TWI255181B - Remedies for enhancing of the production of nerve growth factor - Google Patents

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1255181 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（1 ) 技術領域 本發明係有關於具有神經成長因子產生增強作用之醫 樂、試藥、食品、飲料、或飼料。 過去之技術 神經細胞係於人類之智慧運作、記憶、感情、行動等之 精神活動的維持上，扮演主要的角色。一般咸認，爲使成 爲這些精神活動的基礎之神經細胞的分化、生存、功能表 現得以進行’在各種神經細胞上都須要特異之神經營養因 子。在神經營養因子中，最早被明瞭其存在及功能者，有 神經成長因子（Nerve Growth Factor，以下稱爲NGF)，現在 則發現尚有腦衍生神經成長因子（Brain-derived_ neurotrophic Factor)、親神經因子（Neur〇tr〇phin)-3、親神 經因子-4/5等。 由於N G F係前腦基底部之大細胞性、膽鹼激素性的 (cholinergic)神經細胞的神經營養因子，因此被關注並認 爲與阿茲海默症有密切關聯（法馬西亞，ν〇1· 22, N〇. 2, 147〜15 1 (1986);老年精神醫學，v〇1 3, N〇 6, 751 〜乃8 (1986)) 〇 所謂的阿茲海默症，係老年癡呆症的一種型態，其伴隨 著發育障礙、巢症狀、下肢的僵直痙攣、痛瘤狀態的發: 等臨床症狀，並且在病理學上可觀察到有老人性斑、以及 阿兹海默症原纖維變化等。在近年的高齡化社會中可觀察 到有增加之傾向，因而受到社會相當的關切，然而，尚未 發現這些症狀的改善以及治療方法。 -4 - ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公爱 ----------------—--訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1255181 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 A7 B7 五、發明說明（2 ) 阿茲海默症型癡呆症病患的腦中，可發現在其邁氏基底 核爲中心之前腦基底部上有顯著的變性，以及乙醯膽驗基 轉位酵素（CAT)活性有顯著降低之現象（Annu. Rev. Neurosci·，Vol· 3, 77 (1980))。1985年在使用大鼠的腦之研 旯中，NGF被發現係在腦的該部位之神經營養因子（emBO J·，Vol· 4, 13 89 (1985))，因而NGF與本疾病之關聯性就被 密切關注。又，杭亭頓舞蹈症病患的腦之線條體上，亦被 發現在GABΑ激素性神經細胞的脱落之同時，乙醯激素性 神經細胞亦明顯地脱落，而這也是NGF作用於線條體的内 在性膽驗激素性神經細胞所致（Science，Vol. 234，1341 (1986))，基此，一般咸認，本疾病亦可能與NGF有關聯。 將可作爲各種神經疾病模型的大鼠等動物，研究NGF對其 之效果，結果發現，若在大鼠神經細胞顯著變性以前，以 NGF進行腦内投與，就可以中止其變性，並防止CAT活性 之降低（J. Neurosci·，Vol· 6, 2155 (1986)，Brain Res.，Vol. 293, 305 (1985), Science, Vol. 235, 214 (1986), Proc. Natl. Acad· Sci· USA，Vol· 83, 923 1 (1986))。由於NGF在末梢的 交感神經支配組織以及腦中被生合成，末梢組織、或腦組 織間質細胞之纖維芽細胞、或膠狀星細胞，亦被證明在該 NGF的生合成上，皆各自扮演重要之角色（j. Bol. chem.， Vol. 259，1259 (1984)，Biochem. Biophys. Res. Commun·， Vol· 13 6，57 (1986))。又，該纖維芽細胞及星狀膠細胞所 產生之NGF的抗原性、分子量、等電點、生物活性，除被 發現與過去常被研究之顎下腺NGF相同之外，由於在纖維 -5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐） -----------裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1255181 A7 B7 五、發明說明（3 芽細胞（L-M細胞）及星狀膠細胞的培養液中，進行了加入 各種神經傳遞物質的實驗之故，發現兒茶酚胺類具有NGF 產生增強作用（j· Biol. Chem，V〇i· 20 l 6039 (1986))。 在以NGF作爲神經營養因子而作用之部位上，有變性發 生的神經疾病，NGF係被期待作爲中止變性之治療藥劑: 又，腦血管障礙、腦腫瘤、腦尖、頭部外傷變性疾病、麻 醉藥物中毒等腦神經細胞，其若一旦變性，則終其一生再 f典法恢復，結果不止會造成智慧功能降低、記憶障礙， 還會引起感情障礙、行動異常等各種障礙。然而，由於神 經纖維具有可塑性，其若受到傷害，^由附近健康的纖維 開始喬芽，而由受傷之突觸重新形成新的突觸，所以，此 時NGF就被期待可作爲促進神經功能之修復再生的治療劑 而使用。 訂 i 然而’欲將NGF應用於各種神經疾病的治療上，就一定 要使NGF盡可能地到達該需要之神經細胞的旁邊，因而在 中樞神經疾病上，亦必須將NGF送到腦細胞的患部，但問 I就在於典法將NGF透過血管送到腦内。何以如此，其原 因係腦内的血管内皮細胞係彼此緊密地結合著（所謂的腦 血液閥），所以除了水、氣體、脂溶性物質以外，其他的 物質在移行至腦組織的過程中都會受到限制，從而高分子 物質的蛋白質（含有NGF)則完全無法通過腦血管閥。又， 右考慮將眾NGF直接以外科之方法投與至腦内，以現在的 技術而言，危險仍然是過大的。 另一方面，亦有不直接投與NGF，而努力開發出可增強 -6- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格⑵G x 297公髮） 1255181 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 -------- —_JB7________一 —___ 五、發明說明（4 ) NGF產生之物質。具有NGF產生增強作用之物質，除了前 述的兒茶酚胺以外，尚有咖啡因酸，以及第四個位置有= 取代之兒茶酚類，舉例來説，代表性的化合物已知有‘甲 基兒茶酚（特公平第5_29207號公報）、其他還有特開平第 2-104568號公報、日本國特許第2719〇42號説明書、^開平 第8-27086號公報以及特公平第7_u〇812號公報，皆有^示 具有NGF產生增強活性之化合物。然而，這其中，有許I =有急性毒性等強烈毒性之物質、產生毒性的濃度與有二 ;辰度非^接近之物質、或者會產生神經興奮作用等對於神 經系非常嚴重副作用之物質（例如，前述兒茶紛胺類就已 知係代表性的腎上腺素激導性的藥劑），又，尚有ngf產生 增強活性的有效濃度範圍過窄，投與量之控制困難等，仍 有很多的困難點。舉例來説，有關特公平第^ 1〇812號公 報所揭示之物質，就顯示NGF產生增強活性與化合物濃度 t間具有雙峰性的關係。又，特開平第2_1〇4568號公報、 日本國特許第2719042號説明書、特開平第8_27〇86號公報 所揭示之化合物的NGF產生增強活性，其被確認之濃度各 自皆只有一點而已，所以關於活性的有效濃度範圍尚且不 明。由於這種種的問題存在之故，使得具有NGF產生增強 作用之物質尚未到達實用化的程度。 發明之揭示 本發明者們經過反覆研究之結果，發現下述以一般式（1) 所表示之化合物，其較習知之具有NGF產生增強作用的化 合物’具有1)在更低濃度下更強的增強活性，2)顯示增強 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） -----------裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1255181 A7 B7

1) 五、發明說明（5 活性的濃度區域廣泛，及/或3)低毒性 成了本發明。 故而元 ^概要説明本發明，本發明係關於 [1 ] 一種需要神經成長因子產生增強 預防劑，其特徵係含有由下述-般式⑴所代1之:：或 R2 (1)

Rs (式中’ Ri、R2、R3、R4以及R5各自可良4 ^ 5曰j馬相同或相異，而 爲氫原子、羥基、烷氧基或醯氧基； 其中，X爲下述一般式（2):

Y (2) (式中，Z係可取代有氫原子或特性基之脂防族基、堯 族基或芳香脂肪族基’ Y係氫原子或經基，m及η各爲 下述一般式（3) -8 · 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ------------^--------II--------- (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 1255181 A7 B7 五、發明說明（6

n(〇r" 、(ω 3) (式中，Z’係可取代有氫原子或特性基之脂肪族基、芳香 族基或芳香脂肪*灰基’ γ係氫原子或經基，m及n各爲〇或 1)， 或者下述一般式（4):

(4) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制农 (式中，R6以及R?各自可爲相同或相異，而爲氫原子、糖 殘基、或可取代有特性基之脂肪族基、芳香族基或芳香脂 肪族基）。 > 但疋，不包括前述一般式⑴中，&、&以及心共同爲氫 原子，h及R.3共同爲羥基，以及χ爲前述一般式（2)，且該 一般式（2)中，11爲1，m爲0，Z及Y爲氫原子。） 以及樂理學上可接受的這些鹽類構成之群組中，選擇至 少一種的化合物作爲有效成分。 [2]種神經成長因子產生增強劑，其特徵係含有由前 ^ [1 ] σ己載之—般式（1)所表示之化合物，及藥理學上可接

297公釐） -----------裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1255181 A7 疾 經 式 五、發明說明（7 受的這些鹽類構成之群組中，選擇至少—種 有效成分。 口物作馬 [3 ] —種神經成長因子產 甘& 、十、「η々恭> 一 ό二丁座生的、&万法，其特徵係由前 Ν己載之I式⑴所表示之化合物，及藥理學 受的這些鹽類構成之群組中，選擇至少—種的化合 至動物。 又入 [4] -種神經成長因子產生增強用食品、飲料 前述[1]記載之一般式⑴所表示之化合物 及其鹽類構成〈群組中’選擇至少-種的化合物作爲有效 成分。 〜 > m-種使用’其係於需要神經成長因子產生增強之 病的治療劑或預防劑、神經成長因子產生增強劑、或神經 成長因子產生增強用食品、飲料或飼料之製造上，前述二 記載之-般式(1)所表示之化合物及其鹽類構成之群組中， 選擇至少-種的化合物而進行。x，本發明提供一種 神經成長因子產生增強活性之新穎化合物。以及 /、 [6]由下列化合物構成之群組中，所選擇之下述 (5)〜（12)表示之化合物： ' ------------•裝--------訂---------Φ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1255181 A7 B7 五、發明說明（8 )

Η ο 6 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Η OH Η 7 8 9 ) ο (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1255181 A7 B7 五、發明說明（9 )

圖示之簡要説明 圖1係表示化合物（5)之1H-NMR光譜圖。 圖2係表示化合物（6)之1H-NMR光譜圖。 圖3係表示化合物（7)之1H-NMR光譜圖。 圖4係表示化合物（8)之1H-NMR光譜圖。 圖5係表示化合物（9>之W-NMR光譜圖。 圖6係表示化合物（10)之1H-NMR光譜圖。 圖7係表示化合物（11)之1H-NMR光譜圖。 圖8係表示化合物（12)之1H-NMR光譜圖·。 圖9係表示化合物（27)之1H-NMR光譜圖。 實施發明之最佳型態 本發明中作爲有效成分使用之化合物，其只要是由上述 一般式（1)所表示之化合物及其鹽類構成之群組中，選擇至 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -----------裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) !255181 Α7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（1〇 ) 、的化口物，並具有NGF產生增強作用者即可，並無 、j、限制y重鹽類係以藥學上可接受之鹽類爲理想。 又，其亦可爲後述之具有前驅藥物功能的該化合物之衍生 物。因此，所謂的本發明有關的有效成分，係含有前述— 般式⑴所表示之化合物及其鹽類，以及在可得到本發明所 期待效果之前提下，前述一般式⑴所表示之化合物的衍生 物以及其鹽類。 又，本説明書中，「NGF產生增強活性」以及「卿產 生增強作用」，係各意指增強NGF產生之功能以及造 NGF產生增強，其意義並無特別嚴格之區別。又，「 強」所包括之情形，除了比起在本發明之有效成分作… 前，其作用後之目的物質量增加之型態外，尚有藉由本發 明有效成分之作用而謗導產生目的物質之情形。 作爲有效成分使用之前述一般式（1)所表示之化合物的 合例子有，具有3-苯基-2-丙烯-1-酮骨架之化合物、具有 苯基丙烷小酮骨架之化合物、具有扣笨基丁晞小酮 架4化合物以及具有4-苯基丁烷小酮骨架之化合物等。 又，本説明書中，具有3-苯基-2-丙烯酮骨架•苯基 3-丁烯-1-酮骨架之化合物，舉例來說，將前述式（5)戈土 (11)記載之化合物的構造，將其雙鍵結合位置之立體結 以反式表示者，但本發明所使用之化合物並不特別 式體，只要是具有NGF產生增強活性者即便爲順式㈣ 可。又，只要是具有NGF產生增強活性，其他如前述2 般式（1)所表示之化合物的光學異構物、酮_晞醇 立交 13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 成 增 適 3- 骨 式 反 亦 異構 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 裝 訂---------. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1255181 A7

五、發明說明（11 ) 物、幾何異構物等各種異構物，亦全部皆可使用於本發 月，進一步，各異構物可以分離或者混合物的型態來使 用。 兹說明前述一般式（1)〜(4)之各取代基。本説明書中，烷 氧基可以Ri〇-來表示。在此，該Ri例如有甲基、乙基、n_ 丙基等的碳數爲1〜3〇之直鏈狀燒基、異丙基、異丁基、 sec-丁基、tert-丁基、異戊基、新戊基、ter卜戊基等的分枝 狀燒基、乙烯基、烯丙基、反-丨_丙烯基、順-丨_丙晞基、 順-8-十七碳烯基、順·8_順-;11-十七碳二晞基、順-8nn_ 順-14-十七碳三晞基、順·4_順-7-順-10-十九碳三烯基、順一 4-順-7-順-10-順-13-十九碳四晞基、順順-7-順-10-順-13- 順-16-十九碳五晞基、順_ 12-二Ί--碳晞基、順-3 -順-6-順- 9-順-12-順-15-順-18-二Η 碳六烯基等的直鏈狀鏈烯基、 異丙烯基、順-1 -曱基-1 -丙烯基、反-1 -甲基-丨_丙烯基、反· 1 -甲基-1 -丙烯基、反-1 -乙基-1 -丙烯基等的分枝狀鏈烯 基、後述之方香族基等。基於表現本發明所期望的效果之 觀點，這種烷氧基的適當例子，有甲氧基、乙氧基、缔丙 氧基、苯氧基等。 又，本説明書中，所謂的醯氧基可以RiiC〇〇-表示。在 此，該Rii可爲前述Ri所例示之基。這種醯氧基的適當例子 有，乙酸基、丙酸基、苯甲酸基等。 本説明書中，脂肪族基的適當例子有前述Ri所例示之 本説明書中，芳香族基的適當例子，例如苯基、莕基、 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------· 1255181 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 胳苯基之外，尚有吡咯基、啕哚基、咪唑美、 甲苯基等。 土、T本基、一 亡：明書：’芳香脂妨族基的適當例子，例如垸基的確 基等。 基）、本乙烯基、肉档族二要香是Λ有生增強活性者，亦可在上述脂肪 :二香狹基、方香脂肪族基上，取代有疏醇基、魏 基、硫代基、胺基、硝基、硫酸基、鱗酸基、燒氧基 原子、醯氧基、醯硫代基等的特性基。 土》 構進二：其本説明書中，糖殘基可爲去掉-嶋的糖之 構“的&。該糖之理想者’除了單糖之外，舉例來說， =可馬2〜20個殘基的單糖所構成之寡糖或21個殘基以上的 =所構成（糖類。又，構成糖的單糖成分並無限定，舉 =，除D-葡萄糖、D_果糖、L_藏李糖、半乳糖、甘露 二U有D-半乳糖胺、2·脱氧I核醣等…在構成 ‘。早糖成分中，纟無特別限定須爲D體、L體等立體構 本發明所使用之化合物可以上述—般式⑴表示，但理相 ::如有表丨及表2所示之化合物，以及式(26)所表示之； :S于、式(27)所表示之賽福綠明A等。該表中所例示之化 人物係七述一般式（1)中，X爲前述一般式（2)或（3)之化 口物。又’表1及表2中之R1、R2、R3、R4、R5以及X，係 上逑-般式⑴所對應者。又，式(N)之化合物係指化合物 (N)。舉例來説，表1中，式（5)之化合物則指化合物（5)。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 • n n ϋ ----tr---------·

本紙張尺度 297公釐） 1255181 A7 B7 五、發明說明（13 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

表1 名稱 R i R ： R 5 R 4 R 5 X 化合物(5) 3,4,2'，4’-四乙醯紫柳因 Ιί OAc OAc H 11 化合物(6) 3,4-二羥基-2/4·-二氣 查耳Sii Η Oil OH U H 化合物(7) 3,4-二經基-2·，4,-二甲 氧基查耳酮 Η OH OH H H 化合物(8) 4-(3,4-二羥苯基)-3-丁晞-2-酮 11 Oil OH H H o 化合物(9) 1-金剛基-3-(3,4-二 羥苯基>2-丙烯-1-酮 Η OK OK K H ϋ 化合物(10) 二羥紫柳因 Η OK OH H H 化合物(11) 1 -金剛基-4-(3,4-二經 苯基)-3-丁晞-1-Sq Ιί OH DH H H 化合物(12) 1-金剛基-3-羥基-4-(3,4-二羥苯基)丁烷 -1-酮 ♦ Η m OH H H 化合物(13) 紫柳因 II Oil Oil II H 化合物(14) 異立桂特精. Η II Oil H 11 化合物(15) 咖啡因酸苯乙基酯 II OH OH H 11 ςτ^τ〆 化合物(16) 薑黃素 II OMc OH H II •16- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 .Φ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1255181 A7 B7 五、發明說明（14 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣

表2 名稱 R 1 R ! R ： R s X 化合物(17) 3,4,5,2’，心五羥查耳酮 Η 0Η ΟΗ Oil Η 化合物(18) 3,4,2’，5’-四羥查耳酮 1[ ΟΙί Oil li Η 化合物(19) 3,4,3'，4'-四羥查耳酮 Η 0Η ΟΗ II Κ 化合物(20) 3,4,3'，5'-四羥查耳酮 Η ΟΗ ΟΗ II Η ο 化合物(21) 3,4,三羥查耳酮 Η ΟΗ ΟΗ Η Η 9r^ 化合物(22) 3,4,2'，3’，4’-五羥查耳酮 Η ΟΗ ΟΗ Η 11 化合物(23) 迷迭香寧酸 Η ΟΗ ΟΗ H Η 花合物(24) 黃當歸醇 Η Η ΟΗ II Η 化合物(25) 心羥基紫柳因 [{ ΟΗ 01! II Η 警 化合物(26) 黃腐醇 Η Η ΟΙΙ II H 化合物(27) 赛福錄明A Η II Oil II II —_________·裝--------訂---------Φ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) 1255181 A7 B7 五、發明說明（15 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 、成又，本發明中作爲有效成分使用之理想的化合物，在前 述⑭般式（1)中，χ係前述一般式（4)，並係構造中具有黃烷 =骨架之化合物。這種化合物，舉例來説，在前述—般式 (=)中，Rl、r4、R5及R7皆爲氫，112及113皆爲羥基，以及 馬a -L-鼠李糖殘基所表示之櫟素（Quercitrin) ; &、h、 R5、R6及R7皆爲氫，R2及R3皆爲羥基，所表示之櫟精 (Quercetin :亦稱爲 3,3，，4，，5，五羥基黃酮 ” Ri、^、^及t皆爲氯，R2、R^R4皆爲經基，所表示之楊梅6酮 ynCeUn ·亦稱爲3,3，，4，，5,5’，7-六羥基黃酮）；以及汉丨、1^ 二7皆馬虱’ I 1及〜皆爲羥基，以及R6“心鼠李糖 歹欠基所表示之楊梅貳（Myricitrin)。 、本务明所使用之化合物，除可利用市售之化合物之 亦可將苯㈣衫類、苯、苯環上取代有經基之 酸（例如2’5、姓基苯甲酸）等的苯甲駿類 '色滿類、桂 ^桂皮酸或咖啡因酸等作爲起始原料，而利用習知之 :通田地合成。又’若是以天然物型態存在時，例如可 Γ例如明日葉、紅花、蛇麻草等）等利用一般方法加 卒取、純化而得到。 ]疋上述表1及表2所示之化合物中，化合物（5)、 &⑹、化合物⑺、化合物⑻、化合物⑼、化合 (10)、化合物（11)、化人物η σ 、 σ物（12)，皆係本發明首先合成之 毛、“。亦即’本發明亦提供了這些具有臟產生增 活性（新穎化合物。這些化合物如前所述，可以任何習 之方法進行合成。 甲皮將 以 參 化 物 新 強 知 -1 8 - 本紙張尺度刺+ _家標準（CNS)aI^T^ x 297公釐） 1255181 A7 B7 五、發明說明（16 ) 化合物（6)、（7)、（8)、（9)之合成法並無特別之限制，例 如可使用日本國特許第29 13706號説明書所記載之習知方 法。亦即’在幾化鋇等的驗存在下，以四氫毗喃輕基保護 之輕基苯甲酸以及具有甲酮基之化合物，將羥基利用克莱 森縮合反應進行縮合，再將所得到之縮合體之四氫吡喃羥 基於催化劑的存在下，進行脱保護反應即可得到。又，在 進行克萊森縮合反應時，亦可利用四氫吡喃羥基而導入保 獲基。又，克萊森縮合反應之催化劑，亦可以使用鹼以外 之氣化氯等的酸類。 化合物（12)的合成法，並無特別之限制，可使甲酮化合 物在一兴丙醯胺鋰的存在下，於低溫下使用醛化合物及醛 醇縮合之方法。進一步，在化合物⑽的位置之基導 入適當之脱離基之後，以鹼類等使其進行脱離反應，就可 以合成化合物(11)。又，化合物⑹、⑺、⑻、⑼之合 成，亦可以使用如上述，經過化合物（12)，而合成化合： (11)之方法。 化a物（5)之合成法，並益特別士 ”·、狩別又限制，可以將化合物 在 爲 )乙醞化’例如將化合物(13)與無水醋酸在鹼類 下，進行反應就可以得到。又，此時供給 醋酸氣化物等的醋酸齒化物。 m 土 ，可 等 化合物（10)之合成法，並無特別之限制 的傕化劑存在下，在含有化合物 ·’巴 添加氫氣而合成。 ）…寺的溶劑中， 珂述一般式（1)所表示之化合物的骑 a頌，例如有鹼金屬 -19· 本紙張尺度適用中關家標準（CNS)A4遍⑵G χ挪公髮^ !255181

五、發明說明（17 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 鹽、鹼土金屬鹽'有機鹼類等的鹽。這種鹽係以藥理學上 可接受之鹽類爲理想…本發明中所使用之藥理學上可 接受之鹽類，係意指對生物實質上無毒，且具有ngf產生 増強活性之化合物的鹽類。該鹽類例如有鈉、鉀、鈣、 叙、按鹽或質子化的卞星（benzathine，ν,νι·二-爷基乙撑 二胺）、膽鹼、乙醇胺、三乙醇胺、乙撑二胺、美拉明(ν_ 甲基柯卡明）、貝他明(Ν_节基苯乙胺)、哌嗪或特洛美他明 經甲基]，3_丙二醇)等的鹽類。這些鹽類，例如 可刖述一般式⑴所表示之化合物，且其中X爲前述一般 2(2)或⑺，η爲i'm爲〇, 2或2，爲氣原子，丫或丫，爲氯原 :所表示之羧酸，以習知之方法變換而得到。又，舉例來 :’若爲前述—般式⑴所表示之化合物，且其中X爲前述 -般式⑷時，可將該化合物中的苯盼性趣基以習知之方法 變換成鹽而得到。 進—步，本發明所使用之前述—般式⑴的化合物，舉例 來：，可作成醋類等，其在體内很容易加水分解，就可以 =制可發揮期待效果的衍生物（前驅藥物）。這種前驅藥物 形式備可根據習知之方法 '又，這種衍生物亦可以爲鹽類 2發明中作爲有效成分使用之前述—般式⑴的化合物及 例Γ ’如前所述，冑具有NGF產生增強活性。該活性，舉 又1乳，可根據後述之參考例丨所示之方法來進行評估。 物’如後述之實施例所明白敘述者，作爲有效成分之化合 ，其比較習知之具有NGF產生增強活性的化合物，更具 裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -20- 本紙張尺度"^?ϊϋ^Ν5)Α4規格(2¥ X 297公釐） 1255181 A7 B7 五、發明說明（18 ) 有υ在更低濃度下更強的增強活性，2)顯示增強活性的濃 度區域廣泛，及/或3)低毒性，等特徵。纟發明中作爲有 效成分使用之化合物，其NGF產生增強活性，舉例來説， 如後述之實施例18所明白敘述者，係透過_產生增強而 產生促進神經突起的伸長之效果，此外，對於活性氧以及 營養I几餓或物理性的損傷等所引起之神經細胞壞死，亦且 有抑制之效果。因此，如後所述，料需要卿產生增強 t疾病的治療或預防亦被認爲相當有用。 本發明中作爲有效成分使用之前述一般式⑴的化合物， 係依據後述之參考例1所示之方法篩選之結果而發現者， Q此’本發明〈—種型態’亦提供具有NGF產生增強活性 之化合物的篩選方法。 訂 本發明中作爲有效成分使用之前述一般式⑴的化合物及 其，，其即使對於生體投與卿產生增強活性的有效量亦 参 …母陘舉例來况，若經口投與時，具有苯丙烯醯苯骨架 的化合物之紫柳因(BUtein)[化合物(13)] ::類，其任何一者，以1〇〇〇毫克/公斤對於老鼠進行單 次投與’都沒有死亡例發生。又，具有黃酮醇骨架的化合 物之甘油三Ή酸酉旨或藥理學上可接受之鹽類，其任何 乂 15 〇 克/公斤對於老鼠進行單次投與，亦沒有死 亡例發生。 、發月之第型怨的需要NGF產生增強之疾病的治療劑 2 ’、防…，可知本發明之前述有效成分與公知之醫藥用載 把互相組合，而作成製劑。本發明之型態中，有效成分之 -21- 本紙張適 (eNS)^^ x 297公釐） 1255181 A7 B7 五、發明說明（19 ) 鹽類可使用&里學上可接受之載體。 二本况月書中需要NGF產生增強之疾病，舉例， 可巧癡呆症不申經障礙、末梢神經血 神經病變等。 總尿病性 本發明之治療劑或預防劑之製造，一般而言，可戒 有政成分與藥理學卜 &、 、 ^ 人，再根f目的文又液狀或固狀的載體互相配 I” 的加入溶劑、分散劑、乳化劑、緩衝劑、妾 :㈡：武型剑、結合劑、崩壞劑、潤滑劑等，而作成 劑、顆粒劑、散劑、粉末劑、膠囊劑等的固型劑 ^ d寺的敗劑。又，在使用前添加適當之 ^ :吓可以得到沒有液狀的乾燥品、以及其他如外用 醫藥用載體，可根據治療劑或預防劑之 型而進行選擇。芸& -、土心以及蜊 錠劑、丸劑、膠囊成之經導可作成 使用殿粉、乳糖…：露=劑：顆粒劑等，例如 澱粉、血播糖甘路“、羧甲基纖維素、玉結合劑’:、崩；：:ί面tn劑的製備上，可進-步加 矯味劑、著色劑、香料等:：:：”丨流動性促進劑 據目的，而包被丙基纖劑;：可 性或脂溶性物質的外膜。若爲液髀：衣’或者胃 劑，可作成藥理學上可接受之乳濁;;、：物:構成之經 糖浆等，例如可使用精製水、乙醇” m浮劑 根據目的，添力，劑、懸浮劑等二:劑甘:劑步 載劑 訂 可米 入 參 根溶 口 可 風 I____ -22- 本紙張尺 議)A4規格⑽X挪公至 1255181 A7 B7 五、發明說明（2〇 ) 味劑、防腐劑等。 方面，若爲非經口劑時，可根據一般方法 之可述有效成分作成稀釋劑，而溶解於注射用蒸餘水:明 理食鹽水、葡萄糖水溶液' 注射用植物油、芝麻：7、二生 =、大豆油、玉蜀黍油'丙二醇、聚乙二醇等，並根：= 備加入殺菌劑、安足劑、等張化劑、無痛化劑等； “希。又，亦可製造成固體組合物，在使用前溶解 水或無菌之注射用溶劑中而使用。 、”、、国 外用劑係含有經皮投與用或者經黏膜（口腔内 投與用之固體或半固體狀、半固體或液狀之製劑。又工 !；含1座劑等。舉例來説，可作成乳劑、洗劑等的“ 劑、卜用酉丁劑、經黏膜投與用液劑等的液狀製劑、油性軟 嘗'親水性軟膏等的軟膏劑、塗片劑、帶劑、濕布劑等的 經皮投與用或經黏膜投與用的貼付劑等。 以上的各種製劑，可利用各種習知之醫藥用載體等， 通當地根據習知之方法而製造。又，這種製劑中的有效 分之含量，可考慮其投與型態、投與方法等，理想者目^ 後述之投與量範㈣，投與該有效成分之量 別之限制。 本發明之治療劑及預防劑，可根據其劑型以適當的投 途徑進行投與。投與方法並無特別之限制，可爲内用、 用及注射。注射劑可在例如靜脈内、肌肉内、皮下、皮 等進行投與，外用劑則例如可將座劑以適當的投盥方法 行投與。 〃 其 而 成 在 與 外 進 ------------ΦΜ--------^---------Φ f請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) __ # -23- 本紙張尺度綱中國國家標準（CNS)A4規格咖x 297公髮 1255181 A7 B7

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明之治療劑及預防劑 M 士土 ^ 、丨万J的奴與量，可根據其劑型、投 例7、、使用目的及該治療劑或預防劑 二:，年齡、體重、症狀而適當地加以設定。舉 成:a人的時候’—般在製劑中所含有之前述有效 :，理想係成人1曰的量。當 : , 里因局要根據各種條件變動之故，有可能會比 更y里就夠的情形’或者必須超過該範圍之情 與在期望之投與量範圍内’可以！曰内單次，或者 刀成數次來進行。 NGF係作用於神經細胞，而使神經細胞伸長，以及維持 神經哭起細胞。因此，本發明中所使用之有效成分係可使 卿產生增強，維持生體之神經系，以及使其活性化。從 而，本發明之治療劑或預防劑係在前述各種疾病的治療及 預防上有用。 本發明（第二種型態，亦即含有本發明之前述有效成分 的卿產生增強劑，其可爲前述有效成分，或者亦可爲本 有前述有效成分之組合物。本發明之型態中，作爲有效^ 分之鹽類引吏用t理學上可接受之鹽類。卿產±增強劑 之製造’舉例來説，可以將前述有效成分在可與前述有效 成分相同用途下配合使用之其他成分，根據上述治療劑或 預防劑的製造方法而製造成—般使用之試劑型態。這種增 強劑中之前述有效成分之含有量，可考慮增強劑的投與^ 法、使用目的等，而設定成可得到本發明期望效果的量， 並無特別之限制。又，該增強劑之使用量，亦係只要可得 請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝

-n n I 訂---------^9— · 24· 1255181 A7 B7 五、發明說明（22 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 到本發明期望效果的量即可， ^ , 並然特別之限制。转別口 投與至生體而使用時，理邦、去、 特别疋， 該增強劑。 里，而使用 本發明之NGF產生增強劑’可用於神經細胞活性化（ 來説，在學習記憶能力的提昇等 牛 j促幵寺）上。又，使 則，並利用後述之NGF產生> ^ ,κ 曰 度玍、&万法，就可以進行神唾 胞機構有關的生化學研究、U H 、'' 筛選。 子^ ""Μ呆症、神經障礙藥劑的 本發明的第三種型態，係提供_種將本發明之前述有效 成分投與至動物的NGF產生的增強方法。本發明的型態 中，作爲有效成分的鹽類係可使用藥理學上可接受之鹽 類。這種方法，對於被預測需要NGF產生增強的動物，或 者對於有需要之動物，可將前述有效成分（理想者爲本發 明之NGF產生增強劑）進行投與，而藉由這種投與，就可 增強NGF之產生。有效成分之投與方法、投與量等，理 者可根據前述NGF產生增強劑來設定。又，本發明之治 劑或預防劑、後述之食品 '飲料或飼料，亦可與NGF產 增強劑相同地來加以使用。 根據這種NGF產生增強方法，舉例來説，利用該方法 使神經細胞活性化，而進行細胞内外之相關因子的動向 解析’就可以進行關於神經細胞機構的生化學之研究 又，利用這種NGF產生增強方法，可以進行痴呆症、神 障礙藥劑等的篩選。 以 相 療 生 可 之 經 ^ 裝--------訂---------#. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -25- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1255181 A7 B7 五、發明說明（23 經濟部智慧財產局員工消費合作社印剩衣 本發明的第四種型態，係提 料或飼料。這種食品、飲料 屋生增強用食品、飫 有效成分者。本發明之型能丨1 : ’係含有本發明之前迷 使用藥理學上容許的鹽^ 且乍馬有效成分之鹽類3 類。本發明之食品、飲料或料:’、其相同安全性之發 用，對於前述該有效成分且=\措由其NGF產生增強作 ^ ^ X /- X- ^ ^ , ，、有敏感性、且需要NGF產生μ w各^關症狀改善、預防上，係極爲有用。^ 又’本發明（食品、飲料或飼料中之「 指含有、添加、稀釋之意，所 ^ 一/，係 或飼料中，含有本發明所 + , 你六认人σ 定用又有政成分的型態；所謂添 加，：在：…飲料或飼料的原料中，添 ,ν 〜所明稀釋，係在於本發明所使用 有效成/刀上，添加食品、飲料或飼料之原料的型態。 本發明之食品'飲料或飼料之製造法， 制。舉例來説，配合、調理、加# …f 里加工寺根據一般食品來進行 即可即根據k些食品、飲料或飼料之製造法來進行製造 即可，然後再於所製造之食品、飲料或飼料中，由具 NGF產生增強作用之本發明之有效成分，加人其中作爲 效成分即可。 本發明之食品或飲料，其並無特別之限制，例如有含有 本發明之前述有效成分之毅類加工品(小麥粉加工品、殺 粉類加工口口口、預混維生素米加工品、麵類、通心麵、麵 類、餡麵包類、蕎麥麵類、麩類、米粉、冬粉、包装 等）、油脂加工品（可塑性油脂、天婦羅油、沙拉油、美 之 限 有有 包 乃 -^1^-^·---- - - 訂·--------^__vi Γ if先83讀背¾之a意事項再填寫本頁) •26- 1255181 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 五、發明說明（24 ) 滋類、調味汁類）、大豆加工品（豆腐類、味噌、納豆等 食肉加工品(火腿、燻豬肉、壎製香腸、香腸等卜水制 品（冷凍磨碎魚肉、魚板、竹輪、半片、炸魚丸、含魚 子、壽司、魚肉火腿、香腸、鰹魚節、魚卵加工品、水丸 罐頭、細煮等）、乳製品（原料乳、霜溪淋、優格、奶油屋 乳路、起士、煉乳、乳粉、冰澳淋等）、蔬菜·水果加 品(糊類、醬類、潰物類、果實飲料、蔬菜飲料、混人： 料）、糕點類(巧克力、餅乾類、糕點麵包類、蛋鲜、：二 點、米果類等）、酒精類（日本酒、中國酒、葡萄酒、^ 忌、燒酒、伏特加、白蘭地、杜松子酒、蘭姆酒、啤酒 清涼酒精飲料、果實酒、甜香酒等)、嗜好性飲料(綠苓： 紅茶、烏龍茶、咖啡、清涼飲料、乳酸飲料等）、調二料 (醬油、辣醬油、醋、甜酒等）、罐頭·瓶罐頭·袋裝食 (牛丼飯、小鍋燴飯、紅豆飯、咖哩飯、其他各種調理 之食品）、半乾燥或濃縮食品（肝醬、其他的塗抹食品、 麥麵·烏龍麵之醬汁、濃縮湯類)、乾燥食品(速食：類、 速食咖哩飯、即溶咖啡、粉末果汁、粉末湯類、速食味嗜 湯虫調理過之湯類等)、冷床食品(壽喜燒、茶碗蒸、烤鰻 魚串、漢堡牛肉餅、燒賣、 等）、固能P肉排、雞尾酒 寺）口.、㈣食品（湯類等）、香辛料等的農產•林 產加工品、蓄產加工品、以及水產加工品等。 本發明之食品或飲料中之前述有效成分之含有量並血特 別之限制，可以由並咸官 ,I亚”·、特 與Μ ±、， 心&及活性表現之點加以適當地 擇，舉例來說，食品方面，可爲每⑽重量部之食品理 品 蕎 選 裝--- (請先閱讀背面之注咅P事項再填寫本頁) 訂- 27- 本紙張尺度適用中國國家 X 297公釐） 1255181 A7 ------------ B7 —__ —____ 五、發明說明（25 ) 爲〇_〇〇〇!重量部以上、更理想則爲〇〇〇1〜1〇重量部，而飲 料例如可爲每100重量部之飲料，理想爲00001重量部以 上、更理想則爲0.G01〜1G重量部。又，本發明之食品或飲 料。又，成人每曰之攝取，其中所含有之有效成分，理想 可爲0.01〜100毫克/公斤。 又，根據本發明，可提供一具有NGF產生增強活性，且 含有本發明之前述有效成分之生物用飼料。又，本發明之 另一型態，亦提供一生物之飼育方法，其特徵爲將前述有 放成分投與至生物上。進一步，本發明之再一型態，可提 供一生物飼育用劑，其特徵係去有前述有效成分。 k些發明中，所謂的生物例如有養殖動物、寵物動物 等，養殖動物則例如有家畜、實驗動物、家禽、魚類、甲 豉類或貝類。飼料則例如有身體狀況維持及/或改善用飼 料。生物用飼育用劑例如有浸潰用劑、飼料添加劑、飲料 用添加劑。 藉由這些發明，在適用於這些的前述範例的生物上，基 於本發明所使用之前述有效成分的NGF產生增強活性，就 可以期待具有與本發明之前述治療劑或預防劑相同效果之 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 I --- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 表現。亦即，可期待在該生物在癡呆症、神經障礙的治療 或預防效果上有所表現。 本發明所使用之前述有效成分，一般而言，理想者係以 對象生物之體重1公斤，每日投與〇·〇丨〜⑼⑻毫克。投與 時’舉例來説，其可以將該有效成分添加混合於供應對象 生物的人工配合飼料之原料中，或與人工配合飼料之粉末 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） 1255181 A7 B7 五、發明說明（26 原料混合之；^$、r μ ^ 又，前、…、 混合於其他的原料之中。 U有政成分之飼料中，其含有量並無特 而可以配合目的來使用，以〇 〇〇1 、又制， 合。 重里/〇的比率爲適 人工配合飼料例如有利用魚粉、酪蛋白 :物性原料、大豆柏、小麥粉、殿粉等的植物二ΓΓ 性：脂、大豆油、菜種油等的植物性油脂動物 物貝類、抗氧化劑類等爲原料之人工配合飼料。又，、备壙 末等的魚類用飼料亦可以使用。 ，、、' 肉 6本發明之飼料，其製造方法並無特別之限制，又， 組合亦根據-般的飼料即可，只要在所製造之詞 可。’含有具有NGF產生增強活性之本發明的有效成分即 又，具有NGF產生增強活性之本發明的前述有效成分， 其投與S亦可以藉由直接添加於水池、水槽、保存水 詞育區域之水、海水等中，並將對象生物浸潰於其中而達 成。此種浸潰方法在對象生物的飼料攝取量降低時特別有 效。具有NGF產生增強活性之本發明的前述有效成分，立 水中或海水中之濃度並無特別之限制，配合目的而使用者 即可，理想爲0.00001〜1重量％之比率。 、又，具有NGF產生增強活性之本發明的前述有效成分， 亦可將其含有於飲料中，而作成飼育用飲料使對象生物攝 取。具有NGF產生增強活性之本發明的前述有效成分，其 -29- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐 c請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁；> 裝 n I n n ϋ 一口、a n ϋ_1 n I i 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1255181 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制π A7 五、發明說明（27 ) 在飲料中之濃度並無特別之限制， 可，理想爲0·0001〜1重量。/。之比率 σ目的而使用者即 含有具有NGF產生增強活性之本發 生物飼育用劑，例如有浸潰用劑、:：：前述有效成分之 加劑等，可以其習知之内容配合及劑、飲料用添 生物飼育用劑 中之有效成分之含有°万法製備即可。該 明所期望之效果者即可，並盔 ’只要是可得到本發 :”、、评別之限 本發明所適用之生物並無特別之 。 馬、牛、豬、羊、山羊、駱駝 丄：*殖動物例如有 鼠、土撥鼠、兔子等實驗動物、雞°、、、、等家田、老鼠、大 家禽、眞鯛、石鯛、比目备、♦ 甲、、、、火雄、鴕鳥等的 辦魚、條紋竹荚魚、，占魚：鼓魚'、:二、飯魚、、鮪魚、 魚、泥鰍、鯰魚等魚類、車蝦、、、、、弋、虎河豚、鰻 甲殼類等、鮑魚、蝶螺、海扇、;^菩=瑕、榜蟹等的 物動物’故係廣泛適於陸上·水中的動物“龍 猎由使攝食含有具有NGF產生增強活性之本發 :效成分，飼料，或者藉由使對象生物浸潰於含有具有 :F產生i曰強活性之本發明的前述有效成分之含有液中， 说可以使豕田、實驗動物、家禽、魚類、甲殼類、貝齊、 寵物動物等的身體狀況維持或者獲得改善。 、/ 本發明之食品、飲料或飼料，其只要是含有本發明的前 述有效成分，並含有表現NGF產生增強活性之必要量者即 可’其形狀並無特別之限制。 進一步，本發明之第五種型態，係於需要NGF產生增強 -30- 本紙張尺度_巾關家鮮 297公釐） ------------裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1255181 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明說明（28) 之疾病的治療劑或預防劑、NGF產生增強劑、或NGF產生 增強用食品、飲料或飼料的製造上，提供本發明的前述有 效成分之使用。這種使用之型態，其例如有於本發明的前 述治療劑或預防劑、NGF產生增強劑、或NGF產生增強用 食品、飲料或飼料的製造上，提供前述有效成分之使用。 舉例來説’在需要NGF產生增強之疾病的治療劑或預防 劑、或者NGF產生增強劑的製造中，該前述有效成分之使 用，包括有錠劑、顆粒劑、散劑、粉末劑、膠囊劑等的固 型劑、通常液劑、懸浮劑、乳劑等的液劑，或者，也可以 在使用前添加適當的載體，而得到沒有液 豆孝己燥品的製 造。 本發明之有效成分，如後述之實施例所明白敎述者，其 較習知之具有NGF產生增強作用的化合鉍 ’、 ^ ^ ’具有1)在更低 /辰度下更強的增強活性，2)顯示增強法k 一 ,7 ^ 曰S，舌性的濃度區域廣 之，及/或3)低毒性，等特徵。因此，本 丄。 〇有該有效成分之 本發明之治療劑或預防劑，或食品、飲粗 ^ „ χτ 竹或飼料，JL對於 而要NGF產生增強之疾病的治療或預 ’ ，係有用的。 又，含有前述有效成分之NGF產生增強劑，" 機構有關的生化學研究、以及瘦呆症 〃在H田月已 選上係有用的。 神經障礙藥劑的筛 實施例 以下’茲以製造例、實施例等更且濟· 本發明並不限定於這些實施例。又明本發明，但 等，關於「％」之記載，若無特別之情製造例、實施例 %即係指重量％之 .31- 本紙張尺度適用中關家標準（CNS)X4規格⑽χ 297公爱丁 ----------裝------—訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1255181 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（29 意 製造例1紫柳因（Butein)[化合物（13)]之合成 將 2’，4’-二樂基乙驢苯（2’，4’-Dihydroxy acetophenone ;東 京化成製）1 克（6·6 mmol)、3,4-二羥基苯甲醛（3,4-Dihydroxy 匕€112&1(1€11丫<^;東京化成製）912毫克（6.6 111111〇1)、以及對續 酸甲苯吡啶省鹽（Pyridinium p-toluensulfonate ;東京化成 製）80毫克（0.32 mmol)，溶解於二氯甲苯26毫升中，在室 溫下攪拌30分鐘之後，添加3,4-二羥基-2H-吡喃（3,4-DihydroJH-pyrane ;東京化成製）1〇毫升，於室溫下再攪掉 3小時。將反應液以水洗淨二次，鹼壓濃縮之後，所得到 之油狀物質溶解於曱燒26毫升中，添加氫化鋇八水合物 2· 1 5克，於40°C下攪拌約20小時。將反應液稀釋於甲烷26 毫升中之後，以一級之鹽酸調整pH値至中性附近。將反應 液以乙基醋fe萃取之後’所仔到之有機層以飽和重曹水、 10%檸檬酸水溶液、飽和氣化鈉水溶液的順序洗淨之後， 以無水硫酸鎂使其乾燥，並進行減壓濃縮。將濃縮物供注 於使用己烷：乙基醋酸（容量比）=5: 1作爲展開溶劑之矽凝 膠系管柱（富士西里西亞（股）製）中，以進行色層分析（以下 稱爲碎層析），並得到化合物（13)之四羥基吡喃（THp)。將 化合物（13)之THP化體溶解於甲烷26毫升中，添加無水柳 酸（Siilf0saliCyiic acid dehydrate) 67 毫克（〇 264 随叫，在 罜溫下攪拌3小時。將反應液以乙基醋酸稀釋之後，以飽 和乳化鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鎂使其乾燥，並進行減 壓濃縮。利用己烷與乙基醋酸使濃縮物再結晶成爲丨克的 裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -32-

1255181 五、發明說明（3〇) 化合物（13)(回收率56%)。各以JNM_A5〇〇(日本電子公司 製）、MS (DX3 02)質量分析器來分析化合物（13)之核磁共振 (NMR)光譜、質譜、質量光譜，並決定其構造。nmr* 譜、質譜之測定結果係如以下所示。 1H NMR : d 6.26 (1H，d，J3, 5, 2Hz，H_3，），6 38 (1H，dd， 6’ 9Hz，H-5，），6.80 (1H，d5 J5, 6 8Hz，Η·5)，7·19 (1H，dd， J2, 6 2Hz，H-6)，7.26 (1H，d，H-6)，7·64 (2H，m，Η- a，冷）， 8.12(1H，d，H-6，） 但，樣品溶解於重二甲基亞砜，而殘留之二甲基亞颯之 化學移動値，則表示爲2.49ppm。 FAB-MS : m/z 273 (M+H)+(但，係使用甘油作爲基質） 製造例2 3,4,5,2’，4，-五羥基苯丙烯醯苯（3,4,5,2，，4，_

Pentahydroxy chalcone)[化合物（π)]之合成 以2 ,4_ 一每基乙臨苯0.5克（2.9 mmol)與3，4 -二經基苯甲 醛0.4克（2.9 爲起始材料，以製造例1相同之方法， 柃到化合物（17) 600毫克（回收率72%)。其NMR光譜、質譜 之測足結果係如以下所示。 1H NMR : 6.23 (1H，d，J3·，5· 2Hz，H-3，），6.36 (1H，dd，J5., 6. 9Hz，H-5’），6.78 (2H，s，H-2，6)，7.54 (2H，m, Η- α，/?)， 8·07 (1H，d，H-6，） 但’樣品溶解於重二甲基亞砜，而殘留之二甲基亞颯之 化學移動値’則表示爲2.49ppm。 FAB-MS : m/z 2 89 (M+H)+(但，係使用甘油作爲基質） 製造例3 3,4,2，，5，-四羥基苯丙烯醯苯p/jy-Tetrahydroxy -33- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐） ----------物裝--------訂---------Ρ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

1255181 五、發明說明（31 ) chalcone)[化合物（18)]之合成 以 2，5 一·^ 基乙—木（2,，5, Dihydr〇xy ;東 京化成製）497¾克（3.3 mmol)與3, 4_二羥基苯甲醛451毫克 (3.3 mmol)作爲起始材料，以製造例丨相同之方法，得到化 合物（1 8) 760毫克（回收率85%)。其1^1^11光譜、質譜之測定 結果係如以下所示。 1H NMR : d 6.79 (1H，d，J5 6 8Ηζ，Η_5), 6 81 (1H，d，】3, 4, 9Hz，H-3’），6.00 (1H，dd，J4, 6· 3hz，H-4’），7.17 (1H，dd，J2, 6 2Hz，H-6)，7·23 (1H，d，H-2)，7.44 (1H，d，H-6，），7.55 (1H，d， β 15Hz? H-〇/ )5 7.66 (1H5 d5 H-^ ) 但，樣品落解於重二甲基亞砜，而殘留之二甲基亞颯之 化學移動値，則表示爲2.49 ppm。 FAB-MS : m/z 273 (M+H)+(但，係使用甘油作爲基質） 製 k 例 4 3,4,3，4 -四每基苯丙晞醯苯（3,4,3’，4’-Tetrahydroxy chalcone)[化合物（19)]之合成 以 3，4 - 一 喪基乙醯苯（3’，4'-Dihydroxy acetophenone ;東 京化成製）5 1 5毫克（3 ·4 mmol)與3, 4_二經基苯甲醛468毫克 (3.4 mmol)作爲起始材料，以製造例1相同之方法，得到化 合物（19)272毫克（回收率30%)。其NMR光譜、質譜之測定 結果係如以下所示。 1H NMR : β 6·78 (1H，d，J5, 6 8Hz，H-5)，6.83 (1H，dd，J5·，6· 8Hz，H-5，），7·11 (1H，dd，J2, 6 2Hz，H-6)，7.18 (1H，d，H-2)， 7.46 (1H，d，J2，，6, 2Hz，H-2丨)，7.48 (2H，m，Η- a，/5 )，7.54 (1H，dd，H-6，） -34- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） AW- ^--------tr--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經¾部智慧財產局員工消費合作社印制衣 1255181 -A7 —…… ------—s〜一 B7 五、發明說明（32 ) 但，樣品溶解於重二甲基亞砜，而殘留之二甲基亞颯之 化學移動値，則表示爲2 49ppm。 FAB-MS。m/Z 273 (ΜτΗ)+(但，係使用甘油作爲基質） 製仏例5 3,4,3，5、四羥基苯丙烯醯苯（m5、Tetrahydroxy chalcone)[化合物（2〇)]之合成 以 3，5 罗工基乙®监表（S’J'-Dihydroxy acetophenone ;東 承化成製）816¾克（5·4 mm〇1)與3, 4_二羥基苯甲醛74ι毫克 (5.4mmol)作爲起始材料，以製造例1相同之方法，得到化 合物（20)605毫克（回收率41%)。光譜、質譜之測定 結果係如以下所示。 1H NMR ： δ 6 45 Μ ΐ-τ λα τ ^ τ ττ 。·”（出，dd，J2· 4, 2, J4，，6. 2Ηζ，Η-4，），6.77 (1Η，d，J5,6 8Hz，Η-5)，6.87 (2Η，d，Η-2, 6，)，7·11 (1Η，dd，J2,6 2Hz，H-6)，7·18 (1H，d，H-2)，7·35 (1H，d，h, e 16Hz，Hi ), 7.51 (1H? d? H-/?) 但，樣品溶解於重二曱基亞砜，而殘留之二甲基亞颯之 化學移動値’則表示爲2.49 ppm。 FAB-MS : m/z 272 (M+H广（但，係使用甘油作爲基質） 製造例6 3,4,2·-三羥基苯丙烯醯苯（3,4,2，-Trihydroxy chalcone)[化合物（21)]之合成 以2 -¾基乙驢苯（2’_Hydroxy acetophenone ;東京化成製） 890毫克（6.5 mmol)與3，4-二羥基苯甲醛902毫克（6.5 mmol) 作爲起始材料，以製造例1相同之方法，得到化合物（2 j) 7 15毫克（回收率43%)。其NMR光譜、質譜之測定結果係如 以下所示。 -35- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂----------

1255181 五、發明說明（33) lHNMR:“.81(1H，d，j5 6 8Hz，H_5) 6 98 (2H，m H_ 3’，5’），7·22 (1H，dd，J2, 6 8Hz，Η-6)，7·29 (1H，d，Η-2)，7·53 (1H，J3., 4’ 8, J4’，5. 8, j4, 6. 2Hz，td，H-4’），7.71 (2H，m，Η- α， /? )，8·21(1Η，dd，J5，6, 8Hz，Η-/?) 但，樣品溶解於重二甲基亞颯，而殘留之二甲基亞砜之 化學移動値’則表示爲2.49 ppm。 FAB-MS : m/z 257 (M+H)+(但，係使用甘油作爲基質） ‘ ie 例 7 3,4,2’，3’，4’_五 #空基苯丙晞酿苯（3,4,2,3，4，-

Pentahydroxy chalcone)[化合物（22)]之合成 以 2’53，，4，-三羥基乙醯苯（2，，3，，4，-Trihydr〇xy acetophenone ;東京化成製）605 毫克（3 6 111111〇1)與3,4 二羥 基苯甲醛500毫克（3·6 mmol)作爲起始材料，以製造例丄相 同之方法，得到化合物（22) 622毫克（回收率6〇%)。其！^1^11 光譜、質譜之測定結果係如以下所示。 1HNMR: d6.41 (lH，d，J5.，6· 9Hz，H-5，），6.80 (lH，d，J5 6 8Hz，H-5)，7.19 (1H，dd，J2, 6 2Hz，H-6)，7.26 (1H，d，H-2)， 7.64 (2H5 m, H-^ , β )? 7.68(1H? d5 H-6') 仁，樣口口 ’谷解於重二甲基亞观，而殘留之二甲基亞風之 化學移動値，則表示爲2.49 ppm。 FAB-MS: m/z 289 (M+H)+(但，係使用甘油作爲基質） 製造例8黃當歸醇（乂抓讣0心§61〇1)[化合物（24)]之製備 將明日葉乾燥品（阪本漢方堂）480克以食物處理器加以粉 碎，以乙基醋酸約1升萃取二次，所得到之有機層劃分進 行減壓濃縮之後，將濃縮物供注於矽層析中。然後，使用 -36- 本紙張尺度適用中ί國家標準（CNS)A4規格⑽χ挪公爱1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制农 1255181 A7 ---------B7 ------------------ 五、發明說明（34 ) 並依照氯仿：甲醇二100:1 (600毫升）、12:1 (6⑻毫升）之順 序，將吸著物階段性地溶離，再分取每一劃分8毫升。所 得到之劃分的第76號番號以下，將濃縮物供注於使用己 k ·乙基醋fei - 1 · 8: 1作爲展開溶劑之石夕層析，而得到包含 第25〜50劃分之高濃度的化合物（24)劃分。由此劃分，利用 乙基醋酸及己烷進行再結晶，得到高純度之化合物（24)約 2⑽毫克。其NMR光譜之測定結果並如以下所示。 1H-NMR ： d 1.58 (3H, s, -Me)? 1.66 (3H? s5 -Me), 1.81 (3H，s，-Me)，2.08 (4H，m)，3.48 (2H，d，J 7Hz)，5.04 (1H，m), 5.29 (1H，m)，6.40 (1H，d J5,，6. 9Hz，H-5，），6·86 (2H，d，J5, 6 9, J2, 3 9Hz，H-2, 6)，7.45 (1H，d，J' 卢 i5Hz，Η- a )，7.54 (2H，d，H-3.5)，7.71 (1H，d5 H-6’），7·82 (1H，d，H-y5 ) 但’樣品溶解於重氯仿，而殘留之氣仿之化學移動値， 則表示爲7.24 ppm。 製造例9 α -經基紫柳因（Butein) ( a -Hydroxybutein)[化合 物（25)]之合成 將後述之實施例1所合成之化合物（5) 200毫克[0.455 mmol]溶解於碳酸鈉緩衝液455毫升中，於室溫下使其反應 5小時。濃縮反應液，並供注於使用逆相系管柱之色層分 析（以下稱爲逆相層析）中。管柱係使用TSK凝膠〇DS-80Ts (直徑21.5 mm X長30 cm ··東梭公司製）。將溶劑A (0.1 %三 氟醋酸水溶液）與溶劑B(包含0 · 1 %三氟醋酸之蒸餾水與乙 腈容量比1比1混合液）的溶離比，係於0分至120分之間， 使溶劑B的比率直線地由〇%提昇至1 00%，接下來的20分鐘 -37- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ------------裝--------訂---------^_wi (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1255181 A7 五、發明說明（35 ) 則使溶劑B的比率保持在1〇〇%。溶離速度爲5毫升/分，檢 測則係以2 1 5 nm行之。 採取包含保持時間第66·〇分鐘時之峰部的劃分，藉由濃 鈿乾固，彳寸到化合物（25) 5.0亳克（回收率2·5%)。其NMR光 邊、貝4之測足結果係如以下所示。 1H NMR : d 6·59 (1H，s5 -H-A )，6.72 (1H，dd，J3.，5, 1.5, J5., 6. 8.5Hz，H-5’），6.85(lH，d，H-3，），6.87(lH，d，J5,68.5Hz，H-5)，7.20 (1H，dd，J2 6 2_0Hz5 H-6)，7·46 (1H，d，H-2)，7.54 (1H，d，H-6，） 但，樣品溶解於重二甲基亞砜，而殘留之二甲基亞颯之 化學移動値，則表示爲2.49 ppm。 F AB-MS : m/ z 27 1 (M-H2 0+ H)+ (但，係使用甘油作爲基 質） 製造例1 0黃腐醇（Xanthohumol)之製備 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 爲純化黃腐醇，將蛇麻草衍生之黃腐醇劃分（霍普史泰公 司製）1.9¾克供注於逆相層析中。管柱係使用tSK凝膠 〇DS-80TsQA(直徑4.6 mmx長25 cm :東梭公司製）。將溶 劑A(包含0.1%三氟醋酸之蒸餾水與乙腈容量比3比丨混合液） 與溶劑B(包含0.1%三氟醋酸之蒸餾水與乙腈容量比丨比3混 合液）的溶離比，係於0分至20分之間，使溶劑3的比率直 線地由50%提昇至100%，接下來的5分鐘則使溶劑B的比率 保持在1 00%，最後溶劑B的比率則於50%下保持5分鐘。溶 離速度爲1毫升/分，檢測則係以2 1 5 nm行之。採取包含保 持時間第12.8分鐘時之峰部的劃分，藉由濃縮乾固，得到 -38- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公髮） 1255181 __________B7___五、發明說明（36 ) 約0.3笔克的化合物。所得到之化合物以nmr加以解析， 確認其爲式（26)所示之黃腐醇。 H〇

OH 2 6) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 OH 〇 其NMR光暗、質譜之測定結果係如以下所示。 1H NMR · cU.60 (3H，s，-Me)，1·69 (3H，s，-Me)，3·12 (2H， d，7Hz，H-l’’a，b)，3 86 (3H，％ _〇Me)，5 13 (lH，％ H 2")， 6.07 (1H，s，H-5’），6·83 (2H，d，J2 3 9Hz，J5 6 9Hz，h_2, 6)， 7·56 (2H，d，H·*3, 5)，7.66 (1H，d，Ja，b 16Hz)，7.75 (1H，d)， 1〇·05 (1H，S，〇H-4)，10.55 (1H，s，OH-4，），14.63 (1H，s，〇H-2’） 但，樣品溶解於重二甲基亞砜，而殘留之二甲基亞砜之 化學移動値，則表示爲2.49 ppm。所得到之黃腐醇的ιΗ NMR光譜係表示於圖9中。在圖9中，橫軸係表示化學移 動値（ppm)，縱軸則表示訊號強度。 FAB_MS : m/z 3 55 (M+H)+(但，係使用甘油作爲基質） 實施例 1 3,4,2，，4、四乙醯紫柳因 CButein) (3,4,2，，4，- Tetraacetyl Butein)[化合物（5)]之合成 將製造例1所合成之化合物（13) 1克（3.7 mmol)，溶解於 二氣甲烷5 0毫升中，在冰浴下，添加無水醋酸（1 8.5 mmol)、三乙基胺（18.5 mmol)、二甲基胺口比咬（1.8 mmol)， •39- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ^w- --------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1255181

五、發明說明（37 ) 、A下技掉一小時。將反應液以飽和重曹水、1 〇%棒 掠酸水落液、飽和氯化鈉水溶液的順序洗淨之後，以無水 1酸鎂使其乾燥，並進行減壓濃縮。將濃縮物利用己烷與 乙基醋酸進行再結晶成爲化合物（5) (15克，回收率9〇%)。 NMR光瑨、質譜之測定結果係如以下所示。 1H NMR ： ^ 2.23 (3H5 s? -OAc)5 2.29 (3H5 s5 -〇Ac)5 2.30 (3H，s，-〇Ac)，2.31 (3H，s，-〇Ac)，7·00 (1H，d，J3.，6. 2, H-3，）， 7·〇9 (1H，d，16Hz，)，7 12 (1H，dd，J5 6 8Hz，H_ 5’），7.23 (1H，d，J5, 6 8Hz，H.5)，7 41 (m，d，j2 6 2Hz，h_2)， 7.44 (1H，dd，H-6)，7·52 (1H，d，H-y5 )，7.71 (1H，d5 H-6，） 但’樣品溶解於重氣仿，而殘留之氣仿之化學移動値， 則表π爲7.24 ppm。所得到之化合物（5)的iH NM[r光譜係 表不於圖1中。在圖i中，橫軸係表示化學移動値（ppm)， 縱軸則表示訊號強度。 FAB_MS : m/z 441 (M+H)+(但，係使用甘油作爲基質） 貝施例2 3,4 一罗空基-2’，4’-二氯苯丙晞臨苯（3,4-Dihydroxy_ 2f，4'-dichlorochalcone)[化合物（6)]之合成 以 2，4 - 一氣乙醯苯紛（2i，4，_Dichloroacetophenone :西格 馬公司製）680毫克（3.6 mm〇i)與3，4-二羥基苯甲醛5 00毫克 (3.6 mmol)作爲起始材料，以製造例1相同之方法，得到化 合物（6) 320 ¾克（回收率29%)。其光譜、質譜之測定 結果係如以下所示。 1H NMR : 6.76 (1H，d，J5, 6 8Hz，H-5)，6.88 (1H，d，J«，卢 16Hz，H_ 泛），7·04 (1H，dd，J2, 6 2Hz，Η-6)，7·11 (1H，d，H-2)， -40- 本紙張尺度適用中國國豕準（CNS)A4規格（21〇 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 tr--------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制农 r 1255181 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制π A7 ------—____B7____ 五、發明說明（38 ) 7.23 (1H，d，H-y5 )，7·55 (2H, m，H-5，，6·)，7.74 (1H，s，H-3，） 但’樣品溶解於重二甲基亞颯，而殘留之二甲基亞砜之 化學移動値，則表示爲2.49 ppm。化合物（6)的1H NMR光 譜係表不於圖2中。在圖2中，橫軸係表示化學移動値 (ppm)，縱軸則表示訊號強度。 FAB-MS : m/z 309 (M+H广（但，係使用甘油作爲基質） 貝施例3 3,4_二羥基_2’，4’-二甲氧基苯丙烯醯苯（3,4_

Dihydroxy-2'，4'-dimethoxychalcone)[化合物（7)]之合成 以 2，4 -一 甲氧基乙醯苯 |分（2’，4，_Dirnethoxyacetophenone ·· 東永化成製）648毫克（3·6 mmol)與3,4-二羥基苯甲醛500毫 克（3·6 mmol)作爲起始材料，以製造例丨相同之方法，得到 化合物（7) 600毫克（回收率56%)。其NMR光譜、質譜之測 足結果係如以下所示。 1H NMR : cM.10 (3H，s，-〇Me)，4·40 (3H，s，-〇Me)，6·62 (1Η，dd，J3·，6. 2, J5,, 6, 9Hz，Η-5*)，6.67 (1Η，d，Η-31)，6.77 OH, d5 J5, 6 8Hz, H-5), 6.99 (1H5 dd? J2, 6 2Hz, H-6)? 7.08 (lH，d，H-2)，7.25(lH，d，J'W6HZ，H-a)，7.39(1H，d，H_ y? )，7 · 6 7 (1H，d，H - 6 丨） 但，樣品溶解於重二曱基亞砜，而殘留之二甲基亞颯之 化學移動値’則表示爲2·49 ppm。化合物⑺的巾圓&光 譜係表示於圖3中。在圖3中，橫軸係表示化學移動値 (ppm) ’縱軸則表示訊號強度。 FAB-MS : m/z301 (M+H)+(但，係使用甘油 實施例4 4-(3,4-二羥苯基）-3-丁晞？ ’土 令丞”】~ 酮[(4-(3,4- ^tT---------Awl (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -41- 1255181 A7 五、發明說明（39

Dihydr〇xyphenyl)-3-butene-2-one)[化合物（8)]之合成 以丙嗣（納可來提斯公司製}1毫升與3,4_二羥基苯甲醛1克 (7.2 mmol)作爲起始材料，以製造例1相同之方法，得到化 合物（8) I80毫克（回收率14%)。其NMR光譜、質譜之測定 結果係如以下所示。 1H NMR : J 2.26 (3H，s，-Me)，6·47 (1H，d，，16Hz， Η- a )，6.76 (1H，d，J5 6 8Hz，H-5)，7.00 (1H，dd，J2, 6 2Hz， H-6)，7.05 (1H，d，H-2)，7·43 (1H，d，H-y5 ) 但’樣品溶解於重二甲基亞楓，而殘留之二甲基亞观之 化學移動値’則表示爲2.49 ppm。化合物（8)的1H NMR光 譜係表示於圖4中。在圖4中，橫軸係表示化學移動値 (ppm) ’縱軸則表示訊號強度。 FAB_MS : m/z 179 (M+H)+(但，係使用甘油作爲基質） 實施例5 1·金剛基-3·(3,4-二羥苯基）-2-丙烯-丨-酮^

Adamantyl-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2，propen-l-one][化合物 (9)]之合成 以卜金剛基甲酮（1-Adamantyl methyl ketone ;西格馬公司 製）640毫克（3·6 mmol)與3,4-二羥基苯曱醛5〇〇克（3 6爪爪川 作爲起始材料，以製造例i相同之方法，得到化合物（9) 5 00 t克（回收率46%)。其NMR光譜、質譜之測定結果係如 以下所示。 1H NMR ： 1.65-2.04 (15H, m5 -adamantyl), 6.74 (1H5 d5 J5, 6, 8Hz，H-5)，7.00 (1H，dd，J2, 6 2Hz，H-6)，7.11 (1H，d，J«. θ 16Hz，Hi )，7.13 (1H，d，H-2)，7·36 (1H，d，H-y3 ) -42- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 裝--------訂---------· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 1255181

五、發明說明（4〇 ) 但，樣品溶解於重二曱基亞砜，而殘留之二甲基亞现之 化學移動値，則表示爲2.49 ppm。化合物（9)的1H NMR光 譜係表示於圖5中。在圖5中，橫軸係表示化學移動値 (ppm)，縱軸貝丨J表示訊號強度。 FAB-MS ·· m/z 299 (M+H)+(但，係使用甘油作爲基質） 實施例6二羥基紫柳因（ButeinKDihydrobutein)[化合物 (10)]之合成 將製造例1所合成之化合物（13) 200毫克（〇.74 mm〇1)溶解 於甲醇15毫升中，在鈀（納可來提斯公司製）200毫克的存 在下，使氫氣一面通過，一面於室溫下攪拌1·5小時。過 滤反應液，減壓濃縮之後，以氯仿：甲醇rr 1 5 : 1作爲展開 溶劑，供注於矽層析中，得到化合物（1〇) 13〇毫克（回收率 65%)。其NMR光譜、質譜之測定結果係如以下所示。 lHNMR:J2.74(lH5t5J«，W.5Hz，H-y5)，3.16(lH，t，H-以），6·23 (1H，d，J3.，5, 2·5Ηζ，Η-3*)，6·34 (1H，dd5 J5，，6, 9Hz， H-5’），6·48 (1H，dd，J5, 6 9, J2, 6 2Hz，H-6)，6.60 (1H，d5 H-5)， 6.61 (1H，d，H，2)，7·77 (1H，d，H-6丨） 但，樣品溶解於重二甲基亞颯，而殘留之二甲基亞楓之 化學移動値，則表示爲2.49 ppm。化合物（1〇)的1η NMR光 譜係表示於圖6中。在圖6中，橫軸係表示化學移動値 (ppm)，縱軸則表示訊號強度。 FAB-MS : m/z 275 (M+H)+(但，係使用甘油作爲基質） 實施例7 1-金剛基-4-(3,4-二羥苯基）-3-丁晞-1-酮fl_

AdamantyM-(3,4-dihydroxyphenyl)-3-butene-l-〇ne][化合物 -43- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -------------裝— (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) · · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 1255181 A7

五、發明說明（41 ) (11)]之合成 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 將後述之實施例8所合成之化合物（12) 900毫克（1.8 mmol)，與實施例1[化合物（5)之合成]相同之方法進行乙醯 化之後’溶解於二氣甲燒4 0毫升中，加入1，8 -二氮雜二環 (5.4,0)-7-十一碳晞[l，8-Diazabicyclo(5,4,0)-7-undecene: DBU]，在室溫下反應二小時。將反應液以1〇%檸檬酸水溶 液洗淨、乾燥之後，濃縮乾固，將濃縮物供注於使用己 燒：乙基醋酸=5: 1作爲展開溶劑之矽層析中，並得到化 合物（11)之THP化體。將化合物（11)之THP化體溶解於甲垸 10¾升中，添加無水柳酸40克（〇· 1 57 mol)，在室溫下攪拌3 小時。將反應液以乙基醋酸稀釋之後，以飽和氣化鈉水溶 液洗淨，以無水硫酸鎂使其乾燥，並進行減壓濃縮。利用 己烷與乙基醋酸使濃縮物進行再結晶，而得到20毫克的化 合物（1 1)(回收率44%)。NMR光譜、質譜之測定結果係如以 下所示。 1H NMR ： ^ 1.66-2.00 (15H, m? -adamantyl), 3.37 (1H? dd? α，，7，J。，々 1Hz，H-汉)，5.93 (1H，dt，J/j j 11Hz, )， 6.22 (1H，d，H4)，6.59 (1H，dd，J2,62, J5,6 8Hz，H-6)，6.63 (1H，d，H-5)，6.75 (1H，d，H-2) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制农 但，樣品溶解於重二甲基亞颯，而殘留之二甲基亞砜之 化學移動値，則表示爲2.49 ppm。化合物（1 1)的1H NMR光 譜係表示於圖7中。在圖7中，橫軸係表示化學移動値 (ppm)，縱軸則表示訊號強度。 FAB-MS : m/z 313 (M+H)+(但，係使用甘油作爲基質） -44- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1255181 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（42 ) 實施例8 1-金剛基》3-經基-4-(3,4-二經苯基）丁 ：!：完-1»酮[1 =

Adamanty 1-3 - hydro xy-4»(3,4-dihydroxyp he nyl)butane-1 - one] [化合物（12)]之合成 在冰冷之氬氣流下，於四氫呋喃（THF)2毫升中，將L6M 的丁基鋰（Butyl lithium)己烷溶液（納可來提斯公司製）1毫 升，徐徐地添加至二異丙胺（Diisopropylamine ;和光純藥 製）224 a L (1.6 mmol)中，並攪拌30分鐘。將反應液以甲 醇/乾冰冷卻至-70 °C，添加1-金剛基曱酮285毫克（1.6 mmol)/ 5 00 # L THF溶液，再攪拌30分鐘。另一方面，使 3’，4’-二每苯基醋酸（3*，4’-Dihydroxyphenyl acetic acid ;納可 來提斯公司製）完全地THP化之後，再以1M的DIBAL己烷 溶液（納可來提斯公司製）還原，所得到之3’，4，-二羥苯基乙 ^ (S'^'-Dihydroxyphenyl acetaldehyde)的 THP 4匕體 500 毫克 (1.6 mmol)/ THF 500 a L，徐徐地添加於在上述反應液中， 於-70°C攪拌10分鐘。在反應液中添加飽和之氯化銨鹽水 溶液，然後將乙醚萃取所獲得之有機層劃分，供注於使用 己fe :乙基醋酸=4: 1作爲展開溶劑之石夕層析中，並得到 化合物（12)之THP化體。將化合物（12)之THP化體溶解於曱 烷10毫升中，添加無水柳酸40亳克（0.157 m〇1)，在室溫下 棍掉3小時。爿ττ反應液以乙基醋酸稀釋之後，以飽和氯化 鈉水溶液洗淨，以無水硫酸鎂使其乾燥，並進行減壓濃 縮。利用己烷與乙基醋酸使濃縮物進行再結晶，而得到 260¾克的化合物（12)(回收率57%)。NMR光譜、質譜之測 定結果係如以下所示。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 訂----- -45 - 1255181 A7 五、發明說明（43 ) 1H NMR . ^ 1.58-1.98 (15H, m? -adamantyl), 2.25 (1H? dd? ^4·5, J' - 16.5Hz，Η-α )，2_41 (1H，dd，h，，6.0, j,,,， 13.5HZ，Hj )，2·61 (1H，dd5 J'々4.5Hz, H-〆），3.99 (1H， m，H-/? )，6.38 (ih，dd，J2, 6 2, J5 6 8Hz，H-6)，6.55 (1H，d， H-2)，6·57 (1H，d，H-2) 但’樣品溶解於重二曱基亞砜，而殘留之二甲基亞砜之 化學移動値，則表示爲2.49Ppm。化合物（12)的iHNMRs 譜係表示於圖8中。在圖8中，橫軸係表示化學移動値 (ppm) ’縱軸則表示訊號強度。 FALMS : m/z331 (M+H)+(但，係使用甘油作爲基質） 參考例1使用咖啡因酸之NGF產生增強活性測定方法之檢討 在含有0.5〇/〇蛋白腺（GIBC0公司製）之M199培養基（icn公 司衣）中’將老鼠纖維芽細胞L-M細胞（ATCC CCL-1.2)懸浮 成1·5Χ 105細胞/毫升，於96孔培養盤中各以〇1毫升進行 接種，而進行無菌培養。在3曰之培養後，除去培養基， 更換成含有0.5%的牛血清白蛋白（西格馬公司製）之“^今培 養基。在含有細胞之各井中，添加具有NGf產生增強活性 之習知物質咖啡因酸[Caffeic Acid :西格馬公司製，二甲 基亞職（DMS0)溶液]，使其最終濃度成爲〇、5〇、1〇〇、 200 " Μ ’培養24小時。又，陰性對照組爲咖啡因酸〇 " %。 又，各井中之DMSO的最終濃度，則調整爲〇.1%。培養結 束後 以酵素兄疫分析法（NGF Emax Immuno Assay System ·晋羅美加公司製）測定培養液中之nGF濃度。各添 加量所造成之咖啡因酸的NGF產生增強的程度，係將陰性 -46- 本紙張尺度翻中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 1255181 A7 B7 五、發明說明（44 ) 對照組的細胞培養液中之NGF濃度當作1〇〇%，而計算各添 加量下之細胞培養液中之NGF濃度。其結果係示於表3。 實驗皆重複進行二次，再採用其平均値。根據本方法就可 以明確地測定咖啡因酸之NGF產生增強活性。又，根據本 參考例’亦確認咖啡因酸係濃度依存性地增強該Ngf之產 生。 表3 添加量（V M) 0 50 100 200 增強率（％) 100 89.7 150 349 但，陰性對照組之NGF濃度，係〇.14278ng/ml。 實施例9因化合物（13)所致之NGF產生之增強 與參考例1相同之方法，來測定化合物（丨船越公司製) 之NGF產生增強活性。將化合物（13)添加使其最終濃度成 爲0、0.5、1、2、5、10、20、50"M。其結果示於表 4。 確認了化合物（13)除濃度依存性地增強L-M細胞之NGF產 生’顯不具有向度的N G F產生增強活性以外，#確認甘作 用有效濃度區域相當廣泛。 表4 添加量（^ M) 0 0.5 1 2 5 10 20 50 增強率（％) 100 120 462 1107 2100 3686 3927 1743 但，陰性對照組之NGF濃度，係0.07091 ng/ml。 實施例10因化合物（14)所致之NGF產生之增強 與參考例1相同之方法，來測定化合物（14)(西格馬公司 製）之NGF產生增強活性。將化合物（14)添加使其最終濃度 -47- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂---------· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制π 1255181 7; 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A_ ^B7 ，發明說％ ( 45 ) - 成爲Ο 50、100 ' 2〇〇〆M。其結果示於表5。確認了化合 物(二1 4)除敬度依存性地增強L_M細胞之ngf產生，顯示具 又勺NGF產生增強活性以外5並確認其作用有效濃度 區域相當廣泛。 表5 添加量（# M) 0 50 100 2〇〇 增強率（％) 100 310 550 1884 但，陰性對照組之NGF濃度，係〇 〇7〇91 ng/ml。 貫施例11因化合物（15)所致之NGF產生之增強 與參考例1相同之方法，來測定化合物（15)(西格馬公司 ‘）之NGF產生增強活性。將化合物（15)添加使其最終濃度 成馬〇、12.5、25、50" Μ。其結果示於表6。確認了化合 物（1 5)除濃度依存性地增強細胞之NGF產生，顯示具 有高度的NGF產生增強活性以外，並確認其作用有效濃度 區域相當廣泛。 表6 添加量（〃 M) 0 12.5 25 50 增強率（％) 100 236 263 320 但，陰性對照組之NGF濃度，係〇.14278ng/ml。 實施例12因化合物（16)所致之NGF產生之增強 與參考例1相同之方法，來測定化合物（1 6)(和光純藥公 司製）之NGF產生增強活性。將化合物（16)添加使其最終濃 度成爲〇、25、50、1〇〇αΜ。其結果示於表7。確認了化合 物（1 6)除濃度依存性地增強L-M細胞之NGF產生，顯示具 -48- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -------------裝--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) · 1255181 A7 B7 五、發明說明（46 ) 有高度的NGF產生增強活性以外，並確認其作用有效濃度 區域相當廣泛。 i 7 •加量（// M) 0 25 50 100 :強率（％) 100 114 116 261 但，陰性對照組之NGF濃度，係0.14278 ng/ml。 :施例13因化合物（5)〜（12)以及（17)〜（25)所致之NGF產生 之增強 與參考例1相同之方法，來測定製造例2〜9以及實施例 1〜8所合成之化合物（5)〜（12)、（17)〜（22)、（24)以及（25)、化 合物（23)(迷迭香酸：船越公司製）、或傳統習知作爲ngf 產生增強物質之咖啡因酸（CA)、4-甲基兒茶酚（4MC)以及 腎上腺素（EN)，其NGF產生增強活性。將各化合物添加使 其最終濃度成爲如表8〜10所示者。又，化合物添加後之細 胞培養時間爲20小時。其結果示於表7〜1〇。各化合物試驗 之進行，皆設計有陰性對照組，各實驗皆重複進行2次， 並採用其平均値。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -· --------訂---------^一^" 經濟部智慧財產局員工消費合作社印剩衣 -49- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） I255181 Α7 Β7i、潑^明說明（47 ) 表8 添加跫（"M) NC (ng/tnl) 0 3.125 6-25 12.5 25 50 100 200 増強率⑻ CA 0.179 100 Ν.Τ. Ν·Τ· Ν.Τ. Ν_Τ· 165.1 169.9 200· 5 4MC 0.239 100 Ν.Τ. Ν.Τ. 143,0 312.9 1047.7 Ν·Τ· Ν·Τ· EN 0.202 100 Ν.Τ. Ν.Τ. Ν.Τ. Ν.Τ. 137.2 218· 0 255.0 化合物ζ5〉0.173 化合物化）0·167 化合物(7) 0·2 化合物(8) 0·1δ1 化合物(9) 0,i81 化合物(10) 0.167 化合物(12) 0.181 化合物(17) 0· 179 化合杨⑽0.2 化合物⑽0· 212 化合物(20) 0,2 化合物〈21) 0.212 化合物<22) (U67 化合物(23) 0.239 化合物(24) 0.199 οοοοοοοοοοοοοοο οοοοοοοοοοοοοοο 1 n 41 1 n 4J J l 11 n «1 ix «1 tx 1 132 3256081 o.4.o.T.o.3.cr:54.<d8.cdT.m 3 6 1 *13 6 9 7 6 4 · . 3 δ 4N839—'- 4 2 3ΝΝΝΝ n 5 7 9 δ —1 7 1 84.62.58,.τ.49.7463..τ.71..τ.:τ:τ; τ:τ::τ: Β73Ν513Ν4ΝΝΝΝΝΝ 6 6 T.n τ)5τ)7ττ,ττ.ττ.τ.τ. *<·^(ν t ον*·♦··♦*· ΝΝΝΝ 2Ν1ΝΝΝΝΝΝΝΝ 1659.5 1280.3 899.3 Ν·Τ· Ν·Τ· 839.3 908· 3 598.1 873.6 312.5 482.4 222.7 Ν.Τ. Ν.Τ. 126.1 Ν.Τ. Ν·Τ· Ν.Τ. 374.8 Ν.Τ· ΝΛ. 111L7 1101.1 Ν.Τ. 844.5 692.4 228.8 123.8 Ν·Τ· 202-6 Ν,Τ· Ν·Τ· Ν.Τ. 676.2 Ν·Τ· Ν.Τ. Ν·Τ· Ν·Τ· Ν.Τ. Ν.Τ. Ν.Τ. 501.5 130.3 110· 9 265,7 Ν·Τ· Ν.Τ. Ν.Τ. 2198.0 Ν.Τ. Ν,Τ. Ν.Τ. Ν.Τ. Ν.Τ. Ν·Τ· Ν.Τ. Ν.Τ. 242.3 131.1 Ν.Τ. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝---- 訂-------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 表9 > 添加量（V Μ) NC 0 0.78 1 1.563 (ng/ml) - 增強率（％) 化合物（Π) 0.181 100 775.2 865.8

P -50- ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297 ^Σ) 1255181 五、發明說明（48 ) 表10

NC 添加量（# Μ) 3 1.25 62.5 125 250 化合物（25) j 增強率（％) 160.6 183.6 273 ^ 495.3 經濟部智慧財產局員工消費合作社印划衣

又，表中又NC係表示陰性對照組之NCF濃度。又，n τ. 則表示沒有進行試驗。 ·’基於此結果，顯示本發明所使用之化合物(5)〜(12)以及 (17)(25)其係較傳統習知作爲NGF產生增強物質之咖啡因酸："基兒茶酚以及腎上腺素，具有更強之NGF產生 曰強活丨生或者’具有相當廣泛的NGF產生增強活性之濃 度區域’等有用性。 實施例14 (1)在含有〇·5〇/ο蛋白腺（GIBCO公司製）之M199培養基（ICN 公司製）中’將老鼠纖維芽細胞L-M細胞（ATCC CCL-1.2)懸 浮成1 · 5 X 1 〇細胞/毫升，於％孔培養盤中各以〇 1毫升進 行接種，而進行無菌培養。在3日之培養後，除去培養 基’更換成含有〇.5%的牛血清白蛋白（西格馬公司製）之 Μ1994口養基。將菊科紅花（Carthamus tinctorius LINNE)的 化萃取所得到之黃色色素（粉末沙黃色n〇 2，三榮源ρ · ρ • 1公司製）作爲試料，添加至上述培養基中，使其最終濃 度成爲〇、1.25、2.5、5 mg/ml，並培養20小時。培養結束 之後，以酵素免疫分析法（NGF Emax Immuno Assay SyStem ••普羅美加公司製）測定培養液中之NGF濃度。NGF (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------- -51- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A格χ 297公髮） 1255181

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) t--------tr---------· 1255181

五、發明說明（50 ) 分鐘之劃分進行質譜之解析，菸 貝日唧吓裂現有分子量013之訊號。 進一步，基於心默光譜（圖9)、13c_nmr光譜之測定結 果，其活性成分係如式（27)所示之化合物（27)的賽福錄明a (分子量612.53)。

將如此所得到之純化赛福錄明八的^^肝產生增強活性， 以與實施例13相同之方法進行測定。並添加純化之賽福錄 明A使其最終濃度成爲〇、2·5 mg/ml。其結果，純化2賽 福錄明A係增強了 L-M細胞之NGF產生。有關於賽福錄明^ 之結果係表示於表12，另保持時間41 8分鐘之劃分中所包 含t物質的結果，則表示於表13(該物質之添加量係表示 於表13)。 ^ ^ 表12 ， ------------•-裝—— (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 添加量（mg/ml) 增強率（％) · 0 100 2.5 130.7 但，陰性對照組之NGF濃度，係0.739 ng/mi。 -53- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐） 1255181

五、發明說明（51

广陰性對照組之卿濃度，係0.736 ng/ml。 貫施例1 5因黃腐醇所致之NGF產生之增強 上人貝犯例13相同之方法，來測定製造例i 〇所製備之黃腐 醇之NGF產生增強活性。將黃腐醇添加使其最終濃度成爲 ^ 15·6 31·3、62·5、125 " Μ。其結果示於表 14。確認了 頁腐醇除;辰度依存性地增強L_M細胞之NGF產生，顯示具 有高度的NGF產生增強活性以外，並確認其作用有效濃度 區域相當廣泛。 表14 ------------IP-裝— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·. 添加量（μ Μ) 增強率（％) 0 100 經濟部智慧財產局員工消費合作社印副农 15 6 160.3 31.3 212.1 62.5 473.2 125 897.1 但’陰性對知、組之NGF濃度’係Ο. ο 5 7 5 ng/m 1。 實施例16 (1)因楊梅酮所致之NGF產生之增強 在含有0.5°/〇蛋白腺（〇16<：0公司製）之1^199培養基（10^公 -54- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1255181

五、發明說明（52 ) 司衣）中’將老鼠纖維芽細胞L-M細胞（ATCC CCL-1.2)懸浮 成1 ·5 X 1 〇細胞/毫升，於96孔培養盤中各以〇· 1毫升進行 接種’而進行無菌培養。在3日之培養後，除去培養基， 更換成含有0.5%的牛血清白蛋白（西格馬公司製）之M1 99培 養基。 添加楊梅酮（西格馬公司製）至上述各井中，使其最終濃 度成爲 0、31.3、62.5、125、250 mg/ml，並培養24小時。 陰丨生對知組則添加蒸餘水。培養結束之後，以酵素免疫分 析法（NGF Emax Immuno Assay System :普羅美加公司製） 測疋培養液中之NGF濃度。各添加量下之NGF產生增強的 程度’係相對於陰性對照組的細胞培養液中之Ngf濃度當 作1〇〇%，而計算各增強率（％)。其結果示於表15。實驗皆 重複進行二次，再採用其平均値。其結果，確認楊梅酮係 裝--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ’辰度依存性地增強L-M細胞之NGF之產生。 表15 添加量（ju M) 0 31.3 62.5 125 250 增強率（％) 100 111 137 307 397 (2)因櫟精所致之NGF產生之·增強 與貫施例16-(1)相同之方法，來測定櫟精（西格馬公司製） < NGF產生增強活性。將櫟精添加使其最終濃度成爲〇、

1 Q 62·5、125、250厂Μ。其結果示於表16。確認了擦精 係濃度依存性地增強L-M細胞之NGF產生。 張 紙 ___.本 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -55- 規格⑽ X 297公釐） 1255181 A7

----_BI 五、發明說明（53 ) 表16 Μ) 0 31.3 62.5 125 250 ϋ^^(〇/〇) 100 122 108 173 219 但，陰性對照組之NGF濃度，係0.053 ng/ml。 (3)因楊梅樹皮菩所致之ngf產生之增強 與實施例16-(1)相同之方法，來測定楊梅樹皮:y：(船越公 司製）之NGF產生增強活性。將楊梅樹皮苷添加使其最終濃 度成爲0、31.3、62.5、125、250 a Μ。其結果示於表17。 確認了楊梅樹皮:y：係濃度依存性地增強L_M細胞之NGF產 生。 ------------裝--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 表17 添加量(u Μ) 0 31.3 62.5 125 250 增強率（％) 100 105 159 294 304 但’陰性對照組之NGF濃度，係0.053 ng/m卜 (4)因櫟苷所致之NGF產生之增強 · 與實施例16-(1)相同之方法，來測定櫟:y：(西格馬公司製） 之NGF產生增強活性。將樣站添加使其最終濃度成爲〇、 3 1 ·3、62.5、125、250 " Μ。其結果示於表18。確認了櫟苷 係濃度依存性地增強L-M細胞之NGF產生。 張 紙 -1-1_一本 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 表18 添加量（A M) 0 31.3 62.5 125 250 增強率（％) 100 122 140 193 207 但’陰性對照組之NGF濃度，係0.053 ng/ml 實施例1 7 -56- 1255181

五、發明說明（54 ) 由日本SLC公司購得雄性SD大鼠，在預備飼育之後五週 大時作爲實驗之用。以每W斤體重1〇〇毫克之數量，將抗 腫瘤抗生素（Streptozotocin，納可來提斯公司製）投與至腹 腔内’以引起糖尿病。在抗腫瘤抗生素投與後五日，根據 其血糖値來加以分群。然後，將紫柳因（Butei咐化合物 (13)]溶解於生理食鹽水中，以每…斤體重i〇〇"g之比 例，投與至腹腔中。對照組則同樣地進行但只投與生理食 鹽水。連日地進行投與，並在投與開始後4週摘取其坐骨 神經（約35毫克）。將摘取之神經均質化，萃取其ngf，並 以酵素免疫分析法（NGF Emax Immun〇 Assay System ••普羅 美加公司製）測定其含有量。 其結果示於表19。表中之數字係表示6例之平均値土標準 次差。又，*印係表示根據學生之t檢測，相對於對照组具 有5%以下危險率之統計上有意義之誤差。亦即，相對於對 照組，在紫柳因（Butein)投與群，其神經中之NGF含有量辦 加了。由是，確認了藉由投與紫柳因（Butein)至 Z曰 可增強NGF之產生。 & ’ 表19 NGF含有量（pg/坐骨 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ------------農--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 紫柳因（Butein)投與群(N = 6) 對照群(N二6) 平均値土標準誤差 實施例1 8 ⑴在含有0.5%蛋白腺（GIBCO公司製）之1^199培養義（1(^ -57- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐 !255181

五、發明說明（55) △司製）中知老心纖維芽細胞L-M細胞（ATCC： CCL-1.2)懸 孚成2·5 X 10、.’田胞/笔升，於6孔培養盤中各以2毫升進行接 種’而進行無菌培養。在3日之培養後1余去培養基，更 換成1笔升 < 含有〇.5%的牛血清白蛋白（西格馬公司製）之 M199培養基。再於其i添加溶解有紫柳因伽㈣[化合物 (13)] 一甲基亞砜，使其最終濃度成爲%屮奶〇的最 終濃度爲0.1%)，並培養24小時。培養結束後，採取培養 上π液再心加等谷f之含有20%牛胎兒血清（JRH生物科 學公司製）之DME培養基（生物維特克公司製），使其通過 〇·22" mi滅囷濾膜之後，就得到經紫柳因（Butein)處理製 備之k養基。X ’對照組培養基，則係同樣地進行，但只 以謂0代替添加至其培養上清液，而使其最終濃度成爲 0.1% 〇 ⑺以下述之方法，調查在實施例18•⑴所製備之經紫柳 因（Butein)處理製備之培養基，以及對照組製備之培養基 中，其所包含之NGF的生化學活性 首先，在含有10%牛胎兒血清之DME培養基中，將大鼠 副腎褐色細胞腫瘤PC-12細胞（ATCC CRL-172 二 X 104細胞/毫升，於被覆有膠原之96孔培養盤中各以〇 1毫 升進行接種，而進行24小時無菌培養。然後，將含有〇.5= 牛血清白蛋白之Ml 99培養基，與含有2〇%牛胎兒血、、主之 DME培養基加以等量混合，使用該等量混合而製成之掉養 基（以下稱爲分析用培養基），再針對經紫柳因理 製備之培養基以及對照組製備之培養基，制你 _ ^ 衣丨F成二倍稀釋 •58- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） ------------•-裝--- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) . 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 1255181 A7 五、發明說明（56 )系列（亦即，原液、1/ 2蘇獲、、六 ,, 1/16稀釋液、1/32稀釋液） 4稀釋欲、1/8稀釋液、 其培養基，然後添加100^_此養之Ρ「12細胞除去 培養基以及對照组製備之择養::柳因(細-)處理製備之 以無菌培養48小時。另外二梯度口之稀釋液，並 分析用培養基以代替製備择養/添加WO A 1之 士^ ^ 表爾圪餐基，並以無菌培養48小時。 =結束後，在顯微鏡(奥林帕斯公司製)觀察下，隨音 这擇視野以進行細胞照相(倍率：100倍）。以昭片中： :。。〜：細胞作爲對象，計算神經突起伸⑽ 細胞的數目，再根據下0算神經突起伸長率（％)。 神、、工大起伸長率(/〇)-物哭起陽性之細胞數(個)+總細胞數(個)謂〇 又’關於神經突起伸長陽性，係指神經突起之長度較細 中。實 ”千均値。相較於對照組製備之培養基 處理製備之培養基顯示具有‘更強之神經突起增 ------------^裝—— (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) *1^ · · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -59- x 297公釐） 1255181 A7 B7 五、發明說明（57 表20 稀釋液 經紫柳因（Butein)處理相組之製作培養基 製作之培養基

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 原液 1/2稀釋液 1/4稀釋液 1/8稀釋液 1/16稀釋液 1/32稀釋液 若只添加分析用培養基時 實施例19治療劑之製造1 注射劑 I.於生理食鹽水中，加入1%濃度之紫柳因[化合 物（13)]，以製作注射劑。 II·於生理食鹽水中，各加入〇.5%以及1%濃度之紫柳因 (Butein)[化合物（丨3)]以及甘草次酸，以製作注射劑。 又’關於化合物（5)〜（12)、（14)〜(25)，亦與上述I、π同樣 的方法來製作注射劑。 錠劑 III.製備含有紫柳因（But ein)[化合物（13)] 1〇〇毫克以及適 量之微結晶性纖維素的錠劑，覆以糖衣，而製作各錠劑。 IV·製備含有紫柳因（Butein)[化合物（13)] 〇1毫克、甘草 次S&二钾1 0毫克、以及適量之微結晶性纖維素的鍵劑，覆 -60- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 ^^ ·1111111 1255181 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（58 ) 以糖衣，而製作各錠劑。 又，關於化合物（5)〜（12)、（14)〜（27)，亦與上述111、Iv 同樣的方法來製作鍵劑。 實施例20治療劑之製造2 注射劑 I.於生理食鹽水中，加入1 %濃度之甘油三肉苴蔻酸酯， 以製作注射劑。 Π·於生理食鹽水中，各加入〇·5%以及〇 1%濃度之甘油三 肉苴蔻酸酯以及甘草次酸，以製作注射劑。 錠劑 ΠΙ·製備含有甘油三肉苴蔻酸酯1〇〇毫克以及適量之微結 晶性纖維素的|定劑，覆以糖衣，而製作各鍵劑。 IV.製備含有甘油三肉莖蔻酸酯〇1毫克、甘草次酸二_ 1〇耄克、以及適量之微結晶性纖維素的錠劑，覆以糖衣， 而製作各錠劑。 試驗劑1毒性試驗 由曰本SLC么司購彳寸雄性SD大鼠，在預備飼育之後六週 大時作爲實驗之用。將紫柳因（Butein)[化合物（13)]溶解於 生理食鹽水中，並投與至腹腔中，或者懸浮於〇·5%羧甲基 纖維素中，而進行強制地經口投與。投與濃度， 内投與時，係每—公斤體重投與扇毫克（ν=3)、ι〇2 (N:3)'l毫克心3)，毫克(ν=3)，又， = 經口投血睡，仞立 $ f J性 :、’ ‘手'母-么斤體重投與1克(N:2)、(U克( 3)。對Μ則同樣地進行但只各投與溶劑。投與後，不論 -61 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 /1/ 1255181 _ __ 丨_ _ _ u。以以从幻幻姐..................................... ............................. ....... 五、發明說明（59 ) 在任何投與群，皆不見有死亡例、一般症狀之變化、體重 增加之抑制、以及解剖時之異常等。 又，對於CDF丨老鼠（雄性，7週大，日本SLC公司），同樣 地經口投與本發明作爲有效成分使用之化合物以進行試 驗，而確認了其係無毒性或者低毒性。 試驗例2毒性試驗 將實施例16所使用之各化合物，與前述之試驗例丨相同 地，對於老鼠進行經口投與，而確認了其係低毒性。 產業上可利用性 本發明係提供一種含有具有NGF產生增強活性之前述_ 效成分的醫藥。這種醫藥，作爲需要NGF產生增強之疾劣 的治療劑或預防劑，從而維持生體之恆定性上，係有月 的。又，本發明提供一種含有前述有效成分的ngf產生片 強劑。這種增強劑，在神經細胞機構有關的生化學研究 以及癡呆症、神經障礙藥劑的篩選上，係有用的。進— 步，本發明提供NGF產生增強食品、飲料或飼料。這些$ 品、飲料或飼料，在對於本發明所使用之有效成分具有每 感性:且需要NGF產生增強之疾病的症狀改善、預防上 係極爲有用。又，本發明與彼 冬欷月徒供一種具有NGF產生增強活 之新穎化合物。 -62-

Claims (1)

1. 5^)贫)1〇1645號專利中請案 中文申請專利範圍替換本(95年1月） 申請專利範圍 】·一種需要增強神經成、異 、·成長因子產生之疾病的治療劑或預防 d f特徵係含有選自由下述一般式⑴所代表之化合物 以及藥理學上可接受的彼等鹽類構成之群組中至少一種 化合物作為有效成分： R2

   (1) (式中’ ^及以5為氫原子，R2、I及R4各自可為相同或相 異’而為氫原子、羥基、烷氧基或醯氧基； 其中，X為下述一般式（2): η(〇ϊ (2) m(C) 1 (式中’ Z係為可經氣原子或特性基取代之脂肪族基、芳 香族基或芳香脂肪族基，γ係氫原子或羥基，历及n各為〇 或1)、 下述一般式（3): :(〇· 乂 0) 一 Z. 一 68969-950113.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） (3) 1255181 A B c D -〜--- 六、申請專利範圍 香二Ζ:Γ經氣原子或特性基取代之腊肪族基、芳 〇 基或方香脂肪族基，Υ，係氫原子或經基，…各為 或者下述一般式（4):

   (4) (式中，R0為氫原子或鼠李糖基，為氫原子） ΐ是般式⑴中， 子、R2及R3白為經基，以及X為前述一般式 且該一 中 及 合 白 般式（2)中，η為1，爪為〇，z及Y為氫原子之情形。乂 2· —種神經成長因子產生增強劑，其特徵係含有選自由 ，專利範圍第1項記載之一般式⑴所表示之化合物， 藥理學上可接受之彼等鹽類構成之群組中至少一種化 物作為有效成分。 3. 一種神經成長因子產生增強用食品，其特徵係含有選㈡ 由申請專利範圍第記載之一般式⑴所表示之化合物 及彼等之鹽類構成之群組中至少—種化合物作為有效成 分。 4. 一種神經成長因子產生增強用飲料，其特徵係含有選自 由申請專利範圍第1項記載之一般式⑴所表示之化合物 及彼等之鹽類構成之群組中至少一種化合物作為有效成 68969-950113.DOC 1255181 A8 B8 C8

   1255181 8 8 8 8 A B c D

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