KR20180059299A - 케피어 그레인을 포함하는 과민성 대장 증후군의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
케피어 그레인을 포함하는 과민성 대장 증후군의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 케피어(kefir) 제조에 사용되는 케피어 그레인(grain)의 배양물을 포함하여 과민성 대장 증후군(irritable bowel syndrome: IBS)을 효과적으로 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 케피어(kefir)를 제조하는 데에 사용되는 케피어 그레인(grain)의 배양물을 포함하여 과민성 대장 증후군(irritable bowel syndrome: IBS)을 효과적으로 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 조성물에 관한 것이다.
과민성 대장 증후군(Irritable Bowel Syndrome:IBS)은 공통적인 대장 기능성 장애로서, 일반적으로 지속적이거나 반복적인 복통, 복부 불쾌감, 및 변화된 배변 습관에 의해 특징 지워진다. 과민성 대장 증후군은 환자의 사회적 및 개인적 생활을 손상시켜 삶의 질을 떨어뜨리고, 증상이 심할수록 삶의 질을 더 떨어뜨린다.
상기한 과민성 대장 증후군의 발병 원인은 아직까지 명확하게 밝혀지지 않았지만, 스트레스, 예민한 성격, 불규칙한 식습관, 만성피로 및 자극적이고 기름진 음식이 주요 원인으로 알려져 있다. 하지만, 현재까지 제시되고 있는 치료 방법의 효과는 크지 않고, 아직까지 본 질환에 대한 근본적 치료법은 알려진 바 없으며, 오로지 증상 완화에 초첨을 둔 대증적인 치료 방법에 의존하고 있다.
최근 과민성 대장 증후군의 진료 인원이 2012년 162만명으로 5년새 약 8.7%(13만명) 증가하여 연평균 1.7%씩 증가하는 것으로 조사되고 있으며 대부분의 환자(전체 환자의 99.4%)가 외래 방문하여 대증적인 요법으로 치료하고 있다. 따라서 대증적인 치료법 외에 장 기능을 활성화 시킬 수 있는 식품바이오 신소재의 개발이 시급한 실정이다.
한편, 기능성 식품 시장은 매년 고성장세를 보이고 있고 이미 건강 기능식품 시장은 2012년 1조 4천억원의 시장 규모로 성장하고 있으며 소아비만 및 성인병에 대한 경각심이 부각되어 식품 소비경향이 변화됨에 따라 세계의 기능성식품 시장은 꾸준한 성장세를 보일 것으로 예상된다. 하지만 우리나라 건강기능식품 시장은 수입 의존도가 높은 특징을 가고 있고 과민성 대장 증후군 관련 정장용 건강기능식품은 요구 수요에 비해 시판되는 제품은 많지 않기 때문에 이미 포화되어 있는 다른 건강기능식품 원료에 비해 투자가치가 높은 개발 소재이다.
본 발명의 일 목적은 과민성 대장 증후군을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있는 약학 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 다른 목적은 과민성 대장 증후군을 효과적으로 예방 또는 개선할 수 있는 식품 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 발명자들은 케피어의 제조에 사용되며 케피어 내에 존재하는 케피어 그레인의 배양물이 대장 세포주에 대한 항염 효과가 뛰어난 것을 발견하여 본 발명에 이르게 되었다.
본 발명의 일 구현 예에 따르면, 케피어 그레인(kefir grain) 배양물을 유효성분으로 포함하는 과민성 대장 증후군의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 구현 예에 따르면, 케피어 그레인 배양물을 유효성분으로 포함하는 과민성 대장 증후군의 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 상기 "케피어(kefir)"란 코카서스 산간 지방에서 유래한 발효유의 일종으로, 티벳지방 승려들이 건강을 위해 음용하던 것이 대중화된 음료이다. 케피어의 구성 영양소로는 단백질 및 다당류가 포함되어 있고 비타민 A, 비타민 B1, 비타민B2, 비타민B6, 비타민D, 비타민K2, 엽산, 니코틴산 및 칼슘, 철분, 요오드 등을 고루 포함하고 있다. 이러한 케피어는 유산균과 효모 복합체인 케피어 그레인으로 불리우는 균종(케피어 과립균이라고도 한다)을 개시제로 하여 우유를 발효시켜 얻어진 요구르트상의 음료이다.
본 발명에서 상기 "케피어 그레인(kefir grain)"이란 케피어의 제조 과정에서 사용되는 발효원으로, 효모 및/또는 유산균일 수 있다. 구체적으로, 본 발명에서 상기 케피어 그레인에 포함되는 효모는 사카로마이세스(Saccharomyces) 속, 라칸세아(Lachancea) 속, 한세니아오스포라(Hanseniasospora) 속, 지고토루라스포라(Zygotorulaspora) 속, 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) 속, 토룰라(Torula) 속 및 캔디다(Candida) 속 등에 속하는 효모일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 발명에서 상기 케피어 그레인에 속하는 유산균으로는 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 아세토박터(Acetobacter) 속 및 스트렙토코커스(Streptococcus) 속 등에 속하는 유산균일 수 있으며, 바람직하게는 락토바실러스 케피라노팍시엔스(Lactobacillus kefiranofaciens), 락토바실러스 케피리(Lactobacillus kefiri) 및 락토바실러스 케피르그라넘(Lactobacillus kefirgranum)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
본 발명에서 상기 케피어 그레인 배양물은 케피어 그레인을 배지에 배양하여 얻은 것으로, 배지, 케피어 그레인 및 배양 과정에서 발생된 물질을 모두 포함할 수 있다. 또한, 상기 배양물은 액체 배양물 또는 고체 배양물일 수 있다. 여기서, 상기 배지의 종류는 특별히 제한하지 않으며, 예를 들면, MRS 배지, 우유, 치즈 등의 유제품을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 단, 본 발명에서 상기 케피어 그레인의 배양 시 배지로 유제품 등을 사용하는 경우, 배양 과정에서 상기 유제품을 '발효'시키는 의미 또한 포함할 수 있다. 따라서, 케피어 그레인의 '발효' 역시 본 발명의 '배양'에 포함될 수 있으며, 케피어 그레인을 생육시키는 과정이라면 특별히 제한하지 않고 포함될 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 케피어 그레인의 배양 시간은 특별히 제한하지 않으나, 예를 들면, 12~96시간 동안 배양할 수 있다.
본 발명에서 상기 케피어 그레인의 배양물은 (a) 케피어 그레인을 고체 배지에 12~48시간 동안 1차로 배양하는 단계; 및 (b) 1차 배양한 뒤 액체 배지에 1~48시간 동안 2차로 현탁 배양하는 단계에 의하여 얻어진 것일 수 있다.
또한, 본 발명에서 (b) 단계에 후속적으로 얻어진 배양물을 (c) 액체 배지에 추가로 1~14일 동안 현탁 배양하는 단계를 수행할 수 있다. 여기서, 상기 (c) 배양 시 3~7일 동안 현탁 배양하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 (c) 배양 시 3~4일 동안 현탁 배양할 수 있다.
다만, 본 발명에서 상기 케피어 그레인 배양물은 배양물로부터 캐피어 그레인이 제거된 케피어 그레인 배양액인 것이 대장 세포주에 대한 항염 효과를 현저히 향상시킬 수 있어 바람직하다.
구체적으로, 상기 케피어 그레인 배양액은, 케피어 그레인 배양물을 100~1,000g로 0 초과 20℃ 이하의 온도에서 5분 내지 1시간 동안 1차 원심 분리하는 단계; 및 상기 1차 원심 분리 후 상등액을 회수하여 1,000~5,000g로 0 초과 20℃ 이하의 온도에서 10분 내지 1시간 동안 2차 원심 분리하는 단계에 의하여 얻어진 상등액일 수 있다.
또한, 본 발명에서는 상기 2차 원심 분리 후 얻어진 상등액을 5,000~20,000g로 0 초과 20℃ 이하의 온도에서 10분 내지 1시간 동안 3차 원심 분리하여 얻어진 상등액을 사용할 수 있다.
또한, 본 발명에서는 3차 원심 분리 후 얻어진 상등액을 초원심분리기(ultracentrigufe)를 이용하여 100,000~150,000g로 0 초과 20℃ 이하의 온도에서 1시간 내지 3시간 동안 4차 원심 분리하여 얻어진 펠렛을 사용할 수 있다.
한편, 본 발명에서 상기 케피어 그레인의 배양액은 케피어 그레인 배양물을 3,000~5,000g로 5분 내지 1시간 동안 1차 원심 분리하는 단계; 1차 원심 분리 후 얻어진 농축 배양액에 대하여 1N 소디움 아세테이트를 0.1 내지 1.5 부피비, 바람직하게는 0.1 내지 1 부피비, 보다 바람직하게는 0.1 내지 0.5 부피비로 첨가한 뒤 -10℃ 이상 0℃ 이하의 온도에서 30~60분 동안 배양하는 단계에 의하여 얻어진 침전 배양액일 수 있다.
또한, 본 발명에서는 상기 배양 후 얻어진 침전 배양액을 3,000~5,000g로 5분 내지 1시간 동안 2차 원심 분리하여 얻어진 펠렛을 사용할 수 있다.
또한, 본 발명에서는 정제 효율을 높이기 위하여 추가적으로 상기 2차 원심 분리 후 얻어진 펠렛을 필요에 따라 0.1N 소디움 아세테이트로 세척한 뒤 3,000~5,000g로 5분 내지 1시간 동안 원심 분리하여 얻어진 펠렛을 사용할 수 있다.
본 발명에서 상기 케피어 그레인 배양액은 케피어 그레인 배양물로부터 원심분리하여 얻어진 농축 배양액을 사용하는 것이 항염 효과를 높일 수 있어 장 바람직하지만, 제조 공정의 효율을 고려하여 침전법에 의해 얻어진 침전 배양액을 사용할 수 있다.
본 발명에서 예방, 개선 및 치료의 과민성 대장 증후군은 설사 우세형 과민성 대장 증후군(d-IBS), 변비 우세형 과민성 대장 증후군, 또는 설사-변비 혼합형 과민성 대장 증후군일 수 있다.
한편, 본 발명에서, "예방"은 본 발명의 약학 조성물을 이용하여 과민성 대장 증후군의 증상을 차단하거나, 그 증상의 억제 또는 지연시키는 모든 행위라면 제한없이 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에서, "개선"은 본 발명의 약학 조성물을 이용하여 과민성 대장 증후군의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위라면 제한없이 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에서, "치료"는 본 발명의 약학 조성물을 이용하여 과민성 대장 증후군의 증상이 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위라면 제한없이 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학 조성물은 캡슐, 정제, 과립, 주사제, 연고제, 분말 또는 음료 형태임을 특징으로 할 수 있으며, 상기 약학 조성물은 인간을 대상으로 하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 이들로 한정되는 것은 아니지만, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 약제적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체는 경구 투여 시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있으며, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사용할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 투여시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서(elixir), 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수회 투약 형태로 제조할 수 있다. 기타, 용액, 현탁액, 정제, 캡슐, 서방형 제제 등으로 제형할 수 있다.
한편, 제제화에 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말디톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등이 사용될 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 투여 경로는 이들로 한정되는 것은 아니지만 구강, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장이 포함된다. 경구 또는 비경구 투하가 바람직하다.
본 발명에서, "비경구"는 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액낭내, 흉골내, 경막내, 병소내 및 두개골내 주사 또는 주입기술을 포함한다. 본 발명의 약학 조성물은 또한 직장 투여를 위한 좌제의 형태로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 사용된 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 정식, 투여시간, 투여경로, 배출율, 약물 배합 및 예방 또는 치료될 특정 질환의 중증을 포함한 여러 요인에 따라 다양하게 변할 수 있고, 상기 약학 조성물의 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약무형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있고, 1일 0.0001 내지 50mg/kg 또는 0.001 내지 50mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명에 따른 의약 조성물은 환제, 당의정, 캡슐, 액제, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁제로 제형될 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물은 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 과자, 떡, 빵 등의 형태로 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 독성 및 부작용이 거의 없는 식물추출물로 구성된 것이므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.
본 발명의 케피어 그레인의 배양액이 식품 조성물에 포함될 때 그 양은 전체 중량의 0.1 내지 50%의 비율로 첨가할 수 있다.
여기서, 상기 식품 조성물이 음료 형태로 제조되는 경우 지시된 비율로 상기 식품 조성물을 함유하는 것 외에 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 즉, 천연 탄수화물로서 포도당 등의 모노사카라이드, 과당 등의 디사카라이드, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜 등을 포함할 수 있다. 상기 향미제로서는 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등) 등을 들 수 있다.
그 외 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 50 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명에서 제공하는 조성물은 대장세포에서 염증인자의 발현을 억제하는 효과가 뛰어나, 과민성 대장 증후군을 효과적으로 예방, 개선 또는 치료할 수 있다. 또한, 본 발명에서 제공하는 조성물은 보존 기간에 따른 생리활성의 감소가 없고, 유당 민감성인 사람도 섭취가 가능한 장점이 있다.
도 1의 (a) 및 (b)는 각각 실험예 1에서 배양 시간 별 케피어 그레인 배양액 내에 포함된 나노입자의 입자수와 단백질의 함량을 나타낸 것이다.
도 2는 실험예 2에서 케피어 그레인 배양액의 농축물 및 침전물에 포함된 나노입자의 입자수를 NTA로 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 실험예 3에서 염증 유도된 대장 세포주 CaCo-2에 본 발명에 따른 케피어 그레인의 배양액 처리 후 IL-8과 TNF-α의 mRNA 발현 수준을 측정하여 그 결과를 나타낸 것이다.
도 4의 (a) 및 (b)는 각각 실험예 4에서 염증 유도된 대장 세포주 CaCo-2에 본 발명에 따른 케피어 그레인의 배양액 처리 후 IL-8과 TNF-α의 발현량을 측정하여 그 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 실험예 5에서 염증 유도된 대장 세포주 CaCo-2에 본 발명에 따른 케피어 그레인의 배양액 처리 후 세포 생존율의 변화를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 실험예 2에서 케피어 그레인 배양액의 농축물 및 침전물에 포함된 나노입자의 입자수를 NTA로 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 실험예 3에서 염증 유도된 대장 세포주 CaCo-2에 본 발명에 따른 케피어 그레인의 배양액 처리 후 IL-8과 TNF-α의 mRNA 발현 수준을 측정하여 그 결과를 나타낸 것이다.
도 4의 (a) 및 (b)는 각각 실험예 4에서 염증 유도된 대장 세포주 CaCo-2에 본 발명에 따른 케피어 그레인의 배양액 처리 후 IL-8과 TNF-α의 발현량을 측정하여 그 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 실험예 5에서 염증 유도된 대장 세포주 CaCo-2에 본 발명에 따른 케피어 그레인의 배양액 처리 후 세포 생존율의 변화를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예
[
실시예
1]
케피어
그레인의
농축 배양액 획득
락토바실러스 람노수스 및 락토바실러스 아시도필루스를 고상의 MRS 배지에 스트리킹(streaking)하여 37℃에서 24시간 배양한 후, 액상의 MRS 배지에 적은 규모로 24시간 동안 현탁 배양하였다. 이 후 OD 값을 맞춰서 액상의 MRS 배지에 큰 규모로 현탁 배양하였다. 배양 4일차에 배양물을 회수하여 300g로 4℃에서 10분 동안 원심분리하고, 상층액을 취하여 1,200g에서 4℃에서 20분 동안 원심분리한 뒤, 상층액을 취하여 10,000g로 4℃에서 30분 동안 원심분리하고, 상층액을 취하여 초원심분리기를 이용해 110,000g로 4℃에서 1시간 10분 동안 원심분리한 뒤 상층액을 제거하여 침전물(pellet)을 PBS로 현탁하였다.
[
실시예
2]
케피어
그레인의
침전 배양액 획득
락토바실러스 람노수스 및 락토바실러스 아시도필루스를 고상의 MRS 배지에 스트리킹(streaking)하여 37℃에서 24시간 배양한 후, 액상의 MRS 배지에 적은 규모로 24시간 동안 현탁 배양하였다. 이 후 OD 값을 맞춰서 액상의 MRS 배지에 큰 규모로 현탁 배양하였다. 배양 4일차에 배양물을 회수하여 5,000g로 10분 동안 원심분리하고, 1N 소디움 아세테이트를 배양액 10ml 당 1ml의 비율로 넣은 뒤 아이스에서 45분 동안 배양하였다. 배양 후, 5,000g로 10분 동안 원심분리한 뒤 상층액을 제거하고 침전물을 0.1N 소디움 아세테이트로 세척하였다. 이후, 5,000g에서 10분 동안 원심분리한 뒤 상층액을 제거하고 침전물(pellet)을 PBS로 현탁하였다.
[
실험예
1] 단백질 함량 측정
상기 실시예 1 및 2에서 얻어진 농축 배양액 및 침전 배양액 1ml에 포함된 단백질의 함량을 측정하여 그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따라 케피어 그레인의 배양물로부터 초원심분리기 또는 소디움 아세테이트를 이용하여 세포가 제거된 배양액(실시예 1 및 2) 내에는 다량의 단백질이 함유된 것을 볼 수 있었고, 특히 초원심분리기를 이용하여 얻어진 농축 배양액(실시예 1) 내에 단백질이 더욱 많이 포함된 것을 볼 수 있었다.
[
실험예
2]
케피어
그레인
배양액의 항염 효과 확인
TNF-α 20ng으로 염증 유도된 대장 세포주 CaCo-2를 12-웰 플레이트에 웰당 1 X 106 cell로 플레이팅한 뒤 각각에 상기 실시예 1에서 얻어진 농축 배양액 1ml을 24시간 동안 처리하였다. 이 후, 48시간 배양 후에 각 군의 세포에서 RNA를 추출한 후 인트론 프레믹스(intron premix)를 이용하여 상보적 DNA(cDNA)를 합성하고 이를 이용하여 실시간 PCR(Real-time PCR)을 수행하였다. 각각의 처리 군의 세포에서 염증 인자로 IL-8과 TNF-α의 발현량을 측정하여 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에서 보는 바와 같이 본 발명에 따른 케피어 그레인의 농축 배양액을 처리하자 IL-8과 TNF-α의 발현량이 현저히 감소한 것을 볼 수 있다.
[
실험예
3]
케피어
그레인
배양액의 과민성 대장 증후군의 치료 효과 확인
설사-우세형 과민성 대장 증후군을 앓고 있는 환자 30명(남성 환자 14명, 여성 환자 16명)을 대상으로 4주 동안 하기의 조건으로 임상 시험을 수행하였다.
구체적으로는 상기 환자군을 무작위로 3 그룹(각 10명씩)으로 분류한 뒤, 제1 그룹에는 상기 실시예 1의 농축 배양액 1ml, 제2 그룹에는 상기 실시예 2의 침전 배양액 1ml, 제3 그룹에는 위약(비교예 1)을 매일 총 4주 동안 경구 투여하였다.
치료 전 및 4주간 치료 후 각 그룹 별 환자들이 6가지 증상에 대하여 최대 점수 10점으로 해 10-cm 시각 아날로그 척도(visual analogue scale, “VAS”)로 평가한 결과를 하기 표 1 및 2에 나타내었다.
증상 | 실시예 1 | 실시예 2 | 비교예 1 |
설사의 중증도 | 2.37±0.83 | 2.42±0.81 | 2.18±0.79 |
복부 팽만감 중증도 | 2.58±1.13 | 2.67±0.88 | 2.72±0.61 |
복부 통증 중증도 | 2.21±0.75 | 2.75±0.91 | 2.32±0.72 |
복부 불쾌감 중증도 | 3.25±0.98 | 2.93±0.75 | 2.87±1.21 |
복부 통증 빈도 | 2.50±1.18 | 2.77±1.03 | 2.82±0.99 |
배변 빈도 | 6.88±3.72 | 6.51±4.13 | 6.18±4.51 |
증상 | 실시예 1 | 실시예 2 | 비교예 1 |
설사의 중증도 | 1.02±0.57 | 1.21±0.63 | 1.87±0.55 |
복부 팽만감 중증도 | 1.26±0.46 | 1.30±0.52 | 1.76±0.98 |
복부 통증 중증도 | 1.63±0.85 | 1.54±0.73 | 1.95±1.01 |
복부 불쾌감 중증도 | 2.11±0.72 | 1.86±0.92 | 2.53±1.50 |
복부 통증 빈도 | 1.37±1.20 | 1.58±0.44 | 1.92±0.78 |
배변 빈도 | 2.84±1.69 | 2.13±1.80 | 4.02±1.26 |
상기 표 1 및 2에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 1의 농축 배양액과 실시예 2의 침전 배양액을 처리한 경우 과민성 대장 증후군의 증상이 현저히 완화된 것을 볼 수 있다. 비교예 1의 플라시보 효과와 비교하였을 때에도 그 증상 완화 효과가 상당함을 알 수 있다.
Claims (17)
- 케피어 그레인(kefir grain) 배양물을 유효성분으로 포함하는 과민성 대장 증후군의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 케피어 그레인은 사카로마이세스(Saccharomyces) 속, 라칸세아(Lachancea) 속, 한세니아오스포라(Hanseniasospora) 속, 지고토루라스포라(Zygotorulaspora) 속, 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) 속, 토룰라(Torula) 속, 캔디다(Candida) 속, 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 아세토박터(Acetobacter) 속 및 스트렙토코커스(Streptococcus) 속으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주를 포함하는, 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 케피어 그레인 배양물은 (a) 케피어 그레인을 고체 배지에 12~48시간 동안 1차로 배양하는 단계; 및 (b) 1차 배양한 뒤 액체 배지에 1~48시간 동안 2차로 현탁 배양하는 단계에 의하여 얻어진 것인, 약학 조성물. - 제3항에 있어서,
상기 (b) 단계에 후속적으로 얻어진 배양물을 (c) 액체 배지에 추가로 1~14일 동안 현탁 배양하는 단계를 추가로 수행하여 얻어진 것인, 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 케피어 그레인 배양물은 상기 케피어 그레인 배양물로부터 케피어 그레인이 제거된 케피어 그레인 배양액인, 약학 조성물. - 제5항에 있어서,
상기 케피어 그레인 배양액은 케피어 그레인 배양액을 100~1,000g로 0 초과 20℃ 이하의 온도에서 5분 내지 1시간 동안 1차 원심 분리하는 단계; 및 상기 1차 원심 분리 후 상등액을 회수하여 1,000~5,000g로 0 초과 20℃ 이하의 온도에서 10분 내지 1시간 동안 2차 원심 분리하는 단계에 의하여 얻어진 상등액인, 약학 조성물. - 제6항에 있어서,
상기 케피어 그레인 배양액은 상기 2차 원심 분리 후 얻어진 상등액을 5,000~20,000g로 0 초과 20℃ 이하의 온도에서 10분 내지 1시간 동안 3차 원심 분리하여 얻어진 상등액인, 약학 조성물. - 제7항에 있어서,
상기 케피어 그레인 배양액은 상기 3차 원심 분리 후 얻어진 상등액을 초원심분리기(ultracentrigufe)를 이용하여 100,000~150,000g로 0 초과 20℃ 이하의 온도에서 1시간 내지 3시간 동안 4차 원심 분리하여 얻어진 펠렛인, 약학 조성물. - 제5항에 있어서,
상기 케피어 그레인 배양액은 케피어 그레인 배양물을 3,000~5,000g로 5분 내지 1시간 동안 1차 원심 분리하는 단계; 1차 원심 분리 후 얻어진 농축 배양액에 대하여 1N 소디움 아세테이트를 0.1 내지 1.5 부피비로 첨가한 뒤 -10℃ 이상 0℃ 이하의 온도에서 30~60분 동안 배양하는 단계에 의하여 얻어진 침전 배양액인, 약학 조성물. - 제9항에 있어서,
상기 케피어 그레인 배양액은 상기 침전 배양액을 3,000~5,000g로 5분 내지 1시간 동안 2차 원심 분리하여 얻어진 펠렛인, 약학 조성물. - 제10항에 있어서,
상기 케피어 그레인 배양액은 상기 2차 원심 분리 후 얻어진 침전물을 3,000~5,000g로 5분 내지 1시간 동안 원심 분리하여 얻어진 펠렛인, 약학 조성물. - 제10항에 있어서,
상기 과민성 대장 증후군은 설사 우세형 과민성 대장 증후군(d-IBS), 변비 우세형 과민성 대장 증후군, 또는 설사-변비 혼합형 과민성 대장 증후군인, 약학 조성물. - 케피어 그레인(kefir grain) 배양물을 유효성분으로 포함하는 과민성 대장 증후군의 예방 또는 치료용 식품 조성물.
- 제13항에 있어서,
상기 케피어 그레인은 사카로마이세스(Saccharomyces) 속, 라칸세아(Lachancea) 속, 한세니아오스포라(Hanseniasospora) 속, 지고토루라스포라(Zygotorulaspora) 속, 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) 속, 토룰라(Torula) 속, 캔디다(Candida) 속, 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 아세토박터(Acetobacter) 속 및 스트렙토코커스(Streptococcus) 속으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 균주를 포함하는, 식품 조성물. - 제13항에 있어서,
상기 케피어 그레인 배양물은 (a) 케피어 그레인을 고체 배지에 12~48시간 동안 1차로 배양하는 단계; 및 (b) 1차 배양한 뒤 액체 배지에 1~48시간 동안 2차로 현탁 배양하는 단계에 의하여 얻어진 것인, 식품 조성물. - 제15항에 있어서,
상기 (b) 단계에 후속적으로 얻어진 배양액을 (c) 액체 배지에 추가로 1~14일 동안 현탁 배양하는 단계를 추가로 수행하여 얻어진 것인, 식품 조성물. - 제13항에 있어서,
상기 케피어 그레인 배양물은 상기 케피어 그레인 배양물로부터 케피어 그레인이 제거된 케피어 그레인 배양액인, 식품 조성물.
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US10632161B1 (en) | 2019-05-23 | 2020-04-28 | Prostemics Co. Ltd. | Method for ameliorating or treating a bowel disease |
EP3815700A1 (en) * | 2019-10-30 | 2021-05-05 | Biomillenia SAS | Medical compositions and their use in treating inflammatory bowel disease |
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US10632161B1 (en) | 2019-05-23 | 2020-04-28 | Prostemics Co. Ltd. | Method for ameliorating or treating a bowel disease |
EP3815700A1 (en) * | 2019-10-30 | 2021-05-05 | Biomillenia SAS | Medical compositions and their use in treating inflammatory bowel disease |
WO2021083970A1 (en) * | 2019-10-30 | 2021-05-06 | Biomillenia Sas | Medical compositions and their use in treating inflammatory bowel disease |
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