CN104254342A - 新抗体药物缀合物(adc)及其用途 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及针对靶标FGFR2的N，N-二烷基耳他汀的新抗体-药物缀合物(ADC)，涉及所述ADC的药物代谢物，涉及用于制备所述ADC的方法，涉及所述ADC用于治疗和/或预防疾病的用途，以及涉及所述ADC用于生产药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防疾病，更具体地是过度增生性疾病和/或血管生成性疾病，例如，癌病。此类治疗可以作为单一疗法或者与其它药物或进一步治疗性措施联用来实施。
Description
本申请涉及针对靶标成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)的N，N-二烷基耳他汀(auristatin)的新的结合剂-药物缀合物(ADC)，涉及这些ADC的活性代谢物，涉及用于制备这些ADC的方法，涉及这些ADC用于治疗和/或预防疾病的用途，以及涉及这些ADC用于生产药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防疾病，更具体地是过度增生性疾病和/或血管生成性疾病，例如，癌性疾病。此类治疗可以作为单一疗法或者与其它药物或进一步治疗性措施联用来实施。
癌性疾病是很多种组织中不受控制的细胞生长的结果。在很多情况下，新细胞穿透现有组织(侵袭性生长)，或者它们转移至远端器官。癌性疾病发生在很多种器官中，并且该疾病通常以组织特异性方式发展。因此，作为通用术语的名称“癌性疾病”描述一大群不同器官、组织和细胞类型的定义的疾病。
早期肿瘤可能能够通过手术和放疗措施除去。转移的肿瘤通常仅可通过化疗剂施用姑息性治疗。在该情况下目标是实现改善生命质量和延长剩余寿命的最佳组合。
例如，目前胃肠外施用的大部分化疗剂通常不是针对肿瘤组织或肿瘤细胞目标导向的，由于其全身性施用，而是在体内非特定分布，因此包括在不希望接触该药物的位置，例如健康细胞、组织和器官。这可能导致不希望的副作用，以及甚至导致一般毒性的严重影响，然后该毒性通常极大限制了药物治疗有用的剂量的范围，或必须完全停止用药。
因此，一方面，这些化疗剂在肿瘤细胞或立即包围组织中的改进的且选择性的可用性和相关的效果提高，以及另一方面，毒性副作用的最小化，已成为多年来新化疗剂的发展中的焦点。至今人们已作出很多尝试以发展将药物引入靶细胞的有效方法。但是，例如优化药物和细胞内目标的关联以及使相邻细胞的药物细胞间分布最小化仍然构成棘手的问题。
例如，单克隆抗体适用于肿瘤组织和肿瘤细胞的靶向定位。近年来，已看到此类用于临床治疗癌性疾病的抗体的重要性显著普遍提高，这是基于此类的试剂的活性，所述试剂例如曲妥珠单抗利妥昔单抗西妥昔单抗和贝伐珠单抗该试剂后来已被批准用于治疗单独的具体肿瘤疾病[参见例如G.P.Adams和L.M.Weiner，Nat.BiotechnoL.23，1147-1157(2005)]。因此，对所谓的免疫缀合物(例如，前述ADC)的兴趣也已显著增加，其中针对肿瘤相关抗原的内化抗体通过连接单元(“接头”)与细胞毒性剂共价结合。在将ADC引入至肿瘤细胞中并随后切割缀合物之后，细胞毒性剂本身或另一种由细胞毒性剂形成的具有细胞毒性活性的代谢物在肿瘤细胞内释放，在肿瘤细胞中能够直接地且选择性地发挥其作用。与癌性疾病的常规化疗相比，以该方式可以将对正常组织的破坏保持在极大接近极限内[参见例如J.M.Lambert，Curr.Opin.Pharmacol.5，543-549(2005)；A.M.Wu and P.D.Senter，Nat.Biotechnol.23，1137-1146(2005)；P.D.Senter，Curr.Opin.Chem.Biol.13，235-244(2009)；L.Ducry and B.Stump，Bioconjugate Chem.21，5-13(2010)]。
除了抗体，例如小分子药物领域的结合剂也可以用作选择性地与具体目标位置(“靶标”)(例如受体)结合的结合剂[参见例如E.Ruoslahti等人，Science279，377-380(1998)；D.Karkan等人，PLoS ONE 3(6)，e2469(2008年6月25日)]。还已知细胞毒性药物和定位配体(addressing ligand)的缀合物在配体和药物之间存在确定的切割点用于药物的释放。例如，在肽链中可能存在这种类型的“预定的断裂点”，该肽链可在特定位点通过位于作用位置的特异性酶而选择性地被切割[参见例如R.A.Firestone和L.A.Telan，美国专利申请US 2002/0147138]。
在不同类型的癌症中证实了单克隆抗体的活性。因此，和 分别被成功地用于治疗HER2-阳性的乳腺癌和EGFR-阳性的结直肠癌。
细胞毒性的化合物与抗体的偶联会形成扩大的进一步改善癌症治疗的可能性，因为这些缀合物允许肿瘤-特异性的毒性基团积累，并同时减少全身性毒性。就活性和耐受性而言，Brentuximab vedotin在霍奇金淋巴瘤中和曲妥珠单抗-DM1在乳腺癌中的临床研究已经产生了非常有前途的结果，这支持了针对其它肿瘤抗原的新抗体和新ADC的开发。
证实了基于抗体的治疗可非常有效地治疗多种癌，包括实体瘤。因而，例如已经被成功地用于治疗乳腺癌，在与B细胞有关的癌形式中是强效的。针对优选地在肿瘤细胞上表达的细胞表面蛋白的抗体的分离，是开发成功的基于抗体的治疗的焦点。
成纤维细胞生长因子受体是酪氨酸受体激酶(RTK)，在哺乳动物中已知其中的4种(FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4)。已经鉴别出22种人成纤维细胞生长因子(FGF)作为配体(Eswarakumar和Schlessinger，Cytokine&Growth Factor Reviews 2005，16：139-149；Shimada等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2001，98：6500-6505)。所述FGFR由3个细胞外免疫球蛋白(Ig)-样结构域(即D1-D3，其中结构域2和3是配体结合所必需的)以及单个跨膜结构域和细胞质结构域(其含有蛋白酪氨酸激酶的催化中心)组成(示意图给出在图1中)。
FGFR2的结构的示意图.将α(SEQ ID NO：1)和β(SEQ ID NO：2)剪接变体彼此对比。附图显示了3个Ig-样结构域(D1、D2和D3)、跨膜结构域(TM)和细胞内激酶结构域。同样标记了肝素结合位点(HBS)、酸性盒(AB)和替代性的IIIb/IIIc结构域。氨基端用N标记，羧基端用C标记。
细胞外组分额外带有酸性盒(AB)和肝素结合位点(HBS)(参见图1)。FGFR家族的RTK的一个重要特征是，存在不同的交替剪接的变体。将全长FGFR鉴别为FGFRαt(SEQ ID NO：1)，而将缺失D1的异形体鉴别为FGFRβ(SEQ ID NO：2)(图1)。在结构域3中的选择性剪接会产生2种不同的变体，即FGFR2 IIIb(其由外显子7和8编码)和FGFR2 IIIc(其由外显子7和9编码)(图1)。后一种剪接会影响配体结合，从而导致特异性模式。FGFR2 IIIc主要由间充质细胞表达，FGFR2 IIIb基本上由上皮细胞表达。FGF7也被称作角质形成细胞生长因子(KGF)，并且仅结合FGFR2 IIIb，因此也被称为KGFR。当FGF结合它们的受体时，存在FGFR的随后二聚化和磷酸化以及经由FRS-GRB2船坞蛋白复合物向RAS-MAPK信号转导级联和the PI3K-AKT信号转导级联的下游信号传递。前一个信号转导级联涉入细胞生长和细胞分化，而后一个涉入细胞的存活和细胞命运的确定(Katoh和Katoh，Int.J.Oncol.2006，29：163-168)。
为了在胚胎发生过程中的正确器官发生，经由不同FGF对所有4种受体(FGFR1至FGFR4)和它们的剪接变体的协同信号转导是必需的(Ornitz等人，Genome Biol 2001，2：3005)。在FGFR2的情况下，所有FGFR2变体的缺失会导致胎盘和肢芽形成中的缺陷，并因此导致在E10.5阶段的死亡。在小鼠中对FGFR2 IIIb的特异性敲除同样导致与肺、前叶、甲状腺、牙齿和肢体的发育不全有关的死亡(在P0)，而FGFR2 IIIc变体的破坏是可存活的，发生延迟的骨化、成比例的侏儒症和头盖骨基底的骨连结(Eswarakumar和Schlessinger，2005)。胚迹中的FGFR2的活化突变会在胚胎发生过程中导致严重畸形，诸如在人类中在阿佩尔综合征的情况下或在斐弗综合征的情况下的冠骨连结和颅骨连结(Robin等人，Gene Reviews，NCBI Bookshelf Washington，Pagon等人编，1993)。在成年人中，FGFR2信号转导涉入伤口愈合、上皮修复以及皮肤和粘膜的细胞的保护(Braun等人，Phil.Trans.R.Soc.Lond.B 2004，359：753-757)和在肝损伤的情况下的再生(Steiling等人，Oncogene 2003，22：4380-4388；，dissertation，Technische Hochschule Zürich，2009)。因此，正在讨论FGFR2信号转导在梗塞以后EPDC(贲门上部衍生的细胞)向心脏迁移中的作用，因为在胚胎发生过程中，FGF10-FGFR2信号转导是EPDC向致密心肌中的迁移所必需的，所述迁移是心脏发育所必需的一个过程(Vega-Hernández等人，Development 2011：3331-3340；Winter和De Groot，Cell Mol.Life Sci.2007，64：692-703)。FGFR2所起的所有这些作用在性质上是再生性的，由于组织体内稳态的破坏而显然仅在非生理条件下具有根本的重要性。经由FGFR2而增加的肉体信号转导涉入不同的病理学状况诸如痤疮(Katoh，J.of Invest.Dermatol.2009，129：1861-1867)、银屑病(Finch等人，Am.J.Pathol.1997，151：1619-1628；Xu等人，J.Invest.Dermatol.2011：131：1521-1529)和癌症(参见下面)。
已经公开的许多研究表明FGFR2表达与癌症患者中的不利结果的强烈关联：
FGFR2和/或KGF的过表达伴随着胃癌的扩大生长和患者的更短存活期(Matsunobu等人，Int.J.Cancer 2006，28：307-314；Toyokawa等人，Oncol.Reports 2009，21：875-880)。在所有检查的胃癌样品的31-36.5％中，检测到FGFR2的过表达(Matsunobu等人，Int.J.Cancer 2006，28：307-314；Toyokawa等人，Oncol.Reports 2009，21：875-880)。另外，将腺癌(所有胃癌的70％)细分成2种不同的病理学类型，即肠型胃癌和弥散型胃癌。令人感兴趣的是，第一种低侵袭类型与活化的ErbB2信号途径有关，而在后一种更高侵袭类型的情况下，在FGFR2/P13K信号途径中发生畸变(Yamashita等人，Surg.Today 2011，41：24-38)。在所有弥散型胃癌样品的53％中，发生FGFR2过表达(Yamashita等人，Surg.Today 2011，41：24-38)。总结所有数据，HER2表达和FGFR2表达似乎发生在2个不同的患者群体中。在某种程度上，FGFR2的表达可能是基因扩增的结果，因为在所有原发性胃癌的大约7-10％中发现了FGFR2的扩增(Kunii等人，Cancer Res.2008，68：23-40-2348)。此外，不仅已经在转移灶中发现FGFR2表达，而且实际上在转移灶中甚至比在原发性肿瘤中更大(Yamashita等人，Surg.Today 2011，41：24-38)。
在乳腺癌的情况下，在57％的肿瘤样品中发现了FGFR2 IIIb表达，但是在健康组织中根本没有发现(Tamaru等人.2004，84：1460-1471)。KGF(FGF7)发生在45％的随机样品中，通常与FGFR2 IIIb一起。通过与原发性乳腺癌(在其中既不表达FGF7也不表达FGFR2 IIIb)对比，FGF7和它的单一受体FGFR2 IIIb的共表达与原发性肿瘤内的显著减少的细胞凋亡性细胞的数目有关(Tamaru等人.2004，84：1460-1471)。如在胃癌的情况下一样，同样发现了对于乳腺癌而言的基因扩增，以及在4％的三重阴性的乳腺癌(TNBC)中(Turner等人，Oncogene 2010，29：2013-2023)。在乳腺癌中，已经鉴别出许多与增加的乳腺癌风险有关的单核苷酸变化(单核苷酸多态性，SNP)(Hunter等人，Nature Genetics 2007，6：870-874)。如果SNP局限在内含子2内，这会导致FGFR2的转录增量调节(Katoh，ExpertReviews 2010，10：1375-1379)。令人感兴趣的是，在雌激素受体(ER)阳性的乳腺癌的情况下优先增量调节FGFR1。而在ER-阴性的乳腺癌的情况下增量调节FGFR2(Katoh，Expert Reviews 2010，10：1375-1379)。
在胰腺癌的情况下，FGFR2 IIIb和/或FGF7的过表达腐败入侵(venalinvasion)高度相关(Cho等人，Am.J.Pathol.170：1964-1974)，已经在肿瘤细胞中发现了FGFR2和FGF7的共表达，但是甚至在邻近肿瘤细胞的基质细胞中更频繁地发生(Ishiwata等人，Am.J.Pathol.1998，153：213-222)。
在上皮卵巢癌的情况下，80％的病例表现出与正常组织相比的FGRF2增量调节，且在70％的病例中，在腹水液中存在FGF7(Steele等人，Oncogene 20：5878-5887)。
在所有试验的侵袭性宫颈癌中发现了FGFR2蛋白，在肿瘤的侵袭前沿处具有强表达(Kawase等人，Int.J.Oncol.2010，36：331-340)。
在肺腺癌的情况下，FGF7和FGFR2的共表达发生在51.6％的病例中，且与较低的分化程度、较高的增殖速率、淋巴结转移和较短的5年存活期相关(Yamayoshi等人，J.Pathol.2004，204：110-118)。
在子宫内膜癌的情况下，FGFR2活化突变发生在大约16％的病例中(Pollock等人，Oncogene 2007，26：7158-7162)。
在食道癌(OC)的情况下，在26％的患者中发现了FGF7和FGFR2在癌细胞中的共表达，并且所述共表达与向较短存活时间的趋势有关(Yoshino等人，Int.J.Oncol.2007，31：721-728)。
在肝细胞癌的情况下，在低分化的肿瘤中更强烈地增量调节FGFR2的表达4.7倍。该表达与门静脉侵入的发生和较低无病存活时间有关(Harimoto等人，Oncology 2010，78：361-368)。
许多含有体外和体内实验数据的出版物表明了改变的FGFR2信号转导和肿瘤生长之间的因果联系。
胃癌(Takeda等人，Clin.Cancer Res.2007；13：3051-3057；Kunii等人，Cancer Res.2008；68：2340-2348)、乳腺癌(Turner等人，Oncogene 2010，29：2013-2023)、卵巢癌(Cole等人，Cancer Biol.Ther.2010，10：495-504)和头颈鳞状癌(Marshall等人，Clin.Cancer Res.2011，17：5016-5025)的细胞中FGFR2的击昏或抑制会导致肿瘤细胞的减低的增殖或增加的细胞凋亡。同样，在肿瘤异种移植物中，观察到过表达FGFR2的肿瘤细胞系中的FGFR2的击昏和FGFR2的抑制会造成胃癌细胞系(Takeda等人，Clin.Cancer Res.2007；13：3051-3057)和卵巢癌细胞系(Cole等人，Cancer Biol.Ther.2010，10：495-504)的生长抑制。此外，排它地活化FGFR2的FGF7会增加胃癌细胞系(Shin等人，J.Cancer Res.Clin.Oncol.2002，128：596-602)、乳腺癌细胞系(Zhang等人，Anticancer Res.1998，18：2541-2546)和卵巢癌细胞系(Cole等人，Cancer Biol.Ther.2010，10：495-504)在体外和在体内的增殖。此外，子宫内膜癌细胞系(其含有具有活化突变的FGFR2)中的FGFR2击昏同样会导致细胞周期的停滞和细胞死亡的诱导(Byron等人，CancerRes.2008，68：6902-6907)。
FGFR2信号转导会促进胃癌细胞系(Shin等人，J.Cancer Res.Clin.Oncol.2002，128：596-602)、乳腺癌细胞系(Zhang等人，Anticancer Res.1998，18：2541-2546)和体外胰腺癌细胞系(Nomura等人，Br.J.Cancer 2008，99：305-313；Niu等人，J.Biol.Chem.2007，282：6601-6011)的迁移和侵入。
在食道癌的情况下，FGFR2是在肿瘤相关的成纤维细胞中最高增量调节的基因。分离的肿瘤相关的成纤维细胞会释放出促进食道癌细胞增殖的可溶性因子(Zhang等人，hum.Cancer Biol.2009，15：4017-4022)，由此证实由基质细胞表达的FGFR2也能够促进肿瘤进展。
仅存在少量关于抗-FGFR2抗体的报道。Fortin等人(J.Neurosci.2005，25：7470-7479)描述了阻断性的抗-FGFR2抗体。Wei等人(Hybridoma 2006，25：115-124)已经证实了对FGFR2 IIIb具有唯一特异性的抗体，其会抑制KGF诱导的细胞增殖。WO2007/144893描述了结合FGFR2和FGFR3的抑制性抗体。在WO2010/054265和Zhao等人(Clin.Cancer Res.2010，16：5750-5758)中描述了抑制FGF结合的抗体，包括例如GAL-FR21和GAL-FR22。Bai等人(Cancer Res.2010，70：7630-7639)描述了对FGFR2IIIb具有特异性的抗体。R&D Systems在销售抗-FGFR2抗体，其在生产商的测定中具有活性中和效应。WO2005/066211描述了针对不同细胞-表面FGFR(包括FGFR2)的抗体。WO2009/100105描述了可以与效应分子共价连接的异形体特异性的抗-FGFR2抗体。WO2007/134210描述了使用抗-FGFR2抗体或免疫缀合物治疗结直肠癌的方法。WO2007/144893描述了对其它FGFR具有结合亲和力的FGFR2抗体，所述抗体会阻断配体依赖性的和组成配体非依赖性的FGFR2受体活化。
耳他汀E(AE)和单甲基耳他汀E(MMAE)是多拉司他汀的合成类似物，是线性假肽的特定集合，所述线性假肽最初从海洋源分离并且其在某些情况下对于肿瘤细胞具有极有效的细胞毒性活性[关于综述，参见例如G.R.Pettit，Prog.Chem.Org.Nat.Prod.70，1-79(1997)；G.R.Pettit等人，Anti-Cancer Drug Design10，529-544(1995)；G.R.Pettit等人，，Anti-CancerDrug Design13，243-277(1998)]。
但是，MMAE具有较高全身毒性的缺点。为了提高肿瘤选择性，MMAE更具体地与可酶促切割的缬氨酸-瓜氨酸接头结合以ADC方式使用，用于更靶向的肿瘤治疗[WO 2005/081711-A2；S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.17，114-124(2006)]。在蛋白水解性裂解以后，MMAE优选地从对应的ADC在细胞内释放。
单甲基耳他汀F(MMAF)是具有C-末端苯丙氨酸单元的耳他汀衍生物，与MMAE相比，其仅具有中等抗增殖活性。这极可能可归因于游离羧基，该羧基的极性和电荷对该化合物进入细胞的能力有不利的影响。在这种连接中，MMAF的甲基酯(MMAF-OMe)已被描述为具有细胞进入能力的中性电荷的前药衍生物，与MMAF相比，其对于各种增加了多个数量级的癌细胞系MMAF-OMe具有体外细胞毒性[S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.17，114-124(2006)]。可假定该作用由MMAF本身产生，所述MMAF在摄取前药进入细胞后，通过细胞内的酯水解而快速释放。
但是，基于简单酯衍生物的药物化合物通常经受由于非特异性酯水解造成的化学不稳定性的风险，该非特异性酯水解不依赖于作用的目标位点，例如通过存在于血浆中的酯酶来进行水解；这种非特异性水解可大大限制了此类化合物在治疗中的可用性。
已经在WO 2005/081711-A2中公开了单甲基耳他汀F(MMAF)及其各种酯衍生物和酰胺衍生物。在WO 01/18032-A2中描述了其它具有C-末端酰胺取代的苯丙氨酸单元的其它耳他汀类似物。WO 02/088172-A2和WO 2007/008603-A1要求保护MMAF类似物，所述MMAF类似物涉及苯丙氨酸的侧链改性，而WO 2007/008848-A2要求保护其中苯丙氨酸的羧基已经被改性的MMAF类似物。最近，已经在WO 2009/117531-A1中描述了通过C-末端连接的耳他汀缀合物[也参见S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.19，1960-1963(2008)]。
本发明解决的问题是这样的问题：提供新的结合剂-药物缀合物(ADC)，其通过新的N，N-二烷基耳他汀衍生物与创新的合适接头和结合剂的组合而表现出非常有吸引力的活性谱，例如，以它们的特异性肿瘤效应和/或在细胞内形成的代谢物作为转运蛋白等蛋白的底物的潜力减小的方式，并且它们因此适合用于治疗和/或预防例如过度增生性和/或血管生成性疾病，诸如癌性疾病。
本发明提供了通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中
n是1-50的数字，
AK是结合FGFR2的结合剂，
基团§-G-L1-B-§§是接头，
其中
§表示与基团AK的连接位点，且
§§表示与氮原子的连接位点，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
本发明的化合物是式(I)的化合物和它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，符合以下所示式并且由式(I)所涵盖的化合物和它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，以及下文作为工作实施例所确定的并且由式(I)所涵盖的化合物和它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，在一定程度上下文所示并且由式(I)所涵盖的化合物并非已经存在的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物。
根据它们的结构，本发明的化合物可以以不同的立体异构体形式存在，即以构型异构体的形式或者在适当的情况下作为构象异构体(对映异构体和/或非对映异构体，包括阻转异构体的情况下的异构体)存在。因此，本发明包括对映异构体和非对映体及其各自的混合物。可以通过已知的方式从此类对映异构体和/或非对映体的混合物中分离立体异构体均一的组分；为此目的，优选使用色谱法，更优选HPLC色谱法在非手性相或手性相上分离。
当本发明的化合物可以以互变异构体形式存在时，本发明包括所有的互变异构体形式。
本发明也包括本发明的化合物的所有合适的同位素变体。本发明的化合物的同位素变体在这里被理解为是指这样的化合物：其中在本发明的化合物内至少一个原子已经被替换为相同原子序数的另一原子，但是所述另一原子的原子质量不同于在自然界中通常存在或优势存在的原子质量。可以掺入本发明化合物中的同位素的例子是：氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘的同位素，诸如2H(氘)、3H(氚)、13C、14C、15N、17O、18O、32P、33P、33S、34S、35S、36S、18F、36Cl、82Br、123I、124I、129I和131I。本发明化合物的特定同位素变体(如特别是其中已经掺入一种或多种放射性同位素的那些)可能是有用的，例如，用于检查在体内的作用机理或药物在体内的分布；由于比较而言容易的可制备性和可检测性，用3H或14C同位素标记的化合物特别适用于这些目的。另外，由于化合物的更大代谢稳定性，同位素(例如氘)的掺入例如可以导致某些治疗益处，例如导致体内半衰期的延长或导致必需的活性剂量的降低；因此，本发明化合物的这种改性也可以任选构成本发明的优选实施方案。通过技术人员已知的方法，例如根据以后在下面描述的方法和在工作实施例中重现的操作，通过使用各种反应试剂和/或起始化合物的相应的同位素改性，可以制备本发明化合物的同位素变体。
在本发明范围内，优选的盐是本发明化合物生理上可接受的盐。本发明还包括这样的盐：尽管该盐本身不适合于药物应用，但可将其用于例如分离或纯化本发明的化合物。
本发明化合物的生理上可接受的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，其例子是以下酸的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸。
本发明化合物的生理上可接受的盐还包括常规碱的盐，例如，(仅为示例性并优选)碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)和衍生自氨或含有1-16个C原子的有机胺的铵盐，所述有机胺包括例如(仅为示例性并优选)乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙基胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己基胺、二甲基氨基乙醇、普鲁卡因、二苄基胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸和1，2-乙二胺。
在本发明范围内，溶剂合物是这些形式的本发明化合物，所述化合物通过与溶剂分子配位而形成的固态或液态形式的复合物。水合物是溶剂合物的一种具体形式，其中与水发生配位。在本发明范围内，溶剂合物优选为水合物。
另外，本发明还包括本发明化合物的前药。本文中术语“前药”指这样的化合物：该化合物本身可为生物活性或无生物活性的，但其在体内停留过程中转化为本发明的化合物(例如通过代谢或水解)。
在本发明范围内，除非另有说明，取代基定义如下：
在本发明范围内，(C 1 -C 4 )-烷基是具有1-4个碳原子的直链或支链烷基残基。作为例子且优选地，可以提及下述的：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、1-甲基丙基和叔丁基。
在本发明范围内，烷二基是具有指定的特定碳原子数目的直链α，ω-二价烷基残基。作为例子且优选地，可以提及下述的：亚甲基、乙烷-1，2-二基(1，2-亚乙基)、丙烷-1，3-二基(1，3-亚丙基)、丁烷-1，4-二基(1，4-亚丁基)、戊烷-1，5-二基(1，5-亚戊基)、己烷-1，6-二基(1，6-亚己基)、庚烷-1，7-二基(1，7-亚己基)、辛烷-1，8-二基(1，8-亚辛基)、壬烷-1，9-二基(1，9-亚壬基)、癸烷-1，10-二基(1，10-亚癸基)。
在本发明范围内，(C 3 -C 7 )-环烷基和3-7元碳环分别是具有3-7个碳原子的单环饱和环烷基。作为例子且优选地，可以提及下述的：环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
在R19的定义中的α-氨基酸的侧基不仅包括天然存在的α-氨基酸的侧基，而且包括这些α-氨基酸的同系物和异构体的侧基。所述α-氨基酸在这里可以是L或D构型，或者可以呈现为L和D形式的混合物。可以给出的侧基的例子如下：甲基(丙氨酸)、丙烷-2-基(缬氨酸)、丙烷-1-基(正缬氨酸)、2-甲基丙烷-1-基(亮氨酸)、1-甲基丙烷-1-基(异亮氨酸)、丁-1-基(正亮氨酸)、叔丁基(2-叔丁基甘氨酸)、苯基(2-苯基甘氨酸)、苄基(苯丙氨酸)、对羟基苄基(酪氨酸)、吲哚-3-基甲基(色氨酸)、咪唑-4-基甲基(组氨酸)、羟基甲基(丝氨酸)、2-羟基乙基(高丝氨酸)、1-羟基乙基(苏氨酸)、巯基甲基(半胱氨酸)、甲硫基甲基(S-美司坦)、2-巯基乙基(高半胱氨酸)、2-甲硫基乙基(蛋氨酸)、氨甲酰基甲基(天冬酰胺)、2-氨甲酰基乙基(谷氨酰胺)、羧甲基(天冬氨酸)、2-羧基乙基(谷氨酸)、4-氨基丁-1-基(赖氨酸)、4-氨基-3-羟基丁-1-基(羟基赖氨酸)、3-氨基丙烷-1-基(鸟氨酸)、2-氨基乙基(2、4-二氨基丁酸)、氨基甲基(2、3-二氨基丙酸)、3-胍基丙烷-1-基(精氨酸)、3-脲基丙烷-1-基(瓜氨酸)。在R19的定义中优选的α-氨基酸侧基是甲基(丙氨酸)、丙烷-2-基(缬氨酸)、2-甲基丙烷-1-基(亮氨酸)、苄基(苯丙氨酸)、咪唑-4-基甲基(组氨酸)、羟基甲基(丝氨酸)、1-羟基乙基(苏氨酸)、4-氨基丁-1-基(赖氨酸)、3-氨基丙烷-1-基(鸟氨酸)、2-氨基乙基(2、4-二氨基丁酸)、氨基甲基(2、3-二氨基丙酸)、3-胍基丙烷-1-基(精氨酸)。L构型在每种情况下是优选的。
在本发明范围内，4-7元杂环是具有共计4-7个环原子的单环饱和杂环，其含有一个或两个选自系列N、O、S、SO和/或SO2的环杂原子，且经由环碳原子或任选的环氮原子连接。优选的是，具有一个或两个选自系列N、O和/或S的环杂原子的5-7元杂环，更优选的是具有一个或两个选自系列N和/或O的环杂原子的5或6元杂环。作为例子，可以提及下述的：氮杂环丁基、氧杂环丁基、吡咯烷基、吡唑烷基、四氢呋喃基、硫杂环戊烷基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、硫代吗啉基、六氢氮杂环庚三烯基和六氢-1，4-二氮杂环庚三烯基。优选的是，吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基和吗啉基。
在分别可以由A、B、D、G、L1、L2、L4、R1、R2、R3、R4和R5代表的基团的式中，符号#6、＊、＊＊、#3、#1、#2、##1、##2、##3、##4、＊＊＊、＊＊＊＊、#4、#5、#6、#7、#8或#9所在的线的端点不是碳原子或CH2基团，而是与在每种情况下指定的、A、B、D、G、L1、L2、L4、R1、R2、R3、R4或R5所键合的原子形成的键的一部分。
在本发明范围内，所有多次出现的基团具有其彼此独立的定义。如果本发明化合物中的基团是经取代的，除非另有说明，所述基团可一次或多次被取代。优选用一种取代基或两种相同的或不同的取代基进行取代。特别优选用一种取代基进行取代。
在本发明范围内，除非另外指出，使用的术语具有下述定义：
术语“接头”在最宽的含义上被理解为这样的化学单元：其包含使结合剂与药物共价连接的共价键或一系列原子。术语“接头”优选地被理解为，在本发明意义上使结合剂与药物共价连接的一系列原子。此外，可以由例如二价化学单元(诸如烷基二基、芳基二基、杂芳基二基、杂环基二基、二羰基酸酯、二羰基酸酰胺)来代表接头。
术语“结合剂”在最宽的含义上被理解为结合靶分子的分子，所述靶分子存在于要用结合剂-药物缀合物定位的特定靶细胞群体上。术语“结合剂”应当以它的最宽解释进行理解，且包括，例如，凝集素、能够结合特定糖链的蛋白或磷脂结合蛋白。这样的结合剂包括，例如，高分子量蛋白(结合蛋白)、多肽或肽(结合肽)、非肽(例如适体(US5，270，163)(综述文章参见Keefe AD.，等人，Nat.Rev.Drug Discov.2010；9：537-550)或维生素)和所有其它的结合细胞的分子或物质。结合蛋白是，例如，抗体和抗体片段或抗体模拟物例如，亲和体(affibodies)、adnectins、anticalins、DARPins、亲和体(avimers)、纳米抗体(nanobodies)(综述文章参见Gebauer M.等人，Curr.Opinion in Chem.Biol.2009；13：245-255；Nuttall S.D.等人，Curr.Opinion in Pharmacology 2008；8：608-617)。结合肽是，例如，配体-受体对的配体，诸如配体-受体对VEGF/KDR中的VEGF，诸如配体-受体对转铁蛋白/转铁蛋白受体中的转铁蛋白，或细胞因子/细胞因子受体，诸如配体受体对TNFα/TNFα受体中的TNFα。
本文中使用的术语“表位”包括能够特异性地结合免疫球蛋白或T-细胞受体的蛋白的任意决定簇。这样的决定簇通常由分子(诸如氨基酸、碳水化合物或它们的组合)的化学活性表面排列组成，例如，其通常具有特定三维结构以及确定的电荷性质。如果以竞争性结合测定形式证实第一抗体与第二抗体竞争，那么两种抗体结合相同表位。这类结合测定是技术人员已知的。
“靶分子”在最宽的含义上被理解为这样的分子：其存在于靶细胞群体中，且可以是蛋白(例如生长因子的受体)或非肽分子(例如糖或磷脂)。优选地，它是受体或抗原。
术语“细胞外的”靶分子描述了附着于细胞且位于细胞外侧上的靶分子，或者位于细胞外侧上的靶分子的一部分，即结合剂可以结合完整细胞的细胞外靶分子。细胞外靶分子可以锚定在细胞膜中，或者可以是细胞膜的一部分。技术人员已知鉴别细胞外靶分子的方法。对于蛋白而言，这可以通过跨膜结构域的确定和蛋白在膜中的取向来实现。在蛋白数据库(例如SwissProt)中一般地记录了该数据。
术语“癌症靶分子”描述了这样的靶分子：与相同组织类型的非癌细胞相比，其在一种或多种癌细胞类型上的存在倍增。与相同组织类型的非癌细胞相比，癌症靶分子优选地选择性地存在于一种或多种癌细胞类型上，其中“选择性地”描述了与相同组织类型的非癌细胞相比，在癌细胞上的至少2倍积累(“选择性的癌症靶分子”)。癌症靶分子的应用允许用本发明的缀合物对癌细胞进行选择性治疗。
结合剂可以经由键连接至接头。结合剂的连接可以借助于结合剂的杂原子而发生。本发明的可以用于连接的结合剂杂原子是硫(在一个实施方案中，经由结合剂的巯基)、氧(根据本发明，借助于结合剂的羧基或羟基)和氮(在一个实施方案中，经由结合剂的伯胺或仲胺基团或酰胺基)。这些杂原子可以存在于天然的结合剂中，或者可以借助于化学或分子生物学方法引入。根据本发明，结合剂与毒性基团的连接对结合剂与靶分子的结合活性几乎没有影响。在一个优选实施方案中，所述连接对结合剂与靶分子的结合活性没有影响。
术语“抗体”根据本发明在它的最宽的含义上进行理解，且包括免疫球蛋白分子，例子是完整的或改性的单克隆抗体、多克隆抗体或多特异性抗体(例如双特异性抗体)。免疫球蛋白分子优选地包括具有4条通常通过二硫桥连接的多肽链的分子，所述4条多肽链为2个重链(H链)和2个轻链(L链)。每个重链包含重链的可变结构域(缩写为VH)和重链的恒定结构域。重链的恒定结构域可以包括，例如，3个结构域CH1、CH2和CH3。每个轻链包含可变结构域(缩写为VL)和恒定结构域。轻链的恒定结构域包含一个结构域(缩写为CL)。所述VH和VL结构域可以进一步细分成具有高变异性的区域(也称为互补性决定区，缩写为CDR)，和具有低序列变异性的区域(“框架区”，缩写为FR)。每个VH和VL区域通常由3个CDR和至多4个FR组成。例如，从氨基端至羧基端按照下述次序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。抗体可以得自适合于所述抗体的任意物种，例如，兔、骆马、骆驼、小鼠或大鼠。在一个实施方案中，所述抗体具有人或鼠起源。抗体可以是例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
术语“单克隆的”抗体是指，已经从基本上同质的抗体的群体得到的抗体，即除了可能以小量发生的天然存在的突变以外为相同的群体的单个抗体。单克隆抗体会高特异性地识别单个抗原结合位点。术语“单克隆抗体”不表示特定生产方法。
术语“完整的”抗体表示这样的抗体：其不仅包含抗原结合域，而且包含轻链和重链的恒定结构域。所述恒定结构域可以是天然存在的结构域或其变体，在所述变体中，多个氨基酸位置已经改变。
术语“改性的完整的”抗体表示这样的完整抗体：其已经经由其氨基端或羧基端借助于共价键(例如肽键)与另一种非源自抗体的多肽或蛋白融合。此外，通过在确定的位置引入反应性的半胱氨酸，可以将抗体改性，从而促进与毒性基团的偶联(参见Junutula等人.Nat Biotechnol.2008年8月；26(8)：925-32)。
术语“人”抗体是指这样的抗体：其可以从人类得到，或者是合成的人抗体。“合成的”人抗体是这样的抗体：其部分地或者作为整体可从计算机合成序列(其基于人抗体序列的分析)得到。人抗体可以由例如核酸编码，所述核酸已经分离自具有人起源的抗体序列文库。这样的抗体的一个例子可以参见：等人，Nature Biotech.2000，18：853-856。
术语“人源化的”或“嵌合的”抗体描述了由非人序列组分和人序列组分组成的抗体。在这些抗体中，人免疫球蛋白(受体)的序列的一部分被非人免疫球蛋白(供体)的序列组分替代。在许多情况下，供体为鼠免疫球蛋白。对于人源化抗体，受体中的CDR的氨基酸被供体的氨基酸替代。在某些情况下，框架的氨基酸也被供体的对应氨基酸替代。在某些情况下，所述人源化抗体含有这样的氨基酸：其既不存在于受体中也不存在于供体中，且其在抗体优化过程中插入。在嵌合抗体的情况下，供体免疫球蛋白的可变结构域与人抗体的恒定区融合。
术语互补性决定区(CDR)在这里用于表示抗体可变结构域中的、与抗原结合所必需的那些氨基酸。每个可变区通常具有3个CDR区域，被鉴别为CDR1、CDR2和CDR3。每个CDR区域可以包含根据Kabat的定义的氨基酸和/或根据Chotia定义的高变环的氨基酸。根据Kabat的定义包括，例如，可变轻链的大约氨基酸位置24-34(CDR1)、50-56(CDR2)和89-97(CDR3)的区域，和可变重链的大约氨基酸位置31-35(CDR1)、50-65(CDR2)和95-102(CDR3)的区域(Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmulological Interest，第5版Public Health Service，National Institutes ofHealth，Bethesda，MD.(1991))。根据Chotia的定义包括，例如，可变轻链的大约氨基酸位置26-32(CDR1)、50-52(CDR2)和91-96(CDR3)的区域，和可变重链的大约氨基酸位置26-32(CDR1)、53-55(CDR2)和96-101(CDR3)的区域(Chothia和Lesk；J Mol Biol 196：901-917(1987))。在某些情况下，CDR可以包含来自如Kabat和Chotia定义的一个CDR区域的氨基酸。
根据重链的恒定结构域的氨基酸序列，可以将抗体分成不同的类别。存在5大类完整抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且它们中的许多可以进一步分成亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、igG3、IgG4、IgA1和IgA2。与不同类别相对应的重链的恒定结构域被鉴别为[alpha/α]、[delta/δ]、[epsilon/ε]、[gamma/γ]和[mu/μ]。抗体的三维结构和亚基结构是已知的。
术语抗体/免疫球蛋白的“功能片段”或“结合抗原的抗体片段”被定义为这样的抗体/免疫球蛋白的片段(例如IgG的可变结构域)：其进一步包括抗体/免疫球蛋白的抗原结合域。抗体的“抗原结合域”通常包括抗体的一个或多个高变区，例如CDR、CDR2和/或CDR3区域。但是，抗体的“框架”或“支架”区域也可以在抗体与抗原的结合方面起作用。框架区形成CDR的支架。抗原结合域优选地至少包括可变轻链的氨基酸4-103和可变重链的氨基酸5-109，更优选可变轻链的氨基酸3-107和可变重链的氨基酸4-111，特别优选的是完整可变轻链和重链，即VL的氨基酸1-109和VH的氨基酸1-113(根据WO97/08320编号)。
本发明的“功能片段”或“结合抗原的抗体片段”非最终性地包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段、双体、单结构域抗体(DAb)、直链抗体、抗体的单个链(单链Fv，缩写为ScFv)；和多特异性抗体，诸如双和三特异性抗体，例如，由抗体片段C形成。A.K Borrebaeck编(1995)Antibody Engineering(Breakthroughs in Molecular Biology)，Oxford University Press；R.Kontermann和S.Duebel，编(2001)Antibody Engineering(SpringerLaboratory Manual)，Springer Verlag)。除了“多特异性的”或“多功能的”抗体以外的抗体是具有相同结合位点的那些抗体。多特异性抗体可以对抗原的不同表位是特异性的，或者可以对超过一种抗原的表位是特异性的(参见，例如WO93/17715；WO 92/08802；WO 91/00360；WO 92/05793；Tutt，等人，1991，J.Immunol.147：6069；美国专利号4,474,893；4,7 14,68 1；4,925,648；5,573,920；5,601,819；或Kostelny等人，1992，J.Immunol.148：1547 1553)。可以构建F(ab’)2或Fab分子，从而可以减少或者完全阻止Ch1和CL结构域之间发生的分子间二硫键相互作用的数目。
“功能片段”或“结合抗原的抗体片段”可以经由其氨基端或羧基端借助于共价键(例如肽键)与另一种非源自抗体的多肽或蛋白融合。此外，通过在确定的位置引入反应性的半胱氨酸，可以将抗体和抗原结合片段改性，从而促进与毒性基团的偶联(参见Junutula等人.Nat Biotechnol.2008年8月；26(8)：925-32)。
通过本领域普通技术人员已知的方法，可以制备多克隆抗体。通过本领域普通技术人员已知的方法，可以制备单克隆抗体(和Milstein，Nature，256，495-497，1975)。通过本领域普通技术人员已知的方法，可以制备人和人源化的单克隆抗体(Olsson等人，Meth Enzymol.92，3-16或Cabilly等人US 4,816,567或Boss等人US 4,816,397)。
本领域普通技术人员知晓用于制备人抗体及其片段的不同方法，例如，借助于转基因小鼠(N Lonberg和D Huszar，Int Rev Immunol.1995；13(1)：65-93)或噬菌体展示技术(Clackson等人，Nature.1991 Aug15；352(6336)：624-8)。可以从重组抗体文库得到本发明的抗体，所述重组抗体文库由例如大量抗体(其从大量健康志愿者编译成)的氨基酸序列组成。借助于已知的重组DNA技术，也可以生产抗体。抗体的核酸序列可以通过常规测序得到，或者可从公众可接近的数据库得到。
“分离的”抗体或结合剂已经经过纯化，以除去细胞的其它组分。可能干扰诊断或治疗用途的细胞污染组分是，例如，细胞的酶、激素或其它肽或非肽组分。一种优选的抗体或结合剂是这样的：其与抗体或结合剂相比已经被纯化至超过95％的程度(例如通过Lowry方法、紫外-可见光光谱法或通过SDS毛细管凝胶电泳来确定)。此外，所述抗体已经被纯化至这样的程度：可能确定氨基端或内部氨基酸序列的至少15个氨基酸，或者其已经被纯化至同质性，所述同质性通过在还原或非还原条件下的SDS-PAGE来确定(可以借助于考马斯蓝染色或优选地通过银着色来确定检测)。但是，通常通过一个或多个纯化步骤来制备抗体。
术语“特异性结合”或“特异性地结合”表示结合预定的抗原/靶分子的抗体或结合剂。抗体或结合剂的特异性结合通常描述了具有至少10-7M的亲和力的抗体或结合剂，与不是预定抗原/靶分子或密切相关的抗原/靶分子的非特异性抗原/靶分子(例如牛血清白蛋白或酪蛋白)相比，所述抗体或结合剂对预定抗原/靶分子的亲和力高至少2倍。
对癌细胞抗原特异性的抗体可以由本领域普通技术人员借助于他或她熟悉的方法(例如重组表达)来制备，或者可以商业获得(例如从MerckKGaA，德国)。在癌症治疗中已知的商购可得抗体的例子是(西妥昔单抗，Merck KGaA)，(贝伐珠单抗，Roche)和(曲妥珠单抗，Genentech)。曲妥珠单抗是IgG1κ型重组人源化单克隆抗体，其在基于细胞的测定(Kd＝5nM)中以高亲和力结合人表皮生长受体的细胞外结构域。所述抗体在CHO细胞中重组生产。
本发明的一个优选主题是通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-50的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是结合FGFR2的结合剂，并且经由所述结合剂的硫原子键合至基团G，
AK2是结合FGFR2的结合剂，并且经由所述结合剂的氮原子键合至基团G，
G 在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的硫原子的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C1-C10)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C10)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键或(C2-C4)-烷二基，
L6是键或下式的基团
其中
##7表示与羰基的连接位点，
##8表示与L1B的连接位点，
R33是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
R34是氢或甲基，
R29是氢或(C1-C4)-烷基，
R30是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R29和R30与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R31是氢或(C1-C4)-烷基，
R32是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R31和R32与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
L1B是直链(C2-C10)-烷二基，
并且
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
L3是键或(C2-C4)-烷二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
R28是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
Q1是4-7元杂环，
Q2是3-7元碳环或4-7元杂环，
R14是氢或(C1-C4)-烷基，
R15是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R14和R15与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R16是氢或(C1-C4)-烷基，
R17是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R18是氢或(C1-C4)-烷基，
R19是氢或者天然α-氨基酸或其同系物或异构体的侧基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或(C1-C4)-烷基，
R22是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成3-7元碳环，
R23是(C1-C4)-烷基，
R24是氢或(C1-C4)-烷基，
R27是氢或(C1-C4)-烷基，
R36是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
R37是氢或甲基，
或者
R36和R37与它们所键合的原子一起形成吡咯烷环，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
本发明的优选主题是通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-20的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是结合FGFR2的结合剂，并且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是结合FGFR2的结合剂，并且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G 在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C6)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键，
L6是键或下式的基团
其中
##7表示与羰基的连接位点，
##8表示与L1B的连接位点，
R33是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R34是氢或甲基，
R29是氢，
R30是氢，
R31是氢或甲基，
R32是氢或甲基，
L1B是直链(C2-C6)-烷二基，
并且
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
Q1是4-7元杂环，
R14是氢，
R15是氢，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R18是氢，
R19是氢、甲基、丙烷-2-基、2-甲基丙烷-1-基或1-甲基丙烷-1-基，
R20是氢或甲基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或甲基，
R22是氢或甲基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成环丙基环，
R23是甲基，
R24是氢或甲基，
R27是氢，
R36是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R37是氢或甲基，
或者
R36和R37与它们所键合的原子一起形成吡咯烷环，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
本发明的优选主题是通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是结合FGFR2的结合剂，并且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是结合FGFR2的结合剂，并且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G 在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基、下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
Q1是哌啶-1，4-二基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R21是氢或甲基，
R22是氢或甲基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成环丙基环，
R23是甲基，
R24是氢，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHCH2苯基的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R35是甲基或羟基。
本发明的优选主题是通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK2，
其中
AK2是结合FGFR2的结合剂，并且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G是羰基，
L1是键，
B是键，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基、4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是苄基、4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢，
R9是氢或苄基，
R35是甲基。
本发明的优选主题是通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK1，
其中
AK1是结合FGFR2的结合剂，并且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
L1是键、直链(C3-C5)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C3-C5)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
L2是直链(C3-C5)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基、4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是苄基、4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢，
R9是氢或苄基，
R35是甲基。
本发明另外优选地提供了如上所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂包含在SEQ ID NO：14(Vl)和SEQ ID NO：13(Vh)中重现的、抗体M048-D01-hIgG1-b的可变轻链和重链的氨基酸序列，在SEQ ID NO：9(轻链)和SEQ ID NO：10(重链)中重现的、抗体M048-D01-hIgG1-b的轻链和重链的氨基酸序列。
本发明另外提供了式(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中
Cys是半胱氨酸残基，其经由侧链的硫原子键合至琥珀酰亚胺的碳原子，
L1是键、直链(C1-C10)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C10)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键或(C2-C4)-烷二基，
L6是键，
R29是氢或(C1-C4)-烷基，
R30是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R29和R30与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R31是氢或(C1-C4)-烷基，
R32是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R31和R32与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
L1B是直链(C2-C10)-烷二基，
并且
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
L3是键或(C2-C4)-烷二基，
L4是键，
Q1是4-7元杂环，
Q2是3-7元碳环或4-7元杂环，
R14是氢或(C1-C4)-烷基，
R15是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R14和R15与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R16是氢或(C1-C4)-烷基，
R17是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R18是氢或(C1-C4)-烷基，
R19是氢或天然α-氨基酸或其同系物或异构体的侧基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或(C1-C4)-烷基，
R22是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成3-7元碳环，
R23是(C1-C4)-烷基，
R24是氢或(C1-C4)-烷基，
R27是氢或(C1-C4)-烷基，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
在本发明范围内优选的另外还是式(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
Cys是半胱氨酸残基，其经由侧链的硫原子键合至琥珀酰亚胺的碳原子，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基、下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C6)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键，
L6是键，
R29是氢，
R30是氢，
R31是氢或甲基，
R32是氢或甲基，
L1B是直链(C2-C6)-烷二基，
并且
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键，
R14是氢，
R15是氢，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R23是甲基，
R24是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHCH2苯基的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R35是甲基或羟基。
在本发明范围内特别优选的另外还是式(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
Cys是半胱氨酸残基，其经由侧链的硫原子键合至琥珀酰亚胺的碳原子，
L1是键或直链(C2-C6)-烷二基，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键，
L4是键，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是苄基、4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢，
R8是氢，
R9是氢，
R35是甲基。
本发明另外提供了式(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中
L1是键、直链(C1-C10)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C10)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键或(C2-C4)-烷二基，
L6是键，
R29是氢或(C1-C4)-烷基，
R30是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R29和R30与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R31是氢或(C1-C4)-烷基，
R32是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R31和R32与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
L1B是直链(C2-C10)-烷二基，
并且
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
Q1是4-7元杂环，
Q2是3-7元碳环或4-7元杂环，
R18是氢或(C1-C4)-烷基，
R19是氢或者天然α-氨基酸或其同系物或异构体的侧基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或(C1-C4)-烷基，
R22是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成3-7元碳环，
R27是氢或(C1-C4)-烷基，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
在本发明范围内优选的还是式(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
R18是氢，
R19是甲基、丙烷-2-基、2-甲基丙烷-1-基或1-甲基丙烷-1-基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或甲基，
R22是氢或甲基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成环丙基环，
R27是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
并且
其中烷二基链的彼此处于1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHCH2苯基的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R35是甲基或羟基。
在本发明范围内特别优选的还是式(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是键，
B是键，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基、4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是苄基、4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢，
R8是氢，
R9是氢，
R35是甲基。
在本发明范围内优选的还是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK1
其中
AK1是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合FGFR2并经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
并且
n、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK2
其中
AK2是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合FGFR2并经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G是羰基，
并且
n、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK1
其中
AK1是结合剂，其结合FGFR2并且其经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
并且
n、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK2
其中
AK2是结合剂，其结合FGFR2并且其经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G是羰基，
并且
n、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是通式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK2
其中
AK2是结合剂，其结合FGFR2并且其经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G是羰基，
L1是键，
B是键，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
n、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是通式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK1
其中
AK1是结合剂，其结合FGFR2并且其经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
L1是键、直链(C3-C5)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C3-C5)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
L2是直链(C3-C5)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
并且
n、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是键，
B是键，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
并且
n、AK、Cys、G、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是直链(C1-C10)-烷二基或下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或(C2-C4)-烷二基，
L4是下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
R28是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
Q1是4-7元杂环，
R16是氢或(C1-C4)-烷基，
R17是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R23是(C1-C4)-烷基，
R24是氢或(C1-C4)-烷基，
R36是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
R37是氢或甲基，
或者
R36和R37与它们所键合的原子一起形成吡咯烷环，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
n、AK、G、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是直链(C2-C6)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R36是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R37是氢或甲基，
或者
R36和R37与它们所键合的原子一起形成吡咯烷环，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
并且
n、AK、G、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是式(Ia)和(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
L1是直链(C3-C5)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C3-C5)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键，
L2是直链(C3-C5)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
并且
n、AK1、Cys、D、R16和R17具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被取代甲氧基羰基或羧基
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
并且
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
并且
n、AK、Cys、G、L1、B、L2和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
并且
n、AK、Cys、G、L1、B、L2和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
R35是羟基，
并且
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内优选的还是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
R35是甲基，
并且
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
本发明的一个优选主题是通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中D可以具有下述结构，且＊代表与氮原子的连接位点：
本发明的一个优选主题是通式(Ia)的结合剂-药物缀合物和它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中D具有被本发明的中间体之一公开的结构；并且接头单元§-G-L1-B-L2-§§以及所有其它变量根据本发明进行定义。AK优选地是抗-FGFR2抗体或其抗原结合片段。
本发明的一个优选主题是通式(Ia)的结合剂-药物缀合物和它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中接头-药物单元具有被本发明的中间体或实施例之一公开的结构。AK优选地是抗-FGFR2抗体或其抗原结合片段。
本发明的一个优选主题是通式(Ia)的结合剂-药物缀合物和它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中接头-药物单元具有被本发明的实施例之一公开的结构。AK优选地是抗-FGFR2抗体或其抗原结合片段。
本发明的特别优选的主题是通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中
n是1-50的数字，
AK是结合FGFR2的结合剂，
基团§-G-L1-B-§§是接头，
其中
§表示与基团AK的连接位点，且
§§表示与氮原子的连接位点，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个甲基取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团，其中＊是与氮原子的连接位点
本发明的特别优选的主题是下式的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中AK是结合FGFR2的结合剂，且n是1-10的数字。优选的是，所述结合剂经由赖氨酸残基的NH侧基键合至接头-毒性基团单元。
本发明的特别优选的主题是下式的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中AK是结合FGFR2的抗体或抗体片段，且n是1-10的数字。优选的是，所述抗体或抗体片段经由所述抗体或抗体片段的赖氨酸残基的NH侧基键合至接头-毒性基团单元。
本发明的特别优选的主题是下式的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中AK2A是M048-D01-hIgG1，且n是1-10的数字。
本发明的另一个特别优选的主题是下式的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中AK2B是M048-D01-hIgG1-b，且n是1-10的数字。
在残基的各种组合和优选组合中单独指出的残基的定义也任意被其它组合的残基定义替代，所述替代独立于指出的各种残基组合。
特别优选的是2个或更多个上述优选范围的组合。
本发明另外提供了一种制备式(Ia)的本发明化合物的方法，其特征在于，将结合剂在PBS缓冲液中的溶液
[A]与合适的还原剂例如二硫苏糖醇或三(2-羧基乙基)膦盐酸盐混合，随后与式(IIa)的化合物反应
其中D、L1、B、L2和R35各自具有上面指出的定义，
以得到式(I-A)的化合物
其中n、AK1、D、L1、B、L2和R35各自具有上面指出的定义，
或者
[B]与式(IIIa)的化合物反应
其中D、L1、B、L2和R35各自具有上面指出的定义，
以得到式(Ia-B)的化合物
其中n、AK2、D、L1、B、L2和R35各自具有上面指出的定义。
半胱氨酸偶联：
根据技术人员已知的方法，参见例如Ducry等人，Bioconj.Chem.2010，21，5和其中的参考文献，Klussman等人，Bioconj.Chem.2004，15(4)，765-773，进行抗体的部分还原，以及随后(部分地)还原的抗体与式(IIa)的化合物的缀合。抗体的温和还原优选地如下实现：将2-6当量的TCEP加给抗体，所述抗体存在于合适的缓冲溶液、优选磷酸盐缓冲液中，并在15-40℃之间的温度(优选在室温)搅拌30-180分钟。这之后如下进行缀合：将式(IIa)的化合物在DMSO、乙腈或DMF中的溶液加入(部分地)还原的抗体在PBS缓冲液中的溶液中，随后在0℃至+40℃(更具体地+10℃至+30℃)的温度反应30分钟至6小时(更具体地1-2小时)的时段。
赖氨酸偶联：
首先，通过常规肽化学方法，制备式(IIIa)的化合物或可比较的活化的羧基组分。然后将它们溶解于惰性溶剂诸如DMSO或DMF中，例如，并加给抗体，所述抗体优选地存在于中性pH的磷酸盐缓冲液中。将该溶液在15-40℃之间的温度(优选室温)搅拌1-16h。
使用下面的路线图(路线图1和2)，通过实施例阐明了上述的制备方法：
路线图1
[a)：1.AK(抗体)，TCEP，PBS缓冲液，室温；2.加入在DMSO中的马来酰亚胺衍生物，室温]。
72
路线图2
[a)：AK(抗体)，PBS缓冲液，在室温与接头-药物组分的活化的羧基衍生物混合]。
可以如下制备式(II)的化合物，其中L1和B是键：
将式(IV)的化合物
其中D具有上面指出的定义，
在惰性溶剂中用式(V)的化合物进行还原胺化
其中
L2A具有上面定义的L2的定义，但是其烷基链长度缩短了1个碳原子，
PG1是氨基保护基，例如，(9H-芴-9-基甲氧基)羰基、叔丁氧基羰基或苄氧基羰基，
得到式(VI)的化合物
其中D、L2和PG1具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基PG1，并使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱存在下与2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯反应，得到式(II-A)的化合物
其中D和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(II)的化合物，其中B是式(B1)的基团
其中＊、＊＊、R14和R15各自具有上面指出的条件，
通过技术人员已知的方法，从式(VI)的化合物消除保护基PG1，并使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱存在下与式(VII)的化合物反应
其中L1具有上面指出的定义，
得到式(II-B)的化合物
其中D、L1和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(II)的化合物，其中B是式(B2)的基团
其中＊、＊＊、L3、R16和R17各自具有上面指出的条件：
将式(IV)的化合物在惰性溶剂中用式(VIII)的化合物进行还原胺化
其中
L2A具有上面定义的L2的定义，但是其烷基链长度缩短了1个碳原子，
得到式(IX)的化合物
其中D和L2具有上面指出的定义，
和使该化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(X)的化合物反应，
其中L1和L3各自具有上面指出的定义，
得到式(II-C)的化合物
其中D、L1、L2和L3各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(II)的化合物，其中B是式(B3)的基团
其中＊、＊＊、L3、R16和R17各自具有上面指出的条件，且
L4A是下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱和合适的偶联剂存在下与式(XI-A)或(XI-B)的化合物反应
其中R25和PG1各自具有上面指出的定义，且
PG2是合适的羧基-保护基，更具体地是苄基，
得到化合物(XII-A)或(XII-B)
其中D、PG1、PG2和L2具有上面指出的定义，
随后，通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基PG2，并使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(X)的化合物反应，最后，通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基PG1，得到式(II-D-A)或(II-D-B)的化合物
其中D、L1、L2和L3具有上面指出的定义。
可以如下制备式(II)的化合物，其中B是式(B4)的基团
其中＊、＊＊各自具有上面指出的条件，且
Q1A是N-连接的4-7元杂环，
使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱和合适的偶联剂存在下与式(XXI)的化合物反应
其中PG1和Q1A各自具有上面指出的定义，
得到式(XXII)的化合物
其中PG1、Q1A、D和L2具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基PG1，随后使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(XXIII)的化合物反应
其中L1具有上面指出的定义，
得到式(II-D)的化合物
其中Q1A、D、L1和L2具有上面指出的定义。
可以如下制备式(III)的化合物，其中L1和B是键：使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与N-羟基琥珀酰亚胺反应，得到式(III-A)的化合物
其中D和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(III)的化合物，其中L1是键，且B是式(B5A)的基团
其中＊、＊＊和P各自具有上面指出的定义，且
Q2A是3-7元碳环，
使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(XIII)的化合物反应
其中P、Q2A和PG2各自具有上面指出的定义，
得到式(XIV)的化合物
其中D、P、Q2A、L2和PG2各自具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基PG2，随后使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱存在下与N-羟基琥珀酰亚胺反应，得到式(III-B)的化合物
其中D、P、Q2A和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(III)的化合物，其中L1是键，且B是式(B6)的基团
其中＊、＊＊、R18、R19和R20各自具有上面指出的定义，
使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(XV)的化合物反应
其中R18、R19、R20和PG2各自具有上面指出的定义，
得到式(XVI)的化合物
其中D、R18、R19、R20、L2和PG2各自具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基PG2，随后使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与N-羟基琥珀酰亚胺反应，得到式(III-C)的化合物
其中D、R18、R19、R20和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(III)的化合物，其中L1是键，且B是式(B7)的基团
其中＊、＊＊、R21和R22各自具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从式(VI)的化合物消除保护基PG1，并使得到的去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱存在下与式(XVII)的化合物反应
其中R21和R22各自具有上面指出的定义，
得到式(III-D)的化合物
其中D、R21、R22和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(III)的化合物，其中B是式(B8)的基团
其中＊、＊＊、R23和R24各自具有上面指出的定义，
使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(XVIII)的化合物反应
其中R23、R24和PG1各自具有上面指出的定义，
得到式(XIX)的化合物
其中D、R23、R24、L2和PG1各自具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基PG1，随后使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(XX)的化合物反应
其中
L1A是直链(C1-C10)-烷二基或是下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个甲基取代基取代，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
得到式(III-E)的化合物
其中D、R23、R24、L1A和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(III)的化合物，其中B是式(B5B)的基团
其中＊和＊＊各自具有上面指出的定义，并且
Q2B是N-连接的4-7元杂环，
使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱和合适的偶联剂存在下与式(XXIV)的化合物反应
其中PG1和Q2B各自具有上面指出的定义，
得到式(XXV)的化合物
其中PG1、Q2B、D和L2具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基PG1，
并随后将去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱存在下用式(XX)的化合物转化成式(III-F)的化合物
其中Q2B、D、L1A和L2具有上面指出的定义。
任选地在有作为催化剂的酸和/或除水剂存在下，在溶剂中进行反应(IV)+(V)→(VI)和(IV)+(VIII)→(IX)，所述溶剂是还原胺化的常规溶剂，且在反应条件下是惰性的。这样的溶剂包括，例如，醇类诸如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇，醚类诸如四氢呋喃、1，4-二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷或双(2-甲氧基乙基)醚，或其它溶剂诸如二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、N，N-二甲基甲酰胺或者水。也可能使用这些溶剂的混合物。优选的是，使用1，4-二噁烷/水混合物作为溶剂，并加入乙酸或稀盐酸作为催化剂。
适合用于该反应的还原剂具体地是，硼氢化物复合物，例如，硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、四正丁基硼氢化铵或硼烷-吡啶复合物。优选的是，使用氰基硼氢化钠或硼烷-吡啶复合物。
通常在0℃至+120℃的温度范围，优选地在+50℃至+100℃，进行反应(IV)+(V)→(VI)和(IV)+(VIII)→(IX)。所述反应可以在常压、增压或减压(例如0.5-5巴)下进行；通常在常压下进行。
通过标准的肽化学方法[参见例如M.Bodanszky，Principles of PeptideSynthesis，Springer-Verlag，Berlin，1993；M.Bodanszky和A.Bodanszky，The Practice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，Berlin，1984；H.-D.Jakubke和H.Jeschkeit，，Peptide，Proteine，Verlag Chemie，Weinheim，1982]，进行上述的偶联反应(IX)+(X)→(II-C)、(XII-A)或(XII-B)+(X)→(II-D-A)或(II-D-B)、(IX)+(XIII)→(XIV)、(IX)+(XV)→(XVI)和(XXII)+(XXIII)→(II-D)(分别从胺组分和羧酸组分形成酰胺)。
用于这些偶联反应的惰性溶剂的例子是：醚类诸如二乙基醚、二异丙基醚、叔丁基甲基醚、四氢呋喃、1，4-二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷或双(2-甲氧基乙基)醚，烃类诸如苯、甲苯、二甲苯、戊烷、己烷、庚烷、环己烷或石油馏分，卤代烃类诸如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1，2-二氯乙烷、三氯乙烯或氯苯，或偶极非质子溶剂类诸如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲亚砜(DMSO)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)、N，N′-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)。也可以使用这样的溶剂的混合物。优选的是，使用N，N-二甲基甲酰胺。
用于这些偶联的合适的活化剂/缩合剂的例子包括：碳二亚胺类诸如N，N′-二乙基碳二亚胺、N，N′-二丙基碳二亚胺、N，N′-二异丙基碳二亚胺、N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)或N-(3-二甲基氨基异丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，光气衍生物类诸如N，N′-羰基二咪唑(CDI)或氯甲酸异丁酯，1，2-噁唑鎓化合物类诸如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓3-硫酸盐或2-叔丁基-5-甲基异噁唑鎓高氯酸盐，酰基氨基化合物类诸如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉，磷化合物类诸如丙烷膦酸酸酐、氰基膦酸二乙酯、双(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐或苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐(PyBOP)，或脲鎓化合物类诸如O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)、O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)、2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TPTU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)或O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓-四氟硼酸盐(TCTU)，上述试剂任选地与其它助剂诸如1-羟基苯并三唑(HOBt)或N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)相组合，以及，作为碱，碱金属碳酸盐，例如碳酸钠或碳酸钾，或叔胺碱诸如三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、N，N-二异丙基乙胺、吡啶或4-N，N-二甲基氨基吡啶。
在本发明范围内，作为用于这样的偶联反应的活化剂/缩合剂，优选的是，使用与1-羟基苯并三唑(HOBt)和N，N-二异丙基乙胺相组合的N-(3-二甲基氨基异丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，或者同样与N，N-二异丙基乙胺相组合的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)。
通常在-20℃至+60℃的温度范围，优选地在0℃至+40℃，进行偶联反应(IX)+(X)→(II-C)、(XII-A)或(XII-B)+(X)→(II-D-A)或(II-D-B)、(IX)+(XIII)→(XIV)、(IX)+(XV)→(XVI)和(XXII)+(XXIII)→(II-D)。所述反应可以在常压、增压或减压(例如0.5-5巴)下进行；通常在常压下进行。
与上述的酰胺偶联反应类似地进行酯化反应(IX)+(XVIII)→(XII)和(IX)+(XI-A)或(XI-B)→(XII-A)或(XII-B)、(IX)+(XXIV)→(XXV)以及(IX)+(XXI)→(XXII)。优选地，使用N-(3-二甲基氨基异丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和4-二甲基氨基吡啶，在+50℃至100℃的温度，在常压下，在二氯甲烷中进行这些反应。
如果有用或需要的话，在上述方法步骤中，任选地存在于化合物中的官能团(具体而言，诸如氨基、羟基和羧基)还可以以暂时受保护的形式存在。在这些情况下，根据肽化学中已知的常规方法引入和除去这样的保护基[参见，例如，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in OrganicSynthesis，Wiley，New York，1999；M.Bodanszky和A.Bodanszky，ThePractice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，Berlin，1984]。当存在两个或更多个受保护的基团时，任选地也可在单釜式反应中同时将所述受保护的基团释放，或者也可以在分开的反应步骤中释放。
优选使用叔丁氧基羰基(Boc)，苄氧基羰基(Z)或(9H-芴-9-基甲氧基)羰基(Fmoc)作为氨基保护基PG1；对于羟基或羧基官能团，优选使用叔丁基或苄基作为保护基PG2。叔丁基或叔丁氧基羰基基团的消除通常是在惰性溶剂中通过使用强酸处理来完成，所述强酸包括例如盐酸、氢溴酸或三氟乙酸，所述惰性溶剂包括例如乙醚、1，4-二噁烷、二氯甲烷或乙酸；任选地，该反应还可在不加入惰性溶剂的情况下进行。在苄基或苄氧基羰基作为保护基的情况下，该基团优选在存在合适的钯催化剂的条件下通过氢解来除去，所述钯催化剂包括例如负载在活性炭上的钯。(9H-芴-9-基甲氧基)羰基通常使用仲胺碱(例如二乙基胺或哌啶)来除去。
反应(VI)→(II-A)在溶剂中进行，所述溶剂在反应条件下为惰性的，例如，醚类诸如四氢呋喃、1，4-二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷或双(2-甲氧基乙基)醚，醇类诸如甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇，或偶极非质子溶剂类诸如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲亚砜(DMSO)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)、N，N′-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)或水。也可以使用这样的溶剂的混合物。优选的是，使用1，4-二噁烷和水的混合物。
对于反应(VI)→(II-A)而言合适的碱是，例如，碱金属碳酸盐诸如碳酸钾、碳酸钠或碳酸锂，碱金属碳酸氢盐诸如碳酸氢钠或碳酸氢钾，或碱金属烷醇盐诸如甲醇钠、乙醇钠或叔丁醇钾。优选的是，使用碳酸氢钠。
反应(VI)→(II-A)在0℃至+50℃的温度范围内进行，优选地在+10℃至+30℃。所述反应可以在常压下、在增压下或在减压下(例如0.5-5巴)下进行；通常在常压下进行。
反应(VI)+(VII)→(II-B)在溶剂中进行，所述溶剂在反应条件下为惰性的，例如，醚类诸如四氢呋喃、1，4-二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷或双(2-甲氧基乙基)醚，醇类诸如甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇，或偶极非质子溶剂类诸如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲亚砜(DMSO)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)、N，N′-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)或水。也可以使用这样的溶剂的混合物。优选的是，使用DMF。
对于反应(VI)+(VII)→(II-B)而言合适的碱是，例如，叔胺碱类诸如三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、N，N-二异丙基乙胺、吡啶或4-N，N-二甲基氨基吡啶。优选的是，使用N，N-二异丙基乙胺。
反应(VI)+(VII)→(II-B)在0℃至+50℃的温度范围内进行，优选地在+10℃至+30℃。所述反应可以在常压下、在增压下或在减压下(例如0.5-5巴)下进行；通常在常压下进行。
反应(IX)→(III-A)、(XIV)→(III-B)和(XVI)→(III-C)以及(VI)+(XVII)→(III-D)、(XIX)+(XX)→(III-E)和(XXV)+(XX)→(III-F)在溶剂中进行，所述溶剂在反应条件下为惰性的。合适的溶剂的例子是：醚类诸如二乙基醚、二异丙基醚、叔丁基甲基醚、四氢呋喃、1，4-二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷或双(2-甲氧基乙基)醚，烃类诸如苯、甲苯、二甲苯、戊烷、己烷、庚烷、环己烷或石油馏分，卤代烃类诸如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1，2-二氯乙烷、三氯乙烯或氯苯，或偶极非质子溶剂类诸如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲亚砜(DMSO)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)、N，N′-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)。也可以使用这样的溶剂的混合物。优选的是，使用N，N-二甲基甲酰胺。
对于这些反应而言合适的碱是，例如，叔胺类诸如三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、N，N-二异丙基乙胺、吡啶或4-N，N-二甲基氨基吡啶。优选的是，使用N，N-二异丙基乙胺，任选地加入4-N，N-二甲基氨基吡啶。
反应(IX)→(III-A)、(XIV)→(III-B)和(XVI)→(III-C)以及(VI)+(XVII)→(III-D)和(XIX)+(XX)→(III-E)在0℃至+50℃的温度范围内进行，优选地在+10℃至+30℃。所述反应可以在常压下、在增压下或在减压下(例如0.5-5巴)下进行；通常在常压下进行。
式(II)和(III)的化合物分别属于式(IIa)和(IIIa)的化合物，其中R35是甲基。与如上所述的式(II)和(III)的化合物的制备类似地，进行化合物(IIa)和(IIIa)的制备。
通过例如下述合成路线图(路线图3-13、18)解释了上述方法：
路线图3
[a)：1.水/二噁烷，1N HCl，100℃；2.H2，Pd/C，甲醇，室温；b)：NaHCO3，H2O，二噁烷，室温]。
路线图4
[a)：二异丙基乙胺，DMF，室温]。
路线图5
[a)：水/二噁烷，1N HCl，100℃；b)：HATU，二异丙胺，DMF，室温]。
路线图6
[a)：1.EDCI，DMAP，二氯甲烷，室温；2.H2，甲醇，室温；b)：1.EDCI，HOBt，二异丙胺，DMF，室温；2.二氯甲烷，室温]。
路线图7
[a)：1.EDCI，DMAP，二氯甲烷，室温；2.H2，甲醇，室温；b)：HATU，二异丙胺，DMF，室温]。
路线图8
[a)：EDCI，二氯甲烷，室温]。
路线图9
[a)：HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.H2，甲醇，室温；b)：EDCI，DMAP，二氯甲烷，室温]。
路线图10
[a)：1.HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.二氯甲烷，室温；b)：EDCI，DMAP，二氯甲烷，室温]。
路线图11
[a)：二异丙基乙胺，DMF，室温]。
路线图12
[a)：1.EDCI，DMAP，二氯甲烷，室温；2.二氯甲烷，室温；b)：二异丙胺，DMAP，二氯甲烷，室温]。
路线图13
[a)：DMAP，二异丙胺，二氯甲烷，室温]。
路线图18
[a)：1.水/二噁烷，1N HCl，100℃；2.H2，Pd/C，甲醇，室温；b)：HATU，二异丙基乙胺，室温]。
与从文献已知的方法类似地，根据常规肽化学方法，且如实验部分中所述，从商购可得的氨基酸结构单元或由文献已知的那些结构单元，可以制备式(IV)的化合物(参见，例如，Pettit等人，Synthesis1996，719；Shioiri等人，Tetrahedron Lett.1991，32，931；Shioiri等人，Tetrahedron1993，49，1913；Koga等人，Tetrahedron Lett.1991，32，2395；Vidal等人，Tetrahedron2004，60，9715；Poncet等人，Tetrahedron 1994，50，5345.Pettit等人，J.Org.Chem.1994，59，1796)。下面的合成路线图(路线图14-16)作为示例解释了制备。
路线图14
[a)：盐酸羟胺，KOH，MeOH，0℃→室温；b)：BrCH2(CH2)2CH2Br，K2CO3，丙酮，回流]。
路线图15
[a)：1.二异丙基乙胺，BEP，二氯甲烷，-10℃→室温；2.MeOH]。
路线图16
[a)：1.二异丙基乙胺，BEP，DMF，室温；2.二氯甲烷；b)：1.HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.二氯甲烷，室温；c)：1.HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.哌啶，DMF，室温]。
式(XI)、(XIII)、(XV)、(XVII)和(XXI)的化合物(如果合适，包括其手性或非对映异构体形式)是市售可得的或如文献中所述的此类化合物，或者其可通过对本领域技术人员显而易见的方式，以与文献中公开的方法类似的方法进行制备。在关于起始化合物和中间体的制备的部分中，实验部分还给出了许多关于起始原料制备的详尽的说明和文献信息。
式(V)、(VII)、(VIII)、(X)、(XVIII)、(XX)和(XXIII)的化合物(如果合适，包括其手性或非对映异构体形式)是从文献中已知的，或者其可通过对本领域技术人员显而易见的方式，以与文献中公开的方法类似的方法进行制备。在关于起始化合物和中间体的制备的部分中，实验部分还给出了许多关于起始原料制备的详尽的说明和文献信息。
可替换地，制备顺序的各个步骤可以以不同的次序或用其它保护基组合进行。在下面的合成路线图(路线图17、19、20和21)中作为示例解释了该方案。
路线图17
[a)：硼烷-吡啶复合物，乙酸，MeOH；b)：1.HOBt，EDCI，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.TFA，二氯甲烷，室温；c)：HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；d)：1.Pd/C，MeOH，室温；2.NaHCO3，二噁烷，水]。
路线图19
[a)：1.HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.TFA，二氯甲烷，室温；3.((H3C)3C(C＝O))2O，DMF，二异丙基乙胺；b)：二异丙基乙胺，BEP，DMF，室温；c)：1.H2，Pd/C(10％)，甲醇，室温；2.HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；3.TFA，二氯甲烷，室温]。
路线图20
[a)：硼烷-吡啶复合物，乙酸，MeOH；b)：1.HOBt，EDCI，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.TFA，二氯甲烷，室温；3.H2，Pd/C，MeOH，室温c)：1.NaHCO3，二噁烷，水；d)：HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温]。
路线图21
[a)：1.HOBt，EDCI，二异丙基乙胺，DMF，室温；b)H2，Pd/C，MeOH，室温；c)硼烷-吡啶复合物，乙酸，MeOH；d)TFA，二氯甲烷，室温；e)：HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；f)：HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；g)H2，Pd/C，MeOH，室温]。
本发明的结合剂的FGFR2癌症靶分子是技术人员已知的。全长FGFR2被鉴别为FGFR2α(SEQ ID NO：1)，而缺失D1结构域的异形体被鉴别为FGFR2β(SEQ ID NO：2)(参见图1)。在结构域3中的选择性剪接会产生2种不同的变体，即FGFR2IIIb(其由外显子7和8编码)和FGFR2IIIc(其由外显子7和9编码)(参见图1)。
在本发明的一个实施方案中，所述结合剂优选地特异性地结合FGFR2。在本发明的另一个主题中，所述结合剂优选地特异性地结合靶分子FGFR2的细胞外结构域(参见图1)。
在本发明的另一个实施方案中，所述结合剂优选地特异性地结合人FGFR2多肽的一种或多种形式。在本发明的另一个主题中，所述结合剂优选地特异性地结合FGFR2的所有异形体和剪接变体。在下文中，FGFR2的不同“形式”的概念包括、但不限于，不同的异形体、不同的剪接变体、不同的糖型或发生不同的翻译和翻译后修饰的FGFR2多肽。
在本发明的另一个实施方案中，所述结合剂优选地特异性地结合癌症靶分子FGFR2的N-端结构域。在本发明的另一个主题中，所述结合剂优选地特异性地结合FGFR2的细胞外N-端表位(1RPSFSLVEDTTLEPE15)(SEQ ID NO：23)。
在本发明的另一个实施方案中，所述结合剂也优选地特异性地结合不同物种的FGFR2。其结果是，可以在这些物种中更容易地在药理学上研究本发明的缀合物。优选的物种是啮齿类动物，更具体地是小鼠或大鼠，但是也包括狗、猪和非人灵长类动物。
在一个优选实施方案中，所述结合剂在结合靶细胞上的FGFR2以后，作为所述结合的结果，被靶细胞内化。其结果是，靶细胞摄入结合剂-药物缀合物(其可以是免疫缀合物或ADC)。
在一个实施方案中，所述结合剂是结合蛋白。在一个优选实施方案中，结合剂是抗体、结合抗原的抗体片段、多特异性抗体或抗体模拟物。
优选的抗体模拟物是亲和体(affibodies)、adnectins、anticalins、DARPins、亲和体(avimers)或纳米抗体(nanobodies)。优选的多特异性抗体是双特异性的和三特异性抗体。
在一个优选实施方案中，所述结合剂是抗体或结合抗原的抗体片段，更优选地是分离的抗体或分离的结合抗原的抗体片段。
优选的结合抗原的抗体片段是Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段、双体、DAb、直链抗体和scFv。特别优选的是Fab、双体和scFv。
在一个特别优选的实施方案中，结合剂是抗体。特别优选的是单克隆抗体或其结合抗原的抗体片段。进一步特别优选的是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体或其结合抗原的抗体片段。
在一个优选的实施方案中，所述抗体或所述抗原结合片段包含抗体M048-D01-hIgG1的可变轻链和重链的CDR序列的氨基酸序列。
在另一个优选的实施方案中，所述抗体或所述抗原结合片段包含在SEQ ID NO：15(H-CDR1)、SEQ ID NO：16(H-CDR2)、SEQ ID NO：17(H-CDR3)、SEQ ID NO：18(L-CDR1)、SEQ ID NO：19(L-CDR2)和SEQID NO：20(L-CDR3)中表示的、抗体M048-D01-hIgG1的可变轻链和重链的CDR序列的氨基酸序列。
在另一个优选的实施方案中，所述抗体或所述抗原结合片段包含抗体M048-D01-hIgG1或M048-D01-hIgG1-b的可变轻链和重链的氨基酸序列。
在另一个优选的实施方案中，所述抗体或所述抗原结合片段包含在SEQ ID NO：12(Vl)和SEQ ID NO：11(Vh)中表示的抗体M048-D01-hIgG1的可变轻链和重链的氨基酸序列，或在SEQ ID NO：14(Vl)和SEQ ID NO：13(Vh)中表示的抗体M048-D01-hIgG1-b的可变轻链和重链的氨基酸序列。
在另一个特别优选的实施方案中，所述抗体或所述抗原结合片段包含在SEQ ID NO：14(Vl)和SEQ ID NO：13(Vh)中表示的、抗体M048-D01-hIgG1-b的可变轻链和重链的氨基酸序列。
在另一个特别优选的实施方案中，所述抗体包含在SEQ ID NO：9(轻链)和SEQ ID NO：10(重链)中表示的、抗体M048-D01-hIgG1-b的轻链和重链的氨基酸序列。
在另一个特别优选的实施方案中，所述抗体包含在SEQ ID NO：7(轻链)和SEQ ID NO：8(重链)中表示的、抗体M048-D01-hIgG1的轻链和重链的氨基酸序列。
其它FGFR2抗体的例子是在本发明中描述的GAL-FR21-mIgG1(SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4)和GAL-FR22-mIgG2a(SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6)抗体。最后提及的2种抗体基于WO2010/054265从其中描述的抗体GAL-FR21(得自WO2010/054265的SEQ ID NO：1和SEQ IDNO：4)和GAL-FR22(得自WO2010/054265的SEQ ID NO：7和SEQ IDNO：8)的轻(Vl)和重(Vh)链的可变区构建，其中已经将GAL-FR21的可变区重新格式化成mIgG1形式，同时将GAL-FR22的可变区重新格式化成mIgG2a形式。
本领域普通技术人员使用已知的方法，例如，化学合成或重组表达，可以制备结合癌症靶分子的抗体或结合抗原的抗体片段。癌症靶分子的结合剂可以商业获得，或者可以由本领域普通技术人员使用已知的方法(例如，化学合成或重组表达)制备。在WO 2007070538(参见第22页“抗体”)中描述了用于制备抗体或结合抗原的抗体片段的其它方法。技术人员知晓如何编辑诸如噬菌体展示文库等方法(例如Morphosys HuCAL Gold)并用于发现抗体或结合抗原的抗体片段(参见WO 2007070538，第24页及以后页，和第70页的实施例1，第72页的实施例2)。在例如第26页(WO 2007070538)描述了使用得自B-细胞的DNA文库制备抗体的其它方法。用于人源化抗体的方法描述于WO2007070538的第30-32页，并且更详细地描述于Queen，等人，Pros.Natl.Acad.Sci.USA 86：10029-10033，1989或WO 90/0786。此外，用于重组表达一般蛋白和特别是抗体的方法是技术人员已知的(参见，例如，Berger和Kimrnel(Guide to MolecularCloningTechniques，Methods in Enzymology，第152卷，Academic Press，Inc.)；Sambrook，等人，(Molecular Cloning：A Laboratory Manual，(第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press；Cold Spring Harbor，N.Y.；1989)第1-3卷)；Current Protocols in Molecular Biolony，(F.M.Ausabel等人.[编]，Current Protocols，Green Publishing Associates，Inc./John Wiley&Sons，Inc.)；Harlow等人，(MonocIonal Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press(19881，Paul[编])；FundamentalImmunology，(Lippincott Williams&Wilkins(1998))；和Harlow，等人，(Using Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor LaboratoryPress(1998))。技术人员知晓蛋白/抗体的表达所必需的对应载体、启动子和信号肽。常规方法还描述于WO 2007070538的第41-45页。用于制备IgG1抗体的方法描述于例如WO 2007070538中的第74ff页的实施例6。允许确定抗体在与它的抗原结合以后的内化的方法是技术人员已知的，且描述于例如WO 2007070538的第80页。技术人员能够使用在WO 2007070538中描述的方法，所述方法已经被用于制备碳酸酐酶IX(Mn)抗体，其与具有不同靶分子特异性的抗体的制备类似。
FGFR2结合剂的其它例子是在WO2007144893中描述的单链Fv抗体片段PRO-007(以高亲和力结合FGFR2)和PRO-001(以高亲和力结合FGFR3和以低亲和力结合FGFR2)。
本发明的化合物具有有价值的药理学性能，且可以用于预防和治疗人类和动物的疾病。
本发明的式(Ia)的结合剂-药物缀合物(ADC)表现出对肿瘤细胞的较高的且特异性的细胞毒性活性，这可以基于在实验部分(部分C)中阐述的测定来证实。本发明的式(Ia)的结合剂-药物缀合物(ADC)的这种较高的且特异性的细胞毒性活性通过用接头对新的N，N-二烷基耳他汀衍生物和结合剂的适当组合来实现，所述接头不仅表现出酶促地、水解地或还原地可切割的预定断裂点(用于释放毒性基团)，而且没有这样的预定断裂点。更具体地，通过使用稳定接头，非常特异性地限制对肿瘤细胞的活性，所述接头不具有酶促地、水解地或还原地可切割的预定断裂点(用于释放毒性基团)，并且其在ADC被摄入肿瘤细胞中以后和在抗体的完全细胞内酶促断裂以后仍然保持完全或部分完整性。ADC和稳定接头之间的相容性预先假定，尤其是，可以以足够的效力形成在细胞内形成的代谢物，其能够到达它们的靶标，且能够在那里以足够的效能发挥它们对靶标的抗增殖活性，无需预先再次用转运蛋白等蛋白对肿瘤细胞实现。ADC与稳定接头化学和与目标靶标的这样的相容性会提供扩大的治疗窗(参见，例如，L.Ducry，Bionconjugate Chem.2010，21-5；A.G.Polson，Cancer Res.2009，69，2358)。
更具体地，本发明的式(Ia)的结合剂-药物缀合物对表达FGFR2的肿瘤细胞表现出较高的且特异性的细胞毒性活性。同时，对不表达FGFR2的肿瘤细胞的活性显著更弱。
基于性质的这些概况，因此本发明化合物通常在一定程度上适合于治疗人和哺乳动物的过度增生性疾病。所述化合物在一方面能够抑制、阻断、减少或降低细胞增殖和细胞分裂，在另一方面，其可增加细胞凋亡。
可使用本发明化合物治疗的过度增生性疾病具体包括癌症和肿瘤疾病组。在本发明范围内，具体而言，所述疾病应理解为包括、但不限于以下疾病：乳腺癌和乳腺肿瘤(导管和小叶形式，也是原位的、三阴性的、HER2-阴性的)、呼吸道肿瘤(小细胞癌和非小细胞癌，支气管癌)、脑肿瘤(例如，脑干的脑肿瘤和下丘脑的脑肿瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤以及神经外胚层肿瘤和松果体肿瘤)、消化器官的肿瘤(食道、食管胃连接部(＝EGJ)的癌、胃(弥散和肠形式)、胆囊、小肠、大肠、直肠)、肝肿瘤(包括肝细胞癌、胆管细胞癌和混合的肝细胞和胆管细胞癌)、头部和颈部区域的肿瘤(喉、下咽、鼻咽、口咽、唇和口腔)、皮肤肿瘤(鳞状上皮癌、卡波西肉瘤、恶性黑素瘤、梅克尔细胞皮肤癌和非黑色素瘤的皮肤癌)、软组织肿瘤(包括软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤和横纹肌肉瘤)、眼睛的肿瘤(包括眼内黑素瘤和视网膜母细胞瘤)、内分泌腺和外分泌腺(例如甲状腺和甲状旁腺、胰腺和唾液腺)的肿瘤、泌尿道的肿瘤(膀胱、阴茎、肾、肾盂和输尿管的肿瘤)以及生殖器官的肿瘤(女性的子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌和子宫癌，男性的前列腺癌和睾丸癌)。这些还包括呈固体形式的和作为循环血细胞的增殖性血液疾病，例如淋巴瘤、白血病和骨髓增生性疾病，例如，急性髓系白血病、急性淋巴母细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和毛细胞白血病，以及艾滋病相关的淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤和中枢神经系统的淋巴瘤。
抗-FGFR2结合剂-药物缀合物的优选过度增生性疾病
本发明的化合物优选地可以用于治疗的过度增生性疾病是表达FGFR2的肿瘤，例如，胃癌(肠和弥散型)，环状体癌(特别是弥散型)，食道癌，食管胃连接部(EGJ)的癌症，乳腺癌，大肠癌，结肠直肠癌，直肠癌，前列腺癌，肾癌，头颈区域的癌，胰腺癌，肝癌，宫颈癌，卵巢癌，子宫内膜癌(更具体地是子宫内膜样类型、乳头状血清类型或透明细胞亚型)，肺癌(更具体地是非小细胞肺癌(NSCLC))，腺癌，鳞状癌，和胰腺癌。
这些人类的确定地描述的疾病也可以与可比较的病原学一起发生在其它哺乳动物中，且可以用本发明的化合物进行治疗。
在本发明范围内，术语“治疗”或“处理”表示其常规含义，意在表示护理、管理和支持患者，目的在于对抗、减轻、减弱或缓解疾病或健康缺陷，改善受该疾病不利影响的生活状况(例如，在癌性疾病的情况下)。
本发明此外提供了本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病、尤其是上述疾病的用途。
本发明此外提供了本发明的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防疾病、尤其是上述疾病。
本发明此外提供了本发明的化合物在用于治疗和/或预防疾病、尤其是上述疾病的方法中的用途。
本发明此外提供了一种用于治疗和/或预防疾病、尤其是上述疾病的方法，其中使用有效量的至少一种本发明的化合物。
根据本发明的化合物可单独使用，或者如果需要的话，与一种或多种其它药理学活性物质联用，只要该联用不会导致不希望的和不可接受的副作用即可。因此，本发明还提供了药物，该药物包括至少一种本发明化合物以及一种或多种其它药物，具体而言，本发明药物用于治疗和/或预防上述疾病。
例如，本发明化合物可与已知的用于治疗癌性疾病的抗过度增生的、细胞生长抑制性的或细胞毒性的物质联用。作为示例，联用中可提及的合适的药物如下：
阿地白介素、阿仑膦酸、干扰素、阿利维A酸、别嘌醇、别嘌醇钠、帕洛诺司琼(aloxi)、六甲蜜胺、氨鲁米特、氨磷汀、氨柔比星、安吖啶、阿那曲唑、甲磺酸多拉司琼、阿法达贝泊汀(aranesp)、阿格拉宾、三氧化二砷、阿诺新、5-氮胞苷、硫唑嘌呤、卡介苗(BCG)或tice种卡介苗(tice-BCG)、苯丁抑制素、醋酸倍他米松、倍他米松磷酸钠、贝沙罗汀、硫酸博来霉素、溴尿苷、硼替佐米、白消安、降钙素、阿仑单抗(campath)、卡培他滨、卡铂、康士得、赛孚松(cefesone)、西莫白介素、柔红霉素、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯屈膦酸、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、更生霉素、枸橼酸柔红霉素脂质体(DaunoXome)、地卡特隆、磷酸地塞米松(Decadron phosphate)、戊酸雌二醇、地尼白介素2、甲基泼尼松龙、地洛瑞林、右丙亚胺、己烯雌酚、大扶康、多西他赛、去氧氟尿苷、多柔比星、屈大麻酚、DW-166HC、醋酸亮丙瑞林、拉布立酶(elitek)、盐酸表柔比星、阿瑞吡坦(emend)、表柔比星、红细胞生成素-α、促红细胞生成素(epogen)、依他铂、左旋咪唑、雌二醇片(estrace)、雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、炔雌醇、阿密磷定、依替膦酸、凡毕复、依托泊苷、法倔唑、法斯通(farstone)、非格司亭、非那雄胺、fligrastim、氟尿苷、氟康唑、氟达拉滨、5-氟脱氧尿苷单磷酸、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟甲睾酮、氟他胺、福美坦、fosteabine、福莫司汀、氟维司群、Gammagard、吉西他滨、吉姆单抗、格列卫、卡氮芥糯米纸胶囊剂(gliadel)、戈舍瑞林、盐酸格拉司琼、组氨瑞林和美新、氢化可的松、赤式-羟基壬基腺嘌呤、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、干扰素-α、干扰素-α-2、干扰素-α-2α、干扰素-α-2β、干扰素-α-n1、干扰素-α-n3、干扰素-β、干扰素-γ-1α、白介素-2、甘乐能、易瑞沙、伊立替康、凯特瑞、硫酸香菇多糖、来曲唑、亚叶酸、亮丙瑞林、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、左旋叶酸钙盐、左甲状腺素钠、左甲状腺素钠片、洛莫司汀、氯尼达明、屈大麻酚、氮芥、甲钴胺、醋酸甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、美法仑、酯化雌激素(Menest)、6-巯嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、氨基乙酰丙酸甲酯(Metvix)、米替福新、米诺环素、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、曲洛司坦、多柔比星脂质体(Myocet)、奈达铂、聚乙二醇非格司亭(Neulasta)、奥普瑞白介素(Neumega)、优保津、尼鲁米特、诺瓦得士、NSC-631570、OCT-43、奥曲肽、盐酸昂丹司琼、泼尼松龙(Orapred)、奥沙利铂、紫杉醇、泼尼松磷酸钠制剂(Pediapred)、培门冬酶、派罗欣、喷司他丁、溶血性链球菌制剂、盐酸毛果芸香碱、吡柔比星、普卡霉素、卟吩姆钠、泼尼莫司汀、泼尼松龙、泼尼松、倍美力、丙卡巴肼、阿法依泊汀(Procrit)、雷替曲塞、利比、依替膦酸铼-186、利妥昔单抗、罗荛愫、罗莫肽、盐酸毛果芸香碱片(Salagen)、善宁、沙格司亭、司莫司汀、西佐喃、索布佐生、甲强龙、链佐星、氯化锶-89、左甲状腺素钠(Synthroid)、他莫昔芬、坦洛新、他索那敏、tastolactone、泰索帝、替西白介素、替莫唑胺、替尼泊苷、丙酸睾酮、甲睾酮胶囊剂(Testred)、硫鸟嘌呤、塞替派、促甲状腺素、替鲁膦酸、托泊替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、曲奥舒凡、维A酸、甲氨蝶呤(Trexall)、三甲基三聚氰胺、三甲曲沙、醋酸曲普瑞林、双羟萘酸曲普瑞林、优福定(UFT)、尿苷、戊柔比星、维司力农、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、维鲁利秦、右雷佐生、净司他丁斯酯、枢复宁；ABI-007、acolbifen、actimmune、affinitak、氨基蝶呤、阿佐昔芬、阿索立尼、阿他美坦、阿曲生坦、阿伐他汀、BAY 43-9006(索拉非尼)、CCI-779、CDC-501、西乐葆、西妥昔单抗、克立那托、醋酸环丙孕酮、地西他滨、DN-101、多柔比星-MTC、dSLIM、度他雄胺、艾特咔林、依氟鸟氨酸、依沙替康、芬维A胺、二盐酸组胺、组氨瑞林水凝胶植入物、钬-166DOTMP、伊班膦酸、干扰素-γ、干扰素-PEG、伊沙匹隆、钥孔戚血蓝素、L-651582、兰瑞肽、拉索昔芬、libra、氯那法尼、米泼昔芬、米诺膦酸盐、MS-209、脂质体MTP-PE、MX-6、那法瑞林、奈莫柔比星、新伐司他、诺拉曲塞、奥利美生、onko-TCS、osidem、聚谷氨酸紫杉醇、帕米膦酸二钠、PN-401、QS-21、夸西泮、R-1549、雷洛昔芬、豹蛙酶(ranpirnas)、13-顺式-维甲酸(13-cis-retic acid)、沙铂、西奥骨化醇、T-138067、特罗凯、二十二碳六烯酸紫杉醇、胸腺素-α-1、噻唑羧胺核苷、替匹法尼、替拉扎明、TLK-286、托瑞米芬、transMID-107R、伐司朴达、伐普肽、伐拉尼布、维替泊芬、长春氟宁、Z-100、唑来膦酸和这些的组合。
在一个优选实施方案中，本发明化合物可与抗过度增生剂联用，作为示例(而非限制性)，所述抗过度增生剂如下：
氨鲁米特、L-门冬酰胺酶、硫唑嘌呤、5-氮胞苷、博来霉素、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、门冬酰胺酶、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、更生霉素、柔红霉素、己烯雌酚、2′，2′-二氟脱氧胞苷、多西他赛、多柔比星(阿霉素)、表柔比星、埃博霉素及其衍生物、赤式-羟基壬基腺嘌呤、炔雌醇、依托泊苷、磷酸氟达拉滨、5-氟脱氧尿苷、5-氟脱氧尿苷单磷酸、5-氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、六甲蜜胺、羟基脲、己酸羟孕酮、伊达比星、异环磷酰胺、干扰素、伊立替康、亚叶酸、洛莫司汀、氮芥、醋酸甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、美法仑、6-巯嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、紫杉醇、喷司他丁、N-膦酰基乙酰基L-天冬氨酸(PALA)、普卡霉素、泼尼松龙、泼尼松、丙卡巴肼、雷洛昔芬、司莫司汀、链佐星、他莫昔芬、替尼泊苷、丙酸睾酮、硫鸟嘌呤、塞替派、托泊替康、三甲基三聚氰胺、尿苷、长春碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨。
本发明化合物还可以非常有前景的方式与生物治疗剂例如抗体(例如阿伐他汀、rituxan、爱必妥、赫赛汀)联用。本发明化合物还在与针对血管生成的治疗(例如，与阿伐他汀、阿昔替尼、recentin、瑞戈非尼、索拉非尼或舒尼替尼)联用中实现积极效果。由于其有利的副作用的概况，还特别适合与蛋白酶体抑制剂和mTOR抑制剂的联用以及与抗激素和甾体代谢酶抑制剂的联用。
通常，通过本发明化合物与具有抑制细胞生长的或细胞毒性作用的其它试剂联用可追求以下目的：
·与使用单一药物治疗相比，在降低肿瘤生长速率、减少其尺寸或甚至使其完全消除方面，具有改进的活性；
·与单一治疗相比，以较低的剂量进行化疗的可能性；
·与单独施用相比，具有少量副作用且可耐受性更高的治疗的可能性；
·治疗更广范围的肿瘤疾病的可能性；
·实现对治疗较高的响应率；
·与目前标准治疗相比，患者的存活时间更长。
另外，本发明化合物还可用于与放射疗法和/或外科手术联用。
本发明还提供了药物，该药物包括至少一种本发明化合物，并且通常与一种或多种惰性、无毒、药学上合适的赋形剂一起，本发明还提供了该药物用于上述目的的用途。
本发明的化合物可以全身性地和/或局部地起作用。为此目的，可以以合适的方式施用它们，例如胃肠外地，可能借助于吸入或作为植入物或支架。
本发明化合物可以这些途径的合适施用形式进行施用。
可以不经过吸收步骤(例如静脉内、动脉内、心内、脊柱内或腰内)或同时包括吸收(例如肌内、皮下、皮内、经皮或腹膜内)来实施胃肠道外施用。适合于胃肠道外施用的施用形式包括呈溶液剂、混悬剂、乳剂或冻干粉剂的形式的注射和输注制剂。胃肠外施用是优选的，尤其是静脉内施用。
通常而言，已证实在胃肠道外施用的情况下，为了实现有效的结果，施用量约为0.001-1mg/kg体重是有益的，优选约0.01-0.5mg/kg体重。
但是，根据以下情况可能需要发生与所述量的偏差，具体而言取决于体重、施用途径、对活性化合物的个体表现、制剂的特性和进行施用的时间点或间隔。因此，在某些情况下可能低于上述最小量即可，而在其它情况下必须超过所述上限。在施用量较大的情况下，可建议在一天内将其分配成几个单独剂量。
下述实施例说明了本发明。本发明不限于所述实施例。
除非另有说明，以下试验和实施例中的百分比数值是重量百分数，份数是重量份。在每种情况下，液体/液体溶液的溶剂比、稀释比和浓度数据与体积有关。
A.实施例
HPLC和LC-MS方法：
方法1(LC-MS)：
仪器：Waters Acquity SQD UPLC System；柱：Waters Acquity UPLCHSS T31.8μ50mm x 1mm；洗脱液A：1l水+0.25ml 99％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.25ml 99％浓度的甲酸；梯度：0.0min 90％A→1.2min5％A→2.0min 5％A；流速：0.40ml/min；恒温箱：50℃；紫外检测：210-400nm。
方法2(LC-MS)：
仪器：Micromass QuattroPremier with Waters UPLC Acquity；柱：Thermo Hypersil GOLD 1.9μ50mm x 1mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％浓度的甲酸；梯度：0.0min90％A→0.1min 90％A→1.5min 10％A→2.2min 10％A；流速：0.33ml/min；恒温箱：50℃；紫外检测：210nm。
方法3(LC-MS)：
仪器：Micromass Quattro Micro MS with HPLC Agilent Series 1100；柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ20mm x 4mm；洗脱液A：1l水+0.5ml50％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％浓度的甲酸；梯度：0.0min 100％A→3.0min 10％A→4.0min 10％A→4.01min 100％A(流速2.5ml/min)→5.00min 100％A；恒温箱：50℃；流速：2ml/min；紫外检测：210nm。
方法4(LC-MS)：
MS仪器：Micromass ZQ；HPLC仪器：HP 1100Series；UV DAD；柱：Phenomenex Gemini 3μ30mm x 3.00mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％浓度的甲酸；梯度：0.0min90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速：0.0min 1ml/min→2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；恒温箱：50℃；紫外检测：210nm。
方法5(HPLC)：
仪器：HP 1090Series II；柱：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e，50mm x 4.6mm；前置柱：Merck Chromolith Guard Cartridge KitRP-18e，5mm x 4.6mm；注射体积：5μl；洗脱液A：70％的HClO4水溶液(4ml/升)，洗脱液B：乙腈；梯度：0.00min 20％B→0.50min 20％B→3.00min 90％B→3.50min 90％B→3.51min 20％B→4.00min 20％B；流速：5ml/min；柱温度：40℃。
方法6(HPLC)：
仪器：带有DAD 996的Waters 2695；柱：Merck ChromolithSpeedROD RP-18e，50mm x 4.6mm；Ord.No.：1.51450.0001，前置柱：Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP-18e，5mm x 4.6mm；Ord.No.：1.51470.0001，洗脱液A：70％的HClO4水溶液(4ml/升)，洗脱液B：乙腈；梯度：0.00min 5％B→0.50min 5％B→3.00min 95％B→4.00min95％B；流速：5ml/min。
方法7(LC-MS)：
MS仪器：Waters ZQ；HPLC仪器：Agilent 1100Series；UV DAD；柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ20mm x 4mm；洗脱液A：1l水+0.5ml50％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％浓度的甲酸；梯度：0.0min 100％A→3.0min 10％A→4.0min 10％A→4.1min 100％A(流速2.5ml/min)；恒温箱：55℃；流速：2ml/min；紫外检测：210nm。
方法8(LC-MS)：
MS仪器：Waters ZQ；HPLC仪器：Agilent 1100Series；UV DAD；柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ20mm x 4mm；洗脱液A：1l水+0.5ml50％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％浓度的甲酸；梯度：0.0min 100％A→2.0min 60％A→2.3min 40％A→3.0min 20％A→4.0min10％A→4.2min 100％A(流速2.5ml/min)；恒温箱：55℃；流速：2ml/min；紫外检测：210nm。
方法9(LC-MS)：
仪器：Waters Acquity SQD UPLC System；柱：Waters Acquity UPLCHSS T31.8μ50mm x 1mm；洗脱液A：1l水+0.25ml 99％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.25ml 99％浓度的甲酸；梯度：0.0min 95％A→6.0min5％A→7.5min 5％A；恒温箱：50℃；流速：0.35ml/min；紫外检测：210-400nm。
方法10(HPLC)：
仪器：Agilent1200Series；柱：Agilent Eclipse XDB-C185μ4.6mm x150mm；前置柱：Phenomenex KrudKatcher Disposable Pre-Column；注射体积：5μl；洗脱液A：1l水+0.01％三氟乙酸；洗脱液B：1l乙腈+0.01％三氟乙酸；梯度：0.00min 10％B→1.00min 10％B→1.50min 90％B→5.5min 10％B；流速：2ml/min；柱温度：30℃。
对于以下未明确描述其制备的所有反应物或试剂，其均从通常可得的来源市售获得。对于以下同样未描述其制备的所有其它反应物或试剂，并且其不是市售可得的或其来源不是通常可得的，给出了描述其制备方法的公开文献。
方法11(LC-MS)：
仪器：Waters ACQUITY SQD UPLC System；柱：Waters AcquityUPLC HSS T31.8μ30x 2mm；洗脱液A：1l水+0.25ml 99％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.25ml 99％浓度的甲酸；梯度：0.0min 90％A→1.2min5％A→2.0min 5％A；恒温箱：50℃；流速：0.60ml/min；紫外检测：208-400nm。
方法12(HPLC)：
仪器：带有柱恒温箱和DAD的Agilent 1200Series；柱：MerckChromolith SpeedROD RP-18e，50mm x 4.6mm；Ord.No.：1.51450.0001；前置柱：Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP-18e，5mm x 4.6mm；Ord.No.：1.51470.0001；洗脱液A：70％的HClO4水溶液(4ml/升)，洗脱液B：乙腈；梯度：0.00min 5％B→0.50min 5％B→3.00min 95％B→4.00min 95％B；流速：5ml/min；柱温度：30℃。
起始化合物和中间体：
起始化合物1
(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(Boc-多拉脯氨酸)
可以根据文献方法通过各种途径制备标题化合物；参见，例如，Pettit等人，Synthesis1996，719；Shioiri等人，Tetrahedron Lett.1991，32，931；Shioiri等人，Tetrahedron 1993，49，1913；Koga等人，Tetrahedron Lett.1991，32，2395；Vidal等人，Tetrahedron 2004，60，9715；Poncet等人，Tetrahedron1994，50，5345。将其制备为游离酸或与二环己胺的1∶1盐。
起始化合物2a
(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基氨基)庚酸叔丁酯盐酸盐
(多拉异亮氨酸-OtBu x HCl)
可以根据文献方法通过各种途径制备标题化合物；参见，例如，Pettit等人，J.Org.Chem.1994，59，1796；Koga等人，Tetrahedron Lett.1991，32，2395；Shioiri等人，Tetrahedron Lett.1991，32，931；Shioiri等人，Tetrahedron 1993，49，1913。
起始化合物2b
(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基氨基)庚酸叔丁酯
(多拉异亮氨酸-OtBu)
与起始化合物2a类似地制备所述化合物，但是在没有加入1N盐酸下进行氢化。
起始化合物3
Nα-(叔丁氧基羰基)-N-羟基-L-苯基丙氨酰胺
通过文献方法(A.Ritter等人，J.Org.Chem.1994，59，4602)，制备标题化合物。
收率：750mg(理论值的75％)
LC-MS(方法3)：Rt＝1.67min；MS(ESIpos)：m/z＝281(M+H)+。
起始化合物4
1，2-噁唑烷盐酸盐
标题化合物可以通过文献方法(参见，例如，H.King，J.Chem.Soc.1942，432)来制备；它也是商购可得的。
起始化合物5
1，2-噁嗪烷盐酸盐
标题化合物可以通过文献方法(参见，例如，H.King，J.Chem.Soc.1942，432)来制备。
起始化合物6
2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯
通过文献方法(参见，例如，C.Johnson等人，Tetrahedron Lett.1998，39，2059)，可以制备Boc保护形式的标题化合物；通过三氟乙酸处理和随后中和，以常规方式实现去保护。
收率：149mg(理论值的89％)
起始化合物7
(1S，2R)-1-(羟基氨甲酰基)-2-苯基环丙基氨基甲酸叔丁酯
通过文献方法(A.Ritter等人，J.Org.Chem.1994，59，4602)，从商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸开始，制备标题化合物(C.Cativiela等人，Chirality 1999，11，583)。
收率：339mg(理论值的59％)
LC-MS(方法1)：Rt＝0.82min；MS(ESIpos)：m/z＝293(M+H)+。
中间体1
(3R，4S，5S)-4-[{N-[(苄氧基)羰基]-L-缬氨酰基}(甲基)氨基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯
将10.65g(41.058mmol)(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基氨基)庚酸叔丁酯(起始化合物2b)溶解于250ml二氯甲烷中，并将溶液冷却至-10℃。然后，在搅拌下，加入10.317g(41.058mmol)N-[(苄氧基)羰基]-L-缬氨酸、16.866g(61.586mmol)2-溴-1-乙基吡啶鎓四氟硼酸盐(BEP)和28.6ml N，N-二异丙基乙胺，随后将混合物在室温搅拌20h。然后用二氯甲烷稀释反应混合物，并与饱和氯化钠溶液一起摇动2次，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用4∶1石油醚/乙酸乙酯作为洗脱液。浓缩对应的级分，并在高真空下干燥残余物过夜。得到10.22g(理论值的51％)标题化合物，为微黄色油。
HPLC(方法5)：Rt＝2.3min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.59min；MS(ESIpos)：m/z＝493(M+H)+。
中间体2
(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-缬氨酰基)氨基]庚酸叔丁酯
将500mg(1mmol)(3R，4S，5S)-4-[{N-[(苄氧基)羰基]-L-缬氨酰基}(甲基)氨基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯(中间体1)溶解在50ml甲醇中，并在加入100mg 10％活性炭载钯以后，在标准氢压力下在室温氢化1h。然后滤出催化剂，并在减压下除去溶剂。得到370mg(定量)标题化合物，为基本上无色的油。
HPLC(方法5)：Rt＝1.59min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.74min；MS(ESIpos)：m/z＝359(M+H)+。
中间体3
N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-叔丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将4.64g(13.13mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酸溶解在20ml DMF中，并接连地与4.28g(11.94mmol)(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-缬氨酰基)氨基]庚酸叔丁酯(中间体2)、2.75g(14.33mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和2.2g(14.33mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物混合。将混合物在室温搅拌过夜。然后将反应混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物中。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物不经进一步纯化直接用于下一阶段。
收率：9.1g(定量，60％纯度)
HPLC(方法5)：Rt＝2.7min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.99min；MS(ESIpos)：m/z＝694(M+H)+。
中间体4
N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将9.1g粗产物N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-叔丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体3)溶解于56.6ml二氯甲烷中，加入56.6ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌2h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并通过快速色谱法纯化剩余的残余物，使用二氯甲烷、3∶1二氯甲烷/乙酸乙酯和15∶5∶0.5二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇作为洗脱液。在纯化对应的级分和浓度以后，得到5.8g(理论值的86％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.3min；MS(ESIpos)：m/z＝638(M+H)+。
中间体5
(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基氨基甲酸叔丁酯
将500mg(1.9mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸溶解在10mlDMF中，并接连地与466mg(3.8mmol)1，2-噁嗪烷盐酸盐(起始化合物5)、433mg(2.3mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、382mg(2.8mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和731mg(5.7mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌过夜。然后将反应混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物中。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。得到620mg(理论值的98％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.62min；MS(ESIpos)：m/z＝235(M-C4H8-CO2+H)+。
中间体6
(2S)-2-氨基-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-3-苯基丙烷-1-酮三氟乙酸盐
将620mg(1.85mmol)(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基氨基甲酸叔丁酯(中间体5)溶解于5ml二氯甲烷中，加入10ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，将剩余的残余物从水/乙腈低压冻干。以此方式，得到779mg(理论值的91％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝0.45min；
LC-MS(方法3)：Rt＝1.09min；MS(ESIpos)：m/z＝235(M+H)+。
中间体7
(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐
将360mg(1.25mmol)(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)溶解于10ml DMF中，并接连地与579.2mg(1.25mmol)(2S)-2-氨基-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-3-苯基丙烷-1-酮三氟乙酸盐(中间体6)、714.5mg(1.88mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和655μl N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌16h。然后浓缩反应混合物，将残余物溶解于乙酸乙酯中，并通过首先与5％柠檬酸水溶液一起摇动、然后与5％碳酸氢钠水溶液一起摇动、随后与饱和氯化钠溶液一起摇动，进行萃取。浓缩有机相，并通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用16∶4二氯甲烷/甲醇作为洗脱液。合并对应的级分，并在减压下除去溶剂。在已经在高真空下干燥残余物以后，得到503.5mg(理论值的74％)Boc-保护的中间体(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.12min；MS(ESIpos)：m/z＝504(M+H)+。
将503mg(1mmol)该中间体溶解于20ml二氯甲烷中，加入10ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，并与二氯甲烷一起再蒸馏。用正戊烷使剩余的残余物从乙酸乙酯中沉淀，并倾析出溶剂。将如此得到的残余物溶解在水中，并通过与乙酸乙酯一起摇动进行萃取，随后将水相低压冻干。以此方式，得到462mg(理论值的89％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝1.53min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.57min；MS(ESIpos)：m/z＝404(M+H)+。
中间体8
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将51mg(0.08mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解在10ml DMF中，并加入0.5ml哌啶。在室温搅拌10min以后，在减压下浓缩反应混合物，并将残余物与二乙基醚一起搅拌。将不溶性的组分滤出，并用二乙基醚重复洗涤。，然后，将滤渣溶解于5ml二噁烷/水中，并用1N氢氧化钠溶液将溶液调节至pH11。在超声处理下，分成几份加入共349mg(1.6mmol)二碳酸二叔丁酯，在此过程中，使溶液的pH保持在11。反应已经结束后，蒸发出二噁烷，并用柠檬酸将水溶液调节至2-3的pH。每次用50ml乙酸乙酯，将混合物萃取2次。合并有机相，经硫酸镁干燥，并在减压下浓缩。将残余物溶解于二乙基醚中，并用戊烷沉淀标题化合物。通过倾析，除去溶剂。将残余物用戊烷消化几次，最后在高真空下干燥。如此得到40mg(理论值的97％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.32min；MS(ESIpos)：m/z＝516(M+H)+。
中间体9
(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
与中间体5、6和7的合成类似地，经3个阶段制备标题化合物：使商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸与1，2-噁嗪烷盐酸盐(起始化合物5)偶联，随后用三氟乙酸去保护，并与起始化合物1偶联。通过制备型HPLC，纯化终产物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.12min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.25min；MS(ESIpos)：m/z＝516(M+H)+。
中间体10
N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将315mg(0.494mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解在12ml DMF中，并与104mg(0.543mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和83mg(0.543mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物混合，并将混合物在室温搅拌90min。随后，加入112μl N，N-二异丙基乙胺和149mg(0.494mmol)(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酸三氟乙酸盐，后者已经预先借助于三氟乙酸消除Boc保护基而从起始化合物1制备。将混合物在室温搅拌2h，然后在高真空下浓缩。通过制备型HPLC，将剩余的残余物纯化2次。得到无色泡沫形式的140mg(理论值的35％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.40min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.38min；MS(ESIpos)：m/z＝807(M+H)+。
中间体11
N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-苏氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，如下从237mg(0.887mmol)它的二环己胺盐中释放N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-苏氨酸：将其溶解在乙酸乙酯中，并与5％硫酸水溶液一起萃取摇动。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于16mlDMF中，并接连地与365mg(1mmol)(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-缬氨酰基)氨基]庚酸叔丁酯(中间体2)、185mg(0.967mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和148mg(0.967mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物混合。将混合物在室温搅拌2h。然后将反应混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物中。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。如此得到283mg(理论值的53％)叔丁基酯中间体N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-苏氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-叔丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
HPLC(方法5)：Rt＝2.17min。
将283mg(0.466mmol)该中间体溶解于5ml二氯甲烷中，加入5ml无水三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌2h。随后，将反应混合物在高真空下浓缩，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。得到156mg(理论值的61％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.50min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.09min；MS(ESIpos)：m/z＝552(M+H)+。
中间体12
N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸盐
在第一步中，如下从600mg(1.28mmol)对应的二环己基铵盐中释放起始化合物1：将所述盐溶解于100ml乙酸乙酯中，并首先与50ml 0.5％硫酸一起，然后与饱和氯化钠溶液一起，进行萃取摇动。然后，有机相经硫酸镁干燥，过滤，浓缩，并立即与中间体7的合成类似地与L-苯基丙氨酸苄酯反应，然后去保护。
收率：650mg(94％，经2个阶段)
HPLC(方法6)：Rt＝1.76min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.68min；MS(ESIpos)：m/z＝425(M+H)+。
中间体13
(βS)-N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-β-甲基-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸盐
首先，如下从351mg(0.75mmol)二环己胺盐(起始化合物1)中释放出(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸：将它溶解于乙酸乙酯中，并与5％硫酸氢钾水溶液一起进行萃取摇动。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于10ml DMF中，并接连地与373mg(0.75mmol)(βS)-β-甲基-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸盐[通过EDC/DMAP介导的与苯甲醇的酯化，随后用三氟乙酸除去Boc保护基，从商购可得的(βS)-N-(叔丁氧基羰基)-β-甲基-L-苯丙氨酸制备]、428mg(1.125mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和392μl N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌20h。然后将反应混合物倒在半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物上。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，随后浓缩。借助于制备型HPLC纯化残余物。得到230mg(理论值的57％)Boc-保护的中间体(βS)-N-{(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酰基}-β-甲基-L-苯基丙氨酸苄酯。
HPLC(方法6)：Rt＝2.3min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.36min；MS(ESIpos)：m/z＝539(M+H)+。
将230mg(0.42mmol)该中间体溶解于5ml二氯甲烷中，加入5ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物。剩余的残余物为在减压下进一步干燥的反应混合物，然后从乙腈/水低压冻干。以此方式，得到230mg(定量)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.6min。
中间体14
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将143mg(0.223mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解于15ml DMF中，并接连地与141mg(0.22mmol)(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐(中间体7)、102mg(0.27mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和128μl(0.74mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌3h。然后将反应混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物中。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。得到275mg(定量)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
HPLC(方法5)：Rt＝2.73min；
LC-MS(方法4)：Rt＝3.19min；MS(ESIpos)：m/z＝1023(M+H)+。
将46mg(0.045mmol)该中间体溶解在4ml DMF中。已经加入1ml哌啶以后，将反应混合物在室温搅拌1h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物(洗脱液：乙腈+0.01％TFA/水+0.01％TFA)。得到22mg(理论值的54％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.68min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.03min；MS(ESIpos)：m/z＝801(M+H)+
1H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ＝8.8(m，2H)，8.7(m，1H)，8.42和8.15(2d，1H)，7.3-7.1(m，5H)，5.12和4.95(2m，1H)，4.70和4.62(2m，1H)，4.62和4.50(2t，1H)，4.1-3.9(m，3H)，3.85(m，1H)，3.75-3.6(m，2H)，3.23，3.18，3.17，3.14，3.02和2.96(6s，9H)，3.1-2.9和2.75(2m，2H)，2.46(m，3H)，2.4-2.1(m，2H)，2.05(br.m，2H)，1.85-1.55(br.m，6H)，1.5-1.2(br.m，3H)，1.1-0.8(m，18H)，0.75(t，3H)[其它信号被隐藏在H2O峰下]。
中间体15
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将126mg(0.198mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解于10ml DMF中，并接连地与105mg(0.198mmol)(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐(中间体17)、41.6mg(0.217mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、33mg(0.217mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和79μl(0.454mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌过夜。然后将反应混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物中。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。得到220mg(定量)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
HPLC(方法5)：Rt＝2.77min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.5min；MS(ESIpos)：m/z＝1037(M+H)+。
将220mg(0.212mmol)该中间体溶解在5ml DMF中。已经加入1ml哌啶以后，将反应混合物在室温搅拌1h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物(洗脱液：乙腈+0.01％TFA/水+0.01％TFA)。得到91mg(理论值的46％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.71min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝815(M+H)+
1H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ＝8.87和8.80(2d，2H)，8.75(m，1H)，8.40和7.98(2d，1H)，7.3-7.1(m，5H)，5.45和5.2(2t，1H)，4.78和4.62(2m，1H)，4.73和4.58(2t，1H)，4.2-4.0(m，3H)，3.7-3.6(m，1H)，3.35，3.20，3.18，3.14，3.12和3.00(6s，9H)，3.1和2.95(2m，2H)，2.46(m，3H)，2.4-2.0(m，4H)，1.9-1.6(m，4H)，1.6-1.2(m，5H)，1.1-0.75(m，21H)，0.80(t，3H)[其它信号被隐藏在H2O峰下]。
中间体16
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将617mg(1.2mmol)(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间体24)溶解于44ml二氯甲烷中，加入4.4ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，并将剩余的残余物从二噁烷/水低压冻干。得到702mg(定量)去保护的化合物(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐，为粗产物，其不经进一步纯化用于以后的阶段中。
将470mg(0.74mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解于57ml DMF中，并接连地与390mg(大约0.74mmol)上面得到的(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐、336mg(0.88mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和423μl(2.4mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌2h。然后将反应混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物中。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。得到453mg(理论值的59％)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
HPLC(方法5)：Rt＝2.58min；
LC-MS(方法1)：Rt＝3.10min；MS(ESIpos)：m/z＝1035(M+H)+。
将453mg(0.438mmol)该中间体溶解在24ml DMF中。已经加入2.4ml哌啶以后，将反应混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC(洗脱液：乙腈/0.1％的TFA水溶液)纯化残余物。得到260mg(理论值的64％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.64min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝813(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝8.8(m，2H)，8.65(m，2H)，7.3-7.1(m，5H)，4.8-4.05(m，2H)，4.0和3.82(2m，2H)，3.8-3.5(m，8H)，3.32，3.29，3.20，3.19，3.12和3.00(6s，9H)，2.65(t，1H)，2.5-2.45(m，3H)，2.4-1.3(m，15H)，1.15-0.85(m，18H)，0.8和0.75(2d，3H)[其它信号被隐藏在H2O峰下]。
中间体17
N-苄基-N-甲基-L-苯基丙氨酰胺三氟乙酸盐
将1000mg(3.77mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸溶解在10mlDMF中，并与457mg(3.77mmol)N-甲基苄胺、2150mg(5.65mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和657μl N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌30min，然后在减压下浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中，并通过与水一起摇动萃取3次。有机相经硫酸镁干燥，并浓缩。通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用3∶1石油醚/乙酸乙酯作为洗脱液。浓缩产物级分，并在高真空下干燥残余物。得到1110mg(理论值的75％)Boc-保护的中间体N-苄基-Nα-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-苯基丙氨酰胺。
HPLC(方法6)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.14min；MS(ESIpos)：m/z＝369(M+H)+。
将1108mg(3，007mmol)该中间体溶解于30ml二氯甲烷中，加入10ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，将剩余的残余物与二氯甲烷一起搅拌，并蒸馏出溶剂。将残余物与戊烷一起搅拌另外2次，每次再次倾析出溶剂，最后在高真空下干燥标题化合物。如此得到1075mg(理论值的93％)作为树脂的标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.6min；MS(ESIpos)：m/z＝269(M+H)+。
中间体18
N-苄基-Nα-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-N-甲基-L-苯基丙氨酰胺三氟乙酸盐
首先，如下从141mg(0.491mmol)它的二环己胺盐中释放出(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)：将它溶解于乙酸乙酯中，并与5％硫酸水溶液一起萃取摇动。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于10ml DMF中，并加入187.6mg(0.49mmol)N-苄基-N-甲基-L-苯基丙氨酰胺三氟乙酸盐(中间体9)、190.3mg(1.47mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和256μl N，N-二异丙基乙胺。将混合物在室温搅拌1h。然后浓缩反应混合物，将残余物溶解于乙酸乙酯中，随后如下萃取溶液：接连地与饱和氯化铵溶液、饱和碳酸氢钠溶液和水一起摇动。有机相经硫酸镁干燥，并浓缩。通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用30∶1乙腈/水作为洗脱液。浓缩产物级分，并在高真空下干燥残余物。得到168mg(理论值的64％)Boc-保护的中间体(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)氨基]-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。
HPLC(方法6)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.22min；MS(ESIpos)：m/z＝538(M+H)+。
将168mg(0.312mmol)该中间体溶解于15ml二氯甲烷中，加入3ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物。将剩余的残余物首先与二氯甲烷一起搅拌，然后与二乙基醚一起搅拌，每次重新蒸馏出溶剂。在高真空下干燥以后，得到作为树脂的170mg(理论值的99％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.73min；MS(ESIpos)：m/z＝438(M+H)+。
中间体19
N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯基丙氨酸甲酯三氟乙酸盐
与中间体18的合成类似地，从(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)(其从二环己胺盐中释放出)和L-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐开始，制备标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝0.6min；
LC-MS(方法3)：Rt＝1.17min；MS(ESIpos)：m/z＝349(M+H)+。
中间体20
N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酸苄酯三氟乙酸盐
与中间体18的合成类似地，从(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)(其从二环己胺盐中释放出)和L-色氨酸苄酯开始，制备标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.8min；MS(ESIpos)：m/z＝464(M+H)+。
中间体21
(1S，2R)-1-({(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}氨基)-2-苯基环丙烷甲酸苄酯三氟乙酸盐
与中间体18的合成类似地，从(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)(其从二环己胺盐中释放出)和(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸苄酯开始，制备标题化合物。(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸苄酯已经预先通过标准方法如下制备：用苯甲醇酯化商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸，随后用三氟乙酸除去Boc。
HPLC(方法5)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法2)：Rt＝0.93min；MS(ESIpos)：m/z＝437(M+H)+。
中间体22
6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N′-甲基己烷酰肼三氟乙酸盐
将100mg(473μmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸溶解在71μlDMF中，然后与139mg(947μmol)1-甲基肼甲酸叔丁酯、182mg(947μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和145mg(947μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷/水低压冻干以后，得到129mg(理论值的80％)受保护的中间体，为无色泡沫。
随后，用2ml三氟乙酸在8ml二氯甲烷中的溶液将所述129mg(380μmol)去保护。在室温搅拌1h以后，在减压下浓缩反应混合物。从乙腈/水低压冻干残余物，得到125mg(理论值的83％)标题化合物，为无色泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.38min；MS(ESIpos)：m/z＝240(M+H)+
中间体23
N-(2-氨基乙基)-4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丁酰胺三氟乙酸盐
首先，在5ml DMF中混合35mg(164μmol)2-(甲基氨基)乙基氨基甲酸叔丁酯盐酸盐三氟乙酸盐、30mg(164μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸、75mg(197μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和57μl N，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌过夜。随后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分，并且通过从二噁烷/水中低压冻干，得到35mg(理论值的63％)受保护的中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.71min；MS(ESIpos)：m/z＝340(M+H)+。
随后，用1ml三氟乙酸在5ml二氯甲烷中的溶液将全部量的受保护的中间体去保护，得到28mg(理论值的77％)标题化合物。
LC-MS(方法3)：Rt＝0.75min；MS(ESIpos)：m/z＝240(M+H)+。
中间体24
4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-[2-(甲基氨基)乙基]丁酰胺三氟乙酸盐
首先，在5ml DMF中混合35mg(164μmol)(2-氨基乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯盐酸盐三氟乙酸盐、30mg(164μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸、75mg(197μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和57μl N，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌30min。随后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分，并且通过从二噁烷/水中低压冻干，得到51mg(理论值的91％)受保护的中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.77min；MS(ESIpos)：m/z＝340(M+H)+。
随后，用1ml三氟乙酸在5ml二氯甲烷中的溶液将全部量去保护，得到45mg(理论值的69％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.19min；MS(ESIpos)：m/z＝240(M+H)+。
中间体25
(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酸苄酯三氟乙酸盐
首先，如下从1.82g(388mmol)它的二环己胺盐中释放出(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸：将它溶解于乙酸乙酯中，并与100ml 0.5％硫酸一起进行萃取摇动。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于10ml二噁烷和10ml水中，加入1517mg(4.66mmol)碳酸铯，并将混合物在超声浴中处理5min，并在减压下浓缩，并与DMF一起再蒸馏1次。然后将残余物溶解于15ml二氯甲烷中，并加入1990mg(11.64mmol)苄基溴。将混合物在超声浴中处理15min，然后在减压下浓缩。将残余物在乙酸乙酯和水之间分配，取出有机相，并通过与饱和氯化钠溶液一起摇动进行萃取，然后浓缩。然后通过制备型HPLC纯化残余物。得到1170mg(理论值的80％)Boc-保护的中间体。
随后，立即用5ml三氟乙酸在15ml二氯甲烷中的溶液将这些1170mg去保护。在室温搅拌15min以后，在减压下浓缩反应混合物。将残余物从二噁烷低压冻干。在高真空下干燥以后，剩下1333mg(理论值的84％)标题化合物，为黄色油。
HPLC(方法6)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.59min；MS(ESIpos)：m/z＝278(M+H)+。
中间体26
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将1200mg(2.33mmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体5)与910.8mg(2.33mmol)(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酸苄酯三氟乙酸盐(中间体14)、1327mg(3.49mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和2027μl N，N-二异丙基乙胺一起在50ml DMF中混合，并将混合物在室温搅拌5min。此后，在减压下除去溶剂。将剩余的残余物溶解于乙酸乙酯中，并通过接连地与5％柠檬酸水溶液和饱和碳酸氢钠溶液一起摇动进行萃取。取出有机相，并浓缩。借助于制备型HPLC纯化残余物。将产物级分合并和浓缩，并在高真空下干燥残余物。得到1000mg(理论值的55％)作为树脂的苄基酯中间体N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-(苄氧基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.56min；MS(ESIpos)：m/z＝775(M+H)+。
将全部量的得到的该中间体溶解于25ml甲醇和二氯甲烷(20∶1)的混合物中，并用10％活性炭载钯作为催化剂，通过在标准氢压力下氢化，除去苄基酯基。在室温搅拌30min后，滤出催化剂，并在减压下浓缩滤液。得到803mg(理论值的91％)标题化合物，为白色固体。
HPLC(方法6)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.24min；MS(ESIpos)：m/z＝685(M+H)+。
中间体27
(1S，2R)-1-氨基-2-苯基-N-丙基环丙烷羧酰胺三氟乙酸盐
如下制备标题化合物：在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)存在下，将商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸与正丙胺偶联，随后用三氟乙酸除去Boc(收率：经2个阶段，理论值的85％)。
HPLC(方法6)：Rt＝1.2min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.52min；MS(ESIpos)：m/z＝219(M+H)+。
中间体28
(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸乙酯三氟乙酸盐
如下制备标题化合物：通过标准方法，通过用乙醇酯化商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸，随后用三氟乙酸除去Boc。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.50min；MS(ESIpos)：m/z＝206(M+H)+。
中间体29
4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁酸
在0℃，向1.39g(8.95mmol)N-甲氧基羰基马来酰亚胺在44ml饱和碳酸氢钠溶液中的溶液中，加入1.5g(8.95mmol)4-氨基-2，2-二甲基丁酸，并将混合物搅拌40min。随后，除去冷却浴，并将反应混合物搅拌另外1h。然后在用冰冷却的同时，通过加入硫酸将反应混合物调节至pH 3，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机相经硫酸镁干燥，并浓缩。得到1.17g(79％纯度，理论值的49％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.64min；m/z＝212(M+H)+。
中间体30
2-[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁酰基]肼甲酸叔丁酯
在0℃，向50mg(237μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁酸在2ml THF中的溶液中，首先加入26μl(237μmol)4-甲基吗啉，然后加入31μl(237μmol)氯甲酸异丁酯。除去冷却浴并在室温搅拌另外15min以后，加入31.3mg(237μmol)叔丁基氧基羰基酰肼。将反应混合物搅拌过夜，然后浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。得到50.8mg(理论值的66％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.71min；m/z＝324(M-H)-。
中间体31
4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁烷酰肼三氟乙酸盐
将50mg(154mmol)2-[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁酰基]肼甲酸叔丁酯溶解在2ml二氯甲烷中，并加入0.4ml三氟乙酸。将反应混合物在室温搅拌30min，然后浓缩。得到55.2mg(93％纯度，理论值的99％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.36min；m/z＝226(M+H)+。
中间体32
N-(叔丁氧基羰基)-L-苯基丙氨酸金刚烷-1-基甲酯
在室温，向500mg(1.89mmol)N-Boc-L-苯丙氨酸在25ml二氯甲烷中的溶液中，加入1192mg(6.2mmol)EDC、578μl(4.1mmol)三乙胺、345mg(2.8mmol)DMAP和345mg(2.1mmol)1-金刚烷基甲醇。将反应混合物搅拌过夜，然后用50ml二氯甲烷稀释，并接连地用10％柠檬酸水溶液、水和饱和氯化钠溶液洗涤。有机相经硫酸镁干燥，然后浓缩，并通过制备型HPLC纯化残余物。得到769mg(理论值的90％)标题化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝1.84min；m/z＝414(M+H)+。
中间体33
L-苯基丙氨酸金刚烷-1-基甲酯盐酸盐
将769mg(1.86mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-苯基丙氨酸金刚烷-1-基甲酯(中间体13)溶解在25ml 4N的氯化氢在二噁烷中的溶液中，并在室温搅拌1h。随后，浓缩反应混合物，并在减压下干燥残余物。得到619mg(理论值的95％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.82min；m/z＝314(M+H)+。
中间体34
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
在室温，向20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在1ml DMF中的溶液中，加入15.3μl(88μmol)N，N-二异丙基乙胺、6.7mg(44μmol)HOBt和6.7mg(35μmol)EDC，并将混合物搅拌30min。随后，加入10.1mg(32μmol)L-苯基丙氨酸金刚烷-1-基酯盐酸盐。搅拌过夜后，通过制备型HPLC将反应混合物直接地分离成它的组分。得到27.5mg(理论值的93％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.70min；m/z＝980(M+H)+。
中间体35
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将27.5mg(28μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在1.8ml二氯甲烷中，并加入361μl TFA。将反应混合物搅拌30min，然后浓缩。将残余物溶解于水中，并低压冻干。得到22.7mg(理论值的81％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.14min；m/z＝880(M+H)+。
中间体36
(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基氨基甲酸叔丁酯
在氩气氛下，将500mg(1.99mmol)N-Boc-L-苯基丙氨醇溶解在5mlDMF中，并冷却至0℃。随后，加入159mg(3.98mmol)60％的氢化钠在石蜡油中的混悬液。将反应混合物搅拌至气体产生结束，然后加入260μl(2.19mmol)苄基溴。除去冷却浴，并将反应混合物在室温搅拌2h。此后，浓缩反应混合物，将残余物溶解于冰水中，并用二氯甲烷萃取混合物。将有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，并浓缩。借助于制备型HPLC纯化残余物。得到226mg(理论值的33％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.28min；m/z＝342(M+H)+。
中间体37
(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-胺盐酸盐
将220mg(644μmol)(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基氨基甲酸叔丁酯溶解在11ml 4N的氯化氢在二噁烷中的溶液中，并在室温搅拌1h。然后，浓缩反应混合物，并在减压下干燥残余物。得到138mg(理论值的77％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.65min；m/z＝242(M+H)+。
中间体38
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
在室温，向20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在1ml DMF中的溶液中，加入15.3μl(88μmol)N，N-二异丙基乙胺，6.7mg(44μmol)HOBt和6.7mg(35μmol)EDC，并将混合物搅拌30min。随后，加入7.8mg(32μmol)(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-胺盐酸盐。搅拌过夜后，通过制备型HPLC，将反应混合物直接地分离成它的组分。得到26mg(理论值的98％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.51min；m/z＝909(M+H)+。
中间体39
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将26mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在1.8ml二氯甲烷中，并加入370μl TFA。将反应混合物在室温搅拌30min，然后浓缩。将残余物溶解于水中，并低压冻干。得到26.4mg(定量)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；m/z＝809(M+H)+。
中间体40
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
在10ml DMF中将50mg(70μmol)中间体26和11mg(70μmol)(1S，2R)-2-氨基-1-苯基丙烷-1-醇与42mg(0.11μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和25μl N，N-二异丙基乙胺混合，并将反应混合物在室温搅拌5min。这之后借助于制备型HPLC浓缩和纯化残余物。合并对应的级分、浓缩和在高真空下干燥以后，得到49mg(81％)受保护的中间体。随后，通过已知的条件，用三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液除去Boc基团。浓缩之后，通过制备型HPLC纯化标题化合物，得到26mg(52％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.65min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.77min；MS(ESIpos)：m/z＝718(M+H)+。
中间体41
3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸三氟乙酸盐
将150mg(541μmol)3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸叔丁酯溶解在3ml二氯甲烷中，并加入1.5ml三氟乙酸，将反应混合物在室温搅拌1h，然后浓缩。
得到181mg(理论值的100％)标题化合物。
MS(EI)：m/z 222(M+H)+
中间体42
3-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酸
将186mg(555μmol)3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸三氟乙酸盐溶解在2.6ml饱和碳酸氢钠溶液中，并在0℃与86mg(555μmol)N-甲氧基羰基马来酰亚胺混合。将反应混合物在0℃搅拌40min和在室温搅拌1h，然后再次冷却至0℃，用硫酸调节至pH3，并用25ml乙酸乙酯萃取3次。合并的有机相经硫酸镁干燥和浓缩。
得到126mg(理论值的75％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.53min；m/z＝302(M+H)+。
中间体43
15-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-4-氧代-7，10，13-三氧杂-2，3-二氮杂十五烷-1-酸叔丁酯
在0℃，将125mg(417μmol)3-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酸溶解在2.1ml THF中，并与46μl(417mmol)4-甲基吗啉和54.5μl(417μmol)氯甲酸异丁酯混合。除去冰浴，并将反应混合物在室温搅拌30min。随后，在0℃，加入55mg(417μmol)叔丁基氧基羰基酰肼。将反应混合物温热至室温过夜，浓缩，并通过制备型HPLC进行纯化。
得到60mg(理论值的33％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.66min；m/z＝416(M+H)+。
中间体44
3-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙烷酰肼三氟乙酸盐
将60mg(145μmol)15-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-4-氧代-7，10，13-三氧杂-2，3-二氮杂十五烷-1-酸叔丁酯溶解在1ml二氯甲烷中，并加入0.2ml三氟乙酸。将反应混合物在室温搅拌30min，然后浓缩。
得到62mg(理论值的100％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.35min；m/z＝316(M+H)+。
中间体45
(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸苄酯三氟乙酸盐
如下制备标题化合物：通过标准方法，通过用苯甲醇酯化商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸，随后用三氟乙酸除去Boc。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.72min；MS(ESIpos)：m/z＝268(M+H)+。
中间体46
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
在15ml DMF中将383mg(0.743mmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体8)与485mg(0.743mmol)N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸盐(中间体12)、424mg(1.114mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和388μl N，N-二异丙基乙胺混合，并将混合物在室温搅拌10min。随后，在减压下除去溶剂。将剩余的残余物溶解于乙酸乙酯中，并通过接连地与5％柠檬酸水溶液和饱和碳酸氢钠溶液一起摇动进行萃取。取出有机相并浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。将产物级分合并和浓缩，并在高真空下干燥残余物。得到335mg(理论值的48％)苄基酯中间体，为泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.49min；MS(ESIpos)：m/z＝922(M+H)+。
将100mg(0.11mmol)该中间体溶解于15ml甲醇中，并用10％活性炭载钯作为催化剂，通过在标准氢压力下氢化，除去苄基酯基。在室温搅拌1h后，滤出催化剂，并在减压下浓缩滤液。从二噁烷低压冻干以后，得到85mg(理论值的94％)标题化合物，为固体。
HPLC(方法12)：Rt＝2.4min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.24min；MS(ESIpos)：m/z＝832(M+H)+。
中间体47
N-苄基-L-色氨酰胺三氟乙酸盐
将202mg(0.5mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-色氨酸-2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯和45mg(0.42mmol)苄胺溶解在10ml DMF中，并加入110μl(630μmol)N，N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温搅拌3h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并通过在硅胶上的快速色谱法(洗脱液：20∶0.5∶0.05二氯甲烷/甲醇/17％水溶液氨)纯化残余物。合并对应的级分，并浓缩。用二乙基醚消化得到的残余物，然后在高真空下干燥。随后，将该残余物溶解于10ml二氯甲烷中，并加入3ml无水三氟乙酸。在室温搅拌45分钟以后，浓缩混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物。在高真空下干燥以后，得到117mg(经2个阶段，理论值的57％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.66min；MS(ESIpos)：m/z＝294(M+H)+。
中间体48
(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷羧酰胺三氟乙酸盐
将50mg(180μmol)商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸溶解在5ml DMF中，加入94μl(541μmol)N，N-二异丙基乙胺、31mg(270μmol)N-羟基琥珀酰亚胺和41.5mg(216μmol)EDC，然后将混合物在室温搅拌过夜。然后浓缩反应混合物，将残余物溶解于二噁烷中，加入71mg(901μmol)碳酸氢铵，然后将反应混合物在室温静置3天。然后用乙酸乙酯和水的1∶1混合物稀释反应混合物。取出有机相，经硫酸镁干燥，并浓缩。随后将得到的残余物溶解于3ml二氯甲烷中，并加入3ml无水三氟乙酸。在室温搅拌1h，然后浓缩。将残余物与戊烷一起搅拌，抽滤出，并从二噁烷中低压冻干。以此方式，得到32mg(经2个阶段，理论值的62％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝0.38min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.20min；MS(ESIpos)：m/z＝177(M+H)+。
中间体49
Nα-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酰胺三氟乙酸盐
与中间体13的合成类似地，从起始化合物1和L-色氨酰胺盐酸盐，制备标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.4min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝473(M+H)+。
中间体50
2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基氨基甲酸-4-硝基苯酯
将813mg(3.1mmol)三苯基膦溶解在25ml THF中，并在氩下冷却至-70℃。逐滴加入627mg(3.1mmol)偶氮二甲酸二异丙酯以后，将混合物搅拌5min。随后，将逐滴加入溶解在5ml THF中的500mg(3.1mmol)2-氨基乙基氨基甲酸叔丁酯，并将反应混合物在-70℃搅拌另外5min。然后，加入136.6mg(1.55mmol)2，2-二甲基-1-丙醇(溶解在1ml THF中)和301mg(3.1mmol)马来酰亚胺，将反应混合物在-70℃搅拌另外10min，然后将混合物温热至室温。在室温搅拌另外16h以后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC纯化残余物。得到463mg(62％)受保护的中间体。
在标准条件下除去Boc保护基以后，得到652mg作为三氟乙酸盐的1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2，5-二酮。
将112.9mg(543μmol)氯甲酸硝基苯酯溶解在30ml THF中，并且在加入100mg(271.6μmol)1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2，5-二酮三氟乙酸盐以后，将混合物在室温搅拌30min。过滤混合物，并将滤液浓缩至干燥，然后用二乙基醚制浆。抽滤和干燥以后，得到60mg(理论值的95％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝0.65min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.74min；MS(ESIpos)：m/z＝306(M+H)+。
中间体51
(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙胺三氟乙酸盐
首先在0℃，将200mg(0.75mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸加入5.5ml二氯甲烷中，并加入128mg(0.79mmol)1，1′-羰基二咪唑。30min以后，加入103mg(0.75mmol)苯甲酰基酰肼。在0℃另外45min以后，最后加入500mg(1.5mmol)四溴化碳和395mg(1.5mmol)三苯基膦。将反应混合物首先在0℃搅拌2h，然后在室温搅拌过夜。随后在旋转蒸发器上浓缩混合物，并在高真空下干燥残余物。借助于制备型HPLC，纯化如此得到的粗产物。得到217mg(理论值的78％)Boc-保护的中间体(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基氨基甲酸叔丁酯。
LC-MS(方法12)：Rt＝1.15min；MS(ESIpos)：m/z＝366(M+H)+
将217mg(0.59mmol)该中间体溶解于3ml二氯甲烷中，并加入0.6ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物。剩余的残余物为在减压下进一步干燥的反应混合物，然后从二噁烷低压冻干。以此方式，得到214mg(理论值的90％)标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.62min；MS(ESIpos)：m/z＝266(M+H)+
中间体52
(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙胺三氟乙酸盐
首先在0℃将200mg(0.75mmol)N-(叔丁氧基羰基)-D-苯丙氨酸加入5.5ml二氯甲烷中，并加入128.3mg(0.79mmol)1，1′-羰基二咪唑。30min以后，加入103mg(0.75mmol)苯甲酰基酰肼。在0℃另外45min以后，最后加入500mg(1.5mmol)四溴化碳和395mg(1.5mmol)三苯基膦。将反应混合物首先在0℃搅拌2h，然后在室温搅拌过夜。随后在旋转蒸发器上浓缩混合物，并在高真空下干燥残余物。借助于制备型HPLC，纯化如此得到的粗产物。得到219mg(理论值的80％)Boc-保护的中间体(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基氨基甲酸叔丁酯。
LC-MS(方法2)：Rt＝1.36min；MS(ESIpos)：m/z＝366(M+H)+
将219mg(0.6mmol)该中间体溶解于3ml二氯甲烷中，加入0.6ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物。剩余的残余物为在减压下进一步干燥的反应混合物，然后从二噁烷低压冻干。以此方式，得到196mg(理论值的86％)标题化合物，为固体。
HPLC(方法10)：Rt＝2.41min
中间体53
(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-胺
首先将200mg(1.13mmol)(4S)-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮加入3ml叔丁醇中，并加入280mg(2.26mmol)苄基硫醇。随后将混合物在回流下加热2天。此后，在旋转蒸发器上浓缩反应混合物，并将得到的(2S)-1-(苄基硫烷基)-3-苯基丙烷-2-胺中间体不经后处理直接进一步转化。
HPLC(方法10)：Rt＝2.63min
LC-MS(方法1)：Rt＝0.67min；MS(ESIpos)：m/z＝258(M+H)+
将上面得到的粗制中间体溶解在2ml30％过氧化氢和5ml甲酸的溶液中，并将混合物在室温搅拌12h。然后，将反应混合物加入饱和硫酸钠溶液中，并用乙酸乙酯萃取3次。有机相经硫酸镁干燥，并在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化得到的粗产物。如此得到343mg(理论值的61％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.40min；
LC-MS(方法12)：Rt＝0.65min；MS(ESIpos)：m/z＝290(M+H)+
中间体54
(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-胺
将552.7mg(9.85mmol)氢氧化钾溶解在甲醇中，吸附在1.1g中性氧化铝上，然后在高真空下干燥。在5-10℃，向240mg(0.82mmol)(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-胺和1.56g如此制备的氧化铝负载的氢氧化钾在6.2ml正丁醇中的溶液中，逐滴加入307μl(3.3mmol)二溴二氟甲烷。将反应混合物在室温搅拌2h，然后穿过硅藻土(Celite)过滤，并用二氯甲烷彻底洗涤残余物。浓缩滤液，并在减压下干燥得到的残余物。借助于制备型HPLC，纯化如此得到的粗产物。得到98mg(理论值的35％)标题化合物，E/Z非对映异构体比例为4∶1。
HPLC(方法10)：Rt＝2.46min；
LC-MS(方法12)：Rt＝0.75min；MS(ESIpos)：m/z＝224(M+H)+
将上面得到的E/Z非对映异构体混合物溶解在2ml乙醇和0.2ml N，N-二异丙基乙胺中，并借助于在手性相上的HPLC[柱：Daicel ChiralpakAD-H，5μm250mm x20mm，洗脱液：己烷/(乙醇+0.2％二乙胺)50∶50v/v；紫外检测：220nm；温度：30℃]进行分离。在旋转蒸发器上浓缩适当的级分，并在减压下干燥残余物。得到45mg标题化合物。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ[ppm]＝2.62-2.83(m，2H)3.52-3.71(m，1H)6.18-6.30(m，1H)6.34-6.46(m，1H)6.98-7.57(m，10H)[其它信号被隐藏在溶剂峰下]。
中间体55
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在1ml DMF中，加入13.3mg(35μmol)HATU和15.3μl(88μmol)N，N-二异丙基乙胺，并将混合物在室温搅拌30min。随后，加入12.2mg(32μmol)(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙胺三氟乙酸盐。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后通过制备型HPLC进行分离。得到22mg(理论值的81％)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法12)：Rt＝1.45min；MS(ESIpos)：m/z＝933(M+H)+
通过随后用三氟乙酸除去BOC保护基，然后得到22.4mg(理论值的98％)标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝833(M+H)+
中间体56
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
与中间体55的合成类似地，通过使20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺与12.2mg(32μmol)(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙胺三氟乙酸盐反应，制备N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
收率：17mg(理论值的64％)
HPLC(方法10)：Rt＝3.74min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.45min；MS(ESIpos)：m/z＝933(M+H)+
通过随后用三氟乙酸除去BOC保护基，然后得到17.1mg(理论值的99％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.55min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝833(M+H)+
中间体57
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
与中间体55的合成类似地，通过使20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺与9.3mg(20μmol)(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-胺反应，制备N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
收率：19.2mg(理论值的68％)
HPLC(方法10)：Rt＝3.5min；
LC-MS(方法12)：Rt＝1.41min；MS(ESIpos)：m/z＝957(M+H)+
通过随后用三氟乙酸除去BOC保护基，然后得到19.3mg(理论值的99％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.52min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝857(M+H)+
中间体58
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
与中间体55的合成类似地，通过使20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺与7.1mg(32μmol)(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-胺反应，制备N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
收率：15.1mg(理论值的58％)
HPLC(方法10)：Rt＝4.2min；
LC-MS(方法12)：Rt＝1.51min；MS(ESIpos)：m/z＝891(M+H)+
通过随后用三氟乙酸除去BOC保护基，然后得到15.7mg(理论值的99％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.62min；
LC-MS(方法12)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝791(M+H)+
中间体61
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将50mg(0.054mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体16)溶解在8ml二噁烷/水中，并加入70ml(0.108mmol)15％的4-氧代丁酸在水中的溶液。随后将反应混合物在100℃搅拌1h。冷却至室温后，加入3.7mg(0.059mmol)氰基硼氢化钠，并通过加入约300μl0.1N盐酸，将混合物调节至pH3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外2h。冷却后，加入另外70ml(0.108mmol)15％4-氧代丁酸溶液，并将反应混合物再次在100℃搅拌1h。然后，加入另外3.7mg(0.059mmol)氰基硼氢化钠，并随后使用约300μl0.1N盐酸将pH调回3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外2h。在转化仍然不完全的情况下，重复该操作第三次。最后浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。以此方式，得到无色泡沫形式的32mg(理论值的65％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.64min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.76min；MS(ESIpos)：m/z＝899(M+H)+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ＝8.95和8.8(2m，1H)，8.88和8.65(2s，1H)，7.4-7.1(m，5H)，5.0，4.78，4.65和4.55(4m，2H)，4.1-3.7(m，5H)，3.32，3.29，3.20，3.12，3.1和3.0(6s，9H)，2.75(m，2H)，2.63(t，1H)，2.4-2.2(m，4H)，2.1-1.2(m，12H)，1.2-0.8(m，16H)，0.75(m，3H)[其它信号被隐藏在H2O和DMSO峰下]。
中间体62
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体61的合成类似地，通过使50mgN-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体14)与4-氧代丁酸反应，制备标题化合物。
收率：34mg(理论值的70％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.64min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.77min；MS(ESIpos)：m/z＝887(M+H)+。
中间体63
N-(4-羧基苄基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体61的合成类似地，通过使15mgN-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体16)与4-甲酰基苯甲酸反应，制备标题化合物。
收率：7.5mg(理论值的48％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.75min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝947(M+H)+。
中间体64
N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(0.011mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体16)溶解在2ml二噁烷/水中，并加入2.8mg(0.022mmol)6-氧代己酸。随后将反应混合物在100℃搅拌1h。冷却至室温后，加入0.75mg(0.012mmol)氰基硼氢化钠，并通过加入0.1N盐酸，将混合物调节至pH3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外1小时。冷却后，加入另外2.8mg(0.022mmol)6-氧代己酸，并将反应混合物再次在100℃搅拌1h。加入另外0.75mg(0.012mmol)氰基硼氢化钠，随后使用0.1N盐酸将pH调回3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外1h。然后将该操作重复第三次。最后浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化粗产物。得到6.4mg(理论值的64％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.68min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.86min；MS(ESIpos)：m/z＝927(M+H)+。
中间体65
N-(2-氨基乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺双三氟乙酸盐
如下制备标题化合物：使68mgN-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体14)与2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯反应，随后用三氟乙酸除去Boc保护基。
收率：49mg(经2个阶段，理论值的62％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.58min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.05min；MS(ESIpos)：m/z＝844(M+H)+
1H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ＝8.25(m，1H)，8.45和8.15(2d，1H)，7.65-7.55(m，3H)，7.23-7.1(m，5H)，5.12和4.95(2m，1H)，4.72和4.62(2m，1H)，4.6和4.52(2t，1H)，4.2-3.8(m，4H)，3.7(d，1H)，3.23，3.20，3.19，3.18，3.03和2.98(6s，9H)，3.0-2.7(m，6H)，2.4-1.2(m，15H)，1.05，1.0，0.88和0.82(4d，6H)，0.92(m，6H)，0.73(m，6H)[其它信号被隐藏在H2O峰下]。
中间体66
N-(3-氨基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体65的合成类似地，通过使25mg(0.027mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体16)与3-氧代丙基氨基甲酸苄酯反应，随后氢解除去Z保护基(用10％炭载钯作为催化剂，在作为溶剂的乙醇中)，制备标题化合物。
收率：11mg(经2个阶段，理论值的41％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.53min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.72min；MS(ESIpos)：m/z＝870(M+H)+。
中间体67
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将26mg(26μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐和33.9μl15％琥珀醛酸水溶液(53μmol)溶解在957μl1∶1-二噁烷/水混合物中，并加热至100℃保持1h。短暂冷却后，加入1.81mg(29μmol)氰基硼氢化钠。通过加入0.1N盐酸，将反应混合物调节至pH3，并将混合物加热至100℃保持另外2h。再次加入相同量的琥珀醛酸溶液、氰基硼氢化钠和盐酸以后，将混合物再次加热至100℃保持2h。然后借助于制备型HPLC，将反应混合物直接分离成它的组分。如此得到18.5mg(理论值的73％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.17min；m/z＝967(M+H)+。
中间体68
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将24mg(26μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐和33.7μl15％琥珀醛酸水溶液(52μmol)溶解在953μl1∶1-二噁烷/水混合物中，并加热至100℃保持1h。短暂冷却后，加入1.80mg(29μmol)氰基硼氢化钠。通过加入0.1N盐酸，将反应混合物调节至pH3，并将混合物加热至100℃保持另外2h。再次加入相同量的琥珀醛酸溶液、氰基硼氢化钠和盐酸以后，将混合物再次加热至100℃保持2h。然后借助于制备型HPLC，将反应混合物直接分离成它的组分。如此得到15.2mg(理论值的65％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；m/z＝895(M+H)+
中间体69
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将53mg(84μmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)和45mg(84μmol)N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸盐(中间体12)溶解于2ml DMF中，加入19μl N，N-二异丙基乙胺、14mg(92μmol)HOBt和17.6mg(92μmol)EDC，然后将混合物在室温搅拌过夜。随后，浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。得到59mg(理论值的68％)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.55min；m/z＝1044(M+H)+。
在5ml DMF中，用1.2ml哌啶处理57mg(0.055mmol)该中间体，以除去Fmoc保护基。借助于制备型HPLC浓缩和纯化以后，得到39mg(理论值的76％)游离胺中间体N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；m/z＝822(M+H)+。
将37mg(0.045mmol)该中间体溶解在5ml二噁烷/水中，并与中间体66中的化合物的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与15％的4-氧代丁酸水溶液反应。得到无色泡沫形式的16mg(理论值的39％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；MS(ESIpos)：m/z＝908(M+H)+。
中间体70
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体14中描述的合成类似地，从中间体4和26开始，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
将30mg(0.032mmol)该化合物溶解在6ml二噁烷/水中，并加入41μl(0.063mmol)15％的4-氧代丁酸水溶液。随后将反应混合物在100℃搅拌1h。冷却至室温后，加入2.2mg(0.035mmol)氰基硼氢化钠，并通过加入约300μl0.1N盐酸，将混合物调节至pH3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外2h。冷却后，加入另外41μl(0.063mmol)15％4-氧代丁酸溶液，并将反应混合物再次在100℃搅拌1h。然后，加入另外2.2mg(0.035mmol)氰基硼氢化钠，随后使用约300μl0.1N盐酸将pH调回3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外2h。在转化仍然不完全的情况下，将该操作重复第三次。最后浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化粗产物。得到24mg(理论值的82％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.15min；MS(ESIpos)：m/z＝922(M+H)+。
中间体71
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体14中描述的合成类似地，从中间体4和39开始，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。然后与中间体61的制备类似地，通过使7mg(0.009mmol)该化合物在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到2mg(理论值的22％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.06min；MS(ESIpos)：m/z＝832(M+H)+。
中间体72
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将212mg(411μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体8)和237mg(411μmol)N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酸苄酯三氟乙酸盐(中间体20)溶解于30ml DMF中，并加入188mg(493μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和215μl N，N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温搅拌20h，然后在减压下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。将产物级分合并和浓缩，并在高真空下干燥残余物。得到315mg(理论值的80％)Boc-保护的中间体N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为无色泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.45min；m/z＝961(M+H)+。
用1ml三氟乙酸在9ml二氯甲烷中的溶液处理50mg(52μmol)该中间体，以除去Boc保护基。借助于制备型HPLC浓缩和纯化以后，得到29mg(理论值的57％)游离胺中间体N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.99min；m/z＝861(M+H)+。
将29mg(0.03mmol)该中间体溶解在6ml二噁烷/水中，并加入39μl(0.059mmol)15％的4-氧代丁酸水溶液。随后将反应混合物在100℃搅拌1h。冷却至室温后，加入2mg(0.033mmol)氰基硼氢化钠，并通过加入约300μl0.1N盐酸，将混合物调节至pH3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外2h。冷却后，加入另外39μl(0.059mmol)15％4-氧代丁酸溶液，并将反应混合物再次在100℃搅拌1h。然后，加入另外2mg(0.033mmol)氰基硼氢化钠，并随后使用约300μl0.1N盐酸将pH调回3。然后将混合物在100℃搅拌另外2h。此后，将反应混合物倒在半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的1∶1混合物上。取出有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，并浓缩。从水/乙腈冷冻干燥残余物。得到27mg(理论值的94％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.04min；MS(ESIpos)：m/z＝947(M+H)+。
中间体73
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)氨基]-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体14中描述的合成类似地，从中间体4和38开始，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)氨基]-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。然后使用25mg(0.026mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到13mg(理论值的54％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.01min；MS(ESIpos)：m/z＝921(M+H)+。
中间体74
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(1S，2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基环丙基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将50mg(73μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和28mg(73μmol)(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸苄酯三氟乙酸盐(中间体45)溶解于5ml DMF中，并加入42mg(110μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和38μl N，N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温搅拌5h，然后在减压下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。合并产物级分，并浓缩。从二噁烷/水低压冻干以后，得到35mg(理论值的51％)Boc-保护的中间体N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(1S，2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基环丙基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为无色泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.52min；m/z＝934(M+H)+。
用1ml三氟乙酸在5ml二氯甲烷中的溶液处理35mg该中间体，以除去Boc保护基。浓缩和从二噁烷/水低压冻干以后，得到34mg(理论值的97％)游离胺中间体N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(1S，2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基环丙基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.91min；m/z＝834(M+H)+。
然后与中间体66的制备类似地，通过使11mg(0.011mmol)该中间体在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到2.5mg(理论值的24％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.1min；MS(ESIpos)：m/z＝920(M+H)+。
中间体75
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S，2R)-2-苯基-1-(丙基氨甲酰基)环丙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体74中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和(1S，2R)-1-氨基-2-苯基-N-丙基环丙烷羧酰胺三氟乙酸盐(中间体27)偶联，随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S，2R)-2-苯基-1-(丙基氨甲酰基)环丙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用14mg(0.016mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到11.3mg(理论值的83％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.27min；MS(ESIpos)：m/z＝871(M+H)+。
中间体76
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使中间体46(N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺)与中间体48((1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸乙酯三氟乙酸盐)偶联和随后除去Boc，制备起始化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐。然后与中间体61类似地，通过使用70mg(0.079mmol)该起始原料与4-氧代丁酸反应，得到46mg(理论值的68％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.28min；MS(ESIpos)：m/z＝858(M+H)+
中间体77
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体75中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和L-苯基丙氨酰胺盐酸盐偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用47mg(0.049mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到39mg(理论值的96％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.44min；MS(ESIpos)：m/z＝817(M+H)+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ＝8.95和8.8(2m，1H)，8.25和8.0(2d，1H)，7.45，7.35和7.0(3s，宽峰，2H)，7.3-7.1(m，5H)，4.8-4.4(2m，3H)，3.95(m，1H)，3.82(m，1H)，3.72(d，1H)，3.22，3.18，3.15，3.05和3.00(5s，9H)，2.85-2.7(m，4H)，2.45-1.6(m，12H)，1.5-1.2(m，3H)，1.1-0.7(m，21H)[其它信号被隐藏在溶剂峰下]。
中间体78
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体66类似地，经2个阶段制备该化合物：从20mg(16μmol)得自中间体14和6-氧代己基氨基甲酸苄酯的化合物开始，在作为溶剂的甲醇中进行氢化。
收率：7.6mg(理论值的55％，经2个阶段)
HPLC(方法6)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.7min；MS(ESIpos)：m/z＝901(M+H)+。
中间体79
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将36mg(43μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体46)和4.6mg(43μmol)苄胺溶解于5ml DMF中，加入7.5μl(88μmol)N，N-二异丙基乙胺、10mg(65μmol)HOBt和10mg(52μmol)EDC，然后将混合物在室温搅拌过夜。随后，浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。得到29mg(理论值的73％)Boc-保护的中间体N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.43min；m/z＝921(M+H)+。
用1ml三氟乙酸在6ml二氯甲烷中的溶液处理29mg该中间体，以除去Boc保护基。浓缩和从二噁烷/水低压冻干以后，得到30mg(定量)游离胺中间体N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.95min；m/z＝821(M+H)+。
然后使用17mg(0.018mmol)该中间体，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到13mg(理论值的80％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.97min；MS(ESIpos)：m/z＝907(M+H)+。
中间体80
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体74中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和N-苄基-L-色氨酰胺三氟乙酸盐(中间体47)偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用10mg(0.01mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到2.5mg(理论值的26％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.13min；MS(ESIpos)：m/z＝946(M+H)+。
中间体81
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-氨甲酰基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体74中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷羧酰胺三氟乙酸盐(中间体48)偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-氨甲酰基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用14mg(0.0163mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到8mg(理论值的57％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.64min；MS(ESIpos)：m/z＝829(M+H)+。
中间体82
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体69中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)和Nα-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酰胺三氟乙酸盐(中间体49)偶联，并随后借助于哌啶除去Fmoc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用78mg(0.088mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到68mg(理论值的90％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.49min；MS(ESIpos)：m/z＝856(M+H)+。
中间体83
N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体82中的化合物类似地，从20mg(26μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐开始，在有制备的氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，制备该化合物。
收率：5mg(理论值的25％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.72min；MS(ESIpos)：m/z＝884(M+H)+。
中间体84
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(吗啉-4-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体79中描述的合成类似地，通过在有EDC和HOBT存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体46)和吗啉偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(吗啉-4-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用30mg(0.033mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到22mg(理论值的76％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.58min；MS(ESIpos)：m/z＝887(M+H)+。
中间体85
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3R)-1-(苄基氨基)-3-羟基-1-氧代丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体79中描述的合成类似地，通过在有HATU存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体46)和N-苄基-L-苏氨酰胺三氟乙酸盐偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3R)-1-(苄基氨基)-3-羟基-1-氧代丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用21mg(0.024mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到20mg(理论值的97％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.54min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.49min；MS(ESIpos)：m/z＝861(M+H)+。
中间体86
4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-tert.-丁氧基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基](甲基)氨基}-3-甲基丁-2-基]氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基](甲基)氨基}丁酸
首先，与在中间体74中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和L-苯基丙氨酸叔丁酯盐酸盐偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基得到叔丁基酯(与三氟乙酸一起在二氯甲烷中搅拌40分钟)，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用22mg(0.02mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到16mg(理论值的94％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.05min；MS(ESIpos)：m/z＝874(M+H)+。
中间体87
4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基](甲基)氨基}-3-甲基丁-2-基]氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基](甲基)氨基}丁酸
与在中间体86中描述的合成类似地，从230mg(336μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和L-色氨酸叔丁酯盐酸盐开始，经3个阶段制备该化合物。
收率：95mg(理论值的31％，经3个阶段)
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.05min；MS(ESIpos)：m/z＝913(M+H)+。
中间体88
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体69中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)和Nα-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酰胺三氟乙酸盐(中间体49)偶联，并随后借助于哌啶除去Fmoc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用30mg(0.03mmol)该化合物，与中间体61的化合物的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与6-氧代己基氨基甲酸苄酯(其已经预先通过氧化6-羟基己基氨基甲酸苄酯而得到)反应，得到17mg(理论值的45％)Z-保护的化合物。随后，在10％钯/活性炭上在甲醇中进行氢解，得到标题化合物。
收率：14mg(理论值的95％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.73min；MS(ESIpos)：m/z＝869(M+H)+。
中间体89
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体86中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和L-色氨酸叔丁酯盐酸盐偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基得到叔丁基酯(与1∶10三氟乙酸/二氯甲烷一起搅拌30min)，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用71mg(0.075mmol)该化合物，与中间体61的化合物的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与6-氧代己基氨基甲酸苄酯(其已经预先通过氧化6-羟基己基氨基甲酸苄酯而得到)反应，得到35mg(理论值的44％)z-保护的化合物。随后，在10％钯/活性炭上在甲醇中进行氢解，得到标题化合物。
收率：30mg(理论值的98％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.77min；MS(ESIpos)：m/z＝926(M+H)+。
中间体90
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体74中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和2-(1H-吲哚-3-基)乙胺偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用100mg(0.119mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到50mg(理论值的49％)标题化合物。在这里通过在硅胶上的快速色谱法纯化标题化合物，使用二氯甲烷/甲醇/17％氨作为洗脱液，在此过程中，将混合比从最初的15/2/02转换至15/4/0.5。
HPLC(方法6)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝813(M+H)+。
中间体91
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-{(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-{(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-[(2-苯基乙基)氨基]丙基}吡咯烷-1-基]-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基}-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体74中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和苯基乙胺偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-{(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-{(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-[(2-苯基乙基)氨基]丙基}吡咯烷-1-基]-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基}-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用57mg(0.071mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到44mg(理论值的80％)标题化合物。在这里也通过在硅胶上的快速色谱法纯化标题化合物，使用二氯甲烷/甲醇/17％氨作为洗脱液(15/2/02-＞15/4/0.5)。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.64min；MS(ESIpos)：m/z＝774(M+H)+。
中间体92
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使用100mg(0.139mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体40)，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到94mg(理论值的84％)标题化合物。通过制备型HPLC纯化标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.46min；MS(ESIpos)：m/z＝804(M+H)+。
中间体93
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将22.4mg(24μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐溶解在1.4ml二噁烷/水中，并且与中间体61的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与15％的4-氧代丁酸水溶液反应。从二噁烷低压冻干以后，得到白色固体形式的8.2mg(理论值的38％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.54min
LC-MS(方法12)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝919(M+H)+
中间体94
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将17.1mg(18μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐溶解在1.1ml二噁烷/水中，并且与中间体61的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与15％的4-氧代丁酸水溶液反应。从二噁烷低压冻干以后，得到白色固体形式的14.8mg(理论值的89％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.54min；
LC-MS(方法12)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝919(M+H)+
中间体95
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将19.3mg(20μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐溶解在1.2ml二噁烷/水中，并且与中间体61的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与15％的4-氧代丁酸水溶液反应。从二噁烷低压冻干以后，得到固体形式的8.6mg(理论值的45％)标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝943(M+H)+
中间体96
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将15.5mg(10μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐溶解在1.0ml二噁烷/水中，并且与中间体61的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与15％的4-氧代丁酸水溶液反应。从二噁烷低压冻干以后，得到白色固体形式的10.3mg(理论值的68％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.59min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝877(M+H)+
中间体97
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下制备标题化合物：与中间体66的合成类似地，使200mg(0.108mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体16)与3-氧代己基氨基甲酸苄酯反应，随后氢解除去Z保护基(用5％炭载钯作为催化剂，在作为溶剂的甲醇中)。
收率：69mg(理论值的65％，经2个阶段)
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.76min；MS(ESIpos)：m/z＝912(M+H)+。
中间体98
N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体80中描述的合成类似地制备该化合物。通过制备型HPLC实现纯化。
收率：40mg(理论值的29％，经3个阶段)
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝974(M+H)+。
中间体99
(2S)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)丙烷-1-酮三氟乙酸盐
将324mg(0.81mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-色氨酸-2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯溶解在20ml DMF中，并加入200mg(1.62mmol)1，2-噁嗪烷盐酸盐(起始化合物5)和850μl N，N-二异丙基乙胺。将反应混合物在50℃搅拌过夜，然后在减压下浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中，并用水萃取。有机相经硫酸镁干燥，并浓缩。通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用4∶1二氯甲烷/乙酸乙酯作为洗脱液。浓缩产物级分，并在高真空下干燥残余物。得到147.5mg(理论值的48％)Boc-保护的中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.03min；MS(ESIpos)：m/z＝374(M+H)+。
使用166mg(444.5μmol)该中间体，在标准条件下，用3ml三氟乙酸在20ml二氯甲烷中的溶液，除去Boc保护基，并且在HPLC纯化以后，得到155mg(理论值的86％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.43min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.56min；MS(ESIpos)：m/z＝274(M+H)+。
中间体100
N-(6-{[(苄氧基)羰基]氨基}己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将177mg(260μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和100mg(260μmol)(2S)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)丙烷-1-酮三氟乙酸盐(中间体99)溶解于15ml DMF中，并加入118mg(310μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和140μl N，N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温搅拌30min，然后在减压下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。合并产物级分，并浓缩。从二噁烷低压冻干以后，得到170mg(理论值的68％)Boc-保护的中间体。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.36min；m/z＝940(M+H)+。
将170mg该中间体用3ml三氟乙酸在30ml二氯甲烷中的溶液处理30min，以除去Boc保护基。然后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物，得到155mg(理论值的86％)去保护的N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝1.85min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝840(M+H)+。
然后使用50mg(0.052mmol)该中间体，与中间体97的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与3-氧代己基氨基甲酸苄酯反应，随后氢解除去Z保护基(用5％炭载钯作为催化剂，在作为溶剂的甲醇中)，得到标题化合物。
收率：21mg(理论值的37％)
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.02min；MS(ESIpos)：m/z＝1073(M+H)+。
中间体101
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将26.7mg(24.87μmol)中间体100溶解在10ml甲醇中，并在标准氢压力下在钯/活性炭(5％)上氢化30min。滤出催化剂，并在减压下蒸发出溶剂。在已经在高真空下干燥残余物以后，得到22.5mg(理论值的96％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.76min；MS(ESIpos)：m/z＝939(M+H)+。
中间体102
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(吗啉-4-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(吗啉-4-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼，制备该化合物。
收率：8mg(理论值的71％)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝1094(M+H)+。
中间体103
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3R)-1-(苄基氨基)-3-羟基-1-氧代丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3R)-1-(苄基氨基)-3-羟基-1-氧代丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼，制备该化合物。
收率：3mg(理论值的22％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.78min；MS(ESIpos)：m/z＝1069(M+H)+。
中间体104
N-{4-[(反式-4-{[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}环己基)氨基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，如下从反式-4-氨基环己烷甲酸制备反式-4-氨基环己烷甲酸苄酯三氟乙酸盐：引入Boc保护基，然后引入苄基酯保护基，随后通过常规肽化学方法除去Boc保护基。
然后将15mg(18μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在5ml二甲基甲酰胺中，随后与13mg(35μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、9μl N，N-二异丙基乙胺和15mg(44μmol)反式-4-氨基环己烷甲酸苄酯三氟乙酸盐混合。将混合物在室温搅拌1h，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。合并对应的级分，并在减压下蒸发出溶剂。在已经在高真空下干燥残余物以后，得到14.7mg(理论值的78％)受保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.95min；MS(ESIpos)：m/z＝1072(M+H)+。
从该受保护的中间体，首先通过氢解方式除去苄基酯，并以定量收率得到游离羧基组分。将14mg(14μmol；1当量)去保护的化合物溶解于5mlDMF中，并在有4.1mg(21μmol；1.5当量)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、7.5μl(44μmol；3.1当量)N，N-二异丙基乙胺和0.9mg(7μmol；0.5当量)4-二甲基氨基吡啶存在下与3.3mg(29μmol；2.1当量)N-羟基琥珀酰亚胺混合，并将混合物在室温搅拌过夜。然后，加入另外10当量的N-羟基琥珀酰亚胺、5当量的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、5当量的N，N-二异丙基乙胺和0.5当量的4-二甲基氨基吡啶，并将反应混合物在超声浴中处理5h。随后，蒸发出溶剂，借助于制备型HPLC纯化残余物，合并对应的级分，并浓缩。从二噁烷低压冻干残余物以后，得到9.7mg(理论值的62％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.77min；MS(ESIpos)：m/z＝1078(M+H)+。
中间体105
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基](甲基)氨基}-3-甲基丁-2-基]氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基](甲基)氨基}丁酸和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼开始，制备该化合物。以42％收率，得到酯中间体。在第二步中，用三氟乙酸叔丁基酯裂解6mg(6μmol)该中间体。HPLC纯化以后，得到3.4mg(理论值的48％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.66min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.04min；MS(ESIpos)：m/z＝1025(M+H)+。
中间体106
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将14mg(16μmol)N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体87)溶解于750μl二噁烷中，并与1.5ml饱和碳酸氢钠溶液混合，然后与3.2mg(21μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯混合。将反应混合物在室温搅拌1h，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到5.5mg(理论值的36％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.84min；MS(ESIpos)：m/z＝949(M+H)+。
中间体107
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将38mg(47μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在37ml DMF中，然后与71mg(187μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、33μl N，N-二异丙基乙胺和37mg(140μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌1h。这之后，在高真空下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化剩余的残余物。从而得到12.2mg(理论值的26％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝1020(M+H)+。
中间体108
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-{(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-{(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-[(2-苯基乙基)氨基]丙基}吡咯烷-1-基]-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基}-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体107类似地制备所述化合物。
收率：2.5mg(理论值的30％)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝981(M+H)+。
中间体109
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体107类似地，从中间体92的化合物制备所述化合物。
收率：35mg(理论值的65％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.76min；MS(ESIpos)：m/z＝1011(M+H)+。
中间体110
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体147类似地，从中间体83的化合物制备所述化合物。
收率：2.4mg(理论值的24％)
HPLC(方法6)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝981(M+H)+。
中间体111
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-1-甲基肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体140类似地，从中间体82和中间体22制备所述化合物。
收率：6.5mg(理论值的51％)
HPLC(方法6)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝4.71min；MS(ESIpos)：m/z＝1077(M+H)+。
中间体112
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-氨甲酰基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，从中间体81的化合物制备所述化合物。
收率：5.7mg(理论值的57％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝1036(M+H)+。
中间体113
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将95mg(104μmol)4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基](甲基)氨基}-3-甲基丁-2-基]氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基](甲基)氨基}丁酸溶解在DMF中，然后与79.5mg(209μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、73μl N，N-二异丙基乙胺和68mg(261μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌2h。这之后，在高真空下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化剩余的残余物。从而得到104mg(理论值的89％)标题化合物的叔丁基酯，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.93min；MS(ESIpos)：m/z＝1121(M+H)+。
将中间体溶解于33.4ml二氯甲烷中，加入17ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌1h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物。
从而得到61mg(理论值的62％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1064(M+H)+。
中间体114
N-[6-({[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]氨甲酰基}氨基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将5mg(5μmol)N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解于885μl DMF中，并与5.3mg(8μmol)2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基氨基甲酸-4-硝基苯酯和2.8μl N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌2h，然后浓缩至干燥。借助于制备型HPLC纯化残余物。
收率：0.58mg(理论值的11％)无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.83min；MS(ESIpos)：m/z＝1035(M+H)+。
中间体115
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体147中的化合物类似地，从8mg(9μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺开始，制备该化合物。浓缩后，借助于制备型HPLC纯化活化的酯，并且，在减压下除去溶剂以后，立即与抗体反应。
收率：3mg(理论值的27％)(水解敏感的)
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝996(M+H)+。
中间体116
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体147中的化合物类似地，从5mg(6μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺开始，制备该化合物。浓缩后，借助于制备型HPLC纯化活化的酯，并且，在减压下除去溶剂以后，立即与抗体反应。
收率：3.2mg(理论值的43％)(水解敏感的)
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝984(M+H)+。
中间体117
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，从中间体86的化合物制备所述化合物。
收率：7mg(理论值的42％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝1081(M+H)+。
中间体118
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2R)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，从7mg(7.8μmol)中间体68中的化合物制备目标化合物。收率：6.3mg(理论值的53％)
LC-MS(方法1)：Rt＝1.00min；MS(ESIpos)：m/z＝1102(M+H)+。
中间体119
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，使7.4mg(8.1mmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和6.3mg(24.2mmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼盐酸盐偶联，并后处理。得到1.6mg(理论值的13％)作为固体的标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.89min；MS(ESIpos)：m/z＝1126(M+H)+
中间体120
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，使12.8mg(13.9mmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和10.9mg(41.8mmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼盐酸盐偶联，并后处理。得到10.8mg(理论值的59％)作为固体的标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.90min；MS(ESIpos)：m/z＝1126(M+H)+
中间体121
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，使7.4mg(7.9mmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和6.2mg(23.5mmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼盐酸盐偶联，并后处理。得到6.9mg(理论值的74％)作为固体的标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝1150(M+H)+
中间体122
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，使8mg(9.1mmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和7.2mg(27.4mmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼盐酸盐偶联，并后处理。得到8.2mg(理论值的82％)作为白色固体的标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.95min；MS(ESIpos)：m/z＝1083(M+H)+
中间体123
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将30mg(30μmol)中间体89溶解于2ml1，4-二噁烷中，并与4ml饱和碳酸氢钠溶液混合，然后与7.5mg(50μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯混合。将反应混合物在室温搅拌1h，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到24mg(理论值的74％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；MS(ESIpos)：m/z＝1006(M+H)+。
中间体124
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使22mg(20μmol)中间体123与4ml三氟乙酸在8ml二氯甲烷中在室温反应1h。此后，在减压下浓缩反应混合物。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到11mg(理论值的54％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝950(M+H)+。
中间体125
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将22.5mg(20μmol)中间体101溶解于2ml1∶1二噁烷/水中，然后与5.6mg(40μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯和与0.25ml饱和碳酸氢钠溶液混合。将反应混合物在室温搅拌30min。然后，加入另外0.25ml饱和碳酸氢钠溶液，并将反应混合物在室温搅拌另外15min，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到12.8mg(理论值的50％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.95min；MS(ESIpos)：m/z＝1019(M+H)+。
中间体126
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将64mg(70μmol)N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体97)溶解于3ml1∶1二噁烷/水中，然后用4ml饱和碳酸氢钠溶液调节至pH9，随后与16.3mg(110μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯混合。将反应混合物在室温搅拌1h，然后在减压下浓缩。然后，加入另外8mg(55μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯，并将反应混合物再次调至pH9，并在室温搅拌另外1小时。这之后进行浓缩，并借助于制备型HPLC纯化剩余的残余物。最初得到31mg仍未环化的中间体。将27mg该中间体再次溶解于2ml1∶1二噁烷/水中，然后与250μl饱和碳酸氢钠溶液混合。在室温搅拌2小时以后，浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。低压冻干以后，得到20mg(理论值的29％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.96min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝992(M+H)+。
中间体127
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将17mg(18μmol)N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体98)溶解在2.8ml二氯甲烷中，并与20mg(174mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，然后与10mg(52μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.21mg(0.17μmol)DMAP混合。在室温搅拌4h以后，在减压下浓缩反应混合物。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到8.2mg(理论值的43％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.98min；MS(ESIpos)：m/z＝1071(M+H)+。
中间体128
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将5mg(5.6μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在845μlDMF中，然后与3.2mg(17μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、2.6mg(17μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、1.96μl N，N-二异丙基乙胺和5.9mg(22.5μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到2.2mg(理论值的36％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.88min；MS(ESIpos)：m/z＝1094(M+H)+。
中间体129
N-(6-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将4mg(4.3μmol)N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在646μl DMF中，然后与2.5mg(13μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、2.0mg(13μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、2.25μl N，N-二异丙基乙胺和4.5mg(17μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌3h，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到1.9mg(理论值的39％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.9min；MS(ESIpos)：m/z＝1134(M+H)+。
中间体130
N-(4-{[(2R)-1-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-5-氧代戊酰基}氨基)丙烷-2-基]氧基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10.5mg(11.7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在3.7ml二氯甲烷中，然后与6.7mg(35μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、0.7mg(5.8μmol)4-二甲基氨基吡啶和8.2mg(47μmol)商购可得的(2R)-2-羟丙基氨基甲酸叔丁酯混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到7.5mg(理论值的61％)Boc-保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.03min；MS(ESIpos)：m/z＝1056(M+H)+。
随后，用三氟乙酸除去Boc保护基。然后将4.9mg(0.005mmol)去保护的粗产物不经进一步纯化溶解于1.8ml二氯甲烷中，并与3.7mg(0.011mmol)1，1′-[(1，5-二氧代戊烷-1，5-二基)双(氧基)]二吡咯烷-2，5-二酮、2.4μl(0.014mmol)N，N-二异丙基乙胺和0.6mg(5μmol)4-二甲基氨基吡啶混合。将混合物在室温搅拌2h，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到0.77mg(理论值的15％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.93min；MS(ESIpos)：m/z＝1167(M+H)+。
中间体131
N-{4-[(1-{5-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-5-氧代戊酰基}哌啶-4-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(11μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在2ml二氯甲烷中，然后与4.3mg(22μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、0.88mg(6μmol)4-二甲基氨基吡啶和5.2mg(22μmol)商购可得的4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到5mg(理论值的40％)Z-保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.04min；MS(ESIpos)：m/z＝1116(M+H)+。
随后，通过在钯/活性炭上在乙醇中的氢解方式，除去Z保护基。然后将4.6mg(0.005mmol)去保护的粗产物不经进一步纯化溶解于1.8ml二氯甲烷中，并与3.8mg(0.012mmol)1，1′-[(1，5-二氧代戊烷-1，5-二基)双(氧基)]二吡咯烷-2，5-二酮、0.8μl(0.005mmol)N，N-二异丙基乙胺和0.6mg(5μmol)4-二甲基氨基吡啶混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到0.96mg(理论值的16％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝1193(M+H)+。
中间体132
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将15mg(16.7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在2500μl DMF中，然后与9.6mg(50μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、7.6mg(50μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、5.8μl N，N-二异丙基乙胺和17.4mg(67μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到11.2mg(理论值的52％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.09min；MS(ESIpos)：m/z＝1106(M+H)+。
中间体133
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将5.8mg(6.3μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在943μl DMF中，然后与3.6mg(19μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、2.9mg(19μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、2.2μl N，N-二异丙基乙胺和6.6mg(25μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到4.5mg(理论值的64％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.03min；MS(ESIpos)：m/z＝1129(M+H)+。
中间体134
N-[3-({[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]氨甲酰基}氨基)丙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，在标准条件下，从商购可得的1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2，5-二酮三氟乙酸盐和氯碳酸-4-硝基苯酯开始，制备2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基氨基甲酸-4-硝基苯酯。
将5mg(6μmol)N-(3-氨基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在1000μl DMF中，然后与2μl N，N-二异丙基乙胺和2.2mg(9μmol)2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基氨基甲酸-4-硝基苯酯混合。将混合物在室温搅拌1h，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到1.6mg(理论值的23％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.09min；MS(ESIpos)：m/z＝1036(M+H)+。
中间体135
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(11μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在4000μl DMF中，然后与6.3mg(33μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、4.5mg(33μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、5.7μl N，N-二异丙基乙胺和11.5mg(44μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到2.6mg(理论值的14％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；MS(ESIpos)：m/z＝1115(M+H)+。
中间体136
N-(4-{4-[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰基]哌嗪-1-基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，在标准条件下，从哌嗪-1-甲酸叔丁酯和4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸开始，经2个阶段制备1-[4-氧代-4-(哌嗪-1-基)丁基]-1H-吡咯-2，5-二酮三氟乙酸盐。
将5mg(5.6μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在1000μl DMF中，然后与2.1mg(11μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1.7mg(11μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、2μl N，N-二异丙基乙胺和3.5mg(5.6μmol)1-[4-氧代-4-(哌嗪-1-基)丁基]-1H-吡咯-2，5-二酮三氟乙酸盐混合。将混合物在室温搅拌过夜。然后，加入2.1mg(5.6μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐，并将反应混合物在室温搅拌另外3h。随后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分，并且，通过从水低压冻干，得到0.6mg(理论值的10％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝1132(M+H)+。
中间体137
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-1-甲基肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，在标准条件下，从商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸和1-甲基肼甲酸叔丁酯开始，经2个阶段制备6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N′-甲基己烷酰肼三氟乙酸盐。
将6.9mg(8μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在2540μlDMF中，然后与3.6mg(9μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、3μl N，N-二异丙基乙胺和4.1mg(12μmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N′-甲基己烷酰肼三氟乙酸盐混合。将混合物在室温搅拌过夜。随后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到3.9mg(理论值的45％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.93min；MS(ESIpos)：m/z＝1108(M+H)+。
中间体138
N-{4-[(2-{[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰基](甲基)氨基}乙基)(甲基)氨基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先从2-(甲基氨基)乙基氨基甲酸叔丁基甲酯和4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸开始，经2个阶段，制备4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]丁酰胺三氟乙酸盐。
将6.6mg(7.3μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在2000μl DMF中，然后与5.6mg(14.7μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、2.6μl N，N-二异丙基乙胺和4.1mg(9μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]丁酰胺三氟乙酸盐混合。在室温搅拌3h以后，再次加入相同量的HATU和N，N-二异丙基乙胺，然后将反应混合物在室温搅拌过夜。随后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到4mg(理论值的44％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.91min；MS(ESIpos)：m/z＝1134(M+H)+。
中间体139
(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7，10-二异丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-5，11-二甲基-6，9-二氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-酸-(2R，3S)-3-氨基-4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁-2-基酯
将13mg(14.7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在10ml二氯甲烷中，然后与8.4mg(44μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、5.4mg(44μmol)4-二甲基氨基吡啶和9mg(29.3μmol)商购可得的N-(叔丁氧基羰基)-L-苏氨酸苄酯混合。将混合物在室温搅拌5h。随后，通过与水和有机相一起摇动，将反应混合物萃取2次，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷/水低压冻干以后，得到14mg(理论值的81％)受保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝2.3min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.13min；MS(ESIpos)：m/z＝1178(M+H)+。
随后，通过在10％钯/活性炭上在甲醇中的氢解方式，除去Z保护基。然后将9.5mg(0.0087mmol)去保护的粗产物不经进一步纯化溶解于5mlDMF中，并与5mg(26.2μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、4mg(26.2μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、54.6μl N，N-二异丙基乙胺和9.1mg(34.9μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌1h，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷低压冻干以后，得到9.5mg(理论值的84％)Boc-保护的中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝1295(M+H)+。
随后，用0.5ml三氟乙酸在2ml二氯甲烷中的溶液，将9.5mg(7.3μmol)Boc-保护的中间体去保护，从二噁烷低压冻干以后，得到9mg(理论值的82％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.84min；MS(ESIpos)：m/z＝1195(M+H)+。
中间体140
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-1-甲基肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将4.1mg(12μmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N′-甲基己烷酰肼三氟乙酸盐(中间体22)与6.9mg(8μmol)得自中间体61的化合物一起溶解在2.5ml DMF中，然后与3.5mg(9μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和3μl N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷低压冻干以后，得到2.6mg(理论值的30％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.90和0.91min；MS(ESIpos)：m/z＝1120(M+H)+。
中间体141
N-[4-({1-[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰基]哌啶-4-基}氧基)-4-氧代丁基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将44mg(49μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在2ml二氯甲烷中，然后与18.8mg(98μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、3.8mg(24μmol)4-二甲基氨基吡啶和23mg(98μmol)商购可得的4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到22mg(理论值的40％)Z-保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.04min；MS(ESIpos)：m/z＝1116(M+H)+。
随后，通过在钯/活性炭上在乙醇中的氢解方式，除去Z保护基。
然后将19mg(19μmol)去保护的粗产物不经进一步纯化溶解于4mlDMF中，并与7mg(39μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸、11mg(29μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和5μl N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌1h，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷低压冻干以后，得到7.5mg(理论值的34％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝1147(M+H)+。
中间体142
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将9mg(9.5μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体72)溶解在1000μlDMF中，然后与10mg(38μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼、7.2mg(19μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和8μl N，N-二异丙基乙胺混合，并将反应混合物在室温搅拌1h。随后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分，并通过低压冻干法得到6.4mg(理论值的58％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.99min；MS(ESIpos)：m/z＝1154(M+H)+。
中间体143
N-(4-{2-[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体142类似地，使6mg(6.7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体61)与3mg(8.7μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁烷酰肼三氟乙酸盐反应，得到2mg(理论值的27％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法3)：Rt＝1.92min；MS(ESIpos)：m/z＝1106(M+H)+。
中间体144
N-(4-{2-[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
向5mg(5.6μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在1ml DMF中的溶液中，加入7.65mg(22.5μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁烷酰肼三氟乙酸盐、3.2mg(16.9μmol)EDC、1.96μl(11.3μmol)二异丙基乙胺和2.6mg(16.9μmol)HOBT。将反应混合物在室温搅拌3h。随后，加入另外0.95mg(2.8μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁烷酰肼三氟乙酸盐。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC进行纯化。得到3.5mg(85％纯度，理论值的48％)标题化合物。
LC-MS(方法3)：Rt＝1.86min；m/z＝1094(M+H)+。
中间体145
N-[3-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将12mg(14μmol)N-(3-氨基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体66)溶解于750μl二噁烷中，并与1.5ml饱和碳酸氢钠溶液混合，然后与3.2mg(21μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯混合。将反应混合物在室温搅拌1h，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到4.2mg(理论值的32％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝950(M+H)+。
中间体146
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)氨基]-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体133类似地，使9mg(9.8μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)氨基]-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体73)与10mg(39μmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼反应，得到1.8mg(理论值的15％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.11min；MS(ESIpos)：m/z＝1128(M+H)+。
中间体147
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将16mg(17μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体70)溶解在2ml二氯甲烷中，并与2.6mg(23mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，然后与4mg(21μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐混合。在室温搅拌2h以后，再次加入相同量的1-羟基吡咯烷-2，5-二酮和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。然后，在室温搅拌过夜，在减压下浓缩反应混合物。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到10mg(理论值的56％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
中间体148
N-{4-[(2-{[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰基](甲基)氨基}乙基)氨基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将6mg(7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体61)与2.8mg(8μmol)N-(2-氨基乙基)-4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丁酰胺三氟乙酸盐、10.1mg(27μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和5μl N，N-二异丙基乙胺在2ml DMF中混合，并在室温搅拌过夜。然后，加入另外5mg(23.5μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和3μl N，N-二异丙基乙胺。在室温搅拌另外5h以后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分，并通过从二噁烷低压冻干，得到1.3mg(理论值的15％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.21min；MS(ESIpos)：m/z＝1120(M+H)+。
中间体149
N-{4-[(2-{[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰基]氨基}乙基)(甲基)氨基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将6mg(7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体61)与3.1mg(9μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-[2-(甲基氨基)乙基]丁酰胺三氟乙酸盐、10.1mg(27μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和5μl N，N-二异丙基乙胺在2ml DMF中混合，并将混合物在室温搅拌4h。然后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分，并通过从二噁烷低压冻干，得到1mg(理论值的13.4％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.89min；MS(ESIpos)：m/z＝1121(M+H)+。
中间体150
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S，2R)-2-苯基-1-(丙基氨甲酰基)环丙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将7.9mg(9μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S，2R)-2-苯基-1-(丙基氨甲酰基)环丙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在3ml DMF中，然后与10.4mg(54μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、8.3mg(54μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、9μl N，N-二异丙基乙胺和9.5mg(36μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到4.3mg(理论值的22％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.93min；MS(ESIpos)：m/z＝1078(M+H)+。
中间体151
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-氨甲酰基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体150类似地，从中间体81中的化合物开始，制备所述化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝1036(M+H)+。
中间体152
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(12μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在3ml DMF中，然后与8.9mg(23μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、10μlN，N-二异丙基乙胺和12mg(47μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌1h。这之后，在高真空下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化剩余的残余物。从而得到5.8mg(理论值的37％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.99min；MS(ESIpos)：m/z＝1066(M+H)+。
中间体153
N-[1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12，15-二氧代-3，6，9-三氧杂-13，14-二氮杂十八烷-18-基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
向5mg(5.6μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在1ml DMF中的溶液中，加入9.7mg(22.5μmol)3-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙烷酰肼三氟乙酸盐、3.2mg(16.9μmol)EDC、1.96μl(11.3μmol)N，N-二异丙基乙胺和2.6mg(16.9μmol)HOBT。将反应混合物在室温搅拌3h。随后，加入另外1.2mg(2.8μmol)3-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙烷酰肼三氟乙酸盐。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后通过制备型HPLC进行纯化。
得到3.6mg(理论值的51％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.90min；m/z＝1185(M+H)+。
中间体154
(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7，10-二异丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-5，11-二甲基-6，9-二氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-酸-(2R，3S)-3-氨基-4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁-2-基酯
将15mg(17μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在10ml二氯甲烷中，然后与12.8mg(67μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、10mg(83μmol)4-二甲基氨基吡啶和10.3mg(33μmol)商购可得的N-(叔丁氧基羰基)-L-苏氨酸苄酯混合。将混合物加热至回流保持4h。然后，再次加入相同量的偶联剂和4-二甲基氨基吡啶，并将反应混合物在回流下加热过夜。随后，用二氯甲烷稀释反应混合物，并通过与水一起摇动1次进行萃取，取出有机相，并在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到7.7mg(理论值的37％)受保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝2.5min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.13min；MS(ESIpos)：m/z＝1190(M+H)+。
随后，通过在标准氢压力下在10％钯/活性炭上在甲醇中氢化，除去苄基酯保护基，如在中间体151中所述，将如此得到酸与6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼偶联。在最后一步中，用三氟乙酸除去Boc保护基。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到0.22mg(理论值的2.5％，经3个阶段)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.81min；MS(ESIpos)：m/z＝1207(M+H)+。
中间体155
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体152中描述的合成类似地，从N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼制备该化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.82min；MS(ESIpos)：m/z＝1024(M+H)+。
中间体156
N-(3-{[(1-{[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}环丙基)羰基]氨基}丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体131的最后阶段中描述的合成类似地，从N-(3-氨基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和1，1′-[环丙烷-1，1-二基双(碳酰氧基)]二吡咯烷-2，5-二酮(其已经预先从对应的二羧酸得到)制备该化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝1080(M+H)+。
中间体157
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将15mg(18μmol)(N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在3.8ml DMF中，然后与27mg(70μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、12μl N，N-二异丙基乙胺和14mg(53μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将反应混合物在室温搅拌1h。这之后，在高真空下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化剩余的残余物。从而得到6.2mg(理论值的33％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝1063(M+H)+。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6，特征信号)：δ＝10.8(d，1H)，9.8-9.7(m，2H)，9.6和9.4(2m，1H)，8.9，8.88，8.78和8.75(4d，1H)，8.08和7.85(2d，1H)，7.6-6.9(m，9H)，4.7-4.4(m，3H)，3.4(t，2H)，3.23，3.2，3.18，3.0，和2.99(5s，9H)，2.8(m，3H)，2.1(t，2H)，1.06和1.01(2d，3H)，0.95-0.8(m，15H)，0.8-0.75(dd，3H)。
中间体158
N-[4-({(2R)-1-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基}氨基)-4-氧代丁基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将13mg(14.7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在4ml二甲基甲酰胺中，然后与9.4mg(25μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、6μl N，N-二异丙基乙胺和7mg(31μmol)商购可得的D-亮氨酸叔丁酯盐酸盐三氟乙酸盐混合。将混合物在室温搅拌5h，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷/水低压冻干以后，得到6.5mg(理论值的49％)受保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.21min；MS(ESIpos)：m/z＝1076(M+H)+。
首先使用三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液从该受保护的中间体除去Boc保护基，得到6.2mg(理论值的99％)去保护的化合物。将5.2mg(5μmol)该中间体溶解于1.5ml二氯甲烷中，并在有1.2mg(6μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.16mg(1μmol)4-二甲基氨基吡啶存在下与0.8mg(7μmol)N-羟基琥珀酰亚胺反应。在室温搅拌2h以后，浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC进行纯化。得到1.3mg标题化合物，将其中的一些水解为反应物。
中间体159
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼，制备该化合物。
收率：6mg(理论值的53％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝1114(M+H)+。
中间体160
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从20mg(21μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼，制备该化合物。
收率：13mg(理论值的52％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝1153(M+H)+。
中间体161
N-(6-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼，制备该化合物。
收率：0.8mg(理论值的16％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.78min；MS(ESIpos)：m/z＝1092(M+H)+。
中间体162
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将18mg(20μmol)N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体64)溶解在3.2ml二氯甲烷中，并与22mg(190mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，然后与11mg(60μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.24mg(0.17μmol)DMAP混合。在室温搅拌2h以后，加入另外22mg(190mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮、11mg(60μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.24mg(0.17μmol)DMAP，并将反应混合物在室温搅拌另外1小时。这之后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到8.2mg(理论值的41％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝1024(M+H)+。
中间体163
[(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙基](1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基)甲酮三氟乙酸盐
首先，与文献方法(参见H.King，J.Chem.Soc.1942，432)类似地，从265mg(0.82mmol)(1S，2R)-1-(羟基氨甲酰基)-2-苯基环丙基氨基甲酸叔丁酯(起始化合物7)开始，通过与1，2-双(溴甲基)苯反应，制备Boc-保护的(1S，2R)-1-(1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基羰基)-2-苯基环丙基氨基甲酸叔丁酯中间体。
收率：108mg(理论值的34％)
LC-MS(方法2)：Rt＝1.3min；MS(ESIpos)：m/z＝395(M+H)+。
将108mg(0.27mmol)该中间体溶解于3.7ml二氯甲烷中，加入1.8ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌15min。这之后在减压下浓缩，并从二噁烷中低压冻干剩余的残余物。以定量收率得到112mg标题化合物，为无色泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.7min；MS(ESIpos)：m/z＝295(M+H)+。
中间体164
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将166mg(0.196mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体10)溶解于40ml DMF中，并接连地与80mg(0.196mmol)[(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙基](1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基)甲酮三氟乙酸盐(中间体163)、112mg(0.294mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和682μl(3.9mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。随后将混合物在室温搅拌过夜。然后在减压下浓缩反应混合物，将残余物溶解于乙酸乙酯中，并用饱和氯化钠水溶液洗涤溶液。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。最后通过制备型HPLC纯化残余物。以此方式，得到19mg(理论值的9％)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
HPLC(方法5)：Rt＝1.68min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.51min；MS(ESIpos)：m/z＝1083(M+H)+。
将19mg(0.015mmol)该中间体溶解在4ml DMF中。已经加入817μl哌啶以后，将反应混合物在室温搅拌5min。这之后在减压下浓缩，并首先用二乙基醚消化残余物，然后借助于制备型HPLC(洗脱液∶乙腈+0.1％TFA/0.1％水溶液TFA)进行纯化。合并对应的级分，在减压下除去溶剂，然后将残余物从二噁烷/水低压冻干。得到12mg(理论值的92％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝861(M+H)+。
中间体165
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使用20mg(0.021mmol)中间体164，与中间体97的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与3-氧代己基氨基甲酸苄酯反应，随后氢解除去Z保护基(用5％炭载钯作为催化剂，在作为溶剂的甲醇中)，以制备标题化合物。
收率：4.5mg(理论值的23％，经2个阶段)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝960(M+H)+。
中间体166
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将4.4mg(4.5μmol)中间体165溶解于1ml1∶1二噁烷/水中，然后与1mg(6.8μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯和50μl饱和碳酸氢钠水溶液混合。将反应混合物在室温搅拌30min。然后，加入另外50μl饱和碳酸氢钠水溶液，并将反应混合物在室温搅拌另外15min，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到1mg(理论值的21％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.08min；MS(ESIpos)：m/z＝1040(M+H)+。
中间体167
3-{2-[2-(2-氧代乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸苄酯
如下从6g(21.55mmol)商购可得的3-{2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸制备标题化合物：首先在标准条件下，用苄基氯和碳酸铯进行酯化，随后用三氧化硫-吡啶复合物进行氧化。
收率：611mg(理论值的10％，经2个阶段)
LC-MS(方法2)：Rt＝1.69min；MS(ESIpos)：m/z＝311(M+H)+。
中间体168
N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体69中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)和Nα-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酰胺三氟乙酸盐(中间体49)偶联，并随后借助于哌啶除去Fmoc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
将25mg(0.028mmol)该化合物和17.5mg(0.06mmol)中间体167在2ml甲醇中混合，并与12.6mg(0.14mmol)硼烷-吡啶复合物和2.5ml乙酸混合。将反应混合物在室温搅拌过夜。然后，再次加入相同量的硼烷-吡啶复合物和乙酸，并将反应混合物在室温搅拌另外24h。这之后在减压下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。浓缩对应的级分和从1∶1二噁烷/水低压冻干以后，得到26.5mg(理论值的88％)Z-保护的标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.04min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝1064(M+H)+。
将25mg(0.024mmol)该中间体溶解于10ml甲醇中，并在10％活性炭载钯上在标准氢压力下在室温氢化45min。然后滤出催化剂，并在减压下除去溶剂。从二噁烷低压冻干以后，得到19.7mg(理论值的85％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.83min；MS(ESIpos)：m/z＝974(M+H)+。
中间体169
N-{2-[2-(2-{3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(10μmol)中间体168溶解在3ml DMF中，并与3.5mg(30mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，然后与2.4mg(10μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和5μl N，N二异丙基乙胺混合。在室温搅拌20h以后，加入8mg(0.02mmol)HATU，并将反应混合物再次在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷低压冻干以后，得到8.6mg(理论值的64％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.81min；MS(ESIpos)：m/z＝1071(M+H)+。
中间体170
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体101类似地，从26mg(0.028mmol)中间体15开始，经2个阶段制备所述化合物。
收率：16.7mg(理论值的63％，经2个阶段)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.81min；MS(ESIpos)：m/z＝914(M+H)+。
中间体171
N-(6-{[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰基]氨基}己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将6.7mg(7.3μmol)从中间体170形成的化合物和3mg(14.7μmol)商购可得的4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸溶解于2ml DMF中，并与5.6mg(14.7μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和2μl N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌30min。浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。合并对应的级分，在减压下除去溶剂，然后将残余物从二噁烷低压冻干。从而得到4.5mg(理论值的56％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.12min；MS(ESIpos)：m/z＝1079(M+H)+。
中间体172
2-{2-[2-(2-氧代乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基氨基甲酸苄酯
如下从商购可得的2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙醇，制备标题化合物：首先在标准条件下引入Z保护基，然后用三氧化硫-吡啶复合物氧化。
HPLC(方法12)：Rt＝1.4min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.65min；MS(ESIpos)：m/z＝326(M+H)+。
中间体173
{2-[2-(2-氧代乙氧基)乙氧基]乙基氨基甲酸苄酯
与中间体172类似地，如下从商购可得的2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙醇制备标题化合物：首先在标准条件下引入Z保护基，然后用三氧化硫-吡啶复合物氧化。
HPLC(方法12)：Rt＝1.3min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.68min；MS(ESIpos)：m/z＝282(M+H)+。
中间体174
N-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体167的制备类似地，在有硼烷-吡啶复合物存在下，用2-{2-[2-(2-氧代乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基氨基甲酸苄酯对47mg(0.05mmol)中间体16进行还原胺化。随后，用5％炭载钯作为催化剂和在作为溶剂的甲醇中，通过氢解方式除去Z保护基，并制备38mg(理论值的66％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.8min；MS(ESIpos)：m/z＝988(M+H)+。
中间体175
N-[2-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体166类似地，从34mg(0.03mmol)中间体174开始，进行制备。
收率：8.3mg(理论值的23％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝1068(M+H)+。
中间体176
N-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下进行制备：与中间体174和175类似地，从用中间体173还原胺化中间体16开始，随后去保护和形成马来酰亚胺。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.8min；MS(ESIpos)：m/z＝981(M+H)+。
中间体177
N-[2-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下进行制备：与中间体174和175类似地，从用中间体172还原胺化中间体16开始，随后去保护和形成马来酰亚胺。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1025(M+H)+。
中间体178
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体162类似地，从6mg中间体82开始，进行制备。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.82min；MS(ESIpos)：m/z＝953(M+H)+。
中间体179
4-[(1E，3S)-3-氨基-4-苯基丁-1-烯-1-基]苯磺酸三氟乙酸盐
将13.6mg(0.06mmol)乙酸钯(II)、469mg(1.46mmol)4-碘苯磺酸钾、300mg(1.21mmol)1-苯基丁-3-烯-2-基氨基甲酸-(S)-叔丁酯、16.5mg(0.12mmol)苯基脲和167.6mg(1.21mmol)碳酸钾在7.5ml DMF中的混合物在微波中加热至160℃保持15min。随后通过制备型HPLC直接纯化粗产物。得到312mg31％的BOC-保护的化合物和69％的游离胺的混合物。
随后将该混合物溶解于30ml二氯甲烷中，与1ml三氟乙酸混合，并在室温搅拌20h。在减压下浓缩以后，将残余物与二乙基醚一起搅拌，并抽滤出形成的沉淀物，用二乙基醚洗涤。得到200mg(理论值的62％)标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.44min；MS(ESIpos)：m/z＝304(M+H)+。
中间体180
4-[(3R)-3-氨基-4-苯基丁基]苯磺酸
将100mg(0.25mmol)4-[(1E，3S)-3-氨基-4-苯基丁-1-烯-1-基]苯磺酸三氟乙酸盐悬浮于10ml乙酸以及几滴DMF和水中，与70mg(0.07mmol)炭载钯(10％)混合，并在2.2巴氢压力下氢化24h。过滤溶液，并通过制备型HPLC纯化滤液。
得到29mg(76％纯度，理论值的21％)产物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.46min；MS(ESIpos)：m/z＝306(M+H)+。
中间体181
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
向90mg(0.13mmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在4ml DMF中的溶液中，加入60mg(0.16mmol)HATU和69μl(0.39mmol)Hünig碱。将反应混合物在室温搅拌30min，然后与60mg(0.15mmol)60.3mg(0.13mmol)4-[(1E，3S)-3-氨基-4-苯基丁-1-烯-1-基]苯磺酸三氟乙酸盐混合。搅拌过夜后，通过制备型HPLC纯化反应混合物。得到127mg标题化合物和已经去保护的胺的44∶56混合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.21min；MS(ESIpos)：m/z＝971(M+H)+；Rt＝0.84min；对于去保护的化合物，MS(ESIpos)：m/z＝871(M+H)+。
中间体182
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将90mg中间体180溶解在4.6ml二氯甲烷中，并加入0.92ml三氟乙酸。将反应混合物在室温搅拌30min，然后浓缩。通过制备型HPLC，纯化得到的粗产物。
得到91mg(理论值的98％)目标化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝871(M+H)+
中间体183
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先将16.7μl(0.03mmol)15％琥珀醛水溶液加入943μl甲醇中，并与17mg(0.02mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体181)和1.1μl(0.02mmol)乙酸混合。将反应混合物在室温搅拌5min，然后加入2.9μl(0.02mmol)硼烷-吡啶复合物。1h以后，加入各自另外2当量的琥珀醛、乙酸和硼烷-吡啶复合物，并将混合物在室温搅拌20h。然后通过制备型HPLC纯化反应混合物。
得到20mg(83％纯度，理论值的80％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝957(M+H)+
中间体184
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将8mg(7.5μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺、2.8mg(8.2μmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼三氟乙酸盐、3.4mg(9μmol)HATU和3.9μl Hünig碱在0.77ml DMF中在室温搅拌20h。随后，通过制备型HPLC纯化反应混合物。
得到3mg(理论值的31％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.90min；MS(ESIpos)：m/z＝1164(M+H)+
中间体185
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
向8mg(7.5μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在2ml DMF中的溶液中，加入8.6mg(74.8μmol)N-羟基琥珀酰亚胺、8.5mg(22.4μmol)EDCI和0.1mg(0.75μmol)DMAP。将反应混合物在室温搅拌20h。随后，加入1.3μl(7.5μmol)Hünig碱，并将混合物搅拌1h。然后通过制备型HPLC纯化反应混合物。得到2.6mg(72％纯度，理论值的21％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.89min；MS(ESIpos)：m/z＝1054(M+H)+
中间体186
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
向43mg(0.06mmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在1.9ml DMF中的溶液中，加入29mg(0.07mmol)HATU和33μl(0.19mmol)Hünig碱。将反应混合物在室温搅拌30min，然后与29mg(0.07mmol)4-[(3R)-3-氨基-4-苯基丁基]苯磺酸三氟乙酸盐混合。搅拌过夜后，通过制备型HPLC纯化反应混合物。得到58mg标题化合物和已经去保护的胺的45∶55混合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.09min；MS(ESIpos)：m/z＝973(M+H)+；Rt＝0.87min；对于去保护的化合物，MS(ESIpos)：m/z＝873(M+H)+。
中间体187
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将58mg中间体186溶解在4.1ml二氯甲烷中，加入0.41ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。在减压下浓缩以后，通过制备型HPLC纯化粗产物。
得到50mg(90％纯度，理论值的85％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝873(M+H)+
中间体188
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先将171μl(0.26mmol)15％琥珀醛水溶液加入2.5ml甲醇中，并与50mg(0.05mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐和11.6μl(0.2mmol)乙酸混合。将反应混合物在室温搅拌5min，然后加入30μl(0.24mmol)硼烷-吡啶复合物。搅拌24小时以后，加入另外等量的硼烷-吡啶复合物，并将混合物搅拌另外2h。然后通过制备型HPLC纯化反应混合物。
得到40mg(90％纯度，理论值的66％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.91min；MS(ESIpos)：m/z＝959(M+H)+
中间体189
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(9.3μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺、3.5mg(10.3μmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼三氟乙酸盐、4.3mg(11.2μmol)HATU和4.9μl(28μmol)Hünig碱在1ml DMF中在室温搅拌20h。随后，通过制备型HPLC纯化反应混合物。
得到4.2mg(92％纯度，理论值的33％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.91min；MS(ESIpos)：m/z＝1166(M+H)+
中间体190
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
向10mg(9.3μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在2.5ml DMF中的溶液中，加入10.7mg(93μmol)N-羟基琥珀酰亚胺、10.6mg(28μmol)EDCI和0.12mg(0.9μmol)DMAP。将反应混合物在室温搅拌20h，然后通过制备型HPLC进行纯化。
得到3.8mg(72％纯度，理论值的25％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.90min；MS(ESIpos)：m/z＝1055(M+H)+
中间体191
(2R，3R)-N-[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐
与中间体7的合成类似地，从起始化合物1和(2S)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)丙烷-1-酮三氟乙酸盐(中间体99)开始，经2个阶段制备标题化合物。
2个阶段的收率：62mg(理论值的67％)
HPLC(方法6)：Rt＝1.65min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.7min；MS(ESIpos)：m/z＝443(M+H)+。
中间体192
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将1015mg(1.59mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解于50ml DMF中，与654mg(2.39mmol)2-溴-1-乙基吡啶鎓四氟硼酸盐(BEP)和2.8mlN，N-二异丙基乙胺混合，并在室温搅拌10min。然后，加入1083mg(1.75mmol)(2R，3R)-N-[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐(中间体191)，然后将混合物在超声浴中在室温处理30min。然后将反应混合物在减压下浓缩，并将残余物溶解于300ml乙酸乙酯中。将有机相接连地用5％柠檬酸水溶液和5％碳酸氢钠水溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将如此得到的粗产物(1684mg不经进一步纯化溶解于20ml乙腈中，加入2ml哌啶，然后将反应混合物在室温搅拌10min。然后，将混合物在减压下浓缩，并将残余物与二乙基醚一起混合。通过再次蒸发来浓缩溶剂，并通过在硅胶上的快速色谱法(洗脱液∶15∶1∶0.1-＞15∶2∶0.2二氯甲烷/甲醇/17％氨水溶液)纯化残余物。合并对应的级分，在减压下除去溶剂，并将残余物从乙腈/水低压冻干。从而得到895mg(67％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.84min；MS(ESIpos)：m/z＝840(M+H)+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ＝10.8(d，1H)，8.3和8.05(2d，1H)，8.0(d，1H)，7.5(m，1H)，7.3(m，1H)，7.15和7.08(2s，1H)7.05-6.9(m，2H)，5.12和4.95(2m，1H)，4.65(m，1H)，4.55(m，1H)，4.1-3.8(m，4H)，3.75(d，1H)，3.23，3.18，3.17，3.12，2.95和2.88(6s，9H)，3.1-3.0和2.85(2m，2H)，2.65(d，1H)，2.4-2.2(m，3H)，2.15(m，3H)，1.95(br.m，2H)，1.85-0.8(br.m，11H)，1.08和1.04(2d，3H)，0.9-0.75(m，15H)，0.75-0.65(dd，3H)[其它信号被隐藏在H2O峰下]。
中间体193
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将50mg(0.052mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体192)和204μl15％的4-氧代丁酸水溶液在2ml甲醇中混合，并与23.4mg(0.252mmol)硼烷-吡啶复合物和6μl乙酸混合。将反应混合物在室温搅拌过夜。这之后在减压下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。浓缩对应的级分以后，得到38mg(理论值的78％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.7min；MS(ESIpos)：m/z＝926(M+H)+。
中间体194
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从10mg(11μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼，制备该化合物。
收率：4.4mg(理论值的35％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.90min；MS(ESIpos)：m/z＝1133(M+H)+。
中间体195
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体166类似地，从9mg(0.010mmol)中间体170开始，制备所述化合物。
收率：1.1mg(理论值的10％)
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.99min；MS(ESIpos)：m/z＝994(M+H)+。
中间体196
(2S)-2-氨基-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-3-苯基丙烷-1-酮三氟乙酸盐
将41mg(0.37mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-苯基丙氨酸-2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯溶解于10ml DMF中，并与149mg(0.41mmol)2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯(起始化合物6)和72μl(0.41mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌1h。在减压下除去溶剂，将残余物溶解于乙酸乙酯中，并通过与5％柠檬酸水溶液一起摇动，然后与5％碳酸氢钠水溶液一起摇动，进行萃取。浓缩有机相，并使用10∶1甲苯/乙醇作为洗脱液，通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物。合并对应的级分，并在减压下除去溶剂。在已经在高真空下干燥残余物以后，如此得到69mg(理论值的47％)Boc-保护的中间体(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基氨基甲酸叔丁酯，为非对映异构体混合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.1min；MS(ESIpos)：m/z＝359(M+H)+。
将64mg(0.18mmol)该中间体溶解于10ml二氯甲烷中，加入1ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。这之后在减压下浓缩，并将剩余的残余物从水/二噁烷中低压冻干。以此方式，得到66mg(定量)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝1.45min；
LC-MS(方法3)：Rt＝1.12min；MS(ESIpos)：m/z＝259(M+H)+。
中间体197
(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐
首先，如下从83mg(0.18mmol)它的二环己胺盐中释放出(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)：将它溶解于乙酸乙酯中，并与5％硫酸氢钾溶液水溶液一起萃取摇动。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于10ml DMF中，并接连地与66mg(0.18mmol)(2S)-2-氨基-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-3-苯基丙烷-1-酮三氟乙酸盐(中间体196)、101mg(0.266mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和93μl(0.53mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌30min。然后浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物。得到52mg(理论值的56％)Boc-保护的中间体(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。
HPLC(方法6)：Rt＝2.13min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.13min；MS(ESIpos)：m/z＝528(M+H)+。
将52mg(0.1mmol)该中间体溶解于10ml二氯甲烷中，加入1ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌20min。这之后在减压下浓缩，并与20ml二乙基醚一起搅拌剩余的残余物。10min以后，过滤混合物，并在高真空下干燥滤渣。以此方式，得到39mg(理论值的72％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.62min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.68min；MS(ESIpos)：m/z＝428(M+H)+。
中间体198
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将44.5mg(0.071mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解于10ml DMF中，并接连地与38.6mg(0.071mmol)(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐(中间体197)、32.5mg(0.086mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和41μl(0.235mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌1h。然后在减压下浓缩反应混合物，将残余物溶解于乙酸乙酯中。将有机相接连地用5％柠檬酸水溶液和5％碳酸氢钠水溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。得到73mg(理论值的98％)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
HPLC(方法6)：Rt＝2.78min；
LC-MS(方法3)：Rt＝2.96min；MS(ESIpos)：m/z＝1047(M+H)+。
将73mg(0.071mmol)该中间体溶解在5ml DMF中。已经加入0.5ml哌啶以后，将反应混合物在室温搅拌10min。这之后在减压下浓缩，并用二乙基醚重复消化残余物。已经倾析出二乙基醚以后，通过制备型HPLC(洗脱液∶乙腈/0.1％水溶液TFA)纯化残余物。得到16mg(理论值的26％)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝1.94min；
LC-MS(方法3)：Rt＝1.71min；MS(ESIpos)：m/z＝825(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝8.9-8.6(m，3H)，8.4，8.3，8.1和8.0(4d，1H)，7.3-7.1(m，5H)，6.7-6.5(m，2H)，5.2-4.8(m，3H)，4.75-4.55(m，3H)，4.05-3.95(m，1H)，3.7-3.4(m，4H)，3.22，3.17，3.15，3.05，3.02和2.95(6s，9H)，3.0和2.7(2br.m，2H)，2.46(m，3H)，2.4-1.2(br.m，13H)，1.1-0.85(m，18H)，0.75(m，3H)[其它信号被隐藏在H2O峰下]。
中间体199
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体193和194类似地，从23mg(24μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体198)开始，制备标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法2)：Rt＝2.1min；MS(ESIpos)：m/z＝1118(M+H)+。
中间体200
N-[2-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下进行制备：与中间体174和175类似地，从用中间体172将中间体192还原烷基化开始，随后去保护和形成马来酰亚胺。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1025(M+H)+。
中间体201
N-{6-[(溴乙酰基)氨基]己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将22mg(0.023mmol)N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体101)溶解在9.5ml THF中，并与4.2μl三乙胺在0℃混合。逐滴加入溴乙酰氯在THF中的溶液，并将反应混合物在0℃搅拌30min。浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物。从而得到6.9mg(理论值的26％)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝1059和1061(M+H)+。
中间体202
N-{2-[2-(2-{3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下进行制备：最初与中间体168类似地，从用中间体167将中间体192还原烷基化开始，随后对N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺的苄基酯进行氢解裂解。
将13mg(10μmol)该中间体溶解在5ml DMF中，并与2.1mg(20mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮、6.5μl N，N-二异丙基乙胺和7.1mg(0.02mmol)HATU混合。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从乙腈/水低压冻干以后，得到9.2mg(理论值的62％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法2)：Rt＝2.1min；MS(ESIpos)：m/z＝1141(M+H)+。
中间体203
6-肼基-6-氧代己基氨基甲酸叔丁酯
如下制备该化合物：通过标准肽化学方法，在有EDCI和HOBT存在下，使6-[(叔丁氧基羰基)氨基]己酸与肼甲酸苄酯偶联，随后氢解除去苄氧基羰基保护基。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.59min；MS(ESIpos)：m/z＝246(M+H)+。
中间体204
N-{4-[2-(6-氨基己酰基)肼基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将146mg(50μmol)(N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在5ml DMF中，然后与30.6mg(80μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、19μl N，N-二异丙基乙胺和22.4mg(60μmol)6-肼基-6-氧代己基氨基甲酸叔丁酯混合。将反应混合物在室温搅拌1.5h。这之后，在高真空下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化剩余的残余物。从而得到43mg(理论值的68％)受保护的中间体，然后将其溶解于10ml二氯甲烷中，并用1ml三氟乙酸去保护。浓缩反应混合物，将残余物与二氯甲烷一起搅拌，并再次在减压下除去溶剂。从而得到45mg(理论值的68％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.66min；MS(ESIpos)：m/z＝983(M+H)+。
中间体205
N-(4-{2-[6-({[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]氨甲酰基}氨基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体114类似地，从中间体50和204开始，制备所述化合物。
收率：4mg(理论值的78％)
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.73min；MS(ESIpos)：m/z＝1149(M+H)+。
中间体206
N-(6-{[3-({3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙基}二硫烷基)丙酰基]氨基}己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将8mg(10μmol)中间体101溶解在2ml DMF中，并与8.6mg(20μmol)1，1′-{二硫烷二基双[(1-氧代丙烷-3，1-二基)氧基]}二吡咯烷-2，5-二酮和3.7μlN，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌2h，然后在减压下蒸发出溶剂，并通过制备型HPLC纯化残余物。得到7.2mg(理论值的68％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝615[1/2(M+2H+]
中间体207
(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸三氟乙酸盐
通过用三氟乙酸将210mg(0.76mmol)商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸去保护，以定量收率得到标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.23min；MS(ESIpos)：m/z＝178(M+H)+。
中间体208
6-氧代己基氨基甲酸-9H-芴-9-基甲酯
通过在标准条件下用三氧化硫-吡啶复合物氧化，从1g(2.95mmol)商购可得的6-羟基己基氨基甲酸-9H-芴-9-基甲酯制备标题化合物。得到840mg(理论值的85％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.1min；MS(ESIpos)：m/z＝338(M+H)+。
中间体209
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羧基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体75中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸三氟乙酸盐(中间体207)偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羧基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
然后，向22mg(0.026mmol)该化合物在10ml甲醇中的溶液中，加入17mg(0.05mmol)6-氧代己基氨基甲酸-9H-芴-9-基甲酯(中间体208)和2.3mg乙酸以及11.4mg(0.12mmol)硼烷-吡啶复合物。将反应混合物在室温搅拌过夜。然后，再次加入相同量的硼烷-吡啶复合物和乙酸以及8mg6-氧代己基氨基甲酸芴-9-基甲酯，并将反应混合物在室温搅拌另外24h。这之后在减压下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。浓缩对应的级分以后，将产物立即用于下一阶段。
将33mg仍然被污染的中间体溶解于5ml DMF中，并加入1ml哌啶。在室温搅拌15min以后，浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化得到的残余物。从而得到11mg(理论值的55％，经2个阶段)氨基羧酸中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.7min；MS(ESIpos)：m/z＝843(M+H)+。
将6mg(7.12μmol)该中间体溶解于1ml二噁烷中，然后与6.6mg(42.7μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯和5μl饱和碳酸氢钠水溶液混合。将反应混合物在室温搅拌1h。然后，加入另外3部分各自为50μl的饱和碳酸氢钠水溶液，并将反应混合物在室温搅拌另外30min。然后，用三氟乙酸将反应混合物酸化至pH2，并随后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从乙腈/水低压冻干以后，得到4mg(理论值的60％)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.88min；MS(ESIpos)：m/z＝923(M+H)+。
中间体210
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，通过文献方法(J.Org.Chem.58，1993，2196-2200)，制备6-氧代己酸。
在9ml甲醇中混合80mg(0.08mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体192)和65.4mg(0.5mmol)6-氧代己酸，并与10μl乙酸和37.4mg(0.4mmol)硼烷-吡啶复合物混合。将反应混合物在室温搅拌过夜。这之后在减压下浓缩，并将残余物溶解于1∶1乙腈/水中，并用三氟乙酸调节至pH2。再次浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。浓缩对应的级分以后，得到70mg(理论值的86％)N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝955(M+H)+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6，特征信号)：δ＝12.0(br.M，1H)，10.8(s，1H)，9.4(m，1H)，8.9和8.8(2d，1H)，8.3和8.02(2d，1H)，7.5(m，1H)，7.3(m，1H)，7.15和7.1(2s，1H)7.05-6.9(m，2H)，5.12和4.95(2m，1H)，4.7-4.5(m，2H)，4.1-3.8(m，4H)，3.75(d，1H)，3.25，3.2，3.18，3.13，2.98和2.88(6s，9H)，2.8(m，3H)，1.08和1.04(2d，3H)，0.95-0.8(m，15H)，0.8-0.65(dd，3H)。
将22mg(23μmol)该中间体溶解在1.8ml二氯甲烷中，并与13.2mg(70μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、26.5mg(230μmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮和0.28mg(2μmol)二甲基氨基吡啶混合，并将反应混合物在室温搅拌2h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从乙腈/水低压冻干以后，得到21.3mg(理论值的88％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝1052(M+H)+。
中间体211
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体210类似地，用6-氧代己酸将15mg(20μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体15)还原烷基化。
收率：9.2mg(理论值的61％)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝929(M+H)+。
将9mg(10μmol)该中间体溶解在3ml DMF中，并与5.6mg(48μmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮、5μl N，N-二异丙基乙胺和5.5mg(0.015mmol)HATU混合，并将反应混合物在超声浴中处理6h。在此过程中，每小时加入5.5mg HATU。随后，在减压下浓缩反应混合物，并将残余物溶解于乙腈/水中，并用三氟乙酸调节至pH2。在减压下再次浓缩以后，借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从乙腈/水低压冻干以后，得到5.8mg(理论值的57％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.95min；MS(ESIpos)：m/z＝1027(M+H)+。
中间体212
N-{2-[2-(2-{3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下进行制备：最初与中间体168类似地，从用中间体167将中间体15还原烷基化开始，随后进行N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺的苄基酯的氢解裂解。
将8.4mg(8μmol)该中间体溶解在3ml DMF中，并与9.5mg(80μmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮、10μl N，N-二异丙基乙胺和9.4mg(25μmol)HATU混合，并将反应混合物在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩。随后，在减压下浓缩反应混合物，并将残余物溶解于乙腈/水中，用三氟乙酸调节至pH2。在减压下再次浓缩以后，借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从乙腈/水低压冻干以后，得到4mg(理论值的32％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.96min；MS(ESIpos)：m/z＝1117(M+H)+。
中间体213
N-{6-[(反式-4-{[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}环己基)氨基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体104类似地，从N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(其合成描述在中间体210下)开始，制备所述化合物。得到9.3mg标题化合物(理论值的37％，经3个阶段)。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝1177(M+H)+。
中间体214
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体210类似地，通过将中间体92转化成活性酯，制备所述化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.82min；MS(ESIpos)：m/z＝901(M+H)+。
中间体215
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与中间体183类似地，将中间体40与硼烷-吡啶复合物一起用于制备N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。与中间体210类似地，然后从该化合物制备活性酯。得到34mg(理论值的36％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝930(M+H)+。
中间体216
N-(4-{[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}苄基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与中间体183的制备类似地，使中间体192与4-甲酰基苯甲酸和硼烷-吡啶复合物反应，得到N-(4-羧基苄基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。然后与中间体210类似地，使用该化合物制备11mg(理论值的68％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.13min；MS(ESIpos)：m/z＝1072(M+H)+。
中间体217
N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将53mg(84μmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)和45mg(84μmol)N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸盐(中间体12)溶解于2ml DMF中，加入19μl N，N-二异丙基乙胺、14mg(92μmol)HOBt和17.6mg(92μmol)EDC，然后将混合物在室温搅拌过夜。随后，浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。得到59mg(理论值的68％)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.55min；m/z＝1044(M+H)+。
在5ml DMF中用1.2ml哌啶处理57mg(0.055mmol)该中间体，以除去Fmoc保护基。借助于制备型HPLC浓缩和纯化以后，得到39mg(理论值的76％)游离胺中间体N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；m/z＝822(M+H)+。
与中间体210类似地，在有硼烷-吡啶复合物存在下，使60mg(0.06mmol)该中间体与6-氧代己酸反应。得到45mg(理论值的75％)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝9936(M+H)+。
中间体218
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
通过将42mg(0.05mmol)中间体217转化成活性酯，制备该化合物。
收率：26mg(54％)
HPLC(方法5)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；MS(ESIpos)：m/z＝1034(M+H)+。
中间体219
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将20mg(0.02mol)得自中间体218的化合物溶解于2.4ml甲醇中，并在5％活性炭载钯上在标准氢压力下在室温氢化30min。然后滤出催化剂，并在减压下除去溶剂。从1∶1乙腈/水低压冻干残余物。得到14mg(理论值的92％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝944(M+H)+。
中间体220
N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将500mg该中间体溶解在20ml DMF中，并与466mg(3.8mmol)中间体191、382mg(1.01mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和440μl(2.5mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌1h，然后浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中，并通过首先与5％柠檬酸水溶液一起摇动、然后与饱和碳酸氢钠水溶液一起摇动，进行萃取。浓缩有机相，并通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用95∶5二氯甲烷/甲醇作为洗脱液。合并对应的级分，并在减压下除去溶剂。在已经在高真空下干燥残余物以后，得到562mg(65％理论值的，经2个阶段)Z-保护的中间体。
将562mg(0.57mmol)该中间体溶解于50ml甲醇中，并用155mg10％活性炭载钯在标准氢压力下在室温氢化20min。然后滤出催化剂，并在减压下除去溶剂。通过制备型HPLC纯化残余物。合并对应的级分，在减压下蒸发出溶剂，并将残余物从二噁烷低压冻干。得到361mg(理论值的87％)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法5)：具有Rt＝1.75和1.86min的双峰；
LC-MS(方法1)：在Rt＝0.84min和0.91min的双峰，具有相同质量；MS(ESIpos)：m/z＝944(M+H)+。
中间体221
N-{(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-苯基丙基}-N-甲基-L-缬氨酸
在22ml甲醇中混合100mg(0.76mmol)商购可得的N-甲基-L-缬氨酸和285mg(1.14mmol)商购可得的(2S)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基氨基甲酸叔丁酯，并与340mg(3.66mmol)硼烷-吡啶复合物和70μl乙酸混合。将反应混合物在室温搅拌过夜。这之后在减压下浓缩，并通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用二氯甲烷/甲醇/17％氨水溶液作为洗脱液。浓缩对应的级分和从1∶1二噁烷/水低压冻干以后，得到259mg(理论值的93％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.76min；MS(ESIpos)：m/z＝365(M+H)+。
中间体222
N-[(2S)-2-氨基-3-苯基丙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将40mg(0.11mmol)N-{(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-苯基丙基}-N-甲基-L-缬氨酸(中间体221)溶解在5ml DMF中，并与80mg(0.11mmol)N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体220)、50mg(0.13mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和57μl(2.5mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌1h，然后浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯中，并首先用5％柠檬酸水溶液洗涤，然后用水洗涤。浓缩有机相，并借助于制备型HPLC纯化残余物。合并对应的级分，并在减压下除去溶剂。从二噁烷低压冻干以后，得到60mg(理论值的50％)受保护的中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.17min；MS(ESIpos)：m/z＝1073(M+H)+。
将60mg(0.05mmol)该中间体溶解于10ml二氯甲烷中，加入2ml三氟乙酸，并将反应混合物在室温搅拌1.5h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。合并对应的级分，在减压下除去溶剂，并将残余物从二噁烷/水低压冻干。以此方式，得到25mg(理论值的42％)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.95min；MS(ESIpos)：m/z＝974(M+H)+。
中间体223
N-[(2S)-2-({[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]氨甲酰基}氨基)-3-苯基丙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体134类似地，从5mg(4.6μmol)中间体222开始，进行制备。得到3.4mg(理论值的65％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.99min；MS(ESIpos)：m/z＝1140(M+H)+。
中间体224
N-[(2S)-2-({[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]氨甲酰基}氨基)丙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体223的合成类似地进行制备。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝1064(M+H)+。
中间体225
N-(2-氨基乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
在20ml甲醇中混合100mg(0.76mmol)商购可得的N-甲基-L-缬氨酸和182mg(1.14mmol)商购可得的2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯，并与340mg(3.66mmol)硼烷-吡啶复合物和65μl乙酸混合。将反应混合物在室温搅拌过夜。这之后在减压下浓缩，并通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用二氯甲烷/甲醇/17％氨水溶液(15/4/0.5)作为洗脱液。浓缩对应的级分和从1∶1二噁烷/水低压冻干以后，得到190mg 39％纯度(理论值的35％)的中间体，将其不经进一步纯化进行转化。
将50mg(0.07mmol)该中间体溶解在10ml DMF中，并与52mg(0.07mmol)N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体220)、32mg(0.09mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和37μl(0.2mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯中，并通过首先与5％柠檬酸水溶液一起摇动、然后与水一起摇动，进行萃取。浓缩有机相，并借助于制备型HPLC纯化残余物。合并对应的级分，并在减压下除去溶剂。从二噁烷低压冻干以后，得到53mg(理论值的76％)受保护的中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.02min；MS(ESIpos)：m/z＝984(M+H)+。
将53mg(0.05mmol)该中间体溶解于10ml二氯甲烷中，加入2ml三氟乙酸，并将反应混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。合并对应的级分，在减压下除去溶剂，并将残余物从二噁烷/水低压冻干。以此方式，以65％纯度得到21mg(理论值的40％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝884(M+H)+。
中间体226
N-[2-({[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]氨甲酰基}氨基)乙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体134的合成类似地，从中间体225进行制备。得到11.6mg(理论值的59％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.90min；MS(ESIpos)：m/z＝1050(M+H)+。
中间体227
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体218类似地，通过转化成活性酯，制备所述化合物。
收率：18mg(理论值的51％)
HPLC(方法5)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.98min；MS(ESIpos)：m/z＝1073(M+H)+。
中间体228
(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7，10-二异丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-5，11-二甲基-6，9-二氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-酸-(2R，3S)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁-2-基酯
得到标题化合物，作为中间体154的合成中的中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝1308(M+H)+。
中间体229
(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7，10-二异丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-5，11-二甲基-6，9-二氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-酸-(2R，3S)-3-乙酰氨基-4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁-2-基酯
通过在有0.4μl N，N-二异丙基乙胺存在下，用2.3μl乙酸酐在1ml DMF中的溶液乙酰化，从7.5mg(2.5μmol)中间体154制备标题化合物。
收率：1.4mg(理论值的40％)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1250(M+H)+。
中间体230
(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-7，10-二异丙基-5，11-二甲基-6，9-二氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-酸-(2R，3S)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁-2-基酯
与中间体229类似地，从中间体193开始，制备所述化合物。得到16mg(理论值的30％，经3个阶段)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.02min；MS(ESIpos)：m/z＝1335(M+H)+。
中间体231
(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-7，10-二异丙基-5，11-二甲基-6，9-二氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-酸-(2R，3S)-3-乙酰氨基-4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁-2-基酯
如下从8mg(6μmol)中间体230制备该化合物：首先用三氟乙酸去保护，随后在有N，N-二异丙基乙胺存在下在DMF中用乙酸酐乙酰化。得到2mg(理论值的37％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.88min；MS(ESIpos)：m/z＝1277(M+H)+。
中间体232
N-[(4-硝基苯氧基)羰基]-β-丙氨酸苄酯
将200mg(0.57mmol)商购可得的β-丙氨酸-4-甲基苯磺酸-苄酯和229mg(1.14mmol)氯碳酸-4-硝基苯酯溶解于15ml四氢呋喃中，然后将反应混合物加热至回流保持30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。浓缩对应的级分和在高真空下干燥残余物以后，得到86mg(理论值的44％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.07min；MS(ESIpos)：m/z＝345(M+H)+。
中间体233
N-{2-[({3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙基}氨甲酰基)氨基]乙基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将13mg(10μmol)中间体225和6.7mg(20μmol)中间体232溶解在3ml DMF中，然后加入7μl N，N-二异丙基乙胺。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分和在高真空下干燥残余物以后，得到5.4mg(理论值的38％)受保护的中间体。
HPLC(方法5)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.6in；MS(ESIpos)：m/z＝1089(M+H)+。
将5.4mg(5μmol)该中间体溶解在5ml甲醇中，并在加入2mg 10％活性炭载钯以后，在标准氢压力下在室温氢化20min。然后滤出催化剂，并在减压下除去溶剂。在已经在高真空下干燥残余物以后，得到5mg(定量)酸中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.84min；MS(ESIpos)：m/z＝999(M+H)+。
将5mg(10μmol)该中间体溶解在1ml DMF中，并与5.8mg(50mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，然后与2.6μl N，N-二异丙基乙胺和3.8mg(10μmol)HATU混合。在室温搅拌20h以后，在减压下浓缩反应混合物。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从1∶1二噁烷/水低压冻干以后，得到1.1mg(理论值的20％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝1096(M+H)+。
中间体234
N-(6-{[(苄氧基)羰基]氨基}己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将25mg(30μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体55)和45mg(180μmol)6-氧代己基氨基甲酸苄酯溶解于3ml甲醇中，并用乙酸酸化。随后在室温加入15μl(144μmol；9.4M)硼烷-吡啶复合物。随后将混合物在室温搅拌24h，并在8h以后再次加入乙酸和15μl(144μmol；9.4M)硼烷-吡啶复合物。随后用TFA将反应混合物调节至pH 2，并借助于制备型HPLC进行纯化。将产物级分合并和浓缩，并在高真空下干燥残余物。得到15mg(理论值的46％)标题化合物，为泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.03min；m/z＝1066(M+H)+。
中间体235
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将15mg(14μmol)N-(6-{[(苄氧基)羰基]氨基}己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体234)溶解于3ml甲醇中，并加入1.8mg炭载钯(5％)。随后将反应混合物在标准氢压力下在室温氢化2h。然后滤出催化剂，并在减压下除去溶剂。从1∶1乙腈/水低压冻干残余物。得到11mg(理论值的86％)标题化合物，为泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.81min；m/z＝932(M+H)+。
中间体236
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将11mg(12μmol)N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体235)溶解于500μl1∶1二噁烷/水中，并与253μl 1M碳酸氢钠水溶液混合，然后与2.8mg(18μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯混合。将反应混合物在室温搅拌30min，然后用三氟乙酸酸化。借助于制备型HPLC纯化反应混合物。低压冻干以后，得到0.8mg(理论值的7％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；m/z＝1012(M+H)+。
中间体237
N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将25mg(30μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体55)和23mg(180μmol)6-氧代己酸溶解于3ml甲醇中，并用乙酸酸化。随后在室温加入15μl(144μmol；9.4M)硼烷-吡啶复合物。随后将反应混合物在室温搅拌20h，并在8h以后再次加入乙酸和15μl(144μmol；9.4M)硼烷-吡啶复合物。随后用三氟乙酸将反应混合物调节至pH 2，并借助于制备型HPLC进行纯化。将产物级分合并和浓缩，并将残余物低压冻干。如此得到21mg(理论值的74％)标题化合物，为泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.91min；m/z＝947(M+H)+。
中间体238
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将21mg(22μmol)中间体237溶解在1ml DMF中，并与38mg(333μmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，然后与2.4mg(10μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和19μl N，N-二异丙基乙胺混合。在室温搅拌2h以后，借助于制备型HPLC，纯化反应混合物。从二噁烷低压冻干以后，得到22mg(理论值的96％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.95min；m/z＝1044(M+H)+。
中间体239
N-甲基-L-苏氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
首先，如下从237mg(0.887mmol)它的二环己胺盐中释放出N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-苏氨酸：将它溶解于乙酸乙酯中，并与5％硫酸水溶液一起萃取摇动。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将14.7mg(0.055mmol)N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-苏氨酸溶解于3ml DMF中，并接连地与40mg(0.055mmol)中间体220、12.7mg(0.066mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和10mg(0.066mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物混合。随后将混合物在室温搅拌2h。然后在减压下除去溶剂，并通过制备型HPLC纯化残余物。如此得到29mg(理论值的54％)Z-保护的中间体。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.15min；MS(ESIpos)：m/z＝976(M+H)+。
将29mg(0.003mmol)该中间体溶解在5ml甲醇中，并在5mg 5％钯/炭上在室温和标准压力下氢化1h。随后滤出催化剂，并蒸发出溶剂。通过制备型HPLC纯化剩余的残余物。得到17mg(理论值的54％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.77min；MS(ESIpos)：m/z＝842(M+H)+。
中间体240
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-苏氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体210类似地，从15.6mg(0.016mmol)中间体239，制备所述化合物。得到10.8mg(理论值的67％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝1053(M+H)+。
中间体241
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
首先，与中间体5类似地，制备三氟乙酸-(2S)-2-氨基-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)丙烷-1-酮(1∶1)。然后使用该试剂，与在中间体75中描述的合成类似地，在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下，与N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，以制备标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝817(M+H)+。
中间体242
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体210类似地，在有硼烷-吡啶复合物存在下，使50mg(0.05mmol)中间体241与6-氧代己酸反应。随后，将22.5mg(0.02mmol)得到的酸转化成活化的酯。得到13.5mg(理论值的36％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1028(M+H)+。
可替换地，还可以通过在氢标准压力下在10％活性炭载钯上在甲醇中在室温对中间体250的1小时催化氢化，得到标题化合物。
中间体243
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下进行制备：与中间体78类似地，用6-氧代己基氨基甲酸苄酯和硼烷-吡啶复合物将中间体241还原烷基化，和随后在作为溶剂的甲醇中氢化。
收率：17.5mg(理论值的34％，经2个阶段)
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.63min；MS(ESIpos)：m/z＝916(M+H)+。
中间体244
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体166类似地，从中间体243开始，进行制备。
收率：1.3mg(理论值的12％)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.89min；MS(ESIpos)：m/z＝996(M+H)+。
中间体245
O-[(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-7，10-二异丙基-5，11-二甲基-6，9，15-三氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-基]-N-(叔丁氧基羰基)-L-苏氨酰基-β-丙氨酸-2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯
首先，如在中间体154下所述，使中间体193与N-(叔丁氧基羰基)-L-苏氨酸苄酯反应，然后，通过氢解除去苄基酯。然后在有HATU存在下使如此得到的30mg(0.027mmol)N-[4-({(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1-羧基丙烷-2-基}氧基)-4-氧代丁基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺与β-丙氨酸-4-甲基苯磺酸-苄酯偶联(1∶1)，并再次通过氢解除去苄基酯(收率：24mg(理论值的71％，经2个阶段))。最后，将10mg(0.008mmol)得到的酸转化成活化的酯。HPLC纯化以后，得到2.7mg(理论值的23％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；MS(ESIpos)：m/z＝1295(M+H)+
中间体246a
(2S)-2-氨基-1-(4-羟基-1，2-噁唑烷-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙烷-1-酮三氟乙酸(1∶1)非对映异构体1
将1.6g(3.982mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-色氨酸-2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯溶解在15ml DMF中，并与500mg(3.982mmol)1，2-噁唑烷-4-醇和100μl N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌过夜。然后，加入另外100μl N，N-二异丙基乙胺，并将混合物首先在超声浴中处理5h，然后在室温搅拌过夜，随后在减压下浓缩。将剩余的残余物溶解于乙酸乙酯中，并首先用5％柠檬酸水溶液萃取2次，然后用饱和碳酸氢钠水溶液萃取，最后用水萃取。浓缩有机相，并通过在硅胶上的快速色谱法，使用95∶5二氯甲烷/甲醇作为洗脱液，将残余物分离成非对映异构体。合并两种非对映异构体的对应级分，并在减压下除去溶剂。已经在高真空下干燥残余物以后，得到272mg(理论值的18％)非对映异构体1(Rf＝0.18(95∶5二氯甲烷/甲醇)和236mg(理论值的16％)非对映异构体2(Rf＝0.13(95∶5二氯甲烷/甲醇)，以及333mg(理论值的22％)Boc-保护的中间体的混合级分。
在标准条件下，使用5ml三氟乙酸在20ml二氯甲烷中的溶液从272mg(725μmol)该中间体的非对映异构体1除去Boc保护基，并在从二噁烷/水低压冻干以后，以75％纯度得到290mg(定量)标题化合物，并不经进一步纯化用于下一阶段。
HPLC(方法12)：Rt＝1.1min；
LC-MS(方法13)：Rt＝1.80min；MS(ESIpos)：m/z＝276(M+H)+
中间体246b
(2S)-2-氨基-1-(4-羟基-1，2-噁唑烷-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙烷-1-酮三氟乙酸(1∶1)非对映异构体2
在标准条件下，使用5ml三氟乙酸在20ml二氯甲烷中的溶液从236mg(630μmol)在246a中描述的中间体的非对映异构体2除去Boc保护基，浓缩、与二乙基醚一起搅拌和在高真空下干燥残余物以后，得到214mg(76％)标题化合物。
LC-MS(方法13)：Rt＝1.84min；MS(ESIpos)：m/z＝276(M+H)+
中间体247a
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(4-羟基-1，2-噁唑烷-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
为了合成该化合物，首先如关于中间体74所述，使中间体26和246a偶联，然后除去Boc保护基。随后，在有硼烷-吡啶复合物存在下，用6-氧代己酸烷基化，随后如关于中间体210所述，将所述酸转化成活性酯。通过制备型HPLC纯化标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1053(M+H)+
中间体247b
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(4-羟基-1，2-噁唑烷-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
为了合成该化合物，首先如关于中间体74所述，使中间体26和246b偶联，然后除去Boc保护基。随后，在有硼烷-吡啶复合物存在下，用6-氧代己酸烷基化，随后如关于中间体210所述，将所述酸转化成活性酯。通过制备型HPLC纯化标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1053(M+H)+
中间体248
N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-3-(4-羟基苯基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体86中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和L-酪氨酸叔丁酯偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基得到叔丁基酯(与三氟乙酸一起在二氯甲烷中搅拌40min)，制备胺化合物N-[(2R，3R)-3-甲氧基-3-{(2S)-1-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基{(2S)-3-甲基-2-[(N-甲基-L-缬氨酰基)氨基]丁基}氨基)庚酰基]吡咯烷-2-基}-2-甲基丙酰基]-L-酪氨酸叔丁酯，为三氟乙酸盐。然后使用38mg(0.04mmol)该化合物，与中间体210的制备类似地，通过在有硼烷-吡啶复合物存在下与4-氧代己酸反应，得到31mg(理论值的99％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.88min；MS(ESIpos)：m/z＝918(M+H)+。
中间体249
三氟乙酸-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-[4-(苄氧基)苯基]-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(1∶1)
首先，与中间体5和6类似地，从O-苄基-N-(叔丁氧基羰基)-L-酪氨酸开始，制备三氟乙酸-(2S)-2-氨基-3-[4-(苄氧基)苯基]-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)丙烷-1-酮(1∶1)。然后，从该结构单元开始，与在中间体75中描述的合成类似地，在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下与N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)偶联，并随后借助于三氟乙酸消除Boc保护基，得到标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.15min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.99min；MS(ESIpos)：m/z＝908(M+H)+。
中间体250
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-[4-(苄氧基)苯基]-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
在有硼烷-吡啶复合物存在下，使100mg(0.088mmol)中间体249与中间体210类似地与6-氧代己酸(6-oxanoic acid)反应。然后，将30mg(0.029mmol)得到的酸转化成活化的酯。得到15mg(理论值的40％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.26min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.05min；MS(ESIpos)：m/z＝1119(M+H)+。
中间体251
N-[4-(2-{5-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-5-氧代戊酰基}-2-甲基肼基)-4-氧代丁基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，将30mg(0.032mmol)中间体193转化成活化的N-羟基琥珀酰亚胺酯。将10.3mg(0.009mmol)该活性酯溶解在2ml DMF中，与2.7mg(0.018mmol)1-甲基肼甲酸叔丁酯和8μL N，N-二异丙基乙胺混合，并在室温搅拌16h。重复该操作，然后将批料浓缩，并将剩余的残余物通过制备型HPLC进行纯化。浓缩对应的级分并在高真空下干燥，得到5.4mg(43％)中间体。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.99min；MS(ESIpos)：m/z＝1054(M+H)+。
使用三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液，从3.5mg(0.002mmol)该中间体除去Boc保护基。浓缩并在高真空下干燥以后，将残余物溶解于4ml二氯甲烷中并与1，1′-[(1，5-二氧代戊烷-1，5-二基)双(氧基)]二吡咯烷-2，5-二酮和2μl N，N-二异丙基乙胺混合。在室温搅拌1h以后，将批料浓缩，并将剩余的残余物通过制备型HPLC进行纯化。浓缩对应的级分并在高真空下干燥，得到1.4mg(44％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.88min；MS(ESIpos)：m/z＝1166(M+H)+。
中间体252
N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将100mg(0.088mmol)中间体249和109mg(0.350mmol)中间体167在10ml甲醇中组合，并与39mg(0.42mmol)硼烷-吡啶复合物和15μl乙酸混合。将批料在室温搅拌过夜。然后，再次加入相同量的硼烷-吡啶复合物和乙酸，并将批料在室温搅拌另外24h。然后在减压下浓缩，并将残余物借助于制备型HPLC进行纯化。浓缩对应的级分，并从1∶1的二噁烷/水低压冻干，得到98mg(理论值的93％)二-苄基中间体。将该中间体溶解于18.5ml甲醇中，并在标准氢压力下在5％活性炭载钯上在室温进行催化氢化1h。将残余物过滤、浓缩和从二噁烷低压冻干，得到73mg(理论值的87％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.85min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.84min；MS(ESIpos)：m/z＝1021(M+H)+。
中间体253
N-{2-[2-(2-{3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将22mg(22μmol)中间体252溶解在8.5ml DMF中，并与25mg(215μmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，随后与12.3mg(32μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和37μl N，N-二异丙基乙胺混合。在室温搅拌2h以后，借助于制备型HPLC纯化反应混合物。从二噁烷低压冻干，得到16mg(理论值的62％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.57min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.8min；MS(ESIpos)：m/z＝1118(M+H)+。
中间体254
N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(0.012mmol)中间体55和11mg(0.036mmol)中间体167在1ml甲醇中组合，并与5.4mg(0.058mmol)硼烷-吡啶复合物和1μl乙酸混合。将批料在室温搅拌过夜。然后，再次加入相同量的硼烷-吡啶复合物和乙酸，并将批料在室温搅拌另外20h。然后在减压下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。浓缩对应的级分并从1∶1的二噁烷/水低压冻干，得到8mg(理论值的58％)二-苄基中间体。将该中间体溶解于2ml甲醇中，并在标准氢压力下在5％活性炭载钯上在室温进行催化氢化1h。将残余物过滤、浓缩、和从二噁烷低压冻干，得到7mg(理论值的95％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.99min；MS(ESIpos)：m/z＝1036(M+H)+。
中间体255
N-{2-[2-(2-{3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将7.3mg(7μmol)中间体254溶解在0.3ml DMF中，并与12mg(106μmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，随后与13.5mg(35μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和6μl N，N-二异丙基乙胺混合。在室温搅拌2h以后，借助于制备型HPLC纯化反应混合物。从二噁烷低压冻干，得到7.7mg(理论值的79％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝1134(M+H)+。
中间体256
N-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体254的制备类似地，在有硼烷-吡啶复合物存在下，用(2-{2-[2-(2-氧代乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)氨基甲酸苄酯(中间体172)对20mg(0.02mmol)中间体55进行还原胺化。随后使用5％炭载钯作为催化剂和在作为溶剂的甲醇中通过氢解除去Z保护基，制备21mg(理论值的85％，经2个阶段)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝1008(M+H)+。
中间体257
N-[2-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将21mg(20.8μmol)中间体256溶解于1ml 1∶1的二噁烷/水中，然后与4.9mg(31.2μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯以及与42μl1M碳酸氢钠水溶液混合。将反应混合物在室温搅拌30min。然后，加入另外374μl 1M碳酸氢钠水溶液，并将反应混合物在室温搅拌另外30min，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC纯化剩余的残余物。低压冻干得到4.5mg(理论值的20％)标题化合物，为无色泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.04min；MS(ESIpos)：m/z＝1088(M+H)+。
中间体258
N-{2-[2-(2-{3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-[4-(苄氧基)苯基]-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下从中间体249开始制备该化合物：使用3-{2-[2-(2-氧代乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸叔丁酯进行还原烷基化，随后叔丁酯切割，并转化成N-羟基琥珀酰亚胺酯。
HPLC(方法5)：Rt＝1.96min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.11min；MS(ESIpos)：m/z＝1208(M+H)+。
中间体259
N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将9.6mg(8.4μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体58)和6.5mg(51μmol)6-氧代己酸溶解于769μl甲醇中，并用乙酸酸化。然后，在室温，加入4μl(40μmol)硼烷-吡啶复合物。随后将反应混合物在室温搅拌20h。然后用三氟乙酸将反应混合物调至pH 2，并借助于制备型HPLC进行纯化。将产物级分合并和浓缩，并将残余物低压冻干。得到8mg(理论值的93％)标题化合物，为泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.06min；m/z＝1019(M+H)+。
中间体260
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将7.5mg(7.4μmol)中间体259溶解在332μl DMF中，并与12.7mg(110μmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，随后与14mg(37μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和6μl N，N-二异丙基乙胺混合。在室温搅拌2h以后，借助于制备型HPLC纯化反应混合物。从二噁烷低压冻干，得到4mg(理论值的55％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.19min；m/z＝1002(M+H)+。
中间体261
N-{2-[2-(2-{3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下从中间体16开始制备该化合物：使用3-{2-[2-(2-氧代乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸苄酯进行还原烷基化，随后通过氢解切割苄酯，并转化成N-羟基琥珀酰亚胺酯。
HPLC(方法5)：Rt＝1.83min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.93min；MS(ESIpos)：m/z＝1114(M+H)+。
B：抗体-药物缀合物(ADC)的制备
B-1.抗-FGFR2抗体的制备
使用得自Bioinvent International AB的原初Fab抗体文库n-CoDeR(Lund，瑞典；描述于等人，Nat.Biotech.2000，18：853-856)，通过噬菌体展示技术，分离本发明的人抗-FGFR2抗体M048-D01-hIgG1和M048-D01-hIgG1-b。一个筛选命中是亲本Fab片段M048-D01。该Fab片段的重链Vh的可变区由SEQ ID NO：21给出；轻链Vl的可变区由SEQID NO：22给出。在鉴别M048-D01 Fab片段以后，以人IgG的形式在名称M048-D01-hIgG1-b(SEQ ID NO：10代表重链，SEQ ID NO：9代表轻链)下表达它。为了有效克隆，可替换地，还将M048-D01-hIgG1-b的重链的N-端的前3个氨基酸[EVQ]表达为QVE。该变异产生抗体M048-D01-hIgG1(SEQ ID NO：8代表重链，SEQ ID NO：7代表轻链)。可变区Vh和Vl M048-D01-hIgG1由SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12给出；可变区Vh和Vl M048-D01-hIgG1-b由SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14给出。两种抗体具有相同的CDR序列，它们由SEQ ID NO：15(H-CDR1)、16(H-CDR2)、17(H-CDR3)、18(L-CDR1)、19(L-CDR2)和20(L-CDR3)给出。
在WO2010/054265中将抗体GAL-FR21-mIgG1和GAL-FR22-mIgG2a描述为mIgG1(GAL-FR21)和mIgG2b(GAL-FR22)。在其中通过Vh(WO2010/054265中的SEQ ID NO：4)和通过Vl(WO2010/054265中的SEQ ID NO：1)来定义GAL-FR21，并通过Vh(WO2010/054265中的SEQ ID NO：8)和通过Vl(WO2010/054265中的SEQ ID NO：7)来定义GAL-22。对于在本申请中描述的研究，将GAL-FR21的Vl和Vh重新格式化成鼠IgG1形式，从而产生抗体GAL-FR21-mIgG1(本申请的SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4)。将GAL-FR22的Vl和Vh重新格式化成鼠IgG2a形式，从而产生抗体GAL-FR22-mIgG2a(本申请的SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6)。
B-2.抗-FGFR2抗体的表达
在哺乳动物细胞培养物中短暂地生产抗体M048-D01-hIgG1、M048-D01-hIgG1-b、GAL-FR21-mIgG1和GAL-FR22-mIgG2a。
如下所述制备表达构建体：
为了将源自噬菌体展示的M048-D01Fab的Vh和Vl区域转换成IgG形式，并且为了将表达系统从大肠杆菌改变成哺乳动物细胞，使用PCR引物扩增得自噬菌体展示大肠杆菌克隆的Vh和Vl序列。将侧接限制性酶切割位点引入在Vh和Vl的5’和3’末端。使用这些限制性酶切割位点将Vh和Vl克隆进含有IgG主链的表达载体中。
将大肠杆菌细胞在装有100μl水的试管中在95℃温育10分钟，然后在冰上放置5分钟。在短暂涡旋以后，通过离心使溶液澄清。将分离出的上清液用于DNA扩增。单独进行Vh和Vl的PCR反应。这使用特异性引物对进行，所述特异性引物对具有BamHI和NotI切割位点(对于Vl和MfeI)以及MfeI和BlpI切割位点(对于Vh)。使用AccuPrime Pfx聚合酶(Invitrogen，#12344-024)，根据生产商的说明书进行PCR反应。在1％琼脂糖凝胶上分析PCR产物。为了得到相容的末端，根据生产商的说明书用对应的限制性内切核酸酶在37℃消化表达载体和PCR产物2小时(参见表1)。通过在70℃温育15分钟，停止消化。将得到的片段连接进表达载体中，并通过标准方法用所述构建体转化大肠杆菌或哺乳动物细胞。
通过用于哺乳动物基因表达的Geneart基因合成和基因优化器(geneoptimizer)技术(life technologies，Grand Island，NY，USA)，合成某些抗体(GAL-FR21-mIgG1、GAL-FR22-mIgG2a和M048-D01-hIgG1-b)的Vh和Vl结构域或完整轻链的DNA序列。在基因合成过程中，将编码哺乳动物信号肽的序列上的V结构域与上游Kozaki序列融合。将侧接限制切割位点插在合成的DNA构建体的5’和3’末端上。使用这些限制切割位点将Vh和Vl或轻链克隆进含有IgG的编码恒定区的表达载体中。
根据生产商的说明书用各种限制性内切核酸酶在37℃消化表达载体和Geneart构建体2小时，得到相容的末端(参见表1)。通过在70℃温育15分钟，停止消化。将得到的片段连接，并用连接物转化大肠杆菌细胞。根据标准方法，使用从这些转化体得到的质粒转化哺乳动物细胞。
表1：用于将Vh和Vl或轻链克隆进IgG表达载体中的限制切割位点
＊完整轻链的克隆
#PCR产物向EcoRI-BlpI和BamHI-NotI-消化的表达载体中的克隆。
如在Tom等人(Tom等人，Methods Express：Expression Systems中的第12章，Michael R.Dyson和Yves Durocher编，Scion Publishing Ltd，2007)中所述，在哺乳动物细胞培养物中短暂地表达抗体：为了表达抗-FGFR2抗体例如M048-D01-hIgG1、GAL-FR21-mIgG1和GAL-FR22-mIgG2a，用合适的基于CMV启动子的表达质粒短暂地转染HEK293 6E细胞。细胞培养规模为在摇瓶中的多达1.5l或在“波袋”中的10l。在补充了含有1％“FCS超低IgG”(Invitrogen)和0.5mM丙戊酸的胰蛋白胨TN1(Organotechnie)的F17培养基(Invitrogen)中在37℃进行表达5-6天。
可替换地，在稳定转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系中表达抗-FGFR2抗体，例如M048-D01-hIgG1-b。这使用单载体系统进行。在补料分批过程中以不同规模在生物反应器中进行发酵。
如下表达亲本Fab片段M048-D01(Vh：SEQ ID NO：21，Vl：SEQ IDNO：22)，其属于得自噬菌体展示(phase display)的基于M048-D01的抗体：给20-50ml LB培养基(与0.1mg/ml氨苄西林和0.1％葡萄糖混合)接种对应大肠杆菌克隆的最初培养物，后者含有最初的pBif载体，所述pBif载体缺少geneIII序列，但是其具有克隆进它的M048-D01Fab序列。通过添加0.5mM IPTG(终浓度)，开始sFab的生产。在250rpm在30℃温育过夜。
B-3.FGFR-2抗体的纯化
从细胞培养物上清液得到抗体例如M048-D01-hIgG1、M048-D01-hIgG1-b、GAL-FR21-mIgG1和GAL-FR22-mIgG2a。通过从细胞离心，澄清细胞上清液。随后通过在MabSelect Sure(GE Healthcare)色谱柱上的亲和色谱法，纯化细胞上清液。为此目的，将柱在DPBS pH 7.4(Sigma/Aldrich)中平衡，施加细胞上清液，并将柱用约10柱体积的DPBSpH 7.4+500mM NaCl洗涤。将抗体洗脱在50mM乙酸钠pH 3.5+500mM NaCl中，随后通过凝胶过滤色谱法在Superdex 200柱(GEHeathlcare)上在DPBS pH 7.4中进一步纯化。
如下纯化在大肠杆菌中表达的亲本M048-D01 Fab片段：将大肠杆菌细胞通过离心进行收获，并通过在裂解缓冲液(20％蔗糖(w/v)，30mMTRIS，1mM EDTA，pH 8.0，1mg/ml溶菌酶(Sigma L-6876)和2.5U/mlBenzonase(Sigma E1014))中在4℃温育1小时进行裂解。此后，添加相同体积的PBS。然后，将澄清的上清液施加于Dynabead用于his-标签分离(Invitrogen，101-03D)，并将混合物在4℃涡旋2小时。此后，将基质用缓冲液1(50mM磷酸钠缓冲液，pH 7.4，300mM NaCl，5mM咪唑，0.01％吐温20)洗涤3次。随后在缓冲液2中进行单个洗涤步骤(与0.005％的吐温20混合的PBS)。最后，将Fab用缓冲液E(10mM磷酸钠缓冲液，pH 7.4，300mM NaCl，300mM咪唑)洗脱，并使用PBS缓冲液在Vivaspin 500浓缩器(截止值10 000，得自GE，28-9322-25)中浓缩。
B-4.基于M048-D01的抗体的交叉反应性谱的构建
使用亲本Fab片段M048-D01(包含Vh：SEQ ID NO：21和Vl：SEQ IDNO：22)，确定本申请的人抗体M048-D01-hIgG1和M048-D01-hIgG1-b的交叉反应性。
在ELISA中试验M048-D01Fab片段对在表2中列出的不同FGF受体变体的结合。
表2：用于建立FGFR2结合剂的交叉反应性谱的重组蛋白的列表
| 蛋白 | 起源 | 目录号(RnD Systems) |
| hFGFR2β-Fc(IIIb) | 人 | 665-FR |
| mFGFR2β-Fc(IIIb) | 小鼠 | 708-MF |
| hFGFR2α-Fc(IIIb) | 人 | 663-FR |
| hFGFR2β-Fc(IIIc) | 人 | 684-FR |
| hFGFR1β-Fc(IIIc) | 人 | 661-FR |
| hFGFR1β-Fc(IIIb) | 人 | 765-FR |
| hFGFR3-Fc(IIIc) | 人 | 766-FR |
| hFGFR3-Fc(IIIb) | 人 | 1264-FR |
| hFGFR4-Fc | 人 | 685-MF |
| mFGFR2β-Fc(IIIc) | 小鼠 | 716-MF |
| mFGFR3-Fc(IIIc) | 小鼠 | 710-MF |
| hTRAIL-Fc | 人 | 630-TR |
所有变体呈在无载体制剂中的Fc融合蛋白的形式。根据生产商的说明书，将蛋白使用2倍摩尔过量的生物素-LC-NHS(Pierce；目录号21347)生物素化，并使用Zeba脱盐柱(Pierce；目录号89889)脱盐。
对于ELISA，给用抗生蛋白链菌素(Pierce，15500)预处理的96-孔平板加载1μg/ml生物素化的蛋白在4℃过夜。将已经加载生物素化的TRAIL-Fc的孔用作参照。次日，将平板用PBST(与0.05％吐温20(Sigma，P7949)混合的1×PBS)洗涤3次，用封闭缓冲液(与3％BSA(Sigma A4503)混合的PBST)处理，并再次用PBST洗涤3次。加入100μl纯化的Fab(1μg/ml)，并在室温进行温育1小时。用PBST洗涤3倍以后，加入HRP偶联的抗-hIgG(Fab-特异性的)(1∶2500稀释，Sigma，A0293)，并在室温温育1小时。通过加入50μl TMB(Invitrogen，2023)来激活显色反应，并在5-15分钟以后通过加入50μl H2SO4(Merck，1120801000)来停止。在平板读数器(Tecan)中在450nm监测显色反应。将含有TRAIL-Fc的孔的信号强度用作背景值，并计算信号/背景比率，如表3所总结。
表3：关于M048-D01的交叉反应性的ELISA数据的总结
信号/背景比率：0：＜2；+：2-3；++：3-5；+++：＞5
如从表2显而易见的，基于M048-D01的抗体M048-D01-hIgG1和M048-D01-hIgG1-b结合人和鼠FGFR2，并且独立于目标形式是α或β异形体还是IIIb和IIIc剪接形式而这样结合。如从该表同样显而易见的，本发明的基于M048-D01的抗体不会结合FGFR1、FGFR3和FGFR4。
B-5.借助于CLIPS技术的表位作图
为了试验基于M048-D01的抗体的结合特征，基于Pepscan的专有的“Chemically Linked peptides on Scaffolds”(CLIPS)Technologie(Timmerman等人，J.Mol.Recognit.2007，20：283-99)，进行本发明的表位作图操作。总共设计了8653种不同的CLIPS肽，长度从15个氨基酸至30个氨基酸，其覆盖了人FGFR2上的线性的、构象的和不连续的表位。在肽阵列上合成所述肽。在基于ELISA的方法中在肽阵列上试验人抗体M048-D01-hIgG1。对产生最高ELISA值的肽进行分析，以分离共有的类似氨基酸序列。
为了重构靶分子的不连续表位，合成了结构化的肽的文库。CLIPS技术允许将肽构造成单环、双环、三环、片层样环、螺旋样环和这些结构元件的组合：为此目的，将CLIPS模板与肽阵列的半胱氨酸残基偶联。例如，将T2CLIPS模板1，3-双(溴甲基)苯的0.5mM溶液溶解在碳酸氢铵(20mM，pH 7.9)/乙腈(1∶1(v/v))中。将该溶液加至肽阵列。与所述肽的2个半胱氨酸的侧链结合的CLIPS模板存在于肽阵列(具有3μl孔的455孔板)中。将肽阵列在溶液中小心地涡旋30-60分钟，并用溶液完全覆盖。在结束时，将阵列用过量水彻底洗涤，并在裂解缓冲液(1％SDS、0.1％的β-巯基乙醇在PBS(pH 7.2)中的溶液)中在超声浴中在70℃处理30分钟。随后将在超声浴中的处理在水中重复另外45分钟。以类似的方式制备带有T3 CLIPS的肽。
在基于PEPSCAN的ELISA中试验抗体与每种肽的结合(Sloostra等人，Molecular Diversity 1996，1：87-96)。将肽阵列用5％至100％的结合缓冲液预温育(1h，20℃)。结合缓冲液由1％吐温80、4％马血清和5％卵白蛋白(w/v)在PBS中的溶液组成。洗涤步骤以后，将肽阵列与第一抗体(1-5μg/ml)在1％吐温80的PBS溶液中的溶液一起在4℃温育过夜。另一个洗涤步骤以后，在抗体过氧化物酶缀合物(抗-人-IgG)在100％结合剂缓冲液中的1/1000稀释物中，将肽阵列在25℃温育1小时。另一个洗涤步骤以后，加入过氧化物酶底物2，2’-联氮基-二-3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐(ABTS)和2μl/ml 3％浓度的H2O2。1小时以后，测量颜色的发展，并使用CCD照相机和图像处理系统定量。
在该方法中得到的粗数据是在0-3000mAU(毫吸收单位)范围内的光学值。
结果是，所有基于M048-D01的抗体结合在由FGFR2的15个N-末端残基(1RPSFSLVEDTTLEPE15)组成的表位上。1257种CLIPS和线性肽的分析一致地产生N-端肽的高ELISA值。
N-末端残基(1RPSFSLVEDTTLEPE15)存在于人FGFR2的所有剪接变体中，独立于在结构域D3中的选择性剪接(其产生IIIb和IIIc异形体)。如果通过剪接从全长FGFR2(FGFR2α，SEQ ID NO：1)除去结构域D1从而产生FGFR2的较短β-形式(SEQ ID NO：2)，所述表位也存在。在该情况下，所述表位位于结构域D2前面紧邻处。
一个特别感兴趣的内容是以下事实：N-端序列在人、小鼠、大鼠和恒河猴中是保守的。这允许M048-D01抗体的宽广的物种间交叉反应性。M048-D01-hIgG1和M048-D01-hIgG1-b(本发明的2种实施例抗体)的结合表位在图1中被标记为有条纹的框。
B-6.用于偶联半胱氨酸侧链的一般方法
在偶联反应中使用的抗体如下：
M048-D01-hIgG1
M048-D01-hIgG1-b
向对应的抗体在PBS缓冲液中的溶液(在1mg/ml至10mg/ml之间的浓度范围内)中，加入3当量的三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCEP)在PBS缓冲液中的溶液，并将混合物在室温搅拌1小时。随后，根据期望的负载，加入2-10当量的用于偶联的马来酰亚胺前体化合物或卤化物前体化合物(中间体102、103、105-109、111-114、117-126、128、129、132-146、148-155、157、159-161、166、171、175-177、184、189、194-195、199-201、205、209、223-224、226、228-231、236、244和257)在DMSO中的溶液。这里的DMSO的量不应超过总体积的10％。将该批料在室温搅拌60-120分钟，然后应用于经PBS平衡过的PD 10柱(GE Healthcare)，并用PBS缓冲液洗脱。任选地，另外借助于超速离心，进行浓缩操作。
通常，除非另有说明，使用5mg对应抗体在PBS缓冲液中的溶液进行还原和随后的偶联。在经由PD10柱纯化以后，在每种情况下得到对应的ADC在3.5ml PBS缓冲液中的溶液。然后确定这些溶液中的指定的特定蛋白浓度。此外，根据下面描述的方法，确定抗体的负载(药物/mAb比率)。
使用该方法来制备在实施例1、3、5-6、8、10-12、14、15、27和32中代表的免疫缀合物。
在解释的结构式中，AK1A和AK1B的定义如下：
AK1A＝抗-FGFR2抗体M048-D01-hIgG1(经部分地还原)-S§1
AK1B＝抗-FGFR2抗体M048-D01-hIgG1-b(经部分地还原)-S§1
其中
§1 表示与琥珀酰亚胺基团的连接，
并且
S 代表经部分地还原的抗体的半胱氨酸残基的硫原子。
B-7.用于偶联赖氨酸侧链的一般方法：
在偶联反应中使用以下抗体：
M048-D01-hIgG1
M048-D01-hIgG1-b
GAL-FR21-mIgG1
GAL-FR22-mIgG2a
根据期望的负载，向对应的抗体在PBS缓冲液中的溶液(在1mg/ml至10mg/ml的浓度范围内)中，加入2-5当量的用于偶联的前体化合物(中间体104、110、115、116、127、130、131、147、156、158、162、169、178、185、190、202、206、210-216、218、219、227、233、238、240、242、245、247a、247b、250、251、253、255、258和260-261)在DMSO中的溶液。在室温搅拌30分钟以后，再次加入相同量的前体化合物在DMSO中的溶液。这里的DMSO的量不应超过总体积的10％。在室温搅拌另外30分钟以后，将该批料应用于PD 10柱(Sephadex G-25)，并用PBS缓冲液洗脱。任选地，另外借助于超滤，进行浓缩操作。如果必要的话，为了更有效地除去低分子量组分，在用PBS缓冲液再稀释以后，重复超滤浓缩。
通常，除非另有说明，使用5mg对应抗体在PBS缓冲液中的溶液进行偶联。在经由PD10柱纯化以后，在每种情况下得到对应的ADC在3.5mlPBS缓冲液中的溶液。然后确定这些溶液中的指定的特定蛋白浓度，并根据下面描述的方法，确定抗体的负载(药物/mAb比率)。
使用该方法来制备在实施例2、4、7、9、13、16-17、25、26、28-31和33-35中代表的免疫缀合物。
在解释的结构式中，AK2A、AK2B、AK2D和AK2E的定义如下：
AK2A＝抗-FGFR2抗体M048-D01-hIgG1-NH§2
AK2B＝抗-FGFR2抗体M048-D01-hIgG1-b-NH§2
AK2D＝抗-FGFR2抗体GAL-FR21-mIgG1-NH§2
AK2E＝抗-FGFR2抗体GAL-FR22-mIgG2a-NH§2
其中
§2 表示与羰基的连接，
并且
NH 代表抗体的赖氨酸残基的侧链氨基。
B-8.用于制备半胱氨酸加合物的一般方法：
将10μmol上述的马来酰亚胺前体化合物溶解于3ml DMF中，并与2.1mg(20μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。
在解释的结构式中，Cys的定义如下
其中
§3 表示与接头-毒性基团单元的连接。
B-9.用于制备赖氨酸加合物的一般方法：
将10μmol上述的活性酯前体化合物溶解于5ml DMF中，并在有30μmol的N，N-二异丙基乙胺存在下与α-氨基-保护的L-赖氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。然后通过已知方法除去保护基。
本发明的缀合物的进一步纯化和表征
已经进行反应后，在某些情况下，通过例如超滤来浓缩反应混合物，然后借助于色谱法脱盐和纯化，例如使用用例如磷酸盐缓冲盐水(PBS)进行洗脱。随后对溶液进行无菌过滤，并冷冻。一种替代选择是低压冻干缀合物。
B-10.毒性基团负载的确定
如下确定在工作实施例中描述的缀合物在PBS缓冲液中形成的溶液的毒性基团负载：
通过各种缀合物物质的分子量的质谱测定，确定赖氨酸-连接的ADC的毒性基团负载。在该情况下，为了开始，借助于PNGaseF将抗体缀合物去糖基化，并将样品酸化，在HPLC分离以后，使用ESI-MicroTofQ(Bruker Daltonik)通过质谱法进行分析。通过TIC(总离子色谱图)中的信号，累加所有波谱，并基于MaxEnt Deconvolution，计算不同缀合物物质的分子量。在不同物质的信号积分以后，然后计算DAR(药物/抗体比)。
对于蛋白鉴别而言，除了分子量测定以外，在去糖基化和/或变性以后进行胰蛋白酶消化，并且在变性、还原和衍生化以后，该消化基于检测到的胰蛋白酶肽而证实了蛋白的身份。
经由还原的和变性的ADC的反相色谱法，确定半胱氨酸-连接的缀合物的毒性基团负载。将ADC溶液(1mg/mL，50μL)与盐酸胍(GuHCl)(28.6mg)混合，并与DL-二硫苏糖醇(DTT)的溶液(500mM，3μL)混合。将混合物在55℃温育1小时，并通过HPLC进行分析。
在Agilent 1260 HPLC系统上进行HPLC分析，在220nm检测。使用的柱是Polymer Laboratories PLRP-S Polymeric Reversed Phase柱(目录号PL1912-3802)(2.1×150mm，8μm粒度，)，流速为1mL/min，使用下述梯度：0min，25％B；3min，25％B；28min，50％B。洗脱液A由0.05％的三氟乙酸(TFA)在水中的溶液组成，洗脱液B由0.05％的三氟乙酸在乙腈中的溶液组成。
通过与未缀合的抗体的轻链(L0)和重链(H0)的保留时间对比，指定检测到的峰。将仅在缀合的样品中检测到的峰指定给具有1个毒性基团的轻链(L1)和具有1、2和3个毒性基团的重链(H1、H2、H3)。
如下从通过积分确定的峰面积来确定具有毒性基团的抗体的平均负载：将轻链负载计算为属于轻链的峰的毒性基团数目加权积分结果的总和除以属于轻链的峰的单个加权积分结果的总和。将重链负载计算为属于重链的峰的毒性基团数目加权积分结果的总和除以属于重链的峰的单个加权积分结果的总和。由此得到平均药物负载，为轻链负载和重链负载的总和的2倍。在某些个别情况下，由于某些峰的共洗脱，不可能精确地确定毒性基团负载。
B-11.ADC的抗原结合试验
在已经进行偶联以后，试验了结合剂与靶分子的结合能力。技术人员知晓多种用于实现该目的的方法：例如，借助于ELISA技术或表面等离子体共振分析(BIAcoreTM测量)，可以试验缀合物的亲和力。技术人员使用普通方法可以测量缀合物浓度：例如，对于抗体缀合物而言，借助于蛋白测定(也参见Doronina等人.；Nature Biotechnol.2003；21：778-784和Polson等人，Blood 2007；1102：616-623)。
工作实施例-免疫缀合物
实施例1
使用30mg M048-D01-hIgG1在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩，用PBS重新稀释，并再次浓缩。
蛋白浓度：15.5mg/ml
药物/mAb比率：3.7
实施例2
使用32mg M048-D01-hIgG1在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，用PBS重新稀释，并再次浓缩。
蛋白浓度：11.7mg/ml
药物/mAb比率：3.9
实施例3
使用30mg M048-D01-hIgG1在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩，用PBS重新稀释，并再次浓缩。
蛋白浓度：12.5mg/ml
药物/mAb比率：3.7
实施例4
使用2mg M048-D01-hIgG1在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并用PBS重新稀释。
蛋白浓度：1.92mg/ml
药物/mAb比率：3.7
实施例5
使用3mg M048-D01-hIgG1在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并重新稀释。
蛋白浓度：2.54mg/ml
药物/mAb比率：3.1
实施例6
使用4mg M048-D01-hIgG1在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并重新稀释。
蛋白浓度：1.53mg/ml
药物/mAb比率：2.7
实施例7
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并重新稀释。
蛋白浓度：1.28mg/ml
药物/mAb比率：6.1
实施例8
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并重新稀释。
蛋白浓度：1.26mg/ml
药物/mAb比率：3.5
实施例9
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并重新稀释。
蛋白浓度：1.28mg/ml
药物/mAb比率：6.1
实施例10
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并重新稀释。
蛋白浓度：1.36mg/ml
药物/mAb比率：4.4
实施例11
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并重新稀释。
蛋白浓度：1.27mg/ml
药物/mAb比率：4.8
实施例12
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并重新稀释。
蛋白浓度：1.48mg/ml
药物/mAb比率：4.0
实施例13
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并重新稀释。
蛋白浓度：1.21mg/ml
药物/mAb比率：1.5
实施例14
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并重新稀释。
蛋白浓度：1.27mg/ml
药物/mAb比率：2.7
实施例15
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并用PBS重新稀释。
蛋白浓度：1.37mg/ml
药物/mAb比率：3.9
实施例16
使用4mg GAL-FR21-mIgG1在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并用PBS重新稀释。
蛋白浓度：1.63mg/ml
药物/mAb比率：8.7
实施例17
使用4mg GAL-FR22-mIgG2a在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并用PBS重新稀释。
蛋白浓度：1.60mg/ml
药物/mAb比率：8.1
实施例18
N-(6-{[(5S)-5-氨基-5-羧基戊基]氨基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将15.5mg(15μmol)中间体210溶解于5ml DMF中，并与4.4mg(18μmol)N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸以及7.7μL(44μmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩。随后通过制备型HPLC纯化残余物。得到14mg(理论值的81％)标题化合物的受保护的中间体，随后将其溶解于1ml二氯甲烷中，并用1ml三氟乙酸去保护。浓缩该批料，并在从乙腈/水(1：1)低压冻干残余物以后，得到15mg(理论值的97％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.79min；MS(ESIpos)：m/z＝1083(M+H)+。
实施例19
N-(6-{[(5S)-5-氨基-5-羧基戊基]氨基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将40mg(40μmol)中间体227溶解于5ml DMF中，并与11.5mg(40μmol)N2-[(苄氧基)羰基]-L-赖氨酸以及13μL(80μmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到32.5mg(理论值的70％)标题化合物的受保护的中间体。
将该32.5mg中间体溶解在10ml甲醇中，并在加入2mg 10％活性炭载钯以后，在标准氢压力下在室温氢化30分钟。然后通过过滤除去催化剂，并在减压下除去溶剂。从二噁烷/水(1：1)低压冻干残余物，得到26mg(理论值的99％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.76min；MS(ESIpos)：m/z＝1014(M+H)+。
实施例20
N-[(18S)-18-氨基-18-羧基-12-氧代-3，6，9-三氧杂-13-氮杂十八-1-基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将3.5mg(3μmol)中间体202溶解于2ml DMF中，并与0.8mg(3μmol)N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸以及1.6μL(10μmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩。将残余物溶解于乙腈/水：(1：1)中，用三氟乙酸调节至pH 2，然后通过制备型HPLC进行纯化。得到1mg(理论值的25％)标题化合物的受保护的中间体，随后将其溶解于500μl二氯甲烷中，并用500μl三氟乙酸去保护。浓缩该批料，并在从乙腈/水(1：1)低压冻干残余物以后，得到1mg(理论值的89％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.82min；MS(ESIpos)：m/z＝1173(M+H)+。
实施例21
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(10μmol)中间体157溶解于5.2ml DMF中，并与2.28mg(20μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到5.8mg(理论值的48％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.45min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.74min；MS(ESIpos)：m/z＝1184(M+H)+。
实施例22
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(10μmol)中间体113溶解于5.2ml DMF中，并与2.28mg(20μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到6mg(理论值的54％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.77min；MS(ESIpos)：m/z＝1185(M+H)+。
实施例23
N-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(10μmol)中间体124溶解于4ml DMF中，并与2.5mg(20μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到7.2mg(理论值的64％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.8min；MS(ESIpos)：m/z＝1071(M+H)+。
实施例24
N-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(10μmol)中间体125溶解于4ml DMF中，并与2.4mg(20μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到7.7mg(理论值的69％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.91min；MS(ESIpos)：m/z＝1140(M+H)+。
实施例25
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并重新稀释。
蛋白浓度：1.27mg/ml
药物/mAb比率：1.0
实施例26
使用35mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，用PBS重新稀释，并再次浓缩。
蛋白浓度：11.60mg/ml
药物/mAb比率：3.7
实施例27
使用35mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，用PBS重新稀释，并再次浓缩。
蛋白浓度：11.7mg/ml
药物/mAb比率：4.2
实施例28
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将反应混合物通过超速离心进行浓缩，用PBS重新稀释，并用PBS重新稀释。
蛋白浓度：1.31mg/ml
药物/mAb比率：3.7
实施例29
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将反应混合物通过超速离心进行浓缩，用PBS重新稀释，并用PBS重新稀释。
蛋白浓度：1.53mg/ml
药物/mAb比率：1.3
实施例30
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将批料通过超速离心进行浓缩，并重新稀释。
蛋白浓度：1.61mg/ml
药物/mAb比率：3.9
实施例31
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将反应混合物通过超速离心进行浓缩，用PBS重新稀释，并重新稀释。
蛋白浓度：1.32mg/ml
药物/mAb比率：1.7
实施例32
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将反应混合物通过超速离心进行浓缩，用PBS重新稀释，并重新稀释。
蛋白浓度：1.12mg/ml
药物/mAb比率：0.2
实施例33
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将反应混合物通过超速离心进行浓缩，用PBS重新稀释，并重新稀释。
蛋白浓度：1.29mg/ml
药物/mAb比率：5.5
实施例34
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将反应混合物通过超速离心进行浓缩，用PBS重新稀释，并重新稀释。
蛋白浓度：1.04mg/ml
药物/mAb比率：0.5
实施例35
使用5mg M048-D01-hIgG1-b在PBS中的溶液进行这里的偶联，并在Sephadex纯化以后，将反应混合物通过超速离心进行浓缩，用PBS重新稀释，并重新稀释。
蛋白浓度：1.66mg/ml
药物/mAb-Ratio：3.4
实施例36
N-(6-{[(5S)-5-氨基-5-羧基戊基]氨基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将8mg(8μmol)中间体242溶解于3ml DMF中，并与2.9mg(12μmol)N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸以及2.7μL(16μmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后再与相同量的N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸和N，N-二异丙基乙胺混合，并在室温搅拌另外4小时。随后将批料在减压下浓缩。然后通过制备型HPLC纯化残余物。从乙腈/水低压冻干，得到6.5mg(理论值的72％)标题化合物的受保护的中间体，随后将其溶解于5ml二氯甲烷中，并用0.75ml三氟乙酸去保护。浓缩该批料，并从二噁烷/水低压冻干残余物，得到5mg(理论值的76％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.69min；MS(ESIpos)：m/z＝1059(M+H)+。
实施例37
N-(6-{[(5S)-5-氨基-5-羧基戊基]氨基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(4-羟基苯基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
首先38mg(41μmol)中间体248将转化成N-羟基琥珀酰亚胺酯。将72mg得到的粗产物溶解于5ml DMF中，并与24mg(100μmol)N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸和23μL N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后再与16mg N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸和12μL N，N-二异丙基乙胺混合，随后在超声浴中处理另外2小时。然后在减压下浓缩该批料，并通过制备型HPLC纯化残余物。从乙腈/水低压冻干，得到20mg(理论值的50％)标题化合物的受保护的中间体。
随后将15mg(12μmol)该中间体溶解于3ml二氯甲烷中，并与1ml三氟乙酸混合。在室温搅拌40分钟以后，加入另外1.5ml三氟乙酸，并将该批料在超声浴中处理1小时。此后，将批料浓缩，并从二噁烷/水低压冻干残余物，得到13mg(理论值的90％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.68min；MS(ESIpos)：m/z＝990(M+H)+。
C：生物活性的评价：
通过下述的测定，证实了本发明的化合物的生物学效应：
C-1.在细胞表面上具有不同FGFR2水平的肿瘤细胞的鉴别
为了确定在细胞表面上可被抗体利用的FGFR2的量，在流式细胞计量术中分析了FGFR2抗体在不同肿瘤细胞系上的细胞结合。将下面的细胞系用于实验。关于FGFR2的突变和拷贝数的信息得自Sanger CenterGenome Project：
-SNU-16人胃癌细胞，FGFR2基因扩增(拷贝数14；ATCC-CRL-5974，RPMI 1640(Biochrom FGl215)+10％FCS
-KatoIII人胃癌细胞，FGFR2基因扩增(拷贝数14ATCC-TCP-1008；Iscove’s(Biochrom FG0465)+20％FCS
-SUM52-PE人乳腺癌细胞，FGFR2基因扩增(拷贝数14；Asterand批号：28062A1-6004；Ham的F12(Biochrom FG0815)+5％FCS+10mMHepes缓冲液+1μg/ml氢化可的松+5μg/ml胰岛素
-MFM-223人乳腺癌细胞，FGFR2基因扩增(拷贝数14；ECACC-98050130，MEM Earle(Biochrom F0315)+10％FCS+2mM谷氨酰胺
-NCI-H716人结肠直肠癌细胞，FGFR2基因扩增(拷贝数：8；ATCC-CCL-251；RPMI 1640(Biochrom FG1215)+10％FCS)
-MDA-MB-231人乳腺癌细胞(没有FGFR2基因扩增，拷贝数3；ATCC-HTB-26，DMEM/HAM的F12(Biochrom FG4815)+10％FCS
对于实验，将贴壁细胞用PBS(不含钙(Ca2+)和镁(Mg2+)离子)洗涤2次，并使用不含酶的、基于PBS的细胞解离缓冲液(Invitrogen)脱离。将大约1×105个细胞/孔悬浮于FACS缓冲液(不含Ca2+和Mg2+的含有3％FCS(Biochrom)的PBS)中，随后离心(250g，5min，4℃)，并抛弃上清液。将细胞再悬浮于抗体(5μg/ml，80μl)在FACS缓冲液中的稀释液中，并在冰上温育1小时。接着，将细胞用100μl冷FACS缓冲液洗涤1次，并加入80μl1：150稀释的第二抗体(对于GAL-FR21-mIgG1和对于GAL-FR22-mIgG2a，为PE偶联的山羊抗-小鼠IgG，Jackson ImmunoResearch#115-115-164；对于M048-D01-hIgG1，为PE偶联的山羊抗-人IgG，Dianova#109-115-098for)。
在冰上温育1小时以后，将细胞再次用冷FACS缓冲液洗涤，再悬浮于100μl FACS缓冲液中，并在FACS阵列流式细胞计(BD Biosciences)中分析。将结果计算为用FGFR2抗体检测到的细胞群体的几何平均值减去背景荧光，其通过仅与第二抗体一起温育细胞群体进行测量。通过下述系统来分析值：FGFR2抗体的几何平均值减去仅第二抗体的几何平均值＞10+，＞100++，＞1000+++，＞10000++++，-：没有信号。在分类限度附近的值用()标记。
在表4中指示了FGFR2抗体与肿瘤细胞的结合：
表4
| M048-D01-hIgG1 | GAL-FR21-mIgG1 | GAL-FR22-mIgG2a | |
| MFM-223 | +++ | +++ | +++ |
| SNU-16 | ++(+) | ++(+) | ++ |
| MDA-MB-231 | - | nd1) | nd1) |
1）nd：未测定
FGFR2抗体会检测在MFM-223和SNU-16癌细胞的细胞表面上的FGFR2。
C-2.针对FGFR2的ADC的细胞毒性效应的确定
如下确定在具有不同FGFR2表达量的不同细胞系上的FGFR2 ADC的细胞毒性效应：
使用在C-1下面指出的生长培养基，根据标准方法培养细胞。为了实现，将细胞用胰蛋白酶(0.05％)和EDTA(0.02％)在PBS中的溶液(Biochrom AG#L2143)脱离，丸粒化，再悬浮于培养基中，计数，并接种进具有白底的96-孔培养板(Costar#3610)中(在细胞计数/孔以后，以75μl/孔：SNU-16：3000；MFM-223：7000；MDA-MB-231：4000；SUM52-PE：3000；NCI-H716：3000；KatoIII：3000)，并在5％二氧化碳下在37℃在培养箱中温育。24小时以后，将25μl培养基中的抗体-药物缀合物(4倍浓度)施加给细胞，在细胞上产生3×10-7M至3×10-11M的最终抗体-药物缀合物浓度(一式三份)。然后将细胞在培养箱中在37℃和5％二氧化碳中温育。在一个平行平板中，使用Cell Titer Glow Luminescent Cell Viabilitv Assay(Promega#G7573和#G7571)，确定在药物处理开始(第0天)时的细胞活力。为此，给每个细胞批加入100μl底物，然后给平板覆盖铝箔，用平板振荡器在180 rpm摇动2分钟，在实验室工作台上静置8分钟，然后使用光度计(Victor X2，Perkin Elmer)测量。所述底物检测活细胞中的ATP含量，从而产生发光信号，其水平与细胞的活力直接成比例。与抗体-药物缀合物一起温育72小时以后，同样如上所述使用Cell Titer Glow LuminescentCell Viability Assay确定这些细胞中的活力。使用实验室软件MTS(由Schering AG和Bayer Business Services 1999-2009开发)，基于4-参数适应，从测量的数据相对于第0天来计算生长抑制的IC50。
下面的表5列出了1)得自该测定的代表性工作实施例的IC50值：
表5
1)报道的活性数据与在实验部分中描述的工作实施例相关，指示了药物/mAB比率。所述值可能偏离不同的药物/mAB比率。
工作实施例1抑制在细胞表面上表达FGFR2的SNU-16和MFM-223癌细胞系的增殖，具有在亚纳摩尔浓度范围内的IC50。工作实施例1抑制不在细胞表面上表达FGFR2的MDA-MB-231癌细胞系的增殖，具有300nM的IC50。从数据显而易见，所有试验的抗体-药物缀合物(工作实施例1-31、33-35)选择性地抑制表达FGFR2的癌细胞系(SNU-16、MFM-223、SUM52-PE、KatoIII或NCI-H716)的增殖。
C-3.对微管蛋白聚合的作用的确定
癌细胞是变性细胞，其经常导致肿瘤的形成，这也是细胞分裂增加的结果。微管形成纺锤体的纺锤丝，并且是细胞周期的必需组成部分。微管有规律的构建和分解使得染色体在子细胞中精确分裂，并构成连续的动态过程。该动态过程的破坏将导致不正确的细胞分裂，并最终导致细胞死亡。但是，癌细胞细胞分裂的增加也会使其对纺锤丝毒剂特别敏感，该纺锤丝毒药构成化疗的固定组分。纺锤丝毒剂(例如紫杉醇或大环内酯)会造成微管的聚合速率急剧升高，而长春花生物碱或单甲基耳他汀E(MMAE)会造成微管的聚合速率急剧降低。在这两种情况下，细胞周期的必要活力被严重破坏。
使用来自Cytoskeleton的“基于荧光的微管聚合测定试剂盒”(Denver，Colorado，USA；订单号：BK011)，对微管蛋白聚合进行研究。在该测定中，向未聚合的微管蛋白添加GTP，使得聚合自发地进行。该测定基于荧光团4′，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)与微管蛋白的结合。游离的DAPI和结合的DAPI可基于不同的发射光谱进行区分。由于与非聚合的微管蛋白相比，DAPI对聚合的微管蛋白具有显著的高亲和性，因此通过结合的DAPI荧光团的荧光增加可跟踪微管蛋白聚合。
为了实施该测定，用水将本发明化合物(在DMSO溶液中)从其10mM的初始浓度稀释至1μM。除了缓冲液对照以外，还使用紫杉醇(具有聚合增加作用)和长春碱(具有聚合抑制作用)作为测定对照。使用具有半底部区域的96孔板进行测定。在37℃在荧光计中监测微管蛋白聚合的动力学1小时。激发波长为355nm，并且在460nm监测发射。对于前10分钟内的线性增加区域，对每分钟的荧光变化(ΔF/min)进行计算，该变化表示微管的聚合速率。基于其各自的聚合速率的降低来定量试验物的效力。下面的表6给出了代表性的工作实施例对微管蛋白聚合的影响的数据。表6：选择的毒性基因变体的实施例对微管蛋白聚合的阻断.
MMAF毒性基团和工作实施例随着它们的浓度而变化地抑制微管蛋白聚合。在100μM MMAF，微管蛋白聚合被完全抑制。在本发明范围内研究的化合物导致微管的聚合速率降低。工作实施例18-21在1μM将微管蛋白聚合抑制至关于1μM MMAF测得的值的45-88％。
C-4.用于确定细胞渗透性的体外试验
使用Caco-2细胞，在流量测定(flux assay)中通过体外试验，可以研究物质的细胞渗透性[M.D.Troutman和D.R.Thakker，Pharm.Res.20(8)，1210-1224(2003)]。为此目的，将所述细胞在24-孔滤板上培养15-16天。为了确定渗透，在HEPES缓冲液中将各工作实施例从顶端(A)或基部(B)施加给细胞，并温育2小时。0小时和2小时后，将样品从顺式和反式隔室中取出。使用反相柱通过HPLC(Agilent 1200，德国)分离样品。该HPLC系统通过涡轮增压离子喷雾接口(Turbo Ion SprayInterface)连接至三重四极杆质谱仪API4000(Triple Quadropolmass spectrometer API4000)(Applied Biosystems Applera，Darmstadt，德国)。基于Papp值来评价渗透性，该Papp值使用由Schwab等人公开的公式进行计算[D.Schwab等人，J.Med.Chem.46，1716-1725(2003)]。
对于在细胞内释放的毒性基团而言，至关重要的是，从B至A的渗透性[Papp(B-A)]：该渗透性越低，工作实施例在细胞内释放以后在细胞中的停留时间越长，并且因此可用于与生化靶标(在该情况下：微管蛋白)相互作用的时间越长。
下面表7阐述了得自该测定的代表性工作实施例的渗透性数据：
表7
所述工作实施例表现出较低的从B至A的渗透性[Papp(B-A)]，并因此在CaCo-2细胞中具有长停留时间。与此相比，单甲基耳他汀E(MMAE)和单甲基耳他汀F(MMAF)在该试验中表现出73nm/s的Papp(B-A)值，并因此在Caco-2细胞中具有显著更短的停留时间。
C-5.用于确定P-糖蛋白(P-gp)的底物性质的体外试验
许多肿瘤细胞表达药物的转运蛋白等蛋白，并且这经常伴随对细胞抑制剂的抗性的发展。例如，不是此类转运蛋白等蛋白(诸如P-糖蛋白(P-gp)或BCRP)的底物的物质因此表现出提高的活性谱。
使用过表达P-gp的LLC-PK1细胞(L-MDR1细胞)，通过流量测定，确定物质作为P-gp(ABCB1)的底物的性质[A.H.Schinkel等人，J.Clin.Invest.96，1698-1705(1995)]。为此目的，将LLC-PK1细胞或L-MDR1细胞在96-孔滤板上培养3-4天。为了确定渗透，在HEPES缓冲液中将各试验物(单独或在有抑制剂(诸如伊维菌素或维拉帕米)存在下)从顶端(A)或基部(B)施加给所述细胞，并温育2小时。0小时和2小时后，将样品从顺式和反式隔室中取出。使用反相柱通过HPLC分离样品。该HPLC系统通过涡轮增压离子喷雾接口连接至三重四极杆质谱仪API 3000(Applied Biosystems Applera，Darmstadt，德国)。基于Papp值来评价渗透性，该Papp值使用由Schwab等人公开的公式进行计算[D.Schwab等人，J.Med.Chem.46，1716-1725(2003)]。
对于在细胞内释放的毒性基团而言，至关重要的是，从B至A的渗透性[Papp(B-A)]：该渗透性越低，工作实施例在细胞内释放以后在细胞中的停留时间越长，并且因此可用于与生化靶标(在该情况下：微管蛋白)相互作用的时间越长。
下面表8列出了得自该测定的代表性工作实施例的渗透性数据，所述测定在L-MDR1细胞中进行：
表8
所述工作实施例表现出较低的从B至A的渗透性[Papp(B-A)]，并因此在L-MDR1细胞中具有长停留时间。
C-6.在SNU-16肿瘤模型中的药代动力学
在静脉内施用不同ADC以后，测量ADC以及潜在代谢物的血浆浓度和肿瘤浓度，并计算药代动力学参数诸如清除率(CL)、曲线下面积(AUC)和半衰期(t1/2)。
用于定量潜在发生的代谢物的分析
借助于与串联质谱仪(MS)联用的高压液相色谱法(HPLC)，在用甲醇沉淀蛋白以后，测量血浆和肿瘤中的化合物。
对于100μL血浆的加工，将它与400μL甲醇和10μL内部标准品(ISTD，50ng/mL的在甲醇中的溶液)混合，并摇动10秒。在16000g离心5分钟以后，将250μL上清液转移至自动采样瓶，补加250μL乙酸铵缓冲液(AAC，10mM，pH 6.8)，并再次摇动。
对于肿瘤的加工，将它与4倍量的甲醇混合。在Tissuelyser II(Quiagen)中，以每分钟30次撞击，将样品粉碎6分钟，然后在16000g离心5分钟。将50μl上清液转移至自动采样瓶，并补加50μL乙酸铵缓冲液(10mM，pH6.8)和5μL ISTD。再次摇动后，肿瘤样品准备好用于测量。
最后，在得自SCIEX的API4000仪器上，借助于涡轮增压离子喷雾接口(TISP)，用HPLC偶联的大气压电离/串联质谱仪进行两种基质样品的测量。
在带有Gemini柱(5μm C18110A，50×3mm，Phenomenex)的HP1100泵(Agilent)上，运行HPLC/LC-MSMS(TISP)分析。
C-7.体内活性试验
通过例如异种移植物模型，在体内试验了本发明的缀合物的活性。技术人员知晓在现有技术中用于试验本发明的缀合物的活性的方法(参见，例如，WO 2005/081711；Polson等人，Cancer Res.2009Mar15；69(6)：2358-64)。为此目的，例如，给啮齿类动物(例如小鼠)植入表达结合剂的靶分子的肿瘤细胞系。随后给这些荷瘤啮齿类动物施用本发明的缀合物或对照抗体缀合物或等渗盐溶液。施用进行一次或多次。每周借助于滑动测径器确定肿瘤生长2次。肿瘤生长数周后，将缀合物治疗的动物和对照组的肿瘤大小进行对比。缀合物治疗的动物表现出显著更小的肿瘤大小。
C-7a.在小鼠内的实验肿瘤中试验ADC
将表达FGFR2的人肿瘤细胞皮下地接种进免疫抑制的小鼠(诸如裸鼠或SCID小鼠)的胁腹。从细胞培养物取出100-1000万细胞，离心，并用100μl培养基、50％培养基/50％Matrigel或100％Matrigel再悬浮。将细胞混悬液注射到小鼠皮肤下面。
在几天内，肿瘤生长。在确定20-25mm2的肿瘤大小的肿瘤之前，不开始治疗。
通过静脉内途径，将缀合物治疗施用进小鼠的尾静脉。将缀合物溶解于PBS中，并以5-10ml/kg的体积施用。
治疗方案取决于抗体的药代动力学。作为标准，在每个第四天或每个第七天以后，进行治疗3次。但是，治疗也可以进一步继续，或者可以在更靠后的时间点之后进行第二个3天治疗的循环。
作为标准基础，每个治疗组使用8只动物。如果预见到治疗以后肿瘤生长有特别强的波动，该数字可以更高。象接受活性物质的组一样，作为对照组的一个组根据相同的方案仅用缓冲液治疗。
在实验过程中，使用滑动测径器，在2个维度(长度/宽度)定期测量肿瘤的面积。借助于公式长度×宽度，计算肿瘤的面积。
在实验结束时，取出肿瘤，并称重。将治疗组(T)与对照组(C)的平均肿瘤重量比率表达为T/C。如果对照组和治疗组在不同时间结束，那么使用所有治疗组和对照组的最后一个共同测量的肿瘤面积，计算T/C值。
C-7b.在小鼠内的SNU-16异种移植物模型中试验FGFR2-ADC
将200万个SNU-16胃癌细胞皮下地接种进雌性NODscid小鼠的胁腹中。
在20-30mm2的平均肿瘤大小时，开始使用缀合物的静脉内治疗。当对照组已经达到最大允许尺寸时，将这些组结束。当肿瘤再次开始生长时，结束用FGFR2缀合物治疗的实验组。在第31天(媒介物对照仍然处于实验中的最后一个时间点)确定缀合物的活性。所有试验的FGFR2缀合物以剂量依赖性的方式抑制肿瘤生长。在5mg/kg的剂量，实施例1达到0.08的T/C，实施例3达到0.06的T/C，实施例26达到0.10的T/C。对于所有治疗的动物，在该时间点的肿瘤小于在治疗开始时(肿瘤的部分消退)。在2.5mg/kg的剂量，实施例26达到0.14的T/C。在该剂量，实施例26在40％的动物中导致部分消退。在1mg/kg的剂量，实施例1达到0.15的T/C，实施例3达到0.36的T/C。同样在该剂量，实施例1在所有治疗的动物中导致部分消退，而在实施例3的情况下，没有得到部分消退。对于所有试验的缀合物，直到1mg/kg的剂量，达到了与对照相比显著的抗肿瘤作用。对应的对照抗体-缀合物在相同剂量在该模型中根本没有表现出活性。
C7c.在小鼠内的MFM-223异种移植物模型中试验FGFR2-ADC
将1000万个MFM-223乳腺癌细胞皮下地接种进雌性NMRI nu/nu小鼠的胁腹中。预先已经给这些小鼠补充雌二醇丸剂。
在30-35mm2的平均肿瘤大小，开始使用缀合物的静脉内治疗。当对照组在第40天已经达到最大允许尺寸时，结束所有治疗组，并确定肿瘤重量。实施例26在10mg/kg的剂量达到0.09的T/C，在5mg/kg的剂量达到0.13的T/C，并在1mg/kg的剂量达到0.26的T/C。对于所有试验的3种剂量，达到了与对照相比显著的抗肿瘤作用。对应的对照抗体缀合物仅在10mg/kg的剂量在该模型中表现出显著的非特异性作用。
C7d.在小鼠内的NCI-H716异种移植物模型中试验FGFR2-2ADC
将150万个NCI-H716肠癌细胞皮下地接种进雌性NMRI nu/nu小鼠的胁腹中。
在25-30mm2的平均肿瘤大小，开始使用缀合物的静脉内治疗。当对照组在第36天已经达到最大允许尺寸时，结束所有治疗组，并确定肿瘤重量。使用实施例26的治疗导致肿瘤重量的显著减小，在5mg/kg达到0.24的T/C。在该剂量，对应的对照缀合物在该模型中根本没有活性。
D.药物组合物的工作实施例
可以如下将本发明的化合物转化成药物制剂：
静脉内溶液：
在生理学上耐受的溶剂(例如，等渗盐水溶液，D-PBS，或加入了聚山梨酯80的甘氨酸和氯化钠在柠檬酸盐缓冲液中的制剂)中，以低于饱和溶解度的浓度，溶解本发明的化合物。对溶液进行无菌过滤，并分配进无菌的且无热原的注射容器中。
静脉内溶液：
可以将本发明的化合物转化成引用的施用形式。这可以通过已知的方式如下实现：与惰性的、无毒的、药学上合适的赋形剂(例如缓冲物质、稳定剂、增溶剂、防腐剂)“混合”或“溶解在”所述赋形剂中。例如，下述物质可能存在：氨基酸(甘氨酸、组氨酸、蛋氨酸、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸和其它氨基酸)，糖类和有关的化合物(葡萄糖、蔗糖、甘露醇、海藻糖、蔗糖、甘露糖、乳糖、山梨醇)，甘油，钠盐、钾盐、铵盐和钙盐(例如氯化钠、氯化钾或磷酸氢二钠和许多其它盐)，乙酸盐/乙酸缓冲液系统，磷酸盐缓冲液系统，柠檬酸和柠檬酸盐缓冲液系统，氨丁三醇(TRIS和TRIS盐)，聚山梨酯(例如聚山梨酯80和聚山梨酯20)，泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188和泊洛沙姆171)，聚乙二醇类(PEG衍生物，例如3350)，Triton X-100，EDTA盐，谷胱甘肽，白蛋白(例如人白蛋白)，脲，苯甲醇，苯酚，氯甲酚，间甲酚，苯扎氯铵和许多其它物质。
用于以后转化成静脉内、皮下或肌肉内溶液的冻干粉剂：
可替换地，可以将本发明的化合物转化成稳定的冻干粉剂(可能借助于上述的赋形剂)，并且，在施用之前，用合适的溶剂(例如注射级水、等渗盐水溶液)重构，并施用。
Claims (41)
1.通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中
n是1-50的数字，
AK是结合FGFR2的结合剂，
基团§-G-L1-B-§§是接头，
其中
§表示与基团AK的连接位点，且
§§表示与氮原子的连接位点，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
2.根据权利要求1所述的通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-50的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是结合剂，其结合FGFR2并且经由所述结合剂的硫原子键合至基团G，
AK2是结合剂，其结合FGFR2并且经由所述结合剂的氮原子键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与所述结合剂的硫原子的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C1-C10)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C10)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键或(C2-C4)-烷二基，
L6是键或下式的基团
其中
##7表示与羰基的连接位点，
##8表示与L1B的连接位点，
R33是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
R34是氢或甲基，
R29是氢或(C1-C4)-烷基，
R30是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R29和R30与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R31是氢或(C1-C4)-烷基，
R32是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R31和R32与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
L1B是直链(C2-C10)-烷二基，
并且
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
L3是键或(C2-C4)-烷二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
R28是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
Q1是4-7元杂环，
Q2是3-7元碳环或4-7元杂环，
R14是氢或(C1-C4)-烷基，
R15是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R14和R15与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R16是氢或(C1-C4)-烷基，
R17是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R18是氢或(C1-C4)-烷基，
R19是氢或者天然α-氨基酸或其同系物或异构体的侧基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或(C1-C4)-烷基，
R22是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成3-7元碳环，
R23是(C1-C4)-烷基，
R24是氢或(C1-C4)-烷基，
R27是氢或(C1-C4)-烷基，
R36是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
R37是氢或甲基，
或者
R36和R37与它们所键合的原子一起形成吡咯烷环，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
3.根据权利要求1或2所述的通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-20的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是结合剂，其结合FGFR2并且经由所述结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是结合剂，其结合FGFR2并且经由所述结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与所述结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C6)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键，
L6是键或下式的基团
其中
##7表示与羰基的连接位点，
##8表示与L1B的连接位点，
R33是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R34是氢或甲基，
R29是氢，
R30是氢，
R31是氢或甲基，
R32是氢或甲基，
L1B是直链(C2-C6)-烷二基，
并且
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
Q1是4-7元杂环，
R14是氢，
R15是氢，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R18是氢，
R19是氢、甲基、丙烷-2-基、2-甲基丙烷-1-基或1-甲基丙烷-1-基，
R20是氢或甲基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或甲基，
R22是氢或甲基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成环丙基环，
R23是甲基，
R24是氢或甲基，
R27是氢，
R36是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R37是氢或甲基，
或者
R36和R37与它们所键合的原子一起形成吡咯烷环，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
4.根据权利要求1-3中的任一项所述的通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是结合FGFR2的结合剂，并且经由所述结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是结合FGFR2的结合剂，并且经由所述结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与所述结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基、下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
Q1是哌啶-1，4-二基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R21是氢或甲基，
R22是氢或甲基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成环丙基环，
R23是甲基，
R24是氢，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是苄基、1-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHCH2苯基的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R35是甲基或羟基。
5.根据权利要求1-4中的任一项所述的通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK2
其中
AK2是结合FGFR2的结合剂，并且经由所述结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G是羰基，
L1是键，
B是键，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-2一基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是苄基、4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢，
R9是氢或苄基，
R35是甲基。
6.根据权利要求1-5中的任一项所述的通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK1
其中
AK1是结合FGFR2的结合剂，并且经由所述结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与所述结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
L1是键、直链(C3-C5)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C3-C5)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
L2是直链(C3-C5)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是苄基、4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢，
R9是氢或苄基，
R35是甲基。
7.通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中
n是1-50的数字，
AK是结合FGFR2的结合剂，
基团§-G-L1-B-§§是接头，
其中
§表示与基团AK的连接位点，且
§§表示与氮原子的连接位点，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团，其中＊是与氮原子的连接位点
8.下式的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中AK是结合FGFR2的结合剂，且n是1-10的数字。
9.下式的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中AK是结合FGFR2的抗体或抗体片段，且n是1-10的数字。
10.下式的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中AK2A是M048-D01-hIgG1，且n是1-10的数字。
11.下式的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中AK2B是M048-D01-hIgG1-b，且n是1-10的数字。
12.式(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中
Cys是半胱氨酸残基，其经由侧链的硫原子键合至琥珀酰亚胺的碳原子，
L1是键、直链(C1-C10)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C10)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键或(C2-C4)-烷二基，
L6是键，
R29是氢或(C1-C4)-烷基，
R30是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R29和R30与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R31是氢或(C1-C4)-烷基，
R32是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R31和R32与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
L1B是直链(C2-C10)-烷二基，
并且
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
L3是键或(C2-C4)-烷二基，
L4是键，
Q1是4-7元杂环，
Q2是3-7元碳环或4-7元杂环，
R14是氢或(C1-C4)-烷基，
R15是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R14和R15与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R16是氢或(C1-C4)-烷基，
R17是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R18是氢或(C1-C4)-烷基，
R19是氢或者天然α-氨基酸或其同系物或异构体的侧基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或(C1-C4)-烷基，
R22是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成3-7元碳环，
R23是(C1-C4)-烷基，
R24是氢或(C1-C4)-烷基，
R27是氢或(C1-C4)-烷基，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
13.根据权利要求12所述的式(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
Cys是半胱氨酸残基，其经由侧链的硫原子键合至琥珀酰亚胺的碳原子，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基、下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C6)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键，
L6是键，
R29是氢，
R30是氢，
R31是氢或甲基，
R32是氢或甲基，
L1B是直链(C2-C6)-烷二基，
并且
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键，
R14是氢，
R15是氢，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R23是甲基，
R24是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHCH2苯基的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R35是甲基或羟基。
14.根据权利要求12或13中的任一项所述的式(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
Cys是半胱氨酸残基，其经由侧链的硫原子键合至琥珀酰亚胺的碳原子，
L1是键或直链(C2-C6)-烷二基，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键，
L4是键，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是苄基、4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢，
R8是氢，
R9是氢，
R35是甲基。
15.式(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中
L1是键、直链(C1-C10)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C10)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键或(C2-C4)-烷二基，
L6是键，
R29是氢或(C1-C4)-烷基，
R30是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R29和R30与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R31是氢或(C1-C4)-烷基，
R32是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R31和R32与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
L1B是直链(C2-C10)-烷二基，
并且
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
Q1是4-7元杂环，
Q2是3-7元碳环或4-7元杂环，
R18是氢或(C1-C4)-烷基，
R19是氢或者天然α-氨基酸或其同系物或异构体的侧基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或(C1-C4)-烷基，
R22是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成3-7元碳环，
R27是氢或(C1-C4)-烷基，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
并且
其中所述烷二基链的彼此处于1，2-、1，3-或1，4-关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
16.根据权利要求15所述的式(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
*表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
R18是氢，
R19是甲基、丙烷-2-基、2-甲基丙烷-1-基或1-甲基丙烷-1-基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或甲基，
R22是氢或甲基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成环丙基环，
R27是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
并且
其中烷二基链的彼此处于1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任意碳原子)可以桥连以形成苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHCH2苯基的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R35是甲基或羟基。
17.根据权利要求15或16中的任一项所述的式(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是键，
B是键，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是苄基、4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢，
R8是氢，
R9是氢，
R35是甲基。
18.用于制备根据权利要求1-11中的任一项所述的具有通式(Ia)的本发明化合物的方法，其特征在于，使所述结合剂在缓冲液中的溶液
[A]与合适的还原剂例如二硫苏糖醇或三(2-羧基乙基)膦盐酸盐混合，随后与式(II)的化合物反应
其中D、L1、B、L2和R35各自具有在权利要求1-11中指出的定义，以得到式(I-A)的化合物
其中n、AK1、D、L1、B、L2和R35各自具有在权利要求1-11中指出的定义，
或者
[B]与式(III)的化合物反应
其中D、L1、B、L2和R35各自具有在权利要求1-11中指出的定义，以得到式(I-B)的化合物
其中n、AK2、D、L1、B、L2和R35各自具有在权利要求1-11中指出的定义。
19.通过权利要求18所述的方法制备的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中AK1和AK2是包含抗体M048-D01-hIgG1或M048-D01-hIgG1-b的6个CDR序列、抗体M048-D01-hIgG1或M048-D01-hIgG1-b的可变轻链和可变重链、或抗体M048-D01-hIgG1或M048-D01-hIgG1-b的轻链和重链的抗体。
20.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂特异性地结合FGFR2。
21.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂结合FGFR2的细胞外结构域。
22.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中FGFR2是FGFR2α和/或FGFR2β。
23.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂结合FGFR2的细胞外N-端表位(1RPSFSLVEDTTLEPE15)。
24.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂以及人FGFR2也结合鼠FGFR2。
25.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂在结合靶细胞上的FGFR2以后，通过所述靶细胞的结合而被内化。
26.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂是结合蛋白。
27.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂是抗体或其结合抗原的抗体片段。
28.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂是单克隆抗体或其结合抗原的抗体片段。
29.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体或其结合抗原的抗体片段。
30.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂是IgG抗体或其结合抗原的抗体片段。
31.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂是IgG1抗体或其结合抗原的抗体片段。
32.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂与GAL-FR21、GAL-FR22或M048-D01-hIgG1抗体竞争对癌症靶分子FGFR2的结合。
33.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂包含：在SEQ ID NO：15(H-CDR1)、SEQ ID NO：16(H-CDR2)、SEQ ID NO：17(H-CDR3)、SEQ ID NO：18(L-CDR1)、SEQ ID NO：19(L-CDR2)和SEQ ID NO：20(L-CDR3)中表示的抗体M048-D01-hIgG1的可变轻链和重链的CDR序列的氨基酸序列，
在SEQ ID NO：12(V1)和SEQ ID NO：11(Vh)中表示的抗体M048-D01-hIgG1的可变轻链和重链的氨基酸序列，
在SEQ ID NO：14(V1)和SEQ ID NO：13(Vh)中表示的抗体M048-D01-hIgG1-b的可变轻链和重链的氨基酸序列，
在SEQ ID NO：9(轻链)和SEQ ID NO：10(重链)中表示的抗体M048-D01-hIgG1-b的轻链和重链的氨基酸序列，
在SEQ ID NO：7(轻链)和SEQ ID NO：8(重链)中表示的抗体M048-D01-hIgG1的轻链和重链的氨基酸序列，或
抗体GAL-FR21或GAL-FR22的可变轻链和重链的氨基酸序列。
34.根据前述权利要求中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，其中所述结合剂包含在SEQ ID NO：14(V1)和SEQ ID NO：13(Vh)中表示的抗体M048-D01-hIgG1-b的可变轻链和重链的氨基酸序列，
在SEQ ID NO：9(轻链)和SEQ ID NO：10(重链)中表示的抗体M048-D01-hIgG1-b的轻链和重链的氨基酸序列。
35.用于治疗和/或预防疾病的根据权利要求1-34中的任一项所述的结合剂-药物缀合物或化合物。
36.用在治疗和/或预防过度增生性疾病和/或血管生成性疾病的方法中的根据权利要求1-34中的任一项所述的结合剂-药物缀合物或化合物。
37.用于制备药物的根据权利要求1-34中的任一项所述的结合剂-药物缀合物，所述药物用于治疗和/或预防过度增生性疾病和/或血管生成性疾病。
38.药物，其包含与惰性的、无毒的、药学上合适的赋形剂相组合的根据权利要求1-34中的任一项所述的结合剂-药物缀合物或化合物。
39.药物，其包含与一种或多种抗过度增生性的、细胞生长抑制性的或细胞毒性的物质相组合的根据权利要求1-34中的任一项所述的结合剂-药物缀合物或化合物。
40.用于治疗和/或预防过度增生性疾病和/或血管生成性疾病的根据权利要求38或39所述的药物。
41.用于治疗和/或预防人类和动物的过度增生性疾病和/或血管生成性疾病的方法，所述方法使用有效量的至少一种根据权利要求1-34中的任一项所述的结合剂-药物缀合物或化合物或在权利要求39和40中的任一项中所述的药物。
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