CN112843136A - 植物发酵液的用途及植物发酵液的制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种植物发酵液用于制备降低水解酶活性的组合物及/或用于制备用于受体减肥的组合物的用途。其中，植物发酵液是由黑醋栗(Ribes nigrum)、覆盆子(Rubus idaeus L.)及丁香(Syzygium aromaticum)经多个菌种发酵所制得。

Description

植物发酵液的用途及植物发酵液的制备方法
技术领域
本发明关于一种发酵液，特别是关于一种植物发酵液的制备方法及其用途。
背景技术
自有机及天然的饮食概念兴起后，生技公司及食品业者积极投入关于天然植物的相关产品的研发。为使植物相关产品对身体健康帮助有科学验证的基础，植物的活性成分分析及功效评估成为产品开发的重点项目。
而产品开发的项目常与现今社会关注的议题有关，如减重、美白、肠胃保健、生酮饮食等。
发明内容
在一些实施例中，一种植物发酵液用于制备降低水解酶活性的组合物的用途，其中植物发酵液是由黑醋栗(Ribes nigrum)、覆盆子(Rubus idaeus L.)及丁香(Syzygiumaromaticum)经多个菌种发酵所制得。
在一些实施例中，水解酶是淀粉酶、葡萄糖苷酶、麦芽糖酶、蔗糖酶或其组合。
在一些实施例中，一种植物发酵液用于制备用于受体减肥的组合物的用途，其中植物发酵液是由黑醋栗(Ribes nigrum)、覆盆子(Rubus idaeus L.)及丁香(Syzygiumaromaticum)经多个菌种发酵所制得。
在一些实施例中，植物发酵液用于以下至少之一者：减少受体的体重、减少受体的体脂、减少受体的腰围、减少受体的臀围。
在一些实施例中，植物发酵液用于减少脂质油滴的生成，进而减少受体的脂肪形成。
在一些实施例中，植物发酵液用于促进受体的瘦体素生成。
在一些实施例中，植物发酵液用于抑制受体的以下至少一者的表现量：CEBPa基因、GLUT4基因及PPARG2基因。
在一些实施例中，植物发酵液用于抑制受体的GLUT4蛋白质的生成。
在一些实施例中，一种植物发酵液的制备方法，包括准备黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料及水、提供培养液、加入0.05wt％-0.2wt％的酵母菌至培养液内发酵24小时以形成第一发酵原液、加入0.02wt％-0.1wt％的乳酸菌至第一发酵原液内发酵24小时以形成第二发酵原液、加入3wt％-7wt％的醋酸菌至第二发酵原液发酵96小时以形成第三发酵原液、加入丁香原料至第三发酵原液发酵24小时以形成植物发酵原液，以及调整植物发酵原液以形成植物发酵液。
综上所述，根据任一实施例的植物发酵液，其具有降低水解酶(如，淀粉酶、葡萄糖苷酶、麦芽糖酶、蔗糖酶或其组合)活性，进而降低受体对于糖类的吸收。根据任一实施例的植物发酵液，其具有减少受体的体重、减少受体的体脂、减少受体的腰围、减少受体的臀围、减少脂质油滴的生成、促进受体的瘦体素生成、抑制受体的以下至少一者的表现量：CEBPa基因、GLUT4基因及PPARG2基因，以及抑制受体的GLUT4蛋白质的生成，进而用于受体减肥。并且，根据任一实施例的植物发酵液的制备方法，其能制备植物发酵液，且植物发酵液可用于制备用于降低水解酶活性的组合物及/或制备用于受体减肥的组合物。
附图说明
图1是植物发酵液的制备流程图；
图2是α-淀粉酶活性的相对测量结果图；
图3是葡萄糖苷酶活性的相对测量结果图；
图4是麦芽糖酶活性的相对测量结果图；
图5是蔗糖酶活性的相对测量结果图；
图6是脂肪形成相关基因的相对表现结果图；
图7是GLUT4蛋白质的相对表现结果图；
图8是脂质油滴堆积量的相对测量结果图；
图9是瘦体素的相对测量结果图；
图10是第0周、第2周及第4周的体重数据结果图；
图11是第0周、第2周及第4周的全身体脂率数据结果图；
图12是第0周、第2周及第4周的躯干体脂率数据结果图；
图13是第0周、第2周及第4周的腰围数据结果图；以及
图14是第0周、第2周及第4周的臀围数据结果图。
其中，附图标记：
S100-S700:步骤
具体实施方式
在一些实施例中，植物发酵液是由黑醋栗原料、覆盆子原料及丁香原料经过多个菌种发酵所制得。举例来说，黑醋栗原料是指黑醋栗(Ribes nigrum)的完熟果实(包含种子)或黑醋栗果汁(即，黑醋栗果实的汁液)、覆盆子原料是指覆盆子(Rubus idaeus L.)的完熟果实(包含种子)或覆盆子果汁(即，覆盆子果实的汁液)，而丁香原料是指丁香(Syzygium aromaticum)的花或花蕾。在一些实施例中，黑醋栗及覆盆子的完熟果实包含果皮、果肉及种子。在一些实施例中，汁液是指果实(黑醋栗或覆盆子)的纯汁或以溶剂稀释纯汁的稀释液。
在一些实施例中，植物发酵液是由黑醋栗原料、覆盆子原料、水及葡萄糖所得到的培养液，经过酵母菌(Yeast)、乳酸杆菌(Lactobacillus)及醋酸菌(Acetobacter aceti)发酵，并于醋酸菌发酵期间中加入丁香原料所制得。并且，于醋酸菌的发酵期间加入丁香原料可避免部分菌种的生长被抑制。换言之，于醋酸菌的发酵期间加入丁香原料有助于提高植物发酵液的发酵率。
在一些实施例中，植物发酵液是由黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料、水及葡萄糖所得到的培养液，经过酵母菌、乳酸杆菌及醋酸菌发酵所制得。
请参阅图1。首先，准备黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料及水(步骤S100)。在一些实施例中，黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料及水的重量比例为1：1：1：50。
将黑醋栗原料、覆盆子原料及水混合以形成莓果混合液。举例来说，莓果混合液可以是透过榨取黑醋栗及覆盆子的果实所得的莓果汁液并与水混合而得之、透过直接搅碎过滤黑醋栗及覆盆子的果实所得的莓果汁液并与水混合而得之，或是黑醋栗果汁及覆盆子果汁与水混合而得之。在一些实施例中，莓果混合液更包括丁香原料。意即，将黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料及水混合以形成莓果混合液。
接着，于莓果混合液中加入总重的10％的葡萄糖以形成植物基液。在一些实施例中，植物基液的白利糖度(Brix°)大于或等于9.5。
接着，将植物基液加热以形成植物浸提液，并降温以提供培养液(步骤S200)。在一些实施例中，植物浸提液是将植物基液加热至95℃以上并持续加热60分钟所得之。在一些实施例中，植物浸提液是于95℃的加热环境下加热60分钟所得之。并且，在一些实施例中，将植物浸提液降温至小于或等于38℃后，可得到培养液，以供后续发酵程序使用。
于步骤S200后进行三阶段的发酵程序。首先，第一阶段的发酵程序中，加入0.05wt％-0.2wt％的酵母菌至培养液内发酵24小时以形成第一发酵原液(步骤S300)。举例来说，酵母菌可以是啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。举例而言，啤酒酵母可为寄存于食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心(BCRC)且寄存编号BCRC20271菌株的啤酒酵母(且国际寄存编号ATCC26602)，或是其他的市售啤酒酵母。在步骤S300的一些实施例中，添加的酵母菌的量可以为0.05wt％、0.1wt％、0.15wt％及0.2wt％。并且，在一些实施例中，酵母菌的培养温度为30℃。
于步骤S300后，在第二阶段的发酵程序中，加入0.02wt％-0.1wt％的乳酸菌至第一发酵原液内发酵24小时以形成第二发酵原液(步骤S400)。举例来说，乳酸菌可以是胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。举例而言，胚芽乳杆菌可为寄存于食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心(BCRC)且寄存编号BCRC910805的胚芽乳杆菌(且国际寄存编号DSM33108)。在步骤S400的一些实施例中，添加的乳酸菌的量可以为0.02wt％、0.05wt％、0.07wt％及0.1wt。并且，在一些实施例中，乳酸菌的培养温度为30℃。
于步骤S400后，在第三阶段的发酵程序中，加入3wt％-7wt％的醋酸菌至第二发酵原液发酵120小时以形成植物发酵原液。举例来说，醋酸菌可为寄存于食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心(BCRC)且寄存编号BCRC11688的醋酸菌(Acetobacter aceti)(且国际寄存ATCC15973)。在步骤S500的一些实施例中，添加的醋酸菌的量可以为3wt％、4wt％、5wt％、6wt％及7wt％。并且，在一些实施例中，醋酸菌的培养温度为30℃。
在一些实施例中，当培养液由黑醋栗原料、覆盆子原料、葡萄糖及水所组成，则于第三阶段的发酵程序中，加入3wt％-7wt％的醋酸菌至第二发酵原液发酵96小时以形成第三发酵原液(步骤S500)。并且，于步骤S500后，加入丁香原料至第三发酵原液发酵24小时以形成植物发酵原液(步骤S600)。
在一些实施例中，当培养液由黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料、葡萄糖及水所组成，则于第三阶段的发酵程序中，加入3wt％-7wt％的醋酸菌至第二发酵原液发酵120小时以形成植物发酵原液。
于此，植物发酵原液是将黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料、葡萄糖及水透过酵母菌、乳酸菌、醋酸菌依序经由三阶段的发酵程序所形成。并且，于三阶段的发酵程序后，调整植物发酵原液以形成植物发酵液(步骤S700)。
在一些实施例中，将植物发酵原液以200目数(mesh)的网孔的滤网过滤，并在55℃-65℃下减压浓缩以形成植物发酵液。举例来说，减压浓缩的温度设定值为60℃。在一些实施例中，减压浓缩的压力设定值为150巴(Bar)。于此，透过减压浓缩能去除植物发酵原液内酒精成分。
在一些实施例中，植物发酵液包含覆盆子酮(Raspberry Ketones)、单宁酸(Tannin)、花青素(Anthocyanin)及乙酰丁香酮(Acetosyringone)。
在一些实施例中，植物发酵液用以降低水解酶活性。举例来说，水解酶是淀粉酶(α-amylase)、葡萄糖苷酶(Glucosidase)、麦芽糖酶(Maltase)、蔗糖酶(Sucrase)或其组合。换言之，植物发酵液用以降低消化酶的活性。于此，植物发酵液可抑制淀粉酶、葡萄糖苷酶、麦芽糖酶及蔗糖酶的酵素活性，藉此降低受体摄取的淀粉转换为双醣及单醣的转换率，进而降低受体吸收醣类的能力。
于此，在一些实施例中，植物发酵液能用于制备降低水解酶活性的组合物。
在一些实施例中，植物发酵液可用于受体减肥。举例来说，植物发酵液可用于以下至少一者：减少该受体的体重、减少该受体的体脂、减少该受体的腰围、该受体的臀围。
在一些实施例中，植物发酵液用于减少脂质油滴的生成，进而减少受体的脂肪形成。
在一些实施例中，植物发酵液用于促进受体的瘦体素生成。于此，当受体的瘦体素含量提高后，可抑制受体的食欲及增加瘦体的能量消耗。
在一些实施例中，植物发酵液用于抑制受体的以下至少一者的表现量：CEBPa(CCAAT Enhancer Binding Protein Alpha)基因(Gene ID:1050；以下称CEBPa基因)、GLUT4基因(又称Slc2a4基因，Gene ID:6517；以下称GLUT4基因)及PPARG2(peroxisomeproliferator activated receptor gamma)基因(Gene ID:5468；以下称PPARG2基因)。于此，透过服用植物发酵液可使受体体内的CEBPa基因、GLUT4基因、PPARG2基因或其组合的表现量降低，进而减少受体的脂肪形成。
在一些实施例中，植物发酵液用于抑制受体的4型葡萄糖转运蛋白质(Glucosetransporter type 4,GLUT4；以下称GLUT4蛋白质)的生成。于此，植物发酵液可降低运送葡萄糖至细胞的能力，进而抑制细胞吸收葡萄糖。
于此，在一些实施例中，植物发酵液能用于制备用于受体减肥的组合物。
在一些实施例中，受体为人。
在一些实施例中，前述任一组合物可为医药品。换言之，此医药品包含有效含量的植物发酵液。
在一些实施例中，前述医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成适合于经肠道地、非经肠道地(parenterally)、口服的、或局部地(topically)投药剂型。
在一些实施例中，经肠道或口服的投药剂型可为，但不限于，锭剂(tablet)、片剂(troche)、口含锭(lozenge)、丸剂(pill)、胶囊(capsule)、分散性粉末(dispersiblepowder)或细颗粒(granule)、溶液、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、糖浆(syrup)、酏剂(elixir)、浓浆(slurry)或类似之物。在一些实施例中，非经肠地道或局部地投药剂型可为，但不限于，注射品(injection)、无菌的粉末(sterile powder)、外部制剂(externalpreparation)或类似之物。在一些实施例中，注射品的投药方式可为皮下注射(subcutaneous injection)、表皮内注射(intraepidermal injection)、皮内注射(intradermal injection)或病灶内注射(intralesional injection)。
在一些实施例中，前述医药品可包含被广泛地使用于药物制造技术的医药上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable carrier)。在一些实施例中，医药上可接受的载剂可为下列载剂中一种或多种：溶剂(solvent)、缓冲液(buffer)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、黏结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizingagent)、螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorptiondelaying agent)、脂质体(liposome)以及类似物。关于选用载剂的种类与数量是落在熟习此项技术之人士的专业素养与例行技术范畴内。在一些实施例中，作为医药上可接受的载剂的溶剂可为水、生理盐水(normal saline)、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate bufferedsaline,PBS)、或含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)。
在一些实施例中，前述任一组合物可为食用产品。换言之，食用产品包含特定含量的植物发酵液。在一些实施例中，食用产品可为一般食品、保健食品或膳食补充品。
在一些实施例中，前述食用产品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成适合于口服的剂型。在一些实施例中，前述一般食品可为食用产品本身。在一些实施例中，一般食品可为但不限于：饮料(beverages)、发酵食品(fermented foods)、烘培产品(bakeryproducts)或调味料。
在一些实施例中，所得的植物发酵液可进一步作为食品添加物(food additive)，以制得含有植物发酵液的食品组合物。于此，能藉由现有技术方法于原料制备时添加任一实施例的植物发酵液，或是于食品的制作过程中添加任一实施例的植物发酵液，而与任一种可食性材料配制成供人类与非人类动物摄食的食用产品(即食品组合物)。
例1：植物发酵液的制备
首先，准备重量比为1：1：1：50的黑醋栗果汁、覆盆子果汁、丁香的花蕾及水。其中，黑醋栗果汁是购自纽西兰的供货商(New Zealand Blackcurrant Co-Operative Ltd)，产品名称为黑醋栗浓缩(Blackcurrant concentrate)；覆盆子果汁是购自奥地利的供货商(Ybbstaler Fruit Austria GmbH)，产品名称为覆盆子果汁浓缩(Raspberry juiceconcentrate)。
接着，将黑醋栗果汁、覆盆子果汁及水混合以形成莓果混合液，并加入相对于莓果混合液总重10％的葡萄糖以形成植物基液。于此，植物基液的白利糖度大于9.5。
将植物基液加热至95℃，并于加热环境达到95℃后持续加热60分钟，以得到植物浸提液。并且，待植物浸提液的温度降温至小于38℃后，即可作为后续发酵程序的培养液使用。
于培养液中加入0.1wt％的啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，并于30℃静置培养24小时以形成第一发酵原液。于此，啤酒酵母是采用寄存编号BCRC20271的啤酒酵母。
接着，于第一发酵原液中加入0.05wt％的胚芽乳杆菌(Lactobacillusplantarum)，并于30℃静置培养24小时以形成第二发酵原液。于此，胚芽乳杆菌是采用寄存编号BCRC910805的胚芽乳杆菌。
于第二发酵原液加入5wt％的醋酸菌(Acetobacter aceti)，并于30℃静置培养96小时以形成第三发酵原液。于此，醋酸菌是采用寄存编号BCRC11688的醋酸菌。
接着，于第三发酵原液加入丁香的花，并继续于30℃静置培养24小时以形成植物发酵原液。于此，植物发酵原液的白利糖度小于3.8，且其酸碱值(pH值)为3.3±1。
将植物发酵原液以孔径200目数的筛网进行过滤，并将过滤后的植物发酵原液于60℃下及150巴下进行浓缩，以得到植物发酵液。于此，透过浓缩可去除植物发酵原液内的酒精，且浓缩后的植物发酵液的体积为植物发酵原液的体积的70％。
例2：植物水萃液的制备
将重量比为1：1：1：50的黑醋栗(Ribes nigrum)的果实制成的黑醋栗果汁、覆盆子(Rubus idaeus L.)的果实制成的覆盆子果汁、丁香(Syzygium aromaticum)的花及水混合形成植物混合液。其中，黑醋栗果汁是购自纽西兰的供货商(New Zealand BlackcurrantCo-Operative Ltd)，产品名称为黑醋栗浓缩(Blackcurrant concentrate)；覆盆子果汁是购自奥地利的供货商(Ybbstaler Fruit Austria GmbH)，产品名称为覆盆子果汁浓缩(Raspberry juice concentrate)。
接着，于植物混合液中加入相对于植物混合液总重10％的葡萄糖后，将其加热至95℃，并于加热环境达到95℃后持续加热60分钟，以得到植物水萃液。于此，植物水萃液的pH值为2.7±0.5。
例3：α-淀粉酶活性测试
3-1.溶液配置
含有6mM氯化钠的0.02摩尔浓度(M)磷酸钠缓冲溶液(Sodium phosphate buffer)(以下简称NaCl-Pi缓冲溶液)：将0.7356克的磷酸一氢钠(购自J.T.Baker，编号3828-01)、0.5492克的磷酸二氢钠(购自Sigma，编号04270)及1.7532克的氯化钠(购自第一化工，编号C4B07)混合并溶于500毫升的水(H2O)中，以配置含有6mM氯化钠且酸碱值(pH)为6.3的NaCl-Pi缓冲溶液。
2当量浓度(N)氢氧化钠(NaOH)溶液：以8克氢氧化钠(购自Macron，编号7708-10)溶于100毫升水中，以配置2N的氢氧化钠溶液。
二硝基水杨酸颜色试剂(Dinitrosalicylic acid color reagent，以下称终止剂)：将1克3,5-二硝基水杨酸(购自Sigma，编号D0550)溶入50毫升去离子水中，再缓慢加入30克酒石酸钾钠(sodium potassium tartrate tetrahydrate，购自Sigma，编号32312)及缓慢加入20毫升2N氢氧化钠溶液，并以去离子水定量至100毫升。于此，可得到终止剂。
1％淀粉溶液：称取1克淀粉(购自Sigma，编号S9765)至100毫升NaCl-Pi缓冲溶液并缓慢加热使淀粉完全溶解于NaCl-Pi缓冲溶液中，待加热后的含有淀粉的NaCl-Pi缓冲溶液降至室温后，以水定量至100毫升。于此，可得到1％淀粉溶液。
α-淀粉酶(α-amylase)溶液(5单位/毫升)：将0.0096克α-淀粉酶(购自Sigma，编号A3176)溶解于25毫升NaCl-Pi缓冲溶液。于此，可得到每毫升5单位的α-淀粉分解酶溶液。
3-2：测试流程
于此，以例1所制备的植物发酵液作为测试样品的测试组别为实验组，以例2所制备的植物水萃液作为测试样品的测试组别为控制组。并且，实验组及控制组以反应时间点分为实验组(0分钟)、控制组(0分钟)、实验组(10分钟)及控制组(10分钟)。其中，实验组(0分钟)及控制组(0分钟)代表α-淀粉酶并无与淀粉反应的测试组别(以下称反应起始点(0分钟))，而实验组(10分钟)及控制组(10分钟)代表α-淀粉酶与淀粉进行10分钟反应的测试组别(以下称反应终止点(10分钟))。
表1
测试组别 测试样品 反应酵素 反应基质
实验组(0分钟) 植物发酵液 α-淀粉酶 1％淀粉溶液
实验组(10分钟) 植物发酵液 α-淀粉酶 1％淀粉溶液
控制组(0分钟) 植物水萃液 α-淀粉酶 1％淀粉溶液
控制组(10分钟) 植物水萃液 α-淀粉酶 1％淀粉溶液
依照表1，取200μL的测试样品至离心管中，接着分别于各离心管中加入200μL的α-淀粉酶溶液(5单位/毫升)，并进行震荡以将离心管内的测试样品及α-淀粉酶溶液混合均匀以形成待反应溶液。接着，将离心管置于25℃环境下反应10分钟。
将反应起始点(0分钟)的测试组别分别加入400μL的终止剂至离心管中与待反应溶液混合均匀，再分别加入200μL的1％淀粉溶液并于25℃下静置10分钟以形成未反应溶液。换言之，在反应起始点(0分钟)的测试组别中，α-淀粉酶不会与淀粉产生反应。
将反应终止点(10分钟)的测试组别分别加入200μL的1％淀粉溶液至离心管中，使1％淀粉溶液与待反应溶液混合均匀以形成混合溶液。将装有混合溶液的离心管置于25℃下反应10分钟以形成反应溶液，然后再加入400μL的终止剂与反应溶液混合均匀，以停止淀粉与α-淀粉酶的反应。
接着，将所有测试组别置于沸水(100℃)中反应5分钟，并冷却至室温(25℃)，以形成待测溶液。从各测试组别分别取出150μL待测溶液与850μL水混合以稀释待测溶液。接着取200μL稀释后的待测溶液至96孔盘中，并测量其在540nm下的吸光值。
3-3.实验结果
根据下列公式(1)计算实验组相对于控制组的淀粉酶活性，如图2所示。换言之，是将控制组的淀粉酶活性视为1，来计算实验组的淀粉酶活性。
公式(1)
Figure BDA0002775491400000111
其中，α-Amylase活性代表淀粉酶活性；A540nm(Sample10min-Sample0min)代表反应终止点(10分钟)的实验组在540nm下的吸光值与反应起始点(0分钟)的实验组在540nm下的吸光值之间的差值，且此测试组别为实验组。A540nm(Control10min-Control0min)代表反应终止点(10分钟)的控制组在540nm下的吸光值与反应起始点(0分钟)的控制组在540nm下的吸光值之间的差值。
请参阅图2。相较于控制组(即其淀粉酶活性视为1)，实验组的淀粉酶活性为0.9。换言之，实验组的淀粉酶活性相对于控制组明显下降10％。由此可知，植物发酵液对于淀粉酶活性的抑制能力明显高于植物水萃液对于淀粉酶活性的抑制能力。
例4：葡萄糖苷酶活性测试
4-1.溶液配置
0.1摩尔浓度(M)磷酸钠缓冲溶液(Sodium phosphate buffer，以下简称Pi缓冲溶液)：将4.7283克的磷酸一氢钠(购自J.T.Baker，编号3828-01)及2.0028克的磷酸二氢钠(购自Sigma，编号04270)混合并溶于400毫升的逆渗透水(RO水)中，并以定量瓶定量至500毫升，以得到酸碱值(pH)为7.0的Pi缓冲溶液。
2.5mM对硝基苯酚-β-D葡萄糖苷(p-Nitrophenylβ-D-glucopyranoside,PNPG)：称取0.0377克PNPG以逆渗透水(RO水)定量至100毫升。
0.2M碳酸钠(Na2CO3)：称取2.1198克碳酸钠(购自Sigma，编号31432)以RO水定量至100毫升，作为葡萄糖苷酶的终止剂。
0.2单位/毫升(units/ml)α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase，购自sigma ChemicalCo.(St.Louis,MO,G5003-100UN))溶液：取3.85毫克的固态α-葡萄糖苷酶以2.0毫升的0.1MPi缓冲溶液溶解，以得到50U/毫升之α-葡萄糖苷酶原液。接着，取0.1毫升50U/毫升之α-葡萄糖苷酶原液并以RO水定量至25毫升，即可得到0.2U/毫升α-葡萄糖苷酶溶液。
4-2.测试流程
于此，以例1所制备的植物发酵液作为测试样品的测试组别为实验组，以例2所制备的植物水萃液作为测试样品的测试组别为控制组。并且，实验组及控制组以反应时间点分为实验组(0分钟)、控制组(0分钟)、实验组(15分钟)及控制组(15分钟)。其中，实验组(0分钟)及控制组(0分钟)代表葡萄糖苷酶并无与PNPG反应的测试组别(以下称反应起始点(0分钟))，而实验组(15分钟)及控制组(15分钟)代表葡萄糖苷酶与PNP进行15分钟反应的测试组别(以下称反应终止点(15分钟))。
表2
Figure BDA0002775491400000121
Figure BDA0002775491400000131
依照表2，取160μL的测试样品至96孔盘中，接着分别于各孔中加入20μL Pi缓冲溶液以形成待反应溶液。
将反应起始点(0分钟)的测试组别分别加入20μL的Pi缓冲溶液至对应的孔中与待反应溶液混合均匀并于25℃下反应10分钟。于反应10分钟后，于每孔中加入20μL的2.5mMPNPG，并将待反应溶液、Pi缓冲溶液及PNPG混合均匀后置于37℃下反应15分钟以形成0分钟组反应溶液。于0分钟组反应溶液中加入80μL终止剂。接着，于0分钟组反应溶液与终止剂混合均匀后，测量其在405nm下的吸光值。
将反应终止点(15分钟)的测试组别分别加入20μL的0.2单位/毫升α-葡萄糖苷酶溶液至对应的孔中与待反应溶液混合均匀，接着，将反应终止点(15分钟)的三组测试组别置于25℃下反应10分钟，以活化α-葡萄糖苷酶。于反应10分钟后，再于每孔中加入20μL的2.5mM PNPG，使活化的α-葡萄糖苷酶与PNPG作用。将待反应溶液、α-葡萄糖苷酶溶液及PNPG混合均匀后置于37℃下反应15分钟以形成15分钟组反应溶液。于15分钟组反应溶液中加入80μL终止剂，以中止α-葡萄糖苷酶的活性。接着，15分钟组反应溶液与终止剂混合均匀后，测量其在405nm下的吸光值。
4-3.实验结果
根据下列公式(2)计算实验组的葡萄糖苷酶活性，如图3所示。换言之，是将控制组的葡萄糖苷酶活性视为1，来计算实验组的葡萄糖苷酶活性。
公式(2)
Figure BDA0002775491400000132
其中，α-Glucosidase活性代表葡萄糖苷酶活性；A405nm(Sample15min-Sample0min)代表反应终止点(15分钟)的实验组在405nm下的吸光值与反应起始点(0分钟)的实验组在405nm下的吸光值之间的差值。A405nm(Control15min-Control0min)代表反应终止点(15分钟)的控制组在405nm下的吸光值与反应起始点(0分钟)的控制组在405nm下的吸光值之间的差值。
请参阅图3，相较于控制组(即其葡萄糖苷酶活性视为1)，实验组的葡萄糖苷酶活性为0.4。换言之，实验组的葡萄糖苷酶活性相对于控制组明显下降60％。由此可知，植物发酵液对于葡萄糖苷酶活性的抑制能力明显高于植物水萃液对于葡萄糖苷酶活性的抑制能力。
例5：麦芽糖酶活性测试
5-1.溶剂配置
于此，所使用的待测液中含有50vol％测试样品、50vol％麦芽糖(Maltose；品牌：sigma Chemical Co)、100mM柠檬酸钠(citrate-NaOH,pH6.5；品牌：sigma Chemical Co)、2U麦芽糖酶(Maltase；品牌：sigma Chemical Co)。所使用的酵素溶液中含有100mM三(羟甲基)甲基甘氨酸-氢氧化钠(Tricine-NaOH,pH7.8；品牌：sigma Chemical Co)、5mM氯化镁(品牌：sigma Chemical Co)、1mM三磷酸腺苷(ATP；品牌：sigma Chemical Co)、1mM烟碱酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+；品牌：sigma Chemical Co)、0.5U己糖激酶(hexo-kinase；品牌：sigma Chemical Co)及0.25U葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose 6-phosphatedehydrogenase；品牌：sigma Chemical Co)。
5-2.测试流程
于此，实验组的待测液中含有的测试样品为例1所制备的植物发酵液，而控制组的待测液含有的测试样品为例2所制备的植物水萃液。
首先，取100μL的各组的待测液于室温下培养30分钟，并以ELISA读取仪(厂牌：BioTek)读取各组待测液的吸光值(OD340)。接着，于各组的待测液中加入100μL的酵素溶液混合并反应10分钟以形成各组的反应溶液，然后再以ELISA读取仪(厂牌：BioTek)读取各组反应溶液的吸光值(OD340)。并以两次吸光值计算麦芽糖酶的活性。
5-3.实验结果
于此，将控制组的麦芽糖酶活性的倍率视为1，来计算实验组的麦芽糖酶活性的相对倍率。请参阅图4，实验组的麦芽糖酶活性的相对倍率为0.64。换言之，实验组的麦芽糖酶活性相对于控制组明显下降36％。由此可知，植物发酵液对于麦芽糖酶活性的抑制能力明显高于植物水萃液对于麦芽糖酶活性的抑制能力。
例6：蔗糖酶活性测试
6-1.溶液配置
0.1M马来酸缓冲液(maleate buffer；品牌：sigma Chemical Co)，其pH值为7.0，以下称maleate缓冲液。
二硝基水杨酸颜色试剂(Dinitrosalicylic acid color reagent，以下称终止剂)：使用3,5-二硝基水杨酸(购自Sigma，编号D0550)、离子水、酒石酸钾钠(sodiumpotassium tartrate tetrahydrate，购自Sigma，编号32312)、2N氢氧化钠溶液制备，制法同例3。
60mM蔗糖：秤取2.05g蔗糖(Sucrose；购自Sigma，编号S9378)溶于100ml maleate缓冲液。
蔗糖酶(Surcrase；购自Sigma，编号D9909)，其活性浓度为5单位/毫升。
6-2.测试流程
首先，将样品以maleate缓冲液稀释以形成测试样品(pH 6.0)。其中，实验组的样品为例1所制备的植物发酵液，而控制组的样品为例2所制备的植物水萃液。
接着，取90μL的测试样品至玻璃试管中，并加入10μL的0.25单位/毫升蔗糖酶混合均匀，然后置于37℃环境下反应15分钟以使蔗糖酶活化。接着，加入100μL的60mM蔗糖至玻璃试管中并于室温下反应30分钟，以形成反应溶液。于30分钟后，加入200μL的终止剂与反应溶液混合均匀，并置于沸水(100℃)中反应5分钟以终止蔗糖酶与蔗糖的反应。于此，终止反应的反应溶液为待测溶液。
接着，从实验组及控制组中别取出200μL待测溶液至96孔盘中，并测量其在540nm下的吸光值。
6-3.实验结果
根据下列公式(3)计算实验组相对于控制组的蔗糖酶活性，如图5所示。换言之，是将控制组的蔗糖酶活性视为1，来计算实验组的蔗糖酶活性相对于控制组被抑制的程度。
公式(3)
Figure BDA0002775491400000161
其中，抑制程度代表蔗糖酶活性被抑制的程度；Abs control代表控制组的在540nm下之吸光值。Abs sample代表实验组在540nm下之吸光值。
于此，将控制组的蔗糖酶活性视为1，来计算实验组的相对蔗糖酶活性。意即，实验组的蔗糖酶活性被抑制的程度。请参阅图5，实验组的蔗糖酶活性为0.95。换言之，实验组的蔗糖酶活性相对于控制组明显下降5％，代表蔗糖酶活性被抑制的程度为5％。由此可知，植物发酵液对于蔗糖酶活性的抑制能力明显高于植物水萃液对于蔗糖酶活性的抑制能力。
例7：脂肪形成相关基因表现试验
7-1.溶液配置
于此，所使用的条件培养基(Condition Medium)为添加有20vol％FBS(品牌：Gibco)及1vol％盘尼西林-链霉素之最低必需培养基α(Minimum Essential MediumAlpha，MEMα，品牌：Gibco)。
7-2.检测流程
首先，以每孔1×105个细胞的细胞数，将小鼠骨髓基质细胞株OP9(购自BCRC，编号6566)接种于含有2mL条件培养基的6孔培养盘的各孔中，并置于37℃下培养24小时。接着，于培养24小时后，再将含有OP9细胞的6孔培养盘置于37℃下接续培养7天。并于7-10天的培养期间，每2天更换一次新鲜的2mL条件培养基。并于培养7-10天后，使用显微镜(厂牌：ZEISS)观察各孔中的细胞内的油滴(lipid droplet)形成以确认OP9细胞完全分化成脂肪细胞。
将脂肪细胞分成3个组别：实验组、控制组以及空白组。移除各组别的条件培养基，并更换成每孔2mL实验培养基，然后置于37℃下分别接续培养48小时。其中，实验组的实验培养基为含有0.0625vol％例1中所得到的植物发酵液的条件培养基。控制组的实验培养基为含有0.0625vol％例2中所得到的植物水萃液的条件培养基。空白组的实验培养基为单纯的条件培养基(即不含植物发酵液或植物水萃液)。
于培养48小时后，移除各孔中的实验培养基并以1X DPBS(品牌：Gibco)清洗一次。去除1X DPBS，接着以RNA纯化套组(RNA purification kit，品牌：GeneMark)从各组别的脂肪细胞萃取出RNA。接着，透过反转录酶套组(SuperScriptTM Reverse Transcriptase kit，品牌：Invitrogen)将各组别萃取出的RNA反转录为cDNA，并透过ABI系统(ABI StepOnePlusTM System，品牌：Applied Biosystems)配合引子(Primer)(如表3所示，SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:6)量化脂肪细胞内脂肪形成相关基因的表现量，并以2-ΔΔCt方法进行基因定量，如图6所示。需要特别说明的是，图6中的基因表现是以相对表现倍率呈现，其中使用Excel软件之STDEV公式计算标准偏差，且各组之间的统计学显著差异是藉由学生t-试验来统计分析。在图6中，「*」代表在与空白组比较下其p值小于0.05、「**」代表在与空白组比较下其p值小于0.01及「***」代表在与空白组比较下其p值小于0.001；「#」代表在与控制组比较下其p值小于0.05、「##」代表在与控制组比较下其p值小于0.01及「###」代表在与控制组比较下其p值小于0.001。
表3
Figure BDA0002775491400000171
Figure BDA0002775491400000181
7-3.实验结果
脂肪形成相关基因包括CEBPa基因、GLUT4基因、及PPARG2基因，如图6所示。
请参阅图6。将空白组的各组基因的表现量视为1.00(即空白组的各组基因的表现量为100％)。相较于空白组，实验组的CEBPa基因的表现量为0.49，而控制组的CEBPa基因的表现量为0.84。于此，实验组的CEBPa基因的表现量相较于控制组有明显的被抑制，代表植物发酵液能有效地抑制CEBPa基因的表现，进而减少脂肪形成。相较于空白组，实验组的GLUT4基因的表现量为0.03，而控制组的GLUT4基因的表现量为0.25。此，实验组的GLUT4基因的表现量相较于控制组有明显的被抑制，代表植物发酵液能有效地抑制GLUT4基因的表现，进而避免脂肪组织增加。相较于空白组，实验组的PPARG2基因的表现量为0.72，而控制组的PPARG2基因的表现量为0.93。于此，实验组的PPARG2基因的表现量相较于控制组有明显的被抑制，代表植物发酵液能有效地抑制PPARG2基因的表现，进而减少脂肪形成。
由此可知，植物发酵液能有效地抑制与脂肪形成相关的基因的表现，进而有助于减少脂肪形成，且避免脂肪组织增加。换言之，植物发酵液具有减少脂肪形成的功能，进而避免脂肪累积，达成减少受体的脂肪形成及减肥的功能。
例8：GLUT4蛋白质含量试验
8-1.溶液配置
于此，所使用细胞培养基为添加有10vol％FBS(品牌：Gibco，編號10437-028)及1vol％盤尼西林-鏈黴素(品牌：Gibco，編號15240-062)的DMEM培养基(品牌：Gibco，編號12100046)。所使用的胰岛素培养基为添加1μM胰岛素(品牌：Sigma，編號I9278-5ML)的DMEM培养基。
8-2.试验流程
首先，以每孔1×105个细胞的细胞数，将肝脏细胞HepG2(购自
Figure BDA0002775491400000191
编号HB-8065TM)接种于含有2mL细胞培养基的6孔培养盘的各孔中，并置于37℃下培养24小时。
接着，更换培养基为胰岛素培养基，然后置于37℃下培养72小时。
将肝脏细胞分为3个组别：实验组、控制组以及空白组。移除各组胰岛素培养基，并更换为2mL实验培养基，然后置于37℃下培养48小时。其中，实验组的实验培养基为含有0.0625vol％例1所制备的植物发酵液的细胞培养基。控制组的实验培养基为含有0.0625vol％例2所制备的植物水萃液的细胞培养基。空白组的实验培养基为单纯的细胞培养基(即不含植物发酵液或植物水萃液)。
接着，移除各孔中的实验培养基并以1xDPBS润洗二次。继而，收集各孔内的肝脏细胞至微量离心管，并以400xg离心5分钟以去除上清液。接着，加入4％三聚甲醛(paraformaldehyde；品牌：Sigma)反应15分钟以固定肝脏细胞，再加入0.5％triton X100与肝脏细胞反应15分钟。接着，加入1％BSA/PBS进行阻断(blocking)1小时后，以400xg离心5分钟以去除上清液。于每管离心管中加入1xDPBS及GLUT4一级抗体(1:500)(品牌：Invitrogen，编号MA5-17176)反应1小时后，以400xg离心5分钟以去除上清液。接着，以1xDPBS润洗二次后，再与荧光二级抗体(Alexa Fluor 488 goat anti-mouse，1:200)(品牌：Invitrogen，编号A-11001)避光反应1小时。400xg离心5分钟以去除微量离心管的上清液后，接着以1xDPBS润洗二次后，将各组肝脏细胞回溶于1xDPBS中。
以流式细胞仪(BD，AccuriTM C6 Plus)侦测荧光二级抗体的荧光异硫氢酸盐(FITC)的绿色萤光强度来分析GLUT4蛋白质的表现量。并且，各组之间的统计学显著差异是藉由学生t-试验来统计分析，如图7所示。在图7中，「***」代表在与空白组比较下其p值小于0.001，而「###」代表在与控制组比较下其p值小于0.001。
8-3.实验结果
于此，将空白组量测到的GLUT4蛋白质的相对表现量视为1，以计算控制组及实验组的GLUT4蛋白质的相对表现量。请参阅图7，实验组的GLUT4蛋白质的相对表现量为0.4，而控制组的GLUT4蛋白质的相对表现量为0.8。换言之，实验组的GLUT4蛋白质的相对表现量显著地低于控制组。由此可知，植物发酵液能有效地抑制GLUT4蛋白质的产生，进而降低葡萄糖运输至细胞的能力，并具有阻断受体对于糖类吸收的功能。
例9：脂质油滴堆积量试验
9-1.溶液配置
于此，所使用的前脂肪细胞增殖培养基(pre-adipocyte expansion medium)为添加有20vol％FBS(品牌：Gibco)及1vol％盘尼西林-链霉素的最低必需培养基α(MinimumEssential Medium Alpha，MEMα，品牌：Gibco)。所使用的分化培养基(differentiationmedium)为添加有20vol％FBS(品牌：Gibco)及1vol％盘尼西林-链霉素的MEMα(品牌：Gibco)。并且，将油-红O染色试剂(品牌：Sigma)彻底溶解于100％异丙醇(isopropanol，供货商：ECHO)以配制3mg/mL的油-红O染色试剂的储备溶液。为获得可供使用的油-红O工作溶液(oil-red O working solution)，于使用前实时将油-红O染色试剂的储备溶液以二次水(ddH2O)稀释至浓度1.8mg/mL，即为60％油-红O染色试剂的储备溶液。
9-2.检测流程
首先，以每孔8×104个细胞的细胞数，将小鼠骨髓基质细胞株OP9(购自BCRC，编号6566)接种于含有500μL前脂肪细胞增殖培养基的24孔培养盘的各孔中，并置于37℃下培养7天。于7天的培养期间，每3天更换一次新鲜的500μL分化培养基。于培养7天后，使用显微镜(厂牌：ZEISS)观察各孔中的细胞内的油滴(lipid droplet)形成以确认细胞完全分化成脂肪细胞，供后续实验使用。
将脂肪细胞分成3个组别：实验组、控制组以及空白组。移除各组别的分化培养基，并更换成每孔500μL实验培养基，然后置于37℃下接续培养7天。于7天的培养期间，每3天更换一次新鲜的500μL实验培养基。其中，实验组的实验培养基为含有0.0325vol％例1所制备的植物发酵液的分化培养基。控制组的实验培养基为含有0.0325vol％例2所制备的植物水萃液的分化培养基。空白组的实验培养基为单纯的分化培养基(即不含植物发酵液或植物水萃液)。
接着，移除各孔中的实验培养基并以1xDPBS润洗二次。继而，于各孔内添加1mL的10％甲醛(formaldehyde，供货商：ECHO)并于室温下培养30分钟，藉以固定细胞。之后，移除各孔内的甲醛并以1X DPBS对各孔润洗二次。于再次润洗后，添加1mL的60％异丙醇至每孔中并作用1分钟。接着，移除异丙醇，再添加1mL油-红O工作溶液并于室温下作用1小时。
于作用1小时后，移除油-红O工作溶液并以1mL的60％异丙醇快速退染5秒。接着，加入100％异丙醇至各孔中，并置于振荡器(shaker)上反应10分钟以溶解染剂。然后，从各孔中取100μL前述之染剂-异丙醇溶液至96孔培养盘并于510nm的波长下以ELISA读取仪(厂牌：BioTek)读取各孔的吸光值(OD510)。
于量测后，藉由将所测得的吸光值代入下列公式(4)而计算出脂质油滴堆积量(％)。换言之，于此，是将空白组的脂质油滴堆积量视为1(即空白组的脂质油滴堆积量为100％)来计算各组别的脂质油滴堆积量(％)。并且，各组之间的统计学显著差异是藉由学生t-试验来统计分析，如图8所示。在图8中，「**」代表在与空白组比较下其p值小于0.01，而「##」代表在与控制组比较下其p值小于0.01。
公式(4)
脂质油滴堆积量(％)＝(OD510 sample/OD510 control)×100％(3)
其中，OD510 sample代表欲换算的组别的吸光值，而OD510 control代表空白组的吸光值。
9-3.实验结果
请参阅图8。控制组的脂质油滴堆积量为97.34％，而实验组的脂质油滴堆积量为90.49％。于此，相较于空白组及控制组，实验组的脂肪细胞内的脂质油滴堆积量滴明显减少。由此可知，植物发酵液能有效地抑制脂肪累积，具有减少受体的脂肪形成的功能，进而达成减肥的功能。
例10：瘦体素的产率试验
10-1.溶液配置
于此，所使用的细胞分化培养基为添加有10vol％FBS(品牌：Gibco，编号10437-028)、1vol％抗生素-抗霉菌素(Antibiotic-Antimycotic)(Gibco公司，产品编号：15240-062)(以下称AA)、1.0μM/mL地塞米松(dexamethasone,DEXA；品牌：Sigma，编号50-02-2)、0.5mM/ml IBMX(Methylisobutylxanthine；品牌：Sigma，编号28822-58-4)及1.0μg/ml胰岛素(Insulin品牌：Sigma，编号I9278)的DMEM培养基。所使用的脂肪维持培养基为添加10vol％FBS、1vol％AA及1.0μg/ml胰岛素(Insulin)的DMEM培养基(品牌：Gibco)。
10-2.检测流程
首先，以每孔1×104个细胞的细胞密度，将3T3-L1细胞(购自BCRC，编号60159)接种含有100μL细胞分化培养基的96孔培养盘的各孔中，并置于37℃下培养6天。于6天的培养期间，每2天更换一次新鲜的细胞分化培养基。接着，于培养6天后，更换细胞分化培养基为脂肪维持培养基，并置于37℃下培养7天。于7天的培养期间，每2天更换一次新鲜的脂肪维持培养基。于培养7天后，使用显微镜(厂牌：ZEISS)观察各孔中的细胞内的油滴(lipiddroplet)是否形成以确认细胞完全分化成脂肪细胞，供后续实验使用。
将脂肪细胞分成3个组别：实验组、控制组以及空白组。移除各组别的分化培养基，并更换成每孔100μL实验培养基，然后置于37℃下接续培养12天。于12天的培养期间，每2天更换一次新鲜的100μL实验培养基。其中，实验组的实验培养基为含有0.0625vol％例1所制备的植物发酵液的脂肪维持培养基。控制组的实验培养基为含有0.0625vol％例2所制备的植物水萃液的脂肪维持培养基。空白组的实验培养基为单纯的脂肪维持培养基(即不含植物发酵液或植物水萃液)。
接着，以Mouse LEP(Leptin)ELISA套组(品牌：Elabscience，编号E-EL-M3008)收集各组3T3-L1细胞的实验培养基并检测各组3T3-L1细胞的瘦体素产率。
10-3.实验结果
于此，将空白组检测到的瘦体素相对产率视为100％来计算控制组及实验组的瘦体素相对产率。并且，各组之间的统计学显著差异是藉由学生t-试验来统计分析，如图9所示。在图9中，「*」代表在与空白组比较下其p值小于0.05，而「**」代表在与空白组比较下其p值小于0.01。
请参阅图9。实验组的瘦体素相对产率为111.23％，而控制组的瘦体素相对产率为94.88％。换言之，实验组的瘦体素相对产率明显高于控制组。由此可知，植物发酵液能有效地促进受体的瘦体素生成，进而达成抑制受体食欲及增加受体能量消耗的功能。
例11：人体试验
11-1.样品制备
首先，将例1所制备的植物发酵液以水及异麦芽寡糖调整浓度及白利糖度，以形成植物发酵饮品(其含有40wt％植物发酵溶液及60wt％异麦芽寡糖，且植物发酵溶液为70vol％例1制备的植物发酵液及40vol％水所组成)。于此，植物发酵饮品的白利糖度为39±2，且其pH值为3.2±1。
11-2.受试者：8位受试者(年龄介于20-55岁)。其中，受试者的BMI大于或等于24并小于27，且男性受试者的体脂率大于25％、女性受试者的体脂率大于30％。
11-3.测试项目：体重、全身体脂率、躯干体脂率、腰围及臀围。
11-4.测试方式：
令8位受试者每日饮用6mL植物发酵饮品，并连续饮用4周。于饮用前(即第0周)、饮用2周后(即第2周)及饮用4周后(即第4周)，以体重计(厂牌：TANITA，产品：四肢与躯干体组成计，型号BC-545F)测量此些受试者的体重、全身体脂率及躯干体脂率。
并且，以皮尺测量此些受试者的腰围及臀围。其中，量测腰围时，需去除受试者腰部覆盖的衣物，并于受试者轻松站立、双手自然下垂时，以受试者的肚脐为水平量测点量取受试者的腰围数值。量测臀围则是以受试者臀部最高点为量测点。
11-5.实验结果
请参阅图10，8位受试者的平均体重从66.8公斤(第0周)下降至65.6公斤(第2周)，再下降至64.9公斤(第4周)。请参阅图11，8位受试者的平均全身体脂率从34.6％(第0周)下降至33.6％(第2周)，再下降至33.3％(第4周)。请参阅图12，8位受试者的平均躯干体脂率从34.8％(第0周)下降至33.6％(第2周)，再下降至33.2％(第4周)。请参阅图13，8位受试者的平均腰围从81.8公分(第0周)下降至80.6公分(第2周)，再下降至80.0公分(第4周)。请参阅图14，8位受试者的平均臀围从100.3公分(第0周)下降至99.0公分(第2周)，再下降至98.0公分(第4周)。
换言之，相比饮用前(第0周)，持续饮用2周含有植物发酵液的植物发酵饮品后可使此些受试者的平均体重下降1.2公斤、使此些受试者的平均全身体脂率下降1.0％、使此些受试者的平均躯干体脂率下降1.2％、使此些受试者的平均腰围减少1.2公分以及使此些受试者的平均臀围减少1.3公分。并且，持续饮用4周含有植物发酵液的植物发酵饮品后可使此些受试者的平均体重显著地下降1.9公斤、使此些受试者的平均全身体脂率下降1.3％、使此些受试者的平均躯干体脂率下降1.6％、使此些受试者的平均腰围显著地减少1.8公分以及使此些受试者的平均臀围显著地减少2.3公分。
由此可知，长期使用植物发酵液可改善受体的体重、全身体脂、躯干体脂、腰围及臀围，即植物发酵液具瘦身减肥的功效。
综上所述，根据本发明任一实施例的植物发酵液可用于制备用于受体减肥的组合物及可用于制备用于降低水解酶活性的组合物。换言之，前述组合物具有下列一种或多种功能：抑制淀粉酶活性、抑制葡萄糖苷酶活性、抑制麦芽糖酶活性、抑制蔗糖酶活性、抑制脂肪形成相关基因的表现量、抑制GLUT4蛋白质表现、促进瘦体素形成、抑制脂肪累积、减少受体的脂肪形成以及减肥瘦身。并且，根据任一实施例的植物发酵液的制备方法可制备植物发酵液。
当然，本发明还可有其它多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明权利要求的保护范围。
Figure BDA0002775491400000251
Figure BDA0002775491400000261
Figure BDA0002775491400000271
【序列表】
<110> 大江生医股份有限公司
<120> 植物发酵液的用途及植物发酵液的制备方法
<130> NA
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CEBPa-F
<400> 1
caagaacagc aacgagtacc g 21
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CEBPa-R
<400> 2
gtcactggtc aactccagca c 21
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GLUT4-F
<400> 3
gtgactggaa cactggtcct a 21
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GLUT4-R
<400> 4
ccagccacgt tgcattgtag 20
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<211> 20
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PPARG2-F
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tcgctgatgc actgcctatg 20
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PPARG2-R
<400> 6
gagaggtcca cagagctgat t 21

Claims (10)

1.一种植物发酵液用于制备降低水解酶活性的组合物的用途，其特征在于，该植物发酵液是由黑醋栗(Ribes nigrum)、覆盆子(Rubus idaeus L.)及丁香(Syzygiumaromaticum)经多个菌种发酵所制得。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，该水解酶是淀粉酶、葡萄糖苷酶、麦芽糖酶、蔗糖酶或其组合。
3.一种植物发酵液用于制备用于受体减肥的组合物的用途，其特征在于，该植物发酵液是由黑醋栗(Ribes nigrum)、覆盆子(Rubus idaeus L.)及丁香(Syzygium aromaticum)经多个菌种发酵所制得。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，该植物发酵液用于以下至少之一者：减少该受体的体重、减少该受体的体脂、减少该受体的腰围、减少该受体的臀围。
5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，该植物发酵液用于减少脂质油滴的生成，进而减少该受体的脂肪形成。
6.如权利要求3所述的用途，其特征在于，该植物发酵液用于促进该受体的瘦体素生成。
7.如权利要求3所述的用途，其特征在于，该植物发酵液用于抑制该受体的以下至少一者的表现量：CEBPa基因、GLUT4基因及PPARG2基因。
8.如权利要求3所述的用途，其特征在于，该植物发酵液用于抑制该受体的GLUT4蛋白质的生成。
9.一种植物发酵液的制备方法，其特征在于，包括：
准备黑醋栗原料、覆盆子原料、丁香原料及水；
提供培养液，该培养液包括该黑醋栗原料、该覆盆子原料及该水所形成的一莓果混合液及该莓果混合液总重的10％的葡萄糖；
加入0.05wt％-0.2wt％的酵母菌至该培养液内发酵24小时以形成第一发酵原液；
加入0.02wt％-0.1wt％的乳酸菌至该第一发酵原液内发酵24小时以形成第二发酵原液；
加入3wt％-7wt％的醋酸菌至该第二发酵原液发酵96小时以形成第三发酵原液；
加入该丁香原料至该第三发酵原液发酵24小时以形成植物发酵原液；以及
调整该植物发酵原液以形成该植物发酵液。
10.如权利要求9所述的植物发酵液的制备方法，其特征在于，该提供该培养液的步骤包括：
混合该黑醋栗原料、该覆盆子原料、该水及该葡萄糖以形成植物基液；
将该植物基液于95℃下萃取60分钟以得到植物浸提液；以及
降温该植物浸提液至温度小于38℃以得到该培养液。
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