TW201912626A - 一種新毒素及其中間體的製備方法 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及一種新毒素及其中間體的製備方法，具體涉及通式(III)化合物及其的製備方法，特別是在一種用於合成通式(I)所示的製備方法中，所述方法包含通式(III)所示的化合物經過一系列的上保護基、脫保護基和縮合反應得到通式(I)所示的化合物。該方法具有反應條件溫和，操作簡便，光學純度高和合成成本低廉等優點，適於大規模生產。

Description

一種新毒素及其中間體的製備方法
本發明涉及一種新毒素及其中間體的製備方法。
專利申請WO2016127790A1(公開日2016.08.18)中涉及一類配體-細胞毒性藥物偶聯物，該配體-細胞毒性藥物偶聯物及其藥物組合物藉由受體調節在製備治療癌症的藥物中的用途中具有良好的效果，在合成該類配體-細胞毒性藥物偶聯物時，發現通式(I)所示化合物是重要的中間體，結構如下所示： 其製備方法如下所示： 在該合成路線中，採用化合物1i與化合物7d直接縮合得到中間體7e，最後與6-馬來醯亞胺基己醯氯反應得到目標化合物Mc-MMAF類似物，總計四步反應。
專利申請WO2005081711A2(公開日2005.09.09)中公開了Mc-MMAF的製備方法。
在合成本發明化合物的實驗過程中，採用上述類似方法合成本發明通式(I)所示化合物的過程中，總路線較長，產率較低，因此利用現有的合成方法大量合成通式(I)所示化合物還存在不少困難和不足，有必要開發高產率並適用於大規模合成通式(I)所示化合物的方法。
本發明的合成方法，採用兩個片段分別合成，最後直接縮合得到通式(I)所示的化合物，總產率大大提高，該方法合成路線具有合成成本低，適合工業化生產等特點，具有顯著的社會效益和經濟效益。
本申請人的專利申請WO2017144015A1中也公開了(I)所示化合物的製備方法，其發明思路與本發明完全不同。
本發明要解决的技術問題是提供一種製備式(I)所示化合物及其中間體的方法，所述方法包含通式(III)所示化合物经過一系列的上保護基、脫保護基、與6-馬來醯亞胺基己醯氯發生醯胺化反應得到通式(I)所示的化合物，該方法克服現有技術對受質的限制，具有反應條件溫和，操作簡便，光學純度高和合成成本低廉等優點，適於大規模生產。
本發明的技術方案如下：本發明提供一種式(III)所示化合物：
其中：R1選自氫原子或羧基保護基，該羧基保護基選自甲基、取代的甲基類、乙基、2-取代的乙基類、烯丙基、第三丁基、烷氧基烷基類、烷氧基烷氧基烷基類、2,6-二烷基苯基類、苄基、取代的苄基類、矽烷基類或錫烷基類；該取代的甲基類選自9-芴基甲基、三異丙基矽甲基、環丙基甲基、二苯基甲基或三苯基甲基；該2-取代的乙基類選自2,2,2-三氯乙基、2-(三甲基矽烷基)乙基、2-(對甲苯磺醯基)乙基或2-氰基乙基；該烷氧基烷基類選自甲氧基甲基、苄氧基甲基或三異 丙基矽氧基甲基；該烷氧基烷氧基烷基類選自甲氧基乙氧基甲基；該2,6-二烷基苯基類選自2,6-二甲基苯基、2,6-二異丙基苯基或2,6-二第三丁基-4-甲氧基苯基；該取代的苄基類選自對甲基苄基、2,4-二甲氧基苄基、2,6-二甲氧基苄基、對硝基苄基或鄰硝基苄基；該矽烷基類選自三甲基甲矽烷基、三乙基甲矽烷基、三異丙基甲矽烷基或苯基二甲基甲矽烷基、；該錫烷基類選自三甲基甲錫烷基；較佳為甲基、烯丙基、第三丁基、苄基、2,4-二甲氧基苄基、對甲基苄基、五氟苯基或甲氧乙氧甲基。
較佳的，通式(III)所示化合物選自：
本發明進一步涉及一種式(III)所示化合物的製備方法，其特徵在於，該方法包括由式(II)所示化合物與6-馬來醯亞胺基己酸反應得到式(III)所示化合物的步驟，
其中，R1如式(III)中所定義；R2選自氫原子或胺基保護基；該胺基保護基較佳為烷氧羰基類胺基保護基、醯基類胺基保護基、磺醯基類胺基保護基或烷基類胺基保護基；該烷氧羰基類胺基保護基選自苄氧羰基、第三丁氧羰基、笏甲氧羰基、烯丙氧羰基、三甲基矽乙氧羰基、甲氧羰基或乙氧羰基；該醯基類胺基保護基選自鄰苯二甲醯基、三氟乙醯基、特戊醯基、苯甲醯基、甲醯基或乙醯基；該磺醯基類胺基保護基選自對甲苯磺醯基、鄰硝基苯磺醯基或對硝基苯磺醯基；該烷基類胺基保護基選自三苯甲基、2,4-二甲氧基苄基、對甲氧基苄基或苄基；較佳為烷氧羰基類胺基保護基，更佳為第三丁氧羰基或笏甲氧羰基。
該反應為縮合反應，形成醯胺鍵的縮合劑選自1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N,N'-二環己基碳二亞胺、N,N'-二異丙基碳二亞胺、O-苯并三唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸鹽、1-羥基苯并三唑、1-羥基-7-偶氮苯并三唑、O-苯并三唑-N,N,N',N'-四甲脲六氟磷酸鹽、2-(7- 偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基胺基)磷鎓六氟磷酸鹽或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，較佳為2-(7-偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽；上述縮合反應較佳在鹼性條件下進行，該鹼選自有機鹼或無機鹼，該有機鹼類較佳為三乙胺、二乙胺、N,N'-二異丙基乙胺、吡啶、六甲基二矽基胺基鈉，正丁基鋰、第三丁醇鉀或四丁基溴化銨，該無機鹼選自氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀或碳酸銫，更較佳為N,N-二異丙基乙胺。
較佳的，該式(II)化合物，其中R1為羧基保護基，R2為氫原子；更較佳的，該R1羧基保護基為DMB(2,4-二甲氧基苄基)，該式(II)化合物如式(IIa)化合物所示。
較佳的，該式(III)化合物，其中R1為羧基保護基；更較佳的，該R1羧基保護基為DMB(2,4-二甲氧基苄基)，該式(III)化合物如式(IIIa)化合物所示；或者當該R1為氫原子時，該式(III)化合物如式(IIIb)化合物所示。
較佳的，該方法為
其中式(IIa)所示化合物與6-馬來醯亞胺基己酸發生縮合反應得到式(IIIa)所示化合物。
進一步較佳的，該方法還包括以下步驟
式(IIIa)化合物經脫保護基反應，得到式(IIIb)化合物。
較佳的，該式(II)化合物，當其中R1為氫原子時，R2為胺基保護基，該式(II)化合物如式(IIc)化合物所示；更較佳的，該R1羧基保護基為DMB(2,4-二甲氧基苄基)，R2為胺基保護基，該式(II)化合物如式(IIb)化合物所示。
更佳的，該方法還包括以下步驟
上述方案中，該方法還包括式(IIc)所示化合物加上羧基保護基後得到通式(IIb)所示化合物，式(IIb)所示化合物在鹼性條件下脫Fmoc保護基得到式(IIa)所示化合物的步驟，其中，該鹼選自有機鹼或無機鹼，該有機鹼類較佳為三乙胺、二乙胺、N,N'-二異丙基乙胺、吡啶、六甲基二矽基胺基鈉，正丁基鋰、第三丁醇鉀或四丁基溴化銨，該無機鹼選自氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫化鈉、碳酸鈉、碳酸氫 鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀或碳酸銫，更較佳為二乙胺。
本發明還涉及式(I)所示化合物的製備方法，其特徵在於，該方法包括式(III)所示的化合物與式(IV)所示化合物反應得到式(V)所示化合物，式(V)所示化合物脫去保護基得到式(I)所示化合物的步驟， 其中，A選自3-8員環烷基，較佳為3員環烷基；R選自鹵素，較佳為氟、氯、溴或碘，最較佳為氟；R1如式(III)中定義；R3選自羧基保護基，該羧基保護基選自2,4-二甲氧基苄基、苄基、烯丙基、五氟苯基、甲基、對甲基苄基、甲氧乙氧甲基或第三丁基，較佳為2,4-二甲氧基苄基；Rx選自視需要取代的烷基或環烷基，該取代基選自烷 基、鹵烷基、鹵素、羥基、胺基、硝基、氰基、烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基；n選自1、2、3、4或5。
較佳為的，該方法還包括式(III)所示化合物在縮合劑的作用下與式(IV)所示化合物發生縮合反應得到式(V)所示化合物的步驟，其中，該縮合劑選自1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N,N'-二環己基碳二亞胺、N,N'-二異丙基碳二亞胺、O-苯并三唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸鹽、1-羥基苯并三唑、1-羥基-7-偶氮苯并三唑、O-苯并三唑-N,N,N',N'-四甲脲六氟磷酸鹽、2-(7-偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基胺基)磷鎓六氟磷酸鹽或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，較佳為2-(7-偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽。
上述縮合反應較佳在鹼性條件下進行，該鹼選自有機鹼或無機鹼，該有機鹼類較佳三乙胺、二乙胺、N,N-二異丙基乙胺(二異丙基乙基胺)、吡啶、六甲基二矽基胺基鈉，正丁基鋰、第三丁醇鉀或四丁基溴化銨，該無機鹼選自氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀或碳酸銫，更較佳N,N-二異丙基乙胺。
更佳的，該方法為
較佳的，該方法包括式(IIIb)所示化合物與式(IVa)所示化合物在鹼性條件下，縮合劑的作用下發生縮合反應得到式(Va)所示化合物，(Va)所示化合物在酸作用下脫去保護基得到式(Ia)所示化合物。
其中，該縮合劑選自1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N,N'-二環己基碳二亞胺、N,N'-二異丙基碳二亞胺、O-苯并三唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸鹽、1-羥基苯并三唑、1-羥基-7-偶氮苯并三唑、O-苯并三唑-N,N,N',N'-四甲脲六氟磷酸鹽、2-(7-偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基胺基)磷鎓六氟磷酸鹽或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，較佳為2-(7-偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽。
該鹼選自有機鹼或無機鹼，該有機鹼類較佳三乙胺、 二乙胺、N,N-二異丙基乙胺(二異丙基乙基胺)、吡啶、六甲基二矽基胺基鈉，正丁基鋰、第三丁醇鉀或四丁基溴化銨，該無機鹼選自氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀或碳酸銫，更較佳N,N-二異丙基乙胺。
提供酸性的條件的試劑包括但不限於氯化氫、氯化氫的1,4-二噁烷溶液、氯化銨、三氟乙酸、甲酸、乙酸、鹽酸、硫酸、甲磺酸、硝酸、磷酸和對苯甲磺酸，較佳三氟乙酸。
本發明還提供式(IVa)化合物的製備方法： 式(M3)所示化合物在縮合劑的作用下與式(i)所示化合物發生醯胺化反應得到式(IVb)所示化合物，式(IVb)所示化合物在鹼作用下脫去保護基得到式(IVa)所示化合物，其中，該縮合劑選自1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N,N'-二環己基碳二亞胺、N,N'-二異丙基碳二亞胺、O-苯并三唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸鹽、1-羥基苯并三唑、1-羥基-7-偶氮苯并三唑、O-苯并三唑-N,N,N',N'-四甲脲六氟磷酸鹽、2-(7-偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基胺基)磷鎓六氟磷酸鹽或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，較佳 為2-(7-偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽；該鹼選自無機鹼或有機鹼，較佳為有機鹼，有機鹼選自胺類有機鹼，例如二乙胺、三乙胺或氨水。
本發明還提供式(M3)化合物的製備方法： 其中，式(M1)所示化合物在鹼作用下與2,4-二甲氧基苄醇反應得到式(M2)所示化合物，式(M2)所示化合物在鹼作用下脫去保護基得到式(M3)所示化合物；該鹼選自無機鹼或有機鹼，較佳為有機鹼，該有機鹼選自胺類有機鹼，例如二乙胺、三乙胺、4-二甲胺基吡啶或1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺。
本發明進一步提供式(i)化合物的製備方法： 其中，式(a)所示化合物在有機鹼和有機硼作用下與式(b)所示化合物反應得到式(c)所示化合物，式(c)所示化合物在氧化劑(如雙氧水)和鹼(如一水氫氧化鋰)作用下反應得到式(d)所示化合物，式(d)所示化合物在鹼(如碳酸氫鈉)作用與溴化苄反應得到式(e)所示化合物，式(e)所示化合物與 碘甲烷反應得到式(f)所示化合物，式(f)所示化合物脫去保護基得到式(g)所示化合物，式(g)所示化合物與鹽酸反應得到式(h)所示化合物，式(h)所示化合物在鹼(如N,N-二異丙基乙胺)作用下與9-芴甲基-N-琥珀醯亞胺基羧酸酯反應得到式(i)所示化合物。
本發明還提供一種製備抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受鹽的方法，其特徵在於，所述抗體藥物偶聯物由抗體藉由接頭單元與上述方案中的通式(I)所示化合物偶聯而成，該抗體較佳為TNF-α抗體、VEGF抗體、EGFR抗體、c-MET抗體、Her2抗體或PD-1抗體，該接頭單元較佳為亞烴基、亞芳基、亞雜芳基、亞烴基硫烷基或亞胺基硫烷基。
較佳的，該TNF-α抗體選自依那西普、英夫利昔單抗、或阿達木單抗，VEGF抗體選自貝伐珠單抗，EGFR抗體選自西妥昔單抗、帕尼單抗或尼妥珠單抗，Her2抗體選自曲妥珠單抗(赫賽汀)或帕妥珠單抗，PD-1抗體選自納武單抗或帕母單抗。
更佳的，該抗體藥物偶聯物選自 其中，抗體Ab較佳為TNF-α抗體、VEGF抗體、EGFR抗體、Her2抗體或PD-1抗體，y的範圍為1至8，較佳為2至5；y是正實數，可以為整數或非整數。
發明詳述
在本申請的說明書和申請專利範圍中，除非另有說明，否則本文中使用的科學和技術名詞具有本領域技術人員所通常理解的含義。然而，為了更好地理解本發明，下面提供了部分相關術語的定義和解釋。另外，當本申請所提供的術語的定義和解釋與本領域技術人員所通常理解的含義不一致時，以本申請所提供的術語的定義和解釋為準。
本發明所述“鹵”是指被“鹵素原子”取代，“鹵素原子”是指氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等。
本發明所述“烷基”表示直鏈或支鏈的含有1至6個碳原子的烷基，包括例如“C1-4烷基”、“C1-3烷基”等，具體實例包括但不限於：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、異戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、異己基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。
本發明所述的“鹵烷基”指一個或多個“鹵素原子”取代“烷基”上的一個或多個氫原子所衍生的基團，該“鹵素原子”和“烷基”如前文所定義。
本發明所述的“羥基烷基”指一個或多個“羥基”取代“烷基”上的一個或多個氫原子所衍生的基團，該“烷基”如前文所定義。
本發明所述的“烷氧基”是指以烷基-O-方式連接的 基團，其中“烷基”如前文所定義。
本發明所述的“環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀基團，環原子個數包含3至20個，較佳為3至8個碳原子，更佳為3至6個碳原子。具體實例包括但不限於：環丙烷基、環丁烷基、環戊烷基、環己烷基、環庚烷基、環辛烷基等。
本發明所述的“雜環基”是指含有3至8個環原子(其中至少一個環原子為雜原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的環狀基團。視需要地，環狀結構中的環原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧化，較佳為“5至6員雜環基”。具體實例包括但不僅限於：氮雜環丙烷基、2H-氮雜環丙烷基、二氮雜環丙烷基、3H-二氮雜環丙烯基、氮雜環丁烷基、1,4-二氧雜環己烷基、1,3-二氧雜環己烷基、1,3-二氧雜環戊烷基、1,4-二氧雜環己二烯基、四氫呋喃基、二氫吡咯基、吡咯烷基、咪唑烷基、4,5-二氫咪唑基、吡唑烷基、4,5-二氫吡唑基、2,5-二氫噻吩基、四氫噻吩基、4,5-二氫噻唑基、噻唑烷基、哌啶基、四氫吡啶基、哌啶酮基、四氫吡啶酮基、二氫哌啶酮基、哌嗪基、嗎啉基、4,5-二氫噁唑基、4,5-二氫異噁唑基、2,3-二氫異噁唑基、噁唑烷基、2H-1,2-噁嗪基、6H-1,3-噁嗪基、4H-1,3-噻嗪基、6H-1,3-噻嗪基、2H-吡喃基、2H-吡喃-2-酮基、3,4-二氫-2H-吡喃基等。
本發明所述的“芳基”是指含有6至15個環碳原子的具有芳香性的環狀基團，包括“6至8員芳基”、“6至 15員稠芳基”，視需要地，環狀結構中的環原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧化。其實例包括但不限於：苯基、環辛四烯基、萘基、蒽基、菲基等。
本發明所述的“雜芳基”是指含有5至15個環原子(其中至少一個環原子為雜原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的具有芳香性的環狀基團，包括“5至8員雜芳基”、“5至15員稠雜芳基”，視需要地，環狀結構中的環原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧化。具體實例包括但不限於：呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、2-吡啶酮基、4-吡啶酮基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、1,2,3-三嗪基、1,3,5-三嗪基、1,2,4,5-四嗪基、氮雜環庚三烯基、1,3-二氮雜環庚三烯基、氮雜環辛四烯基、苯并呋喃基、苯并異呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、異吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基、喹啉基、2-喹啉酮基、4-喹啉酮基、1-異喹啉酮基、異喹啉基、吖啶基、菲啶基、苯并噠嗪基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、酚嗪基、喋啶基、嘌呤基、萘啶基、吩嗪基、吩噻嗪基等。
本發明所述的“接頭單元”指包含使抗體共價附著於藥物模塊的共價鍵或原子鏈的化學模塊，例如，亞烴基、亞芳基、亞雜芳基、亞烴基硫烷基或亞胺基硫烷基，接頭單元連同式(I)中的馬來醯亞胺基團一起形成完整的接頭。 接頭是本領域已知的，例如SMCC、SPP、SPDP等。
本發明所述“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，較佳為為最多5個，更佳為為1至3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，本領域技術人員能夠在不付出過多努力的情況下確定(藉由實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。
縮寫詞：
發明的有益效果
與現有技術(WO2005081711A2，公開日2005.09.09)相比，本發明製備式(I)所示化合物的技術方案具有以下優點：(1)反應步驟縮短，本發明在製備式(I)所示化合物關鍵步驟中的反應物不同，本發明關鍵步驟中的第一步由反應物式(IIIb)所示化合物與式(IVa)所示化合物反應得到式(Va)所示化合物，第二步由式(Va)所示化合物脫去羧基保護基得到目標式(Ia)所示化合物，與現有技術比較，本發明的反應步驟縮短為兩步，現有技術的反應步驟為四步；(2)6-馬來醯亞胺基己醯氯與片段連接的順序不同；(3)生產相同量的產物所需要反應物的投料量減少，本發明關鍵中間體式(IVa)所示化合物的投料量減少很多，本發明方法可以縮減生產成本，提高生產效率，具有突出的技術進步和顯著的經濟效果。
以下將結合具體實例詳細地解釋本發明，使得本專業技術人员更全面地理解本發明，具體實例僅用於说明本發明的技術方案，並不以任何方式限定本發明。
實施例
化合物的結構是藉由核磁共振(NMR)或/和質譜(MS)來確定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的單位給出。NMR的 測定是用Bruker AVANCE-400核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d6)、氘代氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)，內標為四甲基矽烷(TMS)。
MS的測定用FINNIGAN LCQAd(ESI)質譜儀(生產商：Thermo，型號：Finnigan LCQ advantage MAX)。
HPLC的測定使用安捷倫1200DAD高壓液相色譜儀(Sunfire C18 150×4.6mm色譜管柱)和Waters 2695-2996高壓液相色譜儀(Gimini C18 150×4.6mm色譜管柱)。
手性HPLC分析測定使用LC-10A vp(Shimadzu)或者SFC-analytical(Berger Instruments Inc.)。
激酶平均抑制率及IC50值的測定用NovoStar酶標儀(德國BMG公司)。
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm~0.2mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm~0.5mm。
管柱層析一般使用煙臺黃海矽膠200~300目矽胺為載體。
手性製備管柱層析使用Prep Star SD-1(Varian Instruments Inc.)或SFC-multigram(Berger Instruments Inc.)。
本發明的已知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買自ABCR GmbH & Co.KG、Acros Organics、Aldrich Chemical Company、韶遠化學科技(Accela ChemBio Inc)、達瑞化學品等公司。
實施例中無特殊說明，反應能夠均在氬氣氛或氮氣氛下進行。
氬氣氛或氮氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氬氣或氮氣氣球。
氫氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氫氣氣球。
加壓氫化反應使用Parr 3916EKX型氫化儀和清藍QL-500型氫氣發生器或HC2-SS型氫化儀。
氫化反應通常抽真空，充入氫氣，重複操作3次。
微波反應使用CEM Discover-S 908860型微波反應器。
實施例中無特殊說明，溶液是指水溶液。
實施例中無特殊說明，反應的溫度為室溫，為20℃~30℃。
實施例中的反應進程的監測採用薄層色譜法(TLC)，反應所使用的展開劑的體系有：A：二氯甲烷和甲醇體系，B：正己烷和乙酸乙酯體系，C：石油醚和乙酸乙酯體系，D：丙酮，溶劑的體積比根據化合物的極性不同而進行調節。純化化合物採用的管柱層析的沖提劑的體系和薄層色譜法的展開劑體系包括：A：二氯甲烷和甲醇體系，B：正己烷和乙酸乙酯體系，C：二氯甲烷和丙酮體系，溶劑的體積比根據化合物的極性不同而進行調節，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等鹼性或酸性試劑進行調節。
實施例1
(S)-2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-( 6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1基)-N-甲基己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-N,3-二甲基丁醯胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚醯基)-2-氮雜二環[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯胺基)-3-(2-氟苯基)丙酸1
第一步
(1S,3S,5S)-第三丁基3-((1R,2R)-1-羥基-2-甲基-3-((4R,5S)-4-甲基-2-側氧基-5-苯基噁唑烷-3-基)-3-側氧基丙基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-羧酸
將(4R,5S)-3-丙醯基-4-甲基-5-苯基-2-噁唑烷酮1b(14.7g，63.1mmol，採用專利申請“WO2015162291”公開的方法製備而得)溶解於二氯甲烷(120mL)中，冰浴冷卻至0℃，滴加三乙胺(9.7mL，72.6mmol)和三氟甲磺酸二丁硼(65mL，65mmol)，加畢，攪拌反應1小時。反應液於乾冰-丙酮浴中冷卻至-78℃，將(1S,3S,5S)-第三丁基3-甲醯基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-羧酸1a(12g，56.8mmol，採用專利申請“WO2008081399”公開的方法製備而得)溶解於二氯甲烷(10mL)中，向反應液中滴加上述溶液，加畢，攪拌反應2小時。撤去乾冰丙酮浴，反應液自然升溫至0℃，在0℃下， 反應1.5小時。向反應液中加入磷酸鹽緩衝液(pH=7.0)和甲醇的混合溶液(100mL,V：V=1：3)，再加入甲醇和雙氧水(30%)的混合溶液(100mL,V：V=2：1)，攪拌30分鐘。反應液減壓蒸除有機相，剩餘水相用二氯甲烷(150mL×3)萃取，合併有機相，用水(100mL×2)洗滌，飽和氯化鈉溶液(100mL×2)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物1c(15.6g，產率72.3%)。
MS m/z(ESI)：445.4[M+1]
第二步
(2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基)-3-羥基-2-甲基丙酸
將1c(15.7g，35.3mmol)加入四氫呋喃(500mL)中，冰浴下，邊緩慢滴加雙氧水(15.3g，134mmol)邊調控反應液溫度在0℃，再加入一水氫氧化鋰(2.5g，60mmol)，加畢，撤去冰浴，反應液溫度自然升至室溫，攪拌反應16小時。冰浴下，向反應液中分批緩慢加入亞硫酸鈉(17.8g，141.2mmol)，加畢，攪拌反應30分鐘，再加入水(150mL)，撤去冰浴，反應液減壓蒸除有機相，剩餘水相用二氯甲烷(150mL×3)洗滌，冰浴下，滴加2N的鹽酸溶液至pH為2-3，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，用水(500mL)洗滌，飽和氯化鈉溶液(500mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到標題產物1d(9.3g，產率92%)。
MS m/z(ESI)：284.3[M-1]
第三步
(1S,3S,5S)-第三丁基3-((1R,2R)-3-(苄氧基)-1-羥基-2-甲基-3-側氧基丙基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-羧酸
將1d(9.3g，32.6mmol)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(120mL)中，冰浴至0℃，加入碳酸氫鈉(15.06g，179.3mmol)和溴化苄(27.9g，163.1mmol)，加畢，撤去冰浴，反應液於20℃攪拌16小時。冰浴下，向反應液中加入飽和氯化銨溶液(200mL)淬滅反應，用乙酸乙酯(150mL×3)萃取反應液，有機相依次用水(200mL)和飽和氯化鈉溶液(150mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物1e(10.3g，產率84.2%)。
MS m/z(ESI)：376.4[M+1]
第四步
(1S,3S,5S)-第三丁基3-((1R,2R)-3-(苄氧基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-羧酸
將1e(10.3g，27.4mmol)溶於N-甲基吡咯烷酮(90mL)中，加入碘甲烷(18mL，234mmol)，分批加入60%的氫化鈉(1.28g，32.1mmol)，攪拌反應30分鐘。冰浴下，將飽和氯化銨溶液(200mL)降溫至0℃，加入反應液，攪拌10分鐘，用乙酸乙酯(300mL×3)萃取，有機相依次用水(200mL×2)和飽和氯化鈉溶液(200mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物1f(9.3g，產率87.2%)。
MS m/z(ESI)：390.4[M+1]
第五步
(2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸
將1f(9.3g，23.88mmol)溶於四氫呋喃(90mL)中，加入鈀碳(10%，1.86g)，氫氣置換三次，反應液加熱至35℃，攪拌反應30分鐘。反應液經矽藻土過濾，濾液濃縮乾燥，得到粗品標題產物1g(8.2g)，產品不經純化直接進行下一步反應。
第六步
(2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸鹽酸鹽
將粗品1g(8.3g，27.7mmol)溶於氯化氫的1,4-二噁烷溶液(5.0M，50mL)中，攪拌反應30分鐘。反應液減壓濃縮乾燥，得到粗品標題產物1h(8.2g)，產品不經純化直接進行下一步反應。
第七步
(2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸
將粗品1h(8.2g，41.2mmol)溶解於水(70mL)中，加入1,4-二噁烷(70mL)，冰浴下冷卻至0℃，加入N,N-二異丙基乙胺(31.9g，247.2mmol)。將9-芴甲基-N-琥珀醯亞胺基羧酸酯(18.06g，53.56mmol)溶解於1,4-二噁烷(70mL)中，將上述溶液加入到反應液中，加畢，撤去冰浴，反應 液溫度自然升至室溫，攪拌反應2.5小時。反應液減壓蒸除有機相，加入水(100mL)，冰浴下滴加1N的鹽酸至反應液pH為2，用二氯甲烷(300mL×3)萃取，有機相依次用水(300mL×2)和飽和氯化鈉溶液(300mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物1i(8.7g，產率85%)。
MS m/z(ESI)：422.4[M+1]
第八步
(S)-2,4-二甲氧基苄基2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-(2-氟苯基)丙酸
將(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-(2-氟苯基)丙酸1j(13g，32.6mmol)溶解於二氯甲烷(50mL)中，加入3,5-二甲氧基苯甲醇(5.93g，35.27mmol)，滴加N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛(8.9mL，36.8mmol)，加畢，攪拌反應40小時。反應液依次用水(50mL)和飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到粗品標題產物1k(34.2g)，產品不經純化直接進行下一步反應。
MS m/z(ESI)：556.4[M+1]
第九步
(S)-2,4-二甲氧基苄基2-胺基-3-(2-氟苯基)丙酸
將1k(17g，30.6mmol)溶於二氯甲烷(40mL)中，加入 二乙胺(80mL，0.78mmol)，攪拌反應3小時。反應液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物1l(7.8g，產率76.4%)。
MS m/z(ESI)：334.3[M+1]
第十步
(1S,3S,5S)-(9H-芴-9-基)甲基3-((1R,2R)-3-(((S)-1-((2,4-二甲氧基苄基)氧基)-3-(2-氟苯基)-1-側氧基丙基-2-基)胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-羧酸
條件一：
將1i(2.5g，5.94mmol)和1l(2.04g，5.94mmol)溶於二氯甲烷和N,N-二甲基甲醯胺的混合溶液(36mL,V：V=5：1)中，加入2-(7-偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(2.7g，7.13mmol)和N,N-二異丙基乙胺(3.1mL，17.8mmol)，加畢，20℃攪拌反應1小時。向反應液中加入水(100mL)，攪拌，分層，有機相依次用水(100mL×2)洗滌，飽和氯化鈉溶液(100mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物1m(3.9g，產率89.2%)。
條件二：
將化合物1i(9.1g，21.62mmol)，1l(7.5g，22.69mmol)和2-(7-偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HATU，9.9g，25.94mmol)溶於二氯甲烷和N,N-二甲基甲醯胺的混合溶液(120mL，V：V=5：1)中，加入N,N-二異丙基 乙胺(8.4g，64.89mmol)，20℃反應1小時。向反應液中加入水(80mL)，攪拌分層，水相用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物1m(15.7g，產率98%)。
MS m/z(ESI)：737.5[M+1]
第十一步
(S)-2,4-二甲氧基苄基2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯胺)-3-(2-氟苯基)丙酸
條件一：
將1m(3.9g，5.29mmol)溶於二氯甲烷(20mL)中，加入二乙胺(40mL，0.39mmol)，20℃攪拌反應2小時。反應液減壓蒸餾除去大部分二乙胺，加入甲苯(10mL)，減壓濃縮乾燥。所得殘餘物用二氯甲烷(100mL)溶解，依次用水(100mL×2)洗滌，飽和氯化鈉溶液(100mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化殘留物，得到標題產物1n(2.31g，產率84.9%)。
條件二：
將1m(15.7g，21.3mmol)溶於二氯甲烷(100mL)中，於10-15℃緩慢加入二乙胺(150mL，1.5mmol)，攪拌反應3小時。反應液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物1n(10g，產率 91.7%)。
MS m/z(ESI)：515.4[M+1]
第十二步
(5S,8S,11S,12R)-11-((S)-第二丁基)-1-(9H-芴-9-基)-5,8-二異丙基-12-甲氧基-4,10-二甲基-3,6,9-三側氧基-2-氧雜-4,7,10-三氮雜十四-14-酸-2,4-二甲氧基苄酯1p
將(5S,8S,11S,12R)-11-((S)-第二丁基)-1-(9H-芴-9-基)-5,8-二異丙基-12-甲氧基-4,10-二甲基-3,6,9-三側氧基-2-氧雜-4,7,10-三氮雜十四-14-酸1o(5.13g，8.04mmol，採用專利申請“WO2013072813”公開的方法製備而得)溶於二氯甲烷(90mL)中，依次加入4-二甲胺基吡啶(100mg，0.8mmol)和1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺(2.31g，12.06mmol)，攪拌反應15分鐘，滴加2,4-二甲氧基苄醇(1.62g，9.65mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)，攪拌反應2小時。反應液中加入飽和氯化銨溶液(100mL)，攪拌，靜置，分離有機相，有機相依次用飽和氯化銨溶液(100mL)、水(100mL)、飽和氯化鈉溶液(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物1p(5.6g，產率88.5%)。
MS m/z(ESI)：788.8[M+1]
第十三步
(3R,5S)-4-((S)-N,3-二甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲胺基)丁醯胺基)丁醯胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸-2,4-二甲氧基苄酯1q
將1p(4g，5.08mmol)溶於二氯甲烷(20mL)中，加入 二乙胺(40mL)，攪拌反應3小時。反應液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物1q(2.7g，產率94%)。
MS m/z(ESI)：566.1[M+1]
第十四步
(3R,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-N,3-二甲基丁醯胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸-2,4-二甲氧基苄酯1r
將1q(2.7g，4.77mmol)溶於二氯甲烷和N,N-二甲基甲醯胺(48mL,V/V=5：1)混合溶劑中，依次加入6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸(1.1g，5.25mmol，採用公知的方法“Journal of Medcinal Chemistry,2013,56(24),9955-9968”製備而得)、2-(7-偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(2.18g，5.72mmol)和二異丙基乙基胺(3.3mL，19mmol)，攪拌反應1小時。反應液中加入水(100mL)，攪拌，靜置，分離有機相，有機相依次用水(100mL×2)、飽和氯化鈉溶液洗滌(100mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物1r(3g，產率82.9%)。
MS m/z(ESI)：759.8[M+1]
第十五步
(3R,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-N,3-二甲基丁醯胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸1s (3R,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)-N-methylhexanamido)-3-methylbutanamido)-N,3-dimethylbutanamido)-3-methoxy-5-methylheptanoic acid
將1r(3g，3.95mmol)溶於三氟乙酸和二氯甲烷(50mL,V/V=2.5%)混合溶劑中，攪拌反應15分鐘。反應液中加入二氯甲烷，過濾，濾餅用二氯甲烷淋洗，濾液依次用水(100mL)、飽和氯化鈉溶液洗滌(100mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到粗品標題產物1s(2.3g)，產物不經純化直接進行下一步反應。
MS m/z(ESI)：609.7[M+1]
第十六步
(2S)-2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((3R,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-N,3-二甲基丁醯胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚醯基)-2-氮雜二環[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯胺基)-3-(2-氟苯基)丙酸-2,4-二甲氧基苄酯1t
將粗品1s(2.3g，3.78mmol)和(S)-2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-氮雜二環[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯胺基)-3-(2-氟苯基)丙酸-2,4-二甲氧基苄酯1n(1.94g，3.78mmol)溶於二氯甲烷和N,N-二甲基甲醯胺(36mL,V/V=5：1)混合溶劑中，依次加入2-(7-偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(1.72g，4.54mmol)和二異丙基乙基胺(2.0mL，11.34mmol)，攪拌反應1小時。反應液中加入水(100mL)，攪拌，靜置，分離有機相，有機 相依次用水(100mL×2)、飽和氯化鈉溶液洗滌(100mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物1t(1.94g，產率46.5%)。
MS m/z(ESI)：1122.6[M+18]
第十七步
(2S)-2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((3R,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1基)-N-甲基己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-N,3-二甲基丁醯胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚醯基)-2-氮雜二環[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯胺基)-3-(2-氟苯基)丙酸1
將1t(1.94g，1.75mmol)溶於三氟乙酸和二氯甲烷(40mL,V/V=2.5%)混合溶劑中，攪拌反應15分鐘。反應液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物1(1.17g，產率69.8%)。
MS m/z(ESI)：956.1[M+1]
1H-NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.36-7.30(m,1H),7.29-7.21(m,1H),7.17-7.02(m,2H),6.83-6.79(m,2H),4.81-4.71(m,2H),4.69-4.55(m,2H),4.25-4.15(m,1H),4.13-4.04(m,1H),3.96-3.85(m,2H),3.70-3.61(m,1H),3.55-3.46(m,3H),3.40-3.21(m,4H),3.18-3.10(m,2H),3.07-2.96(m,4H),2.67-2.56(m,2H),2.54-2.34(m,3H),2.29-2.17(m,2H),2.10-1.99(m,1H),1.89-1.57(m,7H),1.52-1.28(m,6H),1.21-1.11(m,4H),1.07-0.96(m,6H),0.95-0.81(m,12H), 0.80-0.69(m,1H)
對比例
採用現有技術的方法，直接用兩個重要中間體連接生成式1所示化合物的方法：
第1步
(2S)-2,4-二甲氧基苄基2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-第二丁基)-1-(9H-芴-9-基)-5,8-二異丙基-12-甲氧基-4,10-二甲基-3,6,9-三羰基-2-氧雜-4,7,10-三氮雜十四烷基-14-醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯胺)-3-(2-氟苯基)丙酸酯
將1n(2.97g，5.77mmol)和(5S,8S,12R)-11-((S)-第二丁基)-1-(9H-芴-9-基)-5,8-二異丙基-12-甲氧基-4,10-二甲基-3,6,9-三羰基-2-氧雜-4,7,10-三氮雜十四烷-14-羧酸1o (3.68g，5.77mmol，採用專利申請“WO 2013072813”公開的方法製備而得)溶於二氯甲烷和N,N-二甲基甲醯胺的混合溶液(48mL,V：V=5：1)中，加入2-(7-偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(2.63g，6.92mmol)和N,N-二異丙基乙胺(3mL，17.31mmol)，20℃攪拌反應1小時。加入水(100mL)，攪拌，分層，有機相依次用水(100mL×2)洗滌，飽和氯化鈉溶液(100mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化殘留物，得到標題產物1p(5.3g，產率81.0%)。
MS m/z(ESI)：1151.6[M+18]
第2步
(2S)-2,4-二甲氧基苄基2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((3R,5S)-4-((S)-N,3-二甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基胺基)丁醯胺基)丁醯胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯胺基)-3-(2-氟苯基)丙酸酯
將1p(3.86g，3.4mmol)溶於二氯甲烷(20mL)中，加入二乙胺(40mL，0.39mmol)，20℃攪拌反應2小時。反應液減壓蒸餾除大部分二乙胺，所得殘餘物中加入甲苯(10mL)，繼續減壓濃縮乾燥。向所得殘餘物種加入水(100mL)和二氯甲烷(100mL)，攪拌，分液，有機相依次用水(100mL×2)洗滌，飽和氯化鈉溶液(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化殘留物，得到標題產物1q(2.73g，產率87%)。
MS m/z(ESI)：912.9[M+1]
第3步
(2S)-2,4-二甲氧基苄基2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((3R,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-N,3-二甲基丁醯胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯胺基)-3-(2-氟苯基)丙酸酯
將1q(1.7g，1.86mmol)溶於二氯甲烷和N,N-二甲基甲醯胺的混合溶液(30mL,V：V=5：1)中，依次加入6-馬來醯亞胺基己酸(0.39g，1.86mmol)，2-(7-偶氮苯并三唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(0.85g，2.23mmol)和N,N-二異丙基乙胺(0.97mL，5.58mmol)，攪拌反應1小時。向反應液中加入50mL水(100mL)，攪拌，分層，有機相依次用水(50mL×2)洗滌，飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化殘留物，得到標題產物1r(1.01g，產率49%)。
MS m/z(ESI)：1122.7[M+18]
第4步
(2S)-2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((3R,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二羰基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-甲基己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-N,3-二甲基丁醯胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙醯 胺基)-3-(2-氟苯基)丙酸
將1r(2.5g，2.26mmol)溶於三氟乙酸的二氯甲烷溶液中(2.5%，50mL)，攪拌反應20分鐘。冰浴下減壓蒸除二氯甲烷，所得殘餘物減壓乾燥後用二氯甲烷溶解，濕法上樣，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物1(1.4g，產率64.8%)。
MS m/z(ESI)：956.0[M+1]
1H-NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.36-7.30(m,1H),7.29-7.21(m,1H),7.17-7.02(m,2H),6.83-6.79(m,2H),4.81-4.71(m,2H),4.69-4.55(m,2H),4.25-4.15(m,1H),4.13-4.04(m,1H),3.96-3.85(m,2H),3.70-3.61(m,1H),3.55-3.46(m,3H),3.40-3.21(m,4H),3.18-3.10(m,2H),3.07-2.96(m,4H),2.67-2.56(m,2H),2.54-2.34(m,3H),2.29-2.17(m,2H),2.10-1.99(m,1H),1.89-1.57(m,7H),1.52-1.28(m,6H),1.21-1.11(m,4H),1.07-0.96(m,6H),0.95-0.81(m,12H),0.80-0.69(m,1H).
結論：
由表1可知，本發明在第14步時6-馬來醯亞胺基己醯氯與片段連接後，在生成相同量的目標式1所示化合物時，本發明與現有技術關鍵步驟使用的中間體不同，本發明採用中間體1s與1n反應(其中1s由1o製備得到)，對比例使用中間體1o與1n反應；本發明與現有技術比較，等量的中間體1o製備等量的式1化合物，所需要的中間體1n的量二者完全不相同，本發明中間體1n的量可以減少很多，中間體1n的量為1.94g，而現有技術為2.82g；本發明與現有技術關鍵反應步驟不相同，本發明為2步反應，現有技術為4步反應，現有技術需要經過多步複雜的路線合成式1所示化合物，在採用本發明的合成方法後能大大降低生產成本，縮短反應時間、提高生產效率，具有突出的技術進步和顯著的經濟效果。

Claims (26)

  1. 一種通式(III)所示的化合物， 其中：R 1選自氫原子或羧基保護基。
  2. 一種如申請專利範圍第1項所述通式(III)所示化合物的製備方法，其特徵在於，該方法包括由式(II)所示化合物與6-馬來醯亞胺基己酸反應得到式(III)所示化合物的步驟， 其中，R 1如申請專利範圍第1項中定義；R 2選自氫原子或胺基保護基。
  3. 如申請專利範圍第2項所述的方法，其中，該方法為
  4. 如申請專利範圍第3項所述的方法，其中，該方法還包括以下步驟
  5. 如申請專利範圍第3項所述的方法，其中，該方法還包括以下步驟
  6. 如申請專利範圍第5項所述的方法，其中，式(IIb)所示化合物在鹼性條件下脫Fmoc保護基得到式(IIa)所示化合物，其中，該鹼選自有機鹼或無機鹼。
  7. 如申請專利範圍第6項所述的方法，其中，該有機鹼為三乙胺、二乙胺、 N, N'-二異丙基乙胺、吡啶、六甲基二矽基胺基鈉，正丁基鋰、第三丁醇鉀或四丁基溴化銨。
  8. 如申請專利範圍第7項所述的方法，其中，該有機鹼為二乙胺。
  9. 如申請專利範圍第6所述的方法，其中，該無機鹼選自氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀或碳酸銫。
  10. 一種通式(I)所示化合物的製備方法，其特徵在於，該方法包括式(III)所示的化合物與式(IV)所示化合物反應得到式(V)所示化合物，式(V)所示化合物脫去保護基得 到式(I)所示化合物的步驟， 其中，A選自3-8員環烷基；R選自鹵素；R 1如申請專利範圍第1項中定義；R 3選自羧基保護基；R x選自視需要取代的烷基或環烷基，該取代基選自烷基、鹵烷基、鹵素、羥基、胺基、硝基、氰基、烷氧基、羥基烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基；n選自1、2、3、4或5。
  11. 如申請專利範圍第10項所述的方法，其中，該A選自3員環烷基。
  12. 如申請專利範圍第10項所述的方法，其中，該R選自 氟、氯、溴或碘。
  13. 如申請專利範圍第12項所述的方法，其中，該R為氟。
  14. 如申請專利範圍第10項所述的方法，其中，該羧基保護基選自2,4-二甲氧基苄基、苄基、烯丙基、五氟苯基、甲基、對甲基苄基、甲氧乙氧甲基或第三丁基。
  15. 如申請專利範圍第14項所述的方法，其中，該羧基保護基為2,4-二甲氧基苄基。
  16. 如申請專利範圍第10項所述的方法，其特徵在於，式(III)所示化合物在縮合劑的作用下與式(IV)所示化合物發生醯胺化反應得到式(V)所示化合物，該縮合劑選自1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、 N, N'-二環己基碳二亞胺、 N, N'-二異丙基碳二亞胺、O-苯并三氮唑- N, N, N', N'-四甲基脲四氟硼酸鹽、1-羥基苯并三唑、1-羥基-7-偶氮苯并三唑、O-苯并三唑- N, N, N', N'-四甲脲六氟磷酸鹽、2-(7-偶氮苯并三唑)- N, N, N', N'-四甲基脲六氟磷酸鹽、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基胺基)磷鎓六氟磷酸鹽或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷。
  17. 如申請專利範圍第16項所述的方法，其中，該縮合劑為2-(7-偶氮苯并三唑)- N, N, N', N'-四甲基脲六氟磷酸鹽。
  18. 如申請專利範圍第10項所述的方法，其中，該方法為
  19. 如申請專利範圍第18項所述的方法，其中，該方法還包括以下步驟
  20. 如申請專利範圍第19項所述的方法，其中，該方法還包括以下步驟
  21. 如申請專利範圍第19項所述的方法，其中，該方法還包括以下步驟
  22. 一種製備抗體藥物偶聯物或其藥學上可接受鹽的方法，其特徵在於，該抗體藥物偶聯物由抗體藉由接頭單員與申請專利範圍第10項所述的通式(I)所示化合物反應而成。
  23. 如申請專利範圍第22項所述的方法，其中，該抗體為TNF-α抗體、VEGF抗體、EGFR抗體、c-MET抗體、Her2抗體或PD-1抗體。
  24. 如申請專利範圍第23項所述的方法，其中，該TNF-α抗體選自依那西普、英夫利昔單抗、或阿達木單抗，VEGF抗體選自貝伐珠單抗，EGFR抗體選自西妥昔單抗、帕尼單抗或尼妥珠單抗，Her2抗體選自曲妥珠單抗(赫賽汀)或帕妥珠單抗，PD-1抗體選自納武單抗或帕母單抗。
  25. 如申請專利範圍第22項所述的方法，其中，該抗體藥物偶聯物選自 其中，抗體Ab如申請專利範圍第24項中所定義，y的範圍為1至8。
  26. 如申請專利範圍第25項所述的方法，其中，y的範圍為2至5。
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