CN109422651B - 十氢化萘类化合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及十氢化萘类化合物及其用途。本发明从短指软珊瑚Sinularia sandensis的共附生真菌Phoma sp.的发酵液中提取分离得到十氢化萘类化合物，所述十氢化萘类化合物具有T细胞亚型调控活性，并且细胞毒性低，可用于制备免疫调节药物。本发明为研制新的免疫调节药物提供了先导化合物，为深入研究和开发新的免疫调节药物开辟了新的途径，有利于开发利用海洋药用资源。

Description

十氢化萘类化合物及其用途
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及十氢化萘类化合物及其用途。
背景技术
宿主珊瑚Sinularia sandensis属于软珊瑚目(Alcyonacea)、软珊瑚亚目(Alcyoniina)、软珊瑚科(Alcyoniidae)、指型软珊瑚属(Sinularia)动物。对于软珊瑚Sinularia sandensis的研究较少，仅有3篇文献报导，对其共附生微生物化学成分的研究还没有报导。目前，从该种软珊瑚中分离得到的化合物约有20种，主要为西松烷型二萜(Anjaneyulu,A.；Rao,G.V.；Sagar,K.；Kumar,K.R.；Mohan,K.C.,Sandensolide:A newdihydroxycembranolide from the soft coral,Sinularia sandensis Verseveldt ofthe Indian Ocean.Natural Product Letters 1995,7(3),183-190；Tsai,T.-C.；Chen,H.-Y.；Sheu,J.-H.；Chiang,M.Y.；Wen,Z.-H.；Dai,C.-F.；Su,J.-H.,StructuralElucidation and Structure–Anti-inflammatory Activity Relationships ofCembranoids from Cultured Soft Corals Sinularia sandensis and Sinulariaflexibilis.Journal of agricultural and food chemistry 2015,63(32),7211-7218；Cheng,S.-Y.；Wang,S.-K.；Chen,P.-W.；Duh,C.-Y.,Sandensone A,a novelsesquiterpenoid from the Formosan soft coral Sinularia sandensis.Bioorganic&medicinal chemistry letters 2015,25(11),2353-2355)。
共附生真菌Phoma sp.属于子囊菌门(Ascomycota)、盘菌亚门(Pezizomycotina)、座囊菌纲(Dothideomycetes)、格孢菌目(Pleosporales)、亚隔孢壳科(Didymellaceae)，是常见的土壤真菌。已从该种真菌中分离得到的化合物约有30余种(Sugano,M.；Sato,A.；Iijima,Y.；Oshima,T.；Furuya,K.；Kuwano,H.；Hata,T.；Hanzawa,H.,Phomactin A；Anovel PAF antagonist from a marine fungus Phoma sp.Journal of the AmericanChemical Society 1991,113(14),5463-5464；Sugano,M.；Sato,A.；Iijima,Y.；Furuya,K.；Kuwano,H.；Hata,T.,Phomactin E,F,and G:New phomactin-group PAF antagonistsfrom a marine fungus Phoma sp.The Journal of antibiotics 1995,48(10),1188-1190；Liu,Z.；Jensen,P.R.；Fenical,W.,A cyclic carbonate and related polyketidesfrom a marine-derived fungus of the genus Phoma.Phytochemistry 2003,64(2),571-574；Kong,F.；Wang,Y.；Liu,P.；Dong,T.；Zhu,W.,Thiodiketopiperazines from themarine-derived fungus Phoma sp.OUCMDZ-1847.Journal of natural products 2013,77(1),132-137)。但是，未见有关从该种真菌中分离得到十氢化萘类化合物以及此类化合物具有免疫调节活性的报道。
发明内容
基于此，本发明的目的是提供一种十氢化萘类化合物，由以下化学结构式中的一种表示：
Figure BDA0001396739090000021
Figure BDA0001396739090000031
在其中一个实施例中，所述十氢化萘类化合物提取自短指软珊瑚Sinulariasandensis的共附生真菌Phoma sp.的发酵液。
本发明的另一目的是提供一种十氢化萘类化合物在制备免疫调节药物中的用途，所述十氢化萘类化合物由以下化学结构通式中的一种表示：
Figure BDA0001396739090000032
其中，
R1、R2、R3、R6和R7各自独立地是H或OH；
R4是α-CH3或β-CH3；
R5是H或＝O；
X是OH、CH2CH2OOCH3、CH3或CH2CH2OH。
较优地，所述十氢化萘类化合物是以下化合物中的一种：
Figure BDA0001396739090000041
在其中一个实施例中，所述十氢化萘类化合物提取自短指软珊瑚Sinulariasandensis的共附生真菌Phoma sp.的发酵液。
本发明从短指软珊瑚Sinularia sandensis的共附生真菌Phoma sp.的发酵液中提取分离得到本发明中的十氢化萘类化合物，通过红外、紫外、质谱和二维核磁共振等多种现代光谱技术的综合解析进行结构鉴定，确定了这些化合物的化学结构。本发明的十氢化萘类化合物具有T细胞亚型调控活性，并且细胞毒性低，可用于制备免疫调节药物。本发明为研制新的免疫调节药物提供了先导化合物，为深入研究和开发新的免疫调节药物开辟了新的途径，有利于开发利用海洋药用资源。
附图说明
图1为本发明的化合物对小鼠脾淋巴细胞凋亡的影响测试数据图；
图2为本发明的化合物对ConA诱导的小鼠CD3+T亚型细胞的影响测试数据图；
图3为本发明的化合物对ConA诱导的小鼠CD4和CD8+T亚型细胞的影响测试数据图；
图4为本发明的化合物对ConA诱导的小鼠脾细胞中T亚型细胞的影响测试数据图。
具体实施方式
本发明从短指软珊瑚Sinularia sandensis的共附生真菌Phoma sp.的发酵液中提取分离得到2种已知的聚酮类化合物Aspermytin A(化合物1)和Aspermytin A acetate(化合物2)，以及14种新化合物Phomaketide A～N(化合物3-化合物16)，通过红外、紫外、质谱和二维核磁共振等多种现代光谱技术的综合解析进行结构鉴定，确定了化合物Phomaketide A～N的化学结构。
实施例所用菌株发酵液的制备：将菌株接种至生物麦芽提取物(biomalt)琼脂(agar)培养基(3％biomalt，2％agar)，在28℃发酵28天。
实施例1.制备化合物1-16，即Aspermytin A、Aspermytin A acetate和Phomaketide A～N
1.制备总粗提物
将12L菌株发酵液，按常规乙酸乙酯超声提取，将提取液减压浓缩，得总粗提物7.8g。
2.分离纯化
将浸膏用正相硅胶色谱(200～300目)分离，依次用石油醚：乙酸乙酯＝80:1、50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1，100％乙酸乙酯，和100％甲醇的洗脱液进行梯度洗脱，根据薄层板监测，按照各流份极性的差别从小到大共收集15个部分洗脱液，以馏分1-馏分15(Fr 1-Fr 15)表示。
将馏分12(Fr 12)经Sephadex LH-20凝胶柱(流动相为CH2Cl2：MeOH＝2:1)层析，得到6部分，以Fr 12.1-12.6表示，将Fr 12.4经正相硅胶色谱(流动相为石油醚：丙酮＝10:1)和高效液相色谱(HPLC)(流动相为MeOH：H2O＝65:35，流速为2mL/min)纯化，得到Aspermytin A acetate(43.8mg，保留时间为40min)；将Fr 12.6经HPLC纯化(流动相为MeOH：H2O＝60:40，流速为2mL/min)得到Phomaketide K(3.1mg，保留时间为54min)。
将馏分13(Fr 13)经Sephadex LH-20和正相硅胶色谱分离，然后用HPLC(流动相为MeOH：H2O＝68:32，流速为2mL/min)纯化，得到Aspermytin A(44.3mg，保留时间为32min)。
将馏分14(Fr 14)经Sephadex LH-20凝胶柱(流动相为CH2Cl2：MeOH＝2:1)层析，得到5部分，以Fr 14.1-14.5表示，将Fr 14.3用HPLC(流动相为MeOH：H2O＝49:51，流速为2mL/min)纯化，得到Phomaketide D(9.2mg，保留时间为58min)；将Fr 14.4经正相硅胶色谱(流动相为石油醚：异丙醇＝20:1)分离，得到9个组分，以Fr 14.4.1-Fr 14.4.9表示。将Fr14.4.3经HPLC纯化(流动相为MeOH：H2O＝58:42，流速为2mL/min)得到Phomaketide J(11.2mg，保留时间为30min)和Phomaketide B(8.3mg，保留时间为45min)；将Fr 14.4.5经HPLC(流动相为MeOH：H2O＝47:53，流速为2mL/min)纯化，得到Phomaketide H(0.8mg，保留时间为51min)和Phomaketide C(4.9mg，保留时间为25min)。
将Fr 15经Sephadex LH-20凝胶柱(流动相为CH2Cl2：MeOH＝2:1)层析，得到8部分，以Fr 15.1-15.8表示；将Fr 15.4经正相硅胶色谱(流动相为石油醚：丙酮＝5:1)和HPLC(流动相为MeOH：H2O＝55:45，流速为2mL/min)纯化，得到Phomaketide G(14.0mg，保留时间为47min)和Phomaketide A(10.2mg，保留时间为66min)；将Fr 15.5经HPLC(流动相为MeOH：H2O＝53:47，流速为2mL/min)纯化，得到Phomaketide L(2.6mg，保留时间为55min)、Phomaketide F(1.6mg，保留时间为42min)和Phomaketide N(0.8mg，保留时间为25min)；将Fr 15.6经反相硅胶色谱(流动相为MeOH：H2O＝55:45)和HPLC(流动相为MeOH：H2O＝45:55，流速为2mL/min)纯化，得到Phomaketide E(4.0mg，保留时间为33min)、Phomaketide M(2.9mg，保留时间为50min)和Phomaketide I(12.6mg，保留时间为65min)。
3.结构鉴定
通过红外、紫外、质谱和二维核磁共振等多种现代光谱技术的综合解析进行结构鉴定，确定了化合物Phomaketide A-N的化学结构。
Phomaketide A：无色晶体(甲醇)，易溶于氯仿、二氯甲烷；熔点(mp)174-175℃；比移值(Rf)＝0.60(二氯甲烷/丙酮4:1)；旋光度
Figure BDA0001396739090000071
Figure BDA0001396739090000072
电子圆二色谱(ECD)(CH3CN,c 0.0037M)λmax(Δε):294.5(-0.38),211(+0.65),196.5(-1.13),190(-0.15)nm；紫外光谱UV(CH3CN)λmax(logε):198(2.71)nm；红外光谱IR(film)νmax 3360,2922,1732,1372,1248,1091,1040,804,730cm-1；高分辨电子轰击质谱HREIMS m/z324.1925[M]+(计算值C18H28O5,324.1931)。1H和13C核磁共振数据见表1和表2。
Phomaketide B：无色晶体(甲醇)，易溶于氯仿、二氯甲烷；mp 163-164℃；Rf＝0.50(石油醚/异丙醇10:1)；
Figure BDA0001396739090000073
ECD(CH3CN,c0.0050M)λmax(Δε):221(+0.24),191.5(-4.41),190(-4.22)nm；UV(CH3CN)λmax(logε):199(2.56)nm；IR(film)νmax 3460,2920,1699,1454,1377,1238,1121,735cm-1；HREIMS m/z 238.1563[M]+(计算值C14H22O3,238.1563)。1H和13C核磁共振数据见表1和表2。
Phomaketide C：无色油状，易溶于氯仿、二氯甲烷；Rf＝0.50(二氯甲烷/甲醇10:1)；
Figure BDA0001396739090000081
ECD(CH3CN,c 0.0048M)λmax(Δε):294.5(-2.85),212.5(+0.53),197.5(-1.70),190(-0.15)nm；UV(CH3CN)λmax(logε):199(2.62)nm；IR(film)νmax 3406,2962,2925,1688,1260,1096,802,735cm-1；HREIMS m/z 252.1703[M]+(计算值C15H24O3,252.1720)。1H和13C核磁共振数据见表1和表2。
Phomaketide D：白色无定形粉末，易溶于氯仿、二氯甲烷；Rf＝0.50(二氯甲烷/甲醇8:1)；
Figure BDA0001396739090000082
ECD(CH3CN,c 0.0045M)λmax(Δε):190(-3.50)nm；UV(CH3CN)λmax(logε):199(2.65)nm；IR(film)νmax 3452,2926,1722,1271,1133,1092,1056,968cm-1；HRESIMS m/z 287.1622[M+Na]+(计算值C16H24O3Na,287.1623)。1H和13C核磁共振数据见表3和表2。
Phomaketide E：白色无定形粉末，易溶于氯仿、二氯甲烷；Rf＝0.50(二氯甲烷/丙酮5:1)；
Figure BDA0001396739090000083
ECD(CH3CN,c 0.0043M)λmax(Δε):231.5(+0.14),198(-1.37),190(-2.79)nm；UV(CH3CN)λmax(logε):198(2.66)nm；IR(film)νmax3429,2924,1708,1291,1135,1087,1043,975cm-1；HRESIMS m/z 303.1564[M+Na]+(计算值C16H24O4Na,303.1572)。1H和13C核磁共振数据见表3和表2。
Phomaketide F：白色无定形粉末，易溶于氯仿、二氯甲烷；Rf＝0.60(二氯甲烷/丙酮2:1)；
Figure BDA0001396739090000084
ECD(CH3CN,c 0.0045M)λmax(Δε):190(-2.87)nm；UV(CH3CN)λmax(logε):202(2.71)nm；IR(film)νmax 3424,2925,2860,1451,1372,1133,1084,886,851,616cm-1；HREIMS m/z 266.1879[M]+(计算值C16H26O3,266.1876)。1H和13C核磁共振数据见表3和表2。
Phomaketide G：白色固体，易溶于氯仿、甲醇；mp 166-167℃；Rf＝0.60(二氯甲烷/丙酮4:1)；
Figure BDA0001396739090000085
ECD(CH3CN,c 0.0043M)λmax(Δε):216.5(+0.60),202(+0.39),190(+1.28)nm；UV(CH3CN)λmax(logε):196(2.50)nm；IR(film)νmax 3449,2923,1711,1263,1143,1091,1058,972cm-1；HRESIMS m/z 303.1566[M+Na]+(计算值C16H24O4Na,303.1572)。1H和13C核磁共振数据见表4和表5。
Phomaketide H：无色晶体(甲醇)；mp 144-145℃；Rf＝0.40(二氯甲烷/甲醇10:1)；
Figure BDA0001396739090000086
ECD(CH3CN,c 0.0041M)λmax(Δε):215(+0.59),202(+0.33),190(+1.05)nm；UV(CH3CN)λmax(logε):197(2.65)nm；IR(film)νmax 3353,2923,1704,1459,1272,1057,969,868cm-1；HREIMS m/z 296.1623[M]+(计算值C16H24O5,296.1618)。1H和13C核磁共振数据见表4和表5。
Phomaketide I:无色油状；Rf＝0.60(二氯甲烷/甲醇10:1)；
Figure BDA0001396739090000091
Figure BDA0001396739090000092
199nm；ECD(CH3CN,c 0.0043M)λmax(Δε):294(-0.94),194.5(+1.88),190(+1.56)nm；UV(CH3CN)λmax(logε):199(2.76)nm；IR(film)νmax 3380,2925,1693,1454,1386,1032,733cm-1；HRESIMS m/z 341.1521[M+Na]+(计算值C16H27ClO4Na,341.1517)。1H和13C核磁共振数据见表6和表7。
Phomaketide J:无色油状；Rf＝0.60(石油醚/异丙醇10:1)；
Figure BDA0001396739090000093
Figure BDA0001396739090000094
ECD(CH3CN,c 0.0033M)λmax(Δε):294.5(-1.00),194(+2.05),190(+1.83)nm；UV(CH3CN)λmax(logε):200(2.80)nm；IR(film)νmax 3453,2925,1740,1458,1385,1243,1035,804cm-1；HRESIMS m/z 383.1584[M+Na]+(计算值C18H29ClO5Na,383.1601)。1H和13C核磁共振数据见表6和表7。
Phomaketide K:无色晶体(甲醇)；mp 136-137℃；Rf＝0.60(二氯甲烷/丙酮3:1)；
Figure BDA0001396739090000095
ECD(CH3CN,c 0.0041M)λmax(Δε):294.5(-0.50),194.5(+1.26),190(+1.01)nm；UV(CH3CN)λmax(logε):205(2.85)nm；IR(film)νmax 3451,2925,1688,1455,1385,1355,1115,1029,736,699cm-1；HRESIMS m/z 311.1387[M+Na]+(计算值C15H25ClO3Na,311.1390)。1H和13C核磁共振数据见表6和表7。
Phomaketide L:无色晶体(甲醇)；mp 170-171℃；Rf＝0.50(二氯甲烷/丙酮3:1)；
Figure BDA0001396739090000096
ECD(CH3CN,c 0.0048M)λmax(Δε):293(+1.41),201(+2,26),190(+0.37)nm；UV(CH3CN)λmax(logε):211(2.81)nm；IR(film)νmax 3329,2924,1703,1450,1375,1259,1107,999,909,810cm-1；HREIMS m/z 252.1696[M]+(计算值C15H24O3,252.1720)。1H和13C核磁共振数据见表8和表9。
Phomaketide M:无色油状；Rf＝0.40(二氯甲烷/丙酮5:1)；
Figure BDA0001396739090000097
Figure BDA0001396739090000098
ECD(CH3CN,c 0.0043M)λmax(Δε):294(-2.23),211(+0.37),197.5(+0.08),190(+0.89)nm；UV(CH3CN)λmax(logε):207(2.82)nm；IR(film)νmax 3405,2925,1693,1454,1381,1034cm-1；HREIMS m/z 282.1832[M]+(计算值C16H26O4,282.1826)。1H和13C核磁共振数据见表8和表9。
Phomaketide N:无色油状；Rf＝0.50(二氯甲烷/丙酮2:1)；[α]2 D 5＝+12.3(c0.0029,CH3CN)；UV(CH3CN)λmax(log ε):264(2.85)nm；IR(film)νmax 3374,2924,2854,1732,1641,1459,1396,1311,1041,1001cm-1；HRESIMS m/z 303.1576[M+Na]+(计算值C16H24O4Na,303.1572)。1H和13C核磁共振数据见表8和表9。
实施例2.本发明化合物的T细胞亚型调控实验
采用流式细胞术对本发明化合物Aspermytin A、Aspermytin A acetate和Phomaketide A-N进行T细胞亚型调控试验。
1.实验用动物株
雌性C57BL/6小鼠(18-20g)购自上海斯莱克实验动物有限公司。所有实验操作均严格按照国家对实验动物的使用和保养规定进行，符合作者所在单位的实验动物中心确定的指导方针，并通过第二军医大学动物伦理委员会批准。
2.实验试剂、耗材和仪器
1640培养液(Gibco)；血清(Gibco)；淋巴细胞分离液(eBioscience)；DMSO(sigma)；刀豆蛋白(sigma)；pe-anti-cd3抗体(eBioscience)，fitc-anti-cd4抗体(eBioscience)，cy5.5-anti-cd8抗体(eBioscience)；凋亡检测试剂盒(BD Biosciences)；培养皿(Corning)；移液管(Corning)；96孔板(Corning)；CO2孵箱(SANYO)；流式细胞仪(BDFACSCalibur)。
3.实验用药
本发明化合物Aspermytin A(化合物1)、Aspermytin A acetate(化合物2)和Phomaketide A-N(化合物3-16)，由实施例1制备。
4.细胞制备
(1)将C57BL/6小鼠颈椎脱臼处死，无菌分离小鼠脾脏，置于预冷PBS中洗涤，再放入置于2mL预冷的1640培养基中的70μm孔径的尼龙网中，用针筒的针芯碾压；
(2)收集细胞，用2mL注射器抽吸，制成单细胞悬液；
(3)转移4mL淋巴细胞分离液至15mL离心管中，然后将细胞悬液小心加入上层。水平离心机转速1500rpm，离心30min，小心取出离心管，吸取中间淋巴细胞层；
(4)转移淋巴细胞悬液至离心管中，加入10倍体积的1640培养基，洗涤一次，弃上清；
(5)重复步骤(4)两次；
(6)用含10％FBS的RPMI-1640培养基重悬脾淋巴细胞，计数；
(7)将制备的脾淋巴细胞以1×106个/mL密度接种到96孔板，每孔100μL；
(8)同时设置空白孔(培养基、溶药溶剂)，对照孔(细胞悬液、溶药溶剂)和给药孔(细胞悬液、系列浓度的药物)，每组做3复孔，边缘孔用培养液填充以减少边缘效应。将加好样的细胞培养板放置5％CO2，37℃孵育箱分别培养。
5.细胞凋亡检测
按凋亡试剂盒使用说明书染色：收集待测细胞，用预冷的1％BSA-PBS(牛血清白蛋白-磷酸盐缓冲液)离心洗涤一遍，1500rpm离心5min，重悬细胞于500μL 1％BSA-PBS内，调整细胞密度为1×106cells/mL，分别立即加入5μL的Annexin V和PI进行染色，冰上暗处孵育10min，上流式细胞仪检测。
6.T细胞亚型检测实验
首先制备脾细胞悬液，按2×106/mL铺24孔板，选用5μg/mL刀豆蛋白刺激处理24h，然后收集不同处理组的细胞。用400μL，1％BSA-PBS缓冲液重悬，加入pe-anti-cd3抗体，fitc-anti-cd4抗体，cy5.5-anti-cd8抗体，避光孵育20min，流式上机检测。
二、实验结果
用流式细胞仪分析研究了本发明化合物Aspermytin A(化合物1)、Aspermytin Aacetate(化合物2)和Phomaketide A-N(化合物3-16)对ConA诱导的小鼠脾细胞的凋亡和细胞分型的影响。如图1所示，图中编号1-16对应化合物1-16，细胞凋亡结果显示，这16种化合物在3μM浓度条件下对脾细胞的细胞毒性很低。在这个实验条件的基础上，用5μg/mL的ConA活化细胞(The immunotoxicological pattern of subchronic and chronic benzeneexposure in rats.Toxicol Lett.2017,5；275:1-5；Immuno-modulatory and cellularantioxidant activities ofκ-selenocarrageenan in combination with Epirubicinin H22hepatoma-bearing mice.Biomed Pharmacother.2017；91:132-137)，同时加入本发明化合物刺激，以仅用Con A活化的组为对照组，24小时后，如图2所示，Aspermytin A、Phomaketide B和Phomaketide H明显诱导CD3+T细胞的增殖；如图3所示，化合物Aspermytin A acetate、Phomaketide E、Phomaketide I和Phomaketide L明显诱导CD4+T细胞的分化而抑制CD8+T细胞的分化，与对照组相比，化合物Aspermytin A acetate、Phomaketide E、Phomaketide I、Phomaketide L、Phomaketide M和Phomaketide N干预后CD4/CD8值升高。
上述实验结果表明，本发明化合物具有一定的T细胞亚型调控活性，故可用于制备免疫调控药物。本发明为研制新的免疫调节药物提供了先导化合物，为深入研究和开发新的免疫调节药物开辟了新的途径，有利于开发利用海洋药用资源。
表1.化合物Phomaketide A-C的核磁共振氢谱数据
Figure BDA0001396739090000121
Figure BDA0001396739090000131
a＝400,b＝500MHz,in C5D5N,J in Hz
表2.化合物Phomaketide D-F的核磁共振氢谱数据
Figure BDA0001396739090000132
a＝400,b＝500MHz,in C5D5N,J in Hz
表3.化合物Phomaketide A-F的核磁共振碳谱数据
Figure BDA0001396739090000133
Figure BDA0001396739090000141
a＝400,b＝500MHz,in C5D5N,J in Hz
表4.化合物Phomaketide G-H的核磁共振氢谱数据
Figure BDA0001396739090000142
Figure BDA0001396739090000151
600MHz,in CDCl3,J in Hz
表5.化合物Phomaketide G-H的核磁共振碳谱数据
Figure BDA0001396739090000152
Figure BDA0001396739090000161
100MHz,in CDCl3
表6.化合物Phomaketide I-K的核磁共振氢谱数据
Figure BDA0001396739090000162
400MHz,in C5D5N,J in Hz
表7.化合物Phomaketide I-K的核磁共振碳谱数据
Figure BDA0001396739090000163
Figure BDA0001396739090000171
100MHz,in C5D5N
表8.化合物Phomaketide L-N的核磁共振氢谱数据
Figure BDA0001396739090000172
Figure BDA0001396739090000181
aIn C5D5N,bin CDCl3,500MHz,J in Hz
表9.化合物Phomaketide L-N的核磁共振碳谱数据
Figure BDA0001396739090000182
Figure BDA0001396739090000191
aIn C5D5N,bIn CDCl3,100MHz
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (4)

1.一种十氢化萘类化合物，其特征在于，由以下化学结构式中的一种表示：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
2.一种十氢化萘类化合物在制备免疫调节药物中的用途，其特征在于，所述十氢化萘类化合物由以下化学结构通式中的一种表示：
Figure 404553DEST_PATH_IMAGE002
其中，
R1、R2、R3、R6和R7各自独立地是H或OH；
R4是α-CH3或β- CH3；
R5是H或=O；
X是OH、CH3或CH2CH2OH；
或者，所述十氢化萘类化合物由以下化学结构通式中的一种表示：
Figure DEST_PATH_IMAGE003
3.根据权利要求2所述的十氢化萘类化合物在制备免疫调节药物中的用途，其特征在于，所述十氢化萘类化合物是以下化合物中的一种：
Figure 56114DEST_PATH_IMAGE004
4.根据权利要求2或3所述的十氢化萘类化合物在制备免疫调节药物中的用途，其特征在于，所述十氢化萘类化合物提取自短指软珊瑚Sinularia sandensis的共附生真菌Phoma sp.的发酵液。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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