TWI772921B - 西梅發酵原液以及其用於腸道保健功效的用途 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種西梅發酵原液，係藉由一包含下列步驟之製備方法製得：將西梅果實與水混合以得到培養液，以及將培養液及複數菌種進行發酵4-15日以得到西梅發酵原液。本發明另提供一種將西梅發酵原液用於腸道保健的用途。

Description

西梅發酵原液以及其用於腸道保健功效的用途

本發明關於一種將西梅發酵原液用於腸道保健的用途。

腸道菌相可以影響到人類的免疫力。研究中指出，腸道中的益菌占比高，人類的免疫力較高。反之，腸道中的壞菌占比高，人類的免疫力則下降。

腸道菌相亦可以影響到人類的肥胖或是體重，已有研究指出，肥胖或體重過重的指標(BMI指數)愈高的人，F/B ration愈高，前述可參見例如：Obesity alters gut microbial ecology.PNAS August 2,2005 102(31)11070-11075、Human intestinal microbiota composition is associated with local and systemic inflammation in obesity.OBESITY(2013)21(12),E607-E615等文獻之全文。

然而，腸道菌相會隨者人類的飲食所改變，因此如提供一種可以改變腸道菌相的食品、保健食品為現在主要解決的問題。免疫力降低，將導致當免疫系統受到真實細菌或病毒的侵害時無法有效發揮功效，使得個體之免疫力大幅下降，暴露於較高風險之中。肥胖或是體重過重，將增加罹患心血管疾病的機率。

有鑑於此，研究或開發一種腸道保健的組合物來有效改善 腸道菌相、以及研究或開發一種提升免疫力的組合物來提升生物體的免疫力是有其需求的。

本發明的一目的在於提供一種西梅發酵液，係藉由一包含下列步驟之製備方法製得：(a)將葡萄糖、西梅果實與水混合以得到一培養液，其中水之重量為西梅果實總重的15-25倍；以及(b)將該培養液及複數菌種進行發酵4-15日以得到該西梅發酵原液，其中該複數菌種包括相對於該培養液為0.01-0.5wt%的酵母菌、相對於該培養液為0.01-0.25wt%的乳酸菌及相對於該培養液為3-10wt%的醋酸菌。

在一些實施例中，於(a)步驟之得到該培養液的步驟中，葡萄糖的添加量為西梅果實與水總重的8-12wt%。

在一些實施例中，於(a)步驟之得到該培養液的步驟中包括：(a1)將葡萄糖、西梅果實與水混合，形成一混合液；以及(a2)將該混合液於50-100℃下萃取0.5-1.5小時以得到該培養液。

在一些實施例中，於(a)步驟之得到該培養液的步驟中包括：(a1)將西梅果實與水混合，於50-100℃下萃取0.5-1.5小時，形成一西梅水萃液；以及(a2)將葡萄糖加入至該西梅水萃液以得到該培養液。

在一些實施例中，於(b)將該培養液及該複數菌種進行發酵以得到該西梅發酵原液的步驟中，醋酸菌為最後加入的菌種。

在一些實施例中，於(b)將該培養液及該複數菌種進行發酵以得到該西梅發酵原液的步驟，包括：(b1)於該培養液中加入酵母菌 進行發酵1-2日後形成一第一初發酵液；(b2)於該第一初發酵液中加入乳酸菌進行發酵1-3日後形成一第二初發酵液；以及(b3)於該第二初發酵液中加入醋酸菌進行發酵2-10日後形成該西梅發酵原液。

在一些實施例中，於(b3)於該第二初發酵液中加入醋酸菌進行發酵2-10日後形成該西梅發酵液的步驟中包括：於該第二初發酵液中加入醋酸菌進行發酵2-10日後，得到一西梅發酵原液，將該西梅發酵原液在50-60℃下減壓濃縮及以200-400目篩網過濾後，得到該西梅發酵液。

在一些實施例中，於(b)將該培養液及該複數菌種進行發酵以得到該西梅發酵原液的步驟包括：將該培養液及該複數菌種進行發酵4-15日後，得到一西梅發酵原液，將該西梅發酵原液經濃縮及過濾後，得到該西梅發酵液。

在一些實施例中，於(b)將該培養液及複數菌種進行發酵以得到該西梅發酵原液的步驟包括：將該培養液及該複數菌種進行發酵4-15日後，得到一西梅發酵原液；添加一乳醣醇至該西梅發酵原液以使該西梅發酵原液的糖度達到60°Bx以形成該西梅發酵液。

在一些實施例中，西梅發酵原液的pH值為3.5-4.0，且其糖度為4.0以下。

在一些實施例中，酵母菌為Saccharomyces cerevisiae，乳酸菌為Lactobacillus plantarum，醋酸菌為Acetobacter aceti。

根據一些實施例，本發明提供一種西梅發酵原液用於製備一腸道保健的組合物的用途。

在一些實施例中，於腸道保健的組合物係同時具有以下所述功能的至少其中兩種：提升腸道益生菌的生長、以及減少壞菌的生長。

在一些實施例中，腸道保健的組合物用於提升疣微菌門(Verrucomicrobia)、嗜黏蛋白艾克曼菌(Akkermansia muciniphila)、以及雙歧桿菌屬(Bifidobacteria)益生菌的生長，則該腸道保健的組合物含有12vol%的該西梅發酵液。

在一些實施例中，腸道保健的組合物用於減少嗜膽菌屬(Bilophila)、以及韋榮球菌屬(Veillonella)壞菌的生長，則該腸道保健的組合物含有12vol%的該西梅發酵液。

根據一些實施例中，本發明提供一種西梅發酵原液用於製備一預防肥胖或體重過重的組合物的用途。

在一些實施例中，其中該預防肥胖或體重過重的組合物係降低厚壁菌門/擬桿菌門比例。

綜上，根據任一實施例的西梅的發酵液、或是由西梅發酵原液所製成西梅發酵物，可用以改善腸道菌相、預防肥胖、或是預防體重過重。在一實施例中，在發酵過程中分次依序加入複數菌種並且控制使用各菌種的發酵時間，以使得菌種能有最佳的生長，並且進一步提升西梅的發酵液中有效成分濃度。在一些實施例中，藉由使用特定的混合成分萃取物來進行發酵，所得到的西梅的發酵液可同時以至少兩種以上的路徑來進行腸道保健。在一些實施例中，藉由使用特定的混合成分萃取物來進行發酵，所得到的西梅發酵液可提升益菌占比，也藉此預防肥 胖、或是預防體重過重。

[圖1]係總多醣含量測試結果的比較數據圖。

[圖2]係腸道相對定殖率結果數據圖。

[圖3]係相對一氧化氮含量的測試結果數據圖。

[圖4]係全身體脂率結果數據圖。

[圖5]係軀幹體脂率結果數據圖。

[圖6]係腸道疣微菌門(Verrucomicrobia)的相對菌數百分比的數據圖。

[圖7]係腸道嗜黏蛋白艾克曼菌(Akkermansia muciniphila)的相對菌數百分比的數據圖。

[圖8]係腸道雙歧桿菌屬(Bifidobacteria)的相對菌數百分比的數據圖。

[圖9]係腸道嗜膽菌屬(Bilophila)的相對菌數百分比的數據圖。

[圖10]係腸道韋榮球菌屬(Veillonella)的相對菌數百分比的數據圖。

[圖11]係腸道菌相厚壁菌門/擬桿菌門比例的比較數據圖。

圖式中「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上的差異越顯著。

以下將描述本案的部分具體實施態樣。在不背離本案精神 下，本案尚可以多種不同形式之態樣來實踐，不應將保護範圍限於說明書所具體陳述的條件。

本案使用Excel軟體進行統計分析。數據以平均值±標準差(SD)表示，各組之間的差異以學生t檢驗(student's t-test)進行分析。

本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在正負10%的範圍內，最佳為在正負5%的範圍內。

在一些實施例中，西梅發酵液中為使用西梅的果實進行發酵，其中西梅學名為Prunus domestica，為薔薇科李屬的植物，其果實皮薄多汁。又稱歐洲李，主要分布在西亞、歐洲以及中國等地。本發明使用的來自南美洲智利國家的西梅果實(供應商Diana food CHILE SpA)。所指「西梅果實」可以包括其果肉/果實、含有果皮(外果皮、中間果皮和/或內果皮)的果肉/果實、或含有籽的果肉/果實。

本案所述的西梅發酵液，如同前述，在一些實施例中係指以水萃取含西梅果實得到西梅水萃液後，再將此西梅水萃液經過特定發酵程序，形成西梅發酵液。

在一些實施例中，西梅發酵液可經由其他合適的處理步驟，得到西梅發酵液中所含有之西梅發酵物。舉例而言，「西梅發酵物」可為由西梅發酵液經乾燥而得之粉末。

在一些實施例中，西梅發酵液藉由一包含下列步驟之製備方法製得：(a)將葡萄糖以及西梅果實與水混合以得到培養液，其中水之重量為西梅果實總重的15-25倍；以及(b)將培養液及複數菌種進行發酵4-15日以得到西梅發酵液。

在一些實施例中，葡萄糖的添加量為西梅果實與水總重的8-12wt%。藉由添加葡萄糖，使培養液中具有足夠的糖度以確保發酵時菌種可以有足夠的養份，讓後續發酵可順利進行。

在一些實施例中，先將即西梅果實與水混合，於50-100℃下浸泡0.5-1.5小時以進行萃取，得到一西梅水萃液；再將葡萄糖加入至西梅水萃液中得到培養液。

而在另一些實施例中，可先將葡萄糖、西梅果實與水一起混合，形成混合液；再將混合液於50-100℃下浸泡萃取0.5-1.5小時以得到培養液。藉由將葡萄糖與西梅果實同時混合來進行萃取程序，由於不需再開啟萃取設備添加葡萄糖、且加入的葡萄糖可再經過高溫環境處理，有助於葡萄糖的溶解且可降低原料受污染風險。

在獲得培養液後，可將培養液及複數菌種進行發酵4-15日以得到西梅發酵液。其中，複數菌種包括相對於培養液為0.01-0.5wt%的酵母菌、相對於培養液為0.01-0.25wt%的乳酸菌及相對於培養液為3-10wt%的醋酸菌(Acetobacter aceti)。在一些實施例中，培養液不另濾除其內部的固形物(萃取後的西梅果實)而直接於其中加入菌種進行發酵(此時培養液的總重為固形物與液態的重量)，藉以利用菌種進一步提取固形物中的活性成分。在另一些實施例中，可先濾除培養液內部的固形物，再添加菌種進行發酵(此時培養液的總重為液態的重量)，藉此可避免當後續發酵反應過度時，產生其他較複雜且非所欲的成分而可較佳地控制萃取物品質。

在一些實施例中，將培養液及複數菌種進行發酵以得到西 梅發酵液的步驟中，酵母菌、乳酸菌以及醋酸菌可以同時加入至培養液中。

在一些實施例中，將培養液及複數菌種進行發酵以得到西梅發酵液的步驟中，係將酵母菌、乳酸菌、以及醋酸菌以此特定順序進行分批發酵。舉例而言，在一些實施例中，先於培養液中加入酵母菌進行發酵1-2日後形成第一初發酵液；再於第一初發酵液中加入乳酸菌進行發酵1-3日後形成第二初發酵液；以及於第二初發酵液中加入醋酸菌進行發酵2-10日後形成西梅發酵液。

藉由先於培養液中添加酵母菌，可先將培養液中的糖份(例如葡萄糖)經發酵轉化為乙醇，而乙醇有助於萃取西梅內的有效成分。而後，於第一初發酵液中加入乳酸菌，可使第一初發酵液內尚未反應的糖份經發酵而轉化為乳酸，以進一步消耗其中之糖份，進而降低第二初發酵液所含糖度。由於在第二初發酵液中產生了乳酸，其將會進一步改變整體反應環境(例如使第二初發酵液的pH值下降)，對於萃取西梅內的有效成分亦有影響與助益(使溶於酸性溶液的有效成分更易萃取出)。接著，再於第二初發酵液中加入醋酸菌，藉此可使第二初發酵液內的乙醇轉化為乙酸。而由於乙醇被進一步消耗，酵母菌可進一步地繼續將糖份轉化為乙醇，使酵母菌進行的反應更為完全，糖度進一步降低。在一些實施例中，西梅發酵液的糖度為4.0以下，以確保發酵反應完全。在一些實施例中，西梅發酵液的pH值約為3.5-4.0，糖度約為3.0-4.0°Bx。

在另一些實施例中，將培養液及複數菌種進行發酵以得到西梅發酵液的步驟中，酵母菌與乳酸菌彼此間的添加順序不限，但醋酸 菌為最後加入的菌種。藉此，可讓發酵液中確保已經產生乙醇，使醋酸菌可更佳地生長、進行乙醇轉化反應，進而最終降低西梅發酵液中的乙醇含量。在一些實施例中，醋酸菌進行發酵的時間長於酵母菌的發酵時間以及長於乳酸菌的發酵時間，藉此使醋酸菌可更完全地消耗發酵液中的乙醇。在一些實施例中，醋酸菌進行發酵的時間可為5-10日。

在一些實施例中，可先於培養液中同時添加酵母菌與乳酸菌進行發酵，再於其中加入醋酸菌發酵得到西梅發酵液。因酵母菌與乳酸菌兩者的發酵反應皆較為快速，其所需發酵時間較為接近，而藉由將醋酸菌於酵母菌、乳酸菌後再加入，可讓發酵液在酵母菌、乳酸菌階段先以較短時間(例如共同發酵1日)同時完成其發酵反應，能減少整體發酵所需時間。

在一些實施例中，酵母菌、乳酸菌、以及醋酸菌可於25-40℃下進行發酵反應。若溫度超過40℃，則將會使菌種失去活性；若溫度低於25℃，則發酵反應的速率將過低、甚至無法進行發酵反應，不利於西梅發酵液的取得。在一些實施例中，酵母菌、乳酸菌、以及醋酸菌可於28-32℃下進行發酵反應。

在一些實施例中，所使用的酵母菌可以是市售的啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。舉例而言，可為向財團法人食品工作發展研究所採購之寄存編號BCRC20271(國際寄存ATCC26602)菌株的啤酒酵母。

在一些實施例中，所使用的乳酸菌可以是為市售的瑞士乳酸菌(Lactobacillus helveticus)、胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophiles)或植物乳桿菌。舉例而言，可採用瑞士乳酸菌TCI357(財團法人食品工作發展研究所寄存編號BCRC910846、國際寄存編號DSM33107)、寄存編號BCRC910805(國際寄存DSM33108)菌株的胚芽乳酸桿菌TCI028、寄存編號BCRT910760(國際寄存DSM32451)菌株的胚芽乳酸桿菌TCI378、或寄存編號BCRC910636(國際寄存DSM28121)菌株的嗜熱鏈球菌TCI633。

在一些實施例中，所使用的醋酸菌係向美國菌種中心(American Type Culture Collection)所採購、寄存編號BCRC11688(國際寄存ATCC15973)菌株的醋酸菌。

在一些實施例中，當培養液完成所有菌種的發酵步驟後(例如經過醋酸菌發酵後)，將先得到西梅發酵原液。而後，將此西梅發酵原液經過濾、濃縮，再得到西梅發酵液。舉例而言，在一些實施例中，可將培養液及複數菌種進行發酵4-15日後所得到西梅發酵原液，經適當孔洞大小的濾網(例如200-400目篩網)過濾，再將過濾後的液體於50℃-60℃下進行減壓濃縮，以得到西梅發酵液。在一些實施例中，亦可先進行減壓濃縮，再進行過濾步驟。藉由濃縮步驟，可再進一步調整西梅發酵液中的成分濃度。

在一些實施例中，可於西梅發酵原液中添加寡醣、或是乳醣醇，以使最後得到的西梅發酵液具有所欲的糖度。舉例而言，在一些實施例中，可於西梅發酵原液中添加乳醣醇，使西梅發酵原液的糖度達到40°Bx-60°Bx。寡糖係指由3-10個單醣分子聚合而成的低聚糖。其中，寡 糖可為果寡糖、半乳寡糖、木寡糖、或異麥芽寡糖等等。在一些實施例中，添加乳醣醇可調整西梅發酵原液的風味，且有助於西梅發酵液的保存。

將此西梅水萃液經過特定發酵程序後所形成的西梅發酵原液可具有較高的總多醣含量。舉例而言，在一些實施例中，西梅發酵原液的總多醣含量為40000-45000μg/ml，而西梅水萃液的總多醣含量為15000-20000μg/ml。據此可知，藉由本案發酵方式所得之西梅發酵原液，其總多醣含量可被大幅提升215%，故本案的發酵方式確實可有效改變西梅水萃液中的所含成分，有效提升活性成分。此外，在一些實施例中，此總多醣含量亦可作為西梅發酵原液的檢驗基準。

此外，根據本案的一些實施例，以水萃取西梅果實所得到之西梅水萃液，在經過特定發酵程序後所形成的西梅發酵原液，可提升腸道益生菌以達到腸道保健之用途。故此西梅發酵原液可用於製備一腸道保健的組合物的用途。

在一些實施例中，前述的各組合物可為醫藥組合物、保養品組合物、食品組合物、保健食品組合物。

醫藥組合物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於經腸道地(enterally)、非經腸道地(parenterally)或局部地(topically)投藥的劑型。例如可為：注射品(injection)[例如，無菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、無菌的粉末(sterile powder)、外部製劑(external preparation)或其他類似物。

醫藥組合物可進一步包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，醫藥上可接受的載劑可包含下列一種或多種載劑：乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤濕劑(wetting agent)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些載劑的選用與數量是熟習此項技術人員可視情況進行選擇的。

在一些實施例中，醫藥上可接受的載劑可包含下列一種溶劑：水、生理鹽水(normal saline)、磷酸鹽緩衝生理鹽水(phosphate buffered saline，PBS)、含有醇的水性溶液(alcohol containing aqueous solution)以及其他任何合適的溶劑。

在一些實施例中，該醫藥組合物可由下列所述的任一種非經腸道途徑(parenteral routes)來投藥：皮下注射(subcutaneous injection)、表皮內注射(intraepidermal injection)、皮內注射(intradermal injection)以及病灶內注射(intralesional injection)。

在一些實施例中，醫藥組合物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於局部施用於皮膚上的外部製劑(external preparation)。舉例而言，其可為下列所述的任一種，但不限於此：乳劑 (emulsion)、凝膠(gel)、軟膏(ointment)、乳霜(cream)、貼片(patch)、擦劑(liniment)、粉末(powder)、氣溶膠(aerosol)、噴霧(spray)、乳液(lotion)、乳漿(serum)、糊劑(paste)、泡沫(foam)、滴劑(drop)、懸浮液(suspension)、油膏(salve)以及繃帶(bandage)。

在一些實施例中，外部製劑是藉由將醫藥組合物與一為熟習此項技藝者所詳知的基底(base)相混合而製成。

在一些實施例中，該基底可包含下列一種或多種的添加劑(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氫化合物(hydrocarbons)[諸如石油膠(petroleum,jelly)以及白凡士林(white petrolatum,)]、蠟(wax)[諸如石蠟(paraffin)以及黃蠟(yellow wax)]、保存劑(preserving agents)、抗氧化劑(antioxidants)、界面活性劑(surfactants)、吸收增強劑(absorption enhancers)、安定劑(stabilizing agents)、膠凝劑(gelling agents)[諸如卡波普®974P(carbopol®974P)、微結晶纖維素(microcrystalline cellulose)以及羧基甲基纖維素(carboxymethylcellulose)]、活性劑(active agents)、保濕劑(humectants)、氣味吸收劑(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH調整劑(pH adjusting agents)、螯合劑(chelating agents)、乳化劑(emulsifiers)、閉塞劑(occlusive agents)、軟化劑(emollients)、增稠劑(thickeners)、助溶劑(solubilizing agents)、滲透增強劑(penetration enhancers)、抗刺激劑(anti-irritants)、著色劑(colorants)以及推進劑(propellants)等。有關這些添加劑的選用 與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

在一些實施例中，保養品中可包含有一被廣泛地使用於保養品製造技術之可接受的佐劑(acceptable adjuvant)。例如，該可接受的佐劑可包含下列一種或多種佐劑：溶劑、膠凝劑、活性劑、防腐劑、抗氧化劑、遮蔽劑(screening agent)、螯合劑、界面活性劑、染色試劑(coloring agent)、增稠劑(thickening agent)、填料(filler)、香料以及氣味吸收劑。可根據實際需求對這些試劑的選用與數量進行合適的調整。

在一些實施例中，保養品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於護膚(skincare)或化妝(makeup)的形式，其可為下列中的任一種，但不限於此：水性溶液(aqueous solution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oily solution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或複合型之乳劑、凝膠、軟膏、乳霜、面膜(mask)、貼片、貼布(pack)、擦劑、粉末、氣溶膠、噴霧、乳液、乳漿、糊劑、泡沫、分散液、滴劑、慕斯(mousse)、防曬油(sunblock)、化妝水(tonic water)、粉底(foundation)、卸妝產品(makeup remover products)、肥皂(soap)以及其他身體清潔產品(body cleansing products)等。

在一些實施例中，保養品亦可與下列中之已知活性的外用劑(external use agents)的一種或多種一起合併使用：美白劑(whitening agents)[諸如維生素A酸(tretinoin)、兒茶素(catechin)、麴酸、熊果苷以及維生素C]、保濕劑、殺菌劑(bactericides)、紫外線吸收劑 (ultraviolet absorbers)、植物萃取物(plant extracts)[諸如蘆薈萃取物(aloe extract)]、皮膚營養劑(skin nutrients)、麻醉劑(anesthetics)、抗痘劑(anti-acne agents)、止癢劑(antipruritics)、止痛劑(analgesics)、抗皮膚炎劑(antidermatitis agents)、抗過角化劑(antihyperkeratolytic agents)、抗乾皮膚劑(anti-dry skin agents)、抗汗劑(antipsoriatic agents)、抗老化劑(antiaging agents)、抗皺劑(antiwrinkle agents)、抗皮脂溢出劑(antiseborrheic agents)、傷口治療劑(wound-healing agents)、皮質類固醇(corticosteroids)以及激素(hormones)。有關這些外用劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

在一些實施例中，醫藥組合物可被當作食品添加物(food additive)，藉由習知方法於原料製備時添加，或是於食品的製作過程中添加，而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食品產品。

在一些實施例中，食品的種類可為但不限於：飲料(beverages)、發酵食品(fermented foods)、烘培產品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食補充品(dietary supplements)。

下列範例中的實驗步驟若無特別敘明，即在室溫(25±5℃)、常壓(1atm)下進行。

[實施例1]西梅發酵原液的製備

首先將西梅(Prunus domestica)的全果實(若有特殊部位可 補充，例如含皮)打碎成粒徑12mm以下的西梅顆粒。將西梅顆粒與水以1：20的比例混合均勻以得到原料混合液。然後，將原料混合液在80℃-100℃下浸泡萃取0.5~1小時，其中一較佳實施例為將原料混合液在95℃下浸泡萃取0.5小時，得到西梅水萃液。而後，在尚未回溫至室溫前，根據西梅水萃液的總重，添加8wt%的葡萄糖於西梅水萃液中，得到培養液。培養液此時的pH值為5.4，糖度值為10.7°Bx。

待培養液冷卻至室溫後，先添加培養液0.1wt%的BCRC20271菌株之啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)於培養液中，進行發酵1天以形成第一初發酵液。再添加相對於培養液為0.05wt%的TCI378菌株之胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)於第一初發酵液內，進行發酵1天以形成第二初發酵液。最後添加相對於培養液為5wt%的BCRC11688菌株之醋酸菌(Acetobacter aceti)於第二初發酵液內，進行發酵5天以得到西梅發酵原液。前述各發酵階段皆於30℃下進行。西梅發酵原液的pH值為3.5±1，糖度值為4.0°Bx，顯示大部分的糖份皆已反應。

[實施例2]西梅發酵液的製備

承上述實施例1，近一步將西梅發酵原液在60℃下減壓濃縮及以200目篩網過濾西梅發酵原液，並將乳醣醇及西梅發酵原液以2：1之重量比混合，以得到糖度達到60°Bx的西梅發酵液。

[實施例3]西梅發酵原液的製備

將西梅果實以及水以1：20之重量比混合後，再根據總重量，添加10wt%的葡萄糖於其中，得到混合液。將混合液於95℃下浸泡 萃取1小時，得到培養液。培養液此時的pH值為5.4，糖度值為10.7°Bx。

待培養液冷卻至室溫後，先添加培養液0.1wt%的BCRC20271菌株之啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)於培養液中，進行發酵1天以形成第一初發酵液。再添加相對於培養液為0.05wt%的TCI378菌株之胚芽乳酸桿菌於第一初發酵液內，進行發酵1天以形成第二初發酵液。最後添加相對於培養液為5wt%的BCRC11688菌株之醋酸菌(Acetobacter aceti)於第二初發酵液內，進行發酵5天以得到西梅發酵原液。前述各發酵階段皆於30℃下進行。

[實施例4]西梅發酵原液的製備

將西梅果實以及水以1：20之重量比混合後，在95℃下浸泡萃取1小時，得到西梅水萃液。而後，在尚未回溫至室溫前，根據總重量，添加10wt%的葡萄糖於西梅水萃液中，得到培養液。培養液此時的pH值為5.4，糖度值為10.7°Bx。

待培養液冷卻至室溫後，先添加培養液0.1wt%的BCRC20271菌株之啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)以及相對於培養液為0.05wt%的TCI378菌株之胚芽乳酸桿菌於培養液中，進行發酵1天。再添加相對於培養液為5wt%的BCRC11688菌株之醋酸菌(Acetobacter aceti)於其中，進行發酵5天以得到西梅發酵原液。前述各發酵階段皆於30℃下進行。

[實施例5]總多醣含量測試

本案以D-葡萄糖(D-Glucose)當量作為總多醣相對含量的表示。故以D-葡萄糖(D-Glucose)作為標準品製作標準曲線(Standard curve)。

首先，精密秤取D-葡萄糖(D-Glucose)(購自J.T.Baker，料號：1916-01)10mg，置於10mL容量瓶中，以二次蒸餾水(ddH₂O)定量至10mL，配置成1mg/mL濃度之D-葡萄糖溶液。

接著，將上述標準品進行系列稀釋，以二次蒸餾水稀釋為0,20,50,100,150,200μg/mL之D-葡萄糖溶液。可參酌下表一之方式配置標準溶液：

D-葡萄糖溶液標準溶液配置後，取標準溶液各100μL放置於玻璃試管中，再各加入500μL濃度為5%的苯酚溶液(Phenol)(購自Merck，料號：1.00206.0250)。接著緩慢加入2.5mL濃度為95.5%，比重1.84之濃硫酸溶液(H₂SO₄)(購自Showa，料號：1970-5250)。經由渦旋(vortex)確保無氣泡後，靜置20分鐘。最後，取200μL樣品放入96孔培養盤，於490nm下測定其吸光值，並繪製標準曲線。

將[實施例1]所得到所得的、尚未發酵的西梅水萃液，以水稀釋200倍至1200ml，並取100μL的體積至玻璃試管中，每組樣品需三重複。之後，加入500μL濃度為5%的苯酚溶液(Phenol)(購自Merck，料號：1.00206.0250)。

另將[實施例1]中所得到的西梅發酵原液(糖度值為4.0°Bx)，以水稀釋200倍至1200ml，並取100μL的體積至玻璃試管中，每組樣品需三重複。之後，加入500μL濃度為5%的苯酚溶液(Phenol)(購自Merck，料號：1.00206.0250)。

接著緩慢加入2.5mL濃度為95.5%，比重1.84之濃硫酸溶液(H₂SO₄)(購自Showa，料號：1970-5250)。經由渦旋(vortex)確保無氣泡後，靜置20分鐘。最後，取200μL樣品放入96孔培養盤，於490nm下測定其吸光值，並以內插法算出實驗濃度後再乘回稀釋倍數以取得原樣品濃度，舉例而言，原樣品濃度(μg/mL)=實驗濃度(μg/mL)x200。

圖1為本發明西梅發酵原液的總多醣含量檢測數據圖。由圖1可見，西梅水萃液的總多醣含量為19600μg/mL，西梅發酵原液的總多醣含量為42200μg/mL，與西梅水萃液相較之下，西梅發酵原液的總多醣含量顯著的提升1.15倍。本實施例的結果顯示，本發明西梅發酵原液會大量釋出多醣。此總多醣含量亦可作為西梅發酵原液的檢驗基準。

[實施例6]西梅發酵原液對於腸道定殖的效用評估

此處以瑞士乳酸菌作為腸道益生菌的指標，將瑞士乳酸菌與人類結腸腺癌細胞株C2BBe1共同培養以模擬腸道環境，並觀察分別添加西梅水萃液和西梅發酵液後，瑞士乳酸菌存活於腸道的菌數以計算定殖率。若瑞士乳酸菌的菌數越多代表定殖率效果較佳。

材料與儀器

1.細胞株：人類結腸腺癌細胞株C2BBe1，購自美國典型培養物保存 中心(American Type Culture Collection，ATCC)，產品編號CRL-2102。

2.含FBS的細胞株培養基：於改良式Eagle’s最低限度基本培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM，購自Gibco，商品編號12100-046)中額外添加其10vol%的FBS(fetal bovine Serum，購自Gibco，10437-028)以及1vol%的抗生素-抗真菌藥(Antibiotic-Antimycotic，AA，購自Gibco，商品編號15240-062)配製而成。

3.不含抗生素的細胞株培養基：於改良式Eagle’s最低限度基本培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM，購自Gibco，商品編號12100-046)中添加10vol%的FBS(fetal bovine Serum，購自Gibco，10437-028)配製而成。

4.磷酸緩衝鹽溶液(PBS溶液)：購自Gibco，產品編號14200-075。

5.瑞士乳酸菌株：使用TCI357作為實驗菌種，此菌種已寄存於財團法人食品工業發展研究所，寄存編號BCRC910846。此菌種亦寄存於德國國家菌種保藏中心(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)，寄存編號為DSM 33107。

6.MRS培養基(BD^TM Difco^TM Lactobacilli MRS Broth)，購自Gibco，商品編號12100-046)。

7.裂解液(Triton X-100 Lysis Buffer)購自MERCK，編號T8787。

8.西梅水萃液樣品溶液：將[實施例1]中所得到、尚未發酵的西梅水萃液預先與不含抗生素的細胞株培養基進行1：40的稀釋。

9.西梅發酵原液樣品溶液：將[實施例1]中所得到的西梅發酵原液(糖度值為4.0°Bx)與不含抗生素的細胞株培養基，以體積比1：40的稀釋。

實驗步驟

預先將存有瑞士乳酸菌株的冷凍保存管解凍，接種至37℃下的13毫升的MRS培養基中培養16~18個小時以活化該菌株。然後將經一次活化的瑞士乳酸菌株以1x PBS潤洗二次並以8000×g離心10分鐘，最後以不含抗生素的細胞株培養基回溶，同時將菌數調整為每毫升1x10⁸CFU。

將人類結腸腺癌細胞株C2BBe1細胞培養於24孔盤，每孔含有7.5×10⁵的細胞於2毫升含FBS的細胞株培養基，放置於5% CO2、37℃恒溫培養箱中培養24小時。接著，移除培養液，以1x PBS潤洗細胞二次後，於各孔加入1毫升含有1x10⁸CFU的瑞士乳酸菌株培養1小時後，分別添加100微升的西梅水萃液樣品溶液和西梅發酵原液樣品溶液至人類結腸腺癌細胞株C2BBe1中，於37℃、5%CO₂下於培養箱中培養2小時。最後，移除培養液後，以1xPBS潤洗各孔二次，將未吸附於Caco-2細胞上之瑞士乳酸菌株洗掉。

於24孔盤各孔中添加裂解液以進行細胞裂解。取細胞裂解液於MRS培養基上進行塗盤，並於37℃下培養72小時，並計數瑞士乳酸菌株之活菌數。最後，以如下公式進行定殖率的計算，並獲得本發明瑞士乳酸菌株的定殖率：定殖率%=瑞士乳酸菌活菌數/細胞總數*100%

在沒有西梅水萃液或西梅發酵原液的環境下，瑞士乳酸菌的定殖率為135%，並作為空白組。當瑞士乳酸菌於含有西梅水萃液的環境下培養時，瑞士乳酸菌的定殖率為95%。當瑞士乳酸菌於含有西梅發酵原液的環境下培養時，瑞士乳酸菌的定殖率為210%。由圖2可得知，當空白組作為100%時，當瑞士乳酸菌於含有西梅水萃液的環境下培養時，瑞士乳酸菌的定殖率為70.4%；當瑞士乳酸菌於含有西梅發酵原液的環境下培養時，瑞士乳酸菌的定殖率為155.6%，相對於空白組，本發明乳西梅發酵原液具有優異的腸道定殖效果，定殖率提升55.6%。前述結果顯示，本發明西梅發酵原液於投予至人類結腸腺癌細胞株C2BBe1後，可於腸道中增加瑞士乳酸菌株的生長，並提供所欲之功效。

[實施例7]西梅發酵原液對於抑制腸道發炎的效用評估

此處以脂多醣(Lipopolysaccharide，後續簡稱LPS)誘發巨噬細胞發炎，模擬發炎反應時誘導型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，後續簡稱iNOS)產生大量一氧化氮(Nitric Oxide，後續簡稱NO)自由基，NO的測定以格里斯(Griess)試驗法進行。雖然Griess試劑係用以測定NO₂ ^-，但由於NO的半衰期很短，將會迅速地被氧化成NO₂ ^-。因此在短時間內，可藉由使用Griess試劑測定NO₂ ^-的量，來間接地表示NO的釋放量。

材料與儀器

1.細胞株：小鼠巨噬細胞RAW 264.7，購自美國典型培養物保存中心(American Type Culture Collection，ATCC)，產品編號TIB-71。

2.含FBS的巨噬細胞培養基：於改良式Eagle’s最低限度基本培養基 (Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM，購自Gibco，商品編號12100-046)中額外添加其10vol%的FBS(fetal bovine Serum，購自Gibco，10437-028)以及1vol%的抗生素-抗真菌藥(Antibiotic-Antimycotic，AA，購自Gibco，商品編號15240-062)配製而成。

3.不含FBS的巨噬細胞培養基：於改良式Eagle’s最低限度基本培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM，購自Gibco，商品編號12100-046)中添加1vol%的抗生素-抗真菌藥(Antibiotic-Antimycotic，AA，購自Gibco，商品編號15240-062)配製而成。

4.人類結腸細胞C2BBe1，購自美國典型培養物保存中心(American Type Culture Collection，ATCC)，產品編號CRL-2102。

5.含FBS的結腸細胞培養基：於改良式Eagle’s最低限度基本培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM，購自Gibco，商品編號12100-046)中額外添加其10vol%的FBS(fetal bovine Serum，購自Gibco，10437-028)以及1vol%的抗生素-抗真菌藥(Antibiotic-Antimycotic，AA，購自Gibco，商品編號15240-062)以及0.01mg/ml holo-transferrin human(購自MERCK，T4132)配製而成。

6.不含FBS的結腸細胞培養基：於改良式Eagle’s最低限度基本培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM，購自Gibco，商品編號12100-046)中添加1vol%的抗生素-抗真菌藥(Antibiotic-Antimycotic，AA，購自Gibco，商品編號15240-062)以 及0.01mg/ml holo-transferrin human(購自MERCK，T4132)配製而成。

7.磷酸緩衝鹽溶液(PBS溶液)：購自Gibco，產品編號14200-075。

8.脂多醣(Lipopolysaccharides，LPS)，購自Sigma，產品編號SI-L2880。

9.Griess試劑組，購自Life Technologies，產品編號1445263。

10.ELISA分光光度計，Epoch，型號1212171。

11.西梅水萃液樣品溶液：將[實施例1]中所得到、尚未發酵的西梅水萃液與不含FBS的結腸細胞培養基，以體積比1：3200的方式進行配製(西梅水萃液的濃度約為0.03125vol%)。再於不含FBS的巨噬細胞培養基中添加LPS，使其中之LPS濃度為300ng/ml。

12.西梅發酵液樣品溶液：將[實施例1]中所得到的西梅發酵液(糖度值為2.0°Bx)與不含FBS的結腸細胞培養基，以體積比1：3200的方式進行配製(西梅發酵液的濃度約為0.03125vol%)。再於不含FBS的巨噬細胞培養基中添加LPS，使其中之LPS濃度為300ng/ml。

實驗步驟

將小鼠巨噬細胞RAW 264.7以每孔2×10⁴個的方式，接種於每孔含1ml之含FBS的巨噬細胞培養基中，並於5%CO₂、37℃環境下，培養24小時。

將人類結腸細胞C2BBe1以每孔2x10⁴個密度，接種於24孔的嵌入皿(transwell insert)中，每孔含400μL之含FBS的結腸細胞培養基。並於5%CO₂、37℃環境下，培養24小時。

而後，將各孔的培養基移除，並將含有結腸細胞的嵌入皿 移至含有巨噬細胞之孔上。再將細胞分為3組，分別為空白組、對照組以及西梅發酵原液組。針對空白組的細胞，僅加入1mL以不含FBS的巨噬細胞培養基於嵌入皿下層、400μL不含FBS的結腸細胞培養基於上層。針對對照組的細胞，僅加入1mL以不含FBS的巨噬細胞培養基所配製的LPS溶液(LPS濃度為300ng/ml)於嵌入皿下層、400μL不含FBS的結腸細胞培養基於上層；針對西梅發酵液組的細胞，則是加入1mL以不含FBS的巨噬細胞培養基所配製的LPS溶液(LPS濃度為300ng/ml)於嵌入皿下層、400μL以不含FBS的結腸細胞培養基配製之西梅發酵原液樣品溶液於上層。將各組細胞於5%CO₂、37℃環境下，培養24小時。

接著，取一新的培養盤，每孔中加入130μL的二次水。再從前方所述各組的下層每孔中取出150μL，加入至前述已含有130μL的二次水的孔中。接著根據Griess試劑組中的說明，配製Griess試劑，並於每孔中加入20μL配製好的Griess試劑，使細胞避光靜置30分鐘。再以ELISA分光光度計測量各孔細胞溶液在548nm波長下的光密度值(optical density，OD)，作為吸光度。OD值讀值越大，可間接表示NO的含量濃度越高。以空白組的NO濃度為100%，將各組結果繪示於圖3中。

由圖3可知，相較於空白組，經LPS刺激的細胞相對產生232.4%的NO。相較於空白組，經LPS刺激且添加西梅發酵原液的細胞相對產生222%的NO。可得知，西梅發酵原液可減少約10.4%的NO產生量。據此可知，西梅發酵液可抑止NO的產生，藉由抑制或改善腸道發炎，減少因發炎所造成的腹痛、腹瀉、甚至衍生為發炎性大腸瘜肉與大腸癌。

[實施例8]減脂瘦身之人體檢測

令9位肥胖受試者(即其體脂率大於25%或BMI值大於24)每日飲用一瓶50mL西梅發酵飲料(其含有12vol%實施例1中所得到的西梅發酵汁液與88vol%水)，連續飲用2週。並且，於飲用前(即第0週)及飲用2週後(即第2週)，以體重機測量此些受試者體重，以體脂計(廠牌：TANITA BC-545F)測量此些受試者全身體脂率和軀幹體脂率。並且，第0週的量測結果與第2週的量測結果之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析，如圖4至圖5所示。

參照圖4，相比飲用前(第0週)，持續2週飲用西梅發酵飲料可使全身體脂率減少約0.4%。

參照圖5，相比飲用前(第0週)，持續2週飲用西梅發酵飲料可使軀幹體脂率減少約0.6%。

由此可知，短期間2週使用西梅發酵汁液即可改善肥胖者的脂肪累積，即西梅發酵汁液具瘦身減脂之功效。

[實施例9]腸道菌相之人體檢測

為進一步確認西梅發酵液對於人體腸道菌相的調節作用，針對實施例8的受試者於飲用前(第0週)及飲用後(第4週)進行腸道菌相檢測。檢測方式為採集受試者糞便檢體後，先對糞便檢體進行DNA萃取，以定量即時聚合酶鏈反應(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)針對細菌16S核糖體基因(16S ribosomal gene)的高度變異區(hypervariable regions)進行擴增。高度變異區(hypervariable regions)會隨著菌屬和菌種的不同，在序列組成上有多樣性，可用來查 看物種間的差異。於本實施例中，選擇以16S rRNA基因的V3至V4高度變異區，意即選擇16S rRNA基因中的第341至805位進行擴增，前述可參見例如：Transitions in bacterial communities along the 2000km salinity gradient of the Baltic Sea(2011)5：1571-1579等文獻之全文並於此處以供參考。

本實施例是以次世代定序方式進行，由圖爾思生物科技股份有限公司進行微生物體16S擴增子定序(16S Amplicon Sequencing)，將糞便樣本進行DNA萃取後，使用由Illumina(Illumina,San Diego,USA)開發之16S宏基因組測序文庫製備方案進行16S rRNA基因擴增子測序。簡言之，將糞便萃取的DNA採用靶向16S rRNA基因之高度變異區V3至V4之引子擴增。

完成16S rRNA基因的高度變異區V3至V4的擴增，依據MiSeq Reagent Kit v3(Illumina,Wilmington,DE,USA)建雙端庫(pair-end library)，並於Illumina系統進行高通量定序。定序完成後得到的原始數據(Raw Data)，會經由成對序列拼接(Raw Tags)、過濾得到Clean Tags，再進行去除嵌合體得到可用於後續分析的有效數據(Effective Tags)。接著基於有效數據進行相似度(大於97%)OTUs (Operational Taxonomic Units)聚類和物種分類分析。根據OTUs聚類結果對代表序列做物種注釋，得到對應的物種資訊和基於物種的豐度分佈情況，分析檢體內的微生物種類及比例。

參照圖6，相比飲用前(第0週)，持續4週飲用西梅發酵飲料可使疣微菌門(Verrucomicrobia)的菌數增加約60%。已有研究指出，疣微菌門(Verrucomicrobia)為腸道益生菌，具有抗發炎、增免疫、減肥功效，前述可參見例如：Akkermansia muciniphila and its role in regulating host functions.106(2017)171-181文獻之全文並於此處以供參考。

參照圖7，相比飲用前(第0週)，持續4週飲用西梅發酵飲料可使嗜黏蛋白艾克曼菌(Akkermansia muciniphila)的菌數增加約66.9%。已有研究指出，嗜黏蛋白艾克曼菌(Akkermansia muciniphila)為腸道益生菌，該菌佔成人腸道菌的1%至4%，是一種生長在大腸的絕對厭氧革蘭氏陰性菌，可利用黏蛋白(mucin)作為唯一營養來源。艾克曼菌被報導為與醣類和脂肪代謝相關，有助維持體重和身材，前述可參見例如：Akkermansia muciniphila and its role in regulating host functions.106(2017)171-181文獻之全文並於此處以供參考。

參照圖8，相比飲用前(第0週)，持續4週飲用西梅發酵飲料可使雙歧桿菌屬(Bifidobacteria)的菌數增加約54.6%。已有研究指出，增加腸道雙歧桿菌屬(Bifidobacteria)可提升腸道健康，前述可參見例如：Bifidobacteria and Their Health-Promoting Effects.Microbiolspec June 2017 vol.5 no.3文獻之全文並於此處以供參考。

參照圖9，相比飲用前(第0週)，持續4週飲用西梅發酵飲料可使嗜膽菌屬(Bilophila)的菌數減少約36.2%。已有研究指出，嗜膽菌會製造硫化氫(H2S)，易造成腸組織發炎及癌化，減少嗜膽菌屬(Bilophila)可降低腸道疾病的發生風險，前述可參見例如：A glycyl radical enzyme enables hydrogen sulfide production by the human intestinal bacterium Bilophila wadsworthia.PNAS February 19,2019 116(8)3171-3176文獻之全文並於此處以供參考。

參照圖10，相比飲用前(第0週)，持續4週飲用西梅發酵飲料可使韋榮球菌屬(Veillonella)的菌數減少約68.1%。已有研究指出，減少韋榮球菌屬(Veillonella)可降低腸躁症機率，前述可參見例如：Immunomodulatory Properties of Streptococcus and Veillonella Isolates from the Human Small Intestine Microbiota 2014；9(12)：e114277文獻之全文並於此處以供參考。

參照圖11，相比飲用前(第0週)，持續4週飲用西梅發酵飲料可使厚壁菌門/擬桿菌門比例(Firmicutes/Bacteroidetes ration,F/B ration)降低至0.88倍。已有研究指出，肥胖或體重過重的指標(BMI指數)愈高的人，F/B ration愈高。因此，可得知本發明西梅發酵飲料可降低F/B ration至0.88倍，代表具有降低肥胖或體重過重的功效。

雖然本發明的技術內容已經以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神所作些許之更動與潤飾，皆應涵蓋於本發明的範疇內，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

Claims (11)

1. 一種西梅發酵原液，係藉由一包含下列步驟之製備方法製得：(a)將葡萄糖、西梅果實與水混合以得到一培養液，其中水之重量為西梅果實總重的15-25倍；以及(b)將該培養液及複數菌種進行發酵4-15日以得到該西梅發酵原液，其中該複數菌種包括相對於該培養液為0.01-0.5wt%的酵母菌、相對於該培養液為0.01-0.25wt%的乳酸菌及相對於該培養液為3-10wt%的醋酸菌；其中該(a)步驟之得到該培養液的步驟包括：(a1)將西梅果實與水混合，於50-100℃下萃取0.5-1.5小時，形成一西梅水萃液；以及(a2)將葡萄糖加入至該西梅水萃液以得到該培養液；該(b)將該培養液及該複數菌種進行發酵以得到該西梅發酵原液的步驟中包括：(b1)於該培養液中加入酵母菌進行發酵1-2日後形成一第一初發酵液；(b2)於該第一初發酵液中加入乳酸菌進行發酵1-3日後形成一第二初發酵液；以及(b3)於該第二初發酵液中加入醋酸菌進行發酵2-10日後形成該西梅發酵原液。
2. 如請求項1所述的西梅發酵原液，其中該(a)步驟之得到該培養液的步驟中，葡萄糖的添加量為西梅果實與水總重的8-12wt%。
3. 如請求項1所述的西梅發酵原液，其中該(b3)於該第二初發酵液中加入醋酸菌進行發酵2-10日後形成該西梅發酵原液的步驟更包括：將該西梅發酵原液經濃縮及過濾後，得到一西梅發酵液。
4. 如請求項3所述的西梅發酵原液，其中該(b3)於該第二初發酵液中加入醋酸菌進行發酵2-10日後形成該西梅發酵原液的步驟包括：於該第二初發酵液中加入醋酸菌進行發酵2-10日後，得到該西梅發酵原液，將該西梅發酵原液在50-60℃下減壓濃縮及以200-400目篩網過濾後，得到該西梅發酵液。
5. 如請求項1所述的西梅發酵原液，其中該(b)將該培養液及複數菌種進行發酵以得到該西梅發酵原液的步驟包括：將該培養液及該複數菌種進行發酵4-15日後，得到該西梅發酵原液；添加一乳醣醇至該西梅發酵原液以使該西梅發酵原液的糖度達到60°Bx以形成一西梅發酵液。
6. 如請求項1所述的西梅發酵原液，其中該西梅發酵原液的pH值為3.5-4.0，且其糖度為4.0以下。
7. 如請求項1所述的西梅發酵原液，其中酵母菌為Saccharomyces cerevisiae，乳酸菌為Lactobacillus plantarum，醋酸菌為Acetobacter aceti。
8. 一種將如請求項1至7中任一項所述的西梅發酵原液用於製備一腸道保健的組合物的用途。
9. 如請求項8所述的用途，其中該腸道保健的組合物係同時具有以下所述功能：提升腸道益生菌的生長、以及減少壞菌的生長。
10. 如請求項9所述的用途，其中該組合物用於提升疣微菌門(Verrucomicrobia)、嗜黏蛋白艾克曼菌(Akkermansia muciniphila)、以及雙歧桿菌屬(Bifidobacteria)益生菌的生長，且該組合物含有12vol%的該西梅發酵液。
11. 如請求項9所述的用途，其中該組合物用於減少嗜膽菌屬(Bilophila)、以及韋榮球菌屬(Veillonella)壞菌的生長，且該組合物含有12vol%的該西梅發酵液。

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