TW586932B - Aqueous formulations of peptides - Google Patents

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586932 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 .............. B7 五、發明説明（i) 相關申請案之對賭 本案依3 5XJ.S.C· 119(e)之瑪定y請求於1996年7月3曰之 美國申請案系列案第6〇/022，199號之優先權，其揭示併入本 文中以供參考。 發明範疇 本發明係關於高濃度之胜肤化合物之安定水性調配物。 發明背景 本發明説明書中參照到下列參考資料之相關部分係以角 择弧（[])中之編號表示。 !· Zoladex (goserelin acetate implant), Physician's Desk Reference, 50th Edition, pages 2.858-2861 (1996). 2.美國專利第3,94,412號，核發於1975年i〇月&曰。 3·美國專利第4,547,370號，核發於1985年1〇月15日。 4·身國專利第4,6(1，472號，核發於1987年4月28日。 5.美國專利第4,689,396號，核發於1987年8月25日。 美國專利第4,851，385號，核發於1989年7月25曰。 7·美國專利第5，198,533,號，核發於1993年3月30曰。 8·美國專利第5,480,868號，核發於1996年1月2曰。 9. WO92/2071 1 ，公告於 1992年 11 月 26 曰。 10. W095/00168，公告於 1995年1月 5 日。 1 1.W095/04540，公告於 1995 年2 月 16 日。 12."Stability of Gonadorelin and Triptorelin in Aqueous Solution11, V.J. Helm, B.W. Mtiller, Pharmaceutical 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---^--^--.--—-----IT------9 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 586932 A7 B7 五、發明説明（） ·

Research, 7/12? pages 1253-1256 (1990). 13. "New Degradation Product of Des-Gly^O-NH2-LH-RH-Ethylamide (Fertirelin) in Aqueous Solution11, J. Okada, T. Seo， F. Kasahara, K.Takeda, S. Kondo, J· of Pharmaceutical Sciences, 80/2, pages 167-170 (1991). 14. HCharacterisation of the Solution Degradation Product of Histrelin, a Gonadotropin Releasing Hormone(LHRH) Agonist", A.R. Oyler, R.E. Naldi, J.R. Lloyd, D.A. Graden, C.J. Shaw3 M.L. Cotter, J. of Pharmaceutical Sciences^ 80/3? pages 271-275(1991). 15 · "Parenteral Peptide Formulations: Chemical and

Physical Properties of Native Luteinizing Hormone-Releasing Hormone(LHRH) and Hydrophobic Analogues in Aqueous Solution"，M.F. Powell, L.M. Sanders, A. Rogerson, V. Si, Pharmaceutical Research^ 8/105 pages 1258-1263(1991). 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 16."Degradation of the LHRH Analog Nafarelin Acetate in Aqueous Solution11, D.M. Johnson, R.A. Pritchard, W.F. Taylor, D. Conley, G. Zuniga, K.G. McGreevy, Inti. J. of PharrHaceutics, 31, pages 125-129(1986). 1 7.HPercutaneous Absorption Enhancement of Leuprolide,,3 M.Y. Fu Lu5 D. Lee， G.S. Rao, Pharmaceutical Research, 9/12? pages 1575-1576(1992). 18 .Lutrepulse (gonadorelin acetate for IV injection), -5 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 586932 A7 B7 五、發明説明（3 )

Physician's Desk Reference, 50th Edition, pages 980-982(1996). 19. Factrel (gonadorelin HC1 for subcutaneous or IV injection), Physician’s Desk Reference, 50th Edition， pages 2877-287^(1996). 20. Luproii (leuprolide acetate for subcutaneous injection), Physician's Desk Reference, 10th Edition， 2555-2556(1996). 21. Lupron depot (leuprolide acetate for depot suspension), Physician’s Desk Referencer，5〇th Edition, pages 2556-2562 (1996). 22. "Pharmaceutical Manipulation of Leuprorelin Acetate to Improve Clinical Performance"，H. Toguchi，J· of IntL Medical Research, 18, pages 35-41 (1990). 23. "Long，1Term Stability of Aqueous Solutions of Luteinizing Hormone-Releasing Hormone Assessed by an In-Vitro Bioassay and Liquid Chromatography", Y.F. Shi5 R.J. Sherins, D. Brightwell, J.F. Gallelli, D.C. Chatterji, J. of Pharmaceutical Sciences, 73/6， pages 819-821 (1984). 24. nPeptide Liquid Crystals: Inverse Correlation of Kinetic Formation and Thermodynamic Stability iri Aqueous Solution··，M.F. Powell，J. Fleitm^n，L.M. Sanders V.C. Si5 Pharmaceutical Research, 11/9，pages 一 6 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） —；—^^------IT------φ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 586932 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _B7 _五、發明説明（4 ) 1352-1354 (1994). 25. HSolution Behavior of Leuprolide Acetate, an LHRH Agonist， as Determined by Circular Dichroism Spectroscopy··，M.E. Powers、，A. Adejei，M.Y. Fu Lu， M.C. Manning， Inti· J· of Pharmaceutics, 10%, pages 49-55 (1994).. 26. f,Preparation of Three -Month Depot Injectable Microspheres of Leuprorelin Acetate Using Biodegradable Polymers’’， Pharmaceutical Research, 11/8, pages 1143-1147 (1994). 上述各公告、專利或專利申請案之揭示全部併入本發明 中供作參考資料，即，各公告、專利或專利申請案4用語 係特定地具個別地併入本文中供作參考。 促黃體激素釋放激素（LHRH)，如熟知的促性腺激素釋 放激素（GnRH)，係爲結構如下之十胜肽： pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2· 其由下視丘分泌並結合至腦下垂體、促黃體激素（LH)及促 濾泡敎素（FSH)之接受子。LH及FSH因此刺激性腺合成類 脂醇激素。許多的LHRH同系物係爲已知，包括相關於 LHRH之胜肽，其係作爲激動劑及彼等作爲拮抗劑者[1-15] ° LHRH同系物已知係有用於治療與激素有關之疾病，如 前列腺癌、良性前列腺肥大、子宮内膜組織異位形成、子 宮肌瘤、子宮纖維瘤、早熟性發身期或乳癌及作爲避孕劑 [8 1 °激動劑LHRH-相關化合物及拮抗劑LHRH-相關化合 (請先閲讀背面之注意事' 4 ，項再填」 裝II 寫本頁) 訂 it 本紙張又度適用中國國家榡準（㈣）八槻^ ( 2lGx297公策） M6932 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 五、發明^~一— 物兩者以持續釋放投藥係爲較佳，前者係於重複投藥後減 ^可利用接受子的數量而抑制類脂醇激素之產生；後者則 必需連續投藥以持久抑制内生性LHRH[ 8 ]。 藥物持續而非經腸的輸送，尤其是胜肽藥物，提供了許 多優點。使用植入性裝置於多種萆杨或其他有益試劑的持 續輸送係爲習知。典型的裝直係，例如，描述於美國專利 奢第5,〇34,229; 5,057,318及-5，1 10,596號中者。此等專利之 每一揭示皆列入本發明中參考。 道系’胜肤包括LHRH-相關化合物，其口服乏生物利用 性是低的[16-17]。 一般市售之LHRH、其同系物及相關化合物之水性調配物 ’其係供作非經腸注射液，通常含有相當低濃度t 相關化合物（0.05-5亳克/毫升），及包含如甘露醇或乳糖等 賦形劑[18-20] 6此等LHRH-相關化合物之調配物必須冷 藏野存或僅可短期_存於室溫。 經投藥而可於超過1 _3個月期間持續釋放的LHRH_相侧 化合物之可利用性貯存調配物，包括置於圓筒中供作皮下 注射而由分散於D，L·乳酸及羥基乙酸共聚物篡質之 15%LHRH-相關化合_所組成之調配物[丨]，及由微粒子組 成之調配物，其含有LHRH-相關化合物及明膠組成的核心 ’其外圍包覆著D，L-乳酸及幾基乙酸共聚物基質組成的殼 層。此等微粒子懸浮於稀釋液中而用於皮下注射或肌内注 射[21 ’ 26]。此等產物必須貯存於室溫或更低之溫度σ LHRH-相關化合物之水性調配物已知具有化學及物理之不 ---;--J---1®—^------1T------ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格（21〇><297公釐） 586932 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（6 ) 安定性’且於照射後會降解[1^-16，22-25]。 已知爲安定性之調配物（t9G約五年），係爲濃度極低 (25μ§/ιη1)之水性緩衝溶液（10mM緩衝液，離子強度0.15) ’薇溶液僅能貯存於不高於室澤之溫度（25。〇[15]。 因而仍需要安定，高濃度之胜肽水性調配物。 發明概述 本發明提供安定之水性調配物，其係濃度爲至少約1〇0/〇 胜肽化合物之水溶液。此等安定而高幕度之調配物可長期 貯存於高溫（即37°C)，尤其係有用於長致性植入性輸送裝 置以長期間輸送藥物（即1-12個月或更長）。此水性調配物 視需要可包括緩衝液、賦形劑、乙醇（Et〇H)、界面活性 劑或防腐劑。 一方面，本發明提供胜肽化合物之安定水性調配物，該 調配物包含至少約l〇%(w/w)胜肽化合物及水。 另一方面，本發明提供製備胜肽化合物的安定水性調配 物之方法’該方法包含溶解至少約1.0% (w/w)胜肽化合物 於水中。 進一步，本發明提供治療罹患病症之實驗者之方法，其 症狀可經投藥胜肽化合物而減_輕，該方法包含投藥有效量 之含至少約1 0% (w/w)胜肽化合物及水之安定水性調配物 給實驗者。 圖式簡要説明 圖1説明80°C下、兩個月後，以逆向高效液相層析法（RP一 HPLC)測定40%留普來醋酸鹽（leuprolide acetate)水溶液 -9 - 本紙張尺度適用中國國家標準《CNS ) A4規格（210X297公釐） ---；--^~ "0—^------^ Φ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 586932 A7 B7 經濟部中央標準局貝工消费合作社印裝 五、發明説明（ 之安定性。 圖2係以與圖1相同之樣品注入，以大小排除層析法 (size exclusion chromatograph，SEC)測定。此圖顯示溶 液中具有極少之的凝集，此凝集包括二聚物及吞聚物產物 ，並無較高等叙之凝集物。 圖3代表阿瑞尼士（ Arrhenius)圖，其顯示4 〇 %留普來醋 酸鹽水溶液中留普來之損失。 圖4説明貯存於g〇°C、兩個月後，40%留普來醋酸鹽水溶 液之物理及化學安定性。 圖5説明在37°C，50Ό，及80°C下貯存超過3-6個丹之 期間’留普來醋酸犛自40%水溶液之損失符貪僞一級反應 動力學。 圖6説明在37°C、九個月後，40%留普來醋酸鹽水溶液之 物理及化學安定性。 圖7説明於80°C、14天後，30%高色寧（g0seriin)於乙酸緩 衝液及甘露醇溶液中之安定性。 圖8説明留普來（370毫克/亳升）之膠態與非膠態水性調配 物於3 7°C下可維持趕過6個月的安定性α 奋明詳細説明 本發明係關於非可預期乏發現，即高濃度（即至少約丨〇y〇) 的胜肽溶解於水中可得到安定之水性調配物b先前已知的 胜肤化合物之水性調配物，係含有如Ej)TA或抗壞血酸等 賦形劑之稀釋的緩衝水溶液，其必須貯存於低溫（4_25C) ’否則會經由如酸/鹼催化之水解反應、去胺化反應、消 -10 - 本紙張尺度適用中國國豕標準（CNS )八4規格（210χ297公羡） I_.--^----ipp 裝------訂------ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 586932 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _______B7 五、發明説明（） 旋反應及氧化反應等降解途徑而形成降解產物。相反的， 本發明請求之調配物於高溫（37O-80°C)高濃度下可安定胜 肽化合物，因此胜肽於植入悻輸送裝置進行輸送成爲可行。 標準的胜肽及蛋白質調配物由稀釋水溶液組成。胜肽講 配物的兩個重妻觀點包括*藥物分子的溶解性及安定性。通 常藉由改變一或多種下列西子而達到胜肽之安定性：pH， 綾衝液形式，離子強度，賦形劑（EDTA，抗壞血酸等）。 相反的’本發明中，調配高濃庳胜肽於水申可形成安定溶 液。 本#明係用於鬲濃度胜肽於水溶液中以安定胜肽調配物 而抗拒化學及物理降解。 A ,定義·· 本文中所用之用語具有下述意義： 用語’’化學安定性π意指[經由如氧化作用或水解作用等化 學途徑而形成之降解產物的可择受百分比。尤其係指3 兩個月後’凋配物若形成不超過20%之裂解產物則視爲化 學安定性者。 用語"物理安定性"意指形成凝集（即二聚物，三聚物及較 大形式）之可接受百分比。尤其係於37。(：、二個月後，調 配物形成不超過1 5 %之凝箪則可視爲物理安定^性者。 用語”安定性調配物”意指37°C(或相當於高溫之條件）、 二個启後，保有至少約65%化學及物理上之安定性胜肽化 合物。尤其較佳之調配物係爲於此等條件下，可保留至少 約80%化學及物理安定性之彼等胜肽。特別較佳之安定調 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ^ ^ 裝 訂 ^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 586932 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（9) 配杨係彼等經輻射（即伽瑪、貝它或電子束）滅菌後，不發 生降解作用者。 用語"胜肽"及/或"胜肽化合物"意指高達約5Q個胺基酸 殘基以醯胺鍵（CONH)鍵結在一起之聚合物。同系物、持 生物、激動劑、拮抗劑及薔藥上可接受之鹽皆含於此用語 之列。此用語亦包接具有D -胺基酸，經修飾、衍生或非天 然產生的D-或L-構形及/或腺擬單元作爲部分結構之旌肽 及/或胜肽化合物。 用語"LHRH相關化合物"意指促黃體激素釋放激素 (LHRH)及其同系物與醫藥可接受之鹽。八，九及十胜肽 之LHRH激動劑及拮抗劑係包含於”LHRH相關化合物"此用 語中’例如天然之LHRH，尤其較佳的LHRH相關化合物係 包括LHRH ’留普来，南色寧’内服寧（nafareHn)及其它 已知的激動劑與拮抗劑[1 -2 1 ]。 用語1r高濃度"意指至少約10%(w/w)及最高達LHRH相關 化合物之最大溶解度。 用語”賦形劑"意指調配物中或多或少包含之惰性物質， 其以稀釋劑或媒劑形式添加；或用以定形或增加堅度。賦 形劑與例如乙醇等溶劑之區別處係後者可用以溶解調配物 中之藥物’賦形劑與例如Tween 20之非離子性界面活性劑 之區別處在於後者可用於使藥物可溶於調配物，賦形劑與 例如苯醇或對甲基或對乙基羥苯酸之區別處則在於後者可 用於避免或抑制微生物之生長。 用語”緩衝能力"意指由於溶液中存有酸/鹼對之混合物 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I丨---^----裝------訂^~^---- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 586932 經濟部中央樣準局員工消費合作社印裝 A7 ----B7 二 —------- 五、發明説明（） ’而當溶液中添加酸或鹼時可減少任何pH値變化之能力。 用語"極性非質子性溶劑”意指不含酸性氫且不作爲氫提 供者之極性溶劑。拯性非質子性溶劑之實例爲二甲亞颯 (DMSO) ’二甲基甲醯胺（DMF)，六甲亞磷三醯銨 (HMPT)及正甲基吡咯酮。 另.調配杨之f锆： 本發明係爲胜肽化合物之高濃度液體水性詞配物，其於 馬溫係可長期間維持安定者。標準的稀釋水性胜肽及蛋白 質調配物需要調整緩衝形式、離子強度、pH値及賦形劑（ 何如，EDJA及抗壞血酸）以達到安定。相反的，本發明請 求之調配物係利用溶解高濃度（至少約丨〇%/w)之化合 物於水中而達成胜肽化合物之安定性。 可用於本發明中以調配胜肽及胜肽化合物之例子，包括 彼等具有生物活性或可用於治療疾病或其它病理症狀之胜 肽。其包括，但不限於，促腎上腺皮貲激素，血管收縮素 ί及II，前房利納尿胜肽（atrial natriuretic peptide)，旁貝 素（bombesin)，緩激肽，抑鈣激素，小腦激素（cerebellin) ，代若啡（dynophin A)，阿爾法及貝它腦内啡，内皮素 (en,doth el in)，五肽素（enkephalin)，上皮細胞生長因子， 弗提瑞寧（fertirelin)，攄泡的促性腺漱素釋放胜肽，歸樂 寧（§&1&11丨11)，升糖激素，勾多瑞寧（8〇11&<1〇『〇1]^)，促性腺 激素，高色寧，生長激素釋放胜肽，西斯瑞寧（histrelin) ，胰島素，留普來，LHRH，蠕動素，内服寧，神經張力 素，催產激素，體制素，物質P，腫瘤壞死因子，吹普多 -13 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） ------^----^------IT (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 586932 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 I 1 -—-—-------_ 五、發明説明（） 瑞寧（triptorelin)及血管增壓素。亦可使用上述之同系物、 衍生物、拮抗劑、激動劑及醫藥上可接受之鹽。 取決於所欲調配之特殊胜肽化合物，離予強奉及成爲 値得考慮的因子。例如，本發明中已發現較隹之留普來醋 酸鹽水性調配物具有低離子強度及約4_6間之pH値。 有用於本發明之調配物及方法中之胜肽化合物，可爲鹽 類之形式，較佳爲醫藥可择受之鹽類。有用之鹽類係熟習 此項技藝者已知，且包括無機酸、有機酸、無機鹼或有機 驗之鹽。較佳之鹽類爲醋酸鹽。 較佳用於本發明之胜肤化合物係爲親水性且可迅速溶於 水中者。技藝人士可根據其對水之溶解度而很容易地決定 可利用之化合物。即，該化合物必須爲至少約丨〇%.(w/w)可 溶於水中。較佳地，該溶解量亦爲醫藥上之有效量。特佳 的胜肽化合物爲LHRH-相闕化合物包括留普來及留普來醋 酸鹽。 胜肽之配比依化合物，欲治療之症狀，化合物溶解度， 預期劑量及投藥期間而異（可見於，例如，The Pharmacological Basis of Therapeutic 幺，吉爾曼等人，第7 版（190)及 Pharmaceutical Sciences，瑞明頓，第 18 版 ( 1990)，其揭示於此作爲參考）。胜肽化合物之濃度範国 可自至少約10%(w/w)至化合物之最大溶解度。較佳範圍 係自約20%至約60%(w/w) ’更佳範谓爲自約30%至約 50%(w/w)及最佳範圍爲约35%至約45%〇/w)。 通常，本發明之安定調配物可僅經由將治療上肴效量之 _ 14 - (請先閲讀背面之注意事-

•項再填I 裝-- 窝本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 12586932 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（） 所欲胜肽溶解於水中而成，亦可適當地調整pH値。 热習此技藝者已知緩衝液，賦形劑，例如乙醇之溶劑， 例如非離子性界面活性劑之溶解劑及防腐劑可添加於製藥 之胜肽调配物中（例如，pharmaceutieal Sciences，瑞明瘐 ，第18版（ 1990))。此類試劑可視需要而添加至本發明所 請求之調馬物中。 C ·方法 頃發現胜肽化合物之安定性調配物可經由溶解高濃度（ 至少約1 0 %)之胜肤化合物兩調配於水中。 本發明中已測試此+胜肤化合物調配物之安定性，特別 是LHRH-相關化合物留普來之調配物，係經由將其於高溫 加速熟成後並測定調配物之化學及物理安定性。此等奸究 結果（見於例如表JII及圖i，》及6)説明此等調配物於37Ό 下貯存大約或超遇一年仍具安定性。 本發明中亦實驗如上述製備之姓肽化合物調配物於25兆 拉德（megarad)伽瑪射線照射後之安定性。結果如表…所 示，在此種Μ射後，此等調配物維持化學及物理肇定性。 以電子束照射調配物亦發；其維持安定性。 如表I所示，我們亦實驗如本文中多種胜肽調配物之安定 性，特別是留普來，高色寧，LHRH，血管收縮素1及11， 緩激肽，抑鈣激素，胰島素，胰蛋白酶原及血管增壓素， 係藉由將之溶解（或嘗試溶解）於水中接著於高溫加速熟成 後，再實驗它們而測試調配物之安定性ό其結果以3rc下 之半衰期表示於表I中，並假定5a=22.2仟卡/莫耳。在試驗 -15 - ---；--；----1---IT----- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 586932 A7 B7 ττ 五、發明説明（） 條件下，大範圍的受測胜肽可溶於水中並維持安定。一般 的熟W技藝者可使用一般程序而輕易測定特定胜肽於水中 之溶解度及所得溶液乏安定性。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 表I ϊ胜肽調配物於水中之安定性 調配物 半衰期(溫度） 40%留普來 9.7 年(3rc) 40%高色寧 19.3 月（80°C) ( 20% LHilH 2.5 年（65°Cj t ^ - 20%血管收縮素I .....................................................t.............................................................................................：-...................................................... !...........................，.................... ( - 、 不溶性膠（65°C) 20%缓激肽 8·5 月（65〇C) 40%抑鈣崴素 不溶性（80°C) 20%抑鈣激素 9·6 月（80〇C) 5%抑鈣激素 23·5 月（50〇C) 20%胰島素 不溶性膠（80°C) 4 0 %胰蛋白酶原 不溶性膠（65°C/80°C) 20%胰蛋白酶原 不溶性膠（65°C) 40%血管增壓素 降解（80°C) 20%血管增壓素 14·3 天（80〇C) *37 °C下之半衰期，假定 Ea=22.2仟卡/莫耳 i 40%留普來於水中之調配物於37°C下貯存六個月，經測 定溶液中胜肽之總損失量，顯示其降解呈現線性。分析此 等數據可得22.2仟卡/莫耳之活化能（Ea)及13.8個月之t9〇， -16 - 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（2!0X297公釐） 請 先 閲 讀 背 面 之 注 意 事 項 再 f 裝 訂 586932 A7 B7

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 其顯示此等調配物於高溫下之安定性。 本發明中亦非可預期地發現本發明之胜肽調配物係爲靜 菌痢（即抑制細菌·生長），殺菌劑（即使細菌死亡）及殺跑子 劑（即殺死孢子）。特別的，50-400毫克/毫升之留普來魏 配物呈現靜菌，殺菌及殺孢子活性。樣品之安定桂教不會 被細菌影響，包括細菌死亡並溶裂釋出之酶，並木舍影^ 產品之安定性。此説明此等調配物並不有益於酶b活性。 某些胜肽，例如抑鈣激素及留普來，已知係爲物理不安 定性者，當其調配於水溶液時呈現凝集、膠化及纖維化。 例如，留普來於增加胜肽濃度，添加鹽或溫和攪掉時會形 成膠狀。敌善物理安定性可用於非經腸投藥，包括使用植 入性藥物輸送系統。 吾人非可預期地發現添加極性非質子溶劑如DMS()於特 定月生肽之水性調配物如留普來，高色寧及抑鈣激素中可避 免調配物膠化。顯然地，其是因爲非水溶性極性非質子溶 劑可使胜肽形成螺旋/α螺旋構形而不會再、摺叠成貝它（β) 摺板結構，因而不致膠化。因此，此等溶劑具有抗膠化效 果。 此外，研究貯存於37°C下六週之膠化與未膠化的留普來 水性調配物（370毫克/毫升）之結果，以RP_HPLC_示相似 的化學安定性輪廓，結果列示於圖8。相似地，液體與膠 化的（經攪拌）水性調配物，其安定性分別於3 7 °c下體外及 於老鼠體内加以研究。結果列於表Η，其顯示膠化與液體 調配物可維持安定性超過1 8週。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS.) A4規格（210X297公釐） ^|_^__―--------、玎-----破 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 586932 A7 B7 五、發明説明（16 ) 2.貯存池之盤備 將植入性輸送裝置之貯存池（揭示於例如美國專利申請 案系列案號第08/595,76m，併入本文、中供作參考）充滿 適當的留普來溶液，該充滿的裝置接著進行安定性試驗。 將調配物充滿鈦或聚合物製成之貯存地，並於每一端以聚 合拴塞住。充滿的貯存池接著以聚合箔袋密封並置於安定 性試驗烘箱。 其應注意到此等裝置的貯存池中之調配物係完全與外界 環境隔離。 3 ·逆向-HPLC(RP-HPLC) 使甩梯度沖提逆向HPLC分析所有安定性樣品之留普來 濃度及％尖峰面積，其中使用'具冷藏（)的自動送樣器 ’以使樣品之分解最小化。所使用之色層分析條件列於下 面0 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝· 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 RP-HPLC色層分析條件 敘述 參數 管柱 HaiSil C18，4.6x250毫米，S/N 5103051 流速 〇·8毫升分鐘-1 注射體積 20微升 檢測 2 1 Onm 留普來滯留時間 25-30分鐘之間 移動相 A^lOO亳莫耳磷酸鈉，ρΗ3·0 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 586932 、發明説明（ 17

4_6個不同濃度之留普來標準液，一般係於〇 U1 2毫克y 亳升之間，隨著安定性樣品進行試驗。安定性樣品以標準 套組排在一起，標準套組之間爲具有不超過40個之樣品。 將位於播效體積與45分鐘之間的所有尖峰予以積分。留普 來標準液之積分面積係以濃度函數繪製成圖。作爲安定性 ^ w之各留、普來濃皮接著使用線性迴歸計算。記錄奠以樣 時間點之函數繪圖留普來尖峰之％尖峰面積、留普來谕 之冲k尖峰總値（標示爲"其它（〇thers)")及留普來後之沖 提尖峰總値（標示爲"凝集（aggregates)")。 小排除層析法（Sizq Exclusion Chromato whv，SEC) 使用具冷藏的自動送樣囍（4 C)之等梯度溶液SEC分析儀 ’分析所選擇的安定性樣姦之％尖峰面積及分予量。所使 用的色層分析條件列於下面。 請 先 閎一 面. I丨 % 售 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 SEC色層分析條件 敘述 參數 管柱 Pharmacia 胜肽，hr iQ/30， 10x300毫米 流速 ------—------ 0.5毫升分鐘d 注射體積 20uL 檢測 2 1 Onm 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） 586932 A7 B7 五、發明説明（） 18 留普來滯留時間 约25分鐘 移動相 ΙΟΟιήΜ磷酸銨，ρΉ2·0，200mM 氯 化斜，30%乙腈 •裝- 訂 大小排除管柱之無效體積及總體積對分子量的計算係爲 必要，BioRad高分子量標準品及0.1 %丙酮係用以分別測定 無效艟積及總體積。記錄BioRgd標準品及丙酮尖峰中的第 一根尖峰之滯奪時間，並使用下述方程式轉換成體積單位 。此等値於特別的SEC管柱及HPLC系統係爲常數，於每 次SEC管柱及HPLC系統改變時，須重新測定無效體積及 總體積。安定性樣品之後接著進行標準品測定。標準品混 合物含有大約0.2毫克/毫升之下列胜肽：Bursin(MW=449) ，WLFR、胜肽（MW=619)，血管收縮素（MW=1181)， GRF(MW=5108)及細胞色素C(MW=12394)。選用此等槔 準品係因其與留普來分子量成順序排列及具有與留普來相 似之等電點（pi)。 . 記錄所有尖峰之尖峰面積％，使用下列方程式計算所分 離物種之分子量。

Vs二流速（毫升/分鐘）x樣品尖峰之滯留時間（分鐘） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Vo=流速（毫升/分鐘）x無效體積尖峰之滯留時間（分鐘） Vt=流速（毫升/分鐘）X總體積尖峰之滯留時間（分鐘） Kd=Vs-Vo/Vt-Vo 其中：

Vs=標準品或樣品體積 Vo=無效體積 -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） 586932 A7 B7 五、發明説明（）

Vt=總體積 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 計算每一胜肽標準尖峰之Vs。使用先前測定之vt及Vo値 計算每一胜肽標準品之Kd値。使用logMW對Kd-1作圖之 線性迴歸線測定安定性樣品中每一尖峰之分子量，並記錄 安定性樣品之％尖峰面積。 5.儀器與材料 用於之儀器與材料如下：

Waters Millennium HPLC系統包括7 17自動送樣器，62$ 幫浦，6000S控制器，900光二極體陣列偵測器及414折射指 數偵測器（Waters Chrom^togJiiphy，Milford，MA)。 HPLC 小瓶，置於位置 48 及 96,(Waters Chromatogiraphy， Milford，ΜΑ) 〇

Haifil C18，120Α，5 μπι4.6χ250 毫米 HPLC 管柱 (Higgins Analytical > Mountain View ? CA)

Pharmacia 胜肽，HR 10/30 SEC 管柱（Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ) 6 .純度 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 使用RP-HPLC分析安定衽樣品，留普來尖峰曲線下之面 積除以所有尖峰曲線下之面積可得到純度％。[應注意以 純度％數據表示之濃度％數據（實例5，6及7)尚未確定，此 等實驗中用於測定濃度％之分析方法不可信賴]。 以下實例係用以説明本發明，然並非以任何方式限制本 發明之範圍。 實例1 -22 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 586932 經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝 A7 B7__ 五、發明説明（2()) 留普來酷酸鹽調配物之增加安定性研究 以上述方法製備40%(w/w)留普來醋酸鹽（相當於約37% 留普來游離鹼）溶於滅菌蒸餾水，酒精/水（7〇/3〇)或含 10%Tween 20之水中之調配物，並用其充滿植入藥物輸送 裝置之貯存池。某些貯存池以聚合物材料製成，某些則以 欽製成。 充滿的裝覃接著於培養箱（Precision Scientific or Thelco)中，於高溫（ 80-88°C)下貯存7夫而促進熟成。假定 活化能（Ea)爲22.2仟卡/莫耳，此相當於y7°C下約1.5年或 室溫下約4年。 使用上述之RP-HPLC及SEC分析樣品並測定熟成的調配 物之化學與物理安定性。 結果表示於表III中，其説明此等水性調酩物可保持 LHRH-相關化合物留普來之安定性&於每一例中，至少保 留65%之留普來。然而，於研究斯間，大量含乙醇之調配 物自貯存池中蒸發，其指出含高濃度揮發性溶劑如乙醇之 調配物長期貯存於高溫下會產生铜題。經發現，含有非離 子性界面活性劑1 〇%Tween 20之調配物，若無添加溶解劑 將不會安定。

表III 高溫7天後，40%(w/w)留普來醋鲮鹽調配物之安定性 溫度（V) 貯存池材料 調配物 7夫後之留普來。/〇 88 聚合物 40%於水中 68 1 / 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閒讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 586932 A7 B7 9 1 五、發明説明（） 88 鈦 40%於水中 ί ' '1 71 88 聚合物 40%於水中 661 88 聚合物 40%於乙醇/水 852 (tO/30)中 88 聚合物 40% 於 10% 65 Tween 2〇 中 80 聚合物 、 、\. 40%於水中 &3 80 聚合物 40%於水中 80 I ' 80 聚合物 40%於水中 78 1 ' 80 聚合物 40 %於水中 f 1 1 79 80 聚合物 40%於水中 83 80 聚合物 40%於水中 77 80 聚合物 40%於水中 79 80 聚合物 40%於水中 74 80 聚合物、 40%於水中 88 (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝·

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1 10%蒸發 2 60%蒸發 實例2 經照射之留普來醋酸鹽、調配物之安定性研究 以上述方法製備含40%(w/w)留普來醋酸鹽於水中之調 配物（相當於約37%留普來游離鹼），並如上所述將其充滿 植入藥物輸送裝置之貯存池。某些貯存池以聚合物材料製 成，某些則以鈦製成。 _ 24 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X 297公釐） 586932 A7 B7 oo 五、發明説明（） 充滿的裝置以2.5兆拉德伽瑪射線照射實驗，樣品船運至 Sterigenics(Tustin，Calfornia)並以批次模式照射伽瑪射 線（鈷60)，樣品接著如實例1所述進行增進熟成。標上" 冷（cold)"係經船運並於乾冰中照射。於第〇及第7天取樣 ，並如上述使用RP-HPLC及SEC分析以測定經照射調配杨 之化學與物理安定性。 結果發表於表IV，其説明此等留普來醋酸鹽調配物於照 射後係爲安定。於每一例中，至少保留65%留普來及低度 之凝集物生成。

表IV 經2·5兆拉德伽瑪射線煦射後，40%(w/w)#普來醋酸鹽水 性調配物之要定性 (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 586932 Α7Β7: 23 五、發明説明（） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 命 命 4 $ -9- 〇 § $ I § 湓 許 Ρ ίο CO 00 N) 1 CO 2 b 0D 03 2 CJ1 > 伞 ? 〇 CD 00 Ο) CO CD CD •CD _k. CO CD CD s CD CO CO b CD C0 cn m CD § 00 g S 〇 ω m ο Ο in o bo o CD 〇 o CD o ^JL ο k) 〇 N) —w Kj 1· 对 ρ CD (D 03 CO CD CO CO C7I CD ί s b s CD CD o CO CD ro 二 00 ο CD 4¾¾ CO 'a ω Ca3 CD ro o M ω ω CJ b h W 対 Ά 6 2 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ2?7公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝·

、1T 586932 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 24 χ五、發明説明（） 實例3 留普來醋酸鹽於水中之長期改善的安定性研皆 ,〆-------\ 1 \ 製備(40^留普來（w/w)於水中之溶液並辟其注入貯存池 中，於80 °C下貯存兩個月，並以上述方法分析。結果見於 圖l(RP-HPLC)及圖2(SE〇>其顯示兩個丹後回收81。/〇留 普來，只有14.6%之化學降解及5.1%物理性凝集。 以前所述方法，製備、注入、貯存並分析留普來（40%， (w/w)於水中）溶液。圖4係為留普來及·其化學及物理降喊 產物於三個月後回收之圖形。此三個元素之總數亦以質量 平衡表之。其結果顯示可對所有胜肤物質如完整的留普來 或降解種類作説明，指出安定性實驗並不會遣漏降解過程 或產物。 製備留普來醋酸鹽溶液（40%，（w/w))於水中並將其注入 貯存池中，於37°C，50°C，65°C或80°C下貯存並使用如上 所述之11?-11?1^€：分析。圖5'表示於3-6個月期間，留普來自 此等溶液之失去，並指出留普來降解符合僞一級動力學。 再者，如以下所討論，圖3指出留普來於水中之降解符合 線性阿瑞尼士（ Arrhenius)動力學。因此，增進的安定性實 驗係爲評估留普來之安定性及於3 7°C下外穑之有效技術。 製備40%留普來醋酸鹽（w/w)於水中之溶液，將其注入貯 存池並貯存於37°C、506C、65°C或$〇°C下，並使用如上所 述之RP-HPLC進行分析。將所得結果依sicai pharmacy: Physical Chemical Principle in the Pharmaceutical Sciences，3rd ed·，Martin et al.，Chapter 14(1983)中所述 -27 - (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 586932 A7 B7 五、發明説明（ 25 之方法計算，其顯示此等溶液之活化能爲22 2仟卡/莫耳 ，而t90爲13·8個月。 數據表於下表JL其阿瑞尼士（Arrhenius)圖表示於圖3 〇 水

°C

Kobs(月-1 tl/2(月） 37 7.24x10-3 95.7 50 3.21x10-2 21.6 65 0.111 6.3 80 0.655 1.1 (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· £往=2、2.2仟卡/莫4 實例4 普^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ 如上所述方法製備及分柝40%留普來醋酸奪溶液，其化 學安、定性表於圖6。於37°C下、九個月後，’存有超過S5%之 留普來及少於10%之化學降解產物（根據RP-HPLC，圖中 以"早’’（early)表示），以及少於5%(3.5%)之物理性礙集（根 據RP_HPLC數據且符於SEC數據者，於圖中以"晚“（late)表 示）。 實例5 高色寧之增進安定性研究 30%高色寧（〜&)於乙酸緩衝液（？115.()，0.02821^)及3(% 甘露醇中之調配物係於8 0 °C下貯存於玻璃安瓶14夭，並如 上所逑分析純度0 -28 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇Χ：297公釐） 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

-Hi HI HI 586932 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 ___ " 2 6 五、發明説明（） 圖7之結果顯示9天後保留約65%之高色亨。 實例6 高色寧調配物之委定性研究 如上所述製備40-45%高色寧於乙酸緩衝液（pH5.0， 〇.〇28、^^)友3%甘露醇中或於乙酸缓衝液及鹽（〇9%氱化鈉） 中之調配物，並豊於聚合容器中。 將此等容器覃於培養箱中於37°C下貯存一個月。 使用RP-HPLC測定熟成調配物之化學安定性以分析該樣 品p 結果發表如下，其説明此等水性調配物可保持LHRJH-相 關化合物问色寧之安定性。在夸二例中皆可保留至少9 8 % 之高色寧。 --Ά3 #J _% 純度_% 濃度 咼色寧 乙酸缓衝液/甘露醇 98.8 54.2 高色寧 乙破緩衝液/盛 98.0 5 0.1 實例7 为服寧調配物之安定性研资 如上所述方法製備15%内服寧（w/w)於乙酸緩衝液及3〇/ύ 甘露醇中之調配物，並將之置於聚合容器中。 將此等容器於37°C下貯存於培養槽中一個月。 使用RP-HPLC分析樣品並測定熟成樣品之化學安定性。 結果列於下面，其說明此等水性調配物可保持LHrH·相 關化合物内服寧之安定性ό在每—例中皆可保留至少98% - 29 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公楚;） ml — I — d. (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 訂 586932 27~ --—_______ 五、發明説明（；） ^ 之内服寧。 紐--~_%純度 _ 内服寧 乙酸緩衝液/甘露醇 9,8.8 18.3 上述實施本發明各具體實施例之改良模式，係可由技藝 人士依^發明之敎示即可得务。上述實施例並非以限制本 發明之範圍，而僅爲例示之用，本發明之範園係以下列申 請專利範園定義。 ---*1 .f— Ml I--裝—I —---訂—---- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -30 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X297公釐）

Claims (1)

1. 586932

   第〇861〇9391號專利申請案 益 中文申請專利範圍替換本(92年12月)g88 六、申請專利範圍 1· 一種LHRH-相關化合物之安定性水性組合物，其包 含： a) 10Q/〇(w/w)或更多之一或多種親水性且可迅速溶於水 之L H R Η -相關化合物；及 b) 水； 其中該組合物在3 7 °C可安定至少2個月。 2. 根據申請專利範圍第1項之組合物，其包含30%(w/w) 或更多之L H R Η -相關化合物。 3· 根據申請專利範圍第3項之組合物，其中L H RH -相關 化合物係選自由留普來（leupr〇lide)，LHRH，内服寧 (nafarelin)及高色寧（g〇serelin)所組成之群。 4 根據申請專利範圍第1項之組合物，其經照射後係為 安定者。 5·根據中請專利範圍第1項之組合物，其於80°C可安定2 個月或更久。 6· 根據申請專利範圍第1項之組合物，其於37t可安定3 個月或更久》 7·根據申請專利範圍第1項之組合物，其於37°C可安定1 年或更久。 8·根據申請專利範圍第1項之組合物，其適合用於植入 性藥物輸送裝置。 9· 根據申請專利範圍第1項之組合物，其進一步包含一 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 申請專利範圍 或多種選自由緩衝液，賦形劑，溶劑，溶解劑及防腐 劑所組成之群。 1〇·根據申請專利範圍第1項之組合物，其主要由30%至 50%(w/w)之LHRH_相關化合物留普來醋酸鹽於無菌的 蒸餾水中所構成。 Π.根據申請專利範圍第1項之組合物，其係形成膠體。 12. 根據申清專利範圍第1項之組合物，進一步包括一或 多種非水性極性非質子性溶劑。 13. 根據申清專利範圍第12項之組合物，其中非水性極性 非質子性溶劑係為二甲亞颯（DM SO)或二甲基甲醯胺 (DMF)。 14·根據申請專利範圍第！項之組合物，係用於治療罹患 經投藥LHRH-相關化合物即可減輕症狀的患者。 15·根據申請專利範圍第14項之組合物，其中^投藥係為 非經腸之投藥。 根據申請專利範圍第14項之組合物，其中該投藥係為 長期連續投藥。 17.根據申請專利範圍第16項之組合物，其中該投藥係使 用植入性藥物輸送裝置完成。 18·根據申請專利範圍第14項之組合物，其中該症狀係前 列線癌’而該述LHRH-相關化合物係為留普來 (leuprolide) 〇 -2 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 586932 A8 B8 C8 D8

   19·根據申請專利範圍第14項之組合物，其中每天投藥8〇 微克或更多之留普來（leuprolide)。 20·根據申請專利範圍第19項之組合物，其中所述每天連續投 藥之期間係選自由3個月’ 6個月及12個月所組成之群。 21·根據申請專利範圍第2 0項之組合物，其中該每天連續 投藥之期間係使用植入性藥物輸送裝置而完成。 22.根據申請專利範圍第14項之組合物，其中該症狀係前 列腺癌而該述LHRH-相關化合物係LHRH拮抗劑。 -3 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 586932

   第86109391號專利申請案 中文圖式修正頁(89年9月） 水

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