TWI354561B - Pharmaceutical compositions and uses for treatment - Google Patents

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TWI354561B
TWI354561B TW092119891A TW92119891A TWI354561B TW I354561 B TWI354561 B TW I354561B TW 092119891 A TW092119891 A TW 092119891A TW 92119891 A TW92119891 A TW 92119891A TW I354561 B TWI354561 B TW I354561B
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K Taylor Lori
E Spiegler Clive
E Tracey Daniel
K Chartash Elliot
S Hoffman Rebecca
T Barchuk William
Yan Phillip
Murtaza Anwar
G Salfeld Jochen
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Description

1354561 玖、發明說明： 相_關申請案
山T印彡心赏无罹。本申請 美國專利臨時申請案序號 凊），及先前提出申請之美 60/411，〇81 (2002年9月16曰提出申請），及 國專利臨時申請案序號60/417490 (2002年1〇月1〇曰提出申請） 之優先權。本申請案亦請求關於先前提出申請之美國專利 臨時申請案序號60/455777 (2003年3月18日提出申請）之優先權 。此外，本申請案係關於美國專利案號6,〇9〇,382、6,258，淑及 6,509,015。本申請案亦關於2001年3月7日提出申請之美國專 利申請案序號09/801,185 ; 2002年1丨月22日提出申請之美國專 利申請案序號10/302,356 ; 2002年6月2日提出申請之美國專利 申請案序號10/163657 ;及2002年4月26曰提出申請之美國專利 申請案序號10/133715。 本申請案係關於美國利用性申請案（律師案件目錄編號Βρι_ 187) ’其標題為"TNFa-相關病症使用TNFa抑制劑之治療”， (律師案件目錄編號BPI-188)，其標題為”脊椎關節病使用tnf 抑制劑之治療"，（律師案件目錄編號BPI-189)，其標題為” 肺病使用TNF α抑制劑之治療"，（律師案件目錄編號BPI-190) ’其標題為”冠狀病症使用TNF α抑制劑之治療"，（律師案 件目錄編號ΒΡΙ-191)，其標題為”代謝病症使用TNFa抑制劑 之治療π，（律師案件目錄編號BPI-192)，其標題為”貧血使用 TNF α抑制劑之治療11，（律師案件目錄編號ΒΡΙ-193)，其標題 86869 1354561 為"疼痛使用TNF α抑制劑之治療π，（律師案件目錄編號BPI-194) ’其標題為"肝病使用χΝρ α抑制劑之治療”，（律師案件 目錄編號ΒΡΙ-195)，其標題為”皮膚與指甲病症使用TNF α抑 制劑之治療”，（律師案件目錄編號ΒΡΙ-196)，其標題為”脈管 炎使用TNFa抑制劑之治療"，及（律師案件目錄編號βΡΙ_197) ，其標題為”TNFa相關病症使用TNFa抑制劑之治療”，其全 部均與本案同一曰期提出申請。各此等專利與專利申請案 之全部内容，係據此併於本文供參考。 【發明所屬之技術領域】 本發明係包括安全且有效之治療其中TNF α活性為有害之 TNF 〇：-相關病症之方法。 【先前技術】 細胞活素，譬如間白血球活素-1 (IL-1)與腫瘤壞死因子（TNF) ’係為由多種細胞產生之分子，譬如單細胞與巨嗟細胞， 其已被確認為炎性過程之介體。細胞活素，包括TNF，會調 節由於損傷或感染所發生之炎性回應之強度與延續時間。 TNF 〇:(亦被稱為TNF)係與多種人類疾病與病症之病理生理學 有關聯，包括敗血病、感染、自身免疫疾病、移植排斥及 移植物-對-宿主疾病（參閱，例如Moeller等人（1990) 2: 162 :頒予Moeller等人之美國專利5,231,024 ; Moeller A.等人之歐洲 專利公報案號 260 610 Bl ; Vasilli (1992) 4mm. i?ev. /wmw«o/. 10 : 411 ;Tracey 與 Cerami (1994) 45: 491)。 【發明内容】 有需要以一種安全且有效之方式，以治療其中TNF α:活性 86869 1354561 為有害之TNFW目關病症。本發明包㈣全且有 ™^活性為有害之聊叫目關病症之方法。 療”中 本發明之一方面係描述— 、女本，立勺虹也 種在病患中治療TNM-相關病症 之万法纟包括對病患投予治療上有效量之中和、 力TNFa抗體，以致該病症係經治療。於—項具體實施例中 ，雙心相關病症為脊椎關節病、肺病、冠狀病症、新陳代 謝病症、貧血、疼痛、肝病、皮膚病、指甲病症或脈管炎 。於另一項具體實施例中，·_關病症為與老化有關聯 之惡病質、阿耳滋海默氏疾病、腦水腫、炎性腦部傷堂、 慢性疲勞徵錢、纽炎、藥物反應、在於賴巾及/或其 附近之水腫、家族週期性熱病、吻氏徵候誤、纖維變性、 絲球體性腎炎（例如鏈球菌後絲球體性腎炎或以腎病）、假 k鬆弛、微觀多血管炎、混合結缔組織病症、多發性骨 髓瘤、癌症與惡病質、多重器官病症、脊髓發育不良徵候 族、睪丸骨組織崩解，胰腺炎，包括急性、慢性及胰膿腫 ，齒周膜疾病多肌炎、進行性腎衰竭、假痛風、壞疸性膿 皮病、復發多軟骨炎、風濕性心臟病、肉狀瘤病、硬化性 膽官炎、中風、胸腹主動脈瘤修復（TAAA)、受體有關聯 之週期性欲候簇（TRAPS)、與黃熱病接種疫苗有關聯之病徵 、與耳朵有關聯之炎性疾病、慢性耳朵發炎或兒科耳朵發 炎。於本發明之又另一項具體實施例中，胃心相關病症係 為克隆氏病-相關病症、幼年關節炎/別11氏疾病（JRA)、葡萄 膜炎、坐骨神經痛、前列腺炎、子宮内膜組織異位形成、 脈絡膜新血管生成作用、狼瘡、Sj〇gren氏徵候簇及濕斑點變 86869 丄 性。 於—項具體實施例中，本發明之抗體為經單離之人類抗體 ’或其抗原結合部份’其係解離自人類曹α，具有心 1χ!〇8μ或較低，且、速率f ^4ΐχΐσνι或較低，兩者 係藉由表面電漿激元共振測得，及在標準活體外⑽檢測中 ’中和人類ΤΝΜ細胞毒性，具有IC5〇為ixi〇.7Mii較低。 獅於本發明之另—項具體實施财，抗體為經單離之人類抗 :或其k原結合部份’纟係解離自人類蕭α，#藉表面電 漿激元共振測定時，具有Iff速率常數為IxlO-'i或較低， 具有輕鏈咖功能部位，包含順序識別碼：3之胺基酸順序 或於位置1，4,5,7或8，藉由單一丙胺酸取代，或於位置 1、，3,4,6,7,8及/或9’藉由一至五個保守胺基酸取代，自順 序識別碼：3修正；及具有重鏈^^汜功能部位，包含順序識 別碼· 4之胺基酸順序’或於位置2, 3,4, 5, 6, 8, 9, 10或11，藉 ^單—丙胺酸取代’或於位置^七^^说^及/或丨之， 藉由一至五個保守胺基酸取代，自順序識別碼：4修正。 於本發明之另一項具體實施例中，抗體為經單離之人類抗 阮或其杬原結合邵份，具有輕鏈可變區（LCVR)，包含順序識 別碼：1之胺基酸順序，及重鏈可變區^CVR),包含順序識 別碼：2之胺基酸順序。 在本發明之進一步具體實施例中，抗體為D2E7，亦被稱為 HIJMIRA® 或阿達利母馬（a(jaiimumab) 〇 本發明之另一方面，包括一種治療患有TNF α-相關病症之 病患之方法，其包括對該病患投予治療上有效量之TNF 〇：抗 86869 -10- 丄丄 ，或其抗原結合片段’其中抗體係解離自人類TNFa，具有 d為Ιχω Μ或較低，且速率常數為ΐχΐ〇…或較低， 者係藉由表面電漿激①共振測得，及在標準活體外⑽檢 測中，中和人類TKFa細胞毒性，具有IC5〇為ΐχΐ〇.7Μ或較低 ，以致該TNFa-相關病症係經治療。 、發月之又另一方面係包括一種治療患有讯^心相關病症 ，病患之方法’其包括投予治療上有效量之㈣α抗體或其 抗原結合片段’其中抗體係解離自，當藉表面電漿激 元共振測定時，具有Iff速率常數為IxlO—Vi或較低；具有 輕鏈CDR3功能部位，包含順序識別碼：3之胺基酸順序，或 於么置1，4, 5, 7或8，藉由單一丙胺酸取代，或於位置 I 3,4,6, 7, 8及/或9，藉由一至五個保守胺基酸取代，自順 序識別碼：3修正；及具有重鏈(：1)尺3功能部位，包含識別碼 .4<胺基酸順序順序，或於位置2,3,4,5,6,8,9，1〇或11，藉 由單一丙胺酸取代’或於位置^七^^说^及/或口， 藉由一至五個保守胺基酸取代，自順序識別碼：4修正，以 致該TNF α-相關病症係經治療0 本發明進一步方面之特徵是一種治療患有心相關病症 之病患之方法’其包括投予治療上有效量之_ α抗體或其 抗原結合片段，具有輕鏈可變區（LCVR)，包含順序識別碼： 1之胺基酸順序，及重鏈可變區（HCVR)，包含順序識別碼： 2之胺基酸順序’以致該TNF 〇：-相關病症係經治療。於—项 具體實施例中，TNFa抗體或其抗原結合片段為D2E7。於另 一項具體實施例中，TNF α抗體係與至少一種其他治療劑— 86869 • 11 - 1354561 起投藥。 本發明又另一方面之特徵是一種在患有TNF α-相關病症之 人類病患中抑制人類TNFo:活性之方法，其包括對該病患投 予治療上有效量之TNFa抗體或其抗原結合片段，其中抗體 係解離自TNFa，具有Kd為1χ10_8Μ或較低，及尺。„速率常數 為1 X 10_3s·1或較低，兩者係藉表面電漿激元共振測得，及在 標準活體外L929檢測中，中和人類TNFa細胞毒性，具有IC50 為1 X 1(Τ7M或較低。於一項具體實施例中，TNF α抗體或其 抗原結合片段為D2E7。 本發明之又另一方面，係包括一種治療患有TNF α-相關病 症之病患之方法，其包括對該病患投予治療上有效量之D2E7 或其抗原結合片段，以致該疾病係經治療。 本發明之又再另一方面，係包括一種治療患有TNF α-相關 病症之病患之方法，其包括對該病患投予治療上有效量之 D2E7或其抗原結合片段，以致該疾病係經治療。 於本發明之一項具體實施例中，D2E7 (亦被稱為HUMIRA® 或阿達利母馬（adalimumab))係與至少一種其他治療劑一起投 藥。 本發明之另一方面為一種套件，其包含一種醫藥組合物， 其包含TNF 抗體或其抗原結合部份，與一種藥學上可接受 之載劑；及對病患投予TNF α抗體醫藥組合物，以治療患有 TNF CK-相關病症之病患之說明書。於一項具體實施例中，TNF α抗體或其抗原結合部份係為D2E7 (HUMIRA®)。 發明詳述 86869 -12- 1354561 本發明係關於治療TNFa-相關病症之方法，其中τΝρα活性 ，例如人類TNF α活性，係為有害的。此等方法包括對該病 患投予治療上有效量之XNFa抑制劑，以致TNFa相關病症係 經治療。本發明亦關於其中TNFa抑制劑係併用另一種治療 劑投藥’以治療TNF <2_相關病症之方法。本發明之各方面係 關於以抗體及抗體片段之治療，及包含_ α抑制劑與藥學 上可接受載劑之醫藥組合物，用於治療相關病症。 定義 為使本發明可更易於明瞭，故首先定義某些術語。 於本文中使用之"人類TNF α"(於本文中縮寫成hTNF α，或 僅只是hTNF) —詞，係意欲指稱人類細胞活素，以17出分泌 形式及26 kD細胞膜結合形式存在，其生物活性形式係由非 共價键方式結合17 kD分子之三聚體所組成。hTNF α之結構 係進一步描述於例如 Pernica, D.等人，(\9m Nature 3U ： 724-729 ;Davis，J.M.等人，（1987)所oc/zem妨7 24: 1322-1326;及 Jones，E.Y. 等人，（1989) : 225-228中。人類TNF ο: —詞係意欲包括 重組人類TNF a (rhTNF a)，其可藉由標準重組表現方法製備 ，或市購而得（R&D系統，目綠編號210-TA，Minneapolis, MN)。 TNF α亦被稱為TNF。 "TNFa抑制劑"一詞包括會抑制TNFo:之藥劑。TNFa抑制劑 之實例包括恩塔臬西伯（etanercept)(Enbrel®, Amgen)、因弗利西 馬（inflkimab)(Remicade®，Johnson & Johnson)、人類抗-TNF 單株抗 體（D2E7/HUMIRA®，Abbott 實驗室）' CDP 571 (Celltech)及 CDP 870 (Celltech)，以及其他會抑制TNFo:活性之化合物，以致當投予 86869 -13- 1354561 患有其中TNF α活性為有害之病症或處於患有該病症之危險 下之病患時，該病症係經治療。於一項具體實施例中，TNF α抑制劑為排除恩塔臬西伯（etanercept)與因弗利西馬（infliximab) 之化合物，其會抑制TNF α活性。於另一項具體實施例中， 本發明之TNF α抑制劑係用以治療TNF α-相關病症，如更詳細 地於段落II中所述者。於一項具體實施例中，排除恩塔臬西 伯與因弗利西馬之TNF α抑制劑，係用以治療TNF α-相關病症 。於另一項具體實施例中，排除恩塔臬西伯與因弗利西馬 之TNF 抑制劑，係用以治療關節黏連脊椎炎。此術語亦包 括本文中所述之各抗-TNF α人類抗體及抗體部份，以及在美 國專利案號6,090,382 ; 6,258,562 ; 6,509,015中，及在美國專利申 請案序號09/801185與10/302356中所述者。 於本文中使用之π抗體π —詞，係意欲指稱免疫球蛋白分子 ，其包含四個多肽鏈，兩個重（Η)鏈與兩個輕（L)鏈，藉由二 硫化物键結互連。各重鏈包含一個重鏈可變區（於本文中縮 寫成HCVR或VH)與一個重鏈恒定區。重鏈恒定區包含三個 功能部位CHI、CH2及CH3。各輕鏈包含一個輕鏈可變區（於 本文中縮寫成LCVR或VL)與一個輕鏈恒定區。輕鏈恒定區包 含一個功能部位CL。VH與VL區域可進一步再細分成高可變 性區域，稱為互補性決定區（CDR)，散佈著較保守之區域， 稱為骨架區（FR)。各VH與VL係由三個CDR與四個FR所組成 ，以下列順序，從胺基末端排列至羧基末端：FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4。本發明之抗體係更詳細描述於美國專 利案號6,090,382 ; 6,258,562 ;及6,509,015中，以及於美國專利申 86869 -14- 1354561 請案序號09/801185與10/302356中，其每一件均以其全文併於 本文供參考。 於本文中使用之抗體之"抗原結合部份"（或僅只是”抗體部 份"）一詞，係指抗體之一或多個片段，其係保留專一性地結 合至抗原（例如hTNFo:)之能力。已証實抗體之抗原結合功能 ，可藉由全長抗體之片段施行。被涵蓋在抗體之''抗原結合 部份π —詞内之結合片段之實例，包括（i) Fab片段，一種包含 VL、VH、CL及CH1功能部位之單價片段；（ii) F(ab’)2片段， 一種二價片段，包含兩個Fab片段，藉由二硫化橋鍵在鉸鏈 區連結；（iii) Fd片段，包含VH與CH1功能部位；（iv) Fv片段， 包含抗體單臂之VL與VH功能部位；（v) dAb片段（Ward等人， (19S9) Nature Ml- 544-546)，其包含VH功能部位；及（vi)經單離 之互補性決定區（CDR)。再者，雖然Fv片段之兩個功能部位 ，VL與VH，係被個別基因編碼，但其可使用重組方法藉由 合成鏈結接合，該鏈結使得彼等能夠被製成單一蛋白質鏈 ，其中VL與VH區域係成對而形成單價分子（稱為單鏈Fv (scFv) ;參閱，例如 Bird 等人（1988) Sdewce 242 : 423-426 ;及 Huston 等 人（1988)尸rac. Ato/. t/似 Μ : 5879-5883)。此種單鏈抗體亦 意欲被涵蓋在抗體之"抗原結合部份"一詞中。單鏈抗體之 其他形式，譬如雙抗體，亦涵蓋在内。雙抗體為二價雙專 一性抗體，其中VH與VL功能部位係表現於單一多肽鏈上， 但使用一種鏈結，其係太短以致不允許相同鏈上之兩個功 能部位之間形成配對，於是迫使此等功能部位與另一個鏈 之互補功能部位成對，並建立兩個抗原結合位置（參閱，例 86869 -15 - 1354561 如 Holliger，P.等人，（1993) Prac. &ζ·· : 6444-6448 ；
Poljak，R.J.等人，（1994)汾rMC阶: 1121-1123)。本發明之抗體部 份係更詳細描述於美國專利案號6,090,382、6,258,562、6,509,015 中，及於美國專利申請案序號09/801185與10/302356中，其每 一件均以其全文併於本文供參考。 結合片段係藉由重組DNA技術，或藉由完整免疫球蛋白之 酵素或化學分裂而產生。結合片段包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fabc 、Fv、單鏈及單鏈抗體。不為”雙專一性”或"雙官能性”之 免疫球蛋白或抗體’應明瞭免疫球蛋白或抗體係具有其各 為相同之結合位置。”雙專一性"或”雙官能性抗體"係為人 造雜種抗體，具有兩個不同重/輕鏈對及兩個不同結合位置 。雙專一性抗體可藉多種方法產生，包括雜種瘤之融合或FaW 片段之連結。參閱，例如 Songsivilai & Lachmann, C/z_«. /mwiwwo/. 79 :315-321 (1990); Kostelny 等人，148, 1547-1553 (1992)。 於本文中使用之"保守胺基酸取代”，係為其中一個胺基酸 殘基被另一個具有類似側鍵之胺基酸殘基置換。具有類似 侧鏈之胺基酸殘基之族群，已被定義於此項技藝中，包括 鹼性側鏈（例如離胺酸、精胺酸、組胺酸）、酸性側鏈（例如 天門冬胺酸、越胺酸）、未帶電極性侧鍵（例如甘胺酸、天 冬素、麩醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸）、非 極性側键（例如丙胺酸、綱、胺酸、白胺酸、異白胺酸、脑胺 酸、苯丙胺酸、曱硫胺酸、色胺酸）、少分枝狀側鏈（例如 蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸）及芳族侧鏈（例如酪胺酸、苯 丙胺酸、色胺酸、組胺酸）。 86869 •16- =本文中使用之”人類抗體”―詞，係意欲包括具有街生自 人類胚細胞系免疫球蛋白順序之可變與恒定區之抗體。本 a月又人類抗體可包括未被人類胚細胞系免疫球蛋白順序 :胺基酸殘基（例如藉由活體外之任意或位置專—性突 變或藉由活體内體細胞突變所引進之突變型），例如在： 二且特別是CDR3中。但是，於本文中使用之”人類抗體，一 =並不意欲包括其中衍生自另一種哺乳動物物種(譬如老 鼠）之胚細胞系之CDR順序已被接枝於人類骨架順序I 體。 、於本文中使用之”重組人類抗冑”一詞，係錢包括藉重組 万式製備、表現、產生或單離之所有人類抗體，譬如使用 被轉染至宿主細胞中之重組表現載體所表現之抗體（進一步 私迷於下又）’單離自重組、結合人類抗體庫之抗體（進一 步描述於下文），單離自動物（例如老鼠）之抗體，其對人類 免疫球蛋白基因為轉基因（參閱，例如丁吵1沉，L D等人（1992) 細· 20 : 6287)，或藉任何涉及人類免疫球蛋白基因 順序之接合至其他腿順序之其他方式製備、表現、產生 或单離之&體。^匕種重組人類抗體具有衍生自人類胚細胞 系免疫球蛋白順序之可變與恒定區。但是，在某些具體實 施例中，係使此種重組人類抗體接受活體外致突變（或當使 用對人類1g順序轉基因之動物於活體内體細胞致突變時）， 且因此重組抗體之VH與VL區域之胺基酸順序，係為雖然衍 生自及相關於人類胚細胞請纽順序，但可能不會自然 地存在於活體内人類抗體胚細胞系存庫内之順序。 86869 -17- 1354561 於本文中使用之"經單離抗體”，係意欲指稱一種抗體，其 實質上不含其他具有不同抗原專一性之抗體（例如一種專一 性地結合hTNF α之經單離抗體，係實質上不含會專一性地結 合hTNF α以外之抗原之抗體）。但是，一種會專一性地結合 hTNFa之經單離抗體，可具有對其他抗原之交叉反應性，譬 如對於來自其他物種之TNF α分子（更詳細討論於下文）。再 者，經單離抗體可實質上不含其他細胞物質及/或化學品。 於本文中使用之π中和抗體π (或”中和hTNFa活性之抗體'·） ，係意欲指稱其結合至hTNFa會造成抑制hTNFa之生物學活 性之抗體。hTNF α生物學活性之此種抑制，可藉由度量hTNF α生物學活性之一或多項指標進行評估，譬如hTNF 所引致 之細胞毒性（無論是活體外或活體内），hTNFa-所引致之細胞 活化作用及hTNF α對hTNF α受體之結合。hTNF α生物學活性 之此等指標，可藉此項技藝中已知之數種標準活體外或活 體内檢測之一或多種進行評估（參閱美國專利6,090,382)。抗 體中和hTNF α活性之能力，較佳係藉由抑制L929細胞之hTNF α-所引致之細胞毒性進行評估。作為hTNF α活性之另一個或 替代參數，可評估抗體抑制hTNFa-所引致之ELAM-1在HUVEC 上表現之能力，作為hTNF <2-所引致之細胞活化作用之一種度 量方式。 於本文中使用之”表面電漿激元共振” 一詞，係指一種光學 現象，其允許在生物感測器矩陣内，藉由偵測蛋白質濃度 上之改變，分析即時生物專一性交互作用，例如使用BIAcore 系統（Pharmacia 生物感測器 AB，Uppsala, Sweden 與 Piscataway，NJ)。 86869 -18- 1354561 關於進一步描述，可參閱美國專利6,258,562之實例1，及Jonsson 等人（1993)^(««·5/σ/· C7z>!· 51 : 19 ; Jonsson 等人（1991)历oiec/m每《π 11 :620-627 ; Johnsson 等人（1995)/M0/.i?ecog«". 8 : 125 ;及 Johnnson 等人（1991)/如/.及〇£：/^；71 198:268。 於本文中使用之nKQffn —詞，係意欲指稱關於抗體自抗體 /抗原複合物解離之脫離速率常數。 於本文中使用之nKd” 一詞，係意欲指稱特定抗體-抗原交 互作用之解離常數。 於本文中使用之"IC50” 一詞，係意欲指稱抑制吾人感興趣 之生物學終點，例如中和細胞毒性活性，所需要之抑制劑 濃度。 於本文中使用之π核酸分子”一詞，係意欲包括DNA分子與 RNA分子。核酸分子可為單股或雙股，但較佳為雙股DNA。 關於使結合hTNFa之抗體或抗體部份（例如VH、VL、CDR3) 編碼之核酸，而於本文中使用之π經單離核酸分子” 一詞， 係意欲指稱一種核酸分子，其中使抗體或抗體部份編碼之 核苷酸順序，係不含其他使結合hTNF α以外之抗原之抗體或 抗體部份編碼之核甞酸順序，該其他順序可自然地繞過人 類基因組DNA中之核酸。因此，例如使抗-hTNF α抗體之VH 區域編碼之本發明經單離核酸，係未含有使結合hTNF α以外 之抗原之其他VH區域編碼之其他順序。 於本文中使用之”載體” 一詞，係意欲指稱能夠輸送已連結 至其上之另一種核酸之核酸分子。載體之一種類型為π質粒π ，其係指環狀雙股DNA圈環，於其中可連接其他DNA鏈段。 86869 -19- 1354561 載K另—種類型為病毒載體’其中可使其他⑽A鍵段連 接至病毒基因組中。某些載體係能夠在其被引進之宿主細 :中自律複製(例如具有細菌複製來源之細菌載體，及附加 Λ動物載體）。其他載體（例如非附加體哺乳動物載體） 在引進宿主細胞中時可被整合至宿主細胞之基因組中，於 是伴隨著宿主基因組被複製。再者，某些載體係能夠引導 可運用地連結至其上之基因之表現。此種載體於本文中係 稱為”重組表現載體"（或僅只是"表現載體”）。一般而言，在 重組職技財有㈣性之表„體，經常呈質粒形式。 在本專利說明書中’ ”質粒”與”載體"可交換地使用，因質 粒係為載體之最常用形式。但是’本發明係意欲包括此種 其他形式之表現載體’譬如病毒載體（例如複製缺陷反轉錄 酶祸毒、腺病毒及與腺有關聯之病毒），其係充當相當之功 月£ 、本又中使用< ί組宿主細胞，、或僅只是"宿主細胞”)一 詞’係意欲指稱其中已引進重組表現載體之細胞。應明瞭 n種術語係意欲不僅指稱特定對象細胞，而且是指 此種細胞之後代。由於某些變性可能發生在後續世代中， 此係由於無論是突轡式提$ 疋大又次％境影嚮所致，故此種後代事實上 可能與母細胞不相同，徊^ 4 π但仍被包含在本文中使用之"宿主細 胞π術語之範圍内。 ’ 於本文中使用之"服藥” 、 版杗—同，係指物質（例如抗-TNFa抗 體）之投藥，以達成治卷θ M r 於本文中使用之”兩週—次服藥使用法 、 療目的（例如治療TNFa-有關聯之病症）。 -cA -λ" -cV rt? yrf； ΠΟ i. ^ ’ ”兩週一次服藥" 86869 -20. 1354561 及’I兩週一次投藥”之術語，係指對病患投予物質（例如抗-丁师 α柷體），以達成治療目的（例如治療胃心有關聯病症）之時 間過程。兩週一次服藥使用法，並不意欲包括每週服藥使 用法。此物質較佳係每9_19天，更佳為每1147天，又更佳為 每13-15天，且最佳為每μ天投藥。 ，組合一詞，如在"第一種藥劑與第二種藥劑之組合，，之 措辭中，係包括第一種藥劑與第二種藥劑之共同投藥，例 如可使其溶解或互混於相同藥學上可接受之载劑中，或第 一種藥劑，接著為第二種藥劑之投藥，或第二種藥劑，接 著為第-種藥劑之投藥。因，匕，本發明係包括組合治療處 理之方法，及組合醫藥組合物。 /共同”一詞，如在”共同治療處理，，之措辭中，係包括於 第二種藥劑存在下’投卜種藥劑。纟同治療處理方法包 括其中將第-種、第二種、第三種或其他藥劑共同投藥之 方法。共同治療處理方法1包括其中將第—種或其他藥 劑於第二種或其他藥劑存在下投藥之方法，其中第二種或 其他藥劑，例如可能已經預先投藥。纟同、冶療處理方法可 逐步由不同實行者執行。例#，—個實行者可將第-種藥 劑投予病患，而第二個實行者 貝仃考·了將第二種樂劑投予病患， 城藥步料同時或接近輯或在遠離相下執行，只要 第一種藥劑（與其他藥劑）#— )於弟—種藥劑（與其他藥劑）存在 下才又樂後即可。實行者血症^ 、人士 m届患可為相同個體(例如人類）。 心本又中使用之”組合療法”一詞 質之投藥，例如抗抗體盎另：1“種或多種治療物 私與另一種藥物，譬如DMARD或 86869 -21 · 1354561 NSAID。其他藥物可與抗―丁师“抗體共同投藥，在其投藥之 前或在其之後投藥。 ΠΤΝΡα所媒介之症狀'’或"TNFa-相關病症"之術語，係指其 中TNFa為導致病症表象之主要介體之局部及/或系統生理 學病症。 炎丨生病症或炎性疾病"術語，當可交換地使用於本文 中時，係指發炎所媒介之病，無論是否亦為免疫所媒介。 火性祸症係為其中過量或未經調節之炎性回應會導致過度， 炎性病徵、宿主組織傷害或組織功能喪失之病症。實例包 括風濕性關節炎與脊椎關節病。於一項具體實施例中，本 發明《炎性病症係指發炎所媒介之病，排除骨關節炎與風 濕性脊椎炎。 、於本又中使用”肺病"一詞’係指任何原發性組織間隙肺 病及/或’fe性阻塞氣道病症^於本發明之—項具體實施例中 ’肺病-詞係包括任何肺病及/或慢性阻塞氣道病症，排除 克肺丨又性肺火疾病、肺肉狀瘤病、肺纖維變性及矽土 沉著病。 、五”原發性组織間隙肺疾病I，或”原發性組織間隙肺病症"術 语當可交換地使用於本文中時，係指具有類似臨床特徵 產生擴政病理學變化，主要是在肺胞間之間質組織中之 未=因學《數種疾病之任—種。原發性組織間隙肺疾病 *只例&括仁不限於組織間隙肺纖維變性(IPF)。於一項具 ，實施例中，原發性組織間隙肺疾病包括具有類似臨床特 !!產生擴散病理學變化，王要是在肺胞間之間質組織中 86869 -22- 1354561 之未知病因學之數種疾病之任一種，但排除休克肺、慢性 肺炎疾病、肺肉狀瘤病、肺纖維變性及秒土沉著病。 於本文中使用之"慢性阻塞氣道病症"一詞，係指由於生理 學上測得之慢性氣流阻塞，而不管病因學之肺病。慢性阻 塞氣道病症之實例，包括但不限於氣喘與慢性阻塞肺病（c〇pD) 。於一項具體實施例中，慢性阻塞氣道病症一詞係包括由 於生理學上測得之慢性氣流阻塞，但排除休克肺'慢性肺 炎疾病、肺肉狀瘤病、肺纖維變性及矽土沉著病之肺病。 "氣道阻塞"一詞係指增加藉由特徵性肺量計發現所顯示對 氣流之阻力。 "心與血管病症”或”冠狀病症”術語，當可交換地於本文 中使用時，係指涉及心與血管系統，例如心臟、血管及/或 血液之任何疾病 '病症或狀態。冠狀病症一般特徵為供應 血液與氧至心臟（冠狀動脈）之血管變窄。冠狀疾病經常由 於脂肪物質與斑之蓄積所造成。當冠狀動脈狹窄時，血液 至心臟之流量可能會減緩或停止。本發明之冠狀病症可適 用於動脈之任何異常，無論是結構、組織學、生物化學或 任何其他異常。冠狀心臟疾病之實例為再狹窄。於一項具 體實施例中，冠狀病症係指涉及心與血管系統之任何疾病 、病症或狀態’排除心臟之絕血及心臟機能不全。 於本文中使用之”再狹窄"一詞，係指狹窄之復發，其係為 動脈之變窄或挾縮。當在害病血管中之改造程序之後發展 予-閉基抽傷時，再狹窄經常會發生。此術語不僅應用於先 則存在狹窄之復發，而且應用於先前正常而在血管分流之 86869 -23· 1354561 後變成部份堵塞之血管。於另一項具體實施例中，本發明 係提供一種治療再狹窄之方法，其包括對具有或處於發展 再狹窄危險下之病患，投予本發明之抗體或其抗原結合部 份。 於本文中使用之π支架"一詞，係指被插入解剖血管（例如 動脈）之腔管中之結構，尤其是為使先前被阻塞之通路保持 打開。支架係用以保持流體（例如血液）流動，從血管之一 部份至另一部份，而血管内骨架或支架係保持打開身體通 路及/或支撐移植物或包覆物。支架經常在氣脹血管造形術 之後使用，惟其亦可作為治療狹窄之直接療法使用。 於本發明之一項具體實施例中，支架為藥物溶離性。π藥 物溶離π —詞係指支架已被塗覆緩慢至中等釋出之藥物配方 。’'藥物溶離”或’'藥物釋出”或”藥物塗覆"之術語，可於本 文中交換使用。支架可塗覆治療冠狀心臟疾病之任何藥物 ，包括例如本發明之抗體或其抗原結合片段。於另一項具 體實施例中，支架係傳輸D2E7。於進一步具體實施例中， 支架係傳輸D2E7，且併用另一種用以治療冠狀病症之藥物 ，包括地塞米松、苯丙胺酸氮芥、環磷醯胺、苯丁酸氮芥 、順式-銘、BiCNU、亞德里亞霉素、多克索紅菌素、鹽酸紅 比霉素、愛達霉素、米斯霉素（mithracin)、絲裂霉素、氟脲p密 淀、胺甲p巣呤、索鳥嘌呤（thoguanine)、多克索帖里（toxotere)、 衣托糖誓（etoposide)、長春新驗(vincristine)、伊利諾提肯（irinotecan) 、海肯普汀（hycamptin)、曱基罕肼、吱蒙（vumon)、環己醇、 經基脲、真母札（gemzar)、長春新驗（oncovin)、衣托麟（etophophos) 86869 -24- 1354561 、塔可利馬斯（tacr〇ii聰S)(FK506)，及下列喜洛利莫斯恤〇nmus) 之類似物：SDZ-RAD、CCI_779、7备雷帕霉素、7·硫基甲基· 雷帕霉素、7_表-三甲氧基苯基_雷帕霉素、7_表-硫基甲基雷 帕霉素、7_脫？氧基嚐帕霉素' 32_脫甲氧基、脫曱基及脯 胺酸。 、本文中使用之代病症”-詞’係、指會影嚮身體如何處 理用以進行生理功能所需要物質之疾病或病症。代謝病症 之實例包括但不P&於糖尿病與肥胖。於本發明之—項評 實施例中，"代謝病症詞係用以指會㈣身體如何處= 用以進行生理功能所需要物質之病症，排除自身免疫糖尿 病。 ’’糖尿病”或"糖尿病症，，或”糖尿疾病"之術語，冬可六換 地於本文中使料，係指藉由提高糖（葡萄糖）在;^之 含量作標記之疾病。糖尿病可因太少胰島素(藉由騰腺所產 生《化學物質’以調節血糖）、對胰島素之抗藥性或 造成。 | 於本文中使用之”與糖尿病有關聯之病症，，之措辭，… :隨著或相關㈣尿病之症狀及其他疾病。與糖尿病^關 汁病症（貫例’包括例如高血糖、姨島素過多、高、 :胰島素抗藥性、受傷害之葡萄糖新陳代謝作用、二胖症 糖尿病患者之視網膜病、斑點變性、 之腎病、向管球硬化、糖尿病和病=章、糖尿病患者 τ %两、勃起機能隨谌π 經前徵候簇、血管再狹窄、溃瘍性 月 、高血壓、心狡痛、心肌梗塞、心％犬、冠狀心臟疾病 風、皮膚與結缔组織病 86869 -25- 1354561 症足邵〉貝瘍、新陳代謝酸中毒、關銘# s π 趴太、^ 母關即炎及骨質疏鬆症。 於本又中使用之Π肥胖，，一詞 ’系中病患相對於痩體挺 /、有過量體脂肪之症狀。於一 、 Φx ^^± 貞/、姐貫施例中，肥胖係指 :、中個^重超過對於其身高Μ之最高值至 ::Γ:另當成人超過100碎過重時，其係被認為是"發病 肥胖。於另一項具體實施 肥胖係被疋義為ΒΜΙ(身體 貝里指數）超過30公斤./平方米。 於本文中使用之"貧血”一詞 τ, . ^ ^ 你知異吊低數目之循環紅血 球或降低濃度之血紅素在血液中。 於本文中使用之"疼痛"一詞 ， ^ ^ ^ t 係扣所有類型炙疼痛。此術 口係4日急性與慢性疼痛，馨' 、 3如神經病原性疼痛與手術後疼 痛、k性下方背痛、蔴焦5g也 、、 群集^痛、Μ神經痛、幻想肢疼痛 中樞疼痛、牙痛、類阿片、 頁片虹樂性疼痛、内臟疼痛、手術 疼痛、骨頭損傷疼痛、生產與 , /、刀挽，、月間尤疼痛，由於灼傷 k成之疼痛，包括晒斑，分换接政产 _ , 刀规後疼痛、偏頭痛 '絞痛， 及尿生殖道有關聯之夜痛，a 典 、_ '、Μ包括膀胱炎。此術語亦包括感 又傷〇疼痛或感受傷害。 於本文中使用之"肝滤"—叫 "， 、 、 斤雨 3 ’係指哺乳動物’且較佳為人 通之肝病或與肝細胞損傷有關聯、，⑴& G領柄’關聯 < 症狀或膽道病症。於一 項具體實施例中，肝症伤并 、、 肝病係彳曰人類肝病或與肝細胞損傷有關 聯《症狀或膽道病症，排除肝炎、酒精性肝炎及病毒肝炎。 皮膚病症4皮膚疾病”術語，當可交換地於本文中使 用時’係指損傷以外夕由虐s * , 卜又皮膚異吊’其已引致發炎狀態。於 一項具體實施例中，士 ' 本愈月<皮膚病為炎性皮膚病，其中 86869 -26- 1354561 皮膚疋特徵為微血管擴張、白血球浸潤、發紅、發熱及/或 疼痛。皮膚病之實例包括但不限於牛皮癬、尋常天疱瘡、 硬皮病、異位性皮炎、肉狀瘤病、結節性紅斑、汗腺炎化 濃、爲平苔蘚、Sweet氏徵候簇及白斑病。 於本文中使用牛皮癖"一詞，係指與表皮增生有關聯之 皮膚病牛皮癬之貫例包括但不限於慢性斑點牛皮癬、滴 狀牛皮癬、逆牛皮癖、膿疱牛皮癖 '尋常牛皮癬及紅皮牛 皮癖。牛皮癬亦可與其他炎性病症有關聯，包括炎性腸疾 病（IBD)與風濕性關節炎(RA)。 健康皮膚"或"正常皮膚"術語係指未損傷皮膚，意即未 八有視覺上顯而易見之紅斑，水腫，高_、低-或不均勻色 素沉著，鱗形成，乾燥症，或水疱形成。組織學上健康或 正吊皮膚係指具有形態學外觀之皮膚組織，包括良好組織 之基底、棘狀及粒狀層，及黏附多層狀角質層。 於本文中使用之"指甲病症”或”指甲疾病"術語，係指其 中指甲或腳指甲具有異常顏色、形狀、質地或厚度之症狀 。脈管炎"或”脈管炎症"術語，當可交換地於本文中使用 時’係指-組病症，其特徵為血管發炎。所有大小之血管 均可被感染，從身體中之最大血管（主動脈）至皮膚中之最 小血管（微血管）。受感染血管之大小，會根據特定類型之 脈管炎而改變。 於本又中使用之"套件，，一詞，係指包裝產物，其包含一些 成份，本發明之TNFa抗體係與其—起投藥，以治療 關病症。Λ套件較佳係包含容納套件成份之箱+或容器。 86869 •27- 1354561 此箱子或容器係附加標籤或美國食品藥物管理局核准之擬 案。此箱子或容器係容納本發明之成份，其較佳係被包含 在聚乙烯、聚丙烯、乙烯或丙烯塑膠容器中。此容器可為 加蓋管件或瓶子。此套件亦可包含投予本發明之TNF α抗體 之說明書。 本發明之各方面係更詳細描述於本文中。 I. 本發明之TNF 〇;抑制劑 本發明係提供一種治療TNFa-相關病症之方法，其中TNFa 抑制劑之投藥為有利的。於一項具體實施例中，此等方法 係包括經單離人類抗體或其抗原結合部份之投藥，其係以 高親和力及低脫離速率結合至人類TNF α，並具有高中和能 力。本發明之人類抗體，較佳為重組、中和人類抗-hTNF α 抗體。本發明之最佳重組中和抗體，於本文中係被稱為D2E7 ，亦被稱為HUMIRA®與阿達利母馬（adalimumab)(D2E7 VL區域之 胺基酸順序係顯示於順序識別碼：1中；D2E7 VH區域之胺 基酸順序係顯示於順序識別碼：2中）。D2E7 (HUMIRA®)之性 質，已被描述於Salfeld等人，美國專利6,090,382中，其係併於 本文供參考。 於一項具體實施例中，本發明之治療包括投予D2E7抗體與 抗體部份，D2E7-相關抗體與抗體部份，及具有與D2E7相當 性質之其他人類抗體與抗體部份，譬如結合至hTNFo:之高親 和力，具有低解離動力學與高中和能力。於一項具體實施 例中，本發明係提供以經單離之人類抗體或其抗原結合部 份之治療，其係解離自人類TNF α，具有Kd為1 X 10_8M或較 86869 •28- 1354561 :二"速率常數為㈣或較低，兩者係藉由表面電 ”敫U辰測得’及在標準活體外敗9檢測中，中和人類_ α細胞毒性，具有ICW為lxl〇-7M或較低。更佳，产 _ :離之人類抗體或其抗原結合部份，係解離自：類：經 具有Κ^5χ10、-1或較低’或又更佳為具有^為㈤、] 或較低。更佳情況是，經單離之人類抗體或其抗原結合部 份，係在標準活體外⑽檢測中，中和人類啊細胞毒性 ’具有IC50為1x10,或較低，又更佳為具有％❶為 或較低’且又更佳為，具有IC50為lxl0-10M或較低。於一項 較佳具體實施例中，抗體為經單離之人類重組抗體或其抗 原結合部份。 此項技藝中習知抗體重與輕鏈CDR3功能部位，在抗體對 抗原之結合專一性/親和力上，係扮演—項重要角色。因此 ，於另一方面，本發明係關於治療其中ΤΝρ α活性為有堂之 TNFa-相關病症之方法，其方式是投予人類抗體，其對於與 hTNFa缔合，具有缓慢解離動力學，且具有於結構上係相同 於或相關於D2E7之輕與重鏈CDR3功能部位。D2E7vlcdr3之 位置9可被Ala或Thr佔據，而不會實質上影嚮K〇ff_因此， 對於D2E7 VL CDR3之同感主體係包含胺基酸順序：q_r_y_n_r_ A-P-Y-(T/A)(順序識別碼：此外，D2E7 VH CDR3之位置12 可被Tyr或Asn佔據，而不會實質上影嚮。因此，關於 D2E7 VH CDR3之同感主體’係包含胺基酸順序：v_S-Y_L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N)(順序識別碼：4)。再者，如美國專利6,〇9〇,382 之貫例2中所1正貫，D2E7重與輕鏈之CDR3功能部位係易於接 86869 -29- 1354561 受單一丙胺酸殘基之取代（在VL CDR3内之位置1，4, 5, 7或8， 或在VH CDR3内之位置2, 3,4, 5, 6, 8,9, 10或11)而不會實質上影 嚮、。又再者’熟練技師將明瞭，在D2E7VL與VHCDR3功 能部位對於被丙胺酸取代之可接受性下，其他胺基酸在CDR3 功能部位内之取代是可行的，同時仍然保留抗體之低脫離 速率常數，特別是以保守胺基酸取代。較佳係不超過一至 五個保守胺基酸取代，在D2E7 VL及/或VH CDR3功能部位内 施行。更佳係不超過一至三個保守胺基酸取代，在D2E7 VL 及/或VH CDR3功能部位内施行。此外，保守胺基酸取代不 應在對於結合至hTNFa*重要之胺基酸位置上施行。 VLCDR3之位置2與5，及D2E7VHCDR3之位置,顯示對 於與hTNFa之交互作用是重要的’因此，保守胺基酸取代較 佳係不在此等位置上施行（惟丙胺酸在D2E7 VL CDR3之位置$ 上之取代，是可接受的，如上述）（參閱美國專利6,〇9〇,382)。 因此’於另-項具體實施例中’本發明係提供治療嘗& 相關病症之方法’纟方式是投予經單離之人類抗體或其抗 原結合部份。抗體或其抗原結合部份較佳係含有下列特徵： _自人類職’ f藉表面電漿激元共振測定時，具 有Kcff速率常數為lxl〇_3s-i或較低； b)具有輕鏈CDR3功能部位 順序，或於位置1，4,5,7或8， 置1，3, 4, 6, 7, 8及/或9，藉由 正自順序識別碼：3 ; 包含順序識別碼：3之胺基酸 藉由單一丙胺酸取代，或於位 一至五個保守胺基酸取代，修 c)具有重鏈CDR3功能部位 包含順序識別碼：3之胺基酸 86869 -30· 1354561 ，或於位置UW’M’K)』 取代 «·分A /又AZ 籍由一至五個保Φ 胺基鉍取代，修正自順序識別碼：4。 、 更佳情況是，抗體或其抗社入 ,,、、，" Q邵伤係解離自人類TNF β 具有KcfASxio-S-i或較低。 έ士人血八2 更佳h，兄疋，抗體或其抗原 、“ Μ係解離自人類ΤΝΡα ’具有K〇ff4ixi〇_vi_。 ,、於又另—項具體實施例中’本發明係提供治療TNP"目關 病症之方法’其方式是投予經 早離 < 人類柷體或其抗原結 备邵份。抗體或其抗原結合部份較佳係含有—個輕鍵可變 區（職），具有CDR3功能部位，包含順序識別碼：3之胺基 酸順序’或於位置……，藉由單一丙胺酸取代，修正 自順序識別碼：3,及具有一個重鏈可變區田⑽，具有⑶幻 力能部位，包含順序識別碼：4之胺基酸順序，或於位置 2,3,4,5,6,8,9，1〇或11，藉由單一丙胺酸取代，修正自順序識 別碼.4。杈佳情況是，LCVR係進一步具有CDR2功能部位 ，包含順序識別碼：5之胺基酸順序（意即D2E7VLCDR2)，且 HCVR係進一步具有CDR2功能邵位，包含順序識別碼：6之 胺基酸順序（意即D2E7VHCDR2)。又更佳情況是，LCVR進一 步具有CDR1功能部位，包含順序識別碼：7之胺基酸順序 (意即D2E7 VL CDR1)，且HCVR具有CDR1功能部位，包含順 序識別碼：8之胺基酸順序（意即D2E7 VH CDR1)。VL之骨架 區較佳係得自v /c 1人類胚細胞系族群，更佳係得自A20人類 胚細胞系Vk基因，而最佳係得自D2E7 VL骨架順序，示於美 國專利6,090,382之圖1A與1B中。VH之骨架區較佳係得自vH 3 86869 -31 - 1354561 人類胚細胞系族群’更佳係得自DP-31人類胚細胞系vh基因 ，而最佳係得自D2E7 VH骨架順序，示於美國專利6,〇9〇,382之 圖2A與2B中。 因此，於另—項具體實施例中，本發明係提供治療TNF 〇：-相關病症之方法，其方式是投予經單離之人類抗體或其抗 原結合部份。抗體或其抗原結合部份較佳係含有一個輕鏈 可又區（LCVR)，包含順序識別碼：丨之胺基酸順序（意即 D2E7VL)，及—個重鏈可變區（HCVR)，包含順序識別碼：2 之胺基酸順序（意即職讀）。在某些具體實施例中，此抗 體包含-個重鏈恒定區’譬如帆购，购帆私，驶離 或IgD恒定區。此重鏈恒定區較佳為1§(51重鏈恒定區或每 重鏈恒定區。再者，此抗體可包含輕鏈恒， 鍵恒定區物鍵恒定區。此抗體較佳係包含二定: 。或者，柷體邵份可為例如Fab片段或單鏈Fv片段。 於又其他具體實施例中，本發明係提供治療娜“相⑽ ，二法，其中抗抗體之投藥是有利的，其方式是击 人补：《人廣抗體或其抗原結合部份。抗體或其抗原^ =2較㈣含有娜_几與呢咖功㈣位，例如 抗m或其抗原結合部份，且有 個㈣可變區①咖），具有 順库Γ位，包含胺基酸順序’選自包㈣序識別碼：3 揭==碼：u、順序識別碼：12、順序識別碼：13、 別…、順序識別碼：15、順序識別碼： :Γ 順岸識別碼：18、順序識別…、順序： 別碼· 20、順序識別碼： °0 順序相碼·· 22 '順序識別 86869 -32- 1354561 碼：23、順序識別碼：24、順序識別碼：25及順序識別碼 :26，或具有一個重鏈可變區（HCVR)，具有CDR3功能部位 ，包含胺基酸順序，選自包括順序識別碼：4、順序識別碼 :27、順序識別碼：28、順序識別碼：29、順序識別碼：30 、順序識別碼：31、順序識別碼：32、順序識別碼：33、 順序識別碼：34及順序識別碼：35。 於另一項具體實施例中，本發明之TNF α抑制劑為恩塔臬 西伯（etanercept)(描述於 WO 91/03553 與 WO 09/406476 中）、因弗利 西馬（infliximabX描述於美國專利5,656,272中）、CDP571 (人化之 單株抗-TNF-o: IgG4抗體）、CDP870 (人化之單株抗-TNF-0：抗體 片段）、D2E7 (人類抗-TNF mAb)、可溶性TNF受體類型I或經 PEG化之可溶性TNF受體類型I (PEG TNF-R1)。 本發明之TNF α抗體可經修正。在一些具體實施例中，TNF α抗體或其抗原結合片段，係以化學方式修正，以提供所要 之作用。例如，本發明之抗體與抗體片段之PEG化作用，可 藉此項技藝中已知之任何PEG化反應進行，如下列參考資料 中所述：立燾厉子之洚腐3 : 4-10 (1992) ; EP 0 154 316 ;及 EP 0 401 384 (其每一個係以其全文併於本文供參考）。PEG化 作用較佳係經由醯化反應或烷基化反應，以反應性聚乙二 醇分子（或類似反應性水溶性聚合體）進行。供本發明之抗 體與抗體片段PEG化用之較佳水溶性聚合體為聚乙二醇（PEG) 。於本文中使用之''聚乙二醇"係意欲涵蓋已被用以衍化其 他蛋白質之任何PEG形式，譬如單（C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇。 86869 -33- 1354561 製備本發明之經PEG化抗體與抗體片段之方法，係一般性 地包括以下步驟，⑻使抗體或抗體片段與聚乙二醇，譬如PEG 之反應性酯或醛衍生物，在其中抗體或抗體片段變成連接 至一或多個PEG基團之條件下反應，與（b)獲得反應產物。一 般熟諳此藝者將明瞭選擇最適宜反應條件，或以已知參數 及所要之結果為基礎之酸化反應。 經PEG化之抗體與抗體片段，可一般性地用以治療本發明 之TNFa-相關病症，其方式是投予本文中所述之TNFa抗體與 抗體片段。一般而言，經PEG化之抗體與抗體片段，當與未 經PEG化之抗體及抗體片段比較時，具有增加之半生期。經 PEG化之抗體與抗體片段可單獨、一起採用，或併用其他醫 藥組合物。 於本發明之又另一項具體實施例中，TNF α抗體或其片段 可以改變，其中抗體之恒定區係經修正，相對於未經修正 之抗體，係減少至少一個恒定區所媒介之生物學效應子功 能。為修改本發明之抗體，以致使其顯示降低對Fc受體之 結合，可使此抗體之免疫球蛋白恒定區鏈段，在Fc受體（FcR) 交互作用所必須之特定區域上突變（參閱，例如Canfield，S.M. 與 S.L. Morrison (1991)/·五%;?. Med· 173 : 1483-1491 ;及 Lund，J.等人 {1991) J. Immunol. 14Z : 2657-2662)。降低抗體之 FcR 結合能力， 亦可降低倚賴FcR交互作用之其他效應子功能，譬如調理作 用與呑嗟作用，及抗原依存性細胞毒性。 本發明之抗體或抗體部份可被衍化或連結至另一種官能性 分子（例如另一種肽或蛋白質）。因此，本發明之抗體與抗 86869 -34- 1354561 部份係意欲包括本文中所述人類抗α抗體之經衍化 及以其他方式修正之形式，包括免疫黏連分子。例如，本 發明又抗體或抗體部份可於官能性上連結（藉由化學偶合、 基因融合、非共價鍵缔合或其他方式）至一或多個其他分子 實體，譬如另一種抗體（例如雙專一性抗體或雙抗體）、可 偵測藥劑、細胞毒劑、醫藥劑及/或可媒介抗體或抗體部份 與另一種分子缔合之蛋白質或肽（譬如鏈霉胺基酸核心區域 或多組胺酸標記）。 經衍化抗體之-種類型係經由使兩種或多種抗體（相同類 型或不同類型’例如為產生雙專一性抗體)交聯而製成。適 當交聯劑包括異雙官能性，具有兩個藉由適當間隔基(例如 間-順丁晞二SI亞胺基苯甲醯基㈣基琥㈣亞胺醋）分隔之 不同反應性基團，或均雙官能性(例如辛二酸二琥珀醯亞胺 醯酉旨）。此種連結劑可得自Pi⑽化學公司（Rockford，IL)。 —本發明之抗體或抗體部份可以其進行衍化之可使用可侦、測 藥训，係包括螢光化合物。舉例之螢光可偵測藥劑包括螢 光素、螢光素異硫氰酸醋、羅達胺、氯化5-二甲胺小茶續醯 、藻紅蛋白等。抗體亦可以可偵測酶衍化，譬如鹼性磷 酶、辣根過氧化酶、葡萄糖氧化酶等。當抗體以可偵測丨 竹化時’其係藉由添加里他讀亦丨丨；姑认 J ^ 他斌剤而被檢出，該酶係使用 其他試劑以產生可偵測次β虛#仏 ，， I W疋反應產物。例如，當可偵測藥 辣根過氧化酶存在時，禾Λ Μ窃> ρ 牧〒斗加過軋化氫與二胺基聯苯胺會 致有色反應產物，其係A环楨、彳 你為可偵測。抗體亦可以生物素衍 ，且經過杬生物素蛋白或鍵霉胺 母欣丞歒結合艾間接度量而 86869 -35- 1354561 檢出。 本發明之抗體或抗體部份可藉由免疫球蛋白輕與重鏈基因 之重組表現，在宿主細胞中製成。為以重組方式表現抗體 ，係將宿主細胞以一或多種帶有使抗體之免疫球蛋白輕與 重鏈編碼之DNA片段之重組表現載體轉染，以致使該輕與 重鏈表現於宿主細胞中，且較佳係分泌至其中培養宿主細 胞之培養基中，抗體可自該培養基回收。使用標準重組DNA 操作法，以獲得抗體重與輕鏈基因，使此等基因併入重組 表現載體中，及使載體引進宿主細胞中，譬如在Sambrook， Fritsch及Maniatis (編著），分子為從繁禮，·紫翁f f艰，#二廣， Cold Spring Harbor，N.Y·，（1989)，Ausubel，F.M.等人（編著）於分子兰 之浼#凝案，Greene聯合出版社，（1989)，及在Boss等人 之美國專利4,816,397中所述者。 為表現D2E7或D2E7-相關抗體，係首先獲得使輕與重鏈可 變區域編碼之DNA片段。此等DNA可使用聚合酶連鎖反應 (PCR)，藉由胚細胞系輕與重鏈可變順序之放大與修正獲得 。人類重與輕鏈可變區基因之胚細胞系DNA順序，係為此 項技藝中已知（參閱，例如”Vbase"人類胚細胞系順序資料庫 ;亦參閱Kabat，E.A.等人，（1991)具克疫學重妾#之蛋白#膺序， 廣五废，健康與人類服務之美國部門，NIH公報案號91-3242 ; Tomlinson, I.M.等人，（1992) π人類胚細胞系VH順序之存庫發現具 有不同高可變圈環之約五十組VH鏈段",J. Μο/.所〇/. 221 ： 776-798 ;及Cox, J.P.L.等人（1994)π人類胚細胞系V78鏈段之導向，發 現其用途上之強偏向” 乂加wtmo/· 24 : 827-836 ;其每一項之 86869 -36- 1354561 内容係明確地併於本文供參考）。為獲得使D2E7或D2E7-相關 抗體之重鏈可變區編碼之DNA片段，係將人類胚細胞系VH 基因之VH3族群之成員，藉由標準PCR放大。最佳係使DP-31 VH 胚細 胞系順 序放大 。為 獲得使 D2E7 或 D2E7-相關 抗體之 輕鏈可變區編碼之DNA片段，係將人類胚細胞系VL基因之 族群之成員，藉由標準PCR放大。最佳係將A20 VL胚細 胞系順序放大。適用於使DP-31胚細胞系VH與A20胚細胞系 VL順序放大之PCR引物，可以揭示於前文所引用參考資料 中之核苷酸順序為基礎，使用標準方法設計。 一旦獲得胚細胞系VH與VL片段，即可使此等順序突變， 以使本文中所揭示之D2E7或D2E7-相關胺基酸順序編碼。被 胚細胞系VH與VL DNA順序編碼之胺基酸順序，係首先與 D2E7或D2E7-相關之VH與VL胺基酸順序比較，以確認D2E7或 D2E7-相關順序中之月安基酸殘基，其係與胚細胞系不同。然 後，使胚細胞系DNA順序之適當核甞酸突變，以致使已突 變之胚細胞系順序使D2E7或D2E7-相關胺基酸順序編碼，使 用遺傳密碼以決定應施行何種核苷酸改變。胚細胞系順序 之致突變，係藉由標準方法進行，譬如PCR所媒介之致突變 (其中經突變之核甞酸係被併入PCR引物中，以致使PCR產物 含有突變型）或位置引導之致突變。 一旦獲得使D2E7或D2E7-相關VH與VL鏈段編碼之DNA片段 (如上述，藉由胚細胞系VH與VL基因之放大與致突變），此 等DNA片段可進一步藉由標準重組DNA技術操控，例如使可 變區基因轉化成全長抗體鏈基因、Fab片段基因或scFv基因 86869 -37- 1354561 。在此等操控中，VL-或VH-編碼用之DNA片段係可運用地 連結至使另一種蛋白質編碼之另一種DNA片段，譬如抗體 恒定區或可撓性連結劑。”可運用地連結”一詞，當於本文 中使用時，係意謂兩個DNA片段被接合，以致使被兩個DNA 片段編碼之胺基酸順序，仍然存在於架構内。 使VH區域編碼之經單離DNA，可被轉化至全長重鏈基因 ，其方式是可運用地連結VH-編碼用之DNA至另一個使重鏈 恒定區（CHI、CH2及CH3)編碼之DNA分子。人類重鏈恒定區 基因之順序，係為此項技藝中已知的（參閱，例如Kabat, E.A. 寄从人\99\)具免疫學重要性之蛋白質順序，第五版，故氤奐尺 類服務之美國部門，NIH公報案號91-3242)，且涵蓋此等區域 之DNA片段可藉由標準PCR放大而獲得。重鏈恒定區可為 IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE，IgM 或 IgD 恒定區，但最佳為 IgGl 或IgG4恒定區。對Fab片段重鏈基因而言，VH-編碼用之DNA 係可運用地連結至另一種僅使重鏈CH1恒定區編碼之DNA分 子。 使VL區域編碼之經單離DNA可被轉化至全長輕鏈基因（以 及Fab輕鏈基因），其方式是可運用地連結VL-編碼用之DNA 至另一種使輕鏈恒定區CL編碼之DNA分子。人類輕鏈恒定 區基因之順序，係為此項技藝中已知的（參閱，例如Kabat，E.A. 等k人\99\)具免疫學重要性之蛋白質順序，第五版，资氟與尺 類服務之美國部門，NIH公報案號91-3242)，且涵蓋此等區域 之DNA片段可藉由標準PCR放大而獲得。輕鏈恒定區可為/c 或λ恒定區，但最佳為/c恒定區。 86869 -38- 1354561 為產生scFv基因，係將VH-與VL-編碼用之DNA片段可運用 地連結至另一種使可撓性連結劑編碼之片段，例如使胺基 酸順序（Gly4 -Ser)3編碼，以致VH與VL順序可以鄰接單鏈蛋白 質表現，其中VL與VH區域係藉由可撓性連結劑接合（參閱 ，例如 Bird 等人（1988) Science 242： 423-426; Huston 等人（1988) Proc.
5879-5883; McCafferty 等人，A/aiwre(1990)MS :552-554)。 為表現本發明之抗體或抗體部份，係將按上述獲得之使部 份或全長輕與重鏈編碼之DNA插入表現載體中，以致使此 等基因可運用地連結至轉錄與轉譯控制順序。就此而論，" 可運用地連結”一詞，係意謂抗體基因係連接至載體，以致 使在載體中之轉錄與轉譯控制順序，係充當其調節抗體基 因之轉錄與轉譯之意欲功能。表現載體與表現控制順序係 經選擇’以與所使用之表現宿主細胞相容。可將抗體輕鏈 基因與抗體重鏈基因插入個別載體中，或更典型上，係將 兩種基因插入相同表現載體中。抗體基因係藉由標準方法 插入表現載體中（例如，抗體基因片段與載體上之互補限制 位置之連接’或若無限制位置存在則為鈍端連接）。在插入 D2E7或D2E7_相關之輕或重鏈順序之前，表現載體可能已帶 有抗體恒定區順序。例如，使D2E7或D2E7-相關VH與VL順序 轉化至全長抗體基因之一項途徑，是將其插入已經使重鏈 恒定與輕鏈恒定區個別編碼之表現載體中，以致使VH鏈段 可運用地連結至載體内之CH鏈段，且YL鏈段係可運用地連 結至載體内之CL鏈段。另外地或替代地，重組表現載體可 86869 -39- 1354561 使訊息肽編碼，其有助於抗體鏈自宿主細胞分泌。可使抗 體鏈基因無性繁殖於載體中，以致使訊息肽於架構内連結 至抗體鏈基因之胺基末端。訊息肽可為免疫球蛋白訊息肽 或異種訊息肽（意即得自非免疫球蛋白蛋白質之訊息肽）。 除了抗體鏈基因以外，本發明之重組表現載體帶有調節順 序，其係控制抗體鏈基因在宿主細胞中之表現。"調節順序 "一詞係意欲包含啟動子、增強予及其他表現控制元素（例 如水腺苷酸化作用訊息），其係控制抗體鏈基因之轉錄或轉 澤此種凋節順序係描述於例如Goeddel ;基琢4浼沒...游 荸之万法185,大學出版社，SanDieg〇, CA (199〇)。熟諳此藝者應 明瞭的是，表現載體之設計，包括調節順序之選擇可依一 些因素而疋’譬如欲被轉變宿主細胞之選擇，所要蛋白質 表現（&度等。哺礼動物宿主細胞表現之較佳調節順岸， 包括病毒元素’其係在哺乳動物細胞中導引高程度之蛋白 質表現’譬如啟動子及/或增強子，衍生自巨細胞病毒 (s CMV啟動子/增強子）、猿病毒4〇 (sv4〇)(譬如sv4〇啟動 子/增強子）、腺病毒（例如腺病毒主要晚期啟動子（綱⑽ 及多瘤病毒。關於病毒調節元素及其順序之進—步說明， 可參閱例如Stinsld之美國專利5，職〇62，聽等人之美國專利 切⑽’及施驗等人之美國專利侧奶。 可Si:二鏈基因與調郎順序以外’本發明之重組表現載體 !:、他順序，譬如調節宿主細胞(例如複製來源)與可 選擇#己物基因中載I#乏通愈】+响& … 載…复製《順序。可選擇標記物基因 有助於其中已引進載麫 戰紅^佰王細胞尤選擇（參閱，例如美國 86869 1354561 專利 4,399,216、4,634,665 及 5,179,017，全部均由 Axel 等人申請） 。例如，典型上，可選擇標記物基因係於其中已引進載體 之宿主細胞上賦予對藥物之抗藥性，譬如G418、潮霉素或 胺曱喋呤。較佳可選擇標記物基因包括二氫葉酸酯還原酶 (DHFR)基因（供使用於具有胺甲喋呤選擇/放大之dhfr-宿主細 胞中）與新基因（供G418選擇）。 關於輕與重鏈之表現，使重與輕鏈編碼之表現載體係藉標 準技術轉染至宿主細胞中。"轉染"術語之各種形式係欲予 涵蓋常用於引進外源DNA至原核細胞或真核細胞宿主細胞 中之極多種技術，例如電擊穿孔、磷酸鈣沉澱作用、DEAE-葡聚醣轉染等。雖然理論上能夠在無論是原核細胞或真核 細胞宿主細胞中表現本發明之抗體，但在真核細胞，且最 佳為哺乳動物宿主細胞中表現抗體，係為最佳，因為此種 真核細胞，且特別是哺乳動物細胞，係比原核細胞更可能 組裝且分泌一種經適當地折疊與免疫學上活性之抗體。抗 體基因之原核細胞表現已被報告無法用於產生高產率之活 性抗體（Boss，M.A.與 Wood，C.R· (1985)浼 /七充疫 : 12-13)。
用於表現本發明重組抗體之較佳哺乳動物宿主細胞，包括 中國大頰鼠卵巢（CHO細胞）（包括dhfr-CHO細胞，描述於Urlaub 與 Chasin, (1980)Proc. A/fli/. 2c沉/·汾/ 22 : 4216-4220 中，與 DHFR 可選擇標記物一起使用，例如在R.J. Kaufman與P.A. Sharp (1982) Mol. Biol m : 601-621中所述者）、NSO骨髓細胞瘤細胞、COS 細胞及SP2細胞。當使抗體基因編碼之重組表現載體被引進 哺乳動物宿主細胞中時，抗體係藉由將宿主細胞培養，歷 86869 -41 - 1354561 經一段足以允許抗體在宿主細胞中表現之時間而產生，或 更佳為抗體分泌至其中生長宿主細胞之培養基中。抗體可 使用標準蛋白質純化方法，自培養基回收。 宿主細胞亦可用以產生完整抗體之一部份，譬如Fab片段 或scFv分子。應明瞭的是，於上述程序上之變異係在本發明 之範圍内。例如，一般可能期望以使本發明抗體之無論是 輕鏈或重鏈（但並非兩者）編碼之DNA，轉染宿主細胞。重組 DNA技術亦可用以移除一部份或全部使輕與重鏈之任一個 或兩者編碼之DNA，其對於結合至hTNF α是無必要的。自此 種截頭DNA分子表現之分子，亦被本發明之抗體所涵蓋。 此外，可產生雙官能性抗體，其中一個重鏈與一個輕鏈係 為本發明之抗體，而另一個重與輕鏈對hTNF α以外之抗原係 為專一，其方式是使本發明之抗體藉由標準化學交聯方法 ，交聯至第二種抗體。 於本發明抗體或其抗原結合部份之重組表現之一項較佳系 統中*使抗體重鍵與抗體輕鍵兩者編碼之重組表現載體係 藉由磷酸#5所媒介之轉染引進dhfr-CHO細胞中。在重組表現 載體内，抗體重與輕鏈基因係各可運用地連結至CMV增強 子/ AdMLP啟動子調節元素，以驅動基因之高程度轉錄。重 組表現載體亦帶有DHFR基因，其允許使用胺曱喋呤選擇/ 放大，選擇已被載體轉染之CHO細胞。將經選擇之轉化株宿 主細胞培養，以允許抗體重與輕鏈之表現，並自培養基回 收完整抗體。使用標準分子生物學技術，以製備重組表現 載體，轉染宿主細胞，選擇轉化株，培養宿主細胞，及自 86869 -42- 1354561 培養基回收抗體。 本發明之重組人類抗體，除了本文中所揭示之D2E7或其抗 原結合部份或D2E7-相關抗體以外，可藉由重組結合抗體庫 ，較佳為scFv噬菌體顯示庫之篩選而單離，使用製自衍生自 人類淋巴細胞之mRNA之人類VL與VH cDNA製成。製備與筛 選此種庫之操作法，係為此項技藝中已知的。除了產生噬 菌體顯示庫之市購可得套件（例如Pharmacia f .纽禮磨燈疾禮 廣·絲，目錄編號27-9400-01 ;及Stratagene SurfZAPTM嗤菌體顯示套 件，目錄編號240612)以外，特別易使用於產生與篩選抗體顯 示庫之方法與試劑之實例，可參閱例如Ladner等人之美國專 利 5,223,409 ; Kang 等人之 PCT 公報案號 WO 92/18619 ; Dower 等人 之PCT公報案號WO 91/17271 ; Winter等人之PCT公報案號 WO 92/20791 ; Markland 等人之 PCT 公報案號 WO 92/15679 ; Breitling 等人之PCT公報案號WO 93/01288 ; McCafferty等人之PCT公報案 號 WO 92/01047 ; Garrard 等人之 PCT 公報案號 WO 92/09690 ; Fuchs 等人（1991)所〇/7^加〇/〇取交：1370-1372; Hay 等人（1992)仇myl«劭Μ 母办以⑽似 81-85; Huse 等人（1989) Science 246: 1275-1281; McCafferty 等人，Mzmre (1990)巡：552-554 ; Griffiths 等人（1993)五施Ο «/II 725-734 ; Hawkins 等人(1992、JMol Biol 226 : 889-896 ; Clackson 等人 (1991) Mziwre M2 : 624-628 ; Gram 等人（1992)/WASSi : 3576-3580 ; Garrard 等人（1991)所(?/rec/mofogy 殳：1373-1377; Hoogenboom 等人（1991) Nuc Acid Res 4133-4137 ； iL Barbas ψ A (1991)ΡΑ^5&Ε ： 7978-7982 。單離對於hTNFa具有高親和力與低脫離速率常數之人類抗 體之方法，係描述於美國專利案號6,090,382、6,258,562及 86869 -43- 1354561 6,509,015中，其每一案均併於本文供參考。 II.本發明TNFa抑制劑之用途 在一項具體實施例中，本發明係提供在患有其中TNF α活 性為有害之TNFa-相關病症之病患中抑制TNFa活性之方法。 於一項具體實施例中，TNF α抑制劑為D2E7，亦被稱為 HUMIRA®( Ρ可達利母馬（adalimumab))。 TNF α係牵連極多種TNF 相關病症之病理生理學，包括敗 血病、感染、自身免疫疾病、移植排斥及移植物-對-宿主疾 病（參閱，例如 Moeller Α·等人，（1990) 2 : 162-169 ;頒予
Moeller等人之美國專利5,231,024 ; Moeller A.等人之歐洲專利公 報編號 260 610 Bl ； Vasilli. P. (1992) Annu. Rev. Immunol. 10 : 411-452 ;Tracey, K.J.與 Cerami, A. (1994)j«⑽.45. : 491-503)。本發 明係提供在患有TNFa-相關病症之病患中抑制TNFa活性之方 法，此方法包括對該病患投予抗體、抗體部份或其他TNF α 抑制劑，以致在患有TNF <2-相關病症之病患中抑制TNF α活性 。本發明亦提供在患有脈管炎之病患中抑制或降低TNF α活 性之方法，其包括對該病患投予本發明之抗體或抗體部份 或其他TNFa抑制劑，以致在該病患中抑制或降低TNFa活性 。較佳情況是，TNF α為人類TNF α，而病患為人類病患。或 者，病患可為表現TNF α之哺乳動物，本發明之抗體係與其 交叉反應。又再者，病患可為哺乳動物，於其中已引進hTNF α (例如藉由hTNFa之投藥，或藉由hTNFo:轉基因之表現）。可 將本發明之抗體投予人類病患，供治療目的用（進一步討論 於下文）。 86869 -44- 1354561 再者，可將本發明之抗體投予表現ΤΝρα之非人類哺乳動 物，此抗體係與其交叉反應（例如靈長類動物、豬或老鼠） ’供獸醫目的用，或作為人類疾病之動物模式。關於後者 ’此種動物模式可用於評估本發明抗體之治療功效（例如投 藥之劑量與時間過程之測試）。用以研究脊椎關節病之動物 模式之實例，包括ank/ank轉基因老鼠、HLA-B27轉基因大白 鼠（參閱Taurog等人（1998) 办/ariAnYiWes1·牛津：牛津大學 出版社）。 用於評估藥劑治療肝病之治療功效之動物模式之實例，包 括黑猩猩C型肝炎病毒模式（參閱Shimizu等人（1990)iVocMzi/ ▲Μ 87 : 6441)。用以研究皮膚與指甲病症之動物模式 之實例，包括例如嚴重合併之免疫不全（SCID)老鼠模式（牛 皮癣）與Smith細胞系（SL)雞及脫色素老鼠（白斑病）（參閱 Nickoloff(2000)/rtve 幼办mpPrac. 5: 67; Austin 等人（1995)jm */户(3伙〇/.146.1529，1^11161：等人（1986)/7^咖/)677«如〇/.87:299)。 評估TNF 〇:抗體治療新陳代謝病症功效之動物模式之實例 ，包括N0D轉基因老鼠、Akita老鼠、NSY轉基因老鼠及ob/ob 老鼠（參閱 Baeder 等人（1992) 89 : 174 ; Haseyama 等人（2002) 如 /五;φ Med.198: 233 ; Makino 等人（1980): 29: 1; Kolb(1987)潜及痞/新縻代款琢廣3: 751; Hamada等人 (2001) Metabolism. 50- 1282 J Colsman (1978) Diabetologia, 14 · 1411 Bailey 等人（1982)/«ί· 办6 : 11)。用以研究脈管炎之動物模式之 實例，包括老鼠HSV模式（Behcet氏疾病）、老鼠L. casei模式 (Kawasaki疾病）及老鼠ANCA模式（Kawasaki氏疾病）。脈管炎之 86869 -45- 1354561 其他模式包括老鼠之McH5-lpr/lpr品系（Nose, Μ.等人，（1996) Am. J. Path. 149 ： 1763)輿 SCG/Kj 品系（Kinjoh 等人（1993)外〇匕鳩以· Ad &/·, 90 : 3413)。此等老鼠品系會自發性地發展脾臟 、胃、心臟、子宮及卵巢之小動脈與微動脈之新月形絲球 體性腎炎與壞死性脈管炎。此等動物會發展血内丙型球蛋 白過多，及會與髓過氧化酶（MPO)反應之ANCA自體抗原。 此外，具有人類MPO之大白鼠之免疫作用，會造成ANCA-有 關聯之壞死性新月形絲球體性腎炎（Brouwer, E.等人，（1993) 乂五xp. 177 : 905)。用以研究原發性組織間隙肺病與慢性 阻塞氣道病症之動物模式之實例，包括卵清蛋白（OVA)所引 致之過敏性氣喘老鼠與香煙煙霧所引致之慢性阻塞肺病老 鼠（參閱 Hessel,EM.等人，（1995)及尸kmaco/. 293 : 401 ; KeastD 等人，（1981)/. 135: 249)。 '用於研究冠狀病症包括再狹窄之常用動物模式，包括大白 鼠或老鼠頸動脈連接模式與頸動脈損傷模式（Ferns等人（1991) : 1129 ; Clowes 等人（1983) Lab· Invest. 49 : 208 ; Lindner 等人（1993) 73 : 792)。在頸動脈連接模式中，動脈血 液流動係藉由接近末梢分叉血管之連接而被瓦解。如在 Clowes等人中所述者，係施行頸動脈損傷模式，以致使共同 頸動脈藉由經過外部頸動脈引進之氣脹導管之管腔内通路 ，造成内皮之剝裸。於2週時，頸動脈係由於平滑肌細胞挾 縮而顯著地變窄，但在2與12週之間，血管内膜於厚度上加 倍，導致降低管腔大小。任何此等模式均可用以測定本發 明TNFa抗體在人類再狹窄之預防與治療上之潛在治療作用。 86869 -46- 1354561 用以研究貧血之動物模式之實例包括以肽聚醣-多醣聚合 體接種之大白氣（參閱Coccia等人，（2001)£·；φ//β腦to/ogy. 29 : 1201-1209)。用以研究疼痛之動物模式之實例係為此項技藝 中所習知，且包括大白鼠坐骨神經連接模式與大白鼠片段 脊髓神經連接模式（參閱 Bennett 與 Zie, (1988) 33 : 87-107; Kim 與 Chung (1992) 50: 355-363)。 於本文中使用之π其中TNFa活性為有害之TNFa-相關病症’’ 一詞，係意欲包括TNF α-相關之疾病及其他病症，其中TNF α 之存在於患有此病症之病患中，已被証實係為或被懷疑係 為無論是負貴該病症之病理生理學，或助長該病症惡化之 因素，例如幼年風濕性關節炎。因此，其中TNF α活性為有 害之TNFa-相關病症，係為其中預期TNFa活性之抑制會減輕 此病症之病徵及/或進展之病症。此種病症可藉由例如增加 TNFa在患有此病症之病患中之生物流體内之濃度而被証實（ 例如增加TNFa在病患之血清、血漿、滑液等中之濃度），其 可使用例如上述之抗-TNF α抗體而被檢出。本發明之抗體、 抗體部份及其他TNFa抑制劑，在治療其中TNFa活性為有害 之特定TNF α-相關病症上之用途，係進一步討論於下文。在 某些具體實施例中，本發明之抗體、抗體部份或其他TNF 抑制劑，係併用另一種治療劑投予病患，如下文段落ΠΙ所 述。 k.脊椎關節病 TNF α係牽連極多種病症之病理生理學，包括炎性疾病， 譬如脊椎關節病（參閱，例如Moeller, Α·等人，（1990) 2 : 86869 -47- 1354561 162-169 ;頒予 Moeller 等人之美國專利 5,231，〇24 ; Moeller, a 之歐 洲專利公報編號260 610 B1)。本發明係提供α活性之方法 ’在患有此種病症之病患中進行’此方法包括對該病患投 予抗體、抗體部份或其他TNF α抑制劑，以致在患有脊椎關 節病之病患中之TNFa活性係被抑制。於一項具體實施例中 ’本發明係提供一種治療脊椎關節病之方法。
於本文中使用之"脊椎關節病"或，，多種脊椎關節病"術語 ，係用以指數種影嚮脊椎關節疾病之任—種，其中此種^ 病係共有一般臨床、放射學及組織學特徵。許多脊椎關^ 病係共有基因特徵，意即其係與购327對偶基因有關聯即 於-項具體實施例巾，脊椎關節病術語係用以指數種号;鄉 脊椎關節疾病之任-種，排除關節黏連脊椎炎，其中此: 疾病係共有—般臨床、放射學及組織學特徵。脊椎 之㈣，包括關節黏連脊椎炎、牛皮癬關節炎/脊椎炎 A反應f生關即炎或賴透氏徵候簇 椎關節病。 金⑴·^含
險下ΓΓ广:抗體亦可用以治療處於發展脊椎輸 懷下义病患。處於具有昝松 /、名會椎關即病危險下之病串 包括患有關節炎之人~ , 两W〈貫你， 火古M 類。含椎關節病可與其他形式之^ 火有關聯，包括風渴性關 ..JS B h ’·.、、丨土關即火。於一項且眘> ,,, 發明之抗體係用以fL 列中， 關節病之病患。 P人有關聯又f 、〜 本發明乏TNFa抗體治療之眷分 义貫例，係描述於下文： ’、脊椎關節 \ 關節黏連脊椎炎(As) 86869 -48- 1354561 腫瘤壞死因子係牵連關節黏連脊椎炎之病理生理學（參閱 Verjans 等人（1991) driAnto 34(4) : 486 ; Verjans 等人（1994) C/z'WjExp/mmimc)/. 97(1) : 45 ; Kaijtzel 等人（1999)//wmimmwwo/· 60(2): 140)。關節黏連脊椎炎（AS)係為涉及一或多個椎骨發炎之炎 性病症。AS為慢性炎性疾病，其會影嚮軸向骨架及/或末 梢關節，包括在脊椎椎骨間之關節，與臀骼關節，及在脊 椎與骨盆間之關節。AS最後可造成受感染之椎骨融合或生 長在一起。脊椎關節病，包括AS，可伴隨著牛皮癬關節炎(PsA) 及/或炎性腸疾病（IBD)，包括潰瘍性結腸炎與克隆氏病。 AS之早期表象可藉由射線照像試驗測得，包括CT掃描與 MRI掃描。AS之早期表象經常包括臀骼關節炎，及在臀骼 關節上之變化，其係藉由軟骨下骨頭皮質邊緣之模糊，接 著為糜爛與硬化而被証實。亦已發現疲勞係作為AS之共同 病徵(Duffy等人（2002)dC7?裏π眉卒肩#學#議摘要）。因此， 本發明之抗體或其抗原結合片段，可用以治療AS。於一項 具體實施例中，本發明之TNFa抗體或抗原結合片段，係用 以治療與IBD有關聯之脊椎關節病，包括as。 AS經常以非類固醇消炎藥療法（NSAID)治療，譬如阿斯匹 靈或吲嗓美薩辛（indomethacin)。因此，本發明之tnf α抗體亦 可併用常用以降低經常伴隨著關節黏連脊椎炎之發炎與疼 痛之藥劑一起投藥。 1牛皮癬關節炎 腫瘤壞死因子係牵連牛皮癬關節炎之病理生理學（putsch等 人（1998)也伽.57 : 691 ; Ritchlin 等人（1998)</划ew_i〇/ 25 86869 •49- 1354561 :⑽）。當於本文中指稱時，牛皮癖關節炎（psA)或與皮膚 有關聯之牛皮癖’係指與牛皮癬有關聯之慢性炎性關節炎 。牛皮癖為常見慢性皮膚症狀’其會造成紅色斑點於身體 上。於具有牛皮癬之2〇個人中約有“固將伴隨著皮膚症狀發 展關節炎’·而在約75%病例中，牛皮癬係先行於關節炎。Μ 本身係以夕種方式顯不’涵蓋之範圍從溫和至嚴重關節炎 其中關即炎經常會影嚮手指與脊椎。當脊椎被影嚮時， 病徵係類似關節黏連脊椎炎，如上述。本發明之·抗體或 其抗原結合片段，可用以治療PsA。
PsA有時係與殘毁性關節炎有關聯。殘毀性關節炎係指其 特徵為過度骨頭麋爛而造成總體糜爛變形之病症，其會使 關節殘毀。於一項具體實施例中，本發明之α抗體或其 k原結合片段可用以治療殘毁性關節炎。 飞.反應性關節炎/賴透氏徵候貘 腫瘤壞死因子係牵連反應性關節炎之病理生理學，其亦被 稱為賴透氏彳政候誤（Braun等人（1999)也加池42 (10) : 2039) 。反應性關節炎（ReA)係指會使身體中別處之感染複雜化之 關節炎，其經常是在腸或泌尿生殖器感染之後。ReA經常之 特徵為某些臨床徵候，包括關節之發炎（關節炎）、尿道炎 、結合膜炎及皮膚與黏膜之損傷。此外，ReA可發生於被性 傳染病感染或痢疾感染之後，包括衣原體屬、彎曲桿菌屬 、沙門桿菌屬或耶爾森氏菌屬。因此，本發明之α抗體 或其抗原結合片段，可用以治療ReA。 《、未鑒別之脊椎關節病 86869 •50- 1354561 於一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體係用以治療患 有未鑒別之脊椎關節病之病患（參閱Zeidler等人（1992)i?AeWm ZXs C//n 18 : 187)。用以描述未鑒別脊椎關節病之其他 術語，包括血清陰性寡關節炎與未鑒別之寡關節炎。於本 文中使用之未鑒別脊椎關節病，係指其中病患僅表露出一 部份與脊椎關節病有關聯病徵之病症。此症狀經常被發現 於未具有IBD、牛皮癖，或AS或賴透氏徵候簇之古典病徵之 年輕成人。於一些情況中，未鑒別之脊椎關節病可為AS之 早期適應徵。於一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體或 其抗原結合片段可用以治療未鑒別之脊椎關節病。 肺病 TNF α係牽連極多種肺病之病理生理學，包括譬如原發性 組織間隙肺病與慢性阻塞氣道病症之肺病（參閱，例如 PiquetPF 等人（1989)/及φΜβ·170 : 655-63 ; Whyte，M 等人，（2000) Am J Respir Crit Care Med. 162 : 755-8 ; AnticevichSZ 等人，（1995) 及284 : 221-5)。本發明係提供TNF α活性之方法， 在患有此種肺病之病患中進行，此方法包括對該病患投予 抗體、抗體部份或其他TNF a抑制劑，以致在患有原發性組 織間隙肺病或慢性阻塞氣道病症之病患中之TNF a活性，係 被抑制。其中TNFa;活性為有害之原發性組織間隙肺病與慢 性阻塞氣道病症之實例，係進一步討論於下文。 \.原發性組織間隙肺病 於一項具體實施例中，本發明之TNF a抗體係用以治療具 有原發性組織間隙肺病之病患。原發性組織間隙肺病係以 86869 -51 - 1354561 三種方式影嚮肺臟：首先，肺臟組織係以某種已知或未知 方式受到傷害；第二，肺臟中之肺胞囊壁變得發炎；及最 後，傷疤（或纖維變性）係開始於组織間隙（或在肺胞囊間之 組織）中，且肺臟變得僵硬。原發性組織間隙肺病之實例， 係描述於下文。 a. 自發性肺纖維變性(IPF) 腫瘤壞死因子係牽連自發性肺纖維變性（IPF)之病理生理學 (參閱 PiquetPF 等人（1989)·/ExpMei/. 170: 655-63; Whyte，Μ 等人（2000) J/iss/wV Crz'i Care Mei/ 162: 755-8 ; Corbett EL 等人（2002) <7及&^> CWi C^re Med. 165 : 690-3)。例如，已發現IPF病患於巨嗟細胞 與類型II上皮細胞中具有增加含量之TNF表現（Piquet等人（1993) v4m</Pa认σΠ43:651;Nash等人（1993)/¾topaί/^¢)/ogy22:343;Zhang 等人（1993) J/mmwm?/150 : 4188)。某些基因同質異相亦與增加 之TNF表現有關聯，且牵連IPF與碎土沉著病並扮演一項角 色（Whyte等人，如前文出處；Corbett EL等人，如前文出處）。 "自發性肺纖維變性"或"IPF”術語，係指一組病症，其特徵 為深肺臟組織之發炎與最後傷疤，導致呼吸短促。肺胞（肺 胞囊）及其支撐結構（組織間隙）在IPF中之傷疤，最後會導致 功能性肺胞單位之喪失，及減少氧從空氣轉移至血液。IPF 亦被稱為擴散主質肺病；肺胞炎；隱原纖維化肺胞炎（CFA) ;原發性肺炎(IPP);及一般組織間隙肺炎（UIP)。IPF經常與UIP ("IPF/UIP”）同義地使用，因為UIP為在IPF病理學診斷上最常見 之細胞型式。 患有IPF之病人，經常顯示某些病徵，包括乾咳、胸痛及 86869 •52· 1354561 /或呼吸短促。治療IPF之常用藥物係為潑尼松與環磷醯胺 ，惟只有少部份病患隨著持續使用此等藥物而改善（美國胸 麻學會（2000) Jm. /. OzY. Care Med. 161 : 646)。肺臟之氧投 予與移植，係為治療之其他選擇。於一項具體實施例中， 係將本發明之TNFa抗體，併用另一種治療劑，例如氧，投 予病患，以治療自發性肺纖維變性。 慢性阻塞氣道病症 於一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體係用以治療具 有慢性阻塞氣流病症之病患。在此等疾病中，氣流阻塞可 為慢性且持久，或偶發及復發。氣流阻塞經常藉由強制呼 氣肺量測定法測定，其係為在最大呼氣期間，呼氣體積對 著時間之記錄。在未具有阻塞氣流之病患中，完全強制呼 氣經常花費3與4秒之間。在具有慢性阻塞氣流病症之病患 中，其中氣流係被阻塞，其經常花費高達15至20秒，且可 能被屏息時間所限制。在呼氣第一秒中之正常強制呼氣體 積（FEVi)係容易度量，且以年齡、性別及高度為基礎精確地 預測。FEVi對強制肺活量之比例（FEVi /FVC)通常係超過0.75 。記錄強制呼氣期間空氣流量對著體積，及後續強制吸氣--流量體積循環--亦有用，主要是為區別上與下氣道變窄。慢 性阻塞氣道病症之實例係描述於下文。 a. 扃喘 腫瘤壞死因子係牽連氣喘之病理生理學（Anticevich, SZ等人 (1995)Ewr/PAarmaco/· 284: 221-5; Thomas PS 等人 Care Med. 152 ： 76-80 ； Thomas PS, Heywood G. (2002) Thorax. 57 ： 774-8) 86869 -53- 1354561 。例如，已發現急性氣喘發作係與肺嗜中性白血球及提高 BALTNF 含量有關聯（Ordonez CL.等人（2000)Care ΜβίΠ61 : 1185)。已發現氣喘病徵之嚴重性係與近距離粉塵中 之内毒素含量有相互關聯。在大白鼠中，抗-TNF抗體會降 低内毒素引致之氣道變化（Kips等人（1992) 145 : 332)。 於本文中使用之"氣喘”一詞，係指其中氣道之發炎會造成 進入與離開肺臟之氣流受到限制之病症。氣喘亦被稱為枝 氣管氣喘，運動引致之氣喘-枝氣管，及反應性氣道疾病（RAD) 。於一些情況中，氣喘係與過敏反應有關聯及/或係為家族 性。氣喘包括其特徵為在枝氣管氣道之直徑或管徑上，於 短期時間内廣泛波動，而造成肺功能變化之症狀。所造成 增加對氣流之阻力，會在受感染病患中產生病徵，包括透 不過氣（呼吸困難）、胸部挾縮或’'緊密'’及哮鳴。 患有氣喘之病人，根據NIH指引，其特徵係被描述為溫和 間歇性、溫和持續性、中等持續性及嚴重持續性（參閱氣喘 診斷與管理之NAEPP專業小組報告指引-關於選擇論題之更 新2002. JACI 2002 ; 110 : S141-5209 ;氣喘診斷與管理之指引，NIH 刊物，97-4051，1997年7月）。被診斷患有中等持續性氣喘之病 患，經常以吸入之皮質類固醇治療。被診斷患有嚴重持續 性氣喘之病患，經常以高劑量吸入之皮質類固醇與口服皮 質類固醇治療。 b. 慢性阻塞肺病（c〇pd) 腫瘤壞处*因子係牽連慢性阻塞肺病之病理生理學（Keatings 86869 -54- 1354561 VM· (2000) CAe对.118 : 971-5 ; Sakao 等人（2001 Med 163 : 420-22 ; Sakao 等人（2002) CAe此 122 : 416-20)。'，慢性阻 塞肺病”或"C0PDn術語，當可交換地於本文中使用時，係指 一組肺病，其特徵為受到限制之氣流，具有可變程度之氣 囊腫大與肺臟組織破壞。COPD —詞包括慢性枝氣管炎（黏液 過度分泌，與杯狀細胞黏膜下腺增生）、慢性阻塞枝氣管炎 或氣腫（氣道主質之破壞）或此等症狀之組合。氣腫與慢性 枝氣管炎係為慢性阻塞肺病之最常見形式。C0PD係被定義 為不可逆氣流阻塞。 在C0PD中，慢性發炎會導致小氣道與肺臟主質之固定變 窄，及肺胞壁破壞（氣腫）。其特徵為增加肺胞巨噬細胞、 嗜中性白血球及細胞毒性T淋巴球之數目，且釋出多重炎性 介體（脂質、化學細胞活素、細胞活素、生長因子）。此發 炎會導致具有小氣道變窄之纖維變性，及肺臟主質破壞。 亦有高程度之氧化應力，其可擴大此發炎。 C.冠狀病症
TNF α係牽連極多種冠狀病症之病理生理學，包括再狹窄（ 參閱，例如Clausell等人（1994),同前文出處；Medall等人（1997) 价加78(3) : 273)。於本文中使用之''其中TNF α活性為有害之 冠狀病症π —詞，係意欲包括冠狀與心血管疾病，其中TNF 存在於患有此病症之病患中，已被ΐ正實係為或被懷疑為無 論是負責此病症之病理生理學，或助長此病症惡化之因素 ，包括心與血管病症，例如再狹窄。其中TNF α活性為有害 之冠狀病症，經常由於動脈中之堵塞所造成。此種堵塞可 86869 -55 - 1354561 、鬼所化成，其經常在已於先前因通常相關於動脈粥瘤 硬化之變化所變有之冠狀動脈中形成。例如，若動脈壁内 側《動脈粥瘤硬化斑龜裂，其可觸發血栓或血塊形成。此 :祸症：藉由例如增加，α在患有此病症之病患之生物流 體中之濃度（例如增加在病患之血清、血漿、滑液等中 之濃度）而被証實，其可使用例如上述抗__^抗體而被檢 $。冠狀病症亦可因動脈壓力上之平衡缺失，心臟之功能 P早礙或血耳又堵塞而造成，例如因血栓。冠狀病症包括冠 狀動脈疾病與末梢血管疾病兩者。 有彳^其中TNF 〇;活性為有害之冠狀病症之實例，包括再 狹窄。本發明之抗體、抗體部份及其他TNFa抑制劑，在治 療特定冠狀病症上之用途，係進一步討論於下文。在某些 具體實施例中，本發明之抗體、抗體部份或其他1^1?“抑制 劑，係併用另一種如下文所述之治療劑，一起投予病患。 本發明係提供在具有冠狀病症之病患中抑制TOF α活性之 方法本發明係&供在具有冠狀病症之病患中抑制或降低 TNFa活性之方法，其包括對該病患投予本發明之抗體或抗 體邵份或其他TNFo;抑制劑，以致使病患中之TNFa活性係被 抑制或降低。較佳情況是，為人類TOFa，而病患為人 類病患。或者’病患可為表現〇之哺乳動物，本發明之 ^體係與其交又反應。又再者，病患可為於其中已被引進hTNF a之哺乳動物（例如藉由hTNF a之投藥，或藉由_F a轉基 因之表現）。本發明之抗體可投予人類病患，以提供治療目 的（進一步討論於下文）。再者，本發明之抗體可投予表現顶卩 86869 -56- «之非人類哺乳動物，此抗體係與其交叉反應（例如靈長類 動物、豬或老藏）’以提供獸醫目的，或作為人類疾病之動 物才旲式。關於後者，此種動物模式可用於評估本發明抗體 之治療功效（例如測試投藥之劑量與時間過程）。 用於研究冠狀病症包括再狹有之常用動物模式，包括大白 鼠或老鼠頸動脈連接模式與頸動脈損傷模Spems等人（i99i) 讀e 253 · 1129 ’ Clowes 等人（1983)城/m视 49 : 208 ; Lindner 等人（1993)⑽级73: 792)。在頸動脈連接模式中，動脈血 欲流動係因接近末梢分叉血管之連接而被瓦解^在ci_ 等人中所述者’係施行頸動脈損傷模式，以致使共同頭動 脈藉由經過外部頸動脈引進之氣脹導管之管腔内通路，造 成内皮之裸。於2週時’頸動脈係由於平滑肌細胞挟縮而 顯著地變f，但在2與12週之間，血管内祕厚度上加倍， 導致降低g腔大小。&何此等模式均可用以測定本發明顶F α抗體在人類再㈣之預防與治療上之潛在治療作用。 本發明之抗體可用以治療其中職活性為有害之心與血 管病症，其中預期TNFU性之抑制會緩和冠狀疾病之病徵 及/或進展’或預防冠狀疾病。患有或處於發展冠狀病症危 ，下之病，t ’可經過臨床徵候確認。在冠狀疾病中之臨床 徵候’經常包括胸痛、呼吸短促、虛弱、昏厥不適、意識 上《變更、肢端疼痛、陣發性夜时吸_、短暫絕血性 發作及病患所經歷之其他此種現象。冠狀疾病之臨床跡象 亦可包括EKG異常、改變末梢脈搏、動脈嘈聲，異常心音、 速率及哮鳴’頸靜脈膨脹 神經變質及被臨床家所辨識之 86869 •57- 1354561 其他此種發現。通狀病症亦可藉由例如增加TNF α在患有此 病症之病患之生物流體中之濃度（例如增加TNF α在病患之血 清、血漿、滑液等中之濃度）而被Ί正實。 心與血管病症之實例包括但不限於冠狀動脈疾病、心狡痛 、心肌梗塞、因心動停止所造成之心與血管組織傷害、因 心臟分流所造成之心與血管組織傷害、心臟性休克與高血 壓、動脈粥瘤硬化、冠狀動脈痙攣、冠狀動脈疾病、瓣膜 疾病、節律不齊及心肌病。本發明之抗體、抗體部份及其 他TNF α抑制劑，在治療特定心與血管疾病上之用途，係進 一步討論於下文。在某些具體實施例中，本發明之抗體、 抗體部份或其他TNF α抑制劑，係併用另一種治療劑，一起 投予病患，如下文段落ΙΠ中所述。 V再狹窄 TNF α係牽連再狹窄之病理生理學（參閱Zhou等人（2002)動脈 粥瘤硬化.161 : 153 ; Javed 等人（2〇〇2)£·ψ_^Μσ/Ραί/ζσ/73 : 104) 。例如，在老鼠導線頸動脈模式中，TNF -/-老鼠，與野生型 老鼠比較，ΐ正實在血管内膜增生上有七倍降低（Zimmerman等 人Comp Physiol 283: R505)。再狹窄可 由於任何型式之血管重建而發生，無論是在冠狀血管分佈 中或在末梢中（Colburn與Moore (1998)肌血管内膜增生，第690-709 頁，f 乎..·，祭合回廢Philadelphia : Saunders)。例如，研 究已報告在冠狀血管造形術後徵狀再狹窄率為30-50% (參閱 Berk 與 Harris (1995) jdv. /«iem. 40 : 455-501)。於頸動脈動脈 内膜切除術後，作為另一項實例，20%經研究之病患，具有 86869 -58- 1354561 管腔變窄大於 50% (Clagett 等人（1986) J. Vase. Surg. 3 : 10-23)。再 狹窄係以不同程度之徵狀學証實，其係伴隨著不同解剖學 位置上之預閉塞損害，此係由於一些因素之組合所致，包 括所涉及血管之性質，殘留疾病程度及局部血液動力學。 於本文中使用之”狹窄”係指動脈變窄，正如在閉塞病症中 或於再狹窄中所見及者。狹窄可伴隨著反映出通過變窄動 脈鏈段之血液流量降低之病徵，於此種情況中，會導致狹 窄之病症係被稱為疾病（意即閉塞疾病或再狹窄疾病）。狹 窄可無徵狀地存在於血管中，僅被診斷介入檢出，譬如血 管X射線檢法或血管實驗室研究。 本發明之抗體可用以治療患有或處於發展再狹窄危險下之 病患。處於發展再狹窄危險下之病患，包括已接受PTCA之 病患。此病患亦可能已具有被插入之支架，以預防再狹窄 。本發明之TNF α抗體可單獨使用，或併用支架以預防狹窄 在患有心與血管疾病之病患中再發生。 Ί. 營血性心衰竭 TNF α係牽連鬱血性心衰竭之病理生理學（參閱Zhou等人 (2002)乂认饥^/6^治161 : 153)。TNFa之血清含量，在患有發血 性心衰竭之病人中，係被提高，其方式係直接與疾病之嚴 重性成正比（Levine 等人（1990)7^5^57/^^323 : 236 ; Torre-Amione 等人（1996) /乂m Co// CaWo/ 27 : 1201)。此外，TNF α 之抑制劑亦 已証實會改善鬱血性心衰竭病徵（Chung等人（2003)循環107 : 3133)。 於本文中使用之M鬱血性心衰竭π —詞，包括其特徵為減少 86869 -59- 1354561 心臟供應身體之氧需求能力之症狀。鬱血性心衰竭之病徵 與跡象，包括減少血液流動至身體之不同組織，過量血液 蓄積在不同器官中，例如當心臟不能夠泵出藉由大靜脈返 回其中之血液時、用力呼吸困難、疲勞及/或末梢水腫，例 如由於左心室機能障礙所造成之末梢水腫。鬱血性心衰竭 可為急性或k性。鬱血性心衰竭之表象，經常發生於多種 心臟或系統病症之後期，其係共有心臟功能之暫時或永久 喪失。此種病症之實例包括高血壓、冠狀動脈疾病、瓣膜 疾病及心肌病，例如肥大、擴大或限制性心肌病。 具有或正患有鬱血性心衰竭之病患”係為具有涉及各種不 同病因學 < 臨床徵候簇之病症之病患，該病因學係藉由受 知害心臟泵送之共同起源所連結，其中心臟不能夠泵送與 生物代谢組織需要量相當之血液，或只有來自提高充填壓 力才可如此進行。”處於發展鬱血性心衰竭危險下之病患，, 係為由於某些影嚮病患之心與血管系統之因素，而具有發 展營血性心衰竭傾向之病患。一般期望在此等病患中降低 參血性心衰竭之危險或預防其發展。”具有鬱血性心衰竭，, 之措辭’係包括相對於一般個體群，處於患有此症狀危險 下 < 病患，即使其可能尚未患有該病症，但由於顯示危險 因子亦然。例如’患有未經治療高血壓之病人可能尚未患 有鬱血性心衰竭，但由於其高血壓症狀，故係處於危險下 。於本發明之一項具體實施例中，抗體D2E7係用以治療處 於發展鬱血性心衰竭危險下之病患。 Y急性冠狀徵候裹 86869 -60· 1354561 TNF α係牽連急性冠狀徵候簇之病理生理學（參閱Libby (1995) G>cw/油·⑽91 : 2844)。急性冠狀徵候簇包括其中病患由 於血液流量限制而造成不足夠氧抵達心臟而經歷疼痛之病 症。研究已發現TNF α在急性冠狀徵候簇中係扮演一項角色 。例如，在能夠於下游血液動力作用不存在下引致心肌梗 塞之新穎大白鼠異位心臟移植冠狀連接模式中，嵌合可溶 性TNF受體（sTNFR)之投藥，係廢除短暫LV改造與機能障礙 (Nakamura 等人（2003)/. Gmto/· 41 : 41)。亦已發現 sTNFR 表現質 粒之直接注射至心肌，會在急性心肌梗塞(AMI)實驗大白鼠中 ，造成梗塞形成大小之降低（Sugano等人(2002) J 16 : 1421)。 於一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體係在病患中用 以治療或預防急性冠狀徵候簇，其中急性冠狀徵候簇係為 心肌梗塞或絞痛。 於本文中使用之"心肌梗塞''或”ΜΙ”術語，係指心臟病發作 。心肌梗塞係涉及心臟之一個區域之壞死或永久性傷害， 此係由於不充分供應氧至該區域所致。此壞死典型上係因 冠狀動脈之阻塞所造成，無論是來自動脈粥瘤硬化或栓子 。藉由本發明之TNF α抗體治療之ΜΙ，包括Q-波與非Q-波心 肌梗塞。大部份心臟病發作係因血塊所造成，其會阻斷冠 狀動脈（將血液與氧帶至心臟肌肉之血管）之一。例如，在 冠狀動脈中之血塊會中斷血液與氧流動至心臟肌肉，導致 該區域中之心臟細胞死亡。受到傷害之心臟肌肉會永久地 失去其收縮之能力，且其餘心臟肌肉必須彌補之。ΜΙ亦可 因個人中之無法抵抗壓力所造成。 86869 -61 - 1354561 "絞痛"一詞係指痙攣性、閉塞性或窒息性疼痛，且尤其是 當顯示心狡痛時’其係為陣發性胸廓疼痛，最常由於心肌 之缺氧症所致。絞痛包括變型絞痛與用力绞痛。具有絞痛 之病患，具有絕血性心臟疾病’其係藉由突然、嚴重、壓 迫胸骨下疼痛作為表象，其經常會輻射至左肩且沿著左臂 。TNFa；係牽連絞痛，因TNFo;含量在患有MI與安定絞痛之 病人中，係向上調節（Balbay等人（2001)也抑521〇9)。 I動脈粥瘤硬化 於本文中使用之”動脈粥瘤硬化"係指其中脂肪物質沿著動 脈壁沉積之症狀。此脂肪物質會稠化、硬化及最後可能阻 塞動脈。動脈粥瘤硬化亦被稱為動脈硬化、動脈之硬固及 動脈斑蓄積。針對胸之多株抗體，已在兔子動脈粥瘤硬 化模式中，對於中和會造成發炎與再狹窄之TOFa活性上， 被证實疋有效的（Zhou等人，如前文出處）。因此，本發明之 α抗體可用㈣钱肋患有或處於具有動脈粥瘤硬化危險 下之病患。 5. 心肌病 於本文中使用之”心肌病"—詞，係用以定義心肌疾病，其 中心臟肌肉或心肌係被弱化，經常造成不充分心臟系送。 心肌病可因病毒感n病發作、酒精中毒、長期嚴重 南血壓（高血液恩力）或因自身免疫原因所造成。 、，在":約75娜^臟衰竭病患巾，冠狀祕疾病係為心肌 病《從屬原因’且被稱為”絕血性心肌病"。絕血性心肌病 係因心臟病發作所造成’其係在心臟肌肉或心肌中留下傷 86869 -62. 1354561 疤。於是，受感染之心肌不能夠貢獻心臟泵送功能。傷疤 愈大或心臟病發作愈多，則發展絕血性心肌病之機會愈高。 未歸因於從屬之冠狀動脈疾病之心肌病，係被稱為''非絕 血性心肌病''。非絕血性心肌病包括但不限於原發性心肌病 、肥大心肌病、酒精性心肌病、擴張之心肌病、分娩期周 圍心肌病及限制性心肌病。 ό.代謝病症 TNF α係牽連極多種病症之病理生理學，包括代謝病症， 譬如糖尿病與肥胖（Spiegelman 與 Hotamisligil (1993) Ce//73: 625; Chu 等人Int J Obes Relat Metab Disord. 24 ·· 1085 ; Ishii 等人（2000) 49 : 1616)。本發明係提供TNF 活性之方法，在患 有此種代謝病症之病患中進行，此方法包括對該病患投予 抗體、抗體部份或其他TNF α抑制劑，以致在患有新陳代謝 病症之病患中之TNFa活性係被抑制。本發明之TNFo:抗體亦 可用以治療處於發展新陳代謝病症危險下之病患。代謝病 症經常與關節炎有關聯，包括風濕性關節炎。於一項具體 實施例中，本發明之抗體係用以治療患有與風濕性關節炎 有關聯之新陳代謝病症之病患。於另一項具體實施例中， 本發明之TNF α抗體係用以治療與糖尿病或肥胖有關聯之病 症。 代謝病症會影嚮身體如何處理進行生理功能所需要之物質 。本發明之許多代謝病症係共有某些特徵，意即其係伴隨 著胰島素抗藥性、缺乏調節血糖之能力、體重增加及增加 身體質量指數。代謝病症之實例包括糖尿病與肥胖。糖尿 86869 -63- 1354561 病之實例包括第1型糖尿病、第2型糖尿病、糖尿病神經病 、末梢神經病、糖尿病患者之視網膜病、糖尿病患者之潰 瘍、視網膜病潰瘍、糖尿病患者之巨血管病及肥胖。可以 本發明之TNFa抗體治療之代謝病症之實例，係更詳細描述 於下文： 糖尿病 腫瘤壞死因子係牽連糖尿病之病理生理學（參閱，例如 Navarro J.F., Mora C.，Maca，Am J Kidney Dis. 2003 年 7 月；42(1) : 53-61 ; Daimon M.等人，Diabetes Care. 2003 年 7 月；26(7) : 2015-20 ; Zhang Μ· 等人，J Tongji Med Univ. 1999 ; 19(3) : 203-5, Barbieri Μ.等人，Am J Hypertens. 2003 年 7 月；16(7) : 537-43)。例如，TNFa 係牵·連胰 島素抗藥性之病理生理學。已發現在患有胃腸癌之病人中 之血清TNF含量，係與胰島素抗藥性有關聯（參閱，例如McCall， J.等人，Br.J.Surg. 1992; 79: 1361-3)。 糖尿病包括此病症之兩種最常見類型，意即第I型糖尿病 與第II型糖尿病，此兩者均由於身體無法調節胰島素所造成 。胰島素為藉由胰腺釋出之激素，以回應血液中增加之血 糖（葡萄糖）含量。 於本文中使用之π第1型糖尿病”一詞，係指當胰腺產生太 少胰島素，以致不能適當調節血糖含量時，所發生之慢性 疾病。第1型糖尿病亦為被稱為胰島素依賴性糖尿病、IDMM 、幼年開始型糖尿病及糖尿病-第I型。第1型糖尿病係為胰 yS-細胞之進行性自身免疫破壞之結果，且接著是胰島素不 足0 86869 -64- 丄斗：)〇丄 ’正第r糖尿病”-詞係指當胰腺未能製造足夠胰島辛以保 雕吊匕血糖含量時，所發生之慢性疾病，其經常是由於身 月丑未ilb良好地回鹿膜覓音所# 士 睡*主、 〜島素所&成。弟2型糖尿病亦被稱為非 '、依賴性糖尿病' NDDM及糖尿病_第κ型。 糖尿病可藉由葡萄糖容許度試驗之投藥而被診斯出。臨床 —’經常將糖尿病區分成數個基本種類。此等種類之主要 二】包括自身免疫糖尿病、非姨島素依賴性糖尿病⑷刑 冰届、非胰島素依賴性捵 T依U生糖尿届（弟2型刪M)及年輕人之成 二因1:尿病_DY)。另一種類，，經常被稱為續發性， ❹ 可確認之症狀所產生之糖尿病，該症狀會造成 徵候誤發展。續發性種類之實例包括因騰疾 尿广、吊所造成之糖尿病’藥物-或化學-所引致之糖 >因胰島素⑼異常所造成之糖尿病、與遣傳徵候誤 =聯之糖尿病及其他原因之糖尿病（參閱，例純—陶 罘 14 版，New York, McGraw-Hill) 〇 =病係顯示在前述種類中，並可造成數種併發症，其係 =万；下文段落中。因此，本發明之抗體或其抗原結合片 又上用以冶療糖尿病。於—項具體實施例中，本發明之冒 =體或其抗原結合片段’係用以治療與上文所確認之種類 有關聯之糖尿病。 ^糖尿病經常以食物療法'胰島素服藥及本文中所述之各種 =療法治因此’本發明之聊4體亦可併用常用以治 伴隨L病之代謝病症與疼痛之藥劑，—起投藥。 86869 -65- 1354561 於一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體亦可用以治療 與糖尿病有關聯之病症。糖尿病係顯現在許多與糖尿病有 關聯之併發症與症狀中，包括下述種類： a. 糖尿病神經病與末梢神經病 腫瘤壞死因子係牽連糖尿病神經病與末梢神經病之病理生 理學（參閱 Benjafield 等人（2001) Care. 24 : 753 ; Qiang, X.等 人（1998) 41 : 1321-6 ; Pfeiffer 等人（1997) 29 : 111)。 ”神經病”一詞，亦被稱為神經傷害-糖尿病，當於本文中 使用時，係指糖尿病之常見併發症，其中神經係由於高血 糖（高血糖含量）之結果而受到傷害。多種糖尿病神經病已 被察覺，譬如末梢感覺與運動多神經病、病灶運動神經病 及自主神經病。 ”末梢神經病"一詞亦稱為末梢神經炎與糖尿病神經病，當 於本文中使用時，係指神經未能攜帶訊息往返腦部與脊髓 。末梢神經病會產生一些病徵，譬如疼痛、感覺喪失及無 法控制肌肉。在一些情況中，神經未能控制血管、腸功能 及其他器官，會造成異常之血壓、消化及喪失其他基本不 隨意過程。末梢神經病可能涉及對單一神經或神經組之傷 害（單神經病），或可影嚮多重神經（多神經病）。 會影嚮交感與副交感神經之小的有髓鞘與無髓鞘纖維之神 經病，係被稱為’'末梢神經病"。再者，末梢神經病之相關 病症，亦被稱為末梢神經炎與糖尿病神經病，係指神經未 能攜帶訊息往返腦部與脊髓。這會產生一些病徵，譬如疼 86869 -66- 1354561 痛、感覺喪失及無法控制肌肉。在一些情況中，神經未能 控制血管、腸功能及其他器官，會造成異常之血壓、消2 及喪失其他基本不隨意過程。末梢神經病可能涉及對單— 神經或神經組之傷害（單神經病）或可能影嚮多重神經（多神 經病）。 ，，糖尿病神經病詞係、指糖尿病之常見併發症，其中神經 係由於高血糖（高血糖含量）之結果而受到傷害。糖尿病= 經病亦=稱為神經病與神經傷害·糖尿病。多種糖尿病神經 病已被察覺，譬如末梢感覺與運動乡神經病 '病灶運動神 經病及自主神經病。 b.糖尿病患者之視網膜病 腫瘤袠叱因子係牵連糖尿病患者視網膜病之病理生理學 (Scholz等人（2003) 施咖〇Ul : 171)。於本文中使用之，，糖 尿病患者 < 視網膜病"一詞，係指因長期糖尿病所造成對眼 晴視網膜之進行性傷害。糖尿病患者之視網膜病包括增生 性視網膜病。增生性神經病依次包括新血管生成作用、經 由視網膜出血及视網膜脫離。 在^么展之視網膜病中，小血管會增生於視網膜之表面上 匕等血g為脆性的’易於出血，且可能會造成經由視網 膜出血、此出血會遮蔽視覺，而當此出血為再吸收之纖維 ’·且4形式時，會傾向於视網膜脫離與视覺喪失。此外，糖 尿病患者疋視網膜病包括增生性視網膜病，其包括新血管 生成作用、經由視網膜出血及視網膜脫離。糖尿病患者之 視...罔膜病亦包括”背景視網膜病"，其係涉及伴隨著視網膜 86869 -67- 1354561 層生成之變化。 C. 糖尿病患者之潰瘍與視網膜病潰瘍 腫瘤壞死因子係牽連糖尿病患者潰瘍之病理生理學（參閱 Lee 等人（2003) ifwm Tmmwno/. 64 : 614 ; Navarro 等人（2003) dm •/沿办它少 ZXs. 42 : 53 ; Daimon 等人（2003)1)/^6^1 Care. 26 : 2015 ; Zhang 等人 (1999)/7b«g/z'Met/ C/mV. 19 : 203 ; Barbieri 等人（2003) 肌 16 :537; Venn 等人（1993) ΑίΛπ·"·? 36: 819; Westacott 等人（1994) J Rheumatol. 21 · 1710) 〇 於本文中使用之"糖尿病患者之潰瘍π —詞，係指由於糖尿 病之併發症所造成之潰瘍。潰瘍為在皮膚或黏膜上，因炎 性、傳染性、惡性症狀或代謝病症所造成之彈坑狀損傷。 典型上，糖尿病患者之潰瘍可發現於四肢與端部上，更典 型上為腳部。因糖尿病症狀所造成之此等潰瘍，譬如神經 病與血管機能不全，可能會導致絕血與不良傷口癒合。更 廣泛之潰瘍可發展成骨髓炎。一旦發展骨髓炎，其可能難 以單獨使用抗生素根除，而可能必須截斷。 於本文中使用之”視網膜病潰瘍”一詞，係指會使得或造成 對眼睛與眼睛視網膜傷害之潰瘍。視網膜病潰瘍可包括譬 如視網膜病出血之症狀。 d. 糖尿病患者之巨血管病 腫瘤壞死因子係牵連糖尿病患者巨血管病之病理生理學 (Devaraj 等人（2000)arcw/a"on_l02 : 191 ; HattoriY 等人（2000) CaWomsc 及叹 46 : 188; Clausell N 等人（1999) 8: 145) 。”糖尿病患者之巨血管病"一詞，亦被稱為”巨血管疾病" 86869 -68- 1354561 ，當於本文中使用時，係指由於糖尿病所造成之血管疾病 。糖尿病患者之巨血管病併發症，係在例如脂肪與血凝塊 蓄積在大血管中，且黏附至血管壁時發生。糖尿病患者之 巨血管病包括一些疾病，譬如冠狀疾病、腦血管疾病與末 梢血管疾病、高血糖與心血管疾病及中風。 2.肥胖 腫瘤壞死因子係牵連肥胖之病理生理學（參閱，例如 Pihlajamaki J 等人（2003) 06β5·/?β5· 11 : 912 ; Barbieri 等人（2003)Jm«7 16 : 537 ; Tsuda 等人（2003)>/iVMir· 133 : 2125)。肥胖會增 加人們由於糖尿病、中風、冠狀動脈疾病、高血壓、高膽 固醇及腎臟與膽囊病症所致患病與死亡之危險。肥胖亦可 增加某些類型癌症之危險，且可為發展骨關節炎與睡眠窒 息之危險因子。肥胖可單獨以本發明之抗體治療，或與其 他代謝病症包括糖尿病一起治療。 E.貧血 TNF α係牽連極多種貧血之病理生理學（參閱，例如Jongen-Lavrencic Μ·等人，（1997) «/· 24(8) ’· 1504-9 ; Demeter J·等人， (2002) Ann Hematol. 81(10) ： 566-9 ； DiCato M., (2003) The Oncologist 8 (補充1) : 19-21)。本發明係提供在患有此種病症之病患中抑 制TNF α活性之方法，此方法包括對該病患投予本發明之抗 體、抗體部份或其他TNFa抑制劑，以致在患有貧血之病患 中之TNFa活性係被抑制。於一項具體實施例中，貧血係伴 隨著風濕性關節炎。 於本文中使用之"貧血"一詞’係指異常低數目之循環紅血 86869 •69- 1354561 球或降低血液中之血紅素濃度。與風濕性關節炎有關聯之 貧血之實例，包括例如慢性疾病之貧血、鐵缺乏貧血及自 身免疫溶血性貧血。於一項具體實施例中，本發明係提供 治療相關於貧血之方法，例如相關於風濕性關節炎之貧血 '感染與慢性炎性疾病之貧血、鐵缺乏貧血、自身免疫溶 血性貧血、骨髓消耗貧血、再生障礙性貧血、發育不全貧 血、純紅血球發育不全，及與腎衰竭或内分泌病症有關聯 之貧血、巨胚紅血球貧血、於血質或血球蛋白合成上之缺 陷，因紅血球中結構上缺陷所造成之貧血，例如鐮狀細胞 貧血，及未知起源之貧血，譬如鐵胚紅血球貧血，與慢性 感染有關聯之貧血，譬如瘧疾、錐蟲病、HIV、肝炎病毒或 其他病毒，及因骨髓缺失所造成之骨髓消耗貧血。 F.疼痛 TNFa係牵連極多種疼痛徵候簇之病理生理學（參閱，例如 Sorkin, LS.等人，（1997) TVewmsdewce. 81(1) : 255-62 ; HuygenFJ.等人， (2002) 11(1) : 47-51 ; ParadaCA.等人，（2003) 17⑼：1847-52)。本發明係提供在患有此種疼痛病症 之病患中抑制TNF α活性之方法，此方法包括對該病患投予 本發明之抗體、抗體部份或其他TNFa抑制劑，以致在患有 疼痛之病患中之TNF α活性，係被抑制。疼痛已經以多種方 式定義，包括感受傷害疼痛與神經病原性疼痛。最常經歷 之疼痛形式可被定義為刺激在神經末梢上之作用，其會造 成脈衝傳遞至大腦。疼痛亦常與炎性病症有關聯，包括例 如風濕性關節炎。於一項具體實施例中，本發明之抗體係 86869 -70- 1354561 用以治療患有與風濕性關節炎有關聯疼痛之病患。其中TNF α活性為有害之疼痛病症之實例，係進一步討論於下文。 X.神經病原性疼痛 腫瘤壞死因子係牽連神經病原性疼痛之病理生理學（參閱 Sommer C., (1999) iSc/wzerz. 13(5): 315-23; Empl Μ.等人，（2001) 56(10) : 1371-7 ; Schafers Μ.等人，（2003) 23(7) : 3028-38)。 於本文中使用之”神經病原性疼痛"一詞，係指由於對神經 、脊髓或腦部之損傷所造成，且經常涉及神經過敏性之疼 痛。神經病原性疼痛之實例，包括慢性下方背痛、與關節 炎有關聯之疼痛、與癌症有關聯之疼痛、疱疹神經痛、幻 想肢疼痛、中樞疼痛、類阿片抗藥性神經病原性疼痛、骨 頭損傷疼痛及生產與分娩期間之疼痛。神經病原性疼痛之 其他實例，包括手術後疼痛、群集頭痛、牙痛、手術疼痛 、由於嚴重例如三級灼傷所造成之疼痛、分娩後疼痛、絞 痛、尿生殖道相關疼痛，及包括膀胱炎。 神經病原性疼痛係與感受傷害疼痛有區別。涉及感受傷害 機制之疼痛，經常於持久性上受限於組織修復之期間，且 一般係被可採用之止痛劑或類阿片所:緩和（Myers，Regional Anesthesia，20 : 173-184(1995))。神經病原性疼痛典型上為長持 續性或慢性，且在最初急性組織傷害之後，經常發展數天 或數個月。神經病原性疼痛可涉及持久自發性疼痛，以及 感覺異常，其係為對通常不會疼痛之刺激之疼痛回應。神 經病原性疼痛之特徵亦可為痛覺過敏，其中對通常為不足 道之疼痛刺激，譬如針刺，有加重之回應。與感受傷害疼 86869 -71 - 1354561 痛不同，神經病原性疼痛通常對類阿片療法具抗藥性(Myers, 同前文出處，1995)。因此，本發明之抗體或其抗原結合片段 ，可用以治療神經病原性疼痛。 Ί.感受傷害疼痛 於本文中使用之”感受傷害疼痛"一詞，係指被傳遞越過完 整神經元途徑之疼痛，意即因對身體損傷所造成之疼痛。 感受傷害疼痛包括疼痛之體細胞感覺與正常功能，且通知 病患迫近之組織傷害。感受傷害途徑存有對病患之保護， 例如回應灼傷所經歷之疼痛。感受傷害疼痛包括骨頭疼痛 、内臟疼痛及與柔軟組織有關聯之疼痛。 腫瘤壞死因子係牽連内臟疼痛之病理生理學（參閱Coelho A. 等人，（2000) Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 279 : G781-G790 ; Coelho 等人（2000) Brain Res Bull. 52(3) : 223-8)。内臟疼痛係用以 指藉由A- (5與C神經纖維上之受體所媒介之感受傷害疼痛。 A-占與C-神經纖維係位於皮膚、骨頭、結缔組織、肌肉及内 臟中。内臟疼痛可於分佈上為模糊，於本性上為痙攣性， 且在性質上經常被描述為深沉、疼痛、擠壓及絞痛。内臟 疼痛之實例包括與心臟病發作有關聯之疼痛，其中内臟疼 痛可在手臂、頸部及/或背部中感覺到，及肝囊疼痛，其中 内臟疼痛可在背部及/或右肩中感覺到。因此，本發明之TNF α抗體或其抗原結合片段，可用以治療内臟疼痛。 G-肝病 TNF α係牽連極多種肝病之病理生理學（參閱，例如 CollettiLM.等人，（1990)/C"n/m奶ί· 85(6): 1936-43; Tiegs G· (1997) jcto 86869 -72- 1354561 60(2) : 176-9 ; Fernandez ED.等人，（2000)«/⑼ 6(4) : 321-8)。本發明係提供在患有此種肝病之病患中之 TNFa活性之方法，此方法包括對該病患投予本發明之抗體 、抗體部份或其他TNF α抑制劑，以致在患有肝病之病患中 之TNFo:活性係被抑制。 於本文中使用之π其中TNF α活性為有害之肝病π —詞，係 意欲包括肝臟之疾病及其他病症，其中TNFa存在於患有此 病症之病患中，已被証實係為或被懷疑係為無論是負責該 病症之病理生理學，或助長該病症惡化之因素。因此，其 中TNFo:活性為有害之肝病，係為其中預期TNFa活性之抑制 會緩和肝病之病徵及/或進展之病症。 肝病包括許多疾病與病症，其中肝係不適當地發揮功用或 停止發揮功用。肝細胞傷害可包括酒精性肝硬化、α 1抗胰 蛋白酶不足、自身免疫肝硬化、隱原肝硬化、暴發性肝炎 、Β與C型肝炎及皮脂腺肝炎。膽道病症之實例包括膽囊纖 維變性、原發性膽硬化、硬化性膽管炎及膽管阻塞（Wiesner, R. Η, 肝臟移植之現行適應徵，逆適應徵及計時（1996),肝臟移植， Saunders (出版）；Busuttil, R· W_ 與 Klintmalm, G_ B.(編著）第 6 章， 例如表6-3與6-5以及圖6-11 ; Klein，A. W., (1998)部份高血壓：肝 臟移植之角色，Musby (出版），現行外科療法，第6補充版， Cameron, J.(編著）。 π肝炎” 一詞係指肝臟之發炎。肝炎可因被各種生物體，包 括細菌、病毒（A、Β、C型肝炎等）或寄生蟲之感染所造成 。化學毒素，譬如醇、藥物或有毒蕈類，亦可傷害肝臟， 86869 -73- 1354561 並造成其變成發炎。肝炎之少有但極端危險之原因，係由 於乙醯胺吩（捕熱息痛（Tylenol))之劑量過度所造成，其可為致 命的。此外，體中之免疫細胞可攻擊肝臟，並造成自身免 疫肝炎。肝炎可快速地消褪（急性肝炎）或造成長期疾病（慢 性肝炎）。於一些情況中，可造成進行性肝臟傷害或肝臟衰 竭。肝炎之發生率與嚴重性係依許多因素而改變，包括肝 臟傷害及病患中任何從屬疾病之原因。 於一項具體實施例中，本發明之特徵為治療其中TNFa活 性為有害之肝病之方法，其包括對該病患投予有效量之TNF α抑制劑，以致該病症係經治療。於一項具體實施例中，肝 病係選自包括C型肝炎病毒、自身免疫肝炎、脂肪肝疾病、 Β型肝炎病毒、肝毒性，及非酒精性肝炎，包括非酒精性皮 脂腺肝炎（NASH)。肝病之實例係進一步描述於下文。 X. C型肝炎病毒(HCV) 腫瘤壞死因子係牽連C型肝炎病毒之病理生理學（參閱 Gonzalez-Amaro. (1994) Exp Med. 179 : 841-8 ; Nelson DR,等人（1997) Zh’gZfe 4·2 : 2487-94· ; Kallinowski B 等人（1998) 67ζ·« /mmwm?/. Ill :269-77)。nC型肝炎病毒”或nHCV"術語係用以描述肝炎病毒 ，其係為非A型、非B型肝炎之病因劑。C型肝炎病毒會造 成肝臟發炎。HCV感染會造成C型肝炎。在急性期中之C型 肝炎，通常係比B型肝炎溫和，但較大比例之此種感染變成 慢性。HCV為急性肝炎與慢性肝病之一項主要原因，包括肝 硬化與肝癌。HCV為病毒（A、B ' C、D及E)之一，其係一 起負責病毒肝炎之絕多數病例。其在黃病毒科中為一種有 86869 -74- 1354561 被膜RNA病毒，其顯示具有狹窄宿主範圍。此病毒之一項重 要特徵是其基因組之相對可突變性，其依次可能與引致慢 性感染之高傾向（80% )有關聯。HCV係群集成數種不同基因 型，其在決定疾病之嚴重性及對治療之回應上，可能是重 要的。於一項具體實施例中，本發明之TNFo:抗體或其抗原 結合片段，可用以治療HCV。 於一項具體實施例中，被HCV感染之病患，係以本發明之 TNFa抗體治療。HCV感染（C型肝炎）之病徵，包括下列至少 一個：黃疸、腹痛（尤其是在右上腹部）、疲勞、食慾喪失 、惡心與嘔吐、低等級發熱、蒼白或土色糞便、暗色尿液 及全身搔癢。但是，應注意的是，被C型肝炎感染之許多人 ，並未具有病徵，因C型肝炎經常在血液試驗期間，對例行 身體或其他醫療程序被檢出。 Ί.自身免疫肝炎(AIH) 腫瘤壞死因子係牽連自身免疫肝炎之病理生理學（參閱 Cookson S.等人，（1999) 30(4): 851-6; Jazrawi S.等人，（2003) hver Trara〆 9(4) : 377-82)。於本文中使用之"自身免疫肝炎”係 指肝病，其特徵為肝臟發炎，因惡行免疫細胞所造成，該 細胞係將肝臟之正常細胞誤認為外來組織或病原（致病劑） 。自身免疫肝炎經常負貴肝主質之進行性破壞，若留置未 經處理則具有高死亡率（Johnson P.J.等人，（1993)18 : 998-1005)。自身免疫肝炎特徵之一，係為循環自體抗原以病 人血清之幾乎90%存在。此種抗體可用以確認具有自身免疫 肝炎之病患。 86869 -75- 1354561 於病患間之臨床與血清學差異，已導致aih分類成兩種類 型。類型I之特徵為抗平滑肌（SMA)及/或抗核抗體（ANA)存 在於病患血清中，而來自類型II病患之血清顯示抗肝腎微粒 體柷體類型 I(LKM1) (Homberg J.C.等人，（1987)//^p<3to/ogy, 7 : 1333-1339; MaggioreG.等人，（1993)·/· /W/air· 17: 376-381) 。一種血清學標記物，抗肝細胞溶質類型I抗體（LC1)，已在 患有AIH類型II病人之30%中被確認。此外，LC1在受測試病 患之10%中，証實是唯一血清學標記物（Martini E.等人，（1988) i/epato/ogy, 8 : 1662-1666)。於一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體或其抗原結合片段，係用以治療AIH。 脂肪肝疾病 腫瘤壞死因子係牵連脂肪肝疾病之病理生理學（參閱 Valenti L.等人，(2002) Gastroenerology 122(2): 274-80; Li Ζ.等人，(2003) Hepatology 37(2) : 343-50)。脂肪肝疾病係指其中脂肪（肝細胞） 係過度地累積在肝臟中之疾病。咸認脂肪肝疾病係因過度 營養、醇之攝食過多、糖尿病及由於醫藥服用之副作用所 造成。脂肪肝疾病可能會造成嚴重疾病，譬如慢性肝炎與 肝硬化。在患有脂肪肝疾病之病人中，脂質，特別是中性 脂肪，會累積在肝細胞中，達超過生理學上可容許範圍量 之程度。從生物化學觀點看來，脂肪肝判斷之標準是中性 脂肪之重量為肝組織濕重之約10% (1〇〇毫克/克濕重）或更多 。於一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體或其抗原結合 片段，可用以治療脂肪肝疾病。 ^ Β型肝炎病毒(HBV) 86869 -76- 1354561 腫瘤壞死因子係牽連B型肝炎病毒之病理生理學（參閱 Kasahara S.等人，（2003) Wra/. 77(4): 2469-76; Wang F.S·，（2003)的rW·/ G:β你Όe«ίera/.9(4):641-4;BieπnerM.等人，（2003)>/^^?/Ό/.77⑺：4033-42)。"B型肝炎病毒”（HBV) —詞係用以描述會在人類中產生 病毒肝炎B型之病毒（血清性肝炎病毒）。其與具有短潛伏期 之A型肝炎病毒（傳染性肝炎病毒）對照，係為具有長潛伏期 (約50至160天）之病毒疾病。B型肝炎病毒經常藉由受感染 血液或血液衍生物之注射或僅利用受污染之針頭、刺血針 或其他儀器傳遞。於臨床上與病理學上，此疾病係類似病 毒肝炎A型；但是，沒有交叉保護性免疫。於感染後，病毒 抗原（HBAg)已被發現於血清中。 B型肝炎病毒係在極高速率下感染人類。變成被B型肝炎 感染之大部份人，會在6個月内除去病毒，其中短暫感染係 被稱為B型肝炎之"急性"病例。據估計至少約3億人係為HBV 之慢性載體。被此病毒感染會造成一範圍之臨床病徵，包 括較少之流行性感冒狀病徵至死亡。於一項具體實施例中 ，本發明之TNF α抗體或其抗原.結合片段，可用以治療HBV 感染。 5.肝毒性 腫瘤壞死因子係牽連肝毒性之病理生理學（參閱Bmccoleri Α. 等人，（1997)//epaio/ogy25(1) : 133-41 ; LusterM.L 等人，（2000) 919 : 214-20 ; SimeonovaP.等人，（2001) P/zamaco/. 177(2) : 112-20)。肝毒性一詞係指因藥療法及其他化 學品或藥物所造成之肝臟傷害。確認病患中之肝臟毒性之 86869 -77- 1354561 最良好指標，係為血液中某些酵素度量佶 徂疋升南，譬如AST ( 天冬胺酸轉胺酶）、ALT(丙@酸轉胺酶）及G〇T(楚胺酸草酷
酸酯轉胺酶）。 B 肝毒性可能會造成永久損傷與死亡。肝毒 . ^母性炙取初病徵可 包括急性胃腸病徵，例如嚴重腹瀉。肝毒性第二階段之特 徵為病徵之緩減。在此明顯消退期間，呈現肝損傷2生物 化學証據。少尿症(減少尿液產量)在第二階段期間是很平 常的。具有明顯肝傷害之第三階段，在化學品攝食後3至5 天，k成臨床上明顯的，具有黃疸之外觀。腎衰竭亦可能 發生。以化學方式引致（藥物所引致）肝炎之病徵，係類似 傳染性肝炎。於一項具體實施例中’本發明之抗體或 其抗原結合片段，可用以治療肝毒性。 6.肝哀竭（例如慢性肝衰竭) 腫瘤壞死因子係牽連肝衰竭之病理生理學（例如慢性肝衰 竭）（參閱 Tak印aka Κ.等人，（1998) «SW. 43(4): 887_92; Nagaki Μ. 等人，（1999)«//职加/. 31⑹：997-1005 ; Streetz K.等人，（2000) 如⑼你〇/〇幻λ 119(2) : 446_6(^肝衰竭包括慢性肝衰竭，經常 歷經數年期間發展，且係因對肝臟之重複損傷所造成（譬如 酒精濫用或被肝炎病毒感染），其會慢慢地傷害該器官。肝 衰竭較不常為急性，而是歷經數天或數週期間發生。急性 肝衰竭之原因包括肝炎病毒感染、藥物、懷孕、自身免疫 性疾病及突然低血液流動至肝臟。於一項具體實施例中， 本發明之TNF α抗體或其抗原結合片段可用於肝衰竭。
1非酒精性肝炎，包括NASH 86869 -78 ‘ 1354561 腫瘤壞死因子係牽連非酒精性肝炎之病理生理學，包括非 酒精性皮脂腺肝炎（參閱Crespo J.等人，（2001)加/ogy, 34⑹： 1158-63; PessayreD•等人，（2002)282(2) : G193-9)。”非酒精性皮脂 腺肝炎”或"NASH”術語，係指在肝臟中發展組織學變化，其 相當於藉由過度醇攝取，但於酒精濫用不存在下所引致者 。NASH之特徵為巨泡囊及/或微泡囊脂肪變性、小葉性與 肝門發炎及有時是具有纖維變性與肝硬化之Mallory物體。 NASH亦常伴隨著血脂肪過多、肥胖及第II型糖尿病。 其他表現肝脂肪變性與發炎特徵之臨床症狀，包括過度禁 食、空迴腸旁分流、總原始營養、慢性C型肝炎、威爾遜氏 病，及不利藥物作用，譬如皮質類固醇、鈣通道阻斷劑、 高劑量合成雌激素、胺甲喋呤及乙胺碘呋酮。因此，”非酒 精性皮脂腺肝炎” 一詞可用以描述顯示此等活體組織檢法發 現之病患，伴隨著不存在⑻顯著醇消耗，（b)對於體重減輕 之先前手術，（c)與皮脂腺肝炎有關聯之藥物使用病歷，（d) 遣傳肝病之註據，或（e)慢性C型肝炎感染（參閱Ludwig, J.R.等 人，（1980) Μα少〇 Prac·, 55 : 434 ; Powell E.等人，（1990) 11 : 74)。於一項具體實施例中，本發明之TNFa抗體或其抗 原結合片段，可用以治療NASH。 从.皮膚與指甲病症 於一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體係用以治療皮 膚與指甲病症。於本文中使用之”其中TNFa活性為有害之 皮膚與指甲病症”一詞，係意欲包括皮膚及/或指甲病症及 其他病症，其中TNF α之存在於患有此病症之病患中，已被 86869 -79- 1354561 証實係為或被懷疑係為無論是負責該病症之病理生理學或 助長該病症惡化之因素，例如牛皮癖。因此，其中TNF α活 性為有害之皮膚與指甲病症，係為其中預期TNF α活性之抑 制會緩和該病症之病徵及/或進展之病症。本發明之抗體、 抗體部份及其他TNF α抑制劑，在治療特定皮膚與指甲病症 上之用途，係進一步討論於下文。在某些具體實施例中， 本發明之抗體、抗體部份或其他TNF α抑制劑係併用另一種 治療劑投予病患，如下文在段落III中所述者。於一項具體 實施例中，本發明之TNF α抗體係併用另一種治療劑投予病 患，以治療牛皮癖，及治療與關節炎有關聯之牛皮癖。 牛皮癬 腫瘤壞死因子係牽連牛皮濟之病理生理學（Takematsu等人 (1989) Arch Dermatol Res. 281 · 398 ; Victor 與 Gottlieb (2002) Ji/rwgs 汾〇/. 1(3) : 264) 〇牛皮癬係被描述為皮膚發炎（刺激與發 紅），其特徵為不斷偶發之發紅、搔癢，及濃厚、乾燥、銀 色鱗片於皮膚上。特定言之，係形成損傷，其係涉及表皮 增生上之初期與續發變質、皮膚之炎性回應及調節分子之 表現，譬如淋巴細胞活素與炎性因子。牛皮癖皮膚於形態 學上之特徵為增加表皮細胞之轉換、加粗之表皮、異常角 質化、炎性細胞浸潤至表皮中，及多形核白血球與淋巴細 胞浸潤至表皮層中，造成增加基底細胞循環。牛皮癬經常 涉及指曱，其常常顯示凹陷、指曱分離、變厚及脫色。牛 皮癖經常伴隨著其他炎性病症，例如關節炎，包括風濕性 關節炎、炎性腸疾病（IBD)及克隆氏病。 86869 -80- 牛皮癖之註據最常見於驅幹、財部、膝 手指…但其可影窝皮膚之任何或所有部份膚: =情況下’新皮膚細胞從下層發展至表面，係花 二r皮癖中，此過程只花費數天，造成死亡皮膚細 胞艾畜積，及厚鱗片之形成。 , 乂千皮癬义病徵包括：皮膚斑 /、係為乾燥或發紅，以* 拙 以銀色鱗片覆蓋，凸起之皮膚斑， 伴P过著發紅邊緣，並可龜 . /、了龜1且變仔疼蹋，及經常位於肘 虑膝部、軀幹、頭皮及雙手上；皮膚損傷，.包括膿癌、皮 膚龜裂及皮膚移> 士. " ''' ，關即疼蹋或痠痛，其可能與關節炎有 關聯，例如牛皮癖關節炎。 關於牛皮癬之治療，經常包括局部皮質類固醇、維生素〇 類似物及局部或口服類視色素或其組合。於一項具體實施 例中，本發明疋聊^；抑制劑係併用或於此等常用治療藥品 之一存在下投藥。亦可與本發明TOFa抑制劑併用以治療牛 皮癬之其他治療劑，係更詳細描述於段落III.B中。 牛皮癖之診斷經常以皮膚外觀為基礎。此外，可能必須進 仃皮膚活體組織檢法或皮膚斑之刮削與培養，以排除其他 皮膚病症。若關節疼痛存在且持續，則χ•射線可用以檢查牛 皮癖關節炎。 於本發明之一項具體實施例中，TNFa抑制劑係用以治療 牛皮癬，包括慢性斑點牛皮癬、滴狀牛皮癖、逆牛皮癬、 膿疱牛皮癬、尋常天疱瘡、紅皮牛皮癬、與炎性腸疾病（IBD) 有關聯之牛皮癬及與風濕性關節炎（RA)有關聯之牛皮癖。被 包含在本發明治療方法中之特定牛皮癬類型，係詳細描述 86869 -81 - 1354561 於下文： a. 慢性斑點牛皮癖 腫瘤壞死因子係牵連慢性斑點牛皮癖之病理生理學 (AsaduUah等人（1999)5"乃奶_〇/•⑷：岣。慢性斑點牛皮癖（ 亦被稱為尋常牛皮癖）係為牛皮癖之最常見形 <。慢性斑點 牛皮癖之特徵為皮膚之凸起發紅斑點，範圍從硬幣大小至 遠為較大。在慢性斑點牛皮癬中，此斑點可為單一或多重 ，其可改變大Φ，從數毫米至數公分。斑點經常為紅色， ▼具有鱗狀表面，且當溫和地到搔時會反射光線，產生"銀色 ”效果。I自慢性斑點牛皮癬之損傷（其經常為對稱的）係發 生於整個身體’但對於伸肌表面具有偏愛，包括膝部、肘 部、腰與臀區域、頭皮及指甲。古去 又相T。有時忮性斑點牛皮癬可發 生於陰莖、女陰及彎曲處，但剥落經常不存在。患有慢性 ^料皮癖之病人之診斷，經常以上述臨床特徵為基礎。 言之：在慢性斑點牛皮痗中之損傷之分佈、顏色及典 土艮色剝洛，係為慢性斑點牛皮癖之特徵。 b· 滴狀牛皮癬 皮癖係指具有特徵性水滴形鱗狀斑點之牛皮癖形式 癖之展開，通常係跟隨在感染之後，最值得注 葱的疋鏈球菌咽喉咸鎏。，浪办 外觀AM 皮癖之料經常以皮膚之 卜觀為基礎，且經常有最近咽喉炎病歷之事實。 c· 逆牛皮癖 逆牛皮癖為牛皮癖之一種形十 H ^ ^式，其中病患具有平滑而經常 潮濕疋皮膚區域，其係為發紅 丑贫火，其係與伴隨著斑點 86869 -82· 1354561 皮癬或撓曲 、在乳房下 近，且由於 區域。 牛皮癬之剝落不同。逆牛皮癬亦被稱為擦爛牛 牛皮癬。逆牛皮癬大部份發生在腋窩、腹股溝 方，及在其他皮膚折疊處，於生殖器與臀部附 王現位置之結果，故摩擦與出汗可刺激受感染之 d.膿疱牛皮癖 月辰疮牛皮癖為會造成膿充填水癌之牛皮癖形式，盆备改代 =小與位置，但經常發生在雙手與雙腳上。水射:局二 ’擴散於身體之大區域上。膿疱牛皮癬可為觸痛且疼 ，可能會造成發熱。 e. 其他牛皮癖病症 可以本發明之™^抗體治療之其他牛皮癖病症實例，包 括^皮牛皮癬、尋常牛皮癖、與IBD有關聯之牛皮癖，及與 關節炎有關聯之牛皮癣，包括風濕性關節炎。 1，寻常天疮瘡 寻常天癌癌為嚴重自身免疫系統皮膚疾病，其經常會影嚮 腔黏膜與皮膚。尋常天癌瘡之發病原理係被認為是自身 免疫過程，其係被引導於皮膚與口腔黏膜橋粒上。因而， 細胞不會互相黏連。此病症係以大的流體充填之易於破裂 大水泡作為表象’並具有獨特組織學外觀。消炎劑為此疾 病之唯一有效療法，該疾病具有高死亡率。來自於患有尋 $天疱瘡病患之併發症，係為難治之疼痛，干擾營養與流 體損失，及感染。 、.異位性皮炎/濕療 異么性皮炎（亦被稱為濕疹）為藉由鱗狀與癢斑分類之慢性 86869 -83- 1354561 皮膚病症。具有濕疹之人們經常具有過敏性症狀之家族病 歷，例如氣喘、乾草熱或濕疹。異位性皮炎為過敏性反應（ 類似過敏反應）’其係發生於皮膚上，會造成慢性發炎。此 發炎會造成皮膚變得很癢且為鱗狀^慢性刺激與抓癢可造 成皮膚變厚，且變成皮革狀結構化。曝露至環境刺激物可 使病徵惡化’例如可為皮膚乾燥，曝露至水、溫度改變及 壓力。 具有異位性皮炎之病患可藉由某些病徵確認，其經常包括 強烈搔癢、具有徐滲與結痂之水疱、水疱附近之皮膚發紅 或發炎、皮疹、乾燥、皮革狀皮膚區域、來自抓癢之皮膚 粗糙區域及耳朵流膿/流血。 ^ 肉狀瘤病 肉狀瘤病為其中肉芽腫發炎發生於淋巴節、肺臟、肝臟、 眼睛、皮膚及/或其他組織中之疾病。肉狀瘤病包括皮肉狀 瘤病（皮膚之肉狀瘤病）與結狀肉狀瘤病（淋巴節之肉狀瘤病） w有肉狀瘤病之病患，可藉由一些病徵確認，其經常包 括一般不舒服.、不舒適或生病感覺；發熱；皮膚損傷。 結節性紅斑 結節性紅斑係指炎性病症，其特徵為觸痛，於皮膚下方之 發紅小瘤，典型上係在前面下方雙腳上。與結節性紅斑有 j聯艾彳貝傷，紐常以扁平但牢固之熱發紅疼痛結塊（直徑大 为英吋）開始。在數天内，損傷可能變成帶紫色，然後遷 ，經數週褪色成褐色平坦斑點。 於-些情況巾，結節性紅斑可能與感染有關聯，包括鍵对 86869 -84- 301 = '球⑼病、結核病、B型肝炎、梅毒、描抓疾病、土 丙耶爾森氏菌屬、細螺旋體病鸚鵡病、組 早核球增多症（EBV)。在並 冲 於某也藥物之敏咸降/' ,，結節性紅斑可能與對 續⑽Γ ，包括口服避孕藥、青霉素、 、柳酸确颯頒、巴比女酸鹽、乙内醯脲、非那西汀讷_—) 症有關；、Γ物及黃體製劑。帛節性紅斑經常與其他病 炎。血病、肉狀瘤病、風濕熱及溃瘍性結腸 但知傷亦可發 踩部、大腿及 病徵’可包括 結即性紅斑之病徵本身經常存在於脛部上， 生在身體之其他區域上’包括臀部、小腿、 上肢端。在具有結節性紅斑之病患中之其他 發熱與不舒服。 化濃性汗腺炎 化濃性汗腺炎係指皮膚病症，其中腫脹、疼痛、發炎損傷 或結塊係發展於腹股溝中，而有時在手臂下方，及乳房下 方、。化濃性汗腺炎料生於泌離腺出口變得被汗水阻塞或 由於不完全腺發育而不能夠^正常情況下料時。被捕獲 在腺中之分泌物，會迫使汗水與細菌進入周園組織中，造 成皮下硬結、發炎及感染。化濃性汗腺炎係被局限至含有 泌離腺之身體區$。此等區域係為腋部、乳冑、腹股溝、 會陰、肛周圍及臍周圍區域。 Ί.扁平苔薄 病理生理學（Sklavounou等 平苔蘚係指皮膚與黏膜 腫瘤壞死因子係牽連扁平苔薄之 人（2000) J Oral Pathol Med. 29 .. 370)。鳥 86869 -85- 1354561 之病症，造成發炎、搔癢及獨特皮膚損傷。扁平苔蘚可與c 型肝炎或某些藥物有關聯。 % · Sweet氏徵候籙 炎性細胞活素，包括腫瘤壞死因子，係與Sweet氏徵候誤 之病理生理學有關聯（Reuss-Borst等人（1993)5r 所攸>/. 84: 356) 。Sweet氏徵候誤，其係由R.D. Sweet在1964年描述，其特徵為 發熱、白血球增多及皮療之突然展開。此皮療係包括觸痛 、紅斑、良好分界之丘疹及斑點，其在微觀上顯示濃密嗜 中性白血球浸潤。此損傷可出現在任何位置，但偏愛上身 ，包括臉部。個別損傷經常被描述為假水泡或假膿疱，但 可為顯著膿疱、大水疱或潰瘍。口腔與眼睛涉入（結合膜炎 或上鞏膜炎）亦已常常被報告在患有Sweet氏徵候簇之病患。 白血病亦與Sweet氏徵候簽有關聯。 9.白斑病 白斑病係指皮膚症狀，其中有色素從皮膚區域損失，而造 成具有正常皮膚結構之不規則白色斑點。白斑病之損傷特 徵係以平坦脫色區域呈現。損傷之邊緣係清晰界定，但不 規則。在具有白斑病之病患中之經常被感染區域，係包括 臉部、肘部與膝部、雙手與雙腳及生殖器。 说.硬皮病 腫瘤壞死因子係牽連硬皮病之病理生理學（Tutuncu Z等人 (2002) 20(6 補充 28) : S146-51 ; MackiewiczZ 等人 (2003) 21(1) : 41-8 ; MurotaH 等人（2003)々ίΑπ.ώ 48(4) : 1117-25)。硬皮病係指擴散結缔組織疾病，其特 86869 -86- 1354561 徵為皮膚、血管、骨骼肌肉及内部器官上之改變。硬皮病 亦被稱為CREST徵候蔟或進行性系統硬化，且經常影嚮年齡 在30-50間之人們❶女人比男人更常被感染。 硬皮病之原因係為未知。此疾病可產生局部或系統病徵。 此疾病之過程與嚴重性在受感染處係廣泛地改變。在皮膚 及其他器官中之過量膠原沉積物’會產生病徵。對皮膚及 丈感染益官中之小血管之傷害亦會發生。在皮膚中可發 生/貝瘍、鈣化作用及在色素沉著上之改變。系統特徵可包 括纖維變性，及心臟、肺臟、腎臟及胃腸道之變性。 患有硬皮病之病患，顯示某些臨床特徵，包括手指與腳趾 之變白、藍色或紅色，以回應熱與冷（雷諾氏現象），手指 與關節之疼痛、僵硬及腫脹，皮膚變厚及光亮雙手與前臂 ，食管回流或心口灼熱、呑服困難及呼吸短促。用以診斷 硬皮病 < 其他臨床病徵，包括提高紅血球沉降速率（esr)、 提回類風濕因子（RF)、陽性抗核抗體試驗、顯示蛋白質與微 觀血液足尿分析法、可顯示纖維變性之胸部χ_光及顯示限制 性肺病之肺功能研究。 U·指甲病症 指甲病症包括指甲之任何異f ^特定指甲病症包括但不限 於凹陷、甲、Beau氏線#、匙狀指曱、甲鬆動、黃色指甲 翼狀贅肉（在扁平荅嫜中見及）及白甲病。凹陷之特徵為 有小凹陷存在於指甲表面隆起或線性升高可沿著指甲 發展以，從向或橫向"方向發生。Beau氏線條為線性凹 fe於扎甲中檢向地"（橫向）發生。白曱病係描述白色條 86869 -87- '^4561 痕或斑點於指曱上。凹甲為手指 具有 ”曰甲《異常形狀，其中指甲 凸起（I脊’且為薄與凹的。 聯。 凹甲經常與鐵缺乏有關 可以本發明之ΤΝΡα抗體治療之指 指甲。Α — 钿平届痖，亦包括牛皮癬 皮癬指甲包括指甲中之改變並 。於—士丨主 又又，其可歸因於牛皮癬 ' —二^況中，牛皮癣可僅發生 別虛鈿力士 相甲中，而在身體之 處都〉又有。指曱中之牛皮癖變化， 成盍軏圍從溫和至嚴 ，通常反映出牛皮癖涉及指甲 自Α 、 两知甲基質，意即指甲 ”生長之組織’指曱床’意 指 丨在知甲下万之組織，及在 土底 < 皮膚《程度。藉由牛皮癬之膿赫型對指甲
木〈傷害，可造成指甲之損失。於牛皮癖中之指甲改變， 1落入-般種類中’其可單獨或全部—起發生。在牛皮癖 指甲之一種類別中，指甲面係深深地凹陷，可能是由於牛 皮f所造成之指甲生長缺陷所致。在另一種類中，指甲具 有黃色至黃粉紅色褪色，可能是由於牛皮癖涉及指甲床。 牛皮癣指T之第三種亞型，其特徵為白色區域，其係出現 在指甲面下方。白色區域實際上為氣泡標記點，其中指甲 面正在轉化成與指甲床脫離。亦可以有發紅皮膚環繞指甲 。第四種類係藉由帶黃色斑點中之指甲面碎裂証實，意即 爪曱營養不良’其可能是由於牛皮癖涉及指甲基質所致。 第五種類之特徵為指甲喪失其整體性，此係由於牛皮癖涉 及指甲基質與指T床所致。 本發明之TNFa抗體亦可用以治療經常與扁平苔蘚有關聯 之指甲病症。在具有扁平苔薄之病患中之指f，經常顯示 86869 '88- 1354561 指甲面之變薄與表面粗糙，具有縱向隆起或翼狀贅肉。 本發明之TNFa抗體可用以治療譬如本文中所述之指甲病 症。指甲病症經常與皮膚病症有關聯。於一項具體^施: 中，本發明係包括一種以TNFa抗體治療指甲病症之:法。 於另-項具體實施例中，指甲病症係與另一種病症有關聯 ，包括皮膚病症，譬如牛皮癖。於另一項具體實施例中， 與指甲病症有關聯之病症係為關節炎，包括牛皮癖關節炎。 VI.其他皮膚與指曱病症 本發明之TNF α抗體可用以治療其他皮膚與指甲病症，嬖 如慢性光化皮膚炎、大泡型類天疱瘡及簇狀禿髮。慢性^ 化皮膚炎（CAD)亦被稱為光敏性皮膚炎/光化網狀徵候簇 (PD/AR)。CAD為其中.皮膚變得發炎之症狀，特別是在已被 曝露至陽光或人造光下之區域中。通常，CAD病患對於與其 皮膚接觸之某些物質’具有過敏反應，特別是各種花草、 木材、香料、防晒劑及橡膠配料。大泡型類天疱瘡係指皮 膚病症，其特徵為形成大水疱於軀幹與肢端上。誤狀亮髮 係指毛髮掉落，其特徵為在頭皮或鬚中之全禿之圓形斑點。 Y 脈管炎 TNFo:係牽連多種脈管炎之病理生理學（參閱，例如DegucW 等人（1989) Lancet. 2 : 745)。於一項具體實施例中，本發明係 提供一種在患有其中TNFa活性為有害之脈管炎之病患中抑 制TNF 活性之方法。於本文中使用之"其中TNF α活性為有 害之脈管炎11 一詞，係意欲包括脈管炎，其中办正α之存在 於患有此病症之病患中’已被該實係為或被懷疑係為無論 86869 -89- 1354561 是負責此病症之病理生理學，或助長此病症惡化之因素。 此種病症可藉由例如增加_ α在患有此病症之病患之生物 流體中之濃度（例如增加ΧΝΡα在病患之血清、血漿、滑液等 中之濃度）而被証實，其可例如使用如上述之抗抗體 而被檢出。 有許多其中TNFa活性為有害之脈管炎之實例，包括 氏疾病。本發明之抗體、抗體部份及其他TNFa抑制劑，在 治療特定脈管炎上之料，係進—步討論於下文。在某些 具體實施例中，本發明之抗體、抗體部份或其他tn^抑制 劑，係併用另一種治療劑投予病患，如下文所述。 本發明之抗體可用以治療其中蕭〇活性為有害之脈管炎 ’其中預期啊活性之抑制會緩和脈管炎之病徵及/或進 展η或預防脈管炎。患有或處於發展脈管炎危險下之病患 二二、經過臨床徵候與錢驗確認。例如，具有脈管炎之病i I吊在嗜中性白血球之細胞質中發展對某些蛋白質之抗體 扰嗜中性白血球細胞質抗體(ANCA)。因A，於一些情況 *炎可藉由減& (例如ELISA)註實，其係度量anca存 在〇 脈管炎及其結果可為疾病之單獨表象，或其可為另一種主 要疾病〈續發成份。脈管炎可被局限於單—器官，或其可 2時感染數種器官’且依徵候誤而^，所有大小之動脈與 #脈均:被感染。脈管炎可感染身體中之任何器官。 容止、人中，血管腔經常被危害到，其係與藉由所涉及血 〜之”且織之絕血有關聯。可由於此過程而造成之寬廣 86869 1354561 範圍病症，係由於任何類 、靜脈、小動脈、小靜脈 脈管炎係一 般性地根據受感染血管之 土 大小及么置之血管（例如動脈 、微血管）均可涉及之事實所致。 大小作分類，如下文 所述。應注意的是 些小與大血管脈管炎可涉及中等大 小之動脈； 動脈之血管 但大與中等大小之血管脈管炎， 。大血管疾病包括但不限於巨細 不會涉及小於 胞動脈炎，亦 稱為顳動脈炎或腦動脈炎、多肌痛風濕 動脈炎，#亦被稱為主動脈弓徵候簇、年輕女性動脈炎及 無脈疾病。中等血管疾病包括但不限於古典節結性多動脈 炎與Kawasaki氏疾病’亦稱為黏膜與皮膚淋巴節徵候簇。小 血管疾病之非限制性實例為Behcet氏徵候簇、牌氏肉芽 ，病、微觀多淋巴管炎’過敏性脈管&，亦稱為皮膚脈管 ：： 血萑脈雀災、Henoch_Schonlein氏紫癜病，過敏性肉芽 腫病與脈管炎’ _4ChurgStrauss徵候簇。其他脈管炎包括 但不限於分離之中樞神經系統脈管炎與血栓閉塞性血管炎 ’亦稱為倍耳勾氏病。 人古典即結性多動脈炎（PAN)、微觀PAN及過敏性肉芽腫病， =少#被群集在一起，且係被稱為系統壞死性脈管炎。脈 巨夫<進—步說明，係描述於下文： V大血管脈管炎 、’具體實施例中，本發明之丽^抗體係用以治療具 係^血&脈管炎之病患。於本文中使用之”大血管” 一詞， 例戈朝向王要身體區域之主動脈與最大分枝。大血管包括 王動脈，及其分枝與相應靜脈，例如鎖骨下動脈；頭 86869 •91· 1354561 臂動脈；共用頸動脈；無名靜脈；内部與外部頸靜脈；肺 動脈與靜脈；腔靜脈；腎動脈與靜脈；股動脈與靜脈；及 頸動脈。大血管脈管炎之實例係描述於下文。 a. 巨細胞動脈炎(GCA) 腫瘤壞死因子係牽連巨細胞動脈炎之病理生理學（Sneller, M.C· (2002) C/eve. J. MM. 69 : SII40-3 ; Schett, G.等人，（2002)4狀.
Dzi. 61 : 463)。巨細胞動脈炎（GCA)係指涉及發炎及對. 血管傷害之脈管炎，特別是大或中等動脈，其係從頸部之 外部頸動脈分枝。GCA亦被稱為顳動脈炎或腦動脈炎，且為 年長者中之最常見主要脈管炎。其幾乎只會影嚮超過50歲 之個人，但是，有40歲及較年輕病患之充分記載之病例。GCA 經常會影嚮顱外動脈。GCA可影嚮頸動脈之分枝，包括顳動 脈。GCA亦為系統疾病，其可涉及多重位置中之動脈。 於組織病理學上，GCA為全動脈炎，其中炎性單核細胞係 浸潤在血管壁内，伴隨著不斷之Langhans型巨細胞形成。有 血管内膜肉芽腫發炎之增生，及内部彈性層之分裂。於器 官中之病理學發現，係為與所涉及血管有關聯之絕血結果。 患有GCA之病患，顯示某些臨床徵候，包括發熱、頭痛、 貧血及高紅血球沉降速率（ESR)。GCA之其他典型適應徵包 括頷或舌跛、頭皮觸痛、全身病徵、蒼白視神經盤水腫（特 別是’’白堊白色”盤水腫）及視覺障礙。診斷係藉由顳動脈活 體組織檢法確認。 b. 多肌痛風濕病 腫瘤壞死因子係牽連多肌痛風濕病之病理生理學（Straub，R.H. 86869 -92- 1354561 等人，（2002) (Oxford) 41: 423; Uddhammar，Α·等人，（1998)
Br. J. RheumaioL 37 ·· 766)。β·肌痛風混病係指風濕、病症，其係 與中等至嚴重肌肉疼痛，及在頸部、肩部及髖部中之僵硬 有關聯，最顯著的是在早晨。IL-6與IL-1 /5表現亦已在患有 多肌痛風濕病之病患之大部份循環單細胞中被檢出。多肌 痛風濕病可獨立地發生，或可與GCA共存或在其之前，其係 為血管之發炎。 c. Takayasu氏動脈炎 腫瘤壞死因子係牽連Takayasu氏動脈炎之病理生理學 (Kobayashi, Y·與 Numano，F.(2002)T«ie/77. Μεί/·41 : 44 ; Fraga, A.與 Medina F. (2002) Curr. Rheumatol. Rep. 4 ' 30) ° Takayasu M Elk A # 指脈管炎，其特徵為主動脈及其主要分枝之發炎。Takayasu 氏動脈炎（亦稱為主動脈弓徵候簇、年輕女性動脈炎及無脈 疾病）會影嚮胸與腹主動脈，及其主要分枝，或肺動脈。主 動脈壁及其分枝（例如頸動脈、無名及鎖骨下動脈）之纖維 變性變厚，會導致血管腔大小之降低，其係由於主動脈弓 而發生。此症狀典型上亦會影嚮腎動脈。
Takayasu氏動脈炎主要係影嚮通常年齡為20-40歲大之年輕 女性，特別是具有亞洲人血統者，且可藉由不舒服、關節 痛及肢端跋行之逐漸展開作為表象。大部份病患已不對稱 性地減少脈搏，經常伴隨著兩臂中之血壓差別。可發生冠 狀及/或腎動脈狹窄。
Takayasu氏動脈炎之臨床特徵，可被區分成早期炎性疾病 之特徵，與後期疾病之特徵。Takayasu氏疾病之早期炎性階 86869 -93 - !354561 段之臨床特徵為： 關節痛及多形知斑 、里度發熱、體重減輕、肌痛、 《纖維變性狹t與血㈣成。 、争徵為動脈 性現象，例如微^不__ /成《"°床特徵為絕血 致，視覺障礙，例如暗 血壓不 kθ /、千目 其他神經病縣鄉 , 括眩軍與暈厥、半身輕癱或中風。此等臨=，包 脈狹有與血检形成所致之絕血所造成。 ；係由於動 1 中等血管疾病 於一項具體實施例中，太议 古 本發月之TNF «抗體係用以、;Α瘆且 有中等血管脈管炎之病 療具 Τ寺血管 詞係用w扣仏免 血管係為主要内臟動脈。 "寺 與靜脈、㈣脈與&實例包括腸系膜動脈 炎……脈及上領動脈與靜脈。中等血管脈管 人尤Λ例，係描述於下文。 a* 節結性多動脈炎 腫瘤衷叱因子係牵連節結性多動脈炎之病理生理學 (=W，N.等人，（1997山咖紹ι: 667)。節結性多動脈 犬或郎結性動脈外層炎係沪 人保扣脈管炎，其係為嚴重血管疾病 ,、中小與中等大小動脈變成腫脹且受到傷害，因其係被 惡行免疫細胞攻擊。節結性多動脈炎通常會比兒童更频繁 地影嚮成人。其會傷害藉由受感染動脈所供應之組織，因 其若無適當血液供應’即不會得到足夠氧與營養。 在患有節結性多動脈炎之病患中顯示之病徵，一般係由於 對受感染器官之傷害所造成，該器心常為皮膚、心臟、 腎臟及神經系統。節結性多動脈炎之—般化病徵，包括發 86869 - 94- 1354561 熱、疲勞、虛弱、食慾喪失及體重減輕。肌肉痠痛（肌痛） 與關節痠痛（關節痛）係為常見的。具有節結性多動脈炎之病 患之皮膚，亦可顯示皮疹、腫脹、潰瘍及結塊（結狀損傷）。 古典PAN (節結性多動脈炎）為小至中等肌動脈炎之系統動 脈炎，其中涉及腎與内臟動脈係為常見的。腹部血管在50% PAN病患中具有動脈瘤或閉塞。古典PAN並未涉及肺動脈， 惟可涉及枝氣管血管。肉芽腫，顯著嗜伊紅血球過多及過 敏性素質，並非此徵候簇之一部份。雖然可涉及任何器官 系統，但最常見表象包括末梢神經病、多發性單神經炎、 腸絕血、腎絕血、睪丸疼痛及網狀青斑。 b. Kawasaki 氏疾病 腫瘤壞死因子係牽連Kawasaki氏疾病之病理生理學（Sundel, R.P. (2002) Curr. Rheumatol. Rep. 4' 474； Gedalia, A. (2002) Curr. Rheumatol. 4 : 25)。雖然Kawasaki氏疾病之原因為未知，但其係與冠 狀動脈之急性發炎有關聯，這指出與此疾病有關聯之組織 傷害，可藉由預發炎劑譬如TNF α所媒介。Kawasaki氏疾病係 指脈管炎，其會影嚮黏膜、淋巴節、血管襯裡及心臟。Kawasaki 氏疾病亦經常被稱為黏膜與皮膚淋巴節徵候簇、黏膜與皮 膚淋巴節疾病及幼兒多動脈炎。罹患Kawasaki氏疾病之病患 會發展脈管炎，其經常涉及冠狀動脈，其可能會導致心肌 炎與心包炎。通常當急性發炎減退時，冠狀動脈可發展動 脈瘤、血栓形成，及導致心肌梗塞。
Kawasaki氏疾病為與手掌與腳底中之水腫有關聯之熱系統 脈管炎，伴隨著頸淋巴節之腫大，裂唇及”莓狀舌”。雖然 86869 -95- 1354561 炎性回應已被發現於全身之血管中，但終器傷害之最常見 位置為冠狀動脈。Kawasaki氏疾病主要係影嚮5歲以下之兒 童。最高發生率係在曰本，但正轉變成漸增地在西方被察 覺，且目前為在美國兒童中後天心臟疾病之主要原因。 Kawasaki氏疾病之最嚴重併發症，係為冠狀動脈炎與動脈瘤 形成，其係發生於三分之一未經治療之病患中。 小血管疾病 於一項具體實施例中，本發明之TNF 〇:抗體係用以治療具 有小血管脈管炎之病患。''小血管''一詞係用以指小動脈、 小靜脈及微血管。小動脈為僅含有1或2層平滑肌細胞，且 為微血管網狀組織之末端並與其連續之動脈。小靜脈係攜 帶血液，從微血管網狀組織至靜脈，且微血管連接小動脈 與小靜脈。小血管脈管炎之實例係描述於下文。 a. Behcet氏疾病 腫瘤壞死因子係牵連Behcet氏疾病之病理生理學（Sfikakis, P.P. (2002) Ann. Rheum. Dis. 61 · ii51-3 ; Dogan，D.與 Farah, C. (2002) 52 : 23)。Behcet氏疾病為涉及全身血管發炎之慢 性病症。Behcet氏疾病亦可造成各種類型之皮膚損傷、關節 炎、腸發炎及腦膜炎（腦部與脊髓細胞膜之發炎）。由於Behcet 氏疾病之結果，具有此病症之病患可在全身之組織與器官 中具有發炎，包括胃腸道、中樞神經系統、血管系統、肺 臟及腎臟。Behcet氏疾病係在男性中比在女性中更常見三倍 ，且在東地中海與日本中較常見。 具有Behcet氏疾病之病患可顯示臨床徵候，包括復發口腔 86869 -96- 1354561 潰瘍（類似口壞疽潰爛）、復發生殖器潰瘍及眼睛發炎。TNF a、IL-8、IL-1、IL-6、INF-r&IL-12之血清含量係在Behcet病 患中係被提高，且此等因子之生產已被t正實，在單細胞Behcet 病患中係被提高（參閱，例如i爹之炎從虔病（2001) Marcel Dekker 公司，G,S, Hoffman 與 C.M_ Weyand 編著，第 473 頁）。 b. Wegener氏肉芽腫病 腫瘤壞死因子係牵連Wegener氏肉芽腫病之病理生理學 (Marquez, J.等人，（2〇〇3) Cm/t. iiep· 5 : 128 ; Harman, L.E_ 與
Margo，C.E. (1998) 42 : 458)。Wegener 氏肉芽腫病 係指會造成上呼吸道（鼻子、竇、耳朵）、肺臟及腎臟中之 血管發炎之脈管炎。Wegener氏肉芽腫病亦被稱為中線肉芽 腫病。Wegener氏肉芽腫病包括涉及呼吸道之肉芽腫發炎， 及會影嚮小至中等大小血管之壞死性脈管炎。具有Wegener 氏肉芽腫病之病患，亦經常具有關節炎（關節發炎）。絲球 體性腎炎亦可存在於受感染之病患中，但實際上任何器官 均可能涉及。 感染Wegener氏肉芽腫病之病患，典型上顯示臨床徵候，包 括復發竇炎或鼻出血、黏膜潰瘍、中耳炎、咳嗽、心病性 咳血及呼吸困難。Wegener氏肉芽腫病之最初病徵，經常包 括上呼吸道病徵、關節疼痛、虛弱及疲倦。 c. Churg-Strauss 徵候誤 腫瘤壞死因子係牽連Churg-Strauss徵候誤之病理生理學 (Gross, W.L (2002) Curr. Opin. Rheumatol. 14 * 11 ； Churg, W.A. (2001)
Mod Ραί/ζο/· 14 : 1284)。Churg-Strauss徵候簇係指系統性脈管炎 86869 -97- 1354561 ，且顯示氣喘與嗜伊紅血球過多之早期表象徵候。Churg-Strauss徵候簇亦被稱為過敏性肉芽腫病與血管炎，且發生於 過敏性鼻炎、氣喘及嗜伊紅血球過多之環境中。竇炎與肺 浸潤亦發生於Churg-Strauss徵候簇中，主要是影嚮肺臟與心臟 。末梢神經病、冠狀動脈炎及胃腸涉入，係為常見的。 罹患Churg-Strauss徵候誤之病患，可根據由美國風濕病學院 (ACR)所建立之標準進行診斷。此等標準係意欲區別CSS與 其他形式之脈管炎。並非所有病患均符合每一項標準。事 實上，有些可能僅具有2或3項標準，而其仍然被分類為 Churg-Strauss徵候菠。ACR選擇6種疾病特徵（標準）作為與其 他脈管炎最良好區別之Churg-Strauss徵候誤。此等標準包括： 1)氣喘；2)嗜伊紅血球過多[於差別WBC計數上>10% ]; 3)單 神經病；4)於胸部X-射線上之短暫肺浸潤；5)鼻旁竇異常； 及6)含有伴隨著血管外嗜伊紅體之血管之活體組織檢法。 其他TNF a-相關病症 於一項具體實施例中，本發明之特徵為治療其中TNF α活 性為有害之TNFa-相關病症之方法，其包括對病患投予有效 量之TNFa抑制劑，以致該TNFa-相關病症係經治療。其中TNF α活性為有害之TNF <2-相關病症之實例’係進一步討論於下 文。 V克隆氏病-相關病症 腫瘤壞死因子係牽連炎性腸病症（IBD)之病理生理學，包 括克隆氏病（參閱，例如Tracy，K.J.等人，（1986) 3d⑼ce 2Μ: 470-474 ;Sun, X-M·等人，（1988)/. Twv&si. Μ : 1328-1331 ; MacDonald, T.T. 魯 rI354561 等人，(1990) Clin. Exp. Immunol. : 301_3〇5)。 於一項具體實施例中’本發明之TNFa抑制劑係用以治療 經常與roD及克隆氏病有關聯之病症。"炎性腸病症（IBD)相 關病症”或"克隆氏病-相關病症"術語，當可交換地使用於本 文中時，係用以描述經常與IBD及克隆氏病有關聯之症狀與 併發症。克隆氏病-相關病症之實例包括在膀胱、陰道及皮 膚中之瘻管，·腸阻塞；膿腫；營養不足；來自皮質類固醇 使用之併發症；關節之發炎；結節性紅斑； :及眼睛之㈣。常與克隆氏病有關聯之其他病症=
Crohn氏病相關之關節痛、形成瘻管之Cr〇hn氏病 '不確定結 腸炎及囊炎。 ° 幼年關節炎 腫瘤壞死因子係牵連幼年關節炎之病理生理學，包括幼年 風濕性關節炎（G麵等人（1996)杨妝版祖％ : i7〇3 ; Man^ 等人…95)施祕㈣.8 : 211)。於—項具體實施例中，本發 明《TNFa抗體係用以治療幼年風濕性關節炎。 於本又中使m力年風濕性關節炎，，或，，财，術語，係产 慢性、炎性疾病’其係發生们6歲之前，其可造成關節^ 結缔組織傷害。似亦被稱為幼年慢性多關節炎與氏疾 病0 JRA會在16歲或較小免童中造成關節發炎與 週。發炎會在關節中造成發紅、腫脹、溫熱及疼痛 關節均可被咸染，曰旅 ^ 發火可限制受感染關節之移動性 之一種類型亦可影嚮内部器官。 -95- 1354561 JRA經常藉由所涉及關節之數目、病徵及由血液試驗所發 現之某些抗體之存在或不存在，而被分類成三種類型。此 等分類有助於醫師測定疾病將如何進展，及内部器官或皮 膚是否被感染。JRA之分類包括下列 a_ 少關節JRA，其中病患具有四個或較少個關節被感染 。少關節為JRA之最常見形式，且典型上會影嚮大關節，譬 如膝部。 b. 多關節HRA，其中五個或更多個關節被感染。小關節 ’譬如在雙手與雙腳中者，係最常被涉及，但此疾病亦可 感染大關節。 c. 系統JRA之特徵為關節腫脹、發熱、輕微皮疹，且亦 可感染内部器官，譬如心臟、肝臟、脾臟及淋巴節。系統JRA 亦被稱為Still氏疾病。少百分比之此等兒童會在許多關節中 發展關節炎，並可具有嚴重關節炎，持續至成人期。 1 子宮内膜組織異位形成 腫瘤壞死因子係牽連子宮内膜組織異位形成之病理生理學 ，因具有子宮内膜組織異位形成之婦女具有提高之TNF腹膜 含量（Eisermann J 等人（1988) Feriz’/iSien·/50 : 573 ; Halme J. (1989) 161: 1718; Mori Η 等人（1991) dm 26
:62; TaketaniY 等人（1992) 如 167: 265; OvertonC 等人（1996)/iwmi?印r〇i/1996 ; 11 : 380)。於一項具體實施例中， 本發明之TNFa抗體係用以治療子宮内膜組織異位形成。於 本文中使用之"子宮内膜組織異位形成''一詞，係指其中通 常做為子宮内襯（子宮内膜）之組織在身體之其他區域中生 86869 •100· 1354561 長’而造成疼痛、不規則出血及經常為不孕之症狀。 夂.前列腺炎 腫瘤壞死因予係牽連前列腺炎之病理生理學，因具有慢性 前列腺炎與慢性骨盆疼痛之男性，與對照組比較，具有顯 著較高含量之TNF與IL-1在精液中（Alexander RJB等人（1998) i/w/ogy 52 : 744 ; NadlerRB 等人（2〇〇〇)«/6^/ 164 : 214 ; Orhan 等人 (2001) /«iJ C/ra/ 8 : 495)。再者，於前列腺炎之大白鼠模式中， 在與對照組比較下，TNF含量亦增加（AsakawaK等人（2001) 所《少没yc> 47 : 459 ; Harris 等人（2000) Pras加e 44 : 25)。於一項 具體實施例中，本發明之TNFa抗體係用以治療前列腺炎。 於本文中使用之π前列腺炎"一詞，係指前列腺之發炎。前 列腺炎亦被稱為骨盆疼痛徵候簇。前列腺炎係以多種形式 顯現，包括非細菌性前列腺炎、細菌前列腺炎及急性前列 腺炎。急性前列腺炎係指突然發展之前列腺發炎。急性前 列腺炎經常因前列腺之細菌感染所造成。慢性前列腺炎為 逐漸發展之前列腺發炎，持續長期時間，且典型上具有複 雜病徵。慢性前列腺炎亦經常因細菌感染所造成。 自身免疫·病症· 腫瘤壞死因子係牵連許多自身免疫病症之病理生理學，包 括狼瘡（Shvidel 等人（2〇〇2)//emfli0/c/. 3: 32; Studnicka-Benke 等人（1996) 价35 : 1067)。於一項具體實施例中，本發明之TNF α 抗體係用以治療自身免疫病症，譬如狼瘡、多系統自身免 疫疾病及自身免疫聽覺喪失。 於本文中使用之”狼瘡” 一詞係指慢性、炎性自身免疫病症 86869 • 101 - 1354561 ，稱為紅斑性狼瘡，其可影嚮許多器官系統，包括皮膚、 關節及内部器官。狼瘡為一般術語，其包括許多特定類型 之狼瘡，包括系統性狼瘡、狼瘡腎炎及狼瘡腦炎。在系統 性狼瘡（SLE)中，身體之自然防禦係被轉變成針對身體，且 惡行免疫細胞會攻擊身體組織。可產生抗體，其可針對身 體之血球、器官及組織反應。此反應會導致免疫細胞，攻 擊受感染之系統，產生慢性疾病。狼瘡腎炎亦被稱為狼瘡 血管球疾病，其係為腎臟病症，其經常為SLE之併發症，且 其特徵為對血管球之傷害，及腎功能之漸進損失。狼瘡腦 炎係指SLE之另一種併發症，其係為腦部及/或中樞神經系 統之發炎。 脈絡膜新血管生成作用 腫瘤壞死因予係牵連脈絡膜新血管生成作用之病理生理學 。例如，在以手術方式切除脈絡膜新血管細胞膜時，新血 管係陽性地沾染 TNF 與 IL-1 (OhH 等人（1999)7«νβ?ί 吻 制40 : 1891)。於一項具體實施例中，本發明之TNFa抗體係 用以治療脈絡膜新血管生成作用。於本文中使用之”脈絡膜 新血管生成作用''一詞，係指新血管之生長，其係源自脈絡 膜，經過Bruch細胞膜中之一個中斷，進入視網膜下色素上 皮（下RPE)或視網膜下空間中。脈絡膜新血管生成作用（CNV) 為在患有此症狀之病人中視覺損失之一項主要原因。 Ί.坐骨神經痛 腫瘤壞死因子係牽連坐骨神經痛之病理生理學（Ozaktay等 人（2002)五⑽·处/此/· 11 : 467 ; Brisby 等人（2002)he·/. 11 : 62) 86869 -102- 1354561 。於-項具體實施例中，本發明之抗體係用以治療坐 骨神經痛。於本文中使用之”坐骨神經痛”一詞，係指涉及 腳中減弱之動作及/或知覺之症狀，其係因料坐骨神經之 傷害所造成。坐骨神經痛㈣被稱為坐骨神經之神經病， 及坐骨神經機能障礙。坐骨神經痛為末梢神經病之Γ種形 式。其係發生在對於位在腿背後之坐骨神經有傷害時。坐 骨神經係控制膝部背後及下方腳部之肌肉，且對大腿背後 、部份下方腳部及足底提供知覺。坐骨神經射為另一種 病症4表徵，包括腰部患赫尼亞圓盤、椎骨狹窄、變性圓 盤疾病、絕血性脊椎滑脫症及松子狀病徵候蔟。 名· Sjogren氏徵候簇 腫瘤壞死因子係牽連Sjogren氏徵候簇之病理生理學（K〇ski等 人（2001) . ~施麵祕19 : 131)。於一項具體實施例中，本 發明足TNFa抗體係用以治療Sj0gren氏徵候簇。於本文中使 用之"Sjogren氏徵候簇"一詞，係指系統炎性病症，其特徵為 口乾、減少流淚及其他乾燥黏膜，且經常與自身免疫風濕 病症有關聯，譬如風濕性關節炎。眼睛與嘴巴之乾燥，係 為此徵候簇之最常見病徵。此病徵可單獨發生，或伴隨著 與風濕性關節炎或其他結缔組織疾病有關聯之病徵。可以 有伴隨之唾液腺腫大。其他器官可變成被感染。此徵候簇 可與風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡、硬皮病、多肌炎及 其他疾病有關聯。 葡萄膜炎 腫瘤壞死因子係牽連葡萄膜炎之病理生理學與 86869 -103- 1354561
Lloyd (1992) Q^oA:z>2e4 : 1 ; Woon 等人（1998) CWr五少17 : 955)。 於一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體係用以治療葡萄 膜炎。於本文中使用之π葡萄膜炎”一詞，係指葡萄膜發炎 ，其係為介於鞏膜與視網膜間之層，其包含虹膜、睫狀體 及脈絡膜。葡萄膜炎亦常被稱為虹膜炎、睫狀環炎、脈絡 · 膜炎、脈絡膜網膜炎、前葡萄膜炎及後葡萄膜炎。葡萄膜 - *_ 炎之最常見形式為前葡萄膜炎，其係涉及眼睛前方部份之 發炎，其經常與虹膜分離。此症狀經常稱為虹膜炎。於一 _ 項具體實施例中，葡萄膜炎一詞係指葡萄膜之發炎，其係 籲 排除與自身免疫性疾病有關聯之發炎，意即排除自身免疫 葡萄膜炎。 \0•濕斑點變性
腫瘤壞死因子係牽連濕斑點變性之病理生理學。於一項具 體實施例中，本發明之TNFa抗體係用以治療濕斑點變性。 於本文中使用之''濕斑點變性"一詞，係指會影嚮斑點（眼睛 視網膜之中樞部份）且會造成降低視覺敏度及可能之中樞視 覺損失之病症。患有濕斑點變性之病患，會在視網膜下方 發展新血管，其會造成出血、腫脹及傷症組織。 \\.骨質疏鬆症 腫瘤壞死因子係牽連骨質疏鬆症之病理生理學（Tsutsumimoto 等人（1999)«/5(^灿>^及烈.14 : 1751)。骨質疏鬆症係用以指其 特徵為骨頭密度之漸進損失與骨頭組織變稀之病症。骨質 疏鬆症係發生於身體未能形成足夠新骨質時，或當太多舊 骨質被身體再吸收時，或兩者。本發明之TNFa抗體或其抗 86869 -104- 1354561 原結合片段，可用以治療骨質疏鬆症。 \2.骨關節炎 腫瘤壞死因子係牽連骨關節炎之病理生理學（Venn等人（1993) /4厂认，此'及/^«»2.36:819;\\^1&。〇1;1:等人（1994)</及/2從爪也〇/.21:1710) 。骨關節炎（0A)亦被稱為肥大骨關節炎、骨關節病及變性關 節疾病。0A為骨路關節之慢性變質疾病，其會在所有年齡 之成人中影嚮特定關節，一般為膝部、髖部、手關節及脊 椎。0A之特徵為多種下列表象，包括關節軟骨之退化與稀 化，且伴隨發展”潰瘍”或坑口，骨贅形成，骨頭在邊緣處 之肥大，及在滑液細胞膜上之改變，以及受感染關節之腫 大。再者，骨關節炎係伴隨著疼痛與僵硬，特別是在長期 活動之後。本發明之抗體或其抗原結合片段可用以治療骨 關節炎。骨關節炎之特徵性射線照像特徵，包括關節空間 變窄、軟骨下硬化、骨贅形成、軟骨下囊腫形成、鬆散骨 性身體（或’’關節鼠π)。 用以治療骨關節炎之藥物，包括多種非類固醇消炎藥物 (NSAID)。此外，COX 2抑制劑，包括些利卜瑞斯（Celebrex)、維 歐克斯（Vioxx)及貝克斯拉（Bextra)與依托庫西比（Etoricoxib)，亦 用以治療0A。被直接注射至關節中之類固醇，亦可使用以 減少發炎與疼痛。於本發明之一項具體實施例中，本發明 之TNF α抗體係併用NSAID、C0X2抑制劑及/或類固醇一起 投藥。 W其他 本發明之抗體與抗體部份，亦可用以治療其中TNF α活性 86869 -105 - 1354561 2有各種其他病症。其中·^活性係牵連其病理生理 因此’、可使用本發明之抗體或抗體部份治療之其他 疾病與病症之實例’包括與老化有關聯之惡病質、阿耳滋 ，默，疾病、腦水腫、炎性腦部傷害、癌纟、癌症與惡病 質、^性疲勞徵候簇、皮肌炎，藥物反應，譬如％麵·她訓 徵候蔟與Jansch-Herxheimer反應’在脊髓中及/或其附近之水 腫，家族週期性發熱、Fdty氏徵賤、纖維變性、▲管球性 腎炎（例如鏈球菌後絲球體性腎炎或IgA腎病）、假器之鬆弛 :微觀多血管炎、混合結缔組織病症、多發性骨髓瘤、癌 症與心病為、夕重器官病症、脊髓發育不良徵候簇、睪丸 骨組織朋解，胰腺炎，包括急性、慢性及胰膿腫，齒周膜 疾病多肌炎、進行性腎衰竭、假痛風、壞疸性膿皮病、復 發夕I人骨炎、風濕性心臟病、肉狀瘤病、硬化性膽管炎、 中風、胸腹主動脈瘤修復（TAAA)、TNF受體有關聯之週期性 徵候簇（TRAPS)、與黃熱病接種疫苗有關聯之病徵、與耳朵 有關聯之炎性疾病、慢性耳朵發炎、具有或未具有膽硬脂 瘤之慢性中耳炎、兒科耳朵發炎、肌炎、卵巢癌、結腸直 腸癌、與移植有關聯之病症、與所引致之炎性徵候簇有關 聯之療法（例如在IL-2投藥後之徵候簇）及與再灌注損傷有關 聯之病症。 應明瞭的是’所有上文所提及之TNFa·相關病症，在適當 情況下均包括該疾病之成人與幼年形式兩者。亦應明瞭的 是，所有上文所提及之病症’係包括該疾病之慢性與急性 形式。此外，本發明之TNF α抗體可用以治療各上文所提及 86869 -106· 丄允4：)61 之單獨或彼此合併之㈣目關病症，例如 狼瘡之病患。 j』腰4與 HI· S~iLM合物粗醫華招竿 組合物與投藥 本發明《抗體 '抗體部份及其他蕭口抑制劑，可 ::予病患之醫藥組合物中。典型上，此醫藥組合物係： 。本發明疋抗體、抗體部份或其他胸抑制劑，及 可接文疋載劑。於本文中使用之••藥學上可接受之載劑"， 包括生理學上可相容之任何及所有溶劑、分散媒質 層、抗細菌劑與抗真菌劑、等渗與吸收延遲劑等。藥^ 可=載劑之實例，包括一或多種水、鹽水、鱗酸鹽二 ^水：右旋糖、甘油、乙醇等，以及其組合。在許；： ’兄車义佳係在組合物中包含..等滲劑，例如糖類，多元醇 類，譬如甘露醇、花楸醇，或氯化執。藥學上可接 劑，可步包含少量輔助物質，譬如潤濕或乳化劑、防 劑之辟架壽命或有^ ^邵份或其他挪〇抑制 本發月《組合物可呈多種形式。其包括例如液體、半固體 及固體劑量形式’譬如液體溶液（例如可注射與可灌注溶液） :分散液或懸浮液、片劑、丸劑、粉末、微脂粒及栓劑。 較佳形式係依意欲投藥之模式及治療應用而定。血型較佳 组合物係呈可注射或可灌注溶液形式，譬如類似用於人類 《被'免疫而具有其他抗體或其他啊抑制劑之組合物。 較佳投藥模式為非經腸（例如靜脈内、皮下、腹膜腔内、肌 86869 107- 1354561 ^ )於一項較佳具體實施例中，抗體或其他TNFa抑制劑係 藉由靜脈内灌注或注射投藥。在另一項較佳具體實施例中 狁體或其他抑制劑係藉由肌内或皮下注射投藥。 〜療組合物於製造與儲存之條件下，典型上必須是無菌且 安定。此組合物可被調配成溶液、微乳化液、分散液、微 脂粒或適用於高藥物濃度之其他有序結構。無菌可注射溶 履可經由將活性&合物（意即抗冑 '抗體部份或其他響“抑 制劑）以戶斤需要之量摻入適當溶劑中Μ吏用上文所列舉成份 :―或組合，㈣要而定’接著過濾滅菌而製成。一般而 刀散液係經由將活性化合物摻入含有鹼性分散媒質及 來自上又所列舉《所需要其他成份之無菌媒劑中而製成。 在用於製備纟菌可注射溶液之無菌粉末之情況中，較佳製 備方法係為真空乾燥與冷陳乾燥，其係產生活性成份加上 來自預先經過無菌過濾溶液之任何其他所要成份之粉末。 溶硬之適當流動性可被保持著，例如利職層，譬如卵鱗 脂，在分散液之情況中藉由維持所需要之粒子大小，及利 用界面活性劑。可注射組合物之長期吸收，可藉由在組合 物中包含-種延遲吸收之藥劑例如單硬脂酸鹽與明 生。 亦可將補充活性化合物摻入組合物中。在某些具體實施例 ，係將本發明之抗體或抗體部份，與—或多種其他治療 劑共同調配及/或业同將藥。 /飞，、门投栾。例如，本發明之抗-hTNFo：抗 月豆或抗體部份，可與一或多種 MAKD或—或多種NSAID或一 次多種結合其他標的之並他括触〃点丨t 八他抗m (例如結合其他細胞活素或 86869 •108- 1354561 結合細胞表面分子抗體），一或多種細胞活素，可溶性 受體（參閱，例如PCT公報案號w〇 94/06476)及/或一或多種 抑制hTNF α生產或活性之化學劑（譬如亞環己烷基衍生物， 如在PCT公報案號W093/19751中所述者）或其任何組合共同調 配及/或共同投藥。再者，可將本發明之—或多種抗體，與 兩種或多種前述治療劑合併使用。此種組合療法可有利地 利用較低劑量之所投予治療劑，因此避免與各種單一療法 有關聯之可能副作用、併發症或低程度之病患回應。 於-項具體實施例中，本發明係包括醫藥組合物，其包含 有效量之胸抑制劑與藥學上可接受之載劑，其中有效： 之TNFa抑制劑可有效治療-相關病症，包括例如坐骨神 經痛、子宮内膜組織異位形成及前列腺炎。本發明之抗體 、抗體部份及其他TNFa抑射j，可藉由此項技藝中已知之 夕種方法投藥$對4多治療應用而言，較佳投藥途徑/模 式為靜脈内注射或灌注。正如熟練技師將明瞭的，投藥之 途輕及/或模式將依所要之έ士杲泠 +甘u 夂、、。果而改麦。在某些具體實施例 中，活性化合物可以載劑製備，其將保護化合物抵抗快速 釋出，譬如受控釋出配方，包括植入物、經皮貼藥及微包 勝傳輸系統。可使用生物可降 』降解生物可相容之聚合體， 譬如乙烯醋酸乙浠酯、聚酕邾 取7 # 朱酐類、聚乙醇酸、膠原、聚原酸 醋及聚乳酸。製備此種配方 《疔义万法，係取得專利權， 或對熟諳此藝者_-勒· p + Α 已知。參閱，例如择鬢與受控釋政 ^ # $ M J.R. Robinson m, ^ λ/γ , τ, 扁耆，Marcel Dekker 公司，New Y〇rk， 1978 〇 86869 109· 1354561 本發明之™^抗體亦可以蛋白質結晶配方之形式投藥， 其包含蛋白質結晶，被包覆在聚合體載劑中，以形成經塗 覆粒子之組合。蛋白質結晶配方之經塗覆粒子，可具有球 月且形恐學’且為至局500微米直徑之微球體，或其可具有某 種其他形態學且為微粒子。提高之蛋白質結晶濃度允許本 發明之抗體以皮下方式值柃 反r万式傳輸。於一項具體實施例中，本發 明之職抗體係經由蛋白質傳輸系統傳輸，其中係將一： 多種蛋白質結晶配方或組合物投予具有·&相關病症之病 患。完整抗體結晶或抗體片段結晶之經安定化配方之板入 物與製備方法，亦描述於w〇〇肅鳩中，其係併於本文^ 參考。於-項具體實施例中，描述於實例37與38中包含结 晶抗體片段之配方’係用以治療·㈣目關病症。 ° 在某些具體實施例中，本發明之抗體、抗體部份或其他避 “抑制劑，可經口投予，例如使用惰性稀釋劑或能同化之可 食用載齊卜亦可將化合物（及其他成份，若需要時）密封在 硬或軟殼明膠膠囊中’壓縮成片劑，或直接摻入病患之膳 食中。對口服治療投藥而言，可將化合物與賦形劑一起^ 入，並以可攝食片劑、類含片、錠劑、膠囊、_、縣浮 液、糖漿'扁片等形式使用。為藉由非經腸投藥以外之方 式投予本發明化合物，可能必須以—種物質塗覆該 ，或與該化合物共同投藥，以防止其失活。 σ 本發明之醫藥組合物可包含”治療上有效量”或”預防 用量及歷經所必須之時間下，有效達成所要治療結= 86S69 -110- 1354561 療上有效里之抗體、抗體部份或其他^^ α抑制劑，可 根據些因素而改變，譬如個人之疾病狀態、年齡、性別 及體重’以及抗體、抗體部份、其他TNFa抑制劑在個人中 引出所要回應《能力。治療上有效量亦為其中抗體、抗體 部知或其他TNFa抑制劑之任何毒性或有害作用係被治療上 有】作用I過。預防上有效量"係指在服用量及歷經所必 4《時間了，有效達成所要預防結果之量。典型上，由於 、 預防劑I係在疾病之前或在其較早期使用於病患、，故㈣ ._ · 上有效量將低於治療上有效量。 鲁 口可碉整劑量服用法，以提供最適宜之所要回應（例如治療· 或預防回應）。例如，可投予單—大丸劑，可隨著時間投予 個刀離劑里’或劑量可按治療狀況之危急性所指示而成 匕例地降低或增加。為了易於投藥與劑量均勻性，尤其有 利的疋凋配呈劑量單位形式之非經腸組合物。於本文中使 Y量單仅开）式係指適合作為欲被治療哺乳動物病患之 :劑里之物理上分立單位；各單位含有預定量之活性化 · 二物’經計算以產生所要治療效果，且伴隨著所需要之* # :::!l。關於本發明劑量單位形式之規格，係藉由且直接' 、、 、、、下^況所主導，⑻活性化合物之獨特特徵，及欲被 · '、、、特毛冶療或預防效果，與（b)於摻配此種活性化合物 <技藝中對於治療個人敏感性之固有限制。關於治療上或 予爵 卜 放量之本發明抗體或抗體部份之舉例非限制性範 ’、'為丨〇-15〇毫克，更佳為20-80毫克，且最佳為約4〇毫克 。應注意的是，劑量值可隨著欲被減輕症狀之類型與嚴重 86869 -111- 1354561 性而改變°更應明瞭以，對任何料病患而t，特定劑 量服用法應根據個別需求及執行或管理該組合物投藥人員 之專業判if ’隨著時間調整，且本文所提出之劑量範圍僅 為舉例而& ’並不意欲限制所請求組合物之範圍或實施。 於上文列舉烺度中間之範圍，例如約6_144毫克，毫升，亦 意欲成為本發明之—部份。例如，使用任何上文所列舉數 值之組合作為上及/或下限之數值範圍，係欲被包含在内。 本發月亦關於包裝之醫藥組合物，其包含本發明之α 抑制d 1關於如上述使用此抑制劑以治療心相關病症 之說明書。 本發明之另一方面係關私表| , f關於套件，其含有一種醫藥組合物’ ^包含抗.TNFa抗體與藥學上可接受之載劑，及—或多種醫 樂組合物’各包含可用於㈣挪㈣目關病症之藥物及藥學 上可接受之載劑。或者，此套件肖 g 嘗忏包含早一醫藥組合物，包 含抗-TNF <2抗體、一或多種可用认 ^裡』用於治療TNF α-相關病症之藥 物及藥學上可接受之載劑。 此套件含有關於服用此醫藥組 合物以治療TNFa-相關病症之說明蚩甘士』， — 成明書，其中抗-TNF α抗體之 投藥是有益的，譬如狼瘡。 本發明亦關於包裝之醫藥組合物或套件，其包含本發明之 聊〇抑制劑，及關於使用此抑制劑以治療其中挪。活性為 有害之特定録之說明#，如上述。此包裝或套件可替代 地含有TNF α抑制劑，且其可被促谁 攸彳疋進利用，無論是在包裝内 或經由所附之訊息，供本文中 ' Τ所迷涡症之使用或治療。包 裝之醫藥或套件可進一步包含第_ 一種藥劑（如本文中所述） 86869 -112 - —種藥劑（如本文中所述） 1354561 伴隨著關於使用第二種藥劑與第 之說明書一起包裝或共同促銷。 其他治療劑 本發明係關於醫藥組合物及其關於治療心相關病症之 吏用方法此醫藥組合物包含第—種預防或抑制·…相關 病症之藥劑。此醫藥組合物亦可包含第二種藥劑，並係為 :性醫藥成份；意"二種藥劑為治療性，且其功能係 超過不活性成&，譬如醫藥載劑、防腐劑、稀釋劑或緩衝 剑。弟一種藥劑可用於治療或預防挪仏相關病#。第二種 藥劑可減少或治療至少一種與標的疾病有關聯之病徵。第 —種與第二種藥劑可藉由類似或不相關之作用機制，施加 其生物學作用；或第—種與第二種藥劑之任—種或兩者可 藉由作用機制之多重性施加其生物學作用。此醫藥組合物 亦可包含第三種化合物，或甚至又更多，其中第三種(與第 四種等）化合物具有第二種藥劑之相同特徵。 應明瞭的是，本文中所述之醫藥組合物可對各所述具體實 2例，具有罘一種與第二種、第三種或其他藥冑，在相同 藥學上可接受之載劑中’或在不同藥學上可接受之載劑中 。更應明瞭的是’帛—種、第二種' 第三種及另一種藥劑 可在所述具體實施例内同時或相繼地投藥。或者，第一種 與第二種藥劑可同時投予，而第三種或另—種藥劑可在最 初兩種藥劑之前或之後投予。 在本又中所述方法與醫藥組合物内所使用藥劑之組合，對 於作為治療標的之症狀或疾病，可具有治療加成或増效作 86869
-113· 用在本文中所述方法或醫藥組合物内所使用藥劑之組合 ，2可減少當單獨或未具有此特定醫藥組合物之其他藥劑 投藥時所伴卩遺著之至少—種該藥劑之不利作用。例如，一 1354561 種藥劑之毒性副作用’可藉由組合物之另一種藥劑而被減 弱，因此允許較高劑量，改善病患順應性及改善治療結果 。組合物之加成或增效作用、利益與優點，均適用於治療 J之種類，供論是結構或官能性種類，或個別化合物本身。 補充之活性化合物亦可被摻入組合物中。在某些具體實施 例中，本發明之抗體或抗體部份係與一或多種可用於治療 其中TNFa活性為有害之请仏相關病症之其他治療劑共同調 配及/或共同投藥。例如’本發明之抗細Fa抗體、抗體 部份或其他TNFa抑制劑，可與一或多種會結合其他標的之 胞活素或結合細胞表面分子之 才几fla )或夕種細胞/舌素、可〉容性TNF α受體（參閱，例如PCT 么報本5虎W0 94/06476)及/或一或多種會抑制hTNF q生產或活 性之化子釗（譬如亞環己烷基衍生物，如在公報案號 WO 93/19751中所述者）共同調配及/或共同投藥。再者，本 發明之-或多種抗體或其他抑制劑，可與兩種或多種 前述治療劑合併使用。此種組合療法可有利地使用較低服 用量之所投予治療劑，目此避免與各種單一療法有關聯之 可能毒性或併發症。特定治療劑係—般性地以被治療之特 定TNFa-相關病症為基礎作選擇，如下文所討論者。 本發明之抗體、抗體部份或其他WFa抑制劑可與其合併 之’口療内J之非限制性貫例，包括下列：非類固醇消炎藥物
其他抗體（例如會結合其他細
86869 -114- 1354561
(NSAID);細胞活素抑制消炎藥物（CSAID) ; CDP-571/BAY-10-3356 ( 人化之抗-TNFo;抗體；Celltech/Bayer); cA2 / 因弗利西馬（infliximab) (嵌合抗-TNF α抗體；Centocor) ; 75 kdTNFR-IgG /恩塔臬西伯 (etanercept)(75 kD TNT 受體-IgG 融合蛋白質；Immunex ;參閱，例 如游摩Γ 义 ά 屬濕启（1994)第 37 卷，S295 ; /· /«vesi. MM. (1996)第 44 卷，235A) ; 55 kdTNF-IgG (55 kD TNF 受體-IgG 融合蛋白質； Hoffmann-LaRoche) ; IDEC-CE9.1/SB 210396 (非耗乏性首次接觸抗 原之抗-CD4抗體；IDEC/SmithKline ;參閱，例如顧鎅炎ά眉濕 病（1995)第 卷，S185) ; DAB 486-IL-2 及 / 或 DAB 389-IL2 (IL-2 融 合蛋白質；Seragen ;參閱，例如鄺荩义ά属濕疬（1993)第卷， 1223);抗-Tac (人化之抗-IL-2Ra ;蛋白質設計實驗室/ Roche)
;IL-4 (消炎細胞活素；DNAX/Schering) ; IL-10 (SCH 52000 ;重組 IL-10,消炎細胞活素；DNAX/Schering) ; IL-4 ; IL-10 及 / 或 IL-4 催 動劑（例如催動劑抗體）；IL-IRA (IL-1受體拮抗劑；Synergen/Amgen) ;TNF-bp/s-TNF (可溶性TNF結合蛋白質；參閱，例如腐莰义 ά属濕病（1996)第卷，第9期，（補充），5284 ; Xwer.«/.洲少加/·-心 廯與#環立湮# (1995)第卷，第37-42頁）；R973401 (磷酸二 酯酶類型IV抑制劑；參閱，例如#莰爻ά屈濕病（1996)第 卷，第9期，（補充），S282) ; MK-966 (COX-2抑制劑；參閱，例如 顧鎅泌ά属濕斿(1996)第卷，第9期（補充）,S81);衣洛普斯特 (Iloprost)(參閱，例如## #泌ά属濕褚（1996)第卷，第9期（補 充），S82);胺甲喋呤；酞胺哌啶酮（參閱，例如鄺莰泌ά屈濕 扃（1996)第迎_卷，第9期（補充），5282)，及酞胺哌啶酮相關藥物 (例如Celgen);列弗諾麥得（leflunomide)(消炎與細胞活素抑制劑 86869 -115 - 1354561 ’參閱，例如游摩尤ά屬满滅（1996)第卷，第9期（補充）,si31 ;發义呀龙（1996)第45_眷，第103-107頁）；凝血酸（血纖維蛋白 溶酶原活化作用之抑制劑；參閱，例如游舉泌沒屬廣4 (1996) 弟22_卷，第9期（補充），S284)，丁-614 (細胞活素抑制劑；參閱， 例如Μ靳义ά屈濕疬（1996)第卷，第9期（補充），S282);前列 腺素Ε1 (參閱，例如游康义ά屈廣雇（1996)第卷，第9期（補 充），S282);天尼達普（Tenidap)(非類固醇消炎藥物；參閱，例 如粼擧炎ά眉濕斿（1996)第处卷，第9期（補充）,S280);那丙新 (Naproxen)(非類固醇消炎藥物；參閱，例如术.經禮告（1996)第 卷，第Π09-1213頁）；美氧胺（Meloxicam)(非類固醇消炎藥物）； 異丁苯丙酸（Ibupr0fen)(非類固醇消炎藥物）；吡氧胺（pir〇xicam)( 非類固醇消炎藥物）；二可吩拿克(picl〇fenac)(非類固醇消炎藥 物）；吲哚美薩辛（Indomethacin)(非類固醇消炎藥物）；硫酸沙 ”井（Sulfasalazine)(參閱’例如鄺擧义ά屈濕疬（1996)第见卷，第9 期（補充），S281);硝基脒唑硫嘌呤（參閱，例如粼鏔炎没屑濕 病（1996)第2£_卷，第9期（補充）,S281) ; ICE抑制劑（酵素間白血 球活素-1 /3轉化酶之抑制劑）；zap_7〇及/或lck抑制劑（酪胺酸 激酶zap-70或lck之抑制劑）；VEGF抑制劑及/或VEGF_R抑制 劑（血管内皮細胞生長因子或血管内皮細胞生長因子受體之 抑制劑；血管生成抑制劑）；皮質類固醇消炎藥物（例如 SB203580); TNF-轉化酶抑制劑；抗_IL_12抗體；抗孔_18抗體 ;間白血球活素-11 (參閱，例如顧莰义戎扃濕疬（1996)第处卷， 第9期（補充），S296)，間白血球活素_13 (參閱，例如游莰义邊 扃濕疬（1996)第卷，第9期（補充）,S3〇8);間白血球活素_17抑 86869 -116· 1354561 制劑（參閱，例如鄺#彡ά屑潢游（1996)第卷，第9期（補充）, S120);金；青霉胺；氯喹；羥氯喹；苯丁酸氮芥（Chl〇rambucil) ;環磷醯胺；環孢素；全部淋巴樣照射；抗-胸腺細胞球蛋 白；抗-CD4抗體；CD5-毒素；經口投予之肽與膠原；洛編雜 里特（lobenzarit)二鈉；細胞活素調節劑（CRA) HP228與HP466 (Houghten醫藥公司）；ICAM-1反有意義偶磷基硫代酸酯寡脫氧 核苷酸（ISIS 2302 ; Isis醫藥公司）；可溶性互補受體1 (TP10 ; Τ細胞科學公司）；潑尼松；歐果質（orgotein);葡萄糖胺聚糖 多硫酸鹽；二曱胺四環素；抗-IL2R抗體；海生與植物脂質（ 魚與植物種子脂肪酸類；參閱，例如DeLuca等人（1995) d 21 : 759-777);歐蘭諾吩（auranofin);苯基 保泰松(phenylbutazone);甲氯滅酸；氟滅酸；靜脈内免疫球蛋 白；吉留通（zileuton);霉菌防禦毒（RS-61443);塔可利馬斯 (tacrolimus)(FK-506);喜洛利莫斯（sirolimus)(雷帕霉素）；安米普 利糖（amiprilose)(舍拉非克汀（therafectin));克拉利賓（cladribine)(2-氯基脫氧腺苷）；氮利賓（azaribine);胺甲喋呤；抗病毒劑；及 免疫調制劑。任何上述藥劑可併用本發明之TNF α抗體一起 投藥，以治療TNF 相關病症。 於一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體係併用下列藥 劑之一投藥，以治療風濕性關節炎：KDR (ΑΒΤ-123)之小分子 抑制劑、Tie-2之小分子抑制劑；胺甲喋呤；潑尼松；塞拉庫 西比（celecoxib);葉酸；幾氯p查硫酸鹽；羅費庫西比（rofecoxib) ;恩塔臬西伯（etanercept);因弗利西馬（infliximab);列弗諾麥得 (leflunomide);那丙新（naproxen);維德庫西比（valdecoxib);硫酸 86869 •117· 1354561 沙畊（sulfasalazine);甲基氫化潑尼松；異丁苯丙酸（ibupr〇fen); 美氧胺（meloxicam);曱基氫化潑尼松醋酸鹽；硫基蘋果酸金 鈉；阿斯匹靈；稍基脒唑硫嘌呤；丙酮化氟趣脫氫皮崔醇 ;丙氧吩(propxyphene)莕磺酸鹽/阿帕伯（apap);葉酸鹽；那布 美東（nabumetone);二可吩拿克（diclofenac);吡氧胺（piroxicam); 依托多拉克（etodolac)，.一氯革胺苯乙酸納；1^亏普羅辛（〇xaprozin) ;羥基二氫待因酮（oxycodone) HC1 ;重酒石酸二氫可待因酮/ 阿帕伯（apap)，一氣本胺苯乙酸鋼/米索普斯把（misoprostol); 芬太尼（fentanyl);安那金拉（Anakinra)人類重組體；搓馬嗓 (tramadol) HC1 ;沙沙雷特（Salsalate);沙林達克（sulindac);氰钴胺 酸/ fa / p比吟醇；乙驢胺吩（acetaminophen);阿連宗酸（alendronate) 鈉；氫化潑尼松；嗎啡硫酸鹽；利多卡因鹽酸鹽；啕哚美 薩辛（indomethacin);葡萄糖胺硫酸鹽/軟骨素；環孢素；阿米 替林（amitriptyline) HC1;磺胺嘧啶；羥基二氫待因酮（oxyc〇d〇ne) HC1 / 乙醯胺吩（acetaminophen);歐若巴塔定（olopatadine) HC1 ;米索 普斯托（misoprostol);那丙新（naproxen)納；歐美普吐（omeprazole) ;分枝酿酸莫非替（mycophenolate mofetil);環磷醯胺；利圖西 馬伯（rituximab) ; IL-1 TRAP ; MRA ; CTLA4-IG ; IL-18BP ; ABT-874 ;ABT-325 (抗-IL 18);抗-IL 15 ; BIRB-796 ; SCIO-469 ; VX-702 ; AMG-548 ; VX-740 ;洛弗拉斯特（Roflumilast) ; IC-485 ; CDC-801 ; 及美索普蘭（mesopram)。於另一項具體實施例中，係投予本 發明之TNFa抗體，以治療TNFo:相關病症，且併用上述藥劑 之一，以治療風濕性關節炎。 於一項具體實施例中，本發明之TNFa抗體係併用下列藥 86869 -118- 1354561 劑之一投藥，以治療其中TNF ά活柯、a 士， 1王為有害之TNFa-相關病症 :抗-IL 12 抗體（ABT874);抗-IL 18 括嘴 仇體（ABT 325) ; LCK之小分 子抑制劑；COT之小分子抑制劑；> 知-IL 1抗體；MK2之小分 子抑制劑；抗-〇0 19抗體；（^〇13夕,\ <小分予抑制劑；CCR5之 小分子抑制劑；CCR 11抗-E/L選擇去4、- 坪I柷體之小分子抑制劑； Ρ2Χ7之小分子抑制劑；IRAK-4之小八2 2 4刀予抑制劑；類皮質糖受 體之小分子催動劑；抗-C5a受體抗辦. 凡體，C5a受體之小分子抑 制劑；抗-CD32抗體；及CD32作為治威疋 Q潔蛋白質。 於又另一項具體實施例中，本發日日、啊 I明<TNF〇：抗體係併用抗 生素或防止傳染劑一起投藥。防止值，九& 4 [ '^傳染劑包括此項技藝中 已知用以治療病毒、真菌、寄生物十Λ 物或細菌感染之藥劑。於 本文中使用之”抗生素”一詞，係指知& τ &抑制微生物之生長或將 其殺死之化學物質。被此術語所涵苫去 ..,, 134政考，係為藉由微生物 所產生之抗生素，以及此項技藝中已知之合成抗生素（例如 類似物）。抗生素包括但不限於克拉利霉素（clarithromycin) (Biaxiri® )、西普弗薩辛（ciprofloxacin)(Cipro® )及滅滴靈（Metronidazole) (Flagyl®)。 於另一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體係併用另一 種治療劑一起投藥，以治療坐骨神經痛或疼痛。可用以降 低或抑制坐骨神經痛或疼痛病徵之藥劑之實例，包括重酒 石酸二氫可待因酮/阿帕伯（apap)、羅費庫西比（rofecoxib)、 環笨雜林（cyclobenzaprine) HC1、曱基氫化潑尼松、那丙新（naproxen) 、異丁苯丙酸(ibuprofen)、經基二氫待因酮（oxycodone) HC1 /乙 醯胺吩（acetaminophen)、塞拉庫西比（celecoxib)、維德庫西比 86869 -119- 1354561 (valdecoxib)、甲基氫化潑尼松醋酸鹽、潑尼松、可待因磷酸 鹽 / 阿帕伯（apap)、搓馬 11 朵（tramadol) HC1 / 乙酿胺吩（acetaminophen) 、美塔沙隆（metaxalone)、美氧胺（meloxicam)、甲卡巴摩 (methocarbamol)、利多卡因鹽酸鹽、二氯苯胺苯乙酸鈉、加巴 潘亭（gabapentin)、地塞米松、異丙安寧（carisoprodol)、酮洛拉 克（ketorolac) 丁三醇胺、朵美薩辛（indomethacin)、乙Si胺吩 (acetaminophen)、苯甲二氮萆、那布美東（nabumetone)、羥基二 氫待因酮（oxycodone) HC1、太札尼定（tizanidine) HC1、二氯苯胺 苯乙酸鈉/米索普斯托（misoprostol)、丙氧吩莕續酸鹽/阿帕 伯（apap)、asa / 氧基叩得（oxycod) / 羧基二氫待因酮（oxycodone) ter 、異丁苯丙酸（ibuprofen) /二氫可待因自同小片塊、搓馬嗓 (tramadol) HC1、依托多拉克（etodolac)、丙氧吩HC1、阿米替林 (amitriptyline) HC1、異丙安寧/可待因phos/asa、嗎啡硫酸鹽、 多維生素、那丙新(naproxen)納、奥菲那淋（orphenadrine)擰檬酸 鹽及帖馬吉片（temazepam)。 於又另一項具體實施例中，TNFa-相關病症係以本發明之 TNF 抗體併用血液透析治療。 於另一項具體實施例中，本發明之TNF <2抗體係與用以治 療克隆氏病或克隆氏相關病症之藥物合併使用。可用以治 療克隆氏病之治療劑之實例，包括美沙胺（mesalamine)、潑尼 松、硝基脒吨硫嗓冷、疏基p票呤、因弗利西馬（infliximab)、 布蝶松化物、硫酸沙11 井（sulfasalazine)、甲基氫化潑尼松琥轴酸 納、氰苯p底醋/ atrop sulf、洛伯酿胺（loperamide)鹽酸鹽、胺曱 噪呤、歐美普攻（omeprazole)、葉酸鹽、西普弗薩辛（ciprofloxacin) 86869 -120- 1354561 /右旋糖-水、重酒石酸二氫可待因酮/阿帕伯（apap)、四環 素鹽酸鹽、氟西諾奈得、滅滴靈（Metronidazole)、硫柳汞/棚 酸、消膽胺（cholestyramine) /篇糖、西普弗薩辛（ciprofloxacin)鹽 酸鹽、天仙子胺硫酸鹽、唤淀鹽酸鹽、米達吐蘭（midazolam) 鹽酸鹽、經基二氫待因酮（oxycodone) HC1 /乙Si胺吩（acetaminophen) 、鹽酸異丙畊、磷酸鈉、磺胺甲基異喝唑/三甲氧芊二胺嘧 咬、塞拉庫西比（celecoxib)、多嗜竣酸劑、丙氧吩審續酸鹽、 氫基可體松、多維生素、巴薩疊氮化二鈉、可待因磷酸鹽/ 阿帕伯（apap)、可列西威蘭（colesevelam) HC1、氰姑胺酸、葉酸 、左旋弗薩辛（levoiloxacin)、甲基氫化潑尼松、那塔利諸馬 (natalizumab)及干擾素-7*。於另一項具體實施例中，本發明之 TNF α抗體係併用另一種治療劑一起投藥，以治療氣喘。可 用以減少或抑制氣喘病徵之藥劑實例，包括下列：舒喘寧 (albuterol);沙美特醇（salmeterol) / 福路替卡松（fluticasone);福路 替卡松丙酸納（sodium fluticasone propionate);布蝶松化物；潑尼 松；沙美特醇（salmeterol)愛克辛那弗酸鹽；列瓦布特羅 (levalbuterol) HC1 ;硫酸鹽/依普拉搓品（ipratropium);氫化潑尼 松磷酸鈉；丙酮化氟羥脫氫皮崔醇；二丙酸氯地米松；溴 化依普拉搓品（ipratropium bromide);阿濟霉素（azithromycin) ; p比 丁特醇(pirbuterol)醋酸鹽、氫化潑尼松、無水茶鹼、曱基氫化 潑尼松琥轴酸納、克拉利霉素（clarithromycin)、雜咬路卡斯特 (zafirlukast)、弗莫特醇反丁晞二酸鹽、流行性感冒病毒疫苗 、曱基氫化潑尼松三水合物、氟尼梭來、過敏反應注射液 、可若莫林（Cromolyn)制、非克索吩拿定（fexofenadine)鹽酸鹽、 86869 -121 - 1354561 氟尼梭來/堇醇、阿莫克霉素（amoxicillin) /可拉五蘭酸鹽 (clavulanate)、左旋弗薩辛（levofloxacin)、吸入器輔助裝置、瓜 菲尼辛（guaifenesin)、地塞米松磷酸鈉；莫克西弗薩辛 (moxifloxacin) HC1;半乙醇酸鹽酸鹽；瓜菲尼辛（guaifenesin) / D_ 美索吩（methorphan);假麻黃鹼/叩得（c〇d) /氯菲諾（chlorphenir) ;皆替弗薩辛（Gatifloxacin);西替利_ (cetirizine)鹽酸鹽；糠酸 莫美塔松；沙美特醇（salmeterol)愛克辛那弗酸鹽；退咳露； 頭孢菌素IV; pe/二氫可待因酮/氯菲諾（chl〇rphenir);西替利 畊（cetirizine) HC1 /假麻黃鹼；苯腎上腺素/叩得（c〇d) /異丙啡 (promethazine);可待因 / 異丙畊（promethazine);西弗若吉（<^φΓ0Ζί1) ;地塞米松；瓜菲尼辛（guaifenesin) /假麻黃鹼、氯吩尼拉明 (chlorpheniramine) / 二氫可待因酮、聶朵可洛密（ned〇cr〇mil)鈉、 間羥特丁腎上腺素硫酸鹽 '腎上腺素及甲基氫化潑尼松、 間丙特瑞醇（metaproterenol)硫酸鹽。 於另一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體係併用另一 種治療劑一起投藥，以治療COPD。可用以減少或抑制COPD 病徵之藥劑之實例，包括舒喘寧（albuterol)硫酸鹽/依普拉搓 品（ipratropium);溴化依普拉搓品（ipratropium bromide);沙美特醇 (salmeterol) / 福路替卡松（fluticasone);舒喘寧（albuterol);沙美特 醇（salmeterol);愛克辛那弗酸鹽；丙酸福路替卡松 (fluticasone propionate);潑尼松；無水茶鹼；曱基氫化潑尼松琥 珀酸鈉；蒙帖路卡斯特（montelukast)鈉；布蝶松化物；弗莫特 醇反丁烯二酸鹽；丙酮化氟羥脫氫皮留醇；左旋弗薩辛 (levofloxacin);瓜菲尼辛（guaifenesin);阿濟霉素（azithromycin);貝 86869 -122- 1354561 可美塞松（beclomethasone)二丙酸鹽；列瓦布特羅（levalbuterol) HCl ;氟尼梭來制三水合物；皆替弗薩辛（Gatifloxacin);雜吱路卡 斯特（zafirlukast);阿莫克霉素（amoxicillin) /可拉五蘭酸鹽 (clavulanate);氟尼梭來 / 莖醇；氯吩尼拉明（chlorpheniramine) / 二氫可待因酮；間丙特瑞醇（metaproterenol)硫酸鹽；曱基氫化 潑尼松；p夫喃曱酸S旨；麻黃驗'/叩得（c_od) /氯菲諾（chlorphenir) ;巧匕丁特醇（pirbuterol)酷酸鹽；麻黃驗/羅拉他ί丁（loratadin); 間經特丁腎上腺素硫酸鹽；溴化提歐多平（tiotropium bromide); (R,R)-弗莫特醇；TgAAT ;西若米拉斯特（Cilomilast)及洛弗拉斯 特（Roflumilast) 〇 於另一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體係併用另一 種治療劑投藥，以治療IPF。可用以減少或抑制IPF病徵之藥 劑之實例，包括潑尼松；确基脒峻硫嗓呤；舒喘寧（albuterol) :秋水仙素硫酸鹽；異羥基洋地黃毒苷；干擾素；甲基氫 化潑尼松琥珀酸鈉；利尿磺胺；利辛諾普利（lisinopril);硝基 甘油；螺甾内酉旨；環磷酸胺；；臭化依普拉搓品（ipratropium bromide) ;放線菌素d ;阿帖普酶（alteplase);丙酸福路替卡松（fluticasone propionate);左旋弗薩辛（levofloxacin);間丙特瑞醇（metaproterenol) 硫酸鹽；嗎啡硫酸鹽；羥基二氫待因酮（oxycodone) HC1 ;氯化 丙酮化氟幾脫氫皮崔醇；無水塔可利馬斯（tacrolimus)約； 干擾素-α ;胺甲噪呤；分枝齡酸莫非替(mycophenolate mofetil)。 於本發明之一項具體實施例中，TNF α抗體係併用一種常 用以治療脊椎關節病之藥劑投藥。此種藥劑之實例包括非 類固醇消炎藥物(NSAID)，COX 2抑制劑，包括Celebrex®、Vioxx® 86869 1354561 及Bextra®，以及依托庫西比（etoricoxib)。物理療法亦常被用以 治療脊椎關節病，其經常伴隨著非類固醇炎性藥物。 於另一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體係併用另一 種治療劑投藥，以治療關節黏連脊椎炎。可用以減少或抑 制關節黏連脊椎炎病徵之藥劑之實例，包括異丁苯丙酸 (ibuprofen)、二可吩拿克（diclofenac)與米索普斯托（misoprostol)、 那丙新(naproxen)、美氧胺（meloxicam)、4丨p朵美薩辛（indomethacin) 、二可吩拿克（diclofenac)、塞拉庫西比（celecoxib)、羅費庫西比 (rofecoxib)、硫酸沙p井（sulfasalazine)、潑尼松、胺甲噪吟、硝基 脒唾硫喝呤、米婼環素（minocyclin)、潑尼松、恩塔臬西伯 (etanercept)及因弗利西馬（infliximab)。 於另一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體係併用另一 種治療劑一起投藥，以治療牛皮癖關節炎。可用以減少或 抑制牛皮癖關節炎病徵之藥劑之實例，包括胺甲喋呤；恩 塔莱西伯（etanercept);羅費庫西比（rofecoxib);塞拉庫西比（celecoxib) ;葉酸；碗酸沙哨·（sulfasalazine);那丙新（naproxen);列弗諾麥 得（leflunomide);甲基氫化潑尼松酷酸鹽；Θ丨嗓美薩辛 (indomethacin);經氣峻硫酸鹽；沙林達克（sulindac);潑尼松； 增強之二丙；(5-美塞松；因弗利西馬（infliximab);胺甲喋呤；葉 酸鹽；丙酮化氟羥脫氫皮甾醇；二可吩拿克（diclofenac);二曱 亞/5風；p比氧胺（piroxicam);二氯苯胺苯乙酸鈉；酮基丙吩 (ketoprofen);美氧胺（meloxicam);潑尼松；甲基說化潑尼松； 那布美東（nabumetone);四苯醯?比p各乙酸（tolmetin)納；波三稀#5 (calcipotriene);環孢素；二可吩拿克（diclofenac);納/米索普斯 86869 -124- 1354561 托（misoprostol);氟西諾奈得；葡萄糖胺硫酸鹽；硫基蘋果酸 金鈉；二氫可待因酮；酸性酒石酸鹽/阿帕伯（apap);異丁 苯丙酸（ibuprofen);利些宗酸（risedronate)納；續胺π密咬；硫基 鳥嗓呤；維德庫西比（valdecoxib);阿列發謝特（alefacept);及也 發利祖馬（efalizumab)。 於一項具體實施例中，TNF 抑制劑係在治療冠狀心臟疾 病之最初程序後投藥。此種程序之實例包括但不限於冠狀 動脈分流移植法（CABG)，及經皮經管腔冠狀氣脹血管造形 術（PTCA)或血管造形術。於一項具體實施例中，係投予TNF α抑制劑，以預防狹窄再發生。於本發明之另一項具體實施 例中，係投予TNF α抑制劑以預防或治療再狹窄。本發明亦 提供一種治療方法，其中TNF α抑制劑係在插入支架於病患 動脈中，接受治療冠狀心臟疾病程序之前、伴隨或之後投 藥。於一項具體實施例中，支架係在CABG或PTCA之後投予 。就本發明而論，有極多種支架移植物可被利用，依所要 治療之位置與性質而定。支架移植物可為例如分叉狀或管 件移植物、圓柱形或推拔狀、可自動膨脹或氣球可膨脹、 單一個體或組成單位。再者，支架移植物可配合調整，以 在只有末梢端或沿著支架移植物之整個本體，釋出藥物。 亦可將本發明之TNF α抑制劑投藥於支架上。於一項具體實 施例中，本發明之TNFa抗體，包括例如D2E7/HUMIRA®，係 藉由藥物溶離支架投藥。 本發明之TNF α抗體可併用另一種治療劑投藥，以治療再 狹窄。可用以治療或預防再狹窄之藥劑之實例，包括喜洛 86869 -125- 1354561 利莫斯（sirolimus)、培克里他索（paclitaxel)、約洛利莫斯（everolimus) 、塔可利馬斯（tacrolimus)、ABT-578 及乙酸胺吩（acetaminophen) 。本發明之TNFa抗體可併用另一種治療劑投藥，以治療心 肌梗塞。可用以治療或預防心肌梗塞之藥劑之實例，包括 阿斯匹靈、塞多甘油（sitroglycerin)、美多心安（metoprolol)酒石 酸鹽、恩諾沙肝素（enoxaparin)納 '肝素納' 克羅匹多葛瑞 (clopidogrel)酸性硫酸鹽、卡威迪羅（carvedilol)、胺醯心安（atenolo) 、嗎啡硫酸鹽、美多心安(metoprolol)破祐酸鹽' p圭華靈（warfarin) 鈉、利辛諾普利（lisinopril)、異花楸醇醋單確酸鹽、異經基洋 地黃毒嘗、利尿續胺、辛伐制菌素（simvastatin)、瑞米普利（ramipril) 、腱激酶、安那拉普利（enalapril)順丁烯二酸鹽、托西麥得 (torsemide)、瑞塔威斯（retavase)、若沙坦（losartan)鉀、奎那普利 (quinapril) HC1 / 馬革卡巴（magcarb)、丁 苯氧酸(bumetanide)、阿帖 普酶（alteplase)、安那拉普雷特（enalaprilat)、乙胺ί典吱酮鹽酸鹽 、提洛飛邦（tirofiban) HC1 m-水合物、迪耳替阿簡（diltiazem)鹽酸 鹽、卡普脫普利（captopril).、愛貝沙坦(irbesartan)、法沙坦(valsartan) 、丙喏羅（propranolol)鹽酸鹽、弗新諾普利（fosinopril)鈉、利多 卡因鹽酸鹽、約伯提菲巴太（eptifibatide)、頭孢峻琳鈉、阿托 品硫酸鹽、胺基己酸、螺甾内醋、干擾素、梭達羅（s〇tal〇l)鹽 酸鹽、氯化鉀、都卡酸鈉、多巴酚丁胺HC1、阿普拉唑蘭 (alprazolam)、普拉伐制菌素（pravastatin)鈉、阿托瓦制菌素 (atorvastatin)名弓、米達吐蘭（midazolam)鹽酸鹽、唤咬鹽酸鹽、二 硝酸異花楸醇酯、腎上腺素、多巴胺鹽酸鹽、必伐利魯叮 (bivalimdin)、洛蘇伐制菌素（rosuvastatin)、也吉提麥伯（ezetimibe) 86869 -126- 1354561 /辛伐制菌素（simvastatin)、亞發西米貝（avasimibe)、亞伯西瑪 伯（abciximab)及卡利波來得（cariporide)。 本發明之TNFa抗體可併用另一種治療劑投藥，以治療絞 痛。可用以治療或預防絞痛之藥劑之實例，包括：阿斯匹 靈；硝基甘油；異花楸醇酿單硝酸鹽；美多心安（metoprolol) 琥ίό酸鹽；胺心安（atenolo);美多心安（metoprolol)酒石酸鹽 ;胺若地平（amlodipine)苯績酸鹽、迪耳替阿簡（diltiazem)鹽酸 鹽、二硝酸異花楸醇酯；克羅匹多葛瑞（clopidogrel)酸性硫酸 鹽；硝苯ρ比咬（nifedipine);阿托瓦制菌素（atorvastatin) #5 ;氯化 鉀；利尿續胺；辛伐制菌素（simvastatin);異博停（verapamil) HC1 :異經基洋地黃毒';丙嗓羅（propranolol) HC1 ;卡威迪羅 (carvedilo);利辛諾普利（lisinopril);螺甾内酯；氫氯p塞畊；安 那拉普利（enalapril)順丁烯二酸鹽；馬多羅（mad〇l〇l);瑞米普利 (ramipril);恩諾沙肝素（enoxaparin)鈉；肝素鈉；法沙坦（valsartan) ;梭達羅（sotalol)鹽酸鹽；非楛纖酸酿（fenofibrate);也吉提麥伯 (ezetimibe) ; 丁 苯氧酸（bumetanide);若沙坦（losartan)钾；利辛諾 普利（lisinopril) /氫氯嘧畊；非若地平（fel〇dipine);卡普脫普利 (captopril);及必梭普羅（bisoprolol)反丁稀二酸鹽。 於本發明之一項具體實施例中，TNF α抗體係併用一種常 用以治療C型肝炎病毒之藥劑投藥。此種藥劑之實例包括干 擾素-a-2a、干擾素-o:-2b、干擾素-oxonl、干擾素-α-ηΐ、經PEG 化之干擾素-a-2a、經PEG化之干擾素-a-2b、三唑核铝、PEG 干擾素-a-2b及三唑核苷、烏索脫氧膽酸、甘草酸、席嗎發 辛（thymalfasin)、美可薩胺(Maxamine)及 VX-497。 86869 -127- 1354561 本發明之TNF α抗體係併用局部皮質類固醇、維生素D類 似物及局部或口服類視色素或其組合一起投藥，以治療牛 皮癬。此外，本發明之TNFa抗體係併用下列藥劑之一投藥 ，以治療牛皮癖：KDR (ABT-123)之小分子抑制劑、Tie-2之小 分子抑制劑、波三烯飼（calcipotriene)、丙酸氯氟美松、丙酮化 說經脫氫皮甾醇、鹵貝他索（halobetasol)丙酸鹽、塔雜若ί丁 (tazarotene)、胺曱喋呤、氟西諾奈得、增強之二丙石-美塞松 、膚輕松、丙酮化物、亞西催；丁（acitretin)、焦油洗髮劑、/3-美塞松戊酸鹽、糠酸莫美塔松、酮康吐（ketoconazole)、丙嗎 卡因/膚輕松、氫基可體松戊酸鹽、氟化羥基氟化可體酮、 尿素、/5-美塞松、丙酸氯|l美松/恩若爾（emroll)、丙酸福路 替卡松（fluticasone propionate)、阿濟霉素（azithromycin)、氫基可體 松、潤濕配方、葉酸、第松奈、煤焦油、二氟松二醋酸鹽 '恩塔臬西伯（etanercept)、葉酸鹽、乳酸、甲氧沙聯（methoxsalen) 、he /錢蘇伯加（subgal) /吉諾克斯（znox) /瑞索（resor)、甲基氫 化潑尼松醋酸鹽、潑尼松、防晒劑、柳酸、氯氟松、蒽林 、氣皮酮四醇第三戊酸鹽、煤萃取物、煤焦油/柳酸、煤焦 油/柳酸/硫、脫氧美塔松（desoximetasone)、苯曱二氮萆、潤 膚劑、皮美洛利馬（pimecrolimus)潤膚劑、氟西諾奈得/潤膚 劑、礦油/蓖麻油/ na lact、礦油/花生油、石油/肉豆蔻酸 異丙酯、補骨脂内酯、柳酸、肥皂/三溴沙蘭（tribromsalan)、 硫柳汞/硼酸、塞拉庫西比（celecoxib)、因弗利西馬（infliximab) 、阿列發謝特(alefacept)、也發利祖馬（efalizumab)、塔可利馬斯 (tacrolimus)、皮美洛利馬（pimecrolimus)、PUVA、UVB 及硫酸沙 86869 -128- 1354561 p井（sulfasalazine)。 本發明之抗體、抗體部份或其他TNF α抑制劑，可併用其 他藥劑以治療皮膚症狀。例如，本發明之抗體、抗體部份 或其他TNF α抑制劑係與PUVA療法合併。PUVA為補骨脂内 酯（Ρ)與長波紫外線輻射（UVA)之組合，其係用以治療許多不 同皮膚症狀。本發明之抗體、抗體部份或其他TNFa抑制劑 ，亦可併用皮美洛利馬（pimecrolimus)。於另一項具體實施例 中，本發明之抗體係用以治療牛皮癬，其中抗體係併用塔 可利馬斯（tacrolimus) —起投藥。於進一步具體實施例中，塔 可利馬斯（tacrolimus)與TNF α抑制劑係併用胺甲噪呤及/或環 孢素一起投藥。於又再另一項具體實施例中，本發明之TNF α抑制劑係與激元雷射治療一起施予，以治療牛皮癣。 TNF α抑制劑可與其合併以治療皮膚或指甲病症之其他治 療劑之非限制性實例，包括UVA與UVB光療法。可併用TNF α抑制劑之其他非限制性實例，包括抗-IL-12與抗-IL-18治療 劑，包括抗體。 於一項具體實施例中，本發明之TNF α抗體係併用另一種 治療劑一起投藥，以治療Behcet氏疾病。可用以治療Behcet氏 疾病之其他治療劑，包括但不限於潑尼松、環磷驢胺（Cytoxan) 、硝基脒唑硫嘌呤（亦稱為咪唑硫嘌呤（Imuran))、胺甲喋呤、 提美索普林（timethoprim) /磺胺甲基異11号唑（亦稱為增效續胺甲 基異1^吐或謝普搓（septra))及葉酸。
任一種上文所指出之治療劑，單獨或併用，可投予患有其 中TNFa為有害之TNFa-相關病症之病患，且併用本發明之TNF 86869 -129- 1354561 α抗體。於一項具體實施例中，除了抗體以外，任一 種上又所提及之治療劑，單獨或併用，可投予患有風濕性 關節炎之病患，以治療TNFa-相關病症。 本發明係、進-步藉下述實例說明，不應將其解釋為限制。 在整個本申請案中引用之所有參考資料'專利及已公告之-專利申請案之内容，係併於本文供參考。 - 【實施方式】 . · 實例 白鼠模式中泛τ驗抑· 制劑 對人類白血球柷原_B27 (HLA_B27)大白鼠投予咖卩抗體，以測 試進行性關節黏連之抑制 以基因工程方式帶有高複製數之人類主要組織適應複合種 頒1對偶基因B27與小球蛋白基因之驗打344大白鼠，顯 示類似人類脊椎關節病’特別是關節黏連脊椎炎⑽之病徵 (Zhang等人，Curr版職⑹峋2〇〇2 : 4 : 5〇7)。雄性轉基因人類 · 白血球抗原B27 (HLA-B27)大白藏係在1〇週大時獲得，並飼養皆 在動物成備中，直到其為4Q週大為止。獲得—組馳沉344大· · 白队並充作非轉基因對照組。對照組大白鼠係在36週大-時購貝，並於相同條件下，在動物設備中再飼養3至4週。 /實驗處理之前，對财初轉基因大白藏與對照組大白 风兩者度里重，以確定在兩者之間沒有顯著差異。然後 乂腹膜月工内万4 (l p )對大白藏投予無論是安慰劑或單株抗 TNFa抗m <劑量，已知該抗體係結合並中和大白鼠賣^， 86869 -130- 1354561 例如抗體 參閲 Marzi 等人（1995)伽^3 · 27 ;
WilH纖等人（1992)尸肌厕如恤.^89 :娜；BDBi〇sd議 Pharmingen)。使用下述試驗，評估大白藏之…病徵在約略 36週大時開始，並於整個研究中持續著：體重、鐵絲網之 前掌抓握力、抱住倒置鐵絲網之能力、步態、胸部撓性、-脊柱移動性，及眼睛、皮膚、指甲、生殖器之外觀，及末. 梢與軸向骨骼關節關於發紅與腫脹、關節變形及移動性。 亦t查大白鼠1關郎炎組據，特別是在經治療之大白鼠中Μ 、 病徵艾減少，並密切地觀察皮膚與指甲之生長特徵與改變 _ 於第4 6、8、10、12、16及20週時，使大白鼠犧牲，供 射線照像與微觀分析。 實-例2 :-~~~ΙΜ抑制劑對as症擀 > 作 關節黏連脊椎炎臨床考量 將顯不出常與AS有關聯病徵之病患進行檢查並測試，以 測定其是否患有AS，且因此取得供研究之資格。常與如有 關聯（病徵’係為下背疼痛’其在不活動後更差，下背僵 硬且限制移動’ ft關節疼痛與僵硬，限制胸部擴張，限制Μ :多動圍(尤其是涉及脊柱與髖部），在肩部、膝部及踝 :《關即疼痛與關節腫脹，頸部疼痛，腳跟疼痛，慢性馬它-月以舒解褐徵，疲勞、發熱、輕度喪失食慾、體重減輕及/ 或眼睛發炎。給予病患物理診察’以測定其是否顯示任何 ^ 病徵與As有關聯之受限脊柱移動或胸部擴張之表 谜顯7^ As又試驗實例，包括臀骼關節與脊椎之χ·射線， 其顯示與AS有關聯之特徵發現。 86869 •131- 1354561 關節黏連脊椎炎係使用經修正之紐約標準（Moll等人 (1973) Ann Rheum Dis 32: 354; Van der Linden 等人（1984) Arthritis Rheum 27 : 361)作診斷。關於關節黏連脊椎炎之紐約標準係為羅馬 標準之修正，如在1966年期間於紐約之CIOMS討論會中所提 出者。其係將臀骼關節之臨床標準與射線照像發現兩者合 併。紐約標準之臨床標準： ⑻腰椎在全部3個平面中之移動限制（前向彎曲、側向彎曲 、拉伸）。有助於診察之皮膚標記係示於Moll,同前文出處中； (b) 疼痛之病歷或疼痛在背與腰接面處或在腰椎中之存在； 及 (c) 胸部擴張至1英吋（2.5公分）或較少之限制，在第四肋間空 間之程度下度量。 關於紐約標準之記分指標 臀骼關節中之射線照像改變 等級 正常 0 可疑 1 最少臀骼關節炎 2 中等臀骼關節炎 3 關節黏連 4 AS之臨床過程係利用評估各種AS病徵之任何儀器度量。 一些常用尺度包括關節黏連脊椎炎之評估（ASAS)、Barti關節 黏連脊椎炎疾病活性指數（BASDAI)(Garrett等人（1994)Jr/zew麵to/ 21 : 2286)、Batii關節黏連脊椎炎計量學指數（BASMI)(Jenkinson 等人（1994)·/^6Μ»ί<^ο/21 : 1694)及Bath關節黏連脊椎炎功能性 86869 -132- 1354561 指數（BASFI) (Calin 等人（1994)«/划ewm0to/21 : 2281)。此等指數可 長時間用以監測病患，並測定改善。各此等尺度係進一步 描述於下文： 用以度量AS臨床過程之標準 1. 關節黏連脊椎炎中之評估（ASAS20)係為樞紐期3 AS研 究中之主要終點。2 20%改善與2 10單位之絕對改善（等級〇- . 100)係在4個功能部位之2 3個中：病患總體評估、疼痛、功 ， t 能及發炎。退化必須不存在於可能之其餘功能部位中（退化 4 係被定義為對2 20%之較差者之改變，且淨惡化2 10單位（ _ 等級 0-100))。 2. Bath關節黏連脊椎炎疾病活性指數（BASDAI)可在患有 AS之病人中用以評估疾病活性之程度。BASDAI係專注於AS 炎性方面之跡象與徵候、夜間與總背痛、病患之總體評估 及脊髓移動性之實際物理度量，譬如Schober試驗，胸部擴張 評分及後頭部至壁度量法。BASDAI係根據六種關於疲勞、 脊髓疼痛、末梢關節炎、填補炎（在其中腱/韌帶/關節囊 4 進入骨頭中之點處發炎）及早晨僵硬之問題，度量疾病活性 t 。此等問題係在10公分水平視覺類比標度上獲得解答，其 係度量疲勞、脊髓與末梢關節疼痛、局部觸痛及早晨僵硬 之嚴重性（定性與定量兩者）。最後BASDAI評分具有0至10之 範圍。 3. Bath關節黏連脊椎炎功能性指數(BASFI)係度量因AS所 造成之身體功能損害，且係為自身評估工具，其包括8個關 於AS功能之特定問題，與2個反映出病患應付日常生活能力 86869 -133 - 1354561 之問題。各問題係在10公分水平視覺類比標度上獲得解答 ，其平均係獲得BASFI評分（〇_1〇)。 4. Bath關節黏連脊椎炎計量學指數（BASMI)係包含$種簡 易臨床度量法’其係提供複合指數，及界定As之疾病狀態 彳量學之分析（20種度量）確認此5種度量法係最精確地反 映出軸向狀態：頸部旋轉、耳屏至壁距離、側向彎曲、經 修正之Schober試驗及踝間距離。BASMI係為快速（7分鐘）、可 重現性，且對於橫越整個疾病範圍之改變很敏感。BASMI指 數包含AS中之髖關節與脊柱移動性之5種度量值。五種 BASMI度量值，標度〇 (溫和）至1〇 (嚴重），係包括耳屏至壁 距離、頸部旋轉、腰部彎曲、腰側彎曲及踝間距離。使用 上又所提及標準之组合，以評估病患。此外，可使用射線 知、像、MRI及骨頭與軟骨降解標記物，以測定as病患中之 疾病活性。 在患有活性AS之人類病患中診查mE7之臨床研究 在安慰劑控制之臨床試驗中，以皮下方式對病患投予聰7 劑ΐ ’歷經數週期間，並於每2_6週再診查直到隔年，以測 疋AS病U疋否被降低或治療。在此研究中係使用每隔一週4〇 «克之劑量’其對治療風濕性關節炎係為有效且安全。只 有具有經確騎斷活性AS之病患，經選擇以供進行研究^ 該確認診斷係經由具有下列3種標準之2種所界定·Μ黯指 數、關於疼痛之視覺類比標度(V，及早晨僵硬之存在。 BASDAI指數係更詳έ田y；奸、+，、λ 、’’也描述於上文。為登記在此項研究中 ，在篩檢下與在某續"ρ，+ 士 忒下竭患必須具有顯著疼痛，疼痛評 86869 •134- 1354561 分>4於10公分VAS上，與BASDAI評分g 4。 在此研究中允許改變疾病用之抗風濕藥物（DMARDS)或其 他免疫抑制劑。若病患係在每天<1〇毫克潑尼松之等效劑量 下，則允許其登記。 在研究登記之前，進行筛檢診察，以考証每位病患之醫療 病歷與目前發現。下列資訊係得自每位病患：早晨僵硬（延 績時間與嚴重性）、先前葡萄膜炎之發生（偶發事件之次數 與延續時間）及發炎末梢關節之數目。對每位病患，獲得椎 骨柱與臀骼關節之射線照像。亦可使用磁共振成像，以考 1正登記病患之脊柱。 將病患隨機地區分成實驗與安慰劑组，並每兩週一次，以 s目方式投予無論是D2E7或安慰劑，直到第12週或第24週 為止。已經在20至80毫克之劑量下投予D2E7，其已被有效 地用以、冶療風濕性關節炎；4G毫克劑量被測^為有效。可 能需要較高劑量以治療脊髓發炎，因&，在此研究中，係 使用較高劑量（在無回應者及未於胺Η呤上之病患中，每 週40毫克）。計算達成ASAS2〇之病患之百分比。 實例3在關於牛立農腹之臨庆研究中之TNF抑制州 具有牛皮癬關節炎之人類病患中之D2E? 有何亞土之中等至嚴重牛皮癬關節炎（末梢指骨間關 節：關節炎、殘毁性關節炎、對稱性多關節炎、不 關卽炎及/或脊尬關γ p、、、 Ρ祸）义病人，係被選擇以供研究。 患無論是已對非類植：由 4 負固醉肩炎樂物CNSAID)或改變疾病浼 濕藥物（DMARD)失敗或趣-^ 又疾涡又抗風 、次,4不不谷許性。治療係單獨及/或和 86869 -135- 1354561 NSAID與DMARD合併給予。 經評估之劑量範圍包括每隔一週40毫克，其係為D2E7劑量 ，已發現其在治療病患中之風濕性關節炎上最有效。較高 劑量（每週40毫克）亦已被研究。研究係與安慰劑比較，歷 經12至24週，接著為開放標識治療，以測定長期安全性與 功效。 病患係在篩檢，基線，且頻繁地在治療期間，以臨床方式 診查。對跡象與徵候之主要功效，係在第12週，經由美國 風濕病學院對於改善之初步標準（ACR20)度量。另一個主要 終點包括評估6至12個月内之放射學變化，以評估結構傷害 之改變。在治療期間進行多重其他評估，包括牛皮癬關節 炎回應標準（PsARC)、生命品質度量及皮膚評估，以測定對 牛皮癬損傷之功效（牛皮癬區域嚴重性指數（PASI)與標的損傷 評估）。 實例4 : 在關於氣喘之老鼠模式中之TNFa抑制劑 使用卵清蛋白（OVA)所引致之過敏性氣喘老鼠之TNF抗體研究 過敏性氣喘之老鼠OVA模式（HesselE.M.等人，（1995)五wr··/. /Vzamzaco/· 293 : 401; Daphne, T.等人，（2001) J. Ce//Mo/· 5z_o/· 25 : 751)係用於下文關於治療過敏性氣喘之研究中。 使所有老鼠對OVA (難卵清蛋白，粗等級V; Sigma, St. Louis, MO) 敏化。於間隔天，藉由給予七次腹膜腔内注射0.5毫升不含 熱原鹽水中之10微克OVA (每夭注射一次）進行活性敏化作用 ，無需佐劑。於最後敏化作用後三週，連續數天，使老鼠 曝露至無論是16次OVA激發（2毫克/毫升，在不含熱原鹽水 86869 -136- 1354561 中）或16次含鹽氣溶膠激發，歷經5分鐘（每天一次氣溶膠） 。另一組老鼠首先接受八次0VA氣溶膠，接著為八次含鹽 氣落膠（OVA /鹽水，自然解決組）。 對於在過敏性氣喘之較嚴重進行模式中之實驗，係經由以 兩次腹膜腔内注射（分隔7天）〇.1毫升明礬沉澱抗原之活性敏 化作用’使所有老鼠對〇VA敏化，該抗原包含已被吸附於2.25 笔克明礬上之 10 微克 〇VA (Alumimject ; Pierce，Rockford，IL)。於 第二次敏化作用後兩週，在每個第三天，使老鼠曝露至無 論是六次OVA激發（1〇毫克/毫升，在不含熱原鹽水中）或六 次含鹽氣溶膠激發，歷經2〇分鐘（每個第三天，一次氣溶膠） 。另一組老鼠係首先接受三次0VA氣溶膠，接著是三次含 鹽氣溶膠（OVA /鹽水，自然解決組）。 氣溶膠處理係在耐熱有機玻璃曝露室（5升）中進行，其係 聯結至Pari LC Star霧化器（PAri呼吸設備，VA ;粒子大 小2.5-3.1微米）’藉由壓縮空氣，在6升/分鐘流率下驅動。 氣溶膠係給予由不超過八隻動物所組成之組群。 將已知會結合並中和老鼠TNFa之單株抗TNFa抗體，例如 抗體 TN3 (ΤΝ3-19·12)(參閱 Marzi 等人（1995)施)cA:3 : 27 ; Williams 等人（1992) Prac C/aS1 A 89: 9784; BD Bioscience Pharmingen) ，於第二次敏化作用後’根據此項技藝中已知之標準擬案 ’在一範圍之劑量下’投予經OVA敏化之老鼠。適當安慰 劑對照組亦經投藥。 在有知覺而不受限制之老鼠中，使用氣壓計量之全身體積 描記法’經由記錄回應已吸入乙醯甲膽鹼（氯化乙醯基甲 S6869 -137· 1354561 基膽鹼；Sigma)之呼吸壓力曲線，度量氣道回應性。簡言之 ，將老鼠放置在全身室中，並獲得基底讀數，且平均3分鐘 。使氣溶膠化鹽水，接著是加倍濃度之乙醯甲膽鹼（涵蓋從 1.6-50毫克/毫升鹽水之範圍）喷霧3分鐘，並在各噴霧後， 取得讀數，且平均3分鐘。對乙Si曱膽驗之劑量-回應曲線 (DRC)係藉由重複度量之一般線性模式，接著是組群間之後-hoc比較，以統計學方式分析。.於分析前，使數據經LOG轉 變，以使所有組群中之方差均等化。 在活體内氣道回應性之度量後，藉由腹膜腔内注射不含熱 原鹽水中之1毫升10%胺基甲酸酯（Sigma)，使老鼠犧牲。接 著，藉由心臟穿刺將老鼠採血，並藉由ELISA度量OVA-專一 之IgE。簡言之，係在4°C下，將微滴定板（Nunc A/S, Roskilde, Denmark)，使用已被稀釋於磷酸鹽緩衝鹽水（PBS)中之2微克 /毫升大白鼠抗-老鼠IgE (無性繁殖系EM95)塗覆過夜。隔天 ，於室溫下進行ELISA。在以ELISA缓衝劑（PBS，含有0.5%牛 血清白蛋白[Sigma], 2 mM EDTA，136.9 mM NaCl, 50 mM Tris, 0.05 % Tween-20 [Merck, Whitehouse Station，NJ] pH 7.2)阻斷 1 小時後，添加 血清試樣與重複標準曲線（開始為1 : 10)，於ELISA緩衝劑中 稀釋，歷經2小時。OVA-專一之IgE參考標準係經由以OVA之 腹膜腔内免疫作用獲得，並任意地指定1〇,〇〇〇個實驗單位/ 毫升（EU /毫升）之數值。於培養後，添加ELISA緩衝劑中經 偶合至異羥洋地黃毒苷元（DIG)之1微克/毫升OVA，其係製 自含有DIG-3-鄰-甲基羰基-ε-胺基己酸-N-羥基-琥珀醯亞胺-酉旨 之套件（Roche诊斷劑，Basel, Switzerland)，歷經1·5小時，接著以 86869 -138- 1354561 偶合至辣根過氧化酶（Roche診斷劑），而以1 : 500稀釋於ELISA 緩衝劑中之抗-DIG-Fab片段培養1小時。以鄰-苯二胺-二氯化 物受質（0.4毫克/毫升，Sigma)與4mMH202在PBS中，進行顏 色發展，並藉由添加4MH2S04使其停止。光密度係在492毫 微米下，使用基準標記微板讀取器（Bio-Rad實驗室，Hercules, CA) 讀取。ELISA之檢測極限為0.5 EU/毫升IgE。 · 在將老鼠採血後，立即進行枝氣管肺胞灌洗（BAL)。簡言 之，係將氣道經過氣管套管，以溫熱至37°C之1毫升液份之 不含熱原鹽水灌洗五次。匯集所回收之灌洗流體，並使細 胞粒化（32x克，4°C，5分鐘），並再懸浮於150微升冷PBS中。 BALF中之細胞總數係使用Burker-Turk計數室（Karl Hecht Assistent
KG，Sondheim/Rohm, Germany)測定。對於差別 BALF 細胞計數， 係製成細胞旋轉製劑，並以 Diff-Quick (Dade AG，Dudingen，Switzerland) 染色。每一次細胞旋轉，係計數400個細胞，並藉由標準形 態學，區分成單核細胞（單細胞、巨嗟細胞及淋巴細胞）、 嗜伊紅體及嗜中性白血球。統計分析係使用非參數Mann-Whitney U試驗進行。 藉由抗原再刺激T細胞在肺臟組織中之細胞活素產生，係 如前述進行測定（Hofstra，C.L.，等人（1999)/ny?fl»wz. 48 : 602)。 簡言之，係將肺臟按前述灌洗，並經由右室，以含有100U/ 毫升肝素之4毫升鹽水灌注，以移除任何血液與血管内白血 球。移除全肺臟組織，並轉移至冷無菌PBS。然後，將肺臟 切碎，並於37°C下，在含有2.4毫克/毫升膠原酶A與DNase I ( 等級11)(兩者皆得自Roche Diagnostics)之3毫升RPMI 1640中，煮 86869 -139- 1354561 解30分鐘。膠原酶活性係藉由添加牛胎兒血清（FCS)而被停 止。將肺臟組織煮解液經過70-微米尼龍細胞粗濾器（Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ)，以 10 毫升 RPMI 1640 過滤， 獲得單一細胞懸浮液。將肺臟細胞懸浮液洗滌，再懸浮於 培養基（RPMI 1640，含有10% FCS、1% glutamaxl及間他霉素 (gentamicin)[均得自生命技術，Gaithersburg, MD])與 50 mM 召-窺基 乙醇（Sigma)中，並使用Burker-Turk計數室測定肺細胞總數。 使肺細胞（8 xlO5個肺細胞/井），於OVA (10微克/毫升）或僅 有培養基存在下，在圓底96-井板（Greiner Bio-One GmbH, Kremsmuenster，Austria)中培養。使細胞在板結合之大白氣抗-老 鼠CD3存在下（無性繁殖系17A2，50微克/毫升，在4°C下塗 覆過夜）培養，作為正對照组。各活體外刺激係以三份進行 。在37t下培養5天後，採集上層清液，匯集每一刺激，並 於-20°C下儲存，直到藉由ELISA測定細胞活素含量為止。 IFN- 7、IL-4、IL-5、IL-10 及 IL-13 ELISA 係根據製造者之說 明書（PharMingen，San Diego, CA)進行。ELISA 之偵測極限，對 IFN-7為160微微克/毫升，對IL-4為16微微克/毫升，對IL-5為32 微微克/毫升，及對IL-10與IL-13為100微微克/毫升。 在所有實驗中，對乙醯甲膽鹼之氣道回應性、血清中之OVA-專一 IgE含量、BALF中之細胞浸潤，及肺臟組織中之T-細胞 回應，係在各老鼠中之最後激發後，度量24小時。 於實驗老鼠中之氣喘改善，係藉由BALF中之單核細胞（包 括單細胞、巨噬細胞及淋巴細胞）、嗜伊紅體及嗜中性白血 球之數目減少，氣道高回應性之減少，及減少肺臟組織中 86869 -140- 1354561 藉由抗原再刺激τ細胞之細胞活素產生，作為標示。 實例5 : 在慢性阻塞肺病（COPD)老鼠模式中之TNFa抑制劊 關於肺胞腫大與發炎之診查治療之研究 下述研究係使用香煙煙霧所引致之COPD老鼠模式（Keast，D. 等人（1981) /·尸ai/w/· 135 : 249 ; Hautmaki, R.D.，等人（1997) 277 :2002)進行。回應香煙煙霧，已發現炎性細胞反射增進至 肺臟中，接著是氣腫之病理學改變特徵。先前研究已証實 進行性炎性細胞反射增進，係在吸煙之第一個月内開始， 接著為香煙曝露3至4個月後之空氣間隙腫大（Hautmaki等人 (1997) 277 : 2002)。 使老鼠每天曝露至來自兩支無濾嘴香煙之煙霧，每週6天 ’歷經6個月，並利用具有適合老鼠之小室之吸煙裝置。未 吸煙、年齡相當之動物係作為對照組使用。按前述曝露至 煙霧6個月後，根據此項技藝中已知之標準擬案，將一範圍 之劑量，投予已知會結合並中和老鼠TNF α之單株抗-TNF α 抗體’例如抗體 ΤΝ3 (ΤΝ3-19.12)(參閱 Marzi 等人（1995) <S7wd:3 : 27 ;Williams 等人（1992) Proc MziMcad «SW C/&4. 89 : 9784 ; BD Bioscience Pharmingen)。適當安慰劑對照組亦經投藥。老鼠係經施予抗 體治療，歷經21天期間。使老鼠犧牲，接著如下文所述， 診察肺臟體積與順應性、細胞活素度量、組織學黏液指數 度量、肺胞導管腫大、空氣間隙度量、肺胞與組織間隙巨 噬細胞計數與肺胞大小。 在抗體治療之後，對已安樂死之動物進行細枝氣管灌洗； 藉純器解剖分離氣管，並插入小口徑管件，及固定在氣道 86869 -141- 1354561 中。滴注兩體積之1.0毫升具有〇.1%BSA2PBS，溫和地吸出 並匯集。使各BAL流體試樣離心，並將上層清液儲存於_7〇〇 下，直到使用為止。細胞活素度量係如實例5中所述。 為測定肺臟體積與順應性，故使動物麻醉，以套管插入氣 管，並將肺臟經由”T”碎片連接，以100%〇2通氣。然後，夹 住氣管，並使氧被吸收在前進肺灌注之表面中。在此脫氣 結束時，將肺臟與心臟全體移除’並在逐漸增加壓力從〇至 30公分下，以PBS使其膨大。肺臟在各5_公分間隔下之大小 ，係經由體積置換進行評估^經治療動物與經安慰劑處理 之對照動物比較，於肺臟體積上之增加，顯示c〇pD之改善。 關於組織學分析，係使動物犧牲，並進行中央胸骨切^術 且以不含鈣與鎂之PBS達成右心臟灌注，以清理肺血管内 S間。然後，使肺臟固定至具有中性緩衝1〇%福馬林之壓力 (25 a刀）下，在10%福馬林中固定過夜，包埋在石螺中，在 5微米下切片，及以蘇木素與曙紅阳&扮及具有澱粉糖化酶 之過琪酸-Schiff (D-PAS)染色。 組織學黏液指數（HMI)係提供上皮細胞百分比之度量，其 係為每單位氣道基底膜之D_PAS+。其係計算自D_pAS_染色切 片（CohnL.，等人（1997)«/· 編186 : 1737)。經治療動物與經安 慰劑處理對照動物比較，於上之減少，係顯示c〇pD上 之改善。
Lm為空氣間隙大小之指標，其係對得自15隻任意田野之 每隻老鼠，在x200下，利用5〇_線計數格網（總長度1〇毫米）計 舁而得。其結果係為兩位獨立研究人員度量之平均。經产 86869 -142- 1354561 療動物與經安慰劑處理對照動物比較，於空氣間隙大小上 之增加，顯示COPD上之改善。 為測定肺胞導管腫大，故使用Optimus 5.2影像分析軟體 (Optimus, Bothell, WA)，度量從末端細枝氣管-肺胞導管轉移延 伸250微米至導管中之近端表面積。經治療動物與經安慰劑 處理對照動物比較，於肺胞導管大小上之減少，顯示COPD 上之改善。 肺胞與組織間隙巨噬細胞係經由計數藉由老鼠Mac-3 (對老 鼠之大白鼠抗體（0.5毫克/毫升），在1 : 4000稀釋下使用； PharMingen，San Diego, CA0，使用抗生物素蛋白-生物素驗進行 免疫染色）所確認之巨嗟細胞定量。經治療動物與經安慰劑 處理對照動物比較，於肺胞與組織間隙巨噬細胞數上之減 少，顯示COPD上之改善。 肺胞大小係估計自空氣間隙之平均索長度（Ray, P.等人（1997) J. C/z_n. Την冰.100 : 2501)。此度量係類似平均線性截距，為空 氣間隙大小之一種標準度量方式，但具有與肺胞中隔厚度 無關之優點。切片係按上述製備。為在隨機下獲得影像以 供分析5將各載玻片置於印刷矩形格網上’並將一系列網 點放置在覆蓋片條上，於格網線條之交叉點上，意即在約1 毫米之間隔下。儘可能靠近各網點之場，係經由在2毫米間 隔下，以系統方式掃描而獲得。將含有可鑒別人造物或非 蜂窠狀結構譬如枝氣管血管束或胸膜之場拋棄。 最少取得十個得自每隻老鼠肺臟之場，經過幢抓取器板， 進入 Macintosh G3 電腦（韻果電腦.公司，Cupertino, California, USA) 86869 -143 - 1354561 中。影像係在8-位元灰度中，於最終放大率為每微米丨.5個像 素下獲得。影像係於Macintosh電腦上分析，使用由Wayne Rasband在NIH所寫之公開功能部位NIH影像程式，利用慣例 所寫之巨集指令’其可得自網站（http : //rsb.info.nih.gov/nih-image) 。影像係以手動方式出發，然後平滑並逆轉。接著，使影 像接受連續邏輯影像配合，”並且”以水平然後以垂直格網 操作。對每隻動物施行每場至少300個度量值。將覆蓋在上.· 之空氣間隙平均，作為平均索長度。索長度係隨著肺胞腫 大而增加。經治療動物與經安慰劑處理對照動物比較，於 肺胞大小上之增加，顯示COPD上之改善。 實例6: 在自發性肺纖維變性(IPF)老鼠模式中之TNFa抑制劑 研究使用博來霉素所引致之肺纖維變性老鼠模式之IPF治療 下述研究係使用博來霉素所引致之肺纖維變性老鼠模式進 行（回顧於 Bowden，D.H. (1984) /«ν冰.50 : 487 ; Tokuda, A·，等人 (2000) /· /mmwwo/. 164 : 2745 中）。 將博來霉素硫酸鹽投予8-10週大之C57BL/6J雌性老鼠。簡 言之，以腹膜腔内方式注射200微升5毫克/毫升戍巴比妥， 使C57BL/6J老鼠麻醉，接著為氣管内滴注50微升無菌鹽水中 之3毫克/公斤博來霉素硫酸鹽。 在如上述之博來霉素之氣管内滴注後，以一範圍之劑量， 將已知會結合並中和老鼠TNF α之單株抗-TNF 〇:抗體，例如 抗體 ΤΝ3 (ΤΝ3-19.12)(參閱 Marzi 等人（1995)泓od 3 : 27 ; Williams 等人（1992) 89 : 9784'; BD Bioscience Pharmingen) 投予博來霉素所引致之肺纖維變性老鼠。適當安慰劑對照 86869 •144- 1354561 組亦經投藥。將老鼠每日處理兩次，歷經14天。 在博來霉素處理後第20與60天，使老鼠犧牲。使組織固定 在10%缓衝福馬林中，並包埋在石蠟中。將切片以蘇木素與 曙紅染色，並藉光學顯微術檢視。如下文所述，測定肺臟 浸潤白血球計數、細胞活素度量及總肺臟膠原含量。 BAL細胞與肺臟浸潤白血球係按Smith等人（1994) J· /wmwwo/. 153 : 4704中所述製成。簡言之，在麻醉之後，滴注1毫升PBS ，並經由氣管内套管，自肺臟抽取五次。收集BAL流體，並 於RBC溶胞後，測定總白血球計數。於細胞旋轉離心後，測 定細胞差別。將試樣以Diff-Quik產物（Baxter，Miami，FL)染色。 為單離肺臟浸潤白血球，將肺臟以鹽水灌注，與胸腔分割 ，然後以剪刀切碎。使各試樣於搖軸上，在15毫升煮解緩 衝劑（10% FCS，在具有1%膠原酶之RPMI 164〇中；曰本大阪 Wako純化學）中，於37°C下，培養30分鐘。接著，於沖洗後 ，使試樣經過尼龍篩網壓縮，並懸浮於10% FCS-RPMI 1640中 。將細胞懸浮液以 Histopaque-1119 (Sigma，St. Louis，Mo)處理，並 在2000 rpm下離心20分鐘，以移除肺臟主質細胞與RBC。在 沖洗後，使丸粒再懸浮於2.5% FCS-PBS中。於進行細胞計數 後，進行流動細胞計數免疫螢光分析。 末梢血液白血球與肺臟浸潤白血球之免疫螢光法分析，係 利用Epics Elite細胞選取器（Coulter電子工業，Hialeah, FL)，按以 前所述進行（Yoneyama 等人（1998) J. d /nv抓.102 : 1933 ; Murai 等人（1999) J. d 104 : 49)。末梢血液白血球係以RBC溶 胞緩衝劑’製自正常老鼠。以Fc阻斷（抗-CD16/32 ; PharMingen, 86869 -145- 1354561
San Diego, CA)培養10分鐘後，使細胞以PE-共軛之mAb對CD3 、CD4、CD8、CDllb、CDllc 及 Gr-l(PharMingen)染色，且亦以 20微克/毫升兔子抗-CCR1多株Ab染色，接著以FITC-共軛山 羊抗免子IgG染色（Leinco技術，St. Louis, Mo)。於分析前，進行 硤化普羅匹定（propidium iodide)(Sigma)染色，以移除死細胞。經 治療動物與經安慰劑處理對照動物比較，於肺臟浸潤白血 球數目上之減少，顯示IPF上之改善。 肺臟試樣之免疫組織化學，係按下述進行：肺臟試樣係按 以前所述（Yoneyama 等人（1998) J· C"n. /wve此 102 : 1933 ; Murai 等 人（1999) J· d /«veW· 104 : 49)製成。簡言之，將肺臟試樣固定 在過碘酸鹽-離胺酸-聚甲醛中，以含有蔗糖之PBS洗滌，包 埋在組織-Tek OCT化合物（Miles, Elkhart，IN)中，冷凍於液態氮 中，並以低溫恒溫器切成7微米厚切片。在抑制内源過氧化 酶活性後，將切片與第一種Ab —起培養。所使用之Ab為兔 子抗-CCR1 Ab、大白鼠抗-F4/80 (BMA 生物醫學，Genva，Switzerland) 、大白鼠抗-CD4、大白鼠抗-CD8、大白鼠抗-Gr-1 (PharMingen) 、大白鼠抗-非淋巴樣樹突細胞（NLDC)-145及大白鼠抗-MHC 種類II (BMA生物醫學）。個別使用無論是兔子IgG或大白鼠IgG ，作為負對照組。將其相繼以無論是HRP-共軛山羊抗兔子IgG (Cedarlane 實驗室，Homby, Ontario, Canada)或 HRP-共辆山羊抗-大白 鼠 IgG (BioSource International，Camarillo, CA)處理。在以 3,3'-二胺基 聯苯胺（Wako純化學）或3-胺基-9-乙基咔唑受質套件（病媒實驗 室，Burlingame, CA)染色後，使試樣以可蘇木素對比染色。經 治療動物與經安慰劑處理對照動物比較，於CCR1上之減少 86869 -146- 1354561 ，及於CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、非淋巴樣樹突細胞（NLDC) 及帶有MHC種類Π細胞之數目上之減少，顯示ipf上之改良。 總肺臟膠原含量係根據製造者之說明書，使 用Sircol膠原 檢測套件（Biocolor，Northern Ireland)，經由檢測總可溶性膠原而 測得。簡言之’係於投予博來霉素後之第14天，採集肺臟 ’並在含有約1毫克胃蛋白酶/ 10毫克組織殘留物之10毫升 0_5 Μ醋酸中均化。使各試樣於4。(：下培養24小時，並攪摔。 離心分離後’檢測200微升各上層清液。將結合至膠原之一 毫升Sircol染色試劑添加至各試樣中，然後混合3〇分鐘。離 心分離後，使丸粒懸浮於包含在套件中之1毫升鹼金屬試劑 内，並在540毫微米下，藉分光光度計讀取。使用膠原標準 溶液，以建構標準曲線。膠原含有約14重量％羥脯胺酸， 而以此方法獲得之膠原含量，根據製造者之數據，係見好 地與輕脯胺奴含量產生關聯。經治療動物與經安慰劑處理 對照動物比較，於肺臟膠原含量上之減少，顯示JPF上之改 善。 使用博來霉素所引致之肺纖維變性老鼠模式，係對老鼠診. 查BAL細胞計數之減少，末梢血液白血球與肺臟浸潤白血球 <減少。當與經安慰劑處理之老鼠比較時，亦對老鼠診查 經D2E7處理老鼠中總肺臟膠原含量上之減少。 t例 7 .~~TNFa 抑制劊 D2E7在具有氣喘之人類病患中之臨床研究 12至65歲之病患，若其已具有經記載之氣喘診斷為至少2 年延績時間’且亦已具有可証實之可逆枝氣管痙攣，在舒 86869 -147- 1354561 喘寧（albuterol)投藥後，於前六個月内，具有FEV1上之增加為 15%或更多，係適合此項研究。其他加入標準包括基線FEV1 在經預測正常之50%與80%之間，氣喘以外之任何臨床上顯 著疾病不存在，每日使用吸入皮質類固醇之病歷，及在開 始研究之前30天，停止所有/52-催動劑使用。 於篩檢探訪後，在7天内進行基線視察。所有病患均接受 FEV1之評估，並具有全身檢查。進行肺聽診與口咽診察， 並評估氣喘病徵。將取得資格之病患隨機地指定為治療組 ，包括安慰劑組。 在基線度量之後，病患開始接受處理。其係被隨機選取， 並以盲目方式，使用無論是D2E7或安慰劑處理。在第15與29 天，係將基線視察下進行之所有診察重複。亦進行12-先導ECG 。調閱關於使用其他藥物與任何不利情況之病患之日記卡 片。 對於在每次探訪時度量之肺量測定試驗，測定其改善。其 包括FEV1、尖峰呼氣流率（PEFR) '強制肺活量（FCV)及在25% 至75% FVC下之強制呼氣流量。在最後探訪時之FEV1係被認 為是功效之主要度量。將由病患進行之每日兩次PEFR試驗 作比較，並計算援救藥物之吸入次數。氣喘病徵（哮鳴、胸 部嚴密度、呼吸短促及咳嗷）之病患/醫師評估，係以嚴重 性表現其特徵。順應性係藉由病患日記卡片之調閱，並經 由收集未使用之研究藥物進行評估。 實例8 : 在C0PD治療中之TNFa抑制劑 在具有COPD之人類病患中臨床研究診查D2E7 86869 -148- 1354561 研究個體群為男性與女性病患，其係為40至80歲，具有 COPD之診斷。病患必須具有最良好FEV1/FVC比例$ 0.70升， 固定之氣道阻塞，被界定為在投予舒喘寧（albuterol)後，於FEV1 上，S 15%或S 200毫升（或兩者）增加，而於後舒喘寧（albuterol) FEV1係在所預測之30與70%之間。病患亦必須為目前或先前 之吸煙者，數年來具有吸煙2 10包之歷史。 在基線度量之後，病患開始接受治療。將其隨機選取，並 以盲目方式，使用無論是D2E7或安慰劑處理。 改善係在預枝氣管擴張藥FEV1中之研究藥物後，藉由從 服藥前基線之增加，及在St. George呼吸問卷（Jones, P.W。等人 (1991)及叫>· Λ/βί/· 85 (補充）：25)之總評分中，從基線改變而顯 示，其顯示病患生命品質之改善。改善亦被見及為在峰谷 處，從基線FVC之增加，首次COPD惡化時間上之增加，及 在運動後透不過氣中，從基線之減少（經修正之Borg尺度； Stulbarg，M” Adams, L· Dyspnea· : Murray J，Nadel J 編著，呼吸醫藥教 科書，Philadelphia, PA : WB Saunders 2000 ; 541-552)。安全性之度 量為在所有雙盲探諸時之不利情況、生命跡象、心動電流 波，及實驗室評估。 實例9 : 在IPF治療中之TNFa抑制劑 D2E7在具有IPF之人類病患中之臨床研究 進行多中心、雙盲安慰劑控制之研究，將以D2E7治療IPF 病患對以安慰劑處理作比較。病患對此研究係為合格的， 若其具有組織學上確認之IPF，且在開始研究之前，於12個 月期間，具有肺功能之衰退為至少10%，而不管以類皮質糖 86869 -149- 1354561
或其他免疫抑制劑或兩者，連續或重複治療至少6個月。用 以確認IPF之主要組織學特徵，係為僅具有較少細胞浸潤之 胸膜下與腺胞周圍纖維變性損傷存在。兩側斑狀浸潤不存 在於高解析經計算之局部X射線檢法上，及証實損傷之主要 末梢分佈，係為確認此疾病之放射學標準。具有曝露至已 知會造成肺纖維變性之有機或無機粉塵或藥物病歷之病患 ，與具有結缔組織疾病或其他慢性肺病者，係被排除在外 。患有末期IPF之病患，當以總肺容量低於所預測正常值之45 %為基準而被確認時，亦被排除在外。取得關於重複肺功 能試驗、FVC、總肺容量（TLC)及氧飽和之基線值。 在基線度量之後，病患開始接受治療。其係被隨機選取， 並以盲目方式，以無論是D2E7或安慰劑處理。
IPF病患之改善，包括在研究中病患整體存活率之增加， 及FVC、總肺容量（TLC)及氧飽和上之改善。肺功能之改善 係被定義為FVC或TLC預期值上之10%或更多增加，或於具 有相同分率之呼出空氣、靜止或用力之氧飽和上之3%或更 多增加。關於各度量之類似方式之減少，係被認為是退化 。未展示改善或退化之病患，被認為是安定。 實例10:在降低發炎與再狹窄中之TNFa抑制劑 使用老鼠頸動脈模式之再狹窄研究 下述再狹窄之研究，係使用老鼠頸動脈模式進行（Kumar與 Ι^ηώΐ6ΐ·(1997)νί7Υβπ·α5·ί：/^·. TTzram办.ffec·所<?/· 17 : 2238 ; deWaard 等人 (2002) Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 22 · 1978)。經由腹膜腔内方 式（i.p.)注射曱苯嘍畊溶液，使年齡範圍從二至四個月之老鼠 86869 -150- 1354561 麻醉。將左邊共用頸動脈解剖，並接近頸動脈分叉處連接 。然後，使老鼠恢復。 將已知會結合並中和老鼠TNFa之單株抗-TNFa抗體，例如 抗體 TN3 (TN3-19.12)(參閱 Marzi 等人（1995)劭〇4 3 : 27 ; Williams 等人（1992)尸rac 89 : 9784 ; BD Bioscience Pharmingen) 投予實驗組。每週使老鼠每日接受無論是抗-TNF抗體或安 慰劑之皮下注射。在頸動脈連接後無論是2.5或4週，使老鼠 犧牲，接著經由灌注PBS中之4%聚甲醛而固定。將頸動脈 切除，浸沒在70% (v/v)乙醇中，並包埋在石蠟中。未經連接 之右頸動脈係充作對於經D2E7注射與安慰劑注射老鼠之内 部對照組。切割一序列切片，供形態測定分析用，按de Waard 等人，如前文出處中所述進行。 形態測定分析係對經處理與未經處理之連接頸動脈，在距 共同物理參考點之某些設定距離，提供總血管面積之度量 法。先前已証實連接會造成動脈變窄（構成之改型XKumar與 Lindner,同前文出處；Kumar 等人（1997) 96 : 4333)。將 頸動脈之橫切片裝載於顯微鏡載玻片上，並以蘇木素與曙 紅染色。使用顯微鏡數位照相術獲得頸動脈影像，並度量 血管内膜與介質之橫截面面積，當與經安慰劑注射之老鼠 比較時，獲得動脈變窄作用之減少（意即，較大血管直徑）。 實例11:在動脈粥瘤硬化之猴子模式中之TNFa抑制劑 D2E7在動脈粥瘤硬化猴子模式中之作用 下述研究係使用飲食引致之動脈粥瘤硬化之猴子模式進行 (Lentz SR 等人（2002) G>cw/油·⑽ 106 (7): 842-6 ; Sundell CL 等人（2003) 86869 -151 - 1354561 305 (3) : 1116-23)。 將成年獮猴屬猴子（Macaca fascicularis)餵食致粥瘤性飲食，其 含有作為脂肪之0.7%膽固醇與43%總熱量。進行致粥瘤性飲 食44 ± 1個月後，以氯胺酮鹽酸鹽（20毫克/ kb IM)使動物鎮 靜，以戊巴比妥鈉（20毫克/公斤IV)麻醉。將非阻塞導管插 入腋動脈中，以供血液取樣，並以套管插入腋靜脈中，以 供投予無論是D2E7或安慰劑與補充麻醉劑（戊巴比妥鈉，每 小時5毫克/公斤）。D2E7已被証實在多種物種中有效地抑 制TNFa活性，包括獮猴屬猴子（參閱美國專利6,258,562)。 在注入D2E7或安慰劑之前，自腋動脈導管收集血液，直接 進入1/10體積之3.8%檸檬酸鈉中，以供止血檢測。於收集後 ，將血液試樣立即置於冰上，並藉離心分離，於2500克下， 在4°C下，將血漿分離30分鐘。將其他血液試樣收集至血清 分離器管件中，供膽固醇測定，或進入以3.4毫莫耳/升EDTA 製成之血清分離器管件中，供總血漿高胱胺酸（tHCY)測定。 於10分鐘内，經過腋靜脈導管，將D2E7或安慰劑灌入10毫 升鹽水中。於灌注後，規則地收集血液試樣。 動物在處理後患有動脈粥瘤硬化之程度，係以各種方式評 估。將血清試樣規則地取自猴子，並檢測總膽固醇、HDL膽 固醇、LDL膽固醇、tHCY及甘油三酯。診查經治療之猴子， 以測定當與經安慰劑處理之猴子比較時，總膽固醇與LDL膽 固醇及tHCY含量是否較低，及HDL含量是否較高。 實例12 : TNFo：抑制劑在病患中治瘙再狹窄 D2E7在具有再狹窄之人類病患中之研究 86869 -152- 1354561 u擇已接义軋脹血管造形術之病患，以供研究，因其具有 在血g &形術後之最初六個月内，增加發生再狹窄之機會。 在’口療·^則，係參考引導導管施行血管與損傷參數之評價
。評價包括參考血管直徑（RVD)、預處理最小管腔直徑（MLD 其係藉由（RVD X [1 -程序前百分比直徑狹窄]測得）、程序 後MLD (其係藉由（RVDX [丨-程序後百分比直徑狹窄]測得）、 急性增進（程序後河!^程序前_)、害病血管數及交易血 管數。 病心之貝驗組係投予無論是以兩週一次與每週一次4〇毫克 劑K D2E7，或安慰劑。劑量可經由熟諳再狹窄之一般熟 練技師調整。追縱病患，並在血管造形術後六個月進行評 :古、以測疋再狹窄是否已發生。病患亦在第9個月及長期進 仃砰估，以在此等組群中測定延遲再狹窄之作用，其中再 狹窄係由於治療而被預防或降低。血管與損傷參數之許價 係在D2E7治療之後作記錄。進行統計分析以比較病患中再 狹窄之程度（Jackson等人（2〇〇3)拙价奶j 145 : 8乃）。 fAl_3 · TNF^!抑制劑_屋於治瘓心啤杳竭 D2E7在具有心臟衰竭之人類病患中之臨床研究 選擇患有安定紐約協會_八)種類π或…心臟衰竭，且左 心室噴出分率低於35%之病人，以供研究。在卿Α標準下 ’種類ΠΙ (揭患係被定義為具有顯著活動限制纟，意即， :只有在靜止時為舒服的，而種㈣病患係被定義為應在 %全靜止下者，意即限於床或椅予，或其中任何身體活動 均會導致不舒服，並在靜止時發生病徵者。如在B刪等人 86869 -153· 1354561 中所述者，左心室噴出分率係與六個月死亡率有關聯（Bums 等人（2QQ2)JAm Coll Cafdiol. 39 ·· 3(ϊ)。 病患係接受兩週一次D2E7之40毫克劑量，或經熟諳心臟衰 竭之一般熟練技師調整之劑量。對照組係給予安慰劑。病 患在第1、2、6、10、14、20及18週接受診察。於每一次探 訪時，每位病患係經診查，並給予其整體心臟衰竭狀態之 評估，相對於其在研究開始時之狀態，意即評估其ΝΥΗΑ種 類。在心臟衰竭研究結束時，將病患之最後ΝΥΗΑ種類與最 初ΝΗΥΑ種類作比較。 實例14: TNFa抑制劑在老鼠模式中用於糖尿病 TNF抗體在NOD老鼠模式中之研究 下述研究係使用第1型糖尿病之不肥胖糖尿病（NOD)老鼠模 式進行。在研究開始時，經由測試NOD老鼠血液中之葡萄 糖含量，確立胰島素含量。經由使老鼠禁食過夜（Π小時）， 建立基線胰島素含量。確認血糖含量，並於投予葡萄糖4分 鐘後，再確認一次。血糖係以反射度計測定。使1毫升注射 器中之葡萄糖（200毫克/毫升，在0.85%氯化鈉中）預先溫熱 至40°C，並在3克/公斤體重下，以腹膜腔内方式注入老鼠 。第二次血糖度量係在投予葡萄糖後4分鐘測定。使用第二 次血液度量之試樣，以利用葡萄糖計Elite測定血糖含量。將 其餘血液試樣收集至微離心管件中，並用以分離血清，以 供胰島素或C-肽測定。胰島素含量係使用齧齒動物放射免 疫檢測（RIA)套件，根據製造者之說明書，或酵素連結免疫 檢測（ELISA)進行測定。 86869 -154- 1354561 糖尿病老鼠係以其具有血糖讀數大於300毫克/公合之標 準為基礎作選擇。非糖尿病老鼠係經選擇，以致使其藉由 葡萄糖計之葡萄糖讀數，係在200毫克/公.合下。使NOD老 鼠（顯示上述葡萄糖讀數者）發展糖尿病，並投予安慰劑或 已知會結合並中和老鼠TNF α單株抗-TNF α抗體例如抗體 ΤΝ3 (ΤΝ3-19_12)之劑量（參閱 Marzi 等人（1995)泓od: 3 : 27 ; Williams 等人（1992) Proc «SW 89 : 9784 ; BD Bioscience Pharmingen) 。使老鼠每日接受TNF抗體或安慰劑之皮下注射。胰島素與 葡萄糖含量係在每週增量下度量，以測定血糖含量是否有 降低。 實例15: TNFo;抑制劑在糖尿病之老鼠模式中 TNF抗體在第2型糖尿病老鼠模式中之研究 下述研究係使用NSY老鼠模式（第2型糖尿病）進行（Ueda等 人，Diabetes，第 48 卷，1999 年 5 月，1168 : 1174)。NSY 老鼠係密切 地擬似人類第2型糖尿病，此係由於展開係為年齡依存性， 動物並非嚴重地肥胖，且胰島素抗藥性與對葡萄糖之減弱 胰島素回應兩者，皆會助長疾病發展。此項研究係評估許 多表現型數據，包括葡萄糖含量、胰島素含量、老鼠之身 高與體重。 葡萄糖係在NSY老鼠中根據標準技術度量，包括藉由靜脈 内葡萄糖容許度試驗。基線葡萄糖抗藥性係在開始研究之 前12週進行度量，且葡萄糖、胰島素、身高及體重係據此 作成圖表。 NSY老鼠係投予無論是安慰劑或已知會結合並中和老鼠 86869 -155- 1354561 TNFo:之單株抗-TNFo：抗體例如抗體TN3 (TN3-19.12)之劑量（參 閱 Martiz 等人（1995)劭ocA：3: 27; Williams 等人（1992)外沉/^/也以5^· i/«SL4· 89 : 9784 ; BD Bioscience Pharmingen)。使老鼠每日接受抗-TNF 抗體或安慰劑之皮下注射。於開始研究之後，在第〇、12、 24、36及48週時，在腹膜腔内葡萄糖投藥後120分鐘，取得 葡萄糖含量度量值，以檢查葡萄糖不容許性是否有降低。 TNFO；抑制劑在肥胖老鼠模式中 TNF抗體在肥胖老鼠模式中之研究 下述研究係使用肥胖老鼠（ob/ob)之老鼠模式進行。對老鼠 評估體重減輕與其身體質量指數之降低。肥胖老鼠之特徵 為顯著肥胖、攝食過度、短暫高血糖及顯著提高之血漿胰 島素濃度，與蘭氐胰島；5細胞之數目與大小上之增加有關聯 (Coleman，同前文出處）。肥胖老鼠（〇b/〇b)於表現型上係與其痩 動物夥伴（ob/+與+/+)，在約26天大時，以體重為基礎作區別 。肥胖老鼠係迅速地增進體重，且在5週大時具有顯著肥胖 。肥胖老鼠係在7-8個月大時，達到最大體重60-70克，而痩 動物夥伴係在3-4個月中，達到其最大體重30-40克（Coleman,同 前文出處；Westman (1968) 4 : 141 ; Bray & York (1971) 生理學回顧.5\ ·· 5挑）。 將十三（13)週大之ob/ob老鼠與相當之野生型對照老鼠稱重 ，以建立基線體重。老鼠係投予無論是安慰劑或已知會結 合並中和老鼠TNFa之單株抗-TNF α抗體例如抗體TN3 (TN3-19.12)之劑量（參閱 Marzi 等人（1995) 3: 27; Williams 等人（1992) 尸rac TVaiMcafi? 5c/89 : 9784 ; BD Bioscience Pharmingen)。使老 86869 -156- 1354561 鼠每日接受TNF抗體或安慰劑之皮下注射。所有老鼠均餵食 高脂肪。飲食（58%脂肪，研究飲食D12330)歷經12週。每週記 錄體重。12週後，使老鼠安樂死，並將脂肪分割及稱重， 以及動物之最後體重，以測定最後身體質量指數（BMI)與肥 胖之發生。 或者，可在出生時開始以D2E7治療ob/ob老鼠，並餵食正規 飲食，意即非低脂、非高脂飲食。將經治療與對照之老鼠（ob/ob 動物夥伴）每週稱重。於正常情況下，在第五週時，ob/ob老 鼠會顯示指示其為肥胖之BMI。於第五週時診查老鼠，以測 定其是否比對照組具有較低BMI度量值。 實例17: TNFa抑制劑在人類中治療第2型糖尿病 D2E7在具有第2型糖尿病之人類病患中之研究 選擇被診斷患有第2型糖尿病之病患，以供研究。使用下 列加入標準：40-65歲，已知之糖尿病延續時間>12個月，安 定BMI < 35公斤/ m2，仰臥血壓< 140/90毫米/ Hg，血清肌酸 酐< 106微莫耳/升，m24-hUAE介於20與200微克/分鐘之間 ，在每週評估之試樣中，於第一次評估之前3個月期間，及 在15天安慰劑空轉期間，且於研究開始之前，無心與血管 、肝或系統疾病。病患並未服用任何其他藥物，惟用於治 療其糖尿病者除外。在研究之前三天及在整個研究期間， 病患係遵照等熱量飲食（〜0.13毫焦耳X公斤-1 X天-1 ; 50%碳 水化合物，35%脂質，15%蛋白質），未具有鈉攝取之限制 。在每一次探訪時，檢查黏附至飲食之建議。 病患係以兩週一次服藥使用法投予40毫克D2E7，惟此劑量 86869 -157- 1354561 與服用頻率可經由具有HCV治療知識之一般熟練技師作調整 。對病患至少每週監測一次，歷經十二週，其中重複之檢 測係類似在D2E7治療起始前所進行且如下文所述者。 關於每一位病患在整個研究中之評估，係進行下列基線診 察：仰臥血壓度量；BMI ;三種二十四小時尿液試樣之平均 ;血糖含量；二十四小時尿液葡萄糖；血清肌酸含量；肌 酸酐清除率；及心動電流波讀數。再者，每一位病患均保 持每日日記，以監測典型第2型糖尿病病徵，譬如疲勞、過 度口渴、頻尿、視覺模糊、高感染率、慢慢癒合之傷口、 心情變化及性問題。病患係經診查，以測定是否在D2E7中 有血糖含量上之降低，以及第II型糖尿病之典型病徵上之減 少，譬如疲勞、過度口渴、頻尿、視覺模糊、高感染率、 慢慢癒合之傷口及心情變化。 實例18 : 在鐵缺乏贫血中之TNFa抑制劑 D2E7在鐵缺乏大白鼠模式中之研究 下述研究係使用鐵缺乏貧血之大白鼠動物模式進行（Catani 等人，（2003)价似 J. Mei/·所〇/·办又 36 ; 693)。將雄性 Wistar-EPM 大 白鼠（大約三週大）餵食不含鐵之AIN-93G (美國齧齒動物飲食 營養學會）飲食，歷經兩週期間，以引致鐵缺乏貧血。大白 鼠係投予安慰劑或已知會結合並中和大白鼠TNFa之單株抗-TNFa抗體例如抗體TN3 (TN3-19.12)之劑量（參閱Marzi等人（1995) 劭ocA:3 : 27 ; Williams 等人（1992)PwcA^/v4cW&z· aSA 89 : 9784 ; BD Bioscience Pharmingen)。在處理前後採取血液試樣，以測定 血紅素與血球容積率數值。關於血球容積率與血紅素濃度 86869 -158- 1354561 之分析，係收集血液，並與5毫升0.5 M EDTA混合。血球容 積率係在密封肝燐脂化毛細管中藉由血液之離心分離而測 得。血紅素濃度係計算自氰變性血紅素在546毫微米下之吸 光率。大白鼠係經診查，以測定是否有經改良之血球容積 率度量值。 督例19:慢性疾病貧血之TNFa抑制劑研衆 D2E7對於與慢性炎性疾病有關聯之貧血之研究 下述研究係使用慢性疾病貧血之大白鼠模式進行（Coccia等 人，（2001)£知· 29 ; 1201)。於第0天，將八至十週大 之雌性路易士大白鼠，以腹膜腔内（i.p.)注射肽聚膽·多醋聚 合體（PG-APS)進行接種，該聚合體係懸浮於0.85%鹽水中，經 平衡至15微克鼠李糖/公斤之劑量。經由尾靜脈，將血液收 集至EDTA塗覆之微濾器管中，並於經校準以供大白鼠血液 用之ADVA 120血液學系統上，進行全血液計數（CBC)。收集 另一份血液試樣，並於微濾器血清分離器離心管上分離， 且分析血清之鐵、膽紅素及内源EPO濃度。大白鼠係投予安 慰劑或已知會結合並中和老鼠TNF α之單株抗α抗體例 如抗體ΤΝ3 (ΤΝ3-19.12)之劑量（參閱Marzi等人（1995)劭: 27 ;Williams 等人（1992) PracMzi/Jcai/89 : 9784 ; BD Bioscience
Pharmingen)，並檢查經改良之鐵、膽紅素及Bp。濃度度量值。 實例20 :對贫血之TNFa抑制劑 D2E7在具有貧血之人類病患中之研究 將顯示一般與貧血有關聯病徵之病患進行診查並測試，以 測定其是否患有貧血。一般與貧血有關聯之病徵，係為疲 86869 -159- 1354561 勞、胸痛、呼吸短促、臉色蒼白及心跳速率快速。指示貧 血之試驗’其實例全血液計數（CBC)、網狀紅血球計數及鐵 供應之度量’包括血清鐵、總鐵結合容量及血清鐵蛋白。 在患有嚴重貧血與紅血球形態學異常之病人中，骨髓抽吸 與活體組織檢法係為重要診斷工具。患有貧血之病人係經 選擇’以供研究。 在CBC測試中’自動化細胞計數器係度量許多參數，以作 為CBC之一部份，包括血紅素、紅血球計數、紅血球體積分 佈、血小板計數及白血球計數。計數器亦計算血球容積率（ 以RBC計數與體積為基準）、平均細胞體積（MCVx以體積分 佈為基礎）' 平均細胞血紅素血紅素除以血球容積率） 及紅血球分佈寬度（RDW)。紅血球指數與奶评係與染 色血液塗片足直接檢查一起使用，以評估紅血球形態學。 颖似CBC測忒，網狀紅血球計數之精確度量，係為任何貧 血最初分類之關鍵。網狀紅血球係為新生紅血球，其含有 足夠殘留之RNA，其可以超活體染料染色，並以循環紅血球 個fa群之百刀比數。在基礎狀態中，根據此計數方法， 正常網狀紅血球計數係、涵蓋1至2百分比之範圍。此係與大 、勺1百刀比I# %紅Α球個體群之正常每日替補有關聯。網 片、血球4數上之增加，係提供回應貧血H血球製造之 可靠度量。 為使用網狀紅血球計數作Α制 τ致作為製造度量方式，必須首先校正 病患血球容積率之改變， 及促紅血球生成素對骨髓網狀么工 血球之早期釋入循環中 、 宁 <作用。血球容積率（HCT)校正 86869 -160, 1354561 網狀紅血球百分比轉化成絕對數目： %網狀紅血球xmcT=絕對％網狀紅血球 45% 骨髓網狀紅血球（，，移轉”）校正係涉及將絕對百分比除以丨5至 2.5 <因數，於其中任何時候有顯著血紅素含量增多在末梢 血欲塗片上。移轉校正應總是被應用至具有貧金與極高網 狀紅血球計數之任何病患，以提供有效紅血球製造之真實 扣數。正常病患將對血球容積率回應小於3〇百分比，其中 在網狀紅血球製造指數上增加二_至三倍。因此，此單獨之 度量方式將確認病患具有適當促紅血球生成素回應、正常 紅細胞骨髓及足夠鐵供應以符合此激發之事實。當網狀紅 血球指數下降至低於2時，骨髓增生或先質成熟上之缺陷必 定存在。 鐵供應之標準度量，包括血清鐵、轉移鐵結合容量 及血清鐵蛋白含量。正常血清鐵係涵蓋9至27微莫耳/升⑼ 至150微克/公合）之範圍，而正常丁16<：;為54至64微莫耳/升 (3〇〇至360微克/公合）。因此，在基礎狀態+，於猶環中之 轉移只有30至50百分比係被鐵飽和。重要資訊係由各度量 法以及計算而得之百分比飽和提供。血清鐵蛋白係用以評 估身體鐵儲存。成年男性具有血清鐵蛋白含量在5()與15()毫 克/升之間，相當於鐵儲存為㈣至麵毫克。成年女性呈 有較低血清鐵蛋白含量⑴至㈣克/升），及較小鐵儲㈣ 晕克當鐵儲存被耗盡時’係發現較低血清鐵蛋白含 低於15 $克/升之含量係顯示儲存耗盡與鐵缺乏。 86869 -161 - 1354561 骨髓之試樣係易於藉由針頭抽吸或活體組織檢法而獲得。 其在患有過少增生貧血或紅血球成熟病症之病人中，具有 最大數值，提供關於骨髓結構與細胞結構以及先質增生與 成熟之有價值資訊。紅細胞對粒性細胞先質（E/G比例）之比 例’係用以評價紅細胞先質之增生能力。具有過少增生貧 血與網狀紅血球指數<2之病患，將証實E/G比例$ 1 ·· 3或1 : 2。對照上而言，具有製造指數$ 3至5之溶血性貧血病患係 具有E/G比例>1 . 1。紅血球先質成熟缺陷係由jg/G比例與網 狀紅血球製造指數間之失配作確認。此等個體証實E/G比例 大於1 : 1，伴隨著低網狀紅血球指數，其為成熟病症之無 效紅血球生成之典型代表。 在基線度量之後，病患開始接受治療。將其隨機選取，並 以目目方式’使用無論是D2E7或安慰劑治療。病患之全血 液計數（CBC)、網狀紅血球計數及鐵供應度量，係至少每兩 週監測一次。 f一例21 .在神經疫^隹疼痛之動物模式中之TNFa抑制劑 在大白鼠坐骨神經連接模式中之mF抗體 下述研究係使用關於神經病原性疼痛之大白鼠坐骨神經連 接模式進行（Bennett與Zie(1988)P_33: 87)。在手術之前施行 基線行為度量法（對機械感覺異常與熱痛覺過敏之回應，擬 案係描述於下文中）。熱痛覺過敏係才旨大白鼠熱疼痛低限值 而機械感見異^係指對於輕觸覺刺激之回應低限值。使 时重在120-150克間之雄性史泊格多利伽__〇滅丫）大白鼠 麻醉，並對每一隻進行坐骨神經連接程序。坐骨神經連接 86869 -162· 1354561 程序係涉及使共用坐骨神經曝露，然後，將其以具有約1毫 米間距之4條缚線鬆散地打結。使大白鼠復原，並投予無論 是安慰劑或已知會結合並中和大白鼠TNF α之單株抗-TNF α 抗體例如抗體ΤΝ3 (ΤΝ3-19.12)之劑量（參閱Marzi等人（1995) iS7zoc々 3 : 27 ; Williams 等人（1992)L^4· 89 : 9784 ; BD Bioscience Pharmingen)。每週使實驗組每日接受TNF抗體或 安慰劑之皮下注射。 在手術之後，機械感覺異常與熱痛覺過敏，係於每週基礎 下進行10週。止痛測試係診查對有害熱之回應，且係經由 將大白鼠放置於一個具有透明玻璃地板之室中，並將來自 地板下方之輻射熱來源瞄準受感染足部之足掌表面而測得 。記錄縮回潛伏狀態與延續時間。於處理後，縮回後足掌 之增加潛伏狀態，係為止痛活性之展示。 對正常無害機械刺激之回應（機械感覺異常度量法）係經由 將大白鼠放置於一個具有篩網地面之室中，並以漸變之 von Frey毛髮刺激後足掌之足掌表面而測得，該漸變之von Frey 毛髮係藉由使足掌彎曲所需要力之克數校準。具有坐骨神 經連接之大白鼠，與未經手術之大白鼠比較，會藉由足部 之反應縮回，而對較低克數之機械刺激有回應。此種對於 通常為無害之刺激之回應，係被稱為感覺異常。於處理後 產生足部縮回所需要之機械力克數之增加，係為抗感覺異 常活性之展示，及神經病原性疼痛之降低。 實例22 :在神經病原性疼痛之動物模式中之TNFa抑制劑 TNF抗體在大白鼠片段脊髓神經連接模式中之研究 86869 -163- 1354561 下述研究係使用關於神經病原性疼痛之大白鼠片段脊髓神 經連接模式進行（Kim與Chung, 50 (1992) 355-363)。使體重為 120-150克之雄性史泊格多利（Sprague Dawley)大白鼠麻醉，並以 平伏姿勢放置。將左邊脊髓旁肌肉，自棘狀過程，在L4-S2 階層下分離。使左邊L5與L6神經根部外露，並以6-0手術絲 缝合線緊密地連接至背側根部神經節末梢。使大白鼠復原 ，並投予無論是安慰劑或已知會結合並中和大白鼠TNF α之 單株抗-TNF α抗體例如抗體ΤΝ3 (ΤΝ3-19.12)之劑量（參閱Marzi 等人（1995)3 : 27 ; Williams 等人（1992) Proc 89 :9784 ; BD Bioscience Pharmingen)。每週使實驗組每日接受 TNF 抗體或安慰劑之皮下注射。在手術之前，施行基線行為度 量法（如上文所述，對於機械感覺異常與熱痛覺過敏測試之 回應）。在手術之後，關於神經病原性疼痛之機械感覺異常 與止痛測試，係於每週基礎下進行10週。 實例23 :在神經病原性疼痛之治療中之TNFa抑制劑 D2E7在具有神經病原性疼痛之人類病患中之研究診查 被診斷患有神經病原性疼痛之病人係經選擇，以供研究。 臨床神經病原性疼痛係以臨床背景為基礎進行測定，包括 病歷、身體檢查及病患所表現病徵與跡象之適當研究。在 國際疼痛研究協會（IASP)慢性疼痛分類中定義之診斷標準定 義，係用以支持神經病原性疼痛之臨床診斷。一些病患係 以下列標準為基礎而被排除在外，包括但不限於具有相等 或較大嚴重性之另一種疼痛問題，其可能會減弱神經病原 性疼痛之評估；與神經病原性疼痛之原因無關聯之顯著神 86869 -164- 1354561 經病或精神病學病症， 估，現行藥物或酒精濫 病。 其可能會減弱神經病原性疼痛之評 用；及臨床上顯著之肝臟、腎或肺 ―神經病原性疼痛病患之評估，係使用標準疼痛評估工具施 仃，譬如短暫形式-McGi11疼痛問卷（SF-MPQ) ; 1〇〇毫米垂直視 覺類比標度（VAS)(0=沒有疼痛，觸=不能忍受之疼痛）；及 變化之臨床家總體印象(CGIC)。病患亦可使用每日之曰記， 以將其神經病原性疼痛評分。每—個夜晚，病患係檢定其 在之則24小時期間平均疼痛強度之等級。 在一週 < 基線度量後，病患開始接受治療。將其隨機選取 ，並以頁目方式，使用無論是D2E7或安慰劑治療。每兩週 監測病患一次，並診查病患神經病原性疼痛評估與疼痛平 均強度上之之降低’如在其每日日記中所加以作圖者。 皇_例2_4 :在關於C型肝炎感染之動物模式中之TNFq;抑制办丨 D2E7在HCV黑彳星獲模式中之研究 下述研究係使用黑猩猩C型肝炎病毒（HCV)模式進行 (Shimizu ψ A (1990) Proc. Natl. Acad Sci. USA 87 ： 6441) ° 將黑獲猛以靜脈内方式（I.V.)接種〇·5毫升未經稀釋之血漿， 其係得自患有輸血後急性非A型、非B型肝炎之病人。接種 物含有例如每毫升1〇6·5黑猩猩50%感染劑量（CID5{) /毫升）之 HCV。在接種之前及處理後之每一週，採取血清試樣與肝臟 活體組織檢查試樣。於接種後’黑猩猩係投予D2E7或安慰 劑之劑量。D2E7係以高親和力方式有效結合TNF，橫跨物種 ，參閱美國專利6,258,562。 86869 165- 1354561 接種後之HCV含量，係以多種方式監測。血清試樣係規則 地取自黑猩猩，並檢測丙胺酸轉胺酶（ALT)。ALT檢測為一 組被稱為肝功能測試（或LFT)之試驗之一，且係用以監測對 肝臟之傷害。對HCV之循環抗體（抗-C100-3抗體）係藉由BCV 抗體ELISA試驗系統偵測。此外，HCV係在血清試樣中偵測 ，cDNA/PCR 檢測係按 Weiner 等人，（1990)Z^«cei 335; 1 中所述進 行。亦根據 Shimizu 等人，（1985) iVoc. <Scz·· L/&4 82 ; 2138 中所述之方法，經由以單株抗體48-1免疫螢光染色，對冷凍 肝臟活體組織檢法試樣測試細胞質抗原。經治療之黑猩猩 係經診查，以測定當與經安慰劑處理之黑猩猩比較時，ALT 含量與HCV血清含量是否較低。 實例25:在人類HCV感染中之TNFa抑制劑 D2E7在人類中治療HCV之研究 選擇18至70歲具有補償慢性HCV感染之男性與女性。為取 得供此研究之資格，病患必須藉由反轉錄作用-聚合酶連鎖 反應（RT-PCR)，對於抗-HCV(第二代酶免疫分析）與HCVRNA ，進行測試而呈陽性。病患亦具有在研究登錄之一年内顯 示慢性肝炎之肝臟活體組織檢查，且在治療起始之前，具 有高血清丙胺酸轉胺酶（ALT)含量達至少6個月。登錄白血球 計數應為至少2,500 /微升；血小板計數應大於70,000 /微升。 排除標準包括但不限於肝病或其他有關聯病症之任何其他 原因，包括人類免疫不全或B型肝炎病毒共感染；臨床上顯 著之心臟或心與血管異常，器官移植物，系統性細菌或真 菌感染；臨床上顯著之出血病症；在前一年内之酒精或藥 86869 -166- 1354561 物濫用。 治療前與治療後血清HCVRNA係藉由標準化之RT-PCR檢測 作定量。HCV RNA之定性偵測，係在治療後所獲得之血清試 樣中，藉由RT-PCR進行。HCV之定基因型係藉由逆雜化檢測 進行。感情與心理學狀態係使用適當健康相關生命品質等 級度量。 在基線度量後，病患開始接受治療。將其隨機選取，並以 盲目方式，使用無論是D2E7或安慰劑治療。病患係以兩週 一次服藥使用法投予40毫克之D2E7，惟此劑量與服用頻率 可經由具有HCV治療知識之一般熟練技師作調整。對病患至 少每4週監測一次，其中重複之檢測係類似D2E7治療起始前 所進行者。相對於僅接受安慰劑者，於HCV含量上之降低， 係藉由較弱RT-PCR訊息証實。 實例26:在關於牛皮癬之老鼠模式中之TNFa抑制劑 TNF抗體在牛皮癖SCID老鼠模式中之研究 選擇已接受人類牛皮癬斑點移植之嚴重合併免疫不全（SCID) 老鼠，作為研究牛皮癬之動物模式，因為此等老鼠係長時 間保有牛皮癖之典型臨床與組織學特徵（Nickoloff等人（1995) JmJAziAc»/ 146: 580-8)。 2-3個月大之雌性遠系繁殖C.B17 SCID老鼠係得自不含病原 動物繁殖設備。人類皮膚試樣係取自患有慢性斑點牛皮癬 之男性白種病人。包含臨床上所涉及皮膚之1x3公分英忖大 小之紡錘形皮膚試樣，係於局部麻醉下獲得，且係經由移 除皮下脂肪而製成，以供移植，經固定在冷卻之磷酸鹽緩 86869 -167- 1354561 衝鹽水(PBS)中。皮膚試樣係在1-2小時内進行移植。 將全厚度皮膚試樣分割成8-10毫米直徑之片塊，然後移植 至老鼠後背，每隻老鼠帶有一個移植物。對手術程序而言 ，係藉由腹膜腔内注射（i.p·)米達σ坐蘭（midazolam)與芬太尼 (fentanyl)二氫擰檬酸鹽之1 : 1混合物，使老鼠麻醉。將全厚 度皮膚之紡錘形碎片移植於經修面中央背部之相應切除全 厚度缺陷上，並藉由6-0無外傷單絲缝合線固定。於施加無 菌凡士林浸潰.紗布後，經由在移植區域上，使用相鄰兩側 皮膚，將皮膚袋囊縫合，保護此移植物免於損傷。缝合線 與上方連接之袋囊係留在原位上，直到2-3週後其自然消褪 為止。 SCID-人類皮膚嵌合體係顯示類似人類牛皮癬之病徵。於 SCID老鼠上之移植斑點，係顯示牛皮癬之典型臨床特徵， 包括鱗屑、紅斑及變厚。此模式亦顯示牛皮癬之典型組織 學特徵，包括不全角化、棘皮病、細長網背脊、乳頭上變 薄及在乳頭狀真皮中之淋巴單核細胞浸潤。 將經移植之SCID老鼠，以皮下方式，在損傷之位置，注射· 無論是安慰劑或已知會結合並中和老鼠TNF α之單株抗-TNF α 抗體例如抗體 ΤΝ3 (ΤΝ3-19.12)(參閱 Marzi 等人（1995) S/wd: 3 : 27 ;Williams 等人（1992) Proc Mzi/ 89 : 9784 ; BD Bioscience
Pharmingen) 〇每週使實驗組每日接受TNF抗體或安慰劑之皮 下注射。在經TNF抗體治療之SCID老鼠中之改善，係藉由與 牛皮癖斑點有關聯病徵之減少而被証實。 實例27:在牛皮癖之臨床研究中之TNFa抑制劑 86869 -168 - 1354561 在具有牛皮癬之人類病患中之D2E7 患有中等至嚴重慢性斑點牛皮癬之病人係經選擇，以供研 究。在研究登錄之前，沒有一位病患已接受任何牛皮癬治 療藥品至少4週，或任何局部治療藥品至少2週。D2E7之劑 量係在每週40毫克或每隔一週40毫克下開始，其係藉由皮 下注射投予。 病患係以臨床方式每2-4週作診查。牛皮癬皮膚損傷之臨 床活性，係利用牛皮癬面積與嚴重性指數（PASI)(Fredriksson與 Pettersson(l 978) 157 : 238-44)及藉由相同研究人員之醫師總 體評估而進行評估，以確保一致評估。於第12週時，測定 病患達成PASI評分之至少75%減少之比例之主要終點，與基 線作比較。搔癢病係利用已確認之標度進行評估。生命品 質許估係使用已確認之工具度量，包括但不限於DLQI、SF-36 及EQ-5D。排除臉部之全身照片，係在整個研究中之計劃探 訪時拍攝。 皮膚活體組織檢查試樣係在研究期間之計劃間隔下獲得， 以使皮膚中之組織學與生物標記物，與治療產生關聯。正 常皮膚之活體組織檢法*係在基線下獲得’以與牛皮癖皮 膚作比較。 實例28. 在Behcet氏疾病之動物模式中之TNFa抑制劑 TNF抗體在Behcet氏徵候簇老鼠模式中之研究 下述研究係使用Behcet氏疾病之老鼠HSV模式進行（Hirata, Y. 等人（1993) dcto. 503 : 79)。將表現人類 TNF 之 老鼠耳垂（參閱五M50JC1991) 10 : 4025-4031，關於進一步說明） 86869 -169- 1354561 以針頭刮傷，然後接種LO x 106斑點形成單位（pfli) /毫升之單 純疱疹病毒類型1 (HSV1)(K0S菌種）溶液，其會造成炎性細胞 聚集在於血管及其周圍。因此，發生腸、口腔、耳垂及生 殖器上皮之損害。具有Behcet氏疾病狀徵候誤之老鼠，係被 定義為具有兩種或多種病徵之老鼠，其係類似在人類Behcet 氏疾病中所見及之典型形態學改變。 將已知會結合並中和老鼠TNF α之單株抗-TNF α抗體例如抗 體 ΤΝ3 (ΤΝ3-19.12)(參閱 Marzi 等人（1995)劭〇冰3 : 27 ; Williams 等 人（1992) PracTVai/Jcai/89 : 9784 ; BD Bioscience Pharmingen) ，以一範圍之劑量，於接種前後，或從損傷發生當天起， 投予HSV引致之Behcet氏徵候簇之老鼠。亦投予適當安慰劑 對照組。監測毛髮掉落、口部與生殖器皮膚之潰瘍及眼睛 牵連性 > 並自損傷處收集組織試樣。將組織試樣經福馬林 固定，並經石蠟包埋，供切片分析。將損傷切片以蘇木素 與曙紅染色，並檢視炎性細胞之外觀。將30隻老鼠在相同 位置處接種培養基，作為對照組。四週後，使用相同方法 進行第二次接種，接著觀察16週。 檢查老鼠之毛髮再生長與經治療老鼠中潰瘍之減少，與經 安慰劑處理之老鼠作比較。在經治療老鼠中損傷之改善， 在經過目視檢查與組織學分析測定時，發現潰瘍位置發炎 之減少，與炎性細胞例如T細胞數目在潰瘍位置之減少，亦 為改善之進一步指標。 實例29. 在Kawasaki氏疾病治療中之TNF a抑制劑 TNF抗體在使用乾乳酪酸桿菌老鼠模式之Kawasaki氏疾病中 86869 -170- 1354561 之作用 使用Kawasaki氏疾病之老鼠乾乳酿酸桿菌模式（Lehman，TJ.， 等人（1985)乂，汾，池及/!從所28:652;〇11〇11名，1'.1\(2002)/批/所細敗/15 :79 ; Brahn, E.，等人（1999) /所細《〇/ 90 : 147)進行下述研究。 冠狀動脈炎係在表現人類TNF α(參閱上文）之老鼠中，以單 獨腹膜腔内（ip)注射乾乳酪酸桿菌細胞片段而被謗發。已証 實以乾乳酪酸桿菌處理之老鼠之心臟組織學切片，係類似， 在患有Kawasaki疾病兒童之中等大小冠狀動脈中所發現之脈 管炎與動脈瘤（Lehman 等人（1985)々从28 : 652 ; Duong (2002)/«//撕^”〇/15:79;3瓜1111等人（1999)(7"«/所/«1/«〇/90:147)。 經乾乳酪酸桿菌注射之老鼠係以腹膜腔内方式，經過標準 擬案，投予無論是對照安慰劑或已知會結合並中和老鼠TNF α之單株抗-TNF α抗體，例如抗體TN3 (TN3-19.12)(參閱Marzi 等人（1995)劭od: 3 : 27 ; Williams 等人（1992) iVodi/JcM 89 :9784 ; BD Bioscience Pharmingen)。於第 14 天（疾病早期）或在研 究結束時（已建立疾病），收取得自經注射老鼠之心臟。將 組織學切片對脈管炎盲目地評分。 當與經安慰劑處理之動物比較時，冠狀動脈炎之降低係藉 由測定經TNF抗體治療老鼠之冠狀血管壁之炎性損傷之減少 而作評估。當與經安慰劑處理之動物比較時，冠狀動脈炎 之降低，係以冠狀血管壁之炎性單核細胞浸潤之減少，伴 隨著血管内膜增生之減少，及血管腔管之較少變窄，進行 評估。 實例30· 在Kawasaki氏疾病之動物模式中之TNF α抑制劑 86869 -171 - 1354561 在使用ANCA老鼠模式之Kawasaki氏疾病中之TNF抗體 下述研究係使用Kawasaki氏疾病之老鼠抗内皮細胞抗體 (ANCA)模式進行（Grunebaum 等人（2002) d 五平加細《〇/. 130 : 233 ，Blank 等人（1995) C/in. /mmwwo/· 102 : 120 ; Tomer 等人（1995) dr认38: 1375; Damianovich 等人（1996)/· Tawwmw/· 156: 4946) 。使動物以抗内皮細胞抗體（ANCA)免疫，其含有衍生自 Wegener氏肉芽腫病病患血漿之蛋白自每3-專一抗體。以純化之 ANCA使老鼠免疫，並將對照老鼠注射正常igG。老鼠係每週 投予無論是安慰劑或已知會結合並中和老鼠TNFo:之單株抗-TNF α抗體例如抗體TN3 (TN3-19.12)之劑量（參閱Maizi等人（1995) 3 : 27 ; Williams 等人（1992) 89 : 9784 ; BD Bioscieiices pharmingen)，高達四個月。在以人類ANCA免疫 後三個月，老鼠係發展對ANCA之内源抗體。使老鼠安樂死 ，並對肺臟、腎臟及心臟以組織學方式診查圍繞小動脈與 小靜脈之淋巴樣細胞浸潤，以及Igs在血管壁外部處之沉積 ，就像在患有Kawasaki氏疾病之病人身上所發現者（Grunebaum 等人（2002) 五冲./zwmmo/. 130 : 233 ; Blank 等人（1995) C7/«. /awwmwo/· 102 : 120 ; Tomer 等人（.1995) 38 : 1375 ;
Damianovich 等人（1996)J_/mmw⑽/· 156 : 4946)。淋巴樣細胞浸潤 與IgG在血管壁中沉積之減少，及ANCA抗體滴定度上之降低 ，係為Kawasaki氏疾病改善之指標。 實例31. 在Kawasaki氏疾病之治療中之TNF α抑制劑 D2E7在具有Kawasaki氏疾病之人類病患中之臨床研究 將患有Kawasaki氏疾病（KD)之病人登記於研究中；所有病 86869 -172- 1354561 患均有發熱，及關於KD所發表之5種臨床標準中之至少4種 (Barron, K.S.等人（1999)/· 攸》/. 26 : 170)。病例對照組亦經 確認。冠狀動脈之直徑係藉由超音波心臟動態診斷法度量 ，並校正身體表面積。對心動電流波篩選可能存在於KD中 之典型改變，包括延長之PR或QT間隔、異常Q波、ST-與T-波變化、低電壓或節律不齊。KD病患係投予無論是隔週與 每週40毫克劑量之D2E7或安慰劑。劑量可經由熟諳KD之一 般熟練技師作調整。對病患監測發熱降低。輔助療法，例 如皮質類固醇，係按需要投予。監測病患，並使用追蹤超 音波心臟動態診斷，以測定冠狀動脈傷害是否已發生，抑 或經由已改善超音波心臟動態圖結果所証實之冠狀動脈損 傷上之改善是否已發生。 實例32. 在Behcet氏疾病之治療中之TNFa抑制劑 D2E7在具有Behcet氏疾病之人類病患中之臨床研究 供研究之病患係經選擇，因其符合國際研究組群標準，其 需要口腔潰瘍，加上生殖器潰瘍、典型定義之眼睛損傷、 典型定義之皮膚損傷或陽性病應性試驗中之任兩種存在 {Lancet. (1990) 335 '· 1078 ; Kaklamani, V.G.等人（2001) iSemz’w· jriAnYz’i 30 : 299)長達平均6年。Behcet氏病患係被投予無論是 隔週與每週40毫克劑量之D2E7或安慰劑。劑量可經由熟諳 Behcet氏疾病之一般熟練技師作調整。經治療與安慰劑之病 患係給予全身檢查與詳細眼科學評估，包括視覺敏度、眼 内壓度量、裂隙燈活組織檢視法及後片段之檢眼鏡間接檢 法，接著是基底照相術，在治療服用法之前及之後進行。 86869 -173 - 1354561 對病患診查與Behcet氏疾病有關聯之經記載病徵上之改善， 例如眼睛發炎上之減少，與口部潰瘍數目或嚴重性上之降 低。 實例33:在後瘡之動物模式中之TNFa抑制剗 TNF抗體在老鼠狼瘡模式中之研究 選擇MRL/lpr老鼠模式，以研究狼瘡（Reilly與Gilkeson (2002) /wwnmo/ogz.ciiej'eizrc/z. 25 (2) : 143-153 ; Mishra 等人（2003)^/6¾/«vesi. Ill (4) : 539-552)。MRL/lpr老鼠顯示加速自身免疫徵候簇之展 開，其中多株B細胞活化作用與血内丙型球蛋白過多係在約 8週大時開始。於MRL/lpr老鼠中，在12-16週大時，有一陣列 自體抗原之血清學証據，包括抗雙股DNA(抗-dsDNA)自體抗 原與補體過少病。MRL/lpr老鼠在16-24週大時，顯示關節炎 、巨大淋巴腺病、脾腫大、脈管炎及絲球體性腎炎（GN)之臨 床跡象。大約50%之MRL/lpr老鼠在24週大時死亡，主要是由 於腎衰竭所致。 將八週大之雌性MRIVlpr老鼠使用於此項研究中。在第十四 週時，對MRL/lpr老鼠以腹膜腔内方式（i.p.)注射無論是不同濃 度之安慰劑，或使大白鼠恢復，並投予無論是安慰劑或已 知會結合並中和老鼠TNFa之單株抗-TNFa抗體例如抗體TN3 (TN3-19.12)之劑量（參閱 Marzi 等人（1995)劭〇以3 : 27 ; Williams 等 人（1992) i/iSA 89 : 9784 ; BD Bioscience Pharmingen) 。每週使實驗組每日接受TNF抗體或安慰劑之皮下注射。 患有狼瘡之一些病人會發展狼瘡腎炎，其係被定義為腎臟 中之持續發炎（刺激與腫脹）。此等病患最後可能會發展腎 86869 -174- 1354561 衰竭，且需要滲析或腎臟移植。為診查腎病之進展，故在 注射D2E7後，將MRL/lpr老鼠放置於代謝籠子中，以進行24 小時之尿液收集。尿清蛋白排泄係在以D2E7治療之前與後 ，藉由ELISA，使用已知濃度之老鼠清蛋白之標準曲線測定 (Cappel 研究產物，Durham, North Carolina, USA，如在 Weinberg 等人 (1994)J 179 : 651中所述者）。於蛋白尿之早期疾病表 象與進展上之改善，係在治療後，藉由平均清蛋白排泄上 之降低而被証實。 在第19週時，於異弗喃（isofluran)麻醉後，藉由頸部脫位， 使老鼠犧牲，並移除腎臟。將一顆腎臟以緩衝福馬林固定 ，包埋於石蠟中，切片，並以H&E染色。診查腎病理學疾病 ，並藉由標準方法，將血管球發炎、增生、新新月體形成 及壞死分級。亦記下组織間隙變化與脈管炎。對各特徵指 定0至3之評分，然後加在一起，以產生最後腎評分，如由 Watson等人（1992)/办尸似乂 176 : 1645-1656所述者。在加總之前 ，將關於壞死與新月體形成之評分加倍。例如，血管球發 炎係按下述分級：〇,正常；1,少數炎性細胞；2,溫和發炎； 及3,嚴重發炎。當與經安慰劑處理之老鼠比較時，改善係藉 由得自D2E7治療老鼠之腎臟切片中發炎或細胞增生之最少 跡象（較低腎病理學指數）証實。 亦度量脾臟重量，以測定老鼠中狼瘡活性進展之延遲或預 防。脾臟大小係為狼瘡活性之指標，其係反映出所從屬之 免疫病理學疾病。MRL/lpr老鼠會隨著疾病進展，發展巨大 脾腫與淋巴腺病。為測定脾臟大小，在19週大時，使得自 86869 -175- 1354561 各組（治療與安慰劑）之老鼠動物犧牲，並測定平均脾臟重 量。較低平均脾臟重量係顯示狼瘡之改善。 實例34 :對狼瘡之TNFa抑制劊治療 在具有狼瘡之人類病患中研究檢驗D2E7 患有經診斷狼瘡之病人係基於此研究作選擇。病，串係基於 一般與狼瘡有關聯病徵之呈現作選擇，包括發熱、疲勞、 一般之不舒服、不舒適或生病感覺（不舒服）、體重減輕、 皮疹、”蝶狀”疹、陽光惡化之皮疹、對陽光敏感、關節疼 痛與腫脹、關節炎、腫脹腺、肌肉痠痛 '惡心與嘔吐、胸 膜炎胸痛、發作及精神病。其他病徵包括血液在尿液中、 咳血、流鼻血、呑服困難、皮膚顏色不調和、皮膚上之發 紅斑點、於壓力下或在冷時手指顏色改變（雷諾氏現象）、 麻木與刺痛、口部潰爛、毛髮掉落、腹痛及視覺障礙。給 予病患身體檢查’以測定其是否顯示任何表示狼瘡之特徵 陡病倣。狼瘡之診斷係以疾病之十—種典型特徵中至少四 種之存在為基準。 、!疋此等疾病表象存在之試驗可以改變，但係包括下列之 部份.抗核抗體（ANA)名單，包括抗_DNA與抗-Smith抗體 其中後述兩種在單獨之狼瘡中通常測試呈陽性；特徵性 皮疹或損傷；胸部X-光顯示胸膜炎或心包炎；以聽診器傾 聽胸部，發現心臟摩擦或胸膜摩擦；尿分析，在尿液中顯 不血液、脫落物或蛋白質；全血球計數，顯示一些細胞類 之減V , %臟活體組織檢法；及神經病診察。此疾病亦 可改變下列試驗之結果：WBC：計數；血清球蛋白質電泳； 86869 •176· 1354561 類風濕因子；蛋白質，尿液；蛋白質電泳-血清；單核球增 多症點滴試驗；紅血球沉降速率（ESR);冷球蛋白；直接Coomb 氏測試；互補成份3 (C3);互補物；抗甲狀腺微粒體抗體； 抗甲狀腺球蛋白抗體；抗粒線體抗體；及抗平滑肌抗體。 將病患隨機地分成實驗與安慰劑組，並投予無論是D2E7或 安慰劑。於研究中係使用劑量範圍，以測定何種劑量對於 治療狼瘡最有效。劑量應在40毫克下開始，其係為已發現 在病患中治療風濕性關節炎最有效之D2E7劑量。給予病患 無論是D2E7或安慰劑之4至7次灌注。每隔一週將病患再作 診查，以測定狼瘡病徵是否減少或被治療，其係藉由ESR與 C-反應性蛋白質（CRP)含量上之降低而測定。 實例35: TNFa抑制劑用於Sjogren氏徵候簇 在具有Sjogren氏徵候簇之人類病患中研究檢驗D2E7 選擇符合歐洲與美國風濕病學院關於初期Sjogren氏疾病分 類之病患，以供研究（參閱Vitali等人（1993)yir//znto 及/zewm 36: 340-7 ;Fox 等人29 : 577-85)。病患為至少 18 歲。 在登記時，所有病患均具有活性初期Sjogren氏疾病，其係被 定義為在篩檢時至少有高紅血球沉降速率（ESR ; >25 /毫米/ 小時）或血内丙型球蛋白過多（>1.4克/升）存在。在研究期間 ，不允許改變疾病用之抗風濕藥物（DMARD)與皮質類固醇， 且在基線之前，停止至少4週。排除標準包括前3個月之嚴 重感染、潛伏結核病、經記載之人類免疫不全病毒或C型肝 炎病毒感染、威脅生命之脈管炎、已知惡性病症、共存之 嚴重或未經控制疾病及任何其他結缔組織疾病之存在。 86869 -177- 1354561 此研究包括在第Ο、2及6週時投予3次咖7灌注（於约奶毫 克之劑量下），及在第10與14週時之2次追縱探訪。允許病 患持續人工淚液，其條件是在整個研究中，劑量與時間表 是安定的。 在基線及在第2、4、6、1()及14週時，進行臨床、眼科學 及生物學評估。臨床評估係由相同醫師進行。並包括一般 身體檢查，口乾評估（使用〇.2之等級，其中〇=無乾燥 溫和至中等乾燥，及2 =嚴重乾燥 取里祀踝）及5吾吕能力測試（在2分 鐘期間内’字詞”puttica”可被重複之次數，此為一種由 在1997年1月’於倫敦關於Sj〇胸氏徵候誤之基礎 科學、參斷及治療之考斤 療《新進展《會議中所提出之技術）。此外 據已建』疋方法，使用吐延技術收集未經刺激之全部 歷經5分鐘，並將試樣於分析天平上稱重，以測定所 獲…液體積(1克=i毫升)to(1993) 一 徵進行㈣評估（以〇_2之等級記分，其中〇=無病 皿至中寺祸徵’其係藉由人工淚液(AT)舒解，及2 = 嚴重病徵，其未諸舒解），並敎AT之使用頻率。 答:疲勞評估_°毫米視覺類比標度(VAS))，並回 2 ^ D —播疲勞，1 =不會干擾每日活動之溫和疲勞， 2 =會干擾每日活動之中筈竑激 ^ 赞 。臨庄、 疲；，及3 =嚴重降低活動之疲勞） =⑽可包括觸痛關節計數(最大64)、觸痛點計數（ 體呼估^患《疼痛評估_毫米寫）。病患與醫師之總 Μ估係使用0-100毫米VAS施行。 斤有眼科學坪估均由相同醫師進行，且包括勞光素淚膜破 86869 •178- 1354561 裂時間（TBUT)試驗，Schirmer I試驗，及藉由利斯胺綠色染色 所進行之角膜評估（0-9之van Bijsterveld評分）。生物學參數係 在整個研究中度量，且包括ESR、C-反應性蛋白質含量（CRP) 、全血球計數、腎與肝功能試驗、產生磷酸激酶含量，IgA 、IgM、IgG、抗核抗體（ANA)及類風濕因子（RF，與淋巴細 胞分型（CD4=與CD8=細胞之數目）之血清含量。與Sjogren氏徵 候簇病徵有關聯病徵之減少，包括觸痛點與末梢關節疼痛 上之減少。 實例36: TNFa抑制劑用於幼年風濕性關節炎 在患有幼年風濕性關節炎之兒童中研究檢驗D2E7 選擇患有經診斷為幼年風濕性關節炎（JRA)之病人，以供 研究。病患係接受D2E7達16週，然後隨機地分成實驗與安 慰劑組。接著，對病患投予無論是D2E7或安慰劑。病患係 每隔一週投予約20毫克/平方米/BSA (身體表面積）至最大 40毫克間之劑量範圍。在每隔一週時，給予病患無論是D2E7 或安慰劑之皮下注射，歷經治療期間。每隔一週對病患作 再診查，以測定JRA病徵是否減少或被治療。JRA之改善係 藉由疾病臨床徵候之減少而測得。JRA之改善係使用由 Giannini所定義之標準測得（Giannini等人（1997)々认沉5(5： tom 40 : 1202)。使用此標準，改善之定義係為在核心 組合之任6個變數之3個中，距基線至少30%改善，且其餘 變數中沒有超過1個惡化達>30%。在核心組合中之變數，包 括疾病活性之醫師總體評估、整體人類之母體/病患評估（ 各於10公分視覺類比標度上評分）、功能性能力、具有活性
86869 -179- 1354561 關節炎之關節數目、具有受限運動範圍之關節數目及紅血 球沉降速率。 實例37 : D2E7 F(abV^_片段之結晶化作用 D2E7F(ab)'2片段之產生與純化 D2E7 F(ab)’2片段係根據下述程序產生並純化。使二毫升 D2E7IgG(大約63毫克/毫升）對著1升缓衝劑A(20mMNaOAc ，pH 4)滲析過夜。於滲析後，將蛋白質稀釋至20毫克/毫 升之濃度。將已固定化之胃蛋白酶（Pierce ; 6.7毫升漿液）與27 毫升緩衝劑A混合，並離心（Beckman地板離心機，5000 rpm， 10分鐘）。移除上層清液，並將此洗滌程序再重複兩次。使 已洗滌之經固定化胃蛋白酶再懸浮於13.3毫升緩衝劑A中。 將D2E7 (7.275毫升，20毫克/毫升，145.5毫克）與7·725毫升緩 衝劑Α及7.5毫升已洗滌之經固定化胃蛋白酶漿液混合。使 D2E7 /胃蛋白酶混合物於37°C下培養4.5小時，並振盪（300 rpm) 。然後，藉由離心分離，將經固定化之胃蛋白酶分離。上 層清液藉由SDS-PAGE之分析，顯示D2E7之消化基本上完成 (〜115 kDa帶未減少，〜30與〜32 kDa帶減少）。 使用蛋白質A層析，將D2E7 F(ab)'2片段與完整D2E7及Fc片 段分離。將一半上述反應上層清液（10毫升）以10毫升緩衝劑B (20 mM磷酸Na, pH 7)稀釋，經過0.45微米Acrodisk濾器過滤，並 裝填於5毫升蛋白質A瓊脂糖管柱（Pharmacia Hi-Trap ;先前以50 毫升緩衝劑B洗滌）上。收集溶離份。於裝填蛋白質混合物 後，將管柱以緩衝劑B洗滌，直到280毫微米下之吸收再建 立於基線上為止。將結合蛋白質以5毫升緩衝劑C (100 mM檸 86869 -180- 1354561 檬酸，pH 3)溶離；藉由添加0.2毫升2 M Tris · HCl，pH 8.9使此等 溶離份中和。藉由SDS-PAGE分析溶離份；匯集含有D2E7 F(ab)'2 片段者（〜42毫升）。蛋白質濃度係在6M胍·HCl，pH7中，藉由 280毫微米下之吸收測得（計算消光係數：D2E7, 1.39 (AU-毫升） /毫克；F(aby2, 1.36 (AU-毫升）/毫克）。流經之匯集物含有〜38.2 毫克蛋白質（濃度〇·91毫克/毫升），其表示79%產率之F(ab)'2( 理論產率為起始物質之〜2/3，除以二[只有一半經純化]，意 即〜48.5毫克）。 使D2E7 F(ab)'2片段藉由尺寸排阻層析進一步純化。使匯集 之蛋白質A流經物，從〜42毫升濃縮至〜20毫升，然後使一部 份（5毫升，〜7.5毫克）於先前已使用緩衝劑D (20 mM HEPES, pH 7, 150 mM NaCl，0.1 mM EDTA)達成平衡（及溶離）之 Superdex 200 管柱 上層析（26/60，Pharmacia)。藉由280毫微米下之吸收，記下兩 個吸收峰：吸收峰1，於172-200毫升下溶離，包含F(ab)’2(藉 SDS-PAGE分析；〜115kDa帶未減少，〜30與〜32 kDa帶減少）；吸 收峰2，於236-248毫升下溶離，包含低分子量片段（〜15kDa， 減少或未減少）。使吸收峰1濃縮至5.3毫克/毫升，以供結 晶化試驗。 D2E7F(ab)、片段之結晶化作用 使用坐滴蒸氣擴散方法，經由將等體積之F(ab)'2與結晶化 作用緩衝劑（各約1微升）混合，並使混合物在4或18°C下，對 結晶化作用緩衝劑達成平衡，而使D2E7 F(ab)'2片段（5.3毫克/ 毫升，在20mMHEPES,pH7，150mMNaα，0·lmMEDTA中）結晶。 所使用之結晶化作用緩衝劑包括Hampton研究結晶篩檢I (溶
86869 • 181 - 1354561 液 1-48)與 II (溶液 1-48)、Emerald Biostructures Wizard 篩檢 I 與 II (各 溶液1-48)及Jena Bioscience篩檢1-10 (各溶液1-24)。結晶係於許 多不同條件下獲得，如表1中所摘述者。 表1.關於D2E7 F(ab)'2片段之結晶化條件摘述 篩檢 溶液 溫度 °C 條件 結果 Hampton 1 32 4 2.0M(NH4)2 S04 微小針狀物群集體 Hampton 1 46 4 0.2MCa(Oac)2,0.1 M 二甲次胂酸Na， pH 6.5, 18% PEG 8K 中等大小針狀物 群集體 Hampton 1 48 4 0.1 MTris HC1, pH 8.5, 2.0MNH4H2PO4 微針狀物群集體 Hampton 2 2 4 0.01 M十六基三甲 基溴化銨，0.5 Μ NaCl, 0.01 M MgCl2 小碎片結晶 Hampton 2 13 4 0.2M(NH4)2 S04, 0.1 MNaOAc, pH 4.6, 30% PEG MME 2000 小針狀物群集體 Hampton 2 15 4 0.5M(NH4)2 S04, 0.1 MNaOAc, pH 5.6, 1.0MLi2 S04 大針狀物群集體 Hampton 2 16 4 0.5 MNaCl,0.1 M NaOAc，pH5.6,4% 次 乙亞胺聚合體 大不規則結晶 Hampton 1 34 18 0.1 NaOAc, pH 4.6, 2.0M曱酸Na 針狀物群集體 Hampton 1 35 18 0.1 M Hepes, pH 7.5, 0.8 M磷酸二氫單 鈉，0.8 M磷酸二氫 單却 針狀物群集體 Hampton 2 9 18 0.1Μ NaOAc, pH4.6, 2.0M NaCl 稠密針狀物群集體 86869 -182- 1354561 篩檢 溶液 溫度 °C 條件 結果 Hampton 2 12 18 0.1MCdCl2,0_lM NaOAc, pH4.6, 30% PEG 400 針狀物&非晶質 結晶 Hampton 2 15 18 0.5M(NH4)2S〇4, O.lMNaOAc, pH5.6, 1.0MLi2SO4 微小針狀物群集體 Wizard I 27 4 1.2M NaH2PO4,0.8M K2HPO4,0.1MCAPS, pH10.5,0.2M Li2S04 中等大針狀物群 集體 Wizard I 30 4 1.26M(NH4)2 S04j O.lMNaOAc, pH4.5, 0.2M NaCl 小針狀物群集體 Wizard II 8 4 10% PEG 8K, 0.1M 磷酸 Na/K, pH6.2， 0.2M NaCl 以群集體生長之 大板塊結晶 Wizard II 43 4 10% PEK 8K, O.lMTris, pH7.0, 0.2M MgCl2 微針狀物群集體 Wizard I 4 18 35%MPD，0.1M 咪唑 ，pH8.0, 0.2M MgCl2 棒狀結晶 Wizard I 27 18 1.2M NaH2P04,0.8M K2HPO4,0.1MCAPS, pH10.5,0.2M Li2S04 針狀物群集體 Wizard II 7 18 30% PEG 3K, 0.1M Tris, pH8.5, 0.2M naCl 微小針狀物群集體 Wizard II 11 18 10%2-丙醇，0.11\4二 曱次胂酸鹽，pH6.5, 0,2M Zn(Oac)2 微小六角形或 K面體結晶 Wizard II 46 18 1.0MAP，0.1M咪唑， pH8.0,0.2M NaCl 1種不規則結晶
86869 -183- 1354561 篩檢 溶液 溫度 °C 條件 結果 JB 1 D6 4 30% PEG3K, 0.1M Tris HC1, pH8.5, 0.2M Li2 S04 微小針狀物在沉 澱物中 JB 2 B6 4 20% PEG 4K, 0.1M Tris HC1, pH8.5, 0.2M 二甲次肿酸Na 微小針狀物群集 體球 JB 3 A1 4 8% PEG 4K, 0.8M LiCl, O.lMTris HC1, pH8.5 大霜狀結晶 JB3 B1 4 15% PEG 4K,0.2M (NH4)2 so4 微小針狀物群集體 JB3 D5 4 30% PEG4K，0.1M 擰 檬酸 Na，pH5.6,0.2M NH4OAc 微小針狀物在沉 澱物中 JB4 B1 4 15% PEG 6K, 0.05M KC1, 0.01MMgCl2 針狀物群集體球 JB3 A6 18 12% PEG 4K,0.1M NaOAc, pH4.6, 0.2M NH4OAc 針狀物群集體 JB 3 B1 18 15% PEG 4K,0.2M (NH4)2S04 針狀物群集體在 沉澱物中 JB3 C6 18 25% PEG4K，0.1M 擰 檬酸 Na，pH5.6,0.2M NH4 OAc 長薄針狀物 JB4 C5 18 8% PEG 8K, 0.2M LiCl, 0.05M MgS04 霜狀結晶 JB5 A3 4 15% PEG 8K,0.2M (NH4)2S04 長單獨針狀物， 呈相分離 JB5 A4 4 15% PEG 8K, 0.5MLi2SO4 微小針狀物群集 體
86869 -184- 1354561 篩檢 溶液 溫度 °C 條件 結果 - — JB5 A5 4 15% PEG 8K, 0.1M Na MES, pH6.5, 0.2M Ca(OAc)2 針狀物群集體球 JB6 B2 4 1.6M(NH4)2 S04, 0.5 LiCl 微小針狀物群集 體球 JB6 C2 4 2.0M(NH4)2 S04, 0.1M NaOAc, pH4.6 微針狀物群集體 JB 10 D3 18 2.0M 甲酸 Na，0.1M NaOAc, pH4.6 針狀物群集體 下列條件（如在表1中所述者）會產生可用於繞射品質結晶 之結晶：Wizard II，11，18, 10% 2-丙醇，0.1M二曱次胂酸鹽， pH 6.5, 0.2M Zn(Oac)2，微小六角形或六面體結晶；Wizard II, 10% PEG 8K, 0.1M磷酸Na/K，pH 6.2, 0.2M NaCl，在群集體中生長之大板 塊結晶；JB3,C6, 18,25%PEG4K，0.1M檸檬酸Na，pH5.6,0.2M醋 酸铵，長而薄針狀物；Hampton 2, 15, 18, 0.5M AS, 0.1M醋酸Na三 水合物，pH 5.6,1.0M硫酸Li單水合物，微小針狀物群集體。
實例38 : D2E7 Fab片段之結晶化作用 D2E7 Fab片段之產生與純化 D2E7 Fab片段係根據下述程序產生並純化。將四毫升 D2E7 IgG (經稀釋至約20毫克/毫升）以4毫升緩衝劑E (20 mM 麟酸Na, 5 mM半胱胺酸· HC1，10 mM EDTA，pH7)稀釋，並與6.5 毫升經固定化木瓜蛋白酶之漿液（Pierce，1 % ;先前以26毫升 缓衝劑E洗滌兩次）混合。使D2E7 /木瓜蛋白酶混合物於37*t 下培養過夜，並振盪（300 rpm)。藉由離心分離，將固定化之 木瓜蛋白酶與沉澱蛋白質分離；上層清液藉由SDS-PAGE之 86869 -185- 1354561 分析，顯示D2E7之消化部份完成（〜55、50、34及30 kDa帶未 減少，其中一部份為完整的，而部份消化之D2E7在〜115與 〜150 kDa ;〜30與~32 kDa帶減少，以及〜50 kDa帶）。雖然如此 ，仍停止消化，並使其接受純化。 使D2E7 Fab片段基本上如上文關於F(ab)'2片段所述，藉由蛋 白質A層析與Superdex 200尺寸排阻層析純化。蛋白質A管柱 流經匯集物（21毫升）含有〜9.2毫克（0.44毫克/毫升），而蛋白 質A溶離物（4毫升）含有〜19.5毫克（4.9毫克/毫升）。藉由SDS-PAGE之分析顯示流經物基本上為純Fab片段（〜48與〜30 kDa未 減少，在〜30 kDa之寬帶減少），然而溶離物係保持原狀，與 部份消化之D2E7。使Fab片段於Superdex 200管柱上進一步純 化，在216-232毫升下溶離，意即正如預期，在F(ab)’2片段之 後，但在小Fc片段之前。使D2E7 Fab片段濃縮至12.7毫克/ 毫升，以供如下文所述之結晶化試驗用。 D2E7 Fab片段之結晶化作用 基本上如上文關於F(ab)’2片段所述，使用坐滴蒸氣擴散方 法，使 D2E7 Fab 片段（12·7 毫克 / 毫升，在 20mM HEPES, pH7, 150 mM NaCl, 0.1 mM EDTA中）結晶。結晶係於許多不同條件下獲 得，如表2中所摘述者。 86869 -186- 1354561 表2.關於D2E7 Fab片段之結晶化條件之摘述 篩檢 溶液 溫度 °C 條件 結果 Hampton 1 4 4 O.lMTris, pH8.5,2M (NH4)2S04 纖細針狀物 Hampton 1 10 4 0.2MNH4OAc, 0.1M NaOAc, pH4.6, 30% PEG 4K 纖細針狀物群集體 Hampton 1 18 4 0.2M Mg(OAc)2,0.1M 二甲次胂酸Na， pH6.5, 20% PEG 8K 針狀物群集體 Hampton 1 20 4 0.2M(NH4)2S〇4,0.1 MNaOAc, pH4.6, 25% PEG 4K 微小針狀物群集體 Hampton 1 32 4 2M (NH4)2S04 長纖細針狀物 Hampton 1 33 4 4M甲酸Na 微小針狀物群集體 Hampton 1 38 4 O.lMHepes, pH7.5 微小針狀物群集體 Hampton 1 43 4 30% PEG 1500 微小針狀物群集體 Hampton 1 46 4 0.2M Ca(OAc)2,0.1M 二曱次胂酸Na， pH6.5, 18% PEG 8K 大板塊群集體 Hampton 1 47 4 O.lMNaOAc, pH4.6, 2M(NH4)2S04 長纖細針狀物 Hampton 2 1 4 2M NaCl, 10% PEG 6K 小板塊群集體 Hampton 2 2 4 0.01M十六基三甲 基溴化銨，0.5M NaCl, 0.01 MgCl2 圓形&不規則板塊 Hampton 2 5 4 2M(NH4)2S04,5% 異丙醇 長纖維繩索 Hampton 2 13 4 0.2M(NH4)2 S04, O.lMNaOAc, pH4.6, 25% PEG MME 2K 微小纖細針狀物群 集體
86869 -187- 1354561 篩檢 溶液 溫度 °C 條件 結果 Hampton 2 14 4 0.2M酒石酸K/Na, 0.1M擰檬酸Na, pH5.6, 2M(NH4)2S04 微小針狀物群集體 Hampton 2 27 4 0.01M Z11SO4, 0.1 MES, pH6.5, 25% PEG MME 550 微小針狀物群集體 Hampton 2 28 4 30% MPD 微小針狀物群集體 Hampton 1 4 18 O.lMTris, pH8.5,2M (nh4)2so4 針狀物群集體 Hampton 1 9 18 0.2MNH4OAc, 0.1M 檸檬酸 Na，pH5.6, 30 % PEG 4K 針狀物群集體 Hampton 1 17 18 0.2M Li2 SO4,0.1M Tris, pH8.5, 30% PEG 4K 長纖細針狀物 Hampton 1 32 18 2M(NH4)2S04 針狀物群集體 Hampton 1 33 18 4M甲酸Na 微小針狀物群集體 Hampton 1 38 18 0.1M Hepes, pH7.5 纖維束 Hampton 1 43 18 30% PEG 1500 微小針狀物群集體 Hampton 1 47 18 O.lMNaOAc, pH4.6, 2M(NH4)2S04 微小針狀物群集體 Hampton 2 1 18 2MNaCl, 10% PEG 6K 長纖細針狀物群集 體 Hampton 2 5 18 2M(NH4)2S04,5% 2-丙醇 微小針狀物群集體 Hampton 2 9 18 O.lMNaOAc, pH4.6, 2M NaCl 長纖細針狀物 Hampton 2 13 18 0.2M(NH4)2SO45 O.lMNaOAc, pH4.6, 25% PEG MME 2K 微小針狀物群集體 86869 -188- 1354561 篩檢 溶液 溫度 °C 條件 結果 Hampton 2 14 18 0.2M酒石酸K/Na， 0.1M檸檬酸Na， pH5.6, 2M(NH4)2 S04 長纖細針狀物 Hampton 2 27 18 0.01M ZnS04, 0.1 MES,pH6.5, 25% PEG MME550 微小針狀物群集體 Wizard I 20 4 0.4M NaH2P04/1.6M K2HPO4,0.1M咪唑， pH8, 0.2M NaCl 微小針狀物群集體 Wizard I 28 4 20% PEG 3K, 0.1M Hepes, pH7.5, 0.2M NaCl 大斜方板群集體 Wizard I 31 4 20%PEG8K,0_1M 磷 酸鹽檸檬酸鹽， pH4.2, 0.2MNaCl 纖細針狀物群集體 Wizard I 39 4 20% PEG 1K，0.1M 磷 酸鹽檸檬酸鹽， pH4.2, 0.2M Li2 S04 針狀物群集體 Wizard II 3 4 20% PEG 8K, 0.1M Tris, pH8.5, 0.2M MgCl2 大六角形或斜方板 群集體，呈相分離 Wizard II 4 4 2M(NH4)2SO4,0.1M 二甲次胂酸鹽， pH6.5, 0.2 NaCl 微小針狀物群集體 Wizard II 9 4 2M (NH4)2SO4,0.1M 磷酸鹽檸檬酸鹽， pH4.2 微小纖細針狀物群 集體 - Wizard II 28 4 20% PEG 8K, 0.1M MES, pH6, 0.2M Ca(Oac)2 微小針狀物群集體 ;大纖細針狀物群 集體 86869 -189- 1354561 篩檢 溶液 溫度 °C 條件 結果 Wizard II 35 4 0.8M NaH2P04/1.2M K2HPO4,0.1MNaOAc ,pH4.5 微小纖維束 Wizard II 38 4 2.5MNaCl，0_lM NaOAc, pH4.5, 0.2M Li2 S04 長纖細針狀物 Wizard II 47 4 2.5MNaCl,0.1M 咪唑 ，pH8, 0.2M Zn(Oac)2 微小針狀物群集體 Wizard I 6 18 20%PEG3K,0.1M 擰 檬酸鹽，pH5.5 針狀物群集體 Wizard I 20 18 0.4M NaH2P04/1.6M K2HPO4,0.1M咪唑， pH8,0.2M NaCl 微小針狀物群集體 Wizard I 27 18 1.2M NaH2PO4/0.8M K2HPO4,0.1MCAPS, pHIO, 0.2M Li2S04 纖細針狀物群集體 Wizard I 30 18 1.26M(NH4)2S〇4, 0.1M NaOAc, pH4.5, 0.2M NaCl 纖細針狀物 Wizard I 31 18 20%PEG8K,0.1M 磷 酸鹽檸檬酸鹽， pH4.2, 0.2MNaCl 微小針狀物群集體 Wizard I 33 18 2M(NH4)2 S04j 0.1MCAPS,pH10.5, 0.2M Li2 S04 纖維束 Wizard I 39 18 20%PEG1K,0.1M 磷 酸鹽檸檬酸鹽， ρΗ4.2, 0.2Μ Li2S04 針狀物群集體 Wizard II 4 18 2Μ(ΝΗ4)2 S〇4,〇.1M 二曱次肺酸鹽， ρΗ6·5, 0.2 NaCl 針狀物群集體 86869 -190- 1354561 篩檢 溶液 溫度 °C 條件 結果 Wizard II 9 18 2M(NH4)2SO4,0.1M 磷酸鹽檸檬酸鹽， PH4.2 纖細針狀物 Wizard II 35 18 0.8M NaH2P04/1.2M K2HPO4,0.1MNaOAc ,pH4.5 微小針狀物群集體 Wizard II 38 18 2.5M MgCl, 0.1M NaOAc, ρΗ4.5, 0.2M Li2 S04 微小針狀物群集體 下列條件（如在表2中所述者）會產生可用於繞射品質結晶 之結晶：Hampton 2, 1，4C，2M NaCl, 10% PEG 6K,小板塊群集體；
Hamptonl，46, 4C, 0.2M 醋酸 Ca，0.1M 二甲次肺酸 Na, pH6.5, 18% PEG 8K，大板塊群集體；Wizard I, 28, 4C，20% PEG 3K, 0.1M Hepes, pH 7.5, 0.2M NaCl，大斜方板群集體；Wizard II, 3,4C, 20% PEG 8K, 0.1M Tris,pH8.5,0.2MMgCl2,大六面體或斜方板群集體，呈相分離。 等效事物 熟諳此藝者將明瞭或能夠使用不超出例行實驗術，即可確 定本文中所述之本發明特殊具體實施例之許多等效事物。 此種等效事物係意欲被下述申請專利範圍所涵蓋。 86869 -191 - 1354561 序列表 <11〇> 美商亞培公司 <120〉結合人類TNFa之人類抗體
<130> BPI-187AR <140> 092119891 < 14 1 > 2003-07-18 <150> 60/397,275 <151> 2002-07-19 <150〉 60/411,081 <151> 2002-09-16 <150> 60/417,490 <151> 2002-10-10 <150> 60/455,777 <151> 2003-03-18 <160> 37
< 17 0> 供 Windows 4.0 版用之 FastSEQ <210> 1 <211> 107 <212〉 PRT <213〉人工順序 <220> <223>突變人類抗體 <400> 1
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 2 <211〉 121 <212> PRT <213>人工順序 1354561 <220> <223>突變人類抗體 <400> 2 Glu Val Gin Leu Val Glu 1 5 Ser Leu Arg Leu Ser Cys 20 Ala Met His Trp Val Arg 35 Ser Ala lie Thr Trp Asn 50 Glu Gly Arg Phe Thr lie 65 70 Leu Gin Met Asn Ser Leu 85 Ala Lys Val Ser Tyr Leu 100 Gin Gly Thr Leu Val Thr 115
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg 10 15
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 25 30
Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 40 45
Ser Gly His lie Asp Tyr Ala Asp Ser Val 55 60
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 75 80
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 90 95
Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly 105 110
Val Ser Ser 120 > > > > 0 12 3 I—< 1 i—I Ti 2 2 2 2 3 3 PRT 人工順序 <220> <221>變種 <222> 9 <223> Xaa = Thr 或 Ala <223>突變人類抗體 <400> 3 Gin Arg Tyr Asn Arg Ala 1 5
Pro Tyr Xaa <210> 4 <211> 12 <212> PRT <213〉人工順序 <220> <221>變種 <222> 12 <223〉Xaa = Tyr 或 Asn <223>突變人類抗體 <400> 4 Val Ser Tyr Leu Ser Thr 1 5
Ala Ser Ser Leu Asp Xaa 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213>人工順序 1354561 <220> <223>突變人類抗體 <400> 5 Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser 1 5 <210〉 6 <211> 17 <212> PRT <213>人工順序 <220> <223>突變人類抗體 <400> 6 Ala lie Thr Trp Asn Ser Gly 1 5 Gly
His lie Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu 10 15 0 12 3 IX Ti f—< 2 2 2 2 < < < < 11 PRT 人工順序 <220〉 <223>突變人類抗體 <400> 7 Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg 1 5
Asn Tyr Leu Ala 10 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213>人工順序 <220> <223>突變人類抗體 <400> 8 Asp Tyr Ala Met His 1 5 <210> 9 <211> 107 <212> PRT <213>人工順序 <220> * <223>突變人類抗體 <400> 9 Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser lie Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Tyr 86869 -3- 20 1354561
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 35 40
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser 50 55
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys 85
Ala Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val 100 25 30
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 45
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60
Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 75 80
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr 90 95
Glu lie Lys 105 <210> 10 <211> 121 <212> PRT <213>人工順序 <220> . <223>突變人類抗體 <400> 10
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly 1 5
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala 20
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala 35 40
Ser Ala lie Thr Trp Asn Ser Gly 50 55
Glu Gly Arg Phe Ala Val Ser Arg 65 70
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Pro 85
Thr Lys Ala Ser Tyr Leu Ser Thr 100
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 115 120
Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg 10 15
Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 25 30
Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 45
His lie Asp Tyr Ala Asp Ser Val 60
Asp Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr 75 80
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 90 95
Ser Ser Ser Leu Asp Asn Trp Gly 105 110
Ser %
<210> 11 <211> 9 <212> PRT <213〉人工順序 <220> <223>‘突變人類抗體 <400> 11
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Ala 1 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213〉人工順序 <220> <223〉突變人類抗體 1354561 <400> 12
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213〉人工順序 <220> <223>突變人類抗體 <400> 13
Gin Lys Tyr Gin Arg Ala Pro Tyr Thr 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213〉人工順序 <220> <223>突變人類抗體 <400> 14
Gin Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213〉人工順序 <220> . <223>突變人類抗體 <400> 15
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213〉人工順序 <220> <223>突變人類抗體 <400> 16
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr 1 5
<210> 17 <211> 9 <212> PRT
5- 〇<〇<〇 1354561 <213〉人工順序 <220> <223>突變人類抗體 <400> 17
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Tyr 1 5 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213>人工順序 <220> <223>突變人類抗體 <400> 18
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Asn 1 5 <210> 19 <211> 9 <212> PRT <213〉人工順序 <220> <223>突變人類抗體 <400> 19
Gin Lys Tyr Thr Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213>人工順序 <220> <223>突變人類抗體 <400> 20
Gin Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Asn 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213〉人工順序 <220> <223〉突變人類抗體 <400> 21
Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Ala Tyr Ser 1 5 86869 1354561 <210> <211> 22 9 <212> <213> PRT 人工順序 <220> <223> 突變人類抗體 <400> 22
Gin Gin Tyr Asn Ser Ala Pro Asp Thr 1 5 <210> <211> <212> <213> 23 9 PRT 人工順序 <220> <223> 突變人類抗體 <400> 23
Gin Lys Tyr Asn Ser Asp Pro Tyr Thr 1 5 <210> <211> 24 9 <212> <213> PRT 人工順序 <220> <223> 突變人類抗體 <400> 24
Gin Lys Tyr lie Ser Ala Pro Tyr Thr 1 5 <210> <211> <212> <213> 25 9 PRT 人工順序 ， <220> <223> 突變人類抗體 <400> 25
Gin Lys Tyr Asn Arg Pro Pro Tyr Thr 1 5 <210> <211> 26 9 <212> <213> PRT 人工順序 <220> <223> 突變人類抗體 1354561 <400> 26
Gin Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala 1 5 <210> <211> <212> <213> 27 12 PRT 人工順序 <220> <223> 突變人類抗體 <400> 27
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asn 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 28 12 PRT 人工順序 <220> <223> 突變人類抗體 <400> 28
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Lys 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 29 12 PRT 人工順序 <220> <223> 突變人類抗體 <400> 29
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 30 12 PRT 人工順序 <220> <223> 突變人類抗體 <400> 30
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asp 1 5 10 <210> <211> 31 12 —3— 1354561 <212> PRT <213〉人工順序 <220> <223〉突變人類抗體 <400> 31
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Phe Ser Leu Asp Tyr 15 10 <210> 32 <211> 12 <212> PRT <213〉人工順序 <220> <223>突變人類抗體 <400> 32
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu His Tyr 15 10 <210> 33 <211> 12 <212> PRT <213> 人工順序 <220> <223> 突變人類抗體 <400> 33 Ala Ser Phe Leu Ser 1 5 <210> 34 <211> 12 <212> PRT <213> 人工順序 <220> <223> 突變人類抗體 <400> 34 10
Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Glu Tyr 15 10 > > > > 0 12 3 r"H r—H r—i rH 2 2 2 2 35 12
PRT 人工順序 <220> <223>突變人類抗體 <400> 35
Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Asn 1 5 10 -~9- 1354561 <210> 36 <211> 321 <212> DNA <213>人工順序 <220> <223〉突變人類抗體 <400> 36 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtagggga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcaagtca gggcatcaga aattacttag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct 180 cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctacagcct 240 gaagatgttg caacttatta ctgtcaaagg tataaccgtg caccgtatac ttttggccag 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 37 <211> 363 <212> DNA <213>人工順序 <220> <223>突變人類抗體 <400〉 37 cctgagactc 60 ccggcaagct 120 catagactat 180 ctccctgtat 240 gaaagtctcg 300 caccgtctcg 360 ccggcaggtc tgcactgggt atagtggtca acgccaagaa attactgtgc gtaccctggt gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc tcctgtgcgg cctctggatt cacctttgat gattatgcca ccagggaagg gcctggaatg ggtctcagct atcacttgga gcggactctg tggagggccg attcaccatc tccagagaca ctgcaaatga acagtctgag agctgaggat acggccgtat taccttagca ccgcgtcctc ccttgactat tggggccaag agt 86869

Claims (1)

  1. 第092119891號專利申請案 中文申請專利範圍替換本(100年8月） 100. β. 1 5 1354561 - 公告本 拾、申請專利範Ιι:~~ 1. 一種在病患中治療TNFa-相關病症之醫藥組合物，該組合 物包含經單離之人類抗-TNFa抗體或其抗原結合部份，其 中該抗體： a) 當藉表面電漿激元共振測定時，以KDff速率常數為 lxl(Th·1或更低解離自人類TNFa ; b) 具有一個輕鏈CDR3功能部位，其包含SEQ ID NO : 3 之胺基酸序列，或自SEQ ID NO : 3於位置1、4、5、7或8， 藉由單一丙胺酸取代，或於位置1、3、4、6、7、8及/或9， 藉由一至五個保守胺基酸取代所修飾；及 c) 具有一個重鏈CDR3功能部位，其包含SEQ ID NO : 4 之胺基酸序列，或自SEQ ID NO : 4於位置2、3、4、5、6、 8、9、10或11，藉由單一丙胺酸取代所修飾及 其中該TNFa-相關病症係選自由幼年風濕性關節炎 (JRA)、牛皮癬及牛皮癬關節炎所組成之群。 2. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該經單離之 人類抗-TNFa抗體或其抗原結合部份，具有一個輕鏈可變 區（LCVR)，其包含SEQ ID NO : 1之胺基酸序列，與一個 重鏈可變區（HCVR)，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列。 3. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該抗體為 D2E7。 4.根據申請專利範圍第1至3項中任·-項之醫藥組合物，其 中該經單離之人類抗-TNFa抗體或其抗原結合部份係與 至少一種其他治療劑一起投藥。 86869-1000815.doc 5. 根棱申請專利範圍第⑴項中任一項之醫藥組合物其 中該牛皮癬為慢性斑點牛皮癖。 6. —種套件，其包含： a) —種醫藥組合物，其包含經單離人類抗_TNFa抗體或 其抗原結合部份，及藥學上可接受之載劑，其中該抗體： i)當藉表面電浆激元共振測定時，以K〇ff速率常數為 lxl(T3s_i或更低解離自人類TNFa ; Π)具有一個輕鏈CDR3功能部位，其包含SEQmN〇: 3 之胺基酸序列，或自SEQ ID NO : 3於位置1 ' 4、5、7或8， 藉由單一丙胺酸取代’或於位置1、3、4、6、7、8及/或9， 藉由一至五個保守胺基酸取代所修飾；及 出）具有一個重鏈CDR3功能部位，其包含SEq ID N〇 : 4之胺基酸序列，或自Seq id NO : 4於位置2、3、4、5、 6、8'9、10或11，藉由單一丙胺酸取代所修飾；與 b) 說明書，關於對患有選自由幼年風濕性關節炎 (JRA)、牛皮癖及牛皮癬關節炎所組成之群之TNFa相關 病症之病患投予該人類抗_TNFa抗體醫藥組合物。 7. 根據申請專利範圍第6項之套件，其中該牛皮癖為慢性斑 點牛皮癖。 8. 根據申請專利範圍第6項之套件，其中該經單離之人類抗 -TNFa抗體或其抗原結合部份，具有—個輕鏈可變區 (LC VR)，其包含SEQ ID NO : 1之胺基酸序列，與一個重 鏈可變區（HCVR) ’其包含SEq ID no : 2之胺基酸序列。 9. 根據申請專利範圍第6項之套件，其中該經單離之人類抗 86869-1000815.doc 1354561 -TNFa抗體為 D2E7。 ίο. -種經單離之人類抗_TNFa抗體或其抗原結合部份於製 備治療TNFa-相關病症之藥物之用途，其中該丁胸相關 病症係選自由幼年風濕性關節炎（JRA)、牛皮癖及牛皮癖 關節炎所組成之群，其中該抗體： i)當藉表面電裳激元共振敎時，以^速率常數為 lxl(T3s_1或更低解離自人類TNFa ; Π)具有一個輕鏈CDR3功能部位，其包含SEQmN〇: 3 之胺基酸序列，或自SEQ ID NO: 3於位置卜4、5、7或8， 藉由單一丙胺酸取代，或於位置1、3、4、6、7、8及/或9, 藉由一至五個保守胺基酸取代所修飾；及 iii)具有一個重鏈CDR3功能部位，其包含SEQIDNO: 4之胺基酸序列’或自Seq ID NO : 4於位置2、3、4、5、 6、8、9、10或11，藉由單一丙胺酸取代所修飾。 11 _根據申請專利範圍第10項之用途，其中該抗體或其抗原 結合部份，具有一個輕鍵可變區（LCVR)，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列，與一個重鏈可變區（HcVR)，其包 含SEQ ID NO : 2之胺基酸序列。 12. 根據申請專利範圍第1〇項之用途，其中該抗體為D2E7 » 13. 根據申請專利範圍第10至12項中任一項之用途，其中該 抗體係與至少一種額外治療TNFa-相關病症之藥劑使 用’其中該TNFa-相關病症係選自由幼年風濕性關節炎 (JRA)、牛皮癬及牛皮癬關節炎所組成之群。 14. 根據申請專利範圍第10至12項中任一項之用途，其中該 牛皮癬為慢性斑點牛皮癬。 86869-1000815.doc -3-
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