TW202015654A - 皮膚之抗老化用劑及抗老化相關基因表現調控用劑 - Google Patents
皮膚之抗老化用劑及抗老化相關基因表現調控用劑 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202015654A TW202015654A TW108125848A TW108125848A TW202015654A TW 202015654 A TW202015654 A TW 202015654A TW 108125848 A TW108125848 A TW 108125848A TW 108125848 A TW108125848 A TW 108125848A TW 202015654 A TW202015654 A TW 202015654A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- aging
- dna
- gene expression
- gene
- hyaluronic acid
- Prior art date
Links
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 title claims abstract description 66
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 62
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 title description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 51
- 235000020712 soy bean extract Nutrition 0.000 claims abstract description 49
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 claims abstract description 28
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims abstract description 20
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims abstract description 17
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 57
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 50
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 50
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 26
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 24
- 230000037319 collagen production Effects 0.000 claims description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 22
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 18
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 14
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 13
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 claims description 12
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 claims description 12
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 8
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims description 8
- 101710197057 Hyaluronan synthase 1 Proteins 0.000 claims description 7
- 101710197056 Hyaluronan synthase 2 Proteins 0.000 claims description 7
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 claims description 7
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 claims description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 5
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 3
- 230000036569 collagen breakdown Effects 0.000 claims description 3
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 abstract description 8
- 230000032683 aging Effects 0.000 abstract description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000007665 sagging Methods 0.000 abstract description 2
- 230000037394 skin elasticity Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000036558 skin tension Effects 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 76
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 66
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 66
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 38
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 31
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 27
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 25
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 25
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 25
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 102100040206 Hyaluronan synthase 2 Human genes 0.000 description 13
- 101710199679 Hyaluronidase-1 Proteins 0.000 description 13
- 102100039283 Hyaluronidase-1 Human genes 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 11
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 11
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 11
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 11
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 102100040203 Hyaluronan synthase 1 Human genes 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 9
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 8
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 7
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 6
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 6
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 5
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 5
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 5
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 description 4
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 description 4
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 4
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 4
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 3
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 3
- 101001013150 Homo sapiens Interstitial collagenase Proteins 0.000 description 3
- 108090000320 Hyaluronan Synthases Proteins 0.000 description 3
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 3
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 101001037191 Homo sapiens Hyaluronan synthase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001037187 Homo sapiens Hyaluronan synthase 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000962530 Homo sapiens Hyaluronidase-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000003918 Hyaluronan Synthases Human genes 0.000 description 2
- 101710128038 Hyaluronan synthase Proteins 0.000 description 2
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 2
- 208000003351 Melanosis Diseases 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 241000277331 Salmonidae Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- -1 anti-inflammatory Substances 0.000 description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 2
- VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N cadaverine Chemical compound NCCCCCN VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 2
- 102000055973 human HAS1 Human genes 0.000 description 2
- 102000049894 human HAS2 Human genes 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 229910052814 silicon oxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000037393 skin firmness Effects 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 2
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGRLGBBJGNXVML-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-3,5-dimethylphenyl)-2,6-dimethylaniline Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1.CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 NGRLGBBJGNXVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016284 Aggrecans Human genes 0.000 description 1
- 108010067219 Aggrecans Proteins 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 206010008570 Chloasma Diseases 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 206010014970 Ephelides Diseases 0.000 description 1
- 239000004230 Fast Yellow AB Substances 0.000 description 1
- 241000276438 Gadus morhua Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001066129 Homo sapiens Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 238000009015 Human TaqMan MicroRNA Assay kit Methods 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 206010040954 Skin wrinkling Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001338 aliphatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001153 anti-wrinkle effect Effects 0.000 description 1
- 239000000043 antiallergic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000003212 astringent agent Substances 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 210000004177 elastic tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000014106 fortified food Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N guanidine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.NC(N)=N YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003676 hair preparation Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000047486 human GAPDH Human genes 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000007427 paired t-test Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical group 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002040 relaxant effect Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 210000002374 sebum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M sodium;(2r)-2-[6-(4-chlorophenoxy)hexyl]oxirane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].C=1C=C(Cl)C=CC=1OCCCCCC[C@]1(C(=O)[O-])CO1 RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M 0.000 description 1
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 1
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
- A61K8/606—Nucleosides; Nucleotides; Nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
- A61K8/987—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of species other than mammals or birds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/13—Nucleic acids or derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/318—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on skin health and hair or coat
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2250/00—Food ingredients
- A23V2250/20—Natural extracts
- A23V2250/204—Animal extracts
- A23V2250/2042—Marine animal, fish extracts
Abstract
本發明之課題在於提供一種安全性較高且可長期安心使用之皮膚之抗老化用劑、抗老化相關基因表現調控用劑及包含該抗老化用劑或抗老化相關基因表現調控用劑而成之化妝品。
本發明之皮膚之抗老化用劑、抗老化相關基因表現調控用劑及包含該抗老化用劑或抗老化相關基因表現調控用劑而成之化妝品包含特殊低分子化DNA與大豆萃取物、較佳為大豆芽萃取物作為有效成分。該有效成分具有真皮纖維母細胞之功能活化作用,因此期待預防或改善肌膚之緊緻或彈力之降低、皺紋或鬆弛等皮膚之老化。
Description
本發明係關於一種皮膚之抗老化用劑或抗老化相關基因表現調控用劑,進一步詳細而言,係關於一種包含特殊低分子化DNA及大豆萃取物作為有效成分之皮膚之抗老化用劑、抗老化相關基因表現調控用劑、及包含該抗老化用劑或抗老化相關基因表現調控用劑而成之化妝品。
皮膚可大體分為與外界接觸之表皮、位於其內側且與表皮以強力接著之真皮、進一步處於其內側且位於真皮與肌肉之間之皮下脂肪組織。位於表皮與皮下脂肪組織之間之真皮包括乳頭層、真皮網狀層及結合性纖維組織。該真皮之約70%由膠原蛋白所占,此外包含彈性纖維(彈力蛋白)、透明質酸等細胞外基質成分。該等構成真皮之膠原蛋白、彈力蛋白、透明質酸等藉由存在於真皮網狀層之真皮纖維母細胞而生成。
一般而言,認為由於紫外線、乾燥、年齡增加等,該等纖維被破壞,變老而彈力降低,並且細胞外基質成分之產生功能降低而導致肌膚之緊緻或彈力降低、皺紋或鬆弛等肌膚老化。如上所述,真皮之細胞外基質成分、特別是膠原蛋白或透明質酸之減少與皮膚之彈性之降低或皺紋形成等老化現象有關聯。
因此,認為若使真皮纖維母細胞之功能活化來增加上述細胞外基質成分之產生,則可預防或改善肌膚之老化。特別是形成於臉部之皺紋作為老化標誌對人類之外觀造成較大影響。因此,對作為保持青春之方法之具有預防或改善皺紋之效果之化妝品(抗老化、抗皺化妝品)的需求日益變高(非專利文獻1)。
此處,報告用作安全且效果優異之功能性食品之脫氧核糖核酸(DNA)具有改善肌膚狀態(水分量、皮脂量、溝表皮密度、皺紋、黃褐斑、雀斑等)之效果(專利文獻1、2)。
又,報告大豆之種子、胚芽(胚)或芽之萃取物包含較多之聚胺,具有支持皮膚結構之彈力蛋白、膠原蛋白、透明質酸等細胞外基質成分之產生促進作用(專利文獻3)。
然而,關於該等脫氧核糖核酸(DNA)與大豆萃取物之交互作用,據本發明者所知,未有報告。
[先前技術文獻]
[專利文獻]
專利文獻1:日本專利特開2007-291062號公報
專利文獻2:日本專利特開2008-63315號公報
專利文獻3:日本專利特開2012-46544號公報
[非專利文獻]
非專利文獻1:鈴木正人主編「抗老化、美白、保濕化妝品之技術開發」(普及版)CMC股份有限公司出版 2007年8月23日 第1次印刷發行
[發明所欲解決之問題]
若使真皮纖維母細胞之功能活化來使細胞外基質成分、特別是膠原蛋白或透明質酸之產生增加,則如上所述,可期待預防或改善肌膚之老化。因此,本發明之課題在於提供一種具有更加優異之真皮纖維母細胞之活化效果且安全性較高、可長期安心使用之皮膚之抗老化用劑、抗老化相關基因表現調控用劑及包含該抗老化用劑或抗老化相關基因表現調控用劑而成之化妝品。
[解決問題之技術手段]
本發明人等對上述課題進行了銳意研究,結果發現:即便長期服用亦安全之特殊低分子化DNA及大豆萃取物對真皮纖維母細胞具有協同活化作用,即細胞增生作用、膠原蛋白產生促進作用及透明質酸產生促進作用之協同效果(協同效應);且協同地促進與透明質酸合成相關之基因表現,並且減少與透明質酸分解相關之基因表現。本發明係基於該等見解而完成者。即,本發明如下所示。
(1)一種皮膚之抗老化用劑,其特徵在於:包含特殊低分子化DNA及大豆萃取物作為有效成分,且上述特殊低分子化DNA為自動植物提取之DNA之水解處理物,上述大豆萃取物為選自由大豆之種子、胚芽及芽所組成之群中之至少1種之萃取物。
(2)如(1)記載之抗老化用劑,其中抗老化為真皮纖維母細胞之功能活化,且該功能活化為選自由真皮纖維母細胞之增生促進作用、I型膠原蛋白產生促進作用及透明質酸產生促進作用所組成之群中之至少1種作用。
(3)如(1)或(2)記載之抗老化用劑,其中特殊低分子化DNA之含量為0.001~1質量%,且大豆萃取物之含量為0.001~1質量%。
(4)一種皮膚之抗老化相關基因表現調控用劑,其特徵在於:包含特殊低分子化DNA及大豆萃取物作為有效成分,且上述特殊低分子化DNA為自動植物提取之DNA之水解處理物,上述大豆萃取物為選自由大豆之種子、胚芽及芽所組成之群中之至少1種之萃取物。
(5)如(4)記載之抗老化相關基因表現調控用劑,其中抗老化相關基因表現調控為選自由I型膠原蛋白合成酵素基因、透明質酸合成酵素1基因及透明質酸合成酵素2基因所組成之群中之至少1種之基因表現促進、或膠原蛋白分解酵素基因及/或透明質酸分解酵素基因之基因表現減少。
(6)如(4)或(5)記載之抗老化相關基因表現調控用劑,其中特殊低分子化DNA之含量為0.001~1質量%,且大豆萃取物之含量為0.001~1質量%。
(7)一種化妝品,其係包含如(1)至(3)中任一項記載之抗老化用劑、或如(4)至(6)中任一項記載之抗老化相關基因表現調控用劑而成。
[發明之效果]
根據本發明,作為有效成分之特殊低分子化DNA及大豆萃取物對真皮纖維母細胞具有協同活化作用,因此可期待皮膚之抗老化,即預防或改善肌膚之緊緻或彈力之降低、皺紋或鬆弛等肌膚老化等效果。
以下,對本發明之實施形態進行詳細說明,但以下之說明為本發明之實施形態之一例,本發明並不限定於以下之記載內容。再者,本說明書中,於使用「~」之表達之情形時,作為包括其前後之數值或物性值在內之表達來使用。又,有效成分之含量(%)只要未特別明確記載,則為質量百分比(wt%)。
本發明之皮膚之抗老化用劑之特徵在於:包含特殊低分子化DNA及大豆萃取物作為有效成分,且特殊低分子化DNA為可藉由對自動植物提取之DNA進行水解處理而製備之成分,大豆萃取物為選自由大豆之種子、胚芽及芽所組成之群中之至少1種之萃取物。
此處,所謂皮膚之抗老化意指真皮纖維母細胞之功能活化,所謂該功能活化意指選自由真皮纖維母細胞之增生促進作用、I型膠原蛋白產生促進作用及透明質酸產生促進作用所組成之群中之至少1種作用。
又,本發明之皮膚之抗老化相關基因表現調控用劑之特徵在於:包含上述特殊低分子化DNA及大豆萃取物作為有效成分,且特殊低分子化DNA為可藉由對自動植物提取之DNA進行水解處理而製備之成分,大豆萃取物為選自由大豆之種子、胚芽及芽所組成之群中之至少1種之萃取物。
此處,於本發明中,所謂皮膚之抗老化相關基因意指如下所示之編碼參與真皮纖維母細胞中之膠原蛋白或透明質酸之合成或分解之任一種酵素的基因。
・I型膠原蛋白合成酵素基因(Human Collagen Type1 Alpha 1;COL1A1)
・膠原蛋白分解酵素基因(Human Matrix Metallopeptidase 1;MMP1)
・透明質酸合成酵素1基因(Human Hyaluronan Synthase 1;HAS1)
・透明質酸合成酵素2基因(Human Hyaluronan Synthase 2;HAS2)
・透明質酸分解酵素基因(Human Hyaluronidase 1;HYAL1)
又,所謂基因表現調控,意指上述合成酵素基因之表現促進(表現量之增加)及/或分解酵素基因之表現減少(表現量之減少)。作為該等皮膚之抗老化相關基因表現調控,較佳為意指選自由I型膠原蛋白合成酵素基因(COL1A1)、透明質酸合成酵素1基因(HAS1)及透明質酸合成酵素2基因(HAS2)所組成之群中之至少1種之基因表現促進、或膠原蛋白分解酵素基因(MMP1)及/或透明質酸分解酵素基因(HYAL1)之基因表現減少。
進而,所謂上述真皮纖維母細胞之功能活化,可為真皮纖維母細胞中之上述基因表現促進或上述基因表現減少。
本發明之皮膚之抗老化用劑或皮膚之抗老化相關基因表現調控用劑亦可包含特殊低分子化DNA及大豆萃取物作為有效成分,且視需要進而包含其他任意成分。
本發明中之特殊低分子化DNA係可藉由對自動植物提取之DNA進行水解處理而製備之成分。DNA之供給源可為動物、植物、微生物等各種生物,又,亦可使用合成DNA作為DNA。該等中,就包含較多DNA或可有效地利用水產加工之廢棄物之觀點而言,特佳為使用源自鮭魚、鱒魚、鱈魚等魚類之精巢(魚白)的DNA。
自魚類之精巢之DNA之萃取及純化可藉由常規方法(例如依據日本專利特開2005-245394號公報之記載)進行。例如,粗粉碎魚類之精巢,對於經粗粉碎之魚類之精巢,於DNA不會分解之條件下進行蛋白質分解酵素(蛋白酶)處理,向經酵素處理之溶液中添加醇(甲醇、乙醇、異丙醇等),使DNA以DNA鹽(DNA鈉鹽)之形式沈澱,回收該沈澱物。或者向經酵素處理之溶液中添加酸(鹽酸、磷酸、檸檬酸等),使DNA沈澱,回收該沈澱物,用氫氧化鈉進行中和並進行乾燥,藉此可獲得DNA鹽(DNA鈉鹽)。
使用核酸酶等核酸分解酵素使所獲得之DNA鹽水解,藉此可獲得特殊低分子化DNA。作為水解處理所使用之核酸酶,例如可使用源自青黴菌之核酸酶。
水解例如可藉由如下方式進行:向調整至65℃左右之溫水中投入上述DNA鹽(DNA鈉鹽)作為原料,攪拌後,進一步加溫至70℃,添加核酸酶並使之反應。作為水解處理時之溫度,較佳為60~75℃,更佳為70℃。
對所獲得之水解產物例如進行冷凍乾燥,藉此可獲得粉末狀之特殊低分子化DNA。利用上述方法所得之特殊低分子化DNA通常能夠以鈉鹽之狀態獲得。再者,鹽並不限於鈉鹽,例如亦可為鉀鹽或鈣鹽。又,特殊低分子化DNA亦可不為鹽而為游離體。
特殊低分子化DNA較佳為含有分子量為12,000以下之組分10~80%,更佳為含有分子量為5,000以下之組分10~80%。再者,分子量分佈之測定可藉由如下方式進行:藉由GPC將試樣基於分子量進行分級後藉由UV(ultraviolet,紫外線)檢測器進行定量。
本發明中之大豆萃取物為選自由大豆之種子、胚芽及芽所組成之群中之至少1種之萃取物。萃取條件並無特別限定,較佳為獲得包含聚胺之植物萃取物之方法、例如如專利文獻3所記載,將大豆之種子、胚芽(胚)或芽於適當之介質中進行粉碎,於酸性條件下進行萃取之方法。再者,用作原料之胚芽只要收集自種子分離者即可,關於大豆之芽,只要收集於適當之條件下使大豆種子發芽所得之芽部分即可。
此處,大豆萃取物中包含較多聚胺。聚胺為具有2個以上一級胺基之直鏈脂肪族烴之總稱,並作為存在於所有生物中且參與細胞分裂或蛋白合成之生長因子而為人所知。
大豆萃取物中之聚胺含量並無特別限制,較佳為0.05%以上,更佳為0.1%以上,進而較佳為0.15%以上,特佳為0.2%以上。再者,聚胺含量可藉由高效液相層析法進行測定。
大豆萃取物、特別是大豆芽部分之萃取物(以下,有時稱為「大豆芽萃取物」)中包含較多聚胺(腐胺、屍胺、亞精胺、精胺等)(專利文獻3)。藉由使用包含較多聚胺之大豆芽萃取物,可期待聚胺所發揮之效果。
作為大豆萃取物,可使用市售品。具體而言,例如可列舉:東洋紡公司製造之大豆芽萃取物(Phytopolyamine(註冊商標)-S(商品號:SPA-301)、Phytopolyamine-SP(商品號:SPA-308))、Combi股份有限公司製造之大豆萃取物素材(Soypolya(註冊商標))等。
抗老化用劑中之有效成分之含量係根據製劑之種類或形態、使用目的、使用頻率等而不同,難以統一規定,但各成分之含量或含量比較佳為對真皮纖維母細胞之活化作用發揮協同效應之含量或含量比。
例如,將抗老化用劑應用於皮膚(抗老化用劑為化妝品)之情形係如下所示。特殊低分子化DNA之含量較佳為0.01~10 mg/mL(約0.001~1%),更佳為0.01~5 mg/mL(約0.001~0.5%),進而較佳為0.01~2 mg/mL(約0.001~0.2%)。又,大豆萃取物之含量較佳為0.01~10 mg/mL(0.001~1%),更佳為0.1~5 mg/mL(0.01~0.5%),進而較佳為0.1~2 mg/mL(0.01~0.2%)。
又,特殊低分子化DNA與大豆萃取物之含量比並無特別限制,以質量比計,較佳為特殊低分子化DNA:大豆萃取物=1:50~50:1,更佳為1:20~10:1,進而較佳為1:10~5:1。
進而,抗老化用劑中之聚胺濃度係根據製劑之種類或製品形態、使用目的、使用頻率等而決定,並無特別限定,適宜為通常0.00001~100 mM、較佳為0.00005~75 mM、更佳為0.0001~50 mM。
若特殊低分子化DNA或大豆萃取物之含量或含量比為較佳之範圍內,則如下述實施例中具體所示,於對真皮纖維母細胞之活化作用(細胞增生、膠原蛋白產生促進、透明質酸產生促進、透明質酸合成酵素基因表現促進、透明質酸分解酵素基因表現減少)發揮協同效應或顯著效果之方面上有利。
此處,所謂真皮纖維母細胞之活化作用之協同效應意指:對真皮纖維母細胞併用特殊低分子化DNA與大豆萃取物時,細胞增生率、膠原蛋白產生率、透明質酸產生率之任一者大於(明顯大於)單獨使用各者時之程度之和;或對真皮纖維母細胞併用特殊低分子化DNA與大豆萃取物時,膠原蛋白或透明質酸合成酵素基因之表現量、較佳為透明質酸合成酵素基因之表現量、膠原蛋白或透明質酸分解酵素基因之表現減少量、較佳為透明質酸分解酵素表現減少量之任一者大於(明顯大於)單獨使用各者時之程度之和。又,所謂顯著效果意指在與陰性對照比較之情形時存在有意義差之效果。
本發明之抗老化用劑或抗老化相關基因表現調控用劑可藉由如下方式製成所需劑型:藉由常規方法將特殊低分子化DNA、大豆萃取物、及視需要之其他成分加以混合。此處,作為其他成分,可列舉與下述本發明之化妝品可含有之任意成分相同之成分。
本發明之化妝品係包含皮膚之抗老化用劑或抗老化相關基因表現調控用劑而成者。此處,所謂「包含而成」意指亦可包含與所需之製品形態對應之生理學上可容許之載體或可併用之其他輔助成分等任意成分。
本發明之化妝品例如可作為基礎化妝品或用於塗抹於頭皮及毛髮上之頭髮用化妝品等而提供。再者,於本發明中,所謂化妝品,除日本藥事法之化妝品以外,亦包含準藥品。
於將本發明之抗老化用劑或抗老化相關基因表現調控用劑作為化妝品來提供之情形時,可採用之劑型只要為可應用於皮膚者即可,並無特別限制。具體而言,可以液狀、乳劑狀、凝膠狀、乳霜狀、軟膏狀、泡沫狀、霧狀、氣溶膠狀等劑型製成化妝水、乳液、乳霜、凝膠、凍膠、香精、唇膏、敷劑、面膜等來提供。
作為該等化妝品可含有之其他任意成分,並無特別限制,可使用可調配於普通化妝品之添加劑等。作為此種添加劑,例如可列舉:水、油脂類、蠟類、烴類、脂肪酸類、醇類、酯類、界面活性劑、香料、收斂劑、殺菌、抗菌劑、美白劑、紫外線吸收劑、保濕劑、細胞活化劑、消炎、抗過敏劑、抗氧化劑、維生素劑、天然萃取物等。該等其他任意成分之含量亦無特別限制,可視所需劑型等而適宜地選擇。
又,本發明之抗老化用劑或抗老化相關基因表現調控用劑可以用於經口攝取之飲食品之形式來提供。飲食品除包含健康食品(例如,功能性食品、營養輔助食品、健康輔助食品、營養強化食品、營養調整食品、補充品等)、保健功能食品(例如,特定保健用食品、營養功能食品、功能性顯示食品等)、特殊用途食品(例如,患者用食品、嬰幼兒用調製奶粉、孕產婦或哺乳期婦女用奶粉等)以外,亦包含如附帶因真皮纖維母細胞之功能降低所導致之疾病或狀態(症狀)之風險降低、預防或改善之顯示之飲食品之分類者。
作為該等飲食品可含有之其他任意成分,並無特別限制,可使用可調配於普通飲食品之添加劑等。
[實施例]
以下,藉由實施例對本發明更具體地進行說明,但本發明之技術範圍並不限定於該等例示。
[實施例1]細胞增生作用、膠原蛋白、透明質酸產生促進作用
1 試驗之目的及概要
認為皮膚內之膠原蛋白或透明質酸對皮膚之緊緻、皮膚之柔軟性或潤澤發揮重要作用。因此,藉由真皮纖維母細胞之增生作用或膠原蛋白、透明質酸產生促進作用,對試驗樣品(特殊低分子化DNA與大豆萃取物)之協同效應進行評價。
2 材料與試驗方法
2-1 細胞
使用源自人類新生兒之真皮纖維母細胞株NB1RGB細胞(RIKEN BRC,Japan),於CO2
培養箱(CO2
濃度為5%,37℃)內進行培養。
2-2 培養基
使用包含0.1%(v/v)胎牛血清(Fetal Bovine Serum)(FBS,Hyclone,UK)及1.0%(v/v)抗真菌劑(Invitrogen,USA)之伊格爾最低必需培養基(Eagle's Minimal Essential Medium)(EMEM,Wako,Japan)。
2-3 試驗樣品
(1)特殊低分子化DNA
使用日生生物股份有限公司製造之水解DNA-Na(粉末)。本品係藉由利用上述方法自鮭魚科魚類之精巢(魚白)提取DNA之Na鹽,使其水解而製備所得者。
再者,將所使用之日生生物股份有限公司製造之水解DNA-Na之利用凝膠滲透層析法(GPC)所得之分析結果示於圖1,保持時間與分子量之關係係示於表1。分子量標準之12,000係以細胞色素C(Cytochrome c)(MW為12,400)之保持時間為基礎。
根據上述分析結果,日生生物股份有限公司製造之水解DNA-Na之基於分子量之組分如下所示。
分子量為12,000~5,000之組分(溶出時間為20分鐘~未達25分鐘):32.0%
分子量為5,000以下之組分(溶出時間為25分鐘以下):32.4%
由此,日生生物股份有限公司製造之水解DNA-Na之分子量為12,000以下之組分為64.4%。
藉由30 μM之L-抗壞血酸(CAS No. 50-81-7,Wako,Japan)及含有0.1%FBS之EMEM,將調整至3.0 mg/mL之試驗樣品(水解DNA-Na)以公比10進行連續稀釋而用時製備為共2個濃度(0.03 mg/mL、0.3 mg/mL)(最終濃度為0.01 mg/mL、0.1 mg/mL)。
(2)大豆萃取物
使用東洋紡公司製造之Phytopolyamine(註冊商標)-SP(商品號:SPA-308、調配比率:大豆芽萃取物約為70%、檸檬酸Na約為30%)。
藉由30 μM之L-抗壞血酸(CAS No. 50-81-7,Wako,Japan)及含有0.1%FBS之EMEM,用時製備0.39 mg/mL、0.81 mg/mL及1.53 mg/mL之試驗樣品(SPA-308)(最終濃度為0.13 mg/mL、0.27 mg/mL及0.51 mg/mL)。
(3)混合溶液(併用)
使用上述2種試驗樣品。
藉由30 μM之L-抗壞血酸(CAS No. 50-81-7,Wako,Japan)及含有0.1%FBS之EMEM,並藉由調整至0.81 mg/mL之含有SPA-308之EMEM,將調整至3.0 mg/mL之水解DNA-Na以公比10進行連續稀釋而用時製備為共2個濃度(0.03 mg/mL、0.3 mg/mL)[SPA-308之最終濃度為0.27 mg/mL,水解DNA-Na之最終濃度為0.01 mg/mL、0.1 mg/mL]。
2-4 試驗構成
於細胞增生、膠原蛋白產生及透明質酸產生之算出時,1個處理組使用3孔之平均值。又,1板設置試驗樣品投予組、操作對照組各1組而實施試驗。包括試驗樣品製備在內,有關試驗之操作只要無特別記載,則均於室溫下實施。
2-5 試驗操作
(1)細胞培養
向96孔板(Lot. 3595,Corning,USA)中每1孔接種2.0×104
cells/200 μL之NB1RGB細胞,於CO2
培養箱內培養24小時。又,為了防止培養時之乾燥,向不用於試驗之孔中添加200 μL之磷酸鹽緩衝溶液(Phosphate buffer saline)(PBS(-),Lot.198601,Nissui,Japan)。
24小時後,向96孔板中添加100 μL之試驗樣品及陰性對照,於CO2
培養箱內培養48小時。陰性對照使用30 μM之L-抗壞血酸及含有0.1%FBS之EMEM。
48小時後,將培養上清液分注、冷凍保存(-20℃)至新的96孔板。使用2-5(3)及(4)所示之ELISA(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,酵素結合免疫吸附分析法)測定該培養上清液中之膠原蛋白量及透明質酸量,評價試驗樣品之膠原蛋白、透明質酸產生促進作用。又,藉由2-5(2)所示之方法測定去除培養上清液之96孔板之細胞數,評價試驗樣品之細胞增生作用。
(2)細胞增生作用
如下述般評價試驗樣品對真皮纖維母細胞之增生所造成之效果。
將去除了培養基之96孔板之各孔用加溫至37℃之PBS(-)300 μL安靜地洗淨2次。繼而,每1孔添加0.5 mg/mL之3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-噻唑蘭(3-(4,5-dimethylthiazol-2-ul)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)(MTT,CAS No. 298-93-1,Sigmα-Aldrich,USA)溶液100 μL,於CO2
培養箱內培養2小時。
培養結束後,去除MTT溶液,用200 μL之PBS(-)進行洗淨。為了使所生成之不溶性甲䐶(formazan)可溶,添加包含0.04 N之鹽酸(CAS No. 7647-01-0,Kanto Chemical,Japan)之2-丙醇(CAS No. 67-63-0,Kanto Chemical,Japan)200 μL,於遮光下靜置1小時。
將96孔板以270 rpm振盪10秒,使孔內之色素分散均勻後,使用微盤讀取器(SPARKTM
10M,TECAN,Switzerland)測定570 nm之吸光度(OD570
)。
算出將陰性對照之OD570
設為100%之試驗樣品投予組之OD570
作為細胞增生率(%)。利用不對應之2組檢定(Student's t-test,史都登氏t試驗法)對陰性對照與試驗樣品投予組之細胞增生率(%)進行有意義差檢定。檢定均於兩側將有意義水準設為未達5%(p<0.05,p<0.01,p<0.001)。
(3)膠原蛋白產生促進作用
利用競爭ELISA如下述般評價試驗樣品對所謂對肌膚賦予緊緻或彈力之I型膠原蛋白之產生量的效果。
培養上清液中之膠原蛋白量之測定係使用人I型膠原ELISA套組(Human Collagen typeI ELISA kit)(Lot. EC1-E105,ACEL,Japan)。
藉由稀釋緩衝液(Dilution buffer)將膠原蛋白標準溶液以公比2進行連續稀釋,製備共7個濃度。又,藉由稀釋緩衝液將培養上清液進行2倍稀釋。
向126 μL之膠原蛋白標準溶液及經2倍稀釋之培養上清液中添加14 μL之生物素標記膠原蛋白抗體溶液,藉由輕敲進行混合。
藉由200 μL之洗淨緩衝液(Wash buffer)將膠原蛋白固相化微量滴定盤洗淨3次,添加含有50 μL之生物素標記膠原蛋白抗體之標準溶液及培養上清液,以約270 rpm振盪1小時。
1小時後,藉由200 μL之洗淨緩衝液洗淨3次,添加50 μL之過氧化酶標記抗生物素蛋白溶液,以約270 rpm振盪1小時。1小時後,藉由200 μL之洗淨緩衝液洗淨3次,每1孔添加3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine)受質溶液50 μL,並靜置15分鐘。
其次,每1孔添加停止溶液(Stop solution)50 μL,將微量滴定盤以270 rpm振盪1分鐘而使孔內之色素均勻後,使用微盤讀取器測定450 nm之吸光度(OD450
)。
根據膠原蛋白標準溶液之OD450
將校準曲線藉由4-參數邏輯斯蒂模型(4-Parameter logistic model)進行回歸。用由回歸方程式所獲得之值乘以稀釋倍率而算出陰性對照及試驗樣品之膠原蛋白產生量(μg/mL)。
將陰性對照之膠原蛋白產生量設為100%,算出試驗樣品之膠原蛋白產生率(%)。利用不對應之2組檢定(Student's t-test)對陰性對照與試驗樣品添加之膠原蛋白產生率(%)進行有意義差檢定。檢定均於兩側將有意義水準設為未達5%(p<0.05,p<0.01,p<0.001)。
(4)透明質酸產生促進作用
利用夾層ELISA如下述般評價試驗樣品對所謂於膠原蛋白或彈力蛋白之間含有水分之透明質酸之產生量的效果。
培養上清液中之透明質酸量之測定係使用Hyaluronan Quantikine ELISA套組(Lot. DHYAL0,R&D Systems,USA)。
藉由稀釋緩衝液將透明質酸標準溶液以公比2進行連續稀釋,製備共7個濃度。又,藉由稀釋緩衝液將培養上清液進行8倍稀釋。
向聚集蛋白聚糖固相化微量滴定盤中每1孔添加50 μL之生物素標記透明質酸抗體溶液。進而,添加50 μL之經稀釋之培養上清液,以約270 rpm振盪1小時。
1小時後,藉由400 μL之洗淨緩衝液洗淨5次,添加100 μL之過氧化酶標記抗生物素蛋白溶液,以約270 rpm振盪1小時。1小時後,藉由400 μL之洗淨緩衝液洗淨5次,每1孔添加100 μL之3,3',5,5'-四甲基聯苯胺受質溶液,於遮光下靜置30分鐘。
其次,每1孔添加100 μL之停止溶液,將微量滴定盤以270 rpm振盪1分鐘而使孔內之色素均勻後,使用微盤讀取器測定450 nm之吸光度(OD450
)。
根據透明質酸標準溶液之OD450
將校準曲線藉由4-參數邏輯斯蒂模型進行回歸。用由回歸方程式所獲得之值乘以稀釋倍率,算出陰性對照及試驗樣品之透明質酸產生量(ng/mL)。
將陰性對照之透明質酸產生量設為100%,算出試驗樣品之透明質酸產生率(%)。利用不對應之2組檢定(Student's t-test)對陰性對照與試驗樣品添加之透明質酸產生率(%)進行有意義差檢定。檢定均於兩側將有意義水準設為未達5%(p<0.05,p<0.01,p<0.001)。
3 試驗結果
3-1 特殊低分子化DNA
(1)細胞增生作用
將陰性對照之細胞增生量(OD570
)設為100%來算出時之試驗樣品(水解DNA-Na)0.01 mg/mL及0.1 mg/mL之細胞增生率±標準偏差分別為101.3±6.8%及102.6±3.3%。
(2)I型膠原蛋白產生促進作用
將陰性對照之膠原蛋白產生量設為100%來算出時之試驗樣品(水解DNA-Na)0.01 mg/mL及0.1 mg/mL之膠原蛋白產生率±標準偏差分別為126.4±7.9%(p<0.01)及134.0±3.6%(p<0.01)。
(3)透明質酸產生促進作用
將陰性對照之透明質酸產生量設為100%來算出時之試驗樣品(水解DNA-Na)0.01 mg/mL及0.1 mg/mL之透明質酸產生率±標準偏差分別為102.2±5.0%及102.9±7.5%。
3-2 大豆萃取物
(1)細胞增生作用
將陰性對照之細胞增生量(OD570
)設為100%時之試驗樣品(SPA-308)0.13 mg/mL、0.27 mg/mL及0.51 mg/mL之細胞增生率±標準偏差分別為111.6±1.0%(p<0.01)、123.7±2.4%(p<0.01)及137.0±6.9%(p<0.01)。
(2)I型膠原蛋白產生促進作用
將陰性對照之膠原蛋白產生促進作用設為100%來算出時之試驗樣品(SPA-308)0.13 mg/mL、0.27 mg/mL及0.51 mg/mL之膠原蛋白產生促進率±標準偏差分別為135.1±1.3%(p<0.01)、174.1±6.3%(p<0.01)及199.9±11.8%(p<0.01)。
(3)透明質酸產生促進作用
將陰性對照之透明質酸產生量設為100%來算出時之試驗樣品(SPA-308)0.13 mg/mL、0.27 mg/mL及0.51 mg/mL之透明質酸產生率±標準偏差分別為113.1±4.7%(p<0.01)、123.3±3.8%(p<0.01)及137.8±10.3%(p<0.01)。
3-3 特殊低分子化DNA與大豆萃取物之併用
(1)細胞增生作用
將陰性對照之細胞增生量(OD570
)設為100%來算出之試驗樣品(水解DNA-Na+SPA-308)0.01 mg/mL+0.27 mg/mL及0.1 mg/mL+0.27 mg/mL之細胞增生率±標準偏差分別為133.0±4.8%(p<0.01)及140.8±5.7%(p<0.01)。
(2)I型膠原蛋白產生促進作用
將陰性對照之膠原蛋白產生量設為100%來算出時之試驗樣品(水解DNA-Na+SPA-308)0.01 mg/mL+0.27 mg/mL及0.1 mg/mL+0.27 mg/mL之膠原蛋白產生率±標準偏差分別為178.1±5.5%(p<0.01)及230.6±9.9%(p<0.01)。
(3)透明質酸產生促進作用
將陰性對照之透明質酸產生量設為100%來算出時之試驗樣品(水解DNA-Na+SPA-308)0.01 mg/mL+0.27 mg/mL及0.1 mg/mL+0.27 mg/mL之透明質酸產生率±標準偏差分別為132.7±7.6%(p<0.01)及139.8±2.9%(p<0.01)。
將上述結果示於表2。表2中,「DNA-Na」為「水解DNA-Na」。由表2可知,併用特殊低分子化DNA(水解DNA-Na)與大豆萃取物(SPA-308)時之細胞增生率、膠原蛋白產生率、透明質酸產生率顯著大於單獨使用各者時之程度(率)之和。藉此,可確認特殊低分子化DNA與大豆萃取物對真皮纖維母細胞之功能活化作用(細胞增生作用、膠原蛋白產生促進作用及透明質酸產生促進作用)之協同效應。
[實施例2]透明質酸合成或分解酵素基因表現調控
1 試驗之目的及概要
已知皮膚內之膠原蛋白或透明質酸對皮膚之緊緻、柔軟性或潤澤發揮重要作用,特別是真皮內之透明質酸量之減少與皮膚之彈力之降低或皺紋形成相關聯。此處,於本實施例中,藉由即時聚合酶鏈鎖反應法對真皮纖維母細胞之透明質酸之合成或分解等試驗樣品(特殊低分子化DNA與大豆萃取物)對與抗老化相關之基因之表現的效果進行評價。
2 材料與試驗方法
2-1 細胞
於相同條件下培養與實施例1之2-1相同之細胞並使用。
2-2 培養基
將FBS(Fetal Bovine Serum)之含量變為10.0%(v/v),除此以外,使用與實施例1之2-2相同之組成之培養基(EMEM)。
2-3 試驗樣品
(1)特殊低分子化DNA溶液
使用與實施例1之2-3之(1)相同之特殊低分子化DNA(水解DNA-Na)。
藉由含有10%FBS之EMEM,將調整至1 mg/mL之試驗樣品(水解DNA-Na)以公比10進行連續稀釋而用時製備成共2個濃度(最終濃度為0.01 mg/mL、0.1 mg/mL)。
(2)大豆萃取物溶液
使用與實施例1之2-3之(2)相同之大豆萃取物(SPA-308)。
藉由含有10%FBS之EMEM,將調整至2.7 mg/mL之試驗樣品(SPA-308)以公比10進行連續稀釋而用時製備成共2個濃度(最終濃度為0.027 mg/mL、0.27 mg/mL)。
(3)混合溶液(併用)
使用上述2種試驗樣品。
藉由含有10%FBS之EMEM,並藉由調整至0.27 mg/mL之含有SPA-308之EMEM,將調整至1 mg/mL之水解DNA-Na以公比10進行連續稀釋而用時製備成共2個濃度(SPA-308之最終濃度為0.27 mg/mL,水解DNA-Na之最終濃度為0.01 mg/mL、0.1 mg/mL)。
2-4 基因表現分析
使用TaqMan Assay(Applied Biosystems,USA),對編碼如下酵素之基因實施表現分析。
・透明質酸合成酵素1(Human Hyaluronan Synthase 1(HAS1),Assay ID. Hs00758053_m1)
・透明質酸合成酵素2(Human Hyaluronan Synthase 2(HAS2),Assay ID. Hs00193435_m1)
・透明質酸分解酵素(Human Hyaluronidase 1(HYAL1),Assay ID. Hs00201046_m1)
作為內部標準基因,使用甘油醛-3-磷酸脫氫酶(Human Glyceraldehyde-3-PhosphateDehydrogenase(GAPDH),Assay ID. Hs02786624_g1)基因。
2-5 試驗構成
於基因表現量之分析時,1個處理組使用3片35 mm之皿(Cat No. 150318,Thermo Scientific,USA)之平均值。包括試驗樣品製備在內之與試驗相關之操作只要無特別記載,則均於室溫下實施。
2-6 試驗方法
(1)細胞培養及試驗樣品添加
向35 mm之皿中接種5.0×105
cells/2 mL之NB1RGB細胞,於CO2
培養箱內培養24小時。24小時後,去除35 mm之皿之培養基並添加試驗樣品及含有陰性對照之培養基,於CO2
培養箱內培養24小時。
(2)RNA(ribonucleic acid,核糖核酸)提取、純化及定量
使用PureLinkTM
RNA迷你套組(Cat No. 12183018A,Invitrogen,USA),如下述般進行RNA提取、純化。
培養24小時後,將去除了培養基之35 mm之皿用加溫至37℃之PBS(-)2 mL洗淨2次。向其中添加600 μL之含有2 M之二硫蘇糖醇(Dithiothreitol)(CAS No. 27565-41-9,Invitrogen,USA)之細胞溶解緩衝液(Lysis Buffer)而使細胞溶解,回收溶菌液。
進而,使用均質器(Homogenizer)(Cat No. 12183-026,Invitrogen,USA),將所回收之溶菌液中之細胞破碎。
向細胞破碎液中添加600 μL之70%乙醇(CAS No. 64-17-5,Japan Alcohol,Japan)溶液後,移至帶有氧化矽薄膜之管柱後,於12,000×g、室溫下離心15秒,廢棄濾液。
向氧化矽薄膜中添加700 μL之含有異硫氰酸胍之洗淨緩衝液I及500 μL之含有乙醇之洗淨緩衝液II,洗淨後,於12,000×g、室溫下離心15秒,使其乾燥。向其中添加30 μL之去RNA酶水(RNase-Free Water),於室溫下靜置1分鐘後,於12,000×g、室溫下離心15秒。將該等步驟重複2次,使RNA自膜溶出。
將所溶出之RNA之一部分分取至UV透過性96孔板(Cat No. 8404,Thermo Scientific,USA)中並藉由三羥甲基胺基甲烷-四乙酸乙二胺緩衝液(Tris-EDTA Buffer)(TE(pH值為8.0),Cat No. 310-90023,NIPPON GENE,Japan)進行25倍稀釋,使用微盤讀取器(SPARKTM
10M TECAN,Switzerland)測定260 nm之吸光度(OD260
)。
使用OD260
並藉由下式算出陰性對照及試驗樣品之RNA濃度,藉由TE緩衝液進行稀釋而將RNA濃度調整至10 μg/mL。
RNA濃度(μg/mL)=A×K×0.3(光程長度:cm)×25(稀釋倍率)
A:陰性對照或試驗樣品之OD260
K:K=40、RNA之吸光係數
(3)利用即時聚合酶鏈鎖反應法所進行之基因表現分析
使用SuperScriptTM
IV VILOTM
Master Mix with ezDNase(Cat No. 11766050,Invitrogen,USA),如下述般進行RNA之反轉錄。
向8連管(AB1182,Thermo Scientific,USA)中每1孔添加1 μL之10×ezDNase Buffer、1 μL之ezDNase enzyme、6 μL之去核酸酶水(Nuclease-free Water)及2 μL之10 μg/mL之RNA,於37℃下保溫2分鐘。2分鐘後,向8連管中每1孔添加4 μL之SuperScriptTM
IV VILOTM
Master Mix及6 μL之去核酸酶水,使用即時聚合酶鏈鎖反應(QuantStudioTM
3,Applied Biosystems,USA)於25℃下加熱10分鐘、於50℃下加熱10分鐘、於85℃下加熱5分鐘而合成cDNA。
向PCR板(Cat No. N8010560,Thermo Scientific,USA)中每1孔添加10 μL之TaqManTM
Fast Advanced Master Mix(Cat No. 4444557,Applied Biosystems,USA)、1 μL之TaqMan Gene Expressior、7 μL之UltraPureTM
Distilled Water(Invitrogen,Cat No. 10977-015,USA)及2 μL之cDNA,藉由板封(Cat No. 4360954,Thermo Scientific,USA)進行密封。
使用板式離心機將溶液短暫離心,去除起泡後,使用即時聚合酶鏈鎖反應系統,進行即時螢光定量聚合酶鏈鎖反應(Real-Time qPCR),算出陰性對照及試驗樣品中之各基因之螢光訊號達到任意閾值時之循環數即閾值循環數(Threshold Cycle)(Ct)值。藉由內部標準基因來修正Ct值,設為ΔCt值。藉由陰性對照之ΔCt值之平均來修正ΔCt值,將其設為ΔΔCt值。藉由ΔΔCt法,假定每1循環之檢測之差成為2倍量之差,代入2-ΔΔCt
而分析將陰性對照之基因表現量設為1時之試驗樣品之基因表現量。利用有對應之2組檢定(paired t-test)對陰性對照與試驗樣品添加之基因表現量進行有意義差檢定。檢定均於兩側將有意義水準設為未達5%(p<0.05,p<0.01,p<0.001)。
3 試驗結果
3-1 特殊低分子化DNA
(1)透明質酸合成酵素1基因(HAS1)表現
將陰性對照之HAS1表現量設為1時之試驗樣品(水解DNA-Na)0.01 mg/mL及0.1 mg/mL之HAS1表現量±標準偏差分別為1.11±0.04及1.02±0.07。
(2)透明質酸合成酵素2基因(HAS2)表現
將陰性對照之HAS2表現量設為1時之試驗樣品(水解DNA-Na)0.01 mg/mL及0.1 mg/mL之HAS2表現量±標準偏差分別為1.25±0.09(p<0.05)及1.49±0.05(p<0.001)。
(3)透明質酸分解酵素基因(HYAL1)表現
將陰性對照之HYAL1表現量設為1時之試驗樣品(水解DNA-Na)0.01 mg/mL及0.1 mg/mL之HYAL1表現量±標準偏差分別為1.06±0.12及1.34±0.14。
3-2 大豆萃取物
(1)透明質酸合成酵素1基因(HAS1)表現
將陰性對照之HAS1表現量設為1時之試驗樣品(SPA-308)0.027 mg/mL及0.27 mg/mL之HAS1表現量±標準偏差分別為1.03±1.2及0.99±0.16。
(2)透明質酸合成酵素2基因(HAS2)表現
將陰性對照之HAS2表現量設為1時之試驗樣品(SPA-308)0.027 mg/mL及0.27 mg/mL之HAS2表現量±標準偏差分別為1.88±0.46(p<0.05)及1.50±0.11(p<0.01)。
(3)透明質酸分解酵素基因(HYAL1)表現
將陰性對照之HYAL1表現量設為1時之試驗樣品(SPA-308)0.027 mg/mL及0.27 mg/mL之HYAL1表現量±標準偏差分別為0.97±0.08及0.84±0.06。
3-3 特殊低分子化DNA與大豆萃取物之併用
(1)透明質酸合成酵素1基因(HAS1)表現
將陰性對照之HAS1表現量設為1時之試驗樣品(水解DNA-Na+SPA-308)0.01 mg/mL+0.27 mg/mL及0.1 mg/mL+0.27 mg/mL之HAS1表現量±標準偏差分別為0.99±0.08及1.51±0.26(p<0.05)。
(2)透明質酸合成酵素2基因(HAS2)表現
將陰性對照之(HAS2)表現量設為1時之試驗樣品(水解DNA-Na+SPA-308)0.01 mg/mL+0.27 mg/mL及0.1 mg/mL+0.27 mg/mL之(HAS2)表現量±標準偏差分別為1.41±0.10(p<0.01)及1.54±0.07(p<0.001)。
(3)透明質酸分解酵素基因(HYAL1)表現
將陰性對照之(HYAL1)表現量設為1時之試驗樣品(水解DNA-Na+SPA-308)0.01 mg/mL+0.27 mg/mL及0.1 mg/mL+0.27 mg/mL之(HYAL1)表現量±標準偏差分別為0.58±0.11(p<0.01)及0.93±0.05。
將上述結果示於表3。表3中,「DNA-Na」為「水解DNA-Na」。由表3可知,於併用特殊低分子化DNA(水解DNA-Na)與大豆萃取物(SPA-308)之情形時,透明質酸合成酵素-1基因(HAS1)之表現量協同增加,透明質酸合成酵素-2基因(HAS2)之表現量與陰性對照相比顯著增加。進而,可知透明質酸分解酵素基因(HYAL1)表現量協同減少。由此,可確認藉由併用特殊低分子化DNA(水解DNA-Na)與大豆萃取物(SPA-308),與透明質酸合成相關之基因表現之促進及與分解相關之基因表現之減少同時發生。
由以上結果可推測,併用實施例1所示之特殊低分子化DNA(水解DNA-Na)與大豆萃取物(SPA-308)時之膠原蛋白與透明質酸之協同產生增加的原因在於:與膠原蛋白及透明質酸之合成相關之基因表現之促進及與分解相關之基因表現之減少同時發生。
[產業上之可利用性]
本發明之皮膚之抗老化用劑具有與先前之抗老化劑不同之作用、功能,可較先前之抗老化劑更有效率地預防及/或改善肌膚之老化,因此於化妝品之領域特別有用。
圖1係表示實施例中所使用之水解DNA-Na之利用凝膠滲透層析法(Gel Permeation Chromatography:GPC)所得之分析結果之圖。圖之橫軸為保持時間(分鐘),縱軸為紫外區域(波長為260 nm)之吸光度。
Claims (7)
- 一種皮膚之抗老化用劑,其特徵在於:包含特殊低分子化DNA及大豆萃取物作為有效成分,且 上述特殊低分子化DNA為自動植物提取之DNA之水解處理物, 上述大豆萃取物為選自由大豆之種子、胚芽及芽所組成之群中之至少1種之萃取物。
- 如請求項1之抗老化用劑,其中抗老化為真皮纖維母細胞之功能活化,且該功能活化為選自由真皮纖維母細胞之增生促進作用、I型膠原蛋白產生促進作用及透明質酸產生促進作用所組成之群中之至少1種作用。
- 如請求項1或2之抗老化用劑,其中特殊低分子化DNA之含量為0.001~1質量%,且大豆萃取物之含量為0.001~1質量%。
- 一種皮膚之抗老化相關基因表現調控用劑,其特徵在於:包含特殊低分子化DNA及大豆萃取物作為有效成分,且 上述特殊低分子化DNA為自動植物提取之DNA之水解處理物, 上述大豆萃取物為選自由大豆之種子、胚芽及芽所組成之群中之至少1種之萃取物。
- 如請求項4之抗老化相關基因表現調控用劑,其中抗老化相關基因表現調控為選自由I型膠原蛋白合成酵素基因、透明質酸合成酵素1基因及透明質酸合成酵素2基因所組成之群中之至少1種之基因表現促進、或膠原蛋白分解酵素基因及/或透明質酸分解酵素基因之基因表現減少。
- 如請求項4或5之抗老化相關基因表現調控用劑,其中特殊低分子化DNA之含量為0.001~1質量%,且大豆萃取物之含量為0.001~1質量%。
- 一種化妝品,其係包含如請求項1至3中任一項之抗老化用劑、或如請求項4至6中任一項之抗老化相關基因表現調控用劑而成。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018138405A JP6555674B1 (ja) | 2018-07-24 | 2018-07-24 | 皮膚の抗老化用剤及び抗老化関連遺伝子発現調節用剤 |
JP2018-138405 | 2018-07-24 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW202015654A true TW202015654A (zh) | 2020-05-01 |
TWI747011B TWI747011B (zh) | 2021-11-21 |
Family
ID=67539789
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW108125848A TWI747011B (zh) | 2018-07-24 | 2019-07-22 | 真皮纖維母細胞之功能活化劑及真皮纖維母細胞之基因表現調控劑 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11554092B2 (zh) |
EP (1) | EP3677248A4 (zh) |
JP (1) | JP6555674B1 (zh) |
KR (1) | KR102366340B1 (zh) |
BR (1) | BR112020006113A2 (zh) |
MX (1) | MX2020004602A (zh) |
MY (1) | MY194768A (zh) |
PH (1) | PH12020550395A1 (zh) |
RU (1) | RU2744251C1 (zh) |
TW (1) | TWI747011B (zh) |
WO (1) | WO2020022131A1 (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7458207B2 (ja) * | 2019-05-10 | 2024-03-29 | 花王株式会社 | 毛髪処理方法 |
CN110632303A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-12-31 | 广州市华代生物科技有限公司 | 一种基于酶学系统组合多种体外模型评价皮肤抗衰老功效的方法 |
JP7433685B1 (ja) | 2023-06-09 | 2024-02-20 | 日生バイオ株式会社 | 真皮線維芽細胞の機能賦活用剤及びそれを含んでなる化粧品 |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100471372B1 (ko) | 2001-12-04 | 2005-03-08 | 주식회사 태평양 | 피부 탄력 향상용 화장료 조성물 |
JP2005245394A (ja) | 2004-03-08 | 2005-09-15 | Nissei Bio Kk | 魚類白子からの二本鎖dnaの抽出・精製方法 |
JP2007021062A (ja) * | 2005-07-21 | 2007-02-01 | Taneaki Futagami | 血栓症予防クッション |
JP5025253B2 (ja) | 2006-03-31 | 2012-09-12 | 日生バイオ株式会社 | 基礎化粧品用配合剤及び基礎化粧品 |
JPWO2007148737A1 (ja) * | 2006-06-22 | 2009-11-19 | 東洋紡績株式会社 | 植物抽出物の調製方法、並びに植物抽出物及びその用途 |
JP5025254B2 (ja) * | 2006-08-09 | 2012-09-12 | 日生バイオ株式会社 | 皮溝密度を改良する化粧品用配合剤及び化粧品 |
US20080161229A1 (en) | 2006-12-21 | 2008-07-03 | Nissei Bio Co., Ltd. | Compounding ingredients for basic cosmetics and basic cosmetics |
US20080153741A1 (en) | 2006-12-21 | 2008-06-26 | Nissei Bio Co., Ltd. | Compounding ingredients for cosmetic formulation for improving skinditch density and cosmetic |
CN101371918B (zh) * | 2007-08-24 | 2013-03-20 | 天津天狮生物发展有限公司 | 鱼精多肽中的抗氧化二肽的新用途 |
JP2009234938A (ja) * | 2008-03-26 | 2009-10-15 | Toyobo Co Ltd | 植物由来ポリアミン含有抽出物を含有する化粧品組成物 |
JP2009234940A (ja) | 2008-03-26 | 2009-10-15 | Toyobo Co Ltd | 植物抽出物を含有する化粧品組成物 |
KR101476381B1 (ko) * | 2010-08-09 | 2014-12-24 | 정래준 | 어류 정액 또는 알로부터 분리된 dna 중합체 단편복합체를 포함하는 세포활성 강화용 조성물, 및 얼굴 또는 피부 충진제 |
KR101279870B1 (ko) * | 2010-12-08 | 2013-06-28 | 김보라 | 연어 정소를 이용한 화장품용 항노화 및 항산화 기능성 수액의 제조방법 |
JP5578160B2 (ja) | 2011-11-29 | 2014-08-27 | 東洋紡株式会社 | 植物由来の賦活化剤及び細胞外マトリックス産生促進剤 |
FR2987998B1 (fr) * | 2012-03-19 | 2014-04-25 | Isp Investments Inc | Composition cosmetique comprenant un systeme activateur de la proteine trf2 a action synergique constitue d'une association d'un extrait peptidique de soja et de levure et ses utilisations |
RU2657439C2 (ru) * | 2016-06-06 | 2018-06-13 | Часайэ Байэутекнолэджи Коп. | Экстракт семян сои, способ его получения, композиция экстракта семян сои, способ стимуляции пролиферации нейронов, лечения заболеваний головного мозга и лечения нейродегенеративных заболеваний (варианты) |
JP6836874B2 (ja) * | 2016-10-05 | 2021-03-03 | 株式会社ディーエイチシー | 育毛剤組成物、及び血管内皮細胞増殖因子産生促進剤 |
-
2018
- 2018-07-24 JP JP2018138405A patent/JP6555674B1/ja active Active
-
2019
- 2019-07-17 MY MYPI2020001651A patent/MY194768A/en unknown
- 2019-07-17 RU RU2020113255A patent/RU2744251C1/ru active
- 2019-07-17 WO PCT/JP2019/027998 patent/WO2020022131A1/ja unknown
- 2019-07-17 EP EP19840073.1A patent/EP3677248A4/en active Pending
- 2019-07-17 KR KR1020207009269A patent/KR102366340B1/ko active IP Right Grant
- 2019-07-17 US US16/652,778 patent/US11554092B2/en active Active
- 2019-07-17 BR BR112020006113-1A patent/BR112020006113A2/pt unknown
- 2019-07-17 MX MX2020004602A patent/MX2020004602A/es unknown
- 2019-07-22 TW TW108125848A patent/TWI747011B/zh active
-
2020
- 2020-04-02 PH PH12020550395A patent/PH12020550395A1/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR102366340B1 (ko) | 2022-02-23 |
RU2744251C1 (ru) | 2021-03-04 |
EP3677248A4 (en) | 2020-11-18 |
JP6555674B1 (ja) | 2019-08-07 |
BR112020006113A2 (pt) | 2021-02-09 |
US20200237636A1 (en) | 2020-07-30 |
MY194768A (en) | 2022-12-15 |
JP2020015672A (ja) | 2020-01-30 |
US11554092B2 (en) | 2023-01-17 |
WO2020022131A1 (ja) | 2020-01-30 |
MX2020004602A (es) | 2020-08-06 |
PH12020550395A1 (en) | 2021-03-08 |
KR20200044934A (ko) | 2020-04-29 |
EP3677248A1 (en) | 2020-07-08 |
TWI747011B (zh) | 2021-11-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105792837B (zh) | 包含胶原蛋白肽、弹性蛋白肽及蛋白多糖的组合物 | |
JP4456796B2 (ja) | コラーゲン産生増強剤の製造方法とその用途 | |
JP6670166B2 (ja) | 化粧料 | |
TWI747011B (zh) | 真皮纖維母細胞之功能活化劑及真皮纖維母細胞之基因表現調控劑 | |
JP5235439B2 (ja) | HMG−CoA還元酵素産生促進剤 | |
JP6374579B2 (ja) | 環状ジペプチドを有効成分とする皮膚保湿機能改善剤 | |
TW201210633A (en) | Agent for promoting hyaluronic acid production | |
KR20130088997A (ko) | 생캐비어 추출물 및 발효추출물을 이용한 육모, 발모, 탈모방지 및 두피 개선용 화장료 조성물 | |
JP6096943B2 (ja) | 飲食品組成物 | |
TW202145996A (zh) | 包含半乳寡醣或半乳寡醣和膠原蛋白三肽以改善免疫功能及皮膚狀況的功能性食品組合物和化妝品組合物 | |
JP2011042627A (ja) | ヒアルロン酸合成促進剤 | |
CN107106464B (zh) | 抗氧化剂和抗氧化/防uv化妆品 | |
TWI747488B (zh) | 佛手柑發酵汁液用於製備改善皮膚老化組合物的用途 | |
JP2019178123A (ja) | カンゾウ抽出発酵物、美白剤、抗老化剤、皮膚化粧料及び飲食品 | |
KR101578403B1 (ko) | 생물전환기법으로 추출한 해마, 해삼 및 전복 혼합추출물을 함유하는 피부보습용 화장료 조성물 | |
CN110573138B (zh) | 皮肤抗衰老剂以及抗衰老相关基因表达调节剂 | |
JP2019136027A (ja) | 発酵物 | |
JP5951077B2 (ja) | ヒアルロン酸合成促進剤 | |
JP2019202967A (ja) | 抗老化用組成物、抗老化用皮膚化粧料および抗老化用飲食品 | |
JP6375100B2 (ja) | 抗老化剤、美白剤、皮膚化粧料および飲食品 | |
JP2024060053A (ja) | 糖化に起因した保湿機能低下の抑制剤、皮膚化粧料および飲食品 | |
KR20230098055A (ko) | 난각막 미세분말을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 | |
KR20230111062A (ko) | 피부 항노화 및 보습용 식품 조성물 및 화장료 조성물 | |
CN117815159A (zh) | 金色鱼子紧致提升精华液及其制备方法 | |
TW201900194A (zh) | 泡葉藻萃取物用於調節基因群組表現之用途 |