TW202118501A - 植物發酵液的用途及植物發酵液的製備方法 - Google Patents
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Abstract
一種植物發酵液用於製備降低水解酶活性的組合物及/或用於製備用於受體減肥的組合物之用途。其中，植物發酵液是由黑醋栗（Ribes nigrum
）、覆盆子（Rubus idaeus
L.）及丁香（Syzygium aromaticum
）經複數菌種發酵所製得。
Description
本發明關於一種發酵液，特別是關於一種植物發酵液的製備方法及其用途。
自有機及天然的飲食概念興起後，生技公司及食品業者積極投入關於天然植物的相關產品之研發。為使植物相關產品對身體健康助益有科學驗證的基礎，植物的活性成分分析及功效評估成為產品開發的重點項目。
而產品開發的項目常與現今社會關注的議題有關，如減重、美白、腸胃保健、生酮飲食等。
在一些實施例中，一種植物發酵液用於製備降低水解酶活性的組合物之用途，其中植物發酵液是由黑醋栗（Ribes nigrum
）、覆盆子（Rubus idaeus
L.）及丁香（Syzygium aromaticum
）經複數菌種發酵所製得。
在一些實施例中，水解酶是澱粉酶、葡萄糖苷酶、麥芽糖酶、蔗糖酶或其組合。
在一些實施例中，一種植物發酵液用於製備用於受體減肥的組合物之用途，其中植物發酵液是由黑醋栗（Ribes nigrum
）、覆盆子（Rubus idaeus
L.）及丁香（Syzygium aromaticum
）經複數菌種發酵所製得。
在一些實施例中，植物發酵液用於以下至少之一者：減少受體的體重、減少受體的體脂、減少受體的腰圍、減少受體的臀圍。
在一些實施例中，植物發酵液用於減少脂質油滴的生成，進而減少受體的脂肪形成。
在一些實施例中，植物發酵液用於促進受體的瘦體素生成。
在一些實施例中，植物發酵液用於抑制受體的以下至少之一者的表現量：CEBPa
基因、GLUT4
基因及PPARG2
基因。
在一些實施例中，植物發酵液用於抑制受體的GLUT4蛋白質的生成。
在一些實施例中，一種植物發酵液的製備方法，包括準備黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料及水、提供培養液、加入0.05wt%-0.2wt%的酵母菌至培養液內發酵24小時以形成第一發酵原液、加入0.02wt%-0.1wt%的乳酸菌至第一發酵原液內發酵24小時以形成第二發酵原液、加入3wt%-7wt%的醋酸菌至第二發酵原液發酵96小時以形成第三發酵原液、加入丁香原料至第三發酵原液發酵24小時以形成植物發酵原液，以及調整植物發酵原液以形成植物發酵液。
綜上所述，根據任一實施例的植物發酵液，其具有降低水解酶（如，澱粉酶、葡萄糖苷酶、麥芽糖酶、蔗糖酶或其組合）活性，進而降低受體對於糖類的吸收。根據任一實施例的植物發酵液，其具有減少受體的體重、減少受體的體脂、減少受體的腰圍、減少受體的臀圍、減少脂質油滴的生成、促進受體的瘦體素生成、抑制受體的以下至少之一者的表現量：CEBPa
基因、GLUT4
基因及PPARG2
基因，以及抑制受體的GLUT4蛋白質的生成，進而用於受體減肥。並且，根據任一實施例的植物發酵液的製備方法，其能製備植物發酵液，且植物發酵液可用於製備用於降低水解酶活性的組合物及/或製備用於受體減肥的組合物。
在一些實施例中，植物發酵液是由黑醋栗原料、覆盆子原料及丁香原料經過複數菌種發酵所製得。舉例來說，黑醋栗原料是指黑醋栗（Ribes nigrum
）的完熟果實（包含種子）或黑醋栗果汁（即，黑醋栗果實的汁液）、覆盆子原料是指覆盆子（Rubus idaeus
L.）的完熟果實（包含種子）或覆盆子果汁（即，覆盆子果實的汁液），而丁香原料是指丁香（Syzygium aromaticum
）的花或花蕾。在一些實施例中，黑醋栗及覆盆子的完熟果實包含果皮、果肉及種子。在一些實施例中，汁液是指果實（黑醋栗或覆盆子）的純汁或以溶劑稀釋純汁的稀釋液。
在一些實施例中，植物發酵液是由黑醋栗原料、覆盆子原料、水及葡萄糖所得到的培養液，經過酵母菌（Yeast）、乳酸桿菌（Lactobacillus
）及醋酸菌（Acetobacter aceti
）發酵，並於醋酸菌發酵期間中加入丁香原料所製得。並且，於醋酸菌的發酵期間加入丁香原料可避免部分菌種的生長被抑制。換言之，於醋酸菌的發酵期間加入丁香原料有助於提高植物發酵液的發酵率。
在一些實施例中，植物發酵液是由黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料、水及葡萄糖所得到的培養液，經過酵母菌、乳酸桿菌及醋酸菌發酵所製得。
請參閱圖1。首先，準備黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料及水（步驟S100）。在一些實施例中，黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料及水的重量比例為1：1：1：50。
將黑醋栗原料、覆盆子原料及水混合以形成莓果混合液。舉例來說，莓果混合液可以是透過搾取黑醋栗及覆盆子的果實所得的莓果汁液並與水混合而得之、透過直接攪碎過濾黑醋栗及覆盆子的果實所得的莓果汁液並與水混合而得之，或是黑醋栗果汁及覆盆子果汁與水混合而得之。在一些實施例中，莓果混合液更包括丁香原料。意即，將黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料及水混合以形成莓果混合液。
接著，於莓果混合液中加入總重的10%的葡萄糖以形成植物基液。在一些實施例中，植物基液的白利糖度（Brix°）大於或等於9.5。
接著，將植物基液加熱以形成植物浸提液，並降溫以提供培養液（步驟S200）。在一些實施例中，植物浸提液是將植物基液加熱至95℃以上並持續加熱60分鐘所得之。在一些實施例中，植物浸提液是於95℃的加熱環境下加熱60分鐘所得之。並且，在一些實施例中，將植物浸提液降溫至小於或等於38℃後，可得到培養液，以供後續發酵程序使用。
於步驟S200後進行三階段的發酵程序。首先，第一階段的發酵程序中，加入0.05wt%-0.2wt%的酵母菌至培養液內發酵24小時以形成第一發酵原液（步驟S300）。舉例來說，酵母菌可以是啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae
）。舉例而言，啤酒酵母可為寄存於食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心（BCRC）且寄存編號BCRC20271菌株的啤酒酵母（且國際寄存編號ATCC26602），或是其他的市售啤酒酵母。在步驟S300的一些實施例中，添加的酵母菌的量可以為0.05wt%、0.1wt%、0.15wt%及0.2wt%。並且，在一些實施例中，酵母菌的培養溫度為30℃。
於步驟S300後，在第二階段的發酵程序中，加入0.02wt%-0.1wt%的乳酸菌至第一發酵原液內發酵24小時以形成第二發酵原液（步驟S400）。舉例來說，乳酸菌可以是胚芽乳桿菌（Lactobacillus plantarum
）。舉例而言，胚芽乳桿菌可為寄存於食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心（BCRC）且寄存編號BCRC910805的胚芽乳桿菌（且國際寄存編號DSM33108）。在步驟S400的一些實施例中，添加的乳酸菌的量可以為0.02wt%、0.05wt%、0.07wt%及0.1wt。並且，在一些實施例中，乳酸菌的培養溫度為30℃。
於步驟S400後，在第三階段的發酵程序中，加入3wt%-7wt%的醋酸菌至第二發酵原液發酵120小時以形成植物發酵原液。舉例來說，醋酸菌可為寄存於食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心（BCRC）且寄存編號BCRC11688的醋酸菌（Acetobacter aceti
）（且國際寄存ATCC15973）。在步驟S500的一些實施例中，添加的醋酸菌的量可以為3wt%、4wt%、5wt%、6wt%及7wt%。並且，在一些實施例中，醋酸菌的培養溫度為30℃。
在一些實施例中，當培養液由黑醋栗原料、覆盆子原料、葡萄糖及水所組成，則於第三階段的發酵程序中，加入3wt%-7wt%的醋酸菌至第二發酵原液發酵96小時以形成第三發酵原液（步驟S500）。並且，於步驟S500後，加入丁香原料至第三發酵原液發酵24小時以形成植物發酵原液（步驟S600）。
在一些實施例中，當培養液由黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料、葡萄糖及水所組成，則於第三階段的發酵程序中，加入3wt%-7wt%的醋酸菌至第二發酵原液發酵120小時以形成植物發酵原液。
於此，植物發酵原液是將黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料、葡萄糖及水透過酵母菌、乳酸菌、醋酸菌依序經由三階段的發酵程序所形成。並且，於三階段的發酵程序後，調整植物發酵原液以形成植物發酵液（步驟S700）。
在一些實施例中，將植物發酵原液以200目數（mesh）的網孔的濾網過濾，並在55℃-65℃下減壓濃縮以形成植物發酵液。舉例來說，減壓濃縮的溫度設定值為60℃。在一些實施例中，減壓濃縮的壓力設定值為150巴（Bar）。於此，透過減壓濃縮能去除植物發酵原液內酒精成分。
在一些實施例中，植物發酵液包含覆盆子酮（Raspberry Ketones）、單寧酸（Tannin）、花青素（Anthocyanin）及乙酰丁香酮（Acetosyringone）。
在一些實施例中，植物發酵液用以降低水解酶活性。舉例來說，水解酶是澱粉酶（α-amylase）、葡萄糖苷酶（Glucosidase）、麥芽糖酶（Maltase）、蔗糖酶（Sucrase）或其組合。換言之，植物發酵液用以降低消化酶的活性。於此，植物發酵液可抑制澱粉酶、葡萄糖苷酶、麥芽糖酶及蔗糖酶的酵素活性，藉此降低受體攝取的澱粉轉換為雙醣及單醣的轉換率，進而降低受體吸收醣類的能力。
於此，在一些實施例中，植物發酵液能用於製備降低水解酶活性的組合物。
在一些實施例中，植物發酵液可用於受體減肥。舉例來說，植物發酵液可用於以下至少之一者：減少該受體的體重、減少該受體的體脂、減少該受體的腰圍、該受體的臀圍。
在一些實施例中，植物發酵液用於減少脂質油滴的生成，進而減少受體的脂肪形成。
在一些實施例中，植物發酵液用於促進受體的瘦體素生成。於此，當受體的瘦體素含量提高後，可抑制受體的食慾及增加瘦體的能量消耗。
在一些實施例中，植物發酵液用於抑制受體的以下至少之一者的表現量：CEBPa
（CCAAT Enhancer Binding Protein Alpha）基因（Gene ID:1050；以下稱CEBPa
基因）、GLUT4
基因（又稱Slc2a4
基因，Gene ID:6517；以下稱GLUT4
基因）及PPARG2
（peroxisome proliferator activated receptor gamma）基因（Gene ID:5468；以下稱PPARG2
基因）。於此，透過服用植物發酵液可使受體體內的CEBPa
基因、GLUT4
基因、PPARG2
基因或其組合的表現量降低，進而減少受體的脂肪形成。
在一些實施例中，植物發酵液用於抑制受體的4型葡萄糖轉運蛋白質（Glucose transporter type 4, GLUT4；以下稱GLUT4蛋白質）的生成。於此，植物發酵液可降低運送葡萄糖至細胞的能力，進而抑制細胞吸收葡萄糖。
於此，在一些實施例中，植物發酵液能用於製備用於受體減肥的組合物。
在一些實施例中，受體為人。
在一些實施例中，前述之任一組合物可為醫藥品。換言之，此醫藥品包含有效含量的植物發酵液。
在一些實施例中，前述之醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成適合於經腸道地、非經腸道地（parenterally）、口服的、或局部地（topically）投藥劑型。
在一些實施例中，經腸道或口服的投藥劑型可為，但不限於，錠劑（tablet）、片劑（troche）、口含錠（lozenge）、丸劑（pill）、膠囊（capsule）、分散性粉末（dispersible powder）或細顆粒（granule）、溶液、懸浮液（suspension）、乳劑（emulsion）、糖漿（syrup）、酏劑（elixir）、濃漿（slurry）或類似之物。在一些實施例中，非經腸道地或局部地投藥劑型可為，但不限於，注射品（injection）、無菌的粉末（sterile powder）、外部製劑（external preparation）或類似之物。在一些實施例中，注射品的投藥方式可為皮下注射（subcutaneous injection）、表皮內注射（intraepidermal injection）、皮內注射（intradermal injection）或病灶內注射（intralesional injection）。
在一些實施例中，前述之醫藥品可包含被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑（pharmaceutically acceptable carrier）。在一些實施例中，醫藥上可接受的載劑可為下列載劑中一種或多種：溶劑（solvent）、緩衝液（buffer）、乳化劑（emulsifier）、懸浮劑（suspending agent）、分解劑（decomposer）、崩解劑（disintegrating agent）、分散劑（dispersing agent）、黏結劑（binding agent）、賦形劑（excipient）、安定劑（stabilizing agent）、螯合劑（chelating agent）、稀釋劑（diluent）、膠凝劑（gelling agent）、防腐劑（preservative）、潤濕劑（wetting agent）、潤滑劑（lubricant）、吸收延遲劑（absorption delaying agent）、脂質體（liposome）以及類似之物。關於選用之載劑的種類與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。在一些實施例中，作為醫藥上可接受的載劑的溶劑可為水、生理鹽水（normal saline）、磷酸鹽緩衝生理鹽水（phosphate buffered saline, PBS）、或含有醇的水性溶液（aqueous solution containing alcohol）。
在一些實施例中，前述之任一組合物可為食用產品。換言之，食用產品包含特定含量的植物發酵液。在一些實施例中，食用產品可為一般食品、保健食品或膳食補充品。
在一些實施例中，前述之食用產品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成適合於口服的劑型。在一些實施例中，前述之一般食品可為食用產品本身。在一些實施例中，一般食品可為但不限於：飲料（beverages）、發酵食品（fermented foods）、烘培產品（bakery products）或調味料。
在一些實施例中，所得的植物發酵液可進一步作為食品添加物（food additive），以製得含有植物發酵液的食品組合物。於此，能藉由習知方法於原料製備時添加任一實施例的植物發酵液，或是於食品的製作過程中添加任一實施例的植物發酵液，而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食用產品（即食品組合物）。
例
1
：
植物發酵液的製備
首先，準備重量比為1：1：1：50的黑醋栗果汁、覆盆子果汁、丁香的花蕾及水。其中，黑醋栗果汁是購自紐西蘭的供應商（New Zealand Blackcurrant Co-Operative Ltd），產品名稱為黑醋栗濃縮（Blackcurrant concentrate）；覆盆子果汁是購自奧地利的供應商（Ybbstaler Fruit Austria GmbH），產品名稱為覆盆子果汁濃縮（Raspberry juice concentrate）。
接著，將黑醋栗果汁、覆盆子果汁及水混合以形成莓果混合液，並加入相對於莓果混合液總重10%的葡萄糖以形成植物基液。於此，植物基液的白利糖度大於9.5。
將植物基液加熱至95℃，並於加熱環境達到95℃後持續加熱60分鐘，以得到植物浸提液。並且，待植物浸提液的溫度降溫至小於38℃後，即可作為後續發酵程序的培養液使用。
於培養液中加入0.1wt%的啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），並於30℃靜置培養24小時以形成第一發酵原液。於此，啤酒酵母是採用寄存編號BCRC20271的啤酒酵母。
接著，於第一發酵原液中加入0.05wt%的胚芽乳桿菌（Lactobacillus plantarum
），並於30℃靜置培養24小時以形成第二發酵原液。於此，胚芽乳桿菌是採用寄存編號BCRC910805的胚芽乳桿菌。
於第二發酵原液加入5wt%的醋酸菌（Acetobacter aceti
），並於30℃靜置培養96小時以形成第三發酵原液。於此，醋酸菌是採用寄存編號BCRC11688的醋酸菌。
接著，於第三發酵原液加入丁香的花，並繼續於30℃靜置培養24小時以形成植物發酵原液。於此，植物發酵原液的白利糖度小於3.8，且其酸鹼值（pH值）為3.3±1。
將植物發酵原液以孔徑200目數的篩網進行過濾，並將過濾後的植物發酵原液於60℃下及150巴下進行濃縮，以得到植物發酵液。於此，透過濃縮可去除植物發酵原液內的酒精，且濃縮後的植物發酵液的體積為植物發酵原液的體積的70%。
例
2
：
植物水萃液的製備
將重量比為1：1：1：50的黑醋栗（Ribes nigrum
）的果實製成的黑醋栗果汁、覆盆子（Rubus idaeus
L.）的果實製成的覆盆子果汁、丁香（Syzygium aromaticum
）的花及水混合形成植物混合液。其中，黑醋栗果汁是購自紐西蘭的供應商（New Zealand Blackcurrant Co-Operative Ltd），產品名稱為黑醋栗濃縮（Blackcurrant concentrate）；覆盆子果汁是購自奧地利的供應商（Ybbstaler Fruit Austria GmbH），產品名稱為覆盆子果汁濃縮（Raspberry juice concentrate）。
接著，於植物混合液中加入相對於植物混合液總重10%的葡萄糖後，將其加熱至95℃，並於加熱環境達到95℃後持續加熱60分鐘，以得到植物水萃液。於此，植物水萃液的pH值為2.7±0.5。
例
3
：
α-
澱粉酶活性測試
3-1. 溶液配置
含有6mM氯化鈉的0.02莫爾濃度（M）磷酸鈉緩衝溶液（Sodium phosphate buffer）（以下簡稱NaCl-Pi緩衝溶液）：將0.7356克的磷酸一氫鈉（購自J.T.Baker，編號3828-01）、0.5492克的磷酸二氫鈉（購自Sigma，編號04270）及1.7532克的氯化鈉（購自第一化工，編號C4B07）混合並溶於500毫升的水（H2
O）中，以配置含有6mM氯化鈉且酸鹼值（pH）為6.3的NaCl-Pi緩衝溶液。
2當量濃度（N）氫氧化鈉（NaOH）溶液：以8克氫氧化鈉（購自Macron，編號7708-10）溶於100毫升水中，以配置2N的氫氧化鈉溶液。
二硝基水楊酸顏色試劑（Dinitrosalicylic acid color reagent，以下稱終止劑）：將1克3,5-二硝基水楊酸（購自Sigma，編號D0550）溶入50毫升去離子水中，再緩慢加入30克酒石酸鉀鈉（sodium potassium tartrate tetrahydrate，購自Sigma，編號32312）及緩慢加入20毫升2N氫氧化鈉溶液，並以去離子水定量至100毫升。於此，可得到終止劑。
1%澱粉溶液：秤取1克澱粉（購自Sigma，編號S9765）至100毫升NaCl-Pi緩衝溶液並緩慢加熱使澱粉完全溶解於NaCl-Pi緩衝溶液中，待加熱後的含有澱粉的NaCl-Pi緩衝溶液降至室溫後，以水定量至100毫升。於此，可得到1%澱粉溶液。
α-澱粉酶（α-amylase）溶液（5單位/毫升）：將0.0096克α-澱粉酶（購自Sigma，編號A3176）溶解於25毫升NaCl-Pi緩衝溶液。於此，可得到每毫升5單位的α-澱粉分解酶溶液。
3-2：測試流程
於此，以例1所製備的植物發酵液作為測試樣品的測試組別為實驗組，以例2所製備的植物水萃液作為測試樣品的測試組別為控制組。並且，實驗組及控制組以反應時間點分為實驗組（0分鐘）、控制組（0分鐘）、實驗組（10分鐘）及控制組（10分鐘）。其中，實驗組（0分鐘）及控制組（0分鐘）代表α-澱粉酶並無與澱粉反應的測試組別（以下稱反應起始點（0分鐘）），而實驗組（10分鐘）及控制組（10分鐘）代表α-澱粉酶與澱粉進行10分鐘反應的測試組別（以下稱反應終止點（10分鐘））。
表1
| 測試組別 | 測試樣品 | 反應酵素 | 反應基質 |
| 實驗組（0分鐘） | 植物發酵液 | α-澱粉酶 | 1%澱粉溶液 |
| 實驗組（10分鐘） | 植物發酵液 | α-澱粉酶 | 1%澱粉溶液 |
| 控制組（0分鐘） | 植物水萃液 | α-澱粉酶 | 1%澱粉溶液 |
| 控制組（10分鐘） | 植物水萃液 | α-澱粉酶 | 1%澱粉溶液 |
依照表1，取200μL的測試樣品至離心管中，接著分別於各離心管中加入200μL的α-澱粉酶溶液（5單位/毫升），並進行震盪以將離心管內的測試樣品及α-澱粉酶溶液混合均勻以形成待反應溶液。接著，將離心管置於25℃環境下反應10分鐘。
將反應起始點（0分鐘）的測試組別分別加入400μL的終止劑至離心管中與待反應溶液混合均勻，再分別加入200μL的1%澱粉溶液並於25℃下靜置10分鐘以形成未反應溶液。換言之，在反應起始點（0分鐘）的測試組別中，α-澱粉酶不會與澱粉產生反應。
將反應終止點（10分鐘）的測試組別分別加入200μL的1%澱粉溶液至離心管中，使1%澱粉溶液與待反應溶液混合均勻以形成混合溶液。將裝有混合溶液的離心管置於25℃下反應10分鐘以形成反應溶液，然後再加入400μL的終止劑與反應溶液混合均勻，以停止澱粉與α-澱粉酶的反應。
接著，將所有測試組別置於沸水（100℃）中反應5分鐘，並冷卻至室溫（25℃），以形成待測溶液。從各測試組別分別取出150μL待測溶液與850μL水混合以稀釋待測溶液。接著取200μL稀釋後的待測溶液至96孔盤中，並測量其在540nm下之吸光值。
3-3. 實驗結果
根據下列公式（1）計算實驗組相對於控制組的澱粉酶活性，如圖2所示。換言之，是將控制組的澱粉酶活性視為1，來計算實驗組的澱粉酶活性。
公式（1）
α-Amylase 活性 =
（1）
其中，α-Amylase活性代表澱粉酶活性；A540nm
(Sample10min
-Sample0min
)代表反應終止點（10分鐘）的實驗組在540nm下之吸光值與反應起始點（0分鐘）的實驗組在540nm下之吸光值之間的差值，且此測試組別為實驗組。A540nm
(Control10min
-Control0min
)代表反應終止點（10分鐘）的控制組在540nm下之吸光值與反應起始點（0分鐘）的控制組在540nm下之吸光值之間的差值。
請參閱圖2。相較於控制組（即其澱粉酶活性視為1），實驗組的澱粉酶活性為0.9。換言之，實驗組的澱粉酶活性相對於控制組明顯下降10%。由此可知，植物發酵液對於澱粉酶活性的抑制能力明顯高於植物水萃液對於澱粉酶活性的抑制能力。
例
4
：葡萄糖苷酶活性測試
4-1. 溶液配置
0.1莫爾濃度（M）磷酸鈉緩衝溶液（Sodium phosphate buffer，以下簡稱Pi緩衝溶液）：將4.7283克的磷酸一氫鈉（購自J.T.Baker，編號3828-01）及2.0028克的磷酸二氫鈉（購自Sigma，編號04270）混合並溶於400毫升的逆滲透水（RO水）中，並以定量瓶定量至500毫升，以得到酸鹼值（pH）為7.0的Pi緩衝溶液。
2.5mM對硝基苯酚-β-D葡萄糖苷（p-Nitrophenyl β-D-glucopyranoside, PNPG）：秤取0.0377克 PNPG以逆滲透水（RO水）定量至100毫升。
0.2M碳酸鈉（Na2
CO3
）：秤取2.1198克碳酸鈉（購自Sigma，編號31432）以RO水定量至100 毫升，作為葡萄糖苷酶的終止劑。
0.2單位/毫升（units/ml）α-葡萄糖苷酶（α-glucosidase，購自 sigma Chemical Co.（St. Louis, MO, G5003-100UN））溶液：取3.85毫克的固態α-葡萄糖苷酶以2.0毫升的0.1M Pi緩衝溶液溶解，以得到50 U/毫升之α-葡萄糖苷酶原液。接著，取0.1毫升 50 U/毫升之α-葡萄糖苷酶原液並以RO水定量至25毫升，即可得到0.2 U/毫升α-葡萄糖苷酶溶液。
4-2. 測試流程
於此，以例1所製備的植物發酵液作為測試樣品的測試組別為實驗組，以例2所製備的植物水萃液作為測試樣品的測試組別為控制組。並且，實驗組及控制組以反應時間點分為實驗組（0分鐘）、控制組（0分鐘）、實驗組（15分鐘）及控制組（15分鐘）。其中，實驗組（0分鐘）及控制組（0分鐘）代表葡萄糖苷酶並無與PNPG反應的測試組別（以下稱反應起始點（0分鐘）），而實驗組（15分鐘）及控制組（15分鐘）代表葡萄糖苷酶與PNP進行15分鐘反應的測試組別（以下稱反應終止點（15分鐘））。
表2
| 測試組別 | 測試樣品 | 反應酵素 |
| 實驗組（0分鐘） | 植物發酵液 | Pi緩衝溶液 |
| 實驗組（15分鐘） | 植物發酵液 | 葡萄糖苷酶 |
| 控制組（0分鐘） | 植物水萃液 | Pi緩衝溶液 |
| 控制組（15分鐘） | 植物水萃液 | 葡萄糖苷酶 |
依照表2，取160μL的測試樣品至96孔盤中，接著分別於各孔中加入20μL Pi緩衝溶液以形成待反應溶液。
將反應起始點（0分鐘）的測試組別分別加入20μL的Pi緩衝溶液至對應的孔中與待反應溶液混合均勻並於25℃下反應10分鐘。於反應10分鐘後，於每孔中加入20μL的2.5mM PNPG，並將待反應溶液、Pi緩衝溶液及PNPG混合均勻後置於37℃下反應15分鐘以形成0分鐘組反應溶液。於0分鐘組反應溶液中加入80μL終止劑。接著，於0分鐘組反應溶液與終止劑混合均勻後，測量其在405nm下之吸光值。
將反應終止點（15分鐘）的測試組別分別加入20μL的0.2單位/毫升α-葡萄糖苷酶溶液至對應的孔中與待反應溶液混合均勻，接著，將反應終止點（15分鐘）的三組測試組別置於25℃下反應10分鐘，以活化α-葡萄糖苷酶。於反應10分鐘後，再於每孔中加入20μL的2.5mM PNPG，使活化的α-葡萄糖苷酶與PNPG作用。將待反應溶液、α-葡萄糖苷酶溶液及PNPG混合均勻後置於37℃下反應15分鐘以形成15分鐘組反應溶液。於15分鐘組反應溶液中加入80μL終止劑，以中止α-葡萄糖苷酶的活性。接著，15分鐘組反應溶液與終止劑混合均勻後，測量其在405nm下之吸光值。
4-3. 實驗結果
根據下列公式（2）計算實驗組的葡萄糖苷酶活性，如圖3所示。換言之，是將控制組的葡萄糖苷酶活性視為1，來計算實驗組的葡萄糖苷酶活性。
公式（2）
α-Glucosidase活性=
（2）
其中，α-Glucosidase活性代表葡萄糖苷酶活性；A405nm
(Sample15min
-Sample0min
)代表反應終止點（15分鐘）的實驗組在405nm下之吸光值與反應起始點（0分鐘）的實驗組在405nm下之吸光值之間的差值。A405nm
(Control15min
- Control0min
)代表反應終止點（15分鐘）的控制組在405nm下之吸光值與反應起始點（0分鐘）的控制組在405nm下之吸光值之間的差值。
請參閱圖3，相較於控制組（即其葡萄糖苷酶活性視為1），實驗組的葡萄糖苷酶活性為0.4。換言之，實驗組的葡萄糖苷酶活性相對於控制組明顯下降60%。由此可知，植物發酵液對於葡萄糖苷酶活性的抑制能力明顯高於植物水萃液對於葡萄糖苷酶活性的抑制能力。
例
5
：麥芽糖酶活性測試
5-1. 溶劑配置
於此，所使用的待測液中含有50vol%測試樣品、50vol%麥芽糖（Maltose；品牌：sigma Chemical Co）、100mM檸檬酸鈉（citrate-NaOH, pH6.5；品牌：sigma Chemical Co）、2 U麥芽糖酶（Maltase；品牌：sigma Chemical Co）。所使用的酵素溶液中含有100mM 三（羥甲基）甲基甘氨酸-氫氧化鈉（Tricine-NaOH, pH7.8；品牌：sigma Chemical Co）、5mM氯化鎂（品牌：sigma Chemical Co）、1mM三磷酸腺苷（ATP；品牌：sigma Chemical Co）、1mM菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+
；品牌：sigma Chemical Co）、0.5U 己糖激酶（hexo-kinase；品牌：sigma Chemical Co）及0.25U葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（glucose 6-phosphate dehydrogenase；品牌：sigma Chemical Co）。
5-2. 測試流程
於此，實驗組的待測液中含有的測試樣品為例1所製備的植物發酵液，而控制組的待測液含有的測試樣品為例2所製備的植物水萃液。
首先，取100μL的各組的待測液於室溫下培養30分鐘，並以ELISA讀取儀（廠牌：BioTek）讀取各組待測液的吸光值（OD340
）。接著，於各組的待測液中加入100μL的酵素溶液混合並反應10分鐘以形成各組的反應溶液，然後再以ELISA讀取儀（廠牌：BioTek）讀取各組反應溶液的吸光值（OD340
）。並以兩次吸光值計算麥芽糖酶的活性。
5-3. 實驗結果
於此，將控制組的麥芽糖酶活性的倍率視為1，來計算實驗組的麥芽糖酶活性的相對倍率。請參閱圖4，實驗組的麥芽糖酶活性的相對倍率為0.64。換言之，實驗組的麥芽糖酶活性相對於控制組明顯下降36%。由此可知，植物發酵液對於麥芽糖酶活性的抑制能力明顯高於植物水萃液對於麥芽糖酶活性的抑制能力。
例
6
：蔗糖酶活性測試
6-1. 溶液配置
0.1 M馬來酸緩衝液（maleate buffer；品牌：sigma Chemical Co），其pH值為7.0，以下稱maleate緩衝液。
二硝基水楊酸顏色試劑（Dinitrosalicylic acid color reagent，以下稱終止劑）：使用3,5-二硝基水楊酸（購自Sigma，編號D0550）、離子水、酒石酸鉀鈉（sodium potassium tartrate tetrahydrate，購自Sigma，編號32312）、2N氫氧化鈉溶液製備，製法同例3。
60mM蔗糖：秤取2.05g蔗糖（Sucrose；購自Sigma，編號S9378）溶於100 ml maleate緩衝液。
蔗糖酶（Surcrase；購自Sigma，編號D9909），其活性濃度為5單位/毫升。
6-2. 測試流程
首先，將樣品以maleate緩衝液稀釋以形成測試樣品（pH 6.0）。其中，實驗組的樣品為例1所製備的植物發酵液，而控制組的樣品為例2所製備的植物水萃液。
接著，取90μL的測試樣品至玻璃試管中，並加入10μL的0.25單位/毫升蔗糖酶混合均勻，然後置於37℃環境下反應15分鐘以使蔗糖酶活化。接著，加入100μL的60mM蔗糖至玻璃試管中並於室溫下反應30分鐘，以形成反應溶液。於30分鐘後，加入200μL的終止劑與反應溶液混合均勻，並置於沸水（100℃）中反應5分鐘以終止蔗糖酶與蔗糖的反應。於此，終止反應的反應溶液為待測溶液。
接著，從實驗組及控制組中別取出200μL待測溶液至96孔盤中，並測量其在540nm下之吸光值。
6-3. 實驗結果
根據下列公式（3）計算實驗組相對於控制組的蔗糖酶活性，如圖5所示。換言之，是將控制組的蔗糖酶活性視為1，來計算實驗組的蔗糖酶活性相對於控制組被抑制的程度。
公式（3）
抑制程度 =
（3）
其中，抑制程度代表蔗糖酶活性被抑制的程度；Abs control代表控制組的在540nm下之吸光值。Abs sample代表實驗組在540nm下之吸光值。
於此，將控制組的蔗糖酶活性視為1，來計算實驗組的相對蔗糖酶活性。意即，實驗組的蔗糖酶活性被抑制的程度。請參閱圖5，實驗組的蔗糖酶活性為0.95。換言之，實驗組的蔗糖酶活性相對於控制組明顯下降5%，代表蔗糖酶活性被抑制的程度為5%。由此可知，植物發酵液對於蔗糖酶活性的抑制能力明顯高於植物水萃液對於蔗糖酶活性的抑制能力。
例
7
：脂肪形成相關基因表現試驗
7-1. 溶液配置
於此，所使用的條件培養基（Condition Medium）為添加有20vol% FBS（品牌：Gibco）及1vol%盤尼西林-鏈黴素之最低必需培養基α（Minimum Essential Medium Alpha，MEMα，品牌：Gibco)。
7-2. 檢測流程
首先，以每孔1×105
個細胞的細胞數，將小鼠骨髓基質細胞株OP9（購自BCRC，編號6566）接種於含有2mL條件培養基的6孔培養盤的各孔中，並置於37°C下培養24小時。接著，於培養24小時後，再將含有OP9細胞的6孔培養盤置於37°C下接續培養7天。並於7-10天的培養期間，每2天更換一次新鮮的2mL條件培養基。並於培養7-10天後，使用顯微鏡（廠牌：ZEISS）觀察各孔中的細胞內的油滴（lipid droplet）形成以確認OP9細胞完全分化成脂肪細胞。
將脂肪細胞分成3個組別：實驗組、控制組以及空白組。移除各組別的條件培養基，並更換成每孔2mL實驗培養基，然後置於37°C下分別接續培養48小時。其中，實驗組的實驗培養基為含有0.0625vol%例1中所得到的植物發酵液的條件培養基。控制組的實驗培養基為含有0.0625vol%例2中所得到的植物水萃液的條件培養基。空白組的實驗培養基為單純的條件培養基（即不含植物發酵液或植物水萃液）。
於培養48小時後，移除各孔中的實驗培養基並以1X DPBS（品牌：Gibco）清洗一次。去除1X DPBS，接著以RNA純化套組（RNA purification kit，品牌：GeneMark）從各組別的脂肪細胞萃取出RNA。接著，透過反轉錄酶套組（SuperScript™ Reverse Transcriptase kit ，品牌：Invitrogen）將各組別萃取出的RNA反轉錄為cDNA，並透過ABI系統（ABI StepOne Plus™ System，品牌：Applied Biosystems）配合引子（Primer）（如表3所示，SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:6）量化脂肪細胞內脂肪形成相關基因的表現量，並以2- ΔΔCt
方法進行基因定量，如圖6所示。需要特別說明的是，圖6中的基因表現是以相對表現倍率呈現，其中使用Excel軟體之STDEV公式計算標準差，且各組之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析。在圖6中，「*」代表在與空白組比較下其p值小於0.05、「**」代表在與空白組比較下其p值小於0.01及「***」代表在與空白組比較下其p值小於0.001；「#」代表在與控制組比較下其p值小於0.05、「##」代表在與控制組比較下其p值小於0.01及「###」代表在與控制組比較下其p值小於0.001。
表3
| 目標基因 | 引子名稱 | 序列編號 | 序列 | 長度 |
| CEBPa | CEBPa-F | SEQ ID NO:1 | CAAGAACAGCAACGAGTACCG | 21 |
| CEBPa-R | SEQ ID NO:2 | GTCACTGGTCAACTCCAGCAC | 21 | |
| GLUT4 | GLU4T-F | SEQ ID NO:3 | GTGACTGGAACACTGGTCCTA | 21 |
| GLU4T-R | SEQ ID NO:4 | CCAGCCACGTTGCATTGTAG | 20 | |
| PPARG2 | PPARG2-F | SEQ ID NO:5 | TCGCTGATGCACTGCCTATG | 20 |
| PPARG2-R | SEQ ID NO:6 | GAGAGGTCCACAGAGCTGATT | 21 |
7-3. 實驗結果
脂肪形成相關基因包括CEBPa
基因、GLUT4
基因、及PPARG2
基因，如圖6所示。
請參閱圖6。將空白組的各組基因的表現量視為1.00（即空白組的各組基因的表現量為100%）。相較於空白組，實驗組的CEBPa
基因的表現量為0.49，而控制組的CEBPa
基因的表現量為0.84。於此，實驗組的CEBPa
基因的表現量相較於控制組有明顯的被抑制，代表植物發酵液能有效地抑制CEBPa
基因的表現，進而減少脂肪形成。相較於空白組，實驗組的GLUT4
基因的表現量為0.03，而控制組的GLUT4
基因的表現量為0.25。此，實驗組的GLUT4
基因的表現量相較於控制組有明顯的被抑制，代表植物發酵液能有效地抑制GLUT4
基因的表現，進而避免脂肪組織增加。相較於空白組，實驗組的PPARG2
基因的表現量為0.72，而控制組的PPARG2
基因的表現量為0.93。於此，實驗組的PPARG2
基因的表現量相較於控制組有明顯的被抑制，代表植物發酵液能有效地抑制PPARG2
基因的表現，進而減少脂肪形成。
由此可知，植物發酵液能有效地抑制與脂肪形成相關的基因的表現，進而有助於減少脂肪形成，且避免脂肪組織增加。換言之，植物發酵液具有減少脂肪形成的功能，進而避免脂肪累積，達成減少受體的脂肪形成及減肥的功能。
例
8
：
GLUT4
蛋白質含量試驗
8-1. 溶液配置
於此，所使用細胞培養基為添加有10 vol%FBS（品牌：Gibco，編號10437-028）及1 vol%盤尼西林-鏈黴素（品牌：Gibco，編號15240-062）的DMEM培養基（品牌：Gibco，編號12100046）。所使用的胰島素培養基為添加1μM胰島素（品牌：Sigma，編號I9278-5ML）的DMEM培養基。
8-2. 試驗流程
首先，以每孔1×105
個細胞的細胞數，將肝臟細胞HepG2（購自ATCC®
，編號HB-8065™
）接種於含有2mL細胞培養基的6孔培養盤的各孔中，並置於37°C下培養24小時。
接著，更換培養基為胰島素培養基，然後置於37°C下培養72小時。
將肝臟細胞分為3個組別：實驗組、控制組以及空白組。移除各組胰島素培養基，並更換為2mL實驗培養基，然後置於37°C下培養48小時。其中，實驗組的實驗培養基為含有0.0625vol%例1所製備的植物發酵液的細胞培養基。控制組的實驗培養基為含有0.0625vol%例2所製備的植物水萃液的細胞培養基。空白組的實驗培養基為單純的細胞培養基（即不含植物發酵液或植物水萃液）。
接著，移除各孔中的實驗培養基並以1xDPBS潤洗二次。繼而，收集各孔內的肝臟細胞至微量離心管，並以400xg離心5分鐘以去除上清液。接著，加入4%三聚甲醛（paraformaldehyde；品牌：Sigma）反應15分鐘以固定肝臟細胞，再加入0.5% triton X100與肝臟細胞反應15分鐘。接著，加入1%BSA/PBS 進行阻斷（blocking）1小時後，以400xg離心5分鐘以去除上清液。於每管離心管中加入1xDPBS及GLUT4一級抗體（1:500）（品牌：Invitrogen，編號MA5-17176）反應1小時後，以400xg離心5分鐘以去除上清液。接著，以1xDPBS潤洗二次後，再與螢光二級抗體（Alexa Fluor 488 goat anti-mouse，1:200）（品牌：Invitrogen，編號A-11001）避光反應1小時。400xg離心5分鐘以去除微量離心管的上清液後，接著以1xDPBS潤洗二次後，將各組肝臟細胞回溶於1xDPBS中。
以流式細胞儀（BD，Accuri™ C6 Plus）偵測螢光二級抗體的螢光異硫氰酸鹽（FITC）的綠色螢光強度來分析GLUT4蛋白質的表現量。並且，各組之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析，如圖7所示。在圖7中，「***」代表在與空白組比較下其p值小於0.001，而「###」代表在與控制組比較下其p值小於0.001。
8-3. 實驗結果
於此，將空白組量測到的GLUT4蛋白質的相對表現量視為1，以計算控制組及實驗組的GLUT4蛋白質的相對表現量。請參閱圖7，實驗組的GLUT4蛋白質的相對表現量為0.4，而控制組的GLUT4蛋白質的相對表現量為0.8。換言之，實驗組的GLUT4蛋白質的相對表現量顯著地低於控制組。由此可知，植物發酵液能有效地抑制GLUT4蛋白質的產生，進而降低葡萄糖運輸至細胞的能力，並具有阻斷受體對於糖類吸收的功能。
例
9
：脂質油滴堆積量試驗
9-1. 溶液配置
於此，所使用的前脂肪細胞增殖培養基（pre-adipocyte expansion medium）為添加有20vol% FBS（品牌：Gibco）及1vol%盤尼西林-鏈黴素之最低必需培養基α（Minimum Essential Medium Alpha，MEMα，品牌：Gibco)。所使用的分化培養基（differentiation medium）為添加有20vol% FBS（品牌：Gibco）及1vol%盤尼西林-鏈黴素之MEMα（品牌：Gibco)。並且，將油-紅O染色試劑（品牌：Sigma）徹底溶解於100%異丙醇（isopropanol，供應商：ECHO）以配製3mg/mL之油-紅O染色試劑的儲備溶液。為獲得可供使用的油-紅O工作溶液（oil-red O working solution），於使用前即時將油-紅O染色試劑的儲備溶液以二次水（ddH2
O）稀釋至濃度1.8mg/mL，即為60%油-紅O染色試劑的儲備溶液。
9-2. 檢測流程
首先，以每孔8×104
個細胞的細胞數，將小鼠骨髓基質細胞株OP9（購自BCRC，編號6566）接種於含有500μL前脂肪細胞增殖培養基的24孔培養盤的各孔中，並置於37°C下培養7天。於7天的培養期間，每3天更換一次新鮮的500μL分化培養基。於培養7天後，使用顯微鏡（廠牌：ZEISS）觀察各孔中的細胞內的油滴（lipid droplet）形成以確認細胞完全分化成脂肪細胞，供後續實驗使用。
將脂肪細胞分成3個組別：實驗組、控制組以及空白組。移除各組別的分化培養基，並更換成每孔500μL實驗培養基，然後置於37°C下接續培養7天。於7天的培養期間，每3天更換一次新鮮的500μL實驗培養基。其中，實驗組的實驗培養基為含有0.0325vol%例1所製備的植物發酵液的分化培養基。控制組的實驗培養基為含有0.0325vol%例2所製備的植物水萃液的分化培養基。空白組的實驗培養基為單純的分化培養基（即不含植物發酵液或植物水萃液）。
接著，移除各孔中的實驗培養基並以1xDPBS潤洗二次。繼而，於各孔內添加1mL的10%甲醛（formaldehyde，供應商：ECHO）並於室溫下培養30分鐘，藉以固定細胞。之後，移除各孔內的甲醛並以1X DPBS對各孔潤洗二次。於再次潤洗後，添加1mL的60%異丙醇至每孔中並作用1分鐘。接著，移除異丙醇，再添加1mL油-紅O工作溶液並於室溫下作用1小時。
於作用1小時後，移除油-紅O工作溶液並以1mL的60%異丙醇快速退染5秒。接著，加入100%異丙醇至各孔中，並置於振盪器（shaker）上反應10分鐘以溶解染劑。然後，從各孔中取100μL前述之染劑-異丙醇溶液至96孔培養盤並於510nm的波長下以ELISA讀取儀（廠牌：BioTek）讀取各孔的吸光值（OD510
）。
於量測後，藉由將所測得的吸光值代入下列公式（4）而計算出脂質油滴堆積量（%）。換言之，於此，是將空白組的脂質油滴堆積量視為1（即空白組的脂質油滴堆積量為100%）來計算各組別的脂質油滴堆積量（%）。並且，各組之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析，如圖8所示。在圖8中，「**」代表在與空白組比較下其p值小於0.01，而「##」代表在與控制組比較下其p值小於0.01。
公式（4）
脂質油滴堆積量（%）＝(OD510
sample/OD510
control)×100% （4）
其中，OD510
sample代表欲換算之組別的吸光值，而OD510
control代表空白組的吸光值。
9-3. 實驗結果
請參閱圖8。控制組的脂質油滴堆積量為97.34%，而實驗組的脂質油滴堆積量為90.49%。於此，相較於空白組及控制組，實驗組的脂肪細胞內的脂質油滴堆積量滴明顯減少。由此可知，植物發酵液能有效地抑制脂肪累積，具有減少受體的脂肪形成的功能，進而達成減肥之功能。
例
10
：瘦體素的產率試驗
10-1. 溶液配置
於此，所使用的細胞分化培養基為添加有10vol% FBS（品牌：Gibco，編號10437-028）、1vol%抗生素-抗黴菌素(Antibiotic-Antimycotic)（Gibco公司，產品編號：15240-062）（以下稱AA）、1.0 μM/mL地塞米松（dexamethasone, DEXA；品牌：Sigma，編號50-02-2）、0.5 mM/ml IBMX（Methylisobutylxanthine；品牌：Sigma，編號28822-58-4）及1.0 μg/ml 胰島素（Insulin；品牌：Sigma，編號I9278）的DMEM培養基。所使用的脂肪維持培養基為添加10vol% FBS、1vol%AA及1.0 μg/ml 胰島素（Insulin）的DMEM培養基（品牌：Gibco）。
10-2. 檢測流程
首先，以每孔1×104
個細胞的細胞密度，將3T3-L1細胞（購自BCRC，編號60159）接種含有100μL細胞分化培養基的96孔培養盤的各孔中，並置於37°C下培養6天。於6天的培養期間，每2天更換一次新鮮的細胞分化培養基。接著，於培養6天後，更換細胞分化培養基為脂肪維持培養基，並置於37°C下培養7天。於7天的培養期間，每2天更換一次新鮮的脂肪維持培養基。於培養7天後，使用顯微鏡（廠牌：ZEISS）觀察各孔中的細胞內的油滴（lipid droplet）是否形成以確認細胞完全分化成脂肪細胞，供後續實驗使用。
將脂肪細胞分成3個組別：實驗組、控制組以及空白組。移除各組別的分化培養基，並更換成每孔100μL實驗培養基，然後置於37°C下接續培養12天。於12天的培養期間，每2天更換一次新鮮的100μL實驗培養基。其中，實驗組的實驗培養基為含有0.0625vol%例1所製備的植物發酵液的脂肪維持培養基。控制組的實驗培養基為含有0.0625vol%例2所製備的植物水萃液的脂肪維持培養基。空白組的實驗培養基為單純的脂肪維持培養基（即不含植物發酵液或植物水萃液）。
接著，以Mouse LEP（Leptin） ELISA 套組（品牌：Elabscience，編號E-EL-M3008）收集各組3T3-L1細胞的實驗培養基並檢測各組3T3-L1細胞的瘦體素產率。
10-3. 實驗結果
於此，將空白組檢測到的瘦體素相對產率視為100%來計算控制組及實驗組的瘦體素相對產率。並且，各組之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析，如圖9所示。在圖9中，「*」代表在與空白組比較下其p值小於0.05，而「**」代表在與空白組比較下其p值小於0.01。
請參閱圖9。實驗組的瘦體素相對產率為111.23%，而控制組的瘦體素相對產率為94.88%。換言之，實驗組的瘦體素相對產率明顯高於控制組。由此可知，植物發酵液能有效地促進受體的瘦體素生成，進而達成抑制受體食慾及增加受體能量消耗的功能。
例
11
：人體試驗
11-1. 樣品製備
首先，將例1所製備的植物發酵液以水及異麥芽寡糖調整濃度及白利糖度，以形成植物發酵飲品（其含有40wt%植物發酵溶液及60 wt%異麥芽寡糖，且植物發酵溶液為70vol%例1製備的植物發酵液及40vol%水所組成）。於此，植物發酵飲品的白利糖度為39±2，且其pH值為3.2±1。
11-2. 受試者：8位受試者（年齡介於20-55歲）。其中，受試者的BMI大於或等於24並小於27，且男性受試者的體脂率大於25%、女性受試者的體脂率大於30%。
11-3. 測試項目：體重、全身體脂率、軀幹體脂率、腰圍及臀圍。
11-4. 測試方式：
令8位受試者每日飲用6mL植物發酵飲品，並連續飲用4周。於飲用前（即第0周）、飲用2周後（即第2周）及飲用4周後（即第4周），以體重計（廠牌：TANITA，產品：四肢與軀幹體組成計，型號BC-545F）測量此些受試者的體重、全身體脂率及軀幹體脂率。
並且，以皮尺測量此些受試者的腰圍及臀圍。其中，量測腰圍時，需去除受試者腰部覆蓋的衣物，並於受試者輕鬆站立、雙手自然下垂時，以受試者的肚臍為水平量測點量取受試者的腰圍數值。量測臀圍則是以受試者臀部最高點為量測點。
11-5. 實驗結果
請參閱圖10，8位受試者的平均體重從66.8公斤（第0周）下降至65.6公斤（第2周），再下降至64.9公斤（第4周）。請參閱圖11，8位受試者的平均全身體脂率從34.6%（第0周）下降至33.6%（第2周），再下降至33.3%（第4周）。請參閱圖12，8位受試者的平均軀幹體脂率從34.8%（第0周）下降至33.6%（第2周），再下降至33.2%（第4周）。請參閱圖13，8位受試者的平均腰圍從81.8公分（第0周）下降至80.6公分（第2周），再下降至80.0公分（第4周）。請參閱圖14，8位受試者的平均臀圍從100.3公分（第0周）下降至99.0公分（第2周），再下降至98.0公分（第4周）。
換言之，相比飲用前（第0週），持續飲用2周含有植物發酵液的植物發酵飲品後可使此些受試者的平均體重下降1.2公斤、使此些受試者的平均全身體脂率下降1.0%、使此些受試者的平均軀幹體脂率下降1.2%、使此些受試者的平均腰圍減少1.2公分以及使此些受試者的平均臀圍減少1.3公分。並且，持續飲用4周含有植物發酵液的植物發酵飲品後可使此些受試者的平均體重顯著地下降1.9公斤、使此些受試者的平均全身體脂率下降1.3%、使此些受試者的平均軀幹體脂率下降1.6%、使此些受試者的平均腰圍顯著地減少1.8公分以及使此些受試者的平均臀圍顯著地減少2.3公分。
由此可知，長期使用植物發酵液可改善受體的體重、全身體脂、軀幹體脂、腰圍及臀圍，即植物發酵液具瘦身減肥之功效。
綜上所述，根據本發明任一實施例的植物發酵液可用於製備用於受體減肥的組合物及可用於製備用於降低水解酶活性的組合物。換言之，前述之組合物具有下列一種或多種功能：抑制澱粉酶活性、抑制葡萄糖苷酶活性、抑制麥芽糖酶活性、抑制蔗糖酶活性、抑制脂肪形成相關基因的表現量、抑制GLUT4蛋白質表現、促進瘦體素形成、抑制脂肪累積、減少受體的脂肪形成以及減肥瘦身。並且，根據任一實施例的植物發酵液的製備方法可製備植物發酵液。
雖然本發明的技術內容已經以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神所作些許之更動與潤飾，皆應涵蓋於本發明的範疇內，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
S100-S700:步驟
圖1是植物發酵液的製備流程圖；
圖2是α-澱粉酶活性的相對測量結果圖；
圖3是葡萄糖苷酶活性的相對測量結果圖；
圖4是麥芽糖酶活性的相對測量結果圖；
圖5是蔗糖酶活性的相對測量結果圖；
圖6是脂肪形成相關基因的相對表現結果圖；
圖7是GLUT4蛋白質的相對表現結果圖；
圖8是脂質油滴堆積量的相對測量結果圖；
圖9是瘦體素的相對測量結果圖；
圖10是第0周、第2周及第4周的體重數據結果圖；
圖11是第0周、第2周及第4周的全身體脂率數據結果圖；
圖12是第0周、第2周及第4周的軀幹體脂率數據結果圖；
圖13是第0周、第2周及第4周的腰圍數據結果圖；以及
圖14是第0周、第2周及第4周的臀圍數據結果圖。
Claims (10)
- 一種植物發酵液用於製備一降低一水解酶活性的組合物之用途，其中該植物發酵液是由黑醋栗（Ribes nigrum ）、覆盆子（Rubus idaeus L.）及丁香（Syzygium aromaticum ）經複數菌種發酵所製得。
- 如請求項1所述的用途，其中該水解酶是澱粉酶、葡萄糖苷酶、麥芽糖酶、蔗糖酶或其組合。
- 一種植物發酵液用於製備一用於一受體減肥的組合物之用途，其中該植物發酵液是由黑醋栗（Ribes nigrum ）、覆盆子（Rubus idaeus L.）及丁香（Syzygium aromaticum）經複數菌種發酵所製得。
- 如請求項3所述的用途，其中該植物發酵液用於以下至少之一者：減少該受體的體重、減少該受體的體脂、減少該受體的腰圍、減少該受體的臀圍。
- 如請求項3所述的用途，其中該植物發酵液用於減少脂質油滴的生成，進而減少該受體的脂肪形成。
- 如請求項3所述的用途，其中該植物發酵液用於促進該受體的瘦體素生成。
- 如請求項3所述的用途，其中該植物發酵液用於抑制該受體的以下至少之一者的表現量：CEBPa 基因、GLUT4 基因及PPARG2 基因。
- 如請求項3所述的用途，其中該植物發酵液用於抑制該受體的GLUT4蛋白質的生成。
- 一種植物發酵液的製備方法，包括： 準備一黑醋栗原料、一覆盆子原料、一丁香原料及一水； 提供一培養液，該培養液包括該黑醋栗原料、該覆盆子原料及該水所形成的一莓果混合液及該莓果混合液總重的10%的葡萄糖； 加入0.05wt%-0.2wt%的酵母菌至該培養液內發酵24小時以形成一第一發酵原液； 加入0.02wt%-0.1wt%的乳酸菌至該第一發酵原液內發酵24小時以形成一第二發酵原液； 加入3wt%-7wt%的醋酸菌至該第二發酵原液發酵96小時以形成一第三發酵原液； 加入該丁香原料至該第三發酵原液發酵24小時以形成一植物發酵原液；以及 調整該植物發酵原液以形成該植物發酵液。
- 如請求項9所述的植物發酵液的製備方法，其中該提供該培養液的步驟包括： 混合該黑醋栗原料、該覆盆子原料、該水及該葡萄糖以形成一植物基液； 將該植物基液於95℃下萃取60分鐘以得到一植物浸提液；以及 降溫該植物浸提液至溫度小於38℃以得到該培養液。
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