ES2604690T3

ES2604690T3 - Inhibidores del virus de la hepatitis C

Info

Publication number: ES2604690T3
Application number: ES12729291.0T
Authority: ES
Inventors: Ramkumar Rajamani; Kishore V. Renduchintala; Kandhasamy SARKUNAM; Pulicharla NAGALAKSHMI; Nicholas A. Meanwell; Paul Michael Scola
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2011-06-15
Filing date: 2012-06-12
Publication date: 2017-03-08
Anticipated expiration: 2032-06-12
Also published as: US8691757B2; EP2721053B1; BR112013032049A2; JP2014522809A; EA201391717A1; AR086934A1; CN103732613A; WO2012173983A1; EP2721053A1; US20130142754A1; MX2013014002A; EA024173B1; TW201305173A; CA2839400A1; JP6078536B2

Abstract

Un compuesto de fórmula (I)**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que q es 1 o 2; es un enlace simple o doble; Rp se selecciona entre en la que Rp está unido al resto molecular precursor a través de cualquier átomo de carbono sustituible en el grupo; n es 0, 1,2, 3, 4, 5 o 6; X0 se selecciona entre CH y N; X1 se selecciona entre CH y N; X2 y X3 se seleccionan independientemente entre CH, C(Ra) y N; con la condición de que al menos uno de X1, X2 y X3 sea distinto de N; cada Ra se selecciona independientemente entre alqueniloxi, alcoxi, alcoxialcoxi, alquilo, benzodioxanilo, carboxamido, carboxi, carboxialcoxi, ciano, cicloalquilalcoxi, cicloalquiloxi, deuteroalcoxi, dialquilamino, halo, haloalquilo, haloalcoxi, haloalcoxicarbonilo, hidroxi, morfolinilo, fenilo, piperazinilo, pirazolilo, piridinilo y pirrolidinilo, en donde el morfolinilo, el fenilo, el piperazinilo, el piridinilo y el pirrolidinilo están opcionalmente sustituidos con uno o dos grupos seleccionados independientemente entre alcoxi, alquilo, alquilsulfonilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo y morfolinilo; y en donde dos grupos Ra adyacentes, junto con los átomos de carbono a los que están unidos, pueden formar opcionalmente un anillo seleccionado entre dioxanilo, dioxolanilo, morfolinilo, piranilo y fenilo, en donde el anillo está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados independientemente entre alquilo y halo; Rb es alquilo; Rx se selecciona entre metilo y etilo; Ry y Rz se seleccionan independientemente entre hidrógeno e hidroxi; con la condición de que cuando es un enlace doble, Ry y Rz son cada uno hidrógeno; R2 se selecciona entre hidrógeno, alquilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo e hidroxialquilo; y R3 se selecciona entre hidrógeno, alcoxialcoxicarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, alquilcarbonilo, cicloalquilalcoxicarbonilo, cicloalquilcarbonilo, cicloalquiloxicarbonilo, deuteroalcoxicarbonilo, deuterohaloalcoxicarbonilo, dialquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilcarbonilo, haloalcoxicarbonilo, haloalquilaminocarbonilo, haloalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, heterocicliloxicarbonilo, fenilcarbonilo y feniloxicarbonilo, en donde la parte cicloalquilo del cicloalquilalcoxicarbonilo, el cicloalquilcarbonilo y el cicloalquiloxicarbonilo, la parte heterociclilo del heterociclilcarbonilo y el heterocicliloxicarbonilo, y la parte fenilo del fenilcarbonilo y el feniloxicarbonilo, están opcionalmente sustituidas con uno, dos o tres grupos.

Description

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DESCRIPCION

Inhibidores del virus de la hepatitis C Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

La presente solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud Provisional de EE.UU. con Numero de Serie 61/497, presentada el 15 de junio de 2011.

La presente divulgacion se dirige generalmente a compuestos antivmcos y mas espedficamente se dirige a compuestos que inhiben la funcion de la proteasa NS3 (tambien denominada en el presente documento "serina proteasa") codificada por el virus de la Hepatitis C (VHC), a composiciones que comprenden tales compuestos y a procedimientos para inhibir la funcion de la proteasa NS3.

El VHC es un patogeno humano importante, que infecta un estimado de 170 millones de personas en todo el mundo - aproximadamente cinco veces el numero infectado por el virus de inmunodeficiencia humana tipo 1. Una fraccion sustancial de estos individuos infectados por el VHC desarrolla una enfermedad hepatica progresiva grave, incluyendo cirrosis y carcinoma hepatocelular.

Actualmente, la terapia para el VHC mas eficaz emplea una combinacion de alfa-interferon y ribavirina, dando lugar a una eficiencia sostenida en el 40 % de los pacientes. Los resultados clinicos recientes demuestran que el alfa-interferon pegilado es superior al alfa-interferon sin modificar como monoterapia. Sin embargo, incluso con regimenes terapeuticos experimentales que implican combinaciones de alfa-interferon pegilado y ribavirina, una fraccion sustancial de pacientes no tiene una reduction sostenida en la carga virica. De esta manera, hay una necesidad clara y sin cumplir de desarrollar productos terapeuticos eficaces para el tratamiento de la infection por VHC.

El VHC es un virus de ARN de hebra positiva. Basandose en una comparacion de la secuencia deducida de aminoacidos y la similitud extensiva en la region 5' sin traducir, el VHC se ha clasificado como un genero separado en la familia Flaviviridae. Todos los miembros de la familia Flaviviridae tienen viriones envueltos que contienen un genoma de ARN de hebra positiva que codifica todas las proteinas especificas de virus conocidas a traves de la traduction de un unico marco de lectura abierto ininterrumpido.

Se encuentra heterogeneidad considerable dentro del nucleotido y la secuencia de aminoacidos codificada a traves de todo el genoma del VHC. Se han caracterizado seis genotipos principales y se han descrito mas de 50 subtipos. Los genotipos principales del VHC difieren en su distribution en todo el mundo y el significado clinico de la heterogeneidad genetica del VHC se mantiene dificil a pesar de numerosos estudios del posible efecto de los genotipos en la patogenesis y en la terapia.

El genoma de ARN del VHC de hebra unica tiene aproximadamente 9500 nucleotidos de longitud y tiene un marco de lectura abierto (ORF, por sus siglas en ingles) que codifica una unica poliprotema grande de aproximadamente 3000 aminoacidos. En celulas infectadas, esta poliprotema se escinde en multiples sitios por proteasas celulares y viricas para producir las proteinas estructurales y no estructurales (NS, por sus siglas en ingles). En el caso del VHC, la generation de proteinas no estructurales maduras (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A y NS5B) se efectua por dos proteasas viricas. La primera escinde en la union NS2-NS3; la segunda es una serina proteasa contenida dentro de la region N-terminal de NS3 y media todas las escisiones posteriores corriente debajo de NS3, tanto en cis, en el sitio de escision NS3-NS4A, como en trans, para el resto de sitios NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B. La proteina NS4A parece servir para multiples funciones, actuando como un co-factor para la proteasa NS3 y posiblemente asistiendo en la localization en la membrana de NS3 y otros componentes de la replicasa virica. La formation del complejo de la proteina NS3 con NS4A es esencial para el procesamiento eficaz de poliproteinas, potenciando la escision proteolitica en todos los sitos. La proteina NS3 tambien exhibe actividades nucleosido trifosfatasa y ARN helicasa. La NS5B es una ARN polimerasa dependiente de ARN que esta implicada en la replication del VHC.

La presente divulgacion proporciona compuestos peptidicos que pueden inhibir el funcionamiento de la NS3 proteasa, por ejemplo, en combinacion con la NS4A proteasa. Ademas, la presente divulgacion describe la administration de terapia de combinacion a un paciente al que puede administrarse un compuesto de acuerdo con la presente divulgacion, que es eficaz inhibiendo la proteasa NS3 del VHC, con compuestos adicionales que tienen actividad anti-VHC.

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-Q O

imagen1

En su primer aspecto, la presente divulgacion proporciona un compuesto de formula (I):

una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que es 1 o 2;

— es un enlace simple o doble;

Rp se selecciona entre

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en las que Rp esta unido al resto molecular precursor a traves de cualquier atomo de carbono sustituible en el grupo;

n es 0, 1,2, 3, 4, 5 o 6;

X0 se selecciona entre CH y N;

X1 se selecciona entre CH y N;

X2 y X3 se seleccionan independientemente entre CH, C(Ra) y N; con la condicion de que al menos uno de X1, X2 y X3 sea distinto de N;

cada Ra se selecciona independientemente entre alqueniloxi, alcoxi, alcoxialcoxi, alquilo, benzodioxanilo, carboxamido, carboxi, carboxialcoxi, ciano, cicloalquilalcoxi, cicloalquiloxi, deuteroalcoxi, dialquilamino, halo, haloalquilo, haloalcoxi, haloalcoxicarbonilo, hidroxi, morfolinilo, fenilo, piperazinilo, pirazolilo, piridinilo y pirrolidinilo, en los que el morfolinilo, el fenilo, el piperazinilo, el piridinilo y el pirrolidinilo estan opcionalmente sustituidos con uno o dos grupos seleccionados independientemente entre alcoxi, alquilo, alquilsulfonilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo y morfolinilo; y en los que dos grupos Ra adyacentes, junto con los atomos de carbono a los que estan unidos, pueden formar opcionalmente un anillo seleccionado entre dioxanilo, dioxolanilo, morfolinilo, piranilo y fenilo, en donde el anillo esta opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados independientemente entre alquilo y halo;

Rb es alquilo;

Rx se selecciona entre metilo y etilo;

Ry y Rz se seleccionan independientemente entre hidrogeno e hidroxi; con la condicion de que cuando es un enlace doble, Ry y Rz son cada uno hidrogeno;

R2 se selecciona entre hidrogeno, alquilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo e hidroxialquilo; y

R3 se selecciona entre hidrogeno, alcoxialcoxicarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, alquilcarbonilo, cicloaquilalcoxicarbonilo, cicloalquilcarbonilo, cicloalquiloxicarbonilo, deuteroalcoxicarbonilo,

deuterohaloalcoxicarbonilo, dialquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilcarbonilo, haloalcoxicarbonilo, haloalquilaminocarbonilo, haloalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, heterocicliloxicarbonilo, fenilcarbonilo y feniloxicarbonilo, en donde la parte cicloalquilo del cicloalquilalcoxicarbonilo, el cicloalquilcarbonilo y el cicloalquiloxicarbonilo, la parte heterociclilo del heterociclilcarbonilo y el heterocicliloxicarbonilo, y la parte fenilo del fenilcarbonilo y el feniloxicarbonilo, esta opcionalmente sustituida con uno, dos o tres grupos seleccionados independientemente entre alquilo, alquilamino, alquilcarbonilo, cicloalquilo, dialquilamino, halo, haloalcoxi y haloalquilo.

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En una primera realizacion del primer aspecto, la presente divulgacion proporciona un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que:

q es 1;

— es un enlace doble;

Rx es metilo; y

Ry y Rz son cada uno hidrogeno.

En una segunda realizacion del primer aspecto, la presente divulgacion proporciona un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que Rp es:

imagen3

En un tercer aspecto, la presente divulgacion proporciona un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que:

Rp es

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n es 0, 1, 2 o 3;

cada Ra se selecciona independientemente entre alcoxi y halo; y R3 se selecciona entre alcoxicarbonilo y haloalcoxicarbonilo.

En un segundo aspecto, la presente divulgacion proporciona un compuesto de formula (II)

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que n es 0, 1,2, 3, 4, 5 o 6;

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cada R1 se selecciona independientemente entre alcoxi, alquilo, carboxamido, carboxi, ciano, cicloalquiloxi, dialquilamino, halo, haloalquilo, haloalcoxi y fenilo, en los que el fenilo esta opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados independientemente entre alcoxi, alquilo, halo, haloalcoxi y haloalquilo;

R2 se selecciona entre hidrogeno, alquilo, halo y haloalquilo; y

R3 se selecciona entre alcoxicarbonilo, alquilcarbonilo, haloalcoxicarbonilo, haloalquilcarbonilo y fenilcarbonilo, en los que el fenilo esta opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados independientemente entre alquilo y halo.

En un tercer aspecto la presente divulgacion proporciona una composicion que comprende un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y un vehiculo farmaceuticamente aceptable. En una primera realizacion del tercer aspecto la presente divulgacion proporciona una composicion que comprende un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, al menos un compuesto adicional que tiene actividad anti-VHC y un vehiculo farmaceutico. En una segunda realizacion al menos uno de los compuestos adicionales es un interferon o una ribavirina. En una tercera realizacion el interferon se selecciona de interferon alfa 2B, interferon alfa pegilado, interferon consenso, interferon alfa 2A e interferon tau linfoblastoide. En una cuarta realizacion del tercer aspecto la presente divulgacion proporciona una composicion que comprende un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, al menos un compuesto adicional que tiene actividad anti-VHC y un vehiculo farmaceutico, en la que al menos uno de los compuestos adicionales se selecciona de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, imiquimod, ribavirina, un inhibidor de la inosin 5'-monofosfato deshidrogenasa, amantadina y rimantadina. En una quinta realizacion del tercer aspecto la presente divulgacion proporciona una composicion que comprende un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, al menos un compuesto adicional que tiene actividad anti-VHC y un vehiculo farmaceutico, en la que al menos uno de los compuestos adicionales es eficaz inhibiendo la funcion de una diana seleccionada de metaloproteasa del VHC, serina proteasa del VHC, polimerasa del VHC, helicasa del VHC, proteina NS4B del VHC, entrada del VHC, ensamblaje del VHC, egreso del VHC, proteina NS5A del VHC e IMPDH para el tratamiento de una infeccion por VHC.

En un cuarto aspecto la presente divulgacion proporciona un compuesto como se describe anteriormente para usar en un procedimiento para tratar una infeccion por VHC en un paciente, comprendiendo dicho procedimiento administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. En una primera realizacion del cuarto aspecto el procedimiento comprende ademas administrar al menos un compuesto adicional que tiene actividad anti-VHC antes de, despues de o simultaneamente con el compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo. En una segunda realizacion del cuarto aspecto al menos uno de los compuestos adicionales es un interferon o una ribavirina. En una tercera realizacion el interferon se selecciona de interferon alfa 2B, interferon alfa pegilado, interferon consenso, interferon alfa 2A e interferon tau linfoblastoide. En una cuarta realizacion del cuarto aspecto la presente divulgacion proporciona el dicho compuesto para usar en un procedimiento para tratar una infeccion por VHC en un paciente, comprendiendo el procedimiento administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y al menos un compuesto adicional que tiene actividad anti-VHC antes de, despues de o simultaneamente con el compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en el que al menos uno de los compuestos adicionales se selecciona de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, imiquimod, ribavirina, un inhibidor de la inosin 5'-monofosfato deshidrogenasa, amantadina y rimantadina. En una quinta realizacion del cuarto aspecto la presente divulgacion proporciona una composicion para usar en un procedimiento para tratar una infeccion por VHC en un paciente, comprendiendo dicho procedimiento administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y al menos un compuesto adicional que tiene actividad anti-VHC antes de, despues de o simultaneamente con el compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en el que al menos uno de los compuestos adicionales es eficaz inhibiendo la funcion de una diana seleccionada de metaloproteasa del VHC, serina proteasa del VHC, polimerasa del VHC, helicasa del VHC, proteina NS4B del VHC, entrada del VHC, ensamblaje del VHC, egreso del VHC, proteina NS5A del VHC e IMPDH para el tratamiento de una infeccion por VHC.

Otros aspectos de la presente divulgacion pueden incluir combinaciones adecuadas de realizaciones desveladas en el presente documento.

Otros aspectos y realizaciones mas pueden encontrarse en la descripcion proporcionada en el presente documento.

La descripcion de la presente divulgacion en el presente documento debe interpretarse de modo congruente con las leyes y principios del enlace quimico. En algunos casos, puede ser necesario retirar un atomo de hidrogeno para acomodar un sustituyente en cualquier localizacion dada.

Debe entenderse que los compuestos abarcados por la presente divulgacion son aquellos que son adecuadamente estables para su uso como agente farmaceutico.

Se pretende que la definicion de cualquier sustituyente o variable en una localizacion particular en una molecula sea independiente de sus definiciones en cualquier otra parte de dicha molecula. Por ejemplo, cuando n es 2, cada uno de los dos grupos R1 pueden ser iguales o diferentes.

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Como se usa en la presente memoria, las formas singulares "un", "uno" y "el" incluyen referencia en plural a menos que el contexto dicte claramente lo contrario.

El termino "alquenilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo de cadena lineal o ramificada de dos a seis atomos de carbono, que contiene al menos un enlace carbono-carbono doble.

El termino "alqueniloxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquenilo unido al resto molecular precursor a traves de un atomo de oxigeno.

El termino "alcoxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo unido al resto molecular precursor a traves de un atomo de oxigeno.

El termino "alcoxialcoxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alcoxialquilo unido al resto molecular precursor a traves de un atomo de oxigeno.

El termino "alcoxialcoxicarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alcoxialcoxi unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "alcoxialquilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos o tres grupos alcoxi.

El termino "alcoxicarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alcoxi unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "alquilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo obtenido a partir de un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que contiene de uno a diez atomos de carbono.

El termino "alquilcarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "alquilamino", como se usa en el presente documento, se refiere un -NHRq, en el que Rq es alquilo.

El termino "alquilaminocarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilamino unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "alquilsulfonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo unido al resto molecular precursor a traves de un grupo sulfonilo.

El termino "carbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)-.

El termino "carboxamido", como se usa en el presente documento, se refiere a -C(O)NRxRy, en el que Rx y Ry se seleccionan independientemente entre hidrogeno y alquilo.

El termino "carboxi", como se usa en el presente documento, se refiere a -CO2H.

El termino "carboxialcoxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo carboxialquilo unido al resto molecular precursor a traves de un atomo de oxigeno.

El termino "carboxialquilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos o tres grupos carboxi.

El termino "ciano", como se usa en el presente documento, se refiere a -CN.

El termino "cicloalquilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un sistema de anillo hidrocarburo saturado, monodclico o biciclico, que tiene de tres a siete atomos de carbono y cero heteroatomos. Los ejemplos representativos de grupos cicloalquilo incluyen, pero sin limitacion, ciclopropilo, ciclobutilo y ciclopentilo.

El termino "cicloalquilalcoxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo (cicloalquil)alquilo unido al resto molecular precursor a traves de un atomo de oxigeno.

El termino "cicloalquilalcoxicarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo cicloalquilalcoxi unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

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El termino "(ddoalquN)alquNo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos o tres grupos ddoalquilo.

El termino "cicloalquilcarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo cicloalquilo unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "cicloalquiloxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo cicloalquilo unido al resto molecular precursor a traves de un atomo de oxigeno.

El termino "cicloalquiloxicarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo cicloalquiloxi unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "deuteroalcoxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alcoxi en el que al menos uno de los atomos de hidrogeno esta reemplazado por un atomo de deuterio.

El termino "deuteroalcoxicarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo deuteroalcoxi unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "deuterohaloalcoxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo haloalcoxi donde al menos uno de los atomos de hidrogeno esta reemplazado por un atomo de deuterio.

El termino "deuterohaloalcoxicarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo deuterohaloalcoxi unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "dialquilamino", como se usa en el presente documento, se refiere a -NRpRq, en el que Rp y Rq son grupos alquilo. Los grupos alquilo pueden ser iguales o diferentes.

El termino "dialquilaminocarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo dialquilamino unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "dialquilaminocarbonilcarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo dialquilaminocarbonilo unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

Los terminos "halo" y "halogeno", como se usan en el presente documento, se refieren a F, Cl, Br e I.

El termino "haloalcoxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo haloalquilo unido al resto molecular precursor a traves de un atomo de oxigeno.

El termino "haloalcoxicarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo haloalcoxi unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "haloalquilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos, tres o cuatro atomos de halogeno.

El termino "haloalquilcarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo haloalquilo unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "haloalquilamino", como se usa en el presente documento, se refiere un -NHRq, en el que Rq es un grupo haloalquilo.

El termino "haloalquilaminocarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo haloalquilamino unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "heterociclilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un anillo de cinco, seis o siete miembros que contiene uno, dos o tres heteroatomos seleccionados independientemente entre nitrogeno, oxigeno y azufre. El anillo de cinco miembros tiene de cero a dos enlaces dobles y los anillos de seis y siete miembros tienen de cero a tres enlaces dobles. El termino "heterociclilo" tambien incluye grupos bidclicos en los que el anillo heterociclilo esta condensado con un grupo fenilo, un grupo cicloalquenilo monodclico, un grupo cicloalquilo monodclico u otro grupo heterociclilo monodclico; y grupos tridclicos en los que un sistema bidclico esta condensado con un grupo fenilo, un grupo cicloalquenilo monodclico, un grupo cicloalquilo monodclico u otro grupo heterociclilo monodclico. Los grupos heterociclilo de la presente invencion pueden estar unidos al resto molecular precursor a traves de un atomo de carbono o un atomo de nitrogeno en el grupo. Los ejemplos de grupos heterociclilo incluyen, pero sin limitacion, benzotienilo, furilo, imidazolilo, indolinilo, indolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, morfolinilo, oxazolilo, piperazinilo, piperidinilo,

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pirazolilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirrolopiridinilo, pirrolilo, tiazolilo, tienilo y tiomorfolinilo.

El termino "heterociclilcarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo heterociclilo unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "heterocicliloxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo heterociclilo unido al resto molecular precursor a traves de un atomo de oxigeno.

El termino "heterocicliloxicarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo heterocicliloxi unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "hidroxi", como se usa en el presente documento, se refiere a -OH.

El termino "hidroxialquilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno, dos o tres grupos hidroxi.

El termino "fenilcarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo fenilo unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "feniloxi", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo fenilo unido al resto molecular precursor a traves de un atomo de oxigeno.

El termino "feniloxicarbonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo feniloxi unido al resto molecular precursor a traves de un grupo carbonilo.

El termino "sulfonilo", como se usa en el presente documento, se refiere a -SO2-.

Los compuestos de la presente divulgacion pueden existir en forma de sales farmaceuticamente aceptables. La expresion "sal farmaceuticamente aceptable", como se usa en el presente documento, representa sales o formas zwitterionicas de los compuestos de la presente divulgacion que son solubles o dispersables en agua o aceite, que son, dentro del alcance del buen criterio medico, adecuadas para su uso en contacto con los tejidos de pacientes sin excesiva toxicidad, irritacion, repuesta alergica u otro problema o complicacion coherente con una relacion beneficio/riesgo razonable, y son eficaces para su uso pretendido. Las sales pueden prepararse durante el aislamiento y purification finales de los compuestos o por separado haciendo reaccionar una funcionalidad basica adecuada con un acido adecuado. Las sales de adicion de acidos representativas incluyen acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, alcanforato, alcanforsulfonato; digluconato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, formiato, fumarato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, mesitilensulfonato, metanosulfonato, naftilenosulfonato, nicotinato, 2-naftalenosulfonato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilproprionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tricloroacetato, trifluoroacetato, fosfato, glutamato, bicarbonato, paratoluenosulfonato y undecanoato. Los ejemplos de acidos que pueden emplearse para formar sales de adicion farmaceuticamente aceptables incluyen acidos inorganicos, tales como clorhidrico, bromhidrico, sulfurico y fosforico, y acidos organicos, tales como oxalico, maleico, succinico y citrico.

Pueden prepararse sales de adicion basicas durante el aislamiento y purificacion finales de los compuestos haciendo reaccionar un grupo acido con una base adecuada, tal como el hidroxido, carbonato o bicarbonato de un cation metalico o con amonio o una amina organica primaria, secundaria o terciaria. Los cationes de sales farmaceuticamente aceptables incluyen litio, sodio, potasio, calcio, magnesio y aluminio, asi como cationes de amina cuaternaria no toxicos, tales como amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, dietilamina, etilamina, tributilamina, piridina, N,N-dimetilanilina, N-metilpiperidina, N-metilmorfolina, diciclohexilamina, procaina, dibencilamina, N,N-dibencilfenetilamina y N,N-dibenciletilendiamina. Otras aminas organicas representativas utiles para la formation de sales de adicion de bases incluyen etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperidina y piperazina.

Como se usa en el presente documento, la frase "actividad anti-VHC" significa que el compuesto es eficaz tratando el virus del VHC.

La frase "compuestos de la divulgacion" y las expresiones equivalentes, se entiende que abarcan compuestos de formula (I) y enantiomeros, diastereomeros y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos. Similarmente, las referencias a los intermedios, se entiende que abarcan sus sales donde el contexto lo permita de esta manera.

El termino "paciente" incluye tanto humanos como otros mamiferos.

La frase "composition farmaceutica" significa una composition que comprende un compuesto de la presente divulgacion en combination con al menos un vehiculo farmaceutico adicional, es decir, un adyuvante, excipiente o vehiculo, tales como diluyentes, agentes conservantes, cargas, agentes reguladores del flujo, agentes desintegrantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes de suspension, agentes edulcorantes, agentes saborizantes,

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agentes perfumantes, agentes antibacterianos, agentes antifungicos, agentes lubricantes y agentes dispensadores, dependiendo de la naturaleza del modo de administracion y de las formas de dosificacion. Pueden usarse, por ejemplo, los ingredientes listados en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing Company, Easton, PA (1999).

La frase "farmaceuticamente aceptable" se emplea en el presente documento para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificacion que son, dentro del ambito del juicio medico solido, adecuados para usar en contacto con los tejidos de los pacientes sin toxicidad, irritacion, respuesta alergica excesivos u otros problemas o complicaciones acordes con una relacion riesgo/beneficio razonables.

La frase "cantidad terapeuticamente eficaz" significa la cantidad total de cada componente activo que es suficiente para mostrar un beneficio significativo al paciente, por ejemplo, una reduccion sostenida en la carga virica. Cuando se aplica a un individuo el ingrediente activo, administrado solo, la frase se refiere a ese ingrediente solo. Cuando se aplica en una combinacion, la frase se refiere a cantidades combinadas de los principios activos que dan como resultado el efecto terapeutico, bien administrado en combinacion, en serie o simultaneamente.

Los terminos "tratar" y "tratando" se refieren a: (i) prevenir que ocurra una enfermedad, un trastorno o una afeccion en un paciente que puede estar predispuesto a la enfermedad, el trastorno y/o la afeccion pero que todavia no ha sido diagnosticado que la tenga; (ii) inhibir la enfermedad, el trastorno o la afeccion, es decir, evitar su desarrollo; y/o (iii) aliviar la enfermedad, el trastorno o la afeccion, es decir, provocar la regresion de la enfermedad, el trastorno y/o la afeccion.

Donde se usan al nombrar compuestos de la presente divulgacion, las designaciones P1', P1, P2, P2*, P3 y P4, como se usan en el presente documento, mapean las posiciones relativas de los restos de aminoacidos de un inhibidor de la proteasa que se une con respecto a la union del sustrato de escision natural del peptido. La escision se da en el sustrato natural entre P1 y P1' donde las posiciones no primas designan aminoacidos partiendo desde el extremo C-terminal del sitio de escision natural del peptido que se extiende hacia el N-terminal; mientras que, las posiciones primas emanan desde el extremo N-terminal de la designacion del sitio de escision y se extienden hacia el C-terminal. Por ejemplo, P1' se refiere a la primera posicion lejos del extremo a mano derecha del C-terminal del sitio de escision (es decir la primera posicion N-terminal); mientras que P1 empieza la numeracion desde el sitio a mano izquierda del sitio de escision del C-terminal, P2: segunda posicion desde el C-terminal, etc. (vease Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society London series (1970), B257, 249-264).

En los compuestos de la presente divulgacion existen centros asimetricos. Por ejemplo, los compuestos pueden incluir el elemento ciclopropilo P1 de formula

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en la que cada uno de Ci y C2 representa un atomo de carbono asimetrico en las posiciones 1 y 2 del anillo ciclopropilo.

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Debe entenderse que la divulgacion abarca todas las formas estereoquimicas, o mezclas de las mismas, que poseen la capacidad para inhibir la proteasa del VHC.

Determinados compuestos de la presente divulgacion tambien pueden existir en formas conformacionales estables diferentes que pueden ser separables. La asimetria torsional debida a rotacion restringida entorno a un enlace sencillo asimetrico, por ejemplo debida a un impedimento esterico o tension en el anillo, puede permitir la separacion de conformeros diferentes. La presente divulgacion incluye cada isomero conformacional de estos compuestos y mezclas de los mismos.

Determinados compuestos de la presente divulgacion pueden existir en forma en zwiterionica y la presente divulgacion incluye cada zwiterionica de estos compuestos y mezclas de las mismas.

Cuando es posible que, para su uso en terapia, puedan administrarse cantidades terapeuticamente eficaces de un compuesto de formula (I), asi como sales farmaceuticamente aceptables del mismo, en forma del compuesto quimico sin procesar, es posible presentar el ingrediente activo en forma de una composicion farmaceutica. Por consiguiente, la divulgacion tambien proporciona composiciones farmaceuticas, que incluyen cantidades terapeuticamente eficaces de compuestos de formula (I) o sales farmaceuticamente aceptables del mismo, y uno o mas vehiculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables. Los compuestos de formula (I) y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos, son como se han descrito anteriormente. El uno o mas vehiculos, diluyentes o excipientes deben ser aceptables en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulacion y no perjudiciales para el recipiente de los mismos. De acuerdo con otro aspecto de la divulgacion tambien se proporciona un proceso para la preparacion de una formulacion farmaceutica, que incluye mezclar un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, con uno o mas vehiculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables.

Las formulaciones farmaceuticas pueden presentarse en formas de dosificacion unitarias que contienen una cantidad predeterminada de principio activo por dosis unitaria. Son tipicos los niveles de dosificacion de entre aproximadamente 0,01 y aproximadamente 150 miligramos por kilogramo ("mg/kg") de peso corporal al dia, preferentemente entre aproximadamente 0,05 y aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal al dia de los compuestos de la divulgacion en una monoterapia para la prevencion y el tratamiento de una enfermedad mediada por el VHC. Normalmente, las composiciones farmaceuticas de la presente divulgacion se administraran de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 veces al dia o alternativamente, como una infusion continua. Tal administracion puede usarse como una terapia cronica o aguda. La cantidad de principio activo que puede combinarse con los materiales vehiculo para producir una unica forma de dosificacion variara dependiendo de la afeccion a tratarse, de la gravedad de la afeccion, del tiempo de administracion, de la ruta de administracion, de la velocidad de excrecion del compuesto empleado, de la duracion del tratamiento y de la edad, el genero, el peso y la condicion del paciente. Las formulaciones de dosificacion unitaria preferidas son aquellas que contienen una dosis o sub-dosis diaria, como se recita anteriormente en el presente documento, o una fraccion apropiada de las mismas, de un principio activo. Generalmente, el tratamiento se inicia con pequenas dosificaciones sustancialmente menores de la dosis optima del compuesto. En lo sucesivo, la dosificacion se aumenta por pequenos aumentos hasta que se alcanza el efecto optimo bajo las circunstancias. En general, el compuesto se administra de forma mas deseable en un nivel de concentracion que producira generalmente resultados antiviricamente eficaces sin provocar ningun efecto secundario danino o deletereo.

Cuando las composiciones de la presente divulgacion comprenden una combinacion de un compuesto de la presente divulgacion y uno o mas agentes adicionales terapeuticos y/o profilacticos, tanto el compuesto como el agente adicional pueden estar presentes en una dosis que es menor de o igual a la dosificacion normalmente administrada en un regimen de monoterapia. Las composiciones de la presente divulgacion pueden co-formularse con uno o mas agentes terapeuticos o profilacticos adicionales, por ejemplo, en forma de un comprimido monolitico y/o bi/multi-capa o pueden administrarse separadamente del agente o agentes terapeuticos o profilacticos.

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Las formulaciones farmaceuticas pueden adaptarse para la administracion por cualquier ruta apropiada, por ejemplo por v^a oral (incluyendo bucal o sublingual), rectal, nasal, topica (incluyendo bucal, sublingual o transdermica), vaginal o parenteral (incluyendo inyecciones o infusiones subcutaneas, intracutaneas, intramusculares, intra-articulares, intrasinoviales, intraesternales, intratecales, intralesionales, intravenosas o intradermicas). Tales formulaciones pueden prepararse por cualquier procedimiento conocido en la materia de la farmacia, por ejemplo, poniendo en asociacion el principio activo con el vehiculo o vehiculos o el excipiente o excipientes.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para la administracion oral pueden presentarse como unidades discretas tales como capsulas o comprimidos; polvos o granulos; soluciones o suspensiones en liquidos acuosos o no acuosos; espumas o batidos comestibles; o emulsiones liquidas aceite en agua o emulsiones agua en aceite.

Por ejemplo, para la administracion oral en forma de un comprimido o una capsula, el componente de farmaco activo puede combinarse con un vehiculo inerte farmaceuticamente aceptable oral no toxico tal como etanol, glicerol, agua y similares. Los polvos se preparan moliendo el compuesto hasta un tamano fino adecuado y mezclando con un vehiculo farmaceutico similarmente molido tal como un carbohidrato comestible, como, por ejemplo, almidon o manitol. Tambien pueden estar presentes un agente saborizante, conservante, dispersante y colorante.

Las capsulas se fabrican preparando una mezcla en polvo, como se describe anteriormente y se rellenan laminas de gelatina formadas. Pueden anadirse deslizantes y lubricantes tales como silice coloidal, talco, estearato magnesico, estearato calcico o polietilenglicol solido a la mezcla en polvo antes de la operacion de relleno. Tambien puede anadirse un agente desintegrante o solubilizante tal como agar-agar, carbonato calcico o carbonato sodico para mejorar la disponibilidad del medicamento cuando se ingiere la capsula.

Ademas, cuando se desee o sea necesario, pueden incorporarse tambien a la mezcla aglutinantes, lubricantes, agentes desintegrantes y agentes colorantes adecuados. Los aglutinantes adecuados incluyen almidon, gelatina, azucares naturales tales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de maiz, gomas naturales y sinteticas tales como acacia, tragacanto o alginato sodico, carboximetilcelulosa, polietilenglicol y similares. Los lubricantes usados en estas formas de dosificacion incluyen oleato sodico, cloruro sodico y similar. Los desintegrantes incluyen, sin limitacion, almidon, metilcelulosa, agar, bentonita, goma xantana y similares. Los comprimidos se formulan, por ejemplo, preparando una mezcla en polvo, granulando o batiendo con fuerza, anadiendo un lubricante y un desintegrante y aplicando presion para hacer comprimidos. Se prepara una mezcla en polvo mezclando el compuesto, triturado adecuado, con un diluyente o una base como se describe anteriormente, y opcionalmente, con un aglutinante tal como carboximetilcelulosa, un alginato, un gelificante o polivinilpirrolidona, una solucion retardante tal como parafina, un acelerador de la resorcion tal como una sal cuaternaria y/o un agente de absorcion tal como bentonita, caolin o fosfato dicalcico. La mezcla en polvo puede granularse humedeciendo con un aglutinante tal como un jarabe, pasta de almidon, mucilago de acacia o soluciones de materiales celulosicos o polimericos y forzandolos a traves de un tamiz. Como una alternativa a granular, la mezcla en polvo puede hacerse correr a traves de una maquina de comprimidos y el resultado son lingotes formados imperfectamente que se rompen en granulos. Los granulos pueden lubricarse para prevenir que se peguen a los troqueles formadores de comprimidos por medio de la adicion de acido estearico, una sal de estearato, talco o aceite mineral. La mezcla lubricada se comprime despues en comprimidos. Los compuestos de la presente divulgacion pueden combinarse tambien con un vehiculo inerte libre de fluidez y comprimirse en comprimidos directamente sin pasar a traves de las etapas de granulacion o de rotura con fuerza. Puede proporcionarse un recubrimiento protector transparente u opaco que consiste en una cubierta sellante de shellac, un recubrimiento de azucar o un material polimerico y un recubrimiento pulido de cera. Pueden anadirse colorantes a estos recubrimientos para distinguir diferentes dosificaciones unitarias.

Los fluidos orales tales como solucion, jarabes y elixires pueden prepararse en formas de dosificacion unitarias de tal manera que una cantidad dada contenga una cantidad predeterminada del compuesto. Los jarabes pueden prepararse disolviendo el compuesto en una solucion acuosa adecuadamente saborizada, mientras que los elixires se preparan a traves del uso de un vehiculo no toxico. Tambien pueden anadirse solubilizantes y emulsionantes tales como los alcoholes de isoestearilo etoxilados y los eteres de sorbitol de polioxietileno, conservantes, aditivos de sabor tales como aceite de menta o edulcorantes naturales o sacarina u otros edulcorantes artificiales y similares.

Donde sea apropiado, las formulaciones unitarias de dosificacion para administracion oral pueden estar microencapsuladas. La formulacion tambien puede prepararse para prolongar o sostener la liberacion como por ejemplo recubriendo o embebiendo el material particulados en polimeros, cera o similares.

Los compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos, tambien pueden administrarse en forma de sistemas de transporte de liposomas, tales como pequenas vesiculas unilamelares, vesiculas unilamelares grandes y vesiculas multilamelares. Los liposomas pueden formarse a partir de diversos fosfolipidos, tales como colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas.

Los compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos tambien pueden transportarse por el uso de anticuerpos monoclonales como vehiculos individuales a los que se acoplan las moleculas de compuesto. Los compuestos tambien pueden acoplarse con polimeros solubles como vehiculos farmaceuticos marcables como diana. Tales polimeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolimero de pirano,

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polihidroxipropilmetacrilamidafenol, polihidroxietilaspartamidafenol o polietilenoxidopolilisina sustituida con restos de palmitoilo. Adicionalmente, los compuestos pueden acoplarse a una clase de polimeros biodegradables utiles para lograr la liberacion controlada de un farmaco, por ejemplo, acido polilactico, poliepsilon caprolactona, acido polihidroxi butrnco, poliortoesteres, poliacetales, polidihidropiranos, policianoacrilatos y copolimeros en bloque reticulados o anfifaticos de hidrogeles.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para la administration transdermica pueden presentarse como parches discretos destinados a mantenerse en contacto intimo con la epidermis del receptor durante un periodo de tiempo prolongado. Por ejemplo, el principio activo puede transportarse desde el parche por iontoforesis como se describe generalmente en Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986).

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para la administracion topica pueden formularse como unguentos, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, pulverizadores, aerosoles o aceites.

Para los tratamientos del ojo u otros tejidos externos, por ejemplo la boca y la piel, las formulaciones se aplican preferentemente como un unguento o una crema topicos. Cuando se formula en un unguento, el ingrediente activo puede emplearse bien con una base de unguento parafinica o bien miscible en agua. Alternativamente, el principio activo puede formularse en una crema con una base de crema aceite en agua o una base agua en aceite.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para las administraciones topicas al ojo incluyen gotas oculares en las que el principio activo se disuelve o se suspende en un vehiculo adecuado, especialmente un disolvente acuoso.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para la administracion topica a la boca incluyen pastillas para chupar, pastillas y enjuagues bucales.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para la administracion rectal pueden presentarse como supositorios o como enemas.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para la administracion nasal en las que el vehiculo es un solido incluyen un polvo grueso que se administra aspirando, es decir, por rapida inhalation a traves del pasaje nasal desde un recipiente del polvo mantenido cerca de la nariz. Las formulaciones adecuadas en las que el vehiculo es un liquido, para la administracion como un pulverizador nasal o gotas nasales, incluyen soluciones acuosas u oleaginosas del principio activo.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para la administracion por inhalacion incluyen polvos en particulas finas o vahos, que pueden generarse por medio de diversos tipos de aerosoles, nebulizadores o insufladores presurizados de dosis medidas.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para la administracion vaginal pueden presentarse como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en pulverizador.

Las formulaciones farmaceuticas adaptadas para la administracion parenteral incluyen soluciones para inyeccion esteriles no acuosas que pueden contener anti-oxidantes, tampones, bacteriostaticos y solutos que hacen a la formulation isotonica con la sangre del receptor destinado; y suspensiones esteriles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspension y agentes espesantes. Las formulaciones pueden presentarse en recipientes de dosis unitarias o multi-dosis, por ejemplo ampollas y viales sellados y pueden almacenarse en una condition secada por congelation (liofilizada) requiriendo solamente la adicion del vehiculo liquido esteril, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes de usar. Las soluciones y las suspensiones extemporaneas pueden prepararse a partir de polvos esteriles, granulos y comprimidos.

Debe entenderse que ademas de los ingredientes particularmente mencionados anteriormente, las formulaciones pueden incluir otros agentes convencionales en la tecnica teniendo en cuenta el tipo de formulacion en cuestion, por ejemplo aquellos adecuados para la administracion oral pueden incluir agentes saborizantes.

La Tabla 1 a continuation lista algunos ejemplos ilustrativos de compuestos que pueden administrarse con los compuestos de la presente divulgation. Los compuestos de la divulgation pueden administrarse con otros compuestos con actividad anti-VHC en terapia de combination, bien junta o separadamente, o combinando los compuestos en una composition.

Tabla 1

Nombre de la marca: Clase fisiologica Tipo de inhibidor o diana Compan^a de origen

NIM811: Inhibidor de ciclofilina Novartis

Zadaxin: Inmunomodulador Sciclone

Suvus: Azul de metileno Bioenvision

Actilon (CPG10101): Agonista de TLR9 Coley

Batabulin (T67): Anticancerigeno Inhibidor de p-tubulina Tularik Inc., South San Francisco, CA

ISIS 14803: Antivirico Antisentido ISIS Pharmaceuticals Inc, Carlsbad, CA/Elan Pharmaceuticals Inc., Nueva York, NY

Summetrel: Antivmco Antivirico Endo Pharmaceuticals Holdings Inc., Chadds Ford, PA

GS-9132 (ACH-806): Antivmco Inhibidor del VHC Achillion / Gilead

Compuestos y sales de pirazolopirimidina Del documento WO-2005047288 26 de mayo 2005: Antivmco Inhibidores del VHC Arrow Therapeutics Ltd.

Levovirina: Antivmco Inhibidor del IMPDH Ribapharm Inc., Costa Mesa, CA

Merimepodib (VX-497): Antivirico Inhibidor del IMPDH Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge, MA

XTL-6865 (XTL-002): Antivirico Anticuerpo monoclonal XTL Biopharmaceuticals Ltd., Rehovot, Israel

Telaprevir (VX-950, LY-570310): Antivirico Inhibidor de la NS3 serina proteasa Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge, MA/ Eli Lilly and Co. Inc., Indianapolis, IN

HCV-796: Antivirico Inhibidor de la NS5B replicasa Wyeth / Viropharma

NM-283: Antivirico Inhibidor de la NS5B replicasa Idenix / Novartis

GL-59728: Antivirico Inhibidor de la NS5B replicasa Gene Labs / Novartis

GL-60667: Antivirico Inhibidor de la NS5B replicasa Gene Labs / Novartis

2'C MeA: Antivirico Inhibidor de la NS5B replicasa Gilead

PSI 6130: Antivirico Inhibidor de la NS5B replicasa Roche

R1626: Antivirico Inhibidor de la NS5B replicasa Roche

2'C metil adenosina: Antivirico Inhibidor de la NS5B replicasa Merck

JTK-003: Antivirico Inhibidor de RdRp Japan Tobacco Inc., Tokio, Japon

Levovirina: Antivirico Ribavirina ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, CA

Ribavirina: Antivirico Ribavirina Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

Viramidina: Antivirico Profarmaco de ribavirina Ribapharm Inc., Costa Mesa, CA

Heptazima: Antivirico ribozima Ribozyme Pharmaceuticals Inc., Boulder, CO

BILN-2061: Antivirico Inhibidor de serina proteasa Boehringer Ingelheim Pharma KG, Ingelheim, Alemania

SCH 503034: Antivirico Inhibidor de serina proteasa Schering Plough

Zadazim: Inmunomodulador Inmunomodulador SciClone Pharmaceuticals Inc., San Mateo, CA

Ceplene: Inmunomodulador Inmunomodulador Maxim Pharmaceuticals Inc., San Diego, CA

CellCept: Inmunosupresor VHC IgG inmunosupresor F. Hoffmann-La Roche LTD, Basel, Suiza

Civacir: Inmunosupresor VHC IgG inmunosupresor Nabi Biopharmaceuticals Inc., Boca Raton, FL

Albuferon-a: Interferon albumina IFN-a2b Human Genome Sciences Inc., Rockville, MD

Infergen A: Interferon IFN alfacon-1 InterMune Pharmaceuticals Inc., Brisbane, CA

Omega IFN: Interferon IFN-ffl Intarcia Therapeutics

IFN-p y EMZ701: Interferon IFN-p y EMZ701 Transition Therapeutics Inc., Ontario, Canada

Rebif: Interferon IFN-p1a Serono, Geneva, Suiza

Roferon A: Interferon IFN-a2a F. Hoffmann-La Roche LTD, Basel, Suiza

Intron A: Interferon IFN-a2b Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

Intron A y Zadaxin: Interferon IFN-a2b/a1-timosin RegeneRx Biopharma. Inc., Bethesda, MD/ SciClone Pharmaceuticals Inc, San Mateo, CA

Rebetron: Interferon IFN-a2b/ribavirina Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

Actimmune: Interferon INF-y InterMune Inc., Brisbane, CA

Interferon-p: Interferon Interferon-p-1a Serono

Multiferon: Interferon IFN de larga duracion Viragen/ Valentis

Wellferon: Interferon IFN-an1Linfo-blastoide GlaxoSmithKline plc, Uxbridge, Reino Unido

Omniferon: Interferon IFN-a natural Viragen Inc., Plantation, FL

Pegasys: Interferon IFN-a2a pegilado F. Hoffmann-La Roche LTD, Basel, Suiza

Pegasys y Ceplene: Interferon IFN-a2a pegilado Inmunomodulador Maxim Pharmaceuticals Inc., San Diego, CA

Pegasys y Ribavirina: Interferon IFN-a2a pegilado/ribavirina F. Hoffmann-La Roche LTD, Basel, Suiza

PEG-Intron: Interferon IFN-a2b pegilado Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

PEG-Intron / Ribavirina: Interferon IFN-a2b pegilado /ribavirina Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

IP-501: Proteccion hepatica antifibrotico Indevus Pharmaceuticals Inc., Lexington, MA

IDN-6556: Proteccion hepatica Inhibidor de caspase Idun Pharmaceuticals Inc., San Diego, CA

ITMN-191 (R-7227): Antivirico Inhibidor de serina proteasa InterMune Pharmaceuticals Inc., Brisbane, CA

GL-59728: Antivirico Inhibidor de la NS5B replicasa Genelabs

ANA-971: Antivmco Agonista TLR-7 Anadys

Boceprevir: Antivmco Inhibidor de serina proteasa Schering Plough

TMS-435: Antivmco Inhibidor de serina proteasa Tibotec BVBA, Mechelen, Belgica

BI-201335: Antivirico Inhibidor de serina proteasa Boehringer Ingelheim Pharma KG, Ingelheim, Alemania

MK-7009: Antivirico Inhibidor de serina proteasa Merck

PF-00868554: Antivirico Inhibidor de replicasa Pfizer

ANA598: Antivirico Inhibidor de NS5B polimerasa no nucleosida Anadys Pharmaceuticals, Inc., San Diego, CA, EE.UU.

IDX375: Antivirico Inhibidor de replicasa no nucleosida Idenix Pharmaceuticals, Cambridge, MA, EE.UU.

BILB 1941: Antivirico Inhibidor de NS5B polimerasa Boehringer Ingelheim Canada Ltd R&D, Laval, QC, Canada

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PSI -7851: Antivirico Inhibidor de polimerasa nucleosida Pharmasset, Princeton, NJ, EE.UU.

PSI -7977: Antivirico Inhibidor de NS5B polimerasa nucleotida Pharmasset, Princeton, NJ, EE.UU.

VCH-759: Antivirico Inhibidor de NS5B polimerasa ViroChem Pharma

VCH-916: Antivirico Inhibidor de NS5B polimerasa ViroChem Pharma

GS-9190: Antivirico Inhibidor de NS5B polimerasa Gilead

Peg-interferon lambda: Antivirico Interferon ZymoGenetics/Bristol-Myers Squibb

INX-189: Antivirico Inhibidor de NS5B polimerasa nucleotida Inhibitex

Los compuestos de la presente divulgacion tambien pueden usarse como reactivos de laboratorio. Los compuestos pueden ser instrumentales al proporcionar herramientas de investigation para disenar ensayos de replication virica, validation de sistemas de ensayo animal y estudios estructurales de biologia para potenciar adicionalmente el conocimiento de los mecanismos de la enfermedad del VHC. Ademas, los compuestos de la presente divulgacion son utiles para establecer o determinar el sitio de union de otros compuestos antiviricos, por ejemplo, por inhibition competitiva.

Los compuestos de la presente divulgacion tambien pueden utilizarse para tratar o prevenir la contamination virica de los materiales y por lo tanto reducir el riesgo de infection virica del personal de laboratorio o medico o pacientes que entran en contacto con tales materiales, por ejemplo, sangre, tejido, instrumentos y prendas quirurgicas, instrumentos y prendas de laboratorio y aparatos y materiales de recoleccion de sangre o de transfusion.

La presente divulgacion se destina a abarcar compuestos que tienen la formula (I) cuando se preparan mediante procedimientos de sintesis o mediante procesos metabolicos que incluyen aquellos que se producen en el cuerpo humano o animal (in vivo) o procedimientos que se dan in vitro.

La presente divulgacion se describira ahora en conexion con determinadas realizaciones.

Las abreviaturas usadas en la presente solicitud, incluyendo particularmente en los esquemas ilustrativos y los ejemplos que les siguen, son bien conocidas para los expertos en la materia. Algunas de las abreviaturas usadas son como se indican a continuation: Et2O para eter dietilico; h para horas; min para minutos; THF para tetrahidrofurano; TBME para metil terc-butil eter; DMAP para N,N-dimetilaminopiridina; LiHMDS para hexametildisilzida de litio; DCM para diclorometano; DIPEA para diisopropiletilamina; Boc para terc-butoxicarbonilo; eter de petroleo para eter de petroleo; DMSO para dimetilsulfoxido; ta o TA o Ta para temperatura ambiente o tr TR o Tr para tiempo de retention (el contexto lo dictara); IPA para alcohol isopropilico; t-BuO para terc-butoxi; HATU para hexafluorofosfato de O-(7- azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio; EtOAc para acetato de etilo; TMS para trimetilsililo; DPPA para difenilfosforilazida; Me para metilo; OAc para acetato; n-Bu para n-butilo; DAST para trifluoruro de (dietilamino)azufre; y TFA para acido trifluoroacetico.

Los materiales de partida utiles para sintetizar los compuestos de la presente divulgacion son conocidos para los expertos en la materia y pueden fabricarse facilmente o estan disponibles en el mercado.

Los siguientes metodos expuestos a continuacion se proporcionan con propositos ilustrativos y no estan destinados a limitar el alcance de las reivindicaciones. Se reconocera que puede ser necesario preparar un compuesto tal, en el que el grupo funcional esta protegido, usando un grupo protector convencional para despues retirar el grupo protector para proporcionar un compuesto de la presente divulgacion. Los detalles concernientes al uso de grupos protectores de acuerdo con la presente divulgacion son conocidos para los expertos en la materia.

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Etapa 1: Preparacion de 3-metilpent-4-enoato de etilo

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A una solucion de (E)-but-2-en-1-ol (50 g, 693 mmol) en 1,1,1-trietoxietano (890 ml, 4854 mmol) se anadio acido acetico (5 g, 83 mmol) a temperatura ambiente. La reaccion se calento a 125 °C durante 4 h. El subproducto de etanol se destilo mediante destilacion normal para obtener el compuesto en bruto 3-metilpent-4-enoato de etilo (70 g, 71,0 %) en forma de un aceite incoloro. Este se recogio para la siguiente etapa sin purificacion adicional; RMN 1H (DMSO-d6) 5 ppm 5,82-5,73 (m, 1H), 5,03-4,92 (m, 2H), 4,08-4,02 (m, 2H), 2,50 (m, 1H), 2,31-2,26 (m, 2H), 1,17 (t, J = 8 Hz, 3H), 1,00 (d, J = 8 Hz, 3H).

Etapa 2: PreparaciOn de acido 3-metil pent-4-enoico

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A una solucion de 3-metilpent-4-enoato de etilo (70 g, 492 mmol) en metanol (500 ml) se anadio KOH (41,4 g, 738 mmol) a temperatura ambiente. La masa de reaccion se calento a reflujo durante 18 h. La masa de reaccion se destilo a presion reducida. Se anadio eter (750 ml) al residuo, se lavo con una solucion saturada de bicarbonato sodico (350 ml x 3). La capa acuosa combinada se acidifico usando HCl con. (250 ml), se extrajo con DCM (500 ml x 3). La capa organica combinada se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto acido 3-metilpent-4-enoico en bruto (52 g, 93 %) en forma de un aceite de color pardo; RMN 1H (DMSO-d6) 5 ppm 12,04 (s, a, 1H), 5,84-5,75 (m, 1H), 5,03-4,92 (m, 2H), 2,56-2,50 (m, 1H), 2,28-2,22 (m, 2H), 1,00 (d, J = 8 Hz, 3H).

Etapa 3: Preparacion de 3- metil pent-4-eno-1-ol

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A una suspension de hidruro de litio y aluminio (6,03 g, 0,159 mol) en 150 ml de Et2O seco a 0 °C se le anadio gota a gota una solucion de acido 3-metil pent-4-enoico (17,4 g, 0,122 mol) en 100 ml de Et2O seco. Despues de que se completara la adicion, la reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se agito durante 2 h. La masa de reaccion se vertio en un vaso de precipitados de 1 l. Se anadieron cuidadosamente agua (6,03 ml) y NaOH al 15 % (6,03 ml) con buena agitacion durante un periodo de 30 min. El solido de color blanco separado se retiro por filtracion y se lavo bien con Et2O. Los filtrados combinados se secaron y se concentraron por destilacion a presion atmosferica. El residuo se destilo para obtener el 9,04 g del compuesto deseado (74 %); RmN 1H (CDCb) 5 ppm 5,65 (m, 1H), 4,90 (m, 2H), 3,55 (m, 2H), 3,30 (m, 1H), 2,25 (m, 1H), 1,50 (c, J = 7 Hz, 2H), 1,00 (d, J = 7 Hz, 3h).

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A una solucion agitada de 4,504 g (44,97 mmol) del 3-metilpent-4-eno-1-ol en 100 ml de diclorometano a 0 °C se le anadieron secuencialmente 3,8 ml (49,1 mmol) de cloruro de metanosulfonilo y 6,91 ml (49,6 mmol) de trietilamina, y la mezcla resultante se agito a 0 °C durante 15 min. Despues, la mezcla de reaccion se vertio en 100 ml de NaHCO3 acuoso saturado y la mezcla resultante se agito vigorosamente durante 10 min. La fase organica se separo, se seco (Na2SO4) y despues se concentro a presion reducida para obtener el compuesto de Mesilato en bruto. El compuesto en bruto se disolvio en 130 ml de THF seco y a la solucion se le anadieron 5,87 g (67,6 mmol) de bromuro de litio anhidro. La mezcla resultante se calento a reflujo durante 4 h. La masa de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se diluyo con 300 ml de pentano. La fase organica se lavo con dos porciones de 100 ml de NaHCO3 saturado y cinco porciones de 100 ml de agua, y despues se seco (Na2SO4). El disolvente se retiro por destilacion a traves de una columna Vigreux de 30 cm a presion atmosferica. La destilacion evaporativa del residuo (70 °C, 80 mmHg) dio 6,28 g (86 %) del bromuro. RMN 1H (CDCb) 5 ppm 1,01 (d, J = 5 Hz, 3H,), 1,80 (dt, J = J= 5 Hz, 2H,), 2,35 (m, J = 5 Hz, 1H), 3,36 (t, J = 5 Hz, 2H), 5,02 (m, 2H), 5,64 (m, 1H).

Etapa 5: Preparacion de (2R)-6-metiloct-7-en-2-ol

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Se suspendieron limaduras de magnesio (1,3 g, 55,2 mmol) en THF seco (50 ml) y a la mezcla se le anadio una pizca de yodo (20 mg) a temperatura ambiente. A esta masa de reaccion se le anadio una solucion de 5-bromo-3-metilpent-1-eno (6 g, 36,8 mmol) en THF (200 ml). La masa de reaccion se calento con una pistola de aire caliente para iniciar la reaccion. Cuando la reaccion se considero completa, la solucion se canulo a una solucion de oxido de (S)-propileno (3,21 g, 55,2 mmol) y bromuro de cobre (0,528 g, 3,68 mmol) en THF (50 ml) a -78 °C. Se dejo que la masa de reaccion alcanzara temperatura ambiente y se agito durante una noche. La masa de reaccion se inactivo con una solucion saturada de cloruro de amonio y se extrajo con eter dietilico (200 ml x 3). La capa organica combinada se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro a temperatura ambiente para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia en columna (Gel de Silice, TBMe al 10 % en eter de petroleo) para obtener (2R)-6-metiloct-7-en-2-ol (12,4 g, 92 %) en forma de un liquido oleoso. RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 5,82-5,69 (m, 1H), 4,98-4,91 (m, 2H), 4,27-4,26 (m, 1H), 3,65-3,39 (m, 1H), 2,15-1,98 (m, 1H), 1,36-1,19 (m, 5H), 1,18-1,1 (m, 1H), 1,08-0,95 (m, 5H), 0,89-0,78 (m, 1H).

Etapa 6: Preparacion de 4-metilbencenosulfonato de (2R)-6-metiloct-7-en-2-ilo

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A una solucion de (2R)-6-metiloct-7-en-2-ol (12 g, 84 mmol) en piridina (16 ml) se le anadio DMAP (0,51 g, 4,22 mmol) y la solucion se agito durante 10 min. Se anadio cloruro de P-toluenosulfonilo (18,5 g, 97 mmol) a la masa de reaccion a 0 °C. Se dejo que la masa de reaccion alcanzara temperatura ambiente y se agito durante una noche. Se retiro piridina a presion reducida y el residuo se diluyo con acetato de etilo (200 ml). La solucion organica se lavo con una solucion acuosa 1,5 N de HCl, una solucion saturada de bicarbonato y una solucion de salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto en bruto (14,5 g, 32 %). El compuesto en bruto se llevo a la siguiente etapa sin purificacion adicional.

Etapa 7: Preparacion de 2-(difenilmetilenoamino)-3,7 dimetilnon-8-enoato de (3R)-etilo

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A una solucion de 4-metilbencenosulfonato de (2R)-6-metiloct-7-en-2-ilo (15 g, 50,6 mmol) y ester etilico de N-(difenilmetilen)glicinato (13,53 g, 50,6 mmol) en tolueno (120 ml) se le anadio LiHMDS (60,7 ml, 60,7 mmol, solucion 1 M en THF) a 0 °C. Se dejo que la masa de reaccion alcanzara temperatura ambiente calento a 110 °C durante 2 h. La masa de reaccion se enfrio a temperatura ambiente, se inactivo con agua y se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 3). La capa organica combinada se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto en bruto (14,5 g). El compuesto en bruto se llevo a la siguiente etapa sin purificacion adicional. EM: EM m/z 392,1 (M++1).

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A una solucion de 2-(difenilmetilenoamino)-3,7-dimetilnon-8-enoato de (3R)-etilo (14,5 g, 37 mmol) en eter dietilico (25 ml) se le anadio una solucion acuosa 1,5 N de HCl (125 ml) y la masa de reaccion se agito a temperatura ambiente durante una noche. La masa de reaccion se lavo con eter dietNico (100 ml). La solucion acuosa se basifico usando una solucion saturada de bicarbonato sodico y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). La capa organica combinada se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto en bruto (2,1 g, 23 %). El compuesto en bruto se llevo a la siguiente etapa sin purificacion adicional. RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 5,85-5,60 (m, 1H), 4,98-4,85 (dd, J = 1,6, 2,8 Hz, 2H), 4,10-4,06 (m, 2H), 3,15-3,14 (m, 1H), 2,15-2,02 (m, 1H), 1,94-1,75 (m, 3H), 1,32-1,17 (m, 9H), 0,95-0,93 (m, 3H), 0,84-0,74(m, 3H). EM: EM m/z 227,7 (M+ + 1).

Etapa 9: Preparacion de 2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,7-dimetilnon-8-enoato de (3R)-etilo

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A una solucion de 2-amino-3,7-dimetilnon-8-enoato de (3R)-etilo (2,0 g, 8,8 mmol) en DCM (20 ml) se le anadio DIPEA (1,7 g, 13,2 mmol) seguido de (Boc)2O (2,4 g, 11,4 mmol) a temperatura ambiente. La masa de reaccion se agito a temperatura ambiente durante una noche. La masa de reaccion se diluyo con DCM y se lavo con agua. La capa organica se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia en columna (Gel de Silice, acetato de etilo al 20 % en eter de petroleo) para obtener 2,7 g, (84 %) de 2-(terc- butoxicarbonilamino)-3,7-dimetilnon-8-enoato de (3R)-etilo en forma de un liquido oleoso.

RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 5,85-5,60 (m, 1H), 4,98-4,85 (dd, J = 1,6, 2,8 Hz, 2H), 4,10-4,06 (m, 2H), 2,15-2,02 (m, 1H), 1,55-1,44 (m, 8H), 1,39-1,30 (s, 9H), 1,27-1,21 (m, 4H), 0,95-0,93 (m, 3H), 0,84-0,74 (m, 3H).

Etapa 10: Preparacion de acido (3R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,7-dimetilnon-8-enoico

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A una solucion de 2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,7-dimetilnon-8-enoato de (3R)-etilo (2,7 g, 8,25 mmol) en THF/agua (40 ml, 1:1) se le anadio metanol (20 ml), seguido de LiOH (0,987 g, 41,2 mmol) a temperatura ambiente. La masa de reaccion se agito a temperatura ambiente durante una noche. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se diluyo con agua (100 ml). La solucion acuosa se acidifico con soluciones acuosas 1,5 N de HCl a pH ~3 y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). La capa organica combinada se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia en columna (Gel de Silice, metanol al 3 % en DCM) para obtener 2,1 g (85 %) del compuesto deseado en forma de un liquido gomoso. RMN 1H (400 MHz, DMSO-Ds): 5 ppm 12,2-12,02 (s a, 1H), 6,92-6,85 (m, 1H) 5,72-5,66 (m, 1H), 4,98-4,85 (dd, J = 1,6,

2,8 Hz, 2H), 4,03-3,95 (m, 1H), 2,58-2,56 (m,1H) 2,15-2,02 (m, 1H), 1,45-1,36 (m, 10H), 1,27-1,21 (m, 5H), 0,95-0,93 (m, 3H), 0,84-0,74(m, 3H).

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Etapa 1: Preparacion de 1-((2S,3R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,7-dimetilnon-8-enoil)-4-hidroxipirrolidin- 2-carboxilato de (2S,4R)-metilo

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A una suspension de acido (3R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3,7-dimetilnon-8-enoico (6,5 g, 21,7 mmol), clorhidrato de ester metflico de L-4-hidroxiprolina (3,9 g, 21,7 mmol) y hexafluorofosfato de

0- (7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronio (8,36 g, 21,7 mmol) en DCM (50 ml) a 0 °C, se le anadio gota a gota N,N-diisopropiletilamina (11,5 ml, 66,6 mmol). La mezcla de color amarillo claro resultante se agito a ta durante una noche, se lavo con HCl 1 M (35 ml) y salmuera, se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro al vado. El aceite residual (12 g) se purifico por cromatografia en columna convencional (columna de gel de sflice de 60-120 g), eluyendo con IPA al 4 %~8 %-Hexano para proporcionar el producto deseado

1- ((2S,3R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,7-dimetilnon-8-enoil)-4-hidroxipirrolidin-2-carboxilato de (2S,4R)-metilo (9a, 4,3 g, rendimiento del 46 %) en forma de una espuma de color blanco y el diastereomero indeseado 1-((2R,3R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,7- dimetilnon-8-enoil)-4-hidroxipirrolidin-2-carboxilato de (2S,4R)-metilo (9b, 1,9 g, rendimiento del 20 %) en forma de un aceite viscoso. RmN 1H (400 MHz, CDCh): 5 ppm 5,73-5,64 (m, 1H), 5,19-5,17 (m, 1H), 4,97-4,88 (m, 2H), 4,70-4,66 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 4,53 (s a, 1H), 4,29-4,25 (m, 1H), 3,99-3,96 (d, J = 10,8 Hz, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,70-3,66 (m, 1H), 2,34-2,11 (m, 1H), 2,10-2,00 (m, 2H), 1,85-1,81 (m, 1H), 1,49-1,41 (m, 9H), 1,39-1,14 (m, 3H), 0,98-0,86 (m, 7H) EM: EM m/z 427,2 (M++1).

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Etapa 2: Preparacion de acido (2S,4R)-1-((2S,3R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,7-dimetilnon-8-enoil)-4- hidroxipirrolidin-2-carboxWco

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A una solucion de 1-((2S,3R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,7-dimetilnon-8-enoil)-4-hidroxipirrolidin-2-carboxilato de (2S,4R)-metilo (4,3 g, 10 mmol) en THF/agua (30 ml, 1:1) se le anadio metanol (l0 ml), seguido de LiOH (1,3 g, 0,030 moles) a temperatura ambiente. La masa de reaccion se agito a temperatura ambiente durante una noche. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se diluyo con agua (100 ml). La solucion acuosa se acidifico con soluciona acuosas 1,5 N de HCl a pH ~3 y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). La capa organica combinada se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro a presion reducida para obtener el producto deseado acido (2S,4R)- 1-((2S,3R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,7-dimetilnon-8-enoil)-4-hidroxipirrolidin-2-carboxNico (3,2 g, rendimiento del 78 %) en forma de un solido de color blanco. RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 5,70-5,61 (m, 1H), 5,14-5,12 (d, J =

8,8 Hz, 1H), 4,96-4,88 (m, 2H), 4,82-4,78 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 4,52 (s a, 1H), 4,27-4,23 (m, 1H), 3,57-3,53 (m, 3H), 2,48-2,42 (m, 1H), 2,33-2,28 (m, 1H), 1,88-1,82 (m, 2H), 1,45-1,42 (s, 9H), 1,29-1,21 (m, 3H), 0,98-0,93 (m, 7H) EM: EM m/z 411,2 (M++1).

Etapa 3: Preparacion de acido (2S,4R)-1-((2S,3R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,7-dimetilnon-8-enoil)-4-(4- metoxiisoquinolin-1-iloxi)pirrolidin-2-carboxflico

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A una solucion de acido (2S,4R)-1-((3R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3,7-dimetilnon-8-enoil)-4-

hidroxipirrolidin-2-carboxNico (1,5 g, 3,6 mmol) en DMSO se le anadio 1-cloro-4-metoxiisoquinolina (840 mg, 4,4 mmol), seguido de t-BuOK (sol. 1 M en THF, 18 ml) a temperatura ambiente en una atmosfera de nitrogeno. La masa de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 4 h. La masa de reaccion se inactivo con una solucion acuosa de acido citrico y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica combinada se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico mediante Combiflash para obtener el producto deseado (800 mg, 40 %) en forma de un solido blanquecino. RMN 1H (400 MHz, CDCl3): 5 ppm 8,11-8,09 (m, 2H), 7,70-7,66 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,56-7,51 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 5,78 (s a, 1H), 5,69-5,65 (m, 1H), 5,14-5,11 (m, 1H), 4,96-4,88 (m, 3H), 4,43-4,41 (m, 1H), 4,27-4,24 (m, 1H), 3,99 (s, 4H), 2,75-2,73 (m, 1H), 2,67-2,65 (m, 1h), 2,10 (s a, 1H), 1,88-1,85 (m, 2H), 1,31 (s, 9H), 1,24 (s, 2H), 0,98-0,96 (m, 4H),0,91-0,86 (m, 4H) EM: EM m/z 568,2 (M++1).

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Etapa 4: Preparacion de (2S,3R)-1-((2S,4R)-2-((1R,2S)-1-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-

2-vinilciclopropilcarbamoil)-4-(4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)pirrolidin-1-il)-3,7-dimetil-1-oxonon-8-en-2-ilcarbamato de terc-butilo

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A una solucion de acido (2S,4R)-1-((3R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3,7-dimetilnon-8-enoil)-4-((4-

metoxiisoqumolin-1-il)oxi)pirrolidin-2-carboxilico (800 mg, 1,4 mmol) en diclorometano (30 ml) se le anadio DIPEA (0,73 ml, 4,2 mmol), HATU (530 mg, 1,4 mmol), seguido de clorhidrato de (1R,2S)-1-amino-N-(ciclopropilsulfonil)-2-vinilciclopropanocarboxamida (preparado de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 03/099274, Pagina N.° 53-59, 74-76) (600 mg, 1,5 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 h. La masa de reaccion se diluyo con DCM y se lavo con agua. La capa organica se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico mediante Combiflash para obtener el producto deseado (900 mg, 90 %) en forma de un solido blanquecino. RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 8,13-8,07 (m, 2H), 7,72-7,67 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,57-7,53 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 6,80 (s a, 1H), 5,84-5,79 (m, 2H), 5,73--5,64 (m, 1H), 5,39-5,38 (m, 1H), 5,28-5,23 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,15-5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1H) 4,97-4,88 (m, 2H), 4,49-4,45 (m, 2h), 4,19-4,17 (m, 2H), 4,00 (s, 3H), 2,90-2,81(m, 1h), 2,54-2,48 (m, 1H), 2,23-2,07 (m, 2h), 2,05-1,99 (m, 2H), 1,49-1,42 (m, 1H), 1,33 (s, 12H), 1,22-1,15 (m, 2H), 1,07-1,02 (m, 2H), 0,98-0,96 (d, J = 6,8 Hz, 4H), 0,86-0,81 (d, J = 6,8 Hz, 4H), EM: EM m/z 782,2 (M++1).

Etapa 5: Preparacion del Compuesto 1 y del Compuesto 2

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A una solucion desgasificada de (2S,3R)-1-((2S,4R)-2-((1R,2S)-1-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)- 2-vinilciclopropilcarbamoil)-4-(4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)pirrolidin-1-il)-3,7-dimetil-1-oxonon-8-en-2-ilcarbamato de terc-butilo (900 mg, 0,3 mmol) en dicloroetano (100 ml) se le anadio catalizador de Grubbs de II generacion (24 mg, 10 % p/p) a temperatura ambiente en una atmosfera de nitrogeno. La masa de reaccion se calento a 95 °C durante una noche. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se purifico mediante Combiflash para obtener el producto deseado (500 mg, 58 %) en forma de una mezcla diastereomerica. La mezcla diastereomerica se separo usando HPLC preparativa para obtener el Compuesto 1 (12 mg, 8 %) y el Compuesto 2 (8 mg, 3 %).

Compuesto 1: (2R,6S,7R, 11R, 13aS, 14aR, 16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-(4-

metoxiisoquinolin-1-iloxi)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrocicloprop a[e]pirrolo[1,2-a] [1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de terc-butilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,17-8,15 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,13-8,11 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,75-7,71 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,58-7,54 (m, 2 H), 7,30-7,28 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,83 (s a, 1H), 5,37-5,32 (t, J = 11,2 Hz, 1 H), 5,05-5,01 (m, 1H), 4,77-4,74 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,67-4,63 (m, 1H), 4,04-4,02 (m, 1 H), 3,96 (s, 3 H), 3,87-3,83 (m, 1 H), 2,97-2,96 (m, 1H), 2,76-2,65 (m, 3H), 2,45-2,38 (m, 1H), 1,82-1,81 (m, 1H), 1,78-1,72 (m, 1H), 1,64-1,61 (m, 3h), 1,45-1,32 (m, 5H), 1,13-1,11 (m, 13H), 0,99-0,98 (d, J = 6,4 Hz 3H), 0,95-0,93 (d, J = 6,4 Hz, 3H), EM: EM m/z 754,4 (M++1).

Compuesto 2: (2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(ddopropilsulfonilcarbamoil)-2-(4-metoxiisoquinolin-

1 -iloxi)-7,11 -dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclo- propa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de terc-butilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,17-8,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,13-8,10 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,75-7,71 (dt, J = 6,8 y 1,2 Hz, 1 H), 7,58-7,54 (m, 2 H), 5,83 5 (m, 1 H), 5,38-5,33 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 5,06-5,04 (m, 1 H), 4,74-4,71 (d, J = 11,2 Hz, 1H ), 4,69-4,64 (m, 1H), 4,03-4,01

(m, 1 H), 3,96 (s, 3H), 3,89-3,84 (t, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,28-3,18 (m, 1H), 2,96-2,88 (m, 1h), 2,72-2,57 (m, 2h), 2,35-2,32 (m, 1H), 1,98-1,95 (m, 1H), 1,75-1,69 (m, 2H), 1,64-1,61(m, 3H), 1,40-1,38 (m, 1H), 1,30-1,26 (m, 3h), 1,19-1,12 (m, 3H), 1,07 (s, 9H), 0,99-0,91 (m, 6H), EM: EM m/z 752,4 (M+-1).

10 Preparacion del Compuesto 3 y el Compuesto 4

imagen26

Preparacion de clorhidrato de (2R,6SJR,13aS,14aR,16aS,Z)-6-amino-N-(ddopropilsulfonil)-2-(4-mefoxiisoquinolin-1- 15 iloxi)-7,11 -dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a, 14,14a, 15,16,16a-hexa'decahidrocidopropa[e]pirrolo-

[1,2-a][1,4]diazaddopentadedn-14a-carboxamida

imagen27

20 Una solucion de (2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(dclopropilsulfonilcarbamoil)-2-(4-metoxiiso-

quinolin-1-iloxi)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrol o[1,2-a][1,4]diazaddopentadedn-6-ilcarbamato de terc-butilo (500 mg, 0,66 mmol) en dioxano.HCl se agito a temperatura ambiente durante 30 min. El disolvente se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto (350 mg, 77 %). El compuesto en bruto se lavo con eter dietilico y se recogio para la siguiente etapa sin purificacion 25 adicional. EM: EM m/z 652,2 (M+-1).

Preparacion de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-il carbonato de piridin-2-ilo

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30

A una suspension de NaH (1,03 g, 25,8 mmol) en THF (70 ml) se le anadio 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ol (3 g, 23,42 mmol). La reaccion se agito a 0 °C durante 20 min. Despues, se anadio una solucion de carbonato de dipiridin-2-ilo (5,06 g, 23,42 mmol) en THF (30 ml) a la mezcla. La solucion resultante se agito a temperatura ambiente durante una noche. Los subproductos solidos resultantes se filtraron y se lavaron con EtOAc (2 x 20 ml). Las capas 35 organicas combinadas se lavaron con agua, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El (1,1,1 -trifluoro-2-metilpropan-2-il) carbonato de piridin-2-ilo de color blanco resultante (1,24 g, 21 %) se uso directamente como reactivo.

5

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A una solucion de clorhidrato de (2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-6-amino-N-(ciclopropilsulfonil)- 2-(4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-7,11 -dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a, 14,14a, 15,16,16a-hexa'decahidroddo propa[e]pirrolo'[1,2-a][1,4]diazaddopentadedn-14a- carboxamida (350 mg, 0,53 mmol) en DCM (4 ml) se le anadio DIPEA (0,3 ml, 1,8 mmol), seguido de 2,2,2-trifluoro-1,1-dimetil-etil ester de piridin-2-il ester del acido carbonico (180 mg, 0,72 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 30 min. La masa de reaccion se diluyo con DCM y se lavo con agua. La capa organica se seco sobre Na2SO4 anhidro y se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto en forma de una mezcla de diastereomeros. La mezcla de diastereomeros se separo usando HPLC preparativa para obtener el Compuesto 3 (50 mg, 12 %) y el Compuesto 4 (30 mg, 7 %) en forma de un solido de color blanco.

Compuesto 3: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-(4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)- 7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diaz aciclopentadecin-6-il-carbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 mHz, CD3OD): 5 ppm 8,17-8,15 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,13-8,11 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,75-7,71 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,58-7,54 (m, 2 H), 7,30-7,28 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,82 (m, 1 H), 5,38-5,32 (t, J = 10,4 Hz, 1 H), 5,04-4,98 (m, 1H), 4,79-4,77 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,79-4,77 (m, 1H), 4,02 (s, 3 H), 4,00-3,99 (m, 1 H), 3,85-3,79 (m, , 1 H), 3,98-2,94 (m, 1H), 2,77-2,66 (m, 3 H), 2,42-2,38 (m, 1H), 1,88-1,82 (m, 1 H), 1,74-1,71 (m, 1H), 1,64-1,57(m, 3H), 1,44-1,40 (m, 1H), 1,36-1,31 (m, 6H), 1,17-1,11(m, 4H), 0,99-0,93 (m, 9H), RMN 19F: 5 ppm -85,12 (3 f); EM: EM m/z 808,1 (M++1).

Compuesto 4: (2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-(4-metoxiisoquinolin-

1-iloxi)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a] [1,4]diazaciclopentadecin-6-il-carbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. EM: EM m/z 808,3 (m++1).

Preparacion del Compuesto 5 y el Compuesto 6

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5

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Etapa 1: Preparacion de (2S,3R)-1-((2S,4R)-2-((1R,2S)-1-ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-vinilciclopropilcar- bamoil)-4-hidroxipirrolidin-1-il)-3,7-dimetil-1-oxonon-8-en-2-ilcarbamato de terc-butilo

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A una solucion de acido (2S,4R)-1-((2S,3R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3,7-dimetilnon-8-enoil)-4-hidroxipirrolidin- 2-carboxilico (2 g, 4,9 mmol) en diclorometano (15 ml) se le anadio HATU (1,86 g, 4,9 mmol), seguido de DIPEA (4,2 ml, 24,5 mmol) a temperatura ambiente. La masa de reaccion se agito a la misma temperatura durante 10 min. Se anadio clorhidrato de (1R,2S)-1-amino-N-(ciclopropilsulfonil)-2-vinilciclopropanocarboxamida (preparado de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento WO 03/099274, Pagina N.° 53-59, 74-76) (2 g, 5,3 mmol) a la masa de reaccion y se agito a temperatura ambiente durante 3 h. La masa de reaccion se diluyo con diclorometano y se lavo con agua. La capa organica se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico mediante Combiflash (MeOH al 3 % en CHCb) para obtener

1,9 g (62 %) del producto deseado en forma de un solido de color blanco. EM: EM m/z 623,5 (M+-1).

Etapa 2: Preparacion de (2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-hidroxi-7,11 -dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a, 14,14a, 15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a] [1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de terc-butil terc-butilo

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A una solucion desgasificada de (2S,3R)-1-((2S,4R)-2-((1R,2S)-1-ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-vinilci- clopropilcarbamoil)-4-hidroxipirrolidin-1-il)-3,7-dimetil-1-oxonon-8-en-2-ilcarbamato de terc-butilo (0,9 g, 1,4 mmol) en dicloroetano (150 ml) se le anadio catalizador de Grubbs de II generacion (90 mg, 10 % p/p) a temperatura ambiente en una atmosfera de nitrogeno. La masa de reaccion se calento a 95 °C durante una noche. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se purifico por ISCO para obtener el compuesto deseado (600 mg, 69 %). EM: EM m/z 595,2 (M+-1).

Etapa 3: Preparacion de (2R, 6S, 7R, 13aS, 14aR, 16aS,Z)-2-(5-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-14a-(ci- clopropilsulfonilcarbamoil)-7,11 -dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a, 14,14a, 15,16,16a-hexadecahidroci- clopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de terc-butilo

imagen32

A una solucion de ((2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-((ciclopropilsulfonil)carbamoil)-2-hidroxi-7,11- dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a, 14,14a, 15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a] [1,4]diazaciclopentadecin-6-il)carbamato de terc-butilo (500 mg, 0,8 mmol) y 1,5-dicloro-4-metoxiisoquinolina (230 mg, 1,0 mmol) en DMSO (5 ml) se le anadio t-BuOK (solucion 1 M en THF, 450 mg, 4,0 mmol) a temperatura ambiente en una atmosfera de nitrogeno. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 h. La masa de reaccion

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35

se inactivo con una solucion acuosa de acido dtrico y se extrajo con acetato de etilo (150 ml x 3). La capa organica combinada se lavo con agua y una solucion de salmuera, se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro a presion reducida para obtener el compuesto en bruto en forma de una mezcla de diastereomeros. EM: EM m/z 789,3 (M++1).

Etapa 4: Preparacion del Compuesto 5 y el Compuesto 6

La mezcla de diastereomeros de (2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-14a- (ciclopropilsulfonilcarbamoil)-7,11 -dimetil-5,16-clioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a, 14,14a, 15,16,16a-hexadecahidro- ddopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaddopentadedn-6-ilcarbamato se separo por HPLC preparativa para obtener el compuesto deseado 5 y el compuesto 6.

imagen33

Compuesto 5: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-

14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexade- cahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a] [1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato (230 mg, 35 %). RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,18-8,16 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,78-7,76 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 7,70 (s, 1H), 7,48-7,44 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,67- 6,64 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,83 (s a, 1H), 5,37-5,32 (t, J = 11,2 Hz, 1 H), 5,05-5,01 (m, 1H), 4,77-4,74 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,67- 4,63 (m, 1H), 4,04-4,02 (m, 1 H), 3,96 (s, 3 H), 3,87-3,83 (m, 1 H), 2,97-2,96 (m, 1H), 2,76-2,65 (m, 3H), 2,45-2,38 (m, 1H), 1,82-1,81 (m, 1H), 1,78-1,72 (m, 1H), 1,64-1,61(m, 3H), 1,45-1,32 (m, 5H), 1,13-1,11 (m, 13H), 0,99-0,98 (d, J = 6,4 Hz 3H), 0,95-0,93 (d, J = 6,4 Hz, 3H), EM: EM m/z 789,2 (M++1)

Compuesto 6: (2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-

14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadeca- hidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a] [1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de terc-butilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,18-8,16 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,76-7,74 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,70 (s, 1 H), 7,48-7,44 (d, J = 7,6 Hz, 1H ), 6,59-6,57 (d, J = 8,4 Hz, 1H) 5,83 (s a, 1H), 5,38-5,33 (t, J = 10,4 Hz, 1H), 5,06-5,04 (m, 1 H), 4,74-4,71 (d, J = 11,2 Hz, 1H ), 4,69-4,64 (m, 1H), 4,03-4,01 (m, 1 H), 3,96 (s, 3H), 3,89-3,84 (t, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,28-3,18 (m, 1H), 2,96-2,88 (m, 1h), 2,72-2,57 (m, 2h), 2,35-2,32 (m, 1H), 1,98-1,95 (m, 1H), 1,75-1,69 (m, 2H), 1,64-1,61(m, 3H), 1,40-1,38 (m, 1h), 1,30-1,26 (m, 3H), 1,19-1,12 (m, 3H), 1,07 (s, 9H), 0,99-0,91 (m, 6H), EM: EM m/z 787,8 (M+-1).

Preparacion del Compuesto 7 y el Compuesto 8

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5

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Preparacion de clorhidrato de (2R,6S,7R,13aS,14aR, 16aS,Z)-6-amino-2-(5-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-

iloxi)-N-(ciclopropilsulfonil)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-

hexadecahidrocidopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazacidopentadecin-14a-carboxamida

imagen35

Una solucion de (2R,6S,7R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-14a-(ciclo- propilsulfonilcarbamoil)-7,11 -dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a, 14,14a, 15,l6,16a-hexadecahidrociclo-

propa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de terc-butilo (300 mg, 3,3 mmol) en dioxano.HCl se agito a temperatura ambiente durante 30 min. El disolvente se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto (250 mg, 96 %). El compuesto en bruto se lavo con eter diet^lico y se recogio para la siguiente etapa sin purificacion adicional. EM: EM m/z 688,2 (M+ - 36).

El Compuesto 7 y el Compuesto 8 se prepararon usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis del Compuesto 3. La mezcla diastereomerica se separo por HPLC prep.

Compuesto 7: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-14a-(ciclopropil-

sulfonilcarbamoil)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,l1,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e] pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-il-carbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,18-8,15 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,78-7,76 (d, J = 6,4 Hz, 1 H), 7,70 (s, 1H), 7,49-7,45 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 5,81 (m, 1 H), 5,37-5,35 (t, J = 10,8 Hz, 1 H), 5,04-4,94 (m, 1H), 4,78-4,75 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,70-4,66 (m, 1h),

4,01-3,97 (m, 1 H), 3,96 (s, 3 H), 3,80-3,77 (d, J = 10,4 Hz , 1 H), 2,98-2,94 (m, 1H), 2,77-2,64 (m, 3 H), 2,45-2,38 (m, 1H), 1,84-1,82 (m, 1 H), 1,74-1,71 (m, 1H), 1,65-1,60(m, 3H), 1,43-1,29 (m, 8h), 1,17-1,05 (m, 4H), 0,98-0,91 (m, 9H), RMN 19F: 5 ppm -85,11 (3 F); EM: EM m/z 843,1 (M++1)

Compuesto 8: (2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-14a-(ciclopropil-

sulfonilcarbamoil)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e] pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-il-carbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. EM: EM m/z 843,3 (M++1).

Preparacion del Compuesto 9 y el Compuesto 10

imagen36

Los Compuestos 9 y 10 se prepararon usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis del Compuesto 7 y el Compuesto 8.

Compuesto 9: (2R,6S,7R, 11R,13aS,14aR, 16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfo-

nilcarbamoil)-2-(6-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a- hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-il-carbamato de

1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,10-8,08 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,92-7,91 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,26-7,25(d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,23 (s a, 1H), 7,20 (s, 1H ), 7,12-7,11 (dd, J = 2,4 & 6,4 Hz, 1H) 5,88-5,87 (m,

5

10

15

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1H), 5,39-5,33 (t, J = 10,8 Hz, 1H), 5,04-5,00 (m, 1 H), 4,74-4,68 (m, 2H ), 4,02-3,99 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,88-3,84 (m, 1 H), 3,23-3,21 (m, 1H), 2,96-2,90 (m, 1 h), 2,72-2,58 (m, 2H), 2,37-2,34 (m, 1H), 1,80-1,76 (m, 1H), 1,72-1,68 (m, 1H), 1,65-1,57(m, 3H), 1,40-1,28(m, 6h), 1,21-1,02 (m, 5H), 0,99-0,89 (m, 10H), RMN 19F: 5 ppm -85,15 (3 F); EM: EM m/z 806,2 (M+-1).

Compuesto 10: (2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfo-

nylcarbamoil)-2-(6-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a- hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-il-carbamato de

1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. EM: EM m/z 806,2 (M++1).

Preparacion de 1-Fluoro-4-metoxiisoquinolina

imagen37

Etapa 1: Preparacion de 1-cloro-4-metoxiisoquinolina

A una solucion de 1-cloroisoquinolin-4-ol (5,0 g, 27,8 mmol) en acetonitrilo (50 ml) se le anadio TMS-diazometano (12,73 g, 111,2 mmol) a 0 °C. Se dejo que la mezcla de reaccion alcanzara temperatura ambiente y se agito durante 2 h. El disolvente se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice para obtener 1-cloro-4-metoxiisoquinolina (2,5 g, 46,4 %) en forma de un solido blanquecino. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,29-8,17 (m, 2H), 7,97 (s, 1H), 7,91-7,82 (m, 2H), 4,05 (s, 3H); EM: EM m/z 194,7 (M++1).

Etapa 2: Preparacion de l-fluoro-4-metoxiisoquinolina

A una solucion de 1-cloro-4-metoxiisoquinolina (2,5 g, 12,91 mmol) en DMSO se le anadio fluoruro de cesio (4,01 g, 25,82 mmol) a temperatura ambiente. El recipiente de reaccion (Tubo a presion) se cerro hermeticamente y se calento a 145 °C durante 18 h. La masa de reaccion se diluyo con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre Na2SO4 anhidro y se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice para obtener el compuesto deseado (700 mg, 62 %) en forma de un solido de color blanco. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,10 (m, 1H), 8,08 (m, 1H), 7,78-7,75 (m, 1H), 7,69-7,65 (m, 1H), 7,49 (m, 1H), 4,04 (s, 3H); RMN 19F: 5 ppm -78,66 (1 F); EM: EM m/z 178,1 (M++1).

Preparacion de 1,5-dicloro-4-metoxiisoquinolina

imagen38

Cl: 0 Etapa 1 Cl 0 Etapa 2 Cl 1

Ac: '"OH DPPA ft difenil eter c

U: " I! Benceno .J " 250 °C

Cl: 0' Etapa 4 q| 0^

A: "S - pocia Ar

: NH

: 0 Cl

Etapa 3

Phl(OAc)2

MeS03H

MeOH

Etapa 1: Preparacion de (E)-3-(2-clorofenil)acriloil azida

A una solucion de acido (E)-3-(2-clorofenil) acrilico (13 g, 71,2 mmol) en benceno (100 ml) se le anadio trietilamina (14,4 g, 141 mmol), seguido de DPPA (19,5 g, 71,2 mmol) a temperatura ambiente. La masa de reaccion se agito a la misma temperatura durante 18 h. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se diluyo con agua y se extrajo con diclorometano. La capa organica se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y se evaporo para obtener el

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compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia en columna convencional (Gel de Silice, malla 60-120) usando acetato de etilo al 10 % en eter de petroleo como fase movil para obtener el compuesto deseado en forma de un solido de color amarillo palido (14 g, 95 %). RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 8,19-8,15 (d, J = 16 Hz, 1H), 7,63-7,61 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,44-7,42 (m, 1H), 7,36-7,26 (m, 2H), 6,44-6,40 (d, J = 16 Hz, 1H).

Etapa 2: Preparacion de 5-choroisoquinolin-1(2H)-ona

A un difenil eter (10 ml) caliente (125 °C) se le anadio (E)-3-(2-clorofenil)acriloil azida (2 g, 9,63 mmol) en porciones. La reaccion se calento a 250 °C durante 2 h. La masa de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se diluyo con eter de petroleo. El solido precipitado se filtro y se lavo con eter de petroleo para obtener el compuesto en bruto (1,1 g, 63,6 %) en forma de un solido de color amarillo. El compuesto en bruto se llevo a la siguiente etapa sin purificacion adicional. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,29-8,27 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,84-7,82 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,49 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,32-7,30 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,98-6,96 (d, J = 8 Hz, 1H); EM: EM m/z 180,7 (M++1).

Etapa 3: Preparacion de 5-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-(2H)-ona

A una solucion de 5-choroisoquinolin-1(2H)-ona (3,8 g, 21,2 mmol) en metanol (70 ml) se le anadio yodosobencenodiacetato (7,5 g, 23,4 mmol), seguido de metano acido sulfonico (2,45 g, 25,5 mmol) a temperatura ambiente. La masa de reaccion se calento a reflujo durante 3 h. El disolvente se evaporo y el residuo se diluyo con agua fria. El solido precipitado se filtro, se lavo con agua para obtener el compuesto en bruto (3,9 g, 88 %) en forma de un solido de color rojo claro. RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 8,06-8,03 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,60-7,57 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,01-6,99 (s a, 1H), 3,51 (s, 3H); EM: EM m/z 209,1 (M++1).

Etapa 4: Preparacion de 1,5-dicloro-4-metoxiisoquinolina

Una solucion de 5-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-(2H)-ona (6,4 g, 30,5 mmol) en POCl3 (45 ml) se calento a reflujo durante 18 h. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se diluyo con agua fria. El solido precipitado se filtro, se lavo con agua para obtener el compuesto en bruto (4 g, 57,4 %) en forma de un solido de color pardo claro. RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 8,28-8,25 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,79-7,76 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,58-7,54 (m, 1H), 4,03 (s, 3H); EM: EM m/z 228,0 (M++1).

Preparacion de 1,7-difluoro-4,6-dimetoxiisoquinolina

imagen39

Etapa 1: Preparacion de 7-fluoro-4,6-dimetoxiisoquinolin-1(2H)-ona

A una solucion de 7-fluoro-6-metoxiisoquinolin-1(2H)-ona (6,3 g, 32,6 mmol) en metanol (70 ml) se le anadio yodozobencenodiacetato (10,5 g, 32,6 mmol), seguido de metano acido sulfonico (3,76 g, 39,1 mmol) a temperatura ambiente. La masa de reaccion se calento a reflujo durante 3 h. El disolvente se evaporo y el residuo se diluyo con agua fria. El solido precipitado se filtro, se lavo con agua para obtener el compuesto en bruto (6,6 g, 91 %) en forma de un solido de color rojo claro. EM: EM m/z 224,0 (M++1).

Etapa 2: Preparacion de 1-cloro-7-fluoro-4,6-dimetoxiisoquinolina

Una solucion de 7-fluoro-4, 6-dimetoxiisoquinolin-1(2H)-ona (7,6 g, 34,1 mmol) en POCb; (50 ml) se calento a reflujo durante 18 h. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se diluyo con agua fria. La solucion acuosa se basifico con carbonato sodico solido y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice (acetato de etilo al 20 % en eter de petroleo) para obtener el compuesto deseado (2 g, 24,3 %) en forma de un solido de color amarillo palido. RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 7,88-7,85 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,54-7,52 (d, J = 8 Hz, 1 H), 4,05 (s, 3H); EM: EM m/z 242,0 (M++1).

Etapa 3: Preparacion de 1,7-difluoro-4,6-dimetoxiisoquinolina

A una solucion de 1-cloro-7-fluoro-4,6-dimetoxiisoquinolina (2 g, 8,28 mmol) en DMSO (5 ml) se le anadio fluoruro de cesio (2,51 g, 16,55 mmol) a temperatura ambiente. El recipiente de reaccion (Tubo a presion) se cerro hermeticamente y se calento a 145 °C durante 18 h. La masa de reaccion se diluyo con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica combinada se seco sobre Na2SO4 anhidro y se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice para obtener el compuesto

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deseado (475 mg, 25,5 %) en forma de un solido de color blanco. RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 5 ppm 7,69-7,67 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,53-7,51 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,45-7,44 (m, 1H), 4,05 (s, 3H), 4,03 (s, 3H); RMN 19F: 5 ppm -129,58 (1 F), - 79,2 (1F); EM: EM m/z 226,0 (M++1).

Preparacion de 1-fluoro-4,6-dimetoxiisoquinolina

imagen40

Etapa 1: Preparacion de azida (E)-3-(3-metoxifenil) acnlica

A una solucion de acido (E)-3-(3-metoxifenil)acrilico (20 g, 112 mmol) en benceno (200 ml) se le anadio trietilamina (22,72 g, 224 mmol), seguido de DPPA (30,9 g, 112 mmol) a temperatura ambiente. La masa de reaccion se agito a la misma temperatura durante 18 h. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se diluyo con agua y se extrajo con diclorometano. La capa organica combinada se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y se evaporo para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia en columna convencional (Gel de Silice, malla 60-120) usando acetato de etilo al 10 % en eter de petroleo como fase movil para obtener el compuesto deseado en forma de un solido de color blanco (18 g, 79 %). rMn 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 7,73-7,69 (d, J = 16 Hz, 1H), 7,33-7,29 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,14-7,12 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,05 (s, 1H) 6,98-6,96 (d, J = 4 Hz, 1H), 6,43-6,39 (d, J = 16 Hz, 1H), 3,86 (s, 3H).

Etapa 2: Preparacion de -6-metoxiisoquinolin-1(2H)-ona

A una solucion de (E)-3-(3-metoxifenil) acriloil azida (7 g, 34,4 mmol) en 1,2-diclorobenceno (70 ml) se le anadio acetato mercurico (0,11 g, 0,34 mmol). La reaccion se calento a 150 °C durante 10 min y la temperatura se elevo a 180 °C durante 1 h. La masa de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se diluyo con eter de petroleo. El solido precipitado se filtro y se lavo con eter de petroleo para obtener el compuesto en bruto (3,5 g, 58 %) en forma de un solido de color amarillo. El compuesto en bruto se llevo a la siguiente etapa sin purification adicional. RMN 1H (400 MHz, DMSO): 5 ppm 8,09-8,06 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,14-7,11 (m, 2H), 7,05-7,03 (d, J = 8 Hz, 1 H), 6,48-6,46 (d, J = 4 Hz, 1 H), 3,86 (s, 3H); EM: EM m/z 176,0 (M++1).

Etapa 3: Preparacion de 4,6-dimetoxiisoquinolin-1(2H)-ona

A una solucion de 7-fluoro-6-metoxiisoquinolin-1(2H)-ona (7 g, 40,0 mmol) en metanol (70 ml) se le anadio yodozobencenodiacetato (14,16 g, 40,0 mmol), seguido de acido metanosulfonico (11,52 g, 120 mmol) a temperatura ambiente. La masa de reaccion se calento a reflujo durante 3 h. El disolvente se evaporo y el residuo se diluyo con agua fria. El solido precipitado se filtro, se lavo con agua para obtener el compuesto en bruto (4 g, 48,8 %) en forma de un solido de color rojo claro. RMN 1H (400 MHz, DMSO): 5 ppm 8,11-8,09 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,13-7,11 (d, J = 8 Hz, 1 H), 6,72-6,71 (d, J = 12 Hz, 1 H), 3,89 (s, 3H), 3,79 (s, 3H); EM: EM m/z 206,1 (M++1).

Etapa 4: Preparacion de 1-cloro-4,6-dimetoxiisoquinolina

Una solucion de 4,6-dimetoxiisoquinolin-1 (2H)-ona (4 g, 19,49 mmol) en POCl3 (40 ml) se calento a reflujo durante 18 h. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se diluyo con agua fria. La solucion acuosa se basifico con carbonato sodico solido y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice (acetato de etilo al 20 % en eter de petroleo) para obtener el compuesto deseado (1,2 g, 27,5 %) en forma de un solido de color amarillo palido. RMN 1H (400 mHz, CDCb): 5 ppm 8,16-8,13 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,44-7,43 (d, J = 4 Hz, 1 H), 7,30-7,27 (d, J = 12 Hz, 1 H), 7,26 (s, 1H), 4,05 (s, 3H), 3,97 (s, 3H); EM: EM m/z 224,2 (M++1).

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A una solucion de 1-cloro-4,6-dimetoxiisoquinolina (1,5 g, 6,71 mmol) en DMSO (15 ml) se le anadio fluoruro de cesio (4 g, 26,8 mmol) a temperatura ambiente. El recipiente de reaccion (Tubo a presion) se cerro hermeticamente y se calento a 145 °C durante 18 h. La masa de reaccion se diluyo con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica combinada se seco sobre Na2SO4 anhidro y se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice para obtener el compuesto deseado (280 mg, 20,15 %) en forma de un solido de color blanco. RMN 1H (400 MHz, CDC13): 5 ppm 7,99-7,97 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,44-7,39 (m, 2H), 7,27-7,11 (m, 1H), 4,03 (s, 3H), 3,97 (s, 3H); RMN 19F: 5 ppm -79,32 (1F); EM: EM m/z 208,0 (M++1).

Preparacion de 1-cloro-7-fluoro-4-metoxiisoquinolina

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Etapa 1: Preparacion de (E)-3-(4-fluorofenil) acriloil azida

A una solucion de acido (E)-3-(4-fluorofenil) acrilico (25 g, 150 mmol) en benceno (120 ml) se le anadio trietilamina (30,5 g, 301 mmol), seguido de DPPA (41,4 g, 150 mmol) a temperatura ambiente. La masa de reaccion se agito a la misma temperatura durante 18 h. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se diluyo con agua y se extrajo con diclorometano. La capa organica se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y se evaporo para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia en columna convencional (Gel de Silice, malla 60-120) usando acetato de etilo al 10 % en eter de petroleo como fase movil para obtener el compuesto deseado en forma de un solido de color blanco (26 g, 90 %). RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 7,73-7,69 (d, J = 16 Hz, 1H), 7,55-7,51 (m, 2H), 7,11-7,07 (m, 2H), 6,36-6,32 (d, J = 16 Hz, 1H).

Etapa 2: Preparacion de 7-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona

A difenil eter (25 ml) caliente (125 °C) se le anadio en porciones (E)-3-(4-fluorofenil) acriloil azida (5 g, 26,2 mmol). La reaccion se calento a 250 °C durante 4 h. La masa de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se diluyo con eter de petroleo. El solido precipitado se filtro y se lavo con eter de petroleo para obtener el compuesto en bruto (2,45 g, 57 %). El compuesto en bruto se llevo a la siguiente etapa sin purificacion adicional. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 7,96-7,93 (m, 1H), 7,76-7,72 (m, 1H), 7,56-7,51 (m, 1H), 7,18-7,16 (m, 1H), 6,72-6,70 (m, 1H); EM: EM m/z 164,1 (M++1).

Etapa 3: Preparacion de 7-fluoro-4-metoxiisoquinolin-1(2H)-ona

A una solucion de 7-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (11 g, 67,4 mmol) en metanol se le anadio yodozobencenodiacetato (21,7 g, 67,4 mmol), seguido de metano acido sulfonico (7,78 g, 81 mmol) a temperatura ambiente. La masa de reaccion se calento a reflujo durante 3 h. El disolvente se evaporo y el residuo se diluyo con agua fria. El solido precipitado se filtro y se lavo con agua para obtener el compuesto en bruto (11 g, 84 %) en forma de un solido de color rojo claro. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,06-8,04 (m, 1H), 7,96-7,93 (m, 1H), 7,62-7,54 (m, 2H), 6,74 (s, 1H), 3,89 (s, 3H); EM: EM m/z 194,1 (M++1).

Etapa 4: Preparacion de 1-cloro-7-fluoro-4-metoxiisoquinolina

Una solucion de 7-fluoro-4-metoxiisoquinolin-1(2H)-ona (11 g, 56,9 mmol) en POCb (100 ml) se calento a reflujo durante 18 h. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se diluyo con agua fria. La solucion acuosa se basifico con carbonato sodico solido y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica combinada se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice (acetato de etilo al 20 % en eter de petroleo) para obtener el compuesto deseado (2,9 g, 24 %) en forma de un solido blanquecino. RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 8,36-8,32 (m, 1H), 7,93-7,90 (m, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,70-7,65 (m, 1H), 4,11 (s, 3H); EM: EM m/z 212,1 (M++1).

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A una solucion de 1-cloro-7-fluoro-4-metoxiisoquinolina (3,7 g, 17,48 mmol) en DMSO se le anadio fluoruro de cesio (10,26 g, 69,9 mmol) a temperatura ambiente. El recipiente de reaccion (Tubo a presion) se cerro hermeticamente y se calento a 145 °C durante 18 h. La masa de reaccion se diluyo con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica combinada se seco sobre Na2SO4 anhidro y se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice para obtener el compuesto deseado (1,7 g, 49 %) en forma de un solido de color blanco. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,20-8,18 (m, 1H), 7,69-7,66 (m, 1H), 7,54-7,47 (m, 1H), 7,46 (s, 1 H), 4,04 (s, 3H); RMN 19F: 5 ppm 109,65 (1F), -78,53 (1F); EM: EM m/z 196,1 (M++1).

Preparacion de 2-cloro-6-metoxiquinoxalina y 3-cloro-6-metoxiquinoxalina

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Etapa 1: Preparacion de 6-metoxilquinoxalin-2(1H)-ona and 7-metoxiquinoxalin-2(1H)-ona

A una solucion de 4-metoxibenceno-1,2-diamina (5 g, 36,2 mmol) en etanol (50 ml) se le anadio 2-oxoacetato de etilo (4,06 g, 39,8 mmol)). La masa de reaccion se calento a reflujo durante una noche. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se diluyo con acetato de etilo y despues se evaporo a sequedad para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se lavo con eter de petroleo para obtener el compuesto en bruto (5,1 g, rendimiento del 80 %) en forma de una mezcla de regioisomeros (solido de color negro). Este compuesto en bruto se llevo a la siguiente etapa sin separacion de isomeros. RMN 1H (400 MHz, DMSO- d6): 5 ppm 8,17 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,70-7,68 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,31-7,30 (d, J = 4 Hz, 1 H), 7,27-7,20 (m, 2 H), 6,93-6,90 (m, 1H), 6,77-6,76 (d, J = 4 Hz, 1 H), 3,84 (s, 3H), 3,83 (s, 3H); EM: EM m/z 177,0 (M++1).

Etapas 2 y 3: Preparacion de 2-cloro-6-metoxiquinoxalina y 3-cloro-6-metoxiquinoxalina

Una solucion de 6-metoxiquinoxalin-2(1H)-ona y 7-metoxiquinoxalin-2(1H)-ona (3 g, 18,28 mmol) en POCb (20 ml) se calento a reflujo durante 3 h. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se diluyo con agua fria. La solucion acuosa se basifico con carbonato sodico solido y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica combinada se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice (acetato de etilo al 20 % en eter de petroleo) para proporcionar una mezcla de regioisomeros (3,7 g). Se separaron 2 g de la mezcla anterior por purification de SFC para proporcionar 2-cloro-7-metoxiquinoxalina (0,7 g, 34,7 %) y 2-cloro-7-metoxiquinoxalina (0,9 g, 44,6 %) en forma de un solido de color blanquecino. 2-Cloro-6-metoxiquinoxalina: RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 ppm RMN 1H (400 MHz, CDCl3): 5 ppm 8,71 (s, 1H), 7,91-7,89 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,46-7,38 (m, 2H), 3,97 (s, 3H); EM: EM m/z 194,9(M++1). 2-Cloro-7-metoxiquinoxalina: RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 8,63 (s, 1H), 7,99-7,96 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,43-7,40 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,30 (s, 1H), 3,96 (s, 3H); EM: EM m/z 194 .9 (M++1).

Preparacion de 1-fluoro-4-etoxiisoquinolina

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A una solucion de 1-cloroisoquinolin-4-ol (1,0 g, 5,5 mmol) en acetonitrilo (10 ml) se le anadio K2CO3 (2,3 g, 16,7 mmol), seguido de yoduro de etilo (0,87 ml, 11,0 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante una noche. El disolvente se evaporo a presion reducida y el residuo se diluyo con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica combinada se seco sobre Na2SO4 anhidro y se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice para obtener 1-cloro-4-etoxiisoquinolina (0,7 g, 62 %) en forma de un solido blanquecino. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,26-8,24 (m, 2H), 7,79 (s, 1H), 7,76-7,26 (m, 2H), 4,29-4,24 (c, J = 6,8 Hz, 2H), 1,58-1,54 (t, J = 6,8 Hz, 3H); EM: EM m/z 207,7 (M++1).

Etapa 2: Preparacion de 1-Fluoro-4-etoxiisoquinolina

A una solucion de 1-cloro-4-etoxiisoquinolin (4,8 g, 23,12 mmol) en DMSO se le anadio fluoruro de cesio (6,9 g, 46,24 mmol) a temperatura ambiente. El recipiente de reaccion (Tubo a presion) se cerro hermeticamente y se calento a 145 °C durante 18 h. La masa de reaccion se diluyo con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre Na2SO4 anhidro y se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto. El compuesto en bruto se purifico por cromatografia sobre gel de silice para obtener el compuesto deseado (2,6 g, 58,8 %) en forma de un solido de color blanco. EM: EM m/z 192,3 (M++1).

Preparacion de 1-metilciclopropano-1-sulfonamida

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Etapa 1: Preparacion de ciclopropilsulfonilcarbamato de terc-butilo

A una solucion de ciclopropanosulfonamida (100 g, 82,6 mmol) en DCM (800 ml) se le anadio trietilamina (234 ml, 165 mmol), seguido de DMAP (10,28 g, 82,6 mmol) a 0 °C en una atmosfera de nitrogeno. A esta mezcla de reaccion se le anadio lentamente Boc anhidrido (247 ml, 107 mmol) en DCM (400 ml). La mezcla resultante se agito durante 4 h a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se diluyo con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica combinada se lavo con una solucion HCl de 1,5 N y NaHCO3 al 10 % y se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto en bruto (143 g, 65,0 %) en forma de un solido. El compuesto en bruto se recogio directamente para la siguiente etapa. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 ppm 11,08 (s, 1H), 2,90 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 1,06(m, 4H).

Etapa 2: Preparacion de (1-metilciclopropil) sulfonilcarbamato de terc-butilo

Una solucion de ciclopropilsulfonilcarbamato de terc-butilo (4,3 g, 20 mmol) se disolvio en THF seco (100 ml) y se enfrio a -78 °C. A esta solucion se le anadio lentamente n-BuLi (17,6 ml, 44 mmol, 2,5 M en hexano). La mezcla de reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente durante un periodo de 1,5 h. Despues, esta mezcla se enfrio a -78 °C, y se anadio una solucion de n-BuLi (20 mmol, 8 ml, 2,5 M en hexano), se agito durante 1 h y se anadio una solucion pura de yoduro de metilo (5,68 g, 40 mmol). La mezcla de reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente durante una noche y se inactivo con NH4Cl acuoso saturado (100 ml) a temperatura ambiente. Se extrajo con EtOAc (100 ml). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4, se filtro y se evaporo a presion reducida para dar un aceite de color amarillo que se cristalizo en hexano para proporcionar el producto en forma de un solido de color ligeramente amarillo.(3,1 g, 81 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 ppm 10,97 (s, 1H), 1,44 (s, 12H), 1,35-1,33(m, 2H), 0,93-0,91 (m, 2H).

Etapa 3: Preparacion de 1-metilciclopropano-1-sulfonamida

Una solucion de N-terc-butil-(1-metil) ciclopropil-sulfonamida (1,91 g, 10 mmol) se disolvio en HCl 4 M en dioxano (30 ml) y la mezcla de reaccion se agito a ta durante 16 h. El disolvente se retiro al vacio para dar un aceite de color amarillo que se cristalizo en EtOAc/hexano (1:4, 40 ml) para producir 1-metil-ciclopropilsulfonamida, en forma de un solido de color blanco (1,25 g, 96 %). RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 6,73 (s, 2H), 1,43 (s, 3H), 1,14-1,12(m, 2H), 0,75-0,73(m, 2H).

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Preparacion 1 - (Fluoro metil) ciclopropano-1-sulfonamida

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Etapa 1: Preparacion de 1-(hidroximetil)cidopmpilsulfonilcarbamato de terc-butilo

A una solucion de ciclopropilsulfonilcarbamato de terc-butilo (30 g, 136 mmol) en 750 ml de THF se le anadio gota a gota butillitio (1,6 M en hexano, 212 ml, 339 mmol) durante 30 min a -78 °C y la mezcla resultante se agito a -78 °C durante 1 h. Se genero gas de formaldehido a partir de para-formaldehido (calentando a 180 °C) y se purgo en la masa de reaccion anterior durante 30 min a -30 °C. La reaccion se agito a la misma temperatura durante 1 h, despues se dejo calentar a temperatura ambiente. La reaccion se interrumpio con una solucion acuosa de cloruro de amonio y se diluyo con agua. La masa resultante se lavo con acetato de etilo y la capa acuosa se acidifico a pH ~2 y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos organicos combinados se secaron sobre sulfato sodico, se filtraron y se evaporaron a presion reducida para obtener el compuesto deseado (27 g, 79 %) en forma de un solido de color blanco. RMN 1H (400 MHz, DMSO-de): 5 ppm 10,90 (s a, 1H), 4,95 (s a, 1H), 3,75 (s, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,27(m, 2H), 1,08 (m, 2 H).

Etapa 2: Preparacion de (1-(fluorometil)ciclopropil)sulfonilcabamato de terc-butilo

A una solucion de (1-hidroximetil)ciclopropil) sulfonilcarbamato de terc-butilo (10 g, 39,98 mmol) en DCM (150 ml) a -78 °C se le anadio gota a gota DAST (25,7 g, 159 mmol). La masa de reaccion se agito durante 2 h. La masa de reaccion se inactivo con una solucion 1 N de NaOH (200 ml) y se separo la capa de DCM. La capa de DCM se lavo con una solucion de NaOH (400 ml), la capa acuosa combinada se acidifico con una solucion 1,5 N de HCl (600 ml) y se extrajo con DCM. La capa organica combinada se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto deseado (9,8 g, 97 %) en forma de un solido de color pardo claro. RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 6,97 (s a, 1H), 4,74-4,62 (d, J = 48 Hz, 2H), 1,83-1,80 (m, 2H), 1,56-1,44 (m, 9H), 1,20-1,11 (m, 2H).

Etapa 3: Preparacion de 1-(fluorometil) ciclopropano-1-sulfonamida

A una solucion de (1-(fluorometil)ciclopropil)sulfonilcarbamato de terc-butilo (19,8 g, 38,7 mmol) en DCM (100 ml) se le anadio gota a gota TFA (30 ml, 387 mmol) a temperatura ambiente. La masa de reaccion se agito durante 2 h. La masa de reaccion se evaporo a presion reducida para obtener el compuesto deseado (6 g, 100 %) en forma de un solido de color blanquecino. RMN 1H (400 MHz, CDCb): 5 ppm 4,78-4,66 (d, J = 48 Hz, 2H), 2,61 (s a, 1H), 1,59-1,56 (m, 2H), 1,13-1,10 (m, 2H).

Preparacion del Compuesto 11

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El Compuesto 11 se preparo usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis del Compuesto 5. Compuesto 11: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(4,6-dimetoxiisoquinolin-1-iloxi)-14a-(1-(fluorometil)ciclopropilsulfonilcarbamoil) -7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4] diazaciclopentadecin-6-il-carbamato de terc-butilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,06 (d, J = 9,03 Hz, 1 H) 7,51 (s, 1 H) 7,42 (d, J = 2,51 Hz, 1 H) 7,14 (dd, J = 9,16, 2,64 Hz, 1 H) 5,79 (s a, 1 H) 5,29 (s a, 1 H) 4,54 - 4,65 (m, 2 H) 4,02 (s, 3 H) 3,95 (s, 3 H) 3,03 - 3,09 (m, 3 H) 2,67 (d, J = 17,57 Hz, 2 H) 1,77 (d, J = 4,77 Hz, 1 H) 1,62 (d, J = 11,80 Hz, 2 H) 1,43 (s, 1 H) 1,29 - 1,35 (m, 9 H) 1,24 (s a, 2 H) 1,12 (s, 9 H) 0,99 (dd, J = 13,05, 6,53 Hz, 6 H) 0,89 - 0,94 (m, 3 H);

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EM: EM m/z 816,4 (M++1).

Preparacion del Compuesto 12 y el Compuesto 13

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El Compuesto 12 y el Compuesto 13 se prepararon usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la smtesis del Compuesto 7 y el Compuesto 8.

Compuesto 12: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR, 16aS,Z)-2-(4,6-dimetoxiiso- quinolin-1-iloxi)-14a-(1 -(fluorometil)

ciclopropilsulfonilcarbamoil)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a- hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,89 (s, 1 H) 8,09 (d, J = 9,29 Hz, 1 H) 7,52 (s, 1 H) 7,45 (d, J = 2,51 Hz, 1 H) 7,17 (dd, J = 9,03, 2,51 Hz, 1 H) 5,81 (s a, 1 H) 5,37 (t, J = 9,66 Hz, 1 H) 4,96 - 5,03 (m, 2 H) 4,67 - 4,75 (m, 2 H) 4,43 - 4,61 (m, 1 H) 4,00 - 4,05 (m, 3 H) 3,96 (s, 3 H) 3,85 (d, J = 10,79 Hz, 1 H) 3,23 (d, J = 7,03 Hz, 2 H) 2,59 - 2,71 (m, 2 H) 2,29

- 2,36 (m, 1 H) 1,70 - 1,82 (m, 2 H) 1,63 (td, J = 8,47, 5,40 Hz, 4 H) 1,36 (s, 3 H) 1,31 (s, 3 H) 1,25 - 1,28 (m, 3 h) 1,15

- 1,21 (m, 2 H) 0,97 (d, J = 4,52 Hz, 6 H) 0,87 - 0,93 (m, 2 H); EM: EM m/z 870,4 (M++1).

Compuesto 13: ((2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-2-((4,6-dimetoxiisoquinolin- 1-il)oxi)-14a-(((1-(fluorometil)- ciclopropil)sulfonil)carbamoil)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclo propa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-il)carbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,07 (d, J = 9,29 Hz, 1 H) 7,52 (s, 1 H) 7,42 (d, J = 2,26 Hz, 1 H) 7,09 - 7,16 (m, 1 H) 6,71 (d, J = 8,53 Hz, 1 H) 5,80 (s, 1 H) 5,34 (s a, 1 H) 4,81 - 4,81 (m, 1 H) 4,62 - 4,71 (m, 3 H) 4,02 (s, 4 H) 3,95 (s, 4 H) 2,67 - 2,75 (m, 3 H) 2,42 (s a, 1 H) 1,83 (s a, 1 H) 1,66 (d, J = 7,53 Hz, 6 H) 1,48 (s a, 1 H) 1,17 (s, 11 H) 1,00 (d, J = 6,53 Hz, 3 H) 0,95 (d, J = 6,27 Hz, 4 h); EM: EM m/z 870,6 (M++1).

Preparacion del Compuesto 14

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El Compuesto 14 se preparo usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis del Compuesto 7. Compuesto 14: (2R,6S,7R,11R,13aS,

14aR,16aS,Z)-2-(4,6-dimetoxiisoquinolin-1-iloxi)-7,11-dimetil-14a-(1-metilciclopropilsulfonilcarbamoil)-5,16- dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopenta- decin-6-ilcarbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,07 (d, J = 9,03 Hz, 1 H) 7,53 (s, 1 H) 7,44 (d, J = 2,51 Hz, 1 H) 7,28 (d, J = 8,28 Hz, 1 H) 7,15 (dd, J = 9,03, 2,51 Hz, 1 H) 5,81 (s a, 1 H) 5,34 - 5,40 (m, 1 H) 5,02 (dd, J = 10,42, 7,40 Hz, 1 h) 4,67 - 4,74 (m, 2 h) 3,98 - 4,04 (m, 4 H) 3,95 (s, 3 h) 3,84-3,90 (m, 1 H) 3,20 (s a, 1 H) 2,58 - 2,72 (m, 2 H) 2,35 (c, J = 8,11 Hz, 1 h) 1,79 (d, J = 7,03 Hz, 1 H) 1,57 - 1,69 (m, 5 H) 1,54 (s, 3 h) 1,42 - 1,51 (m, 2 H) 1,37 (s, 3 H) 1,27 - 1,33 (m, 1 H) 1,17 (dd, J = 14,18, 8,91 Hz, 1 H) 0,96 - 1,00 (m, 8 H) 0,89 - 0,93 (m, 3 H); EM: EM m/z 852,5 (M++1).

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El Compuesto 15 y el Compuesto 16 se prepararon usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis de Compuesto 7 y Compuesto 8.

Compuesto 15: (2R,6S,7R,11 R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(7-fluoro-4,6- dimetoxiisoquinolin-1-iloxi)-7,11-dimetil-

14a-(1-metilcidopropilsulfonilcarbamoil)-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclo- propa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-il-carbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 7,75 (d, J = 11,54 Hz, 1 H) 7,58 (d, J = 8,28 Hz, 1 H) 7,54 (s, 1 H) 5,82 (s a, 1 H) 5,33 - 5,40 (m, 1 H) 5,04 (d, J = 10,54 Hz, 1 H) 4,64 - 4,73 (m, 2 H) 3,97 - 4,05 (m, 7 H) 3,86 (d, J = 10,79 Hz, 1 h) 2,57 - 2,72 (m, 2 h) 2,34 (d, J = 6,53 Hz, 1 H) 1,79 (d, J = 6,78 Hz, 1 H) 1,57 - 1,70 (m, 5 H) 1,53 (s, 3 H) 1,48 (d, J = 11,04 Hz, 1 H) 1,39 (s, 3 H) 1,32 (s a, 1 H) 1,12 - 1,29 (m, 3 h) 1,08 (s, 3 H) 0,98 (d, J = 6,53 Hz, 6 H) 0,87 - 0,93 (m, 3 H); EM: EM m/z 870,4 (M++1).

Compuesto 16: (2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(7-fluoro-4,6-dimetoxiisoquinolin- 1-iloxi)-7,11-dimetil-14a- (1-metilciclopropilsulfonilcarbamoil)-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclo- propa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-il-carbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 7,75 (d, J = 11,54 Hz, 1 H) 7,58 (d, J = 8,28 Hz, 1 H) 7,54 (s, 1 H) 5,81 (s a, 1 H) 5,36 (t, J = 10,29 Hz, 1 H) 4,95 (t, J = 10,42 Hz, 1 H) 4,65 - 4,72 (m, 2 h) 4,03 (d, J = 2,01 Hz, 7 H) 3,83 (d, J = 10,29 Hz, 1 H) 2,73 (dt, J = 13,93, 6,84 Hz, 3 H) 2,36 - 2,44 (m, 1 H) 1,85 (s a, 1 h) 1,57 - 1,74 (m, 5 H) 1,54 (s, 3 H) 1,45 (d, J = 11,80 Hz, 2 H) 1,41 (s, 3 H) 1,30 (d, J = 14,05 Hz, 3 H) 1,14 (s, 4 H) 1,01 (d, J = 6,27 Hz, 3 H) 0,95 (d, J = 6,53 Hz, 3 H) 0,91 (s a, 2 H); EM: EM m/z 868,9 (M+-1).

Preparacion del Compuesto 17 y el Compuesto 18

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El Compuesto 17 y el Compuesto 18 se prepararon usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis del Compuesto 7 y el Compuesto 8.

Compuesto 17: ((2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-((7-metoxiqui- noxalin-2-il)oxi)-7,11-dimetil-14a-

(((1-metilciclopropil)sulfonil)carbamoil)-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclo- propa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-il)carbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,26 (s, 1 H) 7,87 (d, J = 9,03 Hz, 1 H) 7,32 (d, J = 2,76 Hz, 1 H) 7,26 - 7,30 (m, 1 H) 5,88 (s a, 1 H) 5,34 (s a, 1 H) 4,75 (s, 1 H) 4,68 (s a, 1 h) 4,07 (d, J = 8,78 Hz, 1 h) 3,99 (s, 3 H) 3,84 (s, 1 h) 2,66 (d, J = 7,03 Hz, 2 h) 2,27 (s a, 1 H) 1,74 - 1,83 (m, 1 H) 1,69 (s a, 1 H) 1,60 (d, J = 8,03 Hz, 3 H) 1,54 (s, 4 H) 1,40 (d, J = 6,27 Hz, 3 H) 1,31 (s, 2 H) 1,26 (s, 4 H) 1,20 (s, 3 H) 0,97 (dd, J = 13,68, 6,40 Hz, 7 H) 0,88 (s a, 2 H); EM: EM m/z 823,5 (M++1).

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Compuesto 18: ((2R,6S,7R, 11S,13aS, 14aR, 16aS,Z)-2-((7-metoxiqui- noxalin-2-il)oxi)-7,11 -dimetil-14a-(((1-

metilddopropil)sulfonil)carbamoil)-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidroddopropa [e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazacidopentadecin-6-il)carbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,27 (s, 1 H) 7,87 (d, J = 9,03 Hz, 1 H) 7,34 (d, J = 2,51 Hz, 1 H) 7,28 (dd, J = 9,03, 2,76 Hz, 1 H) 5,88 (s a, 1 H) 5,32 (t, J = 10,29 Hz, 1 H) 4,73 - 4,81 (m, 1 H) 4,66 (t, J = 8,41 Hz, 1 H) 4,12 (d, J = 10,54 Hz, 1 H) 3,99 (s, 3 H) 3,84 (d, J = 10,29 Hz, 1 H) 2,70 (dd, J = 13,93, 7,65 Hz, 3 H) 2,45 - 2,59 (m, 2 H) 1,98 (s, 2 H) 1,85 (d, J = 6,02 Hz, 1 H) 1,70 - 1,77 (m, 2 H) 1,61 (s a, 3 H) 1,54 (s, 3 H) 1,31 - 1,47 (m, 2 H) 1,28 (s, 4 H) 1,23 (s, 3 H) 0,96 (t, J = 6,90 Hz, 6 H) 0,87 (s a, 2 H); EM: EM m/z 823,5 (M++1).

Preparacion del Compuesto 19 y el Compuesto 20

imagen52

El Compuesto 19 y el Compuesto 20 se prepararon usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis del Compuesto 7 y el Compuesto 8.

Compuesto 19: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(4-etoxiisoquinolin-1-iloxi)-7,11-dimetil-14a-

(1-metilddopropilsulfonNcarbamoN)-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidroddo- propa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-il-carbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan- 2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,16 (t, J = 8,03 Hz, 2 H) 7,74 (t, J = 7,78 Hz, 1 H) 7,54 - 7,60 (m, 2 H) 5,83 (s a, 1 H) 5,37 (t, J = 10,29 Hz, 1 H) 5,00 - 5,06 (m, 1 H) 4,69 - 4,77 (m, 2 H) 4,25 (c, J = 7,03 Hz, 2 H) 4,02 (d, J = 12,05 Hz, 1 H) 3,87 (d, J

= 10,79 Hz, 1 H) 2,58 - 2,75 (m, 3 H) 2,35 (d, J = 8,53 Hz, 1 H) 1,73 - 1,84 (m, 1 H) 1,58 - 1,70 (m, 5 H) 1,53 - 1,57 (m,

6 H) 1,40 - 1,51 (m, 2 H) 1,31 - 1,37 (m, 4 H) 1,28 (s, 1 H) 1,09 - 1,21 (m, 1 H) 0,98 (dd, J = 6,27, 5,02 Hz, 6 H) 0,91 (s,

5 H); EM: EM m/z 836,5 (M++1).

Compuesto 20: (2R,6S,7R,11S,13aS,14aR, 16aS,Z)-2-(4-etoxiisoquinolin-

1- iloxi)-7,11-dietil-14a-(1-metilcidopropilsulfonilcarbamoil)-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a- hexadecahidroddopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaddopentadedn-6-il-carbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-

2- ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,16 (t, J = 7,40 Hz, 2 H) 7,74 (t, J = 7,78 Hz, 1 H) 7,53 - 7,59 (m, 2 H) 5,83 (s

a, 1 H) 5,36 (s, 1 H) 4,93 - 4,99 (m, 1 H) 4,69 - 4,79 (m, 2 H) 4,24 (c, J = 6,94 Hz, 2 H) 4,04 (d, J = 10,29 Hz, 1 H) 3,85

(d, J = 11,29 Hz, 1 H) 2,63 - 2,79 (m, 3 H) 2,42 (s a, 1 H) 1,85 (d, J = 9,54 Hz, 1 H) 1,62 - 1,77 (m, 3 H) 1,52 - 1,59 (m,

6 H) 1,39 - 1,49 (m, 3 H) 1,36 (s, 3 H) 1,27 - 1,32 (m, 3 H) 1,17 (s, 1 H) 0,89 - 1,01 (m, 11 H). EM: EM m/z 836,4 (M++1).

Preparacion del Compuesto 21

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El Compuesto 21 se preparo usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis del Compuesto 5. Compuesto 21: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,l6aS,Z)-14a-(cidopropilsulfonilcarbamoil)-2-(4,6-dimetoxiisoquinolin-1-iloxi)-7,11-dimetil- 5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4] diazaciclopentadecin-6-il-carbamato de terc-butilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,06 (d, J = 9,04 Hz, 1 H) 7,51 (s, 1 H) 7,42 (d, J = 2,51 Hz, 1 H) 7,13 (dd, J = 9,03, 2,51 Hz, 1 H) 5,81 (s a, 1 H) 5,37 (t, J = 10,16 Hz, 1 H) 5,01 (dd, J = 10,54, 7,28 Hz, 1 H) 4,62 - 4,69 (m, 2 H) 3,98 - 4,04 (m, 4 H) 3,89 - 3,96 (m, 4 H) 3,18 - 3,25 (m, 1 H) 2,89 - 2,97 (m, 1 H) 2,55 - 2,70 (m, 2 H) 2,38 (c, J = 7,86 Hz, 1 H) 1,77 (td, J = 10,54, 6,27 Hz, 1 H) 1,70 (dd, J = 8,28, 5,27 Hz, 1 H) 1,57 - 1,66 (m, 3 H) 1,35 - 1,46 (m, 1 H) 1,24 - 1,34 (m, 3 H) 1,02 - 1,22 (m, 12 H) 0,98 (t, J = 6,53 Hz, 6 H) 0,88 - 0,94 (m, 1 H); EM: EM m/z 784,2 (M++1)

Preparacion de Compuesto 22

imagen54

El Compuesto 22 se preparo usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis de Compuesto 7. Compuesto 22: (2R,6S,7R,11R,13aS,

14aR,16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-(4,6-dimetoxiisoquinolin-1-iloxi)-7,11-dimetil-5,16-dioxo- 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-il- carbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,06 (d, J = 9,29 Hz, 1 H) 7,53 (s, 1 H) 7,43 (d, J = 2,51 Hz, 1 H) 7,15 (dd, J = 9,16, 2,64 Hz, 1 H) 5,81 (s a, 1 H) 5,37 (t, J = 10,04 Hz, 1 H) 5,00 - 5,06 (m, 1 H) 4,67 - 4,73 (m, 2 H) 3,97 - 4,04 (m, 4 H) 3,95 (s, 3 H) 3,83 - 3,89 (m, 1 H) 3,22 (d, J = 9,54 Hz, 1 H) 2,94 (s, 1 H) 2,56

- 2,71 (m, 2 H) 2,36 (d, J = 7,28 Hz, 1 H) 1,75 - 1,84 (m, 1 H) 1,71 (dd, J = 8,03, 5,27 Hz, 1 H) 1,56 - 1,66 (m, 3 h) 1,39

- 1,46 (m, 1 H) 1,37 (s, 3 H) 1,24 - 1,32 (m, 2 H) 1,03 - 1,22 (m, 4 H) 0,98 (t, J = 7,53 Hz, 9 H) 0,88 - 0,93 (m, 1 H); EM: EM m/z 838,2 (M++1).

Preparacion del Compuesto 23

imagen55

El Compuesto 23 se preparo usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis de Compuesto 5. Compuesto 23: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-(7-fluoro-4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-7,11-di metil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a] [1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de terc-butilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 9,09 (s, 1 H) 8,17 (dd, J = 9,03, 5,27 Hz, 1 H) 7,74 (dd, J = 9,54, 2,51 Hz, 1 H) 7,49 - 7,58 (m, 2 H) 5,83 (s a, 1 H) 5,36 (t, J = 10,67 Hz, 1 H) 5,03 (t, J = 10,67 Hz, 1 H) 4,63 - 4,78 (m, 2 h) 3,99 - 4,05 (m, 4 H) 3,85 (d, J = 10,54 Hz, 1 H) 2,97 (tt, J = 7,94, 4,86 Hz, 1 H) 2,64 - 2,78 (m, 3 H) 2,41 (ddd, J = 13,80, 9,66, 4,14 Hz, 1 H) 1,78 - 1,87 (m, 1 H) 1,73 (dd, J = 8,28, 5,77 Hz, 1 H) 1,56 - 1,67 (m, 3 H) 1,29 - 1,49 (m, 5 H) 1,04 - 1,21 (m, 12 H) 1,00 (d, J = 6,53 Hz, 3 H) 0,95 (d, J = 6,27 Hz, 3 H); EM: EM m/z 772,4 (M++1).

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El Compuesto 24 se preparo usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la smtesis de Compuesto 7. Compuesto 24: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(cidopropilsulfonilcarbamoil)-2-(7-Huoro-4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-7,11 -dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4] diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 9,10 (s, 1 H) 8,19 (dd, J = 9,16, 5,40 Hz, 1 H) 7,76 (dd, J = 9,54, 2,51 Hz, 1 H) 7,51 - 7,61 (m, 2 H) 5,80 - 5,85 (m, 1 H) 5,36 (t, J = 10,54 Hz, 1 H) 4,99 - 5,06 (m, 1 H) 4,65 - 4,77 (m, 2 H) 3,99 - 4,05 (m, 4 H) 3,81 (d, J = 10,29 Hz, 1 H) 2,94 - 3,00 (m, 1 H) 2,64 - 2,79 (m, 3 H) 2,41 (ddd, J = 13,80, 9,79, 4,27 Hz, 1 H) 1,85 (d, J = 6,27 Hz, 1 H) 1,73 (dd, J = 8,28, 5,77 Hz, 1 H) 1,57 - 1,68 (m, 3 H) 1,44 (d, J = 12,05 Hz, 1 H) 1,29 - 1,39 (m, 7 H) 1,09 - 1,20 (m, 3 H) 1,04 - 1,08 (m, 3 h) 1,00 (d, J = 6,53 Hz, 3 H) 0,94 (d, J = 6,53 Hz, 3 H); EM: EM m/z 824,2 (M+-1).

Preparacion del Compuesto 25

imagen57

El Compuesto 25 se preparo usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la smtesis del Compuesto 7. Compuesto 25:

(2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-2-(5-cloro-4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-7,11-dimetil-14a-(1-metilciclopropilsulfonil- carbamoil)-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a] [1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,18 (dd, J = 8,41, 1,13 Hz, 1 H) 7,78 (dd, J = 7,53, 1,00 Hz, 1 H) 7,72 (s, 1 H) 7,48 (t, J = 8,03 Hz, 1 H) 5,83 (s a, 1 H) 5,36 (t, J = 9,91 Hz, 1 H) 5,01 - 5,07 (m, 1 H) 4,69 - 4,79 (m, 2 H) 3,96 - 4,03 (m, 4 h) 3,83 (d, J = 10,79 Hz, 1 H) 3,19 (s a, 1 H) 2,60 - 2,74 (m, 3 H) 2,32 (s a, 1 H) 1,73 - 1,81 (m, 1 H) 1,56 - 1,71 (m, 5 H) 1,54 (s, 3 H) 1,46 - 1,51 (m, 1 H) 1,39 (s a, 1 H) 1,31 - 1,35 (m, 3 H) 1,24 (d, J = 7,28 Hz, 2 H) 0,97 (t, J = 6,02 Hz, 6 H) 0,90 (s, 6 H); EM: EM m/z 856,2 (M++1).

Preparacion del Compuesto 26 y el Compuesto 27

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El Compuesto 26 y el Compuesto 27 se prepararon usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis del Compuesto 5 y el Compuesto 6.

Compuesto 26: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-(6-

metoxiquinoxalin-2-iloxi)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclo- propa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de terc-butilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,86 (s, 1 H) 8,37 (s, 1 H) 7,82 (d, J = 9,03 Hz, 1 H) 7,36 - 7,44 (m, 2 H) 5,87 (s a, 1 H) 5,37 (t, J = 10,42 Hz, 1 H) 5,02 (dd, J = 10,54, 7,28 Hz, 1 H) 4,64 - 4,73 (m, 2 H) 4,04 (dd, J = 11,80, 3,51 Hz, 1 H) 3,95 (s, 3 H) 3,84 (d, J = 10,79 Hz, 1 H) 3,18 - 3,23 (m, 1 H) 2,90 - 2,98 (m, 1 H) 2,64 (d, J = 8,53 Hz, 2 H) 2,31 - 2,38 (m, 1 h) 1,68 - 1,80 (m, 2 H) 1,55 - 1,67 (m, 3 H) 1,36 - 1,45 (m, 1 H) 1,22 - 1,34 (m, 2 H) 1,15 - 1,22 (m, 2 H) 1,02 - 1,13 (m, 11 H) 0,98 (d, J = 6,27 Hz, 3 H) 0,94 (d, J = 6,53 Hz, 3 H) 0,86 (s a, 1 H); EM: EM m/z 755,4 (M++1). Compuesto 27:

(2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-(6-metoxiquinoxalin-2-iloxi)-7,11-dimetil-5,16 -dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin- 6-ilcarbamato de terc-butilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,38 (s, 1 H) 7,82 (d, J = 9,03 Hz, 1 H) 7,34 - 7,46 (m, 2 H) 5,86 (s a, 1 H) 5,26 - 5,38 (m, 1 h) 4,53 - 4,76 (m, 2 H) 4,12 (c, J = 7,28 Hz, 1 H) 3,95 (s, 3 H) 3,85 (d, J = 10,29 Hz, 1 H) 2,94 (s a, 1 H) 2,62 - 2,77 (m, 2 H) 2,46 (s a, 1 H) 1,55 - 1,87 (m, 5 H) 1,23 - 1,42 (m, 6 H) 1,14 (s, 11 H) 1,05 (dd, J = 6,53, 4,02 Hz, 2 H) 0,89 - 0,98 (m, 6 H); EM: EM m/z 755,4 (M++1).

Preparacion del Compuesto 28 y el Compuesto 29

imagen59

El Compuesto 28 y el Compuesto 29 se prepararon usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis del Compuesto 5 y el Compuesto 6.

Compuesto 28: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-

(7-metoxiquinoxalin-2-iloxi)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidro- ciclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de terc-butilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,24 (s, 1 H) 7,86 (s, 1 H) 7,23 - 7,33 (m, 2 H) 5,89 (d, J = 2,76 Hz, 1 H) 5,36 (t, J = 9,54 Hz, 1 H) 5,05 (s a, 1 H) 4,62 - 4,75 (m, 2 H) 4,07 (d, J = 8,28 Hz, 1 H) 3,98 (s, 3 H) 3,85 (d, J = 10,79 Hz, 1 H) 2,93 (s a, 1 H) 2,60 - 2,72 (m, 2 H) 2,31 (s a, 1 H) 1,68 - 1,82 (m, 2 H) 1,54 - 1,67 (m, 3 H) 1,36 - 1,48 (m, 1 H) 1,16 - 1,32 (m, 5 H) 1,11 (s, 11 H) 0,96 (dd, J = 18,82, 6,53 Hz, 6 H) 0,81 - 0,91 (m, 1 H); EM: EM m/z 755,4 (M++1).

Compuesto 29: (2R,6S,7R,11S,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-(7-

metoxiquinoxalin-2-iloxi)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclo- propa[e]pirrolo[1,2-a] [1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de terc-butilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,25 (s, 1 H) 7,84 (d, J = 9,03 Hz, 1 H) 7,33 (d, J = 2,51 Hz, 1 H) 7,26 (dd, J = 9,03, 2,76 Hz, 1 H) 5,88 (s a, 1 H) 5,29 (s a, 1 H) 4,71 (d, J = 11,54 Hz, 1 H) 4,56 - 4,64 (m, 1 H) 4,16 (s a, 1 H) 3,98 (s, 3 H) 3,88 (d, J = 10,29 Hz, 1 H) 2,94 (s a, 1 H) 2,68 (dd, J = 13,43, 7,91 Hz, 2 H) 2,50 (s a, 1 H) 1,95 - 2,00 (m, 1 H) 1,73 - 1,89 (m, 3 H) 1,62 (s a, 2 h) 1,32 (d, J = 12,05 Hz, 4 H) 1,20 - 1,27 (m, 1 H) 1,13 (s, 12 h) 0,93 - 0,97 (m, 7 H); EM: EM m/z 755,4 (M++1).

Preparacion del Compuesto 30 y el Compuesto 31

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El Compuesto 30 y el Compuesto 31 se prepararon usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis del Compuesto 7 y el Compuesto 8.

Compuesto 30: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-

2-(7-metoxiquinoxalin-2-iloxi)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a- hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,89 (s, 1 H) 8,26 (s, 1 H) 7,87 (d, J = 9,03 Hz, 1 H) 7,25 - 7,35 (m, 2 H) 5,88 (d, J = 2,76 Hz, 1 H) 5,33 - 5,41 (m, 1 H) 5,03 (dd, J = 10,67, 7,15 Hz, 1 h) 4,76 - 4,81 (m, 1 H) 4,69 (t, J = 8,41 Hz, 1 H) 3,96 - 4,07 (m, 4 H) 3,81 (d, J = 10,79 Hz, 1 H) 3,23 (s a, 2 H) 2,90 - 3,00 (m, 1 H) 2,66 (d, J = 6,02 Hz, 2 H) 2,29 - 2,38 (m, 1 H) 1,54 - 1,82 (m, 5 H) 1,40 (d, J = 6,27 Hz, 1 H) 1,28 - 1,35 (m, 3 H) 1,25 (s, 3 H) 1,03 - 1,22 (m, 5 H) 0,84 - 1,02 (m, 7 H); EM: EM m/z 809,2 (M++1).

Compuesto 31: (2R,6S,7R,11S,13aS, 14aR, 16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-

2-(7-metoxiquinoxalin-2-iloxi)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclo propa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopentadecin-6-il-carbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,27 (s, 1 H) 7,86 (d, J = 9,03 Hz, 1 H) 7,33 (d, J = 2,76 Hz, 1 H) 7,27 (dd, J = 9,29, 2,76 Hz, 1 H) 5,86 (s a, 1 H) 5,30 (s a, 1 H) 4,57 - 4,77 (m, 2 h) 4,15 (s a, 1 H) 3,93 - 4,04 (m, 4 H) 3,84 (d, J = 10,79 Hz, 1 H) 2,94 (s a, 1 H) 2,63 - 2,74 (m, 2 H) 2,51 (d, J = 14,31 Hz, 2 H) 1,98 (s, 1 H) 1,72 - 1,91 (m, 3 H) 1,62 (s a, 2 H) 1,32 (d, J = 12,30 Hz, 4 H) 1,28 (s, 3 H) 1,22 (s, 3 h) 1,10 (d, J = 4,52 Hz, 3 H) 0,95 (t, J = 6,02 Hz, 6 H); EM: EM m/z 807,2 (M+-1).

Preparacion del Compuesto 32

imagen61

El Compuesto 32 se preparo usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis del Compuesto 7. Compuesto 32: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-(6-metoxiquinoxalin-2-iloxi)-7,11-dimetil- 5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diaza- ciclopentadecin-6-ilcarbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 Mhz, CD3OD): 5 ppm 8,88 (s, 1 H) 8,39 (s, 1 H) 7,92 (s, 1 H) 7,83 (d, J = 9,03 Hz, 1 H) 7,39 - 7,45 (m, 2 H) 5,86 (s a, 1 H) 5,34 - 5,40 (m, 1 H) 5,03 (dd, J = 10,79, 7,78 Hz, 2 H) 4,66 - 4,77 (m, 2 H) 4,02 (dd, J = 11,92, 3,39 Hz, 1 H) 3,78 - 3,84 (m, 1 H) 3,20 (s a, 1 H) 2,91 - 2,98 (m, 1 H) 2,63 - 2,68 (m, 2 H) 2,29 - 2,35 (m, 1 H) 1,55 - 1,80 (m, 5 H) 1,39 (s a, 1 H) 1,28 - 1,35 (m, 2 h) 1,24 - 1,28 (m, 4 H) 1,22 (s, 3 H) 1,04 - 1,20 (m, 4 h) 0,99 (d, J = 6,53 Hz, 3 H) 0,94 (d, J = 6,53 Hz, 3 H) 0,87 (s a, 1 H); EM: EM

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m/z 809,4 (M++1).

Preparacion del Compuesto 33

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El Compuesto 33 se preparo usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis del Compuesto 7. Compuesto 33: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,l6aS,Z)-14a-(cidopropilsulfonilcarbamoil)-2-(7-fluoro-4,6-dimetoxiisoquinolin-1- iloxi)-7,11-dimetil-5,16-dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2- a][1,4]diazaciclopentadecin-6-ilcarbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 7,74 (d, J = 11,54 Hz, 1 H) 7,57 (d, J = 8,28 Hz, 1 H) 7,54 (s, 1 H) 5,81 (s a, 1 H) 5,37 (t, J = 10,42 Hz, 1 H) 5,02 (dd, J = 10,42, 7,40 Hz, 1 H) 4,64 - 4,71 (m, 2 H) 4,03 (d, J = 1,25 Hz, 6 h) 3,95 - 4,00 (m, 1 h) 3,82 - 3,87 (m, 1 H) 3,22 (d, J = 6,53 Hz, 1 H) 2,90 - 2,97 (m, 1 H) 2,57 (d, J = 4,27 Hz, 2 H) 2,31 - 2,38 (m, 1 H) 1,74 - 1,82 (m, 1 H) 1,70 (dd, J = 8,03, 5,27 Hz, 1 H) 1,57 - 1,66 (m, 3 H) 1,38 (s, 3 H) 1,23 - 1,33 (m, 3 H) 1,10 - 1,22 (m, 3 H) 1,02 - 1,09 (m, 4 H) 0,98 (dd, J = 6,53, 3,76 Hz, 6 H) 0,93 (d, J = 6,53 Hz, 1 H); EM: EM m/z 856,2 (M++1).

Preparacion del Compuesto 34

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El Compuesto 34 se preparo usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis de Compuesto 7. Compuesto 34: (2R,6S,7R,11R,13aS,14aR,16aS,Z)-14a-(ciclopropilsulfonilcarbamoil)-2-(isoquinolin-1-iloxi)-7,11-dimetil-5,16- dioxo-1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazaciclopenta- decin-6-ilcarbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,22 (d, J = 8,78 Hz, 1 H)

8.00 (d, J = 6,02 Hz, 1 H) 7,92 (s, 2 H) 7,83 (d, J = 8,03 Hz, 1 H) 7,72 (td, J = 7,53, 1,25 Hz, 1 H) 7,54 (t, J = 7,15 Hz, 1 H) 7,34 (d, J = 5,77 Hz, 1 H) 5,90 (s a, 1 H) 5,36 (t, J = 10,04 Hz, 1 H) 5,04 (s a, 2 h) 4,72 - 4,81 (m, 3 H) 4,62 (s, 1 H)

4.01 (s a, 1 H) 3,85 (d, J = 10,79 Hz, 1 H) 2,94 (s a, 1 H) 2,61 - 2,76 (m, 2 H) 1,74 - 1,82 (m, 1 H) 1,68 - 1,73 (m, 1 h) 1,64 (dd, J = 9,54, 5,27 Hz, 3 H) 1,41 (s a, 1 H) 1,30 (s, 3 H) 1,23 - 1,28 (m, 1 H) 1,19 (d, J = 8,28 Hz, 4 h) 0,98 (dd, J = 9,03, 6,53 Hz, 6 h) 0,90 - 0,94 (m, 1 H) 0,87 (s, 3 H); EM: EM m/z 776,2 (M+-1).

Preparacion del Compuesto 35

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El Compuesto 35 se preparo usando los intermedios descritos en el presente documento y siguiendo el procedimiento general descrito para la sintesis del Compuesto 7. Compuesto 35: (2R,6S,7R,11R,13aS, 14aR,

16aS,Z)-2-(4-metoxiisoquinolin-1-iloxi)-7,11-dimetil-14a-(1-metilcidopropilsulfonilcarbamoil)-5,16-dioxo- 1,2,3,5,6,7,8,9,10,11,13a,14,14a,15,16,16a-hexadecahidrociclopropa[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazacidopentadecin- 6-ilcarbamato de 1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-ilo. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 5 ppm 8,14 (dd, J = 17,69, 8,16 Hz, 2 H) 7,74 (ddd, J = 8,28, 7,03, 1,25 Hz, 1 H) 7,55 - 7,59 (m, 2 H) 5,83 (s a, 1 H) 5,36 (t, J = 10,29 Hz, 1 H) 5,03 (s a, 1 H) 4,74 (d, J = 10,29 Hz, 2 H) 4,03 (s, 3 H) 3,86 (d, J = 10,54 Hz, 1 H) 3,21 (d, J = 18,07 Hz, 1 H) 2,58 - 2,74 (m, 2 H) 2,34 (s a, 1 H) 1,74 - 1,83 (m, 1 H) 1,56 - 1,70 (m, 5 H) 1,53 (s, 3 H) 1,38 - 1,50 (m, 3 H) 1,31 - 1,35 (m, 3 H) 1,13 - 1,29 (m, 3 H) 0,97 (t, J = 6,02 Hz, 6 H) 0,90 (s, 5 H); EM: EM m/z 823,4 (M++1).

Estudios biologicos

Se utilizaron ensayos enzimaticos del complejo de la proteasa NS3/4A del VHC y ensayos celulares del replicon del VHC en la presente description, y se prepararon, se llevaron a cabo y se validaron como sigue:

Generacion del complejo de la proteasa NS3/4A del VHC recombinante

Se generaron complejos de proteasa NS3 del VHC, derivados de la cepa BMS, de la cepa H77 o de la cepa J4L6S, como se describe a continuacion. Estas proteinas recombinantes purificadas se generaron para usar en un ensayo homogeneo (vease a continuacion) para proporcionar indicios sobre cuan eficaces resultarian los compuestos de la presente divulgacion para inhibir la actividad proteolitica de NS3 del VHC.

Se obtuvo suero de un paciente infectado con VHC del Dr. T. Wright, Hospital de San Francisco. Se construyo un molde de longitud completa de ADNc (acido desoxirribonucleico complementario) del genoma del VHC (cepa bMS) a partir de fragmentos de ADN obtenidos por PCR de transcripcion reversa (RT-PCR) de ARN del suero (acido ribonucleico) y usando cebadores seleccionados sobre la base de homologia entre otras cepas del genotipo la. A partir de la determinacion de la secuencia completa del genoma, se asigno un genotipo la al aislado de VHC de acuerdo con la clasificacion de Simmonds y col. (vease P Simmonds, KA Rose, S Graham, SW Chan, F McOmish, BC Dow, EA Follett, PL Yap y H Marsden, J. Clin. Microbiol., 31(6), 1493-1503 (1993)). La secuencia de aminoacidos de la region no estructural, NS2-5B, se mostro que era >97 % identica al genotipo 1 a del VHC (H77) y un 87 % identica al genotipo 1 b (J4L6S). Los clones infecciosos, H77 (genotipo 1a) y J4L6S (genotipo 1b) se obtuvieron de R. Purcell (NIH) y las secuencias se publican en Genbank (AAB67036, vease Yanagi, M., Purcell, R.H., Emerson, S.U. y Bukh, J. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94(16), 8738-8743 (1997); AF054247, vease Yanagi, M., St Claire,M., Shapiro, M., Emerson,S.U., Purcell, R.H. y Bukh, J., Virology 244 (1), 161-172, (1998)).

Se utilizaron las cepas H77 y J4L6S para la produccion de los complejos de proteasa NS3/4A recombinante. Se manipulo el ADN que codifica el complejo de proteasa NS3/4A recombinante (aminoacidos 1027 a 1711) para estas cepas como se describe por P. Gallinari y col. (vease Gallinari P, Paolini C, Brennan D, Nardi C, Steinkuhler C, De Francesco R. Biochemistry. 38(17):5620-32, (1999)). Brevemente, se anadio una cola solubilizadora de tres lisinas en el extremo 3' de la region codificante del NS4A. La cisteina en la posicion P1 del sitio de escision de NS4A-NS4B (aminoacido 1711) se cambio por una glicina para evitar la escision proteolitica de la cola de lisina. Adicionalmente, se introdujo una mutacion de cisteina a serina por PCR en la posicion del aminoacido 1454 para evitar la escision autolitica en el dominio de NS3 helicasa. El fragmento de ADN variante se clono en el vector de expresion bacteriano pET21b (Novagen) y el complejo de NS3/4A se expreso en Escherichia coli cepa BL21 (DE3) (Invitrogen) siguiendo el protocolo descrito por P. Gallinari y col. (vease Gallinari P, Brennan D, Nardi C, Brunetti M, Tomei L, Steinkuhler C, De Francesco R., J Virol. 72(8):6758-69 (1998)) con modificaciones. Brevemente, se indujo la expresion del complejo de la proteasa NS3/4a con Isopropil p-D-1-tiogalactopiranosido (IPTG) 0,5 mM durante 22 horas (h) a 20 °C. Una fermentacion tipica (1 litro (l)) produjo aproximadamente 10 gramos (g) de pasta humeda de celulas. Las celulas se resuspendieron en tampon de lisis (10 ml/g) que consistia en acido N-(2-Hidroxietil)Piperazin-W-(2- etansulfonico) (HEPES) 25 mM, pH 7,5, glicerol al 20 %, cloruro de sodio (NaCl) 500 mM, Triton X100 al 0,5 %, 1 microgramo/mililitro de lisozima ("|jg/ml"), Cloruro de magnesio 5 mM (MgCh), DNasal 1 |jg/ml, p-mercaptoetanol (pME) 5 mM, inhibidor de proteasa-libre de acido etilendiamino tetraacetico (EDTA) (Roche), se homogeneizaron e incubaron durante 20

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minutos (min) a 4 °C. El homogeneizado se trato con ultrasonidos y se clarifico por ultracentrifugacion a 235000 g durante 1 hora (h) a 4 °C. Se anadio imidazol al sobrenadante hasta una concentracion final de 15 mM y el pH se ajusto a 8,0. El extracto bruto de proteina se cargo en una columna de mquel-acido nitrilotriacetico (Ni-NTA) preequilibrada con tampon B (HEPES 25 mM, pH 8,0, glicerol al 20 %, NaCl 500 mM, Triton X-100 al 0,5 %, imidazol 15 mM, pME 5 mM). La muestra se cargo a una velocidad de caudal de 1 ml/min. La columna se lavo con 15 volumenes de columna de tampon C (el mismo tampon que B excepto con Triton X-100 al 0,2%). La proteina se eluyo con 5 volumenes de columna de tampon D (lo mismo que para el tampon C pero con imidazol 200 mM).

Las fracciones que contenian el complejo proteasa NS3/4A se juntaron y se cargaron en una columna de desalacion Superdex-S200 pre-equilibrada con tampon D (HEPES 25 mM, pH 7,5, glicerol al 20 %, NaCl 300 mM, Triton X-100 al 0,2%, pME 10 mM). La muestra se cargo a una velocidad de caudal de 1 ml/min. Las fracciones que contenian el complejo de proteasa NS3/4A se juntaron y se concentraron a aproximadamente 0,5 mg/ml. Se considero que la pureza de los complejos de proteasa NS3/4A, derivados de las cepas BMS, H77C y J4L6S, era mayor del 90 % por SDS-PAGE y analisis de espectrometria de masas. La enzima se almaceno a -80 °C, se descongelo en hielo y se diluyo antes de usar en tampon de ensayo.

Ensayo del peptido FRET para monitorizar la actividad proteolftica de NS3/4A del VHC

El proposito de este ensayo in vitro era medir la inhibicion de los complejos de proteasa NS3 del VHC, derivados de la cepa BMS, de la cepa H77C o de la cepa J416S, como se describio anteriormente, por los compuestos de la presente divulgacion. Este ensayo proporciona indicios de cuan eficaces serian los compuestos de la presente divulgacion para inhibir la actividad proteolitica de NS3 del VHC.

Para monitorizar la actividad proteasa de NS3/4A del VHC, se uso un sustrato peptidico NS3/4A. El sustrato fue RET S1 (Transferencia de Energia por Resonancia del Sustrato Depsipeptido; AnaSpec, Inc. n.° de cat 22991) (peptido FRET), descrito por Taliani y col. en Anal. Biochem. 240(2):60-67 (1996). La secuencia de este peptido se basa libremente en el sitio de escision natural NS4A/NS4B para la proteasa NS3 del VHC excepto porque hay un enlace ester en lugar de un enlace amida en el sitio de escision. El peptido tambien contiene un donante fluorescente, EDANS, cerca de un extremo del peptido y un aceptor, DABCYL, cerca del otro extremo. La fluorescencia del peptido se inactiva por transferencia de energia por resonancia intermolecular (RET) entre el donante y el aceptor, pero ya que la proteasa NS3 escinde el peptido los productos se liberan de la inactivacion del RET y la fluorescencia del donante se vuelve evidente.

El sustrato peptidico se incubo con uno de los tres complejos de proteasa NS3/4A recombinantes, en ausencia o presencia de un compuesto de la presente divulgacion. Los efectos inhibidores de un compuesto se determinaron monitorizando la formacion del producto de reaccion fluorescente en tiempo real usando un Cytofluor Series 4000.

Los reactivos fueron como sigue: HEPES y Glicerol (Ultrapure) se obtuvieron de GIBCO-BRL. El Dimetil Sulfoxido (DMSO) se obtuvo de Sigma. El p-Mercaptoetanol se obtuvo de Bio Rad.

Tampon de ensayo: HEPES 50 mM, pH 7,5; NaCl 0,15 M; Triton al 0,1 %; Glicerol al 15 %; pME 10 mM. Sustrato: concentracion final 2 |jM (a partir de una solucion madre 2 mM en DMSO almacenada a -20 °C). Proteasa NS3/4A del VHC tipo 1a (1 b), concentracion final 2-3 nM (a partir de una solucion madre 5 jM en HEPES 25 mM, pH 7,5, glicerol al 20 %, NaCl 300 mM, Triton-X100 al 0,2 %, pME 10 mM). Para compuestos con potencias que se aproximan al limite del ensayo, el ensayo se hizo mas sensible anadiendo Albumina de Suero Bovino 50 jg/ml (Sigma) al tampon de ensayo y reduciendo la concentracion final de proteasa a 300 pM.

El ensayo se realizo en una placa negra de poliestireno de 96 pocillos de Falcon. Cada pocillo contenia 25 jl de complejo de proteasa NS3/4A en tampon de ensayo, 50 jl de un compuesto de la presente divulgacion en DMSO/tampon de ensayo al 10 % y 25 jl de sustrato en tampon de ensayo. Tambien se preparo un control (sin compuesto) en la misma placa de ensayo. El complejo enzimatico se mezclo con solucion de compuesto o de control durante 1 min antes de iniciar la reaccion enzimatica por adicion del sustrato. La placa de ensayo se leyo inmediatamente usando el Cytofluor Series 4000 (Perspective Biosystems). El instrumento se ajusto para leer una emision de 340 nm y una excitacion de 490 nm a 25 °C. Las reacciones se siguieron en general durante aproximadamente 15 min.

El porcentaje de inhibicion se calculo con la siguiente ecuacion:

100-[(5Finh/5Fcon)x100]

donde 5F es el cambio de fluorescencia en el intervalo lineal de la curva. Se aplico un ajuste de curva no lineal a los datos de inhibicion-concentracion y se calculo la concentracion eficaz para el 50 % (IC50) mediante el uso del software Excel XLfit usando la ecuacion, y=A+((B-A)/(1+((C/x)AD))).

Se encontro que los compuestos de la presente divulgacion, que se ensayaron frente a mas de un tipo de complejo de NS3/4a, tenian propiedades de inhibicion similares aunque los compuestos demostraron uniformemente mayor

5

10

15

20

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30

35

40

45

50

55

potencia frente a las cepas 1b en comparacion con las cepas 1a.

Generacion del replicon del VHC

Se establecio un sistema de celula entera de replicon del VHC como describen Lohmann V, Korner F, Koch J, Herian U, Theilmann L, Bartenschlager R., Science 285(5424):110-3 (1999) y se modifico para introducir un indicador de luciferasa, como se describe en primer lugar por Krieger y col. (Krieger N, Lohmann V, y Bartenschlager R, J. Virol. 75(10):4614-4624 (2001)). El ADNc que codifica una forma humanizada del gen de la luciferasa Renilla y una secuencia de enlace fusionada directamente al extremo 3' del gen de la luciferasa se introdujeron en el constructo de replicon usando un sitio de restriccion Asc1 ubicado en el centro, directamente corriente arriba del gen marcador de neomicina. Tambien se introdujo la mutacion adaptativa en la posicion 1179 (de serina a isoleucina) (Blight KJ, Kolykhalov, AA, Rice, CM, Science 290(5498):1972-1974). Se genero una linea celular estable que expresa constitutivamente el constructo replicon del VHC linealizando el ADN del plasmido con Scal. Los transcritos de ARN se sintetizaron in vitro usando el kit de transcripcion T7 MegaScript (Ambion, Austin, TX) de acuerdo con las directrices del fabricante. Los transcritos in vitro de ADNc se transfectaron a la linea celular del hepatoma humano, HUH-7. La selection de celulas que expresan constitutivamente el replicon del VHC se logro en presencia del marcador seleccionable, neomicina (G418). Las lineas celulares resultantes se caracterizaron por la production de hebras de ARN positivas y negativas y la produccion de proteinas con el transcurso del tiempo.

Se genero una linea celular indicadora de luciferasa del replicon del VHC que representa la cepa H77 del genotipo 1a (Yanagi M, Purcell RH, Emerson SU, y col. Transcripts from a single full-length cDNA clone of hepatitis C virus are infectious when directly transfected into the liver of a chimpanzee. Proc Natl Acad Sci USA 1997; 94(16):8738-8743) como se describe previamente para la linea celular del replicon que expresa luciferasa del genotipo 1b(Con1). El constructo del replicon se modifico mediante la introduction de mutaciones en los genes que codifican el dominio NS3 helicasa (prolina reemplazada por leucina en la posicion 1496) y NS5A (de serina a isoleucina en la posicion 2204) para mejorar la replication en cultivo celular.

Ensayo del indicador de luciferasa con replicon del VHC

Se desarrollaron ensayos de luciferasa con el replicon del VHC para monitorizar los efectos inhibidores de los compuestos descritos en la presente divulgation sobre los genotipos 1a y 1b de replicacion virica del VHC. Las celulas HUH-7, que expresan constitutivamente el replicon del VHC, se hicieron crecer en el medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) (Gibco-BRL) que contenia suero de ternero fetal (FCS) (Sigma) al 10 % y G418 1 mg/ml (Gibco-BRL). Los compuestos se diluyeron en serie 3 veces en DMSO durante una titulacion de veinte puntos y posteriormente se transfirieron a placas tratadas esteriles de cultivo tisular de 384 pocillos (Corning n.° de cat. 3571). Las placas se sembraron despues con 50 |jl de celulas a una densidad de 3,0 x 103 celulas/pocillo en DMEM que contenia FCS al 4 % (concentration final de DMSO al 0,5 %). Despues de 3 dias de incubation a 37 °C, las celulas se analizaron para determinar la actividad de la luciferasa Renilla, utilizando EnduRen como sustrato (Promega n.° de cat. E6485). El sustrato EnduRen se diluyo en DMEM y despues se anadio a las placas a una concentracion final de 7,5 jM. Las placas se incubaron durante 2 h a 37 °C y despues se leyeron inmediatamente durante 30 segundos con Viewlux Imager (PerkinElmer), usando un programa de luminiscencia. Para evaluar la citotoxicidad de los compuestos, se generaron los valores CC50 multiplexando las placas que contenian EnduRen con Cell Titer-Blue (Promega, n.° de cat. G8082). Se anadio Cell-Titer Blue (3 jl) a cada pocillo y se incubo durante 8 horas a 37 °C. Se leyo la senal de fluorescencia de cada pocillo, con una longitud de onda de excitation a 525/10 nm y una longitud de onda de emision a 598/10 nm, usando el Viewlux Imager.

Los valores EC50 para los compuestos se calcularon usando una ecuacion logistica de cuatro parametros:

y = A+((B-A)/(1 +((C/x)AD))),

donde A y B denotan el % minimo y maximo de inhibition, respectivamente, C es la EC50, D es la pendiente de Hill y x representa la concentracion del compuesto.

La tabla 2 muestra los valores de EC50 de los compuestos representativos de la presente invention. Los intervalos son como sigue: A = 0,20 nM - 1,00 nM; B = 1,01 nM - 2,0 nM; C = 2,01 nM - 5,00 nM; D = 5,01 nM - 68 nM.

Tabla 2

Numeros de compuesto: Genotipo 1a EC50 (nM) Genotipo 1b EC50 (nM)

3: A A

4: 4,9 2,8

5: 0,41 1,2

6: B C

7: B A

8: C B

9: 1,0 0,36

11: C A

12: C B

13: D C

14: C B

15: B B

17: D D

18: D D

19: C B

21: B A

22: B A

23: D D

24: D D

25: B A

26: 214,8 86,5

27: D D

28: D B

29: D D

30: C A

31: D D

32: D D

33: C B

34: C A

35: 1,96 0,51

Claims

5

10

15

20

25

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35

40

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de formula (I)

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que q es 1 o 2;

es un enlace simple o doble;

Rp se selecciona entre

imagen2

en la que Rp esta unido al resto molecular precursor a traves de cualquier atomo de carbono sustituible en el grupo;

n es 0, 1,2, 3, 4, 5 o 6;

X0 se selecciona entre CH y N;

X1 se selecciona entre CH y N;

X2 y X3 se seleccionan independientemente entre CH, C(Ra) y N; con la condicion de que al menos uno de X1, X2 y X3 sea distinto de N;

cada Ra se selecciona independientemente entre alqueniloxi, alcoxi, alcoxialcoxi, alquilo, benzodioxanilo, carboxamido, carboxi, carboxialcoxi, ciano, cicloalquilalcoxi, cicloalquiloxi, deuteroalcoxi, dialquilamino, halo, haloalquilo, haloalcoxi, haloalcoxicarbonilo, hidroxi, morfolinilo, fenilo, piperazinilo, pirazolilo, piridinilo y pirrolidinilo, en donde el morfolinilo, el fenilo, el piperazinilo, el piridinilo y el pirrolidinilo estan opcionalmente sustituidos con uno o dos grupos seleccionados independientemente entre alcoxi, alquilo, alquilsulfonilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo y morfolinilo; y en donde dos grupos Ra adyacentes, junto con los atomos de carbono a los que estan unidos, pueden formar opcionalmente un anillo seleccionado entre dioxanilo, dioxolanilo, morfolinilo, piranilo y fenilo, en donde el anillo esta opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados independientemente entre alquilo y halo;

Rb es alquilo;

Rx se selecciona entre metilo y etilo;

Ry y Rz se seleccionan independientemente entre hidrogeno e hidroxi; con la condicion de que cuando es un enlace doble, Ry y Rz son cada uno hidrogeno;

R2 se selecciona entre hidrogeno, alquilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo e hidroxialquilo; y R3 se selecciona entre hidrogeno, alcoxialcoxicarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, alquilcarbonilo, cicloalquilalcoxicarbonilo, cicloalquilcarbonilo, cicloalquiloxicarbonilo, deuteroalcoxicarbonilo, deuterohaloalcoxicarbonilo, dialquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilcarbonilo, haloalcoxicarbonilo, haloalquilaminocarbonilo, haloalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, heterocicliloxicarbonilo, fenilcarbonilo y feniloxicarbonilo, en donde la parte cicloalquilo del cicloalquilalcoxicarbonilo, el cicloalquilcarbonilo y el cicloalquiloxicarbonilo, la parte heterociclilo del heterociclilcarbonilo y el heterocicliloxicarbonilo, y la parte fenilo del fenilcarbonilo y el feniloxicarbonilo, estan opcionalmente sustituidas con uno, dos o tres grupos

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seleccionados independientemente entre alquilo, alquilamino, alquilcarbonilo, cicloalquilo, dialquilamino, halo, haloalcoxi y haloalquilo.
2. Un compuesto de la reivindicacion 1, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en el que:

q es 1;

es un enlace doble;

Rx es metilo; y

Ry y Rz son cada uno hidrogeno.
3. Un compuesto de la reivindicacion 1, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en el que Rp es:

imagen3
4. Un compuesto de la reivindicacion 2, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en el que n es 0, 1, 2 o 3;

cada Ra se selecciona independientemente entre alcoxi y halo; y R3 se selecciona entre alcoxicarbonilo y haloalcoxicarbonilo.
5. Un compuesto de la reivindicacion 1 que tiene la formula (II)

imagen4

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que n es 0, 1,2, 3, 4, 5 o 6;

cada R1 se selecciona independientemente entre alcoxi, alquilo, carboxamido, carboxi, ciano, cicloalquiloxi, dialquilamino, halo, haloalquilo, haloalcoxi y fenilo, en donde el fenilo esta opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados independientemente entre alcoxi, alquilo, halo, haloalcoxi y haloalquilo;

R2 se selecciona entre hidrogeno, alquilo, halo y haloalquilo; y

R3 se selecciona entre alcoxicarbonilo, alquilcarbonilo, haloalcoxicarbonilo, haloalquilcarbonilo y fenilcarbonilo, en donde el fenilo esta opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados independientemente entre alquilo y halo.
6. Un compuesto de la reivindicacion 1, seleccionado entre

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imagen6

rA a n Wf

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imagen9

5

10

15

20

25

30

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
7. Una composicion que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y un vehiculo farmaceuticamente aceptable.
8. La composicion de la reivindicacion 7 que comprende ademas al menos un compuesto adicional que tiene actividad anti-VHC.
9. La composicion de la reivindicacion 8 en la que al menos uno de los compuestos adicionales es un interferon o una ribavirina.
10. La composicion de la reivindicacion 9 en la que el interferon se selecciona de interferon alfa 2B, interferon alfa pegilado, interferon consenso, interferon alfa 2A e interferon tau linfoblastoide.
11. La composicion de la reivindicacion 8 en la que al menos uno de los compuestos adicionales se selecciona de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, Imiquimod, ribavirina, un inhibidor de la inosin 5'-monofosfato deshidrogenasa, amantadina y rimantadina.
12. La composicion de la reivindicacion 8 en la que al menos uno de los compuestos adicionales es eficaz inhibiendo la funcion de una diana seleccionada de metaloproteasa de VHC, serina proteasa de VHC, polimerasa de VHC, helicasa de VHC, proteina NS4B de VHC, entrada de VHC, ensamblaje de vHc, egreso de VHC, proteina NS5A de VHC e IMPDH para el tratamiento de una infeccion por VHC.
13. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para usar en un procedimiento de tratamiento de una infeccion por VHC en un paciente.
14. El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicacion 13 que ademas comprende administrar al menos un compuesto adicional que tiene actividad anti-VHC antes de, despues de, o simultaneamente con el compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
15. El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicacion 14 en el que el al menos un compuesto adicional es como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12.