TW201141546A - Hemostatic sponge - Google Patents

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201141546 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 之方法及其各種 本發明係關於止企棉、製造該等海綿 用途之領域。 L先刖技術】 基於人類或動物來源之凝血因子的生物膠已久為人 知。us 4,362,567、us 4，謂，598 及 us 4,377,572 描述製造 基於纖維蛋白原及因子χι„之組織黏著劑的方法。組織黏 著劑通常與含有凝血酶之各別組分一起施用，凝血酶以酶 促方式作用於纖維蛋白原而形成纖維蛋白，且作用於因子 則而形成活性因子xma，其交聯於纖維蛋白而獲得穩定 纖維蛋白凝塊。 多年來已使用膠原蛋白襯墊來改良創傷癒合或止血。 其止血作用機制係基於使血小板凝集及活化、在活化之血 小板表面上形成凝血酶及藉由凝血酶對纖維蛋白原之催化 作用形成止血纖維蛋白凝塊。為了改良膠原蛋白襯墊或薄 片之止血作用’已建議在該等概塾内包括止血因子。 在US 4,600,5 74中，描述基於膠原蛋白與纖維蛋白原 及因子XIII之組合的組織黏著劑。此材料係以即用型凍乾 形式提供。藉由用包含纖維蛋白原及因子χιπ之溶液浸潰 膠原之平坦材料並凍乾該材料來使纖維蛋白原及因子ΧΙΠ 與勝原蛋白組合。 W〇 97/37694揭示一種基於膠原蛋白及均勻分佈於其

S 4 201141546 中之凝血活化劑或前活化劑的止血棉。此海綿係以風乾或 康乾之乾燥形式提供。然而，其仍含有至少2%之水含量。 US 5,614,587論述包含交聯膠原蛋白且使用多官能活 性合成親水性聚合物之生物黏著性組成物以及使用該等組 成物實現第一表面與第二表面之黏著的方法，其中第一表 面及第二表面中至少一者可為天然組織表面。 W02004028404描述一種由合成膠原蛋白或明膠及親 電子交聯劑構成的組織密封劑，其係以乾燥狀態提供❶此 組成物在適當pH值下濕潤時，兩種組分之間發生反應且形 成具有密封性質之凝膠。該密封劑的作用方式基本上類似 於其他已知的兩組分密封劑（由具有多個親電子基之試劑 及具有多個親核基之試劑構成），該等密封劑在此項技術中 為已知的或可自市面上購得，例如c〇sealTM。在該發明之特 疋具體貝例中’密封劑之兩種組分（親電子交連劑及合成 膠原蛋白/明膠）係塗佈於生物材料上。 US 5’428,〇24、us 5,352,715 及仍 5,2〇4,382 描述含膠 原蛋白之組成物’丨已被機械破壞以改變其物理特性。此 等專利大體上係關於原纖維及不溶性膠原蛋白。US M〇3,075描料注射㈣蛋自組成物,5,5丨Μη描述 可注射骨/軟骨組成物。W0 96/39159描述包含大小介於$ :了〜範圍内之乾燥粒子的基於膠原蛋白之遞送基 :’。、可懸浮於水中且具有特定表面電荷密度。粒徑為… 作氣溶膠喷霧以形成創傷敷料的膠原蛋白 祕述於US5，196，185中。描述膠原蛋白組成物之其他 201141546 專利包括 US 5,672,3 36 及 US 5,356,614。 【發明内容】 本發明之標的物為一種多孔複合止血棉，其包含： i )生物材料基質；及 Π ) —種包含活性基團之親水性聚合組分； 其中i )與ii )彼此締合以保留聚合組分之活性，其中 締合意謂： -s亥聚合組分塗佈於該生物材料基質之表面上；或 -該基質經該聚合材料浸潰；或 -二者。 已發現先前用於創傷癒合之纖維生物材料襯墊，尤其 膠原蛋白襯塾在止血異常（例如在肝素化後）@狀況下不 能誘導止血。本發明之海綿改良止血。此外，纟發明之海 緯在施用於創傷時對組織顯示強黏H本發明之海綿在 施用於創傷後進一步顯示改良之膨脹特性 另一態樣係關於一種處理損傷之方法 損傷部位投與多孔複合止血棉。 亦即低膨脹。 S玄方法包含向 本 係 佳 明 曰組，該套組包含士, 文所揭示之海綿及緩衝溶液。上 °平5之’此套組及其組< 用於製造供處理損傷用之醫用海綿。 文中所揭示之所有較 ’但不必限制一般發 可視為所有發明態樣 熟習此項技術者將容易瞭解，下 具體實例均為特定具體實例之實例 概念。此外，所有特定具體實例均 201141546 及具體實例之任何組人rx 4 匕、 、σ (右不互相排斥）。本發明包括熟習 此項技術者所公認之所有等效物或明顯改變或改進。 【實施方式】 本發明之目標為一種多孔複合止血棉，其包含： i )生物材料基質；及 11 ) 一種包含活性基團之親水性聚合組分； 其中1 )與ii )彼此締合以保留聚合組分之活性，其_ 締合意謂： ^ -該聚合組分係塗佈於該生物材料基質之表面上，例如 呈處於該海綿之至少一個表面上的連續層或不連續層形 式；或 -該基質經該聚合材料浸潰；或 -二者。 本文中術語浸潰意欲包括術語聚合材料吸收於生物材 料基質中。 術語海綿、襯墊及纖維網在本發明說明書中可互換使 用。 生物材料較佳為膠原蛋白、蛋白質、生物聚合物或多 醣。尤其較佳為選自由以下組成之群的生物材料：膠原蛋 白、明膠（尤其交聯明膠）、纖維蛋白、多醣（尤其聚葡萄 胺糖、氧化纖維素、酿活化葡聚糖、基於澱粉之聚搭（可 藉由過碘酸鹽氡化獲得）、合成生物可降解生物材料（尤其 聚乳酸或聚乙醇酸）及其衍生物，膠原蛋白更佳。 201141546 根據本發明，提供包含具有止血性質之水不溶性生物 材料基質及與其締合之親水性聚合交聯劑的多孔複合材 料。 與流血組織接觸時，親水性聚合交連劑與血液蛋白質 發生交聯反應，形成具有密封及止血性質的凝膠。交聯亦 發生於組織表面蛋白質，且視水不溶性基質生物材料之性 質而定’亦可發生於基質生物材料。I一種反應有助於改 良複合材料與創傷組織表面之黏著。 此外對本發明複合物之止血效力而言，重要的是生 物材料基質具有浸透能力，亦即能夠浸透/吸收諸如血液、 血清、血漿之液體。 該等浸透能力尤其取決於組成基質之聚合物的親水 性、互連開孔之三維結構或親水性纖維之三維網路。基質 之孔徑及彈性對於浸透能力同樣重要。彈性意謂基質可在 水溶液中壓縮並在導致壓縮之力解除後恢復其初始體積。 海錦為當施用於損傷部位時能夠吸收體液的多孔網狀 生物材料。由此允許創傷之血液（包括所有血液組分，諸 如血細胞或凝血蛋白）進 沲 〃逍八海綿。因此，本發明之多孔海 綿當施用於患者時具有可接+ , 接取啫如血液之外部流體的内部 體積。例> ’可藉由冷康乾燥將膠原蛋白凝膠、懸浮液或 溶液凍乾來製造多礼膠原蛋白海飧 丁贫曰/母綿（而標準風乾產生膠原 蛋白膜）。由此可見，在膠原蛋白之情況下，本發明之所得 多孔海綿典型地具有…〇〇 mg/cm3之膠原蛋白，而膠肩 蛋白膜具有㈣至_ mg/w之膠原蛋白。若諸如血液之

S 8 201141546 外部流體得以與本發明之海綿接觸’ m包含活性基團之親 水性聚合組分可與血液組分及/或生物材料基質之表面反 應’從而使結合至（至少兩個）活性基團的組分交聯。此 外’海綿通常具有可撓性且適合施用於具有各種形狀 樣組織及位置。 用於本發明之膠原蛋白可來自任何膠原蛋白材料，自 括可處理成多孔基質、尤其多孔纖維基質的液體、糊狀' 纖維狀或粉狀材料。例> EP 0891 193 (其係以引用的方3 併入本文中）描述製備膠原蛋白凝膠以供製造海綿，且η 包括s夂化直至形成凝膠及隨後之ρΗ值中和。為了改 形成能^或溶解度，膠原蛋白可（部分）水解或改質，^ 要在乾燥時形成穩定海綿之性質不減弱即可。 海綿基質之膠原蛋白或明膠較佳來源 ^ ，在患者對異種蛋白質過敏的情況下，亦可 ί = 原蛋白。亦可使用合成或重組膠原蛋白。海綿 於I類、^較佳來源於人類，由此使得㈣尤其適合施用 在—較佳具體實例中 約50、例如約至約3〇 分乾海錦。 ，多孔膠原蛋白海綿含有約5至 、較佳約25毫克膠原蛋白/立方公 物材料可能未交聯或已交聯，生物材料較佳已交 (例广:1明海綿之親水性聚合組分為在海綿施用於; 二生：團創：或患者需要止血活性之另-位置）時〗 土團反應的親水性交聯齊卜因此，對於本發日> 9 201141546 δ，重要的是聚合組分之活性基團在施用於患者時具有活 性。因此，必需製造本發明之海綿以便在製造過程中保留 在施用於創傷時應發生反應的聚合組分之活性基團。 此舉可用各種方式進行。例 >，常見親水性聚合組分 具有在與水接觸後易於水解的活性基團。因此，在將海綿 投與患者前，《其在製造期間，必須防止與水或含水液體 過早接觸。然而，在製造期間處理親水性聚合組分亦可能 在水性介質中、在抑制活性基團之反應的條件下（例如在 低pH值下）進行。若親水性聚合組分可熔融，則熔融之親 水性聚合組分可喷塗或印刷於基質生物聚合物上。亦可將 乾燥形式（例如粉末）之親水性聚合組分喷灑於基質上。 若有必要，則可增加溫度以使喷灑於基質上之親水性聚合 、且刀熔融以獲得海綿之永久塗層。或者，此等親水性聚合 組分可溶解於惰性有機溶劑（相對於親水性聚合組分之活 性，團為惰性）中並施於生物材料基質上。該等有機溶劑 之實例為無水乙醇 '無水丙酮或無水二氣甲烷（例如對於 諸如經NHS g旨取代之PEG之親水性聚合組分為惰性）。、 在一較佳具體實例中，親水性聚合物組分為單一親水 聚σ物組刀且為聚環乳烧（P〇lyalkylene 〇xide)聚合物，尤 其較佳為包含PEG之聚合物，在下文中稱為「該材料」。該 材料之活性基團較佳為親電子基。 ^該材料可能為多親電子基聚環氧烷（P〇lyalkylene Qxide) 聚合物，例如多親電子4 PEG。該材料可包括兩個或兩個 以上親電子基，諸如-C〇N(COCH2)2、-CH0、·Ν=(>0及/ 201141546 或-N(COCH2)2，例如W〇2〇〇8/〇16983 (以全文引用的方式 併入本文中）中所揭示之組分及可以商標c〇Seai<s購得的組 分之一。 本發明之親水性聚合交聯劑之較佳親電子基為對蛋白 質之胺基、㈣、硫醇基及經基或其混合物具有活性的基 團。 在碳化二亞胺、異氰酸醋或THpp (心[參（經甲基）鱗基] 丙3夂）存在下’較佳胺基特異性活性基團為nhs醋基、亞 fcS曰基、路基、敌基’尤其較佳為新戊四醇聚（乙二醇）喊四 丁一醯亞胺基戊二酸酿（=新戊四醇肆[1-1，-側氧基-5,-丁二 醯亞胺基戊_ _2·聚氧乙二醇]醚（=NHS_pEG，娜 10,000)) ο 在碳化二亞胺存在下，較佳羧基特異性活性基團為胺 基。 較佳硫醇基特異性活性基團為順丁烯二醯亞胺基或_ 乙酿基。 較佳羥基特異性活性基團為異氰酸酯基。 _親水（·生交聯劑上之活性基團可能相同（同官能）或不 5 、 )親水性聚合組分可具有兩個活性基團（同雙 s 或異雙官能）或兩個以上活性基團（同/異三官能或三 官能以上）。 在特疋具體實例中，該材料為合成聚合物，較佳包含 PEG聚合物可為PEG衍生物，其包含適用於交聯於並黏 著於組織之活性側基。 201141546 藉由活性基團，親水性聚合物能夠交聯於血液蛋白質 以及組織表面蛋白質。亦可交聯於生物材料。 多親電子基聚環氧烷（polyalkylene oxide)可包括兩個 或兩個以上丁二酿亞胺基。多親電子基聚環氧烷 (polyalkylene oxide)可包括兩個或兩個以上順丁烯二醯亞 胺基。 夕親電子基聚環氧烷（p〇lyalkylene 〇xide)較佳為聚乙 二醇或其衍生物。 在最佳具體實例中，聚合組分為新戊四醇聚（乙二醇） 醚四丁 一醯亞胺基戊二酸酯（=COH 1 02，亦即新戊四醇肆 Π 1側氧基-5-丁二醢亞胺基戊酸酯_2_聚氧乙二醇]醚）。 在一較佳具體實例中，本發明之海綿包含膠原蛋白作 為生物材料，且聚合組分（例如COH102)係塗佈於膠原蛋 白表面上（=塗佈形式）。 塗層為不連續塗層尤其較佳，例如圆6中所示。 在另一較佳具體實例中，塗層為連續薄塗層，如藉由 例如將炫融的聚合，組分喷塗於生物材料基質上所獲得。該 塗層可與膜樣或玻璃樣結構相當，例如圖7中所示。 在另一較佳具體實例中，本發明之海綿包含膠原蛋白 作為生物材料’且聚合組分（例如c〇m〇2)係浸潰於膠原 蛋白中（=浸潰形式）。 聚合組分之分子量較佳在5〇〇至5〇〇〇〇範圍内，最佳 為約10000 。 該生物材料海綿上之聚合組分相對於所塗海綿的塗佈

S 12 201141546 ϊ孝父佳為約1 mg/cm至約20 mg/cm2，更佳為約2 mg/cm2 至約1 4 mg/cm。聚合組分相對於所浸潰海綿的濃度較佳為 約5 mg/Cm3至約100 mg/cm3，更佳為約1〇 mg/cm3至約7〇 mg/cm3。 在另一較佳具體貫例中，本發明海綿包含浸潰形式與 塗佈形式之組合。此外，在聚合組分具有可水解活性基團 的情況下（例如NHS-PEG )，本發明海綿藉由呈乾燥形式（例 如具有低於10%、尤其低於2%且尤其低於1%的總體水含 量）來保留包含活性基團之親水性聚合組分之活性基團的 活性。較高水含量（例如高於1〇%)亦會產生功能海綿， 但儲存穩定性會惡化。因此，水含量低於2% ( w/w )較佳·, 低於1%甚至更佳；低於〇 5%特別較佳。 在另一較佳具體實例中，存在另一層之另一種生物材 料。另一層可來自與基質相同的生物材料或其可為不同的 生物材料，例如生物材料基質為膠原蛋白而另一層為氧化 纖維素。彳包括如上文所提及之生物材料之所有組合。 海4整體上可具有適合活體内生物分解之生物可降解 性’或生物可吸收性，亦即能夠活體内再吸收，例如經由 活體内所存在之蛋白酶及活體内可水解之基團降解。全部 再吸收意謂殘留的細胞外片段不顯著。生物可降解材料與 :生物可降解材料不同之處在於’生物可降解材料可生物 刀^ j可自生物系統移除及Μ可以化學方式併人生物系統 中的早p在—較佳具體實例中，特定材料、 海綿整體上可A ,丨、μ κ 3(4 在夕於6個月、少於3個月、少於1個月、 13 201141546 少於2週内被個體（詳言之’人類個體）降解。 海綿可進一步包含凝血活化劑或前活化劑，包括纖維 蛋白原、凝血酶或凝血酶前驅物，如例如us 5,7丨4,3 (以 引用的方式併入本文中）中所揭示。凝血酶或凝血酶前驅 物應分別理解為在與血液接觸時或在施用於患者後具有凝 血酶活性且誘導凝血酶活性的蛋白質β其活性可表述為凝 血酶活性（ΝΙΗ單元）或產生相應Nm單元之凝血酶等效 活性。海綿活性可為100至10，_，較佳為則至5 〇〇〇。 在下文中，凝血酶活性應理解為包含凝血酶活性或任何等 效活性。具有凝血酶活性之蛋白質可選自由〜凝血酶、強 凝血酶（meiZ0thr0mbin)、凝血酶衍生物或重組凝&酶組成 之群。適合前驅物可能係選自由以下組成之群：凝血酶原、 因子Xa (視情況與鱗脂—起）、因子以汪、活化凝血酶原複 。物FEIBA #何内在或外在凝血活化劑或前活化劑 其混合物。 本發明之止血棉可與其他生理物質一起使用。例如， 海綿較佳進一步包含藥理學活性物質，其中有抗纖維蛋白 溶解劑，諸如纖維蛋白溶酶原活化劑抑制劑或纖維蛋白产 酶抑制劑或纖維蛋白溶Μ 办 贫曰'合解劑去活劑。較佳抗纖維蛋白滚組 劑係選自由以下組成之雜$丄 > 丄 ' ，珉之群.柷蛋白鉍或抗蛋白酶衍生物、 巨球蛋白、蛋白質C或、、壬& π丄# 次活化蛋白質C之抑制劑或去活

與天然受質具有競爭作田M U λ J 肀作用的結合至纖維蛋白溶酶之受 擬物、及抑制纖維蛋白溶解活性之抗體。 ^ 作為另一種藥理昼、本k ,, α 早理于活性物質的抗生素（諸如抗細菌劑 14 201141546 較佳用作均勻 諸如生長因子 該海綿可適用 或抗黴菌劑）可與本發明之海錦—起使用 分佈在海綿中之組分。其他生物活性物質 及/或止痛藥，亦可存在於本發明之海絲中 於例如創傷癒合。 其他組合較佳使用特定 即加速或抑制）海綿之再吸 或抑制劑。又，適合防腐劑 綿中。 酶或酶抑制劑，其可調節（亦 收。其中為膠原酶、其增強劑 可與海綿一起使用或可含於海 雖然較佳具體實例係關於含有凝血活化劑或前活化劑 為唯/舌f生組为之止血棉的用途，但亦可包含影響凝血 速度、止血及密封品質（諸如拉伸強度、内部（黏著）強 度及耐久性）的其他物質。 "T*使用增強或改良内太斗、& + 、 s 〜又民阌在或外在凝血之促凝血劑，諸如 凝血.因子或輔因子、因早γΤΤΐ .,. η、，、·且織因子、凝血酶原複合 物、活化凝血酶原福会物、— 灵口物或複合物之部分、凝血酶原酶 複合物 '磷脂及鈣離子、备 ^ y ,、，、槓蛋白。在需要精確密封之手 術程序的情況下，較佳延县 <長將止血棉施用於患者之後及對 凝結起作用之前的卫作時段。若本發明之海綿進—步包含 適量凝血抑制劑，則將確保延長凝結反應。諸如視情況與 肝素一起使用之抗凝血酶m赤权 哪或任何其他絲胺酸蛋白酶抑制 劑之抑制劑較佳。 為防止材料局部不穩n疑固性過冑，亦較佳 添加劑（詳言之，凝血酶或凝血酶前驅物）均勻分佈於材 料中。即使在4的水含量了，凝血酶活性亦令人驚訏地 15 201141546 穩定，此可能係由於均質混合物中凝a酶與膠原蛋白密切 接觸之故。然而，可根據本發明使用較佳選自由多元醇、 多聽、聚稀烴基二醇（pc)IyalkyIene伽叫、胺基酸或其混 合物組成之群的凝血酶穩定劑。例示性使用山梨糖醇、甘 〆由聚乙一醇、聚丙二醇、諸如葡萄糖或荒糖之單醣或雙 餹，或者能夠穩定凝血酶活性之任何糖或續化胺基酸較佳二 可根據本發明使用之添加劑的其他實例包括諸如血管 收縮劑、抗生素或岩g依聚糖（fuec>idan)之物質。 /發明之海綿可進—步含有染料，例如核黃素或先前 支術中已知的具有生物相容性的其他染料。染料可例如作 為另一層（塗層）包括在内且尤其可有助於外科醫生分別 鑑別本發明之所塗海綿的哪一個表面為活性表面或非活性 表面。 本發明海綿之總體厚度較佳小於3 cm，較佳為約i mm 至約3 cm，更伟*的！ 為、力1 mm至約2 cm ,最佳為約丨mm至約 2 mm » mm 在本發明之海綿中，塗層厚度較佳為約0.01 mm至約i 於 本發明之海綿較佳用於最低侵入性手術中，例如用 腹腔鏡應用。 海綿可經乾燥，且在乾燥後，海綿可具有至少0.5%(此 處百分比以w/w出示）水含量。在某些具體實例中，海綿 可經/東乾或風乾。 本發明亦提供包含本發明海錦之創傷敷層。海綿及所

16 201141546 u層可以適合尺寸之即用型創傷敷層形式提供。海綿 及/或敷層可為襯墊或薄片，較佳具有至少！麵或至少’2 mm 1至v 5随及/或至乡2q删之厚度，此視適應症而 定。當：對較厚之可撓性海綿施用於創傷時，重要的是， 在可充當其他創傷分泌物吸收障壁的纖維蛋白形成之前， 血液及纖維蛋白原可吸收於整個海綿中。 本發明之另一態樣係關於一種製造止血棉之方法（製 程I)，其包含： )提供包含呈乾燥形式之生物材料基質的海綿； )提供種呈乾粉末形式之活性聚合材料； 吏）與13 )接觸以使該b )材料存在於該海綿之至 少一個表面上；及 d)將該b)材料固定於該a)海绵上 至 65°c之溫 度下維持 足 鐘 ，較佳約 4分鐘， 以 定 0 或者， 可藉由紅 外 定 。調節襯墊與加熱 器

線照射曝露時間以使塗層在最小熱曝露下'、達成㈣;V 本發明之另-態樣係關於一種製造止血棉之方法（製 程II) ’其包含： ，仏匕3呈乾燥形式之生物材料基質的海綿體； b)提供-種呈溶液形式之活性聚合材料，例如pH值 17 201141546 低於5、較佳為約3之水溶液，或基於無水有機 例如基於乙醇、丙_、二氣甲烧及其類㈣；☆ 液， C)使〇與b)接觸以使該a)材料經b) d )乾燥步驟c )中所獲得之該材料。 =成浸潰之接觸可藉由將聚合溶液置 使浴液滲人料綿中維持^以達成該吸收之時 分鐘至約2小時、較佳3〇分鐘來進行。 、·勺2 乾燥可包括凍乾或風乾，且包含 分。 秒陈"丨L體之揮發性組

在另-態樣中’本發明提供一種可藉由製程 之製造方法獲得的止血棉。 J 本發明之另一態樣係關於本發明海綿用於處理選自由 創傷、出血、組織損傷及/或組織流血组成之群的損傷的用 途：本發明之海綿較佳用於密封組織，例如肺、脾臟、肝 臟，及止血。 本發明之複合物亦可用作即用型組織密封劑，只要體 液蛋白質濃度足夠高；^ & + &加# i , 允δ午形成如上文所述之密封凝膠 即可。 一特別指出’在藉由綁紮或習知程序控制流.血無效或不 可仃時’本發明之海綿在開放式及.内窺鏡/腹腔鏡/胸腔鏡 /MIS (最低侵人性手術）手術程序中作為佐劑用於止血、 處理手術流血、有效抑制滲液。 在-較佳具體實例中，本發明之海綿與緩衝溶液一起 施用例如鹼性緩衝溶液，諸如碳酸氫鹽溶液，諸如pH 8 3

S 18 201141546 之8.4% NaHC03，例如處於紗布上。 已發現與經生理食鹽水浸透之紗布相比，施用經8.4 〇/0 NaHCCh溶液浸透之紗布後，反應速度增加。依據在施用

NaHCCb之情況下，過2分鐘後海綿與組織之黏著性更高來 觀察此現象。 本發明進一步提供一種套組，其包含如申請專利範圍 第1項至第5項中任一項之海綿及缓衝溶液（例如驗性緩 衝溶液，諸如碳酸氫鹽或碳酸鹽），以及其使用說明書。鹼 性緩衝溶液較佳具有約8之pH值，諸如8 3。 〜' T水Ί尔關"、Ί玉1亂仪甘柳，再包含水 不溶性止血材料（其睹、a 土吳）及具有活性基團之親水性聚合交 聯劑’該複合物包含允許外部流體、尤其人類血液接入該

複合物中的孔隙。止血材料可為上文提及為「生物材料基 質」的任何材料，其自身 —AA L 料以及其止血性質在二有一疋的止血性質。該等材 RB 質在此項技術中大體上已為人所知。本發 具有允許外部流體接入複合物之内部的孔 :物於創傷，則此創傷之血液可進入該複 之實例包括止血 荨孔隙而得以浸透。在實務上重要 棉。此止血材計接：編織織物或編織織物或多孔止A W科較佳為膠房I 卜 物、纖维蛋6 U 、蛋白H乳化再生纖維素織 戡、、隹蛋白海綿或明谬 勝原蛋白（亦即天然膠原蛋白纖唯=海綿為貫質天然 保留或在處理期門 、義，准、-構在很大程度上得以 期間藉由原纖維形成而得以 親水性聚合交聯劑之活性在本特：較佳。 +赞明複合物令得以保 19 201141546 留。此思S胃交聯劑之活性基團尚未與止血材料（之表面） 反應且未被水水解。此現象可藉由將止血材料與交聯劑以 不引起交聯劑活性基團與止血材料或水反應的方式組合來 達成，例如如本文所揭示之藉由在惰性條件下熔融、喷霧、 浸透等。通常’此舉包括省去水性條件（或濕潤），尤其在 不存在酸性條件的情況下濕潤（若交聯劑在酸性條件下不 具活性）。由此得到活性止血材料。本發明之止血複合物較 佳含有聚乙二醇（PEG)作為具有活性基團之親水性聚合交 聯劑，尤其包含兩個或兩個以上、較佳4個活性基團的 (該等活性基團選自丁二醯亞胺酯基（_c〇N(c〇CH2)2 )、醛 基（-CHO )及異氰酸酯基（_N=c = 〇 )、尤其較佳為丁二醯 亞胺酯基），諸如下文所定義之c〇seal之組分c〇Hl〇2。 在一較佳具體實例中，形成海綿之多孔網路的基質材 料在乾燥多孔海綿中佔1%至5〇%、1%至1〇%、或約3% (w/w% )。 本發明之生物材料基質，尤其膠原蛋白，一般不可溶， 尤其不溶於水。然而，由於海綿具有多孔及/或吸濕性，因 此當其與含水流體（尤其血液、血清、血漿等或創傷中所 存在之其他流體）相遇時會膨脹並吸收此等流體。 本發明之止血棉為「流體吸收型」。「流體吸收型」應 視為當接觸時可容納流體的物理過程，其可能引起或不引 起海綿膨脹。海綿可容納流體（尤其是血液）的量較佳為 海綿乾重之至少1倍、至少2倍、至少4倍或至少丨〇倍及 /或至多1 00倍、至多2〇倍或至多丨〇倍。本發明之海綿材 20 3 201141546 料即使在壓力下亦可吸收流體。 本發明之多孔海綿材料較 至500 μπι、較伟兔 10至200 μιη之孔徑。可在製 狂苟 J在I這海綿生物材料的過程中 地調節此孔徑，尤其利用名咕制 田 ^ ]用在5亥製造過程中控制乾燥製程來 調節此孔控。 本發明之海綿較佳以「即用型」形式提供’以使其可 直接施用於有需要之患者，例如施用於此患者之創傷;此 後開始交聯）。因此將本發明之海綿包裝於防止㈣在儲存 ^皮污$ (例如濕氣或微生物）的無菌包裝卜在使用 前，可打開包裝（較佳亦扁I μ 、 、权住7Γ在無菌條件下）且可將海綿直接 施用,於患者（「即用型」）。 如已提及，親水性聚合組分為親水性交聯劑。根據一 較佳具體貝例’此交聯劑具有超過兩個供交聯之活性基團 (「臂」）’例如3、4、5、6、7、8或8個以上具有供交聯之 活性基團的臂。例如，NHS_PEG_NHS為本發明之有效親水 性交聯劑。然而，對於一些具體實例，4臂聚合物（例如4 煮P NP-PEG )可旎更佳；基於相同基本原理，對於多反應 交聯有利之具體實例，8臂聚合物（例如8臂NHS pEG) 可此甚至更佳。此外，本發明之親水性交聯劑為聚合物， 亦即由重複結構單元典型地經共價化學鍵連接而構成的大 分子（巨分子）。本發明之聚合物應具有至少1〇〇〇 Da之分 子量（以適當地充當本發明海綿之交聯劑）；本發明之交聯 聚合物較佳具有至少5000 Da、尤其至少8000 Da之分子量。 對於一些親水性交聯劑，存在驗性反應條件（例如在 21 201141546

=指）對於功能性表現為較佳的或必需的（例如對於 又樂部位之較快交聯反應例如，可在投藥部位另外提供 (例如以緩衝溶液或經該緩衝液浸透之碳 酸根或碳酸氮根離子（例如呈PH值為7.6或7.6以= 佳為8.0或8.0以上、太'盆或R 、 尤，、為8·3及8.3以上之緩衝液形式）， 以便允許改良本發明海錦之效能或允許有效用作止血及/或 創傷黏著材料。 藉由以下實施例進一步例示本發明，但本發明不限於 此專實施例。 在隨後之部分中’使用以下縮寫： ACT AcOH NaOAc aq_ COH102

EtOH PEG PET min NHS-PEG-NHS 活化凝血時間 乙酸 乙酸鈉 水溶液 新戊四醇聚（乙二醇）驗四丁二醯亞胺基 戊二酸酯=新戊四醇肆[1-1'-側氧基-5，-丁 二醯亞胺基戊酸酯-2-聚氧乙二醇]醚 (=NHS-PEG，MW 10,000) 乙醇 聚乙二醇 聚對苯二甲酸伸乙酯 分鐘 α-[6_[(2,5-二側氧基-1-吼咯啶基）氧 基]-6-側氧基己基]-ω-[6-[(2,5-二側氧基 -1-吼咯啶基）氧基]-6-側氧基己氧基]-聚 氧乙烯 22 201141546

8 臂 NHS-PEG 4 臂 p-NP-PEG CHO-PEG-CHO %氧樹脂-PEG-環氧樹月旨 4臂環氧樹脂-PEG ISC-PEG-ISC AA-聚葡萄糖 DSS EGS 六甘油八（丁二醯亞胺基氧基戊二醯基) 聚氧乙烯 新戊四醇肆(4-硝基苯氧基羰基)聚氧乙烯 同雙官能基盤-聚乙二醇 同雙官能基環氧樹脂-聚乙二醇 同多官能基環氧樹脂聚乙二醇 同雙官能基異氰酸酯-聚乙二醇 路活化聚葡萄糖 —丁 一酿亞胺基辛二酸醋 乙二醇-雙（丁二酸N-羥基丁二醯亞胺酯） 實施例： 双刀的勁物止血模型 面擦傷模型） 在肝表面擦傷模型中測試本發明止血墊對肝素化 ("ACT)豬之止&效力.。心平坦圓形旋轉式擦傷工具在 肝表面上產生-個圓形流企創傷（直徑l 8cm)。將呈乾燥 狀態之本發明襯塾（大小，3 cm)施用於流血創傷上且用 經生理食鹽水濕潤之紗布施加輕微壓力2分鐘 位。評估止血效力。 就 實施例1 :製備牛膠原蛋白懸浮液 使50 g牛真皮切片分散於5〇〇 ml 2 M N顧溶 在饥下搜拌約90分鐘。筛出真皮且用蒸館H2〇沖洗直至 流出H2〇達到❾8.〇之阳值。使經洗膝 於h2〇中且用_ρΗ值調節至約 二 Μ下授掉隔夜且獲得膠原蛋白溶液。使二=在約 呎所侍溶液冷卻至 23 201141546 5 C且用NaOH將pH值調節至1f7性。藉由使溶液保持】8。匸 而不攪拌來進行膠原蛋白沈澱隔夜。藉由過濾分離所得朦 原蛋白沈澱物。藉由重量分析法測定所得材料的膠原蛋白 濃度。視情況可與戊二醛進行化學交聯，其中製備1 %膠原 蛋白水懸浮液且在12°C下添加5000 ppm戊二醛《將所得懸 浮液攪拌隔夜。過濾所得交聯膠原蛋白且用H2〇洗務。如 上文所述測定所得材料的膠原蛋白濃度。 實施例2 :經NHS-PEG塗佈之膠原蛋白襯塾 使COH102粉末均句分佈於市售膠原蛋白海綿 (Matnstypt®, Dr. Suwelack Skin and Healthcare, Germany, 1 mm或2 mm厚）的一個表面上。c〇m〇2之塗佈用量為2 rng/crn:、7 mg/cm2、10 mg/cm2、14 mg/cm2 ' 2〇 mg/cm2。 藉由熔融將COH1〇2粉末固定於海綿表面上。此舉如下進 行：將具有PEG粉末混合物之海絲置於預熱之供箱中、在 60°C至65°C下維持4分鐘。 在 所得乾燥海綿體與乾燥 25千格雷（kGray)下經 劑裳一起密封於不透氣袋中且 Ύ滅菌。 實施例3:經NHS_PEG浸潰之膠原蛋白概墊 製備濃度為 1〇 mg/Cm3、20 mg/cm3、30 mg/cmi 4〇 mg/cm3 的 COH102 之酸性水.¾¾ γ ττ 水/合液（PH 3.0，Ac0H)且將其 填充於9x7 cm PET盤中。將與务 啊丹无刖填充之COH102溶液具 有相同體積的9χ7χ〇. 1 CmE^ 及9x7x〇.2cm之市售牛膠原蛋白 海綿（Matnstypt® )置於溶液 又τ良。P以次潰20分鐘。吸收 COH102溶液且將所得膠原蛋 龙白材枓凍乾。所得海綿可如實

S 24 201141546 施例2中所述另外經c〇H 102塗佈。 /東乾及/或塗佈後’將所得各乾燥海綿與含有乾燥劑之 囊一起密封於不透氣袋中且在25千格雷下藉由γ照射加以 滅菌。 實施例4 :經NHS-PEG塗佈的含有氧化纖維素粉末之 膠原蛋白襯塾 使 0.5 g 或 1 g Traumastem® Ρ 粉末（Bioster, Czech Republic)均勻分佈於根據實施例1所製造的22 ml中性膠 原蛋白水懸浮液（2.15 mg/ml ; 4.3 mg/ml 及 1〇 mg/ml )中。 將所得混合物填充於9x7 cm PET平盤中並凍乾。所得纖維 網具有.約3至4 mm之厚度且如實施例2中所述經c〇H 1 〇2 塗佈。 塗佈後’所得各海綿與含有乾燥劑之囊一起密封於不 透氣袋中且在25千格雷下藉由γ照射滅菌。 實施例5 :經NHS-PEG塗佈的含有氧化纖維素織物之 膠原蛋白概墊 將 6x5 cm Traumastem® TAF 輕織物（Bioster，Czech

Republic)浸沒於如實施例1中所述之ι%牛膠原蛋白懸浮 液中。6x5 cm氧化纖維素織物保留約6 g膠原蛋白懸浮液。 獲得經膠原蛋白懸浮液浸透之織物且置於盤令並康乾。所 得纖維網具有約3至4 mm之厚度且如實施例2中所述經 COH102 塗佈。 塗佈後’所得各海綿與含有乾燥劑之囊一起密封於不 透氣袋中且在25千格雷下藉由γ照射滅菌。 25 201141546 實施例6 :經NHS-PEG塗佈之氧化纖維素織物 雙層 Traumastem®P 纖維網（Bioster，Czech Republic) 如實施例2中所述經14 mg/cm2 COH102塗佈。所得襯墊之 厚度為約1 -2 mm。 實施例7 :經NHS-PEG塗佈之含有岩藻依聚糖 (fucoidan)作為止血增強物質的膠原蛋白槻墊 用相同體積的泡葉藻（A. nodosum )岩藻依聚糖 (fucoidan)溶液（10 μΜ 及 200 μΜ，於 40 mM Ca2 +溶液中） 浸潰牛膠原蛋白海綿Matristypt® ( 9x7x〇.2 cm )並康乾。 所得海綿如實施例2中所述經C0H102塗佈。 實施例8 :經NHS-PEG塗佈之含有凝血酶作為止血增 強物質的膠原蛋白槻墊 用相同體積之凝jk酶溶液（500 IU/ml )浸潰牛膠原蛋 白海綿Matristypt® ( 9x7x〇.2cm)並凍乾。所得海綿如實施 例2中所述經c〇H 102塗佈。 實施例9 :經NHS-PEG塗佈之膠原蛋白襯墊的密封效 力 根據實施例2製造經14 mg/cm2 COH102塗佈之止血 塾。藉由解剖刀在豬肺上設定直徑為約1 5至2 cm之損傷。 字》亥襯墊之3 X 3 c m樣品施用於創傷上且藉助於紗布施加輕 微壓力2分鐘以固定就位。紗布經生理食鹽水或鹼性碳酸 氣鹽溶液（pH 8.3 )預先濕潤。施用後，襯墊穩固地黏著至 肺表面（參看圖6 )。使用經碳酸氫鹽濕潤之紗布增加獲得 黏著性之速度。為了控制氣密性及襯墊對組織之黏著性，

S 26 201141546 1 〇分鐘後用林格氏溶液（Ringer's solution )填充胸部。未 觀察到氣體洩漏或襯墊脫離。 實施例10 :經NHS-PEG浸潰之膠原蛋白襯墊的密封 效力 根據實施例3製造經40 mg/cm3 COH102浸潰之止血_ 墊。 藉由解剖刀在豬肺上設定直徑為約1.5至2 cm之損 傷。將該襯墊之3x3 cm樣品施用於創傷上且藉助於紗布施 加輕微壓力2分鐘以固定就位。紗布經驗性碳酸氫鹽溶液 (pH 8.3 )預先濕潤。施用後，襯墊穩固地黏著至肺表面。 如貫施例9中所述測定氣密性及襯塾對組織之黏著性。 實施例11: 一個襯墊表面之色彩標記 將由不鏽鋼板（1111111厚）製成的具有孔圖案的遮罩置 於 1 或 2 mm 厚膠原蛋白海綿（Matristypt®，Dr. Suwelack

Skin and Healthcare，Germany )之一個側面上。遮罩之孔具 有2 mm之直徑且以彼此相距丨cm之距離置於立式方形網 格之節點。藉由標準喷搶裝置將0.5%羊毛署紅 (Eri〇giaucine)水溶液（Fiuka Switzeriand)噴在遮罩之孔 上。 。移除遮罩，且在環境氛圍下在真空烘箱或乾燥器中乾 燥所得具有藍色點圖案的膠原蛋白薄#。位於—個側面上 之點圖案具有區別所塗襯墊之活性表面與非活性表面的作 用。塗層可塗覆在有點側面上或無點側面上。 實施例12:製備纖維蛋白織維網 27 201141546 使用靜惑混合器混合2 5 mg/m]纖維蛋白原〗〇 Tds/Ηα、15〇mMNaC1 (ρΗ7·4)與等體積之 55 iu/mw 血酶、10 mM CaCl2之溶液，且立即填充於〇 7⑽高之盤 中。在盤中獲得纖維蛋白凝塊。藉由冰，東乾燥該凝塊，獲 得纖維蛋白纖維網。 實施例13··製備經NHS_PEG_NHS塗佈之膠原蛋白襯 些及在動物模型中對其進行測試 在6x6 cm膠原蛋白襯墊（如實施例丨丨中所述製造） 之無色側面上使M mg/cm2及28叫/⑽2雙官能 NHS-PEG-NHS ( Mw 1〇〇〇〇，卿公司，—η)均勾分佈 並藉由熔融加以固定。此舉如下進行：將經pEG粉末塗佈 之海綿置於預熱之烘箱令在約7〇t下維持4分鐘。 將所得海綿肖含有乾燥劑之t 一起密封於不透氣袋 中。 用如上文所述之肝擦傷模型測試該等襯墊在豬中的止 血效能。2分鐘後達成止血。1〇分鐘後未觀察到再流血。 襯塾充分黏著於組織上。 實施例14;製備經8臂NHs_pEG塗佈之膠原蛋白概 墊及在動物模型中對其進行測試 在6X6。爪膠原蛋白襯墊（如實施例u中所述製造） 之無色側面上使14 mg/cm2 8臂_NHs pEG(霞15刪， a司Japan )均勻分佈並藉由熔融加以固定。此舉如下進 行：將具有PEG粉末之海綿置於預熱之烘箱中在饥下維 持4分鐘。

S 28 201141546 將所得海綿與含有乾燥劑之囊一起密封於不透氣袋 中。 在如上文所述之肝擦傷模型中測試該襯墊在豬中的止 血效能。2分鐘後達成止血。1〇分鐘後未觀察到再流血。 襯墊充分黏著於組織上。 實施例l5a:製備經4臂P-NP_PEG塗佈之膠原蛋白襯 墊及在動物模型中對其進行測試 在6x6 cm膠原蛋白襯墊（如實施例u中所述製造） 之無色側面上使 14mg/cm24 臂 p_Np_pEG(MW 1〇〇〇〇，n〇f 公司，Japan)均勻分佈並藉由熔融加以固定。此舉如下進 行將具有PEG粕末之海綿置於預熱之烘箱中在65下維 持4分鐘。 將所得㈣與含有乾燥劑之囊—起密封於不透氣袋 中。 在如上文所述之肝擦傷模型中測試該襯墊在豬中的止 血效能° 2分鐘後達成止血。1()分鐘後未觀察到再流丘。 襯墊充分黏著於組織上。 實施例15b.製備經4臂p_Np_PEG塗佈之膠原蛋白襯 墊及在動物模型中對其進行測試 用如上文所述之肝擦傷模型測試如實施例丨中所製 備之襯墊在豬中的止血效能，但進行如下修改：襯墊與經 8%鹼性碳酸氫鈉溶液預先濕潤之紗布一起施用。2分鐘後 達成止血。1G分鐘後未觀察到再流血。襯墊充分黏著於組 織上。 29 201141546 實施例10a :製備經CHO-PEG-CHO塗佈之膠原蛋白 襯墊及在動物模型中對其進行測試 在6 X 6 cm膠原蛋白襯墊（如實施例！ ！中所述製造） 之無色側面上使 9.5 mg/cm2 CHO-PEG-CHO ( MW 3400,

Interchim，France)均勻分佈並藉由熔融加以固定。此舉如 下進行：將具有PEG粉末之海綿置於預熱之烘箱中在7(rc 下維持4分鐘。 將所得海綿與含有乾燥劑之囊一起密封於不透氣袋 中〇 在如上文所述之肝擦傷模型中測試該襯墊在豬中的止 血效能。2分鐘後達成止血^ 1 〇分鐘後未觀察到再流血。 襯墊充分黏著於組織上。 實施例16b :製備經CHO-PEG-CHO塗佈之膠原蛋白 襯墊及在動物模型中對其進行測試 用如上文所述之肝擦傷模型測試如實施例丨6a中所製 備之襯墊在豬中的止血效能，但進行如下修改：襯墊與經 驗性碳酸氫鈉溶液預先濕潤之紗布一起施用。2分鐘後達成 止血。1 〇分鐘後未觀察到再流血。襯墊充分黏著於組織上。 實施例17a:製備經環氧樹脂_Peg-環氧樹脂塗饰之膠 原蛋白襯墊及在動物模型中對其進行測試 在6x6 cm膠原蛋白襯墊（如實施例丨丨中所述製造） 之無色側面上使9.5 mg/cm2環氧樹脂_PEG_環氧樹脂（MW 3400, lnterchim, France )均勻分佈並藉由熔融加以固定。 此舉如下進行：將具有PEG粉末之海綿置於預熱之烘箱中

S 30 201141546 在70°C下維持4分鐘。 將所得海綿與含有乾燥劑之囊一起密封於不透氣袋 ΐ|ί 〇 在如上文所述之肝擦傷模型中測試該襯墊在豬中的止 血效能。2分鐘後未達成止血《襯墊在組織上之黏著性不足。 實施例17b:製備經環氧樹脂-peg-環氧樹脂塗佈之膠 原蛋白襯墊及在動物模型中對其進行測試 用如上文所述之肝擦傷模型測試如實施例17a中所製 備之襯墊在豬中的止血效能’但進行如下修改：襯墊與經 驗性碳酸氫納溶液預先濕潤之紗布一起施用。2分鐘後達成 止血。5分鐘後未觀察到再流血。襯墊充分黏著於組織上。 實施例18:製備經4-臂環氧樹脂_peg塗佈之膠原蛋白 襯墊及在動物模型中對其進行測試 在6X6 cm膠原蛋白襯墊（如實施例} i中所述製造） 之無色側面上使14 mg/cm2 4臂環氧樹脂_peg ( MW 10000,

Inteixhim，France )均勻分佈並藉由熔融加以固定。此舉如 下進行.將具有PEG粉末之海綿置於預熱之焕箱中在7〇。〇 下維持4分鐘。 將所得海綿與含有乾燥劑之囊一起密封於不透氣袋 中。 用如上文所述之肝擦傷模型測試該襯墊在豬中的止血 效此，但進行如下修改：襯墊與經鹼性碳酸氫鈉溶液預先 濕潤之紗布一起施用。2分鐘後達成止血。5分鐘後未觀察 到再流企。襯墊充分黏著於組織上。 31 201141546 實施例19:製備經ISC_PEG IS(：塗佈之膠原蛋白襯墊 及在動物模型中對其進行測試 在6x6 cm膠原蛋白襯墊（如實施例丨丨中所述製造） 之無色側面上使 9.5 mg/cm2 ISC-PEG-ISC ( MW 3400, Interchim，France)均勻分佈並藉由熔融加以固定。此舉如 下進行：將具有PEG粉末之海綿置於預熱之烘箱中在7〇。〇 下維持4分鐘。 將所得海綿與含有乾燥劑之囊一起密封於不透氣袋 中。 用如上文所述之肝擦傷模型測試該襯塾在豬中的止血 效能。2分鐘後達成止血。！ 〇分鐘後未觀察到再流血。襯 墊充分黏著於組織上。 實施例20 :製備經AA_聚葡萄糖塗佈之膠原蛋白襯墊 及在動物模型中對其進行測試 在6x6 cm膠原蛋白襯墊（如實施例丨丨中所述製造） 之無色側面上使0.1 mg/cm2 AA-聚葡萄糖（MW.40000, Pierce, USA)及 13.9 mg/cm2未經取代之 peg (Mw 1〇〇〇〇, Sigma Aldrich，Germany)之 14 mg/cmi 合物均勻分佈並藉 由熔融加以固定。此舉如下進行：將具有粉末混合物之海 綿置於預熱之烘箱中在80°C下維持4分鐘。 將所得海綿與含有乾燥劑之囊一起密封於不透氣袋 中〇 用如上文所述之肝葉擦傷模型測試該襯墊在豬中的止 血效能，但進行如下修改：襯墊與經鹼性碳酸氫鈉溶液預

S 32 201141546 先濕调之紗布一起施用。2分鐘後達成止血。1 〇分鐘後未 觀察到再流血。襯墊充分黏著於組織上。 實施例21a :經DSS塗佈之膠原蛋白襯墊之製備及其 在動物模型中之測試 在6x6 cm膠原蛋白襯墊（如實施例丨丨中所述製造） 之無色側面上使 DSS( Mw 368 35, sigma AMrich，Germany ) 與未經取代之 PEG (MW 10000, Sigma Aldrich，Germany) 之20 mg/cm2丨：！混合物均勻分佈並藉由熔融加以固定。此 舉如下進行.將具有粉末混合物之海綿置於預熱之供箱申 在80°C下維持4分鐘。 將所得海綿與含有乾燥劑之囊一起密封於不透氣袋 中〇 在如上文所述之肝葉擦傷模型中測試該襯.塾在豬中的 止血效此。2分鐘後未達成止血。襯墊在組織上之黏著性不 足。 實施例2lb:製備經DSS塗佈之膠原蛋白襯墊及在動 物模型中對其進行測試 用如上文所述之肝葉擦傷模型測試如實施例21a中所 製備之襯墊在豬中的止血效能，但進行如下修改：襯墊與 經鹼性碳酸氫鹽溶液預先濕潤之紗布一起施用。2分鐘後達 成止血。10分鐘後未觀察到再流血。襯墊充分黏著於組織 上。 實施例22a :製備經EGS塗佈之膠原蛋白襯墊及在動 物模型中對其進行測試 33 201141546 在6x6 cm膠原蛋白襯墊（如實施例u中所述製造） 之無色側面上使 EGS( MW 456.36, Sigma Alddch，Gennany ) 與未經取代之 PEG ( MW 10000, sigma Aldrich，Germany) 之26mg/Cm2 1:1混合物均勻分佈並藉由熔融加以固定。此 舉如下進行.將具有粉末混合物之海綿置於預熱之烘箱中 在80°C下維持4分鐘。 將所得海綿與含有乾燥劑之囊一起密封於不透氣袋 中。 用如上文所述之肝擦傷模型測試該襯塾在豬中的止血 效能^ 2分鐘後未達成止血。襯墊在組織上之黏著性不足。 實施例22b :製備經EGS塗佈之膠原蛋白襯墊及在動 物模型中對其進行測試 用如上文所述之肝擦傷模型測試如實施例2 2 a中所製 備之襯塾在豬中的止血效能’但進行如下修改：襯塾與經 驗性碳酸氫鈉溶液預先濕潤之紗布一起施用。2分鐘後達成 止血。1 〇分鐘後未觀察到再流血。襯塾充分黏著於組織上。 實施例23 :經NHS-PEG塗佈之纖維蛋白織維網 在如實施例12中所述而製造之纖維蛋白纖維網之一個 側面上使14 mg/cm2 COH102均勻分佈並藉由熔融加以固 定。此舉如下進行：將具有PEG粉末之海綿置於預熱之烘 箱中在65°C下維持4分鐘。 將所得海綿與含有乾燥劑之囊一起密封於不透氣袋 中。 用如上文所述之肝擦傷模型測試該襯塾在緒中的止血

S 34 201141546 效能。2分鐘後達成止血。1 0分鐘後未觀察到再流血。概 墊充分黏著於組織上。 實施例24:對組織之黏著力與用於膠原蛋白襯墊塗層 之交聯劑之間的關係 將襯墊施用於肝擦傷模型之流血組織後，評估襯墊對 肝組織之黏著性。用鉗子側部施加輕微切向力。若不能使 襯墊自施用部位移動，則認為存在黏著性（與組織結合）。 黏著性評分：1 =在施用後5分鐘時不移動；2 =在施用後10 分鐘不移動；3 =在施用後1 0分鐘移動（無黏著性）。 實施例編號 交聯劑 黏著性評分 13 NHS-PEG-NHS 1 14 8 臂 NHS-PEG 1 15a 4 臂 p-NP-PEG 3 15b 4臂p-NP-PEG-鹼性應用 2 16a CHO-PEG-CHO 1 16b CHO-PEG-CHO -鹼性應用 2 17a 環氧樹脂-PEG-環氧樹脂 3 17b 環氧樹脂-PEG-環氧樹脂-鹼性應用 2 18 4臂環氧樹脂-PEG -鹼性應用 2 19 ISC-PEG-ISC 1 20 AA-聚葡萄糖-鹼性應用 1 21a DSS 3 21b DSS-鹼性應用 2 22a EGS 3 22b EGS-鹼性應用 2 35 201141546 實施例25:經NHS-pEG塗佈之聚葡萄胺糖/明膠海絲 及在動物模型中對其進行測試 在市售聚葡萄胺糖/明膠海綿（⑧， Med1Cal，Germany)上使 14 mg/cm2 c〇hi〇2 均勻分佈且藉 由炼融加以固定。此舉如下進行：將具有pEG粉末之海綿 置於預熱之烘箱中在65°c下維持4分鐘。 將所得海绵肖含有乾燥劑之囊一起密封於不透氣袋 中〇 用如上文所述之肝擦傷模型測試該襯墊在豬中的止血 效能。2分鐘後達成止血。1〇分鐘後未觀察到再流血（圖9)。 襯墊充分黏著於組織上。 實施例26:製備經NHS_PEG塗佈之明膠襯墊及在動 物模型中對其進行測試 在市售明膠海綿（Gelfoam®，Pfizer，US幻上使14 mg/cm2 COH102均勻分佈且藉由熔融加以固定。此舉如下 進行·將經PEG粉末塗佈之海綿置於預熱之烘箱中在約 70°C下維持4分鐘。 將所得海綿與含有乾燥劑之囊一起密封於不透氣袋 中〇 用如上文所述之肝表面擦傷模型測試該等襯墊在豬中 的止血效能。1 〇分鐘後，因在組織上缺乏黏著性而未達成 止血且減緩海綿吸收液體。 實施例27 :水吸收速度 將乾膠原蛋白海綿（Matristypt®，Dr. Suwelack， 36 201141546 以而叮）或乾交聯明膠海綿（Gelfoam®，Pfizer )之2x2 cm 碎片置於燒杯中之蒸館H2〇表面上。乾海綿浮在水表面上 且經2x2 cm接觸表面吸收水。6秒後，Matristyy⑧完全被 H20浸透，且將其自水表面移除。13秒後，較厚以如⑺⑧ 海綿未完全被H2〇浸透，但在13秒後將其自水表面移除。 根據2x2 cm海綿在與水表面接觸之前及之後之重量、與水 表面接觸之時間及與水表面接觸之面積，計算單位接觸表 面（cm2)之海綿初始水吸收速度（毫克水/秒> ⑧ 之初始水吸收速度為35 mgxcm·〗，，且Gelf〇am⑧之初始水 吸收速度為0.8 mgXcrtT1 s·1。 【圖式簡單說明】 圖1 :經NHS-PEG塗佈之膠原蛋白襯墊的止血效力 止血塾係根據實施例2製造且經14 mg/cm2 COH102塗 佈（如上文所定義）。如上文所述根據動物評估止血效力。 施用襯墊後2分鐘時停止流血。未觀察到再流血。 圖2 :經NHS-PEG浸潰之膠原蛋白襯墊的止血效力 止血塾係根據實施例3製造且經8 mg/cm2 COH102浸 貝如上文所述根據動物評估止血效力。施用襯塾後2分 鐘時停止流血。未觀察到再流血。 圖3 :經NHS-PEG塗佈之含有氧化纖維素織物之膠原 蛋白襯塾的止血效力 止血墊係根據實施例5製造且經14 mg/cm2 COH102塗 布如上文所述根據動物评估止血效力。施用槪墊後2分 37 201141546 鐘時停止流血。未觀察到再流血。 圓4 :經NHS-PEG塗佈之氧化纖維素織物的止血效力 止血塾係根據實施例6製造且經14 mg/cm2 COH102塗 佈。如上文所述根據動物評估止血效力。施用襯墊後2分 鐘時停止流血。未觀察到再流血。 圖5 :經NHS-PEG塗佈之含有岩藻依聚糖（fuc〇idan) 作為止血增強物質之膠原蛋白襯墊的止血效力 止血墊係根據貫施例7製造且經丨4 mg/cm2 c〇H丨〇2塗 佈。如上文所述根據動物評估止血效力。施用襯墊後2分 鐘時停止流血。未觀察到再流血。 圏6:經$連續塗佈之膠原蛋白海綿表面的掃描電子顯 微術影像（放大：x500 ) 圖7:經連續塗佈之膠原蛋白海綿表面的掃描電子顯微 術影像（放大：χ500 ) 圖8 .肝葉擦傷模型中經M mg/cm2 C〇H1〇2塗佈之 Gelfoam 圖9··肝葉擦傷模型中經14 mg/cm2 c〇hi〇2塗佈之 Chitoskin 【主要元件符號說明】 益 38

Claims (1)

1. 201141546 七、申請專利範圍： 1· 一種多孔複合止血棉，其包含： i )生物材料基質；及 ii ) 一種包含活性基團之親水性聚合組分； 其中i )與ii )係彼此締合以保留該聚合組分之活性， 其中締合意謂·· 該聚合組分塗佈於該生物材料基質之表面上；或 該基質經該聚合材料浸潰；或 二者0 2. 如申請專利範圍第1項之止血棉，其中該生物材料係選自 由以下組成之群：膠原蛋白；明膠；纖維蛋白；多醣， 例如聚葡萄胺糖；合成生物可降解生物材料，例如聚乳 酸或聚乙醇酸；及其衍生物。 3. 如申請專利範圍第丨項或第2項之止血棉，其中該親水性 聚合物為聚環氧烷（p〇lyalkyleneoxide)聚合物，尤其較佳 為包含PEG之聚合物，例如多親電子基聚環氧烷 (polyalkylene oxide)聚合物，例如多親電子基pEG，諸汝 新戊四醇聚（乙二醇）醚四丁二醢亞胺基戊二酸醋。 4. 如申請專利範圍第i項至第3項中任—項之止血棉，其中 該生物材料為膠原蛋白且該聚合組分為新戊四醇聚（乙二 醇m四丁二醢亞胺基戊二酸醋，其中該多聚合形式係； 佈於該膠原蛋白上。 土 如申請專利範圍第i項至第3項中任— J•貝之止血棉，苴中 該生物材料為膠原蛋白且該聚合組分為新戊四醇聚（乙二 39 201141546 醇）醚四丁一酿亞胺基戊二 八甲該多聚合形式俜、、其 潰於該膠原蛋白中。 糸/又 6· —種如申請專利範圍第丨 田冷甘拉 只玍弟5項中任一項之止血棉的 用途，其係用於處理選自由創傷、 也mn、 出血、組織損傷及/或 ，，且、成/爪血組成之群的損傷。 7· —種處理選自由創傷、出、纟 ^ ^ 、减彳貝傷及/或組織流血组 =的損傷的方法，該方法包含向該損傷部位投與如 月專利範圍第1項至第5項中任-項之止血棉。 8. 如申請專利範圍第7 . . _ 、 法，〃中s玄止血棉係與例如紗 帝上之例如碳酸氫鹽溶液之續彳私、、六、* 傷。 合履之緩衝洛液一起施用於該損 9. 一種套組，其包含如申喑 甲π專利範圍第1項至第5項中任_ 項之止血棉及緩衝溶液以1 ν、使用說明書，該緩衝溶液 為例如鹼性緩衝溶液，諸如碳酸氫鹽。 10. —種製造止血棉之方法，其包含： 供包含呈乾燥形式之生物材料基質的海綿； b) 提供一種呈乾粉末形式之活性聚合材料； c) 使a)與b)接觸以使該b)材料存在於該止血棉之 至J 一個表面上；及 d) 將該b)材料固定於該a)止血棉上。 11. 如申请專利範圍第1 〇項之方、>，甘 項之方法其中藉由在30〇C至 80。(：、較佳 60。(：至 65°C之、、ra 许 nr ρ、 L之皿度下溶融足以固定之時段、 較佳1分鐘至1 〇公妒 ^ 里、尤八，，，勺4匇鐘來達成固定》 12. —種製造止血棉之方法，其包含： S 40 201141546 a) &供包含呈乾燥 式之生物材料基質的海綿； b) 提供一種呈溶液 合狀形式之活性聚合材料； c )使a )與b )接觸w# 、 使该a)材料經b)浸潰；及 d )乾舞步驟〇 ) φ μ松 V娜C ;中所獲得之該材料。 13·· —種海綿’並可游減丄& 、 據如申請專利範圍第10項至第12項 中任一項方法獲得。 巧 14. 一種止血複合物，且 八包έ止血材料及具有活性基 水性聚合交聯劑，哕葙a从^ a ^ '-设5物包含允許外部流體、尤其人 類血液接入該複合物中的孔隙。 、 1 5·如申請專利範圍第1 ^ 員之止血複合物，其中該止血材料 :-·止血纖維之非編織織物或編織織物或多孔止血棉。. 16. 如申請專利範圍第14項或第Η項之止血複合物，其中 該止血材料為膠原蛋白溴 y 海綿虱化纖维素織物、纖維蛋 白海綿或明膠海轉。 17. 如申請專利範圍第Μ項至篦 負至第16項中任一項之止血複合 物’其中該具有活性基團之雜士 土图之親水性聚合交聯劑為聚乙二 醇（PEG)，較佳為包令&伽々工 勹匕3兩個或兩個以上活性基團的pEG， 該等活性基團選自丁 -醢巧 —醞亞胺 s日基（-con(coch2)2 )、 酸基（-CHO)及異瀆响, 吳虱西“曰基（_Ν·〇)，尤其較佳為丁 二酸亞胺醋基。 八、圖式： (如次頁） 41