TW201801749A - 糖皮質素受體促效劑及其免疫結合物 - Google Patents

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Abstract

本文所提供係糖皮質素受體促效劑免疫結合物、糖皮質素受體促效劑及使用該等以例如治療自體免疫或發炎性疾病之方法。

Description

糖皮質素受體促效劑及其免疫結合物
本發明領域概言之係關於糖皮質素受體促效劑免疫結合物，以及製備及使用該等以例如治療自體免疫或發炎性疾病之方法。
腫瘤壞死因子α (TNFa)在若干人類病症之病理生理學中起關鍵作用，且抗TNFa劑(例如，阿達木單抗(adalimumab)、依那西普(etanercept)及英利昔單抗(infliximab))在治療自體免疫及發炎性病症(例如類風濕性關節炎、牛皮癬及發炎性腸病)方面具有臨床上經驗證之治療效用。儘管其成功用於臨床上，但抗TNFa生物劑可在患者中達成之最大效能仍受限，從而需要鑑別並研發出更強效且有效之治療劑。經抗TNFa生物劑治療之患者亦可產生針對治療劑之免疫原性反應，由此限制其有效性。因此，具有較低免疫原性及高效能之抗TNFa療法將可用於進一步控制疾病。 合成糖皮質素受體促效劑(例如，地塞米松(dexamethasone)、普賴蘇濃(prednisolone)及布地奈德(budesonide)係用於治療發炎性病症之強效類小分子，但其於疾病慢性治療方面之效用因嚴重副作用而受限。業內已闡述若干保留合成糖皮質素之抗發炎效能同時減小不期望毒性之方法(Rosen, J及Miner, JNEndocrine Reviews 26: 452-64 (2005))。然而，該等方法不太成功。自體免疫及發炎性疾病治療學領域需要研發出具有與抗TNF抗體相比增強的效能及較長作用持續時間且具有極小不期望效應之治療劑。
在一態樣中，本發明提供由下式I-a 及I-b 表示之糖皮質素受體促效劑免疫結合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或前藥。在另一態樣中，本發明提供由下式I-a 及I-b 表示之糖皮質素受體促效劑免疫結合物。具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療自體免疫疾病，例如(但不限於)類風濕性關節炎、幼年型特發性關節炎、牛皮癬關節炎、關節黏連性脊椎炎、成人克隆氏病(adult Crohn's disease)、小兒克隆氏病、潰瘍性結腸炎、斑塊狀牛皮癬、化膿性汗腺炎、眼色素層炎、貝切特氏病(Behcets disease)、脊椎關節病或牛皮癬。在一態樣中，具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療類風濕性關節炎。在一態樣中，具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療幼年型特發性關節炎。在一態樣中，具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療牛皮癬關節炎。在一態樣中，具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療關節黏連性脊椎炎。在一態樣中，具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療成人克隆氏病。在一態樣中，具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療小兒克隆氏病。在一態樣中，具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療潰瘍性結腸炎。在一態樣中，具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療斑塊狀牛皮癬。在一態樣中，具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療化膿性汗腺炎。在一態樣中，具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療眼色素層炎。在一態樣中，具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療貝切特氏病。在一態樣中，具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療脊椎關節病。在一態樣中，具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物可用於治療牛皮癬。 在另一態樣中，本發明提供由下文式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' (其中R7b 係氫)表示之糖皮質素受體促效劑及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或前藥。在另一態樣中，本發明提供由下文式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' (其中R7b 係氫)表示之糖皮質素受體促效劑。具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療自體免疫疾病，例如(但不限於)類風濕性關節炎、幼年型特發性關節炎、牛皮癬關節炎、關節黏連性脊椎炎、成人克隆氏病、小兒克隆氏病、潰瘍性結腸炎、斑塊狀牛皮癬、化膿性汗腺炎、眼色素層炎、貝切特氏病、脊椎關節病或牛皮癬。在一態樣中，具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療類風濕性關節炎。在一態樣中，具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療幼年型特發性關節炎。在一態樣中，具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療牛皮癬關節炎。在一態樣中，具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療關節黏連性脊椎炎。在一態樣中，具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療成人克隆氏病。在一態樣中，具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療小兒克隆氏病。在一態樣中，具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療潰瘍性結腸炎。在一態樣中，具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療斑塊狀牛皮癬。在一態樣中，具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療化膿性汗腺炎。在一態樣中，具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療眼色素層炎。在一態樣中，具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療貝切特氏病。在一態樣中，具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療脊椎關節病。在一態樣中，具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 之化合物可用於治療牛皮癬。 在另一態樣中，本發明提供由式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 表示之化合物，其可作為合成中間體用於製備具有式I-a 及I-b 之糖皮質素受體促效劑免疫結合物。 在另一態樣中，本發明提供醫藥組合物，其包含由式I-a 及I-b 表示之糖皮質素受體促效劑免疫結合物或由式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 表示之糖皮質素受體促效劑，及賦形劑及/或醫藥上可接受之載劑。 在另一態樣中，本發明提供由式I-a 及I-b 表示之糖皮質素受體促效劑免疫結合物或由式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 表示之糖皮質素受體促效劑，其用於治療自體免疫疾病。 在另一態樣中，本發明提供由式I-a 及I-b 表示之糖皮質素受體促效劑免疫結合物或由式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 及IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 及IX-b'' 表示之糖皮質素受體促效劑的用途，其用於製造用來治療自體免疫疾病之藥劑。 在另一態樣中，本發明提供製備由式I-a 及I-b 表示之糖皮質素受體促效劑免疫結合物之方法。
相關申請案 本申請案主張於2016年6月2日提出申請之美國臨時申請案第62/344,948號及於2016年8月4日提出申請之美國臨時申請案第62/371,134號的優先權，該等申請案之全文皆以引用方式併入本文中。 本文提供糖皮質素受體促效劑免疫結合物、糖皮質素受體促效劑及製備及使用其之方法。I. 定義 為幫助理解本發明，下文定義多個術語及片語。 術語「抗TNF α蛋白」係指能夠(i) 結合至TNF α及(ii) 抑制可溶性TNF-α與細胞表面TNF受體(p55及/或p75)之結合及/或在活體外在補體存在下溶解表面TNF α或TNF α受體表現細胞之蛋白質。抗TNF α蛋白包括例如抗TNF抗體或其抗原結合片段(例如，阿達木單抗或英利昔單抗)以及可溶性TNF受體(例如，依那西普)。 如本文所用術語「抗體(antibody)」及「抗體(antibodies)」係專門術語且在本文中可互換使用並係指具有特異性結合抗原之抗原結合位點之分子。 術語「抗體」意指經由免疫球蛋白分子可變區內之至少一個抗原識別位點識別並特異性結合至靶(例如蛋白質、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂質或前述各者之組合)之免疫球蛋白分子。如本文所用術語「抗體」涵蓋完整多株抗體、完整單株抗體、嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體、包含抗體之融合蛋白及任何其他經修飾免疫球蛋白分子，只要抗體展現期望生物活性即可。抗體基於其重鏈恆定結構域(分別稱為α、δ、ε、γ及μ)之身份可為五種主要免疫球蛋白類別IgA、IgD、IgE、IgG及IgM或其子類(同型) (例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)中之任一者。不同類別之免疫球蛋白具有不同且熟知之亞單元結構及三維構形。抗體可為裸露或結合至諸如毒素、放射性同位素等其他分子。如本文所用術語「抗體」涵蓋雙特異性及多特異性抗體。 術語「抗體片段」係指完整抗體之一部分。「抗原結合片段」係指完整抗體之結合至抗原之部分。抗原結合片段可含有完整抗體之抗原決定可變區。抗體片段之實例包括(但不限於) Fab、Fab'、F(ab')2及Fv片段、線性抗體及單鏈抗體。「抗原結合片段」可為雙特異性或多特異性抗原結合片段。 「阻斷性」抗體或「拮抗性」抗體係抑制或降低所結合抗原(例如TNF-α)之生物活性之抗體。在一些實施例中，阻斷性抗體或拮抗性抗體實質上或完全抑制抗原之生物活性。生物活性可降低10%、20%、30%、50%、70%、80%、90%、95%或甚至100%。 術語「抗TNF-α抗體」或「結合至TNF-α之抗體」係指能夠以足夠親和力結合TNF-α、使得該抗體可用作靶向TNF-α之診斷劑及/或治療劑之抗體。抗TNF-α抗體與無關非TNF-α蛋白結合之程度可小於該抗體與TNF-α結合之約10%，如藉由例如放射免疫分析(RIA)所量測。在某些實施例中，結合至TNF-α之抗體具有≤1 μM、≤100 nM、≤10 nM、≤1 nM或≤0.1 nM之解離常數(Kd)。 「單株」抗體或其抗原結合片段係指參與單一抗原決定子或表位之高特異性識別及結合之均質抗體或抗原結合片段群體。此與通常包括針對不同抗原決定子之不同抗體之多株抗體不同。術語「單株」抗體或其抗原結合片段涵蓋完整及全長單株抗體二者以及抗體片段(例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、單鏈(scFv)突變體、包含抗體部分之融合蛋白及任何其他包含抗原識別位點之經修飾免疫球蛋白分子。另外，「單株」抗體或其抗原結合片段係指以任一數量之方式、包括(但不限於)藉由雜交瘤、噬菌體選擇、重組表現及轉基因動物製備之該等抗體及其抗原結合片段。 術語「人類化」抗體或其抗原結合片段係指非人類(例如鼠類)抗體或抗原結合片段之形式，其為含有極少非人類(例如，鼠類)序列之特異性免疫球蛋白鏈、嵌合免疫球蛋白或其片段。通常，人類化抗體或其抗原結合片段係互補決定區(CDR)之殘基經非人類物種(例如小鼠、大鼠、兔、倉鼠) CDR之具有期望特異性、親和力及容量之殘基替代(「CDR移植」)之人類免疫球蛋白(Jones等人，Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann等人，Nature 332:323-327 (1988)；Verhoeyen等人，Science 239:1534-1536 (1988))。在一些情況下，人類免疫球蛋白之Fv框架區(FR)殘基經非人類物種之具有期望特異性、親和力及容量之抗體或片段之相應殘基替代。人類化抗體或其抗原結合片段可進一步藉由取代Fv框架區中及/或經替代非人類殘基內之其他殘基來修飾以細化並最佳化抗體或其抗原結合片段特異性、親和力及/或容量。一般而言，人類化抗體或其抗原結合片段將包含實質上所有的至少一個、且通常兩個或三個含有所有或實質上所有對應於非人類免疫球蛋白之CDR區之可變結構域，而所有或實質上所有的FR區係人類免疫球蛋白共有序列之FR區。人類化抗體或其抗原結合片段亦可包含免疫球蛋白恆定區或結構域(Fc) (通常為人類免疫球蛋白恆定區或結構域)之至少一部分。用於生成人類化抗體之方法之實例闡述於以下文獻中：美國專利5,225,539；Roguska等人，Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 91(3):969-973 (1994)；及Roguska等人，Protein Eng . 9(10):895-904 (1996)。在一些實施例中，「人類化抗體」係表面重修抗體。 抗體之「可變區」係指抗體輕鏈之可變區或抗體重鏈之可變區，單獨或呈組合形式。重鏈及輕鏈之可變區各自由三個互補決定區(CDR，亦稱為超變區)連接之四個框架區(FR)組成。每一鏈中之CDR藉由FR保持緊密地靠近在一起，與另一鏈之CDR一起促進形成抗體之抗原結合位點。存在至少兩種測定CDR之技術：(1) 基於交叉物種序列可變性之方法(即，Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest, (第5版，1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.))；及(2) 基於抗原-抗體複合物之結晶學研究之方法(Al-lazikani等人(1997)J .Molec. Biol. 273:927-948)。另外，在業內有時使用該兩種方法之組合來測定CDR。 通常在提及可變結構域中之殘基(約輕鏈之殘基1-107及重鏈之殘基1-113)時使用Kabat編號系統(例如，Kabat等人，Sequences of Immunological Interest.第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))。除非另外明確指示，否則本文所用之編號系統係Kabat編號系統。 如Kabat中之胺基酸位置編號係指在Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)中用於抗體編譯之重鏈可變結構域或輕鏈可變結構域之編號系統。使用此編號系統，實際線性胺基酸序列可含有極少或其他對應於可變結構域FR或CDR之縮短或插入之胺基酸。舉例而言，重鏈可變結構域可包括在H2之殘基52後之單胺基酸插入(根據Kabat之殘基52a)及重鏈FR殘基82後之插入殘基(例如，根據Kabat之殘基82a、82b及82c等)。給定抗體殘基之Kabat編號可藉由比對抗體序列之同源區與「標準」Kabat編號序列來確定。而Chothia係指結構環之位置(Chothia及Lesk，J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。當使用Kabat編號慣例編號時，Chothia CDR-H1環之末端在H32與H34之間變化，此端視環之長度而定(此乃因Kabat編號方案將插入置於H35A及H35B處；若35A及35B皆不存在，則環終止於32處；若僅存在35A，則環終止於33處；若35A及35B二者皆存在，則環終止於34處)。AbM超變區代表Kabat CDR與Chothia結構環之間之折衷方案且用於Oxford Molecular之AbM抗體建模軟體中。
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在某些態樣中，抗體或其抗原結合片段之CDR可根據Chothia編號方案來確定，其係指免疫球蛋白結構環之位置(例如，參見Chothia C及Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917；Al-Lazikani B等人(1997) J Mol Biol 273: 927-948；Chothia C等人(1992) J Mol Biol 227: 799-817；Tramontano A等人(1990) J Mol Biol 215(1): 175-82；及美國專利第7,709,226號)。通常，在使用Kabat編號慣例時，Chothia CDR-H1環存在於重鏈胺基酸26至32、33或34處，Chothia CDR-H2環存在於重鏈胺基酸52至56處，且Chothia CDR-H3環存在於重鏈胺基酸95至102處，而Chothia CDR-L1環存在於輕鏈胺基酸24至34處，Chothia CDR-L2環存在於輕鏈胺基酸50至56處，且Chothia CDR-L3環存在於輕鏈胺基酸89至97處。當使用Kabat編號慣例編號時，Chothia CDR-H1環之末端在H32與H34之間變化，此端視環之長度而定(此乃因Kabat編號方案將插入置於H35A及H35B處；若35A及35B皆不存在，則環終止於32處；若僅存在35A，則環終止於33處；若35A及35B二者皆存在，則環終止於34處)。 在某些態樣中，抗體或其抗原結合片段之CDR可根據IMGT編號系統來確定，如Lefranc M-P, (1999) The Immunologist 7: 132-136及Lefranc M-P等人(1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212中所述。根據IMGT編號方案，VH-CDR1處於位置26至35，VH-CDR2處於位置51至57，VH-CDR3處於位置93至102，VL-CDR1處於位置27至32，VL-CDR2處於位置50至52，且VL-CDR3處於位置89至97。 在某些態樣中，抗體或其抗原結合片段之CDR可根據MacCallum RM等人(1996) J Mol Biol 262: 732-745來確定。亦參見例如Martin A. 「Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains」，Antibody Engineering , Kontermann及Dübel編輯，第31章，第422-439頁，Springer-Verlag, Berlin (2001)。 在某些態樣中，抗體或其抗原結合片段之CDR可根據AbM編號方案來確定，其係指代表Kabat CDR與Chothia結構環之間之折衷方案且用於Oxford Molecular之AbM抗體建模軟體(Oxford Molecular Group, Inc.)之AbM超變區。 術語「人類」抗體意指人類所產生之抗體或使用業內已知之任何技術製備之具有對應於人類所產生之抗體的胺基酸序列之抗體。此人類抗體之定義包括完整或全長抗體、其片段及/或包含至少一條人類重鏈及/或輕鏈多肽之抗體(例如包含鼠類輕鏈及人類重鏈多肽之抗體)。 術語「嵌合」抗體係指其中免疫球蛋白分子之胺基酸序列衍生自兩個或更多個物種之抗體。通常，輕鏈及重鏈二者之可變區對應於具有期望特異性、親和力及容量之衍生自一個哺乳動物物種(例如小鼠、大鼠、兔等)之抗體之可變區，而恆定區與衍生自另一者(通常人類)之抗體中的序列同源以避免引發該物種中之免疫反應。 術語「表位」或「抗原決定子」在本文中可互換使用且係指抗原之能夠經特定抗體識別並特異性結合之部分。當抗原係多肽時，可自藉由蛋白質之三級摺疊並置之鄰接胺基酸及非鄰接胺基酸二者形成表位。自鄰接胺基酸形成之表位通常在蛋白質變性後得以保留，而藉由三級摺疊形成之表位通常在蛋白質變性後丟失。表位通常包括至少3個、且更通常至少5個或8-10個呈獨特空間構形之胺基酸。 「結合親和力」通常係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合配偶體(例如抗原)之間之非共價相互作用的總強度。除非另有指示，否則如本文所用「結合親和力」係指反映結合對成員(例如，抗體與抗原)之間之1:1相互作用之固有結合親和力。分子X對其配偶體Y之親和力通常可表示為解離常數(Kd)。親和力可藉由業內已知之常用方法(包含本文中所述之彼等)來量測。低親和力抗體通常緩慢地結合抗原且往往易於解離，而高親和力抗體通常較快速結合抗原且往往較長時間保持結合。多種量測結合親和力之方法為業內已知，其任一者皆可用於本發明之目的。具體說明性實施例闡述於下文中。 「或較佳」當在本文中用於提及結合親和力時係指分子與其結合配偶體之間之較強結合。「或較佳」當用於本文中時係指較強結合，由較小Kd數值表示。舉例而言，對抗原具有「0.6 nM或較佳」親和力之抗體意指該抗體對抗原之親和力為＜0.6 nM，即0.59 nM、0.58 nM、0.57 nM等或小於0.6 nM之任一值。 「特異性結合」通常意指抗體經由其抗原結合結構域結合至表位，且該結合需要抗原結合結構域與表位之間之一定互補性。根據此定義，認為抗體在其結合至表位時經由其抗原結合結構域「特異性結合」至該表位比其結合至隨機無關表位更容易。術語「特異性」在本文中用於量化某一抗體結合至某一表位之相對親和力。舉例而言，抗體「A」可視為針對給定表位具有高於抗體「B」之特異性，或抗體「A」可視為以高於其對相關表位「D」所具有之特異性結合至表位「C」。 「優先結合」意指抗體特異性結合至表位比其結合至相關、相似、同源或類似表位更容易。因此，「優先結合」至給定表位之抗體將更可能結合至該表位而非相關表位，即使該抗體可與相關表位交叉反應。 若抗體優先結合至給定表位或重疊表位，則就其阻斷參考抗體與該表位之結合程度而言，該抗體視為「競爭性抑制」參考抗體與該表位之結合。競爭性抑制可藉由業內已知之任何方法(例如競爭ELISA分析)來測定。抗體可視為競爭性抑制至少90%、至少80%、至少70%、至少60%或至少50%的參考抗體與給定表位之結合。 如本文所用片語「實質上相似」或「實質上相同」表示兩個數值(通常一者與本發明抗體相關且另一者與參考/比較抗體相關)之間之足夠高相似度，使得熟習此項技術者認為該兩個值間之差異在藉由該等值(例如，Kd值)量測之生物學特徵之背景下具有較小或不具生物學及/或統計學顯著性。該兩個值間之差異可小於約50%、小於約40%、小於約30%、小於約20%或小於約10%，其隨參考/比較抗體之值而變化。 「經分離」之多肽、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組合物係呈在自然界中未發現形式之多肽、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組合物。經分離多肽、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組合物包括已經純化至其不再呈在自然界中發現形式之程度之彼等。在一些實施例中，經分離之抗體、多核苷酸、載體、細胞或組合物係實質上純淨的。 如本文所用「實質上純淨」係指為至少50%純淨(即，不含污染物)、至少90%純淨、至少95%純淨、至少98%純淨或至少99%純淨之材料。 如本文所用術語「免疫結合物」、「結合物」、「抗體-藥物結合物」或「ADC」係指連接至蛋白質(例如細胞結合劑，例如抗TNF-α抗體或其片段)且由以下通式定義之化合物或其衍生物：(SM-L-Q)n -A，其中SM = 衍生自小分子糖皮質素受體促效劑(例如糖皮質類固醇)之基團，L = 連接體，Q = 異二官能基、異三官能基或係不存在，且A = 蛋白質(例如，抗體或其抗原結合片段、抗TNF蛋白、抗TNF-α抗體或其片段、可溶性受體或可溶性TNF受體)，且n = 1-10。免疫結合物亦可由呈相反順序之以下通式定義：A-(Q-L-SM)n 。藉助圖解說明，以下通式顯示具有二肽(Ala-Ala)連接體及基於琥珀醯亞胺硫醚之異二官能基之免疫結合物：
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在本揭示內容中，術語「連接體」係指能夠連接蛋白質(例如抗體、抗體片段(例如，抗原結合片段))或功能等效於糖皮質類固醇之任一化學部分。連接體可易於裂解(「可裂解連接體」)，藉此促進糖皮質類固醇釋放。舉例而言，該等可裂解連接體在糖皮質類固醇及/或抗體保持活性之條件下可易於進行酸誘導之裂解、光誘導之裂解、肽酶誘導之裂解、酯酶誘導之裂解及二硫鍵裂解。或者，連接體可實質上抵抗裂解(「不可裂解連接體」)。 在本揭示內容中，不可裂解連接體係能夠以穩定、共價方式連接糖皮質類固醇與抗體之任一化學部分且並不屬上文針對可裂解連接體所列示之種類。因此，不可裂解連接體實質上抵抗酸誘導之裂解、光誘導之裂解、肽酶誘導之裂解、酯酶誘導之裂解及二硫鍵裂解。另外，不可裂解係指連接體中或與連接體相鄰之化學鍵能夠在糖皮質類固醇及/或抗體並不損失其活性之條件下承受由裂解二硫鍵之酸、光不穩定裂解劑、肽酶、酯酶或化學或生理學化合物誘導的裂解。 一些可裂解連接體係由肽酶裂解(「肽酶可裂解連接體」)。僅某些肽易於在細胞內部或外部裂解，參見例如Trout等人，79 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 626-629 (1982)及Umemoto等人，43 Int. J. Cancer, 677-684 (1989)。另外，肽係由α-胺基酸單元及肽鍵構成，肽鍵在化學上係一種胺基酸之羧酸酯與第二胺基酸之胺基之間的醯胺鍵。其他醯胺鍵(例如羧酸酯與離胺酸之α-胺基之間之鍵)應理解為並非肽鍵且視為不可裂解。 一些連接體係由酯酶裂解(「酯酶可裂解連接體」)。僅某些酯可由存在於細胞內部或外部之酯酶裂解。酯係藉由羧酸及醇之縮合形成。簡單酯係使用簡單醇(例如脂肪族醇以及小環及小芳香族醇)產生之酯。 在一些實施例中，可裂解連接體組分可包含包括1至10個胺基酸殘基之肽。在該等實施例中，肽允許蛋白酶裂解連接體，藉此促進糖皮質類固醇在暴露於細胞內蛋白酶(例如溶酶體酶)時釋放(Doronina等人(2003) Nat. Biotechnol. 21:778-784)。實例性肽包括(但不限於)二肽、三肽、四肽及五肽。實例性二肽包括(但不限於)丙胺酸-丙胺酸(ala-ala)、纈胺酸-瓜胺酸(vc或val-cit)、丙胺酸-苯丙胺酸(af或ala-phe)；苯丙胺酸-離胺酸(fk或phe-lys)；苯丙胺酸-高離胺酸(phe-homolys)或N-甲基-纈胺酸-瓜胺酸(Me-val-cit)。實例性三肽包括(但不限於)甘胺酸-纈胺酸-瓜胺酸(gly-val-cit)及甘胺酸-甘胺酸-甘胺酸(gly-gly-gly)。 肽可包含天然及/或非天然胺基酸殘基。術語「天然胺基酸」係指Ala、Asp、Cys、Glu、Phe、Gly、His、He、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Thr、Val、Trp及Tyr。藉助非限制性實例，「非天然胺基酸」(即，胺基酸並非天然存在)包括高絲胺酸、高精胺酸、瓜胺酸、苯基甘胺酸、牛磺酸、碘酪胺酸、硒基-半胱胺酸、正白胺酸(「Nle」)、正纈胺酸(「Nva」)、β-丙胺酸、L-或D-萘基丙胺酸、鳥胺酸(「Orn」)及諸如此類。肽可經設計及最佳化以經特定酶(例如腫瘤相關蛋白酶、細胞自溶酶B、C及D或胞漿素蛋白酶)酶裂解。 胺基酸亦包括D-形式之天然及非天然胺基酸。「D-」表示具有與天然(「L-」)胺基酸之構形相反之「D」(右旋)構形之胺基酸。天然及非天然胺基酸可在市面上購得(Sigma Chemical Co., Advanced Chemtech)或使用業內已知之方法合成。 在本揭示內容中，術語「糖皮質類固醇」係指與糖皮質素受體相互作用之天然或合成類固醇激素。非限制性實例性糖皮質類固醇包括：
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舉例而言，布地奈德之類固醇骨架之A環、B環、C環及D環經標記。糖皮質類固醇闡述於WO 2009/069032中。 「糖皮質類固醇之基團」衍生自自親代糖皮質類固醇移除一或多個氫原子。移除氫原子有助於親代糖皮質類固醇附接至連接體。在一個實施例中，氫原子係自親代糖皮質類固醇之任一適宜-NH2 基團移除。在另一實施例中，氫原子係自親代糖皮質類固醇之任一適宜-OH基團移除。在另一實施例中，氫原子係自親代糖皮質類固醇之任一適宜-SH基團移除。在另一實施例中，氫原子係自親代糖皮質類固醇之任一適宜-N(H)-基團移除。在另一實施例中，氫原子係自親代糖皮質類固醇之任一適宜-CH3 、-CH2 -或-CH=基團移除。在一個實施例中，「糖皮質類固醇之基團」係衍生自自親代糖皮質類固醇移除一個氫原子之單價基團。 在本揭示內容中，術語「異二官能基」或術語「異三官能基」係指連接連接體及蛋白質(例如抗體)之化學部分。異二及異三官能基之特徵在於在化學部分之任一末端具有不同反應性基團。非限制性實例性異二官能基包括：
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及
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。 非限制性實例性異三官能基係：
Figure TW201801749AD00008
。 術語「藥物抗體比率」或「DAR」係指連接至A (即，蛋白質，例如抗體或其抗原結合片段、抗TNF蛋白、抗TNF-α抗體或其片段、可溶性受體或可溶性TNF受體)之SM (即，衍生自小分子糖皮質素受體促效劑(例如糖皮質類固醇)之基團)之數量。因此，在具有通式(SM-L-Q)n -A之免疫結合物中，DAR由變量「n」定義。 當提及具有式(SM-L-Q)n -A之化合物代表個別免疫結合物時，DAR係指連接至個別A之SM之數量(例如，n係1至10之整數)。 當提及具有式(SM-L-Q)n -A之化合物代表複數個免疫結合物時，DAR係指連接至A之SM之平均數(例如，n係1至10之整數或分數)。因此，藉助實例，包含具有3個SM/A之第一免疫結合物及具有4個SM/A之第二免疫結合物的具有式(SM-L-Q)n -A之化合物將具有3.5之DAR (即，「n」)。 術語「個體」係指欲為具體治療之接受者之任何動物(例如，哺乳動物)，包括(但不限於)人類、非人類靈長類動物、齧齒類動物及諸如此類。通常，術語「個體」及「患者」在提及人類個體時在本文中可互換使用。 術語「醫藥調配物」係指呈容許活性成分之生物活性有效之形式、且不含對投與調配物之個體具有不可接受毒性之其他組分之製劑。調配物可為無菌的。 如本文所揭示免疫結合物或糖皮質素受體促效劑之「有效量」係足以實施明確所述目的之量。「有效量」可針對所述目的來確定。 術語「治療有效量」係指免疫結合物或糖皮質素受體促效劑之可有效地「治療」個體或哺乳動物之疾病或病症之量。「預防有效量」係指可有效地達成期望預防結果之量。 諸如「治療(treating)」或「治療(treatment)」或「以治療(to treat)」或「緩和(alleviating)」或「以緩和(to alleviate)」等術語係指治癒、減慢、減輕經診斷病理學病況或病症之症狀及/或停止其進展之治療性措施。因此，需要治療之彼等包括已經診斷患有或懷疑患有病症之彼等。預防性(prophylactic或preventative)措施係指預防及/或減緩靶向病理學病況或病症之發展之措施。因此，需要預防性措施之彼等包括易患病症之彼等及欲預防病症之彼等。 如本文所互換使用之「多核苷酸」或「核酸」係指任一長度之核苷酸之聚合物，且包括DNA及RNA。核苷酸可為去氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾核苷酸或鹼基及/或其類似物或可藉由DNA或RNA聚合酶納入聚合物中之任何受質。多核苷酸可包含經修飾核苷酸，例如甲基化核苷酸及其類似物。若存在，可在組裝聚合物之前或之後賦予對核苷酸結構之修飾。核苷酸之序列可雜有非核苷酸組分。多核苷酸可在聚合後藉由例如與標記組分結合來進一步修飾。其他類型之修飾包括例如「帽」、用類似物取代天然核苷酸中之一或多者、核苷酸間修飾，例如具有不帶電連接(例如，膦酸甲酯、磷酸三酯、胺基磷酸酯、胺基甲酸酯等)及具有帶電連接(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)之彼等、含有側接部分(例如，蛋白質(例如，核酸酶、毒素、抗體、信號肽、聚-L-離胺酸等)之彼等、含有嵌入劑(例如，吖啶、補骨脂素等)之彼等、含有螯合劑(例如，金屬、放射性金屬、硼、氧化金屬等)之彼等、含有烷基化劑之彼等、具有經修飾連接(例如，α變旋異構核酸等)之彼等以及多核苷酸之未經修飾形式。另外，通常存在於糖中之任一羥基皆可經例如膦酸酯基團、磷酸酯基團替代，經標準保護基團保護，或經活化以製備與額外核苷酸之額外連接，或可結合至固體載體。5'及3'末端OH可經胺或1至20個碳原子之有機封端基團部分磷酸化或取代。其他羥基亦可衍生化成標準保護基團。多核苷酸亦可含有業內通常已知之核糖或去氧核糖之類似形式，包括例如2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基、2'-氟-或2'-疊氮基-核糖、碳環糖類似物、α-變旋異構糖、差向異構糖(例如阿拉伯糖、木糖或來蘇糖)、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、非環類似物及無鹼基核苷類似物(例如甲基核苷)。一或多個磷酸二酯連接可經替代性連接基團替代。該等替代性連接基團包括(但不限於)以下實施例：其中磷酸酯經P(O)S (「硫代酯」)、P(S)S (「二硫代酯」)、(O)NR2 (「醯胺化物」)、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2 (「甲乙縮醛」)替代，其中每一R或R'獨立地係H或視情況含有醚(--O--)連接之經取代或未經取代之烷基(1-20個C)、芳基、烯基、環烷基、環烯基或芳烷基(araldyl)。多核苷酸中之所有連接無需相同。前述說明適用於本文中提及之所有多核苷酸，包括RNA及DNA。 術語「載體」意指能夠遞送且視情況在宿主細胞中表現一或多個所關注基因或序列之構築體。載體之實例包括(但不限於)病毒載體、裸DNA或RNA表現載體、質體、黏粒或噬菌體載體、與陰離子縮合劑相關之DNA或RNA表現載體、囊封於脂質體中之DNA或RNA表現載體及某些真核細胞(例如生產細胞)。 術語「多肽」、「肽」及「蛋白質」在本文中可互換使用且係指任何長度之胺基酸之聚合物。聚合物可為直鏈或具支鏈，其可包含經修飾胺基酸，且其可雜有非胺基酸。該等術語亦涵蓋經天然或介入修飾之胺基酸聚合物；例如，二硫鍵形成、醣基化、脂化、乙醯化、磷酸化或任何其他操縱或修飾(例如與標記組分結合)。該定義亦包括例如含有胺基酸(包括例如非天然胺基酸等)之一或多種類似物之多肽以及業內已知之其他修飾。應理解，由於本發明多肽基於抗體，故在某些實施例中，多肽可以單鏈或締合鏈形式存在。 術語「一致」或「一致性」百分比在兩個或更多個核酸或多肽之背景下係指，在比較並比對(若需要，引入空位)以獲得最大對應性時，兩個或更多個序列或子序列相同或具有指定百分比之相同核苷酸或胺基酸殘基，其中不將任何保守胺基酸取代視為序列一致性之一部分。一致性百分比可使用序列比較軟體或算法或藉由目視檢查來量測。可用於獲得胺基酸或核苷酸序列之比對之多種算法及軟體為業內已知。序列比對算法之一個該非限制性實例係Karlin等人，Proc. Natl. Acad. Sci. , 87:2264-2268 (1990)中所述、如Karlin等人，Proc. Natl. Acad. Sci. , 90:5873-5877 (1993)中修改並納入NBLAST及XBLAST程式(Altschul等人，Nucleic Acids Res. , 25:3389-3402 (1991))中之算法。在某些實施例中，可如Altschul等人，Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997)中所述使用空位化BLAST。可用於比對序列之其他可公開獲得之軟體程式係BLAST-2、WU-BLAST-2 (Altschul等人，Methods in Enzymology , 266:460-480 (1996))、ALIGN、ALIGN-2 (Genentech, South San Francisco, California)或Megalign (DNASTAR)。在某些實施例中，兩個核苷酸序列之間之一致性百分比係使用GCG軟體中之GAP程式來測定(例如，使用NWSgapdna.CMP矩陣及空位權重40、50、60、70或90及長度權重1、2、3、4、5或6)。在某些替代性實施例中，可使用GCG軟體包中納入Needleman及Wunsch之算法(J. Mol. Biol. (48):444-453 (1970))之GAP程式來測定兩個胺基酸序列之間之一致性百分比(例如，使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣及空位權重16、14、12、10、8、6或4及長度權重1、2、3、4、5)。或者，在某些實施例中，使用Myers及Miller之算法(CABIOS , 4:11-17 (1989))來測定兩個核苷酸或胺基酸序列之間之一致性百分比。舉例而言，一致性百分比可使用ALIGN程式(2.0版)及使用PAM120及殘基表、空位長度罰分12及空位罰分4來測定。藉由特定比對軟體之最大比對之適宜參數可由熟習此項技術者確定。在某些實施例中，使用比對軟體之預設參數。在某些實施例中，第一胺基酸序列與第二胺基酸序列之一致性百分比「X」係按100 × (Y/Z)來計算，其中Y係在第一與第二序列之比對(如藉由目視檢查或特定序列比對程式來比對)中評分為一致匹配之胺基酸殘基數，且Z係第二序列中之殘基總數。若第一序列之長度長於第二序列，則第一序列與第二序列之一致性百分比將長於第二序列與第一序列之一致性百分比。 作為非限制性實例，在某些實施例中，任一具體多核苷酸是否與參考序列具有某一序列一致性百分比(例如，為至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致，且在一些實施例中為至少95%、96%、97%、98%或99%一致)可使用Bestfit程式來測定(Wisconsin序列分析包，第8版，Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, 575 Science Drive, Madison, WI 53711)。Bestfit使用Smith及Waterman之局部同源性算法(Advances in Applied Mathematics 2: 482 489 (1981))來發現兩個序列之間之最佳同源性區段。當使用Bestfit或任何其他序列比對程式來確定特定序列是否與本發明參考序列例如95%一致時，設定參數，使得計算參考核苷酸序列全長之一致性百分比且允許參考序列中核苷酸總數之至多5%之同源性空位。 在一些實施例中，兩個本發明核酸或多肽實質上一致，此意指在比較並比對以獲得最大對應性時，其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、且在一些實施例中至少95%、96%、97%、98%、99%核苷酸或胺基酸殘基一致性，如使用序列比較算法或藉由目視檢查所量測。一致性可存在於長度為至少約10個、約20個、約40-60個殘基或其間之任一整數值之序列區域內，且可在長於60-80個殘基、例如至少約90-100個殘基之區域內，且在一些實施例中，序列在所比較序列(例如核苷酸序列之編碼區)之全長內實質上一致。 「保守胺基酸取代」係其中一個胺基酸殘基經具有相似側鏈之另一胺基酸殘基替代者。業內已定義具有相似側鏈之胺基酸殘基之家族，包括具有鹼性側鏈之胺基酸(例如，離胺酸、精胺酸、組胺酸)、具有酸性側鏈之胺基酸(例如，天冬胺酸、麩胺酸)、具有不帶電極性側鏈之胺基酸(例如，甘胺酸、天冬醯胺、麩胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、具有非極性側鏈之胺基酸(例如，丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、具有β分枝側鏈之胺基酸(例如，蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及具有芳香族側鏈之胺基酸(例如，酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。舉例而言，用苯丙胺酸取代酪胺酸係保守取代。在一些實施例中，本發明多肽及抗體之序列中之保守取代並不消除含有胺基酸序列之抗體與抗原(例如抗體所結合之TNF-α)之結合。鑑別不消除抗原結合之核苷酸及胺基酸保守取代之方法為業內所熟知(例如，參見Brummell等人，Biochem. 32: 1180-1 187 (1993)；Kobayashi等人，Protein Eng. 12(10):879-884 (1999)；及Burks等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:.412-417 (1997))。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「鹵基」係指-Cl、-F、-Br或-I。在一個實施例中，鹵基係-Cl或-F。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「羥基」係指-OH。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「硫醇」或術語「硫氫基」係指-SH。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「烷基」係指未經取代之含有1至12個碳原子(即C1-12 烷基)或指定碳原子數(例如C1 烷基，例如甲基；C2 烷基，例如乙基；C3 烷基，例如丙基或異丙基；C1-3 烷基，例如甲基、乙基、丙基或異丙基等)之直鏈或具支鏈脂肪族烴。在一個實施例中，烷基係C1-10 烷基。在另一實施例中，烷基係C1-6 烷基。在另一實施例中，烷基係C1-4 烷基。在另一實施例中，烷基係直鏈C1- 10 烷基。在另一實施例中，烷基係具支鏈鏈C3-10 烷基。在另一實施例中，烷基係直鏈C1-6 烷基。在另一實施例中，烷基係具支鏈鏈C3-6 烷基。在另一實施例中，烷基係直鏈C1-4 烷基。在另一實施例中，烷基係具支鏈鏈C3-4 烷基。在另一實施例中，烷基係直鏈或具支鏈C3-4 烷基。非限制性實例性C1-10 烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、第二丁基、第三丁基、異丁基、3-戊基、己基、庚基、辛基、壬基及癸基。非限制性實例性C1-4 烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、第二丁基、第三丁基及異丁基。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「視情況經取代之烷基」係指未經取代或經一個、兩個或三個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代之烷基：硝基、羥基、氰基、鹵代烷氧基、芳基氧基、烷基硫基、磺醯胺基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺醯基、芳基磺醯基、羧基、甲醯胺基、烷氧基羰基、硫醇、-N(H)C(=O)NH2 及-N(H)C(=NH)NH2 、視情況經取代之芳基及視情況經取代之雜芳基。在一個實施例中，視情況經取代之烷基經兩個取代基取代。在另一實施例中，視情況經取代之烷基經一個取代基取代。在另一實施例中，視情況經取代之烷基未經取代。非限制性實例性經取代烷基包括-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Ph、-CH2 (4-OH)Ph、-CH2 (咪唑基)、-CH2 CH2 CO2 H、-CH2 CH2 SO2 CH3 、-CH2 CH2 COPh及-CH2 OC(=O)CH3 。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「環烷基」係指未經取代之含有1至3個環具有3至12個碳原子(即C3-12 環烷基)或指定碳數之飽和或部分不飽和(例如含有一或兩個雙鍵)環狀脂肪族烴。在一個實施例中，環烷基具有兩個環。在另一實施例中，環烷基具有一個環。在另一實施例中，環烷基係飽和的。在另一實施例中，環烷基係不飽和的。在另一實施例中，環烷基係C3-8 環烷基。在另一實施例中，環烷基係C3-6 環烷基。術語「環烷基」意欲包括其中環-CH2 -經-C(=O)-替代之基團。非限制性實例性環烷基包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、降莰基、十氫萘、金剛烷基、環己烯基、環戊烯基及環戊酮。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「視情況經取代之環烷基」係指未經取代或經一個、兩個或三個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代之環烷基：鹵基、硝基、氰基、羥基、烷基羰基氧基、環烷基羰基氧基、胺基、鹵代烷基、羥基烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷基硫基、甲醯胺基、磺醯胺基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺醯基、芳基磺醯基、羧基、羧基烷基、視情況經取代之烷基、視情況經取代之環烷基、烯基、炔基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之雜環、烷氧基烷基、(胺基)烷基、(甲醯胺基)烷基、(雜環)烷基及-OC(=O)-胺基。術語視情況經取代之環烷基包括具有視情況經取代之稠合芳基(例如苯基)或視情況經取代之稠合雜芳基(例如吡啶基)的環烷基。具有視情況經取代之稠合芳基或具有視情況經取代之稠合雜芳基的視情況經取代之環烷基可在環烷基環上之任一可用碳原子處附接至分子之其餘部分。在一個實施例中，視情況經取代之環烷基經兩個取代基取代。在另一實施例中，視情況經取代之環烷基經一個取代基取代。在另一實施例中，視情況經取代之環烷基未經取代。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「芳基」係指未經取代之具有6至14個碳原子之單環或二環芳香族環系統，即C6-14 芳基。非限制性實例性芳基包括苯基(縮寫為「Ph」)、萘基、菲基、蒽基、茚基、薁基、聯苯、伸聯苯基及茀基。在一個實施例中，芳基係苯基或萘基。 在本揭示內容中，如本文單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「視情況經取代之芳基」係指未經取代或經1至5個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代之芳基：鹵基、硝基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基胺基、二烷基胺基、視情況經取代之烷基、鹵代烷基、羥基烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷基硫基、甲醯胺基、磺醯胺基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺醯基、鹵代烷基磺醯基環烷基磺醯基、(環烷基)烷基磺醯基、芳基磺醯基、雜芳基磺醯基、雜環磺醯基、羧基、羧基烷基、視情況經取代之環烷基、烯基、炔基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之雜環、烷氧基羰基、烷氧基烷基、(胺基)烷基、(甲醯胺基)烷基及(雜環)烷基。 在一個實施例中，視情況經取代之芳基係視情況經取代之苯基。在另一實施例中，視情況經取代之苯基具有四個取代基。在另一實施例中，視情況經取代之苯基具有三個取代基。在另一實施例中，視情況經取代之苯基具有兩個取代基。在另一實施例中，視情況經取代之苯基具有一個取代基。在另一實施例中，視情況經取代之苯基未經取代。非限制性實例性經取代芳基包括2-甲基苯基、2-甲氧基苯基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、3-甲基苯基、3-甲氧基苯基、3-氟苯基、3-氯苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-甲氧基苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、2,6-二-氟苯基、2,6-二-氯苯基、2-甲基、3-甲氧基苯基、2-乙基、3-甲氧基苯基、3,4-二-甲氧基苯基、3,5-二-氟苯基3,5-二-甲基苯基、3,5-二甲氧基、4-甲基苯基、2-氟-3-氯苯基、3-氯-4-氟苯基、4-(吡啶-4-基磺醯基)苯基。術語視情況經取代之芳基包括具有視情況經取代之稠合環烷基或視情況經取代之稠合雜環基的苯基。具有視情況經取代之稠合環烷基或視情況經取代之稠合雜環基的視情況經取代之苯基可在苯基環上之任一可用碳原子處附接至分子之其餘部分。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「烯基」係指含有一個、兩個或三個碳至碳雙鍵之烷基。在一個實施例中，烯基具有一個碳至碳雙鍵。在另一實施例中，烯基係C2-6 烯基。在另一實施例中，烯基係C2-4 烯基。非限制性實例性烯基包括乙烯基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基、第二丁烯基、戊烯基及己烯基。 在本揭示內容中，如本文單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「視情況經取代之烯基」係指未經取代或經一個、兩個或三個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代之烯基：鹵基、硝基、氰基、羥基、胺基、烷基胺基、二烷基胺基、鹵代烷基、羥基烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷基硫基、甲醯胺基、磺醯胺基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺醯基、芳基磺醯基、羧基、羧基烷基、視情況經取代之烷基、視情況經取代之環烷基、烯基、炔基、視情況經取代之芳基、雜芳基及視情況經取代之雜環。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「炔基」係指含有1至3個碳至碳三鍵之烷基。在一個實施例中，炔基具有一個碳至碳三鍵。在另一實施例中，炔基係C2-6 炔基。在另一實施例中，炔基係C2-4 炔基。非限制性實例性炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、2-丁炔基、戊炔基及己炔基。 在本揭示內容中，如本文單獨或作為一部分使用之術語「視情況經取代之炔基」係指未經取代或經一個、兩個或三個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代之炔基：鹵基、硝基、氰基、羥基、胺基、烷基胺基、二烷基胺基、鹵代烷基、羥基烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷基硫基、甲醯胺基、磺醯胺基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺醯基、芳基磺醯基、羧基、羧基烷基、視情況經取代之烷基、環烷基、烯基、炔基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基及雜環。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「鹵代烷基」係指經一或多個氟、氯、溴及/或碘原子取代之烷基。在一個實施例中，烷基經一個、兩個或三個氟及/或氯原子取代。在另一實施例中，鹵代烷基係C1-4 鹵代烷基。非限制性實例性鹵代烷基包括氟甲基、2-氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、1,1-二氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟丙基、4,4,4-三氟丁基及三氯甲基。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「烷氧基」係指附接至末端氧原子之視情況經取代之烷基、視情況經取代之環烷基、視情況經取代之烯基或視情況經取代之炔基。在一個實施例中，烷氧基係附接至末端氧原子之視情況經取代之烷基。在一個實施例中，烷氧基係附接至末端氧原子之C1-6 烷基。在另一實施例中，烷氧基係附接至末端氧原子之C1-4 烷基。非限制性實例性烷氧基包括甲氧基、乙氧基及第三丁氧基。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「烷基硫基」係指附接至末端硫原子之視情況經取代之烷基。在一個實施例中，烷基硫基係C1-4 烷基硫基。非限制性實例性烷基硫基包括-SCH3 及-SCH2 CH3 。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「鹵代烷氧基」係指附接至末端氧原子之鹵代烷基。非限制性實例性鹵代烷氧基包括氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基及2,2,2-三氟乙氧基。 在本揭示內容中，術語「雜芳基」係指未經取代之具有5至14個環原子之單環及二環芳香族環系統，即5至14員雜芳基，其中一個環之至少一個碳原子經獨立地選自由氧、氮及硫組成之群之雜原子替代。在一個實施例中，雜芳基含有1個、2個、3個或4個獨立地選自由氧、氮及硫組成之群之雜原子。在一個實施例中，雜芳基具有三個雜原子。在另一實施例中，雜芳基具有兩個雜原子。在另一實施例中，雜芳基具有一個雜原子。在另一實施例中，雜芳基係5至10員雜芳基。在另一實施例中，雜芳基係5員或6員雜芳基。在另一實施例中，雜芳基具有5個環原子，例如噻吩基，其係具有四個碳原子及一個硫原子之5員雜芳基。在另一實施例中，雜芳基具有6個環原子，例如吡啶基，其係具有五個碳原子及一個氮原子之6員雜芳基。非限制性實例性雜芳基包括噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2,3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、苯并呋喃基、吡喃基、異苯并呋喃基、苯并噁嗪酮基、𠳭烯基、𠮿基、2H -吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、嗒嗪基、異吲哚基、3H -吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、異喹啉基、喹啉基、呔嗪基、萘啶基、㖕啉基、喹唑啉基、蝶啶基、4aH -咔唑基、咔唑基、β-哢啉基、啡啶基、吖啶基、嘧啶基、啡啉基、吩嗪基、噻唑基、異噻唑基、吩噻唑基、異噁唑基、呋呫基及吩噁嗪基。在一個實施例中，雜芳基選自由以下組成之群：噻吩基(例如，噻吩-2-基及噻吩-3-基)、呋喃基(例如，2-呋喃基及3-呋喃基)、吡咯基(例如，1H-吡咯-2-基及1H-吡咯-3-基)、咪唑基(例如，2H-咪唑-2-基及2H-咪唑-4-基)、吡唑基(例如，1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基及1H-吡唑-5-基)、吡啶基(例如，吡啶-2-基、吡啶-3-基及吡啶-4-基)、嘧啶基(例如，嘧啶-2-基、嘧啶-4-基及嘧啶-5-基)、噻唑基(例如，噻唑-2-基、噻唑-4-基及噻唑-5-基)、異噻唑基(例如，異噻唑-3-基、異噻唑-4-基及異噻唑-5-基)、噁唑基(例如，噁唑-2-基、噁唑-4-基及噁唑-5-基)、異噁唑基(例如，異噁唑-3-基、異噁唑-4-基及異噁唑-5-基)及吲唑基(例如，1H-吲唑-3-基)。術語「雜芳基」亦欲包括可能的N-氧化物。非限制性實例性N-氧化物係吡啶基N-氧化物。 在一個實施例中，雜芳基係5員或6員雜芳基。在一個實施例中，雜芳基係5員雜芳基，即雜芳基係具有5個環原子之單環芳香族環系統，其中環之至少一個碳原子經獨立地選自氮、氧及硫之雜原子替代。非限制性實例性5員雜芳基包括噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、異噻唑基及異噁唑基。在另一實施例中，雜芳基係6員雜芳基，例如，雜芳基係具有6個環原子之單環芳香族環系統，其中環之至少一個碳原子經氮原子替代。非限制性實例性6員雜芳基包括吡啶基、吡嗪基、嘧啶基及嗒嗪基。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「視情況經取代之雜芳基」係指未經取代或經一個、兩個、三個或四個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代之雜芳基：鹵基、硝基、氰基、羥基、胺基、烷基胺基、二烷基胺基、鹵代烷基、羥基烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷基硫基、甲醯胺基、磺醯胺基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺醯基、鹵代烷基磺醯基環烷基磺醯基、(環烷基)烷基磺醯基、芳基磺醯基、雜芳基磺醯基、羧基、羧基烷基、視情況經取代之烷基、視情況經取代之環烷基、烯基、炔基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之雜環、烷氧基烷基、(胺基)烷基、(甲醯胺基)烷基及(雜環)烷基。在一個實施例中，視情況經取代之雜芳基具有一個取代基。在另一實施例中，視情況經取代之雜芳基未經取代。任一可用碳或氮原子可經取代。術語包括雜芳基具有視情況經取代之稠合環烷基或視情況經取代之稠合雜環基的視情況經取代之雜芳基。具有視情況經取代之稠合環烷基或視情況經取代之稠合雜環基的視情況經取代之雜芳基可在雜芳基環上之任一可用碳原子處附接至分子之其餘部分。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「雜環」係指未經取代之含有一個、兩個或三個環、具有3至14個環成員之飽和及部分不飽和(例如含有一或兩個雙鍵)環狀基團，即3至14員雜環，其中環之至少一個碳原子經雜原子替代。每一雜原子獨立地選自由氧、硫(包括亞碸及碸)及/或氮原子組成之群，其可經氧化或四級銨化。術語「雜環」包括其中環-CH2 -經-C(=O)-替代之基團，例如環狀脲基(例如2-咪唑啶酮)及環狀醯胺基(例如β-內醯胺、γ-內醯胺、δ-內醯胺、ε-內醯胺及六氫吡嗪-2-酮)。術語「雜環」亦包括具有視情況經取代之稠合芳基(例如吲哚啉基或𠳭-4-基)之基團。在一個實施例中，雜環基係C4-6 雜環，即含有一個環及一或兩個氧及/或氮原子之4員、5員或6員環狀基團。在一個實施例中，雜環基係含有一個環及一個氮原子之C4-6 雜環。雜環可視情況經由任一可用碳或氮原子連接至分子之其餘部分。非限制性實例性雜環基包括氮雜環丁基、二噁烷基、四氫吡喃基、2-側氧基吡咯啶-3-基、六氫吡嗪-2-酮、六氫吡嗪-2,6-二酮、2-咪唑啶酮、六氫吡啶基、嗎啉基、六氫吡嗪基、吡咯啶基及吲哚啉基。 在本揭示內容中，如本文單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「視情況經取代之雜環」係指未經取代或經一個、兩個、三個或四個獨立地選自由以下組成之群之取代基取代之雜環：鹵基、硝基、氰基、羥基、胺基、烷基胺基、二烷基胺基、鹵代烷基、羥基烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、芳基氧基、芳烷基氧基、烷基硫基、甲醯胺基、磺醯胺基、烷基羰基、環烷基羰基、烷氧基羰基、CF3 C(=O)-、芳基羰基、烷基磺醯基、芳基磺醯基、羧基、羧基烷基、烷基、視情況經取代之環烷基、烯基、炔基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之雜環、烷氧基烷基、(胺基)烷基、(甲醯胺基)烷基或(雜環)烷基。取代可在任一可用碳或氮原子或二者上進行。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「胺基」係指式-NR22a R22b 基團，其中R22a 及R22b 各自獨立地選自由氫、視情況經取代之烷基及芳烷基組成之群，或R22a 及R22b 一起形成3至8員視情況經取代之雜環。非限制性實例性胺基包括-NH2 及-N(H)(CH3 )。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「甲醯胺基」係指式-C(=O)NR23a R23b 基團，其中R23a 及R23b 各自獨立地選自由氫、視情況經取代之烷基、羥基烷基及視情況經取代之芳基、視情況經取代之雜環及視情況經取代之雜芳基組成之群，或R23a 及R23b 與其所附接之氮一起形成3至8員視情況經取代之雜環基。在一個實施例中，R23a 及R23b 各自獨立地係氫或視情況經取代之烷基。在一個實施例中，R23a 及R23b 與其所附接之氮一起形成3至8員視情況經取代之雜環基。非限制性實例性甲醯胺基包括-CONH2 、-CON(H)CH3 及-CON(CH3 )2 。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「烷氧基羰基」係指經烷氧基取代之羰基，即-C(=O)-。在一個實施例中，烷氧基係C1-4 烷氧基。非限制性實例性烷氧基羰基包括-C(=O)OMe、-C(=O)OEt及-C(=O)OtBu。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「羧基」係指式-CO2 H基團。 在本揭示內容中，如單獨或作為另一基團之一部分使用之術語「馬來醯亞胺」係指：
Figure TW201801749AD00009
。 在本揭示內容中，如作為可裂解連接體之一部分使用之術語「琥珀醯亞胺」係指：
Figure TW201801749AD00010
。 在本揭示內容中，如作為可裂解連接體之一部分使用之術語「水解琥珀醯亞胺」係指：
Figure TW201801749AD00011
。 在本揭示內容中，如作為可裂解連接體之一部分使用之術語「醯胺」係指：
Figure TW201801749AD00012
在本揭示內容中，如作為可裂解連接體之一部分使用之術語「硫脲」係指：
Figure TW201801749AD00013
。 在本揭示內容中，如作為可裂解連接體之一部分使用之術語「硫醚」係指：
Figure TW201801749AD00014
。 在本揭示內容中，如作為可裂解連接體之一部分使用之術語「肟」係指：
Figure TW201801749AD00015
。 在本揭示內容中，如作為可裂解連接體之一部分使用之術語「自消性基團」係指能夠將兩個間隔的化學部分共價連接成通常穩定之三重分子、可藉助酶裂解自三重分子釋放一個間隔的化學部分；並在酶裂解後可自分子之其餘部分自發裂解以釋放其他間隔的化學部分(例如糖皮質類固醇)之雙官能化學部分。在一些實施例中，自消性基團包含對胺基苄基單元。在一些該等實施例中，經由醯胺鍵將對胺基苄醇附接至胺基酸單元，且在苄醇與藥物之間製備胺基甲酸酯、胺基甲酸甲酯或碳酸酯(Hamann等人(2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15:1087-1103)。在一些實施例中，自消性基團係對胺基苄基氧基羰基(PAB)。 在本揭示內容中，術語「保護基團」或「PG」係指阻斷(即保護)胺官能基、同時對分子之其他官能基或部分實施反應之基團。熟習此項技術者將熟悉胺保護基團之選擇、附接及裂解，且將瞭解許多不同保護基團為業內已知，一種保護基團或另一者之適合性取決於所計劃之具體合成方案。關於標的之論文可參見例如Wuts, P. G. M.; Greene, T. W., 「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis」，第4版，J. Wiley & Sons, NY, 2007。適宜保護基團包括苄氧羰基(Cbz)、第三丁基氧基羰基(BOC)、9-茀基甲基氧基羰基(FMOC)及苄基(Bn)。在一個實施例中，保護基團係BOC基團。 本文所揭示之化合物含有不對稱中心且因此產生鏡像異構物、非鏡像異構物及其他立體異構形式。本發明意欲涵蓋所有該等可能形式以及其外消旋及拆分形式及其混合物的用途。個別鏡像異構物可根據本揭示內容根據業內已知之方法分離。當本文所述化合物含有烯烴雙鍵或其他幾何異構不對稱中心時且除非另外指定，否則其意欲包括E及Z幾何異構物二者。本發明亦欲涵蓋所有互變異構物。 本發明涵蓋本文所揭示化合物之溶劑合物之製備及用途。溶劑合物通常不會顯著改變化合物之生理活性或毒性，且因此可用作藥理學等效物。如本文所用術語「溶劑合物」係本發明化合物與溶劑分子之組合、物理締合及/或溶劑合，例如二溶劑合物、單溶劑合物或半溶劑合物，其中溶劑分子對本發明化合物之比率分別為約2:1、約1:1或約1:2。此物理締合涉及不同程度之離子及共價鍵結，包括氫鍵結。在某些情況下，例如當將一或多個溶劑分子納入結晶固體之晶格中時，溶劑合物可經分離。因此，「溶劑合物」涵蓋溶液相及可分離溶劑合物二者。本文所揭示之化合物可以與醫藥上可接受之溶劑(例如水、甲醇、乙醇及諸如此類)之溶劑合形式存在，且本發明意欲包括本文所揭示化合物之溶劑合及非溶劑合形式二者。一種類型之溶劑合物係水合物。「水合物」與溶劑分子為水之特定溶劑合物亞群相關。溶劑合物通常可用作藥理學等效物。溶劑合物之製備為業內已知。參見例如M. Caira等人，J. Pharmaceut. Sci., 93(3) :601-611 (2004)，其闡述氟康唑(fluconazole)與乙酸乙酯及與水之溶劑合物之製備。溶劑合物、半溶劑合物、水合物及諸如此類之類似製備闡述於E.C. van Tonder等人，AAPS Pharm. Sci. Tech., 5(1) :第12篇(2004)及A.L. Bingham等人，Chem. Commun. 603-604 (2001)中。製備溶劑合物之典型非限制性製程將涉及在高於20℃至約25℃之溫度下將本文所揭示之化合物溶解於期望溶劑(有機溶劑、水或其混合物)中，然後以足以形成晶體之速率冷卻溶液，及藉由已知方法(例如過濾)分離晶體。可利用諸如紅外光譜術等分析技術來確認溶劑合物之晶體中溶劑之存在。 本發明涵蓋本文所揭示化合物之鹽(包括無毒醫藥上可接受之鹽)之製備及用途。醫藥上可接受之加成鹽之實例包括無機及有機酸加成鹽及鹼性鹽。醫藥上可接受之鹽包括(但不限於)金屬鹽，例如鈉鹽、鉀鹽、銫鹽及諸如此類；鹼土金屬鹽，例如鈣鹽、鎂鹽及諸如此類；有機胺鹽，例如三乙胺鹽、吡啶鹽、甲吡啶鹽、乙醇胺鹽、三乙醇胺鹽、二環己基胺鹽、N,N'-二苄基乙二胺鹽及諸如此類；無機酸鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽及諸如此類；有機酸鹽，例如檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、苦味酸鹽、乙酸鹽、二氯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、草酸鹽、甲酸鹽及諸如此類；磺酸鹽，例如甲烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及諸如此類；及胺基酸鹽，例如精胺酸鹽、天冬醯胺酸鹽、麩胺酸鹽及諸如此類。 酸加成鹽可藉由混合所揭示特定化合物之溶液與醫藥上可接受之無毒酸(例如鹽酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、乙酸、檸檬酸、酒石酸、碳酸、磷酸、草酸、二氯乙酸或諸如此類)之溶液來形成。鹼性鹽可藉由混合本發明化合物之溶液與醫藥上可接受之無毒鹼(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化膽鹼、碳酸鈉及諸如此類)之溶液來形成。 除非上下文另外明確指示，否則如本揭示內容及申請專利範圍中所用之單數形式「一(a、an)」及「該」包括複數形式。 應理解，無論本文中在何處以語言「包含」闡述實施例，亦提供以「由……組成」及/或「基本上由……組成」闡述之其他類似實施例。 如本文片語(例如「A及/或B」)中所用之術語「及/或」意欲皆包括「A及B」、「A或B」、「A」及「B」。同樣，如片語(例如「A、B及/或C」)中所用之術語「及/或」意欲涵蓋以下實施例中之每一者：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A (單獨)；B (單獨)；及C (單獨)。II. 連接至糖皮質素受體促效劑之蛋白質 本發明提供含有連接至蛋白質(例如抗體或其抗原結合片段及可溶性受體蛋白)之糖皮質素受體促效劑之藥劑免疫結合物。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段為人類、人類化、嵌合或鼠類。在一些實施例中，蛋白質(例如抗體、其抗原結合片段或可溶性受體蛋白)可結合至細胞表面上之靶且變得內化。 本發明亦提供含有連接至抗TNF α蛋白之糖皮質素受體促效劑之免疫結合物。在某些實施例中，抗TNF α蛋白係抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，抗TNF α蛋白係結合至TNF α (例如，可溶性TNF α及/或膜結合TNF α)之抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，抗TNF α蛋白係可溶性TNF受體蛋白，例如融合至重鏈恆定結構域或其片段(例如Fc)之可溶性TNF受體蛋白。在一些實施例中，抗TNF α蛋白(例如抗TNF抗體、其抗原結合片段或可溶性TNF受體)可結合至細胞表面上之TNF α且變得內化。舉例而言，US 2014/0294813 (其全文皆以引用方式併入本文中)揭示在結合至細胞表面人類TNF時展現細胞內化之抗TNF蛋白。 在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段結合至人類及/或小鼠TNF-α。結合至TNF-α之抗體及抗原結合片段為業內已知。 膜結合人類TNF α之全長胺基酸序列係： MSTESMIRDVELAEEALPKKTGGPQGSRRCLFLSLFSFLIVAGATTLFCLLHFGVIGPQREEFPRDLSLISPLAQAVRSSSRTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRRANALLANGVELRDNQLVVPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVSYQTKVNLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGVFQLEKGDRLSAEINRPDYLDFAESGQVYFGIIAL (SEQ ID NO:1)。可溶性人類TNF α含有SEQ ID NO:1之胺基酸77-233。膜結合鼠類TNF-α之全長胺基酸序列係： MSTESMIRDVELAEEALPQKMGGFQNSRRCLCLSLFSFLLVAGATTLFCLLNFGVIGPQRDEKFPNGLPLISSMAQTLTLRSSSQNSSDKPVAHVVANHQVEEQLEWLSQRANALLANGMDLKDNQLVVPADGLYLVYSQVLFKGQGCPDYVLLTHTVSRFAISYQEKVNLLSAVKSPCPKDTPEGAELKPWYEPIYLGGVFQLEKGDQLSAEVNLPKYLDFAESGQVYFGVIAL (SEQ ID NO:2)。可溶性鼠類TNF α含有SEQ ID NO:2之胺基酸80-235。 在一些實施例中，抗TNF-α抗體或其抗原結合片段結合至人類TNF-α。在一些實施例中，抗TNF-α抗體或其抗原結合片段為人類、人類化或嵌合。 在一些實施例中，抗TNF-α抗體或其抗原結合片段結合至鼠類TNF-α。在一些實施例中，抗TNF-α抗體或其抗原結合片段為鼠類。 在某些實施例中，抗TNF-α抗體或抗原結合片段具有以下效應中之一或多者：在活體外L929分析中中和人類TNF-α細胞毒性且IC50為1×10-7 M或更小；阻斷TNF-α與p55及p75細胞表面受體之相互作用；及/或在活體外在補體存在下溶解表面TNF表現細胞。 在某些實施例中，抗TNF-α抗體或抗原結合片段並不結合至TNF-β。 抗TNF-α抗體及其抗原結合片段包括例如阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗(afelimomab)、奈瑞莫單抗(nerelimomab)、奧挫珠單抗(ozoralizumab)、普拉庫魯單抗(placulumab)及戈利木單抗(golimumab)。其他抗TNF-α抗體及抗原結合片段提供於例如WO 2013/087912、WO 2014/152247及WO 2015/073884中，該等專利中每一者之全文皆以引用方式併入本文中。 阿達木單抗闡述於美國專利第6,258,562號中，其全文皆以引用方式併入本文中。英利昔單抗闡述於美國專利第5,656,272號中，其全文皆以引用方式併入本文中。賽妥珠單抗論述於WO 01/94585中，其全文皆以引用方式併入本文中。阿非莫單抗(亦稱為MAK195)論述於Vincent,Int. J. Clin. Pract. 54 : 190-193 (2000)中，其全文皆以引用方式併入本文中。奧挫珠單抗(亦稱為ATN-103)係奈米抗體。其含有三個藉由GlySer連接體融合之重鏈可變區。可變區1及3相同，且奧挫珠單抗不含重鏈。奧挫珠單抗論述於WO 2012/131053中，其全文皆以引用方式併入本文中。普拉庫魯單抗(亦稱為CEP-37247)係由VL-pCH1-CH2-CH3 或[V-κ]2-Fc之二聚體組成之結構域抗體且論述於Gay等人，Mabs 2 : 625-638 (2010)中，其全文皆以引用方式併入本文中。戈利木單抗(亦稱為CNTO 148)論述於WO2013/087912中，且序列提供於基因庫DI496971.1及基因庫DI 496970.1中，其中之每一者之全文皆以引用方式併入本文中。 抗TNF-α抗體及其抗原結合片段亦包括競爭性抑制阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗或戈利木單抗與TNF-α之結合之抗體及其抗原結合片段。抗TNF-α抗體及其抗原結合片段亦包括結合至與阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗或戈利木單抗相同之TNF-α表位之抗體及抗原結合片段。 在某些實施例中，抗TNF-α抗體或其抗原結合片段競爭性抑制阿達木單抗與TNF-α之結合。在某些實施例中，抗TNF-α抗體或其抗原結合片段結合至與阿達木單抗相同之TNF-α表位。在某些實施例中，抗TNF-α抗體或其抗原結合片段係阿達木單抗或其抗原結合片段。在某些實施例中，抗TNF-α抗體或其抗原結合片段係阿達木單抗。 在某些實施例中，抗TNF-α抗體或其抗原結合片段包含阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗或戈利木單抗之序列，例如互補決定區(CDR)、可變重鏈結構域(VH)及/或可變輕鏈結構域(VL)。實例性抗TNF-α抗體或其抗原結合片段之序列提供於表1-6中。 表1：可變重鏈CDR胺基酸序列：
Figure TW201801749AD00016
 表2：可變輕鏈CDR胺基酸序列
Figure TW201801749AD00017
 表3：可變重鏈胺基酸序列
Figure TW201801749AD00018
 表4：可變輕鏈胺基酸序列
Figure TW201801749AD00019
 表5：全長重鏈胺基酸序列
Figure TW201801749AD00020
 表6：全長輕鏈胺基酸序列
Figure TW201801749AD00021
 亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少80%序列一致性之VH及VL。或亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少85%序列一致性之VH及VL。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 91及60、或54及92具有至少85%序列一致性之VH及VL。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少90%序列一致性之VH及VL。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 91及60、或54及92具有至少90%序列一致性之VH及VL。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少95%序列一致性之VH及VL。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 91及60、或54及92具有至少95%序列一致性之VH及VL。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少96%序列一致性之VH及VL。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 91及60、或54及92具有至少96%序列一致性之VH及VL。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少97%序列一致性之VH及VL。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 91及60、或54及92具有至少97%序列一致性之VH及VL。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少98%序列一致性之VH及VL。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 91及60、或54及92具有至少98%序列一致性之VH及VL。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少99%序列一致性之VH及VL。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 91及60、或54及92具有至少99%序列一致性之VH及VL。 亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少80%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、5及32-34；7-9及35-37；10或13、11、12及38-40；14-16及41-43；17-19及44-46；或29-31及47-49之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、91及60、或54及92具有至少80%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、94及32-34；7-9及35-37；或17-19及44-46之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少85%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、5及32-34；7-9及35-37；10或13、11、12及38-40；14-16及41-43；17-19及44-46；或29-31及47-49之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、91及60、或54及92具有至少85%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、94及32-34；7-9及35-37；或17-19及44-46之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少90%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、5及32-34；7-9及35-37；10或13、11、12及38-40；14-16及41-43；17-19及44-46；或29-31及47-49之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、91及60、或54及92具有至少90%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、94及32-34；7-9及35-37；或17-19及44-46之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少95%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、5及32-34；7-9及35-37；10或13、11、12及38-40；14-16及41-43；17-19及44-46；或29-31及47-49之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、91及60、或54及92具有至少95%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、94及32-34；7-9及35-37；或17-19及44-46之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少96%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、5及32-34；7-9及35-37；10或13、11、12及38-40；14-16及41-43；17-19及44-46；或29-31及47-49之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、91及60、或54及92具有至少96%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、94及32-34；7-9及35-37；或17-19及44-46之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少97%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、91及60、或54及92具有至少97%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、94及32-34；7-9及35-37；或17-19及44-46之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少98%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、5及32-34；7-9及35-37；10或13、11、12及38-40；14-16及41-43；17-19及44-46；或29-31及47-49之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、91及60、或54及92具有至少98%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、94及32-34；7-9及35-37；或17-19及44-46之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、51及60、52及61、53及62、54及63、或58及65具有至少99%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、5及32-34；7-9及35-37；10或13、11、12及38-40；14-16及41-43；17-19及44-46；或29-31及47-49之CDR。亦提供抗體或抗原結合片段，其包含分別與SEQ ID NO: 50及59、91及60、或54及92具有至少99%序列一致性之VH及VL，且分別含有SEQ ID NO: 3或6、4、94及32-34；7-9及35-37；或17-19及44-46之CDR。 在某些實施例中，抗TNF α抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 3-5及32-34或SEQ ID NO: 6、4、5及32-34之CDR。在某些實施例中，抗TNF α抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO: 3、4、94及32-34或SEQ ID NO: 6、4、94及32-34之CDR。在某些實施例中，抗TNF α抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:50之VH及/或SEQ ID NO:59之VL。在某些實施例中，抗TNF α抗體包含SEQ ID NO: 66之重鏈及/或SEQ ID NO:75之輕鏈。 F α抗體包含SEQ ID NO:74之重鏈及/或SEQ ID NO:82之輕鏈。 在某些態樣中，本文提供抗體或其抗原結合片段，其特異性結合至TNF-α且包含阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗或戈利木單抗之VL之Chothia VL CDR。在某些態樣中，本文提供抗體或其抗原結合片段，其特異性結合至TNF-α且包含阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗或戈利木單抗之VH之Chothia VH CDR。在某些態樣中，本文提供抗體或其抗原結合片段，其特異性結合至TNF-α且包含阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗或戈利木單抗之VL之Chothia VL CDR且包含阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗或戈利木單抗之VH之Chothia VH CDR。在某些實施例中，特異性結合至TNF-α之抗體或抗原結合片段包含一或多個CDR，其中Chothia及Kabat CDR具有相同的胺基酸序列。在某些實施例中，本文提供抗體及其抗原結合片段，其特異性結合至TNF-α且包含Kabat CDR及Chothia CDR之組合。 在具體實施例中，本文提供抗體或其抗原結合片段，其特異性結合至TNF-α且包含阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗或戈利木單抗之CDR，如藉由IMGT編號系統所確定，例如如Lefranc M-P (1999)上文文獻及Lefranc M-P等人(1999)上文文獻中所述。 在具體實施例中，本文提供抗體，其特異性結合至TNF-α且包含阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗或戈利木單抗之CDR，如藉由MacCallum RM等人中之方法所確定。 在具體實施例中，本文提供抗體或其抗原結合片段，其特異性結合至TNF-α且包含阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗或戈利木單抗之CDR，如藉由AbM編號方案所確定。 在具體實施例中，本文提供特異性結合至CD163之抗體或其抗原結合片段。 單株抗體可使用雜交瘤方法(例如Kohler及Milstein (1975) Nature 256:495所述之彼等)製備。使用雜交瘤方法免疫小鼠、倉鼠或其他適宜宿主動物以引發產生特異性結合至免疫抗原之抗體之淋巴球。亦可在活體外免疫淋巴球。免疫後，分離淋巴球並使用例如聚乙二醇與適宜骨髓瘤細胞系融合，以形成雜交瘤細胞，該等雜交瘤細胞隨後可從未融合之淋巴球及骨髓瘤細胞加以挑選出來。然後使用標準方法(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, 1986)以活體外培養方式或以如動物中腹水腫瘤之活體內方式來增生可以產生特異性對抗所選抗原之如藉由免疫沈澱、免疫印跡或藉由活體外結合分析(例如，放射免疫分析(RIA)；酶聯免疫吸附分析(ELISA))確定之單株抗體之雜交瘤。然後從針對如所述多株抗體之培養基或腹水中純化出單株抗體。 或者，亦可使用如美國專利4,816,567中所述之重組DNA方法製備單株抗體。例如藉由RT-PCR使用特異性擴增編碼抗體重鏈及輕鏈之基因之寡核苷酸引子，從成熟B細胞或雜交瘤細胞分離出編碼單株抗體之多核苷酸，且使用習用程序測定其序列。然後將編碼重鏈及輕鏈之經分離多核苷酸選殖至適宜表現載體中，當該等表現載體轉染至原本不會產生免疫球蛋白之宿主細胞(例如大腸桿菌(E. coli )細胞、猿猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞)中時，由宿主細胞生成單株抗體。另外，可如所述自表現期望物種之CDR之噬菌體展示文庫分離期望物種之重組單株抗體或其片段(McCafferty等人，1990, Nature, 348:552-554；Clackson等人，1991, Nature, 352:624-628；及Marks等人，1991, J. Mol. Biol., 222:581-597)。 編碼單株抗體之多核苷酸可以多種不同方式使用重組DNA技術進一步經修飾以生成替代性抗體。在一些實施例中，例如小鼠單株抗體之輕鏈及重鏈之恆定結構域可取代1) 例如人類抗體之彼等區域，以生成嵌合抗體，或2) 非免疫球蛋白多肽以生成融合抗體。在一些實施例中，恆定區經截短或移除以生成單株抗體之期望抗體片段。可利用可變區之定點或高密度誘變來最佳化單株抗體之特異性、親和力等。 在一些實施例中，針對TNF-α之單株抗體係人類化抗體。在某些實施例中，該等抗體在投與人類個體時在治療上可用於減低抗原性及HAMA (人類抗小鼠抗體)反應。 亦可使用且業內熟知改造、人類化或表面重修非人類或人類抗體之方法。人類化、表面重修或經類似改造之抗體可具有一或多個來自非人類來源(例如但不限於小鼠、大鼠、兔、非人類靈長類動物或其他哺乳動物)之胺基酸殘基。該等非人類胺基酸殘基常常被稱之為「導入」殘基所替代，該等典型地係取自已知人類序列之「導入」可變、恆定或其他結構域之殘基。 該等導入序列可用於降低免疫原性或減小、增強或改良結合、親和力、締合速率、解離速率、親合力、特異性、半衰期或任何其他適宜特徵，如業內已知。一般而言，CDR殘基直接且最為實質性地參與影響TNF-α結合。因此，非人類或人類CDR序列之一部分或全部得以維持，同時可變及恆定區之非人類序列可經人類或其他胺基酸替代。 抗體亦可視情況經人類化、表面重修、改造或人類抗體改造以保留對抗原(例如TNF-α)之高親和力及其他有利生物性質。為達成此目標，可視情況藉由親代序列及多種概念性人類化及經改造產物之分析方法使用親代、經改造及人類化序列之三維模型製備人類化(或人類)或經改造抗體及表面重修抗體。三維免疫球蛋白模型通常在市面有售且為熟習此項技術者所熟悉。可使用可說明並顯示所選候選免疫球蛋白序列之可能三維構形結構之電腦程式。藉由檢查該等顯示內容可分析殘基在候選免疫球蛋白序列功能發揮中之可能作用，即分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原(例如TNF-α)之能力的殘基。以此方式，可自共有及導入序列選擇框架(FR)殘基併合併，以使得達成期望抗體特徵，例如對靶抗原之親和力增加。 本發明抗體之人類化、表面重修或改造可使用任何已知方法、例如(但不限於)以下文獻中所述之彼等來實施：Winter (Jones等人，Nature 321:522 (1986)；Riechmann等人，Nature 332:323 (1988)；Verhoeyen等人，Science 239:1534 (1988))；Sims等人，J. Immunol. 151: 2296 (1993)；Chothia及Lesk, J. Mol. Biol. 196:901 (1987)；Carter等人，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:4285 (1992)；Presta等人，J. Immunol. 151:2623 (1993)；美國專利第5,639,641號、第5,723,323號；第5,976,862號；第5,824,514號；第5,817,483號；第5,814,476號；第5,763,192號；第5,723,323號；第5,766,886號；第5,714,352號；第6,204,023號；第6,180,370號；第5,693,762號；第5,530,101號；第5,585,089號；第5,225,539號；第4,816,567號；PCT/：US98/16280；US96/18978；US91/09630；US91/05939；US94/01234；GB89/01334；GB91/01134；GB92/01755；WO90/14443；WO90/14424；WO90/14430；EP 229246；7,557,189；7,538,195；及7,342,110，該等文獻中每一者之全文皆以引用方式併入本文中，包括其中所引用之參考文獻。 在某些替代性實施例中，抗體(例如，抗TNFα抗體)係人類抗體。人類抗體可直接使用多種業內已知之技術製備。可生成在活體外經免疫或自免疫個體分離之產生針對靶抗原之抗體之永生化人類B淋巴球(例如，參見Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss，第77頁(1985)；Boemer等人，1991, J. Immunol., 147 (1):86-95；及美國專利5,750,373)。另外，人類抗體可選自噬菌體文庫，其中該噬菌體文庫表現人類抗體，如例如以下文獻中所述：Vaughan等人，1996, Nat. Biotech., 14:309-314；Sheets等人，1998, Proc. Nat'l. Acad. Sci., 95:6157-6162；Hoogenboom及Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381；及Marks等人，1991, J. Mol. Biol., 222:581。生成及使用抗體噬菌體文庫之技術亦闡述於以下文獻中：美國專利第5,969,108號、第6,172,197號、第5,885,793號、第6,521,404號；第6,544,731號；第6,555,313號；第6,582,915號；第6,593,081號；第6,300,064號；第6,653,068號；第6,706,484號；及第7,264,963號；及Rothe等人，2007, J. Mol. Bio., doi:10.1016/j.jmb.2007.12.018 (其中之每一者之全文皆以引用方式併入)。親和力成熟策略及鏈改組策略(Marks等人，1992, Bio/Technology 10:779-783，其全文皆以引用方式併入)為業內已知且可用於生成高親和力人類抗體。 人類化抗體亦可在能夠在免疫後在內源免疫球蛋白產生不存在下產生完整人類抗體譜之含有人類免疫球蛋白基因座之轉基因小鼠中製得。此方法闡述於美國專利5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；及5,661,016中。 在某些實施例中提供抗體片段以例如增加腫瘤滲透。業內已知多種產生抗體片段之技術。傳統上，該等片段係經由蛋白水解消化完整抗體衍生而來(例如Morimoto等人，1993, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117；Brennan等人，1985, Science, 229:81)。在某些實施例中，抗體片段係以重組方式產生。Fab、Fv及scFv抗體片段皆可在大腸桿菌或其他宿主細胞中表現及自其分泌，因此可產生大量該等片段。該等抗體片段亦可自抗體噬菌體文庫分離。抗體片段亦可為線性抗體，如美國專利5,641,870中所述。其他用於產生抗體片段之技術將為熟習此項技術者所明瞭。 出於本發明之目的，應瞭解經修飾抗體可包含任一類型之提供抗體與抗原(例如，TNF α)之締合之可變區。就此而言，可變區可包含或衍生自任一類型之可經誘導以產生體液反應且生成針對期望腫瘤相關抗原之免疫球蛋白的哺乳動物。因此，經修飾抗體之可變區可為例如人類、鼠類、非人類靈長類動物(例如，食蟹猴、獼猴等)或狼來源。在一些實施例中，經修飾免疫球蛋白之可變區及恆定區二者皆為人類。在其他實施例中，相容抗體(通常衍生自非人類來源)之可變區可經改造或特異性調整以改良分子之結合性質或降低其免疫原性。就此而言，可用於本發明中之可變區可經人類化或以其他方式經由納入導入胺基酸序列改變。 在某些實施例中，重鏈及輕鏈二者中之可變結構域係藉由至少部分替代一或多個CDR及(若需要)藉由部分框架區替代及序列變化來改變。儘管CDR可衍生自與衍生出框架區之抗體相同類別或甚至子類之抗體，但設想該等CDR將衍生自不同類別之抗體且在某些實施例中衍生自來自不同物種之抗體。可無需用來自供體可變區之完整CDR替代所有CDR以將一個可變結構域之抗原結合能力轉移至另一者。相反，可僅需要轉移彼等為維持抗原結合位點之活性所需之殘基。鑒於美國專利第5,585,089號、第5,693,761號及第5,693,762號中所述之解釋，熟習此項技術者能夠藉由實施常規實驗或藉由試驗及誤差測試來獲得具有降低的免疫原性之功能抗體。 抗TNF α蛋白包括可溶性TNF受體蛋白。抗TNF α蛋白可為可溶性p75 TNF受體。抗TNF α蛋白可為可溶性p55 TNF受體。 可溶性TNF受體可結合至TNF α及TNF β二者。可溶性TNF受體可結合至TNF α，但不結合至TNF β。 可溶性TNF受體可抑制TNF α (及視情況TNF β)與細胞表面TNF受體之結合。 可溶性TNF受體可為依那西普。 抗TNF α蛋白(例如可溶性TNF受體)可融合至重鏈恆定結構域或其片段或Fc區或其片段。重鏈恆定結構域片段或Fc片段可為恆定結構域或Fc之能夠結合至Fc受體之部分。重鏈恆定結構域片段或Fc片段可為恆定結構域或Fc之能夠在活體外在補體存在下誘導細胞溶解之部分。重鏈恆定結構域片段或Fc片段可為恆定結構域或Fc之能夠誘導ADCC之部分。 重鏈恆定結構域或其片段或Fc區或其片段可為人類重鏈恆定結構域或其片段或人類Fc區或其片段。重鏈恆定結構域或其片段或Fc區或其片段可為IgG1重鏈恆定結構域或其片段或IgG1 Fc區或其片段。重鏈恆定結構域或其片段或Fc區或其片段可為人類IgG1重鏈恆定結構域或其片段或人類IgG1 Fc區或其片段。 熟習此項技術者應瞭解，本發明之抗體及其抗原結合片段及本發明之抗TNF蛋白包括抗體、其抗原結合片段及抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)，其包含一或多個恆定區結構域，包括已經改變以提供期望生物化學特徵(例如與包含天然或未改變恆定區之大致相同免疫原性之抗體、其抗原結合片段或抗TNF蛋白相比縮短的血清半衰期)之結構域。在一些實施例中，抗體、其抗原結合片段或抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)之恆定區將包含人類恆定區。與本發明相容之恆定區之修飾包含添加、缺失或取代一或多個結構域中之一或多個胺基酸。亦即，本文所揭示之抗體、其抗原結合片段或抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)可包含三個重鏈恆定結構域(CH1、CH2或CH3)中之一或多者及/或輕鏈恆定結構域(CL)之改變或修飾。在一些實施例中，涵蓋其中一或多個結構域部分或完全缺失之經修飾恆定區。在一些實施例中，抗體、其抗原結合片段或抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)將包含結構域缺失之構築體或其中已移除整個CH2結構域之變體(ΔCH2構築體)。在一些實施例中，省略之恆定區結構域將由提供通常由不存在的恆定區賦予之一定分子撓性之短胺基酸間隔體(例如，10個殘基)替代。 應注意，在某些實施例中，抗體、其抗原結合片段或抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)可經改造以使CH3結構域直接融合至各別抗體、其抗原結合片段或抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)之鉸鏈區。在其他構築體中，可期望提供鉸鏈區與經修飾CH2及/或CH3結構域之間之肽間隔體。舉例而言，可表現相容性構築體，其中CH2結構域已缺失且剩餘CH3結構域(經修飾或未經修飾)利用5-20胺基酸間隔體連接至鉸鏈區。可添加該間隔體，例如以確保恆定結構域之調控元件保持自由及可及或鉸鏈區保持撓性。然而，應注意，胺基酸間隔體在一些情形下可證實具有免疫原性且引發針對構築體之不期望免疫反應。因此，在某些實施例中，添加至構築體中之任何間隔體將為相對非免疫原性或甚至完全省略，以維持抗體、其抗原結合片段或抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)之期望生物化學品質。 應瞭解，本發明之抗體、其抗原結合片段及抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)可藉由部分缺失或取代少數或甚至單一胺基酸來提供。舉例而言，突變所選CH2結構域區域中之單一胺基酸可足以實質上減少Fc結合且藉此增加腫瘤定位。類似地，可期望僅缺失一或多個恆定區結構域之控制欲調節效應物功能(例如，補體C1Q結合)之部分。恆定區之該等部分缺失可改良所選抗體特徵(血清半衰期)，同時使與標的恆定區結構域相關之其他期望功能保持完整。另外，如上文所提及，所揭示抗體、其抗原結合片段及抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)之恆定區可經由突變或取代一或多個胺基酸以增強所得構築體之特徵來修飾。就此而言，可破壞保守結合位點所提供之活性(例如，Fc結合)，同時實質上維持抗體、其抗原結合片段及抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)之構形及免疫原性特徵。某些實施例可包含將一或多個胺基酸添加至恆定區中以增強期望特徵(例如減小或增加效應物功能)或提供更多糖皮質素受體促效劑附接。在該等實施例中，可期望插入或複製衍生自所選恆定區結構域之特定序列。 應瞭解，本發明之抗體、其抗原結合片段及抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)可經修飾以降低免疫原性，即降低抗藥物免疫反應(ADA)。進行修飾之方法揭示於例如WO 2015/073884中，其全文皆以引用方式併入本文中。 本發明進一步涵蓋實質上與本文所述之抗體、其抗原結合片段及抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)同源之變體及等效物。該等變體及等效物含有例如保守取代突變，即一或多個胺基酸經相似胺基酸取代。舉例而言，保守取代係指用相同一般類別內之另一胺基酸取代胺基酸，例如用另一酸性胺基酸取代一個酸性胺基酸、用另一鹼性胺基酸取代一個鹼性胺基酸或用另一中性胺基酸取代一個中性胺基酸。保守胺基酸取代之意義所在為業內所熟知。 本發明之多肽可為抗體、其抗原結合片段或抗TNF蛋白之重組多肽、天然多肽或合成多肽。業內應意識到，可在不顯著影響蛋白質之結構或功能下改變本發明之一些胺基酸序列。因此，本發明進一步包括多肽之顯示實質活性或包括抗體、其抗原結合片段或抗TNF α蛋白之區域之變化形式。該等突變體包括缺失、插入、倒位、重複及類型取代。 多肽及類似物可進一步經修飾以含有通常不為蛋白質部分之其他化學部分。彼等衍生部分可改良蛋白質之溶解度、生物半衰期或吸收。該等部分亦可減少或消除蛋白質之任何期望副作用及諸如此類。關於彼等部分之綜述可參見REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES，第20版，Mack Publishing Co., Easton, PA (2000)。 本文所述之經分離多肽可藉由業內已知之任何適宜方法產生。該等方法介於直接蛋白質合成方法至構築編碼經分離多肽序列之DNA序列及在適宜經轉變宿主中表現彼等序列之範圍內。在一些實施例中，DNA序列係使用重組技術藉由分離或合成編碼所關注野生型蛋白之DNA序列來構築。視情況，該序列可經位點特異性誘變誘變以提供其功能類似物。例如，參見Zoeller等人，Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 81:5662-5066 (1984)及美國專利第4,588,585號。 在一些實施例中，編碼所關注多肽之DNA序列將使用寡核苷酸合成器藉由化學合成構築。該等寡核苷酸可基於期望多肽之胺基酸序列並選擇在其中將產生所關注重組多肽之宿主細胞中有利之彼等密碼子來設計。可應用標準方法來合成編碼所關注經分離多肽之經分離多核苷酸序列。舉例而言，可使用完整胺基酸序列來構築回轉譯基因。另外，可合成含有編碼特定經分離多肽之核苷酸序列之DNA寡聚物。舉例而言，可合成且然後連接若干編碼期望多肽之部分之小寡核苷酸。個別寡核苷酸通常含有5'或3'懸突用於互補組裝。 組裝(藉由合成、定點誘變或另一方法)後，將編碼特定所關注經分離多肽之多核苷酸序列立即插入至表現載體中且可操作連接至適於在期望宿主中表現蛋白質之表現控制序列。可藉由核苷酸測序、限制酶圖譜分析及生物活性多肽在適宜宿主中之表現來確認適當組裝。如業內所熟知，為在宿主中獲得高表現量之經轉染基因，必須將該基因可操作連接至在所選表現宿主中發揮功能之轉錄及轉譯表現控制序列。 在某些實施例中，重組表現載體用於擴增及表現DNA編碼抗體、其抗原結合片段或抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)。重組表現載體係可複製DNA構築體，其具有可操作連接至衍生自哺乳動物、微生物、病毒或昆蟲基因之適宜轉錄或轉譯調控元件的編碼抗體、其抗原結合片段或抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)之多肽鏈之合成或cDNA衍生之DNA片段。轉錄單元通常包含以下之總成：(1) 具有調控基因表現作用之遺傳元件，例如轉錄啟動子或增強子，(2) 轉錄成mRNA且轉譯成蛋白質之結構或編碼序列，及(3) 適宜轉錄及轉譯起始及終止序列。該等調控元件可包括控制轉錄之操縱子序列。可另外納入通常由複製起點賦予之在宿主中複製之能力及幫助識別轉變體之選擇基因。DNA區域在其功能彼此相關時可操作連接。舉例而言，若信號肽(分泌前導序列)之DNA表現為參與多肽分泌之前體，則該信號肽(分泌前導序列)之DNA可操作連接至該多肽之DNA；若啟動子控制編碼序列之轉錄，則該啟動子可操作連接至該序列；或若核糖體結合位點之定位有助於轉譯，則該核糖體結合位點可操作連接至該編碼序列。意欲用於酵母表現系統中之結構元件包括能夠使宿主細胞細胞外分泌經轉譯蛋白質之前導序列。或者，倘若重組蛋白經表現無前導序列或轉運序列，則其可包括N末端甲硫胺酸殘基。此殘基可視情況隨後自所表現重組蛋白裂解以提供最終產物。 表現控制序列及表現載體之選擇將端視宿主之選擇而定。可採用眾多種表現宿主/載體組合。可用於真核宿主之表現載體包括例如包含來自SV40、牛乳頭瘤病毒、腺病毒及巨細胞病毒之表現控制序列之載體。可用於細菌宿主之表現載體包括已知細菌質體(例如來自大腸桿菌(Escherichia coli)之質體，包括pCR 1、pBR322、pMB9及其衍生物)、較寬宿主範圍質體(例如M13及絲狀單鏈DNA噬菌體)。 適於在適宜啟動子控制下表現抗體、其抗原結合片段及抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)之宿主細胞包括原核生物、酵母、昆蟲或高等真核細胞。原核生物包括革蘭氏(gram)陰性或革蘭氏陽性生物體，例如大腸桿菌或芽孢桿菌。高等真核細胞包括哺乳動物來源之已確立細胞系。亦可採用無細胞轉譯系統。適於與細菌、真菌、酵母及哺乳動物細胞宿主一起使用之選殖及表現載體闡述於Pouwels等人(Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, N.Y., 1985)中，其相關揭示內容以引用方式併入本文中。關於蛋白質產生(包括抗體產生)方法之其他資訊可參見例如美國專利公開案第2008/0187954號、美國專利第6,413,746號及第6,660,501號以及國際專利公開案第WO 04009823號，該等專利中每一者之全文皆以引用方式併入本文中。 多種哺乳動物或昆蟲細胞培養系統亦有利地用於表現重組蛋白。可在哺乳動物細胞中實施重組蛋白之表現，此乃因該等蛋白質通常經正確摺疊、經適當修飾且功能完整。適宜哺乳動物宿主細胞系之實例包括HEK-293及HEK-293T、由Gluzman (Cell 23:175, 1981)闡述之COS-7猴腎細胞系及其他細胞系，包括例如L細胞、C127、3T3、中國倉鼠卵巢(CHO)、HeLa及BHK細胞系。哺乳動物表現載體可包含非轉錄元件(例如複製起點、連接至欲表現基因之適宜啟動子及增強子及其他5'或3'側接非轉錄序列)，及5'或3'非轉譯序列(例如必需核糖體結合位點、多聚腺苷酸化位點、剪接供體及受體位點及轉錄終止序列)。用於在昆蟲細胞中產生異源蛋白質之桿狀病毒系統綜述於Luckow及Summers, Bio/Technology 6:47 (1988)。 由經轉變宿主產生之蛋白質可根據任何適宜方法純化。該等標準方法包括層析(例如，離子交換、親和力及粒度分級管柱層析)、離心、差別溶解度或任何其他標準蛋白質純化技術。可將親和標籤(例如六組胺酸、麥芽糖結合結構域、流行性感冒病毒包衣序列及麩胱甘肽-S-轉移酶)附接至蛋白質以允許容易地藉由穿過適宜親和力管柱純化。經分離蛋白亦可使用諸如蛋白分解、核磁共振及x射線結晶學等技術在物理上表徵。 舉例而言，首先可使用市售蛋白質濃縮過濾器(例如Amicon或Millipore Pellicon超濾單元)濃縮將重組蛋白分泌至培養基中之系統之上清液。濃縮步驟後，可將濃縮物施加至適宜純化基質中。或者，可採用陰離子交換樹脂，例如具有二乙基胺基乙基(DEAE)側基之基質或受質。基質可為丙烯醯胺、瓊脂醣、聚葡萄糖、纖維素或常用於蛋白質純化之其他類型。或者，可採用陽離子交換步驟。適宜陽離子交換劑包括多種包含磺丙基或羧基甲基之不溶性基質。最後，可採用一或多個採用疏水RP-HPLC介質(例如具有甲基側基或其他脂肪族基團之矽膠)之反相高效液相層析(RP-HPLC)步驟進一步純化抗TNF蛋白(例如，全長抗體、抗體之抗原結合片段或可溶性TNF受體蛋白)。亦可採用一些或所有前述純化步驟之多個組合來提供均質重組蛋白。 可例如藉由以下方式分離在細菌培養物中產生之重組蛋白：首先自細胞糰粒提取，然後進行一或多個濃縮、鹽析、水性離子交換或粒徑篩析層析步驟。高效液相層析(HPLC)可用於最後純化步驟。用於表現重組蛋白之微生物細胞可藉由任何便捷方法(包括冷凍-解凍循環、超音波處理、機械破壞或使用細胞溶解劑)來破壞。 業內已知用於純化抗體、其抗原結合片段及抗TNF α蛋白之方法亦包括例如美國專利公開案第2008/0312425號、第2008/0177048號及第號2009/0187005中所述之彼等，該等公開案中每一者之全文皆以引用方式併入本文中。III. 含有糖皮質素受體促效劑之免疫結合物 本文提供含有糖皮質素受體促效劑之免疫結合物。在一些實施例中，本文所提供之免疫結合物結合至Fc γ受體。在一些實施例中，本文所提供之免疫結合物在GRE跨膜TNF-α報導基因分析中有活性(如本文所用之「GRE跨膜TNF-α報導基因分析」係指下文實例79中所用之分析)。在一些實施例中，本文所提供之免疫結合物在L929分析中有活性(如本文所用之「L929分析」係指下文實例82中所用之分析)。在一些實施例中，本文所提供之免疫結合物顯示與免疫結合物中之單獨蛋白質(例如，抗體、其抗原結合片段或可溶性受體)相比降低的免疫原性(降低的抗藥物免疫反應(ADA))。 在一個實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物： (SM-L-Q)n -A1 I-a 或其醫藥上可接受之鹽，其中： A1 係抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白； L係連接體； Q係異二官能基或異三官能基；或 Q係不存在； n係1-10；且 SM係糖皮質類固醇之基團。 在一個實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物： (SM-L-Q)n -A1 I-a 或其醫藥上可接受之鹽，其中： A1 係抗腫瘤壞死因子(TNF) α抗體、抗TNF α單株抗體或阿達木單抗； L係連接體； Q係異二官能基或異三官能基；或 Q係不存在； n係1-10；且 SM係糖皮質類固醇之基團。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係糖皮質類固醇之單價基團。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係選自由以下組成之群之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00022
及
Figure TW201801749AD00023
， 其中硫、氧或氮原子直接或間接附接至糖皮質類固醇之C或D環，且R係C1-4 烷基。在另一實施例中，硫、氧或氮原子直接或間接附接至糖皮質類固醇之D環。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-a 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00024
， 其中： R1 選自由氫及鹵基組成之群； R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群； R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、-OH (或羥基)、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00025
及
Figure TW201801749AD00026
組成之群； R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群； R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH及C1-4 烷氧基組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自氫及C1-4 烷基； R9a 選自由視情況經取代之烷基、視情況經取代之環烷基、視情況經取代之芳基及視情況經取代之雜芳基組成之群； R9b 選自由氫及烷基組成之群；或 R9a 係：
Figure TW201801749AD00027
或
Figure TW201801749AD00028
；且 R9b 係氫或甲基； X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -及-C≡C-組成之群；或 X係不存在； t係1或2； Z選自由=CH-、=C(OH)-及=N-組成之群； 每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或 R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基； R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R6a 、R6b 、R6c 、R6d 及R6e 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群； R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R11 選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00029
代表單鍵或雙鍵。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 之糖皮質類固醇之單價基團，其中R9a 係：
Figure TW201801749AD00030
。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a' 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00031
， 其中R1 、R2 、R3 、R9a 、R9b 及
Figure TW201801749AD00032
係如結合式II-a 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-b 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00033
其中R1 、R2 、R3 、R9a 、R9b 及
Figure TW201801749AD00034
係如結合式II-a 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-b' 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00035
其中R1 、R2 、R3 、R9a 、R9b 及
Figure TW201801749AD00036
係如結合式II-a 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-c 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00037
， 其中R1 、R2 、R9a 、R9b 及
Figure TW201801749AD00038
係如結合式II-a 所定義；且 W選自由-O-及-S-組成之群。在另一實施例中，W係-O-。在另一實施例中，W係-S-。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-c' 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00039
， 其中R1 、R2 、R9a 、R9b 、W及
Figure TW201801749AD00040
係如結合式II-c 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-d 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00041
。 其中R1 、R2 、R9a 、R9b 、W及
Figure TW201801749AD00042
係如結合式II-c 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-d' 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00043
。 其中R1 、R2 、R9a 、R9b 、W及
Figure TW201801749AD00044
係如結合式II-c 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-e 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00045
， 其中： R1 、R2 、W及
Figure TW201801749AD00046
係如結合式II-c 所定義； R9c 選自由氫、C1-4 烷基及-C(=O)R9e 組成之群； R9d 選自由氫、視情況經取代之烷基、視情況經取代之環烷基、視情況經取代之芳基及視情況經取代之雜芳基組成之群；且 R9e 選自由氫、視情況經取代之烷基、視情況經取代之環烷基、視情況經取代之芳基及視情況經取代之雜芳基組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-e' 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00047
， 其中R1 、R2 、W、R9c 、R9d 及
Figure TW201801749AD00048
係如結合式II-e 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-f 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00049
， 其中： R1 、R2 、R9c 、R9d 、W及
Figure TW201801749AD00050
係如結合式II-e 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-f' 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00051
， 其中R1 、R2 、R9c 、R9d 、W及
Figure TW201801749AD00052
係如結合式II-e 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-b 之化合物： (SM-L-Q)n -A2 I-b 或其醫藥上可接受之鹽，其中： A2 係蛋白質； L係連接體； Q係異二官能基或異三官能基；或 Q係不存在； n係1-10；且 SM係具有下式中之任一者之糖皮質類固醇之單價基團： (1) 式II-l ：
Figure TW201801749AD00053
； (2) 式II-m ：
Figure TW201801749AD00054
； (3) 式II-n ：
Figure TW201801749AD00055
； (4) 式II-o ：
Figure TW201801749AD00056
； (5) 式II-p ：
Figure TW201801749AD00057
；或 (6) 式II-q ：
Figure TW201801749AD00058
， 其中： R1 選自由氫及鹵基組成之群； R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群； R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、-OH、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00059
及
Figure TW201801749AD00060
組成之群； R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群； R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH及C1-4 烷氧基組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自氫及C1-4 烷基； R6a 、R6b 、R6c 、R6d 及R6e 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群； X選自由以下組成之群：-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d - (包括E 及Z 異構物二者)及-C≡C-；(其中當X係-CH2 S-、-CH2 O-或-N(H)C(R8a )(R8b )-時，-CH2 S-、-CH2 O-或-N(H)C(R8a )(R8b )-之雜原子可附接至任一6員環，即-CH2 S-等效於-SCH2 -、-CH2 O-等效於-OCH2 -且-N(H)C(R8a )(R8b )-等效於-C(R8a )(R8b )N(H)-)；或 X係不存在，即X代表化學鍵； Y2 選自由-O-、-S-及-N(R7a )-組成之群；或 Y2 係不存在，即Y2 代表化學鍵； t係1或2； Z選自由=CR11a -及=N-組成之群； 每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或 R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基； R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00061
代表單鍵或雙鍵。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-b 之化合物： (SM-L-Q)n -A2 I-b ， 其中： A2 係蛋白質； L係連接體； Q係異二官能基或異三官能基；或 Q係不存在； n係1-10；且 SM係具有下式中之任一者之單價基團： (1) 式II-l' ：
Figure TW201801749AD00062
； (2) 式II-m' ：
Figure TW201801749AD00063
； (3) 式II-n' ：
Figure TW201801749AD00064
； (4) 式II-o' ：
Figure TW201801749AD00065
； (5) 式II-p' ：
Figure TW201801749AD00066
；或 (6) 式II-q' ：
Figure TW201801749AD00067
， 其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00068
、R6a 、R6c 、R6d 、R6e 、R9f 、R11b 、Y2 、X及Z係如結合式II-l 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-b 之化合物： (SM-L-Q)n -A2 I-b ， 其中： A2 係蛋白質； L係連接體； Q係異二官能基或異三官能基；或 Q係不存在； n係1-10；且 SM係具有下式中之任一者之單價基團： (1) 式II-l'' ：
Figure TW201801749AD00069
； (2) 式II-m'' ：
Figure TW201801749AD00070
； (3) 式II-n'' ：
Figure TW201801749AD00071
； (4) 式II-o'' ：
Figure TW201801749AD00072
； (5) 式II-p'' ：
Figure TW201801749AD00073
；或 (6) 式II-q'' ：
Figure TW201801749AD00074
， 其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00075
、R6a 、R6c 、R6d 、R6e 、R9f 、R11b 、Y2 及X係如結合式II-l 所定義，且當R2 係鹵基或羥基時，標記有「*」之碳原子係R-異構物或S-異構物。在一個實施例中，標記有「*」之碳原子係R-異構物。在另一實施例中，標記有「*」之碳原子係S-異構物。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-l 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00076
， 其中： R1 選自由氫及鹵基組成之群； R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群； R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、-OH、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00077
及
Figure TW201801749AD00078
組成之群； R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群； R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH及C1-4 烷氧基組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自氫及C1-4 烷基； X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -及-C≡C-組成之群；或 X係不存在； t係1或2； Z選自由=CR11a -及=N-組成之群； 每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或 R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基； R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R6a 、R6c 、R6d 及R6e 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群； Y2 選自由-O-、-S-及-N(R7a )-組成之群；或 Y2 係不存在； R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00079
代表單鍵或雙鍵。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-m 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00080
。 其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00081
、R6a 、R6c 、R6d 、R6e 、R9f 、R11b 、Y2 、X及Z係如結合式II-l 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-n 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00082
。 其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00083
、R6a 、R6c 、R6d 、R6e 、R9f 、R11b 、Y2 、X及Z係如結合式II-l 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-o 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00084
， 其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00085
、R6a 、R6d 、R6e 、R9f 、R11b 、Y2 、X及Z係如結合式II-l 所定義；且R6b 選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-p 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00086
。 其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00087
、R6a 、R6b 、R6d 、R6e 、R9f 、R11b 、Y2 、X及Z係如結合式II-o 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-q 之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00088
。 其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00089
、R6a 、R6b 、R6d 、R6e 、R9f 、R11b 、Y2 、X及Z係如結合式II-o 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中
Figure TW201801749AD00090
代表雙鍵。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中R1 選自由氫及氟組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中R2 選自由氫及氟組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中R3 選自由-CH2 OH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F及-OH組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中： R3 選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00091
及
Figure TW201801749AD00092
； R3a 選自由氫及甲基組成之群； R3b 選自由甲基、乙基、異丙基、異丁基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基及異丁氧基組成之群； R3c 選自由氫、甲基、乙基、-CH2 OH、甲氧基、乙氧基及異丙氧基組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自由氫、甲基及乙基組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中R5 及R8a 獨立地選自由氫及甲基組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中Z係=CH-。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中Z係=N-。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中R6a 、R6d 及R6e 係氫。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中Y2 係-N(R7a )-。在另一實施例中，R7a 選自由氫及甲基組成之群。在另一實施例中，R7a 係氫。在另一實施例中，R7a 係甲基。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中： X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-CH2 S-及-N(H)CH(R8a )-組成之群； t係1； R4a 及R4b 獨立地選自由氫及甲基組成之群；或 R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3員環烷基；且 R8a 選自由氫及甲基組成之群。在另一實施例中，X係-CH2 -。在另一實施例中，X選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00093
及
Figure TW201801749AD00094
。 在另一實施例中，X係-O-。在另一實施例中，X係-S-。在另一實施例中，X係-CH2 S-。在另一實施例中，X係-N(H)CH2 -。在另一實施例中，X選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00095
及
Figure TW201801749AD00096
。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-l 、II-m 或II-n 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-l'' 、II-m'' 或II-n'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中R6c 選自由氫、-Cl、-OMe(或-OCH3 )及-OH組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中R6b 選自由氫、-Cl、-OMe (或-OCH3 )及-OH組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中R9f 係氫。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中R9f 係甲基。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中R11a 選自由氫及-OH組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中R11b 係氫。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中L係可裂解連接體。在另一實施例中，可裂解連接體包含琥珀醯亞胺、醯胺、硫脲、硫醚、肟或自消性基團或其組合。在另一實施例中，可裂解連接體包含肽。在另一實施例中，可裂解連接體包含三肽。在另一實施例中，可裂解連接體包含二肽。在另一實施例中，可裂解連接體包含磷酸酯。在另一實施例中，可裂解連接體包含焦磷酸二酯。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中Q係不存在。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中Q係異二官能基。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中Q係選自由以下組成之群之異二官能基：
Figure TW201801749AD00097
Figure TW201801749AD00098
及
Figure TW201801749AD00099
； 其中m係1、2、3、4、5或6。在另一實施例中，Q選自由Q-1、Q-2、Q-3及Q-4組成之群。在另一實施例中，Q選自由Q-3及Q-4組成之群。在另一實施例中，m係2。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中Q係異三官能基。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中Q係以下異三官能基：
Figure TW201801749AD00100
。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00101
； m係2或3；且 R10a 及R10b 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。在另一實施例中，m係2。在另一實施例中，m係1。在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00102
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00103
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00104
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00105
。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00106
； m係2或3；且 R10a 及R10b 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。在另一實施例中，m係2。在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00107
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00108
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00109
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00110
。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中L係不可裂解連接體。在另一實施例中，連接體包含一或多個聚乙二醇單元。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00111
； m係2或3；且 x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。在另一實施例中，m係2。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00112
； m係2或3；且 x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。在另一實施例中，m係2。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00113
；且 x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物或前藥，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l" 、II-m" 、II-n" 、II-o" 、II-p" 或II-q" 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00114
；且 x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00115
； m係1或2； x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15；且R10a 及R10b 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00116
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00117
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00118
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00119
。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00120
； m係1或2； x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15；且R10a 及R10b 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00121
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00122
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00123
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00124
。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00125
； x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15；且R10a 及R10b 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00126
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00127
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00128
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00129
。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00130
； x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15；且R10a 及R10b 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00131
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00132
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00133
。 在另一實施例中，-L-Q-係：
Figure TW201801749AD00134
。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中-L-Q-係表I化學結構中之任一者： 表I
Figure TW201801749AD00135
Figure TW201801749AD00136
Figure TW201801749AD00137
Figure TW201801749AD00138
；及
Figure TW201801749AD00139
。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 或I-b 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中n係2-8。在另一實施例中，n係1-5。在另一實施例中，n係2-5。在另一實施例中，n係1。在另一實施例中，n係2。在另一實施例中，n係3。在另一實施例中，n係4。在另一實施例中，n係5。在另一實施例中，n係6。在另一實施例中，n係7。在另一實施例中，n係8。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係糖皮質類固醇之單價基團，其為表II化學結構中之任一者。 表II
Figure TW201801749AD00140
Figure TW201801749AD00141
Figure TW201801749AD00142
Figure TW201801749AD00143
Figure TW201801749AD00144
Figure TW201801749AD00145
Figure TW201801749AD00146
Figure TW201801749AD00147
Figure TW201801749AD00148
Figure TW201801749AD00149
Figure TW201801749AD00150
及
Figure TW201801749AD00151
。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 或I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中SM係選自由以下組成之群之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00152
及
Figure TW201801749AD00153
。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 係抗體或其抗原結合片段或其中A2 係抗體或其抗原結合片段。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 係結合至人類TNF α及/或鼠類TNF α之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係結合至人類TNF α及/或鼠類TNF α之蛋白質。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 係結合至可溶性TNF α之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係結合至可溶性TNF α之蛋白質。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 係結合至膜結合TNF α之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係結合至膜結合TNF α之蛋白質。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 係包含抗TNF抗體之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係包含抗TNF抗體之蛋白質。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 係包含抗TNF受體抗體之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係包含抗TNF受體抗體之蛋白質。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 係包含抗TNF抗體之抗原結合片段之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係包含抗TNF抗體之抗原結合片段之蛋白質。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 係包含抗TNF受體抗體之抗原結合片段之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係包含抗TNF受體抗體之抗原結合片段之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中抗原結合片段選自由以下組成之群：Fab、Fab'、F(ab')2、單鏈Fv或scFv、二硫鍵連接之Fv、V-NAR結構域、IgNar、內抗體、IgGΔCH2、微小抗體、F(ab')3、四價抗體、三價抗體、雙價抗體、單結構域抗體、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2或scFv-Fc。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中抗體或其抗原結合片段為鼠類、嵌合、人類化或人類。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 係包含可溶性TNF受體之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係包含可溶性TNF受體之蛋白質。在另一實施例中，可溶性TNF受體係可溶性p75 TNF受體。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 包含重鏈恆定結構域或其片段，或其中A2 包含重鏈恆定結構域或其片段。在另一實施例中，重鏈恆定結構域或其片段包含選自由以下組成之群之恆定結構域：(a) IgA恆定結構域；(b) IgD恆定結構域；(c) IgE恆定結構域；(d) IgG1恆定結構域；(e) IgG2恆定結構域；(f) IgG3恆定結構域；(g) IgG4恆定結構域；及(h) IgM恆定結構域，或係其片段。在另一實施例中，重鏈恆定結構域包含人類IgG1重鏈恆定結構域或其片段。在另一實施例中，重鏈恆定結構域包含人類IgG1 Fc結構域。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 包含輕鏈恆定結構域或其片段，或其中A2 包含輕鏈恆定結構域或其片段。在另一實施例中，輕鏈恆定結構域或其片段包含選自由以下組成之群之恆定結構域：(a) Ig κ恆定結構域及(b) Ig λ恆定結構域，或係其片段。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 競爭性抑制選自由阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗及戈利木單抗組成之群之抗體與TNF-α之結合，或其中A2 競爭性抑制選自由阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗及戈利木單抗組成之群之抗體與TNF-α之結合。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 結合至與選自由阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗及戈利木單抗組成之群之抗體相同之TNF-α表位，或其中A2 結合至與選自由阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗及戈利木單抗組成之群之抗體相同之TNF-α表位。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中抗TNF α蛋白選自由以下組成之群：阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗及戈利木單抗。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 包含分別SEQ ID NO:3或6、SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5之可變重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列以及分別SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、及SEQ ID NO:34之可變輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列，或其中A2 包含分別SEQ ID NO:3或6、SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5之可變重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列以及分別SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33及SEQ ID NO:34之可變輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 包含SEQ ID NO:50之可變重鏈序列及SEQ ID NO:59之可變輕鏈序列，或其中A2 包含SEQ ID NO:50之可變重鏈序列及SEQ ID NO:59之可變輕鏈序列。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 不與TNF β結合，或其中A2 不與TNF β結合。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 結合至TNF β，或其中A2 結合至TNF β。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 在活體外L929分析中中和人類TNF-α細胞毒性且IC50為1×10- 7 M或更小，或其中A2 在活體外L929分析中中和人類TNF-α細胞毒性且IC50為1×10-7 M或更小。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 阻斷TNF-α與p55及p75細胞表面受體之相互作用，或其中A2 阻斷TNF-α與p55及p75細胞表面受體之相互作用。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中A1 在活體外在補體存在下溶解表面TNF表現細胞，或其中A2 在活體外在補體存在下溶解表面TNF表現細胞。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中可溶性p75 TNF受體係依那西普。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-a 之化合物，其中SM係具有式II-a 、II-b 、II-c 、II-d 、II-e 、II-f 、II-l 、II-m 、II-n 、II-o 、II-p 或II-q 中之任一者或式II-a' 、II-b' 、II-c' 、II-d' 、II-e' 、II-f' 、II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團；或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，例如具有式I-b 之化合物，其中SM係具有式II-l 、 II-m 、 II-n 、 II-o 、 II-p 或II-q 中之任一者或式II-l' 、II-m' 、II-n' 、II-o' 、II-p' 、II-q' 、II-l'' 、II-m'' 、II-n'' 、II-o'' 、II-p'' 或II-q'' 中之任一者的糖皮質類固醇之單價基團，其中抗體係阿達木單抗。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其為表III化學結構中之任一者： 表III
Figure TW201801749AD00154
Figure TW201801749AD00155
Figure TW201801749AD00156
Figure TW201801749AD00157
Figure TW201801749AD00158
Figure TW201801749AD00159
及
Figure TW201801749AD00160
其中n係1-5且A係A1 或A2 。在另一實施例中，A係阿達木單抗。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其為表IV化學結構中之任一者： 表IV
Figure TW201801749AD00161
Figure TW201801749AD00162
Figure TW201801749AD00163
Figure TW201801749AD00164
Figure TW201801749AD00165
Figure TW201801749AD00166
Figure TW201801749AD00167
Figure TW201801749AD00168
Figure TW201801749AD00169
Figure TW201801749AD00170
Figure TW201801749AD00171
其中A係A1 或A2 。在另一實施例中，A係阿達木單抗。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其為表IV-A化學結構中之任一者： 表IV-A
Figure TW201801749AD00172
其中A係A1 或A2 。在另一實施例中，A係阿達木單抗。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其為表V化學結構中之任一者： 表V
Figure TW201801749AD00173
其中n係1-5且A係A1 或A2 。在另一實施例中，A係阿達木單抗。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽或具有式I-b 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00174
Figure TW201801749AD00175
其中n係2-4，A係A1 或A2 。在另一實施例中，A係阿達木單抗。在另一實施例中，n係2或4。在另一實施例中，n係2。在另一實施例中，n係4。IV. 糖皮質素受體促效劑 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 之化合物：
Figure TW201801749AD00176
或其醫藥上可接受之鹽，其中： R1 選自由氫及鹵基組成之群； R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群； R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、-CH2 OS(=O)2 OH、-OH、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00177
及
Figure TW201801749AD00178
組成之群； R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群； R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH、C1-4 烷氧基、-CH2 (胺基)及-CH2 CH2 C(=O)OR3f 組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； X選自由以下組成之群：-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d - (包括E 及Z 異構物二者)、-C≡C-、-N(R5 )C(=O)-及-OC(=O)-；(其中當X係-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-N(R5 )C(=O)-或-OC(=O)-時，-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-N(R5 )C(=O)-或-OC(=O)-之雜原子可附接至任一6員環，即-CH2 S-等效於-SCH2 -，-CH2 O-等效於-OCH2 -，-N(H)C(R8a )(R8b )-等效於-C(R8a )(R8b )N(H)-，-N(R5 )C(=O)-等效於-C(=O)N(R5 )C=O-且-OC(=O)-等效於-C(=O)O-)；或 X係不存在，即X代表化學鍵； t係1或2； Z選自由=CR11a -及=N-組成之群； 每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或 R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基； R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R6a 、R6b 、R6c 及R6d 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群； R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R7b 選自由氫、-L-H、-L-PG、
Figure TW201801749AD00179
及
Figure TW201801749AD00180
組成之群；或 R7a 及R7b 與其所附接之氮原子一起形成：
Figure TW201801749AD00181
；或 R7a 及R7b 與其所附接之氮原子一起形成硝基(-NO2 )； m係1、2、3、4、5或6； L係連接體； PG係保護基團，例如Boc、FMOC； R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00182
代表單鍵或雙鍵。在另一實施例中，R7b 係氫。在另一實施例中，R7b 選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00183
及
Figure TW201801749AD00184
； m係1、2、3、4、5或6；且 R10a 及R10b 各自獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII' 之化合物：
Figure TW201801749AD00185
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00186
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII'' 之化合物：
Figure TW201801749AD00187
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00188
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 及X係如結合式VII 所定義，且當R2 係鹵基或羥基時，標記有「*」之碳原子係R-異構物或S-異構物。在一個實施例中，標記有「*」之碳原子係R-異構物。在另一實施例中，標記有「*」之碳原子係S-異構物。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII-A 或式VII-B 之化合物：
Figure TW201801749AD00189
或
Figure TW201801749AD00190
， 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中： R1 選自由氫及鹵基組成之群； R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群； R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、-CH2 OS(=O)2 OH、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00191
及
Figure TW201801749AD00192
組成之群； R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群； R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH、C1-4 烷氧基、-CH2 (胺基)及-CH2 CH2 C(=O)OR3f 組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -、-C≡C-、-N(R5 )C(=O)-及-OC(=O)-組成之群；或 X係不存在； t係1或2； Z選自由=CR11a -及=N-組成之群； 每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或 R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基； R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R6a 、R6b 及R6c 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群； R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R7b 選自由氫、-L-H、-L-PG、
Figure TW201801749AD00193
及
Figure TW201801749AD00194
組成之群；或 R7a 及R7b 與其所附接之氮原子一起形成：
Figure TW201801749AD00195
；或 R7a 及R7b 與其所附接之氮原子一起形成硝基(-NO2 )； m係1、2、3、4、5或6； L係連接體； PG係保護基團； R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00196
代表單鍵或雙鍵。在另一實施例中，R7b 係氫。在另一實施例中，R7b 選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00197
及
Figure TW201801749AD00198
； m係1、2、3、4、5或6；且 R10a 及R10b 各自獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII-A' 或式VII-B' 之化合物：
Figure TW201801749AD00199
或
Figure TW201801749AD00200
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00201
、R6a 、R6b 、R6c 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII-A 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII-A'' 或式VII-B'' 之化合物：
Figure TW201801749AD00202
或
Figure TW201801749AD00203
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00204
、R6a 、R6b 、R6c 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 及X係如結合式VII-A 所定義，且當R2 係鹵基或羥基時，標記有「*」之碳原子係R-異構物或S-異構物。在一個實施例中，標記有「*」之碳原子係R-異構物。在另一實施例中，標記有「*」之碳原子係S-異構物。 在另一實施例中，本文揭示具有式VIII 之化合物：
Figure TW201801749AD00205
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00206
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式VIII' 之化合物：
Figure TW201801749AD00207
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00208
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式VIII'' 之化合物：
Figure TW201801749AD00209
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00210
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 及X係如結合式VII 所定義，且當R2 係鹵基或羥基時，標記有「*」之碳原子係R-異構物或S-異構物。在一個實施例中，標記有「*」之碳原子係R-異構物。在另一實施例中，標記有「*」之碳原子係S-異構物。 在另一實施例中，本文揭示具有式VIII-a 之化合物：
Figure TW201801749AD00211
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00212
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式VIII-a' 之化合物：
Figure TW201801749AD00213
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00214
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式VIII-a'' 之化合物：
Figure TW201801749AD00215
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00216
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 及X係如結合式VII 所定義，且當R2 係鹵基或羥基時，標記有「*」之碳原子係R-異構物或S-異構物。在一個實施例中，標記有「*」之碳原子係R-異構物。在另一實施例中，標記有「*」之碳原子係S-異構物。 在另一實施例中，本文揭示具有式VIII-b 之化合物：
Figure TW201801749AD00217
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00218
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式VIII-b' 之化合物：
Figure TW201801749AD00219
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00220
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式VIII-b'' 之化合物：
Figure TW201801749AD00221
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00222
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 及X係如結合式VII 所定義，且當R2 係鹵基或羥基時，標記有「*」之碳原子係R-異構物或S-異構物。在一個實施例中，標記有「*」之碳原子係R-異構物。在另一實施例中，標記有「*」之碳原子係S-異構物。 在另一實施例中，本文揭示具有式IX 之化合物：
Figure TW201801749AD00223
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00224
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式IX' 之化合物：
Figure TW201801749AD00225
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00226
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式IX'' 之化合物：
Figure TW201801749AD00227
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00228
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 及X係如結合式VII 所定義，且當R2 係鹵基或羥基時，標記有「*」之碳原子係R-異構物或S-異構物。在一個實施例中，標記有「*」之碳原子係R-異構物。在另一實施例中，標記有「*」之碳原子係S-異構物。 在另一實施例中，本文揭示具有式IX-a 之化合物：
Figure TW201801749AD00229
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00230
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式IX-a' 之化合物：
Figure TW201801749AD00231
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00232
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式IX-a'' 之化合物：
Figure TW201801749AD00233
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00234
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 及X係如結合式VII 所定義，且當R2 係鹵基或羥基時，標記有「*」之碳原子係R-異構物或S-異構物。在一個實施例中，標記有「*」之碳原子係R-異構物。在另一實施例中，標記有「*」之碳原子係S-異構物。 在另一實施例中，本文揭示具有式IX-b 之化合物：
Figure TW201801749AD00235
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00236
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式IX-b' 之化合物：
Figure TW201801749AD00237
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00238
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 、X及Z係如結合式VII 所定義。 在另一實施例中，本文揭示具有式IX-b'' 之化合物：
Figure TW201801749AD00239
， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、
Figure TW201801749AD00240
、R6a 、R6b 、R6c 、R6d 、R7a 、R7b 、R9f 、R11b 及X係如結合式VII 所定義，且當R2 係鹵基或羥基時，標記有「*」之碳原子係R-異構物或S-異構物。在一個實施例中，標記有「*」之碳原子係R-異構物。在另一實施例中，標記有「*」之碳原子係S-異構物。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中
Figure TW201801749AD00241
代表單鍵或雙鍵。在另一實施例中，
Figure TW201801749AD00242
代表雙鍵。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 選自由氫及氟組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R2 選自由氫及氟組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R3 選自由-CH2 OH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F及-OH組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中： R3 選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00243
及
Figure TW201801749AD00244
； R3a 選自由氫及甲基組成之群； R3b 選自由甲基、乙基、異丙基、異丁基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基及異丁氧基組成之群； R3c 選自由氫、甲基、乙基、-CH2 OH、甲氧基、乙氧基及異丙氧基組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自由氫、甲基及乙基組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R5 及R8a 獨立地選自由氫及甲基組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 或IX-b' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Z係=CH-。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Z係=N-。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R7a 選自由氫及甲基組成之群。在另一實施例中，R7a 係氫。在另一實施例中，R7a 係甲基。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中： X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-CH2 S-及-N(H)CH(R8a )-組成之群； t係1；且 R4a 及R4b 獨立地選自由氫及甲基組成之群；或 R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3員環烷基。在另一實施例中，X係-CH2 -。在另一實施例中，X選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00245
及
Figure TW201801749AD00246
。 在另一實施例中，X係-O-。在另一實施例中，X係-S-。在另一實施例中，X係-CH2 S-。在另一實施例中，X係-N(H)CH2 -。在另一實施例中，X選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00247
及
Figure TW201801749AD00248
。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R11b 係氫。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R7b 係氫。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R7a 及R7b 係氫。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，R6b 選自由氫、-Cl、-OMe (或-OCH3 )及-OH組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R9f 係氫。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R9f 係甲基。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R11a 選自由氫及-OH組成之群。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R11b 係氫。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R7b 係R7b -1。在另一實施例中，R10a 及R10b 獨立地係視情況經取代之C1-6 烷基。在另一實施例中，R10a 及R10b 獨立地係視情況經取代之C1-4 烷基。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R7b 係R7b -2，且PG係BOC。在另一實施例中，R10a 及R10b 獨立地係視情況經取代之C1-6 烷基。在另一實施例中，R10a 及R10b 獨立地係視情況經取代之C1-4 烷基。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R7b 係R7b-3 。在另一實施例中，m係2或3，且R10a 及R10b 各自係視情況經取代之C1-6 烷基。在另一實施例中，m係2。在另一實施例中，R10a 及R10b 獨立地係視情況經取代之C1-4 烷基。 在另一實施例中，本文揭示之化合物具有式VIII 或其醫藥上可接受之鹽，其為表VI化合物中之任一者。 表VI
Figure TW201801749AD00249
Figure TW201801749AD00250
Figure TW201801749AD00251
Figure TW201801749AD00252
Figure TW201801749AD00253
及
Figure TW201801749AD00254
。 在另一實施例中，本文揭示之化合物具有式VIII 或其醫藥上可接受之鹽，其為表VI-A化合物中之任一者。 表VI-A
Figure TW201801749AD00255
Figure TW201801749AD00256
Figure TW201801749AD00257
Figure TW201801749AD00258
Figure TW201801749AD00259
及
Figure TW201801749AD00260
。 在另一實施例中，本文揭示具有式VII-A 或式VII-B 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其為表VI-B化合物中之任一者。 表VI-B
Figure TW201801749AD00261
Figure TW201801749AD00262
及
Figure TW201801749AD00263
。 在另一實施例中，本文揭示具有式VIII 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00264
及
Figure TW201801749AD00265
。 在另一實施例中，本文揭示具有式IX 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其為表VII化合物中之任一者。 表VII
Figure TW201801749AD00266
Figure TW201801749AD00267
Figure TW201801749AD00268
Figure TW201801749AD00269
及
Figure TW201801749AD00270
。 在另一實施例中，本文揭示具有式IX-a 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00271
及
Figure TW201801749AD00272
。V. 製備免疫結合物及合成中間體之方法 本發明免疫結合物之一般合成闡述於一般方案1中。 一般方案1
Figure TW201801749AD00273
在一般方案1中，SM-N(R7a )(R7b )係具有-NH(R7a )基團(其中R7a 係氫或C1-4 烷基)之糖皮質類固醇或具有式VII 、 VIII 、 VIII-a 、 VIII-b 、 IX 、 IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或表9之化合物；HS-A係具有有限數量之還原鏈間二硫鍵之抗體或抗原結合片段，R' 及R'' 獨立地係在天然(例如甲基、異丙基)及/或非天然胺基酸(例如-CH2 CH2 CH2 N(H)C(=O)NH2 )中發現之任一側鏈，m係1、2、3、4、5或6，且PG係保護基團，例如BOC。出於圖解說明之目的，一般方案1僅顯示抗體或抗原結合片段中之一個硫氫基可用於結合。 在另一實施例中，本文揭示製備具有式I-c 之化合物或其醫藥上可接受之鹽之方法， 其中： A係A1 或A2 ； A1 係抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白； A2 係蛋白質； L係連接體； n係1-10；且 SM係糖皮質類固醇之基團，例如具有式II-a -q 中之任一者之化合物： 該方法包含： a) 使具有式X 之化合物：
Figure TW201801749AD00274
， 與抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白或蛋白質結合；及 b) 分離具有式I-c 之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在另一實施例中，該方法進一步包含使具有式I-c 之化合物水解以獲得具有式I-d 之化合物：
Figure TW201801749AD00275
。 在另一實施例中，本文揭示製備具有式I-e 之化合物或其醫藥上可接受之鹽之方法，
Figure TW201801749AD00276
其中： A係A1 或A2 ； A1 係抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白； A2 係蛋白質； L係連接體； R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； n係1-10； m係1、2、3、4、5或6；且 SM係糖皮質類固醇之基團，例如具有式II-a-e 或l-q 中之任一者之化合物； 該方法包含： a) 使具有式XI 之化合物：
Figure TW201801749AD00277
， 與抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白或蛋白質結合；及 b) 分離具有式I-e 之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在另一實施例中，該方法進一步包含使具有式I-e 之化合物水解以獲得具有式I-f 之化合物：
Figure TW201801749AD00278
。 在另一實施例中，本文揭示製備具有式I-G 之化合物之方法： 其中： A係阿達木單抗；且 n係1-10， 該方法包含： a) 使88號化合物：
Figure TW201801749AD00279
， 與經部分還原之阿達木單抗結合；及 b) 例如藉由層析分離具有式I-G 之化合物。 在另一實施例中，本文揭示製備具有式I-H 之化合物之方法： 其中： A係阿達木單抗；且 n係1-10， 該方法包含使具有式I-G 之化合物水解以獲得式I-H 。 在另一實施例中，本文揭示製備具有式I-G 或式I-H 之化合物之方法，其中n係1-7。在另一實施例中，n係1-5。在另一實施例中，n係2-4。在另一實施例中，n係1。在另一實施例中，n係1.5。在另一實施例中，n係2。在另一實施例中，n係2.5。在另一實施例中，n係3。在另一實施例中，n係3.5。在另一實施例中，n係4。在另一實施例中，n係4.5。在另一實施例中，n係5。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-H 之化合物： 其中： A係阿達木單抗；且 n係1-10。 在另一實施例中，本文揭示具有式I-H 之化合物，其中n係1-7。在另一實施例中，n係1-5。在另一實施例中，n係2-4。在另一實施例中，n係1。在另一實施例中，n係1.5。在另一實施例中，n係2。在另一實施例中，n係2.5。在另一實施例中，n係3。在另一實施例中，n係3.5。在另一實施例中，n係4。在另一實施例中，n係4.5。在另一實施例中，n係5。在另一實施例中，n係5.5。在另一實施例中，n係6。在另一實施例中，n係6.5。在另一實施例中，n係7。在另一實施例中，n係7.5。在另一實施例中，n係8。 根據本發明，糖皮質素受體促效劑可經由任一方法且在不防止抗體、其抗原結合片段或抗TNF α蛋白結合抗原(例如，TNF α)或不防止糖皮質素受體促效劑活性之任一位置連接至抗體、其抗原結合片段或抗TNF α蛋白。用於達成該連接之方法論述於例如以下文獻中：Panowski等人，mAbs 6 : 34-45 (2014)；J ain等人，Pharm. Res. 32 : 3526-3540 (2015)；Mack等人，Seminars in Oncology 41 : 637-652 (2014)；美國公開申請案第2008/0305044號及美國公開申請案第2011/0097322號，其中之每一者之全文皆以引用方式併入本文中。 糖皮質素受體促效劑可經由天然胺基酸(例如具有親核基團之側鏈之胺基酸)連接至抗體、其抗原結合片段或抗TNF α蛋白。 舉例而言，糖皮質素受體促效劑可連接至離胺酸殘基。經由離胺酸結合之方法為業內已知。該等方法包括兩步製程，其中在第一化學反應中將連接體附接至抗體、其抗原結合片段或抗TNF α蛋白，且然後在第二化學反應中使連接體與糖皮質素受體促效劑反應。在另一方法中，與預形成之連接體-糖皮質素受體促效劑一步反應以形成含有連接至抗體、其抗原結合片段或抗TNF α蛋白之糖皮質素受體促效劑之結合物。 糖皮質素受體促效劑亦可連接至半胱胺酸殘基。經由半胱胺酸結合之方法為業內已知。IgG1抗體含有四個鏈間二硫鍵，且經由半胱胺酸結合可以在還原該等鍵產生可用於結合之硫氫基後進行。 糖皮質素受體促效劑可經由位點特異性結合連接至抗體、其抗原結合片段或抗TNF α蛋白。 一種位點特異性結合之方法係基於半胱胺酸之位點特異性結合。此方法之實例報導於J unutula等人，Nat. Biotechnol 26 : 925-935 (2008)中；亦參見J unutula等人，J. Immunol. Methods 332 : 41-52 (2008)，其中之每一者之全文皆以引用方式併入本文中。使用此方法，抗體、其抗原結合片段或抗TNF α蛋白可經將反應性硫醇基提供給結合物糖皮質素受體促效劑之額外半胱胺酸改造。該等公開案亦提供關於選擇不會干擾抗原結合之反應性半胱胺酸之指引。 另一位點特異性結合方法利用硒基半胱胺酸。硒基半胱胺酸類似於半胱胺酸，但含有另一反應性硒原子替代半胱胺酸中之硫原子。可使用其中硒基半胱胺酸經選擇性活化之條件。Hofer等人，Biochemistry 48 : 12047-12057 (2009) (其全文皆以引用方式併入本文中)已例示此技術。 另一位點特異性結合方法利用非天然胺基酸，例如乙醯基苯丙胺酸(pAcPhe)或對疊氮基苯丙胺酸(pAF)。Wang等人，Proc. Natl. Acad. Sci. 100 : 56-61 (2003)；Axup 等人， Proc. Natl. Acad. Sci. 109:16101-16106 (2012)；及Kern等人，JACS 138 : 1430-1445 (2016) (其中之每一者之全文皆以引用方式併入本文中)已例示此技術。 另一位點特異性結合方法利用酶方法，例如經由醣基轉移酶或轉麩醯胺酸酶。可使用突變體醣基轉移酶將化學活性糖部分附接至抗體、其抗原結合片段或抗TNF α蛋白上之醣基化位點。人類IgG抗體在Fc片段之殘基Asn-297處含有N-醣基化位點。可使在此殘基處附接之聚糖去半乳糖基化以使得突變體醣基轉移酶能夠向其轉移。Boeggeman等人，Bioconjug. Chem. 20 : 1228-1236 (2009) (其全文皆以引用方式併入本文中)已例示此技術。例如來自茂原鏈輪絲菌(Streptoverticillium mobaranse )之轉麩醯胺酸酶識別可改造至抗TNF α蛋白中之麩醯胺酸標籤(例如LLQG)。Jeger等人，Angew Chem. Int. Ed. Engl. 49 : 9995-9997 (2010) (其全文皆以引用方式併入本文中)已例示此技術。 亦可使用經由所表現蛋白連接之C末端附接。舉例而言，內含肽介導之C末端硫酯形成可用於與含有N末端半胱胺酸肽之抗TNF α蛋白之化學選擇性連接。Chiang等人，J. Am. Chem. Soc. 136 : 3370-3373 (2014) (其全文皆以引用方式併入本文中)已例示此技術。 本文亦提供可用於製備免疫結合物之合成中間體，例如具有式X 及XI 之化合物。 在一個實施例中，本文所揭示之合成中間體係具有式VII 、 VIII 、 VIII-a 、 VIII-b 、 IX 、 IX-a 或IX-b 中之任一者或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者的化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R7b 選自由以下組成之群：-L-H、-L-PG、
Figure TW201801749AD00280
及
Figure TW201801749AD00281
； 在另一實施例中，本文所揭示之合成中間體係具有式VIII 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其為表VIII化合物中之任一或多者： 表VIII
Figure TW201801749AD00282
Figure TW201801749AD00283
Figure TW201801749AD00284
Figure TW201801749AD00285
Figure TW201801749AD00286
Figure TW201801749AD00287
及
Figure TW201801749AD00288
其中R7b 選自由以下組成之群：-L-H、-L-PG、
Figure TW201801749AD00289
及
Figure TW201801749AD00290
。 在另一實施例中，R7b 選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00291
及
Figure TW201801749AD00292
。 在另一實施例中，R7b 係R7b -4。在另一實施例中，R7b 係R7b -5。在另一實施例中，R7b 係R7b -6。在另一實施例中，R7b 係表IX結構中之任一者。 表IX
Figure TW201801749AD00293
Figure TW201801749AD00294
Figure TW201801749AD00295
及
Figure TW201801749AD00296
。 在另一實施例中，本文所揭示之合成中間體係具有式VIII 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其為表X化合物中之任一者。 表X 及 。 在另一實施例中，本文所揭示之合成中間體係具有式VIII 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其為表X-A化合物中之任一者。 表X-A
Figure TW201801749AD00297
Figure TW201801749AD00298
及
Figure TW201801749AD00299
。 在另一實施例中，本文所揭示之合成中間體係具有式IX 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其為表XI化學結構中之任一者。 表XI
Figure TW201801749AD00300
Figure TW201801749AD00301
Figure TW201801749AD00302
及
Figure TW201801749AD00303
其中R7b 選自由以下組成之群：-L-H、-L-PG、
Figure TW201801749AD00304
及
Figure TW201801749AD00305
。 在另一實施例中，R7b 選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00306
及
Figure TW201801749AD00307
。 在另一實施例中，R7b 係R7b -4。在另一實施例中，R7b 係R7b -5。在另一實施例中，R7b 係R7b -6。在另一實施例中，R7b 係表IX化學結構中之任一者。 在另一實施例中，本文所揭示之合成中間體係具有式IX 之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其為表XII化合物中之任一者。 表XII
Figure TW201801749AD00308
Figure TW201801749AD00309
Figure TW201801749AD00310
Figure TW201801749AD00311
及
Figure TW201801749AD00312
。VI. 使用方法及醫藥組合物 本文提供具有式I-a 及I-b 之結合物及具有式VII 、VII-A 、VII-B 、VIII 、VIII-a 、VIII-b 、IX 、IX-a 或IX-b 或式VII' 、VII-A' 、VII-B' 、VIII' 、VIII-a' 、VIII-b' 、IX' 、IX-a' 、IX-b' 、VII'' 、VII-A'' 、VII-B'' 、VIII'' 、VIII-a'' 、VIII-b'' 、IX'' 、IX-a'' 或IX-b'' 中之任一者(其中R7b 係氫)的糖皮質素受體促效劑，其可在活體外或活體內使用。因此，本文亦提供包含於生理上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑中之具有期望純度之本文所述結合物或糖皮質素受體促效劑之組合物(例如醫藥組合物)用於某些活體內用途(Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA)。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所用劑量及濃度下對接受者無毒。 欲用於活體內投與之組合物(例如，醫藥組合物)可為無菌的。此容易地經由例如無菌過濾膜過濾來實現。欲用於活體內投與之組合物(例如，醫藥組合物)可包含防腐劑。 包含本文所提供糖皮質素受體促效劑之醫藥組合物可調配為例如鼻噴霧劑、吸入性氣溶膠(例如，用於經口吸入)或膠囊、錠劑或丸劑(例如，用於經口投與)。 本文所提供之糖皮質素受體促效劑(例如，抗TNF ADC)係化合物，其中組合物中之糖皮質類固醇平均數/抗體(DAR)為約1至約10。在一些實施例中，組合物中之糖皮質類固醇平均數/抗體(DAR)為約2至約6。在一些實施例中，組合物中之糖皮質類固醇平均數/抗體(DAR)為約3至約4。在一些實施例中，組合物中之糖皮質類固醇平均數/抗體(DAR)為約3.1。在一些實施例中，組合物中之糖皮質類固醇平均數/抗體(DAR)為約3.2。在一些實施例中，組合物中之糖皮質類固醇平均數/抗體(DAR)為約3.3。在一些實施例中，組合物中之糖皮質類固醇平均數/抗體(DAR)為約3.4。在一些實施例中，組合物中之糖皮質類固醇平均數/抗體(DAR)為約3.5。在一些實施例中，組合物中之糖皮質類固醇平均數/抗體(DAR)為約3.6。在一些實施例中，組合物中之糖皮質類固醇平均數/抗體(DAR)為約3.7。在一些實施例中，組合物中之糖皮質類固醇平均數/抗體(DAR)為約3.8。在一些實施例中，組合物中之糖皮質類固醇平均數/抗體(DAR)為約3.9。 糖皮質素受體促效劑及包含本文所述糖皮質素受體促效劑之醫藥組合物可用於抑制細胞介素釋放(活體外或活體內)及/或用於治療自體免疫或發炎性疾病。糖皮質素受體促效劑及包含本文所述糖皮質素受體促效劑之醫藥組合物可用於治療氣喘(例如，支氣管氣喘)、克隆氏病(Crohn's disease) (例如，涉及迴腸及/或升結腸之輕度至中度活動性克隆氏病及/或維持涉及迴腸及/或升結腸之輕度至中度克隆氏病之臨床緩解長達3個月)、潰瘍性結腸炎(例如，用於誘導活動性、輕度至中度潰瘍性結腸炎患者之緩解)、過敏性鼻炎(例如與季節性過敏性鼻炎及/或常年性過敏性鼻炎相關之鼻症狀)。 對於投與人類患者，本文所提供糖皮質素受體促效劑之總日劑量通常介於0.001 mg至5000 mg範圍內或介於0.01 mg至1000 mg範圍內，此端視投與模式而定。舉例而言，經口投與或靜脈內、肌內、關節內或關節周投與可需要0.01 mg至1000 mg或0.1 mg至100 mg之總日劑量。總日劑量可以單一或分開劑量投與。 包含本文所提供結合物之醫藥組合物可經調配例如用於靜脈內投與或輸注。 結合物及包含本文所述結合物之醫藥組合物可用於溶解表現表面TNF-α之細胞(活體外或活體內)，用於治療特徵在於增加的TNF-α (例如，增加的滑液TNF-α)之疾病或病症，及/或用於治療自體免疫或發炎性疾病。 包含本文所述糖皮質素受體促效劑或結合物之醫藥組合物用於治療類風濕性關節炎(RA)、幼年型特發性關節炎(J IA)、牛皮癬關節炎(PsA)、脊椎關節病(例如關節黏連性脊椎炎(AS)或軸性脊椎關節炎(axSpA))、成人克隆氏病(CD)、小兒克隆氏病、潰瘍性結腸炎(UC)、斑塊狀牛皮癬(Ps)、化膿性汗腺炎(HS)、眼色素層炎、貝切特氏病或牛皮癬(包括斑塊狀牛皮癬)。 對於投與人類患者，本文所提供結合物之總日劑量通常介於0.01 µg至100 mg/kg體重範圍內，且可以每日、每週、每月或每年一或多次給予。 本發明亦提供實施例(Emb) 1-209作為具體實施例。實施例中未顯示之提及該等具體實施例之式及表闡述於上文說明中。 實施例(Emb) 1. 一種具有式I-a之化合物： (SM-L-Q)n -A1 I-a 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中： A1 係抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白；L係連接體；Q係異二官能基或異三官能基；或Q係不存在；n係1-10；且SM係糖皮質類固醇之基團。 Emb 2. 如Emb 1之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係糖皮質類固醇之單價基團。 Emb 3. 如Emb 2之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係選自由以下組成之群之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00313
及
Figure TW201801749AD00314
，其中硫、氧或氮原子直接或間接附接至糖皮質類固醇之C或D環，且R係C1-4 烷基。 Emb 4. 如Emb 3之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中硫、氧或氮原子直接或間接附接至糖皮質類固醇之D環。 Emb 5. 如Emb 2或Emb 3之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係具有式II-a之糖皮質類固醇之單價基團，其中： R1 選自由氫及鹵基組成之群；R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群；R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00315
及
Figure TW201801749AD00316
組成之群； R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群；R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH及C1-4 烷氧基組成之群；R3d 及R3e 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R9a 選自由視情況經取代之烷基、視情況經取代之環烷基、視情況經取代之芳基及視情況經取代之雜芳基組成之群；R9b 選自由氫及烷基組成之群；或R9a 係：
Figure TW201801749AD00317
；且 R9b 係氫或甲基； X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -及-C≡C-組成之群；或X係不存在；t係1或2； Z選自由=CH-、=C(OH)-及=N-組成之群；每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基；R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R6a 、R6b 、R6c 、R6d 及R6e 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R11 選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00318
代表單鍵或雙鍵。 Emb 6. 如Emb 5之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係具有式II-b之糖皮質類固醇之單價基團。 Emb 7. 如Emb 2-4中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係具有式II-c之糖皮質類固醇之單價基團，其中：R1 選自由氫及鹵基組成之群； R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群；R9a 選自由視情況經取代之烷基、視情況經取代之環烷基、視情況經取代之芳基及視情況經取代之雜芳基組成之群；且R9b 選自由氫及烷基組成之群；或R9a 係：
Figure TW201801749AD00319
；且 R9b 係氫； W選自由-O-及-S-組成之群；X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -及-C≡C-組成之群；或X係不存在；t係1或2；Z選自由=CH-、=C(OH)-及=N-組成之群；每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基；R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R6a 、R6b 、R6c 、R6d 及R6e 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R11 選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00320
代表單鍵或雙鍵。 Emb 8. 如Emb 7之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係具有式II-d之糖皮質類固醇之單價基團。 Emb 9. 如Emb 2-4中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係具有式II-e之糖皮質類固醇之單價基團，其中：R1 選自由氫及鹵基組成之群；R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群；R9c 選自由氫、C1-4 烷基及-C(=O)R9e 組成之群；R9d 選自由氫、視情況經取代之烷基、視情況經取代之環烷基、視情況經取代之芳基及視情況經取代之雜芳基組成之群；R9e 選自由氫、視情況經取代之烷基、視情況經取代之環烷基、視情況經取代之芳基及視情況經取代之雜芳基組成之群；W選自由-O-及-S-組成之群；且
Figure TW201801749AD00321
代表單鍵或雙鍵。 Emb 10. 如Emb 9之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係具有式II-f之糖皮質類固醇之單價基團。 Emb 11. 如Emb 7-10中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中W係-S-。 Emb 12. 如Emb 7-10中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中W係-O-。 Emb 13. 一種具有式I-b之化合物： (SM-L-Q)n -A2 I-b， 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中：A2 係蛋白質；L係連接體；Q係異二官能基或異三官能基；或Q係不存在；n係1-10；且SM係具有式II-l、式II-m、式II-n、式II-o、式II-p或式II-q中之任一者之糖皮質類固醇之單價基團，其中：R1 選自由氫及鹵基組成之群；R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群；R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00322
及
Figure TW201801749AD00323
組成之群；R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R3b 選自由C1- 4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群；R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH及C1-4 烷氧基組成之群；R3d 及R3e 獨立地選自氫及C1-4 烷基；R6a 、R6b 、R6c 、R6d 及R6e 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -及-C≡C-組成之群；或X係不存在；Y2 選自由-O-、-S-及-N(R7a )-組成之群；或Y2 係不存在；t係1或2；Z選自由=CR11a -及=N-組成之群；每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基；R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00324
代表單鍵或雙鍵。 Emb 14. 如Emb 2-4或13中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係具有式II-l之糖皮質類固醇之單價基團，其中：R1 選自由氫及鹵基組成之群；R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群；R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00325
及
Figure TW201801749AD00326
組成之群；R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群；R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH及C1-4 烷氧基組成之群；R3d 及R3e 獨立地選自氫及C1-4 烷基；X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -及-C≡C-組成之群；或X係不存在；t係1或2；Z選自由=CR11a -及=N-組成之群；每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基；R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R6a 、R6c 、R6d 及R6e 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；Y2 選自由-O-、-S-及-N(R7a )-組成之群；或Y2 係不存在；R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00327
代表單鍵或雙鍵。 Emb 15. 如Emb 14之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係具有式II-m之糖皮質類固醇之單價基團。 Emb 16. 如Emb 14之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係具有式II-n之糖皮質類固醇之單價基團。 Emb 17. 如Emb 2-4或13中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係具有式II-o之糖皮質類固醇之單價基團，其中：R1 選自由氫及鹵基組成之群；R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群；R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00328
及
Figure TW201801749AD00329
組成之群；R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群；R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH及C1-4 烷氧基組成之群；R3d 及R3e 獨立地選自氫及C1-4 烷基；X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -及-C≡C-組成之群；或X係不存在；t係1或2；Z選自由=CR11a -及=N-組成之群；每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基；R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R6a 、R6b 、R6d 及R6e 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；Y2 選自由-O-、-S-及-N(R7a )-組成之群；或Y2 係不存在；R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00330
代表單鍵或雙鍵。 Emb 18. 如Emb 17之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係具有式II-p之糖皮質類固醇之單價基團。 Emb 19. 如Emb 17之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係具有式II-q之糖皮質類固醇之單價基團。 Emb 20. 如Emb 5-19中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中
Figure TW201801749AD00331
代表雙鍵。 Emb 21. 如Emb 5-20中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R1 選自由氫及氟組成之群。 Emb 22. 如Emb 5-21中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R2 選自由氫及氟組成之群。 Emb 23. 如Emb 5、6或13-22中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R3 選自由-CH2 OH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F及羥基組成之群。 Emb 24. 如Emb 5、6或13-22中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R3 選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00332
及
Figure TW201801749AD00333
； R3a 選自由氫及甲基組成之群；R3b 選自由甲基、乙基、異丙基、異丁基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基及異丁氧基組成之群；R3c 選自由氫、甲基、乙基、-CH2 OH、甲氧基、乙氧基及異丙氧基組成之群；R3d 及R3e 獨立地選自由氫、甲基及乙基組成之群。 Emb 25. 如Emb 5-8或11-24中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R5 及R8a 獨立地選自由氫及甲基組成之群。 Emb 26. 如Emb 5-8、11-25中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中Z係=CH-。 Emb 27. 如Emb 5-8或11-25中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中Z係=N-。 Emb 28. 如Emb 5-8或11-27中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R6a 、R6d 及R6e 係氫。 Emb 29. 如Emb 13-28中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中Y2 係-N(R7a )-。 Emb 30. 如Emb 29之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7a 選自由氫及甲基組成之群。 Emb 31. 如Emb 30之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7a 係氫。 Emb 32. 如Emb 30之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7a 係甲基。 Emb 33. 如Emb 5-8或13-32中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中：X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-CH2 S-及-N(H)CH(R8a )-組成之群；t係1；R4a 及R4b 獨立地選自由氫及甲基組成之群；或R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3員環烷基；且R8a 選自由氫及甲基組成之群。 Emb 34. 如Emb 33之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X係-CH2 -。 Emb 35. 如Emb 33之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00334
及
Figure TW201801749AD00335
。 Emb 36. 如Emb 33之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X係-O-。 Emb 37. 如Emb 33之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X係-S-。 Emb 38. 如Emb 33之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X係-CH2 S-。 Emb 39. 如Emb 33之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X係-N(H)CH2 -。 Emb 40. 如Emb 33之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00336
及
Figure TW201801749AD00337
。 Emb 41. 如Emb 13-16或20-40中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R6c 選自由氫、-Cl、-OCH3 及羥基組成之群。 Emb 42. 如Emb 13或17-40中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R6b 選自由氫、-Cl、-OCH3 及羥基組成之群。 Emb 43. 如Emb 13-42中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R9f 係氫。 Emb 44. 如Emb 13-42中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R9f 係甲基。 Emb 45. 如Emb 13-44中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R11a 選自由氫及羥基組成之群。 Emb 46. 如Emb 13-44中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R11b 係氫。 Emb 47. 如Emb 1-46中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中L係可裂解連接體。 Emb 48. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中可裂解連接體包含琥珀醯亞胺、醯胺、硫脲、硫醚、肟或自消性基團或其組合。 Emb 49. 如Emb 1-48中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中可裂解連接體包含肽。 Emb 50. 如Emb 49之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中可裂解連接體包含三肽。 Emb 51. 如Emb 49之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中可裂解連接體包含二肽。 Emb 52. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中可裂解連接體包含磷酸酯。 Emb 53. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中可裂解連接體包含焦磷酸二酯。 Emb 54. 如Emb 1-53中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中Q係不存在。 Emb 55. 如Emb 1-53中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中Q係選自由Q-1、Q-2、Q-3、Q-4、Q-5及Q-6組成之群之異二官能基，其中m係1、2、3、4、5或6。 Emb 56. 如Emb 1-53中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中Q係為Q-7之異三官能基。 Emb 57. 如Emb 55之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中Q選自由Q-1、Q-2、Q-3及Q-4組成之群。 Emb 58. 如Emb 57之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中Q選自由Q-3及Q-4組成之群。 Emb 59. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-1；m係1或2；且R10a 及R10b 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。 Emb 60. 如Emb 59之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-2。 Emb 61. 如Emb 59之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-3。 Emb 62. 如Emb 59之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-4。 Emb 63. 如Emb 59之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-5。 Emb 64. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-6；m係1或2；且R10a 及R10b 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。 Emb 65. 如Emb 64之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-7。 Emb 66. 如Emb 64之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-8。 Emb 67. 如Emb 64之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-9。 Emb 68. 如Emb 64之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係：LQ-10。 Emb 69. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中L係不可裂解連接體。 Emb 70. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中連接體包含一或多個聚乙二醇單元。 Emb 71. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-11；m係1或2；且x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。 Emb 72. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-12；m係1或2；且x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。 Emb 73. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-14；m係1或2；x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15；且R10a 及R10b 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。 Emb 74. 如Emb 73之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-15。 Emb 75. 如Emb 73之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-16。 Emb 76. 如Emb 73之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-17。 Emb 77. 如Emb 73之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-18。 Emb 78. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-19；m係1或2；x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15；且R10a 及R10b 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。 Emb 79. 如Emb 78之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-20。 Emb 80. 如Emb 78之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-21。 Emb 81. 如Emb 78之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-22。 Emb 82. 如Emb 78之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-23。 Emb 83. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-13；且x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。 Emb 84. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-29；且x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。 Emb 85. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-24；x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15；且R10a 及R10b 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。 Emb 86. 如Emb 85之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-25。 Emb 86A. 如Emb 85之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-26。 Emb 87. 如Emb 85之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-27。 Emb 88. 如Emb 85之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-28。 Emb 89. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-30；x係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15；且R10a 及R10b 獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。 Emb 90. 如Emb 89之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-31。 Emb 91. 如Emb 89之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-32。 Emb 92. 如Emb 89之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-33。 Emb 93. 如Emb 89之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係LQ-34。 Emb 94. 如Emb 55、59-68或71-82中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中m係2。 Emb 95. 如Emb 1-47中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中-L-Q-係表I化學結構中之任一者。 Emb 96. 如Emb 1-95中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中n係2-8。 Emb 97. 如Emb 96之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中n係2-5。 Emb 98. 如Emb 1-95中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中n係2。 Emb 99. 如Emb 1-95中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中n係4。 Emb 100. 如Emb 1或47-99中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係糖皮質類固醇之單價基團，其為表II化學結構中之任一者。 Emb 101. 如Emb 100之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中SM係選自由以下組成之群之糖皮質類固醇之單價基團：
Figure TW201801749AD00338
及
Figure TW201801749AD00339
Emb 102. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 係抗體或其抗原結合片段，或其中A2 係抗體或其抗原結合片段。 Emb 103. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 係結合至人類TNF α及/或鼠類TNF α之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係結合至人類TNF α及/或鼠類TNF α之蛋白質。 Emb 104. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 係結合至可溶性TNF α之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係結合至可溶性TNF α之蛋白質。 Emb 105. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 係結合至膜結合TNF α之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係結合至膜結合TNF α之蛋白質。 Emb 106. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 係包含抗TNF抗體之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係包含抗TNF抗體之蛋白質。 Emb 107. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 係包含抗TNF抗體之抗原結合片段之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係包含抗TNF抗體之抗原結合片段之蛋白質。 Emb 108. 如Emb 102-105或107中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中抗原結合片段選自由以下組成之群：Fab、Fab'、F(ab')2、單鏈Fv或scFv、二硫鍵連接之Fv、V-NAR結構域、IgNar、內抗體、IgGΔCH2、微小抗體、F(ab')3、四價抗體、三價抗體、雙價抗體、單結構域抗體、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2或scFv-Fc。 Emb 109. 如Emb 1-108中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中抗體或其抗原結合片段為鼠類、嵌合、人類化或人類。 Emb 110. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 係包含可溶性TNF受體之抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白，或其中A2 係包含可溶性TNF受體之蛋白質。 Emb 111. 如Emb 110之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中可溶性TNF受體係可溶性p75 TNF受體。 Emb 112. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 包含重鏈恆定結構域或其片段，或其中A2 包含重鏈恆定結構域或其片段。 Emb 113. 如Emb 112之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中重鏈恆定結構域或其片段包含選自由以下組成之群之恆定結構域：(a) IgA恆定結構域；(b) IgD恆定結構域；(c) IgE恆定結構域；(d) IgG1恆定結構域；(e) IgG2恆定結構域；(f) IgG3恆定結構域；(g) IgG4恆定結構域；及(h) IgM恆定結構域，或係其片段。 Emb 114. 如Emb 113之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中重鏈恆定結構域包含人類IgG1重鏈恆定結構域或其片段。 Emb 115. 如Emb 114之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中重鏈恆定結構域包含人類IgG1 Fc結構域。 Emb 116. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 包含輕鏈恆定結構域或其片段，或其中A2 包含輕鏈恆定結構域或其片段。 Emb 117. 如Emb 116之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中輕鏈恆定結構域或其片段包含選自由以下組成之群之恆定結構域：(a) Ig κ恆定結構域及(b) Ig λ恆定結構域，或係其片段。 Emb 118. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 競爭性抑制選自由阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗及戈利木單抗組成之群之抗體與TNF-α之結合，或其中A2 競爭性抑制選自由阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗及戈利木單抗組成之群之抗體與TNF-α之結合。 Emb 119. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 結合至與選自由阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗及戈利木單抗組成之群之抗體相同之TNF-α表位，或其中A2 結合至與選自由阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗及戈利木單抗組成之群之抗體相同之TNF-α表位。 Emb 120. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中抗TNF α蛋白或蛋白質選自由以下組成之群：阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗及戈利木單抗。 Emb 121. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 包含分別SEQ ID NO:3或6、SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5之可變重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列以及分別SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、及SEQ ID NO:34之可變輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列，或其中A2 包含分別SEQ ID NO:3或6、SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5之可變重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列以及分別SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33及SEQ ID NO:34之可變輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列。 Emb 122. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 包含SEQ ID NO:50之可變重鏈序列及SEQ ID NO:59之可變輕鏈序列，或其中A2 包含SEQ ID NO:50之可變重鏈序列及SEQ ID NO:59之可變輕鏈序列。 Emb 123. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 不與TNF β結合，或其中A2 不與TNF β結合。 Emb 124. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 結合至TNF β，或其中A2 結合至TNF β。 Emb 125. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 在標準活體外L929分析中中和人類TNF-α細胞毒性且IC50為1×10-7 M或更小，或其中A2 在標準活體外L929分析中中和人類TNF-α細胞毒性且IC50為1×10-7 M或更小。 Emb 126. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 阻斷TNF-α與p55及p75細胞表面受體之相互作用，或其中A2 阻斷TNF-α與p55及p75細胞表面受體之相互作用。 Emb 127. 如Emb 1-101中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中A1 在活體外在補體存在下溶解表面TNF表現細胞，或其中A2 在活體外在補體存在下溶解表面TNF表現細胞。 Emb 128. 如Emb 111之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中可溶性p75 TNF受體係依那西普。 Emb 129. 如Emb 102之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中抗體係阿達木單抗。 Emb 130. 如Emb 1-101中任一者之化合物，其中A1 結合至Fc γ受體，或其中A2 結合至Fc γ受體。 Emb 131. 如Emb 1-101中任一者之化合物，其中A1 在GRE跨膜TNF-α報導基因分析及/或L929分析中有活性，或其中A2 在GRE跨膜TNF-α報導基因分析及/或L929分析中有活性。 Emb 132. 如Emb 1或102-131中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表III化學結構中之任一者，其中n係1-5且A係A1 或A2 。 Emb 133. 如Emb 132之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表IV化學結構中之任一者，其中A係A1 或A2 。 Emb 134. 如Emb 1或102-131中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表V化學結構中之任一者，其中n係1-5且A係A1 或A2 。 Emb 135. 如Emb 134之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中n係2或4。 Emb 136. 一種醫藥組合物，其包含如Emb 1-135中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物及醫藥上可接受之載劑。 Emb 137. 一種醫藥組合物，其包含複數種如Emb 1-135中任一者之化合物或其醫藥鹽或溶劑合物，其中醫藥組合物中之化合物具有平均1至10個SM-L-Q/A1 或A2 (即n係1-10)、2至6個SM-L-Q/A1 或A2 、3至4個SM-L-Q/A1 或A2 、約2個SM-L-Q/A1 或A2 、約3個SM-L-Q/A1 或A2 或約4個SM-L-Q/A1 或A2 。 Emb 138. 一種溶解表現表面TNF-α之細胞之方法，其包含使細胞與如Emb 1-135中任一者之化合物或如Emb 136或137之醫藥組合物接觸。 Emb 139. 一種治療有需要之患者之自體免疫疾病之方法，其包含向該患者投與如Emb 1-135中任一者之化合物或如Emb 136或137之醫藥組合物。 Emb 140. 如Emb 139之方法，其中該自體免疫疾病係類風濕性關節炎、幼年型特發性關節炎、牛皮癬關節炎、關節黏連性脊椎炎、成人克隆氏病、小兒克隆氏病、潰瘍性結腸炎、斑塊狀牛皮癬、化膿性汗腺炎、眼色素層炎、貝切特氏病、脊椎關節病或牛皮癬。 Emb 141. 一種治療有需要之患者之特徵在於增加的滑液TNF-α之疾病或病症之方法，其包含向該患者投與如Emb 1-135中任一者之化合物或如Emb 136或137之醫藥組合物。 Emb 142. 一種具有式VII之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中：R1 選自由氫及鹵基組成之群；R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群；R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00340
及
Figure TW201801749AD00341
組成之群；R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群；R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH及C1-4 烷氧基組成之群；R3d 及R3e 獨立地選自氫及C1-4 烷基；X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -及-C≡C-組成之群；或X係不存在；t係1或2；Z選自由=CR11a -及=N-組成之群；每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基；R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R6a 、R6b 、R6c 及R6d 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R7b 選自由氫、-L-H、-L-PG、
Figure TW201801749AD00342
及
Figure TW201801749AD00343
組成之群；m係1、2、3、4、5或6；L係連接體；PG係保護基團；R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00344
代表單鍵或雙鍵。 Emb 143. 如Emb 142之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 選自由R7b -1、R7b -2及R7b -3組成之群；m係1、2、3、4、5或6；且R10a 及R10b 各自獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。 Emb 144. 如Emb 142或143之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其具有式VIII。 Emb 145. 如Emb 144之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其具有式VIII-a。 Emb 146. 如Emb 144之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其具有式VIII-b。 Emb 147. 如Emb 142之化合物或143或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其具有式IX。 Emb 148. 如Emb 147之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其具有式IX-a。 Emb 149. 如Emb 147之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其具有式IX-b。 Emb 150. 如Emb 142-149中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中
Figure TW201801749AD00345
代表雙鍵。 Emb 151. 如Emb 142-150中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R1 選自由氫及氟組成之群。 Emb 152. 如Emb 142-151中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R2 選自由氫及氟組成之群。 Emb 153. 如Emb 142-152中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R3 選自由-CH2 OH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F及羥基組成之群。 Emb 154. 如Emb 142-152中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R3 選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00346
及
Figure TW201801749AD00347
； R3a 選自由氫及甲基組成之群；R3b 選自由甲基、乙基、異丙基、異丁基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基及異丁氧基組成之群；R3c 選自由氫、甲基、乙基、-CH2 OH、甲氧基、乙氧基及異丙氧基組成之群；R3d 及R3e 獨立地選自由氫、甲基及乙基組成之群。 Emb 155. 如Emb 142-154中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R5 及R8a 獨立地選自由氫及甲基組成之群。 Emb 156. 如Emb 142-155中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中Z係=CH-。 Emb 157. 如Emb 142-155中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中Z係=N-。 Emb 158. 如Emb 142-155中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7a 選自由氫及甲基組成之群。 Emb 159. 如Emb 158之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7a 係氫。 Emb 160. 如Emb 158之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7a 係甲基。 Emb 161. 如Emb 142-160中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中： X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、 -S(=O)-、-S(=O)2 -、-CH2 S-及-N(H)CH(R8a )-組成之群；t係1；且R4a 及R4b 獨立地選自由氫及甲基組成之群；或R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3員環烷基。 Emb 162. 如Emb 161之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X係-CH2 -。 Emb 163. 如Emb 161之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00348
及
Figure TW201801749AD00349
。 Emb 164. 如Emb 161之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X係-O-。 Emb 165. 如Emb 161之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X係-S-。 Emb 166. 如Emb 161之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X係-CH2 S-。 Emb 167. 如Emb 161之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X係-N(H)CH2 -。 Emb 168. 如Emb 161之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中X選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00350
及
Figure TW201801749AD00351
。 Emb 169. 如Emb 142-168中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R11b 係氫。 Emb 170. 如Emb 142-169中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係氫。 Emb 171. 如Emb 142-170中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R6b 選自由氫、-Cl、-OCH3 及羥基組成之群。 Emb 172. 如Emb 142-171中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R9f 係氫。 Emb 173. 如Emb 142-171中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R9f 係甲基。 Emb 174. 如Emb 142-173中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R11a 選自由氫及羥基組成之群。 Emb 175. 如Emb 142-174中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R11b 係氫。 Emb 176. 如Emb 143-175中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -1。 Emb 177. 如Emb 176之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R10a 及R10b 獨立地係視情況經取代之C1-6 烷基。 Emb 178. 如Emb 143-175中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -2，且PG係BOC。 Emb 179. 如Emb 178之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R10a 及R10b 獨立地係視情況經取代之C1-6 烷基。 Emb 180. 如Emb 143-175中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -3。 Emb 181. 如Emb 180之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中m係1或2，且R10a 及R10b 各自係視情況經取代之C1-6 烷基。 Emb 182. 如Emb 142之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表VI化合物中之任一或多者。 Emb 183. 如Emb 182之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00352
及
Figure TW201801749AD00353
。 Emb 184. 如Emb 142之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表VIII化學結構中之任一或多者，其中R7b 選自由R7b -4、R7b -5及R7b -6組成之群。 Emb 185. 如Emb 184之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -4。 Emb 186. 如Emb 184之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -5。 Emb 187. 如Emb 184之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -6。 Emb 188. 如Emb 142之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表VIII化學結構中之任一或多者， 其中R7b 係表IX化學結構中之任一者。 Emb 189. 如Emb 142之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表X化合物中之任一者。 Emb 190. 如Emb 142之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表VII化合物中之任一者。 Emb 191. 如Emb 190之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00354
及
Figure TW201801749AD00355
Emb 192. 如Emb 142之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表XI化合物中之任一者， 其中R7b 選自由R7b -4、R7b -5及R7b -6組成之群。 Emb 193. 如Emb 192之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -4。 Emb 194. 如Emb 192之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -5。 Emb 195. 如Emb 192之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -6。 Emb 196. 如Emb 142之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表XI化學結構中之任一者， 其中R7b 係表IX結構中之任一者。 Emb 197. 如Emb 142之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表XII化合物中之任一者。 Emb 198. 一種醫藥組合物，其包含如Emb 142-197中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物(其中R7b 係氫)及醫藥上可接受之載劑。 Emb 199. 一種治療有需要之患者之自體免疫或發炎性疾病之方法，該方法包含向該患者投與如Emb 142-197中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物(其中R7b 係氫)或如Emb 198之醫藥組合物。 Emb 200. 如Emb 199之方法，其中該自體免疫疾病係類風濕性關節炎、幼年型特發性關節炎、牛皮癬關節炎、關節黏連性脊椎炎、成人克隆氏病、小兒克隆氏病、潰瘍性結腸炎、斑塊狀牛皮癬或化膿性汗腺炎。 Emb 201. 一種製備具有式I-c之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物之方法，其中：A1 係抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白；L係連接體；n係1-10；且SM係糖皮質類固醇之基團，該方法包含：a) 使具有式X之化合物與抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白結合；及b) 分離具有式I-c之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 Emb 202. 如Emb 201之方法，其進一步包含使具有式I-c之化合物水解以獲得具有式I-d之化合物。 Emb 203. 一種製備具有式I-e之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物之方法，其中：A1 係抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白；L係連接體；R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；n係1-10；m係1、2、3、4、5或6；且SM係糖皮質類固醇之基團，該方法包含：a) 使具有式XI之化合物與抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白結合；及b) 分離具有式I-e之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 Emb 204. 如Emb 203之方法，其進一步包含使具有式I-e之化合物水解以獲得具有式I-f之化合物。 Emb 205. 如Emb 182之化合物，其係
Figure TW201801749AD00356
或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 Emb 206. 如Emb 182之化合物，其係
Figure TW201801749AD00357
或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 Emb 207. 如Emb 182之化合物，其係
Figure TW201801749AD00358
或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 Emb 208. 如Emb 189之化合物，其係
Figure TW201801749AD00359
或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 Emb 209. 如Emb 132之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表IV化學結構中之任一者，其中A係A1 或A2 。 本發明亦提供Emb I-XXXIII作為具體實施例。Emb I-XXXII中未顯示之提及該等具體實施例之式及表闡述於上文說明中。 Emb I. 一種具有式I-a 之化合物： (SM-L-Q)n -A1 I-a 其中：A1 係抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白；L係連接體；Q係異二官能基或異三官能基；或Q係不存在；n係1-10；且SM係糖皮質類固醇之單價基團。 Emb II. 一種具有式I-b 之化合物： (SM-L-Q)n -A2 I-b 其中A2 係蛋白質；L係連接體；Q係異二官能基或異三官能基；或Q係不存在；n係1-10；且SM係具有式II-m 或式II-p 之糖皮質類固醇之基團；R1 選自由氫及鹵基組成之群；R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群；R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00360
及
Figure TW201801749AD00361
組成之群；R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R3b 選自由C1- 4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群；R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH及C1-4 烷氧基組成之群；R3d 及R3e 獨立地選自氫及C1-4 烷基；R6a 、R6b 、R6c 、R6d 及R6e 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -及-C≡C-組成之群；或X係不存在；Y2 選自由-O-、-S-及-N(R7a )-組成之群；或Y2 係不存在；t係1或2；Z選自由=CR11a -及=N-組成之群；每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基；R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00362
代表單鍵或雙鍵。 Emb III. 如Emb I或II之化合物，其中SM係具有式II-m 之糖皮質類固醇之基團；R1 選自由氫及鹵基組成之群；R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群；R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00363
及
Figure TW201801749AD00364
組成之群；R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群；R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH及C1-4 烷氧基組成之群；R3d 及R3e 獨立地選自氫及C1-4 烷基；R6a 、R6c 、R6d 及R6e 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -及-C≡C-組成之群；或X係不存在；Y2 選自由-O-、-S-及-N(R7a )-組成之群；或Y2 係不存在；t係1或2；Z係=CH-；每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基；R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R11b 選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00365
代表單鍵或雙鍵。 Emb IV. 如Emb II或III之化合物，其中
Figure TW201801749AD00366
代表雙鍵；R1 選自由氫及氟組成之群；R2 選自由氫及氟組成之群；R3 選自由-CH2 OH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F及
Figure TW201801749AD00367
組成之群；R3d 及R3e 獨立地選自由氫、甲基及乙基組成之群；R6a 、R6c 、R6d 及R6e 係氫；X選自由-CH2 -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-CH2 S-及-N(H)CH2 -組成之群；Y2 係-N(H)-；Z係=CH-；R9f 係氫；且R11b 係氫。 Emb V. 如Emb I-IV中任一者之化合物，其中L係包含二肽之連接體。 Emb VI. 如Emb I-V中任一者之化合物，其中Q係選自由Q-3及Q-4組成之群之異二官能基且m係1、2、3或4。 Emb VII. 如Emb I-VII中任一者之化合物，其中-L-Q-係LQ-7；m係2或3；且R10a 及R10b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群。 Emb VIII. 如Emb I-VII中任一者之化合物，其中n係2-5。 Emb IX. 如Emb I或II之化合物，其中SM係糖皮質類固醇之單價基團，其為表II化合物中之任一者。 Emb X. 如Emb I或III-IX中任一者之化合物，其中A1 係(i) 結合至人類TNF α之抗體或其抗原結合片段或(ii) 可溶性TNF受體。 Emb XI. 如Emb I或III-X中任一者之化合物，其中A1 選自由以下組成之群：阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗及戈利木單抗。 Emb XII. 如Emb I之化合物，其為表III化合物中之任一或多者，其中n係1-5；A係A1 ；且A1 選自由以下組成之群：阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗及戈利木單抗。 Emb XIII. 如Emb II之化合物，其為表III化合物中之任一或多者，其中n係1-5；A係A2 ；且A2 選自由抗體、其抗原結合片段或可溶性受體蛋白組成之群。 Emb XIV. 一種化合物，其選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00368
Figure TW201801749AD00369
其中n係1-5且A係包含分別SEQ ID NO:66及SEQ ID NO:73之重鏈及輕鏈序列之抗體。 Emb XV. 如Emb XIV之化合物，其選自由以下組成之群：
Figure TW201801749AD00370
 Emb XVI. 如Emb XIV之化合物，其中該化合物係
Figure TW201801749AD00371
 Emb XVII. 如Emb XIV之化合物，其中該化合物係
Figure TW201801749AD00372
 Emb XVIII.如Emb XIV之化合物，其中該化合物係
Figure TW201801749AD00373
 Emb XIX.如Emb XIV之化合物，其中該化合物係
Figure TW201801749AD00374
 Emb. XX. 如Emb XIV之化合物，其中該化合物係
Figure TW201801749AD00375
 Eb.XXI. 如Emb XIV之化合物，其中該化合物係
Figure TW201801749AD00376
 Emb XXII. 一種醫藥組合物，其包含如Emb I-XXI之化合物及醫藥上可接受之載劑。 Emb XXIII. 一種治療有需要之患者之自體免疫疾病之方法，其包含向該患者投與如Emb I-XXI之化合物或如Emb XXII之醫藥組合物，視情況其中該自體免疫疾病係類風濕性關節炎、幼年型特發性關節炎、牛皮癬關節炎、關節黏連性脊椎炎、成人克隆氏病、小兒克隆氏病、潰瘍性結腸炎、斑塊狀牛皮癬、化膿性汗腺炎、眼色素層炎、貝切特氏病、脊椎關節病或牛皮癬。 Emb XXIV. 一種具有式VII 之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R1 選自由氫及鹵基組成之群；R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群；R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、-CH2 OS(=O)2 OH、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00377
、
Figure TW201801749AD00378
及
Figure TW201801749AD00379
組成之群；R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群；R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH、C1-4 烷氧基、-CH2 (胺基)及-CH2 CH2 C(=O)OR3f 組成之群；R3d 及R3e 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R3f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -、-C≡C-、-N(R5 )C(=O)-及-OC(=O)-組成之群；或X係不存在；t係1或2；Z選自由=CR11a -及=N-組成之群；每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基；R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R6a 、R6b 、R6c 及R6d 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R7b 選自由氫、-L-H、-L-PG、
Figure TW201801749AD00380
及
Figure TW201801749AD00381
組成之群；或R7a 及R7b 與其所附接之氮原子一起形成：
Figure TW201801749AD00382
；或R7a 及R7b 與其所附接之氮原子一起形成硝基(-NO2 )；m係1、2、3、4、5或6；L係連接體；PG係保護基團；R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00383
代表單鍵或雙鍵。 Emb XXV. 一種具有式VII-A 或式VII-B 之化合物：
Figure TW201801749AD00384
或
Figure TW201801749AD00385
， 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中： R1 選自由氫及鹵基組成之群； R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群； R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、-CH2 OS(=O)2 OH、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
Figure TW201801749AD00386
及
Figure TW201801749AD00387
組成之群； R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群； R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH、C1-4 烷氧基、-CH2 (胺基)及-CH2 CH2 C(=O)OR3f 組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -、-C≡C-、-N(R5 )C(=O)-及-OC(=O)-組成之群；或 X係不存在； t係1或2； Z選自由=CR11a -及=N-組成之群； 每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或 R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基； R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R6a 、R6b 及R6c 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群； R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R7b 選自由氫、-L-H、-L-PG、
Figure TW201801749AD00388
及
Figure TW201801749AD00389
組成之群；或 R7a 及R7b 與其所附接之氮原子一起形成：
Figure TW201801749AD00390
； m係1、2、3、4、5或6； L係連接體； PG係保護基團； R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
Figure TW201801749AD00391
代表單鍵或雙鍵。 Emb XXVI. 如Emb XXIV或XXV之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 選自由R7b -1、R7b -2及R7b -3組成之群；m係1、2、3、4、5或6；且R10a 及R10b 各自獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。 Emb XXVII. 如Emb XXIV或XXVI之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其具有式VIII-a 。 Emb XXVIII. 如Emb XXIV-XXVII中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中
Figure TW201801749AD00392
代表雙鍵；R1 選自由氫及氟組成之群；R2 選自由氫及氟組成之群；R3 選自由-CH2 OH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F及
Figure TW201801749AD00393
組成之群；R3d 及R3e 獨立地選自由氫、甲基及乙基組成之群；Z係=CH-；R6a 、R6b 、R6c 及R6d 係氫；R7a 係氫；X選自由-CH2 -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-CH2 S-及-N(H)CH2 -組成之群；R9f 係氫；且R11b 係氫。 Emb XXIX. 如Emb XXIV-XXVIII中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係氫。 Emb XXX. 如Emb XXIV-XXVIII中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -1。 Emb XXXI. 如Emb XXIV-XXVIII中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -2，且PG係BOC。 Emb XXXII. 如Emb XXIV-XXVIII中任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -3。 Emb XXXIII. 如Emb XXIX之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表VI化合物中之任一或多者。 Emb XXXIV. 如Emb XXIX之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表VII化合物中之任一者。 Emb XXXV. 如Emb XXXIII之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其係：
Figure TW201801749AD00394
。 Emb XXXVI. 如Emb XXIV之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表VIII化合物中之任一或多者，其中R7b 選自由R7b -4、R7b -5及R7b -6組成之群。 Emb XXXVII. 如Emb XXIV之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其為表X化合物中之任一或多者。 Emb XXXVIII. 如Emb XXXVII之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其係：
Figure TW201801749AD00395
。 Emb XXXIX. 一種製備具有式I-e 之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物之方法，
Figure TW201801749AD00396
， 其中A係A1 或A2 ；A1 係抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白；A2 係蛋白質；L係連接體；R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；n係1-10；m係1、2、3、4、5或6；且SM係糖皮質類固醇之基團， 該方法包含： a) 使具有式XI 之化合物：
Figure TW201801749AD00397
， 與抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白或蛋白質結合；及 b) 分離具有式I-e 之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 Emb XL. 如Emb XXXIV之方法，其進一步包含使具有式I-e 之化合物水解以獲得具有式I-f 之化合物：
Figure TW201801749AD00398
， 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 Emb XLI. 一種化合物，其係：
Figure TW201801749AD00399
其中A係阿達木單抗。 Emb XLII. 一種組合物，其包含如Emb XLI之化合物。 本發明實施例可進一步藉由參考以下非限制性實例來定義，該等實例詳細闡述某些本發明抗體之製備及使用本發明抗體之方法。熟習此項技術者應明瞭，可在不背離本發明之範疇下實踐材料及方法二者之許多修改。 實例 應理解，本文所述之實例及實施例僅出於說明之目的，且基於其之各種修改或變化應為熟習此項技術者所瞭解且意欲包括在本發明之精神及範圍內。 化合物合成及表徵之分析方法 在一般程序之說明或實例之表中，將分析數據納入以下程序內。除非另外陳述，否則所有1 H及13 C NMR數據皆係在Varian Mercury Plus 400 MHz或Bruker AVIII 300 MHz儀器上收集；化學位移以百萬分率(ppm)引述。使用表7中所提供之方法，HPLC分析數據詳述於實驗內或參考LC/MS及HPLC條件之表。 表7：LC/MS及GC/MS方法之列表
Figure TW201801749AD00400
 用於以下實例中之縮寫：
Figure TW201801749AD00401
 實例 1 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(4-胺基苯氧基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮步驟 1 ： 合成(4-(4-甲醯基苯氧基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00402
向(4-羥基苯基)胺基甲酸第三丁基酯(10 g, 47.8 mmol)及4-氟苯甲醛(11.86 g, 96 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(100 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(39.6 g, 287 mmol)。將混合物在90℃下攪拌5小時。如上文所述設置另一瓶。合併所有兩瓶反應混合物且用DCM (300 mL)稀釋，然後用水(3 × 100 mL)萃取。用鹽水(100 mL)洗滌有機層且經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由管柱層析(用PE: EtOAc = 30:1至5:1溶析)純化殘餘物，以獲得黃色固體狀目標化合物(20 g, 63.8 mmol, 66.7%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.91 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 7.90 (d,J =8.6 Hz, 2H), 7.54 (d,J =8.8 Hz, 2H), 7.11 - 7.02 (m, 4H), 1.48 (s, 9H)。步驟 2 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(4-胺基苯氧基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00403
將(6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-二氟-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(4.5 g, 10.91 mmol)及硫酸鎂(6.57 g, 54.6 mmol)於MeCN (100 mL)中之懸浮液在20℃下攪拌1小時。一次性添加(4-(4-甲醯基苯氧基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(3.42 g, 10.91 mmol)於MeCN (100 mL)中之溶液。經由注射器逐滴添加三氟甲磺酸(4.84 mL, 54.6 mmol)，利用冰浴同時維持25℃之內部溫度。添加後，將混合物在20℃下攪拌2小時。如上文所述設置另外三瓶。合併所有四瓶反應混合物且過濾，在減壓下濃縮濾液以獲得殘餘物，藉由製備型HPLC純化該殘餘物，以獲得黃色固體狀目標化合物(7.5 g, 12.34 mmol, 28.8%產率)。LCMS (方法a，表7) Rt = 2.21 min; MS m/z = 608.3 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.36 (d,J =8.6 Hz, 2H), 7.27 (d,J =10.1 Hz, 1H), 6.85 (d,J =8.6 Hz, 2H), 6.75 (d,J =8.6 Hz, 2H), 6.58 (d,J =8.6 Hz, 2H), 6.29 (dd,J =1.3, 10.1 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.76 - 5.65 (m, 1H), 5.62 - 5.57 (m, 1H), 5.54 (d,J =3.1 Hz, 1H), 5.44 (s, 1H), 5.12 (t,J =5.8 Hz, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.94 (d,J =4.9 Hz, 1H), 4.53 (dd,J =6.4, 19.4 Hz, 1H), 4.26 - 4.14 (m, 2H), 2.72 - 2.58 (m, 1H), 2.34 - 2.17 (m, 2H), 2.04 (d,J =13.7 Hz, 1H), 1.77 - 1.62 (m, 3H), 1.49 (s, 3H), 0.86 (s, 3H)。製備型HPLC方法：儀器：Gilson 281半製備型HPLC系統，移動相：A：CF3 CO2 H/H2 O = 0.075% v/v；B：CH3 OH；管柱：Phenomenex Luna C18 250*50 mm*10 um；流速：80 mL/min；監測波長：220 nm及254 nm。
Figure TW201801749AD00404
 實例 2 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮步驟 1 ： 合成4-(溴甲基)苯甲醛
Figure TW201801749AD00405
經1小時，將二異丁基氫化鋁(153 mL, 153 mmol, 1 M於甲苯中)逐滴添加至4-(溴甲基)苯甲腈(20 g, 102 mmol)於甲苯(400 mL)中之0℃溶液中。如上文所述設置另外兩瓶。合併所有三瓶反應混合物。向混合物溶液中添加10% HCl水溶液(1.5 L)。用DCM (3 × 500 mL)萃取混合物。經Na2 SO4 乾燥有機層，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠上之管柱層析(用PE/EtOAc = 10/1溶析)純化殘餘物，以獲得白色固體狀目標化合物(50 g，產率82%)。1 H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 10.02 (s, 1H), 7.91 - 7.82 (m, 2H), 7.56 (d,J =7.9 Hz, 2H), 4.55 - 4.45 (m, 2H)。步驟 2 ： 合成3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯胺
Figure TW201801749AD00406
向3-溴苯胺(40 g, 233 mmol)於1,4-二噁烷(480 mL)中之溶液中添加4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-雙(1,3,2-二氧雜硼烷) (94 g, 372 mmol)、乙酸鉀(45.6 g, 465 mmol)、2-二環己基膦基-2',4',6'-三-異丙基-1,1'-聯苯(X-phos) (8.07 g, 13.95 mmol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (8.52 g, 9.30 mmol)。然後將混合物在80℃下在氮下加熱4小時。如上文所述設置另一瓶。合併兩瓶反應混合物，濃縮且藉由矽膠上之管柱層析(用PE/EtOAc = 10/1溶析)純化殘餘物，以獲得淺黃色固體狀目標化合物(60 g，產率55.4%)。1 H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.80 (d,J =7.5 Hz, 1H), 3.82 - 3.38 (m, 2H), 1.34 (s, 12H)。步驟 3 ： 合成(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00407
將3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯胺(30 g, 137 mmol)及二碳酸二第三丁基酯(38.9 g, 178 mmol)於甲苯(600 mL)中於100℃下混合24小時。如上文所述設置另一瓶。合併兩瓶反應混合物。將棕色混合物蒸發，溶解於EtOAc (1.5 L)中，用0.1 N HCl (3 × 2 L)及鹽水(3 L)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮，以獲得紅色固體狀標題化合物(50 g，產率57%)。1 H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 7.63 (br. s., 2H), 7.48 (d,J =7.1 Hz, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 1H), 1.52 (s, 9H), 1.34 (s, 12H)。步驟 4 ： 合成(3-(4-甲醯基苄基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00408
將4-(溴甲基)苯甲醛(24.94 g, 125 mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II) DCM錯合物(13.75 g, 18.80 mmol)、(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(20 g, 62.7 mmol)及碳酸鉀(43.3 g, 313 mmol)於四氫呋喃(400 mL)中之混合物加熱至80℃並保持12小時。如上文所述設置另一瓶。合併兩瓶反應混合物。用水(500 mL)稀釋反應混合物。用EtOac (3 × 500 mL)萃取水層。經Na2 SO4 乾燥有機層，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠上之管柱層析(用PE/EtOAc = 10/1溶析)純化殘餘物，以獲得白色固體狀標題化合物(15 g，產率38.4%)。1 H NMR (400 MHz，氯仿-d) δ 9.95 (s, 1H), 7.78 (d,J =7.9 Hz, 2H), 7.33 (d,J =7.9 Hz, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.82 (d,J =7.1 Hz, 1H), 6.47 (br. s., 1H), 4.00 (s, 2H), 1.48 (s, 9H)。步驟 5 ： 合成(6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-二氟-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮
Figure TW201801749AD00409
將(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a,10,10-四甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮(20 g, 44.2 mmol)懸浮於40% HBF4 水溶液(440 mL)中，且將混合物在25℃下攪拌48小時。完成反應後，添加2 L H2 O且藉由過濾收集固體以獲得白色固體。用H2 O (1 L)且然後用MeOH (200 mL)洗滌此固體，以獲得白色固體狀標題化合物(11 g，產率60.3%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.25 (d,J =10.1 Hz, 1H), 6.28 (d,J =10.1 Hz, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.73 - 5.50 (m, 1H), 5.39 (br. s., 1H), 4.85 - 4.60 (m, 2H), 4.50 (d,J =19.4 Hz, 1H), 4.20 - 4.04 (m, 2H), 2.46 - 2.06 (m, 6H), 1.87 - 1.75 (m, 1H), 1.56 - 1.30 (m, 6H), 0.83 (s, 3H)。步驟 6 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00410
將(6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-二氟-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(4.4 g, 10.67 mmol)及硫酸鎂(6.42 g, 53.3 mmol)於MeCN (100 mL)中之懸浮液在20℃下攪拌1小時。一次性添加(3-(4-甲醯基苄基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(3.65 g, 11.74 mmol)於MeCN (100 mL)中之溶液。逐滴添加三氟甲磺酸(9.01 mL, 53.3 mmol)，同時利用冰浴維持內部溫度低於25℃。添加後，將混合物在20℃下攪拌2小時。如上文所述設置另外三瓶。合併所有四瓶反應混合物。濃縮混合物溶液且藉由製備型HPLC純化殘餘物，以獲得黃色固體狀標題化合物(4.5 g，產率14.2%)。LCMS (方法b，表7) Rt = 2.65 min; MS m/z = 606.2 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.44 - 7.17 (m, 5H), 6.89 (t,J =7.7 Hz, 1H), 6.44 - 6.25 (m, 4H), 6.13 (br. s., 1H), 5.79 - 5.52 (m, 2H), 5.44 (s, 1H), 5.17 - 4.89 (m, 3H), 4.51 (d,J =19.4 Hz, 1H), 4.25 - 4.05 (m, 2H), 3.73 (s, 2H), 3.17 (br. s., 1H), 2.75 - 2.55 (m, 1H), 2.36 - 1.97 (m, 3H), 1.76 - 1.64 (m, 3H), 1.59 - 1.39 (m, 4H), 0.94 - 0.78 (m, 3H)。製備型HPLC方法：儀器：Gilson 281半製備型HPLC系統；移動相：A：甲酸/H2 O=0.01% v/v；B：CH3 CN；管柱：Luna C18 150*25 5微米；流速：25 mL/min；監測波長：220 nm及254 nm。
Figure TW201801749AD00411
 實例 2A ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮(41號化合物)步驟 1 ： 合成4-(溴甲基)苯甲醛
Figure TW201801749AD00412
在0℃下，向4-(溴甲基)苯甲腈(50 g, 255 mmol)於甲苯(1 L)中之溶液中逐滴添加二異丁基氫化鋁(383 mL, 383 mmol, 1 M於甲苯中)。將混合物攪拌1小時。如上文所述設置另外兩瓶。合併所有三瓶反應混合物。添加10% HCl水溶液(1.5 L)且然後用DCM (3 × 1.5 L)萃取。經Na2 SO4 乾燥有機層，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠上之管柱層析(用石油醚/乙酸乙酯= 10/1溶析)純化殘餘物，以提供白色固體狀標題化合物(120 g, 82%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 10.01 (s, 1H), 7.86 (d,J =8.4 Hz, 2H), 7.55 (d,J =7.9 Hz, 2H), 4.51 (s, 2H)。步驟 2 ： 合成3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯胺
Figure TW201801749AD00413
向3-溴苯胺(80 g, 465 mmol)於1,4-二噁烷(960 mL)中之溶液中添加4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-雙(1,3,2-二氧雜硼烷) (177 g, 698 mmol)、乙酸鉀(91 g, 930 mmol)、2-二環己基膦基-2',4',6'-三-異丙基-1,1'-聯苯(13.45 g, 23.25 mmol)及參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (17.03 g, 18.60 mmol)。將混合物在80℃下在氮下加熱4小時。如上文所述設置另外兩瓶。合併三瓶反應混合物，濃縮且藉由矽膠上之管柱層析(用石油醚/乙酸乙酯= 10/1溶析)純化殘餘物，以提供淺黃色固體狀標題化合物(150 g, 46.6%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.80 (d,J =7.5 Hz, 1H), 3.82 - 3.38 (m, 2H), 1.34 (s, 12H)。步驟 3 ： 合成(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00414
將3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯胺(50 g, 228 mmol)及二碳酸二第三丁基酯(64.8 g, 297 mmol)混合於甲苯(500 mL)中，且將混合物在100℃下攪拌24小時。如上文所述設置另外兩瓶。合併三瓶反應混合物。濃縮棕色混合物且用PE洗滌殘餘物，以提供白色固體狀標題化合物(120 g, 49.5%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.62 (s, 2H), 7.48 (d,J =7.5 Hz, 1H), 7.35 - 7.29 (m, 1H), 6.46 (br. s., 1H), 1.52 (s, 9H), 1.34 (s, 12H)。步驟 4 ： 合成(3-(4-甲醯基苄基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00415
將4-(溴甲基)苯甲醛(29.9 g, 150 mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II) (20.63 g, 28.2 mmol)、(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(30 g, 94 mmol)及碳酸鉀(64.9 g, 470 mmol)於THF (600 mL)中之混合物加熱至80℃並保持12小時。如上文所述設置另外三瓶。合併所有四瓶反應混合物。用水(1 L)稀釋反應混合物。用EtOAc (3 × 800 mL)萃取水層。經Na2 SO4 乾燥有機層，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠上之管柱層析(用PE/EtOAc = 10/1溶析)純化殘餘物，以提供白色固體狀標題化合物(35.5 g, 27.3%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.97 (s, 1H), 7.80 (d,J =7.9 Hz, 2H), 7.35 (d,J =7.9 Hz, 2H), 7.26 (s, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 2H), 6.84 (d,J =7.1 Hz, 1H), 6.43 (br. s., 1H), 4.02 (s, 2H), 1.50 (s, 9H)。步驟 5 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00416
向(8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(6 g, 15.94 mmol)及(3-(4-甲醯基苄基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(4.96 g, 15.94 mmol)於MeCN (50 mL)中之溶液中逐滴添加過氯酸(4.79 mL, 80 mmol)，同時利用冰浴維持內部溫度低於25℃。添加後，將混合物在20℃下攪拌2小時。如上文所述設置另外三瓶。合併所有四瓶反應混合物。用飽和NaHCO3 水溶液(500 mL)淬滅反應混合物且用二氯甲烷(3 × 800 mL)萃取。濃縮有機相且藉由製備型HPLC純化殘餘物，以提供黃色固體狀標題化合物(10 g, 27.0%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.36 (d,J =7.9 Hz, 2H), 7.31 (d,J =10.1 Hz, 1H), 7.20 (d,J =7.9 Hz, 2H), 6.89 (t,J =7.9 Hz, 1H), 6.39 - 6.28 (m, 3H), 6.16 (dd,J =1.5, 9.9 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.39 (s, 1H), 5.08 (t,J =5.7 Hz, 1H), 4.98 - 4.87 (m, 3H), 4.78 (d,J =3.1 Hz, 1H), 4.49 (dd,J =6.2, 19.4 Hz, 1H), 4.29 (br. s., 1H), 4.17 (dd,J =5.5, 19.6 Hz, 1H), 3.74 (s, 2H), 2.61 - 2.53 (m, 1H), 2.36 - 2.26 (m, 1H), 2.11 (d,J =11.0 Hz, 1H), 2.07 (s, 1H), 2.02 (d,J =12.8 Hz, 1H), 1.83 - 1.54 (m, 5H), 1.39 (s, 3H), 1.16 - 0.96 (m, 2H), 0.85 (s, 3H)。tR LCMS: tR = 2.365 min, 98%純度，m/z = 570.2 (M+H)+ LC/MS (表7，方法a) 製備型HPLC之方法：儀器：Gilson 281半製備型HPLC系統，移動相：A：CF3 COOH/H2 O=0.075% v/v；B：CH3 CN，管柱：Phenomenex Luna(2) C18 250*50 10u，流速：80 mL/min，監測波長：220 nm及254 nm，時間B%, 0.0 28, 20.0 45, 20.1 45, 20.2 100, 30.2 100, 0.3 28, 31.5 28。實例 2B ： 合成(2R,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)苯基)-6b-氟-2,7-二羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮
Figure TW201801749AD00417
將三氟甲烷磺酸(1.34 ml, 15.11 mmol)逐滴添加至(6R,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-9-氟-6,11,16,17-四羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(1.55g, 3.78 mmol)、(3-(4-甲醯基苄基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(來自實例2、步驟4) (1.176 g, 3.78 mmol)及MgSO4 (2.273 g, 18.89 mmol)於MeCN (15.1 mL)中之-10℃懸浮液中。20 min後，藉由添加飽和NaHCO3 水溶液(15 mL)、然後添加水(60 mL)及EtOAc (100 mL)淬滅反應。相繼用水(60 mL)、鹽水(60 mL)洗滌有機層，乾燥(Na2 SO4 )，且在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，40 g)純化，用40%-100% EtOAc/庚烷梯度溶析，提供90%純度之泡沫狀標題化合物(880 mg, 1.458 mmol, 39%產率)。可藉由Waters XBridgeTM RP18 5微米管柱(30 × 100 mm)上之反相HPLC進一步純化產物。使用MeCN (A)及水中之0.1 mM NH4 CO3 (B)梯度，流速為40 mL/min (0-5.0 min 5% A, 5.0-19.0 min線性梯度15%-55% A)。LC-MS (方法r，表7) Rt = 0.72 min, m/z = 604.3 [M+H+ ]。1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.37 - 7.31 (m, 2H), 7.28 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.24 - 7.19 (m, 2H), 6.93 - 6.85 (m, 1H), 6.36 (d,J = 2.1 Hz, 2H), 6.35 (p,J = 1.1 Hz, 1H), 6.23 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 6.10 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 5.45 (s, 1H), 5.38 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.96 - 4.91 (m, 3H), 4.51 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.28 - 4.16 (m, 2H), 3.74 (s, 2H), 2.76 - 2.60 (m, 1H), 2.20 (td,J = 12.5, 6.3 Hz, 1H), 2.08 (s, 2H), 1.86 (d,J = 11.8 Hz, 1H), 1.75 - 1.58 (m, 7H), 0.89 (s, 3H)。實例 3 ： 合成(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)硫基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮步驟 1 ： 合成(3-巰基苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00418
向過氯酸鋅(0.422 g, 1.598 mmol)及3-胺基苯硫醇(10 g, 80 mmol)之混合物中逐滴添加二碳酸二第三丁基酯(22.66 g, 104 mmol)。將溶液在25℃下攪拌12小時。如上文所述設置另外三瓶。合併四瓶反應混合物。將混合物溶解於EtOAc (200 mL)中並用水(500 mL)洗滌。經Na2 SO4 乾燥有機層，過濾並在減壓下濃縮以獲得殘餘物。藉由矽膠上之管柱層析(用PE/EtOAc = 5/1溶析)純化殘餘物，以獲得白色固體狀目標化合物(50 g，產率69.4%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.45 (br. s., 1H), 7.16 - 7.09 (m, 1H), 7.06 - 7.01 (m, 1H), 6.92 (d,J =7.4 Hz, 1H), 6.55 (br. s., 1H), 3.46 (s, 1H), 1.52 (s, 9H)。步驟 2 ： 合成(3-((4-甲醯基苯基)硫基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00419
在25℃下，向(3-((4-甲醯基苯基)硫基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(10 g, 44.4 mmol)於DMF (300 mL)中之溶液中添加三苯基膦(11.64 g, 44.4 mmol)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(11.47 g, 89 mmol)。將反應混合物在25℃下在N2 下攪拌30分鐘。在100℃下向混合物中添加4-氟苯甲醛(8.26 g, 66.6 mmol)且將混合物在100℃下攪拌12小時。如上文所述設置另外四瓶。合併五瓶反應混合物。用水(2 L)稀釋混合物且用EtOAc (3 × 1 L)萃取。經Na2 SO4 乾燥有機層，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠上之管柱層析(用PE/EtOAc = 10/1溶析)純化殘餘物，以獲得黃色油狀目標化合物(55 g，產率75%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.90 (s, 1H), 7.71 (d,J =8.4 Hz, 2H), 7.58 (s, 1H), 7.48 - 7.41 (m, 1H), 7.33 (t,J =7.9 Hz, 1H), 7.25 (d,J =8.4 Hz, 2H), 7.17 (d, J=7.9 Hz, 1H), 6.72 (br. s., 1H), 1.50 (s, 9H)。45 (br. s., 1H), 7.16 - 7.09 (m, 1H), 7.06 - 7.01 (m, 1H), 6.92 (d,J =7.4 Hz, 1H), 6.55 (br. s., 1H), 3.46 (s, 1H), 1.52 (s, 9H)。步驟 3 ： 合成(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)苯基)硫基)苯基) (羥基)甲烷磺酸鈉
Figure TW201801749AD00420
在25℃下，向醛(15 g, 45.5 mmol)於CH3 CN (30 mL)中之溶液中添加偏二亞硫酸鈉(11.25 g, 59.2 mmol)於水(90 mL)中之溶液。將混合物在25℃下攪拌48小時。如上文所述設置另一瓶。合併兩瓶反應混合物。過濾溶液且用水(150 mL)、CH3 CN (150 mL)洗滌固體並在減壓下乾燥，以獲得白色固體狀目標化合物(32 g，產率81%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.45 (br. s., 1H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 7.47 - 7.35 (m, 3H), 7.33 - 7.17 (m, 3H), 6.85 (d, J=7.9 Hz, 1H), 5.97 (d,J =4.9 Hz, 1H), 4.98 (d,J =4.9 Hz, 1H), 1.45 (s, 9H)。步驟 4 ： 合成(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)硫基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00421
向(8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-9-氟-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(6 g, 15.21 mmol)及(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)苯基)硫基)苯基)(羥基)甲烷磺酸鈉(4.74 g, 15.21 mmol)於THF (50 mL)中之溶液中逐滴添加過氯酸(4.58 mL, 76 mmol)，同時利用冰浴維持內部溫度低於25℃。添加後，將混合物在20℃下攪拌2小時。如上文所述設置另外三瓶。合併所有四瓶反應混合物。用NaHCO3 水溶液(500 mL)淬滅反應混合物且用DCM (3 × 800 mL)萃取。濃縮有機相且藉由製備型HPLC純化殘餘物，以獲得黃色固體狀目標化合物(9.5 g, 25.8%)。LCMS (方法b，表7) Rt = 2.68 min, m/z = 588.1 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.37 - 7.26 (m, 3H), 7.21 (d,J =7.9 Hz, 2H), 6.89 (t,J =7.7 Hz, 1H), 6.43 - 6.30 (m, 3H), 6.23 (d,J =10.1 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.09 (t,J =5.7 Hz, 1H), 4.93 (br. s., 3H), 4.50 (dd,J =6.2, 19.4 Hz, 1H), 4.28 - 4.09 (m, 2H), 3.74 (s, 2H), 2.73 - 2.54 (m, 2H), 2.35 (d,J =13.2 Hz, 1H), 2.25 - 2.12 (m, 1H), 2.05 (d,J =15.0 Hz, 1H), 1.92 - 1.77 (m, 1H), 1.74 - 1.58 (m, 3H), 1.50 (s, 3H), 1.45 - 1.30 (m, 1H), 0.87 (s, 3H)。製備型HPLC方法：儀器：Gilson 281半製備型HPLC系統；移動相：A：CF3 CO2 H/H2 O=0.075% v/v；B：CH3 CN；管柱：Phenomenex Luna C18 250 × *50 mm*10微米；流速：80 mL/min；監測波長：220 nm及254 nm。
Figure TW201801749AD00422
 實例 4 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)硫基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00423
向(8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(6 g, 15.94 mmol)及(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)苯基)硫基)苯基)(羥基)甲烷磺酸鈉(4.96 g, 15.94 mmol)於MeCN (50 mL)中之溶液中逐滴添加過氯酸(4.79 mL, 80 mmol)，同時利用冰浴維持內部溫度低於25℃。添加後，將混合物在20℃下攪拌2小時。如上文所述設置另外三瓶。合併所有四瓶反應混合物。用飽和NaHCO3 水溶液(500 mL)淬滅反應混合物且用DCM (3 × 800 mL)萃取。濃縮有機相且藉由製備型HPLC純化殘餘物，以獲得黃色固體狀目標化合物(10 g, 27.0%)。LCMS (方法b，表7) Rt = 2.36 min, m/z = 570.2 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.36 (d,J =7.9 Hz, 2H), 7.31 (d,J =10.1 Hz, 1H), 7.20 (d,J =7.9 Hz, 2H), 6.89 (t,J =7.9 Hz, 1H), 6.39 - 6.28 (m, 3H), 6.16 (dd,J =1.5, 9.9 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.39 (s, 1H), 5.08 (t,J =5.7 Hz, 1H), 4.98 - 4.87 (m, 3H), 4.78 (d,J =3.1 Hz, 1H), 4.49 (dd,J =6.2, 19.4 Hz, 1H), 4.29 (br. s., 1H), 4.17 (dd,J =5.5, 19.6 Hz, 1H), 3.74 (s, 2H), 2.61 - 2.53 (m, 1H), 2.36 - 2.26 (m, 1H), 2.11 (d,J =11.0 Hz, 1H), 2.07 (s, 1H), 2.02 (d,J =12.8 Hz, 1H), 1.83 - 1.54 (m, 5H), 1.39 (s, 3H), 1.16 - 0.96 (m, 2H), 0.85 (s, 3H)。製備型HPLC方法：儀器：Gilson 281半製備型HPLC系統；移動相：A：CF3 CO2 H/H2 O=0.075% v/v；B：CH3 CN；管柱：Phenomenex Luna C18 250 × *50 mm*10微米；流速：80 mL/min；監測波長：220 nm及254 nm。
Figure TW201801749AD00424
 實例 5 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)硫基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00425
在25℃下，向類固醇(10 g, 24.25 mmol)於CH3 CN (200 mL)中之溶液中添加硫酸鎂(10.21 g, 85 mmol)。將混合物在25℃下攪拌4小時。然後在0℃下，向上述溶液中添加(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)苯基)硫基)苯基)(羥基)甲烷磺酸鈉(10.51 g, 24.25 mmol)及三氟甲磺酸(20.48 mL, 121 mmol)。將所得混合物在25℃下攪拌1小時。如上文所述設置另外兩瓶。合併三瓶反應混合物。用1 N NaOH (300 mL)稀釋將混合物且用EtOAc (3 × 600 mL)萃取。在減壓下濃縮有機層以獲得殘餘物。將殘餘物溶解於EtOAc (60 mL)中且添加2-丁酮(180 mL)。攪拌30分鐘後，藉由過濾收集固體且藉由製備型HPLC純化，以獲得黃色固體狀標題化合物(8.4 g，產率17.52%)。LCMS (方法c，表7) Rt = 2.66 min; MS m/z = 624.1 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.39 (d,J =8.4 Hz, 2H), 7.25 (d,J =8.4 Hz, 3H), 7.03 (t,J =7.7 Hz, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.53 (t,J =8.2 Hz, 2H), 6.29 (dd,J =1.5, 9.9 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.76 - 5.49 (m, 2H), 5.46 (s, 1H), 4.96 (d,J =4.9 Hz, 1H), 4.52 (d,J =19.4 Hz, 1H), 4.21 (d,J =19.4 Hz, 2H), 2.74 - 2.53 (m, 2H), 2.34 - 2.13 (m, 2H), 2.09 - 1.96 (m, 1H), 1.79 - 1.62 (m, 3H), 1.57 - 1.43 (m, 4H), 0.86 (s, 3H)。製備型HPLC方法：儀器：Shimadzu LC-8A製備型HPLC；管柱：Phenomenex Luna C18 250 × *50 mm*10微米；移動相：A為H2 O (0.09% CF3 CO2 H)且B為CH3 CN；梯度：22%至52% B 20 min；流速：80 mL/min；波長：220 nm及254 nm。實例 6 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基-4-羥基苄基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮
Figure TW201801749AD00426
將三氟甲磺酸(0.2 mL, 2.183 mmol)逐滴添加至(8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(0.164 g, 0.437 mmol)、(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-5-(4-甲醯基苄基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(0.193 g, 0.437 mmol)及MgSO4 (0.189 g, 1.572 mmol)於MeCN (1.8 mL)中之0℃漿液中。40 min後，用EtOAc (15 mL)稀釋反應物，且然後相繼用飽和NaHCO3 水溶液(10 mL × 2)及飽和鹽水溶液(5 mL)洗滌。乾燥(Na2 SO4 )有機相且在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，12 g)純化，用0-10% MeOH/DCM梯度溶析，獲得蠟質固體狀標題化合物(163 mg, 0.278 mmol, 64%產率)。藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 50 mm管柱)上之反相HPLC進一步純化此材料之一部分(約48.9 mg)。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為90 mL/min (0-5.0 min 15% A, 5.0-20 min線性梯度15%-70% A，保持2 min)。在減壓下濃縮合併之部分以移除揮發性溶劑，且將所得溶液冷凍並凍乾，以獲得灰白色固體(11.9 mg)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.75 min, m/z = 586.26 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.27 (s, 1H), 9.04 (s, 2H), 7.34 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 7.28 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.18 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 6.94 (dd,J = 8.1, 2.1 Hz, 1H), 6.90 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 6.82 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 6.17 - 6.07 (m, 1H), 5.90 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 5.37 (s, 1H), 4.89 (d,J = 4.9 Hz, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.46 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.26 (q,J = 3.3 Hz, 1H), 4.14 (d,J = 19.5 Hz, 1H), 3.80 (s, 2H), 2.58 - 2.46 (m, 1H), 2.36 - 1.92 (m, 3H), 1.76 - 1.56 (m, 4H), 1.36 (s, 3H), 1.10 - 0.90 (m, 2H), 0.83 (s, 3H)。實例 7 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)-3-羥基苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮步驟 1 ： 合成4-((3-溴苯基)(羥基)甲基)-3-甲氧基苯甲腈
Figure TW201801749AD00427
將異丙基氯化鎂氯化鋰錯合物(1.3 M於THF中，8.34 mL, 10.85 mmol)逐滴添加至4-溴-3-甲氧基苯甲腈(2 g, 9.43 mmol)於THF (21 mL)中之0-5℃溶液中。將反應物攪拌5h，此後逐滴添加3-溴苯甲醛(1.979 g, 10.38 mmol)於THF (10.5 mL)中之溶液，維持溫度＜10℃。使反應物緩慢升溫至室溫過夜。用飽和NH4 Cl水溶液(25 mL)淬滅反應且用MTBE (50 mL × 3)萃取。用鹽水(20 mL)洗滌合併之有機物，乾燥(Na2 SO4 )，並在減壓下移除溶劑。藉由層析(80 g二氧化矽)純化，用0-10% MTBE/庚烷梯度溶析，獲得米色糖漿/油狀標題化合物(1.77 g, 5.56 mmol, 59%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.86 min; MS (ESI-) m/z = 315.7 [M-H+ ]。1 H NMR (501 MHz, DMSO-d6) δ 7.67 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.47 (t,J = 1.8 Hz, 1H), 7.43 (dd,J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.41 (d,J = 1.4 Hz, 1H), 7.40 - 7.36 (m, 1H), 7.28 (dt,J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.23 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 6.10 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 5.94 (d,J = 4.1 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H)。步驟 2 ： 合成4-(3-溴苄基)-3-甲氧基苯甲腈
Figure TW201801749AD00428
將氯三甲基矽烷(3.63 g, 33.4 mmol)添加至碘化鈉(5.00 g, 33.4 mmol)於MeCN (18.5 mL)中之室溫溶液中，此使得白色固體立即沈澱。然後添加4-((3-溴苯基)(羥基)甲基)-3-甲氧基苯甲腈(1.77 g, 5.56 mmol)於MeCN (18.5 mL)中之溶液，此後將反應混合物加熱至55℃並保持60 min。冷卻至室溫後，將反應物分配於MTBE (50 mL)與水(50 mL)之間。分離各層後，用MTBE (50 mL × 2)萃取水相。相繼用1 M Na2 S2 O3 水溶液(50 mL × 2)、然後用飽和鹽水溶液(30 mL)洗滌合併之有機物，乾燥(Na2 SO4 )，且在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，80 g)純化，用5%-40% MTBE/庚烷梯度溶析，獲得灰白色固體狀標題化合物(1.58 g, 5.23 mmol, 94%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 1.02 min; MS m/z =未觀察到。1 H NMR (501 MHz, DMSO-d6) δ 7.42 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 7.39 - 7.30 (m, 4H), 7.22 (td,J = 7.6, 0.6 Hz, 1H), 7.18 (dt,J = 7.7, 1.4 Hz, 1H), 3.94 (s, 2H), 3.82 (s, 3H)。步驟 3 ： 合成4-(3-溴苄基)-3-甲氧基苯甲醛
Figure TW201801749AD00429
經5 min將二異丁基氫化鋁(4.9 mL，己烷中之1.0 M溶液，4.9 mmol)逐滴添加至4-(3-溴苄基)-3-甲氧基苯甲腈(0.99 g, 3.28 mmol)於甲苯(16 mL)中之0℃溶液中，維持溫度＜ 6℃。10 min後，藉由在0℃下小心地添加1 N HCl水溶液(100 mL)淬滅反應。然後將其用DCM (50 mL × 4)萃取，用飽和鹽水溶液(30 mL)洗滌，且在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，40 g)純化，用0-40% MTBE/庚烷梯度溶析，獲得無色油狀標題化合物(780 mg, 2.56 mmol, 78%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.95 min, MS (DCI+) m/z = 303.9, 305.9 (M+ )。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.93 (s, 1H), 7.47 (dd,J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.44 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 3H), 7.25 - 7.17 (m, 2H), 3.96 (s, 2H), 3.85 (s, 3H)。步驟 4 ： 合成4-(3-溴苄基)-3-羥基苯甲醛
Figure TW201801749AD00430
將三溴化硼(1.0 M於二氯甲烷中，6.4 mL, 6.4 mmol)逐滴添加至4-(3-溴苄基)-3-甲氧基苯甲醛(0.78 g, 2.56 mmol)於DCM (7.8 mL)中之0-3℃溶液中。將反應物在0℃下攪拌30 min；然後在室溫下攪拌90 min。在減壓下移除溶劑且用MeOH (20 mL)及水(15 mL)處理所得深色油狀物，此獲得異質混合物。添加MeCN直至獲得均質溶液(約10 mL)且將溶液攪拌過夜。在減壓下移除揮發性溶劑且用DCM (25 mL × 3)萃取所得水性懸浮液。用鹽水(20 mL)洗滌合併之有機物，經Na2 SO4 乾燥並在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，40 g)純化，用10%-50% MTBE/庚烷梯度溶析，獲得白色固體狀4-(3-溴苄基)-3-羥基苯甲醛(660 mg, 2.267 mmol, 89%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.85 min; MS (DCI+) m/z = 307.98, 309.97 [M+NH4 + ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.07 (s, 1H), 9.83 (s, 1H), 7.39 (q,J = 1.3 Hz, 1H), 7.33 (ddt,J = 6.5, 4.4, 2.0 Hz, 1H), 7.30 (d,J = 0.9 Hz, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.25 - 7.15 (m, 2H), 3.92 (s, 2H)。步驟 5 ： 合成4-(3-溴苄基)-3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)苯甲醛
Figure TW201801749AD00431
將咪唑(0.231 g, 3.40 mmol)及第三丁基二甲基氯矽烷(0.410 g, 2.72 mmol)添加至4-(3-溴苄基)-3-羥基苯甲醛(0.660 g, 2.267 mmol)於DCM (7.6 mL)中之室溫懸浮液中，將其攪拌3 h。添加MeOH (0.5 mL)且繼續攪拌10 min，此後用DCM (100 mL)稀釋反應物，相繼用水(25 mL)、1 N HCl水溶液(25 mL)及飽和鹽水溶液(20 mL)洗滌。乾燥(Na2 SO4 )有機相且在減壓下移除溶劑以獲得糖漿。藉由層析(二氧化矽，40 g)純化，用0-10% MTBE/庚烷梯度溶析，獲得無色油狀目標化合物(820 mg, 2.023 mmol, 89%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 1.18 min, MS (DCI+) m/z = 422.07, 424.09 [M+NH4 + ]。1 H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.94 (s, 1H), 7.50 (dd,J = 7.7, 1.6 Hz, 1H), 7.42 - 7.36 (m, 2H), 7.36 - 7.32 (m, 2H), 7.25 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.17 (ddd,J = 7.7, 1.7, 1.0 Hz, 1H), 4.01 (s, 2H), 0.92 (s, 9H), 0.26 (s, 6H)。步驟 6 ： 合成(3-(4-甲醯基-2-羥基苄基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00432
使氮鼓泡通過4-(3-溴苄基)-3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)苯甲醛(0.820 g, 2.023 mmol)、胺基甲酸第三丁基酯(0.3027 g, 2.58 mmol)、Cs2 CO3 (1.006 g, 3.09 mmol)於對-二噁烷(16 mL)中之混合物達30 min。添加第2代XPhos前觸媒(0.0937 g, 0.119 mmol)且繼續充氮5 min，此後將反應物加熱至100℃並保持4 h。將反應物冷卻至室溫，用1 N HCl水溶液(25 mL)處理，且用MTBE (25 mL × 3)萃取。用鹽水(30 mL)洗滌合併之有機物，經Na2 SO4 乾燥並在減壓下移除溶劑。將殘餘物再溶解於THF (16 mL, 0.125 M)中且用TBAF/SiO2 (1.0-1.5 mmol/g, 4.1338 g, 4.13-6.2 mmol)處理45 min，此後在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，40 g)純化，用0-75% MTBE/庚烷梯度溶析，獲得分離為膠質泡沫之(3-(4-甲醯基-2-羥基苄基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(380 mg, 1.161 mmol, 57%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.85 min; MS (DCI+) m/z = 345.0 [M+NH4 + ]。1 H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.04 (s, 1H), 9.86 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.34 - 7.28 (m, 2H), 7.27 - 7.20 (m, 2H), 7.14 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 6.82 (dt,J = 7.7, 1.2 Hz, 1H), 3.89 (s, 2H), 1.45 (s, 9H)。步驟 7 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)-3-羥基苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮
Figure TW201801749AD00433
將三氟甲磺酸(0.060 mL, 0.680 mmol)逐滴添加至(6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-二氟-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(0.056 g, 0.136 mmol)、(3-(4-甲醯基-2-羥基苄基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(0.049 g, 0.150 mmol)及MgSO4 (0.049 g, 0.408 mmol)於MeCN (1.5 mL)中之0℃漿液中，維持反應溫度＜5℃。30 min後，用EtOAc (15 mL)稀釋反應混合物，並相繼用飽和NaHCO3 水溶液(5 mL × 2)、且然後用飽和鹽水溶液(3 mL)洗滌。乾燥(Na2 SO4 )有機相且在減壓下移除溶劑。藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 30 mm管柱)上之反相HPLC純化。使用MeCN (A)及水中之0.1%甲酸(B)梯度，流速為60 mL/min (0-5.0 min 15% A, 5.0-20.0 min線性梯度15%-80% A，保持5 min)。在減壓下濃縮合併之部分以移除揮發性溶劑，且然後凍乾，以獲得白色非晶形固體狀標題化合物(6.7 mg)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.70 min; MS m/z = 622.39 [M+H+ ]。1 H NMR (501 MHz, DMSO-d6) δ 9.51 (s, 1H), 7.25 (d,J = 10.2 Hz, 1H), 6.96 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 6.89 - 6.81 (m, 2H), 6.75 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 6.37 - 6.24 (m, 4H), 6.11 (s, 1H), 5.63 (ddd,J = 49.2, 11.2, 6.4 Hz, 1H), 5.50 (d,J = 4.3 Hz, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.91 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 4.85 (s, 2H), 4.47 (d,J = 19.3 Hz, 1H), 4.21 4.14 (m, 2H), 3.70 - 3.60 (m, 2H), 2.69 - 2.50 (m, 1H), 2.26 (s, 1H), 2.31 - 2.16 (m, 1H), 2.07 - 1.94 (m, 1H), 1.68 (q,J = 10.2, 8.9 Hz, 2H), 1.64 1.50 (m, 1H), 1.48 (s, 3H), 0.84 (s, 3H)。實例 8 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)-3-羥基苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮
Figure TW201801749AD00434
將三氟甲磺酸(0.35 mL, 3.83 mmol)逐滴添加至(8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(0.296 g, 0.786 mmol)、(3-(4-甲醯基-2-羥基苄基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(0.251 g, 0.767 mmol)及MgSO4 (0.332 g, 2.76 mmol)於MeCN (3.0 mL)中之0℃漿液中，維持反應溫度＜5℃。40 min後，用EtOAc (15 mL)稀釋反應物，並相繼用飽和NaHCO3 水溶液(10 mL × 2)、且然後用飽和鹽水溶液(5 mL)洗滌。經Na2 SO4 乾燥有機層且在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，12 g)純化，用0-10% MeOH/DCM梯度溶析，獲得白色固體狀標題化合物(238.4 mg, 0.407 mmol, 53%產率)。藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 30 mm管柱)上之反相HPLC進一步純化此材料之一部分(約79.1 mg)。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為60 mL/min (0-5.0 min 15% A, 5.0-20 min線性梯度15%-60% A，保持2 min)。在減壓下濃縮合併之部分以移除揮發性溶劑，且將所得溶液冷凍並凍乾，以獲得灰白色固體狀標題化合物(43.4 mg)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.73 min; MS m/z = 586.2 [M+H+ ]。1 H NMR (501 MHz, DMSO-d6) δ 9.61 (s, 1H), 7.30 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.27 - 7.20 (m, 1H), 7.04 (dd,J = 7.7, 2.9 Hz, 2H), 6.95 - 6.91 (m, 2H), 6.90 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.79 (dd,J = 7.7, 1.6 Hz, 1H), 6.15 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 5.92 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 5.29 (s, 1H), 4.88 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.79 (s, 1H), 4.45 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.28 (q,J = 3.3 Hz, 1H), 4.15 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 3.82 (s, 2H), 2.59 - 2.49 (m, 1H), 2.30 (dt,J = 13.0, 3.8 Hz, 1H), 2.16 - 2.05 (m, 1H), 2.07 - 1.98 (m, 1H), 1.75 (d,J = 3.0 Hz, 2H), 1.73 - 1.54 (m, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.05 (qd,J = 12.9, 4.8 Hz, 1H), 0.97 (dd,J = 11.2, 3.6 Hz, 1H), 0.84 (s, 3H)。實例 9 ： 合成(S)-N -(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)-2-((S)-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)丙醯胺步驟 1 ： 合成((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯
Figure TW201801749AD00435
將HATU (1.3 g, 3.41 mmol)及2,6-二甲吡啶(0.4 mL, 3.43 mmol)添加至(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(1.0327 g, 1.705 mmol)及(S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙醯胺基)丙酸(0.782 g, 2.046 mmol)於THF (11.5 mL)中之室溫懸浮液中。在室溫下保持3小時後，用EtOAc (16 mL)稀釋反應物，然後相繼用1N HCl水溶液(4 mL × 3)及飽和鹽水溶液(4 mL)洗滌。藉由層析(二氧化矽，40 g)純化，用75%-100% EtOAc/庚烷梯度溶析，獲得標題化合物(0.926 g, 0.955 mmol, 56%產率)。LC-MS (方法r，表7) Rt = 1.01 min, m/z = 970.18 [M+H+ ]。1 H NMR (500 MHz, DMSO-d6 ) δ 9.85 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 8.08 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 7.89 (dd,J = 7.5, 1.0 Hz, 2H), 7.76 - 7.69 (m, 2H), 7.55 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 7.49 - 7.16 (m, 13H), 6.94 - 6.88 (m, 1H), 6.30 (ddd,J = 10.1, 3.7, 1.9 Hz, 1H), 6.14 (dt,J = 2.6, 1.2 Hz, 1H), 5.74 - 5.55 (m, 1H), 5.53 (dt,J = 5.0, 2.5 Hz, 1H), 5.12 (t,J = 6.0 Hz, 1H), 4.95 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.52 (dd,J = 19.4, 6.2 Hz, 1H), 4.38 (p,J = 7.0 Hz, 1H), 4.32 - 4.16 (m, 5H), 4.09 (p,J = 6.9 Hz, 1H), 3.88 (d,J = 10.9 Hz, 2H), 2.65 - 2.60 (m, 1H), 2.33 - 2.20 (m, 1H), 2.05 (d,J = 13.5 Hz, 1H), 1.77 - 1.63 (m, 3H), 1.50 (s, 3H), 1.28 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.23 (d,J = 7.1 Hz, 4H), 0.88 (d,J = 12.6 Hz, 3H)。步驟 2 ： 合成(S)-2-胺基-N -((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00436
將二乙胺(0.5 mL, 4.79 mmol)添加至((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(1.18 g, 1.216 mmol)於THF (6.0 mL)中之室溫溶液中。2 h後，添加MTBE (10 mL)，此使得黃色固體立即沈澱。將此漿液攪拌90 min，過濾，且用MTBE (5 mL × 3)洗滌，以獲得黃色固體(802.7 mg)。藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 50 mm管柱)上之反相HPLC進一步純化此材料。使用MeCN (A)及水中之0.1%甲酸(B)梯度，流速為90 mL/min (0-5.0 min 15% A, 5.0-20.0 min線性梯度15%-75% A，保持2 min, 22.0-22.5 min線性梯度75%-95%，保持4 min)。將合併之部分在減壓下濃縮至乾燥且然後在真空烘箱中在50℃下乾燥過夜。LC-MS (方法r，表7) Rt = 0.76 min, m/z = 748.5 [M+H+ ]。1 H NMR指示標題化合物係含有(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-胺基丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-甲酸之約1:1混合物(總共0.170 g，每一化合物為0.115 mol及10%產率)。1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.00 (d,J = 3.3 Hz, 2H), 8.42 (d,J = 34.2 Hz, 2H), 8.30 (s, 1H), 7.48 - 7.37 (m, 3H), 7.38 - 7.29 (m, 5H), 7.31 - 7.15 (m, 8H), 6.92 (d,J = 7.6 Hz, 2H), 6.28 (ddd,J = 10.3, 6.6, 1.9 Hz, 3H), 6.12 (d,J = 3.7 Hz, 3H), 5.77 - 5.53 (m, 3H), 5.45 (d,J = 7.7 Hz, 3H), 5.04 - 4.99 (m, 1H), 4.94 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.50 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.40 (s, 3H), 4.23 - 4.12 (m, 2H), 3.54 (dq,J = 17.6, 6.9 Hz, 1H), 2.71 - 2.56 (m, 1H), 2.30 - 2.15 (m, 1H), 2.03 (d,J = 14.2 Hz, 2H), 1.94 (d,J = 14.3 Hz, 1H), 1.84 (d,J = 14.1 Hz, 1H), 1.76 - 1.59 (m, 7H), 1.49 (d,J = 2.6 Hz, 8H), 1.39 - 1.10 (m, 13H), 1.00 (s, 4H), 0.86 (s, 3H)。步驟 3 ： 合成(S)-N -(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)-2-((S)-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00437
將二異丙基乙胺(0.1 mL, 0.573 mmol)添加至(S )-2-胺基-N-((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)丙醯胺(0.170 g, 0.227 mmol)及3-馬來醯亞胺基丙酸N -琥珀醯亞胺酯(0.0691 g, 0.260 mmol)於DMF (2.5 mL)中之室溫溶液中。30 min後，藉由逐滴添加TFA於水中之7%溶液(1.2 mL)將反應混合物之pH調節至4-5。藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 50 mm管柱)上之反相HPLC純化粗混合物。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為90 mL/min (0-5.0 min 15% A, 5.0-20 min線性梯度15%-85% A，保持2 min)。在減壓下濃縮合併之部分以移除揮發性溶劑，且將所得溶液冷凍並凍乾以獲得白色固體(85.2 mg, 0.0473 mmol, 21%產率)。LC-MS (方法R，表7) Rt = 0.82 min, m/z = 899.92 [M+H+ ]。1 H NMR數據與標題化合物(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-1,2,4,6a,6b,7,8,8a,11a,12,12a,12b-十二氫-8bH-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-甲酸之1:1混合物一致(關於避免此混合物之標題化合物之替代性製備參見實例10)。MS分析確認此材料係m/z = 899.1 [M+H+ ]及m/z = 885.0 [M+H+ ]之兩種化合物之混合物。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.71 (s, 2H), 8.16 (d,J = 7.1 Hz, 2H), 8.03 (d,J = 7.3 Hz, 2H), 7.49 - 7.29 (m, 9H), 7.30 - 7.13 (m, 9H), 6.96 (s, 3H), 6.92 - 6.85 (m, 2H), 6.27 (dt,J = 10.1, 1.9 Hz, 2H), 6.11 (d,J = 2.3 Hz, 2H), 5.74 - 5.53 (m, 2H), 5.46 (d,J = 23.9 Hz, 4H), 4.93 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 4.32 (p,J = 7.1 Hz, 2H), 4.27 - 4.13 (m, 3H), 4.17 (s, 3H), 3.59 (t,J = 7.3 Hz, 4H), 2.69 - 2.53 (m, 2H), 2.38 (t,J = 7.3 Hz, 4H), 2.28 (s, 3H), 2.22 (s, 1H), 2.08 - 1.98 (m, 1H), 1.98 - 1.90 (m, 1H), 1.83 - 1.68 (m, 2H), 1.69 (s, 2H), 1.66 (s, 2H), 1.48 (d,J = 3.7 Hz, 8H), 1.25 (d,J = 7.0 Hz, 6H), 1.15 (d,J = 7.1 Hz, 6H), 0.99 (s, 3H), 0.84 (s, 3H)。實例 10 ： 合成(S)-N -(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)-2-((S)-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)丙醯胺步驟 1 ： 合成((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S, 8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00438
將HATU (610 mg, 1.605 mmol)及2,6-二甲吡啶(0.3 mL, 2.58 mmol)添加至(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(648.1 mg, 1.070 mmol)及(S)-2-((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯胺基)丙酸(334 mg, 1.284 mmol)於THF (11.5 mL)中之室溫混合物中。9小時後，用EtOAc (16 mL)稀釋反應物，然後用1N HCl水溶液(4 mL × 3)、然後用飽和鹽水溶液(4 mL)洗滌。藉由層析(二氧化矽，40 g)純化，用0-10% MeOH/DCM梯度溶析，獲得黃色泡沫狀標題化合物(773.7 mg, 0.912 mmol, 85%產率)。LC-MS (方法r，表7) Rt = 0.92 min, m/z = 848.53 [M+H+ ]。步驟 2 ： 合成(S)-2-胺基-N -((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00439
將TFA (1.97 mL, 25.6 mmol)逐滴添加至((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.7683 g, 0.906 mmol)於DCM (6.0 mL)中之室溫溶液中。50 min後，在減壓下移除溶劑以獲得棕色糖漿。將殘餘物溶解於1:1 DMSO:MeOH (12 mL)中且藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 50 mm管柱)上之反相HPLC純化。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為90 mL/min (0-5.0 min 15% A, 5.0-20 min線性梯度15%-75% A，保持2 min, 22.0-22.5 min線性梯度75%-95% A，保持4 min)。將合併之部分在減壓下濃縮至乾燥且將殘餘物在真空烘箱中在50℃下乾燥過夜，以獲得標題化合物(230 mg, 0.308 mmol, 34%產率)。LC-MS (方法r，表7)主要縮醛異構物Rt = 0.73 min, m/z = 748.78 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.01 (s, 1H), 8.62 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 8.04 (d,J = 5.4 Hz, 3H), 7.46 - 7.31 (m, 4H), 7.31 - 7.13 (m, 4H), 6.91 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.27 (dd,J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.76 - 5.47 (m, 2H), 5.43 (s, 1H), 4.93 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 4.49 (d,J = 19.5 Hz, 1H), 4.42 (q,J = 7.1 Hz, 1H), 4.23 - 4.13 (m, 2H), 2.72 - 2.54 (m, 1H), 2.33 - 2.16 (m, 2H), 2.02 (dt,J = 13.6, 3.6 Hz, 1H), 1.69 (h,J = 5.9, 5.1 Hz, 3H), 1.48 (s, 4H), 1.33 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.30 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 0.85 (s, 3H)。步驟 3 ： 合成(S)-N -(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)-2-((S)-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)丙醯胺基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00440
將二異丙基乙胺(0.1 mL, 0.573 mmol)添加至(S )-2-胺基-N -((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)丙醯胺(0.220 g, 0.294 mmol)及3-馬來醯亞胺基丙酸N -琥珀醯亞胺基酯(0.086 g, 0.324 mmol)於DMF (2.8 mL)中之室溫溶液中。30 min後，藉由逐滴添加TFA於水中之7%溶液(1.0 mL)將反應混合物之pH調節至4-5。藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 50 mm管柱)上之反相HPLC純化粗混合物。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為90 mL/min (0-5.0 min 15% A, 5.0-20 min線性梯度15%-85% A，保持2 min)。在減壓下濃縮合併之部分以移除揮發性溶劑，且將所得溶液冷凍並凍乾以獲得白色固體(175.2 mg, 0.195 mmol, 66%產率)。LC-MS (方法r，表7) Rt = 0.82 min, m/z = 899.87 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.70 (s, 1H), 8.14 (d,J = 7.0 Hz, 1H), 8.01 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.47 - 7.35 (m, 2H), 7.32 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.26 - 7.10 (m, 4H), 6.95 (s, 1H), 6.87 (dt,J = 7.6, 1.3 Hz, 1H), 6.26 (dd,J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.09 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 5.72 - 5.51 (m, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.91 (d,J = 4.9 Hz, 1H), 4.47 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.30 (p,J = 7.1 Hz, 1H), 4.25 - 4.11 (m, 3H), 3.85 (s, 2H), 3.57 (t,J = 7.3 Hz, 2H), 2.71 - 2.48 (m, 1H), 2.36 (dd,J = 8.0, 6.7 Hz, 2H), 2.23 (ddt,J = 25.1, 12.2, 6.6 Hz, 2H), 2.01 (dt,J = 13.7, 3.7 Hz, 1H), 1.75 - 1.57 (m, 3H), 1.48 (p,J = 11.9 Hz, 1H), 1.46 (s, 3H), 1.24 (d,J = 7.2 Hz, 3H), 1.13 (d,J = 7.2 Hz, 3H), 0.83 (s, 3H)。實例 11 ： 合成(S)-N-((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙醯胺步驟 1 ： 合成(S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(1H-咪唑-5-基)丙酸, 2鹽酸
Figure TW201801749AD00441
在0℃下，向(S)-2-胺基-3-(1H-咪唑-5-基)丙酸(1.55 g, 9.99 mmol)於水(40 mL)及1,4-二噁烷(10 mL)中之溶液中添加NaOH (10 mL, 19.98 mmol)及BOC酸酐(2.319 mL, 9.99 mmol)。將所得混合物在23℃下攪拌4h。然後用HCl溶液將混合物酸化至pH 5，且用EtOAc (3 × 30 mL)洗滌。然後將無機層冷凍乾燥以獲得白色固體狀標題化合物(包括NaCl)) (4.449 g, 9.90 mmol, 99%產率)。LCMS (方法m，表7) Rt = 1.22 min, m/z 256.2 (M+1)+ 。步驟 2 ： 合成((S)-1-(((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S, 8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-3-(1H-咪唑-5-基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00442
在0℃下，向(S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(1H-咪唑-5-基)丙酸, 2鹽酸(170 mg, 0.197 mmol)、(S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(1H-咪唑-5-基)丙酸, 2鹽酸(443 mg, 0.986 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中添加DIPEA (0.345 mL, 1.973 mmol)及HATU (90 mg, 0.237 mmol)、DMAP (31.3 mg, 0.256 mmol)，且將所得混合物在0℃下攪拌10 min，並逐步升溫至25℃且保持16h。此後，濃縮混合物以獲得殘餘物，藉由DCM/MeOH(10:1)藉由矽膠純化該殘餘物，以獲得黃色固體狀標題化合物(194 mg, 0.138 mmol, 69.9%產率)。LCMS (方法m，表7) Rt = 1.72 min, m/z 985.3 (M+1)+ ;1 H NMR: (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 0.82-0.89 (m, 10H), 1.12-1.18 (m, 9H), 1.23 (s, 9H), 1.68-1.71 (m, 2H), 2.20-2.33 (m, 2H), 3.86-3.88 (m, 2H), 4.18-4.29 (m, 4H), 4.36-4.39 (m, 1H), 4.49-4.54 (m, 1H), 4.94 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 5.13 (bs, 1H), 5.45 (s, 1H), 5.57-5.74 (m, 2H), 6.12(s, 1H), 6.29 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 6.91 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.01 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.10-7.25 (m, 4H), 7.29-7.37 (m, 3H), 7.44-7.49 (m, 2H), 8.06 (d,J = 6.0 Hz, 1H)。步驟 3 ： 合成(S)-2-胺基-N-((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)-3-(1H-咪唑-5-基)丙醯胺, 3三氟乙酸
Figure TW201801749AD00443
向((S)-1-(((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-3-(1H-咪唑-5-基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(120 mg, 0.122 mmol)於DCM (3 mL)中之溶液中添加TFA (0.6 mL, 7.79 mmol)，且將反應混合物在20℃下攪拌1小時。此後，用DCM稀釋混合物，在真空中在約25℃下濃縮，以獲得黃色固體狀標題化合物(149 mg, 0.103 mmol, 84.90%產率)。LCMS (方法m，表7) Rt = 1.64 min, m/z 885.3 (M+1)+ 。步驟 4 ： 合成(S)-N-((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00444
在0℃下，將DIPEA (0.106 mL, 0.607 mmol)添加至(S)-2-胺基-N-((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)-3-(1H-咪唑-5-基)丙醯胺, 3三氟乙酸(149 mg, 0.121 mmol)及3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(48.5 mg, 0.182 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中，且然後將混合物在室溫下攪拌2 h。藉由製備型HPLC (移動相：A=水中之0.05%TFA，B=MeCN；流速：2 mL/min)純化反應混合物，以提供白色固體狀標題化合物(11.4 mg, 9.02 mmol, 7.43%產率)。LCMS (方法m，表7) RT= 1.62 min, m/z 1058.3 (M+Na)+ ;1 H NMR: (400 MHz, DMSO-d) δ ppm: 0.86 (s, 3H), 1.24-1.29 (m, 9H), 1.46-1.54 (m, 3H), 1.68-1.76 (m, 2H), 1.98-2.06 (m, 2H), 2.20-2.33 (m, 2H), 2.40-2.44 (m, 2H), 2.60-2.68 (m, 1H), 2.88-2.94 (m, 1H), 3.00-3.05 (m, 1H), 3.57 (t,J = 7.4 Hz, 2H), 3.89 (s, 2H), 4.18-4.39 (m, 4H), 4.49-4.60 (m, 2H), 4.95 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.54-5.74 (m, 2H), 6.13 (s, 1H), 6.30 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 6.92 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.00 (s, 2H), 7.20-7.28 (m, 4H), 7.35-7.46 (m, 5H), 8.16 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 8.23 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 8.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 8.96 (s, 1H), 9.89 (s, 1H)。實例 12 ： 合成(S)-5-(((S)-1-((4-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-4-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-5-側氧基戊酸(81號化合物)步驟 1 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-8b-(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙醯基)-2,6b-二氟-7-羥基-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮
Figure TW201801749AD00445
在0℃下，向(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(62.4 mg, 0.1 mmol)及咪唑(34.0 mg, 0.500 mmol)於DCM中之攪拌溶液中添加TBS-Cl (45.2 mg, 0.300 mmol)。在同一溫度下持續攪拌30 min後，使混合物升溫至室溫並攪拌2 h。用EtOAc(10 mL)稀釋反應混合物，用水(2×10 mL)及鹽水(1×10 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由管柱(EA:PE= 1:10-1:1)純化殘餘物，以獲得產物(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-8b-(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙醯基)-2,6b-二氟-7-羥基-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(50 mg, 0.068 mmol, 67.8%產率)。LCMS (方法m，表7) Rt = 2.144 min, m/z 738 (M+H)。步驟 2 ： 合成((S)-1-((4-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙醯基)-2,6b-二氟-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00446
向(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-8b-(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙醯基)-2,6b-二氟-7-羥基-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(0.148 g, 0.2 mmol)及(S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸(0.076 g, 0.400 mmol)於DCM (3 mL)中之攪拌溶液中添加吡啶(0.162 mL, 2.000 mmol)，然後逐滴添加POCl3 (0.075 mL, 0.800 mmol)。將反應混合物在環境溫度下攪拌1小時，然後在真空中濃縮，且藉由管柱(EA:PE=1:10-9:1)純化殘餘物，以獲得半固體狀((S)-1-((4-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙醯基)-2,6b-二氟-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.073 g, 0.080 mmol, 40%產率)。LCMS (方法m，表7) Rt = 2.156 min, m/z 909 (M+H)。步驟 3 ： 合成(S)-2-胺基-N-(4-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00447
向((S)-1-((4-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙醯基)-2,6b-二氟-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.091 g, 0.1 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之攪拌溶液中添加TFA (1 mL, 12.98 mmol)，且將溶液在環境溫度下攪拌2小時，然後在真空中濃縮，以獲得產物(S)-2-胺基-N-(4-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a, 8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)丙醯胺(7.21 g, 10.38 mmol, 80%產率)。LCMS (方法m，表7) Rt = 1.653 min, m/z 695 (M+H)。步驟 4 ： 合成(S)-5-(第三丁氧基)-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-5-側氧基戊酸
Figure TW201801749AD00448
向(S)-2-胺基-5-(第三丁氧基)-5-側氧基戊酸(406 mg, 2 mmol)及3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(532 mg, 2.000 mmol)於二甲基甲醯胺(2 mL)中之攪拌溶液中添加DIPEA (0.524 mL, 3.00 mmol)。在室溫下持續攪拌2h後，用EtOAc (10 mL)稀釋反應混合物，用水(2 × 10 mL)及鹽水(1×10 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在真空中濃縮，且藉由管柱(MeOH/DCM=0:10-1:10)純化殘餘物，以獲得黃色油狀標題化合物(209 mg, 0.590 mmol, 29.5%產率)。LCMS (方法m，表7) Rt = 1.490 min, m/z 377 (M+Na)。步驟 5 ： 合成(S)-5-(((S)-1-((4-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS, 8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-4-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-5-側氧基戊酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00449
將(S)-2-胺基-N-(4-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b, 11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)丙醯胺(40 mg, 0.058 mmol)、(S)-5-(第三丁氧基)-2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-5-側氧基戊酸(30.6 mg, 0.086 mmol)、HATU (32.8 mg, 0.086 mmol)及DIPEA (0.030 mL, 0.173 mmol)於二甲基甲醯胺(2 mL)中之溶液在室溫下攪拌過夜，且用EtOAc (10 mL)稀釋，用水(2 ×10 mL)及鹽水(1×10 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下蒸發。藉由管柱層析(MeOH/ DCM=0:10-1:10)純化殘餘物以獲得標題化合物(30 mg, 0.029 mmol, 50.5%產率)。LCMS (方法m，表7) Rt = 2.051 min, m/z 1031 (M+H)。步驟 6 ： 合成(S)-5-(((S)-1-((4-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-4-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-5-側氧基戊酸
Figure TW201801749AD00450
向(S)-5-(((S)-1-((4-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R, 11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-4-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-5-側氧基戊酸第三丁基酯(10.31 mg, 0.01 mmol)於DCM (0.5 mL)中之攪拌溶液中添加TFA (0.5 mL, 6.49 mmol)。持續攪拌2 h後，在真空中濃縮反應混合物以獲得標題化合物(6.83 mg, 7.00 µmol, 70%產率)。LCMS (方法m，表7) Rt = 1.875 min, m/z 975 (M+H)。實例 13 ： 合成N-(4-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯氧基)苯基)-1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧雜三十九烷-39-醯胺步驟 1 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(4-胺基苯氧基)苯基)-8b-(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙醯基)-2,6b-二氟-7-羥基-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮
Figure TW201801749AD00451
在0℃下，向(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(4-胺基苯氧基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(290 mg, 0.477 mmol)及咪唑(162 mg, 2.386 mmol)於CH2 Cl2 (10 mL)中之攪拌溶液中添加TBS-Cl (216 mg, 1.432 mmol)。在同一溫度下持續攪拌30 min後，使混合物升溫至室溫並攪拌2 h。用EtOAc(10 mL)稀釋反應混合物，用水(2×10 mL)及鹽水(1×10 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由管柱(EA:PE= 1:10-9:1)純化殘餘物以獲得標題化合物(300 mg, 0.416 mmol, 87%產率)。LCMS (方法m，表7) Rt = 1.812 min, m/z 722 (M+H)。步驟 2 ： 合成(39-((4-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙醯基)-2,6b-二氟-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯氧基)苯基)胺基)-39-側氧基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧雜三十九烷基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00452
向(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(4-胺基苯氧基)苯基)-8b-(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙醯基)-2,6b-二氟-7-羥基-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(144 mg, 0.2 mmol)及2,2-二甲基-4-側氧基-3,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41-十三氧雜-5-氮雜四十四烷-44-酸(144 mg, 0.200 mmol)於CH2 Cl2 (3 mL)中之攪拌溶液中添加吡啶(0.162 mL, 2.000 mmol)，然後逐滴添加POCl3 (0.037 mL, 0.400 mmol)。將反應混合物在環境溫度下攪拌1小時，然後在真空中濃縮，且藉由管柱層析(MeOD:DCM=0:10-1:10)純化殘餘物，以獲得半固體狀標題化合物(120 mg, 0.084 mmol, 42.2%產率)。LCMS (方法m，表7) Rt = 2.065 min, m/z 1422 (M+H-100)。步驟 3 ： 合成1-胺基-N-(4-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯氧基)苯基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧雜三十九烷-39-醯胺
Figure TW201801749AD00453
向(39-((4-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙醯基)-2,6b-二氟-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯氧基)苯基)胺基)-39-側氧基-3,6,9,12,15,18,21,24, 27,30,33,36-十二氧雜三十九烷基)胺基甲酸第三丁基酯(190 mg, 0.134 mmol)於二氯甲烷(0.5 mL)中之攪拌溶液中添加TFA (0.1 mL, 1.298 mmol)，且將溶液在環境溫度下攪拌2小時，然後在真空中濃縮以獲得標題化合物(100 mg, 0.083 mmol, 62.0%產率)。LCMS (方法m，表7) Rt = 1.521 min, m/z 1208 (M+H)。步驟 4 ： 合成N-(4-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯氧基)苯基)-1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧雜三十九烷-39-醯胺
Figure TW201801749AD00454
將DIPEA (6.99 µL, 0.040 mmol)添加至1-胺基-N-(4-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯氧基)苯基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧雜三十九烷-39-醯胺(0.024 g, 0.02 mmol)及3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(7.99 mg, 0.030 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)中之溶液中，且將混合物在室溫下攪拌2 h。用EtOAc (10 mL)稀釋反應混合物且用水(2×10 mL)、鹽水(1×10 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由管柱層析(MeOH/DCM=0:100-10:100)純化殘餘物以獲得標題化合物(0.011 g, 8.20 µmol, 41%產率)。LCMS (方法m，表7) Rt = 1.679 min, m/z 1359 (M+H)。實例 14 ： 合成6-(((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-6-側氧基己酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(78號化合物)
Figure TW201801749AD00455
將(S)-2-胺基-N-((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)丙醯胺(0.060 g, 0.080 mmol)及N ,N -二異丙基乙胺(0.14 mL, 0.802 mmol)於DMSO (1 mL)中之溶液逐滴添加至己二酸雙(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯(0.273 g, 0.802 mmol)於DMSO (3.5 mL)中之室溫溶液中。60 min後，藉由添加TFA於水中之7 wt%溶液淬滅反應以使反應混合物達到pH 4-5。藉由Phenomenex C18(2) 5微米管柱(250 × 21 mm管柱)上之反相HPLC純化粗反應混合物。使用MeCN (A)及水中之0.1%甲酸(B)梯度，流速為30 mL/min (0-1.0 min 15% A, 1.0-11 min線性梯度15%-80% A，保持1 min)。在減壓下濃縮合併之部分以移除揮發性溶劑，且將所得溶液冷凍並凍乾以獲得白色固體狀標題化合物(21.2 mg, 0.022 mmol, 27%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.80 min, m/z = 1005.1 [M+MeOH+H+ ]。1 H NMR (DMSO) δ 0.84 (s, 3H), 1.17 (d,J = 7.1Hz, 3H), 1.25 (d,J = 7.1Hz, 3H), 1.48 (s, 4H), 1.57 (q,J = 6.2Hz, 4H), 1.68 (dq,J = 13.7, 6.3Hz, 3H), 1.99-2.06 (m, 1H), 2.09-2.18 (m, 2H), 2.18-2.36 (m, 2H), 2.55-2.72 (m, 3H), 2.78 (s, 4H), 3.87 (s, 2H), 4.14-4.22 (m, 2H), 4.26 (p,J = 7.1Hz, 1H), 4.33 (p,J = 7.1Hz, 1H), 4.49 (d,J = 19.4Hz, 1H), 4.93 (d,J = 5.1Hz, 1H), 5.43 (s, 1H), 5.49 (d,J = 5.4Hz, 1H), 5.54-5.75 (m, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.28 (dd,J = 10.2, 2.0Hz, 1H), 6.89 (d,J = 7.6Hz, 1H), 7.17 (t,J = 7.9Hz, 1H), 7.23 (t,J = 9.7Hz, 3H), 7.34 (d,J = 7.8Hz, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.44 (d,J = 8.1Hz, 1H), 7.99 (d,J = 7.2Hz, 1H), 8.02 (d,J = 7.3Hz, 1H), 9.77 (s, 1H); MS (ESI-) m/z = 971。實例 15 ： 合成((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00456
將HATU (106 mg, 0.280 mmol)及2,6-二甲吡啶(0.1 mL, 0.859 mmol)添加至(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(113 mg, 0.187 mmol)及(第三丁氧基羰基)-L-纈胺醯基-L-丙胺酸(53.8 mg, 0.187 mmol)於THF (1.25 mL)中之室溫懸浮液中。8h後，用EtOAc (16 mL)稀釋反應物，然後相繼用1M HCl水溶液(4 mL × 3)、飽和NaHCO3 水溶液(4 mL)、且然後用飽和鹽水溶液(4 mL)洗滌。在減壓下移除溶劑且藉由層析(12 g二氧化矽)純化產物，用0-10% MeOH/DCM梯度溶析以獲得標題化合物(148.6 mg, 0.170 mmol, 91%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.94 min, m/z = 875.9 [M+H+ ]。1 H NMR (DMSO-d 6 ) δ 9.85 (s, 1H), 7.99 (d,J = 7.1 Hz, 1H), 7.43 (dd,J = 8.0, 1.7 Hz, 1H), 7.36 - 7.31 (m, 3H), 7.27 - 7.15 (m, 5H), 6.89 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.67 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 6.27 (dd,J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.73 - 5.52 (m, 1H), 5.50 (dd,J = 4.5, 1.7 Hz, 1H), 5.43 (s, 1H), 5.07 (t,J = 5.9 Hz, 1H), 4.93 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 4.49 (dd,J = 19.5, 6.4 Hz, 1H), 4.37 (t,J = 7.0 Hz, 1H), 4.25 - 4.12 (m, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.80 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 2.73 - 2.53 (m, 1H), 2.23 (ddd,J = 18.7, 11.9, 6.0 Hz, 2H), 2.08 - 1.99 (m, 1H), 1.93 (q,J = 7.0 Hz, 1H), 1.77 - 1.59 (m, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.35 (s, 9H), 1.25 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 0.89 - 0.74 (m, 9H)。實例 16 ： 合成(2S ,6aS ,6bR ,7S ,8aS ,8bS ,10R ,11aR ,12aS ,12bS )-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a,10-三甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮及(2S ,6aS ,6bR ,7S ,8aS ,8bS ,10S ,11aR ,12aS ,12bS )-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a,10-三甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮步驟 1 ： 合成1-(4-((4-溴苯基)硫基)苯基)乙酮
Figure TW201801749AD00457
將1-(4-氟苯基)乙酮(2.19 mL, 18.04 mmol)添加至4-溴苯硫醇(3.1 g, 16.40 mmol)及K2 CO3 (2.72 g, 19.67 mmol)於DMF (45 mL)中之攪拌溶液中，此後將反應物加熱至100℃並保持20 min。將反應物冷卻至環境溫度，用水(50 mL)稀釋且用EtOAc (3 × 50 mL)萃取。乾燥(MgSO4 )合併之有機物且在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，120 g)純化，用0-60% EtOAc/庚烷梯度溶析，獲得黃色固體狀標題化合物(3.24 g, 10.55 mmol, 64%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.95 min; m/z = 307.0 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.87 (d,J = 8.7 Hz, 2H), 7.62 (d,J = 8.6 Hz, 2H), 7.38 (d,J = 8.6 Hz, 2H), 7.28 (d,J = 8.7 Hz, 2H), 2.50 (s, 3H)。步驟 2 ： 合成(4-((4-乙醯基苯基)硫基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00458
使氮鼓泡通過1-(4-((4-溴苯基)硫基)苯基)乙酮(3.24 g, 10.55 mmol)、胺基甲酸第三丁基酯(1.483 g, 12.66 mmol)、Cs2 CO3 (5.15 g, 15.82 mmol)及二環己基(2',4',6'-三異丙基-[1,1'-聯苯]-2-基)膦(0.503 g, 1.055 mmol)於1,4-二噁烷中之混合物達30 min。將燒瓶抽空且用N2 (3×)回填。添加Pd2 dba3 (0.290 g, 0.316 mmol)並將反應物抽空且用N2 (3×)回填。將反應混合物加熱至100℃並保持18h。將反應物冷卻至環境溫度，用水(75 mL)處理，然後用EtOAc (3 × 50 mL)萃取，乾燥(MgSO4 )，且在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，120 g)純化，用0-60% EtOAc/庚烷梯度溶析，獲得黃色固體狀標題化合物(2.0 g, 5.82 mmol, 55%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.96 min; m/z = 344.0 [M+H+ ]。1 H NMR (501 MHz, DMSO-d 6) δ 9.62 (s, 1H), 7.82 (d,J = 8.7 Hz, 2H), 7.58 (d,J = 8.7 Hz, 2H), 7.43 (d,J = 6.7 Hz, 2H), 7.11 (d,J = 8.7 Hz, 2H), 2.49 (s, 3H), 1.47 (s, 9H)。步驟 3 ： 合成(2S ,6aS ,6bR ,7S ,8aS ,8bS ,10R ,11aR ,12aS ,12bS )-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a,10-三甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮及(2S ,6aS ,6bR ,7S ,8aS ,8bS ,10S ,11aR ,12aS ,12bS )-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a,10-三甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮
Figure TW201801749AD00459
將三氟甲磺酸(0.431 mL, 4.85 mmol)逐滴添加至(6S ,8S ,9R ,10S ,11S ,13S ,14S ,16R ,17S )-6,9-二氟-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(0.400 g, 0.970 mmol)、(4-((4-乙醯基苯基)硫基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(0.366 g, 1.067 mmol)及MgSO4 (0.350 g, 2.91 mmol)於MeCN (4.0 mL)中之0℃漿液中。30 min後，用EtOAc (25 mL)稀釋反應物，相繼用飽和NaHCO3 水溶液(20 mL)、用飽和鹽水溶液(25 mL)洗滌，乾燥(MgSO4 )，且然後在減壓下移除溶劑以獲得黃色泡沫。藉由層析(二氧化矽，40 g)純化，用0-10% MeOH/DCM梯度溶析，獲得呈縮酮異構物混合物形式之產物(460 mg, 0.721 mmol, 74%產率)。藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 50 mm)上之反相HPLC純化此材料之一部分。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為90 mL/min (0-5.0 min 15% A, 5.0-18 min線性梯度15%-75% A，然後保持5 min)。濃縮合併之部分以在減壓下移除揮發性溶劑，且將所得溶液冷凍並凍乾以獲得黃色固體狀縮酮異構物。次要縮酮異構物：(2S ,6aS ,6bR ,7S ,8aS ,8bS ,10R ,11aR ,12aS ,12bS )-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a,10-三甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮。黃色粉末(10.0 mg)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.80 min; m/z = 638.2 [M+H+ ]。1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.33 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 7.23 (dd,J = 10.1, 1.5 Hz, 1H), 7.19 - 7.12 (m, 2H), 6.96 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.76 - 6.63 (m, 2H), 6.29 (dd,J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.66 - 5.45 (m, 2H), 5.14 (d,J = 5.8 Hz, 1H), 4.65 (d,J = 19.3 Hz, 1H), 4.22 - 4.07 (m, 2H), 2.48 - 2.35 (m, 1H), 2.14 - 2.04 (m, 1H), 2.02 - 1.91 (m, 1H), 1.77 - 1.64 (m, 2H), 1.63 - 1.56 (m, 1H), 1.50 (dd,J = 13.2, 6.3 Hz, 1H), 1.44 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.14 - 0.98 (m, 1H), 0.80 (s, 3H)。主要縮酮異構物：(2S ,6aS ,6bR ,7S ,8aS ,8bS ,10S ,11aR ,12aS ,12bS )-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a,10-三甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮。黃色粉末(18.1 mg)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.85 min; m/z = 638.2 [M+H+ ]。1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.28 (d,J = 10.2 Hz, 1H), 7.20 (dd,J = 8.4, 7.2 Hz, 4H), 6.95 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 6.73 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.31 (d,J = 12.0 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.75 - 5.57 (m, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.00 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.22 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 4.06 - 3.80 (m, 4H), 2.72 - 2.55 (m, 1H), 2.39 - 2.27 (m, 1H), 2.17 - 2.02 (m, 2H), 1.79 - 1.56 (m, 3H), 1.50 (d,J = 12.4 Hz, 6H), 0.73 (s, 3H)。實例 17 ： 合成(6aR ,6bS ,7S ,8aS ,8bS ,10R ,11aR ,12aS ,12bS )-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a,10-三甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮及(6aR,6bS ,7S ,8aS ,8bS ,10S ,11aR ,12aS ,12bS )-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a,10-三甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮
Figure TW201801749AD00460
將三氟甲磺酸(0.24 mL, 2.66 mmol)逐滴添加至(8S ,9S ,10R ,11S ,13S ,14S ,16R ,17S )-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(0.200 g, 0.531 mmol)、(4-((4-乙醯基苯基)硫基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(0.201 g, 0.584 mmol)及MgSO4 (0.192 g, 1.59 mmol)於MeCN (2.0 mL)中之0℃漿液中。30 min後，用EtOAc (15 mL)稀釋反應物，相繼用飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)、且然後用飽和鹽水溶液(10 mL)洗滌，乾燥(MgSO4 )，並在減壓下移除溶劑以獲得黃色泡沫。藉由層析(二氧化矽，24 g)純化，用0-10% MeOH/DCM梯度溶析，獲得呈縮酮異構物混合物形式之產物(198 mg, 0.329 mmol, 62%產率)。藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 50 mm)上之反相HPLC純化此材料之一部分。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為90 mL/min (0-5.0 min 15% A, 5.0-18 min線性梯度15%-75% A，然後保持5 min)。濃縮合併之部分以在減壓下移除揮發性溶劑，且將所得溶液冷凍並凍乾以獲得兩種白色固體狀縮酮異構物。主要縮酮異構物：(6aR ,6bS ,7S ,8aS ,8bS ,10S ,11aR ,12aS ,12bS )-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a,10-三甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮。白色粉末(14.6 mg)。LCMS (方法r；表7) Rt = 0.83 min; m/z = 602.1 [M+H+ ]。1 H NMR (501 MHz, DMSO-d 6) δ 7.30 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.22 - 7.12 (m, 4H), 6.91 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.68 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.16 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 5.91 (s, 1H), 4.93 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 4.74 (brs, 2H), 4.30 (d,J = 2.9 Hz, 1H), 4.02 - 3.79 (m, 4H), 2.53 (dt,J = 14.7, 7.6 Hz, 1H), 2.30 (d,J = 14.8 Hz, 1H), 2.16 - 1.95 (m, 2H), 1.85 (d,J = 3.6 Hz, 1H), 1.78 - 1.67 (m, 2H), 1.55 (td,J = 15.2, 13.3, 7.7 Hz, 2H), 1.50 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.13 - 0.97 (m, 2H), 0.70 (s, 3H)。次要縮酮異構物：(6aR ,6bS ,7S ,8aS ,8bS ,10R ,11aR ,12aS ,12bS )-10-(4-((4-胺基苯基)硫基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a,10-三甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮。白色粉末(12.0 mg)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.80 min; m/z = 602.1[M+H+ ]。1 H NMR (501 MHz, DMSO-d 6) δ 7.32 (d,J = 6.8 Hz, 2H), 7.25 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.13 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.95 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.66 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.13 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 5.87 (s, 1H), 5.09 (d,J = 6.1 Hz, 1H), 4.71 (brs, 1H), 4.62 (d,J = 19.3 Hz, 1H), 4.22 (d,J = 2.9 Hz, 1H), 4.11 (d,J = 19.2 Hz, 2H), 2.47 - 2.37 (m, 1H), 2.25 - 2.07 (m, 1H), 1.94 (qd,J = 11.3, 3.8 Hz, 1H), 1.87 - 1.75 (m, 1H), 1.70 (s, 2H), 1.59 - 1.44 (m, 2H), 1.32 (d,J = 5.1 Hz, 6H), 1.18 - 1.03 (m, 1H), 0.78 (s, 3H), 0.61 (dd,J = 11.2, 3.5 Hz, 1H), 0.50 (qd,J = 12.9, 4.8 Hz, 1H)。實例 18 ： 合成2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(4-胺基苯氧基)-3-羥基苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮步驟 1 ： 合成3-甲氧基-4-(4-硝基苯氧基)苯甲醛
Figure TW201801749AD00461
將香草醛(2.5 g, 16.43 mmol)、4-氟硝基苯(2.61 mL, 24.65 mmol)及碳酸鉀(4.54 g, 32.9 mmol)溶解於DMF (15 mL)中並在80℃下攪拌過夜。冷卻後，用水處理混合物，且用EtOAc (×2)萃取。用水及鹽水洗滌合併之有機層，乾燥(Na2 SO4 )並濃縮。藉由層析(二氧化矽，120 g)純化，用庚烷中之0-40% EtOAc梯度溶析，提供淺黃色固體狀標題化合物(3.37 g, 75%)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.88 min；未觀察到m/z。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.00 (s, 1H), 8.26 - 8.17 (m, 2H), 7.72 - 7.60 (m, 2H), 7.42 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.12 - 7.03 (m, 2H), 3.82 (s, 3H)。步驟 2 ： 合成3-羥基-4-(4-硝基苯氧基)苯甲醛
Figure TW201801749AD00462
將三溴硼烷(110 mL, 110 mmol)添加至3-甲氧基-4-(4-硝基苯氧基)苯甲醛(6.02 g, 22.03 mmol)於DCM (100 mL)中之-78℃溶液中。將反應物在-78℃下攪拌1 h，然後在0℃下攪拌5小時。將混合物與冰混合，並用DCM萃取。用水及鹽水洗滌合併之有機層，乾燥(Na2 SO4 )並濃縮。藉由層析(二氧化矽，120 g)純化，用庚烷中之0-30% EtOAc梯度溶析，提供紫色油狀標題化合物(5.55 g, 97%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.80 min；未觀察到m/z。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.24 (s, 1H), 8.22 - 8.14 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.30 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 7.15 - 7.07 (m, 2H), 7.02 - 6.96 (m, 2H)。步驟 3 ： 合成4-(4-胺基苯氧基)-3-羥基苯甲醛
Figure TW201801749AD00463
將氯化亞錫(18.29 g, 96 mmol)添加至所添加3-羥基-4-(4-硝基苯氧基)苯甲醛(5.g, 19.29 mmol)、氯化亞錫(18.29 g, 96 mmol)於乙醇(60 mL)中之溶液中，將該溶液加熱至80℃並保持2h。將混合物冷卻且小心地與冰及飽和碳酸氫鈉水溶液混合，然後用EtOAc萃取多次。用鹽水洗滌合併之有機層，乾燥(Na2 SO4 )，經由Celite® 過濾，且濃縮濾液，以提供黃色固體狀標題化合物(1.18 g, 27%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.48 min; m/z =未觀察到。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.90 - 9.87 (m, 1H), 10.90 - 9.26 (m, 2H), 8.66 - 8.56 (m, 1H), 7.66 - 7.61 (m, 1H), 7.50 - 7.46 (m, 1H), 7.46 - 7.38 (m, 2H), 7.38 - 7.29 (m, 4H), 7.16 - 6.99 (m, 6H); MS(ESI-) m/z = 227.9 (M-H)。步驟 4 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(4-胺基苯氧基)-3-羥基苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮
Figure TW201801749AD00464
將過氯酸(2.64 mL, 24.25 mmol)添加至4-(4-胺基苯氧基)-3-羥基苯甲醛(0.611 g, 2.67 mmol)及(6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-二氟-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(1 g, 2.425 mmol)於THF (70 mL)中之室溫溶液中。16小時後，用水處理反應物且用EtOAc萃取兩次。用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和硫代硫酸鈉水溶液、然後飽和鹽水溶液洗滌合併之有機層，乾燥(Na2 SO4 )，且在減壓下移除溶劑。藉由Phenomenex C18(2) 5微米管柱(250 × 21 mm管柱)上之反相HPLC純化材料。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為30 mL/min (0.0-1.0 min 15% A, 1.0-10 min線性梯度至65% A，保持1 min)。在減壓下濃縮合併之部分以移除揮發性溶劑，且將所得溶液冷凍並凍乾，以獲得黃色固體狀標題產物(338.9 mg, 23%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.72 min; MS (ESI+) 624.2 (M+H);1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.88 (s, 2H), 7.28 (dd, 1H), 7.27 - 7.22 (m, 2H), 7.07 (d, 1H), 7.00 (d, 1H), 6.96 - 6.88 (m, 3H), 6.30 (dd, 1H), 6.18 - 6.08 (m, 1H), 5.78 - 5.67 (m, 1H), 5.65 - 5.52 (m, 1H), 5.42 (s, 1H), 5.00 - 4.95 (m, 1H), 4.53 (d, 1H), 4.27 - 4.18 (m, 2H), 2.79 - 2.57 (m, 1H), 2.36 - 2.28 (m, 1H), 2.24 (td, 1H), 2.13 - 2.01 (m, 1H), 1.80 - 1.66 (m, 3H), 1.65 - 1.52 (m, 1H), 1.51 (s, 3H), 0.88 (s, 3H)。實例 19 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4-胺基苯基)磺醯基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮步驟 1 ： 合成4-((4-溴苯基)硫基)苯甲腈
Figure TW201801749AD00465
將碳酸鉀(4.39 g, 31.7 mmol)添加至4-溴苯硫醇(5.0 g, 26.4 mmol)及4-氟苯甲腈(3.20 g, 26.4 mmol)於DMF (50 mL)中之溶液中，將該溶液加熱至120℃並保持3h。將反應物冷卻至0℃，添加水(100 mL)且用EtOAc (3 × 50 mL)萃取混合物。乾燥(MgSO4 )合併之有機物且在減壓下移除溶劑。藉由層析(80 g二氧化矽)純化，用0-60% EtOAc/庚烷梯度溶析，獲得黃色固體狀標題化合物(6.82 g, 23.5 mmol, 89%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.95 min; m/z = 291.2 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.72 (d,J = 8.7 Hz, 2H), 7.65 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 7.43 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 7.26 (d,J = 8.7 Hz, 2H)。步驟 2 ： 合成(4-((4-氰基苯基)硫基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00466
使氮鼓泡通過4-((4-溴苯基)硫基)苯甲腈(6.0 g, 20.68 mmol)、胺基甲酸第三丁基酯(2.91 g, 24.81 mmol)、二異丙基(2',4',5'-三異丙基-[1,1'-聯苯]-2-基)膦(0.820 g, 2.068 mmol)及Cs2 CO3 (10.11 g, 31.0 mmol)於1,4-二噁烷(207 mL)中之混合物達30 min。將燒瓶抽空且用N2 (3×)回填。添加Pd2 dba3 (0.568 g, 0.620 mmol)並將反應物抽空且用N2 (3×)回填。將反應混合物加熱至100℃並保持28h。將反應物冷卻至室溫，此後將其用水(200 mL)處理，用EtOAc (3 × 75 mL)萃取，乾燥(MgSO4 )且在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，120 g)純化，用0-30% EtOAc/庚烷梯度溶析，獲得黃色固體狀標題化合物(3.20 g, 9.80 mmol, 47%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 1.0 min; m/z = 344.1 [M+NH4 + ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.67 (s, 1H), 7.69 (d,J = 8.7 Hz, 2H), 7.61 (d,J = 8.7 Hz, 2H), 7.47 (d,J = 8.7 Hz, 2H), 7.14 (d,J = 8.6 Hz, 2H), 1.49 (s, 9H)。步驟 3 ： 合成(4-((4-氰基苯基)磺醯基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00467
將3-氯過氧基苯甲酸(639 mg, 3.71 mmol)逐份添加至(4-((4-氰基苯基)硫基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(480 mg, 1.471 mmol)於CH2 Cl2 (15 mL)中之室溫溶液中。30 min後，將反應物分配於水(20 mL)與EtOAc (10 mL)之間。分離各層且用EtOAc (2 × 25 mL)萃取水相。用飽和鹽水溶液(50 mL)洗滌合併之有機物，經MgSO4 乾燥，且在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，40 g)純化，用0-60% EtOAc/庚烷梯度溶析，獲得黃色固體狀標題化合物(372 mg, 1.04 mmol, 71%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.86 min; m/z = 376.0 [M+NH4 + ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.92 (s, 1H), 8.06 (s, 4H), 7.87 (d,J = 8.9 Hz, 2H), 7.66 (d,J = 9.0 Hz, 2H), 1.45 (s, 9H)。步驟 4 ： 合成(4-((4-甲醯基苯基)磺醯基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00468
將二異丁基氫化鋁(6.53 mL, 1.0 M於甲苯中，6.53 mmol)經5分鐘逐滴添加至(4-((4-氰基苯基)磺醯基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(0.780 g, 2.176 mmol)於THF (20 mL)中之0℃溶液中。30 min後，添加二異丁基氫化鋁(1.0 M於甲苯中) (2.176 mL, 2.176 mmol)且將反應物在0℃下再攪拌1h。在0℃下藉由緩慢添加1 N HCl水溶液(120 mL)淬滅反應且用EtOAc (2 × 75 mL)萃取水相。用飽和鹽水溶液(50 mL)洗滌合併之有機物，經MgSO4 乾燥且在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，80 g)純化，用0-10% CH2 Cl2 /MeOH梯度溶析，獲得黃色油狀標題化合物(0.275 g, 0.761 mmol, 35%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.83 min; m/z = 359.9 [M-H- ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.04 (s, 1H), 9.89 (s, 1H), 8.18 - 7.97 (m, 4H), 7.85 (d,J = 8.9 Hz, 2H), 7.64 (d,J = 8.9 Hz, 2H), 1.43 (s, 9H)。步驟 5 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4-胺基苯基)磺醯基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮
Figure TW201801749AD00469
將三氟甲磺酸(0.12 mL, 1,328 mmol)逐滴添加至(8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(0.100 g, 0.266 mmol)、(4-((4-甲醯基苯基)磺醯基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(0.106 g, 0.292 mmol)及MgSO4 (0.096 g, 0.797 mmol)於MeCN (1.0 mL)中之0℃漿液中。30分鐘後，用EtOAc (15 mL)稀釋反應物，且然後用飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)、然後用飽和鹽水溶液(10 mL)洗滌，且乾燥(MgSO4 )。在減壓下移除溶劑，獲得淺黃色泡沫，藉由層析(二氧化矽，24 g)純化，用0-10% CH2 Cl2 /MeOH梯度溶析，以獲得無色玻璃。藉由Phenomenex C18 (2) 10微米管柱(250 × 30 mm)上之製備型反相HPLC分離縮醛異構物。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為60 mL/min (0-3.0 min 15% A, 3.0-18 min線性梯度15%-80% A，然後保持5 min)。濃縮合併之部分以在減壓下移除揮發性溶劑，且將所得溶液冷凍並凍乾以獲得白色固體狀標題化合物(8.0 mg, 18%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.76 min; MS m/z = 620.0 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.81 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.61 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.49 (d,J = 8.8 Hz, 2H), 7.27 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 6.56 (d,J = 8.8 Hz, 2H), 6.12 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 5.89 (s, 1H), 5.47 (s, 1H), 4.91 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.48 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.24 (s, 1H), 4.13 (d,J = 19.5 Hz, 1H), 2.51 (s, 2H), 2.32 - 2.22 (m, 1H), 2.13 - 2.01 (m, 1H), 2.02 - 1.88 (m, 1H), 1.78 - 1.56 (m, 5H), 1.35 (s, 3H), 1.11 - 0.96 (m, 2H), 0.82 (s, 3H)。實例 20 ： N-(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)-3-(2-(2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)乙氧基)乙氧基)丙醯胺步驟 1 ： 合成(2-(2-(3-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S, 8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00470
將HATU (0.125 g, 0.328 mmol)添加至2,2-二甲基-4-側氧基-3,8,11-三氧雜-5-氮雜十四烷-14-酸(0.100 g, 0.361 mmol)、(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(0.199 g, 0.328 mmol)及2,6-二甲基吡啶(0.12 mL, 0.983 mmol)於THF (2.0 mL)中之室溫溶液中。24小時後，在減壓下移除溶劑且藉由層析(二氧化矽，24 g)純化反應混合物，用0-10% MeOH/CH2 Cl2 梯度溶析，以獲得淺黃色泡沫狀標題化合物(226 mg, 0.261 mmol, 80%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.91 min, m/z = 865.5 [M+H+ ]。1 H NMR (DMSO-d 6 ) δ 0.86 (s, 3H), 1.36 (s, 9H), 1.50 (s, 4H), 1.71 (ddt,J = 17.9, 13.3, 5.8 Hz, 3H), 1.94 - 2.14 (m, 2H), 2.18 - 2.39 (m, 1H), 2.55 - 2.74 (m, 1H), 3.03 (q,J = 6.0 Hz, 2H), 3.48 (hept,J = 3.1, 2.7 Hz, 4H), 3.66 (t,J = 6.3 Hz, 2H), 3.88 (s, 2H), 4.13 - 4.26 (m, 2H), 4.51 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.94 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 5.45 (s, 1H), 5.52 (dd,J = 4.3, 1.7 Hz, 1H), 5.65 (dddd,J = 48.5, 11.4, 6.7, 2.0 Hz, 1H), 6.13 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 6.73 (t,J = 5.8 Hz, 1H), 6.80 - 6.97 (m, 1H), 7.18 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.25 (td,J = 9.1, 8.2, 1.6 Hz, 3H), 7.32 - 7.39 (m, 3H), 7.45 (dd,J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.63 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 8.11 - 8.85 (m, 1H), 9.83 (s, 1H)。步驟 2 ： 3-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)-N-(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b, 11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00471
將TFA (1.0 mL, 12.98 mmol)添加至(2-(2-(3-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)胺基甲酸第三丁基酯(226 mg, 0.261 mmol)於CH2 Cl2 (3.0 mL)中之室溫溶液中。45 min後，在真空下移除揮發性物且粗產物不經進一步純化即用於下一步驟，假設100%產率。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.80 min, m/z = 765.4 [M+H+ ]。步驟 3 ： 合成N-(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)-3-(2-(2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)乙氧基)乙氧基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00472
將N ,N -二異丙基乙胺(0.155 mL, 0.88 mmol)添加至3-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)-N-(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)丙醯胺(0.226 g, 0.295 mmol)及3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(0.087 g, 0.325 mmol)於DMF (2.0 mL)中之室溫溶液中。45 min後，藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 50 mm管柱)上之反相HPLC純化粗反應混合物。使用MeCN (A)及水中之0.1%甲酸(B)梯度，流速為80 mL/min (0-5.0 min 18% A, 5.0-25.0 min線性梯度15%-80% A，保持5 min)。在減壓下濃縮合併之部分以移除揮發性溶劑，且將所得溶液冷凍並凍乾以獲得白色固體狀標題化合物(48 mg, 0.052 mmol, 18%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.84 min, m/z = 916.4 [M+H+ ]。1 H NMR (DMSO-d 6 ) δ 0.84 (s, 3H), 1.48 (s, 4H), 1.59 - 1.76 (m, 3H), 2.03 (d,J = 13.9 Hz, 1H), 2.17 - 2.38 (m, 4H), 2.54 - 2.72 (m, 1H), 3.11 (q,J = 5.8 Hz, 2H), 3.31 - 3.35 (m, 4H), 3.42 - 3.51 (m, 4H), 3.57 (dd,J = 7.8, 6.8 Hz, 2H), 3.64 (t,J = 6.3 Hz, 2H), 3.86 (s, 2H), 4.10 - 4.25 (m, 2H), 4.49 (dd,J = 19.5, 6.0 Hz, 1H), 4.93 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 5.07 (t,J = 5.9 Hz, 1H), 5.43 (s, 1H), 5.51 (s, 1H), 5.53 - 5.74 (m, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.28 (dd,J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.88 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.97 (s, 2H), 7.16 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.20 - 7.28 (m, 3H), 7.30 - 7.39 (m, 3H), 7.38 - 7.48 (m, 1H), 7.96 (t,J = 5.6 Hz, 1H), 9.81 (s, 1H)。實例 21 ： N-(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)-1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-醯胺
Figure TW201801749AD00473
其係藉由與實例20相同之程序製備。白色固體(17 mg, 0.017 mmol, 9%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.82 min, m/z = 1026 [M+Na+ ]。1 H NMR (DMSO-d 6 ) δ 0.85 (s, 3H), 1.22 (s, 8H), 1.49 (s, 3H), 1.61 - 1.77 (m, 2H), 2.03 (d,J = 13.9 Hz, 1H), 2.12 - 2.40 (m, 3H), 2.55 - 2.66 (m, 1H), 3.12 (q,J = 5.8 Hz, 2H), 3.33 (s, 1H), 3.41 - 3.51 (m, 11H), 3.58 (t,J = 7.3 Hz, 2H), 3.65 (t,J = 6.3 Hz, 2H), 3.87 (s, 2H), 4.18 (d,J = 14.1 Hz, 2H), 4.42 - 4.61 (m, 1H), 4.93 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 5.07 (s, 1H), 5.44 (s, 1H), 5.50 (s, 1H), 5.6-5.7 (m, 1H), 6.28 (dd,J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.88 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 6.98 (s, 2H), 7.17 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 7.24 (t,J = 9.8 Hz, 3H), 7.32 - 7.38 (m, 3H), 7.43 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 9.81 (s, 1H)。實例 22 ： N-(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)-1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-醯胺
Figure TW201801749AD00474
其係藉由與實例20相同之程序製備。白色固體(23.2 mg, 0.021 mmol, 22%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.83 min, m/z = 1092.3 [M+H+ ]。1 H NMR (DMSO-d 6 ) δ 0.84 (s, 3H), 1.48 (s, 4H), 1.58 - 1.76 (m, 3H), 2.02 (dt,J = 14.0, 3.6 Hz, 1H), 2.17 - 2.37 (m, 4H), 2.62 (dtd,J = 24.1, 11.9, 4.4 Hz, 1H), 3.12 (q,J = 5.8 Hz, 2H), 3.40 - 3.52 (m, 23H), 3.57 (t,J = 7.3 Hz, 2H), 3.64 (t,J = 6.3 Hz, 2H), 3.86 (s, 2H), 4.10 - 4.25 (m, 2H), 4.49 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.92 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 5.08 (s, 1H), 5.43 (s, 1H), 5.49 - 5.73 (m, 2H), 6.11 (s, 1H), 6.27 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 6.87 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.97 (s, 2H), 7.16 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.23 (dd,J = 13.9, 9.0 Hz, 3H), 7.30 - 7.38 (m, 3H), 7.43 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.98 (t,J = 5.6 Hz, 1H), 9.81 (s, 1H)。實例 23 ： N-(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)-1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氧雜三十九烷-39-醯胺
Figure TW201801749AD00475
其係藉由與實例20相同之程序製備。分離為無色玻璃(20 mg, 0.015 mmol, 18%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.85 min, m/z = 1356.4 [M+H+ ]。1 H NMR (DMSO-d 6 ) δ 0.84 (s, 3H), 1.48 (s, 4H), 1.67 (d,J = 14.3 Hz, 3H), 2.03 (d,J = 14.0 Hz, 1H), 2.30 (q,J = 9.8, 8.5 Hz, 4H), 2.65 (s, 1H), 3.13 (q,J = 5.8 Hz, 2H), 3.34 (t,J = 6.2 Hz, 2H), 3.39 - 3.54 (m, 46H), 3.57 (t,J = 7.3 Hz, 2H), 3.64 (t,J = 6.2 Hz, 2H), 3.86 (s, 2H), 4.18 (d,J = 14.6 Hz, 2H), 4.49 (d,J = 19.2 Hz, 1H), 4.93 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 5.07 (s, 1H), 5.43 (s, 1H), 5.50 (s, 1H), 5.62 (d,J = 41.1 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 6.20 - 6.36 (m, 1H), 6.87 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.98 (s, 2H), 7.16 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.23 (t,J = 9.0 Hz, 3H), 7.34 (d,J = 8.4 Hz, 3H), 7.43 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 9.80 (s, 1H)。實例 24 ： N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00476
在4 mL瓶中添加3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙酸(43.5 mg, 0.26mmol)，然後添加溶解於DMA (1.0 mL)中之HATU (148 mg, 0.39 mmol)，隨後添加純N,N-二異丙基乙胺(67 ul, 0.39 mmol)。然後添加(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)硫基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(80.83 mg, 0.13 mmol) (80.83 mg, 0.13 mmol)溶解於DMA (0.5 mL)中之溶液。將反應物在室溫下振盪2小時。藉由LC/MS檢查反應物且藉由反相HPLC (方法q，線性梯度45%-75%)純化，以提供標題化合物。LCMS (方法s，表7) Rt = 0.78 min; MS m/z = 775.3 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6/D2 O，溫度= 27℃) δ 7.61 - 7.57 (m, 1H), 7.49 - 7.44 (m, 1H), 7.43 - 7.37 (m, 2H), 7.34 - 7.22 (m, 4H), 7.06 - 7.02 (m, 1H), 6.92 (s, 2H), 6.29 (dd,J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.14 - 6.09 (m, 1H), 5.72 - 5.52 (m, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.98 - 4.93 (m, 1H), 4.52 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.26 - 4.14 (m, 2H), 3.73 - 3.71 (m, 2H), 3.69 - 3.65 (m, 2H), 2.73 - 2.55 (m, 1H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 2.25 - 2.12 (m, 1H), 2.03 - 1.95 (m, 1H), 1.79 - 1.62 (m, 3H), 1.55 - 1.39 (m, 4H), 0.85 (s, 3H)。實例 25 ： N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺
Figure TW201801749AD00477
其係如實例24中所述自6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸製備。藉由反相HPLC (方法s，線性梯度50%-80%)純化。LCMS (方法c，表7) Rt = 0.82 min; MS m/z = 817.3 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6/D2 O，溫度= 27℃) δ 7.68 - 7.65 (m, 1H), 7.53 - 7.49 (m, 1H), 7.42 - 7.38 (m, 2H), 7.33 - 7.24 (m, 4H), 7.04 - 7.01 (m, 1H), 6.91 (s, 2H), 6.29 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 6.14 - 6.10 (m, 1H), 5.72 - 5.53 (m, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.96 - 4.92 (m, 1H), 4.51 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 2H), 3.38 (t,J = 7.0 Hz, 2H), 2.70 - 2.54 (m, 1H), 2.35 - 2.11 (m, 5H), 2.03 - 1.96 (m, 1H), 1.76 - 1.61 (m, 3H), 1.59 - 1.41 (m, 8H), 1.24 - 1.13 (m, 2H), 0.85 (s, 3H)。實例 26 ： N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)-4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)苯甲醯胺
Figure TW201801749AD00478
其係如實例24中所述自4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)苯甲酸製備。藉由反相HPLC (方法s，線性梯度50%-80%)純化。LCMS (方法c，表7) Rt = 0.83 min; MS m/z = 823.2 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6/D2 O，溫度= 27℃) δ 8.02 - 7.97 (m, 2H), 7.88 - 7.85 (m, 1H), 7.77 - 7.73 (m, 1H), 7.52 - 7.47 (m, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 3H), 7.35 - 7.30 (m, 2H), 7.29 - 7.23 (m, 1H), 7.15 (s, 2H), 7.14 - 7.10 (m, 1H), 6.29 (dd,J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.15 - 6.09 (m, 1H), 5.71 - 5.54 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 4.97 - 4.94 (m, 1H), 4.52 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.24 - 4.14 (m, 2H), 2.70 - 2.57 (m, 1H), 2.37 - 2.27 (m, 1H), 2.24 - 2.12 (m, 1H), 2.03 - 1.97 (m, 1H), 1.75 - 1.64 (m, 3H), 1.54 - 1.42 (m, 4H), 0.85 (s, 3H)。實例 27 ： N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)-4-((2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)甲基)環己烷甲醯胺
Figure TW201801749AD00479
其係如實例24中所述自4-((2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)甲基)環己烷-1-甲酸製備。藉由反相HPLC (方法q，線性梯度50%-80%)純化。LCMS (方法s，表7) Rt = 0.85 min; MS m/z = 843.3 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6/D2 O，溫度= 27℃) δ 7.68 (t,J = 2.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 7.42 - 7.37 (m, 2H), 7.35 - 7.22 (m, 4H), 7.04 - 7.01 (m, 1H), 6.95 (s, 2H), 6.29 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.71 - 5.53 (m, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.99 - 4.93 (m, 1H), 4.51 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.25 - 4.15 (m, 2H), 3.26 (d,J = 7.0 Hz, 2H), 2.73 - 2.58 (m, 1H), 2.35 - 2.14 (m, 3H), 2.03 - 1.96 (m, 1H), 1.83 - 1.62 (m, 7H), 1.59 - 1.40 (m, 5H), 1.37 - 1.24 (m, 2H), 0.98 - 0.87 (m, 2H), 0.85 (s, 3H)。實例 28 ： N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)-1-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-醯胺
Figure TW201801749AD00480
其係如實例24中所述自1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3-側氧基-7,10,13,16-四氧雜-4-氮雜十九烷-19-酸製備。藉由反相HPLC (方法s，線性梯度45%-75%)純化。LCMS (方法c，表7) Rt = 0.76 min; MS m/z = 1022.4 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6/D2 O，溫度= 27℃) δ 7.70 - 7.66 (m, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 1H), 7.43 - 7.37 (m, 2H), 7.34 - 7.23 (m, 4H), 7.06 - 7.01 (m, 1H), 6.92 (s, 2H), 6.29 (dd,J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.14 - 6.11 (m, 1H), 5.72 - 5.53 (m, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.00 - 4.92 (m, 1H), 4.51 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.26 - 4.15 (m, 2H), 3.66 (t,J = 6.1 Hz, 2H), 3.59 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 3.51 - 3.40 (m, 11H), 3.33 (t,J = 5.8 Hz, 2H), 3.12 (t,J = 5.8 Hz, 2H), 2.70 - 2.58 (m, 1H), 2.51 - 2.47 (m, 3H), 2.36 - 2.25 (m, 3H), 2.24 - 2.13 (m, 1H), 2.04 - 1.97 (m, 1H), 1.75 - 1.65 (m, 3H), 1.56 - 1.42 (m, 4H), 0.85 (s, 3H)。實例 29 ： N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)-1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-醯胺
Figure TW201801749AD00481
其係如實例24中所述自1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-酸製備。藉由反相HPLC (方法s，線性梯度45%-75%)純化。LCMS (方法c，表7) Rt = 0.80 min; MS m/z = 951.3 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6/D2 O，溫度= 27℃) δ 7.69 - 7.66 (m, 1H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 7.42 - 7.37 (m, 2H), 7.35 - 7.24 (m, 4H), 7.06 - 7.01 (m, 1H), 6.93 (s, 2H), 6.29 (dd,J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.17 - 6.10 (m, 1H), 5.71 - 5.55 (m, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.98 - 4.93 (m, 1H), 4.51 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.24 - 4.16 (m, 2H), 3.66 (t,J = 6.1 Hz, 2H), 3.56 - 3.51 (m, 2H), 3.50 - 3.36 (m, 14H), 2.71 - 2.60 (m, 1H), 2.51 - 2.48 (m, 2H), 2.33 - 2.27 (m, 1H), 2.18 (q,J = 10.5 Hz, 1H), 2.03 - 1.94 (m, 1H), 1.74 - 1.66 (m, 3H), 1.56 - 1.44 (m, 4H), 0.85 (s, 3H)。實例 30 ： N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)-1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-醯胺
Figure TW201801749AD00482
其係如實例24中所述自1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-酸製備。藉由反相HPLC (方法q，線性梯度10%-100%)純化。LCMS (方法s，表7) Rt = 0.80 min; MS m/z未電離；1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6/D2 O，溫度= 27℃) δ 7.69 - 7.66 (m, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 1H), 7.44 - 7.37 (m, 2H), 7.34 - 7.24 (m, 4H), 7.06 - 7.01 (m, 1H), 6.94 (s, 2H), 6.29 (dd,J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.69 - 5.55 (m, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.97 - 4.93 (m, 1H), 4.51 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.23 - 4.16 (m, 2H), 3.66 (t,J = 6.1 Hz, 2H), 3.56 - 3.38 (m, 22H), 2.70 - 2.63 (m, 1H), 2.54 - 2.53 (m, 2H), 2.51 - 2.48 (m, 2H), 2.33 - 2.26 (m, 1H), 2.18 (q,J = 10.3 Hz, 1H), 2.03 - 1.97 (m, 1H), 1.73 - 1.65 (m, 3H), 1.55 - 1.44 (m, 4H), 0.85 (s, 3H)。實例 31 ： N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)-3-(2-(2-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00483
其係如實例24中所述自3-(2-(2-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸製備。藉由反相HPLC (方法q，線性梯度45%-75%)純化。LCMS (方法s，表7) Rt = 0.80 min; MS m/z = 908.1 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6/D2 O，溫度= 27℃) δ 7.69 - 7.66 (m, 1H), 7.54 - 7.51 (m, 1H), 7.42 - 7.38 (m, 2H), 7.34 - 7.24 (m, 4H), 7.06 - 7.02 (m, 1H), 6.93 (s, 2H), 6.29 (dd,J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.68 - 5.55 (m, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.98 - 4.94 (m, 1H), 4.51 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.24 - 4.16 (m, 2H), 3.64 (t,J = 6.1 Hz, 2H), 3.55 - 3.50 (m, 2H), 3.47 - 3.37 (m, 9H), 2.69 - 2.66 (m, 1H), 2.54 - 2.53 (m, 1H), 2.50 - 2.47 (m, 2H), 2.32 - 2.25 (m, 1H), 2.21 - 2.14 (m, 1H), 2.03 - 1.97 (m, 1H), 1.74 - 1.65 (m, 3H), 1.54 - 1.43 (m, 4H), 0.85 (s, 3H)。實例 32 ： N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)-3-(2-(2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)乙氧基)乙氧基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00484
其係如實例24中所述自3-(2-(2-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯胺基)乙氧基)乙氧基)丙酸製備。藉由反相HPLC (方法q，線性梯度45%-75%)純化。LCMS (方法s，表7) Rt = 0.76 min; MS m/z = 934.4 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6/D2 O，溫度= 27℃) δ 7.69 - 7.66 (m, 1H), 7.54 - 7.49 (m, 1H), 7.42 - 7.38 (m, 2H), 7.34 - 7.23 (m, 4H), 7.05 - 7.01 (m, 1H), 6.91 (s, 2H), 6.29 (dd,J = 10.2, 1.9 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.68 - 5.56 (m, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.97 - 4.93 (m, 1H), 4.51 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 2H), 3.66 (t,J = 6.2 Hz, 2H), 3.58 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 3.51 - 3.43 (m, 4H), 3.33 (t,J = 5.8 Hz, 2H), 3.10 (t,J = 5.7 Hz, 2H), 2.63-2.58(m,1H), 2.55 - 2.53 (m, 1H), 2.50 - 2.49 (m, 2H), 2.32 - 2.27 (m, 2H), 2.18 (q,J = 10.3 Hz, 1H), 2.03 - 1.97 (m, 1H), 1.73 - 1.63 (m, 3H), 1.54 - 1.42 (m, 4H), 0.85 (s, 3H)。實例 33 ： N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙醯胺
Figure TW201801749AD00485
其係如實例24中所述自2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙酸製備。藉由反相HPLC (方法s，線性梯度45%-75%)純化。LCMS (方法c，表7) Rt = 0.95 min; MS m/z = 761.7 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6/D2 O，溫度= 27℃) δ 7.65 - 7.61 (m, 1H), 7.52 - 7.47 (m, 1H), 7.44 - 7.39 (m, 2H), 7.36 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 7.33 - 7.25 (m, 3H), 7.11 - 7.08 (m, 1H), 7.07 (s, 2H), 6.32 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.72 - 5.55 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.00 - 4.92 (m, 1H), 4.53 (d,J = 19.5 Hz, 1H), 4.30 - 4.17 (m, 4H), 2.72 - 2.61 (m, 1H), 2.38 - 2.28 (m, 1H), 2.19 (q,J = 10.3 Hz, 1H), 2.05 - 1.98 (m, 1H), 1.78 - 1.64 (m, 3H), 1.60 - 1.42 (m, 4H), 0.87 (s, 3H)。實例 34 ： N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯基)硫基)苯基)-3-(2-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00486
其係如實例24中所述自3-(2-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸製備。藉由反相HPLC (方法q，線性梯度40%-75%)純化。LCMS (方法c，表7) Rt = 0.95 min; MS m/z = 863.9 (M+H)+ ;1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6/D2 O，溫度= 27℃)δ 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.55 - 7.51 (m, 1H), 7.44 - 7.38 (m, 2H), 7.36 - 7.25 (m, 4H), 7.08 - 7.03 (m, 1H), 6.91 (s, 2H), 6.31 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 6.14 (s, 1H), 5.72 - 5.55 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 4.98 - 4.94 (m, 1H), 4.53 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.27 - 4.14 (m, 2H), 3.63 (t,J = 6.1 Hz, 2H), 3.53 - 3.43 (m, 8H), 2.72 - 2.61 (m, 1H), 2.48 (t,J = 6.2 Hz, 2H), 2.35 - 2.24 (m, 1H), 2.20 (q,J = 10.4 Hz, 1H), 2.05 - 1.96 (m, 1H), 1.76 - 1.65 (m, 3H), 1.57 - 1.41 (m, 4H), 0.87 (s, 3H)。實例 34A ： 合成3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N -((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)丙醯胺步驟 1 ： 合成(S)-2-胺基-N -((S)-1-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00487
將HATU (601 mg, 1.580 mmol)及2,6-二甲吡啶(0.37 mL, 3.16 mmol)添加至(S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙醯胺基)丙酸(765 mg, 2.00 mmol)、(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(600 mg, 1.053 mmol)於DCM (6 mL)及DMF (12 mL)中之0℃溶液中。30 min後，使混合物升溫至室溫並攪拌過夜。將二乙胺(2.18 mL, 21.06 mmol)添加至反應混合物中，並在室溫下持續攪拌3 h，此後在減壓下移除揮發性溶劑。將殘餘物溶解於1:1 DMSO:MeOH (12 mL)中且藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 50 mm管柱)上之反相HPLC純化。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為90 mL/min (0-5.0 min 15% A, 5.0-20 min線性梯度15%-85% A，保持5 min)。凍乾合併之產物部分以獲得灰白色固體狀標題化合物(447 mg, 0.628 mmol, 60%產率)。LC-MS (方法r，表7) Rt = 0.78 min, m/z = 711.9 [M+H]。1 H NMR (501 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.03 (s, 1H), 8.63 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 8.07 (d,J = 5.4 Hz, 3H), 7.44 - 7.38 (m, 2H), 7.38 - 7.34 (m, 2H), 7.29 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.23 - 7.16 (m, 3H), 6.90 (dt,J = 7.7, 1.3 Hz, 1H), 6.14 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 5.90 (t,J = 1.6 Hz, 1H), 5.38 (s, 1H), 4.90 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 4.52 - 4.37 (m, 2H), 4.27 (q,J = 3.3 Hz, 1H), 4.16 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 3.87 (s, 2H), 2.58 - 2.49 (m, 1H), 2.28 (ddd,J = 13.4, 4.5, 2.1 Hz, 1H), 2.09 (dtd,J = 17.0, 10.6, 5.0 Hz, 1H), 2.00 (dd,J = 12.2, 5.7 Hz, 1H), 1.78 - 1.54 (m, 5H), 1.37 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.30 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.01 (ddd,J = 22.1, 11.9, 4.2 Hz, 2H), 0.84 (s, 3H)。步驟 2 ： 合成3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N -((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)丙醯胺
Figure TW201801749AD00488
將N ,N -二異丙基乙胺(0.33 mL, 1.875 mmol)添加至3-馬來醯亞胺基丙酸N -琥珀醯亞胺基酯(250 mg, 0.938 mmol)及(S)-2-胺基-N -((S)-1-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)丙醯胺(445 mg, 0.625 mmol)於DMF (12 mL)中之室溫溶液中。在室溫下30 min後，在減壓下移除揮發性溶劑。用1:1 DMSO:MeOH (12 mL)稀釋殘餘物且藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 50 mm管柱)上之反相HPLC純化。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為90 mL/min (0-5.0 min 25% A, 5.0-20 min線性梯度25%-90% A，保持5 min)。凍乾合併之產物部分以獲得灰白色固體狀標題化合物(295.1 mg, 0.342 mmol, 55%產率)。LC-MS (方法r，表7) Rt = 0.85 min, m/z = 863.4 [M+H]。1 H NMR (501 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.71 (s, 1H), 8.17 (d,J = 7.0 Hz, 1H), 8.03 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 7.43 (dd,J = 7.8, 1.1 Hz, 2H), 7.38 - 7.32 (m, 2H), 7.29 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.22 - 7.15 (m, 3H), 6.96 (s, 2H), 6.88 (dt,J = 7.8, 1.3 Hz, 1H), 6.13 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 5.90 (t,J = 1.6 Hz, 1H), 5.37 (s, 1H), 4.90 (d,J = 5.4 Hz, 1H), 4.48 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.32 (p,J = 7.1 Hz, 1H), 4.27 (q,J = 3.3 Hz, 1H), 4.21 (p,J = 7.1 Hz, 1H), 4.16 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 3.87 (s, 2H), 3.59 (t,J = 7.3 Hz, 2H), 2.57 - 2.49 (m, 1H), 2.38 (dd,J = 8.0, 6.6 Hz, 2H), 2.32 - 2.24 (m, 1H), 2.15 - 2.04 (m, 1H), 2.04 - 1.95 (m, 1H), 1.80 - 1.54 (m, 5H), 1.37 (s, 3H), 1.26 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.15 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.02 (ddd,J = 21.2, 12.1, 4.2 Hz, 2H), 0.84 (s, 3H)。實例 35 ： 以下化合物係使用上文所述之方法製備。化合物編號 結構
Figure TW201801749AD00489
Figure TW201801749AD00490
Figure TW201801749AD00491
Figure TW201801749AD00492
Figure TW201801749AD00493
Figure TW201801749AD00494
Figure TW201801749AD00495
Figure TW201801749AD00496
Figure TW201801749AD00497
Figure TW201801749AD00498
 實例 36 ： 合成N -(3-胺基苯基)-4-((6aR, 6bS, 7S, 8aS, 8bS, 10R, 11aR, 12aS, 12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a, 8a-二甲基-4-側氧基-2, 4, 6a, 6b, 7, 8, 8a, 8b, 11a, 12, 12a, 12b-十二氫-1H-萘并[2', 1':4, 5]茚并[1, 2-d][1, 3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲醯胺步驟 1 ： 合成4-甲醯基苯甲醯氯
Figure TW201801749AD00499
將草醯氯(17.51 mL, 200 mmol)逐滴添加至4-甲醯基苯甲酸(15.01 g, 100 mmol)於THF (100 mL)中之0℃溶液中，然後逐滴添加N ,N -二甲基甲醯胺(0.387 mL, 5.00 mmol)。使混合物升溫至室溫且然後再攪拌2 h。在真空中濃縮混合物以獲得4-甲醯基苯甲醯氯(16.86 g, 100 mmol, 100%產率)，其不經進一步純化即使用。步驟 2 ： 合成(3-(4-甲醯基苯甲醯胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00500
將三乙胺(63.4 mL, 455 mmol)逐滴添加至4-甲醯基苯甲醯氯(16.86 g, 100 mmol)於THF (100 mL)中之0℃溶液中，然後添加(3-胺基苯基)胺基甲酸第三丁基酯(18.93 g, 91 mmol)。在室溫下攪拌2 h後，用EtOAc (200 mL)稀釋混合物，用水(2 × 100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並在真空中濃縮。於20 mL EtOAc/PE (1:1)中研磨殘餘物，且收集所得沈澱物，以獲得黃色固體狀(3-(4-甲醯基苯甲醯胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(27.8 g, 82 mmol, 90%產率)。LCMS (方法e，表7) Rt =2.00 min; MS m/z = 285 [M-t -Bu]。步驟 3 ： 合成N -(3-胺基苯基)-4-((6aR, 6bS, 7S, 8aS, 8bS, 10R, 11aR, 12aS, 12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a, 8a-二甲基-4-側氧基-2, 4, 6a, 6b, 7, 8, 8a, 8b, 11a, 12, 12a, 12b-十二氫-1H-萘并[2', 1':4, 5]茚并[1, 2-d][1, 3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲醯胺
Figure TW201801749AD00501
在0℃下，向(8S, 9S, 10R, 11S, 13S, 14S, 16R, 17S)-11, 16, 17-三羥基-17- (2-羥基乙醯基)-10, 13-二甲基-6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(9.42 g, 25.02 mmol)、以與實例2、步驟5類似之方式製得之(3-(4-甲醯基苯甲醯胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(8.515 g, 25.02 mmol)及MgSO4 (12.04 g, 100 mmol)於MeCN(250 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加三氟甲磺酸(11.11 ml, 125 mmol)。將混合物在0℃下攪拌2小時且然後升溫至室溫並再攪拌16 h。過濾混合物且用THF洗滌，並在真空中濃縮濾液。將殘餘物溶解於THF (100 mL)中且然後用1 M NaOH水溶液中和至pH=8。用EtOAc (200 mL)萃取混合物，用水(2 × 100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並在真空中濃縮。藉由層析(二氧化矽)純化，用5% MeOH/DCM溶析，獲得粗產物，藉由Sunfire C18 10微米(250 × 19 mm管柱)上之反相HPLC進一步純化該粗產物。使用MeCN (A)及水中之0.05% TFA (B)梯度，流速為30 mL/min (0-10.0 min線性梯度22%-32%，保持5 min)。將合併之部分冷凍並凍乾，以獲得白色固體狀N -(3-胺基苯基)-4-((6aR, 6bS, 7S, 8aS, 8bS, 10R, 11aR, 12aS, 12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a, 8a-二甲基-4-側氧基-2, 4, 6a, 6b, 7, 8, 8a, 8b, 11a, 12, 12a, 12b-十二氫-1H-萘并[2', 1':4, 5]茚并[1, 2-d][1, 3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲醯胺(1.972 g, 3.29 mmol, 13%產率)。LCMS (方法f，表7) Rt =1.37 min; MS m/z = 599 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz，甲醇-d 4 ) δ 8.01 - 7.92 (m, 3H), 7.64 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 7.55 - 7.40 (m, 3H), 7.05 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 6.27 (dd,J = 10.2, 1.8 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H), 5.60 (s, 1H), 5.13 (d,J = 4.1 Hz, 1H), 4.68 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.45 (d,J = 3.3 Hz, 1H), 4.37 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 2.68 (dt,J = 14.5, 7.0 Hz, 1H), 2.41 (dd,J = 13.7, 10.2 Hz, 1H), 2.29 (d,J = 10.5 Hz, 1H), 2.18 (d,J = 12.8 Hz, 1H), 1.99 (dd,J = 13.8, 3.5 Hz, 1H), 1.94 - 1.80 (m, 2H), 1.82 - 1.69 (m, 2H), 1.52 (s, 3H), 1.14 (m,J = 16.8, 8.0 Hz, 2H), 1.02 (s, 3H)。 次要縮醛異構物：黃色固體狀N -(3-胺基苯基)-4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲醯胺(112 mg, 0.176 mmol, 0.9%產率)。LCMS (方法e，表7) Rt =1.53 min; MS m/z = 599 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, MeOH-d 4 ) δ 7.90 (d,J = 7.9 Hz, 2H), 7.48 (dd,J = 8.1, 3.5 Hz, 3H), 7.15 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.09 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.96 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 6.59 - 6.51 (m, 1H), 6.28 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 6.25 (s, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.51 - 5.37 (m, 1H), 4.45 (s, 1H), 4.30 (d,J = 19.2 Hz, 1H), 4.14 (d,J = 19.2 Hz, 1H), 2.70 (t,J = 13.6 Hz, 1H), 2.43 (d,J = 13.3 Hz, 1H), 2.22 (dd,J = 23.3, 12.5 Hz, 2H), 2.07 (d,J = 13.5 Hz, 1H), 1.93 (q,J = 5.1, 3.5 Hz, 2H), 1.80 (d,J = 14.0 Hz, 2H), 1.53 (d,J = 1.7 Hz, 3H), 1.21 (dd,J = 41.7, 12.1 Hz, 2H), 1.03 (s, 3H)。實例 37 ： 合成N -(3-胺基苯基)-4-((6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲醯胺
Figure TW201801749AD00502
其係使用與上文實例36相同之程序合成。主要縮醛異構物：N -(3-胺基苯基)-4-((6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲醯胺。LCMS (方法f，表7) Rt =1.35 min; MS m/z = 617 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.29 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 8.00 - 7.93 (m, 2H), 7.73 (s, 1H), 7.59 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.43 (s, 0H), 7.38 (s, 1H), 7.29 (dd,J = 10.0, 5.3 Hz, 2H), 6.81 (s, 1H), 6.24 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 6.05 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 5.62 (s, 1H), 5.49 (s, 1H), 5.03 - 4.96 (m, 1H), 4.58 (d,J = 19.5 Hz, 1H), 4.23 (d,J = 19.6 Hz, 1H), 2.73 - 2.52 (m, 1H), 2.40 - 2.32 (m, 1H), 2.25 - 2.12 (m, 1H), 2.11 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.84 (m, 1H), 1.76 - 1.67 (m, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.40 (tt,J = 14.3, 7.1 Hz, 1H), 0.90 (s, 3H)。 次要縮醛異構物：N -(3-胺基苯基)-4-((6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲醯胺。LCMS (方法B，表7) Rt =1.45 min; MS m/z = 617 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ ppm: 8.06 (s, 1H), 7.95 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.54-7.41 (m, 5H), 7.09 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 6.34 (d,J = 10 Hz, 1H), 6.28 (s, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.49 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 4.34-4.13 (m, 3H), 2.79-2.24 (m, 5H), 1.74-1.63 (m, 2H), 1.60 (s, 3H), 1.04 (s, 3H)。實例 38 ： 合成N -(3-胺基苯基)-4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲醯胺
Figure TW201801749AD00503
其係使用與上文實例36相同之程序合成。主要縮醛異構物：N -(3-胺基苯基)-4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲醯胺。LCMS (方法f，表7) Rt =1.376 min, MS m/z = 635 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, MeOH-d 4 ) δ 7.96 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 7.88 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 7.64 (dd,J = 8.3, 1.5 Hz, 2H), 7.48 - 7.42 (m, 1H), 7.39 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 7.34 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 6.98 (dt,J = 7.7, 1.6 Hz, 1H), 6.41 - 6.26 (m, 2H), 5.71 - 5.45 (m, 2H), 5.14 (d,J = 4.1 Hz, 1H), 4.69 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.44 - 4.28 (m, 2H), 2.73 (dt,J = 25.9, 12.1 Hz, 1H), 2.41 (td,J = 11.7, 6.9 Hz, 2H), 2.29 (dt,J = 14.0, 3.6 Hz, 1H), 1.91 - 1.67 (m, 4H), 1.60 (s, 4H), 1.02 (s, 3H)。 次要縮醛異構物：N -(3-胺基苯基)-4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲醯胺。LCMS (方法e，表7) Rt = 1.506 min, MS m/z = 635 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, MeOH-d 4 ) δ 7.90 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 7.49 (d,J = 7.9 Hz, 2H), 7.35 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 7.16 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.09 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.96 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 6.65 - 6.48 (m, 1H), 6.41 - 6.27 (m, 3H), 5.76 - 5.39 (m, 2H), 4.42 - 4.22 (m, 2H), 4.15 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 2.66 (dd,J = 27.8, 13.4 Hz, 1H), 2.47 - 2.24 (m, 3H), 2.08 - 1.85 (m, 2H), 1.75 (t,J = 14.9 Hz, 2H), 1.61 (s, 3H), 1.03 (s, 3H)。實例 39 ： 合成4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲酸3-胺基苯基酯步驟 1 ： 合成(3-羥基苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00504
向3-胺基酚(10 g, 92 mmol)於THF(450 mL)中之溶液中添加Boc酸酐(23.40 mL, 101 mmol)。將混合物在85℃下加熱16 h，藉由LCMS監測。此後，濃縮混合物以獲得殘餘物，將其溶解於EtOAc (150 mL)中且用水(100 mL)、飽和NaHCO3 (100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並在真空中濃縮。用PE (50 mL × 2)洗滌粗材料，以獲得白色固體狀標題化合物(16.5 g, 76 mmol, 82%產率)。LCMS (方法g，表7) Rt = 1.66 min, MS m/z = 232.1 [M+Na+ ]。步驟 2 ： 合成4-甲醯基苯甲酸3-((第三丁氧基羰基)胺基)苯基酯
Figure TW201801749AD00505
在0℃下，向(3-羥基苯基)胺基甲酸第三丁基酯(5 g, 23.90 mmol)於DCM (60 mL)中之溶液中添加4-甲醯基苯甲酸(3.59 g, 23.90 mmol)、N, N' -二環己基碳二亞胺(7.40 g, 35.8 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(0.584 g, 4.78 mmol)。將所得混合物在此溫度下在氬氣氛下攪拌10 min。然後使混合物升溫至室溫並持續攪拌16 h。在冰浴中冷卻混合物。過濾掉呈沈澱物形式之副產物N, N' -二環己基脲且在真空下濃縮澄清濾液。藉由矽膠層析純化粗材料，用DCM/ EtOAc (100%-30:1)溶析，以獲得白色固體狀標題化合物(7.0 g, 18.54 mmol, 78%產率)。LCMS (方法d，表7) Rt =2.17 min, MS m/z = 364.0 [M+Na+ ]。步驟 3 ： 合成4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲酸3-胺基苯基酯
Figure TW201801749AD00506
在0℃下在氮下，向(6S, 8S, 9R, 10S, 11S, 13S, 14S, 16R, 17S)-6, 9-二氟-11, 16, 17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10, 13-二甲基-6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(步驟5, 實例2) (7.248 g, 17.58 mmol)及4-甲醯基苯甲酸3-((第三丁氧基羰基)胺基)苯基酯(6 g, 17.58 mmol)於無水MeCN (40 mL)及THF (40 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加三氟甲磺酸(7.8 mL, 87.9 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1 h，然後傾倒至冰水(30 mL)上且用EtOAc (2 × 45 mL)萃取。用冷卻水(2 × 30 mL)、鹽水(30 mL)、飽和NaHCO3 (30 mL)及額外水(30 mL)洗滌合併之有機層，在真空中濃縮，提供黃色固體。藉由矽膠管柱層析(200-300目)純化粗材料，用DCM/ MeOH (100%~40:1)溶析且然後藉由製備型HPLC進一步純化，以獲得白色固體狀標題化合物(主要縮醛異構物) (2.166 g, 3.32 mmol, 19%產率)。LCMS (方法d，表7) Rt =1.54 min; MS m/z = 636.3 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.13 (d,J = 8.2 Hz, 2H), 7.66 (d,J = 8.2 Hz, 2H), 7.27 (dd,J = 10.1, 1.4 Hz, 1H), 7.06 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.48 (dd,J = 8.3, 2.1 Hz, 1H), 6.40 (t,J = 2.2 Hz, 1H), 6.34 (dd,J = 7.8, 2.2 Hz, 1H), 6.30 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.82 - 5.47 (m, 3H), 5.31 (s, 2H), 5.15 (t,J = 5.9 Hz, 1H), 5.03 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.60 (dd,J = 19.5, 6.4 Hz, 1H), 4.33 - 4.12 (m, 2H), 2.66 (ddd,J = 26.2, 13.7, 9.3 Hz, 1H), 2.31 (d,J = 10.9 Hz, 1H), 2.21 (td,J = 12.4, 6.3 Hz, 1H), 2.12 - 1.98 (m, 1H), 1.84 - 1.64 (m, 3H), 1.50 (s, 4H), 0.89 (s, 3H)。 亦分離出白色固體狀次要縮醛異構物4-((2S, 6aS, 6bR, 7S, 8aS, 8bS, 10S, 11aR, 12aS, 12bS)-2, 6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a, 8a-二甲基-4-側氧基-2, 4, 6a, 6b, 7, 8, 8a, 8b, 11a, 12, 12a, 12b-十二氫-1H-萘并[2', 1':4, 5]茚并[1, 2-d][1, 3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲酸3-胺基苯基酯(1.073 g, 1.676 mmol, 10%產率)。LCMS (方法d，表7) Rt =1.58 min; MS m/z = 636.3 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.13 - 8.06 (m, 2H), 7.51 (d,J = 8.2 Hz, 2H), 7.28 (dd,J = 10.1, 1.4 Hz, 1H), 7.06 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.52 - 6.44 (m, 1H), 6.43 - 6.28 (m, 4H), 6.14 (s, 1H), 5.80 - 5.48 (m, 2H), 5.39 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 5.31 (s, 2H), 5.04 (t,J = 6.1 Hz, 1H), 4.26 - 4.15 (m, 2H), 4.05 (dd,J = 19.2, 5.9 Hz, 1H), 2.67 - 2.51 (m, 1H), 2.29 (d,J = 6.9 Hz, 1H), 2.27 - 2.14 (m, 1H), 2.11 (d,J = 13.5 Hz, 1H), 1.96 - 1.59 (m, 4H), 1.51 (s, 3H), 0.90 (s, 3H)。實例 40 ： 合成4-((6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲酸3-胺基苯基酯
Figure TW201801749AD00507
其係使用與上文實例39相同之程序合成。主要縮醛異構物：4-((6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲酸3-胺基苯基酯。LCMS (方法d，表7) Rt =1.54 min; MS m/z = 618.3 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, MeOH-d 4 ) δ 8.19 (dd,J = 7.8, 1.9 Hz, 2H), 7.67 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 7.41 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.35 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.97 - 6.84 (m, 3H), 6.32 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.63 (s, 1H), 5.13 (d,J = 5.0 Hz, 1H), 4.69 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.43 - 4.30 (m, 2H), 2.76 (td,J = 13.6, 5.8 Hz, 1H), 2.70 - 2.54 (m, 1H), 2.43 (d,J = 13.6 Hz, 1H), 2.31 (ddd,J = 14.9, 11.6, 4.5 Hz, 2H), 2.01 - 1.92 (m, 1H), 1.89 - 1.69 (m, 3H), 1.62 (s, 4H), 1.03 (s, 3H)。 次要縮醛異構物：4-((6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲酸3-胺基苯基酯。LCMS (方法d，表7) Rt =1.58 min; MS m/z = 618.2 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.10 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.52 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.30 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.16 (dd,J = 9.8, 6.0 Hz, 1H), 6.64 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 6.61 - 6.51 (m, 2H), 6.31 - 6.19 (m, 2H), 6.05 (s, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.38 (d,J = 6.7 Hz, 1H), 4.19 (d,J = 18.7 Hz, 2H), 4.04 (d,J = 19.2 Hz, 1H), 2.66 (td,J = 13.9, 6.3 Hz, 1H), 2.48 - 2.33 (m, 1H), 2.17 - 2.05 (m, 2H), 1.87 (dt,J = 13.8, 7.0 Hz, 2H), 1.84 - 1.69 (m, 2H), 1.51 (s, 4H), 0.90 (s, 3H)。實例 41 ： 合成4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲酸3-胺基苯基酯
Figure TW201801749AD00508
其係使用與上文實例39相同之程序合成。主要縮醛異構物：4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲酸3-胺基苯基酯。LCMS (方法d，表7) Rt =1.86 min; MS m/z = 599.8 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, MeOH-d 4 ) δ 8.14 (d,J = 8.2 Hz, 2H), 7.64 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.44 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 7.14 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.63 (dd,J = 8.1, 2.2 Hz, 1H), 6.54 (q,J = 2.6 Hz, 1H), 6.48 (dd,J = 8.1, 2.2 Hz, 1H), 6.24 (dd,J = 10.0, 2.0 Hz, 1H), 6.00 (s, 1H), 5.59 (s, 1H), 5.13 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 4.69 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.43 (q,J = 3.3 Hz, 1H), 4.37 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 2.66 (td,J = 13.4, 5.3 Hz, 1H), 2.38 (dd,J = 13.7, 4.1 Hz, 1H), 2.32 - 2.19 (m, 1H), 2.14 (d,J = 12.7 Hz, 1H), 2.06 - 1.93 (m, 1H), 1.94 - 1.85 (m, 1H), 1.89 - 1.68 (m, 3H), 1.50 (s, 3H), 1.22 - 1.01 (m, 2H), 1.02 (s, 3H)。 次要縮醛異構物：4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苯甲酸3-胺基苯基酯。LCMS (方法d，表7) Rt =1.89 min; MS m/z = 599.8 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, MeOH-d 4 ) δ 8.22 - 8.11 (m, 2H), 7.53 (d,J = 8.2 Hz, 2H), 7.49 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 7.14 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.63 (dd,J = 8.1, 2.1 Hz, 1H), 6.55 (t,J = 2.2 Hz, 1H), 6.53 - 6.45 (m, 1H), 6.33 - 6.24 (m, 2H), 6.05 (t,J = 1.6 Hz, 1H), 5.46 (t,J = 3.8 Hz, 1H), 4.46 (q,J = 3.3 Hz, 1H), 4.30 (d,J = 19.2 Hz, 1H), 4.15 (d,J = 19.2 Hz, 1H), 2.70 (td,J = 13.5, 5.4 Hz, 1H), 2.48 - 2.38 (m, 1H), 2.23 (ddd,J = 24.3, 12.6, 6.6 Hz, 2H), 2.12 - 2.03 (m, 1H), 2.02 - 1.89 (m, 2H), 1.89 - 1.77 (m, 2H), 1.53 (s, 3H), 1.26 (tt,J = 12.4, 6.3 Hz, 1H), 1.17 (dd,J = 11.1, 3.6 Hz, 1H), 1.03 (s, 3H)。實例 42 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯氧基)甲基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮步驟 1 ： 合成(3-((4-甲醯基苄基)氧基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00509
將K2 CO3 (47.8 g, 346 mmol)及(3-羥基苯基)胺基甲酸第三丁基酯(36.2 g, 173 mmol)相繼添加至4-(溴甲基)苯甲醛(34.4 g, 173 mmol)於二甲基甲醯胺(200 mL)中之溶液中。然後將黃色懸浮液在80℃下在油浴中加熱2 h。用水(200 mL)淬滅反應且用EtOAc (2 × 200 mL)萃取。用鹽水(100 mL)洗滌合併之有機層，經Na2 SO4 乾燥，並在減壓下濃縮。藉由層析(矽膠；石油醚至80:20 PE/EtOAc；梯度溶析)純化所獲得之殘餘物，以提供白色固體狀(3-((4-甲醯基苄基)氧基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(47.27 g, 144 mmol, 83%產率)。LCMS (方法h，表7) Rt =1.92 min; MS m/z = 272 [M-t-Bu+H+ ]。 步驟2： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯氧基)甲基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00510
將三氟甲磺酸(17.76 mL, 200 mmol)逐滴添加至(8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(15.06 g, 40 mmol)及(3-((4-甲醯基苄基)氧基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(13.75 g, 42.0 mmol)及MgSO4 (19.26 g, 160 mmol)於MeCN (400 mL)中之0℃攪拌懸浮液中。然後使反應混合物升溫至20℃並再攪拌2 h。過濾混合物且用THF洗滌，並在真空中濃縮濾液。將殘餘物溶解於THF (100 mL)中，用1 M NaOH水溶液中和至pH 8，用EtOAc (200 mL)稀釋，用水(2 × 200 mL)及鹽水(200 mL)洗滌，乾燥(Na2 SO4 )，並在真空中濃縮。藉由急速管柱(MeOH:DCM=1:20)純化殘餘物。藉由Sunfire C18 10微米(250 × 19 mm管柱)上之製備型HPLC進一步純化所得材料。使用MeCN (A)及水中之0.05% TFA (B)梯度，流速為30 mL/min (0-10.0 min線性梯度22%-32% A，保持5 min)，以獲得黃色固體狀標題化合物(7.338 g, 12.15 mmol, 30%產率)。LCMS (方法i，表7) Rt =1.47 min; MS m/z = 586 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, MeOD-d4 ) δ 7.502-7.446 (m, 5H), 7.389-7.349 (m, 1H), 7.009, 6.988 (dd,J 1 = 2 Hz, J2 = 8.4 Hz, 1H), 6.890-6.859 (m, 2H), 6.275, 6.250 (dd,J 1 = 1.2 Hz, J2 = 8.8 Hz, 1H), 6.027 (s, 1H), 5.501 (s, 1H), 5.147 (s, 2H), 5.107, 5.078 (dd,J 1 = 6.8 Hz,J 2 = 11.6 Hz, 1H), 4.672 (d,J = 19.6 Hz, 1H), 4.436 (s, 1H), 4.370 (d,J = 19.2 Hz, 1H), 2.706-2.671 (m, 1H), 2.652-2.265 (m, 3H), 2.002-1.700 (m, 5H), 1.512 (s, 3H), 1.151-1.112 (m, 1H), 1.054-1.009 (m, 4H)。 次要縮醛異構物：亦分離出次要縮醛異構物黃色固體狀(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯氧基)甲基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮(354 mg, 0.604 mmol, 2%產率)。LCMS (方法i，表7) Rt =1.51 min; MS m/z = 586 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.416 (d,J = 8 Hz, 2H), 7.332-7.276 (m, 3H), 6.879 (t,J = 8 Hz, 1H), 6.185-6.115 (m, 5H), 5.948 (s, 1H), 5.319 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 5.041-5.014 (m, 3H), 4.980 (s, 2H), 4.791 (d,J = 3.2 Hz, 1H), 4.302-4.239 (m, 2H), 4.056, 4.008 (dd,J 1 = 6 Hz,J 2 = 19.6 Hz, 1H), 2.552-2.540 (m, 1H), 2.337-2.304 (m, 1H), 2.075-2.005 (m, 2H), 1.884-1.736 (m, 5H), 1.395 (s, 3H), 1.219-1.045 (m, 2H), 0.892 (s, 3H)。實例 43 ： 合成(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯氧基)甲基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00511
其係使用與上文實例42相同之程序合成。主要縮醛異構物：(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯氧基)甲基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮。LCMS (方法i，表7) Rt =1.74 min; MS m/z = 604 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 7.48 - 7.49 (m, 4H), 7.44 - 7.33 (m, 2H), 7.02 (dd,J = 8.3, 1.9 Hz, 1H), 6.96 - 6.84 (m, 2H), 6.32 (dd,J = 10.1, 1.8 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.52 (s, 1H), 5.16 (s, 2H), 5.08 (d,J = 4.9 Hz, 1H), 4.65 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.46 - 4.27 (m, 2H), 2.84 - 2.50 (m, 2H), 2.45 - 2.27 (m, 3H), 2.01 - 1.90 (m, 1H), 1.80 - 1.70 (m, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.55 (dd,J = 12.8, 4.8 Hz, 1H), 1.02 (s, 3H)。 次要縮醛異構物：(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯氧基)甲基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮。LCMS (方法i，表7) Rt =1.77 min; MS m/z = 604 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.42 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.36 - 7.25 (m, 3H), 7.01 (t,J = 8.1 Hz, 1H), 6.43 - 6.30 (m, 3H), 6.24 (dd,J = 10.1, 1.5 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.35 (d,J = 7.1 Hz, 1H), 5.02 (s, 2H), 4.31 - 4.14 (m, 2H), 4.04 (d, J = 19.2 Hz, 1H), 2.72 - 2.58 (m, 1H), 2.18 - 1.98 (m, 2H), 1.85 (d,J = 6.9 Hz, 2H), 1.77 - 1.63 (m, 2H), 1.58 - 1.40 (m, 4H), 0.90 (s, 3H)。實例 44 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯氧基)甲基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00512
其係使用與上文實例42相同之程序合成。主要縮醛異構物：(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯氧基)甲基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮。LCMS (方法f，表7) Rt =1.45 min; MS m/z = 622 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.44 (s, 4H), 7.27 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 6.87 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.30 (dd,J = 10.1, 1.5 Hz, 1H), 6.24 - 6.04 (m, 4H), 5.81 - 5.39 (m, 3H), 5.13 (t,J = 5.9 Hz, 1H), 5.09 - 4.91 (m, 5H), 4.55 (dd,J = 19.5, 6.4 Hz, 1H), 4.32 - 4.09 (m, 2H), 3.60 (t,J = 6.3 Hz, 2H), 2.81 - 2.55 (m, 1H), 2.40 - 2.14 (m, 2H), 2.06 (d,J = 13.6 Hz, 1H), 1.85 - 1.63 (m, 6H), 1.58 - 1.43 (m, 4H), 0.88 (s, 3H)。 次要縮醛異構物：(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯氧基)甲基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮。LCMS (方法f，表7) Rt =1.49 min; MS m/z = 622 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.41 (d,J = 8.1 Hz, 3H), 7.35 - 7.20 (m, 3H), 6.88 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.31 (dd,J = 10.1, 1.6 Hz, 1H), 6.16 (dd,J = 13.9, 5.0 Hz, 6H), 5.77 - 5.45 (m, 2H), 5.36 (d,J = 7.1 Hz, 1H), 4.35 - 4.13 (m, 2H), 4.05 (dd,J = 18.9, 4.9 Hz, 1H), 2.70 - 2.53 (m, 1H), 2.29 (s, 1H), 2.24 - 2.13 (m, 1H), 2.12 - 2.04 (m, 1H), 1.96 - 1.81 (m, 1H), 1.81 - 1.63 (m, 3H), 1.50 (s, 4H), 0.89 (s, 3H)。實例 45 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苄基)氧基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮步驟 1 ： 合成(3-(羥基甲基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00513
向(3-胺基苯基)甲醇(88.5 g, 719 mmol)於THF (80 mL)中之溶液中添加二碳酸二第三丁基酯(184 mL, 790 mmol)。將混合物在25℃下攪拌過夜。然後將混合物濃縮至乾燥且藉由矽膠管柱層析(用EtOAc/己烷=1:9, v/v溶析)純化殘餘物，以提供白色固體狀標題化合物(161.1 g, 722 mmol, 100%產率)。LCMS (方法j，表7) Rt =1.77 min; MS m/z = 246 [M+Na+ ]。步驟 2 ： 合成(3-(溴甲基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00514
在-20℃下，向(3-(羥基甲基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(120 g, 484 mmol)於THF (50 mL)中之溶液中添加三苯基膦(254 g, 967 mmol)，然後添加N -溴琥珀醯亞胺(103 g, 580 mmol)。攪拌3 h後，在真空中移除溶劑，且藉由矽膠管柱層析(用己烷:EtOAc = 100:1溶析)純化殘餘物，以提供白色固體狀標題化合物(125 g, 437 mmol, 90%產率)。LCMS (方法j，表7) Rt =2.10 min; MS m/z = 230, 232 [M-t-Bu+H+ ]。步驟 3 ： 合成(3-((4-甲醯基苯氧基)甲基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00515
將4-羥基苯甲醛(25.6 g, 210 mmol)及碳酸鉀(29.0 g, 210 mmol)於二甲基甲醯胺(300 mL)中之混合物攪拌15 min。然後添加(3-(溴甲基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(60 g, 210 mmol)。將混合物加熱至60℃並在此溫度下攪拌2小時。將混合物傾倒至50 mL水中，用EtOAc (3 × 50 mL)萃取。用水(1×100 mL)及鹽水(1×100 mL)洗滌合併之有機層，在真空中濃縮。藉由矽膠管柱層析(用二氯甲烷/甲醇= 500:1溶析)純化粗材料，以提供白色固體狀標題化合物(72 g, 209 mmol, 100%產率)。LCMS (方法j，表7) Rt =2.08 min; MS m/z = 272 [M-t-Bu+H+ ]。步驟 4 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苄基)氧基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00516
在0℃下，將三氟甲磺酸(12.38 mL, 139 mmol)逐滴添加至硫酸鎂(13.43 g, 112 mmol)、(3-((4-甲醯基苯氧基)甲基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(10.96 g, 33.5 mmol)及(8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11, 16, 17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10, 13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(10.5 g, 27.9 mmol)於MeCN (150 mL)中之混合物中。使混合物升溫至室溫並在此溫度下攪拌2小時。過濾混合物且將濾液傾倒至500 mL飽和碳酸氫鈉溶液中，用EtOAc (250 mL)萃取。用鹽水(200 mL)及水(200 mL)洗滌有機層，在真空中濃縮。藉由矽膠管柱層析(用DCM-MeOH = 50:1, v/v溶析)純化粗材料，且藉由製備型HPLC進一步純化所得產物，以提供白色固體狀標題化合物(6.04 g, 10.31 mmol, 37%產率)。LCMS (方法k，表7) Rt =1.91 min; MS m/z = 586 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.35 (dd,J = 19.6, 9.4 Hz, 3H), 7.09 - 6.89 (m, 3H), 6.61 - 6.33 (m, 3H), 6.18 (dd,J = 10.1, 1.7 Hz, 1H), 5.95 (s, 1H), 5.38 (s, 1H), 5.16 - 5.01 (m, 3H), 5.02 - 4.85 (m, 3H), 4.80 (d,J = 3.0 Hz, 1H), 4.50 (dd,J = 19.5, 6.3 Hz, 1H), 4.31 (s, 1H), 4.18 (dd,J = 19.4, 5.5 Hz, 1H), 2.33 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 2.17 - 1.98 (m, 2H), 1.90 - 1.53 (m, 5H), 1.40 (s, 3H), 1.13 - 0.96 (m, 2H), 0.87 (s, 3H)。實例 46 ： 合成(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苄基)氧基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00517
其係使用與上文實例45相同之程序合成。LCMS (方法k，表7) Rt =1.89 min; MS m/z = 604 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.32 (dd,J = 17.3, 9.4 Hz, 3H), 7.10 - 6.94 (m, 3H), 6.65 - 6.35 (m, 3H), 6.25 (dd,J = 10.1, 1.7 Hz, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.58 - 5.32 (m, 2H), 5.22 - 5.03 (m, 3H), 5.01 - 4.86 (m, 3H), 4.52 (dd,J = 19.5, 6.4 Hz, 1H), 4.20 (dd,J = 19.4, 5.5 Hz, 2H), 2.78 - 2.56 (m, 1H), 2.44 - 2.31 (m, 1H), 2.19 (td,J = 12.0, 6.8 Hz, 1H), 2.06 (d,J = 13.7 Hz, 1H), 1.95 - 1.81 (m, 1H), 1.68 (dd,J = 15.4, 9.7 Hz, 3H), 1.57 - 1.30 (m, 4H), 0.88 (s, 3H)。實例 47 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苄基)氧基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00518
其係使用與上文實例45相同之程序合成。LCMS (方法C，表7) Rt =1.45 min; MS m/z = 622 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 7.57 - 7.29 (m, 6H), 7.24 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 7.02 (d,J = 8.6 Hz, 2H), 6.45 - 6.23 (m, 2H), 5.69 - 5.49 (m, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.16 (s, 2H), 5.06 (d,J = 3.7 Hz, 1H), 4.64 (d,J = 19.5 Hz, 1H), 4.43 - 4.15 (m, 2H), 2.89 - 2.56 (m, 1H), 2.52 - 2.32 (m, 2H), 2.28 (d,J = 13.8 Hz, 1H), 1.87 - 1.62 (m, 4H), 1.60 (s, 3H), 1.00 (s, 3H)。 次要縮醛異構物：(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苄基)氧基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮。LCMS (方法C，表7) Rt =1.48 min; MS m/z = 622 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.41 - 7.13 (m, 3H), 7.08 - 6.90 (m, 3H), 6.61 (s, 1H), 6.52 (dd,J = 17.3, 7.5 Hz, 2H), 6.31 (d,J = 10.2 Hz, 1H), 6.11 (d,J = 18.4 Hz, 2H), 5.79 - 5.56 (m, 1H), 5.53 (d,J = 3.3 Hz, 1H), 5.34 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 5.18 - 5.00 (m, 3H), 4.93 (s, 2H), 4.28 (dd,J = 19.1, 6.2 Hz, 1H), 4.19 (d,J = 5.9 Hz, 1H), 4.05 (dd,J = 19.1, 5.9 Hz, 1H), 3.60 (t,J = 6.2 Hz, 3H), 2.72 - 2.51 (m, 1H), 2.29 (s, 1H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 2.06 (d,J = 13.4 Hz, 1H), 1.93 - 1.80 (m, 1H), 1.80 - 1.60 (m, 6H), 1.50 (s, 3H), 1.36 (s, 1H), 0.89 (s, 3H)。實例 48 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)乙炔基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮 步驟1： 合成(3-乙炔基苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00519
將二碳酸二第三丁基酯(123 ml, 531 mmol)添加至3-乙炔基苯胺(56.6 g, 483 mmol)於THF (300 mL)中之攪拌溶液中。將混合物加熱至回流過夜。然後將混合物冷卻至環境溫度且吸收於乙酸乙酯(500 mL)中並相繼用1N HCl水溶液(200 mL)、飽和Na2 CO3 水溶液(200 mL)及鹽水(200 mL)洗滌。經Na2 SO4 乾燥有機層，在真空中濃縮，且藉由矽膠管柱層析(用15% EtOAc/PE溶析)純化，以獲得(3-乙炔基苯基)胺基甲酸第三丁基酯(94 g, 435 mmol, 90%產率)。LCMS (方法f，表7) Rt =1.80 min; MS m/z = 162 [M-t-Bu+H+ ]。步驟 2 ： 合成(3-((4-甲醯基苯基)乙炔基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00520
在500 mL圓底燒瓶中，將4-碘苯甲醛(30.2 g, 130 mmol)、雙(三苯基膦)氯化鈀(II) (4.56 g, 6.50 mmol)、碘化銅(I) (2.476 g, 13.00 mmol)及三苯基膦(3.41 g, 13.00 mmol)溶解於THF (200 mL)及三乙胺(181 mL, 1300 mmol)中，然後添加(3-乙炔基苯基)胺基甲酸第三丁基酯(28.2 g, 130 mmol)。將混合物在75℃下在氮氣氛下攪拌16 h。完成反應後，完全移除揮發性溶劑。藉由矽膠管柱層析(用PE/CH2 Cl2 =1:3溶析)純化粗材料，以獲得灰白色固體狀(3-((4-甲醯基苯基)乙炔基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(35.5 g, 111 mmol, 85%產率)。LCMS (方法f，表7) Rt =2.08 min; MS m/z = 322 [M+H+ ]。步驟 3 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)乙炔基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00521
將三氟甲磺酸(4.44 ml, 50.0 mmol)逐滴添加至(8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11, 16, 17-三羥基-17- (2-羥基乙醯基)-10, 13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(3.76 g, 10.00 mmol)、(3-((4-甲醯基苯基)乙炔基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(3.21 g, 10 mmol)及MgSO4 (4.81 g, 40.0 mmol)於MeCN (100 ml)中之0℃懸浮液中。將混合物再攪拌2 h。過濾混合物且用THF洗滌。在真空中濃縮濾液。將殘餘物溶解於THF (50 mL)中，用1 M NaOH水溶液中和至pH=8，用EtOAc (200 mL)萃取，用水(2 × 100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並在真空中濃縮。藉由管柱層析(矽膠，用MeOH : DCM=1:40溶析)純化殘餘物以獲得2.5 g粗產物，藉由製備型HPLC進一步純化該粗產物，以提供黃色固體狀標題化合物(1.449 g, 2.500 mmol, 25%產率)。LCMS (方法l，表7) Rt =1.86 min; MS m/z = 580 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.65 - 7.41 (m, 4H), 7.32 (d,J = 9.9 Hz, 2H), 7.05 (dd,J = 9.8, 5.7 Hz, 1H), 6.85 - 6.49 (m, 4H), 6.29 - 6.05 (m, 1H), 6.01 - 5.83 (m, 1H), 5.63 - 5.40 (m, 1H), 5.26 (s, 2H), 5.12 (t,J = 5.8 Hz, 1H), 4.96 (d,J = 4.3 Hz, 1H), 4.82 (d,J = 3.0 Hz, 1H), 4.63 - 4.41 (m, 1H), 4.37 - 4.08 (m, 2H), 2.40 - 1.91 (m, 5H), 1.87 - 1.52 (m, 6H), 1.40 (s, 4H), 1.14 - 0.95 (m, 2H), 0.88 (s, 3H)。 亦分離次要縮醛異構物黃色固體狀(6aR, 6bS, 7S, 8aS, 8bS, 10S, 11aR, 12aS, 12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)乙炔基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a, 8a-二甲基-6a, 6b, 7, 8, 8a, 8b, 11a, 12, 12a, 12b-十氫-1H-萘并[2', 1':4, 5]茚并[1, 2-d][1, 3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(85 mg, 0.147 mmol, 1.5%產率)。LCMS (方法i，表7) Rt =1.93 min; MS m/z = 580 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.51 (d,J = 7.6 Hz, 2H), 7.42 - 7.21 (m, 3H), 7.05 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 6.83 - 6.45 (m, 3H), 6.29 - 6.07 (m, 2H), 5.95 (s, 1H), 5.47 - 5.14 (m, 3H), 4.82 (s, 1H), 4.38 - 4.14 (m, 2H), 4.03 (d,J = 19.3 Hz, 1H), 2.33 (d,J = 10.3 Hz, 2H), 2.15 - 1.96 (m, 1H), 1.93 - 1.68 (m, 5H), 1.40 (s, 3H), 1.33 - 0.97 (m, 3H), 0.89 (s, 3H)。實例 49 ： 合成(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)乙炔基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00522
其係使用與上文實例48相同之程序合成。主要縮醛異構物：(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)乙炔基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮。LCMS (方法f，表7) Rt =1.57 min; MS m/z = 598 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.55 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.46 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.30 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.05 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.66 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.60 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 6.24 (d,J = 8.9 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.51 (d,J = 15.2 Hz, 2H), 5.26 (s, 2H), 4.97 (d,J = 4.4 Hz, 1H), 4.55 (d,J = 19.5 Hz, 1H), 4.22 (d,J = 19.5 Hz, 2H), 2.74 - 2.56 (m, 1H), 2.36 (d,J = 9.7 Hz, 1H), 2.24 - 2.10 (m, 1H), 2.06 (d,J = 14.5 Hz, 1H), 1.92 - 1.78 (m, 1H), 1.78 - 1.58 (m, 3H), 1.50 (s, 3H), 1.45 - 1.31 (m, 1H), 0.88 (s, 3H)。 次要縮醛異構物：(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)乙炔基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮。LCMS (方法f，表7) Rt =1.61 min; MS m/z = 598 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.51 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.39 - 7.22 (m, 3H), 7.05 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 6.67 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.60 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 6.24 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 6.18 (s, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.49 (s, 1H), 5.35 (d,J = 6.9 Hz, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.19 (d,J = 18.9 Hz, 2H), 4.04 (d,J = 19.1 Hz, 1H), 2.75 - 2.55 (m, 1H), 2.37 (d,J = 10.2 Hz, 1H), 2.09 (d,J = 7.1 Hz, 2H), 1.84 (d,J = 6.5 Hz, 2H), 1.78 - 1.62 (m, 2H), 1.50 (s, 4H), 0.89 (s, 3H)。實例 50 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)乙炔基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00523
其係使用與上文實例48相同之程序合成。主要縮醛異構物：(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)乙炔基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮。LCMS (方法f，表7) Rt =1.57 min; MS m/z = 616 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.55 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.47 (d,J = 8.2 Hz, 2H), 7.27 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.05 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.66 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.60 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 6.30 (dd,J = 10.1, 1.4 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.80 - 5.58 (m, 1H), 5.55 (d,J = 7.1 Hz, 2H), 5.26 (s, 2H), 5.14 (t,J = 5.9 Hz, 1H), 4.99 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.56 (dd,J = 19.5, 6.4 Hz, 1H), 4.23 (dd,J = 19.5, 5.4 Hz, 2H), 2.79 - 2.56 (m, 1H), 2.31 (s, 1H), 2.26 - 2.14 (m, 1H), 2.12 - 1.99 (m, 1H), 1.83 - 1.62 (m, 3H), 1.61 - 1.40 (m, 4H), 0.88 (s, 3H)。 次要縮醛異構物：(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)乙炔基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮。LCMS (方法f，表7) Rt =1.61 min; MS m/z = 616 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.52 (d,J = 8.3 Hz, 2H), 7.33 (d,J = 8.2 Hz, 2H), 7.28 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 7.05 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.68 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.61 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 6.32 (dd,J = 10.1, 1.7 Hz, 1H), 6.21 (s, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.78 - 5.58 (m, 1H), 5.55 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 5.36 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 5.27 (s, 2H), 5.08 (t,J = 5.8 Hz, 1H), 4.33 - 4.12 (m, 2H), 4.06 (dd,J = 19.1, 5.0 Hz, 1H), 2.72 - 2.53 (m, 1H), 2.29 (s, 1H), 2.23 - 2.02 (m, 2H), 1.92 - 1.82 (m, 1H), 1.82 - 1.61 (m, 3H), 1.51 (s, 4H), 0.90 (s, 3H)。實例 51 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E )-3-胺基苯乙烯基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮步驟 1 ： 合成(E )-(3-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)乙烯基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00524
將4,4,5,5-四甲基-1, 3, 2-二氧雜硼烷(16.70 mL, 115 mmol)及羰基氫氯化參(三苯基膦)釕(II) (2.63 g, 2.76 mmol)添加至(3-乙炔基苯基)胺基甲酸第三丁基酯(10 g, 46.0 mmol)於甲苯(150 mL)中之氮吹掃溶液中。將混合物在50℃下加熱16 h，此後將其在減壓下濃縮。藉由層析(二氧化矽)純化，用PE/ EtOAc (100%~10:1)溶析，獲得白色固體狀標題化合物(13.25 g, 36.8 mmol, 80%產率)。LCMS (方法d，表7) Rt =2.19 min; MS m/z = 290.1 [M-t Bu]+ 。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 1.33 (s, 12H), 1.54 (s, 9H), 6.17 (d,J = 18.4 Hz, 1H), 6.49 (bs, 1H), 7.18 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.26-7.29 (m, 1H), 7.35-7.40 (m, 2H), 7.47 (s, 1H)。步驟 2 ： 合成(E )-(3-(4-甲醯基苯乙烯基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00525
在20℃下在N2 下，向(E )-(3-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)乙烯基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(6 g, 17.38 mmol)及4-溴苯甲醛(3.38 g, 18.25 mmol)於THF (85 mL)中之溶液中添加K2 CO3 (4.80 g, 34.8 mmol)及Pd(Ph3 P)4 (1.607 g, 1.390 mmol)。將混合物在80℃下攪拌32 h。濃縮混合物以獲得殘餘物，用EtOAc (50 mL)溶解該殘餘物且過濾。濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析純化殘餘物，用PE/ EtOAc (10:1-6:1)溶析，以獲得產物，用PE (10 mL)進一步洗滌該產物，以獲得綠色固體狀標題化合物(3.43 g, 10.49 mmol, 60%產率)。LCMS (方法d，表7) Rt =2.08 min; MS m/z = 324.1 [M+H+ ]。步驟 3 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E )-3-胺基苯乙烯基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00526
在氮下，將三氟甲磺酸(5.38 mL, 60.6 mmol)逐滴添加至(6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-二氟-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(實例2, 步驟5) (5.0 g, 12.12 mmol)及(E )-(3-(4-甲醯基苯乙烯基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(4.612 g, 12.12 mmol)於無水MeCN (30 mL)及THF (30 mL)中之0℃攪拌懸浮液中。將混合物在0℃下攪拌1 h，然後傾倒至冰水(30 mL)上且用EtOAc (2 × 50 mL)萃取。用冷卻水(30 mL)、鹽水(30 mL)、飽和NaHCO3 (30 mL)及水(30 mL)再洗滌合併之有機層，並在真空中濃縮，提供黃色固體。藉由矽膠管柱層析(200-300目)純化粗材料，用DCM/ MeOH (100%~40:1)溶析，且然後藉由製備型HPLC進一步純化以獲得標題化合物(1.45 g, 2.328 mmol, 19%產率)。LCMS (方法d，表7) Rt =1.47 min; MS m/z = 618.3 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.61 (d,J = 8.2 Hz, 2H), 7.43 (d,J = 8.3 Hz, 2H), 7.28 (d,J = 10.9 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 16.4 Hz, 1H), 7.03 (dd,J = 15.5, 7.6 Hz, 2H), 6.75 (dd,J = 8.0, 4.7 Hz, 2H), 6.50 (dd,J = 7.9, 1.3 Hz, 1H), 6.31 (dd,J = 10.1, 1.8 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.79 - 5.46 (m, 3H), 5.13 (dd,J = 14.7, 8.7 Hz, 3H), 4.97 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.55 (dd,J = 19.5, 6.4 Hz, 1H), 4.23 (dd,J = 19.4, 5.5 Hz, 2H), 2.73 - 2.56 (m, 1H), 2.40 - 2.21 (m, 2H), 2.15 - 2.02 (m, 1H), 1.82 - 1.64 (m, 3H), 1.61 - 1.44 (m, 4H), 0.88 (s, 3H)。 亦分離出白色固體狀次要縮醛異構物(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E)-3-胺基苯乙烯基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮(0.30 g, 0.456 mmol, 4%產率)。LCMS (方法d，表7) Rt = 1.51 min; MS m/z = 618.3 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.57 (d,J = 8.2 Hz, 2H), 7.27 (d,J = 7.9 Hz, 3H), 7.18 - 6.97 (m, 3H), 6.75 (d,J = 7.8 Hz, 2H), 6.50 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 6.31 (dd,J = 10.2, 1.6 Hz, 1H), 6.15 (d,J = 10.3 Hz, 2H), 5.78 - 5.67 (m, 1H), 5.63 - 5.49 (m, 2H), 5.37 (d,J = 7.0 Hz, 1H), 5.07 (dd,J = 12.0, 5.8 Hz, 3H), 4.33 - 4.15 (m, 2H), 4.06 (dd,J = 19.2, 5.7 Hz, 1H), 2.69 - 2.54 (m, 1H), 2.36 - 2.08 (m, 3H), 1.94 - 1.60 (m, 4H), 1.50 (s, 3H), 0.90 (s, 3H)。實例 52 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E )-3-胺基苯乙烯基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00527
其係使用與上文實例51相同之程序合成。主要縮醛異構物：(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E)-3-胺基苯乙烯基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮。LCMS (方法d，表7) Rt =1.48 min; MS m/z = 582.3 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 0.88 (s, 3H), 1.00-1.09 (m, 2H), 1.40 (s, 3H), 1.63-1.79 (m, 5H), 2.04-2.15 (m, 2H), 2.32-2.34 (m, 1H), 2.55-2.60 (m, 1H), 4.20 (dd,J = 20.2 Hz, 5.0 Hz, 1H), 4.31 (s, 1H), 4.54 (dd,J = 19.2 Hz, 6.0 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.94-4.95 (m, 1H), 5.10-5.14 (m, 3H), 5.46 (s, 1H), 5.95 (s, 1H), 6.18 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 6.50 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.73-6.76 (m, 2H), 7.00-7.14 (m, 3H), 7.32 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 7.45 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.59 (d,J = 8.0 Hz, 2H)。 次要縮醛異構物：(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E)-3-胺基苯乙烯基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮。LCMS (方法d，表7) Rt =1.52 min; MS m/z = 582.3 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 0.89 (s, 3H), 1.05-1.31 (m, 3H), 1.40 (s, 3H), 1.74-1.89 (m, 5H), 2.05-2.07 (m, 2H), 2.31-2.34 (m, 1H), 2.54-2.59 (m, 1H), 4.00-4.06 (m, 1H), 4.23-4.31 (m, 2H), 4.80 (s, 1H), 5.05-5.09 (m, 3H), 5.31-5.32 (m, 1H), 5.95 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 6.18 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 6.49-6.50 (m, 1H), 6.74-6.76 (m, 2H), 7.00-7.14 (m, 3H), 7.26 (d,J = 7.6 Hz, 2H), 7.32 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 7.57 (d,J = 7.6 Hz, 2H)。實例 53 ： 合成(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E)-3-胺基苯乙烯基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00528
其係使用與上文實例51相同之程序合成。主要縮醛異構物：(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E)-3-胺基苯乙烯基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮。LCMS (方法d，表7) Rt =1.45 min; MS m/z = 600.3 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.61 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.42 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.30 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 16.4 Hz, 1H), 7.03 (dd,J = 15.6, 7.6 Hz, 2H), 6.79 - 6.70 (m, 2H), 6.50 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 6.25 (dd,J = 10.1, 1.4 Hz, 1H), 6.06 (s, 1H), 5.54 - 5.43 (m, 2H), 5.13 (t,J = 6.0 Hz, 3H), 4.95 (d,J = 4.5 Hz, 1H), 4.55 (dd,J = 19.5, 6.4 Hz, 1H), 4.22 (dd,J = 19.3, 5.4 Hz, 2H), 2.62 (m, 2H), 2.42 - 2.02 (m, 3H), 1.92 - 1.80 (m, 1H), 1.77 - 1.61 (m, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.47 - 1.32 (m, 1H), 0.89 (s, 3H)。 次要縮醛異構物：(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E)-3-胺基苯乙烯基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮。 LCMS (方法d，表7) Rt =1.48 min; MS m/z = 600.3 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.57 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.28 (dd,J = 12.2, 9.3 Hz, 3H), 7.18 - 6.97 (m, 3H), 6.75 (d,J = 7.7 Hz, 2H), 6.50 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 6.25 (dd,J = 10.1, 1.2 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.46 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 5.35 (d,J = 6.9 Hz, 1H), 5.06 (dd,J = 14.0, 7.9 Hz, 3H), 4.24 (dd,J = 19.3, 6.3 Hz, 2H), 4.05 (dd,J = 19.1, 5.8 Hz, 1H), 2.73 - 2.58 (m, 1H), 2.47 - 2.30 (m, 2H), 2.09 (d,J = 10.1 Hz, 2H), 1.85 (d,J = 6.5 Hz, 2H), 1.78 - 1.65 (m, 2H), 1.50 (s, 4H), 0.90 (s, 3H)。實例 54 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苯乙基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮步驟 1 ： 合成(E )-(3-(4-(羥基甲基)苯乙烯基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯 將NaBH4 (0.936 g, 24.74 mmol)添加至(E )-(3-(4-甲醯基苯乙烯基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(步驟2, 實例51) (4.0 g, 12.37 mmol)於MeOH (60 mL)及THF (60 mL)中之0℃溶液中並在0℃下攪拌1 h。用飽和NH4 Cl水溶液(20 mL)淬滅混合物，濃縮以獲得殘餘物，將其分配於EtOAc (100 mL)與水(100 mL)之間。在減壓下濃縮有機層，且藉由矽膠管柱層析純化，用DCM/EtOAc (10:1-5:1)溶析，以獲得淺紅色固體狀標題化合物(3.23 g, 7.08 mmol, 57%產率)。LCMS (方法d，表7) Rt = 1.98 min; MS m/z = 348.1 [M+Na+ ]。步驟 2 ： 合成(3-(4-(羥基甲基)苯乙基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00529
用氫氣球處理Pd/C (0.657 g, 0.618 mmol)及(E )-(3-(4-(羥基甲基)苯乙烯基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(純淨)7 (3.35 g, 10.29 mmol)於EtOAc (50 mL)及THF (50 mL)中之懸浮液並在0℃下攪拌1.5 h，藉由LCMS監測。過濾混合物。將額外Pd/C (0.657 g, 0.618 mmol)添加至濾液中。將混合物在氫氣氛下再攪拌1 h且藉由LCMS監測。過濾混合物且用EtOAc (15 mL)洗滌。濃縮濾液以獲得殘餘物，藉由矽膠管柱層析純化該殘餘物，用PE/ EtOAc (10:1-2:1)溶析，以獲得白色固體狀標題化合物(1.2 g, 3.49 mmol, 34%產率)。LCMS (方法d，表7) Rt =2.0 min; MSm/z = 350.0 [M+Na+ ]。步驟 3 ： 合成(3-(4-甲醯基苯乙基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00530
用氮氣球處理MnO2 (9.24 g, 106 mmol)及(3-(4-(羥基甲基)苯乙基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(2.9 g, 8.86 mmol)於DCM (40 mL)中之懸浮液並在30℃下攪拌2 h，藉由LCMS監測。將額外MnO2 (0.8 g, 9.2 mmol)添加至上述混合物中，在30℃下再攪拌1 h。過濾混合物且用DCM (20 mL)洗滌。濃縮濾液，以獲得黃色固體狀標題化合物(2.9 g, 8.58 mmol, 97%產率)。LCMS (方法d，表7) Rt =2.14 min; MSm/z = 226.0 [M-Boc]+ 。1 H NMR(400 MHz, CDCl3 ) δ 9.90 (s, 1H), 7.71 (d,J = 7.8 Hz, 2H), 7.25 (s, 2H), 7.19 - 6.97 (m, 3H), 6.73 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 6.48 (s, 1H), 2.98 - 2.87 (m, 2H), 2.86 - 2.78 (m, 2H), 1.44 (s, 9H)。步驟 4 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苯乙基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00531
將三氟甲磺酸(5.61 mL, 64.2 mmol)逐滴添加至(3-(4-甲醯基苯乙基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(4.18 g, 12.85 mmol)及(6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-二氟-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(5.3 g, 12.85 mmol)於無水MeCN (30 mL)及THF (30 mL)中之0℃攪拌懸浮液中。將所得混合物在0℃下攪拌1 h，然後傾倒至冰水(20 mL)上且用EtOAc (2 × 25 mL)萃取。用冷卻水(20 mL)、鹽水(10 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(20 mL)及水(20 mL)洗滌合併之有機層，在真空中濃縮，提供黃色固體。藉由矽膠管柱層析(200-300目)純化粗材料，用二氯甲烷/甲醇(100%~40:1)溶析以獲得產物，藉由製備型HPLC進一步純化該產物，以獲得白色固體狀標題化合物(2.21 g, 3.57 mmol, 28%產率)。LCMS (方法d，表7) Rt =1.75 min; MS m/z = 619.8 [M+H+ ]。1 H NMR(400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.34 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.27 (t,J = 8.0 Hz, 3H), 6.89 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 6.43 (s, 1H), 6.36 (d,J = 7.9 Hz, 2H), 6.31 (dd,J = 10.2, 1.8 Hz, 1H), 6.14 (s, 1H), 5.75 - 5.56 (m, 1H), 5.54 (d,J = 2.9 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.12 (t,J = 6.0 Hz, 1H), 4.95 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.53 (dd,J = 19.5, 6.4 Hz, 1H), 4.21 (dd,J = 19.4, 5.6 Hz, 2H), 2.83-2.79 (m, 2H), 2.73 - 2.57 (m, 3H), 2.275-2.25 (m, 2H), 2.08-2.04 (m, 1H), 1.79 - 1.62 (m, 3H), 1.67-1.50 (m, 4H), 0.87 (s, 3H)。 亦分離出白色固體狀次要縮醛異構物(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苯乙基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮(0.45 g, 0.667 mmol, 5%產率)。LCMS (方法d，表7) Rt =1.79 min; MS m/z = 619.8 [M+H+ ]。1 H NMR(400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.33-7.17 (m, 5H), 6.89 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 6.46 - 6.27 (m, 4H), 6.12 (d,J = 8.8 Hz, 2H), 5.75 - 5.55 (m, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.34 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.31 - 4.15 (m, 2H), 4.05 (dd,J = 19.2, 5.6 Hz, 1H), 2.83-2.79 (m, 2H), 2.72 - 2.54 (m, 3H), 2.29 (s, 1H), 2.21-2.13 (m, 1H), 2.09-2.05 (m, 1H), 1.93 - 1.81 (m, 1H), 1.79 - 1.60 (m, 3H), 1.50 (s, 3H), 0.88 (s, 3H)。實例 55 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苯乙基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00532
其係使用與上文實例54相同之程序合成。主要縮醛異構物：LCMS (方法d，表7) Rt =1.74 min; MS m/z = 583.8 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.34 (dd,J = 16.7, 9.1 Hz, 3H), 7.24 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 6.89 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 6.42 (s, 1H), 6.36 (dd,J = 7.7, 1.6 Hz, 2H), 6.17 (dd,J = 10.1, 1.7 Hz, 1H), 5.95 (s, 1H), 5.41 (s, 1H), 5.11 (t,J = 5.9 Hz, 1H), 4.93 (d,J = 5.4 Hz, 3H), 4.81 (d,J = 3.0 Hz, 1H), 4.52 (dd,J = 19.5, 6.4 Hz, 1H), 4.30 (s, 1H), 4.19 (dd,J = 19.5, 5.6 Hz, 1H), 2.87 - 2.77 (m, 2H), 2.73 - 2.64 (m, 2H), 2.62 - 2.52 (m, 1H), 2.32 (d,J = 11.0 Hz, 1H), 2.18 - 1.98 (m, 2H), 1.83 - 1.58 (m, 5H), 1.40 (s, 3H), 1.24 - 0.97 (m, 2H), 0.87 (s, 3H)。 次要縮醛異構物(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苯乙基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮：LCMS (方法d，表7) Rt = 1.77 min; MS m/z = 583.9 [M+H+ ]。1 H NMR(400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.32 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.19 (q,J = 8.2 Hz, 4H), 6.89 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 6.44 - 6.29 (m, 3H), 6.17 (dd,J = 10.1, 1.8 Hz, 1H), 6.07 (s, 1H), 5.95 (s, 1H), 5.29 (d,J = 6.9 Hz, 1H), 5.03 (t,J = 6.1 Hz, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.78 (d,J = 3.1 Hz, 1H), 4.34 - 4.19 (m, 2H), 4.02 (dd,J = 19.2, 5.9 Hz, 1H), 2.81 (dd,J = 9.5, 6.1 Hz, 2H), 2.68 (dd,J = 9.6, 6.0 Hz, 2H), 2.61 - 2.52 (m, 1H), 2.32 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 2.03 (d,J = 7.8 Hz, 2H), 1.91 - 1.67 (m, 5H), 1.39 (s, 3H), 1.27 - 1.01 (m, 2H), 0.89 (s, 3H)。實例 56 ： 合成(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苯乙基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00533
其係使用與上文實例54相同之程序合成。主要縮醛異構物：LCMS (方法d，表7) Rt =1.74 min; MS m/z = 601.9 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.32 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 7.26 (t,J = 8.0 Hz, 2H), 6.89 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 6.43 (s, 1H), 6.36 (d,J = 7.7 Hz, 2H), 6.24 (dd,J = 10.1, 1.7 Hz, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 5.10 (t,J = 5.9 Hz, 1H), 4.97 - 4.85 (m, 3H), 4.52 (dd,J = 19.5, 6.4 Hz, 1H), 4.20 (dd,J = 19.2, 5.6 Hz, 2H), 2.85 - 2.76 (m, 2H), 2.72 - 2.54 (m, 3H), 2.36 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 2.20-2.18 (m, 1H), 2.04 (s, 1H), 1.91 - 1.80 (m, 1H), 1.73 - 1.61 (m, 3H), 1.50 (s, 3H), 1.40-1.38 (m, 1H), 0.87 (s, 3H)。 次要縮醛異構物(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苯乙基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮：LCMS (方法d，表7) Rt =1.77 min; MS m/z = 601.9 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 7.35 - 7.13 (m, 5H), 6.89 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 6.41 (s, 1H), 6.36 (d,J = 7.6 Hz, 2H), 6.24 (dd,J = 10.1, 1.7 Hz, 1H), 6.06 (d,J = 13.8 Hz, 2H), 5.44 (d,J = 2.6 Hz, 1H), 5.33 (d,J = 7.0 Hz, 1H), 5.04 (t,J = 6.0 Hz, 1H), 4.91 (s, 2H), 4.27-4.21 (m, 2H), 4.04 (dd,J = 19.2, 5.9 Hz, 1H), 2.85 - 2.76 (m, 2H), 2.70-2.66 (m, 3H), 2.37-2.35 (m, 2H), 2.07-2.06 (m, 2H), 1.84 (d,J = 7.1 Hz, 2H), 1.71 (t,J = 10.3 Hz, 2H), 1.50 (s, 4H), 0.90 (s, 3H)。實例 57 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)胺基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮步驟 1 ： 合成(3-((4-甲醯基苯基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00534
使(3-胺基苯基)胺基甲酸第三丁基酯(31.2 g, 150 mmol)、4-溴苯甲醛(33.3 g, 180 mmol)、Pd(OAc)2 (1.684 g, 7.50 mmol)、BINAP ((RS)2,2'-雙(二苯基膦基)-1,1'-聯萘基) (9.34 g, 15.00 mmol)、Cs2 CO3 (98 g, 300 mmol)之混合物於甲苯(300 mL)中在氮下回流16 h。冷卻至室溫後，將混合物分配於水與EtOAc之間。濃縮有機層且藉由管柱層析純化，用PE:EtOAc (5:1)溶析，以獲得黃色油狀標題化合物(32.8 g, 105 mmol, 70%產率)。LCMS (方法j，表7) Rt =1.94 min; MS m/z = 313 [M+H+ ]。步驟 2 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)胺基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00535
將三氟甲磺酸(14.21 ml, 160 mmol)逐滴添加至(8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)- 10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(12.05 g, 32.0 mmol)及(3-((4-甲醯基苯基)胺基)苯基)胺基甲酸第三丁基酯(10 g, 32.0 mmol)於THF (50.00 ml)及MeCN (50 ml)中之0℃懸浮液中。將反應混合物在同一溫度下再攪拌2小時。用EtOAc (200 mL)稀釋混合物，用水(100 mL)、飽和NaHCO3 溶液(1× 100 mL)及鹽水(1×100 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，並在真空中濃縮。藉由管柱層析(MeOH:DCM=1:40)純化殘餘物，且藉由製備型HPLC進一步純化所得材料，以提供白色固體狀標題化合物(1.729 g, 3.03 mmol, 10%產率)。LCMS (方法k，表7) Rt =1.50 min; MS m/z = 571[M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.01 (s, 1H), 7.33 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.27 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 7.00 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.87 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 6.36 (s, 1H), 5.94 (s, 1H), 5.32 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 5.02 - 4.87 (m, 3H), 4.80 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 4.51 (d,J = 16.4 Hz, 1H), 4.31 (s, 1H), 4.20 (d,J = 17.8 Hz, 1H), 2.62 - 2.52 (m, 1H), 2.32 (d,J = 11.0 Hz, 1H), 2.20 - 1.98 (m, 2H), 1.86 - 1.69 (m, 4H), 1.69 - 1.55 (m, 1H), 1.41 (s, 3H), 1.18 - 0.97 (m, 2H), 0.87 (s, 3H)。 白色固體狀次要縮醛異構物(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)胺基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮(78 mg, 0.137 mmol, 0.4%產率)。LCMS (方法k，表7) Rt =1.53 min; MS m/z = 571[M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.00 (s, 1H), 7.32 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.07 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.96 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.87 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 6.35 (s, 1H), 6.24 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 6.17 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 6.10 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 6.00 (s, 1H), 5.95 (s, 1H), 5.27 (d,J = 7.0 Hz, 1H), 5.02 (t,J = 5.9 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.78 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 4.30 (s, 2H), 4.03 (dd,J = 19.1, 5.8 Hz, 1H), 2.65 - 2.52 (m, 1H), 2.32 (d,J = 10.2 Hz, 1H), 2.14 - 1.95 (m, 2H), 1.89 - 1.63 (m, 5H), 1.39 (s, 3H), 1.28 - 1.11 (m, 1H), 1.05 (d,J = 10.7 Hz, 1H), 0.89 (s, 3H)。實例 58 ： 合成(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)胺基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00536
其係使用與上文實例57相同之程序合成。主要縮醛異構物：LCMS (方法k，表7) Rt =1.49 min; MS m/z = 589 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.02 (s, 1H), 7.30 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.23 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.99 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.87 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 6.36 (s, 1H), 6.31 - 6.16 (m, 2H), 6.10 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.45 (d,J = 2.6 Hz, 1H), 5.35 (s, 1H), 5.11 (t,J = 5.9 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.91 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 4.51 (dd,J = 19.5, 6.3 Hz, 1H), 4.20 (dd,J = 19.2, 5.5 Hz, 2H), 2.74 - 2.58 (m, 1H), 2.36 (d,J = 10.2 Hz, 1H), 2.27 - 2.13 (m, 1H), 2.06 (d,J = 9.5 Hz, 2H), 1.93 - 1.78 (m, 1H), 1.78 - 1.57 (m, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.42 (dd,J = 12.4, 4.5 Hz, 1H), 0.87 (s, 3H)。 次要縮醛異構物(6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)胺基)苯基)-6b-氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮：LCMS (方法k，表7) Rt =1.50 min; MSm/z = 589 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.01 (s, 1H), 7.29 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.08 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.97 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 6.87 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 6.35 (s, 1H), 6.24 (d,J = 8.6 Hz, 2H), 6.10 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 6.02 (d,J = 18.4 Hz, 2H), 5.44 (s, 1H), 5.30 (d,J = 7.1 Hz, 1H), 4.97 (s, 3H), 4.30 (d,J = 19.1 Hz, 1H), 4.19 (d,J = 9.2 Hz, 1H), 4.05 (d,J = 19.1 Hz, 1H), 2.78 - 2.56 (m, 1H), 2.36 (d,J = 13.3 Hz, 1H), 2.06 (d,J = 10.7 Hz, 2H), 1.83 (dd,J = 16.3, 10.0 Hz, 2H), 1.76 - 1.61 (m, 2H), 1.50 (s, 4H), 0.89 (s, 3H)。實例 59 ： 合成(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)胺基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00537
其係使用與上文實例57相同之程序合成。主要縮醛異構物：LCMS (方法l，表7) Rt =1.62 min; MS m/z = 607 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.02 (s, 1H), 7.25 (dd,J = 18.2, 9.4 Hz, 3H), 6.99 (d,J = 8.6 Hz, 2H), 6.87 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 6.36 (t,J = 1.9 Hz, 1H), 6.30 (dd,J = 10.1, 1.8 Hz, 1H), 6.25 - 6.19 (m, 1H), 6.14 (s, 1H), 6.09 (dd,J = 7.9, 1.3 Hz, 1H), 5.77 - 5.55 (m, 1H), 5.53 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 5.35 (s, 1H), 5.11 (t,J = 6.0 Hz, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.92 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.51 (dd,J = 19.5, 6.4 Hz, 1H), 4.21 (dd,J = 19.3, 5.6 Hz, 2H), 2.76 - 2.53 (m, 1H), 2.28 (dd,J = 12.6, 5.9 Hz, 2H), 2.06 (d,J = 12.0 Hz, 3H), 1.70 (dt,J = 20.2, 6.0 Hz, 3H), 1.60 - 1.40 (m, 4H), 0.86 (s, 3H)。 次要縮醛異構物(2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苯基)胺基)苯基)-2,6b-二氟-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮：LCMS (方法l，表7) Rt =1.65 min; MS m/z = 607 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.01 (s, 1H), 7.27 (d,J = 9.8 Hz, 1H), 7.09 (d,J = 7.9 Hz, 2H), 6.97 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 6.88 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 6.41 - 6.19 (m, 3H), 6.20 - 6.07 (m, 2H), 6.03 (s, 1H), 5.65 (d,J = 46.4 Hz, 1H), 5.52 (s, 1H), 5.32 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 5.06 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.32 (dd,J = 19.1, 5.3 Hz, 1H), 4.19 (s, 1H), 4.06 (dd,J = 18.7, 4.8 Hz, 1H), 2.59 (d,J = 13.8 Hz, 1H), 2.29 (s, 1H), 2.17 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 2.07 (s, 1H), 1.87 (d,J = 6.7 Hz, 1H), 1.69 (dd,J = 23.7, 12.4 Hz, 3H), 1.50 (s, 4H), 0.89 (s, 3H)。實例 60 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苄基)硫基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮步驟 1 ： 合成4-((3-硝基苄基)硫基)苯甲醛
Figure TW201801749AD00538
向(3-硝基苯基)甲烷硫醇(35 g, 282 mmol)及4-氟苯甲醛(52.5 g, 310 mmol)於無水二甲基亞碸(220 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(78 g, 564 mmol)。將反應混合物加熱至100℃並保持4小時。如上文所述設置另一瓶。合併兩瓶反應物並用水(2 L)稀釋且然後用EtOAc (3 × 600 mL)萃取。經Na2 SO4 乾燥合併之有機層，且濃縮以獲得殘餘物，藉由管柱層析(用PE/EtOAc = 20/1至5/1溶析)純化該殘餘物，以獲得淺棕色固體狀標題化合物(62 g, 80%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 4.54 (s, 2 H) 7.51 (d,J =8.33 Hz, 2 H) 7.59 (s, 1 H) 7.77 (d,J =8.33 Hz, 2 H) 7.87 (d,J =7.89 Hz, 1 H) 8.05 - 8.10 (m, 1 H) 8.30 (s, 1 H) 9.87 (s, 1 H)。 步驟2： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-10-(4-((3-硝基苄基)硫基)苯基)-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00539
將三氟甲磺酸(21.23 mL, 239 mmol)逐滴添加至(8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(9 g, 23.91 mmol)及4-((3-硝基苄基)硫基)苯甲醛(7.19 g, 26.3 mmol)於MeCN (500 mL)中之0℃溶液中。將反應物在0℃下攪拌1小時。如上文所述設置另外兩瓶。合併所有三瓶反應物且傾倒至水(2 L)中。用EtOAc (3 × 500 mL)萃取所得混合物。經Na2 SO4 乾燥合併之有機層，且濃縮以獲得殘餘物，藉由製備型HPLC純化該殘餘物，以獲得白色固體狀標題化合物(5.57 g, 16%產率)。LCMS (方法n，表7): Rt =3.20 min; m/z = 632.0 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 0.84 (s, 3 H) 0.93 - 1.08 (m, 2 H) 1.37 (s, 3 H) 1.52 - 1.76 (m, 5 H) 1.94 - 2.15 (m, 2 H) 2.29 (br d,J =11.91 Hz, 1 H) 2.50 - 2.58 (m, 1 H) 4.15 (dd,J =19.40, 5.51 Hz, 1 H) 4.27 (br d,J =2.87 Hz, 1 H) 4.39 (s, 2 H) 4.48 (dd,J =19.40, 6.39 Hz, 1 H) 4.77 (d,J =3.09 Hz, 1 H) 4.89 (d,J =4.63 Hz, 1 H) 5.07 (t,J =5.95 Hz, 1 H) 5.38 (s, 1 H) 5.91 (s, 1 H) 6.15 (dd,J =10.14, 1.76 Hz, 1 H) 7.25 - 7.38 (m, 5 H) 7.55 (t,J =7.94 Hz, 1 H) 7.79 (d,J =7.72 Hz, 1 H) 8.04 (dd,J =8.16, 1.54 Hz, 1 H) 8.19 (d,J =1.76 Hz, 1 H) 亦獲得白色固體狀次要縮醛異構物(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-10-(4-((3-硝基苄基)硫基)苯基)-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮(0.34 g, 1%產率)。LCMS (方法n，表7): Rt =3.28 min; MS m/z = 631.8 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 0.86 (s, 3 H) 0.98 - 1.05 (m, 1 H) 1.10 - 1.21 (m, 1 H) 1.37 (s, 3 H) 1.66 - 1.88 (m, 5 H) 1.94 - 2.08 (m, 2 H) 2.29 (br dd,J =13.23, 2.87 Hz, 1 H) 2.50 - 2.56 (m, 1 H) 3.99 (dd,J =19.18, 5.95 Hz, 1 H) 4.20 (dd,J =19.07, 6.28 Hz, 1 H) 4.27 (br s, 1 H) 4.39 (s, 2 H) 4.77 (d,J =3.09 Hz, 1 H) 4.99 (s, 1 H) 5.26 (d,J =6.84 Hz, 1 H) 5.92 (s, 1 H) 6.04 (s, 1 H) 6.15 (dd,J =10.03, 1.87 Hz, 1 H) 7.16 (d,J =8.38 Hz, 2 H) 7.26 - 7.34 (m, 3 H) 7.55 (t,J =7.94 Hz, 1 H) 7.75 (d,J =7.72 Hz, 1 H) 8.05 (dd,J =8.16, 1.54 Hz, 1 H) 8.21 (t,J =1.76 Hz, 1 H)。 步驟3： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-胺基苄基)硫基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00540
將(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-10-(4-((3-硝基苄基)硫基)苯基)-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮(138 mg, 0.22 mmol)、鋅(214 mg, 3.28 mmol)及乙酸(0.4 ml, 6.99 mmol)於EtOAc (2 mL)中之混合物在40℃下攪拌2小時。LCMS顯示部分轉化成期望苯胺產物。再添加鋅(71 mg, 1.09 mml)並在40℃下再攪拌2小時。將溶液冷卻至室溫且分配於飽和NaHCO3 水溶液與EtOAc (3×)之間。經Na2 SO4 乾燥合併之有機層且藉由層析(矽膠)純化，用DCM中之0-5% MeOH溶析，以獲得標題化合物(64 mg, 0.106 mmol, 49%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt =0.77 min; MS m/z = 601.9 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.35 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 7.32 - 7.24 (m, 3H), 6.89 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 6.56 (q,J = 2.3 Hz, 1H), 6.47 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 6.40 (ddd,J = 7.6, 2.6, 1.4 Hz, 1H), 6.15 (dd,J = 10.1, 1.8 Hz, 1H), 5.95 - 5.89 (m, 1H), 5.38 (s, 1H), 5.03 (d,J = 14.0 Hz, 3H), 4.90 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 4.77 (d,J = 3.5 Hz, 1H), 4.54 - 4.44 (m, 1H), 4.28 (s, 1H), 4.16 (d,J = 20.6 Hz, 1H), 4.06 (d,J = 2.3 Hz, 2H), 2.59 - 2.50 (m, 1H), 2.30 (d,J = 11.5 Hz, 1H), 2.14 - 2.03 (m, 1H), 1.97 (s, 2H), 1.88 - 1.67 (m, 4H), 1.63 (td,J = 11.9, 10.4, 5.1 Hz, 1H), 1.37 (d,J = 1.9 Hz, 3H), 1.10 - 0.92 (m, 2H), 0.84 (s, 3H)。實例 61 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((2-胺基吡啶-4-基)甲基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮 步驟1： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(溴甲基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮
Figure TW201801749AD00541
將4-(溴甲基)苯甲醛(0.539 g, 2.71 mmol)添加至(8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-三羥基-17-(2-羥基乙醯基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氫-3H-環戊[a]菲-3-酮(1.0738 g, 2.85 mmol)、4-(溴甲基)苯甲醛(0.539 g, 2.71 mmol)及MgSO4 (1.33 g, 11.05 mmol)於MeCN (18 ml)中之0℃懸浮液中。以逐滴方式添加三氟甲磺酸(2.0 g, 13.5 mmol)，以維持小於7℃之溫度。將反應物攪拌4 min，此後藉由添加飽和NaHCO3 水溶液(20 mL)將其淬滅且用EtOAc (60 mL)萃取。用鹽水(10 mL)洗滌合併之有機物且在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，40 g)純化，用0-5% MeOH/DCM梯度溶析，獲得灰白色泡沫狀標題化合物(1.59 g, 2.85 mmol, 100%產率) (縮醛非鏡像異構物之9:1混合物)。提供主要縮醛異構物之表徵：LCMS (方法r，表7) Rt =1.04 min; MS m/z = 557.2, 559.2 [M+H]。1H NMR (501 MHz, DMSO-d6) d 7.44 (s, 4H), 7.30 (dd,J = 10.1, 2.2 Hz, 1H), 6.15 (ddd,J = 10.1, 4.8, 1.9 Hz, 1H), 5.91 (t,J = 1.7 Hz, 1H), 5.43 (s, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.93 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.77 (dd,J = 3.6, 0.9 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.51 (dd,J = 19.4, 4.1 Hz, 1H), 4.31 4.26 (m, 1H), 4.17 (d,J = 19.5 Hz, 1H), 2.58 2.49 (m, 1H), 2.30 (dd,J = 12.9, 4.7 Hz, 1H), 2.16 2.05 (m, 1H), 1.99 (d,J = 23.9 Hz, 1H), 1.89 1.71 (m, 2H), 1.75 1.65 (m, 1H), 1.67 1.57 (m, 1H), 1.38 (s, 3H), 1.11 0.91 (m, 2H), 0.85 (s, 3H)。步驟 2 ： 合成(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((2-胺基吡啶-4-基)甲基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-4H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4-酮
Figure TW201801749AD00542
向20 mL瓶中裝填脫氣二噁烷(2.0 ml)/水(0.200 mL)溶液中之(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(溴甲基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(0.100 g, 0.179 mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2-胺(0.039 g, 0.179 mmol)及K2 CO3 (0.099 g, 0.718 mmol)。將懸浮液抽空且用無水N2 (3×)回填。添加Pd(dppf)Cl2 (0.012 g, 0.016 mmol)且將瓶再次抽空並用無水N2 回填。將反應混合物加熱至90℃。1.5小時後耗盡起始材料。使反應物冷卻至室溫，用EtOAc (20 mL)稀釋且用水(25 mL)、然後用鹽水(25 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，且在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，40 g)純化，用0-10% MeOH/CH2 Cl2 梯度溶析，獲得淺褐色固體。藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 50 mm)上之反相製備型HPLC進一步純化。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為80 mL/min (0-5.0 min 15% A, 5.0-20 min線性梯度15%-85% A，保持20-25 min)。將合併之部分冷凍並凍乾以獲得白色固體狀標題化合物(27 mg, 0.047 mmol, 26%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt = 0.90 min; MS m/z = 571.3 [M+H+ ]。1H NMR (501 MHz, DMSO-d6) δ 7.93 (s, 2H), 7.82 (d,J = 6.6 Hz, 1H), 7.44 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.39 - 7.22 (m, 3H), 6.73 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 6.69 (s, 1H), 6.24 - 6.09 (m, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.44 (s, 1H), 4.94 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 4.50 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.30 (s, 1H), 4.19 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 3.99 (s, 2H), 2.61 - 2.51 (m, 1H), 2.35 - 2.27 (m, 1H), 2.19 - 2.08 (m, 1H), 2.08 - 1.99 (m, 1H), 1.82 - 1.59 (m, 5H), 1.40 (s, 3H), 1.02 (ddd,J = 27.9, 11.7, 3.2 Hz, 2H), 0.87 (s, 3H)。 以下實例係使用與實例61 (上文)相同之程序合成。 表8.
Figure TW201801749AD00543
 實例 67 ： 合成1-(3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮
Figure TW201801749AD00544
步驟 1 ： 合成(Z )-4-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸
Figure TW201801749AD00545
將馬來酸酐(46.5 mg, 0.474 mmol)添加至(6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-胺基苄基)苯基)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-4(2H)-酮(239 mg, 0.420 mmol)於THF (3.0 mL)中之室溫溶液中。75 min後，在減壓下移除溶劑以獲得灰白色泡沫狀標題化合物。此不經進一步純化即用於下一步驟(假設100%產率)中。LCMS (方法o，表7) Rt =0.86 min; MS m/z = 668.5 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.99 (s, 1H), 10.29 (s, 1H), 7.45 7.38 (m, 2H), 7.38 7.31 (m, 2H), 7.27 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.24 7.15 (m, 3H), 6.92 (dt,J = 7.8, 1.3 Hz, 1H), 6.38 (d,J = 12.1 Hz, 1H), 6.25 (d,J = 12.0 Hz, 1H), 6.12 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 5.89 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 5.36 (s, 1H), 5.03 (s, 1H), 4.88 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.73 (d,J = 3.3 Hz, 1H), 4.46 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 4.26 (p,J = 3.2 Hz, 1H), 4.14 (d,J = 19.4 Hz, 1H), 3.87 (s, 2H), 2.52 (dd,J = 13.6, 5.3 Hz, 1H), 2.32 2.23 (m, 1H), 2.07 (tt,J = 10.8, 6.2 Hz, 1H), 2.02 1.94 (m, 1H), 1.84 1.51 (m, 5H), 1.36 (s, 3H), 1.09 0.93 (m, 2H), 0.82 (s, 3H)。步驟 2 ： 合成1-(3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮
Figure TW201801749AD00546
將雙(三甲基矽基)胺(HMDS) (63.4 µL, 0.306 mmol)添加至溴化鋅(75.0 mg, 0.333 mmol)及(Z )-4-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸(171 mg, 0.256 mmol)於四氫呋喃(2.0 mL)中之溶液中。將混合物加熱至50℃並保持2.5 h。LCMS指示不完全轉化，因此添加另一等份雙(三甲基矽基)胺(HMDS) (63.4 µL, 0.306 mmol)。在50℃下額外90 min後完成反應。將混合物冷卻至室溫，用EtOAc (20 mL)稀釋，然後相繼用1 N HCl水溶液(2 × 10 mL)、飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)、鹽水(10 mL)洗滌，經Na2 SO4 乾燥，且在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽，12 g)純化，用0-10% MeOH/DCM梯度溶析，獲得灰白色固體狀標題化合物(82.6 mg, 0.127 mmol, 50%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt =1.02 min; MS m/z = 650.5 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.27 (dt,J = 7.8, 3.7 Hz, 3H), 7.19 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.17 7.06 (m, 4H), 7.06 7.01 (m, 3H), 6.04 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 5.81 (t,J = 1.5 Hz, 1H), 5.64 (s, 1H), 5.29 (s, 1H), 4.95 (t,J = 5.9 Hz, 1H), 4.80 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.65 (d,J = 3.2 Hz, 1H), 4.38 (dd,J = 19.4, 6.4 Hz, 1H), 4.18 (t,J = 3.4 Hz, 1H), 4.06 (dd,J = 19.5, 5.7 Hz, 1H), 3.86 (s, 2H), 2.45 (dd,J = 13.5, 5.4 Hz, 1H), 2.30 2.11 (m, 1H), 2.11 1.81 (m, 1H), 1.76 1.44 (m, 4H), 1.28 (s, 3H), 1.02 0.83 (m, 2H), 0.75 (s, 3H)。實例 68 ： 合成磷酸二氫2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)苄基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙基酯
Figure TW201801749AD00547
將二磷醯氯(158 mg, 0.609 mmol)逐滴添加至1-(3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)-1H-吡咯-2,5-二酮(82 mg, 0.126 mmol)於四氫呋喃(0.5 mL)中之-51℃溶液中。經1小時使反應物緩慢升溫至-10℃，然後用-5℃水淬滅。用飽和NaHCO3 水溶液處理混合物以獲得pH為8之溶液。用EtOAc (5 mL)處理，獲得乳白色乳液。藉由添加1 N HCl水溶液將pH調節至1來改良乳液。用EtOAc (4 × 5 mL)萃取，然後用鹽水(5 mL)洗滌合併之有機物，乾燥(Na2 SO4 )，並在減壓下移除溶劑。藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250 × 50 mm)上之反相製備型HPLC純化產物。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為90 mL/min (0-5.0 min 15% A, 5.0-20.0 min線性梯度15%-95% A)。將合併之部分冷凍並凍乾以獲得白色固體狀標題化合物(3.6 mg, 4.93 mmol, 4%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt =0.95 min; MS m/z = 730.5 [M+H+ ]。1 H NMR (501 MHz, DMSO-d6) δ 7.38 (dt,J = 7.8, 3.7 Hz, 3H), 7.31 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.29 7.26 (m, 2H), 7.25 7.22 (m, 1H), 7.19 (t,J = 1.9 Hz, 1H), 7.17 7.12 (m, 3H), 6.16 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 5.93 (t,J = 1.6 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 4.96 4.86 (m, 2H), 4.84 (s, 1H), 4.56 (dd,J = 18.1, 8.1 Hz, 1H), 4.30 (q,J = 3.3 Hz, 1H), 3.97 (s, 2H), 2.59 2.52 (m, 1H), 2.31 (d,J = 12.0 Hz, 1H), 2.17 2.07 (m, 1H), 2.05 1.98 (m, 1H), 1.85 1.56 (m, 5H), 1.39 (s, 3H), 1.03 (ddd,J = 18.5, 11.8, 4.1 Hz, 2H), 0.88 (s, 3H)。實例 69 ： 合成磷酸二氫2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙醯胺基)丙醯胺基)丙醯胺基)苯氧基)甲基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙基酯
Figure TW201801749AD00548
步驟1： 合成((S)-1-(((S)-1-((3-((4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((二-第三丁氧基磷醯基)氧基)乙醯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)氧基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure TW201801749AD00549
將二-第三丁基N ,N -二乙基亞磷醯胺(0.226 ml, 0.811 mmol)添加至((S)-1-(((S)-1-((3-((4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)氧基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(463 mg, 0.559 mmol)及1H-四唑(0.45 M於MeCN中，4.97 ml, 2.237 mmol)於二甲基乙醯胺(2 ml)中之室溫溶液中。4.5小時後再裝填二-第三丁基N ,N -二乙基亞磷醯胺(0.2 mL)並持續攪拌過夜。將反應物冷卻至0℃，此後逐滴添加過氧化氫於水中之30%溶液(0.17 mL, 1.67 mmol)。在1.5內完成至磷酸酯之氧化。將反應物冷卻至0℃，且藉由添加1M Na2 S2 O3 水溶液(8 mL)淬滅反應。用EtOAc (2 × 30 mL)萃取混合物，用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2 SO4 乾燥，並在減壓下移除溶劑。藉由層析(二氧化矽)使用100% EtOAc作為溶析液純化，提供白色固體狀標題化合物(366 mg, 0.359 mmol, 64%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt =1.08 min; MS m/z = 1020.5 [M+H+ ]。步驟 2 ： 合成磷酸二氫2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-((S)-2-((S)-2-胺基丙醯胺基)丙醯胺基)苯氧基)甲基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙基酯
Figure TW201801749AD00550
將TFA (0.95 mL)添加至((S)-1-(((S)-1-((3-((4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((二-第三丁氧基磷醯基)氧基)乙醯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)氧基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(364 mg, 0.357 mmol)於DCM (2 mL)中之室溫溶液中。在2 h內完成反應，此後在減壓下移除溶劑。獲得淺黃色泡沫固體狀標題化合物且其不經進一步純化即使用。LCMS (方法r，表7)主要縮醛異構物：Rt =0.77 min; MS m/z = 808.3 [M+H+ ]，次要縮醛異構物：Rt =0.79 min; MS m/z = 808.3 [M+H+ ]。步驟 3 ： 合成磷酸二氫2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙醯胺基)丙醯胺基)丙醯胺基)苯氧基)甲基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙基酯
Figure TW201801749AD00551
將N,N-二異丙基乙胺(0.37 mL, 2.12 mmol)及馬來醯亞胺基乙酸N-羥基琥珀醯亞胺酯(89 mg, 0.353 mmol)相繼添加至磷酸二氫2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-((S)-2-((S)-2-胺基丙醯胺基)丙醯胺基)苯氧基)甲基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙基酯(285 mg, 0.353 mmol)於二甲基甲醯胺(1.5 mL)中之室溫溶液中並攪拌過夜。用DMSO稀釋反應混合物且藉由Phenomenex C18(2) 10微米管柱(250× 50 mm)上之製備型反相HPLC純化。使用MeCN (A)及水中之0.1% TFA (B)梯度，流速為30 mL/min (0-3.0 min 15% A, 3.0-19.0 min線性梯度15%-60% A，然後19.0-23.0 min線性梯度至85% A)。濃縮合併之部分以在減壓下移除揮發性溶劑，且將所得溶液冷凍並凍乾以獲得白色固體狀標題化合物(93 mg, 0.098 mmol, 28%產率)。主要縮醛異構物：LCMS (方法r，表7) Rt=0.83 min; MS m/z = 945.4 [M+H+]。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.78 (s, 1H), 8.39 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.37 (m, 4H), 7.33 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.10 - 7.05 (m, 1H), 7.03 (s, 2H), 6.64 (dd, J = 8.0, 2.4 Hz, 1H), 6.13 (dd, J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 5.89 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.50 (s, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.96 - 4.85 (m, 2H), 4.81 (s, 1H), 4.55 (dd, J = 18.1, 8.2 Hz, 1H), 4.38 - 4.21 (m, 3H), 4.13 - 3.98 (m, 2H), 2.53 (dd, J = 13.2, 5.2 Hz, 1H), 2.28 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.09 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.08 - 1.95 (m, 1H), 1.70 (dddd, J = 29.9, 25.9, 14.4, 6.4 Hz, 5H), 1.36 (s, 3H), 1.26 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.18 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.02 (ddd, J = 14.7, 11.6, 4.0 Hz, 2H), 0.86 (s, 3H)。實例 70 ： 合成2-(二甲基胺基)乙酸2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙醯胺基)丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙基酯2,2,2-三氟乙酸鹽
Figure TW201801749AD00552
步驟 1 ： 合成2-(二甲基胺基)乙酸2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙基酯2,2,2-三氟乙酸鹽
Figure TW201801749AD00553
向((2S)-1-(((2S)-1-((3-(4-((6aR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(以與實例10、步驟1相同之方式製備)(78 mg, 0.096 mmol)、2-(二甲基胺基)乙酸(10.9 mg, 0.106 mmol)及2,6-二甲基吡啶(0.022 mL, 0.192 mmol)於無水N,N -二甲基甲醯胺(2.0 mL)中之溶液中添加HATU (43.8 mg, 0.115 mmol)，且將所得溶液在室溫下攪拌45分鐘。藉由C18 HPLC純化粗產物，用0.1M TFA水溶液中之5%-95% MeCN梯度溶析。藉由凍乾濃縮含有純淨產物之部分，以提供標題化合物(82 mg, 89%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt =0.80 min, MS m/z = 898.2 [M+H+ ]。步驟 2 ： 合成2-(二甲基胺基)乙酸2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙醯胺基)丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙基酯2,2,2-三氟乙酸鹽
Figure TW201801749AD00554
將2-(二甲基胺基)乙酸2-((6aR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙基酯(82 mg, 0.074 mmol)於DCM (4 mL)及TFA (1 mL)中之溶液在室溫下攪拌20分鐘，且然後在真空中濃縮。向此化合物於無水N,N -二甲基甲醯胺(1 mL)中之溶液中添加休尼格鹼(Hunig’s base) (0.20 mL, 1.15 mmol)及2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(27.8 mg, 0.11 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌15分鐘，且添加TFA (0.106 mL, 1.376 mmol)。藉由C18 HPLC純化粗產物，用0.1M TFA水溶液中之5%-95% MeCN梯度溶析。藉由凍乾濃縮含有純淨產物之部分，以提供無色固體狀標題化合物(46 mg, 0.0439 mmol, 59%產率)。LCMS (方法r，表7)主要縮醛異構物Rt =0.82 min, MS m/z = 934 [M+H+ ]；次要縮醛異構物Rt = =0.81 min, MS m/z = 934 [M+H+ ]。1 H NMR (501 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.12 (s, 2H), 9.75 (s, 1H), 8.40 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 8.11 (d,J = 7.1 Hz, 1H), 7.45 - 7.42 (m, 1H), 7.38 (dd,J = 8.2, 2.0 Hz, 2H), 7.31 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.22 (d,J = 8.2 Hz, 2H), 7.17 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.89 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 6.50 (s, 1H), 6.15 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 5.93 - 5.90 (m, 1H), 5.52 (s, 1H), 5.30 (d,J = 17.7 Hz, 1H), 5.00 (d,J = 17.7 Hz, 1H), 4.86 (t,J = 5.0 Hz, 2H), 4.36 - 4.25 (m, 4H), 4.12 - 4.02 (m, 2H), 3.87 (s, 1H), 2.82 (s, 3H), 2.56 - 2.51 (m, 1H), 2.50 (s, 0H), 2.50 (d,J = 1.8 Hz, 0H), 2.33 - 2.26 (m, 2H), 2.15 - 2.06 (m, 2H), 2.04 - 1.97 (m, 2H), 1.84 - 1.80 (m, 1H), 1.77 - 1.60 (m, 4H), 1.37 (s, 3H), 1.26 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.19 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.10 - 0.98 (m, 3H), 0.89 (s, 3H)。實例 71 ： 合成4-(2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙醯胺基)丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙氧基)-4-側氧基丁酸
Figure TW201801749AD00555
步驟 1 ： 合成琥珀酸2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙基酯第三丁基酯
Figure TW201801749AD00556
標題化合物係使用針對實例70闡述之方法、用4-(第三丁氧基)-4-側氧基丁酸取代2-(二甲基胺基)乙酸來製備。LCMS (方法r，表7) Rt =1.03 min; MS m/z = 968 [M+H+ ]。步驟 2 ： 合成4-(2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙醯胺基)丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙氧基)-4-側氧基丁酸
Figure TW201801749AD00557
標題化合物係使用實例69、步驟2中所述之方法製備。其分離為無色固體(49 mg, 43%)。LCMS (方法r，表7) Rt =0.88 min; MS m/z = 948.9 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.23 (s, 1H), 9.74 (s, 1H), 8.37 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 8.09 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 3H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 7.17 (dd,J = 20.7, 7.9 Hz, 3H), 6.90 - 6.84 (m, 1H), 6.15 - 6.09 (m, 1H), 5.90 - 5.87 (m, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.07 (d,J = 17.7 Hz, 1H), 4.86 - 4.79 (m, 2H), 4.37 - 4.23 (m, 3H), 4.12 - 3.98 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 2.65 - 2.58 (m, 2H), 2.52 - 2.47 (m, 2H), 2.32 - 2.24 (m, 2H), 2.09 (d,J = 10.8 Hz, 2H), 2.02 - 1.94 (m, 2H), 1.85 - 1.56 (m, 6H), 1.36 (s, 3H), 1.24 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.17 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.10 - 0.95 (m, 3H), 0.85 (s, 3H)。實例 72 ： 合成硫酸氫2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙醯胺基)丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙基酯
Figure TW201801749AD00558
步驟 1 ： 合成硫酸氫2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙基酯
Figure TW201801749AD00559
向以與實例10、步驟1類似之方式製備之((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-羥基-8b-(2-羥基乙醯基)-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-10-基)苄基)苯基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(53 mg, 0.065 mmol)於MeCN (2 mL)中之溶液中添加吡啶三氧化硫複合物(42 mg, 0.26 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時。藉由C18 HPLC純化粗產物，用0.1M TFA水溶液中之5%-95% MeCN梯度溶析。藉由凍乾濃縮含有純淨產物之部分，以提供標題化合物。LCMS (方法r，表7) Rt =0.83 min; MS m/z = 892.0 [M+H+ ]。步驟 2 ： 合成硫酸氫2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙醯胺基)丙醯胺基)丙醯胺基)苄基)苯基)-7-羥基-6a,8a-二甲基-4-側氧基-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-十二氫-1H-萘并[2',1':4,5]茚并[1,2-d][1,3]二氧雜環戊烯-8b-基)-2-側氧基乙基酯
Figure TW201801749AD00560
標題化合物係使用實例69、步驟2中所述之方法製備。其分離為無色固體(27 mg, 28%產率)。LCMS (方法r，表7) Rt =0.77 min; MS m/z = 928.9 [M+H+ ]。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.75 (s, 1H), 8.37 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 8.10 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.44 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 2H), 7.33 - 7.29 (m, 1H), 7.27 (d,J = 10.1 Hz, 1H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 7.04 (s, 1H), 6.93 - 6.83 (m, 2H), 6.12 (dd,J = 10.1, 1.9 Hz, 1H), 5.91 - 5.86 (m, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.87 (d,J = 5.1 Hz, 1H), 4.84 (s, 1H), 4.74 (d,J = 18.3 Hz, 1H), 4.45 (d,J = 18.3 Hz, 1H), 4.36 - 4.24 (m, 3H), 4.11 - 3.99 (m, 2H), 3.86 (s, 2H), 2.58 - 2.48 (m, 1H), 2.32 - 2.22 (m, 1H), 2.08 (d,J = 11.1 Hz, 1H), 1.98 (s, 1H), 1.77 (s, 2H), 1.75 - 1.56 (m, 4H), 1.36 (s, 3H), 1.24 (d,J = 7.1 Hz, 3H), 1.17 (d,J = 7.0 Hz, 3H), 1.10 - 0.95 (m, 2H), 0.83 (s, 3H)。實例 73 ： 結合方案一般半胱胺酸結合方案 製備期望抗體於PBS緩衝液(pH 7.4)中之約10 mg/mL溶液以及PBS中之10 mM TCEP溶液(Pierce Bond-Breaker，目錄77720)。然後藉由添加約2莫耳當量之10 mM TCEP、簡單混合並在37℃下培育60 min來部分還原抗體(抗hTNF hIgG1 (D2E7)或抗mTNF mIgG2a (8C11; McRae BL等人，J Crohns Colitis 10 (1): 69-76 (2016))。然後將DMSO足量添加至經部分還原之抗體中至總共15% DMSO。對於結合，然後添加8莫耳當量之10 mM D-L-馬來醯亞胺溶液(其中SM係糖皮質類固醇之基團且L係連接體)且在室溫下培育30 min。然後使用先前經PBS緩衝液(pH 7.4)平衡之NAP-5脫鹽管柱(GE Healthcare，目錄17-0853-02)移除過量組合及DMSO。然後藉由粒徑篩析層析(SEC)、疏水相互作用層析(HIC)及還原質譜分析脫鹽樣品。硫基琥珀醯亞胺水解
Figure TW201801749AD00561
本發明ADC之硫基琥珀醯亞胺環之水解係藉由在升高pH下培育ADC來實現。簡言之，製備0.7 M精胺酸(pH 9.0)溶液且添加至PBS緩衝液中之每一ADC中以使總精胺酸濃度達到50 mM (pH約8.9)。然後將材料在25℃下培育72小時。然後藉由還原質譜確認琥珀醯亞胺環之水解，此後藉由添加0.1 M乙酸溶液至總共12.5 mM乙酸(pH約7.1)來淬滅水解。一般離胺酸結合方案 首先製備期望抗體於PBS緩衝液(pH 7.4)中之約10 mg/mL溶液。然後將8莫耳當量之D-L-N-羥基琥珀醯亞胺(其中SM係糖皮質類固醇之基團且L係連接體)添加至抗體中且在23℃下在15% DMSO存在下培育至多24小時。然後使用經PBS緩衝液(pH 7.4)平衡之NAP-5脫鹽管柱(GE Healthcare，目錄17-0853-02)將結合樣品脫鹽以移除過量組合及DMSO。然後藉由粒徑篩析層析(SEC)、疏水相互作用層析(HIC)及還原質譜分析脫鹽樣品。ADC 分析程序 疏水相互作用層析. 藉由疏水相互作用層析(HIC)剖析ADC以確定結合程度及計算大致藥物對抗體藥物比率(DAR)。簡言之，將100 μg ADC裝載至配備有4.6 × 35 mm丁基-NPR管柱(Tosoh Bioscience，目錄14947)之Ultimate 3000 Dual LC系統(Thermo Scientific)上。將ADC裝載至於100%緩衝液A中平衡之管柱上且使用100%緩衝液A至100%緩衝液B之線性梯度以0.8 mL/min溶析12 min，其中緩衝液A係25 mM磷酸鈉、1.5 M硫酸銨, pH 7.25且緩衝液B係25 mM磷酸鈉、20%異丙醇, pH 7.25。藉由對每一峰面積%乘以其相應載藥量求和並用加權和除以100來確定DAR。 粒徑篩析層析. 藉由粒徑篩析層析(SEC)使用配備有7.8 × 300 mm TSK-凝膠3000SWXL 管柱(Tosoh Bioscience，目錄08541)之Ultimate 3000 Dual LC系統(Thermo Scientific)剖析ADC之粒徑分佈。將20 ug每一ADC裝載至管柱上且使用等度梯度以1 mL/min之100 mM硫酸鈉、0.8 mL/min之100 mM磷酸鈉, pH 6.8溶析17 min。實例 74 ： 製備與糖皮質類固醇結合之阿達木單抗以獲得ADC 藉由兩步化學製程製備具有平均DAR 3.5之阿達木單抗MP-ala-ala類固醇ADC：阿達木單抗之二硫鍵還原，隨後用馬來醯亞胺基丙基丙胺酸-丙胺酸類固醇88號化合物烷基化(結合)。
Figure TW201801749AD00562
在第一步驟中，用參(2-羧基乙基)膦(「TCEP」) (≥ 1.8當量)還原阿達木單抗之有限數量之鏈間二硫鍵。然後使經部分還原之阿達木單抗於DMSO中結合至88號化合物(≥ 5當量)。 提及顯示所得ADC製劑之層析解析度之圖5，ADC係端視所還原鏈間二硫鍵之數量含有附接有0個藥物連接體分子(「E0」峰)、附接有2個藥物連接體分子(「E2」峰)、附接有4個藥物連接體分子(「E4」峰)、附接有6個藥物連接體分子(「E6」峰)及附接有8個藥物連接體分子(「E8」峰)之抗體之非均質混合物。層析分離及分離均質E2及E4峰之方法闡述於Hamblett等人，Clin Cancer Res 2004;10:7063-7070。圖5中所用之HIC條件如下： 管柱為TOSOH Tskgel丁基-NPR, 4.6 mm × 3.5 cm, 2.5µ且管柱溫度為30℃。波長為280 nm，運行時間為22分鐘，注射體積為40 μL，流速為0.5 mL/分鐘。移動相A：25 mM Na2 HPO4 , pH 7.0及1.5M (NH4 )2 SO4 ，移動相B：25 mM Na2 HPO4 , pH 7.0/IPA =75/25。梯度特徵：
Figure TW201801749AD00563
 層析分離及分離均質E2及E4峰之方法闡述於Hamblett等人，Clin Cancer Res 2004;10:7063-7070。簡言之，在水解及調節至pH ＜7.4後，用3 M硫酸銨/50 mM磷酸鹽緩衝液處理寬分佈混合物以使硫酸銨之總溶液濃度達到約0.8 M。藉由用0.5 N NaOH溶液(4 CV)消毒、用注射用水(WFI, 0.5 CV)沖洗並用0.8 M硫酸銨/25 mM磷酸鹽緩衝液(4 CV)平衡來製備預填充疏水相互作用層析(HIC)管柱(樹脂丁基sepharose HP)。將寬分佈/硫酸銨緩衝溶液裝載於HIC管柱(大致載量為30 mg蛋白質/mL樹脂)上，然後用0.8 M硫酸銨/25 mM磷酸鹽緩衝液(2.5 CV)洗滌。產物之溶析如下：0.72 M硫酸銨/25 mM磷酸鹽緩衝液(3 CV)，未結合之mAb；0.56 M硫酸銨/25 mM磷酸鹽緩衝液(4.5 CV)，DAR2 ADC；0.32 M硫酸銨/25 mM磷酸鹽緩衝液(6.5 CV)，DAR4 ADC。然後經由超濾(Millipore Ultracel, 30 kD截止值)、隨後滲濾至WFI (8 CV)中將DAR 2及DAR4產物部分單獨濃縮至約30 mg/mL。 藉由使用精胺酸緩衝液將產物溶液之pH調節至≥ 9使經純化E4結合物之琥珀醯亞胺水解以提供穩定附接。將溶液在環境溫度下保持≥ 2天，此時LC-MS分析測定水解為＞90%完全。關於LC-MS層析圖之一部分參見圖6。圖6中所用之SEC條件如下： 管柱為TOSOH TSK-gel G3000SWxL , 5µ, 250Å, 7.8 × 300 mm，管柱為環境溫度，波長為214 nm，運行時間為55分鐘，注射體積為10 μL，流速為0.25 mL/分鐘，自動取樣器溫度為4℃。移動相：100 mM Na2 HPO4 及100 mM Na2 SO4 , pH 6.8 / IPA = 90/10。 與MP-ala-ala-類固醇88號化合物結合之阿達木單抗之原始(圖7)及解捲積(圖8) MS數據。黑色正方形及圓形分別代表琥珀醯亞胺水解及未水解之ADC。使用水解及未水解ADC之相對豐度來確定水解轉化率。 水解 用pH 8.0、pH 8.5及pH 9.0之硼酸鹽緩衝液以及pH 8.0及pH 9.0之精胺酸緩衝液實施結合後琥珀醯亞胺環之水解以研究環水解之速率。結果顯示於下表9中。 表9：琥珀醯亞胺環水解
Figure TW201801749AD00564
 實例 75 ：小分子類固醇之活體外活性糖皮質素受體結合分析 根據製造商之方案使用PolarscreenTM 糖皮質素受體分析套組Red (ThermoFisher A 15898)測試小分子之糖皮質素受體(GR)結合。簡言之，將化合物連續稀釋於DMSO中，然後以1:10稀釋轉移至分析套組緩衝液中。將化合物以1:5進一步稀釋於分析套組緩衝液中，且將10 μl轉移至384孔小體積黑色壁板(Corning 4514)。將5 μl 4× Fluormone GS Red原液及5 ul 4× GR全長原液添加至含有測試化合物之每一孔中，且將板在室溫下避光培育4小時。使用EnVision多標記讀板儀(Perkinelmer編號2104-0010)量測每一板之螢光極化(mP)，且使用四參數曲線擬合分析數據以生成EC50值。結果顯示於下表10中。鹽皮質素受體細胞分析 根據製造商之方案使用PathHunter® NHRPRO CHO-K1 MR細胞系(DiscoveRx目錄號93-0451C2)測試小分子之鹽皮質素受體(MR)促效劑活性。簡言之，在37℃下將培養基中之20,000個細胞/孔平鋪於96半孔板(Costar目錄號3885)中過夜。將培養基移除且更換為分析培養基中之連續稀釋之小分子(30 μl；最終0.3% DMSO)。將板在37℃下培育過夜。將培養基移除，更換為檢測試劑(DiscoveRx目錄號93-0001; 12 μl/孔)，且在室溫(RT)下培育60分鐘。使用EnVision多標記讀板儀(Perkinelmer編號2104-0010)量測每一板之發光，且使用四參數曲線擬合分析數據以生成EC50值。結果顯示於下表10中。助孕酮受體結合分析 使用LanthaScreen® TR-FRET助孕酮受體共活化劑分析(Thermofisher目錄號A15903)之修改來測試小分子之助孕酮受體(PR)結合，其中將螢光黃標記之共活化劑肽更換為Fluormone AL-Red (Thermofisher目錄號PV4294)以改良分析信號。簡言之，將化合物連續稀釋於DMSO中，然後以1:10稀釋轉移至分析緩衝液(Thermofisher目錄號PV4301 + 5 mM DTT)中。將10 μl化合物一式兩份轉移至96半面積黑色孔板(Corning目錄號3694)。將5 μl PR-LBD蛋白(分析緩衝液中之4 nM原液；Thermofisher目錄號P2899)添加至每一孔中。另外，亦將Fluormone AL-Red (12 nM)及經鋱標記之抗GST單株抗體(mAb) (20 nM; Thermofisher目錄號PV3550)於分析緩衝液中之5 μl經製備混合物添加至每一孔中。將板在室溫(RT)下培育2小時，且然後使用EnVision多標記讀板儀(Perkinelmer編號2104-0010)量測TR-FRET發射比。使用四參數曲線擬合分析數據以生成EC50值。結果顯示於下表10中。雄激素受體結合分析 使用LanthaScreen® TR-FRET雄激素受體共活化劑分析(Thermofisher目錄號A15878)之修改來測試小分子之雄激素受體(AR)結合，其中將螢光黃標記之共活化劑肽更換為Fluormone AL-Red (Thermofisher目錄號PV4294)以改良分析信號。簡言之，將化合物連續稀釋於DMSO中，然後以1:10稀釋轉移至分析緩衝液(Thermofisher目錄號PV4295 + 5 mM DTT)中。將10 μl化合物一式兩份轉移至96半面積黑色孔板(Corning目錄號3694)。將5 μl AR-LBD蛋白(分析緩衝液中之5 nM原液；Thermofisher目錄號3009)添加至每一孔中。另外，亦將Fluormone AL-Red (20 nM)及經鋱標記之抗GST單株抗體(mAb) (30 nM; Thermofisher目錄號PV3550)於分析緩衝液中之5 μl經製備原液添加至每一孔中。將板在室溫(RT)下培育6小時，然後使用EnVision多標記讀板儀(Perkinelmer編號2104-0010)量測TR-FRET發射比。使用四參數曲線擬合分析數據以生成EC50值。結果顯示於下表10中。GRE 報導基因分析 將實例78中所述之K562親代GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro])細胞以50,000個細胞/孔平鋪於經組織培養物處理之96孔白色板(Costar: 3917)上之50 µL分析培養基(RPMI、1% CSFBS、1% L-麩醯胺酸、1%丙酮酸鈉及1% MEAA)中。將小分子GR促效劑化合物以100 μM之起始濃度連續稀釋且於100% DMSO中連續稀釋4倍。藉由將2 μl經連續稀釋之化合物轉移至248 μl分析培養基中至二次稀釋板(1:125稀釋)中在分析培養基中進一步稀釋小分子化合物。然後用25 µL以1:125稀釋之GR促效劑化合物(最終起始濃度為266.7 nM (1:3))或單獨培養基處理細胞且在37℃、5% CO2 下培育24小時。培育24小時後，用75 µL Dual-Glo螢光素酶分析系統(Promega-E2920)將細胞處理10分鐘且使用TopCount或MicroBeta2 (PerkinElmer)分析發光。雌激素受體結合分析 使用LanthaScreen® TR-FRET雌激素受體α共活化劑分析(Thermofisher目錄號A15885)之修改來測試小分子之雌激素受體(ER) α結合，其中經螢光黃標記之共活化劑肽更換為Fluormone ES2 Green (Thermofisher目錄號PV6045)以改良分析信號。簡言之，將化合物連續稀釋於DMSO中，然後以1:10稀釋轉移至分析緩衝液(Thermofisher目錄號PV4295 + 5 mM DTT)中。將10 μl化合物一式兩份轉移至96半面積黑色孔板(Corning目錄號3694)。將5 μl ER-LBD蛋白(分析緩衝液中之5 nM原液；Thermofisher目錄號4542)添加至每一孔中。另外，亦將Fluormone ES2 Green (12 nM)及經鋱標記之抗GST單株抗體(mAb) (8 nM; Thermofisher目錄號PV3550)於分析緩衝液中之5 μl經製備原液添加至每一孔中。將板在室溫(RT)下培育4小時，且然後使用EnVision多標記讀板儀(Perkinelmer編號2104-0010)量測TR-FRET發射比。使用四參數曲線擬合分析數據以生成EC50值。結果顯示於下表10中。 表10：活體外活性
Figure TW201801749AD00565
 ++指示所報告數據係多個數據點之平均值且所報告數據可讀取為「大於」所報告數據 NT指示未測試實例 76 ： 抗TNF-α免疫結合物之穩定性 基質穩定性 測試在生理條件下抗TNFα類固醇ADC對過早釋放小分子酬載之敏感性。在該等實驗中，將ADC以一式兩份稀釋於血漿(人類、猴、小鼠或大鼠)或緩衝液中且在37℃、5% CO2 下培育6天。在時間0分鐘及在6天時段內之各個時間點淬滅每一樣品。然後使用LC/MS/MS分析樣品且與相應小分子之標準曲線進行比較。計算小分子酬載隨時間之最大釋放%。結果匯總於下表11中。 表11：抗TNFα類固醇ADC之穩定性
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 該等結果展示，抗TNFα類固醇ADC在緩衝液及多個物種之血漿中較為穩定且觀察到最少小分子釋放。蛋白水解穩定性 比較類固醇ADC與使用結合至鼠類CD-19抗體之vcmcMMAE藥物連接體生成之ADC對經由蛋白酶處理釋放其酬載之敏感性。將ADC (平均DAR為4)與細胞自溶酶B或蛋白酶K一起培育，且藉由LC-MS分析各個時間點(0小時、1小時、4小時、7小時及24小時)之酬載釋放。 結果顯示於圖1中且展示類固醇ADC抵抗外源細胞自溶酶介導之自ADC釋放酬載。此與在細胞自溶酶處理後大量釋放MMAE之已知酬載連接體(mcvcMMAE) ADC不同。此數據指示類固醇ADC遠不如已知ADC對源自循環中之細胞自溶酶活性之過早酬載釋放敏感。實際上，用展示寬裂解特異性之絲胺酸蛋白酶蛋白酶K僅觀察到類固醇釋放。此指示類固醇ADC之抗體部分需要在類固醇連接體裂解之前進行顯著分解代謝且酬載釋放可受限於可進行ADC之抗體支架消化之環境(例如溶酶體)。細胞自溶酶 B 消化 在緩衝液(25 mM Tris、50 mM NaCl及5%甘油)中製備細胞自溶酶B (Sigma)之0.2 mg/mL原液。為生成細胞自溶酶B之10 μg/mL工作溶液，將5 μl 0.2 mg/mL細胞自溶酶B原液與95 μl活化緩衝液(50 mM乙酸鈉pH 5、1 mM EDTA及5 mM DTT)混合且在37℃下培育15分鐘。對於ADC消化，將20 μl 100 ug/mL ADC及20 μl細胞自溶酶B工作溶液與160 μl稀釋緩衝液(50 mM乙酸鈉、1 mM EDTA)混合。在37℃下在振盪的同時培育樣品，且在0小時、1小時、4小時、7小時及24小時後移除40 μl等份。向每一等份中添加160 μl淬滅溶液(0.1%甲酸；1:1 MeOH:MeCN；100 nM磺胺丁脲)，且如先前所述藉由LC-MS/MS檢測釋放之小分子。蛋白酶 K 消化 在去離子(DI)水中製備蛋白酶K (Sigma)之5 mg/mL原液。藉由混合50 μL 5 mg/mL蛋白酶K與950 μl稀釋緩衝液(1× HBSS及1 mM EDTA)來製備蛋白酶K之0.25 mg/mL工作溶液。對於ADC消化，將20 μL 100 ug/mL ADC及40 μl蛋白酶K工作溶液與140 μl稀釋緩衝液混合。在37℃下在振盪的同時培育樣品，且在0小時、1小時、4小時、7小時及24小時後移除40 μL等份。向每一等份中添加160 μl淬滅溶液(0.1%甲酸；1:1 MeOH:MeCN；100 nM磺胺丁脲)，且如先前所述藉由LC-MS/MS檢測釋放之小分子。實例 77 ： 抗TNF-α免疫結合物之活體內穩定性 在小鼠中評價類固醇ADC對經歷藥物連接體損失之敏感性。使MP-Ala-Ala-類固醇結合至人類IgG1 mAb (平均DAR 4)且在pH 9下培育以催化硫基琥珀醯亞胺環之開環水解。中和後，在小鼠中注射類固醇ADC，且經7天藉由LC-MS監測藥物連接體損失之動力學。 在該等實驗中，將調配於磷酸鹽緩衝液鹽水中之ADC以5 mg/kg靜脈內投用至15隻雄性DBA/1小鼠。在劑量後1 hr、24 hr、72 hr、168 hr及240 hr殺死3隻小鼠。收集EDTA全血且製備血清以藉由質譜進行活體內DAR分析。血清樣品預稀釋 基於藉由總抗體配體結合分析量測之ADC之總抗體濃度將血清樣品稀釋於馬血清(Life technologies, 16050-122)中。稀釋係基於至10-30 µg/mL範圍之最終濃度估計值，其適於磁珠結合能力上限。免疫親和性親和純化 在蛋白質LoBind管(Eppendorf North America)中，將350 µL馬血清添加至100 µL之每一預稀釋ADC血清樣品中至450 µL之總體積，然後添加4 µg生物素-抗人類Fc抗體(2 µL生物素-抗人類，2 mg/mL溶液)。在室溫下藉由在定軌振盪器上在900 rpm下振盪將樣品培育2小時(hr)。對於每一血清樣品，用LoBind管中之PBS緩衝液中之0.1% Tween (PBST)平衡鏈黴抗生物素蛋白包覆之磁珠(Pierce，目錄號88817)的50 µL漿液。在藉由將LoBind管置於磁架上將磁珠拉至LoBind管之側後，藉由吸量管移除含有Tween 20之磷酸鹽緩衝鹽水(PBST)緩衝液。將血清樣品在與抗人類捕獲試劑一起培育2 hr後轉移至含有經平衡磁珠之LoBind管，且在室溫下在定軌振盪器上在900 rpm下培育1 hr。在磁珠培育後移除血清，且用500 µL PBST (3次)、然後用500 µL於MilliQ水中之5% MeOH (3次)充分洗滌磁珠。藉由將磁珠與100 µL於50% MeOH/MilliQ水中之0.5%甲酸一起培育15分鐘來釋放磁珠結合之ADC。經純化 ADC 之還原 藉由將10 µL還原試劑(自購自Thermo Scientific之粉末新鮮製備之10 mM TCEP，含有10 mM EDTA於2M pH 7.5 Tris緩衝液中)添加至100 µL樣品中並在37℃下培育30分鐘來還原釋放之ADC。LC/MS 分析 經由溫度受控(5℃)之CTC自動取樣器將經還原樣品(10 µL)注射至LC/MS系統之Agilent 6550 QT中。在Waters C-4, 3.5 µm, 300 Å, 2.1 × 50 mm i.d. HPLC管柱上達成樣品溶析。移動相為：A：水中之0.1%甲酸，及B：MeCN中之0.1%甲酸；流速為0.45 mL/min；且將管柱室維持在40℃下。 HPLC梯度如下：
Figure TW201801749AD00567
 在配備有以正離子模式操作之Dual Agilent Jet Stream電噴霧電離(ESI)源之Agilent 6550四極桿飛行時間(Agilent Technology, San Clara, CA)上實施經還原ADC之高解析度MS分析。以MS範圍高達3,200 m/z之擴大的動態範圍(2G Hz)模式操作質譜儀。使用初級ESI源進行LC/MS分析，且使用次級ESI探針在922.009798 m/z下輸注校正溶液以達成實時MS校正。每日校正質譜儀。在每日操作中分析物相對於理論質量之典型質量誤差小於± 5百萬分率。使用MassHunter Qual Browser Build 5.0處理MS數據。MS 光譜解捲積 使用MassHunter Bioconfirm軟體包中之最大熵方法來使多個帶電離子質譜解捲積以衍生出中性分子量譜。使用解捲積峰之強度來計算DAR。來自解捲積 MS 光譜之 DAR 值計算 DAR值係基於以下等式使用解捲積MS峰強度來計算： 輕鏈(LC)之DAR值：LC DAR = (2 × LC^之峰強度)⁄((LC之峰強度+LC^之峰強度)) LC及LC^分別係具有0個及1個藥物連接體之輕鏈。 重鏈(HC)之DAR值： HC DAR=2×(HC^之峰強度+2×HC^^之峰強度+3×HC^^^之峰強度)/(HC之峰強度+HC^之峰強度+HC^^之峰強度+HC^^^之峰強度) HC、HC^、HC^^及HC^^^分別係具有0個、1個、2個及3個藥物連接體之重鏈。 總DAR =LC DAR+HC DAR結果 結果顯示於圖2中。此實例展示在7天內自類固醇ADC觀察到最小藥物連接體損失。實例 78 ：人類及小鼠跨膜TNF-α GRE報導基因細胞系之生成 為產生親代細胞系，在37℃、5% CO2 下將K562細胞以500,000個細胞/孔接種於含有2 mL完全生長培養基(RPMI、10% FBS、1% L-麩醯胺酸、1%丙酮酸鈉及1% MEM NEAA)之6孔平皿(Costar: 3516)上並保持24小時。第二天，將1.5 μg pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro] (Promega: E316)、1.5 ug pGl4.75 [hRLuc/CMV] (Promega: E639A)及3 μl PLUS試劑(Invitrogen: 10964-021)稀釋於244 uL Opti-MEM (Gibco: 31985-070)中且在室溫下培育15分鐘。pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro]載體含有因應若干核受體(例如糖皮質素受體及雄激素受體)之活化驅動螢光素酶報導基因luc2P轉錄之MMTV LTR (鼠類乳房腫瘤病毒長末端重複)。pGL4.75[hRluc/CMV]載體編碼螢光素酶報導基因hRluc (海腎(Renilla reniformis))且經設計用於高表現及還原性不規則轉錄。 培育後，將經稀釋之DNA溶液與1:1 Lipofectamine LTX溶液(Invitrogen: 94756) (13.2 μl + 256.8 μl Opti-MEM)一起預培育且在室溫下培育25分鐘以形成DNA-Lipofectamine LTX複合物。培育後，將500 μl DNA-Lipofectamine複合物直接添加至含有細胞之孔中。在37℃、5% CO2 下將K562細胞轉染24小時。培育後，用3 mL PBS洗滌細胞且用含有125 μg/mL潮黴素B (Invitrogen: 10687-010)之完全生長培養基選擇兩週。產生「K562 pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_pGL4.75[hRLuc/CMV]」細胞。 為產生鼠類跨膜TNF-α GRE報導基因細胞系，在37℃、5% CO2 下將親代細胞K562 pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_pGL4.75[hRLuc/CMV]以500,000個細胞/孔接種於含有2 mL完全生長培養基(RPMI、10% FBS、1% L-麩醯胺酸、1%丙酮酸鈉及1% MEM NEAA)之6孔平皿(Costar: 3516)上並保持24小時。第二天，將3 μg編碼無標籤小鼠TNF之mFL_TNFa DNA (Origene: MC208048)及3 μl PLUS試劑(Invitrogen: 10964-021)稀釋於244 uL Opti-MEM (Gibco: 31985-070)中且在室溫下培育15分鐘。培育後，將經稀釋之DNA溶液與1:1 Lipofectamine LTX溶液(Invitrogen: 94756) (13.2 uL + 256.8 uL Opti-MEM)一起預培育且在室溫下培育25分鐘以形成DNA-Lipofectamine LTX複合物。培育後，將500 μl DNA-Lipofectamine複合物直接添加至含有細胞之孔中。在37℃、5% CO2 下將親代K562 pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_pGL4.75[hRLuc/CMV]細胞轉染24小時。培育後，用3 mL PBS洗滌細胞且用含有125 μg/mL潮黴素B (Invitrogen: 10687-010)及250 μg/mL G418 (Gibco: 10131-027)之完全生長培養基選擇兩週。產生「K562小鼠FL-TNFa GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro])」細胞。 為產生人類跨膜TNF-α GRE報導基因細胞系，用質體hTNF δ 1-12 C-Myc pcDNA3.1(-)質體構築體轉染親代細胞K562 pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_pGL4.75[hRLuc/CMV]。此質體為編碼tace抗性跨膜TNF (即，缺少胺基酸77-88之SEQ ID NO:1)之pcDNA 3.1 (Thermofisher目錄號V79020)。(關於tace抗性跨膜TNF之論述參見Perez C等人，Cell 63 (2): 251-8 (1990)。)然後將該等細胞系用於後續實例中所述之TNF-α報導基因分析中。實例 79 ：在GRE跨膜TNF-α報導基因分析中抗TNF-α免疫結合物之活性 將K562親代GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro])細胞及K562 mFL-TNF-a或hTNF δ 1-12 GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro])細胞以50,000個細胞/孔平鋪於組織培養物處理之96孔白色板(Costar: 3917)上之50 µL分析培養基(RPMI、1% CSFBS、1% L-麩醯胺酸、1%丙酮酸鈉及1% MEAA)中。用分析培養基中之25 µL 3×連續稀釋之鼠類或人類抗TNF-a抗體藥物結合物、類固醇化合物或單獨培養基處理細胞且在37℃、5% CO2 下培育48小時。培育48小時後，用75 µL Dual-Glo螢光素酶分析系統(Promega-E2920)將細胞處理10分鐘且使用TopCount (PerkinElmer)分析發光。使用四參數曲線擬合分析數據以生成EC50值。將最大活化%正規化至視為最大活化之100 nM地塞米松。使用鼠類TNF-α細胞系之結果顯示於下表12中，且使用人類TNF-α細胞系之結果顯示於下表13中。在下表12中，A係指8C11。在下表13中，A係指阿達木單抗(SEQ ID NO: 66及73)。如先前所述藉由SEC測定百分數(%)單體(參見ADC分析程序)。 表12：在小鼠跨膜TNFa GRE報導基因分析中抗鼠類TNFa抗體藥物結合物之活體外活性(A係指抗鼠類TNFa抗體8C11)
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Figure TW201801749AD00589
表13：在人類跨膜TNFa GRE報導基因分析中抗人類TNFa抗體藥物結合物之活體外活性(A係指抗人類TNFa抗體阿達木單抗(SEQ ID NO: 66及73))
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Figure TW201801749AD00591
Figure TW201801749AD00592
實例 80 ：在GRE跨膜TNF-α報導基因分析中多種抗人類TNF-α免疫結合物之活性抗人類 TNF α 免疫結合物之製備 使用實例36中之一般半胱胺酸結合方案下突出顯示之條件使所有蛋白質結合至99號化合物。當在下表14中指示時，將半胱胺酸添加(加下劃線)改造至抗TNF序列中以允許結合。 表14：用於免疫結合物中之抗人類TNF α抗體之胺基酸序列
Figure TW201801749AD00593
 1 Kronqvist J等人，Protein Engineering, Design & Selection 21 (4):247-255 (2008)在 GRE 報導基因分析中抗人類 TNF α 免疫結合物之活性 在如實例79中所述之條件下測試抗人類TNF α免疫結合物(亦稱為抗人類TNF α ADC或抗hTNF α類固醇ADC)在K562親代GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/hydgro])及K562 hTNF δ 1-12 GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/hydgro])細胞系中之活性。表15中所顯示之結果指示，所測試之所有抗hTNF α類固醇ADC皆展示與其對親代細胞系之活性無關之強效抗原依賴性活性。 表15： 在人類跨膜TNFa GRE報導基因分析中抗人類TNF α ADC之活體外活性(ADC濃度針對MW及DAR正規化)
Figure TW201801749AD00594
 抗人類 TNF α 免疫結合物與人類 TNF α 之結合 藉由在25℃下使用抗人類Fc/抗人類F(ab’)2 捕獲(用於除親和體及奧挫珠單抗ADC外之所有ADC)或直接NHS/EDC介導之胺偶合方法(僅用於奧挫珠單抗ADC)在Biacore T200儀器(GE Healthcare)上進行之基於表面電漿共振之量測來測定抗h TNF α類固醇ADC與重組可溶性TNFα三聚體之結合動力學。將約10000 RU之山羊抗人類IgG Fc多株抗體(Thermo Fisher Scientific Inc.，目錄號31125)或山羊抗人類F(ab’)2 多株抗體(Jackson Immunoresearch Laboratories, Inc.，目錄號109-006-006)在10 mM乙酸鈉(pH 4.5)中稀釋至5 µg/mL，且使用標準胺偶合套組根據製造商之說明書及程序固定於CM5生物感測器晶片上。用1M乙醇胺封阻生物感測器表面上之未反應部分。對於直接胺偶合方法，將約750 RU之奧挫珠單抗類固醇結合物直接固定至CM5晶片上。在分析緩衝液HBS-EP+ (10 mM Hepes, pH 7.4、150 mM NaCl、3 mM EDTA、0.05% Tween 20)中進行晶片製備及結合動力學量測。對於呈捕獲格式之結合動力學量測，每一分析週期係由以下步驟組成：1) 以0.5 µg/mL之濃度及5 µL/min之流速經60 s捕獲測試表面上之測試ADC；2) 將分析物以50 µl/min經300s注射(人類TNFα或僅緩衝液)於參考及測試表面二者上，此後以50 µl/min經600秒監測解離；3) 藉由將10 mM甘胺酸-HCl (pH 1.5)或100 mM HCl (用於直接偶合ADC)注射於參考及測試表面二者上使捕獲表面再生。對於呈直接胺偶合格式之結合動力學量測，僅實施步驟2)及步驟3)。在分析期間，所有量測係參考單獨空白表面(即不含經捕獲之測試抗體或經固定之奈米抗體)且將僅緩衝液注射用於雙重參考。TNFα注射之濃度分別介於2倍稀釋系列之50 nM至0.39 nM範圍內。對數據進行處理且使用Biacore T200評估軟體整體擬合至1:1結合模型以確定結合動力學速率常數ka (M- 1 s-1 )及kd (s-1 )以及平衡解離常數KD (M)。實施兩次獨立實驗。表16中報告之值係該等實驗之平均值。 表16：抗hTNF α類固醇ADC對人類TNF α之結合親和力(ND= 未測定)
Figure TW201801749AD00595
 實例 81 ：在脂多醣刺激之人類PBMC細胞介素釋放分析中抗hTNF α類固醇ADC之活性 自Biological Specialty Corporation (目錄號214-00-10)購得原代人類末梢血單核細胞(PBMC)，在50 mL PBS中洗滌，重懸浮於含有5% DMSO之FBS中，等分且冷藏保存於液氮中直至使用。將PBMC解凍，重懸浮於補充有2% FBS及1%青黴素(Penicillin)-鏈黴素(Streptomycin)之RPMI中，且平鋪於細胞分析板(Costar編號3799)中。將細胞與不同濃度之抗hTNF α類固醇ADC在37℃及5% CO2 下一起培育4小時。然後用100 ng/ml LPS刺激細胞過夜。第二天，將板在1000 rpm下旋轉5分鐘，且將100 µL上清液培養基直接轉移至其他96孔板並分析IL-6 (MSD，編號K151AKB)及IL-1β (MSD，編號K151AGB)濃度。使用非線性回歸將劑量反應數據擬合至S型曲線，且藉助GraphPad 5.0 (GraphPad Software, Inc.)計算IC50值。表17中所顯示之結果展示抗hTNF α類固醇ADC具有強效的抑制促發炎細胞介素IL-6及IL-1β自活化之原代免疫細胞釋放之活性。 表17：在LPS刺激之人類PBMC細胞介素釋放分析中抗人類TNF α ADC之活體外活性(n=2)
Figure TW201801749AD00596
 實例 82 ：在L929細胞中在TNFa誘導之細胞毒性分析中抗TNF-α免疫結合物之活性 L929係藉由用放線菌素D預處理敏化之鼠類非整倍體纖維肉瘤細胞系。用TNFa處理會起始細胞凋亡及後續細胞死亡。使用0.05%胰蛋白酶收穫對數期之L929細胞，用D-PBS洗滌兩次且藉由CEDEX計數。將細胞以1E6個細胞/mL重懸浮於含有4 µg/mL放線菌素D之分析培養基中且將50 µL添加至所有孔中。將抗鼠類TNF α類固醇ADC (抗鼠類TNF α 8C11結合至化合物71；亦稱為抗mTNF α類固醇ADC)及抗鼠類TNF mAb (8C11)在分析培養基中稀釋至4×濃度且實施1:3連續稀釋。將小鼠TNFα稀釋至600 pg/mL之4×濃度。將抗mTNF類固醇ADC及抗mTNF mAb (125 µL)以1:2稀釋方案添加至mTNFα (125 µL)中且在室溫下培育1小時，溫和振盪。將抗體/mTNFα (或ADC/ mTNFα)混合物以50 µL/孔一式三份添加至孔中。將板在37℃、5% CO2 下培育20小時。為量化存活率，將10 µL WST-1試劑(Roche目錄號11644807001)添加至孔中。將板在分析條件下培育3.5小時，在500 ×g下離心且將75 µL上清液轉移至ELISA板(Costar目錄號3369)。在OD 420-600 nm下使用Spectromax 190 ELISA讀板儀讀取板。分析數據且使用GraphPad Prism 5中之S型劑量反應(可變斜率)擬合來計算IC50 值。 抗mTNF α類固醇ADC具有與未結合之抗mTNF α mAb (IC50 1.5 nM)相當之中和功效(IC50 1.9 nM)。 測試抗人類TNF α免疫結合物在上文所述條件下之中和活性。結果顯示於表18中且指示所測試之抗人類TNF α免疫結合物展示強效的人類TNF α中和。 表18：抗hTNF α類固醇ADC對L929細胞中人類TNF α誘導之細胞毒性之中和功效(ND= 未測定)
Figure TW201801749AD00597
 實例 83 ：抗mTNF-α類固醇ADC與小鼠Fcγ受體之結合 使用基於SPR (表面電漿共振)之Biacore T200儀器(GE Healthcare)來評估抗mTNF-α類固醇ADC (抗mTNF 8C11結合至化合物71)及抗mTNF-α mAb與重組小鼠FcgR (皆來自R&D Systems)之結合。將FcgR直接固定於CM5型S Biacore晶片之2個、3個及/或4個流動槽之表面上以達成約1000-2000 RU (共振單位)之密度。使用每一Biacore晶片之一個流動槽之空白修飾表面作為參考表面。每一實驗係由締合期及解離期組成。締合期係由滴定所有流動槽上之流速為50 ul/min且濃度為4000 nM、2000 nM、1000 nM、500 nM、250 nM、125 nM、62.5 nM、 31.25及0 nM (對於FcgRIIB及FcgRIII)及100 nM、50 nM、25 nM、12.5 nM、6.25 nM、3.13 nM、1.56及0 nM (對於受體I及IV)之親代mAb及ADC組成。解離期係由流速為50 ul/min之運行緩衝液(HBS-EP+, pH 7.4, GE Healthcare)之連續流動組成。每5 min (受體I及IV)或每1 min (受體II及III)監測締合及解離期。在每一結合週期後用5s脈衝之100 mM HCl以100 ul/min之流速使晶片表面再生。使用Biacore評估軟體將原始數據擬合至1:1 (FcgRI及IV)或穩態(受體IIB及III)結合模型。結果顯示於表19中。ka 係締合速率常數(1/Ms)；kd 係解離速率常數(1/s)；KD 係平衡解離常數(M)。 表19：抗TNF-α免疫結合物與小鼠Fcγ受體之結合親和力
Figure TW201801749AD00598
 實例 84 ：在接觸性過敏模型中抗mTNF-α類固醇ADC之活性 在急性接觸性過敏模型中評估抗mTNF α類固醇ADC，該模型利用延遲型過敏(DTH)反應(T細胞驅動)經由施加敏化劑(異硫氰酸螢光黃(FITC))引發急性皮膚發炎。藉由減少耳腫脹之能力量測抗mTNF α類固醇ADC之效能。類固醇生物標記物皮質酮及前膠原1型N末端前肽(P1NP)納入為讀數以評價抗mTNF α類固醇ADC治療分別對下視丘-垂體-腎上腺(HPA)軸及骨更新推定的影響。耳腫脹 在第0天，將小鼠置於全身麻醉下且將腹部剃毛。使用微量移液器，藉由在腹部上皮上施加400 uL FITC溶液(1.5%溶液於1:1丙酮:DBP中)來敏化小鼠。6天後，在用FITC攻擊耳之前1小時向小鼠投用媒劑或治療劑。對於耳攻擊，將小鼠置於全身麻醉下且藉由將20 μl FITC施加至右耳上來攻擊。在攻擊後24小時，將小鼠置於全身麻醉下且藉由測徑器量測其耳厚度。計算經攻擊耳與未經攻擊耳之間之差別。在耳攻擊後72小時，以1mpk IP向小鼠注射ACTH，且在ACTH後30 min進行末端采血。收集血漿且分析P1NP、皮質酮、游離類固醇及大分子含量。經釋放游離類固醇及內源皮質酮之量化 在小鼠血漿中製備最終濃度為呈8個不同濃度值之0.03 nM至0.1 µM之類固醇之校正曲線。在PBS緩衝液中之70 mg/mL牛血清白蛋白溶液中製備介於0.3 nM至1 µM最終皮質酮濃度之間之皮質酮校正曲線。將含有0.1%甲酸之160 µL MeCN之溶液添加至40 µL研究血漿樣品或校正標準品中。用蒸餾水稀釋上清液且注射30 µL最終樣品溶液進行LC/MS分析。 在連接至與以正模式操作之電噴霧電離源介接之Shimadzu AC20 HPLC系統的AB Sciex 5500三重四極桿質譜儀上實施經釋放游離類固醇及皮質酮之量化。使用Waters XBridge BEH C18, 2.1×30 mm, 3.5 µm管柱進行層析分離。移動相A係Milli Q HPLC水中之0.1%甲酸，且移動相B係MeCN中之0.1%甲酸。施加0.6分鐘至1.2分鐘之2%移動相B至98%移動相B之線性梯度。在0.8 mL/min流速下之總運行時間為2.6 min。在700℃之源溫度下以正MRM模式操作質譜儀。血漿 P1NP 之量化 在LC/MS平臺上基於蛋白質胰蛋白酶消化實施血漿P1NP之量化。藉由添加MeCN/0.1M碳酸氫銨/DTT混合物使血漿樣品部分沈澱且完全還原。收集上清液且藉由添加碘乙酸烷基化。藉由胰蛋白酶消化烷基化蛋白質且藉由LC/MS分析所得胰蛋白酶肽。藉由使用摻入馬血清(非干擾代用基質)中之合成胰蛋白酶肽生成校正曲線。使用經同位素標記之穩定側接肽(胰蛋白酶肽之兩個末端上之3-6個胺基酸延伸)作為添加於MeCN/DTT蛋白沈澱混合物中之內標準品以正規化消化效率及LC/MS注射二者。 使用Columnex Chromenta BB-C18, 2.1×150 mm, 5 µm管柱進行層析分離。移動相A係Milli Q HPLC水中之0.1%甲酸且移動相B係MeCN中之0.1%甲酸。施加0.6 min至3 min之2%移動相B至65%移動相B之線性梯度。在0.45 mL/min流速下之總運行時間為8 min。在700℃之源溫度下以正MRM模式使用AB Sciex 4000Qtrap質譜儀來量化P1NP肽。血漿中總 ADC 之量化 使用Mesoscale Discovery (MSD)平臺藉由配體結合分析量測總抗體(ADC及主鏈mAb)之濃度。使用生物素標記之小鼠TNF作為抗mTNF α類固醇ADC之捕獲試劑且使用磺基標籤結合之山羊抗小鼠檢測抗體進行檢測。藉由在匹配基質中連續稀釋ADC分子來生成校正曲線且使用QC樣品來量化分析結果 結果顯示於下表20中： 表20：在CHS發炎模型中比較抗mTNF α類固醇ADC對耳腫脹及類固醇生物標記物之活性
Figure TW201801749AD00599
 該等結果展示，抗mTNF α類固醇ADC可獲得等效於小分子類固醇治療之有效反應，同時減少對皮質酮及P1NP之不期望效應。 實施另一接觸性過敏(CHS)研究以解決類固醇酬載與抗TNF mAb之結合是否為增強效能所必需。根據上文所述之方案向小鼠腹膜內投用一次媒劑、抗mTNF α mAb (10 mpk)、抗mTNF α類固醇ADC (10 mpk) (化合物編號139)或抗mTNF α mAb與等效量之小分子類固醇共投用(以單一腹膜內注射同時遞送)以匹配ADC化學計量之混合物。對於10 mpk劑量之DAR為4之抗mTNF α類固醇ADC，此經計算為4 μg小分子類固醇(化合物編號42)。圖9中所顯示之結果展示與抗mTNF α mAb及小分子類固醇之組合或單獨抗mTNF α mAb相比，抗mTNF α類固醇ADC治療具有顯著增加減輕耳發炎的效能。實例 85 ：抗mTNF-α類固醇ADC在膠原誘發之關節炎中之活性 在關節炎之膠原誘發之關節炎(CIA)模型中評價抗mTNF α類固醇ADC (化合物編號137)影響疾病之能力。 在該等實驗中，雄性DBA/1J 小鼠係自Jackson Labs (Bar Harbor, ME)獲得。使用6至12週齡之小鼠。將所有動物維持在12小時亮/暗週期下之恆定溫度及濕度下且隨意飼餵齧齒類動物飼料(Lab Diet 5010 PharmaServ, Framingham, MA)及水。AbbVie係經認證的AAALAC (國際實驗動物管理評價及認證協會(Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care))，且所有程序經機構動物照護及使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee，IACUC)批准且由主治獸醫師監測。監測體重及狀況，且若展現＞20%體重損失則對動物實施安樂死。 用100 µL含有溶解於0.1 N乙酸中之100 µg II型牛膠原(MD Biosciences)及200 µg熱不活化結核分枝桿菌H37Ra (完全弗氏佐劑(Complete Freund's Adjuvant), Difco, Laurence, KS)之乳液在尾基部真皮內(i.d.)免疫雄性DBA/J小鼠。在用膠原免疫後21天，用PBS中之1 mg酵母多醣A (Sigma, St. Louis, MO)對小鼠實施腹膜內加強免疫。加強免疫後，每週3至5次監測小鼠之關節炎。使用Dyer spring測徑器(Dyer 310-115)評估後爪之爪腫脹。 使小鼠在疾病之第一臨床體徵之第24天與第28天之間入選且分佈至等效關節炎嚴重程度之組中。在入選時開始早期治療性治療。 向動物經口(p.o.)投用一次0.5% HPMC/0.02% Tween 80媒劑[v/]中之類固醇(化合物編號3) (10 mpk)或腹膜內(i.p.)投用一次0.9%鹽水中之抗mTNF α mAb (10 mpk) (8C11)或抗mTNF α類固醇ADC (10 mpk) (化合物編號137)。在劑量後24小時及72小時藉由尾切口收集血液用於抗體暴露。在末端時間點收集爪用於組織病理學。在末端時間點藉由心臟穿刺收集血液用於完全血球計數(Sysmex XT-2000iV)。藉由ANOVA確定統計學顯著性。 結果顯示於圖3中且展示與單獨抗mTNF α mAb或小分子類固醇相比，單一劑量之抗mTNF α類固醇ADC可經由改善爪腫脹達約6週展現延長的作用持續時間。 在經設計以解決抗mTNF α類固醇ADC之TNF靶向功能之單獨研究中，向動物腹膜內投用一次抗mTNF α mAb (10 mpk)或抗mTNF α類固醇ADC (10 mpk) (化合物編號145)或同型類固醇ADC (10 mpk) (化合物編號224)：
Figure TW201801749AD00600
其識別不在小鼠中表現之抗原雞卵蛋白卵白蛋白。兩種ADC具有等效之載藥量。每日一次(q.d)經口投用小分子類固醇(3 mpk)。結果顯示於圖10中且展示單一劑量之抗mTNF α類固醇ADC具有與經21天時段每日投用之小分子類固醇等效之效能。單一劑量之非靶向同型類固醇ADC僅具有部分效能，此與相同時段內之單獨抗mTNF mAb類似。百分比表示與媒劑相比之抑制%。整個此研究進程中動物體重之評估(圖11)揭露除抗mTNF α類固醇ADC組外之所有治療組皆有體重損失。相比之下，經抗mTNF α類固醇ADC治療之小鼠在整個21天研究中展現正常增重。實例 86 ：多種抗mTNF α類固醇ADC在膠原誘發之關節炎中之活性 在小鼠關節炎模型中測試若干具有不同類固醇酬載或藥物:抗體比率(DAR)之抗mTNF α類固醇ADC之效能。根據實例85中所概述之程序實施研究。結果顯示於下表21中。 表21：抗mTNF α類固醇ADC在關節炎模型中之效能
Figure TW201801749AD00601
 實例 87 ：抗hTNF-α免疫結合物在人類TNF轉基因Tg1278TNF剔除小鼠膠原抗體誘發之關節炎模型中之活性 在人類TNFa轉基因小鼠關節炎模型中評價抗人類TNF α ADC之效能。 如先前所述(Moore A等人，J Transl Med 12 (1): 285 (2014))使用人類TNF轉基因Tg1278TNF剔除小鼠實施膠原抗體誘發之關節炎(CAIA)模型(Moore, ARJ Transl Med 12:285 (2014))。在第0天將8 mg靶向II型膠原之不同表位之單株抗體混合劑(ArthritoMabTM )腹膜內(i.p.)投與小鼠。在第3天，向小鼠腹膜內注射10 μg LPS以加強疾病病理學。自第3天開始直至研究之第14天每日評估動物之關節炎評分。使用8隻雄性小鼠/組且每週兩次持續兩週腹膜內投與檢品或PBS媒劑。 結果顯示於圖4中且展示與抗人類TNF α mAb (阿達木單抗)相比，抗人類TNF α ADC可顯著減小疾病評分。實例 88 ：抗mTNF α類固醇ADC對峰值發炎之活性 實施小鼠CIA實驗以確立抗mTNF α類固醇ADC對患有峰值發炎之動物之效能。對於後期治療劑投用，使小鼠在疾病之第一臨床體徵入選研究且在入選後6天投用。在疾病第7天在向所有其他組投用時殺死一組動物以藉由微電腦斷層攝影(µCT)及組織學分析提供關節炎變化之基線。在第6天向所有動物投用一次媒劑(0.9%鹽水)、抗mTNF α mAb (10 mpk) (8C11)或抗mTNF α類固醇ADC (10 mpk) (化合物編號145)且在第21天殺死。收集關節炎後爪且實施µCT分析。然後使用相同的爪進行組織學評估。在實驗結束時，藉由心臟穿刺收集全血以評估完全血球計數(CBC)。 微電腦斷層攝影(µCT) 在脛骨/腓骨處完整地移除後爪且固定於10%福馬林中。藉由µCT (Scanco Medical AG, Micro-CT40)在55 kVp及145 µA下在高解析度設定(2048×2048像素重建下之1000次投射/180°)下使用各向同性三維像素及300 毫秒積分時間掃描各爪。圍繞所關注區域自脛距接合處且延伸至踝中手動繪製圓柱形輪廓用於100 個切片(1.8 mm)。藉由Scanco軟體使用0.8西格瑪高斯(sigma gauss)以及上臨限值1000及下臨限值320實施評估。組織學評估 將所治療小鼠之後爪浸沒固定於10%中性緩衝福馬林中且在Calrite溶液中部分脫鈣達48小時以允許修整跗之側面及中間邊緣。然後將爪回置於Calrite中達約48小時以完成脫鈣。以常規方式處理樣品，包埋於石蠟之矢狀面中，製成5微米切片且用蘇木素及伊紅染色。使用0-4等級用顯微鏡評估載玻片之發炎/血管翳形成、嗜中性球浸潤、骨侵蝕及軟骨損傷之存在：0= 不存在，1 = 輕度，2 = 中度，3 = 顯著，4 = 重度。 圖12中所顯示之結果展示單一劑量之抗mTNF α類固醇ADC可逆轉已確立疾病且減輕爪腫脹至接近基線。相比之下，單一劑量之抗mTNF α mAb對發炎具有最小效應。 治療對如藉由µCT量測之跗骨損失之效應顯示於圖13中。結果展示與單獨抗mTNF α mAb相比，在發炎峰值處投與之單一劑量之抗mTNF α類固醇ADC能夠顯著抑制疾病介導之關節骨侵蝕。 所治療CIA小鼠之關節之組織學評估的結果顯示於圖14-17中。其展示截至第21天相對於年齡匹配之媒劑對照，在峰值疾病處投與之單一劑量之抗mTNF α類固醇ADC可顯著減少發炎、血管翳形成、骨侵蝕及軟骨損傷(p＜0.001)，且疾病之程度等效於在對照之基線(媒劑d6)處所觀察到之程度。在所評估6個爪中之兩者中，與第6天基線(治療前)小鼠及第21天媒劑治療小鼠之100%發病率相比，在第21天在經抗mTNF α類固醇ADC治療之動物之跗/指關節中無法檢測到疾病。 相比之下，在d21時相對於年齡匹配之媒劑對照，在峰值疾病處單一劑量之抗mTNF α mAb並不抑制發炎、骨侵蝕、血管翳形成或軟骨破壞。疾病之程度比基線對照更嚴重，且觀察到經改良發炎之輕度趨勢。 分析全血以評估治療之末梢血細胞亞組之變化。圖18-23中所顯示之結果展示在患病動物中所觀察到之一些末梢血細胞群體之增加可利用單一劑量之抗mTNF α類固醇ADC來消除。利用抗mTNF α類固醇ADC治療觀察到總白血球、嗜中性球及單核球之統計學上顯著之減少。實例 89 ：抗mTNF-α類固醇ADC與抗CD163 ADC之比較 為展示抗TNF免疫結合物在治療發炎性疾病方面增強的治療效能，比較其活性與靶向血紅素清除劑受體CD163 (文獻中所述以具有靶向抗發炎功能之一種糖皮質素免疫結合物途徑) (PCT國際申請案WO2011039510A2，Graversen NJH等人；Graversen JH等人，Mol. Ther. 20 (8): 1550-8 (2012))之ADC的活性。小鼠 CD163 GRE 報導基因細胞系之生成 以與實例78中所述類似之方式、但使用CHO-K1細胞替代K562細胞來產生親代細胞系。然後在實例78中所述之條件下用編碼小鼠CD163 (Origene目錄號MR216798)之質體轉染所得親代細胞系CHO pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_PGL4.75[hRLuc/CMV]。使用所得細胞系CHO mCD163 GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro])來測試抗mTNF-α及抗小鼠CD163免疫結合物(亦稱為抗mCD163免疫結合物或抗mCD163類固醇ADC)二者之活體外活性。抗小鼠 CD163 免疫結合物之製備 自如所述純系3E10B10之VH及VL序列(來自PCT國際申請案WO 2011/039510A2之SEQ ID NO: 87/88)生成嵌合大鼠抗小鼠CD163 mIgG2a/k抗體。使用實例36中之一般半胱胺酸結合方案下突出顯示之條件使此抗體結合至99號化合物以獲得4之藥物:抗體比率(DAR)。在小鼠 CD163 GRE 報導基因分析中抗小鼠 CD163 免疫結合物之活性 在實例79中所述之條件下測試抗小鼠CD163免疫結合物對CHO mCD163 GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro])細胞系之活性。納入抗mTNF α類固醇ADC (化合物編號145)作為陰性對照。表22中之結果展示抗小鼠CD163免疫結合物(化合物編號223)：
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顯示與抗mTNF α類固醇ADC無關之對小鼠CD163 GRE細胞系之抗原依賴性活性。 表22
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 抗小鼠 CD163 免疫結合物在小鼠膠原誘發之關節炎中之活性 在RA之膠原誘發之關節炎(CIA)模型中評價抗小鼠CD163類固醇免疫結合物影響爪腫脹之能力。亦在同一研究中評估具有與抗mCD163類固醇ADC相同之藥物-連接體及DAR之對照抗mTNF α類固醇ADC (化合物139)且亦納入兩種ADC之親代mAb作為治療組。根據實例85中所概述之程序實施實驗。結果顯示於圖24中且展示儘管抗mCD163類固醇ADC在單一劑量治療後之前幾天初始減輕爪腫脹，但此效應係暫時的。相比之下，單一劑量之抗mTNF α類固醇ADC足以在研究之持續時間自始至終完全抑制發炎。 應瞭解，意欲使用[實施方式]部分而非[發明內容]及[摘要]部分來解釋申請專利範圍。[發明內容]及[摘要]部分陳述一或多個但非全部本發明者所涵蓋之本發明實例性實施例，且因此不欲以任何方式限制本發明及隨附申請專利範圍。 本發明已在上文藉助說明指定功能及其關係之實施之功能結構單元來闡述。為便於描述，本文已任意界定該等功能結構單元之邊界。可界定替代邊界，只要適宜實施指定功能及其關係即可。 特定實施例之前述描述將完整地揭露本發明之一般性質，以使得他人可在不背離本發明之一般概念下藉由應用技術領域內之知識無需過多實驗即可容易地修改及/或調整該等實施例之多個應用。因此，基於本文所呈現之教示及指導方針，該等調整及修改意欲在所揭示實施例之等效內容之意義及範圍內。應理解，本文之片語或術語係用於描述而非限制目的，使得熟習此項技術者根據教示及指導方針理解本說明書之術語或片語。 本發明之廣度及範疇不應受限於上文所述之例示性實施例中之任一者，而應僅根據隨附申請專利範圍及其等效內容來界定。
圖1顯示含有類固醇之ADC及含有MMAE (單甲基奧裡斯他汀E (monomethyl auristatin E))之ADC之蛋白水解穩定性。(參見實例76。) 圖2顯示小鼠中類固醇ADC之藥物連接體之動力學。(參見實例77。) 圖3顯示小鼠關節炎模型中抗mTNFa類固醇ADC之單一治療劑量反應之活性。(參見實例85。) 圖4顯示huTNFa Tg CAIA小鼠關節炎模型中抗人類TNFa類固醇之活性。(參見實例87。) 圖5係HIC層析圖，其顯示端視已經還原之鏈間二硫鍵之數量，含有附接有0個SM-L-Q-分子(「E0」峰)、附接有2個SM-L-Q-分子(「E2」峰)、附接有4個SM-L-Q-分子(「E4」峰)、附接有SM-L-Q-部分(「E6」峰)及附接有8個SM-L-Q-分子(「E8」峰)之抗體之非均質混合物。(SM係糖皮質類固醇之基團；L係連接體，且Q係異二官能基或異三官能基；或Q係不存在。) (參見實例74。) 圖6係與糖皮質類固醇結合之阿達木單抗之SEC層析圖。(參見實例74。) 圖7係顯示與糖皮質類固醇結合之阿達木單抗之原始MS數據之線圖。(參見實例74。) 圖8係顯示與糖皮質類固醇結合之阿達木單抗之解捲積MS數據之線圖。黑色正方形及圓形分別代表琥珀醯亞胺水解及未水解之ADC。使用水解及未水解ADC之相對豐度來確定水解轉化率。(參見實例74。) 圖9顯示抗TNF類固醇ADC在減少小鼠之耳發炎方面比同時組合抗TNF抗體及類固醇或比單獨抗TNF抗體顯著更有效。(參見實例84。) 圖10顯示單一劑量之抗TNF類固醇ADC在減輕爪腫脹方面與21天每日投用類固醇同樣有效。(參見實例85。) 圖11顯示經類固醇、抗TNF抗體、抗TNF ADC或同型ADC治療之動物之體重變化。(參見實例85。) 圖12顯示單一劑量之抗TNF類固醇ADC可減輕既定爪腫脹，而單一劑量之抗TNF抗體具有極小效應。(參見實例88。) 圖13顯示用抗TNF類固醇ADC治療對跗骨損失之效應，如藉由微電腦斷層攝影(µCT)所量測。(個別數據點(例如，圓形、正方形或三角形)代表個別動物。) (參見實例88。) 圖14顯示用抗TNF類固醇ADC治療對發炎之效應。(個別數據點(例如，圓形、正方形或三角形)代表個別動物。) (參見實例88。) 圖15顯示用抗TNF類固醇ADC治療對血管翳形成之效應。(個別數據點(例如，圓形、正方形或三角形)代表個別動物。) (參見實例88。) 圖16顯示用抗TNF類固醇ADC治療對骨侵蝕之效應。(個別數據點(例如，圓形、正方形或三角形)代表個別動物。) (參見實例88。) 圖17顯示用抗TNF類固醇ADC治療對軟骨損傷之效應。(個別數據點(例如，圓形、正方形或三角形)代表個別動物。) (參見實例88。) 圖18顯示用抗TNF類固醇ADC治療對末梢血中之白血球之效應。(個別數據點(例如，圓形、正方形或菱形)代表個別動物。) (參見實例88。) 圖19顯示用抗TNF類固醇ADC治療對末梢血中之嗜中性球之效應。(個別數據點(例如，圓形、正方形或菱形)代表個別動物。) (參見實例88。) 圖20顯示用抗TNF類固醇ADC治療對末梢血中之淋巴球之效應。(個別數據點(例如，圓形、正方形或菱形)代表個別動物。) (參見實例88。) 圖21顯示用抗TNF類固醇ADC治療對末梢血中之單核球之效應。(個別數據點(例如，圓形、正方形或菱形)代表個別動物。) (參見實例88。) 圖22顯示用抗TNF類固醇ADC治療對末梢血中之嗜酸性球之效應。(參見實例88。) 圖23顯示用抗TNF類固醇ADC治療對末梢血中之嗜鹼性球之效應。(參見實例88。) 圖24顯示抗TNF類固醇ADC及抗CD163類固醇ADC在小鼠膠原誘發之關節炎中之活性。(參見實例89。)
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Claims (40)

  1. 一種化合物，其具有式I-a ： (SM-L-Q)n -A1 I-a 其中： A1 係抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白； L係連接體； Q係異二官能基或異三官能基；或 Q係不存在； n係1至10；且 SM係糖皮質類固醇之單價基團。
  2. 一種化合物，其具有式I-b ： (SM-L-Q)n -A2 I-b 其中： A2 係蛋白質； L係連接體； Q係異二官能基或異三官能基；或 Q係不存在； n係1至10；且 SM係糖皮質類固醇之基團，以式II-m 或式II-p 表示：
    Figure TW201801749AC00001
    或
    Figure TW201801749AC00002
    其中： R1 選自由氫及鹵基組成之群； R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群； R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
    Figure TW201801749AC00003
    及
    Figure TW201801749AC00004
    組成之群； R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群； R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH及C1-4 烷氧基組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自氫及C1-4 烷基； R6a 、R6b 、R6c 、R6d 及R6e 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群； X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -及-C≡C-組成之群；或 X係不存在； Y2 選自由-O-、-S-及-N(R7a )-組成之群；或 Y2 係不存在； t係1或2； Z選自由=CR11a -及=N-組成之群； 每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或 R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基； R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
    Figure TW201801749AC00005
    代表單鍵或雙鍵。
  3. 如請求項1或2之化合物，其中SM係以式II-m 表示之糖皮質類固醇之基團：
    Figure TW201801749AC00006
    ； R1 選自由氫及鹵基組成之群； R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群； R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
    Figure TW201801749AC00007
    及
    Figure TW201801749AC00008
    組成之群； R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群； R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH及C1-4 烷氧基組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自氫及C1-4 烷基； R6a 、R6c 、R6d 及R6e 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群； X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -及-C≡C-組成之群；或 X係不存在； Y2 選自由-O-、-S-及-N(R7a )-組成之群；或 Y2 係不存在； t係1或2； Z係=CH-； 每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或 R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基； R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R11b 選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
    Figure TW201801749AC00009
    代表單鍵或雙鍵。
  4. 如請求項2或3之化合物，其中：
    Figure TW201801749AC00010
    代表雙鍵； R1 選自由氫及氟組成之群； R2 選自由氫及氟組成之群； R3 選自由-CH2 OH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F及
    Figure TW201801749AC00011
    組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自由氫、甲基及乙基組成之群； R6a 、R6c 、R6d 及R6e 係氫；X選自由-CH2 -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-CH2 S-及-N(H)CH2 -組成之群； Y2 係-N(H)-； Z係=CH-； R9f 係氫；且 R11b 係氫。
  5. 如請求項1至4中任一項之化合物，其中L係包含二肽之連接體。
  6. 如請求項1至5中任一項之化合物，其中Q係選自由以下組成之群之異二官能基：
    Figure TW201801749AC00012
    及
    Figure TW201801749AC00013
    ，且 m係1、2、3或4。
  7. 如請求項1至6中任一項之化合物，其中-L-Q-係：
    Figure TW201801749AC00014
    m係2或3；且 R10a 及R10b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群。
  8. 如請求項1至7中任一項之化合物，其中n係2至5。
  9. 如請求項1或2之化合物，其中SM係為表II化合物中任一者之糖皮質類固醇之單價基團。
  10. 如請求項1或3至8中任一項之化合物，其中A1 係(i)結合至人類TNF α之抗體或其抗原結合片段或(ii) 可溶性TNF受體。
  11. 如請求項1或3至9中任一項之化合物，其中A1 選自由以下組成之群：阿達木單抗(adalimumab)、英利昔單抗(infliximab)、聚乙二醇化賽妥珠單抗(certolizumab pegol)、阿非莫單抗(afelimomab)、奈瑞莫單抗(nerelimomab)、奧挫珠單抗(ozoralizumab)、普拉庫魯單抗(placulumab)及戈利木單抗(golimumab)。
  12. 如請求項1之化合物，其係表III化合物中任一或多者，其中： n係1至5； A係A1 ；且 A1 選自由以下組成之群：阿達木單抗、英利昔單抗、聚乙二醇化賽妥珠單抗、阿非莫單抗、奈瑞莫單抗、奧挫珠單抗、普拉庫魯單抗及戈利木單抗。
  13. 如請求項2之化合物，其係表III化合物中任一或多者，其中： n係1至5； A係A2 ；且 A2 係抗體或可溶性受體蛋白。
  14. 一種化合物，其選自由以下組成之群：
    Figure TW201801749AC00015
    Figure TW201801749AC00016
    其中n係1至5，且A係分別包含SEQ ID NO:66及SEQ ID NO:73之重鏈及輕鏈序列之抗體。
  15. 如請求項14之化合物，其選自由以下組成之群：
    Figure TW201801749AC00017
  16. 如請求項15之化合物，其中該化合物係
    Figure TW201801749AC00018
  17. 如請求項15之化合物，其中該化合物係
    Figure TW201801749AC00019
  18. 如請求項15之化合物，其中該化合物係
    Figure TW201801749AC00020
  19. 如請求項15之化合物，其中該化合物係
    Figure TW201801749AC00021
  20. 如請求項15之化合物，其中該化合物係
    Figure TW201801749AC00022
  21. 如請求項15之化合物，其中該化合物係
    Figure TW201801749AC00023
  22. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至21中任一項之化合物及醫藥上可接受之載劑。
  23. 一種治療有需要之患者中自體免疫疾病之方法，其包含向該患者投與如請求項1至21中任一項之化合物或如請求項22之醫藥組合物，視情況其中該自體免疫疾病係類風濕性關節炎、幼年型特發性關節炎、牛皮癬關節炎、關節黏連性脊椎炎、成人克隆氏病(adult Crohn's disease)、小兒克隆氏病、潰瘍性結腸炎、斑塊狀牛皮癬、化膿性汗腺炎、眼色素層炎、貝切特氏病(Behcets disease)、脊椎關節病或牛皮癬。
  24. 一種化合物，其具有式VII ：
    Figure TW201801749AC00024
    ， 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中： R1 選自由氫及鹵基組成之群； R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群； R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、-CH2 OS(=O)2 OH、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
    Figure TW201801749AC00025
    及
    Figure TW201801749AC00026
    組成之群； R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群； R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH、C1-4 烷氧基、-CH2 (胺基)及-CH2 CH2 C(=O)OR3f 組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -、-C≡C-、-N(R5 )C(=O)-及-OC(=O)-組成之群；或 X係不存在； t係1或2； Z選自由=CR11a -及=N-組成之群； 每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或 R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基； R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R6a 、R6b 、R6c 及R6d 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群； R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R7b 選自由氫、-L-H、-L-PG、
    Figure TW201801749AC00027
    及
    Figure TW201801749AC00028
    組成之群；或 R7a 及R7b 與其所附接之氮原子一起形成：
    Figure TW201801749AC00029
    ；或 R7a 及R7b 與其所附接之氮原子一起形成硝基； m係1、2、3、4、5或6； L係連接體； PG係保護基團； R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
    Figure TW201801749AC00030
    代表單鍵或雙鍵。
  25. 一種化合物，其具有式VII-A 或式VII-B ：
    Figure TW201801749AC00031
    或
    Figure TW201801749AC00032
    ， 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中： R1 選自由氫及鹵基組成之群； R2 選自由氫、鹵基及羥基組成之群； R3 選自由-CH2 OH、-CH2 SH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F、-SCH2 CF3 、-CH2 OS(=O)2 OH、羥基、-OCH2 CN、-OCH2 Cl、-OCH2 F、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-SCH2 CN、
    Figure TW201801749AC00033
    及
    Figure TW201801749AC00034
    組成之群； R3a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3b 選自由C1-4 烷基及C1-4 烷氧基組成之群； R3c 選自由氫、C1-4 烷基、-CH2 OH、C1-4 烷氧基、-CH2 (胺基)及-CH2 CH2 C(=O)OR3f 組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R3f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群；X選自由-(CR4a R4b )t -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-NR5 -、-CH2 S-、-CH2 O-、-N(H)C(R8a )(R8b )-、-CR4c =CR4d -、-C≡C-、-N(R5 )C(=O)-及-OC(=O)-組成之群；或 X係不存在； t係1或2； Z選自由=CR11a -及=N-組成之群； 每一R4a 及R4b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群；或 R4a 及R4b 與其所附接之碳原子一起形成3至6員環烷基； R4c 及R4d 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R5 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R6a 、R6b 及R6c 各自獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群； R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R7b 選自由氫、-L-H、-L-PG、
    Figure TW201801749AC00035
    及
    Figure TW201801749AC00036
    組成之群；或 R7a 及R7b 與其所附接之氮原子一起形成：
    Figure TW201801749AC00037
    ；或 R7a 及R7b 與其所附接之氮原子一起形成硝基； m係1、2、3、4、5或6； L係連接體； PG係保護基團； R9f 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R8a 及R8b 獨立地選自由氫及C1-4 烷基組成之群； R11a 及R11b 獨立地選自由氫、鹵基、C1-4 烷基、C1-4 鹵代烷基、氰基、羥基、硫醇、胺基、烷基硫基及烷氧基組成之群；且
    Figure TW201801749AC00038
    代表單鍵或雙鍵。
  26. 如請求項24或25之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中： R7b 選自由以下組成之群：
    Figure TW201801749AC00039
    及
    Figure TW201801749AC00040
    ； m係1、2、3、4、5或6；且 R10a 及R10b 各自獨立地選自由氫及視情況經取代之C1-6 烷基組成之群。
  27. 如請求項24或26之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其具有式VIII-a ：
    Figure TW201801749AC00041
    。
  28. 如請求項24至27中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中：
    Figure TW201801749AC00042
    代表雙鍵； R1 選自由氫及氟組成之群； R2 選自由氫及氟組成之群； R3 選自由-CH2 OH、-CH2 Cl、-SCH2 Cl、-SCH2 F及
    Figure TW201801749AC00043
    組成之群； R3d 及R3e 獨立地選自由氫、甲基及乙基組成之群； Z係=CH-； R6a 、R6b 、R6c 及R6d 係氫； R7a 係氫； X選自由-CH2 -、-O-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2 -、-CH2 S-及-N(H)CH2 -組成之群； R9f 係氫；且 R11b 係氫。
  29. 如請求項24至28中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係氫。
  30. 如請求項24至28中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -1。
  31. 如請求項24至28中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -2，且P係BOC。
  32. 如請求項24至28中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中R7b 係R7b -3。
  33. 如請求項29之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其係表VI化合物中任一或多者。
  34. 如請求項29之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其係表VII化合物中任一者。
  35. 如請求項33之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其係：
    Figure TW201801749AC00044
    。
  36. 如請求項24之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其係表VIII化合物中任一或多者， 其中R7b 選自由以下組成之群：
    Figure TW201801749AC00045
    ；及
    Figure TW201801749AC00046
    。
  37. 如請求項24之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其係表X化合物中任一或多者。
  38. 如請求項37之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其係：
    Figure TW201801749AC00047
    。
  39. 一種製備具有式I-e 之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物之方法，
    Figure TW201801749AC00048
    ， 其中： A係A1 或A2 ； A1 係抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白； A2 係蛋白質； L係連接體； R7a 選自由氫及C1-4 烷基組成之群； n係1至10； m係1、2、3、4、5或6；且 SM係糖皮質類固醇之基團， 該方法包含： a) 使具有式XI 之化合物：
    Figure TW201801749AC00049
    ， 與抗腫瘤壞死因子(TNF) α蛋白或蛋白質結合；及 b) 分離該具有式I-e 之化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。
  40. 如請求項38之方法，其進一步包含使該具有式I-e 之化合物水解以獲得具有式I-f 之化合物：
    Figure TW201801749AC00050
    ， 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。
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