JP2015505850A - 新規な抗体薬物コンジュゲート(adc)およびそれらの使用 - Google Patents
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Abstract
本出願は、標的FGFR2に対するN,Nジアルキルアウリスタチンの新規な抗体薬物コンジュゲート(ADC)、このようなADCの薬物代謝物、このようなADCを産生するための方法、病気の処置および/または予防のためのこのようなADCの使用、ならびに病気、特に、過剰増殖性疾患および/または血管形成疾患、例えば、癌の処置および/または予防のための薬剤を生成するためのこのようなADCの使用に関する。このような処置は、単独療法として行われてもよいし、または他の薬剤もしくは追加の治療方法と組み合わせて行われてもよい。
Description
本出願は、標的の線維芽細胞増殖因子受容体2(FGFR2)に対するN,N−ジアルキルアウリスタチン類の新規な結合剤−薬物コンジュゲート(ADC)に、これらのADCの代謝物を活性化することに、これらのADCを製造するための方法に、疾患を処置および/または予防するためのこれらのADCの使用に、ならびにまた、疾患、さらに具体的には、過剰増殖性および/または血管新生疾患、例えば、癌疾患などを処置および/または予防するための医薬を製造するためのこれらのADCの使用にも関する。このような処置は、単独療法として行われても、そうでなければ他の医薬もしくはさらなる治療方法と組み合わせて行われてもよい。
癌疾患は、広範な種々の組織中での未制御の細胞増殖の結果である。多くの場合、新しい細胞が既存の組織に侵入する(浸潤性増殖)か、またはそれらは、離れた臓器に転移する。癌疾患は、広範な種々の臓器で生じ、病気は、組織特異的な様式で進行する場合が多い。従って、一般的用語としての「癌疾患」という名称は、異なる臓器、組織および細胞種の規定の疾患の大きなグループを記載する。
初期段階の腫瘍は、外科的手段および放射線療法の手段によって除去可能である。転移した腫瘍は一般には、化学療法剤による所定の対症療法を受けることしかできない。そのような場合、クオリティーオブライフの改善および余命の延長の最適の組み合わせを達成することが目的である。
現在、非経口的に投与される化学療法剤のほとんどが、腫瘍組織または腫瘍細胞で標的指向性ではない場合が多く、代わりに、それらの全身投与の結果として、身体内で非特異的に分布されており、従って、これには、薬物に対する暴露が望ましくない位置、例えば、健康な細胞、組織および臓器などを含んでいる。これは、望ましくない副作用をもたらす場合があり、さらに全身毒性という重篤な影響をもたらす場合があり、従ってこれが、薬物の治療上有用な用量範囲を大きく制限するか、医薬の完全な中断を必要とする場合が多い。
従って、腫瘍細胞またはすぐ周囲の組織におけるこれらの化学療法剤のアベイラビリティーの改善および選択的なアベイラビリティー、ならびに一方では効果における関連のブースト、および他方では毒性の副作用の最小化が、従って、新規な化学療法剤の発達において長年にわたって焦点であった。標的細胞へ薬物を導入する効率的な方法を開発するために、今まで多くの試みが行われてきている。それにもかかわらず、薬物と細胞内標的との間の関連を最適化すること、および隣接する細胞に対する、薬物の細胞内分布を最小化することは、例えば、困難な問題であり続けている。
例えば、モノクローナル抗体は、腫瘍組織および腫瘍細胞の標的指向性の取り組みのために適切である。癌疾患の臨床処置のためのこのような抗体の重要性は、個々の特定の腫瘍性疾患の治療のために現在、承認されている、トラスツズマブ(Herceptin(登録商標))、リツキシマブ(Rituxan(登録商標))、セツキシマブ(Erbitux(登録商標))およびベバシヅマブ(Avastin(登録商標))などの薬剤の活性に基づいて、近年ではかなり一般的に増大している[例えば、G.P.AdamsおよびL.M.Weiner,Nat.Biotechnol.23,1147−1157(2005)を参照のこと]。結果的に、例えば、上述のADCのような、いわゆる免疫複合体には関与する顕著な増大があり、ここでは、腫瘍関連抗原に対する内部移行した抗体は、細胞毒性剤に対して連結単位(「リンカー」)を介して共有結合される。腫瘍細胞へのADCの導入および引き続くこのコンジュゲートの切断後、細胞毒性剤自体、または細胞毒性活性を有する別の代謝物のいずれか(細胞毒性剤から形成される)は、腫瘍細胞内に放出され、ここでその効果を直接および選択的に発達できる。この方法では、癌疾患の従来の化学療法と比較して、有意に狭い限界内で正常な組織に対する損傷を保持することが可能である[例えば、J.M.Lambert,Curr.Opin.Pharmacol.5,543−549(2005);A.M.WuおよびP.D.Senter,Nat.Biotechnol.23,1137〜1146(2005);P.D.Senter,Curr.Opin.Chem.Biol.13,235〜244(2009);L.DucryおよびB.Stump,Bioconjugate Chem.21,5〜13(2010)を参照のこと]。
抗体の代わりに、特定の標的位置(「標的」)に対して、例えば、受容体などに対して選択的に結合する結合剤として用いられるべき低分子薬物の球由来の結合剤についても可能である[例えば、E.Ruoslahtiら、Science 279,377−380(1998);D.Karkanら、PLoS ONE 3(6)、e2469(2008年6月25日)]。細胞毒性薬物のコンジュゲートおよび薬物の放出のためにリガンドと薬物との間の規定の切断ポイントを示すアドレシングリガンドも公知である。この種の「所定のブレイクポイント(break point)」は、例えば、作用位置で特定の酵素によって特定部位で選択的に切断され得るペプチド鎖内に存在し得る[例えば、R.A.FirestoneおよびL.A.Telan,米国特許出願公開第2002/0147138号を参照のこと]。
モノクローナル抗体の活性は、種々の種類の癌で実証されている。従って、HERCEPTIN(登録商標)およびErbitux(登録商標)が、それぞれ、HER2陽性の乳癌およびEGFR陽性の結腸直腸癌の処置に首尾よく用いられている。
抗体に対する細胞毒性化合物のカップリングは、癌治療をさらに改善する能力の向上をもたらす。なぜなら、これらのコンジュゲートは、腫瘍特異的なトキソフォア蓄積を可能にし、および同時に、全身毒性を低下するからである。活性および耐性に関して、ホジキンリンパ腫におけるブレンツキシマブベドチンを用いる、および乳癌におけるトラスツズマブ−DM1を用いる臨床研究では、極めて有望な結果が得られ、これによって、他の腫瘍抗原に対する新しい抗体および新しいADCの開発が支持される。
抗体ベースの治療は、固形腫瘍を含めて種々の癌の処置に極めて強力であることが証明されている。従って、例えば、Herceptin(登録商標)は、乳癌の処置に首尾よく配備され、そしてRituxan(登録商標)は、B細胞と関連する癌腫の形態に強力である。首尾よい抗体ベースの治療の開発の焦点は、好ましくは腫瘍細胞上で発現される細胞表面タンパク質に対する抗体の単離である。
線維芽細胞増殖因子受容体は、チロシン受容体キナーゼ(RTK)であり、その4つが哺乳動物で公知である(FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4)。リガンドとしては、22個のヒト線維芽細胞増殖因子(FGF)が特定された(Eswarakumar and Schlessinger,Cytokine & Growth Factor Reviews 2005,16:139−149;Shimadaら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2001,98:6500−6505)。FGFRは、3つの細胞外免疫グロブリン(Ig)様ドメイン、すなわち、D1−D3からなり、ドメイン2およびドメイン3は、リガンド結合について、および個々の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメイン(タンパク質チロシンキナーゼ(模式図は図1に示す)の触媒性中心を含む)の結合についても必須である。
FGFR2の構造の模式図。α(配列番号1)およびβ(配列番号2)スプライス変異を、お互いと比較する。この図は、3つのIg様ドメイン(D1、D2およびD3)、膜貫通ドメイン(TM)および細胞内キナーゼドメインを示す。ヘパリン結合部位(HBS)、酸性ボックス(acidic box)(AB)、および別のIIIb/IIIcドメインが同様に表示されている。アミノ末端は、Nで、カルボキシ末端はCで示す。
FGFR2の構造の模式図。α(配列番号1)およびβ(配列番号2)スプライス変異を、お互いと比較する。この図は、3つのIg様ドメイン(D1、D2およびD3)、膜貫通ドメイン(TM)および細胞内キナーゼドメインを示す。ヘパリン結合部位(HBS)、酸性ボックス(acidic box)(AB)、および別のIIIb/IIIcドメインが同様に表示されている。アミノ末端は、Nで、カルボキシ末端はCで示す。
細胞外構成要素はさらに、酸性ボックス(AB)およびヘパリン結合部位(HBS)を保有する(図1を参照のこと)。RTKのFGFRファミリーの重要な特徴は、異なる、選択的にスプライスされた変異体が存在するということである。全長FGFRは、FGFRα(配列番号1)として特定されるが、D1を欠いているアイソフォームは、FGFRβ(配列番号2)として特定される(図1)。ドメイン3中の別のスプライシングは、2つの異なる変異体、すなわち、FGFR2IIIb(エキソン7および8によってコードされる)、およびFGFR2 IIIc(これは、エキソン7および9によってコードされる)をもたらす(図1)。後者のスプライシングは、リガンド結合をもたらし、これは、特異性パターンをもたらす。FGFR2 IIIcは主に、間葉細胞によって発現され、FGFR2 IIIbは本質的に、上皮細胞によって発現される。FGF7はまた、ケラチノサイト増殖因子(KGF)としても公知であり、FGFR2 IIIbにのみ結合し、従って、これはKGFRとも呼ばれる。FGFがそれらのレセプターに結合する場合、引き続くFGFR二量体化およびリン酸化があり、ならびにRAS−MARKシグナル伝達カスケードへのおよびPI3K−AKTシグナル伝達カスケードへのFRS−GRB2ドッキングタンパク質を介した下流シグナル伝達がある。RAS−MARKシグナル伝達カスケードは、細胞増殖および細胞分化に関与しているが、PI3K−AKTシグナル伝達カスケードは、細胞の生存、および細胞の運命の決定に関与している(KatohおよびKatoh,Int.J.Oncol.2006,29:163−168)。
胚発生の間の正確な器官形成に関して、4つの受容体全て(FGFR1〜FGFR4)の、およびそれらのスプライシング変異体の種々のFGFを介した組織的なシグナル伝達が必要である(Ornitzら、Genome Biol 2001,2:3005)。FGFR2の場合、全てのFGFR2変異体が無ければ、胎盤および肢芽の形成の欠失がもたらされ、従って、E10.5段階での致死率がもたらされる。マウスにおけるFGFR2 IIIbの特異的なノックアウトは、同様に、肺の血管形成、前葉の血管形成、甲状腺の血管形成、歯の血管形成および脚の血管形成に関して致死率(P0)につながるが、FGFR2IIIc変異体の破壊は、生残可能であって、骨形成の遅延、均衡性小人症および頭蓋骨基部の骨癒合の出現をともなう(EswarakumarおよびSchlessinger,2005)。生殖細胞系におけるFGFR2の活性化変異は、胚形成の間の重度の先天性異常、例えば、尖頭症(coronal synostosis)および頭蓋癒合症(cranial synostosis)を、アペール症候群の場合において、またはヒトのファイファー症候群の場合において、もたらす(Robinら、in Gene Reviews,NCBI Bookshelf Washington,編集Pagonら、1993)。成人では、FGFR2シグナル伝達は、皮膚および粘膜の細胞の創傷治癒、表皮修復および細胞の保護に(Braunら、Phil.Trans.R.Soc.Lond.B 2004,359:753−757)、ならびに肝臓障害の事象における再生に(Steilingら、Oncogene 2003,22:4380−4388;Boehm,dissertation,Eidgenoessische Technische Hochschule Zuerich,2009)関与する。従って、梗塞後の心臓へのEPDC(心外膜由来細胞:epicardial derived cell)の遊走におけるFGFR2シグナル伝達の役割が、考察されている。なぜなら、胚形成の間、FGF10−FGFR2シグナル伝達は、心臓の発達に必須である過程である、緻密心筋へのEPDCの遊走に必須であるからである(Vega−Hernaendezら、Development 2011:3331−3340;Winter and De Groot,Cell Mol.Life Sci.2007,64:692−703)。FGFR2によって果たされるこれらの役割の全ては、事実上修復性であり、組織ホメオスターシスの破壊の結果として、非生理学的条件下でのみ本質的に重要であるようである。FGFR2を介した体細胞シグナル伝達の増大は、座瘡(Katoh,J.of Invest.Dermatol.2009,129:1861−1867)、乾癬(Finchら、Am.J.Pathol.1997,151:1619−1628;Xuら、J.Invest.Dermatol.2011:131:1521−1529)および癌(以下を参照)のような種々の生理学的状態に関与する。
癌患者の有害な転帰とのFGFR2発現の強力な関連を示す多数の研究が公表されている。
FGFR2および/またはKGFの過剰発現は、胃癌の膨張性増殖および患者の短い生存ともなう(Matsunobuら、Int.J.Cancer 2006,28:307−314;Toyokawaら、Oncol.Reports 2009,21:875−880)。FGFR2の過剰発現は、試験される全ての胃癌サンプルの31〜36.5%で検出された(Matsunobuら、Int.J.Cancer 2006,28:307−314;Toyokawaら、Oncol.Reports 2009,21:875−880)。腺癌(全ての胃癌の70%)は、さらに、2つの異なる病理型、すなわち、腸型の胃癌およびびまん性の胃癌に小分類される。興味深いことに、最初の、低侵襲型は、活性化ErbB2シグナル経路に関連するが、後者の、より侵襲性の型では、異常が、FGFR2/PI3Kシグナル経路で生じる(Yamashitaら、Surg.Today 2011,41:24−38)。FGFR2の過剰発現は、びまん型の胃癌の全サンプルのうち53%で生じた(Yamashitaら、Surg.Today 2011,41:24−38)。全てのデータをまとめると、HER2発現およびFGFR2発現は、2つの異なる患者集団で生じるようである。おそらくある程度までは、FGFR2の発現は、遺伝子増幅の結果である。なぜならFGFR2の増幅は、全ての原発性胃癌のうち約7〜10%で見出されるからである(Kuniiら、Cancer Res.2008,68:23−40−2348)。さらに、FGFR2発現は、転移で見出されるだけでなく、実際には、原発性腫瘍よりも転移でさらに大きかった(Yamashitaら、Surg.Today 2011,41:24−38)。
乳癌の場合、FGFR2IIIb発現は、腫瘍サンプルのうち57%で見出されたが、健康な組織ではかなり少なかった(Tamaruら、2004,84:1460−1471)。KGF(FGF7)は、一般にはFGFR2 IIIbと一緒に、ランダムなサンプルのうち45%で生じた。FGF7およびその単一の受容体FGFR2 IIIbの同時発現は、原発性乳癌(FGF7もFGFR2 IIIbも発現されなかった)と比較した、原発性腫瘍内のアポトーシス細胞の数の有意な減少と関連している(Tamaruら、2004,84:1460−1471)。胃癌の場合と同様、遺伝子増幅が乳癌について見出され、同様にまた、トリプルネガティブ乳癌(triply negative breast carcinomas)(TNBC)の4%でも見出された(Turnerら、Oncogene 2010,29:2013−2023)。乳癌では、乳癌のリスクの増大に関連する、個々のヌクレオチドにおける変化の数(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)を特定した(Hunterら、Nature Genetics 2007,6:870−874)。SNPがIntron2の中に局在化する場合、これは、FGFR2の転写の上方制御につながる(Katoh,Expert Reviews 2010,10:1375−1379)。興味深いことに、FGFR1は、エストロゲン受容体(ER)陽性乳癌の場合には優先的に上方制御されるが、FGFR2は、ER陰性乳癌の場合には上方制御される(Katoh,Expert Reviews 2010,10:1375−1379)。
膵臓癌の場合、FGFR2IIIbおよび/またはFGF7の過剰発現は、静脈浸潤と(Choら、Am.J.Pathol.170:1964−1974)、腫瘍細胞中で見出されているFGFR2およびFGF7の同時発現と重度に関連しており、ただし腫瘍細胞に隣接する間質細胞中にはさらに高頻度に存在する(Ishiwataら、Am.J.Pathol.1998,153:213−222)。
上皮卵巣癌の場合、80%の症例で、正常な組織と比較してFGFR2の上方制御を示し、70%では、腹水中にFGF7があった(Steeleら、Oncogene 20:5878−5887)。
FGFR2タンパク質は、試験された全ての浸潤性の子宮頸癌で見出され、腫瘍の浸潤前面で強力に発現された(Kawaseら、Int.J.Oncol.2010,36:331−340)。
肺の腺癌の場合、FGF7およびFGFR2の同時発現は、51.6%の症例で生じ、分化の程度が低いこと、増殖率が高いこと、リンパ節転移、および5年生存率の短さと相関していた(Yamayoshiら、J.Pathol.2004,204:110−118)。
子宮内膜癌の場合、活性化FGFR2変異が、約16%の場合に生じる(Pollockら、Oncogene 2007,26:7158−7162)。
食道癌(OC)の場合、癌細胞におけるFGF7およびFGFR2の同時発現は、患者の26%で見出され、生存時間が短くなる方向と関連していた(Yoshinoら、Int.J.Oncol.2007,31:721−728)。
肝細胞癌腫の場合、FGFR2の発現は、分化の劣る腫瘍では4.7倍強力に上方制御された。この発現は、門脈浸潤の頻度および無病生存時間の低さと関連している(Harimotoら、Oncology 2010,78:361−368)。
多数の刊行物(インビトロおよびインビボの実験データを含む)によって、変更されたFGFR2シグナル伝達と腫瘍増殖との間の因果関係が示される。
胃癌(Takedaら、Clin.Cancer Res.2007,13:3051〜3057;Kuniiら、Cancer Res.2008;68:2340〜2348)、乳癌(Turnerら、Oncogene 2010,29:2013−2023)、卵巣癌(Coleら、Cancer Biol.Ther.2010,10:495−504)および頭頸部の扁平上皮癌(Marshallら、Clin.Cancer Res.2011,17:5016−5025)の細胞中のFGFR2のノックダウンまたは阻害によって、腫瘍細胞の増殖の低下またはアポトーシスの増大がもたらされた。腫瘍異種移植片では同様に、FGFR2を過剰発現する腫瘍細胞株中のFGFR2のノックダウンおよびFGFR2の阻害が、胃癌細胞株(Takedaら、Clin.Cancer Res.2007;13:3051−3057)および卵巣癌細胞株(Coleら、Cancer Biol.Ther.2010,10:495−504)での増殖阻害を生じることが観察された。さらに、FGFR2を排他的に活性化するFGF7は、胃癌細胞株(Shinら、J.Cancer Res.Clin.Oncol.2002,128:596−602)、乳癌細胞株(Zhangら、Anticancer Res.1998,18:2541−2546)および卵巣癌細胞株(Coleら、Cancer Biol.Ther.2010,10:495−504)の増殖をインビトロおよびインビボで増大する。さらに、活性化変異を有するFGFR2を含む子宮内膜癌細胞株中のFGFR2のノックダウンは同様に、細胞周期の行き止まり、および細胞死の誘導を導く(Byronら、Cancer Res.2008,68:6902−6907)。
FGFR2シグナル伝達は、胃癌細胞株(Shinら、J.Cancer Res.Clin.Oncol.2002,128:596−602)、乳癌細胞株(Zhangら、Anticancer Res.1998,18:2541−2546)および膵臓癌細胞株(Nomuraら、Br.J.Cancer 2008,99:305−313;Niuら、J.Biol.Chem.2007,282:6601−6011)の遊走および侵襲をインビトロで促進する。
食道癌の場合、FGFR2は、腫瘍関連線維芽細胞において最も高度に上方制御される遺伝子である。単離された腫瘍関連の線維芽細胞は、食道癌細胞の増殖を促進する可溶性因子を遊離し(Zhangら、hum.Cancer Biol.2009,15:4017−4022)、それによって、間質細胞によって発現されるFGFR2がまた腫瘍進行を促進できることも示される。
抗FGFR2抗体については、2〜3の報告しかない。Fortinら、(J.Neurosci.2005,25:7470−7479)は、抗FGFR2抗体のブロックを記載している。Weiら、(Hybridoma 2006,25:115−124)は、KGF−誘導性細胞増殖を阻害する、FGFR2IIIbについて排他的特異性を有する抗体を示した。WO2007/144893では、FGFR2およびFGFR3に結合する阻害性抗体を記載している。WO2010/054265では、およびZhaoら(Clin.Cancer Res.2010,16:5750−5758)では、FGF結合を阻害する抗体が記載されており、これには、例えば、GAL−FR21およびGAL−FR22が挙げられる。Baiら、(Cancer Res.2010,70:7630−7639)は、FGFR2IIIbに特異性を有する抗体を記載している。R&D Systemsは、製造者のアッセイで、活性中和効果を有する抗FGFR2抗体を市販している。WO2005/066211は、FGFR2を含めて、種々の細胞表面FGFRに対する抗体を記載している。WO2009/100105は、エフェクター分子に共有結合され得る、アイソフォーム−特異的な抗FGFR2抗体を記載している。WO2007/134210は、抗FGFR2抗体または免疫複合体を用いて結腸直腸癌を処置するための方法を記載している。WO2007/144893は、リガンド−依存性および構成的なリガンド−依存性のFGFR2レセプター活性化をブロックする、さらなるFGFRに結合親和性を有するFGFR2抗体を記載している。
アウリスタチンE(AE)およびモノメチルアウリスタチンE(MMAE)は、海洋源からもともと単離され、腫瘍細胞に対してある場合には極めて強力な細胞毒性活性を有する、直鎖状擬ペプチドの特定の群である、ドラスタチン類の合成アナログである[概説に関しては、例えば、G.R.Pettit,Prog.Chem.Org.Nat.Prod.70,1−79(1997);G.R.Pettitら、Anti−Cancer Drug Design 10,529−544(1995);G.R.Pettitら、Anti−Cancer Drug Design 13,243−277(1998)を参照のこと]。
しかし、MMAEは、合成毒性が比較的高いという不利な点がある。腫瘍選択性の改善のために、MMAEを、より具体的には、さらに標的化された腫瘍療法のためのADC設定において酵素切断可能なバリン−シトルリンリンカーと組み合わせて用いる[WO2005/081711−A2;S.O.Doroninaら、Bioconjugate Chem.17,114−124(2006)]。タンパク質分解性の切断の後、MMAEは好ましくは、対応するADCから細胞内で放出される。
モノメチルアウリスタチンF(MMAF)は、MMAEと比較して中度の抗増殖性活性しか示さないC−末端フェニルアラニン単位を有するアウリスタチン誘導体である。この事実は、おそらく、遊離のカルボキシル基(その極性および荷電はこの化合物が細胞に接近する能力に対して有害な影響がある)に極めて帰属せしめられるべきである。これに関して、MMAFのメチルエステル(MMAF−OMe)は、細胞接近能力を有する中性荷電プロドラッグ誘導体として記載されている。(これはMMAFに比較して、多数のケタ数まで増大される、種々の癌細胞株に関するインビトロ細胞毒性を有する)[S.O.Doroninaら、Bioconjugate Chem.17,114−124(2006)]。これによって、MMAF自体について得られる効果(細胞へのプロドラッグの取り込み後)は、細胞内エステル加水分解によって急速に放出されるということが想定できる。
しかし、単純なエステル誘導体に基づく薬物化合物は一般には、血漿中に存在する。例えば、エステラーゼによって、意図する作用部位とは独立して、非特異的なエステル加水分解という理由で、化学的不安定性のリスクを受ける;この非特異的な加水分解によって、治療においてこのような化合物の有用性は有意に制限され得る。
モノメチルアウリスタチンF(MMAF)およびまた種々のエステル誘導体およびそのアミド誘導体は、WO2005/081711−A2に開示されている。C末端のアミド置換されたフェニルアラニン単位を有するさらなるアウリスタチンアナログは、WO01/18032−A2に記載される。WO02/088172−A2およびWO2007/008603−A1は、フェニルアラニンの側鎖改変に関するMMAFアナログを特許請求しているが、WO2007/008848−A2は、フェニルアラニンのカルボキシル基が改変されたアナログを特許請求している。C末端を介して連結されたアウリスタチンコンジュゲートは現在、WO2009/117531−A1に記載されている[また、S.O.Doroninaら、Bioconjugate Chem.19,1960−1963(2008)も参照のこと]。
本発明で取り組む問題は、新規な結合剤−薬物コンジュゲート(ADC)であって、革新的な、適切なリンカーおよび結合剤との新規なN,N−ジアルキルアウリスタチン誘導体の組み合わせを通じて、例えば、それらの特定の腫瘍効果に関して、および/または輸送体タンパク質に対する基質であるように細胞内で形成された代謝物の能力の低下に関して、極めて魅力的な活性プロフィールを示し、従って、例えば、癌疾患のような過剰増殖性のおよび/または血管新生の疾患の処置および/または予防に適切である、新規な結合剤−薬物コンジュゲート(ADC)を提供することであった。
本発明は、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲートであって
式中、
nは、1〜50の数であり、
AKは、FGFR2に結合する結合剤であって、
基§−G−L1−B−§§はリンカーであり、
ここで
§は、基AKとの連結部位を示しており、かつ
§§は、窒素原子との連結部位を示しており、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり、
式中、
pは、2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基で置換されてもよく、
および
ここでお互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、それらの間に位置する任意の炭素原子を含めて、架橋されて(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Dは、以下の式の基であり、
式中、
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
式中、
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中に存在するN−O部分を有する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
式中、
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素もしくはメチルであり、
R4は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
式中、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中、
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は水素、メチルもしくは以下の式の基であり、
式中、
#9は、−CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されていてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されていてもよく、
R26は、水素もしくはヒドロキシであり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート
ならびにまた、それらの塩、溶媒和物およびこの塩の溶媒和物を提供する。
nは、1〜50の数であり、
AKは、FGFR2に結合する結合剤であって、
基§−G−L1−B−§§はリンカーであり、
ここで
§は、基AKとの連結部位を示しており、かつ
§§は、窒素原子との連結部位を示しており、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり、
pは、2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基で置換されてもよく、
および
ここでお互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、それらの間に位置する任意の炭素原子を含めて、架橋されて(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Dは、以下の式の基であり、
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中に存在するN−O部分を有する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素もしくはメチルであり、
R4は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中、
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は水素、メチルもしくは以下の式の基であり、
#9は、−CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されていてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されていてもよく、
R26は、水素もしくはヒドロキシであり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート
ならびにまた、それらの塩、溶媒和物およびこの塩の溶媒和物を提供する。
(原文に記載なし)
本発明の化合物は、式(I)の化合物、ならびにそれらの塩、溶媒和物およびこの塩の溶媒和物、下に特定される、式(I)によって包含される式の化合物、ならびにそれらの塩、溶媒和物およびこの塩の溶媒和物、ならびにまた、実施例として下に特定され、式(I)によって包含される化合物、ならびにそれらの塩、溶媒和物およびこの塩の溶媒和物である(下に特定され式(I)によって包含される化合物が既に、塩、溶媒和物およびその塩の溶媒和物ではない限りは)。
それらの構造に応じて、本発明の化合物は、異なる立体異性型で、すなわち、高次構造の異性体の形態で、そうでなければ必要に応じて高次構造の異性体(光学異性体および/またはジアステレオマー(アトロプ異性体の場合を含む))として存在してもよい。従って、本発明は、光学異性体およびジアステレオマー、ならびにそれらのそれぞれの混合物を包含する。立体異性体的に相同な構成要素は、公知の方法で、光学異性体および/またはジアステレオマーのこのような混合物から単離されてもよい;この目的のためには、クロマトグラフィープロセス、さらに具体的にはHPLCクロマトグラフィーを、アキラル相またはキラル相上で用いることが好ましい。
本発明の化合物が、互変異性型で存在し得る場合、本発明は、全ての互変異性型を包含する。
本発明はまた、本発明の化合物の全ての適切な同位体的変異体を包含する。本発明の化合物の同位体的変異体とは、ここでは、本発明の化合物内の少なくとも1つの原子が、同じ原子数の別の原子について交換されているが、通常または優先的に天然に存在する原子量と異なる原子量を有する化合物を意味することが理解される。本発明の化合物中に組み込まれ得る同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素の同位体、例えば2H(重水素)、3H(トリチウム)、13C、14C、15N、17O、18O、32P、33P、33S、34S、35S、36S、18F、36Cl、82Br、123I、124I、129Iおよび131Iである。本発明の化合物の具体的な同位体変異体、例えば、特に、1つ上の放射性同位体が組み込まれている化合物は、例えば、体内での薬物の作用機序または分布の研究のために有益であり得る;容易な調製可能性および検出可能性のために、3Hまたは14C同位体で標識された化合物が、特に、これらの目的に関しては適切である。さらに、同位体、例えば重水素などの導入は、例えば、化合物のより高い代謝安定性の結果として、具体的な治療上の利益、例えば体内での半減期の延長または必要とされる活性用量の減少を、例えば、もたらし得る;従って、本発明の化合物のそのような修飾はまた、必要に応じて、本発明の好ましい実施形態を構成し得る。本発明の化合物の同位体変異体は、当業者に公知のプロセス、例えば下記の方法および実施例に記載の方法により、各々の試薬および/または出発化合物の対応する同位体修飾を使用することによって、調製することができる。
本発明の状況で好ましい塩は、本発明の化合物の生理的に許容される塩である。医薬適用にそれ自体適切でなくても、例えば、本発明の化合物の単離または精製に使用できる塩もまた包含される。
本発明の化合物の生理的に許容される塩は、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩を包含する。
本発明の化合物の生理的に許容される塩はまた、慣習的な塩基の塩、例えば、好ましくは、アルカリ金属塩(例えば、ナトリウム塩およびカリウム塩)、アルカリ土類金属塩(例えば、カルシウム塩およびマグネシウム塩)およびアンモニアまたは1〜16個の炭素原子を有する有機アミンから誘導されたアンモニウム塩、例えば、好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、N−メチルモルホリン、アルギニン、リジン、および1,2−エチレンジアミンも包含する。
本発明の状況における溶媒和物は、溶媒分子との配位により、固体または液体の状態で、複合体を形成する本発明の化合物の溶媒和物形態である。水和物は、配位が水とのものである特定の形態の溶媒和物である。本発明の状況で好ましい溶媒和物は水和物である。
さらに、本発明は、本発明の化合物のプロドラッグも包含する。「プロドラッグ」という用語は本明細書において、それ自体は生物学的に活性であっても不活性であってもよいが、体内での滞留時間の間に本発明の化合物に変換(例えば、代謝もしくは加水分解)され得る化合物を意味する。
本発明の状況では、別段特記しない限り、置換基は以下のように定義される:
本発明の状況における(C 1 −C 4 )−アルキルは、1〜4個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基である。例えば、好ましくは、以下を挙げることができる:メチル、エチル、n−プロピル、イソプロピル、n−ブチル、イソブチル、1−メチルプロピル、およびtert−ブチル。
アルカンジイルとは、本発明の状況では、直鎖の、α,ω−二価アルキルラジカルであって、示される特定の炭素原子数を有するラジカルである。例えば、および好ましくは、以下を挙げることができる:メチレン、エタン−1,2−ジイル(1,2−エチレン)、プロパン−1,3−ジイル(1,3−プロピレン)、ブタン−1,4−ジイル(1,4−ブチレン)、ペンタン−1,5−ジイル(1,5−ペンチレン)、ヘキサン−1,6−ジイル(1,6−ヘキシレン)、ヘプタン−1,7−ジイル(1,7−ヘキシレン)、オクタン−1,8−ジイル(1,8−オクチレン)、ノナン−1,9−ジイル(1,9−ノニレン)、デカン−1,10−ジイル(1,10−デシレン)。
(C 3 −C 7 )−シクルアルキルおよび3員〜7員の炭素環はそれぞれ、本発明の状況では、単環式、飽和シクロアルキル基(3〜7個の炭素原子を有する)である。例えば、好ましくは、以下を挙げてもよい:シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチル。
R19の定義におけるα−アミノ酸の側鎖基は、天然に存在するα−アミノ酸の側鎖を包含するだけでなく、これらのα−アミノ酸の相同体および異性体の側鎖基も包含する。α−アミノ酸はここでは、L立体配置であっても、もしくはD立体配置であってもよいし、またはL型およびD型の混合物として存在してもよい。言及し得る側鎖の基の例は、以下のとおりである:メチル(アラニン)、プロパン−2−イル(バリン)、プロパン−1−イル(ノルバリン)、2−メチルプロパン−1−イル(ロイシン)、1−メチルプロパン−1−イル(イソロイシン)、ブタン−1−イル(ノルロイシン)、tert−ブチル(2−tert−ブチルグリシン)、フェニル(2−フェニルグリシン)、ベンジル(フェニルアラニン)、p−ヒドロキシベンジル(チロシン)、インドール−3−イルメチル(トリプトファン)、イミダゾール−4−イルメチル(ヒスチジン)、ヒドロキシメチル(セリン)、2−ヒドロキシエチル(ホモセリン)、1−ヒドロキシエチル(スレオニン)、メルカプトメチル(システイン)、メチルチオメチル(S−メチルシステイン)、2−メルカプトエチル(ホモシステイン)、2−メチルチオエチル(メチオニン)、カルバモイルメチル(アスパラギン)、2−カルバモイルエチル(グルタミン)、カルボキシメチル(アスパラギン酸)、2−カルボキシエチル(グルタミン酸)、4−アミノブタン−1−イル(リジン)、4−アミノ−3−ヒドロキシブタン−1−イル(ヒドロキシリジン)、3−アミノプロパン−1−イル(オルニチン)、2−アミノエチル(2,4−ジアミノ酪酸)、アミノメチル(2,3−ジアミノプロピオン酸)、3−グアニジノプロパン−1−イル(アルギニン)、3−ウレイドプロパン−1−イル(シトルリン)。R19の定義における好ましいα−アミノ酸の側鎖の基は、メチル(アラニン)、プロパン−2−イル(バリン)、2−メチルプロパン−1−イル(ロイシン)、ベンジル(フェニルアラニン)、イミダゾール−4−イルメチル(ヒスチジン)、ヒドロキシメチル(セリン)、1−ヒドロキシエチル(スレオニン)、4−アミノブタン−1−イル(リジン)、3−アミノプロパン−1−イル(オルニチン)、2−アミノエチル(2,4−ジアミノ酪酸)、アミノメチル(2,3−ジアミノプロピオン酸)、3−グアニジノプロパン−1−イル(アルギニン)である。各場合において、L立体配置が好ましい。
本発明の状況における4員〜7員の複素環は、単環式、飽和の複素環であって、全部で4〜7個の環原子を有しており、これは、シリーズN、O、S、SOおよび/またはSO2から1つまたは2つの環原子を含み、かつ環の炭素原子または必要に応じて環の窒素原子を介して連結される。好ましいのは、シリーズN、Oおよび/またはSから1つまたは2つの環のヘテロ原子を有する5員〜7員の複素環、さらに好ましくは、シリーズNおよび/またはOから1つまたは2つの環のヘテロ原子を有する5員もしくは6員の複素環である。例えば、以下を挙げてもよい:アゼチジニル、オキセタニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、テトラヒドロフラニル、チオラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ヘキサヒドロアゼピニルおよびヘキサヒドロ−1,4−ジアゼピニル。ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニルおよびモルホリニルが好ましい。
それぞれ、A、B、D、G、L1、L2、L4、R1、R2、R3、R4およびR5によって提示され得る基の式では、記号#6、*、**、#3、#1、#2、##1、##2、##3、##4、***、****、#4、#5、#6、#7、#8または#9が位置する線の末端は、炭素原子でも、CH2基でもなく、代わりに、お互いに示される原子に結合される部分であり、ここにA、B、D、G、L1、L2、L4、R1、R2、R3、R4またはR5が結合される。
本発明の状況では、複数存在する全てのラジカルが、お互いに独立してそれらの定義を有する。本発明の化合物中のラジカルが置換される場合、このラジカルは、別段特定しない限り、1回以上置換されてもよい。1つのもしくは2つの同一のまたは異なる置換基による置換が好ましい。特に好ましいのは、1つの置換基による置換である。
本発明の状況では、用いられる用語は、他に特定しない限り、以下の定義を有する:
「リンカー」という用語は、共有結合もしくはある薬物に結合剤を共有結合的に連結する一連の原子を含む、化学単位として広義で理解される。「リンカー」という用語は、好ましくは、ある薬物に対して共有結合する結合剤を連結する本発明の意味における一連の原子として理解される。さらに、リンカーは、例えば、二価の化学単位、例えば、アルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイル、ヘテロシクリルジイル、ジカルボニル酸エステル、ジカルボニル酸アミドによって提示され得る。
「結合剤」という用語は、広義の意味では、結合剤−薬物コンジュゲートで取り組まれるべき特定の標的細胞集団に存在する標的分子に結合する分子として理解される。「結合剤」という用語は、その広義の解釈で理解されるべきであり、例えば、特定の糖鎖に結合できるタンパク質であるレクチン、またはリン脂質結合タンパク質を包含する。このような結合剤は、例えば、高分子量タンパク質(結合タンパク質)、ポリペプチドまたはペプチド(結合ペプチド)、非ペプチド(例えば、アプタマー(米国特許第5,270,163号)Keefe AD.,らによる概説文献、Nat.Rev.Drug Discov.2010;9:537−550)、またはビタミンおよび全ての他の細胞結合分子または物質を含む。結合タンパク質は、例えば、抗体および抗体フラグメントまたは抗体模倣物、例えば、アフィボディ、アドネクチン、アンチカリン、DARPins、アビマー(avimer)、ナノボディ(nanobody)(Gebauer M.ら、Curr.Opinion in Chem.Biol.2009;13:245−255;Nuttall S.D.ら、Curr.Opinion in Pharmacology 2008;8:608−617による概説文献)。結合ペプチドとは、例えば、リガンド−レセプターの対のリガンド、例えば、リガンド−レセプターの対のVEGF/KDR中のVEGF、例えば、リガンド−レセプター対のトランスフェリン/トランスフェリンレセプターのトランスフェリン、またはサイトカイン/サイトカインレセプター、例えば、リガンドレセプター対のTNFα/TNFαレセプター中のTNFαである。
本明細書において使用する用語「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはT細胞受容体に特異的に結合するできるタンパク質の任意の抗原決定基を包含する。このような抗原決定基は通常、アミノ酸、炭水化物またはそれらの組み合わせのような分子の化学的に活性な表面配列から、例えば、構成され、通常は特定の三次元構造を有し、また既定の荷電特性も有する。第一の抗体が第二の抗体と競合することが競合結合アッセイ形式で示される場合、2つの抗体が同じエピトープに結合する。この種の結合アッセイは当業者に公知である。
「標的分子」は、広義には、標的細胞集団に存在する分子である分子であり、タンパク質(例えば、増殖因子の受容体)または非ペプチド分子(例えば、糖またはリン脂質)であってもよいことが理解される。好ましくは、これは受容体または抗原である。
「細胞外」標的分子という用語は、細胞に結合され、かつ細胞の外側または細胞の外側に位置する標的分子の一部に位置する標的分子を述べており、すなわち、結合剤は、インタクトな細胞に対してその細胞外標的分子で結合してもよい。細胞外標的分子は、細胞膜中で固定されてもよいし、または細胞膜の一部であってもよい。当業者は、細胞外標的分子を特定するための方法を公知である。タンパク質については、これは、膜貫通ドメインおよび膜の中のタンパク質の方向の決定によって行われ得る。このデータは一般には、タンパク質データベース中に記録される(例えば、SwissProt)。
「癌標的分子」という用語は、同じ組織種類の非癌細胞と比較して1つ以上の癌細胞種に多重に存在する標的分子を述べる。癌標的分子は好ましくは、同じ組織種の非癌細胞に比較して、1つ以上の癌細胞種に選択的に存在し、ここで「選択的に」とは、同じ組織種の非癌細胞と比較して癌細胞に対して少なくとも2倍の蓄積を述べている(「選択的癌標的分子」)。癌標的分子の使用によって、本発明のコンジュゲートを用いる癌細胞の選択的治療が可能になる。
結合剤は、リンカーに対する結合を介して連結されてもよい。結合剤の連結は、結合剤のヘテロ原子によって生じ得る。連結のために用いられ得る結合剤の本発明のヘテロ原子は、硫黄(一実施形態では、結合剤のスルフヒドリル基を介する)、酸素(本発明によれば、結合剤のカルボキシル基またはヒドロキシル基による)および窒素(一実施形態では、結合剤の一級または二級のアミン基またはアミド基を介して)である。これらのヘテロ原子は、天然の結合剤に存在してもよく、化学もしくは分子生物学の方法によって導入されてもよい。本発明によれば、トキソフォアに対する結合剤の連結は、標的分子に対する結合剤の結合活性を上回る影響は少ない。好ましい実施形態では、この連結は、標的分子に対する結合剤の結合活性に影響がない。
「抗体」という用語は、本発明によって、その広義の意味で理解され、免疫グロブリン分子、例えば、インタクトまたは修飾されたモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体または多価抗体(例えば、二重特異性抗体)を包含する。免疫グロブリン分子は好ましくは、ジスルフィド架橋によって典型的には連結される、4つのポリペプチド鎖、2つの重鎖(H鎖)および2つの軽鎖(L鎖)を有する分子を含む。各々の重鎖は、重鎖の可変ドメイン(VHと略称)および重鎖の定常ドメインを含む。重鎖の定常ドメインは、例えば、3つのドメインCH1、CH2およびCH3を含んでもよい。各々の軽鎖は、可変ドメイン(VLと略称)および定常ドメインを含む。軽鎖の定常ドメインは、1つのドメインを含む(CLと略称される)。VHおよびVLドメインは、さらに相補性決定領域(CDRと略称)とも呼ばれる超可変性を有する領域、および配列の変動が低い領域(「フレームワーク領域」、FRと略称)に小分割され得る。各々のVHおよびVL領域は典型的には、3つのCDRおよび最大で4つのFRから構成される。例えば、アミノ末端からカルボキシ末端への順序によって:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。抗体は、その抗体に適切な任意の種、例えば、ウサギ、ラマ、ラクダ、マウスまたはラットなどから得てもよい。一実施形態では、抗体は、ヒトの抗体またはマウス由来である。抗体は例えば、ヒト、ヒト化またはキメラであってもよい。
「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、微量に存在するかもしれない自然に生じる変異を除けば、同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原結合部位を高い特異性で認識する。「モノクローナル」という用語は、特定の産生方法を指すのではない。
「インタクトな」抗体という用語は、抗原−結合ドメインだけでなく、軽鎖および重鎖の定常ドメインも含む抗体を指す。定常ドメインは、天然に存在するドメインであっても、または複数のアミノ酸位置が変更されているその変異体であってもよい。
「改変されたインタクトな」抗体という用語は、共有結合(例えば、ペプチド連結)によって、そのアミノ末端またはカルボキシル末端を介して、ある抗体に由来しない、別のポリペプチドまたはタンパク質と融合されているインタクトな抗体を指す。さらに、抗体は、トキソフォアに対するカップリングを容易にするために、規定の位置に反応性システインを導入することによって修飾されてもよい(Junutulaら、Nat Biotechnol.2008 Aug;26(8):925−32を参照のこと)。
「ヒト」抗体という用語は、ヒト由来であってもよいし、または合成のヒト抗体である抗体を特定する。「合成の」ヒト抗体とは、ヒト抗体配列の分析に基づいて、インシリコで合成配列から一部がまたは全体として入手可能な抗体である。ヒト抗体は、例えば、ヒト由来である抗体配列のライブラリーから単離された核酸によってコードされてもよい。このような抗体の1例は、Soederlindら、Nature Biotech.2000,18:853−856に見ることができる。
「ヒト化」または「キメラ」抗体という用語は、非ヒト成分から、およびヒト配列成分からなる抗体を述べる。これらの抗体では、ヒト免疫グロブリンの配列の一部(レシピエント)が、非ヒト免疫グロブリン(ドナー)の配列成分によって置き換えられる。多くの場合、ドナーは、マウス免疫グロブリンである。ヒト化抗体の場合、レシピエント中のCDRのアミノ酸は、ドナーのアミノ酸によって置き換えられる。ある場合には、フレームワークのアミノ酸は同様に、ドナーの対応するアミノ酸によって置き換えられる。ある場合にはヒト化抗体は、レシピエントにもドナーにも存在せず、かつ抗体の最適化の間に挿入されたアミノ酸を含む。キメラ抗体の場合、ドナー免疫グロブリンの可変ドメインは、ヒト抗体の定常領域と融合される。
本明細書において用いる場合「相補性決定領域」(CDR)という用語は、抗原に対する結合に必要な可変抗体ドメイン中のそれらのアミノ酸を指す。あらゆる可変領域は典型的には、CDR1、CDR2およびCDR3として同定される3つのCDR領域を有する。各々のCDR領域は、Kabatの定義によるアミノ酸、および/またはChotiaによって規定される、超可変ループのアミノ酸を含んでもよい。Kabatによる定義は、例えば、軽鎖可変のほぼアミノ酸一24〜34(CDR1)、50〜56(CDR2)および89〜97(CDR3)、ならびに可変重鎖の31〜35(CDR1)、50〜65(CDR2)および95〜102(CDR3)の領域を包含する(Kabatら、Sequences of Proteins of Immulological Interest,第5版、公衆衛生局、米国国立衛生研究所、メリーランド州ベセスダ (1991)))。Choitaによる定義は、例えば、可変軽鎖のほぼアミノ酸位置26〜32(CDR1)、50〜52(CDR2)および96〜101(CDR3)、ならびに可変重鎖の26〜32(CDR1)、53〜55(CDR2)および96〜101(CDR3)を包含する(ChothiaおよびLesk;J Mol Biol 196:901−917(1987)))。いくつかの例では、CDRは、KabatおよびChotiaによって定義されるように1つのCDR領域由来のアミノ酸を含んでもよい。
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、抗体は、異なるクラスに分けられてもよい。インタクトな抗体には5つの主要クラス:IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMがあり、これらの多くは、さらにサブクラス(アイソタイプ)、例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、およびIgA2に分けてもよい。異なる抗体クラスに対応する重鎖の定常ドメインは、[アルファ/α]、[デルタ/δ]、[イプシロン/ε]、[ガンマ/γ]、および[ミュー/μ]とされる。抗体の三次元構造とサブユニット構造の両方とも公知である。
抗体/免疫グロブリンの「機能的フラグメント」または「抗原結合性抗体フラグメント」という用語は、抗体/免疫グロブリンの抗原結合ドメインをさらに包含する、抗体/免疫グロブリンのフラグメント(例えばIgGの可変ドメイン)として定義される。抗体の「抗原結合ドメイン」は、典型的には、抗体の1つ以上の超可変領域、例えばCDR1、CDR2、および/またはCDR3領域を包含する。しかし、抗体の「フレームワーク」または「足場」領域も、抗原に対する抗体の結合にある役割を果たし得る。「フレームワーク」領域は、CDRの足場を形成する。抗原結合ドメインは、好ましくは、少なくとも可変軽鎖のアミノ酸4〜103と、可変重鎖の5〜109、より好ましくは、可変軽鎖のアミノ酸残基3〜107と、可変重鎖の4〜111を含み、特に好ましいのは完全な可変軽鎖と重鎖、すなわち、VLのアミノ酸1〜109およびVHの1〜113(WO97/08320によるナンバリング)である。
本発明の「機能的フラグメント」または「抗原結合性抗体フラグメント」は、決定的ではないが、Fab、Fab’、F(ab’)2、およびFvフラグメント:ダイアボディ(diabody);単一ドメイン抗体(DAb)、線状抗体(linear antibody);抗体の個々の鎖(単鎖Fv、ScFvと略称);および、例えば抗体フラグメントから形成された多重特異性(例えば二重特異性および三重特異性)抗体を包含する(C.A.K Borrebaeck編(1995)「Antibody Engineering」(Breakthroughs in Molecular Biology)、Oxford University Press:R.KontermannおよびS.Duebel編(2001)「Antibody Engineering」(Springer Laboratory Manual)、Springer Verlag))。「多重特異性」抗体または「多機能」抗体以外の抗体は、同一の結合部位を有するものであると理解される。多価特異的抗体は、抗原の異なるエピトープに特異的であってもよいし、または2つ以上の抗原のエピトープに特異的であってもよい(例えば、WO93/17715;WO92/08802;WO91/00360;WO92/05793;Tutt,ら、1991,J.Immunol.147:60 69;米国特許第4,474,893号;同第4,714,681号;同第4,925,648号;同第5,573,920号;同第5,601,819号;またはKostelnyら、1992,J.Immunol.148:1547 1553を参照のこと)。F(ab’)2またはFab分子は、Ch1ドメインとCLドメインの間に存在する分子間ジスルフィド相互作用が最小にできるように、または完全に除去されるように、構築され得る。
「機能的なフラグメント」または「抗原−結合抗体フラグメント」を、共有結合(例えば、ペプチド結合)によって、そのアミノ末端またはカルボキシル末端を介して、ある抗体に由来しない、別のポリペプチドまたはタンパク質と融合してもよい。さらに、抗体および抗原−結合フラグメントは、トキソフォアに対するカップリングを容易にするために、規定の位置で反応性システインを導入することによって修飾されてもよい(Junutulaら、Nat Biotechnol.2008 Aug;26(8):925−32を参照のこと)。
ポリクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって調製され得る。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって調製され得る(Koehler and Milstein,Nature,256,495−497,1975)。ヒトおよびヒト化モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって調製され得る(Olssonら、Meth Enzymol.92,3−16またはCabillyら、米国特許第4,816,567号またはBossら、米国特許第4,816,397号)。
当業者は、例えば、トランスジェニックマウス(N Lonberg and D Huszar,Int Rev Immunol.1995;13(1):65−93)またはファージディスプレイ技術(Phage Display Technologies)(Clacksonら、Nature.1991 Aug 15;352(6336):624−8)などによって、ヒト抗体およびそれらのフラグメントを調製するための多様な方法を承知している。本発明の抗体は、多数の健康なボランティアから編集された抗体の多重性のアミノ酸から例えば構成される、組み換え抗体ライブラリーから得てもよい。抗体はまた、公知の組み換えDNA技術によって生成され得る。抗体の核酸配列は、慣用的な配列決定によって得てもよいし、公的に入手可能なデータベースから入手可能である。
「単離された」抗体または結合剤は、細胞の他の構成要素を除去するために精製された。診断または治療用途を邪魔し得る細胞の混入している構成要素は、例えば、酵素、ホルモン、または細胞の他のペプチドもしくは非ペプチド構成要素である。好ましい抗体または結合剤とは、その抗体または結合剤に対して、95%を超える程度まで精製されたものである(例えば、ローリー法、UV−Vis分光法によって、またはSDSキャピラリーゲル電気泳動によって決定)。さらに、抗体は、アミノ末端の、または内部アミノ酸配列の少なくとも15アミノ酸を決定することができるような程度まで精製されたか、または均一まで精製され、この均一性は、還元条件下または非還元条件下でSDS−PAGEで決定される(検出は、Coomassie Blau染色によって、好ましくは銀呈色によって決定され得る)。しかし、抗体は正常には、1つ以上の精製工程で調製される。
「特異的な結合」または「特異的に結合する」という用語は、所定の抗原/標的分子に結合する抗体または結合剤を指す。抗体または結合剤の特定の結合とは典型的には、少なくとも10−7Mの親和性を有する抗体または結合剤を述べており、この抗体または結合剤は、所定の抗原/標的分子または密接に関連する抗原/標的分子ではない、非特異的な抗原/標的分子(例えば、ウシ血清アルブミンまたはカゼイン)についてよりも、この所定の抗原/標的分子について少なくとも2倍高い親和性を有している。
癌細胞抗原に対して特異的な抗体は、当業者によって、彼らが慣れている方法(例えば、組み換え発現など)によって調製されてもよいし、または商業的に入手されてもよい(例えば、Merck KGaA,Germany)。癌治療で公知の商業的に利用される抗体の例は、Erbitux(登録商標)(cetuximab,Merck KGaA)、Avastin(登録商標)(bevacizumab,Roche)およびHerceptin(登録商標)(trastuzumab,Genentech)である。トラスツズマブは、IgG1κ型の組み換えヒト化モノクローナル抗体であり、これは、細胞ベースのアッセイ(Kd=5nM)で、ヒト上皮増殖レセプターの細胞外ドメインと高い親和性で結合する。この抗体は、CHO細胞中で組み換え産生される。
本発明の好ましい主題は、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲートであって、ここで
nは、1〜50の数であり、
AKは、AK1またはAK2であり、
式中、
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であり、かつG基に対して結合剤のイオウ原子を介して結合され、
AK2は、FGFR2に結合する結合剤であり、かつG基に対して結合剤の窒素原子を介して結合され、
Gは、AK=AK1である場合、以下の式の基であり、
式中、
#1は、前記結合剤のイオウ原子との連結部位を示しており、
#2は、は、L1基との連結部位を示しているか、
または
AK=AK2である場合は、カルボニルであり、
L1は、結合、直鎖(C1−C10)−アルカンジイル、式
の基であり、
式中、mは、2〜6の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
L1Aは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
B1は、以下の式の基であり、
式中、
##5は、L1A基との連結部分を示しており、
##6は、L1B基との連結部分を示しており、
L5は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L6は、結合もしくは以下の式の基であり、
式中、##7は、カルボニル基との連結部位を示しており、
##8は、L1Bとの連結部位を示しており、
R33は、水素、(C1−C4)−アルキルカルボニル、tert−ブチルオキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルであり、
R34は、水素もしくはメチルであり、
R29は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R30は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
または
R29およびR30は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R31は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R32は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R31およびR32は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
L1Bは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで(C1−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互い独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されており、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成するように架橋されてもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり、
式中、
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
Pは、OもしくはNHであり、
L3は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L4は、結合もしくは以下の式の基であり、
式中、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、水素もしくはメチルであり、
R28は、水素、(C1−C4)−アルキルカルボニル、tert−ブチルオキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルであり、
Q1は、4員〜7員の複素環であり、
Q2は、3員〜7員の炭素環または4員〜7員の複素環であり、
R14は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R15は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R14およびR15は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R16は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R17は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R18は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R19は、水素もしくは天然のα−アミノ酸の、またはその相同体もしくは異性体の側鎖基であり、
R20は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R19およびR20は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R22は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R21およびR22は、それらが結合される原子と一緒になって、3員〜7員の炭素環を形成し、
R23は、(C1−C4)−アルキルであり、
R24は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R27は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R36は、水素、(C1−C4)−アルキルカルボニル、tert−ブチルオキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルであり、
R37は、水素もしくはメチルであるか、
または
R36およびR37は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり、
式中、
pは2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルが、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互いと独立して選択される1〜4個の置換基で置換されてもよく、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成するように架橋されてもよく、
Dは、以下の式の基であり、
式中、#3は窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイルを形成し、
式中、
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
式中、
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素もしくはメチルであり、
R4は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
ここで
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり、
式中、
#9は、−CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されていてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26は、水素もしくはヒドロキシであり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35はメチルもしくはヒドロキシである、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート、
ならびにまたそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
nは、1〜50の数であり、
AKは、AK1またはAK2であり、
式中、
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であり、かつG基に対して結合剤のイオウ原子を介して結合され、
AK2は、FGFR2に結合する結合剤であり、かつG基に対して結合剤の窒素原子を介して結合され、
Gは、AK=AK1である場合、以下の式の基であり、
#1は、前記結合剤のイオウ原子との連結部位を示しており、
#2は、は、L1基との連結部位を示しているか、
または
AK=AK2である場合は、カルボニルであり、
L1は、結合、直鎖(C1−C10)−アルカンジイル、式
式中、mは、2〜6の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
L1Aは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
B1は、以下の式の基であり、
##5は、L1A基との連結部分を示しており、
##6は、L1B基との連結部分を示しており、
L5は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L6は、結合もしくは以下の式の基であり、
##8は、L1Bとの連結部位を示しており、
R33は、水素、(C1−C4)−アルキルカルボニル、tert−ブチルオキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルであり、
R34は、水素もしくはメチルであり、
R29は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R30は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
または
R29およびR30は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R31は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R32は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R31およびR32は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
L1Bは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで(C1−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互い独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されており、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成するように架橋されてもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり、
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
Pは、OもしくはNHであり、
L3は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L4は、結合もしくは以下の式の基であり、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、水素もしくはメチルであり、
R28は、水素、(C1−C4)−アルキルカルボニル、tert−ブチルオキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルであり、
Q1は、4員〜7員の複素環であり、
Q2は、3員〜7員の炭素環または4員〜7員の複素環であり、
R14は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R15は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R14およびR15は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R16は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R17は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R18は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R19は、水素もしくは天然のα−アミノ酸の、またはその相同体もしくは異性体の側鎖基であり、
R20は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R19およびR20は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R22は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R21およびR22は、それらが結合される原子と一緒になって、3員〜7員の炭素環を形成し、
R23は、(C1−C4)−アルキルであり、
R24は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R27は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R36は、水素、(C1−C4)−アルキルカルボニル、tert−ブチルオキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルであり、
R37は、水素もしくはメチルであるか、
または
R36およびR37は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり、
pは2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルが、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互いと独立して選択される1〜4個の置換基で置換されてもよく、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成するように架橋されてもよく、
Dは、以下の式の基であり、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイルを形成し、
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素もしくはメチルであり、
R4は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#8は、T1との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
ここで
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり、
#9は、−CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されていてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26は、水素もしくはヒドロキシであり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35はメチルもしくはヒドロキシである、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート、
ならびにまたそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
本発明の好ましい主題は、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲートであって、ここで
nは、1〜20の数であり、
AKは、AK1またはAK2であり、
ここで
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であり、かつG基に対して結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合され、
AK2は、FGFR2に結合する結合剤であり、かつG基に対して結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gは、AK=AK1である場合、以下の式の基であり
式中、
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しているか、
または
AK=AK2である場合は、カルボニルであり、
L1は結合、直鎖(C2−C6)−アルカンジイル、以下の式の基であり
式中、
mは2〜6の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
L1Aは、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
B1は、以下の式の基であり
式中、
##5は、L1A基との連結部位を示しており、
##6は、L1B基との連結部位を示しており、
L5は結合であり、
L6は、結合もしくは以下の式の基であり
式中、
##7は、カルボニル基との連結部位を示しており、
##8は、L1Bとの連結部位を示しており、
R33は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R34は、水素もしくはメチルであり、
R29は、水素であり、
R30は、水素であり、
R31は、水素もしくはメチルであり、
R32は、水素もしくはメチルであり、
L1Bは、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで(C2−C6)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり
式中、
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は結合もしくは以下の式の基であり
式中、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、水素もしくはメチルであり、
R28は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
Q1は4員〜7員の複素環であり、
R14は、水素であり、
R15は、水素であり、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
R18は、水素であり、
R19は、水素、メチル、プロパン−2−イル、2−メチルプロパン−1−イルもしくは1−メチルプロパン−1−イルであり、
R20は、水素もしくはメチルであるか、
または
R19およびR20は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21は、水素もしくはメチルであり、
R22は、水素もしくはメチルであるか、
または
R21およびR22それらが結合される原子と一緒になって、シクロプロピル環を形成し、
R23は、メチルであり、
R24は、水素もしくはメチルであり、
R27は、水素であり、
R36は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R37は、水素もしくはメチルであるか、
または
R36およびR37は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し、
L2は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
pは2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されていてもよく、
Dは、以下の式の基であり
式中、
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
式中、
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素であり、
R4は、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
ここで、R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり、
式中、
#9は、−CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されていてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26は、水素もしくはヒドロキシであり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35はメチルもしくはヒドロキシである、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート、
ならびにまた、それらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。
nは、1〜20の数であり、
AKは、AK1またはAK2であり、
ここで
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であり、かつG基に対して結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合され、
AK2は、FGFR2に結合する結合剤であり、かつG基に対して結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gは、AK=AK1である場合、以下の式の基であり
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しているか、
または
AK=AK2である場合は、カルボニルであり、
L1は結合、直鎖(C2−C6)−アルカンジイル、以下の式の基であり
mは2〜6の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
L1Aは、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
B1は、以下の式の基であり
##5は、L1A基との連結部位を示しており、
##6は、L1B基との連結部位を示しており、
L5は結合であり、
L6は、結合もしくは以下の式の基であり
##7は、カルボニル基との連結部位を示しており、
##8は、L1Bとの連結部位を示しており、
R33は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R34は、水素もしくはメチルであり、
R29は、水素であり、
R30は、水素であり、
R31は、水素もしくはメチルであり、
R32は、水素もしくはメチルであり、
L1Bは、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで(C2−C6)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は結合もしくは以下の式の基であり
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、水素もしくはメチルであり、
R28は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
Q1は4員〜7員の複素環であり、
R14は、水素であり、
R15は、水素であり、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
R18は、水素であり、
R19は、水素、メチル、プロパン−2−イル、2−メチルプロパン−1−イルもしくは1−メチルプロパン−1−イルであり、
R20は、水素もしくはメチルであるか、
または
R19およびR20は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21は、水素もしくはメチルであり、
R22は、水素もしくはメチルであるか、
または
R21およびR22それらが結合される原子と一緒になって、シクロプロピル環を形成し、
R23は、メチルであり、
R24は、水素もしくはメチルであり、
R27は、水素であり、
R36は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R37は、水素もしくはメチルであるか、
または
R36およびR37は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し、
L2は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されていてもよく、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素であり、
R4は、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
ここで、R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり、
#9は、−CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されていてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26は、水素もしくはヒドロキシであり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35はメチルもしくはヒドロキシである、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート、
ならびにまた、それらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。
本発明の好ましい主題は、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲートであって、式中、
nは、1〜10の数であり、
AKは、AK1またはAK2であり、
ここで、
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であって、G基に対してその結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合され、
AK2は、FGFR2に結合する結合剤であって、G基に対してその結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gは、AK=AK1である場合、以下の式の基であり
式中、
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しているか、
または
AK=AK2である場合はカルボニルであり、
L1は、結合、直鎖(C2−C6)−アルカンジイル、以下の式の基であり
式中、
mは、2もしくは3の数であり、
##1はG基との連結部位を示しており、
##2はB基との連結部位を示しており、
ここで(C2−C6)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり
式中
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は、結合もしくは以下の式の基であり、
式中、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、メチルであり、
R28は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
Q1は、ピペリジン−1,4−ジイル、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
R21は、水素もしくはメチルであり、
R22は、水素もしくはメチルであるか、
または
R21およびR22それらが結合される原子と一緒になって、シクロプロピル環を形成し、
R23は、メチルであり、
R24は、水素であり、
L2は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
式中、
pは2〜6の数であり、
##3はB基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
Dは、以下の式の基であり
式中、
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
式中、
#4隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
式中、
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素であり、
R4は、ベンジル、1−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
式中、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、または−CH2−O−R11の基であり、
式中
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであり、
R11はベンジルであり、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の一般式の基であり
式中、
#9は、−CHCH2フェニルとの連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである、
一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
nは、1〜10の数であり、
AKは、AK1またはAK2であり、
ここで、
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であって、G基に対してその結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合され、
AK2は、FGFR2に結合する結合剤であって、G基に対してその結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gは、AK=AK1である場合、以下の式の基であり
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しているか、
または
AK=AK2である場合はカルボニルであり、
L1は、結合、直鎖(C2−C6)−アルカンジイル、以下の式の基であり
mは、2もしくは3の数であり、
##1はG基との連結部位を示しており、
##2はB基との連結部位を示しており、
ここで(C2−C6)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は、結合もしくは以下の式の基であり、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、メチルであり、
R28は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
Q1は、ピペリジン−1,4−ジイル、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
R21は、水素もしくはメチルであり、
R22は、水素もしくはメチルであるか、
または
R21およびR22それらが結合される原子と一緒になって、シクロプロピル環を形成し、
R23は、メチルであり、
R24は、水素であり、
L2は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
pは2〜6の数であり、
##3はB基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#4隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素であり、
R4は、ベンジル、1−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、または−CH2−O−R11の基であり、
式中
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであり、
R11はベンジルであり、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の一般式の基であり
#9は、−CHCH2フェニルとの連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである、
一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
本発明の好ましい主題は、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲートであって、ここで
nは、1〜10の数であり、
AKはAK2であり
ここで
AK2は、FGFR2に結合する結合剤であって、かつG基に対して結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gは、カルボニルであり、
L1は結合であり、
Bは結合であり、
L2は、直鎖(C3−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
式中
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
Dは、以下の式の基であり
式中
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、ベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニル-シクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分を有する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
式中
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R3は、水素であり、
R4は、ベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7または−C(=O)−NR8R9の基であり、
式中
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素であり、
R9は、水素もしくはベンジルであり、
R35は、メチルである、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート、
ならびにまた、それらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
nは、1〜10の数であり、
AKはAK2であり
ここで
AK2は、FGFR2に結合する結合剤であって、かつG基に対して結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gは、カルボニルであり、
L1は結合であり、
Bは結合であり、
L2は、直鎖(C3−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、ベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニル-シクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分を有する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R3は、水素であり、
R4は、ベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7または−C(=O)−NR8R9の基であり、
式中
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素であり、
R9は、水素もしくはベンジルであり、
R35は、メチルである、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート、
ならびにまた、それらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
本発明の好ましい主題は、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲートであって、式中
nは、1〜10の数であり、
AKは、AK1であり
式中、
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であって、G基に対してこの結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合され、
Gは、以下の式の基であり
式中、
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しており、
L1は、結合、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり、
式中、
mは、2もしくは3の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
ここで(C3−C5)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり
式中、
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は、結合もしくは以下の式の基であり、
式中、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、メチルであり、
R28は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
L2は、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であって
式中
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
Dは、以下の式の基であり
式中、
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、ベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
式中、
#4は隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分を有する環Aは単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
式中
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R3は、水素であり、
R4はベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イル-メチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7または−C(=O)−NR8R9の基であり、
ここで
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素であり、
R9は、水素もしくはベンジルであり、
R35は、メチルである、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート、
ならびに、それらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
nは、1〜10の数であり、
AKは、AK1であり
式中、
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であって、G基に対してこの結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合され、
Gは、以下の式の基であり
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しており、
L1は、結合、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり、
mは、2もしくは3の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
ここで(C3−C5)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は、結合もしくは以下の式の基であり、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、メチルであり、
R28は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
L2は、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であって
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、ベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#4は隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分を有する環Aは単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R3は、水素であり、
R4はベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イル-メチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7または−C(=O)−NR8R9の基であり、
ここで
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素であり、
R9は、水素もしくはベンジルであり、
R35は、メチルである、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート、
ならびに、それらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
さらに好ましくは、本発明によって提供されるのは、上記のような結合剤−薬物コンジュゲートであって、ここでこの結合剤が、配列番号14(Vl)および配列番号13(Vh)によって再生される、抗体M048−D01−hIgG1−bの可変の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列、配列番号9(軽鎖)および配列番号10(重鎖)によって再生される、抗体M048−D01−hIgG1−bの軽鎖および重鎖のアミノ酸配列を含む、結合剤−薬物コンジュゲートである。
さらに、本発明によって提供されるのは、式(XXXa)の化合物であって、
式中
Cysが、スクシンイミドの炭素原子に対して側鎖のイオウ原子を介して結合されるシステイン残基であって、
L1が、結合、直鎖(C1−C10)−アルカンジイル、以下の式の基であり
式中、
mが、2〜6の数であり、
##1が、G基との連結部位を示しており、
##2が、B基との連結部位を示しており、
L1Aは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
B1が、以下の式の基であり
式中、
##5は、L1A基との結合部位を示しており、
##6は、L1B基との結合部位を示しており、
L5は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L6は結合であり、
R29は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R30は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R29およびR30は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R31は、水素もしくは(C1−C4)−アルキル、
R32は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R31およびR32は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
L1Bは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで、(C1−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されていてもよく、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、架橋されて(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり、
式中
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
Pは、OもしくはNHであり、
L3は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L4は結合であり、
Q1は、4員〜7員の複素環であり、
Q2は、3員〜7員の炭素環または4員〜7員の複素環であり、
R14は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R15は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R14およびR15は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R16は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R17は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R18は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R19は、水素もしくは天然のα−アミノ酸の、またはその相同体もしくは異性体の側鎖基であり、
R20は、水素もしくは(C1−C4)−アルキル、
または
R19およびR20は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R22は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R21およびR22は、それらが結合される原子と一緒になって、3員〜7員の炭素環を形成し、
R23は、(C1−C4)−アルキルであり、
R24は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R27は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイル、または以下の式の基であり
式中
pは2〜6の数であり、
##3はB基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで、(C2−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互い独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されていてもよく、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2−、1,3−または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子が架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Dは、以下の式の基であり
式中
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニル-シクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分を有する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
式中
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシ、
R3は、水素もしくはメチルであり、
R4は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中、
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、これはメトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり、
式中、
#9は、−CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されていてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26は、水素もしくはヒドロキシであり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
Cysが、スクシンイミドの炭素原子に対して側鎖のイオウ原子を介して結合されるシステイン残基であって、
L1が、結合、直鎖(C1−C10)−アルカンジイル、以下の式の基であり
mが、2〜6の数であり、
##1が、G基との連結部位を示しており、
##2が、B基との連結部位を示しており、
L1Aは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
B1が、以下の式の基であり
##5は、L1A基との結合部位を示しており、
##6は、L1B基との結合部位を示しており、
L5は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L6は結合であり、
R29は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R30は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R29およびR30は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R31は、水素もしくは(C1−C4)−アルキル、
R32は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R31およびR32は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
L1Bは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで、(C1−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されていてもよく、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、架橋されて(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり、
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
Pは、OもしくはNHであり、
L3は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L4は結合であり、
Q1は、4員〜7員の複素環であり、
Q2は、3員〜7員の炭素環または4員〜7員の複素環であり、
R14は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R15は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R14およびR15は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R16は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R17は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R18は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R19は、水素もしくは天然のα−アミノ酸の、またはその相同体もしくは異性体の側鎖基であり、
R20は、水素もしくは(C1−C4)−アルキル、
または
R19およびR20は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R22は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R21およびR22は、それらが結合される原子と一緒になって、3員〜7員の炭素環を形成し、
R23は、(C1−C4)−アルキルであり、
R24は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R27は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイル、または以下の式の基であり
pは2〜6の数であり、
##3はB基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで、(C2−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互い独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されていてもよく、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2−、1,3−または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子が架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニル-シクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分を有する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシ、
R3は、水素もしくはメチルであり、
R4は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中、
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、これはメトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり、
#9は、−CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されていてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26は、水素もしくはヒドロキシであり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、さらに、式(XXXa)の化合物であって、ここで
Cysが、スクシンイミドの炭素原子を介して側鎖のイオウ原子を介して結合されるシステイン残基であり、
L1が、結合、直鎖(C2−C6)−アルカンジイル、以下の式の基
であり、
mが、2もしくは3の数であり、
##1が、G基との連結部位を示しており、
##2が、B基との連結部位を示しており、
L1Aが、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
B1が、以下の式の基であり
式中、
##5がL1A基との連結部位を示しており、
##6が、L1B基との結合部位を示しており、
L5が、結合であり、
L6が、結合であり、
R29が、水素であり、
R30が、水素であり、
R31が、水素もしくはメチルであり、
R32が、水素もしくはメチルであり、
L1Bが、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで(C2−C6)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されていてもよく、
Bが、結合もしくは以下の式の基であり
式中、
*が、L1との連結部位を示しており、
**が、L2との連結部位を示しており、
L3が、結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は結合であり、
R14が、水素であり、
R15が、水素であり、
R16が、水素もしくはメチルであり、
R17が、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17が、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
R23が、メチルであり、
R24が、水素もしくはメチルであり、
L2が、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であって
式中、
pが、2もしくは3の数であり、
##3が、B基との連結部位を示しており、
##4が、窒素原子との連結部位を示しており、
Dが、以下の式の基であって
式中、
#3が、窒素原子との連結部位を示しており、
R1が、水素であり、
R2が、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中、
#4が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5が、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aが、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
式中、
#6が、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6が、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3が、水素であり、
R4が、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニル-シクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
式中、
#7が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8が、T1基との連結部位を示しており、
T1が、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中、
R7が、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8が、水素もしくはメチルであり、
R9が、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9が、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11が、ベンジルであって、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されていてもよく、
R5が、水素、メチルもしくは以下の式の基であり
式中、
#9が、−CHCH2フェニルに対する連結部位を示しており
R12が、フェニルであって、これが、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13が、フェニルであって、これが、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R35が、メチルもしくはヒドロキシである、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
Cysが、スクシンイミドの炭素原子を介して側鎖のイオウ原子を介して結合されるシステイン残基であり、
L1が、結合、直鎖(C2−C6)−アルカンジイル、以下の式の基
mが、2もしくは3の数であり、
##1が、G基との連結部位を示しており、
##2が、B基との連結部位を示しており、
L1Aが、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
B1が、以下の式の基であり
##5がL1A基との連結部位を示しており、
##6が、L1B基との結合部位を示しており、
L5が、結合であり、
L6が、結合であり、
R29が、水素であり、
R30が、水素であり、
R31が、水素もしくはメチルであり、
R32が、水素もしくはメチルであり、
L1Bが、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで(C2−C6)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されていてもよく、
Bが、結合もしくは以下の式の基であり
*が、L1との連結部位を示しており、
**が、L2との連結部位を示しており、
L3が、結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は結合であり、
R14が、水素であり、
R15が、水素であり、
R16が、水素もしくはメチルであり、
R17が、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17が、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
R23が、メチルであり、
R24が、水素もしくはメチルであり、
L2が、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であって
pが、2もしくは3の数であり、
##3が、B基との連結部位を示しており、
##4が、窒素原子との連結部位を示しており、
Dが、以下の式の基であって
#3が、窒素原子との連結部位を示しており、
R1が、水素であり、
R2が、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5が、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aが、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6が、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6が、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3が、水素であり、
R4が、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニル-シクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#7が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8が、T1基との連結部位を示しており、
T1が、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中、
R7が、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8が、水素もしくはメチルであり、
R9が、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9が、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11が、ベンジルであって、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されていてもよく、
R5が、水素、メチルもしくは以下の式の基であり
#9が、−CHCH2フェニルに対する連結部位を示しており
R12が、フェニルであって、これが、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13が、フェニルであって、これが、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R35が、メチルもしくはヒドロキシである、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で特に好ましいのは、さらに、式(XXXa)の化合物であって、ここで
Cysが、システイン残基であって、これが、スクシンイミドの炭素原子を介して側鎖のイオウ原子を介して結合され、
L1が、結合もしくは直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
Bが、結合もしくは以下の式の基であり
式中、
*が、L1との連結部位を示しており、
**が、L2との連結部位を示しており、
L3が、結合であり、
L4が、結合であり、
R16が、水素もしくはメチルであり、
R17が、水素もしくはメチルであり、
L2が、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
式中
pが、2もしくは3の数であり、
##3が、B基との連結部位を示しており、
##4が、窒素原子との連結部位を示しており、
Dが、以下の式の基であり
式中、
#3が、窒素原子との連結部位を示しており、
R1が、水素であるか、
または
R2が、ベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中、
#4が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5が、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分を有する環Aが、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
式中、
#6が、カルボニル基との連結部位を示しており、
R3が、水素であり、
R4はベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中、
#7が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8が、T1基との連結部位を示しており、
T1が、式−C(=O)−OR7または−C(=O)−NR8R9であり、
式中
R7が、水素であり、
R8が、水素であり、
R9が、水素であり、
R35が、メチルである、化合物
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
Cysが、システイン残基であって、これが、スクシンイミドの炭素原子を介して側鎖のイオウ原子を介して結合され、
L1が、結合もしくは直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
Bが、結合もしくは以下の式の基であり
*が、L1との連結部位を示しており、
**が、L2との連結部位を示しており、
L3が、結合であり、
L4が、結合であり、
R16が、水素もしくはメチルであり、
R17が、水素もしくはメチルであり、
L2が、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
pが、2もしくは3の数であり、
##3が、B基との連結部位を示しており、
##4が、窒素原子との連結部位を示しており、
Dが、以下の式の基であり
#3が、窒素原子との連結部位を示しており、
R1が、水素であるか、
または
R2が、ベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5が、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分を有する環Aが、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6が、カルボニル基との連結部位を示しており、
R3が、水素であり、
R4はベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#7が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8が、T1基との連結部位を示しており、
T1が、式−C(=O)−OR7または−C(=O)−NR8R9であり、
式中
R7が、水素であり、
R8が、水素であり、
R9が、水素であり、
R35が、メチルである、化合物
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
本発明がさらに提供するのは、式(XXXI)の化合物であって
式中、L1が、結合、直鎖(C1−C10)−アルカンジイル、以下の式の基であって
式中、
mが、2〜6の数であり、
##1が、G基との連結部位を示しており、
##2が、B基との連結部位を示しており、
L1Aが、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
B1が、以下の式の基であり
式中、
##5が、L1A基との連結部位を示しており、
##6が、L1B基との結合部位を示しており、
L5が、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L6が、結合であり、
R29が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R30が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R29およびR30が、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R31が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R32が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R31およびR32が、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
L1Bが、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで(C1−C10)−アルカンジイルが、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互い独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されていてもよく、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Bが、結合もしくは以下の式の基であり
式中、
*が、L1との連結部位を示しており、
**が、L2との連結部位を示しており、
Pが、OもしくはNHであり、
Q1が、4員〜7員の複素環であり、
Q2が、3員〜7員の炭素環または4員〜7員の複素環であり、
R18が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R19が、水素もしくは天然のα−アミノ酸の、またはその相同体もしくは異性体の側鎖基であり、
R20が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R19およびR20が、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R22が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R21およびR22が、それらが結合される原子と一緒になって、3員〜7員の炭素環であり、
R27が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
L2が、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
式中
pは2〜6の数であり、
##3が、B基との連結部位を示しており、
##4が、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルが、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互い独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されていてもよく、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子が、架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Dが、以下の式の基であり
式中、
#3が、窒素原子との連結部位を示しており、
R1が、水素もしくはメチルであり、
R2が、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中、
#4が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5が、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分を有する環Aが、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
式中、
#6が、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6が、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3が、水素もしくはメチルであり、
R4が、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
式中、
#7が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8が、T1基との連結部位を示しており、
T1が、以下の式の基であり−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11、
式中、
R7が、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8が、水素もしくはメチルであり、
R9が、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9が、それらが結合される窒素原子と一緒になって4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、これが、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されていてもよく、
R5が、水素、メチルもしくは以下の式の基であり
#9が、−CHC(R26)−T2との連結部位を記しており、
R12が、フェニルであって、これが、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されていてもよく、
R13が、フェニルであって、これが、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26が、水素もしくはヒドロキシであり、
T2が、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35が、メチルもしくはヒドロキシである、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
mが、2〜6の数であり、
##1が、G基との連結部位を示しており、
##2が、B基との連結部位を示しており、
L1Aが、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
B1が、以下の式の基であり
##5が、L1A基との連結部位を示しており、
##6が、L1B基との結合部位を示しており、
L5が、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L6が、結合であり、
R29が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R30が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R29およびR30が、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R31が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R32が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R31およびR32が、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
L1Bが、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで(C1−C10)−アルカンジイルが、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互い独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されていてもよく、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Bが、結合もしくは以下の式の基であり
*が、L1との連結部位を示しており、
**が、L2との連結部位を示しており、
Pが、OもしくはNHであり、
Q1が、4員〜7員の複素環であり、
Q2が、3員〜7員の炭素環または4員〜7員の複素環であり、
R18が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R19が、水素もしくは天然のα−アミノ酸の、またはその相同体もしくは異性体の側鎖基であり、
R20が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R19およびR20が、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R22が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R21およびR22が、それらが結合される原子と一緒になって、3員〜7員の炭素環であり、
R27が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
L2が、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
pは2〜6の数であり、
##3が、B基との連結部位を示しており、
##4が、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルが、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互い独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されていてもよく、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子が、架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Dが、以下の式の基であり
#3が、窒素原子との連結部位を示しており、
R1が、水素もしくはメチルであり、
R2が、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5が、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分を有する環Aが、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
#6が、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6が、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3が、水素もしくはメチルであり、
R4が、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#7が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8が、T1基との連結部位を示しており、
T1が、以下の式の基であり−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11、
式中、
R7が、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8が、水素もしくはメチルであり、
R9が、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9が、それらが結合される窒素原子と一緒になって4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、これが、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されていてもよく、
R5が、水素、メチルもしくは以下の式の基であり
R12が、フェニルであって、これが、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されていてもよく、
R13が、フェニルであって、これが、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26が、水素もしくはヒドロキシであり、
T2が、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35が、メチルもしくはヒドロキシである、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのが、式(XXXI)の化合物であって、式中、
L1は結合、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
式中
mが、2もしくは3の数であり、
##1が、G基との連結部位を示しており、
##2が、B基との連結部位を示しており、
ここで(C2−C6)−アルカンジイルが、1または2個のメチル置換基によって置換されていてもよく、
Bが、結合もしくは以下の式の基であり
式中、
*が、L1との連結部位を示しており、
**が、L2との連結部位を示しており、
R18が、水素であり、
R19が、メチル、プロパン−2−イル、2−メチルプロパン−1−イルもしくは1−メチルプロパン−1−イルであり、
R20が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R19およびR20が、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21が、水素もしくはメチルであり、
R22が、水素もしくはメチルであるか、
または
R21およびR22が、それらが結合される原子と一緒になって、シクロプロピル環を形成し、
R27が、水素もしくはメチルであり、
L2が、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり、
式中
pが、2もしくは3の数であり、
##3が、B基との連結部位を示しており、
##4が、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルが、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子が、架橋されて、フェニル環を形成してもよく、
Dが、以下の式の基であり
式中、
#3が、窒素原子との連結部位を示しており、
R1が、水素であり、
R2が、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
またはR1およびR2が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中、
#4が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5が、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aが、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
式中、
#6が、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6が、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3が、水素であり、
R4が、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中、
#7が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8が、T1基との連結部位を示しており、
T1が、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中、
R7が、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8が、水素もしくはメチルであり、
R9が、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9が、それらが結合される窒素原子と一緒になって4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、これはメトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5が、水素、メチルもしくは以下の式の基であり
式中、
#9が、−CHCH2フェニルとの連結部位を示しており、
R12が、フェニルであって、これが、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13が、フェニルであって、これが、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R35が、メチルもしくはヒドロキシである、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
L1は結合、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
mが、2もしくは3の数であり、
##1が、G基との連結部位を示しており、
##2が、B基との連結部位を示しており、
ここで(C2−C6)−アルカンジイルが、1または2個のメチル置換基によって置換されていてもよく、
Bが、結合もしくは以下の式の基であり
*が、L1との連結部位を示しており、
**が、L2との連結部位を示しており、
R18が、水素であり、
R19が、メチル、プロパン−2−イル、2−メチルプロパン−1−イルもしくは1−メチルプロパン−1−イルであり、
R20が、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R19およびR20が、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21が、水素もしくはメチルであり、
R22が、水素もしくはメチルであるか、
または
R21およびR22が、それらが結合される原子と一緒になって、シクロプロピル環を形成し、
R27が、水素もしくはメチルであり、
L2が、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり、
pが、2もしくは3の数であり、
##3が、B基との連結部位を示しており、
##4が、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルが、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
かつ
ここで、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子が、架橋されて、フェニル環を形成してもよく、
Dが、以下の式の基であり
#3が、窒素原子との連結部位を示しており、
R1が、水素であり、
R2が、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
またはR1およびR2が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5が、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aが、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6が、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6が、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3が、水素であり、
R4が、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#7が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8が、T1基との連結部位を示しており、
T1が、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中、
R7が、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8が、水素もしくはメチルであり、
R9が、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9が、それらが結合される窒素原子と一緒になって4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、これはメトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5が、水素、メチルもしくは以下の式の基であり
#9が、−CHCH2フェニルとの連結部位を示しており、
R12が、フェニルであって、これが、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13が、フェニルであって、これが、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R35が、メチルもしくはヒドロキシである、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で特に好ましいのは、式(XXXI)の化合物であって、式中、
L1が、結合であり、
Bが、結合であり、
L2が、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
式中、
pが、2もしくは3の数であり、
##3が、B基との連結部位を示しており、
##4が、窒素原子との連結部位を示しており、
Dが、以下の式の基であり
ここで、
#3が、窒素原子との連結部位を示しており、
R1が、水素であり、
R2が、ベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中、
#4が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5が、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aが、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
式中、
#6が、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6が、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3が、水素であり、
R4が、ベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
式中、
#7が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8が、T1基との連結部位を示しており、
T1が、式−C(=O)−OR7または−C(=O)−NR8R9の基であり、
式中、
R7が、水素であり、
R8が、水素であり、
R9が、水素であり、
R35が、メチルである、化合物
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
L1が、結合であり、
Bが、結合であり、
L2が、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
pが、2もしくは3の数であり、
##3が、B基との連結部位を示しており、
##4が、窒素原子との連結部位を示しており、
Dが、以下の式の基であり
#3が、窒素原子との連結部位を示しており、
R1が、水素であり、
R2が、ベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5が、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aが、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6が、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6が、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3が、水素であり、
R4が、ベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#7が、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8が、T1基との連結部位を示しており、
T1が、式−C(=O)−OR7または−C(=O)−NR8R9の基であり、
式中、
R7が、水素であり、
R8が、水素であり、
R9が、水素であり、
R35が、メチルである、化合物
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、式(Ia)の化合物であって、
AKは、AK1であり
式中、
AK1は、FGFR2に結合し、かつG基に対して結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合される、抗体または抗原−結合抗体フラグメントであり、
Gは、式
式中、
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しており、
かつ
n、L1、B、L2、DおよびR35は、上記で示される定義を有する、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
AKは、AK1であり
式中、
AK1は、FGFR2に結合し、かつG基に対して結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合される、抗体または抗原−結合抗体フラグメントであり、
Gは、式
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しており、
かつ
n、L1、B、L2、DおよびR35は、上記で示される定義を有する、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、式(Ia)の化合物であって、ここで
AKは、AK2であり
ここで
AK2は、抗体または抗原−結合抗体フラグメントであり、これは、FGFR2に結合し、かつG基に対して結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gは、カルボニルであり、
かつ
n、L1、B、L2、DおよびR35は、上記の定義を有している、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
AKは、AK2であり
ここで
AK2は、抗体または抗原−結合抗体フラグメントであり、これは、FGFR2に結合し、かつG基に対して結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gは、カルボニルであり、
かつ
n、L1、B、L2、DおよびR35は、上記の定義を有している、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、式(Ia)の化合物であって、ここで
AKは、AK1であり、
ここで
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であって、G基に対してこの結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合され、
Gは、以下の式の基であり
式中、
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しており、
かつ
n、L1、B、L2、DおよびR35が上記のような定義を有する、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
AKは、AK1であり、
ここで
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であって、G基に対してこの結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合され、
Gは、以下の式の基であり
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しており、
かつ
n、L1、B、L2、DおよびR35が上記のような定義を有する、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、式(Ia)の化合物であって、ここで
AKは、AK2であり、
ここで
AK2は、結合剤であって、これはFGFR2に結合し、かつG基に対してこの結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gは、カルボニルであり、
かつ
n、L1、B、L2、DおよびR35が、上記のような定義を有する、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
AKは、AK2であり、
ここで
AK2は、結合剤であって、これはFGFR2に結合し、かつG基に対してこの結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gは、カルボニルであり、
かつ
n、L1、B、L2、DおよびR35が、上記のような定義を有する、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、一般式(Ia)の化合物であって、ここで
AKがAK2であり、
ここで
AK2は、結合剤であって、FGFR2に結合し、かつG基に対してこの結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gはカルボニルであり、
L1は結合であり、
Bは結合であり、
L2は、直鎖(C3−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
式中、
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
n、DおよびR35は、上記の定義を有している、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物。
AKがAK2であり、
ここで
AK2は、結合剤であって、FGFR2に結合し、かつG基に対してこの結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gはカルボニルであり、
L1は結合であり、
Bは結合であり、
L2は、直鎖(C3−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
n、DおよびR35は、上記の定義を有している、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物。
また、本発明の状況で好ましいのは、一般式(Ia)の化合物であって、ここで、
AKが、AK1であり
ここで
AK1は、結合剤であって、FGFR2に結合し、かつG基に対してこの結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合され、
Gが、以下の式の基であり
式中、
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しており、
L1は、結合、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
式中、
mは、2もしくは3の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
式中(C3−C5)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基で置換されてもよい、
Bは結合もしくは以下の式の基であり
式中
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合またはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は、結合もしくは以下の式の基であり、
式中
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、メチルであり、
R28は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであり、
または
R16およびR17それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
L2は、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルであるか、もしくは以下の式の基であり
式中、
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
かつ
n、DおよびR35は、上記の定義を有する化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
AKが、AK1であり
ここで
AK1は、結合剤であって、FGFR2に結合し、かつG基に対してこの結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合され、
Gが、以下の式の基であり
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しており、
L1は、結合、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
mは、2もしくは3の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
式中(C3−C5)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基で置換されてもよい、
Bは結合もしくは以下の式の基であり
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合またはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は、結合もしくは以下の式の基であり、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、メチルであり、
R28は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであり、
または
R16およびR17それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
L2は、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルであるか、もしくは以下の式の基であり
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
かつ
n、DおよびR35は、上記の定義を有する化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、式(Ia)、(XXXa)および(XXXI)の化合物であって、式中
L1は、結合であり、
Bは、結合であり、
L2は、直鎖(C3−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
式中、
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
かつ
n、AK、Cys、G、DおよびR35は、上記の定義を有している、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
L1は、結合であり、
Bは、結合であり、
L2は、直鎖(C3−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
かつ
n、AK、Cys、G、DおよびR35は、上記の定義を有している、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、式(Ia)の化合物であって、ここで
L1は、直鎖(C1−C10)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
式中、
mは、2〜6の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
式中、(C1−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシルおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基によって選択されていてもよく、
Bは結合もしくは以下の式の基であり
式中、
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L4は、以下の式の基であり
式中、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、水素もしくはメチルであり、
R28は、水素、(C1−C4)−アルキルカルボニル,tert−ブチルオキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルであり、
Q1は、4員〜7員の複素環であり、
R16は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R17は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R23は、(C1−C4)−アルキルであり、
R24は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R36は、水素、(C1−C4)−アルキルカルボニル、tert−ブチルオキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルであり、
R37は、水素もしくはメチルであるか、
または
R36およびR37は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、もしくは以下の式の基であり、
式中
pは2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシルおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基によって選択されていてもよく、
かつ
n、AK、G、DおよびR35は、上記の定義を有する、化合物
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
L1は、直鎖(C1−C10)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
mは、2〜6の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
式中、(C1−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシルおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基によって選択されていてもよく、
Bは結合もしくは以下の式の基であり
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L4は、以下の式の基であり
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、水素もしくはメチルであり、
R28は、水素、(C1−C4)−アルキルカルボニル,tert−ブチルオキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルであり、
Q1は、4員〜7員の複素環であり、
R16は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R17は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R23は、(C1−C4)−アルキルであり、
R24は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R36は、水素、(C1−C4)−アルキルカルボニル、tert−ブチルオキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルであり、
R37は、水素もしくはメチルであるか、
または
R36およびR37は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、もしくは以下の式の基であり、
pは2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシルおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基によって選択されていてもよく、
かつ
n、AK、G、DおよびR35は、上記の定義を有する、化合物
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、式(Ia)の化合物であって、ここで
L1は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
式中、
mは、2もしくは3の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり、
式中、
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合またはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は、以下の式の基であり
式中、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、水素もしくはメチルであり、
R28は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
R36は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R37は、水素もしくはメチルであるか、
または
R36およびR37は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し、
L2は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
式中
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
かつ
n、AK、G、DおよびR35は上記の定義を有している、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
L1は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
mは、2もしくは3の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり、
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合またはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は、以下の式の基であり
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、水素もしくはメチルであり、
R28は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
R36は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R37は、水素もしくはメチルであるか、
または
R36およびR37は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し、
L2は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
かつ
n、AK、G、DおよびR35は上記の定義を有している、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、式(Ia)および(XXXa)の化合物であって、式中
Gは、以下の式の基であり
式中、
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しており、
L1は、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
式中、
mは、2もしくは3の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
ここで(C3−C5)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されていてもよく、
Bは結合もしくは以下の式の基であり
式中、
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は結合であり、
L2は、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
式中
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
および
n、AK1、Cys、D、R16およびR17は上記の定義を有している化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
Gは、以下の式の基であり
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しており、
L1は、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
mは、2もしくは3の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
ここで(C3−C5)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されていてもよく、
Bは結合もしくは以下の式の基であり
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は結合であり、
L2は、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
および
n、AK1、Cys、D、R16およびR17は上記の定義を有している化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、式(Ia)、(XXXa)および(XXXI)の化合物であって、ここで、
Dは、以下の式の基であり
式中
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
またはR1およびR2それらが結合される炭素原子と一緒になって以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
ここで、
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
式中
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素もしくはメチルであり、
R4は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニル-エチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
式中
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、以下の式の基であり−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、これはフェニル基において、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されていてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり
式中
#9は、-CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されていてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26は、水素であり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
かつ
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、DおよびR35は、上記で示される定義を有する、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
またはR1およびR2それらが結合される炭素原子と一緒になって以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素もしくはメチルであり、
R4は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニル-エチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合される炭素原子と一緒になって以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、以下の式の基であり−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10はベンゾイルであり、
R11はベンジルであり、これはフェニル基において、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されていてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり
#9は、-CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されていてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26は、水素であり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
かつ
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、DおよびR35は、上記で示される定義を有する、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、式(Ia)、(XXXa)および(XXXI)の化合物であって、式中
Dは、以下の式の基であり
式中
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2それらが結合される炭素原子と一緒になって以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
式中
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
かつ
n、AK、Cys、G、L1、B、L2およびR35は上記で示される定義を有している、化合物
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2それらが結合される炭素原子と一緒になって以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
かつ
n、AK、Cys、G、L1、B、L2およびR35は上記で示される定義を有している、化合物
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、式(Ia)、(XXXa)および(XXXI)の化合物であって、式中
Dは、以下の式の基であり
式中
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2はベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2それらが結合される炭素原子と一緒になって以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
式中
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
式中
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
かつ
n、AK、Cys、G、L1、B、L2およびR35は、上記の定義を有している、化合物
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物。
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2はベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2それらが結合される炭素原子と一緒になって以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
かつ
n、AK、Cys、G、L1、B、L2およびR35は、上記の定義を有している、化合物
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物。
また、本発明の状況で好ましいのは、式(Ia)、(XXXa)および(XXXI)の化合物であって、式中
R35は、ヒドロキシルであり、
かつ
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、DおよびR35は、上記の定義を有している、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
R35は、ヒドロキシルであり、
かつ
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、DおよびR35は、上記の定義を有している、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
また、本発明の状況で好ましいのは、式(Ia)、(XXXa)および(XXXI)の化合物であって、式中
R35は、メチルであり、
かつ
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、DおよびR3は、上記の定義を有する、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
R35は、メチルであり、
かつ
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、DおよびR3は、上記の定義を有する、化合物、
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
本発明の好ましい主題は、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲートであって、式中Dが、以下の構造を有してもよく、かつ*が、窒素原子との連結部位を表す、結合剤−薬物コンジュゲート:
ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
本発明の好ましい主題は、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲートであって、ここでDは、本発明の中間体のうちの1つによって開示される構造;およびリンカー単位§−G−L1−B−L2−§§、また本発明によって定義される全ての他の変異体を有する、結合剤−薬物コンジュゲート;ならびにそれらの塩、溶媒和物およびこの塩の溶媒和物である。AKは好ましくは、抗FGFR2抗体またはその抗原−結合フラグメントである。
本発明の好ましい主題は、リンカー−薬物単位が本発明の中間体または例の1つによって開示される構造を有している、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート;ならびにそれらの塩、溶媒和物およびこの塩の溶媒和物である。AKは好ましくは、抗FGFR2抗体またはその抗原−結合フラグメントである。
本発明の好ましい主題は、リンカー−薬物単位が本発明の実施例の1つによって開示される構造を有している、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート;ならびにそれらの塩、溶媒和物およびこの塩の溶媒和物である。AKは好ましくは、抗FGFR2抗体またはその抗原−結合フラグメントである。
本発明の特に好ましい主題は、一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲートであって
式中
nは、1〜50の数であり、
AKは、FGFR2に結合する結合剤であり、
基§−G−L1−B−§§はリンカーであり、
式中、
§は、AK基との連結部位を示しておりかつ
§§は、窒素原子との連結部位を示しており、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、もしくは以下の式の基であり
式中、
pは2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで、(C2−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシルおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個のメチル置換基によって置換されていてもよく、
かつ
ここで、式中、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、架橋されて(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Dは、以下の式の基であって、
ここで*が、窒素原子に対する連結部位である、式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート、ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
nは、1〜50の数であり、
AKは、FGFR2に結合する結合剤であり、
基§−G−L1−B−§§はリンカーであり、
式中、
§は、AK基との連結部位を示しておりかつ
§§は、窒素原子との連結部位を示しており、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、もしくは以下の式の基であり
pは2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで、(C2−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシルおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個のメチル置換基によって置換されていてもよく、
かつ
ここで、式中、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、架橋されて(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Dは、以下の式の基であって、
本発明の特に好ましい主題は、以下の式の化合物であって
式中、AKは、FGFR2に結合する結合剤であって、かつnは、1〜10の数である化合物、ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。結合剤が、リンカー−トキソフォア単位に対してリジン残基のNH側鎖基を介して結合される場合、これは好ましい。
本発明の特に好ましい主題は、以下の式の化合物であって
式中、AKは、FGFR2に結合する抗体または抗体フラグメントであり、かつnは、1〜10の数である化合物、ならびに、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。これは、抗体または抗体フラグメントが、リンカー−トキソフォア単位に対して抗体または抗体フラグメントのリジン残基のNH側鎖基を介して結合される場合、好ましい。
本発明の特に好ましい主題は、以下の式の化合物であって
式中、AK2Aは、M048−D01−hIgG1であり、かつnは、1〜10の数である化合物、またそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
本発明のさらに特に好ましい主題は、以下の式の化合物であって
式中、AK2Bは、M048−D01−hIgG1−bであり、かつnは、1〜10の数である、化合物、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、およびその塩の溶媒和物である。
それぞれの組み合わせで個々に示されるラジカルの定義、およびラジカルの好ましい組み合わせはまた、示されるラジカルのそれぞれの組み合わせと独立して、他の組み合わせのラジカル定義によって適宜配置される。
特に好ましいのは、上述の好ましい範囲のうちの2つ以上の組み合わせである。
本発明によってさらに提供されるのは、式(Ia)の本発明の化合物を製造するための方法であって、結合剤が含有されるPBS緩衝液の溶液
[A]が、適切な還元剤、例えば、ジチオスレイトールもしくはtris(2−カルボキシエチル)ホスフィンハイドロクロライドなどと混合され、引き続き、式(IIa)の化合物と反応され
(IIa)、
式中、D、L1、B、L2およびR35は各々が、上記で示される定義を有して、
式(I−A)の化合物が得られ
(Ia−A)、
式中n、AK1、D、L1、B、L2およびR35は、各々が上記で示される定義を有しているか、
または
[B]が、式(IIIa)の化合物と反応され
式中D、L1、B、L2およびR35は、各々が上記で示される定義を有しており、
式(Ia−B)の化合物が得られ、
式中、n、AK2、D、L1、B、L2およびR35は各々が上記で示される定義を有しているという点で特徴付けられる、プロセスである。
[A]が、適切な還元剤、例えば、ジチオスレイトールもしくはtris(2−カルボキシエチル)ホスフィンハイドロクロライドなどと混合され、引き続き、式(IIa)の化合物と反応され
式中、D、L1、B、L2およびR35は各々が、上記で示される定義を有して、
式(I−A)の化合物が得られ
式中n、AK1、D、L1、B、L2およびR35は、各々が上記で示される定義を有しているか、
または
[B]が、式(IIIa)の化合物と反応され
式(Ia−B)の化合物が得られ、
システインカップリング:
抗体の部分的還元、およびまた式(IIa)の化合物との(部分的に)還元された抗体の引き続くコンジュゲーションは、当業者に公知の方法によって生じる。例えば、Ducryら、Bioconj.Chem.2010,21,5およびその引用文献,Klussmanら、Bioconj.Chem.2004,15(4)、765−773を参照のこと。抗体の軽度の還元は、適切な緩衝液、好ましくはリン酸緩衝液中に存在する抗体に対するTCEPの2−6等価物の添加の添加によって、および15〜40℃の温度、好ましくはRTでの30〜180分間の撹拌によって達成される。この後に、コンジュゲーションが続き、DMSO、アセトニトリルまたはDMF中に含まれる式(IIa)の化合物の溶液の、PBS緩衝液中に含まれる(部分的に)還元された抗体の溶液への添加、および引き続いて、0℃〜+40℃、さらに具体的には+10℃〜+30℃の温度での、30分〜6時間、さらに具体的には1〜2時間の反応が続く。
抗体の部分的還元、およびまた式(IIa)の化合物との(部分的に)還元された抗体の引き続くコンジュゲーションは、当業者に公知の方法によって生じる。例えば、Ducryら、Bioconj.Chem.2010,21,5およびその引用文献,Klussmanら、Bioconj.Chem.2004,15(4)、765−773を参照のこと。抗体の軽度の還元は、適切な緩衝液、好ましくはリン酸緩衝液中に存在する抗体に対するTCEPの2−6等価物の添加の添加によって、および15〜40℃の温度、好ましくはRTでの30〜180分間の撹拌によって達成される。この後に、コンジュゲーションが続き、DMSO、アセトニトリルまたはDMF中に含まれる式(IIa)の化合物の溶液の、PBS緩衝液中に含まれる(部分的に)還元された抗体の溶液への添加、および引き続いて、0℃〜+40℃、さらに具体的には+10℃〜+30℃の温度での、30分〜6時間、さらに具体的には1〜2時間の反応が続く。
リジンカップリング:
まず第一に、式(IIIa)の化合物または匹敵する活性化されたカルボキシル成分は、ペプチド化学の従来の方法によって調製される。次いで、例えば、DMSOまたはDMFのような不活性溶媒中に採取して、中性のpHでリン酸緩衝液中に好ましくは存在する抗体に添加する。この溶液を、15〜40℃の温度で、好ましくはRTで1〜16時間撹拌する。
まず第一に、式(IIIa)の化合物または匹敵する活性化されたカルボキシル成分は、ペプチド化学の従来の方法によって調製される。次いで、例えば、DMSOまたはDMFのような不活性溶媒中に採取して、中性のpHでリン酸緩衝液中に好ましくは存在する抗体に添加する。この溶液を、15〜40℃の温度で、好ましくはRTで1〜16時間撹拌する。
上記の調製プロセスは、下のスキームを用いて例えば、解明される(スキーム1および2):
72
式中L1およびBが結合である、式(II)の化合物は、式(IV)の化合物
であって、
式中Dが、上記で示される定義を有している化合物を、式(V)の化合物であって
式中
L2Aは、L2の上記の定義を有するが、アルキル鎖長中で1炭素原子ずつ短くなり、
PG1は、例えば、(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)カルボニル、tert−ブトキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルのようなアミノ保護基である化合物を用いる不活性溶媒中での還元性アミノ化に供して、式(VI)の化合物であって
式中D、L2およびPG1は、上記で示される定義を有している化合物を得ることと、
この化合物から保護基PG1を当業者に公知の方法によって取り除き、適切な塩基の存在下で不活性溶媒中の脱保護された化合物を、メチル2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−カルボキシレートと反応させて、式(II−A)の化合物であって
式中DおよびL2は、各々が上記で示される定義を有している、化合物を得ることと、によって調製され得る。
式中Dが、上記で示される定義を有している化合物を、式(V)の化合物であって
L2Aは、L2の上記の定義を有するが、アルキル鎖長中で1炭素原子ずつ短くなり、
PG1は、例えば、(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)カルボニル、tert−ブトキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルのようなアミノ保護基である化合物を用いる不活性溶媒中での還元性アミノ化に供して、式(VI)の化合物であって
この化合物から保護基PG1を当業者に公知の方法によって取り除き、適切な塩基の存在下で不活性溶媒中の脱保護された化合物を、メチル2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−カルボキシレートと反応させて、式(II−A)の化合物であって
式(II)の化合物であって、式中が、以下の式(B1)の基であり
式中*、**、R14およびR15が各々、上記で示される条件を有する化合物は、
式(VI)の化合物から保護基PG1を、当業者に公知の方法によって取り除くこと、および適切な塩基の存在下で不活性溶媒中の脱保護された化合物を、式(VII)の化合物であって
式中L1は、上記の定義を有している化合物と反応させて、
式(II−B)の化合物であって
式中D、L1およびL2は各々が上記で示される定義を有している、化合物を得ることと、によって調製され得る。
式(VI)の化合物から保護基PG1を、当業者に公知の方法によって取り除くこと、および適切な塩基の存在下で不活性溶媒中の脱保護された化合物を、式(VII)の化合物であって
式(II−B)の化合物であって
式(II)の化合物であって、式中Bが以下の式(B2)の基であり
式中*、**、L3、R16およびR17が各々、上記の条件を有している化合物は、式(IV)の化合物を、不活性溶媒中で式(VIII)の化合物であって
式中
L2AがL2の上記の定義を有するが、アルキル鎖中で1つの炭素原子ずつ短縮される化合物を用いる還元性アミノ化に供して、
式(IX)の化合物であって、
式中DおよびL2が上記で示される定義を有している、化合物を得ることと、
この化合物を不活性溶媒中で適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下で式(X)の化合物であって
式中L1およびL3は、各々が上記で示される定義を有している化合物と反応させて、
これによって式(II−C)の化合物であって、
式中D、L1、L2およびL3は各々が上記で示される定義を有している、化合物を得ることとによって調製され得る。
L2AがL2の上記の定義を有するが、アルキル鎖中で1つの炭素原子ずつ短縮される化合物を用いる還元性アミノ化に供して、
式(IX)の化合物であって、
この化合物を不活性溶媒中で適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下で式(X)の化合物であって
これによって式(II−C)の化合物であって、
式(II)の化合物であって、式中Bが以下の式(B3)の基であり、
式中*、**、L3、R16およびR17は各々が、上記の条件を有しており、かつ
L4Aが、以下の式の基であり
式中、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、水素もしくはメチルである、化合物は、
式(IX)の化合物を適切な塩基および適切なカップリング試薬の存在下で、式(XI−A)または(XI−B)の化合物であって
式中R25およびPG1は各々が、上記の定義を有しており、かつ
PG2が適切なカルボキシル−保護基、さらに具体的にはベンジルである化合物と反応させて、
化合物(XII−A)または(XII−B)であって
式中D、PG1、PG2およびL2が上記で示される定義を有している化合物を得ることと、
この保護基PG2を、当業者に公知の方法によって、この化合物から引き続き除去することと、この脱保護された化合物を、不活性溶媒中で、適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下で、式(X)の化合物と反応させることと、最終的に、この保護基PG1を、この化合物から、当業者に公知の方法によって取り除いて、式(II−D−A)または(II−D−B)の化合物であって、
式中D、L1、L2およびL3が上記の定義を有する化合物を得ることと、によって調製してもよい。
L4Aが、以下の式の基であり
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、水素もしくはメチルである、化合物は、
式(IX)の化合物を適切な塩基および適切なカップリング試薬の存在下で、式(XI−A)または(XI−B)の化合物であって
PG2が適切なカルボキシル−保護基、さらに具体的にはベンジルである化合物と反応させて、
化合物(XII−A)または(XII−B)であって
この保護基PG2を、当業者に公知の方法によって、この化合物から引き続き除去することと、この脱保護された化合物を、不活性溶媒中で、適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下で、式(X)の化合物と反応させることと、最終的に、この保護基PG1を、この化合物から、当業者に公知の方法によって取り除いて、式(II−D−A)または(II−D−B)の化合物であって、
式(II)の化合物であって、式中Bは式(B4)の基であり、
式中*、**は各々が上記の条件を有しており、かつ
Q1Aは、N結合の4員〜7員の複素環である化合物は、式(IX)の化合物を
不活性な溶媒中で、適切な塩基および適切なカップリング試薬の存在下で、式(XXI)の化合物であって
式中PG1およびQ1Aは、各々が上記で示される定義を有している化合物と反応させて、式(XXII)の化合物であって、
式中、PG1、Q1A、DおよびL2が上記で示される定義を有している化合物を得ることと、
保護基PG1をこの化合物から、当業者に公知の方法によって取り除くことと、引き続きこの脱保護された化合物を、不活性な溶媒中で、適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下で、式(XXIII)の化合物であって、
式中、L1が上記で示される定義を有している化合物と反応させて、
式(II−D)の化合物であって、
式中、Q1A、D、L1およびL2が上記で示される定義を有する化合物を得ることと、によって調製され得る。
Q1Aは、N結合の4員〜7員の複素環である化合物は、式(IX)の化合物を
不活性な溶媒中で、適切な塩基および適切なカップリング試薬の存在下で、式(XXI)の化合物であって
保護基PG1をこの化合物から、当業者に公知の方法によって取り除くことと、引き続きこの脱保護された化合物を、不活性な溶媒中で、適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下で、式(XXIII)の化合物であって、
式(II−D)の化合物であって、
式(III)の化合物(式中L1およびBが結合される)は、式(IX)の化合物を、不活性な溶媒中で、適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下で、N−ヒドロキシスクシンイミドと反応させて、式(III−A)の化合物であって
式中、DおよびL2は各々が上記で示される定義を有している、化合物を得ることによって調製できる。
式(III)の化合物であって、式中L1が結合であり、かつBが以下の式の基であり(B5A)
式中*、**およびPが各々上記で示される定義を有し、かつ
Q2Aが3員〜7員の炭素環である化合物は、
式(IX)の化合物を、不活性な溶媒中で、適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下で、式(XIII)の化合物であって
式中、P、Q2AおよびPG2は、各々が上記で示される定義を有している化合物と反応させて、
式(XIV)の化合物であって
式中、D、P、Q2A、L2およびPG2は、各々が上記で示される定義を有している化合物を得ることと、
保護基PG2をこの化合物から当業者に公知の方法によって取り除くことと、引き続きこの脱保護された化合物を不活性な溶媒中で、適切な塩基の存在下で、N−ヒドロキシスクシンイミドと反応させて、式(III−B)の化合物であって
式中D、P、Q2AおよびL2は各々が上記で示される定義を有している、化合物を得ることとによって調製され得る。
Q2Aが3員〜7員の炭素環である化合物は、
式(IX)の化合物を、不活性な溶媒中で、適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下で、式(XIII)の化合物であって
式(XIV)の化合物であって
保護基PG2をこの化合物から当業者に公知の方法によって取り除くことと、引き続きこの脱保護された化合物を不活性な溶媒中で、適切な塩基の存在下で、N−ヒドロキシスクシンイミドと反応させて、式(III−B)の化合物であって
式(III)の化合物であって、式中L1が結合であり、かつBは式(B6)の基であり
式中、*、**、R18、R19およびR20は、各々が上記で示される定義を有している化合物は、
式(IX)の化合物を、不活性な溶媒中で適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下で式(XV)の化合物であって
式中、R18、R19、R20およびPG2は、各々が上記で示される定義を有している化合物と反応させて、
式(XVI)の化合物であって
式中、D、R18、R19、R20、L2およびPG2は、各々が上記で示される定義を有している化合物を得ることと、
保護基PG2を、この化合物から、当業者に公知の方法によって取り除くことと、引き続いて、この脱保護された化合物を、不活性な溶媒中で適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下でN−ヒドロキシスクシンイミドと反応させて、式(III−C)の化合物であって
式中、D、R18、R19、R20およびL2は各々が上記で示される定義を有している、化合物を得ることと、によって調製され得る。
式(IX)の化合物を、不活性な溶媒中で適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下で式(XV)の化合物であって
式(XVI)の化合物であって
保護基PG2を、この化合物から、当業者に公知の方法によって取り除くことと、引き続いて、この脱保護された化合物を、不活性な溶媒中で適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下でN−ヒドロキシスクシンイミドと反応させて、式(III−C)の化合物であって
式(III)の化合物(式中L1は、結合およびBは式(B7)の基であって
式中*、**、R21およびR22は、各々が上記で示される定義を有している化合物は、
保護基PG1を、式(VI)の化合物から、当業者に公知の方法によって取り除くことと、得られた脱保護された化合物を、不活性な溶媒中で適切な塩基の存在下で、式(XVII)の化合物であって
式中、R21およびR22は、各々が上記で示される定義を有している化合物と反応させて、
式(III−D)の化合物であって
式中、D、R21、R22およびL2は各々が上記で示される定義を有している、化合物を得ることと、
によって調製され得る。
保護基PG1を、式(VI)の化合物から、当業者に公知の方法によって取り除くことと、得られた脱保護された化合物を、不活性な溶媒中で適切な塩基の存在下で、式(XVII)の化合物であって
式(III−D)の化合物であって
によって調製され得る。
式(III)の化合物であって、式中Bは式(B8)の基であって
式中、*、**、R23およびR24は、各々が上記で示される定義を有している化合物は、式(IX)の化合物を、不活性な溶媒中で、適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下で、式(XVIII)の化合物であって
式中、R23、R24およびPG1は、各々が上記で示される定義を有している化合物と反応させて、式(XIX)の化合物であって、
式中D、R23、R24、L2およびPG1は、各々が上記で示される定義を有している化合物を得ることと、この保護基PG1を、この化合物から、当業者に公知の方法によって取り除くことと、引き続いて、この脱保護された化合物を、不活性な溶媒中で適切なカップリング試薬および適切な塩基の存在下で、式(XX)の化合物であって
式中
L1Aは、直鎖(C1−C10)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
式中、
mは2〜6の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
ここで、(C1−C10)−アルカンジイルは1〜4個のメチル置換基によって置換されていてもよく、
式中、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子が、架橋されて(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成する、化合物と反応させて、
式(III−E)の化合物であって
式中、D、R23、R24、L1AおよびL2は各々が上記で示される定義を有している、化合物を得ることと、によって調製される。
L1Aは、直鎖(C1−C10)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
mは2〜6の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
ここで、(C1−C10)−アルカンジイルは1〜4個のメチル置換基によって置換されていてもよく、
式中、それらの間に任意の炭素原子が位置する、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子が、架橋されて(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成する、化合物と反応させて、
式(III−E)の化合物であって
式(III)の化合物、式中Bは式の基であり(B5B)
式中*および**は各々が、上記で示される定義を有しており、かつ
Q2Bは、N結合の4員〜7員の複素環である化合物は、
式(IX)の化合物を、不活性な溶媒中で、適切な塩基および適切なカップリング試薬の存在下で、式(XXIV)の化合物であって
式中、PG1およびQ2Bは、各々が上記で示される定義を有している化合物と反応させて、
式(XXV)の化合物であって
式中、PG1、Q2B、DおよびL2は上記で示される定義を有している化合物を得ることと、
この保護基PG1を、この化合物から、当業者に公知の方法によって取り除くことと、
引き続き、この脱保護された化合物を、不活性な溶媒中で、適切な塩基の存在下で、式(XX)の化合物を用いて式(III−F)の化合物であって
式中、Q2B、D、L1AおよびL2が上記で示される定義を有する化合物に変換する工程と、によって調製され得る。
Q2Bは、N結合の4員〜7員の複素環である化合物は、
式(IX)の化合物を、不活性な溶媒中で、適切な塩基および適切なカップリング試薬の存在下で、式(XXIV)の化合物であって
式(XXV)の化合物であって
この保護基PG1を、この化合物から、当業者に公知の方法によって取り除くことと、
引き続き、この脱保護された化合物を、不活性な溶媒中で、適切な塩基の存在下で、式(XX)の化合物を用いて式(III−F)の化合物であって
反応(IV)+(V)→(VI)および(IV)+(VIII)→(IX)は、還元的アミノ化には慣例であって、反応条件下(必要に応じて、酸のおよび/または水除去剤の触媒としての存在下)では不活性である、溶媒の中で生じる。このような溶媒としては、例えば、アルコール、例えば、メタノール、エタノール、n−プロパノール、イソプロパノール,n−ブタノールまたはtert−ブタノール、エーテル、例えば、テトラヒドロフラン、1,4−ジオキサン、1,2−ジメトキシエタンまたはbis(2−メトキシエチル)エーテル,または他の溶媒、例えば、ジクロロメタン、1,2−ジクロロエタン、N,N−ジメチルホルムアミドまたは他に水が挙げられる。これらの溶媒の混合物を使用することも可能である。溶媒としては、1,4−ジオキサン/水混合物を使用することが好ましく、酢酸または希塩酸を触媒として添加する。
この反応に適切な還元剤は、具体的には、複合ホウ化水素、例えば、水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ほう素ナトリウム、テトラ−n−ブチルアンモニウムボロヒドリドまたはボラン−ピリジン複合体である。シアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはボラン−ピリジン複合体を用いることが好ましい。
反応(IV)+(V)→(VI)および(IV)+(VIII)→(IX)は、一般には、0℃〜+120℃、好ましくは+50℃〜+100℃の温度で生じる。反応は、大気圧で行われても、上昇した圧力で行われても、または低下した圧力で行われてもよい(例えば、0.5〜5bar);大気圧で作動することが通常である。
上記のカップリング反応(IX)+(X)→(II−C)、(XII−A)または(XII−B)+(X)→(II−D−A)または(II−D−B)、(IX)+(XIII)→(XIV)、(IX)+(XV)→(XVI)および(XXII)+(XXIII)→(II−D)(それぞれ、アミン成分およびカルボン酸成分からのアミド形成)は、ペプチド化学の標準的な方法で行う[例えば、M.Bodanszky,Principles of Peptide Synthesis,Springer−Verlag,Berlin,1993;M.BodanszkyおよびA.Bodanszky,The Practice of Peptide Synthesis,Springer−Verlag,Berlin,1984;H.−D.JakubkeおよびH.Jeschkeit,Aminosaeuren,Peptide,Proteine,Verlag Chemie,Weinheim,1982を参照のこと]。
これらのカップリング反応のための不活性な溶媒の例は、エーテル、例えばジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、tert−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,4−ジオキサン、1,2−ジメトキシエタンまたはbis(2−メトキシエチル)エーテル、炭化水素、例えばベンゼン、トルエン、キシレン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサンまたは石油画分、ハロゲン化炭化水素、例えばジクロロメタン、トリクロロメタン、テトラクロロメタン、1,2−ジクロロエタン、トリクロロエチレンまたはクロロベンゼン、または双極性−非プロトン性溶媒、例えばアセトン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、酢酸エチル、ピリジン、ジメチルスルホキシド(DMSO)、N,N−ジメチルホルムアミド(DMF)、N,N−ジメチルアセトアミド(DMA)、N,N’−ジメチルプロピレンウレア(DMPU)またはN−メチルピロリジノン(NMP)である。このような溶媒の混合物を用いることもまた可能である。好ましいのは、N,N−ジメチルホルムアミドを用いることである。
これらのカップリングのための適切な活性化剤/縮合剤の例としては、カルボジイミド、例えば、N,N’−ジエチル−、N,N’−ジプロピル−、N,N’−ジイソプロピル−、N,N’−ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)またはN−(3−ジメチルアミノイソプロピル)−N’−エチルカルボジイミドハイドロクロライド(EDC)、ホスゲン誘導体、例えば、N,N’−カルボニルジイミダゾール(CDI)またはイソブチルクロロギ酸エステル、1,2−オキサゾリウム化合物、例えば2−エチル−5−フェニル−1,2−オキサゾリウム3−硫酸塩または2−tert−ブチル−5−メチルイソオキサゾリウム過塩素酸塩、アシルアミノ化合物、例えば、2−エトキシ−1−エトキシカルボニル−1,2−ジヒドロキノリン、リン化合物、例えば、無水プロパンホスホン酸、シアノホスホン酸ジエチル、ビス(2−オキソ−3−オキサゾリジニル)ホスホリルクロライド、ベンゾトリアゾール−1−イルオキシ−トリス(ジメチルアミノ)−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートもしくはベンゾトリアゾール−1−イルオキシ−トリス(ピロリジノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(PyBOP)、またはウロニウム化合物、例えば、O−(ベンゾ−トリアゾール−1−イル)−N,N,N',N'−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート(TBTU)、O−(ベンゾ−トリアゾール−1−イル)−N,N,N',N'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HBTU)、2−(2−オキソ−1−(2H)−ピリジル)−1,1,3,3−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレート(TPTU)、O−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N',N'−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスフェート(HATU)もしくはO−(1H−6−クロロベンゾトリアゾール−1−イル)−1,1,3,3−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレート(TCTU)が挙げられ、適宜、1−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)もしくはN−ヒドロキシスクシンイミド(HOSu)のようなさらなる補助剤、およびまた塩基として炭酸アルカリ金属塩、例えば炭酸ナトリウムもしくは炭酸カリウム、または有機塩基、例えば、トリエチルアミン、N−メチル−モルホリン、N−メチルピペリジン、N,N−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンもしくは4−N,N−ジメチル−アミノピリジンと組み合わされてもよい。
本発明の状況では、このようなカップリング反応のための活性化剤/縮合剤は、N−(3−ジメチルアミノイソプロピル)−N’−エチルカルボジイミドハイドロクロライド(EDC)を、1−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)およびN,N−ジイソプロピルエチルアミン、またはO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HATU)を同様に、N,N−ジイソプロピルエチルアミンと組み合わせて用いることが好ましい。
カップリング反応(IX)+(X)→(II−C)、(XII−A)または(XII−B)+(X)→(II−D−A)または(II−D−B)、(IX)+(XIII)→(XIV)、(IX)+(XV)→(XVI)および(XXII)+(XXIII)→(II−D)を、一般には、−20℃〜+60℃、好ましくは0℃〜+40℃の温度範囲で行う。この反応は、大気圧下で、上昇した圧力で行われても、または低下した圧力で行われてもよい(例えば、0.5〜5バール);大気圧で作動させることが通常である。
エステル化(IX)+(XVIII)→(XII)および(IX)+(XI−A)または(XI−B)→(XII−A)または(XII−B)、(IX)+(XXIV)→(XXV)およびまた(IX)+(XXI)→(XXII)も、上記のアミドカップリング反応と同様に生じる。これらの反応は、好ましくは、ジクロロメタンの中で、N−(3−ジメチルアミノイソプロピル)−N’−エチルカルボジイミドハイドロクロライド(EDC)および4−ジメチルアミノピリジンを用いて、+50℃〜100℃の温度で、大気圧下で生じる。
化合物中に必要に応じて存在する官能基、例えば、特に、アミノ、ヒドロキシルおよびカルボキシル基は具体的には、有用または必須である場合、上記の工程段階の間に一時的に保護された形態で存在してもよい。これらの場合、このような保護基は、ペプチド化学から公知の慣習的方法によって導入および除去される[例えば、T.W.GreeneおよびP.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,Wiley,New York,1999;M.BodanszkyおよびA.Bodanszky,The Practice of Peptide Synthesis,Springer−Verlag,Berlin,1984]。2つ以上の保護された基が存在する場合、それらは、ワンポット反応で必要に応じて同時に遊離されてもよいし、または別の反応工程で再度遊離されてもよい。
アミノ−保護基PG1として、tert−ブトキシカルボニル(Boc)、ベンジルオキシカルボニル(Z)または(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)カルボニル(Fmoc)を用いることが好ましく;ヒドロキシルもしくはカルボキシル基については、tert−ブチルもしくはベンジルを保護基PG2として用いることが好ましい。tert−ブチルもしくはtert−ブトキシカルボニル基の排除は典型的には、強酸、例えば、塩化水素、臭化水素、またはトリフルオロ酢酸での処理によって、不活性溶媒、例えばジエチルエーテル、1,4−ジオキサン、ジクロロメタンまたは酢酸中で達成される;この反応は、必要に応じてまた、不活性溶媒の添加なしで行われてもよい。保護基としてベンジルまたはベンジルオキシカルボニルの場合、この基は好ましくは、例えば、パラジウム/活性炭のような、適切なパラジウム触媒の存在下で加水分解によって除去される。(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)カルボニル基は一般には、例えばジエチルアミンまたはピペリジンのような二級アミン塩基を用いて除去される。
反応(VI)→(II−A)は、反応条件下で不活性な溶媒、例えば、エーテル、例えば、テトラヒドロフラン、1,4−ジオキサン、1,2−ジメトキシエタンもしくはbis(2−メトキシエチル)エーテルなど、アルコール、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、n−ブタノールもしくはtert−ブタノールなど、または双極性−非プロトン性溶媒、例えばアセトン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、酢酸エチル、ピリジン、ジメチルスルホキシド(DMSO)、N,N−ジメチルホルムアミド(DMF)、N,N−ジメチルアセトアミド(DMA)、N,N’−ジメチルプロピレンウレア(DMPU)もしくはN−メチルピロリジノン(NMP)、または水の中で生じる。このような溶媒の混合物を用いることもまた可能である。好ましいのは、1,4−ジオキサンおよび水の混合物を用いることである。
反応(VI)→(II−A)に適切な塩基は、例えば、アルカリ金属炭酸塩、例えば炭酸カリウム、炭酸ナトリウムもしくは炭酸リチウム、アルカリ金属炭酸水素塩、例えば、炭酸水素ナトリウムもしくは炭酸水素カリウム、またはアルカリ金属アルコキシド、例えば、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドもしくはカリウムtert−ブトキシドである。炭酸水素ナトリウムを用いることが好ましい。
反応(VI)→(II−A)は、0℃〜+50℃、好ましくは+10℃〜+30℃の温度範囲で行われる。この反応は、大気圧下で行われても、上昇した圧力下で行われても、または低下した圧力下で行われてもよい(例えば、0.5〜5バール);大気圧下で作動することが通常である。
反応(VI)+(VII)→(II−B)は、反応条件下で不活性な溶媒、例えば、エーテル、例えば、テトラヒドロフラン、1,4−ジオキサン、1,2−ジメトキシエタンもしくはbis(2−メトキシエチル)エーテルなど、アルコール、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、n−ブタノールもしくはtert−ブタノールなど、または双極性−非プロトン性溶媒、例えばアセトン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、酢酸エチル、ピリジン、ジメチルスルホキシド(DMSO)、N,N−ジメチルホルムアミド(DMF)、N,N−ジメチルアセトアミド(DMA)、N,N’−ジメチルプロピレンウレア(DMPU)もしくはN−メチルピロリジノン(NMP)、または水の中で生じる。このような溶媒の混合物を用いることもまた可能である。好ましいのは、DMFを用いることである。
反応(VI)+(VII)→(II−B)の適切な塩基は、例えば、三級アミン塩基、例えばトリエチルアミン、N−メチルモルホリン、N−メチルピペリジン、N,N−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンまたは4−N,N−ジメチルアミノピリジンである。N,N−ジイソプロピルエチルアミンを用いることが好ましい。
反応(VI)+(VII)→(II−B)は、0℃〜+50℃、好ましくは+10℃〜+30℃の範囲の温度で生じる。この反応は、大気圧下で行われても、上昇した圧力下で行われても、または低下した圧力下で行われてもよい(例えば、0.5〜5バール);大気圧下で作動することが通常である。
反応(IX)→(III−A)、(XIV)→(III−B)および(XVI)→(III−C)ならびにまた(VI)+(XVII)→(III−D)、(XIX)+(XX)→(III−E)および(XXV)+(XX)→(III−F)は、反応条件下で不活性な溶媒中で行われる。適切な溶媒の例は、エーテル、例えばジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、tert−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,4−ジオキサン、1,2−ジメトキシエタンまたはbis(2−メトキシエチル)エーテル、炭化水素、例えばベンゼン、トルエン、キシレン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサンまたは石油画分、ハロゲン化炭化水素、例えばジクロロメタン、トリクロロメタン、テトラクロロメタン、1,2−ジクロロエタン、トリクロロエチレンまたはクロロベンゼン、または双極性−非プロトン性溶媒、例えばアセトン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、酢酸エチル、ピリジン、ジメチルスルホキシド(DMSO)、N,N−ジメチルホルムアミド(DMF)、N,N−ジメチルアセトアミド(DMA)、N,N’−ジメチルプロピレンウレア(DMPU)またはN−メチルピロリジノン(NMP)である。このような溶媒の混合物を用いることもまた可能である。好ましいのは、N,N−ジメチルホルムアミドを用いることである。
これらの反応のための適切な塩基は、例えば、三級アミン、例えばトリエチルアミン、N−メチルモルホリン、N−メチルピペリジン、N,N−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンまたは4−N,N−ジメチルアミノピリジンである。N,N−ジイソプロピルエチルアミンを、必要に応じて、4−N,N−ジメチルアミノピリジンの添加とともに用いることが好ましい。
反応(IX)→(III−A)、(XIV)→(III−B)および(XVI)→(III−C)ならびにまた(VI)+(XVII)→(III−D)および(XIX)+(XX)→(III−E)は、0℃〜+50℃、好ましくは+10℃〜+30℃の温度で起こる。この反応は、大気圧下で行われても、上昇した圧力下で行われても、または低下した圧力下で行われてもよい(例えば、0.5〜5バール);大気圧下で作動することが通常である。
式(II)および(III)の化合物は、それぞれ式(IIa)および(IIIa)の化合物の半量であり、ここでR35は、メチルである。化合物(IIa)および(IIIa)の調製は、上記のような、式(II)および(III)の化合物の調製と同様に行う。
上記のプロセスは、例えば、以下の合成スキームによって図示される(スキーム3〜13,18):
式(IV)の化合物は、市販のアミノ酸構築ブロックから調製されてもよいし、または文献から公知のプロセスと同様に、ペプチド化学の通常の方法に従って、および本実験のセクションで記載されるように、文献から公知のものであってもよい(例えば、Pettitら、Synthesis 1996,719;Shioiriら、Tetrahedron Lett.1991,32,931;Shioiriら、Tetrahedron 1993,49,1913;Kogaら、Tetrahedron Lett.1991,32,2395;Vidalら、Tetrahedron 2004,60,9715;Poncetら、Tetrahedron 1994,50,5345.Pettitら、J.Org.Chem.1994,59,1796を参照のこと)。下の合成スキーム(スキーム14〜16)は冷として調製物を図示する。
式(XI)、(XIII)、(XV)、(XVII)および(XXI)の化合物であって、例としては、必要に応じて、そのキラル型またはジアステレオマー型を含む化合物は、市販されているか、もしくは文献中で記載されているか、またはそれらは、文献に公開された方法と類似の、当業者に明らかな経路で調製され得る。多数の包括的な指示およびまた出発材料の調製に対する文献情報はまた、実験のセクションでも、出発化合物および中間体の調製に関するセクションにおいて示される。
式(V)、(VII)、(VIII)、(X)、(XVIII)、(XX)および(XXIII)の化合物であって、例としては、必要に応じて、そのキラル型またはジアステレオマー型を含む化合物は、文献から公知であるか、または文献に公開された方法と類似の、当業者に明らかな経路で調製されてもよい。多数の包括的な指示およびまた出発材料の調製に対する文献情報はまた、実験のセクションでも、出発化合物および中間体の調製に関するセクションにおいて示される。
あるいは、調製順序の個々の工程は、異なる順序で、または他の保護基と組み合わせて行われてもよい。このアプローチは、例えば、下の合成スキーム中に図示される(スキーム17、19、20および21)。
スキーム20
本発明の結合剤のFGFR2癌標的分子は、当業者に公知である。全長FGFR2は、FGFR2α(配列番号1)と特定されるが、D1ドメインを欠くアイソフォームは、FGFR2β(配列番号2)として特定される(図1を参照のこと)。ドメイン3中の別の選択的スプライシングによって、2つの異なる変異体、すなわちFGFR2IIIb(エキソン7および8によってコードされる)、およびFGFR2IIIc(エキソン7および9によってコードされる)(図1を参照のこと)がもたらされる。
本発明の一実施形態では、結合剤は、(好ましくは特に)FGFR2に結合する。本発明のさらなる主題では、結合剤は、(好ましくは特に)標的分子FGFR2の細胞外ドメインに結合する(図1を参照のこと)。
本発明のさらなる実施形態では、結合剤は、(好ましくは特に)1つ以上の形態のヒトFGFR2ポリペプチドに結合する。本発明のさらなる主題では、結合剤は、(好ましくは特に)FGFR2の全てのアイソフォームおよびスプライス変異体に結合する。本明細書において以下では、FGFR2の異なる「アイソフォーム」の概念としては、限定するものではないが、異なるアイソフォーム、異なるスプライス変異体、異なる糖型またはFGFR2ポリペプチド(異なる翻訳および翻訳後修飾を受ける)が挙げられる。
本発明のさらなる実施形態では、結合剤は、(好ましくは特に)癌標的分子FGFR2のN−末端ドメインに結合する。本発明のさらなる主題では、この結合剤は、(好ましくは特に)FGFR2の細胞外N−末端エピトープ(1RPSFSLVEDTTLEPE15)(配列番号23)に結合する。
本発明のさらなる実施形態では、この結合剤はまた、(好ましくは特に)異なる種のFGFR2に結合する。この効果は、本発明のコンジュゲートが、これらの種でより容易に、薬理学的に検討できるということである。好ましい種は、げっ歯類、さらに具体的には、マウスまたはラットであり、ただしまた、ブタおよび非ヒト霊長類でもある。
1つの好ましい実施形態では、結合剤は、標的細胞上のFGFR2に対する結合後に、結合の結果として表的細胞によって内部移行される。この効果は、免疫複合体よる場合も、またはADCによる場合もある、結合剤−薬物コンジュゲートが、標的細胞によって取り込まれるということである。
一実施形態では、結合剤は、結合タンパク質である。1つの好ましい実施形態では、この結合剤は、抗体、抗原−結合抗体フラグメント、多価特異的抗体または抗体模倣物である。
好ましい抗体模倣物は、アフィボディ、アドネクチン、アンチカリン、DARPins、アビマー(avimer)、またはナノボディ(nanobody)である。好ましい多価特異的抗体は、二価特異的および三価特異的抗体である。
1つの好ましい実施形態では、結合剤は、抗体または抗原−結合抗体フラグメント、より好ましくは単離された抗体または単離された抗原−結合抗体フラグメントである。
好ましい抗原−結合抗体フラグメントは、Fab、Fab’、F(ab’)2およびFvフラグメント、ダイアボディ、DAb、直鎖抗体およびscFvである。特に好ましいのは、Fab、ダイアボディおよびscFvである。
1つの特に好ましい実施形態では、結合剤は、抗体である。特に好ましいのは、モノクローナル抗体またはその抗原−結合抗体フラグメントである。さらに特に好ましいのは、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、またはその抗原−結合抗体フラグメントである。
1つの好ましい実施形態では、抗体または抗原−結合フラグメントは、抗体M048−D01−hIgG1の可変の軽鎖および重鎖のCDR配列のアミノ酸配列を含む。
さらに好ましい実施形態では、この抗体または抗原−結合フラグメントは、配列番号15(H−CDR1)、配列番号16(H−CDR2)、配列番号17(H−CDR3)、配列番号18(L−CDR1)、配列番号19(L−CDR2)および配列番号20(L−CDR3)に示される抗体M048−D01−hIgG1の可変の軽鎖および重鎖のCDR配列のアミノ酸配列を含む。
さらに好ましい実施形態では、この抗体または抗原−結合フラグメントは、抗体M048−D01−hIgG1またはM048−D01−hIgG1−bの可変の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列を含む。
さらに好ましい実施形態では、この抗体または抗原−結合フラグメントは、配列番号12(Vl)および配列番号11(Vh)に示される抗体M048−D01−hIgG1の可変の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列、または配列番号14(Vl)および配列番号13(Vh)に示される抗体M048−D01−hIgG1−bの可変の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列を含む。
さらに特に好ましい実施形態では、この抗体または抗原−結合フラグメントは、配列番号14(Vl)および配列番号13(Vh)に示される抗体M048−D01−hIgG1−bの可変の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列を含む。
さらに特に好ましい実施形態では、この抗体は、配列番号9(軽鎖)および配列番号10(重鎖)に示される抗体M048−D01−hIgG1−bの軽鎖および重鎖のアミノ酸配列を含む。
さらに特に好ましい実施形態では、抗体は、配列番号7(軽鎖)および配列番号8(重鎖)に示される抗体M048−D01−hIgG1の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列を含む。
さらなるFGFR2抗体の例は、本発明に記載される、GAL−FR21−mIgG1(配列番号3および配列番号4)およびGAL−FR22−mIgG2a(配列番号5および配列番号6)の抗体である。2つの最後に言及した抗体は、抗体GAL−FR21(WO2010/054265の配列番号1および配列番号4)およびGAL−FR22(WO2010/054265の配列番号7および配列番号8)の軽鎖(Vl)および重鎖(Vh)の可変領域(本明細書に記載される)から、WO2010/054265に基づいて構築され、ここでGAL−FR21の可変領域は、mIgG1形式に再フォーマットされているが、GAL−FR22の可変領域は、mIgG2a形式に再フォーマットされた。
癌標的分子に結合する抗体または抗原−結合抗体フラグメントは、例えば、化学合成または組み換え発現のような、公知のプロセスを用いて、当業者によって調製され得る、癌標的分子の結合剤は、商業的に入手されてもよいし、または公知のプロセス、例えば、化学合成または組み換え発現などを用いて当業者によって調製されてもよい。抗体または抗原−結合抗体フラグメントを調製するためのさらなるプロセスは、WO2007070538に記載される(22ページ「抗体」を参照のこと)。当業者は、ファージディスプレイライブラリー(例えば、Morphosys HuCAL Gold)のようなプロセスが、抗体または抗原−結合抗体フラグメントを発見するために編集され、かつ用いられ得る方法を承知している(WO2007070538,ページ24ffおよび70ページの実施例1、72ページの実施例2を参照のこと)。B細胞由来のDNAライブラリーを用いる抗体を調製するためのさらなるプロセスは、例えば、26ページに記載されている(WO2007070538)。抗体をヒト化するためのプロセスは、WO2007070538の30〜32ページに、詳細には、Queen,ら、Pros.Natl.Acad.Sci.USA 86:10029−10033,1989に、またはWO90/0786に記載されている。さらに、一般的には、タンパク質の、および特には抗体の組み換え発現のためのプロセスは、当業者に公知である(例えば、BergerおよびKimrnel(Guide to Molecular Cloning Techniques,Methods in Enzymology,Vo1.152,Academic Press,Inc.);Sambrook,ら、(Molecular Cloning:A Laboratory Manual,(第2版,Cold Spring Harbor Laboratory Press;Cold Spring Harbor,N.Y.;1989)Vol.1−3);Current Protocols in Molecular Biolony,(F.M.Ausabelら、[編集],Current Protocols,Green Publishing Associates,Inc./John Wiley & Sons,Inc.);Harlowら,(Monoclonal Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press(19881,Paul[編集]);Fundamental Immunology,(Lippincott Williams & Wilkins(1998));ならびにHarlow,ら、(Using Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press(1998)を参照のこと)。当業者は、対応するベクター、プロモーターおよびシグナルペプチド(タンパク質/抗体の発現に必須である)を公知である。通常のプロセスは、WO2007070538の41〜45ページにも記載されている。IgG1抗体を調製するためのプロセスは、例えば、実施例6のWO2007070538のページ74ffに記載されている。抗体のその抗原への結合後の内部移行の決定を可能にするプロセスは、当業者に公知であり、かつ、例えば、WO2007070538の80ページに記載されている。当業者は、異なる標的分子特異性を有する抗体の調製と同様に、カルボアンヒドラーゼIX(Mn)抗体を調製するために用いられたWO2007070538に記載のプロセスを用いることが可能である。
FGFR2結合剤のさらなる例は、単鎖のFv抗体フラグメントPRO−007(高い親和性でFGFR2に結合する)およびPRO−001(高い親和性でFGFR3に、および低い親和性でFGFR2に結合する)である(WO2007144893に記載)。
本発明の化合物は、有用な薬理学的特性を有し、かつヒトおよび動物の疾患の予防および処置に用いられ得る。
本発明の、式(Ia)の、結合剤−薬物コンジュゲート(ADC)は、本発明の実験のセクション(セクションC)で示されるアッセイに基づいて示され得るように、腫瘍細胞に関して高くかつ特異的な細胞毒性活性を示す。本発明の、式(Ia)の、結合剤−薬物コンジュゲート(ADC)の一部に対する高くてかつ特異的な細胞毒性活性は、新規な、N,N−ジアルキルアウリスタチン誘導体および結合剤と、タキソフォアの放出に関して、酵素的に、加水分解的に、または還元的に切断可能な所定の切断点を示すだけでなく、このような所定の切断点を示さないリンカーとの適切な組み合わせを通じて達成される。さらに具体的には、トキソフォアの放出について、酵素的に、加水分解的にまたは還元的に切断可能な所定の切断点を有さず、そして腫瘍細胞へのADCの取り込み後、および完全な細胞内の抗体の酵素切断後に、完全にまたは部分的にインタクトなままである、適切なリンカーの使用を通じて、活性は、腫瘍細胞に対して極めて特異的に限局される。ADCと安定なリンカーとの間の適合性によれば、とりわけ、細胞内で形成される代謝物が、十分な有効性で形成され得、それらの標的に到達し得、十分な力価を有する標的に対するそれらの抗増殖活性を発揮できる(輸送体タンパク質によって腫瘍細胞が再度事前に運搬されることなく)ことが仮定される。ADCの安定なリンカー化学との、および該当の標的とのこのような適合性によって、拡大された治療ウインドウが得られる(例えば、L.Ducry,Bionconjugate Chem.2010,21−5;A.G.Polson,Cancer Res.2009,69,2358).
さらに具体的には、本発明の、式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲートは、FGFR2を発現する腫瘍細胞と高く、かつ特異的な細胞毒性活性を示す。FGFR2を発現しない腫瘍細胞に対する活性は、同時に有意に弱い。
特性のこのプロフィールに基づき、従って、本発明の化合物は、一般には、ヒトおよび動物の抗増殖性疾患の処置のために特別な程度まで適切である。この化合物は、一方では、細胞増殖、および細胞分裂の阻害、ブロック、低減または低下を、ならびに他方ではアポトーシスの増大をすることができる。
本発明の化合物が使用できる、疾患についての過剰増殖性の疾患としては、具体的には、癌および腫瘍疾患の群が挙げられる。本発明の状況では、これらは、特に、限定するものではないが、以下の疾患を意味することが理解される:乳癌および乳腺腫瘍(乳管および小葉型、また非浸潤性、三重陰性、HER2−陰性)、呼吸器官の腫瘍(小細胞性および非小細胞性癌、気管支癌)、脳腫瘍(例えば、脳幹の腫瘍、および視床下部の腫瘍、星状細胞腫、髄芽腫、上衣細胞腫および神経外胚葉性腫瘍および松果体腫瘍)、消化器の腫瘍(食道、食道胃接合部(=EGJ)の癌、胃癌(びまん型および腸管型)、胆嚢、小腸、大腸、直腸)、肝臓腫瘍(例としては、肝細胞癌、胆管細胞癌および混合型の幹細胞癌および胆管細胞癌)、頭頸部領域(喉頭、下咽頭、上咽頭、中咽頭、口唇および口腔)の腫瘍、皮膚がん(扁平上皮細胞癌、カポジ肉腫、悪性黒色腫、Merkel細胞皮膚癌、および非黒色腫皮膚癌)、軟部組織の腫瘍(例としては、軟部組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、リンパ肉腫および横紋筋肉腫)、眼の腫瘍(例としては、眼内黒色腫および網膜芽細胞腫)、内分泌腺および外分泌腺(例えば、甲状腺および副甲状腺、膵臓および唾液腺)の腫瘍、泌尿器官の腫瘍(膀胱、陰茎、腎臓、腎盂および尿管の腫瘍)、および生殖器官の腫瘍(女性の子宮内膜、子宮頸部、卵巣、膣、外陰部、および子宮の癌、ならびに男性の前立腺および精巣の癌)。これらとしてはまた、固体型の疾患でのおよび循環血球としての増殖性血液疾患、例えば、リンパ腫、白血病および骨髄増殖性疾患、例えば、急性骨髄腫、急性リンパ球芽性、慢性リンパ球性、慢性骨髄性および有毛細胞白血病、ならびにまたAIDS関連リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚T細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫および中枢神経系のリンパ腫が挙げられる。
抗FGFR2結合剤−薬物コンジュゲートについて好ましい過剰増殖性の疾患
本発明の化合物がその処置に使用され得るのが好ましい過剰装飾性の疾患は、FGFR2発現性腫瘍、例えば、胃癌(腸型およびびまん性胃癌)、印環細胞癌、特にびまん性のもの、食道癌、食道胃接合部(EGJ)の癌、乳癌、大腸の癌、結腸直腸癌、直腸癌、前立腺癌、腎臓癌、頭頸部領域の癌、膵臓癌、肝臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、子宮内膜癌、さらに具体的には、類内膜型の癌、乳頭漿液型の癌、または透明細胞亜型、肺癌、より具体的には、非小細胞肺癌(NSCLC)、腺癌、扁平上皮癌および膵臓癌である。
本発明の化合物がその処置に使用され得るのが好ましい過剰装飾性の疾患は、FGFR2発現性腫瘍、例えば、胃癌(腸型およびびまん性胃癌)、印環細胞癌、特にびまん性のもの、食道癌、食道胃接合部(EGJ)の癌、乳癌、大腸の癌、結腸直腸癌、直腸癌、前立腺癌、腎臓癌、頭頸部領域の癌、膵臓癌、肝臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、子宮内膜癌、さらに具体的には、類内膜型の癌、乳頭漿液型の癌、または透明細胞亜型、肺癌、より具体的には、非小細胞肺癌(NSCLC)、腺癌、扁平上皮癌および膵臓癌である。
また、ヒトにおけるこれらの十分に記載された疾患は、他の哺乳動物においても匹敵する原因論で生じ得、本発明の化合物で処置され得る。
本発明の状況では、「処置、処理(treatment)」または「処置する、処理する(treat)」という用語は、慣習的に用いられ、かつ患者の看護、管理および支持を意味し、疾患または健康上の欠陥と戦う、軽減する、緩和する、または救済するという目的、ならびに癌疾患の場合のように、この疾患によって有害な影響を受ける、生存状態を改善するという目的を有する。
従って、本発明はさらに、疾患、具体的には上述の疾患の処置および/または予防のための本発明の化合物の使用を提供する。
本発明はさらに、疾患、具体的には上述の疾患の処置および/または予防のための医薬の調製のための本発明の化合物の使用を提供する。
本発明はさらに、疾患、具体的には上述の疾患の処置および/または予防のための方法における本発明の化合物の使用を提供する。
本発明はさらに、疾患、具体的には上述の疾患の処置および/または予防のための方法であって、本発明の化合物のうちの少なくとも1つの有効量を用いる方法を提供する。
本発明による化合物は、それ自体で使用されてもよいし、または必要に応じて、1つ以上の他の薬理学的に活性な物質と組み合わせて(この組み合わせが、望ましくない、許容されない副作用をもたらさない限り)使用されてもよい。従って、本発明は、特に、上述の疾患の処置および/または予防のために、本発明の化合物のうち少なくとも1つおよび1つ以上のさらなる薬物を含んでいる医薬を、提供する。
例えば、本発明の化合物は、癌疾患の処置のための公知の抗過剰増殖性、細胞増殖抑制または細胞毒性物質と組み合わされてもよい。例えば、言及され得る適切な薬物は以下のとおりである:
アルデスロイキン、アレンドロン酸、アルファフェロン、アリトレチノイン、アロプリノール、アロプリム(aloprim)、アロキシ、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アミホスチン、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アンズメト(anzmet)、アラネスプ、アルグラビン、三酸化ヒ素、アロマシン、5−アザシチジン、アザチオプリン、BCGまたはtice−BCG、ベスタチン、酢酸ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、ベキサロテン、硫酸ブレオマイシン、ブロクスウリジン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルシトニン、カンパス(campath)、カペシタビン、カルボプラチン、カソデックス、セフェソン、セルモロイキン、セルビジン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クラドリビン、クロドロン酸、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノキソム、デカドロン、リン酸デカドロン、デレストロゲン、デニロイキンディフィトックス、デポメドロール、デスロレリン、デキスラゾキサン、ジエチルスチルベストロール、ジフルカン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドロナビノール、DW−166HC、エリガルド(eligard)、エリテク(elitek)、エレンス(ellence)、エメンド、エピルビシン、エポエチン・アルファ、エポゲン、エプタプラチン、エルガミゾール、エストレース、エストラジオール、エストラムスチン・リン酸ナトリウム、エチニル・エストラジオール、エチオール、エチドロン酸、エトポフォス、エトポシド、ファドロゾール、ファルストン、フィルグラスチム、フィナステリド、フリグラスチム、フロクシウリジン、フルコナゾール、フルダラビン、5−フルオロデオキシウリジン・モノホスファート、5−フルオロウラシル(5−FU)、フルオキシメステロン、フルタミド、ホルメスタン、ホステアビン、ホテムスチン、フルベストラント、ガンマガルド、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、グリベック、グリアデル、ゴセレリン、グラニセトロン塩酸塩、ヒストレリン、ハイカムチン、ヒドロコルトン、エリスロ−ヒドロキシノニルアデニン(eyrthro−hydroxynonyladenine)、ヒドロキシウレア、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロンα、インターフェロンα2、インターフェロンα−2A、インターフェロンα−2β、インターフェロンα−n1、インターフェロンα−n3、インターフェロンβ、インターフェロンγ−1α、インターロイキン−2、イントロンA、イレッサ、イリノテカン、キトリル、レンチナン・スルフェート、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、酢酸ロイプロリド、レバミゾール、レボホリン酸カルシウム塩(levofolinic acid calcium salt)、レボトロイド、レボキシル、ロムスチン、ロニダミン、マリノール、メクロレタミン、メコバラミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲステロール、メルファラン、メネスト、6−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、メトビキス、ミルテホシン、ミノサイクリン、マイトマイシンC、ミトタン、ミトキサントロン、モドレナール、ミオセト、ネダプラチン、ニューラスタ、ニューメガ、ノイポゲン、ニルタミド、ノルバデックス、NSC−631570、OCT−43、オクトレオチド、オンダンセトロン塩酸塩、オラプレド、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペジアプレド、ペグアスパラガーゼ、ペガシス、ペントスタチン、ピシバニール、ピロカルピン塩酸塩、ピラルビシン、プリカマイシン、ポルフィマー・ナトリウム、プレドニムスチン、プレドニソロン、プレドニゾン、プレマリン、プロカルバジン、プロクリット、ラルチトレキセド、レビフ(rebif)、レニウム−186エチドロン酸、リツキシマブ、ロフェロン−A、ロムルチド、サラゲン、サンドスタチン、サルグラモスチム、セムスチン、シゾフィラン、ソブゾキサン、ソル−メドロール、ストレプトゾシン、ストロンチウム−89クロライド、シントロイド、タモキシフェン、タムスロシン、タソネルミン、タストラクトン、タキソテール、テセロイキン、テモゾロミド、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、テストレド(testred)、チオグアニン、チオテパ、チロトロピン、チルドロン酸、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレオスルファン、トレチノイン、トレキサル、トリメチルメラミン、トリメトレキサート、トリプトレリン・アセテート、トリプトレリン・パモエート、UFT、ウリジン、バルルビシン、ベスナリノン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ビルリジン、ザインカード、ジノスタチン・スチマラマー、ゾフラン;ABI−007、アコルビフェン、アクチンムン、アフィニタク、アミノプテリン、アルゾキシフェン、アソプリスニル、アタメスタン、アトラセンタン、アバスチン、BAY 43−9006(ソラフェニブ)、CCI−779、CDC−501、セレブレックス、セツキシマブ、クリスナトール、シプロテロン・アセタート、デシタビン、DN−101、ドキソルビシン−MTC、dSLIM、デュタステライド、エドテカリン、エフロルニチン、エキサテカン、フェンレチニド、ヒスタミン・ジヒドロクロライド、ヒストレリン・ハイドロゲル・インプラント、ホルミウム−166 DOTMP、イバンドロン酸、インターフェロンγ、イントロン−PEG、イキサベピロン、キーホール・リンペット・ヘモシアニン、L−651582、ランレオチド、ラソホキシフェン、リブラ(libra)、ロナファルニブ、ミプロキシフェン、ミノドロナート、MS−209、リポソームMTP−PE、MX−6、ナファレリン、ネモルビシン、ネオバスタット、ノラトレキセド、オブリメルセン、onco−TCS、オシデム、パクリタキセル・ポリグルタメート、パミドロン酸二ナトリウム、PN−401、QS−21、クアゼパム、R−1549、ラロキシフェン、ランピルナーゼ、13−cis−レチノイン酸、サトラプラチン、セオカルシトール、T−138067、タルセバ、タキソプレキシン、チモシンα1、チアゾフリン、チピファルニブ、チラパザミン、TLK−286、トレミフェン、TransMID−107R、バルスポダル、バプレオチド、バタラニブ、ベルテポルフィン、ビンフルニン、Z−100、ゾレドロン酸、ならびにそれらの組合せ。
アルデスロイキン、アレンドロン酸、アルファフェロン、アリトレチノイン、アロプリノール、アロプリム(aloprim)、アロキシ、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アミホスチン、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アンズメト(anzmet)、アラネスプ、アルグラビン、三酸化ヒ素、アロマシン、5−アザシチジン、アザチオプリン、BCGまたはtice−BCG、ベスタチン、酢酸ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、ベキサロテン、硫酸ブレオマイシン、ブロクスウリジン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルシトニン、カンパス(campath)、カペシタビン、カルボプラチン、カソデックス、セフェソン、セルモロイキン、セルビジン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クラドリビン、クロドロン酸、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノキソム、デカドロン、リン酸デカドロン、デレストロゲン、デニロイキンディフィトックス、デポメドロール、デスロレリン、デキスラゾキサン、ジエチルスチルベストロール、ジフルカン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドロナビノール、DW−166HC、エリガルド(eligard)、エリテク(elitek)、エレンス(ellence)、エメンド、エピルビシン、エポエチン・アルファ、エポゲン、エプタプラチン、エルガミゾール、エストレース、エストラジオール、エストラムスチン・リン酸ナトリウム、エチニル・エストラジオール、エチオール、エチドロン酸、エトポフォス、エトポシド、ファドロゾール、ファルストン、フィルグラスチム、フィナステリド、フリグラスチム、フロクシウリジン、フルコナゾール、フルダラビン、5−フルオロデオキシウリジン・モノホスファート、5−フルオロウラシル(5−FU)、フルオキシメステロン、フルタミド、ホルメスタン、ホステアビン、ホテムスチン、フルベストラント、ガンマガルド、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、グリベック、グリアデル、ゴセレリン、グラニセトロン塩酸塩、ヒストレリン、ハイカムチン、ヒドロコルトン、エリスロ−ヒドロキシノニルアデニン(eyrthro−hydroxynonyladenine)、ヒドロキシウレア、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロンα、インターフェロンα2、インターフェロンα−2A、インターフェロンα−2β、インターフェロンα−n1、インターフェロンα−n3、インターフェロンβ、インターフェロンγ−1α、インターロイキン−2、イントロンA、イレッサ、イリノテカン、キトリル、レンチナン・スルフェート、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、酢酸ロイプロリド、レバミゾール、レボホリン酸カルシウム塩(levofolinic acid calcium salt)、レボトロイド、レボキシル、ロムスチン、ロニダミン、マリノール、メクロレタミン、メコバラミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲステロール、メルファラン、メネスト、6−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、メトビキス、ミルテホシン、ミノサイクリン、マイトマイシンC、ミトタン、ミトキサントロン、モドレナール、ミオセト、ネダプラチン、ニューラスタ、ニューメガ、ノイポゲン、ニルタミド、ノルバデックス、NSC−631570、OCT−43、オクトレオチド、オンダンセトロン塩酸塩、オラプレド、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペジアプレド、ペグアスパラガーゼ、ペガシス、ペントスタチン、ピシバニール、ピロカルピン塩酸塩、ピラルビシン、プリカマイシン、ポルフィマー・ナトリウム、プレドニムスチン、プレドニソロン、プレドニゾン、プレマリン、プロカルバジン、プロクリット、ラルチトレキセド、レビフ(rebif)、レニウム−186エチドロン酸、リツキシマブ、ロフェロン−A、ロムルチド、サラゲン、サンドスタチン、サルグラモスチム、セムスチン、シゾフィラン、ソブゾキサン、ソル−メドロール、ストレプトゾシン、ストロンチウム−89クロライド、シントロイド、タモキシフェン、タムスロシン、タソネルミン、タストラクトン、タキソテール、テセロイキン、テモゾロミド、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、テストレド(testred)、チオグアニン、チオテパ、チロトロピン、チルドロン酸、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレオスルファン、トレチノイン、トレキサル、トリメチルメラミン、トリメトレキサート、トリプトレリン・アセテート、トリプトレリン・パモエート、UFT、ウリジン、バルルビシン、ベスナリノン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ビルリジン、ザインカード、ジノスタチン・スチマラマー、ゾフラン;ABI−007、アコルビフェン、アクチンムン、アフィニタク、アミノプテリン、アルゾキシフェン、アソプリスニル、アタメスタン、アトラセンタン、アバスチン、BAY 43−9006(ソラフェニブ)、CCI−779、CDC−501、セレブレックス、セツキシマブ、クリスナトール、シプロテロン・アセタート、デシタビン、DN−101、ドキソルビシン−MTC、dSLIM、デュタステライド、エドテカリン、エフロルニチン、エキサテカン、フェンレチニド、ヒスタミン・ジヒドロクロライド、ヒストレリン・ハイドロゲル・インプラント、ホルミウム−166 DOTMP、イバンドロン酸、インターフェロンγ、イントロン−PEG、イキサベピロン、キーホール・リンペット・ヘモシアニン、L−651582、ランレオチド、ラソホキシフェン、リブラ(libra)、ロナファルニブ、ミプロキシフェン、ミノドロナート、MS−209、リポソームMTP−PE、MX−6、ナファレリン、ネモルビシン、ネオバスタット、ノラトレキセド、オブリメルセン、onco−TCS、オシデム、パクリタキセル・ポリグルタメート、パミドロン酸二ナトリウム、PN−401、QS−21、クアゼパム、R−1549、ラロキシフェン、ランピルナーゼ、13−cis−レチノイン酸、サトラプラチン、セオカルシトール、T−138067、タルセバ、タキソプレキシン、チモシンα1、チアゾフリン、チピファルニブ、チラパザミン、TLK−286、トレミフェン、TransMID−107R、バルスポダル、バプレオチド、バタラニブ、ベルテポルフィン、ビンフルニン、Z−100、ゾレドロン酸、ならびにそれらの組合せ。
好ましい実施形態では、本発明の化合物は、抗過剰増殖性剤と組み合わされてもよく、この抗過剰増殖性作用剤は、例えば、包括的なリストではないが、以下であり得る:
アミノグルテチミド、L−アスパラギナーゼ、アザチオプリン、5−アザシチジン、ブレオマイシン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、コラスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ドカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、2’2’−ジフルオロデオキシシチジン、ドセタキセル、ドキソルビシン(アドリアマイシン)、エピルビシン、エポチロン、およびその誘導体、エリスロ−ヒドロキシノニルアデニン、エチニルエストラジオール、エトポシド、リン酸フルダラビン、5−フルオロデオキシウリジン、5−フルオロデオキシウリジン・モノホスファート、5−フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシウレア、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロン、イリノテカン、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲステロール、メルファラン、6−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキセート、マイトマイシンC、ミトタン、ミトキサントロン、パクリタキセル、ペントスタチン、N−ホスホノアセチル−L−アスパラギン酸(PALA)、プリカマイシン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ラロキシフェン、セムスチン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、トリメチルメラミン、ウリジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン。
アミノグルテチミド、L−アスパラギナーゼ、アザチオプリン、5−アザシチジン、ブレオマイシン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、コラスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ドカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエチルスチルベストロール、2’2’−ジフルオロデオキシシチジン、ドセタキセル、ドキソルビシン(アドリアマイシン)、エピルビシン、エポチロン、およびその誘導体、エリスロ−ヒドロキシノニルアデニン、エチニルエストラジオール、エトポシド、リン酸フルダラビン、5−フルオロデオキシウリジン、5−フルオロデオキシウリジン・モノホスファート、5−フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシウレア、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロン、イリノテカン、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲステロール、メルファラン、6−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキセート、マイトマイシンC、ミトタン、ミトキサントロン、パクリタキセル、ペントスタチン、N−ホスホノアセチル−L−アスパラギン酸(PALA)、プリカマイシン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ラロキシフェン、セムスチン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テニポシド、プロピオン酸テストステロン、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、トリメチルメラミン、ウリジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン。
本発明の化合物はまた、抗体のような生物学的治療剤(例えば、アバスチン、リツキサン、エルビツクス、ハーセプチン)と極めて有望な方式で組み合わされてもよい。本発明の化合物はまた、例えば、アバスチン、アキシチニブ、レセンチン、レゴラフェニブ、ソラフェニブまたはスニチニブなどのような血管形成に対する治療剤と組み合わせて正の効果を達成し得る。プロテアソームのおよびmTORのインヒビターとの組み合わせ、ならびにまた抗ホルモンおよびステロイド代謝性酵素インヒビターとの組み合わせも同様に、特に、それらの副作用のプロフィールが好ましいおかげで、適切である。
一般には、以下の目的は、本発明の化合物と、細胞増殖抑制作用または細胞毒性作用を有する他の剤との組み合わせで達成され得る:
・個々の薬物での処置と比較して、腫瘍の増殖を減速するか、腫瘍の大きさを低下するか、またはさらには腫瘍の完全な排除における活性の改善
・単独療法よりも用いられる化学療法剤が低用量で済むという可能性;
・個々の投与と比較して副作用が少なく、より耐容性の療法という可能性;
・腫瘍疾患の広範なスペクトルの処置という可能性;
・治療に対するより高い奏効率の達成;
・現行の標準療法と比較して長い患者の生存期間
・個々の薬物での処置と比較して、腫瘍の増殖を減速するか、腫瘍の大きさを低下するか、またはさらには腫瘍の完全な排除における活性の改善
・単独療法よりも用いられる化学療法剤が低用量で済むという可能性;
・個々の投与と比較して副作用が少なく、より耐容性の療法という可能性;
・腫瘍疾患の広範なスペクトルの処置という可能性;
・治療に対するより高い奏効率の達成;
・現行の標準療法と比較して長い患者の生存期間
また、本発明による化合物はさらに、放射線療法および/または外科的介入と組み合わせて使用されてもよい。
本発明はさらに、本発明の少なくとも1つの化合物を、1つ以上の不活性な、非毒性の薬学的に安定な賦形剤と慣習的には一緒に含む医薬、および上述の目的のためのそれらの使用を提供する。
本発明の化合物は、全身で、および/または局所で作用し得る。それらは、この目的のために適切な方式で、例えば、非経口的に、可能性としては、吸入によって、またはインプラントもしくはステントとしてなどで、投与されてもよい。
本発明の化合物は、これらの投与経路のために適切な投与経路で投与されてもよい。
非経口投与は、吸収工程(例えば、静脈内、動脈内、頸動脈内、脊髄内または腰椎内に)の迂回で、または吸収(例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内)を含むことによって影響され得る。非経口投与に適切な投与型としては、溶液、懸濁液、エマルジョンまたは凍結乾燥の形態の注射および注入の処方物が挙げられる。非経口投与は、特に静脈内投与に好ましい。
一般には、有効な結果を得るためには、体重あたり約0.001〜1mg/kg、好ましくは約0.01〜0.5mg/kgの量を投与することが、非経口投与の場合には、有利であることがわかっている。
それにもかかわらず、述べた量とは外れることが必要である場合も、特に、体重、投与経路、活性化合物に対する個々の挙動、処方物の性質および投与が行われる時点または間隔次第であり得る。従って、上述の最小量未満で管理するのに十分である場合もあるが、他の場合には、言及される上限を超えなければならない場合もある。比較的大量に投与される場合、この用量をその日に数回の個々の用量で与えるように助言され得る。
以下の実施例は本発明を例示する。本発明はこの実施例に限定されない。
以下の試験および実施例のパーセンテージの数字は、他に言及されない限り重さに対するパーセンテージであり;部は重量あたりの部である。液体/液体溶液の溶媒の比、希釈比および濃度データは、各々の場合に、容積に関する。
A.実施例
略語および頭文字:
略語および頭文字:
HPLCおよびLC−MS法:
方法1(LC−MS):
装置:Waters Acquity SQD UPLCシステム;カラム:Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50mm×1mm;溶出剤A:1lの水+0.25mlの99%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.25mlの99%の強度のギ酸;勾配:0.0分の90%のA→1.2分の5%のA→2.0分の5%のA;流速:0.40ml/分;オーブン:50℃;UV検出:210−400nm。
方法1(LC−MS):
装置:Waters Acquity SQD UPLCシステム;カラム:Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50mm×1mm;溶出剤A:1lの水+0.25mlの99%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.25mlの99%の強度のギ酸;勾配:0.0分の90%のA→1.2分の5%のA→2.0分の5%のA;流速:0.40ml/分;オーブン:50℃;UV検出:210−400nm。
方法2(LC−MS):
装置:Waters UPLC Acquityを備えたMicromass QuattroPremier;カラム:Thermo Hypersil GOLD 1.9μ 50mm×1mm;溶出剤A:1lの水+0.5mlの50%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.5mlの50%の強度のギ酸;勾配:0.0分の90%のA→0.1分の90%のA→1.5分の10%のA→2.2分の10%のA;流速:0.33ml/分;オーブン:50℃;UV検出:210nm。
装置:Waters UPLC Acquityを備えたMicromass QuattroPremier;カラム:Thermo Hypersil GOLD 1.9μ 50mm×1mm;溶出剤A:1lの水+0.5mlの50%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.5mlの50%の強度のギ酸;勾配:0.0分の90%のA→0.1分の90%のA→1.5分の10%のA→2.2分の10%のA;流速:0.33ml/分;オーブン:50℃;UV検出:210nm。
方法3(LC−MS):
装置:HPLC Agilentシリーズ 1100を備えたMicromass Quattro Micro MS;カラム:Thermo Hypersil GOLD 3μ 20mm×4mm;溶出剤A:1lの水+0.5mlの50%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.5mlの50%の強度のギ酸;勾配:0.0分の100%のA→3.0分の10%のA→4.0分の10%のA→4.01分の100%のA(流速 2.5ml/分)→5.00分の100%のA;オーブン:50℃;流速:2ml/分;UV検出:210nm。
装置:HPLC Agilentシリーズ 1100を備えたMicromass Quattro Micro MS;カラム:Thermo Hypersil GOLD 3μ 20mm×4mm;溶出剤A:1lの水+0.5mlの50%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.5mlの50%の強度のギ酸;勾配:0.0分の100%のA→3.0分の10%のA→4.0分の10%のA→4.01分の100%のA(流速 2.5ml/分)→5.00分の100%のA;オーブン:50℃;流速:2ml/分;UV検出:210nm。
方法4(LC−MS):
MS装置:Micromass ZQ;HPLC装置:HP 1100シリーズ;UV DAD;カラム:Phenomenex Gemini 3μ 30mm×3.00mm;溶出剤A:1lの水+0.5mlの50%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.5mlの50%の強度のギ酸;勾配:0.0分の90%のA→2.5分の30%のA→3.0分の5%のA→4.5分の5%のA;流速:0.0分の1ml/分→2.5分/3.0分/4.5分の2ml/分;オーブン:50℃;UV検出:210nm。
MS装置:Micromass ZQ;HPLC装置:HP 1100シリーズ;UV DAD;カラム:Phenomenex Gemini 3μ 30mm×3.00mm;溶出剤A:1lの水+0.5mlの50%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.5mlの50%の強度のギ酸;勾配:0.0分の90%のA→2.5分の30%のA→3.0分の5%のA→4.5分の5%のA;流速:0.0分の1ml/分→2.5分/3.0分/4.5分の2ml/分;オーブン:50℃;UV検出:210nm。
方法5(LC−MS):
装置:HP 1090シリーズ II;カラム:Merck Chromolith SpeedROD RP−18e,50mm×4.6mm;予備カラム:Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP−18e,5mm×4.6mm;注入容積:5μl;溶出剤A:水に含有される70%のHClO4(4ml/リットル)、溶出剤B:アセトニトリル;勾配:0.00分の20%のB→0.50分の20%のB→3.00分の90%のB→3.50分の90%のB→3.51分の20%のB→4.00分の20%のB;流速:5ml/分;カラム温度:40℃。
装置:HP 1090シリーズ II;カラム:Merck Chromolith SpeedROD RP−18e,50mm×4.6mm;予備カラム:Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP−18e,5mm×4.6mm;注入容積:5μl;溶出剤A:水に含有される70%のHClO4(4ml/リットル)、溶出剤B:アセトニトリル;勾配:0.00分の20%のB→0.50分の20%のB→3.00分の90%のB→3.50分の90%のB→3.51分の20%のB→4.00分の20%のB;流速:5ml/分;カラム温度:40℃。
方法6(LC−MS):
装置:DAD 996を備えるWaters 2695;カラム:Merck Chromolith SpeedROD RP−18e,50mm×4.6mm;Ord.No.:1.51450.0001,予備カラム:Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP−18e,5mm×4.6mm;Ord.No.:1.51470.0001、溶出剤A:水に含有される70%のHClO4(4ml/リットル)、溶出剤B:アセトニトリル;勾配:0.00分の5%のB→0.50分の5%のB→3.00分の95%のB→4.00分の95%のB;流速:5ml/分。
装置:DAD 996を備えるWaters 2695;カラム:Merck Chromolith SpeedROD RP−18e,50mm×4.6mm;Ord.No.:1.51450.0001,予備カラム:Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP−18e,5mm×4.6mm;Ord.No.:1.51470.0001、溶出剤A:水に含有される70%のHClO4(4ml/リットル)、溶出剤B:アセトニトリル;勾配:0.00分の5%のB→0.50分の5%のB→3.00分の95%のB→4.00分の95%のB;流速:5ml/分。
方法7(LC−MS):
MS装置:Waters ZQ;HPLC装置:Agilent 1100シリーズ;UV DAD;カラム:Thermo Hypersil GOLD 3μ 20mm×4mm;溶出剤A:1lの水+0.5mlの50%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.5mlの50%の強度のギ酸;勾配:0.0分の100%のA→3.0分の10%のA→4.0分の10%のA→4.1分の100%のA(流速 2.5ml/分);オーブン:55℃;流速:2ml/分;UV検出:210nm。
MS装置:Waters ZQ;HPLC装置:Agilent 1100シリーズ;UV DAD;カラム:Thermo Hypersil GOLD 3μ 20mm×4mm;溶出剤A:1lの水+0.5mlの50%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.5mlの50%の強度のギ酸;勾配:0.0分の100%のA→3.0分の10%のA→4.0分の10%のA→4.1分の100%のA(流速 2.5ml/分);オーブン:55℃;流速:2ml/分;UV検出:210nm。
方法8(LC−MS):
MS装置:Waters ZQ;HPLC装置:Agilent 1100シリーズ;UV DAD;カラム:Thermo Hypersil GOLD 3μ 20mm×4mm;溶出剤A:1lの水+0.5mlの50%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.5mlの50%の強度のギ酸;勾配:0.0分の100%のA→2.0分の60%のA→2.3分の40%のA→3.0分の20%のA→4.0分の10%のA→4.2分の100%のA(流速2.5ml/分);オーブン:55℃;流速:2ml/分;UV検出:210nm。
MS装置:Waters ZQ;HPLC装置:Agilent 1100シリーズ;UV DAD;カラム:Thermo Hypersil GOLD 3μ 20mm×4mm;溶出剤A:1lの水+0.5mlの50%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.5mlの50%の強度のギ酸;勾配:0.0分の100%のA→2.0分の60%のA→2.3分の40%のA→3.0分の20%のA→4.0分の10%のA→4.2分の100%のA(流速2.5ml/分);オーブン:55℃;流速:2ml/分;UV検出:210nm。
方法9(LC−MS):
装置:Waters Acquity SQD UPLCシステム;カラム:Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50mm×1mm;溶出剤A:1lの水+0.25mlの99%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.25mlの99%の強度のギ酸;勾配:0.0分の95%のA→6.0分の5%のA→7.5分の5%のA;オーブン:50℃;流速:0.35ml/分;UV検出:210−400nm。
装置:Waters Acquity SQD UPLCシステム;カラム:Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50mm×1mm;溶出剤A:1lの水+0.25mlの99%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.25mlの99%の強度のギ酸;勾配:0.0分の95%のA→6.0分の5%のA→7.5分の5%のA;オーブン:50℃;流速:0.35ml/分;UV検出:210−400nm。
方法10(LC−MS):
装置:Agilent 1200シリーズ;カラム:Agilent Eclipse XDB−C18 5μ 4.6mm×150mm;予備カラム:Phenomenex KrudKatcher Disposable Pre−Column;注入容積:5μl;溶出剤A:1lの水+0.01%のトリフルオロ酢酸;溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.01%のトリフルオロ酢酸;勾配:0.00分の10%のB→1.00分の10%のB→1.50分の90%のB→5.5分の10%のB;流速:2ml/分;カラム温度:30℃。
装置:Agilent 1200シリーズ;カラム:Agilent Eclipse XDB−C18 5μ 4.6mm×150mm;予備カラム:Phenomenex KrudKatcher Disposable Pre−Column;注入容積:5μl;溶出剤A:1lの水+0.01%のトリフルオロ酢酸;溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.01%のトリフルオロ酢酸;勾配:0.00分の10%のB→1.00分の10%のB→1.50分の90%のB→5.5分の10%のB;流速:2ml/分;カラム温度:30℃。
全ての反応物または試薬(その調製は、下に明確には記載されていない)に関して、それらは、一般的に入手可能な供給源から市販されている。全ての他の反応物または試薬(reacent)(その調製は、同様に、下には記載されておらず、市販はされていないかまたは一般的には入手できない供給源から得られた)に関して、それらの調製を記載している公表文献に対して言及する。
方法11(LC−MS):
装置:Waters ACQUITY SQD UPLCシステム;カラム:Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 30×2mm;溶出剤A:1lの水+0.25mlの99%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.25mlの99%の強度のギ酸;勾配:0.0分の90%のA →1.2分の5%のA→2.0分の5%のA オーブン:50℃;流速:0.60ml/分;UV検出:208−400nm。
装置:Waters ACQUITY SQD UPLCシステム;カラム:Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 30×2mm;溶出剤A:1lの水+0.25mlの99%の強度のギ酸、溶出剤B:1lのアセトニトリル+0.25mlの99%の強度のギ酸;勾配:0.0分の90%のA →1.2分の5%のA→2.0分の5%のA オーブン:50℃;流速:0.60ml/分;UV検出:208−400nm。
方法12(HPLC):
装置:カラムオーブンおよびDADを備えたAgilent 1200シリーズ;カラム:Merck Chromolith SpeedROD RP−18e,50mm×4.6mm;Ord.No.:1.51450.0001;予備カラム:Merck Chromolith Guard Cartridge Kit(カートリッジ キット)RP−18e,5mm×4.6mm;Ord.No.:1.51470.0001;溶出剤A:水に含有される70%のHClO4(4ml/リットル)、溶出剤B:アセトニトリル;勾配:0.00分の5%のB→0.50分の5%のB→3.00分の95%のB→4.00分の95%のB;流速:5ml/分;カラム温度:30℃。
装置:カラムオーブンおよびDADを備えたAgilent 1200シリーズ;カラム:Merck Chromolith SpeedROD RP−18e,50mm×4.6mm;Ord.No.:1.51450.0001;予備カラム:Merck Chromolith Guard Cartridge Kit(カートリッジ キット)RP−18e,5mm×4.6mm;Ord.No.:1.51470.0001;溶出剤A:水に含有される70%のHClO4(4ml/リットル)、溶出剤B:アセトニトリル;勾配:0.00分の5%のB→0.50分の5%のB→3.00分の95%のB→4.00分の95%のB;流速:5ml/分;カラム温度:30℃。
出発化合物および中間体:
出発化合物1
(2R,3R)−3−[(2S)−1−(tert−ブトキシカルボニル)ピロリジン−2−イル]−3−メトキシ−2−メチルプロパン酸(Boc−ドラプロイン)
表題の化合物は、文献の方法によって様々な方法で調製され得る;例えば、Pettitら、Synthesis 1996,719;Shioiriら、Tetrahedron Lett.1991,32,931;Shioiriら、Tetrahedron 1993,49,1913;Kogaら、Tetrahedron Lett.1991,32,2395;Vidalら、Tetrahedron 2004,60,9715;Poncetら、Tetrahedron 1994,50,5345を参照のこと。これは、遊離の酸として、またはジシクロヘキシルアミンとの1:1の塩として調製された。
出発化合物1
(2R,3R)−3−[(2S)−1−(tert−ブトキシカルボニル)ピロリジン−2−イル]−3−メトキシ−2−メチルプロパン酸(Boc−ドラプロイン)
出発化合物2a
tert−ブチル(3R,4S,5S)−3−メトキシ−5−メチル−4−(メチルアミノ)ヘプタノエートヒドロクロライド
(ドライソロイシン−OtBu×HCl)
tert−ブチル(3R,4S,5S)−3−メトキシ−5−メチル−4−(メチルアミノ)ヘプタノエートヒドロクロライド
(ドライソロイシン−OtBu×HCl)
出発化合物2b
tert−ブチル(3R,4S,5S)−3−メトキシ−5−メチル−4−(メチルアミノ)ヘプタノエート(ドライソロイシン−OtBu)
tert−ブチル(3R,4S,5S)−3−メトキシ−5−メチル−4−(メチルアミノ)ヘプタノエート(ドライソロイシン−OtBu)
出発化合物3
Nα−(tert−ブトキシカルボニル)−N−ヒドロキシル、−フェニルアラニンアミド
Nα−(tert−ブトキシカルボニル)−N−ヒドロキシル、−フェニルアラニンアミド
収率:750mg(理論値の75%)
LC−MS(方法3):Rt=1.67分;MS(ESIpos):m/z=281(M+H)+。
出発化合物4
1,2−オキサゾリジンヒドロクロライド
1,2−オキサゾリジンヒドロクロライド
出発化合物5
1,2−オキサジナンヒドロクロライド
1,2−オキサジナンヒドロクロライド
出発化合物6
2−オキサ−3−アザビシクロ[2.2.2]オクト−5−エン
2−オキサ−3−アザビシクロ[2.2.2]オクト−5−エン
収率:149mg(理論値の89%)
出発化合物7
tert−ブチル(1S,2R)−1−(ヒドロキシカルバモイル)−2−フェニルシクロプロピルカルバメート
tert−ブチル(1S,2R)−1−(ヒドロキシカルバモイル)−2−フェニルシクロプロピルカルバメート
収率:339mg(理論値の59%)
LC−MS(方法1):Rt=0.82分;MS(ESIpos):m/z=293(M+H)+。
中間体1
tert−ブチル(3R,4S,5S)−4−[{N−[(ベンジルオキシ)カルボニル]−L−バリル}(メチル)アミノ]−3−メトキシ−5−メチルヘプタノエート
tert−ブチル(3R,4S,5S)−4−[{N−[(ベンジルオキシ)カルボニル]−L−バリル}(メチル)アミノ]−3−メトキシ−5−メチルヘプタノエート
LC−MS(方法2):Rt=1.59分;MS(ESIpos):m/z=493(M+H)+。
中間体2
tert−ブチル(3R,4S,5S)−3−メトキシ−5−メチル−4−[メチル(L−バリル)アミノ]ヘプタノエート
tert−ブチル(3R,4S,5S)−3−メトキシ−5−メチル−4−[メチル(L−バリル)アミノ]ヘプタノエート
HPLC(方法5):Rt=1.59分;
LC−MS(方法1):Rt=0.74分;MS(ESIpos):m/z=359(M+H)+。
中間体3
N−[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)カルボニル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−tert−ブトキシ−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)カルボニル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−tert−ブトキシ−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収率:9.1g(定量的、60%という純度)
HPLC(方法5):Rt=2.7分;
LC−MS(方法2):Rt=1.99分;MS(ESIpos):m/z=694(M+H)+。
中間体4
N−[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)カルボニル]−N−メチル−L−バリル−N−[(2R,3S,4S)−1−カルボキシ−2−メトキシ−4−メチルhexan−3−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)カルボニル]−N−メチル−L−バリル−N−[(2R,3S,4S)−1−カルボキシ−2−メトキシ−4−メチルhexan−3−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.3分;MS(ESIpos):m/z=638(M+H)+。
中間体5
tert−ブチル(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イルカルバメート
tert−ブチル(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イルカルバメート
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法2):Rt=1.62分;MS(ESIpos):m/z=235(M−C4H8−CO2+H)+。
中間体6
(2S)−2−アミノ−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−3−フェニルプロパン−1−オントリフルオロアセテート
(2S)−2−アミノ−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−3−フェニルプロパン−1−オントリフルオロアセテート
HPLC(方法5):Rt=0.45分;
LC−MS(方法3):Rt=1.09分;MS(ESIpos):m/z=235(M+H)+。
中間体7
(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−N−[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパンアミドトリフルオロアセテート
(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−N−[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパンアミドトリフルオロアセテート
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=1.12分;MS(ESIpos):m/z=504(M+H)+。
503mg(1mmol)のこの中間体を、20mlのジクロロメタン中に採取して、10mlのトリフルオロ酢酸を添加して、この混合物をRTで30分間攪拌した。引き続き、この反応混合物を、減圧下で濃縮して、ジクロロメタンで再蒸留した。残りの残渣を、酢酸エチルからn−ペンタンを用いて沈殿して、その溶媒をデカントした。このように得られた残渣を、水中に溶解して、酢酸エチルと振盪することによって抽出して、その水相を、引き続き凍結乾燥した。この方法では、462mg(理論値の89%)の表題の化合物を無色の泡状物として得た。
HPLC(方法12):Rt=1.53分;
LC−MS(方法11):Rt=0.57分;MS(ESIpos):m/z=404(M+H)+。
中間体8
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(2R,3S,4S)−1−カルボキシ−2−メトキシ−4−メチルヘキサン−3−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(2R,3S,4S)−1−カルボキシ−2−メトキシ−4−メチルヘキサン−3−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法6):Rt=2.2分;
LC−MS(方法2):Rt=1.32分;MS(ESIpos):m/z=516(M+H)+。
中間体9
tert−ブチル(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−カルボン酸塩
tert−ブチル(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−カルボン酸塩
LC−MS(方法2):Rt=1.25分;MS(ESIpos):m/z=516(M+H)+。
中間体10
N−[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)カルボニル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−2−カルボキシ−1−メトキシプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)カルボニル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−2−カルボキシ−1−メトキシプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=2.40分;
LC−MS(方法1):Rt=1.38分;MS(ESIpos):m/z=807(M+H)+。
中間体11
N−[(ベンジルオキシ)カルボニル]−N−メチル−L−トレオニル−N−[(2R,3S,4S)−1−カルボキシ−2−メトキシ−4−メチルヘキサン−3−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[(ベンジルオキシ)カルボニル]−N−メチル−L−トレオニル−N−[(2R,3S,4S)−1−カルボキシ−2−メトキシ−4−メチルヘキサン−3−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=2.17分。
283mg(0.466mmol)のこの中間体を、5mlのジクロロメタン中に採取して、5mlの無水トリフルオロ酢酸を添加した。この混合物をRTで2時間撹拌した。引き続き、この反応混合物を、高真空下で濃縮し、残りの残渣を、分取HPLCによって精製した。これによって156mg(理論値の61%)の表題の化合物を無色の泡状物として得た。
HPLC(方法5):Rt=1.50分;
LC−MS(方法2):Rt=1.09分;MS(ESIpos):m/z=552(M+H)+。
中間体12
ベンジル N−{(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}−L−フェニルアラニナートトリフルオロアセテート
ベンジル N−{(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}−L−フェニルアラニナートトリフルオロアセテート
収率:650mg(2段階にまたがって94%)
HPLC(方法6):Rt=1.76分;
LC−MS(方法2):Rt=1.68分;MS(ESIpos):m/z=425(M+H)+。
中間体13
ベンジル(βS)−N−{(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}−β−メチル−L−フェニルアラニナートトリフルオロアセテート
ベンジル(βS)−N−{(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}−β−メチル−L−フェニルアラニナートトリフルオロアセテート
HPLC(方法6):Rt=2.3分;
LC−MS(方法1):Rt=1.36分;MS(ESIpos):m/z=539(M+H)+。
230mg(0.42mmol)のこの中間体を、5mlのジクロロメタン中に採取し、5mlのトリフルオロ酢酸を添加し、この混合物をRTで30分間撹拌した。引き続き、この反応混合物を、減圧下で濃縮した。残りの残渣を、反応混合物をさらに減圧下で乾燥し、次いでアセトニトリル/水から凍結乾燥した。この方法では、230mg(定量的)の表題の化合物を得た。
HPLC(方法6):Rt=1.6分。
中間体14
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセテート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセテート
HPLC(方法5):Rt=2.73分;
LC−MS(方法4):Rt=3.19分;MS(ESIpos):m/z=1023(M+H)+。
46mg(0.045mmol)のこの中間体を、4mlのDMF中に溶解した。1mlのピペリジンを添加した後、この反応混合物を、RTで1時間撹拌した。引き続き、この反応混合物を、減圧下で濃縮して、その残渣を分取HPLCによって精製した(溶出剤:アセトニトリル+0.01%のTFA/水+0.01%のTFA)。22mg(理論値の54%)の表題の化合物を無色の泡状物として得た。
HPLC(方法5):Rt=1.68分;
LC−MS(方法2):Rt=1.03分;MS(ESIpos):m/z=801(M+H)+
1H NMR(600MHz,DMSO−d6):δ=8.8(m,2H)、8.7(m,1H)、8.42および8.15(2d,1H)、7.3−7.1(m,5H)、5.12および4.95(2m,1H)、4.70および4.62(2m,1H)、4.62および4.50(2t,1H)、4.1−3.9(m,3H)、3.85(m,1H)、3.75−3.6(m,2H)、3.23,3.18,3.17,3.14,3.02および2.96(6s,9H)、3.1−2.9および2.75(2m,2H)、2.46(m,3H)、2.4−2.1(m,2H)、2.05(br.m,2H)、1.85−1.55(br.m,6H)、1.5−1.2(br.m,3H)、1.1−0.8(m,18H)、0.75(t,3H)[さらなるシグナルはH2Oピーク下に隠れている]。
中間体15
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S,3S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセテート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S,3S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセテート
HPLC(方法5):Rt=2.77分;
LC−MS(方法1):Rt=1.5分;MS(ESIpos):m/z=1037(M+H)+。
220mg(0.212mmol)のこの中間体を、5mlのDMF中に溶解した。1mlのピペリジンを添加した後、この反応混合物をRTで1時間撹拌した。引き続き、この反応混合物を、減圧下で濃縮して、その残渣を分取HPLCによって精製した(溶出剤:アセトニトリル+0.01%のTFA/水+0.01%のTFA)。91mg(理論値の46%)の表題の化合物を無色の泡状物として得た。
HPLC(方法5):Rt=1.71分;
LC−MS(方法1):Rt=0.9分;MS(ESIpos):m/z=815(M+H)+
1H NMR(600MHz,DMSO−d6):δ=8.87および8.80(2d,2H)、8.75(m,1H)、8.40および7.98(2d,1H)、7.3−7.1(m,5H)、5.45および5.2(2t,1H)、4.78および4.62(2m,1H)、4.73および4.58(2t,1H)、4.2−4.0(m,3H)、3.7−3.6(m,1H)、3.35,3.20,3.18,3.14,3.12および3.00(6s,9H)、3.1および2.95(2m,2H)、2.46(m,3H)、2.4−2.0(m,4H)、1.9−1.6(m,4H)、1.6−1.2(m,5H)、1.1−0.75(m,21H)、0.80(t,3H)[さらなるシグナルはH2Oピークの下に隠れている]。
中間体16
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセテート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセテート
470mg(0.74mmol)のN−[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)カルボニル]−N−メチル−L−バリル−N−[(2R,3S,4S)−1−カルボキシ−2−メトキシ−4−メチルヘキサン−3−イル]−N−メチル−L−バリンアミド(中間体4)を、57mlのDMF中に採取して、連続して、390mg(約0.74mmol)の上記で得た(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−N−[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパンアミドトリフルオロアセテート、336mg(0.88mmol)のO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩(HATU)および423μl(2.4mmol)のN,N−ジイソプロピルエチルアミンと混合した。この混合物をRTで2時間撹拌した。この反応混合物を、次いで半飽和の塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルの混合物中に注いだ。この有機相を取り出して、連続して、飽和炭酸水素ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液を用いて洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して、濃縮した。その残渣を分取HPLCによって精製した。これによって453mg(理論値の59%)のFmoc保護の中間体N−[(9H−フルオレン−9−イルメトキシ)カルボニル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドを得た。
HPLC(方法5):Rt=2.58分;
LC−MS(方法1):Rt=3.10分;MS(ESIpos):m/z=1035(M+H)+。
453mg(0.438mmol)のこの中間体を、24mlのDMF中に溶解した。2.4mlのピペリジンを添加した後、この反応混合物をRTで30分間撹拌した。引き続き、この反応混合物を、減圧下で濃縮して、その残渣を、分取HPLC(溶出剤:水の中に含有されるアセトニトリル/0.1%のTFA)によって精製した。260mg(理論値の64%)の表題の化合物を無色の泡状物として得た。
HPLC(方法5):Rt=1.64分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=813(M+H)+
1H NMR(400MHz,DMSO−d6):δ=8.8(m,2H)、8.65(m,2H)、7.3−7.1(m,5H)、4.8−4.05(m,2H)、4.0および3.82(2m,2H)、3.8−3.5(m,8H)、3.32,3.29,3.20,3.19,3.12および3.00(6s,9H)、2.65(t,1H)、2.5−2.45(m,3H)、2.4−1.3(m,15H)、1.15−0.85(m,18H)、0.8および0.75(2d,3H)[さらなるシグナルは、H2Oピークの下に隠れている]。
中間体17
N−ベンジル−N−メチル−L−フェニルアラニンアミドトリフルオロアセテート
N−ベンジル−N−メチル−L−フェニルアラニンアミドトリフルオロアセテート
HPLC(方法6):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=1.14分;MS(ESIpos):m/z=369(M+H)+。
1108mg(3,007mmol)のこの中間体を、30mlのジクロロメタン中に採取して、10mlのトリフルオロ酢酸を添加し、この混合物をRTで30分間撹拌した。引き続き、この反応混合物を、減圧下で濃縮して、残りの残渣を、ジクロロメタンとともに撹拌して、溶媒を蒸留した。その残渣を、ペンタンを用いて2回撹拌し、その溶媒を各時点で再度デカントして、表題の化合物を最終的に高真空下で乾燥した。1075mg(理論値の93%)の表題の化合物を、このようにして樹脂として得た。
HPLC(方法6):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.6分;MS(ESIpos):m/z=269(M+H)+。
中間体18
N−ベンジル−Nα−{(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}−N−メチル−L−フェニルアラニンアミドトリフルオロアセテート
N−ベンジル−Nα−{(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}−N−メチル−L−フェニルアラニンアミドトリフルオロアセテート
HPLC(方法6):Rt=2.2分;
LC−MS(方法2):Rt=1.22分;MS(ESIpos):m/z=538(M+H)+。
168mg(0.312mmol)のこの中間体を、15mlのジクロロメタン中に採取して、3mlのトリフルオロ酢酸を添加し、この混合物をRTで30分間撹拌した。引き続き、この反応混合物を、減圧下で濃縮した。その残りの残渣を、最初にジクロロメタンと、次いでジエチルエーテルとともに撹拌し、その溶媒を、各時点で再度蒸留した。高真空下での乾燥後、170mg(理論値の99%)の表題の化合物を樹脂として得た。
HPLC(方法6):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.73分;MS(ESIpos):m/z=438(M+H)+。
中間体19
メチルN−{(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}−L−フェニルアラニナートトリフルオロアセテート
メチルN−{(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}−L−フェニルアラニナートトリフルオロアセテート
HPLC(方法5):Rt=0.6分;
LC−MS(方法3):Rt=1.17分;MS(ESIpos):m/z=349(M+H)+。
中間体20
ベンジル N−{(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}−L−トリプトファナートトリフルオロアセテート
ベンジル N−{(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}−L−トリプトファナートトリフルオロアセテート
HPLC(方法6):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.8分;MS(ESIpos):m/z=464(M+H)+。
中間体21
ベンジル(1S,2R)−1−({(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}アミノ)−2−フェニルシクロプロパンカルボキシレートトリフルオロアセテート
ベンジル(1S,2R)−1−({(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}アミノ)−2−フェニルシクロプロパンカルボキシレートトリフルオロアセテート
HPLC(方法5):Rt=1.5分;
LC−MS(方法2):Rt=0.93分;MS(ESIpos):m/z=437(M+H)+。
中間体22
6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−N’−メチルヘキサンヒドラジドトリフルオロアセテート
6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−N’−メチルヘキサンヒドラジドトリフルオロアセテート
引き続き、129mg(380μmol)を、8mlのジクロロメタン中に含まれる2mlのトリフルオロ酢酸で脱ブロックした。RTで1時間撹拌した後、この反応混合物を、減圧下で濃縮した。その残渣を、アセトニトリル/水から凍結乾燥して、これを125mg(理論値の83%)の表題の化合物無色の泡状物として残した。
LC−MS(方法1):Rt=0.38分;MS(ESIpos):m/z=240(M+H)+。
中間体23
N−(2−アミノエチル)−4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−N−メチルブタンアミドトリフルオロアセテート
N−(2−アミノエチル)−4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−N−メチルブタンアミドトリフルオロアセテート
HPLC(方法12):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.71分;MS(ESIpos):m/z=340(M+H)+。
引き続き、保護された中間体の全体の量を、5mlのジクロロメタン中の1mlのトリフルオロ酢酸を用いて脱ブロックして、28mg(理論値の77%)の表題の化合物を得た。
LC−MS(方法3):Rt=0.75分;MS(ESIpos):m/z=240(M+H)+。
中間体24
4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−N−[2−(メチルアミノ)エチル]ブタンアミドトリフルオロアセテート
4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−N−[2−(メチルアミノ)エチル]ブタンアミドトリフルオロアセテート
HPLC(方法12):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.77分;MS(ESIpos):m/z=340(M+H)+。
引き続き、全体の量を5mlのジクロロメタン中に含まれる1mlのトリフルオロ酢酸を用いて脱保護して、45mg(理論値の69%)の表題の化合物を得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.19分;MS(ESIpos):m/z=240(M+H)+。
中間体25
ベンジル(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノエートトリフルオロアセテート
ベンジル(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノエートトリフルオロアセテート
引き続き、これらの1170mgを、15mlのジクロロメタンの中に含有される5mlのトリフルオロ酢酸で直ちに脱保護した。RTで15分間撹拌した後、この反応混合物を、減圧下で濃縮した。その残渣を、ジオキサンから凍結乾燥した。高真空下での乾燥後、1333mg(理論値の84%)の表題の化合物が、黄色の油状物として残った。
HPLC(方法6):Rt=1.5分;
LC−MS(方法1):Rt=0.59分;MS(ESIpos):m/z=278(M+H)+。
中間体26
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−2−カルボキシ−1−メトキシプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−2−カルボキシ−1−メトキシプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.56分;MS(ESIpos):m/z=775(M+H)+。
この得られた中間体の全量を、メタノールおよびジクロロメタン(20:1)の25mlの混合物中に採取して、ベンジルエステル基を、活性炭上の10%パラジウムを触媒として用いて標準の水素圧下での水素化によって除去した。RTで30分間の撹拌後、この触媒をろ過して、この濾液を、減圧下で濃縮した。これによって、803mg(理論値の91%)の表題の化合物を、白色の固体として得た。
HPLC(方法6):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=1.24分;MS(ESIpos):m/z=685(M+H)+。
中間体27
(1S,2R)−1−アミノ−2−フェニル−N−プロピルシクロプロパンカルボキサミドトリフルオロアセテート
(1S,2R)−1−アミノ−2−フェニル−N−プロピルシクロプロパンカルボキサミドトリフルオロアセテート
HPLC(方法6):Rt=1.2分;
LC−MS(方法1):Rt=0.52分;MS(ESIpos):m/z=219(M+H)+。
中間体28
エチル(1S,2R)−1−アミノ−2−フェニルシクロプロパンカルボキシレートトリフルオロアセテート
エチル(1S,2R)−1−アミノ−2−フェニルシクロプロパンカルボキシレートトリフルオロアセテート
LC−MS(方法1):Rt=0.50分;MS(ESIpos):m/z=206(M+H)+。
中間体29
4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−2,2−ジメチルブタン酸
4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−2,2−ジメチルブタン酸
LC−MS(方法1):Rt=0.64分;m/z=212(M+H)+。
中間体30
tert−ブチル2−[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−2,2−ジメチルブタノイル]ヒドラジンカルボン酸塩
tert−ブチル2−[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−2,2−ジメチルブタノイル]ヒドラジンカルボン酸塩
LC−MS(方法1):Rt=0.71分;m/z=324(M−H)−.
中間体31
4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−2,2−ジメチルブタンヒドラジドトリフルオロアセテート
4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−2,2−ジメチルブタンヒドラジドトリフルオロアセテート
LC−MS(方法1):Rt=0.36分;m/z=226(M+H)+。
中間体32
アダマンタン−1−イルメチルN−(tert−ブトキシカルボニル)−L−フェニルアラニナート
アダマンタン−1−イルメチルN−(tert−ブトキシカルボニル)−L−フェニルアラニナート
LC−MS(方法2):Rt=1.84分;m/z=414(M+H)+。
中間体33
アダマンタン−1−イルメチルL−フェニルアラニナートヒドロクロライド
アダマンタン−1−イルメチルL−フェニルアラニナートヒドロクロライド
LC−MS(方法1):Rt=0.82分;m/z=314(M+H)+。
中間体34
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(アダマンタン−1−イルメトキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(アダマンタン−1−イルメトキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
中間体35
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(アダマンタン−1−イルメトキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセテート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(アダマンタン−1−イルメトキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセテート
LC−MS(方法1):Rt=1.14分;m/z=880(M+H)+。
中間体36
tert−ブチル(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−フェニルプロパン−2−イルカルバメート
tert−ブチル(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−フェニルプロパン−2−イルカルバメート
LC−MS(方法1):Rt=1.28分;m/z=342(M+H)+。
中間体37
(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−フェニルプロパン−2−アミンヒドロクロライド
(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−フェニルプロパン−2−アミンヒドロクロライド
LC−MS(方法1):Rt=0.65分;m/z=242(M+H)+。
中間体38
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.51分;m/z=909(M+H)+。
中間体39
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセテート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセテート
LC−MS(方法1):Rt=0.97分;m/z=809(M+H)+。
中間体40
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−ヒドロキシ−1−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−ヒドロキシ−1−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.65分;
LC−MS(方法1):Rt=0.77分;MS(ESIpos):m/z=718(M+H)+。
中間体41
3−{2−[2−(2−アミノエトキシ)エトキシ]エトキシ}プロパン酸トリフルオロアセテート
3−{2−[2−(2−アミノエトキシ)エトキシ]エトキシ}プロパン酸トリフルオロアセテート
181mg(理論値の100%)の表題の化合物を得た。
MS(EI):m/z 222(M+H)+。
中間体42
3−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エトキシ)プロパン酸
3−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エトキシ)プロパン酸
LC−MS(方法1):Rt=0.53分;m/z=302(M+H)+。
中間体43
tert−ブチル15−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−4−オキソ−7,10,13−トリオキサ−2,3−ジアザペンタデカン−1−エート
tert−ブチル15−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−4−オキソ−7,10,13−トリオキサ−2,3−ジアザペンタデカン−1−エート
60mg(理論値の33%)の表題の化合物を得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.66分;m/z=416(M+H)+。
中間体44
3−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エトキシ)プロパンヒドラジドトリフルオロアセテート
3−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エトキシ)プロパンヒドラジドトリフルオロアセテート
62mg(理論値の100%)の表題の化合物を得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.35分;m/z=316(M+H)+。
中間体45
ベンジル(1S,2R)−1−アミノ−2−フェニルシクロプロパンカルボキシレートトリフルオロアセテート
ベンジル(1S,2R)−1−アミノ−2−フェニルシクロプロパンカルボキシレートトリフルオロアセテート
LC−MS(方法1):Rt=0.72分;MS(ESIpos):m/z=268(M+H)+。
中間体46
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−フェニルエチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−フェニルエチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.49分;MS(ESIpos):m/z=922(M+H)+。
100mg(0.11mmol)のこの中間体を、15mlのメタノール中に採取して、ベンジルエステル基を、活性炭上の10%パラジウムを触媒として用いて標準水素圧下での水素化によって除去した。RTで1時間の攪拌後、その触媒を濾過して、その濾液を減圧下で濃縮した。ジオキサンからの凍結乾燥後、85mg(理論値の94%)の表題の化合物を固体として得た。
HPLC(方法12):Rt=2.4分;
LC−MS(方法1):Rt=1.24分;MS(ESIpos):m/z=832(M+H)+。
中間体47
N−ベンジル−L−トリプトファンアミドトリフルオロアセテート
N−ベンジル−L−トリプトファンアミドトリフルオロアセテート
HPLC(方法12):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.66分;MS(ESIpos):m/z=294(M+H)+。
中間体48
(1S,2R)−1−アミノ−2−フェニルシクロプロパンカルボキサミドトリフルオロアセテート
(1S,2R)−1−アミノ−2−フェニルシクロプロパンカルボキサミドトリフルオロアセテート
HPLC(方法6):Rt=0.38分;
LC−MS(方法1):Rt=0.20分;MS(ESIpos):m/z=177(M+H)+。
中間体49
Nα−{(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}−L−トリプトファンアミドトリフルオロアセテート
Nα−{(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパノイル}−L−トリプトファンアミドトリフルオロアセテート
HPLC(方法5):Rt=1.4分;
LC−MS(方法1):Rt=0.92分;MS(ESIpos):m/z=473(M+H)+。
中間体50
4−ニトロフェニル 2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチルカルバマート
4−ニトロフェニル 2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチルカルバマート
標準条件下でBoc保護基を除去後、652mgの1−(2−アミノエチル)−1H−ピロール−2,5−ジオンをトリフルオロアセタートとして得た。
112.9mg(543μmol)のニトロフェニルクロロホルマートを30mlのTHF中に溶解し、100mg(271.6μmol)の1−(2−アミノエチル)−1H−ピロール−2,5−ジオントリフルオロアセタートを添加後、混合物をRTで30分間攪拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮乾固後、ジエチルエーテルを使ってスラリー化した。吸引濾過および乾燥後、60mg(理論値の95%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法5):Rt=0.65分;
LC−MS(方法1):Rt=0.74分;MS(ESIpos):m/z=306(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=0.65分;
LC−MS(方法1):Rt=0.74分;MS(ESIpos):m/z=306(M+H)+。
中間体51
(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エタンアミントリフルオロアセタート
(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エタンアミントリフルオロアセタート
LC−MS(方法12):Rt=1.15分;MS(ESIpos):m/z=366(M+H)+。
217mg(0.59mmol)の前記中間体を3mlのジクロロメタンに溶解し、0.6mlのトリフルオロ酢酸を加え、混合物をRTで30分間攪拌した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮した。残った反応混合物を、残渣をさらに減圧下乾燥後、ジオキサンから凍結乾燥した。この結果、214mg(理論値の90%)の標記化合物を得た。
LC−MS(方法11):Rt=0.62分;MS(ESIpos):m/z=266(M+H)+。
LC−MS(方法11):Rt=0.62分;MS(ESIpos):m/z=266(M+H)+。
中間体52
(1R)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エタンアミントリフルオロアセタート
(1R)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エタンアミントリフルオロアセタート
LC−MS(方法2):Rt=1.36分;MS(ESIpos):m/z=366(M+H)+。
219mg(0.6mmol)の前記中間体を3mlのジクロロメタン中に溶解し、0.6mlのトリフルオロ酢酸を加え、混合物をRTで30分間攪拌した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮した。残りの反応混合物残渣を減圧下でさらに乾燥した後、ジオキサンから凍結乾燥した。この結果、196mg(理論値の86%)の標記化合物を固体として得た。
HPLC(方法10):Rt=2.41分。
HPLC(方法10):Rt=2.41分。
中間体53
(2S)−1−(ベンジルスルホニル)−3−フェニルプロパン−2−アミン
(2S)−1−(ベンジルスルホニル)−3−フェニルプロパン−2−アミン
HPLC(方法10):Rt=2.63分
LC−MS(方法1):Rt=0.67分;MS(ESIpos):m/z=258(M+H)+。
上記で得られた粗製中間体を2mlの30%過酸化水素溶液および5mlのギ酸に溶解し、混合物をRTで12時間混合した。その後、反応混合物を飽和硫酸ナトリウム溶液に加え、酢酸エチルで3回抽出した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた粗生成物を分取HPLCにより精製した。これにより、343mg(理論値の61%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法10):Rt=2.40分;
LC−MS(方法12):Rt=0.65分;MS(ESIpos):m/z=290(M+H)+。
HPLC(方法10):Rt=2.40分;
LC−MS(方法12):Rt=0.65分;MS(ESIpos):m/z=290(M+H)+。
中間体54
(2S,3E)−1,4−ジフェニルブタ−3−エン−2−アミン
(2S,3E)−1,4−ジフェニルブタ−3−エン−2−アミン
HPLC(方法10):Rt=2.46分;
LC−MS(方法12):Rt=0.75分;MS(ESIpos):m/z=224(M+H)+。
得られたE/Zジアステレオマー混合物を2mlのエタノールおよび0.2mlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンに溶解し、HPLCを使ってキラル相を分離した[カラム:Daicel Chiral pak AD−H、5μM250mMx20mm、溶出剤:ヘキサン/(エタノール+0.2%ジエチルアミン)50:50v/v;UV検出:220nm;温度:30℃]。該当する画分をロータリーエバポレーターで濃縮し、残渣を減圧下乾燥して、45mgの標記化合物を得た。
1H NMR(400MHz,DMSO−d6):δ[ppm]=2.62−2.83(m,2H)、3.52−3.71(m,1H)、6.18−6.30(m,1H)、6.34−6.46(m,1H)、6.98−7.57(m,10H)[これ以外のシグナルは溶媒のピークで隠された]。
1H NMR(400MHz,DMSO−d6):δ[ppm]=2.62−2.83(m,2H)、3.52−3.71(m,1H)、6.18−6.30(m,1H)、6.34−6.46(m,1H)、6.98−7.57(m,10H)[これ以外のシグナルは溶媒のピークで隠された]。
中間体55
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
LC−MS(方法12):Rt=1.45分;MS(ESIpos):m/z=933(M+H)+。
その後、BOC保護基をトリフルオロ酢酸で除去することにより、22.4mg(理論値の98%)の標記化合物を得た。
LC−MS(方法11):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=833(M+H)+。
LC−MS(方法11):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=833(M+H)+。
中間体56
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1R)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1R)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
収量:17mg(理論値の64%)
HPLC(方法10):Rt=3.74分;
LC−MS(方法1):Rt=1.45分;MS(ESIpos):m/z=933(M+H)+。
その後、BOC保護基をトリフルオロ酢酸で除去することにより、17.1mg(理論値の99%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法10):Rt=2.55分;
LC−MS(方法11):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=833(M+H)+。
HPLC(方法10):Rt=2.55分;
LC−MS(方法11):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=833(M+H)+。
中間体57
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルスルホニル)−3−フェニルプロパン−2−yl]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルスルホニル)−3−フェニルプロパン−2−yl]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
収量:19.2mg(理論値の68%)
HPLC(方法10):Rt=3.5分;
LC−MS(方法12):Rt=1.41分;MS(ESIpos):m/z=957(M+H)+。
その後、BOC保護基をトリフルオロ酢酸で除去することにより、19.3mg(理論値の99%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法10):Rt=2.52分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=857(M+H)+。
HPLC(方法10):Rt=2.52分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=857(M+H)+。
中間体58
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3E)−1,4−ジフェニルブタ−3−エン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3E)−1,4−ジフェニルブタ−3−エン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
収量:15.1mg(理論値の58%)
HPLC(方法10):Rt=4.2分;
LC−MS(方法12):Rt=1.51分;MS(ESIpos):m/z=891(M+H)+。
その後、BOC保護基をトリフルオロ酢酸で除去することにより、15.7mg(理論値の99%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法10):Rt=2.62分;
LC−MS(方法12):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=791(M+H)+。
HPLC(方法10):Rt=2.62分;
LC−MS(方法12):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=791(M+H)+。
中間体61
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.64分;
LC−MS(方法9):Rt=4.76分;MS(ESIpos):m/z=899(M+H)+
1H NMR(500MHz,DMSO−d6):δ=8.95および8.8(2m,1H)、8.88および8.65(2s,1H)、7.4−7.1(m,5H)、5.0,4.78,4.65および4.55(4m,2H)、4.1−3.7(m,5H)、3.32,3.29,3.20,3.12,3.1および3.0(6s,9H)、2.75(m,2H)、2.63(t,1H)、2.4−2.2(m,4H)、2.1−1.2(m,12H)、1.2−0.8(m,16H)、0.75(m,3H)[これら以外のシグナルは、H2OおよびDMSOピークで隠された]。
中間体62
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:34mg(理論値の70%)
HPLC(方法5):Rt=1.64分;
LC−MS(方法9):Rt=4.77分;MS(ESIpos):m/z=887(M+H)+。
中間体63
N−(4−カルボキシベンジル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−カルボキシベンジル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:7.5mg(理論値の48%)
HPLC(方法5):Rt=1.75分;
LC−MS(方法1):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=947(M+H)+。
中間体64
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.68分;
LC−MS(方法9):Rt=4.86分;MS(ESIpos):m/z=927(M+H)+。
中間体65
N−(2−アミノエチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドビストリフルオロアセタート
N−(2−アミノエチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドビストリフルオロアセタート
収量:49mg(2段の反応を合わせて理論値の62%)
HPLC(方法5):Rt=1.58分;
LC−MS(方法2):Rt=1.05分;MS(ESIpos):m/z=844(M+H)+
1H NMR(600MHz,DMSO−d6):δ=8.25(m,1H)、8.45および8.15(2d,1H)、7.65−7.55(m,3H)、7.23−7.1(m,5H)、5.12および4.95(2m,1H)、4.72および4.62(2m,1H)、4.6および4.52(2t,1H)、4.2−3.8(m,4H)、3.7(d,1H)、3.23,3.20,3.19,3.18,3.03および2.98(6s,9H)、3.0−2.7(m,6H)、2.4−1.2(m,15H)、1.05,1.0,0.88および0.82(4d,6H)、0.92(m,6H)、0.73(m,6H)[これら以外のシグナルは、H2Oのピークで隠された]。
中間体66
N−(3−アミノプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−アミノプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:11mg(2段反応の理論値の41%)
HPLC(方法5):Rt=1.53分;
LC−MS(方法1):Rt=0.72分;MS(ESIpos):m/z=870(M+H)+。
中間体67
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(アダマンタン−1−イルメトキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(アダマンタン−1−イルメトキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.17分;m/z=967(M+H)+。
中間体68
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.01分;m/z=895(M+H)+。
中間体69
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.55分;m/z=1044(M+H)+。
57mg(0.055mmol)のこの中間体を5mlのDMF中の1.2mlのピペリジンで処理し、Fmoc保護基を除去した。分取HPLCを使った濃縮と精製後、39mg(理論値の76%)の遊離アミン中間体N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドをトリフルオロアセタートとして得た。
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=1.01分;m/z=822(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=1.01分;m/z=822(M+H)+。
37mg(0.045mmol)のこの中間体を5mlのジオキサン/水に溶解し、中間体66化合物の調製と同様に、ナトリウムシアノボロヒドリドの存在下、15%の4−オキソブタン酸水溶液と反応させた。16mg(理論値の39%)の標記化合物を無色発泡体の形で得た。
HPLC(方法6):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=1.01分;MS(ESIpos):m/z=908(M+H)+。
HPLC(方法6):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=1.01分;MS(ESIpos):m/z=908(M+H)+。
中間体70
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
30mg(0.032mmol)のこの化合物を6mlのジオキサン/水に溶解し、41μL(0.063mmol)の15%の4−オキソブタン酸水溶液を加えた。その後、反応混合物を100℃で1時間攪拌した。RTに冷却後、2.2mg(0.035mmol)のナトリウムシアノボロヒドリドを加え、約300μlの0.1N塩酸を加えることにより、混合物のpHを3に調節した。次いで、反応混合物を100℃でさらに2時間攪拌した。冷却後、追加の41μL(0.063mmol)の15%の4−オキソブタン酸溶液を加え、反応混合物を、再度、100℃で1時間攪拌した後、追加の2.2mg(0.035mmol)のナトリウムシアノボロヒドリドを添加し、約300μlの0.1N塩酸を使ってpHを3に戻した。その後、反応混合物を100℃でさらに2時間攪拌した。変換がそれでも不完全の場合は、この手続きを、3回繰り返した。最後に反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取HPLCで精製した。この結果、24mg(理論値の82%)の標記化合物を無色発泡体の形で得た。
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法9):Rt=5.15分;MS(ESIpos):m/z=922(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法9):Rt=5.15分;MS(ESIpos):m/z=922(M+H)+。
中間体71
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−3−{[(2S)−1−メトキシ−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−3−{[(2S)−1−メトキシ−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法6):Rt=1.9分;
LC−MS(方法2):Rt=1.06分;MS(ESIpos):m/z=832(M+H)+。
中間体72
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.45分;m/z=961(M+H)+。
50mg(52μmol)のこの中間体を9mlのジクロロメタン中の1mlのトリフルオロ酢酸で処理して、Boc保護基を除去した。分取HPLCを使って濃縮と精製後、29mg(理論値の57%)の遊離アミン中間体N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドをトリフルオロアセタートとして得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.99分;m/z=861(M+H)+。
LC−MS(方法1):Rt=0.99分;m/z=861(M+H)+。
29mg(0.03mmol)のこの中間体を6mlのジオキサン/水に溶解し、39μL(0.059mmol)の15%4−オキソブタン酸水溶液を加えた。その後、反応混合物を100℃で1時間攪拌した。RTに冷却後、2mg(0.033mmol)のナトリウムシアノボロヒドリドを添加し、約300μlの0.1N塩酸を加えることにより混合物のpHを3に調節した。次に、反応混合物を100℃でさらに2時間攪拌した。冷却後、追加の39μL(0.059mmol)の15%の4−オキソブタン酸溶液を加え、反応混合物を、再度、100℃で1時間攪拌した。その後、追加の2mg(0.033mmol)のナトリウムシアノボロヒドリドを添加した後、約300μlの0.1N塩酸を使って、pHを3に戻し、混合物を100℃でさらに2時間攪拌した。その後、反応混合物を半飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルの1:1混合物中に注ぎ込んだ。有機相を取り出し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥して、濃縮した。残渣を水/アセトニトリルから凍結乾燥して、27mg(理論値の94%)の標記化合物を無色発泡体の形で得た。
HPLC(方法5):Rt=2.2分;
LC−MS(方法9):Rt=5.04分;MS(ESIpos):m/z=947(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=2.2分;
LC−MS(方法9):Rt=5.04分;MS(ESIpos):m/z=947(M+H)+。
中間体73
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−({(2S)−1−[ベンジル(メチル)アミノ]−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル}アミノ)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−({(2S)−1−[ベンジル(メチル)アミノ]−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル}アミノ)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=2.2分;
LC−MS(方法9):Rt=5.01分;MS(ESIpos):m/z=921(M+H)+。
中間体74
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−({(1S,2R)−1−[(ベンジルオキシ)カルボニル]−2−フェニルシクロプロピル}アミノ)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−({(1S,2R)−1−[(ベンジルオキシ)カルボニル]−2−フェニルシクロプロピル}アミノ)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.52分;m/z=934(M+H)+。
35mgのこの中間体を5mlのジクロロメタン中の1mlのトリフルオロ酢酸で処理し、Boc保護基を除去した。濃縮およびジオキサン/水から凍結乾燥後、34mg(理論値の97%)の遊離アミン中間体N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−({(1S,2R)−1−[(ベンジルオキシ)カルボニル]−2−フェニルシクロプロピル}アミノ)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドをトリフルオロアセタートとして得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.91分;m/z=834(M+H)+。
LC−MS(方法1):Rt=0.91分;m/z=834(M+H)+。
次に、中間体66の量性と同様に、11mg(0.011mmol)のこの中間体を使って、ナトリウムシアノボロヒドリドの存在下で、4−オキソブタン酸と反応させて2.5mg(理論値の24%)の標記化合物を無色発泡体の形で得た。
HPLC(方法12):Rt=2.2分;
LC−MS(方法9):Rt=5.1分;MS(ESIpos):m/z=920(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=2.2分;
LC−MS(方法9):Rt=5.1分;MS(ESIpos):m/z=920(M+H)+。
中間体75
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S,2R)−2−フェニル−1−(プロピルカルバモイル)シクロプロピル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S,2R)−2−フェニル−1−(プロピルカルバモイル)シクロプロピル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法6):Rt=1.9分;
LC−MS(方法2):Rt=1.27分;MS(ESIpos):m/z=871(M+H)+。
中間体76
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−(エトキシカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−(エトキシカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法6):Rt=1.9分;
LC−MS(方法2):Rt=1.28分;MS(ESIpos):m/z=858(M+H)+。
中間体77
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法6):Rt=1.7分;
LC−MS(方法9):Rt=4.44分;MS(ESIpos):m/z=817(M+H)+
1H NMR(500MHz,DMSO−d6):δ=8.95および8.8(2m,1H)、8.25および8.0(2d,1H)、7.45,7.35および7.0(3s,broad,2H)、7.3−7.1(m,5H)、4.8−4.4(2m,3H)、3.95(m,1H)、3.82(m,1H)、3.72(d,1H)、3.22,3.18,3.15,3.05および3.00(5s,9H)、2.85−2.7(m,4H)、2.45−1.6(m,12H)、1.5−1.2(m,3H)、1.1−0.7(m、21H)[これらの他のシグナルは、溶媒のピークに隠された]。
中間体78
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:7.6mg(2段階で理論値の55%)
HPLC(方法6):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.7分;MS(ESIpos):m/z=901(M+H)+。
中間体79
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.43分;m/z=921(M+H)+。
29mgのこの中間体を、6mlのジクロロメタン中の1mlのトリフルオロ酢酸で処理し、Boc保護基を除去した。濃縮およびジオキサン/水から凍結乾燥後、30mg(定量収量)の遊離アミン中間体N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドをトリフルオロアセタートとして得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.95分;m/z=821(M+H)+。
LC−MS(方法1):Rt=0.95分;m/z=821(M+H)+。
次に、中間体61の調製と同様に、17mg(0.018mmol)のこの中間体を使って、ナトリウムシアノボロヒドリドの存在下で4−オキソブタン酸と反応させ、13mg(理論値の80%)の標記化合物を無色発泡体の形で得た。
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法9):Rt=4.97分;MS(ESIpos):m/z=907(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法9):Rt=4.97分;MS(ESIpos):m/z=907(M+H)+。
中間体80
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法2):Rt=1.13分;MS(ESIpos):m/z=946(M+H)+。
中間体81
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−カルバモイル−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−カルバモイル−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法9):Rt=4.64分;MS(ESIpos):m/z=829(M+H)+。
中間体82
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法9):Rt=4.49分;MS(ESIpos):m/z=856(M+H)+。
中間体83
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:5mg(理論値の25%)
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法11):Rt=0.72分;MS(ESIpos):m/z=884(M+H)+。
中間体84
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(モルホリン−4−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(モルホリン−4−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法9):Rt=4.58分;MS(ESIpos):m/z=887(M+H)+。
中間体85
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3R)−1−(ベンジルアミノ)−3−ヒドロキシ−1−オキソブタン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3R)−1−(ベンジルアミノ)−3−ヒドロキシ−1−オキソブタン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.54分;
LC−MS(方法9):Rt=4.49分;MS(ESIpos):m/z=861(M+H)+。
中間体86
4−{[(2S)−1−{[(2S)−1−{[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−tert.−ブトキシ−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル](メチル)アミノ}−3−メチルブタン−2−イル]アミノ}−3−メチル−1−オキソブタン−2−イル](メチル)アミノ}ブタン酸
4−{[(2S)−1−{[(2S)−1−{[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−tert.−ブトキシ−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル](メチル)アミノ}−3−メチルブタン−2−イル]アミノ}−3−メチル−1−オキソブタン−2−イル](メチル)アミノ}ブタン酸
HPLC(方法5):Rt=2.0分;
LC−MS(方法9):Rt=5.05分;MS(ESIpos):m/z=874(M+H)+。
中間体87
4−{[(2S)−1−{[(2S)−1−{[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−tert.−ブトキシ1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル](メチル)アミノ}−3−メチルブタン−2−イル]アミノ}−3−メチル−1−オキソブタン−2−イル](メチル)アミノ}ブタン酸
4−{[(2S)−1−{[(2S)−1−{[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−tert.−ブトキシ1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル](メチル)アミノ}−3−メチルブタン−2−イル]アミノ}−3−メチル−1−オキソブタン−2−イル](メチル)アミノ}ブタン酸
収量:95mg(3段階の反応全体で理論値の31%)。
HPLC(方法5):Rt=2.0分;
LC−MS(方法9):Rt=5.05分;MS(ESIpos):m/z=913(M+H)+。
中間体88
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:14mg(理論値の95%)
HPLC(方法5):Rt=1.5分;
LC−MS(方法1):Rt=0.73分;MS(ESIpos):m/z=869(M+H)+。
中間体89
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−tert−ブトキシ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−tert−ブトキシ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:30mg(理論値の98%)
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.77分;MS(ESIpos):m/z=926(M+H)+。
中間体90
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法6):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=813(M+H)+。
中間体91
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−{(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−[(2S)−2−{(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−[(2−フェニルエチル)アミノ]プロピル}ピロリジン−1−イル]−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル}−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−{(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−[(2S)−2−{(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−[(2−フェニルエチル)アミノ]プロピル}ピロリジン−1−イル]−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル}−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法9):Rt=4.64分;MS(ESIpos):m/z=774(M+H)+。
中間体92
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−ヒドロキシ−1−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−ヒドロキシ−1−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.5分;
LC−MS(方法9):Rt=4.46分;MS(ESIpos):m/z=804(M+H)+。
中間体93
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法10):Rt=2.54分
LC−MS(方法12):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=919(M+H)+。
中間体94
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1R)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1R)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法10):Rt=2.54分;
LC−MS(方法12):Rt=0.92分;MS(ESIpos):m/z=919(M+H)+。
中間体95
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルスルホニル)−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルスルホニル)−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法11):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=943(M+H)+。
中間体96
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3E)−1,4−ジフェニルブタ−3−エン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3E)−1,4−ジフェニルブタ−3−エン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法10):Rt=2.59分;
LC−MS(方法11):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=877(M+H)+。
中間体97
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:69mg(2段階反応合わせて理論値の65%)
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.76分;MS(ESIpos):m/z=912(M+H)+。
中間体98
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:40mg(2段階反応合わせて理論値の29%)
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.92分;MS(ESIpos):m/z=974(M+H)+。
中間体99
(2S)−2−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)プロパン−1−オントリフルオロアセタート
(2S)−2−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)プロパン−1−オントリフルオロアセタート
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=1.03分;MS(ESIpos):m/z=374(M+H)+。
166mg(444.5μmol)のこの中間体を使って、20mlのジクロロメタン中の3mlのトリフルオロ酢酸を使った標準条件下、Boc保護基を除去し、HPLC精製後、155mg(理論値の86%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=1.43分;
LC−MS(方法11):Rt=0.56分;MS(ESIpos):m/z=274(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.43分;
LC−MS(方法11):Rt=0.56分;MS(ESIpos):m/z=274(M+H)+。
中間体100
N−(6−{[(ベンジルオキシ)カルボニル]アミノ}ヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−{[(ベンジルオキシ)カルボニル]アミノ}ヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.36分;m/z=940(M+H)+。
170mgのこの中間体を、30mlのジクロロメタン中の3mlのトリフルオロ酢酸で30分間処理し、Boc保護基を除去した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を分取HPLCで精製して、155mg(理論値の86%)の脱保護N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド中間体を得た。
HPLC(方法12):Rt=1.85分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=840(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.85分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=840(M+H)+。
次に、中間体97の調製と同様に、ナトリウムシアノボロヒドリドの存在下で、50mg(0.052mmol)のこの中間体を、ベンジル6−オキソヘキシルカルバマートと反応させ、続いて、Z保護基の水素添加脱離(5%パラジウム炭素を触媒として、メタノールを溶媒として使って)を行い、標記化合物を調製した。
収量:21mg(理論値の37%)
HPLC(方法12):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=1.02分;MS(ESIpos):m/z=1073(M+H)+。
収量:21mg(理論値の37%)
HPLC(方法12):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=1.02分;MS(ESIpos):m/z=1073(M+H)+。
中間体101
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.76分;MS(ESIpos):m/z=939(M+H)+。
中間体102
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(モルホリン−4−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(モルホリン−4−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:8mg(理論値の71%)
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=1094(M+H)+。
中間体103
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3R)−1−(ベンジルアミノ)−3−ヒドロキシ−1−オキソブタン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3R)−1−(ベンジルアミノ)−3−ヒドロキシ−1−オキソブタン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:3mg(理論値の22%)
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.78分;MS(ESIpos):m/z=1069(M+H)+。
中間体104
N−{4−[(trans−4−{[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]カルボニル}シクロヘキシル)アミノ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{4−[(trans−4−{[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]カルボニル}シクロヘキシル)アミノ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
次に、15mg(18μmol)のN−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドを5mlのジメチルホルムアミドに溶解し、その後、13mg(35μmol)のO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、9μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび15mg(44μmol)のベンジルtrans−4−アミノシクロヘキサンカルボキシラートトリフルオロアセタートと混合した。この混合物をRTで1時間攪拌した後、減圧下で濃縮した。残った残渣を分取HPLCで精製した。同一画分を合わせて、溶媒を減圧下留去した。残渣を高真空下で乾燥後、14.7mg(理論値の78%)の保護中間体を無色の発泡体として得た。
HPLC(方法6):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.95分;MS(ESIpos):m/z=1072(M+H)+。
HPLC(方法6):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.95分;MS(ESIpos):m/z=1072(M+H)+。
この保護中間体から、最初に、水素添加によりベンジルエステルを除去し、遊離カルボキシル成分を定量的収率で得た。14mg(14μmol;1当量)の脱保護化合物を5mlのDMF中に溶解し、4.1mg(21μmol;1.5当量)の1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩、7.5μl(44μmol;3.1当量)のN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび0.9mg(7μmol;0.5当量)の4−ジメチルアミノピリジンの存在下、3.3mg(29μmol;2.1当量)のN−ヒドロキシスクシンイミドをと混合し、この混合物をRTで一晩攪拌した。その後、別の10当量のN−ヒドロキシスクシンイミド、5当量の1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩、5当量のN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび0.5当量の4−ジメチルアミノピリジンを加え、反応混合物を超音波洗浄機で5時間処理した。その後、溶媒を留去し、残渣を分取HPLCで精製し、同一画分を合わせて、濃縮した。残渣のジオキサンからの凍結乾燥後、9.7mg(理論値の62%)の標記化合物を無色の発泡体として得た。
HPLC(方法6):Rt=1.8分;
LC−MS(方法11):Rt=0.77分;MS(ESIpos):m/z=1078(M+H)+。
HPLC(方法6):Rt=1.8分;
LC−MS(方法11):Rt=0.77分;MS(ESIpos):m/z=1078(M+H)+。
中間体105
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−フェニルエチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−フェニルエチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.66分;
LC−MS(方法2):Rt=1.04分;MS(ESIpos):m/z=1025(M+H)+。
中間体106
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.84分;MS(ESIpos):m/z=949(M+H)+。
中間体107
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=1020(M+H)+。
中間体108
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−{(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−[(2S)−2−{(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−[(2−フェニルエチル)アミノ]プロピル}ピロリジン−1−イル]−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル}−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−{(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−[(2S)−2−{(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−[(2−フェニルエチル)アミノ]プロピル}ピロリジン−1−イル]−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル}−N−メチル−L−バリンアミド
収量:2.5mg(理論値の30%)
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.9分;MS(ESIpos):m/z=981(M+H)+。
中間体109
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−ヒドロキシ−1−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−ヒドロキシ−1−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:35mg(理論値の65%)
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法11):Rt=0.76分;MS(ESIpos):m/z=1011(M+H)+。
中間体110
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:2.4mg(理論値の24%)
HPLC(方法6):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=981(M+H)+。
中間体111
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]−1−メチルヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]−1−メチルヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:6.5mg(理論値の51%)
HPLC(方法6):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=4.71分;MS(ESIpos):m/z=1077(M+H)+。
中間体112
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−カルバモイル−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−カルバモイル−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:5.7mg(理論値の57%)
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=1036(M+H)+。
中間体113
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.93分;MS(ESIpos):m/z=1121(M+H)+。
この中間体を33.4mlのジクロロメタンに溶解し、17mlのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物をRTで1時間攪拌した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を、分取HPLCを使って精製した。
この結果、61mg(理論値の62%)の標記化合物を無色の発泡体として得た。
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=1064(M+H)+。
この結果、61mg(理論値の62%)の標記化合物を無色の発泡体として得た。
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=1064(M+H)+。
中間体114
N−[6−({[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチル]カルバモイル}アミノ)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[6−({[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチル]カルバモイル}アミノ)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:0.58mg(理論値の11%)の無色発泡体
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.83分;MS(ESIpos):m/z=1035(M+H)+。
中間体115
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:3mg(理論値の27%)(加水分解感受性)
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=996(M+H)+。
中間体116
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:3.2mg(理論値の43%)(加水分解感受性)
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.92分;MS(ESIpos):m/z=984(M+H)+。
中間体117
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−tert−ブトキシ−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−tert−ブトキシ−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:7mg(理論値の42%)
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=1081(M+H)+。
中間体118
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2R)−1−(ベンジルオキシ)−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2R)−1−(ベンジルオキシ)−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:6.3mg(理論値の53%)
LC−MS(方法1):Rt=1.00分;MS(ESIpos):m/z=1102(M+H)+。
中間体119
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法11):Rt=0.89分;MS(ESIpos):m/z=1126(M+H)+。
中間体120
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1R)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1R)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法11):Rt=0.90分;MS(ESIpos):m/z=1126(M+H)+。
中間体121
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルスルホニル)−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルスルホニル)−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法11):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=1150(M+H)+。
中間体122
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3E)−1,4−ジフェニルブタ−3−エン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3E)−1,4−ジフェニルブタ−3−エン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法11):Rt=0.95分;MS(ESIpos):m/z=1083(M+H)+。
中間体123
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−tert−ブトキシ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−tert−ブトキシ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=2.2分;
LC−MS(方法1):Rt=1.01分;MS(ESIpos):m/z=1006(M+H)+。
中間体124
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法11):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=950(M+H)+。
中間体125
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.95分;MS(ESIpos):m/z=1019(M+H)+。
中間体126
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.96分;
LC−MS(方法1):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=992(M+H)+。
中間体127
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.98分;MS(ESIpos):m/z=1071(M+H)+。
中間体128
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.88分;MS(ESIpos):m/z=1094(M+H)+。
中間体129
N−(6−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−6−オキソヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−6−オキソヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法9):Rt=4.9分;MS(ESIpos):m/z=1134(M+H)+。
中間体130
N−(4−{[(2R)−1−({5−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−5−オキソペンタノイル}アミノ)プロパン−2−イル]オキシ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{[(2R)−1−({5−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−5−オキソペンタノイル}アミノ)プロパン−2−イル]オキシ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=1.03分;MS(ESIpos):m/z=1056(M+H)+。
その後、Boc保護基をトリフルオロ酢酸で除去した。次に、4.9mg(0.005mmol)の脱保護粗生成物を、さらに精製せずに、1.8mlのジクロロメタンに溶解し、3.7mg(0.011mmol)の1,1’−[(1、5−ジオキソペンタン−1、5−ジイル)ビス(オキシ)]ジピロリジン−2,5−ジオン、2.4μl(0.014mmol)のN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび0.6mg(5μmol)の4−ジメチルアミノピリジンと混合した。この混合物をRTで2時間攪拌後、高真空下濃縮した。残った残渣を分取HPLCで精製した。これにより、0.77mg(理論値の15%)の標記化合物を無色の発泡体として得た。
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.93分;MS(ESIpos):m/z=1167(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.93分;MS(ESIpos):m/z=1167(M+H)+。
中間体131
N−{4−[(1−{5−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−5−オキソペンタノイル}ピペリジン−4−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{4−[(1−{5−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−5−オキソペンタノイル}ピペリジン−4−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=1.04分;MS(ESIpos):m/z=1116(M+H)+。
その後、Z保護基をエタノール中でパラジウム/活性炭を使った水素添加により離脱させた。4.6mg(0.005mmol)の脱保護粗生成物を、さらなる精製無しで、1.8mlのジクロロメタンに溶解し、3.8mg(0.012mmol)の1,1’−[(1、5−ジオキソペンタン−1、5−ジイル)ビス(オキシ)]ジピロリジン−2,5−ジオン、0.8μl(0.005mmol)のN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび0.6mg(5μmol)の4−ジメチルアミノピリジンと混合した。この混合物をRTで一晩攪拌し、高真空下濃縮した。残った残渣を分取HPLCで精製した。この結果、0.96mg(理論値の16%)の標記化合物を無色の発泡体として得た。
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=1193(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=1193(M+H)+。
中間体132
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジニル}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジニル}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法2):Rt=1.09分;MS(ESIpos):m/z=1106(M+H)+。
中間体133
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジニル}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジニル}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=1.03分;MS(ESIpos):m/z=1129(M+H)+。
中間体134
N−[3−({[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチル]カルバモイル}アミノ)プロピル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[3−({[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチル]カルバモイル}アミノ)プロピル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
5mg(6μmol)のN−(3−アミノプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドを1000μlのDMFに溶解後、2μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび2.2mg(9μmol)の4−ニトロフェニル2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチルカルバマートと混合した。この混合物をRTで1時間攪拌後、高真空下濃縮した。残った残渣を分取HPLCで精製した。この結果、1.6mg(理論値の23%)の標記化合物を無色の発泡体として得た。
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法2):Rt=1.09分;MS(ESIpos):m/z=1036(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法2):Rt=1.09分;MS(ESIpos):m/z=1036(M+H)+。
中間体135
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法6):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=1.01分;MS(ESIpos):m/z=1115(M+H)+。
中間体136
N−(4−{4−[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタノイル]ピペラジン−1−イル}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{4−[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタノイル]ピペラジン−1−イル}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
5mg(5.6μmol)のN−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドを1000μlのDMFに溶解後、2.1mg(11μmol)の1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩、1.7mg(11μmol)の1−ヒドロキシ−1H−ベンゾトリアゾール水和物、2μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび3.5mg(5.6μmol)の1−[4−オキソ−4−(ピペラジン−1−イル)ブチル]−1H−ピロール−2,5−ジオントリフルオロアセタートと混合した。この混合物をRTで一晩攪拌した。その後、2.1mg(5.6μmol)のO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファートを加え、反応混合物をRTでさらに3時間攪拌した。その後、溶媒を減圧下除去し、残った残渣を分取HPLCで精製した。同一画分を濃縮し、水からの凍結乾燥により、0.6mg(理論値の10%)の標記化合物を無色の発泡体として得た。
HPLC(方法6):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.9分;MS(ESIpos):m/z=1132(M+H)+。
HPLC(方法6):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.9分;MS(ESIpos):m/z=1132(M+H)+。
中間体137
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]−1−メチルヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]−1−メチルヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
6.9mg(8μmol)のN−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドを2540μlのDMFに溶解後、3.6mg(9μmol)のO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、3μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび4.1mg(12μmol)の6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−N’−メチルヘキサンヒドラジドトリフルオロアセタートと混合した。この混合物をRTで一晩攪拌した。その後、溶媒を減圧下除去し、残った残渣を分取HPLCで精製した。その結果、3.9mg(理論値の45%)の標記化合物を無色の発泡体として得た。
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.93分;MS(ESIpos):m/z=1108(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.93分;MS(ESIpos):m/z=1108(M+H)+。
中間体138
N−{4−[(2−{[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタノイル](メチル)アミノ}エチル)(メチル)アミノ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{4−[(2−{[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタノイル](メチル)アミノ}エチル)(メチル)アミノ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
6.6mg(7.3μmol)のN−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドを2000μlのDMFに溶解後、5.6mg(14.7μmol)のO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、2.6μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび4.1mg(9μmol)の4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−N−メチル−N−[2−(メチルアミノ)エチル]ブタンアミドトリフルオロアセタートと混合した。RTで3時間攪拌後、同量のHATUおよびN,N−ジイソプロピルエチルアミンを再度加え、反応混合物をRTで一晩攪拌した。その後、溶媒を減圧下除去し、残った残渣を分取HPLCで精製した。これにより、4mg(理論値の44%)の標記化合物を無色の発泡体として得た。
HPLC(方法6):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.91分;MS(ESIpos):m/z=1134(M+H)+。
HPLC(方法6):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.91分;MS(ESIpos):m/z=1134(M+H)+。
中間体139
(2R,3S)−3−アミノ−4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブタン−2−イル(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−7、10−ジイソプロピル−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−5、11−ジメチル−6、9−ジオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−オアート
(2R,3S)−3−アミノ−4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブタン−2−イル(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−7、10−ジイソプロピル−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−5、11−ジメチル−6、9−ジオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−オアート
HPLC(方法12):Rt=2.3分;
LC−MS(方法1):Rt=1.13分;MS(ESIpos):m/z=1178(M+H)+。
続いて、メタノール中で10%パラジウム/活性炭を使って、水素添加によりZ保護基を離脱させた。9.5mg(0.0087mmol)の脱保護粗生成物を、次に、さらに精製をしないで、5mlのDMFに溶解し、5mg(26.2μmol)の1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩、4mg(26.2μmol)の1−ヒドロキシ−1H−ベンゾトリアゾール水和物、54.6μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび9.1mg(34.9μmol)の市販の6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサンヒドラジドを混合した。混合物をRTで1時間攪拌後、高真空下濃縮した。残った残渣を分取HPLCで精製した。ジオキサンから凍結乾燥後、9.5mg(理論値の84%)のBoc保護中間体を得た。
HPLC(方法12):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=1295(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=1295(M+H)+。
続いて、2mlのジクロロメタン中の0.5mlのトリフルオロ酢酸を使って、Boc保護中間体の9.5mg(7.3μmol)を脱保護し、ジオキサンから凍結乾燥後、9mg(理論値の82%)の標記化合物を無色の発泡体として得た。
HPLC(方法12):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=0.84分;MS(ESIpos):m/z=1195(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=0.84分;MS(ESIpos):m/z=1195(M+H)+。
中間体140
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]−1−メチルヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]−1−メチルヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.90および0.91分;MS(ESIpos):m/z=1120(M+H)+。
中間体141
N−[4−({1−[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタノイル]ピペリジン−4−イル}オキシ)−4−オキソブチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[4−({1−[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタノイル]ピペリジン−4−イル}オキシ)−4−オキソブチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=1.04分;MS(ESIpos):m/z=1116(M+H)+。
続いて、エタノール中でパラジウム/活性炭を使って水素添加によりZ保護基を離脱させた。
19mg(19μmol)の脱保護粗生成物を、さらなる精製無しで、4mlのDMFに加え、7mg(39μmol)の4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタン酸、11mg(29μmol)のO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファートおよび5μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンを混合した。混合物をRTで1時間攪拌した後、高真空下濃縮した。残った残渣を分取HPLCで精製した。ジオキサンから凍結乾燥後、7.5mg(理論値の34%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=1147(M+H)+。
19mg(19μmol)の脱保護粗生成物を、さらなる精製無しで、4mlのDMFに加え、7mg(39μmol)の4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタン酸、11mg(29μmol)のO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファートおよび5μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンを混合した。混合物をRTで1時間攪拌した後、高真空下濃縮した。残った残渣を分取HPLCで精製した。ジオキサンから凍結乾燥後、7.5mg(理論値の34%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=1147(M+H)+。
中間体142
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.99分;MS(ESIpos):m/z=1154(M+H)+。
中間体143
N−(4−{2−[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−2、2−ジメチルブタノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−2、2−ジメチルブタノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=2.1分;
LC−MS(方法3):Rt=1.92分;MS(ESIpos):m/z=1106(M+H)+。
中間体144
N−(4−{2−[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−2、2−ジメチルブタノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−2、2−ジメチルブタノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法3):Rt=1.86分;m/z=1094(M+H)+。
中間体145
N−[3−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)プロピル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[3−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)プロピル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=950(M+H)+。
中間体146
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−({(2S)−1−[ベンジル(メチル)アミノ]−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル}アミノ)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−({(2S)−1−[ベンジル(メチル)アミノ]−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル}アミノ)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=2.2分;
LC−MS(方法9):Rt=5.11分;MS(ESIpos):m/z=1128(M+H)+。
中間体147
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=2.0分。
中間体148
N−{4−[(2−{[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタノイル](メチル)アミノ}エチル)アミノ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{4−[(2−{[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタノイル](メチル)アミノ}エチル)アミノ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=2.1分;
LC−MS(方法2):Rt=1.21分;MS(ESIpos):m/z=1120(M+H)+。
中間体149
N−{4−[(2−{[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタノイル]アミノ}エチル)(メチル)アミノ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{4−[(2−{[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタノイル]アミノ}エチル)(メチル)アミノ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=0.89分;MS(ESIpos):m/z=1121(M+H)+。
中間体150
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S,2R)−2−フェニル−1−(プロピルカルバモイル)シクロプロピル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S,2R)−2−フェニル−1−(プロピルカルバモイル)シクロプロピル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法6):Rt=1.9分;
LC−MS(方法9):Rt=4.93分;MS(ESIpos):m/z=1078(M+H)+。
中間体151
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−カルバモイル−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−カルバモイル−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=1036(M+H)+。
中間体152
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−(エトキシカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−(エトキシカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法6):Rt=2.0分;
LC−MS(方法9):Rt=4.99分;MS(ESIpos):m/z=1066(M+H)+。
中間体153
N−[1−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−12、15−ジオキソ−3、6、9−トリオキサ−13、14−ジアザオクタデカン−18−イル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[1−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−12、15−ジオキソ−3、6、9−トリオキサ−13、14−ジアザオクタデカン−18−イル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
3.6mg(理論値の51%)の標記化合物を得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.90分;m/z=1185(M+H)+。
中間体154
(2R,3S)−3−アミノ−4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブタン−2−イル(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−7、10−ジイソプロピル−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−5、11−ジメチル−6、9−ジオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−オアート
(2R,3S)−3−アミノ−4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブタン−2−イル(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−7、10−ジイソプロピル−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−5、11−ジメチル−6、9−ジオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−オアート
HPLC(方法12):Rt=2.5分;
LC−MS(方法1):Rt=1.13分;MS(ESIpos):m/z=1190(M+H)+。
その後、標準水素圧力下、メタノール中で、10%パラジウム/活性炭を使った水素添加によりベンジルエステル保護基を除去し、得られた酸を、中間体151で記載のように、6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサンヒドラジドに連結した。最終ステップで、Boc保護基を、トリフルオロ酢酸を使って脱離させた。残った残渣を分取HPLCで精製し、0.22mg(2段階で理論値の2.5%)の標記化合物を無色の発泡体として得た。
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.81分;MS(ESIpos):m/z=1207(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.81分;MS(ESIpos):m/z=1207(M+H)+。
中間体155
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.82分;MS(ESIpos):m/z=1024(M+H)+。
中間体156
N−(3−{[(1−{[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]カルボニル}シクロプロピル)カルボニル]アミノ}プロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−{[(1−{[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]カルボニル}シクロプロピル)カルボニル]アミノ}プロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.92分;MS(ESIpos):m/z=1080(M+H)+。
中間体157
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=1063(M+H)+。
1H−NMR(500MHz,DMSO−d6,特性シグナル):δ=10.8(d,1H)、9.8−9.7(m,2H)、9.6および9.4(2m,1H)、8.9,8.88,8.78および8.75(4d,1H)、8.08および7.85(2d,1H)、7.6−6.9(m,9H)、4.7−4.4(m,3H)、3.4(t,2H)、3.23,3.2,3.18,3.0,および2.99(5s,9H)、2.8(m,3H)、2.1(t,2H)、1.06および1.01(2d,3H)、0.95−0.8(m,15H)、0.8−0.75(dd,3H)。
中間体158
N−[4−({(2R)−1−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−メチル−1−オキソペンタン−2−イル}アミノ)−4−オキソブチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[4−({(2R)−1−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−メチル−1−オキソペンタン−2−イル}アミノ)−4−オキソブチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=2.2分;
LC−MS(方法1):Rt=1.21分;MS(ESIpos):m/z=1076(M+H)+。
最初に、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸を使って、この保護中間体からBoc保護基を離脱させ、6.2mg(理論値の99%)の脱保護化合物を得た。5.2mg(5μmol)のこの中間体を1.5mlのジクロロメタンに溶解し、1.2mg(6μmol)の1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩および0.16mg(1μmol)の4−ジメチルアミノピリジンの存在下で、0.8mg(7μmol)のN−ヒドロキシスクシンイミドと反応させた。RTで2時間攪拌後、反応混合物を濃縮し、分取HPLCで精製した。1.3mgの標記化合物を得て、その一部を反応物質へと加水分解した。
中間体159
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:6mg(理論値の53%)
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=1114(M+H)+。
中間体160
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルアミノ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:13mg(理論値の52%)
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.92分;MS(ESIpos):m/z=1153(M+H)+。
中間体161
N−(6−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−6−オキソヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−6−オキソヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:0.8mg(理論値の16%)
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.78分;MS(ESIpos):m/z=1092(M+H)+。
中間体162
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=2.0分;
LC−MS(方法11):Rt=0.9分;MS(ESIpos):m/z=1024(M+H)+。
中間体163
[(1S,2R)−1−アミノ−2−フェニルシクロプロピル](1,4−ジヒドロ−3H−2、3−ベンゾオキサジン−3−イル)メタノントリフルオロアセタート
[(1S,2R)−1−アミノ−2−フェニルシクロプロピル](1,4−ジヒドロ−3H−2、3−ベンゾオキサジン−3−イル)メタノントリフルオロアセタート
収量:108mg(理論値の34%)
LC−MS(方法2):Rt=1.3分;MS(ESIpos):m/z=395(M+H)+。
108mg(0.27mmol)のこの中間体を3.7mlのジクロロメタンに溶解し、1.8mlのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物をRTで15分間攪拌した。次に、減圧下で濃縮し、残った残渣をジオキサンから凍結乾燥した。112mgの標記化合物を無色の発泡体として、定量的収率で得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.7分;MS(ESIpos):m/z=295(M+H)+。
LC−MS(方法1):Rt=0.7分;MS(ESIpos):m/z=295(M+H)+。
中間体164
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−(1,4−ジヒドロ−3H−2、3−ベンゾオキサジン−3−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−(1,4−ジヒドロ−3H−2、3−ベンゾオキサジン−3−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
HPLC(方法5):Rt=1.68分;
LC−MS(方法1):Rt=1.51分;MS(ESIpos):m/z=1083(M+H)+。
19mg(0.015mmol)のこの中間体を4mlのDMFに溶解した。817μLのピペリジンを添加した後、反応混合物をRTで5分間攪拌し、続いて、減圧下で濃縮を行い、残渣を、最初、ジエチルエーテルで温浸し、その後、分取HPLCで精製した(溶出剤:アセトニトリル+0.1%TFA/0.1%aq.TFA)。同一画分を合わせて、溶媒を減圧下除去し、残渣をジオキサン/水から凍結乾燥した。12mg(理論値の92%)の標記化合物を無色の発泡体として得た。
HPLC(方法6):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=861(M+H)+。
HPLC(方法6):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=861(M+H)+。
中間体165
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−(1,4−ジヒドロ−3H−2、3−ベンゾオキサジン−3−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−(1,4−ジヒドロ−3H−2、3−ベンゾオキサジン−3−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:4.5mg(2段の反応で理論値の23%)
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.9分;MS(ESIpos):m/z=960(M+H)+。
中間体166
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−(1,4−ジヒドロ−3H−2、3−ベンゾオキサジン−3−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−(1,4−ジヒドロ−3H−2、3−ベンゾオキサジン−3−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=1.08分;MS(ESIpos):m/z=1040(M+H)+。
中間体167
ベンジル3−{2−[2−(2−オキソエトキシ)エトキシ]エトキシ}プロパノアート
ベンジル3−{2−[2−(2−オキソエトキシ)エトキシ]エトキシ}プロパノアート
収量:611mg(2段階の反応で理論値の10%)
LC−MS(方法2):Rt=1.69分;MS(ESIpos):m/z=311(M+H)+。
中間体168
N−(2−{2−[2−(2−カルボキシエトキシ)エトキシ]エトキシ}エチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(2−{2−[2−(2−カルボキシエトキシ)エトキシ]エトキシ}エチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
25mg(0.028mmol)のこの化合物および17.5mg(0.06mmol)の中間体167を2mlのメタノール中で混合し、12.6mg(0.14mmol)のボラン−ピリジン複合体および2.5mlの酢酸と混合した。この反応混合物をRTで一晩攪拌した。その後、同量のボラン−ピリジン複合体および酢酸を再度加え、反応混合物をRTでさらに24時間攪拌した。続いて、減圧下で濃縮し、残渣を分取HPLCで精製した。同一画分の濃縮および1:1ジオキサン/水からの凍結乾燥後、26.5mg(理論値の88%)のZ−保護標記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=2.04分;
LC−MS(方法1):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=1064(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=2.04分;
LC−MS(方法1):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=1064(M+H)+。
25mg(0.024mmol)のこの中間体を10mlのメタノールに溶解し、10%パラジウム/活性炭上で、標準水素圧力下、RTで45分間、水素化した。次に、触媒を濾別し、溶媒を減圧下除去した。ジオキサンから凍結乾燥後、19.7mg(理論値の85%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.83分;MS(ESIpos):m/z=974(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.83分;MS(ESIpos):m/z=974(M+H)+。
中間体169
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法11):Rt=0.81分;MS(ESIpos):m/z=1071(M+H)+。
中間体170
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S,3S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S,3S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:16.7mg(2段階で理論値の63%)
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.81分;MS(ESIpos):m/z=914(M+H)+。
中間体171
N−(6−{[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタノイル]アミノ}ヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S,3S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−{[4−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ブタノイル]アミノ}ヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S,3S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=1.12分;MS(ESIpos):m/z=1079(M+H)+。
中間体172
ベンジル2−{2−[2−(2−オキソエトキシ)エトキシ]エトキシ}エチルカルバマート
ベンジル2−{2−[2−(2−オキソエトキシ)エトキシ]エトキシ}エチルカルバマート
HPLC(方法12):Rt=1.4分;
LC−MS(方法11):Rt=0.65分;MS(ESIpos):m/z=326(M+H)+。
中間体173
ベンジル{2−[2−(2−オキソエトキシ)エトキシ]エチルカルバマート
ベンジル{2−[2−(2−オキソエトキシ)エトキシ]エチルカルバマート
HPLC(方法12):Rt=1.3分;
LC−MS(方法11):Rt=0.68分;MS(ESIpos):m/z=282(M+H)+。
中間体174
N−(2−{2−[2−(2−アミノエトキシ)エトキシ]エトキシ}エチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(2−{2−[2−(2−アミノエトキシ)エトキシ]エトキシ}エチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.8分;MS(ESIpos):m/z=988(M+H)+。
中間体175
N−[2−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[2−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:8.3mg(理論値の23%)
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=1068(M+H)+。
中間体176
N−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.8分;
LC−MS(方法11):Rt=0.8分;MS(ESIpos):m/z=981(M+H)+。
中間体177
N−[2−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[2−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=1025(M+H)+。
中間体178
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=0.82分;MS(ESIpos):m/z=953(M+H)+。
中間体179
4−[(1E、3S)−3−アミノ−4−フェニルブタ−1−エン−1−イル]ベンゼンスルホン酸トリフルオロアセタート
4−[(1E、3S)−3−アミノ−4−フェニルブタ−1−エン−1−イル]ベンゼンスルホン酸トリフルオロアセタート
次に、この混合物を、30mlのジクロロメタンに溶解し、1mlのトリフルオロ酢酸と混合し、RTで20時間攪拌した。減圧下で濃縮後、残渣をジエチルエーテルと共に攪拌し、形成された析出物を吸引により濾別し、ジエチルエーテルで洗浄した。これにより、200mg(理論値の62%)の標記化合物を得た。
LC−MS(方法11):Rt=0.44分;MS(ESIpos):m/z=304(M+H)+。
LC−MS(方法11):Rt=0.44分;MS(ESIpos):m/z=304(M+H)+。
中間体180
4−[(3R)−3−アミノ−4−フェニルブチル]ベンゼンスルホン酸
4−[(3R)−3−アミノ−4−フェニルブチル]ベンゼンスルホン酸
LC−MS(方法1):Rt=0.46分;MS(ESIpos):m/z=306(M+H)+。
中間体181
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2S,3E)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタ−3−エン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2S,3E)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタ−3−エン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.21分;MS(ESIpos):m/z=971(M+H)+;Rt=0.84分;MS(ESIpos):m/z=871(M+H)+(脱保護化合物)。
中間体182
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2S,3E)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタ−3−エン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2S,3E)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタ−3−エン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
91mg(理論値の98%)の目的化合物を得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=871(M+H)+。
中間体183
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2S,3E)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタ−3−エン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2S,3E)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタ−3−エン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=957(M+H)+。
中間体184
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2S,3E)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタ−3−エン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2S,3E)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタ−3−エン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=0.90分;MS(ESIpos):m/z=1164(M+H)+。
中間体185
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2S,3E)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタ−3−エン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2S,3E)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタ−3−エン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=0.89分;MS(ESIpos):m/z=1054(M+H)+。
中間体186
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2R)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2R)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.09分;MS(ESIpos):m/z=973(M+H)+;Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=873(M+H)+(脱保護化合物)。
中間体187
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2R)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2R)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
50mg(90%純度、理論値の85%)の標記化合物を得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=873(M+H)+。
中間体188
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2R)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2R)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=0.91分;MS(ESIpos):m/z=959(M+H)+。
中間体189
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2R)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2R)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=0.91分;MS(ESIpos):m/z=1166(M+H)+。
中間体190
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2R)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(2R)−1−フェニル−4−(4−スルホフェニル)ブタン−2−イル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=0.90分;MS(ESIpos):m/z=1055(M+H)+。
中間体191
(2R,3R)−N−[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパンアミドトリフルオロアセタート
(2R,3R)−N−[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]−3−メトキシ−2−メチル−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパンアミドトリフルオロアセタート
2段階全体での収量:62mg(理論値の67%)
HPLC(方法6):Rt=1.65分;
LC−MS(方法1):Rt=0.7分;MS(ESIpos):m/z=443(M+H)+。
中間体192
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.84分;MS(ESIpos):m/z=840(M+H)+。
1H NMR(500MHz,DMSO−d6):δ=10.8(d,1H)、8.3および8.05(2d,1H)、8.0(d,1H)、7.5(m,1H)、7.3(m,1H)、7.15および7.08(2s,1H)7.05−6.9(m,2H)、5.12および4.95(2m,1H)、4.65(m,1H)、4.55(m,1H)、4.1−3.8(m,4H)、3.75(d,1H)、3.23,3.18,3.17,3.12,2.95および2.88(6s,9H)、3.1−3.0および2.85(2m,2H)、2.65(d,1H)、2.4−2.2(m,3H)、2.15(m,3H)、1.95(br.m,2H)、1.85−0.8(br.m,11H)、1.08および1.04(2d,3H)、0.9−0.75(m,15H)、0.75−0.65(dd,3H)[これ以外のシグナルは、H2Oピークで隠された]。
中間体193
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(3−カルボキシプロピル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法9):Rt=4.7分;MS(ESIpos):m/z=926(M+H)+。
中間体194
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:4.4mg(理論値の35%)
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.90分;MS(ESIpos):m/z=1133(M+H)+。
中間体195
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S,3S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S,3S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:1.1mg(理論値の10%)
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.99分;MS(ESIpos):m/z=994(M+H)+。
中間体196
(2S)−2−アミノ−1−(2−オキサ−3−アザビシクロ[2.2.2]オクタ−5−エン−3−イル)−3−フェニルプロパン−1−オントリフルオロアセタート
(2S)−2−アミノ−1−(2−オキサ−3−アザビシクロ[2.2.2]オクタ−5−エン−3−イル)−3−フェニルプロパン−1−オントリフルオロアセタート
LC−MS(方法1):Rt=1.1分;MS(ESIpos):m/z=359(M+H)+。
64mg(0.18mmol)のこの中間体を10mlのジクロロメタンに溶解し、1mlのトリフルオロ酢酸を添加し、混合物をRTで30分攪拌した。この後、減圧下で濃縮し、残った残渣を水/ジオキサンから凍結乾燥した。この結果、66mg(定量)の標記化合物を発泡体として得た。
HPLC(方法6):Rt=1.45分;
LC−MS(方法3):Rt=1.12分;MS(ESIpos):m/z=259(M+H)+。
HPLC(方法6):Rt=1.45分;
LC−MS(方法3):Rt=1.12分;MS(ESIpos):m/z=259(M+H)+。
中間体197
(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−N−[(2S)−1−(2−オキサ−3−アザビシクロ[2.2.2]オクタ−5−エン−3−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパンアミドトリフルオロアセタート
(2R,3R)−3−メトキシ−2−メチル−N−[(2S)−1−(2−オキサ−3−アザビシクロ[2.2.2]オクタ−5−エン−3−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]−3−[(2S)−ピロリジン−2−イル]プロパンアミドトリフルオロアセタート
HPLC(方法6):Rt=2.13分;
LC−MS(方法1):Rt=1.13分;MS(ESIpos):m/z=528(M+H)+。
52mg(0.1mmol)のこの中間体を10mlのジクロロメタンに溶解し、1mlのトリフルオロ酢酸を加え、混合物をRTで20分攪拌した。続いて、減圧下で濃縮し、残った残渣を20mlのジエチルエーテルと共に攪拌した。10分後、混合物を濾過し、濾過残渣を高真空下で乾燥した。この結果、39mg(理論値の72%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法6):Rt=1.62分;
LC−MS(方法1):Rt=0.68分;MS(ESIpos):m/z=428(M+H)+。
HPLC(方法6):Rt=1.62分;
LC−MS(方法1):Rt=0.68分;MS(ESIpos):m/z=428(M+H)+。
中間体198
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(2−オキサ−3−アザビシクロ[2.2.2]オクタ−5−エン−3−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(2−オキサ−3−アザビシクロ[2.2.2]オクタ−5−エン−3−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
HPLC(方法6):Rt=2.78分;
LC−MS(方法3):Rt=2.96分;MS(ESIpos):m/z=1047(M+H)+。
73mg(0.071mmol)のこの中間体を5mlのDMFに溶解した。0.5mlのピペリジンを添加した後、反応混合物をRTで10分間攪拌した。続いて、減圧下で濃縮し、残渣をジエチルエーテルで繰り返し温浸した。ジエチルエーテルをデカントで除去後、残渣を分取HPLC(溶出剤:アセトニトリル/0.1%aq.TFA)で精製した。16mg(理論値の26%)の標記化合物を発泡体として得た。
HPLC(方法6):Rt=1.94分;
LC−MS(方法3):Rt=1.71分;MS(ESIpos):m/z=825(M+H)+。
1H NMR(400MHz,DMSO−d6):δ=8.9−8.6(m,3H)、8.4,8.3,8.1および8.0(4d,1H)、7.3−7.1(m,5H)、6.7−6.5(m,2H)、5.2−4.8(m,3H)、4.75−4.55(m,3H)、4.05−3.95(m,1H)、3.7−3.4(m,4H)、3.22,3.17,3.15,3.05,3.02および2.95(6s,9H)、3.0および2.7(2br.m,2H)、2.46(m,3H)、2.4−1.2(br.m,13H)、1.1−0.85(m,18H)、0.75(m,3H)[これ以外のシグナルは、H2Oピークで隠された]。
HPLC(方法6):Rt=1.94分;
LC−MS(方法3):Rt=1.71分;MS(ESIpos):m/z=825(M+H)+。
1H NMR(400MHz,DMSO−d6):δ=8.9−8.6(m,3H)、8.4,8.3,8.1および8.0(4d,1H)、7.3−7.1(m,5H)、6.7−6.5(m,2H)、5.2−4.8(m,3H)、4.75−4.55(m,3H)、4.05−3.95(m,1H)、3.7−3.4(m,4H)、3.22,3.17,3.15,3.05,3.02および2.95(6s,9H)、3.0および2.7(2br.m,2H)、2.46(m,3H)、2.4−1.2(br.m,13H)、1.1−0.85(m,18H)、0.75(m,3H)[これ以外のシグナルは、H2Oピークで隠された]。
中間体199
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(2−オキサ−3−アザビシクロ[2.2.2]オクタ−5−エン−3−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S)−1−(2−オキサ−3−アザビシクロ[2.2.2]オクタ−5−エン−3−イル)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法2):Rt=2.1分;MS(ESIpos):m/z=1118(M+H)+。
中間体200
N−[2−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[2−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=1025(M+H)+。
中間体201
N−{6−[(ブロモアセチル)アミノ]ヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(ブロモアセチル)アミノ]ヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法11):Rt=0.9分;MS(ESIpos):m/z=1059および1061(M+H)+。
中間体202
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
13mg(10μmol)のこの中間体を5mlのDMFに溶解し、2.1mg(20mmol)の1−ヒドロキシピロリジン−2,5−ジオン、6.5μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび7.1mg(0.02mmol)のHATUと混合した。この反応混合物をRTで一晩攪拌後、減圧下で濃縮した。残った残渣を分取HPLCで精製した。アセトニトリル/水から凍結乾燥後、9.2mg(理論値の62%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法2):Rt=2.1分;MS(ESIpos):m/z=1141(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法2):Rt=2.1分;MS(ESIpos):m/z=1141(M+H)+。
中間体203
tert−ブチル6−ヒドラジノ−6−オキソヘキシルカルバマート
tert−ブチル6−ヒドラジノ−6−オキソヘキシルカルバマート
LC−MS(方法11):Rt=0.59分;MS(ESIpos):m/z=246(M+H)+。
中間体204
N−{4−[2−(6−アミノヘキサノイル)ヒドラジノ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
N−{4−[2−(6−アミノヘキサノイル)ヒドラジノ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
HPLC(方法12):Rt=1.6分;
LC−MS(方法11):Rt=0.66分;MS(ESIpos):m/z=983(M+H)+。
中間体205
N−(4−{2−[6−({[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチル]カルバモイル}アミノ)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{2−[6−({[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチル]カルバモイル}アミノ)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:4mg(理論値の78%)
HPLC(方法12):Rt=1.7分;
LC−MS(方法11):Rt=0.73分;MS(ESIpos):m/z=1149(M+H)+。
中間体206
N−(6−{[3−({3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロピル}ジスルファニル)プロパノイル]アミノ}ヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−{[3−({3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロピル}ジスルファニル)プロパノイル]アミノ}ヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法11):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=615[1/2(M+2H+]。
中間体207
(1S,2R)−1−アミノ−2−フェニルシクロプロパンカルボン酸トリフルオロアセタート
(1S,2R)−1−アミノ−2−フェニルシクロプロパンカルボン酸トリフルオロアセタート
LC−MS(方法1):Rt=0.23分;MS(ESIpos):m/z=178(M+H)+。
中間体208
9H−フルオレン−9−イルメチル6−オキソヘキシルカルバマート
9H−フルオレン−9−イルメチル6−オキソヘキシルカルバマート
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=1.1分;MS(ESIpos):m/z=338(M+H)+。
中間体209
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−カルボキシ−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−カルボキシ−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
22mg(0.026mmol)のこの化合物の、10mlのメタノール中溶液に、17mg(0.05mmol)の9H−フルオレン−9−イルメチル6−オキソヘキシルカルバマート(中間体208)および2.3mgの酢酸、さらに、11.4mg(0.12mmol)のボラン−ピリジン複合体を加えた。反応混合物をRTで一晩攪拌した。その後、同量のボラン−ピリジン複合体および酢酸、および、8mgのフルオレン−9−イルメチル6−オキソヘキシルカルバマートを再度加え、反応混合物をRTでさらに24時間攪拌した。続いて、減圧下で濃縮し、残渣を分取HPLCで精製した。同一画分を濃縮後、生成物を直接次の段階に使用した。
33mgの未だ不純物を含む中間体を5mlのDMFに溶解し、1mlのピペリジンを加えた。RTで15分間攪拌後、反応混合物を濃縮し、得られた残渣を分取HPLCで精製した。この結果、11mg(2段の反応で理論値の55%)のアミノカルボン酸中間体を得た。
HPLC(方法12):Rt=1.7分;
LC−MS(方法11):Rt=0.7分;MS(ESIpos):m/z=843(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.7分;
LC−MS(方法11):Rt=0.7分;MS(ESIpos):m/z=843(M+H)+。
6mg(7.12μmol)のこの中間体を1mlのジオキサンに溶解後、6.6mg(42.7μmol)のメチル2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−カルボキシラートおよび5μlの飽和ナトリウムヒドロゲンカルボナート水溶液と混合した。この反応混合物をRTで1時間攪拌した後、さらに、それぞれ50μlずつ3回に分けて飽和ナトリウムヒドロゲンカルボナート水溶液を添加し、反応混合物をRTでさらに30分攪拌した。その後、反応混合物を、トリフルオロ酢酸を使ってpH2に酸性化し、減圧下で濃縮した。残った残渣を分取HPLCで精製した。アセトニトリル/水から凍結乾燥後、4mg(理論値の60%)の標記化合物を発泡体として得た。
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法11):Rt=0.88分;MS(ESIpos):m/z=923(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法11):Rt=0.88分;MS(ESIpos):m/z=923(M+H)+。
中間体210
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
80mg(0.08mmol)のN−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド(中間体192)および65.4mg(0.5mmol)の6−オキソヘキサン酸を9mlのメタノール中で混合し、10μlの酢酸および37.4mg(0.4mmol)のボラン−ピリジン複合体と混合した。この反応混合物をRTで一晩攪拌した。続いて、減圧下で濃縮し、残渣を1:1アセトニトリル/水に溶解し、トリフルオロ酢酸を使ってpHを2に調節した。反応混合物を再度濃縮し、残渣を分取HPLCで精製した。同一画分を濃縮し、70mg(理論値の86%)のN−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドをトリフルオロアセタートとして得た。
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=955(M+H)+。
1H NMR(500MHz,DMSO−d6,特性シグナル):δ=12.0(br.M,1H)、10.8(s,1H)、9.4(m,1H)、8.9および8.8(2d,1H)、8.3および8.02(2d,1H)、7.5(m,1H)、7.3(m,1H)、7.15および7.1(2s,1H)7.05−6.9(m,2H)、5.12および4.95(2m,1H)、4.7−4.5(m,2H)、4.1−3.8(m,4H)、3.75(d,1H)、3.25,3.2,3.18,3.13,2.98および2.88(6s,9H)、2.8(m,3H)、1.08および1.04(2d,3H)、0.95−0.8(m,15H)、0.8−0.65(dd,3H)。
22mg(23μmol)のこの中間体を1.8mlのジクロロメタンに溶解し、13.2mg(70μmol)の1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド塩酸塩、26.5mg(230μmol)の1−ヒドロキシピロリジン−2,5−ジオンおよび0.28mg(2μmol)のジメチルアミノピリジンと混合し、反応混合物をRTで2時間攪拌した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残った残渣を分取HPLCで精製した。アセトニトリル/水から凍結乾燥後、21.3mg(理論値の88%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=1052(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.94分;MS(ESIpos):m/z=1052(M+H)+。
中間体211
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S,3S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S,3S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:9.2mg(理論値の61%)
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=929(M+H)+。
9mg(10μmol)のこの中間体を3mlのDMFに溶解し、5.6mg(48μmol)の1−ヒドロキシピロリジン−2,5−ジオン、5μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび5.5mg(0.015mmol)のHATUと混合し、反応混合物を超音波洗浄機で6時間処理した。この途中で、毎時5.5mgのHATUを添加した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をアセトニトリル/水に溶解し、トリフルオロ酢酸を使ってpHを2に調節した。再度減圧下で濃縮後、残った残渣を分取HPLCで精製した。アセトニトリル/水から凍結乾燥後、5.8mg(理論値の57%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.95分;MS(ESIpos):m/z=1027(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.95分;MS(ESIpos):m/z=1027(M+H)+。
中間体212
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S,3S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(2S,3S)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソ−3−フェニルブタン−2−イル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
8.4mg(8μmol)のこの中間体を3mlのDMFに溶解し、9.5mg(80μmol)の1−ヒドロキシピロリジン−2,5−ジオン、10μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび9.4mg(25μmol)のHATUと混合し、反応混合物をRTで一晩攪拌後、減圧下で濃縮した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をアセトニトリル/水に溶解し、トリフルオロ酢酸を使ってpHを2に調節した。減圧下で再度濃縮後、残った残渣を分取HPLCで精製した。アセトニトリル/水から凍結乾燥後、4mg(理論値の32%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.96分;MS(ESIpos):m/z=1117(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.96分;MS(ESIpos):m/z=1117(M+H)+。
中間体213
N−{6−[(trans−4−{[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]カルボニル}シクロヘキシル)アミノ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(trans−4−{[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]カルボニル}シクロヘキシル)アミノ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.9分;MS(ESIpos):m/z=1177(M+H)+。
中間体214
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−ヒドロキシ−1−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{4−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−4−オキソブチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−ヒドロキシ−1−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法11):Rt=0.82分;MS(ESIpos):m/z=901(M+H)+。
中間体215
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−ヒドロキシ−1−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S,2R)−1−ヒドロキシ−1−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=930(M+H)+。
中間体216
N−(4−{[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]カルボニル}ベンジル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(4−{[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]カルボニル}ベンジル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=1.13分;MS(ESIpos):m/z=1072(M+H)+。
中間体217
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.55分;m/z=1044(M+H)+。
57mg(0.055mmol)のこの中間体を5mlのDMF中の1.2mlのピペリジンで処理し、Fmoc保護基を離脱させた。濃縮後、分取HPLCにより精製し、39mg(理論値の76%)の遊離アミン中間体:N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドをトリフルオロアセタートとして得た。
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=1.01分;m/z=822(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=1.01分;m/z=822(M+H)+。
60mg(0.06mmol)のこの中間体を、中間体210と同様に、ボラン−ピリジン複合体の存在下で、6−オキソヘキサン酸と反応させた。45mg(理論値の75%)の標記化合物を発泡体として得た。
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=9936(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=9936(M+H)+。
中間体218
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:26mg(54%)
HPLC(方法5):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=1.01分;MS(ESIpos):m/z=1034(M+H)+。
中間体219
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−フェニルエチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−フェニルエチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=944(M+H)+。
中間体220
N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
500mgのこの中間体を20mlのDMFに溶解し、466mg(3.8mmol)の中間体191,382mg(1.01mmol)のO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート(HATU)および440μl(2.5mmol)のN,N−ジイソプロピルエチルアミンと混合した。この混合物をRTで1時間攪拌した後、濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶解し、最初に、2回の5%クエン酸水溶液で、次に、飽和ナトリウムヒドロゲンカルボナート水溶液で振盪することにより抽出した。有機相を濃縮し、残渣を95:5ジクロロメタン/メタノールを溶出剤として使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製した。同一画分を合わせ、溶媒を減圧下除去した。残渣を高真空下乾燥後、562mg(両段階あわせて理論値の65%)のZ−保護中間体を得た。
562mg(0.57mmol)のこの中間体を50mlのメタノールに溶解し、155mgの10%パラジウム/活性炭を使って、標準水素圧力下、RTで20分間水素添加した。その後、触媒を濾別し、溶媒を減圧下した。残渣を分取HPLCで精製した。同一画分を合わせ、溶媒を減圧下留去し、残渣をジオキサンから凍結乾燥し、361mg(理論値の87%)の標記化合物を発泡体として得た。
HPLC(方法5):Rt=1.75および1.86分にダブルピーク;
LC−MS(方法1):Rt=0.84分および0.91分に同質量のダブルピーク;
MS(ESIpos):m/z=944(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=1.75および1.86分にダブルピーク;
LC−MS(方法1):Rt=0.84分および0.91分に同質量のダブルピーク;
MS(ESIpos):m/z=944(M+H)+。
中間体221
N−{(2S)−2−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]−3−フェニルプロピル}−N−メチル−L−バリン
N−{(2S)−2−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]−3−フェニルプロピル}−N−メチル−L−バリン
HPLC(方法12):Rt=1.6分;
LC−MS(方法11):Rt=0.76分;MS(ESIpos):m/z=365(M+H)+。
中間体222
N−[(2S)−2−アミノ−3−フェニルプロピル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
N−[(2S)−2−アミノ−3−フェニルプロピル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
HPLC(方法12):Rt=2.2分;
LC−MS(方法1):Rt=1.17分;MS(ESIpos):m/z=1073(M+H)+。
60mg(0.05mmol)のこの中間体を10mlのジクロロメタンに溶解し、2mlのトリフルオロ酢酸を加え、反応混合物をRTで1.5時間攪拌した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残った残渣を分取HPLCで精製した。同一画分を合わせて、溶媒を減圧下除去し、残渣をジオキサン/水から凍結乾燥した。この結果、25mg(理論値の42%)の標記化合物を発泡体として得た。
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.95分;MS(ESIpos):m/z=974(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.95分;MS(ESIpos):m/z=974(M+H)+。
中間体223
N−[(2S)−2−({[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチル]カルバモイル}アミノ)−3−フェニルプロピル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[(2S)−2−({[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチル]カルバモイル}アミノ)−3−フェニルプロピル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=0.99分;MS(ESIpos):m/z=1140(M+H)+。
中間体224
N−[(2S)−2−({[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチル]カルバモイル}アミノ)プロピル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[(2S)−2−({[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチル]カルバモイル}アミノ)プロピル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.92分;MS(ESIpos):m/z=1064(M+H)+。
中間体225
N−(2−アミノエチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
N−(2−アミノエチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
50mg(0.07mmol)のこの中間体を10mlのDMFに溶解し、52mg(0.07mmol)のN−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド(中間体220)、32mg(0.09mmol)のO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート(HATU)および37μl(0.2mmol)のN,N−ジイソプロピルエチルアミンと混合した。この混合物をRTで一晩攪拌後、濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、最初、5%クエン酸水溶液、次に、水で振盪することにより抽出した。有機相を濃縮し、残渣を分取HPLCで精製した。同一画分を合わせて、溶媒を減圧下除去した。ジオキサンから凍結乾燥後、53mg(理論値の76%)の保護中間体を得た。
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=1.02分;MS(ESIpos):m/z=984(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=1.02分;MS(ESIpos):m/z=984(M+H)+。
53mg(0.05mmol)のこの中間体を10mlのジクロロメタンに溶解し、2mlのトリフルオロ酢酸を加え、反応混合物をRTで30分間攪拌した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残った残渣を分取HPLCで精製した。同一画分を合わせて、溶媒を減圧下除去し、残渣をジオキサン/水から凍結乾燥して、21mg(理論値の40%)の標記化合物を65%純度で得た。
HPLC(方法12):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=884(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=884(M+H)+。
中間体226
N−[2−({[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチル]カルバモイル}アミノ)エチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[2−({[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エチル]カルバモイル}アミノ)エチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.90分;MS(ESIpos):m/z=1050(M+H)+。
中間体227
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(ベンジルオキシ)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:18mg(理論値の51%)
HPLC(方法5):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=0.98分;MS(ESIpos):m/z=1073(M+H)+。
中間体228
(2R,3S)−3−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]−4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブタン−2−イル(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−7、10−ジイソプロピル−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−5、11−ジメチル−6、9−ジオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−オアート
(2R,3S)−3−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]−4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブタン−2−イル(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−7、10−ジイソプロピル−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−5、11−ジメチル−6、9−ジオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−オアート
HPLC(方法12):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=1308(M+H)+。
中間体229
(2R,3S)−3−アセトアミド−4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブタン−2−イル(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−7、10−ジイソプロピル−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−5、11−ジメチル−6、9−ジオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−オアート
(2R,3S)−3−アセトアミド−4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブタン−2−イル(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−7、10−ジイソプロピル−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−5、11−ジメチル−6、9−ジオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−オアート
収量:1.4mg(理論値の40%)
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=1250(M+H)+。
中間体230
(2R,3S)−3−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]−4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブタン−2−イル(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−7、10−ジイソプロピル−5、11−ジメチル−6、9−ジオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−オアート
(2R,3S)−3−[(tert−ブトキシカルボニル)アミノ]−4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブタン−2−イル(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−7、10−ジイソプロピル−5、11−ジメチル−6、9−ジオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−オアート
HPLC(方法12):Rt=2.0分;
LC−MS(方法1):Rt=1.02分;MS(ESIpos):m/z=1335(M+H)+。
中間体231
(2R,3S)−3−アセトアミド−4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブタン−2−イル(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−7、10−ジイソプロピル−5、11−ジメチル−6、9−ジオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−オアート
(2R,3S)−3−アセトアミド−4−{2−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブタン−2−イル(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−7、10−ジイソプロピル−5、11−ジメチル−6、9−ジオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−オアート
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.88分;MS(ESIpos):m/z=1277(M+H)+。
中間体232
ベンジルN−[(4−ニトロフェノキシ)カルボニル]−ベータ−アラニナート
ベンジルN−[(4−ニトロフェノキシ)カルボニル]−ベータ−アラニナート
HPLC(方法12):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=1.07分;MS(ESIpos):m/z=345(M+H)+。
中間体233
N−{2−[({3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロピル}カルバモイル)アミノ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{2−[({3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロピル}カルバモイル)アミノ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=2.1分;
LC−MS(方法1):Rt=0.6分;MS(ESIpos):m/z=1089(M+H)+。
5.4mg(5μmol)のこの中間体を5mlのメタノールに溶解し、2mgの10%パラジウム/活性炭の添加後、標準水素圧力下、RTで20分間水素添加した。触媒を濾別し、溶媒を減圧下除去した。残渣を高真空下で乾燥後、5mg(定量)の酸中間体を得た。
HPLC(方法12):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.84分;MS(ESIpos):m/z=999(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.84分;MS(ESIpos):m/z=999(M+H)+。
5mg(10μmol)のこの中間体を1mlのDMFに溶解し、5.8mg(50mmol)の1−ヒドロキシピロリジン−2,5−ジオン、続いて、2.6μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンおよび3.8mg(10μmol)のHATUと混合した。RTで20時間攪拌後、反応混合物を減圧下で濃縮した。残った残渣を分取HPLCで精製した。1:1ジオキサン/水から凍結乾燥後、1.1mg(理論値の20%)の標記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=1096(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.87分;MS(ESIpos):m/z=1096(M+H)+。
中間体234
N−(6−{[(ベンジルオキシ)カルボニル]アミノ}ヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−{[(ベンジルオキシ)カルボニル]アミノ}ヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.03分;m/z=1066(M+H)+。
中間体235
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=0.81分;m/z=932(M+H)+。
中間体236
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=1.01分;m/z=1012(M+H)+。
中間体237
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=0.91分;m/z=947(M+H)+。
中間体238
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
LC−MS(方法1):Rt=0.95分;m/z=1044(M+H)+。
中間体239
N−メチル−L−スレオニル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
N−メチル−L−スレオニル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
LC−MS(方法1):Rt=1.15分;MS(ESIpos):m/z=976(M+H)+。
29mg(0.003mmol)のこの中間体を5mlのメタノールに溶解し、5mgの5%パラジウム/チャコール上で、標準圧力下、RTで1時間水素添加した。次に、触媒を濾別し、溶媒を留去した。残った残渣を分取HPLCで精製し、17mg(理論値の54%)の標記化合物を得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.77分;MS(ESIpos):m/z=842(M+H)+。
LC−MS(方法1):Rt=0.77分;MS(ESIpos):m/z=842(M+H)+。
中間体240
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−スレオニル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−スレオニル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=1053(M+H)+。
中間体241
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセタート
HPLC(方法12):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=817(M+H)+。
中間体242
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=1028(M+H)+。
あるいは、表記化合物は、標準水素圧力下で10%パラジウム/活性炭を用いてメタノール中で、室温で中間体250の1時間の触媒性水素化によっても得ることができる。
中間体243
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(6−アミノヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:17.5mg(2段階で理論値の34%)
HPLC(方法12):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.63分;MS(ESIpos):m/z=916(M+H)+。
中間体244
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
収量:1.3mg(理論値の12%)
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.89分;MS(ESIpos):m/z=996(M+H)+。
中間体245
2,5−ジオキソピロリジン−1−イルO−[(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−7、10−ジイソプロピル−5、11−ジメチル−6、9、15−トリオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−イル]−N−(tert−ブトキシカルボニル)−L−スレオニル−ベータ−アラニナート
2,5−ジオキソピロリジン−1−イルO−[(3R,4S,7S,10S)−4−[(2S)−ブタン−2−イル]−3−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−7、10−ジイソプロピル−5、11−ジメチル−6、9、15−トリオキソ−2−オキサ−5、8、11−トリアザペンタデカン−15−イル]−N−(tert−ブトキシカルボニル)−L−スレオニル−ベータ−アラニナート
HPLC(方法5):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=1.01分;MS(ESIpos):m/z=1295(M+H)+。
中間体246a
(2S)−2−アミノ−1−(4−ヒドロキシ−1,2−オキサゾリジン−2−イル)−3−(1H−インドール−3−イル)プロパン−1−オントリフルオロ酢酸(1:1)ジアステレオマー1
(2S)−2−アミノ−1−(4−ヒドロキシ−1,2−オキサゾリジン−2−イル)−3−(1H−インドール−3−イル)プロパン−1−オントリフルオロ酢酸(1:1)ジアステレオマー1
標準条件下、20mlのジクロロメタン中の5mlのトリフルオロ酢酸を使って、この中間体の272mg(725μmol)のジアステレオマー1から、Boc保護基を脱離させ、ジオキサン/水から凍結乾燥後、290mg(定量)の標記化合物を75%純度で得て、さらに精製せずに、次の段階に使用した。
HPLC(方法12):Rt=1.1分;
LC−MS(方法13):Rt=1.80分;MS(ESIpos):m/z=276(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.1分;
LC−MS(方法13):Rt=1.80分;MS(ESIpos):m/z=276(M+H)+。
中間体246b
(2S)−2−アミノ−1−(4−ヒドロキシ−1,2−オキサゾリジン−2−イル)−3−(1H−インドール−3−イル)プロパン−1−オントリフルオロ酢酸(1:1)ジアステレオマー2
(2S)−2−アミノ−1−(4−ヒドロキシ−1,2−オキサゾリジン−2−イル)−3−(1H−インドール−3−イル)プロパン−1−オントリフルオロ酢酸(1:1)ジアステレオマー2
LC−MS(方法13):Rt=1.84分;MS(ESIpos):m/z=276(M+H)+。
中間体247a
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(4−ヒドロキシ−1,2−オキサゾリジン−2−イル)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(4−ヒドロキシ−1,2−オキサゾリジン−2−イル)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=1053(M+H)+。
中間体247b
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(4−ヒドロキシ−1,2−オキサゾリジン−2−イル)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−(4−ヒドロキシ−1,2−オキサゾリジン−2−イル)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.86分;MS(ESIpos):m/z=1053(M+H)+。
中間体248
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−tert−ブトキシ−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−tert−ブトキシ−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法12):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.88分;MS(ESIpos):m/z=918(M+H)+。
中間体249
トリフルオロ酢酸−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−[4−(ベンジルオキシ)フェニル]−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド(1:1)
トリフルオロ酢酸−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−[4−(ベンジルオキシ)フェニル]−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド(1:1)
最初に、中間体5および6と同様に、O−ベンジル−N−(tert−ブトキシカルボニル)−L−チロシンから出発して、トリフルオロ酢酸−(2S)−2−アミノ−3−[4−(ベンジルオキシ)フェニル]−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)プロパン−1−オン(1:1)を調製した。次いで、この構築ブロックから、中間体75に記載の合成と同様に、N−(tert−ブトキシカルボニル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−2−カルボキシ−1−メトキシプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド(中間体26)と、O−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートの存在下で、カップリングし、引き続いて、トリフルオロ酢酸によるBoc保護基の排除によって表記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=2.15分;
LC−MS(方法1):Rt=0.99分;MS(ESIpos):m/z=908(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=2.15分;
LC−MS(方法1):Rt=0.99分;MS(ESIpos):m/z=908(M+H)+。
中間体250
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−[4−(ベンジルオキシ)フェニル]−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−[4−(ベンジルオキシ)フェニル]−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
中間体249の100mg(0.088mmol)を、ボラン−ピリジン複合体の存在下で、中間体210と同様に、6−オキサン酸(oxanoic acid)と反応させた。次いで、得られた酸の30mg(0.029mmol)を、活性化エステルに変換した。これによって、15mg(2工程にまたがって理論値の40%)の表記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=2.26分;
LC−MS(方法1):Rt=1.05分;MS(ESIpos):m/z=1119(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=2.26分;
LC−MS(方法1):Rt=1.05分;MS(ESIpos):m/z=1119(M+H)+。
中間体251
N−[4−(2−{5−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−5−オキソペンタノイル}−2−メチルヒドラジノ)−4−オキソブチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[4−(2−{5−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−5−オキソペンタノイル}−2−メチルヒドラジノ)−4−オキソブチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
最初に、30mg(0.032mmol)の中間体193を、活性化されたN−ヒドロキシスクシンイミドエステルに変換した。10.3mg(0.009mmol)のこの活性なエステルを、2mlのDMF中に溶解して、2.7mg(0.018mmol)のtert−ブチル1−メチルヒドラジンカルボキシレートおよび8μLのN,N−ジイソプロピルエチルアミンと混合し、RTで16時間攪拌した。この操作を繰り返し、次いで、バッチを濃縮して、残りの残渣を分取HPLCによって精製した。対応する画分の濃縮および高真空下での乾燥によって、5.4mg(43%)の中間体を得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.99分;MS(ESIpos):m/z=1054(M+H)+。
LC−MS(方法1):Rt=0.99分;MS(ESIpos):m/z=1054(M+H)+。
Boc保護基を、3.5mg(0.002mmol)のこの中間体から、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸を用いて取り除いた。濃縮および高真空での乾燥後、その残渣を、4mlのジクロロメタン中に採取して、1,1’−[(1,5−ジオキソペンタン−1,5−ジイル)bis(オキシ)]ジピロリジン−2,5−ジオンおよび2μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンと混合する。RTで1時間の攪拌後、そのバッチを濃縮して、残りの残渣を、分取HPLCによって精製した。対応する画分の濃縮および高真空下での乾燥によって、1.4mg(44%)の表記化合物を得た。
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.88分;MS(ESIpos):m/z=1166(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.88分;MS(ESIpos):m/z=1166(M+H)+。
中間体252
N−(2−{2−[2−(2−カルボキシエトキシ)エトキシ]エトキシ}エチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(2−{2−[2−(2−カルボキシエトキシ)エトキシ]エトキシ}エチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
100mg(0.088mmol)の中間体249および109mg(0.350mmol)の中間体167を、10mlのメタノール中で合わせて、39mg(0.42mmol)のボラン−ピリジン複合体および15μlの酢酸と混合する。このバッチを、RTで一晩攪拌した。次いで、同じ量のボラン−ピリジン複合体および酢酸を、再度添加して、そのバッチを、さらに24時間、RTで攪拌した。次いで、これを、減圧下で濃縮し、その残渣を、分取HPLCによって精製した。対応する画分の濃縮およびジオキサン/水の1:1からの凍結乾燥によって、98mg(理論値の93%)のbis−ベンジル中間体を得た。この中間体を、18.5mlのメタノールに採取して、および標準的な水素圧力下で、室温で1時間、5%パラジウム/活性炭上で触媒性の水素化に供した。ジオキサンからの残渣の濾過、濃縮および凍結乾燥によって、73mg(理論値の87%)の表記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=1.85分;
LC−MS(方法1):Rt=0.84分;MS(ESIpos):m/z=1021(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.85分;
LC−MS(方法1):Rt=0.84分;MS(ESIpos):m/z=1021(M+H)+。
中間体253
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
22mg(22μmol)の中間体252を、8.5mlのDMF中に溶解し、および25mg(215μmol)の1−ヒドロキシピロリジン−2,5−ジオンと、ならびに引き続き12.3mg(32μmol)のO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HATU)および37μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンと混合した。RTで2時間撹拌した後、その反応混合物を分取HPLCによって精製した。ジオキサンからの凍結乾燥によって、16mg(理論値の62%)の表記化合物を得た。
HPLC(方法5):Rt=1.57分;
LC−MS(方法1):Rt=0.8分;MS(ESIpos):m/z=1118(M+H)+.
HPLC(方法5):Rt=1.57分;
LC−MS(方法1):Rt=0.8分;MS(ESIpos):m/z=1118(M+H)+.
中間体254
N−(2−{2−[2−(2−カルボキシエトキシ)エトキシ]エトキシ}エチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(2−{2−[2−(2−カルボキシエトキシ)エトキシ]エトキシ}エチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
10mg(0.012mmol)の中間体55および11mg(0.036mmol)の中間体167を、1mlのメタノールと合わせて、5.4mg(0.058mmol)のボラン−ピリジン複合体および1μlの酢酸と混合した。このバッチを、RTで一晩撹拌した。次いで、同じ量のボラン−ピリジン複合体および酢酸をもう一度添加し、そのバッチをRTでさらに20時間撹拌した。次いで、これを減圧下で濃縮し、その残渣を、分取HPLCによって精製した。対応する画分の濃縮およびジオキサン/水の1:1からの凍結乾燥によって、8mg(理論値の58%)のbis−ベンジルの中間体を得た。この中間体を、2mlのメタノールの中に採取して、5%パラジウム/活性炭上の触媒性の水素化に、標準の水素圧下で、室温で1時間供した。その残渣のジオキサンからの濾過、濃縮、および凍結乾燥によって7mg(理論値の95%)の表記化合物を得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.99分;MS(ESIpos):m/z=1036(M+H)+.
LC−MS(方法1):Rt=0.99分;MS(ESIpos):m/z=1036(M+H)+.
中間体255
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
7.3mg(7μmol)の中間体254を、0.3mlのDMFに溶解し、ならびに12mg(106μmol)の1−ヒドロキシピロリジン−2,5−ジオンと、および引き続き13.5mg(35μmol)のO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HATU)および6μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンと混合した。RTで2時間の撹拌後、その反応混合物を、分取HPLCによって精製した。ジオキサンからの凍結乾燥によって、7.7mg(理論値の79%)の表記化合物を得た。
LC−MS(方法1):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=1134(M+H)+.
LC−MS(方法1):Rt=0.97分;MS(ESIpos):m/z=1134(M+H)+.
中間体256
N−(2−{2−[2−(2−アミノエトキシ)エトキシ]エトキシ}エチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(2−{2−[2−(2−アミノエトキシ)エトキシ]エトキシ}エチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
20mg(0.02mmol)の中間体55を、中間体254の調製と同様に、ボラン−ピリジン複合体の存在下で、ベンジル(2−{2−[2−(2−オキソエトキシ)エトキシ]エトキシ}エチル)−カルバメート(中間体172)を用いる、還元的アミノ化に供した。Z保護基を引き続き、水素化分解によって、5%パラジウム/炭素を触媒として用い、かつメタノール溶媒中で取り出して、21mg(2段階にまたがって理論値の85%)の表記化合物を調製した。
LC−MS(方法1):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=1008(M+H)+。
LC−MS(方法1):Rt=0.85分;MS(ESIpos):m/z=1008(M+H)+。
中間体257
N−[2−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−[2−(2−{2−[2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ]エトキシ}エトキシ)エチル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(5−フェニル−1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
21mg(20.8μmol)の中間体256を、1mlのジオキサン/水の1:1の中に採取し、次いで、4.9mg(31.2μmol)のメチル2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−カルボキシレート、およびまた42μlの1Mの炭酸水素ナトリウム水溶液と混合した。その反応混合物を、RTで30分間撹拌した。次いで、さらに374μlの1M炭酸水素ナトリウム水溶液を添加し、その反応混合物をRTでさらに30分間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。その残った残渣を、分取HPLCによって精製した。凍結乾燥によって4.5mg(理論値の20%)の表記化合物を、無色の泡状物として得た。
LC−MS(方法1):Rt=1.04分;MS(ESIpos):m/z=1088(M+H)+。
LC−MS(方法1):Rt=1.04分;MS(ESIpos):m/z=1088(M+H)+。
中間体258
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−[4−(ベンジルオキシ)フェニル]−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−[4−(ベンジルオキシ)フェニル]−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
この化合物は、中間体249から出発して、tert−ブチル3−{2−[2−(2−オキソエトキシ)エトキシ]エトキシ}プロパノエートを用いる還元性アルキル化によって、続いて、t−ブチルエステル切断およびN−ヒドロキシスクシンイミドエステルへの変換によって調製した。
HPLC(方法5):Rt=1.96分;
LC−MS(方法1):Rt=1.11分;MS(ESIpos):m/z=1208(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=1.96分;
LC−MS(方法1):Rt=1.11分;MS(ESIpos):m/z=1208(M+H)+。
中間体259
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3E)−1,4−ジフェニルブト−3−エン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−(5−カルボキシペンチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3E)−1,4−ジフェニルブト−3−エン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
9.6mg(8.4μmol)のN−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3E)−1,4−ジフェニルブト−3−エン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドトリフルオロアセテート(中間体58)および6.5mg(51μmol)の6−オキソヘキサン酸を、769μlのメタノール中に採取して、酢酸を用いて酸性にした。次いで、室温で、4μl(40μmol)のボラン−ピリジン複合体を添加した。その反応混合物を、引き続きRTで20時間撹拌した。次いで、その反応混合物を、トリフルオロ酢酸を用いてpH2に調整し、分取HPLCによって精製した。その生成画分を、合わせて、濃縮し、その残渣を、凍結乾燥した。これによって8mg(理論値の93%)の表記化合物を、泡状物として得た。
LC−MS(方法1):Rt=1.06分;m/z=1019(M+H)+。
LC−MS(方法1):Rt=1.06分;m/z=1019(M+H)+。
中間体260
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3E)−1,4−ジフェニルブト−3−エン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{6−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−6−オキソヘキシル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S,3E)−1,4−ジフェニルブト−3−エン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
7.5mg(7.4μmol)の中間体259を、332μlのDMFに溶解し、12.7mg(110μmol)の1−ヒドロキシピロリジン−2,5−ジオンと、ならびに引き続き14mg(37μmol)のO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HATU)および6μlのN,N−ジイソプロピルエチルアミンと混合した。RTで2時間の撹拌後、その反応混合物を、分取HPLCによって精製した。ジオキサンからの凍結乾燥によって、4mg(理論値の55%)の表記化合物を得た。
LC−MS(方法1):Rt=1.19分;m/z=1002(M+H)+。
LC−MS(方法1):Rt=1.19分;m/z=1002(M+H)+。
中間体261
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
N−{2−[2−(2−{3−[(2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)オキシ]−3−オキソプロポキシ}エトキシ)エトキシ]エチル}−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−{[(1S,2R)−1−(1,2−オキサジナン−2−イルカルボニル)−2−フェニルシクロプロピル]アミノ}−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
この化合物は、中間体16から出発して、ベンジル3−{2−[2−(2−オキソエトキシ)エトキシ]エトキシ}プロパノエートを用いる還元性アルキル化、引き続いて水素化分解によるベンジルエステル切断、およびN−ヒドロキシスクシンイミドエステルへの変換によって調製した。
HPLC(方法5):Rt=1.83分;
LC−MS(方法1):Rt=0.93分;MS(ESIpos):m/z=1114(M+H)+。
HPLC(方法5):Rt=1.83分;
LC−MS(方法1):Rt=0.93分;MS(ESIpos):m/z=1114(M+H)+。
B:抗体−薬物コンジュゲート(ADCs)の調製
B−1.抗FGFR2抗体の生成
本発明の抗FGFR2抗体M048−D01−hIgG1およびM048−D01−hIgG1−bは、ファージディスプレイ技術によって、Bioinvent International AB(Lund,Sweden;Soederlingら、Nat.Biotech.2000,18:853−856に記載)のナイーブなFab抗体ライブラリーn−CoDeRを用いて、単離した。1つのスクリーニングヒットは、親のFabフラグメントM048−D01であった。このFabフラグメントの重鎖Vhの可変領域は、配列番号21に示されており;軽鎖Vlの可変領域は、配列番号22によって示される。M048−D01のFabフラグメントの特定後、これは、M048−D01−hIgG1−bの名称で(重鎖については、配列番号10、および軽鎖については配列番号9)、ヒトIgGの形態で発現された。効率的なクローニングのためには、M048−D01−hIgG1−b[EVQ]の重鎖のN末端の最初の3アミノ酸も、代わりにQVEとして発現された。このバリエーションによって、抗体M048−D01−hIgG1(重鎖について配列番号8、および軽鎖について配列番号7)が得られた。M048−D01−hIgG1の可変領域VhおよびVlは、配列番号11および配列番号12として示される;M048−D01−hIgG1−bの可変領域VhおよびVlは、配列番号13および配列番号14で示される。両方の抗体とも同じCDR配列を有し、これは、配列番号15(H−CDR1)、16(H−CDR2)、17(H−CDR3)、18(L−CDR1)、19(L−CDR2)および20(L−CDR3)によって示される。
B−1.抗FGFR2抗体の生成
本発明の抗FGFR2抗体M048−D01−hIgG1およびM048−D01−hIgG1−bは、ファージディスプレイ技術によって、Bioinvent International AB(Lund,Sweden;Soederlingら、Nat.Biotech.2000,18:853−856に記載)のナイーブなFab抗体ライブラリーn−CoDeRを用いて、単離した。1つのスクリーニングヒットは、親のFabフラグメントM048−D01であった。このFabフラグメントの重鎖Vhの可変領域は、配列番号21に示されており;軽鎖Vlの可変領域は、配列番号22によって示される。M048−D01のFabフラグメントの特定後、これは、M048−D01−hIgG1−bの名称で(重鎖については、配列番号10、および軽鎖については配列番号9)、ヒトIgGの形態で発現された。効率的なクローニングのためには、M048−D01−hIgG1−b[EVQ]の重鎖のN末端の最初の3アミノ酸も、代わりにQVEとして発現された。このバリエーションによって、抗体M048−D01−hIgG1(重鎖について配列番号8、および軽鎖について配列番号7)が得られた。M048−D01−hIgG1の可変領域VhおよびVlは、配列番号11および配列番号12として示される;M048−D01−hIgG1−bの可変領域VhおよびVlは、配列番号13および配列番号14で示される。両方の抗体とも同じCDR配列を有し、これは、配列番号15(H−CDR1)、16(H−CDR2)、17(H−CDR3)、18(L−CDR1)、19(L−CDR2)および20(L−CDR3)によって示される。
抗体GAL−FR21−mIgG1およびGAL−FR22−mIgG2aは、WO2010/054265において、mIgG1(GAL−FR21)およびmIgG2b(GAL−FR22)として記載されている。GAL−FR21は、そこでは、Vh(WO2010/054265では配列番号4)で、およびVl(WO2010/054265の配列番号1)で定義されており、かつGAL−22は、Vh(WO2010/054265の配列番号8)およびVl(WO2010/054265の配列番号7)で規定されている。本出願に記載される研究に関しては、GAL−FR21のVlおよびVhは、マウスのIgG1形式に再フォーマットされ、これによって、抗体GAL−FR21−mIgG1(本出願の配列番号3および配列番号4)が得られる。GAL−FR22のVlおよびVhは、マウスIgG2a形式に再フォーマットされ、これによって、抗体GAL−FR22−mIgG2a(本出願の配列番号5および配列番号6)が得られる。
B−2.抗FGFR2抗体の発現
抗体M048−D01−hIgG1、M048−D01−hIgG1−b、GAL−FR21−mIgG1およびGAL−FR22−mIgG2aは、哺乳動物細胞培養物中で一過性に生成された。
抗体M048−D01−hIgG1、M048−D01−hIgG1−b、GAL−FR21−mIgG1およびGAL−FR22−mIgG2aは、哺乳動物細胞培養物中で一過性に生成された。
この発現構築物は下に記載のとおり生成した:
ファージディスプレイに由来するM048−D01 FabのVhおよびVl領域をIgG形式へ変換するために、およびE.coli由来の発現系を哺乳動物細胞へ変化するために、ファージディスプレイE.coliクローンからのVhおよびVl配列を、PCRプライマーを用いて増幅した。隣接する制限酵素部位を、HhおよびVlの両方の5’および3’末端に導入した。これらの制限酵素切断部位を、IgG骨格を含む発現ベクターへのVhおよびVlのクローニングにために用いた。
ファージディスプレイに由来するM048−D01 FabのVhおよびVl領域をIgG形式へ変換するために、およびE.coli由来の発現系を哺乳動物細胞へ変化するために、ファージディスプレイE.coliクローンからのVhおよびVl配列を、PCRプライマーを用いて増幅した。隣接する制限酵素部位を、HhおよびVlの両方の5’および3’末端に導入した。これらの制限酵素切断部位を、IgG骨格を含む発現ベクターへのVhおよびVlのクローニングにために用いた。
E.coli細胞を、100μlの水を含む試験管中で95℃で10分間、インキュベートし、次いで、氷上に5分間置いた。短いボルテックスの後、その溶液を遠心分離によって清澄化した。分取した上清を、DNA増幅のために用いた。PCR反応は、VhおよびVlについて別々に行った。これは、VlについてはBamHIおよびNotI切断部位を、ならびにVhについては、MfeI、およびMfeIおよびBlpI切断部位を用いて特定のプライマー対を用いて行った。PCR反応は、製造業者の指示に従って、AccuPrime Pfxポリメラーゼ(Invitrogen,#12344−024)を用いて行った。PCR生成物は、1%アガロースゲルで分析した。適合性の末端を得るために、発現ベクターおよびPCR生成物を、製造業者の指示に従って、対応する制限エンドヌクレアーゼを用いて37℃で2時間消化した(表1を参照のこと)。消化は、70℃で15分間のインキュベーションによって停止させた。得られたフラグメントを、発現ベクターに連結して、E.coliまたは哺乳動物細胞を、標準的な方法によって構築物で形質転換した。
特定の抗体(GAL−FR21−mIgG1,GAL−FR22−mIgG2aおよびM048−D01−hIgG1−b)のVhドメインおよびVlドメインの、または完全軽鎖のDNA配列を、Geneart遺伝子合成および遺伝子最適化技術(life technologies,Grand Island,NY,USA)によって、哺乳動物遺伝子発現のために合成した。遺伝子合成の間、哺乳動物シグナルペプチドをコードする配列上のVドメインを、上流のKozaki配列と融合した。隣接する制限切断部位を、合成されたDNA構築物の5’および3’末端に挿入した。これらの制限切断部位を、VhおよびVl、または軽鎖を発現ベクター(IgGの定常領域のコードを含む)にクローニングするために用いた。
発現ベクターおよびGeneart構築物を、製造業者の指示に従って、それぞれの制限エンドヌクレアーゼを用いて37℃で2時間消化して、適合性の末端を得た(表1を参照のこと)。消化は、70℃で15分間のインキュベーションで停止した。得られたフラグメントを連結し、E.coli細胞を連結物で形質転換した。これらの形質転換体から得られたプラスミドを用いて、標準的な方法によって哺乳動物細胞を形質転換した。
抗体は、Tomら、(Tomら、第12章 in Methods Express:Expression Systems,編集Michael R.DysonおよびYves Durocher,Scion Publishing Ltd,2007)に記載のとおり、哺乳動物細胞培養物中で一過性に発現された:抗FGFR2抗体、例えば、M048−D01−hIgG1、GAL−FR21−mIgG1およびGAL−FR22−mIgG2aの発現のためには、HEK2936E細胞を、適切なCMVプロモーターベースの発現プラスミドで一過性のトランスフェクトした。細胞培養物の規模は、振盪スラスコ中で最大1.5lまで、または「ウェーブ・バッグ(wave−bag)」中で10lまでであった。発現は、37℃で5〜6日間、1%「FCS超低IgG」(Invitrogen)および0.5mMバルプロ酸を含む、トリプトンTN1(Organotechnie)を補充したF17培地(Invitrogen)で行った。
あるいは、抗FGFR2抗体、例えば、M048−D01−hIgG1−bは、安定にトランスフェクトされたチャイイーズハムスター卵巣(Chinese hamster ovary)(CHO)細胞株中で発現された。これは、1つのベクター系を用いて行った。ファーメンテーションは、供給バッチプロセスで、異なるスケールで、バイオリアクター中でおきた。
ファージディスプレイからのM048−D01−ベースの抗体に属する親のFabフラグメントM048−D01(Vh:配列番号21、Vl:配列番号22)は、以下のように発現された:20〜50mlのLB培地(0.1mg/mlアンピシリンおよび0.1%グルコースと混合)に、最初のpBifベクターを含み、遺伝子III配列は欠いていたが、ただしその中にM048−D01 Fab配列はクローニングされていた、対応するE.coliクローンの初代培養物を接種した。sFabの産生は、0.5mMのIPTG(最終濃度)の添加によって開始した。インキュベーションは、30℃一晩250rpmで行った。
B−3.FGFR−2抗体の精製
抗体、例えば、M048−D01−hIgG1、M048−D01−hIgG1−b、GAL−FR21−mIgG1およびGAL−FR22−mIgG2aは、細胞培養上清から得た。細胞上清は、細胞からの遠心分離によって清澄化した。この細胞上清は、引き続きアフィニティークロマトグラフィーによって、MabSelect Sure(GE Healthcare)クロマトグラフィーカラム上で精製した。この目的のために、カラムを、DPBS pH7.4(Sigma/Aldrich)中で平衡にし、細胞上清を加えて、カラムを約10カラム容積のDPBS(pH7.4)+500mMのNaClで洗浄した。抗体を、50mMの酢酸Na(pH3.5)+500mMのNaCl中で溶出し、引き続き、ゲル濾過クロマトグラフィーによってSuperdex 200カラム(GE Heathlcare)上でDPBS pH7.4でさらに精製した。
抗体、例えば、M048−D01−hIgG1、M048−D01−hIgG1−b、GAL−FR21−mIgG1およびGAL−FR22−mIgG2aは、細胞培養上清から得た。細胞上清は、細胞からの遠心分離によって清澄化した。この細胞上清は、引き続きアフィニティークロマトグラフィーによって、MabSelect Sure(GE Healthcare)クロマトグラフィーカラム上で精製した。この目的のために、カラムを、DPBS pH7.4(Sigma/Aldrich)中で平衡にし、細胞上清を加えて、カラムを約10カラム容積のDPBS(pH7.4)+500mMのNaClで洗浄した。抗体を、50mMの酢酸Na(pH3.5)+500mMのNaCl中で溶出し、引き続き、ゲル濾過クロマトグラフィーによってSuperdex 200カラム(GE Heathlcare)上でDPBS pH7.4でさらに精製した。
E.coliで発現される親のM048−D01 Fabフラグメントを以下のように精製した:E.coli細胞は、遠心分離によって回収して、溶解緩衝液(20%スクロース(w/v)、30mM TRIS,1mMのEDTA、pH8.0、1mg/mlリゾチーム(Sigma L−6876)および2.5U/ml Benzonase(Sigma E1014))の中で、4℃で1時間のインキュベーションによって溶解した。その後、同じ容積のPBSを添加した。その後、清澄化した上清を、his−タグ単離のためにDynabeadsに加え(Invitrogen,101−03D)、その混合物を、4℃で2時間、旋回させた。その後、マトリックスを、緩衝液1(50mM リン酸Na緩衝液,pH7.4,300mMのNaCl,5mMのイミダゾール、0.01%のTween 20)を用いて3回洗浄した。引き続き、緩衝液2中で単回洗浄工程を行う(0.005%のTween20と混合したPBS)。最後に、Fabsを緩衝液E(10mMのリン酸Na緩衝液、pH7.4、300mMのNaCl、300mMのイミダゾール)で溶出し、およびVivaspin 500濃縮器でPBS緩衝液を用いて濃縮した(カットオフ10000、GE,28−9322−25より)。
B−4.M048−D01ベースの抗体の交差反応性プロフィールの構築
本出願のヒト抗体M048−D01−hIgG1およびM048−D01−hIgG1−bの交差反応性は、親のFabフラグメントM048−D01を用いて決定した(Vh:配列番号21およびVl:配列番号22を含んでいる)。
M048−D01 Fabフラグメントは、表2に列挙される種々のFGFレセプター変異体に対する結合についてELISA中で試験した。
本出願のヒト抗体M048−D01−hIgG1およびM048−D01−hIgG1−bの交差反応性は、親のFabフラグメントM048−D01を用いて決定した(Vh:配列番号21およびVl:配列番号22を含んでいる)。
M048−D01 Fabフラグメントは、表2に列挙される種々のFGFレセプター変異体に対する結合についてELISA中で試験した。
全ての変異体は、担体なしの調製物中でFc融合タンパク質の形態をとる。このタンパク質は、製造業者の指示に従って、2倍モル過剰のビオチン−LC−NHS(Pierce;Cat.No.21347)を用いて、ビオチン化され、Zeba脱塩カラム(Pierce;Cat.No.89889)を用いて脱塩された。
ELISAのために、ストレプトアビジンで事前処理された96ウェルプレート(Pierce,15500)に、一晩、4℃で、1μg/mlのビオチン化タンパク質をロードした。ビオチン化TRAIL−Fcをロードしたウェルが参照として役立った。翌日、プレートを、3×のPBST(1×PBS、0.05%のTween20(Sigma,P7949))を用いて洗浄し、ブロッキング緩衝液(3%BSAと混合されたPBST(Sigma A4503))で処理して、再度PBSTで3回洗浄した。100μlの精製されたFab(1μg/ml)を添加して、インキュベーションを室温で1時間行った。PBSTを用いて3倍洗浄の後、HRPカップリング抗hIgG(Fab−特異的)(1:2500希釈,Sigma,A0293)を添加し、インキュベーションは、室温で1時間行った。呈色反応は、50μlのTMB(Invitrogen,2023)の添加によって活性化し、50μlのH2SO4(Merck,1120801000)の添加によって5〜15分後に停止した。呈色反応は、プレートリーダー中(Tecan)中で、450nmでモニターした。TRAIL−Fcを含むウェルのシグナル強度を、バックグラウンド値として用いて、シグナル対バックグラウンドの比を表3にまとめたように算出した。
表2で証明されるとおり、M048−D01ベースの抗体であるM048−D01−hIgG1およびM048−D01−hIgG1−bは、ヒトおよびマウスのFGFR2に結合し、そのため該当の形態がαアイソフォームであるかβアイソフォームであるかとは独立して、IIIbおよびIIIcスプライス型である。表から同様に明らかであるとおり、本発明のM048−D01ベースの抗体は、FGFR1、FGFR3およびFGFR4に結合しない。
B−5.CLIPS技術によるエピトープマッピング
M048−D01ベースの抗体の結合特徴を試験するために、本発明のエピトープマッピング操作は、Pepscan’s proprietary「Chemically Linked peptides on Scaffolds」(CLIPS)Technologie(Timmermanら、J.Mol.Recognit.2007, 20:283−99)に基づいて行った。全てにおいて、8653個の異なるCLIPSペプチドを、15アミノ酸〜30アミノ酸長で、デザインし、これは、ヒトFGFR2上の直鎖、立体配置的および不連続のエピトープをカバーしている。このペプチドは、ペプチドアレイ上で合成した。ヒト抗体M048−D01−hIgG1を、ELISAベースの手順で、ペプチドアレイ上で試験した。最高のELSA値をもたらしたペプチドを、分析して、共通の同様のアミノ酸配列を単離した。
M048−D01ベースの抗体の結合特徴を試験するために、本発明のエピトープマッピング操作は、Pepscan’s proprietary「Chemically Linked peptides on Scaffolds」(CLIPS)Technologie(Timmermanら、J.Mol.Recognit.2007, 20:283−99)に基づいて行った。全てにおいて、8653個の異なるCLIPSペプチドを、15アミノ酸〜30アミノ酸長で、デザインし、これは、ヒトFGFR2上の直鎖、立体配置的および不連続のエピトープをカバーしている。このペプチドは、ペプチドアレイ上で合成した。ヒト抗体M048−D01−hIgG1を、ELISAベースの手順で、ペプチドアレイ上で試験した。最高のELSA値をもたらしたペプチドを、分析して、共通の同様のアミノ酸配列を単離した。
標的分子の不連続エピトープを再構築するために、構築されたペプチドのライブラリーを合成した。CLIPS技術によって、ペプチドを個々のループ、二重ループ、三重ループ、シート様ループ、らせん様ループおよびこれらの構造要素の組み合わせに構築することが可能になる:この目的のためにCLIPSテンプレートを、ペプチドアレイのシステイン残基に結合させる。例えば、T2 CLIPSテンプレート1,3−bis(ブロモメチル)ベンゼンの0.5mM溶液を、重炭酸アンモニウム(20mM,pH7.9)/アセトニトリル(1:1(v/v))中に溶解した。この溶液を、ペプチドアレイに添加した。CLIPSテンプレートは、ペプチドアレイ中に存在するペプチドの2システインの側鎖に結合した(3μlのウェルを有する、455ウェルのプレート)。ペプチドアレイは、溶液で完全に覆われて、溶液中で30〜60分間注意深く旋回された。終わりに、このアレイを過剰の水で徹底的に洗浄して、分離緩衝液(1% SDS、0.1%β−メルカプトエタノール、PBS(pH7.2))中で、70℃で30分間、超音波浴中で処理した。超音波浴中の処理を引き続き水中でさらに45分間繰り返した。T3 CLIPS−保有ペプチドを、同様の方式で調製した。
各々のペプチドに対する抗体の結合は、PEPSCANベースのELISA(Sloostraら、Molecular Diversity 1996,1:87−96)で試験した。ペプチドアレイを、5%〜100%の結合緩衝液を用いてプレインキュベート(1時間、20℃)した。この結合緩衝液は、1%のTween80、4%のウマ血清および5%のオボアルブミン(w/v)PBS溶液から構成された。洗浄工程後、ペプチドアレイを、PBSの中の1%Tween80中の一次抗体溶液(1〜5μg/ml)を用いて4℃で一晩インキュベートした。さらなる洗浄工程の後、ペプチドアレイを、25℃で1時間、1/1000希釈の抗体ペルオキシダーゼコンジュゲート(抗−ヒト−IgG)が含有される100%結合剤緩衝液中でインキュベートした。さらなる洗浄工程の後、ペルオキシダーゼ基質2,2’−アジノ−ジ−3−エチルベンゾチアゾリンスルホネート(ABTS)および2μl/mlの3%強度のH2O2を添加した。1時間後、発色を測定して、CCDカメラおよび画像処理システムを用いて定量した。この方法で得た生データは、0〜3000mAU(ミリ吸収単位)におよぶ光学値である。
この結果、M048−D01ベースの抗体の全てが、FGFR2(1RPSFSLVEDTTLEPE15)の15個のN−末端残基からなるエピトープに結合する。1257個のCLIPSおよび直鎖のペプチドの分析によって、N末端ペプチドについて一貫して高いELISA値が得られた。N−末端残基(1RPSFSLVEDTTLEPE15)が、ドメインD3の選択的スプライシングと独立して、ヒトFGFR2の全てのスプライス変異体に存在して、IIIbおよびIIIcアイソフォームを生じる。このエピトープはまた、ドメインD1がスプライシングによって全長FGFR2(FGFR2α、配列番号1)から取り除かれる場合にも存在し、結果として、より短いβ型のFGFR2(配列番号2)が生じる。この場合、エピトープはドメインD2の直前に位置する。
特に興味深いのは、N−末端配列がヒト、マウス、ラット、およびアカゲザルで観察されるという事実である。これによって、M048−D01抗体の広範な種間交差反応性が可能になる。本発明の2つの例示的な抗体である、M048−D01−hIgG1およびM048−D01−hIgG1−bの結合エピトープは、図1では縞模様のボックスで示す。
B−6.システイン側鎖に対する結合のための一般的プロセス
カップリング反応で用いられる抗体は以下のとおりであった:
M048−D01−hIgG1
M048−D01−hIgG1−b
カップリング反応で用いられる抗体は以下のとおりであった:
M048−D01−hIgG1
M048−D01−hIgG1−b
1mg/ml〜10mg/mlの濃度範囲のPBS緩衝液中の対応する抗体の溶液に、3当量のトリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩(TCEP)(PBS緩衝液中の溶液)を添加して、その混合物をRTで1時間撹拌した。その後、所望の負荷次第で、中間体102、103、105〜109、111〜114、117〜126、128、129、132〜146、148〜155、157、159〜161、166、171、175〜177、184、189、194〜195、199〜201、205、209、223〜224、226、228〜231、236、244および257からのカップリングのためのマレイミド前駆体化合物またはハロゲン化物前駆体化合物の2当量〜10当量を、DMSO中の溶液として添加した。DMSOの量は、全体的溶液の10%を超えるべきではない。このバッチを、RTで、60〜120分撹拌し、次いで、PBSで平衡にしたPD10カラム(Sephadex(登録商標)G−25,GE Healthcare)に加え、PBS緩衝液で溶出した。必要に応じて濃縮手順を、さらに超遠心分離によって行った。
正常には、別段示さない限り、PBS緩衝液中の5mgの対応する抗体を、還元および引き続くカップリングのために用いた。PD10カラムを介した精製後、これによって、各々の場合に、3.5mlのPBS緩衝液中の対応するADCの溶液を得た。次いで、示したこの特定のタンパク質濃度は、これらの溶液について決定された。さらに、抗体の負荷(薬物/mAb比)は、下記の方法によって決定された。このプロセスを用いて、実施例1、3、5〜6、8、10〜12、14、15、27および32に提示される免疫複合体を調製した。
図示された構造式では、AK1AおよびAK1Bの定義は以下のとおりである。
AK1A=抗−FGFR2抗体M048−D01−hIgG1(部分的に還元)−S§1
AK1B=抗−FGFR2抗体M048−D01−hIgG1−b(部分的に還元)−S§1
ここで
§1は、スクシンイミド基との結合を示し、
かつ
Sは、部分的に還元された抗体のシステイン残基のイオウ原子を表す。
AK1A=抗−FGFR2抗体M048−D01−hIgG1(部分的に還元)−S§1
AK1B=抗−FGFR2抗体M048−D01−hIgG1−b(部分的に還元)−S§1
ここで
§1は、スクシンイミド基との結合を示し、
かつ
Sは、部分的に還元された抗体のシステイン残基のイオウ原子を表す。
B−7.リジン側鎖に対するカップリングのための一般的プロセス:
以下の抗体をカップリング反応の用いた:
M048−D01−hIgG1
M048−D01−hIgG1−b
GAL−FR21−mIgG1
GAL−FR22−mIgG2a
以下の抗体をカップリング反応の用いた:
M048−D01−hIgG1
M048−D01−hIgG1−b
GAL−FR21−mIgG1
GAL−FR22−mIgG2a
1mg/ml〜10mg/mlの濃度範囲におけるPBS緩衝液中の対応する抗体の溶液に、所望の負荷次第で、DMSO中の溶液として、中間体104、110、115、116、127、130、131、147、156、158、162、169、178、185、190、202、206、210−216、218、219、227、233、238、240、242、245、247a、247b、250、251、253、255、258および260〜261からのカップリングのために、2〜5当量の前駆体化合物をを添加した。RTでの30分間の撹拌後、DMSO中の同量の前駆体化合物を再度添加した。DMSOの量は、全体の溶液の10%を超えてはならない。RTでさらに30分間撹拌した後、そのバッチを、PD10カラム(Sephadex(登録商標)G−25,PBS緩衝液で溶出)に加えた。必要に応じて、濃縮手順は、さらに限外濾過によって行った。必要に応じて、低分子量構成要素のさらに有効な除去のために、限外濾過による濃縮を、PBS緩衝液での再希釈後に繰り返した。
正常には、他に示さない限り、PBS緩衝液中の5mgの対応する抗体を、カップリングのために用いた。PD10カラムを介した精製後、これによって、各々の場合に、3.5mlのPBS緩衝液中の対応するADCの溶液を得た。次いで、示された特定のタンパク質濃度を、これらの溶液について決定して、抗体の負荷(薬物/mAb比)を、下記の方法によって決定した。
このプロセスを用いて、実施例2、4、7、9、13、16−17、25、26、28−31および33−35に示される免疫複合体を調製した。
図示された構造式では、AK2A、AK2B、AK2DおよびAK2Eの定義は以下のとおりである
AK2A=抗−FGFR2抗体M048−D01−hIgG1−NH§2
AK2B=抗−FGFR2抗体M048−D01−hIgG1−b−NH§2
AK2D=抗−FGFR2抗体 GAL−FR21−mIgG1−NH§2
AK2E=抗−FGFR2抗体 GAL−FR22−mIgG2a−NH§2
ここで
§2は、カルボニル基との連結を示し
かつ
NHは、抗体のリジン残基の側鎖アミノ基を表す。
AK2A=抗−FGFR2抗体M048−D01−hIgG1−NH§2
AK2B=抗−FGFR2抗体M048−D01−hIgG1−b−NH§2
AK2D=抗−FGFR2抗体 GAL−FR21−mIgG1−NH§2
AK2E=抗−FGFR2抗体 GAL−FR22−mIgG2a−NH§2
ここで
§2は、カルボニル基との連結を示し
かつ
NHは、抗体のリジン残基の側鎖アミノ基を表す。
B−8.システイン付加物を調製するための一般的プロセス:
10μmolの上記のマレイミド前駆体化合物を、3mlのDMF中に採取し、2.1mg(20μmol)のL−システインと混合した。その反応混合物をRTで2時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮して、引き続き分取HPLCによって精製した。
10μmolの上記のマレイミド前駆体化合物を、3mlのDMF中に採取し、2.1mg(20μmol)のL−システインと混合した。その反応混合物をRTで2時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮して、引き続き分取HPLCによって精製した。
図示した構造式では、Cysの定義は以下のとおりである
ここで、
§3は、リンカー−トキソフォア単位との連結を示す。
§3は、リンカー−トキソフォア単位との連結を示す。
B−9.リジン添加物を調製するための一般的プロセス:
10μmolの上記の活性なエステル前駆体化合物を、5mlのDMF中に採取して、30μmolのN,N−ジイソプロピルエチルアミンの存在下で、α−アミノ−保護されたL−リジンと混合した。その反応混合物を、RTで2時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、引き続いて分取HPLCによって精製した。次いで、保護基を公知の方法によって取り除いた。
10μmolの上記の活性なエステル前駆体化合物を、5mlのDMF中に採取して、30μmolのN,N−ジイソプロピルエチルアミンの存在下で、α−アミノ−保護されたL−リジンと混合した。その反応混合物を、RTで2時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、引き続いて分取HPLCによって精製した。次いで、保護基を公知の方法によって取り除いた。
本発明のコンジュゲートのさらなる精製および特徴付け
反応が生じた後、特定の場合に、反応混合物を、例えば、限外濾過によって濃縮し、次いで、例えば、Sephadex(登録商標)G−25を用いる、クロマトグラフィーによって脱塩して精製した。溶出は、例えば、リン酸緩衝化生理食塩水(PBS)で行った。この溶液を引き続き、無菌濾過および凍結に供した。別の選択肢は、コンジュゲートを凍結乾燥することである。
反応が生じた後、特定の場合に、反応混合物を、例えば、限外濾過によって濃縮し、次いで、例えば、Sephadex(登録商標)G−25を用いる、クロマトグラフィーによって脱塩して精製した。溶出は、例えば、リン酸緩衝化生理食塩水(PBS)で行った。この溶液を引き続き、無菌濾過および凍結に供した。別の選択肢は、コンジュゲートを凍結乾燥することである。
B−10.トキソフォア負荷の決定
PBS緩衝液中の、実施例に記載のコンジュゲートの得られた溶液のトキソフォア負荷は以下のとおり決定した:
リジン連結ADCのトキソフォア負荷は、個々のコンジュゲート種の分子量の質量分析決定によって決定した。この場合、開始のために、抗体コンジュゲートを、PNGaseFによって脱グリコシル化して、サンプルを酸性にして、HPLC分離後に、ESI−MicroTofQ(Bruker Daltonik)を用いて質量分析によって分析した。全てのスペクトルは、TIC(Total Ion Chromatogram)中のシグナルを介して添加し、種々のコンジュゲート種の分子量を、MaxEnt Deconvolutionに基づいて算出した。異なる種のシグナル積分後、次に、DAR(薬物/抗体比(薬物/抗体比))を算出した。
PBS緩衝液中の、実施例に記載のコンジュゲートの得られた溶液のトキソフォア負荷は以下のとおり決定した:
リジン連結ADCのトキソフォア負荷は、個々のコンジュゲート種の分子量の質量分析決定によって決定した。この場合、開始のために、抗体コンジュゲートを、PNGaseFによって脱グリコシル化して、サンプルを酸性にして、HPLC分離後に、ESI−MicroTofQ(Bruker Daltonik)を用いて質量分析によって分析した。全てのスペクトルは、TIC(Total Ion Chromatogram)中のシグナルを介して添加し、種々のコンジュゲート種の分子量を、MaxEnt Deconvolutionに基づいて算出した。異なる種のシグナル積分後、次に、DAR(薬物/抗体比(薬物/抗体比))を算出した。
タンパク質特定のために、分子量決定に加えて、トリプシン消化を、脱グリコシル化および/または変性の後に行い、そしてこの消化によって、変性、還元および誘導体化後に、検出されたトリプシンペプチドに基づいてタンパク質特定を確認した。
システイン連結コンジュゲートのトキソフォア負荷は、還元および変性したADCの逆相クロマトグラフィーによって決定した。ADC溶液(1mg/mL,50μL)を、グアニジン塩酸塩(GuHCl)(28.6mg)と、およびDL−ジチオスレイトール(DTT)(500mM,3μL)の溶液と混合した。その混合物を、55℃で1時間インキュベートして、HPLCによって分析した。
HPLC分析を、220nmの検出によってAgilent 1260 HPLC Systemで行った。用いたカラムは、Polymer Laboratories PLRP−S Polymeric Reversed Phaseカラム(カタログ番号PL1912−3802)(2.1×150mm、8μm粒径,1000Å)であって、流速1mL/分であり、以下の勾配を用いた:0分、25%のB;3分、25%のB;28分、50%のB。溶出液Aは、水に含有される0.05%のトリフルオロ酢酸(TFA)からなり、溶出液Bは、アセトニトリルに含有される0.05%のトリフルオロ酢酸からなった。
検出されたピークを、非コンジュゲートの抗体の軽鎖(L0)および重鎖(H0)との保持時間比較によって割り当てた。コンジュゲートされたサンプル中で排他的に検出されたピークを、軽鎖に(トキソフォア(L1)を有する)、および重鎖に(1、2および3つのトキソフォア(H1、H2、H3)を有する)に割り当てた。
トキソフォアによる抗体の平均負荷は、以下のような積分によって決定したピーク面積から決定した:軽鎖負荷は、軽鎖に属するピークのトキソフォア数の加重された積分結果の合計を、軽鎖に属するピークの単独の加重積分結果の合計で割って算出された。重鎖負荷は、重鎖に属するピークのトキソフォア数の加重された積分結果の合計を、重鎖に属するピークの単独の加重積分結果の合計で割って算出された。平均の薬物負荷は、それらから軽鎖負荷および重鎖負荷の2倍の合計として得る。特定の個々の場合、特定のピークの同時溶出のせいで、トキソフォア負荷を決定することが正確には不可能である場合がある。
B−11.TDCの抗原結合の試験
標的分子に対する結合剤の結合能力は、カップリングが生じた後に試験した。当業者は、これを活性化するための多様な方法を公知である。例えば、コンジュゲートの親和性は、ELISA技術または表面プラズモン共鳴分析(BIAcore(商標)測定)によって試験され得る。コンジュゲート濃度は、一般的な方法を用いて、例えば、抗体コンジュゲートについては、タンパク質決定によって、当業者によって測定され得る(また、Doroninaら、;Nature Biotechnol.2003;21:778−784およびPolsonら、Blood 2007;1102:616−623も参照のこと)。
標的分子に対する結合剤の結合能力は、カップリングが生じた後に試験した。当業者は、これを活性化するための多様な方法を公知である。例えば、コンジュゲートの親和性は、ELISA技術または表面プラズモン共鳴分析(BIAcore(商標)測定)によって試験され得る。コンジュゲート濃度は、一般的な方法を用いて、例えば、抗体コンジュゲートについては、タンパク質決定によって、当業者によって測定され得る(また、Doroninaら、;Nature Biotechnol.2003;21:778−784およびPolsonら、Blood 2007;1102:616−623も参照のこと)。
実施例−免疫複合体
実施例1
カップリングはここで、PBS中に含まれる30mgのM048−D01−hIgG1を用いて行い、その後にSephadex精製を続けて、そのバッチを、限外濾過によって濃縮して、PBSで再希釈して、再度濃縮された。
タンパク質濃度:15.5mg/ml
薬物/mAb比:3.7
実施例1
タンパク質濃度:15.5mg/ml
薬物/mAb比:3.7
実施例2
カップリングはここで、PBS中の32mgのM048−D01−hIgG1を用いて行い、その後にSephadex精製を続けて、そのバッチを、限外濾過によって濃縮して、PBSを用いて再希釈して、そして再度濃縮した。
タンパク質濃度:11.7mg/ml
薬物/mAb比:3.9
タンパク質濃度:11.7mg/ml
薬物/mAb比:3.9
実施例3
カップリングはここで、PBS中に含まれる30mgのM048−D01−hIgG1を用いて行い、その後にSephadex精製を続けて、そのバッチを、限外濾過によって濃縮して、PBSを用いて再希釈して、そして再度濃縮した。
タンパク質濃度:12.5mg/ml
薬物/mAb比:3.7
タンパク質濃度:12.5mg/ml
薬物/mAb比:3.7
実施例4
カップリングはここで、PBS中に含まれる2mgのM048−D01−hIgG1を用いて行い、その後にSephadex精製を続けて、そのバッチを、限外濾過によって濃縮して、およびPBSを用いて再希釈した。
タンパク質濃度:1.92mg/ml
薬物/mAb比:3.7
タンパク質濃度:1.92mg/ml
薬物/mAb比:3.7
実施例5
カップリングはここで、PBS中に含まれる3mgのM048−D01−hIgG1を用いて行い、その後にSephadex精製を続けて、そのバッチを、限外濾過によって濃縮して、そして、再希釈した。
タンパク質濃度:2.54mg/ml
薬物/mAb比:3.1
タンパク質濃度:2.54mg/ml
薬物/mAb比:3.1
実施例6
カップリングはここで、PBS中に含まれる4mgのM048−D01−hIgG1を用いて行い、その後にSephadex精製を続けて、そのバッチを、限外濾過によって濃縮して、そして、再希釈した。
タンパク質濃度:1.53mg/ml
薬物/mAb比:2.7
タンパク質濃度:1.53mg/ml
薬物/mAb比:2.7
実施例7
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、その後にSephadex精製を続けて、そのバッチを、限外濾過によって濃縮して、そして、再希釈した。
タンパク質濃度:1.28mg/ml
薬物/mAb比:6.1
タンパク質濃度:1.28mg/ml
薬物/mAb比:6.1
実施例8
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、その後にSephadex精製を続けて、そのバッチを、限外濾過によって濃縮して、そして、再希釈した。
タンパク質濃度:1.26mg/ml
薬物/mAb比:3.5
タンパク質濃度:1.26mg/ml
薬物/mAb比:3.5
実施例9
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、その後にSephadex精製を続けて、そのバッチを、限外濾過によって濃縮して、そして、再希釈した。
タンパク質濃度:1.28mg/ml
薬物/mAb比:6.1
タンパク質濃度:1.28mg/ml
薬物/mAb比:6.1
実施例10
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、その後にSephadex精製を続けて、そのバッチを、限外濾過によって濃縮して、そして、再希釈した。
タンパク質濃度:1.36mg/ml
薬物/mAb比:4.4
タンパク質濃度:1.36mg/ml
薬物/mAb比:4.4
実施例11
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、その後にSephadex精製を続けて、そのバッチを、限外濾過によって濃縮して、そして、再希釈した。
タンパク質濃度:1.27mg/ml
薬物/mAb比:4.8
タンパク質濃度:1.27mg/ml
薬物/mAb比:4.8
実施例12
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、その後にSephadex精製を続けて、そのバッチを、限外濾過によって濃縮して、そして、再希釈した。
タンパク質濃度:1.48mg/ml
薬物/mAb比:4.0
タンパク質濃度:1.48mg/ml
薬物/mAb比:4.0
実施例13
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、その後にSephadex精製を続けて、そのバッチを、限外濾過によって濃縮して、そして、再希釈した。
タンパク質濃度:1.21mg/ml
薬物/mAb比:1.5
タンパク質濃度:1.21mg/ml
薬物/mAb比:1.5
実施例14
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、そしてそのバッチを、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮して、再希釈した。
タンパク質濃度:1.27mg/ml
薬物/mAb比:2.7
タンパク質濃度:1.27mg/ml
薬物/mAb比:2.7
実施例15
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、そしてそのバッチを、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮し、およびPBSを用いて再希釈した。
タンパク質濃度:1.37mg/ml
薬物/mAb比:3.9
タンパク質濃度:1.37mg/ml
薬物/mAb比:3.9
実施例16
カップリングはここで、PBS中に含まれる4mgのGAL−FR21−mIgG1を用いて行い、そしてそのバッチを、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮し、およびPBSを用いて再希釈した。
タンパク質濃度:1.63mg/ml
薬物/mAb比:8.7
タンパク質濃度:1.63mg/ml
薬物/mAb比:8.7
実施例17
カップリングはここで、PBS中に含まれる4mgのGAL−FR22−mIgG2aを用いて行い、そしてそのバッチを、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮し、およびPBSを用いて再希釈した。
タンパク質濃度:1.60mg/ml
薬物/mAb比:8.1
タンパク質濃度:1.60mg/ml
薬物/mAb比:8.1
実施例18
N−(6−{[(5S)−5−アミノ−5−カルボキシペンチル]アミノ}−6−オキソヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド トリフルオロアセテート
15.5mg(15μmol)の中間体210を、5mlのDMF中に採取して、4.4mg(18μmol)のN2−(tert−ブトキシカルボニル)−L−リジンおよびまた7.7μL(44μmol)のN,N−ジイソプロピルエチルアミンとも混合した。その反応混合物を、RTで一晩撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。その残渣を、引き続き分取HPLCによって精製した。これによって14mg(理論値の81%)の表記化合物の保護された中間体を得て、これを引き続き1mlのジクロロメタン中に採取して、1mlのトリフルオロ酢酸で脱保護した。このバッチを濃縮して、アセトニトリル/水(1:1)からの残渣の凍結乾燥後、15mg(理論値の97%)の表記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.79分;MS(ESIpos):m/z=1083(M+H)+。
N−(6−{[(5S)−5−アミノ−5−カルボキシペンチル]アミノ}−6−オキソヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド トリフルオロアセテート
HPLC(方法12):Rt=1.8分;
LC−MS(方法1):Rt=0.79分;MS(ESIpos):m/z=1083(M+H)+。
実施例19
N−(6−{[(5S)−5−アミノ−5−カルボキシペンチル]アミノ}−6−オキソヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
40mg(40μmol)の中間体227を、5mlのDMF中に採取して、11.5mg(40μmol)のN2−[(ベンジルオキシ)カルボニル]−L−リジンおよびまた13μL(80μmol)のN,N−ジイソプロピルエチルアミンとも混合した。その反応混合物を、RTで一晩撹拌し、次いで減圧下で濃縮し、引き続き分取HPLCによって精製した.これによって、32.5mg(理論値の70%)の表記化合物の保護された中間体を得た。
N−(6−{[(5S)−5−アミノ−5−カルボキシペンチル]アミノ}−6−オキソヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
この32.5mgの中間体を10mlのメタノール中に溶解し、続いて2mgの10%パラジウム/活性炭の添加後に、標準の水素圧下で、RTで30分間水素化した。次いで、その触媒を濾過によって除去して、その溶媒を減圧下で除去した。ジオキサン/水(1:1)からのその残渣の凍結乾燥によって26mg(理論値の99%)の表記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.76分;MS(ESIpos):m/z=1014(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.76分;MS(ESIpos):m/z=1014(M+H)+。
実施例20
N−[(18S)−18−アミノ−18−カルボキシ−12−オキソ−3,6,9−trioxa−13−azaoctadec−1−イル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド トリフルオロアセテート
3.5mg(3μmol)の中間体202を、2mlのDMF中に採取して、0.8mg(3μmol)のN2−(tert−ブトキシカルボニル)−L−リジンおよびまた1.6μL(10μmol)のN,N−ジイソプロピルエチルアミンとも混合した。その反応混合物をRTで一晩撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。その残渣を、アセトニトリル/水(1:1)中に採取して、トリフルオロ酢酸を用いてpH2にして、次いで分取HPLCによって精製した。これによって、1mg(理論値の25%)の表記化合物の保護された中間体を得て、これを、引き続き500μlのジクロロメタン中に採取し、500μlのトリフルオロ酢酸を用いて脱保護した。このバッチを濃縮して、アセトニトリル/水(1:1)からその残渣を凍結乾燥した後に、1mg(理論値の89%)の表記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.82分;MS(ESIpos):m/z=1173(M+H)+。
N−[(18S)−18−アミノ−18−カルボキシ−12−オキソ−3,6,9−trioxa−13−azaoctadec−1−イル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド トリフルオロアセテート
HPLC(方法12):Rt=1.9分;
LC−MS(方法1):Rt=0.82分;MS(ESIpos):m/z=1173(M+H)+。
実施例21
N−(4−{2−[6−(3−{[(2R)−2−アミノ−2−カルボキシエチル]フルファニル}−2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
10mg(10μmol)の中間体157を、5.2mlのDMF中に採取し、2.28mg(20μmol)のL−システインと混合した。その反応混合物をRTで2時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮し、引き続き分取HPLCによって精製した。これによって、5.8mg(理論値の48%)の表記化合物を得た。
HPLC(方法5):Rt=1.45分;
LC−MS(方法1):Rt=0.74分;MS(ESIpos):m/z=1184(M+H)+。
N−(4−{2−[6−(3−{[(2R)−2−アミノ−2−カルボキシエチル]フルファニル}−2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−1−アミノ−3−(1H−インドール−3−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.45分;
LC−MS(方法1):Rt=0.74分;MS(ESIpos):m/z=1184(M+H)+。
実施例22
N−(4−{2−[6−(3−{[(2R)−2−アミノ−2−カルボキシエチル]フルファニル}−2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
10mg(10μmol)の中間体113を、5.2mlのDMF中に採取して、2.28mg(20μmol)のL−システインと混合した。その反応混合物を、RTで2時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮し、引き続き分取HPLCによって精製した。これによって、6mg(理論値の54%)の表記化合物を得た。
HPLC(方法5):Rt=1.5分;
LC−MS(方法1):Rt=0.77分;MS(ESIpos):m/z=1185(M+H)+。
N−(4−{2−[6−(3−{[(2R)−2−アミノ−2−カルボキシエチル]フルファニル}−2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)ヘキサノイル]ヒドラジノ}−4−オキソブチル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.5分;
LC−MS(方法1):Rt=0.77分;MS(ESIpos):m/z=1185(M+H)+。
実施例23
N−[6−(3−{[(2R)−2−アミノ−2−カルボキシエチル]フルファニル}−2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
10mg(10μmol)の中間体124を、4mlのDMF中に採取して、2.5mg(20μmol)のL−システインと混合した。その反応混合物を、RTで2時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮し、引き続き分取HPLCによって精製した。これによって、7.2mg(理論値の64%)の表記化合物を得た。
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.8分;MS(ESIpos):m/z=1071(M+H)+。
N−[6−(3−{[(2R)−2−アミノ−2−カルボキシエチル]フルファニル}−2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−(1H−インドール−3−イル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.6分;
LC−MS(方法1):Rt=0.8分;MS(ESIpos):m/z=1071(M+H)+。
実施例24
N−[6−(3−{[(2R)−2−アミノ−2−カルボキシエチル]フルファニル}−2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
10mg(10μmol)の中間体125を、4mlのDMF中に採取し、2.4mg(20μmol)のL−システインと混合した。その反応混合物を、RTで2時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮して、引き続き分取HPLCによって精製した。これによって、7.7mg(理論値の69%)の表記化合物を得た。
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法2):Rt=1.91分;MS(ESIpos):m/z=1140(M+H)+。
N−[6−(3−{[(2R)−2−アミノ−2−カルボキシエチル]フルファニル}−2,5−ジオキソピロリジン−1−イル)ヘキシル]−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(1H−インドール−3−イル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド
HPLC(方法5):Rt=1.7分;
LC−MS(方法2):Rt=1.91分;MS(ESIpos):m/z=1140(M+H)+。
実施例25
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、そしてそのバッチを、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮して、再希釈した。
タンパク質濃度:1.27mg/ml
薬物/mAb比:1.0
タンパク質濃度:1.27mg/ml
薬物/mAb比:1.0
実施例26
カップリングはここで、PBS中に含まれる35mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、そしてそのバッチを、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮し、PBSを用いて再希釈して、そして再度濃縮した。
タンパク質濃度:11.60mg/ml
薬物/mAb比:3.7
タンパク質濃度:11.60mg/ml
薬物/mAb比:3.7
実施例27
カップリングはここで、PBS中に含まれる35mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、そしてそのバッチを、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮し、PBSを用いて再希釈して、そして再度濃縮した。
タンパク質濃度:11.7mg/ml
薬物/mAb比:4.2
タンパク質濃度:11.7mg/ml
薬物/mAb比:4.2
実施例28
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、この反応混合物を、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮し、およびPBSを用いて再希釈した。
タンパク質濃度:1.31mg/ml
薬物/mAb比:3.7
タンパク質濃度:1.31mg/ml
薬物/mAb比:3.7
実施例29
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−b中で行い、この反応混合物を、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮し、およびPBSを用いて再希釈した。
タンパク質濃度:1.53mg/ml
薬物/mAb比:1.3
タンパク質濃度:1.53mg/ml
薬物/mAb比:1.3
実施例30
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、そしてそのバッチを、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮して、再希釈した。
タンパク質濃度:1.61mg/ml
薬物/mAb比:3.9
タンパク質濃度:1.61mg/ml
薬物/mAb比:3.9
実施例31
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−b中で行い、この反応混合物を、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮して、再希釈した。
タンパク質濃度:1.32mg/ml
薬物/mAb比:1.7
タンパク質濃度:1.32mg/ml
薬物/mAb比:1.7
実施例32
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、この反応混合物を、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮して、再希釈した。
タンパク質濃度:1.12mg/ml
薬物/mAb比:0.2
タンパク質濃度:1.12mg/ml
薬物/mAb比:0.2
実施例33
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、この反応混合物を、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮して、再希釈した。
タンパク質濃度:1.29mg/ml
薬物/mAb比:5.5
タンパク質濃度:1.29mg/ml
薬物/mAb比:5.5
実施例34
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−b中を用いて行い、この反応混合物を、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮して、再希釈した。
タンパク質濃度:1.04mg/ml
薬物/mAb比:0.5
タンパク質濃度:1.04mg/ml
薬物/mAb比:0.5
実施例35
カップリングはここで、PBS中に含まれる5mgのM048−D01−hIgG1−bを用いて行い、この反応混合物を、Sephadex精製後に、超遠心によって濃縮して、再希釈した。
タンパク質濃度:1.66mg/ml
薬物/mAb−比:3.4
タンパク質濃度:1.66mg/ml
薬物/mAb−比:3.4
実施例36
N−(6−{[(5S)−5−アミノ−5−カルボキシペンチル]アミノ}−6−オキソヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド トリフルオロアセテート
8mg(8μmol)の中間体242を3mlのDMF中に採取して、2.9mg(12μmol)のN2−(tert−ブトキシカルボニル)−L−リジンおよびまた2.7μL(16μmol)のN,N−ジイソプロピルエチルアミンとも混合した。その反応混合物をRTで一晩撹拌し、次いで同じ量のN2−(tert−ブトキシカルボニル)−L−リジンおよびN,N−ジイソプロピルエチルアミンと再度混合し、そしてRTでさらに4時間撹拌した。このバッチを引き続き減圧下で濃縮した。次いで、その残渣を、分取HPLCによって精製した。アセトニトリル/水からの凍結乾燥によって6.5mg(理論値の72%)の表記化合物の保護された中間体を得て、これを、引き続き5mlのジクロロメタン中に採取して、0.75mlのトリフルオロ酢酸で脱保護した。このバッチを濃縮して、その残渣をジオキサン/水から凍結乾燥して5mg(理論値の76%)の表記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.69分;MS(ESIpos):m/z=1059(M+H)+。
N−(6−{[(5S)−5−アミノ−5−カルボキシペンチル]アミノ}−6−オキソヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(2S)−3−(4−ヒドロキシフェニル)−1−(1,2−オキサジナン−2−イル)−1−オキソプロパン−2−イル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド トリフルオロアセテート
HPLC(方法12):Rt=1.7分;
LC−MS(方法1):Rt=0.69分;MS(ESIpos):m/z=1059(M+H)+。
実施例37
N−(6−{[(5S)−5−アミノ−5−カルボキシペンチル]アミノ}−6−オキソヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−(4−ヒドロキシフェニル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド トリフルオロアセテート
38mg(41μmol)の中間体248を、最初に、N−ヒドロキシスクシンイミドエステルに変換した。得られた72mgの粗生成物を5mlのDMF中に採取して、24mg(100μmol)のN2−(tert−ブトキシカルボニル)−L−リジンおよび23μLのN,N−ジイソプロピルエチルアミンと混合した。その反応混合物をRTで一晩撹拌し、次いで16mgのN2−(tert−ブトキシカルボニル)−L−リジンおよび12μLのN,N−ジイソプロピルエチルアミンと再度混合し、引き続いて超音波浴中でさらに2時間処理した。このバッチを次いで減圧下で濃縮し、その残渣を分取HPLCによって精製した。アセトニトリル/水からの凍結乾燥によって20mg(理論値の50%)の表記化合物の保護された中間体を得た。
N−(6−{[(5S)−5−アミノ−5−カルボキシペンチル]アミノ}−6−オキソヘキシル)−N−メチル−L−バリル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−(4−ヒドロキシフェニル)エチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド トリフルオロアセテート
15mg(12μmol)のこの中間体を、引き続き3mlのジクロロメタン中に採取し、1mlのトリフルオロ酢酸と混合した。RTで40分の撹拌後、さらに1.5mlのトリフルオロ酢酸を添加し、そのバッチを超音波浴中で1時間処理した。その後に、そのバッチを濃縮して、ジオキサン/水からのその残渣の凍結乾燥によって13mg(理論値の90%)の表記化合物を得た。
HPLC(方法12):Rt=1.5分;
LC−MS(方法1):Rt=0.68分;MS(ESIpos):m/z=990(M+H)+。
HPLC(方法12):Rt=1.5分;
LC−MS(方法1):Rt=0.68分;MS(ESIpos):m/z=990(M+H)+。
C:生物学的活性の評価:
本発明の化合物の生物学的効果は、下記のアッセイによって実証された:
C−1.細胞表面上で種々のFGFR2レベルを有する腫瘍細胞の特定
細胞表面上の抗体に利用可能なFGFR2の量を決定するために、種々の腫瘍細胞株に対するFGFR2抗体の細胞結合を、フローサイトメトリーで分析した。下の細胞株を実験に用いた。FGFR2の変異およびコピー数に対する情報は、Sanger Center Genome Projectからである:
−SNU−16ヒト胃癌細胞、FGFR2遺伝子増幅(コピー数14;ATCC−CRL−5974、RPMI 1640(Biochrom FG1215)+10%のFCS
−KatoIIIヒト胃癌細胞,FGFR2遺伝子増幅(コピー数14 ATCC−TCP−1008;Iscove’s(Biochrom FG0465)+20%のFCS
−SUM52−PEヒト乳癌細胞,FGFR2遺伝子増幅(コピー数14;Asterandロット番号:28062A1−6004;Ham’s F12(Biochrom FG0815)+5%のFCS+10mMのHepes緩衝液+1μg/mlのヒドロコルチゾン+5μg/mlインスリン
−MFM−223 ヒト乳癌細胞,FGFR2遺伝子増幅(コピー数14;ECACC−98050130,MEM Earle(Biochrom F0315)+10% FCS+2mM グルタミン
−NCI−H716 ヒト結腸直腸癌細胞,FGFR2遺伝子増幅(コピー数:8;ATCC−CCL−251; RPMI 1640(Biochrom FG1215)+10% FCS)
−MDA−MB−231 ヒト乳癌細胞(FGFR2遺伝子増幅なし、コピー数3;ATCC−HTB−26、DMEM/HAM´s F12(Biochrom FG4815)+10% FCS
本発明の化合物の生物学的効果は、下記のアッセイによって実証された:
C−1.細胞表面上で種々のFGFR2レベルを有する腫瘍細胞の特定
細胞表面上の抗体に利用可能なFGFR2の量を決定するために、種々の腫瘍細胞株に対するFGFR2抗体の細胞結合を、フローサイトメトリーで分析した。下の細胞株を実験に用いた。FGFR2の変異およびコピー数に対する情報は、Sanger Center Genome Projectからである:
−SNU−16ヒト胃癌細胞、FGFR2遺伝子増幅(コピー数14;ATCC−CRL−5974、RPMI 1640(Biochrom FG1215)+10%のFCS
−KatoIIIヒト胃癌細胞,FGFR2遺伝子増幅(コピー数14 ATCC−TCP−1008;Iscove’s(Biochrom FG0465)+20%のFCS
−SUM52−PEヒト乳癌細胞,FGFR2遺伝子増幅(コピー数14;Asterandロット番号:28062A1−6004;Ham’s F12(Biochrom FG0815)+5%のFCS+10mMのHepes緩衝液+1μg/mlのヒドロコルチゾン+5μg/mlインスリン
−MFM−223 ヒト乳癌細胞,FGFR2遺伝子増幅(コピー数14;ECACC−98050130,MEM Earle(Biochrom F0315)+10% FCS+2mM グルタミン
−NCI−H716 ヒト結腸直腸癌細胞,FGFR2遺伝子増幅(コピー数:8;ATCC−CCL−251; RPMI 1640(Biochrom FG1215)+10% FCS)
−MDA−MB−231 ヒト乳癌細胞(FGFR2遺伝子増幅なし、コピー数3;ATCC−HTB−26、DMEM/HAM´s F12(Biochrom FG4815)+10% FCS
実験のために、結合した細胞をPBS(カルシウム(Ca2+)およびマグネシウム(Mg2+)イオンなし)で2回洗浄し、酵素なしの、PBSベースの細胞解離緩衝液緩衝液(Invitrogen)を用いて脱離した。1ウェルあたり約1×105個の細胞を、FACS緩衝液(PBSであってCa2+およびMg2+なし、3%FCS(Biochrom)を含む)中に懸濁し、続いて遠心分離して(250g,5分、4℃)、上清を廃棄した。その細胞を、FACS緩衝液に含まれる抗体希釈物(80μl中に5μg/ml)中に再懸濁して、氷上で1時間インキュベートした。次に、その細胞を、100μlの冷FACS緩衝液で1回洗浄し、および80μlの1:150希釈の二次抗体(PE−結合したヤギ抗マウスIgG,Jackson Immuno Research #115−115−164(GAL−FR21−mIgG1について、およびGAL−FR22−mIgG2aについては)、およびPE−結合ヤギ抗ヒトIgG、Dianova #109−115−098(M048−D01−hIgG1について))を添加した。
1時間の氷上でのインキュベーション後、細胞を再度、冷FACS緩衝液で洗浄し、100μlのFACS緩衝液中に再懸濁し、FACSアレイフローサイトメーター(BD Biosciences)中で分析した。結果は、FGFR2抗体で検出された細胞集団の幾何平均値(二次抗体のみとともに細胞集団をインキュベートすることによって測定したバックグラウンドの蛍光を差し引き)として算出した。その値は以下のシステムで分析した:幾何平均値FGFR2抗体マイナス二次抗体のみの幾何平均値>10+、>100++、>1000+++、>10000++++、−:シグナルなし。このカテゴリー限界の近傍の値は、()で示す。
腫瘍細胞に対するFGFR2抗体の結合は、表4に示す:
FGFR2抗体は、MFM−223およびSNU−16癌細胞の細胞表面上でFGFR2を検出する。
C−2.FGFR2に対するADCの細胞毒性効果の決定
FGFR2 ADCの細胞毒性効果は、以下のように、種々の発現量のFGFR2を有する種々の細胞株で決定した:
細胞は、標準的な方法によって、下のC−1に示す増殖培地を用いて培養した。実施のために、細胞を、PBS(BiochromAG#L2143)の中のトリプシン(0.05%)およびEDTA(0.02%)の溶液で剥離して、ペレットにして、培養培地中に再懸濁して、カウントして、白い基部を有する96ウェル培養プレート中に播種して(Costar #3610)(75μl/ウェル、1ウェルあたりの細胞カウント後:SNU−16:3000;MFM−223:7000;MDA−MB−231:4000;SUM52−PE:3000;NCI−H716:3000;KatoIII:3000)、5%の二酸化炭素のもとで37℃でインキュベーター中でインキュベートした。24時間後、25μlの培養培地(4倍濃度)中の抗体−薬物コンジュゲートを細胞に加えて、細胞に対して3×10−7M〜3×10−11Mという最終の抗体−薬物コンジュゲート濃度を得た(三連)。次いで、細胞をインキュベーター中で、37℃でかつ5%二酸化炭素中でインキュベートした。並行したプレート中で、薬物処理の開始(0日)における細胞生存度を、Cell Titer Glow Luminescent Cell Viability Assay(Promega #G7573および#G7571)を用いて決定した。このために、100μlの基質を、1細胞バッチあたりに添加し、次いでそのプレートを、アルミニウムホイルで覆って、180rpmで、プレートシェーカーを用いて2分間振盪し、実験ベンチ上に8分間置いておき、次いで、照度計(Victor X2,Perkin Elmer)を用いて測定した。基質は、そのレベルが細胞の生存度に正比例する、発光シグナルを発生する生存細胞中のATP含量を検出する。抗体−薬物コンジュゲートとのインキュベーションの72時間後、生存度を、これらの細胞中で同様に、上記のように、Cell Titer Glow Luminescent Cell Viability Assayを用いて決定した。測定されたデータから、増殖阻害のIC50を、4パラメーター適合に基づいて、実験ソフトウェアMTS(Schering AGおよびBayer Business Services 1999−2009が開発)を用いて、0日目のものと比較して算出した。
FGFR2 ADCの細胞毒性効果は、以下のように、種々の発現量のFGFR2を有する種々の細胞株で決定した:
細胞は、標準的な方法によって、下のC−1に示す増殖培地を用いて培養した。実施のために、細胞を、PBS(BiochromAG#L2143)の中のトリプシン(0.05%)およびEDTA(0.02%)の溶液で剥離して、ペレットにして、培養培地中に再懸濁して、カウントして、白い基部を有する96ウェル培養プレート中に播種して(Costar #3610)(75μl/ウェル、1ウェルあたりの細胞カウント後:SNU−16:3000;MFM−223:7000;MDA−MB−231:4000;SUM52−PE:3000;NCI−H716:3000;KatoIII:3000)、5%の二酸化炭素のもとで37℃でインキュベーター中でインキュベートした。24時間後、25μlの培養培地(4倍濃度)中の抗体−薬物コンジュゲートを細胞に加えて、細胞に対して3×10−7M〜3×10−11Mという最終の抗体−薬物コンジュゲート濃度を得た(三連)。次いで、細胞をインキュベーター中で、37℃でかつ5%二酸化炭素中でインキュベートした。並行したプレート中で、薬物処理の開始(0日)における細胞生存度を、Cell Titer Glow Luminescent Cell Viability Assay(Promega #G7573および#G7571)を用いて決定した。このために、100μlの基質を、1細胞バッチあたりに添加し、次いでそのプレートを、アルミニウムホイルで覆って、180rpmで、プレートシェーカーを用いて2分間振盪し、実験ベンチ上に8分間置いておき、次いで、照度計(Victor X2,Perkin Elmer)を用いて測定した。基質は、そのレベルが細胞の生存度に正比例する、発光シグナルを発生する生存細胞中のATP含量を検出する。抗体−薬物コンジュゲートとのインキュベーションの72時間後、生存度を、これらの細胞中で同様に、上記のように、Cell Titer Glow Luminescent Cell Viability Assayを用いて決定した。測定されたデータから、増殖阻害のIC50を、4パラメーター適合に基づいて、実験ソフトウェアMTS(Schering AGおよびBayer Business Services 1999−2009が開発)を用いて、0日目のものと比較して算出した。
下の表5は、このアッセイからの例示的な実施例のIC50値1)を列挙する:
実施例1は、ナノモル未満の濃度範囲のIC50で、細胞表面においてFGFR2を発現するSNU−16およびMFM−223癌細胞の増殖を阻害した。実施例1は、MDA−MB−231癌細胞株(細胞表面でFGFR2を発現しない)の増殖を、300nMのIC50で阻害した。このデータから明らかであるとおり、全ての試験された抗体−薬物コンジュゲート(実施例1−31、33−35)は、FGFR2−発現癌細胞株(SNU−16、MFM−223、SUM52−PE、KatoIIIまたはNCI−H716)の増殖を選択的に阻害する。
C−3.チューブリン重合化に対する効果の決定
癌細胞は、細胞分裂の増大の結果としても腫瘍の形成をもたらす頻度が高い、変性された細胞である。微小管は、紡錘体装置の紡錘糸を形成し、細胞周期の必須構成要素である。調節された構築物および微小管の破壊によって、娘細胞の間の染色体の正確な分裂が可能になり、連続的に動的なプロセスを構成する。この動的プロセスの破壊によって、不正確な細胞分裂および最終的には細胞死が生じる。しかし、癌細胞の細胞分裂の増大によってまた、癌細胞は、紡錘糸毒に対して特に感受性になり、これは、化学療法の固定された構成要素を構成する。防水糸毒、例えば、パクリタキセルまたはエポチロンは、微小管の重合化速度の急激な増大をもたらすが、一方では、ビンカアルカロイドまたはモノメチルアウリスタチンE(MMAE)は、微小管の重合化速度の急激な低下をもたらした。両方の場合とも、細胞周期の必須の活力は決定的に破壊される。
癌細胞は、細胞分裂の増大の結果としても腫瘍の形成をもたらす頻度が高い、変性された細胞である。微小管は、紡錘体装置の紡錘糸を形成し、細胞周期の必須構成要素である。調節された構築物および微小管の破壊によって、娘細胞の間の染色体の正確な分裂が可能になり、連続的に動的なプロセスを構成する。この動的プロセスの破壊によって、不正確な細胞分裂および最終的には細胞死が生じる。しかし、癌細胞の細胞分裂の増大によってまた、癌細胞は、紡錘糸毒に対して特に感受性になり、これは、化学療法の固定された構成要素を構成する。防水糸毒、例えば、パクリタキセルまたはエポチロンは、微小管の重合化速度の急激な増大をもたらすが、一方では、ビンカアルカロイドまたはモノメチルアウリスタチンE(MMAE)は、微小管の重合化速度の急激な低下をもたらした。両方の場合とも、細胞周期の必須の活力は決定的に破壊される。
チューブリン重合化は、Cytoskeleton(Denver,Colorado,USA;order number:BK011)の「Fluorescence−based Microtubule Polymerisation Assay Kit」を用いて検討した。このアッセイでは、GTPを、非重合化チューブリンに加え、同時に重合化が生じることを可能にさせる。このアッセイは、チューブリンに対するフルオロフォア4’,6−ジアミジノ−2−フェニルインドール(DAPI)の結合に基づく。遊離および結合したDAPIは、異なる発光スペクトルに基づいて分化され得る。DAPIは、非重合化チューブリンに比較して重合化チューブリンに有意に高い親和性を示すので、チューブリン重合化の後には、結合されたDAPIフルオロフォアの蛍光の増大が続く場合がある。
このアッセイの実行のために、本発明の化合物は、DMSOに含まれる溶液中で、水の中で10mM〜1μMというそれらの最初の濃度から希釈された。緩衝液コントロールに加えて、パクリタキセル(重合化増大性効果を有する)と、ビンブラスチン(重合化阻害性効果を有する)を、さらに、アッセイコントロールとして用いた。測定は、ベースの半分の面積で96ウェルプレートを用いて行った。チューブリン重合化の動態は、蛍光光度計(Fluorimeter)を用いて、37℃で1時間モニターした。励起波長は、355nmであって、発光は460nmでモニターした。最初の10分内の直線的な増大の領域については、計算は、微小管の重合化速度に相当する、1分あたりの蛍光の変化(△F/分)から行った。試験物質の力価は、重合化速度のそれらのそれぞれの低下に基づいて定量した。下の表6では、チューブリン重合化に対する代表的な実施例の影響についてのデータを示す。
MMAFトキソフォアおよび実施例は、チューブリン重合化を、それらの濃度の関数として阻害する。100μMのMMAFでは、チューブリン重合化は、完全に阻害される。本発明の状況で検討された化合物は、微小管の重合化速度の低下を生じる。実施例18〜21は、1μMでのチューブリン重合化を、1μMのMMAFについて測定された値の45〜88%まで阻害する。
C−4.細胞透過性を決定するためのインビトロ試験
物質の細胞透過性は、Caco−2細胞を用いてfluxアッセイで、インビトロ試験で検討され得る[M.D.TroutmanおよびD.R.Thakker,Pharm.Res.20(8)、1210−1224(2003)]。この目的のために、細胞を24ウェルフィルタープレート上で15〜16日間培養した。浸透の決定のためには、それぞれの実施例を、細胞へのHEPES緩衝液に対して先端的に(A)または基部に(B)加え、2時間インキュベートした。0時間および2時間後に、サンプルをシスおよびトランス区画からとった。サンプルを、逆相カラムを用いてHPLC(Agilent 1200,Boeblingen,Germany)によって分離した。HPLCシステムを、Triple Quadropol質量分析計API 4000(Applied Biosystems Applera、Darmstadt,Germany)に対して、Turbo Ion Spray Interfaceを介して連結した。透過性は、Schwabら[D.Schwabら、J.Med.Chem.46,1716−1725(2003)]が公開した式を用いて算出した、Papp値に基づいて評価した。
物質の細胞透過性は、Caco−2細胞を用いてfluxアッセイで、インビトロ試験で検討され得る[M.D.TroutmanおよびD.R.Thakker,Pharm.Res.20(8)、1210−1224(2003)]。この目的のために、細胞を24ウェルフィルタープレート上で15〜16日間培養した。浸透の決定のためには、それぞれの実施例を、細胞へのHEPES緩衝液に対して先端的に(A)または基部に(B)加え、2時間インキュベートした。0時間および2時間後に、サンプルをシスおよびトランス区画からとった。サンプルを、逆相カラムを用いてHPLC(Agilent 1200,Boeblingen,Germany)によって分離した。HPLCシステムを、Triple Quadropol質量分析計API 4000(Applied Biosystems Applera、Darmstadt,Germany)に対して、Turbo Ion Spray Interfaceを介して連結した。透過性は、Schwabら[D.Schwabら、J.Med.Chem.46,1716−1725(2003)]が公開した式を用いて算出した、Papp値に基づいて評価した。
細胞内に放出されるトキソフォアの重要性は、BからAへの透過性である[Papp(B−A)]:この透過性が低いほど、細胞内放出後の細胞中の実施例の残留時間が長く、従って、また生物学的標的との相互作用に利用可能な時間も長くなる(この場合:チューブリン)。
下の表7は、このアッセイからの代表的な実施例の透過性データを示す:
この実施例は、BからAへの低い透過性[Papp(B−A)]を示し、従ってCaCo−2細胞中で長い残留時間を有する。比較して、この試験での、モノメチルアウリスタチンE(MMAE)およびモノメチルアウリスタチンF(MMAF)は、73nm/sというPapp(B−A)値を示し、従って、Caco−2細胞において有意に短い残留時間を有する。
C−5.P−糖タンパク質(P−gp)の基質特性を決定するためのインビトロ試験
多くの腫瘍細胞は、薬物の輸送体タンパク質を発現し、これは細胞増殖抑制剤に対する耐性の発達を伴う場合が多い。例えば、P−糖タンパク質(P−gp)またはBCRPのような、このような輸送体タンパク質の基質ではない物質は、従って、活性プロフィールの改善を示し得る。
多くの腫瘍細胞は、薬物の輸送体タンパク質を発現し、これは細胞増殖抑制剤に対する耐性の発達を伴う場合が多い。例えば、P−糖タンパク質(P−gp)またはBCRPのような、このような輸送体タンパク質の基質ではない物質は、従って、活性プロフィールの改善を示し得る。
P−gp(ABCB1)の物質の基質特性は、P−gp(L−MDR1細胞)を過剰発現するLLC−PK1細胞を用いるfluxアッセイによって決定した[A.H.Schinkelら、J.Clin.Invest.96,1698−1705(1995)]。この目的のためには、LLC−PK1細胞またはL−MDR1細胞を、3〜4日間96ウェルフィルタープレート上で培養した。浸透の決定のために、それぞれの試験物質は、単独でまたはインヒビター(例えば、IvermectinまたはVerapamil、など)の存在下で、細胞へのHEPES緩衝液に対して先端的に(A)または基部に(B)加え、2時間インキュベートした。0時間および2時間後に、サンプルをシスおよびトランス区画からとった。サンプルを、逆相カラムを用いてHPLCによって分離した。HPLCシステムを、Triple Quadropol質量分析計API 4000(Applied Biosystems Applera、Darmstadt,Germany)に対して、Turbo Ion Spray Interfaceを介して連結した。透過性は、Schwabら[D.Schwabら、J.Med.Chem.46,1716−1725(2003)]が公開した式を用いて算出した、Papp値に基づいて評価した。
細胞内に放出されるトキソフォアのうち特に重要なのは、BからAへの透過性である[Papp(B−A)]:この透過性が低いほど、細胞内放出後の細胞中のこの実施例の残留時間が長く、従って、また生物学的標的との相互作用に利用可能な時間も長くなる(この場合:チューブリン)。
下の表8は、L−MDR1細胞で行った、このアッセイからの代表的な実施例の透過性データを列挙する。
この実施例は、BからAへの低い透過性[Papp(B−A)を示し、従って、L−MDR1細胞中で長い残留時間を有する。
C−6.SNU−16腫瘍モデル中の薬物動態
種々のADCの静脈内投与後、ADCの血漿濃度および腫瘍濃度、ならびにまた潜在的な代謝物の濃度を測定し、薬物動態学的パラメーター、例えばクリアランス(CL)、曲線下面積(AUC)および半減期(t1/2)を算出する。
種々のADCの静脈内投与後、ADCの血漿濃度および腫瘍濃度、ならびにまた潜在的な代謝物の濃度を測定し、薬物動態学的パラメーター、例えばクリアランス(CL)、曲線下面積(AUC)および半減期(t1/2)を算出する。
潜在的に存在する代謝物を定量するための分析
血漿および腫瘍中の化合物の測定は、タンデム質量分析(MS)に連結された高圧液体クロマトグラフィー(HPLC)によって、メタノールでのタンパク質の沈殿後に生じる。
血漿および腫瘍中の化合物の測定は、タンデム質量分析(MS)に連結された高圧液体クロマトグラフィー(HPLC)によって、メタノールでのタンパク質の沈殿後に生じる。
100μLの血漿の処理のために、これを400μLのメタノールおよび10μLの内部標準(ISTD、メタノール中に50ng/mL)と混合して、10秒間振盪する。16000gでの5分間の遠心分離後、250μLの酢酸アンモニウム緩衝液(AAC、10mM、pH6.8)でできた、250μLの上清をオートサンプラーバイアルに移して、再度振盪する。
腫瘍の処理のために、これを4倍量のメタノールと混合する。Tissuelyser II(Quiagen)において、サンプルを、6分間の間、1分あたり30インパクトで続け、次いで16000gで5分間遠心分離する。50μLの上清をオートサンプラーバイアルに移して、50μLの酢酸アンモニウム緩衝液(10mM,pH6.8)および5μLのISTDから作成する。再度振盪した後に、腫瘍サンプルを測定のために準備する。
両方のマトリックスサンプルの測定を、最後は、SCIEXのAPI4000装置でTurbo Ion Spray Interface(TISP)によって、HPLC連結された大気圧イオン化/タンデム質量分析計の補助で最後は行う。
HPLC/LC−MSMS(TISP)分析は、HP1100ポンプ(Agilent)とGeminiカラム(5μm C18110A,50×3mm,Phenomenex)とで行う。
C−7.インビボの活性試験
本発明のコンジュゲート活性は、例えば、異種移植片モデルによってインビボで試験した。当業者は、本発明のコンジュゲートの活性を試験するための当該分野の方法を承知している(例えば、WO2005/081711;Polsonら、Cancer Res.2009Mar 15;69(6):2358−64を参照のこと)。この目的のためには、例えば、げっ歯類(例えば、マウス)に、結合剤の標的分子を発現する腫瘍細胞株を移植した。これらの腫瘍担持げっ歯類に引き続き、本発明のコンジュゲートまたはコントロールの抗体コンジュゲートまたは等張性塩溶液を投与した。投与は、単回で生じるか、またはそれより高頻度に生じた。腫瘍増殖は、ノギスによって週に2回決定した。数週間の腫瘍増殖後、コンジュゲート処理した動物およびコントロール群の腫瘍の大きさを比較した。コンジュゲート処理した動物は、有意に低い腫瘍の大きさを示した。
本発明のコンジュゲート活性は、例えば、異種移植片モデルによってインビボで試験した。当業者は、本発明のコンジュゲートの活性を試験するための当該分野の方法を承知している(例えば、WO2005/081711;Polsonら、Cancer Res.2009Mar 15;69(6):2358−64を参照のこと)。この目的のためには、例えば、げっ歯類(例えば、マウス)に、結合剤の標的分子を発現する腫瘍細胞株を移植した。これらの腫瘍担持げっ歯類に引き続き、本発明のコンジュゲートまたはコントロールの抗体コンジュゲートまたは等張性塩溶液を投与した。投与は、単回で生じるか、またはそれより高頻度に生じた。腫瘍増殖は、ノギスによって週に2回決定した。数週間の腫瘍増殖後、コンジュゲート処理した動物およびコントロール群の腫瘍の大きさを比較した。コンジュゲート処理した動物は、有意に低い腫瘍の大きさを示した。
C−7a.マウスにおける実験腫瘍でのADCの試験
FGFR2を発現するヒト腫瘍細胞を、免疫抑制したマウス、例えば、ヌードマウスまたはSCIDマウスの脇腹に皮下接種した。100万〜1000万個の細胞を細胞培養から剥離して、遠心分離して、100μlの培地、50%培地/50%マトリゲルまたは100%マトリゲルを用いて再懸濁した。細胞懸濁物を、マウスの皮膚下に注射した。
FGFR2を発現するヒト腫瘍細胞を、免疫抑制したマウス、例えば、ヌードマウスまたはSCIDマウスの脇腹に皮下接種した。100万〜1000万個の細胞を細胞培養から剥離して、遠心分離して、100μlの培地、50%培地/50%マトリゲルまたは100%マトリゲルを用いて再懸濁した。細胞懸濁物を、マウスの皮膚下に注射した。
2〜3日内に、腫瘍が増殖した。処置は、腫瘍の確立後、20〜25mm2の腫瘍サイズまでは開始しなかった。
コンジュゲートでの処理は、静脈内経路を介してマウスの尾静脈へ行った。このコンジュゲートをPBS中に溶解して、5−10ml/kgの容積で投与する。
処置スキームは、抗体の薬物動態によって管理した。標準として、処置は、4日後ごとに、または7日後ごとに3回行った。しかし、処置はまた、さらに続けてもよいし、または処置の3日目で第二サイクルを、後の時点で行ってもよい。
標準として、8匹の動物を1つの処置群あたりに用いた。この数は、腫瘍増殖または処置後において特に強力な変動が予想される場合にさらに多くてもよい。活性物質を与えられる群と同様、ある群を、コントロール群として、同じスキームで緩衝液のみを用いて処置した。
実験の経過中に、腫瘍の領域を、ノギスを用いて二次元(長さ/幅)で定期的に測定した。腫瘍の面積を、長さ×幅の式で算出した。
実験の終わりに、腫瘍を取り出して、秤量した。コントロール群(C)に対する治療群(T)の平均腫瘍重量の比をT/Cとして表した。コントロール群および処置群が異なる時点で終わったならば、T/C値を、全ての処置群およびコントロール群の最後の通常の測定の腫瘍面積を用いて算出した。
C−7b.マウスにおけるSNU−16異種移植片モデルでのFGFR2−ADCの試験
2百万個のSNU−16胃癌細胞を、雌性NODscidマウスの脇腹に皮下接種した。
2百万個のSNU−16胃癌細胞を、雌性NODscidマウスの脇腹に皮下接種した。
コンジュゲートを用いた静脈内処置は、平均腫瘍サイズが20〜30mm2で開始した。コントロール群が最大許容サイズに達した時、これらの群は終了とした。FGFR2コンジュゲートで処置した実験群は、腫瘍が増殖し始めた時に終了した。コンジュゲートの活性は、ビヒクルコントロールがまだ実験中である最終時点である31日目に決定した。試験した全てのFGFR2コンジュゲートが、腫瘍増殖を用量依存性の方式で試験した。5mg/kgの用量で、実施例1は、0.08というT/Cを達成し、実施例3は0.06というT/Cを達成し、および実施例26は0.10というT/Cを達成した。処置した全ての動物について、この時点での腫瘍は、処置の開始時点よりも小さかった(腫瘍の部分退縮)。2.5mg/kgの用量では、実施例26は、0.14というT/Cを達成した。この用量では、実施例26は、動物のうち40%で部分的な退縮をもたらした。1mg/kgの用量では、実施例1では、0.15というT/Cを達成し、実施例3は、0.36というT/Cを達成した。この用量では、同様に、実施例1は、処置した全ての動物で部分的退縮をもたらしたが、実施例3の場合は、部分的な退縮は得られなかった。コントロールと比較して有意な抗腫瘍効果が、1mg/kgという用量まで、試験したコンジュゲートの全てについて達成された。対応するコントロールの抗体コンジュゲートは、このモデルでは同じ用量で活性を示さなかった。
C7c マウスにおけるMFM−223異種移植片モデルにおけるFGFR2−ADCの試験
一千万個のMFM−223乳癌細胞を、雌性NMRI nu/nuマウスの脇腹に皮下接種した。これらのマウスには、エストラジオールペレットを事前に補充した。
一千万個のMFM−223乳癌細胞を、雌性NMRI nu/nuマウスの脇腹に皮下接種した。これらのマウスには、エストラジオールペレットを事前に補充した。
このコンジュゲートを用いる静脈内処置は、平均腫瘍サイズが30〜35mm2で開始した。コントロール群が、40日目に最大許容サイズに達した時、処置群の全てを終了して、腫瘍重量を確認した。実施例26では、10mg/kgの用量を用いて、0.09というT/Cを達成し、5mg/kgの用量では0.13というT/Cを、および1mg/kgの用量では、0.26というT/Cを達成した。コントロールと比較した有意な抗腫瘍効果が、試験した全ての3用量で達成された。対応するコントロールの抗体コンジュゲートが10mg/kgの用量でのみこのモデルでは有意な非特異的な効果を示した。
C7d マウスにおけるNCI−H716異種移植片モデルにおけるFGFR2−ADCの試験
1500万個のNCI−H716腸癌細胞を、雌性NMRI nu/nuマウスの脇腹に皮下接種した。
1500万個のNCI−H716腸癌細胞を、雌性NMRI nu/nuマウスの脇腹に皮下接種した。
このコンジュゲートを用いる静脈内処置は、平均腫瘍サイズが25〜30mm2で開始した。コントロール群が、36日目に最大許容サイズに達した時、処置群の全てを終了して、腫瘍重量を確認した。実施例26での処置では、腫瘍重量の有意な低下を生じ、ここで5mg/kgの用量で0.24というT/Cが達成された。この用量では、対応するコントロールのコンジュゲートは、このモデルでは全く活性を有さなかった。
D.薬学的組成物の実施例
本発明の化合物は、以下のように薬学的調製物へ変換できる:
i.v.溶液:
本発明の化合物は、生理学的に耐容される溶媒(例えば、等張性生理食塩水溶液、D−PBS、またはポリソルベート80を添加したクエン酸緩衝液中でグリシンおよび塩化ナトリウムを用いる処方物)中で飽和溶解度未満の濃度で溶解される。この溶液を滅菌ろ過に供して、無菌でかつ発熱物質のない注射容器中に分注する。
本発明の化合物は、以下のように薬学的調製物へ変換できる:
i.v.溶液:
本発明の化合物は、生理学的に耐容される溶媒(例えば、等張性生理食塩水溶液、D−PBS、またはポリソルベート80を添加したクエン酸緩衝液中でグリシンおよび塩化ナトリウムを用いる処方物)中で飽和溶解度未満の濃度で溶解される。この溶液を滅菌ろ過に供して、無菌でかつ発熱物質のない注射容器中に分注する。
i.v.溶液:
本発明の化合物は、述べた投与形態に変換されてもよい。これは、不活性な、非毒性の、薬学的に安定な賦形剤(例えば、緩衝液物質、安定化剤、溶解剤、防腐剤)「と混合されること」または「その中に溶解されること」により、公知の方法で達成され得る。例えば、以下が存在してもよい:アミノ酸(グリシン、ヒスチジン、メチオニン、アルギニン、リジン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、グルタミン酸、フェニルアラニンなど)、糖および関連の化合物(グルコース、サッカロース、マンニトール、トレハロース、スクロース、マンノース、ラクトース、ソルビトール)、グリセロール、ナトリウム塩、カリウム、アンモニウム塩およびカルシウム塩(例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウムまたはリン酸水素二ナトリウムなど)、酢酸塩/酢酸緩衝液系、リン酸塩緩衝液系、クエン酸およびクエン酸塩緩衝液系、トロメタモール(TRISおよびTRIS塩)、ポリソルベート類(例えば、Polysorbate 80およびPolysorbate 20)、ポロキサマー類(例えば、Poloxamer 188およびPoloxamer 171)、マクロゴール(PEG誘導体,例えば、3350)、Triton X−100、EDTA塩、グルタチオン、アルブミン(例えば、ヒト)、尿素、ベンジルアルコール、フェノール、クロロクレゾール、メタクレゾール、塩化ベンザルコニウムなど。
本発明の化合物は、述べた投与形態に変換されてもよい。これは、不活性な、非毒性の、薬学的に安定な賦形剤(例えば、緩衝液物質、安定化剤、溶解剤、防腐剤)「と混合されること」または「その中に溶解されること」により、公知の方法で達成され得る。例えば、以下が存在してもよい:アミノ酸(グリシン、ヒスチジン、メチオニン、アルギニン、リジン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、グルタミン酸、フェニルアラニンなど)、糖および関連の化合物(グルコース、サッカロース、マンニトール、トレハロース、スクロース、マンノース、ラクトース、ソルビトール)、グリセロール、ナトリウム塩、カリウム、アンモニウム塩およびカルシウム塩(例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウムまたはリン酸水素二ナトリウムなど)、酢酸塩/酢酸緩衝液系、リン酸塩緩衝液系、クエン酸およびクエン酸塩緩衝液系、トロメタモール(TRISおよびTRIS塩)、ポリソルベート類(例えば、Polysorbate 80およびPolysorbate 20)、ポロキサマー類(例えば、Poloxamer 188およびPoloxamer 171)、マクロゴール(PEG誘導体,例えば、3350)、Triton X−100、EDTA塩、グルタチオン、アルブミン(例えば、ヒト)、尿素、ベンジルアルコール、フェノール、クロロクレゾール、メタクレゾール、塩化ベンザルコニウムなど。
i.v.、s.c.またはi.m.溶液への引き続く変換のための凍結乾燥物:
あるいは、本発明の化合物は、安定な凍結乾燥物(可能性としては、上述の賦形剤の補助がある)に変換され、投与前に、安定な溶媒(例えば、注射等級の水、等張性の生理食塩水溶液)で再構成されて、投与されてもよい。
あるいは、本発明の化合物は、安定な凍結乾燥物(可能性としては、上述の賦形剤の補助がある)に変換され、投与前に、安定な溶媒(例えば、注射等級の水、等張性の生理食塩水溶液)で再構成されて、投与されてもよい。
Claims (41)
- 一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート:
nは、1〜50の数であり、
AKは、FGFR2に結合する結合剤であり、
基§−G−L1−B−§§は、リンカーであり、
ここで
§は、基AKとの連結部位を示しており、かつ
§§は、窒素原子との連結部位を示しており、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり、
pは、2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基で置換されてもよく、
かつ
ここでお互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、それらの間に位置する任意の炭素原子を含めて、架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Dは、以下の式の基であり、
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチル、
または
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素もしくはメチルであり、
R4は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中、
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10は、ベンゾイルであり、
R11は、ベンジルであり、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり、
#9は、−CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26は、水素もしくはヒドロキシであり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである]
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物および前記塩の溶媒和物。 - 請求項1に記載の一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート
[式中、
nは、1〜50の数であり、
AKは、AK1またはAK2であり、
式中、
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であり、かつG基に対して結合剤のイオウ原子を介して結合され、
AK2は、FGFR2に結合する結合剤であり、かつG基に対して結合剤の窒素原子を介して結合され、
Gは、AK=AK1である場合、以下の式の基であり、
#1は、前記結合剤のイオウ原子との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しているか、
または
AK=AK2である場合は、カルボニルであり、
L1は、結合、直鎖(C1−C10)−アルカンジイル、式
式中、
mは、2〜6の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
L1Aは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
B1は、以下の式の基であり、
式中、
##5は、L1A基との連結部分を示しており、
##6は、L1B基との連結部分を示しており、
L5は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L6は、結合もしくは以下の式の基であり、
##7は、カルボニル基との連結部位を示しており、
##8は、L1Bとの連結部位を示しており、
R33は、水素、(C1−C4)−アルキルカルボニル、tert−ブチルオキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルであり、
R34は、水素もしくはメチルであり、
R29は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R30は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R29およびR30は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R31は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R32は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、または
R31およびR32は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
L1Bは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで(C1−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されてもよく、
ここで、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、それらの間に位置する任意の炭素原子を含めて、架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり、
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
Pは、OもしくはNHであり、
L3は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L4は、結合もしくは以下の式の基であり、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、水素もしくはメチルであり、
R28は、水素、(C1−C4)−アルキルカルボニル、tert−ブチルオキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルであり、
Q1は、4員〜7員の複素環であり、
Q2は、3員〜7員の炭素環または4員〜7員の複素環であり、
R14は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R15は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、または
R14およびR15は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R16は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R17は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R18は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R19は、水素もしくは天然のα−アミノ酸の、またはその相同体もしくは異性体の側鎖基であり、
R20は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R19およびR20は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R22は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、または
R21およびR22は、それらが結合される原子と一緒になって、3員〜7員の炭素環を形成し、
R23は、(C1−C4)−アルキルであり、
R24は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R27は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R36は、水素、(C1−C4)−アルキルカルボニル、tert−ブチルオキシカルボニルもしくはベンジルオキシカルボニルであり、
R37は、水素もしくはメチルであるか、
または
R36およびR37は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり、
pは、2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルが、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基で置換されてもよく、
かつ
ここで、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、それらの間に位置する任意の炭素原子を含めて、架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Dは、以下の式の基であり、
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素もしくはメチルであり、
R4は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
ここでR7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10は、ベンゾイルであり、
R11は、ベンジルであり、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり、
#9は、−CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26は、水素もしくはヒドロキシであり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである]
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物および前記塩の溶媒和物。 - 請求項1または2に記載の一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート
[式中、
nは、1〜20の数であり、
AKは、AK1またはAK2であり、
ここで
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であり、かつG基に対して結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合され、
AK2は、FGFR2に結合する結合剤であり、かつG基に対して結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gは、AK=AK1である場合、以下の式の基であり
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しているか、
または
AK=AK2である場合は、カルボニルであり、
L1は、結合、直鎖(C2−C6)−アルカンジイル、以下の式の基であり
mは、2〜6の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
L1Aは、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
B1は、以下の式の基であり
##5は、L1A基との連結部位を示しており、
##6は、L1B基との連結部位を示しており、
L5は、結合であり、
L6は、結合もしくは以下の式の基であり
##7は、カルボニル基との連結部位を示しており、
##8は、L1Bとの連結部位を示しており、
R33は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R34は、水素もしくはメチルであり、
R29は、水素であり、
R30は、水素であり、
R31は、水素もしくはメチルであり、
R32は、水素もしくはメチルであり、
L1Bは、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで(C2−C6)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は、結合もしくは以下の式の基であり
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、水素もしくはメチルであり、
R28は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
Q1は、4員〜7員の複素環であり、
R14は、水素であり、
R15は、水素であり、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
R18は、水素であり、
R19は、水素、メチル、プロパン−2−イル、2−メチルプロパン−1−イルもしくは1−メチルプロパン−1−イルであり、
R20は、水素もしくはメチルであるか、
または
R19およびR20は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21は、水素もしくはメチルであり、
R22は、水素もしくはメチルであるか、
または
R21およびR22それらが結合される原子と一緒になって、シクロプロピル環を形成し、
R23は、メチルであり、
R24は、水素もしくはメチルであり、
R27は、水素であり、
R36は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R37は、水素もしくはメチルであるか、
または
R36およびR37は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し、
L2は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
pは、2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
または
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素であり、
R4は、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
ここで、R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10は、ベンゾイルであり、
R11は、ベンジルであり、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり
#9は、−CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26は、水素もしくはヒドロキシであり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである]
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 請求項1〜3のいずれかに記載の一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート
[式中、
nは、1〜10の数であり、
AKは、AK1またはAK2であり、
ここで、
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であって、G基に対して結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合され、
AK2は、FGFR2に結合する結合剤であって、G基に対して結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gは、AK=AK1である場合、以下の式の基であり
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しているか、
または
AK=AK2である場合はカルボニルであり、
L1は、結合、直鎖(C2−C6)−アルカンジイル、以下の式の基であり
mは、2もしくは3の数であり、
##1はG基との連結部位を示しており、
##2はB基との連結部位を示しており、
ここで(C2−C6)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は、結合もしくは以下の式の基であり、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、メチルであり、
R28は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
Q1は、ピペリジン−1,4−ジイルであり、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
R21は、水素もしくはメチルであり、
R22は、水素もしくはメチルであるか、
または
R21およびR22は、それらが結合される原子と一緒になって、シクロプロピル環を形成し、
R23は、メチルであり、
R24は、水素であり、
L2は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
pは、2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素であり、
R4は、ベンジル、1−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、または−CH2−O−R11の基であり、
ここで、
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであり、
R11は、ベンジルであり、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の一般式の基であり
#9は、−CHCH2フェニルとの連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである]
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 請求項1〜4のいずれかに記載の一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート
[式中、
nは、1〜10の数であり、
AKは、AK2であり
ここで
AK2は、FGFR2に結合する結合剤であって、かつG基に対して結合剤のリジン残基のNH側鎖基を介して結合され、
Gは、カルボニルであり、
L1は、結合であり、
Bは、結合であり、
L2は、直鎖(C3−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、ベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
または
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R3は、水素であり、
R4は、ベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7もしくは−C(=O)−NR8R9の基であり、
式中、
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素であり、
R9は、水素もしくはベンジルであり、
R35は、メチルである]
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 請求項1〜5のいずれかに記載の一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート
[式中、
nは、1〜10の数であり、
AKは、AK1であり
式中、
AK1は、FGFR2に結合する結合剤であって、G基に対して結合剤のシステイン残基のイオウ原子を介して結合され、
Gは、以下の式の基であり
#1は、結合剤のシステイン残基との連結部位を示しており、
#2は、L1基との連結部位を示しており、
L1は、結合、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり、
mは、2もしくは3の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
ここで(C3−C5)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は、結合もしくは以下の式の基であり、
***は、カルボニル基との連結部位を示しており、
****は、L2との連結部位を示しており、
R25は、メチルであり、
R28は、水素、メチルカルボニル、またはtert−ブチルオキシカルボニルであり、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
L2は、直鎖(C3−C5)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であって
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、ベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R3は、水素であり、
R4は、ベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7または−C(=O)−NR8R9であり、
ここで
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素であり、
R9は、水素もしくはベンジルであり、
R35は、メチルである]
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 一般式(Ia)の結合剤−薬物コンジュゲート:
nは、1〜50の数であり、
AKは、FGFR2に結合する結合剤であり、
基§−G−L1−B−§§は、リンカーであり、
式中、
§は、AK基との連結部位を示しており、
§§は、窒素原子との連結部位を示しており、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
pは、2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシルおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されてもよく、
かつ
ここで、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、それらの間に位置する任意の炭素原子を含めて、架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Dは、以下の式の基であって、
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 以下の式の化合物:
- 以下の式の化合物:
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 以下の式の化合物:
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 以下の式の化合物:
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 式(XXXa)の化合物:
Cysは、スクシンイミドの炭素原子に対する側鎖のイオウ原子を介して結合されるシステイン残基であって、
L1は、結合、直鎖(C1−C10)−アルカンジイル、以下の式の基であり
mは、2〜6の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
L1Aは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
B1は、以下の式の基であり
##5は、L1A基との結合部位を示しており、
##6は、L1B基との結合部位を示しており、
L5は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L6は、結合であり、
R29は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R30は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R29およびR30は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R31は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R32は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R31およびR32は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
L1Bは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで、(C1−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されてもよく、
かつ
ここで、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、それらの間に位置する任意の炭素原子を含めて、架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり、
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
Pは、OもしくはNHであり、
L3は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L4は、結合であり、
Q1は、4員〜7員の複素環であり、
Q2は、3員〜7員の炭素環または4員〜7員の複素環であり、
R14は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R15は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R14およびR15は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R16は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R17は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R18は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R19は、水素もしくは天然のα−アミノ酸の、またはその相同体もしくは異性体の側鎖基であり、
R20は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R19およびR20は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R22は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R21およびR22は、それらが結合される原子と一緒になって、3員〜7員の炭素環を形成し、
R23は、(C1−C4)−アルキルであり、
R24は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R27は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイル、または以下の式の基であり
pは、2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで、(C2−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されてもよく、
かつ
ここで、お互いに対して1,2−、1,3−または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、それらの間に位置する任意の炭素原子を含めて、架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素もしくはメチルであり、
R4は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
または
R3およびR4は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中、
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって4員から7員の複素環を形成し、
R10は、ベンゾイルであり、
R11は、ベンジルであり、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり、
#9は、−CHC(R26)−T2との連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26は、水素もしくはヒドロキシであり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである]
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 請求項12に記載の式(XXXa)の化合物
[式中、Cysは、スクシンイミドの炭素原子を介して側鎖のイオウ原子を介して結合されるシステイン残基であり、
L1は、結合、直鎖(C2−C6)−アルカンジイル、以下の式の基であり
mは、2もしくは3の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
L1Aは、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
B1は、以下の式の基であり
##5は、L1A基との連結部位を示しており、
##6は、L1B基との結合部位を示しており、
L5は、結合であり、
L6は、結合であり、
R29は、水素であり、
R30は、水素であり、
R31は、水素もしくはメチルであり、
R32は、水素もしくはメチルであり、
L1Bは、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで(C2−C6)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合もしくはエタン−1,2−ジイルであり、
L4は、結合であり、
R14は、水素であり、
R15は、水素であり、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであるか、
または
R16およびR17は、それらが結合される原子と一緒になって、ピペラジニル環を形成し、
R23は、メチルであり、
R24は、水素もしくはメチルであり、
L2は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であって
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
Dは、以下の式の基であって
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素であり、
R4は、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中、
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって、4員から7員の複素環を形成し、
R10は、ベンゾイルであり、
R11は、ベンジルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり
#9は、−CHCH2フェニルに対する連結部位を示しており
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである]
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 請求項12または13のいずれかに記載の式(XXXa)の化合物
[式中、
Cysは、システイン残基であって、これは、スクシンイミドの炭素原子を介して側鎖のイオウ原子を介して結合され、
L1は、結合もしくは直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであり、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
L3は、結合であり、
L4は、結合であり、
R16は、水素もしくはメチルであり、
R17は、水素もしくはメチルであり、
L2は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、ベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R3は、水素であり、
R4は、ベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7または−C(=O)−NR8R9の基であり、
式中、
R7は、水素であり、
R8は、水素であり、
R9は、水素であり、
R35は、メチルである]
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 式(XXXI)の化合物:
mは、2〜6の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
L1Aは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
B1は、以下の式の基であり
##5は、L1A基との連結部位を示しており、
##6は、L1B基との連結部位を示しており、
L5は、結合もしくは(C2−C4)−アルカンジイルであり、
L6は、結合であり、
R29は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R30は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R29およびR30は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
R31は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R32は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R31およびR32は、それらが結合される原子と一緒になって、5員もしくは6員の複素環を形成し、
L1Bは、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであり、
かつ
ここで(C1−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されてもよく、
かつ
ここで、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、それらの間に位置する任意の炭素原子を含めて、架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
Pは、OもしくはNHであり、
Q1は、4員〜7員の複素環であり、
Q2は、3員〜7員の炭素環または4員〜7員の複素環であり、
R18は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R19は、水素もしくは天然のα−アミノ酸の、またはその相同体もしくは異性体の側鎖基であり、
R20は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R19およびR20は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
R22は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R21およびR22は、それらが結合される原子と一緒になって、3員〜7員の炭素環を形成し、
R27は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであり、
L2は、直鎖(C2−C10)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
pは、2〜6の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで、(C2−C10)−アルカンジイルは、メチル、ヒドロキシおよびベンジルからなる群よりお互いに独立して選択される1〜4個の置換基によって置換されてもよく、
かつ
ここで、お互いに対して1,2、1,3または1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、それらの間に位置する任意の炭素原子を含めて、架橋されて、(C3−C6)−シクロアルキル環またはフェニル環を形成してもよく、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素もしくはメチルであり、
R2は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり、
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素もしくはメチルであり、
R4は、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、フェニル、ベンジル、1−ヒドロキシエチル、4−ヒドロキシベンジル、4−ヒドロキシ−3−ニトロベンジル、4−ヒドロキシ−3−アミノベンジル、1−フェニルエチル、ジフェニルメチル、1H−イミダゾール−4−イルメチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中、
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって4員から7員の複素環を形成し、
R10は、ベンゾイルであり、
R11は、ベンジルであり、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり
#9は、−CHC(R26)−T2との連結部位を記しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R26は、水素もしくはヒドロキシであり、
T2は、フェニル、ベンジル、1H−インドール−3−イルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであり、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである]
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 請求項15に記載の式(XXXI)の化合物
[式中、
L1は、結合、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルもしくは以下の式の基であり
mは、2もしくは3の数であり、
##1は、G基との連結部位を示しており、
##2は、B基との連結部位を示しており、
ここで(C2−C6)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
Bは、結合もしくは以下の式の基であり
*は、L1との連結部位を示しており、
**は、L2との連結部位を示しており、
R18は、水素であり、
R19は、メチル、プロパン−2−イル、2−メチルプロパン−1−イルもしくは1−メチルプロパン−1−イルであり、
R20は、水素もしくは(C1−C4)−アルキルであるか、
または
R19およびR20は、それらが結合される原子と一緒になって、ピロリジニル環を形成し、
R21は、水素もしくはメチルであり、
R22は、水素もしくはメチルであるか、
または
R21およびR22は、それらが結合される原子と一緒になって、シクロプロピル環を形成し、
R27は、水素もしくはメチルであり、
L2は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり、
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
ここで(C2−C10)−アルカンジイルは、1または2個のメチル置換基によって置換されてもよく、
かつ
ここで、お互いに対して1,4−の関係であるアルカンジイル鎖の2つの炭素原子は、それらの間に位置する任意の炭素原子を含めて、架橋されて、フェニル環を形成してもよく、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素であり、
R4は、1−ヒドロキシエチル、ベンジル、4−ヒドロキシベンジル、1−フェニルエチルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7、−C(=O)−NR8R9、−C(=O)−NH−NH−R10または−CH2−O−R11の基であり、
式中、
R7は、水素、メチル、エチル、n−プロピル、tert−ブチル、ベンジルもしくはアダマンチルメチルであり、
R8は、水素もしくはメチルであり、
R9は、水素、メチル、エチル、n−プロピルもしくはベンジルであるか、
または
R8およびR9は、それらが結合される窒素原子と一緒になって4員から7員の複素環を形成し、
R10は、ベンゾイルであり、
R11は、ベンジルであり、これはメトキシカルボニルもしくはカルボキシルによってフェニル基中で置換されてもよく、
R5は、水素、メチルもしくは以下の式の基であり
#9は、−CHCH2フェニルとの連結部位を示しており、
R12は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニル、カルボキシルもしくは式−S(O)2OHの基によって置換されてもよく、
R13は、フェニルであって、これは、メトキシカルボニルもしくはカルボキシルによって置換されてもよく、
R35は、メチルもしくはヒドロキシである]
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 請求項15または16のいずれかに記載の式(XXXI)の化合物
[式中、
L1は、結合であり、
Bは、結合であり、
L2は、直鎖(C2−C6)−アルカンジイルであるか、または以下の式の基であり
pは、2もしくは3の数であり、
##3は、B基との連結部位を示しており、
##4は、窒素原子との連結部位を示しており、
Dは、以下の式の基であり
#3は、窒素原子との連結部位を示しており、
R1は、水素であり、
R2は、ベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し
#4は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#5は、カルボニル基との連結部位を示しており、
その中にN−O部分が存在する環Aは、単環式または二環式の、以下の式の必要に応じて置換された複素環であり
#6は、カルボニル基との連結部位を示しており、
R6は、水素、ヒドロキシまたはベンジルオキシであり、
R3は、水素であり、
R4は、ベンジル、4−ヒドロキシベンジルもしくは1H−インドール−3−イルメチルであるか、
または
R3およびR4は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、以下の式の(1S,2R)−2−フェニルシクロプロパン−1,1−ジイル基を形成し、
#7は、隣接する窒素原子との連結部位を示しており、
#8は、T1基との連結部位を示しており、
T1は、式−C(=O)−OR7または−C(=O)−NR8R9の基であり、
式中、
R7は、水素であり、
R8は、水素であり、
R9は、水素であり、
R35は、メチルである]
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 請求項1〜11のいずれかに記載の一般式(Ia)の本発明の化合物を製造するための方法であって、
[A]緩衝液中の結合剤の溶液を、適切な還元剤、例えば、ジチオスレイトールもしくはtris(2−カルボキシエチル)ホスフィンハイドロクロライドなどと混合し、続いて、式(II)の化合物:
または
[B]緩衝液中の結合剤の溶液を、式(III)の化合物:
- 請求項18に記載の方法によって製造される化合物
[式中、AK1およびAK2が抗体であって、この抗体は、抗体M048−D01−hIgG1もしくはM048−D01−hIgG1−bの6つのCDR配列、抗体M048−D01−hIgG1もしくはM048−D01−hIgG1−bの可変軽鎖および可変重鎖、または抗体M048−D01−hIgG1もしくはM048−D01−hIgG1−bの軽鎖および重鎖を含む]
、ならびにまたそれらの塩、溶媒和物、および前記塩の溶媒和物。 - 前記結合剤が、FGFR2に特異的に結合する、請求項1〜19のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 前記結合剤が、FGFR2の細胞外ドメインに結合する、請求項1〜20のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 前記FGFR2が、FGFR2αおよび/またはFGFR2βである、請求項1〜21のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 前記結合剤が、FGFR2の細胞外N−末端エピトープ(1RPSFSLVEDTTLEPE15)に結合する、請求項1〜22のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 前記結合剤が、ヒトFGFR2と同様にマウスFGFR2にも結合する、請求項1〜23のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 前記結合剤が、標的細胞上のFGFR2に対する結合後に、前記標的細胞の結合によって内部移行される、請求項1〜24のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 前記結合剤が、結合タンパク質である、請求項1〜25のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 前記結合剤が、抗体またはその抗原−結合抗体フラグメントである、請求項1〜26のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 前記結合剤が、モノクローナル抗体またはその抗原−結合抗体フラグメントである、請求項1〜27のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 前記結合剤が、ヒト、ヒト化もしくはキメラ抗体、またはその抗原−結合抗体フラグメントである、請求項1〜28のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 前記結合剤が、IgG抗体またはその抗原−結合抗体フラグメントである、請求項1〜29のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 前記結合剤が、IgG抗体またはその抗原−結合抗体フラグメントである、請求項1〜30のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 前記結合剤が、癌標的分子FGFR2に対する結合において、GAL−FR21、GAL−FR22またはM048−D01−hIgG1抗体と競合する、請求項1〜31のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 前記結合剤が、
配列番号15(H−CDR1)、配列番号16(H−CDR2)、配列番号17(H−CDR3)、配列番号18(L−CDR1)、配列番号19(L−CDR2)および配列番号20(L−CDR3)に示される抗体M048−D01−hIgG1の可変の軽鎖および重鎖のCDR配列のアミノ酸配列、
配列番号12(Vl)および配列番号11(Vh)に示される、抗体M048−D01−hIgG1の可変の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列、
配列番号14(Vl)および配列番号13(Vh)に示される、抗体M048−D01−hIgG1−bの可変の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列、
配列番号9(軽鎖)および配列番号10(重鎖)に示される抗体M048−D01−hIgG1−bの軽鎖および重鎖のアミノ酸配列、
配列番号7(軽鎖)および配列番号8(重鎖)に示される抗体M048−D01−hIgG1の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列、または
抗体GAL−FR21またはGAL−FR22の可変の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列、
を含む、請求項1〜32のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。 - 請求項1〜33のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲートであって、前記結合剤が、
配列番号14(Vl)および配列番号13(Vh)に示される抗体M048−D01−hIgG1−bの可変の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列と、
配列番号9(軽鎖)および配列番号10(重鎖)に示される抗体M048−D01−hIgG1−bの軽鎖および重鎖のアミノ酸配列と、を含む、結合剤−薬物コンジュゲート。 - 疾患の処置および/または予防のための、請求項1〜34のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲートまたは化合物。
- 過剰増殖性疾患および/または血管新生疾患の処置および/または予防のための方法における使用のための、請求項1〜34のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲートまたは化合物。
- 過剰増殖性疾患および/または血管新生疾患の処置および/または予防のための医薬の製造のための、請求項1〜34のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲート。
- 不活性で、非毒性の、薬学的に好適な賦形剤と組み合わせて、請求項1〜34のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲートまたは化合物を含む、医薬。
- 1つ以上の過剰抗増殖性、細胞増殖抑制性または細胞毒性物質と組み合わせて、請求項1〜34のいずれかに記載の結合剤−薬物コンジュゲートまたは化合物を含む、医薬。
- 過剰抗増殖性および/または血管新生疾患の処置および/または予防のための、請求項38または39に記載の医薬。
- 有効量の請求項1〜34のいずれかに記載の少なくとも1つの結合剤−薬物コンジュゲートもしくは化合物または請求項39および40のいずれかに規定の医薬を用いる、ヒトおよび動物における過剰抗増殖性および/または血管新生疾患の処置および/または予防のための方法。
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