CN102325549A - 用人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康治疗癌症 - Google Patents

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Abstract

本发明提供用于在治疗癌症中组合应用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康，伴有或不伴有另外的药剂或治疗，如其它抗癌药物或放射疗法。本发明还包括药物组合物，其由在药用载体中的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康的组合构成。

Description

用人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康治疗癌症
本发明涉及用于治疗癌症的药剂和药物组合物。本发明特别涉及在癌症治疗中组合使用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康(irinotecan)。 
癌症是各种各样的细胞恶性肿瘤的通用名，其特征为生长失控、缺少分化、和能够侵袭局部组织并转移的能力。这些恶性肿瘤以不同的发病率影响体内的每种组织和器官。 
在过去的几十年中已经开发了多种用于治疗各种类型癌症的治疗剂。最常用的抗癌剂类型包括：微管破坏剂(Microtubule disruptors)(例如长春花生物碱(vinca alkaloids)如长春碱(vinblastine)或长春新碱(vincristine)，紫杉烷类(taxanes)如多西他赛(docetaxel)或紫杉醇(paclitaxel)，埃坡霉素(epothilones)如伊沙匹隆(ixabepilone))，抗代谢物(antimetabolites)(例如抗叶酸(anti-folates)如甲氨蝶呤(methotrexate)或氨基蝶呤(aminopterin)，抗嘌呤(anti-purines)如氟达拉滨(fludarabine)，抗嘧啶(anti-pyrimidines)如氟尿嘧啶(fluorouracil)，卡培他滨(capecitabine)或吉西他滨(gemcitabine))，拓扑异构酶抑制剂(topoisomerase inhibitors)(例如喜树碱(camptothecin)，伊立替康(irinotecan)或依托泊苷(etoposide))，DNA插入剂(DNA intercalators)(例如多柔比星(doxorubicin)，柔红霉素(daunorubicin)，放线菌素(actinomycin)，博来霉素(bleomycin))，烷化剂(alkylating agents)(例如环磷酰胺(cyclophosphamide)，苯丁酸氮芥(chlorambucil)，卡莫司汀(carmustine)，尼莫司汀(nimustine)，链佐星(streptozocin)，白消安(busulfan)，顺铂(cisplatin)，奥沙利铂(oxaliplatin)，曲他胺(triethylenemelamine)，达卡巴嗪(dacarbazine))和激素疗法(hormonal therapy)(例如糖皮质激素(glucocorticoids)，芳香酶抑制剂(aromatase inhibitors)如他莫昔芬(tamoxifene)，抗雄激素(antiandrogens)如氟他胺(flutamide)，促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone，GnRH)类似物如亮丙立德(leuprolide))。 
伊立替康(irinotecan) 是拓扑异构酶I抑制剂。该物质是喜树碱(camptothecin，一种天然生物碱)的半合成类似物。其常常与其它化疗剂 组合用于治疗不同类型的癌症，例如结肠癌。 
最近，癌症疗法中的靶向疗法的重要性已经增加。此类物质-小分子或生物治疗药物如抗体-干扰特异性靶标，例如已知促进致癌作用和肿瘤生长的细胞表面受体。 
表皮生长因子受体(EGFR)和抗-EGFR抗体 
人表皮生长因子受体(也已知为HER-1或ErbB-1，并且在本文中称作″EGFR″)是170kDa的跨膜受体，其由c-erbB原癌基因编码，并且显示固有的酪氨酸激酶活性(Modjtahedi等，Br.J.Cancer(英国癌症杂志)73：228-235(1996)；Herbst和Shin，Cancer(癌症)94：1593-1611(2002))。SwissProt数据库登录号P00533提供了EGFR的序列。还存在EGFR的同种型和变体(例如，可变RNA转录物，截短形式，多态性等)，包括但不限于SwissProt数据库登录号P00533-1，P00533-2，P00533-3，和P00533-4确定的那些。已知EGFR结合包括以下各项的配体：表皮生长因子(EGF)，转化生长因子-α(TGF-α)，双调蛋白，肝素结合EGF(HB-EGF)，β动物纤维素，和epiregulin(Herbst和Shin，Cancer(癌症)94：1593-1611(2002)；Mendelsohn和Baselga，Oncogene(致癌基因)19：6550-6565(2000))。EGFR经由酪氨酸激酶介导的信号转导途径调节许多细胞过程，包括但不限于激活控制细胞增殖、分化、细胞存活、程序性细胞死亡、血管发生、有丝分裂发生和转移的信号转导途径(Atalay等，Ann.Oncology(肿瘤学年报)14：1346-1363(2003)；Tsao和Herbst，Signal(信号)4：4-9(2003)；Herbst和Shin，Cancer(癌症)94：1593-1611(2002)；Modjtahedi等，Br.J.Cancer(英国癌症杂志)73：228-235(1996))。 
EGFR的过表达已经在许多人类恶性病症中报道，包括膀胱癌、脑癌、头和颈癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌和肾癌(Atalay等，Ann.Oncology(肿瘤学年报)14，1346-1363(2003)；Herbst和Shin，Cancer(癌症)94，1593-1611(2002)Modjtahedi等，Br.J.Cancer(英国癌症杂志)73，228-235(1996))。在这些病症的许多中，EGFR的过表达与患者的差的预后相关或关联。(Herbst和Shin，Cancer(癌症)94，1593-1611(2002)Modjtahedi等，Br.J.Cancer(英国癌症杂志)73，228-235(1996))。EGFR也 在正常组织的细胞中表达，特别是皮肤、肝脏和胃肠道的上皮组织，尽管通常水平比在恶性细胞中低(Herbst和Shin，Cancer(癌症)94，1593-1611(2002))。 
已经报道了靶向EGFR和阻断EGFR信号传导途径的各种策略。小分子酪氨酸激酶抑制剂如吉非替尼(gefitinib)，厄洛替尼(erlotinib)，卡纳替尼(canertinib)/CI-1033，培利替尼(pelitinib)/EKB-569，neratinib/HKI-272，拉帕替尼(lapatinib)/GW572016以及其它等等阻断在胞内酪氨酸激酶区域内EGFR的自磷酸化，由此抑制下游信号传导事件(Tsao和Herbst，Signal(信号)4，4-9(2003))。另一方面，单克隆抗体，靶向EGFR的胞外部分，导致阻断配体结合并由此抑制下游事件如细胞增殖(Tsao和Herbst，Signal(信号)4，4-9(2003))。 
已经产生了几种鼠单克隆抗体，其获得这种体外阻断并且已经在小鼠异种移植模型中评估它们影响肿瘤生长的能力(Masui，等，Cancer Res.(癌症研究)46，5592-5598(1986)；Masui，等，Cancer Res.(癌症研究)44，1002-1007(1984)；Goldstein，等，Clin.Cancer Res.(临床癌症研究)1，1311-1318(1995))。例如，EMD 55900(EMD Pharmaceuticals)是针对人鳞状细胞癌细胞系A431产生的鼠抗-EGFR单克隆抗体，并且在喉或下咽部晚期鳞状细胞癌患者的临床研究中检验(Bier等，Eur.Arch.Otohinolaryngol.252，433-9(1995))。另外，结合EGFR胞外结构域的大鼠单克隆抗体ICR16，ICR62，和ICR80已经显示有效抑制EGF和TGF-α受体的结合(Modjtahedi等，Int.J.Cancer(国际癌症杂志)75，310-316(1998))。鼠单克隆抗体(mAb)425是另一种针对人A431癌细胞系产生的mAb并且发现在人表皮生长因子受体的外部结构域上与多肽表位结合(Murthy等，Arch Biochem Biophys(生物化学和生物物理学档案)252，549-560(1987))。在治疗中使用鼠抗体的潜在问题是非人单克隆抗体可以被人宿主识别为外源蛋白；因此，重复注射这些抗体可导致诱导免疫应答，导致有害的过敏反应。对于鼠单克隆抗体，这经常被称为人抗小鼠抗体或″HAMA″应答，或人抗大鼠抗体或″HARA″应答。此外，这些“异源”抗体可以被宿主的免疫系统所攻击从而使它们，在达到它们的靶位点前被有效地中和。另外，非人单克隆抗体(例如，鼠单克隆抗体)典型地缺乏人效应子功能性，即它们不能，特别是 通过抗体依赖性细胞-介导的细胞毒性或Fc-受体介导的吞噬作用来介导补体依赖性的裂解或溶解人靶标细胞。 
为避开这些问题，已经开发了嵌合的，人源化的或甚至完整的人抗体，其中仅可变结构域，互补决定区(CDRs)或根本没有任何部分分别是鼠来源，而该抗体的所有其它部分，特别是Fc区，是人来源。 
例如，IMC-C225/西妥昔单抗(cetuximab)( 
Figure BDA0000085113740000041
ImClone)是嵌合小鼠/人抗-EGFR mAb(基于小鼠M225单克隆抗体，其在人临床试验中导致HAMA应答)，其已经报道在各种人异种移植模型中显示抗肿瘤功效(Goldstein等，Clin Cancer Res(临床癌症研究)1，1311-1318(1995)；Herbst和Shin，Cancer(癌症)94，1593-1611(2002))。IMC-C225的功效已经归因于几个机制，包括抑制通过EGFR信号传导途径，和可能通过增加的抗体依赖性细胞-介导的细胞毒性(ADCC)活性调节的细胞事件(Herbst和Shin，Cancer(癌症)94，1593-1611(2002))。IMC-C225也用于临床试验中，包括与放射疗法和化学疗法组合(Herbst和Shin，Cancer(癌症)94，1593-1611(2002))。另外，美国专利号5,891,996(Mateo de Acosta del Rio等，)讨论了针对EGFR的鼠/人嵌合抗体，R3。人源化的基于R3的抗体，h-R3/尼妥珠单抗(nimotuzumab)Mateo等，Immunotechnology(免疫技术)3，71-81(1997)；Crombet-Ramos等，Int J Cancer(国际癌症杂志)101，567-575(2002)，Boland& Bebb，Expert Opin Biol Ther(生物学理论专家观点)9，1199-1206(2009)，正被Oncoscience(Wedel，德国)开发用于癌症治疗。美国专利号5,558,864讨论产生鼠抗-EGFR单克隆抗体(mAb)425的嵌合和人源化形式，人源化的基于mAb 425的抗体，EMD72000/马妥珠单抗(matuzumab)(Bier等，Cancer Immunol Immunother(癌症免疫学免疫理论)46，167-173(1998)，Kim，Curr Opin Mol Ther(现代分子理论观点)6，96-103(2004))正被Merck(Darmstadt，德国)开发用于癌症治疗。Abgenix，Inc.(Fremont，CA)开发了ABX-EGF/帕尼单抗(panitumumab)用于癌症治疗。ABX-EGF是完整的人抗-EGFR mAb(Yang等，Crit Rev Oncol/Hematol(肿瘤学/血液学评论)38；17-23(2001))。另一种完整的人抗-EGFRmAb，2F8/扎芦木单抗(zalutumumab)已经被Genmab Inc.(Princeton，NJ)开发(Bleeker等，J Immunol(免疫学杂志)173，4699-4707(2004)，Lammerts van Bueren，PNAS 105，6109-6114(2008))。 
抗体糖基化 
寡糖成分可以显著地影响与治疗性糖蛋白的功效有关的性质，包括物理稳定性，对蛋白酶攻击的抗性，与免疫系统的相互作用，药物代谢动力学，和特异性生物活性。这些性质可以不仅依赖于寡糖的存在或缺乏，还依赖于寡糖的特定结构。可以在寡糖结构和糖蛋白功能之间进行一些总结。例如，某些寡糖结构通过与特异性糖结合蛋白相互作用介导糖蛋白从血流中快速清除，而其它的可以被抗体结合并且触发不需要的免疫反应。(Jenkins等，Nature Biotechnol.(自然生物技术)14，975-81(1996))。 
IgGl型抗体，在癌症的免疫疗法中最常用的抗体，是在每个CH2结构域的Asn 297具有保守的N-联糖基化位点的糖蛋白。与Asn 297连接的两个复合双触角寡糖隐藏在CH2结构域之间，形成了与多肽主链的广泛接触，并且它们的存在对于抗体介导效应子功能诸如抗体依赖性细胞-介导的细胞毒性(ADCC)是必要的(Lifely等，Glycobiology(糖生物学)5，813-822(1995)；Jefferis等，Immunol Rev(免疫学综述)163，59-76(1998)；Wright和Morrison，Trends Biotechnol(生物技术趋势)15，26-32(1997))。 
单克隆抗体如上文提及的抗-EGFR抗体(例如西妥昔单抗(cetuximab)，尼妥珠单抗(nimotuzumab)，帕尼单抗(panitumumab))的细胞介导的效应子功能可通过如 
Figure BDA0000085113740000051
等，Nat Biotechnol(自然生物技术)17，176-180(1999)和美国专利号6,602,684(WO 99/54342)的描述改造(engineering)它们的寡糖组分而增强。Umana等人显示， (1，4)-N-乙酰葡糖胺转移酶III(GnTIII)，一种催化平分型(bisected)寡糖形成的糖基转移酶，在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的过量表达显著增加了在那些细胞中产生的抗体的体外ADCC活性。Asn 297碳水化合物的组成中的改变或其消除也影响抗体Fc-结构域结合 
Figure BDA0000085113740000053
和C1q蛋白(Umana等，Nat Biotechnol(自然生物技术)17，176-180(1999)；Davies等，Biotechnol Bioeng(生物技术生物工程)74，288-294(2001)；Mimura等，J Biol Chem(生物化学杂志)276，45539-45547(2001)；Radaev等，J Biol Chem(生物化学杂志)276，16478-16483(2001)；Shields等，J Biol Chem(生物化学杂志)276，6591-6604(2001)；Shields等，J Biol Chem(生物化学杂志)277，26733-26740(2002)；Simmons等，J Immunol Methods(免疫学方法杂志)263，133-147(2002))。 
抗瘤药物应该理想地选择性杀伤癌细胞，具有相对于其对非恶性肿瘤细胞毒性而言更为宽泛的治疗指数。即使延长暴露于该药物后，其同样保留针对恶性肿瘤细胞的功效。遗憾的是，没有一种目前的抗癌疗法具有这种理想的特性。相反，多数具有非常窄的治疗指数。此外，癌细胞暴露于轻微亚致死浓度的抗瘤剂通常会形成对该药剂的抗性，形成对一些其它抗瘤制剂的交叉抗性也是很常见的。 
因此，需要治疗瘤形成和其它增生疾病的更有效的疗法。用于提高目前药物治疗功效的策略涉及改变它们的给药时间表，以及与其它抗癌剂或者生化调节剂结合使用。众所周知的组合治疗是一种这样的方法：其可以产生相对于单独使用治疗性相关剂量的每一种制剂更好的功效和减少的副作用。在一些情况下，药物组合的功效是加成性的(组合的功效基本上等于每种药物单独功效的总和)，但在其他情形中，功效是协同的(组合的功效大于每种药物单独给药功效的总和)。例如，当与5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)和亚叶酸(leucovorin)组合时，奥沙利铂(oxaliplatin)作为结肠直肠癌的一线治疗显示25-40％的应答率(Raymond，E.等，Semin Oncol(肿瘤学讲座)25(2Suppl.5)，4-12(1998))。 
同样，与用单一药剂治疗相比，组合使用针对癌细胞表面上的特异性靶标的抗体和化疗剂可以增加抗癌功效。 
发明描述 
认识到将靶向癌症进展中涉及的癌细胞上的表面受体的抗体和化疗剂组合的重大治疗潜力，本发明提供用于在治疗癌症中组合应用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康。 
本发明还包括特别是用于在治疗癌症中应用的药物组合物，其包含在药用载体中的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康。 
本发明还涉及用于癌症治疗的方法，包括向有需要的受试者施用人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康。 
优选地，意欲同时或者顺序施用给患者治疗有效量的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康的组合，其在相同或不同制剂中，并且使用或者不使用另外的药剂或者疗法，诸如其它的抗癌药物或者放射疗法。 
本发明有用的优选的人源化抗-EGFRIgG1抗体描述于WO2006/082515和WO 2008/017963中，其全部内容通过引用并入本文，包括这样的抗体，其特征在于它们是嵌合抗体，具有大鼠单克隆抗体ICR62的结合特异性并且它们的效应子功能通过改变的糖基化而被增强。 
优选的抗-EGFR抗体的特征在于它们包含大鼠ICR62抗体的至少一个(即，一个，两个，三个，四个，五个，或六个)互补决定区(CDR)，或含有所述CDR的至少特异性决定残基并且包含来源于异源多肽的序列的其变体或截短形式。所谓“特异性决定残基”意思是直接参与与抗原相互作用的那些残基。具体地，优选的抗-EGFR抗体包含：(a)重链CDR1序列，其选自由下述序列组成的组：SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：12，和SEQ IDNO：13；(b)重链CDR2序列，其选自由下述序列组成的组：SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ IDNO：19，SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：21，SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQID NO：24，SEQ ID NO：25，SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：27，SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：29，和SEQ ID NO：30；和(c)重链CDR3序列SEQ ID NO：31。优选的抗-EGFR抗体还包含：(a)轻链CDR1序列，其选自由SEQ ID NO：32和SEQ ID NO：33组成的组；(b)轻链CDR2序列SEQ ID NO：34；和(c)轻链CDR3序列SEQ ID NO：35。 
更优选的抗-EGFR抗体的特征在于它们包含大鼠ICR62抗体的至少三个CDR，或含有所述CDR的至少特异性决定残基的其变体或截短形式。 
本发明有用的最优选的抗-EGRF抗体包含： 
a)在重链可变结构域中的SEQ ID NO：1的CDR1，SEQ ID NO：16的CDR2和SEQ ID NO：31的CDR3，和 
b)在轻链可变结构域中的SEQ ID NO：33的CDR1，SEQ ID NO：34的CDR2和SEQ ID NO：35的CDR3。 
本发明有用的优选抗-EGFR抗体的可能CDR序列总结于表1(重链 CDRs)和表2(轻链CDRs)中。 
表1.优选抗-EGFR抗体的重链CDR氨基酸序列。＊ 
表2.优选抗-EGFR抗体的轻链CDR氨基酸序列。＊ 
*“Kabat”是指Kabat等，“免疫目的的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)”，National Institutes of Health(国家健康研究所)，Bethesda(1983)定义的CDRs 
“Chothia”是指Chothia等，J Mol Biol(分子生物学杂志)196，901-917(1987)定义的CDRs 
“AbM”是指Oxford Molecular’s AbM抗体建模软件定义的CDRs 
本发明有用的优选抗-EGFR抗体具有来自于人源化免疫球蛋白的重链和轻链可变结构域构架序列。 
本发明有用的其它优选抗-EGFR抗体包含根据SEQ ID NO：36的大鼠ICR62抗体的重链可变结构域(VH)，或其变体；和非-鼠多肽。另外，优选的抗-EGFR抗体可包含根据SEQ ID NO：37的大鼠ICR62抗体的轻链可变结构域(VL)，或其变体；和非-鼠多肽。 
本发明有用的更优选的抗-EGFR抗体包含SEQ ID NO：38的重链可变结构域和SEQ ID NO：39的轻链可变结构域。 
优选的抗-EGFR抗体的重链和轻链可变结构域氨基酸序列显示于表3中。本发明有用的优选抗-EGFR抗体还可以包含与表3中显示的那些具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或具有保守氨基酸置换的表3中显示的氨基酸序列。 
表3.优选抗-EGFR抗体的重链和轻链可变结构域氨基酸序列。 
Figure BDA0000085113740000101
本发明有用的优选抗-EGFR抗体是灵长类化的(primatized)，或更优选地，人源化的抗体。 
优选地，本发明有用的抗-EGFR抗体包含人Fc区。更优选的，人重链恒定区是Igγ-1，如SEQ ID NO：40所示，即所述抗体是人IgG1亚类。 
人重链恒定区Igγ-1氨基酸序列(SEQ ID NO：40)： 
TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 
然而，也考虑了人Fc区的变体和同种型。例如，适合本发明中使用的变体Fc区可以根据授予Presta的美国专利号6,737,056(由于一个或多个氨基酸修饰具有改变的效应子功能的Fc区变体)；或美国专利申请号60/439,498；60/456,041；60/514,549；或WO 2004/063351(由于氨基酸修饰具有增加的结合亲和力的变体Fc区)；或美国专利申请号10/672,280或WO2004/099249(由于氨基酸修饰具有改变的结合FcγR的Fc变体)中教导的方法产生，其中每个的完整内容通过引用并入本文。 
在另一个优选实施方案中，本发明有用的抗-EGFR抗体已经被糖改造(glycoengineered)为具有在Fc区中改变的寡糖结构。 
具体地，与非-糖改造抗体相比，优选的抗-EGFR抗体在Fc区具有增 加比例的非岩藻糖基化的寡糖。优选地，非岩藻糖基化的寡糖的百分比是至少20％，更优选至少50-70％，最优选至少75％。具有所述百分比非岩藻糖基化寡糖的本发明有用的抗-EGFR抗体还称为部分岩藻糖基化的。非岩藻糖基化的寡糖可以是杂合型或复合(complex)型。 
优选的抗-EGFR抗体可以还具有在Fc区的增加比例的平分型(bisected)寡糖。优选地，抗体Fc区中的平分型寡糖的百分比是总寡糖的至少50％，更优选地，至少60％，至少70％，至少80％，或至少90％，和最优选地至少90-95％。 
特别优选的抗-EGFR抗体在Fc区具有增加比例的平分型的、非岩藻糖基化的寡糖。平分型、非岩藻糖基化的寡糖可以是杂合的或复合的。具体地，优选的抗-EGFR抗体是其中在抗体Fc区中至少15％，更优选地至少20％，更优选地至少25％，更优选地至少30％，更优选地至少35％的寡糖是平分型的、非岩藻糖基化的。 
优选的抗-EGFR抗体的特征还在于它们已经被糖改造(glycoengineered)从而具有增加的效应子功能和/或增加的Fc受体结合亲和力。 
优选地，增加的效应子功能是下述一项或多项：增加的Fc-介导的细胞毒性(包括增加的抗体-依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC))，增加的抗体-依赖性细胞吞噬作用(ADCP)，增加的细胞因子分泌，增加的免疫-复合物-介导的通过抗原呈递细胞的抗原摄取，增加的与自然杀伤(NK)细胞的结合，增加的与巨噬细胞的结合，增加的与单核细胞的结合，增加的与多形核细胞的结合，增加的直接信号传导诱导凋亡，增加的靶-结合抗体的交联，增加的树突状细胞成熟，或增加的T细胞致敏。增加的Fc受体结合亲和力优选地是增加的与Fcγ激活受体结合，最优选是增加的与FcγRIIIa的结合。 
本发明有用的最优选的抗-EGFR抗体的特征在于其包含SEQ IDNO：38的重链可变结构域和SEQ ID NO：39的轻链可变结构域，是人源化的，并且包含如SEQ ID NO：40所示的人重链恒定区Igγ-1。这种抗体称为“GlycArt-mAb”。GlycArt-mAb可以是或不是部分岩藻糖基化的，即如上文所述的糖改造的，从而与非-糖改造的抗体相比在Fc区具有增加比例的非 岩藻糖基化的寡糖。 
产生和分离单克隆抗体和抗体片段的技术，人源化非-人抗体的方法，以及重组产生和纯化抗体的程序是本领域熟知的。此类技术的描述，包括相关的文献在例如WO 2006/082515中给出。 
已知数种机制参与针对生长因子受体如EGFR的抗体的治疗功效。这些包括结合它们受体的配体(例如，EGF，TGF-α等)的阻断和随后激活信号传导途径，抗体依赖性细胞-介导的细胞毒性(ADCC)，补体-依赖性细胞毒性(CDC)和诱导生长停滞，凋亡或终末分化。 
本发明有用的人源化抗-EGFR IgG1抗体的治疗功效可通过在这样的宿主细胞中产生它而增强，所述宿主细胞还表达编码具有β(1，4)-N-乙酰葡糖胺转移酶III(GnTIII)活性的多肽的多核苷酸，如WO 2006/082515中所描述的，其产生在Fc区具有降低比例的岩藻糖基化的寡糖的抗体(称为“部分岩藻糖基化的”抗体)。在优选方面中，所述具有GnTIII活性的多肽是包含GnTIII的催化结构域和异源高尔基体驻留多肽(Golgi resident polypeptide)的高尔基体定位结构域的融合多肽，所述高尔基体定位结构域如甘露糖苷酶II、甘露糖苷酶I，β(1，2)-N-乙酰葡糖胺转移酶I(GnTI)，β(1，2)-N-乙酰葡糖胺转移酶II(GnTII)或α1-6核心岩藻糖基转移酶，优选甘露糖苷酶II或GnTI的高尔基体定位结构域。产生此类融合多肽和使用它们产生具有增加的效应子功能的抗体的方法在美国临时专利申请号60/495,142和美国专利申请公开号2004/0241817A1中公开，其每个的全部内容通过引用并入本文。 
部分岩藻糖基化的人源化抗-EGFR IgG1抗体由于寡糖修饰表现出增加的Fc受体结合亲和力和/或增加的效应子功能。优选地，增加的Fc受体结合亲和力是增加的与Fcγ激活受体，如FcγRIIIa受体的结合。增加的效应子功能优选是下述一项或多项的增加：增加的Fc-介导的细胞毒性(包括增加的抗体-依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC))，增加的抗体-依赖性细胞吞噬作用(ADCP)，增加的细胞因子分泌，增加的免疫-复合物-介导的通过抗原呈递细胞的抗原摄取，增加的与NK细胞的结合，增加的与巨噬细胞的结合，增加的与多形核细胞(PMNs)的结合，增加的与单核细胞的结合，增加的靶-结合抗体的交联，增加的直接信号传导诱导凋亡，增加的树 突状细胞成熟，和增加的T细胞致敏。 
部分岩藻糖基化的抗体可在表达编码所述抗体的多核苷酸和编码具有GnTIII活性的多肽的多核苷酸，或包含此类多核苷酸的载体的宿主细胞中产生。在所述宿主细胞中产生人源化抗-EGFR IgG1抗体包括下述步骤(a)在允许产生所述抗体的条件下培养宿主细胞，该宿主细胞被改造以表达至少一个编码具有GnTIII活性的多肽的核酸，其中所述具有GnTIII活性的多肽以这样的量表达，所述量足以修饰由所述宿主细胞产生的所述抗体的Fc区中的寡糖；和(b)分离所述抗体。 
多种宿主细胞和表达载体系统可用于产生抗体并且是本领域熟知的。用于表达本发明有用的人源化EGFR IgG1抗体的适当的宿主细胞包括培养的细胞，例如培养的哺乳动物细胞如CHO细胞，HEK293-EBNA细胞，BHK细胞，NS0细胞，SP2/0细胞，YO骨髓瘤细胞，P3X63小鼠骨髓瘤细胞，PER细胞，PER.C6细胞或杂交瘤细胞，大肠杆菌(E.coli)细胞，酵母细胞，昆虫细胞，和植物细胞，仅列举一些，也包括转基因动物、转基因植物或培养的植物或动物组织中包含的细胞。关于产生人源化抗-EGFR IgG1抗体的详细信息可在WO 2006/082515中和其中引用的文献中找到。 
本发明提供用于在治疗癌症中组合应用的人源化抗-EGFR IgG1抗体(如上文所描述)和伊立替康。所述人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康可一起或分开，同时或顺序，在相同或不同制剂中，通过相同或不同途径，和伴有或不伴有另外的治疗剂或治疗(如其它抗癌剂或放射疗法)来施用。 
本发明还包括药物组合物，特别是用于在治疗癌症中应用的药物组合物，其包含作为活性成分的人源化抗-EGFR IgG1抗体，如上文所描述的，和伊立替康，药用载体和任选地一种或多种其它治疗活性成分或辅药。其它治疗剂可包括细胞毒性剂，化疗剂或抗癌剂，或增强此类药剂的效应的药剂。 
本文下述实施例中呈现的数据证明与人源化抗-EGFR IgG1抗体一起共施用伊立替康对治疗晚期癌症如非小细胞肺癌(NSCLC)是有效的。因此，本发明提供治疗癌症的方法，特征在于治疗有效量的人源化抗-EGFRIgG1抗体(如上文所描述)和伊立替康的组合被施用给需要此类治疗的受试者。人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康(下文称为“活性剂”)的组合的治 疗有效量可以是每种活性剂的治疗有效量。备选地，为了减少由癌症的治疗导致的副作用，人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康的组合的治疗有效量可以是这样的量，即有效产生加成或超加成或协同抗肿瘤效应，和在组合时有效抑制肿瘤生长但是如果它们单独使用可以是所述活性剂中的一个或两个的低于治疗量(sub-therapeutic amount)的两种活性剂的量。优选地，在根据本发明的癌症的治疗方法中，所述人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康意欲用于一起或分开，同时或顺序，在相同或不同制剂中，通过相同或不同途径和伴有或不伴有另外的药剂或治疗(如其它抗癌药物或放射疗法)施用给患者。 
本发明还提供制备用于治疗癌症的药物的方法，特征在于使用治疗有效量的人源化抗-EGFR IgG1抗体(如上文描述的)和伊立替康的组合，所述人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康意欲用于一起或分开，同时或顺序，在相同或不同制剂中，通过相同或不同途径和伴有或不伴有另外的药剂或治疗施用给患者。如上文所述，人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康的组合的治疗有效量可以是每种活性剂的治疗有效量，或两种活性剂的这样的量，即有效产生加成或超加成或协同抗肿瘤效应，和在组合时有效抑制肿瘤生长但是如果它们单独使用可以是所述活性剂中的一个或两个的低于治疗量的两种活性剂的量。 
本发明还提供用于治疗癌症的包含单个容器的试剂盒，所述单个容器包含人源化抗-EGFR IgG1抗体(如上文所述)和伊立替康两者。本发明还提供试剂盒，其包含含有人源化抗-EGFR IgG1抗体(如上文所述)的第一容器和含有伊立替康的第二容器。在优选的方面中，所述试剂盒容器可以还包括药用载体。所述试剂盒可以还包含无菌稀释剂，其优选存储在分开的另外的容器中。所述试剂盒可以还包含包装说明书，该包装说明书包括指导应用所述组合治疗作为治疗癌症的方法的印刷的说明书。 
本发明意欲用于治疗癌症。因此，需要的受试者是人，马，猪，牛，小鼠，大鼠，犬，猫，鸟或其它温血动物，优选人，其需要治疗癌症或癌前病症或损伤。癌症优选是任何通过施用人源化抗-EGFR IgG1抗体(如上文所述)和伊立替康的组合可部分或完全治疗的癌症，即与EGFR表达相关的病症，特别是细胞增殖病症，其中表达EGFR，更特别地其中异常表 达(例如过表达)EGFR。所述的癌症可以是例如肺癌(lung cancer)，非小细胞肺癌(non small cell lung cancer(NSCLC))，细支气管肺泡癌(bronchioloalveolar carcinoma)，骨癌(bone cancer)，胰腺癌(pancreatic cancer)，皮肤癌(skin cancer)，头或颈癌(cancer of the head or neck)，鳞状细胞癌(squameous cell carcinoma)，皮肤或者眼球内黑素瘤(cutaneous or intraocular melanoma)，子宫癌(uterine cancer)，卵巢癌(ovarian cancer)，结肠直肠癌(colorectal cancer)，直肠癌(rectal cancer)，肛门区癌(cancer of the anal region)，胃癌(stomach cancer)，胃癌(gastric cancer)，结肠癌(colon cancer)，乳腺癌(breast cancer)，子宫癌(uterine cancer)，输卵管癌(carcinoma of the fallopian tubes)，子宫内膜癌(carcinoma of the endometrium)，宫颈癌(carcinoma of the cervix)，阴道癌(carcinoma of the vagina)，外阴癌(carcinoma of the vulva)，霍奇金病(Hodgkin′s Disease)，食道癌(cancer of the esophagus)，小肠癌(cancer of the small intestine)，内分泌系统癌(cancer of the endocrine system)，甲状腺癌(cancer of the thyroid gland)，甲状旁腺癌(cancer of the parathyroid gland)，肾上腺癌(cancer of the adrenal gland)，软组织癌(sarcoma of soft tissue)，尿道癌(cancer of the urethra)，阴茎癌(cancer of the penis)，前列腺癌(prostate cancer)，膀胱癌(cancer of the bladder)，肾或输尿管癌(cancer of the kidney or ureter)，肾细胞癌(renal cell carcinoma)，肾盂癌(carcinoma of the renal pelvis)，间皮瘤(mesothelioma)，肝细胞癌(hepatocellular cancer)，胆管癌(biliary cancer)，慢性或者急性白血病(chronic or acute leukemia)，淋巴细胞淋巴瘤(lymphocytic lymphomas)，中枢神经系统(CNS)瘤(neoplasms)，脊椎瘤(spinal axis tumors)，脑干神经胶质瘤(brain stem glioma)，多形性成胶质细胞瘤(glioblastoma multiforme)，星形细胞瘤(astrocytomas)，神经鞘瘤(schwanomas)，室管膜细胞瘤(ependymonas)，成神经管细胞瘤(medulloblastomas)，脑脊膜瘤(meningiomas)，鳞状细胞癌(squamous cell carcinomas)，垂体腺瘤(pituitary adenoma)，包括任何上述癌症的顽疾，或一种或者多种上述癌症的组合。还包括癌症转移瘤(cancer metastases)。癌前病症或者损伤包括例如由下列组成的组：口腔白斑(oral leukoplakia)，光化性角化病(actinic keratosis)(日光性角化病(solar keratosis))，结肠或者直肠的癌前息肉(precancerous polyps)，胃上皮发育不 良(gastric epithelial dysplasia)，腺瘤发育不良(adenomatous dysplasia)，遗传性息肉结肠癌综合征(hereditary nonpolyposis colon cancer syndrome(HNPCC))，巴雷特食管(Barrett′s esophagus)，膀胱发育不良(bladder dysplasia)，和前癌颈病(precancerous cervical conditions)。优选地，所述的癌症是肺癌或结肠直肠癌，最优选非小细胞肺癌(NSCLC)。 
在本发明的一些方面，人源化抗-EGFR IgG1抗体(如上文所述)和伊立替康可与一种或多种抗癌剂组合施用。优选地，所述抗癌剂可选自下述组：微管破坏剂(microtubule disruptors)(例如长春花生物碱(vinca alkaloids)如长春碱(vinblastine)或长春新碱(vincristine)，紫杉烷类(taxanes)如多西他赛(docetaxel)或紫杉醇(paclitaxel)，埃坡霉素(epothilones)如伊沙匹隆(ixabepilone))，抗代谢物(antimetabolites)(例如抗叶酸(anti-folates)如甲氨蝶呤(methotrexate)或氨基蝶呤(aminopterin)，抗嘌呤(anti-purines)如氟达拉滨(fludarabine)，6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine)或6-硫鸟嘌呤(6-thioguanine)，抗嘧啶(anti-pyrimidines)如5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)，卡培他滨(capecitabine)或吉西他滨(gemcitabine)，羟脲(hydroxyurea))，拓扑异构酶抑制剂(topoisomerase inhibitors)(例如喜树碱(camptothecin)，托泊替康(topotecan)，或鬼臼毒素(podophyllotoxins)如依托泊苷(etoposide))，DNA插入剂(DNA intercalators)(例如多柔比星(doxorubicin)，柔红霉素(daunorubicin)，放线菌素(actinomycin)，博来霉素(bleomycin))，烷化剂(alkylating agents)(例如环磷酰胺(cyclophosphamide)，苯丁酸氮芥(chlorambucil)，亚硝基脲(nitrosureas)如卡莫司汀(carmustine)，或尼莫司汀(nimustine)，链佐星(streptozocin)，白消安(busulfan)，顺铂(cisplatin)，奥沙利铂(oxaliplatin)，曲他胺(triethylenemelamine)，达卡巴嗪(dacarbazine))，激素疗法(hormonal therapies)(例如糖皮质激素(glucocorticoids)，芳香酶抑制剂(aromatase inhibitors)如他莫昔芬(tamoxifene)，抗雄激素(antiandrogens)如氟他胺(flutamide)，促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone，GnRH)类似物如亮丙立德(leuprolide)，抗生素，激酶抑制剂(例如erlotinib，gefitinib，imatinib)，受体拮抗剂，酶抑制剂(例如细胞周期蛋白-依赖性激酶(CDK)抑制剂)，氨基酸-消除酶(amino acid-depleting enzymes)(例如天冬酰胺酶)，亚叶酸(leucovorin)，类视黄酸类(retinoids)，肿瘤细胞凋亡激活剂和 抗血管生成剂(antiangiogenic agents)。 
本发明有用的人源化抗-EGFR IgG1抗体也可缀合细胞毒性剂如化疗剂，毒素(例如细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素，或其片段)，放射性同位素，或细胞毒性剂的前药。 
本发明中使用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康，或根据本发明的药物组合物可以以任何本领域已知的有效方式进行给予，诸如经口，局部，静脉内，腹膜内，淋巴管内，肌肉内，关节内，皮下，鼻内，眼内，阴道，直肠或者真皮内途径，或通过注射直接到肿瘤中。施用途径的选择取决于所要治疗癌症的种类，和处方医生的医学判断，如基于，例如，已经公开的临床研究结果。人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康可通过相同或不同途径施用。优选地，本发明使用的人源化抗-EGFR IgG1抗体意欲用于肠胃外施用，并且本发明中使用的伊立替康意欲用于肠胃外或口服施用。优选地，根据本发明的药物组合物，或本发明中使用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康如果通过相同途径施用，经肠胃外施用，最优选静脉内施用。本发明中使用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康或根据本发明的药物组合物可通过控制释放的方法和/或递送装置施用。 
根据本发明，人源化抗-EGFR IgG1抗体(如上文所述)和伊立替康的组合应当以治疗有效量施用，意思是每种活性剂以治疗有效剂量给予，或所述两种活性剂的量有效产生加成或超加成或协同抗肿瘤效应，从而在组合时它们有效抑制肿瘤生长，尽管如果所述治疗剂单独使用它们将是低于治疗量。 
本发明的组合的化合物的剂量水平将大概如下文所述，或如本领域对这些化合物的描述。本发明中使用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康或根据本发明的药物组合物的最有效的施用方式和给药方案取决于多种因素，包括疾病的严重性和过程，患者的一般健康，年龄，体重，性别，饮食和对治疗的应答，施用的时间和途径，排泄率，与其它药物的组合和治疗医师的判断。因此，人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康或组合物的剂量应当根据个体患者滴定测量。然而，用于本发明的人源化抗-EGFRIgG1抗体的治疗有效剂量将一般在大约0.01至大约2000mg/kg的范围。典型地，每剂肠胃外施用的抗体的治疗有效量将在每天大约1至25mg/kg 患者体重的范围。在一个方面中，有效剂量在大约1.0mg/kg至大约25.0mg/kg的范围。在更具体的方面，剂量在大约1.5mg/kg至大约15mg/kg的范围。在其它方面，剂量在大约1.5mg/kg至大约4.5mg/kg的范围，或在大约4.5mg/kg至大约15mg/kg的范围。本发明的剂量也可以是这些范围中的任何剂量，包括但不限于1.0mg/kg，1.5mg/kg，2.0mg/kg，2.5mg/kg，3.0mg/kg，3.5mg/kg，4.0mg/kg，4.5mg/kg，5.0mg/kg，5.5mg/kg，6.0mg/kg，6.5mg/kg，7.0mg/kg，7.5mg/kg，8.0mg/kg，8.5mg/kg，9.0mg/kg，9.5mg/kg，10.0mg/kg，10.5mg/kg，11.0mg/kg，11.5mg/kg，12.0mg/kg，12.5mg/kg，13.0mg/kg，13.5mg/kg，14.0mg/kg，14.5mg/kg，或15.0mg/kg。本发明中使用的伊立替康的治疗有效剂量将一般在大约0.1至大约2000mg/kg的范围。典型地，每剂肠胃外施用的伊立替康的治疗有效量将在每天大约1至25mg/kg患者体重的范围，或在大约10至大约1000mg/m2的范围。在更具体的方面，伊立替康的有效剂量在大约1至大约10mg/kg的范围，或在大约20至大约500mg/m2的范围。本发明的剂量也可以是这些范围中的任何剂量，包括但不限于1.0mg/kg，1.5mg/kg，2.0mg/kg，2.5mg/kg，3.0mg/kg，3.5mg/kg，4.0mg/kg，4.5mg/kg，5.0mg/kg，5.5mg/kg，6.0mg/kg，6.5mg/kg，7.0mg/kg，7.5mg/kg，8.0mg/kg，8.5mg/kg，9.0mg/kg，9.5mg/kg，10.0mg/kg，或包括但不限于25mg/m2，50mg/m2，75mg/m2，100mg/m2，125mg/m2，150mg/m2，175mg/m2，200mg/m2，225mg/m2，250mg/m2，275mg/m2，300mg/m2，325mg/m2，350mg/m2，375mg/m2，400mg/m2，425mg/m2，450mg/m2，475mg/m2，500mg/m2。 
然而，如上所述，人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康的这些建议的量受限于大量的治疗判断。选择适当剂量和时间表制定的关键因素是所获得的结果，如上所示。例如，对于治疗进行性和急性疾病可能最初需要相对更高的剂量。为了获得最有效的结果，根据疾病或病症，拮抗剂尽可能接近疾病或病症的第一体征，诊断，表现或出现施用或在疾病或病症的缓和过程中施用。 
在用于治疗肿瘤的抗-EGFR抗体的情况中，用足以完全饱和靶细胞上的EGF受体的剂量一般已经获得最佳治疗结果。获得饱和需要的剂量将取决于每个肿瘤细胞表达的EGF受体的数目(其可根据不同肿瘤类型有显 著变化)。低至30nM的血清浓度在治疗一些肿瘤中已经是有效的，而对于其它肿瘤高于100nM的浓度对获得最佳治疗效应可能是必需的。对于给定肿瘤获得饱和需要的剂量可通过放射免疫测定法或免疫沉淀体外容易地确定。 
在一些情况中，本发明的剂量可通过使用预测性生物标志来确定。预测性生物标志是分子标志，其用于确定(即观察和/或定量)肿瘤相关基因或蛋白的表达和/或激活模式，或肿瘤相关信号传导途径的细胞组分。阐明肿瘤组织中靶向疗法的生物学效应和将这些效应与临床应答相关联帮助鉴定肿瘤中工作的主要生长和存活途径，由此建立可能的应答物的概况并且相反地提供克服抵抗的设计策略的原理。例如，抗-EGFR疗法的生物标志可包括EGFR下游信号传导途径的导致细胞增殖病症的分子，包括但不限于Akt，RAS，RAF，MAPK，ERK1，ERK2，PKC，STAT3，STAT5(Mitchell，Nat Biotech(自然生物技术)22，363-364(2004)；Becker，Nat Biotech(自然生物技术)22；15-18(2004)；Tsao和Herbst，Signal(信号)4，4-9(2003))。抗-EGFR疗法的生物标志也可以包括生长因子受体如EGFR，ErbB-2(HER2/neu)，和ErbB-3(HER3)，并且可以是患者对抗-EGFR疗法的正性或负性预测物。例如，生长因子受体ErbB-3(HER3)被确定为对于抗-EGFR抗体ABX-EGF(美国专利申请公开号2004/0132097A1)的负性预测性生物标志。 
预测性生物标志可根据本领域熟知的测定法测量，包括但不限于通过实时反转录PCR或基于微阵列的转录谱分析检测和/或定量RNA，通过免疫组化，流式细胞计量术，免疫荧光，捕获-和-检测测定法，蛋白质印迹，ELISA，反向测定法和/或在美国专利申请公开号2004/0132097A1中所述的测定法检测和/或定量蛋白质，该申请的完整内容通过引用并入本文。抗-EGFR疗法的预测性生物标志可根据美国专利申请公开号2003/0190689A1中所述的技术进行鉴定，该申请的完整内容通过引用并入本文。 
在一方面中，本发明提供治疗EGFR-相关病症的方法，包括通过用一种或多种检测EGFR相关病症(如癌症)预测性生物标志的表达和/或激活的试剂在治疗前测定来自于人受试者的样品，从而预测需要治疗的人受试者 中对抗-EGFR治疗的应答；确定一种或多种所述预测性生物标志的表达和/或激活模式，其中所述模式预测所述人受试者对抗-EGFR治疗的应答；和向被预测对抗-EGFR治疗正性应答的人受试者施用治疗有效量的包含人源化抗-EGFR IgG1抗体的组合物。用于本文中时，“被预测对抗-EGFR治疗正性应答的人受试者”是这样的受试者，对其抗-EGFR将对于EGFR相关病症具有可测量的效应(例如肿瘤退化/收缩)和对其抗-EGFR治疗的益处不被副作用(例如毒性)超过。用于本文时，样品意思是任何来自于生物体(特别是人)的生物学样品，包括一个或多个细胞，包括任何来源的单个细胞，组织或活检样品，其已经从器官如乳房，肺，胃肠道，皮肤，子宫颈，卵巢，前列腺，肾，脑，头和颈或身体的任何其它器官或组织移除，和其它身体样品，包括但不限于涂片，痰，分泌物，脑脊液，胆汁，血液，淋巴液，尿和粪便。 
为本发明的目的，人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康的“共施用”，“共同施用”，“施用组合”和“组合”指的是两种活性剂分开或者一起的任何施用，其中两种活性剂作为设计获得组合治疗疗效的合适剂量方案的一部分施用。因此，可以将这两种活性剂或者作为相同药物组合物的部分或者作为分开的药物组合物给予。伊立替康可以先于、同时或者后于人源化抗-EGFR IgG1抗体的施用，或者以其某种组合施用。当以重复的间隔(例如在一个标准疗程中)将人源化抗-EGFR IgG1抗体施用给患者时，可以将伊立替康先于、同时、或者后于人源化抗-EGFR IgG1抗体或其某种组合的每次施用，或者以相对于人源化抗-EGFR IgG1抗体治疗的不同间隔，或者以单一剂量先于、在期间的任何时间、或者后于人源化抗-EGFR IgG1抗体疗程给予。 
典型地将人源化抗-EGFR IgG1抗体以这样的剂量方案给予患者，该方案提供了对待治疗患者最有效的癌症的治疗(同时从功效和安全角度考虑)，如本领域已知的和例如国际专利公开号WO 2006/082515中所公开。 
如上文所讨论的，施用的人源化抗-EGFR IgG1抗体的量和抗体施用的时机取决于被治疗患者的类型(种类，性别，年龄，重量，等等)和状态，被治疗疾病或者病症的严重度，和施用途径。例如，人源化抗-EGFR IgG1抗体可以0.1-100mg/kg体重每天/或者每周的单独或者分开的剂量范围， 或者通过连续输液施用给患者。在一些情况下，低于前述剂量范围下限的剂量水平可以是足够的，而在另一些情况下，可以使用更大的剂量而不引起任何有害的副作用，条件是这些更大的剂量在全天给予前首先被分成几个小剂量。对于施用伊立替康的量和伊立替康施用的时机上述同样是正确的。 
根据本发明使用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康可以分别或者同时以相同或者不同的途径、以广泛种类的各种剂型施用。 
本发明中使用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康两者，以及根据本发明的药物组合物可以多种剂型，其包括但不限于液体溶液或悬浮液，乳剂，片剂，丸剂，糖锭剂，粉剂，软膏剂，乳膏剂，栓剂或埋植剂。用于本发明的人源化抗-EGFR IgG1抗体和/或伊立替康或根据本发明的组合物也可包埋于微囊剂中，所述微囊剂是例如通过团聚技术或通过界面聚合制备的，例如分别在胶体药物递送系统(例如，脂质体，白蛋白微球体，微乳剂，纳米颗粒和纳米胶囊)或在粗乳状液(macroemulsion)中的羟甲基纤维素或明胶微囊剂和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊剂。此类技术在雷明顿药物科学(Remington′s Pharmaceutical Sciences)，第16版，Mack Pub.Co.(1980)中公开。优选的剂型取决于施用方式和治疗应用。典型地，用于本发明的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康或根据本发明的药物组合物将在可注射或可输注溶液中施用。可注射或可输注制剂必须是无菌的，其通过无菌滤膜过滤容易地实现。 
可以制备持续释放制剂，如膜控制持续释放系统或基于聚合物的基质系统。持续释放基质的实例包括聚酯，水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯))，或聚(乙烯醇)，聚交酯(美国专利号3,773,919)，L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物，不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙立德构成的可注射的微球体)，和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。 
本发明中使用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康或根据本发明的药物组合物可以大量或以制药领域所熟知的任何方法制备的单位剂型方便地给出。此类单位剂型可以是例如适合口服施用的(胶囊，扁囊剂，片剂等)并且每种含有预定量的活性成分。 
本发明中使用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康以及根据本发明的药物组合物将以符合良好医学实践的方式配制，给药和施用。 
本发明使用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康以及根据本发明的药物组合物的最佳制剂将取决于被治疗的特定疾病或病症，被治疗的特定哺乳动物，个体患者的临床状况，疾病或病症的原因，药剂的递送位点，施用途径(例如肠胃外，口服，局部，直肠)，施用的时间表编制和医学执业者已知的其它因素。 
应该对所有制剂进行选择以避免所述人源化抗-EGFR IgG1抗体变性和/或降解和丧失生物活性和/或保存伊立替康的完整性和生物学活性。 
在实践中，依照常规药物混合技术，可以将本发明中使用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和/或伊立替康组合作为活性组分与药学载体紧密掺合。该载体可以采取广泛种类的形式，这取决于期望用于施用，例如肠胃外(包括静脉内)施用的制剂的类型。使用的药物载体可以是例如固体、液体、或者气体。固体载体的实例包括乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、和硬脂酸。液体载体的实例是糖浆、花生油、橄榄油和水。气体载体的实例包括二氧化碳和氮气。除了载体成分，如果合适药物制剂还可以含有其它成分如缓冲剂，稀释剂，溶剂，稳定剂，抗氧化剂，使制剂等渗的试剂，调味剂，粘合剂，表面活性剂，增稠剂，润滑剂，防腐剂，湿润剂，乳化剂，分散剂，分解片剂的试剂等等。所述制剂可通过任何药学方法制备。 
适合注射的含有本发明使用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和/或伊立替康或根据本发明的药物组合物的药物制剂包括无菌水溶液或分散体。此外，活性剂和组合物可以无菌粉末的形式用于临时制备这样的无菌可注射溶液或者分散体。在所有情况下，最终的可注射形式必须是无菌的并且必须是有效的流体以方便注射。制剂必须在制备和储存条件下是稳定的；因此，其优选应该以防止微生物如细菌和真菌的污染作用的方式保存。所述的载体可以是溶剂或者分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油，丙二醇和液体聚乙二醇)，植物油及其适当的混合物。 
对于肠胃外施用任何一种或者全部所述的活性剂，可以使用芝麻油或者花生油中的溶液，或者使用水性丙二醇中的溶液，以及含有所述活性剂 或其相应的水溶性盐的无菌水性溶液。该无菌水性溶液被优选适当地缓冲(例如，用组氨酸、乙酸盐或磷酸盐缓冲剂)并还优选赋予等渗(例如，用充足的盐水或者葡萄糖)。这些特别的水性溶液特别适于静脉内、肌肉内、皮下和腹膜内注射用。油性溶液适用于关节内、肌肉内和皮下注射用。所有这些溶液在无菌条件下的制备通过本领域技术人员熟知的标准制药技术可以很容易地实现。 
含有人源化抗-EGFR IgG1抗体和/或伊立替康的治疗制剂通过将具有需要纯度的活性成分与任选的药用载体、溶剂、赋形剂或稳定剂混合来制备(雷明顿药物科学(Remington′s Pharmaceutical Sciences)第16版，Mack Pub.Co.(1980))。它们可以冻干制剂或水溶液的形式储存。可接受的载体、溶剂、赋形剂或稳定剂在所用的剂量和浓度对于受者是无毒的，并且包括，例如，缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐、组氨酸、乙酸盐和其他有机酸；抗氧化剂包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如氯化十八烷基二甲基苄基铵；六甲氯铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚，丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯如对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲苯酚)；低分子量(少于约10个残基)的多肽；蛋白质如血清白蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇(PEG)；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖；二糖和其它碳水化合物包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂如EDTA；糖如蔗糖，甘露醇，海藻糖或山梨糖醇；形成盐的平衡离子如钠；金属复合物(例如锌蛋白复合物)；和/或非离子表面活性剂如聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯(TWEENTM)或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(PLURONICSTM)。 
WO 97/04801中描述了适合皮下施用的冻干制剂。此类冻干制剂可用适当的稀释剂重构成高蛋白浓度，重构的制剂可皮下施用给本文待治疗的哺乳动物。 
制备包含抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法是本领域中已知的，并在例如WO 2006/082515中描述。制备包含伊立替康的药物组合物的方法也是本领域中已知的(例如Rothenberg等，J Clin Oncol(临床肿瘤学杂志)11，2194-2204(1993)。制备包含人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立 替康的药物组合物的方法根据上述引用的出版物和根据其它已知的文献如Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Pub.Co.(1990)将是明显的。所述组合的组合物可通过任何药学方法制备。 
下文的实例更详细的解释本发明。给出下述制备和实例以便使得本领域技术人员更清楚地理解并实施本发明。然而，本发明不限于示例的方面的范围，所述示例的方面意欲仅作为本发明的单个方面的说明，功能等同的方法在本发明的范围内。事实上，除了本文描述的那些之外的本发明的各种修饰，根据上文和附图的描述对本领域技术人员将是明显的。此类修饰意欲落入所附的权利要求书的范围中。 
本文所用的术语如本领域通常所用的，除非如下另外指出。用于本文时，术语“抗体”意欲包括整个抗体分子，以及具有Fc区并保留结合特异性的抗体片段，和融合蛋白，所述融合蛋白包括等价于免疫球蛋白的Fc区的区域并保留结合特异性，所述整个抗体分子包括单克隆抗体，多克隆抗体和多特异性(例如，双特异性)的抗体。还包括保留结合特异性的抗体片段，包括但不限于VH片段，VL片段，Fab片段，F(ab’)2片段，scFv片段，Fv片段，小抗体(minibodies)，双抗体，三链抗体，和四链抗体(参见，例如Hudson和Souriau，Nat Med(自然医学)9，129-134(2003))。还包括遗传改造的，重组的，人源化的，灵长类化的和嵌合的抗体，以及来自于不同物种如小鼠或人的抗体。 
用于本文时，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”指单一氨基酸组成的抗体分子的制剂。因此，术语“人单克隆抗体”指显示单一结合特异性的抗体，其具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。在一个实施方案中，人单克隆抗体是通过杂交瘤产生的，所述杂交瘤包含获自转基因非人动物，例如转基因小鼠的B细胞，所述B细胞具有包含融合于无限增殖化细胞的人重链转基因和人轻链转基因的基因组。 
用于本文时，术语“人源化”用于指来自非人抗原结合分子，例如，鼠抗体的抗原结合分子，其保持或基本保持母体分子的抗原结合特性，但是在人中具有更少的免疫原性，例如嵌合抗体。免疫原性的降低可以通过各种方法来实现，所述方法包括(a)将整个非人的可变结构域移植到人恒定区上从而产生嵌合抗体，(b)仅将非人CDRs移植到人构架和恒定区上， 保留或不保留关键的构架残基(例如，对于保持良好的抗原结合亲和力或抗体功能是重要的那些)，(c)仅将非人特异性-决定区(SDRs；对于抗体-抗原相互作用关键的残基)移植到人构架和恒定区上，或(d)移植整个非人的可变结构域，但是通过表面残基的取代用人样切片来“遮蔽”它们。这些方法公开于Morrison等，Proc Natl Acad Sci USA(美国科学院院刊)81，6851-6855(1984)；Morrison和Oi，Adv Immunol(高级免疫学)44，65-92(1988)；Verhoeyen等，Science(科学)239，1534-1536(1988)；Padlan，Molec Immun(分子免疫学)28，489-498(1991)；Padlan，Molec Immun(分子免疫学)31(3)，169-217(1994)，Kashmiri等，Methods(方法)36，25-34(2005)，将它们的全文全部通过引用并入本文。在抗体的重链和轻链可变结构域中的每一个通常存在3个互补决定区，或CDRs，(CDR1，CDR2和CDR3)，其侧邻抗体的重链和轻链可变结构域的每个中的四个构架亚区域(即，FR1，FR2，FR3，和FR4)：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。人源化抗体的讨论可以，见于特别是美国专利号6,632,927，和公开的美国申请号2003/0175269中，将它们两者全文并入本文作为参考。 
类似地，用于本文时，术语“灵长类化”指这样的抗体，其来自非灵长类动物抗体，例如，鼠抗体，保留或基本保留母体分子的抗原结合性质，但是在灵长类动物中具有更少的免疫原性。 
用于本文时，“可变区”或“可变结构域”(轻链的可变区(VL)，重链的可变区(VH))表示直接参与抗体与抗原结合的每个轻链和重链对。人轻链和重链的可变结构域具有相同的一般结构并且每个结构域包括4个构架(FR)区，所述构架区的序列是广泛保守的，并通过三个“高变区”(或互补性决定区，CDRs)连接。所述构架区采取β-折叠构象并且所述CDRs可以形成连接β折叠结构的环。每条链中的CDRs通过构架区保持它们的三维结构并且与来自另一条链的CDRs一起形成抗原结合位点。抗体的重链和轻链CDR3区在可用于本发明的抗体的结合特异性/亲和力中具有特别重要的作用，并且因此提供本发明的另外的目标。 
用于本文时，术语“高变区”或“抗体的抗原结合部分”指负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。高变区包括“互补性决定区”或“CDRs”的氨基酸残基。“构架”或“FR”区是除本文中定义的高变区残基之外的那 些可变结构域区域。因此，抗体的轻链和重链的可变区从N端到C端包括结构域FR1，CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。特别地，重链的CDR3是最有助于抗原结合的区域。按照Kabat等，“免疫目的的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)”，第5版，公众健康服务，国家健康研究所(Public Health Service，National Institutes of Health)，Bethesda，MD.(1991))的标准定义和/或来自“高变环”的那些残基可以确定CDR和FR区域。 
在本领域使用和/或接受的术语存在两个或多个定义的情形中，用于本文时的术语的定义倾向于包括所有的这些含义，除非明确地以相反的意思指出。具体的实例是使用术语“互补决定区”(″CDR″)来描述在重链和轻链多肽的可变区中发现的非连续抗原结合位点。这种特别的区域已经在Kabat等，“免疫目的的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)”，National Institutes of Health(国家健康研究所)，Bethesda(1983)和Chothia等，J Mol Biol(分子生物学杂志)196，901-917(1987)中进行了描述，将它们通过引用并入本文，其中当针对彼此比较时，所述定义包括氨基酸残基的重叠或子集。但是，将任一定义用于指抗体或其变体的CDR的应用倾向于在本文所限定和使用的术语的范围内。涵盖如上面引用的参考文献的每个所定义的CDRs的适合的氨基酸残基在下面的表4中提出作为比较。涵盖特定CDR的精确残基数目将根据CDR的序列和大小而变化。给出抗体的可变区氨基酸序列时，本领域技术人员可以常规确定哪些残基包含特定的CDR。 
表4.CDR定义1
    Kabat   Chothia   AbM2
  VH CDR1   31-35   26-32   26-35
  VH CDR2   50-65   52-58   50-58
  VH CDR3   95-102   95-102   95-102
  VL CDR1   24-34   26-32   24-34
  VL CDR2   50-56   50-52   50-56
  VL CDR3   89-97   91-96   89-97
[0105]  1表5中的所有的CDR定义的编号是按照Kabat等(见下)的编号方式进行的。 
2″AbM″是指Oxford Molecular′s″AbM″抗体建模软件定义的CDRs。 
Kabat等还定义了用于可变结构域序列的编号系统，其可应用于任何抗体。本领域普通技术人员可以明确地将这种“Kabat编号”系统赋予任何可变结构域序列，而不依赖于超出序列本身之外的任何实验数据。用于本文时，“Kabat编号”指由Kabat等，“免疫目的的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)”，National Institutes of Health(国家健康研究所)，Bethesda(1983)所述的编号系统。除非另外指出，述及在抗原结合分子中具体氨基酸残基位点的编号是根据Kabat编号系统进行的。 
“恒定结构域”是抗体分子不同于可变区的部分。它们不直接参与将抗体与抗原结合，但是参与效应子功能(例如ADCC，CDC)。本发明有用的抗体的恒定结构域优选是IgG1同种型。具有这些特征的人恒定结构域在Kabat等，“免疫目的的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)”，National Institutes of Health(国家健康研究所)，Bethesda(1991)，和Brüggemann等，J Exp Med(实验医学杂志)166，1351-1361(1987)；Love等，Methods Enzymol(酶学方法)178，515-527(1989)中详细描述。本发明中有用的恒定结构域提供补体结合和Fc区结合。ADCC和任选地CDC通过可变结构域和恒定结构域的组合提供。 
用于本文时，术语“Fc区”意欲指IgG重链的C末端区。尽管IgG重链的Fc区的范围可以轻微变化，人IgG重链Fc区通常定义为从位点Cys 226的氨基酸残基延伸到羧基末端的一段序列。 
用于本文时，术语“等价于免疫球蛋白的Fc区的区域”意欲包括免疫球蛋白的Fc区的天然存在的等位基因变体以及具有改变的变体，所述改变产生置换，添加，或缺失，但是基本不会减少免疫球蛋白介导效应子功能(诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性)的能力。例如，在免疫球蛋白的Fc区域的N-末端或C末端可以缺失一个或多个氨基酸，而基本不丧失生物学功能。可以按照本领域已知的一般规则来选择这些变体从而对活性具有最小的影响。(参见，例如Bowie等，Science(科学)247，1306-1310(1990)。 
用于本文时，“具有GnTIII活性的多肽”指这样的多肽，所述多肽能够 催化以β-1-4连接将N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)残基添加到N-联寡糖中的三甘露糖基核心的β连接的甘露糖苷上。这包括融合多肽，所述多肽显示类似于但不必须相同于β(1，4)-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶III(按照国际生化和分子生物学联合会(NC-IUBMB)，其也被称为β-1，4-甘露糖基-糖蛋白4-β-N-乙酰葡糖胺-转移酶(EC 2.4.1.144))的活性的酶活性，如在具体的生物测定中所测量的，具有或不具有剂量依赖性。在其中确实存在剂量依赖性的情形中，其不需要与GnTIII的剂量依赖性相同，但是与GnTIII活性相比，基本类似于在给定活性中的剂量依赖(即，相对于GnTIII，候选多肽将显示更大的活性或不超过约25倍更少，并且优选地，不超过约10倍更少的活性，并且最优选地，不超过约三倍更少的活性)。 
用于本文时，术语“高尔基体定位结构域”指负责将多肽锚定在高尔基复合体的位置中的高尔基体定居多肽的氨基酸序列。通常，定位结构域包括酶的氨基末端“尾”。 
用于本文时，术语“宿主细胞”包括可以被改造从而产生本发明抗体的任何类型的细胞系统。在一个实施方案中，宿主细胞被改造以容许产生具有修饰糖形的抗体。优选地，所述宿主细胞已经被改造从而表达增加水平的具有GnTIII活性的一种或多种多肽。宿主细胞包括培养的细胞，例如培养的哺乳动物细胞如CHO细胞，HEK293-EBNA细胞，BHK细胞，NS0细胞，SP2/0细胞，YO骨髓瘤细胞，P3X63小鼠骨髓瘤细胞，PER细胞，PER.C6细胞或杂交瘤细胞，大肠杆菌(E.coli)细胞，酵母细胞，昆虫细胞和植物细胞，仅列举一些，也包括转基因动物、转基因植物或培养的植物或动物组织中包含的细胞。 
用于本文时，术语“效应子功能”指可归因于抗体的Fc区域(天然序列Fc区域或氨基酸序列变体Fc区域)的那些生物学活性。抗体效应子功能的实例包括，但不限于，Fc受体结合亲和力，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)，细胞因子分泌，免疫复合物介导的抗原呈递细胞的抗原摄取，细胞表面受体的下调等。 
用于本文时，术语“改造(engineer)”，“改造的(engineered)”，“进行改造(engineering)”，“糖基化改造(glycosylation engineering)”和“糖改造(glycoengineered)”包括天然存在或重组蛋白质，多肽或其片段的糖基化模 式的任何操作。糖改造包括细胞的糖基化机制的代谢改造，所述代谢改造包括对寡糖合成途径进行遗传操作从而获得改变的在这些细胞中表达的糖蛋白的糖基化。此外，糖改造包括突变和细胞环境对糖基化的效应。特别地，糖改造可导致改变的糖基转移酶活性，如改变的氨基葡萄糖转移酶和/或岩藻糖基转移酶活性。 
用于本文时，术语“Fc-介导的细胞毒性”包括抗体依赖性细胞介导的(有时也称为“细胞的”)细胞毒性(ADCC)和由包含人Fc-区域的可溶Fc-融合蛋白介导的细胞的细胞毒性。这是一种导致“人免疫效应细胞”裂解“抗体靶向细胞”的免疫机制，其中： 
“人免疫效应细胞”是在它们的表面上展示Fc受体的白细胞群，通过所述Fc受体它们结合于抗体或Fc-融合蛋白的Fc-区域并且执行效应子功能。这样的群可以包括，但不限于，外周血单核细胞(PBMC)和/或自然杀伤(NK)细胞。 
“抗体靶向细胞”是由抗体或Fc融合蛋白结合的细胞。抗体或Fc融合蛋白通过对于Fc区域来讲为N端的蛋白部分来结合于靶细胞。 
用于本文时，将术语“增加的Fc-介导的细胞的细胞毒性”定义为通过上述定义的Fc-介导的细胞的细胞毒性的机制，在围绕靶细胞的培养基中，以给定浓度的抗体，或给定浓度的Fc-融合蛋白，在给定时间内裂解的“抗体-靶向细胞”的数量的增加，和/或将其定义为通过Fc介导的细胞的细胞毒性的机制，在给定的时间内，获得给定数量的“抗体靶向细胞”的裂解所需要的在围绕靶细胞的培养基中抗体浓度，或Fc-融合蛋白的浓度的减少。Fc-介导的细胞的细胞毒性的增加是相对于这样的细胞毒性，其由相同的抗体或Fc-融合蛋白介导，由相同类型的宿主细胞产生，使用本领域那些技术人员已知的相同的标准产生，纯化，配制和贮存方法，但不是由通过本文所述的方法进行了改造从而表达糖基转移酶GnTIII的宿主细胞产生。 
所谓“具有增加的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的抗体”意为这样的抗体，如该术语在本文中定义地，其具有如通过本领域技术人员已知的任何适合方法确定的增加的ADCC。一个被接受的体外ADCC测定法如下： 
1)所述测定法使用靶细胞，已知所述靶细胞表达由抗体的抗原结合区识别的靶抗原；
2)所述测定法使用由随机选择的健康供体血液分离的人外周血单核细胞(PBMCs)，如效应细胞； 
3)所述测定法根据下述流程进行： 
i)使用标准密度离心方法分离PBMCs，并且以5x106细胞/ml悬浮在RPMI细胞培养基中； 
ii)靶细胞通过标准组织培养方法培养，从具有高于90％的存活力的指数生长期收获，在RPMI细胞培养基中洗涤，并用100微居的51Cr-标记，用细胞培养基洗涤2次，并以105细胞/ml的密度重悬于细胞培养基中； 
iii)将上述制备的100微升的最终靶细胞混悬液转移到96孔微量滴定板的每个孔中； 
iv)所述抗体在细胞培养基中从4000ng/ml系列稀释到0.04ng/ml并将50微升由此生成的抗体溶液加入96孔微量滴定板中的靶细胞中，一式三份地测试完全涵盖上述浓度范围的多种抗体浓度； 
v)对于最大的释放(MR)对照，含有标记的靶细胞的板中的3个另外的孔接受50微升的2％(v/v)非离子去垢剂的水溶液(Nonidet，西格玛(Sigma)，圣路易斯)，代替抗体溶液(上述iv点)； 
vi)对于自发的释放(SR)对照，含有标记的靶细胞的板中的3个另外的孔接受50微升的RPMI细胞培养基来代替抗体溶液(上述iv点)； 
vii)然后，将96孔微量滴定板以50xg离心1分钟并在4℃温育1小时； 
viii)将50微升的PBMC混悬液(上述i点)加入每个孔中，从而产生25∶1的效应细胞∶靶细胞比率，并将所述板置于5％CO2大气下，37℃的温箱中4小时； 
ix)收获来自每个孔的无细胞上清液，并使用γ-计数器量化通过实验释放的放射性(ER)； 
x)按照式(ER-MR)/(MR-SR)x100计算关于每种抗体浓度的特异性溶胞百分比，其中ER是关于该抗体浓度量化的平均放射性(见以上ix点)，MR是关于MR对照(见以上v点)量化的平均放射性(见以上ix点)，并且 SR是关于SR对照(见以上vi点)量化的平均放射性(见以上ix点)； 
4)“增加的ADCC”定义为在上述测试的抗体浓度范围内观察到的最大特异性溶胞百分比的增加，和/或获得在上述测试的抗体浓度范围内观察到的最大特异性溶胞百分比的一半所需要的抗体浓度的减少。ADCC的增加是相对于这样的ADCC，其使用上述测定法测量，由相同抗体介导，由相同类型的宿主细胞产生，使用本领域技术人员已知的相同标准生产、纯化、配制和贮存方法，，但是其尚未通过被改造为过表达GnTIII的宿主细胞产生。 
用于本文时，术语“变体”(或“类似物”)指通过使用，例如重组DNA技术产生的氨基酸插入，缺失，和置换而与本发明特别陈述的多肽区别开的多肽。本发明的抗体的变体包括嵌合的、灵长类化或人源化的抗体，其中氨基酸残基的一个或数个通过以这样的方式置换，添加和/或缺失进行修饰，所述方式基本上不影响抗原(例如，EGFR)结合亲和力。可以通过将特定多肽的序列与同源肽的序列进行比较并使在高同源性的区域(保守区域)中所作的氨基酸序列变化的数量最少化，或通过用共有序列来替代氨基酸来发现确定哪些氨基酸残基可以被取代，添加，或缺失而不会破坏目标活性的指导。 
或者，编码这些相同或类似多肽的重组变体可以通过使用在遗传密码中的“冗余性”来合成或选择。各种密码子置换，诸如产生各种限制性位点的沉默改变可以被引入从而优化克隆到质粒或病毒载体中，或在特定原核或真核系统中的表达。在多核苷酸序列中的突变可以反映在多肽或被加入多肽的其它肽的结构域中从而修饰多肽的任何部分的特性，从而改变特性诸如配体结合亲和力，链间亲和力，或降解/转换率。 
优选地，氨基酸“置换”是用具有相似结构和/或化学性质的另一个氨基酸取代一个氨基酸的结果，即保守性氨基酸取代。“保守性”氨基酸置换可以在涉及的残基的极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性和/或两亲性性质的相似性基础上进行。例如，非极性(疏水)氨基酸包括丙氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，色氨酸和甲硫氨酸；极性中性氨基酸包括甘氨酸，丝氨酸，苏氨酸，半胱氨酸，酪氨酸，天冬酰胺，和谷氨酰胺；带正电荷(碱性)的氨基酸包括精氨酸，赖氨酸和组氨酸；并 且带负电荷的(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。“插入”或“缺失”优选地在约1到20个氨基酸的范围内，更优选在1-10个氨基酸范围内。容许的变化可以使用重组DNA技术和测定得到的重组变体的活性，通过系统性在多肽分子中进行氨基酸插入，缺失或置换来实验性地进行确定。 
所谓具有与本发明的查询氨基酸序列有至少例如95％“同一性”的氨基酸序列的多肽，意指目标多肽的氨基酸序列与查询序列相同，除了目标多肽序列可以在查询氨基酸序列的每100个氨基酸中包括多到5个氨基酸改变以外。换言之，为了获得具有与查询氨基酸序列有至少95％同一性的氨基酸序列的多肽，在目标序列中多到5％的氨基酸残基可以被插入，缺失，或被另一个氨基酸置换。参比序列的这些改变可以发生在参比氨基酸序列的氨基或羧基末端位点，或在那些末端位点之间的任何地方，其单独散在参比序列的残基中或在参比序列的一个或多个连续组中。 
作为实践的问题，可以使用已知的计算机程序来常规确定是否任何特定的多肽与参比多肽具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％的同一性。确定在查询序列(本发明的序列)和目标序列之间的最佳全面匹配的优选方法，也被称为全域序列比对，可以使用基于Brutlag等，Comp App Biosci 6，237-245(1990)的算法的FASTDB计算机程序进行确定。 
用于本文时，术语“EGFR”是指人表皮生长因子受体(也称为HER-1或ErbB-1)(Ulrich等，Nature 309，418-425(1984)；SwissProt Accession#P00533；二级登记号：O00688，O00732，P06268，Q14225，Q68GS5，Q92795，Q9BZS2，Q9GZX1，Q9H2C9，Q9H3C9，Q9UMD7，Q9UMD8，Q9UMG5)，以及其天然存在的同种型和变体。这些同种型和变体包括但不限于，EGFRvIII变体，可变剪接产物(例如，SwissProt登记号P00533-1，P00533-2，P00533-3，P00533-4所标示的)，变体GLN-98，ARG-266，Lys-521，ILE-674，GLY-962，和PRO-988(Livingston等，NIEHS-SNPs，环境基因组计划(environmental genome project)，NIEHS ES15478，基因组科学部(Department of Genome Sciences)，西雅图，WA(2004))，和通过下列登记号标示的其它示例：NM_005228.3，NM_201282.1，NM_201283.1，NM_201284.1(REFSEQ mRNAs)；AF125253.1，AF277897.1，AF288738.1， AI217671.1，AK127817.1，AL598260.1，AU137334.1，AW163038.1，AW295229.1，BC057802.1，CB160831.1，K03193.1，U48722.1，U95089.1，X00588.1，X00663.1；H54484S1，H54484S3，H54484S2(MIPS assembly)；DT.453606，DT.86855651，DT.95165593，DT.97822681，DT.95165600，DT.100752430，DT.91654361，DT.92034460，DT.92446349，DT.97784849，DT.101978019，DT.418647，DT.86842167，DT.91803457，DT.92446350，DT.95153003，DT.95254161，DT.97816654，DT.87014330，DT.87079224(DOT S Assembly)。 
用于本文时，术语“表位”表示能够特异性地与抗体结合的蛋白质决定簇。表位通常由分子的化学活性表面基团诸如氨基酸或糖侧链组成，并且通常具有特异性三维结构特性，以及特异性电荷特性。构象和非构象表位的区别在于在变性溶剂存在下，对前者的结合而不是后者的结合丢失。 
用于本文时，术语“配体”是指结合和/或激活受体如EGFR的多肽。该术语包括配体的膜结合的前体形式，以及配体的蛋白裂解加工的可溶性形式。 
用于本文时，术语“EGFR的配体激活”是指EGFR配体结合介导的信号转导(例如，通过磷酸化受体本身或底物多肽中的酪氨酸残基的EGFR的胞内激酶结构域导致)。 
用于本文时，术语“特征在于EGFR或EGFR配体的异常活化或生产的疾病或病症或与EGFR表达有关的病症”，是指可以涉及或可以不涉及恶性肿瘤或癌症的病症，其中EGFR和/或EGFR配体的异常活化和/或生产在受试者的细胞或组织中发生，所述受试者患有或倾向于所述疾病或病症。 
用于本文时，与表达EGFR的细胞连同使用的术语“过表达”、“过表达的(overexpressed)”和“过表达(overexpressing)”是指与相同组织类型的正常细胞相比，在其表面上具有可测量程度的更高水平的EGFR的细胞。该过表达可以由基因扩增或增加的转录或翻译而导致。EGFR表达(和，因此，过表达)可以在诊断或预后测定中通过本领域已知的技术评估存在于细胞表面上或细胞裂解物中的EGFR水平来测定：例如，经由免疫组织化学测定，免疫荧光测定，免疫酶测定，ELISA，流式细胞术，放射免疫测定 法，蛋白质印迹，配体结合，激酶活性等。(一般参见，Cell Biology：A Laboratory Handbook(细胞生物学：实验室手册)，Celis，J.，编辑，Academic Press(第二版，1998)；Current Protocols in Protein Science(现代蛋白科学中的方案)，Coligan，J.E等，编辑，John Wiley & Sons(1995-2003)；还参见，Sumitomo等，Clin.Cancer Res(临床癌症研究)10，794-801(2004)，将它们的全部内容通过引用并入本文))。备选地，或另外地，例如通过原位杂交中的荧光、DNA印迹法、或PCR技术，可以测量细胞中编码EGFR的核酸分子的水平。将正常细胞中的EGFR水平与受细胞增殖病症(例如癌症)影响的细胞的水平比较，以确定EGFR是否过表达。 
术语“癌症”在动物中指的是存在这样的细胞，该细胞具有致癌细胞的典型特性，例如增殖失控，永生化，转移潜能，快速生长和增殖率，和某些形态学特性。通常，癌细胞的形式是肿瘤，但是这样的细胞可以单独存在于动物中，或者作为独立的细胞在血液中循环，如白血病细胞。 
除非其它指明，本发明使用的“异常细胞生长”指的是细胞生长独立于正常的调控机制(例如丧失接触抑制)。其包括下列情况的异常生长：(1)肿瘤细胞(肿瘤)，其通过表达突变的酪氨酸激酶或者过表达受体酪氨酸激酶而增殖；(2)其它增殖疾病的良性和恶性细胞，其中发生异常的酪氨酸激酶活化；(4)任何通过受体酪氨酸激酶表达和/或激活而增殖的肿瘤；(5)任何通过异常丝氨酸/苏氨酸激酶活化而增殖的肿瘤；和(6)其它增殖疾病的良性和恶性细胞，其中发生异常的丝氨酸/苏氨酸激酶活化。 
除非其它指明，本发明使用的术语“治疗”表示：在患者中部分或者全部逆转、减轻、抑制进程、或者预防肿瘤生长、肿瘤转移或者其它致癌细胞或致肿瘤细胞。患者可以是人或动物。本发明使用的术语“治疗”，除非其它指明，指的是治疗的行为。 
当短语“治疗方法”或其等效语应用于例如癌症时，其指的这样的行动的步骤或者过程，该行动经过设计以在人或动物中降低或者消除癌细胞的数量，阻止癌症的进展，或者缓解癌症的症状。癌症或者其它增殖疾病的“治疗方法”不必定意味着所述的癌细胞或者其它疾病事实上会被消除了；所述细胞的数量或者疾病事实上会被降低；或者癌症或者其它疾病的症状事实上会被缓解。通常，即使成功可能很小，也会进行癌症的治疗方法， 然而考虑到人或动物的用药史和预计的生存期，所述方法就其总体的作用过程来说对该行动过程是有益的。 
术语“治疗有效的药剂或治疗剂”指的是这样的组合物，其将会激发被研究者、兽医、医生或者其它临床医师所研究的组织、系统、动物或者人的生物或者医学应答。 
术语“治疗有效量”或者“有效量”指的是将会激发被研究者、兽医、医生或者其它临床医师所研究的组织、系统、动物或者人的生物或者医学应答的受试化合物或者组合的量。 
用于本文时，术语“伊立替康”包括伊立替康及其药用盐(例如盐酸伊立替康三水合物)。也包括具体的特别适合的多晶型。 
经过以下的实验细节将会更好的理解本发明。但是，本领域的技术人员应该清楚的理解：所讨论的具体的方法和结果仅仅是为了阐述本发明，而后附的权利要求会更完全地概括本发明，这些实验细节不能被认为以任何方式限制了本发明。 
所有的专利、公开的专利申请和本文公开的其它文献都通过引用明确并入本文。 
本领域的技术人员使用不过是常规的实验就会认识到或者能够确定许多于此处具体描述的本发明的具体方面的等价物。下面的权利要求意欲将这些等价物包含其中。 
附图描述 
图1.表示带有A549肺腺癌异种移植物的SCID beige小鼠存活的卡普兰-迈耶(Kaplan-Meier)曲线，小鼠用赋形剂(实线)，25mg/kg部分岩藻糖基化的GlycArt-mAb和20mg/kg CPT-11/伊立替康(短划线)或25mg/kg西妥昔单抗(cetuximab)(ErbituxTM)和20mg/kg CPT-11/伊立替康(点线)处理。 
实施例
实施例1 
用抗-EGFR抗体和伊立替康的组合治疗的带有肺腺癌异种移植物的 小鼠的存活 
测试药剂 
GlycArt-mAb通过产生重组蛋白的一般已知的技术制造。在WO2006/082515和WO 2008/017963中详细描述了用于产生具有改变的糖基化模式的人源化抗-EGFR IgG1抗体的细胞系的产生，表达具有修饰的糖基化模式抗体的转染子或转化体的鉴定，和具有增加的效应子功能(包括抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC))的人源化抗-EGFR IgG1抗体的产生。简言之，来自于原始细胞库(master cell bank)的遗传改造的中国仓鼠卵巢细胞系(CHO)在细胞培养中扩增。该抗体在MabSelect SuReTM柱(GE)上使用蛋白质A亲和层析，随后在Capto STM柱(GE)上通过阳离子交换层析和在Capto TM柱(GE)上最后的阴离子交换层析步骤从条件细胞培养基中纯化。病毒使用 
Figure BDA0000085113740000361
Pro膜(Millipore)通过纳米过滤去除，浓缩抗体并通过渗滤转移到所需的缓冲液中。 
对于部分岩藻糖基化的GlycArt-mAb的制造，使用过表达β(1，4)-N-乙酰葡糖胺转移酶III(GnTIII)的CHO细胞系，如US 7,517,670中所述，并在WO 2006/082515和WO 2008/017963中具体描述。 
部分岩藻糖基化的GlycArt-mAb作为原液(c＝11.3mg/ml)在含有组氨酸、海藻糖和聚山梨酯20的缓冲液中提供。抗体原液在注射前在PBS中适当稀释。 
抗-EGFR抗体西妥昔单抗 
Figure BDA0000085113740000362
作为临床制剂(5mg/ml)从Merck Pharma GmbH，Darmstadt，德国购买。抗体浓度在注射前通过稀释重构的原液进行调整。 
伊立替康/CPT-11 作为临床制剂(20mg/ml)从Pfizer Pharma GmbH，Karlsruhe，德国购买。抗体浓度在注射前通过稀释重构的原液进行调整。 
细胞系和培养条件 
A549人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞从ATCC获得。肿瘤细胞系在补充10％胎牛血清(PAA Laboratories，奥地利)和2mM L-谷氨酰胺的RPMI培养基(PAA Laboratories，奥地利)中于37℃在5％CO2水饱和大气中常规培养。 
肿瘤细胞注射 
第3代的A549细胞用于体内注射。PBS中2x106细胞静脉内(i.v.)注射。 
动物 
雌性SCID beige小鼠；到达时7-8周龄(购自Charles River，Sulzfeld，德国)在无特定病原体的条件下维持，伴随每天12小时光照/12小时黑暗的周期，根据规定指南(committed guidelines(GV-Solas；Felasa；TierschG)进行。实验研究方案由当地政府审查和批准。到来后，将动物维持在动物机构的隔离区中一周，以使它们适应新环境和用于观察。常规进行持续的健康监测。任意提供膳食(Provimi Kliba 3337)和水(酸化的pH 2.5-3)。 
监测 
每天控制动物的临床症状并检测不利效应。为了在整个实验过程中监测，记录动物的体重。 
处理动物 
在肿瘤细胞注射七天后在动物随机化后开始动物处理。GlycArt-mAb或抗EGFR抗体西妥昔单抗 
Figure BDA0000085113740000371
在研究第7，14，21，28，35，42，49，56，63，70，77，84，91天和最后第98天以25mg/kg标示的剂量每七天腹膜内(i.p.)施用。在相同的天施用相应的赋形剂。伊立替康作为单独的药剂或与抗-EGFR抗体组合在研究的第7，10，14和17天以20mg/kg的剂量i.p.给予四次。 
体内动物存活研究 
与商购的抗-EGFR抗体西妥昔单抗和伊立替康的组合，以及抗-EGFR抗体和伊立替康两者作为单独药剂相比，GlycArt-mAb和伊立替康的组合的体内抗-肿瘤功效在A549肺腺癌异种移植物模型中进行分析。主要参数是存活。数据通过时序检验进行统计分析。 
与赋形剂对照相比，用抗-EGFR抗体GlycArt-mAb和西妥昔单抗或伊立替康(CPT-11)作为单独的药剂处理带有A549异种移植物的小鼠(i.v.注射后)显著延长动物存活，分别为p＝0.0005，p＝0.0031和p＝0.017。另外，与对照相比，抗-EGFR抗体GlycArt-mAb或西妥昔单抗和伊立替康的组合处理均提高了动物的中值和长期存活(p＜0.0001和p＝0.0003)。与 GlycArt-mAb或伊立替康作为单独药剂相比，GlycArt-mAb与伊立替康的组合十分优异(p＝0.0116和p＝0.0001)。直接比较抗-EGFR抗体与伊立替康的组合突出了GlycArt-mAb与伊立替康的组合对于西妥昔单抗 
Figure BDA0000085113740000381
与伊立替康的优越性(p＝0.246)。存活数据作为卡普兰-迈耶(Kaplan-Meier)曲线显示于图1中。 
Figure IDA0000085113820000011
Figure IDA0000085113820000031
Figure IDA0000085113820000041
Figure IDA0000085113820000051
Figure IDA0000085113820000061
Figure IDA0000085113820000071
Figure IDA0000085113820000081
Figure IDA0000085113820000091
Figure IDA0000085113820000101

Claims (19)

1.药物组合物，特别用于癌症，其在药用载体中包含人源化抗-EGFRIgG1抗体和伊立替康，其中所述人源化抗-EGFR IgG1抗体包含
a)在重链可变结构域中的SEQ ID NO：1的CDR1，SEQ ID NO：16的CDR2和SEQ ID NO：31的CDR3，和
b)在轻链可变结构域中的SEQ ID NO：33的CDR1，SEQ ID NO：34的CDR2和SEQ ID NO：35的CDR3。
2.权利要求1的药物组合物，其中所述人源化抗-EGFR IgG1抗体在其Fc-区具有至少20％的非岩藻糖基化的或平分型非岩藻糖基化的寡糖。
3.权利要求1或2的药物组合物，其中所述人源化抗-EGFR IgG1抗体包含氨基酸序列SEQ ID NO：38(I-HHD重链可变区构建体)和SEQ IDNO：39(I-KC轻链可变区构建体)。
4.权利要求1-3中任一项的药物组合物，另外包含一种或多种其它抗癌剂。
5.用于在治疗癌症中组合应用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康，其中所述人源化抗-EGFR IgG1抗体包含
a)在重链可变结构域中的SEQ ID NO：1的CDR1，SEQ ID NO：16的CDR2和SEQ ID NO：31的CDR3，和
b)在轻链可变结构域中的SEQ ID NO：33的CDR1，SEQ ID NO：34的CDR2和SEQ ID NO：35的CDR3。
6.权利要求5的用于在治疗癌症中组合应用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康，其中所述人源化抗-EGFR IgG1抗体在其Fc-区具有至少20％的非岩藻糖基化的或平分型非岩藻糖基化的寡糖。
7.权利要求5或6的用于在治疗癌症中组合应用的人源化抗-EGFRIgG1抗体和伊立替康，其中所述人源化抗-EGFR IgG1抗体包含氨基酸序列SEQ ID NO：38(I-HHD重链可变区构建体)和SEQ ID NO：39(I-KC轻链可变区构建体)。
8.权利要求5至7中任意一项的用于在治疗癌症中组合应用的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康，其中所述人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康包含在相同制剂中。
9.权利要求5至7的用于在治疗癌症中组合应用的人源化抗-EGFRIgG1抗体和伊立替康，其中所述人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康包含在不同制剂中。
10.用于在癌症的治疗中应用的试剂盒，其在相同或分开的容器中包含伊立替康和人源化抗-EGFR IgG1抗体，其中所述人源化抗-EGFR IgG1抗体包含
a)在重链可变结构域中的SEQ ID NO：1的CDR1，SEQ ID NO：16的CDR2和SEQ ID NO：31的CDR3，和
b)在轻链可变结构域中的SEQ ID NO：33的CDR1，SEQ ID NO：34的CDR2和SEQ ID NO：35的CDR3。
11.权利要求10的试剂盒，其中所述人源化抗-EGFR IgG1抗体在其Fc-区具有至少20％的非岩藻糖基化的或平分型非岩藻糖基化的寡糖。
12.用于治疗癌症的方法，包括向需要所述治疗的受试者施用治疗有效量的人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康的组合，其中所述人源化抗-EGFR IgG1抗体包含
a)在重链可变结构域中的SEQ ID NO：1的CDR1，SEQ ID NO：16的CDR2和SEQ ID NO：31的CDR3，和
b)在轻链可变结构域中的SEQ ID NO：33的CDR1，SEQ ID NO：34的CDR2和SEQ ID NO：35的CDR3。
13.权利要求12的方法，其中所述人源化抗-EGFR IgG1抗体在其Fc-区具有至少20％的非岩藻糖基化的或平分型非岩藻糖基化的寡糖。
14.权利要求12或13的方法，其中所述人源化抗-EGFR IgG1抗体包含氨基酸序列SEQ ID NO：38(I-HHD重链可变区构建体)和SEQ ID NO：39(I-KC轻链可变区构建体)。
15.权利要求12至14中任意一项的方法，其中所述人源化抗-EGFRIgG1抗体和伊立替康在相同的制剂中施用。
16.权利要求12至14中任意一项的方法，其中所述人源化抗-EGFRIgG1抗体和伊立替康在不同的制剂中施用。
17.权利要求12至16中任意一项的方法，其中所述人源化抗-EGFRIgG1抗体和伊立替康通过相同的途径施用，优选肠胃外施用。
18.权利要求12至17中任意一项的方法，其中另外使用一种或多种其它抗癌剂。
19.上文描述的发明。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104059148A (zh) * 2013-03-18 2014-09-24 回而生医药科技（北京）有限公司 人源化抗人表皮生长因子受体抗体及其应用

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102552903A (zh) * 2010-12-09 2012-07-11 上海张江生物技术有限公司 一种抗egfr人源化单克隆抗体制剂
RU2610336C2 (ru) 2011-04-21 2017-02-09 Сиэтл Дженетикс, Инк. Новые конъюгаты связывающее соединение - активное соединение (adc) и их применение
JO3283B1 (ar) 2011-04-26 2018-09-16 Sanofi Sa تركيب يتضمن أفليبيرسيبت, حمض فولينيك, 5- فلورويوراسيل (5- Fu) وإرينوسيتان (FOLFIRI)
US9944707B2 (en) 2012-05-17 2018-04-17 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibodies that bind epidermal growth factor receptor (EGFR)
EP3170005B1 (en) 2014-07-18 2019-04-10 Sanofi Method for predicting the outcome of a treatment with aflibercept of a patient suspected to suffer from a cancer
EP3659625A1 (en) 2014-10-23 2020-06-03 Innate Pharma Treatment of cancers using anti-nkg2a agents
JP6971858B2 (ja) 2015-06-22 2021-11-24 バイエル ファーマ アクチエンゲゼルシャフト 酵素開裂性基を有する抗体薬物複合体（ａｄｃ）および抗体プロドラッグ複合体（ａｐｄｃ）
WO2017060322A2 (en) 2015-10-10 2017-04-13 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Ptefb-inhibitor-adc
MX2018011627A (es) 2016-03-24 2019-01-10 Bayer Pharma AG Profarmacos de farmacos citotoxicos que tienen grupos enzimaticamente escindibles.
CN109310781B (zh) 2016-06-15 2024-06-18 拜耳制药股份公司 具有ksp抑制剂和抗-cd123-抗体的特异性抗体-药物-缀合物(adc)
CA3047491A1 (en) 2016-12-21 2018-06-28 Bayer Aktiengesellschaft Prodrugs of cytotoxic active agents having enzymatically cleavable groups
JP7066714B2 (ja) 2016-12-21 2022-05-13 バイエル・ファルマ・アクティエンゲゼルシャフト 酵素的に切断可能な基を有する抗体薬物コンジュゲート（ａｄｃ）
EP3558387B1 (de) 2016-12-21 2021-10-20 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Spezifische antikörper-wirkstoff-konjugate (adcs) mit ksp-inhibitoren
US20220025045A1 (en) 2018-12-26 2022-01-27 Innate Pharma Compounds and methods for treatment of head and neck cancer

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101115773A (zh) * 2005-02-07 2008-01-30 格黎卡特生物技术股份公司 结合egfr的抗原结合分子，编码它的载体，及其应用

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
CU22545A1 (es) 1994-11-18 1999-03-31 Centro Inmunologia Molecular Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
CZ282603B6 (cs) 1991-03-06 1997-08-13 Merck Patent Gesellschaft Mit Beschränkter Haftun G Humanizované a chimerické monoklonální protilátky
CN100360184C (zh) 1995-07-27 2008-01-09 基因技术股份有限公司 稳定等渗的冻干蛋白质制剂
US6001358A (en) 1995-11-07 1999-12-14 Idec Pharmaceuticals Corporation Humanized antibodies to human gp39, compositions containing thereof
DK2180007T4 (da) 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20030190689A1 (en) 2002-04-05 2003-10-09 Cell Signaling Technology,Inc. Molecular profiling of disease and therapeutic response using phospho-specific antibodies
AU2003251597A1 (en) 2002-06-19 2004-01-06 Abgenix, Inc. Method for predicting response to epidermal growth factor receptor-directed therapy
EP2368578A1 (en) 2003-01-09 2011-09-28 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
KR101292000B1 (ko) 2003-01-22 2013-08-01 로슈 글리카트 아게 융합 구성체와 Ｆｃ 수용체 결합 친화도 및 이펙터 기능이증가된 항체를 생성하기 위한 이의 용도
AR062223A1 (es) 2006-08-09 2008-10-22 Glycart Biotechnology Ag Moleculas de adhesion al antigeno que se adhieren a egfr, vectores que los codifican, y sus usos de estas

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101115773A (zh) * 2005-02-07 2008-01-30 格黎卡特生物技术股份公司 结合egfr的抗原结合分子，编码它的载体，及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
B VINCENZI ET AL.: "Cetuximab and irinotecan as third-line therapy in advanced colorectal cancer patients: a single centre phase II trial", 《BRITISH JOURNAL OF CANCER》, vol. 94, 31 December 2006 (2006-12-31), pages 792 - 797, XP002586443, DOI: 10.1038/SJ.BJC.6603018 *
G GALIZIA1 ET AL.: "Cetuximab, a chimeric human mouse anti-epidermal growth factor receptor monoclonal antibody, in the treatment of human colorectal cancer", 《ONCOGENE》, vol. 26, no. 25, 31 December 2007 (2007-12-31) *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104059148A (zh) * 2013-03-18 2014-09-24 回而生医药科技（北京）有限公司 人源化抗人表皮生长因子受体抗体及其应用
CN104059148B (zh) * 2013-03-18 2016-09-07 回而生医药科技（北京）有限公司 人源化抗人表皮生长因子受体抗体及其应用

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