TWI807338B

TWI807338B - 結合ＴＧＦ-α及表皮調節素（ＥＰＩＲＥＧＵＬＩＮ）之抗體於治療疼痛之用途

Info

Publication number: TWI807338B
Application number: TW110121674A
Authority: TW
Inventors: 馬希歐切迪; 約瑟夫Ｇ休爾
Original assignee: 美商美國禮來大藥廠
Priority date: 2020-06-26
Filing date: 2021-06-15
Publication date: 2023-07-01
Also published as: KR20230027264A; CN115768518A; US20210403547A1; EP4171741A1; JP2023532287A; AU2021297223A1; BR112022024512A2; TW202214297A; CA3183482A1; IL298711A; MX2022016087A; WO2021262662A1

Abstract

本發明提供結合人類TGF-α及人類表皮調節素(Epiregulin)之抗體於治療慢性疼痛，及特定言之慢性骨關節炎疼痛、慢性糖尿病性神經病變性疼痛或慢性下背痛中之治療用途。

Description

結合TGF-α及表皮調節素(EPIREGULIN)之抗體於治療疼痛之用途

本發明係關於結合人類TGF-α及表皮調節素之抗體於治療慢性疼痛，包括傷害感受性、神經病變性及混合型疼痛，及特定言之於治療慢性骨關節炎(OA)疼痛或慢性糖尿病性周圍神經病變性疼痛(DPNP)或慢性下背痛中之用途。

基於機理將慢性疼痛分成不同類別：傷害感受性、神經病變性及混合型。傷害感受性疼痛由潛在或實際上引起對非神經組織之損傷之刺激物引起。此活化周圍感覺系統中之傷害感受性受體。由於骨關節炎(OA)之疼痛為軀體傷害感受性疼痛之經典實例。神經病變性疼痛係由中樞或周圍神經系統之損傷或疾病引起，導致感覺神經系統之不適應的高敏性。由於糖尿病性周圍神經病變(DPNP)之疼痛為周圍神經病變性疼痛之經典實例。展示傷害感受性及神經病變性疼痛二者之特徵之病狀(諸如慢性下背痛)歸類為混合型疼痛。

慢性疼痛為具有巨大社會影響之高度流行病狀。於2016年，估計在美國20.4%之成人群體經歷慢性疼痛，經定義為大多數時日或於過去6個月每天疼痛，基於來自美國國家衛生訪問調查(National Health Interview Survey)之數據。估計8%之群體具有慢性疼痛，該疼痛在大多數時日或於過去6個月每天限制其生活或工作活動。結果，慢性疼痛為健康護理支出之首要原因，其中於2010年在美國用於管理慢性疼痛之年度成本估計為約$6350億。儘管高的疾病負擔及社會影響，但是慢性疼痛之管理目前係不令人滿意。非藥理學療法單獨很少適用於疼痛減輕或功能改善，及可用藥理學療法提供適度效益且具有顯著安全性風險。目前，減輕最常見類型之慢性疼痛的最頻繁使用之藥物為對乙醯胺基酚(acetaminophen)、非類固醇消炎藥物及類鴉片。加巴噴丁(Gabapentinoid)、其他抗驚厥劑(諸如雙丙戊酸鈉、卡巴西平(carbamazepine)或拉莫三嗪(lamotrigine))及一些抗抑鬱劑(諸如三環類或度洛西汀(duloxetine))可用於一些特定疼痛病症。目前藥理學設備通常顯示低水平之功效、耐受性問題及/或有害副作用。類鴉片針對急性疼痛係有效，但是其為慢性疼痛之有限治療選項，因為高的濫用風險及潛在嚴重不良反應。慢性疼痛對患者及社會之身體、情感及財務影響與缺少有效且耐受治療選項組合，使其為顯著未滿足之醫療需求。

資料表明，EGFR路徑涉及神經病變性疼痛之發病機理(Kersten,C、Cameron MG、Laird B、Mjåland S.Epidermal growth factor receptor-inhibition(EGFR-I)in the treatment of neuropathic pain.Br J Anaesth.2015；115(5)：761-767)。然而，利用EGFR抗體或EGFR酪胺酸激酶抑制劑靶向受體係與胃腸(GI)及皮膚不良反應之高的發生率相關聯，這限制其潛在用於具有慢性疼痛之非腫瘤群體中。結合及活化EGFR之配位體包括表皮調節素(EREG)、轉化生長因子α(TGFα)、表皮生長因子、肝素結合類表皮生長因子、β細胞素、雙調蛋白及表皮細胞分裂原 (epigen)(Schneider MR、Wolf E.The epidermal growth factor receptor ligands at a glance.J Cell Physiol.2009；218(3)：460-466)。EGFR配位體中之兩者，TGFα及表皮調節素係獨特的，在於其無法誘導受體降解及因此促進受體再循環及持久EGFR路徑活化(Roepstorff K、Grandal MV、Henriksen L、Knudesen SL、Lerdrup M、Grøvdal L、Willumsen BM、van Deurs B.Differential effects of EGFR ligands on endocytic sorting of the receptor.Traffic.2009；10(8)：1115-1127)。

抗體I為高親和力人源化免疫球蛋白G4(IgG4)單株抗體，其結合至人類TGFα及表皮調節素之C端區域中之關鍵殘基，從而防止其結合及活化EGFR，且抗體I、及製備此抗體之方法及其調配物連同治療糖尿病性神經病變之方法揭示於WO 2012/138510中。

對慢性疼痛，包括傷害感受性、神經病變性及混合型疼痛之替代及/或改善之治療及特定言之於治療骨關節炎(OA)或糖尿病性周圍神經病變(DPNP)或慢性下背痛中仍存在不滿足的需求。另外對慢性疼痛，包括傷害感受性、神經病變性及混合型疼痛之替代及/或改善之治療及特定言之於治療骨關節炎(OA)或糖尿病性周圍神經病變(DPNP)或慢性下背痛以治療抗療法疼痛中仍存在不滿足的需求，本文中將抗療法疼痛定義為對兩種或更多種先前單藥療法及/或雙重療法治療方案難治之疼痛。

本發明提供針對TGF-α及表皮調節素之抗體，其用於治療慢性疼痛，包括傷害感受性、神經病變性及混合型疼痛，及特定言之治療慢性骨關節炎(OA)疼痛或慢性糖尿病性周圍神經病變性疼痛(DPNP)或慢性下背痛。此外，本發明提供針對TGF-α及表皮調節素之抗體，其用於治療對兩種或更多種先前單藥療法及/或雙重療法治療方案難治之慢性骨關節炎(OA)疼痛或慢性糖尿病性周圍神經病變性疼痛(DPNP)或慢性下背痛。

於一實施例中，本發明提供一種治療有需要個體之慢性疼痛之方法，其包括向該個體投與治療上有效量之包含輕鏈及重鏈之抗體，其中該輕鏈包含輕鏈可變區(LCVR)及該重鏈包含重鏈可變區(HCVR)，其中該LCVR包含胺基酸序列LCDR1、LCDR2及LCDR3，及該HCVR包含胺基酸序列HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中LCDR1為SEQ ID NO：4，LCDR2為SEQ ID NO：5，LCDR3為SEQ ID NO：6，HCDR1為SEQ ID NO：1，HCDR2為SEQ ID NO：2且HCDR3為SEQ ID NO：3。

於一實施例中，本發明提供一種治療有需要個體之慢性骨關節炎疼痛之方法，其包括向該個體投與治療上有效量之包含輕鏈及重鏈之抗體，其中該輕鏈包含輕鏈可變區(LCVR)及該重鏈包含重鏈可變區(HCVR)，其中該LCVR包含胺基酸序列LCDR1、LCDR2及LCDR3，及該HCVR包含胺基酸序列HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中LCDR1為SEQ ID NO：4，LCDR2為SEQ ID NO：5，LCDR3為SEQ ID NO：6，HCDR1為SEQ ID NO：1，HCDR2為SEQ ID NO：2且HCDR3為SEQ ID NO：3。

於一實施例中，本發明提供一種治療有需要個體之慢性糖尿病性周圍神經病變性疼痛之方法，其包括向該個體投與治療上有效量之包含輕鏈及重鏈之抗體，其中該輕鏈包含輕鏈可變區(LCVR)及該重鏈包含重鏈可變區(HCVR)，其中該LCVR包含胺基酸序列LCDR1、LCDR2及LCDR3，及該HCVR包含胺基酸序列HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中 LCDR1為SEQ ID NO：4，LCDR2為SEQ ID NO：5，LCDR3為SEQ ID NO：6，HCDR1為SEQ ID NO：1，HCDR2為SEQ ID NO：2且HCDR3為SEQ ID NO：3。

於一實施例中，本發明提供一種治療有需要個體之慢性下背痛之方法，其包括向該個體投與治療上有效量之包含輕鏈及重鏈之抗體，其中該輕鏈包含輕鏈可變區(LCVR)及該重鏈包含重鏈可變區(HCVR)，其中該LCVR包含胺基酸序列LCDR1、LCDR2及LCDR3，及該HCVR包含胺基酸序列HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中LCDR1為SEQ ID NO：4，LCDR2為SEQ ID NO：5，LCDR3為SEQ ID NO：6，HCDR1為SEQ ID NO：1，HCDR2為SEQ ID NO：2且HCDR3為SEQ ID NO：3。

於一實施例中，本發明提供如以上實施例中之任一者之方法，其中該LCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10。

於一實施例中，本發明提供如以上實施例中之任一者之方法，其中該HCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：7。

於一實施例中，本發明提供如以上實施例中之任一者之方法，其中該LCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：9及該HCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：7。

於一實施例中，本發明提供如以上實施例中之任一者之方法，其中該輕鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14。

於一實施例中，本發明提供如以上實施例中之任一者之方法，其中該重鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：12。

於一實施例中，本發明提供如以上實施例中之任一者之方法，其包含兩條輕鏈，其中各輕鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：13，及兩條重鏈，其中各重鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：12。

於一實施例中，本發明提供如以上實施例中之任一者之方法，其包含兩條輕鏈，其中各輕鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：14，及兩條重鏈，其中各重鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：12。

於一實施例中，本發明提供如以上實施例中之任一者之方法，其中該抗體之劑量為750mg起始劑量，接著每2週500mg劑量持續與患者需要疼痛治療一樣長。

於一實施例中，本發明提供如以上實施例中之任一者之方法，其中該慢性疼痛對兩種或更多種先前單藥療法及/或雙重療法治療方案難治。

於一實施例中，本發明提供包含輕鏈及重鏈之抗體，其中該輕鏈包含輕鏈可變區(LCVR)及該重鏈包含重鏈可變區(HCVR)，其中該LCVR包含胺基酸序列LCDR1、LCDR2及LCDR3，及該HCVR包含胺基酸序列HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中LCDR1為SEQ ID NO：4，LCDR2為SEQ ID NO：5，LCDR3為SEQ ID NO：6，HCDR1為SEQ ID NO：1，HCDR2為SEQ ID NO：2且HCDR3為SEQ ID NO：3，其用於治療慢性疼痛。於一實施例中，本發明進一步提供以上用途，其中該慢性疼痛係選自由慢性骨關節炎疼痛、慢性糖尿病性神經病變性疼痛及慢性下背痛組成之群。於一實施例中，本發明進一步提供以上用途，其中該LCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10。於一實施例中，本發明進一步提供以上用途，其中該HCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：7。於一實施例中，本發明進一步提供以上用途，其中該LCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：9且該HCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：7。於一實施例中，本發明進一步提供以上用途，其中該輕鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14。於一實施例中，本發明進一步提供以上用途，其中該重鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：12。於一實施例中，本發明進一步提供以上用途，其包含兩條輕鏈，其中各輕鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：13，及兩條重鏈，其中各重鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：12。於一實施例中，本發明進一步提供以上用途，其包含兩條輕鏈，其中各輕鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：14，及兩條重鏈，其中各重鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：12。於一實施例中，本發明進一步提供以上用途，其中該慢性疼痛為慢性骨關節炎疼痛。於一實施例中，本發明進一步提供以上用途，其中該慢性疼痛為慢性糖尿病性周圍神經病變性疼痛。於一實施例中，本發明進一步提供以上用途，其中該慢性疼痛為慢性下背痛。於一實施例中，本發明進一步提供以上用途，其中該抗體之劑量為750mg起始劑量，接著每2週500mg劑量持續與患者需要疼痛治療一樣長。於一實施例中，本發明進一步提供以上用途，其中該慢性疼痛對兩種或更多種先前單藥療法及/或雙重療法治療方案難治。於一實施例中，本發明提供如以上實施例之抗體之用途，其用於製造用於治療慢性疼痛之藥劑。於一實施例中，本發明提供如以上實施例之抗體之用途，其用於製造用於治療慢性疼痛之藥劑，其中該慢性疼痛係選自慢性骨關節炎疼痛、慢性糖尿病性神經病變性疼痛及慢性下背痛。

圖1.抗體III於大鼠半月板撕裂模型中之疼痛功效。將數據表示為平均值±SEM，其中組大小為n=6。統計比較：ANOVA及用於與對照IgG1比較之登尼特氏(Dunnett’s)檢驗(*p<0.001)及用於比較1與10mg/kg之間之抗體III之圖基氏(Tukey’s)(*p<.05)。縮略語：ANOVA=方差分析；IgG1=免疫球蛋白G1；SEM=平均值標準誤差。

圖2.將比較抗體I相對於安慰劑之26週，2期，隨機，雙盲，安慰劑對照之研究之概觀。

本申請案主張根據35 U.S.C.§119(e)各自在2020年6月26日及2020年8月26日申請之美國臨時申請案序列號63/044,455及63/070,507之權益；其揭示內容係以引用的方式併入本文中。

如本文中所用，慢性疼痛係指持續超過一天之疼痛，或於一個月內復發若干次之疼痛。慢性骨關節炎疼痛、慢性糖尿病性神經病變性疼痛及慢性下背痛及患有此等病狀之患者之識別可藉由熟習技工已知之方法使用建立之標準(包括本文中所述彼等)確定。如本文中所用，患者為已經診斷為患有需要利用本文中所述抗體治療之病狀或病症之人類。於可藉由本發明之方法治療之病症為已建立及接受之分類已知(諸如骨關節炎疼痛、糖尿病性神經病變性疼痛或下背痛)之彼等情況下，其分類可見於各種來源，及國際疾病分類第10次修訂版(ICD-10)提供本文中所述之病症之分類。熟習技工應知曉，針對本文中所述病症存在替代命名法、疾病分類學及分類系統，包括如DSM-IV及ICD-10中所述之彼等，及術語及分類系統隨著醫療科學進展發展。

如本文中所用，骨關節炎疼痛明確地包括非根(非神經病變性疼痛)。如本文中所用，神經病變性疼痛明確地包括根疼痛CLBP、DNP及LSR。於實施例中，該疼痛為慢性疼痛，諸如，例如，藉由本發明方法治療之骨骼肌以及神經病變性起源二者之慢性疼痛。於其他實施例中，藉由本發明方法治療之疼痛為內臟疼痛(諸如，例如，慢性前列腺炎、間質性膀胱炎(膀胱疼痛)或慢性骨盆疼痛)。

其他實施例提供一種治療傷害感受性/發炎性、神經病變性、可塑性或混合型病因之疼痛之方法。於其他實施例中，該疼痛為慢性疼痛，其係骨骼肌或神經病變性起源。藉由本發明方法治療之疼痛之其他類型包括術後疼痛、類風濕性關節炎疼痛、神經病變性疼痛及骨關節炎疼痛。

疼痛之示例性類型包括神經病變性疼痛，例如，痛性糖尿病性神經病變、化療誘導之周圍神經病變、下背痛、三叉神經痛、帶狀疱疹後遺神經痛、坐骨神經痛及複雜區域疼痛症候群；發炎性疼痛，例如，來自類風濕性關節炎、骨關節炎、顳下頜病症；PDN或CIPN；內臟疼痛，例如，來自胰炎、發炎性腸病、結腸炎、克羅恩氏病(Crohn’sdisease)、內膜異位症、骨盆疼痛及心絞痛；選自以下組之疼痛：癌症疼痛、燒傷疼痛、口腔疼痛、擠壓及損傷誘導之疼痛、切口疼痛、骨疼痛、鐮狀細胞病疼痛、纖維肌痛及骨骼肌疼痛；或來自痛覺過敏或觸摸痛之疼痛。

如本文中所定義，疼痛明確地包括骨骼肌以及神經病變性起源二者之慢性疼痛。「術後疼痛」(可互換稱作「切開後」或「創傷後疼痛」)係指自外部創傷，諸如進入個體組織之切割、穿刺、切口、撕裂或傷口出現或產生之疼痛(包括自所有外科手術產生者，無論是否侵入式或非侵入式)。如本文中所用，術後疼痛不包括在無外部物理創傷下發生(出現或來源)之疼痛。於一些實施例中，術後疼痛為內部或外部(包括周圍)疼痛，及傷口、切割、創傷、撕裂或切口可意外(正如創傷性傷口)或故意(正如手術切口)發生。如本文中所用，「疼痛」包括傷害感受及疼痛感覺，及疼痛可使用疼痛評分及此項技術中熟知之其他方法客觀及主觀評估。如本文中所用，術後疼痛包括觸摸痛(即，對正常無毒刺激物之增加之反應)及痛覺過敏(即，對正常無毒或不愉快刺激物之增加之反應)，其繼而可係天然熱或機械(觸覺)性質。於一些實施例中，疼痛藉由熱敏感性、機械敏感性及/或靜息疼痛表徵。於一些實施例中，術後疼痛包括機械誘導之疼痛或靜息疼痛。於其他實施例中，術後疼痛包括靜息疼痛。疼痛可為原發性或繼發性疼痛，如此項技術中熟知。

如本文中可互換使用，術語「患者」、「受試者」及「個體」係指人類。於某些實施例中，患者進一步表徵為具有將自TGF-α及表皮調節素之抑制受益之疾病、病症或病狀(例如，疼痛)。

術語「治療(treating)」(或治療(treat/treatment))意指減慢、停止、降低或逆轉症狀、病症、病狀或疾病之進展或嚴重度。

有效量可藉由熟習此項技術者藉由使用已知技術及藉由觀察在類似情況下獲得之結果測定。於測定患者之有效量中，考慮許多因素，包括(但不限於)：患者之物種；其大小、年齡及一般健康；涉及之特定疾病或病症；累及之程度或疾病或病症之嚴重度；個別患者之反應；所投與之特定化合物；投與模式；所投與製劑之生物可利用度特徵；所選劑量方案；合併用藥之使用；及其他相關情況。

術語「治療上有效量」係指本發明之抗體之量或劑量，其在向患者單一劑量或多劑量投與後，提供所需治療。於一些實施例中，有效量提供疼痛之臨床上顯著減少。每週、每兩週、每月或每季度非經腸 (包括但不限於皮下、肌肉內及/或靜脈內)劑量可為約0.5mg/kg至約50mg/kg。

每週、每兩週、每月或每季度非經腸(包括但不限於皮下、肌肉內及/或靜脈內)劑量可為約0.5mg/kg至約10mg/kg、約1mg/kg至約10mg/kg、約2mg/kg至約10mg/kg、約3mg/kg至約10mg/kg、約4mg/kg至約10mg/kg、約5mg/kg至約10mg/kg、約6mg/kg至約10mg/kg、約7mg/kg至約10mg/kg、約8mg/kg至約10mg/kg、約1mg/kg至約8mg/kg、約2mg/kg至約8mg/kg、約3mg/kg至約8mg/kg、約4mg/kg至約8mg/kg、約5mg/kg至約8mg/kg、約6mg/kg至約8mg/kg、約1mg/kg至約6mg/kg、約2mg/kg至約6mg/kg、約3mg/kg至約6mg/kg、約4mg/kg至約6mg/kg、約5mg/kg至約6mg/kg、約1mg/kg至約5mg/kg、約2mg/kg至約5mg/kg、約3mg/kg至約5mg/kg、約4mg/kg至約5mg/kg、約1mg/kg至約4mg/kg、約2mg/kg至約4mg/kg、約3mg/kg至約4mg/kg、約3.5mg/kg至約5mg/kg、或約4mg/kg至約5mg/kg。

每週、每兩週、每月或每季度非經腸(包括但不限於皮下、肌肉內及/或靜脈內)劑量可為(例如)約50mg至約500mg、約75mg至約500mg、約100mg至約500mg、約125mg至約500mg、約250mg至約500mg、約300mg至約500mg、約350mg至約500mg、約400mg至約500mg、約450mg至約500mg、約50mg至約400mg、約75mg至約400mg、約100mg至約400mg、約125mg至約400mg、約250mg至約400mg、約300mg至約400mg、約350mg至約400mg、約50mg至約300mg、約75mg至約300mg、約100mg至約300mg、約125mg至約300 mg、約150mg至約300mg、約175mg至約300mg、約200mg至約300mg、約250mg至約300mg、約50mg至約250mg、約75mg至約250mg、約100mg至約250mg、約125mg至約250mg、約150mg至約250mg、約175mg至約250mg、約200mg至約250mg、約75mg至約250mg、約50mg至約200mg、約75mg至約200mg、約100mg至約200mg、約125mg至約200mg、約150mg至約200mg、約175mg至約200mg、約50mg至約175mg、約75mg至約175mg、約100mg至約175mg、約125mg至約175mg、或約150mg至約175mg。

然而，亦設想低於或高於本文中所提及之劑量之劑量，尤其考慮為熟習此項技術者已知及/或本文中所述之劑量考量。正在治療之患者之進展可藉由定期評估監測，及若必要，則因此調整劑量。

用於本發明方法中之抗體結合TGF-α及表皮調節素，及包含輕鏈及重鏈，其中該輕鏈包含輕鏈可變區(LCVR)及該重鏈包含重鏈可變區(HCVR)，其中該LCVR包含胺基酸序列LCDR1、LCDR2及LCDR3，及該HCVR包含胺基酸序列HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中LCDR1為SEQ ID NO：4，LCDR2為SEQ ID NO：5，LCDR3為SEQ ID NO：6，HCDR1為SEQ ID NO：1，HCDR2為SEQ ID NO：2且HCDR3為SEQ ID NO：3。

此外，用於本發明方法中之抗體結合TGF-α及表皮調節素，及包含輕鏈及重鏈，其中該輕鏈包含輕鏈可變區(LCVR)及該重鏈包含重鏈可變區(HCVR)，其中該LCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10。

用於本發明方法中之抗體結合TGF-α及表皮調節素，及包含輕鏈及重鏈，其中該輕鏈包含輕鏈可變區(LCVR)及該重鏈包含重鏈可變區(HCVR)，其中該HCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：7。

用於本發明方法中之抗體結合TGF-α及表皮調節素，及包含輕鏈及重鏈，其中該輕鏈包含輕鏈可變區(LCVR)及該重鏈包含重鏈可變區(HCVR)，其中該LCVR之胺基酸序列及該HCVR之胺基酸序列係選自由以下組成之群：(i)該LCVR為SEQ ID NO：9且該HCVR為SEQ ID NO：7；及(ii)該LCVR為SEQ ID NO：10且該HCVR為SEQ ID NO：7。

用於本發明方法中之抗體結合TGF-α及表皮調節素，及包含輕鏈及重鏈，其中該輕鏈包含輕鏈可變區(LCVR)及該重鏈包含重鏈可變區(HCVR)，其中該LCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：9及該HCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：7。

用於本發明方法中之抗體結合TGF-α及表皮調節素，及包含輕鏈及重鏈，其中該輕鏈包含輕鏈可變區(LCVR)及該重鏈包含重鏈可變區(HCVR)，其中該LCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：10及該HCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：7。

用於本發明方法中之抗體結合TGF-α及表皮調節素，及包含輕鏈及重鏈，其中該輕鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14。

用於本發明方法中之抗體結合TGF-α及表皮調節素，及包含輕鏈及重鏈，其中該重鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：12。

用於本發明方法中之抗體結合TGF-α及表皮調節素，及包含輕鏈及重鏈，其中該重鏈之胺基酸序列及該輕鏈之胺基酸序列係選自由以下組成之群：(i)該重鏈為SEQ ID NO：12且該輕鏈為SEQ ID NO：13，及(ii)該重鏈為SEQ ID NO：12且該輕鏈為SEQ ID NO：14。

用於本發明方法中之抗體結合TGF-α及表皮調節素，及包含兩條輕鏈，其中各輕鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：13，及兩條重鏈，其中各重鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：12。

用於本發明方法中之抗體結合TGF-α及表皮調節素，及包含兩條輕鏈，其中各輕鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：14，及兩條重鏈，其中各重鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：12。

用於本發明方法中之抗體結合TGF-α及表皮調節素，及包括包含如本文中所述之抗體及至少一種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑之醫藥組合物。

用於本發明方法中之抗體可包括醫藥組合物，其包含如本文中所述之抗體，連同至少一種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑，及視情況可選之其他治療性成分。

本發明亦提供一種治療患者之慢性疼痛之方法，其包括向該患者投與本發明之抗體，如本文中所述，與護理標準分開、同時或依序組合。

此外，本發明提供使用如本文中所述之抗體用於療法中之方法，其中該抗體待與護理標準同時或依序組合投與。較佳地，本發明提供使用如本文中所述之抗體用於治療慢性疼痛之方法，其中該抗體待與護理標準同時或依序組合投與。

「抗體」之一般結構係此項技術中極熟知。針對IgG型之抗體，存在經由鏈內及鏈間二硫鍵交聯之四條胺基酸鏈(兩條「重」鏈及兩條「輕」鏈)。當於某些生物系統中表現時，具有未經修飾之人類Fc序列之抗體於Fc區中醣基化。抗體亦可在其他位置經醣基化。抗體之亞單元結構及三維構型係此項技術中熟知。各重鏈包含N-端重鏈可變區(「HCVR」)及重鏈恆定區(「HCCR」)。重鏈恆定區包含針對IgG、IgD及IgA之三個域(CH1、CH2及CH3)；及針對IgM及IgE之4個域(CH1、CH2、CH3及CH4)。各輕鏈包含輕鏈可變區(「LCVR」)及輕鏈恆定區(「LCCR」)。

各輕/重鏈對之可變區形成抗體結合位點。HCVR及LCVR區可進一步細分成散佈有更保守之區，稱作框架區(「FR」)之高可變區，稱作互補決定區(「CDR」)。各HCVR及LCVR包含自胺基端至羧基端以下列順序排列之三個CDR及四個FR：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。本文中，將重鏈之3個CDR稱作「CDRH1、CDRH2及CDRH3」及將輕鏈之3個CDR稱作「CDRL1、CDRL2及CDRL3」。該等CDR含有大多數殘基，其與抗原形成特定相互作用。胺基酸至各域之分配係根據熟知慣例[例如，Kabat，「Sequences of Proteins of Immunological Interest」,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)]。

用於本發明之抗體可具有選自免疫球蛋白類別(IgA、IgD、IgG、IgM及IgE)中之任一者之重鏈恆定區。此外，用於本發明之抗體含有Fc部分，其衍生自人類IgG4 Fc區，因為其如與其他IgG亞型相比降低之結合補體因子之能力。

抗體可衍生自單一複本或純系，包括(例如)任何真核、原核或噬菌體純系。較佳地，用於本發明之抗體存在於抗體分子之同源或實質上同源群體中。全長抗體包含全長或實質上全長恆定區，包括Fc區。此抗體之「抗原結合片段」為包含抗原結合部分及保留抗原結合能力之全長抗體之任何縮短形式。此等縮短形式包括(例如)Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段，該片段包含所揭示抗體之CDR或可變區。此外，此等縮短之抗體形式可為單鏈Fv片段，其可藉由接合編碼LCVR及HCVR之DNA與連接子序列產生。(參見，Pluckthun,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore編輯，Springer-Verlag,New York，第269至315頁，1994)。除非另有指定，否則術語「抗體」不包含此等片段。用於本發明之抗體可使用此項技術中熟知之技術，例如，重組技術、噬菌體呈現技術、合成技術或此等技術之組合或此項技術中易知之其他技術產生。

用於本發明之抗體為經工程改造之抗體，其已經設計以具有與源自人類基因組序列之框架及恆定區相同或實質上相同(實質上人類)之人類起源之框架、鉸鏈區及恆定區。全人類框架、鉸鏈區及恆定區為彼等人類生殖系序列以及具有天然產生之體細胞突變之序列及具有工程改造之突變之彼等。用於本發明之抗體可包含源自全人類框架、鉸鏈或恆定區之其中含有一或多個胺基酸取代、缺失或添加之框架、鉸鏈或恆定區。此外，用於本發明之抗體於人類中係實質上非免疫原性。

各種不同人類框架序列可單獨或組合使用，作為用於本發明之抗體之基礎。較佳地，本發明抗體之框架區係人類起源或實質上人類(至少95%、97%或99%之人類起源)。人類起源之框架區之序列可獲自Marie-Paule Lafranc、Gerard Lefranc之The Immunoglobulin Factsbook, Academic Press 2001,ISBN 012441351。

用於本發明之抗體之框架序列用作「供體」可變框架區及可用於使用此項技術中已知之方法創造具有本文中指定之相同CDR之另外抗體。此外，用於本發明之抗體之框架序列可與其他已知人類框架序列相比以產生另外抗體。因此，此資訊可用於將另一選定同源人類框架區在此等位置處「回突變」為供體胺基酸殘基。此外，任何「罕見」胺基酸可於另外人類框架中檢測到使得可在相關位置處使用共有或供體胺基酸殘基。

「TGF-α」或「人類TGF-α」係指人類TGF-α蛋白(SEQ ID NO：18)。

「表皮調節素」或「人類表皮調節素」係指人類表皮調節素蛋白(SEQ ID NO：33)。本文中Met-人類表皮調節素(SEQ ID NO：22)係用於活體外實驗中。提及如本文中所述之抗體結合或中和人類表皮調節素之能力亦關於其於活體外實驗中結合及中和人類met-表皮調節素之能力。

下列實例基本上可如下所述進行。

實例

實例1：產生抗體

可如下製備及純化抗體I及II。將適宜宿主細胞(諸如HEK 293或CHO)利用用於分泌抗體之表現系統使用最佳預先確定之HC：LC載體比率或編碼HC(諸如SEQ ID NO：15)及LC(諸如SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：17)二者之單一載體系統短暫或穩定轉染。將已分泌抗體之澄清培養基使用許多常用技術中之任一者純化。例如，可將該培養基方便地施覆至已利用相容緩衝液，諸如磷酸鹽緩衝鹽水(pH 7.4)平衡之蛋白質A或G管柱。將該管柱洗滌以移除非特異性結合組分。將所結合之抗體(例如)藉由pH梯度(諸如0.1M磷酸鈉緩衝液pH 6.8至0.1M檸檬酸鈉緩衝液pH 2.5)溶離。將抗體溶離份諸如藉由SDS-PAGE檢測及然後匯集。進一步純化係視情況可選，取決於預期用途。可使用常用技術將抗體濃縮及/或無菌過濾。可溶性聚集體及多聚物可藉由常用技術，包括尺寸排阻、疏水相互作用、離子交換或羥基磷灰石層析法有效移除。抗體於此等層析法步驟後之純度係大於99%。可將產物在-70℃下立即冷凍或可經凍乾。以下提供此等抗體之胺基酸序列。

調配物：

供應於玻璃小瓶中之呈凍乾粉末之抗體I之藥物產品用於臨床試驗使用。將小瓶內容物用無菌0.9%氯化鈉美國藥典(USP)再復水/稀釋。凍乾藥物產品抗體I由抗體I及賦形劑檸檬酸鈉、檸檬酸、聚山梨醇酯80及蔗糖組成。製造小瓶以遞送75mg抗體I。將小瓶內容物用3.2mL無菌0.9%氯化鈉USP復水/稀釋產生pH 6.0之由25mg/mL抗體I組成之透明溶液。

實例2：藉由表面電漿子共振(BIAcore)針對抗體I之親和力結合量測

使用Biacore T2000儀器(BIAcore® AB,Upsala,Sweden)、試劑及Biacore T2000評價軟體Ver 4.1用於表面電漿子共振分析。使用製造商之EDC/NHS胺偶合方法製備CM5晶片。藉由以10μL/min注射EDC/NHS之1：1混合物持續7分鐘來活化所有四種流動細胞之表面。將山羊抗人類Fc γ特異性抗體於10mM乙酸鹽，pH 4.0緩衝液中稀釋至50μg/ml及藉由以10μL/min之流率注射7分鐘以約10000RU固定至所有四種流動細胞上。將未反應位點用乙醇胺以10μL/min注射7分鐘阻斷。使用甘胺酸pH 1.5以30μL/min注射3 x 20秒，以移除非共價締合蛋白。運行緩衝液為HBS-EP[10mM HEPES，150mM氯化鈉，3mM EDTA，0.005%聚山梨醇酯20]。

於研究1中，將抗體I於運行緩衝液中稀釋至50μg/mL，及於流動池2中捕獲約400至600RU。將人類TGF-α(SEQ ID NO：18)、大鼠TGF-α(SEQ ID NO：20)、met-人類表皮調節素(SEQ ID NO：22)及食蟹獼猴表皮調節素(SEQ ID NO：24)於運行緩衝液中自100μg/mL稀釋至200nM及然後於運行緩衝液中兩倍連續稀釋至6.25nM。將小鼠表皮調節素(SEQ ID NO：23)於運行緩衝液中自100μg/mL稀釋至4μM及然後於運行緩衝液中兩倍連續稀釋至125nM。將各配位體濃度之一式兩份注射液以30μL/min注射300秒，接著解離期。該解離期針對人類及大鼠TGF-α為1800秒，針對人類及食蟹獼猴表皮調節素為1200秒，及針對小鼠表皮調節素為120秒。在所有流動池上藉由以30μL/min注射10mM甘胺酸pH 1.5持續3 x 20秒進行再生。

於研究2中，將抗體III於運行緩衝液中稀釋至100μg/mL，及於流動池2中捕獲約400至600RU。將小鼠TGF-α(SEQ ID NO：19)於運行緩衝液中自100μg/mL稀釋至200nM及然後於運行緩衝液中兩倍連續稀釋至6.25nM。將小鼠表皮調節素(SEQ ID NO：23)於運行緩衝液中自100μg/mL稀釋至4μM及然後於運行緩衝液中兩倍連續稀釋至125nM。將各配位體濃度之一式兩份注射液以30μL/min注射300秒，接著解離期。該解離期針對小鼠TGF-α為1800秒，及針對小鼠表皮調節素為120秒。在所有流動池上藉由以30μL/min注射10mM甘胺酸pH 1.5持續30秒進行再生。

收集減去參考之數據為Fc2-Fc1。在25℃下獲得測量值。使用「1：1(朗繆爾(Langmuir))結合」結合模型評價各配位體之締合速率(k _on)及解離速率(k _off)。根據關係：K_D=k _off/k _on自結合動力學計算親和力(K_D)。

表2

因此，抗體I特異性結合TGFα及表皮調節素及極弱地結合至表皮細胞分裂原。抗體I與來自各種物種之TGFα、表皮調節素及表皮細胞分裂原之表觀結合動力學及親和力係藉由表面電漿子共振(SPR)量測。來自各種物種之轉化生長因子α、表皮調節素及表皮細胞分裂原利用抗體I產生濃度依賴性結合反應，其對人類及大鼠TGFα具有強的親和力(K_d在25℃下各自為97.6±20.6pM及70.5±19.4pM)。不單獨量測食蟹獼猴及小鼠TGFα之結合動力學，因為其各自與人類及大鼠TGFα 100%相同。不單獨量測兔TGFα之結合動力學，因為抗體I抗原決定基於兔及人類TGFα中相同。抗體I顯示對人類及食蟹獼猴表皮調節素之強的親和力及對小鼠表皮調節素之親和力(K_d在25℃下各自為1.29±0.03nM、1.05±0.09nM及342±136nM)。不單獨量測大鼠表皮調節素之結合動力學，因為抗體I抗原決定基於大鼠及小鼠表皮調節素中相同。抗體I顯示對人類及小鼠表皮細胞分裂原之極弱親和力(K_d在25℃下各自為>2μM及493±205nM)。

因為抗體I為人源化單株抗體，其用於動物藥理學模型之評價受限，由於由動物產生對化合物之免疫反應之可能性。因此，使用小鼠單株抗體(抗體III)來測定於OA疼痛之動物模型中中和TGFα及表皮調節素之效應。抗體III與小鼠TGFα、表皮調節素及表皮細胞分裂原之結合動力學亦藉由SPR量測。抗體III顯示對TGFα之強的親和力及對表皮調節素及表皮細胞分裂原之弱的親和力，其中締合K_d值在25℃下各自為38.0±13.6pM、215±15nM及365±39nM。

實例3：EGF標靶配位體於人類結腸癌細胞系HT-29中之內部化Alexa Fluor® 488與抗體之結合

根據製造商之協定，將Alexa Fluor® 488與抗體I及對照IgG結合。將蛋白質於PBS中稀釋至2mg/mL。向0.5mL之此2mg/mL溶液中，添加50μL 1M碳酸氫鈉pH 9。然後將蛋白質溶液轉移至染料之小瓶中及在室溫下攪拌1小時。將經標記之蛋白質使用包含有標記套組之Bio-Rad BioGel P-30樹脂純化。

活體外內部化檢定

於研究1中，將已知表現TGF-α及表皮調節素之10,000個HT-29細胞(結腸腺癌細胞系)接種於96孔板之每孔及允許於完全培養基[含有L-麩胺醯胺、10%熱滅活胎牛血清(「FBS」)、1x抗生素及2.438g/L碳酸氫鈉之杜貝克氏(Dulbecco’s)改良之伊格氏(Eagle’s)培養基/F12(Ham)培養基(1：1)(「DMEM/F12」)]中培育過夜。第二天，將細胞用含有0.1% BSA之PBS洗滌及然後在37℃下於組織培養培育箱中用Alexa Fluor® 488結合之抗體I或對照IgG於具有0.1% BSA之PBS中以自0至88μg/mL範圍之濃度培育2小時。於培育期後，將細胞於具有0.1% BSA之PBS中洗滌若干次及然後用4%甲醛固定用於分析。如下進行內部化之定量：利用Cellomics Arrayscan VTI(Thermo Scientific)收集500個細胞/孔。利用該系統之「室分析」生物應用進行影像分析。利用赫斯特(Hoechst)染色(藍色)識別細胞核。設置所關注之兩個區域(ROI)以收集獲自掩蔽影像之來自細胞內點(紅色)及總綠色螢光(紅色及藍色二者)之螢光信號。計算來自各點及細胞之數目、面積及螢光強度。選擇細胞內點(紅色)之平均點總強度用於量測抗體I誘導之內部化。

於研究2中，如先前所述製備10,000個HT-29細胞，及將含於含有0.1% BSA之PBS中之Alexa Fluor® 488結合之抗體I或對照IgG以40μg/mL添加至細胞。將細胞在37℃下於組織培養培育箱中培育自0至120分鐘範圍之各種時間，然後用含有0.1% BSA之PBS洗滌若干次及用4%甲醛固定用於分析。信號之定量基本上如先前所述進行。

來自研究1之成像分析之結果確定，螢光信號經內部化至細胞及利用抗體I，但是非利用對照IgG係劑量依賴性(表3a及表3b)。

來自研究2之結果證實，抗體I經快速內部化及該內部化於添加至細胞2小時後完成(表4)。抗體I於活體外誘導標靶在HT-29細胞上以時間依賴性方式內部化(表4)。以上結果指示，抗體I結合至膜結合之配位體及以劑量依賴性及時間依賴性方式促進其內部化，其中於37℃下培育2小時內完成抗體I(及假定配位體)之內部化。

實例4：EGFR配位體刺激之細胞增殖於肌纖維母細胞細胞系中之中和之量測

使用純系小鼠肌纖維母細胞細胞系(「MFc7」)測試本發明之抗體阻斷EGFR配位體之增殖活性之能力。可活化EGFR之七種配位體為TGF-α(TGFA)、表皮調節素(EREG)、EGF、肝素結合EGF(HB-EGF)、表皮細胞分裂原(EPGN)、雙調蛋白(AREG)及β細胞素(BTC)。該等EGFR配位體共用結構基序，類EGF域，其特徵在於由六個相似間隔之保守半胱胺酸殘基形成之三個分子內二硫鍵。增殖活性藉由溴去氧尿苷(「BrDU」)併入測定及根據製造商之說明利用比色BrDU ELISA套組量測。

首先，將2,000個MFc7細胞/孔平板接種於經組織培養物處理之96孔微板中之含有L-麩胺醯胺、10%熱滅活FBS、1x抗生素及2.438g/L碳酸氫鈉之0.1mL杜貝克氏改良之伊格氏培養基/F12(Ham)培養基(1：1)(「DMEM/F12」)中。允許將細胞附接6小時，及然後移除培養基及用含有0.1% BSA之0.1mL無血清DMEM/F12更換用於血清飢餓過夜。第二天，利用含有0.1% BSA之無血清培養基於96孔聚丙烯板中以0.12mL/孔之體積自範圍自0.001至3000ng/mL之濃度製備EGFR配位體之連續稀釋。於稀釋後，自血清飢餓細胞移除培養基及然後用EGFR配位體刺激24小時。於刺激後，將細胞用BrDU脈衝4小時及然後根據製造商之說明用比色BrDU ELISA套組分析。

於測試抗體I對EGFR配位體之特異性中，於96孔聚丙烯板中以0.06mL/孔之體積自範圍自3000nM至0.059nM之濃度進行抗體之2X或3X之連續稀釋。於抗體之連續稀釋後，每孔添加0.06mL EGFR配位體。然後將板在37℃下於加濕組織培養培育箱中培育30分鐘。於培育後，將每孔0.1mL溶液轉移至細胞。將細胞刺激24小時。於刺激後，將細胞用BrDU脈衝4小時及然後用比色BrDU ELISA套組分析。在SpectraMax 190板讀取器(Molecular Devices)上生成吸光度值(450nM至690nM)及分析數據。

發現小鼠表皮調節素及大鼠TGF-α以及所有人類EGFR配位體(除了表皮細胞分裂原及雙調蛋白外)為該檢定中之細胞增殖之強效刺激物(表5)。抗體I及抗體III具有對人類及大鼠TGF-α及人類表皮調節素活性之高親和力(表5)。

表5概述針對所測試之EGFR配位體之EC50值計算值及針對彼等配位體之抗體之絕對IC50值。抗體I對人類TGF-α之平均IC50計算值為0.46±0.03nM及對人類表皮調節素為3.15±1.04nM。抗體III對人類TGF-α之IC50平均計算值為0.52±0.04nM及對人類表皮調節素為1.12±0.36nM。抗體III對大鼠TGF-α之平均IC50計算值為0.13±0.01nM及對小鼠表皮調節素為214±49nM。因此，抗體I及抗體III具有針對人類TGF-α及人類表皮調節素之高親和力及以完全中和活性經選擇。

總之，表皮生長因子受體配位體為許多譜系之細胞(包括肌纖維母細胞)之強效促有絲分裂因子。為測定抗體I之中和功效及特異性，於活體外評價其對肌纖維母細胞之增殖之效應。使用個別重組配位體刺激肌纖維母細胞之增殖及測定其針對此之相對50%有效濃度(EC₅₀)。隨後，於檢定中評價個別配位體之次最大濃度及抗體I之各種濃度以定量對特異性配位體之抑制活性。抗體I具有對人類、小鼠、大鼠及食蟹獼猴TGFα之強效中和活性(50%抑制濃度[IC₅₀]值<0.5nM)及對人類及食蟹獼猴表皮調節素之強效中和活性(IC₅₀值<3.5nM)。抗體I具有對小鼠及大鼠表皮調節素之較弱中和活性(IC₅₀值<350nM)及對人類、食蟹獼猴及大鼠表皮細胞分裂原之較弱中和活性(IC₅₀值<850nM)及對所測試之其他EGFR配位體無可量測之活性(IC₅₀值>2000nM)。

以相似方式，於肌纖維母細胞增殖檢定中評價小鼠抗體，抗體III之中和活性。抗體III亦強效抑制人類及大鼠TGFα及人類表皮調節素(IC₅₀值各自為0.521±0.037nM、0.131±0.012nM及1.12±0.36nM)及對小鼠表皮調節素之活性(IC₅₀值為214±49nM)。對所測試之其他小鼠EGFR配位體不存在可量測之活性。

因此，抗體I為高親和力人源化免疫球蛋白G4(IgG4)單株抗體，其結合至人類TGFα及表皮調節素之C端區域之關鍵殘基，從而防止其結合至及活化EGFR。抗體I之接合導致TGFα及表皮調節素二者之膜結合之前形式(proform)之內部化及成熟(可溶性)配位體活性之中和。臨床資料顯示，抗體I於至多750mg之單一劑量後於健康個體中耐受良好且於歷時3個月之時期每3週至多750mg靜脈內(IV)之多個劑量後於患有中度至嚴重糖尿病性腎病(DN)之患者中具有可接受之耐受性曲線。抗體I之安全性曲線不同於EGFR抗體或EGFR酪胺酸激酶抑制劑之安全性曲線，具有皮膚及GI不良事件(Ae)之低的發生率。總表皮調節素濃度於抗體I輸注後之劑量/濃度依賴性增加表明，其於活體內結合至表皮調節素。抗體I之分子、藥理學及臨床性質支援如下觀點：此抗體具有活性、可用性、安全性及耐受性以有利地治療對抑制TGFα及表皮調節素二者反應之疾病及病症。

本發明提供抗體I可用於治療慢性疼痛，包括傷害感受性、神經病變性及混合型疼痛，及特定言之治療骨關節炎(OA)或糖尿病性周圍神經病變(DPNP)或慢性下背痛。此外，本發明提供抗體I可用於治療對兩種或更多種先前單藥療法及/或雙重療法治療方案難治之骨關節炎(OA)或糖尿病性周圍神經病變(DPNP)或慢性下背痛。共用與抗體I相同之CDR之抗體III於骨關節炎疼痛之臨床前模型中進行測試，及發現於治療此模型之疼痛中具有功效，如下所述。此支援抗體I可用於治療如本文中所述之慢性疼痛病症之觀點。

實例5：抗TGF α抗體，抗體III於大鼠之骨關節炎膝蓋疼痛之半月板撕裂模型中之活體內效應

OA為慢性，使人虛弱的關節病，於受影響之關節中具有產生之疼痛。於本研究中，測試抗體III防止OA之大鼠MT模型中之疾病進展及減少類骨關節炎膝蓋痛之能力。MT為OA之描述充分之模型，其中關節破壞及疼痛於藉由內側側韌帶與內側半月板之交易的膝關節之手術不穩定後發生。OA疾病進展藉由組織學評估。以具有誘導之OA之手術膝蓋與相同動物之未手術之對側膝蓋之間之承重差異來量測疼痛。以1及10mg/kg之抗體III治療顯示對OA疾病進展無影響，但是顯示與對照IgG1抗體相比，以劑量依賴性方式之統計上顯著疼痛減少。

針對此研究，使用28至29週齡及稱重345至430克之48隻雄性路易士(Lewis)大鼠(Harlan,Indianapolis,IN)。將大鼠分成每個籠子3隻之組圈養及維持於恆溫與12小時光照/12小時黑暗循環中。除了收集資料期間外，動物在任何所有時間可自由獲取食物及水。將大鼠藉由體重隨機分成3組，每組16隻，並在大鼠中藉由右膝關節之內側側韌帶及半月板之手術切片來誘導OA。左膝關節不進行手術切片。以SC方式提供大鼠10mg/kg對照小鼠IgG1抗體，或1或10mg/kg抗體III之劑量。手術當天，就在手術前開始給藥，及對大鼠每週一次給藥直至研究結束。劑量體積為2mL/kg及每週一次經由皮下注射繼續給藥直至手術4週後研究結束。在屍體剖檢之前1週提供最後一次劑量，該屍體剖檢於手術4週後進行。在屍體剖檢時，收穫右及左膝關節，固定於10%鋅福馬林中，及然後送至BolderBioPATH用於由經職業認證之獸醫病理學家包埋，切片，組織學染色及評分。為以此模型評估疼痛，6隻大鼠隨機選自各治療組及在研究之第24天使用能力喪失測試(靜態差分承重)來評估疼痛。此量測手術與未手術膝蓋之間之後爪承重之差異。針對此研究，所報告之數值為3個單獨測量值之平均值，每個測量值係針對每一大鼠量測超過1秒。操作者對所選大鼠之治療組係不知情的。

將疼痛數據表示為平均值與平均值之標準誤差(±SEM)。藉由平均值之單因子分析評價數據。使用鄧尼特氏(Dunnett’s)檢驗比較組，同時利用Tukey-Kramer HSD檢驗以JMP統計分析程式(SAS Institute Inc.,NC)用於成對比較。若p值小於.05(p<.05)，則認為差異顯著。

針對組織學數據，BolderBioPATH進行該分析。使用司圖登特t-檢驗或Mann-Whitney U檢驗(非參數)分析數據。若適宜，則藉由單因子方差分析(ANOVA)或Kruskal-Wallis檢驗(非參數)，連同適宜多重比較事後檢驗進一步跨所有組分析數據。若p值小於.05(p<.05)，則認為差異顯著。

來自此研究之膝關節之組織學評分指示，當與對照IgG1相比時，利用抗體III(1或10mg/kg)治療不顯著影響大鼠之內側半月板撕裂誘導之OA之病變。然而，抗體III與對照IgG1相比在1及10mg/kg二者下顯著減少疼痛(藉由鄧尼特氏檢驗，p<.001)。抗體III之10-mg/kg劑量亦與1-mg/kg劑量顯著不同(p<.05，Tukey Kramer Honest顯著差異檢驗)。數據提供抗體III在減少疼痛方面有效之出人意料及意外的證據，如由大鼠半月板撕裂模型之承重差異所測得。

於人類中之效應

於此節中表示之臨床試驗數據係根據良好臨床實務(GCP)之原則生成。迄今為止已完成兩個臨床試驗，其中93個個體暴露於抗體I。於研究I5V-MC-TGAA(TGAA)中42個健康個體接受單一劑量(IV或SC)。於研究I5V-MC-TGAB(TGAB)中51名患者接受藉由IV輸注的多個劑量。此等研究之設計概述於表6中。

縮略語：ADA=抗藥物抗體；AE=不良事件；DLCO=擴散能力測量值；IV=靜脈內；n=個體之數目，SC=皮下；研究TGAA=研究I5V-MC-TGAA；研究TGAB=研究I5V-MC-TGAB。

實例6：臨床藥理學

藥物動力學

於單一及多個IV給藥後，抗體I展示非線性藥物動力學，這指示標靶介導之藥物沉積(表6.1、6.2及6.3)。在低劑量下，抗體I之表觀血漿清除率係顯著更大，具有相對短的T_1/2。隨著抗體I之劑量增加，抗體I之T_1/2接近432小時(18天)，符合針對靶向膜結合之蛋白質之單株抗體通常所觀察者。於DN患者中，抗體I平均暴露(自時間0至時間t之AUC，其中t為具有可量測濃度之最後時間點，[AUC_0-tlast])自於單一劑量後之2250μg*天/mL(表)增加至於750-mg IV輸注之第五劑量後之4880μg*天/mL(表6)，從而導致當每3週投與時約2倍累積。於750mg之單一IV輸注後，最大濃度(C_max)及暴露(AUC_0-tlast)於健康個體及DN患者中相當(於健康個體及DN患者中，平均C_max各自為265μg/mL及368μg/mL；平均AUC_0-tlast各自為3040μg‧天/mL及2250μg‧天/mL)。群體PK建模顯示，抗體I之藥物動力學於健康個體及DN患者中相似。抗體I於SC劑量投與後之生物可利用率計算值為38%；然而，所評價之劑量(50mg)位於其中藥物動力學係非線性的劑量之範圍內。因此，臨床相關線性PK範圍之生物可利用率可能更高。

縮略語：AUC_0-tlast=自時間0至時間t之濃度-時間曲線下面積，其中t為具有可量測濃度之最後時間點；AUC_0-∞=自時間0至無限之濃度-時間曲線下面積；CL=藥物之總身體清除率，其針對IV投與為絕對清除率及針對SC投與為表觀清除率(CL/F)；C_max=最大血清濃度；CV=變異係數；F=生物可利用率；IV==靜脈內；N=劑量組中之個體之數目；NA=不適用；NC=不可計算；SC=皮下；研究TGAA=研究I5V-MC-TGAA；T_max=達至最大濃度之時間；T_1/2=消除半衰期；V_ss=在穩態下之分佈體積。

^a 來自5個個體之數據包含於此等報告之值中。

^b F=(抗體I 50mg SC平均AUC_0-∞/抗體I 50mg IV平均 AUC_0-∞)*100。

^c 中值(範圍)。

來源：I5V-MC-TGAA表14.2.1.2。導出之抗體I藥物動力學參數之概述。

縮略語：AUC_0-tlast=自時間0至時間t之濃度-時間曲線下面積，其中t為具有可量測濃度之最後時間點；C_max=最大血清濃度；IV=靜脈內；N=劑量組中之個體之數目；研究TGAB=研究I5V-MC-TGAB；T_max=達至最大濃度之時間。

^a 中值(範圍)。

縮略語：AUC_0-tlast=自時間0至時間t之濃度-時間曲線下面積，其中t為具有可量測濃度之最後時間點；AUC_τ=在一個給藥間隔期間濃度相對於時間曲線下面積；C_max=最大血清濃度；IV=靜脈內；N=劑量組中之個體之數目；Q3W=每3週；研究TGAB=研究I5V-MC-TGAB；T_max=達至最大濃度之時間。

^a 中值(範圍)。

^b N=4。

藥效動力學

經由總表皮調節素及總TGFα濃度之測量之標靶接合

於臨床程序中使用藥物耐受性表皮調節素及TGFα檢定以量測總表皮調節素濃度(總表皮調節素或TGFα=抗體I結合之表皮調節素或TGFα+游離表皮調節素或TGFα)。當投與抗體I時，前提為表皮調節素/TGFα將結合至抗體I，且可與EGFR相互作用可得之游離表皮調節素/TGFα之量將減少。期望抗體I結合之表皮調節素TGFα具有較游離表皮調節素/TGFα更低的清除率，從而導致於抗體I投與後總表皮調節素/TGFα濃度之增加。在投與抗體I後，血清總表皮調節素含量於健康個體及患有DN之患者中以劑量依賴性方式增加。總血清表皮調節素含量通常於單一劑量抗體I投與後1與4週之間達到峰值及於後續劑量後繼續累積。此符合血清隔室中之總表皮調節素之隔離，連同其清除率之降低，及因此其血清濃度之逐步累積。此符合對表皮調節素之標靶接合。

血清TGFα含量於健康個體中在抗體I之單一劑量IV投與後似乎不變；於患有DN之患者中於多個劑量後觀察到血清總TGFα濃度之劑量依賴性增加。然而，血清總TGFα增加之量級較表皮調節素增加之量級更低，及其更可變。

針對總血清表皮調節素及TGFα之資料表明，抗體I結合至表皮調節素及TGFα二者及支持抗體I可於人類中於活體內接合表皮調節素及TGFα二者之臨床前資料。

跨臨床研究之安全性資料之概述

研究TGAA：無嚴重不良事件(SAE)與此研究中發生之抗體I給藥相關。無個體由於認為與抗體I相關之AE撤回或停藥。由至少2個於接受抗體I後之個體(或

5%)報告且較接受安慰劑之個體更頻繁報告之所有因果關係之治療緊急Ae(TEAE)包括鼻炎、打噴嚏、背痛、咳嗽、感覺熱、感覺異常及鼻液溢。認為與研究藥物相關之TEAE中無一者於超過2個隨機分至抗體I之個體中觀察到。一個個體於利用1mg抗體I給藥12天後經歷中等嚴重度之瀰漫性瘙癢性斑狀丘疹。皮疹持續10天及自發解決。研究者認為與研究藥物給藥相關之皮疹及符合皮疹通常與投與泛-EGFR抑制劑相關聯。不存在血壓、心率、QTc、臨床實驗室測試或肺擴散能力之臨床顯著異常。

研究TGAB：

於A部分中，無患者經歷導致在研究期間研究藥物之撤回的TEAE、SAE或死亡。治療緊急Ae由3名接受安慰劑之患者中的1名、4名接受10mg抗體I之患者中的3名、4名接受100mg之患者中的4名及4名接受750mg之患者中的2名經歷。於各治療組中之一名患者具有至少1個藥物相關之TEAE。

於B部分中，接受安慰劑之1名患者在研究期間死亡。經歷至少1個SAE之患者之數目包含6名接受安慰劑之患者中的1名(16.7%)、14名於50-mg組中之患者中的3名(21.4%)、13名於250-mg組中之患者中的6名(46.2%)及12名於750-mg組中之患者中的1名(8.3%)。於B部分中接受抗體I之患者中總計25.6%報告SAE。判斷於研究中觀察到之SAE中無一者與研究藥物給藥相關，及沒有由超過一個患者經歷SAE，不管治療與否。

經歷導致研究藥物之撤回之TEAE之患者之數目包含6名接受安慰劑之患者中的1名(16.7%)、14名於50-mg組中之患者中的2名(14.3%)、13名於250-mg組中之患者中的3名(23.1%)及12名於750-mg組中之患者中的1名(8.3%)。除了一個例外，認為導致研究藥物之撤回之所有TEAE與研究藥物不相關。導致研究藥物之撤回之1個相關TEAE為於接受750-mg抗體I之患者中之廣泛性瘙癢。

於B部分中由經抗體I治療之患者經歷之5種最常見TEAE為腹瀉、水腫加重、頭痛、高血壓惡化及噁心(各為10.3%)。由接受安慰劑之患者經歷之2種最常見TEAE為頭痛及慢性腎病(各為33.3%)。不存在TEAE之頻率及抗體I之劑量關係之證據。來自研究TGAB B部分之治療緊急Ae(不管因果關係)概述於表6.4中。於B部分中由超過1個患者報告藥物相關之TEAE中之無一者。針對生命體徵值或實驗室值不存在隨時間流逝自基線之一致變化。

表6.4. 所有抗體I之按首選項之遞減頻率之治療緊急不良事件的概述--B部分

實例7：隨機，安慰劑對照，2期臨床試驗以評價抗體I用於治療骨關節炎。

此研究之目的為提供抗體I於減輕由於骨關節炎(OA)之膝蓋疼痛中之功效的人類臨床證據。收集資料以評估抗體I於此研究群體中之安全性，及耐受性。亦探索藥物動力學(PK)性質、藥效動力學(PD)效應及免疫原性曲線。來自此概念驗證研究之總體資料將評估與抗體I相關聯之效益及風險及通知抗體I之臨床發展。

總體設計：

此為將於患有膝蓋中OA之參與者中比較抗體I相對於安慰劑的26週，2期，隨機，雙盲，安慰劑對照之研究。此為隨機，研究者及參與者盲，安慰劑對照之2期臨床試驗。將約125個參與者隨機分配至研究干預(84個抗體I及41個安慰劑)。此26週研究包含8週雙盲治療期及18週隨訪期。此研究設計示於圖2中。

研究干預將經由緩慢靜脈內(IV)輸注歷時約1小時由盲的現場人員投與。若觀察到輸注反應，則如認為必要可降低輸注速率。劑量為 750-mg起始劑量，接著每2週500mg IV持續總計4個劑量。劑量調配物為經無菌水0.9%氯化鈉溶液復水之凍乾粉末。參與者將接受每2週IV輸注持續總計4次輸注。將於完成各輸注後監測參與者至少4小時。

在患者訪問時，完成所有治療後樣品收集及安全性監測，及指導參與者在其訪問離開之前繼續研究限制及數字評級量表(NRS)日記記錄。於最後劑量至多6週後收集功效數據，這基於抗體I之長PK半衰期及潛在持續標靶接合。於最後投與干預至多20週後將收集安全性、藥物動力學(PK)、藥效動力學(PD)及免疫原性樣品以表徵安全性及臨床免疫原性曲線。若參與者已完成該研究之所有要求階段，包括最後排程之程序，則認為其已完成此研究。

目標及終點：

以下描述主要及次要目標及終點。

視覺類比量表(VAS)：在篩選時及在各臨床訪問時使用針對疼痛之VAS。此為圖形，單項量表，其中要求參與者描述其於研究中區域在過去一週之疼痛強度，以0至100之量表：0=無疼痛，及100=最惡劣的可想像疼痛。參與者藉由將垂直於VAS線之線放在描述其疼痛強度之點處來完成VAS。

數字評級量表(NRS)：在初步資料輸入期(PDEP)期間及整個研究每日使用NRS以描述疼痛嚴重度。此為數字單項量表，其中要求參與者描述其在過去24小時內之平均及最惡劣疼痛，以0至10之量表：0=無疼痛，及10=與你可想像一樣壞之疼痛。參與者每日使用可帶回家裝置完成NRS。在各臨床訪問時審查參與者順從性。每日收集NRS最惡劣疼痛。在各訪問時收集其他次要量度之分數，如訪問時程表中所指定。主要結果量度為平均疼痛強度自基線至終點之平均變化，如由NRS條項「請藉由選擇描述在過去24小時期間你的[研究中區域]疼痛之平均程度之一個數字[0至10]來評定你的疼痛」所評估。此量度基於其證實之檢測疼痛變化之能力及其跨疾病狀態之常見用途選擇。次要量度為最惡劣疼痛強度自基線至終點之平均變化，如由NRS條項「請藉由選擇描述在過去24小時期間你的[研究中區域]疼痛之最惡劣程度之一個數字[0至10]來評定你的疼痛」所量測。針對各參與者每日收集在過去24小時內平均疼痛及最惡劣疼痛之NRS值。對於統計分析，針對每週間隔及每兩週間隔二者計算在過去24小時內平均及最惡劣疼痛之平均NRS值。若參與者完成該研究之安慰劑對照之部分，則針對各參與者，針對NRS之每週間隔之平均值將導致8個基線後觀察結果，及每兩週間隔之平均值將導致4個基線後觀察結果。除非於分析計劃中另有指定，否則於以下所述之主要功效分析及其他分析中將使用針對NRS之每週間隔之平均值。參與者必須在預先指定之時間間隔期間具有50%或更大之每日NRS值以計算平均NRS值；否則，針對該訪問之平均NRS值將視為缺失。

參與者對總體改善之評級：使用患者總體印象變化(PGI)超越了疾病狀態。除了一般改善之次態樣外，其可蒐集參與者對治療之觀點。此為1至7之數字量表：1=極佳；及7=極差。要求參與者回答「與您開始服用此藥之前的情況相比，標記最能描述你現在疼痛症狀的方框」。

情感功能評估：使用EQ-5D-5L健康狀態調查表超越了疾病狀態。EQ-5D-5L為解決生活品質之最流行患者完成之工具中之一者(Buchholz I、Janssen MF、Kohlmann T、Feng YS.A systematic review of studies comparing the measurement properties of the three-level and five-level versions of the EQ-5D.PharmacoEconomics.2018；36(6)：645-661)。其為描述性系統，其包含5個維度：移動性、自理、日常活動、疼痛/不適、及焦慮/抑鬱。要求參與者回答「檢查最能描述今天你的健康之一個方框」，選自在各維度下提供之5個選項。5個維度之評分可呈現為健康曲線或轉化為單個匯總索引號。EQ-5D-5L亦包含EQ VAS，其以0至100之垂直VAS記錄參與者之自評健康：0=你可想像之最惡劣健康，及100=你可想像之最佳健康。以其EQ-5D-5L版本使用之工具為具有優異測試-再測試信度之簡短、可靠，有效性、易於完成之量表，以解決與由於若干疾病之疼痛相關之生活品質。

睡眠品質：睡眠干擾為疼痛研究中之重要問題。在各種可用工具中，醫學結果研究(MOS)睡眠量表提供針對睡眠干擾之獨特心理測量學驗證之分數。此量表由解決過去一週的12個問題組成。參與者在範圍自「所有時間」至「時間中無一者」之6點分類量表上報告各睡眠症狀或問題多經常呈現一次。將關於入睡時間及睡眠品質之問題報告為每晚睡眠之平均小時數。此量表具有低管理負擔，已用於不同疼痛研究中，及已於具有神經病變性疼痛之患者中經驗證。

安全性評估：針對安全性評估之計劃之時間點係根據典型實務確定，及包括身體檢查、生命體徵及體重量測、12導聯ECG、臨床實驗室測試、肝安全性監測、C-SSRS及自發報告之Ae。

功效評估：

當表徵慢性疼痛時，使用評估及域之核心集，其為：疼痛、身體功能、情感功能、參與者對總體改善之評級、不良事件(Ae)及參與者性情。針對主要終點選擇NRS，這基於其證實之檢測疼痛變化之能力及其跨研究中疾病狀態之常見用途。

西安大略及麥克馬斯特大學骨關節炎指數：該西安大略及麥克馬斯特大學骨關節炎指數(WOMAC®)(Bellamy N.The WOMAC Knee and Hip Osteoarthritis Indices：Development,validation,globalization and influence on the development of the AUSCAN Hand Osteoarthritis Indices.Clin Exp Rheumatol.2005；23(增刊39)：148-153)為經驗證之工具，其廣泛用於評價藥劑用於治療骨關節炎疼痛之反應。根據活動之時程表管理WOMAC版本LK3.1。

此表描述24-問題WOMAC及子量表。

參與者將使用0至4李克特(Likert)量表針對各問題記錄其反應：0=不疼痛，及4=極度疼痛。針對各參與者在各時間點，各子量表之評分將藉由將各自子量表中之問題之評分加總來計算。各子量表之可能評分之範圍為「疼痛=0至20」、「僵硬=0至8」及「身體功能=0至68」。將進行貝葉斯(Bayesian)縱向混合模型重複量度分析(MMRM)以評價WOMAC疼痛子量表及身體功能子量表自基線至各基線後訪問之變化。針對各基線後時間點，將估計各治療組中滿足預先指定之二元功效結果之參與者的比例及將用於比較治療組。該等估計將由擬合包含所有基線後觀察結果之貝葉斯縱向模型提供。預先指定之二元功效結果包括於ISA內之參與者之比例：其中自基線減少大於30%、50%及70%，如由WOMAC疼痛子量表所量測，及其中自基線減少大於30%、50%及70%，如由WOMAC身體功能子量表所量測。該模型將包含於以上連續功效分析模型中所述之分類及連續協變量，除了不使用基線及訪問之相互作用。於統計分析計劃中可考慮及指定另外模型項。WOMAC疼痛及身體功能子量表自基線至終點之變化%之累積分佈函數將針對各治療組提供。

活動時程表(SoA)：

此活動時程表顯示抗體I之研究之某些訪問及程序。「主協定」係指協定設置以於給定疾病狀態或多個疾病狀態中指導若干潛在研究，及干預特定附錄係指該協定之與研究中給定干預特定相關之部分。

縮略語：DSA=疾病狀態附錄；ED=提前停藥；V=訪問；WOMAC=西安大略及麥克馬斯特大學骨關節炎指數。

^a若篩選評估降低參與者負擔，則其可在隨機分組之前的其他時間點進行。

^b該現場測定參與者目前正在服用之各疼痛藥物之半衰期以至時程表第2次訪問。由於所需7天PDEP，第2次訪問可在第3次訪問之隨機分組之前不早於7天排程。

^c疼痛藥物之5個半衰期洗出期必須在PDEP之前，從而導致針對大多數參與者最少10天。

研究群體：

若基於患者報告或醫療史男性及女性參與者具有每日疼痛史，則其有資格納入該研究。

納入標準：

僅若所有下列標準適用，則參與者有資格包含於該研究中：其在簽署知情同意書時為40歲或更老；在第1次訪問時，其具有指數膝蓋疼痛之存在>12週；其具有支援骨關節炎之診斷之x-射線，根據美國風濕病學會與Kellgren-Lawrence等級2至4放射攝影術分類之指數膝蓋；其具有穩定血糖控制，如由在篩選時小於或等於10之糖化血紅蛋白(HbA1c)所指示；其為遵守所提供之生殖及避孕要求之男人或女人；其願意停藥針對研究中之病狀之所有疼痛藥物，除了許可之營救藥物直至在隨訪期之V801；其必須於兩隻臂中具有靜脈通路用於IV輸注及樣品收集。

疼痛特徵：

其在第1次及第2次訪問時具有>40及<95之視覺類比量表(VAS)疼痛值；基於患者報告或醫療史，其具有每日疼痛史至少12週；其在疼痛災難化量表上具有

30之值；體重：其具有身體質量指數<40kg/m²(包含)

知情同意書：

其能提供知情同意書，其包含遵從知情同意書(ICF)及協定中所列之要求及限制；其可靠、願意且能參與所有要求之協定程序持續研究之持續時間；其願意維持任何持續非藥理學疼痛減輕療法(例如，物理療法)之一致方案及在研究參與期間將不開始任何新穎非藥理學疼痛減輕療法；其願意停藥針對研究中之病狀之所有疼痛藥物，除了按照協定許可之營救藥物，持續研究之持續時間；在隨機分組之前其必須在PDEP期間輸入所需每日評估持續7天中至少5天。

排除標準：

若下列標準中之任一者適用，則參與者自該研究排除：其大部分或完全喪失能力且不能充分參與所有協定程序，例如，臥床不起或只能坐輪椅，許可很少或無自理；其於指數膝蓋中具有手術硬體或其他外來體之存在；其具有不穩定指數關節(諸如前交叉韌帶撕裂)；其在開始洗出期之前之3個月內於受影響膝蓋中具有外科手術或治療性注射；其具有纖維肌痛、慢性疼痛症候群或可干擾指數膝蓋之評價之其他合併醫學或關節炎病狀；其具有雷特氏(Reiter’s)症候群、類風濕性關節炎、牛皮癬性關節炎、強直性脊柱炎、與發炎性腸病相關聯之關節炎、結節病或澱粉樣變性之歷史；其具有指數膝蓋之活動性膝蓋感染或晶體病之臨床徵兆及症狀；其具有指數關節之感染史；其具有由於晶體之關節炎(例如，痛風、假性痛風)史；其具有身體同側髖骨關節炎；或其他醫療狀況：其於第2次訪問之24週內已具有透明質酸之關節內注射；在第1次訪問或第2次訪問時基於CKD-EPI公式具有小於70ml/min/1.73m²之eGFR；於第3次訪問之3個月內具有任何臨床嚴重或不穩定型心血管疾病、骨骼肌病症、胃腸疾病、內分泌疾病、血液病、肝病、代謝疾病、泌尿道疾病、肺病、皮膚病、免疫學疾病或眼科疾病。

先前/伴隨療法：其已接受針對神經生長因子(NGF)之任何抗體或針對EGFR之抗體或EGFR酪胺酸激酶抑制劑；具有對單株抗體之過敏反應史，或臨床顯著多個或嚴重藥物過敏，包括(但不限於)重症多形性紅斑、線性免疫球蛋白A皮膚病、毒性表皮壞死鬆解或剝脫性皮膚炎；具有不受控制之哮喘、濕疹、顯著特異反應性、顯著遺傳性血管性水腫或常見可變免疫缺陷之歷史或存在，及生殖：其為懷孕或母乳哺餵之女人。

要求參與者在雙盲研究週期期間維持相似活動水平。不允許開始新穎運動程序或新穎費力活動。接受針對指數膝蓋之OA之物理療法之參與者應保持處於相同治療程序(強度及頻率)。

研究評估及程序：

藥物動力學：

收集約4mL之靜脈血樣品用於抗體I濃度之量測。使用樣品評價抗體I之PK。現場人員將記錄抗體I投與(輸注開始及結束)之日期及時間(24小時時鐘時間)，及各PK樣品之日期及時間(24小時時鐘時間)。

藥效動力學：

收集各約4mL之靜脈血樣品用於表皮調節素之量測。可使用任何剩餘血液樣品測試其他潛在PD終點，包括(但不限於)TGF-α。

免疫原性評估：

免疫原性將在由贊助者批准之實驗室在存在抗體I下藉由經設計以檢測ADA之經驗證檢定評估。可進一步表徵抗體中和抗體I之活性之能力。在指定之訪問及時間處，收集給藥前靜脈血樣品以測定針對抗體I之抗體產生。記錄各樣品收集之實際日期及時間(24小時時鐘時間)。若在最後排程評估或停藥訪問時免疫原性樣品係治療緊急(TE)抗藥物抗體(ADA)陽性，則可採取另外樣品直至信號返回基線(即，不再TE-ADA陽性)或持續於最後劑量後至多1年。為幫助解釋此等結果，在相同時間點收集用於PK分析之給藥前血液樣品。

統計假設：

貝葉斯關鍵成功因子(CSF)經定義及用於評價抗體I是否滿足其主要終點。針對主要功效終點，如由NRS所量測之平均疼痛強度，使用本文中所述及熟習技工已知之方法來評價CSF，及在各研究之雙盲部分之結論下計算。CSF將具有以下一般形式：概率(治療效應<所關注效應)>概率臨限值。治療效應經定義為在終點時自基線之變化之抗體I估計-安慰劑估計。所關注效應通常通過文獻搜索或臨床判斷發現。概率臨限值一般經設置以具有治療效應之所需信賴度或在一系列貌似合理假設之藥物效應真實場景(包括空效應)下具有所需操作特徵。另外假設將包含針對本文中所定義之預先指定之目標及終點利用安慰劑主動干預之比較。可於其中考慮多個研究之協定中進行該研究及可視情況共用安慰劑數據。

主要假設之決定基準經定義為至少70%信賴度，抗體I在平均疼痛強度上優於安慰劑至少0.55個單位，如由NRS所量測。關鍵次要空假設為在關鍵次要終點，WOMAC®疼痛子量表評分自基線至終點之平均變化在抗體I與安慰劑之間不存在差異。關鍵次要假設之決定基準經定義為至少70%信賴度，抗體I在WOMAC®疼痛子量表上優於安慰劑至少0.35個單位。

樣本大小測定：

將約125個參與者以2：1比率相應地隨機分組至抗體I及安慰劑。期望約107個參與者將完成研究之雙盲治療期。此樣本大小將提供大於80%功率以證實積極治療組具有

0.7事後概率，其在WOMAC®疼痛子量表(WOMAC=西安大略及麥克馬斯特大學骨關節炎指數)上優於安慰劑至少0.35個單位。

對功率計算之假設在於如由WOMAC疼痛子量表所量測之在終點時疼痛強度自基線之平均減少各自針對安慰劑及抗體I為約3個單位及4個單位，具有2.25之常見標準偏差。若在安慰劑與抗體I之間不存在治療差異，則通過以上指定之功效標準(即，假陽性)之概率為約0.1。於FACTS版本6.0中進行功率計算及樣本大小測定之模擬。

用於分析之群體：

藥物動力學群體包含(例如)所有隨機分組之參與者，其在第3次訪問時接受抗體I之全劑量及具有在給藥之前或於第4次訪問時或之後收集之至少1個可評價PK樣品。

實例8：隨機，安慰劑對照之2期臨床試驗以評價抗體I用於治療糖尿病性周圍神經病變性疼痛。

此研究之目的為提供抗體I於減輕糖尿病性周圍神經病變性疼痛(DPNP)中之功效的人類臨床證據。收集資料以評估抗體I於此研究群體中之安全性，及耐受性。亦探索藥物動力學(PK)性質、藥效動力學(PD)效應及免疫原性曲線。來自此概念驗證研究之總體資料將評估與抗體I相關聯之效益及風險及通知抗體I之臨床發展。

總體設計：

此為將於患有DPNP之參與者中比較抗體I相對於安慰劑的26週，2期，隨機，雙盲，安慰劑對照之研究。此為隨機，研究者及參與者盲，安慰劑對照之2期臨床試驗。將約125個參與者隨機分配至研究干預(84個抗體I及41個安慰劑)。此26週研究包含8週雙盲治療期及18週隨訪期。此研究設計示於圖2中。

研究干預將經由緩慢靜脈內(IV)輸注歷時約1小時由盲的現場人員投與。若觀察到輸注反應，則如認為必要可降低輸注速率。劑量為750-mg起始劑量，接著每2週500mg IV持續總計4個劑量。劑量調配物為經無菌水0.9%氯化鈉溶液復水之凍乾粉末。參與者將接受每2週IV輸注持續總計4次輸注。將於完成各輸注後監測參與者至少4小時。

在患者訪問時，完成所有治療後樣品收集及安全性監測，及指導參與者在其訪問離開之前繼續研究限制及數字評級量表(NRS)日記記錄。於最後劑量至多6週後收集功效數據，基於抗體I之長PK半衰期及潛在持續標靶接合。於最後投與干預至多20週後將收集安全性、藥物動力學(PK)、藥效動力學(PD)及免疫原性樣品以表徵安全性及臨床免疫原性曲線。若參與者已完成該研究之所有要求階段，包括最後排程之程序，則認為其已完成此研究。

目標及終點：

以下描述主要及次要目標及終點。

視覺類比量表(VAS)：在篩選時及在各臨床訪問時使用針對疼痛之VAS。此為圖形，單項量表，其中要求參與者描述其於研究中區域在過去一週之疼痛強度，以0至100之量表：0=無疼痛，及100=最惡劣可想像疼痛。參與者藉由將垂直於VAS線之線放在描述其疼痛強度之點處來完成VAS。

數字評級量表(NRS)：在初步資料輸入期(PDEP)期間及整個研究每日使用NRS以描述疼痛嚴重度。此為數字單項量表，其中要求參與者描述其在過去24小時內之平均及最惡劣疼痛，以0至10之量表：0=無疼痛，及10=與你可想像一樣壞之疼痛。參與者每日使用可帶回家裝置完成NRS。在各臨床訪問時審查參與者順從性。每日收集NRS最惡劣疼痛。在各訪問時收集其他次要量度之分數，如訪問時程表中所指定。主要結果量度為平均疼痛強度自基線至終點之平均變化，如由NRS條項「請藉由選擇描述在過去24小時期間你的[研究中區域]疼痛之平均程度之一個數字[0至10]來評定你的疼痛」所評估。此量度基於其證實之檢測疼痛變化之能力及其跨疾病狀態之常見用途選擇。次要量度為最惡劣疼痛強度自基線至終點之平均變化，如由NRS條項「請藉由選擇描述在過去24小時期間你的[研究中區域]疼痛之最惡劣程度之一個數字[0至10]來評定你的疼痛」所量測。針對各參與者每日收集在過去24小時平均疼痛及最惡劣疼痛之NRS值。對於統計分析，針對每週間隔及每兩週間隔二者計算在過去24小時內平均及最惡劣疼痛之平均NRS值。若參與者完成該研究之安慰劑對照之部分，則針對各參與者針對NRS之每週間隔之平均值將導致8個基線後觀察結果，及每兩週間隔之平均值將導致4個基線後觀察結果。除非於分析計劃中另有指定，否則於以下所述之主要功效分析及其他分析中將使用針對NRS之每週間隔之平均值。參與者必須在預先指定之時間間隔期間具有50%或更大之每日NRS值以計算平均NRS值；否則，針對該訪問之平均NRS值將視為缺失。

參與者對總體改善之評級：跨疾病狀態使用患者總體印象變化(PGI)。除了一般改善之子態樣外，其捕獲參與者對治療之觀點。此為1至7之數字量表：1=極佳，及7=極差。要求參與者回答「與您開始服用此藥之前的情況相比，標記最能描述您現在疼痛症狀的方框」。

情感功能評估：跨疾病狀態使用EQ-5D-5L健康狀態調查表。EQ-5D-5L為解決生活品質之最流行患者完成之工具中之一者(Buchholz I、Janssen MF、Kohlmann T、Feng YS.A systematic review of studies comparing the measurement properties of the three-level and five-level versions of the EQ-5D.PharmacoEconomics.2018；36(6)：645-661)。其為描述性系統，其包含5個維度：移動性、自理、日常活動、疼痛/不適、及焦慮/抑鬱。要求參與者回答「檢查最佳描述今天你的健康之一個方框」，選自在各維度下提供之5個選項。5個維度之評分可呈現為健康曲線或轉化為單個匯總索引號。EQ-5D-5L亦包含EQ VAS，其以0至100之垂直VAS記錄參與者之自評健康：0=你可想像之最惡劣健康，及100=你可想像之最佳健康。以其EQ-5D-5L版本使用之工具為具有優異測試-再測試信度之簡短、可靠、有效性、易於完成之量表，以解決與由於若干疾病之疼痛相關之生活品質。

睡眠品質：睡眠干擾為疼痛研究中之重要問題。在各種可用工具中，醫學結果研究(MOS)睡眠量表提供針對睡眠干擾之獨特心理測量學驗證之分數。此量表由解決過去一週之12個問題組成。參與者在範圍自「所有時間」至「時間中無一者」之6點分類量表上報告各睡眠症狀或問題多經常呈現一次。將關於入睡時間及睡眠品質之問題報告為每晚睡眠之平均小時數。此量表具有低管理負擔，已用於不同疼痛研究中，及已於具有神經病變性疼痛之患者中驗證。

功效評估：

當表徵慢性疼痛時，使用評估及域之核心集，其為：疼痛、身體功能、情感功能、參與者對總體改善之評級、不良事件(Ae)及參與者性情。針對主要終點選擇NRS，基於其證實之檢測疼痛變化之能力及其跨研究中疾病狀態之常見用途。

簡明疼痛量表--修改之簡易形式(BPI-SF)

該BPI-SF為評估疼痛嚴重度(嚴重度量表)，其對日常功能之影響(干擾量表)及於各種疾病狀態中之疼痛之其他態樣(例如，疼痛位置、自藥物減輕)之數字評級量表(Cleeland CS、Ryan KM.Pain assessment：global use of the Brief Pain Inventory.Ann Acad Med Singapore.1994年3月；23(2)：129-138)。此表描述用於BPI之修改版本中之疼痛量表及對應數字評級量表，驗證糖尿病性多發性神經病中之疼痛。參與者將評級其疼痛嚴重度及在過去24小時期間，疼痛如何干擾此表中所述之活動。

活動時程表(SoA)：

此活動時程表顯示抗體I之研究之某些訪問及程序。「主協定」係指協定設置以於給定疾病狀態或多個疾病狀態中指導若干潛在研究，疾病狀態附錄係指對特定疾病狀態之指導，及干預特定附錄係指該協定之與研究中給定干預特定相關之部分。

縮略語：DSA=疾病狀態附錄；ED=提前停藥；V=訪問。

^a若篩選評估降低參與者負擔，則其可在隨機分組之前之其他時間點進行。

研究群體：

若基於患者報告或醫療史男性及女性參與者具有每日疼痛史，則其有資格納入該研究。估計之GFR將用於分層以確保用於分析腎臟作用之參與者之平衡數目。在第2次訪問時收集測量值及子集係大於或等於90，及小於90。

密西根神經病變篩選工具係用於評估患有糖尿病之患者之腿及腳中之神經病變(The Michigan Neuropathy Screening Instrument.University of Michigan網址.在http：//www.med.umich.edu/borc/profs/documents/svi/MNSI_patient.pdf.Published 2000.下可得，2019年12月11日訪問)。其將根據活動時程表執行。此表描述工具中包含之評估。

將執行A部分及B部分二者。僅使用B部分確定研究之納入。

納入標準：

僅若所有下列標準適用，則參與者有資格包含於該研究：其在簽署知情同意書時為18歲或更老；其具有繼發於周圍神經病之每日對稱腳痛

存在至少6個月及如通過使用密西根神經病變篩選工具B部分

3(©密西根大學[WWW])所診斷；其具有1型或2型糖尿病之歷史及目前診斷；其具有穩定血糖控制，如由在篩選時

11之糖化血紅蛋白所指示；其為遵守所提供之生殖及避孕要求之男人或女人；其願意停藥針對研究中之病狀之所有疼痛藥物，除了許可之營救藥物直至在隨訪期之V801；其必須於兩隻臂具有靜脈通路用於IV輸注及樣品收集。

疼痛特徵：

30之值；體重：其具有身體質量指數<40kg/m²(包含)

知情同意書：

其能提供知情同意書，其包含遵從知情同意書(ICF)及協定中所列之要求及限制；其可靠、願意及能參與所有要求之協定程序持續研究之持續時間；其願意維持任何持續非藥理學疼痛減輕療法(例如，物理療法)之一致方案及在研究參與期間不開始任何新穎非藥理學疼痛減輕療法；其願意停藥針對研究中之病狀之所有疼痛藥物，除了按照協定許可之營救藥物，持續研究之持續時間；在隨機分組之前在PDEP期間其必須輸入所需每日評估持續7天中至少5天。

排除標準：

若下列標準中之任一者適用，則參與者自該研究排除：其具有目前藥物誘導之神經病變，例如，由於一些類型之化療，或其他類型之周圍神經病變；其具有已知遺傳運動、感覺或自主神經病變。

其他醫療狀況：

其在第1次訪問或第2次訪問時基於CKD-EPI公式具有小於70ml/min/1.73m²之eGFR；於第3次訪問之3個月內具有任何臨床嚴重或不穩定型心血管疾病、骨骼肌病症、胃腸疾病、內分泌疾病、血液病、肝病、代謝疾病、泌尿道疾病、肺病、皮膚病、免疫學疾病或眼科疾病。

要求參與者在雙盲研究週期期間維持相似活動水平。不允許開始新穎運動程序或新穎費力活動。

藥物動力學：

藥效動力學：

免疫原性評估：

免疫原性將在由贊助者批准之實驗室在存在抗體I下藉由經設計以檢測ADA之經驗證檢定評估。可進一步表徵抗體中和抗體I之活性之能力。在指定之訪問及時間，收集給藥前靜脈血樣品以測定針對抗體I之抗體產生。記錄各樣品收集之實際日期及時間(24小時時鐘時間)。若在最後排程評估或停藥訪問時免疫原性樣品係治療緊急(TE)抗藥物抗體(ADA)陽性，則可採取另外樣品直至信號返回基線(即，不再TE-ADA陽性)或持續於最後劑量後至多1年。為幫助解釋此等結果，在相同時間點收集用於PK分析之給藥前血液樣品。

統計假設：

貝葉斯關鍵成功因子(CSF)經定義及用於評價抗體I是否滿足其主要終點。針對主要功效終點，如由NRS所量測之平均疼痛強度使用本文中所述及熟習技工已知之方法來評價CSF，及在各研究之雙盲部分之結論下計算。CSF將具有以下一般形式：概率(治療效應<所關注效應)>概率臨限值。治療效應經定義為自基線至終點之變化之抗體I估計-安慰劑估計。所關注效應通常通過文獻搜索或臨床判斷發現。概率臨限值一般經設置以具有治療效應之所需信賴度或在一系列貌似合理假設之藥物效應真實場景(包括空效應)下具有所需操作特徵。另外假設將包含針對本文中所定義之預先指定之目標及終點利用安慰劑主動干預之比較。可於其中考慮多個研究之協定中進行該研究及可視情況共用安慰劑數據。

主要假設之決定基準經定義為至少70%信賴度，抗體I在平均疼痛強度方面優於安慰劑至少0.4個單位，如由NRS所量測。

BPI-SF連續功效分析：將進行貝葉斯縱向混合效應模型重複量測(MMRM)分析以評價總疼痛干擾量表自基線至各基線後訪問之變化。使用該分析以分析以下自基線至各基線後訪問之變化：個體疼痛干擾、總疼痛干擾(總計7個反應)及個體疼痛嚴重度量表。將針對各基線後時間點估計滿足預定二元功效結果之各治療組中之參與者之比例及用於比較治療組。該等估計將自包含所有基線後觀察之貝葉斯縱向模型提供。預定二元功效結果包含具有如由BPI-SF個體嚴重度評分所量測自基線減少>30%、50%及70%及具有如由BPI-SF總干擾評分所量測自基線減少>30%、50%及70%之參與者之比例。

樣本大小測定：

0.7事後概率，其在如由NRS所量測之平均疼痛強度上優於安慰劑至少0.4個單位。

對功率計算之假設為如由NRS所量測之在終點時平均疼痛強度之平均減少各自針對安慰劑及抗體I為約1.58個單位及2.58個單位，具有2之常見標準偏差。若在安慰劑與抗體I之間不存在治療差異，則通過以上指定之功效標準(即，假陽性)之概率為約0.06。於FACTS版本6.0中進行功率計算及樣本大小測定之模擬。

用於分析之群體：

藥物動力學群體包含(例如)所有隨機分組之參與者，其在第3次訪問時接受抗體I之全部劑量及具有在給藥之前或於第4次訪問時或之後收集之至少1個可評價PK樣品。

實例9：隨機，安慰劑對照之2期臨床試驗以評價抗體I用於治療慢性下背痛。

此研究之目的為提供抗體I於減輕由於慢性下背痛(CLBP)之疼痛中之功效的人類臨床證據。收集資料以評估抗體I於此研究群體中之安全性，及耐受性。亦探索藥物動力學(PK)性質、藥效動力學(PD)效應及免疫原性曲線。來自此概念驗證研究之總體資料將評估與抗體I相關聯之效益及風險及通知抗體I之臨床發展。

總體設計：

此為將於患有CLBP之參與者中比較抗體I相對於安慰劑的26週，2期，隨機，雙盲，安慰劑對照之研究。此為隨機，研究者及參與者盲，安慰劑對照之2期臨床試驗。將約150個參與者隨機分配至研究干預(100個抗體I及50個安慰劑)。此26週研究包含8週雙盲治療期及18週隨訪期。此研究設計示於圖2中。注意到，方法及說明書及程序可與實例7、8及9相同，及熟習技工應知曉其不必於各實例中重複，及相似地，應瞭解，如針對臨床研究典型之針對健康及不良事件之另外常規測試為實例7、8及9之研究之設計及執行的部分。

研究干預將經由緩慢靜脈內(IV)輸注歷時約1小時藉由盲的現場人員投與。若觀察到輸注反應，則如認為必要可降低輸注速率。劑量為750-mg起始劑量，接著每2週500mg IV持續總計4個劑量。劑量調配物為經無菌水0.9%氯化鈉溶液復水之凍乾粉末。參與者將接受每2週IV輸注持續總計4次輸注。將於完成各輸注後監測參與者至少4小時。

在患者訪問時，完成所有治療後樣品收集及安全性監測，及指導參與者在其訪問離開之前繼續研究限制及數字評級量表(NRS)日記記錄。於最後劑量至多6週後收集功效數據，基於抗體I之長PK半衰期及潛在持續標靶接合。於最後投與干預至多20週後將收集安全性、藥物動力學(PK)、藥效動力學(PD)及免疫原性樣品以表徵安全性及臨床免疫原性曲線。若參與者已完成研究之所有要求階段，包括最後排程之程序，則認為其已完成此研究。

目標及終點：

功效結果量度：主要結果量度包括：如由數字評級量表(NRS)所量測之平均疼痛強度自基線之變化、如由NRS所量測之平均疼痛強度自基線之變化[時間框架：基線上至第8週]，次要結果量度包括：羅蘭莫里斯(Roland Morris)能力喪失調查表(RMDQ)自基線之變化、RMDQ自基線之變化[時間框架：基線上至第8週]、如由患者總體印象變化所量測之總體改善自基線之變化、如由患者總體印象變化所量測之總體改善自基線之變化[時間框架：基線上至第8週]、如由NRS所量測之最惡劣疼痛強度自基線之變化、如由NRS所量測之最惡劣疼痛強度自基線之變化[時間框架：基線上至第8週]、針對疼痛之視覺類比量表(VAS)自基線之變化、針對疼痛之VAS自基線之變化[時間框架：基線上至第8週]、來自醫學結果研究之睡眠量表(MOS睡眠量表)自基線之變化、來自MOS睡眠量表之睡眠量表自基線之變化[時間框架：基線上至第8週]、營救藥物之總量[時間框架：基線上至第8週]、EuroQol-5D 5等級調查表(EQ-5D-5L)自基線之變化、EQ-5D-5L自基線之變化。

評估之概觀：

功效評估：

視覺類比量表(VAS)：在篩選時及在各臨床訪問時使用針對疼痛之VAS。此為圖形，單項量表，其中要求參與者描述其於研究中區域在過去一週之疼痛強度，以0至100之量表：0=無疼痛，及100=最惡劣可想像疼痛。參與者藉由將垂直於VAS線之線放在描述其疼痛強度之點處來完成VAS。數字評級量表(NRS)：在初步資料輸入期(PDEP)期間及整個研究每日使用NRS以描述疼痛嚴重度。此為數字單項量表，其中要求參與者描述其在過去24小時之平均及最惡劣疼痛，以0至10之量表：0=無疼痛，及10=與你可想像一樣壞之疼痛。參與者每日使用可帶回家裝置完成NRS。在各臨床訪問時審查參與者順從性。每日收集NRS最惡劣疼痛。在各訪問時收集其他次要量度之分數，如訪問時程表中所指定。主要結果量度為平均疼痛強度自基線至終點之平均變化，如由NRS條項「請藉由選擇描述在過去24小時期間你的[研究中區域]疼痛之平均程度之一個數字[0至10]來評定你的疼痛」所評估。此量度基於其證實之檢測疼痛變化之能力及其跨疾病狀態之常見用途選擇。次要量度為最惡劣疼痛強度自基線至終點之平均變化，如由NRS條項「請藉由選擇描述在過去24小時期間你的[研究中區域]疼痛之最惡劣程度之一個數字[0至10]來評定你的疼痛」所量測。針對各參與者每日收集在過去24小時內平均疼痛及最惡劣疼痛之NRS值。對於統計分析，針對每週間隔及每兩週間隔二者計算在過去24小時平均及最惡劣疼痛之平均NRS值。若參與者完成該研究之安慰劑對照之部分，則針對各參與者針對NRS之每週間隔之平均值將導致8個基線後觀察結果，及每兩週間隔之平均值將導致4個基線後觀察結果。除非於分析計劃中另有指定，否則於以下所述之主要功效分析及其他分析中將使用針對NRS之每週間隔之平均值。參與者必須在預定時間間隔期間具有50%或更大之每日NRS值以計算平均NRS值；否則，針對該訪問之平均NRS值將視為缺失。

情感功能評估：跨疾病狀態使用EQ-5D-5L健康狀態調查表。EQ-5D-5L為解決生活品質之最流行患者完成之工具中之一者(Buchholz I、Janssen MF、Kohlmann T、Feng YS.A systematic review of studies comparing the measurement properties of the three-level and five-level versions of the EQ-5D.PharmacoEconomics.2018；36(6)：645-661)。其為描述性系統，其包含5個維度：移動性、自理、日常活動、疼痛/不適、及焦慮/抑鬱。要求參與者「檢查最佳描述今天你的健康之一個方框」，選自在各維度下提供之5個選項。5個維度之評分可呈現為健康曲線或轉化為單個匯總索引號。EQ-5D-5L亦包含EQ VAS，其以0至100之垂直VAS記錄參與者之自評健康：0=你可想像之最惡劣健康，及100=你可想像之最佳健康。以其EQ-5D-5L版本使用之工具為具有優異測試-再測試信度之簡短、可靠、有效性、易於完成量表，以解決與由於若干疾病之疼痛相關之生活品質。

睡眠品質：睡眠干擾為疼痛研究中之重要問題。在各種可用工具中，醫學結果研究(MOS)睡眠量表提供針對睡眠干擾之獨特心理測量學驗證之分數。此量表由解決過去一週之12個問題組成。參與者在範圍自「所有時間」至「時間中無一者」之6點分類量表上報告各睡眠症狀或問題多經常呈現一次。將關於入睡時間及睡眠品質之問題報告為每晚睡眠之平均小時數。。

羅蘭莫里斯能力喪失調查表：該羅蘭莫里斯能力喪失調查表(RMDQ)為量測具有背痛之患者之能力喪失之簡單靈敏且可靠方法。RMDQ由關於個人對背痛之觀點及基於：體能/活動、睡眠/休息、社會心理、家庭管理、吃及疼痛頻率之相關能力喪失之24個聲明組成。詢問參與者是否感覺該聲明為在該天其自身情況之描述。總評分藉由將「是」反應之數目計數獲得，範圍自0=無能力喪失至24=最大能力喪失。

疼痛檢測：疼痛檢測調查表由關於神經病變性疼痛症狀之質量之7個問題組成。最初提議捕獲具有下背痛之患者之神經病變性疼痛表現型(Freynhagen 2006)。其由參與者容易回答且不需要身體檢查。

19之評分指示疼痛可能係表現型神經病變性(>90%)。

統計分析：

此表定義慢性下背痛之分層因素。

任何另外分層因素可於ISA中定義。

終點分析--RMDQ

連續功效分析：將進行貝葉斯縱向混合效應模型重複量測(MMRM)分析以評價RMDQ評分自基線至各基線後訪問之變化。將實行與主協定中所述相同之安慰劑借用策略；然而，不進行自其他DSA借用之治療效應。亦使用僅來自各自ISA之數據進行另外貝葉斯MMRM分析，其不利用安慰劑資訊之任何借用。使用該分析以分析RMDQ評分自基線至各基線後訪問之變化。(參見Freynhagen R、Baron R、Gockel U、Tölle TR.painDETECT：a new screening questionnaire to identify neuropathic components in patients with back pain.Curr Med Res Opin.2006；22(10)：1911-1920)。

此表描述該模型中包含之資訊。

分類功效分析：

將針對各基線後時間點估計滿足預定二元功效結果之各治療組中之參與者之比例及用於比較治療組。該等估計將自包含所有基線後觀察之貝葉斯縱向模型提供。

預定二元功效結果包含ISA內之參與者之比例：

‧具有自基線減少大於30%、50%及70%，如由RMDQ評分所量測，及

‧具有RMDQ評分自基線減少至少3.5個點。

該模型將包含以上連續功效分析模型中所述之分類及連續協變量，除了不使用基線及訪問之相互作用。RMDQ評分自基線至終點之變化百分比之累積分佈函數將針對各治療組提供。

活動時程表(SoA)：

縮略語：DSA=疾病狀態附錄；ED=提前停藥；V=訪問。

^b該現場測定參與者目前正在服用之各疼痛藥物之半衰期以至時程表第2次訪問。由於所需7天PDEP，第2次訪問可在第3次訪問之隨機分組之前不早於7天預定。

研究群體：

知情同意書：其能提供知情同意，其包含遵從知情同意書(ICF)及協定中所列之要求及限制；其可靠、願意及能參與所有要求之協定程序持續研究之持續時間；其願意維持任何持續非藥理學疼痛減輕療法(例如，物理療法)之一致方案及在研究參與期間不開始任何新穎非藥理學疼痛減輕療法；其願意停藥針對研究中之病狀之所有疼痛藥物，除了按照協定許可之營救藥物，持續研究之持續時間；在隨機分組之前在PDEP期間其必須輸入所需每日評估持續7天中至少5天。

納入標準：

僅若所有下列標準適用，則參與者有資格包含於該研究：

‧其在簽署知情同意書時為18歲或更老；

‧在篩選期間具有視覺類比量表(VAS)疼痛值

40且<95。

‧基於參與者報告或醫療史具有每日疼痛史至少12週。

‧在疼痛災難化量表上具有

30之值。

‧具有身體質量指數<40kg/m²(包含)。

‧願意維持任何持續非藥理學疼痛減輕療法(例如，物理療法)之一致方案及在研究參與期間不開始任何新穎非藥理學疼痛減輕療法。

‧願意停藥針對研究中之病狀之所有疼痛藥物，除了按照協定許可之營救藥物，持續研究之持續時間。

‧具有位於第12胸椎與下臀褶之間之下背痛持續至少3個月之歷史，利用或不利用放射。

‧具有下背痛史，如由Quebec Task Force類別1至3所分類。

‧具有穩定血糖控制，如由在篩選時小於或等於10之糖化血紅蛋白(HbA1c)所指示；

‧在篩選期間具有小於70ml/min/1.73m²之估計腎小球過濾速率(eGFR)。

‧為能遵守生殖及避孕要求之男人或女人。

排除標準：

若下列標準中之任一者適用，則參與者自該研究排除：

‧於基線之3個月內具有任何臨床嚴重或不穩定型心血管疾病、骨骼肌病症、胃腸(GI)疾病、內分泌疾病、血液病、肝病、代謝疾病、泌尿道疾病、肺病、皮膚病、免疫學疾病或眼科疾病。

‧已接受針對神經生長因子(NGF)之任何抗體、針對EGFR或EGFR酪胺酸激酶抑制劑(TKI)之抗體。

‧具有對單株抗體之過敏反應史，或臨床顯著多個或嚴重藥物過敏，包括(但不限於)重症多形性紅斑、線性免疫球蛋白A皮膚病、毒性表皮壞死鬆解或剝脫性皮膚炎。

‧具有不受控制之哮喘、濕疹、顯著特異反應性、顯著遺傳性血管性水腫或常見可變免疫缺陷之歷史或存在。

‧於開始洗出期之前之3個月內已使用治療性注射(肉毒桿菌毒素或皮質類固醇)；

‧具有骨質疏鬆性壓縮骨折史或當前骨質疏鬆性壓縮骨折；已具有最近嚴重創傷(於V3之6個月內)；

‧於過去6個月內已具有用於治療下背痛之手術干預。

‧生殖：其為懷孕或母乳哺餵之女人。

‧先前/伴隨療法：其已接受針對神經生長因子(NGF)之任何抗體或針對EGFR之抗體或EGFR酪胺酸激酶抑制劑；具有對單株抗體之過敏反應史，或臨床顯著多個或嚴重藥物過敏，包括(但不限於)重症多形性紅斑、線性免疫球蛋白A皮膚病、毒性表皮壞死鬆解或剝脫性皮膚炎；具有不受控制之哮喘、濕疹、顯著特異反應性、顯著遺傳性血管性水腫或常見可變免疫缺陷之歷史或存在，及

研究評估及程序：

藥物動力學：收集約4mL之靜脈血樣品用於抗體I濃度之量測。使用樣品評價抗體I之PK。現場人員將記錄抗體I投與(輸注開始及結束)之日期及時間(24小時時鐘時間)，及各PK樣品之日期及時間(24小時時鐘時間)。

藥效動力學：收集各約4mL之靜脈血樣品用於表皮調節素之量測。可使用任何剩餘血液樣品測試其他潛在PD終點，包括(但不限於)TGF-α。

免疫原性評估：免疫原性將在由贊助者批准之實驗室在存在抗體I下藉由經設計以檢測ADA之經驗證檢定評估。可進一步表徵抗體中和抗體I之活性之能力。在指定之訪問及時間，收集給藥前靜脈血樣品以測定針對抗體I之抗體產生。記錄各樣品收集之實際日期及時間(24小時時鐘時間)。若在最後排程評估或停藥訪問時免疫原性樣品係治療緊急 (TE)抗藥物抗體(ADA)陽性，則可採取另外樣品直至信號返回基線(即，不再TE-ADA陽性)或於最後劑量後持續至多1年。為幫助解釋此等結果，在相同時間點收集用於PK分析之給藥前血液樣品。

統計假設：

貝葉斯關鍵成功因子(CSF)經定義及用於評價抗體I是否滿足其主要終點。針對主要功效終點，如由NRS所量測之平均疼痛強度使用本文中所述及熟習技工已知之方法來評價CSF，及在各研究之雙盲部分之結論下計算。CSF將具有以下通式：概率(治療效應<所關注效應)>概率臨限值。治療效應經定義為自基線至終點之變化之抗體I估計-安慰劑估計。所關注效應通常通過文獻搜索或臨床判斷發現。概率臨限值一般經設置以具有治療效應之所需信賴度或在一系列貌似合理假設之藥物效應真實場景(包括空效應)下具有所需操作特徵。另外假設將包含針對預定目標及本文中所定義之終點利用安慰劑積極干預之比較。可於考慮多個研究之協定中進行該研究及可視情況共用安慰劑數據。

主要假設之決定基準經定義為至少70%信賴度，抗體I在平均疼痛強度方面優於安慰劑至少0.55個單位，如由NRS所量測。關鍵次要零假設為在關鍵次要終點，相關疼痛評分自基線至終點之平均變化在抗體I與安慰劑之間不存在差異。關鍵次要假設之決定基準經定義為至少70%信賴度，抗體I在相關疼痛評分上優於安慰劑至少0.35個單位。

用於分析之群體：藥物動力學群體包含(例如)所有隨機分組之參與者，其在第3次訪間時接受抗體I之全部劑量及具有在給藥之前或於第4次訪問時或之後收集之至少1個可評價PK樣品。

胺基酸及核酸序列表

重鏈CDR

SEQ ID NO：1 GYTFTDAYIN

SEQ ID NO：2 WIWPGPVITYYNPKFKG

SEQ ID NO：3 REVLSPFAY

輕鏈CDR

SEQ ID NO：4 RSSQSIVHSTGNTYLE

SEQ ID NO：5 KVSNRFS

SEQ ID NO：6 FHGTHVPYT

重鏈可變區

SEQ ID NO：7(抗體I及抗體II)

SEQ ID NO：8(抗體III)

輕鏈可變區

SEQ ID NO：9(抗體I)

SEQ ID NO：10(抗體II)

SEQ ID NO：11(抗體III)

完整重鏈

SEQ ID NO：12(抗體I及抗體II)

完整輕鏈

SEQ ID NO：13(抗體I)

SEQ ID NO：14(抗體II)

核苷酸序列

重鏈可變區

SEQ ID NO：15

核苷酸序列

輕鏈可變區

SEQ ID NO：16

SEQ ID NO：17

成熟人類TGF α

SEQ ID NO：18

VVSHFNDCPDSHTQFCFHGTCRFLVQEDKPACVCHSGYVGARCEHADLLA

成熟小鼠(小家鼠)TGF α

SEQ ID NO：19

VVSHFNKCPDSHTQYCFHGTCRFLVQEEKPACVCHSGYVGVRCEHADLLA

成熟大鼠(褐家鼠)TGF α

SEQ ID NO：20

VVSHFNKCPDSHTQYCFHGTCRFLVQEEKPACVCHSGYVGVRCEHADLLA

成熟食蟹獼猴(食蟹獼猴)TGF α

SEQ ID NO：21

VVSHFNDCPDSHTQFCFHGTCRFLVQEDKPACVCHSGYVGARCEHADLLA

成熟人類表皮調節素-添加N-端甲硫胺酸

SEQ ID NO：22

MVSITKCSSDMNGYCLHGQCIYLVDMSQNYCRCEVGYTGVRCEHFFL

成熟小鼠(小家鼠)表皮調節素-添加N-端甲硫胺酸

SEQ ID NO：23

MVQITKCSSDMDGYCLHGQCIYLVDMREKFCRCEVGYTGLRCEHFFL

成熟食蟹獼猴(食蟹獼猴)表皮調節素

SEQ ID NO：24

VSITKCNSDMNGYCLHGQCIYLVDMSQNYCRCEVGYTGVRCE HFYL

成熟人類表皮細胞分裂原

SEQ ID NO：25

AVTVTPPITAQQADNIEGPIALKFSHLCLEDHNSYCINGACAFHHELEKAICRCFTGYTGERCEHLTLTSYA

成熟小鼠(小家鼠)表皮細胞分裂原

SEQ ID NO：26

LKFSHPCLEDHNSYCINGACAFHHELKQAICRCFTGYTGQRCEHLTLTSYA

成熟人類EGF-添加N-端甲硫蛋白

SEQ ID NO：27

MNSDSECPLSHDGYCLHDGVCMYIEALDKYACNCVVGYIGERCQYRDLKWWELR

成熟人類HBEGF

SEQ ID NO：28

DLQEADLDLLRVTLSSKPQALATPNKEEHGKRKKKGKGLGKKRDPCLRKYKDFCIHGECKYVKELRAPSCICHPGYHGERCHGLSL

成熟人類β細胞素

SEQ ID NO：29

DGNSTRSPETNGLLCGDPEENCAATTTQSKRKGHFSRCPKQYKHYCIKGRCRFVVAEQTPSCVCDEGYIGARCERVDLFY

成熟人類雙調蛋白

SEQ ID NO：30

完整重鏈抗體III-小鼠抗體

SEQ ID NO：31

完整輕鏈抗體III-小鼠抗體

SEQ ID NO：32

成熟人類表皮調節素

SEQ ID NO：33

VSITKCSSDMNGYCLHGQCIYLVDMSQNYCRCEVGYTGVRCEHFFL

<110> 美商美國禮來大藥廠(Eli Lilly and Company)

<120> 結合TGF-α及表皮調節素(EPIREGULIN)之抗體於治療疼痛之用途

<130> X22174

<140> TW 110121674

<141> 2021-06-15

<150> US 63/044,455

<151> 2020-06-26

<150> US 63/070,507

<151> 2020-08-26

<160> 33

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 1

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 2

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 3

<210> 4

<211> 16

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 4

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 6

<210> 7

<211> 118

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 7

<210> 8

<211> 118

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 8

<210> 9

<211> 112

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 9

<210> 10

<211> 112

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 10

<210> 11

<211> 112

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 11

<210> 12

<211> 444

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 12

<210> 13

<211> 219

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 13

<210> 14

<211> 219

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 14

<210> 15

<211> 354

<212> DNA

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 15

<210> 16

<211> 336

<212> DNA

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 16

<210> 17

<211> 336

<212> DNA

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 17

<210> 18

<211> 50

<212> PRT

<213> 智人

<400> 18

<210> 19

<211> 50

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 19

<210> 20

<211> 50

<212> PRT

<213> 褐家鼠

<400> 20

<210> 21

<211> 50

<212> PRT

<213> 食蟹獼猴

<400> 21

<210> 22

<211> 47

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 具有添加N-端甲硫胺酸之成熟人類表皮調節素

<400> 22

<210> 23

<211> 47

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 具有添加N-端甲硫胺酸之成熟小鼠(小家鼠)表皮調節素

<400> 23

<210> 24

<211> 46

<212> PRT

<213> 食蟹獼猴

<400> 24

<210> 25

<211> 72

<212> PRT

<213> 智人

<400> 25

<210> 26

<211> 51

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 26

<210> 27

<211> 54

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 具有添加N-端甲硫胺酸之成熟人類EGF

<400> 27

<210> 28

<211> 86

<212> PRT

<213> 智人

<400> 28

<210> 29

<211> 80

<212> PRT

<213> 智人

<400> 29

<210> 30

<211> 98

<212> PRT

<213> 智人

<400> 30

<210> 31

<211> 442

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 31

<210> 32

<211> 219

<212> PRT

<213> 人造序列

<220>

<223> 合成構築體

<400> 32

<210> 33

<211> 46

<212> PRT

<213> 智人

<400> 33

Claims

一種抗體於製造用於治療有需要個體中慢性疼痛之藥劑的用途，其中該抗體包含輕鏈及重鏈，其中該輕鏈包含輕鏈可變區(light chain variable region；LCVR)及該重鏈包含重鏈可變區(heavy chain variable region；HCVR)，其中該LCVR包含胺基酸序列LCDR1、LCDR2及LCDR3，及該HCVR包含胺基酸序列HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中LCDR1為SEQ ID NO：4，LCDR2為SEQ ID NO：5，LCDR3為SEQ ID NO：6，HCDR1為SEQ ID NO：1，HCDR2為SEQ ID NO：2，且HCDR3為SEQ ID NO：3。
如請求項1之用途，其中該慢性疼痛為慢性骨關節炎疼痛。
如請求項1之用途，其中該慢性疼痛為慢性糖尿病性周圍神經病變性疼痛。
如請求項1之用途，其中該慢性疼痛為慢性下背痛。
如請求項1至4中任一項之用途，其中該LCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10。
如請求項1至4中任一項之用途，其中該HCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：7。
如請求項1至4中任一項之用途，其中該LCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：9及該HCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO：7。
如請求項1至4中任一項之用途，其中該輕鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14。
如請求項1至4中任一項之用途，其中該重鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：12。
如請求項1至4中任一項之用途，其中該抗體包含兩條輕鏈及兩條重鏈，其中各輕鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：13，其中各重鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：12。
如請求項1至4中任一項之用途，其中該抗體包含兩條輕鏈及兩條重鏈，其中各輕鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：14，其中各重鏈之胺基酸序列為SEQ ID NO：12。
如請求項1至4中任一項之用途，其中該抗體之劑量為750mg起始劑量，接著每兩週500mg劑量，持續長達該個體需要治療疼痛之時間。
如請求項1至4中任一項之用途，其中該慢性疼痛對兩種或更多種先前單藥療法及/或雙重療法治療方案為難治性的。