TWI310029B

TWI310029B -

Info

Publication number: TWI310029B
Application number: TW091115489A
Authority: TW
Inventors: Kitamura Shiro; Ueda Yasuyoshi
Original assignee: Kaneka Corp
Priority date: 2001-07-13
Filing date: 2002-07-12
Publication date: 2009-05-21
Also published as: KR100876509B1; EP2228360A1; EP1415969A1; CA2453158A1; CN101774996A; CN101906026A; JPWO2003006408A1; CA2453158C; CN101774996B; WO2003006408A1; AU2002318843B2; KR20040017293A; EP1415969A4; EP2402303A2; CN1527807A; EP2402303A3; US7145044B2; EP3321248A2; EP3321248A3; JP4057523B2

Description

A7 1310029, 五、發明說明（/ ) 〔技術領域〕本發明係關於還原型輔Q1 〇之合成方法及結晶析出方法。還原型輔酶Q!。，相較於氧化型輔酶Q1()，係顯示較高的經口吸收性，而能應用於食品、營養機能食品、特定保健用食品、營養輔助劑、營養劑、飮料、飼料、動物用藥、化粧品、醫藥品、治療藥、預防藥等。〔背景技術〕廣泛分布於生物界之苯醌衍生物之氧化型輔酶Q10, 基於其維他命般的機能也稱作維他命Q，係使衰弱的細胞活性返回健康狀態之營養源，而爲使身體年輕化的成份。另一方面，還原型輔酶Q!。，係氧化型輔酶Q1()之2電子還原體，相對於氧化型輔酶Q,。爲橙色結晶，還原型輔酶Q10 爲白色結晶。還原型輔酶Qio及氧化型輔酶Ql〇，係存在於粒線體、溶酶體、高爾基體、微粒體、過氧化物酶體或細胞膜等，已知其作爲電子傳達系統之構成成份而和ΑΤΟ產生賦活、活體內之抗氧化作用、膜安定化有關，而爲維持活體之機能所不可缺的物質。還原型輔酶Qw，已知例如藉合成、發酵、從天然物萃取等以往公知的方法來獲得輔酶Q,。後，藉層析法來濃縮流出液中的還原型輔酶Q!。區，藉此等方法來製得（日本專利特開平10- 109933號公報）。依該公報之記載，這時，進一步將上述還原型輔酶Q1()中所含之氧化型輔酶Q1〇用氫硼化鈉、亞連二硫酸鈉（連二亞硫酸鈉）等一般的還原劑實施還原後，藉層析法來進行濃縮；或令上述還原劑作 4 本紙國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) tr---------線肩 A7 1310029 五、發明說明（i ) 用於既存的高純度輔酶Q1Q(氧化型）中來製得還原型輔酶 Q1〇。然而，如此所得之還原型輔酶Qi〇 ’不一定能以高純度狀態來取得，例如，容易取得的爲含有以氧化型輔酶 Q1〇爲首的雜質之低純度結晶、半固狀或油狀物。又，日本專利特開昭57 - 70834號公報中揭示出，將輔酶Q1g溶解於己烷，於其中添加亞硫酸氫鈉(連二亞硫酸鈉)水溶液並攪拌，而合成出還原型輔酶Qio之例子。但其必須使用輔酶Qio之2倍重量的連二亞硫酸鈉來作爲還原劑，故從經濟觀點、或從之後的精製煩雜觀點，都有問題〇還原型輔酶Q1()，易被分子氧氧化成氧化型輔酶Q10。在工業規模之製造上，要完全除去氧相當困難，且各操作所需時間係實驗室規模的製造上所無法相比之極長時間，因此所殘存的氧會產生極大影響。該氧化和難除去性的氧化型輔酶Q1Q之附帶產生及混入製品中所造成之產率、品質面的問題有直接關聯。爲獲得高純度的還原型輔酶Q1〇結晶’要適當地防護其遭受上述氧化是很重要的。〔發明之摘述〕本發明係有鑑於上述問題，其目的係爲獲得高品質的還原型輔酶q1q而提供一簡便且高效率的合成方法及結晶析出方法。又爲獲得高品質的還原型輔酶Q1()，而提供一 .適用於工業規模的生產之優異製造方法。本發明人等，經深入硏究的結果發現到，還原型輔酶 Qio在特定的溶劑中’可適當的防護其受到分子氧的氧化， _5 本紙張尺度遙甭國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公t ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝---- 訂---------線一 1310029. A7

1310029. A7 本纸張J B7 五、發明說明（；）而導致本發明的完成。亦即，本發明係關於一種還原型輔酶Q1()之製造方法 ’其特徵在於’係在將氧化型輔酶Q1()還原來合成還原型輔酶Q1()之方法中，使用擇自除己烷外之烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中至少一種來當作溶劑。又’本發明係關於一種還原型輔酶Q,。之製造方法，其特徵在於’係在將氧化型輔酶Ql()還原來合成還原型輔酶Qi〇之方法中’於脫氧環境氣氛下，使用烴類作爲溶劑〇又’本發明係關於一種還原型輔酶Q1()之結晶析出方法，其特徵在於，使用擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中至少一種來當作溶劑，來進行還原型輔酶Q1()之結晶析出。 . 又，本發明係關於一種還原型輔酶Q1Q之安定化方法 ’係將還原型輔酶Q1Q溶解在擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中至少一種溶劑中來處理，藉以防護其受分子氧之氧化。又’本發明係關於還原型輔酶q1q/氧化型輔酶Q!。之重量比爲96M以上之還原型輔酶q1q結晶。依據本發明之方法，在將氧化型輔酶q1q還原來合成還原型輔酶Q1Q之方法中，可適當的防護還原型輔酶Q1〇受分子氧之氧化，能在將氧化型輔酶Ql()之附帶產生最小化的狀態下，合成出高品質的還原型輔酶Q1Q。又’在將還原型輔酶Q1q實施結晶析出之方法中，可適當的防護還 6 丨家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .--I--- I · i I I I I-- 1310029 a；五、發明說明（γ) 原型輔酶Qio受分子氧之氧化’能在將氧化型輔酶Qi。之附帶產生最小化的狀態下移往結晶狀態，而取得高品質的 .還原型輔酶Q1Q結晶。〔發明之詳細揭示〕以下詳細說明本發明。本發明中’爲抑制分子氧所造成從還原型輔酶Q10氧化成氧化型輔酶Ql〇，而合成、結晶析出高品質的還原型輔酶Qw，又爲安定的處理還原型輔酶Q1q，係使用高氧化防護效果溶劑之擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中之至少1種。還原型輔酶Q1()，相較於其結晶狀態，當其溶解或懸濁於上述溶劑之狀態下，可適當的防護其受分子氧的氧化。如此般上述溶劑所造成之氧化防護效果，乃是本發明人所首先發現出。作爲烴類並沒有特別的限制，可舉例如脂肪族烴、芳香族烴、鹵化烴等。較佳爲脂肪族烴、芳香族烴，更佳爲脂肪族烴。作爲脂肪族烴，不管環狀、非環狀、飽和、不飽和均可，通常是使用碳數3〜20，較佳爲碳數5〜15者。作爲其具體例，可舉例如丙烷、丁烷、異丁烷、戊烷、2 -甲基丁烷、環戊烷、2 -戊烯、己烷、2 -甲基戊烷、 2,2_二甲基丁烷、2,3 -二甲基丁烷、甲基環戊烷、環己烷、1-己烯、環己烯、庚烷、2 -甲基己烷、3 -甲基己烷、2,3 -二甲基戊烷、2,4 -二甲基戊烷、甲基環己烷、1 -庚嫌、半院、2,2,3 -三甲基戊院、乙基環己院、1 -辛烯 OQ4435__:_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂·-------- 1310029 . μ 五、發明說明（女）、壬烷、2,2,5 -三甲基己烷、1-壬烯、癸烷、1-癸烯、對Μ烷、十一碳烷、十二碳烷等等。其中，較佳爲碳數5〜8之飽和脂肪族烴，較佳爲使用碳數5之戊烷、2-甲基丁烷、環戊烷(稱戊烷類）；碳數6 之己烷' 2 -甲基戊烷、2,2 -二甲基丁烷、2,3 -二甲基丁烷、甲基環戊烷、環己烷(稱己烷類）；碳數7之庚烷、2-甲基己烷、3 -甲基己烷、2,3 -二甲基戊烷、2,4 -二甲基戊烷、甲基環己烷(稱庚烷類）；碳數8之辛烷、2,2,3 -三甲基戊烷、異辛烷、乙基環己烷（稱辛烷類）；以及其等之混合物。特別是上述庚類之氧化防護效果最高，特佳爲庚烷。作爲芳香族烴並沒有特別的限制，通常是使用碳數 6〜20、較佳爲碳數6〜12、更佳爲碳數7〜10者。具體例可列舉出：苯、甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯、乙基苯、異丙苯、均三甲苯、萘滿、丁基苯、對傘花烴、環己基苯、二乙基苯、戊基苯、二戊基苯、十二烷基苯、苯乙烯等等。較佳爲甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯、乙基苯、異丙苯、均三甲苯、萘滿、丁基苯、對傘花烴、環己基苯、二乙基苯、戊基苯。更佳爲甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯、乙基苯、異丙苯、均三甲苯，最佳爲異丙苯。鹵化烴爲環狀、非環狀、飽和、不飽和均可，並沒有. 特別的限制，但以使用非環狀者爲佳。較佳爲氯化烴、氟化煙，更佳爲氣化煙。又，可使用碳數1〜6、較佳爲碳數 --------------------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 8 A7 1310029 _____B7_ 五、發明說明（έ ) 1〜4、更佳爲碳數1〜2者。其具體例可舉例如：二氯甲烷、氯仿、四氯化碳'u -二氯乙烷、ι，2 -二氯乙烷、m -三氯乙烷、u，2 -三氯乙烷、1,1,1,2-四氯乙烷、ι，ι，2,2-四氯乙烷、五氯乙烷、六氯乙烷、1，1-二氯乙烯、1,2-二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、1，2 -二氯丙烷、1，2,3 -三氯丙烷、氯苯、 1，1，1，2 -四氟乙烷等等。較佳爲二氯甲院、氯仿、四氯化碳、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烷、丨丄丨-三氯乙烷、 1，1,2-三氯乙烷、1，1 -二氯乙烯、i,2 _二氯乙燦、三氯乙烯、氯苯、U，l，2-四氟乙烷。更佳爲二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烯、三氯乙烯、氯苯、四氟乙烷。特佳爲—氯甲院、氣仿、1，2 -二氯乙稀、三氯乙嫌。作爲脂肪酸酯類並沒有特別的限制，可舉例如：丙酸酯、乙酸酯、甲酸酯等。較佳爲乙酸酯、甲酸酯，更佳爲乙酸酯。作爲酯基並沒有特別的限制，可舉例如碳數1〜8 之烷基酯、碳數1〜8之芳烷基酯等，較佳爲碳數1〜6之烷基酯，更佳爲碳數1〜4之烷基酯。作爲丙酸酯可舉例如丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丁酯、丙酸異戊酯等，較佳爲丙酸乙酯。作爲乙酸酯可舉例如：乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、乙酸第二丁酯、乙酸戊酯、乙酸異戊酯、乙酸第二己酯、乙酸環己酯、乙酸苄酯等。較佳爲乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、乙酸第二丁酯、乙酸 9 家標毕（CNS)A4 規格（210 X 297 公愛) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 零--------訂-丨丨—丨—丨_ A7 1310029 五、發明說明（7 ) 戊酯、乙酸異戊酯、乙酸第二己酯、乙酸環己酯。更佳爲乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯，最佳爲乙酸乙酯。作爲甲酸酯可舉例如甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸異丙酯、甲酸丁酯、甲酸異丁酯、甲酸第二丁酯、甲酸戊酯等。較佳爲甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸丁酯、甲酸異丁酯、甲酸戊酯，最佳爲甲酸乙酯。作爲醚類，不拘環狀或非環狀，又不拘飽和或不飽和，並沒有特別的限制，但使用飽和者爲較佳。通常是使用碳數3-20、較佳爲碳數4〜12、更佳爲碳數4〜8者。具體例可舉例如：二乙基醚、甲基特丁基醚、二丙基醚、二異丙基醚、二丁基醚、二己基醚、乙基乙烯醚、丁基乙烯醚、苯甲醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二噁烷、呋喃、2 -甲基呋喃、四氫呋喃、四氫毗喃、乙二醇二甲基醚、乙二醇二乙基醚、乙二醇二丁基醚、乙二醇單甲基醚、乙二醇單乙基醚、乙二醇單丁基醚等等。較佳爲二乙基醚、甲基特丁基醚、二丙基醚、二異丙基醚、二丁基醚、二己基醚、苯甲醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二噁烷、2-甲基呋喃、四氫呋喃、四氫吡喃、乙二醇二甲基醚、乙二醇二乙基醚、乙二醇二丁基醚、乙二醇單甲基醚、乙二醇單乙基醚。更佳爲二乙基醚、甲基特丁基醚、苯甲醚、二噁烷、四氫呋喃、乙二醇單甲基醚、乙二醇單乙基醚。最佳爲甲基特丁基醚。作爲腈類，不拘環狀或非環狀，又不拘飽和或不飽和 J)〇4438_^_ 衣紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

· I — I I I 丨丨訂----I I I I I A7 1310029 五、發明說明（f ) ，並沒有特別的限制，但以使用飽和者爲較佳。通常是使用碳數2〜2〇、較佳爲碳數2〜12、更佳爲碳數2〜8者。作爲其具體例可舉例如：乙腈、丙腈、丙二腈、丁腈、異丁腈、丁一_、戊腈、戊二腈、己腈、庚基氰化物、辛基氰化物、十〜烷腈、十二烷腈、十三烷腈、十五烷腈十八院睛氣乙膳、溴乙腈、氯丙膳、溴丙睛、甲氧基乙腈、氰基酯酸甲酯、氰基醋酸乙酯、甲苯腈、苄腈、氯苄腈、溴苄腈、氰基苯甲酸、硝基苄腈、茴香腈、酞腈、溴甲苯腈、甲基氰基苯甲酸鹽、甲氧基苄腈、乙醯苄腈、萘腈、聯本腈、本基丙腈、苯基丁腈、甲基苯基乙腈、二苯基乙腈、萘基乙腈、硝基苯基乙腈、氯苄基氰化物、環丙烷腈、環己烷騰、環庚烷腈、苯基環己烷腈、甲苯環己烷腈等等。較佳爲乙腈、丙腈、丁腈、異丁腈、丁二腈、戊腈、氯丙腈、氰基酯酸甲酯、氰基醋酸乙酯、甲苯腈、苄腈、更佳爲乙腈㈤_、丁腈、異了腈，最佳爲乙腈。上述丨谷劑中’較佳爲考慮沸點、粘性等的性質來作選疋。例如，所具備的沸點大氣壓下，約3〇〜15〇°c)係可適當進行提昇裕解度之加溫，且容易進行溶劑之乾燥除去及結晶析出過濾時的溶劑回收，又所具備的熔點（約2〇t：以下’較佳爲約urc以下，更佳爲約〇。〇以下)係在室溫下處理時或冷觀雜以獨仍料隊，又具讎粘性(2〇 ^下約10cp以下等）。基於工業之作業上的觀點，較佳爲吊溫下不易揮發考’例如沸點約贼以上者，更佳爲沸點 004439 n 幸、紙張尺度i用中國國家標準-----— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂·-------- 肩 A7 1310029 五、發明說明（？）約90°C以上者。還原型輔酶Q1()有溶液濃度越高越不易被氧化的傾向。由於還原型輔酶Q! 〇對上述溶劑顯不局溶解性’故在迫點上述溶劑係適用於氧化防護。爲防護還原型輔酶Qi。之氧化之較佳濃度，視溶劑種類等的不同雖無法一槪而論’ 但還原型輔酶Q1()對該溶劑之濃度，通常爲1w/w%以上’ 較佳爲2w/w%以上。上限雖沒有特別的限定，但基於實際操作性的觀點係取400w/w%以下，較佳爲2〇〇w/w%以下’ 更佳爲l〇〇w/w%以下，特佳爲50w/w%以下。又，還原型輔酶Q1G對該溶劑之溶解度’係顯示良好的溫度依存性。因此，藉由使用該溶劑，能適當的減低還原型輔酶Q1Q之溶解量，而使其移往結晶狀態(結晶化）。如此般，藉由使用該溶劑，不想要之氧的副反應’在氧化型輔酶Q1(>之還原反應及/或還原型輔酶Qi。之結晶析出過程中會形成最小化。此外，藉由使還原型輔酶Q1Q溶解於該溶劑中來作處理，由於可防護其所分子氧之氧化’ 而使還原型輔酶Q1Q安定化，故能適當的實施萃取、水洗( 用外加之該溶劑進行萃取、水洗）、濃縮（包含邊濃縮邊添加其他溶劑之溶劑取代）、管柱層析等處理操作。本發明中，從氧化型輔酶QI()之還原反應到還原型輔酶Qio之結晶析出（精製結晶析出）之一連串的過程(視需要包含還原型輔酶Ql()之萃取 '水洗等），均使用該溶劑來實施當然爲較佳〇本發明’視需要’除該溶劑外，在不產生不良影響之 12 08¾¾¾適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X297公釐） --------------------訂---------線^^* (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 1310029 五、發明說明（〖。）範圍內可倂用其他溶劑。例如，在還原反應中，爲改善氧化型輔酶Q1q或還原型輔酶q1q之溶解度、還原劑之溶解度、反應速度等’或在還原型輔酶q1q之結晶析出中，爲改善還原型輔酶.Q1()之溶解度、結晶析出濃度、結晶析出溫度、產率、漿料特性、結晶特性等，可在該溶劑中適量添加其他溶劑來使用。作爲該其他溶劑並沒有特別的限制，可舉例如：水、醇類、脂肪酸類、酮類、除腈類外之氮化合物類、硫化合物類等。作爲醇類，不拘環狀或非環狀，又不拘飽和或不飽和，並沒有特別的限制，但以使用飽和者爲較佳。通常是使用碳數1〜20、較佳爲碳數1〜12、更佳爲碳數1〜ό、特佳爲碳數1〜5、再佳爲碳數i〜3者。又較佳爲碳數2〜3之i價醇、碳數2〜5之2價醇、碳數3之3價醇。作爲1價醇，可舉例如：甲醇、乙醇、1 -丙醇、2 _ 丙醇、1 - 丁醇、2 - 丁醇、異丁醇、特丁醇、1 _戊醇、2 -戊醇、3 -戊醇、2 -甲基_ 1 _ 丁醇、異戊醇、特戊醇、 3 _甲基一 2 — 丁醇、新戊醇、1 _己醇、2 -甲基- 1 一戊醇、4 —甲基—2_戊醇、2 -乙基-1- 丁醇、1-庚醇、2-庚醇、3 -庚醇、丨—辛醇、2 —辛醇、2 —乙基-1 —己醇、 1 —壬醇、1 —癸醇、1 -十一烷醇、1 -十二烷醇、烯丙醇、丙炔醇、苄醇、環己醇、1 _甲基環己醇、2 ~甲基環己醇、3 -甲基環己醇、4_甲基環己醇等等。較佳爲甲醇、乙醇、1-丙醇、2 -丙醇' 1- 丁醇、2 _ 13 本纸張尺4ΪΙ拂％標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) _~ - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂·-------- 1310029 A7 B7 特戊醇五、發明說明（〖/ ) -丁醇、異丁醇、特丁醇、1-戊醇'2 -戊醇、3 -戊醇、 2 -甲基-1 - 丁醇、異戊醇、特戊醇、3 -甲基-2 - 丁醇、新戊醇、1 -己醇、2 -甲基-1 -戊醇、4_甲基_ 2 -戊醇' 2 -乙基-1 — 丁醇、環己醇。更佳爲甲醇、乙醇、1 -丙醇、2 -丙醇、1- 丁醇、2 - 丁醇、異丁醇、特丁醇、1 -戊醇、2 -戊醇、3 -戊醇、2 -甲基-1 - 丁醇、異戊醇甲基-2 - 丁醇、新戊醇。再佳爲甲醇、乙醇、1 -丙醇、2 -丙醇、1 - 丁醇、2 - 丁醇、異丁醇、2 -甲基-1 - 丁醇、異戊醇。特佳爲甲醇、乙醇、1 —丙醇、2 -丙醇，更佳爲乙醇、1 -丙醇、2 -丙醇，最佳爲乙醇。作爲2價醇，可舉例如：1,2 -乙二醇、1，2 -丙二醇、：1,3 -丙二醇、1，2 - 丁二醇、1,3 - 丁二醇、1，4 - 丁二醇、2,3- 丁二醇、1，5-戊二醇等等。較佳爲1，2-乙二醇、 1,2-丙二醇、1,3-丙二醇，最佳爲l，2-乙二醇。作爲3價醇，可使用例如丙三醇等。作爲脂肪酸類，可舉例如甲酸、乙酸、丙酸等，較佳爲乙酸、丙酸，最佳爲乙酸。作爲酮類並沒有特別的限制，可使用碳數3〜6者。其具體例，可舉例如丙酮、甲基乙基酮、甲基丁基酮、甲基異丁基酮等。較佳爲丙酮、甲基乙基酮，最佳爲丙酮。作爲氮化合物類，可舉例如：硝基甲烷、三乙胺、吡啶、甲醯胺、N.-甲基甲醯胺、Ν,Ν -二甲基甲醯胺、N，N -二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯烷酮等。作爲硫化合物類，例如可列舉二甲亞碾、環丁碉等。 14 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) - — — — III— ^ « I------· *5^ 本紙國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1310029 五、發明說明（) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 該其他溶劑，可根據熔點、沸點、蒸氣壓特性、相轉移等既知的物性和前述反應溶劑量、以及對氧化型輔酶 QI〇、還原型輔酶q1q或還原劑之溶解度所賦予的效果等，依各溶劑的特性而以較佳比例，和擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中之至少1種溶劑一起使用。該其他溶劑，在不產生不良影響的範圍內其使用並沒有特別的限制，但基於氧化防護效果和後述結晶析出產率等的觀點，前述氧化防護效果高的溶劑(擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中之至少1種)的比例(容量比)越大越好 ’較佳爲使用實質上以氧化防護效果高的溶劑爲主成份之溶劑。當系呈均一溶劑相時，反應溶劑、結晶析出溶劑、或濃縮'萃取、管柱層析等處理時所用的主成份，較佳爲擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中之至少1種溶劑。又 ’形成不同系的溶劑相時，使還原型輔酶Q1Q溶解良好的溶劑相(例如，採水相溶性低的有機溶劑和水之混合溶劑系時’還原型輔酶Q1()難溶於水相，但可溶於水相溶性低的有機溶劑相）對主成份，較佳爲擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中之至少1種溶劑。基於本觀點，其他溶劑之使用量，在均一系時相對於全溶劑量之容量比，又在非均一系時相對於使還原型輔酶 Qio溶解良好的溶劑相之容量比，通常爲未達約0.3，較佳爲未達約0.2，更佳爲未達約〇.1，再佳爲未達約0.05。當然其下限爲0。 __QMU2__15 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐〉 A7 1310029 五、發明說明（G ) 上述其他溶劑中，基於在氧化型輔酶Q1()之還原反應中使反應速度及產率提昇之觀點，特佳爲倂用醇類及/或水。在還原型輔酶Q1 〇之結晶析出中，基於改善流動性等之漿料特性之觀點，較佳爲使用水。接著，說明將氧化型輔酶Q1Q還原來製造還原型輔酶 Q1〇之方法。本發明所用之氧化型輔酶Qi〇，如前述般可爲合成、發酵、萃取自天然物等而調製出者，亦可爲既有的高純度輔酶Qio。可爲僅含氧化型輔酶Q1()者，亦可爲氧化型輔酶 Qi。和還原型輔酶Q1(>之混合物。本發明中，氧化型輔酶Qio之還原，可使用上述氧化防護效果高的溶劑、即擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中至少一種溶劑，並使用氫化金屬化合物、鐵(金屬或鹽形態的鐵）、鋅（金屬形態的鋅）、連二亞硫酸類、抗壞血酸類等來作爲還原劑。作爲氫化金屬化合物並沒有特別的限制’例如可舉氫化硼鈉、氫化鋰鋁等。上述氫化金屬化合物的用量，依氫化金屬化合物種類之不同無法一槪而論，通常爲理論氫當量之1〜3倍量。使用鐵或鋅之還原，通常是用酸來實施。酸並沒有特別的限制，可舉例如醋酸等的脂肪酸，甲磺酸等的磺酸，鹽酸和硫酸等的無機酸等。較佳爲無機酸’更佳爲硫酸。鐵之用量沒有特別的限制，相對於氧化型輔酶Qw之加入重量，例如爲約1/5重量以上。其上限雖沒有特別的 16 +、纸張尺ί i rf家標準（CNS〉A4規格（210 X 297公爱) ' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 零--------訂·--------線Λ A7 B7 1310029 五、發明說明（) 限制，但基於經濟性的觀點等，係採約2倍重量以下。鐵不拘金屬鐵的形態，也能使用硫酸鐵(11)等鹽的形態。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 鋅之用量沒有特別的限制，相對於氧化型輔酶Q1()之加入重量，例如爲約1/10重量以上。其上限雖沒有特別的限制，但基於經濟性的觀點等，係採約2倍重量以下。連二亞硫酸類並沒有特別的限制，通常爲連二亞硫酸之鹽類。連二亞硫酸之鹽類並沒有特別的限制，較佳爲鹼金屬鹽、驗土金屬鹽、鏡鹽等，更佳爲鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等的鹼金屬鹽，最佳爲鈉鹽。連二亞硫酸之用量沒有特別的限制，相對於氧化型輔酶Q1()之加入重量，例如爲約1/5 重量以上，較佳爲約2/5重量以上，更佳爲約3/5重量以上。雖過多也不致產生問題，但基於經濟性的觀點等，係採約2倍重量以下，較佳爲同重量以下。因此，適當的實施範圍爲約2/5重量〜約相同重量的範圍。抗壞血酸類並沒有特別的限制，不限於抗壞血酸，例如可舉rhamno -抗壞血酸、arabo -抗壞血酸、gluco —抗土农血酸、fuco -抗壞血酸、glucohepto -抗壞血酸、xylo -抗壞血酸、galacto -抗壞血酸、gulo -抗壞血酸all〇 —抗壞血酸、erythro-抗壞血酸、6-脫氧抗壞血酸等的抗壞血酸類；又亦可爲其等之酯體或鹽類。具體而言，可舉例如 L-抗壞血酸、L -抗壞血酸十六烷酯、抗壞血酸十八烷酯、D - arabo -抗壞血酸等。在製造還原型輔酶Qi〇時 ’雖上述任一抗壞血酸類均可使用，但考慮到和生成之還原Si輔fe Qi。之分離谷易性等的觀點，在上述抗壞血酸類 17 國家標準（CNS)A4規格（210 x 297 ¥釐）— -- 1310029 B7 五、發明說明（U ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 中，較佳爲使用水溶性者，基於取得容易性、價格等之觀點，更佳爲L -抗壞血酸、D - arabo -抗壞血酸等的單體〇上述抗壞血酸之用量並沒有特別的限制’只要是能將氧化輔酶Q1Q轉換成還原型輔酶Q1Q之有效量即可，相對於氧化型輔酶Q1Q，通常爲1倍莫耳量以上’較佳爲1.2倍莫耳量以上。其上限沒有特別的限制，考慮經濟性時，通常爲10倍莫耳量以下，較佳爲5倍莫耳量以下’更佳爲3 倍莫耳量以下。上述還原劑中，基於還原能力、產率、品質之觀點’ 較佳爲鋅、連二亞硫酸類、抗壞血酸類，特佳爲連二亞硫酸類(具體而言爲連二亞硫酸鹽）、抗壞血酸類° 還原反應中，可適當的倂用醇類及/或水。水’特別適用於還原劑爲鐵、鋅、連二亞硫酸類的情形。使用氫化金屬化合物和抗壞血酸類來當作還原劑時’可倂用醇類。水、醇類之倂用，可發揮水、醇類之特性，而提昇反應速度和反應產率等。以下詳細說明較佳的還原方法。使用連二亞硫酸類之還原較佳爲’倂用水，而以擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中至少一種有機溶劑和水所組成之混合溶劑系來實施。這時，反應時之PH，基於產率等之觀點’通常爲pH7以下，較佳爲PH3〜7，更佳爲 pH3〜6。pH可用酸(例如鹽類和硫酸等之無機酸）、驗(例如氫氧化鈉等的鹼金屬氫氧化物)來作調整。 18__ 本紙國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） 1310029 A7 B7 五、發明說明（4) 使用連二亞硫酸類之還原中’水的用量沒有特別的限制，只要是能適度溶解還原劑之連一亞硫酸類之量即可’ 例如，連二亞硫酸類對水的重量’通常調整爲3〇W/W%以下，較佳爲20w/w%以下。又，基於生產性等之觀點’通常爲lw/w%以上，較佳爲5w/w%以上’更佳爲l〇w/w%以上。使用抗壞血酸類之還原’在上述烴類' 脂肪酸酯類、醚類、腈類中’特別是和水相溶性高的溶劑之酸類、腈類中之至少1種，具體而言爲使用四氫肤喃、二螺院、乙腈等來實施更佳。也能使用醇類來作爲其他溶劑。又’基於製造還原型輔酶Qiq時可促進反應之觀點(例如，降低反應溫度、縮短反應時間等），可在鹼性物質或亞硫酸氫鹽等的具有反應促進效果之添加劑的同時存在下’來實施還原。上述鹼性物質並沒有特別的限制’例如不拘無機化合物、有機化合物均可使用。無機化合物並沒有特別的限制，可舉例如金屬（較佳爲鹼金屬、鹼土金屬等）的氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽、銨等。其代表者可舉例如氫氧化鈉等的鹼金屬氫氧化物、碳酸鈉等的鹼金屬碳酸鹽、碳酸氫鈉等的鹼金屬碳酸氫鹽、碳酸鎂等的鹼土類金屬碳酸鹽等等。有機化合物並沒有特別的限制，可舉例如三乙胺等的胺等。鹼性物質中，較佳爲金屬(較佳爲鹼金屬、鹼土類金屬等）之碳酸鹽、碳酸氫鹽、銨等的無機化合物，三乙胺等的胺等之有機化合物，即屬弱鹼性物質者（弱鹼或弱鹼性）。更佳爲上述弱鹼性的無機化合物。 19 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂--------- 本纸張尺標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1310029 B7 五、發明說明（〉亞硫酸氫鹽，例如可舉亞硫酸氫鈉等的鹼金屬亞硫酸氫鹽等。添加劑的量，只要是能發揮所期待程度的反應促進效果之量（有效量)即可，並沒有特別的限制，同時考慮經濟性時’相對於抗壞血酸類，通常爲20倍莫耳量以下，較佳爲10倍奠耳量以下，更佳爲5倍莫耳量以下’再佳爲2倍莫耳量以下。下限並沒有特別的限制，通常爲〇.〇1倍莫耳量以上’較佳爲0.05倍莫耳量以上，更佳爲〇.1倍莫耳量以上’再佳爲〇.2倍莫耳量以上。本發明之還原反應，較佳爲在強制流動下來實施。每單位容積之攪拌所需動力，通常爲約0.0lkW/m3以上，較佳爲約O.lkW/m3以上，更佳爲約0.3kW/m3以上。上述強制流動’通常是藉攪拌葉片之轉動來實施，但只要能獲得該流動則不一定要使用攪拌葉片，例如可利用液體循環之方法等。還原溫度，會因還原劑的種類和量而有不同，並無?去一槪而論。例如，在使用連二亞硫酸類進行還康時，通常爲以下，較佳爲80°C以下，更佳爲60。(：以下。下限爲系之固化溫度。因此，還原通常是在〇〜10(TC左右、胃佳爲0〜80°c左右、更佳爲0〜60°c左右來實施。使用抗壞血酸類之還原中，通常爲30°C以上，較佳爲4〇°C以上，更佳爲5〇t以上。上限爲系之沸點。因此，還原通常是在 30〜150°C左右、較佳爲40〜120°C左右、更佳爲左右來實施。 20 本纸張家標準（CNS)A4 規格（210 X 297 公釐)、~~~ - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ▼裝------- —訂---------· A7 1310029 五、發明說明（β ) 反應濃度並沒有特別的限制，相對於溶劑重量，氧化型輔酶Q1〇之重量通常約lw/w%以上、f交佳爲3w/w%以上、更佳爲10w/w%以上、再佳爲l5w/w%以上。上限並沒有特別的限制，通常約6〇w/w%以下、較佳爲術〜％以下、更佳爲40w/w%以下、再佳爲30w/w%以下。因此，反應濃度可在約1〜6〇W/w%、較佳爲約3〜5〇w/w%、更佳爲約 10〜40w/w%下來實施。远:原反應’雖會因运原劑的種類和毚而有不同，並無法一槪而論’但通常可在48小時以內、較佳爲24小時^ 內、更佳爲10小時以內、再佳爲5小時以內完成。還原反應最好在脫氧環境氣氛下來實施，令人吃驚的是發現到，特別是使用連二亞硫酸類之還原反^，能大幅提昇還原反應產率並減少還原劑用量。脫氧環境氣氛，可藉由利用非活性氣體之取代、減壓、沸騰或其等的組合來達成。至少利用非活性氣體之取代、即使用非活性氣體環境氣氛是合適的。非活性氣體可舉例如氮氣、氨氣、氬氣、氫氣、碳酸氣等，較佳爲氮氣。 ίδ：如此般所得之速原反應液中，採取含有所產生的還原型輔酶Qi。之有機相，視需要(較佳爲），用水或食鹽水等來反覆進行有機相之水洗’完全除去夾雜物後，即可使用於結晶析出。特別是’使用連二亞硫酸鈉等之連二亞硫酸類來作爲還原劑時’爲了完全除去來自連二亞硫酸類之夾雜物、或使水相之pH安定化，較佳爲進行反覆水洗。將氧化型輔酶Q1Q，用上述和水相溶性高的溶齊彳、特 21 本紙張尺標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) --- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -- I-----丨訂 --------I 一 B7 1310029 五、發明說明（I?) 別是擇自和水相溶性高的溶劑之醚類、腈類(例如四氫呋喃、二噁烷、乙腈等）中之至少1種，並用抗壞血酸類來進行還原時，從還原反應液中直接結晶析出（直接單離法）還原型輔酶Q1()之方法爲極簡便且富效率之方法。還原反應後之處理，較佳爲在脫氧環境氣氛下實施，如此可更加提高氧化防護效果。接著說明還原型輔酗QlO之結晶析出。結晶析出所用之還原型輔酶Q1()，例如可爲合成、發酵、自天然物萃取等依據以往周知的方法所得者。較佳爲將還原型輔酶Q!。中所含之氧化型輔酶Qw予以還原、或將氧化型輔酶Q1Q予以還原而得者，更佳爲使用本發明之還原反應所得者。本發明之結晶析出法，雖對於含較多氧化型輔酶Q1〇者也能適用，但對上述還原方法等所調製出之高純度還原型輔酶Q1()特別有效。對以往周知方法所得或上述還原方法等所製造出之含還原型輔酶Q1()之反應液或萃取液，本發明對其等所含之雜質的除去及精製結晶析出特別有效。具體而言，可從上述還原方法所得之還原反應液、或取自該反應液之含還原型輔酶Q1Q之有機相、視需要洗淨有機相而得之溶液中，進行還原型輔酶Q1()之結晶析出。這時，較佳爲自母液中除去雜質。藉此，可除去共存的雜質、特別是通常不一定能容易地除去之構造類似的類化合物(具體有還原型輔酶Q9、還原型輔酶Q8、還原型輔酶Q?等）。當然，也能使用再結晶法，而將一次結晶析出所得之還原 22 家標準（CNS)A4規格（210 X 297公迓")~~" (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂·--------線 A7 1310029 五、發明說明（W ) 型輔酶Q1Q之結晶予以再精製。還原型輔酶Q1Q之結晶析出，可使用擇自上述烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中至少一種來當作溶劑而進行。其中較佳爲烴類，更佳爲脂肪族烴、芳香族烴，再佳爲芳香族烴，特佳爲前述之戊烷、己烷、庚烷、辛烷類。又，基於結晶析出產率、結晶析出時不須過度冷卻等之觀點，在脂肪族烴類中較佳爲非環狀脂肪族烴。結晶析出方法並沒有特別的限制，可使用一般所用的結晶析出法，即冷卻結晶析出、濃縮結晶析出、溶劑取代結晶析出等中之至少一種來實施。特佳爲冷卻結晶析出、或將冷卻結晶析出和其他結晶析出法予以組合來實施。結晶析出時之冷卻溫度爲重要的因子，例如基於產率等之觀點，通常爲20°c以下，較佳爲10°c以下，更佳爲5 °C以下。下限爲系之固化溫度。因此，藉由將冷卻溫度設定在通常-30°C〜+l〇°C左右、較佳爲-20°C〜+1(TC左右、更佳爲-l〇°C〜*左右，可適當的實施結晶析出。爲了使所得還原型輔酶Q1()中各種雜質的混入最小化，或爲獲得良好特性的漿料，可控制結晶析出的每單位時間之結晶析出量。較佳之單位時間的結晶析出量，例如控制在每單位時間能結晶析出全結晶析出量之約50%量之速度以下(即最大爲50%量/時間），較佳爲每單位時間能結晶析出全結晶析出量之約25%量之速度以下(即最大爲25%量 /時間）。又，冷卻結晶析出時之冷卻速度，通常爲約40°C/ 時間以下，較佳爲約2〇°C/時間以下。 23 私紙張尺>^&4483標準（CNS：)A4規格（n〇 X 297公爱) ' ~~~ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) C----

訂---------線J A7 1310029 五、發明說明（w) 結晶析出濃度也是一重要因子，相對於結晶析出終了時結晶析出溶劑之重量，還原型輔酶Qiq之重量爲約 15w/w%以下，較佳爲約13 w/w%以下，更佳爲約1〇以下。依所用溶劑種類，其適當的結晶析出濃度會有不同，爲形成良好的結晶析出，例如當使用脂肪族烴或以脂肪族烴爲主成份時，結晶析出濃度爲約13 w/w%以下，較佳爲約10w/w%以下，更佳爲約8w/w%以下，當使用更適合之非環狀脂肪族烴或以非環狀脂肪族烴爲主成份時，結晶析出ί辰度爲約10w/w%以下，較佳爲約gw/w%以下，更佳爲約7w/w%以下。藉由維持上述濃度，能獲得適用於工業規模的操作性之結晶析出。濃度之下限並沒有特別的限制，基於生產性之觀點，通常爲約lw/w%以上，較佳爲約2 w/w%以上。結晶析出較佳爲在強制流動下實施。爲抑制過飽和的形成，而順利地進行核化、結晶成長，又基於高品質之觀點’每單位容積之攪拌所需動力通常爲約〇.〇lkW/m3以上，較佳爲約O.lkW/m3以上’更佳爲約〇_3kw/m3以上的流動。上述強制流動’通常是藉攪拌葉片之轉動來實施，但只要能獲得該流動則不一定要使用攪拌葉片，例如可利用液體循環之方法等。在進行結晶析出時，爲抑制過飽和之形成而順利地進行核化、結晶成長，較佳爲添加種晶。本發明之結晶析出中，視需要，除上述高氧化防護效果之溶劑外，也能在不致產生不良影響之範圍內倂用輔助 24 衣紙張尺度適闬中國國家標準（CNS)A4規格（210 « 297公釐） Γ请先閱讀背面夂^意事項再填寫本頁) r--------訂-------!線 _ smsm 張尺度適闬中國 A7 1310029 五、發明說明（，）的其他溶劑。爲改善還原型輔酶Qa之溶解度、結晶析出濃度、結晶析出溫度、產率、漿料特性、結晶特性等，可在上述溶劑中適量添加輔助溶劑來使用’若形成混合溶劑，有時會造成溶解急劇上昇，反而有結晶析出產率降低等之傾向。因此，基於氧化防護效果及結晶析出產率之觀點，較佳爲使用實質上以上述溶劑爲主成份之溶劑。因此，和其他溶劑形成混合溶劑來使用時，其他溶劑的比例(容量比)並沒有特別的限定，通常爲約0.3未滿’較佳爲約0.2 未滿，更佳爲約0.1未滿，特佳爲約〇.〇5未滿。當然其下限爲〇。容量比如前所述，在均一系中，相對於全溶劑的容量，係其他溶劑的容量比例；在非均一系中，相對於還原型輔酶Q1Q能溶解良好之溶劑相的容量，係其他溶劑的容量比例。藉由倂用水來作爲輔助性的其他溶劑，可發揮水的特性，而有助於漿料特性的改善等。還原型輔酶Q1()之結晶析出中水的用量，會影響所結晶析出之還原型輔酶Q1()之漿料濃度及漿料特性。水用量越多、漿料濃度越低，通常也會使流動性提昇，但整體而言若漿料濃度降低則生產性會降低’故考慮這幾點來調整其用量，只要能調整、維持於適當範圍內即可，並沒有特別的限制。上述輔助性的其他溶劑，在結晶析出時，可事先添加，也能在結晶析出中途添加，又在結晶析出量安定後添加亦可。如此所得之還原型輔酶Q1Q之結晶，例如能藉由離心 25 家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ~ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 零--------訂---------線· 1310029 B7 五、發明說明（）分離、加壓過濾、減壓過濾等來實施固液分離，再視需要來進行濾餅洗淨，而以濕體的形態來取得。又，進一步將濕體置入內部經非活性氣體取代之減壓乾燥器(真空乾燥器 )，於減壓下乾燥，而能以乾體的形態來取得；而以乾^的形態來取得爲較佳。 & 藉由在脫氧環境氣氛下實施結晶析出，可更加提高氧防護效果。脫氧環境氣氛，可藉由利用非活性氣體之取代減壓、沸騰或其等的組合來達成。至少利用非活性氣體之取代、即使用非活性氣體環境氣氛是合適的。非活性氣體可舉例如氮热、氨热、氨氣、氫氣、碳酸氣等，較佳爲氮氣。依本發明’能簡便且高效率地合成、結晶析出高品質的還原型輔酶Q1Q。又’依本發明所得之還原型輔酶Q1〇之結晶，品質極高，還原型輔酶Q1Q/氧化型輔酶Q1()之重量比96/4以上、較佳爲98/2以上、更佳爲99/1以上是可期待的。〔用以實施本發明之最佳形態〕以下列舉實施例來對本發明作更詳細的說明，但本發明並不限於該等實施例中。又，實施例中還原型輔酶q1〇之純度、還原型輔酶Q,。和氧化型輔酶Q1q之重量比係依下述HPLC分析來求得，但所得還原型輔酶Qiq之純度並非用來規定本發明的純度之界限値。同樣地，還原型輔酶 Qio和氧化型輔酶Q1q之重量比也不是用來規定其上限値。 (HPLC分析條件） 26 家標準（CNS)A4 規格(21G X 297 公釐)一 ~ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁> 訂---------線一 1310029 五、發明說明（沖）管柱：SYMMETRY C18(Waters 製），250mm(長度）， 4.6111111(內徑）’移動相：€21150^1:(1；113011=:4:3(>:乂），檢測波長：2l〇nm，流速：lml/min，還原型輔酶Q1G之保持時間：9.1分，氧化型輔酶Q1Q之保持時間：13.3分。 (實施例1) 將100g氧化型輔酶Q1Q(含0.40%之氧化型輔酶Q9，純度99.4%)於25t下溶解於l〇〇〇g庚烷。邊攪拌(攪拌所需動力0.3kW/m3)，邊緩慢添加將還原劑之連二亞硫酸鈉( 純度75%以上）100g溶解於1000ml水而成之水溶液’於25 °C、pH4〜6下進行還原反應。2小時後，自反應液中除去水相，用脫氣後的飽和食鹽水l〇〇〇g對庚烷相進行6次水洗，獲得含l〇〇g還原型輔酶Q1()(含0.40%還原型輔酶Q9) 之庚烷相。將該庚烷相在攪拌（攪拌所需動力〇.3kW/m3)下冷卻至2。(：，獲得白色漿料。以上所有的操作都在氮環境氣氛下實施。將所得漿料實施減壓過濾，依冷庚烷、冷Z 醇、冷水、冷乙醇、冷庚烷的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜4G °C，1〜30mmHg)，獲得93g白色的乾燥結晶（含0.29%遼原型輔酶Q9，除去率28%)(有效產率93莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q1G/氧化型輔酶Q,。之重量比爲99.6/0.4 ’還原型輔酶Qio之純度爲99.2%。 (實施例2、比較例1) 將實施例1所得之還原型輔酶Q1C)各lg，於25°C溶解於表1所示之各種溶劑20g中。於大氣中，於25°C經24 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丨—丨丨—丨訂· —------·線▲ B7 1310029 五、發明說明（<) 小時攪拌後，測定液中之還原型輔酶Qi〇/氧化型輔酶Q10 之重量比結果，和比較用之相同條件下（將1g還原型輔酶 Q1〇於大氣中、25°C下24小時)保存結晶的結果’一倂顯示於表1。表1 R 庚烷 99.1/0.9 己烷 98.7/1.3 甲苯 98.8/1.2 實施例2 氯仿 98.9/1.1 醋酸乙酯 98.9/1.1 甲基特丁基醚 98.6/1.4 四氫呋喃 98.5/1.5 甲基異丁酮 69.2/30.8 二甲基甲醯胺 31.0/69.0 比較例1 N-甲基-吡咯烷酮 67.3/32.7 結晶 95.9/4.1 R :還原型輔酶Q1()/氧化型輔酶Q1C)之重量比 (實施例3、比較例2) 將實施例1所得之還原型輔酶Qm各lg，於35°C溶解於表2所示之各種溶劑l〇〇g中。於大氣中，於35°C經24 小時攪拌後，測定液中之還原型輔酶Q1()/氧化型輔酶Q10 之重量比結果顯示於表2。 — 004504_^__ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂-------- 一表2 溶劑 R 庚烷 96.7/3.3 實施例3 醋酸乙酯 96.4/3.6 乙腈 96.0/4.0 比較例2 甲基異丁酮 46.1/53.9 1310029 A7 _B7_ 五、發明說明（A ) R :還原型輔酶Qi。/氧化型輔酶Qio之重量比 (實施例4) 將l〇g氧化型輔酶Q1q於25°C下溶解於表3之各種溶劑l〇〇g。邊攪拌(攪拌所需動力0.3kw/m3)，邊緩慢添加將還原劑之市售連二亞硫酸鈉（純度75%以上）10g溶解於 100ml水而成之水溶液，於25°C、pH4〜6下進行還原反應。2小時後，自反應液中除去水相，用脫氣後的飽和食鹽水l〇〇g對有機相進行6次水洗。所有的操作都是在氮環境氣氛下實施。測定有機相中還原型輔酶Q1Q/氧化型輔酶 Q1()之重量比，結果顯示於表3。 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 訂---------% 表3 溶劑 R 庚烷 99.5/0.5 己烷 99.3/0.7 醋酸乙酯 99.4/0.6 甲基特丁基醚 99.2/0.8 甲苯 99.4/0.6 氯仿 99.3/0.7 29 木紙張尺魯@451§惑家標準（(；^3认4規格（21“297公釐） 1310029 a7 _ B7 _ ------ - · 〜^ 五、發明說明（V?) R :還原型輔酶Q1q/氧化型輔酶Q1(3之重量比 (實施例5) 將l〇g氧化型輔酶Q1Q於25°C溶解於l〇〇g庚烷，添力口 1.5g鋅粉及ll〇g之2.9N硫酸，於25°C攪拌6小時後（攪拌所需動力〇.3kw/m3)後，添加l〇〇g濃鹽酸。測定庚烷相之還原型輔酶QW氧化型輔酶Q1()之重量比’結果爲 99.6/0.4。所有操作均在氮環境氣氛下進行。 (實施例6) 除使用己烷作爲溶解氧化型輔酶Q1()之溶劑外，和寶施例1同樣地進行還原和結晶析出。其結果，獲得93§的白色乾燥結晶(有效產率93莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q1G/氧化型輔酶Q1q之重量比爲99.4/0.6，還原型輔酶 Qi〇之純度爲99.0%。 (實施例7) 將100g氧化型輔酶Q!。(純度99.4%)於25°C下溶解於 l〇〇〇g己烷。邊攪拌（攪拌所需動力〇.3kW/m3)，邊緩慢添加將還原劑之連二亞硫酸鈉（純度75%以上）l〇〇g溶解於 1000ml水而成之水溶液，於25°C、pH4〜6下進行還原反應。2小時後，自反應液中除去水相，用脫氣後的飽和食鹽水l〇〇〇g對庚烷相進行6次水洗。在該庚烷相中添加50g 甲醇，在攪拌(攪拌所需動力〇.3kW/m3)下冷卻至2°C，獲得白色漿料。以上所有的操作都在氮環境氣氛下實施。將所得漿料實施減壓過濾，依冷己烷、冷乙醇、冷水、冷乙醇、冷己烷的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2。〇濕 30 t、紙張家標準(CNS)A4規格(210 X 297公爱1 ~ ' ί琦先閱請背面之注意事項再填寫本頁) ----訂---------線邊 1310029 . 37 剌;】Π - j[ —- 五、發明說明（） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°c，1〜30mmHg) ，獲得92g白色的乾燥結晶(有效產率93莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q!。/氧化型輔酶Q1G之重量比爲99.4/0.6，還原型輔酶Qi。之純度爲99.0%。 (實施例8) 將100g氧化型輔酶α。(純度99·4%)於25°C下溶解於 1000g醋酸乙酯。邊攪拌(攪拌所需動力0.3kW/m3)，邊緩慢添加將還原劑之連二亞硫酸鈉(純度75%以上）l〇〇g溶解於1000ml水而成之水溶液，於25°C、pH4〜6下進行還原反應。2小時後，自反應液中除去水相，用脫氣後的飽和食鹽水1000g對醋酸乙酯相進行6次水洗。在該醋酸乙酯相中添加300g乙醇和50g水，在攪拌（攪拌所需動力 0.3kW/m3)下冷卻至，獲得白色漿料。以上所有的操作都在氮環境氣氛下實施。將所得漿料實施減壓過濾，依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°C， 1〜30mmHg)，獲得89g白色的乾燥結晶(有效產率89莫耳 %)。所得結晶之還原型輔酶Q,。/氧化型輔酶Q1Q之重量比爲".5/0.5，還原型輔酶Q1q之純度爲99.2%。 (實施例9) 將l〇〇g還原型輔酶Q1Q(還原型輔酶Q1Q/氧化型輔酶 Qio之重量比=95/5，輔酶Q1G之純度99.4%)於25°C下溶解於1000g庚烷。邊攪拌(攪拌所需動力〇.3kW/m3)，邊緩慢添加將還原劑之連二亞硫酸鈉（純度75%以上）l〇g溶解於一——____ 31_____ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1310029 五、發明說明（θ) 1000ml水而成之水溶液’於25°C、pH4〜6下進行還原反應。2小時後，自反應液中除去水相，用脫氣後的飽和食鹽水lOOOg對庚烷相進行6次水洗，將該庚烷相在攪拌(攪拌所需動力〇.3kW/m3)下冷卻至2°C ’獲得白色漿料。以上所有的操作都在氮環境氣氛下實施。將所得漿料實施減壓過濾，依冷庚烷、冷乙醇、冷水、冷乙醇、冷庚烷的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2 C)濕結晶’藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°C，1〜30mmHg)，獲得93§白色的乾燥結晶(有效產率93莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q10/ 氧化型輔酶Qig之重量比爲99_6/0.4 ’速原型輔酿Qi〇之純度爲99.2%。 (實施例10) 除所使用之氧化型輔酶Q1()之純度爲98_4(含1.0%氧化型輔酶Q9，〇·3〇%氧化型輔酶Qs，〇.04%氧化型輔酶Q7) 外，在和實施例1同樣條件下進行還原及結晶析出。其結果，獲得93g白色乾燥結晶(含有〇·72%氧化型輔酶Q9 ’除去率28% ;含0.11%氧化型輔酶Qs ’除去率;未測出氧化型輔酶仏)(有效產率93莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q1()/氧化型輔酶Qio之重量比爲99.6/〇·4 ’還原型輔酗 Ql〇之純度爲99·0%。 (實施例11) 將和實施例1同樣的方法所得之還原型輔酶Qiq之結晶（含0.29%之還原型輔酶Q9，純度99.1%，還原型輔酶 Q10/氧化型輔酶Q1C之重量比爲99.4/0_6)1〇g ’於45°C溶解 0045C8 32 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝--------訂---------線痛 A7 1310029 五、發明說明（P ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 於140g之乙腈’在攪拌(攪拌所需動力〇.3kW/m3)下冷卻至 2°C，獲得白色漿料。以上所有的操作都在氮環境氣氛下實施。將所得漿料實施減壓過濾，依冷乙腈、冷水、冷乙腈的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶’藉由將濕結晶實施減壓乾燥（20〜4〇°C，1〜30mmHg)，獲得9.5g 白色的乾燥結晶(含〇_25%還原型輔酶Q9，除去率14%)(有效產率95莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q1Q/氧化型輔酶Q1Q之重量比爲99.6/0.4，還原型輔酶Q1()之純度爲 99_1%。 (實施例12) 將和實施例1同樣的方法所得之還原型輔酶Q1()之結晶（含0.29%之還原型輔酶Q9，純度98.8%，還原型輔酶 Q1〇/氧化型輔酶Qw之重量比爲99.1/0.9)10g，於25°C溶解於140g之庚烷，在攪拌(攪拌所需動力〇.3kW/m3)下冷卻至 2°C，獲得白色漿料。以上所有的操作都在空氣中實施。將所得漿料實施減壓過濾，依冷庚烷、冷乙醇、冷水、冷乙醇、冷庚烷的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥（20〜40°C，1〜30mmHg) ，獲得9.3g白色的乾燥結晶(含0.20%還原型輔酶Q9，除去率31%)(有效產率93莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶 Qio/氧化型輔酶Qw之重量比爲99.0/1.0，還原型輔酶Qio 之钝度爲98·8%。 (比較例3) 將實施例1所得之還原型輔酶Q1Q之結晶log，於25 004509 _ 33 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1310029 五、發明說明（i!) t：溶解於70g之N -甲基Ptt略院酮。進一步添加水’在攪拌（攪拌所需動力0.3kW/m3)下冷卻至2°C，獲得淡黃色漿料。以上所有的操作都在空氣中實施。將所得漿料實施減壓過濾，依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥 (20〜40°C，1〜3〇mmHg)，獲得9.6g淡黃色的乾燥結晶（有效產率96莫耳％)。所得結晶爲淡頁色’還原型輔酶Qi〇/ 氧化型輔酶Qi。之重量比爲88·6/11.4，還原型輔酶Qio之純度爲88.3%。 (實施例13) 將100g的氧化型輔酶Qi。於25°C溶解於1000g之己烷。在攪拌(攪拌所需動力0.3kw/m3)下，緩慢加入使還原劑之連二亞硫酸鈉(純度75%以上)4〇g溶解於1000ml水而成之水溶液，於25°C、ρΗ4〜6下進行還原反應。2小時後，從反應液中除去水相，用脫氣後之飽和食鹽水l〇〇〇g對己烷相實施6次水洗。以上所有的操作均在氮環境氣氛下實施。該己烷溶液中還原型輔酶Qi。/氧化型輔酶Qi。之重量比爲99·2/0·8。 (實施例14) 在1000g乙腈中’加入100g氧化型輔酶Qiq(純度 99·4%)、60g的L -抗壞血酸及30G碳酸氫鈉，於55°c下實施攪拌’進行還原反應。40小時後，.’在反應液中添加 1000g庚院、脫氣後的水1000g，冷卻至25°C。除去水層後，進一步用脫氣後的飽和食鹽水1000g對庚焼相實施6 004^10_34 __ 本紙張適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) -- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) . I I II — — 線_ 1310029 A7 B7 五、發明說明（A) 次水洗。將該庚烷相在攪拌(攪拌所需動力0.3kW/m3)下冷卻至2艺，獲得白色漿料。以上所有的操作都在氮環境氣氛下實施。將所得漿料實施減壓過濾，依冷庚烷、冷乙醇、冷水、冷乙醇、冷庚烷的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2。〇濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°C ’ 1〜30mmHg)，獲得95g白色的乾燥結晶(有效產率95莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Q1q/氧化型輔酶Q1Q之重量比爲99.5/0.5，還原型輔酶Q1()之純度爲99.0%。 (比較例4) 除所有的操作均在空氣中進行外，係和實施例13進行同樣的還原反應。所得己烷溶液中之還原型輔酶qiG/氧化型輔酶Q!。之重量比爲45.3/54.7。〔產業上之利用可能性〕本發明由於具備上述構成，故係適用於工業規模的生產之方法，而能簡便且高效率地獲得高品質的還原型輔酶 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Q 10 35 國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims

1310029 B8 C8 D8 ;; 、申請專利範圍第91115489號專利申請案，申請專利範圍修正/替換本2〇〇7.〇5 1、一種還原型輔酶Qn之結晶析出方法，其特徵在於，使用擇自碳數3〜20之脂肪族烴、碳數6〜20之芳香族烴、碳數1〜6之鹵化烴、具有碳數1〜8之酯基的脂肪族酯類、碳數3〜20之醚類、以及碳數2〜2〇之腈類中至少一種當作溶劑，來進行還原型輔酶Qiq之結晶析出。 2、如申請專利範圍第1項之結晶析出方法，係使用碳數3〜20之脂肪族烴作爲溶劑。 3、如申請專利範圍第2項之結晶析出方法，其中該碳數3〜20之脂肪族烴，係碳數3〜20之非環狀脂肪族烴。 4、如申請專利範圍第2項之結晶析出方法，其中該碳數3〜20之脂肪族烴，係擇自戊烷類、己烷類、庚烷類及辛烷類中之至少1種。 5、如申請專利範圍第1項之還原型輔酶Q1Q之結晶析出方法，係從母液中除去雜質。 6、如申請專利範圍第5項之還原型輔酶Q1Q之結晶析出方法，其中，所除去的質，係擇自還原型輔酶Q9、還原型輔酶Q8、及還原型輔酶Q7中之至少1種。 7、如申請專利範圍第1〜6項中任一項之還原型輔酶 Qio之結晶析出方法，其中，還原型輔酶Q1Q之結晶析出，係採冷卻結晶析出、或冷卻結晶析出組合其他結晶析出法來進行。 8、如申請專利範圍第7項之還原型輔酶Q1()之結晶析出方法’其中，結晶折出時的冷卻溫度爲20它以下。本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 χ 297公釐) ..................—---------------訂................^9. (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 1310029 · II D8 六、申請專利範園 9、如申請專利範圍第1〜6項中任一項之還原型輔酶 Q1〇之結晶析出方法，其結晶析出濃度，以還原型輔酶Q10 之重量相對於結晶析出終了時結晶析出溶劑的重量來代表時，係15w/w°/〇以下。 10、如申請專利範圍第1〜6項中任一項之還原型輔酶 Q1〇之結晶析出方法，該結晶析出，係在每單位容積之攪拌所需動力爲0.01kW/m3以上之強制流動下實施。 11、如申請專利範圍第1〜6項中任一項之還原型輔酶 Qio之結晶析出方法，係在結晶析出時添加種晶。 12、如申請專利範圍第1〜6項中任一項之還原型輔酶 Q1〇之結晶析出方法，係在脫氧環境氣氛下實施。 13、一種還原型輔酶Qi。結晶，其還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q1Q之重量比爲96/4以上。 14、一種還原型輔酶Q1()之製造方法，其特徵在於，係在將氧化型輔酶Q,。還原來合成還原型輔酶Q10之方法中，使用擇自碳數6〜20之芳香族烴類、碳數1〜6之鹵化烴、具有碳數1〜8之酯基的脂肪族酯類、以及碳數2〜20 之腈類中至少一種來當作溶劑。 15、如申請專利範圍第14項之還原型輔酶Q1Q之製造方法’其中，該溶劑，係使用擇自具有碳數1〜8之酯基的脂肪酸酯類、碳數2〜20之腈類中之至少一種。 16、如申請專利範圍第14項或第15項之還原型輔酶 Q1〇之製造方法，其中，該還原係在脫氧環境氣氛下進行。 P、一種還原型輔酶Q1()之製造方法，其特徵在於， .係在將氧化型輔酶Q1Q還原來合成還原型輔酶Q,。之方法 2 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐） .......................φ^·.,-------------’玎................ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1310029 留 * C8 __ D8 六、申請專利範圍中’於脫氧環境氣氛下，使用選自碳數3〜20之脂肪族烴、碳數6〜20之芳香族烴、碳數1〜6之鹵化烴、以及碳數3 〜20之醚類中至少一種作爲溶劑。 18、如申請專利範圍第17項之還原型輔酶Q1Q之製造方法，其中，該溶劑係使用選自碳數3〜20之脂肪族烴、碳數6〜20之芳香族烴、以及碳數1〜6之鹵化烴中至少一種〇 19、如申請專利範圍第18項之還原型輔酶Q1G之製造方法，其中，溶劑係使用庚烷類。 20、如申請專利範圍第17項之還原型輔酶Qie之製造方法，其中，該溶劑係使用碳數3〜20之醚類。 21、如申請專利範圍第14項或第17項之還原型輔酶 Qio之製造方法，係使用氮化金屬化合物、鐵、或鲜來作爲還原劑。 22、如申請專利範圍第14項或第17項之還原型輔酶 Q1()之製造方法，係使用連二亞硫酸類作爲還原劑，並在水共存下進行還原。 23、如申請專利範圍第22項之還原型輔酶Q1Q之製造方法，係在pH3〜7下進行。 24、如申請專利範圍第22項之還原型輔酶Q1G之製造方法，其中，連二亞硫酸之使用量，係氧化型輔酶Q10之同重量以下。 25、如申請專利範圍第14項或第17項之還原型輔酶 Q1()之製造方法，係使用抗壞血酸類作爲還原劑來實施。 3 國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐) ' 一 ....................................訂................ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 398895 ABCD 1310029 六、申請專利範圍 26、如申請專利範圍第25項之還原型輔酶Q1Q之製造方法，係使用四氫呋喃、二噁烷以及乙腈中之至少1種作爲溶劑。 27、如申請專利範圍第25項之還原型輔酶Q1()之製造方法，其中，抗壞血酸類之使用量，係氧化型輔酶Q1Q之1 倍莫耳量以上。 28、如申請專利範圍第25項之還原型輔酶Q1Q之製造方法，係在鹼性物質或亞硫酸氫鹽之共存下進行還原。 .29、如申請專利範圍第14項或第17項之還原型輔酶 Q1〇之製造方法，係在還原反應後，採取含生成的還原型輔酶Qio之有機相，對該有機相實施水洗。 3〇、如申請專利範圍第1項之還原型輔酶Q1Q之結晶析出方法，其中，結晶析出所用之還原型輔酶Q1G，係申請專利範圍第14〜29項之任一項之方法所製得者。 31、如申請專利範圍第1項之還原型輔酶Q1()之結晶析出方法，係從申請專利範圍第Η〜29項之任一項之方法所製得之還原反應液中，或從該反應液採取含還原型輔酶 Q1〇之有機相、視需要洗淨有機相而取得之溶液中，進行還原型輔酶Qi。之結晶析出。 4 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) -------------------------------------1τ----------…… (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)