TW201305173A

TW201305173A - Ｃ型肝炎病毒抑制劑

Info

Publication number: TW201305173A
Application number: TW101121400A
Authority: TW
Inventors: 羅庫瑪雷賈曼恩; 基沙爾Ｖ雷杜奇塔拉; 肯哈沙彌沙庫南; 波里奇拉那嘉拉許彌; 尼可拉斯Ａ明威; 保羅麥可史格拉
Original assignee: 必治妥美雅史谷比公司
Priority date: 2011-06-15
Filing date: 2012-06-14
Publication date: 2013-02-01
Also published as: US8691757B2; EP2721053B1; BR112013032049A2; JP2014522809A; EA201391717A1; AR086934A1; CN103732613A; WO2012173983A1; EP2721053A1; US20130142754A1; ES2604690T3; MX2013014002A; EA024173B1; CA2839400A1; JP6078536B2

Abstract

本發明揭示具有通式(I)之C型肝炎病毒抑制劑□本發明亦揭示包含該等化合物之組合物及使用該等化合物抑制HCV之方法。

Description

C型肝炎病毒抑制劑

一般而言，本揭示內容係關於抗病毒化合物，且更具體而言係關於抑制由C型肝炎病毒(HCV)編碼之NS3蛋白酶(本文中亦稱為「絲胺酸蛋白酶」)之功能的化合物、包含該等化合物之組合物及用於抑制NS3蛋白酶之功能之方法。

相關申請案之交叉參考

本申請案主張2011年6月15日申請之美國臨時申請案第61/497,141號之權益。

HCV係主要的人類病原體，全世界估計有170百萬人感染，大致為感染1型人類免疫缺陷病毒之數量的五倍。該等HCV感染個體中很大一部分患有嚴重的進行性肝病，包括硬化及肝細胞癌。

目前，最有效的HCV療法採用α-干擾素與利巴韋林(ribavirin)之組合，在40%之患者中產生持續效力。最新臨床結果表明作為單一療法，聚乙二醇化α-干擾素優於未經修飾之α-干擾素。然而，即使利用涉及聚乙二醇化α-干擾素與利巴韋林之組合之實驗治療方案，很大一部分患者中之病毒負荷沒有持續降低。因此，研發治療HCV感染之有效治療法的需求很明確且未得到滿足。

HCV係正鏈RNA病毒。基於對所推斷胺基酸序列之比對及5'非轉譯區中之廣泛相似性，已將HCV分類為黃病毒科 (Flaviviridae)家族中之單獨屬。黃病毒科家族之所有成員具有含有正鏈RNA基因組之有包膜病毒粒子，該基因組經由轉譯單一、不間斷、開放讀碼框來編碼所有已知病毒特異性蛋白。

在整個HCV基因組中之核苷酸及所編碼胺基酸序列內發現大量異質性。已表徵6個主要基因型，且已描述50個以上亞型。HCV之主要基因型在全世界之分佈不同，且儘管對基因型對發病機制及療法之可能影響進行了大量研究，但HCV之基因異質性之臨床重要性仍難以捉摸。

單鏈HCV RNA基因組之長度係大約9500個核苷酸，且具有編碼約3000個胺基酸之單一較大聚蛋白之單一開放讀碼框(ORF)。在所感染細胞中，此聚蛋白在多個位點處由細胞及病毒蛋白酶裂解，以產生結構及非結構(NS)蛋白。在HCV之情形中，成熟非結構蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A及NS5B)之產生係藉由兩種病毒蛋白酶來實現。第一種在NS2-NS3結合處裂解；第二種係NS3之N端區內所含之絲胺酸蛋白酶且介導NS3下游之所有後續裂解，兩者均在NS3-NS4A裂解位點處呈順式，且對於其餘NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位點呈反式。NS4A蛋白似乎具有多個功能，充當NS3蛋白酶之輔助因子且可能幫助NS3及其他病毒複製酶組份之膜定位。NS3蛋白與NS4A之複合物形成對於高效聚蛋白加工係必要的，從而增強所有位點處之蛋白水解裂解。NS3蛋白亦呈現核苷三磷酸酶及RNA解旋酶活性。NS5R係HCV複製中所涉及之RNA依賴性RNA聚合酶。

本揭示內容提供可抑制NS3蛋白酶與(例如)NS4A蛋白酶組合起作用之肽化合物。此外，本揭示內容闡述向患者投與組合療法，其中有效抑制HCV NS3蛋白酶之本揭示內容化合物可與具有抗HCV活性之其他化合物一起投與。

在其第一態樣中，本揭示內容提供式(I)化合物：或其醫藥上可接受之鹽，其中q係1或2；係單鍵或雙鍵；R^p係選自其中R^p係藉助基團中任一可取代碳原子附接至母體分子部分； n係0、1、2、3、4、5或6；X⁰係選自CH及N；X¹係選自CH及N；X²及X³係獨立地選自CH、C(R^a)及N；限制條件係X¹、X²及X³中之至少一者不為N；每一R^a係獨立地選自烯基氧基、烷氧基、烷氧基烷氧基、烷基、苯并二噁烷基、羧醯胺基、羧基、羧基烷氧基、氰基、環烷基烷氧基、環烷基氧基、氘代烷氧基、二烷基胺基、鹵基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、鹵代烷氧基羰基、羥基、嗎啉基、苯基、六氫吡嗪基、吡唑基、吡啶基及吡咯啶基，其中嗎啉基、苯基、六氫吡嗪基、吡啶基及吡咯啶基視情況經一或兩個獨立地選自烷氧基、烷基、烷基磺醯基、鹵基、鹵代烷氧基、鹵代烷基及嗎啉基之基團取代；且其中兩個毗鄰R^a基團與其所附接之碳原子一起可視情況形成選自二噁烷基、二氧戊環基、嗎啉基、哌喃基及苯基之環，其中該環視情況經一或兩個獨立地選自烷基及鹵基之基團取代；R^b係烷基；R^x係選自甲基及乙基；R^y及R^z係獨立地選自氫及羥基；限制條件係當為雙鍵時，R^y及R^z各自為氫；R²係選自氫、烷基、鹵基、鹵代烷氧基、鹵代烷基及羥基烷基；且R³係選自氫、烷氧基烷氧基羰基、烷氧基羰基、烷基胺基羰基、烷基羰基、環烷基烷氧基羰基、環烷基羰基、環烷基氧基羰基、氘代烷氧基羰基、氘代鹵代烷氧基羰基、二烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基羰基、鹵代烷氧基羰基、鹵代烷基胺基羰基、鹵代烷基羰基、雜環基羰基、雜環基氧基羰基、苯基羰基及苯基氧基羰基，其中環烷基烷氧基羰基、環烷基羰基及環烷基氧基羰基之環烷基部分、雜環基羰基及雜環基氧基羰基之雜環基部分以及苯基羰基及苯基氧基羰基之苯基部分視情況經一個、兩個或三個獨立地選自烷基、烷基胺基、烷基羰基、環烷基、二烷基胺基、鹵基、鹵代烷氧基及鹵代烷基之基團取代。

在第一態樣之第一實施例中，本揭示內容提供式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中：q係1；係雙鍵；R^x係甲基；且R^y及R^z各自係氫。

在第一態樣之第二實施例中，本揭示內容提供式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R^p係：

在第一態樣之第三實施例中，本揭示內容提供式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中： R^p係 n係0、1、2或3；每一R^a係獨立地選自烷氧基及鹵基；且R³係選自烷氧基羰基及鹵代烷氧基羰基。

在第二態樣中，本揭示內容提供式(II)化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中n係0、1、2、3、4、5或6；每一R¹係獨立地選自烷氧基、烷基、羧醯胺基、羧基、氰基、環烷基氧基、二烷基胺基、鹵基、鹵代烷基、鹵代烷氧基及苯基，其中苯基視情況經一或兩個獨立地選自烷氧基、烷基、鹵基、鹵代烷氧基及鹵代烷基之基團取代； R²係選自氫、烷基、鹵基及鹵代烷基；且R³係選自烷氧基羰基、烷基羰基、鹵代烷氧基羰基、鹵代烷基羰基及苯基羰基，其中苯基視情況經一或兩個獨立地選自烷基及鹵基之基團取代。

在第三態樣中，本揭示內容提供包含式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑之組合物。在第三態樣之第一實施例中，本揭示內容提供包含式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽、至少一種具有抗HCV活性之其他化合物及醫藥載劑之組合物。在第二實施例中，該等其他化合物中之至少一者係干擾素或利巴韋林。在第三實施例中，干擾素係選自干擾素α 2B、聚乙二醇化干擾素α、複合干擾素、干擾素α 2A及類淋巴母細胞干擾素τ。在第三態樣之第四實施例中，本揭示內容提供包含式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽、至少一種具有抗HCV活性之其他化合物及醫藥載劑之組合物，其中該等其他化合物中之至少一者係選自介白素2、介白素6、介白素12、咪喹莫特(Imiquimod)、利巴韋林、肉苷5'-單磷酸去氫酶抑制劑、金剛烷胺及金剛烷乙胺。在第三態樣之第五實施例中，本揭示內容提供包含式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽、至少一種具有抗HCV活性之其他化合物及醫藥載劑之組合物，其中該等其他化合物中之至少一者有效抑制選自以下之標靶之功能用於治療HCV感染：HCV金屬蛋白酶、HCV絲胺酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV進入、HCV組裝、HCV釋出、HCV NS5A蛋白及 IMPDH。

在第四態樣中，本揭示內容提供治療患者之HCV感染之方法，其包含向該患者投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。在第四態樣之第一實施例中，該方法進一步包含在式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽之前、之後或與其同時投與至少一種具有抗HCV活性之其他化合物。在第四態樣之第二實施例中，該等其他化合物中之至少一者係干擾素或利巴韋林。在第三實施例中，干擾素係選自干擾素α 2B、聚乙二醇化干擾素α、複合干擾素、干擾素α 2A及類淋巴母細胞干擾素τ。在第四態樣之第四實施例中，本揭示內容提供治療患者之HCV感染之方法，其包含向該患者投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽以及在該式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽之前、之後或與其同時之至少一種具有抗HCV活性之其他化合物，其中該等其他化合物中之至少一者係選自介白素2、介白素6、介白素12、咪喹莫特、利巴韋林、肉苷5'-單磷酸去氫酶抑制劑、金剛烷胺及金剛烷乙胺。在第四態樣之第五實施例中，本揭示內容提供治療患者之HCV感染之方法，其包含向該患者投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽以及在該式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽之前、之後或與其同時之至少一種具有抗HCV活性之其他化合物，其中該等其他化合物中之至少一者有效抑制選自以下之標靶之功能用於治療HCV感染：HCV金屬蛋白酶、HCV絲胺酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV進入、HCV組裝、HCV釋出、HCV NS5A蛋白及IMPDH。

本揭示內容之其他態樣可包括本文所揭示實施例之適宜組合。

又一些態樣及實施例可參見本文所提供之說明。

本文中本揭示內容之說明應符合化學鍵結之定律及原則加以解釋。在一些情況下，可能需要移除氫原子以在任一給定位置處容納取代基。

應理解，本揭示內容所涵蓋之化合物係彼等對於作為醫藥劑之用途適宜地穩定者。

分子中特定位置處之任一取代基或變量的定義意欲獨立於其在該分子中其他處之定義。例如，當n係2時，兩個R¹基團中之每一者可相同或不同。

所有專利、專利申請案及本說明書中所引用之參考文獻均以引用的方式全文併入本文中。在不一致之情形下，將以本揭示內容(包括定義)為準。

除非上下文另外明確說明，否則本文所用單數形式「一」(「a」、「an」)及「該」包括複數個指示物。

本文所用術語「烯基」係指含有至少一個碳-碳雙鍵之兩個或六個碳原子之直鏈或具支鏈基團。

本文所用術語「烯基氧基」係指藉助氧原子附接至母體分子部分之烯基。

本文所用術語「烷氧基」係指藉助氧原子附接至母體分子部分之烷基。

本文所用術語「烷氧基烷氧基」係指藉助氧原子附接至母體分子部分之烷氧基烷基。

本文所用術語「烷氧基烷氧基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之烷氧基烷氧基。

本文所用術語「烷氧基烷基」係指經一個、兩個或三個烷氧基取代之烷基。

本文所用術語「烷氧基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之烷氧基。

本文所用術語「烷基」係指衍生自含有1至10個碳原子之直鏈或具支鏈飽和烴之基團。

本文所用術語「烷基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之烷基。

本文所用術語「烷基胺基」係指-NHR^q，其中R^q係烷基。

本文所用術語「烷基胺基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之烷基胺基。

本文所用術語「烷基磺醯基」係指藉助磺醯基附接至母體分子部分之烷基。

本文所用術語「羰基」係指-C(O)-。

本文所用術語「羧醯胺基」係指-C(O)NR^xR^y，其中R^x及R^y係獨立地選自氫及烷基。

本文所用術語「羧基」係指-CO₂H。

本文所用術語「羧基烷氧基」係指藉助氧原子附接至母體分子部分之羧基烷基。

本文所用術語「羧基烷基」係指經一個、兩個或三個羧基取代之烷基。

本文所用術語「氰基」係指-CN。

本文所用術語「環烷基」係指具有3至7個碳原子及0個雜原子之飽和單環或二環烴環系統。環烷基之代表性實例包括(但不限於)環丙基、環丁基及環戊基。

本文所用術語「環烷基烷氧基」係指藉助氧原子附接至母體分子部分之(環烷基)烷基。

本文所用術語「環烷基烷氧基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之環烷基烷氧基。

本文所用術語「(環烷基)烷基」係指經一個、兩個或三個環烷基取代之烷基。

本文所用術語「環烷基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之環烷基。

本文所用術語「環烷基氧基」係指藉助氧原子附接至母體分子部分之環烷基。

本文所用術語「環烷基氧基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之環烷基氧基。

本文所用術語「氘代烷氧基」係指烷氧基，其中氫原子中之至少一者係經氘原子替代。

本文所用術語「氘代烷氧基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之氘代烷氧基。

本文所用術語「氘代鹵代烷氧基」係指鹵代烷氧基，其中氫原子中之至少一者係由氘原子替代。

本文所用術語「氘代鹵代烷氧基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之氘代鹵代烷氧基。

本文所用術語「二烷基胺基」係指-NR^pR^q，其中R^p及R^q係烷基。該等烷基可相同或不同。

本文所用術語「二烷基胺基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之二烷基胺基。

本文所用術語「二烷基胺基羰基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之二烷基胺基羰基。

本文所用術語「鹵基」及「鹵素」係指F、Cl、Br及I。

本文所用術語「鹵代烷氧基」係指藉助氧原子附接至母體分子部分之鹵代烷基。

本文所用術語「鹵代烷氧基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之鹵代烷氧基。

本文所用術語「鹵代烷基」係指經一個、兩個、三個或四個鹵素原子取代之烷基。

本文所用術語「鹵代烷基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之鹵代烷基。

本文所用術語「鹵代烷基胺基」係指-NHR^q，其中R^q係鹵代烷基。

本文所用術語「鹵代烷基胺基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之鹵代烷基胺基。

本文所用術語「雜環基」係指含有一個、兩個或三個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子之五員、六員或七員環。五員環具有0個至2個雙鍵，且六員及七員環具有0個至3個雙鍵。術語「雜環基」亦包括其中雜環基環係稠合至苯基、單環環烯基、單環環烷基或另一單環雜環基之二環基團；及其中二環系統係稠合至苯基、單環環烯基、單環環烷基或另一單環雜環基之三環基團。本發明之雜環基可藉助基團中之碳原子或氮原子附接至母體分子部分。雜環基之實例包括(但不限於)苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、吲哚啉基、吲哚基、異噻唑基、異噁唑基、嗎啉基、噁唑基、六氫吡嗪基、六氫吡啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯啶基、吡咯并吡啶基、吡咯基、噻唑基、噻吩基及硫嗎啉基。

本文所用術語「雜環基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之雜環基烷基。

本文所用術語「雜環基氧基」係指藉助氧原子附接至母體分子部分之雜環基。

本文所用術語「雜環基氧基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之雜環基氧基。

本文所用術語「羥基」係指-OH。

本文所用術語「羥基烷基」係指經一個、兩個或三個羥基取代之烷基。

本文所用術語「苯基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之苯基。

本文所用術語「苯基氧基」係指藉助氧原子附接至母體分子部分之苯基。

本文所用術語「苯基氧基羰基」係指藉助羰基附接至母體分子部分之苯基氧基。

本文所用術語「磺醯基」係指-SO₂-。

本揭示內容之化合物可以醫藥上可接受之鹽形式存在。本文所用術語「醫藥上可接受之鹽」代表本揭示內容化合物之鹽或兩性離子形式，其為水溶性或油溶性或可分散，其在合理醫學判斷範圍內適於與患者之組織接觸使用而無過度毒性、刺激性、過敏反應或其他問題或併發症，與合理益處/風險比相稱，且對其預期用途有效。該等鹽可在化合物之最終分離及純化期間或單獨藉由使適宜鹼性官能團與適宜酸反應製得。代表性酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡萄糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、已酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、均三甲苯磺酸鹽、甲烷磺酸鹽、伸萘基磺酸鹽、菸酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、三氯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、磷酸鹽、麩胺酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽及十一烷酸鹽。可用於形成醫藥上可接受之加成鹽之酸的實例包括諸如氫氯酸、氫溴酸、硫酸及磷酸等無機酸及諸如草酸、馬來酸、琥珀酸及檸檬酸等有機酸。

鹼加成鹽可在化合物之最終分離及純化期間藉由使酸性基團與適宜鹼(例如金屬陽離子之氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)或與氨或有機一級、二級或三級胺反應製得。醫藥上可接受之鹽的陽離子包括鋰、鈉、鉀、鈣、鎂及鋁以及無毒性四級胺陽離子，例如銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基六氫吡啶、N-甲基嗎啉、二環己基胺、普魯卡因(procaine)、二苄基胺、N,N-二苄基苯乙基胺及N,N'-二苄基乙二胺。可用於形成鹼加成鹽之其他代表性有機胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、六氫吡啶及六氫吡嗪。

本文所用術語「抗HCV活性」意指該化合物可有效治療HCV病毒。

術語「本揭示內容之化合物」及等效表述意欲涵蓋式(I)化合物及醫藥上可接受之鏡像異構體、非鏡像異構體及其鹽。類似地，若上下文允許，則提及中間物之內容意欲涵蓋其鹽。

術語「患者」包括人類及其他哺乳動物二者。

術語「醫藥組合物」意指包含本揭示內容化合物與至少一種其他醫藥載劑(即佐劑、賦形劑或媒劑)組合之組合物，該等載劑係例如稀釋劑、防腐劑、填充劑、流量調節劑、崩解劑、潤濕劑、乳化劑、懸浮劑、甜味劑、矯味劑、香化劑、抗細菌劑、抗真菌劑、潤滑劑及分配劑，此取決於投與模式及劑型之性質。例如，可使用Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Company,Easton,PA(1999)中所列示之成份。

本文所採用片語「醫藥上可接受之」係指彼等如下化合物、材料、組合物及/或劑型：其在合理醫學判斷範圍內適於與患者之組織接觸使用而無過度毒性、刺激性、過敏反應或其他問題或併發症，與合理風險/益處比相稱。

術語「治療有效量」意指每一足以顯示有意義患者益處(例如病毒負荷持續降低)之活性組份的總量。當應用於單獨投與之個別活性成份時，該術語係指該單獨成份。當應用於組合時，該術語係指產生治療效應之活性成份之合併量，無論是組合、連續還是同時投與。

術語「治療」(「treat」及「treating」)係指：(i)預防可易患但尚未診斷為患有疾病、病症及/或病狀之患者出現該疾病、病症或病狀；(ii)抑制該疾病、病症或病狀，即遏製其發展；及/或(iii)緩解該疾病、病症或病狀，即使該疾病、病症及/或病狀消退。

當用於命名本揭示內容化合物時，本文所用名稱P1'、P1、P2、P2*、P3及P4映射相對於天然肽裂解受質之結合蛋白酶抑制劑之胺基酸殘基結合之相對位置。在天然受質中裂解發生在P1與P1'之間，其中無撇號(nonprime)位置指定胺基酸自肽天然裂解位點之C-末端起始延伸至N端；然而，帶撇號位置自裂解位點名稱之N-末端開始且延伸至C-端。例如，P1'係指遠離裂解位點之C端之右手端之第一個位置(即N端第一個位置)；然而P1係自C端裂解位點之右手側開始編號，P2：自C端之第二位置等)。(參見Berger A.及Schechter I.,Transactions of the Royal Society London叢書(1970),B257,249-264]。

本揭示內容之化合物中存在不對稱中心。例如，該等化合物可包括下式之P1環丙基成分其中C₁及C₂各自代表環丙基環之位置1及2處之不對稱碳原子。

應理解，本揭示內容涵蓋所有立體化學形式或其混合物，其具有抑制HCV蛋白酶之能力。

本揭示內容之某些化合物亦可以不同穩定的構象形式存在，該等形式可分離。由於繞不對稱單鍵之受限旋轉、例如由於位阻或環應變而存在之扭轉不對稱可允許分離不同構象異構體。本揭示內容包括該等化合物之每一構象異構體及其混合物。

本揭示內容之某些化合物可以兩性離子形式存在且本揭示內容包括該等化合物之每一兩性離子形式及其混合物。

當可作為粗化學品投與治療有效量之式(I)化合物以及其醫藥上可接受之鹽用於療法中時，可呈遞作為醫藥組合物之活性成份。因此，本揭示內容進一步提供醫藥組合物，其包括治療有效量之式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽及一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽係如上文所述。載劑、稀釋劑或賦形劑在與調配物之其他成份相容且對其接受者無害意義上必須為「可接受的」。根據本揭示內容之另一態樣，亦提供用於製備醫藥調配物之方法，其包括將式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑混合。

可以每單位劑量含有預定量之活性成份的單位劑型呈遞醫藥調配物。本揭示內容化合物之介於約0.01毫克/公斤(「mg/kg」)體重/天與約150毫克/公斤體重/天之間、較佳介於約0.05 mg/kg體重/天與約100 mg/kg體重/天之間之劑量量係用於預防及治療HCV介導疾病之單一療法的典型量。通常，本揭示內容之醫藥組合物將投與約1次/天至約5次/天，或另一選擇為以連續輸注形式投與。該投與可用作慢性或急性療法。可與載劑材料組合以產生單一劑型之活性成份之量將視正治療之病狀、該病狀之嚴重性、投與時間、投與途徑、所採用化合物之排泄速度、治療之持續時間及患者之年齡、性別、重量及病狀而變。較佳單位劑量調配物係彼等含有上文所列舉之日劑量或分劑量或其適當分數之活性成份者。通常，開始時用實質上小於該化合物之最佳劑量之小劑量治療。其後，以小增量增加劑量，直至達到該等情況下之最佳效應。一般而言，最期望以通常將提供抗病毒有效結果、而不產生任何傷害或有害副作用之濃度位準投與化合物。

當本揭示內容之組合物包含本揭示內容化合物與一或多種其他治療及/或預防劑之組合，該化合物及該其他藥劑均可以小於或等於單一療法方案中所通常投與劑量之劑量存在。本揭示內容之組合物可(例如)以單片及/或雙/多層錠劑之形式與一或多種其他治療或預防劑共調配，或可與治療或預防劑分別投與。

醫藥調配物可適於藉由任一適當途徑投與，例如藉由經口(包括經頰或舌下)、直腸、鼻、局部(包括經頰、舌下或經皮)、陰道或非經腸(包括皮下、皮內、肌內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、病灶內、靜脈內或真皮內注射或輸注)途徑。該等調配物可藉由藥學技術內已知之任一方法(例如)藉由使活性成份與載劑或賦形劑結合來製得。

適於經口投與之醫藥調配物可作為諸如膠囊或錠劑等離散單位；粉劑或顆粒；存於水性或非水性液體中之溶液或懸浮液；可食用發泡體或發泡物；或水中油型液體乳液或油中水型乳液呈遞。

例如，對於以錠劑或膠囊形式經口投與，活性藥物組份可與口服無毒性之醫藥上可接受之惰性載劑(例如乙醇、甘油、水及諸如此類)組合。粉劑係藉由將化合物粉碎至適宜精細尺寸並與類似粉碎之醫藥載劑(例如可食用碳水化合物，例如澱粉或甘露醇)混合製得。亦可存在矯味劑、防腐劑、分散劑及著色劑。

膠囊係藉由製備如上文所述粉末混合物並填充成型明膠外殼來製得。可在填充操作之前向粉末混合物中添加助流劑及潤滑劑，例如膠質二氧化矽、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇。亦可添加崩解劑或增溶劑(例如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉)以在攝入膠囊時改良醫藥之可利用性。

此外，若期望或需要，亦可將適宜黏合劑、潤滑劑、崩解劑及著色劑納入混合物中。適宜黏合劑包括澱粉、明膠、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然及合成膠(例如阿拉伯膠(acacia)、黃蓍膠(tragacanth)或海藻酸鈉)、羧甲基纖維素、聚乙二醇及諸如此類。該等劑型中使用之潤滑劑包括油酸鈉、氯化鈉及諸如此類。崩解劑包括(但不限於)澱粉、甲基纖維素、瓊脂、皂白石、三仙膠(xanthan gum)及諸如此類。錠劑係藉由(例如)製備粉末混合物、製粒或擊壓、添加潤滑劑及崩解劑並壓製成錠劑來調配。粉末混合物係藉由將適宜粉碎之化合物與上文所述稀釋劑或鹼及視情況黏合劑(例如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯啶酮)、溶液阻滯劑(例如石蠟)、再吸收加速劑(例如四級鹽)及/或吸收劑(例如皂白石、高嶺土(kaolin)或磷酸二鈣)混合製得。粉末混合物可藉由用黏合劑(例如糖漿、澱粉膏糊、阿卡迪亞(acadia)黏液或纖維素或聚合物材料之溶液)潤濕並藉助網篩壓縮來製粒。作為製粒之替代方案，可使粉末混合物通過錠劑機且結果係破碎為顆粒之不完美成形擊壓物。可藉助添加硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油來潤滑顆粒，以防止黏至錠劑形成模具。然後將經潤滑混合物壓製成錠劑。亦可將本揭示內容組合物與自由流動惰性載劑組合並直接壓製成錠劑而不經歷製粒或擊壓步驟。可提供由蟲膠之密封殼、糖或聚合物材料之塗層及蠟之拋光塗層組成的澄清或不透明保護塗層。可向該等塗層添加染料以區分不同單位劑量。

諸如溶液、糖漿及酏劑等口服液可製成劑量單位形式，以使給定量含有預定量之化合物。糖漿可藉由將化合物溶解於經適當調味之水溶液中製得，而酏劑係藉助使用無毒性媒劑製得。亦可添加增溶劑及乳化劑(諸如乙氧基化異硬脂醇及聚氧乙烯山梨糖醇醚)、防腐劑、矯味添加劑(諸如薄荷油或天然甜味劑或糖精或其他人工甜味劑及諸如此類)。

若適當，則供經口投與之劑量單位調配物可經微囊化。調配物亦可藉由(例如)在聚合物、蠟或諸如此類中塗佈或包埋微粒材料來製備以延長或持續釋放。

式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽亦可以脂質體遞送系統形式(例如小單層囊泡、大單層囊泡及多層囊泡)投與。脂質體可自各種磷脂形成，例如膽固醇、硬脂胺、或磷脂醯膽鹼。

式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽亦可藉由使用單株抗體作為偶合化合物分子之個別載劑遞送。該等化合物亦可與作為可靶向藥物載劑之可溶性聚合物偶合。該等聚合物可包括聚乙烯基吡咯啶酮、哌喃共聚物、聚羥丙基甲基丙烯醯胺苯酚、聚羥乙基天冬醯胺苯酚或經棕櫚醯殘基取代之聚環氧乙烷聚離胺酸。此外，該等化合物可與一類可用於達成藥物受控釋放之生物可降解聚合物偶合，例如，聚乳酸、聚ε己內酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫哌喃、聚氰基丙烯酸酯及水凝膠之交聯或兩親性嵌段共聚物。

適於經皮投與之醫藥調配物可作為意欲保持與接受者表皮長期密切接觸之離散貼片呈遞。例如，活性成份可藉由離子透入法自貼片遞送，如在Pharmaceutical Research,3(6),318(1986)中所概述。

適於局部投與之醫藥調配物可調配成軟膏、乳膏、懸浮液、洗劑、粉劑、溶液、膏糊、凝膠、噴霧、氣溶膠或油狀物。

對於治療眼睛或其他外部組織(例如嘴及皮膚)，該等調配物較佳作為局部軟膏或乳膏施用。在調配於軟膏中時，活性成份可與石蠟或水混溶軟膏基質一起使用。另一選擇為，可用水中油型乳膏基質或油中水型基質將活性成份調配於乳膏中。

適於局部投與眼睛之醫藥調配物包括點眼劑，其中將活性成份溶解或懸浮於適宜載劑、尤其水性溶劑中。

適於局部投與口中之醫藥調配物包括菱形錠劑、軟錠及漱口水。

適於直腸投與之醫藥調配物可作為栓劑或灌腸劑呈遞。

適於經鼻投與之醫藥調配物(其中載劑係固體)包括粗粉，其以鼻吸入方式投與，即，藉由經鼻道自保持靠近鼻子處之含粉末容器快速吸入。適用於作為鼻噴霧或滴鼻劑投與之調配物(其中載劑係液體)包括活性成份之水溶液或油溶液。

適於藉由吸入投與之醫藥調配物包括精細粒子粉塵或薄霧，其可藉助各種類型之經計量劑量加壓氣溶膠、霧化器或吹入器生成。

適於陰道投與之醫藥調配物可作為陰道栓劑、棉塞、乳膏、凝膠、膏糊、發泡體或噴霧調配物呈遞。

適於非經腸投與之醫藥調配物包括水性及非水性無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及使得調配物與預期接受者之血液等滲的溶質；及水性和非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑及增稠劑。該等調配物可以單位劑量或多劑量容器(例如，密封安瓿及小瓶)呈遞，且可儲存於冷凍乾燥(凍乾)條件下，僅需在即將使用前添加無菌液體載劑(例如，注射用水)。可自無菌粉劑、顆粒及錠劑製備臨時注射溶液及懸浮液。

應理解，考慮到所述調配物之類型，除上文特別提及之成份外，調配物亦可包括業內習用之其他試劑，例如彼等適於經口投與者可包括矯味劑。

下表1列示可與本揭示內容化合物一起投與之化合物之一些說明性實例。本揭示內容之化合物在組合療法中可與其他抗HCV活性化合物聯合或分別投與或藉由將該等化合物組合成組合物投與。

本揭示內容化合物亦可用作實驗室試劑。化合物可有助於提供用於病毒複製分析設計、動物分析系統驗證及結構生物學研究之研究工具，以進一步增加關於HCV疾病機制之知識。此外，本揭示內容化合物可用於(例如)藉由競爭性抑制確立或確定其他抗病毒化合物之結合位點。

本揭示內容化合物亦可用於治療或預防材料之病毒污染，且因此降低與該等材料接觸之實驗室或醫療人員或患者之病毒感染風險，例如血液、組織、外科儀器及外套、實驗室儀器及外套及血液收集或輸血裝置及材料。

本揭示內容意欲涵蓋在藉由包括以下過程之合成過程或代謝過程製備時具有式(I)之化合物：彼等發生在人類或動物身體內(活體內)者或發生在活體外之過程。

現將結合某些實施例闡述本揭示內容，該等實施例並不意欲限制其範疇。相反，本揭示內容涵蓋如申請專利範圍之範疇內可包括之所有替代形式、改良形式及等效物。因此，以下實例(其包括具體實施例)將闡釋本揭示內容之一種實踐，應理解，該等實例係出於闡釋某些實施例之目的且經呈遞以提供據信最有用且容易理解其程序及概念性態樣之說明者。

尤其以下圖解說明性反應圖及實例中所包括之本揭示內容中所用之縮寫為熟習此項技術者所熟知。所用之一些縮寫係如下所述：Et₂O用於二乙基醚；h或hr或hrs用於小時；min或mins用於分鐘；THF用於四氫呋喃；TBME用於甲基第三丁基醚；DMAP用於N,N-二甲基胺基吡啶；LiHMDS用於六甲基二矽胺化鋰；DCM用於二氯甲烷；DIPEA用於二異丙基乙胺；Boc用於第三丁氧基羰基；石油醚(pet ether)用於石油醚(petroleum ether)；DMSO用於二甲亞碸；rt或RT或Rt用於室溫或滯留時間(上下文將有所指示)；IPA用於異丙基醇；t-BuO用於第三丁氧基；HATU用於六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓；EtOAc用於乙酸乙酯；TMS用於三甲基甲矽烷基；DPPA用於二苯基磷醯基疊氮化物；Me用於甲基；OAc用於乙酸酯；n-Bu用於正丁基；DAST用於三氟化(二乙基胺基)硫；且TFA用於三氟乙酸。

用於合成本揭示內容化合物之起始材料為熟習此項技術者已知且可容易地製造或市面有售。

下文闡述之以下方法經提供用於闡釋性目的且並不意欲限制申請專利範圍之範疇。應認識到，可能需要製備此一化合物，其中使用習用保護基團保護官能團，隨後移除該保護基團以提供本揭示內容化合物。熟習此項技術者已知關於根據本揭示內容使用保護基團之詳細內容。

步驟1：3-甲基戊-4-烯酸乙酯之製備

在室溫下向存於1,1,1-三乙氧基乙烷(890 mL，4854 mmol)中之(E)-丁-2-烯-1-醇(50 g，693 mmol)溶液中添加乙酸(5 g，83 mmol)。將反應加熱至125℃ 4 h。藉由常規蒸餾蒸餾副產物乙醇，從而得到呈無色油狀物之粗化合物3-甲基戊-4烯酸乙酯(70 g，71.0%)。該產物未經進一步純化即用於下一步驟中；¹H NMR(DMSO-d₆)δ ppm 5.82-5.73(m,1H),5.03-4.92(m,2H),4.08-4.02(m,2H),2.50(m,1H),2.31-2.26(m,2H),1.17(t,J=8 Hz,3H),1.00(d,J=8 Hz,3H)。

步驟2：3-甲基戊-4-烯酸之製備

在室溫下向存於甲醇(500 mL)中之3-甲基戊-4烯酸乙酯(70 g，492 mmol)溶液中添加KOH(41.4 g，738 mmol)。加熱反應物質以回流18 h。在減壓下蒸餾反應物質。將醚(750 ml)添加至殘餘物中，用碳酸氫鈉飽和溶液(350 mL×3)洗滌。使用濃HCl(250 mL)使合併之水層酸化，用DCM(500 mL×3)萃取。將合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥並在減壓下濃縮，從而得到呈褐色油狀物之粗化合物3-甲基戊-4-烯酸(52 g，93%)；¹H NMR(DMSO-d₆)δ ppm 12.04(s,br,1H),5.84-5.75(m,1H),5.03-4.92(m,2H),2.56-2.50(m,1H),2.28-2.22(m,2H),1.00(d,J=8 Hz,3H)。

步驟3：3-甲基戊-4-烯-1-醇之製備

在0℃下向存於150 mL之乾Et₂O中之鋁氫化鋰(6.03 g，0.159 mol)懸浮液中逐滴添加存於100 mL之乾Et₂O中之3-甲基戊-4-烯酸(17.4 g，0.122 mol)溶液。添加完成後，使反應升溫至室溫並攪拌2 h。將反應物質傾倒至1 L燒杯中。在充分攪拌下經30 min時間小心添加水(6.03 mL)及15% NaOH(6.03 mL)。將所分離之白色固體藉由過濾移除並用Et₂O充分洗滌。將合併之濾液乾燥並在大氣壓下藉由蒸餾濃縮。蒸餾殘餘物，從而得到期望化合物9.04 g(74%)；¹H NMR(CDCl₃)δ ppm 5.65(m,1H),4.90(m,2H),3.55(m,2H),3.30(m,1H),2.25(m,1H),1.50(q,J=7 Hz,2H),1.00(d,J=7 Hz,3H)。

步驟4：5-溴-3-甲基戊-1-烯之製備

在0℃下向攪拌之存於100 mL之二氯甲烷中之4.504 g(44.97 mmol)之3-甲基戊-4-烯-1-醇溶液中依序添加3.8 mL(49.1 mmol)之甲磺醯氯及6.91 mL(49.6 mmol)之三乙胺，且在0℃下將所得混合物攪拌15 min。然後將反應混合物傾倒至100 mL之飽和水性NaHCO₃中，且將所得混合物劇烈攪拌10 min。將有機相分離，乾燥(Na₂SO₄)，並然後在減壓下濃縮，從而得到粗甲磺酸鹽化合物。將粗化合物溶解於130 mL之乾THF中，並向該溶液中添加5.87 g(67.6 mmol)之無水溴化鋰。將所得混合物回流4 h。將反應物質冷卻至室溫並用300 mL之戊烷稀釋。用兩個100-mL份之飽和NaHCO₃及五個100-mL份之水洗滌有機相且然後乾燥(Na₂SO₄)。在大氣壓下藉助30-cm韋氏管柱(Vigreux column)藉由蒸餾移除溶劑。蒸發蒸餾殘餘物(70℃,80 mmHg)，從而得到6.28 g(86%)之溴化物。¹H NMR(CDCl₃)δ ppm 1.01(d,J=5 Hz,3H,),1.80(dt,J=J'=5 Hz,2H,),2.35(m,J=5 Hz,1H),3.36(t,J=5 Hz,2H),5.02(m,2H),5.64(m,1H)。

步驟5：(2R)-6-甲基辛-7-烯-2-醇之製備

將鎂屑(1.3 g，55.2 mmol)懸浮於乾THF(50 mL)中，並在室溫下向該混合物中添加少許碘(20 mg)。向此反應物質中添加存於THF(200 mL)中之5-溴-3-甲基戊-1-烯(6 g，36.8 mmol)溶液。利用熱氣槍加熱反應物質以起始該反應。當判斷反應完全時，在-78℃下將該溶液導入存於THF(50 mL)中之(S)-環氧丙烷(3.21 g，55.2 mmol)及溴化銅(0.528 g，3.68 mmol)溶液中。使反應物質回至室溫並攪拌過夜。用氯化銨飽和溶液淬滅反應物質並用二乙基醚(200 mL×3)萃取。將合併之有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在室溫下濃縮，從而得到粗化合物。藉由管柱層析法(矽膠，存於石油醚中之10% TBME)純化粗化合物，從而得到呈油性液體之(2R)-6-甲基辛-7-烯-2-醇(12.4 g，92%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 5.82-5.69(m,1H),4.98-4.91(m,2H),4.27-4.26(m,1H),3.65-3.39(m,1H),2.15-1.98(m,1H),1.36-1.19(m,5H),1.18-1.1(m,1H),1.08-0.95(m,5H),0.89-0.78(m,1H)。

步驟6：(2R)-4-甲基苯磺酸6-甲基辛-7-烯-2-基酯之製備

向存於吡啶(16 mL)中之(2R)-6-甲基辛-7-烯-2-醇(12 g，84 mmol)溶液中添加DMAP(0.51 g，4.22 mmol)，並將溶液攪拌10 min。在0℃下將對甲苯磺醯氯(18.5 g，97 mmol)添加至反應物質中。使反應物質回至室溫並攪拌過夜。在減壓下移除吡啶，並用乙酸乙酯(200 mL)稀釋殘餘物。將有機溶液用1.5 N HCl水溶液、碳酸氫鹽飽和溶液、鹽水溶液洗滌，經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下濃縮，從而得到粗化合物(14.5 g，32%)。粗化合物未經進一步純化即用於下一步驟。

步驟7：(3R)-2-(二苯基亞甲基胺基)-3,7二甲基壬-8烯酸乙酯之製備

在0℃下向存於甲苯(120 mL)中之(2R)-4-甲基苯磺酸6-甲基辛-7-烯-2-基酯(15 g，50.6 mmol)及N-(二苯基亞甲基)甘胺酸乙酯(13.53 g，50.6 mmol)溶液中添加LiHMDS(60.7 mL，60.7 mmol，存於THF中之1 M溶液)。使反應物質回至室溫，在110℃下加熱2 h。將反應物質冷卻至室溫，用水淬滅並用乙酸乙酯(200 mL×3)萃取。將合併之有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下濃縮，從而得到粗化合物(14.5 g)。粗化合物未經進一步純化即用於下一步驟。MS：MS m/z 392.1(M⁺+1)。

步驟8：(3R)-2-胺基-3,7-二甲基壬-8烯酸乙酯之製備

向存於二乙基醚(25 mL)中之(3R)-2-(二苯基亞甲基胺基)-3,7二甲基壬-8烯酸乙酯(14.5 g，37 mmol)溶液中添加 1.5 N HCl水溶液(125 mL)，並在室溫下將反應物質攪拌過夜。用二乙基醚(100 mL)洗滌反應物質。使用碳酸氫鈉飽和溶液使水溶液鹼化並用乙酸乙酯(100 mL×3)萃取。將合併之有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下濃縮，從而得到粗化合物(2.1 g，23%)。粗化合物未經進一步純化即用於下一步驟。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 5.85-5.60(m,1H),4.98-4.85(dd,J=1.6,2.8 Hz,2H),4.10-4.06(m,2H),3.15-3.14(m,1H),2.15-2.02(m,1H),1.94-1.75(m,3H),1.32-1.17(m,9H),0.95-0.93(m,3H),0.84-0.74(m,3H)。MS：MS m/z 227.7(M⁺+1)。

步驟9：(3R)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3,7-二甲基壬-8烯酸乙酯之製備

在室溫下向存於DCM(20 mL)中之(3R)-2-胺基-3,7-二甲基壬-8烯酸乙酯(2.0 g，8.8 mmol)溶液中添加DIPEA(1.7 g，13.2 mmol)，隨後添加(Boc)₂O(2.4 g，11.4 mmol)。在室溫下將反應物質攪拌過夜。將反應物質用DCM稀釋並用水洗滌。將有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下濃縮，從而得到粗化合物。藉由管柱層析法(矽膠，存於石油醚中之20%乙酸乙酯)純化粗化合物，從而得到2.7 g(84%)呈油性液體之(3R)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3,7-二甲基壬-8烯酸乙酯。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 5.85-5.60(m, 1H),4.98-4.85(dd,J=1.6,2.8 Hz,2H),4.10-4.06(m,2H),2.15-2.02(m,1H),1.55-1.44(m,8H),1.39-1.30(s,9H),1.27-1.21(m,4H),0.95-0.93(m,3H),0.84-0.74(m,3H)。

步驟10：(3R)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3,7-二甲基壬-8-烯酸之製備

在室溫下向存於THF/水(40 mL，1：1)中之(3R)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3,7-二甲基壬-8烯酸乙酯(2.7 g，8.25 mmol)溶液中添加甲醇(20 mL)，隨後添加LiOH(0.987 g，41.2 mmole)。在室溫下將反應物質攪拌過夜。在減壓下蒸發溶劑，並用水(100 mL)稀釋殘餘物。用1.5 N HCl水溶液使水溶液酸化至pH~3，並用乙酸乙酯(100 mL×3)萃取。將合併之有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下濃縮，從而得到粗化合物。藉由管柱層析法(矽膠，存於DCM中之3%甲醇)純化粗化合物，從而得到2.1 g(85%)呈膠黏液體之期望化合物。¹H NMR(400 MHz,DMSO-D₆)：δ ppm 12.2-12.02(bs,1H),6.92-6.85(m,1H)5.72-5.66(m,1H),4.98-4.85(dd,J=1.6,2.8 Hz,2H),4.03-3.95(m,1H),2,58-2.56(m,1H)2.15-2.02(m,1H),1.45-1.36(m,10H),1.27-1.21(m,5H),0.95-0.93(m,3H),0.84-0.74(m,3H)。

步驟1：(2S,4R)-1-((2S,3R)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3,7-二甲基壬-8-烯醯基)-4-羥基吡咯啶-2-甲酸甲酯之製備

在0℃下向存於DCM(50 mL)中之(3R)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3,7-二甲基壬-8-烯酸(6.5 g，21.7 mmol)、L-4-羥基脯胺酸甲酯鹽酸鹽(3.9 g，21.7 mmol)及六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓(8.36 g，21.7 mmol)漿液中，逐滴添加N,N-二異丙基乙胺(11.5 mL，66.6 mmol)。在室溫下將所得淺黃色混合物攪拌過夜，用1 M HCl(35 ml)及鹽水洗滌，經Na₂SO₄乾燥，過濾，在真空中濃縮。藉由習用管柱層析法(60 g至120 g矽膠管柱)純化殘餘油狀物(12 g)，利用4%至8% IPA-己烷溶析，從而提供呈白色發泡體之期望產物(2S,4R)-1-((2S,3R)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3,7-二甲基壬-8-烯醯基)-4-羥基吡咯啶-2-甲酸甲酯(9a，4.3 g，46%產率)及呈黏性油狀物之不期望非鏡像異構體(2S,4R)-1-((2R,3R)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3,7-二甲基壬-8-烯醯基)-4-羥基吡咯啶-2-甲酸甲酯(9b，1.9 g，20%產率)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 5.73-5.64(m,1H),5.19-5.17(m,1H),4.97-4.88(m,2H),4.70-4.66(t,J=8.4 Hz,1H),4.53(bs,1H),4.29-4.25(m,1H),3.99-3.96(d,J=10.8 Hz,3H),3.72(s,3H),3.70-3.66(m,1H),2.34-2.11(m,1H),2.10-2.00(m,2H),1.85-1.81(m,1H),1.49-1.41(m,9H),1.39-1.14(m,3H),0.98-0.86(m,7H)MS：MS m/z 427.2(M⁺+1)。

步驟2：(2S,4R)-1-((2S,3R)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3,7-二甲基壬-8-烯醯基)-4-羥基吡咯啶-2-甲酸之製備

在室溫下向存於THF/水(30 mL，1：1)中之(2S,4R)-1-((2S,3R)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3,7-二甲基壬-8-烯醯基)-4-羥基吡咯啶-2-甲酸甲酯(4.3 g，10 mmol)溶液中添加甲醇(10 mL)，隨後添加LiOH(1.3 g，0.030莫耳)。在室溫下將反應物質攪拌過夜。在減壓下蒸發溶劑，並用水(100 mL)稀釋殘餘物。用1.5 N HCl水溶液使水溶液酸化至pH~3，並用乙酸乙酯(100 mL×3)萃取。將合併之有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下濃縮，從而得到呈白色固體之期望產物(2S,4R)-1-((2S,3R)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3,7-二甲基壬-8-烯醯基)-4-羥基吡咯啶-2-甲酸(3.2 g，78%產率)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 5.70-5.61(m,1H),5.14-5.12(d,J=8.8Hz,1H),4.96-4.88(m,2H),4.82-4.78(t,J=8.4 Hz,1H),4.52(bs,1H),4.27-4.23(m,1H),3.57-3.53(m,3H),2.48-2.42(m,1H),2.33-2.28(m,1H),1.88-1.82(m,2H),1.45-1.42(s,9H),1.29-1.21(m,3H),0.98-0.93(m,7H)MS：MS m/z 411.2(M⁺+1)。

步驟3：(2S,4R)-1-((2S,3R)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3,7-二甲基壬-8-烯醯基)-4-(4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)吡咯啶-2-甲酸之製備

在室溫下在氮氣氣氛下向存於DMSO中之(2S,4R)-1-((3R)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3,7-二甲基壬-8-烯醯基)- 4-羥基吡咯啶-2-甲酸(1.5 g，3.6 mmol)溶液中添加1-氯-4-甲氧基異喹啉(840 mg，4.4 mmol)，隨後添加第三BuOK(存於THF中之1 M溶液，18 mL)。在室溫下將反應物質攪拌4 h。將反應物質用檸檬酸水溶液淬滅並用乙酸乙酯萃取。將合併之有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下濃縮，從而得到粗化合物。藉由combiflash純化粗化合物，從而得到呈灰白色固體之期望產物(800 mg，40%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 8.11-8.09(m,2H),7.70-7.66(t,J=7.4 Hz,1H),7.56-7.51(t,J=8.0 Hz,1H),7.47(s,1H),5.78(bs,1H),5.69-5.65(m,1H),5.14-5.11(m,1H),4.96-4.88(m,3H),4.43-4.41(m,1H),4.27-4.24(m,1H),3.99(s,4H),2.75-2.73(m,1H),2.67-2.65(m,1H),2.10(bs,1H),1.88-1.85(m,2H),1.31(s,9H),1.24(s,2H),0.98-0.96(m,4H),0.91-0.86(m,4H)MS：MS m/z 568.2(M⁺+1)。

步驟4：(2S,3R)-1-((2S,4R)-2-((1R,2S)-1-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-乙烯基環丙基胺基甲醯基)-4-(4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)吡咯啶-1-基)-3,7-二甲基-1-側氧基壬-8-烯-2-基胺基甲酸第三丁酯之製備

在室溫下向存於二氯甲烷(30 mL)中之(2S,4R)-1-((3R)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3,7-二甲基壬-8-烯醯基)-4-((4-甲氧基異喹啉-1-基)氧基)吡咯啶-2-甲酸(800 mg，1.4毫莫耳)溶液中添加DIPEA(0.73 mL，4.2 mmol)、HATU(530 mg，1.4毫莫耳)，隨後添加(1R,2S)-1-胺基-N-(環丙基磺醯基)-2-乙烯基環丙烷甲醯胺鹽酸鹽(根據WO 03/099274第53頁至第59頁、第74頁第76頁中所闡述之程序製備)(600 mg，1.5毫莫耳)。在室溫下將反應混合物攪拌2 h。將反應物質用DCM稀釋並用水洗滌。將有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下濃縮，從而得到粗化合物。藉由combiflash純化粗化合物，從而得到呈灰白色固體之期望產物(900 mg，90%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 8.13-8.07(m,2H),7.72-7.67(t,J=7.2 Hz,1H),7.57-7.53(t,J=7.2 Hz,1H),7.47(s,1H),6.80(bs,1H),5.84-5.79(m,2H),5.73-5.64(m,1H),5.39-5.38(m,1H),5.28-5.23(d,J=17.2 Hz,1H),5.15-5.12(d,J=10.4 Hz,1H)4.97-4.88(m,2H),4.49-4.45(m,2H),4.19-4.17(m,2H),4.00(s,3H),2.90-2.81(m,1H),2.54-2.48(m,1H),2.23-2.07(m,2H),2.05-1.99(m,2H),1.49-1.42(m,1H),1.33(s,12H),1.22-1.15(m,2H),1.07-1.02(m,2H),0.98-0.96(d,J=6.8 Hz,4H),0.86-0.81(d,J=6.8 Hz,4H),MS：MS m/z 782.2(M⁺+1)。

步驟5：化合物1及化合物2之製備

在室溫下在氮氣氣氛下向存於二氯乙烷(100 mL)中之(2S,3R)-1-((2S,4R)-2-((1R,2S)-1-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-乙烯基環丙基胺基甲醯基)-4-(4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)吡咯啶-1-基)-3,7-二甲基-1-側氧基壬-8-烯-2-基胺基甲酸第三丁酯(900 mg，0.3毫莫耳)脫氣溶液中添加Grubbs第II代觸媒(24 mg，10% w/w)。在95℃下將反應物質加熱過夜。在減壓下蒸發溶劑，並藉由combi-flash純化殘餘物，從而得到(500 mg，58%)呈非鏡像異構體混合物之期望產物。使用製備型HPLC分離非鏡像異構體混合物，從而得到化合物1(12 mg，8%)及化合物2(8 mg，3%)。

化合物1：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm ¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.17-8.15(d,J=8.4 Hz,1H),8.13-8.11(d,J=8.4 Hz,1H),7.75-7.71(t,J=8.0 Hz,1H),7.58-7.54(m,2H),7.30-7.28(d,J=7.6 Hz,1H),5.83(bs,1H),5.37-5.32(t,J=11.2 Hz,1H),5.05-5.01 (m,1H),4.77-4.74(d,J=11.2 Hz,1H),4.67-4.63(m,1H),4.04-4.02(m,1H),3.96(s,3H),3.87-3.83(m,1H),2.97-2.96(m,1H),2.76-2.65(m,3H),2.45-2.38(m,1H),1.82-1.81(m,1H),1.78-1.72(m,1H),1.64-1.61(m,3H),1.45-1.32(m,5H),1.13-1.11(m,13H),0.99-0.98(d,J=6.4 Hz3H),0.95-0.93(d,J=6.4 Hz,3H),MS：MS m/z 754.4(M⁺+1)。

化合物2：(2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.17-8.15(d,J=8.0 Hz,1H),8.13-8.10(d,J=8.4 Hz,1H),7.75-7.71(dt,J=6.8 & 1.2 Hz,1H),7.58-7.54(m,2H),5.83(m,1H),5.38-5.33(t,J=10.4 Hz,1H),5.06-5.04(m,1H),4.74-4.71(d,J=11.2 Hz,1H),4.69-4.64(m,1H),4.03-4.01(m,1H),3.96(s,3H),3.89-3.84(t,J=9.6 Hz,1H),3.28-3.18(m,1H),2.96-2.88(m,1H),2.72-2.57(m,2H),2.35-2.32(m,1H),1.98-1.95(m,1H),1.75-1.69(m,2H),1.64-1.61(m,3H),1.40-1.38(m,1H),1.30-1.26(m,3H),1.19-1.12(m,3H),1.07(s,9H),0.99-0.91(m,6H),MS：MS m/z 752.4(M⁺-1)。

化合物3及化合物4之製備

(2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-6-胺基-N-(環丙基磺醯基)-2-(4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-14a-甲醯胺鹽酸鹽之製備

在室溫下將存於二噁烷.HCl中之(2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯(500 mg，0.66毫莫耳)溶液攪拌30 min。在減壓下蒸發溶劑，從而得到粗化合物(350 mg，77%)。將粗化合物用二乙基醚洗滌且未經進一步純化即用於下一步驟中。MS：MS m/z 652.2(M⁺-1)。

碳酸吡啶-2-基酯1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯之製備

向存於THF(70 mL)中之NaH(1.03 g，25.8 mmol)漿液中添加1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-醇(3 g，23.42 mmol)。在0℃下將反應攪拌20 min。然後將存於THF(30 mL)中之碳酸二吡啶-2-基酯(5.06 g，23.42 mmol)溶液添加至該混合物中。在室溫下將所得溶液攪拌過夜。過濾所得固體副產物並用EtOAc(2×20 mL)洗滌。將合併之有機層用水洗滌，經無水Na₂SO₄乾燥，過濾並在減壓下濃縮。將所得白色碳酸吡啶-2-基酯(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)酯(1.24 g，21%)直接用作試劑。

化合物3及化合物4之製備：

在室溫下向存於DCM(4 mL)中之(2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-6-胺基-N-(環丙基磺醯基)-2-(4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-14a-甲醯胺鹽酸鹽(350 mg，0.53 mmol)溶液中添加DIPEA(0.3 mL，1.8毫莫耳)，隨後添加碳酸吡啶-2-基酯2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙酯(180 mg，0.72毫莫耳)。在室溫下將反應混合物攪拌30 min。將反應物質用 DCM稀釋並用水洗滌。將有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下蒸發，從而得到呈非鏡像異構體混合物之粗化合物。使用製備型HPLC分離非鏡像異構體混合物，從而得到呈白色固體之化合物3(50 mg，12%)及化合物4(30 mg，7%)。

化合物3：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.17-8.15(d,J=8.4 Hz,1H),8.13-8.11(d,J=8.4 Hz,1H),7.75-7.71(t,J=8.0 Hz,1H),7.58-7.54(m,2H),7.30-7.28(d,J=7.6 Hz,1H),5.82(m,1H),5.38-5.32(t,J=10.4 Hz,1H),5.04-4.98(m,1H),4.79-4.77(d,J=10.8 Hz,1H),4.79-4.77(m,1H),4.02(s,3H),4.00-3.99(m,1H),3.85-3.79(m,,1H),3.98-2.94(m,1H),2.77-2.66(m,3H),2.42-2.38(m,1H),1.88-1.82(m,1H),1.74-1.71(m,1H),1.64-1.57(m,3H),1.44-1.40(m,1H),1.36-1.31(m,6H),1.17-1.11(m,4H),0.99-0.93(m,9H),¹⁹F NMR：δ ppm-85.12(3F)；MS：MS m/z 808.1(M⁺+1)。

化合物4：(2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a, 15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。MS：MS m/z 808.3(M⁺+1)。

化合物5及化合物6之製備

步驟1：(2S,3R)-1-((2S,4R)-2-((1R,2S)-1-環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-乙烯基環丙基胺基甲醯基)-4-羥基吡咯啶-1-基)-3,7-二甲基-1-側氧基壬-8-烯-2-基胺基甲酸第三丁酯之製備

在室溫下向存於二氯甲烷(15 mL)中之(2S,4R)-1-((2S,3R)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3,7-二甲基壬-8-烯醯基)-4-羥基吡咯啶-2-甲酸(2 g，4.9 mmol)溶液中添加HATU(1.86 g，4.9 mmol)，隨後添加DIPEA(4.2 mL，24.5毫莫耳)。在相同溫度下將反應物質攪拌10 min。將(1R,2S)-1-胺基-N-(環丙基磺醯基)-2-乙烯基環丙烷甲醯胺鹽酸鹽(根據WO 03/099274第53頁至第59頁、第74頁第76頁中所闡述之程序製備)(2 g，5.3毫莫耳)添加至反應物質中，並在室溫下攪拌3 hr。將反應物質用二氯甲烷稀釋並用水洗滌。將有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下濃縮，從而得到粗化合物。藉由Combiflash(存於CHCl₃中之3% MeOH)純化粗化合物，從而得到1.9 g(62%)呈白色固體之期望產物。MS：MS m/z 623.5(M⁺-1)。

步驟2：(2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-羥基-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯之製備

在室溫下在氮氣氣氛下向存於二氯乙烷(150 mL)中之(2S,3R)-1-((2S,4R)-2-((1R,2S)-1-環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-乙烯基環丙基胺基甲醯基)-4-羥基吡咯啶-1-基)-3,7-二甲基-1-側氧基壬-8-烯-2-基胺基甲酸第三丁酯(0.9 g，1.4 mmol)脫氣溶液中添加Grubbs第II代觸媒(90 mg，10% w/w)。在95℃下將反應物質加熱過夜。在減壓下蒸發溶劑，並藉由ISCO純化殘餘物，從而得到期望化合物(600 mg，69%)。MS：MS m/z 595.2(M⁺-1)。

步驟3：(2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-氯-4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯之製備

在室溫下在氮氣氣氛下向存於DMSO(5 mL)中之((2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-((環丙基磺醯基)胺基甲醯基)-2-羥基-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基)胺基甲酸第三丁酯(500 mg，0.8 mmol)及1,5-二氯-4-甲氧基異喹啉(230 mg，1.0 mmol)溶液中添加第三BuOK(存於THF中之1 M溶液，450 mg，4.0 mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌2 h。將反應物質用檸檬酸水溶液淬滅並用乙酸乙酯(150 mL×3)萃取。將合併之有機層用水、鹽水溶液洗滌，經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下濃縮，從而得到呈非鏡像異構體混合物之粗化合物。MS：MS m/z 789.3(M⁺+1)。

步驟4：化合物5及化合物6之製備

藉由製備型HPLC分離(2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-氯-4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸酯之非鏡像異構體混合物，從而得到期望化合物5及合物6。

化合物5：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-氯-4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯(230 mg，35%)。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.18-8.16(d,J=7.6 Hz,1H),7.78-7.76(d,J=6.8 Hz,1H),7.70(s,1H),7.48-7.44(t,J=8.0 Hz,1H),6.67-6.64(d,J=8.4 Hz,1H),5.83(bs,1H),5.37-5.32(t,J=11.2 Hz,1H),5.05-5.01(m,1H),4.77-4.74(d,J=11.2 Hz,1H),4.67-4.63(m,1H),4.04-4.02(m,1H),3.96(s,3H),3.87-3.83(m,1H),2.97-2.96(m,1H),2.76-2.65(m,3H),2.45-2.38(m,1H),1.82-1.81(m,1H),1.78-1.72(m,1H),1.64-1.61(m,3H),1.45-1.32(m,5H),1.13-1.11(m,13H),0.99-0.98(d,J=6.4 Hz 3H),0.95-0.93(d,J=6.4 Hz,3H),MS：MS m/z 789.2(M⁺+1)。

化合物6：(2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-氯-4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.18-8.16(d,J=8.4 Hz,1H),7.76-7.74(d,J=7.6 Hz,1H),7.70(s,1H),7.48-7.44(d,J=7.6 Hz,1H),6.59-6.57(d,J=8.4 Hz,1H)5.83(bs,1H),5.38-5.33(t,J=10.4 Hz,1H),5.06-5.04(m,1H),4.74-4.71(d,J=11.2 Hz,1H),4.69-4.64(m,1H),4.03-4.01(m,1H),3.96(s,3H),3.89-3.84(t,J=9.6 Hz,1H),3.28-3.18(m,1H),2.96-2.88(m,1H),2.72-2.57(m,2H),2.35-2.32(m,1H),1.98-1.95(m,1H),1.75-1.69(m,2H),1.64-1.61(m,3H),1.40-1.38(m,1H),1.30-1.26(m,3H),1.19-1.12(m,3H),1.07 (s,9H),0.99-0.91(m,6H),MS：MS m/z 787.8(M⁺-1)。

化合物7及化合物8之製備

(2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-6-胺基-2-(5-氯-4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-N-(環丙基磺醯基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-14a-甲醯胺鹽酸鹽之製備

在室溫下將存於二噁烷.HCl中之(2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-氯-4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯(300 mg，3.3 mmol)溶液攪拌30 min。在減壓下蒸發溶劑，從而得到粗化合物(250 mg，96%)。將粗化合物用二乙基醚洗滌且未經進一步純化即用於下一步驟中。MS：MS m/z 688.2(M⁺-36)。

使用本文所述中間物且藉由遵循針對合成化合物3所闡述之一般程序來製備化合物7及化合物8。藉由製備型HPLC分離非鏡像異構體混合物。

化合物7：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-氯-4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.18-8.15(d,J=7.6 Hz,1H),7.78-7.76(d,J=6.4 Hz,1H),7.70(s,1H),7.49-7.45(t,J=8.0 Hz,1H),5.81(m,1H),5.37-5.35(t,J=10.8 Hz,1H),5.04-4.94(m,1H),4.78-4.75(d,J=11.2 Hz,1H),4.70-4.66(m,1H),4.01-3.97(m,1H),3.96(s,3H),3.80-3.77(d,J=10.4 Hz,1H),2.98-2.94(m,1H),2.77-2.64(m,3H),2.45-2.38(m,1H),1.84-1.82(m,1H),1.74-1.71(m,1H),1.65-1.60(m,3H),1.43-1.29(m,8H),1.17-1.05(m,4H),0.98-0.91(m,9H),¹⁹F NMR：δ ppm-85.11(3 F)；MS：MS m/z 843.1(M⁺+1)。

化合物8：(2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-氯-4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)- 7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。MS：MS m/z 843.3(M⁺+1)。

化合物9及化合物10之製備

使用本文所述中間物且藉由遵循針對合成化合物7及化合物8所闡述之一般程序來製備化合物9及10。

化合物9：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(6-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.10-8.08(d,J=8.8 Hz,1H),7.92-7.91(d,J=6.0 Hz,1H),7.26-7.25(d,J=5.6 Hz,1H),7.23(bs,1H),7.20(s,1H),7.12-7.11(dd,J=2.4 & 6.4 Hz,1H)5.88-5.87(m,1H),5.39-5.33(t,J=10.8 Hz,1H),5.04-5.00(m,1H),4.74-4.68(m,2H),4.02-3.99(m,1H),3.99(s,3H),3.88-3.84(m,1H),3.23-3.21(m,1H),2.96-2.90 (m,1H),2.72-2.58(m,2H),2.37-2.34(m,1H),1.80-1.76(m,1H),1.72-1.68(m,1H),1.65-1.57(m,3H),1.40-1.28(m,6H),1.21-1.02(m,5H),0.99-0.89(m,10H),¹⁹F NMR：δ ppm-85.15(3 F)；MS：MS m/z 806.2(M⁺-1)。

化合物10：(2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(6-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。MS：MS m/z 806.2(M⁺+1)。

1-氟-4-甲氧基異喹啉之製備

步驟1：1-氯-4-甲氧基異喹啉之製備

在0℃下向存於乙腈(50 mL)中之1-氯異喹啉-4-醇(5.0 g，27.8 mmol)溶液中添加TMS-重氮甲烷(12.73 g，111.2 mmol)。使反應混合物回至室溫並攪拌2 h。在減壓下蒸發溶劑，從而得到粗化合物。藉由矽膠層析法純化粗化合物，從而得到呈灰白色固體之1-氯-4-甲氧基異喹啉(2.5 g，46.4%)。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.29-8.17(m,2H),7.97(s,1H),7.91-7.82(m,2H),4.05(s,3H)；MS：MS m/z 194.7(M⁺+1)。

步驟2：1-氟-4-甲氧基異喹啉之製備

在室溫下向存於DMSO中之1-氯-4-甲氧基異喹啉(2.5 g，12.91 mmol)溶液中添加氟化銫(4.01 g，25.82 mmol)。將反應容器(壓力管)密封並在145℃下加熱18 h。將反應物質用水稀釋並用乙酸乙酯萃取。將有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下蒸發，從而得到粗化合物。藉由矽膠層析法純化粗化合物，從而得到呈白色固體之期望化合物(700 mg，62%)。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.10(m,1H),8.08(m,1H),7.78-7.75(m,1H),7.69-7.65(m,1H),7.49(m,1H),4.04(s,3H)；¹⁹F NMR：δ ppm-78.66(1 F)；MS：MS m/z 178.1(M⁺+1)。

1,5-二氯-4-甲氧基異喹啉之製備

步驟1：(E)-3-(2-氯苯基)丙烯醯基疊氮化物之製備

在室溫下向存於苯(100 ml)中之(E)-3-(2-氯苯基)丙烯酸(13 g，71.2 mmol)溶液中添加三乙胺(14.4 g，141 mmol)，隨後添加DPPA(19.5 g，71.2 mmol)。在相同溫度下將反應物質攪拌18 h。在減壓下蒸發溶劑，且將殘餘物用水稀釋並用二氯甲烷萃取。將有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾並蒸發，從而得到粗化合物。藉由習用管柱層析法(矽膠，60目至120目)使用存於石油醚中之10%乙酸乙酯作為流動相純化粗化合物，從而得到呈淺黃色固體之期望化合物(14 g，95%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 8.19-8.15(d,J=16 Hz,1H),7.63-7.61(d,J=8 Hz,1H),7.44-7.42(m,1H),7.36-7.26(m,2H),6.44-6.40(d,J=16 Hz,1H)。

步驟2：5-氯異喹啉-1(2H)-酮之製備

向熱(125℃)二苯基醚(10 ml)中逐份添加(E)-3-(2-氯苯基)丙烯醯基疊氮化物(2 g，9.63 mmol)。在250℃下將反應加熱2 h。將反應物質冷卻至室溫並用石油醚稀釋。將所沈澱固體過濾，用石油醚洗滌，從而得到呈黃色固體之粗化合物(1.1 g，63.6%)。粗化合物未經進一步純化即用於下一步驟。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.29-8.27(d,J=8 Hz,1H),7.84-7.82(d,J=8 Hz,1H),7.49(t,J=8 Hz,1H),7.32-7.30(d,J=8 Hz,1H),6.98-6.96(d,J=8 Hz,1H)；MS：MS m/z 180.7(M⁺+1)。

步驟3：5-氯-4-甲氧基異喹啉-1-(2H)-酮之製備

在室溫下向存於甲醇(70 ml)中之5-氯異喹啉-1(2H)-酮(3.8 g，21.2 mmol)溶液中添加二乙酸碘苯(7.5 g，23.4 mmol)，隨後添加甲磺酸(2.45 g，25.5 mmol)。在回流下將反應物質加熱3 h。蒸發溶劑並用冷水稀釋殘餘物。將所沈澱固體過濾，用水洗滌，從而得到呈淺紅色固體之粗化合物(3.9 g，88%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 8.06-8.03(d,J=12 Hz,1H),7.60-7.57(d,J=12 Hz,1H),7.42(d,J=8 Hz,1H),7.01-6.99(br s,1H),3.51(s,3H)；MS：MS m/z 209.1(M⁺+1)。

步驟4：1,5-二氯-4-甲氧基異喹啉之製備

將存於POCl₃(45 ml)中之5-氯-4-甲氧基異喹啉-1-(2H)-酮(6.4 g，30.5 mmol)溶液回流18 h。在減壓下蒸發溶劑並用冷水稀釋殘餘物。將所沈澱固體過濾，用水洗滌，從而得到呈淺褐色固體之粗化合物(4 g，57.4%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 8.28-8.25(d,J=12 Hz,1H),7.87(s,1H),7.79-7.76(d,J=12 Hz,1H),7.58-7.54(m,1H),4.03(s,3H)；MS：MS m/z 228.0(M⁺+1)。

1,7-二氟-4,6-二甲氧基異喹啉之製備

步驟1：7-氟-4,6-二甲氧基異喹啉-1(2H)-酮之製備

在室溫下向存於甲醇(70 ml)中之7-氟-6-甲氧基異喹啉-1(2H)-酮(6.3 g，32.6 mmol)溶液中添加二乙酸碘苯(10.5 g，32.6 mmol)，隨後添加甲磺酸(3.76 g，39.1 mmol)。在回流下將反應物質加熱3 h。蒸發溶劑並用冷水稀釋殘餘物。將所沈澱固體過濾，用水洗滌，從而得到呈淺紅色固體之粗化合物(6.6 g，91%)。MS：MS m/z 224.0(M⁺+1)。

步驟2：1-氯-7-氟-4,6-二甲氧基異喹啉之製備

將存於POCl₃(50 ml)中之7-氟-4,6-二甲氧基異喹啉-1(2H)-酮(7.6 g，34.1 mmol)溶液回流18 h。在減壓下蒸發溶劑並用冷水稀釋殘餘物。藉由固體碳酸鈉使水溶液鹼化，並用乙酸乙酯萃取。將有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾並在減壓下蒸發，從而得到粗化合物。藉由矽膠層析法(存於石油醚中之20%乙酸乙酯)純化粗化合物，從而得到呈淺黃色固體之期望化合物(2 g，24.3%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 7.88-7.85(d,J=12 Hz,1H),7.75(s,1H),7.54-7.52(d,J=8 Hz,1H),4.05(s,3H)；MS：MS m/z 242.0(M⁺+1)。

步驟3：1,7-二氟-4,6-二甲氧基異喹啉之製備

在室溫下向存於DMSO(5 ml)中之1-氯-7-氟-4,6-二甲氧基異喹啉(2 g，8.28 mmol)溶液中添加氟化銫(2.51 g，16.55 mmol)。將反應容器(壓力管)密封並在145℃下加熱18 h。將反應物質用水稀釋並用乙酸乙酯萃取。將合併之有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下蒸發，從而得到粗化合物。藉由矽膠層析法純化粗化合物，從而得到呈白色固體之期望化合物(475 mg，25.5%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 7.69-7.67(d,J=8 Hz,1H),7.53-7.51(d,J=8 Hz,1H),7.45-7.44(m,1H),4.05(s,3H),4.03(s,3H)；¹⁹F NMR：δ ppm-129.58(1 F),-79.2(1F)；MS：MS m/z 226.0(M⁺+1)。

1-氟-4,6-二甲氧基異喹啉之製備

步驟1：(E)-3-(3-甲氧基苯基)丙烯醯基疊氮化物之製備

在室溫下向存於苯(200 ml)中之(E)-3-(3-甲氧基苯基)丙烯酸(20 g，112 mmol)溶液中添加三乙胺(22.72 g，224 mmol)，隨後添加DPPA(30.9 g，112 mmol)。在相同溫度下將反應物質攪拌18 h。在減壓下蒸發溶劑，且將殘餘物用水稀釋並用二氯甲烷萃取。將合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾並蒸發，從而得到粗化合物。藉由習用管柱層析法(矽膠，60目至120目)使用存於石油醚中之10%乙酸乙酯作為流動相純化粗化合物，從而得到呈白色固體之期望化合物(18 g，79%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 7.73-7.69(d,J=16 Hz,1H),7.33-7.29(t,J=8 Hz,1H),7.26(s,1H),7.14-7.12(d,J=8 Hz,1H),7.05(s,1H)6.98-6.96(d,J=4 Hz,1H),6.43-6.39(d,J=16 Hz,1H),3.86(s,3H)。

步驟2：6-甲氧基異喹啉-1(2H)-酮之製備

向存於1,2-二氯苯(70 ml)中之(E)-3-(3-甲氧基苯基)丙烯醯基疊氮化物(7 g，34.4 mmol)溶液中添加乙酸汞(0.11 g，0.34 mmol)。在150℃下將反應加熱10 min，並使溫度升高至180℃ 1 h。將反應物質冷卻至室溫並用石油醚稀釋。將所沈澱固體過濾，用石油醚洗滌，從而得到呈黃色固體之粗化合物(3.5 g，58%)。粗化合物未經進一步純化即用於下一步驟。¹H NMR(400 MHz,DMSO)：δ ppm 8.09-8.06(d,J=12 Hz,1H),7.14-7.11(m,2H),7.05-7.03(d,J=8 Hz,1H),6.48-6.46(d,J=4 Hz,1H),3.86(s,3H)；MS：MS m/z 176.0(M⁺+1)。

步驟3：4,6-二甲氧基異喹啉-1(2H)-酮之製備

在室溫下向存於甲醇(70 ml)中之7-氟-6-甲氧基異喹啉-1(2H)-酮(7 g，40.0 mmol)溶液中添加二乙酸碘苯(14.16 g，40.0 mmol)，隨後添加甲磺酸(11.52 g，120 mmol)。在回流下將反應物質加熱3 h。蒸發溶劑並用冷水稀釋殘餘物。將所沈澱固體過濾，用水洗滌，從而得到呈淺紅色固體之粗化合物(4 g，48.8%)。¹H NMR(400 MHz,DMSO)：δ ppm 8.11-8.09(d,J=8 Hz,1H),7.19(s,1H),7.13-7.11(d,J=8 Hz,1H),6.72-6.71(d,J=12 Hz,1H),3.89(s,3H),3.79(s,3H)；MS：MS m/z 206.1(M⁺+1)。

步驟4：1-氯-4,6-二甲氧基異喹啉之製備

將存於POCl₃(40 mL)中之4,6-二甲氧基異喹啉-1(2H)-酮(4 g，19.49 mmol)溶液回流18 h。在減壓下蒸發溶劑並用冷水稀釋殘餘物。藉由固體碳酸鈉使水溶液鹼化，並用乙酸乙酯萃取。將有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾並在減壓下蒸發，從而得到粗化合物。藉由矽膠層析法(存於石油醚中之20%乙酸乙酯)純化粗化合物，從而得到呈淺黃色固體之期望化合物(1.2 g，27.5%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 8.16-8.13(d,J=12 Hz,1H),7.74(s,1H), 7.44-7.43(d,J=4 Hz,1H),7.30-7.27(d,J=12 Hz,1H),7.26(s,1H),4.05(s,3H),3.97(s,3H)；MS：MS m/z 224.2(M⁺+1)。

步驟5：1-氟-4,6-二甲氧基異喹啉之製備

在室溫下向存於DMSO(15 ml)中之1-氯-4,6-二甲氧基異喹啉(1.5 g，6.71 mmol)溶液中添加氟化銫(4 g，26.8 mmol)。將反應容器(壓力管)密封並在145℃下加熱18 h。將反應物質用水稀釋並用乙酸乙酯萃取。將合併之有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下蒸發，從而得到粗化合物。藉由矽膠層析法純化粗化合物，從而得到呈白色固體之期望化合物(280 mg，20.15%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 7.99-7.97(d,J=8 Hz,1H),7.44-7.39(m,2H),7.27-7.11(m,1H),4.03(s,3H),3.97(s,3H)；¹⁹F NMR：δ ppm-79.32(1F)；MS：MS m/z 208.0(M⁺+1)。

1-氯-7-氟-4-甲氧基異喹啉之製備

步驟1：(E)-3-(4-氟苯基)丙烯醯基疊氮化物之製備

在室溫下向存於苯(120 mL)中之(E)-3-(4-氟苯基)丙烯酸(25 g，150 mmol)溶液中添加三乙胺(30.5 g，301 mmol)，隨後添加DPPA(41.4 g，150 mmol)。在相同溫度下將反應物質攪拌18 h。在減壓下蒸發溶劑，且將殘餘物用水稀釋並用二氯甲烷萃取。將有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾並蒸發，從而得到粗化合物。藉由習用管柱層析法(矽膠，60目至120目)使用存於石油醚中之10%乙酸乙酯作為流動相純化粗化合物，從而得到呈白色固體之期望化合物(26 g，90%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 7.73-7.69(d,J=16 Hz,1H),7.55-7.51(m,2H),7.11-7.07(m,2H),6.36-6.32(d,J=16 Hz,1H)。

步驟2：7-氟異喹啉-1(2H)-酮之製備

向熱(125℃)二苯基醚(25 ml)中逐份添加(E)-3-(4-氟苯基)丙烯醯基疊氮化物(5 g，26.2 mmol)。在250℃下將反應加熱4 h。將反應物質冷卻至室溫並用石油醚稀釋。將所沈澱固體過濾，用石油醚洗滌，從而得到粗化合物(2.45 g，57%)。粗化合物未經進一步純化即用於下一步驟。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 7.96-7.93(m,1H),7.76-7.72(m,1H),7.56-7.51(m,1H),7.18-7.16(m,1H),6.72-6.70(m,1H)；MS：MS m/z 164.1(M⁺+1)。

步驟3：7-氟-4-甲氧基異喹啉-1(2H)-酮之製備

在室溫下向存於甲醇中之7-氟異喹啉-1(2H)-酮(11 g，67.4 mmol)溶液中添加二乙酸碘苯(21.7 g，67.4 mmol),隨後添加甲磺酸(7.78 g，81 mmol)。在回流下將反應物質加熱3 h。蒸發溶劑並用冷水稀釋殘餘物。將所沈澱固體過濾並用水洗滌，從而得到呈淺紅色固體之粗化合物(11 g，84%)。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.06-8.04(m,1H),7.96-7.93(m,1H),7.62-7.54(m,2H),6.74(s,1H),3.89(s,3H)；MS：MS m/z 194.1(M⁺+1)。

步驟4：1-氯-7-氟-4-甲氧基異喹啉之製備

將存於POCl₃(100 ml)中之7-氟-4-甲氧基異喹啉-1(2H)-酮(11 g，56.9 mmol)溶液回流18 h。在減壓下蒸發溶劑並用冷水稀釋殘餘物。藉由固體碳酸鈉使水溶液鹼化，並用乙酸乙酯萃取。將合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾並在減壓下蒸發，從而得到粗化合物。藉由矽膠層析法(存於石油醚中之20%乙酸乙酯)純化粗化合物，從而得到呈灰白色固體之期望化合物(2.9 g，24%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 8.36-8.32(m,1H),7.93-7.90(m,1H),7.88(s,1H),7.70-7.65(m,1H),4.11(s,3H)；MS：MS m/z 212.1(M⁺+1)。

1,7-二氟-4-甲氧基異喹啉之製備

在室溫下向存於DMSO中之1-氯-7-氟-4-甲氧基異喹啉(3.7 g，17.48 mmol)溶液中添加氟化銫(10.26 g，69.9 mmol)。將反應容器(壓力管)密封並在145℃下加熱18 h。將反應物質用水稀釋並用乙酸乙酯萃取。將合併之有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下蒸發，從而得到粗化合物。藉由矽膠層析法純化粗化合物，從而得到呈白色固體之期望化合物(1.7 g，49%)。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.20-8.18(m,1H),7.69-7.66(m,1H),7.54-7.47(m,1H),7.46(s,1H),4.04(s,3H)；¹⁹F NMR：δ ppm 109.65(1F),-78.53(1F)；MS：MS m/z 196.1(M⁺+1)。

2-氯-6-甲氧基喹喏啉及3-氯-6-甲氧基酮之製備

步驟1：6-甲氧基喹喏啉-2(1H)-酮及7-甲氧基喹喏啉-2(1H)-酮之製備

向存於乙醇(50 ml)中之4-甲氧基苯-1,2-二胺(5 g，36.2 mmol)溶液中添加2-側氧基乙酸乙酯(4.06 g，39.8 mmol)。在回流下將反應物質加熱過夜。在減壓下蒸發溶劑，且將殘餘物用乙酸乙酯稀釋且然後蒸發至乾燥，從而得到粗化合物。用石油醚洗滌粗化合物，從而得到呈區域異構體混合物(黑色固體)之粗化合物(5.1 g，80%產率)。此粗化合物未經分離異構體即用於下一步驟。¹H NMR(400 MHz,DMSO-d₆)：δ ppm 8.17(s,1H),7.98(s,1H),7.70-7.68(d,J=8 Hz,1H),7.31-7.30(d,J=4 Hz,1H),7.27-7.20(m,2H),6.93-6.90(m,1H),6.77-6.76(d,J=4 Hz,1H),3.84(s,3H),3.83(s,3H)；MS：MS m/z 177.0(M⁺+1)。

步驟2及3：2-氯-6-甲氧基酮及3-氯-6-甲氧基酮之製備

將存於POCl₃(20 ml)中之6-甲氧基喹喏啉-2(1H)-酮及7-甲氧基喹喏啉-2(1H)-酮(3 g，18.28 mmol)溶液回流3 h。在減壓下蒸發溶劑並用冷水稀釋殘餘物。藉由固體碳酸鈉使水溶液鹼化，並用乙酸乙酯萃取。將合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾並在減壓下蒸發，從而得到粗化合物。藉由矽膠層析法(存於石油醚中之20%乙酸乙酯)純化粗化合物，從而提供區域異構體之混合物(3.7 g)。藉由SFC純化分離2 g之上文混合物，從而提供呈灰白色固體之2-氯-7-甲氧基酮(0.7 g，34.7%)及2-氯-7-甲氧基酮(0.9 g，44.6%)。

2-氯-6-甲氧基酮：¹H NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ ppm ¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 8.71(s,1H),7.91-7.89(d,J=8 Hz,1H),7.46-7.38(m,2H),3.97(s,3H)；MS：MS m/z 194.9(M⁺+1)。

2-氯-7-甲氧基酮：¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 8.63(s,1H),7.99-7.96(d,J=12 Hz,1H),7.43-7.40(d,J=12 Hz,1H),7.30(s,1H),3.96(s,3H)；MS：MS m/z 194.9(M⁺+1)。

1-氟-4-乙氧基異喹啉之製備

步驟1：1-氯-4-乙氧基異喹啉之製備

在室溫下向存於乙腈(10 mL)中之1-氯異喹啉-4-醇(1.0 g，5.5 mmol)溶液中添加K₂CO₃(2.3 g，16.7 mmol)，隨後添加碘乙烷(0.87 ml，11.0 mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌過夜。在減壓下蒸發溶劑，且將殘餘物用水稀釋並用乙酸乙酯萃取。將合併之有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下蒸發，從而得到粗化合物。藉由矽膠層析法純化粗化合物，從而得到呈灰白色固體之1-氯-4-乙氧基異喹啉(0.7 g，62%)。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.26-8.24(m,2H),7.79(s,1H),7.76-7.26(m,2H),4.29-4.24(q,J=6.8 Hz,2H),1.58-1.54(t,J=6.8 Hz,3H)；MS：MS m/z 207.7(M⁺+1)。

步驟2：1-氟-4-乙氧基異喹啉之製備

在室溫下向存於DMSO中之1-氯-4-乙氧基異喹啉(4.8 g，23.12 mmol)溶液中添加氟化銫(6.9 g，46.24 mmol)。將反應容器(壓力管)密封並在145℃下加熱18 h。將反應物質用水稀釋並用乙酸乙酯萃取。將有機層經無水Na₂SO₄乾燥並在減壓下蒸發，從而得到粗化合物。藉由矽膠層析法純化粗化合物，從而得到呈白色固體之期望化合物(2.6 g，58.8%)。MS：MS m/z 192.3(M⁺+1)。

1-甲基環丙烷-1-磺醯胺之製備

步驟1：環丙基磺醯基胺基甲酸第三丁酯之製備

在0℃下在氮氣下向存於DCM(800 ml)中之環丙烷磺醯胺(100 g，82.6 mmol)溶液中添加三乙胺(234 ml，165 mmol)，隨後添加DMAP(10.28 g，82.6 mmol)。向此反應混合物中緩慢添加存於DCM(400 ml)中之Boc酸酐(247 ml，107 mmol)。在室溫下將所得混合物攪拌4 h。將反應混合物用水稀釋並用乙酸乙酯萃取。將合併之有機層用1.5 N HCl溶液及10% NaHCO₃洗滌，並經無水硫酸鈉乾燥，過濾並在減壓下蒸發，從而得到呈固體之粗化合物(143 g，65.0%)。該粗產物直接用於下一步驟。¹H NMR(400 MHz,DMSO-d6)：δ ppm 11.08(s,1H),2.90(m,1H),1.48(s,9H),1.06(m,4H)。

步驟2：(1-甲基環丙基)磺醯基胺基甲酸第三丁酯之製備

將環丙基磺醯基胺基甲酸第三丁酯(4.3 g，20 mmol)溶液溶解於乾THF(100 ml)中並冷卻至-78℃。向此溶液中緩慢添加正BuLi(17.6 ml，44 mmol，2.5 M，存於己烷中)。使反應混合物升溫至室溫經歷1.5 h之時間。然後將此混合物冷卻至-78℃，且添加正BuLi(20 mmol，8 ml，2.5 M，存於己烷中)溶液，攪拌1 h，並添加碘甲烷(5.68 g，40 mmol)之純淨溶液。使反應混合物升溫至室溫過夜，在室溫下用水性飽和NH₄Cl(100 ml)淬滅。將其用EtOAc(100 ml)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，在Na₂SO₄上乾燥，過濾並在減壓下蒸發，從而得到黃色油狀物，將其自己烷結晶，從而提供呈稍微發黃固體之產物(3.1 g，81%)。¹H NMR(400 MHz,DMSO-d₆)：δ ppm 10.97(s,1H), 1.44(s,12H),1.35-1.33(m,2H),0.93-0.91(m,2H)。

步驟3：1-甲基環丙烷-1-磺醯胺之製備

將N-第三丁基-(1-甲基)環丙基-磺醯胺(1.91 g，10 mmol)溶液溶解於存於二噁烷(30 ml)中之4 M HCl中，並在室溫下將反應混合物攪拌16 h。在真空中移除溶劑，從而得到黃色油狀物，將其自EtOAc/己烷(1：4,40 ml)結晶，從而獲得呈白色固體之1-甲基-環丙基磺醯胺(1.25 g，96%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 6.73(s,2H),1.43(s,3H),1.14-1.12(m,2H),0.75-0.73(m,2H)。

1-(氟甲基)環丙烷-1-磺醯胺之製備

步驟1：1-(羥基甲基)環丙基磺醯基胺基甲酸第三丁酯之製備

在-78℃下經30 min向存於750 mL之THF中之環丙基磺醯基胺基甲酸第三丁酯(30 g，136 mmol)溶液中逐滴添加丁基鋰(1.6 M，存於己烷中，212 mL，339 mmol)，且在-78℃下將所得混合物攪拌1 h。自多聚甲醛產生(藉由在180℃下加熱)甲醛氣體，並在-30℃下將其吹洗至上文反應物質中30 min。在相同溫度下將反應攪拌1 h，然後使其升溫至室溫。將反應用氯化銨水溶液淬滅並用水稀釋。用乙酸乙酯洗滌所得物質，且使水層酸化至pH~2並用乙酸乙酯萃取。將合併之有機物經硫酸鈉乾燥，過濾並在減壓下蒸發，從而得到呈白色固體之期望化合物(27 g，79%)。¹H NMR(400 MHz,DMSO-d₆)：δ ppm 10.90(sb,1H),4.95(sb,1H),3.75(s,2H),1.42(s,9H),1.27(m,2H),1.08(m,2H)。

步驟2：(1-(氟甲基)環丙基)磺醯基胺基甲酸第三丁酯之製備

在-78℃下向存於DCM(150 ml)中之(1-羥基甲基)環丙基)磺醯基胺基甲酸第三丁酯(10 g，39.98 mmol)溶液中逐滴添加DAST(25.7 g，159 mmol)。將反應物質攪拌2 hr。將反應物質用1N NaOH溶液(200 ml)淬滅，分離DCM層。用NaOH溶液(400 ml)洗滌DCM層，用1.5N HCl溶液(600 ml)使合併之水層酸化，並用DCM萃取。將合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥、過濾並在減壓下蒸發，從而得到呈淺褐色固體之期望化合物(9.8 g，97%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 6.97(br,s,1H),4.74-4.62(d,J=48 Hz,2H),1.83-1.80(m,2H),1.56-1.44(m,9H),1.20-1.11(m,2H)。

步驟3：1-(氟甲基)環丙烷-1-磺醯胺之製備

在室溫下向存於DCM(100 ml)中之(1-(氟甲基)環丙基)磺醯基胺基甲酸第三丁酯(19.8 g，38.7 mmol)溶液中逐滴添加TFA(30 ml，387 mmol)。將反應物質攪拌2 hr。在減壓下蒸發反應物質，從而得到呈灰白色固體之期望化合物(6 g，100%)。¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)：δ ppm 4.78-4.66 (d,J=48 Hz,2H),2.61(br,s,1H),1.59-1.56(m,2H),1.13-1.10(m,2H)。

化合物11之製備

使用本文所述中間物並藉由遵循針對合成化合物5所闡述之一般程序來製備化合物11。

化合物11：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(4,6-二甲氧基異喹啉-1-基氧基)-14a-(1-(氟甲基)環丙基磺醯基胺基甲醯基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.06(d,J=9.03 Hz,1H)7.51(s,1H)7.42(d,J=2.51 Hz,1H)7.14(dd,J=9.16,2.64 Hz,1H)5.79(br.s.,1H)5.29(br.s.,1H)4.54-4.65(m,2H)4.02(s,3H)3.95(s,3H)3.03-3.09(m,3H)2.67(d,J=17.57 Hz,2H)1.77(d,J=4.77 Hz,1H)1.62(d,J=11.80 Hz,2H)1.43(s,1H)1.29-1.35(m,9H)1.24(br.s.,2H)1.12(s,9H)0.99(dd,J=13.05,6.53 Hz,6H)0.89-0.94(m,3H)；MS：MS m/z 816.4(M⁺+1)。

化合物12及化合物13之製備

使用本文所述中間物並遵循針對合成化合物7及化合物8所闡述之一般程序來製備化合物12及化合物13。

化合物12：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(4,6-二甲氧基異喹啉-1-基氧基)-14a-(1-(氟甲基)環丙基磺醯基胺基甲醯基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.89(s,1H)8.09(d,J=9.29 Hz,1H)7.52(s,1H)7.45(d,J=2.51 Hz,1H)7.17(dd,J=9.03,2.51 Hz,1H)5.81(br.s.,1H)5.37(t,J=9.66 Hz,1H)4.96-5.03(m,2H)4.67-4.75(m,2H)4.43-4.61(m,1H)4.00-4.05(m,3H)3.96(s,3H)3.85(d,J=10.79 Hz,1H)3.23(d,J=7.03 Hz,2H)2.59-2.71(m,2H)2.29-2.36(m,1H)1.70-1.82(m,2H)1.63(td,J=8.47,5.40 Hz,4H)1.36(s,3H)1.31(s,3H)1.25-1.28(m,3H)1.15-1.21(m,2H)0.97(d,J=4.52 Hz,6H)0.87-0.93(m,2H)；MS：MS m/z 870.4(M⁺+1)。

化合物13：((2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-2-((4,6-二甲氧基異喹啉-1-基)氧基)-14a-(((1-(氟甲基)環丙基)磺醯基)胺基甲醯基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基)胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.07(d,J=9.29 Hz,1H)7.52(s,1H)7.42(d,J=2.26 Hz,1H)7.09-7.16(m,1H)6.71(d,J=8.53 Hz,1H)5.80(s,1H)5.34(br.s.,1H)4.81-4.81(m,1H)4.62-4.71(m,3H)4.02(s,4H)3.95(s,4H)2.67-2.75(m,3H)2.42(br.s.,1H)1.83(br.s.,1H)1.66(d,J=7.53 Hz,6H)1.48(br.s.,1H)1.17(s,11H)1.00(d,J=6.53 Hz,3H)0.95(d,J=6.27 Hz,4H)；MS：MS m/z 870.6(M⁺+1)。

化合物14之製備

使用本文所述中間物且藉由遵循針對合成化合物7所闡述之一般程序來製備化合物14。

化合物14：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(4,6-二甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-14a-(1-甲基環丙基磺醯基胺基甲醯基)-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11, 13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.07(d,J=9.03 Hz,1H)7.53(s,1H)7.44(d,J=2.51 Hz,1H)7.28(d,J=8.28 Hz,1H)7.15(dd,J=9.03,2.51 Hz,1H)5.81(br.s.,1H)5.34-5.40(m,1H)5.02(dd,J=10.42,7.40 Hz,1H)4.67-4.74(m,2H)3.98-4.04(m,4H)3.95(s,3H)3.84-3.90(m,1H)3.20(br.s.,1H)2.58-2.72(m,2H)2.35(q,J=8.11 Hz,1H)1.79(d,J=7.03 Hz,1H)1.57-1.69(m,5H)1.54(s,3H)1.42-1.51(m,2H)1.37(s,3H)1.27-1.33(m,1H)1.17(dd,J=14.18,8.91 Hz,1H)0.96-1.00(m,8H)0.89-0.93(m,3H)；MS：MS m/z 852.5(M⁺+1)。

化合物15及化合物16之製備

使用本文所述中間物並遵循針對合成化合物7及化合物8所闡述之一般程序來製備化合物15及化合物16。

化合物15：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(7-氟-4,6-二甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-14a-(1-甲基環丙基磺醯基胺基甲醯基)-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8, 9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 7.75(d,J=11.54 Hz,1H)7.58(d,J=8.28 Hz,1H)7.54(s,1H)5.82(br.s.,1H)5.33-5.40(m,1H)5.04(d,J=10.54 Hz,1H)4.64-4.73(m,2H)3.97-4.05(m,7H)3.86(d,J=10.79 Hz,1H)2.57-2.72(m,2H)2.34(d,J=6.53 Hz,1H)1.79(d,J=6.78 Hz,1H)1.57-1.70(m,5H)1.53(s,3H)1.48(d,J=11.04 Hz,1H)1.39(s,3H)1.32(br.s.,1H)1.12-1.29(m,3H)1.08(s,3H)0.98(d,J=6.53 Hz,6H)0.87-0.93(m,3H)；MS：MS m/z 870.4(M⁺+1)。

化合物16：(2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(7-氟-4,6-二甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-14a-(1-甲基環丙基磺醯基胺基甲醯基)-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 7.75(d,J=11.54 Hz,1H)7.58(d,J=8.28 Hz,1H)7.54(s,1H)5.81(br.s.,1H)5.36(t,J=10.29 Hz,1H)4.95(t,J=10.42 Hz,1H)4.65-4.72(m,2H)4.03(d,J=2.01 Hz,7H)3.83(d,J=10.29 Hz,1H)2.73(dt,J=13.93,6.84 Hz,3H)2.36-2.44(m,1H)1.85(br.s.,1H)1.57-1.74(m,5H)1.54(s,3H)1.45(d,J=11.80 Hz,2H)1.41(s,3H)1.30(d,J=14.05 Hz,3H)1.14(s,4H)1.01(d,J=6.27 Hz,3H)0.95(d,J=6.53 Hz,3H)0.91(br. s.,2H)；MS：MS m/z 868.9(M⁺-1)。

化合物17及化合物18之製備

使用本文所述中間物並遵循針對合成化合物7及化合物8所闡述之一般程序來製備化合物17及化合物18。

化合物17：((2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-((7-甲氧基喹喏啉-2-基)氧基)-7,11-二甲基-14a-(((1-甲基環丙基)磺醯基)胺基甲醯基)-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基)胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.26(s,1H)7.87(d,J=9.03 Hz,1H)7.32(d,J=2.76 Hz,1H)7.26-7.30(m,1H)5.88(br.s.,1H)5.34(br.s.,1H)4.75(s,1H)4.68(br.s.,1H)4.07(d,J=8.78 Hz,1H)3.99(s,3H)3.84(s,1H)2.66(d,J=7.03 Hz,2H)2.27(br.s.,1H)1.74-1.83(m,1H)1.69(br.s.,1H)1.60(d,J=8.03 Hz,3H)1.54(s,4H)1.40(d,J=6.27 Hz,3H)1.31(s,2H)1.26(s,4H)1.20(s,3H)0.97(dd,J=13.68,6.40 Hz,7H)0.88(br.s.,2H)；MS：MS m/z 823.5(M⁺+1)。

化合物18：((2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-2-((7-甲氧基喹喏啉-2-基)氧基)-7,11-二甲基-14a-(((1-甲基環丙基)磺醯基)胺基甲醯基)-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基)胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.27(s,1H)7.87(d,J=9.03 Hz,1H)7.34(d,J=2.51 Hz,1H)7.28(dd,J=9.03,2.76 Hz,1H)5.88(br.s.,1H)5.32(t,J=10.29 Hz,1H)4.73-4.81(m,1H)4.66(t,J=8.41 Hz,1H)4.12(d,J=10.54 Hz,1H)3.99(s,3H)3.84(d,J=10.29 Hz,1H)2.70(dd,J=13.93,7.65 Hz,3H)2.45-2.59(m,2H)1.98(s,2H)1.85(d,J=6.02 Hz,1H)1.70-1.77(m,2H)1.61(br.s.,3H)1.54(s,3H)1.31-1.47(m,2H)1.28(s,4H)1.23(s,3H)0.96(t,J=6.90 Hz,6H)0.87(br.s.,2H)；MS：MS m/z 823.5(M⁺+1)。

化合物19及化合物20之製備

使用本文所述中間物並遵循針對合成化合物7及化合物8所闡述之一般程序來製備化合物19及化合物20。

化合物19：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(4-乙氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-14a-(1-甲基環丙基磺醯基胺基甲醯基)-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.16(t,J=8.03 Hz,2H)7.74(t,J=7.78 Hz,1H)7.54-7.60(m,2H)5.83(br.s.,1H)5.37(t,J=10.29 Hz,1H)5.00-5.06(m,1H)4.69-4.77(m,2H)4.25(q,J=7.03 Hz,2H)4.02(d,J=12.05 Hz,1H)3.87(d,J=10.79 Hz,1H)2.58-2.75(m,3H)2.35(d,J=8.53 Hz,1H)1.73-1.84(m,1H)1.58-1.70(m,5H)1.53-1.57(m,6H)1.40-1.51(m,2H)1.31-1.37(m,4H)1.28(s,1H)1.09-1.21(m,1H)0.98(dd,J=6.27,5.02 Hz,6H)0.91(s,5H)；MS：MS m/z 836.5(M⁺+1)。

化合物20：(2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(4-乙氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-14a-(1-甲基環丙基磺醯基胺基甲醯基)-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.16(t,J=7.40 Hz,2H)7.74(t,J=7.78 Hz,1H)7.53-7.59(m,2H)5.83(br.s.,1H)5.36(s,1H)4.93-4.99(m,1H)4.69-4.79(m,2H)4.24(q, J=6.94 Hz,2H)4.04(d,J=10.29 Hz,1H)3.85(d,J=11.29 Hz,1H)2.63-2.79(m,3H)2.42(br.s.,1H)1.85(d,J=9.54 Hz,1H)1.62-1.77(m,3H)1.52-1.59(m,6H)1.39-1.49(m,3H)1.36(s,3H)1.27-1.32(m,3H)1.17(s,1H)0.89-1.01(m,11H)。MS：MS m/z 836.4(M⁺+1)。

化合物21之製備

使用本文所述中間物且藉由遵循針對合成化合物5所闡述之一般程序來製備化合物21。

化合物21：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(4,6-二甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.06(d,J=9.04 Hz,1H)7.51(s,1H)7.42(d,J=2.51 Hz,1H)7.13(dd,J=9.03,2.51 Hz,1H)5.81(br.s.,1H)5.37(t,J=10.16 Hz,1H)5.01(dd,J=10.54,7.28 Hz,1H)4.62-4.69(m,2H)3.98-4.04(m,4H)3.89-3.96(m,4H) 3.18-3.25(m,1H)2.89-2.97(m,1H)2.55-2.70(m,2H)2.38(q,J=7.86 Hz,1H)1.77(td,J=10.54,6.27 Hz,1H)1.70(dd,J=8.28,5.27 Hz,1H)1.57-1.66(m,3H)1.35-1.46(m,1H)1.24-1.34(m,3H)1.02-1.22(m,12H)0.98(t,J=6.53 Hz,6H)0.88-0.94(m,1H)；MS：MS m/z 784.2(M⁺+1)。

化合物22之製備

使用本文所述中間物且藉由遵循針對合成化合物7所闡述之一般程序來製備化合物22。

化合物22：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(4,6-二甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.06(d,J=9.29 Hz,1H)7.53(s,1H)7.43(d,J=2.51 Hz,1H)7.15(dd,J=9.16,2.64 Hz,1H)5.81(br.s.,1H)5.37(t,J=10.04 Hz,1H)5.00-5.06(m,1H)4.67-4.73(m,2H)3.97-4.04(m,4H)3.95(s,3H)3.83-3.89(m,1H)3.22(d,J=9.54 Hz,1H)2.94(s,1H)2.56-2.71(m,2H)2.36(d,J=7.28 Hz,1H)1.75-1.84(m, 1H)1.71(dd,J=8.03,5.27 Hz,1H)1.56-1.66(m,3H)1.39-1.46(m,1H)1.37(s,3H)1.24-1.32(m,2H)1.03-1.22(m,4H)0.98(t,J=7.53 Hz,9H)0.88-0.93(m,1H)；MS：MS m/z 838.2(M⁺+1)。

化合物23之製備

使用本文所述中間物且藉由遵循針對合成化合物5所闡述之一般程序來製備化合物23。

化合物23：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(7-氟-4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 9.09(s,1H)8.17(dd,J=9.03,5.27 Hz,1H)7.74(dd,J=9.54,2.51 Hz,1H)7.49-7.58(m,2H)5.83(br.s.,1H)5.36(t,J=10.67 Hz,1H)5.03(t,J=10.67 Hz,1H)4.63-4.78(m,2H)3.99-4.05(m,4H)3.85(d,J=10.54 Hz,1H)2.97(tt,J=7.94,4.86 Hz,1H)2.64-2.78(m,3H)2.41(ddd,J=13.80,9.66,4.14 Hz,1H)1.78-1.87(m,1H)1.73 (dd,J=8.28,5.77 Hz,1H)1.56-1.67(m,3H)1.29-1.49(m,5H)1.04-1.21(m,12H)1.00(d,J=6.53 Hz,3H)0.95(d,J=6.27 Hz,3H)；MS：MS m/z 772.4(M⁺+1)。

化合物24之製備

使用本文所述中間物且藉由遵循針對合成化合物7所闡述之一般程序來製備化合物24。

化合物24：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(7-氟-4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 9.10(s,1H)8.19(dd,J=9.16,5.40 Hz,1H)7.76(dd,J=9.54,2.51 Hz,1H)7.51-7.61(m,2H)5.80-5.85(m,1H)5.36(t,J=10.54 Hz,1H)4.99-5.06(m,1H)4.65-4.77(m,2H)3.99-4.05(m,4H)3.81(d,J=10.29 Hz,1H)2.94-3.00(m,1H)2.64-2.79(m,3H)2.41(ddd,J=13.80,9.79,4.27 Hz,1H)1.85(d,J=6.27 Hz,1H)1.73(dd,J=8.28,5.77 Hz,1H)1.57-1.68(m,3H)1.44 (d,J=12.05 Hz,1H)1.29-1.39(m,7H)1.09-1.20(m,3H)1.04-1.08(m,3H)1.00(d,J=6.53 Hz,3H)0.94(d,J=6.53 Hz,3H)；MS：MS m/z 824.2(M⁺-1)。

化合物25之製備

使用本文所述中間物且藉由遵循針對合成化合物7所闡述之一般程序來製備化合物25。

化合物25：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-氯-4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-14a-(1-甲基環丙基磺醯基胺基甲醯基)-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.18(dd,J=8.41,1.13 Hz,1H)7.78(dd,J=7.53,1.00 Hz,1H)7.72(s,1H)7.48(t,J=8.03 Hz,1H)5.83(br.s.,1H)5.36(t,J=9.91 Hz,1H)5.01-5.07(m,1H)4.69-4.79(m,2H)3.96-4.03(m,4H)3.83(d,J=10.79 Hz,1H)3.19(br.s.,1H)2.60-2.74(m,3H)2.32(br.s.,1H)1.73-1.81(m,1H)1.56-1.71(m,5H)1.54(s,3H)1.46-1.51(m,1H)1.39(br.s.,1H)1.31-1.35 (m,3H)1.24(d,J=7.28 Hz,2H)0.97(t,J=6.02 Hz,6H)0.90(s,6H)；MS：MS m/z 856.2(M⁺+1)。

化合物26及化合物27之製備

使用本文所述中間物並遵循針對合成化合物5及化合物6所闡述之一般程序來製備化合物26及化合物27。

化合物26：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(6-甲氧基喹喏啉-2-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.86(s,1H)8.37(s,1H)7.82(d,J=9.03 Hz,1H)7.36-7.44(m,2H)5.87(br.s.,1H)5.37(t,J=10.42 Hz,1H)5.02(dd,J=10.54,7.28 Hz,1H)4.64-4.73(m,2H)4.04(dd,J=11.80,3.51 Hz,1H)3.95(s,3H)3.84(d,J=10.79 Hz,1H)3.18-3.23(m,1H)2.90-2.98(m,1H)2.64(d,J=8.53 Hz,2H)2.31-2.38(m,1H)1.68-1.80(m,2H)1.55-1.67(m,3H)1.36-1.45(m,1H)1.22-1.34(m,2H)1.15-1.22(m,2H) 1.02-1.13(m,11H)0.98(d,J=6.27 Hz,3H)0.94(d,J=6.53 Hz,3H)0.86(br.s.,1H)；MS：MS m/z 755.4(M⁺+1)。

化合物27：(2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(6-甲氧基喹喏啉-2-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.38(s,1H)7.82(d,J=9.03 Hz,1H)7.34-7.46(m,2H)5.86(br.s.,1H)5.26-5.38(m,1H)4.53-4.76(m,2H)4.12(q,J=7.28 Hz,1H)3.95(s,3H)3.85(d,J=10.29 Hz,1H)2.94(br.s.,1H)2.62-2.77(m,2H)2.46(br.s.,1H)1.55-1.87(m,5H)1.23-1.42(m,6H)1.14(s,11H)1.05(dd,J=6.53,4.02 Hz,2H)0.89-0.98(m,6H)；MS：MS m/z 755.4(M⁺+1)。

化合物28及化合物29之製備

使用本文所述中間物並遵循針對合成化合物5及化合物6所闡述之一般程序來製備化合物28及化合物29。

化合物28：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(7-甲氧基喹喏啉-2-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.24(s,1H)7.86(s,1H)7.23-7.33(m,2H)5.89(d,J=2.76 Hz,1H)5.36(t,J=9.54 Hz,1H)5.05(br.s.,1H)4.62-4.75(m,2H)4.07(d,J=8.28 Hz,1H)3.98(s,3H)3.85(d,J=10.79 Hz,1H)2.93(br.s.,1H)2.60-2.72(m,2H)2.31(br.s.,1H)1.68-1.82(m,2H)1.54-1.67(m,3H)1.36-1.48(m,1H)1.16-1.32(m,5H)1.11(s,11H)0.96(dd,J=18.82,6.53 Hz,6H)0.81-0.91(m,1H)；MS：MS m/z 755.4(M⁺+1)。

化合物29：(2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(7-甲氧基喹喏啉-2-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸第三丁酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.25(s,1H)7.84(d,J=9.03 Hz,1H)7.33(d,J=2.51 Hz,1H)7.26(dd,J=9.03,2.76 Hz,1H)5.88(br.s.,1H)5.29(br.s.,1H)4.71(d,J=11.54 Hz,1H)4.56-4.64(m,1H)4.16(br.s.,1H)3.98(s,3H)3.88(d,J=10.29 Hz,1H)2.94(br.s.,1H)2.68(dd,J=13.43,7.91 Hz,2H)2.50(br.s.,1H)1.95-2.00(m,1H)1.73-1.89(m,3H)1.62(br.s.,2H)1.32(d,J=12.05 Hz,4H)1.20-1.27(m,1H)1.13(s,12H) 0.93-0.97(m,7H)；MS：MS m/z 755.4(M⁺+1)。

化合物30及化合物31之製備

使用本文所述中間物並遵循針對合成化合物7及化合物8所闡述之一般程序來製備化合物30及化合物31。

化合物30：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(7-甲氧基喹喏啉-2-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.89(s,1H)8.26(s,1H)7.87(d,J=9.03 Hz,1H)7.25-7.35(m,2H)5.88(d,J=2.76 Hz,1H)5.33-5.41(m,1H)5.03(dd,J=10.67,7.15 Hz,1H)4.76-4.81(m,1H)4.69(t,J=8.41 Hz,1H)3.96-4.07(m,4H)3.81(d,J=10.79 Hz,1H)3.23(br.s.,2H)2.90-3.00(m,1H)2.66(d,J=6.02 Hz,2H)2.29-2.38(m,1H)1.54-1.82(m,5H)1.40(d,J=6.27 Hz,1H)1.28-1.35(m,3H)1.25(s,3H)1.03-1.22(m,5H)0.84-1.02(m,7H)；MS：MS m/z 809.2(M⁺+1)。

化合物31：(2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(7-甲氧基喹喏啉-2-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.27(s,1H)7.86(d,J=9.03 Hz,1H)7.33(d,J=2.76 Hz,1H)7.27(dd,J=9.29,2.76 Hz,1H)5.86(br.s.,1H)5.30(br.s.,1H)4.57-4.77(m,2H)4.15(br.s.,1H)3.93-4.04(m,4H)3.84(d,J=10.79 Hz,1H)2.94(br.s.,1H)2.63-2.74(m,2H)2.51(d,J=14.31 Hz,2H)1.98(s,1H)1.72-1.91(m,3H)1.62(br.s.,2H)1.32(d,J=12.30 Hz,4H)1.28(s,3H)1.22(s,3H)1.10(d,J=4.52 Hz,3H)0.95(t,J=6.02 Hz,6H)；MS：MS m/z 807.2(M⁺-1)。

化合物32之製備

使用本文所述中間物且藉由遵循針對合成化合物7所闡述之一般程序來製備化合物32。

化合物32：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(6-甲氧基喹喏啉-2-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.88(s,1H)8.39(s,1H)7.92(s,1H)7.83(d,J=9.03 Hz,1H)7.39-7.45(m,2H)5.86(br.s.,1H)5.34-5.40(m,1H)5.03(dd,J=10.79,7.78 Hz,2H)4.66-4.77(m,2H)4.02(dd,J=11.92,3.39 Hz,1H)3.78-3.84(m,1H)3.20(br.s.,1H)2.91-2.98(m,1H)2.63-2.68(m,2H)2.29-2.35(m,1H)1.55-1.80(m,5H)1.39(br.s.,1H)1.28-1.35(m,2H)1.24-1.28(m,4H)1.22(s,3H)1.04-1.20(m,4H)0.99(d,J=6.53 Hz,3H)0.94(d,J=6.53 Hz,3H)0.87(br.s.,1H)；MS：MS m/z 809.4(M⁺+1)。

化合物33之製備

使用本文所述中間物且藉由遵循針對合成化合物7所闡述之一般程序來製備化合物33。

化合物33：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(7-氟-4,6-二甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 7.74(d,J=11.54 Hz,1H)7.57(d,J=8.28 Hz,1H)7.54(s,1H)5.81(br.s.,1H)5.37(t,J=10.42 Hz,1H)5.02(dd,J=10.42,7.40 Hz,1H)4.64-4.71(m,2H)4.03(d,J=1.25 Hz,6H)3.95-4.00(m,1H)3.82-3.87(m,1H)3.22(d,J=6.53 Hz,1H)2.90-2.97(m,1H)2.57(d,J=4.27 Hz,2H)2.31-2.38(m,1H)1.74-1.82(m,1H)1.70(dd,J=8.03,5.27 Hz,1H)1.57-1.66(m,3H)1.38(s,3H)1.23-1.33(m,3H)1.10-1.22(m,3H)1.02-1.09(m,4H)0.98(dd,J=6.53,3.76 Hz,6H)0.93(d,J=6.53 Hz,1H)；MS：MS m/z 856.2(M⁺+1)。

化合物34之製備

使用本文所述中間物且藉由遵循針對合成化合物7所闡述之一般程序來製備化合物34。

化合物34：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(環丙基磺醯基胺基甲醯基)-2-(異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.22(d,J=8.78 Hz,1H)8.00(d,J=6.02 Hz,1H)7.92(s,2H)7.83(d,J=8.03 Hz,1H)7.72(td,J=7.53,1.25 Hz,1H)7.54(t,J=7.15 Hz,1H)7.34(d,J=5.77 Hz,1H)5.90(br.s.,1H)5.36(t,J=10.04 Hz,1H)5.04(br.s.,2H)4.72-4.81(m,3H)4.62(s,1H)4.01(br.s.,1H)3.85(d,J=10.79 Hz,1H)2.94(br.s.,1H)2.61-2.76(m,2H)1.74-1.82(m,1H)1.68-1.73(m,1H)1.64(dd,J=9.54,5.27 Hz,3H)1.41(br.s.,1H)1.30(s,3H)1.23-1.28(m,1H)1.19(d,J=8.28 Hz,4H)0.98(dd,J=9.03,6.53 Hz,6H)0.90-0.94(m,1H)0.87(s,3H)；MS：MS m/z 776.2(M⁺-1)。

化合物35之製備

使用本文所述中間物且藉由遵循針對合成化合物7所闡述之一般程序來製備化合物35。

化合物35：(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(4-甲氧基異喹啉-1-基氧基)-7,11-二甲基-14a-(1-甲基環丙基磺醯基胺基甲醯基)-5,16-二側氧基-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-十六氫環丙并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環十五烯-6-基胺基甲酸1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基酯。¹H NMR(400 MHz,CD₃OD)：δ ppm 8.14(dd,J=17.69,8.16 Hz,2H)7.74(ddd,J=8.28,7.03,1.25 Hz,1H)7.55-7.59(m,2H)5.83(br.s.,1H)5.36(t,J=10.29 Hz,1H)5.03(br.s.,1H)4.74(d,J=10.29 Hz,2H)4.03(s,3H)3.86(d,J=10.54 Hz,1H)3.21(d,J=18.07 Hz,1H)2.58-2.74(m,2H)2.34(br.s.,1H)1.74-1.83(m,1H)1.56-1.70(m,5H)1.53(s,3H)1.38-1.50(m,3H)1.31-1.35(m,3H)1.13-1.29(m,3H)0.97(t,J=6.02 Hz,6H)0.90(s,5H)；MS：MS m/z 823.4(M⁺+1)。

生物學研究

本揭示內容中利用HCV NS3/4A蛋白酶複合酶分析及基於細胞之HCV複製子分析，並如下所述進行製備、實施並驗證：

重組HCV NS3/4A蛋白酶複合物之產生

如下文所述產生源自BMS菌株、H77菌株或J4L6S菌株之HCV NS3蛋白酶複合物。將所產生之該等經純化重組蛋白用於均質性分析(參見下文)，以提供本揭示內容化合物在抑制HCV NS3蛋白水解活性方面之有效程度之指示。

自San Francisco Hospital的T.Wright醫生獲得來自HCV-感染患者之血清。自藉由血清RNA(核糖核酸)之逆轉錄-PCR(RT-PCR)並使用基於其他基因型1a菌株間之同源性所選擇之引物所獲得之DNA片段構築HCV基因組(BMS菌株)之經改造之全長cDNA(互補去氧核糖核酸)模板。自整個基因組序列之確定，根據Simmonds等人之分類法將基因型1a指派為HCV分離物。(參見P Simmonds、KA Rose、S Graham、SW Chan、F McOmish、BC Dow、EA Follett、PL Yap及H Marsden,J.Clin.Microbiol.,31(6),1493-1503(1993))。非結構性區之胺基酸序列NS2-5B顯示與HCV基因型1a(H77)>97%一致且與基因型1b(J4L6S)87%一致。自R.Purcell(NIH)獲得感染性純系H77(1a基因型)及J4L6S(1b基因型)，且該等序列係公佈於Genbank(AAB67036，參見Yanagi,M.、Purcell,R.H.、Emerson,S.U.及Bukh,J.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94(16),8738-8743(1997)；AF054247，參見Yanagi,M.、St Claire,M.、Shapiro,M.、Emerson,S.U.、Purcell,R.H.及Bukh,J.,Virology 244(1),161-172.(1998))中。

使用H77及J4L6S菌株來產生重組NS3/4A蛋白酶複合物。如P.Gallinari等人所述操縱該等菌株之編碼重組HCVNS3/4A蛋白酶複合物之DNA(胺基酸1027至1711)(參見Gallinari P、Paolini C、Brennan D、Nardi C、Steinkuhler C、De Francesco R.Biochemistry.38(17)：5620-32,(1999))。簡言之，在NS4A編碼區之3'-末端處添加三離胺酸增溶尾(solubilizing tail)。將NS4A-NS4B裂解位點(胺基酸1711)之P1位中之半胱胺酸交換為甘胺酸，以避免離胺酸標籤發生蛋白水解裂解。此外，藉由PCR在胺基酸1454位引入半胱胺酸至絲胺酸突變，以防止在NS3解旋酶結構域中自溶裂解。在pET21b細菌表現載體(Novagen)中選殖變體DNA片段，且遵循P.Gallinari等人所述方案並進行修改以在大腸桿菌(Escherichia.coli)菌株BL21(DE3)(Invitrogen)中表現NS3/4A複合物(參見Gallinari P、Brennan D、Nardi C、Brunetti M、Tomei L、Steinkuhler C、De Francesco R.,J Virol.72(8)：6758-69(1998))。簡言之，在20℃下利用0.5毫莫耳(mM)異丙基β-D-1-硫代半乳哌喃糖苷(IPTG)誘導NS3/4A蛋白酶複合物表現22小時(h)。典型發酵(1公升(L))產生大約10克(g)之濕細胞團。將細胞重新懸浮於由以下組成之裂解緩衝液(10 mL/g)中：25 mM N-(2-羥基乙基)六氫吡嗪-N'-(2-乙磺酸)(HEPES)(pH 7.5)、20%甘油、500 mM氯化鈉(NaCl)、0.5% Triton X-100、1微克/毫升(「μg/mL」)溶菌酶、5 mM氯化鎂(MgCl₂)、1 μg/ml DNA酶I、5 mM β-巰基乙醇(βME)、不含乙二胺四乙酸(EDTA)之蛋白酶抑制劑(Roche)，均質化並在4℃下培育20分鐘(min)。對均質物進行聲處理並在4℃下藉由超速離心以235000 g澄清1小時(h)。將咪唑添加至上清液中達15 mM之最終濃度，並將pH調節至8.0。將粗蛋白提取物裝載於經緩衝液B(25 mM HEPES，pH 8.0，20%甘油，500 mM NaCl，0.5% Triton X-100，15 mM咪唑，5 mM βME)預平衡之鎳-氮基三乙酸(Ni-NTA)管柱上。以1 mL/min之流速裝載樣品。用15倍管柱體積之緩衝液C(除0.2% Triton X- 100以外與緩衝液B相同)洗滌管柱。利用5倍管柱體積之緩衝液D(除200 mM咪唑以外與緩衝液C相同)溶析蛋白質。

將含有流分之NS3/4A蛋白酶複合物彙集在一起並裝載於經緩衝液D(25 mM HEPES，pH 7.5，20%甘油，300 mM NaCl，0.2% Triton X-100，10 mM βME)預平衡之去鹽管柱Superdex-S200上。以1 mL/min之流速裝載樣品。將含有流分之NS3/4A蛋白酶複合物彙集在一起並濃縮至大約0.5 mg/ml。源自BMS、H77及J4L6S菌株之NS3/4A蛋白酶複合物之純度藉由SDS-PAGE及質譜分析判斷為大於90%。將酶儲存於-80℃下，在用於分析緩衝液之前在冰上解凍並稀釋。

FRET肽分析以監測HCV NS3/4A蛋白水解活性

此活體外分析之目的係測量本揭示內容化合物對如上文所述源自BMS菌株、H77菌株或J4L6S菌株之HCV NS3蛋白酶複合物之抑制。此分析提供本揭示內容化合物在抑制HCV NS3蛋白水解活性方面之有效程度之指示。

為監測HCV NS3/4A蛋白酶活性，使用NS3/4A肽受質。該受質係RET S1(共振能量轉移酯肽受質；AnaSpec有限公司，目錄編號22991)(FRET肽)，由Taliani等人在Anal.Biochem.240(2)：60-67(1996)中所闡述。此肽之序列係鬆散地基於HCV NS3蛋白酶之NS4A/NS4B天然裂解位點，只是在裂解位點處存在酯連接而非醯胺鍵結。該肽亦在靠近肽之一末端處含有螢光施體EDANS且在靠近另一末端處含有受體DABCYL。該肽之螢光係藉由施體與受體間之分子間共振能量轉移(RET)淬滅，但由於NS3蛋白酶裂解該肽，故產物自RET淬滅釋放且施體之螢光變得明顯。

在不存在或存在本揭示內容化合物之情況下，利用三種重組NS3/4A蛋白酶複合物中之一者培育肽受質。化合物之抑制效應係藉由使用Cytofluor Series 4000即時監測螢光反應產物之形成來測定。

試劑係如下所述：HEPES及甘油(超純)係自GIBCO-BRL獲得。二甲亞碸(DMSO)係自Sigma獲得。β-巰基乙醇係自Bio Rad獲得。

分析緩衝液：50 mM HEPES，pH 7.5；0.15 M NaCl；0.1% Triton；15%甘油；10 mM βME。受質：2 μM最終濃度(來自儲存於-20℃下之存於DMSO中之2 mM儲備溶液)。HCV NS3/4A蛋白酶1a型(1b)，2 nM至3 nM最終濃度(來自存於25 mM HEPES中之5 μM儲備溶液，pH 7.5，20%甘油，300 mM NaCl，0.2% Triton-X100，10 mM βME)。對於具有接近分析極限之效能之化合物，藉由將50 μg/ml牛血清白蛋白(Sigma)添加至分析緩衝液中並將目標蛋白酶濃度降低至300 pM使分析更靈敏。

在來自Falcon之96孔聚苯乙烯黑色板中實施分析。每一孔含有存於分析緩衝液中之25 μl NS3/4A蛋白酶複合物、存於10% DMSO/分析緩衝液中之50 μl之本揭示內容化合物及存於分析緩衝液中之25 μl受質。亦在同一分析板上製備對照(無化合物)。將酶複合物與化合物或對照溶液混合1 min，然後藉由添加受質起始酶促反應。立即使用 Cytofluor Series 4000(Perspective Biosystems)對分析板進行讀數。儀器經設定在25℃下讀取340 nm之發射及490 nm之激發。通常密切注意反應大約15 min。

利用以下等式計算抑制百分比：100-[(δF_inh/δF_con)×100]其中δF係螢光在曲線之線性範圍內之變化。將非線性曲線擬合應用於抑制-濃度數據，且藉由使用等式y=A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))之Excel XL擬合軟體之使用來計算50%有效濃度(IC₅₀)。

發現針對一種以上類型之NS3/4A複合物進行測試之本揭示內容化合物具有類似抑制性能，但與1a菌株相比，該等化合物一致展示對1b菌株之較大效能。

HCV複製子之產生

HCV複製子完整細胞系統係如Lohmann V、Korner F、Koch J、Herian U、Theilmann L、Bartenschlager R.,Science 285(5424)：110-3(1999)所闡述來建立，並經修飾以引入螢光素酶報告基因，如Krieger等人所首次闡述(Krieger N、Lohmann V及BartenschlagerR,J.Virol.75(10)：4614-4624(2001))。直接在新黴素標記基因之上游使用位於核心中之Asc1限制位點，將編碼人類化形式之海腎螢光素酶基因之CDNA及直接融合至螢光素酶基因之3'-末端之連接體序列引入複製子構築體中。亦引入1179位之適應性突變(絲胺酸至異白胺酸)(Blight KJ、Kolykhalov、AA、Rice、CM,Science 290(5498)：1972-1974)。藉由首先使質體DNA與ScaI線性化來產生組成性表現此HCV複製子構築體之穩定細胞系。根據製造商之說明書使用T7 MegaScript轉錄套組(Ambion,Austin,TX)活體外合成RNA轉錄物。將cDNA之活體外轉錄物轉染至人類肝癌細胞系HUH-7中。在可選標記新黴素(G418)之存在下達成組成性表現HCV複製子之細胞之選擇。對所得細胞系表徵隨時間而變之正鏈及負鏈RNA產量及蛋白質產量。

產生代表基因型1a H77菌株之穩定HCV複製子螢光素酶報告基因細胞系(Yanagi M,Purcell RH,Emerson SU等人，Transcripts from a single full-length cDNA clone of hepatitis C virus are infectious when directly transfected into the liver of a chimpanzee.Proc Natl Acad Sci USA 1997；94(16)：8738-8743)，如先前針對基因型1b(Con1)複製子螢光素酶細胞系所闡述。藉由引入突變來修飾複製子構築體，將該等突變引入編碼NS3解旋酶結構域(在1496位處脯胺酸由白胺酸替代)及NS5A(在2204位處絲胺酸至異白胺酸)之基因中，以改良細胞培養中之複製。

HCV複製子螢光素酶報告基因分析

研發HCV複製子螢光素酶分析以監測本揭示內容中所述化合物對HCV基因型1a及1b病毒複製之抑制效應。使組成性表現HCV複製子之HUH-7細胞在含有10%胎牛血清(FCS)(Sigma)及1 mg/mL G418(Gibco-BRL)之杜貝克氏改良伊氏培養基(Dulbecco's Modified Eagle Media，DMEM)(Gibco-BRL)中生長。在DMSO中將化合物連續稀釋3倍用於20點滴定，且隨後轉移至無菌384孔組織培養處理板(Corning目錄編號3571)。然後用50 μL之細胞以3.0×10³個細胞/孔存於含有4% FCS之DMEM中之密度對該等板進行接種(最終DMSO濃度為0.5%)。在37℃下培育3天後，使用EnduRen作為受質(Promega目錄編號E6485)分析細胞之海腎螢光素酶活性。將EnduRen受質稀釋於DMEM中且然後添加至該等板中達7.5 μM之濃度。在37℃下將該等板培育2 hr且然後立即使用發光程序利用Viewlux Imager(PerkinElmer)讀數30秒。為評價化合物之細胞毒性，利用Cell Titer-Blue(Promega，目錄編號G8082)藉由多次使用含有EnduRen之板來產生CC₅₀值。將Cell-Titer Blue(3 μL)添加至每一孔中並在37℃下培育8 hr。使用Viewlux Imager讀取來自每一孔之激發波長為525/10 nm且發射波長為598/10 nm之螢光信號。

藉由使用四參數邏輯等式計算化合物之EC₅₀值：y=A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))，其中A及B分別表示最小及最大抑制%，C係EC₅₀，D係希爾斜率(hill slope)且x代表化合物濃度。

表2顯示本揭示內容之代表性化合物之EC₅₀值。範圍係如下所述：A=0.20 nM至1.0 nM；B=1.01 nM至2.0 nM；C=2.01 nM至5.0 nM；D=5.01 nM至68 nM。

熟習此項技術者應明瞭，本揭示內容並不限於上述說明性實例，且其可涵蓋其他具體形式，而不背離其本質屬性。因此，期望該等實例在所有態樣中均視為僅為說明性而無限定性，參照隨附申請專利範圍而非上述實例，且因此本揭示內容意欲涵蓋屬於申請專利範圍等效內容之含義及範圍內的所有變化。

Claims

一種式(I)化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中q係1或2；係單鍵或雙鍵；R^p係選自其中R^p係藉助該基團中之任一可取代碳原子附接至母體分子部分；n係0、1、2、3、4、5或6；X⁰係選自CH及N；X¹係選自CH及N；X²及X³係獨立地選自CH、C(R^a)及N；限制條件係X¹、X²及X³中之至少一者不為N；每一R^a係獨立地選自烯基氧基、烷氧基、烷氧基烷氧基、烷基、苯并二噁烷基、羧醯胺基、羧基、羧基烷氧基、氰基、環烷基烷氧基、環烷基氧基、氘代烷氧基、二烷基胺基、鹵基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、鹵代烷氧基羰基、羥基、嗎啉基、苯基、六氫吡啶基、吡唑基、吡啶基及吡咯啶基，其中該嗎啉基、該苯基、該六氫吡啶基、該吡啶基及該吡咯啶基視情況經一或兩個獨立地選自烷氧基、烷基、烷基磺醯基、鹵基、鹵代烷氧基、鹵代烷基及嗎啉基之基團取代；且其中兩個毗鄰R^a基團與其所附接之碳原子一起可視情況形成選自二噁烷基、二氧戊環基、嗎啉基、哌喃基及苯基之環，其中該環視情況經一或兩個獨立地選自烷基及鹵基之基團取代；R^b係烷基；R^x係選自甲基及乙基；R^y及R^z係獨立地選自氫及羥基；限制條件係當為雙鍵時，R^y及R^z各自為氫；R²係選自氫、烷基、鹵基、鹵代烷氧基、鹵代烷基及羥基烷基；且R³係選自氫、烷氧基烷氧基羰基、烷氧基羰基、烷基胺基羰基、烷基羰基、環烷基烷氧基羰基、環烷基羰基、環烷基氧基羰基、氘代烷氧基羰基、氘代鹵代烷氧基羰基、二烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基羰基、鹵代烷氧基羰基、鹵代烷基胺基羰基、鹵代烷基羰基、雜環基羰基、雜環基氧基羰基、苯基羰基及苯基氧基羰基，其中該環烷基烷氧基羰基、該環烷基羰基及該環烷基氧基羰基之環烷基部分、該雜環基羰基及該雜環基氧基羰基之雜環基部分以及該苯基羰基及該苯基氧基羰基之苯基部分視情況經一個、兩個或三個獨立地選自烷基、烷基胺基、烷基羰基、環烷基、二烷基胺基、鹵基、鹵代烷氧基及鹵代烷基之基團取代。
如請求項1之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中：q係1；係雙鍵；R^x係甲基；且R^y及R^z各自係氫。
如請求項1之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中R^p係：
如請求項2之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中n係0、1、2或3；每一R^a係獨立地選自烷氧基及鹵基；且R³係選自烷氧基羰基及鹵代烷氧基羰基。
一種式(II)化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其中n係0、1、2、3、4、5或6；每一R¹係獨立地選自烷氧基、烷基、羧醯胺基、羧基、氰基、環烷基氧基、二烷基胺基、鹵基、鹵代烷基、鹵代烷氧基及苯基，其中該苯基視情況經一或兩個獨立地選自烷氧基、烷基、鹵基、鹵代烷氧基及鹵代烷基之基團取代；R²係選自氫、烷基、鹵基及鹵代烷基；且R³係選自烷氧基羰基、烷基羰基、鹵代烷氧基羰基、鹵代烷基羰基及苯基羰基，其中該苯基視情況經一或兩個獨立地選自烷基及鹵基之基團取代。
一種化合物，其選自或其醫藥上可接受之鹽。
一種組合物，其包含式(I)化合物、或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑。
如請求項7之組合物，其進一步包含至少一種具有抗HCV活性之其他化合物。
如請求項8之組合物，其中該等其他化合物中之至少一者係干擾素或利巴韋林(ribavirin)。
如請求項9之組合物，其中該干擾素係選自干擾素α 2B、聚乙二醇化干擾素α、複合干擾素、干擾素α 2A及類淋巴母細胞干擾素τ。
如請求項8之組合物，其中該等其他化合物中之至少一者係選自介白素2、介白素6、介白素12、咪喹莫特(Imiquimod)、利巴韋林、肉苷5'-單磷酸去氫酶抑制劑、金剛烷胺及金剛烷乙胺。
如請求項8之組合物，其中該等其他化合物中之至少一者有效抑制選自以下之標靶之功能用於治療HCV感染：HCV金屬蛋白酶、HCV絲胺酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV進入、HCV組裝、HCV釋出、HCV NS5A蛋白及IMPDH。
一種式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造治療HCV感染之醫藥。
如請求項13之用途，其中該醫藥進一步包含至少一種具有抗HCV活性之其他化合物，或係之前、之後或與其同時投與。
如請求項14之用途，其中該等其他化合物中之至少一者係干擾素或利巴韋林。
如請求項15之用途，其中該干擾素係選自干擾素α 2B、聚乙二醇化干擾素α、複合干擾素、干擾素α 2A及類淋巴母細胞干擾素τ。
如請求項14之用途，其中該等其他化合物中之至少一者係選自介白素2、介白素6、介白素12、咪喹莫特、利巴韋林、肉苷5'-單磷酸去氫酶抑制劑、金剛烷胺及金剛烷乙胺。
如請求項14之用途，其中該等其他化合物中之至少一者有效抑制選自以下之標靶之功能用於治療HCV感染：HCV金屬蛋白酶、HCV絲胺酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV進入、HCV組裝、HCV釋出、HCV NS5A蛋白及IMPDH。