CN109963835B - 一种新毒素及其中间体的制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种新毒素及其中间体的制备方法，具体包含通式(III)化合物及其制备方法，以及通式(III)化合物经过一系列的上保护基、脱保护基和缩合反应得到通式(I)化合物的制备方法。

Description

一种新毒素及其中间体的制备方法
技术领域
本发明涉及一种新毒素及其中间体的制备方法。
背景技术
专利申请WO2016127790A1(公开日2016.08.18)中涉及一类配体-细胞毒性药物偶联物，该配体-细胞毒性药物偶联物及其药物组合物通过受体调节在制备治疗癌症的药物中的用途中具有良好的效果，在合成该类配体-细胞毒性药物偶联物时，发现通式(I)所示化合物是重要的中间体，结构如下所示：
Figure GPA0000266617550000031
其制备方法如下所示：
Figure GPA0000266617550000032
在该合成路线中，采用化合物1i与化合物7d直接缩合得到中间体7e，最后与6-马来酰亚氨基己酰氯反应得到目标化合物Mc-MMAF类似物，总计四步反应。
专利申请WO2005081711A2(公开日2005.09.09)中公开了Mc-MMAF的制备方法。
在合成本发明化合物的实验过程中，采用上述类似方法合成本发明通式(I)所示化合物的过程中，总路线较长，产率较低，因此利用现有的合成方法大量合成通式(I)所示化合物还存在不少困难和不足，有必要开发高产率并适用于大规模合成通式(I)所示化合物的方法。
本发明的合成方法，采用两个片段分别合成，最后直接缩合得到通式(I)所示的化合物，总产率大大提高，该方法合成路线具有合成成本低，适合工业化生产等特点，具有显著的社会效益和经济效益。
本申请人的专利申请WO2017144015A1中也公开了(I)所示化合物的制备方法，其发明思路与本发明完全不同。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种制备式(I)所示化合物及其中间体的方法，所述方法包含通式(III)所示化合物经过一系列的上保护基、脱保护基、与6-马来酰亚氨基己酰氯发生酰胺化反应得到通式(I)所示的化合物，该方法克服现有技术对底物的限制，具有反应条件温和，操作简便，光学纯度高和合成成本低廉等优点，适于大规模生产。
本发明的技术方案如下：
本发明提供一种式(III)所示化合物：
Figure GPA0000266617550000041
其中：
R1选自氢原子或羧基保护基，
所述羧基保护基选自甲基、取代的甲基类、乙基、2-取代的乙基类、烯丙基、叔丁基、烷氧基烷基类、烷氧基烷氧基烷基类、2，6-二烷基苯基类、苄基、取代的苄基类、硅烷基类或锡烷基类；
所述取代的甲基类选自9-芴基甲基、三异丙基硅甲基、环丙基甲基、二苯基甲基或三苯基甲基；
所述2-取代的乙基类选自2，2，2-三氯乙基、2-(三甲基硅烷基)乙基、2-(对甲苯磺酰基)乙基或2-氰基乙基；
所述烷氧基烷基类选自甲氧基甲基、苄氧基甲基或三异丙基硅氧基甲基；
所述烷氧基烷氧基烷基类选自甲氧基乙氧基甲基；
所述2，6-二烷基苯基类选自2，6-二甲基苯基、2，6-二异丙基苯基或2，6-二叔丁基-4-甲氧基苯基；
所述取代的苄基类选自对甲基苄基、2，4-二甲氧基苄基、2，6-二甲氧基苄基、对硝基苄基或邻硝基苄基；
所述硅烷基类选自三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基或苯基二甲基甲硅烷基、；
所述锡烷基类选自三甲基甲锡烷基；
优选甲基、烯丙基、叔丁基、苄基、2，4-二甲氧基苄基、对甲基苄基、五氟代苯基或甲氧乙氧甲基。
优选的，通式(III)所示化合物选自：
Figure GPA0000266617550000051
本发明进一步涉及一种式(III)所示化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括由式(II)所示化合物与6-马来酰亚氨基己酸反应得到式(III)所示化合物的步骤，
Figure GPA0000266617550000052
其中，
R1如式(III)中所定义；
R2选自氢原子或氨基保护基；
所述氨基保护基优选烷氧羰基类氨基保护基、酰基类氨基保护基、磺酰基类氨基保护基或烷基类氨基保护基；
所述烷氧羰基类氨基保护基选自苄氧羰基、叔丁氧羰基、笏甲氧羰基、烯丙氧羰基、三甲基硅乙氧羰基、甲氧羰基或乙氧羰基；
所述酰基类氨基保护基选自邻苯二甲酰基、三氟乙酰基、特戊酰基、苯甲酰基、甲酰基或乙酰基；
所述磺酰基类氨基保护基选自对甲苯磺酰基、邻硝基苯磺酰基或对硝基苯磺酰基；
所述烷基类氨基保护基选自三苯甲基、2，4-二甲氧基苄基、对甲氧基苄基或苄基；优选烷氧羰基类氨基保护基，更优选叔丁氧羰基或笏甲氧羰基。
所述的反应为缩合反应，形成酰胺键的缩合剂选自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N，N′-二环己基碳化二亚胺、N，N′-二异丙基碳二酰亚胺、O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯、1-羟基苯并三唑、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，优选2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯；
上述缩合反应优选在碱性条件下进行，所述碱选自有机碱或无机碱，所述有机碱类优选三乙胺、二乙胺、N，N-二异丙基乙胺(二异丙基乙基胺)、吡啶、六甲基二硅基氨基钠，正丁基锂、叔丁醇钾或四丁基溴化铵，所述无机碱选自氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾或碳酸铯，更优选N，N-二异丙基乙胺。
优选的，所述的式(II)化合物，其中R1为羧基保护基，R2为氢原子；更优选的，所述的R1羧基保护基为DMB(2，4-二甲氧基苄基)，所述的式(II)化合物如式(IIa)化合物所示。
优选的，所述的式(III)化合物，其中R1为羧基保护基；更优选的，所述的R1羧基保护基为DMB(2，4-二甲氧基苄基)，所述的式(III)化合物如式(IIIa)化合物所示；或者当所述的当R1为氢原子时，所述的式(III)化合物如式(IIIb)化合物所示。
优选的，所述方法为
Figure GPA0000266617550000071
其中式(IIa)所示化合物与6-马来酰亚氨基己酸发生缩合反应得到式(IIIa)所示化合物。
进一步优选的，所述方法还包括以下步骤
Figure GPA0000266617550000072
式(IIIa)化合物经脱保护基反应，得到式(IIIb)化合物。
优选的，所述的式(II)化合物，当其中R1为氢原子时，R2为氨基保护基，所述的式(II)化合物如式(IIc)化合物所示；更优选的，所述的R1羧基保护基为DMB(2，4-二甲氧基苄基)，R2为氨基保护基，所述的式(II)化合物如式(IIb)化合物所示。
更优选的，所述方法还包括以下步骤
Figure GPA0000266617550000073
上述方案中，所述方法还包括式(IIc)所示化合物加上羧基保护基后得到通式(IIb)所示化合物，式(IIb)所示化合物在碱性条件下脱Fmoc保护基得到式(IIa)所示化合物的步骤，
其中，
所述碱选自有机碱或无机碱，所述有机碱类优选三乙胺、二乙胺、N，N′-二异丙基乙胺、吡啶、六甲基二硅基氨基钠，正丁基锂、叔丁醇钾或四丁基溴化铵，所述无机碱选自氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾或碳酸铯，更优选二乙胺。
本发明还涉及式(I)所示化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括式(III)所示的化合物与式(IV)所示化合物反应得到式(V)所示化合物，式(V)所示化合物脱去保护基得到式(I)所示化合物的步骤，
Figure GPA0000266617550000081
其中，
A选自3-8元环烷基，优选3元环烷基；
R选自卤素，优选氟、氯、溴或碘，最优选氟；
R1如式(III)中定义；
R3选自羧基保护基，所述羧基保护基选自2，4-二甲氧基苄基、苄基、烯丙基、五氟代苯基、甲基、对甲基苄基、甲氧乙氧甲基或叔丁基，优选2，4-二甲氧基苄基；
RX选自任选取代的烷基或环烷基，所述取代基选自烷基、卤代烷基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、烷氧基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
n选自1、2、3、4或5。
优选的，所述方法还包括式(III)所示化合物在缩合剂的作用下与式(IV)所示化合物发生缩合反应得到式(V)所示化合物的步骤，
其中，
所述缩合剂选自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N，N′-二环己基碳化二亚胺、N，N′-二异丙基碳二酰亚胺、O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯、1-羟基苯并三唑、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，优选2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯。
上述缩合反应优选在碱性条件下进行，所述碱选自有机碱或无机碱，所述有机碱类优选三乙胺、二乙胺、N，N-二异丙基乙胺(二异丙基乙基胺)、吡啶、六甲基二硅基氨基钠，正丁基锂、叔丁醇钾或四丁基溴化铵，所述无机碱选自氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾或碳酸铯，更优选N，N-二异丙基乙胺。
更优选的，所述方法为
Figure GPA0000266617550000091
优选的，所述方法包括式(IIIb)所示化合物与式(IVa)所示化合物在碱性条件下，缩合剂的作用下发生缩合反应得到式(Va)所示化合物，(Va)所示化合物在酸作用下脱去保护基得到式(Ia)所示化合物。
其中，缩合剂选自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N，N′-二环己基碳化二亚胺、N，N′-二异丙基碳二酰亚胺、O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯、1-羟基苯并三唑、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，优选2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯；
所述碱选自有机碱或无机碱，所述有机碱类优选三乙胺、二乙胺、N，N-二异丙基乙胺(二异丙基乙基胺)、吡啶、六甲基二硅基氨基钠，正丁基锂、叔丁醇钾或四丁基溴化铵，所述无机碱选自氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾或碳酸铯，更优选N，N-二异丙基乙胺。
提供酸性的条件的试剂包括但不限于氯化氢、氯化氢的1，4-二氧六环溶液、氯化铵、三氟乙酸、甲酸、乙酸、盐酸、硫酸、甲磺酸、硝酸、磷酸和对苯甲磺酸，优选三氟乙酸。
本发明还提供式(IVa)化合物的制备方法：
Figure GPA0000266617550000101
式(M3)所示化合物在缩合剂的作用下与式(i)所示化合物发生酰胺化反应得到式(IVb)所示化合物，式(IVb)所示化合物在碱作用下脱去保护基得到式(IVa)所示化合物，
其中，
所述缩合剂选自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N，N′-二环己基碳化二亚胺、N，N′-二异丙基碳二酰亚胺、O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯、1-羟基苯并三唑、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，优选2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯；
所述碱选自无机碱或有机碱，优选有机碱，有机碱选自胺类有机碱，例如二乙胺、三乙胺或氨水。
本发明还提供式(M3)化合物的制备方法：
Figure GPA0000266617550000111
其中，式(M1)所示化合物在碱作用下与2，4-二甲氧基苄醇反应得到式(M2)所示化合物，式(M2)所示化合物在碱作用下脱去保护基得到式(M3)所示化合物；
所述碱选自无机碱或有机碱，优选有机碱，所述有机碱选自胺类有机碱，例如二乙胺、三乙胺、4-二甲氨基吡啶或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺。
本发明进一步提供式(i)化合物的制备方法：
Figure GPA0000266617550000112
其中，式(a)所示化合物在有机碱和有机硼作用下与式(b)所示化合物反应得到式(c)所示化合物，式(c)所示化合物在氧化剂(如双氧水)和碱(如一水氢氧化锂)作用下反应得到式(d)所示化合物，式(d)所示化合物在碱(如碳酸氢钠)作用与溴化苄反应得到式(e)所示化合物，式(e)所示化合物与碘甲烷反应得到式(f)所示化合物，式(f)所示化合物脱去保护基得到式(g)所示化合物，式(g)所示化合物与盐酸反应得到式(h)所示化合物，式(h)所示化合物在碱(如N，N-二异丙基乙胺)作用下与9-芴甲基-N-琥珀酰亚氨基羧酸酯反应得到式(i)所示化合物。
本发明还提供一种制备抗体药物偶联物或其药学上可接受盐的方法，其特征在于，所述抗体药物偶联物由抗体通过接头单元与上述方案中的通式(I)所示化合物偶联而成，所述抗体优选TNF-α抗体、VEGF抗体、c-MET抗体、EGFR抗体、Her2抗体或PD-1抗体，所述接头单元优选亚烃基、亚芳基、亚杂芳基、亚烃基硫烷基或亚氨基硫烷基。
优选的，所述TNF-α抗体选自依那西普、英夫利昔单抗、或阿达木单抗，VEGF抗体选自贝伐珠单抗，EGFR抗体选自西妥昔单抗、帕尼单抗或尼妥珠单抗，Her2抗体选自曲妥珠单抗(赫赛汀)或帕妥珠单抗，PD-1抗体选自纳武单抗或帕母单抗。
更优选的，所述抗体药物偶联物选自
Figure GPA0000266617550000121
其中，抗体Ab优选TNF-α抗体、VEGF抗体、EGFR抗体、Her2抗体或PD-1抗体，y的范围为1-8，优选2-5；y是正实数，可以为整数或非整数。
发明详述
在本申请的说明书和权利要求书中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。然而，为了更好地理解本发明，下面提供了部分相关术语的定义和解释。另外，当本申请所提供的术语的定义和解释与本领域技术人员所通常理解的含义不一致时，以本申请所提供的术语的定义和解释为准。
本发明所述“卤代”是指被“卤素原子”取代，“卤素原子”是指氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等。
本发明所述“烷基”表示直链或支链的含有1-6个碳原子的烷基，包括例如“C1-4烷基”、“C1-3烷基”等，具体实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、异己基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1，2-二甲基丙基等。
本发明所述的“卤代烷基”指一个或多个“卤素原子”取代“烷基”上的一个或多个氢原子所衍生的基团，所述“卤素原子”和“烷基”如前文所定义。
本发明所述的“羟基烷基”指一个或多个“羟基”取代“烷基”上的一个或多个氢原子所衍生的基团，所述“烷基”如前文所定义。
本发明所述的“烷氧基”是指以烷基-O-方式连接的基团，其中“烷基”如前文所定义。
本发明所述的“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状基团，环原子个数包含3至20个，优选3至8个碳原子，更优选3至6个碳原子。具体实例包括但不限于：环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、环庚烷基、环辛烷基等。
本发明所述的“杂环基”是指含有3-8个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环状基团。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧化，优选“5-6元杂环基”。具体实例包括但不仅限于：氮杂环丙烷基、2H-氮杂环丙烷基、二氮杂环丙烷基、3H-二氮杂环丙烯基、氮杂环丁烷基、1，4-二氧杂环己烷基、1，3-二氧杂环己烷基、1，3-二氧杂环戊烷基、1，4-二氧杂环己二烯基、四氢呋喃基、二氢吡咯基、吡咯烷基、咪唑烷基、4，5-二氢咪唑基、吡唑烷基、4，5-二氢吡唑基、2，5-二氢噻吩基、四氢噻吩基、4，5-二氢噻唑基、噻唑烷基、哌啶基、四氢吡啶基、哌啶酮基、四氢吡啶酮基、二氢哌啶酮基、哌嗪基、吗啉基、4，5-二氢噁唑基、4，5-二氢异噁唑基、2，3-二氢异噁唑基、噁唑烷基、2H-1，2-噁嗪基、6H-1，3-噁嗪基、4H-1，3-噻嗪基、6H-1，3-噻嗪基、2H-吡喃基、2H-吡喃-2-酮基、3，4-二氢-2H-吡喃基等。
本发明所述的“芳基”是指含有6-15个环碳原子的具有芳香性的环状基团，包括“6-8元芳基”、“6-15元稠芳基”，任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧化。其实例包括但不限于：苯基、环辛四烯基、萘基、蒽基、菲基等。
本发明所述的“杂芳基”是指含有5-15个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的具有芳香性的环状基团，包括“5-8元杂芳基”、“5-15元稠杂芳基”，任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧化。具体实例包括但不限于：呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、吡啶基、2-吡啶酮基、4-吡啶酮基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、1，2，3-三嗪基、1，3，5-三嗪基、1，2，4，5-四嗪基、氮杂环庚三烯基、1，3-二氮杂环庚三烯基、氮杂环辛四烯基、苯并呋喃基、苯并异呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基、喹啉基、2-喹啉酮基、4-喹啉酮基、1-异喹啉酮基、异喹啉基、吖啶基、菲啶基、苯并哒嗪基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、酚嗪基、喋啶基、嘌呤基、萘啶基、吩嗪基、吩噻嗪基等。
本发明所述的“接头单元”指包含使抗体共价附着于药物模块的共价键或原子链的化学模块，例如，亚烃基、亚芳基、亚杂芳基、亚烃基硫烷基或亚氨基硫烷基，接头单元连同式(I)中的马来酰亚胺基团一起形成完整的接头。接头是本领域已知的，例如SMCC、SPP、SPDP等。
本发明所述“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
缩写词：
缩写 全称
Me 甲基
Boc 叔丁氧羰基
t-Bu 叔丁基
Bn 苄基
Ph 苯基
Tosyl 对甲基苯磺酰基
Fmoc 9-芴甲氧羰基
Alloc 烯丙氧羰基
Troc 三氯乙氧羰基
Cbz 苄氧羰基
PfP 五氟代苯基
PMB 对甲基苄基
MEM 甲氧乙氧甲基
Allyl 烯丙基
DMB 2，4-二甲氧基苄基
发明的有益效果
与现有技术(WO2005081711A2，公开日2005.09.09)相比，本发明制备式(I)所示化合物的技术方案具有以下优点：
(1)反应步骤缩短，本发明在制备式(I)所示化合物关键步骤中的反应物不同，本发明关键步骤中的第一步由反应物式(IIIb)所示化合物与式(IVa)所示化合物反应得到式(Va)所示化合物，第二步由式(Va)所示化合物脱去羧基保护基得到目标式(Ia)所示化合物，与现有技术比较，本发明的反应步骤缩短为两步，现有技术的反应步骤为四步；
(2)6-马来酰亚氨基己酰氯与片段连接的顺序不同；
(3)生产相同量的产物所需要反应物的投料量减少，本发明关键中间体式(IVa)所示化合物的投料量减少很多，本发明方法可以缩减生产成本，提高生产效率，具有突出的技术进步和显著的经济效果。
具体实施方式
以下将结合具体实例详细地解释本发明，使得本专业技术人员更全面地理解本发明，具体实例仅用于说明本发明的技术方案，并不以任何方式限定本发明。
实施例
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)、氘代氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪(生产商：Thermo，型号：Finnigan LCQadvantage MAX)。
HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。
手性HPLC分析测定使用LC-10A vp(Shimadzu)或者SFC-analytical(BergerInstruments Inc.)。
激酶平均抑制率及IC50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
手性制备柱层析使用Prep Star SD-1(Varian Instruments Inc.)或SFC-multigram(Berger Instruments Inc.)。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG、Acros Organics、Aldrich Chemical Company、韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，C：石油醚和乙酸乙酯体系，D：丙酮，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，C：二氯甲烷和丙酮体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
实施例1
(S)-2-((2R，3R)-3-((1S，3S，5S)-2-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1基)-N-甲基己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰氨基)-3-(2-氟苯基)丙酸1
Figure GPA0000266617550000161
Figure GPA0000266617550000171
第一步
(1S，3S，5S)-叔丁基3-((1R，2R)-1-羟基-2-甲基-3-((4R，5S)-4-甲基-2-氧代-5-苯基噁唑烷-3-基)-3-氧代丙基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-羧酸
将(4R，5S)-3-丙酰基-4-甲基-5-苯基-2-噁唑烷酮1b(14.7g，63.1mmol，采用专利申请“WO2015162291”公开的方法制备而得)溶解于二氯甲烷(120mL)中，冰浴冷却至0℃，滴加三乙胺(9.7mL，72.6mmol)和三氟甲磺酸二丁硼(65mL，65mmol)，加毕，搅拌反应1小时。反应液于干冰-丙酮浴中冷却至-78℃，将(1S，3S，5S)-叔丁基3-甲酰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-羧酸1a(12g，56.8mmol，采用专利申请“WO2008081399”公开的方法制备而得)溶解于二氯甲烷(10mL)中，向反应液中滴加上述溶液，加毕，搅拌反应2小时。撤去干冰丙酮浴，反应液自然升温至0℃，在0℃下，反应1.5小时。向反应液中加入磷酸盐缓冲液(pH＝7.0)和甲醇的混合溶液(100mL，V∶V＝1∶3)，再加入甲醇和双氧水(30％)的混合溶液(100mL，V∶V＝2∶1)，搅拌30分钟。反应液减压蒸除有机相，剩余水相用二氯甲烷(150mL×3)萃取，合并有机相，用水(100mL×2)洗涤，饱和氯化钠溶液(100mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物1c(15.6g，产率72.3％)。
MS m/z(ESI)：445.4[M+1]
第二步
(2R，3R)-3-((1S，3S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-羟基-2-甲基丙酸
将1c(15.7g，35.3mmol)加入四氢呋喃(500mL)中，冰浴下，边缓慢滴加双氧水(15.3g，134mmol)边控制反应液温度在0℃，再加入一水氢氧化锂(2.5g，60mmol)，加毕，撤去冰浴，反应液温度自然升至室温，搅拌反应16小时。冰浴下，向反应液中分批缓慢加入亚硫酸钠(17.8g，141.2mmol)，加毕，搅拌反应30分钟，再加入水(150mL)，撤去冰浴，反应液减压蒸除有机相，剩余水相用二氯甲烷(150mL×3)洗涤，冰浴下，滴加2 N的盐酸溶液至pH为2-3，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，用水(500mL)洗涤，饱和氯化钠溶液(500mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题产物1d(9.3g，产率92％)。
MS m/z(ESI)：284.3[M-1]
第三步
(1S，3S，5S)-叔丁基3-((1R，2R)-3-(苄氧基)-1-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-羧酸
将1d(9.3g，32.6mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(120mL)中，冰浴至0℃，加入碳酸氢钠(15.06g，179.3mmol)和溴化苄(27.9g，163.1mmol)，加毕，撤去冰浴，反应液于20℃搅拌16小时。冰浴下，向反应液中加入饱和氯化铵溶液(200mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×3)萃取反应液，有机相依次用水(200mL)和饱和氯化钠溶液(150mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物1e(10.3g，产率84.2％)。
MS m/z(ESI)：376.4[M+1]
第四步
(1S，3S，5S)-叔丁基3-((1R，2R)-3-(苄氧基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-羧酸
将1e(10.3g，27.4mmol)溶于N-甲基吡咯烷酮(90mL)中，加入碘甲烷(18mL，234mmol)，分批加入60％的氢化钠(1.28g，32.1mmol)，搅拌反应30分钟。冰浴下，将饱和氯化铵溶液(200mL)降温至0℃，加入反应液，搅拌10分钟，用乙酸乙酯(300mL×3)萃取，有机相依次用水(200mL×2)和饱和氯化钠溶液(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物1f(9.3g，产率87.2％)。
MS m/z(ESI)：390.4[M+1]
第五步
(2R，3R)-3-((1S，3S，5S)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸
将1f(9.3g，23.88mmol)溶于四氢呋喃(90mL)中，加入钯碳(10％，1.86g)，氢气置换三次，反应液加热至35℃，搅拌反应30分钟。反应液经硅藻土过滤，滤液浓缩干燥，得到粗品标题产物1g(8.2g)，产品不经纯化直接进行下一步反应。
第六步
(2R，3R)-3-((1S，3S，5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸盐酸盐
将粗品1g(8.3g，27.7mmol)溶于氯化氢的1，4-二氧六环溶液(5.0M，50mL)中，搅拌反应30分钟。反应液减压浓缩干燥，得到粗品标题产物1h(8.2g)，产品不经纯化直接进行下一步反应。
第七步
(2R，3R)-3-((1S，3S，5S)-2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸
将粗品1h(8.2g，41.2mmol)溶解于水(70mL)中，加入1，4-二氧六环(70mL)，冰浴下冷却至0℃，加入N，N-二异丙基乙胺(31.9g，247.2mmol)。将9-芴甲基-N-琥珀酰亚氨基羧酸酯(18.06g，53.56mmol)溶解于1，4-二氧六环(70mL)中，将上述溶液加入到反应液中，加毕，撤去冰浴，反应液温度自然升至室温，搅拌反应2.5小时。反应液减压蒸除有机相，加入水(100mL)，冰浴下滴加1N的盐酸至反应液pH为2，用二氯甲烷(300mL×3)萃取，有机相依次用水(300mL×2)和饱和氯化钠溶液(300mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物1i(8.7g，产率85％)。
MS m/z(ESI)：422.4[M+1]
第八步
(S)-2，4-二甲氧基苄基2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(2-氟苯基)丙酸
将(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(2-氟苯基)丙酸1j(13g，32.6mmol)溶解于二氯甲烷(50mL)中，加入3，5-二甲氧基苯甲醇(5.93g，35.27mmol)，滴加N，N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(8.9mL，36.8mmol)，加毕，搅拌反应40小时。反应液依次用水(50mL)和饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到粗品标题产物1k(34.2g)，产品不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI)：556.4[M+1]
第九步
(S)-2，4-二甲氧基苄基2-氨基-3-(2-氟苯基)丙酸
将1k(17g，30.6mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中，加入二乙胺(80mL，0.78mmol)，搅拌反应3小时。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物1l(7.8g，产率76.4％)。
MS m/z(ESI)：334.3[M+1]
第十步
(1S，3S，5S)-(9H-芴-9-基)甲基3-((1R，2R)-3-(((S)-1-((2，4-二甲氧基苄基)氧)-3-(2-氟苯基)-1-氧代丙基-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-羧酸
条件一：
将1i(2.5g，5.94mmol)和1l(2.04g，5.94mmol)溶于二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液(36mL，V∶V＝5∶1)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(2.7g，7.13mmol)和N，N-二异丙基乙胺(3.1mL，17.8mmol)，加毕，20℃搅拌反应1小时。向反应液中加入水(100mL)，搅拌，分层，有机相依次用水(100mL×2)洗涤，饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物1m(3.9g，产率89.2％)。
条件二：
将化合物1i(9.1g，21.62mmol)，1l(7.5g，22.69mmol)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，9.9g，25.94mmol)溶于二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液(120mL，V∶V＝5∶1)中，加入N，N-二异丙基乙胺(8.4g，64.89mmol)，20℃反应1小时。向反应液中加入水(80mL)，搅拌分层，水相用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物1m(15.7g，产率98％)。
MS m/z(ESI)：737.5[M+1]
第十一步
(S)-2，4-二甲氧基苄基2-((2R，3R)-3-((1S，3S，5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-(2-氟苯基)丙酸
条件一：
将1m(3.9g，5.29mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入二乙胺(40mL，0.39mmol)，20℃搅拌反应2小时。反应液减压蒸馏除去大部分二乙胺，加入甲苯(10mL)，减压浓缩干燥。所得残余物用二氯甲烷(100mL)溶解，依次用水(100mL×2)洗涤，饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化残留物，得到标题产物1n(2.31g，产率84.9％)。
条件二：
将1m(15.7g，21.3mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，于10-15℃缓慢加入二乙胺(150mL，1.5mmol)，搅拌反应3小时。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物1n(10g，产率91.7％)。
MS m/z(ESI)：515.4[M+1]
第十二步
(5S，8S，11S，12R)-11-((S)-仲丁基)-1-(9H-芴-9-基)-5，8-二异丙基-12-甲氧基-4，10-二甲基-3，6，9-三氧代-2-氧杂-4，7，10-三氮杂十四-14-酸-2，4-二甲氧基苄酯1p
将(5S，8S，11S，12R)-11-((S)-仲丁基)-1-(9H-芴-9-基)-5，8-二异丙基-12-甲氧基-4，10-二甲基-3，6，9-三氧代-2-氧杂-4，7，10-三氮杂十四-14-酸1o(5.13g，8.04mmol，采用专利申请“WO2013072813”公开的方法制备而得)溶于二氯甲烷(90mL)中，依次加入4-二甲氨基吡啶(100mg，0.8mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(2.31g，12.06mmol)，搅拌反应15分钟，滴加2，4-二甲氧基苄醇(1.62g，9.65mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)，搅拌反应2小时。反应液中加入饱和氯化铵溶液(100mL)，搅拌，静置，分离有机相，有机相依次用饱和氯化铵溶液(100mL)、水(100mL)、饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物1p(5.6g，产率88.5％)。
MS m/z(ESI)：788.8[M+1]
第十三步
(3R，5S)-4-((S)-N，3-二甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲氨基)丁酰氨基)丁酰氨基)-3-甲氧基-5-
甲基庚酸-2，4-二甲氧基苄酯1q
将1p(4g，5.08mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入二乙胺(40mL)，搅拌反应3小时。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物1q(2.7g，产率94％)。
MS m/z(ESI)：566.1[M+1]
第十四步
(3R，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基己酰氨基)-3-
甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸-2，4-二甲氧基苄酯1r
将1q(2.7g，4.77mmol)溶于二氯甲烷和N，，N-二甲基甲酰胺(48mL，V/V＝5∶1)混合溶剂中，依次加入6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸(11g，5.25mmol，采用公知的方法“Journal of Medcinal Chemistry，2013，56(24)，9955-9968”制备而得)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(2.18g，5.72mmol)和二异丙基乙基胺(3.3mL，19mmol)，搅拌反应1小时。反应液中加入水(100mL)，搅拌，静置，分离有机相，有机相依次用水(100mL×2)、饱和氯化钠溶液洗涤(100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物1r(3g，产率82.9％)。
MS m/z(ESI)：759.8[M+1]
第十五步
(3R，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基己酰氨基)-3-
甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸1s(3R，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2，5-dioxo-2，5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)-N-methylhexanamido)-3-methylbutanamido)-N，3-dimethylbutanamido)-3-methoxy-5-methylheptanoic acid
将1r(3g，3.95mmol)溶于三氟乙酸和二氯甲烷(50mL，V/V＝2.5％)混合溶剂中，搅拌反应15分钟。反应液中加入二氯甲烷，过滤，滤饼用二氯甲烷淋洗，滤液依次用水(100mL)、饱和氯化钠溶液洗涤(100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题产物1s(2.3g)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI)：609.7[M+1]
第十六步
(2S)-2-((2R，3R)-3-((1S，3S，5S)-2-((3R，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰氨基)-3-(2-氟苯基)丙酸-2，4-二甲氧基苄酯1t
将粗品1s(2.3g，3.78mmol)和(S)-2-((2R，3R)-3-((1S，3S，5S)-2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰氨基)-3-(2-氟苯基)丙酸-2，4-二甲氧基苄酯1n(1.94g，3.78mmol)溶于二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺(36mL，V/V＝5∶1)混合溶剂中，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(1.72g，4.54mmol)和二异丙基乙基胺(2.0mL，11.34mmol)，搅拌反应1小时。反应液中加入水(100mL)，搅拌，静置，分离有机相，有机相依次用水(100mL×2)、饱和氯化钠溶液洗涤(100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物1t(1.94g，产率46.5％)。
MS m/z(ESI)：1122.6[M+18]
第十七步
(2S)-2-((2R，3R)-3-((1S，3S，5S)-2-((3R，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1基)-N-甲基己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰氨基)-3-(2-氟苯基)丙酸1
将1t(1.94g，1.75mmol)溶于三氟乙酸和二氯甲烷(40mL，V/V＝2.5％)混合溶剂中，搅拌反应15分钟。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物1(1.17g，产率69.8％)。
MS m/z(ESI)：956.1[M+1]
1H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ7.36-7.30(m，1H)，7.29-7.21(m，1H)，7.17-7.02(m，2H)，6.83-6.79(m，2H)，4.81-4.71(m，2H)，4.69-4.55(m，2H)，4.25-4.15(m，1H)，4.13-4.04(m，1H)，3.96-3.85(m，2H)，3.70-3.61(m，1H)，3.55-3.46(m，3H)，3.40-3.21(m，4H)，3.18-3.10(m，2H)，3.07-2.96(m，4H)，2.67-2.56(m，2H)，2.54-2.34(m，3H)，2.29-2.17(m，2H)，2.10-1.99(m，1H)，1.89-1.57(m，7H)，1.52-1.28(m，6H)，1.21-1.11(m，4H)，1.07-0.96(m，6H)，0.95-0.81(m，12H)，0.80-0.69(m，1H)
对比例
采用现有技术的方法，直接用两个重要中间体连接生成式1所示化合物的方法：
Figure GPA0000266617550000241
第1步
(2S)-2，4-二甲氧基苄基2-((2R，3R)-3-((1S，3S，5S)-2-((5S，8S，11S，12R)-11-((S)-仲丁
基)-1-(9H-芴-9-基)-5，8-二异丙基-12-甲氧基-4，10-二甲基-3，6，9-三羰基-2-氧杂-4，7，10-三氮杂十四烷基-14-酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-(2-氟苯基)丙酸酯
将1n(2.97g，5.77mmol)和(5S，8S，12R)-11-((S)-仲丁基)-1-(9H-芴-9-基)-5，8-二异丙基-12-甲氧基-4，10-二甲基-3，6，9-三羰基-2-氧杂-4，7，10-三氮杂十四烷-14-羧酸1o(3.68g，5.77mmol，采用专利申请“WO 2013072813”公开的方法制备而得)溶于二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液(48mL，V∶V＝5∶1)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(2.63g，6.92mmol)和N，N-二异丙基乙胺(3mL，17.31mmol)，20℃搅拌反应1小时。加入水(100mL)，搅拌，分层，有机相依次用水(100mL×2)洗涤，饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化残留物，得到标题产物1p(5.3g，产率81.0％)。
MS m/z(ESI)：1151.6[M+18]
第2步
(2S)-2，4-二甲氧基苄基2-((2R，3R)-3-((1S，3S，5S)-2-((3R，5S)-4-((S)-N，3-二甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰氨基)丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰氨基)-3-(2-氟苯基)丙酸酯
将1p(3.86g，3.4mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入二乙胺(40mL，0.39mmol)，20℃搅拌反应2小时。反应液减压蒸馏除大部分二乙胺，所得残余物中加入甲苯(10mL)，继续减压浓缩干燥。向所得残余物种加入水(100mL)和二氯甲烷(100mL)，搅拌，分液，有机相依次用水(100mL×2)洗涤，饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化残留物，得到标题产物1q(2.73g，产率87％)。
MS m/z(ESI)：912.9[M+1]
第3步
(2S)-2，4-二甲氧基苄基2-((2R，3R)-3-((1S，3S，5S)-2-((3R，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰氨基)-3-(2-氟苯基)丙酸酯
将1q(1.7g，1.86mmol)溶于二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液(30mL，V∶V＝5∶1)中，依次加入6-马来酰亚氨基己酸(0.39g，1.86mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(0.85g，2.23mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.97mL，5.58mmol)，搅拌反应1小时。向反应液中加入50mL水(100mL)，搅拌，分层，有机相依次用水(50mL×2)洗涤，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化残留物，得到标题产物1r(1.01g，产率49％)。
MS m/z(ESI)：1122.7[M+18]
第4步
(2S)-2-((2R，3R)-3-((1S，3S，5S)-2-((3R，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2，5-二羰基-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰氨基)-3-(2-氟苯基)丙酸
将1r(2.5g，2.26mmol)溶于三氟乙酸的二氯甲烷溶液中(2.5％，50mL)，搅拌反应20分钟。冰浴下减压蒸除二氯甲烷，所得残余物减压干燥后用二氯甲烷溶解，湿法上样，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物1(1.4g，产率64.8％)。
MS m/z(ESI)：956.0[M+1]
1H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ7.36-7.30(m，1H)，7.29-7.21(m，1H)，7.17-7.02(m，2H)，6.83-6.79(m，2H)，4.81-4.71(m，2H)，4.69-4.55(m，2H)，4.25-4.15(m，1H)，4.13-4.04(m，1H)，3.96-3.85(m，2H)，3.70-3.61(m，1H)，3.55-3.46(m，3H)，3.40-3.21(m，4H)，3.18-3.10(m，2H)，3.07-2.96(m，4H)，2.67-2.56(m，2H)，2.54-2.34(m，3H)，2.29-2.17(m，2H)，2.10-1.99(m，1H)，1.89-1.57(m，7H)，1.52-1.28(m，6H)，1.21-1.11(m，4H)，1.07-0.96(m，6H)，0.95-0.81(m，12H)，0.80-0.69(m，1H).
表1、本发明实施例与现有技术对比例制备式1所示化合物的投料量比较
Figure GPA0000266617550000261
结论：
由表1可知，本发明在第14步时6-马来酰亚氨基己酰氯与片段连接后，在生成相同量的目标式1所示化合物时，本发明与现有技术关键步骤使用的中间体不同，本发明采用中间体1s与1n反应(其中1s由1o制备得到)，对比例使用中间体1o与1n反应；本发明与现有技术比较，等量的中间体1o制备等量的式1化合物，所需要的中间体1n的量二者完全不相同，本发明中间体1n的量可以减少很多，中间体1n的量为1.94g，而现有技术为2.82g；本发明与现有技术关键反应步骤不相同，本发明为2步反应，现有技术为4步反应，现有技术需要经过多步复杂的路线合成式1所示化合物，在采用本发明的合成方法后能大大降低生产成本，缩短反应时间、提高生产效率，具有突出的技术进步和显著的经济效果。

Claims (4)

1.一种通式(Ia)所示化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下所示的步骤：
Figure FDA0003768464520000011
式(IIb)所示化合物在碱性条件下脱Fmoc保护基得到式(IIa)所示化合物，其中，所述碱为二乙胺；
Figure FDA0003768464520000012
其中，式(IIIb)所示化合物在缩合剂的作用下与式(IVa)所示化合物发生酰胺化反应得到式(Va)所示化合物，所述缩合剂为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤
Figure FDA0003768464520000021
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤
Figure FDA0003768464520000022
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤
Figure FDA0003768464520000023
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