RU2744251C1 - Средство для замедления старения кожи и регулятор экспрессии гена, связанного с замедлением старения - Google Patents
Средство для замедления старения кожи и регулятор экспрессии гена, связанного с замедлением старения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2744251C1 RU2744251C1 RU2020113255A RU2020113255A RU2744251C1 RU 2744251 C1 RU2744251 C1 RU 2744251C1 RU 2020113255 A RU2020113255 A RU 2020113255A RU 2020113255 A RU2020113255 A RU 2020113255A RU 2744251 C1 RU2744251 C1 RU 2744251C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dna
- extract
- target low
- gene
- molecular weight
- Prior art date
Links
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 83
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 62
- 230000032683 aging Effects 0.000 title description 26
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 title 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 80
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims abstract description 55
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims abstract description 54
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims abstract description 54
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims abstract description 50
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 48
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 38
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 37
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 claims abstract description 35
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims abstract description 35
- 235000020712 soy bean extract Nutrition 0.000 claims abstract description 27
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 27
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims abstract description 17
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 13
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims abstract description 12
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims abstract description 8
- 230000007064 DNA hydrolysis Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 5
- 101150028074 2 gene Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 claims abstract description 3
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 claims abstract description 3
- 241000894007 species Species 0.000 claims abstract description 3
- 101710199679 Hyaluronidase-1 Proteins 0.000 claims abstract 2
- 101000962530 Homo sapiens Hyaluronidase-1 Proteins 0.000 claims description 9
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 5
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 55
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 abstract description 25
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 10
- 230000007423 decrease Effects 0.000 abstract description 9
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 abstract description 7
- 230000037394 skin elasticity Effects 0.000 abstract description 6
- 230000037393 skin firmness Effects 0.000 abstract description 5
- 101150084750 1 gene Proteins 0.000 abstract description 4
- 238000007665 sagging Methods 0.000 abstract description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 94
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 94
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 37
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 32
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 30
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 30
- 239000000047 product Substances 0.000 description 29
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 27
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 26
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 26
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 230000000979 retarding effect Effects 0.000 description 18
- 230000037319 collagen production Effects 0.000 description 17
- 101710197057 Hyaluronan synthase 1 Proteins 0.000 description 13
- 102100040203 Hyaluronan synthase 1 Human genes 0.000 description 13
- 101710197056 Hyaluronan synthase 2 Proteins 0.000 description 13
- 102100040206 Hyaluronan synthase 2 Human genes 0.000 description 13
- 102100039283 Hyaluronidase-1 Human genes 0.000 description 13
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 13
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 13
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 12
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 10
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 10
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 10
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 9
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 9
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 8
- 101001037191 Homo sapiens Hyaluronan synthase 1 Proteins 0.000 description 7
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 7
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 6
- 101001037187 Homo sapiens Hyaluronan synthase 2 Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101001013150 Homo sapiens Interstitial collagenase Proteins 0.000 description 5
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 5
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 4
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 description 4
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 description 4
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 4
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 239000004430 Mapka Substances 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 241000277331 Salmonidae Species 0.000 description 2
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N cadaverine Chemical compound NCCCCCN VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 239000003340 retarding agent Substances 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 102100030497 Cytochrome c Human genes 0.000 description 1
- 108010075031 Cytochromes c Proteins 0.000 description 1
- 206010014970 Ephelides Diseases 0.000 description 1
- 239000004230 Fast Yellow AB Substances 0.000 description 1
- 241000276438 Gadus morhua Species 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 101001066129 Homo sapiens Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 238000009015 Human TaqMan MicroRNA Assay kit Methods 0.000 description 1
- 101710128038 Hyaluronan synthase Proteins 0.000 description 1
- 208000003351 Melanosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001338 aliphatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000043 antiallergic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000003212 astringent agent Substances 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000011382 collagen catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 210000004177 elastic tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000000686 essence Substances 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N guanidine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.NC(N)=N YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 235000001497 healthy food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 1
- 239000007934 lip balm Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000007427 paired t-test Methods 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007026 protein scission Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 1
- 235000014102 seafood Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 1
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000013022 venting Methods 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 1
- 230000037373 wrinkle formation Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
- A61K8/606—Nucleosides; Nucleotides; Nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
- A61K8/987—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of species other than mammals or birds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/13—Nucleic acids or derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/318—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on skin health and hair or coat
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2250/00—Food ingredients
- A23V2250/20—Natural extracts
- A23V2250/204—Animal extracts
- A23V2250/2042—Marine animal, fish extracts
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Birds (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к средству для замедления старения кожи. Средство для активации функции дермальных фибробластов содержит: целевую низкомолекулярную ДНК и экстракт сои в качестве активных ингредиентов, причем целевая низкомолекулярная ДНК представляет собой продукт гидролиза ДНК, полученной из семенников (молок) рыб, и содержит от 10 до 80% фракций, имеющих молекулярную массу от 330 до 12 000, экстракт сои представляет собой экстракт по меньшей мере одного вида, выбранного из группы, состоящей из семян, зародышей и ростков сои, содержание целевой низкомолекулярной ДНК составляет от 0,001% до 0,5% по массе, а содержание экстракта сои составляет от 0,01 до 0,5% по массе, соотношение содержания целевой низкомолекулярной ДНК и экстракта сои составляет от 1 : 50 до 50 : 1; а упомянутая активация функции представляет собой по меньшей мере одно действие, выбранное из группы, состоящей из стимулирования пролиферации, стимулирования производства коллагена типа I и стимулирования производства гиалуроновой кислоты в дермальных фибробластах. Средство для регуляции экспрессии гена дермальных фибробластов содержит: целевую низкомолекулярную ДНК и экстракт сои в качестве активных ингредиентов, причем целевая низкомолекулярная ДНК представляет собой продукт гидролиза ДНК, полученной из семенников (молок) рыб, и содержит от 10 до 80% фракций, имеющих молекулярную массу от 330 до 12000; экстракт сои представляет собой экстракт по меньшей мере одного вида, выбранного из группы, состоящей из семян, зародышей и ростков сои; содержание целевой низкомолекулярной ДНК составляет от 0,001% до 0,5% по массе, а содержание экстракта сои составляет от 0,01 до 0,5% по массе, соотношение содержания целевой низкомолекулярной ДНК и экстракта сои составляет от 1 : 50 до 50 : 1; а упомянутая регуляция экспрессии гена представляет собой стимуляцию одного или обоих из гена человеческой гиалуронсинтазы 1 и гена человеческой гиалуронсинтазы 2 дермальных фибробластов, или снижение экспрессии гена человеческой гиалуронидазы 1 дермальных фибробластов. Вышеописанные средства обладают активирующим воздействием на функцию дермальных фибробластов, могут предотвращать или замедлять старение кожи, предотвращать снижение упругости и эластичности кожи, образование морщин и обвисание. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл., 2 пр.
Description
Область техники
[0001]
Настоящее изобретение относится к средствам для замедления старения кожи или средствам для регулирования экспрессии гена, связанного с замедлением старения, в частности, средству для замедления старения кожи и средству для регулирования экспрессии гена, связанного с замедлением старения кожи, содержащему целевую низкомолекулярную ДНК и экстракт сои в качестве активных ингредиентов, а также к косметическому продукту, содержащему средство для замедления старения или регулирования экспрессии гена, связанного с замедлением старения.
Предшествующий уровень техники
[0002]
Кожу можно условно разделить на эпидермис, контактирующий с внешней средой, дерму, находящуюся под эпидермисом и плотно прилегающую к нему, и подкожную жировую клетчатку, расположенную ниже дермы между дермой и мышцами. Дерма, расположенная между эпидермисом и подкожной жировой клетчаткой, состоит из папиллярного слоя и сетчатого слоя, а также волокнистой соединительной ткани. Дерма состоит примерно на 70% из коллагена, а также содержит компоненты внеклеточного матрикса, в частности, эластичное волокно (эластин) и гиалуроновую кислоту. Коллаген, эластин, гиалуроновая кислота и прочие составляющие дермы вырабатываются дермальными фибробластами, находящимися в сетчатом слое дермы.
[0003]
Эти волокна разрушаются и стареют под воздействием ультрафиолетовых лучей, сухости, старения и других факторов, приводящих к снижению их эластичности и производственной функции компонентов внеклеточного матрикса, что обычно считается причиной старения кожи, в частности, уменьшения упругости и эластичности кожи, появления морщин и обвисания. Таким образом, уменьшение содержания в дерме компонентов внеклеточного матрикса, в частности, коллагена и гиалуроновой кислоты, способствует процессу старения, в частности, уменьшению эластичности кожи и образованию морщин.
[0004]
Следовательно, считается, что старение кожи можно предотвратить или замедлить, если активировать функцию дермальных фибробластов и увеличить производство вышеописанных компонентов внеклеточного матрикса, раскрытых выше. В частности, образующиеся на лице морщины значительное влияют на внешний вид человека и являются признаком старения. Поэтому возрастает спрос на косметическую продукцию с профилактическим или оздоровительным эффектом (эффектом замедления старения и/или замедления образования морщин), способствующую сохранению молодости (непатентный документ 1).
[0005]
В нем сообщается, что дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК), используемая в качестве безопасного и эффективного функционального питания, улучшает состояние кожи (уровень влажности и жирности, плотность мембраны, количество морщин, пятен и веснушек и т.п.) (патентные документы 1, 2).
[0006]
Кроме того, сообщается, что экстракт семян, зародышей (зачатков) или ростков сои, богатых полиаминами, имеет стимулирующее воздействие на образование компонентов внеклеточного матрикса, в частности, эластина, коллагена и гиалуроновой кислоты, способствующих сохранению структуры кожи (патентный документ 3).
[0007]
Тем не менее, насколько известно авторам изобретения, отсутствуют сообщения о взаимодействии этих дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) с экстрактом сои.
Документы по известному уровню техники
Патентные документы
[0008]
[Патентный документ 1] Японская не рассмотренная патентная заявка, публикация №2007-291062
[Патентный документ 2] Японская не рассмотренная патентная заявка, публикация №2008-63315
[Патентный документ 3] Японская не рассмотренная патентная заявка, публикация №2012-46544
Непатентный документ
[0009]
[Непатентный документ 1] "Development Technology of Anti-aging, Whitening, Moisturizing Cosmetics" («Разработка технологии производства замедляющих старение, отбеливающих, увлажняющих косметических средств») (издание для потребителей), под редакцией Масато Судзуки, CMC Publishing Co., Ltd., 23 августа 2007 г., первый тираж.
Сущность изобретения
Проблема, которую должно решить изобретение
[0010]
Как раскрыто выше, предотвращения или замедления старения кожи можно ожидать в том случае, когда активируется функция дермальных фибробластов и увеличивается производство компонентов внеклеточного матрикса, в частности, коллагена и гиалуроновой кислоты. Соответственно, задачей настоящего изобретения является разработка средства для замедления старения кожи, средства для регулирования экспрессии гена, связанного с замедлением старения, и косметического продукта, содержащего средство для замедления старения или регулирования экспрессии гена, связанного с замедлением старения, которые будут отличаться улучшенной способностью к активации дермальных фибробластов, высокой безопасностью и возможностью эффективного использования в течение длительного времени.
Средства решения указанной проблемы
[0011]
Авторы изобретения провели масштабные исследования вышеуказанной задачи и обнаружили, что целевая низкомолекулярная ДНК и экстракт сои, которые безопасны даже при длительном приеме, обладают синергическим действием на активацию дермальных фибробластов, то есть синергическим эффектом (синергией) на пролиферацию клеток, стимуляцию производства коллагена, стимуляцию производства гиалуроновой кислоты, синергически стимулируя экспрессию генов, связанных с синтезом гиалуроновой кислоты, и также снижая экспрессию генов, связанных с разложением гиалуроновой кислоты. Настоящее изобретение реализовано на основании этих результатов. Сущность настоящего изобретения следующая.
[0012]
(1) Средство, замедляющее старение кожи и содержащее целевую низкомолекулярную ДНК и экстракт сои в качестве активных ингредиентов, причем целевая низкомолекулярная ДНК представляет собой продукт гидролиза ДНК, выделенной из животных или растений, а экстракт сои представляет собой экстракт, по меньшей мере, одного вида, выбранного из группы, состоящей из семян, зародышей и ростков сои.
(2) Средство для замедления старения кожи, по п. (1), в котором замедление старения является активацией функции дермальных фибробластов, причем активация функции представляет собой, по меньшей мере, одно действие, выбранное из группы, состоящей из стимулирования пролиферации, стимулирования производства коллагена типа I и стимулирования производства гиалуроновой кислоты в дермальных фибробластах.
(3) Средство для замедления старения кожи, по п.п. (1) или (2), в котором содержание целевой низкомолекулярной ДНК составляет от 0,001 до 1% по массе, и содержание экстракта сои составляет от 0,001 до 1% по массе.
(4) Средство, регулирующее экспрессию гена, связанного с замедлением старения кожи, содержащее целевую низкомолекулярную ДНК и экстракт сои в качестве активных ингредиентов, причем целевая низкомолекулярная ДНК представляет собой продукт гидролиза ДНК, выделенную из животных или растений, а экстракт сои представляет собой экстракт, по меньшей мере, одного вида, выбранного из группы состоящей из семян, зародышей и ростков сои.
(5) Средство, регулирующее экспрессию гена, связанного с замедлением старения кожи, по п. (4), в котором регуляция экспрессии гена, связанного с замедлением старения кожи, является стимулированием экспрессии по меньшей мере, одного гена, выбранного из группы, состоящей из гена человеческого коллагена типа I альфа 1, гена человеческой гиалуронсинтазы 1 и/или гена человеческой гиалуронсинтазы 2 или снижение экспрессии гена человеческого матрикса металлопептидазы 1 и/или гена человеческой гиалуронидазы 1.
(6) Средство, регулирующее экспрессию гена, связанного с замедлением старения кожи, по п.п. (4) или (5), в котором содержание целевой низкомолекулярной ДНК составляет от 0,001 до 1% по массе, и содержание экстракта сои составляет от 0,001 до 1% по массе. (7) Косметический продукт, содержащий средство, замедляющее старение кожи, по любому из п.п. (1)-(3) или средство, регулирующее экспрессию гена, связанного с замедлением старения кожи, по любому из п.п. (4)-(6).
Технический эффект изобретения
[0013]
Согласно настоящему изобретению, целевая низкомолекулярная ДНК и экстракт сои, являющиеся активными ингредиентами, оказывают синергическое воздействие на активацию дермальных фибробластов и, следовательно, могут предотвращать или замедлять старение кожи, в частности снижение упругости и эластичности кожи, образование морщин и обвисание.
Краткое описание чертежей
[0014]
[Фигура 1] На фигуре показаны результаты гель-проникающей хроматографии (ГПХ) гидролизованной натриевой ДНК, используемой в примерах. На фигуре по горизонтальной оси нанесено время удерживания (мин), а по вертикальной - поглощение в УФ диапазоне (длина волны 260 нм).
Способ осуществления изобретения
[0015]
Способ осуществления настоящего изобретения будет раскрыт ниже, однако следующее описание является только примером способов осуществления настоящего изобретения, и настоящее изобретение ни в коей мере не ограничивается последующим описанием. Следует отметить, что там, где в настоящем описании используется выражение «до», подразумевается, что в диапазон включены численные или физические значения до и после выражения. Кроме того, содержание (%) активных ингредиентов выражается в массовых процентах (масс. %), если не указано иное.
[0016]
Средство, замедляющее старение кожи, согласно данному изобретению, содержит целевую низкомолекулярную ДНК и экстракт сои в качестве активных ингредиентов, причем целевая низкомолекулярная ДНК представляет собой компонент, который может быть получен гидролизом ДНК, экстрагированной из животных или растений, а экстракт сои представляет собой, по меньшей мере, один экстракт, выбранный из группы состоящей из семян, зародышей и ростков сои.
[0017]
В данном случае под замедлением старения кожи понимают активацию функции дермальных фибробластов, а активация функции означает, по меньшей мере, одно действие, выбранное из группы, состоящей из действия по стимулированию пролиферации, стимулированию производства коллагена типа I и стимулированию производства гиалуроновой кислоты в дермальных фибробластах.
[0018]
Кроме того, средство, регулирующее экспрессию гена, связанного с замедлением старения кожи, согласно данному изобретению содержит целевую низкомолекулярную ДНК и экстракт сои в качестве активных ингредиентов, причем целевая низкомолекулярная ДНК представляет собой компонент, полученный гидролизом ДНК, выделенной из животных или растений, а экстракт сои представляет собой, по меньшей мере, один экстракт, выбранный из группы, состоящей из семян, зародышей и ростков сои.
[0019]
Согласно настоящему изобретению под генами, связанными с замедлением старения кожи, подразумевают гены, кодирующие любой из энзимов, участвующих в синтезе или распаде коллагена или гиалуроновой кислоты в дермальных фибробластах, описанные ниже.
• ген человеческого коллагена типа I альфа 1 (COL1A1)
• ген человеческого матрикса металлопептидазы 1 (ММР1)
• ген человеческой гиалуронсинтазы 1 (HAS1)
• ген человеческой гиалуронсинтазы 2 (HAS2)
• ген человеческой гиалуронидазы 1 (HYAL1)
[0020]
Кроме того, под регуляцией экспрессии генов понимают стимулирование экспрессии (повышение уровня экспрессии) генов синтазы и/или снижение экспрессии (снижение уровня экспрессии) генов ферментов распада, раскрытых выше. Такая регуляция экспрессии гена, связанного с замедлением старения кожи, подразумевает стимулирование экспрессии, по меньшей мере, одного гена, выбранного из группы, состоящей из гена человеческого коллагена типа I альфа 1 (COL1A1), гена человеческой гиалуронсинтазы 1 (HAS1), гена человеческой гиалуронсинтазы 2 (HAS2), или снижение экспрессии гена человеческого матрикса металлопептидазы 1 (ММР1) и/или гена человеческой гиалуронидазы 1 (HYAL1).
Кроме того, раскрытая выше активация функции дермальных фибробластов может представлять собой раскрытую выше стимуляцию экспрессии генов или раскрытое выше снижение экспрессии генов в дермальных фибробластах.
[0021]
Средство, замедляющее старение кожи, или средство, регулирующее экспрессию гена, связанного с замедлением старения кожи, согласно данному изобретению, содержит целевую низкомолекулярную ДНК и экстракт сои в качестве активных ингредиентов, а также может содержать другие дополнительные компоненты в случае необходимости.
[0022]
Целевая низкомолекулярная ДНК, согласно данному изобретению, может быть получена гидролизом ДНК, выделенной из животных или растений. Источником ДНК могут быть различные организмы, в частности, животные, растения и микроорганизмы, кроме того, в качестве ДНК может быть использована синтетическая ДНК. При этом наиболее предпочтительно использовать ДНК, полученную из молок (семенников) таких рыб, как лосось, форель и треска, что обусловлено высоким содержанием ДНК и возможностью эффективной утилизации отходов переработки морепродуктов.
[0023]
Извлечение и очистка ДНК из семенников рыб может осуществляться обычным способом (например, в соответствии с раскрытием в публикации японской не рассмотренной патентной заявки №2005-245394). В частности, семенники рыб измельчают, измельченные семенники рыб обрабатывают ферментом расщепления белка (протеазой) при условиях, в которых не повреждается ДНК, в обработанный ферментом раствор добавляют спирт (метиловый, этиловый, изопропиловый или иной спирт) для осаждения ДНК в виде соли ДНК (натриевой соли ДНК), и собирают полученный осадок. В альтернативном варианте в обработанный ферментом раствор добавляют кислоту (соляную, фосфорную, лимонную или иную кислоту) для осаждения ДНК, а осадок собирают, нейтрализуют гидроксидом натрия и высушивают для получения соли ДНК (натриевой соли ДНК).
[0024]
Полученную соль ДНК гидролизуют нуклеолитическим энзимом, в частности, нуклеазой, для получения целевой низкомолекулярной ДНК.
Для гидролиза можно использовать, например, нуклеазу, полученную из пенициллиума.
[0025]
Гидролиз может быть осуществлен, например, путем помещения вышеуказанной соли ДНК (натриевой соли ДНК), в качестве исходного материала, в воду, нагретую примерно до 65°С, после перемешивания ее дальнейшего нагрева до 70°С и добавления нуклеазы для запуска реакции. Температура во время гидролиза, предпочтительно, составляет 60-75°С, более предпочтительно, 70°С.
[0026]
Целевую низкомолекулярную ДНК в порошкообразной форме можно получить, например, путем сублимационной сушки полученного продукта гидролиза. Целевая низкомолекулярная ДНК по вышеуказанному способу может быть получена, по существу, в виде натриевой соли. Отметим, что при этом соль не обязательно должна быть натриевой; в частности, допускается использование калиевой или кальциевой соли. Кроме того, целевая низкомолекулярная ДНК может иметь свободную форму вместо соли.
[0027]
Предпочтительно, целевая низкомолекулярная ДНК содержит от 10 до 80% фракций с молекулярной массой 12000 или менее, более предпочтительно, содержит от 10 до 80% фракций с молекулярной массой 5000 или менее. Отметим, что молекулярно-массовое распределение можно измерить путем классификации образцов по молекулярной массе с использованием гель-проникающей хроматографии с последующим определением количества УФ-детектором.
[0028]
Экстракт сои согласно данному изобретению представляет собой, по меньшей мере, один экстракт выбранный из группы, состоящей из семян, зародышей и ростков сои. Условия экстракции, по существу, не ограничены, однако, предпочтителен способ получения растительного экстракта, содержащего полиамины, в частности, раскрытый в патентном документе 3, согласно которому семена, зародыши или ростки сои измельчают в подходящей среде и экстрагируют в кислой среде. Отметим, что при этом зародыши, используемые в качестве сырья, могут быть отделены от семян и собраны, а ростки сои могут быть собраны с семян сои, пророщенных в подходящих условиях.
[0029]
В данном случае в экстракте сои в изобилии содержатся полиамины. Под общим термином «полиамины» понимают линейные алифатические углеводороды, содержащие две или более первичные аминогруппы, присутствующие в различных живых организмах и известные как фактор роста, связанный с делением клеток и синтезом белков.
[0030]
Содержание полиамина в экстрактах сои, по существу, не ограничено, но составляет, предпочтительно, 0,05% или более, более предпочтительно, 0,1% или более, еще предпочтительнее, 0,15% или более, особенно предпочтительно, 0,2% или более. Отметим, что содержание полиаминов может быть измерено методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
[0031]
Полиамины (путресцин, кадаверин, спермидин, спермин и иные подобные вещества) в изобилии содержатся в экстрактах сои, в частности, в экстракте части ростков сои (далее иногда называемом «экстрактом ростков сои») (патентный документ 3). При использовании экстракта ростков сои, богатого полиаминами, можно ожидать развития эффекта, обеспечиваемого полиаминами.
[0032]
В качестве экстракта сои можно использовать доступный на рынке продукт. В частности, в качестве примеров можно назвать экстракты ростков сои (PHYTOPOLYAMINE (зарегистрированная торговая MapKa)-S (номер продукта: SPA-301) и PHYTOPOLYAMINE-SP (номер продукта: SPA-308)) производства TOYOBO CO., LTD. и материал экстракта сои (SOYPOLYA (зарегистрированная торговая марка)) производства Combi Corporation.
[0033]
Содержание активных ингредиентов в средстве, замедляющем старение, изменяется в зависимости от вида и формы препарата, цели и частоты применения, поэтому трудно установить фиксированное содержание, однако содержание и соотношение содержания каждого компонента, предпочтительно, выбирают таким образом, чтобы обеспечить синергический эффект на активирующее воздействие на дермальные фибробласты.
[0034]
Например, если средство, замедляющее старение (косметический продукт) наносят на кожу, содержание ингредиентов выглядит следующим образом. Содержание целевой низкомолекулярной ДНК составляет, предпочтительно, от 0,01 до 10 мг/мл (примерно от 0,001 до 1%), более предпочтительно, от 0,01 до 5 мг/мл (примерно от 0,001 до 0,5%), еще предпочтительнее, от 0,01 до 2 мг/мл (примерно от 0,001 до 0,2%). Кроме того, содержание экстракта сои составляет, предпочтительно, от 0,01 до 10 мг/мл (от 0,001 до 1%), более предпочтительно, от 0,1 до 5 мг/мл (от 0,01 до 0,5%), еще предпочтительнее, от 0,1 до 2 мг/мл (примерно от 0,01 до 0,2%).
[0035]
Кроме того, соотношение содержания целевой низкомолекулярной ДНК и экстракта сои, по существу, не ограничено, но, с точки зрения массового соотношения, предпочтительным является следующее: целевая низкомолекулярная ДНК : экстракт сои = от 1:50 до 50:1, более предпочтительно, от 1:20 до 10:1, еще предпочтительнее, от 1:10 до 5:1.
[0036]
Кроме того, концентрация полиамина в средстве, замедляющем старение, определяется видом препарата и формой продукта, целью и частотой применения и иными факторами и, по существу, не ограничено, составляя, предпочтительно, от 0,00001 до 100 ммоль, более предпочтительно, от 0,00005 до 75 ммоль, еще предпочтительнее, от 0,0001 до 50 ммоль.
[0037]
Если содержание и соотношение содержания целевой низкомолекулярной ДНК и экстракта сои находятся в пределах предпочтительных диапазонов, это является эффективным в отношении обеспечения синергического эффекта или существенного влияния на активирующее воздействие на дермальные фибробласты (пролиферацию клеток, стимулирование производства коллагена и гиалуроновой кислоты, стимулирование экспрессии гена гиалуронсинтазы, подавление экспрессии гена фермента распада гиалуроновой кислоты), что будет детально раскрыто в нижеследующих примерах.
[0038]
В данном случае под синергическим эффектом на активирующее воздействие на дермальные фибробласты понимают следующее: когда целевая низкомолекулярная ДНК и экстракт сои применяют одновременно к дермальным фибробластам, скорость пролиферации клеток, скорость производства коллагена, или скорость производства гиалуроновой кислоты превышает (существенно превышает) сумму величин, когда целевая низкомолекулярная ДНК и экстракт сои применяются независимо, или когда целевая низкомолекулярная ДНК и экстракт сои применяются одновременно к дермальным фибробластам как уровень экспрессии гена коллагена или гена гиалуронсинтазы, предпочтительно, уровень экспрессии гена гиалуронсинтазы, так и уровень подавления экспрессии гена фермента распада коллагена или гиалуроновой кислоты, предпочтительно, уровень подавления экспрессии гена фермента распада гиалуроновой кислоты, превышает (существенно превышает) сумму величин, когда каждый из компонентов используется независимо. Кроме того, под значительным эффектом понимают эффект со значительной разностью по сравнению с негативным контролем.
[0039]
Средство, замедляющее старение, или средство, регулирующее экспрессию гена, связанного с замедлением старения, согласно данному изобретению, может быть изготовлено в желаемой лекарственной форме путем смешивания известным способом целевой низкомолекулярной ДНК и экстракта сои, а также при необходимости других компонентов. В данном случае, примеры других компонентов включают в себя те же дополнительные компоненты, которые могут входить в состав косметического продукта согласно настоящему изобретению (см. ниже).
[0040]
Косметический продукт, согласно данному изобретению, содержит средство для замедления старения кожи или средство, регулирующее экспрессию гена, связанного с замедлением старения. В данном случае под «содержит» понимают, что косметический продукт может содержать физиологически приемлемый носитель и дополнительные компоненты, в частности, одновременно используемые другие вспомогательные компоненты в соответствии с предполагаемой формой продукта.
[0041]
Косметический продукт, согласно данному изобретению, может быть выполнен в виде, например, косметического продукта по уходу за кожей или косметического продукта для волос, используемого путем нанесения на кожу головы и волосы. Отметим, что косметический продукт, согласно данному изобретению, содержит препараты общего воздействия дополнительно к косметическим продуктам, предусмотренным Законом о фармацевтической продукции.
[0042]
Если средство, замедляющее старение или регулирующее экспрессию гена, связанного с замедлением старения, согласно данному изобретению, предлагается в качестве косметического средства, возможная лекарственная форма, по существу, не ограничена при условии сохранения возможности нанесения на кожу. В частности, средство, замедляющее старение или регулирующее экспрессию гена, связанного с замедлением старения, может быть выполнено в виде лосьона, косметического молочка, крема, геля, желе, эссенции, бальзама для губ, упаковки, маски и т.п., или в лекарственной форме, в виде жидкости, эмульсии, геля, крема, мази, пены, спрея, аэрозоля и т.п.
[0043]
Другие дополнительные компоненты, которые эти косметические продукты могут содержать, по существу, не ограничены; и могут быть использованы добавки, которые могут включаться в состав обычных косметических продуктов. В качестве примеров таких добавок можно назвать: воду, жир и масло, воск, углеводород, жирную кислоту, спирт, эфир, ПАВ, ароматизатор, вяжущее средство, бактерицидное и/или антибактериальное средство, отбеливающее средство, поглотитель УФ-излучения, увлажнитель, активатор клеток, противовоспалительное и/или противоаллергическое средство, антиоксидант, витамин и натуральный экстракт. Содержание этих других дополнительных компонентов также не ограничено и может быть выбрано в соответствии с предполагаемой лекарственной формой или иными подобными факторами.
[0044]
Кроме того, средство, замедляющее старение или регулирующее экспрессию гена, связанного с замедлением старения, согласно данному изобретению, может быть выполнено в качестве продукта питания или напитка, принимаемого внутрь. К пищевым продуктам и напиткам относятся продукты лечебного питания (например, функциональные пищевые продукты, пищевые добавки, биологически активные добавки, продукты, обогащенные питательными веществами, продукты со сбалансированным составом питательных веществ, добавки), полезные для здоровья продукты (например, продукты для определенных категорий пациентов, продукты с определенными питательными элементами и продукты с предписанным действием), диетические продукты (например, продукты для больных людей, сухое молоко с добавками для младенцев и сухое молоко для беременных или кормящих матерей), а также иные продукты, относящиеся к категории продуктов питания и напитков, способствующих снижению риска, профилактике, излечению заболеваний или улучшению состояния (симптомов), вызванных сниженной функцией дермальных фибробластов.
[0045]
Другие дополнительные компоненты, которые могут входить в состав этих продуктов питания и напитков, по существу, не ограничены; допускается включение добавок, входящих в состав обычных продуктов питания и напитков.
Примеры
[0046]
Далее настоящее изобретение будет раскрыто более подробно со ссылкой на примеры, однако объем настоящего изобретения ни в коем случае не ограничивается приведенными примерами.
[0047]
[Пример 1] Действие на пролиферацию клеток, действие на стимулирование производства коллагена и гиалуроновой кислоты 1
Назначение и обзор теста
Считается, что коллаген и гиалуроновая кислота в коже имеют большое значение для повышения упругости кожи, мягкости и жирности кожи. Соответственно, синергический эффект тестовых веществ (целевая низкомолекулярная ДНК и экстракт сои) оценивался по пролиферирующему действию на дермальные фибробласты, а также стимулирующему действию на производство коллагена и гиалуроновой кислоты.
[0048]
2 Материалы и метод тестирования
2-1 Клетка
Использовалась клеточная линия дермальных фибробластов NB1RGB, полученная от новорожденных человеческих младенцев (RIKEN BRC, Япония), культивированная в CO2 инкубаторе (концентрация CO2 5%, 37°С).
[0049]
2-2 Среда
Использована минимальная эссенциальная среда Игла (ЕМЕМ, Wako, Япония), содержащая 0,1% (об/об) эмбриональной бычьей сыворотки (FBS, Hyclone, Великобритания) и 1,0% (об/об) противогрибкового препарата (Invitrogen, США).
[0050]
2-3 Тестовые вещества
(1) Целевая низкомолекулярная ДНК
Использовалась гидролизованная натриевая ДНК (порошок), изготовленная компанией NISSEI BIO CO., LTD. Этот продукт изготовлен раскрытым выше способом путем извлечения натриевой соли ДНК из семенников (молок) лососевых рыб.
Отметим, что результаты гель-проникающей хроматографии (ГПХ) гидролизованной натриевой ДНК (производства NISSEI BIO CO., LTD.) представлены на фигуре 1, а соотношение между временем удерживания и молекулярной массой представлено в таблице 1. Эталон молекулярной массы 12 000 основан на времени удерживания цитохрома-с (MW 12 400).
[0051]
[0052]
По результатам проведенного анализа получены следующие фракции по молекулярной массе гидролизованной натриевой ДНК (производства NISSEI BIO CO., LTD.).
Фракции с молекулярной массой от 12 000 до 5 000 (время элюирования от 20 мин до менее 25 мин): 32,0%
Фракции с молекулярной массой 5 000 или менее (время элюирования 25 мин и более): 32,4%
Таким образом, фракции с молекулярной массой 12 000 или менее гидролизованной натриевой ДНК (производства NISSEI BIO CO., LTD.) составляют 64,4%.
[0053]
Тестовое вещество (гидролизованная натриевая ДНК), скорректированное до 3,0 мг/мл с использованием 30 мкмоль L-аскорбиновой кислоты (CAS №50-81-7, Wako, Япония) и 0,1% минимальной эссенциальной среды Игла с содержанием эмбриональной бычьей сыворотки, были последовательно разбавлены в общем соотношении 10 и приготовлены в двух концентрациях (0,03 мг/мл, 0,3 мг/мл) при использовании (конечные концентрации - 0,01 мг/мл, 0,1 мг/мл).
[0054]
(2) Экстракт сои
Использовался PHYTOPOLYAMINE (зарегистрированная торговая MapKa)-SP (номер продукта: SPA-308, соотношение компонентов: примерно 70% экстракта ростков сои, примерно 30% лимоннокислого натрия) производства TOYOBO CO., LTD.
Тестовое вещество (SPA-308) в концентрациях 0,39 мг/мл, 0,81 мг/мл и 1,53 мг/мл приготовлено с использованием 30 мкмоль L-аскорбиновой кислоты (CAS №50-81-7, Wako, Япония) и 0,1% минимальной эссенциальной среды Игла с содержанием эмбриональной бычьей сыворотки (конечные концентрации - 0,13 мг/мл, 0,27 мг/мл и 0,51 мг/мл).
[0055]
(3) Смешанный раствор (одновременное использование)
Использовались два вида тестовых веществ, раскрытые выше.
Гидролизованную натриевую ДНК, скорректированную до 3,0 мг/мл с использованием минимальной эссенциальной среды Игла с содержанием SPA-308, скорректированной до 0,81 мг/мл с помощью 30 мкмоль L-аскорбиновой кислоты (CAS №50-81-7, Wako, Япония) и 0,1% минимальной эссенциальной среды Игла с содержанием эмбриональной бычьей сыворотки, были последовательно разбавлены в общем соотношении 10 и приготовлены в двух концентрациях (0,03 мг/мл, 0,3 мг/мл) при использовании (конечная концентрация SPA-308 составила 0,27 мг/мл, конечные концентрации гидролизованной натриевой ДНК 0,01 мг/мл, 0,1 мг/мл).
[0056]
2-4 Состав теста
Для расчета пролиферации клеток, производства коллагена и гиалуроновой кислоты использовалось среднее значение из трех лунок на каждую обработанную группу. Кроме того, тест проводился по каждой из групп тестового вещества и оперативного контроля на каждом планшете. Процессы, относящиеся к тесту, включая приготовление тестового вещества, проводились при комнатной температуре, если не было указано иное.
[0057]
2-5 Проведение теста
(1) Клеточная культура
2,0 × 104 клеток/200 мкл клеток NB1 RGB посадили в каждую лунку 96-луночного планшета (партия 3595, Corning, США) и культивировали в CO2 инкубаторе в течение 24 часов. Кроме того, 200 мкл натрий-фосфатного буфера (PBS(-), партия 198601, Nissui, Япония) было добавлено в лунки, не используемые для проведения теста, в целях предотвращения высыхания во время культивирования.
Через 24 часа 100 мкл тестового вещества и негативный контроль были добавлены на 96-луночный планшет и культивированы в течение 48 часов в CO2 инкубаторе. Для негативного контроля использовалось 30 мкмоль L-аскорбиновой кислоты и 0,1% минимальной эссенциальной среды Игла с содержанием эмбриональной бычьей сыворотки.
[0058]
Через 48 часов надосадочную жидкость культуры слили на новый 96-луночный планшет и высушили методом сублимационной сушки (-20°С). Уровень коллагена и гиалуроновой кислоты в надосадочной жидкости культуры измерили методом ИФА (иммуноферментного анализа), раскрытым в 2-5 (3) и (4), с целью оценки стимулирующего действия тестового вещества на производство коллагена и гиалуроновой кислоты. Кроме того, количество клеток на 96-луночном планшете, с которого была слита надосадочная жидкость, подсчитали методом, раскрытым в 2-5 (2), с целью оценки воздействия тестового вещества на пролиферацию клеток.
[0059]
(2) Воздействие на пролиферацию клеток
Влияние тестового вещества на пролиферацию дермальных фибробластов оценивали следующим образом.
Каждую лунку 96-луночного планшета, из которой была удалена среда, дважды осторожно промыли 300 мкл PBS(-), нагретой до 37°С. После этого в лунки добавили 100 мкл раствора 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолиум бромида (МТТ, CAS №298-93-1, Sigma-Aldrich, США) по 0,5 мг/мл на лунку и культивировали в течение 2 часов в С02 инкубаторе.
[0060]
По завершении культивирования раствор МТТ удалили, а планшет промыли 200 мкл PBS(-). На планшет добавили 200 мкл 2-пропанола (CAS №67-63-0, Kan to Chemical, Япония), содержащего 0,04 N соляной кислоты (CAS №7647-01-0, Kanto Chemical, Япония), и выдержали в течение 1 часа в темном месте для перевода образующегося нерастворимого формазана в растворимую форму.
[0061]
96-луночный планшет встряхивали в течение 10 секунд с частотой 270 об/мин для однородного рассеивания пигмента в лунке, после чего измерили абсорбцию при 570 нм (OD570) с помощью микропланшетного считывателя (SPARK(TM) 10М, TECAN, Швейцария).
OD570 в группе тестового вещества с OD570 негативного контроля составлял 100%, рассчитали как скорость пролиферации клеток (%). Скорость пролиферации клеток (%) негативного контроля и группы с введением тестового вещества подвергли проверке на достоверность непарным двусторонним тестом (t-критерием Стьюдента). Все тесты имели уровни достоверности менее 5% с двух сторон (р<0,05, р<0,01, р<0,001).
[0062]
(3) Стимулирующее воздействие на производство коллагена
Влияние тестового вещества на производство коллагена типа I, который, как считается, придает коже упругость и эластичность, определили методом конкурентного ИФА следующим образом.
[0063]
Для измерения уровня коллагена в надосадочной жидкости культуры использовали набор для ИФА человеческого коллагена типа I (партия ЕС1-Е105, ACEL, Япония).
[0064]
Стандартный раствор коллагена последовательно разбавляли буфером для разведения в общем соотношении 2 для получения семи концентраций. Кроме того, надосадочную жидкость культуры дважды разбавили буфером для разведения.
[0065]
14 мкл меченого биотином раствора коллагеновых антител добавили к 126 мкл стандартного раствора коллагена и дважды разведенной надосадочной жидкости культуры и смешали при помощи выпуска.
Микротитрационный планшет с иммобилизованным коллагеном трижды промывали 200 мкл промывочного буфера, добавили 50 мкл стандартного раствора с содержанием меченых биотином коллагеновых антител и надосадочную жидкость культуры, после чего смесь встряхивали в течение 1 часа при частоте вращения 270 об/мин.
[0066]
Через 1 час планшет трижды промыли 200 мкл промывочного буфера, добавили 50 мкл раствора авидина, меченого пероксидазой, после чего полученную смесь встряхивали в течение 1 часа при частоте вращения около 270 об/мин. Через 1 час планшет трижды промыли 200 мкл промывочного буфера, добавили 50 мкл субстратного раствора 3,3',5,5'-тетраметилбензидина на каждую лунку и выдержали в течение 15 минут.
[0067]
Затем добавили 50 мкл останавливающего раствора на каждую лунку, встряхивали микропланшет в течение 1 минуты при частоте вращения 270 об/мин для гомогенизации пигмента в лунке, после чего измерили абсорбцию при 450 нм (OD450) с помощью микропланшетного ридера.
[0068]
Калибровочную кривую регрессировали с OD450 стандартного раствора коллагена с использованием логистической модели по 4 параметрам. Значение, полученное из уравнения регрессии, умножили на скорость разбавления для расчета уровня производства коллагена (мкг/мл) негативного контроля и тестового вещества.
Скорость производства коллагена (%) тестового вещества рассчитали для 100% уровня производства коллагена негативного контроля. Скорость производства коллагена (%) негативного контроля и группы добавления тестового вещества подвергли тесту на достоверность непарным двусторонним тестом (t-критерием Стьюдента). Все тесты имели уровни достоверности менее 5% с двух сторон (р<0,05, р<0,01, р<0,001).
[0069]
(4) Стимулирующее воздействие на производство гиалуроновой кислоты
Влияние тестового вещества на уровень производства гиалуроновой кислоты, которая, как считается, удерживает влагу в коллагене и эластине, определили методом сэндвич-ИФА следующим образом.
[0070]
Для измерения уровня гиалуроновой кислоты в надосадочной жидкости культуры использовали набор Hyaluronan Quantikine ELISA (партия DHYALO, R&D Systems, США).
[0071]
Стандартный раствор гиалуроновой кислоты последовательно разбавляли буфером для разведения в общем соотношении 2 для получения семи концентраций. Кроме того, надосадочную жидкость культуры восемь раз разбавили буфером для разведения.
[0072]
На микротитрационный планшет с иммобилизованным агреканом добавили 50 мкл меченого биотином раствора антител гиалуроновой кислоты на каждую лунку. После этого добавили 50 мкл разбавленной надосадочной жидкости культуры и встряхивали в течение 1 часа с частотой вращения примерно 270 об/мин.
[0073]
Через 1 час планшет пять раз промыли 400 мкл промывочного буфера, добавили 100 мкл раствора авидина, меченого пероксидазой, после чего полученную смесь встряхивали в течение 1 часа при частоте вращения около 270 об/мин. Через 1 час планшет пять раз промыли 400 мкл промывочного буфера, добавили 100 мкл субстратного раствора 3,3',5,5'-тетраметилбензидина на каждую лунку и выдержали в течение 30 минут в темном месте.
[0074]
Затем добавили 100 мкл останавливающего раствора на каждую лунку, встряхивали микротитрационный планшет в течение 1 минуты при частоте вращения 270 об/мин для гомогенизации пигмента в лунке, после чего измерили абсорбцию при 450 нм (OD450) с помощью микропланшетного ридера.
[0075]
Калибровочную кривую регрессировали с OD450 стандартного раствора гиалуроновой кислоты с использованием логистической модели по 4 параметрам. Значение, полученное из уравнения регрессии, умножили на скорость разбавления для расчета уровня производства гиалуроновой кислоты (нг/мл) негативного контроля и тестового вещества.
Скорость производства гиалуроновой кислоты (%) тестового вещества рассчитали для 100% уровня производства гиалуроновой кислоты негативного контроля. Скорости производства гиалуроновой кислоты (%) негативного контроля и группы добавления тестового вещества подвергли проверке на достоверность непарным двусторонним тестом (t-критерием Стьюдента). Все тесты имели уровни достоверности менее 5% с двух сторон (р<0,05, р<0,01, р<0,001).
[0076]
3 Результаты тестов
3-1 Целевая низкомолекулярная ДНК
(1) Воздействие на пролиферацию клеток
Скорость пролиферации клеток±стандартное отклонение 0,01 мг/мл и 0,1 мг/мл тестового вещества (гидролизованной натриевой ДНК) составляла, при 100% уровне пролиферации клеток (OD570) негативного контроля, 101,3±6,8% и 102,6±3,3%, соответственно.
[0077]
(2) Стимулирующее воздействие на производство коллагена типа I
Скорость производства коллагена±стандартное отклонение 0,01 мг/мл и 0,1 мг/мл тестового вещества (гидролизованной натриевой ДНК) составляли, при 100% уровне производства коллагена негативного контроля, 126,4±7,9% (р<0,01) и 134,0±3,6% (р<0,01), соответственно.
[0078]
(3) Стимулирующее воздействие на производство гиалуроновой кислоты
Скорость производства гиалуроновой кислоты±стандартное отклонение 0,01 мг/мл и 0,1 мг/мл тестового вещества (гидролизованной натриевой ДНК) составляли, при 100% уровне производства гиалуроновой кислоты негативного контроля, 102,2±5,0% и 102,9±7,5%, соответственно.
[0079]
3-2 Экстракт сои
(1) Воздействие на пролиферацию клеток
Скорость пролиферации клеток±стандартное отклонение от 0,13 мг/мл, 0,27 мг/мл и 0,51 мг/мл тестового вещества (SPA-308) составляла, при 100%) уровне пролиферации клеток (OD570) негативного контроля, 111,6±1,0% (р<0,01), 123,7±2,4% (р<0,01), и 137,0±6,9% (р<0,01), соответственно.
[0080]
(2) Стимулирующее воздействие на производство коллагена типа I
Скорость стимулирования производства коллагена±стандартное отклонение от 0,13 мг/мл, 0,27 мг/мл и 0,51 мг/мл тестового вещества (SPA-308) составила при 100% уровне стимулирования производства коллагена негативного контроля, 135,1±1,3% (р<0,01), 174,1±6,3% (р<0,01), и 199,9±11,8% (р<0,01), соответственно.
[0081]
(3) Стимулирующее воздействие на производство гиалуроновой кислоты
Скорость производства гиалуроновой кислоты±стандартное отклонение от 0,13 мг/мл, 0,27 мг/мл и 0,51 мг/мл тестового вещества (SPA-308) составила при 100% уровне производства гиалуроновой кислоты негативного контроля, 113,1±4,7% (р<0,01), 123,3±3,8% (р<0,01) и 137,8±10,3% (р<0,01), соответственно.
[0082]
3-3 Одновременное использование целевой низкомолекулярной ДНК и экстракта сои
(1) Воздействие на пролиферацию клеток
Скорость пролиферации клеток±стандартное отклонение от 0,01 мг/мл + 0,27 мг/мл и 0,1 мг/мл + 0,27 мг/мл тестового вещества (гидролизованная натриевая ДНК+SPA-308) составила, при 100% уровне пролиферации клеток (OD570) негативного контроля, 133,0±4,8% (р<0,01) и 140,8±5,7% (р<0,01), соответственно.
[0083]
(2) Стимулирующее воздействие на производство коллагена типа I
Скорость производства коллагена±стандартное отклонение от 0,01 мг/мл + 0,27 мг/мл и 0,1 мг/мл + 0,27 мг/мл тестового вещества (гидролизованной натриевой ДНК+SPA-308) составили, при 100% уровне производства коллагена негативного контроля, 178,1±5,5% (р<0,01) и 230.6±9,9% (р<0,01), соответственно.
[0084]
(3) Стимулирующее воздействие на производство гиалуроновой кислоты
Скорость производства гиалуроновой кислоты±стандартное отклонение от 0,01 мг/мл + 0,27 мг/мл и 0,1 мг/мл + 0,27 мг/мл тестового вещества (гидролизованной натриевой ДНК+SPA-308) составили, при 100%) уровне производства гиалуроновой кислоты негативного контроля, 132,7±7,6% (р<0,01) и 139,8±2,9% (р<0,01), соответственно.
[0085]
Вышеупомянутые результаты собраны в таблицу 2. В таблице 2 под «ДНК-Na» понимают «гидролизованную натриевую ДНК». Из таблицы 2 следует, что скорость пролиферации клеток, скорость производства коллагена и скорость производства гиалуроновой кислоты при одновременном использовании целевой низкомолекулярной ДНК (гидролизованной натриевой ДНК) и экстракта сои (SPA-308) значительно превышает сумму величин (скоростей) по сравнению с использованием каждого компонента по отдельности. Эти результаты могут подтвердить синергический эффект целевой низкомолекулярной ДНК и экстракта сои на активирующее воздействие на функцию дермальных фибробластов (пролиферация клеток, стимулирование производства коллагена и гиалуроновой кислоты).
[0086]
[0087]
[Пример 2] Регуляция экспрессии синтазы или фермента распада гиалуроновой кислоты
1 Назначение и обзор теста
Коллаген и гиалуроновая кислота в коже имеют большое значение для повышения упругости, мягкости и жирности кожи; известно, что снижение уровня гиалуроновой кислоты в дерме способствует уменьшению эластичности кожи и образованию морщин. Соответственно, в данном примере методом ПЦР в реальном времени определяли влияние тестовых веществ (целевой низкомолекулярной ДНК и экстракта сои) на экспрессию генов, связанных с замедлением старения, в частности, синтеза и распада гиалуроновой кислоты в дермальных фибробластах.
[0088]
2 Материалы и метод тестирования
2-1 Клетка
Использовались те же клетки, как и указанные в 2-1 примера 1, культивированные в тех же условиях.
[0089]
2-2 Среда
Использовалась минимальная эссенциальная среда Игла того же состава, что и в 2-2 примера 1, за исключением того, что содержание FBS (эмбриональной бычьей сыворотки) было изменено на 10,0% (об/об).
[0090]
2-3 Тестовые вещества
(1) Раствор целевой низкомолекулярной ДНК
Использовалась та же целевая низкомолекулярная ДНК (гидролизованная натриевая ДНК), что и в 2-3 (1) примера 1.
Тестовое вещество (гидролизованная натриевая ДНК), скорректированное до 1 мг/мл с использованием 10% минимальной эссенциальной среды Игла с содержанием эмбриональной бычьей сыворотки, при использовании последовательно разбавляли в общем соотношении 10 и в общей сложности приготовили в двух концентрациях (конечные концентрации - 0,01 мг/мл, 0,1 мг/мл).
[0091]
(2) Раствор экстракта сои
Использовался тот же экстракт сои (SPA-308), что и в 2-3 (2) примера 1.
Тестовое вещество (SPA-308), скорректированное до 2,7 мг/мл с использованием 10% минимальной эссенциальной среды Игла с содержанием эмбриональной бычьей сыворотки, при использовании последовательно разбавляли в общем соотношении 10 и в общей сложности приготовили в двух концентрациях (конечные концентрации -0,027 мг/мл, 0,27 мг/мл).
[0092]
(3) Смешанный раствор (одновременное использование)
Использовались два тестовых вещества, раскрытые выше.
Гидролизованную натриевую ДНК, скорректированную до 1 мг/мл с использованием минимальной эссенциальной среды Игла с содержанием SPA-308, скорректированной до 0,27 мг/мл с помощью 10% минимальной эссенциальной среды Игла с содержанием эмбриональной бычьей сыворотки, при использовании последовательно разбавляли в общем соотношении 10 и в общей сложности приготовили в двух концентрациях (конечная концентрация SPA-308 составила 0,27 мг/мл, конечные концентрации гидролизованной натриевой ДНК - 0,01 мг/мл, 0,1 мг/мл).
[0093]
2-4 Анализ экспрессии генов
Анализ экспрессии генов, кодирующих следующие ферменты, выполнен с помощью TaqMan Assay (Applied Biosystems, США).
• человеческая гиалуронсинтаза 1 (HAS1), идентификатор анализа Hs00758053_ml
• человеческая гиалуронсинтаза 2 (HAS2), идентификатор анализа Hs00193435_ml
• человеческая гиалуронидаза 1 (HYAL1), идентификатор анализа Hs00201046_ml
[0094]
В качестве внутреннего стандартного гена использован ген глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы человека (GAPDH, идентификатор анализа Hs02786624_g1).
[0095]
2-5 Состав теста
Для анализа уровней экспрессии генов использовалось среднее значение 3-х наборов 35-миллиметровой пластины (кат. №150318, Thermo Scientific, США) на обработанную группу. Процессы, относящиеся к тесту, включая приготовление тестового вещества приготавливались при комнатной температуре, если не было указано иное.
[0096]
2-6 Метод тестирования
(1) Клеточная культура и добавление тестового вещества
5,0 × 105 клеток/2 мл клеток NB1RGB поместили в 35-мм пластину и культивировали в течение 24 часов в С02 инкубаторе. Через 24 часа среду удалили с 35-мм пластины, добавили тестовое вещество и среду с содержанием негативного контроля, и культивировали в течение 24 часов в CO2 инкубаторе.
[0097]
(2) Экстрагирование, очистка и количественное определение РНК
Экстрагирование и очистка РНК выполнены с использованием набора PureLink(TM) RNA Mini (кат. №12183018А, Invitrogen, США) следующим образом.
[0098]
После культивирования в течение 24 часов 35-мм пластину, с которой была удалена среда, дважды промыли 2 мкл PBS(-), нагретой до 37°С. Для этого при растворении клеток добавили 600 мкл лизирующего буфера, содержащего дитиотрейтол (CAS №27565-41-9, Invitrogen, США), после собрали лизат. Далее клетки собранного лизата измельчили в гомогенизаторе (кат. №12183-026, Invitrogen, США).
[0099]
600 мкл 70% раствора этанола (CAS №64-17-5, Japan Alcohol, Япония) добавили к жидкости с измельченными клетками, после чего жидкость переместили в колонку на основе кремнеземной мембраны и центрифугировали в течение 15 секунд при комнатной температуре и 12 000 × g, после чего утилизировали фильтрат.
[0100]
700 мкл промывочного буфера, содержащего изотиоцианат гуанидина, и 500 мкл промывочного буфера II, содержащего этанол, добавили к кремнеземной мембране для промывки, после чего центрифугировали в течение 15 секунд при 12 000 × g при комнатной температуре и высушили. К мембране добавили 30 мкл не содержащей рибонуклеазы воды, выдержали в течение 1 минуты при комнатной температуре, после чего мембрану центрифугировали в течение 15 секунд при комнатной температуре и 12 000 × g. Эту процедуру повторили дважды для элюирования РНК из мембраны.
[0101]
Часть элюированной РНК собрали отдельно на 96-луночный УФ-проницаемый планшет (кат. №8404, Thermo Scientific, США) и разбавили в 25 раз буфером Tris-EDTA (ТЕ (рН 8,0), кат. №310-90023, NIPPON GENE, Япония) для измерения поглощения при 260 нм (OD260) с помощью микропланшетного ридера (SPARK(TM) ЮМ TECAN, Швейцария).
[0102]
Концентрации РНК негативного контроля и тестового вещества рассчитали с использованием OD260 по следующей формуле и разбавили буфером ТЕ для корректировки концентраций РНК до 10 мкг/мл.
Концентрация РНК (мкг/мл)=А × K × 0,3 (оптическая длина: см) × 25 (степень разведения)
A: OD260 отрицательного контроля или тестового вещества
K: K=40, коэффициент поглощения РНК
[0103]
(3) Анализ экспрессии генов методом ПЦР в реальном времени
Обратная транскрипция РНК выполнена с использованием SuperScript(TM) IV VILO(TM) Master Mix с ezDNase (кат. №11766050, Invitrogen, США) следующим образом. [0104]
1 мкл буфера 10 × ezDNase, 1 мкл энзима ezDNase, 6 мкл воды без содержания нуклеаз и 2 мкл РНК 10 мкг/мл на каждую лунку добавили в полоску с 8 пробирками (АВ1182, Thermo Scientific, США) и инкубировали в течение 2 минут при 37°С. Через 2 минуты 4 мкл SuperScript(TM) IV VILO(TM) Master Mix и 6 мкл воды без содержания нуклеаз на каждую лунку добавили в полоску с 8 пробирками и нагревали в течение 10 минут при 25°С, 10 минут при 50°С и 5 минут при 85°С для синтеза кДНК с помощью ПЦР в реальном времени (QuantStudio(TM)3, Applied Biosystems, США).
[0105]
10 мкл смеси TaqMan(TM) Fast Advanced Master Mix (кат. №4444557, Applied Biosystems, США), 1 мкл TaqMan Gene Expressior, 7 мкл дистиллированной воды UltraPure(TM) (Invitrogen, кат. №. 10977-015, США) и 2 мкл кДНК на каждую лунку добавили к планшету ПЦР (кат. №N8010560, Thermo Scientific, США), после чего планшет герметично закрыли пластинчатым уплотнением (кат. №4360954, Thermo Scientific, США).
[0106]
Раствор центрифугировали в планшетной центрифуге, удалили пену, после чего осуществили ПЦР в реальном времени с помощью системы ПЦР в реальном времени для вычисления значения порогового цикла (Ct), равного количеству циклов, при котором флуоресцентный сигнал каждого гена негативного контроля и тестового вещества пересекает любой порог. Значение Ct скорректировали до значения ΔCt с использованием внутреннего стандартного гена. Значение ΔCt скорректировали до значения ΔΔCt с использованием среднего значения ΔCt негативных контролей. Если предположить, что разница в обнаружении за цикл методом ΔΔCt в два раза превышает объем разности, то уровень экспрессии гена тестового вещества анализировали присвоением 2-ΔΔCt, когда уровень экспрессии гена негативного контроля был равен 1. Уровни экспрессии генов негативного контроля и группы добавленного тестового вещества проверили на достоверность парным двусторонним тестом (парным т-критерием). Все тесты имели уровни достоверности менее 5% с двух сторон (р<0,05, р<0,01, р<0,001).
[0107]
3 Результаты тестов
3-1 Целевая низкомолекулярная ДНК
(1) Экспрессия гена человеческой гиалуронсинтазы 1 (HAS1)
Уровни экспрессии HAS1±стандартное отклонение от 0,01 мг/мл и 0,1 мг/мл тестового вещества (гидролизованной натриевой ДНК) составляли при уровне экспрессии HAS1 негативного контроля, равном 1, 1,11±0,04 и 1,02±0,07, соответственно.
[0108]
(2) Экспрессия гена человеческой гиалуронсинтазы 2 (HAS2)
Уровни экспрессии HAS2±стандартное отклонение от 0,01 мг/мл и 0,1 мг/мл тестового вещества (гидролизованной натриевой ДНК) составляли при уровне экспрессии HAS2 негативного контроля, равном 1, 1,25±0,09 (р<0,05) и 1,49±0,05 (р<0,001), соответственно.
[0109]
(3) Экспрессия гена человеческой гиалуронидазы 1 (HYAL1)
Уровни экспрессии HYAL1±стандартное отклонение от 0,01 мг/мл и 0,1 мг/мл тестового вещества (гидролизованной натриевой ДНК) составляли при уровне экспрессии HYAL1 негативного контроля, равном 1, 1,06±0,12 и 1,34±0,14, соответственно.
[0110]
3-2 Экстракт сои
(1) Экспрессия гена человеческой гиалуронсинтазы 1 (HAS1)
Уровни экспрессии HAS1±стандартное отклонение от 0,027 мг/мл и 0,27 мг/мл тестового вещества (SPA-308) составляли при уровне экспрессии HAS1 негативного контроля, равном 1, 1,03±1,2 и 0,99±0,16, соответственно.
[0111]
(2) Экспрессия гена человеческой гиалуронсинтазы 2 (HAS2)
Уровни экспрессии HAS2±стандартное отклонение от 0,027 мг/мл и 0,27 мг/мл тестового вещества (SPA-308) составляли при уровне экспрессии HAS2 негативного контроля, равном 1, 1,88±0,46 (р<0,05) и 1,50±0,11 (р<0,01), соответственно.
[0112]
(3) Экспрессия гена человеческой гиалуронидазы 1 (HYAL1)
Уровни экспрессии HYAL1±стандартное отклонение от 0,027 мг/мл и 0,27 мг/мл тестового вещества (SPA-308) составляли при уровне экспрессии HYAL1 негативного контроля, равном 1, 0,97±0,08 и 0,84±0,06, соответственно.
[0113]
3-3 Одновременное использование целевой низкомолекулярной ДНК и экстракта сои
(1) Экспрессия гена человеческой гиалуронсинтазы 1 (HAS1)
Уровни экспрессии HAS1±стандартное отклонение от 0,01 мг/мл + 0,27 мг/мл и 0,1 мг/мл + 0,27 мг/мл тестового вещества (гидролизованной натриевой ДНК+SPA-308) составляли при уровне экспрессии HAS1 негативного контроля, равном 1, 0,99±0,08 и 1,51±0,26 (р<0,05), соответственно.
[0114]
(2) Экспрессия гена человеческой гиалуронсинтазы 2 (HAS2)
Уровни экспрессии HAS2±стандартное отклонение от 0,01 мг/мл + 0,27 мг/мл и 0,1 мг/мл + 0,27 мг/мл тестового вещества (гидролизованной натриевой ДНК+SPA-308) составляли при уровне экспрессии HAS2 негативного контроля, равном 1, 1,41±0,10 (р<0,01) и 1,54±0,07 (р<0,001), соответственно.
[0115]
(3) Экспрессия гена человеческой гиалуронидазы 1 (HYAL1)
Уровни экспрессии HYAL1±стандартное отклонение от 0,01 мг/мл + 0,27 мг/мл и 0,1 мг/мл + 0,27 мг/мл тестового вещества (гидролизованной натриевой ДНК+SPA-308) составляли при уровне экспрессии HYAL1 негативного контроля, равном 1, 0,58±0,11 (р<0,01) и 0,93±0,05, соответственно.
[0116]
Раскрытые выше результаты сведены в таблицу 3. В таблице 3 под «ДНК-Na» понимают «гидролизованную натриевую ДНК». Из таблицы 3 следует, что при одновременном использовании целевой низкомолекулярной ДНК (гидролизованной натриевой ДНК) и экстракта сои (SPA-308) уровень экспрессии гена человеческой гиалуронсинтазы 1 (HAS1) синергически возрастает, а уровень экспрессии гена человеческой гиалуронсинтазы 2 (HAS2) значительно повышается по сравнению с негативным контролем. Также было обнаружено синергическое снижение уровня экспрессии гена человеческой гиалуронидазы 1 (HYAL1). Полученные результаты позволяют подтвердить, что при одновременном использовании целевой низкомолекулярной ДНК (гидролизованной натриевой ДНК) и экстракта сои (SPA-308) происходит одновременное стимулирование экспрессии генов, связанных с синтезом гиалуроновой кислоты, и подавление экспрессии генов, связанных с распадом гиалуроновой кислоты.
[0117]
[0118]
Вышеприведенные результаты свидетельствуют о том, что синергическое увеличение производства коллагена и гиалуроновой кислоты при одновременном применении целевой низкомолекулярной ДНК (гидролизованной натриевой ДНК) и экстракта сои (SPA-308), показанном в примере 1, вызвано одновременным проявлением стимулирования экспрессии генов, связанных с синтезом коллагена и гиалуроновой кислоты, и подавления экспрессии гена, связанного с их распадом.
Промышленная применимость
[0119]
Средство для замедления старения кожи согласно данному изобретению имеет действие и функции, отличающиеся от известных средств замедления старения, и способно более эффективно предотвращать и/или замедлять старение кожи, чем известные средства замедления старения; таким образом, оно может быть использовано, в частности, в косметической продукции.
Claims (12)
1. Средство для активации функции дермальных фибробластов, содержащее:
целевую низкомолекулярную ДНК и экстракт сои в качестве активных ингредиентов, причем
целевая низкомолекулярная ДНК представляет собой продукт гидролиза ДНК, полученной из семенников (молок) рыб, и содержит от 10 до 80% фракций, имеющих молекулярную массу от 330 до 12 000,
экстракт сои представляет собой экстракт по меньшей мере одного вида, выбранного из группы, состоящей из семян, зародышей и ростков сои,
содержание целевой низкомолекулярной ДНК составляет от 0,001% до 0,5% по массе, а содержание экстракта сои составляет от 0,01 до 0,5% по массе, соотношение содержания целевой низкомолекулярной ДНК и экстракта сои составляет от 1 : 50 до 50 : 1; а
упомянутая активация функции представляет собой по меньшей мере одно действие, выбранное из группы, состоящей из стимулирования пролиферации, стимулирования производства коллагена типа I и стимулирования производства гиалуроновой кислоты в дермальных фибробластах.
2. Средство для регуляции экспрессии гена дермальных фибробластов, содержащее:
целевую низкомолекулярную ДНК и экстракт сои в качестве активных ингредиентов,
причем целевая низкомолекулярная ДНК представляет собой продукт гидролиза ДНК, полученной из семенников (молок) рыб, и содержит от 10 до 80% фракций, имеющих молекулярную массу от 330 до 12000;
экстракт сои представляет собой экстракт по меньшей мере одного вида, выбранного из группы, состоящей из семян, зародышей и ростков сои;
содержание целевой низкомолекулярной ДНК составляет от 0,001% до 0,5% по массе, а содержание экстракта сои составляет от 0,01 до 0,5% по массе, соотношение содержания целевой низкомолекулярной ДНК и экстракта сои составляет от 1 : 50 до 50 : 1; а
упомянутая регуляция экспрессии гена представляет собой стимуляцию одного или обоих из гена человеческой гиалуронсинтазы 1 и гена человеческой гиалуронсинтазы 2 дермальных фибробластов, или снижение экспрессии гена человеческой гиалуронидазы 1 дермальных фибробластов.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018138405A JP6555674B1 (ja) | 2018-07-24 | 2018-07-24 | 皮膚の抗老化用剤及び抗老化関連遺伝子発現調節用剤 |
JP2018-138405 | 2018-07-24 | ||
PCT/JP2019/027998 WO2020022131A1 (ja) | 2018-07-24 | 2019-07-17 | 皮膚の抗老化用剤及び抗老化関連遺伝子発現調節用剤 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2744251C1 true RU2744251C1 (ru) | 2021-03-04 |
Family
ID=67539789
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2020113255A RU2744251C1 (ru) | 2018-07-24 | 2019-07-17 | Средство для замедления старения кожи и регулятор экспрессии гена, связанного с замедлением старения |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11554092B2 (ru) |
EP (1) | EP3677248A4 (ru) |
JP (1) | JP6555674B1 (ru) |
KR (1) | KR102366340B1 (ru) |
BR (1) | BR112020006113A2 (ru) |
MX (1) | MX2020004602A (ru) |
MY (1) | MY194768A (ru) |
PH (1) | PH12020550395A1 (ru) |
RU (1) | RU2744251C1 (ru) |
TW (1) | TWI747011B (ru) |
WO (1) | WO2020022131A1 (ru) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7458207B2 (ja) * | 2019-05-10 | 2024-03-29 | 花王株式会社 | 毛髪処理方法 |
CN110632303A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-12-31 | 广州市华代生物科技有限公司 | 一种基于酶学系统组合多种体外模型评价皮肤抗衰老功效的方法 |
JP7433685B1 (ja) | 2023-06-09 | 2024-02-20 | 日生バイオ株式会社 | 真皮線維芽細胞の機能賦活用剤及びそれを含んでなる化粧品 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007021062A (ja) * | 2005-07-21 | 2007-02-01 | Taneaki Futagami | 血栓症予防クッション |
JP2008063315A (ja) * | 2006-08-09 | 2008-03-21 | Nissei Bio Kk | 皮溝密度を改良する化粧品用配合剤及び化粧品 |
JP2009234938A (ja) * | 2008-03-26 | 2009-10-15 | Toyobo Co Ltd | 植物由来ポリアミン含有抽出物を含有する化粧品組成物 |
KR20120063646A (ko) * | 2010-12-08 | 2012-06-18 | 김보라 | 연어 정소를 이용한 화장품용 항노화 및 항산화 기능성 수액의 제조방법 |
CN104203206B (zh) * | 2012-03-19 | 2017-06-13 | Isp投资公司 | 包含由大豆和酵母的肽提取物的组合组成的协同trf2蛋白活化系统的化妆品组合物及其用途 |
JP2018058793A (ja) * | 2016-10-05 | 2018-04-12 | 株式会社ディーエイチシー | 育毛剤組成物、及び血管内皮細胞増殖因子産生促進剤 |
RU2657439C2 (ru) * | 2016-06-06 | 2018-06-13 | Часайэ Байэутекнолэджи Коп. | Экстракт семян сои, способ его получения, композиция экстракта семян сои, способ стимуляции пролиферации нейронов, лечения заболеваний головного мозга и лечения нейродегенеративных заболеваний (варианты) |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100471372B1 (ko) * | 2001-12-04 | 2005-03-08 | 주식회사 태평양 | 피부 탄력 향상용 화장료 조성물 |
JP2005245394A (ja) | 2004-03-08 | 2005-09-15 | Nissei Bio Kk | 魚類白子からの二本鎖dnaの抽出・精製方法 |
JP5025253B2 (ja) | 2006-03-31 | 2012-09-12 | 日生バイオ株式会社 | 基礎化粧品用配合剤及び基礎化粧品 |
JPWO2007148737A1 (ja) * | 2006-06-22 | 2009-11-19 | 東洋紡績株式会社 | 植物抽出物の調製方法、並びに植物抽出物及びその用途 |
US20080161229A1 (en) | 2006-12-21 | 2008-07-03 | Nissei Bio Co., Ltd. | Compounding ingredients for basic cosmetics and basic cosmetics |
US20080153741A1 (en) | 2006-12-21 | 2008-06-26 | Nissei Bio Co., Ltd. | Compounding ingredients for cosmetic formulation for improving skinditch density and cosmetic |
CN101371918B (zh) * | 2007-08-24 | 2013-03-20 | 天津天狮生物发展有限公司 | 鱼精多肽中的抗氧化二肽的新用途 |
JP2009234940A (ja) | 2008-03-26 | 2009-10-15 | Toyobo Co Ltd | 植物抽出物を含有する化粧品組成物 |
KR101476381B1 (ko) * | 2010-08-09 | 2014-12-24 | 정래준 | 어류 정액 또는 알로부터 분리된 dna 중합체 단편복합체를 포함하는 세포활성 강화용 조성물, 및 얼굴 또는 피부 충진제 |
JP5578160B2 (ja) | 2011-11-29 | 2014-08-27 | 東洋紡株式会社 | 植物由来の賦活化剤及び細胞外マトリックス産生促進剤 |
-
2018
- 2018-07-24 JP JP2018138405A patent/JP6555674B1/ja active Active
-
2019
- 2019-07-17 RU RU2020113255A patent/RU2744251C1/ru active
- 2019-07-17 US US16/652,778 patent/US11554092B2/en active Active
- 2019-07-17 MY MYPI2020001651A patent/MY194768A/en unknown
- 2019-07-17 WO PCT/JP2019/027998 patent/WO2020022131A1/ja unknown
- 2019-07-17 BR BR112020006113-1A patent/BR112020006113A2/pt unknown
- 2019-07-17 KR KR1020207009269A patent/KR102366340B1/ko active IP Right Grant
- 2019-07-17 EP EP19840073.1A patent/EP3677248A4/en active Pending
- 2019-07-17 MX MX2020004602A patent/MX2020004602A/es unknown
- 2019-07-22 TW TW108125848A patent/TWI747011B/zh active
-
2020
- 2020-04-02 PH PH12020550395A patent/PH12020550395A1/en unknown
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007021062A (ja) * | 2005-07-21 | 2007-02-01 | Taneaki Futagami | 血栓症予防クッション |
JP2008063315A (ja) * | 2006-08-09 | 2008-03-21 | Nissei Bio Kk | 皮溝密度を改良する化粧品用配合剤及び化粧品 |
JP2009234938A (ja) * | 2008-03-26 | 2009-10-15 | Toyobo Co Ltd | 植物由来ポリアミン含有抽出物を含有する化粧品組成物 |
KR20120063646A (ko) * | 2010-12-08 | 2012-06-18 | 김보라 | 연어 정소를 이용한 화장품용 항노화 및 항산화 기능성 수액의 제조방법 |
CN104203206B (zh) * | 2012-03-19 | 2017-06-13 | Isp投资公司 | 包含由大豆和酵母的肽提取物的组合组成的协同trf2蛋白活化系统的化妆品组合物及其用途 |
RU2657439C2 (ru) * | 2016-06-06 | 2018-06-13 | Часайэ Байэутекнолэджи Коп. | Экстракт семян сои, способ его получения, композиция экстракта семян сои, способ стимуляции пролиферации нейронов, лечения заболеваний головного мозга и лечения нейродегенеративных заболеваний (варианты) |
JP2018058793A (ja) * | 2016-10-05 | 2018-04-12 | 株式会社ディーエイチシー | 育毛剤組成物、及び血管内皮細胞増殖因子産生促進剤 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
EDWIN D. LEPHART. Human Skin Gene Expression, Attributes of Botanicals: Angelica sinensis, a Soy Extract, Equol and its Isomers and Resveratrol //Gene Technology, vol. 4, Issue 2, pp.1-7. * |
SEIN LEE et al. A fermented barley and soybean formula enhances skin hydration //J. Clin. Biochem. Nutr. | September 2015, vol. 57, no. 2, 156-163. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR102366340B1 (ko) | 2022-02-23 |
TWI747011B (zh) | 2021-11-21 |
BR112020006113A2 (pt) | 2021-02-09 |
US20200237636A1 (en) | 2020-07-30 |
EP3677248A4 (en) | 2020-11-18 |
US11554092B2 (en) | 2023-01-17 |
PH12020550395A1 (en) | 2021-03-08 |
KR20200044934A (ko) | 2020-04-29 |
JP2020015672A (ja) | 2020-01-30 |
JP6555674B1 (ja) | 2019-08-07 |
MX2020004602A (es) | 2020-08-06 |
MY194768A (en) | 2022-12-15 |
EP3677248A1 (en) | 2020-07-08 |
TW202015654A (zh) | 2020-05-01 |
WO2020022131A1 (ja) | 2020-01-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2744251C1 (ru) | Средство для замедления старения кожи и регулятор экспрессии гена, связанного с замедлением старения | |
JP6670166B2 (ja) | 化粧料 | |
TW201609175A (zh) | 包含膠原蛋白胜肽、彈力蛋白胜肽以及蛋白聚醣之組成物 | |
KR102194315B1 (ko) | 락토바실러스 람노서스 균주를 접종하여 발효시킨 병풀 발효 추출물을 포함하는 항산화용 또는 피부 마이크로바이옴 균형 유지용 화장료 조성물 | |
CN102512669A (zh) | 一种女性美白养颜的组合物 | |
WO2010114149A1 (ja) | 皮膚障害の治療及び/又は予防のための組成物 | |
JP2017114814A (ja) | 化粧料 | |
CN109105684A (zh) | 一种减少胶原蛋白肽糖基化的组合物 | |
KR20130088997A (ko) | 생캐비어 추출물 및 발효추출물을 이용한 육모, 발모, 탈모방지 및 두피 개선용 화장료 조성물 | |
TWI784229B (zh) | 金銀花發酵物的製備方法及其改善皮膚外觀與抗老化的用途 | |
KR100974627B1 (ko) | 스피루리나 발효 추출물 및 그 제조방법 | |
Kim et al. | Anti-oxidation and anti-wrinkling effects of Jeju horse leg bone hydrolysates | |
KR20170128726A (ko) | 네오아가로테트라오스를 함유하는 피부노화 개선용 화장료 조성물 | |
KR101904501B1 (ko) | 퓨코스테롤을 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선 또는 피부탄력 증진용 화장료 조성물 | |
Song et al. | Lactobacillus plantarum fermented Laminaria japonica alleviates UVB-induced epidermal photoinflammation via the Keap-1/Nrf2 pathway | |
CN110573138B (zh) | 皮肤抗衰老剂以及抗衰老相关基因表达调节剂 | |
JP2019178123A (ja) | カンゾウ抽出発酵物、美白剤、抗老化剤、皮膚化粧料及び飲食品 | |
KR20160014321A (ko) | 호두 및 밤의 복합 발효추출물을 이용한 피부의 노화방지 및 주름개선용 화장료 조성물 | |
CN110840785B (zh) | 皮肤老化或皮肤皱纹改善用化妆品组合物 | |
KR20220112336A (ko) | 메밀꿀을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물 | |
Lee et al. | Probiotic improves skin oxidation, elasticity, and structural properties in aging rats | |
Kim et al. | Preventive effect of fermented Gelidium amansii and Cirsium japonicum extract mixture against UVB-induced skin photoaging in hairless mice | |
KR20200063408A (ko) | 유산균 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 발모 촉진용 조성물 | |
KR102682937B1 (ko) | 식물세포로부터 pdrn 생산 방법 | |
KR102329921B1 (ko) | 락토바실러스 속 신균주를 이용한 바다제비집 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부상태 개선용 조성물 |