동안 수소부가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 제거했다. 이로써 370 mg (정량적)의 표제 화합물을 사실상 무색 오일로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.59 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.74 분; MS (ESIpos): m/z = 359 (M+H)+.
중간체 3
N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-tert-부톡시-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00308
4.64 g (13.13 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발린을 20 mL의 DMF에서 용해시키고 4.28 g (11.94 mmol)의 tert -부틸 (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-[메틸(L-발릴)아미노]헵타노에이트 (중간체 2), 2.75 g (14.33 mmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 2.2 g (14.33 mmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트과 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 염화암모늄 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 탄산수소나트륨 용액 및 포화된 염화나트륨 용액으로 연속적으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
수율: 9.1 g (quant., 60% 순도)
HPLC (방법 5): Rt = 2.7 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.99 분; MS (ESIpos): m/z = 694 (M+H)+.
중간체 4
N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00309
9.1 g의 조 생성물 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-tert-부톡시-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 3)을 56.6 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 56.6 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 디클로로메탄, 3:1 디클로로메탄/에틸 아세테이트 및 15:5:0.5 디클로로메탄/에틸 아세테이트/메탄올을 용출물로서 사용하는 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획의 정제 및 농축 후, 5.8 g (이론의 86%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.3 분; MS (ESIpos): m/z = 638 (M+H)+.
중간체 5
tert -부틸 (2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일 카바메이트
Figure pct00310
500 mg (1.9 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라닌을 10 mL의 DMF에서 용해시키고 466 mg (3.8 mmol)의 1,2-옥사지난 하이드로클로라이드 (개시 화합물 5), 433 mg (2.3 mmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 382 mg (2.8 mmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트 및 731 mg (5.7 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 염화암모늄 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 탄산수소나트륨 용액 및 포화된 염화나트륨 용액으로 연속적으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 620 mg (이론의 이론의 98%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.62 분; MS (ESIpos): m/z = 235 (M-C4H8-CO2+H)+.
중간체 6
(2S)-2-아미노-1-(1,2-옥사지난-2-일)-3-페닐프로판-1-온 트리플루오로아세테이트
Figure pct00311
620 mg (1.85 mmol)의 tert -부틸 (2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일 카바메이트 (중간체 5)을 5 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 10 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 물/아세토니트릴로부터 동결건조했다. 이런 식으로, 779 mg (이론의 91%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 0.45 분;
LC-MS (방법 3): Rt = 1.09 분; MS (ESIpos): m/z = 235 (M+H)+.
중간체 7
(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00312
360 mg (1.25 mmol)의 (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (개시 화합물 1)을 10 mL의 DMF에서 취하고 579.2 mg (1.25 mmol)의 (2S)-2-아미노-1-(1,2-옥사지난-2-일)-3-페닐프로판-1-온 트리플루오로아세테이트 (중간체 6), 714.5 mg (1.88 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 655 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 농축하고, 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 먼저 5% 수성 시트르산 용액, 그 다음 5% 수성 탄산수소나트륨 용액 및 차후에 포화된 염화나트륨 용액과 함께 흔들어서 추출했다. 유기 상을 농축하고 잔여물을 16:4 디클로로메탄/메탄올을 용출물로서 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 503.5 mg (이론의 74%)의 Boc-보호된 중간체 tert -부틸 (2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-카복실레이트를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.12 분; MS (ESIpos): m/z = 504 (M+H)+.
503 mg (1 mmol)의 이러한 중간체를 20 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 10 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 디클로로메탄과 함께 재증류시켰다. 잔류 잔여물을 에틸 아세테이트로부터 n-펜탄으로 침전시키고, 용매를 데칸트로 제거했다. 이렇게 수득한 잔여물을 물에서 용해시키고 에틸 아세테이트와 함께 흔들어서 추출하고, 수성 상을 차후에 동결건조시켰다. 이런 식으로, 462 mg (이론의 89%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.53 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.57 분; MS (ESIpos): m/z = 404 (M+H)+.
중간체 8
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00313
51 mg (0.08 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 10 mL의 DMF에서 용해시키고, 0.5 mL의 피페리딘을 부가했다. 실온에서 10 분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 디에틸 에테르와 함께 교반했다. 불용성 성분을 여과 제거하고 반복적으로 디에틸 에테르로 세정했다. 그 다음 필터 잔여물을 5 mL의 디옥산/물에서 취하고 용액을 1 N 나트륨 하이드록사이드 용액으로 pH 11로 조정했다. 초음파 처리 하에서, 총 349 mg (1.6 mmol)의 디-tert -부틸 디카보네이트를 몇 개의 부분으로 부가하고, 이 과정에서 용액의 pH는 11에서 유지되었다. 반응이 완료된 후, 디옥산을 증류 제거하고 수용액을 시트르산으로 pH 2-3으로 조정했다. 혼합물을 매번 50 ml의 에틸 아세테이트로 2회 추출했다. 유기 상을 조합하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 디에틸 에테르에서 취하고 표제 화합물을 펜탄으로 침전시켰다. 용매를 기울여 따르기로 제거했다. 잔여물을 펜탄으로 몇 번 더 소화시키고 마지막으로 고진공 하에서 건조했다. 40 mg (이론의 97%)의 표제 화합물을 이렇게 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.32 분; MS (ESIpos): m/z = 516 (M+H)+.
중간체 9
tert -부틸 (2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-카복실레이트
Figure pct00314
표제 화합물을, 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 1,2-옥사지난 하이드로클로라이드 (개시 화합물 5)와 커플링시키고, 차후에 트리플루오로아세트산으로 탈보호하고 개시 화합물 1과 커플링시켜 3 단계에 걸쳐 중간체 5, 6 및 7의 합성과 유사하게 제조했다. 최종 생성물을 분취 HPLC로 정제했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.12 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.25 분; MS (ESIpos): m/z = 516 (M+H)+.
중간체 10
N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00315
315 mg (0.494 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 12 mL의 DMF에서 용해시키고, 104 mg (0.543 mmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 83 mg (0.543 mmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트과 혼합시키고, 혼합물을 실온에서 90 분 동안 교반했다. 차후에, 112 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 149 mg (0.494 mmol)의 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판산 트리플루오로아세테이트는 트리플루오로아세트산으로 Boc 보호 그룹의 제거에 의해 개시 화합물 1로부터 미리 제조되었고, 그것을 부가했다. 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 2회 정제했다. 140 mg (이론의 이론의 35%)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.40 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.38 분; MS (ESIpos): m/z = 807 (M+H)+.
중간체 11
N-[(벤질옥시)카보닐]-N-메틸-L-트레오닐-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00316
먼저, N-[(벤질옥시)카보닐]-N-메틸-L-트레오닌을, 에틸 아세테이트에서 취해서 237 mg (0.887 mmol)의 그의 디사이클로헥실아민 염으로부터 방출하고 5% 수성 황산으로 추출성 흔들기를 했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 16 mL의 DMF에서 취하고 365 mg (1 mmol)의 tert -부틸 (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-[메틸(L-발릴)아미노]헵타노에이트 (중간체 2), 185 mg (0.967 mmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 148 mg (0.967 mmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트와 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 염화암모늄 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 탄산수소나트륨 용액 및 포화된 염화나트륨 용액으로 연속적으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 283 mg (이론의 53%)의 tert-부틸 에스테르 중간체 N-[(벤질옥시)카보닐]-N-메틸-L-트레오닐-N-[(3R,4S,5S)-1-tert-부톡시-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 이렇게 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.17 분.
283 mg (0.466 mmol)의 이러한 중간체를 5 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 5 mL의 무수 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 농축된 고진공 하에서 및 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 156 mg (이론의 61%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.50 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.09 분; MS (ESIpos): m/z = 552 (M+H)+.
중간체 12
벤질 N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00317
제1 단계에서, 개시 화합물 1을 100 mL의 에틸 아세테이트에서 염을 용해시켜서 600 mg (1.28 mmol)의 상응하는 디사이클로헥실암모늄 염으로부터 방출하고 먼저 50 mL의 0.5% 황산 및 그 다음 포화된 염화나트륨 용액과 함께 추출성 흔들기를 했다. 그 다음 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하고 중간체 7의 합성과 유사하게 벤질 L-페닐알라니네이트과 즉각적으로 반응시키소, 및 그 다음 탈보호했다.
수율: 650 mg (94%, 2 단계로)
HPLC (방법 6): Rt = 1.76 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.68 분; MS (ESIpos): m/z = 425 (M+H)+.
중간체 13
벤질 (βS)-N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-β-메틸-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00318
먼저, (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산을 에틸 아세테이트에서 취해서 351 mg (0.75 mmol)의 디사이클로헥실아민 염 (개시 화합물 1)으로부터 방출하고 수성 5% 황산수소칼륨 용액과 함께 추출성 흔들기를 했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 10 mL의 DMF에서 취하고 373 mg (0.75 mmol)의 벤질 (βS)-β-메틸-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트 [벤질 알코올과의 EDC/DMAP-매개된 에스테르화 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해 상업적으로 이용가능한 (βS)-N-(tert-부톡시카보닐)-β-메틸-L-페닐알라닌로부터 제조], 428 mg (1.125 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 392 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 염화암모늄 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물 상에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 탄산수소나트륨 용액 및 포화된 염화나트륨 용액으로 연속적으로 세정하고, 차후에 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 230 mg (이론의 이론의 57%)의 Boc-보호된 중간체 벤질 (βS)-N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로파노일}-β-메틸-L-페닐알라니네이트를 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.3 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.36 분; MS (ESIpos): m/z = 539 (M+H)+.
230 mg (0.42 mmol)의 이러한 중간체를 5 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 5 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 반응 혼합물 감압 하에서 추가로 건조시키고 그 다음 아세토니트릴/물로부터 동결건조시켰다. 이런 식으로, 230 mg (정량적)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.6 분.
중간체 14
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00319
143 mg (0.223 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 15 mL의 DMF에서 취하고 141 mg (0.22 mmol)의 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 7), 102 mg (0.27 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 128 μl (0.74 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 염화암모늄 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 탄산수소나트륨 용액 및 포화된 염화나트륨 용액으로 연속적으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 이로써 275 mg (정량적)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.73 분;
LC-MS (방법 4): Rt = 3.19 분; MS (ESIpos): m/z = 1023 (M+H)+.
46 mg (0.045 mmol)의 이러한 중간체를 4 mL의 DMF에서 용해시켰다. 1 mL의 피페리딘을 부가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC (용출물: 아세토니트릴 + 0.01% TFA / 물 + 0.01% TFA)로 정제했다. 22 mg (이론의 54%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.68 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.03 분; MS (ESIpos): m/z = 801 (M+H)+
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ = 8.8 (m, 2H), 8.7 (m, 1H), 8.42 및 8.15 (2d, 1H), 7.3-7.1 (m, 5H), 5.12 및 4.95 (2m, 1H), 4.70 및 4.62 (2m, 1H), 4.62 및 4.50 (2t, 1H), 4.1-3.9 (m, 3H), 3.85 (m, 1H), 3.75-3.6 (m, 2H), 3.23, 3.18, 3.17, 3.14, 3.02 및 2.96 (6s, 9H), 3.1-2.9 및 2.75 (2m, 2H), 2.46 (m, 3H), 2.4-2.1 (m, 2H), 2.05 (br. m, 2H), 1.85-1.55 (br. m, 6H), 1.5-1.2 (br. m, 3H), 1.1-0.8 (m, 18H), 0.75 (t, 3H) [H2O 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 15
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00320
126 mg (0.198 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 10 mL의 DMF에서 취하고 105 mg (0.198 mmol)의 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 17), 41.6 mg (0.217 mmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 33 mg (0.217 mmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트 및 79 μl (0.454 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 염화암모늄 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 탄산수소나트륨 용액 및 포화된 염화나트륨 용액으로 연속적으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 이로써 220 mg (정량적)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.77 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.5 분; MS (ESIpos): m/z = 1037 (M+H)+.
220 mg (0.212 mmol)의 이러한 중간체를 5 mL의 DMF에서 용해시켰다. 1 mL의 피페리딘을 부가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC (용출물: 아세토니트릴 + 0.01% TFA / 물 + 0.01% TFA)로 정제했다. 91 mg (이론의 이론의 46%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.71 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 815 (M+H)+
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ = 8.87 및 8.80 (2d, 2H), 8.75 (m, 1H), 8.40 및 7.98 (2d, 1H), 7.3-7.1 (m, 5H), 5.45 및 5.2 (2t, 1H), 4.78 및 4.62 (2m, 1H), 4.73 및 4.58 (2t, 1H), 4.2-4.0 (m, 3H), 3.7-3.6 (m, 1H), 3.35, 3.20, 3.18, 3.14, 3.12 및 3.00 (6s, 9H), 3.1 및 2.95 (2m, 2H), 2.46 (m, 3H), 2.4-2.0 (m, 4H), 1.9-1.6 (m, 4H), 1.6-1.2 (m, 5H), 1.1-0.75 (m, 21H), 0.80 (t, 3H) [H2O 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 16
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00321
617 mg (1.2 mmol)의 tert -부틸 (2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-카복실레이트 (중간체 24)을 44 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 4.4 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 디옥산/물으로부터 동결건조했다. 702 mg (정량적)의 탈보호된 화합물 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트를 조 생성물로서 얻었고, 이것을 추가 정제 없이 하기 단계에서 사용했다.
470 mg (0.74 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 57 mL의 DMF에서 취하고 390 mg (대략 0.74 mmol)의 상기-수득한 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트, 336 mg (0.88 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 423 μl (2.4 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민와 연속적으로 혼합했다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 반포화된 수성 염화암모늄 용액 및 에틸 아세테이트의 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 탄산수소나트륨 용액 및 포화된 염화나트륨 용액으로 연속적으로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 453 mg (이론의 59%)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.58 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 3.10 분; MS (ESIpos): m/z = 1035 (M+H)+.
453 mg (0.438 mmol)의 이러한 중간체를 24 mL의 DMF에서 용해시켰다. 2.4 mL의 피페리딘을 부가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC (용출물: 물 중 아세토니트릴 / 0.1% TFA)로 정제했다. 260 mg (이론의 64%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.64 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 813 (M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.8 (m, 2H), 8.65 (m, 2H), 7.3-7.1 (m, 5H), 4.8-4.05 (m, 2H), 4.0 및 3.82 (2m, 2H), 3.8-3.5 (m, 8H), 3.32, 3.29, 3.20, 3.19, 3.12 및 3.00 (6s, 9H), 2.65 (t, 1H), 2.5-2.45 (m, 3H), 2.4-1.3 (m, 15H), 1.15-0.85 (m, 18H), 0.8 및 0.75 (2d, 3H) [H2O 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 17
N-벤질-N-메틸-L-페닐알라닌아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00322
1000 mg (3.77 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라닌을 10 mL의 DMF에서 용해시키고 457 mg (3.77 mmol)의 N-메틸벤질아민, 2150 mg (5.65 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 657 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 디클로로메탄에서 취하고 물과 함께 3회 흔들어서 추출했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다. 잔여물을 3:1 석유 에테르/에틸 아세테이트를 용출물로서 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 생성물 분획을 농축하고 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이로써 1110 mg (이론의 이론의 75%)의 Boc-보호된 중간체 N-벤질-Nα -(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-페닐알라닌아마이드를 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.14 분; MS (ESIpos): m/z = 369 (M+H)+.
1108 mg (3,007 mmol)의 이러한 중간체를 30 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 10 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔류 잔여물을 디클로로메탄과 함께 교반하고 용매를 증류 제거했다. 잔여물을 펜탄과 함께 2회 더 교반하고, 용매를 매번 다시 경사따르기하고 표제 화합물을 마지막으로 고진공 하에서 건조했다. 1075 mg (이론의 이론의 93%)의 표제 화합물을 이렇게 수지로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.6 분; MS (ESIpos): m/z = 269 (M+H)+.
중간체 18
N-벤질-N α -{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-N-메틸-L-페닐알라닌아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00323
먼저, (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (개시 화합물 1)을 에틸 아세테이트에서 취해서 141 mg (0.491 mmol)의 그의 디사이클로헥실아민 염으로부터 방출하고 5% 수성 황산으로 추출성 흔들기를 했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 10 mL의 DMF에서 취하고 187.6 mg (0.49 mmol)의 N-벤질-N-메틸-L-페닐알라닌아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 9), 190.3 mg (1.47 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 256 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 농축하고, 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 용액을 차후에 포화된 염화암모늄 용액, 포화된 탄산수소나트륨 용액 및 물과 연속적으로 흔들어서 추출했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다. 잔여물을 30:1 아세토니트릴/물을 용출물로서 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 생성물 분획을 농축하고 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이로써 168 mg (이론의 64%)의 Boc-보호된 중간체 tert -부틸 (2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[벤질(메틸)아미노]-1-옥소-3-페닐프로판-2-일}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-카복실레이트를 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.22 분; MS (ESIpos): m/z = 538 (M+H)+.
168 mg (0.312 mmol)의 이러한 중간체를 15 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 3 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 먼저 디클로로메탄, 그 다음 디에틸 에테르와 함께 교반하고, 용매를 매번 다시 증류 제거했다. 고진공 하에서 건조한 후, 170 mg (이론의 99%)의 표제 화합물을 수지로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.73 분; MS (ESIpos): m/z = 438 (M+H)+.
중간체 19
메틸 N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00324
표제 화합물을, 디사이클로헥실아민 염로부터 방출된 (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (개시 화합물 1), 및 메틸 L-페닐알라니네이트 하이드로클로라이드로부터 진행하면서 중간체 18의 합성과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 0.6 분;
LC-MS (방법 3): Rt = 1.17 분; MS (ESIpos): m/z = 349 (M+H)+.
중간체 20
벤질 N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-트립토파네이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00325
표제 화합물을, 디사이클로헥실아민 염로부터 방출된 (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (개시 화합물 1) 및 벤질 L-트립토파네이트로부터 진행하면서 중간체 18의 합성과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.8 분; MS (ESIpos): m/z = 464 (M+H)+.
중간체 21
벤질 (1S,2R)-1-({(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}아미노)-2-페닐사이클로프로판카복실레이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00326
표제 화합물을, 디사이클로헥실아민 염로부터 방출된 (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (개시 화합물 1), 및 벤질 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실레이트로부터 진행하면서 중간체 18의 합성과 유사하게 제조했다. 벤질 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실레이트는 표준 방법에 의해, 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 벤질 알코올로 에스테르화하고 트리플루오로아세트산에 의한 차후의 Boc 분리로 미리 제조되었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 0.93 분; MS (ESIpos): m/z = 437 (M+H)+.
중간체 22
6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N'-메틸헥산하이드라자이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00327
100 mg (473 μmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산산을 71 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 139 mg (947 μmol)의 tert-부틸 1-메틸하이드라진카복실레이트, 182 mg (947 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 145 mg (947 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 129 mg (이론의 이론의 80%)의 보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
차후에, 129 mg (380 μmol)을 8 mL의 디클로로메탄 중 2 mL의 트리플루오로아세트산로 탈차단했다. 실온에서 1 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 아세토니트릴/물로부터 동결건조하고, 이로써 125 mg (이론의 83%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.38 분; MS (ESIpos): m/z = 240 (M+H)+
중간체 23
N-(2-아미노에틸)-4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N-메틸부탄아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00328
먼저, 35 mg (164 μmol)의 tert-부틸 2-(메틸아미노)에틸 카바메이트 하이드로클로라이드 트리플루오로아세테이트, 30 mg (164 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄산, 75 mg (197 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 57 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 5 mL의 DMF에서 조합시키고 실온에서 밤새 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 디옥산/물으로부터 동결건조로 농축하고, 35 mg (이론의 63%)의 보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.71 분; MS (ESIpos): m/z = 340 (M+H)+.
차후에, 보호된 중간체의 전체의 양을 5 mL의 디클로로메탄 중 1 mL의 트리플루오로아세트산으로 탈차단하여 28 mg (이론의 77%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 3): Rt = 0.75 분; MS (ESIpos): m/z = 240 (M+H)+.
중간체 24
4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N-[2-(메틸아미노)에틸]부탄아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00329
먼저, 35 mg (164 μmol)의 tert-부틸 (2-아미노에틸)메틸 카바메이트 하이드로클로라이드 트리플루오로아세테이트, 30 mg (164 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄산, 75 mg (197 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 57 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 5 mL의 DMF에서 조합시키고 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 디옥산/물으로부터 동결건조로 농축하고, 51 mg (이론의 91%)의 보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.77 분; MS (ESIpos): m/z = 340 (M+H)+.
차후에, 전체의 양을 5 mL의 디클로로메탄 중 1 mL의 트리플루오로아세트산로 탈보호하여 45 mg (이론의 69%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.19 분; MS (ESIpos): m/z = 240 (M+H)+.
중간체 25
벤질 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노에이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00330
먼저, (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산을 에틸 아세테이트에서 취해서 1.82 g (388 mmol)의 그의 디사이클로헥실아민 염으로부터 방출하고 100 mL의 0.5% 황산과 함께 추출성 흔들기하였다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 10 mL의 디옥산 및 10 mL의 물에서 취하고, 1517 mg (4.66 mmol)의 세슘 카보네이트를 부가하고, 혼합물을 초음파 배쓰에서 5 분 동안 처리하고 감압 하에서 농축하고 DMF로 한번 재증류했다. 그 다음 잔여물을 15 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 1990 mg (11.64 mmol)의 벤질 브로마이드를 부가했다. 혼합물을 초음파 배쓰에서 15 분 동안 처리하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분할하고, 유기 상을 제거하고 포화된 염화나트륨 용액과 함께 흔들어서 추출하고 그 다음 농축했다. 그 다음 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 1170 mg (이론의 이론의 80%)의 Boc-보호된 중간체를 수득했다.
차후에, 이들 1170 mg을 15 mL의 디클로로메탄 중 5 mL의 트리플루오로아세트산으로 즉각적으로 탈보호했다. 실온에서 15 분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 디옥산으로 동결건조했다. 고진공 하에서 건조한 후, 1333 mg (이론의 84%)의 표제 화합물이 황색 오일로서 남아 있었다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.5 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.59 분; MS (ESIpos): m/z = 278 (M+H)+.
중간체 26
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00331
1200 mg (2.33 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 5)을 50 mL의 DMF 중 910.8 mg (2.33 mmol)의 벤질 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노에이트 트리플루오로아세테이트 (중간체 14), 1327 mg (3.49 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 2027 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민와 조합하고, 혼합물을 실온에서 5 분 동안 교반했다. 그 후에, 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔류 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 5% 수성 시트르산 용액 및 포화된 탄산수소나트륨 용액과 함께 연속적으로 흔들어서 추출했다. 유기 상을 제거하고 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축하고, 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이로써 1000 mg (이론의 55%)의 벤질 에스테르 중간체 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-(벤질옥시)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수지로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.56 분; MS (ESIpos): m/z = 775 (M+H)+.
수득한 이러한 중간체이 전체의 양을 메탄올 및 디클로로메탄 (20:1)의 25 mL의 혼합물에서 취하고 벤질 에스테르 그룹을 10% 활성탄 상 팔라듐을 촉매로서 사용하여 수소화로 표준 수소 압력 하에서 제거했다. 실온에서 30 분 동안 교반한 후, 촉매를 여과 제거하고 여과물을 감압 하에서 농축했다. 이로써 803 mg (이론의 91%)의 표제 화합물을 백색 고형물로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.24 분; MS (ESIpos): m/z = 685 (M+H)+.
중간체 27
(1S,2R)-1-아미노-2-페닐-N-프로필사이클로프로판카복사마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00332
표제 화합물을 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU)의 존재에서 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 n-프로필아민으로과 커플링하고 트리플루오로아세트산에 의한 차후의 Boc 분리로 제조했다 (수율: 단계 모두에 걸쳐 이론의 85%).
HPLC (방법 6): Rt = 1.2 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.52 분; MS (ESIpos): m/z = 219 (M+H)+.
중간체 28
에틸 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실레이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00333
표제 화합물을, 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 에탄올로 에스테르화하고 트리플루오로아세트산에 의한 차후의 Boc 분리로 표준 방법으로 제조했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.50 분; MS (ESIpos): m/z = 206 (M+H)+.
중간체 29
4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부탄산
Figure pct00334
44 mL의 포화된 탄산수소나트륨 용액 중 1.39 g (8.95 mmol)의 N-메톡시카보닐말레이마이드의 용액에, 0 ℃에서, 1.5 g (8.95 mmol)의 4-아미노-2,2-디메틸부티르산을 부가하고, 혼합물을 40 분 동안 교반했다. 차후에, 냉각 배쓰를 제거하고 반응 혼합물을 추가 1 시간 동안 교반했다. 얼음으로 냉각하면서, 그 다음 반응 혼합물을 황산을 부가하여 pH 3으로 조정하고, 에틸 아세테이트로 추출했다. 조합된 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다. 1.17 g (79% 순도, 이론의 이론의 49%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.64 분; m/z = 212 (M+H)+.
중간체 30
tert -부틸 2-[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부타노일]하이드라진카복실레이트
Figure pct00335
2 mL의 THF 중 50 mg (237 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부탄산의 용액에, 0 ℃에서, 먼저 26 μl (237 μmol)의 4-메틸모폴린 및 그 다음 31 μl (237 μmol)의 이소부틸 클로로포르메이트를 부가했다. 냉각 배쓰를 제거하고 실온에서 추가 15 분 동안 교반한 후, 31.3 mg (237 μmol)의 tert-부틸옥시카보닐 하이드라자이드를 부가했다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 그 다음 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 50.8 mg (이론의 이론의 66%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.71 분; m/z = 324 (M-H)-.
중간체 31
4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부탄하이드라자이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00336
50 mg (154 mmol)의 tert -부틸 2-[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부타노일]하이드라진카복실레이트를 2 mL의 디클로로메탄에서 용해시키고, 0.4 mL의 트리플루오로아세트산을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 55.2 mg (93% 순도, 이론의 99%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.36 분; m/z = 226 (M+H)+.
중간체 32
아다만탄-1-일메틸 N-(tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라니네이트
Figure pct00337
25 mL의 디클로로메탄 중 500 mg (1.89 mmol)의 N-Boc-L-페닐알라닌의 용액에, 실온에서, 1192 mg (6.2 mmol)의 EDC, 578 μl (4.1 mmol)의 트리에틸아민, 345 mg (2.8 mmol)의 DMAP 및 345 mg (2.1 mmol)의 1-아다만틸메탄올을 부가했다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 그 다음 50 mL의 디클로로메탄으로 희석하고, 10% 수성 시트르산 용액, 물 및 포화된 염화나트륨 용액으로 연속적으로 세정했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 그 다음 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 769 mg (이론의 90%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 2): Rt = 1.84 분; m/z = 414 (M+H)+.
중간체 33
아다만탄-1-일메틸 L-페닐알라니네이트 하이드로클로라이드
Figure pct00338
769 mg (1.86 mmol)의 아다만탄-1-일메틸 N-(tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라니네이트 (중간체 13)을 디옥산 중 염화수소의 25 mL의 4 N 용액에서 용해시키고 실온에서 1시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 감압 하에서 건조했다. 619 mg (이론의 95%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.82 분; m/z = 314 (M+H)+.
중간체 34
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(아다만탄-1-일메톡시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00339
1 mL의 DMF 중 20 mg (29 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에, 실온에서, 15.3 μl (88 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민, 6.7 mg (44 μmol)의 HOBt 및 6.7 mg (35 μmol)의 EDC를 부가하고, 혼합물을 30분 동안 교반했다. 차후에, 10.1 mg (32 μmol)의 아다만탄-1-일 L-페닐알라니네이트 하이드로클로라이드를 부가했다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC를 통해 그의 성분으로 직접적으로 분리했다. 27.5 mg (이론의 이론의 93%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.70 분; m/z = 980 (M+H)+.
중간체 35
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(아다만탄-1-일메톡시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00340
27.5 mg (28 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(아다만탄-1-일메톡시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 1.8 mL의 디클로로메탄에서 용해시키고, 361 μl의 TFA를 부가했다. 반응 혼합물을 30 분 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 잔여물을 물에서 취하고 동결건조시켰다. 22.7 mg (이론의 81%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.14 분; m/z = 880 (M+H)+.
중간체 36
tert -부틸 (2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일 카바메이트
Figure pct00341
아르곤 분위기 하에서, 500 mg (1.99 mmol)의 N-Boc-L-페닐알라니놀을 5 mL의 DMF에서 용해시키고 0 ℃로 냉각시켰다. 차후에, 파라핀 오일 중 수소화나트륨의 159 mg (3.98 mmol)의 60% 서스펜션을 부가했다. 반응 혼합물을 가스의 진전이 완료될 때까지 교반하고 그 다음 260 μl (2.19 mmol)의 벤질 브로마이드를 부가했다. 냉각 배쓰를 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 그 후에, 반응 혼합물을 농축하고, 잔여물을 빙수에서 취하고 혼합물을 디클로로메탄로 추출했다 유기 상을 포화된 염화나트륨 용액으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 226 mg (이론의 이론의 33%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.28 분; m/z = 342 (M+H)+.
중간체 37
(2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-아민 하이드로클로라이드
Figure pct00342
220 mg (644 μmol)의 tert -부틸 (2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일 카바메이트를 디옥산 중 염화수소의 11 mL의 4 N 용액에서 용해시키고 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 감압 하에서 건조했다. 138 mg (이론의 77%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.65 분; m/z = 242 (M+H)+.
중간체 38
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00343
1 mL의 DMF 중 20 mg (29 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에, 실온에서, 15.3 μl (88 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민, 6.7 mg (44 μmol)의 HOBt 및 6.7 mg (35 μmol)의 EDC을 부가하고, 혼합물을 30분 동안 교반했다. 차후에, 7.8 mg (32 μmol)의 (2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-아민 하이드로클로라이드를 부가했다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC를 통해 그의 성분으로 직접적으로 분리했다. 26 mg (이론의 이론의 98%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.51 분; m/z = 909 (M+H)+.
중간체 39
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00344
26 mg (29 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 1.8 mL의 디클로로메탄에서 용해시키고, 370 μl의 TFA를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 잔여물을 물에서 취하고 동결건조시켰다. 26.4 mg (정량적)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; m/z = 809 (M+H)+.
중간체 40
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00345
10 mL의 DMF 중 50 mg (70 μmol)의 중간체 26 및 11 mg (70 μmol)의 (1S, 2R)-2-아미노-1-페닐프로판-1-올을 42 mg (0.11 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 25 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합하고, 반응 혼합물을 실온에서 5 분 동안 교반했다. 그 다음 이것을 농축 분취 HPLC로 잔여물을 정제했다. 상응하는 분획을 조합시키고, 농축하고 고진공 하에서 건조시킨 후, 49 mg (81%)의 보호된 중간체를 수득했다. 차후에, Boc 그룹을 디클로로메탄 중 트리플루오로아세트산으로 공지된 조건으로 분리시켰다. 농축 그 다음 분취 HPLC로 표제 화합물을 정제하고, 26 mg (52%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.65 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.77 분; MS (ESIpos): m/z = 718 (M+H)+.
중간체 41
3-{2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시}프로판산 트리플루오로아세테이트
Figure pct00346
150 mg (541 μmol)의 tert -부틸 3-{2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시}프로파노에이트를 3 mL의 디클로로메탄에서 용해시키고, 1.5 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 그 다음 농축했다.
181 mg (이론의 100%)의 표제 화합물을 수득했다.
MS (EI): m/z 222 (M+H)+
중간체 42
3-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)프로판산
Figure pct00347
186 mg (555 μmol)의 3-{2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시}프로판산 트리플루오로아세테이트를 2.6 mL의 포화된 탄산수소나트륨 용액에서 용해시키고 0 ℃에서 86 mg (555 μmol)의 N-메톡시카보닐말레이마이드와 혼합했다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 40 분 동안 및 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 0 ℃로 다시 냉각하고, 황산으로 pH 3으로 조정하고 25 mL의 에틸 아세테이트로 3회 추출했다. 조합된 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다.
126 mg (이론의 이론의 75%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.53 분; m/z = 302 (M+H)+.
중간체 43
tert -부틸 15-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-4-옥소-7,10,13-트리옥사-2,3-디아자펜타데칸-1-오에이트
Figure pct00348
125 mg (417 μmol)의 3-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시) 프로판산을 0 ℃에서 2.1 mL의 THF에서 용해시키고 46 μl (417 mmol)의 4-메틸모폴린 및 54.5 μl (417 μmol)의 이소부틸 클로로포르메이트와 혼합했다. 빙욕을 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 0 ℃에서, 55 mg (417 μmol)의 tert-부틸옥시카보닐 하이드라자이드를 부가했다. 반응 혼합물을 밤새 실온으로 따뜻하게 하고, 농축하고 분취 HPLC로 정제했다.
60 mg (이론의 이론의 33%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.66 분; m/z = 416 (M+H)+.
중간체 44
3-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)프로판하이드라자이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00349
60 mg (145 μmol)의 tert -부틸 15-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-4-옥소-7,10,13-트리옥사-2,3-디아자펜타데칸-1-오에이트를 1 mL의 디클로로메탄에서 용해시키고, 0.2 mL의 트리플루오로아세트산을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 농축했다.
62 mg (이론의 100%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.35 분; m/z = 316 (M+H)+.
중간체 45
벤질 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실레이트 트리플루오로아세테이트
Figure pct00350
표제 화합물을 표준 방법으로, 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 벤질 알코올로 에스테르화하고 트리플루오로아세트산에 의한 차후의 Boc 분리로 제조했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.72 분; MS (ESIpos): m/z = 268 (M+H)+.
중간체 46
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00351
383 mg (0.743 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 8)을 15 mL의 DMF 중 485 mg (0.743 mmol)의 벤질 N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트 (중간체 12), 424 mg (1.114 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 388 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민와 조합하고, 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔류 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 5% 수성 시트르산 용액 및 포화된 탄산수소나트륨 용액과 연속적으로 흔들어서 추출했다. 유기 상을 제거하고 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축하고, 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 335 mg (이론의 이론의 48%)의 벤질 에스테르 중간체를 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.49 분; MS (ESIpos): m/z = 922 (M+H)+.
100 mg (0.11 mmol)의 이러한 중간체를 15 mL의 메탄올에서 취하고 벤질 에스테르 그룹을 수소화로 표준 수소 압력 하에서 촉매로서 10% 활성탄 상 팔라듐으로 제거했다. 실온에서 1 시간 동안 교반한 후, 촉매를 여과 제거하고 여과물을 감압 하에서 농축했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 85 mg (이론의 94%)의 표제 화합물을 고형물로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.4 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.24 분; MS (ESIpos): m/z = 832 (M+H)+.
중간체 47
N-벤질-L-트립토판아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00352
202 mg (0.5 mmol)의 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 N-(tert-부톡시카보닐)-L-트립토파네이트 및 45 mg (0.42 mmol)의 벤질아민을 10 mL의 DMF에서 용해시키고, 110 μl (630 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다 (용출물: 20:0.5:0.05 디클로로메탄/메탄올/17% 수성 암모니아). 상응하는 분획을 조합하고, 농축했다. 수득한 잔여물을 디에틸 에테르로 소화시키고 그 다음 고진공 하에서 건조했다. 차후에, 이 잔여물을 10 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 3 mL의 무수 트리플루오로아세트산을 부가했다. 실온에서 45 분 동안 교반한 후, 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 고진공 하에서 건조한 후, 117 mg (단계 모두에 걸쳐 이론의 57%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.66 분; MS (ESIpos): m/z = 294 (M+H)+.
중간체 48
(1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복사마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00353
50 mg (180 μmol)의 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 5 mL의 DMF에서 용해시키고, 94 μl (541 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민, 31 mg (270 μmol)의 N-하이드록시석신이마이드 및 41.5 mg (216 μmol)의 EDC를 부가하고, 그 다음 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 농축하고, 잔여물을 디옥산에서 부가하고, 71 mg (901 μmol)의 암모늄 수소카보네이트를 부가하고, 그 다음 반응 혼합물을 실온에서 3 일 동안 정치했다. 그 다음 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물의 1:1 혼합물로 희석했다. 유기 상을 제거하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다. 수득한 잔여물을 차후에 3 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 3 mL의 무수 트리플루오로아세트산을 부가했다. 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 잔여물을 펜탄과 함께 교반하고, 흡입으로 여과 제거하고, 디옥산으로 동결건조했다. 이런 식으로, 32 mg (단계에 모두에 걸쳐 이론의 62%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 0.38 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.20 분; MS (ESIpos): m/z = 177 (M+H)+.
중간체 49
N α -{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-트립토판아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00354
표제 화합물을 개시 화합물 1 및 L-트립토판아마이드 하이드로클로라이드로부터 중간체 13의 합성과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.4 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 473 (M+H)+.
중간체 50
4-니트로페닐 2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸 카바메이트
Figure pct00355
813 mg (3.1 mmol)의 트리페닐포스핀을 25 mL의 THF에서 용해시키고 -70 ℃로 아르곤 하에서 냉각시켰다. 627 mg (3.1 mmol)의 디이소프로필 아조디카복실레이트를 적가한 후, 혼합물을 5 분 동안 교반했다. 차후에, 5 mL의 THF에서 용해된 500 mg (3.1 mmol)의 tert-부틸 2-아미노에틸 카바메이트를 적가하고, 반응 혼합물을 교반된 -70 ℃에서 추가 5 분 동안 교반했다. 그 다음 136.6 mg (1.55 mmol)의 2,2-디메틸-1-프로판올 1 mL의 THF에서 용해시키고 301 mg (3.1 mmol)의 말레이마이드를 부가하고, 반응 혼합물을 -70 ℃에서 추가 10 분 동안 교반하고 그 다음 혼합물을 실온으로 따뜻하게 했다. 실온에서 추가 16 시간 동안 교반한 후, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 463 mg (62%)의 보호된 중간체를 수득했다.
Boc 보호 그룹을 표준 조건 하에서 제거한 후, 652 mg의 1-(2-아미노에틸)-1H-피롤-2,5-디온을 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
112.9 mg (543 μmol)의 니트로페닐 클로로포르메이트를 30 mL의 THF에서 용해시키고, 100 mg (271.6 μmol)의 1-(2-아미노에틸)-1H-피롤-2,5-디온 트리플루오로아세테이트의 부가 후, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축 건조하고 그 다음 디에틸 에테르와 함께 슬러리화했다. 흡입 여과 및 건조 후, 60 mg (이론의 95%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 0.65 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.74 분; MS (ESIpos): m/z = 306 (M+H)+.
중간체 51
(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에탄아민 트리플루오로아세테이트
Figure pct00356
200 mg (0.75 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라닌을 0 ℃에서 5.5 mL의 디클로로메탄에서 초기에 충전하고, 128 mg (0.79 mmol)의 1,1'-카보닐디이미다졸을 부가했다. 30 분 후, 103 mg (0.75 mmol)의 벤조일 하이드라자이드를 부가했다. 0 ℃에서 추가 45 분 후, 500 mg (1.5 mmol)의 탄소 테트라브로마이드 및 395 mg (1.5 mmol)의 트리페닐포스핀을 마지막으로 부가했다. 반응 혼합물을 먼저 0 ℃에서 2 시간 동안 및 그 다음 실온에서 밤새 교반했다. 혼합물을 차후에 회전식 증발기 상에서 농축하고, 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이렇게 수득한 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다. 217 mg (이론의 78%)의 Boc-보호된 중간체 tert -부틸 (1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸 카바메이트를 수득했다.
LC-MS (방법 12): Rt = 1.15 분; MS (ESIpos): m/z = 366 (M+H) +
217 mg (0.59 mmol)의 이러한 중간체를 3 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 0.6 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 반응 혼합물 감압 하에서 추가로 건조시키고 그 다음 디옥산으로 동결건조했다. 이런 식으로, 214 mg (이론의 90%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.62 분; MS (ESIpos): m/z = 266 (M+H) +
중간체 52
(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에탄아민 트리플루오로아세테이트
Figure pct00357
200 mg (0.75 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-D-페닐알라닌을 0 ℃에서 5.5 mL의 디클로로메탄에서 초기에 충전하고, 128.3 mg (0.79 mmol)의 1,1'-카보닐디이미다졸을 부가했다. 30 분 후, 103 mg (0.75 mmol)의 벤조일 하이드라자이드를 부가했다. 0 ℃에서 추가 45 분 후, 500 mg (1.5 mmol)의 탄소 테트라브로마이드 및 395 mg (1.5 mmol)의 트리페닐포스핀을 마지막으로 부가했다. 반응 혼합물을 먼저 0 ℃에서 2 시간 동안 및 그 다음 실온에서 밤새 교반했다. 혼합물을 차후에 회전식 증발기 상에서 농축하고, 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이렇게 수득한 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다. 219 mg (이론의 이론의 80%)의 Boc-보호된 중간체 tert -부틸 (1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸 카바메이트를 수득했다.
LC-MS (방법 2): Rt = 1.36 분; MS (ESIpos): m/z = 366 (M+H) +
219 mg (0.6 mmol)의 이러한 중간체를 3 mL의 디클로로메탄에서 취하고, 0.6 mL의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 반응 혼합물 감압 하에서 추가로 건조시키고 그 다음 디옥산으로 동결건조했다. 이런 식으로, 196 mg (이론의 86%)의 표제 화합물을 고형물로서 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.41 분
중간체 53
(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-아민
Figure pct00358
200 mg (1.13 mmol)의 (4S)-4-벤질-1,3-옥사졸리딘-2-온을 초기에 3 mL의 tert-부탄올에서 충전하고, 280 mg (2.26 mmol)의 벤질 메르캅탄을 부가했다. 혼합물을 차후에 환류 하에서 2 일 동안 가열했다. 그 후에, 반응 혼합물을 회전식 증발기 상에서 농축하고 수득한 (2S)-1-(벤질설파닐)-3-페닐프로판-2-아민 중간체를 워크업없이 추가로 직접적으로 전환했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.63 분
LC-MS (방법 1): Rt = 0.67 분; MS (ESIpos): m/z = 258 (M+H) +
상기 수득한 조 중간체를 2 mL의 30% 과산화수소 및 5 mL의 포름산의 용액에서 용해시키고, 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 포화된 나트륨 설페이트 용액에 부가하고 에틸 아세테이트로 3회 추출했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축했다. 수득한 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다. 343 mg (이론의 61%)의 표제 화합물을 이렇게 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.40 분;
LC-MS (방법 12): Rt = 0.65 분; MS (ESIpos): m/z = 290 (M+H) +
중간체 54
(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-아민
Figure pct00359
552.7 mg (9.85 mmol)의 칼륨 하이드록사이드를 메탄올에서 용해시키고, 1.1 g의 중성 산화알루미늄 상에 흡착시키고 그 다음 고진공 하에서 건조했다. 6.2 mL의 n-부탄올 중 이렇게 제조된 산화알루미늄 상의 240 mg (0.82 mmol)의 (2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-아민 및 1.56 g의 칼륨 하이드록사이드를, 5-10 ℃에서, 307 μl (3.3 mmol)의 디브로모디플루오로메탄을 적가했다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 그 다음 셀라이트를 통해 여과하고, 잔여물을 디클로로메탄으로 철저히 세정했다. 여과물을 농축하고 수득한 잔여물을 감압 하에서 건조했다. 이렇게 수득한 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다. 98 mg (이론의 이론의 35%)의 표제 화합물을 4:1의 E/Z 부분입체이성질체 비로 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.46 분;
LC-MS (방법 12): Rt = 0.75 분; MS (ESIpos): m/z = 224 (M+H) +
상기 수득한 E/Z 부분입체이성질체 혼합물을 2 mL의 에탄올 및 0.2 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민에서 용해시키고, 키랄상 HPLC로 분리했다 [칼럼: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm 250 mm × 20 mm, 용출물: 헥산/(에탄올 + 0.2% 디에틸아민) 50:50 v/v; UV 검출: 220 nm; 온도: 30 ℃]. 적절한 분획을 회전식 증발기 상에서 농축하고, 잔여물을 감압 하에서 건조했다. 45 mg의 표제 화합물을 수득했다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm] = 2.62 - 2.83 (m, 2 H) 3.52 - 3.71 (m, 1 H) 6.18 - 6.30 (m, 1 H) 6.34 - 6.46 (m, 1 H) 6.98 - 7.57 (m, 10 H) [용매 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 55
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00360
20 mg (29 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 1 mL의 DMF에서 용해시키고, 13.3 mg (35 μmol)의 HATU 및 15.3 μl (88 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 12.2 mg (32 μmol)의 (1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에탄아민 트리플루오로아세테이트를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 분취 HPLC로 분리했다. 이로써 22 mg (이론의 81%)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
LC-MS (방법 12): Rt = 1.45 분; MS (ESIpos): m/z = 933 (M+H)+
차후에 BOC 보호 그룹을 트리플루오로아세트산으로 분리하여, 22.4 mg (이론의 이론의 98%)의 표제 화합물을 그 다음 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 833 (M+H)+
중간체 56
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00361
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를, 20 mg (29 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드와 12.2 mg (32 μmol)의 (1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에탄아민 트리플루오로아세테이트와의 반응으로 중간체 55의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 17 mg (이론의 64%)
HPLC (방법 10): Rt = 3.74 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.45 분; MS (ESIpos): m/z = 933 (M+H) +
차후에 BOC 보호 그룹을 트리플루오로아세트산으로 분리하여, 17.1 mg (이론의 99%)의 표제 화합물을 그 다음 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.55 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 833 (M+H) +
중간체 57
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00362
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를, 20 mg (29 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 9.3 mg (20 μmol)의 (2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-아민과 반응시켜 중간체 55의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 19.2 mg (이론의 68 %)
HPLC (방법 10): Rt = 3.5 분;
LC-MS (방법 12): Rt = 1.41 분; MS (ESIpos): m/z = 957 (M+H) +
차후에 BOC 보호 그룹을 트리플루오로아세트산으로 분리하여, 그 다음 19.3 mg (이론의 99%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.52 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 857 (M+H) +
중간체 58
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00363
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를, 20 mg (29 μmol) N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 7.1 mg (32 μmol)의 (2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-아민과 반응시켜 중간체 55의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 15.1 mg (이론의 58 %)
HPLC (방법 10): Rt = 4.2 분;
LC-MS (방법 12): Rt = 1.51 분; MS (ESIpos): m/z = 891 (M+H) +
차후에 BOC 보호 그룹을 트리플루오로아세트산으로 분리하여, 15.7 mg (이론의 99 %)의 표제 화합물을 그 다음 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.62 분;
LC-MS (방법 12): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 791 (M+H) +
중간체 61
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00364
50 mg (0.054 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 16)을 8 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 물 중 4-옥소부탄산의 70 ml (0.108 mmol)의 15% 용액을 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 100 ℃에서 1시간 동안 교반했다. 실온으로 냉각한 후, 3.7 mg (0.059 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 혼합물을 약 300 μl의 0.1 N 염산의 부가로 pH 3으로 조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 2 시간 동안 교반했다. 냉각 후, 또 하나의 70 ml (0.108 mmol)의 15% 4-옥소부탄산 용액을 부가하고 반응 혼합물을 100 ℃에서 1시간 동안 다시 교반했다. 그 다음 추가 3.7 mg (0.059 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 약 300 μl의 0.1 N 염산을 차후에 사용하여 pH를 3으로 역조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 2 시간 동안 교반했다. 전환이 불완전할 때, 이 절차를 3회 반복했다. 반응 혼합물을 마지막으로 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이런 식으로, 32 mg (이론의 65 %)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.64 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.76 분; MS (ESIpos): m/z = 899 (M+H)+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 8.95 및 8.8 (2m, 1H), 8.88 및 8.65 (2s, 1H), 7.4-7.1 (m, 5H), 5.0, 4.78, 4.65 및 4.55 (4m, 2H), 4.1-3.7 (m, 5H), 3.32, 3.29, 3.20, 3.12, 3.1 및 3.0 (6s, 9H), 2.75 (m, 2H), 2.63 (t, 1H), 2.4-2.2 (m, 4H), 2.1-1.2 (m, 12H), 1.2-0.8 (m, 16H), 0.75 (m, 3H) [하에서 숨겨진 추가 신호 H2O 및 DMSO 피크].
중간체 62
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00365
표제 화합물을, 50 mg의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 14)을 4-옥소부탄산과의 반응으로 중간체 61의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 34 mg (이론의 70 %)
HPLC (방법 5): Rt = 1.64 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.77 분; MS (ESIpos): m/z = 887 (M+H)+.
중간체 63
N-(4-카복시벤질)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00366
표제 화합물을, 15 mg의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 16)를 4-포르밀벤조산과의 반응으로 중간체 61의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 7.5 mg (이론의 48 %)
HPLC (방법 5): Rt = 1.75 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 947 (M+H)+.
중간체 64
N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00367
10 mg (0.011 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 16)을 2 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 2.8 mg (0.022 mmol)의 6-옥소헥산산을 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 100 ℃에서 1시간 동안 교반했다. 실온으로 냉각한 후, 0.75 mg (0.012 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 혼합물을 0.1 N 염산을 부가하여 pH 3으로 조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 시간 동안 교반했다. 냉각 후, 또 하나의 2.8 mg (0.022 mmol)의 6-옥소헥산산을 부가하고 반응 혼합물을 100 ℃에서 1시간 동안 다시 교반했다. 추가 0.75 mg (0.012 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 0.1 N 염산을 차후에 사용하여 pH를 3으로 역조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 1 시간 동안 교반했다. 그 다음 이 절차를 3회 반복했다. 반응 혼합물을 마지막으로 농축하고 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 6.4 mg (이론의 64%)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.68 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.86 분; MS (ESIpos): m/z = 927 (M+H)+.
중간체 65
N-(2-아미노에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 비스트리플루오로아세테이트
Figure pct00368
표제 화합물을, 68 mg의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 14)와 tert -부틸 2-옥소에틸 카바메이트와의 반응 및 Boc 보호 그룹의 트리플루오로아세트산으로의 차후의 분리로 제조했다.
수율: 49 mg (이론의 62%, 2 단계에 걸쳐)
HPLC (방법 5): Rt = 1.58 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.05 분; MS (ESIpos): m/z = 844 (M+H)+
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ = 8.25 (m, 1H), 8.45 및 8.15 (2d, 1H), 7.65-7.55 (m, 3H), 7.23-7.1 (m, 5H), 5.12 및 4.95 (2m, 1H), 4.72 및 4.62 (2m, 1H), 4.6 및 4.52 (2t, 1H), 4.2-3.8 (m, 4H), 3.7 (d, 1H), 3.23, 3.20, 3.19, 3.18, 3.03 및 2.98 (6s, 9H), 3.0-2.7 (m, 6H), 2.4-1.2 (m, 15H), 1.05, 1.0, 0.88 및 0.82 (4d, 6H), 0.92 (m, 6H), 0.73 (m, 6H) [하에서 숨겨진 추가 신호 H2O 피크].
중간체 66
N-(3-아미노프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00369
표제 화합물을, 25 mg (0.027 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 16)와 벤질 3-옥소프로필 카바메이트와의 반응 및 Z 보호 그룹의 차후의 수소첨가분해 분리 (촉매로서 10% 목탄상 팔라듐에 의해, 용매로서 에탄올 중)으로 중간체 65의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 11 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 41%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.53 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.72 분; MS (ESIpos): m/z = 870 (M+H)+.
중간체 67
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(아다만탄-1-일메톡시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00370
26 mg (26 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(아다만탄-1-일메톡시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 및 33.9 μl의 15% 수성 석신알데히드산 용액 (53 μmol)을 957 μl의 1:1-디옥산/물 혼합물에서 용해시키고 100 ℃로 1시간 동안 가열했다. 간단한 냉각 후, 1.81 mg (29 μmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가했다. 반응 혼합물을 0.1 N 염산의 부가로 pH 3으로 조정하고 혼합물을 100 ℃로 추가 2 시간 동안 가열했다. 동일한 양의 석신알데히드산 용액, 나트륨 시아노보로하이드라이드 및 염산을 다시 부가한 후, 혼합물을 2시간 동안 100 ℃로 다시 한번 가열했다. 그 다음 반응 혼합물을 분취 HPLC로 그의 성분으로 직접적으로 분리했다. 18.5 mg (이론의 73%)의 표제 화합물을 이렇게 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.17 분; m/z = 967 (M+H)+.
중간체 68
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00371
24 mg (26 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 및 33.7 μl의 15% 수성 석신알데히드산 용액 (52 μmol)을 953 μl의 1:1-디옥산/물 혼합물에서 용해시키고 100 ℃로 1시간 동안 가열했다. 간단한 냉각 후, 1.80 mg (29 μmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가했다. 반응 혼합물을 0.1 N 염산의 부가로 pH 3으로 조정하고 혼합물을 100 ℃로 추가 2 시간 동안 가열했다. 동일한 양의 석신알데히드산 용액, 나트륨 시아노보로하이드라이드 및 염산을 다시 부가한 후, 혼합물을 2시간 동안 100 ℃로 다시 한번 가열했다. 그 다음 반응 혼합물을 분취 HPLC로 그의 성분으로 직접적으로 분리했다. 15.2 mg (이론의 65 %)의 표제 화합물을 이렇게 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; m/z = 895 (M+H)+
중간체 69
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00372
53 mg (84 μmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4) 및 45 mg (84 μmol)의 벤질 N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트 (중간체 12)을 2 mL의 DMF에서 취하고, 19 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민, 14 mg (92 μmol)의 HOBt 및 17.6 mg (92 μmol)의 EDC를 부가하고 그 다음 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 59 mg (이론의 68 %)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.55 분; m/z = 1044 (M+H)+.
57 mg (0.055 mmol)의 이러한 중간체를 5 mL의 DMF 중 1.2 mL의 피페리딘으로 처리하여 Fmoc 보호 그룹을 분리했다. 농축 및 분취 HPLC에 의한 정제 후, 39 mg (이론의 76%)의 유리 아민 중간체 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; m/z = 822 (M+H)+.
37 mg (0.045 mmol)의 이러한 중간체를 5 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 중간체 66에서의 화합물의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산의 15% 수용액과 반응시켰다. 16 mg (이론의 39%)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; MS (ESIpos): m/z = 908 (M+H)+.
중간체 70
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00373
먼저, 중간체 4 및 26으로부터 진행하는 중간체 14에서 기재된 합성과 유사하게, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 제조했다.
30 mg (0.032 mmol)의 이 화합물을 6 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 41 μl (0.063 mmol)의 4-옥소부탄산의 15% 수용액을 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 100 ℃에서 1시간 동안 교반했다. 실온으로 냉각한 후, 2.2 mg (0.035 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 혼합물을 약 300 μl의 0.1 N 염산의 부가로 pH 3으로 조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 2 시간 동안 교반했다. 냉각 후, 또 하나의 41 μl (0.063 mmol)의 15% 4-옥소부탄산 용액을 부가하고 반응 혼합물을 100 ℃에서 1시간 동안 다시 교반했다. 그 다음 추가 2.2 mg (0.035 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 약 300 μl의 0.1 N 염산을 차후에 사용하여 pH를 3으로 역조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 2 시간 동안 교반했다. 전환이 불완전할 때, 이 절차를 3회 반복했다. 반응 혼합물을 마지막으로 농축하고 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 24 mg (이론의 82%)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.15 분; MS (ESIpos): m/z = 922 (M+H)+.
중간체 71
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-3-{[(2S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00374
먼저, 중간체 4 및 39로부터 진행하는 중간체 14에서 기재된 합성과 유사하게, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-3-{[(2S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 제조했다. 그 다음 7 mg (0.009 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 2 mg (이론의 22%)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.06 분; MS (ESIpos): m/z = 832 (M+H)+.
중간체 72
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00375
212 mg (411 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 8) 및 237 mg (411 μmol)의 벤질-N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-트립토파네이트 트리플루오로아세테이트 (중간체 20)을 30 mL의 DMF에서 취하고, 188 mg (493 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 215 μl N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 20 시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축하고, 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이로써 315 mg (이론의 80%)의 Boc-보호된 중간체 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 무색 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.45 분; m/z = 961 (M+H)+.
50 mg (52 μmol)의 이러한 중간체를 9 mL의 디클로로메탄 중 1 mL의 트리플루오로아세트산으로 처리하여 Boc 보호 그룹을 분리했다. 농축 및 분취 HPLC에 의한 정제 후, 29 mg (이론의 57%)의 유리 아민 중간체 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.99 분; m/z = 861 (M+H)+.
29 mg (0.03 mmol)의 이러한 중간체를 6 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 39 μl (0.059 mmol)의 4-옥소부탄산의 15% 수용액을 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 100 ℃에서 1시간 동안 교반했다. 실온으로 냉각한 후, 2 mg (0.033 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 혼합물을 약 300 μl의 0.1 N 염산의 부가로 pH 3으로 조정했다. 그 다음 반응 혼합물을 100 ℃에서 추가 2 시간 동안 교반했다. 냉각 후, 또 하나의 39 μl (0.059 mmol)의 15% 4-옥소부탄산 용액을 부가하고 반응 혼합물을 100 ℃에서 1시간 동안 다시 교반했다. 그 다음 추가 2 mg (0.033 mmol)의 나트륨 시아노보로하이드라이드를 부가하고 약 300 μl의 0.1 N 염산을 차후에 사용하여 pH를 3으로 역조정했다. 그 다음 혼합물을 100 ℃에서 추가 2 시간 동안 교반했다. 그 후에, 반응 혼합물을 반포화된 수성 염화암모늄 용액 및 에틸 아세테이트의 1:1 혼합물에 부었다. 유기 상을 제거하고, 포화된 염화나트륨 용액으로 세정하고, 나트륨 설페이트 상에서 건조시키고 농축했다. 잔여물을 물/ 아세토니트릴로부터 냉동건조시켰다. 이로써 27 mg (이론의 94%)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.04 분; MS (ESIpos): m/z = 947 (M+H)+.
중간체 73
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[벤질(메틸)아미노]-1-옥소-3-페닐프로판-2-일}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00376
먼저, 중간체 4 및 38로부터 진행하는 중간체 14에서 기재된 합성과 유사하게, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[벤질(메틸)아미노]-1-옥소-3-페닐프로판-2-일}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 제조했다. 그 다음 25 mg (0.026 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 13 mg (이론의 84%)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.01 분; MS (ESIpos): m/z = 921 (M+H)+.
중간체 74
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(벤질옥시)카보닐]-2-페닐사이클로프로필}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00377
50 mg (73 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 28 mg (73 μmol)의 벤질 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실레이트 트리플루오로아세테이트 (중간체 45)을 5 mL의 DMF에서 취하고, 42 mg (110 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 38 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 5 시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축했다. 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 35 mg (이론의 51%)의 Boc-보호된 중간체 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(벤질옥시)카보닐]-2-페닐사이클로프로필}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 무색 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.52 분; m/z = 934 (M+H)+.
35 mg의 이러한 중간체를 5 mL의 디클로로메탄 중 1 mL의 트리플루오로아세트산으로 처리하여 Boc 보호 그룹을 분리했다. 농축 및 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 34 mg (이론의 97%)의 유리 아민 중간체 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(벤질옥시)카보닐]-2-페닐사이클로프로필}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.91 분; m/z = 834 (M+H)+.
그 다음 11 mg (0.011 mmol)의 이러한 중간체를, 중간체 66의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 2.5 mg (이론의 24%)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.1 분; MS (ESIpos): m/z = 920 (M+H)+.
중간체 75
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S,2R)-2-페닐-1-(프로필카바모일)사이클로프로필]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00378
먼저, 중간체 74에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐-N-프로필사이클로프로판카복사마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 27)의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S,2R)-2-페닐-1-(프로필카바모일)사이클로프로필]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 14 mg (0.016 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 11.3 mg (이론의 83%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.27 분; MS (ESIpos): m/z = 871 (M+H)+.
중간체 76
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(에톡시카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00379
먼저, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 중간체 46 (N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드)와 중간체 48 (에틸 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실레이트 트리플루오로아세테이트)와의 커플링 및 차후의 Boc 분리하여, 개시 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(에톡시카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트를 제조했다. 그 다음 70 mg (0.079 mmol)의 이 개시 물질을, 4-옥소부탄산과의 반응으로, 중간체 61과 유사하게, 사용하여 46 mg (이론의 68 %)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.28 분; MS (ESIpos): m/z = 858 (M+H)+
중간체 77
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00380
먼저, 중간체 75에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N -(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 L-페닐알라닌아마이드 하이드로클로라이드의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리로, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 47 mg (0.049 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 39 mg (이론의 96%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.44 분; MS (ESIpos): m/z = 817 (M+H)+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 8.95 및 8.8 (2m, 1H), 8.25 및 8.0 (2d, 1H), 7.45, 7.35 및 7.0 (3s, broad, 2H), 7.3-7.1 (m, 5H), 4.8-4.4 (2m, 3H), 3.95 (m, 1H), 3.82 (m, 1H), 3.72 (d, 1H), 3.22, 3.18, 3.15, 3.05 및 3.00 (5s, 9H), 2.85-2.7 (m, 4H), 2.45-1.6 (m, 12H), 1.5-1.2 (m, 3H), 1.1-0.7 (m, 21H) [용매 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 78
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00381
이 화합물을 중간체 14로부터의 20 mg (16 μmol)의 화합물 및 벤질 6-옥소헥실 카바메이트로부터 진행하는 2 단계에 걸쳐 중간체 66과 유사하게 제조했고, 수소화를 용매로서 메탄올에서 수행했다.
수율: 7.6 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 55%)
HPLC (방법 6): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.7 분; MS (ESIpos): m/z = 901 (M+H)+.
중간체 79
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00382
36 mg (43 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 46) 및 4.6 mg (43 μmol)의 벤질아민을 5 mL의 DMF에서 취하고, 7.5 μl (88 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민, 10 mg (65 μmol)의 HOBt 및 10 mg (52 μmol)의 EDC를 부가하고, 그 다음 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 29 mg (이론의 73%)의 Boc-보호된 중간체 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.43 분; m/z = 921 (M+H)+.
29 mg의 이러한 중간체를 6 mL의 디클로로메탄에서 1 mL의 트리플루오로아세트산으로 처리하여 Boc 보호 그룹을 분리했다. 농축 및 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 30 mg (정량적)의 유리 아민 중간체 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.95 분; m/z = 821 (M+H)+.
그 다음 17 mg (0.018 mmol)의 이러한 중간체를, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 13 mg (이론의 80%)의 표제 화합물을 무색 폼 형태로 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.97 분; MS (ESIpos): m/z = 907 (M+H)+.
중간체 80
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00383
먼저, 중간체 74에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 N-벤질-L-트립토판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 47)의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리로, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 10 mg (0.01 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 2.5 mg (이론의 26%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.13 분; MS (ESIpos): m/z = 946 (M+H)+.
중간체 81
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-카바모일-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00384
먼저, 중간체 74에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복사마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 48)의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-카바모일-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 14 mg (0.0163 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 8 mg (이론의 57%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.64 분; MS (ESIpos): m/z = 829 (M+H)+.
중간체 82
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00385
먼저, 중간체 69에 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4) 및 N α -{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-트립토판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 49)의 커플링 및 피페리딘에 의한 Fmoc 보호 그룹의 차후의 분리로, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 78 mg (0.088 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 68 mg (이론의 90%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.49 분; MS (ESIpos): m/z = 856 (M+H)+.
중간체 83
N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00386
이 화합물을 20 mg (26 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트로부터 진행하는 중간체 82에서의 화합물과 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 제조했다.
수율: 5 mg (이론의 25%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.72 분; MS (ESIpos): m/z = 884 (M+H)+.
중간체 84
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(모폴린-4-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00387
먼저, 중간체 79에서 기재된 합성과 유사하게, EDC 및 HOBT의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 46) 및 모폴린의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(모폴린-4-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 30 mg (0.033 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 22 mg (이론의 76%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.58 분; MS (ESIpos): m/z = 887 (M+H)+.
중간체 85
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(벤질아미노)-3-하이드록시-1-옥소부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00388
먼저, 중간체 79에서 기재된 합성과 유사하게, HATU의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 46) 및 N-벤질-L-트레오닌아마이드 트리플루오로아세테이트의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(벤질아미노)-3-하이드록시-1-옥소부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 21 mg (0.024 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 20 mg (이론의 97%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.54 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.49 분; MS (ESIpos): m/z = 861 (M+H)+.
중간체 86
4-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)아미노}-3-메틸부탄-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일](메틸)아미노}부탄산
Figure pct00389
먼저, 중간체 74에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 tert -부틸-L-페닐알라니네이트 하이드로클로라이드의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리로 tert -부틸 에스테르 (디클로로메탄 중 트리플루오로아세트산과 40분 동안 교반)를 얻고, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 22 mg (0.02 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 16 mg (이론의 94%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.05 분; MS (ESIpos): m/z = 874 (M+H)+.
중간체 87
4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)아미노}-3-메틸부탄-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일](메틸)아미노}부탄산
Figure pct00390
이 화합물을 3 단계에 걸처 230 mg (336 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 tert-부틸-L-트립토파네이트 하이드로클로라이드로부터 진행하는 중간체 86에서 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 95 mg (3 단계에 걸쳐 이론의 31%)
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.05 분; MS (ESIpos): m/z = 913 (M+H)+.
중간체 88
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00391
먼저, 중간체 69에 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4) 및 N α -{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-트립토판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 49)의 커플링 및 피페리딘에 의한 Fmoc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 30 mg (0.03 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 화합물의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 벤질 6-하이드록시헥실 카바메이트의 산화에 의해 미리 수득한 벤질 6-옥소헥실 카바메이트과 반응시켜 사용하여, 17 mg (이론의 45%)의 Z-보호된 화합물을 얻엇다. 차후에, 10% 팔라듐/활성탄 상에서 메탄올 중 수소첨가분해로 표제 화합물을 수득했다.
수율: 14 mg (이론의 95%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.73 분; MS (ESIpos): m/z = 869 (M+H)+.
중간체 89
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00392
먼저, 중간체 86에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 tert -부틸-L-트립토파네이트 하이드로클로라이드의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리로 tert -부틸 에스테르 (30 분 동안 1:10 트리플루오로아세트산/디클로로메탄과 함께 교반)로 얻고, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 71 mg (0.075 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 화합물의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 벤질 6-하이드록시헥실 카바메이트의 산화로 미리 수득한 벤질 6-옥소헥실 카바메이트와의 반응으로 사용하여, 35 mg (이론의 44%)의 Z-보호된 화합물을 수득했다. 차후에, 10% 팔라듐/활성탄 상에서 메탄올 중 수소첨가분해로 표제 화합물을 수득했다.
수율: 30 mg (이론의 98%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.77 분; MS (ESIpos): m/z = 926 (M+H)+.
중간체 90
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00393
먼저, 중간체 74에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 2-(1H-인돌-3-일)에탄아민의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 100 mg (0.119 mmol)의 이 화합물을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 50 mg (이론의 49%)의 표제 화합물을 수득했다. 표제 화합물을 용출물로서 디클로로메탄/메탄올/17% 암모니아를 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 여기에서 정제하고, 이 과정에서 혼합 비는 초기에 15/2/02로부터 15/4/0.5로 교환되었다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 813 (M+H)+.
중간체 91
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-{(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-[(2-페닐에틸)아미노]프로필}피롤리딘-1-일]-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일}-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00394
먼저, 중간체 74에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 페닐에틸아민의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-{(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-[(2-페닐에틸)아미노]프로필}피롤리딘-1-일]-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일}-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 57 mg (0.071 mmol)의 이 화합물을 used, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 44 mg (이론의 80%)의 표제 화합물을 수득했다. 표제 화합물은 용출물로서 디클로로메탄/메탄올/17% 암모니아을 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 여기에서 또한 정제될 수 있다 (15/2/02 → 15/4/0.5).
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.64 분; MS (ESIpos): m/z = 774 (M+H)+.
중간체 92
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00395
100 mg (0.139 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 40)을, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산과의 반응으로 사용하여, 94 mg (이론의 84%)의 표제 화합물을 수득했다. 표제 화합물을 분취 HPLC로 정제했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.46 분; MS (ESIpos): m/z = 804 (M+H)+.
중간체 93
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00396
22.4 mg (24 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트를 1.4 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산의 15% 수용액과 반응시켰다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 8.2 mg (이론의 38%)의 표제 화합물을 백색 고형물 형태로 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.54 분
LC-MS (방법 12): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 919 (M+H)+
중간체 94
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00397
17.1 mg (18 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트를 1.1 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산의 15% 수용액과 반응시켰다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 14.8 mg (이론의 89%)의 표제 화합물을 백색 고형물 형태로 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.54 분;
LC-MS (방법 12): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 919 (M+H) +
중간체 95
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00398
19.3 mg (20 μmol) N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트를 1.2 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산의 15% 수용액과 반응시켰다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 8.6 mg (이론의 45%)의 표제 화합물을 고형물 형태로 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 943 (M+H) +
중간체 96
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00399
15.5 mg (10 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트를 1.0 mL의 디옥산/물에서 용해시키고, 중간체 61의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 4-옥소부탄산의 15% 수용액과 반응시켰다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 10.3 mg (이론의 68 %)의 표제 화합물을 백색 고형물 형태로 수득했다.
HPLC (방법 10): Rt = 2.59 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 877 (M+H) +
중간체 97
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00400
표제 화합물을, 200 mg (0.108 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 16)와 벤질 3-옥소헥실 카바메이트와의 반응 및 (용매로서 메탄올 중 촉매로서 5% 목탄상 팔라듐을 갖는) Z 보호 그룹의 차후의 수소첨가분해 분리로 중간체 66의 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 69 mg (2 단계에 걸처 이론의 65%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.76 분; MS (ESIpos): m/z = 912 (M+H)+.
중간체 98
N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00401
이 화합물을 중간체 80에서 기재된 합성과 유사하게 제조했다. 정제를 분취 HPLC에 의해 효과가 생겼다.
수율: 40 mg (3 단계에 걸쳐 이론의 29%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 974 (M+H)+.
중간체 99
(2S)-2-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)프로판-1-온 트리플루오로아세테이트
Figure pct00402
324 mg (0.81 mmol)의 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 N-(tert-부톡시카보닐)-L-트립토파네이트를 20 mL의 DMF에서 용해시키고, 200 mg (1.62 mmol)의 1,2-옥사지난 하이드로클로라이드 (개시 화합물 5) 및 850 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 반응 혼합물을 교반된 at 50 ℃ 밤새 및 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 디클로로메탄에서 취하고 추출된 물로. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축했다. 잔여물을 4:1 디클로로메탄/에틸 아세테이트를 용출물로서 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 생성물 분획을 농축하고 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이로써 147.5 mg (이론의 48 %)의 Boc-보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.03 분; MS (ESIpos): m/z = 374 (M+H)+.
166 mg (444.5 μmol)의 이러한 중간체를, 표준 조건 하에서 20 mL의 디클로로메탄 중 3 mL의 트리플루오로아세트산과 함께 사용하여, Boc 보호 그룹을 분리하고, HPLC 정제 후, 155 mg (이론의 86 %)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.43 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.56 분; MS (ESIpos): m/z = 274 (M+H)+.
중간체 100
N-(6-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00403
177 mg (260 μmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 100 mg (260 μmol)의 (2S)-2-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)프로판-1-온 트리플루오로아세테이트 (중간체 99)을 15 ml의 DMF에서 취하고 118 mg (310 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 140 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 170 mg (이론의 68 %)의 Boc-보호된 중간체를 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.36 분; m/z = 940 (M+H)+.
170 mg의 이러한 중간체를 30 ml의 디클로로메탄 중 3 ml의 트리플루오로아세트산으로 30 분 동안 처리하여 Boc 보호 그룹을 분리했다. 그 다음 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제하여 155 mg (이론의 86 %)의 탈보호된 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.85 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 840 (M+H)+.
그 다음 50 mg (0.052 mmol)의 이러한 중간체를, 중간체 97의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 벤질 3-옥소헥실 카바메이트와 함께 사용하고 (용매로서 메탄올 중 촉매로서 5% 목탄상 팔라듐을 갖는) Z 보호 그룹의 차후의 수소첨가분해 분리하여, 표제 화합물을 제조했다.
수율: 21 mg (이론의 37%)
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.02 분; MS (ESIpos): m/z = 1073 (M+H)+.
중간체 101
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00404
26.7 mg (24.87 μmol)의 중간체 100을 10 ml의 메탄올에서 용해시키고 팔라듐/활성탄 (5%) 상에서 표준 수소 압력 하에서 30분 동안 수소부가했다 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 증발 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 22.5 mg (이론의 96%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.76 분; MS (ESIpos): m/z = 939 (M+H)+.
중간체 102
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(모폴린-4-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00405
이 화합물을 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(모폴린-4-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 8 mg (이론의 71%)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 1094 (M+H)+.
중간체 103
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(벤질아미노)-3-하이드록시-1-옥소부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00406
이 화합물을 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(벤질아미노)-3-하이드록시-1-옥소부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 3 mg (이론의 22%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.78 분; MS (ESIpos): m/z = 1069 (M+H)+.
중간체 104
N-{4-[(트랜스-4-{[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]카보닐}사이클로헥실)아미노]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00407
먼저, 벤질 트랜스-4-아미노사이클로헥산카복실레이트 트리플루오로아세테이트를 Boc 보호 그룹, 그 다음 벤질 에스테르 보호 그룹을 도입하고 차후에 종래의 펩타이드 화학 방법으로 Boc 보호 그룹을 분리하여 트랜스-4-아미노사이클로헥산카복실산으로부터 제조했다.
그 다음 15 mg (18 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 5 ml의 디메틸포름아마이드에서 용해시키고 차후에 13 mg (35 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 9 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 15 mg (44 μmol)의 벤질 트랜스-4-아미노사이클로헥산카복실레이트 트리플루오로아세테이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 증발 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 14.7 mg (이론의 78%)의 보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.95 분; MS (ESIpos): m/z = 1072 (M+H)+.
이 보호된 중간체로부터, 벤질 에스테르를 먼저 수소첨가분해 수단으로 제거하고 유리 카복실 성분을 정량적 수율로 수득했다. 14 mg (14 μmol; 1 당량)의 상기 탈보호된 화합물을 5 ml의 DMF에서 취하고 4.1 mg (21 μmol; 1.5 당량)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 7.5 μl (44 μmol; 3.1 당량)의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 0.9 mg (7 μmol; 0.5 당량)의 4-디메틸아미노피리딘의 존재에서 3.3 mg (29 μmol; 2.1 당량)의 N-하이드록시석신이마이드과 혼합하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 또 하나의 10 당량의 N-하이드록시석신이마이드, 5 당량의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 5 당량의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 0.5 당량의 4-디메틸아미노피리딘을 부가하고 반응 혼합물을 초음파 배쓰에서 5시간 동안 처리하고. 차후에, 용매를 증발 제거하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제하고 상응하는 분획을 조합하고, 농축했다. 디옥산으로부터 잔여물의 동결건조 후, 9.7 mg (이론의 62%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.77 분; MS (ESIpos): m/z = 1078 (M+H)+.
중간체 105
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00408
이 화합물을, 4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)아미노}-3-메틸부탄-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일](메틸)아미노}부탄산 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 진행하여 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다. 에스테르 중간체를 42% 수율로 수득했다. 제2 단계에서, 6 mg (6 μmol)의 이러한 중간체를 트리플루오로아세트산 및 tert-부틸 에스테르로 절단했다. HPLC 정제 후, 3.4 mg (이론의 48 %)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.66 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.04 분; MS (ESIpos): m/z = 1025 (M+H)+.
중간체 106
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00409
14 mg (16 μmol)의 N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 87)을 750 μl의 디옥산에서 취하고 1.5 ml의 포화된 탄산수소나트륨 용액 및 그 다음 3.2 mg (21 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 5.5 mg (이론의 36%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.84 분; MS (ESIpos): m/z = 949 (M+H)+.
중간체 107
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00410
38 mg (47 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 37 ml의 DMF에서 용해시키고 그 다음 71 mg (187 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 33 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 37 mg (140 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 고진공 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 12.2 mg (이론의 26%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 1020 (M+H)+.
중간체 108
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-{(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-[(2-페닐에틸) 아미노]프로필}피롤리딘-1-일]-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일}-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00411
화합물을 중간체 107와 유사하게 제조했다.
수율: 2.5 mg (이론의 30%)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 981 (M+H)+.
중간체 109
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00412
화합물을 중간체 92의 화합물로부터 중간체 107과 유사하게 제조했다.
수율: 35 mg (이론의 65 %)
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.76 분; MS (ESIpos): m/z = 1011 (M+H)+.
중간체 110
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00413
이 화합물을 중간체 83의 화합물로부터 중간체 147과 유사하게 제조했다.
수율: 2.4 mg (이론의 24%)
HPLC (방법 6): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 981 (M+H)+.
중간체 111
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-1-메틸히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00414
이 화합물을 중간체 82 및 중간체 22로부터 중간체 140과 유사하게 제조했다.
수율: 6.5 mg (이론의 51%)
HPLC (방법 6): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 4.71 분; MS (ESIpos): m/z = 1077 (M+H)+.
중간체 112
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-카바모일-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00415
이 화합물을 중간체 81의 화합물로부터 중간체 157과 유사하게 제조했다.
수율: 5.7 mg (이론의 57%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 1036 (M+H)+.
중간체 113
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00416
95 mg (104 μmol)의 4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸)아미노}-3-메틸부탄-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일](메틸)아미노}부탄산을 DMF에서 용해시키고 그 다음 79.5 mg (209 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 73 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 68 mg (261 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 고진공 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 표제 화합물의 104 mg (이론의 89%)의 tert-부틸 에스테르을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.93 분; MS (ESIpos): m/z = 1121 (M+H)+.
중간체를 33.4 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 17 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다.
따라서, 61 mg (이론의 62%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1064 (M+H)+.
중간체 114
N-[6-({[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸]카바모일}아미노)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00417
5 mg (5 μmol)의 N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 885 μl의 DMF에서 취하고 5.3 mg (8 μmol)의 4-니트로페닐 2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸 카바메이트 및 2.8 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고 그 다음 농축 건조했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다.
수율: 0.58 mg (이론의 11%)의 무색 폼
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.83 분; MS (ESIpos): m/z = 1035 (M+H)+.
중간체 115
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00418
이 화합물을 8 mg (9 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드로부터 진행하여 중간체 147의 화합물과 유사하게 제조했다. 농축 후, 활성화된 에스테르를 분취 HPLC로 정제하고, 용매 감압 하에서 용매의 제거 후, 항체와 즉각적으로 반응시켰다.
수율: 3 mg (이론의 27%) (가수분해-민감성)
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 996 (M+H)+.
중간체 116
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00419
이 화합물을 5 mg (6 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드로부터 진행하여 중간체 147의 화합물과 유사하게 제조했다. 농축 후, 활성화된 에스테르를 분취 HPLC로 정제하고, 용매 감압 하에서 용매의 제거 후, 항체와 즉각적으로 반응시켰다.
수율: 3.2 mg (이론의 43%) (가수분해-민감성)
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 984 (M+H)+.
중간체 117
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00420
이 화합물을 중간체 86의 화합물로부터 중간체 157과 유사하게 제조했다.
수율: 7 mg (이론의 42%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 1081 (M+H)+.
중간체 118
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2R)-1-(벤질옥시)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00421
표적 화합물을 중간체 68의 7 mg (7.8 μmol)의 화합물로부터 중간체 157과 유사하게 제조했다. 수율: 6.3 mg (이론의 53%)
LC-MS (방법 1): Rt = 1.00 분; MS (ESIpos): m/z = 1102 (M+H)+.
중간체 119
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00422
7.4 mg (8.1 mmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 6.3 mg (24.2 mmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드 하이드로클로라이드를 커플링하고 중간체 157와 유사하게 워크업했다. 1.6 mg (이론의 13%)의 표제 화합물을 고형물로서 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.89 분; MS (ESIpos): m/z = 1126 (M+H) +
중간체 120
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00423
12.8 mg (13.9 mmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1R)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 10.9 mg (41.8 mmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드 하이드로클로라이드를 커플링하고 중간체 157와 유사하게 워크업했다. 10.8 mg (이론의 59%)의 표제 화합물을 고형물로서 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.90 분; MS (ESIpos): m/z = 1126 (M+H) +
중간체 121
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00424
7.4 mg (7.9 mmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질설포닐)-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 6.2 mg (23.5 mmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드 하이드로클로라이드를 커플링하고 중간체 157와 유사하게 워크업했다. 6.9 mg (이론의 74%)의 표제 화합물을 고형물로서 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 1150 (M+H) +
중간체 122
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3 E )-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00425
8 mg (9.1 mmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 7.2 mg (27.4 mmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드 하이드로클로라이드를 커플링하고 중간체 157와 유사하게 워크업했다. 8.2 mg (이론의 82%)의 표제 화합물을 백색 고형물로서 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.95 분; MS (ESIpos): m/z = 1083 (M+H) +
중간체 123
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00426
30 mg (30 μmol)의 중간체 89를 2 ml의 1,4-디옥산에서 취하고 4 ml의 포화된 탄산수소나트륨 용액 및 그 다음 7.5 mg (50 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 24 mg (이론의 74%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; MS (ESIpos): m/z = 1006 (M+H)+.
중간체 124
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00427
22 mg (20 μmol)의 중간체 123을 실온에서 1시간 동안 8 ml의 디클로로메탄 중 4 ml의 트리플루오로아세트산과 반응시켰다. 그 후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 11 mg (이론의 84%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 950 (M+H)+.
중간체 125
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00428
22.5 mg (20 μmol)의 중간체 101을 2 ml의 1:1 디옥산/물에서 취하고 그 다음 5.6 mg (40 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트 및 0.25 ml의 포화된 탄산수소나트륨 용액과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 그 다음 또 하나의 0.25 ml의 포화된 탄산수소나트륨 용액을 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 15 분 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 12.8 mg (이론의 50%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.95 분; MS (ESIpos): m/z = 1019 (M+H)+.
중간체 126
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00429
64 mg (70 μmol)의 N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 97)을 3 ml의 1:1 디옥산/물에서 취하고, 그 다음 4 ml의 포화된 탄산수소나트륨 용액으로 pH 9로 조정하고 차후에 16.3 mg (110 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 그 다음 또 하나의 8 mg (55 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트를 부가하고, 반응 혼합물을 pH 9로 조정하고 실온에서 추가 시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 먼저, 31 mg의 아직 고리화되지 않은 중간체를 수득했다. 27 mg의 이러한 중간체를 2 ml의 1:1 디옥산/물에서 취하고 그 다음 250 μl의 포화된 탄산수소나트륨 용액과 혼합했다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 20 mg (이론의 29%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.96 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 992 (M+H)+.
중간체 127
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00430
17 mg (18 μmol)의 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 98)을 2.8 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 20 mg (174 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 그 다음 10 mg (52 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 0.21 mg (0.17 μmol)의 DMAP와 혼합했다. 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 8.2 mg (이론의 43%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.98 분; MS (ESIpos): m/z = 1071 (M+H)+.
중간체 128
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00431
5 mg (5.6 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 845 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 3.2 mg (17 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 2.6 mg (17 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 1.96 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 5.9 mg (22.5 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 2.2 mg (이론의 36%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.88 분; MS (ESIpos): m/z = 1094 (M+H)+.
중간체 129
N-(6-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00432
4 mg (4.3 μmol)의 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 646 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 2.5 mg (13 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 2.0 mg (13 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 2.25 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 4.5 mg (17 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 1.9 mg (이론의 39%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.9 분; MS (ESIpos): m/z = 1134 (M+H)+.
중간체 130
N-(4-{[(2R)-1-({5-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-5-옥소펜타노일}아미노)프로판-2-일]옥시}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00433
10.5 mg (11.7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 3.7 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 그 다음 6.7 mg (35 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 0.7 mg (5.8 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘 및 8.2 mg (47 μmol)의 상업적으로 이용가능한 tert -부틸 (2R)-2-하이드록시프로필 카바메이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 7.5 mg (이론의 61%)의 Boc-보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.03 분; MS (ESIpos): m/z = 1056 (M+H)+.
차후에, Boc 보호 그룹을 트리플루오로아세트산으로 분리했다. 그 다음 4.9 mg (0.005 mmol)의 탈보호된 조 생성물을, 추가 정제없이, 1.8 ml의 디클로로메탄에서 취하고 3.7 mg (0.011 mmol)의 1,1'-[(1,5-디옥소펜탄-1,5-디일)비스(옥시)]디피롤리딘-2,5-디온, 2.4 μl (0.014 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 0.6 mg (5 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 0.77 mg (이론의 15%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.93 분; MS (ESIpos): m/z = 1167 (M+H)+.
중간체 131
N-{4-[(1-{5-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-5-옥소펜타노일}피페리딘-4-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00434
10 mg (11 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 2 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 그 다음 4.3 mg (22 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 0.88 mg (6 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘 및 5.2 mg (22 μmol)의 상업적으로 이용가능한 벤질 4-하이드록시피페리딘-1-카복실레이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 5 mg (이론의 40%)의 Z-보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.04 분; MS (ESIpos): m/z = 1116 (M+H)+.
차후에, Z 보호 그룹을 팔라듐/활성탄 상에서 에탄올 중 수소첨가분해 수단으로 분리했다. 그 다음 4.6 mg (0.005 mmol)의 탈보호된 조 생성물을, 추가 정제없이, 1.8 ml의 디클로로메탄에서 취하고 3.8 mg (0.012 mmol)의 1,1'-[(1,5-디옥소펜탄-1,5-디일)비스(옥시)]디피롤리딘-2,5-디온, 0.8 μl (0.005 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 0.6 mg (5 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 0.96 mg (이론의 16%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 1193 (M+H)+.
중간체 132
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지닐}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00435
15 mg (16.7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 2500 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 9.6 mg (50 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 7.6 mg (50 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 5.8 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 17.4 mg (67 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 11.2 mg (이론의 52%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.09 분; MS (ESIpos): m/z = 1106 (M+H)+.
중간체 133
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지닐}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00436
5.8 mg (6.3 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 943 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 3.6 mg (19 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 2.9 mg (19 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 2.2 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 6.6 mg (25 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 4.5 mg (이론의 64%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.03 분; MS (ESIpos): m/z = 1129 (M+H)+.
중간체 134
N-[3-({[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸]카바모일}아미노)프로필]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00437
먼저, 4-니트로페닐 2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸 카바메이트를 상업적으로 이용가능한 1-(2-아미노에틸)-1H-피롤-2,5-디온 트리플루오로아세테이트 및 4-니트로페닐 클로로카보네이트로부터 진행하여 표준 조건 하에서 제조했다.
5 mg (6 μmol)의 N-(3-아미노프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 1000 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 2 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 2.2 mg (9 μmol)의 4-니트로페닐 2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸 카바메이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 1.6 mg (이론의 23%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.09 분; MS (ESIpos): m/z = 1036 (M+H)+.
중간체 135
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00438
10 mg (11 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 4000 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 6.3 mg (33 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 4.5 mg (33 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 5.7 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 11.5 mg (44 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 2.6 mg (이론의 14%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; MS (ESIpos): m/z = 1115 (M+H)+.
중간체 136
N-(4-{4-[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부타노일]피페라진-1-일}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00439
먼저, 1-[4-옥소-4-(피페라진-1-일)부틸]-1H-피롤-2,5-디온 트리플루오로아세테이트를 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 및 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄산로부터 진행하여 표준 조건 하에서 2 단계에 걸쳐 제조했다.
5 mg (5.6 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 1000 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 2.1 mg (11 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 1.7 mg (11 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 2 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 3.5 mg (5.6 μmol)의 1-[4-옥소-4-(피페라진-1-일)부틸]-1H-피롤-2,5-디온 트리플루오로아세테이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 2.1 mg (5.6 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N', N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트를 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 3 시간 동안 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 농축하고, 물로부터 동결건조하여, 0.6 mg (이론의 10%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 1132 (M+H)+.
중간체 137
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-1-메틸히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00440
먼저, 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N'-메틸헥산하이드라자이드 트리플루오로아세테이트를 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산산 및 tert -부틸 1-메틸하이드라진카복실레이트로부터 진행하여 표준 조건 하에서 2 단계에 걸쳐 제조했다.
6.9 mg (8 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 2540 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 3.6 mg (9 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N', N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 3 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 4.1 mg (12 μmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N'-메틸헥산하이드라자이드 트리플루오로아세테이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 3.9 mg (이론의 45%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.93 분; MS (ESIpos): m/z = 1108 (M+H)+.
중간체 138
N-{4-[(2-{[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부타노일](메틸)아미노}에틸)(메틸) 아미노]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00441
tert - 부틸메틸 2-(메틸아미노)에틸 카바메이트 및 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄산으로부터, 2 단계에 걸쳐, 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N-메틸-N-[2-(메틸아미노)에틸]부탄아마이드 트리플루오로아세테이트를 먼저 제조했다.
6.6 mg (7.3 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 2000 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 5.6 mg (14.7 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 2.6 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 4.1 mg (9 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N-메틸-N-[2-(메틸아미노)에틸]부탄아마이드 트리플루오로아세테이트와 혼합했다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 동일한 양의 HATU 및 N,N-디이소프로필에틸아민을 다시 한번 부가하고, 그 다음 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 4 mg (이론의 44%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.91 분; MS (ESIpos): m/z = 1134 (M+H)+.
중간체 139
(2R,3S)-3-아미노-4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부탄-2-일 (3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-7,10-디이소프로필-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오에이트
Figure pct00442
13 mg (14.7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 10 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 그 다음 8.4 mg (44 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 5.4 mg (44 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘 및 9 mg (29.3 μmol)의 상업적으로 이용가능한 벤질 N-(tert-부톡시카보닐)-L-트레오니네이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 물과 함께 흔들어서 2회 추출하고 유기 상을 나트륨 설페이트 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 14 mg (이론의 81%)의 보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.3 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.13 분; MS (ESIpos): m/z = 1178 (M+H)+.
차후에, Z 보호 그룹을 10% 팔라듐/활성탄 상에서 메탄올 중 수소첨가분해 수단으로 분리했다. 그 다음 9.5 mg (0.0087 mmol)의 탈보호된 조 생성물을, 추가 정제없이, 5 ml의 DMF에서 취하고, 5 mg (26.2 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 4 mg (26.2 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 54.6 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 9.1 mg (34.9 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 9.5 mg (이론의 84%)의 Boc-보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 1295 (M+H)+.
차후에, 9.5 mg (7.3 μmol)을 Boc-보호된 중간체의 2 ml의 디클로로메탄 중 0.5 ml의 트리플루오로아세트산으로 탈보호하고, 디옥산으로부터 동결건조한 후, 9 mg (이론의 82%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.84 분; MS (ESIpos): m/z = 1195 (M+H)+.
중간체 140
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-1-메틸히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00443
4.1 mg (12 μmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N'-메틸헥산하이드라자이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 22)을 2.5 ml의 DMF에서 중간체 61로부터의 6.9 mg (8 μmol)의 화합물과 함께 용해시키고 그 다음 3.5 mg (9 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 3 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 2.6 mg (이론의 30%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.90 및 0.91 분; MS (ESIpos): m/z = 1120 (M+H)+.
중간체 141
N-[4-({1-[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부타노일]피페리딘-4-일}옥시)-4-옥소부틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00444
44 mg (49 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 2 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 그 다음 18.8 mg (98 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 3.8 mg (24 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘 및 23 mg (98 μmol)의 상업적으로 이용가능한 벤질 4-하이드록시피페리딘-1-카복실레이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 22 mg (이론의 40%)의 Z-보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.04 분; MS (ESIpos): m/z = 1116 (M+H)+.
차후에, Z 보호 그룹을 팔라듐/활성탄 상에서 에탄올 중 수소첨가분해 수단으로 분리했다.
그 다음 19 mg (19 μmol)의 탈보호된 조 생성물을, 추가 정제없이, 4 ml의 DMF에서 취하고 7 mg (39 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄산, 11 mg (29 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 5 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 7.5 mg (이론의 34%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 1147 (M+H)+.
중간체 142
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00445
9 mg (9.5 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 72)을 1000 μl의 DMF에서 용해시키고 그 다음 10 mg (38 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드, 7.2 mg (19 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 8 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 차후에, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 농축하고, 동결건조하여, 6.4 mg (이론의 58%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.99 분; MS (ESIpos): m/z = 1154 (M+H)+.
중간체 143
N-(4-{2-[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부타노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00446
6 mg (6.7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 61)을 중간체 142와 유사하게 3 mg (8.7 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부탄하이드라자이드 트리플루오로아세테이트와 반응시켜서 2 mg (이론의 27%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 3): Rt = 1.92 분; MS (ESIpos): m/z = 1106 (M+H)+.
중간체 144
N-(4-{2-[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부타노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00447
1 ml의 DMF 중 5 mg (5.6 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에 7.65 mg (22.5 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부탄하이드라자이드 트리플루오로아세테이트, 3.2 mg (16.9 μmol)의 EDC, 1.96 μl (11.3 μmol)의 디이소프로필에틸아민 및 2.6 mg (16.9 μmol)의 HOBT을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 차후에, 추가 0.95 mg (2.8 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-2,2-디메틸부탄하이드라자이드 트리플루오로아세테이트를 부가했다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 농축하고 분취 HPLC로 정제했다. 3.5 mg (85% 순도, 이론의 48%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 3): Rt = 1.86 분; m/z = 1094 (M+H)+.
중간체 145
N-[3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로필]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐 사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00448
12 mg (14 μmol)의 N-(3-아미노프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 66)을 750 μl의 디옥산에서 취하고 1.5 ml의 포화된 탄산수소나트륨 용액 및 그 다음 3.2 mg (21 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 4.2 mg (이론의 32%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 950 (M+H)+.
중간체 146
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[벤질(메틸)아미노]-1-옥소-3-페닐프로판-2-일}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00449
9 mg (9.8 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[벤질(메틸)아미노]-1-옥소-3-페닐프로판-2-일}아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 73)을 중간체 133과 유사하게 10 mg (39 μmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 반응시켜 1.8 mg (이론의 15%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 5.11 분; MS (ESIpos): m/z = 1128 (M+H)+.
중간체 147
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00450
16 mg (17 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 70)을 2 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 2.6 mg (23 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 그 다음 4 mg (21 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드와 혼합했다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 동일한 양의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드를 다시 한번 부가했다. 그 다음 실온에서 밤새 교반하고, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 10 mg (이론의 56%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
중간체 148
N-{4-[(2-{[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부타노일](메틸)아미노}에틸)아미노]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00451
6 mg (7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 61)을 2 ml의 DMF 중 2.8 mg (8 μmol)의 N-(2-아미노에틸)-4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N-메틸부탄아마이드 트리플루오로아세테이트, 10.1 mg (27 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 5 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 조합시키고 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 또 하나의 5 mg (23.5 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 3 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 실온에서 추가 5 시간 동안 교반한 후, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 농축하고, 디옥산으로부터 동결건조하여, 1.3 mg (이론의 15%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.21 분; MS (ESIpos): m/z = 1120 (M+H)+.
중간체 149
N-{4-[(2-{[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부타노일]아미노}에틸)(메틸)아미노]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00452
6 mg (7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 61)을 2 ml의 DMF 중 3.1 mg (9 μmol)의 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-N-[2-(메틸아미노)에틸]부탄아마이드 트리플루오로아세테이트, 10.1 mg (27 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 및 5 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 조합시키고, 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반했다. 그 다음 용매를 감압 하에서 제거하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 농축하고, 디옥산으로부터 동결건조하여, 1 mg (이론의 13.4%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.89 분; MS (ESIpos): m/z = 1121 (M+H)+.
중간체 150
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S,2R)-2-페닐-1-(프로필카바모일)사이클로프로필]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00453
7.9 mg (9 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S,2R)-2-페닐-1-(프로필카바모일)사이클로프로필] 아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 3 ml의 DMF에서 용해시키고 그 다음 10.4 mg (54 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 8.3 mg (54 μmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트, 9 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 9.5 mg (36 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 4.3 mg (이론의 22%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.93 분; MS (ESIpos): m/z = 1078 (M+H)+.
중간체 151
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-카바모일-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00454
화합물을, 중간체 81의 화합물로부터 진행하여 중간체 150과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 1036 (M+H)+.
중간체 152
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(에톡시카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00455
10 mg (12 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(에톡시카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 3 ml의 DMF에서 용해시키고 그 다음 8.9 mg (23 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 10 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 12 mg (47 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 고진공 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 5.8 mg (이론의 37%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.99 분; MS (ESIpos): m/z = 1066 (M+H)+.
중간체 153
N-[1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-12,15-디옥소-3,6,9-트리옥사-13,14-디아자옥타데칸-18-일]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00456
1 ml의 DMF 중 5 mg (5.6 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에 9.7 mg (22.5 μmol)의 3-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)프로판하이드라자이드 트리플루오로아세테이트, 3.2 mg (16.9 μmol)의 EDC, 1.96 μl (11.3 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 2.6 mg (16.9 μmol)의 HOBT을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 차후에, 추가 1.2 mg (2.8 μmol)의 3-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)프로판하이드라자이드 트리플루오로아세테이트를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다.
3.6 mg (이론의 51%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.90 분; m/z = 1185 (M+H)+.
중간체 154
(2R,3S)-3-아미노-4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부탄-2-일 (3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-7,10-디이소프로필-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오에이트
Figure pct00457
15 mg (17 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 10 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 그 다음 12.8 mg (67 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 10 mg (83 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘 및 10.3 mg (33 μmol)의 상업적으로 이용가능한 벤질 N-(tert-부톡시카보닐)-L-트레오니네이트와 혼합했다. 혼합물을 4시간 동안 가열 환류했다. 그 다음 동일한 양의 커플링 시약 및 4-디메틸아미노피리딘을 다시 부가하고 반응 혼합물을 환류 하에서 밤새 가열했다. 차후에, 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 물로 한번 흔들어서 추출하고, 유기 상을 제거하고 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 7.7 mg (이론의 37%)의 보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.5 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.13 분; MS (ESIpos): m/z = 1190 (M+H)+.
차후에, 벤질 에스테르 보호 그룹을 10% 팔라듐/활성탄 상에서 메탄올 중 표준 수소 압력 하에서 수소화로 제거하고, 이렇게 수득한 산을, 중간체 151에서 기재된 바와 같이, 내지 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드과 결합시켰다. 마지막 단계에서, Boc 보호 그룹을 트리플루오로아세트산으로 분리했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 0.22 mg (3 단계에 걸쳐 이론의 2.5%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.81 분; MS (ESIpos): m/z = 1207 (M+H)+.
중간체 155
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00458
이 화합물을 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 152에서 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.82 분; MS (ESIpos): m/z = 1024 (M+H)+.
중간체 156
N-(3-{[(1-{[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]카보닐}사이클로프로필)카보닐]아미노}프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00459
이 화합물을 N-(3-아미노프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상응하는 디카복실산으로부터 미리 수득한 1,1'-[사이클로프로판-1,1-디일비스(카보닐옥시)]디피롤리딘-2,5-디온로부터 중간체 131의 마지막 단계에서 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 1080 (M+H)+.
중간체 157
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00460
15 mg (18 μmol)의 (N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 3.8 ml의 DMF에서 용해시키고 그 다음 27 mg (70 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 12 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 14 mg (53 μmol)의 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 고진공 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 6.2 mg (이론의 33%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 1063 (M+H)+.
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6 , 특징적인 신호): δ = 10.8 (d, 1H), 9.8-9.7 (m, 2H), 9.6 및 9.4 (2m, 1H), 8.9, 8.88, 8.78 및 8.75 (4d, 1H), 8.08 및 7.85 (2d, 1H), 7.6-6.9 (m, 9H), 4.7-4.4 (m, 3H), 3.4 (t, 2H), 3.23, 3.2, 3.18, 3.0, 및 2.99 (5s, 9H), 2.8 (m, 3H), 2.1 (t, 2H), 1.06 및 1.01 (2d, 3H), 0.95-0.8 (m, 15H), 0.8-0.75 (dd, 3H).
중간체 158
N-[4-({(2R)-1-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-메틸-1-옥소펜타n-2-일}아미노)-4-옥소부틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00461
13 mg (14.7 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 4 ml의 디메틸포름아마이드에서 용해시키고 그 다음 9.4 mg (25 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 6 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 7 mg (31 μmol)의 상업적으로 이용가능한 tert -부틸 D-류시네이트 하이드로클로라이드 트리플루오로아세테이트와 혼합했다. 혼합물을 실온에서 5 시간 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 6.5 mg (이론의 49%)의 보호된 중간체를 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.21 분; MS (ESIpos): m/z = 1076 (M+H)+.
디클로로메탄 중 트리플루오로아세트산을 먼저 사용하여 Boc 보호 그룹을 이 보호된 중간체로부터 분리하여, 6.2 mg (이론의 99 %)의 탈보호된 화합물을 얻었다. 5.2 mg (5 μmol)의 이러한 중간체를 1.5 ml의 디클로로메탄에서 취하고 1.2 mg (6 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 0.16 mg (1 μmol)의 4-디메틸아미노피리딘의 존재에서0.8 mg (7 μmol)의 N-하이드록시석신이마이드와 반응시켰다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축하고 분취 HPLC로 정제했다. 1.3 mg의 표제 화합물을 수득했고, 이것의 일부는 반응물로 가수분해되었다.
중간체 159
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00462
이 화합물을 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 6 mg (이론의 53%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 1114 (M+H)+.
중간체 160
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00463
이 화합물을 20 mg (21 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질아미노)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 13 mg (이론의 52%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 1153 (M+H)+.
중간체 161
N-(6-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00464
이 화합물을 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 0.8 mg (이론의 16%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.78 분; MS (ESIpos): m/z = 1092 (M+H)+.
중간체 162
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00465
18 mg (20 μmol)의 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필] 아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 64)을 3.2 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 22 mg (190 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 그 다음 11 mg (60 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 0.24 mg (0.17 μmol)의 DMAP와 혼합했다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 또 하나의 22 mg (190 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온, 11 mg (60 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 0.24 mg (0.17 μmol)의 DMAP를 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 8.2 mg (이론의 41%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 1024 (M+H)+.
중간체 163
[(1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로필](1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일)메타논 트리플루오로아세테이트
Figure pct00466
먼저, 문헌 방법 (참고 H. King, J. Chem . Soc . 1942, 432)과 유사하게 1,2-바이(브로모메틸)벤젠과 반응으로 265 mg (0.82 mmol)의 tert -부틸 (1S,2R)-1-(하이드록시카바모일)-2-페닐사이클로프로필 카바메이트 (개시 화합물 7)로부터 진행하여, Boc-보호된 tert-부틸 (1S,2R)-1-(1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필 카바메이트 중간체를 제조했다.
수율: 108 mg (이론의 34%)
LC-MS (방법 2): Rt = 1.3 분; MS (ESIpos): m/z = 395 (M+H)+.
108 mg (0.27 mmol)의 이러한 중간체를 3.7 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 1.8 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 15 분 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고 디옥산으로부터 잔여 잔류물을 동결건조했다. 112 mg의 표제 화합물을 무색 폼으로서 정량적 수율로 얻었다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.7 분; MS (ESIpos): m/z = 295 (M+H)+.
중간체 164
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00467
166 mg (0.196 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 10)을 40 ml의 DMF에서 취하고 연속적으로 80 mg (0.196 mmol)의 [(1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로필](1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일)메타논 트리플루오로아세테이트 (중간체 163), 112 mg (0.294 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 682 μl (3.9 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 차후에 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 용액을 포화된 수성 염화나트륨 용액으로 세정했다 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 마지막으로 분취 HPLC로 정제했다. 이런 식으로, 19 mg (이론의 9%)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.68 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.51 분; MS (ESIpos): m/z = 1083 (M+H)+.
19 mg (0.015 mmol)의 이러한 중간체를 4 ml의 DMF에서 용해시켰다. 817 μl의 피페리딘이 부가된 후, 반응 혼합물을 실온에서 5 분 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 먼저 디에틸 에테르로 소화시키고 그 다음 분취 HPLC (용출물: 아세토니트릴 + 0.1% TFA / 0.1% 수성 TFA)로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거하고 그 다음 잔여물을 디옥산/물으로부터 동결건조했다. 12 mg (이론의 92%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 861 (M+H)+.
중간체 165
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00468
20 mg (0.021 mmol)의 중간체 164를, 중간체 97의 제조와 유사하게, 나트륨 시아노보로하이드라이드의 존재에서 벤질 3-옥소헥실 카바메이트와 함께 사용하고 (용매로서 메탄올 중 촉매로서 5% 목탄상 팔라듐으로) Z 보호 그룹의 차후의 수소첨가분해분리하여, 표제 화합물을 제조했다.
수율: 4.5 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 23%)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 960 (M+H)+.
중간체 166
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(1,4-디하이드로-3H-2,3-벤족사진-3-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00469
4.4 mg (4.5 μmol)의 중간체 165를 1 ml의 1:1 디옥산/물에서 취하고 그 다음 1 mg (6.8 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트 및 50 μl의 포화된 수성 탄산수소나트륨 용액과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 그 다음 또 하나의 50 μl의 포화된 수성 탄산수소나트륨 용액을 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 15 분 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 1 mg (이론의 21%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.08 분; MS (ESIpos): m/z = 1040 (M+H)+.
중간체 167
벤질 3-{2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시}프로파노에이트
Figure pct00470
표제 화합물을, 먼저 벤질 클로라이드 및 세슘 카보네이트에 의한 에스테르화로 및 황 트리옥사이드-피리딘 복합물에 의한 차후의 산화로6 g (21.55 mmol)의 상업적으로 이용가능한 3-{2-[2-(2-하이드록시에톡시)에톡시]에톡시}프로판산으로부터 표준 조건 하에서 제조했다.
수율: 611 mg (이론의 10%, 2 단계에 걸쳐)
LC-MS (방법 2): Rt = 1.69 분; MS (ESIpos): m/z = 311 (M+H)+.
중간체 168
N-(2-{2-[2-(2-카복시에톡시)에톡시]에톡시}에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00471
먼저, 중간체 69에 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4) 및 N α -{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-트립토판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 49)의 커플링 및 피페리딘에 의한 Fmoc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다.
25 mg (0.028 mmol)의 이 화합물 및 17.5 mg (0.06 mmol)의 중간체 167을 2 ml의 메탄올에서 조합시키고 12.6 mg (0.14 mmol)의 보란-피리딘 복합물 및 2.5 ml의 아세트산과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 동일한 양의 보란-피리딘 복합물 및 아세트산을 다시 한번 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 24 시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 및 1:1 디옥산/물로부터 동결건조 후, 26.5 mg (이론의 88%)의 Z-보호된 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.04 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 1064 (M+H)+.
25 mg (0.024 mmol)의 이러한 중간체를 10 ml의 메탄올에서 취하고 10% 활성탄 상 팔라듐 상에서 표준 수소 압력 하에서 실온에서 45 분 동안 수소부가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 제거했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 19.7 mg (이론의 85%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.83 분; MS (ESIpos): m/z = 974 (M+H)+.
중간체 169
N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로폭시}에톡시)에톡시]에틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00472
10 mg (10 μmol)의 중간체 168을 3 ml의 DMF에서 용해시키고 3.5 mg (30 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 그 다음 2.4 mg (10 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 5 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 실온에서 20 시간 동안 교반한 후, 8 mg (0.02 mmol)의 HATU를 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 다시 한번 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 8.6 mg (이론의 64%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.81 분; MS (ESIpos): m/z = 1071 (M+H)+.
중간체 170
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00473
이 화합물을 26 mg (0.028 mmol)의 중간체 15로부터 진행하여 중간체 101과 유사하게 2 단계에 걸쳐 제조했다.
수율: 16.7 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 63%)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.81 분; MS (ESIpos): m/z = 914 (M+H)+.
중간체 171
N-(6-{[4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부타노일]아미노}헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00474
중간체 170으로부터 형성된 6.7 mg (7.3 μmol)의 화합물 및 3 mg (14.7 μmol)의 상업적으로 이용가능한 4-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)부탄산을 2 ml의 DMF에서 취하고 5.6 mg (14.7 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 2 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거하고 그 다음 잔여물을 디옥산으로 동결건조했다. 따라서, 4.5 mg (이론의 56%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.12 분; MS (ESIpos): m/z = 1079 (M+H)+.
중간체 172
벤질 2-{2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시}에틸 카바메이트
Figure pct00475
표제 화합물을, 먼저 Z 보호 그룹을 도입하고 그 다음 황 트리옥사이드-피리딘 복합물에 의한 산화로 표준 조건 하에서 상업적으로 이용가능한 2-{2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시}에탄올로부터 제조했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.4 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.65 분; MS (ESIpos): m/z = 326 (M+H)+.
중간체 173
벤질 {2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에틸 카바메이트
Figure pct00476
표제 화합물을, 먼저 Z 보호 그룹을 도입하고 그 다음 황 트리옥사이드-피리딘 복합물에 의한 산화로 표준 조건 하에서 상업적으로 이용가능한 2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에탄올로부터 중간체 172와 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.3 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.68 분; MS (ESIpos): m/z = 282 (M+H)+.
중간체 174
N-(2-{2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시}에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐 사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00477
47 mg (0.05 mmol)의 중간체 16을 중간체 167의 제조와 유사하게 보란-피리딘 복합물의 존재에서 벤질 2-{2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시}에틸 카바메이트에 의해 환원적으로 아민화했다. 차후에, Z 보호 그룹을 촉매로서 5% 목탄상 팔라듐으로 및 용매로서 메탄올 중 수소첨가분해 수단으로 제거하고, 38 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 66%)의 표제 화합물을 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.8 분; MS (ESIpos): m/z = 988 (M+H)+.
중간체 175
N-[2-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)에틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00478
제조는 34 mg (0.03 mmol)의 중간체 174로부터 진행하여 중간제 166과 유사하게 영향을 받았다.
수율: 8.3 mg (이론의 23%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 1068 (M+H)+.
중간체 176
N-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00479
제조는 중간체 173에 의한 중간체 16의 환원 아미노화로 시작하고, 말레이마이드의 차후의 탈보호 및 형성으로 중간체 174 및 175와 유사하게 영향을 받았다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.8 분; MS (ESIpos): m/z = 981 (M+H)+.
중간체 177
N-[2-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)에틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00480
제조는 중간체 172에 의한 중간체 16의 환원 아미노화로 시작하고, 말레이마이드의 차후의 탈보호 및 형성으로 중간체 174 및 175와 유사하게 영향을 받았다
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1025 (M+H)+.
중간체 178
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00481
제조는 6 mg의 중간체 82로부터 진행하여 중간체 162와 유사하게 영향을 받았다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.82 분; MS (ESIpos): m/z = 953 (M+H)+.
중간체 179
4-[(1E,3S)-3-아미노-4-페닐부트-1-엔-1-일]벤젠설폰산 트리플루오로아세테이트
Figure pct00482
7.5 ml의 DMF 중 13.6 mg (0.06 mmol)의 팔라듐(II) 아세테이트, 469 mg (1.46 mmol)의 칼륨 4-아이오도벤젠설포네이트, 300 mg (1.21 mmol)의 (S)-tert-부틸 1-페닐부트-3-엔-2-일 카바메이트, 16.5 mg (0.12 mmol)의 페닐우레아 및 167.6 mg (1.21 mmol)의 칼륨 카보네이트의 혼합물을 160 ℃로 마이크로웨이브에서 15 분 동안 가열했다. 조 생성물을 차후에 분취 HPLC로 직접적으로 정제했다. 이로써 31%의 Boc-보호된 화합물 및 69%의 유리 아민의 312 mg의 혼합물을 얻었다.
이 혼합물을 차후에 30 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 1 ml의 트리플루오로아세트산과 혼합하고 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 감압 하에서 농축한 후, 잔여물을 디에틸 에테르와 함께 교반하고, 형성된 침전물을 흡입으로 여과 제거하고, 디에틸 에테르로 세정했다. 이로써 200 mg (이론의 62%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.44 분; MS (ESIpos): m/z = 304 (M+H)+.
중간체 180
4-[(3R)-3-아미노-4-페닐부틸]벤젠설폰산
Figure pct00483
100 mg (0.25 mmol)의 4-[(1E,3S)-3-아미노-4-페닐부트-1-엔-1-일]벤젠설폰산 트리플루오로아세테이트를 10 ml의 아세트산 및 몇 방울의 DMF 및 물에서 현탁하고, 70 mg (0.07 mmol)의 목탄상 팔라듐 (10%)과 혼합하고 수소 압력 2.2 bar에서 24시간 동안 수소부가했다. 용액을 여과하고, 여과물을 분취 HPLC로 정제했다.
29 mg (76% 순도, 이론의 21%)의 생성물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.46 분; MS (ESIpos): m/z = 306 (M+H)+.
중간체 181
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00484
4 ml의 DMF 중 90 mg (0.13 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에 60 mg (0.16 mmol)의 HATU 및 69 μl의 (0.39 mmol) 휘니그 염기를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 60 mg (0.15 mmol) 60.3 mg (0.13 mmol)의 4-[(1E,3S)-3-아미노-4-페닐부트-1-엔-1-일]벤젠설폰산 트리플루오로아세테이트와 혼합했다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 표제 화합물 및 이미 탈보호된 아민의 127 mg의 44:56 혼합물을 얻었다.
LC-MS (방법 1): 상기 탈보호된 화합물에 대한 Rt = 1.21 분; MS (ESIpos): m/z = 971 (M+H)+; Rt = 0.84 분; MS (ESIpos): m/z = 871 (M+H)+.
중간체 182
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00485
90 mg의 중간체 180을 4.6 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고, 0.92 ml의 트리플루오로아세트산을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 수득한 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다.
91 mg (이론의 98%)의 표적 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 871 (M+H)+
중간체 183
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00486
16.7 μl (0.03 mmol)의 15% 수성 석신알데하이드 용액을 943 μl의 메탄올에서 초기에 충전하고 17 mg (0.02 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 181) 및 1.1 μl (0.02 mmol)의 아세트산과 혼합했다. 반응 혼합물을 5 분 동안 실온에서 교반하고 그 다음 2.9 μl (0.02 mmol)의 보란-피리딘 복합물을 부가했다. 1시간 후, 추가 2 당량의 각각의 석신알데하이드, 아세트산 및 보란-피리딘 복합물을 부가하고 혼합물을 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다.
이로써 20 mg (83% 순도, 이론의 80%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 957 (M+H)+
중간체 184
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00487
8 mg (7.5 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드, 2.8 mg (8.2 μmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드 트리플루오로아세테이트, 3.4 mg (9 μmol)의 HATU 및 3.9 μl의 휘니그 염기를 0.77 ml의 DMF에서 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다.
3 mg (이론의 31%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.90 분; MS (ESIpos): m/z = 1164 (M+H)+
중간체 185
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00488
2 ml의 DMF 중 8 mg (7.5 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2S,3E)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부트-3-엔-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에 8.6 mg (74.8 μmol)의 N-하이드록시석신이마이드, 8.5 mg (22.4 μmol)의 EDCI 및 0.1 mg (0.75 μmol)의 DMAP를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 차후에, 1.3 μl (7.5 μmol)의 휘니그 염기를 부가하고 혼합물을 1시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다. 2.6 mg (72% 순도, 이론의 21%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.89 분; MS (ESIpos): m/z = 1054 (M+H)+
중간체 186
N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00489
1.9 ml의 DMF 중 43 mg (0.06 mmol)의 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에 29 mg (0.07 mmol)의 HATU 및 33 μl (0.19 mmol)의 휘니그 염기를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 29 mg (0.07 mmol)의 4-[(3R)-3-아미노-4-페닐부틸]벤젠설폰산 트리플루오로아세테이트와 혼합했다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 58 mg의 표제 화합물 및 이미 탈보호된 아민의 45:55 혼합물을 얻었다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.09 분; MS (ESIpos): m/z = 973 (M+H)+; Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): 상기 탈보호된 화합물에 대한 m/z = 873 (M+H)+.
중간체 187
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00490
58 mg의 중간체 186을 4.1 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고, 0.41 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 감압 하에서 농축 후, 조 생성물을 분취 HPLC로 정제했다.
50 mg (90% 순도, 이론의 85%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 873 (M+H)+
중간체 188
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00491
171 μl (0.26 mmol)의 15% 수성 석신알데하이드 용액을 2.5 ml의 메탄올에서 초기에 충전하고 50 mg (0.05 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 및 11.6 μl (0.2 mmol)의 아세트산과 혼합했다. 반응 혼합물을 5 분 동안 실온에서 교반하고 그 다음 30 μl (0.24 mmol)의 보란-피리딘 복합물을 부가했다. 24시간 동안 교반 후, 추가 동등물의 보란-피리딘 복합물을 부가하고 혼합물을 추가 2 시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다.
40 mg (90% 순도, 이론의 66%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.91 분; MS (ESIpos): m/z = 959 (M+H)+
중간체 189
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00492
10 mg (9.3 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드, 3.5 mg (10.3 μmol)의 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드 트리플루오로아세테이트, 4.3 mg (11.2 μmol)의 HATU 및 4.9 μl (28 μmol)의 휘니그 염기를 1 ml의 DMF에서 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다.
4.2 mg (92% 순도, 이론의 33%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.91 분; MS (ESIpos): m/z = 1166 (M+H)+
중간체 190
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00493
2.5 ml의 DMF 중 10 mg (9.3 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(2R)-1-페닐-4-(4-설포페닐)부탄-2-일]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 용액에 10.7 mg (93 μmol)의 N-하이드록시석신이마이드, 10.6 mg (28 μmol)의 EDCI 및 0.12 mg (0.9 μmol)의 DMAP를 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 20 시간 동안 교반하고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다.
3.8 mg (72% 순도, 이론의 25%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.90 분; MS (ESIpos): m/z = 1055 (M+H)+
중간체 191
(2R,3R)-N-[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00494
표제 화합물을 개시 화합물 1 및 (2S)-2-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)프로판-1-온 트리플루오로아세테이트 (중간체 99)로부터 2 단계에 걸쳐 중간체 7의 합성과 유사하게 제조했다.
2 단계에 걸쳐 얻음: 62 mg (이론의 67%)
HPLC (방법 6): Rt = 1.65 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.7 분; MS (ESIpos): m/z = 443 (M+H)+.
중간체 192
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00495
1015 mg (1.59 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 50 ml의 DMF에서 취하고, 654 mg (2.39 mmol)의 2-브로모-1-에틸피리디늄 테트라플루오로보레이트 (BEP) 및 2.8 ml의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합하고, 실온에서 10분 동안 교반했다. 그 다음 1083 mg (1.75 mmol)의 (2R,3R)-N-[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 191)을 부가하고 그 다음 혼합물을 초음파 배쓰에서 실온에서 30분 동안 처리했다. 그 다음 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 300 ml의 에틸 아세테이트에서 처리했다. 유기 상을 연속적으로 5% 수성 시트르산 용액 및 5% 수성 탄산수소나트륨 용액으로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 이렇게 수득한 조 생성물 (1684 mg)을, 추가 정제없이, 20 ml의 아세토니트릴에서 취하고, 2 ml의 피페리딘을 부가하고 그 다음 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반했다. 그 다음 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 디에틸 에테르와 혼합했다. 용매를 다시 증바로 농축하고 잔여물을 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다 (용출물: 15:1:0.1 → 15:2:0.2 디클로로메탄/메탄올/17% 암모니아수 용액). 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔여물을 아세토니트릴/물로부터 동결건조시켰다. 따라서, 895 mg (67%, 2 단계로)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.84 분; MS (ESIpos): m/z = 840 (M+H)+.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 10.8 (d, 1H), 8.3 및 8.05 (2d, 1H), 8.0 (d, 1H), 7.5 (m, 1H), 7.3 (m, 1H), 7.15 및 7.08 (2s, 1H) 7.05-6.9 (m, 2H), 5.12 및 4.95 (2m, 1H), 4.65 (m, 1H), 4.55 (m, 1H), 4.1-3.8 (m, 4H), 3.75 (d, 1H), 3.23, 3.18, 3.17, 3.12, 2.95 및 2.88 (6s, 9H), 3.1-3.0 및 2.85 (2m, 2H), 2.65 (d, 1H), 2.4-2.2 (m, 3H), 2.15 (m, 3H), 1.95 (br. m, 2H), 1.85-0.8 (br. m, 11H), 1.08 및 1.04 (2d, 3H), 0.9-0.75 (m, 15H), 0.75-0.65 (dd, 3H) [H2O 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 193
N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00496
50 mg (0.052 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 192) 및 204 μl의 4-옥소부탄산의 15% 수용액을 2 ml의 메탄올에서 조합시키고 23.4 mg (0.252 mmol)의 보란-피리딘 복합물 및 6 μl의 아세트산과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 후, 38 mg (이론의 78%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 9): Rt = 4.7 분; MS (ESIpos): m/z = 926 (M+H)+.
중간체 194
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00497
이 화합물을 10 mg (11 μmol)의 N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 및 상업적으로 이용가능한 6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산하이드라자이드로부터 중간체 157에 기재된 합성과 유사하게 제조했다.
수율: 4.4 mg (이론의 35%)
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.90 분; MS (ESIpos): m/z = 1133 (M+H)+.
중간체 195
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00498
이 화합물을 9 mg (0.010 mmol)의 중간체 170으로부터 진행하여 중간체 166과 유사하게 제조했다.
수율: 1.1 mg (이론의 10%)
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.99 분; MS (ESIpos): m/z = 994 (M+H)+.
중간체 196
(2S)-2-아미노-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-3-페닐프로판-1-온 트리플루오로아세테이트
Figure pct00499
41 mg (0.37 mmol)의 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 N-(tert-부톡시카보닐)-L-페닐알라니네이트를 10 ml의 DMF에서 취하고 149 mg (0.41 mmol)의 2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔 (개시 화합물 6) 및 72 μl (0.41 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 5% 수성 시트르산 용액 그 다음 5% 수성 탄산수소나트륨 용액과 함께 흔들어서 추출하고. 유기 상을 농축하고 잔여물을 용출물로서 10:1 톨루엔/에탄올을 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 69 mg (이론의 47%)의 Boc-보호된 중간체 tert -부틸 (2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일 카바메이트를 부분입체이성질체 혼합물로서 따라서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.1 분; MS (ESIpos): m/z = 359 (M+H)+.
64 mg (0.18 mmol)의 이러한 중간체를 10 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 1 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고 물/디옥산로부터 잔류 잔여물을 동결건조했다. 이런 식으로, 66 mg (정량적)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.45 분;
LC-MS (방법 3): Rt = 1.12 분; MS (ESIpos): m/z = 259 (M+H)+.
중간체 197
(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00500
먼저, (2R,3R)-3-[(2S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산 (개시 화합물 1)을 에틸 아세테이트에서 취해고 5% 수성 황산수소칼륨 용액과 함께 추출성 흔들기로 83 mg (0.18 mmol)의 그의 디사이클로헥실아민 염으로부터 방출했다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔여물을 10 ml의 DMF에서 취하고 연속적으로 66 mg (0.18 mmol)의 (2S)-2-아미노-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-3-페닐프로판-1-온 트리플루오로아세테이트 (중간체 196), 101 mg (0.266 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 93 μl (0.53 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 52 mg (이론의 56%)의 Boc-보호된 중간체 tert -부틸 (2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-카복실레이트를 얻었다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.13 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.13 분; MS (ESIpos): m/z = 528 (M+H)+.
52 mg (0.1 mmol)의 이러한 중간체를 10 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 1 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 혼합물을 실온에서 20 분 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고 잔여 잔류물을 20 ml의 디에틸 에테르와 함께 교반했다. 10분 후, 혼합물을 여과하고, 필터 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이런 식으로, 39 mg (이론의 72%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.62 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.68 분; MS (ESIpos): m/z = 428 (M+H)+.
중간체 198
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00501
44.5 mg (0.071 mmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4)을 10 ml의 DMF에서 취하고 연속적으로 38.6 mg (0.071 mmol)의 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 197), 32.5 mg (0.086 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 41 μl (0.235 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취했다. 유기 상을 연속적으로 5% 수성 시트르산 용액 및 5% 수성 탄산수소나트륨 용액과 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 이로써 73 mg (이론의 98%)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 2.78 분;
LC-MS (방법 3): Rt = 2.96 분; MS (ESIpos): m/z = 1047 (M+H)+.
73 mg (0.071 mmol)의 이러한 중간체를 5 ml의 DMF에서 용해시켰다. 0.5 ml의 피페리딘이 부가된 후, 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 디에틸 에테르로 반복적으로 소화시켰다. 디에틸 에테르가 데칸트된 후, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다 (용출물: 아세토니트릴 / 0.1% 수성 TFA). 16 mg (이론의 26%)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 6): Rt = 1.94 분;
LC-MS (방법 3): Rt = 1.71 분; MS (ESIpos): m/z = 825 (M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.9-8.6 (m, 3H), 8.4, 8.3, 8.1 및 8.0 (4d, 1H), 7.3-7.1 (m, 5H), 6.7-6.5 (m, 2H), 5.2-4.8 (m, 3H), 4.75-4.55 (m, 3H), 4.05-3.95 (m, 1H), 3.7-3.4 (m, 4H), 3.22, 3.17, 3.15, 3.05, 3.02 및 2.95 (6s, 9H), 3.0 및 2.7 (2 br. m, 2H), 2.46 (m, 3H), 2.4-1.2 (br. m, 13H), 1.1-0.85 (m, 18H), 0.75 (m, 3H) [H2O 피크 하에서 숨겨진 추가 신호].
중간체 199
N-(4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00502
표제 화합물을 23 mg (24 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S)-1-(2-옥사-3-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-5-엔-3-일)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 198)로부터 진행하여 중간체 193 및 194와 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 2.1 분; MS (ESIpos): m/z = 1118 (M+H)+.
중간체 200
N-[2-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)에틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00503
제조는 중간체 174 및 175과 유사하게, 중간체 172에 의한 중간체 192의 환원 알킬화로 개시하여 영향을 받고, 말레이마이드가 차후에 탈보호 및 형성된다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1025 (M+H)+.
중간체 201
N-{6-[(브로모아세틸)아미노]헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00504
22 mg (0.023 mmol)의 N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 101)을 9.5 ml의 THF에서 용해시키고 0 ℃에서 4.2 μl의 트리에틸아민과 혼합했다. THF 중 브로모아세틸 클로라이드의 용액을 적가하고 반응 혼합물을 0 ℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 6.9 mg (이론의 26%)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 1059 및 1061 (M+H)+.
중간체 202
N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로폭시}에톡시)에톡시]에틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00505
제조는 먼저 중간체 168과 유사하게, 중간체 167에 의한 중간체 192의 환원 알킬화 및 N-(2-{2-[2-(2-카복시에톡시)에톡시]에톡시}에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 벤질 에스테르의 차후의 수소첨가분해 절단로 개시하여 영향을 받았다.
13 mg (10 μmol)의 이러한 중간체를 5 ml의 DMF에서 용해시키고 2.1 mg (20 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온, 6.5 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 7.1 mg (0.02 mmol)의 HATU와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조한 후, 9.2 mg (이론의 62%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 2.1 분; MS (ESIpos): m/z = 1141 (M+H)+.
중간체 203
tert -부틸 6-히드라지노-6-옥소헥실 카바메이트
Figure pct00506
이 화합물을, 표준 펩타이드 화학 방법으로, EDCI 및 HOBT의 존재에서 6-[(tert-부톡시카보닐)아미노]헥산산과 벤질 하이드라진카복실레이트와의 커플링으로, 및 벤질옥시카보닐 보호 그룹의 차후의 수소첨가분해 절단으로 제조했다.
LC-MS (방법 11): Rt = 0.59 분; MS (ESIpos): m/z = 246 (M+H)+.
중간체 204
N-{4-[2-(6-아미노헥사노일)히드라지노]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00507
146 mg (50 μmol)의 (N-(3-카복시프로필)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 5 ml의 DMF에서 용해시키고 그 다음 30.6 mg (80 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트, 19 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 22.4 mg (60 μmol)의 tert -부틸 6-히드라지노-6-옥소헥실 카바메이트와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5 시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 고진공 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 43 mg (이론의 68 %)의 보호된 중간체를 수득하고, 그 다음 이것을 10 ml의 디클로로메탄에서 취하고 1 ml의 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 디클로로메탄과 함께 교반하고, 용매를 감압 하에서 다시 제거했다. 따라서, 45 mg (이론의 68%, 2 단계에 걸쳐)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.66 분; MS (ESIpos): m/z = 983 (M+H)+.
중간체 205
N-(4-{2-[6-({[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸]카바모일}아미노)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00508
이 화합물을 중간체 50 및 204로부터 진행하여 중간체 114와 유사하게 제조했다.
수율: 4 mg (이론의 78%)
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.73 분; MS (ESIpos): m/z = 1149 (M+H)+.
중간체 206
N-(6-{[3-({3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로필}디설파닐)프로파노일]아미노}헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00509
8 mg (10 μmol)의 중간체 101을 2 ml의 DMF에서 용해시키고 8.6 mg (20 μmol)의 1,1'-{디설판디일비스[(1-옥소프로판-3,1-디일)옥시]}디피롤리딘-2,5-디온 및 3.7 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고 그 다음 용매를 감압 하에서 증발 제거하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 7.2 mg (이론의 68 %)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 615 [½(M+2H+]
중간체 207
(1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실산 트리플루오로아세테이트
Figure pct00510
표제 화합물을, 탈보호된 210 mg (0.76 mmol)의 상업적으로 이용가능한 (1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-2-페닐사이클로프로판카복실산을 트리플루오로아세트산으로 탈보호하여 정량적 수율로 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.23 분; MS (ESIpos): m/z = 178 (M+H)+.
중간체 208
9H-플루오렌-9-일메틸 6-옥소헥실 카바메이트
Figure pct00511
표제 화합물을, 표준 조건 하에서, 황 트리옥사이드-피리딘 복합물에 의한 산화로 1 g (2.95 mmol)의 상업적으로 이용가능한 9H-플루오렌-9-일메틸 6-하이드록시헥실 카바메이트로부터 제조했다. 840 mg (이론의 85%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.1 분; MS (ESIpos): m/z = 338 (M+H)+.
중간체 209
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-카복시-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00512
먼저, 중간체 75에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26) 및 (1S,2R)-1-아미노-2-페닐사이클로프로판카복실산 트리플루오로아세테이트 (중간체 207)의 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 아민 화합물 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-카복시-2-페닐사이클로프로필]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다.
그 다음 10 ml의 메탄올 중 22 mg (0.026 mmol)의 이 화합물에 17 mg (0.05 mmol)의 9H-플루오렌-9-일메틸 6-옥소헥실 카바메이트 (중간체 208) 및 2.3 mg의 아세트산, 및 또한 11.4 mg (0.12 mmol)의 보란-피리딘 복합물을 부가했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 동일한 양의 보란-피리딘 복합물 및 아세트산, 및 또한 8 mg의 플루오렌-9-일메틸 6-옥소헥실 카바메이트를 다시 한번 부가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 24 시간 동안 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 후, 생성물을 다음 단계에서 즉각적으로 사용했다.
33 mg의 더욱 오염된 중간체를 5 ml의 DMF에서 취하고, 1 ml의 피페리딘을 부가했다. 실온에서 15 분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축하고 수득한 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 따라서, 11 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 55%)의 아미노카복실산 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.7 분; MS (ESIpos): m/z = 843 (M+H)+.
6 mg (7.12 μmol)의 이러한 중간체를 1 ml의 디옥산에서 취하고 그 다음 6.6 mg (42.7 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트 및 5 μl의 포화된 수성 탄산수소나트륨 용액과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 또 하나의 3 부분의 각각의 50 μl의 포화된 수성 탄산수소나트륨 용액을 부가하고 반응 혼합물을 추가 30 분 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 트리플루오로아세트산으로 pH 2로 산성화하고 차후에 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조한 후, 4 mg (이론의 60%)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.88 분; MS (ESIpos): m/z = 923 (M+H)+.
중간체 210
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00513
먼저, 6-옥소헥산산을 문헌 방법으로 제조했다 (J. Org. Chem. 58, 1993, 2196-2200).
80 mg (0.08 mmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 192) 및 65.4 mg (0.5 mmol)의 6-옥소헥산산을 9 ml의 메탄올에서 조합시키고 10 μl의 아세트산 및 37.4 mg (0.4 mmol)의 보란-피리딘 복합물과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 1:1 아세토니트릴/물에서 취하고 트리플루오로아세트산으로 pH 2로 조정했다. 반응 혼합물을 다시 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 후, 70 mg (이론의 86 %)의 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 955 (M+H)+.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6 , 특징적인 신호): δ = 12.0 (br. M, 1H), 10.8 (s, 1H), 9.4 (m, 1H), 8.9 및 8.8 (2d, 1H), 8.3 및 8.02 (2d, 1H), 7.5 (m, 1H), 7.3 (m, 1H), 7.15 및 7.1 (2s, 1H) 7.05-6.9 (m, 2H), 5.12 및 4.95 (2m, 1H), 4.7-4.5 (m, 2H), 4.1-3.8 (m, 4H), 3.75 (d, 1H), 3.25, 3.2, 3.18, 3.13, 2.98 및 2.88 (6s, 9H), 2.8 (m, 3H), 1.08 및 1.04 (2d, 3H), 0.95-0.8 (m, 15H), 0.8-0.65 (dd, 3H).
22 mg (23 μmol)의 이러한 중간체를 1.8 ml의 디클로로메탄에서 용해시키고 13.2 mg (70 μmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드, 26.5 mg (230 μmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 0.28 mg (2 μmol)의 디메틸아미노피리딘과 혼합하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조한 후, 21.3 mg (이론의 88%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.94 분; MS (ESIpos): m/z = 1052 (M+H)+.
중간체 211
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00514
15 mg (20 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트 (중간체 15)을 중간체 210과 유사하게6-옥소헥산산으로 환원적으로 알킬화했다.
수율: 9.2 mg (이론의 61%)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 929 (M+H)+.
9 mg (10 μmol)의 이러한 중간체를 3 ml의 DMF에서 용해시키고 5.6 mg (48 μmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온, 5 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 5.5 mg (0.015 mmol)의 HATU과 혼합하고, 반응 혼합물을 초음파 배쓰에서 6시간 동안 처리했다. 이 과정에서, 5.5 mg의 HATU를 매 시간 부가했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 아세토니트릴/물에서 취하고 트리플루오로아세트산으로 pH 2로 조정했다. 감압 하에서 다시 농축한 후, 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조한 후, 5.8 mg (이론의 57%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.95 분; MS (ESIpos): m/z = 1027 (M+H)+.
중간체 212
N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로폭시}에톡시)에톡시]에틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00515
제조는 먼저 중간체 168과 유사하게, 중간체 167에 의한 중간체 15의 환원 알킬화 및 N-(2-{2-[2-(2-카복시에톡시)에톡시]에톡시}에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(2S,3S)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소-3-페닐부탄-2-일]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드의 벤질 에스테르의 차후의 수소첨가분해 절단으로 개시하여 영향을 받았다.
8.4 mg (8 μmol)의 이러한 중간체를 3 ml의 DMF에서 용해시키고 9.5 mg (80 μmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온, 10 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 9.4 mg (25 μmol)의 HATU와 혼합하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 아세토니트릴/물에서 취하고 트리플루오로아세트산으로 pH 2로 조정했다. 감압 하에서 다시 농축한 후, 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조한 후, 4 mg (이론의 32%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.96 분; MS (ESIpos): m/z = 1117 (M+H)+.
중간체 213
N-{6-[(트랜스-4-{[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]카보닐}사이클로헥실)아미노]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00516
이 화합물을 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드로부터 진행하여 중간체 104와 유사하게 제조했고, 그것의 합성은 중간체 210 하에서 기재되었다. 9.3 mg의 표제 화합물 (3 단계에 걸처 이론의 37%)을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.9 분; MS (ESIpos): m/z = 1177 (M+H)+.
중간체 214
N-{4-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00517
이 화합물을, 중간체 92의 활성 에스테르로의 전환으로 중간체 210과 유사하게 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.82 분; MS (ESIpos): m/z = 901 (M+H)+.
중간체 215
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00518
먼저, 중간체 40을, 중간체 183과 유사하게, 보란-피리딘 복합물과 함께 사용하여 N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 제조했다. 이 화합물로부터, 중간체 210과 유사하게, 그 다음 활성 에스테르를 얻었다. 34 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 36%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 930 (M+H)+.
중간체 216
N-(4-{[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]카보닐}벤질)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00519
먼저, 중간체 183의 제조와 유사하게, 중간체 192를 4-포르밀벤조산와 보란-피리딘 복합물과 함께 반응시켜 N-(4-카복시벤질)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다. 그 다음 이 화합물을 중간체 210과 유사하게 사용하여, 11 mg (이론의 68 %)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.13 분; MS (ESIpos): m/z = 1072 (M+H)+.
중간체 217
N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00520
53 mg (84 μmol)의 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(2R,3S,4S)-1-카복시-2-메톡시-4-메틸헥산-3-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 4) 및 45 mg (84 μmol)의 벤질 N-{(2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로파노일}-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트 (중간체 12)을 2 ml의 DMF에서 취하고, 19 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민, 14 mg (92 μmol)의 HOBt 및 17.6 mg (92 μmol)의 EDC를 부가하고 그 다음 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 이로써 59 mg (이론의 68 %)의 Fmoc-보호된 중간체 N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.55 분; m/z = 1044 (M+H)+.
57 mg (0.055 mmol)의 이러한 중간체를 5 ml의 DMF 중 1.2 ml의 피페리딘으로 처리하여 Fmoc 보호 그룹을 분리했다. 농축 및 분취 HPLC에 의한 정제 후, 39 mg (이론의 76%)의 유리 아민 중간체 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 트리플루오로아세테이트로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; m/z = 822 (M+H)+.
60 mg (0.06 mmol)의 이러한 중간체를, 중간체 210과 유사하게, 보란-피리딘 복합물의 존재에서6-옥소헥산산과 반응시켰다. 45 mg (이론의 75%)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 9936 (M+H)+.
중간체 218
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00521
이 화합물을 42 mg (0.05 mmol)의 중간체 217의 활성 에스테르로의 전환으로 제조했다.
수율: 26 mg (54%)
HPLC (방법 5): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; MS (ESIpos): m/z = 1034 (M+H)+.
중간체 219
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00522
중간체 218로부터 20 mg (0.02 mol)의 화합물을 2.4 ml의 메탄올에서 취하고 5% 활성탄 상 팔라듐 상에서 표준 수소 압력 하에서 실온에서 30분 동안 수소부가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 1:1 아세토니트릴/물로부터 동결건조했다. 이로써 14 mg (이론의 92%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 944 (M+H)+.
중간체 220
N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00523
500 mg의 이러한 중간체를 20 ml의 DMF에서 용해시키고 466 mg (3.8 mmol)의 중간체 191, 382 mg (1.01 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 440 μl (2.5 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 잔여물을 디클로로메탄에서 취하고 먼저 5% 수성 시트르산 용액으로 2회 및 그 다음 포화된 수성 탄산수소나트륨 용액으과 함께 흔들어서 추출했다. 유기 상을 농축하고 잔여물을 용출물로서 95:5 디클로로메탄/메탄올을 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 562 mg (두 단계 모두에 걸쳐 이론의 65%)의 Z-보호된 중간체를 수득했다.
562 mg (0.57 mmol)의 이러한 중간체를 50 ml의 메탄올에서 취하고 155 mg의 10% 활성탄 상 팔라듐으로 표준 수소 압력 하에서 실온에서 20 분 동안 수소부가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 증발 제거하고 잔여물을 디옥산으로 동결건조했다. 이로써 361 mg (이론의 87%)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.75 및 1.86 분를 갖는 이중피크;
LC-MS (방법 1): 동일한 질량과 함께 실온에서 이중 피크 = 0.84 분 및 0.91 분; MS (ESIpos): m/z = 944 (M+H)+.
중간체 221
N-{(2S)-2-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-3-페닐프로필}-N-메틸-L-발린
Figure pct00524
100 mg (0.76 mmol)의 상업적으로 이용가능한 N-메틸-L-발린 및 285 mg (1.14 mmol)의 상업적으로 이용가능한 tert -부틸 (2S)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일 카바메이트를 22 ml의 메탄올에서 조합하고 340 mg (3.66 mmol)의 보란-피리딘 복합물 및 70 μl의 아세트산과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 용출물로서 디클로로메탄/메탄올/17% 암모니아수 용액을 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 및 1:1 디옥산/물로부터 동결건조 후, 259 mg (이론의 93%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 11): Rt = 0.76 분; MS (ESIpos): m/z = 365 (M+H)+.
중간체 222
N-[(2S)-2-아미노-3-페닐프로필]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00525
40 mg (0.11 mmol)의 N-{(2S)-2-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-3-페닐프로필}-N-메틸-L-발린 (중간체 221)을 5 ml의 DMF에서 용해시키고 80 mg (0.11 mmol)의 N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 220), 50 mg (0.13 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 57 μl (2.5 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고 그 다음 농축했다. 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 먼저 5% 수성 시트르산 용액 및 그 다음 물로 세정했다. 유기 상을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 60 mg (이론의 50%)의 보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.2 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.17 분; MS (ESIpos): m/z = 1073 (M+H)+.
60 mg (0.05 mmol)의 이러한 중간체를 10 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 2 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1.5 시간 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔여물을 디옥산/물으로부터 동결건조했다. 이런 식으로, 25 mg (이론의 42%)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.95 분; MS (ESIpos): m/z = 974 (M+H)+.
중간체 223
N-[(2S)-2-({[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸]카바모일}아미노)-3-페닐프로필]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00526
제조는 5 mg (4.6 μmol)의 중간체로부터 진행하여 중간체 134와 유사하게 영향을 받아 222. 3.4 mg (이론의 65 %)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.99 분; MS (ESIpos): m/z = 1140 (M+H)+.
중간체 224
N-[(2S)-2-({[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸]카바모일}아미노)프로필]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00527
제조는 중간체 223의 합성과 유사하게 영향을 받았다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.92 분; MS (ESIpos): m/z = 1064 (M+H)+.
중간체 225
N-(2-아미노에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00528
100 mg (0.76 mmol)의 상업적으로 이용가능한 N-메틸-L-발린 및 182 mg (1.14 mmol)의 상업적으로 이용가능한 tert -부틸 2-옥소에틸 카바메이트를 20 ml의 메탄올에서 조합하고 340 mg (3.66 mmol)의 보란-피리딘 복합물 및 65 μl의 아세트산과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 이것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 용출물로서 디클로로메탄/메탄올/17% 암모니아수 용액 (15/4/0.5)를 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 및 1:1 디옥산/물로부터 동결건조 후, 39% 순도 (이론의 35%)로 190 mg의 중간체를 수득했고, 이것을 추가 정제없이 전환했다.
50 mg (0.07 mmol)의 이러한 중간체를 10 ml의 DMF에서 용해시키고 52 mg (0.07 mmol)의 N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 220), 32 mg (0.09 mmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N, N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 37 μl (0.2 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 농축했다. 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 먼저 5% 수성 시트르산 용액 및 그 다음 물과 함께 흔들어서 추출했다. 유기 상을 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 53 mg (이론의 76%)의 보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.02 분; MS (ESIpos): m/z = 984 (M+H)+.
53 mg (0.05 mmol)의 이러한 중간체를 10 ml의 디클로로메탄에서 취하고, 2 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거하고 잔여물을 디옥산/물으로부터 동결건조했다. 이런 식으로, 21 mg (이론의 40%)의 표제 화합물을 65% 순도로 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 884 (M+H)+.
중간체 226
N-[2-({[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에틸]카바모일}아미노)에틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00529
제조는 중간체 134의 합성과 유사하게 중간체 225로부터 진행하여 영향을 받았다. 11.6 mg (이론의 59%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.90 분; MS (ESIpos): m/z = 1050 (M+H)+.
중간체 227
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(벤질옥시)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00530
이 화합물을 활성 에스테르로 전환하여 중간체 218과 유사하게 제조했다.
수율: 18 mg (이론의 51%)
HPLC (방법 5): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.98 분; MS (ESIpos): m/z = 1073 (M+H)+.
중간체 228
(2R,3S)-3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부탄-2-일(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-7,10-디이소프로필-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오에이트
Figure pct00531
표제 화합물을 중간체 154의 합성에서 중간체로서 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 1308 (M+H)+.
중간체 229
(2R,3S)-3-아세트아미도-4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부탄-2-일 (3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-7,10-디이소프로필-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오에이트
Figure pct00532
표제 화합물을, 0.4 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재에서 1 ml의 DMF 중 2.3 μl의 아세트산 무수물에 의해 아세틸화로7.5 mg (2.5 μmol)의 중간체 154로부터 제조했다.
수율: 1.4 mg (이론의 40%)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1250 (M+H)+.
중간체 230
(2R,3S)-3-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부탄-2-일 (3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-7,10-디이소프로필-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오에이트
Figure pct00533
이 화합물을 중간체 193으로부터 진행하여 중간체 229와 유사하게 제조했다. 16 mg (3 단계에 걸쳐 이론의 30%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.0 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.02 분; MS (ESIpos): m/z = 1335 (M+H)+.
중간체 231
(2R,3S)-3-아세트아미도-4-{2-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부탄-2-일 (3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-7,10-디이소프로필-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오에이트
Figure pct00534
이 화합물을, 먼저 트리플루오로아세트산에 의한 탈보호 및 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재에서 DMF 중 아세트산 무수물에 의한 차후의 아세틸화로8 mg (6 μmol)의 중간체 230으로부터 제조했다. 2 mg (이론의 37%, 2 단계에 걸쳐)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.88 분; MS (ESIpos): m/z = 1277 (M+H)+.
중간체 232
벤질 N-[(4-니트로페녹시)카보닐]-베타-알라니네이트
Figure pct00535
200 mg (0.57 mmol)의 상업적으로 이용가능한 4-메틸벤젠설폰산-벤질 베타-알라니네이트 및 229 mg (1.14 mmol)의 4-니트로페닐 클로로카보네이트를 15 ml의 테트라하이드로푸란에서 취하고 그 다음 반응 혼합물을 30분 동안 가열 환류했다. 차후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 및 고진공 하에서 잔여물의 건조 후, 86 mg (이론의 44%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.07 분; MS (ESIpos): m/z = 345 (M+H)+.
중간체 233
N-{2-[({3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로필}카바모일)아미노]에틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00536
13 mg (10 μmol)의 중간체 225 및 6.7 mg (20 μmol)의 중간체 232을 3 ml의 DMF에서 용해시키고 그 다음 7 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 고진공 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획의 농축 및 고진공 하에서 잔여물의 건조 후, 5.4 mg (이론의 38%)의 보호된 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 2.1 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.6in; MS (ESIpos): m/z = 1089 (M+H)+.
5.4 mg (5 μmol)의 이러한 중간체를 5 ml의 메탄올에서 용해시키고, 2 mg의 10% 활성탄 상 팔라듐의 부가 후, 표준 수소 압력 하에서 실온에서 20 분 동안 수소부가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 5 mg (정량적)의 산 중간체를 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.84 분; MS (ESIpos): m/z = 999 (M+H)+.
5 mg (10 μmol)의 이러한 중간체를 1 ml의 DMF에서 용해시키고 5.8 mg (50 mmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 그 다음 2.6 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 3.8 mg (10 μmol)의 HATU와 혼합했다. 실온에서 20 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 1:1 디옥산/물로부터 동결건조 후, 1.1 mg (이론의 20%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.87 분; MS (ESIpos): m/z = 1096 (M+H)+.
중간체 234
N-(6-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00537
25 mg (30 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 55) 및 45 mg (180 μmol)의 벤질 6-옥소헥실 카바메이트를 3 ml의 메탄올에서 취하고 아세트산으로 산성화했다. 실온에서, 15 μl (144 μmol; 9.4M)의 보란-피리딘 복합물을 차후에 부가했다. 혼합물을 차후에 실온에서 24 시간 동안 교반하고, 아세트산 및 15 μl (144 μmol; 9.4M)의 보란-피리딘 복합물을 8 시간 후 다시 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 TFA로 pH 2로 조정하고 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축하고, 잔여물을 고진공 하에서 건조했다. 이로써 15 mg (이론의 46%)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.03 분; m/z = 1066 (M+H)+.
중간체 235
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00538
15 mg (14 μmol)의 N-(6-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 234)을 3 ml의 메탄올에서 취하고, 1.8 mg의 목탄상 팔라듐 (5%)을 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 표준 수소 압력 하에서 실온에서 2시간 동안 수소부가했다. 그 다음 촉매를 여과 제거하고 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 1:1 아세토니트릴/물로부터 동결건조했다. 11 mg (이론의 86 %)의 표제 화합물을 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.81 분; m/z = 932 (M+H)+.
중간체 236
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00539
11 mg (12 μmol)의 N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 235)을 500 μl의 1:1 디옥산/물에서 취하고 253 μl의 1M 수성 탄산수소나트륨 용액 및 그 다음 2.8 mg (18 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트와 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하고 그 다음 트리플루오로아세트산으로 산성화했다. 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조 후, 0.8 mg (이론의 7%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; m/z = 1012 (M+H)+.
중간체 237
N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00540
25 mg (30 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 55) 및 23 mg (180 μmol)의 6-옥소헥산산을 3 ml의 메탄올에서 취하고 아세트산으로 산성화했다. 실온에서, 15 μl (144 μmol; 9.4M)의 보란-피리딘 복합물을 차후에 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 실온에서 20 시간 동안 교반하고, 아세트산 및 15 μl (144 μmol; 9.4M)의 보란-피리딘 복합물을 8 시간 후 다시 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 트리플루오로아세트산으로 pH 2로 조정하고 분취 HPLC로 정제했다. 생성물 분획을 조합하고, 농축하고, 잔여물을 동결건조시켰다. 21 mg (이론의 74%)의 표제 화합물을 이렇게 폼으로서 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.91 분; m/z = 947 (M+H)+.
중간체 238
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00541
21 mg (22 μmol)의 중간체 237을 1 ml의 DMF에서 용해시키고 38 mg (333 μmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 그 다음 2.4 mg (10 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 19 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산으로부터 동결건조한 후, 22 mg (이론의 96%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.95 분; m/z = 1044 (M+H)+.
중간체 239
N-메틸-L-트레오닐-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00542
먼저, N-[(벤질옥시)카보닐]-N-메틸-L-트레오닌을, 에틸 아세테이트에서 취해서 5% 수성 황산으로 추출성 흔들기를 하여237 mg (0.887 mmol)의 그의 디사이클로헥실아민 염으로부터. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 14.7 mg (0.055 mmol)의 N-[(벤질옥시)카보닐]-N-메틸-L-트레오닌을 3 ml의 DMF에서 취하고 연속적으로 40 mg (0.055 mmol)의 중간체 220, 12.7 mg (0.066 mmol)의 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이마이드 하이드로클로라이드 및 10 mg (0.066 mmol)의 1-하이드록시-1H-벤조트리아졸 히드레이트와 혼합했다. 혼합물을 차후에 실온에서 2시간 동안 교반했다. 용매를 그 다음 감압 하에서 제거하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 29 mg (이론의 84%)의 Z-보호된 중간체를 이렇게 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.15 분; MS (ESIpos): m/z = 976 (M+H)+.
29 mg (0.003 mmol)의 이러한 중간체를 5 ml의 메탄올에서 용해시키고 5 mg의 5% 팔라듐/목탄 상에서 실온에서 및 표준 압력 1시간 동안 수소부가했다. 촉매를 차후에 여과 제거하고 용매를 증발 제거했다. 잔류 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 17 mg (이론의 84%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.77 분; MS (ESIpos): m/z = 842 (M+H)+.
중간체 240
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-트레오닐-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00543
이 화합물을 15.6 mg (0.016 mmol)의 중간체 239로부터 중간체 210과 유사하게 제조했다. 10.8 mg (이론의 67%, 2 단계에 걸쳐)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 1053 (M+H)+.
중간체 241
N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00544
먼저, 중간체 5와 유사하게, 트리플루오로아세트산-(2S)-2-아미노-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)프로판-1-온 (1:1)을 제조했다. 그 다음 이 시약을, 중간체 75에서 기재된 합성과 유사하게 사용하고, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N -(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드 (중간체 26)에 의한 커플링 및 트리플루오로아세트산에 의한 Boc 보호 그룹의 차후의 분리에 의해, 표제 화합물을 제조했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 817 (M+H)+.
중간체 242
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00545
50 mg (0.05 mmol)의 중간체 241을, 중간체 210과 유사하게, 보란-피리딘 복합물의 존재에서 6-옥소헥산산과 반응시켰다. 차후에, 22.5 mg (0.02 mmol)의 수득한 산을 활성화된 에스테르로 전환시켰다. 13.5 mg (2 단계에 걸쳐 이론의 36%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1028 (M+H)+.
대안적으로, 표제 화합물은 수소 표준 압력 하에서 10% 활성 탄소상 팔라듐 상에서 메탄올에서 실온에서 중간체 250의 1-시간 촉매적 수소첨가에 의해 또한 얻을 수 있다.
중간체 243
N-(6-아미노헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00546
제조는 중간체 241 벤질 6-옥소헥실 카바메이트와 함께 및 보란-피리딘 복합물의 환원 알킬화 및 용매로서 메탄올에서 차후의 수소화에 의해 중간체 78과 유사하게 영향을 받았다.
수율: 17.5 mg (이론의 34%, 2 단계에 걸쳐)
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.63 분; MS (ESIpos): m/z = 916 (M+H)+.
중간체 244
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00547
제조는 중간체 243으로부터 진행하여 중간체 166과 유사하게 영향을 받았다.
수율: 1.3 mg ((이론의 12%)
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.89 분; MS (ESIpos): m/z = 996 (M+H)+.
중간체 245
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 O-[(3R,4S,7S,10S)-4-[(2S)-부탄-2-일]-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-옥소에틸)-7,10-디이소프로필-5,11-디메틸-6,9,15-트리옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-일]-N-(tert-부톡시카보닐)-L-트레오닐-베타-알라니네이트
Figure pct00548
먼저, 중간체 193을, 중간체 154 하에서 기재된 바와 같이, 벤질 N-(tert-부톡시카보닐)-L-트레오니네이트와 반응시키고 그 다음 벤질 에스테르를 수소첨가분해로 제거했다. 그 다음 이렇게 수득한 30 mg (0.027 mmol)의 N-[4-({(1S,2R)-1-[(tert-부톡시카보닐)아미노]-1-카복시프로판-2-일}옥시)-4-옥소부틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드를 HATU의 존재에서 4-메틸벤젠설폰산-벤질 베타-알라니네이트 (1:1)과 커플링하고 벤질 에스테르를 수소첨가분해로 다시 제거했다 (수율: 24 mg (이론의 71%, 2 단계에 걸쳐)). 마지막으로, 10 mg (0.008 mmol)의 수득한 산을 활성화된 에스테르로 전환시켰다. HPLC 정제 후, 2.7 mg (이론의 23%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.01 분; MS (ESIpos): m/z = 1295 (M+H)+
중간체 246a
(2S)-2-아미노-1-(4-하이드록시-1,2-옥사졸리딘-2-일)-3-(1H-인돌-3-일)프로판-1-온 트리플루오로아세트산 (1:1) 부분입체이성질체 1
Figure pct00549
1.6 g (3.982 mmol)의 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 N-(tert-부톡시카보닐)-L-트립토파네이트를 15 ml의 DMF에서 용해시키고 500 mg (3.982 mmol)의 1,2-옥사졸리딘-4-올 및 100 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 또 하나의 100 μl의 N,N-디이소프로필에틸아민을 부가하고, 혼합물을 먼저 초음파 배쓰에서 5 시간 동안 처리하고, 그 다음 실온에서 밤새 교반하고, 차후에 감압 하에서 농축했다. 잔류 잔여물을 에틸 아세테이트에서 취하고 먼저 5% 시트르산 용액으로 2회, 그 다음 포화된 탄산수소나트륨 용액 및 마지막으로 물과 함께 진탕했다. 유기 상을 농축하고 잔여물을 용출물로서 95:5 디클로로메탄/메탄올을 갖는 실리카겔상 플래시 크로마토그래피로 부분입체이성질체로 분리했다. 둘 모두의 부분입체이성질체의 상응하는 분획을 조합하고, 용매를 감압 하에서 제거했다. 잔여물을 고진공 하에서 건조한 후, 272 mg (이론의 18%)의 부분입체이성질체 1 (Rf = 0.18 (95:5 디클로로메탄/메탄올) 및 236 mg (이론의 16%)의 부분입체이성질체 2 (Rf = 0.13 (95:5 디클로로메탄/메탄올), 및 또한 333 mg (이론의 22%)의 Boc-보호된 중간체의 혼합된 분획을 수득했다.
표준 조건 하에서, 20 ml의 디클로로메탄 중 5 ml의 트리플루오로아세트산을 사용하여 Boc 보호 그룹을 272 mg (725 μmol)의 이러한 중간체의 부분입체이성질체 1로부터 분리하고, 디옥산/물로부터 동결건조한 후, 290 mg (quant)의 표제 화합물을 75% 순도로 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.1 분;
LC-MS (방법 13): Rt = 1.80 분; MS (ESIpos): m/z = 276 (M+H)+
중간체 246b
(2S)-2-아미노-1-(4-하이드록시-1,2-옥사졸리딘-2-일)-3-(1H-인돌-3-일)프로판-1-온 트리플루오로아세트산 (1:1) 부분입체이성질체 2
Figure pct00550
표준 조건 하에서, 20 ml의 디클로로메탄 중 5 ml의 트리플루오로아세트산을 사용하여 Boc 보호 그룹을 236 mg (630 μmol)의 246a에서 기재된 중간체의 부분입체이성질체 2로부터 분리하고, 농축 후, 디에틸 에테르와 함께 교반하고 고진공 하에서 잔여물을 건조시키고, 214 mg (76%)의 표제 화합물을 수득했다.
LC-MS (방법 13): Rt = 1.84 분; MS (ESIpos): m/z = 276 (M+H)+
중간체 247a
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(4-하이드록시-1,2-옥사졸리딘-2-일)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00551
이 화합물을 합성하기 위해, 중간체 26 및 246a와 Boc 보호 그룹의 차후의 분리와의 커플링을 먼저 중간체 74에 기재된 바와 같이 수행했다. 차후에, 보란-피리딘 복합물의 존재에서 6-옥소헥산산에 의한 알킬화 및 산의 활성 에스테르로의 차후의 전환을 중간체 210에 대해 기재된 바와 같이 수행했다. 표제 화합물을 분취 HPLC로 정제했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1053 (M+H)+
중간체 247b
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(4-하이드록시-1,2-옥사졸리딘-2-일)-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아마이드
Figure pct00552
이 화합물을 합성하기 위해, 중간체 26 및 246b와 Boc 보호 그룹의 차후의 분리와의 커플링을 먼저 중간체 74에 대해 기재된 바와 같이 수행했다. 차후에, 보란-피리딘 복합물의 존재에서 6-옥소헥산산에 의한 알킬화 및 산의 활성 에스테르로의 차후의 전환을 중간체 210에 대해 기재된 바와 같이 수행했다. 표제 화합물을 분취 HPLC로 정제했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.86 분; MS (ESIpos): m/z = 1053 (M+H)+
중간체 248
N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tert-부톡시-3-(4-하이드록시페닐)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00553
먼저, 중간체 86에서 기재된 합성과 유사하게, by O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N-(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드 (중간체 26) 및 tert-부틸 L-타이로시네이트를 커플링하고 차후에 트리플루오로아세트산으로 Boc 보호 그룹을 탈착하여 (40 분 동안 디클로로메탄 트리플루오로아세트산과 교반하면서) tert-부틸 에스테르를 얻고, 아민 화합물 tert-부틸 N-[(2R,3R)-3-메톡시-3-{(2S)-1-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-(메틸{(2S)-3-메틸-2-[(N-메틸-L-발릴)아미노]부틸}아미노)헵타노일] 피롤리딘-2-일}-2-메틸프로파노일]-L-타이로시네이트를 트리플루오로아세테이트로서 제조했다. 그 다음 38 mg (0.04 mmol)의 이 화합물을 중간체 210의 제조와 유사하게 사용하고, 보란-피리딘 복합물의 존재에서 4-옥소헥산산과 반응시켜 31 mg (이론의 99%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.88 분; MS (ESIpos): m/z = 918 (M+H)+.
중간체 249
트리플루오로아세트산-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-[4-(벤질옥시)페닐]-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드(1:1)
Figure pct00554
먼저, 중간체 5 및 6과 유사하게, O-벤질-N-(tert-부톡시카보닐)-L-티로신으로부터 개시하여, 트리플루오로아세트산-(2S)-2-아미노-3-[4-(벤질옥시)페닐]-1-(1,2-옥사지난-2-일)프로판-1-온(1:1)을 제조했다. 그 다음, 이 빌딩 블록으로부터, 중간체 75에서 기재된 합성과 유사하게, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트의 존재에서 N -(tert-부톡시카보닐)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-카복시-1-메톡시프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드 (중간체 26)와 커플링하고 차후에 트리플루오로아세트산으로 Boc 보호 그룹을 제거하여 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.15 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0. 99 분; MS (ESIpos): m/z = 908 (M+H)+.
중간체 250
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-[4-(벤질옥시)페닐]-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00555
100 mg (0.088 mmol)의 중간체 249를 중간체 210과 유사하게 보란-피리딘 복합물의 존재에서6-옥산산과 반응시켰다. 그 다음 30 mg (0.029 mmol)의 수득한 산을 활성화된 에스테르로 전환했다. 이것으로 gave 15 mg (이론의 40%, 2 단계에 걸쳐)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 2.26 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.05 분; MS (ESIpos): m/z = 1119 (M+H)+.
중간체 251
N-[4-(2-{5-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-5-옥소펜타노일}-2-메틸히드라지노)-4-옥소부틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00556
무엇보다도, 30 mg (0.032 mmol)의 중간체 193을 활성화된 N-하이드록시석신이마이드 에스테르로 전환시켰다. 10.3 mg (0.009 mmol)의 이러한 활성 에스테르를 2 ml의 DMF 에서 용해시키고, 2.7 mg (0.018 mmol)의 tert-부틸 1-메틸하이드라진카복실레이트 및 8 μL N,N-디이소프로필에틸아민와 혼합하고, 실온에서 16 시간 동안 교반했다. 이러한 조작을 반복하고, 그 다음 배치를 농축하고 남아 있는 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 농축하고 고진공 하에서 건조하여 5.4 mg (43%)의 중간체를 얻었다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0. 99 분; MS (ESIpos): m/z = 1054 (M+H)+.
Boc 보호 그룹을, 디클로로메탄 중 트리플루오로아세트산을 사용하여 3.5 mg (0.002 mmol)의 이러한 중간체로부터 제거했다. 농축하고 고진공 하에서 건조한 다음에, 잔여물을 4 ml의 디클로로메탄에서 취하고 1,1'-[(1,5-디옥소펜탄-1,5-디일)비스(옥시)]디피롤리딘-2,5-디온 및 2 μL의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 실온에서 1 시간 동안 교반한 후, 배치를 농축하고 남아 있는 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 농축하고 고진공 하에서 건조하여 1.4 mg (44%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.88 분; MS (ESIpos): m/z = 1166 (M+H)+.
중간체 252
N-(2-{2-[2-(2-카복시에톡시)에톡시]에톡시}에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00557
100 mg (0.088 mmol)의 중간체 249 및 109 mg (0.350 mmol)의 중간체 167을 10 ml의 메탄올에서 조합하고 39 mg (0.42 mmol)의 보란-피리딘 복합물 및 15 μL의 아세트산과 혼합했다. 배치를 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 동일한 양의 보란-피리딘 복합물 및 아세트산을 다시 한번 부가하고, 배치를 추가 24 시간 동안 실온에서 교반했다. 그 다음 그것을 감압 하에서 농축하고, 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 상응하는 분획을 농축하고 디옥산/물 1:1로부터 동결건조하여 98 mg (이론의 93%)의 비스-벤질 중간체를 얻었다. 이러한 중간체를 18.5 ml의 메탄올에서 취하고 5% 활성탄상 팔라듐 상에서 표준 수소 압력 하에서 실온에서 1 시간 동안 촉매적 가수소를 수행했다. 디옥산으로부터 잔여물을 여과, 농축, 및 동결건조하여 73 mg (이론의 87%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.85 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.84 분; MS (ESIpos): m/z = 1021 (M+H)+.
중간체 253
N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로폭시}에톡시)에톡시]에틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00558
22 mg (22 μmol)의 중간체 252를 8.5 ml의 DMF에서 용해시키고 25 mg (215 μmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온 및 차후에 with 12.3 mg (32 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 37 μL의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산으로부터 동결건조하여 16 mg (62% of 이론)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.57 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.8 분; MS (ESIpos): m/z = 1118 (M+H)+.
중간체 254
N-(2-{2-[2-(2-카복시에톡시)에톡시]에톡시}에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00559
10 mg (0.012 mmol)의 중간체 55 및 11 mg (0.036 mmol)의 중간체 167을 1 ml의 메탄올에서 조합하고 5.4 mg (0.058 mmol)의 보란-피리딘 복합물 및 1 μL의 아세트산과 혼합했다. 배치를 실온에서 밤새 교반했다. 그 다음 동일한 양의 보란-피리딘 복합물 및 아세트산을 다시 한번 부가하고, 배치를 실온에서 추가 20 시간 동안 교반했다. 그 다음 그것을 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산/물 1:1로부터 상응하는 분획을 농축하고 동결건조하여 8 mg (이론의 58%)의 비스-벤질 중간체를 얻었다. 이러한 중간체를 2 ml의 메탄올에서 취하고 5% 활성탄상 팔라듐 상에서 표준 수소 압력 하에서 실온에서 1 시간 동안 촉매적 가수소를 수행했다. 디옥산으로부터 잔여물을 여과, 농축, 및 동결건조하여 7 mg (이론의 95%)의 표제 화합물을 얻었다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.99 분; MS (ESIpos): m/z = 1036 (M+H)+.
중간체 255
N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로폭시}에톡시)에톡시]에틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00560
7.3 mg (7 μmol)의 중간체 254를 0.3 ml의 DMF에서 용해시키고 12 mg (106 μmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온과 혼합하고 차후에 13.5 mg (35 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 6 μL의 N,N-디이소프로필에틸아민와 혼합했다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산으로부터 동결건조하여 7.7 mg (이론의 79%)의 표제 화합물을 얻었다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.97 분; MS (ESIpos): m/z = 1134 (M+H)+.
중간체 256
N-(2-{2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시}에틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00561
20 mg (0.02 mmol)의 중간체 55에 대해, 중간체 254의 제조와 유사하게 보란-피리딘 복합물의 존재에서 벤질 (2-{2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시}에틸)-카바메이트 (중간체 172)에 의해 환원성 아미노화를 수행했다. Z 보호 그룹을, 5% 탄소상 팔라듐을 촉매로서 및 메탄올을 용매로서 사용하여 수소첨가분해로 차후에 제거하고, 21 mg (이론의 85%, 2 단계에 걸쳐)의 표제 화합물을 제조했다.
LC-MS (방법 1): Rt = 0.85 분; MS (ESIpos): m/z = 1008 (M+H)+.
중간체 257
N-[2-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}에톡시)에틸]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00562
21 mg (20.8 μmol)의 중간체 256을 1 ml의 디옥산/물 1:1에서 취하고, 그 다음 4.9 mg (31.2 μmol)의 메틸 2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카복실레이트 및 또한 42 μL의 1M 수성 나트륨 수소 카보네이트 용액과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반했다. 그 다음 추가 374 μL의 1M 수성 나트륨 수소 카보네이트 용액을 부가하고, 반응 혼합물을 실온에서 추가 30 분 동안 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 남아 있는 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 동결건조하여 4.5 mg (이론의 20%)의 표제 화합물을 무색 폼으로서 얻었다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.04 분; MS (ESIpos): m/z = 1088 (M+H)+.
중간체 258
N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로폭시}에톡시)에톡시]에틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-[4-(벤질옥시)페닐]-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00563
이 화합물을, tert-부틸 3-{2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시}프로파노에이트을 사용하여 환원 알킬화, 그 다음 t-부틸 에스테르 절단 및 N-하이드록시석신이마이드 에스테르로의 전환으로 중간체 249로부터 개시하여 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.96 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 1.11 분; MS (ESIpos): m/z = 1208 (M+H)+.
중간체 259
N-(5-카복시펜틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00564
9.6 mg (8.4 μmol)의 N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드 트리플루오로아세테이트 (중간체 58) 및 6.5 mg (51 μmol)의 6-옥소헥산산을 769 μL의 메탄올에서 취하고 아세트산으로 산성화했다. 그 다음, 실온에서, 4 μl (40 μmol)의 보란-피리딘 복합물을 부가했다. 반응 혼합물을 차후에 실온에서 20 시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 트리플루오로아세트산으로 2의 pH로 조정하고, 분취 HPLC로 정제했다. 생산 분획을 조합하고, 농축하고 잔여물을 동결건조된. 이것으로 gave 8 mg (이론의 93%)의 표제 화합물을 폼으로서 얻었다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.06 분; m/z = 1019 (M+H)+.
중간체 260
N-{6-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-6-옥소헥실}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3E)-1,4-디페닐부트-3-엔-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00565
7.5 mg (7.4 μmol)의 중간체 259를 332 μL의 DMF 에서 용해시키고 12.7 mg (110 μmol)의 1-하이드록시피롤리딘-2,5-디온과 혼합하고 차후에 14 mg (37 μmol)의 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 및 6 μL의 N,N-디이소프로필에틸아민와 혼합했다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC로 정제했다. 디옥산으로부터 동결건조하여 4 mg (이론의 55%)의 표제 화합물을 얻었다.
LC-MS (방법 1): Rt = 1.19 분; m/z = 1002 (M+H)+.
중간체 261
N-{2-[2-(2-{3-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-3-옥소프로폭시}에톡시)에톡시]에틸}-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-{[(1S,2R)-1-(1,2-옥사지난-2-일카보닐)-2-페닐사이클로프로필]아미노}-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00566
이 화합물을, 벤질 3-{2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시}프로파노에이트에 의한 환원 알킬화, 수소첨가분해에 의한 차후의 벤질 에스테르 절단, 및 N-하이드록시석신이마이드 에스테르로의 전환으로 중간체 16으로부터 개시하여 제조했다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.83 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.93 분; MS (ESIpos): m/z = 1114 (M+H)+.
B: 항체-약물 콘주게이트(ADC)의 제조
B-1. 항- FGFR2 항체의 생성
본 발명의 인간 항-FGFR2 항체 M048-D01-hIgG1 및 M048-D01-hIgG1-b는 바이오인벤트 인터내셔널 에이비(Bioinvent International AB)(스웬덴 룬트 소재; 문헌[Soderling 등, Nat. Biotech. 2000, 18:853-856]에 기재되어 있음)로부터 순수 파브(Fab) 항체 라이브러리 n-CoDeR를 사용하여 파아지 디스플레이(phage display) 기술에 의해 단리하였다. 하나의 스크리닝 히트(hit) 물질은 모 파브 단편 M048-D01이었다. 이러한 파브 단편의 중쇄 Vh의 가변 영역은 서열번호: 21로 주어지고; 경쇄 Vl의 가변 영역은 서열번호: 22로 주어진다. M048-D01 파브 단편 확인에 따라, 명칭 M048-D01-hIgG1-b(중쇄의 경우 서열번호: 10, 및 경쇄의 경우 서열번호: 9) 하에 인간 IgG의 형태로 발현된다. 효율적인 클로닝을 위해, M048-D01-hIgG1-b [EVQ]의 중쇄의 N-말단의 첫 번째 3개 아미노산도 다르게는 QVE로서 발현되었다. 이러한 변화는 항체 M048-D01-hIgG1(중쇄의 경우 서열번호: 8 및 경쇄의 경우 서열번호: 7)를 제공하였다. M048-D01-hIgG1의 가변 영역 Vh 및 Vl는 서열번호: 11 및 서열번호: 12로 주어지고; M048-D01-hIgG1-b의 가변 영역 Vh 및 Vl는 서열번호: 13 및 서열번호: 14로 주어진다. 모든 항체가 서열번호: 15(H-CDR1), 16(H-CDR2), 17(H-CDR3), 18(L-CDR1), 19(L-CDR2) 및 20(L-CDR3)으로 주어진 동일한 CDR 서열을 가진다.
항체 GAL-FR21-mIgG1 및 GAL-FR22-mIgG2a는 WO2010/054265에 mIgG1(GAL-FR21) 및 mIgG2b(GAL-FR22)로서 기재된다. GAL-FR21은 본원에서 Vh(서열번호: WO2010/054265에서 서열번호: 4) 및 Vl(WO2010/054265에서 서열번호: 1)를 통해 규정되고, GAL-22는 Vh(WO2010/054265에서 서열번호: 8) 및 Vl (WO2010/054265에서 서열번호: 7)를 통해 규정된다. 본원에 기재된 실험의 경우, GAL-FR21의 Vl 및 Vh는 쥣과 IgG1 형식으로 다시 포맷되어, 항체 GAL-FR21-mIgG1(본원의 서열번호: 3 및 서열번호: 4)를 생성하였다. GAL-FR22의 Vl 및 Vh는 쥣과 IgG2a 형식으로 다시 포맷되어, 항체 GAL-FR22-mIgG2a(본원의 서열번호: 5 및 서열번호: 6)를 생성하였다.
B-2. 항- FGFR2 항체의 발현
항체 M048-D01-hIgG1, M048-D01-hIgG1-b, GAL-FR21-mIgG1 및 GAL-FR22-mIgG2a는 일시적으로 포유동물 세포 배양물에서 제조되었다.
발현 구조물을 후술하는 바와 같이 제조하였다.
파아지 디스플레이로부터 유래된 M048-D01 파브의 Vh 및 Vl 영역을 IgG 형식으로 전이시키기 위해, 그리고 E. 콜라이로부터의 발현 시스템을 포유동물 세포로 변화시키기 위해, 파아지 디스플레이 E. 콜라이 클론으로부터 Vh 및 Vl 서열을 PCR 프라이머를 사용하여 증폭시켰다. 플랭킹 제한 효소 절단 부위를 Vh 및 Vl의 5' 및 3' 말단에 도입하였다. 이들 제한 효소 절단 부위는 IgG 골격을 함유한 발현 벡터로 Vh 및 Vl을 클로닝하는 데 사용되었다.
E. 콜라이 세포를 10분 동안 95℃에서 물 100 μL의 시험관에서 배양한 다음, 5분 동안 얼음 위에 두었다. 간단한 진탕 후, 용액을 원심분리하여 정화하였다. 분리된 상청액을 DNA 증폭에 사용하였다. PCR 반응은 Vh 및 Vl에 대해 별도로 수행하였다. 이는 Vl에 대해서는 BamHI 및 NotI 절단 부위, 및 Vh에 대해서는 MfeI, 및 MfeI 및 BlpI 절단 부위의 특정 프라이머 쌍을 사용하여 이루어졌다. PCR 반응은 제조자의 지침에 따라 애큐프라임(AccuPrime) Pfx 폴리머라제(인비트로젠(Invitrogen), # 12344-024)를 사용하여 수행하였다. PCR 생성물은 1% 아가로스 겔에서 분석하였다. 상화적 단부를 얻기 위해, 발현 벡터 및 PCR 생성물은 2 시간 동안 37℃에서 상응하는 제한 엔도뉴클레아제로 제조자 지침에 따라 분해하였다(표 1 참조). 분해는 70℃에서 15분 동안 배양에 의해 중지되었다. 생성 단편은 발현 벡터 내로 결찰시키고, E. 콜라이 또는 포유동물 세포는 표준 방법에 의해 구조물로 형질전환시켰다.
Vh 및 Vl 도메인 또는 특정 항체(GAL-FR21-mIgG1, GAL-FR22-mIgG2a 및 M048-D01-hIgG1-b)의 전체 경쇄의 DNA 서열은 포유동물 유전자 발현에 대한 진아트(Geneart) 유전자 합성 및 유전자 최적화 기술(미국 뉴욕주 그랜드 아일랜드 소재 라이프 테크놀로지스(life technologies))에 의해 합성하였다. 유전 합성 과정에서, 포유동물 신호 펩타이드의 코딩 서열의 V 도메인은 상류 코자키(Kozaki) 서열과 융합하였다. 플랭킹 제한 절단 부위는 합성된 DNA 구조물의 5' 및 3' 말단에 삽입되었다. 이들 제한 절단 부위는 IgG의 코딩 불변 영역을 함유하는 발현 벡터 내로 Vh 및 Vl 또는 경쇄를 클로닝하는 데 사용하였다.
발현 벡터 및 진아트 구조물은 상화적 단부를 제공하기 위해 37℃에서 2 시간 동안 각 제한 엔도뉴클레아제에 의해 제조자 지침에 따라 분해하였다(표 1 참조). 분해는 70℃에서 15분 동안 배양에 의해 중지되었다. 생성 단편을 결찰시키고, E. 콜라이 세포는 결찰법에 의해 형질전환시켰다. 이러한 형질전환체로부터 수득된 플라스미드는 표준 방법에 따라 포유동물 세포를 형질전환하는 데 사용하였다.
표 1: Vh 및 Vl, 또는 경쇄를 IgG 발현 벡터로 클로닝하기 위한 제한 절단 부위
Figure pct00567
* 완전한 경쇄의 클로닝
# PCR 생성물의 EcoRI-BlpI 및 BamHI-NotI-분해된 발현 벡터로의 클로닝.
항-FGFR2 항체, 예를 들면 M048-D01-hIgG1, GAL-FR21-mIgG1 및 GAL-FR22-mIgG2a의 발현을 위해 톰 등의 문헌[Tom 등, Chapter　12 in Methods Express: Expression Systems, edited by Michael　R.　Dyson and Yves　Durocher, Scion Publishing Ltd, 2007]에 기재된 바와 같이 상기 항체들을 포유동물 세포 배양물에서 일시적으로 발현시키고, HEK293 6E 세포를 적당한 CMV 프로모터-기반의 발현 플라스미드로 일시적으로 형질감염시켰다. 세포 배양물 규모는 진탕 플라스크에서 최대 1.5 L로 하거나 또는 "웨이브-백"에서 10 L로 하였다. 발현은 1% "FCS 초저 IgG"(인비트로젠) 및 0.5 mM 발프로산과 함께 트립톤 TN1(오가노테크니(Organotechnie))로 보강된 F17 배지(인비트로젠)에서 5 내지 6일 동안 37℃에서 수행되었다.
대안적으로, 항-FGFR2 항체, 예를 들면 M048-D01-hIgG1-b는 안정적으로 형질감염된 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포주에서 발현시켰다. 이는 원-벡터(one-vector) 시스템을 사용하여 수행하였다. 발효는 유가식(fed-batch) 공정의 생물반응기에서 상이한 규모로 일어났다.
파지 디스플레이로부터의 M048-D01-계 항체에 속하는 모 파브 단편 M048-D01(Vh: 서열번호: 21, Vl: 서열번호: 22)은 하기와 같이 발현되었다: 20 내지 50 ml의 LB 배지(0.1 mg/ml 암피실린 및 0.1% 글루코오스와 혼합된)를 상응하는 E. 콜라이 클론의 예비 배양물(이는 초기 pBif 벡터를 함유하고, geneIII 서열이 결여되어 있으나, 그에 클로닝된 M048-D01 Fab 서열을 가짐)로 접종하였다. sFab의 제조는 0.5 mM IPTG(최종 농도)를 부가하여 개시하였다. 배양은 30℃에서 밤새 250 rpm에서 수행되었다.
B-3. FGFR -2 항체의 정제
항체, 예를 들면 M048-D01-hIgG1, M048-D01-hIgG1-b, GAL-FR21-mIgG1 및 GAL-FR22-mIgG2a는 세포 배양물 상청액으로부터 수득하였다. 세포 상청액을 세포로부터 원심분리하여 정화하였다. 이어서, 맵셀렉트 슈어(MabSelect Sure)(지이 헬스케어(GE Healthcare)) 크로마토그래피 칼럼 상의 친화성 크로마토그래피로 세포 상청액을 정제하였다. 이를 위해, 칼럼을 DPBS pH 7.4(시그마/알드리치)에서 평형을 유지하고, 세포 상청액을 적용하고, 칼럼을 약 10 칼럼 용적의 DPBS pH 7.4 + 500 mM NaCl로 세정하였다. 항체를 50 mM Na 아세테이트 pH 3.5 + 500 mM NaCl에서 용리시키고, 이어서 DPBS pH 7.4의 수퍼덱스(Superdex) 200 칼럼(지이 헬스케어) 상에서 겔 여과 크로마토그래피로 추가 정제하였다.
E. 콜라이에서 발현된 모 M048-D01 파브 단편은 하기와 같이 정제하였다: E. 콜라이 세포를 원심분리에 의해 수확하고, 세포용해 버퍼(20% 수크로오스(w/v), 30 mM TRIS, 1 mM EDTA, pH 8.0, 1 mg/ml 리소자임(시그마 L-6876) 및 2.5 U/ml 벤조나제(시그마 E1014))에서 4℃에서 1시간 동안 인규베이션에 의해 용해시켰다. 그 후에 동일한 용적의 PBS를 부가했다. 그 후, 정화된 상청액을 히스-태그(his-tag) 단리용 다이나비즈(Dynabeads)(인비트로젠, 101-03D)에 적용하고, 혼합물을 4℃에서 2 시간 동안 진탕시켰다. 그 후, 매트릭스를 완충액 1(50 mM Na 포스페이트 완충액, pH 7.4, 300 mM NaCl, 5 mM 이미다졸, 0.01% 트윈(Tween) 20)로 3회 세정하였다. 이어서, 단일 세정 단계를 완충액 2(0.005%의 트윈 20과 혼합된 PBS)에서 수행하였다. 마지막으로, 파브를 완충액 E(10 mM Na 포스페이트 완충액, pH 7.4, 300 mM NaCl, 300 mM 이미다졸)로 용리시키고, 비바스핀(Vivaspin) 500 농축기(컷-오프 10 000, 지이(GE), 28-9322-25)에서 PBS 완충액을 사용하여 농축시켰다.
B-4. M048 - D01 -계 항체의 교차-반응성 프로파일 구축
본원의 인간 항체 M048-D01-hIgG1 및 M048-D01-hIgG1-b의 교차-반응성은 모 파브 단편 M048-D01(Vh: 서열번호: 21 및 Vl: 서열번호: 22를 포함함)을 사용하여 결정하였다.
표 2에 열거된 다양한 FGF 수용체 변이체에 결합시키기 위해 M048-D01 파브 단편을 엘리사(ELISA)로 시험하였다.
표 2: FGFR2 결합제의 교차-반응성 프로파일을 설정하는 데 사용되는 재조합 단백질의 목록
Figure pct00568
모든 변이체는 캐리어-비함유 제제에서 Fc 융합 단백질의 형태를 취했다. 2-배 몰 과잉의 바이오틴-LC-NHS(피어스(Pierce); 카탈로그 번호 21347)을 사용하여 제조자의 지침에 따라 단백질을 바이오티닐화하고, 제바(Zeba) 탈염 칼럼(피어스; 카탈로그 번호 89889)을 사용하여 탈염시켰다.
ELISA를 위해, 스트렙타비딘(피어스, 15500)으로 예비처리된 96-웰 플레이트를 밤새 4℃에서 1 μg/ml 바이오티닐화된 단백질로 로딩하였다. 바이오티닐화된 TRAIL-Fc로 로딩된 웰들을 참조물질로서 제공하였다. 다음 날, 플레이트를 PBST(0.05% 트윈 20와 혼합된 1 PBS(시그마, P7949))로 3회 세정하고, 차단 완충액(3% BSA와 혼합된 PBST(시그마 A4503))으로 처리하고, 다시 PBST로 3회 세정하였다. 100 μL의 정제된 파브(1 μg/ml)를 부가하고, 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션을 수행하였다. PBST로 3회 세정 후, HRP-커플링된 항-hIgG(Fab-특이적) (1:2500으로 희석됨, 시그마, A0293)을 부가하고, 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션을 수행하였다. 50 μL의 TMB(인비트로젠, 2023)를 부가하여 칼라 반응을 활성화하고, 50 μL의 H2SO4(메르크(Merck), 1120801000)를 부가하여 5 내지 15분 후 중지시켰다. 칼라 반응을 플레이트 리더(테칸(Tecan))로 450 nm에서 모니터링하였다. TRAIL-Fc를 함유한 웰들의 신호 강도를 배경 값으로 사용하고, 신호-대-배경 비를 표 3에 요약된 바와 같이 계산하였다.
표 3: M048-D01의 교차-반응성에 대한 ELISA 데이터 요약
Figure pct00569
신호-대-배경 비: 0: <2; +: 2-3; ++: 3-5; +++: >5
표 2로부터 알 수 있는 바와 같이, M048-D01-계 항체 M048-D01-hIgG1 및 M048-D01-hIgG1-b는 인간 및 쥣과 FGFR2에 결합하고, 문제의 형태가 알파 또는 베타 동형체인지, 또는 IIIb 및 IIIc 스플라이스 형태인지와는 무관하게 독립적으로 결합한다. 마찬가지로 상기 표로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 M048-D01-계 항체는 FGFR1, FGFR3 및 FGFR4에는 결합하지 않는다.
B-5. CLIPS 기술에 의한 에피토프 맵핑
M048-D01-계 항체의 결합 특성을 시험하기 위해, 집중적인 에피토프 맵핑 조작을 펩스캔(Pepscan) 소유의 문헌[“Chemically Linked peptides on Scaffolds” (CLIPS) Technologie (Timmerman 등, J. Mol. Recognit. 2007, 20:283-99)]에 기초하여 수행하였다. 모두에서, 인간 FGFR2에 대한 선형, 입체구조적 및 불연속적 에피토프를 다룬, 15개 아미노산 내지 30개 아미노산 길이의, 8653개 상이한 CLIPS 펩타이드를 설계하였다. 펩타이드를 펩타이드 어레이 상에서 합성하였다. 인간 항체 M048-D01-hIgG1를 ELISA-기반의 과정으로 펩타이드 어레이 상에서 시험하였다. 최대 ELISA 값을 제공하는 펩타이드를 분석하여 공통의 유사한 아미노산 서열을 단리하였다.
표적 분자의 불연속적 에피토프를 재구성하기 위해, 구조화된 펩타이드의 라이브러리를 합성하였다. CLIPS 기술은 펩타이드를 개별적인 루프, 이중 루프, 삼중 루프, 시트-유사 루프, 나선-유사 루프, 및 이들 구조 요소들의 조합으로 구조화할 수 있다: 이를 위해, CLIPS 템플레이트를 펩타이드 어레이의 시스테인 잔기에 커플링시킨다. 예를 들면, T2 CLIPS 템플레이트 1,3-비스(브로모메틸)벤젠의 0.5 mM 용액을 암모늄 바이카보네이트(20 mM, pH 7.9)/아세토니트릴(1:1 (v/v))에 용해시켰다. 이러한 용액을 펩타이드 어레이에 부가하였다. 펩타이드 어레이(3 μl 웰을 갖는 455개 웰 플레이트)에 존재하는 펩타이드의 2 시스테인의 측쇄에 CLIPS 템플레이트를 결합시켰다. 펩타이드 어레이를 30 내지 60 분 동안 용액 중에서 조심스럽게 진탕시켜 용액으로 완전히 피복시켰다. 마지막으로, 어레이를 과잉의 물로 철저히 세정하고, 70℃에서 30 분 동안에 초음파 배쓰에서 분해 완충액(1% SDS, PBS 중의 0.1% 베타-머캅토에탄올(pH 7.2))으로 처리하였다. 이어서, 초음파 배쓰에서의 처리를 물에서 추가 45분 동안 반복하였다. T3 CLIPS-함유 펩타이드를 유사한 방식으로 제조하였다.
각각의 펩타이드에 대한 항체 결합은 펩스캔(PEPSCAN)-기반의 ELISA에서 시험하였다(문헌[Sloostra 등, Molecular Diversity 1996, 1: 87-96]). 펩타이드 어레이는 5% 내지 100%의 결합 완충액으로 사전 배양(1시간, 20℃)하였다. 결합 완충액은 PBS 중의 1% 트윈 80, 4% 말 혈청 및 5% 난백알부민(w/v) 용액으로 구성되었다. 세정 단계 후, 펩타이드 어레이를 49℃에서 밤새 PBS 중의 1% 트윈 80의 일차 항체 용액(1 내지 5 μg/ml)에서 배양하였다. 추가 세정 단계 후, 펩타이드 어레이를 100% 결합제 완충액 중의 항체 페록시다아제 콘주게이트(항-인간-IgG)의 1/1000 희석액에서 25℃에서 1시간 동안 배양하였다. 추가 세정 단계 후, 페록시다아제 기질 2,2'-아지노-디-3-에틸벤조티아졸린설포네이트(ABTS) 및 2 μl/ml 3% 강도 H2O2을 부가했다. 한 시간 후, 발색을 측정하고, CCD 카메라 및 이미지 처리 시스템을 사용하여 정량화하였다.
이러한 방법으로 수득된 조 데이타는 0 내지 3000 mAU(밀리-흡광도-단위) 범위의 광학 값이다.
결과는 모든 M048-D01-계 항체가 FGFR2의 15 N-말단 잔기(1RPSFSLVEDTTLEPE15)로 구성된 에피토프 상에 결합한다는 것이다. 1257 CLIPS 및 선형 펩타이드의 분석은 N-말단 펩타이드에 대해 일관되게 높은 ELISA 값을 제공하였다.
N-말단 잔기(1RPSFSLVEDTTLEPE15)는, 도메인 D3에서의 대안적인 스플라이싱에 독립적으로, 인간 FGFR2의 모든 스플라이스 변이체에 존재하고, 이는 IIIb 및 IIIc 동형체를 생성한다. 에피토프는 또한 도메인 D1이 스플라이싱에 의해 전체 길이 FGFR2(FGFR2 알파, 서열번호: 1)에서 제거되는 경우에 존재하고, 따라서 더 짧은 베타-형태의 FGFR2(서열번호: 2)를 생성한다. 이 경우에 에피토프는 도메인 D2 바로 앞에 위치한다.
특히 관심 있는 것은 N-말단 서열이 인간, 마우스, 랫트 및 붉은털원숭이에서 보존된다는 사실이다. 이는 M048-D01 항체의 넓은 종(species)간 교차-반응성을 허용한다. 본 발명의 두 가지 실시예인 M048-D01-hIgG1 및 M048-D01-hIgG1-b의 결합 에피토프를 도 1에서 줄무늬 박스로서 표시하였다.
B-6. 시스테인 측쇄에 대한 일반적인 커플링 절차
커플링 반응에 사용된 항체는 하기와 같다:
M048-D01-hIgG1
M048-D01-hIgG1-b
1 mg/ml 내지 10 mg/ml의 농도 범위의 PBS 완충액 중의 상응하는 항체의 용액에, PBS 완충액 중의 3 당량의 트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드(TCEP) 용액을 부가하고, 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 이어서, 원하는 로딩에 따라, 중간체 102, 103, 105-109, 111-114, 117-126, 128, 129, 132-146, 148-155, 157, 159-161, 166, 171, 175-177, 184, 189, 194-195, 199-201, 205, 209, 223-224, 226, 228-231, 236, 244 및 257로부터의 커플링을 위해 2 내지 10 당량의 말레이마이드 전구체 화합물 또는 할라이드 전구체 화합물을 DMSO 중의 용액으로서 부가하였다. 여기서 DMSO의 양은 전체 용적의 10%를 초과하지 않아야 한다. 이 배치(batch)를 60 내지 120 분 동안 실온에서 교반하고, 그 다음, PBS로 평형화된 PD 10 칼럼(세파덱스(Sephadex) G-25, 지이 헬스케어)에 적용하고, PBS 완충액으로 용리시켰다. 선택적으로, 농축 절차는 초-원심분리에 의해 별도로 수행하였다.
일반적으로, 달리 지적되지 않으면, PBS 완충액 중의 5 mg의 상응하는 항체를 환원 및 후속 커플링에 사용하였다. PD10 칼럼을 통한 정제 이후, 이는, 각 경우에, 3.5 ml의 PBS 완충액 중의 상응하는 ADC의 용액을 제공하였다. 그 후, 명시된 특정 단백질 농도를 이들 용액에 대해 결정하였다. 또한, 항체(약물/mAb 비)의 로딩은 하기 기재된 방법에 따라 결정하였다.
이러한 과정은 실시예 1, 3, 5-6, 8, 10-12, 14, 15, 27 및 32에 나타낸 면역콘주게이트를 제조하는 데 사용하였다.
다음과 같은 구조식에서, AK1A 및 AK1B의 정의는 하기와 같다.
AK1A = 항-FGFR2 항체 M048-D01-hIgG1(부분적으로 환원됨)- S§1
AK1B = 항-FGFR2 항체 M048-D01-hIgG1-b(부분적으로 환원됨)- S§1
상기 식에서,
§1는 석신이마이드 기와의 연결을 나타내고,
S는 부분적으로 환원된 항체의 시스테인 잔기의 황 원자를 의미한다.
B-7. 라이신 측쇄에 대한 일반적인 커플링 절차:
하기 항체를 커플링 반응에 사용하였다.
M048-D01-hIgG1
M048-D01-hIgG1-b
GAL-FR21-mIgG1
GAL-FR22-mIgG2a
원하는 로딩에 따라, 1 mg/ml 내지 10 mg/ml의 농도 범위의 PBS 완충액 중의 상응하는 항체의 용액에, DMSO 중의 용액으로서 중간체 104, 110, 115, 116, 127, 130, 131, 147, 156, 158, 162, 169, 178, 185, 190, 202, 206, 210-216, 218, 219, 227, 233, 238, 240, 242, 245, 247a, 247b, 250, 251, 253, 255, 258 및 260-261로부터 커플링을 위한 2 내지 5 당량의 전구체 화합물을 부가했다. 실온에서 30 분 교반한 후, DMSO 중의 동일한 양의 전구체 화합물을 다시 부가하였다. 여기서 DMSO의 양은 전체 용적의 10%를 초과하지 않아야 한다. 실온에서 추가 30분 더 교반한 후, 그 배치를 PD 10 칼럼(세파덱스 G-25)에 적용하고, PBS 완충액으로 용리시켰다. 선택적으로, 농축 절차는 한외여과에 의해 별도로 수행하였다. 필요한 경우, 저 분자량 성분의 더 효과적인 제거를 위해, 한외여과에 의한 농축을 PBS 완충액으로 재-희석시킨 후에 반복하였다.
일반적으로, 달리 지적되지 않으면, PBS 완충액 중의 5 mg의 상응하는 항체를 커플링에 사용하였다. PD10 칼럼을 통한 정제 이후, 이는, 각 경우에, 3.5 ml의 PBS 완충액 중의 상응하는 ADC의 용액을 제공하였다. 그 후, 명시된 특정 단백질 농도를 이들 용액에 대해 결정하고, 항체(약물/mAb 비)의 로딩은 하기 기재된 방법에 따라 결정하였다.
이러한 과정은 실시예 2, 4, 7, 9, 13, 16-17, 25, 26, 28-31 및 33-35에 나타낸 면역콘주게이트를 제조하는 데 사용하였다.
다음과 같은 구조식에서, AK2A, AK2B, AK2D 및 AK2E의 정의는 하기와 같다.
AK2A = 항-FGFR2 항체 M048-D01-hIgG1 - NH§2
AK2B = 항-FGFR2 항체 M048-D01-hIgG1-b - NH§2
AK2D = 항-FGFR2 항체 GAL-FR21-mIgG1 - NH§2
AK2E = 항-FGFR2 항체 GAL-FR22-mIgG2a - NH§2
상기 식에서,
§2는 카보닐 기와의 연결을 나타내고,
NH는 항체의 라이신 잔기의 측쇄 아미노 기를 의미한다.
B-8. 시스테인 부가물의 일반적인 제조 공정:
10 μmol의 상기-기재된 말레이마이드 전구체 화합물를 3 ml의 DMF에 용해시키고, 2.1 mg (20 μmol)의 L-시스테인과 혼합하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축시킨 후, 분취용 HPLC로 정제했다.
다음과 같은 구조식에서, Cys의 정의는 하기와 같다.
Figure pct00570
상기 식에서,
§3은 링커-독성기 단위와의 연결을 나타낸다.
B-9. 라이신 부가물의 일반적인 제조 공정:
10 μmol의 상기 기재된 활성 에스테르 전구체 화합물을 5 ml의 DMF에 용해시키고, 30 μmol의 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재 하에, α-아미노-보호된 L-라이신과 첨가혼합하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축시킨 후, 분취용 HPLC로 정제했다. 이어서, 보호기를 공지된 방법에 의해 제거하였다.
본 발명의 콘주게이트의 추가 정제 및 특성화
반응시킨 후, 어떤 경우에는 반응 혼합물을 예를 들어 한외여과에 의해 농축하고, 그 다음 탈염시키고, 예를 들어 세파덱스 G-25를 사용하여 크로마토그래피로 정제하였다. 예를 들어 포스페이트-완충된 염수(PBS)로 용리시켰다. 이어서, 용액을 멸균 여과시키고 냉동시켰다. 다른 옵션은 콘주게이트를 동결건조시키는 것이다.
B-10. 독성기 ( toxophore ) 로딩의 결정
PBS 완충액 중의, 실시예에 기재된 콘주게이트의 생성 용액의 독성기 로딩은 하기와 같이 결정하였다.
라이신-연결된 ADC의 독성기 로딩은 개별적인 콘주게이트 종의 분자량의 질량 분광분석 측정에 의해 결정하였다. 이 경우에, 우선, 항체 콘주게이트를 PNGaseF에 의해 탈글리코실레이트화하고, 샘플을 산성화하고, HPLC로 분리한 후, ESI-MicroTofQ(브루커 달토닉(Bruker Daltonik))을 사용하여 질량 분광분석법으로 분석하였다. 모든 스펙트럼을 총 이온 크로마토그램(TIC)의 신호를 통해 부가하고, 다양한 콘주게이트 종의 분자량을 맥스엔트 디컨볼루션(MaxEnt Deconvolution)에 기초하여 계산하였다. 상이한 종의 신호 통합 후, 이어서 DAR(약물/항체 비)를 계산하였다.
단백질 확인을 위해, 분자량 결정 이외에, 트립신 분해를 탈글리코실화 및/또는 변성 후에 실시하고, 이러한 분해를, 변성, 환원 및 유도체화한 후, 검출된 트립신계 펩타이드에 기초하여 단백질의 실체를 확인하였다.
시스테인-연결된 콘주게이트의 독성기 로딩은 환원 및 변성된 ADC의 역상 크로마토그래피를 통해 결정하였다. ADC 용액(1 mg/mL, 50 μL)을 구아니디늄 하이드로클로라이드(GuHCl)(28.6 mg)와 혼합하고, DL-디티오트레이톨(DTT)(500 mM, 3 μL)의 용액과 혼합하였다. 혼합물을 55℃에서 1 시간 동안 배양하고, HPLC로 분석하였다.
HPLC 분석은 220 nm에서 검출 파장을 갖는 애질런트(Agilent) 1260 HPLC 시스템 상에서 수행하였다. 사용된 칼럼은, 0 min, 25% B; 3 min, 25 % B; 28 min, 50% B의 구배를 사용한 1 mL/min의 유속의 폴리머 레버러토리즈(Polymer Laboratories) PLRP-S 폴리머 역상 칼럼(카탈로그 번호 PL1912-3802)(2.1 150 mm, 8 μm 입자 크기, 1000 Å)이었다. 용리액 A는 물 중의 0.05% 트리플루오로아세트산(TFA)으로 구성하고, 용리액 B는 아세토니트릴 중의 0.05% 트리플루오로아세트산으로 구성하였다.
검출된 피크는 비-컨주게이트된 항체의 경쇄(L0) 및 중쇄(H0)의 체류 시간 비교에 의해 할당하였다. 컨주게이트된 샘플에서만 검출된 피크는 독성기(L1)에 의해 경쇄에 할당하고, 1, 2 및 3의 독성기(H1, H2, H3)에 의해 중쇄에 할당하였다.
독성기를 갖는 항체의 평균 로딩은 다음과 같이 적분에 의해 결정되는 피크 면적으로부터 결정하였다: 경쇄 로딩은 경쇄에 속하는 피크의 독성기 수 칭량된 적분 결과의 합을 경쇄에 속하는 피크의 단독 칭량된 적분 결과의 합으로 나누어 계산하였다. 중쇄 로딩은 중쇄에 속하는 피크의 독성기 수 칭량된 적분 결과의 합을 중쇄에 속하는 피크의 단독 칭량된 적분 결과의 합으로 나누어 계산하였다. 이로부터 평균 약물 부하(load)를 경쇄 로딩과 중쇄 로딩 2가지의 합으로 얻었다. 어떤 개별적인 사례에서, 특정 피크의 공동-용리 때문에, 독성기 로딩을 정확하게 결정하는 것은 불가능할 수 있다.
B-11. ADC 의 항원 결합 시험
커플링이 일어난 후에 표적 분자에 대한 결합제의 결합능을 시험하였다. 숙련자는 이를 달성하기 위한 다양한 방법을 알고 있으며, 예를 들면, ELISA 기술 또는 표면 플라즈몬 공명 분석(비아코어(BIAcore™) 측정)에 의해 콘주게이트의 친화도를 시험할 수 있다. 콘주게이트 농도는 통상의 방법을 사용하여, 예를 들면, 항체 콘주게이트의 경우, 단백질 측정에 의해 숙련자에 의해 측정될 수 있다(또한, 문헌[Doronina et al.; Nature Biotechnol. 2003; 21:778-784 and Polson 등, Blood 2007; 1102:616-623] 참조).
실시예 - 면역콘주게이트
실시예 1
Figure pct00571
본 커플링을 PBS 중 30 mg의 M048-D01-hIgG1을 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고, PBS로 재희석하고 다시 농축했다.
단백질 농도: 15.5 mg/ml
약물/mAb 비: 3.7
실시예 2
Figure pct00572
본 커플링을 PBS 중 32 mg의 M048-D01-hIgG1을 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고, PBS로 재희석하고 다시 농축했다.
단백질 농도: 11.7 mg/ml
약물/mAb 비: 3.9
실시예 3
Figure pct00573
본 커플링을 PBS 중 30 mg의 M048-D01-hIgG1을 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고, PBS로 재희석하고 다시 농축했다.
단백질 농도: 12.5 mg/ml
약물/mAb 비: 3.7
실시예 4
Figure pct00574
본 커플링을 PBS 중 2 mg의 M048-D01-hIgG1을 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 재희석했다.
단백질 농도: 1.92 mg/ml
약물/mAb 비: 3.7
실시예 5
Figure pct00575
본 커플링을 PBS 중 3 mg의 M048-D01-hIgG1을 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 2.54 mg/ml
약물/mAb 비: 3.1
실시예 6
Figure pct00576
본 커플링을 PBS 중 4 mg의 M048-D01-hIgG1을 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.53 mg/ml
약물/mAb 비: 2.7
실시예 7
Figure pct00577
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.28 mg/ml
약물/mAb 비: 6.1
실시예 8
Figure pct00578
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.26 mg/ml
약물/mAb 비: 3.5
실시예 9
Figure pct00579
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.28 mg/ml
약물/mAb 비: 6.1
실시예 10
Figure pct00580
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.36 mg/ml
약물/mAb 비: 4.4
실시예 11
Figure pct00581
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.27 mg/ml
약물/mAb 비: 4.8
실시예 12
Figure pct00582
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.48 mg/ml
약물/mAb 비: 4.0
실시예 13
Figure pct00583
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.21 mg/ml
약물/mAb 비: 1.5
실시예 14
Figure pct00584
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.27 mg/ml
약물/mAb 비: 2.7
실시예 15
Figure pct00585
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 재희석했다.
단백질 농도: 1.37 mg/ml
약물/mAb 비: 3.9
실시예 16
Figure pct00586
본 커플링을 PBS 중 4 mg의 GAL-FR21-mIgG1을 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 재희석했다.
단백질 농도: 1.63 mg/ml
약물/mAb 비: 8.7
실시예 17
Figure pct00587
본 커플링을 PBS 중 4 mg의 GAL-FR22-mIgG2a을 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 PBS로 재희석했다.
단백질 농도: 1.60 mg/ml
약물/mAb 비: 8.1
실시예 18
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00588
15.5 mg (15 μmol)의 중간체 210을 5 ml의 DMF에서 취하고 4.4 mg (18 μmol)의 N2-(tert-부톡시카보닐)-L-라이신 및 또한 7.7 μL (44 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 차후에 분취 HPLC로 정제했다. 이것으로 gave 14 mg (81% of 이론)의 표제 화합물의 보호된 중간체를 얻었고, 이것을 차후에 1 ml의 디클로로메탄에서 취하고 1 ml의 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 배치를 농축하고, 아세토니트릴/물 (1:1)로부터 잔여물의 동결건조 다음에, 15 mg (이론의 97%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.8 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.79 분; MS (ESIpos): m/z = 1083 (M+H)+.
실시예 19
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00589
40 mg (40 μmol)의 중간체 227을 5 ml의 DMF에서 취하고 11.5 mg (40 μmol)의 N2-[(벤질옥시)카보닐]-L-라이신 및 또한 13 μL (80 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축하고 차후에 분취 HPLC로 정제했다. 이것으로 gave 32.5 mg (이론의 70%)의 표제 화합물의 보호된 중간체를 얻었다.
이러한 32.5 mg의 중간체를 10 ml의 메탄올에서 용해시키고, 2 mg의 10% 활성탄상 팔라듐의 부가 다음에, 표준 수소 압력 하에서 실온에서 30 분 동안에 수소첨가했다. 그 다음 촉매를 여과로 제거하고 용매를 감압 하에서 제거했다. 디옥산/물 1:1로부터 잔여물의 동결건조로 gave 26 mg (이론의 99%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.76 분; MS (ESIpos): m/z = 1014 (M+H)+.
실시예 20
N-[(18S)-18-아미노-18-카복시-12-옥소-3,6,9-트리옥사-13-아자옥타덱-1-일]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00590
3.5 mg (3 μmol)의 중간체 202를 2 ml의 DMF에서 취하고 0.8 mg (3 μmol)의 N2-(tert-부톡시카보닐)-L-라이신 및 또한 1.6 μL (10 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고 그 다음 감압 하에서 농축했다. 잔여물을 아세토니트릴/물 (1:1)에서 취하고, 트리플루오로아세트산으로 2의 pH로 만들었고 그 다음 분취 HPLC로 정제했다. 이것으로 gave 1 mg (이론의 25%)의 표제 화합물의 보호된 중간체를 얻었고, 이것을 차후에 500 μL의 디클로로메탄에서 취하고 500 μL의 트리플루오로아세트산로 탈보호했다. 배치를 농축하고, 아세토니트릴/물 (1:1)로부터 잔여물의 동결건조 다음에, 1 mg (이론의 89%)의 표제 화합물을 수득했다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.9 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.82 분; MS (ESIpos): m/z = 1173 (M+H)+.
실시예 21
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일] 히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-아미노-3-(1H-인돌-3-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00591
10 mg (10 μmol)의 중간체 157을 5.2 ml의 DMF에서 취하고 2.28 mg (20 μmol)의 L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축하고 차후에 분취 HPLC로 정제했다. 이것으로 gave 5.8 mg (이론의 48%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.45 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.74 분; MS (ESIpos): m/z = 1184 (M+H)+.
실시예 22
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥사노일]히드라지노}-4-옥소부틸)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00592
10 mg (10 μmol)의 중간체 113을 5.2 ml의 DMF에서 취하고 2.28 mg (20 μmol)의 L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축하고 차후에 분취 HPLC로 정제했다. 이것으로 gave 6 mg (이론의 54%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.5 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.77 분; MS (ESIpos): m/z = 1185 (M+H)+.
실시예 23
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(1H-인돌-3-일)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00593
10 mg (10 μmol)의 중간체 124을 4 ml의 DMF에서 취하고 2.5 mg (20 μmol)의 L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축하고 차후에 분취 HPLC로 정제했다. 이것으로 gave 7.2 mg (이론의 64%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.6 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.8 분; MS (ESIpos): m/z = 1071 (M+H)+.
실시예 24
N-[6-(3-{[(2R)-2-아미노-2-카복시에틸]설파닐}-2,5-디옥소피롤리딘-1-일)헥실]-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-인돌-3-일)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드
Figure pct00594
10 mg (10 μmol)의 중간체 125을 4 ml의 DMF에서 취하고 2.4 mg (20 μmol)의 L-시스테인과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 그 다음 감압 하에서 농축하고 차후에 분취 HPLC로 정제했다. 이것으로 gave 7.7 mg (이론의 69%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 5): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 2): Rt = 1.91 분; MS (ESIpos): m/z = 1140 (M+H)+.
실시예 25
Figure pct00595
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.27 mg/ml
약물/mAb 비: 1.0
실시예 26
Figure pct00596
본 커플링을 PBS 중 35 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고, PBS로 재희석하고 다시 농축했다.
단백질 농도: 11.60 mg/ml
약물/mAb 비: 3.7
실시예 27
Figure pct00597
본 커플링을 PBS 중 35 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고, PBS로 재희석하고 다시 농축했다.
단백질 농도: 11.7 mg/ml
약물/mAb 비: 4.2
실시예 28
Figure pct00598
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 반응 혼합물을, Sephadex 정제 다음에, 초원심분리로 농축하고 PBS로 재희석했다.
단백질 농도: 1.31 mg/ml
약물/mAb 비: 3.7
실시예 29
Figure pct00599
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 반응 혼합물을, Sephadex 정제 다음에, 초원심분리로 농축하고 PBS로 재희석했다.
단백질 농도: 1.53 mg/ml
약물/mAb 비: 1.3
실시예 30
Figure pct00600
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 Sephadex 정제 다음에 배치를 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.61 mg/ml
약물/mAb 비: 3.9
실시예 31
Figure pct00601
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 반응 혼합물을, Sephadex 정제 다음에, 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.32 mg/ml
약물/mAb 비: 1.7
실시예 32
Figure pct00602
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 반응 혼합물을, Sephadex 정제 다음에, 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.12 mg/ml
약물/mAb 비: 0.2
실시예 33
Figure pct00603
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 반응 혼합물을, Sephadex 정제 다음에, 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.29 mg/ml
약물/mAb 비: 5.5
실시예 34
Figure pct00604
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 반응 혼합물을, Sephadex 정제 다음에, 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.04 mg/ml
약물/mAb 비: 0.5
실시예 35
Figure pct00605
본 커플링을 PBS 중 5 mg의 M048-D01-hIgG1-b를 사용하여 수행하고 반응 혼합물을, Sephadex 정제 다음에, 초원심분리로 농축하고 재희석했다.
단백질 농도: 1.66 mg/ml
약물/mAb-비: 3.4
실시예 36
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-하이드록시페닐)-1-(1,2-옥사지난-2-일)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00606
8 mg (8 μmol)의 중간체 242를 3 ml의 DMF에서 취하고 2.9 mg (12 μmol)의 N2-(tert-부톡시카보닐)-L-라이신 및 또한 2.7 μL (16 μmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 동일한 양의 N2-(tert-부톡시카보닐)-L-라이신 및 N,N-디이소프로필에틸아민과 다시 혼합하고, 실온에서 추가 4 시간 동안 교반했다. 배치를 차후에 감압 하에서 농축했다. 그 다음 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조하여 6.5 mg (이론의 72%)의 표제 화합물의 보호된 중간체를 얻었고, 이것을 차후에 5 ml의 디클로로메탄에서 취하고 0.75 ml의 트리플루오로아세트산으로 탈보호했다. 배치를 농축하고, 디옥산/물로부터 잔여물을 동결건조하여 5 mg (이론의 76%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.7 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.69 분; MS (ESIpos): m/z = 1059 (M+H)+.
실시예 37
N-(6-{[(5S)-5-아미노-5-카복시펜틸]아미노}-6-옥소헥실)-N-메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카복시-2-(4-하이드록시페닐)에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드 트리플루오로아세테이트
Figure pct00607
38 mg (41 μmol)의 중간체 248를 먼조 N-하이드록시석신이마이드 에스테르로 전환했다. 72 mg의 수득된 조 생성물을 5 ml의 DMF에서 취하고 24 mg (100 μmol)의 N2-(tert-부톡시카보닐)-L-라이신 및 23 μL의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 다음 16 mg의 N2-(tert-부톡시카보닐)-L-라이신 및 12 μL의 N,N-디이소프로필에틸아민과 다시 혼합하고, 차후에 초음파 배쓰에서 추가 2 시간 동안 처리했다. 그 다음 배치를 감압 하에서 농축하고 잔여물을 분취 HPLC로 정제했다. 아세토니트릴/물로부터 동결건조하여 20 mg (이론의 50%)의 표제 화합물의 보호된 중간체를 얻었다.
15 mg (12 μmol)의 이러한 중간체를 차후에 3 ml의 디클로로메탄에서 취하고 1 ml의 트리플루오로아세트산과 혼합했다. 실온에서 40 분의 교반 후, 추가 1.5 ml의 트리플루오로아세트산을 부가하고 배치를 초음파 배쓰에서 1 시간 동안 처리했다. 그 후에 배치를 농축하고, 디옥산/물로부터 잔여물을 동결건조하여 13 mg (이론의 90%)의 표제 화합물을 얻었다.
HPLC (방법 12): Rt = 1.5 분;
LC-MS (방법 1): Rt = 0.68 분; MS (ESIpos): m/z = 990 (M+H)+.
C: 생물학적 활성의 평가:
본 발명의 화합물의 생물학적 효과는 하기 기재된 검정에 의해 실증되었다:
C-1. 세포 표면상에서 상이한 FGFR2 수준을 갖는 종양 세포의 확인
세포 표면상에서 항체에 이용가능한 FGFR2의 양을 결정하기 위해, 상이한 종양 세포주 상의 FGFR2 항체의 세포 결합을 유세포측정에서 분석했다. 하기 세포주를 실험에 사용했다. FGFR2의 돌연변이 및 복제수에 대한 정보는 생거 센터 게놈 프로젝트 (Sanger Center Genome Project)로부터 유래한다:
- SNU -16 인간 위 암종 세포, FGFR2 유전자 증폭 (복제수 14; ATCC-CRL-5974, RPMI 1640 (Biochrom FG1215) + 10% FCS
- KatoIII 인간 위 암종 세포, FGFR2 유전자 증폭 (복제수 14 ATCC-TCP-1008; Iscove's (Biochrom FG0465) + 20% FCS
- SUM52 - PE 인간 유방암 세포, FGFR2 유전자 증폭 (복제수 14; Asterand 로트 번호: 28062A1-6004; Ham's F12 (Biochrom FG0815) + 5% FCS + 10 mM Hepes 완충액 + 1 μg/ml 하이드로코르티손 + 5 μg/ml 인슐린
- MFM -223 인간 유방암 세포, FGFR2 유전자 증폭 (복제수 14; ECACC-98050130, MEM Earle (Biochrom F0315) + 10% FCS + 2mM 글루타민
- NCI - H716 인간 결장직장 암종 세포, FGFR2 유전자 증폭 (복제수: 8; ATCC-CCL-251; RPMI 1640 (Biochrom FG1215) + 10% FCS)
- MDA - MB -231 인간 유방암 세포 (FGFR2 유전자 증폭 없음, 복제수 3; ATCC-HTB-26, DMEM/HAM's F12 (Biochrom FG4815) + 10% FCS
실험을 위해, 부착 세포를 PBS (칼슘 (Ca2 +) 및 마그네슘 (Mg2 +) 이온 부재)로 2회 세정하고, 무효소, PBS-기반 세포 해리 완충액 (Invitrogen)을 사용하여 떼어냈다. 대략 1×105 세포/웰을 FACS 완충액 (3% FCS를 포함하고 Ca2 + 및 Mg2 +가 부재한 PBS (Biochrom))에 현탁시키고, 그 다음 원심분리 (250 g, 5 min, 4℃)하고, 상청액을 버렸다. 세포를 FACS 완충액 중의 항체 희석액 (80 μl 중의 5 μg/ml)에 재현탁시키고, 얼음 위에서 1시간 동안 인큐베이션시켰다. 다음으로, 세포를 100 μL의 차가운 FACS 완충액으로 1회 세정하고 80 μL의 1:150 희석된 2차 항체 (GAL-FR21-mIgG1 및 GAL-FR22-mIgG2a를 위한 PE-커플링된 염소 항-마우스 IgG, 잭슨 면역 연구 (Jackson Immuno Research) #115-115-164, 및 M048-D01-hIgG1을 위한 PE-커플링된 염소 항-인간 IgG, Dianova #109-115-098)를 부가했다.
얼음 위에서 1시간 동안 인큐베이션 후, 세포를 다시 차가운 FACS 완충액으로 세정하고, 100 μL의 FACS 완충액으로 재현탁시키고, FACS 어레이 유동 세포분석기 (BD Biosciences)에서 분석했다. 결과를 FGFR2 항체와 함께 검출된 세포 집단의 기하학적 평균값으로서 배경 형광을 빼고 계산했으며, 이것은 세포 집단을 2차 항체만으로 인큐베이션하여 측정되었다. 값을 하기 시스템으로 분석했다: FGFR2 항체의 기하학적 평균값 - 2차 항체만의 기하학적 평균값 > 10 +, > 100 ++, > 1000 +++, > 10000 ++++, -: 신호 없음. 카테고리 한계 부근 값은 ()로 표시한다.
종양 세포에 대한 FGFR2 항체의 결합은 표 4에 명시된다:
표 4
Figure pct00608
1) nd: 측정되지 않음
FGFR2 항체는 MFM-223 및 SNU-16 암 세포의 세포 표면 위의 FGFR2를 검출한다.
C-2. FGFR2 를 겨냥한 ADC 의 세포독성 효과의 결정
FGFR2 ADC의 세포독성 효과는 하기와 같이 상이한 발현 양의 FGFR2를 갖는 다양한 세포주 상에서 결정되었다:
세포를 C-1 하에 명시된 성장 배지를 사용하여 표준 방법에 따라서 배양했다. 실행을 위해, 세포를 PBS (Biochrom AG #L2143) 중의 트립신 (0.05%) 및 EDTA (0.02%) 용액으로 떼어내고, 펠렛화시키고, 배양 배지에 재현탁시키고, 계수하고, 백색 기저를 갖는 96-웰 배양판 (Costar #3610) 내로 시딩하고 (웰당 75 μl로, 이어서 웰당 세포 계수: SNU-16: 3000; MFM-223: 7000; MDA-MB-231: 4000; SUM52-PE: 3000; NCI-H716: 3000; KatoIII: 3000), 5% 이산화탄소 하에서 37℃의 인큐베이터에서 인큐베이션했다. 24시간 후, 25 μL의 배양 배지 중의 항체-약물 콘주게이트 (4배 농도)를 세포에 적용하여, 세포에서 3 × 10-7 M 내지 3 × 10-11 M의 최종 항체-약물 콘주게이트 농도를 제공했다(트리플리케이트). 그 다음, 세포를 37℃ 및 5% 이산화탄소의 인큐베이터에서 인큐베이션했다. 평행 플레이트에서, 약물 치료의 개시시 (0일째) 세포 활력을 세포 역가 글로 발광 세포 생존력 검정 (Cell Titer Glow Luminescent Cell Viability Assay) (Promega #G7573 및 #G7571)을 사용하여 결정했다. 이를 위해, 100 μL의 기질을 세포 배치 당 부가하고, 그 다음 플레이트를 알루미늄 포일로 덮고, 2분 동안 180 rpm에서 플레이트 진탕기에서 흔들고, 8분 동안 실험실 벤치 위에 정치시키고, 그 다음 발광분석기 (Victor X2, Perkin Elmer)를 사용하여 측정했다. 기질은 살아있는 세포 중의 ATP 함량을 측정하여, 그 수준이 세포의 활력에 직접적으로 비례하는 발광 신호를 생산한다. 항체-약물 콘주게이트와 함께 72시간의 인큐베이션 후, 이들 세포에서의 활력을 마찬가지로 상기에서 기재된 바와 같이 세포 역가 글로 발광 세포 생존력 검정을 사용하여 결정했다. 측정된 데이타로부터, 성장 억제의 IC50을 4-파라미터 적응을 기반으로 한 실험실 소프트웨어 MTS (Schering AG 및 Bayer Business Services 1999-2009에 의해 개발됨)를 사용하여 0일째의 것과 비교하여 계산했다.
하기 표 5는 이러한 검정으로부터의 대표적인 실시예의 IC50 값1 )을 열거한다.
표 5
Figure pct00609
1) 보고된 활성 데이타는 명시된 약물/mAB 비와 함께, 본 실험 섹션에 기재된 실시예에 관한 것이다. 값은 아마 상이한 약물/mAB 비에 대해 벗어날 수 있다.
실시예 1은 나노몰 이하의 농도 범위의 IC50을 갖는, 세포 표면에서 FGFR2를 발현시키는 SNU-16 및 MFM-223 암 세포주의 증식을 억제했다. 실시예 1은 300 nM의 IC50을 갖는, 세포 표면에서 FGFR2를 발현시키지 않는 MDA-MB-231 암 세포주의 증식을 억제했다. 데이타로부터 분명한 바와 같이, 모든 시험된 항체-약물 콘주게이트 (실시예 1-31, 33-35)는 FGFR2-발현 암 세포주 (SNU-16, MFM-223, SUM52-PE, KatoIII 또는 NCI-H716)의 증식을 선택적으로 억제한다.
C-3. 튜불린 중합에 대한 효과의 결정
암 세포는 또한 세포 분열 증가의 결과로서 종양의 형성을 빈번하게 유도하는 변성된 세포이다. 미세소관은 스핀들 장치의 스핀들 섬유를 형성하며 세포 주기의 필수적인 구성요소이다. 조절된 구성 및 미세소관의 파손은 딸 세포 중에서 염색체의 정확한 분할을 가능하게 하고, 연속적 역학 공정을 구성한다. 이러한 역학 공정의 파손은 부정확한 세포 분열 및 결국 세포사를 야기한다. 그러나, 암 세포의 세포 분열 증가는 또한 화학요법의 고정된 구성요소를 구성하는, 스핀들 섬유 독에 대해 상기 세포를 특히 민감하게 만든다. 스핀들 섬유 독 예컨대 파클리탁셀 또는 에포틸론은 미세소관의 중합 속도의 급격한 증가를 유도하며, 반면에 빈카 알카로이드 또는 그 밖의 모노메틸아우리스타틴 E (MMAE)는 미세소관의 중합 속도의 급격한 감소를 유도한다. 둘 모두의 경우에, 세포 주기의 필요한 활력은 결정적으로 파열된다.
튜불린 중합은 Cytoskeleton (Denver, Colorado, USA; order number: BK011)으로부터 "형광-기반 미세소관 중합 검정 키트"를 사용하여 조사했다. 이러한 검정의 경우, GTP를 중합되지 않은 튜불린에 부가하여, 중합이 동시에 일어나도록 한다. 검정은 튜불린에 대한 형광단 4',6-디아미디노-2-페닐인돌 (DAPI)의 결합을 기반으로 한다. 유리 및 결합된 DAPI는 상이한 방출 스펙트럼을 기반으로 하여 식별될 수 있다. DAPI가 중합되지 않은 튜불린과 비교하여 중합된 튜불린에 대해 유의미하게 높은 친화도를 나타내기 때문에, 튜불린 중합은 결합된 DAPI 형광단의 형광의 증가를 통해 추적될 수 있다.
이러한 검정의 실행을 위해, DMSO 중의 용액에서 본 발명의 화합물은 10 mM 내지 1 μM의 그의 초기 농도로부터 수중에서 희석되었다. 완충액 대조군 이외에, 중합-증가 효과를 갖는 파클리탁셀, 및 중합 억제 효과를 갖는 빈블라스틴은 검정 대조군으로서 추가로 적용되었다. 절반 기저 면적을 갖는 96-웰 플레이트를 사용하여 측정을 수행했다. 튜불린 중합의 동력학을 1시간 동안 37℃에서 형광계에서 모니터링했다. 여기 파장은 355 nm이었고, 방출은 460 nm에서 모니터링되었다. 처음 10분 내의 선형 증가 영역의 경우, 계산은 분당 형광의 변화 (ΔF/min)로 이루어졌고, 이것은 미세소관의 중합 속도를 나타낸다. 시험 물질의 효능을 이들 각각의 중합 속도 감소를 기반으로 하여 정량화했다. 하기 표 6은 튜불린 중합에 대한 대표적인 실시예의 영향에 대한 데이타를 제공한다.
표 6 : 선택된 실시예의 독성기 변이체에 의한 튜불린 중합의 봉쇄.
Figure pct00610
MMAF 독성기 및 실시예는 그의 농도의 함수로서 튜불린 중합을 억제한다. 100 μM MMAF에서, 튜불린 중합은 완전히 억제된다. 본 발명의 맥락에서 조사된 화합물은 미세소관의 중합 속도 감소를 야기한다. 실시예 18-21은 1 μM에서 1 μM MMAF에 대해 측정된 값의 45-88%까지 튜불린 중합을 억제한다.
C-4. 세포 투과성을 결정하기 위한 시험관내 시험
물질의 세포 투과성은 Caco-2 세포를 사용하여 유동 검정에서 시험관내 시험에 의해 조사될 수 있다 [M.D. Troutman and D.R. Thakker, Pharm . Res . 20 (8), 1210-1224 (2003)]. 이를 위해, 세포를 24-웰 필터 플레이트 위에서 15-16일 동안 배양했다. 투과의 측정을 위해, 각 실시예를 HEPES 완충액 중에서 세포에 정점에서 (A) 또는 기저에서 (B) 적용하고 2시간 동안 인큐베이션했다. 0시간 후 및 2시간 후에, 샘플을 시스 및 트랜스 구획으로부터 채취했다. 샘플을 역상 칼럼을 사용하여 HPLC (Agilent 1200, Boblingen, Germany)로 분리했다. HPLC 시스템은 터보 이온 스프레이 인터페이스 (Turbo　Ion　Spray Interface)를 통해 트리플 쿼드로폴 질량 분광분석기 API 4000 (Applied Biosystems Applera, Darmstadt, Germany)에 커플링되었다. 투과성은 Papp 값을 기반으로 하여 평가했으며, 이것은 Schwab 등에 의해 공개된 식을 사용하여 계산되었다 [D. Schwab 등, J. Med . Chem . 46, 1716-1725 (2003)].
세포내로 방출되는 독성기에 대해 결정적으로 중요한 것은 B에서 A로의 투과성 [Papp (B-A)]이며: 이러한 투과성이 더 낮을수록, 세포내 방출 후 세포에서 실시예의 체류 시간이 더 길어지며, 이에 따라 또한 생화학적 표적 (이 경우에: 튜불린)과의 상호작용을 위해 이용가능한 시간이 더 길어진다.
하기 표 7은 이러한 검정으로부터 대표적인 실시예에 대한 투과성 데이타를 나타낸다:
표 7
Figure pct00611
실시예는 CaCo-2 세포에서 B에서 A로의 낮은 투과성 [Papp (B-A)]을 나타내며, 따라서 긴 체류 시간을 갖는다. 비교하자면, 이러한 시험에서 모노메틸아우리스타틴 E (MMAE) 및 모노메틸아우리스타틴 F (MMAF)는 Caco-2 세포에서 73 nm/s의 Papp (B-A) 값을 나타내며, 따라서 유의미하게 더 짧은 체류 시간을 갖는다.
C-5. P-당단백질 (P- gp )에 대한 기질 특성을 결정하기 위한 시험관내 시험
다수의 종양 세포는 약물을 위한 수송체 단백질을 발현시키고, 이것은 빈번하게 세포정지성에 대한 내성의 발달을 수반한다. 따라서, 그와 같은 수송체 단백질의 기질이 아닌 물질, 예컨대, P-당단백질 (P-gp) 또는 BCRP는 개선된 활성 프로파일을 나타낼 수 있었다.
P-gp (ABCB1)에 대한 물질의 기질 특성은 P-gp를 과발현시키는 LLC-PK1 세포 (L-MDR1 세포)를 사용하여 유동 검정에 의해 결정되었다 [A.H. Schinkel 등, J. Clin. Invest . 96, 1698-1705 (1995)]. 이를 위해, LLC-PK1 세포 또는 L-MDR1 세포를 3-4일 동안 96-웰 필터 플레이트 위에서 배양했다. 투과의 측정을 위해, 각 시험 물질을, 단독으로 또는 억제제 (예컨대, 이베르멕틴 또는 베라파밀)의 존재 하에, HEPES 완충액 중에서 정점에서 (A) 또는 기저에서 (B) 세포에 적용하고 2시간 동안 인큐베이션시켰다. 0시간 후 및 2시간 후에, 샘플을 시스 및 트랜스 구획으로부터 채취했다. 샘플을 역상 칼럼을 사용하여 HPLC로 분리했다. HPLC 시스템은 터보 이온 스프레이 인터페이스를 통해 트리플 쿼드로폴 질량 분광분석기 API 3000 (Applied Biosystems Applera, Darmstadt, Germany)에 커플링되었다. 투과성은 Papp 값을 기반으로 하여 평가했으며, 이것은 Schwab 등에 의해 공개된 식을 사용하여 계산되었다 [D. Schwab 등, J. Med . Chem . 46, 1716-1725 (2003)].
세포내로 방출되는 독성기에 대해 결정적으로 중요한 것은 B에서 A로의 투과성 [Papp (B-A)]이며: 이러한 투과성이 더 낮을수록, 세포내 방출 후 세포에서 실시예의 체류 시간이 더 길어지며, 이에 따라 또한 생화학적 표적 (이 경우에: 튜불린)과의 상호작용을 위해 이용가능한 시간이 더 길어진다.
하기 표 8은 이러한 검정으로부터 대표적인 실시예에 대한 투과성 데이타를 열거하며, 이것은 L-MDR1 세포에서 수행했다:
표 8
Figure pct00612
실시예는 L-MDR1 세포에서 B에서 A로의 낮은 투과성 [Papp (B-A)]을 나타내며, 따라서 긴 체류 시간을 갖는다.
C-6. SNU -16 종양 모델에서의 약동학
다양한 ADC의 정맥내 투여 후에, ADC 및 또한 포텐셜 대사물의 혈장 농도 및 종양 농도를 측정하고, 곡선 (AUC) 및 반감기 (t1 /2) 아래 영역인, 약력학적 파라미터 예컨대 청소능 (CL)을 계산한다.
잠재적으로 발생하는 대사물을 정량하기 위한 분석
혈장 및 종양에서의 화합물의 측정은 탠덤 질량 분광분석기 (MS)에 커플링된 고-압력 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 단백질의 메탄올과의 침전에 따라 일어난다.
100 μL의 혈장의 처리를 위해, 400 μL의 메탄올 및 10 μL의 내부 표준 (ISTD, 메탄올 중의 50 ng/mL)과 혼합하고 10초 동안 흔든다. 16 000 g에서 5분 동안 원심분리한 후, 250 μL의 암모늄 아세테이트 완충액 (AAC, 10 mM, pH 6.8)과 함께 이루어진 250 μL의 상청액을 자동시료주입기 바이알에 옮기고, 다시 흔든다.
종양의 처리를 위해, 4배의 메탄올 양과 혼합한다. Tissuelyser II (Quiagen)에서, 샘플을 분당 30 임팩트에서 6분 동안 분쇄하고 그 다음 5분 동안 16 000 g에서 원심분리한다. 50 μL의 상청액을 자동시료주입기 바이알에 옮기고 50 μL의 암모늄 아세테이트 완충액 (10 mM, pH 6.8) 및 5 μL의 ISTD와 함께 이루어진다. 다시 흔든 후, 종양 샘플은 측정을 위한 준비를 한다.
마지막으로, 두 매트릭스 샘플의 측정은 SCIEX로부터의 API4000 기기상의 터보 이온 스프레이 인터페이스 (TISP)에 의해 HPLC-커플링된, 대기압 이온화/탠덤 질량 분광분석기의 도움으로 일어난다.
HPLC/LC-MSMS (TISP) 분석은 Gemini 칼럼 (5 μm C18 110 A, 50 × 3 mm, Phenomenex)이 장착된 HP1100 펌프 (Agilent) 상에서 실행된다.
C-7. 생체내 활성 시험
본 발명의 콘주게이트의 활성은 예를 들면 이종이식 모델에 의해 생체내에서 시험되었다. 숙련가는 본 발명의 콘주게이트의 활성을 시험하기 위한 선행기술에서의 방법을 안다 (예를 들면, WO 2005/081711; Polson 등, Cancer Res. 2009 Mar 15;69(6):2358-64 참고). 이를 위해, 예를 들면, 설치류 (예를 들면 마우스)는 결합제의 표적 분자를 발현시키는 종양 세포주로 이식되었다. 이들 종양-보유 설치류는 차후에 본 발명의 콘주게이트 또는 대조군 항체 콘주게이트, 또는 등장 염 용액으로 투여되었다. 투여는 단독으로 또는 더 자주 일어났다. 종양 성장을 슬라이딩 캘리퍼에 의해 매주 2회 측정하였다. 몇 주의 종양 성장 후, 콘주게이트-치료된 동물 및 대조군 그룹의 종양 크기를 비교했다. 콘주게이트-치료된 동물은 유의미하게 더 낮은 종양 크기를 보였다.
C-7a. 마우스의 실험 종양에서 ADC 의 시험
FGFR2를 발현시키는 인간 종양 세포를 면역억제된 마우스, 예컨대 누드 마우스 또는 SCID 마우스의 옆구리에 피하로 예방접종했다. 백만-천만 개의 세포를 세포 배양물에서 떼어내고, 원심분리하고, 100 μL의 배지, 50% 배지/50% 매트리겔 또는 100% 매트리겔로 재현탁시킨다. 세포 서스펜션을 마우스의 피부 밑에 주입했다.
며칠 내에, 종양이 성장했다. 치료는 종양의 확립 후 20-25 mm2의 종양 크기에서보다 더 이르지 않게 시작했다.
콘주게이트로의 치료는 마우스의 꼬리 정맥 내로 정맥내 경로를 통해 일어났다. 콘주게이트를 PBS에 용해시키고, 5-10 ml/kg의 용적으로 투여한다.
치료 계획은 항체의 약동학에 의해 좌우되었다. 표준으로써, 치료는 매 4번째 날 또는 매 7번째 날 이후 3회 발생했다. 그러나, 치료는 또한 추가로 계속될 수 있거나 또는 치료 3일을 포함하는 제2 사이클이 이후 시점에 따를 수 있다.
표준 기준으로써, 치료 그룹당 8개의 동물을 사용했다. 이러한 수는 종양 성장에서 또는 치료 후에 특히 강한 변동이 기대되는 경우에 더 높을 수 있다. 활성 물질을 받은 그룹에 더하여, 대조군 그룹으로서 하나의 그룹을 동일한 계획에 따라서 완충액으로만 처리했다.
실험 과정에서, 종양의 면적은 슬라이딩 캘리퍼를 사용하여 2개의 치수 (길이/폭)로 규칙적으로 측정했다. 종양의 면적은 길이 × 폭의 식을 사용하여 계산했다.
실험 종료시, 종양을 제거하고 계량했다. 대조군 그룹 (C)에 대한 치료 그룹 (T)의 평균 종양 중량 비는 T/C로서 표현했다. 대조군 및 치료 그룹이 상이한 시간에 마무리되는 경우, 이때 T/C 값은 모든 치료 및 대조군 그룹의 마지막 공통 측정시 종양 면적을 사용하여 계산했다.
C-7b. 마우스의 SNU -16 이종이식 모델에서의 FGFR2 - ADC 의 시험
2백만 SNU-16 위 암종 세포를 암컷 NODscid 마우스의 옆구리에 피하로 예방접종했다.
콘주게이트로의 정맥내 치료는 20-30 mm2의 평균 종양 크기에서 개시했다. 대조군 그룹이 최대 허용 크기에 도달하는 경우, 이들 그룹을 종료했다. FGFR2 콘주게이트로 처리된 실험 그룹은 종양이 다시 성장하기 시작할 때 종료했다. 콘주게이트의 활성은 비히클 대조군이 실험에서 정지하고 있는 마지막 시점인 31일째에 결정했다. 시험된 모든 FGFR2 콘주게이트는 종양 성장을 용량-의존 방식으로 억제했다. 5 mg/kg의 용량에서, 실시예 1은 0.08의 T/C를 달성했고, 실시예 3은 0.06의 T/C, 실시예 26은 0.10의 T/C를 달성했다. 치료된 모든 동물의 경우, 종양은 이 시점에서 치료의 개시시보다 더 작았다 (종양의 부분 퇴화). 2.5 mg/kg의 용량에서, 실시예 26은 0.14의 T/C를 달성했다. 이러한 용량에서, 실시예 26은 동물의 40%에서 부분 퇴화를 유도했다. 1 mg/kg의 용량에서, 실시예 1은 0.15의 T/C를, 실시예 3은 0.36의 T/C를 달성했다. 이러한 용량에서 또한, 실시예 1은 치료된 모든 동물에서 부분 퇴화를 유도하며, 반면에 실시예 3의 경우에는 부분 퇴화가 수득되지 않았다. 대조군과 비교하여 유의미한 항-종양 효과가 최대 1 mg/kg의 용량에서 시험된 모든 콘주게이트에 대해 달성되었다. 상응하는 대조군 항체-콘주게이트는 이러한 모델에서 동일한 용량에서도 활성이 전혀 나타나지 않았다.
마우스의 MFM -223 이종이식 모델에서의 FGFR2 - ADC 의 C7c 시험
천만 MFM-223 유방 암종 세포를 암컷 NMRI nu/nu 마우스의 옆구리에 피하로 예방접종했다. 이들 마우스는 에스트라디올 펠렛으로 미리 보강되었다.
콘주게이트로의 정맥내 치료는 30-35 mm2의 평균 종양 크기에서 개시했다. 대조군 그룹이 40일째에 최대 허용 크기에 도달했을 때, 모든 치료 그룹을 종료하고 종양 중량을 확인했다. 10 mg/kg의 용량을 갖는 실시예 26은 0.09의 T/C를 달성했고, 5 mg/kg의 용량에서는 0.13의 T/C 및 1 mg/kg의 용량에서는 0.26의 T/C를 달성했다. 대조군과 비교하여 유의미한 항-종양 효과는 시험된 모든 3개의 용량에 대해 달성되었다. 상응하는 대조군 항체 콘주게이트는 이러한 모델에서 10 mg/kg의 용량에서만 유의미한 비-특이적 효과를 나타내었다.
마우스의 NCI - H716 이종이식 모델에서의 FGFR2 -2 ADC 의 C7d 시험
천오백만 NCI - H716 장 암종 세포를 암컷 NMRI nu / nu 마우스의 옆구리에 피하로 예방접종했다.
콘주게이트로의 정맥내 치료는 25-30 mm2의 평균 종양 크기에서 개시했다. 대조군 그룹이 36일째에 최대 허용 크기에 도달했을 때, 모든 치료 그룹을 종료하고 종양 중량을 확인했다. 실시예 26으로의 치료는 종양 중량에서 유의미한 감소를 야기했으며, 5 mg/kg에서 0.24의 T/C를 달성했다. 이러한 용량에서, 상응하는 대조군 콘주게이트는 이러한 모델에서 전혀 활성을 갖지 않았다.
D. 약제학적 조성물에 대한 실시예
본 발명의 화합물은 하기와 같이 약제학적 제제로 전환될 수 있다:
i.v. 용액:
본 발명의 화합물은 생리적으로 용인된 용매 (예를 들면 등장 염수 용액, D-PBS, 또는 폴리소르베이트 80의 부가와 함께 시트레이트 완충액 중의 글리신 및 염화나트륨을 포함하는 제형) 중에서 포화 용해도 미만의 농도에 용해된다. 용액은 멸균 여과에 적용되고, 멸균한, 발열성물질-비함유 주사 용기에 분배된다.
i.v. 용액:
본 발명의 화합물은 인용된 투여 형태로 전환될 수 있다. 이것은 불활성, 비-독성, 약제학적으로 적당한 부형제 (예를 들면 완충액 물질, 안정제, 가용화제, 보존제) "와 혼합시키거나" 또는 "에 용해시킴으로써" 공지된 방식으로 달성될 수 있다. 예를 들면, 하기가 있을 수 있다: 아미노산 (글리신, 히스티딘, 메티오닌, 아르기닌, 라이신, 류신, 이소류신, 트레오닌, 글루탐산, 페닐알라닌 및 다른 것들), 당류 및 관련된 화합물 (글루코오스, 사카로오스, 만니톨, 트레할로오스, 수크로오스, 만노스, 락토오스, 소르비톨), 글리세롤, 나트륨 염, 칼륨, 암모늄 염 및 칼슘 염 (예를 들면 염화나트륨, 칼륨 클로라이드 또는 디나트륨수소포스페이트 및 다수의 다른 것들), 아세테이트/아세트산 완충계, 포스페이트 완충계, 시트르산 및 시트레이트 완충계, 트로메타몰 (TRIS 및 TRIS 염), 폴리소르베이트 (예를 들면 폴리소르베이트 80 및 폴리소르베이트 20), 폴록사머 (예를 들면 폴록사머 188 및 폴록사머 171), 매크로골 (PEG 유도체, 예를 들면 3350), Triton X-100, EDTA 염, 글루타티온, 알부민 (예를 들면 인간), 우레아, 벤질 알코올, 페놀, 클로로크레졸, 메타크레졸, 벤즈알코늄 클로라이드 및 다수의 다른 것들.
i.v., s.c. 또는 i.m. 용액으로의 차후의 전환을 위한 리오필리제이트
대안적으로 본 발명의 화합물은 (아마 상기 언급된 부형제의 도움으로) 안정한 리오필리제이트로 전환될 수 있으며, 투여되기 전에, 적당한 용매 (예를 들면 주사-등급 물, 등장 염수 용액)로 재구성되고 투여될 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> Bayer Intellectual Property GmbH Bayer Pharma AG Seattle Genetics, Inc. <120> New antibody drug conjugates (ADCs) and the use thereof <130> BHC 11 1 026-Foreign countries <160> 23 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 748 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 1 Arg Pro Ser Phe Ser Leu Val Glu Asp Thr Thr Leu Glu Pro Glu Glu 1 5 10 15 Pro Pro Thr Lys Tyr Gln Ile Ser Gln Pro Glu Val Tyr Val Ala Ala 20 25 30 Pro Gly Glu Ser Leu Glu Val Arg Cys Leu Leu Lys Asp Ala Ala Val 35 40 45 Ile Ser Trp Thr Lys Asp Gly Val His Leu Gly Pro Asn Asn Arg Thr 50 55 60 Val Leu Ile Gly Glu Tyr Leu Gln Ile Lys Gly Ala Thr Pro Arg Asp 65 70 75 80 Ser Gly Leu Tyr Ala Cys Thr Ala Ser Arg Thr Val Asp Ser Glu Thr 85 90 95 Trp Tyr Phe Met Val Asn Val Thr Asp Ala Ile Ser Ser Gly Asp Asp 100 105 110 Glu Asp Asp Thr Asp Gly Ala Glu Asp Phe Val Ser Glu Asn Ser Asn 115 120 125 Asn Lys Arg Ala Pro Tyr Trp Thr Asn Thr Glu Lys Met Glu Lys Arg 130 135 140 Leu His Ala Val Pro Ala Ala Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala 145 150 155 160 Gly Gly Asn Pro Met Pro Thr Met Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu 165 170 175 Phe Lys Gln Glu His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Asn Gln His 180 185 190 Trp Ser Leu Ile Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr 195 200 205 Thr Cys Val Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr Tyr His 210 215 220 Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly 225 230 235 240 Leu Pro Ala Asn Ala Ser Thr Val Val Gly Gly Asp Val Glu Phe Val 245 250 255 Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Ile Lys His 260 265 270 Val Glu Lys Asn Gly Ser Lys Tyr Gly Pro Asp Gly Leu Pro Tyr Leu 275 280 285 Lys Val Leu Lys His Ser Gly Ile Asn Ser Ser Asn Ala Glu Val Leu 290 295 300 Ala Leu Phe Asn Val Thr Glu Ala Asp Ala Gly Glu Tyr Ile Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Tyr Ile Gly Gln Ala Asn Gln Ser Ala Trp Leu Thr Val 325 330 335 Leu Pro Lys Gln Gln Ala Pro Gly Arg Glu Lys Glu Ile Thr Ala Ser 340 345 350 Pro Asp Tyr Leu Glu Ile Ala Ile Tyr Cys Ile Gly Val Phe Leu Ile 355 360 365 Ala Cys Met Val Val Thr Val Ile Leu Cys Arg Met Lys Asn Thr Thr 370 375 380 Lys Lys Pro Asp Phe Ser Ser Gln Pro Ala Val His Lys Leu Thr Lys 385 390 395 400 Arg Ile Pro Leu Arg Arg Gln Val Thr Val Ser Ala Glu Ser Ser Ser 405 410 415 Ser Met Asn Ser Asn Thr Pro Leu Val Arg Ile Thr Thr Arg Leu Ser 420 425 430 Ser Thr Ala Asp Thr Pro Met Leu Ala Gly Val Ser Glu Tyr Glu Leu 435 440 445 Pro Glu Asp Pro Lys Trp Glu Phe Pro Arg Asp Lys Leu Thr Leu Gly 450 455 460 Lys Pro Leu Gly Glu Gly Cys Phe Gly Gln Val Val Met Ala Glu Ala 465 470 475 480 Val Gly Ile Asp Lys Asp Lys Pro Lys Glu Ala Val Thr Val Ala Val 485 490 495 Lys Met Leu Lys Asp Asp Ala Thr Glu Lys Asp Leu Ser Asp Leu Val 500 505 510 Ser Glu Met Glu Met Met Lys Met Ile Gly Lys His Lys Asn Ile Ile 515 520 525 Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Gln Asp Gly Pro Leu Tyr Val Ile Val 530 535 540 Glu Tyr Ala Ser Lys Gly Asn Leu Arg Glu Tyr Leu Arg Ala Arg Arg 545 550 555 560 Pro Pro Gly Met Glu Tyr Ser Tyr Asp Ile Asn Arg Val Pro Glu Glu 565 570 575 Gln Met Thr Phe Lys Asp Leu Val Ser Cys Thr Tyr Gln Leu Ala Arg 580 585 590 Gly Met Glu Tyr Leu Ala Ser Gln Lys Cys Ile His Arg Asp Leu Ala 595 600 605 Ala Arg Asn Val Leu Val Thr Glu Asn Asn Val Met Lys Ile Ala Asp 610 615 620 Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile Asn Asn Ile Asp Tyr Tyr Lys Lys Thr 625 630 635 640 Thr Asn Gly Arg Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ala Leu Phe 645 650 655 Asp Arg Val Tyr Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Leu 660 665 670 Met Trp Glu Ile Phe Thr Leu Gly Gly Ser Pro Tyr Pro Gly Ile Pro 675 680 685 Val Glu Glu Leu Phe Lys Leu Leu Lys Glu Gly His Arg Met Asp Lys 690 695 700 Pro Ala Asn Cys Thr Asn Glu Leu Tyr Met Met Met Arg Asp Cys Trp 705 710 715 720 His Ala Val Pro Ser Gln Arg Pro Thr Phe Lys Gln Leu Val Glu Asp 725 730 735 Leu Asp Arg Ile Leu Thr Leu Thr Thr Asn Glu Ile 740 745 <210> 2 <211> 659 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 2 Arg Pro Ser Phe Ser Leu Val Glu Asp Thr Thr Leu Glu Pro Glu Asp 1 5 10 15 Ala Ile Ser Ser Gly Asp Asp Glu Asp Asp Thr Asp Gly Ala Glu Asp 20 25 30 Phe Val Ser Glu Asn Ser Asn Asn Lys Arg Ala Pro Tyr Trp Thr Asn 35 40 45 Thr Glu Lys Met Glu Lys Arg Leu His Ala Val Pro Ala Ala Asn Thr 50 55 60 Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala Gly Gly Asn Pro Met Pro Thr Met Arg 65 70 75 80 Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu Phe Lys Gln Glu His Arg Ile Gly Gly 85 90 95 Tyr Lys Val Arg Asn Gln His Trp Ser Leu Ile Met Glu Ser Val Val 100 105 110 Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr Thr Cys Val Val Glu Asn Glu Tyr Gly 115 120 125 Ser Ile Asn His Thr Tyr His Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His 130 135 140 Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Ala Ser Thr Val Val 145 150 155 160 Gly Gly Asp Val Glu Phe Val Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala Gln Pro 165 170 175 His Ile Gln Trp Ile Lys His Val Glu Lys Asn Gly Ser Lys Tyr Gly 180 185 190 Pro Asp Gly Leu Pro Tyr Leu Lys Val Leu Lys His Ser Gly Ile Asn 195 200 205 Ser Ser Asn Ala Glu Val Leu Ala Leu Phe Asn Val Thr Glu Ala Asp 210 215 220 Ala Gly Glu Tyr Ile Cys Lys Val Ser Asn Tyr Ile Gly Gln Ala Asn 225 230 235 240 Gln Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Pro Lys Gln Gln Ala Pro Gly Arg 245 250 255 Glu Lys Glu Ile Thr Ala Ser Pro Asp Tyr Leu Glu Ile Ala Ile Tyr 260 265 270 Cys Ile Gly Val Phe Leu Ile Ala Cys Met Val Val Thr Val Ile Leu 275 280 285 Cys Arg Met Lys Asn Thr Thr Lys Lys Pro Asp Phe Ser Ser Gln Pro 290 295 300 Ala Val His Lys Leu Thr Lys Arg Ile Pro Leu Arg Arg Gln Val Thr 305 310 315 320 Val Ser Ala Glu Ser Ser Ser Ser Met Asn Ser Asn Thr Pro Leu Val 325 330 335 Arg Ile Thr Thr Arg Leu Ser Ser Thr Ala Asp Thr Pro Met Leu Ala 340 345 350 Gly Val Ser Glu Tyr Glu Leu Pro Glu Asp Pro Lys Trp Glu Phe Pro 355 360 365 Arg Asp Lys Leu Thr Leu Gly Lys Pro Leu Gly Glu Gly Cys Phe Gly 370 375 380 Gln Val Val Met Ala Glu Ala Val Gly Ile Asp Lys Asp Lys Pro Lys 385 390 395 400 Glu Ala Val Thr Val Ala Val Lys Met Leu Lys Asp Asp Ala Thr Glu 405 410 415 Lys Asp Leu Ser Asp Leu Val Ser Glu Met Glu Met Met Lys Met Ile 420 425 430 Gly Lys His Lys Asn Ile Ile Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Gln Asp 435 440 445 Gly Pro Leu Tyr Val Ile Val Glu Tyr Ala Ser Lys Gly Asn Leu Arg 450 455 460 Glu Tyr Leu Arg Ala Arg Arg Pro Pro Gly Met Glu Tyr Ser Tyr Asp 465 470 475 480 Ile Asn Arg Val Pro Glu Glu Gln Met Thr Phe Lys Asp Leu Val Ser 485 490 495 Cys Thr Tyr Gln Leu Ala Arg Gly Met Glu Tyr Leu Ala Ser Gln Lys 500 505 510 Cys Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Thr Glu Asn 515 520 525 Asn Val Met Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile Asn Asn 530 535 540 Ile Asp Tyr Tyr Lys Lys Thr Thr Asn Gly Arg Leu Pro Val Lys Trp 545 550 555 560 Met Ala Pro Glu Ala Leu Phe Asp Arg Val Tyr Thr His Gln Ser Asp 565 570 575 Val Trp Ser Phe Gly Val Leu Met Trp Glu Ile Phe Thr Leu Gly Gly 580 585 590 Ser Pro Tyr Pro Gly Ile Pro Val Glu Glu Leu Phe Lys Leu Leu Lys 595 600 605 Glu Gly His Arg Met Asp Lys Pro Ala Asn Cys Thr Asn Glu Leu Tyr 610 615 620 Met Met Met Arg Asp Cys Trp His Ala Val Pro Ser Gln Arg Pro Thr 625 630 635 640 Phe Lys Gln Leu Val Glu Asp Leu Asp Arg Ile Leu Thr Leu Thr Thr 645 650 655 Asn Glu Ile <210> 3 <211> 214 <212> PRT <213> Mus Musculus <400> 3 Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Met Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Gly Val Ser Asn Asp 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Asn Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Ser Thr Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Asp Ala Ala 100 105 110 Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly 115 120 125 Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile 130 135 140 Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu 145 150 155 160 Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 180 185 190 Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 4 <211> 438 <212> PRT <213> Mus Musculus <400> 4 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Asn Val His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ser Ile Tyr Pro Asp Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly 115 120 125 Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140 Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu 145 150 155 160 Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr 165 170 175 Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu 180 185 190 Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp 195 200 205 Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr 210 215 220 Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 225 230 235 240 Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp 245 250 255 Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp 260 265 270 Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 275 280 285 Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp 290 295 300 Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro 305 310 315 320 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala 325 330 335 Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp 340 345 350 Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile 355 360 365 Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn 370 375 380 Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys 385 390 395 400 Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys 405 410 415 Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu 420 425 430 Ser His Ser Pro Gly Lys 435 <210> 5 <211> 213 <212> PRT <213> Mus Musculus <400> 5 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gly Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Lys Asn Tyr 20 25 30 Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asp Leu Tyr Met 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys Arg Thr Asp Ala Ala Pro 100 105 110 Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn 130 135 140 Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn 145 150 155 160 Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr 180 185 190 Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 6 <211> 450 <212> PRT <213> Mus Musculus <400> 6 Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Phe 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Asp Phe Arg 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Ile Phe Phe 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Pro Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Asn Phe Tyr Tyr Gly Tyr Asp Asp Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val 115 120 125 Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser 180 185 190 Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala 195 200 205 Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile 210 215 220 Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile 245 250 255 Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp 260 265 270 Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His 275 280 285 Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg 290 295 300 Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys 305 310 315 320 Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu 355 360 365 Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp 370 375 380 Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu 405 410 415 Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His 420 425 430 Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 7 <211> 216 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 7 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Glu Asn Tyr Asn Arg Pro Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Tyr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 8 <211> 452 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 8 Gln Val Glu Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Arg Tyr Asn Trp Asn His Gly Asp Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly Lys 450 <210> 9 <211> 216 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 9 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Glu Asn Tyr Asn Arg Pro Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Tyr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 10 <211> 451 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 10 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Arg Tyr Asn Trp Asn His Gly Asp Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly 450 <210> 11 <211> 122 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 11 Gln Val Glu Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Arg Tyr Asn Trp Asn His Gly Asp Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 12 <211> 110 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 12 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Glu Asn Tyr Asn Arg Pro Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Tyr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 13 <211> 122 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 13 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Arg Tyr Asn Trp Asn His Gly Asp Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 14 <211> 110 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 14 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Glu Asn Tyr Asn Arg Pro Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Tyr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 15 <211> 8 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 15 Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp 1 5 <210> 16 <211> 20 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 16 Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly Arg 20 <210> 17 <211> 15 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 17 Ala Arg Val Arg Tyr Asn Trp Asn His Gly Asp Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 18 <211> 13 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 18 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 19 <211> 7 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 19 Glu Asn Tyr Asn Arg Pro Ala 1 5 <210> 20 <211> 12 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 20 Cys Ser Ser Trp Asp Asp Ser Leu Asn Tyr Trp Val 1 5 10 <210> 21 <211> 122 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 21 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Arg Tyr Asn Trp Asn His Gly Asp Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 22 <211> 110 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 22 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Glu Asn Tyr Asn Arg Pro Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Tyr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 23 <211> 15 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 23 Arg Pro Ser Phe Ser Leu Val Glu Asp Thr Thr Leu Glu Pro Glu 1 5 10 15

Claims (41)

  1. 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Figure pct00613

    여기서
    n은 1 내지 50의 수이고,
    AK는 FGFR2에 결합하는 결합제이고,
    그룹 §-G-L1-B-§§는 링커이고,
    여기서
    §는 그룹 AK와의 연결 부위를 나타내고,
    §§는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00614

    여기서
    p는 2 내지 6의 수이고,
    ## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    ##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00615
    또는
    Figure pct00616

    여기서
    #3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소 또는 메틸이고,
    R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00617

    여기서
    #4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
    Figure pct00618
    또는
    Figure pct00619

    여기서
    #6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
    R3은 수소 또는 메틸이고,
    R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00620

    여기서
    #7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert -부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
    R8은 수소 또는 메틸이고,
    R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10는 벤조일이고,
    R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00621

    Figure pct00622
    또는
    Figure pct00623

    여기서
    #9은 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R26은 수소 또는 하이드록시이고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
    R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
  2. 청구항 1에 있어서,
    n은 1 내지 50의 수이고,
    AK는 AK1 또는 AK2이고,
    여기서
    AK1는 FGFR2에 결합하는 결합제이고 결합제의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되고,
    AK2는 FGFR2에 결합하는 결합제이고 결합제의 질소 원자를 통해 그룹 G에 결합되고,
    G는, AK = AK1일 때, 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00624

    또는
    Figure pct00625

    여기서
    #1은 결합제의 황 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #2는 그룹 L1과의 연결 부위를 나타내거나,
    AK = AK2일 때, 카보닐이고,
    L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일, 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00626
    또는
    Figure pct00627

    여기서
    m은 2 내지 6의 수이고,
    ## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
    ##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    L1A는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
    B1은 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00628

    또는
    Figure pct00629

    여기서
    ## 5는 그룹 L1A와의 연결 부위를 나타내고,
    ## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
    L5는 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
    L6은 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00630
    또는
    Figure pct00631

    여기서
    ## 7은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    ## 8은 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
    R33은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
    R34는 수소 또는 메틸이고,
    R29은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R30은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R29 및 R30은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R31은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R32는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R31 및 R32는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
    여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2, 1,3 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00632

    Figure pct00633
    또는
    Figure pct00634

    여기서
    *는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
    **는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
    P는 O 또는 NH이고,
    L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00635
    또는
    Figure pct00636

    여기서
    ***는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    ****는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
    R25는 수소 또는 메틸이고,
    R28은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
    Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
    Q2는 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
    R14는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R15는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R14 및 R15는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R16은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R17은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R18은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R19은 수소 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 천연 α-아미노산의 측면 그룹이고,
    R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    R21은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R22는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
    R23은 (C1-C4)-알킬이고,
    R24는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R27은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R36은 수소, (C1-C4)-알킬카보닐, tert-부틸옥시카보닐 또는 벤질옥시카보닐이고,
    R37은 수소 또는 메틸이거나,
    R36 및 R37은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
    L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00637

    여기서
    p는 2 내지 6의 수이고,
    ## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    ##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00638
    또는
    Figure pct00639

    여기서
    #3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소 또는 메틸이고,
    R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00640

    여기서
    #4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
    Figure pct00641
    또는
    Figure pct00642

    여기서
    #6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
    R3은 수소 또는 메틸이고,
    R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert -부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00643

    여기서
    #7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert -부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
    R8은 수소 또는 메틸이고,
    R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10는 벤조일이고,
    R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00644

    Figure pct00645
    또는
    Figure pct00646

    여기서
    #9은 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R26은 수소 또는 하이드록시이고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
    R35는 메틸 또는 하이드록시인, 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서,
    n은 1 내지 20의 수이고,
    AK는 AK1 또는 AK2이고,
    여기서
    AK1는 FGFR2에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
    AK2는 FGFR2에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
    G는, AK = AK1일 때, 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00647

    여기서
    #1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 나타내고,
    #2는 그룹 L1과의 연결 부위를 나타내거나,
    AK = AK2일 때, 카보닐이고,
    L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00648
    또는
    Figure pct00649

    여기서
    m은 2 내지 6의 수이고,
    ## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
    ##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    L1A는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
    B1은 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00650

    또는
    Figure pct00651

    여기서
    ## 5는 그룹 L1A와의 연결 부위를 나타내고,
    ## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
    L5는 결합이고,
    L6은 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00652
    또는
    Figure pct00653

    여기서
    ## 7은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    ## 8은 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
    R33은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
    R34는 수소 또는 메틸이고,
    R29은 수소이고,
    R30은 수소이고,
    R31은 수소 또는 메틸이고,
    R32는 수소 또는 메틸이고,
    L1B는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00654

    Figure pct00655
    또는
    Figure pct00656

    여기서
    *는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
    **는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
    L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00657
    또는
    Figure pct00658

    여기서
    ***는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    ****는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
    R25는 수소 또는 메틸이고,
    R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
    Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
    R14는 수소이고,
    R15는 수소이고,
    R16은 수소 또는 메틸이고,
    R17은 수소 또는 메틸이거나,
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
    R18은 수소이고,
    R19은 수소, 메틸, 프로판-2-일, 2-메틸프로판-1-일 또는 1-메틸프로판-1-일이고,
    R20은 수소 또는 메틸이거나,
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    R21은 수소 또는 메틸이고,
    R22는 수소 또는 메틸이거나,
    R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
    R23은 메틸이고,
    R24는 수소 또는 메틸이고,
    R27은 수소이고,
    R36은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
    R37은 수소 또는 메틸이거나,
    R36 및 R37은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리딘 고리를 형성하고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00659

    여기서
    p는 2 내지 6의 수이고,
    ## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    ##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00660
    또는
    Figure pct00661

    여기서
    #3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소이고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00662

    여기서
    #4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
    Figure pct00663
    또는
    Figure pct00664

    여기서
    #6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
    R3은 수소이고,
    R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00665

    여기서
    #7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert -부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
    R8은 수소 또는 메틸이고,
    R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10는 벤조일이고,
    R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00666

    Figure pct00667
    또는
    Figure pct00668

    여기서
    #9은 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R26은 수소 또는 하이드록시이고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
    R35는 메틸 또는 하이드록시인, 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 하나의 항에 있어서,
    n은 1 내지 10의 수이고,
    AK는 AK1 또는 AK2이고,
    여기서
    AK1은 FGFR2에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
    AK2는 FGFR2에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
    G는, AK = AK1일 때, 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00669

    여기서
    #1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 나타내고,
    #2는 그룹 L1과의 연결 부위를 나타내거나,
    AK = AK2일 때, 카보닐이고,
    L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00670

    여기서
    m은 2 또는 3의 수이고,
    ## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
    ##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00671

    Figure pct00672
    또는
    Figure pct00673

    여기서
    *는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
    **는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
    L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00674
    또는
    Figure pct00675

    여기서
    ***는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    ****는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
    R25는 메틸이고,
    R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
    Q1은 피페리딘-1,4-디일이고,
    R16은 수소 또는 메틸이고,
    R17은 수소 또는 메틸이거나,
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
    R21은 수소 또는 메틸이고,
    R22는 수소 또는 메틸이거나,
    R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
    R23은 메틸이고,
    R24는 수소이고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00676

    여기서
    p는 2 내지 6의 수이고,
    ##3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    ##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00677
    또는
    Figure pct00678

    여기서
    #3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소이고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00679

    여기서
    #4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
    Figure pct00680
    또는
    Figure pct00681

    여기서
    #6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
    R3은 수소이고,
    R4는 벤질, 1-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00682

    여기서
    #7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert -부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
    R8은 수소 또는 메틸이고,
    R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이고,
    R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00683
    또는
    Figure pct00684

    여기서
    #9은 -CHCH2페닐과의 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R35는 메틸 또는 하이드록시인, 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물.
  5. 청구항 1 내지 4 중 어느 하나의 항에 있어서,
    n은 1 내지 10의 수이고,
    AK는 AK2이고,
    여기서
    AK2는 FGFR2에 결합하고 결합제의 라이신 잔기의 NH 측면 그룹을 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
    G는 카보닐이고,
    L1은 결합이고,
    B는 결합이고,
    L2는 선형 (C3-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00685

    여기서
    p는 2 또는 3의 수이고,
    ## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    ##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00686
    또는
    Figure pct00687

    여기서
    #3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소이고,
    R2는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00688

    여기서
    #4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
    Figure pct00689

    여기서
    #6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    R3은 수소이고,
    R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00690

    여기서
    #7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
    R8은 수소이고,
    R9은 수소 또는 벤질이고,
    R35는 메틸인, 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 하나의 항에 있어서,
    n은 1 내지 10의 수이고,
    AK는 AK1이고,
    여기서
    AK1은 FGFR2에 결합하고 결합제의 시스테인 잔기의 황 원자를 통해 그룹 G에 결합되는 결합제이고,
    G은 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00691

    여기서
    #1은 결합제의 시스테인 잔기와의 연결 부위를 나타내고,
    #2는 그룹 L1과의 연결 부위를 나타내고,
    L1은 결합, 선형 (C3-C5)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00692

    여기서
    m은 2 또는 3의 수이고,
    ## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
    ##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C3-C5)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00693

    여기서
    *는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
    **는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
    L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
    L4는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00694

    여기서
    ***는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    ****는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
    R25는 메틸이고,
    R28은 수소, 메틸카보닐 또는 tert-부틸옥시카보닐이고,
    R16은 수소 또는 메틸이고,
    R17은 수소 또는 메틸이거나,
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
    L2는 선형 (C3-C5)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00695

    여기서
    p는 2 또는 3의 수이고,
    ## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    ##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00696
    또는
    Figure pct00697

    여기서
    #3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소이고,
    R2는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00698

    여기서
    #4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
    Figure pct00699

    여기서
    #6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    R3은 수소이고,
    R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00700

    여기서
    #7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
    R8은 수소이고,
    R9은 수소 또는 벤질이고,
    R35는 메틸인, 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물.
  7. 일반식 (Ia)의 결합제-약물 콘주게이트 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Figure pct00701

    여기서
    n은 1 내지 50의 수이고,
    AK는 FGFR2에 결합하는 결합제이고,
    그룹 §-G-L1-B-§§는 링커이고,
    여기서
    §는 그룹 AK와의 연결 부위를 나타내고,
    §§는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00702

    여기서
    p는 2 내지 6의 수이고,
    ## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    ##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록실 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체로 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2, 1,3 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹이고, 여기서 *는 질소 원자에 대한 연결 부위이다:
    Figure pct00703
    .
  8. 하기 식의 화합물 또는 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Figure pct00704

    여기서 AK는 FGFR2에 결합하는 결합제이고, n은 1 내지 10의 수이다.
  9. 하기 식의 화합물 또는 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Figure pct00705

    여기서 AK는 FGFR2에 결합하는 항체 또는 항체 단편이고, n은 1 내지 10의 수이다.
  10. 하기 식의 화합물 또는 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Figure pct00706

    여기서 AK2A는 M048-D01-hIgG1이고 n은 1 내지 10의 수이다.
  11. 하기 식의 화합물 또는 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Figure pct00707

    여기서 AK2B는 M048-D01-hIgG1-b이고 n은 1 내지 10의 수이다.
  12. 식 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Figure pct00708

    여기서
    Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자에 결합된 시스테인 잔기이고,
    L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일, 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00709
    또는
    Figure pct00710

    여기서
    m은 2 내지 6의 수이고,
    ## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
    ##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    L1A는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
    B1은 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00711
    또는
    Figure pct00712

    여기서
    ## 5는 그룹 L1A와의 연결 부위를 나타내고,
    ## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
    L5는 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
    L6은 결합이고,
    R29은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R30은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R29 및 R30은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R31은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R32는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R31 및 R32는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
    여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2, 1,3 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00713

    Figure pct00714
    또는
    Figure pct00715

    여기서
    *는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
    **는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
    P는 O 또는 NH이고,
    L3은 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
    L4는 결합이고,
    Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
    Q2는 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
    R14는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R15는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R14 및 R15는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R16은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R17은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R18은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R19은 수소 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 천연 α-아미노산의 측면 그룹이고,
    R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    R21은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R22는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
    R23은 (C1-C4)-알킬이고,
    R24는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R27은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00716

    여기서
    p는 2 내지 6의 수이고,
    ## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    ##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2-, 1,3- 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00717
    또는
    Figure pct00718

    여기서
    #3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소 또는 메틸이고,
    R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00719

    여기서
    #4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
    Figure pct00720
    또는
    Figure pct00721

    여기서
    #6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
    R3은 수소 또는 메틸이고,
    R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00722

    여기서
    #7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
    R8은 수소 또는 메틸이고,
    R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10는 벤조일이고,
    R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00723

    Figure pct00724
    또는
    Figure pct00725

    여기서
    #9은 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R26은 수소 또는 하이드록시이고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
    R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
  13. 청구항 12에 있어서, 하기인 식 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자에 결합된 시스테인 잔기이고,
    L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일, 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00726
    또는
    Figure pct00727

    여기서
    m은 2 또는 3의 수이고,
    ## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
    ##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    L1A는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
    B1은 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00728
    또는
    Figure pct00729

    여기서
    ## 5는 그룹 L1A와의 연결 부위를 나타내고,
    ## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
    L5는 결합이고,
    L6은 결합이고,
    R29은 수소이고,
    R30은 수소이고,
    R31은 수소 또는 메틸이고,
    R32는 수소 또는 메틸이고,
    L1B는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00730

    또는
    Figure pct00731

    여기서
    *는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
    **는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
    L3은 결합 또는 에탄-1,2-디일이고,
    L4는 결합이고,
    R14는 수소이고,
    R15는 수소이고,
    R16은 수소 또는 메틸이고,
    R17은 수소 또는 메틸이거나,
    R16 및 R17은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피페라지닐 고리를 형성하고,
    R23은 메틸이고,
    R24는 수소 또는 메틸이고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00732

    여기서
    p는 2 또는 3의 수이고,
    ## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    ##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00733
    또는
    Figure pct00734

    여기서
    #3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소이고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00735

    여기서
    #4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
    Figure pct00736
    또는
    Figure pct00737

    여기서
    #6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
    R3은 수소이고,
    R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00738

    여기서
    #7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
    R8은 수소 또는 메틸이고,
    R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10는 벤조일이고,
    R11는 페닐 그룹에서 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 벤질이고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00739
    또는
    Figure pct00740

    여기서
    #9는 -CHCH2페닐에 대한 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
  14. 청구항 12 또는 13에 있어서, 하기인 식 (XXXa)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Cys는 측쇄의 황 원자를 통해 석신이마이드의 탄소 원자에 결합된 시스테인 잔기이고,
    L1는 결합 또는 선형 (C2-C6)-알칸디일이고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00741

    여기서
    *는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
    **는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
    L3은 결합이고,
    L4는 결합이고,
    R16은 수소 또는 메틸이고,
    R17은 수소 또는 메틸이고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00742

    여기서
    p는 2 또는 3의 수이고,
    ## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    ##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00743
    또는
    Figure pct00744

    여기서
    #3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소이고,
    R2는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00745

    여기서
    #4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
    Figure pct00746

    여기서
    #6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    R3은 수소이고,
    R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00747

    여기서
    #7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
    여기서
    R7은 수소이고,
    R8은 수소이고,
    R9은 수소이고,
    R35는 메틸이다.
  15. 식 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물:
    Figure pct00748

    여기서
    L1은 결합, 선형 (C1-C10)-알칸디일, 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00749
    또는
    Figure pct00750

    여기서
    m은 2 내지 6의 수이고,
    ## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
    ##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    L1A는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
    B1은 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00751
    또는
    Figure pct00752

    여기서
    ## 5는 그룹 L1A와의 연결 부위를 나타내고,
    ## 6은 그룹 L1B와의 연결 부위를 나타내고,
    L5는 결합 또는 (C2-C4)-알칸디일이고,
    L6은 결합이고,
    R29은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R30은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R29 및 R30은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R31은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R32는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R31 및 R32는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 5- 또는 6-원 헤테로사이클을 형성하고,
    L1B는 선형 (C2-C10)-알칸디일이고,
    여기서 (C1-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2, 1,3 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00753

    Figure pct00754
    또는
    Figure pct00755

    여기서
    *는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
    **는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
    P는 O 또는 NH이고,
    Q1은 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
    Q2는 3- 내지 7-원 카보사이클 또는 4- 내지 7-원 헤테로사이클이고,
    R18은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R19은 수소 또는 그것의 동족체 또는 이성질체의 천연 α-아미노산의 측면 그룹이고,
    R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    R21은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    R22는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 3- 내지 7-원 카보사이클을 형성하고,
    R27은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
    L2는 선형 (C2-C10)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00756

    여기서
    p는 2 내지 6의 수이고,
    ## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    ##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 메틸, 하이드록시 및 벤질로 이루어진 그룹으로부터 서로 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,2, 1,3 또는 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 (C3-C6)-사이클로알킬 고리 또는 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00757
    또는
    Figure pct00758

    여기서
    #3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소 또는 메틸이고,
    R2는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00759

    여기서
    #4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
    Figure pct00760
    또는
    Figure pct00761

    여기서
    #6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
    R3은 수소 또는 메틸이고,
    R4는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 페닐, 벤질, 1-하이드록시에틸, 4-하이드록시벤질, 4-하이드록시-3-니트로벤질, 4-하이드록시-3-아미노벤질, 1-페닐-에틸, 디페닐-메틸, 1H-이미다졸-4-일메틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00762

    여기서
    #7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
    R8은 수소 또는 메틸이고,
    R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10는 벤조일이고,
    R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00763

    Figure pct00764
    또는
    Figure pct00765

    #9은 -CHC(R26)-T2와의 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R26은 수소 또는 하이드록시이고,
    T2는 페닐, 벤질, 1H-인돌-3-일- 또는 1H-인돌-3-일메틸이고,
    R35는 메틸 또는 하이드록시이다.
  16. 청구항 15에 있어서,
    L1은 결합, 선형 (C2-C6)-알칸디일 또는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00766

    여기서
    m은 2 또는 3의 수이고,
    ## 1은 그룹 G와의 연결 부위를 나타내고,
    ##2는 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C6)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    B는 결합 또는 하기 식의 그룹이고
    Figure pct00767

    Figure pct00768
    또는
    Figure pct00769

    여기서
    *는 L1과의 연결 부위를 나타내고,
    **는 L2와의 연결 부위를 나타내고,
    R18은 수소이고,
    R19은 메틸이고, 프로판-2-일, 2-메틸프로판-1-일 또는 1-메틸프로판-1-일이고,
    R20은 수소 또는 (C1-C4)-알킬이거나,
    R19 및 R20은, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 피롤리디닐 고리를 형성하고,
    R21은 수소 또는 메틸이고,
    R22는 수소 또는 메틸이거나,
    R21 및 R22는, 이들이 결합되는 원자들과 함께, 사이클로프로필 고리를 형성하고,
    R27은 수소 또는 메틸이고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00770

    여기서
    p는 2 또는 3의 수이고,
    ## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    ##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    여기서 (C2-C10)-알칸디일은 1 또는 2 개의 메틸 치환체에 의해 치환될 수 있고,
    여기서 서로 1,4-관계인 알칸디일 사슬의 2 개의 탄소 원자는, 그것들 사이에 위치한 임의의 탄소 원자를 포함하여, 다리걸쳐서 페닐 고리를 형성할 수 있고,
    D는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00771
    또는
    Figure pct00772

    여기서
    #3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소이고,
    R2는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00773

    여기서
    #4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
    Figure pct00774
    또는
    Figure pct00775

    여기서
    #6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
    R3은 수소이고,
    R4는 1-하이드록시에틸, 벤질, 4-하이드록시벤질, 1-페닐에틸 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R3 및 R4는, 이들이 결합된 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00776

    여기서
    #7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7, -C(=O)-NR8R9, -C(=O)-NH-NH-R10 또는 -CH2-O-R11의 그룹이고,
    여기서
    R7은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, tert-부틸, 벤질 또는 아다만틸메틸이고,
    R8은 수소 또는 메틸이고,
    R9은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필 또는 벤질이거나,
    R8 및 R9는, 이들이 결합되는 질소 원자와 함께, 4- 내지 7-원 헤테로사이클을 형성하고,
    R10는 벤조일이고,
    R11은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 페닐 그룹에서 치환될 수 있는 벤질이고,
    R5는 수소, 메틸 또는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00777
    또는
    Figure pct00778

    여기서
    #9은 -CHCH2페닐과의 연결 부위를 나타내고,
    R12는 메톡시카보닐, 카복실 또는 식 -S(O)2OH의 그룹에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R13은 메톡시카보닐 또는 카복실에 의해 치환될 수 있는 페닐이고,
    R35는 메틸 또는 하이드록시인, 식 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물.
  17. 청구항 15 또는 16에 있어서,
    L1은 결합이고,
    B는 결합이고,
    L2는 선형 (C2-C6)-알칸디일이거나 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00779

    여기서
    p는 2 또는 3의 수이고,
    ## 3은 그룹 B와의 연결 부위를 나타내고,
    ##4는 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    D는 하기 식의 그룹이고,
    Figure pct00780
    또는
    Figure pct00781

    여기서
    #3은 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    R1은 수소이고,
    R2는 벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R1 및 R2는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00782

    여기서
    #4는 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #5는 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    고리에 존재하는 N-O 모이어티를 갖는 고리 A는 하기 식의 모노- 또는 바이사이클릭, 선택적으로 치환된 헤테로사이클이고,
    Figure pct00783

    여기서
    #6은 카보닐 그룹과의 연결 부위를 나타내고,
    R6은 수소, 하이드록시 또는 벤질옥시이고,
    R3은 수소이고,
    R4는 벤질, 4-하이드록시벤질 또는 1H-인돌-3-일메틸이거나,
    R3 및 R4는, 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께, 하기 식의 (1S,2R)-2-페닐사이클로프로판-1,1-디일 그룹을 형성하고,
    Figure pct00784

    여기서
    #7은 인접한 질소 원자와의 연결 부위를 나타내고,
    #8은 그룹 T1과의 연결 부위를 나타내고,
    T1은 식 -C(=O)-OR7 또는 -C(=O)-NR8R9의 그룹이고,
    여기서
    R7은 수소이고,
    R8은 수소이고,
    R9은 수소이고,
    R35는 메틸인, 식 (XXXI)의 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물.
  18. 일반식 (Ia)의, 청구항 1 내지 11 중 어느 하나의 항에 따른 본 발명의 화합물의 제조 방법으로서, 하기인 완충액 중 결합제의 용액인 것을 특징으로 하는 방법:
    [A] 적당한 환원제, 예를 들면, 디티오트레이톨 또는 트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드와 혼합되고, 차후에 식 (II)의 화합물:
    Figure pct00785

    (여기서 D, L1, B, L2 및 R35 각각은 청구항 1 내지 11에서 명시된 정의를 갖는다),
    과 반응하여 식 (I-A)의 화합물:
    Figure pct00786

    (여기서 n, AK1, D, L1, B, L2 및 R35 각각은 청구항 1 내지 11에서 명시된 정의를 갖는다)
    을 얻음,
    또는
    [B] 식 (III)의 화합물:
    Figure pct00787

    (여기서 D, L1, B, L2 및 R35 각각은 청구항 1 내지 11에서 명시된 정의를 갖는다)
    과 반응하여 식 (I-B)의 화합물:
    Figure pct00788

    (여기서 n, AK2, D, L1, B, L2 및 R35 각각은 청구항 1 내지 11에서 명시된 정의를 갖는다)
    을 얻음.
  19. 청구항 18에 방법에 의해 제조되는 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물로서, AK1 및 AK2는, 항체 M048-D01-hIgG1 또는 M048-D01-hIgG1-b의 6 개의 CDR 서열, 항체 M048-D01-hIgG1 또는 M048-D01-hIgG1-b의 가변 경쇄 및 가변 중쇄 또는 항체 M048-D01-hIgG1 또는 M048-D01-hIgG1-b의 경쇄 및 중쇄를 포함하는 항체인, 화합물 및 또한 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물.
  20. 청구항 1 내지 19 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제는 FGFR2에 특이적으로 결합하는 결합제-약물 콘주게이트.
  21. 청구항 1 내지 20 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제는 FGFR2의 세포외 도메인에 결합하는 결합제-약물 콘주게이트.
  22. 청구항 1 내지 21 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 FGFR2는 FGFR2 알파 및/또는 FGFR2 베타인 결합제-약물 콘주게이트.
  23. 청구항 1 내지 22 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제는 FGFR2의 세포외 N-말단 에피토프 (1RPSFSLVEDTTLEPE15)에 결합하는 결합제-약물 콘주게이트.
  24. 청구항 1 내지 23 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제 뿐만 아니라 인간 FGFR2는 쥣과 FGFR2에 또한 결합하는 결합제-약물 콘주게이트.
  25. 청구항 1 내지 24 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제는, 표적 세포 상의 FGFR2에 결합한 후, 표적 세포의 결합에 의해 내면화되는 결합제-약물 콘주게이트.
  26. 청구항 1 내지 25 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제는 결합 단백질인 결합제-약물 콘주게이트.
  27. 청구항 1 내지 26 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제는 항체 또는 그의 항원-결합 항체 단편인 결합제-약물 콘주게이트.
  28. 청구항 1 내지 27 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 항체 단편인 결합제-약물 콘주게이트.
  29. 청구항 1 내지 28 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제는 인간, 인간화된 또는 키메라 항체 또는 그의 항원-결합 항체 단편인 결합제-약물 콘주게이트.
  30. 청구항 1 내지 29 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제는 IgG 항체 또는 그의 항원-결합 항체 단편인 결합제-약물 콘주게이트.
  31. 청구항 1 내지 30 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제는 IgG1 항체 또는 그의 항원-결합 항체 단편인 결합제-약물 콘주게이트.
  32. 청구항 1 내지 31 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제는, 암 표적 분자 FGFR2에 결합 시 GAL-FR21, GAL-FR22 또는 M048-D01-hIgG1 항체와 경쟁하는 결합제-약물 콘주게이트.
  33. 청구항 1 내지 32 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제는 하기를 포함하는 결합제-약물 콘주게이트:
    서열번호:15 (H-CDR1), 서열번호:16 (H-CDR2), 서열번호:17 (H-CDR3), 서열번호:18 (L-CDR1), 서열번호:19 (L-CDR2) 및 서열번호:20 (L-CDR3)에서 제시된 항체 M048-D01-hIgG1의 가변 경쇄 및 중쇄의 CDR 서열의 아미노산 서열,
    서열번호:12 (Vl) 및 서열번호:11 (Vh)에서 제시된 항체 M048-D01-hIgG1의 가변 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열,
    서열번호:14 (Vl) 및 서열번호:13 (Vh)에서 제시된 항체 M048-D01-hIgG1-b의 가변 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열,
    서열번호: 9 (경쇄) 및 서열번호:10 (중쇄)에서 제시된 항체 M048-D01-hIgG1-b의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열,
    서열번호: 7 (경쇄) 및 서열번호:8 (중쇄)에서 제시된 항체 M048-D01-hIgG1 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열, 또는
    항체 GAL-FR21 또는 GAL-FR22의 가변 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열.
  34. 청구항 1 내지 33 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 결합제는 하기를 포함하는 결합제-약물 콘주게이트:
    서열번호:14 (Vl) 및 서열번호:13 (Vh)에서 제시된 항체 M048-D01-hIgG1-b의 가변 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열,
    서열번호: 9 (경쇄) 및 서열번호:10 (중쇄)에서 제시된 항체 M048-D01-hIgG1-b의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열.
  35. 병의 치료 및/또는 예방을 위한, 청구항 1 내지 34 중 어느 하나의 항에 따른 결합제-약물 콘주게이트 또는 화합물.
  36. 과증식 및/또는 혈관신생 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 방법에서 사용하기 위한, 청구항 1 내지 34 중 어느 하나의 항에 따른 결합제-약물 콘주게이트 또는 화합물.
  37. 과증식 및/또는 혈관신생 질환의 치료 및/또는 예방용 약제를 생산하기 위한, 청구항 1 내지 34 중 어느 하나의 항에 따른 결합제-약물 콘주게이트.
  38. 청구항 1 내지 34 중 어느 하나의 항에 따른 결합제-약물 콘주게이트 또는 화합물을, 불활성, 비-독성, 약제학적으로 적당한 부형제와 함께 포함하는 약제.
  39. 청구항 1 내지 34 중 어느 하나의 항에 따른 결합제-약물 콘주게이트 또는 화합물을, 하나 이상의 항-과증식, 세포정지성 또는 세포독성 물질과 함께 포함하는 약제.
  40. 과증식 및/또는 혈관신생 질환의 치료 및/또는 예방을 위한, 청구항 38 또는 39에 따른 약제.
  41. 효과적인 양의, 청구항 1 내지 34 중 어느 하나의 항에 따른 적어도 하나의 결합제-약물 콘주게이트 또는 화합물, 또는 청구항 39 및 40 중 어느 하나에서 규정된 약제를 사용하는, 인간 및 동물에서 과증식 및/또는 혈관신생 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 방법.
KR1020147019085A 2011-12-14 2012-12-12 Fgfr 항체 약물 콘주게이트 (adcs) 및 그의 용도 KR20140114826A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP11193617 2011-12-14
EP11193617.5 2011-12-14
EP12189467.9 2012-10-22
EP12189467 2012-10-22
PCT/EP2012/075277 WO2013087716A2 (de) 2011-12-14 2012-12-12 Neue binder-wirkstoff konjugate (adcs) und ihre verwendung

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20140114826A true KR20140114826A (ko) 2014-09-29

Family

ID=47458914

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020147019085A KR20140114826A (ko) 2011-12-14 2012-12-12 Fgfr 항체 약물 콘주게이트 (adcs) 및 그의 용도

Country Status (16)

Country Link
US (1) US20150023989A1 (ko)
EP (1) EP2790731A2 (ko)
JP (1) JP2015505850A (ko)
KR (1) KR20140114826A (ko)
CN (1) CN104254342A (ko)
AR (1) AR089252A1 (ko)
AU (1) AU2012351685A1 (ko)
BR (1) BR112014014763A8 (ko)
CA (1) CA2859255A1 (ko)
HK (1) HK1200714A1 (ko)
IL (1) IL233050A0 (ko)
MX (1) MX2014007121A (ko)
RU (1) RU2014128467A (ko)
SG (1) SG11201403085PA (ko)
WO (1) WO2013087716A2 (ko)
ZA (1) ZA201405003B (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020153774A1 (ko) * 2019-01-23 2020-07-30 앱티스 주식회사 항체-페이로드 컨쥬게이트 제조용 화합물, 이의 용도

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5933562B2 (ja) 2010-09-29 2016-06-15 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド Ｎ−カルボキシアルキル−アウリスタチンおよびその使用
CN103826661B (zh) 2011-04-21 2019-03-05 西雅图基因公司 新的结合剂-药物缀合物(adc)及其用途
WO2013059740A1 (en) 2011-10-21 2013-04-25 Foundation Medicine, Inc. Novel alk and ntrk1 fusion molecules and uses thereof
KR20230142808A (ko) 2012-10-11 2023-10-11 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 글리신아미드 화합물의 제조 방법
EP2910573B1 (en) 2012-10-19 2020-02-19 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-drug conjugate produced by binding through linker having hydrophilic structure
EP4223770A3 (en) 2012-11-05 2023-10-18 Foundation Medicine, Inc. Novel fusion molecules and uses thereof
AU2013337277B2 (en) 2012-11-05 2018-03-08 Foundation Medicine, Inc. Novel NTRK1 fusion molecules and uses thereof
WO2014113729A2 (en) * 2013-01-18 2014-07-24 Foundation Mecicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
KR102516152B1 (ko) 2013-08-01 2023-03-31 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. 비푸코실화된 항-ｆｇｆｒ２ｉｉｉｂ 항체
AU2014316684A1 (en) 2013-09-06 2016-04-28 Aurigene Discovery Technologies Limited 1,3,4-oxadiazole and 1,3,4-thiadiazole derivatives as immunomodulators
KR102288093B1 (ko) 2013-12-25 2021-08-09 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항 trop2 항체-약물 컨쥬게이트
PL3466976T3 (pl) 2014-01-31 2021-12-20 Daiichi Sankyo Company, Limited Koniugat przeciwciało anty-HER2-lek
EP3789042A1 (en) 2014-04-10 2021-03-10 Daiichi Sankyo Company, Limited Method for producing anti-her3 antibody-drug conjugate
ES2754348T3 (es) 2014-04-10 2020-04-17 Daiichi Sankyo Co Ltd Conjugado de (anticuerpo anti-HER2)-fármaco
GB201416960D0 (en) * 2014-09-25 2014-11-12 Antikor Biopharma Ltd Biological materials and uses thereof
AU2016218840A1 (en) * 2015-02-15 2017-08-31 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Ligand-cytotoxicity drug conjugate, preparing method therefor, and application thereof
KR20180021723A (ko) 2015-06-29 2018-03-05 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항체-약물 콘주게이트의 선택적 제조 방법
TWI618697B (zh) 2015-11-03 2018-03-21 財團法人工業技術研究院 化合物、連接子－藥物、及配體－藥物耦合體
BR112018010410A8 (pt) 2015-11-23 2019-02-26 Five Prime Therapeutics Inc método para tratar câncer em um sujeito, composição e métodos de aumento do número de células nk e de aumento do número de uma ou mais células positivas para pd-l1
BR112018016983A2 (pt) * 2016-02-26 2018-12-26 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. nova toxina e método de preparação de intermediário da mesma
EP3552626A4 (en) 2016-12-12 2020-06-10 Daiichi Sankyo Company, Limited ASSOCIATION OF AN ANTIBODY DRUG CONJUGATE AND AN IMMUNE CONTROL POINT INHIBITOR
CA3050668C (en) 2017-01-17 2023-08-15 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-gpr20 antibody and anti-gpr20 antibody-drug conjugate
WO2018140275A2 (en) * 2017-01-26 2018-08-02 Seattle Genetics, Inc. Novel auristatin derivatives and related antibody-drug conjugates (adcs) and methods of preparation thereof
TWI794230B (zh) 2017-05-15 2023-03-01 日商第一三共股份有限公司 抗ｃｄｈ６抗體及抗ｃｄｈ６抗體-藥物結合物、以及其製造方法
EP3624837A1 (en) 2017-05-16 2020-03-25 Five Prime Therapeutics, Inc. Anti-fgfr2 antibodies in combination with chemotherapy agents in cancer treatment
WO2019044946A1 (ja) 2017-08-31 2019-03-07 第一三共株式会社 抗体－薬物コンジュゲートの新規製造方法
CN111051330A (zh) 2017-08-31 2020-04-21 第一三共株式会社 抗体-药物缀合物的改进制备方法
TW201912626A (zh) * 2017-09-04 2019-04-01 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 一種新毒素及其中間體的製備方法
CN117815404A (zh) 2018-05-18 2024-04-05 第一三共株式会社 抗-muc1抗体-药物缀合物
EP3897741A1 (en) * 2018-12-21 2021-10-27 Sapreme Technologies B.V. Improved cell-targeting binding molecule
CN115368278B (zh) * 2022-10-25 2023-04-11 北京鑫开元医药科技有限公司 一种苯磺酰胺类化合物水解制备苯磺酸类化合物的方法
CN116239513B (zh) * 2023-05-05 2023-08-18 天津凯莱英制药有限公司 Mmae关键中间体的制备方法、mmae的制备方法和抗体偶联药物

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4474893A (en) 1981-07-01 1984-10-02 The University of Texas System Cancer Center Recombinant monoclonal antibodies
US4714681A (en) 1981-07-01 1987-12-22 The Board Of Reagents, The University Of Texas System Cancer Center Quadroma cells and trioma cells and methods for the production of same
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DE8808645U1 (ko) 1988-07-06 1988-08-25 Hofer, Daniel, 7730 Villingen-Schwenningen, De
US4925648A (en) 1988-07-29 1990-05-15 Immunomedics, Inc. Detection and treatment of infectious and inflammatory lesions
US5601819A (en) 1988-08-11 1997-02-11 The General Hospital Corporation Bispecific antibodies for selective immune regulation and for selective immune cell binding
EP0739904A1 (en) 1989-06-29 1996-10-30 Medarex, Inc. Bispecific reagents for aids therapy
US5270163A (en) 1990-06-11 1993-12-14 University Research Corporation Methods for identifying nucleic acid ligands
AU667460B2 (en) 1990-10-05 1996-03-28 Medarex, Inc. Targeted immunostimulation with bispecific reagents
DE69128253T2 (de) 1990-10-29 1998-06-18 Chiron Corp Bispezifische antikörper, verfahren zu ihrer herstellung und deren verwendungen
US5573920A (en) 1991-04-26 1996-11-12 Surface Active Limited Antibodies, and methods for their use
ES2193143T3 (es) 1992-03-05 2003-11-01 Univ Texas Uso de inmunoconjugados para la diagnosis y/o terapia de tumores vascularizaos.
EP0859841B1 (en) 1995-08-18 2002-06-19 MorphoSys AG Protein/(poly)peptide libraries
JP2002544242A (ja) 1999-05-14 2002-12-24 ベーリンガー インゲルハイム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 酵素活性化抗腫瘍プロドラッグ化合物
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
US6884869B2 (en) * 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
SG195524A1 (en) * 2003-11-06 2013-12-30 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
US20070248605A1 (en) 2003-12-19 2007-10-25 Five Prime Therapetutics, Inc. Fibroblast Growth Factor Receptors 1,2,3, and 4 as Targets for Therapeutic Intervention
US8871720B2 (en) * 2005-07-07 2014-10-28 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the C-terminus
WO2007008603A1 (en) * 2005-07-07 2007-01-18 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the c-terminus
DOP2006000277A (es) 2005-12-12 2007-08-31 Bayer Pharmaceuticals Corp Anticuerpos anti mn y métodos para su utilización
CA2651755A1 (en) * 2006-05-12 2007-11-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for the diagnosis and treatment of cancer
US8101721B2 (en) 2006-06-15 2012-01-24 Fibron Ltd. Antibodies blocking fibroblast growth factor receptor activation and methods of use thereof
US20110059091A1 (en) 2008-02-04 2011-03-10 Xiao-Jia Chang Inhibitors of oncogenic isoforms and uses thereof
NO2842575T3 (ko) * 2008-03-18 2018-02-24
US8101723B2 (en) * 2008-11-07 2012-01-24 Galaxy Biotech, Llc Monoclonal antibodies to fibroblast growth factor receptor 2
CA2801971C (en) * 2010-06-10 2018-07-24 Hans-Georg Lerchen Novel auristatin derivatives and their use
CN103826661B (zh) * 2011-04-21 2019-03-05 西雅图基因公司 新的结合剂-药物缀合物(adc)及其用途
AR088941A1 (es) * 2011-11-23 2014-07-16 Bayer Ip Gmbh Anticuerpos anti-fgfr2 y sus usos

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020153774A1 (ko) * 2019-01-23 2020-07-30 앱티스 주식회사 항체-페이로드 컨쥬게이트 제조용 화합물, 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
NZ625745A (en) 2016-07-29
US20150023989A1 (en) 2015-01-22
WO2013087716A2 (de) 2013-06-20
ZA201405003B (en) 2016-01-27
WO2013087716A3 (de) 2013-08-22
AU2012351685A1 (en) 2014-07-03
HK1200714A1 (en) 2015-08-14
CA2859255A1 (en) 2013-06-20
AR089252A1 (es) 2014-08-06
BR112014014763A8 (pt) 2017-07-04
IL233050A0 (en) 2014-07-31
MX2014007121A (es) 2014-09-04
CN104254342A (zh) 2014-12-31
SG11201403085PA (en) 2014-10-30
JP2015505850A (ja) 2015-02-26
EP2790731A2 (de) 2014-10-22
BR112014014763A2 (pt) 2017-06-13
RU2014128467A (ru) 2016-02-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20140114826A (ko) Fgfr 항체 약물 콘주게이트 (adcs) 및 그의 용도
JP6250735B2 (ja) 新規な結合剤−薬物複合体（ａｄｃ）およびそれらの使用
CA2991975C (en) Novel linkers and their uses in specific conjugation of drugs to a biological molecule
ES2815098T3 (es) Conjugados de ligadores (ADCs) con inhibidores de KSP
JP2018506509A (ja) 細胞透過性Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤との抗体薬物コンジュゲート
JP2018524313A (ja) キネシンスピンドルタンパク質（ｋｓｐ）阻害剤の抗ｂ７ｈ３抗体との抗体薬物複合体
JP2020502201A (ja) 酵素開裂基を有する細胞毒性活性剤のプロドラッグ
JP2018524314A (ja) キネシンスピンドルタンパク質（ｋｓｐ）阻害剤の抗ｂ７ｈ３抗体との抗体薬物複合体
NZ625745B2 (en) FGFR antibody drug conjugates (ADCs) and the use thereof
TW201339175A (zh) 新黏合劑－藥物接合體（ａｄｃ）及其用途
TW201302799A (zh) 新穎結合劑－藥物接合物（ＡＤＣｓ）及其用途（一）
NZ615839B2 (en) Novel binder-drug conjugates (adcs) and their use

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid