CN112655948B - 西梅发酵原液以及其用于肠道保健功效的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物发酵领域，特别是关于西梅发酵原液以及其用于肠道保健的用途。本发明提供一种西梅发酵原液，系藉由包含下列步骤的制备方法制得：将西梅果实与水混合以得到培养液，以及将培养液及复数菌种进行发酵4‑15日以得到西梅发酵原液。本发明另提供一种将西梅发酵原液用于肠道保健的用途。

Description

西梅发酵原液以及其用于肠道保健功效的用途

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，特别是关于用于肠道保健的发酵组合物。

背景技术

肠道菌相可以影响到人类的免疫力。研究中指出，肠道中的益菌占比高，人类的免疫力较高。反的，肠道中的坏菌占比高，人类的免疫力则下降。

肠道菌相亦可以影响到人类的肥胖或是体重，已有研究指出，肥胖或体重过重的指标(BMI指数)愈高的人，F/B ration愈高，前述可参见例如:Obesity alters gutmicrobial ecology.PNAS August 2,2005 102(31)11070-11075、Human intestinalmicrobiota composition is associated with local and systemic inflammation inobesity.OBESITY(2013)21(12),E607–E615等文献的全文。

然而，肠道菌相会随者人类的饮食所改变，因此如提供一种可以改变肠道菌相的食品、保健食品为现在主要解决的问题。免疫力降低，将导致当免疫系统受到真实细菌或病毒的侵害时无法有效发挥功效，使得个体的免疫力大幅下降，暴露于较高风险的中。肥胖或是体重过重，将增加罹患心血管疾病的机率。

有鉴于此，研究或开发一种肠道保健的组合物来有效改善肠道菌相、以及研究或开发一种提升免疫力的组合物来提升生物体的免疫力是有其需求的。

发明内容

本发明的一目的在于提供一种西梅发酵液，由包含下列步骤的制备方法制得：(a)将葡萄糖、西梅果实与水混合以得到一培养液，其中水的重量为西梅果实总重的15-25倍；以及(b)将所述培养液及复数菌种进行发酵4-15日以得到所述西梅发酵原液，其中所述复数菌种包括相对于所述培养液为0.01-0.5wt％的酵母菌、相对于所述培养液为0.01-0.25wt％的乳酸菌及相对于所述培养液为3-10wt％的醋酸菌。

在一些实施例中，其特征在于，所述(a)步骤的得到所述培养液的步骤中，葡萄糖的添加量为西梅果实与水总重的8-12wt％。

在一些实施例中，其特征在于，所述(a)步骤的得到所述培养液的步骤中包括：(a1)将葡萄糖、西梅果实与水混合，形成一混合液；以及(a2)将所述混合液于50-100℃下浸提0.5-1.5小时以得到所述培养液。

在一些实施例中，其特征在于，所述(a)步骤的得到所述培养液的步骤中包括：(a1)将西梅果实与水混合，于50-100℃下浸提0.5-1.5小时，形成一西梅水浸提液；以及(a2)将葡萄糖加入至所述西梅水浸提液以得到所述培养液。

在一些实施例中，其特征在于，所述(b)将所述培养液及所述复数菌种进行发酵以得到所述西梅发酵原液的步骤中，醋酸菌为最后加入的菌种。

在一些实施例中，其特征在于，所述(b)将所述培养液及所述复数菌种进行发酵以得到所述西梅发酵原液的步骤，包括：(b1)于所述培养液中加入酵母菌进行发酵1-2日后形成一第一初发酵液；(b2)于所述第一初发酵液中加入乳酸菌进行发酵1-3日后形成一第二初发酵液；以及(b3)于所述第二初发酵液中加入醋酸菌进行发酵2-10日后形成所述西梅发酵原液。

在一些实施例中，其特征在于，所述(b3)于所述第二初发酵液中加入醋酸菌进行发酵2-10日后形成所述西梅发酵液的步骤中包括：于所述第二初发酵液中加入醋酸菌进行发酵2-10日后，得到一西梅发酵原液，将所述西梅发酵原液在50-60℃下减压浓缩及以200-400目筛网过滤后，得到所述西梅发酵液。

在一些实施例中，其特征在于，所述(b)将所述培养液及所述复数菌种进行发酵以得到所述西梅发酵原液的步骤包括：将所述培养液及所述复数菌种进行发酵4-15日后，得到所述西梅发酵原液，将所述西梅发酵原液经浓缩及过滤后，得到西梅发酵液。

在一些实施例中，其特征在于，所述(b)将所述培养液及复数菌种进行发酵以得到所述西梅发酵原液的步骤包括：将所述培养液及所述复数菌种进行发酵4-15日后，得到所述西梅发酵原液；添加一乳糖醇至所述西梅发酵原液以使所述西梅发酵原液的糖度达到60°Bx以形成西梅发酵液。

在一些实施例中，所述西梅发酵原液的pH值为3.5-4.0，且其糖度为4.0以下。

在一些实施例中，其特征在于，酵母菌为Saccharomyces cerevisiae，乳酸菌为Lactobacillus plantarum，醋酸菌为Acetobacteraceti。

根据一些实施例，本发明提供一种西梅发酵原液用于制备一肠道保健的组合物的用途。

在一些实施例中，其特征在于，所述肠道保健的组合物系同时具有以下所述功能的至少其中两种：提升肠道益生菌的生长、以及减少坏菌的生长。

在一些实施例中，其特征在于，所述肠道保健的组合物用于提升疣微菌门(Verrucomicrobia)、嗜黏蛋白艾克曼菌(Akkermansia muciniphila)、以及双歧杆菌属(Bifidobacteria)益生菌的生长，则所述肠道保健的组合物含有12vol％的所述西梅发酵液。

在一些实施例中，其特征在于，所述肠道保健的组合物用于减少嗜胆菌属(Bilophila)、以及韦荣球菌属(Veillonella)坏菌的生长，则所述肠道保健的组合物含有12vol％的所述西梅发酵液。

根据一些实施例中，本发明提供一种西梅发酵原液用于制备一预防肥胖或体重过重的组合物的用途。

在一些实施例中，所述预防肥胖或体重过重的组合物系降低厚壁菌门/拟杆菌门比例。

综上，根据任一实施例的西梅的发酵液、或是由西梅发酵原液所制成西梅发酵物，可用以改善肠道菌相、预防肥胖、或是预防体重过重。在一实施例中，在发酵过程中分次依序加入复数菌种并且控制使用各菌种的发酵时间，以使得菌种能有最佳的生长，并且进一步提升西梅的发酵液中有效成分浓度。在一些实施例中，藉由使用特定的混合成分浸提物来进行发酵，所得到的西梅的发酵液可同时以至少两种以上的路径来进行肠道保健。在一些实施例中，藉由使用特定的混合成分浸提物来进行发酵，所得到的西梅发酵液可提升益菌占比，也藉此预防肥胖、或是预防体重过重。

以下将配合图式进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例系用以阐明本发明的发明特点及应用，而非以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。

附图说明

图1显示总多糖含量测试结果的比较数据图。

图2显示肠道相对定殖率结果数据图。

图3显示相对一氧化氮含量的测试结果数据图。

图4显示全身体脂率结果数据图。

图5显示躯干体脂率结果数据图。

图6显示肠道疣微菌门(Verrucomicrobia)的相对菌数百分比的数据图。

图7显示肠道嗜黏蛋白艾克曼菌(Akkermansia muciniphila)的相对菌数百分比的数据图。

图8显示肠道双歧杆菌属(Bifidobacteria)的相对菌数百分比的数据图。

图9显示肠道嗜胆菌属(Bilophila)的相对菌数百分比的数据图。

图10显示肠道韦荣球菌属(Veillonella)的相对菌数百分比的数据图。

图11显示肠道菌相厚壁菌门/拟杆菌门比例的比较数据图。

图式中「*」代表p值小于0.05，「**」代表p值小于0.01，以及「***」代表p值小于0.001。当「*」越多时，代表统计上的差异越显著。

具体实施方式

以下将描述本案的部分具体实施态样。在不背离本案精神下，本案尚可以多种不同形式的态样来实践，不应将保护范围限于说明书所具体陈述的条件。

定义

本案使用Excel软件进行统计分析。数据以平均值±标准偏差(SD)表示，各组的间的差异以学生t检验(student's t-test)进行分析。

本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在正负10％的范围内，最佳为在正负5％的范围内。

在一些实施例中，西梅发酵液中为使用西梅的果实进行发酵，其中西梅学名为Prunus domestica，为蔷薇科李属的植物，其果实皮薄多汁。又称欧洲李，主要分布在西亚、欧洲以及中国等地。本发明使用的来自南美洲智利国家的西梅果实(供货商Diana foodCHILE SpA)。所指「西梅果实」可以包括其果肉/果实、含有果皮(外果皮、中间果皮和/或内果皮)的果肉/果实、或含有籽的果肉/果实。

本案所述的西梅发酵液，如同前述，在一些实施例中系指以水浸提含西梅果实得到西梅水浸提液后，再将此西梅水浸提液经过特定发酵程序，形成西梅发酵液。

在一些实施例中，西梅发酵液可经由其他合适的处理步骤，得到西梅发酵液中所含有的西梅发酵物。举例而言，「西梅发酵物」可为由西梅发酵液经干燥而得的粉末。

在一些实施例中，西梅发酵液藉由一包含下列步骤的制备方法制得：(a)将葡萄糖以及西梅果实与水混合以得到培养液，其中水的重量为西梅果实总重的15-25倍；以及(b)将培养液及复数菌种进行发酵4-15日以得到西梅发酵液。

在一些实施例中，葡萄糖的添加量为西梅果实与水总重的8-12wt％。藉由添加葡萄糖，使培养液中具有足够的糖度以确保发酵时菌种可以有足够的养份，让后续发酵可顺利进行。

在一些实施例中，先将即西梅果实与水混合，于50-100℃下浸泡0.5-1.5小时以进行浸提，得到一西梅水浸提液；再将葡萄糖加入至西梅水浸提液中得到培养液。

而在另一些实施例中，可先将葡萄糖、西梅果实与水一起混合，形成混合液；再将混合液于50-100℃下浸提0.5-1.5小时以得到培养液。藉由将葡萄糖与西梅果实同时混合来进行浸提程序，由于不需再开启浸提设备添加葡萄糖、且加入的葡萄糖可再经过高温环境处理，有助于葡萄糖的溶解且可降低原料受污染风险。

在获得培养液后，可将培养液及复数菌种进行发酵4-15日以得到西梅发酵液。其中，复数菌种包括相对于培养液为0.01-0.5wt％的酵母菌、相对于培养液为0.01-0.25wt％的乳酸菌及相对于培养液为3-10wt％的醋酸菌(Acetobacteraceti)。在一些实施例中，培养液不另滤除其内部的固形物(浸提后的西梅果实)而直接于其中加入菌种进行发酵(此时培养液的总重为固形物与液态的重量)，藉以利用菌种进一步提取固形物中的活性成分。在另一些实施例中，可先滤除培养液内部的固形物，再添加菌种进行发酵(此时培养液的总重为液态的重量)，藉此可避免当后续发酵反应过度时，产生其他较复杂且非所欲的成分而可较佳地控制浸提物质量。

在一些实施例中，将培养液及复数菌种进行发酵以得到西梅发酵液的步骤中，酵母菌、乳酸菌以及醋酸菌可以同时加入至培养液中。

在一些实施例中，将培养液及复数菌种进行发酵以得到西梅发酵液的步骤中，系将酵母菌、乳酸菌、以及醋酸菌以此特定顺序进行分批发酵。举例而言，在一些实施例中，先于培养液中加入酵母菌进行发酵1-2日后形成第一初发酵液；再于第一初发酵液中加入乳酸菌进行发酵1-3日后形成第二初发酵液；以及于第二初发酵液中加入醋酸菌进行发酵2-10日后形成西梅发酵液。

藉由先于培养液中添加酵母菌，可先将培养液中的糖份(例如葡萄糖)经发酵转化为乙醇，而乙醇有助于浸提西梅内的有效成分。而后，于第一初发酵液中加入乳酸菌，可使第一初发酵液内尚未反应的糖份经发酵而转化为乳酸，以进一步消耗其中的糖份，进而降低第二初发酵液所含糖度。由于在第二初发酵液中产生了乳酸，其将会进一步改变整体反应环境(例如使第二初发酵液的pH值下降)，对于浸提西梅内的有效成分亦有影响与帮助(使溶于酸性溶液的有效成分更易浸提出)。接着，再于第二初发酵液中加入醋酸菌，藉此可使第二初发酵液内的乙醇转化为乙酸。而由于乙醇被进一步消耗，酵母菌可进一步地继续将糖份转化为乙醇，使酵母菌进行的反应更为完全，糖度进一步降低。在一些实施例中，西梅发酵液的糖度为4.0以下，以确保发酵反应完全。在一些实施例中，西梅发酵液的pH值约为3.5-4.0，糖度约为3.0-4.0°Bx。

在另一些实施例中，将培养液及复数菌种进行发酵以得到西梅发酵液的步骤中，酵母菌与乳酸菌彼此间的添加顺序不限，但醋酸菌为最后加入的菌种。藉此，可让发酵液中确保已经产生乙醇，使醋酸菌可更佳地生长、进行乙醇转化反应，进而最终降低西梅发酵液中的乙醇含量。在一些实施例中，醋酸菌进行发酵的时间长于酵母菌的发酵时间以及长于乳酸菌的发酵时间，藉此使醋酸菌可更完全地消耗发酵液中的乙醇。在一些实施例中，醋酸菌进行发酵的时间可为5-10日。

在一些实施例中，可先于培养液中同时添加酵母菌与乳酸菌进行发酵，再于其中加入醋酸菌发酵得到西梅发酵液。因酵母菌与乳酸菌两者的发酵反应皆较为快速，其所需发酵时间较为接近，而藉由将醋酸菌于酵母菌、乳酸菌后再加入，可让发酵液在酵母菌、乳酸菌阶段先以较短时间(例如共同发酵1日)同时完成其发酵反应，能减少整体发酵所需时间。

在一些实施例中，酵母菌、乳酸菌、以及醋酸菌可于25-40℃下进行发酵反应。若温度超过40℃，则将会使菌种失去活性；若温度低于25℃，则发酵反应的速率将过低、甚至无法进行发酵反应，不利于西梅发酵液的取得。在一些实施例中，酵母菌、乳酸菌、以及醋酸菌可于28-32℃下进行发酵反应。

在一些实施例中，所使用的酵母菌可以是市售的啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)。举例而言，可为向中国台湾食品工业发展研究所采购的寄存编号BCRC20271(国际寄存ATCC26602)菌株的啤酒酵母。

在一些实施例中，所使用的乳酸菌可以是为市售的瑞士乳酸菌(Lactobacillushelveticus)、胚芽乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜热链球菌(Streptococcusthermophiles)或植物乳杆菌。举例而言，可采用瑞士乳酸菌TCI357(中国台湾食品工业发展研究所寄存编号BCRC910846、国际寄存编号DSM33107)、寄存编号BCRC910805(国际寄存DSM33108)菌株的胚芽乳酸杆菌TCI028、寄存编号BCRT910760(国际寄存DSM32451)菌株的胚芽乳酸杆菌TCI378、或寄存编号BCRC910636(国际寄存DSM28121)菌株的嗜热链球菌TCI633。

在一些实施例中，所使用的醋酸菌系向美国菌种中心(American Type CultureCollection)所采购、寄存编号BCRC11688(国际寄存ATCC15973)菌株的醋酸菌。

在一些实施例中，当培养液完成所有菌种的发酵步骤后(例如经过醋酸菌发酵后)，将先得到西梅发酵原液。而后，将此西梅发酵原液经过滤、浓缩，再得到西梅发酵液。举例而言，在一些实施例中，可将培养液及复数菌种进行发酵4-15日后所得到西梅发酵原液，经适当孔洞大小的滤网(例如200-400目筛网)过滤，再将过滤后的液体于50℃-60℃下进行减压浓缩，以得到西梅发酵液。在一些实施例中，亦可先进行减压浓缩，再进行过滤步骤。藉由浓缩步骤，可再进一步调整西梅发酵液中的成分浓度。

在一些实施例中，可于西梅发酵原液中添加寡糖、或是乳糖醇，以使最后得到的西梅发酵液具有所欲的糖度。举例而言，在一些实施例中，可于西梅发酵原液中添加乳糖醇，使西梅发酵原液的糖度达到40°Bx-60°Bx。寡糖系指由3-10个单糖分子聚合而成的低聚糖。其中，寡糖可为果寡糖、半乳寡糖、木寡糖、或异麦芽寡糖等等。在一些实施例中，添加乳糖醇可调整西梅发酵原液的风味，且有助于西梅发酵液的保存。

将此西梅水浸提液经过特定发酵程序后所形成的西梅发酵原液可具有较高的总多糖含量。举例而言，在一些实施例中，西梅发酵原液的总多糖含量为40000-45000μg/ml，而西梅水浸提液的总多糖含量为15000-20000μg/ml。据此可知，藉由本案发酵方式所得的西梅发酵原液，其总多糖含量可被大幅提升215％，故本案的发酵方式确实可有效改变西梅水浸提液中的所含成分，有效提升活性成分。此外，在一些实施例中，此总多糖含量亦可作为西梅发酵原液的检验基准。

此外，根据本案的一些实施例，以水浸提西梅果实所得到的西梅水浸提液，在经过特定发酵程序后所形成的西梅发酵原液，可提升肠道益生菌以达到肠道保健的用途。故此西梅发酵原液可用于制备一肠道保健的组合物的用途。

在一些实施例中，前述的各组合物可为医药组合物、保养品组合物、食品组合物、保健食品组合物。

医药组合物可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于经肠地道(enterally)、非经肠道地(parenterally)或局部地(topically)投药的剂型。例如可为：注射品(injection)[例如，无菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、无菌的粉末(sterile powder)、外部制剂(external preparation)或其他类似物。

医药组合物可进一步包含有一被广泛地使用于药物制造技术的医药上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，医药上可接受的载剂可包含下列一种或多种载剂：乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、黏结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizing agent)、螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorption delaying agent)、脂质体(liposome)以及类似的物。有关这些载剂的选用与数量是熟习此项技术人员可视情况进行选择的。

在一些实施例中，医药上可接受的载剂可包含下列一种溶剂：水、生理盐水(normal saline)、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline，PBS)、含有醇的水性溶液(alcohol containing aqueous solution)以及其他任何合适的溶剂。

在一些实施例中，所述医药组合物可由下列所述的任一种非经肠道途径(parenteral routes)来投药：皮下注射(subcutaneous injection)、表皮内注射(intraepidermal injection)、皮内注射(intradermal injection)以及病灶内注射(intralesional injection)。

在一些实施例中，医药组合物可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于局部施用于皮肤上的外部制剂(external preparation)。举例而言，其可为下列所述的任一种，但不限于此：乳剂(emulsion)、凝胶(gel)、软膏(ointment)、乳霜(cream)、贴片(patch)、擦剂(liniment)、粉末(powder)、气溶胶(aerosol)、喷雾(spray)、乳液(lotion)、乳浆(serum)、糊剂(paste)、泡沫(foam)、滴剂(drop)、悬浮液(suspension)、油膏(salve)以及绷带(bandage)。

在一些实施例中，外部制剂是藉由将医药组合物与一为熟习此项技艺者所详知的基底(base)相混合而制成。

在一些实施例中，所述基底可包含下列一种或多种的添加剂(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氢化合物(hydrocarbons)[诸如石油胶(petroleum,jelly)以及白凡士林(white petrolatum,)]、蜡(wax)[诸如石蜡(paraffin)以及黄蜡(yellowwax)]、保存剂(preserving agents)、抗氧化剂(antioxidants)、界面活性剂(surfactants)、吸收增强剂(absorption enhancers)、安定剂(stabilizing agents)、胶凝剂(gelling agents)[诸如

974P(

974P)、微结晶纤维素(microcrystalline cellulose)以及羧基甲基纤维素(carboxymethylcellulose)]、活性剂(active agents)、保湿剂(humectants)、气味吸收剂(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH调整剂(pH adjusting agents)、螯合剂(chelating agents)、乳化剂(emulsifiers)、闭塞剂(occlusive agents)、软化剂(emollients)、增稠剂(thickeners)、助溶剂(solubilizing agents)、渗透增强剂(penetration enhancers)、抗刺激剂(anti-irritants)、着色剂(colorants)以及推进剂(propellants)等。有关这些添加剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

在一些实施例中，保养品中可包含有一被广泛地使用于保养品制造技术的可接受的佐剂(acceptable adjuvant)。例如，所述可接受的佐剂可包含下列一种或多种佐剂：溶剂、胶凝剂、活性剂、防腐剂、抗氧化剂、遮蔽剂(screening agent)、螯合剂、界面活性剂、染色试剂(coloring agent)、增稠剂(thickening agent)、填料(filler)、香料以及气味吸收剂。可根据实际需求对这些试剂的选用与数量进行合适的调整。

在一些实施例中，保养品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于护肤(skincare)或化妆(makeup)的形式，其可为下列中的任一种，但不限于此：水性溶液(aqueous solution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oilysolution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或复合型的乳剂、凝胶、软膏、乳霜、面膜(mask)、贴片、贴布(pack)、擦剂、粉末、气溶胶、喷雾、乳液、乳浆、糊剂、泡沫、分散液、滴剂、慕斯(mousse)、防晒油(sunblock)、化妆水(tonic water)、粉底(foundation)、卸妆产品(makeup remover products)、肥皂(soap)以及其他身体清洁产品(body cleansing products)等。

在一些实施例中，保养品亦可与下列中的已知活性的外用剂(external useagents)的一种或多种一起合并使用：美白剂(whitening agents)[诸如维生素A酸(tretinoin)、儿茶素(catechin)、曲酸、熊果苷以及维生素C]、保湿剂、杀菌剂(bactericides)、紫外线吸收剂(ultraviolet absorbers)、植物浸提物(plant extracts)[诸如芦荟浸提物(aloe extract)]、皮肤营养剂(skin nutrients)、麻醉剂(anesthetics)、抗痘剂(anti-acne agents)、止痒剂(antipruritics)、止痛剂(analgesics)、抗皮肤炎剂(antidermatitis agents)、抗过角化剂(antihyperkeratolytic agents)、抗干皮肤剂(anti-dry skin agents)、抗汗剂(antipsoriatic agents)、抗老化剂(antiaging agents)、抗皱剂(antiwrinkle agents)、抗皮脂溢出剂(antiseborrheic agents)、伤口治疗剂(wound-healing agents)、皮质类固醇(corticosteroids)以及激素(hormones)。有关这些外用剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

在一些实施例中，医药组合物可被当作食品添加物(food additive)，藉由习知方法于原料制备时添加，或是于食品的制作过程中添加，而与任一种可食性材料配制成供人类与非人类动物摄食的食品产品。

在一些实施例中，食品的种类可为但不限于：饮料(beverages)、发酵食品(fermented foods)、烘培产品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食补充品(dietary supplements)。

下列范例中的实验步骤若无特别叙明，即在室温(25±5℃)、常压(1atm)下进行。

[实施例1]西梅发酵原液的制备

首先将西梅(Prunusdomestica)的全果实(若有特殊部位可补充，例如含皮)打碎成粒径12mm以下的西梅颗粒。将西梅颗粒与水以1:20的比例混合均匀以得到原料混合液。然后，将原料混合液在80℃-100℃下浸提0.5～1小时，其中一较佳实施例为将原料混合液在95℃下浸泡浸提0.5小时，得到西梅水浸提液。而后，在尚未回温至室温前，根据西梅水浸提液的总重，添加8wt％的葡萄糖于西梅水浸提液中，得到培养液。培养液此时的pH值为5.4，糖度值为10.7°Bx。

待培养液冷却至室温后，先添加培养液0.1wt％的BCRC20271菌株的啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)于培养液中，进行发酵1天以形成第一初发酵液。再添加相对于培养液为0.05wt％的TCI378菌株的胚芽乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum)于第一初发酵液内，进行发酵1天以形成第二初发酵液。最后添加相对于培养液为5wt％的BCRC11688菌株的醋酸菌(Acetobacteraceti)于第二初发酵液内，进行发酵5天以得到西梅发酵原液。前述各发酵阶段皆于30℃下进行。西梅发酵原液的pH值为3.5±1，糖度值为4.0°Bx，显示大部分的糖份皆已反应。

[实施例2]西梅发酵液的制备

承上述实施例1，进一步将西梅发酵原液在60℃下减压浓缩及以200目筛网过滤西梅发酵原液，并将乳糖醇及西梅发酵原液以2:1的重量比混合，以得到糖度达到60°Bx的西梅发酵液。

[实施例3]西梅发酵原液的制备

将西梅果实以及水以1：20的重量比混合后，再根据总重量，添加10wt％的葡萄糖于其中，得到混合液。将混合液于95℃下浸泡浸提1小时，得到培养液。培养液此时的pH值为5.4，糖度值为10.7°Bx。

待培养液冷却至室温后，先添加培养液0.1wt％的BCRC20271菌株的啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)于培养液中，进行发酵1天以形成第一初发酵液。再添加相对于培养液为0.05wt％的TCI378菌株的胚芽乳酸杆菌于第一初发酵液内，进行发酵1天以形成第二初发酵液。最后添加相对于培养液为5wt％的BCRC11688菌株的醋酸菌(Acetobacteraceti)于第二初发酵液内，进行发酵5天以得到西梅发酵原液。前述各发酵阶段皆于30℃下进行。

[实施例4]西梅发酵原液的制备

将西梅果实以及水以1：20的重量比混合后，在95℃下浸提1小时，得到西梅水浸提液。而后，在尚未回温至室温前，根据总重量，添加10wt％的葡萄糖于西梅水浸提液中，得到培养液。培养液此时的pH值为5.4，糖度值为10.7°Bx。

待培养液冷却至室温后，先添加培养液0.1wt％的BCRC20271菌株的啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)以及相对于培养液为0.05wt％的TCI378菌株的胚芽乳酸杆菌于培养液中，进行发酵1天。再添加相对于培养液为5wt％的BCRC11688菌株的醋酸菌(Acetobacteraceti)于其中，进行发酵5天以得到西梅发酵原液。前述各发酵阶段皆于30℃下进行。

[实施例5]总多糖含量测试

本案以D-葡萄糖(D-Glucose)当量作为总多糖相对含量的表示。故以D-葡萄糖(D-Glucose)作为标准品制作标准曲线(Standard curve)。

首先，精密秤取D-葡萄糖(D-Glucose)(购自J.T.Baker，料号：1916-01)10mg，置于10mL容量瓶中，以二次蒸馏水(ddH₂O)定量至10mL，配置成1mg/mL浓度的D-葡萄糖溶液。

接着，将上述标准品进行系列稀释，以二次蒸馏水稀释为0,20,50,100,150,200μg/mL的D-葡萄糖溶液。可参酌下表一的方式配置标准溶液：表一

D-葡萄糖溶液标准溶液配置后，取标准溶液各100μL放置于玻璃试管中，再各加入500μL浓度为5％的苯酚溶液(Phenol)(购自Merck，料号：1.00206.0250)。接着缓慢加入2.5mL浓度为95.5％，比重1.84的浓硫酸溶液(H₂SO₄)(购自Showa，料号：1970-5250)。经由涡旋(vortex)确保无气泡后，静置20分钟。最后，取200μL样品放入96孔培养盘，于490nm下测定其吸光值，并绘制标准曲线。

将[实施例1]所得到所得的、尚未发酵的西梅水浸提液，以水稀释200倍至1200ml，并取100μL的体积至玻璃试管中，每组样品需三重复。然后，加入500μL浓度为5％的苯酚溶液(Phenol)(购自Merck，料号：1.00206.0250)。

另将[实施例1]中所得到的西梅发酵原液(糖度值为4.0°Bx)，以水稀释200倍至1200ml，并取100μL的体积至玻璃试管中，每组样品需三重复。的后，加入500μL浓度为5％的苯酚溶液(Phenol)(购自Merck，料号：1.00206.0250)。

接着缓慢加入2.5mL浓度为95.5％，比重1.84的浓硫酸溶液(H₂SO₄)(购自Showa，料号：1970-5250)。经由涡旋(vortex)确保无气泡后，静置20分钟。最后，取200μL样品放入96孔培养盘，于490nm下测定其吸光值，并以内插法算出实验浓度后再乘回稀释倍数以取得原样品浓度，举例而言，原样品浓度(μg/mL)＝实验浓度(μg/mL)x200。

图1为本发明西梅发酵原液的总多糖含量检测数据图。由图1可见，西梅水浸提液的总多糖含量为19600μg/mL，西梅发酵原液的总多糖含量为42200μg/mL，与西梅水浸提液相较的下，西梅发酵原液的总多糖含量显着的提升1.15倍。本实施例的结果显示，本发明西梅发酵原液会大量释出多糖。此总多糖含量亦可作为西梅发酵原液的检验基准。

[实施例6]西梅发酵原液对于肠道定殖的效用评估

此处以瑞士乳酸菌作为肠道益生菌的指标，将瑞士乳酸菌与人类结肠腺癌细胞株C2BBe1共同培养以模拟肠道环境，并观察分别添加西梅水浸提液和西梅发酵液后，瑞士乳酸菌存活于肠道的菌数以计算定殖率。若瑞士乳酸菌的菌数越多代表定殖率效果较佳。

材料与仪器

1.细胞株：人类结肠腺癌细胞株C2BBe1，购自美国典型培养物保存中心(AmericanType Culture Collection，ATCC)，产品编号CRL-2102。

2.含FBS的细胞株培养基：于改良式Eagle’s最低限度基本培养基(Dulbecco'sModified Eagle Medium，DMEM，购自Gibco，商品编号12100-046)中额外添加其10vol％的FBS(fetal bovine Serum，购自Gibco，10437-028)以及1vol％的抗生素-抗真菌药(Antibiotic-Antimycotic，AA，购自Gibco，商品编号15240-062)配制而成。

3.不含抗生素的细胞株培养基：于改良式Eagle’s最低限度基本培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM，购自Gibco，商品编号12100-046)中添加10vol％的FBS(fetal bovine Serum，购自Gibco，10437-028)配制而成。

4.磷酸缓冲盐溶液(PBS溶液)：购自Gibco，产品编号14200-075。

5.瑞士乳酸菌株:使用TCI357作为实验菌种，此菌种已寄存于中国台湾食品工业发展研究所，寄存编号BCRC910846。此菌种亦寄存于德国国家菌种保藏中心(GermanCollection of Microorganisms and Cell Cultures)，寄存编号为DSM 33107。

6.MRS培养基(BD^TMDifco^TMLactobacilli MRS Broth)，购自Gibco，商品编号12100-046)。

7.裂解液(Triton X-100Lysis Buffer)购自MERCK，编号T8787。

8.西梅水浸提液样品溶液：将[实施例1]中所得到、尚未发酵的西梅水浸提液预先与不含抗生素的细胞株培养基进行1:40的稀释。

9.西梅发酵原液样品溶液：将[实施例1]中所得到的西梅发酵原液(糖度值为4.0°Bx)与不含抗生素的细胞株培养基，以体积比1：40的稀释。

实验步骤

预先将存有瑞士乳酸菌株的冷冻保存管解冻，接种至37℃下的13毫升的MRS培养基中培养16～18个小时以活化所述菌株。然后将经一次活化的瑞士乳酸菌株以1x PBS润洗二次并以8000×g离心10分钟，最后以不含抗生素的细胞株培养基回溶，同时将菌数调整为每毫升1x10⁸CFU。

将人类结肠腺癌细胞株C2BBe1细胞培养于24孔盘，每孔含有7.5×10⁵的细胞于2毫升含FBS的细胞株培养基，放置于5％CO₂、37℃恒温培养箱中培养24小时。接着，移除培养液，以1xPBS润洗细胞二次后，于各孔加入1毫升含有1x10⁸CFU的瑞士乳酸菌株培养1小时后，分别添加100微升的西梅水浸提液样品溶液和西梅发酵原液样品溶液至人类结肠腺癌细胞株C2BBe1中，于37℃、5％CO₂下于培养箱中培养2小时。最后，移除培养液后，以1xPBS润洗各孔二次，将未吸附于Caco-2细胞上的瑞士乳酸菌株洗掉。

于24孔盘各孔中添加裂解液以进行细胞裂解。取细胞裂解液于MRS培养基上进行涂盘，并于37℃下培养72小时，并计数瑞士乳酸菌株的活菌数。最后，以如下公式进行定殖率的计算，并获得本发明瑞士乳酸菌株的定殖率：

定殖率％＝瑞士乳酸菌活菌数/细胞总数*100％

在没有西梅水浸提液或西梅发酵原液的环境下，瑞士乳酸菌的定殖率为135％，并作为空白组。当瑞士乳酸菌于含有西梅水浸提液的环境下培养时，瑞士乳酸菌的定殖率为95％。当瑞士乳酸菌于含有西梅发酵原液的环境下培养时，瑞士乳酸菌的定殖率为210％。由图2可得知，当空白组作为100％时，当瑞士乳酸菌于含有西梅水浸提液的环境下培养时，瑞士乳酸菌的定殖率为70.4％；当瑞士乳酸菌于含有西梅发酵原液的环境下培养时，瑞士乳酸菌的定殖率为155.6％，相对于空白组，本发明乳西梅发酵原液具有优异的肠道定殖效果，定殖率提升55.6％。前述结果显示，本发明西梅发酵原液于投予至人类结肠腺癌细胞株C2BBe1后，可于肠道中增加瑞士乳酸菌株的生长，并提供所欲的功效。

[实施例7]西梅发酵原液对于抑制肠道发炎的效用评估

此处以脂多糖(Lipopolysaccharide，后续简称LPS)诱发巨噬细胞发炎，模拟发炎反应时诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，后续简称iNOS)产生大量一氧化氮(Nitric Oxide，后续简称NO)自由基，NO的测定以格里斯(Griess)试验法进行。虽然Griess试剂系用以测定NO₂ ^-，但由于NO的半衰期很短，将会迅速地被氧化成NO₂ ^-。因此在短时间内，可藉由使用Griess试剂测定NO₂ ^-的量，来间接地表示NO的释放量。

材料与仪器

1.细胞株：小鼠巨噬细胞RAW 264.7，购自美国典型培养物保存中心(AmericanType Culture Collection，ATCC)，产品编号TIB-71。

2.含FBS的巨噬细胞培养基：于改良式Eagle’s最低限度基本培养基(Dulbecco'sModified Eagle Medium，DMEM，购自Gibco，商品编号12100-046)中额外添加其10vol％的FBS(fetal bovine Serum，购自Gibco，10437-028)以及1vol％的抗生素-抗真菌药(Antibiotic-Antimycotic，AA，购自Gibco，商品编号15240-062)配制而成。

3.不含FBS的巨噬细胞培养基：于改良式Eagle’s最低限度基本培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM，购自Gibco，商品编号12100-046)中添加1vol％的抗生素-抗真菌药(Antibiotic-Antimycotic，AA，购自Gibco，商品编号15240-062)配制而成。

4.人类结肠细胞C2BBe1，购自美国典型培养物保存中心(American Type CultureCollection，ATCC)，产品编号CRL-2102。

5.含FBS的结肠细胞培养基：于改良式Eagle’s最低限度基本培养基(Dulbecco'sModified Eagle Medium，DMEM，购自Gibco，商品编号12100-046)中额外添加其10vol％的FBS(fetal bovine Serum，购自Gibco，10437-028)以及1vol％的抗生素-抗真菌药(Antibiotic-Antimycotic，AA，购自Gibco，商品编号15240-062)以及0.01mg/ml holo-transferrin human(购自MERCK，T4132)配制而成。

6.不含FBS的结肠细胞培养基：于改良式Eagle’s最低限度基本培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM，购自Gibco，商品编号12100-046)中添加1vol％的抗生素-抗真菌药(Antibiotic-Antimycotic，AA，购自Gibco，商品编号15240-062)以及0.01mg/ml holo-transferrin human(购自MERCK，T4132)配制而成。

7.磷酸缓冲盐溶液(PBS溶液)：购自Gibco，产品编号14200-075。

8.脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)，购自Sigma，产品编号SI-L2880。

9.Griess试剂组，购自Life Technologies，产品编号1445263。

10.ELISA分光亮度计，Epoch，型号1212171。

11.西梅水浸提液样品溶液：将[实施例1]中所得到、尚未发酵的西梅水浸提液与不含FBS的结肠细胞培养基，以体积比1：3200的方式进行配制(西梅水浸提液的浓度约为0.03125vol％)。再于不含FBS的巨噬细胞培养基中添加LPS，使其中的LPS浓度为300ng/ml。

9.西梅发酵液样品溶液：将[实施例1]中所得到的西梅发酵液(糖度值为2.0°Bx)与不含FBS的结肠细胞培养基，以体积比1：3200的方式进行配制(西梅发酵液的浓度约为0.03125vol％)。再于不含FBS的巨噬细胞培养基中添加LPS，使其中的LPS浓度为300ng/ml。

实验步骤

将小鼠巨噬细胞RAW 264.7以每孔2×10⁴个的方式，接种于每孔含1ml的含FBS的巨噬细胞培养基中，并于5％CO₂、37℃环境下，培养24小时。

将人类结肠细胞C2BBe1以每孔2x10⁴个密度，接种于24孔的嵌入皿(transwellinsert)中，每孔含400μL的含FBS的结肠细胞培养基。并于5％CO₂、37℃环境下，培养24小时。

而后，将各孔的培养基移除，并将含有结肠细胞的嵌入皿移至含有巨噬细胞的孔上。再将细胞分为3组，分别为空白组、对照组以及西梅发酵原液组。针对空白组的细胞，仅加入1mL以不含FBS的巨噬细胞培养基于嵌入皿下层、400μL不含FBS的结肠细胞培养基于上层。针对对照组的细胞，仅加入1mL以不含FBS的巨噬细胞培养基所配制的LPS溶液(LPS浓度为300ng/ml)于嵌入皿下层、400μL不含FBS的结肠细胞培养基于上层；针对西梅发酵液组的细胞，则是加入1mL以不含FBS的巨噬细胞培养基所配制的LPS溶液(LPS浓度为300ng/ml)于嵌入皿下层、400μL以不含FBS的结肠细胞培养基配制的西梅发酵原液样品溶液于上层。将各组细胞于5％CO₂、37℃环境下，培养24小时。

接着，取一新的培养盘，每孔中加入130μL的二次水。再从前方所述各组的下层每孔中取出150μL，加入至前述已含有130μL的二次水的孔中。接着根据Griess试剂组中的说明，配制Griess试剂，并于每孔中加入20μL配制好的Griess试剂，使细胞避光静置30分钟。再以ELISA分光亮度计测量各孔细胞溶液在548nm波长下的光密度值(optical density，OD)，作为吸亮度。OD值读值越大，可间接表示NO的含量浓度越高。以空白组的NO浓度为100％，将各组结果绘示于图3中。

由图3可知，相较于空白组，经LPS刺激的细胞相对产生232.4％的NO。相较于空白组，经LPS刺激且添加西梅发酵原液的细胞相对产生222％的NO。可得知，西梅发酵原液可减少约10.4％的NO产生量。据此可知，西梅发酵液可抑止NO的产生，藉由抑制或改善肠道发炎，减少因发炎所造成的腹痛、腹泻、甚至衍生为发炎性大肠瘜肉与大肠癌。

[实施例8]减脂减肥的人体检测

令9位肥胖受试者(即其体脂率大于25％或BMI值大于24)每日饮用一瓶50mL西梅发酵饮料(其含有12vol％实施例1中所得到的西梅发酵汁液与88vol％水)，连续饮用2周。并且，于饮用前(即第0周)及饮用2周后(即第2周)，以体重机测量此些受试者体重，以体脂计(厂牌：TANITA BC-545F)测量此些受试者全身体脂率和躯干体脂率。并且，第0周的量测结果与第2周的量测结果间的统计学显著差异是藉由学生t-试验来统计分析，如图4至图5所示。

参照图4，相比饮用前(第0周)，持续2周饮用西梅发酵饮料可使全身体脂率减少约0.4％。

参照图5，相比饮用前(第0周)，持续2周饮用西梅发酵饮料可使躯干体脂率减少约0.6％。

由此可知，短期间2周使用西梅发酵汁液即可改善肥胖者的脂肪累积，即西梅发酵汁液具减肥减脂的功效。

[实施例9]肠道菌相的人体检测

为进一步确认西梅发酵液对于人体肠道菌相的调节作用，针对实施例8的受试者于饮用前(第0周)及饮用后(第4周)进行肠道菌相检测。检测方式为采集受试者粪便检体后，先对粪便检体进行DNA纯化，以定量实时聚合酶链反应(quantitative real-timepolymerase chain reaction,qRT-PCR)针对细菌16S核糖体基因(16S ribosomal gene)的高度变异区(hypervariable regions)进行扩增。高度变异区(hypervariable regions)会随着菌属和菌种的不同，在序列组成上有多样性，可用来查看物种间的差异。于本实施例中，选择以16S rRNA基因的V3至V4高度变异区，意即选择16S rRNA基因中的第341至805位进行扩增，前述可参见例如:Transitions in bacterial communities along the 2000kmsalinity gradient of the Baltic Sea(2011)5:1571–1579等文献的全文并于此处以供参考。

本实施例是以次世代定序方式进行，由图尔思生物科技股份有限公司进行微生物体16S扩增子定序(16S Amplicon Sequencing)，将粪便样本进行DNA纯化后，使用由Illumina(Illumina,San Diego,USA)开发的16S宏基因组测序文库制备方案进行16S rRNA基因扩增子测序。简言之，将粪便萃取的DNA采用靶向16S rRNA基因的高度变异区V3至V4的引子扩增。

完成16S rRNA基因的高度变异区V3至V4的扩增，依据MiSeq Reagent Kit v3(Illumina,Wilmington,DE,USA)建双端库(pair-end library)，并于Illumina系统进行高通量定序。定序完成后得到的原始数据(Raw Data)，会经由成对序列拼接(Raw Tags)、过滤得到Clean Tags，再进行去除嵌合体得到可用于后续分析的有效数据(Effective Tags)。接着基于有效数据进行相似度(大于97％)OTUs(Operational Taxonomic Units)聚类和物种分类分析。根据OTUs聚类结果对代表序列做物种注释，得到对应的物种信息和基于物种的丰度分布情况，分析检体内的微生物种类及比例。

参照图6，相比饮用前(第0周)，持续4周饮用西梅发酵饮料可使疣微菌门(Verrucomicrobia)的菌数增加约60％。已有研究指出，疣微菌门(Verrucomicrobia)为肠道益生菌，具有抗发炎、增免疫、减肥功效，前述可参见例如:Akkermansia muciniphilaand its role in regulating host functions.106(2017)171-181文献之全文并于此处以供参考。

参照图7，相比饮用前(第0周)，持续4周饮用西梅发酵饮料可使嗜黏蛋白艾克曼菌(Akkermansia muciniphila)的菌数增加约66.9％。已有研究指出，嗜黏蛋白艾克曼菌(Akkermansia muciniphila)为肠道益生菌，所述菌占成人肠道菌的1％至4％，是一种生长在大肠的绝对厌氧革兰氏阴性菌，可利用黏蛋白(mucin)作为唯一营养来源。艾克曼菌被报导为与糖类和脂肪代谢相关，有助维持体重和身材，前述可参见例如:Akkermansiamuciniphila and its role in regulating host functions.106(2017)171-181文献之全文并于此处以供参考。

参照图8，相比饮用前(第0周)，持续4周饮用西梅发酵饮料可使双歧杆菌属(Bifidobacteria)的菌数增加约54.6％。已有研究指出，增加肠道双歧杆菌属(Bifidobacteria)可提升肠道健康，前述可参见例如:Bifidobacteria and TheirHealth-Promoting Effects.Microbiolspec June 2017vol.5no.3文献之全文并于此处以供参考。

参照图9，相比饮用前(第0周)，持续4周饮用西梅发酵饮料可使嗜胆菌属(Bilophila)的菌数减少约36.2％。已有研究指出，嗜胆菌会制造硫化氢(H₂S)，易造成肠组织发炎及癌化，减少嗜胆菌属(Bilophila)可降低肠道疾病的发生风险，前述可参见例如:Aglycyl radical enzyme enables hydrogen sulfide production by the humanintestinal bacterium Bilophilawadsworthia.PNAS February 19,2019 116(8)3171-3176文献之全文并于此处以供参考。

参照图10，相比饮用前(第0周)，持续4周饮用西梅发酵饮料可使韦荣球菌属(Veillonella)的菌数减少约68.1％。已有研究指出，减少韦荣球菌属(Veillonella)可降低肠躁症机率，前述可参见例如:Immunomodulatory Properties of Streptococcus andVeillonella Isolates from the Human Small Intestine Microbiota 2014；9(12):e114277文献之全文并于此处以供参考。

参照图11，相比饮用前(第0周)，持续4周饮用西梅发酵饮料可使厚壁菌门/拟杆菌门比例(Firmicutes/Bacteroidetesration,F/B ration)降低至0.88倍。已有研究指出，肥胖或体重过重的指标(BMI指数)愈高的人，F/B ration愈高。因此，可得知本发明西梅发酵饮料可降低F/B ration至0.88倍，代表具有降低肥胖或体重过重的功效。

虽然本发明的技术内容已经以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神所作些许的更动与润饰，皆应涵盖于本发明的范畴内，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。

【序列表】

<110>百岳特生物技术(上海)有限公司

<120>西梅发酵原液以及其用于肠道保健功效的用途

<150> US 62/915,058

<151> 2019-10-15

<160> 2

<170>PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 50

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 16S rRNA基因之高度变异区V3至V4 正向引子(F)

<220>

<221>misc_feature

<222> (42)..(42)

<223> n is a, c, g, or t

<400> 1

tcgtcggcagcgtcagatgtgtataagagacagcctacgggnggcwgcag 50

<210> 2

<211> 55

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 16S rRNA基因之高度变异区V3至V4 反向引子(R)

<400> 2

gtctcgtgggctcggagatgtgtataagagacaggactachvgggtatctaatcc 55

Claims (12)

1.一种西梅发酵原液，由包含下列步骤的制备方法制得：

(a)将葡萄糖、西梅果实与水混合以得到一培养液，其中水的重量为西梅果实总重的15-25倍；以及

(b)将所述培养液及复数菌种进行发酵4-15日以得到所述西梅发酵原液，其中所述复数菌种由相对于所述培养液为0.01-0.5wt％的酵母菌、相对于所述培养液为0.01-0.25wt％的乳酸菌及相对于所述培养液为3-10wt％的醋酸菌所组成；

其中，于所述(b)将所述培养液及所述复数菌种进行发酵以得到所述西梅发酵原液的步骤中，醋酸菌为最后加入的菌种。

2.根据权利要求1所述的西梅发酵原液，其特征在于，所述(a)步骤的得到所述培养液的步骤中，葡萄糖的添加量为西梅果实与水总重的8-12wt％。

3.根据权利要求1所述的西梅发酵原液，其特征在于，所述(a)步骤的得到所述培养液的步骤中，包括：

(a1)将葡萄糖、西梅果实与水混合，形成一混合液；以及

(a2)将所述混合液于50-100℃下浸提0.5-1.5小时以得到所述培养液。

4.根据权利求1所述的西梅发酵原液，其特征在于，所述(a)步骤的得到所述培养液的步骤中，包括：

(a1)将西梅果实与水混合，于50-100℃下浸提0.5-1.5小时，形成一西梅水浸提液；以及

(a2)将葡萄糖加入至所述西梅水浸提液以得到所述培养液。

5.根据权利要求1所述的西梅发酵原液，其特征在于，所述(b)将所述培养液及所述复数菌种进行发酵以得到所述西梅发酵原液的步骤中包括：

(b1)于所述培养液中加入酵母菌进行发酵1-2日后形成一第一初发酵液；

(b2)于所述第一初发酵液中加入乳酸菌进行发酵1-3日后形成一第二初发酵液；以及

(b3)于所述第二初发酵液中加入醋酸菌进行发酵2-10日后形成所述西梅发酵原液。

6.根据权利要求5所述的西梅发酵原液，其特征在于，所述(b3)于所述第二初发酵液中加入醋酸菌进行发酵2-10日后形成所述西梅发酵原液的步骤中包括：于所述第二初发酵液中加入醋酸菌进行发酵2-10日后，得到所述西梅发酵原液，将所述西梅发酵原液在50-60℃下减压浓缩及以200-400目筛网过滤后，得到西梅发酵液。

7.根据权利要求1所述的西梅发酵原液，其特征在于，所述(b)将所述培养液及所述复数菌种进行发酵以得到所述西梅发酵原液的步骤包括：将所述培养液及所述复数菌种进行发酵4-15日后，得到所述西梅发酵原液，将所述西梅发酵原液经浓缩及过滤后，得到西梅发酵液。

8.根据权利要求1所述的西梅发酵原液，其特征在于，所述(b)将所述培养液及复数菌种进行发酵以得到所述西梅发酵原液的步骤包括：将所述培养液及所述复数菌种进行发酵4-15日后，得到所述西梅发酵原液；添加一乳糖醇至所述西梅发酵原液以使所述西梅发酵原液的糖度达到60°Bx以形成西梅发酵液。

9.根据权利要求1所述的西梅发酵原液，其特征在于，所述西梅发酵原液的pH值为3.5-4.0，且其糖度为4.0以下。

10.根据权利要求1所述的西梅发酵原液，其特征在于，酵母菌为Saccharomycescerevisiae，乳酸菌为Lactobacillus plantarum，醋酸菌为Acetobacteraceti。

11.一种根据权利要求1至10中任一项所述的西梅发酵原液用于制备一肠道保健的组合物的用途。

12.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，所述肠道保健的组合物系同时具有以下所述功能：提升疣微菌门(Verrucomicrobia)嗜黏蛋白艾克曼菌(Akkermansiamuciniphila)与双歧杆菌属(Bifidobacteria)益生菌的生长、以及减少嗜胆菌属(Bilophila)与韦荣球菌属(Veillonella)坏菌的生长，所述组合物含有12vol％的所述西梅发酵液。

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