CN101200465B - 一种十氢化萘类化合物及其医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种如结构式I的化合物，该化合物可用于制备TNFα、IL-1β或iNOS表达抑制剂以及NF-κB活性抑制剂，可以用作制备治疗或预防自身免疫性疾病、肿瘤或动脉硬化症的药物。结构式I为：

Description

一种十氢化萘类化合物及其医药用途 

技术领域

本发明属于药学领域，提供了一种十氢化萘类化合物及其医药用途，具体地说涉及一种用于抑制TNFα、TL-1β、iNOS或NF-кB的十氢化萘类化合物及其医药用途。 

背景技术

肿瘤坏死因子α(TNFα)是一种主要由单核-吞噬细胞产生的单核因子，具有广泛的生物学活性，如杀灭肿瘤细胞、抑制肿瘤细胞的生长，提高嗜中性粒细胞的噬菌作用等。白细胞介素-1β(IL-1β)，是由单核巨噬细胞和树枝状细胞分泌的细胞因子，具有调节免疫和炎症反应的作用。核因子кB(NF-кB)是一种重要的多功能核转录因子，参与许多基因特别是炎症反应相关基因的表达及调控，而且能够调控由TNFα、IL-1β等细胞因子所介导的炎症反应。诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)由内毒素或细胞因子(如TNFα)诱导产生，可催化一氧化氮的生成，而一氧化氮是一种非常重要的多效性分子。 

TNFα、IL-1β、NF-кB、和iNOS在生理和病理过程中均起着很重要的作用，很多疾病如自身免疫性疾病、肿瘤、动脉硬化症、糖尿病等都与这些细胞因子的表达或活性有关，而且往往是多个细胞因子共同作用的结果(Ogata H，Hibi T.等，Curr Pharm Des.2003；9(14)：1107-13；Taylor PC.等，CurrPharm Des.2003；9(14)：1095-106；Fan C.等，J.Mol.Med 1999，.77，577-592；以及Alcaraz等，Current Pharmaceutical Design，2002：8，215.)。因此，有必要继续开发安全有效的细胞因子抑制剂。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种十氢化萘类化合物及其医药用途，以解决现有技术的缺陷。 

本发明提供了如结构式(I)所示的十氢化萘类化合物，或该化合物药学上 可接受的盐或异构体： 

其中R₁为H、OH、CHO或CH₂NR_aR_b，R₂和R₃分别为H、OH、或NR_aR_b，或者R₂和R₃连接为＝O或＝NR_c；或者R₁为CH₂OH，R₂和R₃分别为H或NR_aR_b，或者R₂和R₃连接为＝O或＝NR_c； 

其中R_a和R_b分别为H、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；或者R_a和R_b连接起来形成环胺；其中R_c为H、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羟基或烷氧基；或者是R₁、R₂和R₃连接成环并与环A一起组成如下面所示的环形结构： 

其中所述的G为： 

其中R_d为H、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、或R_a’CO，其中R_a’为H、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；R_e和R_f分别为烷氧基、芳氧基、杂环烷氧基、杂芳氧基、烷硫基、芳硫基、杂环烷硫基、杂芳硫基或NR_c’R_d’；其中R_c’和R_d’分别为H、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基，或者R_c’和R_d’，以及和它们相连的N原子一起，形成杂环烷基或杂芳基； 

Z为O或单键。 

本发明还包括上述化合物的相应的所有药学上可以接受的盐、水合物或异构体，这些化合物可以作为外消旋的混合物、单独的对映异构体、单独的非对映异构体、非对映异构体混合物、顺式或反式异构体存在。所有这些异构体都 是可预期的。例如，下面结构式(II)所表示的化合物便是本发明所提供的化合物的具有立体化学性质的异构体： 

其中优选的R₁为H，R₂和R₃连接为＝O；或者R₁和R₂为H，R₃为OH； 

或者R₁、R₂和R₃连接起来与环A形成下述结构 

优选的G为 

其中R_e为H，R_f为杂芳基或NR_c’R_d’；其中R_c’为H，R_d’为烷基。或者优选的G为 

优选的Z为单键。 

如本文所用，所述的“烷基”，除非另有说明，指的是含有2-20个碳原子，的直链或支链烷烃，可以包括一个或一个以上的碳碳双键或碳碳三键。优选的为含有2-10个碳原子的烷烃，例如，烷基包括但不限于甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，叔丁基。 

如本文所用，所述的“环烷基”，除非另有说明，指的是含有3-12个碳原子的饱和或者部分不饱和的环状烃。例如，“环烷基”包括但不限于环丙基，环丁基，环戊基，环戊烯基，环己基，环己烯基，环庚基，环辛基。 

如本文所用，所述的“杂环烷基”指的是含有2-12个碳原子并且至少含N，O，S中一个杂原子的饱和或者部分不饱和的环状烃。 

如本文所用，所述的“芳基”，除非另有说明，指的是含有6个碳原子的单环芳烃，10个碳原子的双环芳烃，14个碳原子的三环芳烃，并且每个环上 可以有1-4个取代基。例如，芳基包括但不限于苯基、萘基、蒽基。 

如本文所用，所述的“芳杂环”，指的是5-8个原子的单环芳烃，8-12个原子的双环芳烃，11-14个原子的三环芳烃，并且含有1个或多个杂原子(例如N，O，S)。“芳杂环”包括但不限于吡啶基、呋喃基、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、噻吩基、喹啉基、吲哚基、噻唑基。 

其中所述的“烷氧基”、“环烷氧基”、“芳氧基”、“杂芳氧基”、和“杂环烷氧基”，分别指的是“烷基-O”、“环烷基-O”、“芳基-O”、“杂芳基-O”、和“杂环烷基-O”。同样，“烷基硫”、“环烷基硫”、“芳基硫”、“杂芳基硫”、和“杂环烷基硫”，分别指的是“烷基-S”、“环烷基-S”、“芳基-S”、“杂芳基-S”、和“杂环烷基-S”。 

其中，环烷基、杂环烷基、芳基、芳杂基均可以含有或不含有取代基。例如，它们可以被含有0-6个包括卤素、氧、硫、氮在内的杂原子的基团取代。烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、芳杂环上的取代基包括烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷氧基、芳氧基、芳基、芳杂环、芳杂氧基、氨基、烷基取代胺基、二烷基取代胺基、芳胺、二芳基取代胺基、羟基、卤素、巯基、烷基取代巯基、芳基取代巯基、烷磺酰基、芳磺酰基、酰胺基、胺甲酰基、脒基、胍基、脲基、氰基、硝基、酰基、酰氧基、羧基、酯基。烷基上可能的取代包括烷基除外的所有上述取代基。 

如本文所用， 

表示在所述的结构式中，一部份的结构被省略。 

如本文所用，键 

表示该位置相应的键是手性的，其可以是 

的形式；或者是 

的形式。 

表1 列举了本发明的一些化合物名称及其结构式。 

表1 

本发明所提供的化合物可以通过市售原料和传统化学转化方式合成，比如，一些化合物可以通过对穿心莲内酯(Andrographolide，AG)进行改造而成，AG是从穿心莲(Andrographis paniculata Nees)中提取的天然内酯化合物(参见美国专利，序列号：11/078,198)。 

下述反应式1表示的是通过改造AG而合成本发明一些化合物的路线： 

反应式1： 

如反应式1所示，AG首先通过文献(Nanduri，et al.，Tetrahedron Letters，2004，45，4883-4886)所公开的方法进行保护，被保护后的AG先与胺反应，然后进行去保护，得到12-胺基-14-脱氧穿心莲内酯。12-胺基-14-脱氧穿心莲内酯再与羰基双咪唑反应生成12-胺基-3，19-O-碳酸酯-14-脱氧穿心莲内酯。- 

反应式2显示的是另外一种通过AG合成本发明化合物的路线。 

先氧化被保护的AG为19-甲酰基-3-羰基-14-乙酰穿心莲内酯，然后去羰基得到19-去羟甲基-3-羰基-14-乙酰穿心莲内酯，19-去羟甲基-3-羰基-14-乙酰穿心莲内酯与胺反应生成12-胺基-19-去羟甲基-3-羰基-14-脱氧穿心莲内酯。12-胺基-19-去羟甲基-3-羰基-14-脱氧穿心莲内酯用NaBH₄还原即得到12-胺基-19-去羟甲基-3-羟基-14-脱氧穿心莲内酯。 

反应式2： 

上述合成方法只是本发明部分化合物的合成路线，根据上述例子，本领域技术人员可以通过调整不同的方法来合成本发明的其他化合物，或者，本领域技术人员根据现有公知技术可以合成本发明的化合物。合成的化合物可以进一步通过柱色谱法、高效液相色谱法或结晶等方式进一步纯化。 

合成化学改造、保护官能团方法学(保护或去保护)对合成应用化合物是很有帮助的，并且是现有技术中公知的技术，如R.Larock，ComprehensiveOrganic Transformations，VCH Publishers(1989)；T.W.Greene and P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3^rd Ed.，John Wiley andSons(1999)；L.Fieser and M.Fieser，Fieser and Fieser’s Reagentsfor Organic Synthesis，John Wiley and Sons(1994)；and L.Paquette，ed.，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis，John Wiley and Sons(1995)中都有公开。 

本发明所公开的十氢化萘类化合物可以有效的抑制TNFα、IL-1β和iNOS的表达和抑制NF-кB的活性。因此，本发明的十氢化萘类化合物可作为TNFα、IL-1β或iNOS表达的抑制剂，也可以作为NF-кB活性的抑制剂，上述抑制剂可作为预防和治疗与TNFα、IL-1β和iNOS的表达以及与NF-кB活性有关的疾病的药物，这些疾病包括自身免疫性疾病、肿瘤、动脉硬化病、糖尿病等。其中，自身免疫性疾病包括但不限于免疫性肠炎(包括Crohn氏疾病和溃疡性大肠炎)、风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病、多发性硬化症、脓毒血症或糖尿病等；肿瘤包括但不限于肺癌、肝癌、食管癌、胰腺癌、胃肠癌、乳腺癌等。 

本发明还提供一种药物组合物，含有治疗有效量的本发明所述的十氢化萘类化合物，以及余量的药学上可接受的载体。 

治疗有效量(即：可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量)的本发明的化合物与药学上可以接受的载体(用于治疗给药的载体，它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性)可以组成药物制剂，这些药物制剂可以制备成口服制剂、注射剂、片剂、粉制剂、胶囊剂、分散片、缓释制剂等。 

治疗有效量的本发明的组合物介于0.001-500mg/kg体重/天之间。任何介于上述范围之内的用量皆为本发明的有效量，其中较低剂量介于0.001mg/kg体重/天和499.999mg/kg体重/天之间，较高剂量介于0.002mg/kg体重/天和 500mg/kg体重/天之间。所述的“治疗有效量”可用于相关疾病的单一用药或联合用药治疗。本领域的专业人员能够理解，在实际给药时的用量可高于或低于上述剂量范围。针对某一对象(如哺乳动物-人)的“治疗有效量”和具体治疗方案可受诸多因素的影响，包括所用化合物或其前药的药效活性、给药对象的年龄、体重、一般情况、性别、饮食、给药时间、疾病易感性、疾病进程以及收治医师的判断等。 

本发明的活性化合物或其组合物可以通过口服、静脉内、肌肉内、皮下、鼻腔内、直肠内等途径给药。固体载体如：淀粉、乳糖、磷酸二醇、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液态载体如：无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适合活性成分的特性和所需要的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，如，调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和BHA。 

这些活性化合物也可肠胃外或腹腔内给药。也可在适当混合有表面活性剂(如羟丙基纤维素)的水中制备这些活性化合物(作为游离碱或药学上可接受的盐)的溶液或悬浮液。还可在甘油、聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散液。在常规储存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以防止微生物的生长。 

适用于注射的药物形式包括：无菌水溶液或分散液和无菌粉(用于临时制备无菌注射液或分散液)。在所有情况中，这些形式必须是无菌的且必须是流体以易于注射器排出流体。在制造和储存条件下必须是稳定的，且必须能防止微生物如细菌和真菌的污染和影响。载体可以是溶剂或分散介质，其中含有如水、醇、它们的适当混合物和植物油。 

本发明所公开的十氢化萘类化合物可以通过体外实验(如抑制TNFα、IL-1β或iNOS的表达，或抑制NF-кB的活性)进行初步筛选，对于在初步筛选中表现出高生物活性的化合物可进一步通过体内实验检测其生物活性。如，通过给予实验动物(如具有自身免疫性疾病、肿瘤或动脉硬化症的小鼠)一定剂量的本发明的化合物，评价其所具有的治疗效果，并且根据上述结果，可以评价其适合的剂量和给药方式。 

本发明的其他方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。 

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解为，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商提供或所建议的条件。 

除非另有定义或说明，本文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术熟练人员所熟悉的意义相同。此外任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。 

实施例1：12-N-苄胺基-14-脱氧穿心莲内酯(化合物1)的合成 

                        化合物1 

将苄胺(3mL，30mmol)的乙醚(10ml)溶液加入3，19-丙酮叉-14-乙酰穿心莲内酯(3.9g，9mmol)(见Nanduri，et al.，Tetrahedron Letters，2004，45，4883-4886.)的乙醚(100ml)溶液中，室温搅拌，反应3h，加入1N HCl溶液(100ml)，并继续搅拌1h，然后用饱和NaHCO₃中和至pH 7.5，分弃乙醚。水相再用3×50ml CH₂Cl₂萃取，合并CH₂Cl₂相，经Na₂SO₄干燥，浓缩，柱层析纯化，得12-N-苄胺基-14-脱氧穿心莲内酯，收率72％. 

MS(m/z)：440.3(M+1) 

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：7.30(m，5H)，7.16(m，1H)，4.81(s，1H)，4.79(m，2H)，4.58(s，1H)，4.19(d，J＝11.3Hz)，3.72(m，2H)，3.32(d，J＝11.0Hz，1H)，1.25(s，3H)，0.60(s，3H). 

实施例2：12-N-甘氨酰胺基-14-脱氧穿心莲内酯(化合物2)的合成 

                        化合物2 

将甘氨酰胺盐酸盐(0.45g，3mmol)，K₂CO₃(0.41g，3mmol)混合于20ml乙醇中，搅拌15min，然后往其中加入3，19-丙酮叉-14-乙酰穿心莲内酯(0.43g，1mmol)的乙醚(50ml)溶液，室温搅拌，反应5h，加入1N HCl溶液(10ml)，并继续搅拌1h，然后用饱和NaHCO₃中和至pH 7.5，分弃乙醚。水相再用3×30ml CH₂Cl₂萃取，合并CH₂Cl₂相，经Na₂SO₄干燥，浓缩，柱层析纯化，得12-N-甘酰氨基-14-脱氧穿心莲内酯，收率65％. 

MS(m/z)：407.2(M+1) 

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：7.23(m，1H)，4.83(s，1H)，4.80(m，2H)，4.62(s，1H)，4.16(d，J＝11.3Hz，1H)，3.40(m，2H)，3.32(d，J＝11.0Hz，1H)，1.20(s，3H)，0.60(s，3H). 

实施例3-19：化合物3-19 

化合物3-19(见表2)的合成采用实施例2相似的方法。 

表2 

实施例20：12-N-苄胺基-3，19-O-碳酸酯-14-脱氧穿心莲内酯(化合物20)的合成 

                    化合物20 

将羰基二咪唑(0.81g，5mmol)加入12-N-苄胺基-14-脱氧穿心莲内酯(1g，2.5mmol)乙腈溶液中，室温下搅拌过夜.加水稀释，然后用3×20ml二氯甲烷萃取.合并二氯甲烷相，无水Na₂SO₄干燥，浓缩，柱层析纯化，得12-N-苄胺基-3，19-O-碳酸酯-14-脱氧穿心莲内酯，收率56％. 

MS(m/z)：466.2(M+1) 

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：7.32(m，5H)，7.26(m，1H)，4.81(s，1H)，4.79(m，2H)，4.58(s，1H)，3.9(m，1H)，3.72(m，2H)，1.25(s，3H)，0.60(s，3H). 

实施例21-28：化合物21-28 

化合物21-28(见表3)的合成采用实施例20相似的方法。 

表3 

实施例29：8，17环氧-12-N-甘氨酸甲酯基-14-脱氧穿心莲内酯(化合物29)的合成 

                        化合物29 

将K₂CO₃(0.138g，1mmol)和间氯过氧苯甲酸(2.3mmol)加入12-N-甘氨酸甲酯14-脱氧穿心莲内酯的CH₂Cl₂(25mL)溶液，室温搅拌过夜.反应液适量饱和NaHCO₃中和，加水稀释，然后用3×20ml二氯甲烷萃取.合并二氯甲烷相，无水Na₂SO₄干燥，浓缩，柱层析纯化，得8，17环氧-12-N-甘氨酸甲酯基-14-脱氧穿心莲内酯，收率60％. 

MS(m/z)：438.24(M+1) 

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：7.25(m，1H)，4.90(m，2H)，3.80(s，3H)，3.2(m，1H)，2.6(m，1H)，2.45(m，1H)，1.21(s，3H)，0.80(s，3H). 

实施例30：14，15-脱氢穿心莲内酯(化合物30)的合成 

                        化合物30 

化合物30按照文献Nanduri，et al.，Tetrahedron Letters，2004，45，4883-4886.记载的方法合成. 

实施例31：11，12-脱氢-19-甲酰基-14-脱氧穿心莲内酯(化合物31a)和11，12-脱氢-19-甲酰基-3-羰基-14-脱氧穿心莲内酯(化合物31b)的合成 

   化合物31a           化合物31b 

将11，12-脱氢-14-脱氧穿心莲内酯(市售)(0.86g，2mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液加入PCC(吡啶氯铬酸盐(0.87g，4mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液，室温搅拌，反应5h，过滤，浓缩，柱层析纯化，得11，12-脱氢-19-甲酰基-14-脱氧穿心莲内酯和11，12-脱氢-19-甲酰基-3-羰基-14-脱氧穿心莲内酯，收率分别为25％和45％. 

化合物31a： 

MS(m/z)：331.18(M+1) 

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：9.81(s，1H)，7.20(m，1H)，6.8(m，1H)，6.1(m，1H)，4.91(s，1H)，4.88(m，2H)，4.52(s，1H)，3.25(m，1H)，1.3(s，3H)，0.7(s，3H). 

化合物31b： 

MS(m/z)：329.18(M+1) 

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：9.82(s，1H)，7.25(m，1H)，6.7(m，1H)，6.1(m， 1H)，4.94(s，1H)，4.88(m，2H)，4.55(s，1H)，1.25(s，3H)，0.8(s，3H). 

实施例32-36：化合物32-36 

化合物32-36(见表4)的合成采用实施例31相似的方法。 

表4 

实施例37：11，12-脱氢-3，19-吲唑-14-脱氧穿心莲内酯(化合物37)的合成 

                            化合物37 

将120μL NH₂NH₂·H₂O(1.5mmol)加入19-甲酰基-3-羰基-14-脱氧穿心莲内酯(329mg，1mmol)的乙醇(20ml)溶液，室温搅拌3h，然后加水稀释，用3×30ml二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，盐水洗，无水Na₂SO₄干燥，浓缩，柱层析纯化，得11，12-脱氢-3，19-吲唑-14-脱氧穿心莲内酯，收率为76％. 

MS(m/z)：325.22(M+1) 

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：8.05(s，1H)，7.23(m，1H)，6.72(m，1H)，6.2(m，1H)，4.8(m，3H)，4.5(s，1H)，1.25(s，3H)，0.4(s，3H). 

实施例38-40：化合物38-40 

化合物38-40(见表5)的合成采用实施例37相似的方法。 

表5 

实施例41：19-去羟甲基3-羰基-14-乙酰穿心莲内酯(化合物41)的合成： 

                    化合物41 

在3，19-丙酮叉-14-乙酰穿心莲内酯(1.2g)的THF(30ml)溶液中加入1NHCl(24ml)，室温搅拌2h，乙酸乙酯萃取，经无水Na₂SO₄干燥，浓缩，得到14-乙酰穿心莲内酯。 

将3ml Jone’s试剂滴加至上述14-乙酰穿心莲内酯(1.0g)的丙酮(25ml)溶液中，混合物在10℃下搅拌2h，加水稀释，经3×30ml乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯，无水Na₂SO₄干燥，浓缩，柱层析纯化，得19-甲酰基-3-羰基-14-乙酰穿心莲内酯(0.7g). 

在19-甲酰基-3-羰基-14-乙酰穿心莲内酯(0.7g)的叔丁醇(10m1)，2，3-二甲基-2-丁烯(10ml)的混合液中，滴加NaClO₂(0.25g，2.2mmol)，NaH₂PO₄(175mg，1.45mmol)的水溶液(10ml).混合物搅拌过夜，用1N HCl调节至pH为3，然后经4×30ml乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯，盐水洗，MgSO₄干燥，浓缩，柱层析纯化，得19-羧基3-羰基-14-乙酰穿心莲内酯(0.5g). 

上述化合物溶于25ml乙酸乙酯，加热回流2h，浓缩，柱层析纯化，得19-去羟甲基3-羰基-14-乙酰穿心莲内酯，收率为45％. 

MS(m/z)：361.19(M+1) 

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：7.03(m，1H)，5.9(m，1H)，4.85(s，1H)，4.80(m，2H)，4.61(s，1H)，1.1(s，3H)，0.95(d，J＝6.3Hz，3H) 

实施例42：12-N-甘氨酰胺基-19-去羟甲基3-羰基-14-脱氧穿心莲内酯(化合物42)的合成 

                        化合物42 

将甘氨酰胺盐酸盐(0.9g，6mmol)，K₂CO₃(0.82g，6mmol)混合于40ml乙醇中，搅拌15min，然后往其中加入19-去羟甲基-3-羰基-14-乙酰穿心莲内酯(0.72g，2mmol)的乙醚(50ml)溶液，室温搅拌，反应5h，用1N HCl调节至pH为3，水相再用3×50ml乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相，经Na₂SO₄干燥，浓缩，柱层析纯化，得12-N-甘氨酰胺基19-去羟甲基-3-羰基-14-脱氧穿心莲内酯，收率为73％. 

MS(m/z)：375.22(M+1) 

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：.7.30(m，1H)，4.9(s，1H)，4.80(m，2H)，4.76(s，1H)，3.40(m，2H)，0.99(d，J＝6.6Hz，3H)，0.90(s，3H). 

实施例43-47：化合物43-47 

化合物43-47(见表6)的合成采用实施例42相似的方法。 

表6 

实施例48：12-N-甘氨酰胺基-19-去羟甲基-14-脱氧穿心莲内酯(化合物48)的合成 

                        化合物48 

将12-N-甘氨酰胺基-19-去羟甲基3-羰基-14-脱氧穿心莲内酯(375mg，1mmol)的甲醇(20ml)溶液在冰浴下搅拌，分批加入NaBH₄(45mg，1.1mmol).反 应2h后，用水稀释，3×30ml乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相，盐水洗，经Na₂SO₄干燥，浓缩，柱层析纯化，得12-N-甘氨酰胺基-19-去羟甲基-14-脱氧穿心莲内酯，收率85％. 

MS(m/z)：377.22(M+1) 

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：7.30(m，1H)，4.9(s，1H)，4.80(m，2H)，4.76(s，1H)，3.40(m，2H)，3.2(m，1H)，0.99(d，J＝6.6Hz，3H)，0.92(s，3H). 

实施例49-53：化合物49-53 

化合物49-53(见表7)的合成采用实施例48相似的方法。 

表7 

实施例54：12-N-甘氨酰胺基-19-去羟甲基-3-羟肟-14-脱氧穿心莲内酯(化合物54)的合成 

化合物54 

在12-N-甘氨酰胺基-19-去羟甲基-3-羰基-14-脱氧穿心莲内酯(750mg，2mmol)的二氧六环(20ml)溶液中加入NH₂OH·HCl(188mg，2.6mmol)和吡啶(215μL，2.6mmol)，混合物升温至40℃，反应3h，浓缩，柱层析纯化，得12-N-甘氨酰胺基-19-去羟甲基-3-羟肟-14-脱氧穿心莲内酯，收率55％. 

MS(m/z)：389.23(M+1) 

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：7.25(m，1H)，4.92(s，1H)，4.80(m，2H)，4.76(s，1H)，3.40(m，2H)，1.01(d，J＝6.6Hz，3H)，0.88(s，3H). 

实施例55：19-N-甲胺基-穿心莲内酯(化合物55)的合成 

                        化合物55 

将19-甲醛基-穿心莲内酯(540mg，1.6mmol)，CH₃NH₂·HCl(125mg，1.6mmol)和NaBHCN₃(240mg，3.2mmol)，加入20ml CH₂Cl_2和5ml C₂H₅OH中，回流30分钟，然后，室温搅拌2h，用水稀释，3×20ml CH₂Cl₂萃取，合并CH₂Cl₂相，盐水洗，经Na₂SO₄干燥，浓缩，柱层析纯化，得19-N-甲胺基-穿心莲内酯，收率62％. 

MS(m/z)：363.24(M+1) 

¹H NMR(CDCl₃，300MHz)：7.30(m，1H)，4.90(m，2H)，4.83(s，1H)，4.62(s，1H)，4.5(s，1H)，3.3(m，1H)，2.5(s，3H)，1.20(s，3H)，0.70(s，3H). 

实施例56：运用体外生物分析方法评价上述化合物在人293HEK细胞中对肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的核因子кB(NF-кB)活化的抑制作用 

人胚肾293细胞株购自于美国ATCC菌种保藏中心；人胚肾293细胞贴壁生长于含10％胎牛血清(FBS)DMEM培养基中，于37℃，5％CO₂的饱和湿度培养箱中培养。pNFкB-Luc质粒(购自Clontech公司)和pcDNA3.1(购自Invitrogen公司)通过脂质体共转染293细胞后，用含0.6mg/ml G418的培养基筛选，建立稳定转染的pNFкB-Luc-293细胞株。pNFкB-Luc-293细胞按照3×10⁴/孔密度接种于96孔板，用于后续药物活性评价。 

用DMEM培养基进行3倍梯度稀释上述合成化合物，加入含有上述pNFкB-Luc-293细胞的培养板孔中，各孔化合物终浓度分别为0.1；0.3；1；3；10μM。于37℃，5％CO₂的饱和湿度培养箱中孵育15分钟后，加入重组人TNFα蛋白(终浓度10ng/ml)到上述培养板中，诱导培养4小时。雷公藤内酯作为阳性对照药，其终浓度为0.1ug/ml。含有10ng/ml TNFα蛋白的培养细胞孔中加入10μL DMEM培养基，作为阴性性对照。未加入重组人TNFα蛋白及化合物的空白细胞孔中，加入10μLDMEM培养基，作为背景对照。 

裂解细胞后，采用荧光素酶检测试剂盒(美国威斯康星州Promega公司产品)进行实验，于Perkin-Elmer VictorIII多功能读板机检测各培养孔中化学发光强度。 

用此公式计算试验样品抑制率： 

抑制率(％)＝[1-(药物处理-背景对照)/(阴性对照-背景对照)]×100％ 

结果显示，实施例中制备的化合物均抑制293细胞中肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的核因子кB(NF-кB)活化。半数抑制浓度(IC₅₀)在0.1-50μM之间，一些化合物的IC₅₀甚至低于0.1μM。 

实施例57运用体外生物分析方法评价上述化合物对TNFα，IL-1β和iNOS基因表达的抑制作用 

人单个核THP-1细胞株及鼠白血病单个核细胞株(即RAW264.7细胞)均购自于美国ATCC菌种保藏中心。细胞培养于含10％胎牛血清(FBS)的RPMI1640或DMEM培养基 

中，于37℃，5％CO₂的饱和湿度培养箱中培养。每孔100μl密度为5×10⁴/m1细胞悬液接种于96孔板，每孔5×10³个细胞用于后续药物活性评价。 

用DMEM培养基进行3倍梯度稀释上述合成化合物，加入含有培养细胞的培养板孔中，各孔化合物终浓度分别为0.1；0.3；1；3；10μM。地塞米松作为阳性对照药，其终浓度为10μM。未加入LPS或IFNγ等刺激物及化合物的空白细胞孔中，加入10μL DMEM培养基，作为背景对照。细胞培养板于37℃，5％CO₂的饱和湿度培养箱中孵育15分钟。为了诱导TNFα和IL-1β mRNA的产生，THP-1细胞中加入脂多糖LPS(终浓度1μg/ml)诱导1小时。为了诱导iNOSmRNA的产生，RAW264.7细胞中加入脂多糖LPS和鼠重组干扰素γ(IFNγ)(终浓度为LPS 1μg/ml和干扰素20ng/ml)共刺激8小时。培养结束后，THP-1细胞于53℃使用含有TNFα或IL-1β目标基因探针的裂解液裂解细胞0.5小时，裂解液供以下检测用。RAW264.7细胞于53℃使用含有iNOS目标基因探针的裂解液裂解细胞0.5小时，裂解液供以下检测用。 

依照bDNA试剂盒试验指南对上述细胞裂解液进行基因表达分析，来源于人TNFα(GenBank NM_000594)，人IL-1β(GenBank NM_000576)及鼠iNOS(GenBank NM_010927)的bDNA探针由上海英骏生物技术公司合成 (Invitrogen Biotechnology Company，Shanghai，China)。分析简述，从上述各孔中吸取100μl裂解液加入试剂盒所附Capture Plate，53℃孵育16到20小时。使用洗涤液洗板后，加入100μl Amplifier探针，53℃孵育1小时。使用洗涤液洗板后，加入100μl Label探针， 

53℃孵育1小时。最后，使用洗涤液洗板后，加入100μl反应底物，46℃孵育0.5小时。使用Perkin-Elmer Victor III多功能读板机检测96孔板各孔化学发光强度。 

用此公式计算试验样品抑制率： 

抑制率(％)＝[1-(药物处理-背景对照)/(刺激物处理-背景对照)]×100％ 

结果显示，化合物抑制细胞中的TNFα，IL-1β，及iNOS mRNA的表达，半数抑制浓度(IC₅₀)在0.1-50μM之间。 

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。 

Claims (23)

1.一种如结构式(I)所示的十氢化萘类化合物或其药学上可接受的盐：

其中R₁为H、CHO、或CH₂NR_aR_b，R₂为H，和R₃为H、OH、或NR_aR_b，或者R₂和R₃连接为＝O；或者R₁为CH₂OH，R₂为H，和R₃为H或NR_aR_b，或者R₂和R₃连接为＝O；

其中R_a和R_b分别为H、或烷基；或者R_a和R_b连接起来形成环胺；或者是R₁、R₂和R₃连接成环并与环A一起组成如下面所示的环形结构：

其中G为：

其中R_d为H、烷基、或R_a’CO，其中R_a’为H、或烷基；其中的Z为O或单键。

2.一种十氢化萘类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于结构式为：

其中R₁为H、CHO、或CH₂NR_aR_b，R₂为H，和R₃为H、OH、或NR_aR_b，或者R₂ 和R₃连接为＝O；或者R₁为CH₂OH，R₂为H，和R₃为H或NR_aR_b，或者R₂和R₃连接为＝O；

其中R_a和R_b分别为H、或烷基；或者R_a和R_b连接起来形成环胺；或者是R₁、R₂和R₃连接成环并与环A一起组成如下面所示的环形结构：

其中G为：

其中R_d为H、烷基、或R_a’CO，其中R_a’为H、或烷基；R_e为H，和R_f为杂芳基或NR_c’R_d’；其中R_c’为H，和R_d’为烷基；其中的Z为O或单键。

3.根据权利要求2所述的十氢化萘类化合物，其特征在于所述的R₁、R₂和R₃与环A连接形成如下结构：

4.根据权利要求2所述的十氢化萘类化合物，其特征在于所述的R₁为H，R₂和R₃一起为＝O。

5.根据权利要求2所述的十氢化萘类化合物，其特征在于所述的R₁和R₂分别为H，R₃为OH。

6.根据权利要求2-5任一项所述的十氢化萘类化合物，其特征在于所述的G为

7.根据权利要求6所述的十氢化萘类化合物，其特征在于所述的Z为单键。

8.根据权利要求7所述的十氢化萘类化合物，其特征在于所述的R_e为H，所述的R_f为NR_c’R_d’，其中R_c’为H，R_d’为烷基。

9.根据权利要求2-5任一项所述的十氢化萘类化合物，其特征在于所述的G为

其中R_d的定义如权利要求2中所述。

10.根据权利要求9所述的十氢化萘类化合物，其特征在于所述的Z为单键。

11.根据权利要求2所述的十氢化萘类化合物，其特征在于所述的Z为单键。

12.根据权利要求11所述的十氢化萘类化合物，其特征在于所述的R₁、R₂和R₃连接起来与环A形成如下结构：

13.根据权利要求11所述的十氢化萘类化合物，其特征在于所述的R₁为H，R₂和R₃一起为＝O。

14.根据权利要求11所述的十氢化萘类化合物，其特征在于所述的R₁和R₂分别为H，R₃为OH。

15.根据权利要求2所述的十氢化萘类化合物，其特征在于所述的R₁为CHO，所述的R₃为H。

16.一种十氢化萘类化合物，其特征在于所述的化合物为：

17.权利要求1-16任一项所述十氢化萘类化合物作为制备TNFα、IL-1β或iNOS表达抑制剂的应用。

18.权利要求1-16任一项所述十氢化萘类化合物作为制备NF-κB活性抑制剂的应用。

19.权利要求1-16任一项所述十氢化萘类化合物作为制备治疗和预防自身免疫性疾病的药物的应用。

20.根据权利要求19所述的应用，其特征在于所述的自身免疫性疾病为免疫性肠炎、关节炎、银屑病、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、多肌炎/皮肌炎、急性骨髓性白血病、帕金森综合症、爱滋病、或阿兹海默症。

21.权利要求1-16任一项所述十氢化萘类化合物作为制备治疗和预防肿瘤的药物的应用。

22.权利要求1-16任一项所述十氢化萘类化合物作为制备治疗和预防动脉硬化症的药物的应用。 

23.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物含有治疗有效量的权利要求1-16任一项所述的化合物，以及余量的药学上可接受的载体。