BR112018074922B1 - Compostos agonistas de receptores de glucocorticoides, composição farmacêutica compreendendo ditos compostos e uso terapêutico dos mesmos - Google Patents
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Abstract
São proporcionados aqui imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides, agonistas de receptores de glucocorticoides e métodos de uso dos mesmos, p.ex., para tratar doenças autoimunes ou inflamatórias.
Description
[001] Este pedido reivindica prioridade em relação ao Pedido Provisório dos E.U.A. No. 62/344,948 depositado a 2 de junho, 2016 e Pedido Provisório dos E.U.A. No. 62/371,134 depositado a 4 de agosto, 2016, cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade.
[002] A área da invenção se relaciona geralmente com imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides e métodos de preparação e uso dos mesmos, p.ex., para tratar doenças autoimunes ou inflamatórias. Antecedentes da Invenção
[003] O Fator de Necrose Tumoral alfa (TNFa) desempenha um papel central na patofisiologia de várias disfunções humanas, e agentes anti-TNFa (p.ex., adalimumab, etanercept e infliximab) validaram clinicamente a utilidade terapêutica no tratamento de disfunções autoimunes e inflamatórias, tais como artrite reumatoide, psoríase e doença inflamatória dos intestinos. Apesar do seu sucesso na clínica, os biológicos anti-TNFa estão ainda limitados na eficácia máxima que conseguem alcançar em pacientes, necessitando a identificação e desenvolvimento de terapêuticos mais potentes e eficazes. Os pacientes tratados com biológicos anti- TNFa podem também desenvolver uma resposta imunogênica ao terapêutico limitando assim a sua eficácia. Portanto, as terapias anti-TNFa com imunogenicidade menor e elevada eficácia seriam úteis para controle adicional da doença.
[004] Os agonistas de receptores de glucocorticoides sintéticos (p.ex., dexametasona, prednisolona e budesonida) são uma classe potente de pequenas moléculas usadas no tratamento de disfunções inflamatórias, mas a sua utilidade no tratamento crônica da doença é limitada devido a efeitos secundários graves. Foram descritas várias abordagens para reter a eficácia anti-inflamatória de glucocorticoides sintéticos enquanto se evitam as toxicidades indesejadas (Rosen, J e Miner, JN Endocrine Reviews 26: 452-64 (2005)). No entanto, estas metodologias têm encontrado pouco sucesso. Existe uma necessidade na área de terapêuticos para doenças autoimunes e inflamatórias de se desenvolverem terapêuticos com eficácia intensificada e duração de ação mais longa em comparação com anticorpos anti-TNF e com efeitos indesejados mínimos.
[005] Em um aspecto, a presente divulgação proporciona um imunoconjugado de agonistas de receptores de glucocorticoides representado pelas Fórmulas I-a e Ib, em baixo, e os seus sais, solvatos ou pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis. Em outro aspecto, a presente divulgação proporciona um imunoconjugado de agonistas de receptores de glucocorticoides representado pelas Fórmulas I-a e I-b, em baixo. Os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento de doenças autoimunes tais como, mas não se limitando a, artrite reumatoide, artrite idiopática juvenil, artrite psoriática, espondilite anquilosante, doença de Crohn adulta, doença de Crohn pediátrica, colite ulcerosa, psoríase em placas, hidradenite supurativa, uveíte, doença de Behçet, uma espondiloartropatia ou psoríase. Em um aspecto, os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento da artrite reumatoide. Em um aspecto, os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento da artrite idiopática juvenil. Em um aspecto, os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento da artrite psoriática. Em um aspecto, os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento da espondilite alquilosante. Em um aspecto, os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento da doença de Crohn adulta. Em um aspecto, os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento da doença de Crohn pediátrica. Em um aspecto, os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento da colite ulcerosa. Em um aspecto, os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento da psoríase em placas. Em um aspecto, os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento da hidradenite supurativa. Em um aspecto, os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento da uveíte. Em um aspecto, os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento da doença de Behçet. Em um aspecto, os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento de uma espondiloartropatia. Em um aspecto, os imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b são úteis para tratamento da psoríase.
[006] Em outro aspecto, a presente divulgação proporciona um agonista de receptores de glucorticoides representado pelas Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII- a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou pelas Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b", em baixo, (em que R7b é hidrogênio) e seus sais, solvatos ou pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis. Em outro aspecto, a presente divulgação proporciona um agonista de receptores de glucorticoides representado pelas Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII- a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou pelas Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b", em baixo, (em que R7b é hidrogênio). Os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b" são úteis para tratamento de doenças autoimunes tais como, mas não se limitando a, artrite reumatoide, artrite idiopática juvenil, artrite psoriática, espondilite anquilosante, doença de Crohn adulta, doença de Crohn pediátrica, colite ulcerosa, psoríase em placas, hidradenite supurativa, uveíte, doença de Behçet, uma espondiloartropatia ou psoríase. Em um aspecto, os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII- a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX- a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” são úteis para tratamento da artrite reumatoide. Em um aspecto, os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” são úteis para tratamento da artrite idiopática juvenil. Em um aspecto, os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” são úteis para tratamento da artrite psoriática. Em um aspecto, os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII- A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” são úteis para tratamento da espondilite anquilosante. Em um aspecto, os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” são úteis para tratamento da doença de Crohn adulta. Em um aspecto, os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” são úteis para tratamento da doença de Crohn pediátrica. Em um aspecto, os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” são úteis para tratamento da colite ulcerosa. Em um aspecto, os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII- a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX- a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” são úteis para tratamento da psoríase em placas. Em um aspecto, os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” são úteis para tratamento da hidradenite supurativa. Em um aspecto, os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” são úteis para tratamento da uveíte. Em um aspecto, os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” são úteis para tratamento da doença de Behçet. Em um aspecto, os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” são úteis para tratamento de uma espondiloartropatia. Em um aspecto, os compostos tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou as Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” são úteis para tratamento da psoríase.
[007] Em outro aspecto, a presente divulgação proporciona compostos representados pelas Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou pelas Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII- B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b", como intermediários sintéticos que podem ser usados para preparar imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas I-a e I-b.
[008] Em outro aspecto, a presente divulgação proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um imunoconjugado de agonistas de receptores de glucorticoides representado pelas Fórmulas I-a e I-b ou um agonista de receptores de glucocorticoides representado pelas Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou pelas Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a" e IX-b” e um excipiente e/ou um transportador farmaceuticamente aceitável.
[009] Em outro aspecto, a presente divulgação proporciona um imunoconjugado de agonistas de receptores de glucorticoides representado pelas Fórmulas I-a e I-b ou um agonista de receptores de glucocorticoides representado pelas Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou pelas Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a" e IX-b” para uso no tratamento de doenças autoimunes.
[010] Em outro aspecto, a presente divulgação proporciona um uso de um imunoconjugado de agonistas de receptores de glucorticoides representado pelas Fórmulas I-a e I-b ou um agonista de receptores de glucocorticoides representado pelas Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a e IX-b ou pelas Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” e IX-b” para a fabricação de um medicamento para tratamento de doenças autoimunes.
[011] Em outro aspecto, a presente divulgação proporciona métodos de preparação de imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides representado pelas Fórmulas I-a e I-b.
[012] A Figura 1 mostra a estabilidade proteolítica de um CAF contendo um esteroide e um CAF contendo MMAE (auristatina de monometila E). (Ver Exemplo 76.)
[013] A Figura 2 mostra a cinética de perda de ligante de fármaco de CAF de esteroide em camundongos. (Ver Exemplo 77.)
[014] A Figura 3 mostra a atividade de uma resposta a dose terapêutica única de CAF de esteroide anti-mTNFa em um modelo de camundongo da artrite. (Ver Exemplo 85.)
[015] A Figura 4 mostra a atividade de esteroide anti-TNFa humano em modelo de CAIA de Tg de huTNFa de camundongo da artrite. (Ver Exemplo 87.)
[016] A Figura 5 é um cromatograma de HIC mostrando uma mistura heterogênea contendo anticorpos tendo zero moléculas de SM-L-Q- anexadas (pico "E0"), duas moléculas de SM-L-Q- anexadas (pico "E2"), quatro moléculas de SM-L- Q- anexadas (pico "E4"), frações de SM-L-Q- anexadas (pico "E6") e oito moléculas de SM-L-Q- anexadas (pico "E8"), dependendo do número de ligações de dissulfeto intercadeias que foram reduzidas. (SM é um radical de um glucocorticoesteroide; L é um ligante e Q é um grupo heterobifuncional ou grupo heterotrifuncional; ou Q está ausente.) (Ver Exemplo 74.)
[017] A Figura 6 é um cromatograma de SEC de adalimumab conjugado com um glucocorticoesteroide. (Ver Exemplo 74.)
[018] A Figura 7 é um gráfico de linhas mostrando dados de MS em bruto de adalimumab conjugado com um glucocorticoesteroide. (Ver Exemplo 74.)
[019] A Figura 8 é um gráfico de linhas mostrando dados de MS deconvoluídos de adalimumab conjugado com um glucocorticoesteroide. O quadrado preto e o círculo representam o CAF com succinimida hidrolisada e não hidrolisada, respectivamente. A abundância relativa de CAF hidrolisado e não hidrolisado é usada para se determinar a conversão de hidrólise. (Ver Exemplo 74.)
[020] A Figura 9 mostra que um CAF de esteroide anti-TNF é significativamente mais eficaz na redução de inflamação das orelhas em camundongos do que a combinação simultânea do anticorpo anti-TNF e o esteroide ou do que o anticorpo anti-TNF sozinho. (Ver Exemplo 84.)
[021] A Figura 10 mostra que uma dose única de um CAF de esteroide anti- TNF é tão eficaz na redução do inchaço das patas como 21 dias de dosagem diária de um esteroide. (Ver Exemplo 85.)
[022] A Figura 11 mostra a mudança nos pesos de animais tratados com esteroide, um anticorpo anti-TNF, um CAF anti-TNF ou um CAF de isotipo. (Ver Exemplo 85.)
[023] A Figura 12 mostra que uma dose única de um CAF de esteroide anti- TNF consegue reduzir o inchaço das patas estabelecido, ao passo que uma dose única de um anticorpo anti-TNF teve um efeito mínimo. (Ver Exemplo 88.)
[024] A Figura 13 mostra o efeito de tratamento com um CAF de esteroide anti-TNF na perda de osso társico como medido por Tomografia Microcomputadorizada (μCT). (Os pontos de dados individuais (p.ex., círculos, quadrados ou triângulos) representam animais individuais.) (Ver Exemplo 88.)
[025] A Figura 14 mostra o efeito de tratamento com um CAF de esteroide anti-TNF na inflamação. (Os pontos de dados individuais (p.ex., círculos, quadrados ou triângulos) representam animais individuais.) (Ver Exemplo 88.)
[026] A Figura 15 mostra o efeito de tratamento com um CAF de esteroide anti-TNF na formação de panos. (Os pontos de dados individuais (p.ex., círculos, quadrados ou triângulos) representam animais individuais.) (Ver Exemplo 88.)
[027] A Figura 16 mostra o efeito de tratamento com um CAF de esteroide anti-TNF na erosão óssea. (Os pontos de dados individuais (p.ex., círculos, quadrados ou triângulos) representam animais individuais.) (Ver Exemplo 88.)
[028] A Figura 17 mostra o efeito de tratamento com um CAF de esteroide anti-TNF nos danos à cartilagem. (Os pontos de dados individuais (p.ex., círculos, quadrados ou triângulos) representam animais individuais.) (Ver Exemplo 88.)
[029] A Figura 18 mostra o efeito de tratamento com um CAF de esteroide anti-TNF em glóbulos brancos no sangue periférico. (Os pontos de dados individuais (p.ex., círculos, quadrados ou diamantes) representam animais individuais.) (Ver Exemplo 88.)
[030] A Figura 19 mostra o efeito de tratamento com um CAF de esteroide anti-TNF em neutrófilos no sangue periférico. (Os pontos de dados individuais (p.ex., círculos, quadrados ou diamantes) representam animais individuais.) (Ver Exemplo 88.)
[031] A Figura 20 mostra o efeito de tratamento com um CAF de esteroide anti-TNF em linfócitos no sangue periférico. (Os pontos de dados individuais (p.ex., círculos, quadrados ou diamantes) representam animais individuais.) (Ver Exemplo 88.)
[032] A Figura 21 mostra o efeito de tratamento com um CAF de esteroide anti-TNF em monócitos no sangue periférico. (Os pontos de dados individuais (p.ex., círculos, quadrados ou diamantes) representam animais individuais.) (Ver Exemplo 88.)
[033] A Figura 22 mostra o efeito de tratamento com um CAF de esteroide anti-TNF em eosinófilos no sangue periférico. (Ver Exemplo 88.)
[034] A Figura 23 mostra o efeito de tratamento com um CAF de esteroide anti-TNF em basófilos no sangue periférico. (Ver Exemplo 88.)
[035] A Figura 24 mostra a atividade de um CAF de esteroide anti-TNF e um CAF de esteroide anti-CD163 na artrite induzida por colágeno de camundongo. (Ver Exemplo 89.)
[036] São proporcionados aqui imunoconjugados de agonistas de receptores de glucocorticoides, agonistas de receptores de glucocorticoides e métodos de preparação e uso dos mesmos.
[037] Para facilitar um entendimento da presente divulgação, um número de termos e frases é definido em baixo.
[038] O termo “proteína anti-TNF alfa” se refere a proteínas que são capazes de (i) se ligarem a TNF alfa e (ii) inibirem a ligação de TNF-alfa solúvel a receptores de TNF da superfície de células (p55 e/ou p75) e/ou lisarem TNF alfa superficial e células expressando receptores de TNF alfa in vitro na presença de complemento. As proteínas anti-TNF alfa incluem, por exemplo, anticorpos anti-TNF ou seus fragmentos de ligação ao antígeno (p.ex., adalimumab ou infliximab) bem como receptores de TNF solúvel (p.ex., etanercept).
[039] Como usados aqui, os termos “anticorpo” e “anticorpos” são termos da técnica e podem ser usados indistintamente aqui e se referem a uma molécula com um local de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno.
[040]O termo “anticorpo” significa uma molécula de imunoglobulina que reconhece e se liga especificamente a um alvo, tal como uma proteína, polipeptídeo, peptídeo, carboidrato, polinucleotídeo, lipídeo ou combinações dos anteriores, através de um local de reconhecimento de antígeno dentro da região variável da molécula de imunoglobulina. Como usado aqui, o termo “anticorpo” engloba anticorpos policlonais intatos, anticorpos monoclonais intatos, anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos humanos, proteínas de fusão compreendendo um anticorpo e qualquer outra molécula de imunoglobulina modificada desde que os anticorpos exibam a atividade biológica desejada. Um anticorpo pode ser de qualquer uma das cinco classes principais de imunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM ou suas subclasses (isotipos) (p.ex., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2), com base na identidade dos seus domínios constantes de cadeia pesada referidos como alfa, delta, épsilon, gama e mu, respectivamente. As diferentes classes de imunoglobulinas têm estruturas de subunidades e configurações tridimensionais diferentes e bem conhecidas. Os anticorpos podem ser nus ou conjugados a outras moléculas tais como toxinas, radioisótopos, etc. Como usado aqui, o termo “anticorpo” engloba anticorpos biespecíficos e multiespecíficos.
[041]O termo “fragmento de anticorpo” se refere a uma porção de um anticorpo intato. Um “fragmento de ligação ao antígeno” se refere a uma porção de um anticorpo intato que se liga a um antígeno. Um fragmento de ligação ao antígeno pode conter as regiões variáveis determinadoras antigênicas de um anticorpo intato. Exemplos de fragmentos de anticorpos incluem, mas não estão limitados a, fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 e Fv, anticorpos lineares e anticorpos de cadeia simples. Um “fragmento de ligação ao antígeno” pode ser um fragmento de ligação ao antígeno biespecífico ou multiespecífico.
[042] Um anticorpo “bloqueante” ou um anticorpo “antagonista” é um que exibe ou reduz a atividade biológica do antígeno ao qual se liga, tal como TNF-alfa. Em algumas modalidades, os anticorpos bloqueantes ou anticorpos antagonistas inibem substancialmente ou completamente a atividade biológica do antígeno. A atividade biológica pode ser reduzida em 10%, 20%, 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% ou mesmo 100%.
[043] O termo “anticorpo anti-TNF-alfa” ou “um anticorpo que se liga a TNF- alfa” se refere a um anticorpo que é capaz de se ligar a TNF-alfa com afinidade suficiente tal que o anticorpo seja útil como um agente de diagnóstico e/ou terapêutico no direcionamento de TNF-alfa. A extensão de ligação de um anticorpo anti-TNF-alfa a uma proteína diferente de TNF-alfa, não relacionada pode ser menor do que cerca de 10% da ligação do anticorpo a TNF-alfa como medida, p.ex., por radioimunoensaio (RIA). Em certas modalidades, um anticorpo que se liga a TNF-alfa tem uma constante de dissociação (Kd) de <1 μM, <100 nM, <10 nM, <1 nM ou <0,1 nM.
[044]Um anticorpo “monoclonal” ou seu fragmento de ligação ao antígeno se refere a uma população de anticorpos homogêneos ou fragmentos de ligação ao antígeno envolvida no reconhecimento e ligação altamente específicos de um determinante antigênico simples ou epítopo. Isto está em contraste com anticorpos policlonais que incluem tipicamente anticorpos diferentes dirigidos contra determinantes antigênicos diferentes. O termo anticorpo “monoclonal” ou seu fragmento de ligação ao antígeno engloba tanto anticorpos monoclonais intatos e de comprimento total bem como fragmentos de anticorpos (tais como Fab, Fab', F(ab')2, Fv), mutantes de cadeia simples (scFv), proteínas de fusão compreendendo uma porção de anticorpo e qualquer outra molécula de imunoglobulina modificada compreendendo um local de reconhecimento do antígeno. Além do mais, anticorpo “monoclonal” ou seu fragmento de ligação ao antígeno se refere a tais anticorpos e seus fragmentos de ligação ao antígeno preparados em qualquer número de modos incluindo mas não se limitando a por hibridoma, seleção de fagos, expressão recombinante e animais transgênicos.
[045]O termo anticorpo “humanizado” ou seu fragmento de ligação ao antígeno se refere a formas de anticorpos não humanos (p.ex., murinos) ou seus fragmentos de ligação ao antígeno que são cadeias de imunoglobulina específicas, imunoglobulinas quiméricas ou seus fragmentos que contêm sequências não humanas (p.ex., murinas) mínimas. Tipicamente, os anticorpos humanizados ou seus fragmentos de ligação ao antígeno são imunoglobulinas humanas nas quais resíduos da região determinadora da complementaridade (CDR) estão substituídos por resíduos da CDR de uma espécie não humana (p.ex., camundongo, rato, coelho, hamster) que têm a especificidade, afinidade e capacidade desejadas (“com enxertia de CDR”) (Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332: 323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239: 1534-1536 (1988)). Em alguns casos, os resíduos da região de framework (FR) de Fv de uma imunoglobulina humana estão substituídos pelos resíduos correspondentes em um anticorpo ou fragmento de uma espécie não humana que tem a especificidade, afinidade e capacidade desejadas. O anticorpo humanizado ou seu fragmento de ligação ao antígeno pode ser adicionalmente modificado pela substituição de resíduos adicionais na região de framework de Fv e/ou dentro dos resíduos não humanos substituídos para refinar e otimizar a especificidade, afinidade e/ou capacidade do anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno. Em geral, o anticorpo humanizado ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreenderá substancialmente todos ou pelo menos um, e tipicamente dois ou três, domínios variáveis contendo todas ou substancialmente todas as regiões CDR que correspondem à imunoglobulina não humana ao passo que todas ou substancialmente todas as regiões FR são aquelas de uma sequência de consenso de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado ou seu fragmento de ligação ao antígeno pode também compreender pelo menos uma porção de um domínio ou região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquele de uma imunoglobulina humana. Exemplos de métodos usados para gerar anticorpos humanizados são descritos na Pat. dos E.U.A. 5,225,539; Roguska et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 91 (3): 969-973 (1994) e Roguska et al., Protein Eng. 9 (10): 895904 (1996). Em algumas modalidades, um “anticorpo humanizado” é um anticorpo resurfaced.
[046] Uma “região variável” de um anticorpo se refere à região variável da cadeia leve do anticorpo ou à região variável da cadeia pesada do anticorpo, sozinha ou em combinação. As regiões variáveis da cadeia pesada e leve consistem cada uma em quatro regiões de framework (FR) conectadas por três regiões determinadoras da complementaridade (CDRs) também conhecidas como regiões hipervariáveis. As CDRs em cada cadeia são mantidas juntas em estreita proximidade pelas FRs e, com as CDRs da outra cadeia, contribuem para a formação do local de ligação ao antígeno dos anticorpos. Existem pelo menos duas técnicas para se determinarem as CDRs: (1) uma abordagem baseada na variabilidade de sequências de espécies cruzadas (i.e., Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest (5.a ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.)); e (2) uma abordagem baseada em estudos cristalográficos de complexos antígeno-anticorpo (Al-lazikani et al. (1997) J. Molec. Biol. 273: 927-948)). Adicionalmente, combinações destas duas abordagens são por vezes usadas na técnica para se determinarem CDRs.
[047] O sistema de numeração de Kabat é geralmente usado quando se refere um resíduo no domínio variável (aproximadamente os resíduos 1-107 da cadeia leve e os resíduos 1-113 da cadeia pesada) (p.ex., Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). A não ser que explicitamente indicado de outro modo, o sistema de numeração usado aqui é o sistema de numeração de Kabat.
[048] A numeração das posições de aminoácidos conforme Kabat se refere ao sistema de numeração usado para domínios variáveis de cadeia pesada ou domínios variáveis de cadeia leve da compilação de anticorpos em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991). Usando este sistema de numeração, a sequencia de aminoácidos linear real pode conter menos ou mais aminoácidos correspondendo a um encurtamento de, ou inserção em, uma FR ou CDR do domínio variável. Por exemplo, um domínio variável de cadeia pesada pode incluir uma inserção de aminoácido simples (resíduo 52a de acordo com Kabat) após o resíduo 52 de H2 e resíduos inseridos (p.ex., resíduos 82a, 82b e 82c, etc. de acordo com Kabat) após o resíduo 82 de FR de cadeia pesada. A numeração de Kabat de resíduos pode ser determinada para um dado anticorpo por alinhamento em regiões de homologia da sequência do anticorpo com uma sequência numerada de Kabat “padrão”. Chothia se refere ao invés à localização das alças estruturais (Chothia e Lesk J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987)). O final da alça CDR-H1 de Chothia quando numerada usando a convenção da numeração de Kabat varia entre H32 e H34 dependendo do comprimento da alça (isto é porque o esquema de numeração de Kabat coloca as inserções em H35A e H35B; se nem 35A nem 35B estiverem presentes, a alça termina em 32; se somente 35A estiver presente, a alça termina em 33; se ambos 35A e 35B estiverem presentes, a alça termina em 34). As regiões hipervariáveis de AbM representam um compromisso entre as CDRs de Kabat e alças estruturais de Chothia e são usadas pelo software de modelação de anticorpos AbM da Oxford Molecular.
[049] Em certos aspectos, as CDRs de um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno podem ser determinadas de acordo com o esquema de numeração de Chothia, que se refere à localização de alças estruturais de imunoglobulina (ver, p.ex., Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; Al- Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273: 927-948; Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A et al., (1990) J Mol Biol 215 (1): 175-82; e Patente dos E.U.A. No. 7,709,226). Tipicamente, quando se usa a convenção de numeração de Kabat, a alça CDR-H1 de Chothia está presente nos aminoácidos de cadeia pesada 26 a 32, 33 ou 34, a alça CDR-H2 de Chothia está presente nos aminoácidos de cadeia pesada 52 a 56 e a alça CDR-H3 de Chothia está presente nos aminoácidos de cadeia pesada 95 a 102, enquanto a alça CDR-L1 de Chothia está presente nos aminoácidos de cadeia leve 24 a 34, a alça CDR-L2 de Chothia está presente nos aminoácidos de cadeia leve 50 a 56 e a alça CDR-L3 de Chothia está presente nos aminoácidos de cadeia leve 89 a 97. O final da alça CDR-H1 de Chothia quando numerada usando a convenção da numeração de Kabat varia entre H32 e H34 dependendo do comprimento da alça (isto é porque o esquema de numeração de Kabat coloca as inserções em H35A e H35B; se nem 35A nem 35B estiverem presentes, a alça termina em 32; se somente 35A estiver presente, a alça termina em 33; se ambos 35A e 35B estiverem presentes, a alça termina em 34).
[050] Em certos aspectos, as CDRs de um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno podem ser determinadas de acordo com o sistema de numeração de IMGT como descrito em Lefranc M-P, (1999) The Immunologist 7: 132-136 e Lefranc M-P et al., (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212. De acordo com o esquema de numeração de IMGT, VH-CDR1 está nas posições 26 a 35, VH-CDR2 está nas posições 51 a 57, VH-CDR3 está nas posições 93 a 102, VL-CDR1 está nas posições 27 a 32, VL-CDR2 está nas posições 50 a 52 e VL-CDR3 está nas posições 89 a 97.
[051] Em certos aspectos, as CDRs de um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno podem ser determinadas de acordo com MacCallum RM et al., (1996) J Mol Biol 262: 732-745. Ver também, p.ex. Martin A. "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains" em Antibody Engineering, Kontermann e Dübel, eds., Capítulo 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlim (2001).
[052] Em certos aspectos, as CDRs de um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno podem ser determinadas de acordo com o esquema de numeração de IMGT, que refere regiões hipervariáveis de AbM que representam um compromisso entre as CDRs de Kabat e alças estruturais de Chothia e são usadas pelo software de modelação de anticorpos AbM da Oxford Molecular (Oxford Molecular Group, Inc.).
[053] O termo anticorpo “humano” significa um anticorpo produzido por um humano ou um anticorpo tendo uma sequência de aminoácidos correspondendo a um anticorpo produzido por um humano preparado usando qualquer técnica conhecida na técnica. Esta definição de um anticorpo humano inclui anticorpos intatos ou de comprimento total, seus fragmentos e/ou anticorpos compreendendo pelo menos um polipeptídeo de cadeia pesada e/ou leve humana tal como, por exemplo, um anticorpo compreendendo polipeptídeos de cadeia leve murina e cadeia pesada humana.
[054] O termo anticorpos “quiméricos” se refere a anticorpos em que a sequência de aminoácidos da molécula de imunoglobulina é derivada de duas ou mais espécies. Tipicamente, a região variável de ambas as cadeias leve e pesada corresponde à região variável de anticorpos derivados de uma espécie de mamíferos (p.ex., camundongo, rato, coelho, etc.) com a especificidade, afinidade e capacidade desejadas enquanto as regiões constantes são homólogas com as sequências em anticorpos derivados de outra (usualmente humano) para evitar desencadear uma resposta imunológica em essa espécie.
[055] Os termos “epítopo” ou “determinante antigênio” são usados indistintamente aqui e se referem àquela porção de um antígeno capaz de ser reconhecida e ligada especificamente por um anticorpo particular. Quando o antígeno é um polipeptídeo, os epítopos podem ser formados tanto a partir de aminoácidos contíguos como de aminoácidos não contíguos justapostos por dobragem terciária de uma proteína. Os epítopos formados a partir de aminoácidos contíguos são tipicamente retidos após desnaturação da proteína, ao passo que os epítopos formados por dobragem terciária são tipicamente perdidos após desnaturação da proteína. Um epítopo inclui tipicamente pelo menos 3 e, mais usualmente, pelo menos 5 ou 8-10 aminoácidos em uma conformação espacial única.
[056] “Afinidade de ligação” se refere geralmente à força da soma total de interações não covalentes entre um local de ligação simples de uma molécula (p.ex., um anticorpo) e seu parceiro de ligação (p.ex., um antígeno). A não ser que indicado de outro modo, como usado aqui, “afinidade de ligação” se refere à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação 1:1 entre membros de um par de ligação (p.ex., anticorpo e antígeno). A afinidade de uma molécula X pelo seu parceiro Y pode ser geralmente representada pela constante de dissociação (Kd). A afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica, incluindo aqueles descritos aqui. Os anticorpos com baixa afinidade se ligam geralmente ao antígeno lentamente e tendem a se dissociar prontamente, ao passo que os anticorpos com elevada afinidade se ligam geralmente ao antígeno mais rapidamente e tendem a permanecer ligados durante mais tempo. Uma variedade de métodos de medição da afinidade de ligação é conhecida na técnica, qualquer um dos quais pode ser usado para propósitos da presente divulgação. Modalidades ilustrativas específicas são descritas no que se segue.
[057] “Ou melhor” quando usado aqui para se refere à afinidade de ligação se refere a uma ligação mais forte entre uma molécula e seu parceiro de ligação. “Ou melhor” quando usado aqui se refere a uma ligação mais forte, representada por um valor numérico de Kd mais pequeno. Por exemplo, um anticorpo que tem uma afinidade por um antígeno de “0,6 nM ou melhor”, a afinidade do anticorpo pelo antígeno é <0,6 nM, i.e., 0,59 nM, 0,58 nM, 0,57 nM, etc. ou qualquer valor menor do que 0,6 nM.
[058] Por “se liga especificamente” se entende geralmente que um anticorpo se liga a um epítopo através do seu domínio de ligação ao antígeno e que a ligação envolve alguma complementaridade entre o domínio de ligação ao antígeno e o epítopo. De acordo com esta definição se diz que um anticorpo “se liga especificamente” a um epítopo quando se liga a esse epítopo, através do seu domínio de ligação ao antígeno mais prontamente do que se ligaria a um epítopo não relacionado, aleatório. O termo “especificidade” é usado aqui para qualificar a afinidade relativa pela qual um certo anticorpo se liga a um certo epítopo. Por exemplo, o anticorpo “A” pode ser considerado como tendo uma especificidade mais elevada por um dado epítopo do que o anticorpo “B” ou se pode dizer que o anticorpo “A” se liga ao epítopo “C” com uma especificidade mais elevada do que tem pelo epítopo relacionado “D”.
[059] Por “se liga preferencialmente” se entende que o anticorpo se liga especificamente a um epítopo mais prontamente do que se ligaria a um epítopo relacionado, similar, homólogo ou análogo. Assim, um anticorpo que “se liga preferencialmente” a um dado epítopo se ligaria mais prontamente a esse epítopo do que um epítopo relacionado, mesmo embora um tal anticorpo possa reagir de modo cruzado com o epítopo relacionado.
[060] É dito que um anticorpo “inibe competitivamente” a ligação de um anticorpo de referência a um dado epítopo se o anticorpo se ligar preferencialmente a esse epítopo ou um epítopo sobreposto na medida em que bloqueie, até algum grau, a ligação do anticorpo de referência ao epítopo. A inibição competitiva pode ser determinada por qualquer método conhecido na técnica, por exemplo, ensaios ELISA de competição. Se pode dizer que um anticorpo inibe competitivamente a ligação do anticorpo de referência a um dado epítopo em pelo menos 90%, pelo menos 80%, pelo menos 70%, pelo menos 60% ou pelo menos 50%.
[061] A frase “substancialmente similar” ou “substancialmente o mesmo”, como usada aqui, denota um grau de similaridade suficientemente elevada entre dois valores numéricos (geralmente um associado a um anticorpo da divulgação e o outro associado a um anticorpo de referência/comparador) tal que um perito na técnica consideraria a diferença entre os dois valores como tendo pouca ou nenhuma significância biológica e/ou estatística dentro do contexto da característica biológica medida pelos referidos valores (p.ex., valores de Kd). A diferença entre os referidos dois valores pode ser menor do que cerca de 50%, menor do que cerca de 40%, menor do que cerca de 30%, menor do que cerca de 20% ou menor do que cerca de 10% como função do valor para o anticorpo de referência/comparador.
[062] Um polipeptideo, anticorpo, polinucleotideo, vetor, célula ou composição que está “isolado” é um polipeptídeo, anticorpo, polinucleotídeo, vetor, célula ou composição que está em uma forma não encontrada na natureza. Os polipeptideos, anticorpos, polinucleotideos, vetores, célula ou composições isolados incluem aqueles que foram purificados até um grau em que não estão mais em uma forma na qual são encontrados na natureza. Em algumas modalidades, um anticorpo, polinucleotideo, vetor, célula ou composição que está isolado é substancialmente puro.
[063] Como usado aqui, “substancialmente puro” se refere a material que é pelo menos 50% puro (i.e., isento de contaminantes), pelo menos 90% puro, pelo menos 95% puro, pelo menos 98% puro ou pelo menos 99% puro.
[064] O termo “imunoconjugado”, “conjugado”, “conjugado anticorpo-fármaco” ou “CAF” como usado aqui se refere a um composto ou um seu derivado que está ligado a proteina tal como um agente de ligação de células (p.ex., um anticorpo anti- TNF-alfa ou seu fragmento) e é definido por uma fórmula genérica: (SM-L-Q)n-A, em que SM = radical derivado de um agonista de receptores de glucocorticoides de pequena molécula, p.ex., um glucocorticoesteroide, L = ligante, Q = grupo heterobifuncional, um grupo heterotrifuncional ou está ausente e A = uma proteina (p.ex., um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antigeno, uma proteina anti-TNF, um anticorpo anti-TNF-alfa ou seu fragmento, um receptor solúvel ou um receptor de TNF solúvel) e n = 1-10. Os imunoconjugados podem ser também definidos pela fórmula genérica em ordem inversa: A-(Q-L-SM)n. A titulo de ilustração, a seguinte fórmula genérica mostra um imunoconjugado tendo um ligante de dipeptideo (Ala-Ala) e grupo heterobifuncional à base de tioéter de succinimida:
[065] Na presente divulgação, o termo “ligante” se refere a qualquer fração química capaz de ligar uma proteína, p.ex., anticorpo, fragmento de anticorpo (p.ex., fragmentos de ligação ao antígeno) ou equivalente funcional a um glucocorticoesteroide. Os ligantes podem ser suscetíveis de clivar (um “ligante clivável” facilidade deste modo a liberação do glucocorticoesteroide. Por exemplo, tais ligantes cliváveis podem ser suscetíveis a clivagem induzida por ácido, clivagem induzida por fótons, clivagem induzida por peptidase, clivagem induzida por esterase e clivagem de ligações de dissulfeto, a condições sob as quais o glucocorticoesteroide e/ou o anticorpo permanece ativo. Alternativamente, os ligantes podem ser substancialmente resistentes à clivagem (um “ligante não clivável”).
[066] Na presente divulgação, os ligantes não cliváveis são qualquer fração química capaz de ligar um glucocorticoesteroide a um anticorpo de um modo covalente, estável e não se enquadra sob as categorias listadas acima para ligantes cliváveis. Assim, os ligantes não cliváveis são substancialmente resistentes à clivagem induzida por ácido, clivagem induzida por fótons, clivagem induzida por peptidase, clivagem induzida por esterase e clivagem de ligações de dissulfeto. Além do mais, não clivável se refere à capacidade da ligação química no ligante ou adjacente ao ligante de suportar clivagem induzida por um ácido, agente clivante fotolábil, uma peptidase, uma esterase ou um composto químico ou fisiológico que cliva uma ligação de dissulfeto, a condições sob as quais o glucocorticoesteroide e/ou o anticorpo não perde a sua atividade.
[067] Alguns ligantes cliváveis são clivados por peptidases (“ligantes cliváveis por peptidase”). Somente certos peptídeos são prontamente clivados dentro ou fora das células, ver, p.ex., Trout et al., 79 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 626-629 (1982) e Umemoto et al. 43 Int. J. Cancer, 677-684 (1989). Além do mais, os peptídeos são compostos por unidades de a-aminoácido e ligações peptídicas, que são quimicamente ligações de amida entre o carboxilato de um aminoácido e o grupo amino de um segundo aminoácido. Outras ligações de amida, tais como a ligação entre um carboxilato e o grupo de α-aminoácido da lisina, são entendidas como não sendo ligações peptídicas e são consideradas não cliváveis.
[068] Alguns ligantes são clivados por esterases (“ligantes cliváveis por esterase”). Somente certos ésteres podem ser clivados por esterases presentes dentro ou fora das células. Os ésteres são formados pela condensação de um ácido carboxílico e um álcool. Os ésteres simples são ésteres produzidos com álcoois simples, tais como álcoois alifáticos, e álcoois cíclicos pequenos e aromáticos pequenos.
[069] Em algumas modalidades, o componente de ligante clivável pode compreender um peptídeo compreendendo um a dez resíduos de aminoácidos. Em estas modalidades, o peptídeo permite clivagem do ligante por uma protease, facilitando deste modo a liberação do glucocorticoesteroide após exposição a proteases intracelulares, tais como enzimas lisossomais (Doronina et al. (2003) Nat. Biotechnol. 21: 778-784). Peptídeos exemplificativos incluem, mas não estão limitados a, dipeptídeos, tripeptídeos, tetrapeptídeos e pentapeptídeos. Dipeptídeos exemplificativos incluem, mas não estão limitados a, alanina-alanina (ala-ala), valina- citrulina (vc ou val-cit), alanina-fenilalanina (af ou ala-phe); fenilalanina-lisina (fk ou phe-lys); fenilalanina-homolisina (phe-homolys); e N-metil-valina-citrulina (Me-val-cit). Tripeptídeos exemplificativos incluem, mas não estão limitados a, glicina-valina- citrulina (gly-val-cit) e glicina-glicina-glicina (gly-gly-gly).
[070] Um peptídeo pode compreender resíduos de aminoácidos ocorrendo naturalmente e/ou não naturais. O termo “aminoácido ocorrendo naturalmente” se refere a Ala, Asp, Cys, Glu, Phe, Gly, His, He, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp e Tyr. “Aminoácidos não naturais” (i.e., aminoácidos que não ocorrem naturalmente) incluem, a título de exemplo não limitante, homosserina, homoarginina, citrulina, fenilglicina, taurina, iodotirosina, seleno-cisteína, norleucina (“Nle”), norvalina (“Nva”), beta-alanina, L- ou D-naftalanina, ornitina (“Orn”) e similares. Os peptídeos podem ser desenhados e otimizados quanto à clivagem enzimática por uma enzima particular, por exemplo, uma protease associada a tumores, catepsina B, C e D ou uma protease de plasmina.
[071] Os aminoácidos incluem também as formas D de aminoácidos naturais e não naturais. “D-” designa um aminoácido tendo a configuração “D” (que roda para a direita), em oposição à configuração nos aminoácidos ocorrendo naturalmente (“L”). Os aminoácidos naturais e não naturais podem ser adquiridos comercialmente (Sigma Chemical Co., Advanced Chemtech) ou sintetizados usando métodos conhecidos na técnica.
[072] Na presente divulgação, o termo “glucocorticoesteroide” se refere a hormônios de esteroides ocorrendo naturalmente ou sintéticos que interagem com receptores de glucocorticoides. Glucocorticoesteroides exemplificativos não limitantes incluem: A título de exemplo, os anéis A, B, C e D do esqueleto de esteroide estão marcados para a budesonida. Os glucocorticoesteroides são descritos em WO 2009/069032.
[073] Um “radical de um glucocorticoesteroide” é derivado da remoção de um ou mais átomos de hidrogênio de um glucocorticoesteroide original. A remoção de átomo(s) de hidrogênio facilita a anexação do glucocorticoesteroide original a um ligante. Em uma modalidade, o átomo de hidrogênio é removido de qualquer grupo - NH2 adequado do glucocorticoesteroide original. Em outra modalidade, o átomo de hidrogênio é removido de qualquer grupo -OH adequado do glucocorticoesteroide original. Em outra modalidade, o átomo de hidrogênio é removido de qualquer um grupo -SH adequado do glucocorticoesteroide original. Em outra modalidade, o átomo de hidrogênio é removido de qualquer grupo -N(H) adequado do glucocorticoesteroide original. Em outra modalidade, o átomo de hidrogênio é removido de qualquer grupo -CH3, -CH2- ou -CH= adequado do glucocorticoesteroide original. Em uma modalidade, o “radical de um glucocorticoesteroide” é um radical monovalente derivado da remoção de um átomo de hidrogênio de um glucocorticoesteroide original.
[074] Na presente divulgação, o termo “grupo heterobifuncional” ou o termo “grupo heterotrifuncional” se refere a uma fração química que conecta um ligante e proteína, p.ex., um anticorpo. Os grupos heterobi- e tri-funcionais são caracterizados como tendo grupos reativos diferentes em qualquer uma das extremidades da fração química. Grupos heterobifuncionais exemplificativos não limitantes incluem: Grupos heterotrifuncionais exemplificativos não limitantes incluem:
[075] O termo “razão de fármaco e anticorpo” ou “DAR” se refere ao número de SMs (i.e., radical derivado de um agonista de receptores de glucocorticoides de pequena molécula, p.ex., um glucocorticoesteroide) ligado a A (i.e., uma proteína, p.ex., um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno, uma proteína anti-TNF, um anticorpo anti-TNF-alfa ou seu fragmento, um receptor solúvel ou um receptor de TNF solúvel). Assim, no imunoconjugado tendo a fórmula genérica (SM-L-Q)n-A, a DAR é definida pela variável “n”.
[076] Quando se refere a um composto tendo a fórmula (SM-L-Q)n-A representando um imunoconjugado individual, a DAR se refere ao número de SMs ligados à A individual (p.ex., n é um número inteiro de 1 a 10).
[077] Quando se refere a um composto tendo a fórmula (SM-L-Q)n-A representando uma pluralidade de imunoconjugados, a DAR se refere ao número médio de SMs ligados às As (p.ex., n é um número inteiro ou fração de 1 a 10). Assim, a título de um exemplo, um composto tendo a fórmula (SM-L-Q)n-A compreendendo um primeiro imunoconjugado com 3 SM por A e um segundo imunoconjugado com 4 SM por A teria uma DAR (i.e., um “n”) de 3,5.
[078] O termo “sujeito” se refere a qualquer animal (p.ex., um mamífero) incluindo, mas não se limitando a, humanos, primatas não humanos, roedores e similares, que é para ser o receptor de um tratamento particular. Tipicamente, os termos “sujeito” e “paciente” são usados indistintamente aqui em referência a um sujeito humano.
[079] O termo “formulação farmacêutica” se refere a uma preparação que está em tal forma de modo a permitir que a atividade biológica do ingrediente ativo seja eficaz e que não contém componentes adicionais que são inaceitavelmente tóxicos a um sujeito ao qual a formulação seria administrada. A formulação pode ser estéril.
[080] Uma “quantidade eficaz” de um imunoconjugado ou agonista de receptores de glucocorticoides como divulgado aqui é uma quantidade suficiente para levar a cabo um propósito especificamente apresentado. Uma “quantidade eficaz” pode ser determinada em relação ao propósito apresentado.
[081] O termo “quantidade terapeuticamente eficaz” se refere a uma quantidade de um imunoconjugado ou agonista de receptores de glucocorticoides eficaz para “tratar” uma doença ou disfunção em um sujeito ou mamífero. Uma “quantidade profilaticamente eficaz” se refere a uma quantidade eficaz para alcançar o resultado profilático desejado.
[082] Termos tais como “tratando” ou “tratamento” ou “tratar” ou “aliviando” ou “aliviar” se referem a medidas terapêuticas que curam, retardam, atenuam sintomas de e/ou param a progressão de uma condição ou disfunção patológica diagnosticada. Assim, aqueles com necessidade de tratamento incluem aqueles já diagnosticados com ou suspeitos de terem a disfunção. Medidas profiláticas ou preventivas se referem a medidas que previnem e/ou retardam o desenvolvimento de uma condição ou disfunção patológica visada. Assim, aqueles com necessidade de medidas profiláticas ou preventivas incluem aqueles propensos a terem a disfunção e aqueles nos quais a disfunção é para ser prevenida.
[083] “Polinucleotídeo” ou “ácido nucleico”, como usados indistintamente aqui, se referem a polímeros de nucleotídeos de qualquer comprimento e incluem DNA e RNA. Os nucleotídeos podem ser desoxirribonucleotídeos, ribonucleotídeos, nucleotídeos ou bases modificados e/ou seus análogos ou qualquer substrato que possa ser incorporado em um polímero por DNA ou RNA polimerase. Um polinucleotídeo pode compreender nucleotídeos, tais como nucleotídeos metilados e seus análogos. Se presente, a modificação à estrutura do nucleotídeo pode ser fornecida antes da ou após a montagem do polímero. A sequência de nucleotídeos pode ser interrompida por componentes diferentes de nucleotídeos. Um polinucleotídeo pode ser adicionalmente modificado após polimerização, tal como por conjugação com um componente de marcação. Outros tipos de modificações incluem, por exemplo “tampas”, substituições de um ou mais dos nucleotídeos ocorrendo naturalmente por um análogo, modificações internucleotídeos tais como, por exemplo, aquelas com ligações não carregadas (p.ex., fosfonatos de metila, fosfotriésteres, fosfoamidatos, carbamatos, etc.) e com ligações carregadas (p.ex., fosforotioatos, fosforoditioatos, etc.), aquelas contendo frações pendentes, tais como, por exemplo, proteínas (p.ex., nucleases, toxinas, anticorpos, peptídeos sinal, ply-L-lisina, etc.), aquelas com intercalantes (p.ex., acridina, psoraleno, etc.), aquelas contendo quelantes (p.ex., metais, metais radioativos, boro, metais oxidativos, etc.), aquelas contendo alquilantes, aquelas com ligações modificadas (p.ex., ácidos nucleicos anomêricos alfa, etc.), bem como formas não modificadas do(s) polinucleotídeo(s). Adicionalmente, qualquer um dos grupos hidroxila habitualmente presentes nos açúcares pode estar substituído, por exemplo, por grupos fosfonato, grupos fosfato, protegido por grupos protetores padrão ou ativado para preparar ligações adicionais a nucleotídeos adicionais ou pode ser conjugado a suportes sólidos. O OH terminal 5' e 3' pode estar fosforilado ou substituído por aminas ou frações de grupos de tampa orgânicas de 1 a 20 átomos de carbono. Outras hidroxilas podem ser também derivatizadas em grupos protetores padrão. Os polinucleotídeos podem também conter formas análogas de açúcares de ribose ou desoxirribose que são geralmente conhecidas na técnica, incluindo, por exemplo, 2'-O-metila-, 2'-O-alila, 2'-fluoro- ou 2'- azido-ribose, análogos de açúcar carbocíclicos, açúcares .alfa.-anomêricos, açúcares epimêricos tais como arabinose, xiloses ou lixoses, açúcares de piranose, açúcares de furanose, sedo-heptuloses, análogos acíclicos e análogos de nucleosídeo abásicos tais como ribosídeo de metila. Uma ou mais ligações de fosfodiéster podem estar substituídas por grupos de ligação alternativos. Estes grupos de ligação alternativos incluem, mas não estão limitados a, modalidades em que o fosfato está substituído por P(O)S ("tioato"), P(S)S ("ditioato”), "(O)NR2 ("amidato"), P(O)R, P(O)OR', CO ou CH2 ("formacetal"), nos quais cada R ou R’ é independentemente H ou é alquila (1-20 C) substituída ou não substituída opcionalmente contendo uma ligação de éter (--O-), arila, alquenila, cicloalquila, cicloalquenila ou araldila. Nem todas as ligações em um polinucleotídeo necessitam de ser idênticas. A descrição precedente se aplica a todos os polinucleotídeos referidos aqui, incluindo RNA e DNA.
[084] O termo “vetor” significa um constructo, que é capaz de administrar, e opcionalmente expressar, um ou mais gene(s) ou sequência(s) de interesse em uma célula hospedeira. Exemplos de vetores incluem, mas não estão limitados a, vetores virais, vetores de expressão de DNA ou RNA nu, plasmídeo, vetores de cosmídeo ou fago, vetores de expressão de DNA ou RNA associados a agentes condensantes catiônicos, vetores de expressão de DNA ou RNA encapsulados em lipossomos e certas células eucarióticas, tais como células produtoras.
[085] Os termos "polipeptídeo", "peptídeo" e "proteína" são usados indistintamente aqui para se referirem a polímeros de aminoácidos de qualquer comprimento. O polímero pode ser linear ou ramificado, pode compreender aminoácidos modificados e pode estar interrompido por não aminoácidos. Os termos englobam também um polímero de aminoácido que foi modificado naturalmente ou por intervenção; por exemplo, formação de ligações de dissulfeto, glicosilação, lipidação, acetilação, fosforilação ou qualquer outra manipulação ou modificação, tal como conjugação com um componente de marcação. Estão também incluídos dentro da definição, por exemplo, polipeptídeos contendo um ou mais análogos de um aminoácido (incluindo, por exemplo, aminoácidos não naturais, etc.), bem como outras modificações conhecidas na técnica. É entendido que, porque os polipeptídeos desta divulgação são baseados em anticorpos, em certas modalidades, os polipeptídeos podem ocorrer como cadeias simples ou cadeias associadas.
[086] Os termos “idênticos” ou porcentagem de "identidade” no contexto de dois ou mais ácidos nucleicos ou polipeptídeos se referem a duas ou mais sequências ou subsequências que são as mesmas ou têm uma porcentagem especificada de nucleotídeos ou resíduos de aminoácidos que são os mesmos, quando comparadas e alinhadas (introduzindo intervalos, se necessário) para correspondência máxima, não considerando quaisquer substituições de aminoácidos conservativas com parte da identidade de sequências. A porcentagem de identidade pode ser medida usando software ou algoritmo de comparação de sequências ou por inspeção visual. Vários algoritmos e software são conhecidos na técnica que podem ser usados para se obterem alinhamentos de sequências de aminoácidos ou nucleotídeos. Um tal exemplo não limitante de um algoritmo de alinhamento de sequências é o algoritmo descrito em Karlin et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 87: 2264-2268 (1990), como modificado em Karlin et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 90: 5873-5877 (1993) e incorporado nos programas NBLAST e XBLAST (Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25: 3389-3402 (1991)). Em certas modalidades, Gapped BLAST pode ser usado como descrito em Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402 (1997). BLAST-2, WU-BLAST-2 (Altschul et al., Methods in Enzymology, 266: 460-480 (1996)), ALIGN, ALIGN-2 (Genentech, South San Francisco, Califórnia) ou Megalign (DNASTAR) são programas de software publicamente disponíveis adicionais que podem ser usados para alinhar sequências. Em certas modalidades, a porcentagem de identidade entre duas sequências de nucleotídeos é determinada usando o programa GAP no software GCG (p.ex., usando uma matriz NWSgapdna.CMP e um peso de intervalos de 40, 50, 60, 70 ou 90 e um peso de comprimento de 1, 2, 3, 4, 5 ou 6). Em certas modalidades alternativas, o programa GAP no pacote de software GCG, que incorpora o algoritmo de Needleman e Wunsch (J. Mol. Biol. (48): 444-453 (1970)), pode ser usado para se determinar a porcentagem de identidade entre duas sequências de aminoácidos (p.ex., usando uma matriz Blossum 62 ou uma matriz PAM250 e um peso de intervalo de 16, 14, 12, 10, 8, 6 ou 4 e um peso de comprimento de 1, 2, 3, 4, 5). Alternativamente, em certas modalidades, a porcentagem de identidade entre sequências de nucleotídeos ou aminoácidos é determinada usando o algoritmo de Myers e Miller (CABIOS, 4: 11-17 (1989)). Por exemplo, a porcentagem de identidade pode ser determinada usando o programa ALIGN (versão 2.0) e usando uma PAM120 com tabela de resíduos, uma penalidade de comprimento de intervalo de 12 e uma penalidade de intervalo de 4. Parâmetros apropriados para alinhamento máximo por software de alinhamento particular podem ser determinados por um perito na técnica. Em certas modalidades, os parâmetros padrão do software de alinhamento são usados. Em certas modalidades, a porcentagem de identidade “X” de uma primeira sequência de aminoácidos com uma segunda sequência de aminoácidos é calculada como 100 x (Y/Z), onde Y é o número de resíduos de aminoácidos pontuado como correspondências idênticas no alinhamento das primeira e segunda sequências (como alinhadas por inspeção visual ou um programa de alinhamento de sequências particular) e Z é o número total de resíduos na segunda sequência. Se o comprimento de uma primeira sequência for mais longo do que a segunda sequência, a porcentagem de identidade da primeira sequência com a segunda sequência será mais longa do que a porcentagem de identidade da segunda sequência com a primeira sequência.
[087]Como um exemplo não limitante, se qualquer polinucleotideo particular tem uma certa identidade de sequências (p.ex., é pelo menos 80% idêntica, pelo menos 85% idêntica, pelo menos 90% idêntica e, em algumas modalidades, pelo menos 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica) com uma sequência de referência pode, em certas modalidades, programa Bestfit (Wisconsin Sequence Analysis Package, Versão 8 para Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, 575 Science Drive, Madison, WI 53711). Bestfit usa o algoritmo de homologia local de Smith e Waterman (Advances in Applied Mathematics 2: 482 489 (1981)) para encontrar o melhor segmento de homologia entre duas sequências. Quando se usa Bestfit ou qualquer outro programa de alinhamento de sequências para se determinar se uma sequência particular é, por exemplo, 95% idêntica com uma sequência de referência de acordo com a presente divulgação, os parâmetros são definidos tal que a porcentagem de identidade seja calculada sobre o comprimento total da sequência de nucleotídeos de referência e que intervalos na homologia de até 5% do número total de nucleotídeos na sequência de referência sejam permitidos.
[088]Em algumas modalidades, dois ácidos nucleicos ou polipeptídeos da divulgação são substancialmente idênticos, significando que têm pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90% e, em algumas modalidades, pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% de identidade de nucleotídeos ou resíduos de aminoácidos, quando comparados e alinhados para correspondência máxima, como medida usando um algoritmo de comparação de sequências ou por inspeção visual. Pode existir identidade sobre uma região das sequências que tem pelo menos cerca de 10, cerca de 20, cerca de 40-60 resíduos em comprimento ou qualquer valor integral intermédio e pode ser sobre uma região mais longa do que 60- 80 resíduos, por exemplo, pelo menos cerca de 90-100 resíduos e, em algumas modalidades, as sequências são substancialmente idênticas sobre o comprimento total das sequências sendo comparadas, tal como a região codificante de uma sequência de nucleotídeos por exemplo.
[089]Uma "substituição de aminoácido conservativa" é uma na qual um resíduo de aminoácido está substituído por outro resíduo de aminoácido tendo uma cadeia lateral similar. As famílias de resíduos de aminoácidos tendo cadeias laterais similares foram definidas na técnica, incluindo cadeias laterais básicas (p.ex., lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (p.ex., ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares não carregadas (p.ex., glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadeias laterais não polares (p.ex., alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano), cadeias laterais beta- ramificadas (p.ex., treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (p.ex., tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Por exemplo, a substituição de uma fenilalanina por uma tirosina é uma substituição conservativa. Em algumas modalidades, as substituições conservativas nas sequências dos polipeptídeos e anticorpos da divulgação não impedem a ligação do anticorpo contendo a sequência de aminoácidos ao(s) antígeno(s), p.ex., o TNF-alfa ao qual o anticorpo se liga. Métodos de identificação de substituições conservativas de nucleotídeos e aminoácidos que não eliminam a ligação ao antígeno são bem conhecidos na técnica (ver, p.ex., Brummell et al., Biochem. 32: 1180-1187 (1993); Kobayashi et al., Protein Eng. 12 (10): 879-884 (1999); e Burks et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 412-417 (1997)).
[090] Na presente divulgação, o termo “halo” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a -Cl, -F, -Br ou -I. Em uma modalidade, o halo é -Cl ou -F.
[091] Na presente divulgação, o termo “hidróxi” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a -OH.
[092] Na presente divulgação, o termo “tiol” ou o termo “hidróxi” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a -SH.
[093] Na presente divulgação, o termo “alquila” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a hidrocarbonetos alifáticos de cadeia linear ou ramificada não substituídos contendo de um a doze átomos de carbono, i.e., alquila C1-12, ou o número de átomos de carbono designado, p.ex., uma alquila C1 tal como metila, uma alquila C2 tal como etila, uma alquila C3 tal como propila ou isopropila, uma alquila C1-3 tal como metila, etila, propila ou isopropila e assim por diante. Em uma modalidade, a alquila é uma alquila C1-10. Em outra modalidade, a alquila é uma alquila C1-6. Em outra modalidade, a alquila é uma alquila C1-4. Em outra modalidade, a alquila é uma alquila C1-10 de cadeia linear. Em outra modalidade, a alquila é uma alquila C3-10 de cadeia ramificada. Em outra modalidade, a alquila é uma alquila C1-6 de cadeia linear. Em outra modalidade, a alquila é uma alquila C3-6 de cadeia ramificada. Em outra modalidade, a alquila é uma alquila C1-4 de cadeia linear. Em outra modalidade, a alquila é uma alquila C3-4 de cadeia ramificada. Em outra modalidade, a alquila é uma alquila C3-4 de cadeia linear ou ramificada. Grupos alquila C1-10 exemplificativos não limitantes incluem metila, etila, propila, isopropila, butila, sec-butila, terc-butila, iso-butila, 3-pentila, hexila, heptila, octila, nonila e decila. Grupos alquila C1-4 exemplificativos não limitantes incluem metila, etila, propila, isopropila, butila, sec-butila, terc-butila e iso-butila.
[094] Na presente divulgação, o termo “alquila opcionalmente substituída” como usao por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a uma alquila que não está substituída ou está substituída por um, dois ou três substituintes independentemente selecionados do grupo consistindo em nitro, hidróxi, ciano, haloacóxi, arilóxi, alquiltio, sulfonamido, alquilcarbonila, arilcarbonila, alquilsulfonila, arilsulfonila, carbóxi, carboxamido, alcóxicarbonila, tiol, -N(H)C(=O)NH2 e - N(H)C(=NH)NH2, arila opcionalmente substituída e heteroarila opcionalmente substituída. Em uma modalidade, a alquila opcionalmente substituída está substituída por dois substituintes. Em outra modalidade, a alquila opcionalmente substituída está substituída por um substituinte. Em outra modalidade, a alquila opcionalmente substituída não está substituída. Grupos alquila substituídos exemplificativos não limitantes incluem -CH2OH, -CH2SH, -CH2Ph, -CH2(4-OH)Ph, -CH2(imidazolil), - CH2CH2CO2H, -CH2CH2SO2CH3, -CH2CH2COPh e -CH2OC(=O)CH3.
[095] Na presente divulgação, o termo “cicloalquila” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a hidrocarbonetos alifáticos cíclicos saturados ou parcialmente insaturados, p.ex., contendo uma ou duas ligações duplas, não substituídos contendo um a três anéis tendo de três a doze átomos de carbono, i.e., cicloalquila C3-12, ou o número de carbonos designado. Em uma modalidade, a cicloalquila tem dois anéis. Em outra modalidade, a cicloalquila tem um anel. Em outra modalidade, a cicloalquila está saturada. Em outra modalidade, a cicloalquila está insaturada. Em outra modalidade, a cicloalquila é uma cicloalquila C3-8. Em outra modalidade, a cicloalquila é uma cicloalquila C3-6. O termo “cicloalquila” se destina a incluir grupos em que um anel -CH2- está substituído por um -C(=O)-. Grupos cicloalquila exemplificativos não limitantes incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila, ciclo-octila, norbornila, decalina, adamantila, ciclo-hexenila, ciclopentenila e ciclopentanona.
[096] Na presente divulgação, o termo “cicloalquila opcionalmente substituída” como usado aqui por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a uma cicloalquila que não está substituída ou está substituída por um, dois ou três substituintes independentemente selecionados do grupo consistindo em halo, nitro, ciano, hidróxi, alquilcarbonilóxi, cicloalquilcarbonilóxi, amino, haloalquila, hidróxialquila, alcóxi, haloalcóxi, arilóxi, aralquilóxi, alquiltio, carboxamido, sulfonamido, alquilcarbonila, arilcarbonila, alquilsulfonila, arilsulfonila, carbóxi, carbóxialquila, alquila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, alquenila, alquinila, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída, heterociclo opcionalmente substituído, alcóxialquila, (amino)alquila, (carboxamido)alquila, (heterociclo)alquila e -OC(=O)-amino. O termo cicloalquila opcionalmente substituída inclui grupos cicloalquila tendo uma arila opcionalmente substituída fundida, p.ex., fenila, ou heteroarila opcionalmente substituída fundida, p.ex., piridila. Uma cicloalquila opcionalmente substituída tendo um grupo arila opcionalmente substituído fundido ou heteroarila opcionalmente substituída fundida pode estar anexada ao restante da molécula em qualquer átomo de carbono disponível no anel de cicloalquila. Em uma modalidade, a cicloalquila opcionalmente substituída está substituída por dois substituintes. Em outra modalidade, a cicloalquila opcionalmente substituída está substituída por um substituinte. Em outra modalidade, a cicloalquila opcionalmente substituída não está substituída.
[097] Na presente divulgação, o termo “arila” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a sistemas anelares aromáticos monocíclicos ou bicíclicos não substituídos tendo de seis a quatorze átomos de carbono, i.e., uma arila C6-14. Grupos arila exemplificativos não limitantes incluem grupos fenila (abreviado como "Ph"), naftila, fenantrila, antracila, indenila, azulenila, bifenila, bifenilenila e fluorenila. Em uma modalidade, o grupo arila é fenila ou naftila.
[098] Na presente divulgação, o termo “arila opcionalmente substituída” como usado aqui por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a uma arila que não está substituída ou está substituída por um a cinco substituintes independentemente selecionados do grupo consistindo em halo, nitro, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquilamino, dialquilamino, alquila opcionalmente substituída, haloalquila, hidróxialquila, alcóxi, haloalcóxi, arilóxi, aralquilóxi, alquiltio, carboxamido, sulfonamido, alquilcarbonila, arilcarbonila, alquilsulfonila, haloalquilsulfonila, cicloalquilsulfonila, (cicloalquil)alquilsulfonila, arilsulfonila, heteroarilsulfonila, heterociclossulfonila, carbóxi, carbóxialquila, cicloalquila opcionalmente substituída, alquenila, alquinila, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída, heterociclo opcionalmente substituído, alcóxicarbonila, alcóxialquila, (amino)alquila, (carboxamido)alquila e (heterociclo)alquila.
[099] Em uma modalidade, a arila opcionalmente substituída é uma fenila opcionalmente substituída. Em outra modalidade, a fenila opcionalmente substituída tem quatro substituintes. Em outra modalidade, a fenila opcionalmente substituída tem três substituintes. Em outra modalidade, a fenila opcionalmente substituída tem dois substituintes. Em outra modalidade, a fenila opcionalmente substituída tem um substituinte. Em outra modalidade, a fenila opcionalmente substituída não está substituída. Grupos arila substituídos exemplificativos não limitantes incluem 2- metilfenila, 2-metóxifenila, 2-fluorofenila, 2-clorofenila, 2-bromofenila, 3-metilfenila, 3- metóxifenila, 3-fluorofenila, 3-clorofenila, 4-metilfenila, 4-etilfenila, 4-metóxifenila, 4- fluorofenila, 4-clorofenila, 2,6-di-fluorofenila, 2,6-di-clorofenila, 2-metila, 3- metóxifenila, 2-etila, 3-metóxifenila, 3,4-di-metóxifenila, 3,5-di-fluorofenila, 3,5-di- metilfenila, 3,5-dimetóxi, 4-metilfenila, 2-fluoro-3-clorofenila, 3-cloro-4-fluorofenila, 4- (piridin-4-ilsulfonil)fenila. O termo arila opcionalmente substituída inclui grupos fenila tendo uma cicloalquila opcionalmente substituída fundida ou grupo heterociclo opcionalmente substituído fundido. Uma fenila opcionalmente substituída tendo um grupo cicloalquila opcionalmente substituído fundido ou heterociclo opcionalmente substituído fundido pode estar anexada ao restante da molécula em qualquer átomo de carbono disponível no anel de fenila.
[0100]Na presente divulgação, o termo “alquenila” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a uma alquila contendo uma, duas ou três ligações duplas carbono-carbono. Em uma modalidade, a alquenila tem uma ligação dupla carbono-com-carbono. Em outra modalidade, a alquenila é uma alquenila C2-6. Em outra modalidade, a alquenila é uma alquenila C2-4. Grupos alquenila exemplificativos não limitantes incluem etenila, propenila, isopropenila, butenila, sec- butenila, pentenila e hexenila.
[0101]Na presente divulgação, o termo “alquenila opcionalmente substituída” como usado aqui por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a uma alquenila que não está substituída ou está substituída por um, dois ou três substituintes independentemente selecionados do grupo consistindo em halo, nitro, ciano, hidróxi, amino, alquilamino, dialquilamino, haloalquila, hidróxialquila, alcóxi, haloalcóxi, arilóxi, aralquilóxi, alquiltio, carboxamido, sulfonamido, alquilcarbonila, arilcarbonila, alquilsulfonila, arilsulfonila, carbóxi, carbóxialquila, alquila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, alquenila, alquinila, arila opcionalmente substituída, heteroarila e heterociclo opcionalmente substituído.
[0102]Na presente divulgação, o termo “alquinila” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a uma alquila contendo uma a três ligações triplas carbono-carbono. Em uma modalidade, a alquinila tem uma ligação tripla carbono-com-carbono. Em outra modalidade, a alquinila é uma alquinila C2-6. Em outra modalidade, a alquinila é uma alquinila C2-4. Grupos alquinila exemplificativos não limitantes incluem grupos etinila, propinila, butinila, 2-butinila, pentinila e hexinila.
[0103]Na presente divulgação, o termo “alquinila opcionalmente substituída” como usado aqui por si próprio ou como parte se refere a uma alquinila que não está substituída ou está substituída por um, dois ou três substituintes independentemente selecionados do grupo consistindo em halo, nitro, ciano, hidróxi, amino, alquilamino, dialquilamino, haloalquila, hidróxialquila, alcóxi, haloalcóxi, arilóxi, aralquilóxi, alquiltio, carboxamido, sulfonamido, alquilcarbonila, arilcarbonila, alquilsulfonila, arilsulfonila, carbóxi, carbóxialquila, alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila, alquinila, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída e heterociclo.
[0104]Na presente divulgação, o termo “haloalquila” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a uma alquila substituída por um ou mais átomos de flúor, cloro, bromo e/ou iodo. Em uma modalidade, o grupo alquila está substituído por um, dois ou três átomos de flúor e/ou cloro. Em outra modalidade, o grupo haloalquila é um grupo haloalquila C1-4. Grupos haloalquila exemplificativos não limitantes incluem grupos fluorometila, 2-fluoroetila, difluorometila, trifluorometila, pentafluoroetila, 1,1-difluoroetila, 2,2-difluoroetila, 2,2,2-trifluoroetila, 3,3,3- trifluoropropila, 4,4,4-trifluorobutila e triclorometila.
[0105]Na presente divulgação, o termo “alcóxi” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a uma alquila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, alquenila opcionalmente substituída ou alquinila opcionalmente substituída anexada a um átomo de oxigênio terminal. Em uma modalidade, o alcóxi é uma alquila opcionalmente substituída anexada a um átomo de oxigênio terminal. Em uma modalidade, o grupo alcóxi é uma alquila C1-6 anexada a um átomo de oxigênio terminal. Em outra modalidade, o grupo alcóxi é uma alquila C1-4 anexada a um átomo de oxigênio terminal. Grupos alcóxi exemplificativos não limitantes incluem metóxi, etóxi e terc-butóxi.
[0106]Na presente divulgação, o termo “alquiltio” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a uma alquila opcionalmente substituída anexada a um átomo de enxofre terminal. Em uma modalidade, o grupo alquiltio é um grupo alquiltio C1-4. Grupos alquiltio exemplificativos não limitantes incluem -SCH3 e - SCH2CH3.
[0107]Na presente divulgação, o termo “haloalcóxi” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a uma haloalquila anexada a um átomo de oxigênio terminal. Grupos haloalcóxi exemplificativos não limitantes incluem fluorometóxi, difluorometóxi, trifluorometóxi e 2,2,2-trifluoroetóxi.
[0108]Na presente divulgação, o termo “heteroarila” se refere a sistemas anelares aromáticos monocíclicos e bicíclicos não substituídos tendo 5 a 14 átomos anelares, i.e., uma heteroarila com 5 a 14 membros, em que pelo menos um átomo de carbono de um dos anéis está substituído por um heteroátomo independentemente selecionado do grupo consistindo em oxigênio, nitrogênio e enxofre. Em uma modalidade, a heteroarila contém 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos independentemente selecionados do grupo consistindo em oxigênio, nitrogênio e enxofre. Em uma modalidade, a heteroarila tem três heteroátomos. Em outra modalidade, a heteroarila tem dois heteroátomos. Em outra modalidade, a heteroarila tem um heteroátomo. Em outra modalidade, a heteroarila é uma heteroarila com 5 a 10 membros. Em outra modalidade, a heteroarila é uma heteroarila com 5 ou 6 membros. Em outra modalidade, a heteroarila tem 5 átomos anelares, p.ex., tienila, uma heteroarila com 5 membros tendo quatro átomos de carbono e um átomo de enxofre. Em outra modalidade, a heteroarila tem 6 átomos anelares, p.ex., piridila, uma heteroarila com 6 membros tendo cinco átomos de carbono e um átomo de nitrogênio. Grupos heteroarila exemplificativos não limitantes incluem tienila, benzo[b]tienila, nafto[2,3- b]tienila, tiantrenila, furila, benzofurila, piranila, isobenzofuranila, benzo-oxazonila, cromenila, xantenila, 2H-pirrolila, pirrolila, imidazolila, pirazolila, piridila, pirazinila, pirimidinila, piridazinila, isoindolila, 3H-indolila, indolila, indazolila, purinila, isoquinolila, quinolila, ftalazinila, naftiridinila, cinolinila, quinazolinila, pteridinila, 4aH-carbazolila, carbazolila, β-carbolinila, fenantridinila, acridinila, pirimidinila, fenantrolinila, fenazinila, tiazolila, isotiazolila, fenotiazolila, isoxazolila, furazanila e fenoxazinila. Em uma modalidade, a heteroarila é selecionada do grupo consistindo em tienila (p.ex., tien-2- ila e tien-3-ila), furila (p.ex., 2-furila e 3-furila), pirrolila (p.ex., 1H-pirrol-2-ila e 1H-pirrol- 3-ila), imidazolila (p.ex., 2H-imidazol-2-ila e 2H-imidazol-4-ila), pirazolila (p.ex., 1H- pirazol-3-ila, 1H-pirazol-4-ila e 1H-pirazol-5-ila), piridila (p.ex., piridin-2-ila, piridin-3-ila e piridin-4-ila), pirimidinila (p.ex., pirimidin-2-ila, pirimidin-4-ila e pirimidin-5-ila), tiazolila (p.ex., tiazol-2-ila, tiazol-4-ila e tiazol-5-ila), isotiazolila (p.ex., isotiazol-3-ila, isotiazol-4-ila e isotiazol-5-ila), oxazolila (p.ex., oxazol-2-ila, oxazol-4-ila e oxazol-5- ila), isoxazolila (p.ex., isoxazol-3-ila, isoxazol-4-ila e isoxazol-5-ila) e indazolila (p.ex., 1H-indazol-3-ila). O termo “heteroarila” se destina também a incluir possíveis N- óxidos. Um N-óxido exemplificativo não limitante é N-óxido de piridila.
[0109]Em uma modalidade, a heteroarila é uma heteroarila com 5 ou 6 membros. Em uma modalidade, a heteroarila é uma heteroarila com 5 membros, i.e., a heteroarila é um sistema anelar aromático monocíclico tendo 5 átomos anelares em que pelo menos um átomo de carbono está substituído por um heteroátomo independentemente selecionado de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Grupos heteroarila com 5 membros exemplificativos não limitantes incluem tienila, furila, pirrolila, oxazolila, pirazolila, imidazolila, tiazolila, isotiazolila e isoxazolila. Em outra modalidade, a heteroarila é uma heteroarila com 6 membros, p.ex., a heteroarila é um sistema anelar aromático monocíclico tendo 6 átomos anelares em que pelo menos um átomo de carbono está substituído por um átomo de nitrogênio. Grupos heteroarila com 6 membros exemplificativos não limitantes incluem piridila, pirazinila, pirimidinila e piridazinila.
[0110]Na presente divulgação, o termo “heteroarila opcionalmente substituída” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a uma heteroarila que não está substituída ou está substituída por um, dois, três ou quatro substituintes, independentemente selecionados do grupo consistindo em halo, nitro, ciano, hidróxi, amino, alquilamino, dialquilamino, haloalquila, hidróxialquila, alcóxi, haloalcóxi, arilóxi, aralquilóxi, alquiltio, carboxamido, sulfonamido, alquilcarbonila, arilcarbonila, alquilsulfonila, haloalquilsulfonila, cicloalquilsulfonila, (cicloalquil)alquilsulfonila, arilsulfonila, heteroarilsulfonila, carbóxi, carbóxialquila, alquila opcionalmente substituída, alquenila, alquinila, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída, heterociclo opcionalmente substituído, alcóxialquila, (amino)alquila, (carboxamido)alquila e (heterociclo)alquila. Em uma modalidade, a heteroarila opcionalmente substituída tem um substituinte. Em outra modalidade, a heteroarila opcionalmente substituída não está substituída. Qualquer átomo de carbono ou nitrogênio disponível pode estar substituído. O termo heteroarila opcionalmente substituída inclui grupos heteroarila tendo um grupo cicloalquila opcionalmente substituído fundido ou heterociclo opcionalmente substituído fundido. Uma heteroarila opcionalmente substituída tendo um grupo cicloalquila opcionalmente substituído fundido ou heterociclo opcionalmente substituído fundido pode estar anexada ao restante da molécula em qualquer átomo de carbono disponível no anel de heteroarila.
[0111]Na presente divulgação, o termo “heterociclo” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a grupos cíclicos saturados e parcialmente insaturados, p.ex., contendo uma ou duas ligações duplas, não substituídos contendo um, dois ou três anéis tendo de três a quatorze membros anelares, i.e., um heterociclo com 3 a 14 membros, em que pelo menos um átomo de carbono de um dos anéis está substituído por um heteroátomo. Cada heteroátomo é independentemente selecionado do grupo consistindo em átomos de oxigênio, enxofre, incluindo sulfóxido e sulfona e/ou nitrogênio, que pode ser oxidado ou quaternizado. O termo “heterociclo” inclui grupos em que um anel -CH2- está substituído por um -C(=O)-, por exemplo, grupos ureido cíclicos tais como 2-imidazolidinona e grupos amida cíclicos tais como β-lactama, Y—lactama, δ-lactama, ε-lactama e piperazin-2-ona. O termo “heterociclo” inclui também grupos tendo grupos arila opcionalmente substituídos fundidos, p.ex., indolinila ou croman-4-ila. Em uma modalidade, o grupo heterociclo é um heterociclo C4-6 , i.e., um grupo cíclico com 4, 5 ou 6 membros, contendo um anel e um ou dois átomos de oxigênio e/ou nitrogênio. Em uma modalidade, o grupo heterociclo é um heterociclo C4-6 contendo um anel e um átomo de nitrogênio. O heterociclo pode estar opcionalmente ligado ao resto da molécula através de qualquer átomo de carbono ou nitrogênio disponível. Grupos heterociclo exemplificativos não limitantes incluem azetidinila, dioxanila, tetra-hidropiranila, 2-oxopirrolidin-3-ila, piperazin-2-ona, piperazina-2,6-diona, 2-imidazolidinona, piperidinila, morfolinila, piperazinila, pirrolidinila e indolinila.
[0112]Na presente divulgação, o termo “heterociclo opcionalmente substituído” como usado aqui por si próprio ou parte de outro grupo se refere a um heterociclo que não está substituído ou está substituído por um, dois, três ou quatro substituintes independentemente selecionados do grupo consistindo em halo, nitro, ciano, hidróxi, amino, alquilamino, dialquilamino, haloalquila, hidróxialquila, alcóxi, haloalcóxi, arilóxi, aralquilóxi, alquiltio, carboxamido, sulfonamido, alquilcarbonila, cicloalquilcarbonila, alcóxicarbonila, CF3C(=O)-, arilcarbonila, alquilsulfonila, arilsulfonila, carbóxi, carbóxialquila, alquila, alquila opcionalmente substituída, alquenila, alquinila, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída, heterociclo opcionalmente substituído, alcóxialquila, (amino)alquila, (carboxamido)alquila ou (heterociclo)alquila. A substituição pode ocorrer em qualquer átomo de carbono ou nitrogênio disponível ou ambos.
[0113]Na presente divulgação, o termo “amino” como usado pro si próprio ou como parte de outro grupo se refere a um radical da fórmula -NR22aR22b, em que R22a e R22b são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, alquila opcionalmente substituída e aralquila ou R22a e R22b são tomados em conjunto com um heterociclo opcionalmente substituído com 3 a 8 membros. Grupos amino exemplificativos não limitantes incluem -NH2 e -N(H)(CH3).
[0114]Na presente divulgação, o termo “carboxamido” como usado pro si próprio ou como parte de outro grupo se refere a um radical da fórmula - C(=O)NR23aR23b, em que R23a e R23b são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, hidróxialquila e arila opcionalmente substituída, heterociclo opcionalmente substituído e heteroarila opcionalmente substituída ou R23a e R23b são tomados em conjunto com o nitrogênio ao qual estão anexados formam um grupo heterociclo opcionalmente substituído com 3 a 8 membros. Em uma modalidade, R23a e R23b são cada um independentemente hidrogênio ou alquila opcionalmente substituída. Em uma modalidade, R23a e R23b são tomados em conjunto para, tomados em conjunto com o nitrogênio ao qual estão anexados, formarem um grupo heterociclo opcionalmente substituído com 3 a 8 membros. Grupos carboxamido exemplificativos não limitantes incluem -CONH2, - CON(H)CH3 e -CON(CH3)2.
[0115]Na presente divulgação, o termo “alcóxicarbonila” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a um grupo carbonila, i.e., -C(=O)-, substituído por um alcóxi. Em uma modalidade, o alcóxi é um alcóxi C1-4. Grupos alcóxicarbonila exemplificativos não limitantes incluem -C(=O)OMe, -C(=O)OEt e - C(=O)OtBu.
[0116]Na presente divulgação, o termo “carbóxi” como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a um radical da fórmula -CO2H.
[0117]Na presente divulgação, o termo "maleimida" como usado por si próprio ou como parte de outro grupo se refere a:
[0118]Na presente divulgação, o termo "succinamida" como usado como parte de um ligante clivável se refere a:
[0119]Na presente divulgação, o termo "succinamida hidrolisada" como usado como parte de um ligante clivável se refere a:
[0120]Na presente divulgação, o termo "amida" como usado como parte de um ligante clivável se refere a:
[0121]Na presente divulgação, o termo "tioureia" como usado como parte de um ligante clivável se refere a:
[0122]Na presente divulgação, o termo "tioéter" como usado como parte de um ligante clivável se refere a: .
[0123]Na presente divulgação, o termo "oxima" como usado como parte de um ligante clivável se refere a:
[0124]Na presente divulgação, o termo "grupo autoimolante" como usado como parte de um ligante clivável se refere a fração química bifuncional que é capaz de ligar covalentemente duas frações químicas espaçadas em uma molécula tripartida normalmente estável, pode liberar uma das frações químicas espaçadas da molécula tripartida por meio de clivagem enzimática; e, após clivagem enzimática, pode espontaneamente clivar do restante da molécula para liberar a outra das frações químicas espaçadas, p.ex., um glucocorticoesteroide. Em algumas modalidades, um grupo autoimolante compreende uma unidade de p-aminobenzila. Em algumas tais modalidades, um álcool de p-aminobenzila está anexado a uma unidade de aminoácido através de uma ligação de amida e um carbamato, metilcarbamato ou carbonato é preparada entre o álcool de benzila e o fármaco (Hamann et al. (2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15: 1087-1103). Em algumas modalidades, o grupo autoimolante é p-aminobenzilóxicarbonila (PAB).
[0125]Na presente divulgação, o termo “grupo protetor” ou “PG” se refere a grupo que bloqueia, i.e., protege, a funcionalidade de amina enquanto são levadas a cabo reações em outros grupos funcionais ou partes da molécula. Os peritos na técnica serão familiares com a seleção, anexação e clivagem de grupos protetores de amina e apreciarão que muitos grupos protetores diferentes são conhecidos na técnica, estando a adequabilidade de um grupo protetor ou outro dependente do esquema sintético o particular planeado. Tratados sobre o assunto estão disponíveis para consulta, tais como Wuts, P. G. M.; Greene, T. W., "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis", 4a Ed., J. Wiley & Sons, NY, 2007. Grupos protetores adequados incluem o grupo carbobenzilóxi (Cbz), terc-butilóxicarbonila (BOC), 9- fluorenilmetilóxicarbonila (FMOC) e benzila (Bn). Em uma modalidade, o grupo protetor é o grupo BOC.
[0126]Os compostos divulgados aqui contêm centros assimétricos e dão assim origem a enantiômeros, diastereoisômeros e outras formas estereoisomêricas. A presente divulgação se destina a englobar o uso de tais formas possíveis, bem como suas formas racêmicas e resolvidas e suas misturas. Os enantiômeros individuais podem ser separados de acordo com métodos conhecidos na técnica tendo em vista a presente divulgação. Quando os compostos descritos aqui contêm ligações duplas olefínicas ou outros centros de assimetria geométrica e, a não ser que especificado de outro modo, se pretende que incluam ambos os isômeros geométricos E e Z. Todos os tautômeros se destinam também a estar englobados pela presente divulgação.
[0127]A presente divulgação engloba a preparação e uso de solvatos dos compostos divulgados aqui. Os solvatos não alteram tipicamente significativamente a atividade fisiológica ou toxicidade dos compostos e, como tal, podem funcionar como equivalentes farmacológicos. O termo “solvato” como usado aqui é uma combinação, associação física e/ou solvatação de um composto da presente divulgação com uma molécula de solvente tal como, p.ex., um dissolvato, monossolvato ou hemissolvato, onde a razão de molécula de solvente em relação ao composto da presente divulgação é cerca de 2:1, cerca de 1:1 ou cerca de 1:2, respectivamente. Esta associação física envolve graus variáveis de ligação iônica e covalente, incluindo ligação de hidrogênio. Em certos casos, o solvato pode ser isolado, tal como quando uma ou mais moléculas de solvente estão incorporadas nos látices de cristal de um sólido cristalino. Assim, “solvato” engloba solvatos tanto de fase em solução como isoláveis. Os compostos divulgados aqui podem estar presentes como formas solvatadas com um solvente farmaceuticamente aceitável, tal como água, metanol, etanol e similares, e se pretende que a divulgação inclua formas tanto solvatadas como não solvatadas de compostos divulgados aqui. Um tipo de solvato é um hidrato. Um “hidrato” se relaciona com um subgrupo particular de solvatos onde a molécula de solvente é água. Os solvatos podem funcionar tipicamente como equivalentes farmacológicos. A preparação de solvatos é conhecida na técnica. Ver, por exemplo, M. Caira et al., J. Pharmaceut. Sci., 93 (3): 601-611 (2004), que descreve a preparação de solvatos de fluconazol com acetato de etila e com água. A preparação similar de solvatos, hemissolvatos, hidratos e similares é descrita por E.C. van Tonder et al., AAPS Pharm. Sci. Tech., 5 (1): Artigo 12 (2004) e A.L. Bingham et al., Chem. Commun. 603-604 (2001). Um processo não limitante, típico de preparação de um solvato envolveria dissolução de um composto divulgado aqui em um solvente desejado (orgânico, água ou uma sua mistura) a temperaturas acima de 20 °C a cerca de 25 °C, depois resfriamento da solução a uma taxa suficiente para formar cristais e isolamento dos cristais por métodos conhecidos, p.ex., filtração. Técnicas analíticas tais como espectroscopia de infravermelhos podem ser usadas para confirmar a presença do solvente em um cristal do solvato.
[0128]A presente divulgação engloba a preparação e uso de sais dos compostos divulgados aqui, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos. Exemplos de sais de adição farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de adição de ácidos e sais básicos inorgânicos e orgânicos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a, sais de metal tais como sal de sódio, sal de potássio, sal de césio e similares; metais alcalinoterrosos tais como sal de cálcio, sal de magnésio e similares; sais de amina orgânica tais como sal de trietilamina, sal de piridina, sal de picolina, sal de etanolamina, sal de trietanolamina, sal de diciclo- hexilamina, sal de N,N'-dibenziletilenodiamina e similares; sais de ácido inorgânico tais como hidrocloreto, hidrobrometo, fosfato, sulfato e similares; sais de ácido orgânico tais como citrato, lactato, tartarato, maleato, fumarato, mandelato, acetato, dicloroacetato, trifluoroacetato, oxalato, formato e similares; sulfonatos tais como metanossulfonato, benzenossulfonato, p-toluenossulfonato e similares; e sais de aminoácido tais como arginato, asparginato, glutamato e similares.
[0129]Os sais de adição de ácidos podem ser formados por mistura de uma solução do composto particular divulgado com uma solução de um ácido não tóxico farmaceuticamente aceitável tal como ácido clorídrico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido acético, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido carbônico, ácido fosfórico, ácido oxálico, ácido dicloroacético ou similares. Os sais básicos podem ser formados por mistura de uma solução do composto da presente divulgação com uma solução de uma base não tóxica farmaceuticamente aceitável tal como hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de colina, carbonato de sódio e similares.
[0130]Como usadas na presente divulgação e reivindicações, as formas singulares "um", “uma” e "o/a" incluem formas plurais a não ser que o contexto dite claramente de outro modo.
[0131]É entendido que, sempre que modalidades sejam descritas aqui com a linguagem “compreendendo”, modalidades de outro modo análogas descritas em termos de “consistindo em” e/ou “consistindo essencialmente em” são também proporcionadas.
[0132]O termo “e/ou” como usado em uma frase tal como “A e/ou B” aqui se destina a incluir ambos “A e B”, “A ou B”, “A” e “B”. Do mesmo modo, o termo “e/ou” como usado em uma frase tal como “A, B e/ou C” se destinam a englobar cada uma das seguintes modalidades: A, B e C; A, B ou C; A ou C; A ou B; B ou C; A e C; A e B; B e C; A (sozinho); B (sozinho); e C (sozinho). II.Proteínas para ligação a agonistas de receptores de glucocorticoides
[0133]A presente divulgação proporciona agentes imunoconjugados contendo agonistas de receptores de glucocorticoides ligados a proteínas, por exemplo, anticorpos ou seus fragmentos de ligação ao antígeno e proteínas receptoras solúveis. Em algumas modalidades, o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno é humano, humanizado, quimérico ou murino. Em algumas modalidades, a proteína, p.ex., anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou proteína receptora solúvel, pode se ligar a um alvo na superfície de uma célula e se torna internalizada.
[0134]A presente divulgação proporciona também imunoconjugados contendo agonistas de receptores de glucocorticoides ligados a proteínas anti-TNF alfa. Em certas modalidades, as proteínas anti-TNF alfa são anticorpos ou seus fragmentos de ligação ao antígeno. Em certas modalidades, as proteínas anti-TNF alfa são anticorpos ou seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam a TNF alfa (p.ex., TNF alfa solúvel e/ou TNF alfa ligado à membrana). Em certas modalidades, as proteínas anti-TNF alfa são proteínas receptoras de TNF solúvel, p.ex., proteínas receptoras de TNF solúvel fundidas a um domínio constante de cadeia pesada ou seu fragmento tal como um Fc. Em algumas modalidades, a proteína anti-TNF alfa, p.ex., anticorpo anti-TNF, seu fragmento de ligação ao antígeno ou receptor de TNF solúvel pode se ligar a um TNF alfa na superfície de uma célula e se torna internalizada. Por exemplo, US 2014/0294813, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade, divulga proteínas anti-TNF que exibem internalização celular após ligação a TNF humano da superfície de células.
[0135]Em certas modalidades, os anticorpos ou seus fragmentos de ligação ao antígeno se ligam a TNF-alfa humano e/ou de camundongo. Anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam a TNF-alfa são conhecidos na técnica.
[0136]A sequência de aminoácidos de comprimento total para TNF alfa humano ligado à membrana é:
[0137]MSTESMIRDVELAEEALPKKTGGPQGSRRCLFLSLFSFLIVAGATTLF CLLHFGVIGPQREEFPRDLSLISPLAQAVRSSSRTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQW LNRRANALLANGVELRDNQLVVPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVS YQTKVNLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGVFQLEKGDRLSAEINRPDYLD FAESGQVYFGIIAL (SEQ ID NO:1). TNF alfa humano solúvel contém os aminoácidos 77-233 de SEQ ID NO:1. A sequência de aminoácidos de comprimento total para TNF- alfa murino ligado à membrana é: MSTESMIRDVELAEEALPQKMGGFQNSRRCLCLSLFSFLLVAGATTLFCLL NFGVIGPQRDEKFPNGLPLISSMAQTLTLRSSSQNSSDKPVAHVVANHQVEEQLEW LSQRANALLANGMDLKDNQLVVPADGLYLVYSQVLFKGQGCPDYVLLTHTVSRFAI SYQEKVNLLSAVKSPCPKDTPEGAELKPWYEPIYLGGVFQLEKGDQLSAEVNLPKY LDFAESGQVYFGVIAL (SEQ ID NO:2). TNF alfa murino solúvel contém os aminoácidos 80-235 de SEQ ID NO:2.
[0138]Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TNF-alfa ou seu fragmento de ligação ao antígeno se liga a TNF-alfa humano. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TNF-alfa ou seu fragmento de ligação ao antígeno é humano, humanizado ou quimérico.
[0139]Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TNF-alfa ou seu fragmento de ligação ao antígeno se liga a TNF-alfa murino. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TNF-alfa ou seu fragmento de ligação ao antígeno é murino.
[0140]Em certas modalidades, o anticorpo anti-TNF-alfa ou fragmento de ligação ao antígeno tem um ou mais dos seguintes efeitos: neutraliza a citotoxicidade de TNF-alfa humano em um ensaio L919 in vitro com uma IC50 de 1X10-7 M ou menor; bloqueia a interação de TNF-alfa com os receptores da superfície de células p55 e p75; e/ou lisa células expressando TNF da superfície in vitro na presença de complemento.
[0141]Em certas modalidades, o anticorpo anti-TNF-alfa ou fragmento de ligação ao antígeno não se liga a TNF-beta.
[0142]Os anticorpos anti-TNF-alfa e seus fragmentos de ligação ao antígeno incluem, por exemplo, adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab e golimumab. Anticorpos anti-TNF-alfa adicionais e fragmentos de ligação ao antígeno são proporcionados, por exemplo, em WO 2013/087912, WO 2014/152247 e WO 2015/073884, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0143]Adalimumab é descrito na Patente dos E.U.A. No. 6,258,562, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Infliximab é descrito na Patente dos E.U.A. No. 5,656,272, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Certolizumab é discutido em WO 01/94585, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Afelimomab (também conhecido como MAK195) é discutido em Vincent, Int. J. Clin. Pract. 54: 190-193 (2000), que é aqui incorporado por referência na sua totalidade. Ozoralizumab (também conhecido como ATN-103) é um nanocorpo. Contém três regiões variáveis de cadeia pesada fundidas por ligantes de GlySer. As regiões variáveis 1 e 3 são idênticas e ozoralizumab não contém uma cadeia pesada. Ozoralizumab é discutido em WO 2012/131053, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Placulumab (também conhecido como CEP-37247) é um anticorpo de domínio consistindo em um dímero de VL-pCH1-CH2- CH3 ou [V-kappa]2-Fc e é discutido em Gay et al., Mabs 2: 625-638 (2010), que é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Golimumab (também conhecido como CNTO 148) é discutido em WO2013/087912 e sequências são proporcionadas em GenBank: DI496971.1 e GenBank DI 496970.1, cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade.
[0144]Os anticorpo anti-TNF-alfa e seus fragmentos de ligação ao antígeno incluem também anticorpos e seus fragmentos de ligação ao antígeno que inibem competitivamente a ligação de adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab ou golimumab a TNF-alfa. Os anticorpo anti-TNF-alfa e seus fragmentos de ligação ao antígeno incluem também anticorpos e seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam ao mesmo epítopo de TNF-alfa que adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab ou golimumab.
[0145]Em certas modalidades, o anticorpo anti-TNF-alfa ou seu fragmento de ligação ao antígeno inibe competitivamente a ligação de adalimumab a TNF-alfa. Em certas modalidades, o anticorpo anti-TNF-alfa ou seu fragmento de ligação ao antígeno se liga ao mesmo epítopo de TNF-alfa que adalimumab. Em certas modalidades, o anticorpo anti-TNF-alfa ou seu fragmento de ligação ao antígeno é adalimumab ou um seu fragmento de ligação ao antígeno. Em certas modalidades, o anticorpo anti-TNF-alfa ou seu fragmento de ligação ao antígeno é adalimumab.
[0146]Em certas modalidades, um anticorpo anti-TNF-alfa ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende sequências de adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab ou golimumab, p.ex., as regiões determinadoras da complementaridade (CDRs), o domínio pesado variável (VH) e/ou o domínio leve variável (VL). Sequências de anticorpos anti-TNF-alfa ou seus fragmentos de ligação ao antígeno exemplificativos são proporcionadas nas Tabelas 1-6. Tabela 1: Sequências c e aminoácidos de CDR de cadeia pesada variável:
Tabela 2: Sequências de aminoácidos de CDR de cadeia leve variável Tabela 3: Sequências de aminoácidos de cadeia pesada variável
Tabela 4: Sequências de aminoácidos de cadeia leve variável
Tabela 5: Sequências de aminoácidos de cadeia pesada de comprimento total
Tabela 6: Sequências de aminoácidos de cadeia leve de comprimento total
[0147]São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 80% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente. Ou são também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 85% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 85% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 90% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 90% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 96% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 96% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 97% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 97% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 98% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 98% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 99% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 99% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente.
[0148]São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 80% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 5 e 32-34; 7-9 e 3537; 10 ou 13, 11, 12 e 38-40; 14-16 e 41-43; 17-19 e 44-46; ou 29-31 e 47-49, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 80% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 94 e 32-34; 7-9 e 35-37; ou 17-19 e 4446, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 85% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 5 e 32-34; 7-9 e 35-37; 10 ou 13, 11, 12 e 38-40; 14-16 e 41-43; 17-19 e 44-46; ou 29-31 e 47-49, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 85% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 94 e 32-34; 7-9 e 3537; ou 17-19 e 44-46, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 90% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 5 e 32-34; 7-9 e 35-37; 10 ou 13, 11, 12 e 38-40; 14-16 e 41-43; 17-19 e 4446; ou 29-31 e 47-49, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 90% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 94 e 32-34; 7-9 e 35-37; ou 17-19 e 44-46, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 5 e 32-34; 7-9 e 35-37; 10 ou 13, 11, 12 e 38-40; 14-16 e 41-43; 17-19 e 4446; ou 29-31 e 47-49, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 95% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 94 e 32-34; 7-9 e 35-37; ou 17-19 e 44-46, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 96% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 5 e 32-34; 7-9 e 35-37; 10 ou 13, 11, 12 e 38-40; 14-16 e 41-43; 17-19 e 4446; ou 29-31 e 47-49, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 96% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 94 e 32-34; 7-9 e 35-37; ou 17-19 e 44-46, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 97% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 97% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 94 e 32-34; 7-9 e 35-37; ou 17-19 e 44-46, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 98% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 5 e 32-34; 7-9 e 3537; 10 ou 13, 11, 12 e 38-40; 14-16 e 41-43; 17-19 e 44-46; ou 29-31 e 47-49, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 98% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 94 e 32-34; 7-9 e 35-37; ou 17-19 e 4446, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 99% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 51 e 60, 52 e 61, 53 e 62, 54 e 63 ou 58 e 65, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 5 e 32-34; 7-9 e 35-37; 10 ou 13, 11, 12 e 38-40; 14-16 e 41-43; 17-19 e 44-46; ou 29-31 e 47-49, respectivamente. São também proporcionados anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um VH e um VL tendo pelo menos 99% de identidade de sequências com SEQ ID NOs: 50 e 59, 91 e 60 ou 54 e 92, respectivamente, e contêm as CDRs de SEQ ID NOs: 3 ou 6, 4, 94 e 32-34; 7-9 e 3537; ou 17-19 e 44-46, respectivamente.
[0149]Em certas modalidades, o anticorpo anti-TNF alfa ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende as CDRs de SEQ ID NOs: 3-5 e 32-34 ou de SEQ ID NOs: 6, 4, 5 e 32-34. Em certas modalidades, o anticorpo anti-TNF alfa ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende as CDRs de SEQ ID NOs: 3, 4, 94 e 32-34 ou de SEQ ID NOs: 6, 4, 94 e 32-34. Em certas modalidades, o anticorpo anti- TNF alfa ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende o VH de SEQ ID NO:50 e/ou o VL de SEQ ID NO:59. Em certas modalidades, o anticorpo anti-TNF alfa compreende a cadeia pesada de SEQ ID NO: 66 e/ou a cadeia leve de SEQ ID NO:75.
[0150]O anticorpo contra F alfa compreende a cadeia pesada SEQ ID NO:74 e/ou a cadeia leve de SEQ ID NO:82.
[0151]Em certos aspectos são proporcionados aqui anticorpos ou seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente a TNF-alfa e compreendem CDRs de VL de Chothia de um VL de adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab ou golimumab. Em certos aspectos são proporcionados aqui anticorpos ou seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente a TNF-alfa e compreendem CDRs de VH de Chothia de um VH de adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab ou golimumab. Em certos aspectos são proporcionados aqui anticorpos ou seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente a TNF-alfa e compreendem CDRs de VL de Chothia de um VL de adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab ou golimumab e compreendem as CDRs de VH de Chothia de um VH de adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab ou golimumab. Em certas modalidades, os anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente a TNF-alfa compreendem uma ou mais CDRs, nas quais as CDRs de Chothia e Kabat têm a mesma sequência de aminoácidos. Em certas modalidades são proporcionados aqui anticorpos ou seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente a TNF-alfa e compreendem combinações de CDRs de Kabat e CDRs de Chothia.
[0152]Em uma modalidade particular são proporcionados aqui anticorpos ou seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente a TNF-alfa e compreendem CDRs de adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab ou golimumab como determinado pelo sistema de numeração de IMGT, por exemplo, como descrito em Lefranc M-P (1999) supra e Lefranc M-P et al., (1999) supra).
[0153]Em uma modalidade particular são proporcionados aqui anticorpos que se ligam especificamente a TNF-alfa e compreendem CDRs de adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab ou golimumab como determinado pelo método em MacCallum RM et al.
[0154]Em uma modalidade particular são proporcionados aqui anticorpos ou seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente a TNF-alfa e compreendem CDRs de adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab ou golimumab como determinado pelo esquema de numeração de AbM.
[0155]Em uma modalidade particular são proporcionados aqui anticorpos ou seus fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente a CD163.
[0156]Os anticorpos monoclonais podem ser preparados usando métodos de hibridoma, tais como aqueles descritos por Kohler e Milstein (1975) Nature 256: 495. Usando o método de hibridoma, um camundongo, hamster ou outro animal hospedeiro apropriado é imunizado para provocar a produção por linfócitos de anticorpos que se ligarão especificamente a um antígeno imunizante. Os linfócitos podem ser também imunizados in vitro. Após imunização, os linfócitos são isolados e fundidos com uma linha de células de mieloma adequada usando, por exemplo, polietilenoglicol, para formar células de hibridoma que podem ser depois separadas por seleção de linfócitos não fundidos e células de mieloma. Os hibridomas que produzem anticorpos monoclonais dirigidos especificamente contra um antígeno escolhido como determinado por imunoprecipitação, imunotransferência ou por um ensaio de ligação in vitro (p.ex., radioimunoensaio (RIA); ensaio imunossorvente ligado a enzimas (ELISA)) podem ser depois propagados cultura in vitro usando métodos padrão (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, 1986) ou in vivo como tumores de ascites em um animal. Os anticorpos monoclonais podem ser depois purificados a partir do meio de cultura ou fluido de ascites como descrito para anticorpo policlonais.
[0157]Alternativamente, os anticorpos monoclonais podem ser também preparados usando métodos de DNA recombinante como descrito na Patente dos E.U.A. 4,816,567. Os polinucleotídeos codificando um anticorpo monoclonal são isolados a partir de células B maduras ou células de hibridoma, tal como por RT-PCR usando iniciadores de oligonucleotídeos que amplificam especificamente os genes codificando as cadeias pesada e leve do anticorpo e a sua sequência é determinada usando procedimentos convencionais. Os polinucleotídeos isolados codificando as cadeias pesada e leve são depois clonados em vetores de expressão adequados, que, quando transferidos para células hospedeiras tais como células de E. coli, células COS de símio, células do ovário do hamster chinês (CHO) ou células de mieloma que não produzem de outro modo proteína de imunoglobulina, anticorpos monoclonais são gerados pelas células hospedeiras. Igualmente, os anticorpos monoclonais recombinantes ou seus fragmentos da espécie desejada podem ser isolados a partir de bibliotecas de exibição em fagos expressando CDRs da espécie descrita como descrito (McCafferty et al., 1990, Nature, 348: 552-554; Clackson et al., 1991, Nature, 352: 624-628; e Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222: 581-597).
[0158]O(s) polinucleotídeo(s) codificando um anticorpo monoclonal pode(m) ser adicionalmente modificado(s) em um número de maneiras diferentes usando tecnologia de DNA recombinante para gerar anticorpos alternativos. Em algumas modalidades, os domínios constantes das cadeias leve e pesada de, por exemplo, um anticorpo monoclonal de camundongo podem estar substituídas 1) por aquelas regiões de, por exemplo, um anticorpo humano para gerar um anticorpo quimérico ou 2) por um polipeptídeo diferente de imunoglobulina para gerar um anticorpo de fusão. Em algumas modalidades, as regiões constantes são truncadas ou removidas para gerar o fragmento de anticorpo desejado de um anticorpo monoclonal. A mutagênese sítio-dirigida ou de elevada densidade da região variável pode ser usada para otimizar a especificidade, afinidade, etc. de um anticorpo monoclonal.
[0159]Em algumas modalidades, o anticorpo monoclonal contra o TNF-alfa é um anticorpo humanizado. Em certas modalidades, tais anticorpos são usados terapeuticamente para reduzir a antigenicidade e respostas de HAMA (anticorpo anticamundongo de humano) quando administrados a um sujeito humano.
[0160]Métodos para manipulação, humanização ou resurfacing de anticorpos não humanos ou humanos podem ser também usados e são bem conhecidos na técnica. Um anticorpo humanizado, resurfaced ou similarmente manipulado pode ter um ou mais resíduos de aminoácidos de uma fonte que é não humana, p.ex., mas não se limitando a, camundongo, rato, coelho, primata não humano ou outro mamífero. Estes resíduos de aminoácidos não humanos estão substituídos por resíduos que são frequentemente referidos como resíduos “importados”, que são tipicamente retirados de um domínio variável, constante ou outro “importado” de uma sequência humana conhecida.
[0161]Tais sequências importadas podem ser usadas para reduzir a imunogenicidade ou reduzir, intensificar ou modificar a ligação, afinidade, taxa de associação, taxa de dissociação, avidez, especificidade, meia-vida ou qualquer outra característica adequada, bem conhecida na técnica. Em geral, os resíduos de CDR estão diretamente e o mais substancialmente envolvidos na influência da ligação a TNF-alfa. Conformemente, parte das ou todas as sequências de CDR não humanas ou humanas são mantidas enquanto as sequências não humanas das regiões variáveis e constantes podem estar substituídas por aminoácidos humanos ou outros.
[0162]Os anticorpos podem ser também opcionalmente humanizados, resurfaced, manipulados ou anticorpos humanos manipulados com retenção de elevada afinidade pelo antígeno, p.ex., TNF-alfa, e outras propriedades biológicas favoráveis. Para se alcançar este objetivo, anticorpos humanizados (ou humanos) ou manipulados e anticorpos resurfaced podem ser opcionalmente preparados por um processo de análise das sequências originais e vários produtos humanizados e manipulados conceptuais usando modelos tridimensionais das sequências originais, manipuladas e humanizadas. Modelos tridimensionais de imunoglobulinas estão comummente disponíveis e são familiar aos peritos na técnica. Estão disponíveis programas de computador que ilustram e exibem estruturas conformacionais tridimensionais prováveis de sequências de imunoglobulinas candidatas selecionadas. A inspeção destas exibições permite análise do papel provável dos resíduos no funcionamento da sequência de imunoglobulina candidata, i.e., a análise de resíduos que influenciam a capacidade da imunoglobulina candidata de se ligar ao seu antígeno, tal como TNF-alfa. Deste modo, os resíduos de framework (FR) podem ser selecionados e combinados a partir das sequências de consenso e importadas tal que a característica do anticorpo desejada, tal como afinidade aumentada para o(s) antígeno(s) alvo(s), seja alcançada.
[0163]A humanização, resurfacing ou manipulação de anticorpos da presente divulgação pode ser realizada usando qualquer método conhecido, tal como aqueles mas não se limitando àqueles descritos em Winter (Jones et al., Nature 321: 522 (1986); Riechmann et al., Nature 332: 323 (1988); Verhoeyen et al., Science 239: 1534 (1988)), Sims et al., J. Immunol. 151: 2296 (1993); Chothia e Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901 (1987), Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89: 4285 (1992); Presta et al., J. Immunol. 151: 2623 (1993), Pat. dos E.U.A. Nos. 5,639,641, 5,723,323; 5,976,862; 5,824,514; 5,817,483; 5,814,476; 5,763,192; 5,723,323; 5,766,886; 5,714,352; 6,204,023; 6,180,370; 5,693,762; 5,530,101; 5,585,089; 5,225,539; 4,816,567; PCT/: US98/16280; US96/18978; US91/09630; US91/05939; US94/01234; GB89/01334; GB91/01134; GB92/01755; WO90/14443; WO90/14424; WO90/14430; EP 229246; 7,557,189; 7,538,195; e 7,342,110, cada um dos quais é inteiramente incorporada aqui por referência, incluindo as referências citadas aí.
[0164]Em certas modalidades alternativas, o anticorpo (p.ex., um anticorpo anti-TNFalfa) é um anticorpo humano. Os anticorpos humanos podem ser diretamente preparados usando várias técnicas conhecidas na técnica. Podem ser gerados linfócitos B humanos imortalizados imunizados in vitro ou isolados a partir de um indivíduo imunizado que produz um anticorpo dirigido contra um antígeno alvo (Ver, p.ex., Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boemer et al., 1991, J. Immunol., 147 (1): 86-95; e Patente dos E.U.A. 5,750,373). Igualmente, o anticorpo humano pode ser selecionado a partir de uma biblioteca de fagos, onde essa biblioteca de fagos expressa anticorpos humanos, como descrito, por exemplo, em Vaughan et al., 1996, Nat. Biotech., 14: 309-314, Sheets et al., 1998, Proc. Nat'l. Acad. Sci., 95: 6157-6162, Hoogenboom e Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227: 381 e Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222: 581). Técnicas para a geração e uso de bibliotecas de fagos de anticorpos são também descritas nas Patentes dos E.U.A. Nos. 5,969,108, 6,172,197, 5,885,793, 6,521,404; 6,544,731; 6,555,313; 6,582,915; 6,593,081; 6,300,064; 6,653,068; 6,706,484; and 7,264,963; e Rothe et al., 2007, J. Mol. Bio., doi:10.1016/j.jmb.2007.12.018 (cada um dos quais é incorporado por referência na sua totalidade). Estratégias de maturação por afinidade e estratégias de embaralhamento de cadeias (Marks et al., 1992, Bio/Technology 10: 779-783, incorporado na sua totalidade) são conhecidas na técnica e podem ser empregues para gerar anticorpos humanos de elevada afinidade.
[0165]Anticorpos humanizados podem ser também preparados em camundongos transgênicos contendo loci de imunoglobulina humana que são capazes após imunização de produzir o repertório total de anticorpos humanos na ausência de produção de imunoglobulina endógena. Esta abordagem é descrita nas Patentes dos E.U.A. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; e 5,661,016.
[0166]Em certas modalidade é proporcionado um fragmento de anticorpo para, por exemplo, aumentar a penetração tumoral. Várias técnicas são conhecidas para a produção de fragmentos de anticorpos. Tradicionalmente, estes fragmentos são derivados através da digestão proteolítica de anticorpos intatos (por exemplo Morimoto et al., 1993, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24: 107-117; Brennan et al., 1985, Science, 229: 81). Em certas modalidades, os fragmentos de anticorpos são produzidos recombinantemente. Fragmentos de anticorpos Fab, Fv e scFv podem ser todos expressos em e secretados a partir de E. coli ou outras células hospedeiras, permitindo assim a produção de grandes quantidades destes fragmentos. Tais fragmentos de anticorpos podem ser também isolados a partir de bibliotecas de fagos de anticorpos. O fragmento de anticorpo pode ser também anticorpos lineares como descrito na Patente dos E.U.A. 5,641,870. Outras técnicas para a produção de fragmentos de anticorpos serão aparentes ao praticante perito.
[0167]Para os propósitos da presente divulgação deve ser apreciado que os anticorpos modificados podem compreender qualquer tipo de região variável que proporcione a associação do anticorpo ao antígeno (p.ex., TNF alfa). A este respeito, a região variável pode compreender ou ser derivada de qualquer tipo de mamífero que possa ser induzido para montar uma resposta humoral e gerar imunoglobulinas contra o antígeno associado ao tumor desejado. Como tal, a região variável dos anticorpos modificados podem ter, por exemplo, origem humana, murina, de primata não humano (p.ex., macaco-cinomólogo, macacos, etc.) ou lupina. Em algumas modalidades, ambas as regiões variáveis e constantes das imunoglobulinas modificadas são humanas. Em outras modalidades, as regiões variáveis de anticorpos compatíveis (usualmente derivadas de uma fonte não humana) podem ser manipuladas ou especificamente customizadas para melhorar as propriedades de ligação ou reduzir a imunogenicidade da molécula. A este respeito, as regiões variáveis úteis na presente divulgação podem ser humanizadas ou de outro modo alteradas através da inclusão de sequências de aminoácidos importadas.
[0168]Em certas modalidades, os domínios variáveis em ambas as cadeias pesada e leve são alterados por substituição pelo menos parcial de uma ou mais CDRs e, se necessário, por substituição parcial da região de framework e mudança de sequências. Embora as CDRs possam ser derivadas de um anticorpo da mesma classe ou mesmo subclasse que o anticorpo do qual as regiões de framework são derivadas é previsto que as CDRs serão derivadas de um anticorpo de classe diferente e em certas modalidades de um anticorpo de uma espécie diferente. Pode não ser necessário substituir todas as CDRs pelas CDRs completas da região variável dadora para transferir a capacidade de ligação ao antígeno de um domínio variável para outro. Ao invés pode ser somente necessário transferir aqueles resíduos que são necessários para manter a atividade do local de ligação ao antígeno. Dadas as explicações apresentadas nas Pat. dos E.U.A. Nos. 5,585,089, 5,693,761 e 5,693,762 estará bem dentro da competência dos peritos na técnica, levando a cabo experimentação de rotina ou por teste de ensaio e erro, obter um anticorpo funcional com imunogenicidade reduzida.
[0169]As proteínas anti-TNF alfa incluem proteínas receptoras de TNF solúvel. A proteína anti-TNF alfa pode ser um receptor de TNF p75 solúvel. A proteína anti-TNF alfa pode ser um receptor de TNF p55 solúvel.
[0170]O receptor de TNF solúvel pode se ligar tanto a TNF alfa como a TNF beta. O receptor de TNF solúvel pode se ligar a TNF alfa, mas não a TNF beta.
[0171]O receptor de TNF solúvel pode inibir a ligação de TNF alfa (e opcionalmente TNF beta) a receptores de TNF da superfície de células.
[0172]O receptor de TNF solúvel pode ser etanercept.
[0173]Uma proteína anti-TNF alfa, p.ex., um receptor de TNF solúvel, pode estar fundida a um domínio constante de cadeia pesada ou seu fragmento ou uma região Fc ou seu fragmento. O fragmento de domínio constante de cadeia pesada ou fragmento Fc pode ser uma porção do domínio constante ou Fc que é capaz de se ligar ao receptor Fc. O fragmento de domínio constante de cadeia pesada ou fragmento Fc pode ser uma porção do domínio constante ou Fc que é capaz de induzir a lise de células in vitro na presença de complemento. O fragmento de domínio constante de cadeia pesada ou fragmento Fc pode ser uma porção do domínio constante ou Fc que é capaz de induzir ADCC.
[0174]O domínio constante de cadeia pesada ou seu fragmento ou região Fc ou seu fragmento pode ser um domínio constante de cadeia pesada humana ou seu fragmento ou região Fc humana ou seu fragmento. O domínio constante de cadeia pesada ou seu fragmento ou região Fc ou seu fragmento pode ser um domínio constante de cadeia pesada de IgG1 ou seu fragmento ou região Fc de IgG1 ou seu fragmento. O domínio constante de cadeia pesada ou seu fragmento ou região Fc ou seu fragmento pode ser um domínio constante de cadeia pesada de IgG1 humana ou seu fragmento ou região Fc de IgG1 humana ou seu fragmento.
[0175]Os peritos na técnica apreciarão que os anticorpos e seus fragmentos de ligação ao antígeno desta divulgação e as proteínas anti-TNF desta divulgação incluem anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno e proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel) compreendendo um ou mais dos domínios de regiões constantes, incluindo domínios que foram alterados de modo a proporcionarem características bioquímicas desejadas tais como meia-vida no soro reduzida quando em comparação com um anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou proteína anti-TNF de aproximadamente a mesma imunogenicidade compreendendo uma região constante nativa ou inalterada. Em algumas modalidades, a região constante do anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou proteína anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel) compreenderá uma região constante humana. Modificações à região constante compatíveis com esta divulgação compreendem adições, deleções ou substituições de um ou mais aminoácidos em um ou mais domínios. Isto é, o anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel) divulgados aqui podem compreender alterações ou modificações a um ou mais dos três domínios constantes de cadeia pesada (CH1, CH2 ou CH3) e/ou ao domínio constante de cadeia leve (CL). Em algumas modalidades estão contempladas regiões constantes modificadas em que um ou mais domínios estão parcialmente ou inteiramente eliminados. Em algumas modalidades, os anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel) compreenderão constructos com domínio deletado ou variantes em que o domínio CH2 foi removido (constructos ΔCH2). Em algumas modalidades, o domínio de região constante omitido estará substituído por um pequeno espaçador de aminoácidos (p.ex., 10 resíduos) que proporciona alguma da flexibilidade molecular tipicamente fornecida pela região constante ausente.
[0176]Será notado que, em certas modalidades, os anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel) podem ser manipulados para fundir o domínio CH3 diretamente à região de charneira dos respectivos anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel). Em outros constructos pode ser desejável proporcionar um espaçador de peptídeo entre a região de charneira e os domínios CH2 e/ou CH3 modificados. Por exemplo poderiam ser expressos constructos compatíveis em que o domínio CH2 foi deletado e o domínio CH3 restante (modificado ou não modificado) está unido à região de charneira com um espaçador de 5-20 aminoácidos. Um tal espaçador pode ser adicionado, por exemplo, para assegurar que os elementos reguladores do domínio constante permanecem livres e acessíveis ou que a região de charneira permanece flexível. No entanto deve ser notado que os espaçadores de aminoácidos podem, em alguns casos, provar ser imunogênicos e provocar uma resposta imunológica indesejada contra o constructo. Conformemente, em certas modalidades, qualquer espaçador adicionado ao constructo serão relativamente não imunogênico, ou mesmo omitido de todo, de modo a manter as qualidades bioquímicas desejadas dos anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel).
[0177]Será apreciado que os anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel) da presente divulgação podem ser proporcionados pela deleção ou substituição parcial de alguns ou mesmo um único aminoácido. Por exemplo, a mutação de um único aminoácido em áreas selecionadas do domínio CH2 pode ser suficiente para reduzir substancialmente a ligação de Fc e aumentar deste modo a localização tumoral. Similarmente pode ser desejável simplesmente deletar aquela parte de um ou mais domínios de regiões constantes que controla a função efetora (p.ex., ligação a C1Q do complemento) a ser modulada. Tais deleções parciais das regiões constantes podem melhorar as características selecionadas do anticorpo (meia-vida no soro) enquanto deixam outras funções desejáveis associadas ao domínio de região constante em questão intatas. Além do mais, como aludido acima, as regiões dos anticorpos divulgados, seus fragmentos de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel) podem ser modificadas através da mutação ou substituição de um ou mais dos aminoácidos que intensifica o perfil do constructo resultante. A este respeito é possível perturbar a atividade proporcionada por um local de ligação conservado (p.ex., ligação a Fc) enquanto se mantêm substancialmente a configuração e perfil imunogênico dos anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel). Certas modalidades podem compreender a adição de um ou mais aminoácidos à região constante para intensificar características desejáveis tais como diminuição ou aumento da função efetora ou proporcionar mais anexação de agonistas de receptores de glucocorticoides. Em tais modalidades pode ser desejável inserir ou replicar sequências específicas derivadas de domínios de regiões constantes selecionados.
[0178]Será apreciado que os anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel) da presente divulgação podem ser modificados para reduzir a imunogenicidade, i.e., para reduzir a resposta imunológica antifármacos (ADA). Métodos para o fazer são divulgados, por exemplo, em WO 2015/073884, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0179]A presente divulgação abrange adicionalmente variantes e equivalentes que são substancialmente homólogos com anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel) apresentados aqui. Estes podem conter, por exemplo, mutações de substituições conservativas, i.e., a substituição de um ou mais aminoácidos por aminoácidos similares. Por exemplo, substituição conservativa se refere à substituição de um aminoácido por outro dentro da mesma classe geral tal como, por exemplo, um aminoácido ácido por outro aminoácido, um aminoácido básico por outro aminoácido básico ou um aminoácido neutro por outro aminoácido neutro. O que se entende por uma substituição de aminoácido conservativa é bem conhecido na técnica.
[0180]Os polipeptídeos da presente divulgação podem ser polipeptídeos recombinantes, polipeptídeos naturais ou polipeptídeos sintéticos de um anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou proteína anti-TNF. Será reconhecido na técnica que algumas sequências de aminoácidos da divulgação podem ser variadas sem efeito significativo da estrutura ou função da proteína. Assim, a divulgação inclui adicionalmente variações dos polipeptídeos que mostram atividade substancialmente ou que incluem regiões de um anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou proteína anti-TNF alfa. Tais mutantes incluem deleções, inserções, inversões, repetições e substituições do tipo.
[0181]Os polipeptídeos e análogos podem ser adicionalmente modificados para conterem frações químicas adicionais não normalmente parte da proteína. Essas frações derivatizadas podem melhorar a solubilidade, a meia-vida biológica ou absorção da proteína. As frações podem também reduzir ou eliminar quaisquer efeitos secundários desejáveis das proteínas e similares. Uma visão global para essas frações pode ser encontrada REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 20.a ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (2000).
[0182]Os polipeptídeos isolados descritos aqui podem ser produzidos por qualquer método adequado conhecido na técnica. Tais métodos variam de métodos sintéticos de proteínas diretos à construção de sequência de DNA codificando sequências de polipeptídeos isoladas e expressão dessas sequências em um hospedeiro transformado adequado. Em algumas modalidades, uma sequência de DNA é construída usando tecnologia recombinante por isolamento ou síntese de uma sequência de DNA codificando uma proteína de tipo selvagem de interesse. Opcionalmente, a sequência pode ser mutagenizada por mutagênese sítio-específica para proporcionar seus análogos funcionais. Ver, p.ex., Zoeller et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 81: 5662-5066 (1984) e Pat. dos E.U.A. No. 4,588,585.
[0183]Em algumas modalidades, uma sequência de DNA codificando um polipeptídeo de interesse seria construída por síntese química usando um sintetizador de oligonucleotídeos. Tais oligonucleotídeos podem ser desenhados com base na sequência de aminoácidos do polipeptídeo desejado e seleção desses códons que são favorecidos na célula hospedeira na qual o polipeptídeo recombinante de interesse será produzido. Métodos padrão podem ser aplicados para sintetizar uma sequência de polinucleotídeos isolada codificando um polipeptídeo de interesse isolado. Por exemplo, uma sequência de aminoácidos completa pode ser usada para construir um gene retrotraduzido. Adicionalmente, um oligômero de DNA contendo uma sequência de nucleotídeos codificando o polipeptídeo isolado particular pode ser sintetizado. Por exemplo, vários pequenos oligonucleotídeos codificando porções do polipeptídeo desejado podem ser sintetizado e depois ligados. Os oligonucleotídeos individuais contêm tipicamente saliências 5' ou 3' para montagem complementar.
[0184]Uma vez montadas (por síntese, mutagênese sítio-dirigida ou outro método), as sequências de polinucleotídeos codificando um polipeptídeo isolado particular de interesse serão inseridas em um vetor de expressão e operacionalmente ligadas a uma sequência de controlo da expressão apropriada para expressão da proteína em um hospedeiro desejado. A montagem apropriada pode ser confirmada por sequenciamento de nucleotídeos, mapeamento de restrição e expressão de um polipeptídeo biologicamente ativo em um hospedeiro adequado. Como é bem conhecido na técnica, de modo a se obterem níveis elevados de expressão de um gene transfectado em um hospedeiro, o gene tem de estar operacionalmente ligado a sequências de controle da expressão transcricionais e translacionais que são funcionais no hospedeiro de expressão escolhido.
[0185]Em certas modalidades são usados vetores de expressão recombinantes para amplificar e expressar DNA codificando anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel). Os vetores de expressão recombinantes são constructos de DNA replicável que têm fragmentos de DNA sintéticos ou derivados de cDNA codificando uma cadeia de polipeptídeos de um anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou proteína anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel), operacionalmente ligados a elementos reguladores transcricionais ou translacionais adequados derivados de genes de mamífero, microbianos, virais ou de inseto. Uma unidade transcricional compreende geralmente uma montagem de (1) um elemento ou elementos genéticos tendo um papel regulador na expressão de genes, por exemplo, promotores ou intensificadores transcricionais, (2) uma sequência estrutural ou codificante que é transcrita em mRNA e traduzida em proteína e (3) sequências de iniciação e terminação da transcrição e tradução apropriadas. Tais elementos reguladores podem incluir uma sequência operada para controlar a transcrição. A capacidade de se replicar em um hospedeiro, usualmente conferida por uma origem de replicação, e um gene de seleção para facilitar o reconhecimento de transformantes podem ser adicionalmente incorporados. As regiões de DNA estão operacionalmente ligadas quando são funcionalmente relacionadas entre si. Por exemplo, o DNA para um peptídeo sinal (líder secretor) está operacionalmente ligado a DNA para um polipeptídeo se for expresso como um precursor que participa na secreção do polipeptídeo; um promotor está operacionalmente ligado a uma sequência codificante se controlar a transcrição da sequência; ou um local de ligação ao ribossomo está operacionalmente ligado a uma sequência codificante se for posicionado de modo a permitir tradução. Os elementos estruturais destinados para uso em sistemas de expressão em levedura incluem uma sequência líder permitindo secreção extracelular de proteína traduzida por uma célula hospedeira. Alternativamente, onde a proteína recombinante é expressa sem uma sequência líder ou de transporte, pode incluir um resíduo de metionina N-terminal. Este resíduo pode ser opcionalmente subsequentemente clivado da proteína recombinante expressa para proporcionar um produto final.
[0186]A escolha de sequência de controle da expressão e vetor de expressão dependerá da escolha de hospedeiro. Uma ampla variedade de combinação hospedeiro/vetor de expressão pode ser empregue. Vetores de expressão úteis para hospedeiros eucarióticos incluem, por exemplo, vetores compreendendo sequências de controle de SV40, vírus do papiloma bovino, adenovírus e citomegalovírus. Vetores de expressão úteis para hospedeiros bacterianos incluem plasmídeo bacterianos conhecidos, tais como plasmídeos de Escherichia coli, incluindo pCR 1, pBR322, pMB9 e seus derivados, plasmídeos de gama mais ampla de hospedeiros, tais como M13 e fagos de DNA de fita única filamentosos.
[0187]Células hospedeiras adequadas para expressão de anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel) incluem células de procariotas, de levedura, de insetos ou eucarióticas superiores sob o controle de promotores apropriados. Os procariotas incluem organismos Gram-negativos ou Gram-positivos, por exemplo E. coli ou bacilos. As células eucarióticas superiores incluem linhas de células estabelecidas de origem mamífera. Sistemas de tradução isentos de células poderiam ser também empregues. Vetores de clonagem e expressão apropriados para uso com hospedeiros celulares bacterianos, fúngicos, de levedura e de mamífero são descritos por Pouwels et al. (Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, N.Y., 1985), a divulgação relevante do qual é deste modo incorporada por referência. Informação adicional dizendo respeito a métodos de produção de proteínas, incluindo produção de anticorpos, pode ser encontrada, p.ex., na Publicação da Patente dos E.U.A. No. 2008/0187954, Patentes dos E.U.A. Nos. 6,413,746 e 6,660,501 e Publicação de Patente Internacional No. WO 04009823, cada uma das quais é deste modo incorporada por referência aqui na sua totalidade.
[0188]Vários sistemas de cultura de células de mamífero ou inseto são também vantajosamente empregues para expressar proteína recombinante. A expressão de proteínas recombinantes em células de mamífero pode ser realizada porque tais proteínas estão geralmente corretamente dobradas, apropriadamente modificadas e completamente funcionais. Exemplos de linhas de células hospedeiras de mamífero adequadas incluem HEK-293 e HEK-293T, as linhas COS-7 de células renais de macaco, descritas por Gluzman (Cell 23: 175, 1981), e outras linhas de células incluindo, por exemplo, células L, C127, 3T3, ovários do hamster chinês (CHO), HeLa e linhas de células BHK. Os vetores de expressão em mamífero podem compreender elementos não transcritos tais como uma origem de replicação, um promotor e intensificador adequados ligados ao gene a ser expresso e outras sequências não transcritas flanqueantes 5' ou 3' e sequências não traduzidas 5' ou 3', tais como locais de ligação ao ribossomo necessários, um local de poliadenilação, locais dadores e aceitadores de splice e sequências de terminação transcricionais. Sistemas de baculovírus para produção de proteínas heterólogas em células de inseto são revistos por Luckow e Summers, Bio/Technology 6: 47 (1988).
[0189]As proteínas produzidas por um hospedeiro transformado podem ser purificadas de acordo com qualquer método adequado. Tais métodos padrão incluem cromatografia (p.ex., cromatografia por permuta iônica, afinidade e em coluna de dimensionamento), centrifugação, solubilidade diferencial ou por qualquer outra técnica padrão para purificação de proteínas. Marcadores da afinidade tais como hexa-histidina, domínio de ligação à maltose, sequência de revestimento da gripe e glutationa-S-transferase podem ser anexados à proteína para permitir purificação fácil por passagem sobre uma coluna de afinidade apropriada. As proteínas isoladas podem ser também fisicamente caracterizadas usando tais técnicas como proteólise, ressonância magnética nuclear e cristalografia de raios X.
[0190]Por exemplo, os sobrenadantes de sistemas que secretam proteína recombinante em meios de cultura podem ser em primeiro lugar concentrados usando um filtro de concentração de proteínas comercialmente disponível, por exemplo, uma unidade de ultrafiltração de Amicon ou Millipore Pellicon. Após o passo de concentração, o concentrado pode ser aplicado a uma matriz de purificação adequado. Alternativamente, uma resina de permuta iônica pode ser empregue, por exemplo, uma matriz ou substrato tendo grupos dietilaminoetila (DEAE) pendentes. As matrizes podem ser acrilamida, agarose, dextrana, celulose ou outros tipos comummente empregues na purificação de proteínas. Alternativamente, um passo de permuta catiônica pode ser empregue. Permutadores catiônicos adequados incluem várias matrizes insolúveis compreendendo grupos sulfopropila ou carboximetila. Finalmente, um ou mais passos de cromatografia líquida de elevado desempenho de fase reversa (RP-HPLC) empregando meios de RP-HPLC hidrofóbicos, p.ex., sílica gel tendo grupos metila ou outros alifáticos pendentes, podem ser empregues para purificar adicionalmente proteínas anti-TNF (p.ex., anticorpos de comprimento total, fragmentos de ligação ao antígeno de anticorpos ou proteínas receptoras de TNF solúvel). Alguns dos ou todos os passos de purificação anteriores, em várias combinações, podem ser também empregues para proporcionar uma proteína recombinante homogênea.
[0191]A proteína recombinante produzida em cultura bacteriana pode ser isolada, por exemplo, por extração inicial a partir de péletes de células, seguida por um ou mais passos de concentração, salga, cromatografia por permuta iônica aquosa ou exclusão de tamanhos. A cromatografia líquida de elevado desempenho (HPLC) pode ser empregue para passos de purificação finais. As células microbianas empregues na expressão de uma proteína recombinante podem ser rompidas por qualquer método conveniente, incluindo ciclo de congelação-descongelação, sonicação, rompimento mecânico ou uso de agentes de lise de células.
[0192]Métodos conhecidos na técnica para purificação de anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno e proteínas anti-TNF alfa incluem também, por exemplo, aqueles descritos nas Publicações de Patentes dos E.U.A. Nos. 2008/0312425, 2008/0177048 e 2009/0187005, cada uma das quais é deste modo incorporada por referência aqui na sua totalidade. III.Imunoconjugados contendo agonistas de receptores de glucocorticoides
[0193]São proporcionados aqui imunoconjugados contendo agonistas de receptores de glucocorticoides. Em algumas modalidades, um imunoconjugado proporcionado aqui se liga ao receptor gama Fc. Em algumas modalidades, um imunoconjugado proporcionado aqui é ativo no ensaio repórter de TNF-alfa transmembranar de GRE (como usado aqui, o “ensaio repórter de TNF-alfa transmembranar de GRE” se refere ao ensaio usado no Exemplo 79 em baixo). Em algumas modalidades, um imunoconjugado proporcionado aqui é ativo no ensaio L929 (como usado aqui, o “ensaio L929” se refere ao ensaio usado no Exemplo 82 em baixo). Em algumas modalidades, um imunoconjugado proporcionado aqui mostra imunogenicidade reduzida (resposta imunológica antifármacos (ADA) reduzida) em comparação com a proteína no imunoconjugado (p.ex., o anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou receptor solúvel) sozinho.
[0194]Em uma modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula Ia: (SM-L-Q)n-A1I-a ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa; L é um ligante; Q é um grupo heterobifuncional ou grupo heterotrifuncional; ou Q está ausente; n é 1-10; e SM é um radical de um glucocorticoesteroide. Em uma modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a: (SM-L-Q)n-A1I-a ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: A1 é um anticorpo antifator de necrose tumoral (TNF) alfa, um anticorpo monoclonal anti-TNF alfa ou adalimumab; L é um ligante; Q é um grupo heterobifuncional ou grupo heterotrifuncional; ou Q está ausente; n é 1-10; e SM é um radical de um glucocorticoesteroide.
[0195]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide.
[0196]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide selecionado do grupo consistindo em: em que o átomo de enxofre, oxigênio ou nitrogênio está anexado diretamente ou indiretamente ao anel C ou D do glucocorticoesteroide e R é alquila C1-4. Em outra modalidade, o átomo de enxofre, oxigênio ou nitrogênio está anexado diretamente ou indiretamente ao anel D do glucocorticoesteroide.
[0197]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-a: em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2SH, -CH2Cl, - SCH2Cl, -SCH2F, -SCH2CF3, -OH (ou hidróxi), -OCH2CN, -OCH2Cl, -OCH2F, -OCH3, - R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, -CH2OH e alcóxi C1-4; R3d e R3e são independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-4; R9a é selecionado do grupo consistindo em alquila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída e heteroarila opcionalmente substituída; R9b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila; ou R9b é hidrogênio ou metila; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, - S(=O)2-, -NR5-, -CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d- e -CEC-; ou X está ausente; t é 1 ou 2; Z é selecionado do grupo consistindo em =CH-, =C(OH)- e =N-; cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4a e R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4c e R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6b, R6c, R6d e R6e são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla.
[0198]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-a, em que R9a é: R6a
[0199]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-a': em que R1, R2, R3, R9a, R9b e — são como definidos em conexão com a Fórmula II-a.
[0200]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-b: em que R1, R2, R3, R9a, R9b e — são como definidos em conexão com a Fórmula II-a.
[0201]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a II-b' em que R1, R2, R3, R9a, R9b e — são como definidos em conexão com a
[0202]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-c: em que R1, R2, R9a, R9b e — são como definidos em conexão com a Fórmula II-a; e
[0203]W é selecionado do grupo consistindo em -O- e -S-. Em outra modalidade, W é -O-. Em outra modalidade, W é -S-.
[0204]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-c': em que R1, R2, R9a, R9b, W e — são como definidos em conexão com a Fórmula II-c.
[0205]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-d: em que R1, R2, R9a, R9b, W e — são como definidos em conexão com a Fórmula II-c.
[0206]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-d': em que R1, R2, R9a, R9b, W e — são como definidos em conexão com a Fórmula II-c.
[0207]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-e: em que: R1, R2, W e — são como definidos em conexão com a Fórmula II-c; R9c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4 e - C(=O)R9e; R9d é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída e heteroarila opcionalmente substituída; e R9e é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída e heteroarila opcionalmente substituída.
[0208]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-e': em que R1, R2, W, R9c, R9d e — são como definidos em conexão com a Fórmula II-e.
[0209]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-f:, em que: R1, R2, R9c, R9d, W e — são como definidos em conexão com a Fórmula II-e.
[0210]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-f': em que R1, R2, R9c, R9d, W e — são como definidos em conexão com a Fórmula II-e.
[0211]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-b: (SM-L-Q)n-A2I-b ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: A2 é uma proteína; L é um ligante; Q é um grupo heterobifuncional ou grupo heterotrifuncional; ou Q está ausente; n é 1-10; e SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma de:
em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2SH, -CH2Cl, - SCH2Cl, -SCH2F, -SCH2CF3, -OH, -OCH2CN, -OCH2Cl, -OCH2F, -OCH3, -OCH2CH3, - R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, -CH2OH e alcóxi C1-4; R3d e R3e são independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6b, R6c, R6d e R6e são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, - S(=O)2-, -NR5-, -CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d- (incluindo ambos os isômeros E e Z) e -C=C-; (em que, quando X é -CH2S-, -CH2O- ou -N(H)C(R8a)(R8b)-, o heteroátomo de -CH2S-, -CH2O- ou -N(H)C(R8a)(R8b)- pode estar anexado a qualquer anel com 6 membros, i.e., -CH2S- é equivalente a -SCH2-, -CH2O- é equivalente a -OCH2- e -N(H)C(R8a)(R8b)- é equivalente a -C(R8a)(R8b)N(H)-); ou X está ausente, i.e., X representa uma ligação química; Y2 é selecionado do grupo consistindo em -O-, -S- e -N(R7a)-; ou Y2 está ausente, i.e., Y2 representa uma ligação química; t é 1 ou 2; Z é selecionado do grupo consistindo em =CR11a- e =N-; cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4a e R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4c e R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R9f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11a e R11b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla.
[0212]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-b: (SM-L-Q)n-A2I-b, em que: A2 é uma proteína; L é um ligante; Q é um grupo heterobifuncional ou grupo heterotrifuncional; ou Q está ausente; n é 1-10; e SM é um radical monovalente tendo qualquer uma de:
em que R1, R2, R3, , R6a, R6c, R6d, R6e, R9f, R11b, Y2, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula II-l.
[0213]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-b: (SM-L-Q)n-A2I-b, em que: A2 é uma proteína; L é um ligante; Q é um grupo heterobifuncional ou grupo heterotrifuncional; ou Q está ausente; n é 1-10; e SM é um radical monovalente tendo qualquer uma de:
em que R1, R2, R3, —, R6a, R6c, R6d, R6e, R9f, R11b, Y2 e X são como definidos em conexão com a Fórmula II-l e o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R ou o isômero S quando R2 é halo ou hidroxila. Em uma modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R. Em outra modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero S.
[0214]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-l: em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2SH, -CH2Cl, - SCH2Cl, -SCH2F, -SCH2CF3, -OH, -OCH2CN, -OCH2Cl, -OCH2F, -OCH3, - R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, -CH2OH e alcóxi C1-4; R3d e R3e são independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-4; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, - S(=O)2-, -NR5-, -CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d- e -CEC-; ou X está ausente; t é 1 ou 2; Z é selecionado do grupo consistindo em =CR11a- e =N-; cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4a e R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4c e R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6c, R6d e R6e são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; Y2 é selecionado do grupo consistindo em -O-, -S- e -N(R7a)-; ou Y2 está ausente; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R9f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11a e R11b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla.
[0215]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-m: em que R1, R2, R3, — R6a, R6c, R6d, R6e, R9f, R11b, Y2, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula II-l.
[0216]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou Ib, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical em que R1, R2, R3, — R6a, R6c, R6d, R6e, R9f, R11b, Y2, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula II-l.
[0217]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-o: em que R1, R2, R3, —, R6a, R6d, R6e, R9f, R11b, Y2, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula II-l; e R6b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi.
[0218]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6d, R6e, R9f, R11b, Y2, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula II-o.
[0219]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6d, R6e, R9f, R11b, Y2, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula II-o.
[0220]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II- b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que — representa uma ligação dupla.
[0221]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II- b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e flúor.
[0222]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II- b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e flúor.
[0223]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l', II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2Cl, -SCH2Cl, -SCH2F e -OH.
[0224]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l', II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que: R3 é selecionado do grupo consistindo em: R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila; R3b é selecionado do grupo consistindo em metila, etila, isopropila, isobutila, metóxi, etóxi, isopropóxi e isobutóxi; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, metila, etila, -CH2OH, metóxi, etóxi e isopropóxi; R3d e R3e são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, metila e etila.
[0225]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que R5e R8a são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e metila.
[0226]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que Z é =CH- .
[0227]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que Z é =N-.
[0228]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que R6a, R6d e R6e são hidrogênio.
[0229]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que Y2 é -N(R7a)-. Em outra modalidade, R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila. Em outra modalidade, R7a é hidrogênio. Em outra modalidade, R7a é metila.
[0230]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que: X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, - S(=O)2-, -CH2S- e -N(H)CH(R8a)-; t é 1; R4a e R4b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e metila; ou R4a e R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 membros; e R8a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila. Em outra modalidade, X é -CH2-. Em outra modalidade, X é selecionado do grupo consistindo em:
[0231]Em outra modalidade, X é -O-. Em outra modalidade, X é -S-. Em outra modalidade, X é -CH2S-. Em outra modalidade, X é -N(H)CH2-. Em outra modalidade, X é selecionado do grupo consistindo em:
[0232]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-l, II-m ou II-n ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-l', II-m', II-n', II-l", II-m" ou II-n", em que R6c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -Cl, -OMe (ou -OCH3) e -OH.
[0233]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-o', II-p', II-q', II-o", II-p" ou II-q" em que R6b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -Cl, -OMe (ou -OCH3) e -OH.
[0234]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que R9f é hidrogênio.
[0235]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que R9f é metila.
[0236]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que R11a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e -OH.
[0237]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que R11b é hidrogênio.
[0238]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que L é um ligante clivável. Em outra modalidade, o ligante clivável compreende um grupo succinimida, amida, tioureia, tioéter, oxima ou autoimolante ou uma sua combinação. Em outra modalidade, o ligante clivável compreende um peptídeo. Em outra modalidade, o ligante clivável compreende um tripeptídeo. Em outra modalidade, o ligante clivável compreende um dipeptídeo. Em outra modalidade, o ligante clivável compreende éster de fosfato. Em outra modalidade, o ligante clivável compreende um diéster de pirofosfato.
[0239]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que Q está ausente.
[0240]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que Q é um grupo heterobifuncional.
[0241]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que Q é um grupo heterobifuncional selecionado do grupo consistindo em: em que m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em outra modalidade, Q é selecionado do grupo consistindo em Q-1, Q-2, Q-3 e Q-4. Em outra modalidade, Q é selecionado do grupo consistindo em Q-3 e Q-4. Em outra modalidade, m é 2.
[0242]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que Q é um grupo heterotrifuncional.
[0243]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que Q é um grupo heterotrifuncional que é:
[0244]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que -L-Q- é: oK sH [O245]R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída. Em outra modalidade, m é 2. Em outra modalidade, m é 1. Em outra modalidade, -L-Q- é:
[0245] R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída. Em outra modalidade, m é 2. Em outra modalidade, m é 1. Em outra modalidade, -L-Q- é:
[0246]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que -L-Q- é:
[0247]R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída. Em outra modalidade, m é 2. .
[0251]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que L é um ligante não clivável. Em outra modalidade, o ligante compreende uma ou mais unidades de polietilenoglicol.
[0252]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', m é 2 ou 3; e x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15. Em outra modalidade, m é 2.
[0253]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que -L-Q- é: m é 2 ou 3; e x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15. Em outra modalidade, m é 2.
[0254]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que -L-Q- é: x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15.
[0255]O composto de qualquer uma das reivindicações 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é: CO2H LQ-29; e x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15.
[0256]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que -L-Q- é: m é 1 ou 2; x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15; e R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 .
[0260]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que -L-Q- é: m é 1 ou 2; x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15; e R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0265]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que -L-Q- é: x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15; e R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0270]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que -L-Q- é: CO2H LQ-30; x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15; e R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída. CO2H LQ-31
[0275]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que -L-Q- é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela I: Tabela I
[0276]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que n é 2-8. Em outra modalidade, n é 1-5. Em outra modalidade, n é 2-5. Em outra modalidade, n é 1. Em outra modalidade, n é 2. Em outra modalidade, n é 3. Em outra modalidade, n é 4. Em outra modalidade, n é 5. Em outra modalidade, n é 6. Em outra modalidade, n é 7. Em outra modalidade, n é 8.
[0277]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide que é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela II.
[0278]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a ou I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical
[0279]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 é um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno ou em que A2 é um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno.
[0280]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa que se liga a TNF alfa humano e/ou TNF alfa murino ou em que A2 é proteína que se liga a TNF alfa humano e/ou TNF alfa murino.
[0281]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa que se liga a TNF alfa solúvel ou em que A2 é proteína que se liga a TNF alfa solúvel.
[0282]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa que se liga a TNF alfa ligado à membrana ou em que A2 é uma proteína que se liga a TNF alfa ligado à membrana.
[0283]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa compreendendo um anticorpo anti-TNF ou em que A2 é proteína compreendendo um anticorpo anti-TNF.
[0284]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa compreendendo um anticorpo antirreceptor de TNF ou em que A2 é uma proteína compreendendo um anticorpo antirreceptor de TNF.
[0285]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa compreendendo um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo anti-TNF ou em que A2 é uma proteína compreendendo um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo anti-TNF.
[0286]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa compreendendo um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo antirreceptor de TNF ou em que A2 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa compreendendo um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo antirreceptor de TNF.
[0287]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que o fragmento de ligação ao antígeno é selecionado do grupo consistindo em Fab, Fab', F(ab')2, Fv de cadeia simples ou scFv, Fv ligados por dissulfeto, domínio V-NAR, IgNar, intracorpo, IgGΔCH2, minicorpo, F(ab')3, tetracorpo, triacorpo, diacorpo, anticorpo de domínio simples, DVD-Ig, Fcab, mAb2, (scFv)2 ou scFv-Fc.
[0288]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno é murino, quimérico, humanizado ou humano.
[0289]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa compreendendo um receptor de TNF solúvel ou em que A2 é uma proteína compreendendo um receptor de TNF solúvel. Em outra modalidade, o receptor de TNF solúvel é um receptor de TNF p75 solúvel.
[0290]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 compreende um domínio constante de cadeia pesada ou um seu fragmento ou em que ou A2 compreende um domínio constante de cadeia pesada ou um seu fragmento. Em outra modalidade, o domínio constante de cadeia pesada ou seu fragmento compreende um domínio selecionado do grupo consistindo em: (a) um domínio constante de IgA; (b) um domínio constante de IgD; (c) um domínio constante de IgE; (d) um domínio constante de IgG1; (e) um domínio constante de IgG2; (f) um domínio constante de IgG3; (g) um domínio constante de IgG4; e (h) um domínio constante de IgM ou é um seu fragmento. Em outra modalidade, o domínio constante de cadeia pesada compreende um domínio constante de cadeia pesada de IgG1 ou seu fragmento. Em outra modalidade, o domínio constante de cadeia pesada compreende um domínio Fc de IgG1.
[0291]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q, em que A1 compreende um domínio constante de cadeia leve ou um seu fragmento ou em que A2 compreende um domínio constante de cadeia leve ou um seu fragmento. Em outra modalidade, o domínio constante de cadeia leve ou seu fragmento compreende um domínio constante selecionado grupo consistindo em (a) um domínio constante kappa de Ig e (b) um domínio constante lambda de Ig ou é um seu fragmento.
[0292] Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 inibe competitivamente a ligação de um anticorpo selecionado do grupo consistindo em adalimumab, infliximab, certolizumab pegol e golimumab a TNF-alfa ou em que A2 inibe competitivamente a ligação de um anticorpo selecionado do grupo consistindo em adalimumab, infliximab, certolizumab pegol e golimumab a TNF-alfa.
[0293] Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 se liga ao mesmo epítopo de TNF-alfa que um anticorpo selecionado do grupo consistindo em adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab e golimumab ou em que A2 se liga ao mesmo epítopo de TNF-alfa que um anticorpo selecionado do grupo consistindo em adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab e golimumab.
[0294] Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que a proteína anti-TNF é selecionada do grupo consistindo em adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab e golimumab.
[0295] Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 compreende as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada variável de SEQ ID NO:3 ou 6, SEQ ID NO:4 e SEQ ID NO:5, respectivamente, e as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve variável de SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33 e SEQ ID NO:34, respectivamente, ou em que A2 compreende as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada variável de SEQ ID NO:3 ou 6, SEQ ID NO:4 e SEQ ID NO:5, respectivamente, e as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve variável de SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33 e SEQ ID NO:34, respectivamente.
[0296] Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 compreende a sequência de cadeia pesada variável de SEQ ID NO:50 e a sequência de cadeia leve variável de SEQ ID NO:59 ou em que A2 compreende a sequência de cadeia pesada variável de SEQ ID NO:50 e a sequência de cadeia leve variável de SEQ ID NO:59.
[0297] Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 não se liga a TNF beta ou em que A2 não se liga a TNF beta.
[0298] Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 se liga a TNF beta ou em que A1 se liga a TNF beta.
[0299] Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 neutraliza a citotoxicidade de TNF-alfa humano em um ensaio L929 in vitro com uma IC50 de 1X10-7 M ou menor ou em que A2 neutraliza a citotoxicidade de TNF-alfa humano em um ensaio L929 in vitro com uma IC50 de 1X10-7 M ou menor.
[0300] Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 bloqueia a interação de TNF-alfa com os receptores da superfície de células p55 e p75 ou em que A2 bloqueia a interação de TNF-alfa com os receptores da superfície de células p55 e p75.
[0301] Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que A1 lisa células expressando TNF superficial in vitro na presença de complemento ou em que A2 lisa células expressando TNF superficial in vitro na presença de complemento.
[0302] Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que o receptor de TNF p75 solúvel é etanercept.
[0303] Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-a, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-a, II-b, II-c, II-d, II-e, II-f, II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-a', II-b', II-c', II-d', II-e', II-f', II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II- m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", ou um composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, p.ex., um composto tendo a Fórmula I-b, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma das Fórmulas II-l, II-m, II-n, II-o, II-p ou II-q ou qualquer uma das Fórmulas II-l', II-m', II-n', II-o', II-p', II-q', II-l", II-m", II-n", II-o", II-p" ou II-q", em que o anticorpo é adalimumab.
[0304]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ou composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela III: Tabela III
em que n é 1-5 e A é A1 ou A2. Em outra modalidade, A é adalimumab.
[0305]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ou composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela IV:
em que A é A1 ou A2. Em outra modalidade, A é adalimumab.
[0306]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ou composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela IV-A:
em que A é A1 ou A2. Em outra modalidade, A é adalimumab.
[0307]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ou composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela V: Tabela V em que n é 1-5 e A é A1 ou A2. Em outra modalidade, A é adalimumab.
[0308]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ou composto tendo a Fórmula I-b, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, selecionado do grupo consistindo em:
em que n é 2-4, A é A1 ou A2. Em outra modalidade, A é adalimumab. Em outra modalidade, n é 2 ou 4. Em outra modalidade, n é 2. Em outra modalidade, n é 4. IV.Agonistas de receptores de glucocorticoides
[0309]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula VII: ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2SH, -CH2Cl, - SCH2Cl, -SCH2F, -SCH2CF3, -CH2OS(=O)2OH, -OH, -OCH2CN, -OCH2Cl, - R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, -CH2OH, alcóxi C1-4, -CH2(amino) e -CH2CH2C(=O)OR3f; R3d e R3e são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R3f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, - S(=O)2-, -NR5-, -CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d- (incluindo ambos os isômeros E e Z), -CEC-, -N(R5)C(=O)- e -OC(=O)-; (em que, quando X é -CH2S-, - CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -N(R5)C(=O)- ou -OC(=O)-; o heteroátomo de -CH2S-, - CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -N(R5)C(=O)- ou -OC(=O)-; pode estar anexado a qualquer anel com 6 membros, i.e., -CH2S- é equivalente a -SCH2-, -CH2O- é equivalente a - OCH2-, -N(H)C(R8a)(R8b)- é equivalente a -C(R8a)(R8b)N(H)-), -N(R5)C(=O)- é equivalente a -C(=O)N(R5)C=O)- e -OC(=O)- é equivalente a -C(=O)O-; ou X está ausente, i.e., X representa uma ligação química; t é 1 ou 2; Z é selecionado do grupo consistindo em =CR11a- e =N-; cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4a e R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4c e R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6b, R6c e R6d são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R7b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -L-H, -L-PG, R7a e R7b, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formam: o o ; ou R7a e R7b, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formam um grupo nitro (-NO2); m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; L é um ligante; PG é um grupo protetor, p.ex., Boc, FMOC; R9f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11a e R11b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla. Em outra modalidade, R7b é hidrogênio. Em outra modalidade, R7b é selecionado do grupo consistindo em: O u R10b H - N. m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; e R10a e R10b são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0310]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII.
[0311]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula VII": ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b e X são como definidos em conexão com a Fórmula VII e o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R ou o isômero S quando R2 é halo ou hidroxila. Em uma modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R. Em outra modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero S.
[0312]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2SH, -CH2Cl, - SCH2Cl, -SCH2F, -SCH2CF3, -CH2OS(=O)2OH, hidróxi, -OCH2CN, -OCH2Cl, -OCH2F, -OCH3, -OCH2CH3, z,° P-O-R3d O'R3e ; R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, -CH2OH, alcóxi C1-4, -CH2(amino) e -CH2CH2C(=O)OR3f; R3d e R3e são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R3f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NR5-, - CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d-, -CEC-, -N(R5)C(=O)- e -OC(=O)-; ou X está ausente; t é 1 ou 2; Z é selecionado do grupo consistindo em =CR11a- e =N-; cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4a e R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4c e R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6b e R6c são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R7b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -L-H, -L-PG, R7a e R7b, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formam: o ; ou R7a e R7b, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formam um grupo nitro (-NO2); m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; L é um ligante; PG é um grupo protetor; R9f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11a e R11b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla. Em outra modalidade, R7b é hidrogênio. Em outra modalidade, R7b é selecionado do grupo consistindo em: m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; e R10a e R10b são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0313]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII-A.
[0314]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R7a, R7b, R9f, R11b e X são como definidos em conexão com a Fórmula VII-A e o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R ou o isômero S quando R2 é halo ou hidroxila. Em uma modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R. Em outra modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero S.
[0315]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula VIII: ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII.
[0316]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula VIII': ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII.
[0317]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula VIII": ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b e X são como definidos em conexão com a Fórmula VII e o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R ou o isômero S quando R2 é halo ou hidroxila. Em uma modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R. Em outra modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero S.
[0318]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula VIII-a: ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII.
[0319]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula VIII-a': ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII.
[0320]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula VIII-a": ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b e X são como definidos em conexão com a Fórmula VII e o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R ou o isômero S quando R2 é halo ou hidroxila. Em uma modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R. Em outra modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero S.
[0321]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula VIII-b: ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII.
[0322]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula VIII-b': ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII.
[0323]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula VIII-b": ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b e X são como definidos em conexão com a Fórmula VII e o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R ou o isômero S quando R2 é halo ou hidroxila. Em uma modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R. Em outra modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero S.
[0324]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula IX: ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII.
[0325]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula IX': ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII.
[0326]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula IX": ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b e X são como definidos em conexão com a Fórmula VII e o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R ou o isômero S quando R2 é halo ou hidroxila. Em uma modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R. Em outra modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero S.
[0327]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula IX-a: ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII.
[0328]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula IX-a': R6a, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII.
[0329]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula IX-a": ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b e X são como definidos em conexão com a Fórmula VII e o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R ou o isômero S quando R2 é halo ou hidroxila. Em uma modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R. Em outra modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero S.
[0330]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula IX-b: ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII.
[0331]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula IX-b': ou seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b, X e Z são como definidos em conexão com a Fórmula VII.
[0332]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula IX-b": ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1, R2, R3, —, R6a, R6b, R6c, R6d, R7a, R7b, R9f, R11b e X são como definidos em conexão com a Fórmula VII e o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R ou o isômero S quando R2 é halo ou hidroxila. Em uma modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero R. Em outra modalidade, o átomo de carbono marcado com um "*" é o isômero S.
[0333]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que — representa uma ligação simples ou dupla. Em outra modalidade, — representa uma ligação dupla.
[0334]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e flúor.
[0335]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e flúor.
[0336]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2Cl, -SCH2Cl, -SCH2F e -OH.
[0337]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: R3 é selecionado do grupo consistindo em: R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila; R3b é selecionado do grupo consistindo em metila, etila, isopropila, isobutila, metóxi, etóxi, isopropóxi e isobutóxi; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, metila, etila, -CH2OH, metóxi, etóxi e isopropóxi; R3d e R3e são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, metila e etila.
[0338]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R5e R8a são selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e metila.
[0339]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a’ ou IX-b’, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que Z é =CH-.
[0340]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a’, IX-b’, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que Z é =N-.
[0341]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila. Em outra modalidade, R7a é hidrogênio. Em outra modalidade, R7a é metila.
[0342]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, - S(=O)2-, -CH2S- e -N(H)CH(R8a)-; t é 1; e R4a e R4b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e metila; ou R4a e R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 membros. Em outra modalidade, X é -CH2- . Em outra modalidade, X é selecionado do grupo consistindo em: Em outra modalidade, X é -O-. Em outra modalidade, X é -S-. Em outra modalidade, X é -CH2S-. Em outra modalidade, X é -N(H)CH2-. Em outra modalidade, X é selecionado do grupo consistindo em:
[0343]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R11b é hidrogênio.
[0344]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R7b é hidrogênio.
[0345]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R7a e R7b são hidrogênio.
[0346]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, R6b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -Cl, -OMe (ou -OCH3) e -OH.
[0347]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R9f é hidrogênio.
[0348]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R9f é metila.
[0349]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R11a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e -OH.
[0350]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R11b é hidrogênio.
[0351]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-1. Em outra modalidade, R10a e R10b são independentemente alquila C1-6 opcionalmente substituída. Em outra modalidade, R10a e R10b são independentemente alquila C1-4 opcionalmente substituída.
[0352]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-2 e PG é BOC. Em outra modalidade, R10a e R10b são independentemente alquila C1-6 opcionalmente substituída. Em outra modalidade, R10a e R10b são independentemente alquila C1-4 opcionalmente substituída.
[0353]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-3. Em outra modalidade, m é 2 ou 3 e R10a e R10b são cada um alquila C1-6 opcionalmente substituída. Em outra modalidade, m é 2. Em outra modalidade, R10a e R10b são independentemente alquila C1-4 opcionalmente substituída.
[0354]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo as Fórmulas VIII, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um dos compostos da Tabela VI.
[0355]Em outra modalidade é divulgado aqui VIII, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um dos compostos da Tabela VI-A. Tabela VI-A
[0356]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula VII-A ou a Fórmula VII-B, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um dos compostos da Tabela VI-B. Tabela VI-B
[0357]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo as Fórmulas VIII, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, selecionado do grupo consistindo
[0358]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula IX, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um dos compostos da Tabela VII.
[0359]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula IX-a, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, selecionado do grupo consistindo V. Métodos de preparação de imunoconjugados e intermediários sintéticos
[0361]No Esquema Geral 1, SM-N(R7a)(R7b) é um glucocorticoesteroide tendo um grupo -NH(R7a) (em que R7a é hidrogênio ou alquila C1-4) ou um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a" ou IX-b” ou um composto da Tabela 9; HS-A é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tendo um número limitado de ligações de dissulfeto intercadeias reduzido, R' e R'' são independentemente qualquer cadeia lateral encontrada em um aminoácido ocorrendo naturalmente, p.ex., metila, isopropila, e/ou não natural, p.ex., -CH2CH2CH2N(H)C(=O)NH2, m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 e PG é um grupo protetor, p.ex., BOC. Para o propósito de ilustração, o Esquema Geral 1 mostra somente uma sulfidrila como estando disponível para conjugação no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0362]Em outra modalidade é divulgado aqui um método de preparação de um composto tendo a Fórmula I-c: ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: A é A1 ou A2; A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa; A2 é uma proteína; L é um ligante; n é 1-10; e SM é um radical de um glucocorticoesteroide, p.ex., um composto tendo qualquer uma das Fórmulas II-a-q; compreendendo o método: a) conjugação de um composto tendo a Fórmula X: com uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa ou uma proteína; e b) isolamento do composto tendo a Fórmula I-c, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Em outra modalidade, o método compreende adicionalmente hidrólise do composto tendo a Fórmula I-c para dar um composto
[0363]Em outra modalidade é divulgado aqui um método de preparação de um composto tendo a Fórmula I-e: ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: A é A1 ou A2; A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa; A2 é uma proteína; L é um ligante; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; n é 1-10; m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; e SM é um radical de um glucocorticoesteroide, p.ex., um composto tendo qualquer uma das Fórmulas II-a-e ou l-q; compreendendo o método: a) conjugação de um composto tendo a Fórmula XI: com uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa ou uma proteína; e b) isolamento do composto tendo a Fórmula I-e, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Em outra modalidade, o método compreende adicionalmente hidrólise do composto tendo a Fórmula I-e para dar um composto
[0364]Em outra modalidade é divulgado aqui um método de preparação de em que: A é adalimumab; e n é 1-10, compreendendo o método: com adalimumab parcialmente reduzido; e b) isolamento, p.ex., por cromatografia, do composto tendo a Fórmula I-G.
[0365]Em outra modalidade é divulgado aqui um método de preparação de um composto tendo a Fórmula I-H: em que: A é adalimumab; e n é 1-10, compreendendo o método hidrólise do composto tendo a Fórmula I-G para dar a Fórmula I-H.
[0366]Em outra modalidade é divulgado aqui um método de preparação de um composto tendo a Fórmula I-G ou a Fórmula I-H, em que n é 1-7. Em outra modalidade, n é 1-5. Em outra modalidade, n é 2-4. Em outra modalidade, n é 1. Em outra modalidade, n é 1,5. Em outra modalidade, n é 2. Em outra modalidade, n é 2,5. Em outra modalidade, n é 3. Em outra modalidade, n é 3,5. Em outra modalidade, n é 4. Em outra modalidade, n é 4,5. Em outra modalidade, n é 5.
[0367]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-H: em que: A é adalimumab; e n é 1-10.
[0368]Em outra modalidade é divulgado aqui um composto tendo a Fórmula I-H, em que n é 1-7. Em outra modalidade, n é 1-5. Em outra modalidade, n é 2-4. Em outra modalidade, n é 1. Em outra modalidade, n é 1,5. Em outra modalidade, n é 2. Em outra modalidade, n é 2,5. Em outra modalidade, n é 3. Em outra modalidade, n é 3,5. Em outra modalidade, n é 4. Em outra modalidade, n é 4,5. Em outra modalidade, n é 5. Em outra modalidade, n é 5,5. Em outra modalidade, n é 6. Em outra modalidade, n é 6,5. Em outra modalidade, n é 7. Em outra modalidade, n é 7,5. Em outra modalidade, n é 8.
[0369]De acordo com a presente divulgação, os agonistas de receptores de glucocorticoides podem estar ligados ao anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF alfa através de qualquer método e em qualquer localização que não impeça o anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou proteína anti-TNF alfa de se ligar ao antígeno (p.ex., TNF alfa) ou impeça a atividade do agonista de receptores de glucocorticoides. Métodos para alcançar uma tal ligação foram discutidos, por exemplo, em Panowski et al., mAbs 6: 34-45 (2014), Jain et al., Pharm. Res. 32: 3526-3540 (2015), Mack et al., Seminars in Oncology 41: 637-652 (2014), Pedido Publicado dos E.U.A. No. 2008/0305044 e Pedido Publicado dos E.U.A. No. 2011/0097322, cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade.
[0370]Os agonistas de receptores de glucocorticoides podem estar ligados aos anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF alfa através de um aminoácido natural, p.ex., um aminoácido que tem uma cadeia lateral com um grupo nucleofílico.
[0371]Por exemplo, o agonista de receptores de glucocorticoides pode estar ligado a um resíduo de lisina. Métodos para conjugação através de lisina são conhecidos. Tais métodos incluem um processo em dois passos no qual um ligante é anexado ao anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou proteína anti-TNF alfa em uma primeira reação química e depois o ligante é reagido com o agonista de receptores de glucocorticoides em uma segunda reação química. Em outro método, uma reação em um passo com um ligante-agonista de receptores de glucocorticoides pré-formado para formar o conjugado contendo o agonista de receptores de glucocorticoides ligado ao anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou proteína anti-TNF alfa.
[0372]O agonista de receptores de glucocorticoides pode estar também ligado a um resíduo de cisteína. Métodos para conjugação através de cisteína são conhecidos. Os anticorpos contra IgG1 contêm quatro ligações de dissulfeto intercadeias e a conjugação através de cisteína pode ocorrer após redução destas ligações criar sulfidrilas disponíveis para conjugação.
[0373]Os agonistas de receptores de glucocorticoides podem estar ligados ao anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF alfa através de conjugação sítio-específica.
[0374]Um método de conjugação sítio-específica é conjugação sítio- específica com base na cisteína. Um exemplo deste método foi relatado por Junutula et al., Nat. Biotechnol 26: 925-935 (2008); ver também Junutula et al., J. Immunol. Methods 332: 41-52 (2008), cada um dos quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Usando este métodos, os anticorpos, seus fragmentos de ligação ao antígeno ou proteínas anti-TNF alfa podem ser manipulados com cisteínas adicionais que proporcionam grupos tiol reativos para conjugar o agonista de receptores de glucocorticoides. Estas publicações proporcionam também orientação dizendo respeito à seleção de cisteínas reativas que não interferem com a ligação ao antígeno.
[0375]Outro método de conjugação sítio-específica faz uso de selenocisteína. A selenocisteína é similar à cisteína mas contém um átomo de selênio mais reativo em lugar do átomo de enxofre na cisteína. Podem ser usadas condições nas quais as selenocisteínas sejam seletivamente ativadas. Hofer et al., Biochemistry 48: 12047-12057 (2009), que é aqui incorporado por referência na sua totalidade, exemplificaram esta técnica.
[0376]Outro método de conjugação sítio-específica faz uso de aminoácidos não naturais, p.ex., acetilfenilalanina (pAcPhe) ou fenilalanina de para-azido (pAF). Wang et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 100: 56-61 (2003), Axup et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 109: 16101-16106 (2012) e Kern et al., JACS 138: 1430-1445 (2016), cada um dos quais é aqui incorporado por referência na sua totalidade, exemplificaram esta técnica.
[0377]Outro método de conjugação sítio-específica faz uso de abordagens enzimáticas, p.ex., glicotransferases ou transglutaminases. Glicotransferases mutantes podem ser usadas para anexar uma fração de açúcar quimicamente ativa a um local de glicosilação em um anticorpo, seu fragmento de ligação ao antígeno ou proteína anti-TNF alfa. Os anticorpos contra IgG humana contêm um local de N- glicosilação no resíduo Asn-297 do fragmento Fc. As glicanas anexadas em este resíduo podem ser degalactosiladas tal que uma glicotransferase mutante seja capaz de se transferir para lá. Boeggeman et al., Bioconjug. Chem. 20: 1228-1236 (2009), que é aqui incorporado por referência na sua totalidade, exemplificaram esta técnica. As transglutaminases, p.ex., de Streptoverticillium mobaranse, reconhecem um marcador de glutamina, p.ex., LLQG, que pode ser manipulado em uma proteína anti- TNF alfa. Jeger et al., Angew Chem. Int. Ed. Engl. 49: 9995-9997 (2010), que é aqui incorporado por referência na sua totalidade, exemplificaram esta técnica.
[0378]Pode ser também usada a anexação C-terminal através de ligação de proteínas expressas. Por exemplo, a formação de tioéster C-terminal mediada por inteína pode ser usada para a ligação quimiosseletiva com uma proteína anti-TNF alfa contendo um peptídeo de cisteína N-terminal. Chiang et al., J. Am. Chem. Soc. 136: 3370-3373 (2014), que é aqui incorporado por referência na sua totalidade, exemplificaram esta técnica.
[0379]São também proporcionados aqui intermediários sintéticos, p.ex., compostos tendo a Fórmula X e XI, que úteis para a preparação de imunoconjugados.
[0380]Em uma modalidade, o intermediário sintético divulgado aqui é um composto tendo qualquer uma das Fórmulas VII, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX-b”, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R7b é selecionado do grupo consistindo em -L-H, -L-PG,
[0381]Em outra modalidade, o intermediário sintético divulgado aqui é um composto tendo a Fórmula VIII, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um ou mais dos compostos da Tabela VIII: Tabela VIII
em que R7b é selecionado do grupo consistindo em -L-H, -L-PG, Em outra modalidade, R7b é selecionado do grupo consistindo em: Em outra modalidade, R7b é R7b-4. Em outra modalidade, R7b é R7b-5. Em outra modalidade, R7b é R7b-6. Em outra modalidade, R7b é qualquer uma das estruturas da Tabela IX. Tabela IX
[0382]Em outra modalidade, o intermediário sintético divulgado aqui é um composto tendo as Fórmulas VIII, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um dos compostos da Tabela X.
[0383] Em outra modalidade, o intermediário sintético divulgado aqui é um composto tendo as Fórmulas VIII, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um dos compostos da Tabela X-A. Tabela X-A
[0384]Em outra modalidade, o intermediário sintético divulgado aqui é um composto tendo a Fórmula IX, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela XI.
em que R7b é selecionado do grupo consistindo em -L-H, -L-PG, Em outra modalidade, R7b é R7b-4. Em outra modalidade, R7b é R7b-5. Em outra modalidade, R7b é R7b-6. Em outra modalidade, R7b qualquer uma das estruturas químicas da Tabela IX.
[0385]Em outra modalidade, o intermediário sintético divulgado aqui é um composto tendo a Fórmula IX, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um dos compostos da Tabela XII. Tabela XII
VI.Métodos de uso e composições farmacêuticos
[0386]São proporcionados aqui conjugados tendo as Fórmulas I-a e I-b e agonistas de receptores de glucocorticoides tendo as Fórmulas VII, VII-A, VII-B, VIII, VIII-a, VIII-b, IX, IX-a ou IX-b ou qualquer uma das Fórmulas VII', VII-A', VII-B', VIII', VIII-a', VIII-b', IX', IX-a', IX-b', VII", VII-A", VII-B", VIII", VIII-a", VIII-b", IX", IX-a” ou IX- b” (em que R7b é hidrogênio) que podem ser usados in vitro ou in vivo. Conformemente são também proporcionadas composições, p.ex., composições farmacêuticas para certos usos in vivo, compreendendo um conjugado ou um agonista de receptores de glucocorticoides descrito aqui tendo o grau desejado de pureza em um transportador, excipiente ou estabilizante fisiologicamente aceitável (Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA). Os transportadores, excipientes ou estabilizantes aceitáveis são não tóxicos aos receptores às dosagens e concentrações empregues.
[0387]As composições (p.ex., composições farmacêuticas) a serem usadas para administração in vivo podem ser estéreis. Isto é prontamente alcançado por filtração através de, p.ex., membranas de esterilização por filtração. As composições (p.ex., composições farmacêuticas) a serem usadas para administração in vivo podem compreender um conservante.
[0388]Uma composição farmacêutica compreendendo um agonista de receptores de glucocorticoides proporcionado aqui pode ser formulada, por exemplo, como uma pulverização nasal, um aerossol de inalação (p.ex., para inalação oral) ou uma cápsula, comprimido ou pílula (p.ex., para administração oral).
[0389]Os agonistas de receptores de glucocorticoides proporcionados aqui (p.ex., um CAF anti-TNF) são compostos, em que o número médio de glucocorticoesteroides por anticorpo (DAR) na composição é cerca de 1 a cerca de 10. Em algumas modalidades, o número médio de glucocorticoesteroides por anticorpo (DAR) na composição é cerca de 2 a cerca de 6. Em algumas modalidades, o número médio de glucocorticoesteroides por anticorpo (DAR) na composição é cerca de 3 a cerca de 4. Em algumas modalidades, o número médio de glucocorticoesteroides por anticorpo (DAR) na composição é cerca de 3,1. Em algumas modalidades, o número médio de glucocorticoesteroides por anticorpo (DAR) na composição é cerca de 3,2. Em algumas modalidades, o número médio de glucocorticoesteroides por anticorpo (DAR) na composição é cerca de 3,3. Em algumas modalidades, o número médio de glucocorticoesteroides por anticorpo (DAR) na composição é cerca de 3,4. Em algumas modalidades, o número médio de glucocorticoesteroides por anticorpo (DAR) na composição é cerca de 3,5. Em algumas modalidades, o número médio de glucocorticoesteroides por anticorpo (DAR) na composição é cerca de 3,6. Em algumas modalidades, o número médio de glucocorticoesteroides por anticorpo (DAR) na composição é cerca de 3,7. Em algumas modalidades, o número médio de glucocorticoesteroides por anticorpo (DAR) na composição é cerca de 3,8. Em algumas modalidades, o número médio de glucocorticoesteroides por anticorpo (DAR) na composição é cerca de 3,9.
[0390]Os agonistas de receptores de glucocorticoides e composições farmacêuticas compreendendo um agonista de receptores de glucocorticoides descritos aqui podem ser úteis na inibição da liberação de citocinas (in vitro ou in vivo) e/ou para o tratamento de doenças autoimunes ou inflamatórias. Os agonistas de receptores de glucocorticoides e composições farmacêuticas compreendendo um agonista de receptores de glucocorticoides descritos aqui podem ser usados para o tratamento da asma (p.ex., asma brônquica), doença de Crohn (p.ex., doença de Crohn ativa ligeira a moderada envolvendo o íleo e/ou o cólon ascendente e/ou a manutenção de remissão clínica de doença de Crohn envolvendo o íleo e/ou o cólon ascendente durante até 3 meses), colite ulcerosa (p.ex., para a indução de remissão em pacientes com colite ulcerosa ativa, ligeira a moderada), rinite alérgica (p.ex., sintomas nasais associados à rinite alérgica sazonal e/ou rinite alérgica perene).
[0391]Para administração a pacientes humanos, a dose diária total de agonistas de receptores de glucocorticoides proporcionados aqui é tipicamente na faixa de 0,001 mg a 5000 mg ou na faixa de 0,01 mg a 1000 mg, dependendo do modo de administração. Por exemplo, a administração oral ou administração intravenosa, intramuscular, intra-articular ou periarticular pode requerer uma dose diária total de 0,01 mg a 1000 mg ou de 0,1 mg a 100 mg. A dose diária total pode ser administrada em doses únicas ou divididas.
[0392]Uma composição farmacêutica compreendendo um conjugado proporcionado aqui pode ser formulada, por exemplo, para administração ou infusão intravenosa.
[0393]Os conjugados e composições farmacêuticas compreendendo conjugados descritos aqui podem ser úteis na lise de uma célula expressando TNF- alfa da superfície (in vitro ou in vivo), para o tratamento de doenças ou disfunções caracterizadas por TNF-alfa aumentado (p.ex., TNF-alfa aumentado no fluido sinovial) e/ou para o tratamento de uma doença autoimune ou inflamatória.
[0394]Uma composição farmacêutica compreendendo um agonista de receptores de glucocorticoides ou um conjugado descrito aqui é usada para o tratamento artrite reumatoide (RA), artrite idiopática juvenil (JIA), artrite psoriática (PsA), uma espondiloartropatia tal como espondilite anquilosante (AS) ou espondiloartrite axial (axSpA), doença de Crohn (CD) adulta, doença de Crohn pediátrica, colite ulcerosa (UC), psoríase em placas (Ps), hidradenite supurativa (HS), uveíte, doença de Behçet ou psoríase, incluindo psoríase em placas.
[0395]Para administração a pacientes humanos, a dose diária total de conjugado proporcionado aqui está tipicamente na faixa de 0,01 μg a 100 mg por kg de peso corporal e pode ser dada uma vez ou mais diariamente, semanalmente, mensalmente ou anualmente.
[0396]A divulgação proporciona também as Modalidades (Mod.) 1-209 como modalidades particulares. As Fórmulas e Tabelas em referência a estas modalidades particulares que não são mostradas na modalidade são apresentadas na descrição acima.
[0397]Modalidade (Mod) 1. Um composto tendo a Fórmula I-a: (SM-L-Q)n-A1I-a ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que:
[0398]A1 é uma proteína antifator da necrose tumoral (TNF) alfa; L é um ligante; Q é um grupo heterobifuncional ou grupo heterotrifuncional; ou Q está ausente; n é 1-10; e SM é um radical de um glucocorticoesteroide.
[0399]Mod 2. O composto da Mod 1, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide.
[0400]Mod 3. O composto da Mod 2, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide selecionado do grupo consistindo em: em que o átomo de enxofre, oxigênio ou nitrogênio está anexado diretamente ou indiretamente ao anel C ou D do glucocorticoesteroide e R é alquila C1-4.
[0401]Mod 4. O composto da Mod 3, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o átomo de enxofre, oxigênio ou nitrogênio está anexado diretamente ou indiretamente ao anel D do glucocorticoesteroide.
[0402]Mod 5. O composto da Mod 2 ou Mod 3, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-a, em que:
[0403]R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2SH, -CH2Cl, -SCH2Cl, -SCH2F, -SCH2CF3, hidróxi,
;
[0404]R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, -CH2OH e alcóxi C1-4; R3d e R3e são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4;
[0405]R9a é selecionado do grupo consistindo em alquila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída e heteroarila opcionalmente substituída; R9b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila; ou R9a é:
[0406]R9b é hidrogênio ou metila;
[0407]X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)- , -S(=O)2-, -NR5-, -CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d- e -CEC-; ou X está ausente; t é 1 ou 2;
[0408]Z é selecionado do grupo consistindo em =CH-, =C(OH)- e =N-; cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4ae R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4c e R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6b, R6c, R6d e R6e são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla.
[0409]Mod. 6. O composto da Mod 5, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-b.
[0410]Mod. 7. O composto de qualquer uma das Mod. 2-4, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-c, em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo;
[0411]R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R9a é selecionado do grupo consistindo em alquila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída e heteroarila opcionalmente substituída; e R9b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila; ou R9a é:
[0412]R9b é hidrogênio;
[0413]W é selecionado do grupo consistindo em -O- e -S-; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NR5-, -CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d- e -C=C-; ou X está ausente; t é 1 ou 2; Z é selecionado do grupo consistindo em =CH-, =C(OH)- e =N-; cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4ae R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4c e R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6b, R6c, R6d e R6e são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla.
[0414]Mod. 8. O composto da Mod 7, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-d.
[0415]Mod. 9. O composto de qualquer uma das Mod. 2-4, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-e, em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R9c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4 e -C(=O)R9e; R9d é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída e heteroarila opcionalmente substituída; R9e é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída e heteroarila opcionalmente substituída; W é selecionado do grupo consistindo em -O- e -S-; e — representa uma ligação simples ou dupla.
[0416]Mod. 10. O composto da Mod 9, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-f.
[0417]Mod. 11. O composto de qualquer uma das Mod. 7-10, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que W é -S-.
[0418]Mod. 12. O composto de qualquer uma das Mod. 7-10, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que W é -O-.
[0419]Mod. 13. Um composto tendo a Fórmula I-b: (SM-L-Q)n-A2I-b, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que: A2 é uma proteína; L é um ligante; Q é um grupo heterobifuncional ou grupo heterotrifuncional; ou Q está ausente; n é 1-10; e SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo qualquer uma de: Fórmula II-l, Fórmula II-m, Fórmula II-n, Fórmula II-o, Fórmula II-p ou Fórmula II-q, em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, - CH2SH, -CH2Cl, -SCH2Cl, -SCH2F, -SCH2CF3, hidróxi, -OCH2CN, -OCH2Cl, -OCH2F, OH Y 'OH ^x/O'y'O'yR ^OyR -OCH3, -OCH2CH3, -SCH2CN, C02H , R3a o , o e
; R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila Ci- 4; R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, -CH2OH e alcóxi C1-4; R3d e R3e são independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6b, R6c, R6d e R6e são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, - S(=O)2-, -NR5-, -CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d- e -CEC-; ou X está ausente; Y2 é selecionado do grupo consistindo em -O-, -S- e -N(R7a)-; ou Y2 está ausente; t é 1 ou 2; Z é selecionado do grupo consistindo em =CR11a- e =N-; cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4ae R4b, tomados em conjunto com o átomo ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4ce R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R9f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11a e R11b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla.
[0420]Mod. 14. O composto de qualquer uma das Mod. 2-4 ou 13, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-l, em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, - CH2SH, -CH2Cl, -SCH2Cl, -SCH2F, -SCH2CF3, hidróxi, -OCH2CN, -OCH2Cl, -OCH2F, OH P-, y O O o3b R3C Y 'OH ^OyR -OCH3, -OCH2CH3, -SCH2CN, C02H , R3a O , e
; R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C14; R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, -CH2OH e alcóxi C1-4; R3d e R3e são independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-4; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NR5-, - CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d- e -C=C-; ou X está ausente; t é 1 ou 2; Z é selecionado do grupo consistindo em =CR11a- e =N-; cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4a e R4b, tomados em conjunto com o átomo ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4c e R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6c, R6d e R6e são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, aquiltio e alcóxi; Y2 é selecionado do grupo consistindo em -O-, -S- e -N(R7a)-; ou Y2 está ausente; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R9f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11a e R11b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla.
[0421]Mod. 15. O composto da Mod 14, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-m.
[0422]Mod. 16. O composto da Mod 14, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-n.
[0423]Mod. 17. O composto de qualquer uma das Mod. 2-4 ou 13, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-o, em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, - CH2SH, -CH2Cl, -SCH2Cl, -SCH2F, -SCH2CF3, hidróxi, -OCH2CN, -OCH2Cl, -OCH2F, OH Y 'OH \/O'Y'O'Y'R -OCH3, -OCH2CH3, -SCH2CN, C02H , R3a O , e
; R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C14; R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, -CH2OH e alcóxi C1-4; R3d e R3e são independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-4; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NR5-, - CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d- e -C=C-; ou X está ausente; t é 1 ou 2; Z é selecionado do grupo consistindo em =CR11a- e =N-; cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4a e R4b, tomados em conjunto com o átomo ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4c e R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6b, R6d e R6e são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, aquiltio e alcóxi; Y2 é selecionado do grupo consistindo em -O-, -S- e -N(R7a)-; ou Y2 está ausente; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R9f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11a e R11b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla.
[0424]Mod. 18. O composto da Mod 17, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-p.
[0425]Mod. 19. O composto da Mod 17, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-q.
[0426]Mod. 20. O composto de qualquer uma das Mod. 5-19, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que — representa uma ligação dupla.
[0427]Mod. 21. O composto de qualquer uma das Mod. 5-20, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e flúor.
[0428]Mod. 22. O composto de qualquer uma das Mod. 5-21, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e flúor.
[0429]Mod. 23. O composto de qualquer uma das Mod. 5, 6 ou 13-22, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2Cl, -SCH2Cl, -SCH2F e hidróxi.
[0430]Mod. 24. O composto de qualquer uma das Mod. 5, 6 ou 13-22, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R3 é selecionado do grupo consistindo em: R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila; R3b é selecionado do grupo consistindo em metila, etila, isopropila, isobutila, metóxi, etóxi, isopropóxi e isobutóxi; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, metila, etila, -CH2OH, metóxi, etóxi e isopropóxi; R3d e R3e são independentemente selecionadas do grupo consistindo em hidrogênio, metila e etila.
[0431]Mod. 25. O composto de qualquer uma das Mod. 5-8 ou 11-24, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R5 e R8a são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e metila.
[0432]Mod. 26. O composto de qualquer uma das Mod. 5-8, 11-25, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que Z é =CH-.
[0433]Mod. 27. O composto de qualquer uma das Mod. 5-8 ou 11-25, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que Z é =N-.
[0434]Mod. 28. O composto de qualquer uma das Mod. 5-8 ou 11-27, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R6a, R6d e R6e são hidrogênio.
[0435]Mod. 29. O composto de qualquer uma das Mod. 13-28, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que Y2 é -N(R7a)-.
[0436]Mod. 30. O composto da Mod. 29, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila.
[0437]Mod. 31. O composto da Mod. 30, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7a é hidrogênio.
[0438]Mod. 32. O composto da Mod. 30, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7a é metila.
[0439]Mod. 33. O composto de qualquer uma das Mod. 5-8 ou 13-32, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que: X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -CH2S- e -N(H)CH(R8a)-; t é 1; R4a e R4b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e metila; ou R4a e R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 membros; e R8a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila.
[0440]Mod. 34. O composto da Mod. 33, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é -CH2-.
[0441]Mod 35. O composto da Mod. 33, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é selecionado do grupo consistindo em:
[0442]Mod. 36. O composto da Mod. 33, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é -O-.
[0443]Mod. 37. O composto da Mod. 33, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é -S-.
[0444]Mod. 38. O composto da Mod. 33, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é -CH2S-.
[0445]Mod. 39. O composto da Mod. 33, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é -N(H)CH2-.
[0446]Mod. 40. O composto da Mod 33, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é selecionado do grupo consistindo em:
[0447]Mod. 41. O composto de qualquer uma das Mod. 13-16 ou 20-40, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R6c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -Cl, -OCH3 e hidróxi.
[0448]Mod. 42. O composto de qualquer uma das Mod. 13 ou 17-40, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R6b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -Cl, -OCH3 e hidróxi.
[0449]Mod. 43. O composto de qualquer uma das Mod. 13-42, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R9f é hidrogênio.
[0450]Mod. 44. O composto de qualquer uma das Mod. 13-42, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R9f é metila.
[0451]Mod. 45. O composto de qualquer uma das Mod. 13-44, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R11a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e hidróxi.
[0452]Mod. 46. O composto de qualquer uma das Mod. 13-44, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R11b é hidrogênio.
[0453]Mod. 47. O composto de qualquer uma das Mod. 1-46, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que L é um ligante clivável.
[0454]Mod. 48. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o ligante clivável compreende um grupo succinimida, amida, tioureia, tioéter, oxima ou autoimolante ou uma sua combinação.
[0455]Mod. 49. O composto de qualquer uma das Mod. 1-48, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o ligante clivável compreende um peptídeo.
[0456]Mod. 50. O composto da Mod 49, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o ligante clivável compreende um tripeptídeo.
[0457]Mod. 51. O composto da Mod 49, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o ligante clivável compreende um dipeptídeo.
[0458]Mod. 52. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o ligante clivável compreende um éster de fosfato.
[0459]Mod. 53. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o ligante clivável compreende um diéster de pirofosfato.
[0460]Mod. 54. O composto de qualquer uma das Mod. 1-53, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que Q está ausente.
[0461]Mod. 55. O composto de qualquer uma das Mod. 1-53, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que Q é um grupo heterobifuncional selecionado do grupo consistindo em Q-1, Q-2, Q-3, Q-4, Q-5 e Q-6, em que m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6.
[0462]Mod. 56. O composto de qualquer uma das Mod. 1-53, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que Q é um grupo heterotrifuncional que é Q-7.
[0463]Mod. 57. O composto da Mod. 55, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que Q é selecionado do grupo consistindo em Q-1, Q-2, Q-3 e Q-4.
[0464]Mod. 58. O composto da Mod. 57, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que Q é selecionado do grupo consistindo em Q-3 e Q-4.
[0465]Mod 59. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-1; m é 1 ou 2; e R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0466]Mod. 60. O composto da Mod. 59, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-2.
[0467]Mod. 61. O composto da Mod. 59, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-3.
[0468]Mod. 62. O composto da Mod. 59, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-4.
[0469]Mod. 63. O composto da Mod. 59, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-5.
[0470]Mod. 64. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-6; m é 1 ou 2; e R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0471]Mod. 65. O composto da Mod. 64, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-7.
[0472]Mod. 66. O composto da Mod. 64, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-8.
[0473]Mod. 67. O composto da Mod. 64, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-9.
[0474]Mod. 68. O composto da Mod. 64, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é: LQ-10.
[0475]Mod. 69. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que L é um ligante não clivável.
[0476]Mod. 70. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o ligante compreende uma ou mais unidades de polietilenoglicol.
[0477]Mod. 71. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-11; m é 1 ou 2; e x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15.
[0478]Mod. 72. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-12; m é 1 ou 2; e x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15.
[0479]Mod. 73. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-14; m é 1 ou 2; x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15; e R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0480]Mod. 74. O composto da Mod. 73, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-15.
[0481]Mod. 75. O composto da Mod. 73, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-16.
[0482]Mod. 76. O composto da Mod. 73, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-17.
[0483]Mod. 77. O composto da Mod. 73, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-18.
[0484]Mod .78. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-19; m é 1 ou 2; x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15; e R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0485]Mod. 79. O composto da Mod. 78, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-20.
[0486]Mod 80. O composto da Mod. 78, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-21.
[0487]Mod 81. O composto da Mod. 78, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-22.
[0488]Mod 82. O composto da Mod. 78, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-23.
[0489]Mod. 83. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-13; e x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15.
[0490]Mod 84. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-29; e x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15.
[0491]Mod. 85. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-24; x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15; e R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0492]Mod. 86. O composto da Mod. 85, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-25.
[0493]Mod. 86A. O composto da Mod. 85, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-26.
[0494]Mod 87. O composto da Mod. 85, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-27.
[0495]Mod. 88. O composto da Mod. 85, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-28.
[0496]Mod. 89. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-30; x é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15; e R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0497]Mod. 90. O composto da Mod. 89, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-31.
[0498]Mod. 91. O composto da Mod. 89, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-32.
[0499]Mod. 92. O composto da Mod. 89, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-33.
[0500]Mod. 93. O composto da Mod. 89, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é LQ-34.
[0501]Mod. 94. O composto de qualquer uma das Mod. 55, 59-68 ou 71-82, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que m é 2.
[0502]Mod. 95. O composto de qualquer uma das Mod. 1-47, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que -L-Q- é qualquer uma as estruturas químicas da Tabela I.
[0503]Mod. 96. O composto de qualquer uma das Mod. 1-95, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que n é 2-8.
[0504]Mod. 97. O composto da Mod 96, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que n é 2-5.
[0505]Mod. 98. O composto de qualquer uma das Mod. 1-95, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que n é 2.
[0506]Mod. 99. O composto de qualquer uma das Mod. 1-95, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que n é 4.
[0507]Mod. 100. O composto de qualquer uma das Mod.. 1 ou 47-99, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide que é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela II.
[0508]Mod. 101. O composto da Mod. 100, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide selecionado do grupo consistindo em:
[0509]Mod. 102. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 é um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno ou em que A2 é um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno.
[0510]Mod. 103. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa que se liga a TNF alfa humano e/ou TNF alfa murino ou em que A2 é proteína que se liga a TNF alfa humano e/ou TNF alfa murino.
[0511]Mod. 104. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa que se liga a TNF solúvel ou em que A2 é uma proteína que se liga a TNF alfa solúvel.
[0512]Mod. 105. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa que se liga a TNF alfa ligado à membrana ou em que A2 é uma proteína que se liga a TNF alfa ligado à membrana.
[0513]Mod. 106. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa compreendendo um anticorpo anti-TNF ou em que A2 é proteína compreendendo um anticorpo anti-TNF.
[0514]Mod. 107. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa compreendendo um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo anti-TNF ou em que A2 é uma proteína compreendendo um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo anti-TNF.
[0515]Mod. 108. O composto de qualquer uma das Mod. 102-105 ou 107, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o fragmento de ligação ao antígeno é selecionado do grupo consistindo em Fab, Fab', F(ab')2, Fv de cadeia simples ou scFv, Fv ligados por dissulfeto, domínio V-NAR, IgNar, intracorpo, IgGΔCH2, minicorpo, F(ab')3, tetracorpo, triacorpo, diacorpo, anticorpo de domínio simples, DVD-Ig, Fcab, mAb2, (scFv)2 ou scFv-Fc.
[0516]Mod. 109. O composto de qualquer uma das Mod. 1 -108, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno é murino, quimérico, humanizado ou humano.
[0517]Mod. 110. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa compreendendo um receptor de TNF solúvel ou em que A2 é uma proteína compreendendo um receptor de TNF solúvel.
[0518]Mod. 111. O composto da Mod. 110, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o receptor de TNF solúvel é um receptor de TNF p75 solúvel.
[0519]Mod. 112. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 compreende um domínio constante de cadeia pesada ou um seu fragmento ou em que ou A2 compreende um domínio constante de cadeia pesada ou um seu fragmento.
[0520]Mod. 113. O composto da Mod. 112, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o domínio constante de cadeia pesada ou seu fragmento compreende um domínio constante selecionado do grupo consistindo em: (a) um domínio constante de IgA; (b) um domínio constante de IgD; (c) um domínio constante de IgE; (d) um domínio constante de IgG1; (e) um domínio constante de IgG2; (f) um domínio constante de IgG3; (g) um domínio constante de IgG4; e (h) um domínio constante de IgM ou é um seu fragmento.
[0521]Mod. 114. O composto da Mod. 113, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o domínio constante de cadeia pesada compreende um domínio constante de cadeia pesada de IgG1 humana ou seu fragmento.
[0522]Mod. 115. O composto da Mod. 114, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o domínio constante de cadeia pesada compreende um domínio Fc de IgG1 humana.
[0523]Mod. 116. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 compreende um domínio constante de cadeia leve ou um seu fragmento ou em que A2 compreende um domínio constante de cadeia leve ou um seu fragmento.
[0524]Mod. 117. O composto da Mod. 116, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o domínio constante de cadeia leve ou seu fragmento compreende um domínio constante selecionado grupo consistindo em (a) um domínio constante kappa de Ig e (b) um domínio constante lambda de Ig ou é um seu fragmento.
[0525]Mod. 118. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 inibe competitivamente a ligação de um anticorpo selecionado do grupo consistindo em adalimumab, infliximab, certolizumab pegol e golimumab a TNF-alfa ou em que A2 inibe competitivamente a ligação de um anticorpo selecionado do grupo consistindo em adalimumab, infliximab, certolizumab pegol e golimumab a TNF-alfa.
[0526]Mod. 119. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 se liga ao mesmo epítopo de TNF- alfa que um anticorpo selecionado do grupo consistindo em adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab e golimumab ou em que A2 se liga ao mesmo epítopo de TNF-alfa que um anticorpo selecionado do grupo consistindo em adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab e golimumab.
[0527]Mod. 120. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que a proteína anti-TNF alfa ou proteína é selecionada do grupo consistindo em adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab e golimumab.
[0528]Mod. 121. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 compreende as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada variável de SEQ ID NO:3 ou 6, SEQ ID NO:4 e SEQ ID NO:5, respectivamente, e as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve variável de SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33 e SEQ ID NO:34, respectivamente, ou em que A2 compreende as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada variável de SEQ ID NO:3 ou 6, SEQ ID NO:4 e SEQ ID NO:5, respectivamente, e as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve variável de SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33 e SEQ ID NO:34, respectivamente.
[0529]Mod. 122. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 compreende a sequência de cadeia pesada variável de SEQ ID NO:50 e a sequência de cadeia leve variável de SEQ ID NO:59 ou em que A2 compreende a sequência de cadeia pesada variável de SEQ ID NO:50 e a sequência de cadeia leve variável de SEQ ID NO:59.
[0530]Mod. 123. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 não se liga a TNF beta ou em que A2 não se liga a TNF beta.
[0531]Mod. 124. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 se liga a TNF beta ou em que A2 se liga a TNF beta.
[0532]Mod 125. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 neutraliza a citotoxicidade de TNF- alfa humano em um ensaio L929 in vitro padrão com uma IC50 de 1X10-7 M ou menor ou em que A2 neutraliza a citotoxicidade de TNF-alfa humano em um ensaio L929 in vitro padrão com uma IC50 de 1X10-7 M ou menor.
[0533]Mod. 126. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 bloqueia a interação de TNF-alfa com os receptores da superfície celular p55 e p75 ou em que A2 bloqueia a interação de TNF-alfa com os receptores da superfície celular p55 e p75.
[0534]Mod. 127. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A1 lisa células expressando TNF superficial in vitro na presença de complemento ou em que A2 lisa células expressando TNF superficial in vitro na presença de complemento.
[0535]Mod. 128. O composto da Mod 111, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o receptor de TNF p75 solúvel é etanercept.
[0536]Mod. 129. O composto da Mod. 102, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que o anticorpo é adalimumab.
[0537]Mod. 130. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, em que A1 se liga ao receptor gama de Fc ou em que A2 se liga ao receptor gama de Fc.
[0538]Mod. 131. O composto de qualquer uma das Mod. 1-101, em que A1 é ativo no ensaio repórter de TNF-alfa transmembranar de GRE e/ou no ensaio L929 ou em que A2 é ativo no ensaio repórter de TNF-alfa transmembranar de GRE e/ou no ensaio L929.
[0539]Mod. 132. O composto de qualquer uma das Mod. 1 ou 102-131, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela III, em que n é 1-5 e A é A1 ou A2.
[0540]Mod. 133. O composto da Mod. 132, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela IV, em que A é A1 ou A2.
[0541]Mod. 134. O composto de qualquer uma das Mod. 1 ou 102-131, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela V, em que n é 1-5 e A é A1 ou A2.
[0542]Mod. 135. O composto da Mod. 134, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que n é 2 ou 4.
[0543]Mod. 136. Uma composição farmacêutica compreendendo o composto de qualquer uma das Mod. 1-135, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, e um transportador farmaceuticamente aceitável.
[0544]Mod. 137. Uma composição farmacêutica compreendendo uma pluralidade de compostos de qualquer uma das Mod. 1-135, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que os compostos na composição farmacêutica têm uma média de 1 a 10 SM-L-Q por A1 ou A2, i.e., n é 1-10, 2 a 6 SM-L-Q por A1 ou A2, 3 a 4 SM-L-Q por A1 ou A2, cerca de 2 SM-L-Q por A1 ou A2, cerca de 3 SM-L-Q por A1 ou A2 ou cerca de 4 SM-L-Q por A1 ou A2.
[0545]Mod. 138. Um método para lise de uma célula expressando TNF-alfa da superficie compreendendo contacto da célula com o composto de qualquer uma das Mod. 1-135 ou a composição farmacêutica das Mod. 136 ou 137.
[0546]Mod. 139. Um método para tratamento de uma doença autoimune em um paciente com sua necessidade compreendendo administração ao referido paciente do composto de qualquer uma das Mod. 1-135 ou da composição farmacêutica das Mod. 136 ou 137.
[0547]Mod. 140. O método da Mod. 139, em que a referida doença autoimune é artrite reumatoide, artrite idiopática juvenil, artrite psoriática, espondilite anquilosante, doença de Crohn adulta, doença de Crohn pediátrica, colite ulcerosa, psoríase em placas, hidradenite supurativa, uveíte, doença de Behçet, uma espondiloartropatia ou psoríase.
[0548]Mod. 141. Um método para tratamento de uma doença ou disfunção caracterizada por TNF-alfa aumentado no fluido sinovial em um paciente com sua necessidade do composto de qualquer uma das Mod. 1-135 ou da composição farmacêutica das Mod. 136 ou 137.
[0549]Mod. 142. Um composto tendo a Fórmula VII, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2SH, -CH2Cl, -SCH2Cl, - SCH2F, -SCH2CF3, hidróxi, -OCH2CN, -OCH2Cl, -OCH2F, -OCH3, -OCH2CH3, - R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, -CH2OH e alcóxi C1-4; R3d e R3e são independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-4; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NR5-, -CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d- e -C=C-; ou X está ausente; t é 1 ou 2; Z é selecionado do grupo consistindo em =CR11a- e =N-; cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4ae R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4c e R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6b, R6c e R6d são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R7b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -L-H, -L-PG, o e o ; m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; L é um ligante; PG é um grupo protetor; R9f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11a e R11b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla.
[0550]Mod. 143. O composto da Mod. 142, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é selecionado do grupo consistindo em R7b- 1, R7b-2 e R7b-3; m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; e R10a e R10b são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0551]Mod. 144. O composto das Mod. 142 ou 143, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, tendo a Fórmula VIII.
[0552]Mod. 145. O composto da Mod. 144, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, tendo a Fórmula VIII-a.
[0553]Mod. 146. O composto da Mod. 144, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, tendo a Fórmula VIII-b.
[0554]Mod. 147. O composto da Mod. 142 ou 143, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, tendo a Fórmula IX.
[0555]Mod. 148. O composto da Mod. 147, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, tendo a Fórmula IX-a.
[0556]Mod. 149. O composto da Mod. 147, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, tendo a Fórmula IX-b.
[0557]Mod. 150. O composto de qualquer uma das Mod. 142-149, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que — representa uma ligação dupla.
[0558]Mod. 151. O composto de qualquer uma das Mod. 142-150, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e flúor.
[0559]Mod. 152. O composto de qualquer uma das Mod. 142-151, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e flúor.
[0560]Mod. 153. O composto de qualquer uma das Mod. 142-152, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2Cl, -SCH2Cl, -SCH2F e hidróxi.
[0561]Mod. 154. O composto de qualquer uma das Mod. 142-152, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R3 é selecionado do grupo consistindo em:
[0562]R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila; R3b é selecionado do grupo consistindo em metila, etila, isopropila, isobutila, metóxi, etóxi, isopropóxi e isobutóxi; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, metila, etila, -CH2OH, metóxi, etóxi e isopropóxi; R3d e R3e são independentemente selecionadas do grupo consistindo em hidrogênio, metila e etila.
[0563]Mod. 155. O composto de qualquer uma das Mod. 142-154, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R5e R8a são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e metila.
[0564]Mod. 156. O composto de qualquer uma das Mod. 142-155, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que Z é =CH-.
[0565]Mod. 157. O composto de qualquer uma das Mod. 142-155, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que Z é =N-.
[0566]Mod. 158. O composto de qualquer uma das Mod. 142-155, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila.
[0567]Mod. 159. O composto da Mod 158, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7a é hidrogênio.
[0568]Mod. 160. O composto da Mod 158, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7a é metila.
[0569]Mod. 161. O composto de qualquer uma das Mod. 142-160, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que:
[0570]X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)- , -S(=O)2-, -CH2S- e -N(H)CH(R8a)-; t é 1; e R4a e R4b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e metila; ou R4ae R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 membros.
[0571]Mod. 162. O composto da Mod. 161, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é -CH2-.
[0572]Mod. 163. O composto da Mod. 161, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é selecionado do grupo consistindo em:
[0573]Mod. 164. O composto da Mod. 161, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é -O-.
[0574]Mod. 165. O composto da Mod. 161, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é -S-.
[0575]Mod. 166. O composto da Mod. 161, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é -CH2S-.
[0576]Mod. 167. O composto da Mod. 161, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é -N(H)CH2-.
[0577]Mod. 168. O composto da Mod. 161, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que X é selecionado do grupo consistindo em:
[0578]Mod. 169. O composto de qualquer uma das Mod. 142-168, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R11b é hidrogênio.
[0579]Mod. 170. O composto de qualquer uma das Mod. 142-169, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é hidrogênio.
[0580]Mod. 171. O composto de qualquer uma das Mod. 142-170, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R6b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -Cl, -OCH3 e hidróxi.
[0581]Mod. 172. O composto de qualquer uma das Mod. 142-171, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R9f é hidrogênio.
[0582]Mod. 173. O composto de qualquer uma das Mod. 142-171, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R9f é metila.
[0583]Mod. 174. O composto de qualquer uma das Mod. 142-173, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R11a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e hidróxi.
[0584]Mod. 175. O composto de qualquer uma das Mod. 142-174, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R11b é hidrogênio.
[0585]Mod. 176. O composto de qualquer uma das Mod. 143-175, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-1.
[0586]Mod. 177. O composto da Mod. 176, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R10a e R10b são independentemente alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0587]Mod. 178. O composto de qualquer uma das Mod. 143-175, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-2 e PG é BOC.
[0588]Mod 179. O composto da Mod. 178, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R10a e R10b são independentemente alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0589]Mod. 180. O composto de qualquer uma das Mod. 143-175, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-3.
[0590]Mod. 181. O composto da Mod. 180, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que m é 1 ou 2 e R10a e R10b são cada um alquila C16 opcionalmente substituída.
[0591]Mod. 182. O composto da Mod. 142, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um ou mais dos compostos da Tabela VI.
[0592]Mod. 183. O composto da Mod. 182, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, selecionado do grupo consistindo em:
[0593]Mod. 184. O composto da Mod. 142, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer uma ou mais das estruturas químicas da Tabela VIII, em que R7b é selecionado do grupo consistindo em R7b-4, R7b-5 e R7b-6.
[0594]Mod 185. O composto da Mod. 184, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-4.
[0595]Mod 186. O composto da Mod. 184, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-5.
[0596]Mod. 187. O composto da Mod. 184, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-6.
[0597]Mod. 188. O composto da Mod. 142, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer uma ou mais das estruturas químicas da Tabela VIII,
[0598]em que R7b é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela IX.
[0599]Mod. 189. O composto da Mod. 142, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um dos compostos da Tabela X.
[0600]Mod. 190. O composto da Mod.142, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um dos compostos da Tabela VII.
[0602]Mod. 192. O composto da Mod. 142, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um dos compostos da Tabela XI,
[0603]em que R7b é selecionado do grupo consistindo em R7b-4, R7b-5 e R7b- 6.
[0604]Mod. 193. O composto da Mod. 192, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-4.
[0605]Mod. 194. O composto da Mod. 192, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-5.
[0606]Mod. 195. O composto da Mod. 192, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-6.
[0607]Mod. 196. O composto da Mod. 142, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela XI,
[0608]em que R7b qualquer uma das estruturas da Tabela IX.
[0609]Mod. 197. O composto da Mod 142, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um dos compostos da Tabela XII.
[0610]Mod. 198. Uma composição farmacêutica compreendendo o composto de qualquer uma das Mod. 142-197, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é hidrogênio, e um transportador farmaceuticamente aceitável.
[0611]Mod. 199. Um método para tratamento de uma doença autoimune ou inflamatória em um paciente com sua necessidade, compreendendo o método administração ao referido paciente do composto de qualquer uma das Mod. 142-197, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é hidrogênio, ou da composição farmacêutica da Mod 198.
[0612]Mod. 200. O método da Mod. 199, em que a referida doença autoimune é artrite reumatoide, artrite idiopática juvenil, artrite psoriática, espondilite anquilosante, doença de Crohn adulta, doença de Crohn pediátrica, colite ulcerosa, psoríase em placas ou hidradenite supurativa.
[0613]Mod. 201. Um método de preparação de um composto tendo a Fórmula I-c, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que: A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa; L é um ligante; n é 1-10; e SM é um radical de um glucocorticoesteroide, compreendendo o método: a) conjugação de um composto tendo a Fórmula X com uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF); e b) isolamento do composto tendo a Fórmula I-c ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.
[0614]Mod 202. O método da Mod. 201 compreendendo adicionalmente hidrólise do composto tendo a Fórmula Ic para dar um composto tendo a Fórmula Id.
[0615]Mod. 203. Um método de preparação de um composto tendo a Fórmula I-e, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que: A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa; L é um ligante; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; n é 1-10; m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; e SM é um radical de um glucocorticoesteroide, compreendendo o método: a) conjugação de um composto tendo a Fórmula XI com uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF); e b) isolamento do composto tendo a Fórmula I-e ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.
[0616]Mod. 204. O método da Mod. 203 compreendendo adicionalmente hidrólise do composto tendo a Fórmula I-e para dar um composto tendo a Fórmula If.
[0621]Mod. 209. O composto da Mod. 132, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer uma das estruturas químicas da Tabela IV, em que A é A1 ou A2.
[0622]A divulgação proporciona também as Mod. I-XXXIII como modalidades particulares. As Fórmulas e Tabelas em referência a estas modalidades particulares que não são mostradas nas Mod. I-XXXIII são apresentadas na descrição acima.
[0623]Mod I. Um composto tendo a Fórmula I-a: (SM-L-Q)n-A1I-a em que: A1 é uma proteína antifator da necrose tumoral (TNF) alfa; L é um ligante; Q é um grupo heterobifuncional ou grupo heterotrifuncional; ou Q está ausente; n é 1-10; e SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide.
[0624] Mod Il.Um composto tendo a Fórmula I-b: (SM-L-Q)n-A2I-b em que A2 é uma proteína; L é um ligante; Q é um grupo heterobifuncional ou grupo heterotrifuncional; ou Q está ausente; n é 1-10; e SM é um radical de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-m ou Fórmula II-p; R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, - CH2SH, -CH2Cl, -SCH2Cl, -SCH2F, -SCH2CF3, hidróxi, -OCH2CN, -OCH2Cl, -OCH2F, OH Y 'OH r\z°Y°YR \/°YR -OCH3, -OCH2CH3, -SCH2CN, C02H , R3a o , e
R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila Ci- 4; R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, -CH2OH e alcóxi C1-4; R3d e R3e são independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6b, R6c, R6d e R6e são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, - S(=O)2-, -NR5-, -CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d- e -C=C-; ou X está ausente; Y2 é selecionado do grupo consistindo em -O-, -S- e -N(R7a)-; ou Y2 está ausente; t é 1 ou 2; Z é selecionado do grupo consistindo em =CR11a- e =N-; cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4ae R4b, tomados em conjunto com o átomo ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4ce R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R9f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11a e R11b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla.
[0625]Mod III.O composto das Mod. I ou II, em que SM é um radical de um glucocorticoesteroide tendo a Fórmula II-m; R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2SH, -CH2Cl, -SCH2Cl, - SCH2F, -SCH2CF3, hidróxi, -OCH2CN, -OCH2Cl, -OCH2F, -OCH3, -OCH2CH3, - R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, -CH2OH e alcóxi C1-4; R3d e R3e são independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6c, R6c, R6d e R6e são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NR5-, - CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d- e -CEC-; ou X está ausente; Y2 é selecionado do grupo consistindo em -O-, -S- e -N(R7a)-; ou Y2 está ausente; t é 1 ou 2; Z é =CH-; cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4ae R4b, tomados em conjunto com o átomo ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4c e R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R9f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla.
[0626]Mod IV.O composto das Mod. II ou III, em que — representa uma ligação dupla; R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e flúor; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e flúor; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2Cl, -SCH2Cl, -SCH2F e
[0627] e R3e são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, metila e etila; R6a, R6c, R6d e R6e são hidrogênio; X é selecionado do grupo consistindo em -CH2-, -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -CH2S- e - N(H)CH2-; Y2 é -N(H)-; Z é =CH-; R9f é hidrogênio; e R11b é hidrogênio.
[0628]Mod. V.O composto de qualquer uma das Mod. I-IV, em que L é um ligante compreendendo um dipeptídeo.
[0629]Mod. VI.O composto de qualquer uma das Mod. I-V, em que Q é um grupo heterobifuncional selecionado do grupo consistindo em Q-3 e Q-4 e m é 1, 2, 3 ou 4.
[0630]Mod. VII.O composto de qualquer uma das Mod. I-VII, em que -L-Q- é LQ-7; m é 2 ou 3; e R10a e R10b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4.
[0631]Mod. VIII.O composto de qualquer uma das Mod. I-VII, em que n é 2-5.
[0632]Mod. IX.O composto das Mod. I ou II, em que SM é um radical monovalente de um glucocorticoesteroide que é qualquer um dos compostos da Tabela II.
[0633]Mod. X. O composto de qualquer uma das Mod. I ou III-IX, em que A1 é (i) um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno que se liga a TNF alfa humano ou (ii) um receptor de TNF solúvel.
[0634]Mod. XI. O composto de qualquer uma das Mod. I ou III-X, em que A1 é selecionado do grupo consistindo em adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab e golimumab.
[0635]Mod. XII.O composto da Mod. I, que é qualquer um ou mais dos compostos da Tabela III, em que n é 1-5; A é A1; e A1 é selecionado do grupo consistindo em adalimumab, infliximab, certolizumab pegol, afelimomab, nerelimomab, ozoralizumab, placulumab e golimumab.
[0636]Mod. XIII.O composto da Mod II, que é qualquer um ou mais dos compostos da Tabela III, em que n é 1-5; A é A2; e A2 é selecionado do grupo consistindo em anticorpo, um seu fragmento de ligação ao antígeno ou uma proteína receptora solúvel.
[0637]Mod. XIV.Um composto selecionado do grupo consistindo em:
em que n é 1-5 e A é um anticorpo compreendendo as sequências de cadeia pesada e leve de SEQ ID NO:66 e SEQ ID NO:73, respectivamente. Mod. XV.O composto da Mod. XIV selecionado do grupo consistindo em: Estrutura
[0644]Mod. XXII. Uma composição farmacêutica compreendendo o composto de qualquer uma das Mod. I-XXI e um transportador farmaceuticamente aceitável.
[0645]Mod. XXIII. Um método para tratamento de uma doença autoimune em um paciente com sua necessidade compreendendo administração ao referido paciente do composto de qualquer uma das Mod. I-XXI ou da composição da Mod. XXII, opcionalmente em que a referida doença autoimune é artrite reumatoide, artrite idiopática juvenil, artrite psoriática, espondilite anquilosante, doença de Crohn adulta, doença de Crohn pediátrica, colite ulcerosa, psoríase em placas, hidradenite supurativa, uveíte, doença de Behçet, uma espondiloartropatia ou psoríase.
[0646]Mod. XXIV. Um composto tendo a Fórmula VII, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2SH, -CH2Cl, -SCH2Cl, - SCH2F, -SCH2CF3, -CH2OS(=O)2OH, hidróxi, -OCH2CN, -OCH2Cl, -OCH2F, -OCH3, - OH A^O^/kJDH /L o n p3b /í R3C Y 'OH OCH2CH3, -SCH2CN, C02H , R3a o , e
; R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C14; R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4; R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, -CH2OH, alcóxi C1-4, - CH2(amino) e -CH2CH2C(=O)OR3f; R3d e R3e são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R3f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, - O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NR5-, -CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d-, - C=C-, -N(R5)C(=O)- e -OC(=O)-; ou X está ausente; t é 1 ou 2; Z é selecionado do grupo consistindo em =CR11a- e =N-; cada R4ae R4bé independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou R4ae R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros; R4c e R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R6a, R6b, R6c e R6d são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R7b é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio,
e R7b, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formam: o ; ou R7a e R7b, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formam um grupo nitro (-NO2); m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; L é um ligante; PG é um grupo protetor; R9f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; R11a e R11b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e — representa uma ligação simples ou dupla
[0648]ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que:
[0649]R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e halo;
[0650]R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo e hidróxi;
[0651]R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2SH, -CH2Cl, - SCH2Cl, -SCH2F, -SCH2CF3, -CH2OS(=O)2OH, hidróxi, -OCH2CN, -OCH2Cl, -OCH2F, OH O^ P-,, FCí Cí p3b <Z«. p3c Y OH r\zoY°'yR -OCH3, -OCH2CH3, -SCH2CN, C02H , R3a o , e
[0652]R3a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4;
[0653]R3b é selecionado do grupo consistindo em alquila C1-4 e alcóxi C1-4;
[0654]R3c é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila C1-4, - CH2OH, alcóxi C1-4, -CH2 (amino) e -CH2CH2C(=O)OR3f;
[0655]R3d e R3e são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4;
[0656]R3f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; X é selecionado do grupo consistindo em -(CR4aR4b)t-, -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NR5- , -CH2S-, -CH2O-, -N(H)C(R8a)(R8b)-, -CR4c=CR4d-, -CEC-, -N(R5)C(=O)- e -OC(=O)-; ou
[0657]X está ausente;
[0658]t é 1 ou 2;
[0659]Z é selecionado do grupo consistindo em =CR11a- e =N-;
[0660]cada R4a e R4b é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; ou
[0661]R4a e R4b, tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam uma cicloalquila com 3 a 6 membros;
[0662]R4c e R4d são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4;
[0663]R5 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4;
[0664]R6a, R6b e R6c são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi;
[0665]R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4;
[0667]R7a e R7b, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formam: o
[0669]m é 1,2, 3, 4, 5 ou 6;
[0670]L é um ligante;
[0671]PG é um grupo protetor;
[0672]R9f é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4;
[0673]R8a e R8b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4;
[0674]R11a e R11b são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, halo, alquila C1-4, haloalquila C1-4, ciano, hidróxi, tiol, amino, alquiltio e alcóxi; e
[0675]— representa uma ligação simples ou dupla.
[0676]Mod. XXVI. O composto das Mod. XXIV ou XXV, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é selecionado do grupo consistindo em R7b-1, R7b-2 e R7b-3; m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; e R10a e R10b são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-6 opcionalmente substituída.
[0677]Mod. XXVII.O composto das Mod. XXIV ou XXVI, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, tendo a Fórmula VIII-a.
[0678]Mod. XXVIII.O composto de qualquer uma das Mod. XXIV-XXVII, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que — representa uma ligação dupla; R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e flúor; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e flúor; R3 é selecionado do grupo consistindo em -CH2OH, -CH2Cl, -SCH2Cl, -SCH2F e o'R3e ; R3d e R3e são independentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, metila e etila; Z é =CH-; R6a, R6b, R6c e R6d são hidrogênio; R7a é hidrogênio; X é selecionado do grupo consistindo em -CH2-, -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -CH2S- e -N(H)CH2-; R9f é hidrogênio; e R11b é hidrogênio.
[0679]Mod. XXIX. O composto de qualquer uma das Mod. XXIV-XXVIII, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é hidrogênio.
[0680]Mod. XXX.O composto de qualquer uma das Mod. XXIV-XXVIII, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-1.
[0681]Mod. XXXI. O composto de qualquer uma das Mod. XXIV-XXVIII, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-2 e PG é BOC.
[0682]Mod. XXXII.O composto de qualquer uma das Mod. XXIV-XXVIII, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que R7b é R7b-3.
[0683]Mod. XXXIII.O composto da Mod. XXIX, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um ou mais dos compostos da Tabela VI.
[0684]Mod. XXXIV.O composto da Mod. XXIX, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um dos compostos da Tabela VII.
[0685]Mod. XXXV.O composto da Mod. XXXIII, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é:
[0686]Mod. XXXVI.O composto da Mod. XXIV, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um ou mais dos compostos da Tabela VIII, em que R7b é selecionado do grupo consistindo em R7b-4, R7b-5 e R7b-6.
[0687]Mod. XXXVII.O composto da Mod. XXIV, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que é qualquer um ou mais dos compostos da Tabela X.
[0689]Mod. XXXIX.Um método de preparação de um composto tendo a Fórmula I-e: ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, em que A é A1 ou A2; A1 é uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa; A2 é uma proteína; L é um ligante; R7a é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila C1-4; n é 1-10; m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; e SM é um radical de um glucocorticoesteroide,
[0690]compreendendo o método:
[0692]com uma proteína antifator de necrose tumoral (TNF) alfa ou uma proteína; e
[0693]b) isolamento do composto tendo a Fórmula I-e ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.
[0694]Mod XL.O método da Mod. XXXIV compreendendo adicionalmente hidrólise do composto tendo a Fórmula I-e para dar um composto tendo a Fórmula I- f: ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.
[0696]Mod. XLII.Uma composição compreendendo o composto da Mod. XLI.
[0697]As modalidades da presente divulgação podem ser adicionalmente definidas por referência aos seguintes exemplos não limitantes, que descrevem em detalhe preparação de certos anticorpos da presente divulgação e métodos para uso de anticorpos da presente divulgação. Será aparente aos peritos na técnica que muitas modificações, tanto aos materiais como aos métodos, podem ser praticadas sem se afastar do escopo da presente divulgação. Exemplos
[0698]É entendido que os exemplos e modalidades descritos aqui são somente para propósitos ilustrativos e que várias modificações ou mudanças no mesmo contexto serão sugeridas a peritos na técnica e são para serem incluídas dentro do espírito e alcance desta divulgação.
[0699]Os dados analíticos estão incluídos dentro dos procedimentos em baixo, nas ilustrações dos procedimentos gerais ou nas tabelas de exemplos. A não ser que de outro modo apresentado, todos os dados de 1H e 13C foram coletados em um instrumento Mercury Plus 400 MHz da Varian ou AVIII 300 MHz da Bruker; os desvios químicos são apresentados em partes por milhão (ppm). Os dados analíticos de HPLC estão detalhados dentro da experimental ou referenciados à tabela de condições de LC/MS e HPLC, usando o método proporcionado na Tabela 7. Tabela 7: Lista de Métodos LC/MS e GC/MS
Exemplo 1: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-(4-aminofenoxi)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0701]A uma solução de (4-hidróxifenil)carbamato de terc-butila (10 g, 47,8 mmol) e 4-fluorobenzaldeído (11,86 g, 96 mmol) em N,N-dimetilformamida (100 mL) foi adicionado carbonato de potássio (39,6 g, 287 mmol). A mistura foi agitada a 90 °C durante 5 horas. Um frasco adicional foi definido como descrito acima. Todas as duas misturas reacionais foram combinadas e diluídas com DCM (300 mL), depois extraídas com água (3 X 100 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (100 mL) e seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (eluído com PE: EtOAc = 30:1 a 5:1) para se obter o composto alvo (20 g, 63,8 mmol, rendimento de 66,7%) como um sólido amarelo. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 9,91 (s, 1H), 9,45 (s, 1H), 7,90 (d, J=8,6 Hz, 2H), 7,54 (d, J=8,8 Hz, 2H), 7,11 - 7,02 (m, 4H), 1,48 (s, 9H).
[0702]Passo 2: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)- 10-(4-(4-aminofenoxi)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona uma suspensão de
[0703]Foi permitido que uma suspensão de (6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-difluoro-11,16,17-tri-hidroxi-17-(2- hidroxiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3Hciclopenta[a]fenantren-3-ona (4,5 g, 10,91 mmol) e sulfato de magnésio (6,57 g, 54,6 mmol) em MeCN (100 mL) agitasse a 20 oC durante 1 hora. Uma solução de 4-(4- formilfenóxi)fenil)carbamato de terc-butila (3,42 g, 10,91 mmol) em MeCN (100 mL) foi adicionada em uma porção. Ácido trifluorometanossulfônico (4,84 mL, 54,6 mmol) foi adicionada gota a gota através de seringa enquanto se mantinha uma temperatura interna de 25 °C usando um banho de gelo. Após a adição, a mistura foi agitada a 20 ºC durante 2 horas. Três frascos adicionais foram definidos como descrito acima. Todas as quatro misturas reacionais foram combinadas e filtradas, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar um resíduo, que foi purificado por HPLC Prep para se obter o composto alvo (7,5 g, 12,34 mmol, rendimento de 28,8%) como um sólido amarelo. LCMS (Método a, Tabela 7) Tr = 2,21 min; MS m/z = 608,3 (M+H)+; 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 7,36 (d, J=8,6 Hz, 2H), 7,27 (d, J=10,1 Hz, 1H), 6,85 (d, J=8,6 Hz, 2H), 6,75 (d, J=8,6 Hz, 2H), 6,75 (d, J=8,6 Hz, 2H), 6,75 (d, J=1,3, 10,1 Hz, 1H), 6,13 (s, 1H), 5,76 - 5,65 (m, 1H), 5,62 - 5,57 (m, 1H), 5,54 (d, J=3,1 Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 5,12 (t, J=5,8 Hz, 1H), 5,00 (s, 2H), 4,94 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,53 (dd, J=6,4, 19,4 Hz, 1H), 4,26 - 4,14 (m, 2H), 2,72 - 2,58 (m, 1H), 2,34 - 2,17 (m, 2H), 2,04 (d, J=13,7 Hz, 1H), 1,77 - 1,62 (m, 3H), 1,49 (s, 3H), 0,86 (s, 3H). Método de HPLC Prep: Instrumento: Sistema de HPLC semipreparativa Gilson 281, Fase móvel: A: CF3CO2H/H2O = 0,075% v/v; B: CH3OH; Coluna: Luna C18 250*50 mm*10 um da Phenomenex; Caudal: 80 mL/min; Comprimento de onda do monitorizador: 220 & 254 nm. Exemplo 2: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10- (4-(3-aminobenzil)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0705]Hidreto de di-isobutilalumínio (153 mL, 153 mmol, 1 M em tolueno) foi adicionado gota a gota a uma solução a 0 °C de 4-(bromometil)benzonitrila (20 g, 102 mmol) em tolueno (400 mL ao longo de 1 hora). Dois frascos adicionais foram definidos como descrito acima. Todas as três misturas reacionais foram combinadas. A solução de mistura foi adicionada HCl aquoso a 10% (1,5 L). A mistura foi extraída com DCM (3 X 500 mL). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (eluído com PE/EtOAc = 10/1) para se obter o composto alvo (50 g, rendimento de 82%) como sólido branco. 1H RMN (400MHz, clorofórmio-d) δ 10,02 (s, 1H), 7,91 - 7,82 (m, 2H), 7,56 (d, J=7,9 Hz, 2H), 4,55 - 4,45 (m, 2H).
[0707]A uma solução de 3-bromoanilina (40 g, 233 mmol) em 1,4-dioxano (480 mL) foram adicionados 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (94 g, 372 mmol), acetato de potássio (45,6 g, 465 mmol), 2-diciclo-hexilfosfino-2',4',6'-tri-i- propil-1,1'-bifenila (X-phos) (8,07 g, 13,95 mmol), tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (0) (8,52 g, 9,30 mmol). Depois, a mistura foi aquecida a 80 °C durante 4 horas sob nitrogênio. Outro frasco adicional foi definido como descrito acima. Duas misturas reacionais foram combinadas, concentradas e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (eluído com PE/EtOAc = 10/1) para se obter o composto alvo (60 g, rendimento de 55,4%) como sólido amarelo-claro. 1H RMN (400MHz, clorofórmio-d) δ 7,23 - 7,13 (m, 3H), 6,80 (d, J=7,5 Hz, 1H), 3,82 - 3,38 (m, 2H), 1,34 (s, 12H).
[0708]Passo 3: Síntese de (3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)fenil)carbamato de terc-butila
[0709]3-(4,4,5,5-Tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)anilina (30 g, 137 mmol) e dicarbonato de di-terc-butila (38,9 g, 178 mmol) foram misturados em tolueno (600 mL) a 100 °C durante 24 horas. Outro frasco adicional foi definido como descrito acima. Duas misturas reacionais foram combinadas. A mistura marrom foi evaporada, dissolvida em EtOAc (1,5 L), lavada com HCl a 0,1 N (3 X 2 L) e salmoura (3 L), seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para dar o composto do título (50 g, rendimento 57%) como sólido vermelho. 1H RMN (400MHz, clorofórmio- d) δ 7,63 (s l, 2H), 7,48 (d, J=7,1 Hz, 1H), 7,37 - 7,28 (m, 1H), 1,52 (s, 9H), 1,34 (s, 12H).
[0711]Uma mistura de 4-(bromometil)benzaldeído (24,94 g, 125 mmol), complexo de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaládio (II) e DCM (13,75 g, 18,80 mmol), (3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)carbamato de terc-butila (20 g, 62,7 mmol) e carbonato de potássio (43,3 g, 313 mmol) em tetra-hidrofurano (400 mL) foi aquecida até 80 °C durante 12 horas. Outro frasco adicional foi definido como descrito acima. Duas misturas reacionais foram combinadas. A mistura reacional foi diluída com água (500 mL). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 500 mL). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (eluído com PE/EtOAc = 10/1) para se obter o composto do título (15 g, rendimento de 38,4%) como sólido branco. 1H RMN (400MHz, clorofórmio-d) δ 9,95 (s, 1H), 7,78 (d, J=7,9 Hz, 2H), 7,33 (d, J=7,9 Hz, 2H), 7,33 (d, J=7,1 Hz, 1H), 6,47 (s l, 1H), 4,00 (s, 2H), 1,48 (s, 9H).
[0712]Passo 5: Síntese de (6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9- difluoro-11,16,17-tri-hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)-10,13-dimetil- 6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona
[0713](2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,11 aR, 12aS, 12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b- (2-hidroxiacetil)-6a,8a,10,10-tetrametil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca- hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4-ona (20 g, 44,2 mmol) foi suspensa em HBF4 aquoso a 40% (440 mL) e a mistura foi agitada a 25 °C durante 48 horas. Após a reação estar completa, 2 L de H2O foram adicionados e o sólido foi coletado por filtração para dar um sólido branco. Este sólido foi lavado com H2O (1 L) e depois MeOH (200 mL) para dar o composto do título (11 g, rendimento 60,3%) como um sólido branco. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 7,25 (d, J=10,1 Hz, 1H), 6,28 (d, J=10,1 Hz, 1H), 6,28 (d, J=19,4 Hz, 1H), 4,20 - 4,04 (m, 2H), 2,46 - 2,06 (m, 6H), 1,87 - 1,75 (m, 1H), 1,56 - 1,30 (m, 6H), 0,83 (s, 3H).
[0714]Passo 6: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)- 10-(4-(3-aminobenzil)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0715]Foi permitido que uma suspensão de (6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-difluoro-11,16,17-tri-hidroxi-17-(2- hidroxiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H- ciclopenta[a]fenantren-3-ona (4,4 g, 10,67 mmol) e sulfato de magnésio (6,42 g, 53,3 mmol) em MeCN (100 mL) agitasse a 20 °C durante 1 hora. Uma solução de 3-(4- formilbenzil)fenil)carbamato de terc-butila (3,65 g, 11,74 mmol) em MeCN (100 mL) foi adicionada em uma porção. Ácido trifluorometanossulfônico (9,01 mL, 53,3 mmol) foi adicionada gota a gota enquanto se mantinha uma temperatura interna abaixo de 25 °C usando um banho de gelo. Após a adição, a mistura foi agitada a 20 °C durante 2 horas. Três frascos adicionais foram definidos como descrito acima. Todas as quatro misturas reacionais foram combinadas. A solução de mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por HPLC Prep para dar o composto do título (4,5 g, rendimento 14,2%) como sólido amarelo. LCMS (Método l, Tabela 7) Tr = 2,65 min; MS m/z = 606,2 (M+H)+; 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 7,44 - 7,17 (m, 5H), 6,89 (t, J=7,7 Hz, 1H), 6,44 - 6,25 (m, 4H), 6,13 (s l, 1H), 5,79 - 5,52 (m, 2H), 5,44 (s, 1H), 5,17 - 4,89 (m, 3H), 4,51 (d, J=19,4 Hz, 1H), 4,25 - 4,05 (m, 2H), 3,73 (s, 2H), 3,17 (s l, 1H), 2,75 - 2,55 (m, 1H), 2,36 - 1,97 (m, 3H), 1,76 - 1,64 (m, 3H), 1,59 - 1,39 (m, 4H), 0,94 - 0,78 (m, 3H). Método de HPLC Prep: Instrumento: Sistema de HPLC semipreparativa Gilson 281; Fase móvel: A: Ácido fórmico/H2O = 0,01% v/v; B: CH3CN; Coluna: Luna C18 150*25 5 mícrons; Caudal: 25 mL/min; Comprimento de onda do monitorizador: 220 e 254 nm. Exemplo 2A: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- (3-aminobenzil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona (Comp. N.° 41)
[0717]A uma solução de 4-(bromometil)benzonitrila (50 g, 255 mmol) em tolueno (1 L) foi adicionado hidreto de di-isobutilalumínio (383 mL, 383 mmol, 1 M em tolueno) gota a gota a 0 °C. A mistura foi agitada durante 1 hora. Dois frascos adicionais foram definidos como descrito acima. Todas as três misturas reacionais foram combinadas. HCl aquoso a 10% (1,5 L) foi adicionado e depois extraído com DCM (3 X 1,5 L). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (eluído com éter de petróleo/acetato de etila = 10/1) para originar o composto do título (120 g, 82%) como um sólido branco. 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 10,01 (s, 1H), 7,86 (d, J=8,4 Hz, 2H), 7,55 (d, J=7,9 Hz, 2H), 4,51 (s, 2H).
[0719]A uma solução de 3-bromoanilina (80 g, 465 mmol) em 1,4-dioxano (960 mL) foram adicionados 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (177 g, 698 mmol), acetato de potássio (91 g, 930 mmol), 2-diciclo-hexilfosfino-2',4',6'-tri-i- propil-1,1'-bifenila (13,45 g, 23,25 mmol) e tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (0) (17,03 g, 18,60 mmol). A mistura foi aquecida a 80 °C durante 4 horas sob nitrogênio. Dois frascos adicionais foram definidos como descrito acima. Três misturas reacionais foram combinadas, concentradas e o resíduo purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (eluído com éter de petróleo/acetato de etila = 10/1) para originar o composto do título (150 g, 46,6%) como um sólido amarelo-claro. 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 7,23 - 7,13 (m, 3H), 6,80 (d, J=7,5 Hz, 1H), 3,82 - 3,38 (m, 2H), 1,34 (s, 12H).
[0720]Passo 3: Síntese de (3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)fenil)carbamato de terc-butila
[0721]3-(4,4,5,5-Tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)anilina (50 g, 228 mmol) e dicarbonato de di-terc-butila (64,8 g, 297 mmol) foram misturados em tolueno (500 mL) e a mistura agitada a 100 °C durante 24 horas. Dois frascos adicionais foram definidos como descrito acima. As três misturas reacionais foram combinadas. A mistura marrom foi concentrada e o resíduo foi lavado com PE para originar o composto do título (120 g, 49,5%) como um sólido branco. 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 7,62 (s, 2H), 7,48 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,35 - 7,29 (m, 1H), 6,46 (s l, 1H), 1,52 (s, 9H), 1,34 (s, 12H).
[0723]Uma mistura de 4-(bromometil)benzaldeído (29,9 g, 150 mmol), 1,1'- bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaládio (II) (20,63 g, 28,2 mmol), (3-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)carbamato de terc-butila (30 g, 94 mmol) e carbonato de potássio (64,9 g, 470 mmol) em THF (600 mL) foi aquecida até 80 °C durante 12 horas. Três frascos adicionais foram definidos como descrito acima. Todas as quatro misturas reacionais foram combinadas. A mistura reacional foi diluída com água (1 L). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 X 800 mL). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (eluído com PE/EtOAc = 10/1) para originar o composto do título (35,5 g, 27,3%) como um sólido branco. 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 9,97 (s, 1H), 7,80 (d, J=7,9 Hz, 2H), 7,35 (d, J=7,9 Hz, 2H), 7,35 (d, J=7,1 Hz, 1H), 6,43 (s l, 1H), 4,02 (s, 2H), 1,50 (s, 9H).
[0724]Passo 5: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-(3-aminobenzil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0725]A uma solução de (8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-tri- hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca- hidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona (6 g, 15,94 mmol) e (3-(4- formilbenzil)fenil)carbamato de terc-butila (4,96 g, 15,94 mmol) em MeCN (50 mL) foi adicionado ácido perclórico (4,79 mL, 80 mmol) gota a gota enquanto se mantinha uma temperatura interna abaixo de 25 °C usando um banho de gelo. Após a adição, a mistura foi agitada a 20 °C durante 2 horas. Três frascos adicionais foram definidos como descrito acima. Todas as quatro misturas reacionais foram combinadas. A mistura reacional foi extinta com NaHCO3 aquoso saturado (500 mL) e extraída com diclorometano (3 X 800 mL). A fase orgânica foi concentrada e o resíduo foi purificado por HPLC Prep para originar o composto do título (10 g, 27,0%) como um sólido amarelo. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 7,36 (d, J=7,9 Hz, 2H), 7,31 (d, J=10,1 Hz, 1H), 7,20 (d, J=7,9 Hz, 2H), 6,89 (t, J=7,9 Hz, 1H), 6,39 - 6,28 (m, 3H), 6,16 (dd, J=1,5, 9,9 Hz, 1H), 5,93 (s, 1H), 5,39 (s, 1H), 5,08 (t, J=5,7 Hz, 1H), 4,98 - 4,87 (m, 3H), 4,78 (d, J=3,1 Hz, 1H), 4,49 (dd, J=6,2, 19,4 Hz, 1H), 4,29 (s l, 1H), 4,17 (dd, J=5,5, 19,6 Hz, 1H), 3,74 (s, 2H), 2,61 - 2,53 (m, 1H), 2,36 - 2,26 (m, 1H), 2,11 (d, J=11,0 Hz, 1H), 2,07 (s, 1H), 2,02 (d, J=12,8 Hz, 1H), 1,83 - 1,54 (m, 5H), 1,39 (s, 3H), 1,16 - 0,96 (m, 2H), 0,85 (s, 3H). LCMS: tR = 2,365 min, 98% pureza, m/z = 570,2 (M+H)+ LC/MS (Tabela 7, método a)
[0726]Método de HPLC Prep: Instrumento: Sistema de HPLC semipreparativa Gilson 281, Fase móvel: A: CF3COOH/H2O = 0,075% v/v; B: CH3CN, Coluna: Luna (2) C18 250*50 10 u da Phenomenex, Caudal: 80 mL/min, Comprimento de onda do monitorizador: 220 & 254 nm, Tempo B%, 0,0 28, 20,0 45, 20,1 45, 20,2 100, 30,2 100, 0,3 28, 31,5 28. Exemplo 2B: Síntese de (2R,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3- Aminobenzil)fenil)-6b-fluoro-2,7-di-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona
[0727]Ácido trifluorometanossulfônico (1,34 mL, 15,11 mmol) foi adicionado gota a gota a uma suspensão a -10 °C de (6R,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-9- fluoro-6,11,16,17-tetra-hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)-10,13-dimetil- 6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona (1,55 g, 3,78 mmol), (3-(4-formilbenzil)fenil)carbamato de terc-butila (do Exemplo 2, passo 4) (1,176 g, 3,78 mmol) e MgSO4 (2,273 g, 18,89 mmol) em MeCN (15,1 mL). Após 20 min, a reação foi extinta por adição de uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (15 mL), seguida por água (60 mL) e EtOAc (100 mL). A camada orgânica foi lavada sequencialmente com água (60 mL), salmoura (60 mL), seca (Na2SO4) e o solvente foi removido sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 40 g) eluindo com um gradiente de EtOAc/heptanos a 40-100% proporcionou o composto do título como uma espuma (880 mg, 1,458 mmol, rendimento de 39%) em pureza de 90%. O produto pôde ser adicionalmente purificado por HPLC de fase reversa em uma coluna XBridgeTM RP18 5 mícrons (30 x 100 mm) da Waters. Um gradiente de MeCN (A) e NH4CO3 a 0,1 mM em água (B) foi usado, a um caudal de 40 mL/min (0-5,0 min A a 5%, 5,0-19,0 min gradiente linear A a 15-55%). LC-MS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,72 min, m/z = 604,3 [M+H+]. 1H RMN (500 MHz, DMSO-dε) δ 7,37 - 7,31 (m, 2H), 7,28 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,24 - 7,19 (m, 2H), 6,93 - 6,85 (m, 1H), 6,36 (d, J = 2,1 Hz, 2H), 6,35 (p, J = 1,1 Hz, 1H), 6,23 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 6,10 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 5,45 (s, 1H), 5,38 (s, 1H), 5,10 (s, 1H), 4,96 - 4,91 (m, 3H), 4,51 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,28 - 4,16 (m, 2H), 3,74 (s, 2H), 2,76 - 2,60 (m, 1H), 2,20 (td, J = 12,5, 6,3 Hz, 1H), 2,08 (s, 2H), 1,86 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 1,75 - 1,58 (m, 7H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 3: Síntese de (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((3-aminofenil)tio)fenil)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0729]A uma mistura de perclorato de zinco (0,422 g, 1,598 mmol) e 3- aminobenzenotiol (10 g, 80 mmol) foi adicionado dicarbonato de di-terc-butila (22,66 g, 104 mmol) gota a gota. A solução foi agitada a 25 °C durante 12 horas. Três frascos adicionais foram definidos como descrito acima. Quatro misturas reacionais foram combinadas. A mistura foi dissolvida em EtOAc (200 mL) e lavada com água (500 mL). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para dar um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (eluído com PE/EtOAc = 5/1) para se obter o composto alvo (50 g, rendimento de 69,4%) como sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,45 (s l, 1H), 7,16 - 7,09 (m, 1H), 7,06 - 7,01 (m, 1H), 6,92 (d, J=7,4 Hz, 1H), 6,55 (s l, 1H), 3,46 (s, 1H), 1,52 (s, 9H).
[0731]A uma solução de (3-((4-formilfenil)tio)fenil)carbamato de terc-butila (10 g, 44,4 mmol) em DMF (300 mL) foram adicionadas trifenilfosfina (11,64 g, 44,4 mmol) e N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (11,47 g, 89 mmol) a 25 °C. A mistura reacional foi agitada a 25 °C durante 30 minutos sob N2. A mistura foi adicionado 4- fluorobenzaldeído (8,26 g, 66,6 mmol) a 100 °C e a mistura foi agitada a 100 °C durante 12 horas. Quatro frascos adicionais foram definidos como descrito acima. As cinco misturas reacionais foram combinadas. A mistura foi diluída com água (2 L) e extraída com EtOAc (3 x 1 L). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (eluído com PE/EtOAc = 10/1) para se obter o composto alvo (55 g, rendimento de 75%) como óleo amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,90 (s, 1H), 7,71 (d, J=8,4 Hz, 2H), 7,58 (s, 1H), 7,48 - 7,41 (m, 1H), 7,33 (t, J=7,9 Hz, 1H), 7,25 (d, J=8,4 Hz, 2H), 7,58 (s, 1H), 7,48 - 7,41 (m, 1H), 7,33 (t, J=7,4 Hz, 1H), 6,55 (s l, 1H), 3,46 (s, 1H), 1,52 (s, 9H).
[0732]Passo 3: Síntese de (4-((3-((terc- butoxicarbonil)amino)fenil)tio)fenil)(hidróxi)metanossulfonato de sódio
[0733]A uma solução do aldeído (15 g, 45,5 mmol) em CH3CN (30 mL) foi adicionada uma solução de metabissulfito de sódio (11,25 g, 59,2 mmol) em água (90 mL) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25 °C durante 48 horas. Outro frasco adicional foi definido como descrito acima. Duas misturas reacionais foram combinadas. A solução foi filtrada e o sólido foi lavado com água (150 mL), CH3CN (150 mL) e seco sob pressão reduzida para dar o composto alvo (32 g, rendimento 81%) como sólido branco. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 9,45 (s l, 1H), 7,54 - 7,49 (m, 1H), 7,47 - 7,35 (m, 3H), 7,33 - 7,17 (m, 3H), 6,85 (d, J=7,9 Hz, 1H), 5,97 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,98 (d, J=4,9 Hz, 1H), 1,45 (s, 9H).
[0734]Passo 4: Síntese de (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-((3-aminofenil)tio)fenil)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0735]A uma solução de (8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-9-fluoro- 11,16,17-tri-hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)-10,13-dimetil- 6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona (6 g, 15,21 mmol) e (4-((3-((terc- butoxicarbonil)amino)fenil)tio)fenil)(hidróxi)metanossulfonato de sódio (4,74 g, 15,21 mmol) em THF (50 mL) foi adicionado ácido perclórico (4,58 mL, 76 mmol) gota a gota enquanto se mantinha uma temperatura interna abaixo de 25 °C usando um banho de gelo. Após a adição, a mistura foi agitada a 20 °C durante 2 horas. Três frascos adicionais foram definidos como descrito acima. Todas as quatro misturas reacionais foram combinadas. A mistura reacional foi extinta com NaHCO3 aquoso sat. (500 mL) e extraída com DCM (3 X 800 mL). A fase orgânica foi concentrada e o resíduo foi purificado por HPLC Prep para dar o composto alvo (9,5 g, 25,8%) um sólido amarelo. LCMS (Método l, Tabela 7) Tr = 2,68 min, m/z = 588,1 (M+H)+; 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 7,37 - 7,26 (m, 3H), 7,21 (d, J=7,9 Hz, 2H), 6,89 (t, J=7,7 Hz, 1H), 6,43 - 6,30 (m, 3H), 6,23 (d, J=10,1 Hz, 1H), 6,04 (s, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,44 (s, 2H), 5,09 (t, J=5,7 Hz, 1H), 4,93 (s l, 3H), 4,50 (dd, J=6,2, 19,4 Hz, 1H), 4,28 - 4,09 (m, 2H), 3,74 (s, 2H), 2,73 - 2,54 (m, 2H), 2,35 (d, J=13,2 Hz, 1H), 2,25 - 2,12 (m, 1H), 2,05 (d, J=15,0 Hz, 1H), 1,92 - 1,77 (m, 1H), 1,74 - 1,58 (m, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,45 - 1,30 (m, 1H), 0,87 (s, 3H). Método de HPLC Prep: Instrumento: Sistema de HPLC semipreparativa Gilson 281; Fase móvel: A: CF3CO2H/H2O = 0,075% v/v; B: CH3CN; Coluna: Luna C18 250*50 mm*10 mícrons da Phenomenex; Caudal: 80 mL/min; Comprimento de onda do monitorizador: 220 e 254 nm. Exemplo 4: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((3-aminofenil)tio)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0736]A uma solução de (8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-tri- hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca- hidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona (6 g, 15,94 mmol) e (4-((3-((terc- butoxicarbonil)amino)fenil)tio)fenil)(hidróxi)metanossulfonato de sódio (4,96 g, 15,94 mmol) em MeCN (50 mL) foi adicionado ácido perclórico (4,79 mL, 80 mmol) gota a gota enquanto se mantinha uma temperatura interna abaixo de 25 °C usando um banho de gelo. Após a adição, a mistura foi agitada a 20 °C durante 2 horas. Três frascos adicionais foram definidos como descrito acima. Todas as quatro misturas reacionais foram combinadas. A mistura reacional foi extinta com NaHCO3 aquoso sat. (500 mL) e extraída com DCM (3 X 800 mL). A fase orgânica foi concentrada e o resíduo foi purificado por HPLC Prep para dar o composto alvo (10 g, 27,0%) um sólido amarelo. LCMS (Método l, Tabela 7) Tr = 2,36 min, m/z = 570,2 (M+H)+; 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 7,36 (d, J=7,9 Hz, 2H), 7,31 (d, J=10,1 Hz, 1H), 7,20 (d, J=7,9 Hz, 2H), 6,89 (t, J=7,9 Hz, 1H), 6,39 - 6,28 (m, 3H), 6,16 (dd, J=1,5, 9,9 Hz, 1H), 5,93 (s, 1H), 5,39 (s, 1H), 5,08 (t, J=5,7 Hz, 1H), 4,98 - 4,87 (m, 3H), 4,78 (d, J=3,1 Hz, 1H), 4,49 (dd, J=6,2, 19,4 Hz, 1H), 4,29 (s l, 1H), 4,17 (dd, J=5,5, 19,6 Hz, 1H), 3,74 (s, 2H), 2,61 - 2,53 (m, 1H), 2,36 - 2,26 (m, 1H), 2,11 (d, J=11,0 Hz, 1H), 2,07 (s, 1H), 2,02 (d, J=12,8 Hz, 1H), 1,83 - 1,54 (m, 5H), 1,39 (s, 3H), 1,16 - 0,96 (m, 2H), 0,85 (s, 3H). Método de HPLC Prep: Instrumento: Sistema de HPLC semipreparativa Gilson 281; Fase móvel: A: CF3CO2H/H2O = 0,075% v/v; B: CH3CN; Coluna: Luna C18 250*50 mm*10 mícrons da Phenomenex; Caudal: 80 mL/min; Comprimento de onda do monitorizador: 220 e 254 nm. Exemplo 5: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-((3-aminofenil)tio)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona A uma solução de esteroide (10 g, 24,25 mmol) em CH3CN (200 mL) foi adicionado sulfato de magnésio (10,21 g, 85 mmol) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25 °C durante 4 horas. À solução acima foram adicionados (4-((3-((terc- butoxicarbonil)amino)fenil)tio)fenil)(hidróxi)metanossulfonato de sódio (10,51 g, 24,25 mmol) e ácido trifluorometanossulfônico (20,48 mL, 121 mmol) a 0 °C. A mistura resultante foi agitada a 25 °C durante 1 hora. Dois frascos adicionais foram definidos como descrito acima. Três misturas reacionais foram combinadas. A mistura foi diluída com NaOH a 1 N (300 mL) e extraída com EtOAc (3 x 600 mL). A camada orgânica foi concentrada sob pressão reduzida para dar um resíduo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (60 mL) e adicionada 2-butanona (180 mL). Após agitação durante 30 minutos, o sólido foi coletado por filtração e purificado por HPLC Prep para dar o composto do título (8,4 g, rendimento 17,52%) como sólido amarelo. LCMS (Método c, Tabela 7) Tr = 2,66 min; MS m/z = 624,1 (M+H)+; 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 7,39 (d, J=8,4 Hz, 2H), 7,25 (d, J=8,4 Hz, 3H), 7,03 (t, J=7,7 Hz, 1H), 6,61 (s, 1H), 6,53 (t, J=8,2 Hz, 2H), 6,29 (dd, J=1,5, 9,9 Hz, 1H), 6,12 (s, 1H), 5,76 - 5,49 (m, 2H), 5,46 (s, 1H), 4,96 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,52 (d, J=19,4 Hz, 1H), 4,21 (d, J=19,4 Hz, 2H), 2,74 - 2,53 (m, 2H), 2,34 - 2,13 (m, 2H), 2,09 - 1,96 (m, 1H), 1,79 - 1,62 (m, 3H), 1,57 - 1,43 (m, 4H), 0,86 (s, 3H). Método de HPLC Prep: Instrumento: HPLC preparativa LC-8A da Shimadzu; Coluna: Luna C18 250*50 mm*10 mícrons da Phenomenex; Fase móvel: A para H2O (CF3CO2H a 0,09%) e B para CH3CN; Gradiente: B de 22% a 52% em 20 min; Caudal: 80 mL/min; Comprimento de onda: 220 & 254 nm. Exemplo 6: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- (3-Amino-4-hidroxibenzil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona Ácido tríflico (0,2 mL, 2,183 mmol) foi adicionado gota a gota a uma pasta a 0 °C de (8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-tri-hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)- 10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H- ciclopenta[a]fenantren-3-ona (0,164 g, 0,437 mmol), (2-((terc-butildimetilsilil)óxi)-5-(4- formilbenzil)fenil)carbamato de terc-butila (0,193 g, 0,437 mmol) e MgSO4 (0,189 g, 1,572 mmol) em MeCN (1,8 mL). Após 40 min, a reação foi diluída com EtOAc (15 mL) e depois lavada sequencialmente com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (10 mL x 2) e com uma solução aquosa saturada de salmoura (5 mL). A fase orgânica foi seca (Na2SO4) e o solvente foi removido sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 12 g) eluindo com um gradiente de MeOH/DCM a 0-10% deu o composto do título (163 mg, 0,278 mmol, rendimento de 64%) como um sólido ceroso. Uma porção deste material (ca. 48,9 mg) foi adicionalmente purificado por HPLC de fase reversa numa coluna C18 (2) 10 mícrons (coluna 250 X 50 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 90 mL/min (0-5,0 min A a 15%, 5,0-20 min gradiente linear A a 15-70%, manter 2 min). As frações combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para se removerem os solventes voláteis e a solução resultante foi congelada e liofilizada para dar um sólido esbranquiçado (11,9 mg). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,75 min, m/z = 586,26 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,27 (s, 1H), 9,04 (s, 2H), 7,34 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 8,1, 2,1 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,17 - 6,07 (m, 1H), 5,90 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 5,37 (s, 1H), 4,89 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,46 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,26 (q, J = 3,3 Hz, 1H), 4,14 (d, J = 19,5 Hz, 1H), 3,80 (s, 2H), 2,58 - 2,46 (m, 1H), 2,36 - 1,92 (m, 3H), 1,76 - 1,56 (m, 4H), 1,36 (s, 3H), 1,10 - 0,90 (m, 2H), 0,83 (s, 3H). Exemplo 7: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-(3-Aminobenzil)fenil)-3-hidroxifenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)- 6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona Passo 1: Síntese de 4-((3-bromofenil)(hidroxi)metil)-3-metóxibenzonitrila
[0737]Complexo de cloreto de isopropilmagnésio e cloreto de lítio (1,3 M em THF, 8,34 mL, 10,85 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução a 0-5 °C de 4- bromo-3-metóxibenzonitrila (2 g, 9,43 mmol) em THF (21 mL). A reação foi agitada durante 5 h, após o que uma solução de 3-bromobenzaldeído (1,979 g, 10,38 mmol) em THF (10,5 mL) foi adicionada gota a gota, mantendo uma temperatura de <10 °C. Foi permitido que a reação aquecesse lentamente até à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional extinta com uma solução aquosa saturada de NH4Cl (25 mL) e extraída com MTBE (50 mL X 3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL), secos (Na2SO4) e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (80 g sílica) eluindo com um gradiente de MTBE/heptanos a 0-10% deu o composto do título (1,77 g, 5,56 mmol, rendimento de 59%) como um xarope/óleo bege. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,86 min; MS (ESI- ) m/z = 315,7 [M-H+]. 1H RMN (501 MHz, DMSO-d6) δ 7,67 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,47 (t, J = 1,8 Hz, 1H), 7,43 (dd, J = 7,8, 1,5 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,40 - 7,36 (m, 1H), 7,28 (dt, J = 7,8, 1,5 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,47 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 5,94 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 3,80 (s, 3H).
[0739]Clorotrimetilsilano (3,63 g, 33,4 mmol) foi adicionado a uma solução à temperatura ambiente de iodeto de sódio (5,00 g, 33,4 mmol) em MeCN (18,5 mL), que resultou na precipitação imediata de um sólido branco. Uma solução de 4-((3- bromofenil)(hidroxi)metil)-3-metóxibenzonitrila (1,77 g, 5,56 mmol) em MeCN (18,5 mL) foi depois adicionada, após o que a mistura reacional foi aquecida até 55 °C durante 60 min. Após resfriamento até à temperatura ambiente, a reação foi dividida entre MTBE (50 mL) e água (50 mL). Após separação das camadas, a fase aquosa foi extraída com MTBE (50 mL X 2). Os orgânicos combinados foram lavados sequencialmente com uma solução aquosa a 1 M de Na2S2O3 (50 mL X 2), seguida por uma solução aquosa saturada de salmoura (30 mL), secos (Na2SO4) e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 80 g) eluindo com um gradiente de MTBE/heptanos a 5-40% deu o composto do título (1,58 g, 5,23 mmol, rendimento de 94%) como um sólido esbranquiçado. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 1,02 min; MS m/z = não observado. 1H RMN (501 MHz, DMSO-d6) δ 7,42 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,39 - 7,30 (m, 4H), 7,22 (td, J = 7,6, 0,6 Hz, 1H), 7,18 (dt, J = 7,7, 1,4 Hz, 1H), 3,94 (s, 2H), 3,82 (s, 3H).
[0741]Hidreto de di-isobutilalumínio (4,9 mL, solução a 1,0 M em hexanos, 4,9 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 5 min a uma solução a 0 °C de 4-(3- bromobenzil)-3-metoxibenzonitrila (0,99 g, 3,28 mmol) em tolueno (16 mL), mantendo uma temperatura de < 6 °C. Após 10 min, a reação foi extinta por adição cuidadosa de uma solução aquosa a 1 N de HCl (100 mL) a 0 °C. Foi depois extraída com DCM (50 mL X 4), lavada com uma solução aquosa saturada de salmoura (30 mL) e o solvente foi removido sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 40 g) eluindo com um gradiente de MTBE/heptanos a 0-40% deu o composto do título (780 mg, 2,56 mmol, rendimento de 78%) como um óleo incolor. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,95 min, MS (DCI+) m/z = 303,9, 305,9 (M+). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,93 (s, 1H), 7,47 (dd, J = 7,5, 1,5 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,42 - 7,33 (m, 3H), 7,25 - 7,17 (m, 2H), 3,96 (s, 2H), 3,85 (s, 3H).
[0743]Tribrometo de boro (1,0 M em cloreto de metileno, 6,4 mL, 6,4 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução a 0-3 °C de 4-(3-bromobenzil)-3- metoxibenzaldeído (0,78 g, 2,56 mmol) em DCM (7,8 mL). A reação foi agitada a 0 °C durante 30 min; depois foi agitada durante 90 min à temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o óleo preto resultante foi tratado com MeOH (20 mL) e água (15 mL), que deu uma mistura heterogênea. MeCN foi adicionado até ter sido obtida uma solução homogênea (ca. 10 mL) e a solução foi agitada durante a noite. Os solventes voláteis foram removidos sob pressão reduzida e a suspensão aquosa resultante foi extraída com DCM (25 mL X 3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL), secos sobre Na2SO4 e o solvente foi removido sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 40 g) eluindo com um gradiente de MTBE/heptanos a 10-50% deu 4-(3-bromobenzil)-3-hidroxibenzaldeído (660 mg, 2,267 mmol, rendimento de 89%) como um sólido branco. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,85 min; MS (DCI+) m/z = 307,98, 309,97 [M+NH4+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,07 (s, 1H), 9,83 (s, 1H), 7,39 (q, J = 1,3 Hz, 1H), 7,33 (ddt, J = 6,5, 4,4, 2,0 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 0,9 Hz, 2H), 7,25 (s, 1H), 7,25 - 7,15 (m, 2H), 3,92 (s, 2H).
[0745]Imidazol (0,231 g, 3,40 mmol) e terc-butildimetilclorossilano (0,410 g, 2,72 mmol) foram adicionados a suspensão à uma temperatura ambiente de 4-(3- bromobenzil)-3-hidroxibenzaldeído (0,660 g, 2,267 mmol) em DCM (7,6 mL), que foi agitada durante 3 h. MeOH (0,5 mL) foi adicionado e a agitação continuou durante 10 min, após o que a reação foi diluída com DCM (100 mL), lavada sequencialmente com água (25 mL), uma solução aquosa a 1 N de HCl (25 mL) e com uma solução aquosa saturada de salmoura (20 mL). A fase orgânica foi seca (Na2SO4) e o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar um xarope. A purificação por cromatografia (sílica, 40 g) eluindo com um gradiente de MTBE/heptanos a 0-10% deu o composto alvo (820 mg, 2,023 mmol, rendimento de 89%) como um óleo incolor. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 1,18 min, MS (DCI+) m/z = 422,07, 424,09 [M+NH4+]. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,94 (s, 1H), 7,50 (dd, J = 7,7, 1,6 Hz, 1H), 7,42 - 7,36 (m, 2H), 7,36 - 7,32 (m, 2H), 7,25 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,17 (ddd, J = 7,7, 1,7, 1,0 Hz, 1H), 4,01 (s, 2H), 0,92 (s, 9H), 0,26 (s, 6H).
[0747]Nitrogênio foi purgado através de uma mistura de 4-(3-bromobenzil)-3- ((terc-butildimetilsilil)oxi)benzaldeído (0,820 g, 2,023 mmol), carbamato de terc-butila (0,3027 g, 2,58 mmol), Cs2CO3 (1,006 g, 3,09 mmol) em p-dioxano (16 mL) durante 30 min. Adicionado o pré-catalisador XPhos de 2.a geração (0,0937 g, 0,119 mmol) e continuada a aspersão durante 5 min, após o que a reação foi aquecida até 100 °C durante 4 h. A reação foi resfriada até à temperatura ambiente, tratada com uma solução aquosa a 1 N de HCl (25 mL) e foi extraída com MTBE (25 mL x 3). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (30 mL), secos sobre Na2SO4 e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi redissolvido em THF (16 mL, 0,125 M) e tratado com TBAF/SiO2 (1,0-1,5 mmol/g, 4,1338 g, 4,13-6,2 mmol) durante 45 min, após o que o solvente foi removido sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 40 g) eluindo com um gradiente de MTBE/heptanos a 0-75% deu (3-(4-formil-2-hidroxibenzil)fenil)carbamato de terc- butila (380 mg, 1,161 mmol, rendimento de 57%) foi isolado como uma espuma gomosa. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,85 min; MS (DCI+) m/z = 345,0 [M+NH4+]. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 10,04 (s, 1H), 9,86 (s, 1H), 9,25 (s, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,34 - 7,28 (m, 2H), 7,27 - 7,20 (m, 2H), 7,14 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,82 (dt, J = 7,7, 1,2 Hz, 1H), 3,89 (s, 2H), 1,45 (s, 9H).
[0748]Passo 7: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)- 10-(4-(3-aminobenzil)fenil)-3-hidroxifenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)- 6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona Ácido tríflico (0,060 mL, 0,680 mmol) foi adicionado gota a gota a uma pasta a 0 °C de (6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-difluoro-11,16,17-tri-hidroxi-17- (2-hidroxiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H- ciclopenta[a]fenantren-3-ona (0,056 g, 0,136 mmol), (3-(4-formil-2- hidroxibenzil)fenil)carbamato de terc-butila (0,049 g, 0,150 mmol) e MgSO4 (0,049 g, 0,408 mmol) em MeCN (1,5 mL), mantendo uma temperatura de reação de < 5 °C. Após 30 min, a mistura reacional foi diluída com EtOAc (15 mL) e foi lavada sequencialmente com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (5 mL X 2) e depois com uma solução aquosa saturada de salmoura (3 mL). A fase orgânica foi seca (Na2SO4) e o solvente foi removido sob pressão reduzida. Purificação por HPLC de fase reversa em uma coluna C18 (2) 10 mícrons (coluna de 250 x 30 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e ácido fórmico a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 60 mL/min (0-5,0 min A a 15%, 5,0-20,0 min gradiente linear A a 15-80%, manter 5 min). As frações combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para se removerem os solventes voláteis e foram depois liofilizadas para dar o composto do título como um sólido amorfo branco (6,7 mg). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,70 min; MS m/z = 622,39 [M+H+]. 1H RMN (501 MHz, DMSO-d6) δ 9,51 (s, 1H), 7,25 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,89 - 6,81 (m, 2H), 6,75 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,37 - 6,24 (m, 4H), 6,11 (s, 1H), 5,63 (ddd, J = 49,2, 11,2, 6,4 Hz, 1H), 5,50 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 5,30 (s, 1H), 5,07 (s, 1H), 4,91 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,85 (s, 2H), 4,47 (d, J = 19,3 Hz, 1H), 4,21 4,14 (m, 2H), 3,70 - 3,60 (m, 2H), 2,69 - 2,50 (m, 1H), 2,26 (s, 1H), 2,31 - 2,16 (m, 1H), 2,07 - 1,94 (m, 1H), 1,68 (q, J = 10,2, 8,9 Hz, 2H), 1,64 1,50 (m, 1H), 1,48 (s, 3H), 0,84 (s, 3H). Exemplo 8: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- (3-aminobenzil)fenil)-3-hidroxifenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona
[0749]Ácido tríflico (0,35 mL, 3,83 mmol) foi adicionado gota a gota a uma pasta a 0 °C de (8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-tri-hidroxi-17-(2- hidroxiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H- ciclopenta[a]fenantren-3-ona (0,296 g, 0,786 mmol), (3-(4-formil-2- hidroxibenzil)fenil)carbamato de terc-butila (0,251 g, 0,767 mmol) e MgSO4 (0,332 g, 2,76 mmol) em MeCN (3,0 mL), mantendo uma temperatura de reação de < 5 °C. Após 40 min, a reação foi diluída com EtOAc (15 mL) e foi lavada sequencialmente com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (10 mL X 2) e depois com uma solução aquosa saturada de salmoura (5 mL). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 e o solvente foi removido sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 12 g) eluindo com um gradiente de MeOH/DCM a 0-10% deu o composto do título (238,4 mg, 0,407 mmol, rendimento de 53%) como um sólido branco. Uma porção deste material (ca. 79,1 mg) foi adicionalmente purificado por HPLC de fase reversa numa coluna C18 (2) 10 mícrons (coluna 250 X 30 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 60 mL/min (0-5,0 min A a 15%, 5,0-20 min gradiente linear A a 15-60%, manter 2 min). As frações combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para se removerem os solventes voláteis e a solução resultante foi congelada e liofilizada para dar o composto do título como um sólido esbranquiçado (43,4 mg). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,73 min; MS m/z = 586,2 [M+H+]. 1H RMN (501 MHz, DMSO-d6) δ 9,61 (s, 1H), 7,30 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,27 - 7,20 (m, 1H), 7,04 (dd, J = 7,7, 2,9 Hz, 2H), 6,95 - 6,91 (m, 2H), 6,90 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,79 (dd, J = 7,7, 1,6 Hz, 1H), 6,15 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 5,92 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,79 (dd, J = 5,1 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,45 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,28 (q, J = 3,3 Hz, 1H), 4,15 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 3,82 (s, 2H), 2,59 - 2,49 (m, 1H), 2,30 (dt, J = 13,0, 3,8 Hz, 1H), 2,16 - 2,05 (m, 1H), 2,07 - 1,98 (m, 1H), 1,75 (d, J = 3,0 Hz, 2H), 1,73 - 1,54 (m, 3H), 1,38 (s, 3H), 1,05 (qd, J = 12,9, 4,8 Hz, 1H), 0,97 (dd, J = 11,2, 3,6 Hz, 1H), 0,84 (s, 3H). Exemplo 9: Síntese de (S)-N-(3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)-2-((S)-2-(3-(2,5-dioxo-2,5- di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)propanamido)propanamida
[0750]Passo 1: Síntese de ((S)-1-(((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)carbamato de (9H-fluoren-9-il)metila
[0751]HATU (1,3 g, 3,41 mmol) e 2,6-lutidina (0,4 mL, 3,43 mmol) foram adicionados a uma suspensão à temperatura ambiente de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-aminobenzil)fenil)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b- deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona (1,0327 g, 1,705 mmol) e ácido (S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9- il)metóxi)carbonil)amino)propanamido)propanoico (0,782 g, 2,046 mmol) em THF (11,5 mL). Após 40 horas à temperatura ambiente, a reação foi diluída com EtOAc (16 mL), depois lavada sequencialmente com uma solução aquosa de HCl a 1 N (4 mL x 3) e uma solução aquosa saturada de salmoura (4 mL). A purificação por cromatografia (sílica, 40 g) eluindo com um gradiente de EtOAc/heptanos a 75-100% deu o composto do título (0,926 g, 0,955 mmol, rendimento de 56%). LC-MS (Método r, Tabela 7) Tr = 1,01 min, m/z = 970,18 [M+H+]. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,85 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,89 (dd, J = 7,5, 1,0 Hz, 2H), 7,76 - 7,69 (m, 2H), 7,55 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,49 - 7,16 (m, 13H), 6,94 - 6,88 (m, 1H), 6,30 (ddd, J = 10,1, 3,7, 1,9 Hz, 1H), 6,14 (dt, J = 2,6, 1,2 Hz, 1H), 5,74 - 5,55 (m, 1H), 5,53 (dt, J = 5,0, 2,5 Hz, 1H), 5,12 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,95 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,52 (dd, J = 19,4, 6,2 Hz, 1H), 4,38 (p, J = 7,0 Hz, 1H), 4,32 - 4,16 (m, 5H), 4,09 (p, J = 6,9 Hz, 1H), 3,88 (d, J = 10,9 Hz, 2H), 2,65 - 2,60 (m, 1H), 2,33 - 2,20 (m, 1H), 2,05 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 1,77 - 1,63 (m, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,28 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,23 (d, J = 7,1 Hz, 4H), 0,88 (d, J = 12,6 Hz, 3H).
[0752]Passo 2: Síntese de (S)-2-amino-N-((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)propanamida
[0753]Dietilamina (0,5 mL, 4,79 mmol) foi adicionada a uma solução à temperatura ambiente de ((S)-1-(((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)carbamato de (9H-fluoren-9-il)metila (1,18 g, 1,216 mmol) em THF (6,0 mL). Após 2 h, MTBE (10 mL) foi adicionado, que resultou na precipitação imediata de um sólido amarelo. Esta pasta foi agitada durante 90 min, filtrada e lavada com MTBE (5 mL x 3) para dar um sólido amarelo (802,7 mg). Este material foi purificado adicionalmente por HPLC de fase reversa em uma coluna C18 (2) 10 mícrons (coluna de 250 x 50 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e ácido fórmico a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 90 mL/min (0-5,0 min A a 15%, 5,0-20,0 min gradiente linear A a 15-75%, manter 2 min, 22,0-22,5 min gradiente linear de 75-95%, manter durante 4 min). As frações combinadas foram concentradas sob pressão reduzida até à secura e depois secas durante a noite no forno de vácuo a 50 °C. LC-MS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,76 min, m/z = 748,5 [M+H+]. A 1H RMN indica que o composto do título é uma mistura aproximadamente 1:1 com ácido (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2- aminopropanamido)propanamido)benzil)fenol)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-6a,8a-dimetil- 4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-8b-carboxílico. (0,170 g total, 0,115 mol e rendimento de 10% de cada composto). 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 10,00 (d, J = 3,3 Hz, 2H), 8,42 (d, J = 34,2 Hz, 2H), 8,30 (s, 1H), 7,48 - 7,37 (m, 3H), 7,38 - 7,29 (m, 5H), 7,31 - 7,15 (m, 8H), 6,92 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 6,28 (ddd, J = 10,3, 6,6, 1,9 Hz, 3H), 6,12 (d, J = 3,7 Hz, 3H), 5,77 - 5,53 (m, 3H), 5,45 (d, J = 7,7 Hz, 3H), 5,04 - 4,99 (m, 1H), 4,94 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,50 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,40 (s, 3H), 4,23 - 4,12 (m, 2H), 3,54 (dq, J = 17,6, 6,9 Hz, 1H), 2,71 - 2,56 (m, 1H), 2,30 - 2,15 (m, 1H), 2,03 (d, J = 14,2 Hz, 2H), 1,94 (d, J = 14,3 Hz, 1H), 1,84 (d, J = 14,1 Hz, 1H), 1,76 - 1,59 (m, 7H), 1,49 (d, J = 2,6 Hz, 8H), 1,39 - 1,10 (m, 13H), 1,00 (s, 4H), 0,86 (s, 3H).
[0754]Passo 3: Síntese de (S)-N-(3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)-2-((S)-2-(3-(2,5-dioxo-2,5- di-hidro-1 H-pirrol-1 -il)propanamido)propanamido)propanamida
[0755]Di-isopropiletilamina (0,1 mL, 0,573 mmol) foi adicionada a uma solução à temperatura ambiente de (S)-2-amino-N-((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)propanamida (0,170 g, 0,227 mmol) e 3-maleimidopropionato de N-succinimidila (0,0691 g, 0,260 mmol) em DMF (2,5 mL). Após 30 min, o pH da mistura reacional foi ajustada até 4-5 por adição gota a gota de uma solução a 7% de TFA em água (1,2 mL). A mistura em bruto foi purificada por HPLC de fase reversa em uma coluna C18 (2) 10 mícrons (coluna de 250 x 50 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 90 mL/min (0-5,0 min A a 15%, 5,0-20 min gradiente linear A a 15-85%, manter 2 min). As frações combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para se removerem os solventes voláteis e a solução resultante foi congelada e liofilizada para dar um sólido branco (85,2 mg, 0,0473 mmol, rendimento de 21%). LC-MS (Método R, Tabela 7) Tr = 0,82 min, m/z = 899,92 [M+H+]. Os dados de 1H RMN foram consistentes com uma mistura 1:1 do composto do título ácido (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3- ((S)-2-((S)-2-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- il)propanamido)propanamido)propanamido)benzil)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-6a,8a- dimetil-4-oxo-1,2,4,6a,6b,7,8,8a,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-8bH- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-8b-carboxílico (ver exemplo 10 para uma preparação alternativa do composto do título, que evita esta mistura). . A análise de MS confirma que este material é uma mistura de dois compostos com m/z = 899,1 [M+H+] e m/z = 885,0 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,71 (s, 2H), 8,16 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 8,03 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 7,49 - 7,29 (m, 9H), 7,30 - 7,13 (m, 9H), 6,96 (s, 3H), 6,92 - 6,85 (m, 2H), 6,27 (dt, J = 10,1, 1,9 Hz, 2H), 6,11 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 5,74 - 5,53 (m, 2H), 5,46 (d, J = 23,9 Hz, 4H), 4,93 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,32 (p, J = 7,1 Hz, 2H), 8,03 (d, J = 7,3 Hz, 4H), 2,69 - 2,53 (m, 2H), 2,38 (t, J = 7,3 Hz, 4H), 2,69 - 2,53 (m, 2H), 2,38 (t, J = 3,7 Hz, 8H), 1,25 (d, J = 7,0 Hz, 6H), 1,15 (d, J = 7,1 Hz, 6H), 0,99 (s, 3H), 0,84 (s, 3H). Exemplo 10: Síntese de (S)-N-(3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)-2-((S)-2-(3-(2,5-dioxo-2,5- di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)propanamido)propanamida
[0756]Passo 1: Síntese de ((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S, 8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)carbamato de terc-butila
[0757]HATU (610 mg, 1,605 mmol) e 2,6-lutidina (0,3 mL, 2,58 mmol) foram adicionados a uma mistura à temperatura ambiente de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-aminobenzil)fenil)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b- deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona (648,1 mg, 1,070 mmol) e ácido (S)-2-((S)-2-((terc-butóxicarbonil)amino)propanamido)propanoico (334 mg, 1,284 mmol) em THF (11,5 mL). Após 40 horas, a reação foi diluída com EtOAc (16 mL), depois lavada com uma solução aquosa de HCl a 1 N (4 mL x 9), seguida por uma solução aquosa saturada de salmoura (4 mL). A purificação por cromatografia (sílica, 40 g) eluindo com um gradiente de MeOH/DCM a 0-10% deu o composto do título como uma espuma amarela (773,7 mg, 0,912 mmol, rendimento de 85%). LC- MS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,92 min, m/z = 848,53 [M+H+].
[0758]Passo 2: Síntese de (S)-2-amino-N-((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)propanamida
[0759]TFA (1,97 mL, 25,6 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução à temperatura ambiente de ((S)-1-(((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)carbamato de terc-butila (0,7683 g, 0,906 mmol) em DCM (6,0 mL). Após 50 min, o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar um xarope marrom. O resíduo foi dissolvido em DMSO:MeOH 1:1 (12 mL) e purificado adicionalmente por HPLC de fase reversa em uma coluna C18 (2) 10 mícrons (coluna de 250 x 50 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 90 mL/min (0-5,0 min A a 15%, 5,0-20 min gradiente linear A a 15-75%, manter 2 min, 22,0-22,5 min gradiente linear A a 75-95%, manter 4 min). As frações combinadas foram concentradas sob pressão reduzida até à secura e o resíduo foi seco durante a noite no forno de vácuo a 50 °C para dar o composto do título (230 mg, 0,308 mmol, rendimento de 34%). LC-MS (Método r, Tabela 7) isômero de acetal principal Tr = 0,73 min, m/z = 748,78 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,01 (s, 1H), 8,62 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,04 (d, J = 5,4 Hz, 3H), 7,46 - 7,31 (m, 4H), 7,31 - 7,13 (m, 4H), 6,91 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,27 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,11 (s, 1H), 5,76 - 5,47 (m, 2H), 5,43 (s, 1H), 4,93 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 19,5 Hz, 1H), 4,42 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 4,23 - 4,13 (m, 2H), 2,72 - 2,54 (m, 1H), 2,33 - 2,16 (m, 2H), 2,02 (dt, J = 13,6, 3,6 Hz, 1H), 1,69 (h, J = 5,9, 5,1 Hz, 3H), 1,48 (s, 4H), 1,33 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,30 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 0,85 (s, 3H).
[0760]Passo 3: Síntese de (S)-N-(3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)-2-((S)-2-(3-(2,5-dioxo-2,5- di-hidro-1 H-pirrol-1 -il)propanamido)propanamido)propanamida
[0761]Di-isopropiletilamina (0,1 mL, 0,573 mmol) foi adicionada a uma solução à temperatura ambiente de (S)-2-amino-N-((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)propanamida (0,220 g, 0,294 mmol) e 3-maleimidopropionato de N-succinimidila (0,086 g, 0,324 mmol) em DMF (2,8 mL). Após 30 min, o pH da mistura reacional foi ajustada até 4-5 por adição gota a gota de uma solução a 7% de TFA em água (1,0 mL). A mistura em bruto foi purificada por HPLC de fase reversa em uma coluna C18 (2) 10 mícrons (coluna de 250 x 50 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 90 mL/min (0-5,0 min A a 15%, 5,0-20 min gradiente linear A a 15-85%, manter 2 min). As frações combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para se removerem os solventes voláteis e a solução resultante foi congelada e liofilizada para dar um sólido branco (175,2 mg, 0,195 mmol, rendimento de 66%). LC-MS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,82 min, m/z = 899,87 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,70 (s, 1H), 8,14 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,47 - 7,35 (m, 2H), 7,32 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,26 - 7,10 (m, 4H), 6,95 (s, 1H), 6,87 (dt, J = 7,6, 1,3 Hz, 1H), 6,26 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 5,72 - 5,51 (m, 1H), 5,48 (s, 1H), 5,41 (s, 1H), 4,91 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,30 (p, J = 7,1 Hz, 1H), 4,25 - 4,11 (m, 3H), 3,85 (s, 2H), 3,57 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,71 - 2,48 (m, 1H), 2,36 (dd, J = 8,0, 6,7 Hz, 2H), 2,23 (ddt, J = 25,1, 12,2, 6,6 Hz, 2H), 2,01 (dt, J = 13,7, 3,7 Hz, 1H), 1,75 - 1,57 (m, 3H), 1,48 (p, J = 11,9 Hz, 1H), 1,46 (s, 3H), 1,24 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,13 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 0,83 (s, 3H). Exemplo 11: Síntese de (S)-N-((S)-1-(((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)-2-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-3- (1H-imidazol-4-il)propanamida
[0762]Passo 1: Síntese de Ácido (S)-2-((terc-butóxicarbonil)amino)-3-(1H- imidazol-5-il)propanoico, ácido 2-clorídrico
[0763]A uma solução de ácido (S)-2-amino-3-(1H-imidazol-5-il)propanoico (1,55 g, 9,99 mmol) em água (40 mL) e 1,4-dioxano (10 mL) a 0 °C foram adicionados NaOH (10 mL, 19,98 mmol) e anidrido de BOC (2,319 mL, 9,99 mmol). A mistura resultante foi agitada a 23 °C durante 4 h. Depois, a mistura foi acidificada com solução de HCl até pH 5 e lavada com EtOAc (3 X 30 mL). Depois, a camada inorgânica foi liofilizada para dar o composto do título (incluindo NaCl)) (4,449 g, 9,90 mmol, rendimento de 99%) como um sólido branco. LCMS (Método m, Tabela 7) Tr= 1,22 min, m/z 256,2 (M+1)+.
[0764]Passo 2: Síntese de ((S)-1-(((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S, 8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-(1H-imidazol-5-il)-1-oxopropan-2-il)carbamato de terc-butila
[0765]A uma solução de ácido (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(1H- imidazol-5-il)propanoico, ácido 2-clorídrico (170 mg, 0,197 mmol), ácido (S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-(1H-imidazol-5-il)propanoico, ácido 2-clorídrico (443 mg, 0,986 mmol) em THF (20 mL) a 0 °C foram adicionados DIPEA (0,345 mL, 1,973 mmol) e HATU (90 mg, 0,237 mmol), DMAP (31,3 mg, 0,256 mmol) e a mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 10 min e gradualmente aquecida até 25 °C durante 16 h. Após isso, a mistura foi concentrada para dar o resíduo, que foi purificado por DCM/MeOH (10:1) por sílica gel para se obter o composto do título (194 mg, 0,138 mmol, rendimento de 69,9%) como um sólido amarelo. LCMS (Método m, Tabela 7) Tr= 1,72 min, m/z 985,3 (M+1)+; 1H RMN: (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 0,82-0,89 (m, 10H), 1,12-1,18 (m, 9H), 1,23 (s, 9H), 1,68-1,71 (m, 2H), 2,20-2,33 (m, 2H), 3,86-3,88 (m, 2H), 4,18-4,29 (m, 4H), 4,36-4,39 (m, 1H), 4,49-4,54 (m, 1H), 4,94 (d, J= 4,4 Hz, 1H), 5,13 (s l, 1H), 5,45 (s, 1H), 5,57-5,74 (m, 2H), 6,12(s, 1H), 6,29 (d, J= 10,0 Hz, 1H), 6,91 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,01 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,01 (d, J= 6,0 Hz, 1H).
[0766]Passo 3: Síntese de (S)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS, 10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2-
[0767]A uma solução de ((S)-1-(((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-(1H-imidazol-5-il)-1-oxopropan-2-il)carbamato de terc-butila (120 mg, 0,122 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado TFA (0,6 mL, 7,79 mmol) e a mistura reacional foi agitada a 20 °C durante 1 hora. Após isso, a mistura foi diluída com DCM, concentrada em vácuo a cerca de 25 °C para dar o composto do título (149 mg, 0,103 mmol, rendimento de 84,90%) como um sólido amarelo. LCMS (Método m, Tabela 7) Tr= 1,64 min, m/z 885,3 (M+1)+.
[0768]Passo 4: Síntese de (S)-N-((S)-1-(((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)-2-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-3- (1H-imidazol-4-il)propanamida
[0769]DIPEA (0,106 mL, 0,607 mmol) foi adicionada à solução de (S)-2- amino-N-((S)-1-(((S)-1-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS, 10R,11aR,12aS,12bS)- 2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-1-oxopropan-2-il)-3- (1H-imidazol-5-il)propanamida, ácido 3-trifluoroacético (149 mg, 0,121 mmol) e 3-(2,5- dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanoato de 2,5-dioxopirrolidin-1-ila (48,5 mg, 0,182 mmol) em DMF (2 mL) a 0 °C e depois a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reacional foi purificada por HPLC prep (Fase Móvel: A = TFA a 0,05% em água, B = MeCN; Caudal: 2 mL/min) para originar o composto do título (11,4 mg, 9,02 mmol, rendimento de 7,43 %) como um sólido branco. LCMS (Método m, Tabela 7) TR= 1,62 min, m/z 1058,3 (M+Na)+; 1H RMN: (400 MHz, DMSO-d) δ ppm: 0,86 (s, 3H), 1,24-1,29 (m, 9H), 1,46-1,54 (m, 3H), 1,68-1,76 (m, 2H), 1,98-2,06 (m, 2H), 2,20-2,33 (m, 2H), 2,40-2,44 (m, 2H), 2,60-2,68 (m, 1H), 2,88-2,94 (m, 1H), 3,003,05 (m, 1H), 3,57 (t, J= 7,4 Hz, 2H), 3,89 (s, 2H), 4,18-4,39 (m, 4H), 4,49-4,60 (m, 2H), 4,95 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 5,46 (s, 1H), 5,54-5,74 (m, 2H), 6,13 (s, 1H), 6,30 (d, J= 10,4 Hz, 1H), 6,92 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 7,00 (s, 2H), 7,20-7,28 (m, 4H), 7,35-7,46 (m, 5H), 8,16 (d, J= 6,4 Hz, 1H), 8,23 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 8,31 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 8,96 (s, 1H), 9,89 (s, 1H). Exemplo 12: Síntese de ácido (S)-5-(((S)-1-((4-((4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-4-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-5-oxopentanoico (Comp. N.° 81)
[0770]Passo 1: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)- 10-(4-((4-Aminofenil)tio)fenil)-8b-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)acetil)-2,6b-difluoro-7- hidróxi-6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona
[0771]A uma solução agitada de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4-aminofenil)tio)fenil)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b- deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona (62,4 mg, 0,1 mmol) e imidazol (34,0 mg, 0,500 mmol) em DCM foi adicionado TBS-Cl (45,2 mg, 0,300 mmol) a 0 °C. Após a agitação ter sido continuada durante 30 min à mesma temperatura foi permitido que a mistura aquecesse até à temperatura ambiente e foi agitada durante 2 h. A mistura reacional foi diluída com EtOAc (10 mL), lavada com água (2 x 10 mL) e salmoura (1 x 10 mL), seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por coluna (EA:PE = 1:10-1:1) para dar o produto (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4-Aminofenil)tio)fenil)-8b- (2-((terc-butildimetilsilil)oxi)acetil)-2,6b-difluoro-7-hidróxi-6a,8a-dimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona (50 mg, 0,068 mmol, rendimento de 67,8%). LCMS (Método m, Tabela 7) Tr= 2,144 min, m/z 738 (M+H).
[0772]Passo 2: Síntese de ((S)-1-((4-((4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((terc- butildimetilsilil)oxi)acetil)-2,6b-difluoro-7-hidróxi-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)carbamato de terc-butila
[0773]A uma solução agitada de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4-Aminofenil)tio)fenil)-8b- (2-((terc-butildimetilsilil)oxi)acetil)-2,6b-difluoro-7-hidróxi-6a,8a-dimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona (0,148 g, 0,2 mmol) e ácido (S)-2-((terc-butóxicarbonil) amino)propanoico (0,076 g, 0,400 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionada piridina (0,162 mL, 2,000 mmol), seguida por POCl3 (0,075 mL, 0,800 mmol) em gota a gota. A mistura reacional foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente, depois concentrada em vácuo e o resíduo foi purificado por coluna (EA:PE = 1:10-9:1) para dar ((S)-1-((4-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((terc- butildimetilsilil)oxi)acetil)-2,6b-difluoro-7-hidróxi-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)carbamato de terc-butila (0,073 g, 0,080 mmol, rendimento de 40%) como um semissólido. LCMS (Método m, Tabela 7) Tr= 2,156 min, m/z 909 (M+H).
[0774]Passo 3: Síntese de (S)-2-amino-N-(4-((4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)propanamida
[0775]A uma solução agitada de ((S)-1-((4-((4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((terc- butildimetilsilil)oxi)acetil)-2,6b-difluoro-7-hidróxi-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)carbamato de terc-butila (0,091 g, 0,1 mmol) em cloreto de metileno (1 mL) foi adicionado TFA (1 mL, 12,98 mmol) e a solução foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente, depois concentrada em vácuo para dar o produto (S)-2-amino-N-(4-((4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)propanamida (7,21 g, 10,38 mmol, rendimento de 80%). LCMS (Método m, Tabela 7) Tr= 1,653 min, m/z 695 (M+H).
[0776]Passo 4: Síntese de Ácido (S)-5-(terc-butoxi)-2-(3-(2,5-dioxo-2,5-di- hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-5-oxopentanoico
[0777]A uma solução agitada de ácido (S)-2-amino-5-(terc-butóxi)-5- oxopentanoico (406 mg, 2 mmol) e 3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanoato de 2,5-dioxopirrolidin-1-ila (532 mg, 2,000 mmol) em formamida de dimetila (2 mL) foi adicionada DIPEA (0,524 mL, 3,00 mmol). Após a agitação ter continuado durante 2 h à temperatura ambiente, a mistura reacional foi diluída com EtOAc (10 mL), lavada com água (2 X 10 mL) e salmoura (1 x 10 mL), seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo e o resíduo foi purificado por coluna (MeOH/DCM = 0:10-1:10) para dar o composto do título (209 mg, 0,590 mmol, rendimento de 29,5%) como um óleo amarelo. LCMS (Método m, Tabela 7) Tr= 1,490 min, m/z 377 (M+Na).
[0778]Passo 5: Síntese de 5-(((S)-1-((4-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS, 8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-4-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-5-oxopentanoato de (S)-terc-butila
[0779]Uma solução de ácido (S)-2-amino-N-(4-((4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b, 11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)propanamida (40 mg, 0,058 mmol), ácido (S)-5-(terc-butóxi)-2-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- il)propanamido)-5-oxopentanoico (30,6 mg, 0,086 mmol), HATU (32,8 mg, 0,086 mmol) e DIPEA (0,030 mL, 0,173 mmol) em formamida de dimetila (2 mL) foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e diluída com EtOAc (10 mL), lavada com água (2 X 10 mL) e salmoura (1 x 10 mL), seca sobre Na2SO4, filtrada e evaporada em pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (MeOH/ DCM = 0:10; 1:10) para dar o composto do título (30 mg, 0,029 mmol, rendimento de 50,5%). LCMS (Método m, Tabela 7) Tr= 2,051 min, m/z 1031 (M+H).
[0780]Passo 6: Síntese de ácido (S)-5-(((S)-1-((4-((4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-4-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-5-oxopentanoico
[0781]A uma solução agitada de 5-(((S)-1-((4-((4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R, 11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-4-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-5-oxopentanoato de (S)-terc-butila (10,31 mg, 0,01 mmol) em DCM (0,5 mL) foi adicionado TFA (0,5 mL, 6,49 mmol). Após a agitação ter continuado durante 2 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo para dar o composto do título (6,83 mg, 7,00 μmol, rendimento de 70%). LCMS (Método m, Tabela 7) Tr= 1,875 min, m/z 975 (M+H). Exemplo 13: Síntese de N(4-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)fenóxi)fenil)-1-(3-(2,5-dioxo-2,5-di- hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36- dodecaoxanonatriacontan-39-amida
[0782]Passo 1: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)- 10-(4-(4-Aminofenoxi)fenil)-8b-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)acetil)-2,6b-difluoro-7- hidróxi-6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona
[0783]A uma solução agitada de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(4-aminofenoxi)fenil)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b- deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona (290 mg, 0,477 mmol) e imidazol (162 mg, 2,386 mmol) em CH2Cl2 (10 mL) foi adicionado TBS-Cl (216 mg, 1,432 mmol) a 0 °C. Após a agitação ter sido continuada durante 30 min à mesma temperatura foi permitido que a mistura aquecesse até à temperatura ambiente e foi agitada durante 2 h. A mistura reacional foi diluída com EtOAc (10 mL), lavada com água (2 x 10 mL) e salmoura (1 x 10 mL), seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por coluna (EA:PE = 1:10-9:1) para dar o composto do título (300 mg, 0,416 mmol, rendimento de 87%). LCMS (Método m, Tabela 7) Tr= 1,812 min, m/z 722 (M+H).
[0784]Passo 2: Síntese de (39-((4-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((terc-Butildimetilsilil)oxi)acetil)- 2,6b-difluoro-7-hidroxi-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b- dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)fenóxi)fenil)amino)-39- oxo-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-dodecaoxanonatriacontil)carbamato de terc-
[0785]A uma solução agitada de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,11aR,12aS,12bS)- 10-(4-(4-aminofenoxi)fenil)-8b-(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)acetil)-2,6b-difluoro-7- hidróxi-6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona (144 mg, 0,2 mmol) e ácido 2,2- dimetil-4-oxo-3,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41-tridecaoxa-5- azatetratetracontan-44-oico (144 mg, 0,200 mmol) em CH2Cl2 (3 mL) foi adicionada piridina (0,162 mL, 2,000 mmol), seguida por POCl3 (0,037 mL, 0,400 mmol) em gota a gota. A mistura reacional foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente, depois concentrada em vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (MeOD:DCM = 0:10-1:10) para dar o composto do título (120 mg, 0,084 mmol, rendimento de 42,2%) como um semissólido. LCMS (Método m, Tabela 7) Tr= 2,065 min, m/z 1422 (M+H-100).
[0786]Passo 3: Síntese de 1-amino-N-(4-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)fenóxi)fenil)- 3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-dodecaoxanonatriacontan-39-amida
[0787]A uma solução agitada de (39-((4-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS, 12bS)-8b-(2-((terc- butildimetilsilil)oxi)acetil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenóxi)fenil)amino)-39-oxo-3,6,9,12,15,18,21,24, 27,30,33,36- dodecaoxanonatriacontil)carbamato de terc-butila (190 mg, 0,134 mmol) em cloreto de metileno (0,5 mL) foi adicionado TFA (0,1 mL, 1,298 mmol) e a solução foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente, depois concentrada em vácuo para dar o composto do título (100 mg, 0,083 mmol, rendimento de 62,0%). LCMS (Método m, Tabela 7) Tr= 1,521 min, m/z 1208 (M+H).
[0788]Passo 4: Síntese de N(4-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)fenóxi)fenil)-1-(3-(2,5-dioxo-2,5-di- hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36- dodecaoxanonatriacontan-39-amida
[0789]DIPEA (6,99 μL, 0,040 mmol) foi adicionada a um solução de 1-amino- N-(4-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)fenóxi)fenil)- 3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33, 36-dodecaoxanonatriacontan-39-amida (0,024 mg, 0,02 mmol) e 3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanoato de 2,5-dioxopirrolidin- 1-ila (7,99 mg, 0,030 mmol) em N,N-dimetilformamida (1 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reacional foi diluída com EtOAc (10 mL) e lavada com água (2 x 10 mL), salmoura (1 x 10 mL), seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (MeOH/ DCM = 0:100; 10:100) para dar o composto do título (0,011 g, 8,20 μmol, rendimento de 41%). LCMS (Método m, Tabela 7) Tr= 1,679 min, m/z 1359 (M+H). Exemplo 14: Síntese de 6- ((S)-1-(((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-6-oxo-hexanoato de 2,5-dioxopirrolidin-1-ila (Comp. N.° 78)
[0790]Uma solução de (S)-2-amino-N-((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)propanamida (0,060 g, 0,080 mmol) e N,N-di-isopropiletilamina (0,14 mL, 0,802 mmol) em DMSO (1 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução à temperatura ambiente de adipato de bis(2,5-dioxopirrolidin-1-il) (0,273 g, 0,802 mmol) em DMSO (3,5 mL). Após 60 min, a reação foi extinta por adição de uma solução a 7% em peso de TFA em água para levar a mistura reacional até um pH de 4-5. A mistura reacional em bruto foi purificada por HPLC de fase reversa em uma coluna C18 (2) 5 mícrons (coluna de 250 x 21 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e ácido fórmico a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 30 mL/min (0-1,0 min A a 15%, 1,0-11 min gradiente linear A a 15-80%, manter 1 min). As frações combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para se removerem os solventes voláteis e a solução resultante foi congelada e liofilizada para dar o composto do título como um sólido branco (21,2 mg, 0,022 mmol, rendimento de 27%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,80 min, m/z = 1005,1 [M+MeOH+H+]. 1H RMN (DMSO) δ 0,84 (s, 3H), 1,17 (d, J = 7,1Hz, 3H), 1,25 (d, J = 7,1Hz, 3H), 1,25 (d, J = 6,2Hz, 4H), 1,68 (dq, J = 13,7, 6,3Hz, 3H), 1,99-2,06 (m, 1H), 2,09-2,18 (m, 2H), 2,18-2,36 (m, 2H), 2,55-2,72 (m, 3H), 2,78 (s, 4H), 3,87 (s, 2H), 4,14-4,22 (m, 2H), 4,26 (p, J = 7,1Hz, 1H), 4,33 (p, J = 7,1Hz, 1H), 4,33 (p, J = 19,4Hz, 1H), 4,93 (d, J = 5,1Hz, 1H), 5,43 (s, 1H), 5,49 (d, J = 5,4Hz, 1H), 5,54-5,75 (m, 1H), 6,11 (s, 1H), 6,28 (dd, J = 10,2, 2,0Hz, 1H), 6,89 (d, J = 7,6Hz, 1H), 7,17 (t, J = 7,9Hz, 1H), 7,23 (t, J = 9,7Hz, 3H), 7,34 (d, J = 7,8Hz, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,44 (d, J = 8,1Hz, 1H), 7,99 (d, J = 7,2Hz, 1H), 8,02 (d, J = 7,3Hz, 1H), 9,77 (s, 1H); MS (ESI-) m/z = 971. Exemplo 15: Síntese de ((S)-1-(((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamato de terc-butila
[0791]HATU (106 mg, 0,280 mmol) e 2,6-lutidina (0,1 mL, 0,859 mmol) foram adicionados a uma suspensão à temperatura ambiente de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-aminobenzil)fenil)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b- deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona (113 mg, 0,187 mmol) e (terc-butóxicarbonil)-L-valil-L-alanina (53,8 mg, 0,187 mmol) em THF (1,25 mL). Após 8 h, a reação foi diluída com EtOAc (16 mL), depois lavada sequencialmente com uma solução aquosa a 1 M de HCl (4 mL x 3), uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (4 mL) e depois uma solução aquosa saturada de salmoura (4 mL). O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia (12 g sílica), eluindo com um gradiente de MeOH/DCM a 0-10% para dar o composto do título (148,6 mg, 0,170 mmol, rendimento de 91%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,94 min, m/z = 875,9 [M+H+]. 1H RMN (DMSO-dε) δ 9,85 (s, 1H), 7,99 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,43 (dd, J = 8,0, 1,7 Hz, 1H), 7,36 - 7,31 (m, 3H), 7,27 - 7,15 (m, 5H), 6,89 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,27 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,11 (s, 1H), 5,73 - 5,52 (m, 1H), 5,50 (dd, J = 4,5, 1,7 Hz, 1H), 5,43 (s, 1H), 5,07 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,49 (dd, J = 19,5, 6,4 Hz, 1H), 4,37 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 4,25 - 4,12 (m, 2H), 3,87 (s, 2H), 3,80 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 2,73 - 2,53 (m, 1H), 2,23 (ddd, J = 18,7, 11,9, 6,0 Hz, 2H), 2,08 - 1,99 (m, 1H), 1,93 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,25 - 4,12 (m, 2H), 3,87 (s, 2H), 3,80 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 0,89 - 0,74 (m, 9H). Exemplo 16: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-((4-Aminofenil)tio)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a,10- trimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona e (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4- Aminofenil)tio)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a,10-trimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona
[0793]1-(4-Fluorofenil)etanona (2,19 mL, 18,04 mmol) foi adicionada a uma solução agitada de 4-bromobenzenotiol (3,1 g, 16,40 mmol) e K2CO3 (2,72 g, 19,67 mmol) em DMF (45 mL), após o que a reação foi aquecida até 100 °C durante 20 min. A reação foi resfriada até à temperatura ambiente, diluída com água (50 mL) e extraída com EtOAc (3 X 50 mL). Os orgânicos combinados foram secos (MgSO4) e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 120 g) eluindo com um gradiente de EtOAc/heptanos a 0-60% deu o composto do título (3,24 g, 10,55 mmol, rendimento de 64%) como um sólido amarelo. LCMS (Método r, Tabela 7) Rt = 0,95 min; m/z = 307,0 [M+H+]. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 7,87 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,62 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 2,50 (s, 3H). Passo 2: Síntese de (4-((4-acetilfenil)tio)fenil)carbamato de terc-butila f-BuOCONH2 XPhos, Pd2dba3 Cs2CO3 Br J
[0794]Nitrogênio foi purgado através de uma mistura de 1-(4-((4- bromofenil)tio)fenil)etanona (3,24 g, 10,55 mmol), carbamato de terc-butila (1,483 g, 12,66 mmol), Cs2CO3 (5,15 g, 15,82 mmol) e diciclo-hexil(2',4',6'-tri-isopropil-[1,1'- bifenil]-2-il)fosfina (0,503 g, 1,055 mmol) em 1,4-dioxano durante 30 min. O frasco foi evacuado e cheio de volta com N2 (3X). Pd2dba3 (0,290 g, 0,316 mmol) foi adicionado e a reação foi evacuada e cheia de volta com N2 (3X). A mistura reacional foi aquecida até 100 °C durante 18 h. A reação foi resfriada até à temperatura ambiente, tratada com água (75 mL), depois extraída com EtOAc (3 X 50 mL), seca (MgSO4) e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 120 g) eluindo com um gradiente de EtOAc/heptanos a 0-60% deu o composto do título (2,0 g, 5,82 mmol, rendimento de 55%) como um sólido amarelo. LCMS (Método r, Tabela 7) Rt = 0,96 min; m/z = 344,0 [M+H+]. 1H NMR (501 MHz, DMSO- d6) δ 9,62 (s, 1H), 7,82 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,58 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 2,49 (s, 3H), 1,47 (s, 9H).
[0795]Passo 3: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)- 10-(4-((4-Aminofenil)tio)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a,10- trimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona e (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4- Aminofenil)tio)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a,10-trimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona
[0796]Ácido tríflico (0,431 mL, 4,85 mmol) foi adicionado gota a gota a uma pasta a 0 °C de (6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-difluoro-11,16,17-tri- hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca- hidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona (0,400 g, 0,970 mmol), (4-((4- acetilfenil)tio)fenil)carbamato de terc-butila (0,366 g, 1,067 mmol) e MgSO4 (0,350 g, 2,91 mmol) em MeCN (4,0 mL). Após 30 min, a reação foi diluída com EtOAc (25 mL), lavada sequencialmente com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (20 mL), com uma solução aquosa saturada de salmoura (25 mL), seca (MgSO4) e depois o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar uma espuma amarela. A purificação por cromatografia (sílica, 40 g) eluindo com um gradiente de MeOH/DCM a 0-10% deu o produto como uma mistura dos isômeros de cetal (460 mg, 0,721 mmol, rendimento de 74%). Uma porção deste material foi purificado por HPLC de fase reversa numa coluna C18 (2) 10 mícrons (250 X 50 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 90 mL/min (0-5,0 min A a 15%, 5,0-18 min gradiente linear A a 15-75%, depois manter 5 min). As frações combinadas foram concentradas para se removerem os solventes voláteis sob pressão reduzida e as soluções resultantes foram congeladas e liofilizadas para dar os isômeros de cetal como sólidos amarelos. Isômero de cetal mínimo: (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4-aminofenil)tio)fenil)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a,10-trimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona. Pó amarelo (10,0 mg). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,80 min; m/z = 638,2 [M+H+]. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,33 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,23 (dd, J = 10,1, 1,5 Hz, 1H), 7,19 - 7,12 (m, 2H), 6,96 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,23 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,10 (s, 1H), 5,66 - 5,45 (m, 2H), 5,14 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 19,3 Hz, 1H), 4,22 - 4,07 (m, 2H), 2,48 - 2,35 (m, 1H), 2,14 - 2,04 (m, 1H), 2,02 - 1,91 (m, 1H), 1,77 - 1,64 (m, 2H), 1,63 - 1,56 (m, 1H), 1,50 (dd, J = 13,2, 6,3 Hz, 1H), 1,44 (s, 3H), 1,36 (s, 3H), 1,14 - 0,98 (m, 1H), 0,80 (s, 3H). Isômero de cetal principal: (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4- aminofenil)tio)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a,10-trimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona. Pó amarelo (18,1 mg). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,85 min; m/z = 638,2 [M+H+]. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,28 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 8,4, 7,2 Hz, 4H), 6,95 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,73 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,31 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 6,13 (s, 1H), 5,75 - 5,57 (m, 1H), 5,53 (s, 1H), 5,00 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,22 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,06 - 3,80 (m, 4H), 2,72 - 2,55 (m, 1H), 2,39 - 2,27 (m, 1H), 2,17 - 2,02 (m, 2H), 1,79 - 1,56 (m, 3H), 1,50 (d, J = 12,4 Hz, 6H), 0,73 (s, 3H). Exemplo 17: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((4-aminofenil)tio)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a,10-trimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona e (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4- aminofenil)tio)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a,10-trimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona
[0797]Ácido tríflico (0,24 mL, 2,66 mmol) foi adicionado gota a gota a uma pasta a 0 °C de (8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-tri-hidroxi-17-(2- hidroxiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H- ciclopenta[a]fenantren-3-ona (0,200 g, 0,531 mmol), (4-((4- acetilfenil)tio)fenil)carbamato de terc-butila (0,201 g, 0,584 mmol) e MgSO4 (0,192 g, 1,59 mmol) em MeCN (2,0 mL). Após 30 min, a reação foi diluída com EtOAc (15 mL), lavada sequencialmente com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (10 mL) e depois com uma solução aquosa saturada de salmoura (10 mL), seca (MgSO4) e o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar uma espuma amarela. A purificação por cromatografia (sílica, 24 g) eluindo com um gradiente de MeOH/DCM a 0-10% deu o produto como uma mistura dos isômeros de cetal (198 mg, 0,329 mmol, rendimento de 62%). Uma porção deste material foi purificado por HPLC de fase reversa numa coluna C18 (2) 10 mícrons (250 X 50 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 90 mL/min (0-5,0 min A a 15%, 5,0-18 min gradiente linear A a 15-75%, depois manter 5 min). As frações combinadas foram concentradas para se removerem os solventes voláteis sob pressão reduzida e a solução resultante foi congelada e liofilizadas para dar ambos os isômeros de cetal como sólidos brancos. Isômero de cetal principal: (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4-aminofenil)tio)fenil)-7-hidroxi- 8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a,10-trimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona. Pó branco (14,6 mg). LCMS (Método r; Tabela 7) Tr = 0,83 min; m/z = 602,1 [M+H+]. 1H RMN (501 MHz, DMSO- d6) δ 7,30 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,22 - 7,12 (m, 4H), 6,91 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,68 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,68 (d, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 5,91 (s, 1H), 4,93 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,74 (s l, 2H), 4,30 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,02 - 3,79 (m, 4H), 2,53 (dt, J = 14,7, 7,6 Hz, 1H), 2,30 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 2,16 - 1,95 (m, 2H), 1,85 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 1,78 - 1,67 (m, 2H), 1,55 (td, J = 15,2, 13,3, 7,7 Hz, 2H), 1,50 (s, 3H), 1,37 (s, 3H), 1,13 - 0,97 (m, 2H), 0,70 (s, 3H). Isômero de cetal mínimo: (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((4-aminofenil)tio)fenil)-7-hidroxi- 8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a,10-trimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona. Pó branco (12,0 mg). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,80 min; m/z = 602,1[M+H+]. 1H RMN (501 MHz, DMSO- d6) δ 7,32 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 5,87 (s, 1H), 5,09 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 4,71 (s l, 1H), 4,62 (d, J = 19,3 Hz, 1H), 4,22 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 4,11 (d, J = 19,2 Hz, 2H), 2,47 - 2,37 (m, 1H), 2,25 - 2,07 (m, 1H), 1,94 (qd, J = 11,3, 3,8 Hz, 1H), 1,87 - 1,75 (m, 1H), 1,70 (s, 2H), 1,59 - 1,44 (m, 2H), 1,32 (d, J = 5,1 Hz, 6H), 1,18 - 1,03 (m, 1H), 0,78 (s, 3H), 0,61 (dd, J = 11,2, 3,5 Hz, 1H), 0,50 (qd, J = 12,9, 4,8 Hz, 1H). Exemplo 18: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-(4-Aminofenoxi)fenil)-3-hidroxifenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)- 6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona
[0799]Vanilina (2,5 g, 16,43 mmol), 4-Fluoronitrobenzeno (2,61 mL, 24,65 mmol) e carbonato de potássio (4,54 g, 32,9 mmol) foram dissolvidos em DMF (15 mL) e agitados a 80 °C durante a noite. Após resfriamento, a mistura foi tratada com água e extraída com EtOAc (x2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas (Na2SO4) e concentradas. A purificação por cromatografia (sílica, 120 g) eluindo com um gradiente de EtOAc em heptanos a 040% originou o composto do título como um sólido ligeiramente amarelo (3,37 g, 75%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,88 min; m/z não observado. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,00 (s, 1H), 8,26 - 8,17 (m, 2H), 7,72 - 7,60 (m, 2H), 7,42 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,12 - 7,03 (m, 2H), 3,82 (s, 3H).
[0801]Tribromoborano (110 mL, 110 mmol) foi adicionado a uma solução a - 78 °C de 3-metoxi-4-(4-nitrofenoxi)benzaldeído (6,02 g, 22,03 mmol) em DCM (100 mL). A reação foi agitada a -78 °C durante 1 h, depois foi agitada a 0 °C durante 5 horas. A mistura foi misturada com gelo e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas (Na2SO4) e concentradas. A purificação por cromatografia (sílica, 120 g) eluindo com um gradiente de EtOAc em heptanos a 0-30% originou o composto do título como um óleo arroxeado (5,55 g, rendimento de 97%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr= 0,80 min; m/z não observado. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,24 (s, 1H), 8,22 - 8,14 (m, 2H), 7,36 (s, 1H), 7,30 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,15 - 7,07 (m, 2H), 7,02 - 6,96 (m, 2H).
[0803]Cloreto estanhoso (18,29 g, 96 mmol) foi adicionado a uma solução de 3-hidroxi-4-(4-nitrofenoxi)benzaldeído adicionado (5 g, 19,29 mmol), cloreto estanhoso (18,29 g, 96 mmol) em etanol (60 mL), que foi aquecida até 80 °C durante 2 h. A mistura foi resfriada e misturada cuidadosamente com gelo e solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio, depois extraída com EtOAc múltiplas vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas (Na2SO4), filtradas através de Celite® e o filtrado foi concentrado para originar o composto do título como um sólido amarelo (1,18 g, rendimento de 27%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,48 min; m/z = não observado. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,90 - 9,87 (m, 1H), 10,90 - 9,26 (m, 2H), 8,66 - 8,56 (m, 1H), 7,66 - 7,61 (m, 1H), 7,50 - 7,46 (m, 1H), 7,46 - 7,38 (m, 2H), 7,38 - 7,29 (m, 4H), 7,16 - 6,99 (m, 6H); MS(ESI-) m/z = 227,9 (M-H).
[0804]Passo 4: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)- 10-(4-(4-Aminofenoxi)fenil)-3-hidroxifenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)- 6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H- nafto[2', 1 ':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona
[0805]Ácido perclórico (2,64 mL, 24,25 mmol) foi adicionado a uma solução à temperatura ambiente de 4-(4-aminofenoxi)-3-hidroxibenzaldeído (0,611 g, 2,67 mmol) e (6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-difluoro-11,16,17-tri-hidroxi-17- (2-hidroxiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H- ciclopenta[a]fenantren-3-ona (1 g, 2,425 mmol) em THF (70 mL). Após 16 horas, a reação foi tratada com água e extraída duas vezes com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, uma solução aquosa saturada de tiossulfato de sódio, depois uma solução aquosa saturada de salmoura, seca (Na2SO4) e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O material foi purificado por HPLC de fase reversa em uma coluna C18 (2) 5 mícrons (coluna de 250 X 21 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado a um caudal de 30 mL/min (0,0-1,0 min A a 15%, 1,0-10 min gradiente linear até A a 65%, manter 1 min). As frações combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para se removerem os solventes voláteis e a solução resultante congelada e liofilizada para dar o composto do título como um sólido amarelo (338,9 mmol, rendimento de 23%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,72 min; MS (ESI+) 624,2 (M+H); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,88 (s, 2H), 7,28 (dd, 1H), 7,27 - 7,22 (m, 2H), 7,07 (d, 1H), 7,00 (d, 1H), 6,96 - 6,88 (m, 3H), 6,30 (dd, 1H), 6,18 - 6,08 (m, 1H), 5,78 - 5,67 (m, 1H), 5,65 - 5,52 (m, 1H), 5,42 (s, 1H), 5,00 - 4,95 (m, 1H), 4,53 (d, 1H), 4,27 - 4,18 (m, 2H), 2,79 - 2,57 (m, 1H), 2,36 - 2,28 (m, 1H), 2,24 (td, 1H), 2,13 - 2,01 (m, 1H), 1,80 - 1,66 (m, 3H), 1,65 - 1,52 (m, 1H), 1,51 (s, 3H), 0,88 (s, 3H). Exemplo 19: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((4-Aminofenil)sulfonil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona
[0807]Carbonato de potássio (4,39 g, 31,7 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-bromobenzenotiol (5,0 g, 26,4 mmol) e 4-fluorobenzonitrla (3,20 g, 26,4 mmol) em DMF (50 mL), que foi aquecida até 120 °C durante 3 h. A reação foi resfriada até 0 °C, água foi adicionada (100 mL) e a mistura foi extraída com EtOAc (3 X 50 mL). Os orgânicos combinados foram secos (MgSO4) e o solvente foi removido sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (80 g sílica) eluindo com um gradiente de EtOAc/heptanos a 0-60% deu o composto do título (6,82 g, 23,5 mmol, rendimento de 89%) como um sólido amarelo. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,95 min; m/z = 291,2 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,72 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,65 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 8,7 Hz, 2H).
[0809]Nitrogênio foi purgado através de uma mistura de 4-((4- bromofenil)tio)benzonitrila (6,0 g, 20,68 mmol), carbamato de terc-butila (2,91 g, 24,81 mmol), di-isopropil(2',4',5'-tri-isopropil-[1,1'-bifenil]-2-il)fosfina (0,820 g, 2,068 mmol) e Cs2CO3 (10,11 g, 31,0 mmol) em 1,4-dioxano (207 mL) durante 30 min. O frasco foi evacuado e cheio de volta com N2 (3X). Pd2dba3 (0,568 g, 0,620 mmol) foi adicionado e a reação foi evacuada e cheia de volta com N2 (3X) vezes. A mistura reacional foi aquecida até 100 °C durante 28 h. A reação foi resfriada até à temperatura ambiente, após o que foi tratada com água (200 mL), extraída com EtOAc (3 X 75 mL), seca (MgSO4) e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 120 g) eluindo com um gradiente de EtOAc/heptanos a 0-30% deu o composto do título (3,20 g, 9,80 mmol, rendimento de 47%) como um sólido amarelo. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 1,0 min; m/z = 344,1 [M+NH4+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,67 (s, 1H), 7,69 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,61 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,61 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,61 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 1,49 (s, 9H).
[0811]Ácido 3-cloroperóxibenzoico (639 mg, 3,71 mmol) foi adicionado porção a porção a uma solução à temperatura ambiente de (4-((4- cianofenil)tio)fenil)carbamato de terc-butila (480 mg, 1,471 mmol) em CH2Cl2 (15 mL). Após 30 min, a reação foi dividida entre água (20 mL) e EtOAc (10 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (2 X 25 mL). Os orgânicos combinados foram lavados com uma solução aquosa saturada de salmoura (50 mL), secos sobre MgSO4 e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 40 g) eluindo com um gradiente de EtOAc/heptanos a 0-60% deu o composto do título (372 mg, 1,04 mmol, rendimento de 71%) como um sólido amarelo. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,86 min; m/z = 376,0 [M+NH4+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,92 (s, 1H), 8,06 (s, 4H), 7,87 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,66 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 1,45 (s, 9H).
[0813]Hidreto de di-isobutilalumínio (6,53 mL, 1,0 M em tolueno, 6,53 mmol) foi adicionado porção a porção ao longo de 5 minutos a uma solução a 0 °C de (4-((4- cianofenil)sulfonil)fenil)carbamato de terc-butila (0,780 g, 2,176 mmol) em THF (20 mL). Após 30 min, hidreto de di-isobutilalumínio (1,0 M em tolueno) (2,176 mL, 2,176 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada a 0 °C durante 1 h adicional. A reação foi extinta a 0 °C por adição lenta de uma solução aquosa a 1 N de HCl (120 mL) e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (2 X 75 mL). Os orgânicos combinados foram lavados com uma solução aquosa saturada de salmoura (50 mL), secos sobre MgSO4 e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 80 g) eluindo com um gradiente de CH2Cl2/MeOH a 0-10% deu o composto do título (0,275 g, 0,761 mmol, rendimento de 35%) como um óleo amarelo. LCMS (Método r, Tabela 7) Rt = 0,83 min; m/z = 359,9 [M-H-]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,04 (s, 1H), 9,89 (s, 1H), 8,18 - 7,97 (m, 4H), 7,85 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,64 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 1,43 (s, 9H).
[0814]Passo 5: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-((4-Aminofenil)sulfonil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona
[0815]Ácido tríflico (0,12 mL, 1,328 mmol) foi adicionado gota a gota a uma pasta a 0 °C de (8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-tri-hidroxi-17-(2- hidroxiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H- ciclopenta[a]fenantren-3-ona (0,100 g, 0,266 mmol), (4-((4- formilfenil)sulfonil)fenil)carbamato de terc-butila (0,106 g, 0,292 mmol) e MgSO4 (0,096 g, 0,797 mmol) em MeCN (1,0 mL). Após 30 minutos, a reação foi diluída com EtOAc (15 mL) e depois lavada com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (10 mL), seguida por uma solução aquosa saturada de salmoura (10 mL) e seca (MgSO4). A remoção de solvente sob pressão reduzida deu uma espuma amarelo-clara, que foi purificada por cromatografia (sílica, 24 g) eluindo com um gradiente de CH2Cl2/MeOH a 0-10% para dar um vidro incolor. Os isômeros de acetal foram separados por HPLC preparativa de fase reversa em uma coluna C18 (2) 10 mícrons (250 X 30 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 60 mL/min (0-3,0 min A a 15%, 3,0-18 min gradiente linear A a 15-80%, depois manter 5 min). As frações combinadas foram concentradas para se removerem os solventes voláteis sob pressão reduzida e a solução resultante foi congelada e liofilizada para dar o composto do título como um sólido branco (8,0 mg, rendimento de 18%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,76 min; MS m/z = 620,0 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,81 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,61 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,61 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 5,47 (s, 1H), 4,91 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,48 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,13 (d, J = 19,5 Hz, 1H), 2,51 (s, 2H), 2,32 - 2,22 (m, 1H), 2,13 - 2,01 (m, 1H), 2,02 - 1,88 (m, 1H), 1,78 - 1,56 (m, 5H), 1,35 (s, 3H), 1,11 - 0,96 (m, 2H), 0,82 (s, 3H). Exemplo 20: N-(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- Difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)-3-(2-(2-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- il)propanamido)etoxi)etóxi)propanamida
[0816]Passo 1: Síntese de (2-(2-(3-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S, 8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-3- oxopropoxi)etóxi)etil)carbamato de terc-butila
[0817]HATU (0,125 g, 0,328 mmol) foi adicionado a uma solução à temperatura ambiente de ácido 2,2-dimetil-4-oxo-3,8,11-trioxa-5-azatetradecan-14- oico (0,100 g, 0,361 mmol), (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- (3-aminobenzil)fenil))-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona (0,199 g, 0,328 mmol) e 2,6-dimetilpiridina (0,12 mL, 0,983 mmol) em THF (2,0 mL). Após 24 horas, os solventes foram removidos sob pressão reduzida e a mistura reacional foi purificada por cromatografia (sílica, 24 g) eluindo com um gradiente de MeOH/CH2Cl2 a 0-10% para dar o composto do título como uma espuma amarelo-clara (226 mg, 0,261 mmol, rendimento de 80%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,91 min, m/z = 865,5 [M+H+]. 1H RMN (DMSO-d6) δ 0,86 (s, 3H), 1,36 (s, 9H), 1,50 (s, 4H), 1,71 (ddt, J = 17,9, 13,3, 5,8 Hz, 3H), 1,94 - 2,14 (m, 2H), 2,18 - 2,39 (m, 1H), 2,55 - 2,74 (m, 1H), 3,03 (q, J = 6,0 Hz, 2H), 3,48 (hept, J = 3,1,2,7 Hz, 4H), 3,66 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,88 (s, 2H), 4,13 - 4,26 (m, 2H), 4,51 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 5,45 (s, 1H), 5,52 (dd, J = 4,3, 1,7 Hz, 1H), 5,65 (dddd, J = 48,5, 11,4, 6,7, 2,0 Hz, 1H), 6,13 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 6,73 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 6,80 - 6,97 (m, 1H), 7,18 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,25 (td, J = 9,1, 8,2, 1,6 Hz, 3H), 7,32 - 7,39 (m, 3H), 7,45 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,25 (td, J = 9,1, 8,2, 1,6 Hz, 3H), 7,32 - 7,39 (m, 3H), 7,45 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 8,11 - 8,85 (m, 1H), 9,83 (s, 1H).
[0818]Passo 2: 3-(2-(2-Aminoetoxi)etoxi)-N-(3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR, 12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b, 11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)propanamida
[0819]TFA (1,0 mL, 12,98 mmol) foi adicionado a uma solução à temperatura ambiente de (2-(2-(3-((3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-3-oxopropoxi)etóxi)etil)carbamato de terc-butila (226 mg, 0,261 mmol) em CH2Cl2 (3,0 mL). Após 45 min, os voláteis foram removidos sob vácuo e o produto em bruto foi conduzido para o passo seguinte sem purificação adicional, assumindo rendimento de 100%. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,80 min, m/z = 765,4 [M+H+].
[0820]Passo 3: Síntese de N-(3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)-3-(2-(2-(3-(2,5-dioxo-2,5- di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)etoxi)etóxi)propanamida
[0821]N,N-Di-isopropiletilamina (0,155 mL, 0,88 mmol) foi adicionada a uma solução à temperatura ambiente de 3-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)-N-((S)-1-((3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)propanamida (0,226 g, 0,295 mmol) e 3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanoato de 2,5- dioxopirrolidin-1-ila (0,087 g, 0,325 mmol) em DMF (2,0 mL). Após 45 min, a mistura reacional em bruto foi purificada por HPLC de fase reversa em uma coluna C18 (2) 10 mícrons (coluna de 250 x 50 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e ácido fórmico a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 80 mL/min (0-5,0 min A a 18%, 5,0-25,0 min gradiente linear A a 15-80%, manter 5 min). As frações combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para se removerem os solventes voláteis e a solução resultante foi congelada e liofilizada para dar o composto do título como um sólido branco (48 mg, 0,052 mmol, rendimento de 18%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,84 min, m/z = 916,4 [M+H+]. 1H RMN (DMSO-d6) δ 0,84 (s, 3H), 1,48 (s, 4H), 1,59 - 1,76 (m, 3H), 2,03 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 2,17 - 2,38 (m, 4H), 2,54 - 2,72 (m, 1H), 3,11 (q, J = 5,8 Hz, 2H), 3,31 - 3,35 (m, 4H), 3,42 - 3,51 (m, 4H), 3,57 (dd, J = 7,8, 6,8 Hz, 2H), 3,64 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,86 (s, 2H), 4,10 - 4,25 (m, 2H), 4,49 (dd, J = 19,5, 6,0 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 5,07 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 5,43 (s, 1H), 5,51 (s, 1H), 5,53 - 5,74 (m, 1H), 6,11 (s, 1H), 6,28 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,97 (s, 2H), 7,16 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,20 - 7,28 (m, 3H), 7,30 - 7,39 (m, 3H), 7,38 - 7,48 (m, 1H), 7,96 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 9,81 (s, 1H). Exemplo 21: N-(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- Difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)-1-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- il)propanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amida Preparada pelo mesmo procedimento que o Exemplo 20. Sólido branco (17 mg, 0,017 mmol, rendimento de 9%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,82 min, m/z = 1026 [M+Na+]. 1H RMN (DMSO-dε) δ 0,85 (s, 3H), 1,22 (s, 8H), 1,49 (s, 3H), 1,61 - 1,77 (m, 2H), 2,03 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 2,12 - 2,40 (m, 3H), 2,55 - 2,66 (m, 1H), 3,12 (q, J = 5,8 Hz, 2H), 3,33 (s, 1H), 3,41 - 3,51 (m, 11H), 3,58 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,65 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,87 (s, 2H), 4,18 (d, J = 14,1 Hz, 2H), 4,42 - 4,61 (m, 1H), 4,93 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,07 (s, 1H), 5,44 (s, 1H), 5,50 (s, 1H), 5,6-5,7 (m, 1H), 6,28 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,98 (s, 2H), 7,17 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,24 (t, J = 9,8 Hz, 3H), 7,32 - 7,38 (m, 3H), 7,43 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,98 (s, 1H), 9,81 (s, 1H). Exemplo 22: N-(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- Difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)-1-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- il)propanamido)-3,6,9,12,15,18-hexaoxahenicosan-21-amida
[0822]Preparada pelo mesmo procedimento que o Exemplo 20. Sólido branco (23,2 mg, 0,021 mmol, rendimento de 22%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,83 min, m/z = 1092,3 [M+H+]. 1H RMN (DMSO-d6) δ 0,84 (s, 3H), 1,48 (s, 4H), 1,58 - 1,76 (m, 3H), 2,02 (dt, J = 14,0, 3,6 Hz, 1H), 2,17 - 2,37 (m, 4H), 2,62 (dtd, J = 24,1, 11,9, 4,4 Hz, 1H), 3,12 (q, J = 5,8 Hz, 2H), 3,40 - 3,52 (m, 23H), 3,57 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,64 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,86 (s, 2H), 4,10 - 4,25 (m, 2H), 4,49 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,92 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,08 (s, 1H), 5,43 (s, 1H), 5,49 - 5,73 (m, 2H), 6,11 (s, 1H), 6,27 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,97 (s, 2H), 7,16 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 13,9, 9,0 Hz, 3H), 7,30 - 7,38 (m, 3H), 7,43 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,98 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 9,81 (s, 1H). Exemplo 23: N-(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- Difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)-1-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- il)propanamido)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-dodecaoxanonatriacontan-39- amida
[0823]Preparada pelo mesmo procedimento que o Exemplo 20. Isolada como um vidro incolor (20 mg, 0,015 mmol, rendimento de 18%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,85 min, m/z = 1356,4 [M+H+]. 1H RMN (DMSO-d6) δ 0,84 (s, 3H), 1,48 (s, 4H), 1,67 (d, J = 14,3 Hz, 3H), 2,03 (d, J = 14,0 Hz, 1H), 2,30 (q, J = 9,8, 8,5 Hz, 4H), 2,65 (s, 1H), 3,13 (q, J = 5,8 Hz, 2H), 3,34 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,39 - 3,54 (m, 46H), 3,57 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,64 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,39 - 3,54 (m, 46H), 3,57 (t, J = 14,6 Hz, 2H), 4,49 (d, J = 19,2 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,07 (s, 1H), 5,43 (s, 1H), 5,50 (s, 1H), 5,62 (d, J = 41,1 Hz, 1H), 6,11 (s, 1H), 6,20 - 6,36 (m, 1H), 6,87 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,98 (s, 2H), 7,16 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,23 (t, J = 9,0 Hz, 3H), 7,34 (d, J = 8,4 Hz, 3H), 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,97 (s, 1H), 9,80 (s, 1H). Exemplo 24: N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)-3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanamida
[0824]Em um frasco de 4 mL, ácido 3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- il)propanoico foi adicionado (43,5 mg, 0,26 mmol), seguido por HATU (148 mg, 0,39 mmol) dissolvido em DMA (1,0 mL), seguido por N,N- Di-isopropiletilamina pura (67 uL, 0,39 mmol). Depois, uma solução de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-aminofenil)tio)fenil)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b- deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona (80,83 mg, 0,13 mmol) dissolvida em DMA (0,5 mL) foi adicionada. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A reação foi checada por LC/MS e purificada por HPLC de fase reversa (Método q, gradiente linear 45 - 75%), para proporcionar o composto do título. LCMS (Método s, Tabela 7) Tr = 0,78 min; MS m/z = 775,3 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6/D2O, Temp = 27 °C) δ 7,61 - 7,57 (m, 1H), 7,49 - 7,44 (m, 1H), 7,43 - 7,37 (m, 2H), 7,34 - 7,22 (m, 4H), 7,06 - 7,02 (m, 1H), 6,92 (s, 2H), 6,29 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,14 - 6,09 (m, 1H), 5,72 - 5,52 (m, 1H), 5,46 (s, 1H), 4,98 - 4,93 (m, 1H), 4,52 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,26 - 4,14 (m, 2H), 3,73 - 3,71 (m, 2H), 3,69 - 3,65 (m, 2H), 2,73 - 2,55 (m, 1H), 2,35 - 2,26 (m, 1H), 2,25 - 2,12 (m, 1H), 2,03 - 1,95 (m, 1H), 1,79 - 1,62 (m, 3H), 1,55 - 1,39 (m, 4H), 0,85 (s, 3H). Exemplo 25: N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)-6-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamida
[0825]Preparada como descrito no exemplo 24 a partir de ácido 6-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanoico. Purificada por HPLC de fase reversa (Método s, gradiente linear 50 - 80%). LCMS (Método c, Tabela 7) Tr = 0,82 min; MS m/z = 817,3 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6/D2O, Temp = 27 °C) δ 7,68 - 7,65 (m, 1H), 7,53 - 7,49 (m, 1H), 7,42 - 7,38 (m, 2H), 7,33 - 7,24 (m, 4H), 7,04 - 7,01 (m, 1H), 6,91 (s, 2H), 6,29 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 6,14 - 6,10 (m, 1H), 5,72 - 5,53 (m, 1H), 5,46 (s, 1H), 4,96 - 4,92 (m, 1H), 4,51 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,24 - 4,15 (m, 2H), 3,38 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,70 - 2,54 (m, 1H), 2,35 - 2,11 (m, 5H), 2,03 - 1,96 (m, 1H), 1,76 - 1,61 (m, 3H), 1,59 - 1,41 (m, 8H), 1,24 - 1,13 (m, 2H), 0,85 (s, 3H). Exemplo 26: N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)-4-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)benzamida
[0826]Preparada como descrito no exemplo 24 a partir de ácido 4-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)benzoico. Purificada por HPLC de fase reversa (Método s, gradiente linear 50 - 80%). LCMS (Método c, Tabela 7) Tr = 0,83 min; MS m/z = 823,2 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6/D2O, Temp = 27 °C) δ 8,02 - 7,97 (m, 2H), 7,88 - 7,85 (m, 1H), 7,77 - 7,73 (m, 1H), 7,52 - 7,47 (m, 2H), 7,44 - 7,36 (m, 3H), 7,35 - 7,30 (m, 2H), 7,29 - 7,23 (m, 1H), 7,15 (s, 2H), 7,14 - 7,10 (m, 1H), 6,29 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,15 - 6,09 (m, 1H), 5,71 - 5,54 (m, 1H), 5,47 (s, 1H), 4,97 - 4,94 (m, 1H), 4,52 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,24 - 4,14 (m, 2H), 2,70 - 2,57 (m, 1H), 2,37 - 2,27 (m, 1H), 2,24 - 2,12 (m, 1H), 2,03 - 1,97 (m, 1H), 1,75 - 1,64 (m, 3H), 1,54 - 1,42 (m, 4H), 0,85 (s, 3H). Exemplo 27: N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)-4-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)metil)ciclo- hexanocarboxamida
[0827]Preparada como descrito no exemplo 24 a partir de ácido 4-((2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)metil)ciclo-hexano-1-carboxílico. Purificada por HPLC de fase reversa (Método q, gradiente linear 50 - 80%). LCMS (Método s, Tabela 7) Tr = 0,85 min; MS m/z = 843,3 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6/D2O, Temp = 27 °C) δ 7,68 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 7,54 - 7,49 (m, 1H), 7,42 - 7,37 (m, 2H), 7,35 - 7,22 (m, 4H), 7,04 - 7,01 (m, 1H), 6,95 (s, 2H), 6,29 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 6,12 (s, 1H), 5,71 - 5,53 (m, 1H), 5,46 (s, 1H), 4,99 - 4,93 (m, 1H), 4,51 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,25 - 4,15 (m, 2H), 3,26 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 2,73 - 2,58 (m, 1H), 2,35 - 2,14 (m, 3H), 2,03 - 1,96 (m, 1H), 1,83 - 1,62 (m, 7H), 1,59 - 1,40 (m, 5H), 1,37 - 1,24 (m, 2H), 0,98 - 0,87 (m, 2H), 0,85 (s, 3H).
[0828]Exemplo 28: N-(3-(4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)-1-(3-(2,5-dioxo-2,5-di- hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amida
[0829]Preparada como descrito no exemplo 24 a partir de ácido 1-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)-3-oxo-7,10,13,16-tetraoxa-4-azanonadecan-19-oico. Purificada por HPLC de fase reversa (Método s, gradiente linear 45 - 75%). LCMS (Método c, Tabela 7) Tr = 0,76 min; MS m/z = 1022,4 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6/D2O, Temp = 27 °C) δ 7,70 - 7,66 (m, 1H), 7,55 - 7,50 (m, 1H), 7,43 - 7,37 (m, 2H), 7,34 - 7,23 (m, 4H), 7,06 - 7,01 (m, 1H), 6,92 (s, 2H), 6,29 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,14 - 6,11 (m, 1H), 5,72 - 5,53 (m, 1H), 5,46 (s, 1H), 5,00 - 4,92 (m, 1H), 4,51 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,26 - 4,15 (m, 2H), 3,66 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 3,59 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,51 - 3,40 (m, 11H), 3,33 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,12 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,12 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,70 - 2,58 (m, 1H), 2,51 - 2,47 (m, 3H), 2,36 - 2,25 (m, 3H), 2,24 - 2,13 (m, 1H), 2,04 - 1,97 (m, 1H), 1,75 - 1,65 (m, 3H), 1,56 - 1,42 (m, 4H), 0,85 (s, 3H). Exemplo 29: N-(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)-1-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)-3,6,9,12- tetraoxapentadecan-15-amida
[0830]Preparada como descrito no exemplo 24 a partir de ácido 1-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-oico. Purificada por HPLC de fase reversa (Método s, gradiente linear 45 - 75%). LCMS (Método c, Tabela 7) Tr = 0,80 min; MS m/z = 951,3 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6/D2O, Temp = 27 °C) δ 7,69 - 7,66 (m, 1H), 7,54 - 7,49 (m, 1H), 7,42 - 7,37 (m, 2H), 7,35 - 7,24 (m, 4H), 7,06 - 7,01 (m, 1H), 6,93 (s, 2H), 6,29 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,17 - 6,10 (m, 1H), 5,71 - 5,55 (m, 1H), 5,46 (s, 1H), 4,98 - 4,93 (m, 1H), 4,51 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,24 - 4,16 (m, 2H), 3,66 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 3,56 - 3,51 (m, 2H), 3,50 - 3,36 (m, 14H), 2,71 - 2,60 (m, 1H), 2,51 - 2,48 (m, 2H), 2,33 - 2,27 (m, 1H), 2,18 (q, J = 10,5 Hz, 1H), 2,03 - 1,94 (m, 1H), 1,74 - 1,66 (m, 3H), 1,56 - 1,44 (m, 4H), 0,85 (s, 3H). Exemplo 30: N-(3-(4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)-1-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)- 3,6,9,12,15,18-hexaoxa-henicosan-21-amida
[0831]Preparada como descrito no exemplo 24 a partir de ácido 1-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)-3,6,9,12,15,18-hexaoxa-henicosan-21-oico. Purificada por HPLC de fase reversa (Método q, gradiente linear 10 - 100%). LCMS (Método s, Tabela 7) Tr = 0,80 min; MS m/z não ionizou; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6/D2O, Temp = 27 °C) δ 7,69 - 7,66 (m, 1H), 7,55 - 7,50 (m, 1H), 7,44 - 7,37 (m, 2H), 7,34 - 7,24 (m, 4H), 7,06 - 7,01 (m, 1H), 6,94 (s, 2H), 6,29 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,13 (s, 1H), 5,69 - 5,55 (m, 1H), 5,46 (s, 1H), 4,97 - 4,93 (m, 1H), 4,51 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,23 - 4,16 (m, 2H), 3,66 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 3,56 - 3,38 (m, 22H), 2,70 - 2,63 (m, 1H), 2,54 - 2,53 (m, 2H), 2,51 - 2,48 (m, 2H), 2,33 - 2,26 (m, 1H), 2,18 (q, J = 10,3 Hz, 1H), 2,03 - 1,97 (m, 1H), 1,73 - 1,65 (m, 3H), 1,55 - 1,44 (m, 4H), 0,85 (s, 3H). Exemplo 31: N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)-3-(2-(2-(2-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- il)etoxi)etoxi)etóxi)propanamida
[0832]Preparada como descrito no exemplo 24 a partir de ácido 3-(2-(2-(2- ((2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)etoxi)etoxi)etóxi)propanoico. Purificada por HPLC de fase reversa (Método q, gradiente linear 45 - 75%). LCMS (Método s, Tabela 7) Tr = 0,80 min; MS m/z = 908,1 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6/D2O, Temp = 27 °C) δ 7,69 - 7,66 (m, 1H), 7,54 - 7,51 (m, 1H), 7,42 - 7,38 (m, 2H), 7,34 - 7,24 (m, 4H), 7,06 - 7,02 (m, 1H), 6,93 (s, 2H), 6,29 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,12 (s, 1H), 5,68 - 5,55 (m, 1H), 5,46 (s, 1H), 4,98 - 4,94 (m, 1H), 4,51 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,24 - 4,16 (m, 2H), 3,64 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 3,55 - 3,50 (m, 2H), 3,47 - 3,37 (m, 9H), 2,69 - 2,66 (m, 1H), 2,54 - 2,53 (m, 1H), 2,50 - 2,47 (m, 2H), 2,32 - 2,25 (m, 1H), 2,21 - 2,14 (m, 1H), 2,03 - 1,97 (m, 1H), 1,74 - 1,65 (m, 3H), 1,54 - 1,43 (m, 4H), 0,85 (s, 3H). Exemplo 32: N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)-3-(2-(2-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- il)propanamido)etoxi)etóxi)propanamida
[0833]Preparada como descrito no exemplo 24 a partir de ácido 3-(2-(2-(3- ((2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)etoxi)etóxi)propanoico. Purificada por HPLC de fase reversa (Método q, gradiente linear 45 - 75%). LCMS (Método s, Tabela 7) Tr = 0,76 min; MS m/z = 934,4 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6/D2O, Temp = 27 °C) δ 7,69 - 7,66 (m, 1H), 7,54 - 7,49 (m, 1H), 7,42 - 7,38 (m, 2H), 7,34 - 7,23 (m, 4H), 7,05 - 7,01 (m, 1H), 6,91 (s, 2H), 6,29 (dd, J = 10,2, 1,9 Hz, 1H), 6,13 (s, 1H), 5,68 - 5,56 (m, 1H), 5,46 (s, 1H), 4,97 - 4,93 (m, 1H), 4,51 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,24 - 4,15 (m, 2H), 3,66 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,58 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,51 - 3,43 (m, 4H), 3,33 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,10 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,63-2,58(m,1H), 2,55 - 2,53 (m, 1H), 2,50 - 2,49 (m, 2H), 2,32 - 2,27 (m, 2H), 2,18 (q, J = 10,3 Hz, 1H), 2,03 - 1,97 (m, 1H), 1,73 - 1,63 (m, 3H), 1,54 - 1,42 (m, 4H), 0,85 (s, 3H). Exemplo 33: N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)-2-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)acetamida
[0834]Preparada como descrito no exemplo 24 a partir de ácido 2-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)acético. Purificada por HPLC de fase reversa (Método s, gradiente linear 45 - 75%). LCMS (Método c, Tabela 7) Tr = 0,95 min; MS m/z = 761,7 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6/D2O, Temp = 27 °C) δ 7,65 - 7,61 (m, 1H), 7,52 - 7,47 (m, 1H), 7,44 - 7,39 (m, 2H), 7,36 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,33 - 7,25 (m, 3H), 7,11 - 7,08 (m, 1H), 7,07 (s, 2H), 6,32 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 6,15 (s, 1H), 5,72 - 5,55 (m, 1H), 5,47 (s, 1H), 5,00 - 4,92 (m, 1H), 4,53 (d, J = 19,5 Hz, 1H), 4,30 - 4,17 (m, 4H), 2,72 - 2,61 (m, 1H), 2,38 - 2,28 (m, 1H), 2,19 (q, J = 10,3 Hz, 1H), 2,05 - 1,98 (m, 1H), 1,78 - 1,64 (m, 3H), 1,60 - 1,42 (m, 4H), 0,87 (s, 3H). Exemplo 34: N-(3-((4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)fenil)tio)fenil)-3-(2-(2-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- il)etoxi)etóxi)propanamida
[0835]Preparada como descrito no exemplo 24 a partir de ácido 3-(2-(2-((2,5- dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)etoxi)etóxi)propanoico. Purificada por HPLC de fase reversa (Método q, gradiente linear 40 - 75%). LCMS (Método c, Tabela 7) Tr = 0,95 min; MS m/z = 863,9 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6/D2O, Temp = 27 °C)δ 7,71 - 7,66 (m, 1H), 7,55 - 7,51 (m, 1H), 7,44 - 7,38 (m, 2H), 7,36 - 7,25 (m, 4H), 7,08 - 7,03 (m, 1H), 6,91 (s, 2H), 6,31 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 6,14 (s, 1H), 5,72 - 5,55 (m, 1H), 5,47 (s, 1H), 4,98 - 4,94 (m, 1H), 4,53 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,27 - 4,14 (m, 2H), 3,63 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 3,53 - 3,43 (m, 8H), 2,72 - 2,61 (m, 1H), 2,48 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 2,35 - 2,24 (m, 1H), 2,20 (q, J = 10,4 Hz, 1H), 2,05 - 1,96 (m, 1H), 1,76 - 1,65 (m, 3H), 1,57 - 1,41 (m, 4H), 0,87 (s, 3H). Exemplo 34A: Síntese de 3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)-N-((S)-1- (((S)-1-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)propanamida
[0836]Passo 1: Síntese de (S)-2-amino-N-((S)-1-((3-(4- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)propanamida
[0837]HATU (601 mg, 1,580 mmol) e 2,6-lutidina (0,37 mL, 3,16 mmol) foram adicionados a uma solução a 0 °C de ácido (S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9- il)metóxi)carbonil)amino)propanamido)propanoico (765 mg, 2,00 mmol), (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-aminobenzil)fenil)-7-hidroxi- 8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona (600 mg, 1,053 mmol) em DCM (6 mL) e DMF (12 mL). Após 30 min, a mistura foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante a noite. Dietilamina (2,18 mL, 21,06 mmol) foi adicionada à mistura reacional e a agitação continuou à temp ambiente durante 3 h, após o que os solventes voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DMSO:MeOH 1:1 (12 mL) e purificado adicionalmente por HPLC de fase reversa em uma coluna C18 (2) 10 mícrons (coluna de 250 x 50 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 90 mL/min (0-5,0 min A a 15%, 5,0-20 min gradiente linear A a 15-85%, manter 5 min). As frações de produto combinadas foram liofilizadas para dar o composto do título como um sólido esbranquiçado (447 mg, 0,628 mmol, rendimento de 60%). LC-MS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,78 min, m/z = 711,9 [M+H]. 1H RMN (501 MHz, DMSO-d6) δ 10,03 (s, 1H), 8,63 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,07 (d, J = 5,4 Hz, 3H), 7,44 - 7,38 (m, 2H), 7,38 - 7,34 (m, 2H), 7,29 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,23 - 7,16 (m, 3H), 6,90 (dt, J = 7,7, 1,3 Hz, 1H), 6,14 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 5,90 (t, J = 1,6 Hz, 1H), 5,38 (s, 1H), 4,90 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,52 - 4,37 (m, 2H), 4,27 (q, J = 3,3 Hz, 1H), 4,16 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 3,87 (s, 2H), 2,58 - 2,49 (m, 1H), 2,28 (ddd, J = 13,4, 4,5, 2,1 Hz, 1H), 2,09 (dtd, J = 17,0, 10,6, 5,0 Hz, 1H), 2,00 (dd, J = 12,2, 5,7 Hz, 1H), 1,78 - 1,54 (m, 5H), 1,37 (s, 3H), 1,35 (s, 3H), 1,30 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,01 (ddd, J = 22,1, 11,9, 4,2 Hz, 2H), 0,84 (s, 3H).
[0838]Passo 2: Síntese de 3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)-N-((S)-1- (((S)-1-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)propanamida
[0839]N,N-Di-isopropiletilamina (0,33 mL, 1,875 mmol) foi adicionada a uma solução à temperatura ambiente de 3-maleimidopropionato de N-succinimidila (250 mg, 0,938 mmol) e (S)-2-amino-N-((S)-1-((3-(4- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)propanamida (445 mg, 0,625 mmol) em DMF (12 mL). Após 30 min à temperatura ambiente, os solventes voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com DMSO:MeOH 1:1 (12 mL) e purificado adicionalmente por HPLC de fase reversa em uma coluna C18 (2) 10 mícrons (coluna de 250 x 50 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 90 mL/min (0-5,0 min A a 25%, 5,0-20 min gradiente linear A a 25-90%, manter 5 min). As frações de produto combinadas foram liofilizadas para dar o composto do título como um sólido esbranquiçado (295,1 mg, 0,342 mmol, rendimento de 55%). LC-MS (Método r, Tabela 7) Tr = 0,85 min, m/z = 863,4 [M+H]. 1H RMN (501 MHz, DMSO-d6) δ 9,71 (s, 1H), 8,17 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,43 (dd, J = 7,8, 1,1 Hz, 2H), 7,38 - 7,32 (m, 2H), 7,29 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,22 - 7,15 (m, 3H), 6,96 (s, 2H), 6,88 (dt, J = 7,8, 1,3 Hz, 1H), 6,13 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 5,90 (t, J = 1,6 Hz, 1H), 5,37 (s, 1H), 4,90 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,48 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,32 (p, J = 7,1 Hz, 1H), 4,27 (q, J = 3,3 Hz, 1H), 4,21 (p, J = 7,1 Hz, 1H), 4,27 (q, J = 19,4 Hz, 1H), 4,32 (p, J = 7,3 Hz, 2H), 2,57 - 2,49 (m, 1H), 2,38 (dd, J = 8,0, 6,6 Hz, 2H), 2,32 - 2,24 (m, 1H), 2,15 - 2,04 (m, 1H), 2,04 - 1,95 (m, 1H), 1,80 - 1,54 (m, 5H), 1,37 (s, 3H), 1,26 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,15 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,15 (d, J = 21,2, 12,1, 4,2 Hz, 2H), 111 Método r, Tabela 7 Tr= 0,86 min; m/z = 881,38 [M+H+] 1H RMN (DMSO-cfe) δ: 0,84 (s, 3H), 1,04 (ddd, J= 14,7, 11,7, 4,1 Hz, 2H), 1,14 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,26 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,37 (s, 3H), 1,54- 1,85 (m, 4H), 1,93 - 2,03 (m, 1H), 2,09 (d, J= 11,6 Hz, 1H), 2,23 - 2,33 (m, 1H), 2,36 (q, J = 6,4, 5,5 Hz, 2H), 2,50 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 3,57 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 4,12 - 4,24 (m, 2H), 4,24 -4,34 (m, 2H), 4,48 (d, J= 19,5 Hz, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,90 (d, J= 5,1 Hz, 1H), 5,39 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 6,14 (dd, J= 10,1, 1,9 Hz, 1H), 6,97 (s, 2H), 7,03 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,22 - 7,35 (m, 4H), 7,42 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,57 (dd, J = 8,2, 2,0 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 9,89 (s, 1H) 112 Método r, Tabela 7 Tr = 0,85 min; m/z = 879,30 [M+H+] 1H RMN (DMSO-cfe) δ: 0,84 (s, 3H), 1,02 (ddd, J = 21 ,5, 11,7, 4,1 Hz, 2H), 1,18 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,27 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,37 (s, 3H), 1,54-1,81 (m, 5H), 1,95 - 2,03 (m, 1H), 2,09 (dd, J = 11,1, 4,0 Hz, 1H), 2,29 (d, J= 12,8 Hz, 1H), 2,36 (td, J = 7,1, 2,0 Hz, 2H), 2,49 - 2,59 (m, 1H), 3,57 (d, z = 7,3 Hz, 2H), 3,77 (s, 2H), 4,13 (d, 3 3 19,4 Hz, 1H), 4,23 - 4,34 (m, 2H), 4,38 (p, J = 7,1 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 19,5 Hz, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,89 (d, H = 5,3 Hz, 1H), 5,37 (s, 1H), 5,90 (t, J = 1,6 Hz, 1H), 6,13 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 1,8 Hz, 2H), 6,97 (s, 2H), 7,17 (d, 2H), 7,28 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,31 - 7,36 (m, 2H), 7,76 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,29 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 8,90 (s, 1H), 9,72 (s, 1H) 113 Método r, Tabela 7 Tr= 0,80 min; m/z = 880,26 [M+H+] 1H RMN (DMSO-d6) δ: 0,84 (s, 3H), 1,04 (ddd, J = 34,7, 11,8, 4,1 Hz, 2H), 1,14 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,25 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,38 (s, 3H), 1,54 - 1,81 (m, 4H), 1,95 - 2,04 (m, 1H), 2,10 (tt, J = 10,9, 5,9 Hz, 1H), 2,25 - 2,33 (m, 1H), 2,37 (dd, J = 8,0, 6,5 Hz, 2H), 2,49 - 2,59 (m, 1H), 3,58 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,78 (s, 2H), 4,15 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,21 (p, J = 7,1 Hz, 1H), 4,25 - 4,36 (m, 2H), 4,45 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,87 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,27 (s, 1H), 5,92 (t, J = 1,6 Hz, 1H), 6,14 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 6,77 (dd, J = 7,7, 1,6 Hz, 1H), 6,84 - 6,91 (m, 2H), 6,97 (s, 2H), 6,99 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,11 - 7,17 (m, 1H), 7,30 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,39 - 7,45 (m, 2H), 8,03 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 8,16 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 9,55 (s, 1H), 9,72 (s, 1H)
[0840]Os seguintes compostos foram preparados usando os métodos descritos acima.
Exemplo 36: Síntese de N-(3-Aminofenil)-4-((6aR, 6bS, 7S, 8aS, 8bS, 10R, 11aR, 12aS, 12bS)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a, 8a-dimetil-4-oxo-2, 4, 6a, 6b, 7, 8, 8a, 8b, 11a, 12, 12a, 12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2', 1':4, 5]indeno[1, 2-d][1, 3]dioxol- 10-il)benzamida
[0842]Cloreto de oxalila (17,51 mL, 200 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução a 0 °C de ácido 4-formilbenzoico (15,01 g, 100 mmol) em THF (100 mL), seguido por N,N-dimetilformamida (0,387 mL, 5,00 mmol) em adição gota a gota. Foi permitido que a mistura aquecesse até à temperatura ambiente e depois foi agitada durante 2 h adicionais. A mistura foi concentrada em vácuo para dar cloreto de 4- formilbenzoíla (16,86 g, 100 mmol, rendimento de 100%), que foi usado sem purificação adicional.
[0844]Trietilamina (63,4 mL, 455 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução a 0 °C de cloreto de 4-formilbenzoíla (16,86 g, 100 mmol) em THF (100 mL), seguido por (3-aminofenil)carbamato de terc-butila (18,93 g, 91 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 2 h, a mistura foi diluída com EtOAc (200 mL), lavada com água (2 x 100 mL) e salmoura (100 mL), seca sobre Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo foi triturado em 20 mL de EtOAc/PE (1:1) e o precipitado resultante foi coletado para dar (3-(4-formilbenzamido)fenil)carbamato de terc-butila (27,8 g, 82 mmol, rendimento de 90%) como um sólido amarelo. LCMS (Método e Tabela 7) Tr=2,00 min; MS m/z = 285 [M-t-Bu].
[0845]Passo 3: Síntese de N-(3-Aminofenil)-4-((6aR, 6bS, 7S, 8aS, 8bS, 10R, 11aR, 12aS, 12bS)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a, 8a-dimetil-4-oxo-2, 4, 6a, 6b, 7, 8, 8a, 8b, 11a, 12, 12a, 12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2', 1':4, 5]indeno[1, 2-d][1, 3]dioxol- 10-il)benzamida
[0846]A uma solução agitada de (8S, 9S, 10R, 11S, 13S, 14S, 16R, 17S)-11, 16, 17-tri-hidroxi-17- (2-hidroxiacetil)-10, 13-dimetil-6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17-dodeca-hidro-3H- ciclopenta[a]fenantren-3-ona (9,42 g, 25,02 mmol), (3-(4- formilbenzamido)fenil)carbamato de terc-butila, preparado de um modo similar ao Exemplo 2, Passo 5 (8,515 g, 25,02 mmol) e MgSO4 (12,04 g, 100 mmol) em MeCN (250 mL) foi adicionado gota a gota ácido trifluorometanossulfônico (11,11 mL, 125 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada a 0 °C durante 2 horas e depois aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 16 h adicionais. A mistura foi filtrada e lavada com THF e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo foi dissolvido em THF (100 mL) e depois neutralizado com solução aquosa de NaOH a 1 M até pH = 8. A mistura foi extraída com EtOAc (200 mL), lavada com água (2 x 100 mL) e salmoura (100 mL), seca sobre Na2SO4 e concentrada em vácuo. A purificação por cromatografia (sílica) eluindo em MeOH/DCM a 5% deu produto em bruto, que foi adicionalmente purificado por HPLC de fase reversa em uma Sunfire C18 10 mícrons (coluna 250 x 19 mm). Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,05% em água (B) foi usado, a um caudal de 30 mL/min (0-10,0 min gradiente linear 22-32%, manter 5 min). As frações combinadas foram congeladas e liofilizadas para dar N-(3-aminofenil)-4-((6aR, 6bS, 7S, 8aS, 8bS, 10R, 11aR, 12aS, 12bS)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a, 8a-dimetil-4-oxo-2, 4, 6a, 6b, 7, 8, 8a, 8b, 11a, 12, 12a, 12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2', 1':4, 5]indeno[1, 2-d][1, 3]dioxol-10-il)benzamida (1,972 g, 3,29 mmol, rendimento de 13%) como um sólido branco. LCMS (Método f, Tabela 7) Tr=1,37 min; MS m/z = 599 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,01 - 7,92 (m, 3H), 7,64 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,55 - 7,40 (m, 3H), 7,05 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,27 (dd, J = 10,2, 1,8 Hz, 1H), 6,03 (s, 1H), 5,60 (s, 1H), 5,13 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 4,68 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 14,5, 7,0 Hz, 1H), 2,41 (dd, J = 13,7, 10,2 Hz, 1H), 2,29 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 2,18 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 1,99 (dd, J = 13,8, 3,5 Hz, 1H), 1,94 - 1,80 (m, 2H), 1,82 - 1,69 (m, 2H), 1,52 (s, 3H), 1,14 (m, J = 16,8, 8,0 Hz, 2H), 1,02 (s, 3H).
[0847]Isômero de acetal mínimo: N-(3-Aminofenil)-4- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzamida (112 mg, 0,176 mmol, rendimento de 0,9%) como um sólido amarelo. LCMS (Método e, Tabela 7) Tr=1,53 min; MS m/z = 599 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, MeOH-d4) δ 7,90 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,48 (dd, J = 8,1, 3,5 Hz, 3H), 7,15 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,09 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,59 - 6,51 (m, 1H), 6,28 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 6,25 (s, 1H), 6,05 (s, 1H), 5,51 - 5,37 (m, 1H), 4,45 (s, 1H), 4,30 (d, J = 19,2 Hz, 1H), 4,14 (d, J = 19,2 Hz, 1H), 4,14 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 2,43 (d, J = 13,3 Hz, 1H), 2,22 (dd, J = 23,3, 12,5 Hz, 2H), 2,07 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 1,93 (q, J = 5,1, 3,5 Hz, 2H), 1,80 (d, J = 14,0 Hz, 2H), 1,53 (d, J = 1,7 Hz, 3H), 1,21 (dd, J = 41,7, 12,1 Hz, 2H), 1,03 (s, 3H). Exemplo 37: Síntese de N-(3-Aminofenil)-4- ((6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzamida
[0848]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 36 acima. Isômero de acetal principal: N-(3-Aminofenil)-4- ((6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzamida. LCMS (Método f, Tabela 7) Tr=1,35 min; MS m/z = 617 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,29 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 8,00 - 7,93 (m, 2H), 7,73 (s, 1H), 7,59 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,43 (s, 0H), 7,38 (s, 1H), 7,29 (dd, J = 10,0, 5,3 Hz, 2H), 6,81 (s, 1H), 6,24 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 6,05 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 5,62 (s, 1H), 5,49 (s, 1H), 5,03 - 4,96 (m, 1H), 4,58 (d, J = 19,5 Hz, 1H), 4,23 (d, J = 19,6 Hz, 1H), 2,73 - 2,52 (m, 1H), 2,40 - 2,32 (m, 1H), 2,25 - 2,12 (m, 1H), 2,11 - 2,02 (m, 1H), 1,92 - 1,84 (m, 1H), 1,76 - 1,67 (m, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,40 (tt, J = 14,3, 7,1 Hz, 1H), 0,90 (s, 3H).
[0849]Isômero de acetal mínimo: N-(3-Aminofenil)-4- ((6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzamida. LCMS (Método B, Tabela 7) Tr=1,45 min; MS m/z = 617 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 8,06 (s, 1H), 7,95 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,54-7,41 (m, 5H), 7,09 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6,34 (d, J = 10 Hz, 1H), 6,28 (s, 1H), 6,13 (s, 1H), 5,49 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,34-4,13 (m, 3H), 2,792,24 (m, 5H), 1,74-1,63 (m, 2H), 1,60 (s, 3H), 1,04 (s, 3H). Exemplo 38: Síntese de N-(3-Aminofenil)-4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzamida
[0850]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 36 acima. Isômero de acetal principal: N-(3-Aminofenil)-4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzamida. LCMS (Método f, Tabela 7) Tr=1,376 min, MS m/z = 635 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, MeOH-d4) δ 7,96 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,88 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,64 (dd, J = 8,3, 1,5 Hz, 2H), 7,48 - 7,42 (m, 1H), 7,39 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 6,98 (dt, J = 7,7, 1,6 Hz, 1H), 6,41 - 6,26 (m, 2H), 5,71 - 5,45 (m, 2H), 5,14 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 4,69 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,44 — 4,28 (m, 2H), 2,73 (dt, J = 25,9, 12,1 Hz, 1H), 2,41 (td, J = 11,7, 6,9 Hz, 2H), 2,29 (dt, J = 14,0, 3,6 Hz, 1H), 1,91 - 1,67 (m, 4H), 1,60 (s, 4H), 1,02 (s, 3H).
[0851]Isômero de acetal mínimo: N-(3-Aminofenil)-4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzamida. LCMS (Método e, Tabela 7) Tr= 1,506 min, MS m/z = 635 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, MeOH-d4) δ 7,90 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,49 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,09 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,65 - 6,48 (m, 1H), 6,41 - 6,27 (m, 3H), 5,76 - 5,39 (m, 2H), 4,42 - 4,22 (m, 2H), 4,15 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 2,66 (dd, J = 27,8, 13,4 Hz, 1H), 2,47 - 2,24 (m, 3H), 2,08 - 1,85 (m, 2H), 1,75 (t, J = 14,9 Hz, 2H), 1,61 (s, 3H), 1,03 (s, 3H). Exemplo 39: Síntese de 4-((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)- 2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)benzoato de 3-aminofenila Passo 1: Síntese de (3-Hidróxifenil)carbamato de terc-butila
[0852]A uma solução de 3-aminofenol (10 g, 92 mmol) em THF (450 mL) foi adicionado anidrido de Boc (23,40 mL, 101 mmol). A mistura foi aquecida a 85 °C durante 16 h, monitorizada por LCMS. Após isso, a mistura foi concentrada para se obter um resíduo, que foi dissolvido em EtOAc (150 mL) e lavado com água (100 mL), NaHCO3 saturado (100 mL) e salmoura (100 mL), seco sobre Na2SO4 e concentrado em vácuo. O material em bruto foi lavado com PE (50 mL x 2) para dar o composto do título (16,5 g, 76 mmol, rendimento de 82%) como um sólido branco. LCMS (Método g, Tabela 7) Tr= 1,66 min, MS m/z = 232,1 [M+Na+].
[0854]A uma solução de (3-hidróxifenil)carbamato de terc-butila (5 g, 23,90 mmol) em DCM (60 mL) a 0 °C foram adicionados ácido 4-formilbenzoico (3,59 g, 23,90 mmol), N, N'-diciclo-hexilcarbodi-imida (7,40 g, 35,8 mmol) e 4- dimetilaminopiridina (0,584 g, 4,78 mmol). A mistura resultante foi agitada a essa temperatura durante 10 min sob uma atmosfera de árgon. Depois, a mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e a agitação foi continuada durante 16 h. A mistura foi resfriada em um banho de gelo. O produto secundário N, N'-diciclo- hexilureia foi separado por filtração como um precipitado e o filtrado límpido foi concentrado sob vácuo. O material em bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel eluindo com DCM/EtOAc (100%~30:1) para dar o composto do título (7,0 g, 18,54 mmol, rendimento de 78%) como um sólido branco. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=2,17 min, MS m/z = 364,0 [M+Na +].
[0855]Passo 3: Síntese de 4- ((2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-2,6b-Difluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzoato de 3-aminofenila
[0856]A uma solução agitada de (6S, 8S, 9R, 10S, 11S, 13S, 14S, 16R, 17S)- 6, 9-difluoro-11, 16, 17-tri-hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)-10, 13-dimetil-6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona (Passo 5, Exemplo 2) (7,248 g, 17,58 mmol) e 4-formilbenzoato de 3-((terc- butóxicarbonil)amino)fenila (6 g, 17,58 mmol) em MeCN anidro (40 mL) e THF (40 mL) a 0 °C sob nitrogênio foi adicionado gota a gota ácido trifluorometanossulfônico (7,8 mL, 87,9 mmol). A mistura foi agitada a 0 °C durante 1 h, depois vertida em água gelada (30 mL) e extraída com EtOAc (2 x 45 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água resfriada (2 x 30 mL), salmoura (30 mL), NaHCO3 saturado (30 mL) e água adicional (30 mL), concentradas in vacuo originando um sólido amarelo. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (malha 200-300), eluindo com DCM/MeOH (100%~40:1) e depois adicionalmente purificado por HPLC prep para dar o composto do título (isômero de acetal principal) (2,166 g, 3,32 mmol, rendimento de 19%) como um sólido branco. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,54 min; MS m/z = 636,3 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,13 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,66 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,66 (d, J = 10,1, 1,4 Hz, 1H), 7,06 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,48 (dd, J = 8,3, 2,1 Hz, 1H), 6,40 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 6,34 (dd, J = 7,8, 2,2 Hz, 1H), 6,30 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 6,12 (s, 1H), 5,82 - 5,47 (m, 3H), 5,31 (s, 2H), 5,15 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 5,03 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,60 (dd, J = 19,5, 6,4 Hz, 1H), 4,33 - 4,12 (m, 2H), 2,66 (ddd, J = 26,2, 13,7, 9,3 Hz, 1H), 2,31 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 2,21 (td, J = 12,4, 6,3 Hz, 1H), 2,12 - 1,98 (m, 1H), 1,84 - 1,64 (m, 3H), 1,50 (s, 4H), 0,89 (s, 3H).
[0857]4-((2S, 6aS, 6bR, 7S, 8aS, 8bS, 10S, 11aR, 12aS, 12bS)-2, 6b-Difluoro- 7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a, 8a-dimetil-4-oxo-2, 4, 6a, 6b, 7, 8, 8a, 8b, 11a, 12, 12a, 12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2', 1':4, 5]indeno[1, 2-d][1, 3]dioxol-10-il)benzoato de 3-aminofenila, o isômero de acetal mínimo, foi também isolado (1,073 g, 1,676 mmol, rendimento de 10%) como um sólido branco. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,58min; MS m/z = 636,3 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,13 - 8,06 (m, 2H), 7,51 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,28 (dd, J = 10,1, 1,4 Hz, 1H), 7,06 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,52 - 6,44 (m, 1H), 6,43 - 6,28 (m, 4H), 6,14 (s, 1H), 5,80 - 5,48 (m, 2H), 5,39 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 5,31 (s, 2H), 5,04 (t, J = 6,1 Hz, 1H), 4,26 - 4,15 (m, 2H), 4,05 (dd, J = 19,2, 5,9 Hz, 1H), 2,67 - 2,51 (m, 1H), 2,29 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 2,27 - 2,14 (m, 1H), 2,11 (d, J = 13,5 Hz, 1H), 1,96 - 1,59 (m, 4H), 1,51 (s, 3H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 40: Síntese de 4-((6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-6b- Fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)benzoato de 3-aminofenila
[0858]Sintetizado usando o mesmo procedimento que o Exemplo 39 acima. Isômero de acetal principal: 4-((6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-6b- fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)benzoato de 3-aminofenila. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,54 min; MS m/z = 618,3 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, MeOH-d4) δ 8,19 (dd, J = 7,8, 1,9 Hz, 2H), 7,67 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,35 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,97 - 6,84 (m, 3H), 6,32 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 6,12 (s, 1H), 5,63 (s, 1H), 5,13 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,69 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,43 - 4,30 (m, 2H), 2,76 (td, J = 13,6, 5,8 Hz, 1H), 2,70 - 2,54 (m, 1H), 2,43 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 2,31 (ddd, J = 14,9, 11,6, 4,5 Hz, 2H), 2,01 - 1,92 (m, 1H), 1,89 - 1,69 (m, 3H), 1,62 (s, 4H), 1,03 (s, 3H).
[0859]Isômero de acetal mínimo: 4- ((6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2- hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzoato de 3-aminofenila. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,58 min; MS m/z = 618,2 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,10 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,52 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,52 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,16 (dd, J = 9,8, 6,0 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,61 - 6,51 (m, 2H), 6,31 - 6,19 (m, 2H), 6,05 (s, 1H), 5,47 (s, 1H), 5,38 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 4,19 (d, J = 18,7 Hz, 2H), 4,04 (d, J = 19,2 Hz, 1H), 2,66 (td, J = 13,9, 6,3 Hz, 1H), 2,48 - 2,33 (m, 1H), 2,17 - 2,05 (m, 2H), 1,87 (dt, J = 13,8, 7,0 Hz, 2H), 1,84 - 1,69 (m, 2H), 1,51 (s, 4H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 41: Síntese de 4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7- hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b- dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzoato de 3- aminofenila
[0860]Sintetizado usando o mesmo procedimento que o Exemplo 39 acima. Isômero de acetal principal: 4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7- hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b- dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzoato de 3- aminofenila. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,86 min; MS m/z = 599,8 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, MeOH-d4) δ 8,14 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,64 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,44 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 7,14 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,63 (dd, J = 8,1, 2,2 Hz, 1H), 6,54 (q, J = 2,6 Hz, 1H), 6,48 (dd, J = 8,1, 2,2 Hz, 1H), 6,54 (q, J = 10,0, 2,0 Hz, 1H), 6,00 (s, 1H), 5,59 (s, 1H), 5,13 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,69 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,43 (q, J = 3,3 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,43 (q, J = 13,4, 5,3 Hz, 1H), 2,38 (dd, J = 13,7, 4,1 Hz, 1H), 2,32 - 2,19 (m, 1H), 2,14 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 2,06 - 1,93 (m, 1H), 1,94 - 1,85 (m, 1H), 1,89 - 1,68 (m, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,22 - 1,01 (m, 2H), 1,02 (s, 3H).
[0861]Isômero de acetal mínimo: 4- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzoato de 3-aminofenila. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,89 min; MS m/z = 599,8 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, MeOH- d4) δ 8,22 - 8,11 (m, 2H), 7,53 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,49 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 7,14 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,63 (dd, J = 8,1, 2,1 Hz, 1H), 6,55 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 6,53 - 6,45 (m, 1H), 6,33 - 6,24 (m, 2H), 6,05 (t, J = 1,6 Hz, 1H), 5,46 (t, J = 3,8 Hz, 1H), 4,46 (q, J = 3,3 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 19,2 Hz, 1H), 4,15 (d, J = 19,2 Hz, 1H), 4,15 (d, J = 13,5, 5,4 Hz, 1H), 2,48 - 2,38 (m, 1H), 2,23 (ddd, J = 24,3, 12,6, 6,6 Hz, 2H), 2,12 - 2,03 (m, 1H), 2,02 - 1,89 (m, 2H), 1,89 - 1,77 (m, 2H), 1,53 (s, 3H), 1,26 (tt, J = 12,4, 6,3 Hz, 1H), 1,17 (dd, J = 11,1, 3,6 Hz, 1H), 1,03 (s, 3H). Exemplo 42: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((3-Aminofenoxi)metil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0863]K2CO3 (47,8 g, 346 mmol) e (3-hidróxifenil)carbamato de terc-butila (36,2 g, 173 mmol) foram adicionados sequencialmente a uma solução de 4- (bromometil)benzaldeído (34,4 g, 173 mmol) em formamida de dimetila (200 mL). A suspensão amarela foi depois aquecida a 80 °C em um banho de óleo durante 2 h. A reação foi extinta com água (200 mL) e extraída com EtOAc (2 x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL), secas sobre Na2SO4 e foram concentradas sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia (sílica gel; éter de petróleo a PE/EtOAc 80:20; eluição de gradiente) para proporcionar (3-((4-formilbenzil)óxi)fenil)carbamato de terc-butila (47,27 g, 144 mmol, rendimento de 83%) como um sólido branco. LCMS (Método h Tabela 7) Tr=1,92 min; MS m/z = 272 [M-t-Bu+H+].
[0864]Passo 2: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-((3-Aminofenoxi)metil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0865]Ácido trifluorometanossulfônico (17,76 mL, 200 mmol) foi adicionado gota a gota a uma suspensão a 0 °C agitada de (8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)- 11,16,17-tri-hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)-10,13-dimetil- 6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona (15,06 g, 40 mmol) e (3-((4-formilbenzil)óxi)fenil)carbamato de terc-butila (13,75 g, 42,0 mmol) e MgSO4 (19,26 g, 160 mmol) em MeCN (400 mL). A mistura reacional foi depois aquecida até 20 °C e agitada durante 2 h adicionais. A mistura foi filtrada e lavada com THF e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo foi dissolvido em THF (100 mL), neutralizado com NaOH aquoso a 1 M até pH 8, diluído com EtOAc (200 mL), lavado com água (2 x 200 mL) e salmoura (200 mL), seco (Na2SO4) e concentrado em vácuo. O resíduo foi purificado por coluna flash (MeOH:DCM = 1:20). O material resultante foi purificado adicionalmente por HPLC prep em uma Sunfire C18 10 mícrons (coluna de 250 x 19 mm). Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,05% em água (B) foi usado, a um caudal de 30 mL/min (0-10,0 min gradiente linear A a 2232%, manter 5 min) para dar o composto do título (7,338 g, 12,15 mmol, rendimento de 30%) como um sólido amarelo. LCMS (Método i, Tabela 7) Tr=1,47 min; MS m/z = 586 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4) δ 7,502-7,446 (m, 5H), 7,389-7,349 (m, 1H), 7,009, 6,988 (dd, J1 = 2 Hz, J2 = 8,4 Hz, 1H), 6,890-6,859 (m, 2H), 6,275, 6,250 (dd, J1 = 1,2 Hz, J2 = 8,8 Hz, 1H), 6,027 (s, 1H), 5,501 (s, 1H), 5,147 (s, 2H), 5,107, 5,078 (dd, J1 = 6,8 Hz, J2 = 11,6 Hz, 1H), 4,672 (d, J = 19,6 Hz, 1H), 4,436 (s, 1H), 4,370 (d, J = 19,2 Hz, 1H), 2,706-2,671 (m, 1H), 2,652-2,265 (m, 3H), 2,002-1,700 (m, 5H), 1,512 (s, 3H), 1,151-1,112 (m, 1H), 1,054-1,009 (m, 4H).
[0866]Isômero de acetal mínimo: (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-aminofenoxi)metil)fenil)-7- hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca- hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4-ona, o isômero de acetal mínimo, foi também isolada (354 mg, 0,604 mmol, rendimento de 2%) como um sólido amarelo. LCMS (Método i, Tabela 7) Tr=1,51 min; MS m/z = 586 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,416 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,332-7,276 (m, 3H), 6,879 (t, J = 8 Hz, 1H), 6,185-6,115 (m, 5H), 5,948 (s, 1H), 5,319 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 5,041-5,014 (m, 3H), 4,980 (s, 2H), 4,791 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 4,302-4,239 (m, 2H), 4,056, 4,008 (dd, J1 = 6 Hz, J2 = 19,6 Hz, 1H), 2,552-2,540 (m, 1H), 2,337-2,304 (m, 1H), 2,075-2,005 (m, 2H), 1,884-1,736 (m, 5H), 1,395 (s, 3H), 1,219-1,045 (m, 2H), 0,892 (s, 3H). Exemplo 43: Síntese de (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((3-aminofenoxi)metil)fenil)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0867]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 42 acima. Isômero de acetal principal: (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3- aminofenoxi)metil)fenil)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona. LCMS (Método i, Tabela 7) Tr=1,74 min; MS m/z = 604 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,48 - 7,49 (m, 4H), 7,44 - 7,33 (m, 2H), 7,02 (dd, J = 8,3, 1,9 Hz, 1H), 6,96 - 6,84 (m, 2H), 6,32 (dd, J = 10,1, 1,8 Hz, 1H), 6,13 (s, 1H), 5,52 (s, 1H), 5,16 (s, 2H), 5,08 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,46 - 4,27 (m, 2H), 2,84 - 2,50 (m, 2H), 2,45 - 2,27 (m, 3H), 2,01 - 1,90 (m, 1H), 1,80 - 1,70 (m, 3H), 1,62 (s, 3H), 1,55 (dd, J = 12,8, 4,8 Hz, 1H), 1,02 (s, 3H).
[0868]Isômero de acetal mínimo: (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-aminofenoxi)metil)fenil)-6b- fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona. LCMS (Método i, Tabela 7) Tr=1,77 min; MS m/z = 604 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 7,42 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,36 - 7,25 (m, 3H), 7,01 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 6,43 - 6,30 (m, 3H), 6,24 (dd, J = 10,1, 1,5 Hz, 1H), 6,12 (s, 1H), 6,04 (s, 1H), 5,47 (s, 1H), 5,35 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 5,02 (s, 2H), 4,31 - 4,14 (m, 2H), 4,04 (d, J = 19,2 Hz, 1H), 2,72 - 2,58 (m, 1H), 2,18 - 1,98 (m, 2H), 1,85 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 1,77 - 1,63 (m, 2H), 1,58 - 1,40 (m, 4H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 44: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-((3-Aminofenoxi)metil)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4-ona
[0869]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 42 acima. Isômero de acetal principal: (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((3-aminofenoxi)metil)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona. LCMS (Método f, Tabela 7) Tr=1,45 min; MS m/z = 622 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 7,44 (s, 4H), 7,27 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 6,87 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,30 (dd, J = 10,1, 1,5 Hz, 1H), 6,24 - 6,04 (m, 4H), 5,81 - 5,39 (m, 3H), 5,13 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 5,09 - 4,91 (m, 5H), 4,55 (dd, J = 19,5, 6,4 Hz, 1H), 4,32 - 4,09 (m, 2H), 3,60 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 2,81 - 2,55 (m, 1H), 2,40 - 2,14 (m, 2H), 2,06 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 1,85 - 1,63 (m, 6H), 1,58 - 1,43 (m, 4H), 0,88 (s, 3H).
[0870]Isômero de acetal mínimo: (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-aminofenoxi)metil)fenil)- 2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona. LCMS (Método f, Tabela 7) Tr=1,49 min; MS m/z = 622 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 7,41 (d, J = 8,1 Hz, 3H), 7,35 - 7,20 (m, 3H), 6,88 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,31 (dd, J = 10,1, 1,6 Hz, 1H), 6,16 (dd, J = 13,9, 5,0 Hz, 6H), 5,77 - 5,45 (m, 2H), 5,36 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 4,35 - 4,13 (m, 2H), 4,05 (dd, J = 18,9, 4,9 Hz, 1H), 2,70 - 2,53 (m, 1H), 2,29 (s, 1H), 2,24 - 2,13 (m, 1H), 2,12 - 2,04 (m, 1H), 1,96 - 1,81 (m, 1H), 1,81 - 1,63 (m, 3H), 1,50 (s, 4H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 45: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- (3-Aminobenzil)oxi)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0872]A uma solução de (3-aminofenil)metanol (88,5 g, 719 mmol) em THF (80 mL) foi adicionado dicarbonato de di-terc-butila (184 mL, 790 mmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante a noite. A mistura foi depois concentrada até à secura e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluída com EtOAc/hexanos = 1:9, v/v) para originar o composto do título (161,1 g, 722 mmol, rendimento de 100%), como um sólido branco. LCMS (Método j, Tabela 7) Tr=1,77 min; MS m/z = 246 [M+Na+]. Passo 2: Síntese de (3-(Bromometil)fenil)carbamato de terc-butila
[0873]A uma solução de (3-(hidróximetil)fenil)carbamato de terc-butila (120 g, 484 mmol) em THF (50 mL) a -20 °C foram adicionadas trifenilfosfina (254 g, 967 mmol) seguida por N-bromossuccinimida (103 g, 580 mmol). Após agitação durante 3 h, o solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluída com hexano:EtOAc = 100:1) para proporcionar o composto do título (125 g, 437 mmol, rendimento de 90%) como um sólido branco. LCMS (Método j, Tabela 7) Tr=2,10 min; MS m/z = 230, 232 [M-t-Bu+H+].
[0875]Uma mistura de 4-hidroxibenzaldeído (25,6 g, 210 mmol) e carbonato de potássio (29,0 g, 210 mmol) em formamida de dimetila (300 mL) foi agitada durante 15 min. Depois, (3-(bromometil)fenil)carbamato de terc-butila (60 g, 210 mmol) foi adicionado. A mistura foi aquecida até 60 °C e agitada durante 2 horas a esta temperatura. A mistura foi vertida em 50 mL de água, extraída com EtOAc (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (1 x 100 mL) e salmoura (1 x 100 mL), concentradas em vácuo. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluída com diclorometano/metanol = 500:1) para originar o composto do título (72 g, 209 mmol, rendimento de 100%) como um sólido branco. LCMS (Método j, Tabela 7) Tr=2,08 min; MS m/z = 272 [M-t-Bu+H+].
[0876]Passo 4: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-(3-aminobenzil)oxi)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-
[0877]Ácido trifluorometanossulfônico (12,38 mL, 139 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de sulfato de magnésio (13,43 g, 112 mmol), (3-((4- formilfenóxi)metil)fenil)carbamato de terc-butila (10,96 g, 33,5 mmol) e (8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11, 16, 17-tri-hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)-10, 13- dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3- ona (10,5 g, 27,9 mmol) em MeCN (150 mL) a 0 °C. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 2 horas a esta temperatura. A mistura foi filtrada e o filtrado foi vertido em 500 mL de solução saturada de bicarbonato de sódio, extraído com EtOAc (250 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (200 mL) e água (200 mL), concentrada in vacuo. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluída com DCM-MeOH = 50:1, v/v) e o produto resultante foi purificado adicionalmente por HPLC prep para originar o composto do título (6,04 g, 10,31 mmol, rendimento de 37%) como um sólido branco. LCMS (Método k, Tabela 7) Tr=1,91 min; MS m/z = 586 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, DMSO- de) δ 7,35 (dd, J = 19,6, 9,4 Hz, 3H), 7,09 - 6,89 (m, 3H), 6,61 - 6,33 (m, 3H), 6,18 (dd, J = 10,1, 1,7 Hz, 1H), 5,95 (s, 1H), 5,38 (s, 1H), 5,16 - 5,01 (m, 3H), 5,02 - 4,85 (m, 3H), 4,80 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,50 (dd, J = 19,5, 6,3 Hz, 1H), 4,31 (s, 1H), 4,18 (dd, J = 19,4, 5,5 Hz, 1H), 2,33 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 2,17 - 1,98 (m, 2H), 1,90 - 1,53 (m, 5H), 1,40 (s, 3H), 1,13 - 0,96 (m, 2H), 0,87 (s, 3H). Exemplo 46: Síntese de (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- (3-aminobenzil)oxi)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0878]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 45 acima. LCMS (Método k, Tabela 7) Tr=1,89 min; MS m/z = 604 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,32 (dd, J = 17,3, 9,4 Hz, 3H), 7,10 - 6,94 (m, 3H), 6,65 - 6,35 (m, 3H), 6,25 (dd, J = 10,1, 1,7 Hz, 1H), 6,05 (s, 1H), 5,58 - 5,32 (m, 2H), 5,22 - 5,03 (m, 3H), 5,01 - 4,86 (m, 3H), 4,52 (dd, J = 19,5, 6,4 Hz, 1H), 4,20 (dd, J = 19,4, 5,5 Hz, 2H), 2,78 - 2,56 (m, 1H), 2,44 - 2,31 (m, 1H), 2,19 (td, J = 12,0, 6,8 Hz, 1H), 2,06 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 1,95 - 1,81 (m, 1H), 1,68 (dd, J = 15,4, 9,7 Hz, 3H), 1,57 - 1,30 (m, 4H), 0,88 (s, 3H). Exemplo 47: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-((3-aminobenzil)oxi)metil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0879]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 45 acima. LCMS (Método C, Tabela 7) Tr=1,45 min; MS m/z = 622 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,57 - 7,29 (m, 6H), 7,24 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,45 - 6,23 (m, 2H), 5,69 - 5,49 (m, 1H), 5,46 (s, 1H), 5,16 (s, 2H), 5,06 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 4,64 (d, J = 19,5 Hz, 1H), 4,43 - 4,15 (m, 2H), 2,89 - 2,56 (m, 1H), 2,52 - 2,32 (m, 2H), 2,28 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 1,87 - 1,62 (m, 4H), 1,60 (s, 3H), 1,00 (s, 3H).
[0880]Isômero de acetal mínimo: (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-aminobenzil)oxi)fenil)- 2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona. LCMS (Método C, Tabela 7) Tr=1,48 min; MS m/z = 622 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 7,41 - 7,13 (m, 3H), 7,08 - 6,90 (m, 3H), 6,61 (s, 1H), 6,52 (dd, J = 17,3, 7,5 Hz, 2H), 6,31 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 6,11 (d, J = 18,4 Hz, 2H), 5,79 - 5,56 (m, 1H), 5,53 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 5,34 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,18 - 5,00 (m, 3H), 4,93 (s, 2H), 4,28 (dd, J = 19,1, 6,2 Hz, 1H), 4,19 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,05 (dd, J = 19,1, 5,9 Hz, 1H), 3,60 (t, J = 6,2 Hz, 3H), 2,72 - 2,51 (m, 1H), 2,29 (s, 1H), 2,22 - 2,11 (m, 1H), 2,06 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 1,93 - 1,80 (m, 1H), 1,80 - 1,60 (m, 6H), 1,50 (s, 3H), 1,36 (s, 1H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 48: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((3-Aminofenil)etinil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0882]Dicarbonato de di-terc-butila (123 mL, 531 mmol) foi adicionada a uma solução agitada de 3-etinilanilina (56,6 g, 483 mmol) em THF (300 mL). A mistura foi aquecida até ao refluxo durante a noite. A mistura foi depois resfriada até à temperatura ambiente e absorvida em acetato de etila (500 mL) e lavada sequencialmente com HCl aquoso a 1 N (200 mL), Na2CO3 aquoso saturado (200 mL) e salmoura (200 mL). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada in vacuo e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (eluída com EtOAc/PE a 15%) para dar (3-etinilfenil)carbamato de terc-butila (94 g, 435 mmol, rendimento de 90%). LCMS (Método f, Tabela 7) Tr=1,80 min; MS m/z = 162 [M-t-Bu+H +].
[0884]Em uns 500 mL de frasco de fundo redondo, 4-iodobenzaldeído (30,2 g, 130 mmol), cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II) (4,56 g, 6,50 mmol), iodeto de cobre (I) (2,476 g, 13,00 mmol) e trifenilfosfina (3,41 g, 13,00 mmol) foram dissolvidos em THF (200 mL) e trietilamina (181 mL, 1300 mmol) seguido por adição de (3- etinilfenil)carbamato de terc-butila (28,2 g, 130 mmol). A mistura foi agitada a 75 °C sob atmosfera de nitrogênio durante 16 h. Após completação da reação, os solventes voláteis foram completamente removidos. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluída com PE/CH2Cl2 = 1:3) para se obter (3- ((4-formilfenil)etinil)fenil)carbamato de terc-butila (35,5 g, 111 mmol, rendimento de 85%) como um sólido esbranquiçado. LCMS (Método f, Tabela 7) Tr=2,08 min; MS m/z = 322 [M+H +].
[0885]Passo 3: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-((3-Aminofenil)etinil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona & BocHN.
[0886]Ácido trifluorometanossulfônico (4,44 mL, 50,0 mmol) foi adicionado gota a gota a uma pasta a 0 °C de (8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11, 16, 17-tri- hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)-10, 13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca- hidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona (3,76 g, 10,00 mmol), (3-((4- formilfenil)etinil)fenil)carbamato de terc-butila (3,21 g, 10 mmol) e MgSO4 (4,81 g, 40,0 mmol) em MeCN (100 mL). A mistura foi agitada durante 2 h adicionais. A mistura foi filtrada e lavada com THF. O filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi dissolvido em THF (50 mL), neutralizado com solução aquosa de NaOH a 1 M até pH = 8, extraído com EtOAc (200 mL), lavado com água (2 x 100 mL) e salmoura (100 mL), seco sobre Na2SO4 e concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel, eluída com MeOH: DCM = 1:40) para dar 2,5 g do produto em bruto que foi adicionalmente purificado por HPLC prep para originar o composto do título (1,449 g, 2,500 mmol, rendimento de 25%) como um sólido amarelo. LCMS (Método l, Tabela 7) Tr=1,86 min; MS m/z = 580 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, DMSO- de) δ 7,65 - 7,41 (m, 4H), 7,32 (d, J = 9,9 Hz, 2H), 7,05 (dd, J = 9,8, 5,7 Hz, 1H), 6,85 - 6,49 (m, 4H), 6,29 - 6,05 (m, 1H), 6,01 - 5,83 (m, 1H), 5,63 - 5,40 (m, 1H), 5,26 (s, 2H), 5,12 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 4,96 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 4,82 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,63 - 4,41 (m, 1H), 4,37 - 4,08 (m, 2H), 2,40 - 1,91 (m, 5H), 1,87 - 1,52 (m, 6H), 1,40 (s, 4H), 1,14 - 0,95 (m, 2H), 0,88 (s, 3H).
[0887]O isômero de acetal mínimo, (6aR, 6bS, 7S, 8aS, 8bS, 10S, 11aR, 12aS, 12bS)-10-(4-((3-aminofenil)etinil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a, 8a- dimetil-6a, 6b, 7, 8, 8a, 8b, 11a, 12, 12a, 12b-deca-hidro-1H-nafto[2', 1':4, 5]-indeno- [1, 2-d][1, 3]dioxol-4(2H)-ona, foi também isolado (85 mg, 0,147 mmol, rendimento de 1,5%) como um sólido amarelo. LCMS (Método i, Tabela 7) Tr=1,93 min ; MS m/z = 580 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,51 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,42 - 7,21 (m, 3H), 7,05 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,83 - 6,45 (m, 3H), 6,29 - 6,07 (m, 2H), 5,95 (s, 1H), 5,47 - 5,14 (m, 3H), 4,82 (s, 1H), 4,38 - 4,14 (m, 2H), 4,03 (d, J = 19,3 Hz, 1H), 2,33 (d, J = 10,3 Hz, 2H), 2,15 - 1,96 (m, 1H), 1,93 - 1,68 (m, 5H), 1,40 (s, 3H), 1,33 - 0,97 (m, 3H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 49: Síntese de (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((3-Aminofenil)etinil)fenil)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0888]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 48 acima. Isômero de acetal principal: (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3- aminofenil)etinil)fenil)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona. LCMS (Método f, Tabela 7) Tr=1,57 min ; MS m/z = 598 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,55 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,46 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,46 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,05 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,71 (s, 1H), 6,66 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,71 (s, 1H), 6,66 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,04 (s, 1H), 5,51 (d, J = 15,2 Hz, 2H), 5,26 (s, 2H), 4,97 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 19,5 Hz, 1H), 4,22 (d, J = 19,5 Hz, 2H), 2,74 - 2,56 (m, 1H), 2,36 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 2,24 - 2,10 (m, 1H), 2,06 (d, J = 14,5 Hz, 1H), 1,92 - 1,78 (m, 1H), 1,78 - 1,58 (m, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,45 - 1,31 (m, 1H), 0,88 (s, 3H).
[0889]Isômero de acetal mínimo: (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-aminofenil)etinil)fenil)-6b- fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona. LCMS (Método f, Tabela 7) Tr=1,61 min; MS m/z = 598 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,51 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,39 - 7,22 (m, 3H), 7,05 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,72 (s, 1H), 6,67 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,24 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 6,18 (s, 1H), 6,05 (s, 1H), 5,49 (s, 1H), 5,35 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,26 (s, 2H), 4,19 (d, J = 18,9 Hz, 2H), 4,04 (d, J = 19,1 Hz, 1H), 2,75 - 2,55 (m, 1H), 2,37 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 2,09 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 1,84 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 1,78 - 1,62 (m, 2H), 1,50 (s, 4H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 50: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-((3-Aminofenil)etinil)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-
[0890]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 48 acima. Isômero de acetal principal: (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((3-aminofenil)etinil)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona. LCMS (Método f, Tabela 7) Tr=1,57 min ; MS m/z = 616 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,55 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,47 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,05 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,71 (s, 1H), 6,66 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,30 (dd, J = 10,1, 1,4 Hz, 1H), 6,13 (s, 1H), 5,80 - 5,58 (m, 1H), 5,55 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 5,26 (s, 2H), 5,14 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 4,99 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,56 (dd, J = 19,5, 6,4 Hz, 1H), 4,23 (dd, J = 19,5, 5,4 Hz, 2H), 2,79 - 2,56 (m, 1H), 2,31 (s, 1H), 2,26 - 2,14 (m, 1H), 2,12 - 1,99 (m, 1H), 1,83 - 1,62 (m, 3H), 1,61 - 1,40 (m, 4H), 0,88 (s, 3H).
[0891]Isômero de acetal mínimo: (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-aminofenil)etinil)fenil)- 2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona. LCMS (Método f, Tabela 7) Tr=1,61 min; MS m/z = 616 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,52 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,33 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 7,05 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,73 (s, 1H), 6,68 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,32 (dd, J = 10,1, 1,7 Hz, 1H), 6,21 (s, 1H), 6,15 (s, 1H), 5,78 - 5,58 (m, 1H), 5,55 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 5,36 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 5,27 (s, 2H), 5,08 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 4,33 - 4,12 (m, 2H), 4,06 (dd, J = 19,1, 5,0 Hz, 1H), 2,72 - 2,53 (m, 1H), 2,29 (s, 1H), 2,23 - 2,02 (m, 2H), 1,92 - 1,82 (m, 1H), 1,82 - 1,61 (m, 3H), 1,51 (s, 4H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 51: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-((E)-3-Aminoestiril)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0892]Passo 1: Síntese de (E)-(3-(2-(4,4,5,5-Tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)vinil)fenil)carbamato de terc-butila
[0893]4,4,5,5-Tetrametil-1, 3, 2-dioxaborolano (16,70 mL, 115 mmol) e carbonilcloro-hidridotris(trifenilfosfina)rutênio (II) (2,63 g, 2,76 mmol) foram adicionados a uma solução purgada com nitrogênio de (3-etinilfenil)carbamato de terc- butila (10 g, 46,0 mmol) em tolueno (150 mL). A mistura foi aquecida a 50 °C durante 16 h, após o que foi concentrada sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica) eluindo com PE/EtOAc (100%~10:1) deu o composto do título (13,25 g, 36,8 mmol, rendimento de 80%) como um sólido branco. LCMS (Método d Tabela 7) Tr=2,19 min; MS m/z = 290,1 [M-tBu]+. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,33 (s, 12H), 1,54 (s, 9H), 6,17 (d, J= 18,4 Hz, 1H), 6,49 (s l, 1H), 7,18 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 7,26-7,29 (m, 1H), 7,35-7,40 (m, 2H), 7,47 (s, 1H).
[0895]A uma solução de (E)-(3-(2-(4,4,5,5-Tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)vinil)fenil)carbamato de terc-butila (6 g, 17,38 mmol) e 4-bromobenzaldeído (3,38 g, 18,25 mmol) em THF (85 mL) a 20 °C sob N2 foram adicionados K2CO3 (4,80 g, 34,8 mmol) e Pd(PhaP)4 (1,607 g, 1,390 mmol). A mistura foi agitada a 80 °C durante 32 h. A mistura foi concentrada para dar o resíduo, que foi dissolvido em EtOAc (50 mL) e filtrada. O filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel eluindo com PE/EtOAc (10:1~6:1) para dar o produto, que foi adicionalmente lavado com PE (10 mL) para se obter o composto do título (3,43 g, 10,49 mmol, rendimento de 60%) como um sólido verde. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=2,08 min; MS m/z = 324,1 [M+H +].
[0896]Passo 3: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)- 10-(4-((E)-3-Aminoestiril)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4-ona
[0897]Ácido trifluorometanossulfônico (5,38 mL, 60,6 mmol) foi adicionado gota a gota a uma suspensão agitada a 0 °C de (6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-difluoro-11,16,17-tri-hidroxi-17.(2- hidroxiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H- ciclopenta[a]fenantren-3-ona (Exemplo 2, Passo 5) (5,0 g, 12,12 mmol) e (3-(4- formilestiril)fenil)carbamato de (E)-terc-butila (4,612 g, 12,12 mmol) em MeCN anidro (30 mL) e THF (30 mL) sob nitrogênio. A mistura foi agitada a 0 °C durante 1 h, depois vertida em água gelada (30 mL) e extraída com EtOAc (2 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água resfriada (30 mL), salmoura (30 mL), NaHCO3 saturado (30 mL) e água (30 mL) novamente e concentradas in vacuo originando um sólido amarelo. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (malha 200-300), eluindo com DCM/MeOH (100%~40:1) e depois adicionalmente purificado por HPLC prep para dar o composto do título (1,45 g, 2,328 mmol, rendimento de 19%). LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,47min; MS m/z = 618,3 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,61 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,03 (dd, J = 15,5, 7,6 Hz, 2H), 6,75 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 2H), 6,50 (dd, J = 7,9, 1,3 Hz, 1H), 6,31 (dd, J = 10,1, 1,8 Hz, 1H), 6,15 (s, 1H), 5,79 - 5,46 (m, 3H), 5,13 (dd, J = 14,7, 8,7 Hz, 3H), 4,97 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,55 (dd, J = 19,5, 6,4 Hz, 1H), 4,23 (dd, J = 19,4, 5,5 Hz, 2H), 2,73 - 2,56 (m, 1H), 2,40 - 2,21 (m, 2H), 2,15 - 2,02 (m, 1H), 1,82 - 1,64 (m, 3H), 1,61 - 1,44 (m, 4H), 0,88 (s, 3H).
[0898]O isômero de acetal mínimo, (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E)-3-aminoestiril)fenil)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona (0,30 g, 0,456 mmol, rendimento de 4%), foi também isolado como um sólido branco. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr = 1,51 min; MS m/z = 618,3 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 7,57 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 7,9 Hz, 3H), 7,18 - 6,97 (m, 3H), 6,75 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 6,50 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,31 (dd, J = 10,2, 1,6 Hz, 1H), 6,15 (d, J = 10,3 Hz, 2H), 5,78 - 5,67 (m, 1H), 5,63 - 5,49 (m, 2H), 5,37 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 5,07 (dd, J = 12,0, 5,8 Hz, 3H), 4,33 - 4,15 (m, 2H), 4,06 (dd, J = 19,2, 5,7 Hz, 1H), 2,69 - 2,54 (m, 1H), 2,36 - 2,08 (m, 3H), 1,94 - 1,60 (m, 4H), 1,50 (s, 3H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 52: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((E)-3-Aminoestiril)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0899]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 51 acima. Isômero de acetal principal: (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E)- 3-aminoestiril)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,48 min; MS m/z = 582,3 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 0,88 (s, 3H), 1,00-1,09 (m, 2H), 1,40 (s, 3H), 1,631,79 (m, 5H), 2,04-2,15 (m, 2H), 2,32-2,34 (m, 1H), 2,55-2,60 (m, 1H), 4,20 (dd, J= 20,2 Hz, 5,0 Hz, 1H), 4,31 (s, 1H), 4,54 (dd, J= 19,2 Hz, 6,0 Hz, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,944,95 (m, 1H), 5,10-5,14 (m, 3H), 5,46 (s, 1H), 5,95 (s, 1H), 6,18 (d, J= 10,0 Hz, 1H), 6,50 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 6,73-6,76 (m, 2H), 7,00-7,14 (m, 3H), 7,32 (d, J= 10,0 Hz, 1H), 6,50 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 7,59 (d, J= 8,0 Hz, 2H).
[0900]Isômero de acetal mínimo: (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E)-3-aminoestiril)fenil)-7- hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca- hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4-ona. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,52 min; MS m/z = 582,3 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 0,89 (s, 3H), 1,05-1,31 (m, 3H), 1,40 (s, 3H), 1,74-1,89 (m, 5H), 2,05-2,07 (m, 2H), 2,31-2,34 (m, 1H), 2,54-2,59 (m, 1H), 4,00-4,06 (m, 1H), 4,23-4,31 (m, 2H), 4,80 (s, 1H), 5,05-5,09 (m, 3H), 5,31-5,32 (m, 1H), 5,95 (s, 1H), 6,12 (s, 1H), 6,18 (d, J= 9,6 Hz, 1H), 6,49-6,50 (m, 1H), 6,74-6,76 (m, 2H), 7,00-7,14 (m, 3H), 7,26 (d, J= 7,6 Hz, 2H), 7,32 (d, J= 10,0 Hz, 1H), 7,57 (d, J= 7,6 Hz, 2H). Exemplo 53: Síntese de (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((E)-3-aminoestiril)fenil)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0901]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 51 acima. Isômero de acetal principal: (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E)- 3-aminoestiril)etinil)fenil)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,45 min; MS m/z = 600,3 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,61 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,03 (dd, J = 15,6, 7,6 Hz, 2H), 6,79 - 6,70 (m, 2H), 6,50 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,25 (dd, J = 10,1, 1,4 Hz, 1H), 6,06 (s, 1H), 5,54 - 5,43 (m, 2H), 5,13 (t, J = 6,0 Hz, 3H), 4,95 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,55 (dd, J = 19,5, 6,4 Hz, 1H), 4,22 (dd, J = 19,3, 5,4 Hz, 2H), 2,62 (m, 2H), 2,42 - 2,02 (m, 3H), 1,92 - 1,80 (m, 1H), 1,77 - 1,61 (m, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,47 - 1,32 (m, 1H), 0,89 (s, 3H).
[0902]Isômero de acetal mínimo: (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((E)-3-aminoestiril)etinil)fenil)-6b- fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona.
[0903]LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,48 min; MS m/z = 600,3 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,57 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,28 (dd, J = 12,2, 9,3 Hz, 3H), 7,18 - 6,97 (m, 3H), 6,75 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 6,50 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,25 (dd, J = 10,1, 1,2 Hz, 1H), 6,13 (s, 1H), 6,05 (s, 1H), 5,46 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,35 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,06 (dd, J = 14,0, 7,9 Hz, 3H), 4,24 (dd, J = 19,3, 6,3 Hz, 2H), 4,05 (dd, J = 19,1, 5,8 Hz, 1H), 2,73 - 2,58 (m, 1H), 2,47 - 2,30 (m, 2H), 2,09 (d, J = 10,1 Hz, 2H), 1,85 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 1,78 - 1,65 (m, 2H), 1,50 (s, 4H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 54: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-(3-aminofenetil)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0905]NaBH4 (0,936 g, 24,74 mmol) foi adicionado a uma solução a 0 °C de (3-(4-formilestiril)fenil)carbamato de (E)-terc-butila (Passo 2, Exemplo 51) (4,0 g, 12,37 mmol) em MeOH (60 mL) e THF (60 mL) e agitado a 0 °C durante 1 h. A mistura foi extinta com NH4Cl aquoso saturado (20 mL), concentrada para se obter um resíduo, que foi dividido entre EtOAc (100 mL) e água (100 mL). A camada orgânica foi concentrada sob pressão reduzida e foi purificada por cromatografia em coluna de sílica gel, eluindo com DCM/EtOAc (10:1~5:1) para dar o composto do título (3,23 g, 7,08 mmol, rendimento de 57%) como um sólido vermelho-claro. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr = 1,98 min; MS m/z = 348,1 [M+Na+].
[0907]Uma suspensão de Pd/C (0,657 g, 0,618 mmol) e (3-(4- (hidróximetil)estiril) fenil)carbamato de (E)-terc-butila (puro) 7 (3,35 g, 10,29 mmol) em EtOAc (50 mL) e THF (50 mL) foi tratada com balão de hidrogênio e agitada a 0 °C durante 1,5 h, monitorizada por LCMS. A mistura foi filtrada. Pd/C adicional (0,657 g, 0,618 mmol) foi adicionado ao filtrado. A mistura foi agitada durante 1 h adicional sob uma atmosfera de hidrogênio e monitorizada por LCMS. A mistura foi filtrada e lavada com EtOAc (15 mL). O filtrado foi concentrado para dar um resíduo, que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel, eluindo com PE/EtOAc (10:1~2:1) para dar o composto do título (1,2 g, 3,49 mmol, rendimento de 34%) como um sólido branco. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=2,0 min; MS m/z = 350,0 [M+Na+].
[0908]Passo 3: Síntese de (3-(4-Formilfenetil)fenil)carbamato de terc-butila
[0909]Uma suspensão de MnO2 (9,24 g, 106 mmol) e (3-(4- (hidróximetil)fenetil) fenil)carbamato de terc-butila (2,9 g, 8,86 mmol) em DCM (40 mL) foi tratada com balão de nitrogênio e agitada a 30 °C durante 2 h, monitorizada por LCMS. MnO2 adicional (0,8 g, 9,2 mmol) foi adicionado à mistura acima, agitada a 30 °C durante 1 h adicional. A mistura foi filtrada e lavada com DCM (20 mL). O filtrado foi concentrado para se obter o composto do título (2,9 g, 8,58 mmol, rendimento de 97%) como um sólido amarelo. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=2,14 min; MS m/z = 226,0 [M-Boc]+. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,90 (s, 1H), 7,71 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,25 (s, 2H), 7,19 - 6,97 (m, 3H), 6,73 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,48 (s, 1H), 2,98 - 2,87 (m, 2H), 2,86 - 2,78 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).
[0910]Passo 4: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)- 10-(4-(3-Aminofenetil)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0911]Ácido trifluorometanossulfônico (5,61 mL, 64,2 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução a 0 °C agitada de 3-(4-formilfenetil)fenil)carbamato de terc- butila (4,18 g, 12,85 mmol) e (6S,8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17S)-6,9-difluoro- 11,16,17-tri-hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)-10,13-dimetil- 6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona (5,3 g, 12,85 mmol) em MeCN anidro (30 mL) e THF (30 mL) sob. A mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 1 h, depois vertida em água gelada (20 mL) e extraída com EtOAc (2 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água resfriada (20 mL), salmoura (10 mL), NaHCO3 aquoso saturado (20 mL) e água (20 mL), concentradas in vacuo originando um sólido amarelo. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (malha 200-300), eluindo com diclorometano/metanol (100%~40:1) para se obter o produto, que foi adicionalmente purificado por HPLC prep para dar o composto do título (2,21 g, 3,57 mmol, rendimento de 28%) como um sólido branco. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,75 min; MS m/z = 619,8 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,34 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,27 (t, J = 8,0 Hz, 3H), 6,89 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,43 (s, 1H), 6,36 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 6,31 (dd, J = 10,2, 1,8 Hz, 1H), 6,14 (s, 1H), 5,75 - 5,56 (m, 1H), 5,54 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 5,46 (s, 1H), 5,12 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,95 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,92 (s, 2H), 4,53 (dd, J = 19,5, 6,4 Hz, 1H), 4,21 (dd, J = 19,4, 5,6 Hz, 2H), 2,83-2,79 (m, 2H), 2,73 - 2,57 (m, 3H), 2,275-2,25 (m, 2H), 2,08-2,04 (m, 1H), 1,79 - 1,62 (m, 3H), 1,67-1,50 (m, 4H), 0,87 (s, 3H).
[0912]O isômero de acetal mínimo, (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-aminofenetil)fenil)-2,6b- difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona (0,45 g, 0,667 mmol, rendimento de 5%), foi também isolado como um sólido branco. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,79 min; MS m/z = 619,8 [M+H +]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,33-7,17 (m, 5H), 6,89 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,46 - 6,27 (m, 4H), 6,12 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,75 - 5,55 (m, 1H), 5,53 (s, 1H), 5,34 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 5,06 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 4,92 (s, 2H), 4,31 - 4,15 (m, 2H), 4,05 (dd, J = 19,2, 5,6 Hz, 1H), 2,83-2,79 (m, 2H), 2,72 - 2,54 (m, 3H), 2,29 (s, 1H), 2,21-2,13 (m, 1H), 2,09-2,05 (m, 1H), 1,93 - 1,81 (m, 1H), 1,79 - 1,60 (m, 3H), 1,50 (s, 3H), 0,88 (s, 3H). Exemplo 55: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- (3-aminofenetil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0913]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 54 acima. Isômero de acetal principal: LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,74 min ; MS m/z = 583,8 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,34 (dd, J = 16,7, 9,1 Hz, 3H), 7,24 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,89 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,42 (s, 1H), 6,36 (dd, J = 7,7, 1,6 Hz, 2H), 6,17 (dd, J = 10,1, 1,7 Hz, 1H), 5,95 (s, 1H), 5,41 (s, 1H), 5,11 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 5,4 Hz, 3H), 4,81 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,52 (dd, J = 19,5, 6,4 Hz, 1H), 4,30 (s, 1H), 4,19 (dd, J = 19,5, 5,6 Hz, 1H), 2,87 - 2,77 (m, 2H), 2,73 - 2,64 (m, 2H), 2,62 - 2,52 (m, 1H), 2,32 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 2,18 - 1,98 (m, 2H), 1,83 - 1,58 (m, 5H), 1,40 (s, 3H), 1,24 - 0,97 (m, 2H), 0,87 (s, 3H).
[0914]Isômero de acetal mínimo, (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-aminofenetil)fenil)-7-hidroxi- 8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro- 4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4-ona. LCMS (Método d, Tabela 7) Tr = 1,77 min; MS m/z = 583,9 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,32 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,19 (q, J = 8,2 Hz, 4H), 6,89 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,44 - 6,29 (m, 3H), 6,17 (dd, J = 10,1, 1,8 Hz, 1H), 6,07 (s, 1H), 5,95 (s, 1H), 5,29 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,03 (t, J = 6,1 Hz, 1H), 4,92 (s, 2H), 4,78 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 4,34 - 4,19 (m, 2H), 4,02 (dd, J = 19,2, 5,9 Hz, 1H), 2,81 (dd, J = 9,5, 6,1 Hz, 2H), 2,68 (dd, J = 9,6, 6,0 Hz, 2H), 2,61 - 2,52 (m, 1H), 2,32 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 2,03 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 1,91 - 1,67 (m, 5H), 1,39 (s, 3H), 1,27 - 1,01 (m, 2H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 56: Síntese de (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- (3-Aminofenetil)fenil)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0915]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 54 acima. Isômero de acetal principal: LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,74 min ; MS m/z = 601,9 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,32 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 7,26 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 6,89 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,43 (s, 1H), 6,36 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 6,24 (dd, J = 10,1, 1,7 Hz, 1H), 6,05 (s, 1H), 5,45 (s, 2H), 5,10 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 4,97 - 4,85 (m, 3H), 4,52 (dd, J = 19,5, 6,4 Hz, 1H), 4,20 (dd, J = 19,2, 5,6 Hz, 2H), 2,85 - 2,76 (m, 2H), 2,72 - 2,54 (m, 3H), 2,36 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 2,20-2,18 (m, 1H), 2,04 (s, 1H), 1,91 - 1,80 (m, 1H), 1,73 - 1,61 (m, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,40-1,38 (m, 1H), 0,87 (s, 3H).
[0916]Isômero de acetal mínimo, (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-aminofenetil)fenil)-6b-fluoro-7- hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca- hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4-ona: LCMS (Método d, Tabela 7) Tr=1,77 min; MS m/z = 601,9 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,35 - 7,13 (m, 5H), 6,89 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,41 (s, 1H), 6,36 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 6,24 (dd, J = 10,1, 1,7 Hz, 1H), 6,06 (d, J = 13,8 Hz, 2H), 5,44 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 5,04 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,91 (s, 2H), 4,27-4,21 (m, 2H), 4,04 (dd, J = 19,2, 5,9 Hz, 1H), 2,85 - 2,76 (m, 2H), 2,70-2,66 (m, 3H), 2,37-2,35 (m, 2H), 2,07-2,06 (m, 2H), 1,84 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 1,71 (t, J = 10,3 Hz, 2H), 1,50 (s, 4H), 0,90 (s, 3H). Exemplo 57: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((3-Aminofenil)amino)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0918]Uma mistura (3-aminofenil)carbamato de terc-butila (31,2 g, 150 mmol), 4-bromobenzaldeído (33,3 g, 180 mmol), Pd(OAc)2 (1,684 g, 7,50 mmol), BINAP ((RS)2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftil) (9,34 g, 15,00 mmol), Cs2CO3 (98 g, 300 mmol) foi submetida ao refluxo em tolueno (300 mL) sob nitrogênio durante 16 h. Após resfriamento até à temperatura ambiente, a mistura foi dividida entre água e EtOAc. A camada orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna eluindo com PE:EtOAc (5:1) para dar o composto do título (32,8 g, 105 mmol, rendimento de 70%) como um óleo amarelo. LCMS (Método j, Tabela 7) Tr=1,94 min; MS m/z = 313 [M+H+].
[0919]Passo 2: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-((3-Aminofenil)amino)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0920]Ácido trifluorometanossulfônico (14,21 mL, 160 mmol) foi adicionado gota a gota a uma suspensão a 0 °C de (8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17- tri-hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca- hidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona (12,05 g, 32,0 mmol) e (3-((4- formilfenil)amino)fenil)carbamato de terc-butila (10 g, 32,0 mmol) em THF (50,00 mL) e MeCN (50 mL). A mistura reacional foi agitada durante 2 horas adicionais à mesma temperatura. A mistura foi diluída com EtOAc (200 mL), lavada com água (100 mL), solução saturada de NaHCO3 (1 x 100 mL) e salmoura (100 mL), seca sobre Na2SO4 e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (MeOH:DCM = 1:40) e o material resultante foi purificado adicionalmente por HPLC prep para originar o composto do título (1,729 g, 3,03 mmol, rendimento de 10%) como um sólido branco. LCMS (Método k, Tabela 7) Tr=1,50 min; MS m/z = 571[M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,01 (s, 1H), 7,33 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,00 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,00 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,36 (s, 1H), 5,94 (s, 1H), 5,32 (s, 1H), 5,10 (s, 1H), 5,02 - 4,87 (m, 3H), 4,80 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,51 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 4,31 (s, 1H), 4,20 (d, J = 17,8 Hz, 1H), 2,62 - 2,52 (m, 1H), 2,32 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 2,20 - 1,98 (m, 2H), 1,86 - 1,69 (m, 4H), 1,69 - 1,55 (m, 1H), 1,41 (s, 3H), 1,18 - 0,97 (m, 2H), 0,87 (s, 3H).
[0921]O isômero de acetal mínimo, (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-aminofenil)amino)fenil)-7- hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca- hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4-ona (78 mg, 0,137 mmol, rendimento de 0,4%) como um sólido branco. LCMS (Método k, Tabela 7) Tr=1,53 min; MS m/z = 571[M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,00 (s, 1H), 7,32 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,96 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,96 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,35 (s, 1H), 6,24 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,35 (s, 1H), 6,24 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 6,10 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,35 (s, 1H), 6,24 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 5,02 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 4,97 (s, 2H), 4,78 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,30 (s, 2H), 4,03 (dd, J = 19,1, 5,8 Hz, 1H), 2,65 - 2,52 (m, 1H), 2,32 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 2,14 - 1,95 (m, 2H), 1,89 - 1,63 (m, 5H), 1,39 (s, 3H), 1,28 - 1,11 (m, 1H), 1,05 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 58: Síntese de (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((3-Aminofenil)amino)fenil)-6b-fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0922]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 57 acima. Isômero de acetal principal: LCMS (Método k, Tabela 7) Tr=1,49 min ; MS m/z = 589 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,02 (s, 1H), 7,30 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,99 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,99 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,36 (s, 1H), 6,31 - 6,16 (m, 2H), 6,10 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,04 (s, 1H), 5,45 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 5,35 (s, 1H), 5,11 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 4,97 (s, 2H), 4,91 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,51 (dd, J = 19,5, 6,3 Hz, 1H), 4,20 (dd, J = 19,2, 5,5 Hz, 2H), 2,74 - 2,58 (m, 1H), 2,36 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 2,27 - 2,13 (m, 1H), 2,06 (d, J = 9,5 Hz, 2H), 1,93 - 1,78 (m, 1H), 1,78 - 1,57 (m, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,42 (dd, J = 12,4, 4,5 Hz, 1H), 0,87 (s, 3H).
[0923]Isômero de acetal mínimo, (6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-aminofenil)amino)fenil)-6b- fluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona: LCMS (Método k, Tabela 7) Tr=1,50 min ; MS m/z = 589 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,01 (s, 1H), 7,29 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,97 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,97 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,35 (s, 1H), 6,24 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,10 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,02 (d, J = 18,4 Hz, 2H), 5,44 (s, 1H), 5,30 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 4,97 (s, 3H), 4,30 (d, J = 19,1 Hz, 1H), 4,19 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 19,1 Hz, 1H), 4,19 (d, J = 13,3 Hz, 1H), 2,06 (d, J = 10,7 Hz, 2H), 1,83 (dd, J = 16,3, 10,0 Hz, 2H), 1,76 - 1,61 (m, 2H), 1,50 (s, 4H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 59: Síntese de (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-((3-Aminofenil)amino)fenil)-2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4-ona
[0924]Sintetizada usando o mesmo procedimento que o Exemplo 57 acima. Isômero de acetal principal: LCMS (Método l, Tabela 7) Tr=1,62 min ; MS m/z = 607 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,02 (s, 1H), 7,25 (dd, J = 18,2, 9,4 Hz, 3H), 6,99 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,87 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 6,36 (t, J = 1,9 Hz, 1H), 6,30 (dd, J = 10,1, 1,8 Hz, 1H), 6,25 - 6,19 (m, 1H), 6,14 (s, 1H), 6,09 (dd, J = 7,9, 1,3 Hz, 1H), 5,77 - 5,55 (m, 1H), 5,53 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,35 (s, 1H), 5,11 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,96 (s, 2H), 4,92 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,51 (dd, J = 19,5, 6,4 Hz, 1H), 4,21 (dd, J = 19,3, 5,6 Hz, 2H), 2,76 - 2,53 (m, 1H), 2,28 (dd, J = 12,6, 5,9 Hz, 2H), 2,06 (d, J = 12,0 Hz, 3H), 1,70 (dt, J = 20,2, 6,0 Hz, 3H), 1,60 - 1,40 (m, 4H), 0,86 (s, 3H).
[0925]Isômero de acetal mínimo, (2S,6aS,6bR,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-aminofenil)amino)fenil)- 2,6b-difluoro-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona: LCMS (Método l, Tabela 7) Tr=1,65 min ; MS m/z = 607 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,01 (s, 1H), 7,27 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 6,97 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,88 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,41 - 6,19 (m, 3H), 6,20 - 6,07 (m, 2H), 6,03 (s, 1H), 5,65 (d, J = 46,4 Hz, 1H), 5,52 (s, 1H), 5,32 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 5,06 (s, 1H), 4,97 (s, 2H), 4,32 (dd, J = 19,1, 5,3 Hz, 1H), 4,19 (s, 1H), 4,06 (dd, J = 18,7, 4,8 Hz, 1H), 2,59 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 2,29 (s, 1H), 2,17 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 2,07 (s, 1H), 1,87 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 1,69 (dd, J = 23,7, 12,4 Hz, 3H), 1,50 (s, 4H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 60: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- (3-Aminobenzil)tio)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0927]A uma solução de (3-nitrofenil)metanotiol (35 g, 282 mmol) e 4- fluorobenzaldeído (52,5 g, 310 mmol) em sulfóxido de dimetila seco (220 mL) foi adicionado carbonato de potássio (78 g, 564 mmol). A mistura reacional foi aquecida até 100 °C durante 4 horas. Um frasco adicional foi definido como descrito acima. As duas reações foram combinadas e diluídas com água (2 L) e depois extraídas com EtOAc (3 x 600 mL). A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4 e concentrada para dar um resíduo, que foi purificado por cromatografia em coluna (eluída com PE/EtOAc = 20/1 a 5/1) para dar o composto do título (62 g, rendimento de 80%) como sólido marrom ligeiro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 4,54 (s, 2 H) 7,51 (d, J=8,33 Hz, 2 H) 7,59 (s, 1 H) 7,77 (d, J=8,33 Hz, 2 H) 7,59 (s, 1 H) 7,77 (d, J=7,89 Hz, 1 H) 8,05 - 8,10 (m, 1 H) 8,30 (s, 1 H) 9,87 (s, 1 H).
[0928]Passo 2: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7- Hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-10-(4-((3-nitrobenzil)tio)fenil)- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0929]Ácido trifluorometanossulfônico (21,23 mL, 239 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução a 0 °C de (8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-tri- hidroxi-17-(2-hidroxiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca- hidro-3H-ciclopenta[a]fenantren-3-ona (9 g, 23,91 mmol) e 4-((3- nitrobenzil)tio)benzaldeído (7,19 g, 26,3 mmol) em MeCN (500 mL). A reação foi agitada durante 1 hora a 0 °C. Dois frascos adicionais foram definidos como descrito acima. Todas as três reações foram combinadas e vertidas em água (2 L). A mistura resultante foi extraída com EtOAc (3 x 500 mL). A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2SO4 e concentrada para dar um resíduo, que foi purificado por HPLC prep para dar o composto do título (5,57 g, rendimento de 16%) como sólido branco. LCMS (Método n Tabela 7): Tr=3,20 min; m/z = 632,0 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 0,84 (s, 3 H) 0,93 - 1,08 (m, 2 H) 1,37 (s, 3 H) 1,52 - 1,76 (m, 5 H) 1,94 - 2,15 (m, 2 H) 2,29 (d l, J=11,91 Hz, 1 H) 2,50 - 2,58 (m, 1 H) 4,15 (dd, J=19,40, 5,51 Hz, 1 H) 4,27 (d l, J=2,87 Hz, 1 H) 4,39 (s, 2 H) 4,48 (dd, J=19,40, 6,39 Hz, 1 H) 4,77 (d, J=3,09 Hz, 1 H) 4,89 (d, J=4,63 Hz, 1 H) 5,07 (t, J=5,95 Hz, 1 H) 5,38 (s, 1 H) 5,91 (s, 1 H) 6,15 (dd, J=10,14, 1,76 Hz, 1 H) 7,25 - 7,38 (m, 5 H) 7,55 (t, J=7,94 Hz, 1 H) 7,79 (d, J=7,72 Hz, 1 H) 8,04 (dd, J=8,16, 1,54 Hz, 1 H) 8,19 (d, J=1,76 Hz, 1 H)
[0930]O isômero de acetal mínimo, (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10S,11aR,12aS,12bS)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-10-(4-((3-nitrobenzil)tio)fenil)-1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca- hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4-ona (0,34 g, rendimento de 1%), foi obtido como um sólido branco. LCMS (Método n, Tabela 7): Tr=3,28 min; MS m/z = 631,8 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 0,86 (s, 3 H) 0,98 - 1,05 (m, 1 H) 1,10 - 1,21 (m, 1 H) 1,37 (s, 3 H) 1,66 - 1,88 (m, 5 H) 1,94 - 2,08 (m, 2 H) 2,29 (d ld, J=13,23, 2,87 Hz, 1 H) 2,50 - 2,56 (m, 1 H) 3,99 (dd, J=19,18, 5,95 Hz, 1 H) 4,20 (dd, J=19,07, 6,28 Hz, 1 H) 4,27 (s l, 1 H) 4,39 (s, 2 H) 4,77 (d, J=3,09 Hz, 1 H) 4,99 (s, 1 H) 5,26 (d, J=6,84 Hz, 1 H) 5,92 (s, 1 H) 6,04 (s, 1 H) 6,15 (dd, J=10,03, 1,87 Hz, 1 H) 7,16 (d, J=8,38 Hz, 2 H) 7,26 - 7,34 (m, 3 H) 7,55 (t, J=7,94 Hz, 1 H) 7,75 (d, J=7,72 Hz, 1 H) 8,05 (dd, J=8,16, 1,54 Hz, 1 H) 8,21 (t, J=1,76 Hz, 1 H).
[0931]Passo 3: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-(3-Aminobenzil)tio)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0932]Uma mistura de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7- hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-10-(4-((3-nitrobenzil)tio)fenil)- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona (138 mg, 0,22 mmol), zinco (214 mg, 3,28 mmol) e ácido acético (0,4 ml, 6,99 mmol) em EtOAc (2 mL) foi agitada a 40 °C durante 2 horas. A LCMS mostrou conversão parcial no produto de anilina desejado. Adicionado mais zinco (71 mg, 1,09 mmol) e agitado a 40 °C durante 2 horas adicionais. A solução foi resfriada até a temperatura ambiente e dividida entre NaHCO3 aquoso e EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 e purificadas por cromatografia (sílica gel) eluindo com MeOH em DCM a 0-5% para dar o composto do título (64 mg, 0,106 mmol, rendimento de 49%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr=0,77 min; MS m/z = 601,9 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,35 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,32 - 7,24 (m, 3H), 6,89 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,56 (q, J = 2,3 Hz, 1H), 6,47 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,40 (ddd, J = 7,6, 2,6, 1,4 Hz, 1H), 6,15 (dd, J = 10,1, 1,8 Hz, 1H), 5,95 - 5,89 (m, 1H), 5,38 (s, 1H), 5,03 (d, J = 14,0 Hz, 3H), 4,90 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,77 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 4,54 - 4,44 (m, 1H), 4,28 (s, 1H), 4,16 (d, J = 20,6 Hz, 1H), 4,06 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 2,59 - 2,50 (m, 1H), 2,30 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 2,14 - 2,03 (m, 1H), 1,97 (s, 2H), 1,88 - 1,67 (m, 4H), 1,63 (td, J = 11,9, 10,4, 5,1 Hz, 1H), 1,37 (d, J = 1,9 Hz, 3H), 1,10 - 0,92 (m, 2H), 0,84 (s, 3H). Exemplo 61: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- ((2-Aminopiridin-4-il)metil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0933]Passo 1: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-(Bromometil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona
[0934]4-(Bromometil)benzaldeído (0,539 g, 2,71 mmol) foi adicionado a uma pasta a 0 °C de (8S,9S,10R,11S,13S,14S,16R,17S)-11,16,17-tri-hidroxi-17-(2- hidroxiacetil)-10,13-dimetil-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H- ciclopenta[a]fenantren-3-ona (1,0738 g, 2,85 mmol), 4-(bromometil)benzaldeído (0,539 g, 2,71 mmol) e MgSO4 (1,33 g, 11,05 mmol) em MeCN (18 mL). Ácido trifluorometanossulfônico (2,0 g, 13,5 mmol) foi adicionado de um modo gota a gota, de modo a manter uma temperatura de menos do que 7 °C. A reação foi agitada durante 4 min, após o que foi extinta por adição de NaHCO3 aquoso saturado (20 mL) e extraída com EtOAc (60 mL). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 mL) e o solvente foi removido sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 40 g) eluindo com um gradiente de MeOH/DCM a 0-5% deu o composto do título (1,59 g, 2,85 mmol, rendimento de 100%) como uma espuma esbranquiçada (mistura 9:1 de diastereoisômeros de acetal). É proporcionada caracterização para o isômero de acetal principal: LCMS (Método r, Tabela 7) Tr=1,04 min; MS m/z = 557,2, 559,2 [M+H]. 1H RMN (501 MHz, DMSO-d6) d 7,44 (s, 4H), 7,30 (dd, J = 10,1, 2,2 Hz, 1H), 6,15 (ddd, J = 10,1, 4,8, 1,9 Hz, 1H), 5,91 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 5,43 (s, 1H), 5,07 (s, 1H), 4,93 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,77 (dd, J = 3,6, 0,9 Hz, 1H), 4,67 (s, 2H), 4,51 (dd, J = 19,4, 4,1 Hz, 1H), 4,31 4,26 (m, 1H), 4,17 (d, J = 19,5 Hz, 1H), 2,58 2,49 (m, 1H), 2,30 (dd, J = 12,9, 4,7 Hz, 1H), 2,16 2,05 (m, 1H), 1,99 (d, J = 23,9 Hz, 1H), 1,89 1,71 (m, 2H), 1,75 1,65 (m, 1H), 1,67 1,57 (m, 1H), 1,38 (s, 3H), 1,11 0,91 (m, 2H), 0,85 (s, 3H).
[0935]Passo 2: Síntese de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10- (4-((2-Aminopiridin-4-il)metil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 1,2,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-4H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4-ona
[0936]Um frasco de 20 mL foi carregado com (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(bromometil)fenil)-7-hidroxi-8b- (2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-4(2H)-ona (0,100 g, 0,179 mmol), 4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina (0,039 g, 0,179 mmol) e K2CO3 (0,099 g, 0,718 mmol) em solução de dioxano desgaseificado (2,0 mL)/água (0,200 mL). A suspensão foi evacuada e cheia de volta com N2 (3X). Pd(dppf)Cl2 (0,012 g, 0,016 mmol) foi adicionado e o frasco foi uma vez novamente evacuada e cheia de volta com N2 (seco). A mistura reacional foi aquecida até 90 °C. Após 1,5 horas, o material de partida foi consumido. Foi permitido que a reação arrefecesse até à temperatura ambiente, foi diluída com EtOAc (20 mL) e lavada com água (25 mL), depois salmoura (25 mL), seca sobre MgSO4 e o solvente foi removido sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 40 g) eluindo com um gradiente de MeOH/CH2Cl2 a 0-10% deu um sólido acastanhado-claro. Purificação adicional por HPLC prep de fase reversa em uma coluna C18 (2) 10 mícrons (250 x 50 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 80 mL/min (0-5,0 min A a 15%, 5,0-20 min gradiente linear A a 15-85%, 2025 min manter). As frações combinadas foram congeladas e liofilizadas para dar o composto do título (27 mg, 0,047 mmol, rendimento de 26%) como um sólido branco. LCMS (Método r, Tabela 7) Rt= 0,90 min; MS m/z = 571,3 [M+H+]. 1H NMR (501 MHz, DMSO-d6) δ 7,93 (s, 2H), 7,82 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,39 - 7,22 (m, 3H), 6,73 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,69 (s, 1H), 6,24 - 6,09 (m, 1H), 5,93 (s, 1H), 5,44 (s, 1H), 4,94 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,50 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,30 (s, 1H), 4,19 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 3,99 (s, 2H), 2,61 - 2,51 (m, 1H), 2,35 - 2,27 (m, 1H), 2,19 - 2,08 (m, 1H), 2,08 - 1,99 (m, 1H), 1,82 - 1,59 (m, 5H), 1,40 (s, 3H), 1,02 (ddd, J = 27,9, 11,7, 3,2 Hz, 2H), 0,87 (s, 3H).
[0937]Os seguintes exemplos foram sintetizados usando o mesmo procedimento que o Exemplo 61 (acima). Tabela 8.
Exemplo 67: Síntese de 1-(3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-Hidroxi- 8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca- hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)-1H-pirrol-2,5-diona
[0938]Passo 1: Síntese de ácido (Z)-4-(3-(4- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-Hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-4-oxobut-2-enoico
[0939]Anidrido maleico (46,5 mg, 0,474 mmol) foi adicionado a uma solução à temperatura ambiente de (6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3- aminobenzil)fenil)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-deca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-4(2H)-ona (239 mg, 0,420 mmol) em THF (3,0 mL). Após 75 min, o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar o composto do título como uma espuma esbranquiçada. Esta foi usada sem purificação adicional no passo seguinte (foi assumido rendimento de 100%). LCMS (Método o, Tabela 7) Tr=0,86 min; MS m/z = 668,5 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,99 (s, 1H), 10,29 (s, 1H), 7,45 7,38 (m, 2H), 7,38 7,31 (m, 2H), 7,27 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,24 7,15 (m, 3H), 6,92 (dt, J = 7,8, 1,3 Hz, 1H), 6,38 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 6,25 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 6,12 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 5,89 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,36 (s, 1H), 5,03 (s, 1H), 4,88 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,26 (p, J = 3,2 Hz, 1H), 4,14 (d, J = 19,4 Hz, 1H), 4,26 (p, J = 13,6, 5,3 Hz, 1H), 2,32 2,23 (m, 1H), 2,07 (tt, J = 10,8, 6,2 Hz, 1H), 2,02 1,94 (m, 1H), 1,84 1,51 (m, 5H), 1,36 (s, 3H), 1,09 0,93 (m, 2H), 0,82 (s, 3H).
[0940]Passo 2: Síntese de 1-(3-(4- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-Hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)-1H-pirrol-2,5-diona
[0941]Bis(trimetilsilil)amina (HMDS) (63,4 μL, 0,306 mmol) foi adicionada a uma solução de brometo de zinco (75,0 mg, 0,333 mmol) e ácido (Z)-4-((3-(4- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-4-oxobut-2-enoico (171 mg, 0,256 mmol) em tetra-hidrofurano (2,0 mL). A mistura foi aquecida até 50 °C durante 2,5 h. A LCMS indicou conversão incompleta, logo outra alíquota de bis(trimetilsilil)amina (HMDS) (63,4 μL, 0,306 mmol) foi adicionada. A reação estava completa após 90 min adicionais a 50 °C. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente, diluída com EtOAc (20 mL), depois lavada sequencialmente com HCl aquoso a 1 N (2 x 10 mL), NaHCO3 aquoso saturado (10 mL), salmoura (10 mL), seca sobre Na2SO4 e o solvente foi removido sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica, 12 g) eluindo com um gradiente de MeOH/DCM a 0-10% deu o composto do título (82,6 mg, 0,127 mmol, rendimento de 50%) como um sólido esbranquiçado. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr=1,02 min; MS m/z = 650,5 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,27 (dt, J = 7,8, 3,7 Hz, 3H), 7,19 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,17 7,06 (m, 4H), 7,06 7,01 (m, 3H), 6,04 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 5,81 (t, J = 1,5 Hz, 1H), 5,64 (s, 1H), 5,29 (s, 1H), 4,95 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 4,80 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 4,38 (dd, J = 19,4, 6,4 Hz, 1H), 4,18 (t, J = 3,4 Hz, 1H), 4,06 (dd, J = 19,5, 5,7 Hz, 1H), 3,86 (s, 2H), 2,45 (dd, J = 13,5, 5,4 Hz, 1H), 2,30 2,11 (m, 1H), 2,11 1,81 (m, 1H), 1,76 1,44 (m, 4H), 1,28 (s, 3H), 1,02 0,83 (m, 2H), 0,75 (s, 3H). Exemplo 68: Síntese de Di-hidrogenofosfato de 2- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H- pirrol-1-il)benzil)fenil)-7-hidróxi-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetila
[0942]Cloreto de difosforila (158 mg, 0,609 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução a -51 °C de 1-((3-(4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7- hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b- dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)-1H-pirrol- 2,5-diona (82 mg, 0,126 mmol) em tetra-hidrofurano (0,5 mL). A reação foi lentamente aquecida até -10 °C ao longo de uma hora, depois extinta com água a -5 °C. A mistura foi tratada com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 para dar uma solução com um pH de 8. O tratamento com EtOAc (5 mL) deu uma emulsão leitosa. O ajuste do pH até 1 por adição de HCl aquoso a 1 N melhorou a emulsão. Extraída com EtOAc (4 x 5 mL), depois lavada com os orgânicos combinados com salmoura (5 mL), seca (Na2SO4) e removido o solvente sob pressão reduzida. O produto foi purificado por HPLC prep de fase reversa em uma coluna C18 (2) 10 mícrons (250 x 50 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 90 mL/min (0-5,0 min A a 15%, 5,0-20,0 min gradiente linear A a 15-95%). As frações combinadas foram congeladas e liofilizadas para dar o composto do título (3,6 mg, 4,93 mmol, rendimento de 4%) como um sólido branco. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr=0,95 min; MS m/z = 730,5 [M+H+]. 1H RMN (501 MHz, DMSO-d6) δ 7,38 (dt, J = 7,8, 3,7 Hz, 3H), 7,31 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,29 7,26 (m, 2H), 7,25 7,22 (m, 1H), 7,19 (t, J = 1,9 Hz, 1H), 7,17 7,12 (m, 3H), 6,16 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 5,93 (t, J = 1,6 Hz, 1H), 5,48 (s, 1H), 4,96 4,86 (m, 2H), 4,84 (s, 1H), 4,56 (dd, J = 18,1, 8,1 Hz, 1H), 4,30 (q, J = 3,3 Hz, 1H), 3,97 (s, 2H), 2,59 2,52 (m, 1H), 2,31 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 2,17 2,07 (m, 1H), 2,05 1,98 (m, 1H), 1,85 1,56 (m, 5H), 1,39 (s, 3H), 1,03 (ddd, J = 18,5, 11,8, 4,1 Hz, 2H), 0,88 (s, 3H). Exemplo 69: Síntese de Di-hidrogenofosfato de 2- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)acetamido)propanamido)propanamido)fenoxi)metil)fenil)-7- hidróxi-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetila
[0943]Passo 1: Síntese de ((S)-1-(((S)-1-((3-((4- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((Di-terc- butoxifosforil)oxi)acetil)-7-hidroxi-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)benzil)óxi)fenil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-1-oxopropan-2- il)carbamato de terc-butila
[0944]N,N-dietilfosforamidita de di-terc-butila (0,226 mL, 0,811 mmol) foi adicionada a uma solução à temperatura ambiente de ((S)-1-(((S)-1-((3-((4- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)óxi)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)carbamato de terc-butila (463 mg, 0,559 mmol) e 1H- tetrazol (0,45 M em MeCN, 4,97 mL, 2,237 mmol) em acetamida de dimetila (2 mL). N,N-dietilfosforamidita de di-terc-butila adicional (0,2 mL) foi carregada após 4,5 horas e a agitação foi continuada durante a noite. A reação foi resfriada até 0 °C, após o que uma solução a 30% de peróxido de hidrogênio em água (0,17 mL, 1,67 mmol) foi adicionada gota a gota. A oxidação no fosfato estava completa no espaço de 1.5. A reação foi resfriada até 0 °C e a reação foi extinta por adição de uma solução aq. a 1 M de Na2S2O3 (8 mL). A mistura foi extraída com EtOAc (2 x 30 mL), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 e o solvente removido sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia (sílica) usando EtOAc a 100% como eluente proporcionou o composto do título (366 mg, 0,359 mmol, rendimento de 64%) como sólido branco. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr=1,08 min; MS m/z = 1020,5 [M+H+].
[0945]Passo 2: Síntese de Di-hidrogenofosfato de 2- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-((S)-2-((S)-2- aminopropanamido)propanamido)fenoxi)metil)fenil)-7-hidróxi-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetila TFA (0,95 mL) foi adicionado a uma solução à temperatura ambiente de ((S)- 1-(((S)-1-((3-((4-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-8b-(2-((di-terc- butoxifosforil)oxi)acetil)-7-hidroxi-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-10-il)benzil)óxi)enil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-1-oxopropan-2- il)carbamato de terc-butila (364 mg, 0,357 mmol) em DCM (2 mL). A reação estava completa no espaço de 2 h, após o que o solvente foi removido sob pressão reduzida. O composto do título foi obtido como um sólido amarelo-claro espumoso e foi usado sem purificação adicional. LCMS (Método r, Tabela 7) isômero de acetal principal: Tr=0,77 min; MS m/z = 808,3 [M+H+], isômero de acetal mínimo: Tr=0,79 min; MS m/z = 808,3 [M+H+].
[0946]Passo 3: Síntese de Di-hidrogenofosfato de 2- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)acetamido)propanamido)propanamido)fenoxi)metil)fenil)-7- hidróxi-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetila
[0947]N,N-Di-isopropiletilamina (0,37 mL, 2,12 mmol) e éster de N- hidróxissuccinimida do ácido maleimidoacético (89 mg, 0,353 mmol) foram adicionados sequencialmente a uma solução à temperatura ambiente de di- hidrogenofosfato de 2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-((3-((S)- 2-((S)-2-aminopropanamido)propanamido)fenoxi)metil)fenil)-7-hidróxi-6a,8a-dimetil- 4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetila (285 mg, 0,353 mmol) em formamida de dimetila (1,5 mL) e foram agitados durante a noite. A mistura reacional foi diluída com DMSO e foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa em uma coluna C18 (2) 10 mícrons (250 x 50 mm) da Phenomenex. Um gradiente de MeCN (A) e TFA a 0,1% em água (B) foi usado, a um caudal de 30 mL/min (0-3,0 min A a 15%, 3,0-19,0 min gradiente linear A a 15-60%, depois 19,0-23,0 min gradiente linear até A a 85%). As frações combinadas foram concentradas para se removerem os solventes voláteis sob pressão reduzida e a solução resultante foi congelada e liofilizadas para dar o composto do título (93 mg, 0,098 mmol, rendimento de 28%) como um sólido branco. Isômero de acetal principal: LCMS (Método r, Tabela 7) Tr=0,83 min; MS m/z = 945,4 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,78 (s, 1H), 8,39 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,49 - 7,37 (m, 4H), 7,33 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,14 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,10 - 7,05 (m, 1H), 7,03 (s, 2H), 6,64 (dd, J = 8,0, 2,4 Hz, 1H), 6,13 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 5,89 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,50 (s, 1H), 5,04 (s, 2H), 4,96 - 4,85 (m, 2H), 4,81 (s, 1H), 4,55 (dd, J = 18,1, 8,2 Hz, 1H), 4,38 - 4,21 (m, 3H), 4,13 - 3,98 (m, 2H), 2,53 (dd, J = 13,2, 5,2 Hz, 1H), 2,28 (d, J = 16,1 Hz, 1H), 2,09 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 2,08 - 1,95 (m, 1H), 1,70 (dddd, J = 29,9, 25,9, 14,4, 6,4 Hz, 5H), 1,36 (s, 3H), 1,26 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,18 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,02 (ddd, J = 14,7, 11,6, 4,0 Hz, 2H), 0,86 (s, 3H). Exemplo 70: Síntese de 2,2,2-Trifluoroacetato de 2-(dimetilamino)acetato de 2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)acetamido)propanamido)propanamido)benzil)fenil)-7- hidróxi-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetila
[0948]Passo 1: Síntese de 2,2,2-Trifluoroacetato de 2-(dimetilamino)acetato de 2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)propanamido)propanamido)benzil)fenil)-7-hidróxi-6a,8a-dimetil- 4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetila
[0949]A uma solução de ((6aR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a-dimetil- 4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)carbamato de terc-butila (Preparado do mesmo modo que o Exemplo 10, Passo 1) (78 mg, 0,096 mmol), ácido 2-(dimetilamino)acético (10,9 mg, 0,106 mmol) e 2,6-dimetilpiridina (0,022 mL, 0,192 mmol) em N,N-dimetilformamida anidra (2,0 mL) foi adicionado HATU (43,8 mg, 0,115 mmol) e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos. O produto em bruto foi purificado por C18 HPLC, eluindo com um gradiente de solvente de MeCN a 5-95% em TFA aquoso a 0,1 M. As frações contendo o produto puro foram concentradas por liofilização para originar o composto do título (82 mg, rendimento de 89%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr=0,80 min, MS m/z = 898,2 [M+H+].
[0950]Passo 2: Síntese de 2,2,2-Trifluoroacetato de 2-(dimetilamino)acetato de 2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5- dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)acetamido)propanamido)propanamido)benzil)fenil)-7- hidróxi-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetila
[0951]Uma solução de 2-(dimetilamino)acetato de 2- ((6aR,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)propanamido)propanamido)benzil)fenil)-7-hidróxi-6a,8a-dimetil- 4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetila (82 mg, 0,074 mmol) em DCM (4 mL) e TFA (1 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos e depois concentrada in vacuo. A uma solução deste composto em N,N-dimetilformamida anidra (1 mL) foram adicionados base de Hunig (0,20 mL, 1,15 mmol) e 2-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)acetato de 2,5-dioxopirrolidin-1-ila (27,8 mg, 0,11 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos e TFA (0,106 mL, 1,376 mmol) foi adicionado. O produto em bruto foi purificado por C18 HPLC, eluindo com um gradiente de solvente de MeCN a 5-95% em TFA aquoso a 0,1 M. As frações contendo o produto puro foram concentradas por liofilização para originar o composto do título como um sólido incolor (46 mg, 0,0439 mmol, rendimento de 59%). LCMS (Método r, Tabela 7) isômero de acetal principal Tr=0,82 min, MS m/z = 934 [M+H+]; isômero de acetal mínimo Tr= =0,81 min, MS m/z = 934 [M+H+]. 1H RMN (501 MHz, DMSO-d6) δ 10,12 (s, 2H), 9,75 (s, 1H), 8,40 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,45 - 7,42 (m, 1H), 7,38 (dd, J = 8,2, 2,0 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,17 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,89 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,50 (s, 1H), 6,15 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 5,93 - 5,90 (m, 1H), 5,52 (s, 1H), 5,30 (d, J = 17,7 Hz, 1H), 5,00 (d, J = 17,7 Hz, 1H), 5,00 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 4,36 - 4,25 (m, 4H), 4,12 - 4,02 (m, 2H), 3,87 (s, 1H), 2,82 (s, 3H), 2,56 - 2,51 (m, 1H), 2,50 (s, 0H), 2,50 (d, J = 1,8 Hz, 0H), 2,33 - 2,26 (m, 2H), 2,15 - 2,06 (m, 2H), 2,04 - 1,97 (m, 2H), 1,84 - 1,80 (m, 1H), 1,77 - 1,60 (m, 4H), 1,37 (s, 3H), 1,26 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,19 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,19 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,10 - 0,98 (m, 3H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 71: Síntese de Ácido 4-(2-((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4- (3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- il)acetamido)propanamido)propanamido)benzil)fenil)-7-hidroxi-6a,8a-dimetil-4-oxo- 2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-nafto[2',1':4,5]indeno[1,2- d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetóxi)-4-oxobutanoico
[0952]Passo 1: Síntese de Succinato de terc-butila de 2- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)propanamido)propanamido)benzil)fenil)-7-hidróxi-6a,8a-dimetil- 4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H-
[0953]O composto do título foi preparado usando o método descrito para o Exemplo 70, substituindo ácido 4-(terc-butóxi)-4-oxobutanoico por ácido 2- (dimetilamino)acético. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr=1,03 min; MS m/z = 968 [M+H+].
[0954]Passo 2: Síntese de Ácido 4-(2- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)acetamido)propanamido)propanamido)benzil)fenil)-7- hidroxi-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetóxi)-4-oxobutanoico
[0955]O composto do título foi preparado usando o método descrito no Passo 2, Exemplo 69. Foi isolado como um sólido incolor (49 mg, 43%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr=0,88 min; MS m/z = 948,9 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,23 (s, 1H), 9,74 (s, 1H), 8,37 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,42 - 7,33 (m, 3H), 7,31 - 7,25 (m, 1H), 7,17 (dd, J = 20,7, 7,9 Hz, 3H), 6,90 - 6,84 (m, 1H), 6,15 - 6,09 (m, 1H), 5,90 - 5,87 (m, 1H), 5,48 (s, 1H), 5,07 (d, J = 17,7 Hz, 1H), 4,86 - 4,79 (m, 2H), 4,37 - 4,23 (m, 3H), 4,12 - 3,98 (m, 2H), 3,85 (s, 2H), 2,65 - 2,58 (m, 2H), 2,52 - 2,47 (m, 2H), 2,32 - 2,24 (m, 2H), 2,09 (d, J = 10,8 Hz, 2H), 2,02 - 1,94 (m, 2H), 1,85 - 1,56 (m, 6H), 1,36 (s, 3H), 1,24 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,17 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,17 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,10 - 0,95 (m, 3H), 0,85 (s, 3H). Exemplo 72: Síntese de Hidrogenossulfato de 2- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)acetamido)propanamido)propanamido)benzil)fenil)-7- hidróxi-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetila
[0956]Passo 1: Síntese de Hidrogenossulfato de 2- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)propanamido)propanamido)benzil)fenil)-7-hidróxi-6a,8a-dimetil- 4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2', 1 ':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetila
[0957]A uma solução de ((S)-1-(((S)-1-((3-(4- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-7-hidroxi-8b-(2-hidroxiacetil)-6a,8a- dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-10-il)benzil)fenil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-1-oxopropan-2-il)carbamato de terc-butila, preparado de um modo similar ao Exemplo 10, Passo 1 (53 mg, 0,065 mmol) em MeCN (2 mL) foi adicionado complexo de piridina e trióxido de enxofre (42 mg, 0,26 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O produto em bruto foi purificado por C18 HPLC, eluindo com um gradiente de solvente de MeCN a 5-95% em TFA aquoso a 0,1 M. As frações contendo o produto puro foram concentradas por liofilização para originar o composto do título. LCMS (Método r, Tabela 7) Tr=0,83 min; MS m/z = 892,0 [M+H+].
[0958]Passo 2: Síntese de hidrogenossulfato de 2- ((6aR,6bS,7S,8aS,8bS,10R,11aR,12aS,12bS)-10-(4-(3-((S)-2-((S)-2-(2-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)acetamido)propanamido)propanamido)benzil)fenil)-7- hidróxi-6a,8a-dimetil-4-oxo-2,4,6a,6b,7,8,8a,8b,11a,12,12a,12b-dodeca-hidro-1H- nafto[2',1':4,5]indeno[1,2-d][1,3]dioxol-8b-il)-2-oxoetila
[0959]O composto do título foi preparado usando o método descrito no Passo 2, Exemplo 69. Foi isolado como um sólido incolor (27 mg, rendimento de 28%). LCMS (Método r, Tabela 7) Tr=0,77 min; MS m/z = 928,9 [M+H+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 9,75 (s, 1H), 8,37 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,40 - 7,32 (m, 2H), 7,33 - 7,29 (m, 1H), 7,27 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 7,23 - 7,12 (m, 3H), 7,04 (s, 1H), 6,93 - 6,83 (m, 2H), 6,12 (dd, J = 10,1, 1,9 Hz, 1H), 5,91 - 5,86 (m, 1H), 5,42 (s, 1H), 4,87 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,84 (s, 1H), 4,74 (d, J = 18,3 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 18,3 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 1,98 (s, 1H), 1,77 (s, 2H), 1,75 - 1,56 (m, 4H), 1,36 (s, 3H), 1,24 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,17 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,10 - 0,95 (m, 2H), 0,83 (s, 3H). Exemplo 73: Protocolos de Conjugação Protocolo de Conjugação Geral de Cisteína
[0960]Uma solução aproximada a 10 mg/mL do anticorpo desejado foi preparada em tampão de PBS, pH 7,4 bem como uma solução de TCEP a 10 mM em PBS (Pierce Bond-Breaker, cat. 77720). Os anticorpos (hIgG1 anti-hTNF (D2E7) ou mIgG2a anti-mTNF (8C11; McRae BL et al. J Crohns Colitis 10 (1): 69-76 (2016)) foram depois parcialmente reduzidos por adição de aproximadamente dois eq molares de TCEP a 10 mM, mistura breve e incubação durante 60 min a 37 °C. DMSO foi depois adicionado aos anticorpos parcialmente reduzidos em quantidade suficiente até DMSO total a 15%. Para as conjugações, 8 eq molares de uma solução de D-L- maleimida a 10 mM (em que S é um radical de um glucocorticoesteroide e L é um ligante) foram depois adicionados e incubados durante 30 min à temperatura ambiente. O combo e o DMSO em excesso foram depois removidos usando colunas de dessalinização NAP-5 (GE Healthcare, cat. 17-0853-02) previamente equilibradas com tampão de PBS, pH 7,4. As amostras dessalinizadas foram depois analisadas por cromatografia por exclusão de tamanhos (SEC), cromatografia por interação hidrofóbica (HIC) e espectrometria de massa reduzida.
[0962]A hidrólise do anel de tiossuccinimida de CAFs da divulgação foi alcançada por incubação dos CAFs a um pH elevado. Brevemente, uma solução de arginina a 0,7 M, pH 9,0 foi preparada e adicionada a cada CAF em tampão de PBS para levar a concentração total de arginina até 50 mM (pH ~ 8,9). O material foi depois incubado a 25 °C durante 72 horas. A hidrólise do anel de succinimida foi depois confirmada por espectrometria de massa reduzida, após o que a hidrólise foi extinta com a adição de uma solução de ácido acético a 0,1 M a ácido acético total a 12,5 mM (pH ~ 7,1).
[0963]Protocolo de Conjugação Geral de Lisina
[0964]Uma solução aproximada a 10 mg/mL do anticorpo desejado foi inicialmente preparada em tampão de PBS, pH 7,4. Oito eq molares da D-L-N- hidróxissuccinimida (em que SM é um radical de um glucocorticoesteroide e L é um ligante) foram depois adicionados ao anticorpo e incubados a 23 °C durante até 24 horas na presença de DMSO a 15%. As amostras conjugadas foram depois dessalinizadas para se remover o combo e o DMSO em excesso usando colunas de dessalinização NAP-5 (GE Healthcare, cat. 17-0853-02) equilibradas com tampão de PBS, pH 7,4. As amostras dessalinizadas foram depois analisadas por cromatografia por exclusão de tamanhos (SEC), cromatografia por interação hidrofóbica (HIC) e espectrometria de massa reduzida.
[0965]Procedimentos Analíticos de CAF
[0966]Cromatografia por Interação Hidrofóbica. Os CAFs foram perfilados por cromatografia por interação hidrofóbica (HIC) para se determinar o grau de conjugação e para se calcularem as razões de fármaco em relação a anticorpo (DARs) aproximadas. Brevemente, 100 μg dos CAFs foram carregados em um sistema de LC Dual Ultimate 3000 (Thermo Scientific) equipado com uma coluna de butila-NPR de 4,6 X 35 mm (Tosoh Bioscience, cat. 14947). Os CAFs foram carregados na coluna equilibrada em tampão A a 100% e eluídos usando um gradiente linear de tampão A a 100% a tampão B a 100% ao longo de 12 min a 0,8 mL/min, onde o tampão A é fosfato de sódio a 25 mM, sulfato de amônio a 1,5, pH 7,25 e o tampão B é fosfato de sódio a 25 mM, isopropanol a 20%, pH 7,25. A DAR foi determinada por consideração da soma de cada área percentual de pico multiplicada pela sua correspondente carga de fármaco e divisão da soma ponderada por 100.
[0967]Cromatografia por Exclusão de Tamanhos. As distribuições de tamanhos dos CAFs foram perfiladas por cromatografia por exclusão de tamanhos (SEC) usando um sistema de LC Dual Ultimate 3000 (Thermo Scientific) equipado com uma coluna TSK-gel 3000SWXL de 7,8 X 300 mm (Tosoh Bioscience, cat. 08541). 20 μg de cada um dos CAFs foram carregados na coluna e eluídos ao longo de 17 min usando um gradiente isocrático a 1 mL/min de sulfato de sódio a 100 mM, fosfato de sódio a 100 mM, pH 6,8 a 0,8 mL/min. Exemplo 74: Preparação de adalimumab conjugado com um glucocorticoesteroide para dar um CAF
[0968]CAF de esteroide adalimumab MP-ala-ala tendo uma DAR média de 3,5 foi preparado por um processo químico com dois passos: redução de dissulfeto de adalimumab seguido por alquilação (conjugação) com esteroide de alanina-alanina de maleimidopropila Comp. N.° 88.
[0969]No primeiro passo, um número limitado de ligações de dissulfeto intercadeias de adalimumab é reduzido com tris(2-carboxietil)fosfina (“TCEP”) (> 1,8 equiv). O adalimumab parcialmente reduzido é depois conjugado com Comp. N.° 88 (> 5 equiv) em DMSO.
[0970]No que se refere à Figura 5 que mostra uma resolução cromatográfica da preparação de CAF resultante, o CAF é uma mistura heterogênea contendo anticorpos tendo zero moléculas de ligante de fármaco anexadas (pico “E0”), duas moléculas de ligante de fármaco anexadas (pico “E2”), quatro moléculas de ligante de fármaco anexadas (pico “E4”), seis moléculas de ligante de fármaco anexadas (pico “E6”) e oito moléculas de ligante de fármaco anexadas (pico “E8”), dependendo do número de ligações de dissulfeto intercadeias reduzidas. Métodos de separação cromatográfica e isolamento dos picos E2 e E4 homogêneos são descritos por Hamblett et al., Clin Cancer Res 2004; 10: 7063-7070. As condições de HIC usadas na Figura 5 foram como se segue:
[0971]A coluna foi TOSOH Tskgel Butila-NPR, 4,6 mm x 3,5 cm, 2,5 μ e a temperatura da coluna foi 30 °C. O comprimento de onda foi 280 nm, o tempo de operação foi 22 minutos, o volume de injeção foi 40 μL, o caudal foi 0,5 mL/minuto. Fase Móvel A: Na2HPO4 a 25 mM, pH 7,0 e (NH4)2SO4 a 1,5 M, Fase Móvel B: Na2HPO4 a 25 mM, pH 7,0/I PA = 75/25. Perfil de Gradiente:
[0972]Métodos de separação cromatográfica e isolamento dos picos E2 e E4 homogêneos são descritos por Hamblett et al., Clin Cancer Res 2004; 10: 7063-7070. Brevemente, após hidrólise e ajuste até pH <7,4, a mistura de distribuição ampla foi tratada com tampão de sulfato de amônio a 3 M/fosfato a 50 mM para levar a concentração global da solução de sulfato de amônio até aproximadamente 0,8 M. Uma coluna de Cromatografia por Interação Hidrofóbica (HIC) pré-empacotada (resina sefarose de butila HP) foi preparada por sanitização com solução de NaOH a 0,5 N (4 CV), enxaguamento com água para injeção (WFI, 0,5 CV) e equilíbrio com tampão de sulfato de amônio a 0,8 M/fosfato a 25 mM (4 CV). A solução de distribuição ampla/tamponada com sulfato de amônio foi carregada na coluna HIC (carga aproximada, 30 mg proteína por mL de resina) seguida por uma lavagem com tampão de sulfato de amônio a 0,8 M/fosfato a 25 mM (2,5 CV). A eluição do produto foi como se segue: tampão de sulfato de amônio a 0,72 M/fosfato a 25 mM (3 CV), mAb não conjugado; tampão de sulfato de amônio a 0,56 M/fosfato a 25 mM (4,5 CV), CAF DAR2; tampão de sulfato de amônio a 0,32 M/fosfato a 25 mM (6,5 CV), CAF DAR4. As frações de produto de DAR 2 e DAR4 foram depois separadamente concentradas até aproximadamente 30 mg/mL através de ultrafiltração (Millipore Ultracel, limiar de exclusão de 30 kD) seguida por diafiltração em WFI (8 CV).
[0973]A succinimida do conjugado E4 purificado foi hidrolisada para proporcionar a anexação estabilizada por ajuste do pH da solução de produto até > 9 usando um tampão de arginina. A solução foi mantida à temperatura ambiente durante > 2 dias, momento em que a análise de LC-MS determinou que a hidrólise estava >90% completa. Ver a Figura 6 para uma porção do cromatograma de LC-MS. As condições de SEC usadas na Figura 6 foram como se segue:
[0974]A coluna foi TOSOH TSK-gel G3000SWXL, 5 μ, 250 A, 7,8 x 300 mm, a coluna foi temperatura ambiente, o Comprimento de onda foi 214 nm, o Tempo de Operação foi 55 minutos, o Volume de Injeção foi 10 μL, o Caudal foi 0,25 mL/minuto, a Temp. do Autoamostrador foi 4 °C. Fase Móvel: Na2HPO4 a 100 mM & Na2SO4 a 100 mM, pH 6,8/IPA = 90/10.
[0975]Os dados de MS em bruto (Figura 7) e deconvoluído (Figura 8) de adalimumab conjugado com MP-ala-ala esteroide, Comp. N.° 88. O quadrado preto e o círculo representam o CAF com succinimida hidrolisada e não hidrolisada, respectivamente. A abundância relativa de CAF hidrolisado e não hidrolisado é usada para se determinar a conversão de hidrólise.
[0976]Hidrólise
[0977]A hidrólise de succinimida após conjugação foi conduzida com tampão de borato a pH 8,0, pH 8,5 e pH 9,0 e tampão de arginina a pH 8,0 e pH 9,0 para se estudar a taxa de hidrólise do anel. Os resultados são mostrados na Tabela 9 em baixo. Tabela 9: Hidrólise do anel de succinimida
Exemplo 75: Atividade in vitro de esteroides de pequena molécula Ensaio de Ligação a Receptores de Glucocorticoides
[0978]As pequenas moléculas foram testadas quanto à ligação a receptores de glucocorticoides (GR) usando o Estojo de Ensaio de Receptores de Glucocorticoides PolarscreenTM, Red (ThermoFisher A 15898) de acordo com o protocolo do fabricante. Brevemente, os compostos foram diluídos em série em DMSO, depois transferidos para tampão de estojo de ensaio a uma diluição 1:10. Os compostos foram adicionalmente diluídos 1:5 em tampão de estojo de ensaio e 10 μL foram transferidos para uma placa com paredes pretas de baixo volume com 384 poços (Corning 4514). 5 μL de 4X solução de estoque 4X Fluormone GS Red e 5uL de 4x solução de estoque de comprimento total GR foram adicionados a cada poço contendo composto de teste e as placas foram incubadas protegidas da luz à temperatura ambiente durante 4 horas. A Polarização por Fluorescência (mP) foi medida para cada placa usando um Leitor de Placas EnVision Multilabel (Perkinelmer # 2104-0010) e os dados foram analisados usando um ajuste de curva de quatro parâmetros para gerar valores de EC50. Os resultados são mostrados na Tabela 10 em baixo.
[0979]As pequenas moléculas foram testadas quanto à atividade de agonistas de receptores de mineralcorticoides (MR) usando a linha de células PathHunter® NHRPRO CHO-K1 MR (DiscoveRx # de cat 93-0451C2) de acordo com o protocolo do fabricante. Brevemente, 20.000 células/poço em meio de cultura foram plaqueadas em uma placa com 96 meio-poços (Costar # de cat 3885) durante a noite a 37 oC. Os meios foram removidos e substituídos com pequenas moléculas diluídas em série em meio de ensaio (30 μL; DMSO final a 0,3%). As placas foram incubadas durante a noite a 37 °C. Os meios foram removidos, substituídos com reagente de detecção (DiscoveRx # de cat 93-0001; 12 μL/poço) e incubados à temperatura ambiente (TA) durante 60 minutos. A luminescência foi medida para cada placa usando um Leitor de Placas EnVision Multilabel (Perkinelmer # 2104-0010) e os dados foram analisados usando um ajuste de curva de quatro parâmetros para gerar valores de EC50. Os resultados são mostrados na Tabela 10 em baixo.
[0980]As pequenas moléculas foram testadas quanto à ligação de receptores de progesterona (PR) usando uma modificação do Ensaio de Coativador de Receptores de Progesterona LanthaScreen® TR-FRET (Thermofisher # de cat A15903) onde o peptídeo coativador marcado com fluoresceína foi substituído por Fluormone AL-Red (Thermofisher # de cat PV4294) para melhorar o sinal do ensaio. Brevemente, os compostos foram diluídos em série em DMSO, depois transferidos para tampão de ensaio (Thermofisher # de cat PV4301 + DTT a 5 mM) a uma diluição 1:10. 10 μL de composto foram transferidos para uma placa com 96 poços pretos de meia-área (Corning # de cat 3694) em duplicado. 5 μL de proteína PR-LBD (estoque a 4 nM em tampão de ensaio; Thermofisher # de cat P2899) foram adicionados a cada poço. Adicionalmente, 5 μL de uma mistura preparada de Fluormone AL-Red (12 nM) e anticorpo monoclonal (mAb) anti-GST marcado com térbio (20 nM; Thermofisher # de cat PV3550) em tampão de ensaio foram também adicionados a cada poço. As placas foram incubadas à temperatura ambiente (TA) durante 2 horas e, depois, a razão de emissão de TR-FRET foi medida usando um Leitor de Placas EnVision Multilabel (Perkinelmer # 2104-0010). Os dados foram analisados usando um ajuste de curva de quatro parâmetros para gerar valores de EC50. Os resultados são mostrados na Tabela 10 em baixo.
[0981]As pequenas moléculas foram testadas quanto à ligação de receptores de andrógeno (AR) usando uma modificação do Ensaio de Coativador de Receptores de Andrógeno LanthaScreen® TR-FRET (Thermofisher # de cat A15878) onde o peptídeo coativador marcado com fluoresceína foi substituído por Fluormone AL-Red (Thermofisher # de cat PV4294) para melhorar o sinal do ensaio. Brevemente, os compostos foram diluídos em série em DMSO, depois transferidos para tampão de ensaio (Thermofisher # de cat PV4295 + DTT a 5 mM) a uma diluição 1:10. 10 μL de composto foram transferidos para uma placa com 96 poços pretos de meia-área (Corning # de cat 3694) em duplicado. 5 μL de proteína AR-LBD (estoque a 5 nM em tampão de ensaio; Thermofisher # de cat 3009) foram adicionados a cada poço. Adicionalmente, 5 μL de um estoque preparado de Fluormone AL-Red (20 nM) e anticorpo monoclonal (mAb) anti-GST marcado com térbio (30 nM; Thermofisher # de cat PV3550) em tampão de ensaio foram também adicionados a cada poço. As placas foram incubadas à temperatura ambiente (TA) durante 6 horas, depois a razão de emissão de TR-FRET foi medida usando um Leitor de Placas EnVision Multilabel (Perkinelmer # 2104-0010). Os dados foram analisados usando um ajuste de curva de quatro parâmetros para gerar valores de EC50. Os resultados são mostrados na Tabela 10 em baixo.
[0982]As células GRE originais K562 (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro]) descritas no Exemplo 78 foram plaqueadas em placas brancas tratadas com cultura de tecidos com 96 poços (Costar: 3917) a 50.000 células por poço em 50 μL de meio de ensaio (RPMI, CSFBS a 1%, L-glutamina a 1%, Piruvato de Na a 1% e MEAA a 1%). Os compostos agonistas de GR de pequena molécula foram diluídos em série a uma concentração inicial de 100 μM e diluídos em série 4 vezes em DMSO a 100%. Os compostos de pequena molécula foram diluídos adicionalmente em meio de ensaio por transferência de 2 μL de compostos diluídos em série em 248 μL meio de ensaio para uma placa de diluição secundária (diluição 1:125). As células foram depois tratadas com 25 μL de composto agonista de GR diluído 1:125 para uma concentração de partida final de 266,7 nM (1:3) ou meios sozinhos e incubadas durante 24 horas a 37 °, CO2 a 5%. Após 24 horas de incubação, as células foram tratadas com 75 μL de Sistema de Ensaio Dual-Glo Luciferase (Promega-E2920) durante 10 minutos e analisadas quanto à luminescência usando o TopCount ou MicroBeta2 (PerkinElmer).
[0983]As pequenas moléculas foram testadas quanto à ligação de receptores de estrógeno (ER) alfa usando uma modificação do Ensaio de Coativador de Receptores de Estrógeno Alfa LanthaScreen® TR-FRET (Thermofisher # de cat A15885) onde o peptídeo coativador marcado com fluoresceína foi substituído por Fluormone ES2 Green (Thermofisher # de cat PV6045) para melhorar o sinal do ensaio. Brevemente, os compostos foram diluídos em série em DMSO, depois transferidos para tampão de ensaio (Thermofisher # de cat PV4295 + DTT a 5 mM) a uma diluição 1:10. 10 μL de composto foram transferidos para uma placa com 96 poços pretos de meia-área (Corning # de cat 3694) em duplicado. 5 μL de proteína ER-LBD (estoque a 5 nM em tampão de ensaio; Thermofisher # de cat 4542) foram adicionados a cada poço. Adicionalmente, 5 μL de um estoque preparado de Fluormone ES2 Green (12 nM) e anticorpo monoclonal (mAb) anti-GST marcado com térbio (8 nM; Thermofisher # de cat PV3550) em tampão de ensaio foram também adicionados a cada poço. As placas foram incubadas à temperatura ambiente (TA) durante 4 horas e, depois, a razão de emissão de TR-FRET foi medida usando um Leitor de Placas EnVision Multilabel (Perkinelmer # 2104-0010). Os dados foram analisados usando um ajuste de curva de quatro parâmetros para gerar valores de EC50. Os resultados são mostrados na Tabela 10 em baixo. Tabela 10: atividade in vitro
++ indica que os dados relatados são uma média de múltiplos pontos de dados e os dados relatados podem ser lidos como “maior do que” os dados relatados NT indica Não Testado Exemplo 76: Estabilidade de imunoconjugados anti-TNF-alfa Estabilidade da Matriz
[0984]Os CAFs de esteroide anti-TNFα foram testados quanto à sua suscetibilidade de liberarem prematuramente carga de pequena molécula sob condições fisiológicas. Em estas experiências, os CAFs foram diluídos em plasma (humano, de macaco, de camundongo ou de rato) ou tampão em duplicado e incubados durante 6 dias a 37 oC, CO2 a 5%. Cada amostra foi extinta ao tempo 0 minutos e a vários pontos temporais ao longo do período de 6 dias. As amostras foram depois analisadas usando LC/MS/MS e comparadas com curvas padrão para a pequena molécula correspondente. A % de liberação máxima de carga de pequena molécula ao longo do tempo foi calculada. Os resultados são resumidos na Tabela 11 em baixo. Tabela 11: Estabilidade de CAFs de esteroide anti-TNFα
Estes resultados mostram que os CAFs de esteroide anti-TNFα são estáveis em tampão e plasma de múltiplas espécies e que é observada liberação mínima de pequena molécula.
[0985]A suscetibilidade de CAFs de esteroide de liberar a sua carga líquida através de tratamento com protease foi comparada com um CAF gerado usando o ligante de fármaco vcmcMMAE conjugado a um anticorpo contra CD-19 murino. Os CAFs (DAR média de 4) foram incubados com catepsina B ou proteinase K, e a liberação de carga foi analisada por LC-MS a vários pontos temporais (0, 1, 4, 7 e 24 horas).
[0986]Os resultados são mostrados na Figura 1 e demonstram que os CAFs de esteroide são resistentes à liberação mediada por catepsina exógena de carga a partir da CAF. Isto está em contraste com um CAF de ligante de carga líquida conhecido (mcvcMMAE), onde MMAE é liberado em quantidades significativas após tratamento com catepsina. Estes dados indicam que os CAFs de esteroide são muito menos suscetíveis à liberação prematura de carga líquida que resulta da atividade de catepsina em circulação do que CAFs conhecidos. De fato, a liberação de esteroide é somente observada com proteinase K, uma serina protease que exibe ampla especificidade de clivagem. Isto indica que a porção de anticorpo do CAF de esteroide necessita de ser significativamente catabolizada antes da clivagem do ligante de esteroide e que a liberação de carga líquida pode estar restrita a um ambiente onde a digestão do molde de anticorpo do CAF pode ocorrer, tal como o lisossomo.
[0987]Uma solução de estoque a 0,2 mg/mL de catepsina B (Sigma) foi preparada em tampão (Tris a 25 mM, NaCl a 50 mM e glicerol a 5%). Para gerar uma solução de trabalho a 10 μg/mL de catepsina B, 5 μL de estoque de catepsina B a 0,2 mg/mL foram misturados com 95 μL de tampão de ativação (acetato de sódio a 50 mM pH 5, EDTA a 1 mM e DTT a 5 mM) e incubados a 37 oC durante 15 minutos. Para digestão de CAF, 20 μL de CAF a 100 μg/mL e 20 μL de solução de trabalho de catepsina B foram misturados com 160 μL tampão de diluição (acetato de sódio a 50 mM, EDTA a 1 mM). A amostra foi incubada a 37 °C com agitação, e alíquotas de 40 μL foram removidas após 0, 1, 4, 7 e 24 horas. A cada alíquota foram adicionados 160 μL de solução de extinção (ácido fórmico a 0,1%; MeOH:MeCN 1:1; carbutamida a 100 nM), e a referida pequena molécula foi detectada por LC-MS/MS como previamente descrito.
[0988]Um estoque a 5 mg/mL de proteinase K (Sigma) foi preparado em água desionizada (DI). Uma solução de trabalho a 0,25 mg/mL de proteinase K foi preparada por mistura de 50 μL de proteinase K a 5 mg/mL com 950 μL tampão de diluição (1x HBSS e EDTA a 1 mM). Para digestão de CAF, 20 μL de CAF a 100 μg/mL e 40 μL de solução de trabalho de proteinase K foram misturados com 140 μL tampão de diluição. A amostra foi incubada a 37 °C com agitação, e alíquotas de 40 μL foram removidas após 0, 1, 4, 7 e 24 horas. A cada alíquota foram adicionados 160 μL de solução de extinção (ácido fórmico a 0,1%; MeOH:MeCN 1:1; carbutamida a 100 nM), e a referida pequena molécula foi detectada por LC-MS/MS como previamente descrito.
[0989]A suscetibilidade do CAF de esteroide de sofrer perda de ligante de fármaco foi avaliada em camundongos. MP-Ala-Ala-esteroide foi conjugado com mAb contra IgG1 humana (DAR média 4) e incubado a pH 9 para catalisar a hidrólise de abertura de anel do anel de tiossuccinimida. Após neutralização, o CAF de esteroide foi injetado em camundongos, e a cinética da perda de ligante de fármaco foi monitorizada ao longo de 7 dias por LC-MS.
[0990]Em estas experiências, o CAF formulado em solução salina tamponada com fosfato foi doseado intravenosamente a 15 camundongos DBA/1 machos a 5 mg/kg. Três camundongos foram sacrificados às 1 h, 24 h, 72 h, 168 h e 240 h pós- dose. Sangue inteiro para EDTA foi coletado e soro foi preparado para análise de DAR in vivo por espectrometria de massa.
[0991]Amostras de soro foram diluídas em soro de cavalo (Life technologies, 16050-122) com base nas concentrações totais de anticorpo de CAF medidas por ensaio de ligação de ligando de anticorpo total. As diluições foram baseadas em estimativas da concentração final até uma faixa de 10-30 μg/mL, que é adequada para o limite superior das esférulas magnéticas da capacidade de ligação.
[0992]Em um tubo LoBind de proteína (Eppendorf North America), 350 μL soro de cavalo foram adicionados a 100 μL de cada amostra de soro de CAF pré-diluída até um volume total de 450 μL, seguido por adição de 4 μg de biotina-anticorpo contra Fc humano (2 μL de biotina-anti humano a solução a 2 mg/mL). As amostras foram incubadas durante 2 horas (h) à temperatura ambiente por agitação a 900 rpm em um agitador orbital. Para cada amostra de soro, 50 μL pasta de esférulas magnéticas revestidas com estreptavidina (Pierce, # de Cat 88817) foram equilibrados com Tween a 0,1% em tampão de PBS (PBST) em um tubo LoBind. O tampão de Solução Salina Tamponada com Fosfato com Tween 20 (PBST) foi removido por uma pipeta após desvio das esférulas magnéticas para o lado do tubo LoBind por colocação do tubo LoBind em uma prateleira magnética. As amostras de soro após 2 h de incubação com reagente de captura anti-humano foram transferidas para os tubos LoBind contendo esférulas magnéticas equilibradas e incubadas à temperatura ambiente durante 1 h a 900 rpm em um agitador orbital. O soro foi removido após incubação com esférula magnética, e a esférula magnética foi lavada extensivamente com 500 μL PBST (3 vezes) seguido por 500 μL MeOH a 5% em água MilliQ (3 vezes). O CAF ligado à esférula magnética foi liberado por incubação das esférulas magnéticas com 100 μL ácido fórmico a 0,5% em MeOH/água MilliQ a 50% durante 15 minutos.
[0993]O CAF liberado foi reduzido por adição 10 μL de reagente redutor (TCEP a 10 mM recém-preparada a partir de pó adquirido da Thermo Scientific, com EDTA a 10 mM em tampão Tris a 2 M pH 7,5) a 100 μL de amostra e incubado a 37 °C durante 30 minutos. Análise de LC/MS
[0994]As amostras reduzidas (10 μL) foram injetadas em um sistema LC/MS 6550 QTof LC/MS da Agilent através de um autoamostrador CTC com temperatura controlada (5 °C). A eluição das amostras foi alcançada em uma coluna de HPLC C4, 3,5 μm, 300 A, i.d. de 2,1 x 50 mm da Waters. As fases móveis foram: A: ácido fórmico a 0,1% em água e B: ácido fórmico a 0,1% em MeCN; o caudal foi 0,45 mL/min; e o compartimento da coluna foi mantido a 40 °C. O gradiente de HPLC foi como se segue:
[0995]A análise MS de elevada resolução de CAF reduzido foi realizada em um tempo-de-voo quadruplo 6550 da Agilent (Agilent Technology, San Clara, CA) equipado com uma fonte de eletropulverização (ESI) Dual Agilent Jet Stream operada no modo de íon positivo. O espectrômetro de massa foi operado no modo de gama dinâmica prolongada (2G Hz) com uma gama de MS até 3.200 m/z. A fonte de ESI primária foi usada a análise de LC/MS, e a sonda de ESI secundária foi usada para infusão da solução de calibração a 922,009798 m/z para se alcançar calibração de MS em tempo real. O espectrômetro de massa foi calibrado em uma base diária. Os erros de massa típicos de analitos em relação às massas teóricas foram menores do que ± 5 partes por milhão em operações diárias. Os dados de MS foram processados usando MassHunter Qual Browser Build 5.0.
[0996]O método da entropia máxima no pacote de software MassHunter Bioconfirm foi usado para deconvoluir os múltiplos espectros de massa de íons carregados para derivar os espectros de peso molecular neutro. A intensidade do pico deconvoluído foi usada para se calculada a DAR.
[0997]Os valores de DAR foram calculados usando intensidade de pico de MS deconvoluído com base nas seguintes equações: Valor de DAR da cadeia leve (LC): DAR de LC = (2 x intensidade de pico de LCAX(intensidade de pico de LC + intensidade de pico de LCA)) LC e LCA são cadeias leves com zero e um ligante de fármaco, respectivamente. Valor de DAR da cadeia pesada (HC): HC DAR=2x(intensidade de pico de HCA + 2 x intensidade de pico de HCAA + 3 x intensidade de pico de HCAAA)/(intensidade de pico de HC + intensidade de pico de HCA + intensidade de pico de HCAA + intensidade de pico de HCAAA) HC, HCA, HCAA e HCAAA são cadeias pesadas com zero, um, dois e três ligantes de fármaco, respectivamente. DAR Total = DAR de LC + DAR de HC
[0998]Os resultados são mostrados na Figura 2. Este exemplo demonstra que é observada perda mínima de ligante de fármaco a partir de CAF de esteroide ao longo de 7 dias. Exemplo 78: Geração de linhas de células repórter de GRE de TNF-alfa transmembranar humanas e de camundongo
[0999]De modo a criar uma linha de células originais, células K562 foram inoculadas em um prato com 6 poços (Costar: 3516) com 2 mL de meio de crescimento completo (RPMI, FBS a 10%, L-glutamina a 1%, Piruvato de Na a 1% e MEM NEAA a 1%) a 500.000 células por poço durante 24 horas a 37 °, CO2 a 5%. No dia seguinte, 1,5 μg de pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro] (Promega: E316), 1,5 μg pGl4.75 [hRLuc/CMV] (Promega: E639A) e 3 μL de reagente PLUS (Invitrogen: 10964021) foram diluídos em 244 uL Opti-MEM (Gibco: 31985-070) e incubados à temperatura ambiente durante 15 minutos. O vetor pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro] contém MMTV LTR (Repetição Terminal Longa de Vírus Tumoral Mamário Murino) que dirige a transcrição do gene repórter da luciferase luc2P em resposta à ativação de vários receptores nucleares tais como receptor de glucocorticoides e receptor de andrógenos. O Vetor pGL4.75[hRluc/CMV] codifica o gene repórter da luciferase hRluc (Renilla reniformis) e é desenhado para elevada expressão e transcrição anômala reduzida. Após incubação, a solução de DNA diluída foi pré-incubada com solução de Lipofectamina LTX 1:1 (Invitrogen: 94756) (13,2 μL + 256,8 μL Opti-MEM) e incubada à temperatura ambiente durante 25 minutos para formar complexos DNA- Lipofectamina LTX. Após incubação, 500 μL de complexos DNA-Lipofectamina foram adicionados diretamente ao poço contendo células. As células K562 foram incubadas durante 24 horas a 37 °/CO2 a 5%. Após incubação, as células foram lavadas com 3 mL de PBS e selecionadas com meio de crescimento completo contendo 125 μg/mL de higromicina B (Invitrogen: 10687-010) durante duas semanas. Foram produzidas células "K562 pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_pGL4.75[hRLuc/CMV]".
[01000]De modo a se criar uma linha de células repórter de GRE de TNF-alfa transmembranar murina, as células originais, K562 pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_pGL4.75[hRLuc/CMV], foram inoculadas com prato com 6 poços (Costar: 3516) com 2 mL de meio de crescimento completo (RPMI, FBS a 10%, L-glutamina a 1%, Piruvato de Na a 1% e MEM NEAA a 1%) a 500.000 células por poço durante 24 horas a 37 °, CO2 a 5%. No dia seguinte, 3 μg de DNA de mFL_TNFa (Origene: MC208048), que codifica TNF de camundongo não marcado, e 3 μL de reagente PLUS (Invitrogen: 10964-021) foram diluídos em 244 uL Opti-MEM (Gibco: 31985-070) e incubados à temperatura ambiente durante 15 minutos. Após incubação, a solução de DNA diluída foi pré-incubada com solução de Lipofectamina LTX 1:1 (Invitrogen: 94756) (13,2 μL + 256,8 μL Opti-MEM) e incubada à temperatura ambiente durante 25 minutos para formar complexos DNA-Lipofectamina LTX. Após incubação, 500 μL de complexos DNA-Lipofectamina foram adicionados diretamente ao poço contendo células. As células originais K562 pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_pGL4.75[hRLuc/CMV] foram transfectadas durante 24 horas a 37 °, CO2 a 5%. Após incubação, as células foram lavadas com 3 mL de PBS e selecionadas com meio de crescimento completo contendo 125 μg/mL de higromicina B (Invitrogen: 10687-010) e G418 a 250 μg/mL (Gibco: 10131-027) durante duas semanas. Foram produzidas células "K562 camundongo FL-TNFa GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro])".
[01001]De modo a se criar uma linha de células repórter de GRE de TNF-alfa transmembranar humana, as células originais, K562 pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_pGL4.75[hRLuc/CMV], foram transfectadas com o plasmídeo constructo de plasmídeo hTNF delta 1-12 C-Myc pcDNA3.1(-). Este plasmídeo é pcDNA 3.1 (Thermofisher # de cat V79020) codificando TNF transmembranar resistente a tace (i.e., SEQ ID NO:1 não tendo os aminoácidos 7788). (Ver Perez C et al. Cell 63 (2): 251-8 (1990) discutindo TNF transmembranar resistente a tace.) Estas linhas de células foram depois usadas nos ensaios repórter de TNF-alfa descritos nos exemplos subsequentes. Exemplo 79: Atividade de imunoconjugados anti-TNF-alfa em ensaios repórter de TNF-alfa transmembranar de GRE
[01002]As células originais K562 GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro]) e células K562 mFL-TNF-a ou hTNF delta 1-12 GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro]) foram plaqueadas em placas brancas tratadas com cultura de tecidos com 96 poços (Costar: 3917) a 50.000 células por poço em 50 μL de meio de ensaio (RPMI, CSFBS a 1%, L-glutamina a 1%, Piruvato de Na a 1% e MEAA a 1%). As células foram tratadas com 25 μL de conjugados de fármaco e anticorpo anti-TNF-a murino ou humano diluídos em série 3x em meio de ensaio, composto esteroide ou meio sozinho e incubados durante 48 horas a 37 °, CO2 a 5%. Após 48 horas de incubação, as células foram tratadas com 75 μL de Sistema de Ensaio Dual-Glo Luciferase (Promega-E2920) durante 10 minutos e analisadas quanto à luminescência usando o TopCount (PerkinElmer). Os dados foram analisados usando um ajuste de curva de quatro parâmetros para gerar valores de EC50. A % de ativação máxima foi normalizada para dexametasona a 100 nM, que foi considerada a ativação máxima. Os resultados usando a linha de células de TNF-alfa murino são mostrados na Tabela 12 em baixo, e os resultados usando a linha de células de TNF-alfa humano são mostrados na Tabela 13 em baixo. Na Tabela 12 em baixo, A se refere a 8C11. Na Tabela 13 em baixo, A se refere a adalimumab (SEQ ID NOs: 66 e 73). A porcentagem (%) de monômero foi determinada por SEC como previamente descrito (ver procedimentos analíticos de CAF). Tabela 12: Atividade in vitro de conjugados de fármaco e anticorpo anti-TNFa murino em ensaio repórter de GRE de TNFa transmembranar de camundongo (A se refere ao anticorpo anti-TNFa murino 8C11)
Tabela 13: Atividade in vitro de conjugados de fármaco e anticorpo anti-TNFa humano em ensaio repórter de GRE de TNFa transmembranar humano (A se refere ao anticorpo anti-TNFa humano adalimumab (SEQ ID NOs: 66 e 73).
Exemplo 80: Atividade de vários imunoconjugados anti-TNF-alfa humano em ensaios repórter de TNF-alfa transmembranar de GRE
[01003]Todas as proteínas foram conjugadas a Cdp. No. 99 usando condições destacadas sob o protocolo de conjugação geral de cisteína no Exemplo 36. Onde indicado na Tabela 14 em baixo, uma adição de cisteína (sublinhado) foi manipulada na sequência anti-TNF para permitir conjugação. Tabela 14: Sequência de aminoácidos de anticorpos anti-TNF alfa humano usados em imunoconjugados
1 Kronqvist J et al. Protein Engineering, Design & Selection 21 (4): 247-255 (2008) Atividade de imunoconjugados anti-TNF-alfa humano em ensaio repórter de GRE
[01004]Imunoconjugados anti-TNF alfa humano (também referidos como CAFs anti-TNF alfa humano ou CAFs de esteroide anti-hTNF alfa) foram testados quanto à atividade nas linhas de células originais K562 GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/hydgro]) e K562 hTNF delta 1-12 GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/hydgro]) sob condições como descritas no Exemplo 79. Os resultados mostrados na Tabela 15 indicam que todos os CAFs de esteroide anti- hTNF alfa testados demonstram potente atividade dependente do antígeno dissociada da sua atividade na linha de células originais. Tabela 15: Atividade in vitro de CAFs anti-TNF alfa humano em ensaio repórter de GRE de TNFa transmembranar humano (as concentrações de CAF foram normalizadas para MW e DAR)
[01005]A cinética de ligação de CAFs de esteroide anti-hTNF alfa ao trímero de TNFα solúvel recombinante foi determinada por medições à base de ressonância de plasmon de superfície feitas em instrumento T200 da Biacore (GE Healthcare) a 25 °C usando captura de Fc anti-humano/anti-F(ab')2 humano (usada para todos os CAFs exceto CAFs de affibody e ozoralizumab) ou abordagem de acoplamento de amida mediada por NHS/EDC direta (usada somente para CAF de ozoralizumab). Aproximadamente 10000 RU de anticorpo policlonal anti-Fc de IgG humano de cabra (Thermo Fisher Scientific Inc., cat. No. 31125) ou anticorpo policlonal anti-F(ab')2 humano de cabra (Jackson Immunoresearch Laboratories, Inc. cat. No. 109-006-006) foram diluídas até 5 μg/mL em acetato de sódio a 10 mM (pH 4,5) e foram imobilizadas ao longo de um chip de biossensor CM5 usando um estojo de acoplamento de amina padrão de acordo com as instruções e procedimentos do fabricante. As frações não reagidas na superfície do biossensor foram bloqueadas com etanolamina a 1 M. Para a abordagem de acoplamento de amida direta, aproximadamente 750 RU de conjugado de esteroide de ozoralizumab foram diretamente imobilizados em chip CM5. A preparação de chips e medições da cinética de ligação foram feitas no tampão de ensaio HBS-EP+ (Hepes a 10 mM, pH 7,4, NaCl a 150 mM, EDTA a 3 mM, Tween 20 a 0,05%). Para as medições da cinética de ligação em formato de captura, cada ciclo de ensaio consistiu nos seguintes passos: 1) captura de CAF de teste na superfície de teste a uma concentração de 0,5 μg/mL e a um caudal de 5 μL/min durante 60 s; 2) injeção de analito (TNFα humano ou somente tampão) sobre ambas as superfícies de referência e teste durante 300 s a 50 μL/min, após o que a dissociação foi monitorizada durante 600 segundos a 50 μL/min; 3) regeneração da superfície de captura por Glicina-HCl a 10 mM, pH 1,5 ou HCl a 100 mM (para CAF diretamente acoplado) sobre ambas as superfícies de referência e teste. Para as medições da cinética de ligação no formato de acoplamento de amina direta, somente o passo 2) e o passo 3) foram realizados. Durante o ensaio, todas as medições foram referenciadas contra a superfície em branco sozinha (i.e., sem anticorpo de teste capturado ou nanocorpo imobilizado) e foram usadas injeções somente de tampão para referenciação dupla. As injeções de TNFα variaram na concentração de 50 nM a 0,39 nM em uma série de diluições de 2 vezes, respectivamente. Os dados foram processados e ajustados globalmente a um modelo de ligação 1:1 usando software T200 da Biacore para se determinarem as constantes de taxa cinética de ligação, ka (M-1s-1) e kd (s-1), e a constante de dissociação em equilíbrio KD (M). Foram conduzidas duas experiências independentes. Os valores relatados na Tabela 16 são médias destas experiências. Tabela 16: Afinidade de ligação de CAFs de esteroide anti-hTNF por TNF alfa humano (ND = não determinado) Exemplo 81: Atividade de CAF de esteroide anti-hTNF alfa em Ensaio de Liberação de Citocinas a partir de PBMC Humanas Estimuladas por Lipopolissacarídeo
[01006]Células mononucleares de sangue periférico humanas primárias (PBMCs) foram adquiridas da Biological Specialty Corporation (# de cat 214-00-10), lavadas em 50 mL PBS, ressuspensas em FBS com DMSO a 5%, aliquotadas e criopreservadas em nitrogênio líquido até ao uso. As PBMCs foram descongeladas, ressuspensas em RPMI suplementado com FBS a 2% e Penicilina-Estreptomicina a 1% e plaqueadas em uma placa de ensaio de células (Costar #3799). As células foram incubadas com concentração variável de CAFs de esteroide anti-hTNF alfa a 37 °C e CO2 a 5% durante 4 horas. As células foram depois estimuladas com LPS a 100 ng/mL durante a noite. No dia seguinte, a placa foi agitada durante cinco minutos a 1000 rpm, e 100 μL de meio de sobrenadante foram diretamente transferidos para uma placa com 96 poços adicional e analisados quanto às concentrações de IL-6 (MSD, #K151AKB) e IL-1 beta (MSD, #K151AGB). Os dados de resposta à dose foram ajustados a uma curva sigmoidal usando regressão não linear, e os valores de IC50 calculados com o auxílio de GraphPad 5.0 (GraphPad Software, Inc.). Os resultados mostrados na Tabela 17 demonstram que os CAFs de esteroide anti-hTNF alfa têm atividade potente na inibição da liberação de citocinas pró-inflamatórias IL-6 e IL-1beta a partir de células imunológicas primárias ativadas. Tabela 17: Atividade in vitro de CAFs de anti-TNF alfa humano em ensaio de iberação de citocinas a partir de PMBC humanas estimuladas por LPS (n = 2) Exemplo 82: Atividade de imunoconjugado anti-TNF-alfa em ensaio de citotoxicidade induzida por TNFa em células L929
[01007]L929 é uma linha de células de fibrossarcoma aneuploide murino que é sensibilizada por pré-tratamento com actinomicina D. O tratamento com TNFa inicia apoptose e subsequente morte de células. Células L929 em fase log foram coletadas usando tripsina a 0,05%, lavadas duas vezes com D-PBS e contadas por CEDEX. As células foram ressuspensas a 1E6 células/mL em meio de ensaio contendo actinomicina D a 4 μg/mL e 50 μL foram adicionados a todos os poços. CAF de esteroide anti-TNF alfa murino (8C11 anti-TNF alfa murino conjugado a Cpd 71; também referido como CAF de esteroide anti-mTNF alfa) e mAb anti-TNF murino (8C11) foram diluídos até uma concentração 4x em meio de ensaio e diluições em série 1:3 foram realizadas. TNFα de camundongo foi diluído até uma concentração 4x de 600 pg/mL. O CAF de esteroide anti-mTNF e mAb anti-mTNF (125 μL) foram adicionados ao mTNFα (125 μL) em um esquema de agitação 1:2 e foi permitido que incubassem durante 1 hora à temperatura ambiente, agitando gentilmente. A mistura anticorpo/mTNFα (ou CAF/mTNFα) foi adicionada a poços a 50 μL/poço em triplicado. As placas foram incubadas durante 20 horas a 37 °C, CO2 a 5%. Para quantificar a viabilidade, 10 μL de reagente WST-1 (Roche # de cat 11644807001) foram adicionados aos poços. As placas foram incubadas sob condições de ensaio durante 3,5 horas, centrifugadas a 500 xg e 75 μL sobrenadante transferidos para uma placa de ELISA (Costar # de cat 3369). As placas foram lidas a OD 420-600 nm usando um leitor de placas de ELISA 190 da Spectromax. Os dados foram analisados e os valores de IC50 calculados usando um ajuste de resposta à dose sigmoidal (declive variável) em GraphPad Prism 5.
[01008]O CAF de esteroide anti-mTNF alfa teve potência neutralizante comparáveis (IC50 1,9 nM) ao mAb anti-mTNF alfa não conjugado (IC50 1,5 nM).
[01009]Os imunoconjugados anti-TNF alfa humano foram testados quanto à atividade neutralizante sob condições descritas acima. Os resultados são mostrados na Tabela 18 e indicam que os imunoconjugados anti-TNF alfa humano testados demonstram neutralização potente de TNF alfa humano. Tabela 18: Potências de neutralização de CAF de esteroide anti-hTNF alfa à citotoxicidade induzida por TNF alfa humano em células L929 (ND = não determinado)
Exemplo 83: Ligação de CAF de esteroide anti-mTNF-alfa a receptores Fcgama de camundongo
[01010]O instrumento T200 da Biacore com base em SPR (ressonância de plasmon de superfície) (GE Healthcare) foi usado para se avaliar a ligação de CAF de esteroide anti-mTNF-alfa (8C11 anti-mTNF conjugado ao Cpd 71) e mAb anti-mTNF- alfa a FcgRs de camundongo recombinante (todos R&D Systems). Os FcgRs foram diretamente imobilizados na superfície das células de fluxo dois, três e/ou quatro chip(s) da Biacore tipo CM5 para se alcançarem densidades de ~1000-2000 RU (unidades de ressonância). A superfície modificada em branco da célula de fluxo uma de cada chip da Biacore foi usada como uma superfície de referência. Cada experiência consistiu em fases de associação e dissociação. A fase de associação consistiu na titulação de mAb original e CAF sobre todas as células de fluxo a um caudal de 50 uL/min e concentrações de 4000, 2000, 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,25 e 0 nM para FcgRIIB e FcgRIII e 100, 50, 25, 12,5, 6,25, 3,13, 1,56 e 0 nM para os receptores I e IV. A fase de dissociação consistiu no fluxo contínuo do tampão de operação (HBS-EP+, pH 7,4, GE Healthcare) ao caudal de 50 uL/min. As fases de associação e dissociação foram monitorizadas durante 5 min cada uma (receptores I e IV) ou 1 min (receptores II e III). As superfícies dos chips foram regeneradas com um pulso de 5 s de HCl a 100 mM HCl a um caudal de 100 uL/min após cada ciclo de ligação. Software Evaluation da Biacore foi usado para ajustar os dados em bruto a modelos de ligação 1:1 (FcgRI e IV) ou Estado Estável (receptores IIB e III). Os resultados são mostrados na Tabela 19. ka é a constante de taxa de associação (1/Ms); kd é a constante de taxa de dissociação (1/s); KD é a constante de dissociação em equilíbrio (M). Tabela 19: Afinidades de ligação de imunoconjugado anti-TNF-alfa por receptores Fcgama de camundongo Exemplo 84: Atividade de CAFs de esteroide anti-mTNF-alfa em modelo de hipersensibilidade de contato
[01011]Os CAFs de esteroide anti-mTNF alfa foram avaliados em um modelo de hipersensibilidade de contato agudo, um desencadeamento de inflamação aguda da pele usando resposta de hipersensibilidade (DTH) do tipo retardado (dirigida por células T) através da aplicação de um agente de sensibilização (isotiocianato de fluoresceína (FITC)). A eficácia de CAFs de esteroide anti-mTNF alfa foi medida pela capacidade de reduzir o inchaço das orelhas. Os biomarcadores esteroides corticoesterona e pró-peptídeo N-terminal do pró-colágeno tipo 1 (P1NP) foram incluídos para se avaliar o impacto putativo do tratamento com CAF de esteroide anti- mTNF alfa no eixo Hipotálamo-Pituitária-Adrenal (HPA) e renovação óssea, respectivamente.
[01012]Ao dia 0, os camundongos foram colocados sob anestesia geral e os abdômens foram rapados. Usando um micropipetador, os camundongos foram sensibilizados por aplicação epicutânea de 400 uL de solução de FITC (solução a 1,5% em acetona:DBP 1:1) no abdômen. 6 dias mais tarde, os camundongos foram doseados com veículo ou agente terapêutico 1 hora antes do desafio das orelhas com FITC. Para o desafio das orelhas, os camundongos foram colocados sob anestesia geral e foram desafiados com 20 μL FITC aplicados à orelha direita. 24 horas após desafio, os camundongos foram colocados sob anestesia geral e a sua espessura da orelha é medida por calibrador. A diferença entre orelhas desafiadas e não desafiadas foi calculada. 72 horas após desafio das orelhas, os camundongos foram injetados com ACTH a 1 mpk IP e terminalmente sangrados aos 30 min pós-ACTH. O plasma é coletado e analisado níveis de P1NP, corticoesterona, esteroide livre e grandes moléculas.
[01013]A curva de calibração de esteroide foi preparada em plasma de camundongo com concentrações finais de 0,03 nM a 0,1 μM a 8 níveis de concentração diferentes. A curva de calibração da corticoesterona variando de concentrações finais de corticoesterona de 0,3 nM a 1 μM foi preparada em solução de albumina de soro bovino a 70 mg/mL em tampão de PBS. Uma solução de 160 μL MeCN com ácido fórmico a 0,1% foi adicionada a 40 μL amostras de plasma em estudo ou padrões de calibração. Os sobrenadantes foram diluídos com água destilada e 30 μL solução de amostra final foram injetados para análise de LC/MS.
[01014]A quantificação de esteroide livre e corticoesterona liberados foi conduzida em um espectrômetro de massa de quadropolo triplo 5500 da AB conectado a um sistema de HPLC AC20 da Shimadzu com interface com uma fonte de ionização por eletropulverização em modo positivo. Uma coluna XBridge BEH C18, 2,1 x 30 mm, 3,5 μm da Waters foi usada para separação por cromatografia. A fase móvel A foi ácido fórmico a 0,1% em água para HPLC MilliQ e a fase móvel B foi ácido fórmico a 0,1% em MeCN. Um gradiente linear de 2% da fase móvel B até fase móvel B a 98% foi aplicado de 0,6 a 1,2 minutos. O tempo de operação total foi 2,6 min a um caudal de 0,8 mL/min. O espectrômetro de massa foi operado em modo MRM positivo à temperatura da fonte de 700 °C.
[01015]A quantificação de P1 NP no plasma foi conduzida em uma plataforma de LC/MS com base em digestão de proteína por tripsina. Amostras de plasma foram parcialmente precipitadas e totalmente reduzidas por adição de mistura de MeCN/bicarbonato de amônio a 0,1 M/DTT. O sobrenadante foi coletado e alquilado por adição de ácido iodoacético. As proteínas alquiladas foram digeridas por tripsina e os peptídeos trípticos resultantes foram analisados por LC/MS. A curva de calibração foi gerada por uso de peptídeo tríptico sintético enriquecido em soro de cavalo (matriz substituta não interferente). Peptídeo flanqueante marcado com isótopo estável (extensão de 3-6 aminoácidos em ambos os terminais do peptídeo tríptico) foi usado como padrão interno adicionado na mistura de precipitação de proteína MeCN/DTT para normalizar a eficácia de digestão e injeção em LC/MS.
[01016]Uma coluna Chromenta BB-C18, 2,1 x 150 mm, 5 μm da Columnex foi usada para separação por cromatografia. A fase móvel A foi ácido fórmico a 0,1% em água para HPLC MilliQ e a fase móvel B foi ácido fórmico a 0,1% em MeCN. Um gradiente linear de 2% da fase móvel B até fase móvel B a 65% foi aplicado de 0,6 a 3 minutos. O tempo de operação total foi 8 min a um caudal de 0,45 mL/min. Um espectrômetro de massa 4000Qtrap da AB Sciex foi usado em modo MRM positivo para quantificar os peptídeos P1 NP, à temperatura da fonte de 700 °C.
[01017]As concentrações de anticorpo total (CAF e mAb de estrutura principal) foram medidas usando plataforma Mesoscale Discovery (MSD). TNF de camundongo marcado com biotina foi usado como o reagente de captura para CAFs de esteroide anti-mTNF alfa e anticorpo de detecção anticamundongo de cabra conjugado com Sulfo-TAG foi usado para detecção. Uma curva de calibração foi gerada por diluição em série da molécula de CAF em matriz correspondente e amostras de QC foram usadas para qualificar o ensaio.
[01018]Os resultados são mostrados na Tabela 20 em baixo: Tabela 20: Comparação da atividade de CAF de esteroide anti-mTNF alfa no inchaço das orelhas e biomarcad ores esteroides no mod elo CHS de inflamação
[01019]Estes resultados demonstram que os CAFs de esteroide anti-mTNF alfa podem obter uma resposta eficaz equivalente ao tratamento com esteroide de pequena molécula enquanto poupam os efeitos indesejáveis na corticoesterona e P1NP.
[01020]Um estudo de hipersensibilidade de contato (CHS) adicional foi conduzido para avaliar se a conjugação da carga de esteroide a mAb anti-TNF era requerida para eficácia intensificada. Os camundongos foram doseados i.p. uma vez de acordo com o protocolo descrito acima com veículo, mAb anti-mTNF alfa (10 mpk), CAF de esteroide anti-mTNF alfa (10 mpk) (cpd no 139) ou uma mistura de mAb anti- mTNF alfa codoseado (administrados simultaneamente em uma injeção i.p. única) com uma quantidade equivalente de esteroide de pequena molécula para corresponder à estequiometria de CAF. Para uma dose de 10 mpk de CAF de esteroide anti-mTNF alfa com uma DAR de 4, esta foi calculada como sendo 4 μg de esteroide de pequena molécula (Comp. N.° 42). Os resultados mostrados na Figura 9 demonstram que o tratamento com CAF de esteroide anti-mTNF alfa teve eficácia significativamente aumentada na redução da inflamação da orelha quando comparado com a combinação de mAb anti-mTNF alfa e esteroide de pequena molécula ou mAb anti-mTNF alfa sozinho. Exemplo 85: Atividade de CAFs de esteroide anti-mTNF-alfa na artrite induzida por colágeno
[01021]A capacidade de CAF de esteroide anti-mTNF alfa (Comp. N.° 137) de impactar a doença foi avaliada no modelo de artrite da artrite induzida por colágeno (CIA).
[01022]Em estas experiências, camundongos DBA/1J machos foram obtidos a partir dos Jackson Labs (Bar Harbor, ME). Os camundongos foram usados das 6 às 12 semanas de idade. Todos os animais foram mantidos a temperatura e umidade constante sob um ciclo de 12 horas de luz/escuridão e alimentados com comida de roedores (Lab Diet 5010 PharmaServ, Framingham, MA) e água ad libitum. A AbbVie é acreditada pela AAALAC (Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care), e todos os procedimentos foram aprovados pelo Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) e monitorizados por um veterinário assistente. O peso corporal e condição foram monitorizados, e os animais foram eutanasiados se exibissem >20% de perda de peso.
[01023]Os camundongos DBA/J machos foram imunizados intradermicamente (i.d.) na base da cauda com 100 μL de emulsão contendo 100 μg de colágeno bovino tipo II (MD Biosciences) dissolvido em ácido acético a 0,1 N e 200 μg de Mycobacterium tuberculosis H37Ra inativado pelo calor (Adjuvante Completo de Freund, Difco, Laurence, KS). Vinte e um dias após imunização com colágeno, os camundongos foram reforçados IP com 1 mg de Zimosan A (Sigma, St. Louis, MO) em PBS. Após o reforço, os camundongos foram monitorizados 3 a 5 vezes por semana quanto à artrite. As patas traseiras foram avaliadas quanto ao inchaço das patas usando calibradores de mola da Dyer (Dyer 310-115)
[01024]Os camundongos foram inscritos entre os dias 24 e 28 nos primeiros sinais clínicos de doença e distribuídos em grupos de gravidade artrítica equivalente. O tratamento terapêutico inicial começou aquando da inscrição.
[01025]Os animais foram doseados uma vez oralmente (p.o.) com esteroide (Comp. N.° 3) (10 mpk) em um veículo de HPMC a 0,5%/Tween80 a 0,02% [v/] ou intraperitoneal (i.p.) com mAb anti-mTNF alfa (10 mpk) (8C11) ou CAF de esteroide anti-mTNF alfa (10 mpk) (Comp. N.° 137) em solução salina a 0,9%. O sangue foi coletado para a exposição ao anticorpo por corte na cauda às 24 e 72 horas após dose. As patas foram coletadas no ponto temporal terminal para histopatologia. O sangue foi coletado no ponto temporal terminal por punção cardíaca para contagens de sangue completo (Sysmex XT-2000iV). A significância estatística foi determinada por ANOVA.
[01026]Os resultados são mostrados na Figura 3 e demonstram que uma dose única de CAF de esteroide anti-mTNF alfa pode exibir uma duração de ação prolongada através da melhoria do inchaço das patas durante ~6 semanas em comparação com mAb anti-mTNF alfa ou esteroide de pequena molécula sozinho.
[01027]Em um estudo separado desenhado para avaliar a funcionalidade de visar TNF do CAF de esteroide anti-mTNF alfa, os animais foram doseados uma vez i.p. com mAb anti-mTNF alfa (10 mpk) ou CAF de esteroide anti-mTNF alfa (10 mpk) (Comp. N.° 145) ou como CAF de esteroide de isotipo (10 mpk (Comp. N.° 224: que reconhece a proteína ovalbumina do ovo da galinha, um antígeno não expresso em camundongos. Ambos os CAFs tiverem carga de fármaco equivalente. O esteroide de pequena molécula (3 mpk) foi doseado oralmente uma vez diariamente (q.d). Os resultados são mostrados na Figura 10 e demonstram que uma dose única de CAF de esteroide anti-TNF alfa tem eficácia equivalente ao esteroide de pequena molécula doseado diariamente ao longo de um período de 21 dias. Um dose única do CAF de esteroide de isotipo não visado teve eficácia somente parcial, similar ao mAb anti-mTNF sozinho ao longo do mesmo intervalo de tempo. As percentagens denotam a % de inibição em comparação com o veículo. Uma avaliação dos pesos corporais dos animais ao longo do decurso deste estudo (Figura 11) revelou que todos os grupos de tratamento com a exceção do grupo com CAF de esteroide anti-mTNF alfa perderam peso. Em contraste, os camundongos tratados com CAF de esteroide anti- mTNF alfa exibiram ganho de peso normal ao longo do estudo de 21 dias. Exemplo 86: Atividade de vários CAFs de esteroide anti-mTNF-alfa na artrite induzida por colágeno
[01028]Vários CAFs de esteroide anti-mTNF alfa com diferentes cargas líquidas de esteroide ou razões fármaco:anticorpo (DARs) foram testados quanto à eficácia em um modelo de camundongo da artrite. Os estudos foram conduzidos de acordo com o procedimento delineado no Exemplo 85. Os resultados são mostrados na Tabela 21 em baixo. Tabela 21: Eficácia de CAFs de esteroide anti-mTNF-alfa em modelo da artrite
Exemplo 87: Atividade de imunoconjugados anti-hTNF-alfa no modelo de camundongo nocaute em Tg1278TNF transgênico em TNF humano da Artrite Induzida por Anticorpo contra Colágeno
[01029]A eficácia de CAFs anti-TNF alfa humano foi avaliada em um modelo de camundongo transgênico em TNFa humano da artrite.
[01030]O modelo da Artrite Induzida por Anticorpo contra colágeno (CAIA) (Moore, AR J Transl Med 12: 285 (2014)) foi realizado usando os camundongos nocaute em Tg1278TNF transgênicos em TNF humano como previamente descrito (Moore A et al. J Transl Med 12 (1): 285 (2014)). Oito mgs de um cocktail de anticorpos monoclonais que visam diferentes epítopos de colágeno tipo II (ArthritoMabTM) foram administrados intraperitonealmente (i.p.) aos camundongos no dia 0. No dia 3, os camundongos foram injetados i.p. com 10 μg LPS para reforçar a patologia da doença. Os animais foram avaliados quanto à pontuação artrítica começando a partir do dia 3 até ao dia 14 do estudo. Oito camundongos machos foram usados por grupo e os artigos de teste ou veículo de PBS foram administrados i.p. duas vezes por semana durante duas semanas.
[01031]Os resultados são mostrados na Figura 4 e demonstram que os CAFs anti anti-TNF alfa humano conseguem reduzir significativamente a pontuação da doença em comparação com um mAb anti-TNF alfa humano (adalimumab). Exemplo 88: Atividade de CAFs de esteroide anti-mTNF-alfa na inflamação de pico
[01032]Uma experiência de CIA de camundongo foi conduzida para se estabelecer a eficácia de CAF de esteroide anti-mTNF alfa em animais com inflamação de pico. Para dosagem terapêutica tardia, os camundongos foram inscritos no estudo aos primeiros sinais clínicos de doença e doseados 6 dias após inscrição. Um grupo de animais foi sacrificado ao dia 7 para proporcionar uma linha de base para mudanças artríticas por tomografia microcomputadorizada (μCT) e análise histológica no momento em que todos os outros grupos foram doseados. Todos os animais foram doseados uma vez no dia 6 com veículo (solução salina a 0,9%), mAb anti-mTNF alfa (10 mpk) (8C11) ou CAF de esteroide anti-mTNF alfa (10 mpk) (Comp. N.° 145) e sacrificados no dia 21. As patas traseiras artríticas foram coletadas e a análise μCT foi realizada. As mesmas patas foram depois usadas para avaliação histológica. No final da experiência, o sangue inteiro foi coletado por punção cardíaca para avaliar as contagens de sangue completo (CBCs).
[01033]As patas traseiras foram removidas intatas na tíbia/fístula e fixas em Formalina a 10%. As patas foram rastreadas por μCT (Scanco Medical AG, Micro- CT40) a 55 kVp a 145 μA no cenário de Elevada Resolução (1000 Projeções/180° a Reconstrução com 2048x2048 Pixels) usando Voxels Isotrópicos e tempo de integração de 300 milissegundos. Um rebordo cilíndrico foi manualmente desenhado em torno da região de interesse a partir da junção tibiotalar e se prolongando para o tornozelo para 100 fatias (1,8 mm). A avaliação foi realizada por software da Scanco utilizando sigma gauss de 0,8, com um limiar superior de 1000 e um limiar inferior de 320.
[01034]As patas traseiras de camundongos tratados foram fixas por imersão em formalina tamponada neutra a 10% e parcialmente descalcificadas em solução de Calrite durante 48 horas para permitir aparamento das bordas lateral e medial do tarso. As patas foram depois colocadas de volta em Calrite durante ~48 horas para completar a descalcificação. As amostras foram rotineiramente processadas, embebidas em parafina no plano sagital, seccionadas aos 5 mícrons e coloridas com hematoxilina e eosina. As fatias foram avaliadas microscopicamente quanto à presença de inflamação/formação de panos, infiltração de neutrófilos, erosão óssea e danos à cartilagem usando uma escala de 0-4: 0 = nenhum presente, 1 = ligeiro, 2 = moderado, 3 = marcado, 4 = grave.
[01035]Os resultados mostrados na Figura 12 demonstram que uma dose única de CAF de esteroide anti-mTNF alfa consegue reverter a doença estabelecida e reduzir o inchaço das patas até quase à linha de base. Em contraste, uma dose única de mAb anti-TNF alfa teve um efeito mínimo na inflamação.
[01036]O efeito de tratamento na perda de osso társico como medida por μCT é mostrado na Figura 13. Os resultados demonstram que uma dose única de CAF de esteroide anti-mTNF alfa administrada no pico da inflamação é capaz de inibir significativamente a erosão óssea na articulação mediada pela doença em comparação com mAb anti-mTNF alfa sozinho.
[01037]Os resultados da avaliação histológica das articulações de camundongos com CIA tratados são mostrados nas Figuras 14-17. Demonstram que uma dose única de CAF de esteroide anti-mTNF alfa administrado no pico da doença resultou em uma diminuição significativa na inflamação, formação de panos, erosão óssea e danos à cartilagem pelo dia 21 em relação aos controles com veículo com correspondência de idade (p<0,001), e os níveis de doença foram equivalentes aos níveis observados em controles na linha de base (veículo d6). Em duas das seis patas avaliadas, não foi detectável doença nas articulações tarso/falange de animais tratados com CAF de esteroide anti-mTNF alfa ao dia 21, em comparação com incidência de 100% em camundongos à linha de base do dia 6 (antes do tratamento) e camundongos tratados com veículo do dia 21.
[01038]Em contraste, uma dose única de mAb anti-mTNF alfa no pico da doença não inibiu a inflamação, erosão óssea, formação de panos ou destruição da cartilagem, em relação aos controles com veículo com correspondência de idade ao d21. Os níveis de doença foram mais graves do que os controles da linha de base, e foi observada uma ligeira tendência para inflamação melhorada.
[01039]O sangue inteiro foi analisado para se avaliarem mudanças em subconjuntos de células do sangue periférico com tratamento. Os resultados mostrados nas Figuras 18-23 demonstram que o aumento e algumas populações de células do sangue periférico observado em animais doentes pode ser resolvido com uma dose única de CAF de esteroide anti-mTNF alfa. Foram observadas reduções estatisticamente significativas em glóbulos brancos, neutrófilos e monócitos globais com tratamento com CAF de esteroide anti-mTNF alfa. Exemplo 89: Comparação de CAFs de esteroide anti-mTNF-alfa e CAFs anti- CD163
[01040]Para demonstrar a eficácia terapêutica intensificada de um imunoconjugado anti-TNF no tratamento de doença inflamatória comparámos a sua atividade com um CAF visando o receptor removedor da hemoglobina CD163, uma abordagem com imunoconjugado de glucocorticoide descrita na literatura como tendo funcionalidade anti-inflamatória visada (Ped. Int. PCT WO2011039510A2 por Graversen NJH, et al.; Graversen JH et al., Mol. Ther. 20 (8): 1550-8 (2012)). Geração de uma linha de células repórter de GRE de CD163 de camundongo
[01041]Uma linha de células originais foi criada similar àquela descrita no Exemplo 78 mas com células CHO-K1 em vez de células K562. A linha de células originais resultante CHO pGL4.36[Luc2P/MMTV/Hygro]_PGL4.75[hRLuc/CMV] foi depois transfectada com um plasmídeo que codifica CD163 de camundongo (Origene no. de cat. MR216798) sob condições descritas no Exemplo 78. A linha de células resultante CHO mCD163 GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro]) foi usada para testar a atividade in vitro de imunoconjugados tanto anti-mTNF-alfa como anti-CD163 de camundongo (também referidos como imunoconjugados anti-mCD163 ou CAF de esteroide anti-mCD163).
[01042]Um anticorpo contra mIgG2a/k anti-CD163 camundongo de rato quimérico foi gerado a partir da sequência de VH e VL para o clone 3E10B10 como descrito (SEQ ID NO: 87/88 do Ped. Int. PCT WO 2011/039510A2). Este anticorpo foi conjugado ao Comp. N.° 99 usando condições destacadas sob o protocolo de conjugação geral de cisteína no Exemplo 36 para dar uma razão fármaco:anticorpo (DAR) de 4. Atividade de imunoconjugado anti-CD163 de camundongo em ensaio repórter de GRE de CD163 de camundongo
[01043]O imunoconjugado anti-CD163 de camundongo foi testado quanto à atividade na linha de células CHO mCD163 GRE (pGL4.36[luc2P/MMTV/Hygro]) sob condições descritas no Exemplo 79. Um CAF de esteroide anti-mTNF alfa (Comp. N.° 145) foi incluído como um controle negativo. Os resultados na Tabela 22 demonstram que o imunoconjugado anti-CD163 de camundongo (Comp. N.° 223): mostra atividade dependente do antígeno dissociada do CAF de esteroide anti-mTNF alfa na linha de células de GRE de CD163 de camundongo. Tabela 22
[01044]A capacidade do imunoconjugado anti-CD163 de camundongo de impactar o inchaço das patas foi avaliada no modelo de artrite induzida por colágeno (CIA) da RA. Um CAF de esteroide anti-mTNF alfa de controle (cpd 139) com o mesmo ligante de fármaco e DAR que o CAF de esteroide anti-mCD163 foi também avaliado no mesmo estudo e os mAbs originais para ambos os CAFs foram também incluídos como grupos de tratamento. A experiência foi conduzida de acordo com o procedimento delineado no Exemplo 85. Os resultados são mostrados na Figura 24 e demonstram que, embora o CAF de esteroide anti-mCD163 reduza inicialmente o inchaço das patas nos primeiros dias após tratamento com dose única, este efeito é transiente. Em comparação, uma dose única de CAF de esteroide anti-mTNF alfa é suficiente para suprimir completamente a inflamação ao longo da duração do estudo.
[01045]É para ser apreciado que a seção da Descrição Detalhada, e não as seções do Sumário e Resumo, se destina a ser usada para interpretar as reivindicações. As seções do Sumário e Resumo apresentam uma ou mais, mas todas as, modalidades exemplificativas da presente divulgação como contemplado pelo(s) inventor(es) e, assim, não se destinam a limitar a presente divulgação e as reivindicações anexadas de qualquer modo.
[01046]A presente divulgação foi descrita acima com o auxílio de blocos de construção funcional ilustrando a implementação de funções especificadas e suas relações. As fronteiras destes blocos de construção funcionais foram arbitrariamente definidas aqui para a conveniência da descrição. Podem ser definidas fronteiras alternativas desde que as funções especificadas e suas relações sejam apropriadamente realizadas.
[01047]A descrição anterior das modalidades específicas revelarão assim totalmente a natureza geral da divulgação que os outro podem, por aplicação de conhecimento dentro da perícia da técnica, prontamente modificar e/ou adaptar para várias aplicações tais modalidades específicas, sem experimentação indevida, sem se afastar do conceito geral da presente divulgação. Portanto, tais adaptações e modificações se destinam a estar dentro do significado e gama de equivalentes das modalidades divulgadas, com base no ensinamento e orientação apresentada aqui. É para ser entendido que a fraseologia ou terminologia aqui é para o propósito de descrição e não de limitação, tal que a terminologia oi fraseologia da presente especificação é para ser interpretada pelo especialista perito no contexto dos ensinamentos e orientação.
[01048]A amplitude e escopo da presente divulgação não devem estar limitados por qualquer uma das modalidades exemplificativas acima descritas, mas devem ser somente definidos de acordo com as seguintes reivindicações e seus equivalentes..
Claims (7)
5. Composição farmacêutica CARACTERIZADA pelo fato de que compre-ende um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
6. Composição farmacêutica CARACTERIZADA pelo fato de que compreende um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que é para o tratamento de artrite reumatoide, artrite idiopática juvenil, artrite psoriá- tica, espondilite anquilosante, doença de Crohn adulta, doença de Crohn pediátrica, colite ulcerativa, psoríase em placas, hidradenite supurativa, uveíte, doença de Behçet, uma espondiloartropatia ou psoríase.
7. Uso de um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a fabricação de uma composição farmacêutica para o tratamento de artrite reumatoide, artrite idiopática juvenil, artrite psoriática, espondilite anquilosante, doença de Crohn adulta, doença de Crohn pediátrica, colite ulcerativa, psoríase em placas, hidradenite supurativa, uveíte, doença de Behçet, uma espondiloartropatia ou psoríase.
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