KR102486028B1 - 락토바실러스 사케이 cvl001 균주 배양액 유래 세포외소포체를 포함하는 골 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물 - Google Patents

락토바실러스 사케이 cvl001 균주 배양액 유래 세포외소포체를 포함하는 골 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 배양액 유래 세포외소포체(Extracellular Vesicle; EV)를 포함하는 골 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것으로서, 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주의 배양액으로부터 분리된 세포외소포체가 파골세포 분화 억제 효과를 나타내므로, 이를 효과적으로 골 질환의 예방, 치료 또는 개선에 이용할 수 있다.

Description

락토바실러스 사케이 CVL001 균주 배양액 유래 세포외소포체를 포함하는 골 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물{Composition for preventing, treating or improving bone diseases containing extracellular vesicles derived from Lactobacillus sakei CVL001 strain culture medium}
본 발명은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 배양액 유래 세포외소포체를 포함하는 골 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주의 배양액으로부터 분리된 세포외소포체를 포함하는 골 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.
갱년기의 여성에게서는 여러 폐경 증후들이 나타나는데, 특히 에스트로겐의 감소로 인하여 뼈에서 칼슘이 빠져나가 뼈의 질량이 감소하고, 구멍이 많아지며, 골 손실이 증가함으로 인하여 골다공증 질환의 발병률이 높아지게 되었다. 폐경기 이후 후기변화는 증상이 나타나기까지 다소 시간이 걸릴 수 있으므로 문제를 쉽게 자각하지 못하는 경우가 많다. 보건복지부 국민 건강 통계치에 따르면 30세 이상에서 골다공증 유병률이 남성에게서는 1%, 여성에게서는 9%로 여성 유병률이 남성대비 9배나 높게 나타난 것으로 보고되었다.
골다공증에 의해 야기되는 골절은 주된 건강 문제를 구성하며 건강 관리 시스템 상에 막대한 경제적 부담을 준다. 골다공증으로 인한 골절의 위험은 서양에서 높으며(여성에서 약 50% 및 남성에서 약 20%), 골절은 현저한 치사율 및 이환율과 연관된다. 피질골(cortical bone)은 신체에서 뼈의 약 80%를 구성하며, 여러 연구들은 피질골이 뼈 강도의 주요 결정인자이며, 이에 따라 골절 민감성의 주요 결정인자임을 보여주었다. 65세 이후에 뼈 손실은 해면질골이 아니라 주로 피질골에서의 손실에 기인한다.
골격은 뼈 형성 골아세포(OBs) 및 뼈흡수 파골 세포(OCLs)에 의해 리모델링된다. 대식세포 콜로니 자극인자(MCSF)는 OCLs 전구세포의 증식 및 생존을 증가시킬뿐만 아니라 OCL에서 핵인자-κB(RANK)의 리셉터 활성제의 발현을 상향조절한다. 이는 RANK 리간드(RANKL)가 바인딩하고 OCL 형성을 이끄는 시그널링 캐스케이드를 개시하도록 한다. RANKL의 영향은 RANKL에 대한 유인 리셉터인 오스테오프로테게린(OPG)에 의해 저해될 수 있다.
최근에, 건강 및 질병 모두를 위해 장내 미생물(gut microbiota; 이하 GM)의 중요성이 집중적으로 연구되어 왔다. GM은 총괄적으로 인간 게놈보다 150배 더 많은 유전자를 함유하는 엄청난 양의 박테리아로 구성된다. 이는 출생시 얻어지며, 구별되는 실재(distinct entity)임에도 불구하고, 분명히 인간 게놈과 함께 공진화하고, 다양한 방식으로 이의 숙주와 소통하고 영향을 미치는 다세포 생물로 간주될 수 있다.
GM의 구성은 음식 및 항생제 치료와 같은 다수의 환경적 요인에 의해 조절된다. 장내 미생물에 의해 생산된 분자들은 유익할 수도 있고 해로울 수도 있으며, 장 내의 내분비 세포, 장 신경계, 장 투과성 및 면역 시스템에 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 동요된 미생물 구성은 크론병, 궤양성 대장염, 류마티스성 관절염, 다발성 경화증, 당뇨, 음식 알레르기, 습진 및 천식뿐만 아니라 비만 및 대사 증후군을 포함하여 장 내외에서 다양한 염증 조건에 연루되는 것으로 상정되어 왔다.
한편, 락토바실러스 속 미생물은 동형 또는 이형발효를 하는 유산간균으로서, 유제품이나 채소의 발효과정에서 흔히 볼 수 있는 균이다. 최근 락토바실러스를 포함한 다양한 발효식품 유래 미생물에서 분비하는 세포외소포체에 대하여 건강기능식품, 식품 첨가제 등으로 개발하고자 하는 효능 평가 연구가 활발히 진행되고 있다. 세포외소포체는 다양한 생물학적 활성을 나타내고, 세포들 사이에 유전 물질과 단백질을 옮기면서 세포 간 상호작용에 중요한 역할을 한다.
이에 본 발명자들은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 미생물에 대한 연구를 계속한 결과, 김치로부터 분리한 락토바실러스 사케이 균주 유래 세포외소포체(Extracellular Vesicle; EV)의 파골세포 분화 억제 효과가 월등히 우수한 것을 확인하였다.
이에, 본 발명의 목적은 락토바실러스 사케이 배양액 유래 세포외소포체를 포함하는 골 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 락토바실러스 사케이 배양액 유래 세포외소포체를 포함하는 골 질환 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 락토바실러스 사케이 배양액 유래 세포외소포체의골 질환 예방, 치료 또는 개선 용도에 관한 것이다.
본 발명은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 배양액 유래 세포외소포체(Extracellular Vesicle; EV)를 포함하는 골 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 조성물은 우수한 파골세포 분화 억제 효과를 나타낸다.
본 발명자들은 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주의 배양액으로부터 세포외소포체를 분리하였고, 이를 마우스 대식세포에 처리함으로써 파골세포 분화를 억제하는 효과가 있음을 확인하였다.
이하 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다.
본 발명의 일 양태는 락토바실러스 사케이 배양액 유래 세포외소포체를 포함하는 골 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물이다.
본 명세서상의 용어 “세포외소포체”는 세포 간 정보교환을 위해 모든 세포들이 외부 환경으로 분비하는 나노 크기의 소포체를 의미한다. 단백질, 지질, 핵산, 대사물질(metabolites) 등 생물학적 활성을 보이는 다양한 물질을 포함하고 있고, 이들의 유래하는 세포들의 상태를 반영하고 있다.
본 발명에 있어서 락토바실러스 사케이는 수탁번호 KCTC13816BP로 기탁된 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 골 질환은 골다공증(osteoporosis), 뼈전이암(bone metastatic cancer), 골연화증(osteomalacia), 구루병, 섬유성 골염, 무형성 골질환, 대사성 골질환 및 치주질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있고, 예를 들어, 골다공증인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 배양액은 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주를 배양하고, 균주를 제거한 후 수득된 배양 상층액, 이의 농축물, 이의 분획물 또는 이의 동결건조물인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 배양액은 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주를 12시간 내지 30시간, 12시간 내지 24시간, 18시간 내지 30시간 또는 18시간 내지 24시간, 예를 들어, 22시간 내지 26시간 동안 배양하여 수득한 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 배양 시간은 24시간을 기점으로 하여 그 이상 배양하는 것이 배양 시간 의존적으로 파골세포 분화 억제 활성에 대하여 현저한 상승효과를 나타내는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 배양액은 pH 6.5 내지 8.5, 6.5 내지 8.0, 6.5 내지 7.5, 7.0 내지 8.5 또는 7.0 내지 8.0, 예를 들어, pH 7.0 내지 7.5인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 배양액에서는 유산균이 자라면서 젖산 등의 대사체를 생산하게 되어 산성화될 수 있고, 이는 세포 배양에 적절하지 않은 pH 범위에 해당한다. 이러한 점에 근거하여, 세포 배양에 있어서 가장 적절한 pH 값은 7.4이다.
본 발명의 약학적 조성물은 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주 배양액의 약학적 유효량 및/또는 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물로 이용될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "약학적 유효량"은 상술한 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주 배양액의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 인간을 포함하는 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방식은 통상적으로 사용되는 모든 방식일 수 있으며, 예컨대, 경구, 피부, 정맥, 근육, 피하 등의 경로로 투여될 수 있으며, 바람직하게는 경구로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제, 캅셀제 또는 젤(예컨대, 하이드로젤) 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 양태는 락토바실러스 사케이 배양액 유래 세포외소포체를 포함하는 골 질환 개선용 식품 조성물이다.
본 발명에 있어서 락토바실러스 사케이는 수탁번호 KCTC13816BP로 기탁된 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 골 질환은 골다공증, 뼈전이암, 골연화증, 구루병, 섬유성 골염, 무형성 골질환, 대사성 골질환 및 치주질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있고, 예를 들어, 골다공증인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 배양액은 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주를 배양하고, 균주를 제거한 후 수득된 배양 상층액, 이의 농축물, 이의 분획물 또는 이의 동결건조물인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 배양액은 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주를 12시간 내지 30시간, 12시간 내지 24시간, 18시간 내지 30시간 또는 18시간 내지 24시간, 예를 들어, 22시간 내지 26시간 동안 배양하여 수득한 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 배양액은 pH 6.5 내지 8.5, 6.5 내지 8.0, 6.5 내지 7.5, 7.0 내지 8.5 또는 7.0 내지 8.0, 예를 들어, pH 7.0 내지 7.5인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 바람직하게는 10 중량% 이하의 양으로 첨가될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜 릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.
상기 음료는 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 당업자의 선택에 의해 적절하게 결정될 수 있다.
상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율 또한 당업자에 의해 적절히 선택될 수 있다.
본 발명은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 배양액 유래 세포외소포체(Extracellular Vesicle; EV)를 포함하는 골 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것으로서, 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주의 배양액으로부터 분리된 세포외소포체가 파골세포 분화 억제 효과를 나타내므로, 이를 효과적으로 골 질환의 예방, 치료 또는 개선에 이용할 수 있다.
도 1은 본 발명의 실시예에 따라 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 배양액으로부터 분리된 세포외소포체(Extracellular Vesicle; EV)의 NTA(nanoparticle tracking analysis) 결과 그래프이다.
도 2는 본 발명의 실시예에 따라 락토바실러스 사케이 배양액으로부터 분리된 세포외소포체의 투과전자현미경(transmission electron microscope; TEM) 사진이다.
도 3은 본 발명의 실시예에 따라 락토바실러스 사케이 배양액으로부터 세포외소포체의 농도별 처리에 따른 파골세포 분화 억제 효과를 나타내는 사진이다.
도 4는 본 발명의 실시예에 따라 락토바실러스 사케이 배양액으로부터 분리된 세포외소포체의 처리에 따른 파골세포 분화 관련 유전자의 발현량 측정 그래프이다.
이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 "%"는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량)%, 고체/액체는 (중량/부피)%, 그리고 액체/액체는 (부피/부피)%이다.
실시예 1: 락토바실러스 사케이 배양액 유래 세포외소포체 분리
세포에 처리하기 위한 배양액을 제조하기 위하여 alpha-MEM(Alpha Modification of Eagle's Minimum Essential Media) 배지에 수탁번호 KCTC13816BP로 기탁된 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) CVL-001 균주를 24h 동안 배양하고 원심분리 후 상층액을 분리하여 pH 7.4로 맞추었다. 이로부터 세포외소포체(extracellular vesicle; EV)를 분리하였다.
구체적으로, 배양된 락토바실러스 사케이 CVL-001의 배양액은 하기 단계에 따라 순차적으로 여과되었다:
1) 락토바실러스 사케이 CVL-001의 배양액을 2000 g, 10분 동안 원심분리하여 상등액을 수득함으로써 배양액으로부터 균주를 분리 및 제거하였다.
2) 상기 1)에서 원심분리된 배양액을 0.2 ㎛ 바틀 탑 필터(Bottle Top Filter)를 통해 여과함으로써 배양액의 순도를 증가시켰다.
3) 접선유동여과(tangential flow filtration; TFF) 방법을 수행하여 배양액을 10배로 농축하였다.
4) 농축된 배양액을 0.22 ㎛ 실린지 필터를 통해 여과하였다.
5) 여과한 배양액을 4℃에서 150,000 g, 3시간 동안 초고속원심분리하여 상등액을 제거하고 남은 세포외소포체 펠렛(pellet)을 수득하였다.
최종적으로 수득한 세포외소포체를 완충용액(phosphate buffered saline; PBS)에 재현탁시켜 준비하였다.
실시예 2: 김치로부터 분리된 락토바실러스 사케이 배양액 유래 세포외소포체 확인
분리한 유산균 유래 세포외소포체는 NTA(nanoparticle tracking analysis)와 투과전자현미경(transmission electron microscope; TEM)으로 크기와 형태를 분석하였다.
도 1 및 2에서 확인할 수 있듯이, 세포외소포체는 대체로 구형을 이루고 직경이 약 150 nm 인 것을 확인하였다. 측정된 직경의 범위는 10 내지 300 nm인 것으로 나타났고, 평균 직경은 150 nm인 것으로 분석되었다.
실시예 3: 김치로부터 분리된 락토바실러스 사케이 배양액 유래 세포외소포체의 파골세포 분화에 대한 억제 평가 (TRAP staining) 확인
마우스 대식세포를 12 웰 플레이트(well plate)에 2 x 105/well의 밀도로 24h 동안 배양하였으며 10% 소태아혈청(fatal bovine serum; FBS), 1% 포스파티딜세린(phosphatidylserine; PS), 25 ng/ml의 대식세포집락자극인자(macrophage colony stimulating factor; M-CSF)가 첨가된 배지로 교체해준 후 세포외소포체 0.5, 5.0 및 50.0 x 108 particles/ml을 2h 동안 처리하였다. 이후 100 ng/ml의 RANKL(Receptor activator of nuclear factor kappa-Βligand)을 처리하여 24h 동안 반응시켰고, 위와 같은 방법으로 4일 동안 분화시켰다.
대식세포에 RANKL을 처리하면 RANK에 결합하며 타타르산염 내성 산성 포스타페이즈(tartrate resistance acid phosphatase; TRAP) 양성 세포로 분화하게 된다. 이후 파골세포의 세포 화학적 표지효소인 TRAP에 발색성 기질을 첨가하여 핵을 염색하였고 핵이 3개 이상으로 다핵화된 세포를 관찰하고 이미지화하였다.
RANKL + + + +
CVL-EV(0.5*108) - + - -
CVL-EV(5.0*108) - - + -
CVL-EV(50.0*108) - - - +
파골세포의 수 1,572 947 586 18
표 1 및 도 3에서 확인할 수 있듯이, 대식세포에 RANKL을 처리했을 때 파골세포의 분화가 증가하였으며 세포외소포체 처리에 의해서 파골세포의 수가 농도의존적으로 현저히 감소된 것을 확인하였다. 이것으로 보아 락토바실러스 사케이 배양액 유래 세포외소포체가 대식세포로부터 파골세포로의 분화를 억제시킴을 확인할 수 있었다.
실시예 4: 김치로부터 분리된 락토바실러스 사케이 배양액 유래 세포외소포체의 파골세포 분화에 대한 억제 평가 (Real-time PCR) 확인
마우스 대식세포를 12 웰 플레이트에 2 x 105/well의 밀도로 24h 동안 배양하였으며 10% FBS, 1% PS, 25 ng/ml의 M-CSF가 첨가된 배지로 교체해준 후 세포외소포체 0.5, 5.0 및 50.0 x 108 particles/ml을 2h 동안 처리하였다. 이후 100 ng/ml의 RANKL을 처리하여 24h 동안 반응시켰고, 위와 같은 방법으로 4일 동안 분화시켰다.
분화시킨 후 TRIzol 용액을 이용하여 세포내 RNA를 분리하고, RNA 정량값을 토대로 RT 프리믹스(premix)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA는 프라이머(primer)를 이용하여 Real time PCR을 통해 증폭시켰다. 사용된 프라이머 Mouse TRAP, DC-STAMP, Cathepsin K는 하기 표 2로 나타내었으며, 대조군(Control) 유전자인 Actin과 비교하여 상대적 양을 비교하였다.
서열번호 명칭 서열 (5'-3')
1 TRAP 정방향 프라이머 CTGGAGTGCACGATGCCAGCGACA
2 TRAP 역방향 프라이머 TCCGTGCTCGGCGATGGACCAGA
3 DC-STAMP 정방향 프라이머 CCAAGGAGTCGTCCATGATT
4 DC-STAMP 역방향 프라이머 GGCTGCTTTGATCGTTTCTC
5 Cathepsin K 정방향 프라이머 GGCCAACTCAAGAAGAAAAC
6 Cathepsin K 역방향 프라이머 GTGCTTGCTTCCCTTCTGG
일반적으로 대식세포에 RANKL을 처리하면 RANK에 결합하여 TRAP 양성인 다핵화된 파골세포로 분화된다. 또한 파골세포로 분화하는데 중요한 전사 인자인 NFATc1을 활성화시키고 파골세포 형성(osteoclastogenesis)에 관여하는 TRAP, Cathepsine K, DC-STAMP의 발현을 증가시킨다.
Real-time PCR 분석 결과는 하기 표 3에 나타내었다.
RANKL - - + +
세포외소포체(EV) - + - +
유전자 유전자의 상대적인 발현량
TRAP 1 19.19 8373.98 304.67
Cathepsin K 1 0.81 345.17 19.4
DC-STAMP 1 0.86 739.09 14.5
표 3 및 도 4에서 확인할 수 있듯이, RANKL 처리에 의하여 증가된 TRAP, DC-STAMP, Cathepsin K의 발현이 락토바실러스 사케이 배양액 유래 세포외소포체에 의해 감소하였다. 이것으로 보아 락토바실러스 사케이 배양액 유래 세포외소포체가 대식세포로부터 파골세포로의 분화 시 증가되는 유전자 발현을 억제시킴으로써 파골세포 분화를 억제시킴을 확인할 수 있었다.
한국생명공학연구원 KCTC13816BP 20190219
<110> INDUSTRY FOUNDATION OF CHONNAM NATIONAL UNIVERSITY <120> Composition for preventing, treating or improving bone diseases containing extracellular vesicles derived from Lactobacillus sakei CVL001 strain culture medium <130> PN200341 <160> 6 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRAP F primer <400> 1 ctggagtgca cgatgccagc gaca 24 <210> 2 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRAP R primer <400> 2 tccgtgctcg gcgatggacc aga 23 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DC-STAMP F primer <400> 3 ccaaggagtc gtccatgatt 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DC-STAMP R primer <400> 4 ggctgctttg atcgtttctc 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Cathepsin K F primer <400> 5 ggccaactca agaagaaaac 20 <210> 6 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Cathepsin K R primer <400> 6 gtgcttgctt cccttctgg 19

Claims (12)

  1. 수탁번호 KCTC13816BP로 기탁된 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) CVL-001 균주 배양액 유래 세포외소포체(Extracellular Vesicle; EV)를 포함하는 골다공증 또는 구루병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서, 배양액은 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주를 배양하고, 균주를 제거한 후 수득된 배양 상층액, 이의 농축물, 이의 분획물 또는 이의 동결건조물인 것인, 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 배양액은 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주를 12시간 내지 30시간 동안 배양하여 수득한 것인, 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 배양액은 pH 6.5 내지 8.5인 것인, 약학적 조성물.
  7. 수탁번호 KCTC13816BP로 기탁된 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) CVL-001 균주 배양액 유래 세포외소포체(Extracellular Vesicle; EV)를 포함하는 골다공증 또는 구루병의 개선용 식품 조성물.
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 제7항에 있어서, 배양액은 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주를 배양하고, 균주를 제거한 후 수득된 배양 상층액, 이의 농축물, 이의 분획물 또는 이의 동결건조물인 것인, 식품 조성물.
  11. 제7항에 있어서, 배양액은 락토바실러스 사케이 CVL-001 균주를 12시간 내지 30시간 동안 배양하여 수득한 것인, 식품 조성물.
  12. 제7항에 있어서, 배양액은 pH 6.5 내지 8.5인 것인, 식품 조성물.
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