CN103379912B - 正羧烷基耳他汀及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及单甲基耳他汀F的新型衍生物(其N末端由羧烷基基团取代)、用来制备这些衍生物的方法，其用于治疗和/或预防疾病以及生产治疗和/或预防疾病的药物的应用，所述疾病特别是过度增殖性和/或抗原性疾病，例如癌症。所述治疗可以以单一治疗或与其它药物或另外的治疗方法联用的形式进行。

Description

正羧烷基耳他汀及其应用
本发明涉及单甲基耳他汀F的新型衍生物(其N末端由羧烷基基团取代)，用于制备这些衍生物的方法，其用于治疗和/或预防疾病以及生产治疗和/或预防疾病的药物的应用，举例而言，所述疾病特别是过度增殖性和/或抗原性疾病，例如癌症。所述治疗可以以单一治疗或与其它药物或另外治疗方法联用的形式出现。
癌症疾病是很多种组织中不受控制的细胞生长的结果。在很多情况中，新细胞穿透现有组织(侵袭性生长)，或者它们转移至远端器官。癌症发生在很多种器官中，并且通常以组织特异性方式发展。出于该原因，所述术语“癌性疾病”指的是大量不同器官、组织和细胞类型的已明确的疾病。
早期肿瘤可以使用外科或放射疗法去除。
转移的肿瘤通常以姑息治疗形式使用化疗剂治疗。本文的主要目标是寻找改善生活质量和延长生命之间的理想组合。
现今使用的胃肠道外给药的化疗剂中的大部分通常不是专门针对肿瘤组织或肿瘤细胞，而是由于其全身性给药而非特异性地分布在体内，于是也出现在不希望接触所述药物的区域，例如，在健康细胞、组织或器官中。这可能会引起不希望出现的副作用，甚至出现常见的毒性作用，这常常限制所述药物的治疗可用剂量，甚至会导致药物治疗终止。
这些化疗剂在肿瘤细胞或周围组织中改进的、选择性的可用性已成为数年来新型化疗剂发展的焦点，不仅在于最大化所述药物的效果，而且在于最小化毒副作用。将所述药物直接给入靶细胞的有效方法已被尝试多次。优化药物与细胞内靶的结合，以及最小化细胞内药物分布(例如进入相邻细胞)的确仍是一项困难的任务。
例如，单克隆抗体适用于肿瘤组织和肿瘤细胞的特异性靶向。近年来，这些用于临床治疗癌性疾病的抗体的重要性已显著提高，这是基于以下试剂的有效性，例如曲妥珠单抗(Herceptin)、利妥昔单抗(Rituxan)、西妥昔单抗(Erbitux)和贝伐单抗(Avastin)，所述所有试剂皆被批准用于治疗单独的特定肿瘤疾病[例如，参见G.P.Adams和L.M.Weiner,Nat.Biotechnol.23,1147-1157(2005)]。结果，人们对所谓免疫偶联物的兴趣显著增加。针对肿瘤相关抗原的内化的抗体通过连接单元(“接头”)共价连接到细胞毒剂。在被引入肿瘤细胞并从所述偶联物脱离后，所述抗体随后可直接并选择性地发挥作用。这样做相较癌性疾病的传统化疗可能可以显著减少对正常组织的损伤[例如，参见J.M.Lambert,Curr.Opin.Pharmacol.5,543-549(2005)；A.M.Wu和P.D.Senter,Nat.Biotechnol.23,1137-1146(2005)；P.D.Senter,Curr.Opin.Chem.Biol.13,235-244(2009)；L.Ducry和B.Stump,BioconjugateChem.21,5-13(2010)]。
作为抗体的替代物，还可以使用来自小分子药物范围的配体，其选择性结合特定目标(例如受体)[例如，参见E.Ruoslahti等,Science279,377-380(1998)；D.Karkan等,PLoSONE3(6),e2469(2008年6月25日)]。由细胞毒性药物和定位配体生成的偶联物也是已知的，它们在配体和药物之间具有的清晰裂解位点以释放所述活性药物。所述“预定断裂点”可在肽链中存在，其在特定区域可以被特异性酶于所需位置选择性地裂解[例如，参见R.A.Firestone和L.A.Telan,美国专利申请US2002/0147138]。
耳他汀E(AE)和单甲基耳他汀E(MMAE)是多拉斯他汀的合成类似物，是线性假肽的特异性基团，所述线性假肽最初分离自海洋源，并且对肿瘤细胞已部分显示非常有效的细胞毒活性[例如，综述参见G.R.Pettit,Prog.Chem.Org.Nat.Prod.70,1-79(1997)；G.R.Pettit等,Anti-CancerDrugDesign10，529-544(1995)；G.R.Pettit等,Anti-CancerDrugDesign13,243-277(1998)]。
然而不幸的是，MMAE具有相对较高的全身毒性。此外，抗体/活性剂偶联物(免疫偶联物)的使用与抗体间的接头和具有酶预定断裂点的活性化合物不相容。[S.O.Doronina等,BioconjugateChem.17,114-124(2006)]。
单甲基耳他汀F(MMAF)是具有C-末端苯丙氨酸单元的耳他汀衍生物，其相较于MMAE仅显示适中的抗增殖活性。这很可能归因于游离羧基，所述羧基的极性和电荷对其进入细胞有不利影响。在这种情况下，MMAF的甲基酯(MMAF-OMe)已被描述为具有进入细胞能力的中性电荷的前药衍生物，相比于MMAF，其对各种癌细胞系显示出高几个数量级的体外毒性[S.O.Doronina等,BioconjugateChem.17,114-124(2006)]。可以推测该效果由MMAF自身引起，MMAF在所述前药被引入细胞之后通过细胞内酯水解而快速释放。
然而，基于简单酯衍生物的药物化合物常经受由非特异性酯水解造成的化学不稳定性的风险，该非特异性酯水解不依赖作用的目标位点，例如，由血浆中出现的酯酶来水解；这种非特异性水解能大幅限制这些化合物用于治疗目的的可用性。此外，耳他汀的衍生物诸如MMAE和MMAF还是众多肿瘤细胞表达的转运蛋白的底物，这可导致发展对此类药物的耐性。
因此，本发明的目的是仅从中等有效的单甲基耳他汀F(MMAF)出发，鉴定新连接并使这些新连接能够特别应用于治疗癌性疾病，其一方面在全细胞实验中显示明显较高的细胞毒活性，另一方面减少转运蛋白的底物特性。所述物质可特别适合作为毒簇来连接蛋白质(例如抗体)，或有可能连接低分子量的配体，以形成抗增殖的(免疫)偶联物。
WO2005/081711-A2中公开了单甲基耳他汀F(MMAF)及其多种酯和酰胺衍生物。WO01/18032-A2中描述了多种其它具有C-末端酰胺取代的苯丙氨酸单元的耳他汀类似物。
WO02/088172-A2和WO2007/008603-A1中描述了苯丙氨酸侧链经修饰的MMAF类似物，WO2007/008848-A2描述了苯丙氨酸的羧基基团经修饰的MMAF类似物。WO2004/010957-A2和WO2009/117531-A1还描述了通过N-或C-末端连接的耳他汀偶联物等[也参见S.O.Doronina等,BioconjugateChem.19,1960-1963(2008)]。
本发明的目的是符合通式(I)的化合物及其盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物。
式中，
L表示直链(C1-C12)-烷二基，该直链(C1-C12)-烷二基最多可被甲基取代四次，并且在该直链(C1-C12)-烷二基中，(a)两个碳原子可以以1,2位、1,3位或1,4位关系彼此连接，若有必要则在所述两个碳原子之间的区域包括碳原子以形成(C3-C6)-环烷基环或苯环，或者(b)至多三个彼此不相邻的CH2基团可被O代替，
R1代表氢或甲基，
R2代表异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、1-羟乙基、苯基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2以及与其两者都相连的碳原子一起形成下式的2-苯基环丙烷-1,1二基基团
式中#标记与所述分子的其它部分相连的连接点，
以及
T代表的基团具有下式：-C(=O)-OR3、-C(=O)-NR4R5、-C(=O)-NH-NH-R6或-CH2-O-R7，其中
R3代表氢、(C1-C6)-烷基或(C3-C10)-环烷基，其中，(C1-C6)-烷基可以由苯基、萘基或(C3-C10)-环烷基取代，
R4代表氢或(C1-C6)-烷基，
R5代表氢、(C1-C6)-烷基或(C3-C10)-环烷基，其中(C1-C6)-烷基可由苯基取代，或者
R4和R5彼此连接，且和同它们连接的氮原子一起形成5-至7-元的饱和氮杂-杂环化合物，其还可包含环-杂原子诸如>N-H、>N-CH3或-O-；并且位于相对于上述氮原子的1,3-位或1,4-位，
R6代表(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-烷基羰基、苯基或苯甲酰基，
并且
R7代表(C1-C6)-烷基，其可由苯基取代，其中苯基还可由(C1-C6)-烷氧基羰基或羧基取代。
本发明的化合物是符合式(I)的化合物及其盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物，符合下述涵盖式(I)的化学式的化合物和它们的盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物，随后将作为工作实施例介绍的涵盖式(I)的化合物及其盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物，假定后文提到的化合物还未成盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物。
根据它们的结构，本发明的化合物可以不同的立体异构形式存在，即，以构型异构体形式或在适当时以构象异构体(对映异构体和/或非对映体，包括阻转异构体)形式存在。因此，本发明包括对映异构体和非对映体及其各自的混合物。可以通过常用方式从所述对映异构体和/或非对映体的混合物中提取立体异构上均一的组分；为实现该目的，优选使用色谱法，特别是HPLC色谱法在非手性相或手性相中分离。
若本发明的化合物以互变异构形式存在，则本发明包括所有互变异构形式。
本发明内容中优选的盐是本发明的化合物的生理上无害的盐。也包括不适合于药物应用的盐，因为该类盐可以用于分离或纯化本发明的化合物。
本发明化合物的生理上无害的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，诸如以下酸的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸。
本发明化合物的生理上无害的盐还包括常见碱的盐，例如，优选碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)和衍生自氨或含有1～16个C原子的有机胺的铵盐，所述有机胺例如，优选乙胺、二乙胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基氨基乙醇、二乙基氨基乙醇、普鲁卡因、二环己基胺、二苄基胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸和1,2-乙二胺。
在本发明内容中，本发明化合物通过与溶剂分子络合形成固态或液态配合物时，这种形式的化合物称作溶剂合物。水合物是溶剂合物的一种特殊形式，其中与水发生配位。在本发明内容中，溶剂合物优选是水合物。
另外，本发明还包括本发明化合物的前药。本文中的术语“前药”指的是这样的化合物：该化合物可以是生物活性或无生物活性的，但其在体内停留过程中转化为本发明的复合物(例如通过代谢或水解)。
在本发明的内容中，除非另有说明，取代基的定义如下：
本文中，(C 1 -C 6 )-烷基和(C 1 -C 4 )-烷基分别代表含有1-6和1-4个碳原子的直链或支化烷基基团。本文优选含有1～4个碳原子的直链或支化烷基基团。作为示例并优选以下基团，包括：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、新戊基、正己基、2-己基和3-己基。
在本发明的内容中，(C 1 -C 6 )-烷基羰基和(C 1 -C 4 )-烷基羰基代表分别含1～6个和1～4个碳原子的直链或支化烷基基团，其通过羰基基团[-C(=O)-]连接。本文优选所述烷基基团中含1～4个碳原子的直链或支化烷基羰基基团。作为示例并优选以下基团，包括：乙酰基、丙酰基、正苯甲酰基、异苯甲酰基、正戊酰基、新戊酰基、正己酰基和正庚酰基。
本发明的内容中，(C 1 -C 6 )-烷氧基和(C 1 -C 4 )-烷氧基分别代表含有1～6和1～4个碳原子的直链或支化烷氧基基团。本文优选含1～4个碳原子的直链或支化烷氧基基团。作为示例并优选以下基团，包括：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和正己氧基。
在本发明的内容中，(C 1 -C 6 )-烷氧基羰基和(C 1 -C 4 )-烷氧基羰基代表分别含1～6个和1～4个碳原子的直链或支化烷氧基基团，其通过羰基基团[-C(=O)-]由氧原子连接。本文优选所述烷氧基基团中含1～4个碳原子的直链或支化烷氧基羰基基团。作为示例并优选以下基团，包括：甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、异丙氧基羰基、正丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、正戊氧基羰基和正己氧基羰基。
本文中(C 1 -C 12 )-烷二基、(C 1 -C 8 )-烷二基和(C 1 -C 6 )-烷二基代表分别含1～12、1～8和1～6个碳原子的直链α,ω-二价烷基基团。本文优选含1～8，特别是1～6个碳原子的直链烷二基基团。作为示例并优选以下基团，包括：亚甲基、乙烷-1,2-二基(1,2-亚乙基)、丙烷-1,3-二基(1,3-亚丙基)、丁烷-1,4-二基(1,4-亚丁基)、戊烷-1,5-二基(1,5-亚戊基)、己烷-1,6-二基(1,6-亚己基)、庚烷-1,7-二基(1,7-亚庚基)、辛烷-1,8-二基(1,8-亚辛基)、壬烷-1,9-二基(1,9-亚壬基)、癸烷-1,10-二基(1,10-亚癸基)、十一烷-1,11-二基(1,11-亚十一烷基)和十二烷-1,12-二基(1,12-亚十二烷基)。
在本发明的内容中，(C 3 -C 6 )-环烷基代表含3～6个碳原子的单环的饱和环烷基基团。作为示例并优选以下基团，包括：环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
在本发明的内容中，(C3-C10)-环烷基代表含3～10个碳原子的单环(或如有必要，双环或三环)的饱和环烷基基团。作为示例并优选以下基团，包括：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、六氢茚满基、十氢萘基、二环[2.1.1]己基、二环[2.2.1]庚基、二环[3.2.1]辛基、二环[2.2.2]辛基、二环[3.2.2]壬基、二环[3.3.1]壬基、二环[3.3.2]癸基、二环[4.3.1]癸基和金刚烷基。
在本发明的内容中，5-至7-元氮杂杂环代表共含5～7个环原子的单环的饱和杂环，其含有一个氮环原子并通过该氮环原子连接，所述饱和杂环还可包括以下另一个环杂原子：>N-H、>N-CH3或-O-，该环杂原子位于相对于上述氮环原子的1,3-位(或者若有必要，1,4-位)。作为示例并优选以下基团，包括：吡咯烷基、1,3-噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基和吗啉基。
在本发明的内容中，所有出现多于一次的基团具有彼此独立的定义。如果本发明的化合物中的基团是被取代的，除非另有说明，所述基团可被取代一次或多次。优选用一种或两种相同的或若干取代基取代。特别优选用一种取代基取代。
本发明的内容中，优选符合式(I)结构的化合物，及其盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，式中：
L代表直链(C1-C8)-烷二基，其中(a)两个碳原子以1,3位或1,4位关系彼此相连，包括位于其间的一个或两个碳原子以形成苯环，或(b)至多两个彼此不相邻的可被O替代的CH2基团，
R1代表氢，
R2代表苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或
R1和R2以及与其两者都相连的碳原子一起形成下式的2-苯基环丙烷-1,1二基基团
其中
#标记与所述分子的其它部分相连的连接点，
并且
T代表的基团具有下式：-C(=O)-OR3、-C(=O)-NR4R5、-C(=O)-NH-NH-R6
或-CH2-O-R7，式中
R3代表氢或(C1-C4)-烷基，其可被苯基、萘基或(C3-C10)-环烷基取代，
R4代表氢或甲基，
R5代表氢或(C1-C4)-烷基，其可由苯基取代，
或者
R4和R5彼此相连并与同它们连接的氮原子一起形成哌啶环或吗啉环，
R6代表(C1-C4)-烷基羰基或苯甲酰基，
并且
R7代表(C1-C4)-烷基或苄基，在苯基基团中，其可由(C1-C4)-烷氧基羰基或羧基取代。
在本发明的内容中，优选符合式(I)的化合物，其中
L代表直链(C1-C6)-烷二基，
R1代表氢，
R2代表苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2以及与其两者都连接的碳原子一起形成下式的(1S,2R)-2-苯基环丙烷-1,1-二基基团
其中
#1标记与相邻氮原子相连的连接点，
#2标记基团T的连接点，
并且
T代表的基团具有下式：-C(=O)-OR3、-C(=O)-NR4R5、-C(=O)-NH-NH-R6或-CH2-O-R7，其中
R3代表氢、甲基、乙基、正丙基、苄基或金刚烷基甲基，
R4代表氢或甲基，
R5代表氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
R6代表苯甲酰基，
并且
R7代表苄基，其可在苯基基团中由甲氧基羰基或羧基取代。
在本发明的内容中，符合式(IA)的化合物及其盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物特别重要，其中
式中，L、R1、R2和T如上定义，支持R1和R2基团的CX-碳原子的构型如图所示。
在本发明的内容中，符合式(I)和式(IA)的化合物及其盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物也特别重要，其中
L代表丙烷-1,3-二基。
独立于给定基团的各自组合，在相关或优选基团组合中给出的具体基团定义还可由其它组合的基团定义替代。特别优选两个或更多个上文给出的优选范围。
本发明还提供制备本发明的式(I)的化合物的方法，其特征在于，式(II)的化合物在惰性溶剂中进行以下反应：
式中，R1、R2和T的定义如上，
[A]通过碱诱导的烷基化与式(III)的化合物偶联得到式(IV)的化合物
式中，L的定义如上，
E1代表氢或(C1-C4)-烷基或苄基，
X代表离去基团，例如氯、溴、碘、甲磺酸根、三氟甲磺酸根或甲苯磺酸根，
式中，E1、L、R1、R2和T定义如上，
然后，如果E1代表(C1-C4)-烷基或苄基，则用常见方法裂解该酯基团，如此一来，即如(III)中的E1代表氢那样，如本发明所述的式(I)的羧酸便得以保留。
式中，L、R1、R2和T定义如上
或者
[B]通过处理，在合适的还原剂存在下与式(V)的化合物偶联得到式(VI)的化合物
式中
E1代表氢或(C1-C4)-烷基或苄基，
LA的定义同上文L的定义，但是，其烷基链长缩短了一个CH2-单元
式中，E1、LA、R1、R2和T定义如上，
然后，如果E1代表(C1-C4)-烷基或苄基，则用常见方法裂解该酯基团，这样一来，即如(V)中的E1代表氢那样，如本发明所述的式(I-B)的羧酸便得以保留。
式中，LA、R1、R2和T定义如上。
并且，符合式(I)和(I-B)的所得化合物可以被按照需要分成其对映异构体和/或非对映体和/或使用以下适当的(i)溶剂和/或(ii)碱或酸转化为其溶剂合物、盐和/或所述盐的溶剂合物。
用于偶联反应(II)+(III)→(IV)的合适的惰性溶剂是，例如：醚类，例如二乙醚、二异丙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、1,4-二噁烷、1,2-二甲氧基乙烷或双-(2-甲氧基乙基)-醚，烃类，例如苯、甲苯、二甲苯、戊烷、己烷、庚烷、环己烷或矿物油馏分，或偶极非质子溶剂类，例如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、二甲亚砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N,N'-二甲基丙烯基脲(DMPU)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)或吡啶。还可使用此类溶剂的混合物。优选丙酮或N,N-二甲基甲酰胺。
用于该烷基化反应的合适的碱具体是碱金属氢氧化物，例如氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾，碱金属或碱土金属碳酸盐，例如碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸钙或碳酸铯，或常用有机胺，例如三乙基胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、N,N-二异丙基乙胺、吡啶或4-N,N-二甲基氨基吡啶。优选碳酸钾或碳酸铯。如有必要，添加以下烷基化催化剂是有益的，例如溴化锂或碘化锂、碘化钠或碘化钾、四正丁基溴化铵或四正丁基碘化胺或苄基三乙基溴化铵。
反应(II)+(III)→(IV)通常在-20°C～+100°C温度范围内进行，优选0°C～+50°C。所述反应可在大气压、升压或减压的条件下进行(例如从0.5至5巴)；通常而言，所述反应在大气压下进行。
反应(II)+(V)→(VI)通常在溶剂中进行，所述溶剂是还原胺化反应所用的标准溶剂且在所述反应条件下呈惰性，若有必要，添加酸和/或脱水剂作为催化剂。所述溶剂包括，例如醇类，例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇；醚类，例如四氢呋喃、1,4-二噁烷、1,2-二甲氧基乙烷或双-(2-甲氧基乙基)醚，或其它溶剂，例如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、N,N-二甲基甲酰胺或水。还可使用此类溶剂的混合物。优先在添加乙酸或稀盐酸作为催化剂的情况下使用1,4-二噁烷/水的混合物。
用于该反应的合适的还原剂具体是络合物硼氢化物，例如硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠或硼氢化四正丁基铵。优选氰基硼氢化钠。
反应(II)+(V)→(VI)通常在-0°C～+120°C温度范围进行，优选在+50°C～+100°C范围内。所述反应可在大气压、升压或减压的条件下进行(例如从0.5至5巴)；通常而言，所述反应在大气压下进行。
酯基团E1在步骤(IV)→(I)和(VI)→(I-B)[E1=(C1-C4)-烷基或苄基]中的裂解使用标准方法进行，通过在惰性溶剂中用酸或碱处理酯，以及在后一种情况中通过使用酸处理形成的羧酸盐以生成游离的羧酸。在叔丁酯的情况中，通过酸来进行裂解。在苄酯情况中，可以在合适的钯催化剂存在下利用氢解来实现裂解，所述钯催化剂例如负载在活性碳上的钯。
选择在反应(III)和(V)中生成的酯基团E1，使得其裂解条件与那些在反应(IV)和(VI)中的相应基团T相容。
用于酯水解的合适的碱是标准无机碱。这些碱具体包括碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物，例如氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钡，或碱金属碳酸盐或碱土金属碳酸盐，例如碳酸钠、碳酸钾或碳酸钙。优选氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾。
用于酯裂解的合适的酸通常是硫酸、氯化氢/盐酸、溴化氢/氢溴酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、甲苯磺酸、甲磺酸或三氟甲磺酸或其混合物，如有必要，则添加水。在叔丁酯的情况中，优选氯化氢或三氟乙酸，在甲酯的情况中，优选盐酸。
适用于这些反应的惰性溶剂是水或用于酯裂解的标准有机溶剂。这些溶剂优选包括：低级醇类，例如甲醇、乙醇、正丙醇或异丙醇，醚类，例如二乙醚、四氢呋喃、1,4-二噁烷或1,2-二甲氧基乙烷，或其它溶剂，例如二氯甲烷、丙酮、甲基乙基酮、N,N-二甲基甲酰胺或二甲亚砜。还可使用此类溶剂的混合物。在碱性酯水解的情况中，优选水和以下溶剂的混合物，所述溶剂包括1,4-二噁烷、四氢呋喃、甲醇、乙醇和/或二甲基甲酰胺。在与三氟乙酸反应的情况中，优选二氯甲烷，在与氯化氢反应的情况中，优选四氢呋喃、二乙醚、1,4-二噁烷或水。
酯裂解通常在-20°C～+100°C温度范围内，优选在0°C～+50°C进行。
式(II)的化合物可以按以下方式生成，例如使用肽化学标准方法，通过在惰性溶剂中于式(VII)的羧基官能团活化下使式(VII)的化合物进行以下反应：
式中，PG代表氨基保护基团，例如(9H-芴-9-基甲氧基)羰基、叔丁氧基羰基或苄氧基羰基，
[C]首先与式(VIII)的化合物或该化合物的盐偶联，得到式(IX)的化合物
式中，E2代表氢、(C1-C4)-烷基或苄基，
式中，E2和PG定义如上，
然后，如果E2代表(C1-C4)-烷基或苄基，则使用标准方法断裂所述酯基团，然后在惰性溶剂中通过活化羧基官能团的方式使所得的式(X)的羧酸与式(XI)的化合物或该化合物的盐偶联，得到式(XII)的化合物
式中，PG定义如上，
式中，R1、R2和T定义如上，
式中，PG、R1、R2和T定义如上，
或者
[D]与式(XIII)的化合物或该化合物的盐偶联，得到式(XII)的化合物
式中，R1、R2和T定义如上，
式中，PG、R1、R2和T定义如上，
然后以常用方式对式(XII)的化合物脱保护以形成式(II)的化合物
式中，R1、R2和T定义如上。
上述的偶联反应(即，由相应的胺和羧酸组分形成酰胺)使用肽化学的标准方法进行[例如，参见M.Bodanszky,PrinciplesofPeptideSynthesis,(《肽合成原理》)柏林施普林格出版公司(Springer-Verlag),1993；M.Bodanszky和A.Bodanszky,ThePracticeofPeptideSynthesis(《肽合成实践》),柏林施普林格出版公司(Springer-Verlag),1984；H.-D.Jakubke和H.Jeschkeit,Peptide,Proteine(《氨基酸、肽、蛋白质》)，魏恩海姆化学出版公司(VerlagChemie),1982]。
用于偶联反应(VII)+(VIII)→(IX)、(X)+(XI)→(XII)和(VII)+(XIII)→(XII)的惰性溶剂是，例如醚类，例如二乙醚、二异丙醚、叔丁基甲基醚、四氢呋喃、1,4-二噁烷、1,2-二甲氧基乙烷或双-(2-甲氧基乙基)-醚，烃类，例如苯、甲苯、二甲苯、戊烷、己烷、庚烷、环己烷或矿物油馏分，卤代烃类，例如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1,2-二氯乙烷、三氯乙烯或氯苯，或偶极非质子溶剂类，例如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲亚砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N,N'-二甲基丙烯基脲(DMPU)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)。还可使用此类溶剂的混合物。优选N,N-二甲基甲酰胺。
适用于这些偶联的活化剂/缩合剂是，例如碳二亚胺类，例如N,N'-二乙基碳二亚胺、N,N'-二丙基碳二亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)或N-(3-二甲基氨基异丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，光气衍生物类，例如N,N'-羰基二咪唑(CDI)或氯甲酸异丁酯，1,2-噁唑鎓化合物类，例如2-乙基-5-苯基-1,2-噁唑鎓-3-硫酸盐或or2-叔丁基-5-甲基异噁唑鎓高氯酸盐，酰胺基化合物类，例如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氢喹啉，α-氯胺类，例如1-氯-2-甲基-1-二甲基氨基-1-丙烯，磷光体化合物类，例如丙烷膦酸酐、氰基膦酸二乙酯、双-(2-氧代-3-噁唑烷基)-磷酰氯、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐或苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷)鏻六氟磷酸盐(PyBOP)，或脲鎓类化合物，例如O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU),O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸(HBTU)、2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TPTU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)或O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TCTU)，若有必要，与其它助剂联用，所述其它助剂如1-羟基苯并三唑(HOBt)或N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)，或者以碱的形式，碱金属碳酸盐，例如碳酸钠或碳酸钾，或叔胺类，例如三乙基胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、N,N-二异丙基乙基胺、吡啶或4-N,N-二甲基氨基吡啶。
在本发明的内容中，对于这些偶联反应，优选用于这些偶联反应的活化剂/缩合剂是N-(3-二甲基氨基异丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和与N,N-二异丙基乙胺相关联的1-羟基苯并三唑(HOBt)及N,N-二异丙基乙胺或O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)联用。
偶联反应(VII)+(VIII)→(IX)、(X)+(XI)→(XII)和(VII)+(XIII)→(XII)通常在-20°C～+60°C的温度范围内进行，优选0°C～+40°C。所述反应可在大气压、升压或减压的条件下进行(例如从0.5至5巴)；通常而言，所述反应在大气压下进行。
如有需要，存在的官能基团——特别是氨基、羟基和羧基基团——在本文描述的步骤中可以暂时是被保护的形式，如果是功能性且必要的话。使用肽化学的标准方法完成所述保护基团的引入和去除。[例如，参见T.W.Greene和P.G.M.Wuts,ProtectivegroupsinOrganicSynthesis(《有机合成中的保护基团》)，纽约的威利出版公司(Wiley)，1999；M.Bodanszky和A.Bodanszky,ThePracticeofPeptideSynthesis(《肽合成实践》)，柏林的施普林格出版公司(Springer-Verlag)，1984]。当若干保护基团存在时，其可在单釜式反应中同时释放，也可在分开的反应步骤中释放。
优选的氨基保护基团是叔丁氧基羰基(Boc)、苄氧基羰基(Z)、或(9H-芴-9-基甲氧基)羰基(Fmoc)；对于羟基或羧基官能团，优选的保护基团是叔丁基或苄基。通常通过在惰性溶剂中使用强酸处理来实现叔丁基或叔丁氧基羰基基团的去除，所述强酸例如氯化氢、溴化氢或三氟乙酸，所述惰性溶剂例如二乙醚、1,4-二噁烷、二氯甲烷或乙酸：如有需要，该反应可在不添加惰性溶剂的情况下进行。若所述保护基团是苄基或苄氧基羰基，其优选通过在合适的钯催化剂存在下的氢解去除，所述钯催化剂例如附在活性碳上的钯。(9H-芴-9-基甲氧基)羰基基团一般使用仲胺碱(例如二乙基胺或哌啶)来除去。
对化合物(VIII)[E2=(C1-C4)-烷基或苄基]中的酯基团E2加以选择，使其裂解的条件与化合物(VII)的特定保护基团相容。
式(VII)的化合物可以类似方式生成，首先，在缩合剂的辅助下使式(XIV)的N-(苄氧基羰基)-L-缬氨酸与式(XV)的化合物或该化合物的盐偶联以形成式(XVI)的化合物
式中，Z代表苄氧基羰基保护基团，
式中，E3代表(C1-C4)-烷基，
式中，E3和Z定义如上，
在利用氢解去除所述Z-保护基团之后，在缩合剂存在下，使式(XVI)的化合物与式(XVII)的N-保护N-甲基-L-缬氨酸偶联，得到式(XVIII)的化合物，
式中，
PG代表氨基保护基团，例如(9H-芴-9-基甲氧基)羰基、叔丁氧基羰基或苄氧基羰基，
式中，E3和PG定义如上，
并最终使用标准方法转移式(XVIII)中的酯基团-C(O)O-E3，转化成游离羧酸(VII)。
偶联反应(XIV)+(XV)→(XVI)和Z-脱保护的(XVI)+(XVII)→(XVIII)在类似于步骤[C]和[D]中描述的反应条件下进行。
酯基团-C(O)O-E3在步骤(XVIII)→(VII)中的水解以类似于步骤[A]和[B]中针对酯基团E1所描述的方式进行。对化合物(XV)中的烷基基团E3加以选择，使其裂解条件与化合物(XVII)的选定保护基团PG相容。
式(XIII)的化合物本身可容易地通过偶联上述化合物(XI)和化合物(XIX)而获得，得到式(XX)的化合物，并且可供后续裂解Boc保护基团。
式中，Boc代表叔丁氧基羰基保护基团，
式中，Boc、R1、R2和T定义如上。
偶联反应(XI)+(XIX)→(XX)在类似于步骤[C]和[D]的偶联步骤中描述的条件下进行。
式(III)、(VIII)、(XI)、(XIV)、(XV)、(XVII)和(XIX)的化合物各自在适当情况下以手性或非对映异构体的形式市售可得，或如文献所述的那样，或可由专业人员以与文献公开方法类似的标准方式生成。在关于起始化合物和中间体制备的实验部分中，可以找到许多关于起始化合物制备的详尽的说明，包括文献来源。
如果相关的异构纯起始化合物不可得，则如本发明所述可在(II)、(IV)、(VI)、(XII)、(XIII)和(XX)化合物阶段使该化合物裂解为其对应异构体和/或非对映体，然后，所得物还可以本文所述的分离形式用于后续的反应步骤。立体异构体的裂解可由专业人员使用标准方法完成。对于非手性和手性分离相，优选色谱法；在自由羧基基团的情况中，作为中间体，可以在手性碱的辅助下通过非对映异构体盐来实现裂解。
本发明的化合物的生成可以用以下方案直观地体现：
方案1
方案2
方案3
方案4
本发明的化合物具有有价值的药理学性质，并可用于预防和治疗人和动物的疾病。
相比于其它为人熟知的耳他汀衍生物，本发明的化合物中包含的N-末端羧基烷基基团[式(I)中的HOOC-L-]，并不仅仅发挥作为与抗体蛋白或其它配体的可能接头的作用，经证明还是惊人地具有对这些化合物有利的性质的组成型结构元件。
相比于例如单甲基耳他汀F(MMAF)，本发明的化合物显示更强的细胞毒活性，但与此同时，还显示作为细胞转运蛋白底物的可能性更低。
因此，本发明的化合物特别适合于治疗一般发生于人和动物内的过度增殖性疾病。另一方面，所述化合物能阻碍、阻滞、减少或降低细胞增殖和细胞分裂，而且还增加凋亡。
能用本发明的化合物治疗的过度增殖性疾病具体是癌性肿瘤疾病。在本发明的内容中，这些疾病包括，但不限于：乳腺癌和乳腺肿瘤(导管和小叶形式，也是原位的)、呼吸道肿瘤(小细胞性和非小细胞性癌，支气管癌)、脑肿瘤(例如，脑干和下丘脑肿瘤、星形细胞瘤、脑室膜瘤、成胶质细胞瘤、神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、脑(脊)膜瘤和神经外胚层以及松果腺肿瘤)、消化器官肿瘤(食道、胃、胆囊、小肠和大肠、直肠和肛门)、肝肿瘤(例如，肝细胞癌、胆管细胞癌和混合型胆管细胞癌)、头颈区域肿瘤(喉、下咽部、鼻咽、口咽、唇和口腔、口黑瘤)、皮肤肿瘤(基底细胞癌、棘细胞癌、鳞状上皮癌、卡波西(Kaposi)肉瘤、恶性黑色素瘤、非恶性皮肤癌、默克尔(Markel)细胞癌、肥大细胞瘤)、软组织肿瘤(例如，软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、纤维肉瘤、血管肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤和横纹肌肉瘤)、眼部肿瘤(例如眼内黑素瘤和眼癌)、内分泌腺和外分泌腺肿瘤(例如，甲状腺和副甲状腺，胰腺和唾液腺、腺癌)、泌尿道肿瘤(膀胱、阴茎、肾、肾盂和输尿管)以及生殖器官肿瘤(女性的子宫内膜、子宫颈、卵巢、阴道、阴户和子宫癌以及男性的前列腺和睾丸癌)。这也包括血液、淋巴系统和脊髓的实体瘤形式和循环细胞形式的增殖性疾病，例如白血病、淋巴瘤和骨髓及外骨髓增殖疾病，例如，急性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病和多毛细胞白血病，还有与艾滋病(AIDS)相关的淋巴瘤、霍奇金(Hodgkin's)淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、伯基特(Burkitt)淋巴瘤和中枢神经系统淋巴瘤。
这些详细描述的人疾病也能存在于其它哺乳动物内，其病因学相当，并且也能用本发明的化合物治疗。
使用本发明的化合物对上述癌症的治疗不仅包括实体瘤治疗，而且包括已转移和循环形式的癌的治疗。
术语“治疗”在本文中以其惯用含意使用，并用来描述以对抗、减轻、减少或缓解疾病或健康障碍并改善生活质量为目的的对已受疾病(正如癌症)影响的患者的供给、照料和监督。因而，本发明的另一点是本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病(具体是上述疾病)的应用。
本发明的另一点是本发明的化合物在开发用于治疗和/或预防疾病(具体是上述疾病)的药物中的应用。
因而，本发明的另一点是所述化合物用于治疗和/或预防疾病(具体是上述疾病)的方法的应用。
本发明的另一点是本发明的化合物在用于治疗和/或预防疾病(具体是上述疾病)的方法中的应用，所述方法以有效量使用本发明的化合物的至少一种。
本发明的化合物可以单独使用，如有需要，与一种或多种其它药理学上有用的物质联用，条件是该联用不会引起不希望和不可接受的副作用。因而，本发明的另一点是包含本发明化合物的至少一种，以及一种或多种活性物质的药物，所述药物具体用于治疗和/或预防上述疾病。
例如，本发明的化合物可与用于治疗癌症的已知的抗过度增殖性、细胞增长抑制性或细胞毒性物质联用。合适的联合剂例如：
阿地白介素、阿伦棒酸、阿法弗龙(alfaferone)、阿利维A酸、别嘌呤醇、别嘌醇钠、阿乐喜(Aloxi)、六甲蜜胺、氨鲁米特、氨磷汀、氨柔比星、安吖啶、阿纳托(司)唑、Anzmet、Aranesp、阿格拉滨(Arglabin)、三氧化二砷、阿诺新、5-氮杂胞苷、(硝基)咪唑硫嘌呤、卡介苗(BCG)或泰斯卡介苗(tice-BCG)、抑氨肽酶素b、倍他米松醋酸倍他米松磷酸钠、贝沙罗汀、硫酸博来霉素、溴尿苷、硼替佐米、白消安、降血钙素、坎帕斯(Campath)、卡培他滨、卡波铂、康士得(Casodex)、赛弗桑(cefesone)、西莫白介素、柔红霉素、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯屈膦酸、环磷酰胺、阿糖胞苷、氮烯唑胺、更生霉素、DaunoXome、地塞米松、磷酸地塞米松(Decadronphosphate)、Delestrogen、地尼白介素、甲基氢化泼尼松、地洛瑞林、右丙亚胺、己烯雌酚、大扶康(Diflucan)、多西紫杉醇、去氧氟尿苷、阿霉素、屈大麻酚、DW-166HC、艾里咖(Eligard)、Elitek、艾伦斯(Ellence)、Emend、表柔比星、促红细胞生成素α、益比奥、依他铂、左旋噻咪唑、Estrace、雌二醇、醇氮芥磷酸钠、炔雌醇、氨磷汀、羟乙磷酸依托泊苷、依托泊苷、法倔唑、法司东(farstone)、非格司亭、非那雄胺、非格司亭、氟尿苷、氟康唑、氟达拉滨、5-FdUMP、5-氟脲嘧啶(5-FU)、氟羚甲基睾丸素、氟他胺、福美坦、Fosteabine、福莫司汀、氟维司群、Gammagard、吉西他滨、吉姆单抗、Gleevec、Gliadel、戈舍瑞林(goserelin)、盐酸格拉司琼、组氨瑞林、癌康定(hycamtin)、氢化可通、EHNA、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、干扰素-α、烦扰素-α-2、干扰素-α-2α、干扰素-α-2β、干扰素-α-n1、干扰素-α-n3、干扰素-β、干扰素-γ-1α、白介素-2、甘乐能(intronA)、易瑞沙(iressa)、依立替康、康泉(kytril)、香菇多糖硫酸酯、来曲唑、甲酰四氢叶酸、亮脯利特、利普安、左旋咪唑、左亚叶酸钙盐、左甲状腺素钠、左旋甲状腺素(levoxyl)、环己亚硝脲、氯尼达明、Marinol、二氯甲基二乙胺、甲钴胺、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、美法仑、Menest、6-巯嘌呤、巯乙磺酸钠、甲氨蝶呤、Metvix、米替福新、二甲胺四环素、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、Modrenal、Myocet、奈达铂、Neulasta、Neumega、优保津(Neupogen)、尼鲁米特、诺瓦得士(Nolvadex)、NSC-631570、OCT-43、奥曲肽、盐酸昂丹司琼、Orapred、奥沙利铂、紫杉醇、Pediapred、培门冬酶、派罗欣(Pegasys)、喷司他丁、Picibanil、盐酸毛果芸香碱、吡柔比星、普卡霉素、卟吩姆钠、松龙苯芥、泼尼松龙(prednisolone)、强的松、倍美力(Premarin)、丙卡巴肼、Procrit、雷替曲塞、利比(Rebif)、羟乙磷酸铼-186、利妥昔单抗、罗飞龙-A(roferon-A)、罗莫肽、舒乐津(Salagen)、名善得定(sandostatin)、沙莫司亭、甲基环己亚硝脲、西佐喃、索布佐生、甲强龙(Solu-Medrol)、链佐星、氯化锶-89、Synthroid、它莫西芬、坦索罗辛、他索纳明、睾内脂、泰索帝、替西白介素、替莫唑胺、替尼泊苷、丙酸睾酮、Testred、硫鸟嘌呤、噻替派、促甲状腺素、替鲁膦酸、托泊替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、苏消安、维甲酸(Tretinoin)、Trexall、三甲基三聚氰胺、三甲曲沙、曲普瑞林醋酸、双羟萘酸曲普瑞林、UFT、尿苷、戊柔比星、维司力农、长春碱、长春新碱、去乙酰长春酰胺、长春瑞滨、Virulizin、辛卡德(Zinecard)、净司他丁斯酯、枢复宁(Zofran)；ABI-007、阿考比芬(Acolbifen)、Actimmun、Affinitak、氨喋呤、阿佐昔芬、阿索利尼(Asoprisnil)、阿他美坦、阿曲生坦、阿瓦斯汀、BAY43-9006(索拉非尼)、CCI-779、CDC-501、西乐葆、西妥昔单抗、克立那托、醋酸环丙氯地孕酮、(DAC)地西台宾、DN-101、阿霉素-MTC、dSLIM、度他雄胺、伊朵堤卡林(edotecarin)、依氟鸟氨酸、依沙替康、芬维A胺、二盐酸组胺、组氨瑞林水凝胶植入物、钬-166-DOTMP、伊班膦酸、干扰素-γ、Ntron-PEG、伊沙匹隆、琥珀酰化钥孔傶血兰蛋白、L-651582、兰乐肽、拉索昔芬、莱布勒(libra)、洛那法尼、米泼昔芬、米诺膦酸、MS-209、MTP-PE脂质体、MX-6、那法瑞林、奈莫柔比星、尼华斯他、诺拉曲塞、奥利默森、Onko-TCS、Osidem、紫杉醇聚谷氨酸、帕米膦酸二钠、PN-401、QS-21、夸西泮、R-1549、雷洛昔芬、豹蛙酶、13-顺-视黄酸、沙铂、西奥骨化醇、T-138067、特罗凯(Tarceva)、DHA1紫杉醇、胸腺素-α-1、噻唑呋林、替吡法尼、替拉扎明、TLK-286、托瑞米芬、反式MID-107R、伐司朴达、伐普肽、瓦他拉尼、维替泊芬、长春氟宁、Z-100、唑来膦酸及其结合。
在一个优选形式中，本发明的化合物可以联合抗过度增殖性试剂，其可以是以下试剂中的一种。然而，该列表并不是排他的：
氨鲁米特、左旋天门冬酰胺酶、(硝基)咪唑硫嘌呤、5-氮(杂)胞苷、博来霉素、白消安、卡波铂、卡氯芥、苯丁酸氮芥、顺铂、左旋门冬酰胺酶、环磷酰胺、阿糖胞苷、氮烯唑胺、放线菌素D、道诺霉素、己烯雌酚、2',2'-双氟脱氧胞苷、紫杉萜、阿霉素(亚德里亚霉素)、表柔比星、埃博霉素及其衍生物、赤式-羟基壬基腺嘌呤、乙炔雌二醇、依托泊苷、氟达拉宾磷酸盐、5-氟脱氧尿苷、5-氟脱氧尿苷单磷酸盐、5-氟尿嘧啶、氟羚甲基睾丸素、氟他胺、六甲基三聚氰胺、羟基脲、己酸孕酮、去甲氧基柔红霉素、异环磷酰胺、干扰素、依立替康、甲酰四氢叶酸、环己亚硝脲、二氯甲基二乙胺、甲羟孕酮醋酸酯、乙酸甲地孕酮、美法仑、6-巯嘌呤、巯乙磺酸钠、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、紫杉醇、喷司他丁、N-膦酰乙酰基L-天冬氨酸(PALA)、普卡霉素、脱氢皮质(甾)醇、泼尼松、甲基苄肼、雷洛昔芬、赛氮芥、链佐星、它莫西芬、替尼泊苷、丙酸睾酮、硫鸟嘌呤、噻替派、托泊替康、三甲基三聚氰胺、尿(嘧啶核)苷、长春碱、长春新碱、去乙酰长春酰胺和长春瑞滨。
本发明的化合物有望与生物治疗剂例如抗体(例如贝伐单抗(avastin)、美罗华(rituxan)、爱必妥(erbitux)、赫赛汀(herceptin))联用。本发明的化合物还在与针对血管生成的治疗(例如，贝伐单抗(avastin)、阿西替尼(axitinib)、瑞森汀(recentin)、瑞格拉芬尼(regorafenib)、索拉非尼(sorafenib)或舒尼替尼(sunitinib))的联用中达到积极效果。本发明的化合物也特别适合于与蛋白酶体抑制剂或mTOR抑制剂联用以及与抗激素和甾体代谢酶抑制剂联用，因为它们的副作用情况比较有利。
一般而言，在本发明的化合物与其它细胞生长抑制剂或细胞毒剂联用时追求以下目标：
·与使用单一药物治疗相比，在减缓肿瘤生长、减小其尺寸甚至将其完全清除方面增加效率，
·以相较于单一治疗的更低的剂量给予化疗剂的可能性；
·相较于单一给药具有更少副作用的更合适的治疗的可能性；
·更加广谱性治疗肿瘤疾病的可能性；
·达到对治疗更高的响应率；
·与现有标准治疗相比，患者的生存率更长。
此外，本发明的化合物还能与放疗和/或外科干预联用。
本发明的另一点是包含本发明的至少一种化合物的药物及其用于上述目的的应用，所述药物通常与一种或多种惰性的、无毒的药学上合适的赋形剂相关联。
本发明的化合物可全身和/或局部作用。出于该目的，可以以合适的方式施加所述化合物，所述方式例如，口服、胃肠道外、肺内、鼻内、舌下、舌、口颊、直肠、经皮、透皮、结膜内或借助植入物或支架。
对于这些应用方法，本发明的化合物可以以合适于所述应用方法的形式给予。
对于口服应用，本发明的化合物可以用快速分配和/或改善分配的方法来给予，所述方法可包括结晶和/或非晶形和/或可溶形式的化合物，例如，片剂(非包衣或包衣片剂，例如所具有的包衣耐胃酸或以延迟方式溶解或不溶解，从而控制本发明化合物释放)；片剂或膜剂/扁剂(oblates)(其在口腔内快速溶解)，膜剂/冻干剂、胶囊剂(例如硬的或软的明胶胶囊)、丸剂、粒剂、团剂、粉剂、乳剂、混悬剂、气溶胶或溶液剂。
肠胃外的施用可以通过绕过吸收步骤(例如静脉内、动脉内、心内或腰内)或利用吸收(例如肌肉内、皮下、皮内、经皮或腹膜内)来实现。适合于胃肠外施用的应用形式是(但不限于)：以溶液、混悬液、乳液、冻干剂或无菌粉末的形式注射和输注制剂。
对于其它的施用方法，可以使用，例如吸入药物形式(粉末吸入剂、喷雾剂)、滴鼻剂、溶液剂或喷剂、片剂、膜剂/扁剂或舌、舌下或颊施用的胶囊、栓剂、耳或眼制剂、阴道胶囊剂，水性混悬剂(乳液、需振荡的混合物)、亲脂性混悬剂、软膏剂、乳膏、透皮治疗系统(例如膏药)、乳、糊剂、泡沫剂、洒粉剂、植入物或支架。
优选口服和胃肠道外给药，特别是口服和静脉内施用。
本发明的化合物可被转化为上述应用的方法。这可以通过以标准方式混合惰性、无毒、药学上合适的赋形剂来实现。这些赋形剂可以是，例如载体物质(例如微晶纤维素、乳糖、甘露醇)、溶剂(例如液体聚乙二醇)、乳化剂和分散剂或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠、聚氧山梨醇油酸酯)、粘结剂(例如聚乙烯基吡咯烷酮)、合成和天然聚合物(例如白蛋白)、稳定剂(例如抗氧化剂，例如抗坏血酸)、着色剂(例如，无机颜料，例如铁氧化物)和味道和/或气味矫正剂。
一般而言，经证明用于胃肠外施用时，给予约0.001到至多1mg/kg的剂量是有利的，优选约0.01到至多0.5mg/kg体重以获得有效结果。对于口服施用，所述剂量是约0.01～100mg/kg，优选约0.01～20mg/kg，理想上是0.1～10mg/kg体重。
然而，有时可能需要偏离上述剂量，取决于体重、施用方法、对活性剂的个体表现和制备物类型及施用的时间或间隔。在一些情况中，可能低于所述最低剂量即已足够，而在一些情况中，可能需要多于所述最高剂量的剂量。如果需要大剂量的施用，可以将这些剂量分为若干较小的剂量贯穿当天给予。
以下实施例说明本发明。本发明不限于所述实施例。
除非另有说明，以下测试和实施例中百分数值是体重百分数，份是重量份。液体/液体溶液的溶剂比、稀释比和浓度数据指的是体积。
A.实施例
缩写和首字母缩写：
abs.绝对
Ac乙酰基
aq.水性、水溶液
Boc叔丁氧基羰基
br.宽峰(NMR中)
Ex.实施例
ca.约、大约
CI化学电离(MS中)
d双峰(NMR中)
d天
TLC薄层色谱法
DCI直接化学电离(MS中)
dd双二重峰(NMR中)
DMAP4-N,N-二甲基氨基吡啶
DME1,2-二甲氧基乙烷
DMFN,N-二甲基甲酰胺
DMSO二甲亚砜
DPBS杜尔伯科(Dulbecco's)磷酸盐缓冲盐溶液
dt双三重峰(NMR中)
o.th.理论上(化学领域)
EDCN'-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐
EI电子冲击电离(MS中)
eq.当量
ESI电子喷雾电离(MS中)
FCS胎牛血清
Fmoc(9H-芴-9-基甲氧基)羰基
sat.饱和的
GTP鸟苷-5'三磷酸
h小时
HATUO-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HEPES4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸
HOAc乙酸
HOBt1-羟基-1H-苯并三唑水合物
HOSuN-羟基琥珀酰亚胺
HPLC高压、高效液相色谱
conc.蒸发的
LC-MS液相色谱-质谱联用
m多重峰(NMR中)
min分钟
MS质谱
MTT3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H溴化四唑
NMMN-甲基吗啉
NMPN-甲基-2-吡咯烷酮
NMR核磁共振
PBS磷酸盐缓冲盐溶液
Pd/C活性炭载钯
quant.定量(用于产率)
quart四重峰(NMR中)
quint五重峰(NMR中)
Rf保留指数(DC中)
RT室温
Rt保留时间(HPLC中)
s单重峰(NMR中)
t三重峰(NMR中)
tert.叔
TFA三氟乙酸
THF四氢呋喃
UV紫外光谱
v/v体积与体积比(溶液的)
Z苄氧基羰基
tog.一起
HPLC和LC-MS方法：
方法1(LC-MS):
仪器：沃特斯公司(Waters)的AcquitySQDUPLC系统；柱：沃特斯公司的AcquityUPLCHSST31.8μ50mm×1mm；洗脱剂A：1l水+0.25ml99%甲酸，洗脱剂B：1l乙腈+0.25ml99%甲酸；梯度：0.0min90%A→1.2min5%A→2.0min5%A；流量：0.40mL/min；炉：50℃；UV检测：210～400nm。
方法2(LC-MS):
仪器：带有沃特斯公司的UPLCAcquity的MicromassQuattroPremier；柱：ThermoHypersilGOLD1.9μ50mm×1mm；洗脱剂A：1l水0.5ml50%甲酸，洗脱剂B：1l乙腈0.5ml50%甲酸；梯度：0.0min90%A→0.1min90%A→1.5min10%A→2.2min10%A；流量：0.33mL/min；炉：50℃；UV检测：210nm。
方法3(LC-MS):
仪器：带有HPLC安捷伦(Agilent)系列1100的MicromassQuattroMicroMS；柱：ThermoHypersilGOLD3μ20mm×4mm；洗脱剂A：1l水+0.5mL50%甲酸，洗脱剂B：1l乙腈+0.5mL50%甲酸；梯度：0.0min100%A→3.0min10%A→4.0min10%A→4.01min100%A(流量2.5mL/min)→5.00min100%A；炉：50℃；流量：2mL/min；UV检测：210nm。
方法4(LC-MS):
MS仪器类型：MicromassZQ；HPLC仪器类型：HP1100系列；UVDAD；柱：PhenomenexGemini3μ30mm×3.00mm；洗脱剂A：1l水+0.5mL50%甲酸，洗脱剂B：1l乙腈+0.5mL50%甲酸；梯度：0.0min90%A→2.5min30%A→3.0min5%A→4.5min5%A；流量：0.0min1mL/min→2.5min/3.0min/4.5min2mL/min；炉：50°C；UV检测：210nm。
方法5(HPLC):
仪器：HP1090系列II；柱：MerckChromolithSpeedRODRP-18e,50mm×4.6mm；前置柱：MerckChromolithGuardCartridgeKitRP-18e，5mm×4.6mm；进样体积：5μL；洗脱剂A：70％HClO4的水溶液(4mL/L)，洗脱剂B：乙腈；梯度：0.00min20%B→0.50min20%B→3.00min90%B→3.50min90%B→3.51min20%B→4.00min20%B；流量：5mL/min；柱温：40℃。
方法6(HPLC):
仪器：带有DAD996的Waters2695；柱：MerckChromolithSpeedRODRP-18e,50mm×4.6mm；前置柱：MerckChromolithGuardCartridgeKitRP-18e，5mm×4.6mm；洗脱剂A：70％HClO4的水溶液(4mL/L)，洗脱剂B：乙腈；梯度：0.00min5%B→0.50min5%B→3.00min95%B→4.00min95%B；流量：5mL/min。
方法7(LC-MS):
MS仪器类型：WatersZQ；HPLC仪器类型：安捷伦1100系列；UVDAD；柱：ThermoHypersilGOLD3μ20mm×4mm；洗脱剂A：1l水+0.5mL50%甲酸，洗脱剂B：1l乙腈+0.5mL50%甲酸；梯度：0.0min100%A→3.0min10%A→4.0min10%A→4.1min100%A(流量2.5mL/min)；炉：55℃；流量：2mL/min；UV检测：210nm。
方法8(LC-MS):
MS仪器类型：WatersZQ；HPLC仪器类型：安捷伦1100系列；UVDAD；柱：ThermoHypersilGOLD3μ20mm×4mm；洗脱剂A：1l水+0.5mL50%甲酸，洗脱剂B：1l乙腈+0.5mL50%甲酸；梯度：0.0min100%A→2.0min60%A→2.3min40%A→3.0min20%A→4.0min10%A→4.2min100%A(流量2.5mL/min)；炉：55℃；流量：2mL/min；UV检测：210nm。
方法9(LC-MS):
仪器：沃特斯公司(Waters)的AcquitySQDUPLC系统；柱：沃特斯公司的AcquityUPLCHSST31.8μ50mm×1mm；洗脱剂A：1l水+0.25mL99%甲酸，洗脱剂B：1l乙腈+0.25ml99%甲酸；梯度：0.0min95%A→6.0min5%A→7.5min5%A；炉：50℃；流量：0.35mL/min；UV检测：210～400nm。
方法10(HPLC):
仪器：安捷伦1200系列；柱：AgilentEclipseXDB-C185μ4.6mm×150mm；前置柱：PhenomenexKrudKatcher一次性前置柱；进样体积：5μl；洗脱剂A：1l水+0.01%三氟乙酸；洗脱剂B：1l乙腈+0.01%三氟乙酸；梯度：0.00min10%B→1.00min10%B→1.50min90%B→5.5min10%B；流量：2mL/min；柱温：30℃。
方法11(LC-MS):
仪器：沃特斯公司(Waters)的AcquitySQDUPLC系统；柱：沃特斯公司的AcquityUPLCHSST31.8μ30mm×2mm；洗脱剂A：1l水+0.25mL99%甲酸，洗脱剂B：1l乙腈+0.25ml99%甲酸；梯度：0.0min90%A→1.2min5%A→2.0min5%A；流量：0.60mL/min；炉：50°C；UV检测：208～400nm。
对于所有未明确说明合成方式的反应物或试剂，可以假定它们可购自容易获得的来源。对于所有未明确说明合成方式而又不能商购或不容易获得的反应物或试剂，则给出其中说明其制备的文献。
起始化合物和中间体：
起始化合物1
(2R,3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(Boc-多拉脯氨酸)二环己基胺盐
该化合物可以按照参考文献以多种方式生成，例如Pettit等,Synthesis1996,719；Shioiri等,TetrahedronLett.1991,32,931；Shioiri等,Tetrahedron1993,49,1913；Koga等,TetrahedronLett.1991,32,2395；Vidal等,Tetrahedron2004,60,9715；Poncet等,Tetrahedron1994,50,5345。本文采用Shioiri等的说明合成所述化合物(TetrahedronLett.1991,32,931)。
起始化合物2
(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基氨基)庚酸叔丁酯盐酸盐(多拉异亮氨酸-OtBu×HCl)
该化合物可以按照参考文献中的多种方法生成，例如Pettit等,J.Org.Chem.1994,59,1796；Koga等,TetrahedronLett.1991,32,2395；Shioiri等,TetrahedronLett.1991,32,931；Shioiri等,Tetrahedron1993,49,1913。本文采用Koga等的说明合成所述化合物(TetrahedronLett.1991,32,2395)。
中间体1
(3R,4S,5S)-4-[{N-[(苄氧基)羰基]-L-缬氨酰基}(甲基)氨基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯
将425mg(1.7mmol)的N-[(苄氧基)羰基]-L-缬氨酸溶解于50mLDMF中，并依次混合500mg(1.7mmol)的(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基氨基)庚酸叔丁酯盐酸盐(起始化合物2)、356mg(1.9mmol)的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、285mg(1.9mmol)的1-羟基-1H-苯并三唑水合物和655mg(5.1mmol)的N,N-二异丙基乙基胺。室温下将该混合物搅拌20小时。添加另一份142mg(0.5mmol)的N-[(苄氧基)羰基]-L-缬氨酸、119mg(0.6mmol)的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、95mg(0.6mmol)的1-羟基-1H-苯并三唑水合物和218mg(1.7mmol)的N,N-二异丙基乙基胺，并将该混合物用超声处理90min。然后将该混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的溶液中。分离除去该有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发。使用制备型HPLC纯化该残留物。得到329mg(理论上40%)的无色油状标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=2.5min；
LC-MS(方法1)：Rt=1.45min；MS(ESIpos)：m/z=493(M+H)+。
中间体2
(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-缬氨酰基)氨基]庚酸叔丁酯
将500mg(1mmol)的(3R,4S,5S)-4-[{N-[(苄氧基)羰基]-L-缬氨酰基}(甲基)氨基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯(中间体1)溶解于50mL的甲醇中，并且在添加100mg10%负载在活性炭上的钯后，在大气压下氢化1h。然后，过滤去除所述催化剂，并在真空去除溶解的试剂。得到370mg(定量)的几乎无色的油状标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=1.59min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.74min；MS(ESIpos)：m/z=359(M+H)+。
中间体3
N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-叔丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将396mg(1.1mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酸溶解于20mLDMF，并依次添加365mg(1mmol)的(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-缬氨酰基)氨基]庚酸叔丁酯(中间体2)、234mg(1.2mmol)的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和187mg(1.2mmol)的1-羟基-1H-苯并三唑水合物。在室温条件下将该混合物搅拌过夜。然后将该混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的溶液中。分离除去该有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发。该残留物无需纯化即可直接用于下一个步骤。
产量：660mg(理论上68%)
HPLC(方法5)：Rt=3.0min；
LC-MS(方法1)：Rt=1.61min；MS(ESIpos)：m/z=694(M+H)+。
中间体4
N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将650mg(0.94mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-叔丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体3)溶解于5mL二氯甲烷，然后，添加5mL三氟乙酸并在室温下搅拌过夜。然后，使所述混合物在真空下蒸发，并使用HPLC纯化残留物。得到430mg(理论上72%)的无色泡沫状标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=2.4min。
LC-MS(方法2)：Rt=1.51min；MS(ESIpos)：m/z=638(M+H)+。
中间体5
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将51mg(0.08mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解于10mLDMF，并添加0.5mL哌啶。在室温下搅拌10min后，使所述混合物在真空下蒸发，并将所得剩余物溶解于二乙醚。滤除不溶的组分，并用乙醚洗涤数次。将所得过滤剩余物添加至5mL二噁烷/水(1:1)中，并使用1N氢氧化钠调节该溶液pH值为11。在超声处理下，分阶段加入349mg(1.6mmol)的二碳酸二叔丁基酯。该溶液的pH值保持在11。在所述反应结束后，蒸发二噁烷，并用柠檬酸将所述水性溶液的pH值调节为2～3。随后各用50mL乙酸乙酯萃取两次。纯化有机相，用硫酸镁干燥，并在真空下蒸发。剩余物由二乙醚吸收，并用戊烷沉淀。利用倾滗分离溶解试剂。用戊烷将剩余物浸软数次，然后在高真空下干燥。因此，获得31mg(理论上93%)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt=2.2min。
LC-MS(方法2)：Rt=1.32min；MS(ESIpos)：m/z=516(M+H)+。
中间体6
N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将315mg(0.494mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解于12mLDMF，然后添加104mg(0.543mmol)的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和83mg(0.543mmol)的1-羟基-1H-苯丙三唑水合物，并在室温下搅拌90min。然后，添加112μL的N,N-二异丙基乙胺和149mg(0.494mmol)的(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酸三氟乙酸钠，后者最初已由起始化合物1通过使用三氟乙酸裂解Boc保护基团而合成。在室温下搅拌该混合物2h，然后在高真空下蒸发。然后，用制备型HPLC纯化所得剩余物两次。得到140mg(理论上35%)的无色泡沫状标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=2.4min。
LC-MS(方法1)：Rt=1.38min；MS(ESIpos)：m/z=807(M+H)+。
中间体7
(βS)-N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-β-甲基-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸钠
首先，通过在乙酸乙酯中吸收351mg(0.75mmol)的(2R,3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸的二环己基胺盐(起始化合物1)，并通过硫酸氢钾水性溶液分离，将(2R,3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸释放。用硫酸镁对该有机相进行干燥，过滤并蒸发。然后，10mLDMF吸收剩余物，并依次添加373mg(0.75mmol)的苄基-(βS)-β-甲基-L-苯基丙氨酸三氟乙酸钠[合成如下：采用市售可得的(βS)-N-(叔丁氧基羰基)-β-甲基-L-苯丙氨酸，通过苄醇的DEC/DMAP-支持的酯化，随后在三氟乙酸辅助下断裂Boc保护基团]、428mg(1.125mmol)的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和392μL的N,N-二异丙基乙胺。室温下将该混合物搅拌20小时。然后将该混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的溶液中。分离出有机相，用碳酸氢钠溶液及随后氯化钠溶液纯化，最后蒸发。使用制备型HPLC纯化该残留物。因此，得到230mg(理论上57%)的Boc保护的中间体(βS)-N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酰基}-β-甲基-L-苯基丙氨酸苄酯。
HPLC(方法6)：Rt=2.3min；
LC-MS(方法1)：Rt=1.36min；MS(ESIpos)：m/z=539(M+H)+。
将230mg(0.42mmol)该中间体吸收于5mL二氯甲烷，然后添加5mL三氟乙酸并在室温下搅拌30min。然后使其在真空下蒸发。所得剩余物在真空下进一步干燥，然后从乙腈/水冻干。因此，获得230mg(定量)的标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt=1.6min；
中间体8
N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸钠
类似于中间体7的合成，所述标题化合物由起始化合物1和L-苯基丙氨酸苄酯合成。
HPLC(方法5)：Rt=1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.85min；MS(ESIpos)：m/z=425(M+H)+。
中间体9
N-苄基-N-甲基-L-苯基丙氨酸酰胺三氟乙酸钠
将1000mg(3.77mmol)的N-(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸溶解于10mLDMF，并添加457mg(3.77mmol)N-甲基苄胺、2150mg(5.65mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和657μLN,N-二异丙基乙胺。所得批料在室温下搅拌30分钟，然后在真空下蒸发。所得剩余物用二氯甲烷吸收，并用水萃取三次。所述有机相用硫酸镁干燥，并蒸发。所得剩余物使用快速色谱在硅胶上用石油醚/乙酸乙酯3:1为溶剂来纯化。蒸发产物馏分，并在高真空下干燥所得剩余物。因此，获得1110mg(理论上75%)的Boc-保护的中间体N-苄基-Nα-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-苯基丙氨酸酰胺。
HPLC(方法5)：Rt=2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt=1.14min；MS(ESIpos)：m/z=369(M+H)+。
将1108mg(3,007mmol)该中间体吸收于30mL二氯甲烷，然后添加10mL三氟乙酸并在室温下搅拌30min。随后使其在真空下蒸发，所得剩余物溶解于二氯甲烷，并蒸馏所述溶解试剂。使剩余物在戊烷中溶解两次，每次倾滗去除溶解试剂，最终产物于高真空下干燥。因此，获得1075mg(理论上93%)的树脂状标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.6min；MS(ESIpos)：m/z=269(M+H)+。
中间体10
N-苄基-Nα-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-N-甲基-L-苯基丙氨酸酰胺三氟乙酸
首先，通过在乙酸乙酯中吸收141mg(0.491mmol)的(2R,3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸的二环己基胺盐(起始材料1)，并与5%硫酸水溶液振荡，将(2R,3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸释放。用硫酸镁对该有机相进行干燥，过滤并蒸发。所得剩余物吸收于10mLDMF，并添加187.6mg(0.49mmol)N-苄基-N-甲基-L-苯基丙氨酸酰胺三氟乙酸盐(中间体9)、190.3mg(1.47mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和256μLN,N-二异丙基乙胺。室温下搅拌该混合物1小时。然后蒸发该批料，所得剩余物吸收于乙酸乙酯中，然后使所得溶液通过使用饱和氯化铵溶液、碳酸氢钠溶液和水依次手动溶液萃取。所述有机相用硫酸镁干燥，并蒸发。所得剩余物使用快速色谱在硅胶上用乙腈/水30:1作为洗脱剂来纯化。蒸发产物馏分，然后在高真空下干燥所得剩余物。因此，得到168mg(理论上64%)的Boc-保护的中间体(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)氨基]-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。
HPLC(方法5)：Rt=2.2min；
LC-MS(方法2)：Rt=1.22min；MS(ESIpos)：m/z=538(M+H)+。
将168mg(0.312mmol)的该中间体吸收于15mL二氯甲烷，然后添加3mL三氟乙酸并在室温下搅拌30min。然后使其在真空下蒸发。所得剩余物先溶解于二氯甲烷中，然后溶解于二乙醚中，每次都蒸馏去除溶解试剂。在高真空下干燥后，得到170mg(理论上99%)的树脂状标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.73min；MS(ESIpos)：m/z=438(M+H)+。
中间体11
N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯基丙氨酸甲酯三氟乙酸盐
类似于中间体10的合成，该标题化合物使用(2R,3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸二环己基胺盐(起始材料1)和L-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐合成。
HPLC(方法6)：Rt=0.6min；
LC-MS(方法3)：Rt=1.17min；MS(ESIpos)：m/z=349(M+H)+。
中间体12
N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酸苄酯三氟乙酸盐
类似于中间体10的合成，该标题化合物使用(2R,3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸二环己基胺盐(起始材料1)和L-色氨酸苄酯合成。
HPLC(方法5)：Rt=2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.8min；MS(ESIpos)：m/z=464(M+H)+。
中间体13
(1S,2R)-1-({(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}氨基)-2-苯基环丙烷羧酸苄酯三氟乙酸氯化钠。
类似于中间体10的合成，该标题化合物使用(2R,3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸二环己基胺盐(起始材料1)和(1S,2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷羧酸苄酯合成。后者通过使用市售可得的(1S,2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷碳酸和苄基醇酯化的标准方法合成，随后使用三氟乙酸脱去Boc。
HPLC(方法6)：Rt=1.5min；
LC-MS(方法2)：Rt=0.93min；MS(ESIpos)：m/z=437(M+H)+。
中间体14
(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酸苄酯三氟乙酸
首先，通过在150mL乙酸乙酯中吸收1.82g(3.88mmol)的(2R,3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸的二环己基胺盐(起始材料1)，并通过100mL的0.5%硫酸水溶液萃取，将(2R,3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸释放。用硫酸镁对该有机相进行干燥，过滤并蒸发。所得剩余物吸收于10mL二噁烷，添加10mL水、1517(4.66mmol)碳酸铯，然后在超声浴中处理5min。然后使其在真空下蒸发，所得剩余物与DMF共蒸馏一次。然后，残余物由15mLDMF吸收，并添加至1990mg(11.64mmol)苄基溴。所述混合物在超声浴中处理15min，然后在真空下蒸发。使该剩余物在乙酸乙酯和水之间分配。分离出有机相，使用溴化钠溶液纯化，然后蒸发。然后使用制备型HPLC纯化该剩余物。因此，得到1170mg(理论上80%)Boc保护的中间体(2S)-2-[(1R,2R)-3-(苄氧基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。
立即添加所述1170mg的中间体至15mL二氯甲烷，然后添加至5mL三氟乙酸。在室温下搅拌15min之后，在真空下蒸发所述混合物，之后，使用二噁烷冻干所述剩余物。在高真空下干燥后，我们得到1333mg(理论上84%)的黄色油状标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=1.5min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.59min；MS(ESIpos)：m/z=278(M+H)+。
中间体15
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使1200mg(2.33mmol)的N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体5)与910.8mg(2.33mmol)(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酸苄酯三氟乙酸钠(中间体14)、1327mg(3.49mmol)的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和2027μLN,N-二异丙基乙胺在50mL的DMF中混合，并在室温下搅拌5分钟。然后，使所述溶剂在真空下蒸发。留下的剩余物吸收于乙酸乙酯中，并依次在5%的柠檬酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液中萃取。分离并蒸发有机相。所得剩余物通过制备型HPLC纯化。合并产物馏分，并在高真空下干燥所得剩余物。以这种方式，产出1000mg(理论上55%)的树脂状的苄酯-中间体N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-(苄氧基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt=1.56min；MS(ESIpos)：m/z=775(M+H)+。
该中间体全部吸收于25mL的甲醇和二氯甲烷(20:1)的混合物中，通过在常压下以10%附着于活性炭上的钯作为催化剂的水合作用脱去所述苄酯基团。在室温下搅拌30分钟后，滤去所述催化剂，并使所得过滤物真空蒸发。产出803mg(理论上91%)的白色固体物质状的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt=1.24min；MS(ESIpos)：m/z=685(M+H)+。
中间体16
(1S,2R)-1-氨基-2-苯基-N-丙基环丙羧酰胺三氟乙酸钠
该标题化合物通过在O(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)存在下使市售可得的(1S,2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷碳酸偶联正丙基胺，随后用三氟乙酸脱去Boc而生成(理论上经历所述两阶段后产量85%)。
HPLC(方法5)：Rt=1.2min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.52min；MS(ESIpos)：m/z=219(M+H)+。
中间体17
(1S,2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷羧酸乙酯三氟乙酸钠
所述标题化合物通过使用市售可得的(1S,2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷碳酸和乙醇酯化的标准方法合成，并随后使用三氟乙酸脱去Boc。
LC-MS(方法1)：Rt=0.50min；MS(ESIpos)：m/z=206(M+H)+。
中间体18
N-(叔丁氧基羰基)-L-苯基丙氨酸1-萘基甲酯
在室温下向含500mg(1.89mmol)N-Boc-L-苯丙氨酸的25mL二氯甲烷溶液添加1192mg(6.2mmol)的EDC、578μL(4.1mmol)的三乙基胺、345mg(2.8mmol)的DMAP和328mg(2.1mmol)的1-萘基甲醇。搅拌所述反应混合物至过夜，然后用50mL二氯甲烷稀释，并依次在10%的柠檬酸水溶液、水和饱和盐水中洗涤。有机相用硫酸镁干燥，然后蒸发，并用制备型HPLC纯化所得剩余物。所述标题化合物的产量是501mg(理论上66%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.33min；m/z=406(M+H)+。
中间体19
L-苯丙氨酸1-萘基甲酯盐酸
将500mg(1.2mmol)的N-(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸1-萘基甲酯(中间体18)在搅拌下加入在二噁烷中稀释的20mL的4N氯化氢溶液，并在室温下搅拌1h。然后蒸发所得反应混合物，并真空干燥所述剩余物。所述标题化合物的产量是421.5mg(定量)。
LC-MS(方法1)：Rt=0.80min；m/z=306(M+H)+。
中间体20
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1-萘基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
向含20mg(29μmol)的N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)的1mLDMF溶液中添加15.3μL(88μmol)N,N-二异丙基乙胺、6.7mg(44μmol)HOBt和6.7mg(35μmol)EDC，然后搅拌该混合物30分钟。然后，添加11mg(32μmol)的L-苯基丙氨酸1-萘基甲酯盐酸(中间体19)。在搅拌所述反应混合物至过夜之后，其组分通过制备型HPLC直接分离。所述标题化合物的产量是26.1mg(理论上92%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.61min；m/z=973(M+H)+。
中间体21
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1-萘基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
在1mL二氯甲烷中溶解26mg(27μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1-萘基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体20)，并和0.2mLTFA混合。该反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后蒸发。所述标题化合物的产量是26.3mg(理论上99.7%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.02min；m/z=873(M+H)+。
中间体22
N-(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸金刚烷-1-基酯
在室温下添加1192mg(6.2mmol)的EDC、578μL(4.1mmol)的三乙胺、345mg(2.8mmol)的DMAP和316mg(2.1mmol)的1-金刚烷醇至含500mg(1.89mmol)的N-Boc-L-苯丙氨酸的25mL二氯甲烷溶液中。搅拌所述反应混合物至过夜，然后用50mL二氯甲烷稀释，并依次在10%的柠檬酸水溶液、水和饱和盐水中洗涤。有机相用硫酸镁干燥，然后蒸发，并用制备型HPLC纯化所得剩余物。所述标题化合物的产量是336mg(理论上43%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.49min；m/z=400(M+H)+。
中间体23
L-苯丙氨酸金刚烷-1-基酯-盐酸
将336mg(840μmol)的N-(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸金刚烷-1-基酯(中间体22)溶解于在二噁烷中稀释的12mL4N氯化氢溶液中，并在室温下搅拌1h。然后，使反应混合物蒸发，并用制备型HPLC(梯度洗脱甲醇/水+0.01%TFA)纯化所得剩余物。所述标题化合物的产量是228mg(理论上81%)。
LC-MS(方法2)：Rt=1.03min；m/z=300(M+H)+。
中间体24
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将15.3μL(88μmol)的N,N-二异丙基乙胺、6.7mg(44μmol)的HOBt和6.7mg(35μmol)的EDC添加至含20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)的1mLDMF中，然后，搅拌所述混合物30分钟。然后，添加9.6mg(32μmol)的L-苯基丙氨酸1-萘基甲酯盐酸(中间体23)。在搅拌所述反应混合物至过夜之后，其组分通过制备型HPLC直接分离。所述标题化合物的产量是15mg(90%纯度，理论上48%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.67min；m/z=967(M+H)+。
中间体25
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸钠
将15mg(16μmol)的N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体24)溶解在1mL二氯甲烷中，然后混合0.2mLTFA。该反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后蒸发。通过制备型HPLC纯化粗产物。所述标题化合物的产量是4.8mg(理论上32%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.10min；m/z=867(M+H)+。
中间体26
N-(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸金刚烷-1-基甲酯
在室温下将1192mg(6.2mmol)的EDC、578μL(4.1mmol)的三乙胺、345mg(2.8mmol)的DMAP和345mg(2.1mmol)的1-金刚烷基甲醇添加至含500mg(1.89mmol)N-Boc-L-苯丙氨酸的25mL二氯甲烷溶液中。搅拌所述反应混合物至过夜，然后用50mL二氯甲烷稀释，并依次在10%的柠檬酸水溶液、水和饱和盐水中洗涤。有机相用硫酸镁干燥，然后蒸发，并用制备型HPLC纯化所得剩余物。所述标题化合物的产量是769mg(理论上90%)。
LC-MS(方法2)：Rt=1.84min；m/z=414(M+H)+。
中间体27
L-苯丙氨酸金刚烷-1-基甲酯盐酸
将769mg(1.86mmol)的N-(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸金刚烷-1-基甲酯(中间体26)溶解于在二噁烷中稀释的25mL4N氯化氢溶液中，并在室温下搅拌1小时。然后蒸发所得反应混合物，并干燥所述剩余物。所述标题化合物的产量是619mg(理论上95%)。
LC-MS(方法1)：Rt=0.82min；m/z=314(M+H)+。
中间体28
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将15.3μL(88μmol)的N,N-二异丙基乙胺、6.7mg(44μmol)的HOBt和6.7mg(35μmol)的EDC添加至含20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)的1mLDMF中，然后，搅拌所述混合物30分钟。然后，添加10.1mg(32μmol)的L-苯基丙氨酸1-萘基甲酯盐酸(中间体27)。在搅拌所述反应混合物至过夜之后，其组分通过制备型HPLC直接分离。所述标题化合物的产量是27.5mg(理论上93%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.70min；m/z=980(M+H)+。
中间体29
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸钠
27.5mg(28μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体28)溶解于1.8mL二氯甲烷中，然后混合361μLTFA。该反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后蒸发。使所得剩余物吸收于水中，并冻干。所述标题化合物的产量是22.7mg(理论上81%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.14min；m/z=880(M+H)+。
中间体30
[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯
将500mg(1.99mmol)的N-Boc-L-苯基氨基丙醇溶解于5mLDMF，并在氩气气氛下冷却至0°C。然后，加入159mg(3.98mmol)的氢化钠在液体石蜡中的60%混悬液。然后，搅拌所述反应混合物直至气体形成过程结束，然后混合260μL(2.19mmol)的苄基溴。移去冷浴，在室温下搅拌反应混合物2小时。然后，使所述批料蒸发，使剩余物吸收于冰水，并用二氯甲烷萃取所述混合物。所述有机相用饱和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并蒸发。所得剩余物通过制备型HPLC纯化。所述标题化合物的产量是226mg(理论上33%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.28min；m/z=342(M+H)+。
中间体31
(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-胺-盐酸
将220mg(644μmol)的[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体30)溶解于在二噁烷中稀释的11mL4N氯化氢溶液中，并在室温下搅拌1小时。然后，蒸发所述批料，并真空干燥所述剩余物。所述标题化合物的产量是138mg(理论上77%)。
LC-MS(方法1)：Rt=0.65min；m/z=242(M+H)+。
中间体32
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将15.3μL(88μmol)的N,N-二异丙基乙胺、6.7mg(44μmol)的HOBt和6.7mg(35μmol)的EDC添加至含20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)的1mLDMF中，然后，搅拌所述混合物30分钟。然后，添加7.8mg(32μmol)的(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-胺-盐酸(中间体31)。在搅拌所述反应混合物至过夜之后，其组分通过制备型HPLC直接分离。所述标题化合物的产量是26mg(理论上98%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.51min；m/z=909(M+H)+。
中间体33
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸钠
将26mg(29μmol)的N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体32)溶解于1.8mL二氯甲烷中，然后混合370μLTFA。该反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后蒸发。使所得剩余物吸收于水中，并冻干。所述标题化合物的产量是26.4mg(定量)。
LC-MS(方法1)：Rt=0.97min；m/z=809(M+H)+。
中间体34
[(2S)-1-(2-苯甲酰基肼基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯
将200mg(754μmol)的N-Boc-L-苯丙氨酸溶解于混合了131μL(754μmol)N,N-二异丙基乙胺、346mg(2261μmol)HOBt、434mg(2261μmol)EDC和411mg(3015μmol)苯甲酰肼的8mLDMF中。在室温下搅拌所述反应混合物至过夜，然后蒸发，并用制备型HPLC纯化所得剩余物。所述标题化合物的产量是313mg(95%纯度，理论上100%)。
LC-MS(方法1)：Rt=0.94min；m/z=384(M+H)+。
中间体35
N'-[(2S)-2-氨基-3-苯基丙酰基]苯甲酰肼盐酸盐
将313mg(818μmol)的[(2S)-1-(2-苯甲酰肼基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体34)在搅拌下加入在二噁烷中稀释的13mL4N氯化氢溶液中，并在室温下搅拌1小时。然后蒸发所得反应混合物，并干燥所述剩余物。所述标题化合物的产量是255mg(理论上92%)。
LC-MS(方法1)：Rt=0.44min；m/z=284(M+H)+。
中间体36
[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(2-苯甲酰基肼基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基](甲基)氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基]氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基]甲基氨基甲酸叔丁酯
将15.3μL(88μmol)的N,N-二异丙基乙胺、6.7mg(44μmol)的HOBt和6.7mg(35μmol)的EDC添加至含20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)的1mLDMF中，然后，搅拌所述混合物30分钟。然后，添加9.1mg(32μmol)的N'-[(2S)-2-氨基-3-苯基丙酰基]苯甲酰基肼盐酸盐(中间体35)。在搅拌所述反应混合物至过夜之后，其组分通过制备型HPLC直接分离。所述标题化合物的产量是6.7mg(理论上24%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.32min；m/z=951(M+H)+。
中间体37
(2S)-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(2-苯甲酰基肼基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N,3-二甲基-2-{[(2S)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰基]氨基}丁酰胺三氟乙酸钠
将6.7mg(7μmol)的[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(2-苯甲酰基肼基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基](甲基)氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基]氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基]甲基氨基甲酸叔丁酯(中间体36)溶解于454μL二氯甲烷中，并与91μLTFA混合。该反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后蒸发。使所得剩余物吸收于水中，并冻干。所述标题化合物的产量是6.8mg(定量)。
LC-MS(方法1)：Rt=0.80min；m/z=851(M+H)+。
中间体38
(1S,2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷羧酸苄酯三氟乙酸钠
后者通过使用市售可得的(1S,2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷碳酸和苄基醇酯化的标准方法合成，随后使用三氟乙酸脱去Boc。
LC-MS(方法1)：Rt=0.72min；MS(ESIpos)：m/z=268(M+H)+。
中间体39
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使383mg(0.743mmol)的N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体5)与485mg(0.743mmol)(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯丙氨酸苄酯三氟乙酸钠(中间体8)、424mg(1.114mmol)的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和388μLN,N-二异丙基乙胺在15mL的DMF中混合，并在室温下搅拌10分钟。然后，使所述溶剂在真空下蒸发。留下的剩余物吸收于乙酸乙酯中，并依次在5%的柠檬酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液中萃取。分离有机相，并通过制备型HPLC纯化所得剩余物。合并产物馏分，并在高真空下干燥所得剩余物。产出335mg(理论上48%)的泡沫状苄酯中间体。
LC-MS(方法1)：Rt=1.49min；MS(ESIpos)：m/z=922(M+H)+。
使100mg(0.11mmol)该中间体吸收于15mL甲醇，并通过在常压下用10%Pd/C作为催化剂水合脱去苄酯基团。在室温下搅拌1小时后，滤去所述催化剂，并使所得滤液真空蒸发。从二噁烷冻干后，产出85mg(理论上94%)的白色固体物质状的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=2.4min；
LC-MS(方法1)：Rt=1.24min；MS(ESIpos)：m/z=832(M+H)+。
中间体40
N-苄基-L-色氨酰胺三氟乙酸钠
将202mg(0.5mmol)的2,5-二氧代吡咯烷-1-基-N-(叔丁氧基羰基)-L-色氨酸酯和45mg(0.42mmol)苄胺溶于10mLDMF，然后与110μL(630μmol)的N,N-二异丙基乙胺混合。室温下搅拌该批料3小时。然后，使其在真空下蒸发，并通过快速色谱使用硅胶作为吸附剂(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇/17%的氨水：20:0.5:0.05)纯化。混合并蒸发合适的馏分。其留下的剩余物用二乙醚浸软，然后在高真空下干燥。然后，使其留下的剩余物吸收于10mL二氯甲烷中，并与3mL无水三氟乙酸混合。在室温下搅拌45分钟后，使其蒸发，并通过制备型HPLC纯化所得剩余物。在高真空下干燥后，产出117mg(两个阶段，理论上57%)所述标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.66min；MS(ESIpos)：m/z=294(M+H)+。
中间体41
(1S,2R)-1-氨基-2-苯基环丙羧酰胺三氟乙酸钠
将50mg(180μmol)市售可得的(1S,2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷碳酸溶解于混合了94μL(541μmol)N,N-二异丙基乙胺、31mg(270μmol)N-羟基琥珀酰亚胺和41.5mg(216μmol)EDC的5mLDMF中，然后在室温下搅拌过夜。然后蒸发所述反应混合物，使剩余物吸收于混合了71mg(901μmol)碳酸氢铵的二噁烷，使所得批料在室温下静置3天。然后，在乙酸乙酯和水的1:1混合物中稀释反应混合物。然后，有机相用饱和盐水分离，用硫酸镁干燥，并蒸发。然后，使其留下的剩余物吸收于3mL二氯甲烷中，并与3mL无水三氟乙酸混合。搅拌1小时后，使其蒸发。使剩余物与戊烷混合，吸出并从二噁烷冻干。以此方式，产出32mg(理论上62%，经两个阶段)的所述标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=0.38min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.20min；MS(ESIpos)：m/z=177(M+H)+。
中间体42
Nα-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酰胺三氟乙酸钠
类似于中间体7的合成，所述标题化合物由起始化合物1和L-色氨酰胺盐酸合成。
HPLC(方法5)：Rt=1.4min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.92min；MS(ESIpos)：m/z=473(M+H)+。
中间体43
4-(溴甲基)苯甲酸叔丁酯
将1000mg(4.65mmol)的4-(溴甲基)苯甲酸添加至6mL二氯甲烷，然后先添加18μL(0.23mmol)DMF，然后逐滴添加811μL(9.3mmol)的草酰氯。搅拌该批料15分钟直至气体生成过程结束，并蒸发。使剩余物吸收在10mL甲苯中，并再次蒸发。
然后，将由此获得的苯甲酰氯在30mL二乙醚中悬浮，并分批与522mg(4.65mmol)的叔丁醇钾在40mL二乙醚中的悬浮液混合。该反应混合物在室温下搅拌一小时，然后蒸发。所得滤出物在水、饱和氯化铵和饱和氯化钠溶液中各清洗三次，用硫酸镁干燥，并在过滤后在真空下蒸发。所得粗产物通过快速色谱用硅胶(洗脱剂：环己烷/乙酸乙酯10:1)纯化。产出770mg(理论上51%)的标题化合物。
MS(DCI):m/z=217(M-54)+.
中间体44
4-({[(2S)-2-氨基-3-苯丙基]氧基}甲基)苯甲酸三氟乙酸钠
将168.5mg(0.67mmol)的[(2S)-1-羟基-3-苯基丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯在氩气气氛下添加至4.9mLDMF，并与53.6mg(1.3mmol)的氢化钠(60%分散于液体石蜡)在0°C温度混合。30分钟后，在0°C的温度添加200mg(0.74mmol)4-(溴甲基)苯甲酸叔丁酯。在测量完毕后，使所述批料于室温下搅拌2小时。之后，使所述批料在旋转水蒸气锅炉中蒸发，使所得剩余物吸收在冰水中，然后各用50ml二氯甲烷萃取所述化合物。有机相在饱和氢化钠溶液中清洗，用硫酸镁干燥，并在真空下蒸发。由此所得的的粗产物通过制备型HPLC纯化。获得50.2mg(理论上17%)的所述中间体：4-[({(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-苯丙基}氧基)甲基]苯甲酸叔丁酯。
HPLC(方法10)：Rt=4.06min；
LC-MS(方法1)：Rt=1.45min；MS(ESIpos)：m/z=442(M+H)+。
使50mg(0.11mmol)该中间体在室温下溶解于1.3mL三氟乙酸和6.4mL二氯甲烷，并搅拌15分钟。然后，使所述批料在旋转水蒸气锅炉中蒸发，所得剩余物在真空下干燥。所述标题化合物的产量是51.2mg(理论上99%)。
HPLC(方法10)：Rt=2.40min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.53min；MS(ESIpos)：m/z=286(M+H)+。
中间体45
4-({[(2S)-2-氨基-3-苯丙基]氧基}甲基)苯甲酸甲酯盐酸
将51.2mg(128μmol)的4-({[(2S)-2-氨基-3-苯丙基]氧基}甲基)苯甲酸三氟乙酸钠添加至5mL甲醇，并与2.4mg(13μmol)的4-苯甲磺酸一水合物混合。在回流下搅拌所述批料至过夜。然后，添加18.7μL(256μmol)的亚硫酰氯，并使所述混合物在回流下再次加热6小时。然后，使反应混合物在旋转水蒸气锅炉中蒸发，所得剩余物在真空下干燥。因此，获得42.3mg(80%纯度，理论上88%)的标题化合物，其不需进一步纯化即用于连续反应。
HPLC(方法10)：Rt=2.48min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.68min；MS(ESIpos)：m/z=300(M+H)+。
中间体46
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-{[4-(甲氧基羰基)苄基]氧基}-3-苯基丙-2-基]氨基}-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸钠
将20mg(29μmol)的N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)添加至0.59mL的DMF，并与13.3mg(35μmol)的HATU和20μL(117μmol)的N,N-二异丙基乙胺混合。30分钟后，添加9.6mg(32μmol)的4-({[(2S)-2-氨基-3-苯丙基]氧基}甲基)苯甲酸甲酯盐酸(中间体45)。搅拌所述反应混合物至过夜，然后，不需进一步处理，直接通过制备型HPLC分离其组分。得到15.2mg(理论上54%)的Boc保护的中间体：N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-{[4-(甲氧基羰基)苄基]氧基}-3-苯基丙-2-基]氨基}-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt=1.49min；MS(ESIpos)：m/z=967(M+H)+。
在用三氟乙酸断裂Boc保护基团之后，获得15.8mg(理论上99%)的标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt=0.90min；MS(ESIpos)：m/z=867(M+H)+。
实施方式
实施例1
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1-萘基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使24mg(24μmol)的N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1-萘基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸钠(中间体21)和31.5μL的15%琥珀醛酸水溶液(49μmol)溶解于900μL的1:1-二噁烷/水混合物，并在100°C的温度下加热1小时。在短时冷却周期后，添加1.7mg(27μmol)的氰基硼氢化钠。用0.1N的盐酸调节反应混合物的pH至3，并在100°C的温度下加热2小时。当再一次添加相同量的琥珀醛酸溶液、氰基硼氢化钠和盐酸之后，在100°C再加热2小时。之后，通过制备型HPLC直接分离所述反应混合物。所述标题化合物的产量是20.1mg(理论上86%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.06min；m/z=959(M+H)+。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]=0.73-0.81(m，3H)，0.82-1.05(m，15H)，1.19-1.48
(m，3H)，1.53-2.10(m，4H)，2.12-2.41(m，5H)，2.79(d，2H)，2.85-3.06(m，3H)，3.06-3.13(m，3H)，3.13-3.28(m，6H)，3.35-3.43(m，1H)，3.89-4.14(m，1H)，4.45-4.81(m，3H)，5.48-5.73(m，2H)，7.13-7.33(m，5H)，7.45-7.53(m，1H)，7.53-7.64(m，3H)，7.91-8.05(m，3H)，8.21-8.60(m，1H)，8.69-9.01(m，1H)，9.27-9.60(m，1H)[其它信号隐藏在溶剂峰下]。
实施例2
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使4.8mg(5μmol)的N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸钠(中间体25)和6.3μL的15%琥珀醛酸水溶液(10μmol)溶解于180μL的1:1-二噁烷/水混合物中，并在100°C的温度下加热1小时。在短时冷却周期后，添加0.34mg(5μmol)的氰基硼氢化钠。用0.1N的盐酸调节反应混合物的pH至3，并在100°C的温度下加热2小时。当再一次添加相同量的琥珀醛酸溶液、氰基硼氢化钠和盐酸之后，在100°C再加热2小时。之后，通过制备型HPLC直接分离所述反应混合物。所述标题化合物的产量是3.2mg(理论上69%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.14min；m/z=952(M+H)+。
实施例3
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使26mg(26μmol)的N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸钠(中间体29)和33.9μL的15%琥珀醛酸水溶液(53μmol)溶解于957μL的1:1-二噁烷/水混合物中，并在100°C的温度下加热1小时。在短时冷却周期之后，添加1.81mg(29μmol)的氰基硼氢化钠。用0.1N的盐酸调节反应混合物的pH至3，并在100°C的温度下加热2小时。当再一次添加相同量的琥珀醛酸溶液、氰基硼氢化钠和盐酸之后，在100°C再加热2小时。之后，通过制备型HPLC直接分离所述反应混合物。所述标题化合物的产量是18.5mg(理论上73%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.17min；m/z=967(M+H)+。
实施例4
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使24mg(26μmol)的N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸钠(中间体33)和33.7μL的15%琥珀醛酸水溶液(52μmol)溶解于953μL的1:1-二噁烷/水混合物中，并在100°C的温度下加热1小时。在短期冷却周期之后，添加1.80mg(29μmol)的氰基硼氢化钠。用0.1N的盐酸调节反应混合物的pH至3，并在100°C的温度下加热2小时。当再一次添加相同量的琥珀醛酸溶液、氰基硼氢化钠和盐酸之后，在100°C再加热2小时。之后，通过制备型HPLC直接分离所述反应混合物。所述标题化合物的产量是15.2mg(理论上65%)。
LC-MS(方法1)：Rt=1.01min；m/z=895(M+H)+。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ[ppm]=0.72-0.81(m，3H)、0.81-1.00(m，15H)、1.03(dd，3H)、1.12-1.56(m，3H)、1.62-2.45(m，10H)、2.61-2.73(m，1H)、2.78(br.s，2H)、2.84-3.07(m，3H)、3.11(br.s，2H)、3.17(s，1H)、3.21(d，3H)、3.26(s，3H)、3.30-3.35(m，2H)、3.51-3.94(m，4H)、4.00(br.s，1H)、4.08-4.35(m，1H)、4.50(s，1H)、4.53(s，1H)、4.55-4.78(m，2H)、7.12-7.16(m，1H)、7.16-7.25(m，4H)、7.30(d，1H)、7.33-7.42(m，4H)、7.76和8.01(2d，1H)、8.73-8.98(m，1H)[其它信号隐藏在溶剂峰下]。
实施例5
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使53mg(84μmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)和45mg(84μmol)的N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯丙氨酸苄酯三氟乙酸钠(中间体8)吸收于2mL的DMF中，与19μL的N,N-二异丙基乙胺、14mg(92μmol)的HOBt和17.6mg(92μmol)的EDC混合，然后在室温下搅拌过夜。然后，使所述反应混合物蒸发，所得剩余物通过制备型HPLC纯化。通过这种方法，获得59mg(理论上68%)的Fmoc保护的中间体：N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt=1.55min；m/z=1044(M+H)+。
用含1.2mL哌啶的5mL二氯甲烷处理57mg(0.055mmol)该中间体，以去除Fmoc保护基团。在HPLC协助下的蒸发和纯化之后，获得39mg(理论上76%)游离胺中间体：三氟乙酸钠盐形式的N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
HPLC(方法5)：Rt=1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt=1.01min；m/z=822(M+H)+。
使37mg(0.045mmol)的该中间体溶解于5mL二噁烷/水(1:1)中，并以类似于制备实施例6的方式，在氰基硼氢化钠的存在下用15%4-氧代丁酸的水溶液处理。得到16mg(理论上39%)的无色泡沫状标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt=1.01min；MS(ESIpos)：m/z=908(M+H)+。
实施例6
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
开始时，类似于实施例5所述的合成方式，基于中间体4和7生成胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
使30mg(0.032mmol)该化合物溶解于6mL二噁烷/水(1:1)中，并与41μL(0.063mmol)15%的4-氧代丁酸水溶液混合。然后，在100°C搅拌所述批料1小时。在室温冷却所述混合物之后，添加2.2mg(0.035mmol)的氰基硼氢化钠，并通过添加大约300μL0.1N的盐酸调整所述混合物的pH值为3。然后，在100°C搅拌所述批料2小时。冷却后，再次添加41μL(0.063mmol)15%的4-氧代丁酸溶液，并在100°C再次搅拌所述批料1小时。然后，添加2.2mg(0.035mmol)的氰基硼氢化钠，并用300μL0.1N的盐酸再次调节pH值至3。
在100°C再次搅拌批料2小时。若所述处理未完成，则第三次重复该过程。最后使所述批料蒸发，并通过制备型HPLC纯化所得粗产物。得到24mg(理论上82%)的无色泡沫状标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=1.9min；
LC-MS(方法9)：Rt=5.15min；MS(ESIpos)：m/z=922(M+H)+。
实施例7
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1-萘基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-2-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
开始时，类似于实施例5中所述的合成方式，基于中间体4和11生成胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。类似于实施例6的制备方式，在氰基硼氢化钠存在下用4-氧代丁酸处理，从7mg(0.009mmol)该化合物得到2mg(理论上22%)的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=1.9min；
LC-MS(方法2)：Rt=1.06min；MS(ESIpos)：m/z=832(M+H)+。
实施例8
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使212mg(411μmol)的N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体5)和237mg(411μmol)N-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酸苄酯三氟乙酸钠(中间体12)吸收于30mLDMF中，并与188mg(493μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和215μLN,N-二异丙基乙胺混合。所述批料在室温下搅拌20小时，并在真空下蒸发，所得剩余物通过制备型HPLC纯化。合并产物馏分，蒸发，并在高真空下干燥所得剩余物。得到315mg(理论上80%)无色泡沫状的Boc保护的中间体：N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt=1.45min；m/z=961(M+H)+。
用含1mL哌啶的9mL二氯甲烷处理50mg(52μmol)该中间体，以断裂Fmoc保护基团。在HPLC协助下的蒸发和纯化之后，获得29mg(理论上57%)游离胺中间体：三氟乙酸盐形式的N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt=0.99min；m/z=861(M+H)+。
使29mg(0.03mmol)该中间体溶解于6mL二噁烷/水(1:1)中，并与39μL(0.059mmol)15%的4-氧代丁酸水溶液混合。然后，在100°C搅拌所述批料1小时。在室温冷却所述混合物之后，添加2mg(0.033mmol)的氰基硼氢化钠，并通过添加大约300μL0.1N的盐酸调整所述混合物的pH值为3。然后，在100°C搅拌所述批料2小时。冷却后，再次添加39μL(0.059mmol)15%的4-氧代丁酸溶液，并在100°C再次搅拌所述批料1小时。然后，添加2mg(0.033mmol)的氰基硼氢化钠，并用300μL0.1N的盐酸再次调节pH值至3。然后，在100°C搅拌该混合物2小时。然后将所述批料倒至半饱和氯化铵水溶液和乙酸乙酯的1:1混合物上。分离有机相，用饱和氢化钠溶液洗涤，用氢化钠干燥，并蒸发。由水/乙腈将该残留物冻干。得到27mg(理论上94%)的无色泡沫状标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=2.2min；
LC-MS(方法9)：Rt=5.04min；MS(ESIpos)：m/z=947(M+H)+。
实施例9
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)氨基]-1-氧代-3-苯基丙-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
开始时，类似于实施例5中所述的合成方式，基于中间体4和10生成胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)氨基]-1-氧代-3-苯基丙-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。类似于实施例6的制备方式，在氰基硼氢化钠存在下通过用4-氧代丁酸处理，从25mg(0.026mmol)该化合物得到13mg(理论上54%)的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=2.2min；
LC-MS(方法9)：Rt=5.01min；MS(ESIpos)：m/z=921(M+H)+。
实施例10
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基环丙基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使50mg(73μmol)的N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)和28mg(73μmol)(1S,2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷羧酸苄酯三氟乙酸钠(中间体38)吸收于5mL的DMF中，并与42mg(110μmol)的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和38μL的N,N-二异丙基乙胺混合。所述批料在室温下搅拌5小时，并在真空下蒸发，所得剩余物通过制备型HPLC纯化。混合并蒸发产物馏分。用二噁烷/水冻干后，得到35mg(理论上51%)无色泡沫状的Boc保护的中间体：N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基环丙基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt=1.52min；m/z=934(M+H)+。
用含1mg三氟乙酸钠的5mL二氯甲烷处理35mg该中间体，以断裂Boc保护基团。在蒸发并用二噁烷/水冻干之后，得到34mg(理论上97%)的游离胺中间体：三氟乙酸钠形式的N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S,2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基环丙基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt=0.91min；m/z=834(M+H)+。
类似于实施例6的制备方式，在氰基硼氢化钠存在下通过用4-氧代丁酸处理，从11mg(0.011mmol)该化合物得到2.5mg(理论上24%)的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=2.2min；
LC-MS(方法9)：Rt=5.1min；MS(ESIpos)：m/z=920(M+H)+。
实施例11
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S,2R)-2-苯基-1-(丙基氨基甲酰基)环丙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，类似于实施例10中所述的合成，通过在O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下偶联N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)和(1S,2R)-1-氨基-2-苯基-N-丙基环丙羧酰胺三氟乙酸钠(中间体16)，然后在三氟乙酸协助下断裂Boc保护基团，生成三氟乙酸钠形式的胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S,2R)-2-苯基-1-(苯基氨基甲酰基)环丙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。类似于实施例6的制备方式，在氰基硼氢化钠存在下用4-氧代丁酸处理，从14mg(0.016mmol)该化合物得到11.3mg(理论上83%)的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=1.9min；
LC-MS(方法2)：Rt=1.27min；MS(ESIpos)：m/z=871(M+H)+。
实施例12
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，类似于实施例10中所述的合成，通过在O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下偶联N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)和(1S,2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷羧酸乙酯三氟乙酸钠(中间体17)，然后在三氟乙酸的协助下断裂Boc保护基团，生成三氟乙酸钠形式的胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。类似于实施例6的制备方式，在氰基硼氢化钠存在下通过用4-氧代丁酸处理，从70mg(0.079mmol)该化合物得到46mg(理论上68%)的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=1.9min；
LC-MS(方法2)：Rt=1.28min；MS(ESIpos)：m/z=858(M+H)+。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ=8.95和8.8(2m，1H)、8.85和8.7(2s，1H)、7.4-7.1(m，5H)、4.8和4.65(2m，1H)、4.55(m，1H)、4.12-3.95(m，2H)、3.9-3.8(m，1H)、3.8-3.4(m，5H)、3.35、3.30、3.20、3.15、3.10、3.00、2.81和2.79(8s，12H)、2.85-2.7(m，2H)、2.7-2.6(m，1H)、2.4-2.2(m，3H)、2.1-1.6(m，9H)、1.5-1.2(m，3H)、1.2-0.7(m，24H)[其它信号隐藏于溶剂峰下]。
实施例13
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-氨基-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，类似于实施例10中所述的合成，通过在O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下偶联N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)和L-苯基丙氨酰胺-盐酸，然后在三氟乙酸的协助下断裂Boc保护基团，生成三氟乙酸钠形式的胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。类似于实施例6的制备方式，在氰基硼氢化钠存在下用4-氧代丁酸处理，从47mg(0.049mmol)该化合物得到39mg(理论上96%)的标题化合物。Rt=1.7min；
LC-MS(方法9)：Rt=4.44min；MS(ESIpos)：m/z=817(M+H)+。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ=8.95和8.8(2m，1H)、8.25和8.0(2d，1H)、7.45、7.35和7.0(3s，宽，2H)、7.3-7.1(m，5H)、4.8-4.4(2m，3H)、3.95(m，1H)、3.82(m，1H)、3.72(d，1H)、3.22、3.18、3.15、3.05和3.00(5s，9H)、2.85-2.7(m，4H)、2.45-1.6(m，12H)、1.5-1.2(m，3H)、1.1-0.7(m，21H)[其它信号隐藏于溶剂峰下]。
实施例14
(3R,4S,7S,10S)-3-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(2-苯甲酰基肼基)-1-氧代-3-苯基丙-2基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-4-[(2S)-丁烷-2-基]-7,10-二异丙基-5,11-二甲基-6,9-二氧代-2-氧杂-5,8,11-三氮杂十五烷-15-酸
使6.2mg(6μmol)的(2S)-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(2-苯甲酰基肼基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N,3-二甲基-2-{[(2S)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰基]氨基}丁酰胺三氟乙酸钠(中间体37)和8.3μL15%琥珀醛酸水溶液(13μmol)溶解于235μL1:1二噁烷/水混合物中，并在100°C的温度加热。短期冷却周期之后，添加0.5mg(7μmol)的氰基硼氢化钠。用0.1的N盐酸调节所述反应混合物的pH至3，并在100°C的温度下加热2小时。当再一次添加相同量的琥珀醛酸溶液、氰基硼氢化钠和盐酸之后，在100°C再加热2小时。之后，通过制备型HPLC直接分离所述反应混合物。所述标题化合物的产量是4.1mg(理论上68%)。
LC-MS(方法1)：Rt=0.86min；m/z=936(M+H)+。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ[ppm]=0.71-0.81(m，3H)、0.82-1.02(m，15H)、1.05(d，2H)、1.19-1.51(m，3H)、1.56-1.89(m，3H)、1.89-2.12(m，2H)、2.18-2.44(m，5H)、2.71-2.90(m，3H)、2.94-3.28(m，10H)、3.36-3.67(m，3H)、3.71-4.02(m，1H)、4.53-4.91(m，3H)、7.14-7.20(m，1H)、7.24(dd，2H)、7.31(d，1H)、7.35(d，1H)、7.52(dd，2H)、7.60(dd，1H)、7.92(d，2H)、8.24和8.46(2d，1H)、10.2-10.3(m，1H)、10.44-10.52(m，1H)[其它信号隐藏于溶剂峰下]。
实施例15
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使36mg(43μmol)的N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体39)和4.6mg(43μmol)苄胺吸收于5mL的DMF中，与7.5μL(88μmol)的N,N-二异丙基乙胺、10mg(65μmol)的HOBt以及10mg(52μmol)的EDC混合，然后在室温下搅拌过夜。然后，使所述反应混合物蒸发，所得剩余物通过制备型HPLC纯化。通过这种方法，获得29mg(理论上73%)的Fmoc保护的中间体：N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt=1.43min；m/z=921(M+H)+。
用含1mg三氟乙酸钠的6mL二氯甲烷处理29mg该中间体，以断裂Boc保护基团。在蒸发和用二噁烷/水冻干之后，获得30mg(定量)游离胺中间体：三氟乙酸钠形式的N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt=0.95min；m/z=821(M+H)+。
类似于实施例6的制备方式，在氰基硼氢化钠存在下用4-氧代丁酸处理，从17mg(0.018mmol)该中间体得到13mg(理论上80%)的标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt=1.7min；
LC-MS(方法9)：Rt=4.97min；MS(ESIpos)：m/z=907(M+H)+。
实施例16
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，类似于实施例10中所述的合成，通过在O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下偶联N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸钠(中间体15)和N-苄基-L-色氨酰胺(中间体40)，然后在三氟乙酸协助下断裂Boc保护基团，生成三氟乙酸钠形式的胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。类似于实施例6的制备方式，在氰基硼氢化钠存在下通过用4-氧代丁酸处理，从10mg(0.01mmol)该化合物得到2.5mg(理论上26%)的标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt=1.7min；
LC-MS(方法2)：Rt=1.13min；MS(ESIpos)：m/z=946(M+H)+。
实施例17
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-氨基甲酰基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，类似于实施例10中所述的合成，通过在O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基六氟脲鎓磷酸盐存在下偶联N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)和(1S,2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酰胺三氟乙酸钠(中间体41)，然后在三氟乙酸的协助下断裂Boc保护基团，生成三氟乙酸钠形式的胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-氨基甲酰基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。类似于实施例6的制备方式，在氰基硼氢化钠存在下通过用4-氧代丁酸处理，从15mg(0.0175mmol)该化合物得到11mg(理论上76%)的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=1.7min；
LC-MS(方法9)：Rt=4.66min；MS(ESIpos)：m/z=829(M+H)+。
实施例18
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，类似于实施例5和10中所述的合成，通过在O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下偶联N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R,3S,4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)和Nα-{(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酰胺三氟乙酸钠(中间体42)，然后在哌啶的协助下断裂Fmoc保护基团，生成三氟乙酸钠形式的胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。类似于实施例6的制备方式，在氰基硼氢化钠存在下通过用4氧代丁酸处理，从78mg(0.088mmol)该化合物得到68mg(理论上90%)的标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt=1.8min；
LC-MS(方法9)：Rt=4.49min；MS(ESIpos)：m/z=856(M+H)+。
实施例19
N-(5-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
类似于实施例18的合成，该标题化合物在氰基硼氢化钠的存在下，用6-氧代己酸处理20mg(26μmol)的N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3基)-1-氧代丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸钠而生成。
产量：5mg(理论上25%)
HPLC(方法6)：Rt=1.6min；
LC-MS(方法11)：Rt=0.72min；MS(ESIpos)：m/z=884(M+H)+。
实施例20
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-1-氧代-3-苯基丙2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，类似于实施例16中所述的合成，通过在O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下偶联N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)和叔丁基-L-苯丙氨酸-盐酸，然后在三氟乙酸的协助下小心地断裂Boc保护基团而保留叔丁酯基团(用含10%三氟乙酸钠的二氯甲烷在室温下搅拌40分钟)，生成三氟乙酸钠形式的胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。类似于实施例1的制备方式，在氰基硼氢化钠存在下用4-氧代丁酸处理，从22mg(0.02mmol，80%纯度)的该化合物得到16mg(理论上94%)的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=2.0min；
LC-MS(方法9)：Rt=5.05min；MS(ESIpos)：m/z=874(M+H)+。
实施例21
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
所述标题化合物的生成经历三个阶段，与实施例20中所述的类似，基于230mg(336μmol)的N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)和L-色氨酸叔丁酯-盐酸。
产量：95mg(经历三个阶段，理论上31%)
HPLC(方法5)：Rt=2.0min；
LC-MS(方法9)：Rt=5.05min；MS(ESIpos)：m/z=913(M+H)+。
实施例22
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
在室温下搅拌8mg(9μmol)的实施例21的化合物和含1mL三氟乙酸的3mL二氯甲烷4小时。使所述批料在真空下蒸发之后，通过制备型HPLC纯化所得粗产物。
产量：3mg(理论上37%)
LC-MS(方法1)：Rt=0.77min；MS(ESIpos)：m/z=857(M+H)+。
实施例23
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(吗啉-4-基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，类似于实施例15中所述的合成，通过在EDC和HOBt存在下偶联N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体39)和吗啉，然后在三氟乙酸的协助下断裂Boc保护基团，生成三氟乙酸钠形式的胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(吗啉-4-基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。类似于实施例1的制备方式，在氰基硼氢化钠存在下通过用4-氧代丁酸处理，从30mg(0.033mmol)该化合物得到22mg(理论上76%)的标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt=1.6min；
LC-MS(方法9)：Rt=4.58min；MS(ESIpos)：m/z=887(M+H)+。
实施例24
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使0.4mg(0.5μmol)的实施例20的化合物吸收于1mL二氯甲烷中，然后与1mL三氟乙酸混合。在室温下搅拌1小时后，蒸发所得制备物，然后用二噁烷/水冻干所得剩余物。得到0.37mg(理论上99%)的无色泡沫状标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.8min；MS(ESIpos)：m/z=818(M+H)+。
实施例25
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(苄基氨基)-3-羟基-1-氧代丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，类似于实施例16中所述的合成，通过在O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下偶联N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体15)和N-苄基-L-苏氨酰胺三氟乙酸钠，然后在三氟乙酸的协助下断裂Boc保护基团，生成三氟乙酸钠形式的胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S,3R)-1-(苄基氨基)-3-羟基-1-氧代丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。类似于实施例1的制备方式，在氰基硼氢化钠存在下通过用4-氧代丁酸处理，从21mg(0.024mmol)该化合物得到20mg(理论上97%)的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt=1.5min；
LC-MS(方法9)：Rt=4.49min；MS(ESIpos)：m/z=861(M+H)+。
实施例26
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-{[4-(甲氧基羰基)苄基]氧基}-3-苯基丙-2-基]氨基}-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使11.5mg(12μmol)的N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-{[4-(甲氧基羰基)苄基]氧基}-3-苯基丙-2-基]氨基}-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸钠(中间体46)溶解于0.7mL二噁烷/水(1:1)，并类似于实施例1，在氰基硼氢化钠存在下用154-氧代丁酸水溶液处理。从二噁烷冻干后，产出8.3mg(理论上74%)的白色固体物质状的标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt=0.95min；MS(ESIpos)：m/z=953(M+H)+。
实施例27
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-1-[(4-羧基苄基)氧基]-3-苯基丙-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使7.5mg(8μmol)的N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-{[4-(甲氧基羰基)苄基]氧基}-3-苯基丙-2-基]氨基}-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(实施例26)溶解于0.25mL的THF/水(1:1)中。添加0.8mg(32μmol)氢氧化锂，然后在室温下搅拌该批料3小时。然后，用1N盐酸酸化所述反应混合物，并用乙酸乙酯萃取三次，每次用5mL乙酸乙酯。有机相用硫酸镁干燥，并在真空下蒸发。从二噁烷冻干后，产出2.3mg(71%纯度，理论上22%)的白色固体物质状的标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt=0.91min；MS(ESIpos)：m/z=939(M+H)+。
实施例28
N-(5-羧基苯基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
类似于实施例16的合成，该标题化合物通过在氰基硼氢化钠存在下用6-氧代己酸处理100mg(103μmol)的N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸钠生成。
产量：40mg(理论上40%)
HPLC(方法5)：Rt=1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt=0.92min；MS(ESIpos)：m/z=974(M+H)+。
B.生物学功效的评价
所述创新化合物的生物学活性可通过一般研究人员已知的体外和体内研究来证明。本发明化合物的药学和药代动力学性质，例如，可以通过以下实验来测定：
B-1.肾细胞癌786-0细胞系的抗增殖效果测定：
将确定数量的人肾癌细胞系786-0细胞培养在96孔微量滴定板内的丰富培养基中(2500或7000细胞/孔)，然后在37°C/5%CO2条件下下孵育过夜。18个小时后，用无血清培养基或含2%FCS的培养基替代所述接种培养基。通过称量不同浓度(10-5M至10-14M)的各测试物质开始处理。孵育时间选择在48小时和96小时之间。通过MTT实验(ATCC，美国弗吉尼亚州马纳萨斯，目录号30-1010K)来测定增殖。在孵育阶段完成后，使MTT试剂与细胞共孵育4小时，然后通过称量去污剂使细胞过夜出现裂解。在570nm处检测生成的染色。将被类似处理但不加测试物质的其它细胞的增殖定义为100%值。从该测试获得的数据代表三重检测，且进行至少两个独立实验。
该实验的代表性实施方式的IC50值列于表1，如下：
表1
实施方式 IC50[nM]
1 1.1
2 2.2
3 0.7
4 0.8
5 0.2
6 1.1
8 5.2
9 53
10 81
11 6.7
12 13
13 12.5
14 59
15 0.9
16 12
18 173
20 0.3
25 164
26 10
相比之下，单甲基耳他汀F(MMAF)显示在该测试中的IC50值是260nM。
B-2.HT-29野生型细胞系的抗增殖作用测定：
将确定数量的人肾癌细胞系786-0细胞培养在96孔微量滴定板内的丰富培养基中(2500或7000细胞/孔)，然后在37°C/5%CO2条件下孵育过夜。18小时后，用含10%FCS的新鲜培养基替代所述接种培养基。由称量各测试物质开始处理。由所述研究物质浓度10-5M～10-14M(1:10稀释)测定剂量响应曲线。孵育时间选择在48小时和96小时之间。通过MTT实验(ATCC，美国弗吉尼亚州马纳萨斯，目录号30-1010K)来测定增殖。在所选孵育阶段完成后，使MTT试剂与细胞共孵育4小时，然后通过称量去污剂使细胞过夜出现裂解。在570nm处检测生成的染色。将被类似处理但不加测试物质的其它细胞的增殖定义为100%值。从该测试获得的数据代表三重检测，且进行至少两个独立实验。
该实验的代表性实施方式的IC50值列于表2，如下：
表2
实施方式 IC50[nM]
1 0.1
4 0.1
6 0.4
8 0.5
9 4.4
11 0.8
13 1.0
16 0.1
18 16
25 1.5
26 1.5
28 1.3
相比之下，单甲基耳他汀F(MMAF)显示在该测试中的IC50值是10nM。
B-3.对微管蛋白聚合的影响测定：
癌细胞是变性细胞，其常常还通过增加的细胞分裂导致肿瘤形成。微管形成纺锤体的纺锤丝，并且是细胞周期的必需组成部分。微管的协调合成和分解能准确地分布染色体至子细胞核并形成连续的动态过程。干扰该动态循环导致不完整的细胞分裂，并最终导致细胞死亡。增加的细胞分裂使癌细胞还易受纺锤丝毒素影响，所述纺锤丝毒素是化疗整体的一部分。纺锤丝毒素例如紫杉醇或大环内酯导致微管聚合速度大幅增加，然而长春花生物碱或单甲基耳他汀E(MMAE)则显著减少微管聚合速度。在这两种情况中，细胞周期的必要动力被严重破坏。本发明中研究的化合物导致微管聚合速度降低。
使用来自细胞骨架有限公司(Cytoskeleton)(美国科罗拉多州丹佛市，订单号：BK011)的“基于荧光的微管聚合实验试剂盒”来研究微管聚合。在该实验中，添加未聚合的微管蛋白GTP用于触发自发聚合。该实验基于所述荧光团的4',6-二眯基-2-苯基吲哚(DAPI)与微管蛋白的结合。由于发射光谱不同，可以区分游离的DAPI和结合的DAPI。由于与未聚合的微管蛋白相反，DAPI对聚合的微管蛋白具有显著较高的亲和性，微管蛋白的聚合可看作荧光结合的DAPI荧光团增加。
为进行该实验，使溶解在DMSO中的测试物质在水中稀释，从其初始浓度10nM稀释至1μM。除缓冲液对照之外，实施增加聚合的紫杉醇为实验对照，实施抑制聚合的长春碱用于另一个对照。使用具有半层空间的96孔穿孔板来测量。用荧光计监测在37°C、1小时期间的微管蛋白聚合动力学。激发波长是355nm，发射波长在460nm。对于最初10分钟的线性增加区域，测试每分钟的荧光改变(AF/min)，其表示微管聚合的速度。通过各自聚合速度的减少定量测试物质的功效。
B-4.体外血浆稳定性的测试：
方法A：
使各1mg测试物质溶解于0.5mL乙腈/MSO(9:1)，提取20μL该溶液并分别添加至加热到37°C的1mL大鼠血浆和人血浆(Harlan&Winkelmann的含有Li肝素的雄性Wistar大鼠的血浆，或来自全血样本的新鲜的人去白细胞血浆)。在添加样本后立即从完全振荡的该血浆溶液中提取100μL等份(初始值作为参考值)，然后在5、10、30、60、120、180和240分钟(若需要，在24小时后)各添加100μL等份至300μL乙腈中。使沉淀的血浆蛋白以5000rpm离心10分钟，然后取30μL上清通过HPLC分析未改变的测试物质的浓度。通过单峰面积百分数来完成定量。
用于大鼠血浆的HPLC方法：
仪器：带有DAD、二元泵、自动采样器、柱温箱和恒温器的安捷伦1200；柱：Kromasil100C18，250mm×4mm，5μm；柱温：45°C；洗脱剂A：5mL氯酸/L水，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-8min98%A，2%B；8-15min56%A，44%B；15-20min10%A，90%B；20-21min10%A，90%B；21-23min98%A，2%B；23-25min98%A，2%B；流量：2mL/min；UV检测：220nm。
用于人血浆的HPLC方法：
仪器：带有DAD、二元泵、自动采样器、柱温箱和恒温器的安捷伦1100；柱：Kromasil100C18，250mm×4mm，5μm；柱温：45°C；洗脱剂A：5mL氯酸/L水，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-3min98%A，2%B；3-10min65%A，35%B；10-15min40%A，60%B；15-21min10%A，90%B；21-22min10%A，90%B；22-24min98%A，2%B；24-26min98%A，2%B；流量：2mL/min；UV检测：220nm。
方法B：
使对应的测试物质分别在大鼠血清和人血清中于37°C在轻度搅拌下孵育5小时。在不同的时间点(0、2、5、10、20、30、60、120、180和300分钟)提取100μL等份。在添加内标(10μL)后，通过添加200μL的乙腈使蛋白沉淀，并用实验室离心机离心所述化合物5分钟。在将150μL乙酸胺缓冲液溶液(pH3)添加至150μL上清液之后，通过LC/MSMS分析未改变的测试物质的浓度。
B-5.细胞渗透性的测定：
物质的细胞渗透性可通过体外测试使用Caco-2细胞在通量实验(fluxassay)中来分析[M.D.Troutman和D.R.Thakker，Pharm.Res.20(8),1210-1224(2003)]。细胞在24膜过滤板上培养15～16天以供所述分析。为测定渗透性，所研究的测试物质从顶(A)给至HEPES缓冲液或从底(B)给予细胞，并孵育2小时。在0和2小时后，从顺式和反式隔室收取所述样品。使用反相柱通过HPLC(安捷伦1200，德国柏布林根)对样本进行分离。HPLC系统通过涡轮增压离子喷雾与三重四极杆质谱仪API4000(德国达姆施塔特(Darmstadt)的应用生物系统阿普雷拉公司(AppliedBiosystemsApplera))相连。所述渗透性通过Papp值评价，该Papp值在Schwab等人公开的公式的协助下计算[D.Schwab等,J.Med.Chem.46,1716-1725(2003)]。若Papp(B-a)和Papp(A-B)的比率>2或<0.5，则将物质归类为是主动的。
从B至A[Papp (B-A)]的渗透性对细胞内释放的毒簇尤为重要：渗透性越低，细胞内释放后物质在细胞内的停留时间越长，因此，能够与生化目标(本文中：微管蛋白)的作用时间也就越长。
本实验的代表性实施方式的渗透性数据列于表3，显示如下：
表3
实施方式 Papp(B-A)[nm/s]
7 18
8 22
11 11
12 15
13 10
14 3
17 2
18 2
19 2
23 2
对比单甲基耳他汀E(MMAE)与单甲基耳他汀F(MMAF)，证实在该测试中其Papp(B-A)值分别是89nm/s和73nm/s。
B-6.P-糖蛋白(P-gp)的底物特征的测定
许多肿瘤细胞表达药物运输蛋白，这常涉及到对细胞抑制的耐性的发展。例如，不是该运输蛋白底物的物质(例如P-糖蛋白(P-gp)或BCRP)因而显示增进的功效。
用于P-gp(ABCB1)的物质的底物特性通过通量实验，使用过表达P-gp的LLC-PK1细胞(L-MDR1细胞)来测定[A.H.Schinkel等,J.Clin.Invest.96,1698-1705(1995)]。LLC-PK1或LMDR1细胞在96膜过滤板上培养3～4天以供所述分析。为测试渗透性，将单独或在抑制剂(例如双氢除虫菌素或维拉帕米(verapamil))存在下的合适的测试物质从顶(A)或底(B)添加至细胞上的HEPES缓冲液溶液，然后孵育2小时。在0小时和2小时后，从顺式和反式隔室收取所述样品。使用反相柱通过HPLC分离样本。HPLC系统通过涡轮增压离子喷雾与三重四极杆质谱仪API3000(德国达姆施塔特的应用生物系统阿普雷拉公司)相连。所述渗透性通过Papp值评价，该Papp值在Schwab等人公开的公式的协助下计算[D.Schwab等,J.Med.Chem.46,1716-1725(2003)]。若Papp(B-A)和Papp(A-B)的比率>2，则将物质归类为是主动的。
评价P-gp底物特性的其它标准可以是L-MDR1和LLC-PK1细胞中的流出比率的比较或者抑制剂存在或不存在下的流出比率的比较。若这些值的差异大于2，则所研究的物质是Pgp底物。
C.药物化合物的实施方式
所发明的化合物可进行如下转化：
片剂：
组成:
100mg本发明化合物、50mg乳糖(一水合物)、50mg玉米淀粉(天然)、10mg聚乙烯基吡咯烷酮(PVP25)(德国路德维希(Ludwigshafen)的巴斯夫公司(BASF)和2mg硬脂酸镁。
片剂重212mg，直径8mm，弯曲半径12mm。
制备:
所述组合物由本发明化合物、乳糖和淀粉组成，将用5%PVP水溶液(m/m)成粒。干燥后，使粒状材料与硬脂酸镁混合5分钟。使用常用片剂压制机(以前文描述的片剂形式)压缩所述混合物。压力15kN可以用作压缩的指示值。
口服混悬剂:
组成:
1000mg本发明化合物、1000mg乙醇(96%)、400mg(黄原胶，来自美国宾夕法尼亚州的FMC公司)和99g水。
对于单剂量，100mg本发明化合物对应10mL口服混悬液。
制备:
使Rhodigel悬浮于乙醇中，将本发明化合物添加至该混悬液中。水在搅拌时添加。搅拌将持续6小时，直至Rhodigel完全浸软。
口服溶液:
组成:
500mg本发明化合物、2.5g聚山梨酯和97g聚乙二醇400。对于单剂量，100mg本发明化合物对应20g口服混悬液。
制备:
将本发明化合物拌入聚乙二醇和聚山梨酯的混合物。持续搅拌直至本发明化合物完全溶解。
IV溶液：
使本发明化合物以低于饱和溶解度的浓度溶解在生理上可耐受的溶剂(例如，等渗盐溶液、葡萄糖溶液5%和/或PEG400溶液30%)中。过滤所述溶液，然后，将所述溶液灌入无菌、无热原的注射容器中。

Claims (13)

1.式(I)的化合物及其盐
式中
L代表直链(C1-C12)-烷二基，该直链(C1-C12)-烷二基任选地最多被甲基取代四次，并且在该直链(C1-C12)-烷二基中，(a)两个碳原子任选地以1,2位、1,3位或1,4位关系彼此连接，若有必要则在所述两个碳原子之间的区域包括碳原子以形成(C3-C6)-环烷基环或苯环，或者(b)至多三个彼此不相邻的CH2基团任选地被O替代，
R1代表氢，
R2代表1-羟乙基、苯基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或
R1和R2以及与其两者都相连的碳原子一起形成下式的2-苯基环丙烷-1,1二基基团
式中
#标记与所述分子的其它部分相连的点，
以及
T代表的基团具有下式：-C(＝O)-OR3、-C(＝O)-NR4R5、-C(＝O)-NH-NH-R6或-CH2-O-R7，其中
R3代表氢、(C1-C6)-烷基或(C3-C10)-环烷基，
其中，(C1-C6)-烷基任选地由苯基、萘基或(C3-C10)-环烷基取代，
R4代表氢或(C1-C6)-烷基，
R5代表氢或(C1-C6)-烷基，
其中(C1-C6)-烷基任选地由苯基取代，
或
R4和R5彼此连接，且和同它们连接的氮原子一起形成5-至7-元的，饱和的氮杂-杂环化合物，其还任选地包含环-杂原子，所述环-杂原子选自>N-H、>N-CH3或-O-；并且位于相对于上述氮原子的1,3-位或1,4-位，
R6代表苯甲酰基，
以及
R7代表(C1-C6)-烷基，其任选地由苯基取代，
其中苯基还任选地由(C1-C6)-烷氧基羰基或羧基取代。
2.如权利要求1所述的式(I)的化合物及其盐，其特征在于
L代表直链(C1-C8)-烷二基，其中(a)两个碳原子以1,3位或1,4位关系彼此相连，包括位于其间的一个或两个碳原子以形成苯环，或(b)至多两个彼此不相邻的任选被O替代的CH2基团，
R1代表氢，
R2代表苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或
R1和R2以及与其两者都相连的碳原子一起形成下式的2-苯基环丙烷-1,1二基基团
式中
#标记与所述分子的其它部分相连的点，
以及
T代表的基团具有下式：-C(＝O)-OR3、-C(＝O)-NR4R5、-C(＝O)-NH-NH-R6或-CH2-O-R7，其中
R3代表氢或(C1-C4)-烷基，其任选地被苯基、萘基或(C3-C10)-环烷基取代，
R4代表氢或甲基，
R5代表氢或(C1-C4)-烷基，其任选地由苯基取代，
或
R4和R5彼此相连并与同它们相连的氮原子一起形成吗啉环，
R6代表苯甲酰基，
以及
R7代表(C1-C4)-烷基或苄基，在苯基基团中，其任选地由(C1-C4)-烷氧基羰基或羧基取代。
3.如权利要求1所述的式(I)的化合物及其盐，其特征在于
L代表直链(C1-C6)-烷二基，
R1代表氢，
R2代表苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或
R1和R2以及与其两者都连接的碳原子一起形成下式的(1S,2R)-2-苯基环丙烷-1,1-二基基团
式中
#1标记与相邻氮原子相连的点
并且
#2标记连接基团T的点，
以及
T代表的基团具有下式：-C(＝O)-OR3、-C(＝O)-NR4R5、-C(＝O)-NH-NH-R6或-CH2-O-R7，其中
R3代表氢、甲基、乙基、正丙基、苄基或金刚烷基甲基，
R4代表氢或甲基，
R5代表氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
R6代表苯甲酰基，
以及
R7代表苄基，在苯基基团中，其任选地由甲氧基羰基或羧基取代。
4.如权利要求1所述的式(I)的化合物及其盐，其特征在于，所述化合物具有式(I-A)
其中，L、R1、R2和T如权利要求1中定义，支持R1和R2基团的CX-碳原子的构型如式(I-A)所示。
5.用于制造如权利要求1～4中任一项定义的式(I)的化合物的方法，其特征在于，使式(II)的化合物在惰性溶剂中，
式中，R1、R2和T如权利要求1～4中任一项所定义
[A]通过碱诱导的烷基化与式(III)的化合物偶联，生成式(IV)的化合物
式中，L具有如权利要求1～4中任一项所指明的含义，
E1代表氢、(C1-C4)-烷基或苄基，
并且
X代表离去基团，
式中E1、L、R1、R2和T定义如上，
然后，如果E1代表(C1-C4)-烷基或苄基，则用常见方法分解该酯基团，如此，正如(III)中的E1代表氢的情况那样，式(I)的羧酸得以保留，
式中L、R1、R2和T定义如上，
或
[B]在合适的还原剂存在下，通过处理与式(V)的化合物偶联，生成式(VI)的化合物
式中
E1代表氢、(C1-C4)-烷基或苄基，
且
LA的定义与权利要求1～4中任一项所述的L定义相同，然而，LA的烷基链长相对短一个CH2-单元，
式中E1、LA、R1、R2和T定义如上，
然后，如果E1代表(C1-C4)-烷基或苄基，则用常见方法分解该酯基团，如此，正如(V)中的E1代表氢那样，符合式(I-B)的羧酸得以保留
式中LA、R1、R2和T定义如上，
并且，所得的式(I)和(I-B)的化合物任选地被分成其对映异构体和/或非对映体和/或使用适当的(i)溶剂和/或(ii)碱或酸转化为其盐。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，X是氯、溴、碘、甲磺酸根、三氟甲磺酸根或甲苯磺酸根。
7.如权利要求1～4中任一项定义的化合物，所述化合物用于治疗和/或预防肾细胞癌或结肠癌的程序中。
8.如权利要求1～4中任一项定义的化合物在制备治疗和/或预防肾细胞癌或结肠癌的药物中的应用。
9.含有如权利要求1～4中任一项定义的化合物的药物，所述药物与一种或多种惰性、无毒、药学上合适的试剂联用。
10.含有如权利要求1～4中的一项定义的化合物的药物，所述药物与一种或多种物质联用。
11.如权利要求9所述的药物，所述药物用于治疗和/或预防肾细胞癌或结肠癌。
12.如权利要求10所述的药物，所述药物用于治疗和/或预防肾细胞癌或结肠癌。
13.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自下组：
或其盐。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103379912B (zh) 2010-09-29 2016-03-16 西雅图基因公司 正羧烷基耳他汀及其应用
JP6023097B2 (ja) * 2011-03-16 2016-11-09 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド Ｎカルボキシアルキルオーリスタチンおよびその使用
JP6088488B2 (ja) * 2011-04-21 2017-03-01 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 新規な結合剤−薬物複合体（ａｄｃ）およびそれらの使用
CN104662000B (zh) 2012-05-15 2018-08-17 索伦托医疗有限公司 药物偶联物及其偶联方法和用途
FR3005051A1 (fr) * 2013-04-25 2014-10-31 Pf Medicament Derives de la dolastatine 10 et d'auristatines
US10208125B2 (en) 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
SG11201604879QA (en) 2013-10-15 2016-07-28 Sorrento Therapeutics Inc Drug-conjugates with a targeting molecule and two different drugs
MX2016007865A (es) 2013-12-17 2017-01-11 Novartis Ag Peptidos citotoxicos y conjugados de los mismos.
CA2946796C (en) 2014-04-25 2019-10-22 Pierre Fabre Medicament Antibody-drug-conjugate and its use for the treatment of cancer
PL3134124T3 (pl) 2014-04-25 2019-09-30 Pierre Fabre Medicament Koniugat przeciwciało IGF-IR-lek i jego zastosowanie do leczenia raka
CA2951368A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Novartis Ag Auristatin derivatives and conjugates thereof
AU2015282627B2 (en) 2014-06-30 2020-04-02 Glykos Finland Oy Saccharide derivative of a toxic payload and antibody conjugates thereof
EP3250238B1 (en) 2015-01-28 2022-06-01 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody drug conjugates
CN106279352B (zh) 2015-05-29 2020-05-22 上海新理念生物医药科技有限公司 海兔毒素10的衍生物及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007008848A2 (en) * 2005-07-07 2007-01-18 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the c-terminus
CN101573384A (zh) * 2006-10-27 2009-11-04 健泰科生物技术公司 抗体和免疫偶联物及其用途

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
CA2315230C (en) 1998-01-09 2004-06-29 Arizona Board Of Regents, A Body Corporate, Acting On Behalf Of Arizona State University Anti-cryptococcal peptides
MXPA01011502A (es) 1999-05-14 2003-08-20 Boehringer Ingelheim Pharma Compuestos de tipo profarmaco anti-tumorigenos, activados por enzimas.
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US6737409B2 (en) 2001-07-19 2004-05-18 Hoffmann-La Roche Inc. Dolastatin 10 derivatives
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
DK1545613T3 (da) 2002-07-31 2011-11-14 Seattle Genetics Inc Auristatinkonjugater og deres anvendelse til behandling af cancer, en autoimmun sygdom eller en infektiøs sygdom
DK1725249T3 (en) 2003-11-06 2014-03-17 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugating to ligands.
EP1817336B1 (en) 2004-11-12 2019-01-09 Seattle Genetics, Inc. Auristatins having an aminobenzoic acid unit at the n terminus
US8343928B2 (en) 2005-07-07 2013-01-01 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain replacements at the C-terminus
CA2667019C (en) 2006-10-27 2016-03-29 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
JP5394246B2 (ja) * 2007-03-30 2014-01-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体及びイムノコンジュゲートとこれらの使用方法
ES2647927T3 (es) 2008-03-18 2017-12-27 Seattle Genetics, Inc. Conjugados enlazadores del fármaco auriestatina
ES2528956T3 (es) 2010-06-10 2015-02-13 Seattle Genetics, Inc. Nuevos derivados de auristatina y su uso
CN103379912B (zh) 2010-09-29 2016-03-16 西雅图基因公司 正羧烷基耳他汀及其应用
JP6023097B2 (ja) 2011-03-16 2016-11-09 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド Ｎカルボキシアルキルオーリスタチンおよびその使用
JP6088488B2 (ja) 2011-04-21 2017-03-01 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 新規な結合剤−薬物複合体（ａｄｃ）およびそれらの使用
BR112014014763A8 (pt) 2011-12-14 2017-07-04 Seattle Genetics Inc novos conjugados de anticorpo-medicamento (adcs) e uso dos mesmos

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007008848A2 (en) * 2005-07-07 2007-01-18 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the c-terminus
CN101573384A (zh) * 2006-10-27 2009-11-04 健泰科生物技术公司 抗体和免疫偶联物及其用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Enhanced Activity of Monomethylauristatin F through Monoclonal Antibody Delivery: Effects of Linker Technology on Efficacy and Toxicity;Svetlana O. Doronina et al;《Bioconjugate Chem》;20061231;第17卷(第1期);114-124 *

Also Published As

Publication number Publication date
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