ES2962645T3 - Lámina hemostática biocompatible y flexible - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a una lámina hemostática flexible, biocompatible, que comprende: - una estructura portadora fibrosa cohesiva que comprende un espacio intersticial tridimensional interconectado; y - distribuidas dentro del espacio intersticial, una pluralidad de partículas de polímero reactivo que comprenden (i) un polímero electrófilo soluble en agua que porta al menos 3 grupos electrófilos reactivos que son capaces de reaccionar con grupos amina en tejido y sangre bajo la formación de un enlace covalente. y (ii) un agente de reticulación nucleófilo que contiene al menos dos grupos nucleófilos reactivos que son capaces de reaccionar con los grupos electrófilos reactivos del polímero electrófilo bajo la formación de un enlace covalente, teniendo dichas partículas de polímero reactivo un diámetro en el rango de 0,5-100 pm y estando presente en una cantidad de al menos 3% en peso de la estructura portadora fibrosa. Cuando la lámina hemostática de la presente invención absorbe la sangre, el polímero electrófilo soluble en agua en las partículas de polímero reactivo comienza a disolverse tan pronto como estas partículas son "humedecidas" por la sangre, permitiendo así que el polímero electrófilo reaccione con grupos nucleófilos reactivos. en la sangre y el tejido, así como con grupos nucleofílicos reactivos del agente reticulante nucleofílico, induciendo así la coagulación sanguínea y el sellado del tejido, los cuales contribuyen a la hemostasia. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Lámina hemostática biocompatible y flexible

CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN

[0001] La presente invención se refiere a una lámina hemostática biocompatible y flexible que puede usarse adecuadamente para minimizar las hemorragias durante procedimientos quirúrgicos. Esta lámina hemostática comprende:

• una estructura portadora fibrosa cohesiva que comprende un espacio intersticial interconectado tridimensional y,

• distribuidas en el espacio intersticial, partículas de polímero reactivo que comprenden (i) un polímero electrofílico soluble en agua con al menos tres grupos electrofílicos reactivos, siendo, dichos grupos electrofílicos reactivos, capaces de reaccionar con grupos amino en el tejido y la sangre bajo la formación de un enlace covalente, y (ii) un agente de reticulación nucleofílico que contiene al menos dos grupos nucleofílicos reactivos capaces de reaccionar con los grupos electrofílicos reactivos del polímero electrofílico bajo la formación de un enlace covalente.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

[0002] Uno de los principales desafíos durante los procedimientos quirúrgicos de tejido parenquimatoso es lograr el control del sangrado. El control de la sutura, el electrocauterio y el sellado ultrasónico a menudo no son suficientes durante operaciones en, por ejemplo, el hígado o los riñones. Como resultado, los procedimientos, como las resecciones hepáticas o la nefrectomía parcial, requieren un enfoque alternativo para controlar el sangrado. Para este fin, se ha desarrollado una amplia gama de productos hemostáticos tópicos que están clínicamente disponibles.

[0003] Lewiset al.(Control of bleeding in surgical procedures: critical appraisal of HEMOPATCH (Sealing Hemostat), Dove Press Journal: Medical Devices Evidence and Research, 22 de dic. 2015, 1-9) describen una almohadilla hemostática (HEMOPATCH) que se compone de un, monómero sintético reactivo a las proteínas y un refuerzo de colágeno. El lado activo está cubierto con el monómero reactivo a las proteínas: polietilenglicol funcionalizado con N-hidroxisuccinimida (NHS-PEG). El NHS-PEG fija rápidamente la almohadilla de colágeno al tejido para promover y mantener la hemostasia.

[0004] Schuhmacheret al.(Safety and effectiveness of a synthetic hemostatic patch for intraoperative soft tissue bleeding, Med Devices (Auckl). 2015; 8: 167-174) describen un parche hemostático (Veriset™) que se compone de un material de refuerzo absorbible, celulosa oxidada e hidrogel de polietilenglicol. El parche hemostático de Veriset™ se proporciona como un parche listo para usar que se aplica con el lado de glicol de polietileno hacia abajo en el sitio de sangrado.

[0005] Boermanet al.(Next Generation Hemostatic Materials Based on NHS-Ester Functionalized Poly(2-oxazoline)s, Biomacromolecules (2017), 18,2529-2538) describen un producto hemostático sintético no bioactivo que se obtiene recubriendo éster de N-hidroxisuccinimida (NHS)-poli(2-oxazolina)s funcionales (NHS-POx) sobre parches de gelatina, que actúa bajo la formación de enlaces cruzados covalentes entre el polímero, las proteínas de la sangre del huésped, la gelatina y el tejido para sellar el sitio de la herida y prevenir la hemorragia durante la cirugía.

[0006] La patente US 2010/0233246 describe un dispositivo de polímero biocompatible que comprende una esponja o una lámina de colágeno impregnada con un polvo de polietilenglicol reactivo en dos partes, donde dicho polvo reactivo comprende un primer polietilenglicol que tiene grupos nucleofílicos y un segundo polietilenglicol que tiene grupos electrofílicos, donde el polvo de polietilenglicol permanece sin reaccionar en estado seco.

[0007] La patente WO 2010/059280 describe una lámina fibrosa anhidra que comprende un primer componente de polímero fibroso, el cual contiene grupos electrofílicos o nucleofílicos, y un segundo componente capaz de reticular el primer componente cuando dicha lámina se expone a un medio acuoso en contacto con tejido biológico para formar un hidrogel reticulado adhesivo al tejido biológico; donde:

a) donde el segundo componente es un polímero fibroso que tiene un esqueleto igual o diferente a la del polímero fibroso del primer componente y que contiene grupos electrofílicos si el primer componente contiene grupos nucleofílicos o que contiene grupos nucleofílicos si el primer componente contiene grupos electrofílicos;

b) el segundo componente es un revestimiento sobre el polímero fibroso del primer componente y donde dicho revestimiento contiene grupos electrofílicos si el primer componente contiene grupos nucleofílicos o grupos nucleofílicos si el primer componente contiene grupos electrofílicos; o

c) el segundo componente es un polvo seco dispersado y atrapado dentro de intersticios del polímero fibroso del primer componente, donde dicho polvo contiene grupos electrofílicos si el primer de componentes contiene grupos nucleofílicos o grupos nucleofílicos si el primer de componentes contiene grupos electrofílicos.

[0008] La patente US 2011/0250257 describe una lámina fibrosa anhidra que comprende un primer componente de polímero fibroso, donde dicho polímero contiene grupos electrofílicos o grupos nucleofílicos, y un segundo de componentes capaz de reticular el primer componente cuando dicha lámina se expone a un medio acuoso en contacto con tejido biológico para formar un hidrogel reticulado que es adhesivo a tejidos biológicos; donde el segundo componente es un polímero fibroso y que contiene grupos electrofílicos si el primer componente contiene grupos nucleofílicos o que contiene grupos nucleofílicos si el primer componente contiene grupos electrofílicos; o el segundo componente es un recubrimiento sobre el polímero fibroso del primer componente, donde dicho recubrimiento contiene grupos electrofílicos si el primer componente contiene grupos nucleofílicos o grupos nucleofílicos si el primer componente contiene grupos electrofílicos; o el segundo componente es un polvo seco disperso y atrapado dentro de los intersticios del polímero fibroso del primer componente, donde dicho polvo contiene grupos electrofílicos si el primer componente contiene grupos nucleofílicos o grupos nucleofílicos si el primer componente contiene grupos electrofílicos.

[0009] La patente WO 2011/124640 describe un método para fabricar una esponja hemostática, que comprende:

a) proporcionar una esponja que comprende una matriz de un biomaterial en forma seca,

b) proporcionar un material polimérico reactivo en forma de polvo seco,

c) poner en contacto a) y b) de modo que el material de b) esté presente en al menos una superficie de dicha esponja, y

d) fijar el material de b) en la esponja de a).

[0010] La fijación se puede lograr fundiendo durante un periodo de tiempo suficientemente largo.

[0011] La patente WO 2012/057628 describe un producto médico adhesivo a tejidos que comprende al menos un 1 % en peso de materia seca de una polioxazolina activada electrolíticamente (EL-POx), donde dicha EL-POx comprende al menos 2 grupos electrofílicos reactivos, que incluyen al menos un grupo electrofílico colgante. Además de EL-POx, el producto médico puede contener una polioxazolina activada nucleofílicamente (NU-POX). Los ejemplos de productos adhesivos a tejidos incluyen cinta adhesiva a tejidos, sellador de tejidos, material poroso hemostático e implantes.

[0012] La patente WO 2016/056901 describe un producto hemostático adhesivo seleccionado de entre una malla recubierta, una espuma recubierta o un polvo recubierto, donde dicho producto hemostático comprende:

• un sustrato sólido poroso que tiene una porosidad de al menos un 5 % en volumen y que comprende una superficie exterior que comprende un polímero nucleofílico que contiene grupos nucleofílicos reactivos;

• un recubrimiento adhesivo que cubre al menos una parte del sustrato sólido, donde dicho recubrimiento comprende una polioxazolina activada electrolíticamente (EL-POx), donde dicha EL-POx contiene en promedio al menos 1 grupo electrofílico reactivo.

[00013] El producto hemostático adhesivo se produce mediante un proceso que comprende los pasos de proporcionar un sustrato sólido poroso; recubrir el sustrato con un líquido de recubrimiento que comprende EL-POx y un solvente; y retirar el solvente.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

[0014] Los inventores han desarrollado una lámina hemostática biocompatible y flexible especialmente indicada para prevenir hemorragias durante los procedimientos quirúrgicos laparoscópicos.

[0015] La lámina hemostática según la presente invención comprende una estructura portadora fibrosa cohesiva que contiene pequeñas partículas que comprenden un polímero que es capaz de unirse de manera covalente con proteínas de la sangre huésped y tejido, y que de este modo induce la hemostasia y/o la adhesión de tejido. Así, un aspecto de la invención se refiere a una lámina hemostática biocompatible y flexible que comprende: • una estructura portadora fibrosa cohesiva que comprende un espacio intersticial interconectado tridimensional; y

• distribuidas dentro del espacio intersticial, una pluralidad de partículas de polímero reactivo que comprenden (i) un polímero electrofílico soluble en agua que contiene al menos 3 grupos electrofílicos reactivos que son capaces de reaccionar con grupos amino en el tejido y sangre bajo la formación de un enlace covalente, y (ii) un agente de reticulación nucleofílico que contiene al menos dos grupos nucleofílicos reactivos que son capaces de reaccionar con los grupos electrofílicos reactivos del polímero electrofílico bajo la formación de un enlace covalente, teniendo dichas partículas de polímero reactivo un diámetro comprendido entre 0,5 y 100 |_im y estando presentes en una cantidad de al menos el 3 % en peso de la estructura portadora fibrosa.

[0016] La lámina hemostática de la presente invención comprende una estructura portadora fibrosa cohesiva que absorbe fácilmente la sangre, ya que la sangre puede penetrar el espacio intersticial. Esta estructura portadora fibrosa puede impregnarse fácilmente con partículas de polímero reactivo. A diferencia de la impregnación con líquidos, esta impregnación seca no afecta a la integridad estructural ni a las propiedades mecánicas de la estructura portadora. Cuando la sangre es absorbida por la lámina hemostática de la presente invención, el polímero electrofílico soluble en agua en las partículas de polímero reactivo comienza a disoloverse tan pronto como estas partículas son "humedecidas" por la sangre, permitiendo así que el polímero electrofílico reaccione con grupos nucleofílicos reactivos en la sangre y el tejido, así como con grupos nucleofílicos reactivos del agente de reticulación nucleofílico, induciendo así la coagulación de la sangre y el sellado del tejido, que contribuyen ambos a la hemostasia.

[0017] Aunque los inventores no desean ceñirse a la teoría, se cree que las propiedades ventajosas de la lámina hemostática de la presente invención se pueden atribuirse al hecho de que las partículas de polímero reactivo se distribuyen por toda la estructura portadora fibrosa creando un mínimo de fricción por flexión y también al hecho de que, debido al pequeño tamaño de las partículas, estas partículas de polímero reactivo se disuelven rápidamente cuando entran en contacto con sangre u otros fluidos corporales acuosos. Así, al aplicar la lámina sobre una herida, se produce una rápida reticulación covalente entre el polímero electrofílico reactivo, por un lado, y las proteínas sanguíneas, el tejido y el agente de reticulación nucleofílico por otro lado, conduciendo a la formación de un hidrogel que sella la superficie de la herida y detiene el sangrado y que puede proporcionar una fuerte adhesión de la lámina fibrosa al tejido, debido a la formación de enlaces covalentes entre los grupos electrofílicos reactivos en el hidrogel y los grupos amino/tiol en el tejido. La estructura portadora fibrosa proporciona fuerza mecánica durante y después de la aplicación, y evita una inflamación excesiva.

[0018] Al combinar el polímero portador de grupos electrofílicos reactivos y el agente reticulante nucleofílico en una única partícula, se garantiza que estos dos componentes reactivos puedan ser homogéneamente distribuidos por toda la lámina hemostática, que no se produzca segregación durante el transporte y la manipulación, y que estos componentes puedan reaccionar inmediatamente entre sí cuando las partículas entren en contacto con la sangre.

[0019] Debido a su flexibilidad, la lámina hemostática de la presente invención puede aplicarse adecuadamente a sitios de sangrado con forma irregular. La lámina hemostática se puede aplicar capa sobre capa si una lámina ya aplicada no detiene completamente el sangrado.

[0020] Otro aspecto de la presente invención se refiere a un método de preparación de una lámina hemostática, comprendiendo dicho método:

• proporcionar una lámina de estructura portadora fibrosa cohesiva como se ha definido anteriormente; • proporcionar partículas de polímero reactivo como se ha definido anteriormente; y

• distribuir las partículas de polímero reactivo dentro del espacio intersticial de la estructura portadora fibrosa.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

[0021] En consecuencia, un aspecto de la invención se refiere a una lámina hemostática biocompatible y flexible que comprende:

• una estructura portadora fibrosa cohesiva que comprende un espacio intersticial interconectado tridimensional; y

• distribuidas en el espacio intersticial, una pluralidad de partículas de polímero reactivo que comprenden (i) un polímero electrofílico soluble en agua que contiene al menos tres grupos electrofílicos reactivos que son capaces de reaccionar con grupos amino en el tejido y la sangre bajo la formación de un enlace covalente, y (ii) un agente de reticulación nucleofílico que contiene al menos dos grupos nucleofílicos reactivos que son capaces de reaccionar con los grupos electrofílicos reactivos del polímero electrofílico bajo la formación de un enlace covalente, teniendo dichas partículas de polímero reactivo un diámetro comprendido entre 0,5-100 |_im y estando presentes en una cantidad de al menos el 3 % en peso de la estructura portadora fibrosa.

[0022] El término "lámina hemostática", como se usa en el presente documento, a menos que se indique lo contrario, se refiere a una lámina que tiene la capacidad de detener el sangrado del tejido dañado. La lámina hemostática de la presente invención puede lograr la hemostasia convirtiendo la sangre en un gel y/o formando un sello que cierra el sitio de la herida.

[0023] El término "adhesivo a tejidos", como se usa en el presente documento, se refiere a la capacidad de la lámina adhesiva a tejidos de adherirse al tejido debido a la formación de enlaces covalentes entre la lámina y el tejido. La formación de estos enlaces covalentes normalmente requiere la presencia de agua.

[0024] El término "espacio intersticial", como se utiliza en este caso, se refiere al espacio nulo ("vacío") dentro de la estructura portadora fibrosa. El espacio intersticial dentro la estructura portadora fibrosa permite la introducción de partículas de polímero reactivo en la lámina. También la sangre y otros fluidos corporales pueden entrar en el espacio intersticial, lo que permite que el polímero electrofílico soluble en agua y el agente de reticulación nucleofílico dentro de las partículas de polímero reactivo se disuelvan.

[0025] La concentración de partículas de polímero reactivo con un diámetro comprendido entre 0,5 y 100 |_im se expresa en “% en peso” de la estructura portadora fibrosaper se,es decir, sin las partículas de polímero reactivo.

[0026] El "polímero electrófilo soluble en agua que contiene grupos electrófilos reactivos", que se emplea según la presente invención, contiene al menos tres grupos reactivos que son capaces de reaccionar con grupos amino en tejido y sangre bajo la formación de un enlace covalente. Este polímero electrofílico soluble en agua tiene un peso molecular de al menos 1 kDa y una solubilidad en agua destilada de 20 °C de al menos 50 g/l.

[0027] El término "capacidad de absorción de agua", como se utiliza en el presente documento, es una medida de la capacidad de la lámina hemostática para absorber agua. La capacidad de absorción de agua se determina pesando una muestra de la lámina seca (peso = Wd) seguido de la inmersión de la muestra en agua destilada (37 °C) durante 45 minutos. A continuación, se retira la muestra del agua y se retira el agua adherida al exterior del sustrato, tras lo cual la muestra se pesa nuevamente (peso = Ww). La capacidad de absorción de agua = 100 % x (Ww - Wd)/Wd. La capacidad de adsorción de agua es indicativa de la porosidad del sustrato, así como de su capacidad para hincharse en presencia de agua.

[0028] El término "colágeno", como se utiliza en el presente documento, se refiere a la proteína estructural principal en el espacio extracelular de varios tejidos conjuntivos en los cuerpos de los animales. El colágeno forma una triple hélice característica de tres cadenas polipeptídicas. Dependiendo del grado de mineralización, los tejidos de colágeno pueden ser rígidos (hueso) o flexibles (tendones) o tener un gradiente de rígido a flexible (cartílago). A menos que se indique lo contrario, el término "colágeno" también abarca colágenos distintos de la gelatina.

[0029] El término "gelatina", como se utiliza en el presente documento, se refiere a una mezcla de péptidos y proteínas producida por hidrólisis parcial de colágeno extraído de la piel, los huesos y los tejidos conectivos de animales, tales como ganado, pollos, cerdos y pescado domésticos. Durante la hidrólisis, los enlaces moleculares naturales entre las hebras de colágeno individuales se descomponen en una forma que se reorganiza más fácilmente.

[0030] El término "polioxazolina", como se utiliza en el presente documento, se refiere a una poli(N-acilalquilenimina) o una poli(aroilalquilenimina) y se denomina, además, POx. Un ejemplo de POx es poli(2-etil-2-oxazolina). El término "polioxazolina" también abarca copolímeros de POx.

[0031] Las partículas de polímero reactivo se pueden distribuir homogéneamente dentro del espacio intersticial de la estructura portadora fibrosa en el sentido de que la densidad de las partículas es esencialmente la misma en toda la estructura portadora. Las partículas de polímero reactivo también pueden estar distribuidas de manera desigual a lo largo de la estructura portadora. Por ejemplo, si la lámina hemostática se prepara en forma de laminado de capas finas de estructura portadora fibrosa y capas de partículas de polímero reactivo, la densidad de partículas de polímero reactivo dentro de la lámina puede fluctuar. Para determinadas aplicaciones, puede resultar ventajoso que la densidad de las partículas del polímero reactivo muestre un gradiente, por ejemplo, en el sentido de que la densidad de las partículas de polímero reactivo es más baja cerca del lado de la lámina que se pretende aplicar sobre una herida sangrante y más alta cerca del otro lado de la lámina.

[0032] La distribución del diámetro de las partículas de polímero reactivo puede determinarse adecuadamente por medio de difracción láser usando un Malvern Mastersizer 2000 en combinación con la unidad de dispersión de muestras de acero inoxidable. La unidad de dispersión de muestras se rellena con aprox. 120 ml de ciclohexano, que se estabiliza durante 5 a 10 minutos a una velocidad de agitación de 1800 rpm y, a continuación, se realizó una medición de fondo (medición de blanco). El tubo de muestra se agita y gira horizontalmente 20 veces. A continuación, se dispersan aproximadamente 50 mg en la unidad de dispersión de muestra que contiene el ciclohexano. Después de introducir la muestra en la unidad de dispersión, la muestra se agita durante un minuto y medio a 1800 rpm para garantizar que todas las partículas se dispersen correctamente, antes de realizar la medición. No se realiza ningún tratamiento ultrasónico sobre las partículas dispersas. El tamaño promedio de partícula se expresa como D [4,3], el diámetro medio ponderado por volumen (ZniDi4)/(ZniDi3).

[0033] En una forma de realización particularmente preferida, a diferencia del sellante de tejido fibroso descrito en la patente US 2011/0250257, la lámina hemostática de la presente invención no forma un hidrogel, es decir, una matriz polimérica hinchable en agua que puede absorber una cantidad sustancial de agua para formar un gel elástico.

[0034] Según una forma de realización particularmente preferida, la lámina hemostática de la presente invención es bioabsorbible, lo que significa que en la estructura portadora, las partículas de polímero reactivo y otros componentes de la lámina hemostática se absorben finalmente en el cuerpo. La absorción de la estructura portadora y de las partículas de polímero reactivo suele requerir la descomposición química (por ejemplo, hidrólisis) de los polímeros que contienen. La bioabsorción completa de la lámina hemostática por el cuerpo humano se consigue típicamente en 1 a 10 semanas, preferiblemente en 2 a 8 semanas.

[0035] De acuerdo con otra forma de realización preferida, la estructura portadora fibrosa cohesiva es resistente al agua. Aquí, el término "resistente al agua" significa que la estructura portadora fibrosa cohesiva no es soluble en agua y no se desintegra en agua para formar una dispersión coloidal, en condiciones de pH neutro (pH 7) y una temperatura de 37°C.

[0036] La lámina hemostática de la presente invención normalmente tiene un grosor medio no comprimido de 0,5 y 25 mm. Más preferiblemente, el grosor medio no comprimido se encuentra comprendido entre 1 y 10 mm, de la manera más preferible, comprendido entre 1,5 y 5 mm.

[0037] Las dimensiones de la lámina hemostática preferiblemente son tales que la parte superior e inferior de la lámina tienen cada una un área superficial de al menos 2 cm2, más preferiblemente de al menos 10 cm2 y de la manera más preferible de 25 a 50 cm2. Normalmente, la lámina tiene una forma rectangular y una longitud de 25 a 200 mm, y una anchura de 25 a 200 mm.

[0038] La lámina hemostática tiene preferiblemente una densidad no comprimida inferior a 200 mg/cm3, más preferiblemente inferior a 150 mg/cm3 y, de la manera más preferible, de 10 a 100 mg/cm3.

[0039] En una forma de realización de la invención, las partículas de polímero reactivo están distribuidas homogéneamente en el espacio intersticial de la estructura portadora fibrosa. En otra forma de realización de la invención, la lámina hemostática es un laminado que comprende alternar capas de estructura portadora fibrosa y capas de partículas de polímero reactivo. En esta última forma de realización, las partículas de polímero reactivo han penetrado preferiblemente las capas de la estructura portadora fibrosa que separan las capas de partículas de polímero reactivo.

[0040] La lámina hemostática de la presente invención es, de manera preferible, esencialmente anhidra. Normalmente, la lámina hemostática tiene un contenido de agua no superior al 5 % en peso, más preferiblemente no superior al 2 % en peso y, de la manera más preferible, no superior al 1 % en peso.

[0041] La capacidad de absorción de agua de la lámina hemostática es preferiblemente de al menos el 50 %, más preferiblemente se encuentra en el rango del 100 % al 800 %, de la manera más preferible, en el rango del 200 % al 500 %.

[0042] Preferiblemente la lámina hemostática de la presente invención es estéril.

[0043] El uso de una estructura portadora fibrosa en la lámina hemostática de la presente invención ofrece la ventaja de que las partículas de polímero reactivo pueden ser homogéneamente distribuidas por esta estructura portadora sin dificultad. Tal distribución homogénea es mucho más difícil de conseguir, por ejemplo, en estructuras portadoras espumadas.

[0044] Las fibras en la estructura portadora fibrosa tienen preferiblemente un diámetro medio de 1 a 500 |_im, más preferiblemente de 2 a 300 |_im y de la manera más preferible de 5 a 200 |_im. El diámetro medio de las fibras se puede determinar adecuadamente usando un microscopio.

[0045] Normalmente, al menos el 50 % en peso, más preferiblemente al menos el 80 % en peso de las fibras en la estructura portadora fibrosa tienen un diámetro de 1 a 300 |_im y una longitud de al menos 1 mm.

[0046] Preferiblemente, al menos el 50 % en peso, más preferiblemente al menos el 80 % en peso de las fibras en la estructura portadora fibrosa tienen una relación de aspecto (relación entre la longitud y el diámetro) de al menos 1000.

[0047] La estructura portadora fibrosa que se emplea de acuerdo con la presente invención es preferiblemente una estructura de fieltro, una estructura tejida o una estructura de punto. De la manera más preferible, la estructura portadora fibrosa es una estructura de fieltro. Aquí el término "estructura de fieltro" se refiere a una estructura que se produce uniendo y presionando las fibras juntas para formar un material compacto.

[0048] Según una forma de realización particularmente preferida, la estructura portadora fibrosa es biodegradable.

[0049] La estructura portadora fibrosa comprende preferiblemente fibras que contienen un polímero fibroso seleccionado de celulosa, celulosa modificada, carboximetildextrano, ácido poli(láctico-co-glicólico) (PLGA), hialuronato/carboximetilcelulosa de sodio, alcohol polivinílico y combinaciones de los mismos. Más preferiblemente, la estructura portadora fibrosa comprende fibras que contienen celulosa modificada, aún más preferiblemente celulosa oxidada y de la manera más preferible celulosa regenerada oxidada.

[0050] La estructura portadora fibrosa comprende preferiblemente al menos un 50 % en peso, más preferiblemente al menos un 80 % en peso y de la manera más preferible al menos un 90 % en peso de fibras que contienen el polímero fibroso anteriormente mencionado.

[0051] En una forma de realización preferida, la estructura portadora fibrosa comprende al menos un 50 % en peso, más preferiblemente al menos un 80 % en peso y de la manera más preferible al menos un 90 % en peso de fibras que contienen al menos un 50 % en peso del polímero fibroso.

[0052] En una forma de realización aún más preferida, la estructura portadora fibrosa comprende al menos un 50 % en peso, más preferiblemente al menos un 80 % en peso y de la manera más preferible al menos un 90 % en peso de fibras hechas de celulosa modificada, más preferiblemente hechas de celulosa oxidada, y de la manera más preferible hechas de celulosa regenerada oxidada.

[0053] Las fibras contenidas en la estructura portadora fibrosa preferiblemente no contienen un polímero de contiene grupos nucleofílicos reactivos capaces de reaccionar con los grupos electrofílicos reactivos del polímero electrofílico soluble en agua bajo la formación de un enlace covalente. Asimismo, las fibras contenidas en la estructura portadora fibrosa preferiblemente no contienen un agente de reticulación nucleofílico que contenga dos o más grupos nucleofílicos reactivos capaces de reaccionar con los grupos electrofílicos reactivos del polímero electrofílico soluble en agua bajo la formación de un enlace covalente.

[0054] La invención abarca el uso tanto de celulosa oxidada regenerada como de celulosa oxidada no regenerada, preferiéndose la primera. La celulosa oxidada se puede producir a partir de celulosa mediante la acción de un agente oxidante. La celulosa oxidada contiene ácidos carboxílicos además de los grupos hidroxilo originales del material de partida. Antes de oxidación, la celulosa puede permanecer no regenerada con fibras no organizadas o se pueden regenerar para formar fibras organizadas. Cuando las fibras de celulosa se tratan con tetróxido de dinitrógeno, los grupos hidroxilo se oxidan en grupos de ácido carboxílico dando lugar a un ácido poliurónico.

[0055] Las estructuras portadoras fibrosas preferidas tienen una estructura de poros abiertos con una permeabilidad al aire de al menos 0,1 L/min x cm2, más preferiblemente de al menos 0,5 L/min x cm2. La permeabilidad al aire se determina de acuerdo con la norma EN ISO 9237:1995 (Textiles - Determinación de la permeabilidad al aire de los tejidos).

[0056] Las fibras en la estructura portadora fibrosa se pueden producir por medio de métodos conocidos en la técnica, como la hilatura eléctrica, la hilatura por electrosoplado y la hilatura con rociador rotatorio de alta velocidad. La producción de una estructura portadora fibrosa por medio de hilatura con rociador rotatorio de alta velocidad se describe en la patente US 2015/0010612. También es posible utilizar láminas fibrosas hemostáticas disponibles en el mercado como estructura portadora fibrosa. Ejemplos de productos comerciales adecuados incluyen SURGICEL SNoW™ (ex Johnson & Johnson Medical), N<u>-KNIT™ (ex Johnson & Johnson Medical) y EVARREST® (ex Ethicon).

[0057] Las partículas de polímero reactivo están preferiblemente presentes en la lámina hemostática de la presente invención en una cantidad del 5 al 90 %, más preferiblemente del 10 al 80 %, aún más preferiblemente del 20 al 75 % y de la manera más preferible del 50 al 70 %, en peso de la estructura portadora fibrosa.

[0058] Las partículas de polímero reactivo contienen preferiblemente al menos un 10 % en peso del polímero electrofílico soluble en agua. Más preferiblemente, las partículas de polímero reactivo contienen al menos un 50 % en peso, más preferiblemente al menos un 90 % en peso del polímero electrofílico.

[0059] Las partículas de polímero reactivo que se distribuyen dentro del espacio intersticial de la estructura portadora fibrosa tienen preferiblemente un tamaño medio de partícula ponderado en volumen en el rango de 2 a 75 |_im, más preferiblemente en el rango de 1 a 50 |_im y de la manera más preferible en el rango de 1 a 25 |_im.

[0060] Las partículas de polímero reactivo de la presente invención se pueden preparar de varias maneras, por ejemplo, por molienda, por secando por pulverización de una solución polimérica, por liofilización, por enfriamiento por pulverización de una masa fundida polimérica, por granulación de una mezcla de polvos, o por recubrimiento de lecho fluidizado.

[0061] El polímero electrofílico soluble en agua normalmente tiene un peso molecular de al menos 2 kDa, más preferiblemente de al menos 5 kDa y de la manera más preferible de 10 a 100 kDa.

[0062] El polímero electrofílico soluble en agua tiene preferiblemente una solubilidad en agua destilada a 20°C de al menos 100 g/L, más preferiblemente de al menos 200 g/L.

[0063] El polímero electrofílico soluble en agua que se emplea de acuerdo con la presente invención, contiene preferiblemente al menos 4 grupos electrofílicos reactivos, más preferiblemente al menos 8 grupos electrofílicos reactivos, aún más preferiblemente al menos 16 grupos electrofílicos reactivos y de la manera más preferible al menos 32 grupos electrofílicos reactivos.

[0064] Las partículas de polímero reactivo en la lámina hemostática comprenden preferiblemente un polímero electrofílico soluble en agua que contiene grupos electrofílicos reactivos seleccionados de ésteres de ácido carboxílico, ésteres de sulfonato, ésteres de fosfonato, ésteres de pentafluorofenilo, ésteres de p-nitrofenilo, ésteres de p-nitrotiofenilo, grupos haluro ácidos, anhídridos, cetonas, aldehídos, isocianato, tioisocianato, isociano, epóxidos, grupos hidroxilo activados, olefinas, éteres glicidílicos, carboxilo, ésteres succinimidílicos, ésteres sulfo succinimidílicos, maleimido (maleimidilo), etenosulfonilo, ésteres de imido, acetoacetato, haloacetal, disulfuro de ortopiridilo, derivados de dihidroxifenilo, vinilo, acrilato, acrilamida, yodoacetamida y combinaciones de los mismos. Más preferiblemente, los grupos electrofílicos reactivos se seleccionan de ésteres de ácido carboxílico, ésteres de sulfonato, ésteres de fosfonato, ésteres de pentafluorofenilo, ésteres de p-nitrofenilo, ésteres de p-nitrotiofenilo, grupos de haluro ácidos, anhinidridos, cetonas, aldehídos, isocianato, tioisocianato, isociano, epóxidos, grupos hidroxilo activados, éteres glicidílicos, carboxilo, ésteres succinimidílicos, ésteres sulfo succinimidílicos, ésteres de imido, derivados de dihidroxifenilo, y combinaciones de los mismos. Aún más preferiblemente, los grupos electrofílicos reactivos se seleccionan de haloacetales, disulfuro de ortopiridilo, maleimidas, sulfona de vinilo, derivados de dihidroxifenilo, vinilo, acrilato, acrilamida, yodoacetamida, ésteres succinimidílicos y combinaciones de los mismos. De la manera más preferible, los grupos electrofílicos reactivos se seleccionan de maleimidas, vinilo, acrilato, acrilamida, ésteres succinimidílicos, ésteres sulfo succinimidílicos y combinaciones de los mismos.

[0065] Ejemplos de ésteres succinimidílicos que se pueden emplear incluyen glutarato de succinimidilo, propionato de succinimidilo, succinamida de succinimidilo, carbonato de succinimidilo, suberato de disuccinimidilo, suberato de bis(sulfosuccinimidilo), ditiobis(succinimidilpropionato), bis(2-succinimidooxicarboniloxi) sulfona de etilo, 3,3'-ditiobis(sulfosuccinimidil-propionato), succinimidil carbamato, sulfosuccinimidil(4-yodoacetil)aminobenzoato, bis(sulfosuccinimidil) suberato, sulfosuccinimidil-4-(N-maleimidometil)-ciclohexano-l-carboxilato, propionato de ditiobis-sulfosuccinimidilo, tartarato de disulfosuccinimidilo; bis[2-(sulfosuccinimidiloxicarboniloxietilsulfona)], etilenglicol bis(sulfosuccinimiclilsuccinato), ditiobis-(succinimidil propionato).

[0066] Ejemplos de derivados de dihidroxifenilo que se pueden emplear incluyen dihidroxifenilalanina, 3,4-dihidroxifenilalanina (DOPA), dopamina, ácido 3,4-dihidroxihidrocinámico (DOHA), norepinefrina, epinefrina y catecol.

[0067] El polímero electrofílico soluble en agua que está presente en las partículas de polímero reactivo se selecciona preferiblemente de entre polioxazolinas, polietilenglicoles, polivinilpirrolidonas, poliuretanos (por ejemplo, como se describe en la patente WO 2017/171551) y combinaciones de los mismos. Incluso más preferiblemente, el polímero electrofílico se selecciona de entre polioxazolinas, polietilenglicoles y combinaciones de los mismos. De la manera más preferible, el polímero electrofílico es una polioxazolina.

[0068] La polioxazolina que comprende grupos electrofílicos reactivos se deriva preferiblemente de una polioxazolina cuyas unidades repetitivas están representadas por la siguiente fórmula (I):

(CHR1)mNCOR2

donde R2 y cada uno de los R1 se seleccionan de manera independiente de H, alquilo C1-22 opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido; y m es 2 o 3.

[0069] Preferiblemente, R1 y R2 en la fórmula (I) se seleccionan de entre H y alquilo C1-8, incluso más preferiblemente de entre H y alquilo C1-4. De la manera más preferible, R1 es H. El número entero m en la fórmula (I) es preferiblemente igual a 2.

[0070] Según una forma de realización preferida, la polioxazolina es un polímero, incluso más preferiblemente un homopolímero de 2-alquil-2-oxazolina, donde dicha 2-alquil-2-oxazolina se selecciona de entre 2-metil-2-oxazolina, 2-etil-2-oxazolina, 2-propil-2-oxazolina, 2-butil-2-oxazolina y combinaciones de las mismas. Preferiblemente, la polioxazolina es un homopolímero de 2-propil-2-oxazolina o 2-etil-oxazolina. De la manera más preferible, la polioxazolina es un homopolímero de 2-etil-oxazolina.

[0071] Según una forma de realización particularmente preferida, el polímero electrofílico que contiene grupos electrofílicos reactivos comprende al menos 20 unidades de oxazolina, más preferiblemente al menos 30 unidades de oxazolina y, de la manera más preferible, al menos 80 unidades de oxazolina. El polímero electrofílico comprende preferiblemente en promedio al menos 0,05 grupos electrofílicos reactivos por residuo de oxazolina. Incluso más preferiblemente, el polímero electrofílico comprende en promedio al menos 0,1 grupos electrofílicos reactivos por residuo de oxazolina. De la manera más preferible, el polímero electrofílico comprende en promedio de 0,12 a 0,5 grupos electrofílicos reactivos por residuo de oxazolina.

[0072] El polímero electrofílico contiene normalmente en promedio al menos 10, más preferiblemente al menos 20 grupos electrofílicos reactivos.

[0073] La polioxazolina puede contener grupos electrofílicos reactivos en sus cadenas laterales (grupos electrofílicos reactivos colgantes), en sus extremos, o en ambos. La polioxazolina que se emplea según la presente invención contiene ventajosamente uno o más grupos electrofílicos reactivos colgantes. Normalmente la polioxazolina contiene de 0,03 a 0,5 grupos electrofílicos reactivos colgantes por monómero, más preferiblemente de 0,04 a 0,35 grupos electrofílicos reactivos colgantes por monómero, incluso más preferiblemente de 0,05 a 0,25 grupos electrofílicos reactivos colgantes por monómero.

[0074] El polietilenglicol (PEG), que comprende grupos electrofílicos reactivos que se aplica según la presente invención, es preferiblemente un PEG de múltiples brazos o un PEG en estrella, que comprende al menos 3 brazos, más preferiblemente al menos 4 brazos terminados con un grupo electrofílico reactivo.

[0075] El agente de reticulación nucleofílico en las partículas de polímero reactivo contiene normalmente al menos 3 grupos nucleofílicos reactivos, más preferiblemente al menos 5 grupos nucleofílicos reactivos, aún más preferiblemente al menos 10 grupos nucleofílicos reactivos, de la manera más preferible al menos 20 grupos nucleofílicos reactivos.

[0076] Los grupos nucleofílicos reactivos del agente de reticulación nucleofílico se seleccionan preferiblemente de grupos amino, grupos tiol, grupos fosfina y combinaciones de los mismos. Más preferiblemente, estos grupos nucleofílicos reactivos se seleccionan de grupos amino, grupos tiol y combinaciones de los mismos. Aún más preferiblemente, los grupos nucleofílicos reactivos son grupos amino. Estos grupos amino se seleccionan preferiblemente de grupos amino primarios, grupos amino secundarios y combinaciones de los mismos. Más preferiblemente, los grupos amino son grupos amino primarios.

[0077] El agente de reticulación nucleofílico tiene preferiblemente un contenido de nitrógeno de al menos un 1%en peso, más preferiblemente de 5 a 10 % en peso y de la manera más preferible de 15 a 25 % en peso.

[0078] En una forma de realización de la invención el agente de reticulación nucleofílico es una poliamina de bajo peso molecular que tiene un peso molecular inferior a 1,000 g/mol, más preferiblemente inferior a 700 g/mol y de la manera más preferible inferior a 400 g/mol. Ejemplos de poliaminas de peso molecular bajo adecuado incluyen dilisina; trilisina; tetralisina; pentalisina; dicisteína; tricisteína; tetracisteína; pentacisteína; oligopéptidos que comprenden dos o más residuos de aminoácidos seleccionados de lisina, ornitina, cisteína, arginina y combinaciones de los mismos, y otros residuos de aminoácidos; espermina; tris(aminometil)amina; arginina y combinaciones de los mismos.

[0079] Según otra forma de realización de la invención, el agente de reticulación nucleofílico es una poliamina con un alto peso molecular (> 1,000 g/mol) seleccionada del grupo de (NU-POX) de POx nucleofílicamente activado; polietilenglicol aminofuncionalizado, quitosano; derivados de quitosano (por ejemplo, polímeros de quitosano derivados de dicarboxi como se describe en la patente WO 2009/028965), polietilenoiminas; polivinilamina; polialilamina; poli(met)acrilatos aminofuncionalizados; sacáridos que contengan fracciones aminofuncionales como aminoglicósidos; polipéptidos que comprendan dos o más residuos de aminoácidos seleccionados de lisina, ornitina, cisteína, arginina y combinaciones de los mismos; y combinaciones de los mismos. La albúmina de fuente natural o recombinante es un ejemplo de un polipéptido que pueda emplearse adecuadamente como un polipéptido. La deoxistreptaminea 4,6-disustituída (Kanamicina A, Amicacina, Tobramicina, Dibekacina, Gentamicina, Sisomicina, Netilmicina), deoxistroptamina 4,5-di sustituida (Neomicinas B, C y Neomicina E (paromomicina)) y aminoglicósidos no deoxistreptamínicos, por ejemplo, estreptomicina, son ejemplos de aminoglicósidos que pueden ser empleados. De la manera más preferible, la poliamina de alto peso molecular es NU-POx.

[0080] En otra forma de realización de la invención el agente de reticulación nucleofílico empleado en el polímero reticulado es un politiol de bajo peso molecular que comprende 2 o más grupos tiol con un peso molecular inferior a 1,000 g/mol, más preferiblemente inferior a 700 g/mol y de la manera más preferible inferior a 400 g/mol. Ejemplos de poliaminas de bajo peso molecular adecuadas incluyen trimercaptopropano, etanoditiol, propaneditiol, éter de 2-mercaptoetilo, 2,2'-(etilenedioxi)dietanetiol, tetra(etilenglicol) ditiol, penta(etilenglicol) ditiol, ditiol de glicol de hexaetileno; pentaeritritol, dipentaeritritol, trimetilolpropano o ditrimetilolpropano modificados con tiol; oligopéptidos que contengan al menos dos residuos de cisteína.

[0081] Según otra forma de realización más de la invención, el agente de reticulación nucleofílico empleado en el polímero reticulado es un politiol con un alto peso molecular (> 1,000 g/mol) seleccionado del grupo de: NU-POx que comprende al menos dos grupos tiol; poli(met)acrilatos funcionalizados con tiol; polisacáridos que contienen fracciones funcionales de tiol, polipéptidos que comprenden dos o más residuos de cisteína.

[0082] Preferiblemente, el agente de reticulación nucleofílico es una poliamina alta de peso molecular seleccionada del grupo de (NU-POX) de POx nucleofílicamente activado; polietilenglicol aminofuncionalizado, quitosano; derivados de quitosano, polietilenoiminas; polivinilamina; polialilamina; poli(met)acrilatos aminofuncionalizados; sacáridos que contienen fracciones aminofuncionales; polipéptidos que comprenden dos o más residuos de aminoácidos seleccionados de lisina, ornitina, cisteína, arginina y combinaciones de los mismos; y combinaciones de los mismos. Más preferiblemente, el agente de reticulación nucleofílico se selecciona de NU-POx; polietilenglicol aminofuncionalizado; gelatina, colágeno, quitosano y combinaciones de los mismos.

[0083] El quitosano es un carbohidrato complejo, biodegradable, no tóxico derivado de quitina (poli-N-acetil-D-glucosamina), una sustancia de origen natural. El quitosano es la forma desacetilada de la quitina. El quitosano aplicado conforme a la presente invención tiene preferiblemente un grado de desacetilación de más del 70 %.

[0084] La poliamina de alto peso molecular comprende preferiblemente tres o más grupos amino, más preferiblemente 10 o más grupos amino, y más preferiblemente 20 o más grupos amino.

[0085] Según una forma de realización particularmente preferida, el agente de reticulación nucleofílico se selecciona de gelatina, colágeno, quitosano y combinaciones de los mismos. Aún más preferiblemente el agente de reticulación nucleofílico se selecciona de gelatina, colágeno y combinaciones de los mismos, prefiriéndose la gelatina. La gelatina se aplica preferiblemente en las partículas de polímero reactivo en forma de gelatina reticulada, más preferiblemente en forma de gelatina reticulada reducida. La gelatina reticulada reducida es una gelatina reticulada (gelfoam) que ha sido parcialmente hidrolizada. La hidrólisis parcial de los enlaces peptídicos en la gelatina reticulada se puede conseguir, por ejemplo, mediante un tratamiento alcalino. La hidrólisis de la gelatina reticulada resulta en un aumento en la densidad de grupos carboxilo y amino libres y en la solubilidad en agua.

[0086] Según una forma de realización preferida, el agente de reticulación nucleofílico contiene dos o más grupos amino reactivos y los grupos electrofílicos reactivos del polímero electrofílico se seleccionan de ésteres de ácido carboxílico, ésteres de sulfonato, ésteres de fosfonato, ésteres de pentafluorofenilo, ésteres de pnitrofenilo, ésteres de p-nitrotiofenilo, grupos haluro ácidos, anhídridos, cetonas, aldehídos, isocianato, tioisocianato, isociano, epóxidos, grupos hidroxilo activados, éteres glicidílicos, carboxilo, ésteres succinimidílicos, ésteres sulfosuccinimidílicos, ésteres de imido, derivados de dihidroxifenilo, y combinaciones de los mismos.

[0087] Según otra forma de realización preferida, el agente de reticulación nucleofílico contiene dos o más grupos tiol reactivos y los grupos electrofílicos reactivos del polímero electrofílico se seleccionan de haloacetales, disulfuro de ortopiridilo, maleimidas, sulfona de vinilo, derivados de dihidroxifenilo, vinilo, acrilato, acrilamida, yodoacetamida, ésteres succinimidílicos, ésteres sulfosuccinmidílicos y combinaciones de los mismos. Más preferiblemente, los grupos electrofílicos reactivos se seleccionan de ésteres succinimidílicos, ésteres sulfosuccinimidílicos, haloacetales, maleimidas, o derivados de dihidroxifenilo y combinaciones de los mismos. De la manera más preferible, los grupos electrofílicos reactivos se seleccionan de derivados de maleimidas o dihidroxifenilo y combinaciones de los mismos.

[0088] Además del polímero electrofílico soluble en agua y el agente de reticulación nucleofílico, las partículas de polímero reactivo pueden contener adecuadamente un polisacárido seleccionado de dextrano, alginato, celulosa oxidada (incluyendo celulosa regenerada oxidada (ORC)), hidroxietilcelulosa, hidroximetilcelulosa, ácido hialurónico; y combinaciones de los mismos. Preferiblemente, dicho polisacárido está contenido en las partículas de polímero reactivo en una concentración de al menos 15 % en peso, más preferiblemente de al menos 25 % en peso y de la manera más preferible de al menos 50 % en peso.

[0089] Las partículas de polímero reactivo que contienen el polímero electrofílico soluble en agua y el agente de reticulación nucleofílico se pueden producir a través de granulación húmeda y secado posterior, preferiblemente a presión reducida. El líquido de granulación debería ser elegido de manera que se produzcan pocas o ninguna reacción durante la granulación entre el polímero electrofílico y el agente de reticulación nucleofílico. Esto se puede conseguir, por ejemplo, utilizando un líquido de granulación en el que al menos uno de estos dos componentes sea insoluble. De la manera más preferible, el polímero soluble en agua que contiene grupos electrofílicos reactivos es insoluble en el líquido de granulación.

[0090] Según una forma de realización particularmente preferida, las partículas de polímero reactivo son aglomerados de partículas que comprenden: (i) partículas electrofílicas que contienen el polímero electrofílico soluble en agua; y (ii) partículas nucleofílicas que contienen el agente de reticulación nucleofílico.

[0091] Las partículas electrofílicas contienen preferiblemente al menos un 30 % en peso, más preferiblemente al menos un 50 % en peso y, de la manera más preferible, al menos un 80 % en peso del polímero electrofílico soluble en agua.

[0092] Las partículas nucleofílicas contienen preferiblemente al menos un 30 % en peso, más preferiblemente al menos un 50 % en peso y, de la manera más preferible, al menos un 80 % en peso del agente de reticulación nucleofílico.

[0093] Normalmente, las partículas híbridas reactivas según esta forma de realización tienen la siguiente composición:

(a) del 25 a 75 % en peso del polímero electrofílico soluble en agua;

(b) del 25 a 75 % en peso del agente de reticulación nucleofílico;

(c) del 0 a 50 % en peso polisacárido;

donde la combinación de los componentes (a) a (c) juntos constituyen al menos el 80 % en peso, más preferiblemente al menos el 90 % en peso de las partículas de polímero reactivo. Según una forma de realización particularmente preferida, el polímero electrofílico que se emplea en esta forma de realización es una polioxazolina (EL-POx).

[0094] Las partículas de polímero reactivo contienen preferiblemente polímero electrofílico soluble en agua y el agente de reticulación nucleofílico en cantidades tales que la relación entre el número total de grupos electrofílicos reactivos proporcionado por el polímero electrofílico soluble en agua y el número total de grupos nucleofílicos reactivos proporcionado por el agente de reticulación nucleofílico se encuentra en el rango de 1:1,5 a 1,5:1, más preferiblemente en el rango de 1:1,2 a 1,2:1 y de la manera más preferible en el rango de 1:1,1 a 1,1:1.

[0095] Conforme a otra forma de realización ventajosa, las partículas de polímero reactivo contienen un sistema de tampón seco. Preferiblemente, el sistema de tampón tiene un pH de tampón en el rango de 7 a 11, más preferiblemente en el rango de 8 a 10. Preferiblemente, el sistema de tampón tiene una capacidad tamponadora de al menos 10 mmol.l-1.pH-1. Más preferiblemente, la capacidad del tampón es de al menos 25 mmol.l- 1.pH-1, de la manera más preferible la capacidad del tampón es de al menos 50 mmol.l-1.pH-1.

[0096] Según una forma de realización particularmente preferida de la presente invención, la estructura portadora fibrosa comprende fibras que contienen celulosa oxidada y las partículas de polímero reactivo contienen EL-POx en combinación con un agente de reticulación nucleofílico. Preferiblemente el agente de reticulación nucleofílico se selecciona de NU-POx; polietilenglicol aminofuncionalizado; gelatina; colágeno y combinaciones de los mismos.

[0097] En otra forma de realización preferida, las partículas de polímero reactivo contienen al menos un 25 % en peso, de la manera más preferible al menos un 50 % en peso de gelatina, preferiblemente en forma de gelatina reticulada reducida.

[0098] Los inventores han descubierto de forma imprevista que puede obtenerse una lámina hemostática que tiene propiedades adhesivas particularmente deseables utilizando partículas de polímero reactivo que contienen de 1 a 20 % en peso, más preferiblemente de 2,5 a 15 % en peso y de la manera más preferible de 5 a 10 % en peso de un polímero no iónico no reactivo. Este polímero no iónico no reactivo no contiene grupos electrofílicos reactivos ni grupos nucleofílicos reactivos.

[0099] En una forma de realización muy preferida, las partículas de polímero reactivo se recubren con el polímero no iónico no reactivo.

[0100] El polímero no iónico no reactivo tiene preferiblemente un punto de fusión en el rango de 40 a 70°C, más preferiblemente en el rango de 45 a 65°C y de la manera más preferible en el rango de 50 a 60°C. Aquí el punto de fusión se refiere a la temperatura a la que el polímero se derrite completamente.

[0101] Los ejemplos de polímeros no iónicos no reactivos que se pueden aplicar adecuadamente en las partículas de polímero reactivo de la presente invención incluyen poloxámeros, polietilenglicoles y combinaciones de los mismos. El poloxámero es un copolímero tribloque no iónico compuesto por una cadena hidrófoba central de polioxipropileno (óxido de polipropileno)) flanqueada por dos cadenas hidrófilas de polioxietileno (poli(óxido de etileno)) y está representado por la fórmula (I)

donde a es un número entero de 10 a 110 y b es un número entero de 20 a 60. Cuando a es 80 y b es 27, este polímero se conoce como poloxámero 188. Otros poloxámeros conocidos útiles en la presente invención son el poloxámero 237 (a = 64; y b = 37), el poloxámero 338 (a = 141; y b = 44) y el poloxámero 407 (a = 101; y b = 56). Otros poloxámeros adicionales que se conocen y pueden ser útiles en la presente invención incluyen el poloxámero 108, el poloxámero 182, el poloxámero 183, el poloxámero 212, el poloxámero 217, el poloxámero 238, el poloxámero 288, el poloxámero 331, el poloxámero 338 y el poloxámero 335.

[0102] Según una forma de realización particularmente preferida, el polímero no iónico no reactivo es un poloxámero, aún más preferiblemente un poloxámero con una masa molecular media de 2,000 a 18,000, de la manera más preferible un poloxámero con una masa molecular media de 7,000 a 10,000.

[0103] El poloxámero aplicado en los aglomerados de partículas es preferiblemente un sólido a temperatura ambiente.

[0104] Otro aspecto de la presente invención se refiere a un paquete sellado que contiene una o más láminas hemostáticas según la presente invención.

[0105] Otro aspecto más de la invención se refiere a un método de preparación de una lámina hemostática, comprendiendo dicho método:

• proporcionar una lámina de estructura portadora fibrosa cohesiva como se ha definido anteriormente;

• proporcionar partículas de polímero reactivo como se ha definido anteriormente; y

• distribuir las partículas de polímero reactivo dentro del espacio intersticial de la estructura portadora fibrosa.

[0106] Las partículas de polímero reactivo se pueden distribuir dentro del espacio intersticial usando un método seco o un método húmedo, prefiriéndose el método seco. En el método seco, las partículas de polímero reactivo se aplican en forma de polvo y este polvo se dispersa en seco a través del espacio intersticial.

[0107] Según una forma de realización preferida de este método seco, las partículas de polímero reactivo se distribuyen dentro del espacio intersticial de la estructura portadora fibrosa agitando o haciendo vibrar la lámina de la estructura portadora fibrosa.

[0108] Conforme a otra forma de realización del método seco, la lámina hemostática se prepara mediante un método de laminación que comprende:

a) proporcionar una lámina de estructura portadora fibrosa,

b) depositar una capa de las partículas de polímero reactivo sobre la lámina de estructura portadora fibrosa;

c) superponer otra lámina de estructura portadora fibrosa sobre la capa de partículas de polímero reactivo;

y

opcionalmente repetir las etapas b) y c) una o más veces.

[0109] La distribución de las partículas de polímero reactivo en el laminado así obtenido se puede promover agitando o haciendo vibrar el laminado.

[0110] En el método húmedo de distribución de partículas de polímero reactivo, se utiliza una dispersión de las partículas de polímero reactivo en un líquido orgánico de bajo punto de ebullición para impregnar la estructura portadora fibrosa, seguido de la evaporación del líquido orgánico de bajo punto de ebullición, preferiblemente a presión reducida. Normalmente, el líquido orgánico de bajo punto de ebullición tiene un punto de ebullición a presión atmosférica inferior a 150°C, más preferiblemente inferior a 98°C y de la manera más preferible inferior a 80°C.

[0111] Preferiblemente, en el presente método la estructura portadora que contiene las partículas de polímero reactivo distribuidas se calienta a una temperatura superior a la temperatura del vidrio del polímero electrofílico soluble en agua durante al menos 5 minutos. Al calentar las partículas de polímero reactivo de esta manera, las partículas se volverán pegajosas y se adherirán a la estructura portadora fibrosa. Normalmente, las partículas de polímero se calientan a una temperatura de al menos 40°C, más preferiblemente de 50 a 80°C durante al menos 15 minutos.

[0112] El presente método comprende preferiblemente la esterilización de la lámina hemostática. La lámina hemostática se puede esterilizar antes del envase aséptico. Alternativamente, la lámina se puede esterilizar dentro de un envase sellado.

[0113] La invención se ilustra mediante los siguientes ejemplos no limitativos.

EJEMPLOS

[0114] Las láminas hemostáticas no que comprenden una estructura portadora fibrosa cohesiva que comprende un espacio intersticial interconectado tridimensional y una pluralidad de partículas de polímero reactivo que comprenden (i) y (ii) distribuidas dentro del espacio intersticial según la reivindicación 1 no son parte de la invención reivindicada.

[0115] En general: donde no se mencione explícitamente el contenido de humedad residual (en polvo seco, granulado y/o estructuras portadoras fibrosas cohesivas) después del secado, los niveles están por debajo de 2,0 % p/p.

Preparación de NHS-POx

[0116] El terpolímero de poli[2-(etil/hidroxi-etil-amida-etil/NHS-éster-etilo-éster-etil-amida-etil)-2-oxazolina] activado con cadena lateral NHS que contenía un 20 % de grupos éster NHS (= EL-POx, 20 % NHS) se sintetizó de la siguiente manera:

Se sintetizó un copolímero de poli[2-(2-(etil/metoxi-carbonil-etil)-2-oxazolina] (GP = /-100) mediante CROP usando 2- etil-2-oxazolina (EtOx) al 60 % y 2-metoxicarbonil-etil-2-oxazolina (MestOx) al 40 %. Se obtuvo un copolímero estadístico que contenía un 40 % de grupos 2-metoxicarbonil-etilo (1H-RMN). En segundo lugar, el polímero que contenía un 40 % de grupos 2-metoxicarbonil-etilo se hizo reaccionar con etanolamina, lo que produjo un copolímero con un 40 % de grupos 2-hidroxi-etil-amida-etilo (1H-RMN). Después de eso, la mitad de los grupos 2-hidroxi-etil-amida-etilo se hizo reaccionar con anhídrido succínico, lo que produjo un terpolímero con un 60 % de grupos 2-etilo, un 20 % de grupos 2-hidroxi-etil-amida-etilo y un 20 % de grupos 2-carboxi-etil-ésteretil-amida-etilo según 1H-RMN. Finalmente, los grupos 2-carboxi-etil-éster-etil-amida-etilo se activaron con N-hidroxisuccinimida (NHS) y diisopropilcarbodiimida (DIC), lo que produjo EL-POx, NHS al 20 %. La NHS-POx contenía un 20 % de grupos éster NHS según 1H-RMN. Se disolvió NHS-POx entre 2 y 8 °C en agua (60 g en 300 mL), se enfrió a menos 80 °C durante media hora y se liofilizó. El polvo liofilizado obtenido de esta manera se secó en un Rotavap a 40 °C hasta que el contenido de agua estuvo por debajo del 0,8 % p/p según se determinó mediante titulación de Karl Fischer. Este polvo seco (blanco) se trituró usando un molino de bolas (Retch MM400) hasta que el tamaño de partícula promedio no superara los 40 |_im (D [4,3]) y se selló al vacío en bolsas de aluminio.

Secado del polvo de NHS-Pox

[0117] 20 gramos de polvo de NHS-POx se disolvieron en agua y se mezclaron con 50 mg de Brilliant Blue R (Sigma Aldrich) utilizando un instrumento de dispersión de alto rendimiento (Ultra-Turrax, IKA). Directamente después de mezclar (2 minutos), la solución se congeló a -78 °C y posteriormente se liofilizó durante toda la noche. El polvo liofilizado obtenido de esta manera se secó en un Rotavap a 40 °C hasta que el contenido de agua residual estuvo por debajo del 0,8 % p/p según se determinó mediante titulación de Karl Fischer. A continuación, el polvo seco (azul) se trituró usando un molino de bolas (Retsch MM400) hasta obtener un polvo de NHS-POx teñido de azul que tenía un tamaño promedio de partícula no superior a 40 |_im (D [4,3]) y se selló al vacío en bolsas de aluminio.

Preparación de NU-POx

[0118] La polioxazolina que contiene grupos etilo y amino en la cadena lateral alquilo se sintetizó mediante CROP de EtOx y MestOx y la posterior amidación de las cadenas laterales de éster metílico con etilenodiamina para producir un copolímero de poli(2-etil/aminoetilamidoetil-2-oxazolina) (NU-POx). La NU-POx contenía NH2 al 10 % según 1H-RMN. Se disolvió NU-POx a una temperatura entre 2 y 8 °C en agua (60 g en 300 ml), se enfrió a menos 80 °C durante media hora y se liofilizó. El polvo liofilizado obtenido de esta manera se secó en un Rotavap a 40 °C hasta que el contenido de agua estuvo por debajo del 0,8 % p/p según se determinó mediante titulación de Karl Fischer. Este polvo seco se trituró en una trituradora de mesa hasta que el tamaño promedio de partícula no fue superior a 100 |_im (D [4,3]) y se selló al vacío en bolsas de aluminio.

Preparación de gránulos reactivos de NHS-POx / NU-POx

[0119] Se humedeció polvo de NHS-POx azul o blanco (sin teñir) con alcohol isopropílico (IPA) en un mezclador de alto cizallamiento hasta que se obtuvo un polvo homogéneo similar a la nieve que contenía aproximadamente de 1 a 2 % p/p de IPA. Después de esto, se añadió polvo NU-POx y se mezcló. El polvo de NHS-POx azul humedecido se mezcló con polvo de NU-POx en una relación molar de 1:0,6, dicha relación molar se refiere a la relación entre el número de grupos NHS proporcionados por NHS-POx y el número de grupos amino proporcionados por el NU-POx. El polvo de NHS-POx humedecido sin teñir también se mezcló con polvo de NU-POx en otras proporciones molares (1:0,8; 1:1 y 1:1,2).

[0120] Después de mezclar, los granulados húmedos se secaron a presión reducida hasta que el contenido de IPA fue inferior al 0,1 % p/p según lo determinado mediante 1H-RMN. Los granulados secos se trituraron utilizando un molino de bolas (Retch MM400) hasta que el tamaño de partícula promedio no superara los 50 |_im (D [4,3]) y se sellaron al vacío en bolsas de aluminio.

[0121] La distribución del tamaño de las partículas de los granulados así obtenidos fue aproximadamente: 90 % en volumen < 20 |_im, 70 % en volumen < 10 |_im y 40 % en volumen < 5 |_im.

[0122] El granulado de NHS-POX/NU-POx (1:1) se analizó utilizando espectroscopia de 1H-RMN. Se disolvieron 25 mg de granulado en ácido trifluoroacético (0,20 ml) mediante sonicación durante 20 minutos. Después de la disolución completa del granulado, la muestra se diluyó con dimetilsulfóxido deuterado (DMSO-cfe) que contenía ácido maleico (2,5 mg/ml) como estándar interno (0,80 ml), se transfirió a un tubo de RMN y se registró un espectro de 1H-RMN. A partir del espectro adquirido, se puede calcular la cantidad de NHS unida a NHS-POx, junto con la proporción molar de NHS y grupos amino presentes en el granulado. La cantidad de NHS unida a NHS-POx en el granulado fue igual a la cantidad de NHS unida a NHS-POx como material de partida, lo que indica que no se descompuso ni se reticuló durante la granulación.

[0123] La recuperación total del polímero, es decir, la combinación de NHS-POx y NU-POx en la muestra de RMN se determinó usando una cantidad conocida de estándar interno (ácido maleico) y una curva de calibración construida a partir de espectros de 1H-RMN registrados de NHS-POx y NU-POx en diferentes concentraciones. Se midió que la recuperación total de polímero era del 99 por ciento, lo que indica que no se formó material reticulado insoluble.

[0124] El granulado de NHS-POX/NU-POx (1:1) se analizó adicionalmente mediante cromatografía de exclusión por tamaño. Se trataron 20 mg del granulado con anhídrido acético (1,00 ml) durante 1 hora a 50 °C. Posteriormente, se añadió metanol (2,00 ml) y la mezcla se agitó durante una hora más a 50 °C. Se tomó una parte alícuota (0,75 ml) y se retiraron todos los volátiles a presión reducida. La muestra fue tomada en N,N-dimetilacetamida conteniendo 50 mM (2,50 ml) de cloruro de litio, que fue el eluyente para el análisis de SEC. La SEC se midió frente a estándares de poli(metacrilato de metilo) y, a partir del cromatograma de exclusión por tamaño obtenido, se determinaron el Mn, el Mw y el PDI. El PDI no fue superior a 1,5, lo que indica que no se había producido ninguna reticulación durante la granulación. La validación analítica de este método cromatográfico de exclusión por tamaño indicó que la reticulación intencional de NHS-POx con NU-POx a un nivel de 0,05 % molar aumentó el PDI a más de 2,5.

Preparación de gránulos reactivos de NHS-POx / NU-POx / P188

[0125] Los gránulos reactivos de NHS-POx / NU-POx se prepararon como se ha descrito anteriormente. Posteriormente, se preparó granulado de NHS-POx / NU-POx reactivo recubierto de P188 (2,5 % p/p o 5 % p/p de P188) calentando el granulado de NHS-POx / NU-POx junto con polvo de P188 en un mezclador de alto cizallamiento a 65 °C durante 10 minutos, seguido de enfriamiento hasta condiciones ambientales. El granulado recubierto fue triturado usando un molino de bola (Retch MM400) hasta que el tamaño de partícula medio no superó los 40 |_im (D [4,3]) y sellado al vacío en bolsas de aluminio.

[0126] La distribución del tamaño de las partículas de los granulados así obtenidos fue aproximadamente: 90 % en volumen < 80 |_im, 50 % en volumen < 40 |_im y 10 % en volumen < 10 |_im.

[0127] El granulado de NHS-POx/NU-POx/P188 (2,5 %) se analizó usando espectroscopía de 1H-RMN. Se disolvieron 25 mg de polvo en ácido trifluoroacético (0,20 ml) mediante sonicación durante 20 minutos. Después de la disolución completa del granulado, la muestra se diluyó con dimetilsulfóxido deuterado (DMSO-d6) (0,80 ml), se transfirió a un tubo de RMN y se registró un espectro de 1H-RMN. A partir del espectro obtenido, se calculó que la cantidad de NHS sin reaccionar era del 98 por ciento en comparación con la NHS-POx.

[0128] El granulado de NHS-POx/NU-POx/P188 (2,5 %) se analizó adicionalmente mediante cromatografía de exclusión por tamaño. Se trataron 20 mg del granulado con anhídrido acético (1,00 ml) durante 1 hora a 50 °C. Posteriormente, se añadió metanol (2,00 ml) y la mezcla se agitó durante una hora más a 50 °C. Se tomó una alícuota (0,75 ml) y se eliminaron todos los volátiles a presión reducida. La muestra fue tomada en N,N-dimetilacetamida conteniendo 50 mM (2,50 ml) de cloruro de litio, que fue el eluyente para el análisis SEC. La SEC se midió frente a estándares de poli(metil metacrilato) y a partir del cromatograma de exclusión por tamaño obtenido, se determinaron la Mn, la Mw y el PDI. El PDI no fue superior a 1,5 lo que indica que no se había producido ninguna reticulación durante la granulación.

Preparación de gelatina reticulada reducida (RXL)

[0129] La gelatina reticulada reducida (RXL) se preparó de acuerdo con tres procedimientos:

•Se disolvieron 12 g de polvo de gelatina (Gelita-SPONO, Gelita Medical GmbH) en 350 ml de una solución acuosa de hidróxido de sodio 0,1 molar agitando durante 2 horas a 40°C. Después de obtener una solución transparente, la mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y el pH se ajustó a 7 mediante la adición de 32,5 ml de una solución acuosa de ácido clorhídrico 1,0 molar. La solución se congeló instantáneamente usando nitrógeno líquido y se liofilizó. Posteriormente, el polvo fue molido en un molinillo de café, secado a presión reducida y sellado al vacío en una bolsa de aluminio. De ahora en adelante, esta gelatina reticulada reducida se denominará RXL-LS (bajo contenido en sal).

• Se disolvieron 12 g de polvo de gelatina (Gelita-SPONO, Gelita Medical GmbH) en 360 ml de una solución acuosa de hidróxido de sodio 1,0 molar agitando durante 10 minutos a 40°C. La solución transparente obtenida se enfrió a temperatura ambiente y el pH se redujo a 7 mediante la adición de 30 ml de una solución concentrada de ácido clorhídrico (37 % p/p). La solución se congeló instantáneamente usando nitrógeno líquido y se liofilizó. Posteriormente, el polvo fue molido en un molinillo de café, secado a presión reducida y sellado al vacío en una bolsa de aluminio. De ahora en adelante, esta gelatina reticulada reducida se denominará RXL-HS (alto contenido en sal).

Preparación de gránulos reactivos de NHS-POx / RXL (bajo y alto contenido en sal)

[0130] Los gránulos reactivos de NHS-POx/RXL se prepararon como sigue: se humedecieron 5 g de polvo azul de NHS-POx con IPA en un mezclador de alto cizallamiento hasta que se obtuvo un polvo homogéneo similar a la nieve que contenía aproximadamente de 1 a 2 % p/p de IPA. Después de esto, se añadieron y mezclaron 5 g de polvo RXL, RXL-LS o RXL-HS. Después de mezclar, los granulados húmedos se secaron a presión reducida hasta que el contenido de IPA fue inferior al 0,1 % p/p según lo determinado mediante 1H-RMN. Los granulados secos se molieron en un molinillo de café hasta que el tamaño de partícula promedio no superara los 90 |_im (D [4,3]) y se sellaron al vacío en bolsas de aluminio.

[0131] La distribución del tamaño de las partículas de los granulados así obtenidos fue aproximadamente: 90 % en volumen < 190 |_im, 50 % en volumen < 60 |_im y 10 % en volumen < 15 |_im.

[0132] El granulado que contenía RXL se analizó mediante análisis de espectroscopía 1H-RMN. Con este fin, a 25 mg del granulado se añadió cloroformo deuterado (CDCl3) que contenía ácido acético al 5 % (v/v) (1,0 ml). El NHS-POx se extrajo selectivamente sometiendo la muestra a ultrasonidos durante 20 minutos. La dispersión se pasó a través de un filtro de 0,22 |_im, se transfirió a un tubo de RMN y se registró un espectro 1H-RMN. A partir del espectro obtenido, se calculó que la cantidad de NHS sin reaccionar era del 98 por ciento en comparación con el NHS-POx.

[0133] La recuperación de NHS-POx en la muestra de RMN se determinó usando trimetilsilano como estándar interno y una curva de calibración construida a partir de espectros 1H-RMN de NHS-POx en diferentes concentraciones. Se midió que la recuperación total de NHS-POx era del 100 por ciento, lo que indica que no se formó material reticulado insoluble.

[0134] El granulado de NHS-POx/RXL se analizó adicionalmente mediante cromatografía de exclusión por tamaño. Por lo tanto, se tomó una alícuota (0,15 ml) de la solución utilizada para el análisis de espectroscopía 1H-RMN. Esta solución se diluyó con N,N-dimetilacetamida conteniendo cloruro de litio 50 mM (1,00 ml), que fue el eluyente para el análisis SEC. La SEC se midió frente a estándares de poli(metil metacrilato) y a partir del cromatograma de exclusión por tamaño obtenido, se determinaron la Mn, la Mw y el PDI. El PDI no fue superior a 1,5, lo que de nuevo indica que no se había producido reticulación durante la granulación.

Preparación de gránulos reactivos de NHS-POx / RXL que contienen carbonato

[0135] Primero, se preparó una mezcla 1:1 mol/mol de carbonato de sodio e hidrogenocarbonato de sodio disolviendo 25,31 g de carbonato de sodio y 20,06 g de hidrogenocarbonato de sodio en 350 ml de agua ultra pura. La solución se congeló instantáneamente en nitrógeno líquido y se liofilizó. El polvo resultante se secó a presión reducida y se selló al vacío en una bolsa de aluminio.

[0136] Los granulados de NHS-POx/RXL/carbonato se prepararon de la siguiente manera: se mezclaron 5 g de RXL-LS o RXL-HS y 0,178 g de carbonato de sodio/carbonato ácido de sodio utilizando un mezclador de alto cizallamiento. A continuación, se añadieron 5 g de NHS-POx azul que contenía aproximadamente de 1 a 2 % p/p de IPA y se mezcló hasta obtener un polvo homogéneo. Después de mezclar, los granulados húmedos se secaron a presión reducida hasta que el contenido de IPA fue inferior al 0,1 % p/p según lo determinado mediante 1H-RMN. Los granulados secos se molieron en un molinillo de café hasta que el tamaño de partícula promedio no superara los 100 |_im (D [4,3]) y se sellaron al vacío en bolsas de aluminio.

Preparación de gránulos reactivos de NHS-PEG / RXL (bajo contenido en sal)

[0137] Se mezclaron 0,62 gramos de RXL-LS con 0,88 gramos de NHS-PEG de 4 brazos MW 10k (ex Creative PEGWorks) en un mortero hasta que se obtuvo un polvo homogéneo; se añadieron y mezclaron aproximadamente 2 gotas de IPA. Después de mezclar, los granulados fueron secados a presión reducida y sellados al vacío en bolsas de aluminio.

Preparación de gránulos reactivos de NHS-PEG / RXL (bajo contenido en sal) que contienen carbonato[0138] Se mezclaron 0,62 gramos de RXL-LS con 0,12 gramos de una mezcla liofilizada 1:1 mol/mol de carbonato de sodio e hidrogenocarbonato de sodio en un mortero hasta que se obtuvo un polvo homogéneo. A continuación, se mezclaron 0,84 gramos de NHS-PEG de 4 brazos MW 10k (ex Creative PEGWorks) con el polvo de RXL / carbonato; se añadieron y mezclaron aproximadamente 2 gotas de IPA. Después de obtener un granulado homogéneo, fue secado a presión reducida y sellado al vacío en una bolsa de aluminio.

Estructuras portadoras fibrosas cohesivas

[0139] Se seleccionaron los siguientes productos hemostáticos disponibles en el mercado para usarse como estructuras portadoras fibrosas en la preparación de láminas hemostáticas según la presente invención:

• SURGICEL® SNoW™: una estructura portadora fibrosa cohesiva formada por un tejido no-tejido absorbible de fibras preparadas mediante la oxidación controlada de celulosa regenerada (ORC). Las dimensiones son de 5,1 cm x 10,2 cm y el contenido de agua no superaba el 2,0 % p/p

• SURGICEL® NU-KNIT®/ SURGICEL® SNoW™-Híbrido: un tejido absorbible denso hecho de fibras preparadas mediante la oxidación controlada de celulosa regenerada (ORC), disponible en varios tamaños (por ejemplo, 15,2 cm x 22,9 cm) tejido sobre SURGICEL® SNoW™ cortado a una dimensión de 5,1 cm x 10,2 cm.

• Se preparó una estructura portadora fibrosa cohesiva consistente en celulosa regenerada oxidada (ORC) y poliglactina 910 con unas dimensiones (longitud; ancho) de 97,0 a 102,5 mm y un grosor de 1,40 a 2,50 mm de la siguiente manera. El poli(láctico-co-glicólico) (PGL, 90/10 mol/mol) fue hilado en estado de fusión en fibra. Se consolidó un hilo multifilamento de 80 deniers en un hilo de 800 deniers. El hilo consolidado se rizó a aproximadamente 110° C. El hilo rizado se cortó en una fibra corta de una longitud de aproximadamente 1,25". Se pesaron 20 g de la fibra corta rizada con precisión y se colocaron uniformemente sobre la cinta transportadora de alimentación de una máquina de cardar multirodillo. Se controlaron las condiciones ambientales (temperatura: 21° C/55 % HR). A continuación, se cardó la fibra corta para crear una guata no tejida. La guata se retiró del rodillo de recogida y se cortó en 4 partes iguales. Estos se volvieron a introducir en la carda perpendicularmente a la dirección de recogida. Después de esta segunda pasada, se pesó la guata (19,8 g: rendimiento de tejido del 99 %) y luego se compactó hasta formar un fieltro. El fieltro compacto se colocó con precisión sobre un tejido de ORC y se fijó firmemente mediante 2 pasadas en el equipo de punzonado. La tela multicapa se recortó y se lavó en 3 baños discretos de alcohol isopropílico para retirar el acabado de hilado y cualquier aceite de máquina. La tela multicapa lavada se secó en un horno a 70 °C durante 30 minutos, se enfrió y se pesó. El contenido de agua fue no fue superior al 2,0 % p/p.

Experimentos de sangrado

[0140] Se utilizaron modelos de sangrado porcinoex vivoein vivoestandarizados para evaluar la eficacia hemostática. Todos los modelos usan heparina para aumentar el tiempo de coagulación de la sangre hasta aproximadamente 2 o 3 veces el tiempo de coagulación activado (ACT).

[0141] Modeloex vivo: modelo porcinoex vivoen tiempo real con un hígado fresco, perfundido con sangre fresca heparinizada procedente del matadero para imitar situaciones realesin vivode la manera más fiel posible. Los hígados se montan en una máquina de perfusión mediante la cual la oxigenación, el pH de la sangre, la temperatura y la presión arterial se mantienen dentro de los límitesin vivo. En el matadero se recogen dos hígados y 10 litros de sangre heparinizada (5000 unidades/l). Los hígados se transportan en hielo; la sangre a temperatura ambiente. En las dos horas posteriores a la recolección, se inspeccionan los hígados en busca de lesiones, que se cierran usando guantes y pegamento de cianoacrilato.

• Parámetros de perfusión: flujo 600 ml/min; presión 10-12 mmHg; temperatura 37 °C (+/- 1 °C);

carbógeno 0,25 litros por minuto

• Con una herramienta de abrasión plana, redonda y giratoria, se crea una herida sangrante circular (8 mm de diámetro) en la superficie del hígado, con una capa de goma para que la profundidad del sangrado perforado sea siempre de 3 mm.

• Después de perfundir adecuadamente el hígado (se verifica el color y la temperatura), las muestras se analizan según el siguiente procedimiento: cortar la muestra al tamaño correcto (2,7 por 2,7 cm); encender la cámara; marcar número de sitio en la cámara; realizar punción de biopsia de 8 mm; cortar la biopsia; retirar la sangre de la hemorragia con gasas (2x); recoger la sangre durante 30 segundos en gasa pesada previamente; puntuar el sangrado (2 investigadores); poner la muestra sobre el sangrado con una gasa previamente humedecida (solución salina) y mantenerla con poca presión durante 1 min; observar durante 5 minutos (verificar y puntuar la adhesión y la hemostasia) y repetir después de 30 minutos.

[0142] Modeloin vivo:rotura de bazo penetrante combinado estandarizado se inflige en cerdo anestesiado (cerdo doméstico, macho, rango de peso corporal: 40 kg, adulto).

[0143] Se realiza una laparotomía de línea media para acceder al bazo y otros órganos. Mediante un bisturí se realizan n=3 (S1...S3) lesiones subcapsulares estandarizadas (10 mm x 10 mm). Los productos hemostáticos se aplican con presión suave mediante una gasa prehumedecida (solución salina) y se mantienen durante 1 min. Después de la aplicación del producto, se evalúa el tiempo hasta la hemostasia (TTH). Si TTH es igual a cero, significa que después de 1 minuto ya se ha logrado la hemostasia por presión.

Sistema de puntuación para parches: Coagulación

[0144]

+++ Logrado inmediatamente después del taponamiento ++ Logrado <10 segundos después del taponamiento

+ Logrado <30 segundos después del taponamiento

Logrado dentro de los 3 minutos posteriores al taponamiento

/- Logrado después de 3 minutos, segundo taponamiento aplicado

- No logrado

Sistema de puntuación para parches: Adhesión 10 minutos después de la aplicación

[0145]

+++ Adhesión muy fuerte (el parche se rompe al retirarlo)

++ Adhesión fuerte (el parche se rompe al retirarlo)

+ Adhesión fuerte (el parche se puede retirar sin romperse)

Adhesión moderada (el parche se puede retirar sin romperse)

/- Adhesión leve (el parche se puede retirar sin romperse)

- No logrado

Ejemplo 1

Impregnación de estructuras portadoras con partículas de polímero teñidas

[0146] Una tamizadora vibratoria AS 300 (Retsch) fue accionada durante dos periodos consecutivos de 5 minutos cada un para introducir el polvo de NHS-POx teñido en las diferentes estructuras portadoras. Después de la producción, los parches hemostáticos se envasaron en bolsas de aluminio conteniendo 1 g de sílice y se sellaron al vacío.

[0147] Usando la máquina agitadora mencionada anteriormente, se introdujo el polvo azul de NHS-POx en tres estructuras portadoras diferentes:

• espuma de gelatina (Gelita Rapid®, Gelita Medical Alemania), una esponja;

• espuma de colágeno (Surgicoll®, MBP, Alemania), una esponja;

• estructura portadora fibrosa (SURGICEL® SNoW™, Ethicon, EE.UU)

[0148] Se observó que, después del tratamiento de agitación, el polvo azul de NHS-POx apenas había penetrado la espuma de gelatina ni la espuma de colágeno. Después de cortar la espuma con un bisturí, quedó claro que no había impregnación en profundidad. En cambio, el tratamiento de agitación había dispersado homogéneamente el polvo azul de NHS-POx por toda la estructura portadora fibrosa.

Ejemplo 2

[0149] Se impregnaron parches hemostáticos (SURGICEL® SNoW™; 5,1 x 10,2 cm, aprox. 0,37 gramos) con los granulados reactivos NHS-POx/NU-POx. La proporción molar entre NHS-POx y NU-POx en estos granulados varió de 1:0,6 a 1:2, refiriéndose dicha proporción molar a la relación entre el número de grupos NHS proporcionados por el NHS-POx y el número de grupos amino proporcionados por el NU-POx.

[0150] Se ditribuyó un gramo de granulado por los parches agitándolos en la tamizadora vibratoria AS 300 (Retsch) durante dos periodos consecutivos de 5 minutos cada uno. A continuación, los parches hemostáticos se envasaron en bolsas de aluminio conteniendo 1 g de sílice y se sellaron al vacío.

[0151] Los parches se cortaron en trozos de 2 x 2 cm y se evaluaron (n=3) en el modeloex vivode hígado perfundido. Se determinó el tiempo hasta la hemostasia tras 1 minuto de presión (TTH), la capacidad hemostática y la adhesión. El parche más eficaz (1:1 NHS-POx:NU-POx) también fue evaluado en el modeloin vivoporcino heparinizado tanto en resecciones de hígado como de bazo. Los resultados se muestran en la tabla 1.

Tabla 1

Ejemplo 3

[0152] Las estructuras portadoras fibrosas cohesivas consistentes en celulosa regenerada oxidada (ORC) y poliglactina 910 (aprox. 0,72 gramos), descritas anteriormente en el presente documento, se impregnaron con el granulado reactivo NHS-POx/NU-POx (1:1) o con el granulado NHS-POx/NU-POx (1:1) recubierto con un 5 % p/p de P188.

[0153] Se distribuyó un gramo de granulado por los parches agitándolos en la tamizadora vibratoria AS 300 (Retsch) durante dos periodos consecutivos de 5 minutos cada uno. A continuación, los parches hemostáticos se envasaron en bolsas de aluminio conteniendo 1 g de sílice y se sellaron al vacío.

[0154] Los parches se cortaron en trozos de 2,5 x 2,5 cm y se evaluaron en el bazo estandarizado y abrasiones de hígado usando el modelo porcinoin vivo.El bazo y el hígado se exteriorizaron a medida que el periodo de análisis progresaba. Ambos órganos se mantuvieron húmedos con esponjas o almohadillas empapadas de solución salina y/o un lavado salino. Se abrasionaron secciones apropiadamente dimensionadas, ~4 cm2, del parénquima hepático/bazo para provocar sangrado de moderado a grave. Las abrasiones fueron creadas por un bisturí quirúrgico. Se colocaron parches en contacto directo con el área de sangrado y se aplicó taponamiento manual durante 1 minuto. Se determinó el tiempo hasta la hemostasia después de 1 minuto de presión (TTH), la capacidad hemostática y la adhesión. Los resultados se muestran en la tabla 2.

Tabla 2

Ejemplo 4

[0155] Dos estructuras portadoras fibrosas cohesivas diferentes descritas anteriormente en el presente documento se impregnaron con diferentes polvos de polímeros reactivos. Las propiedades hemostáticas de los parches así obtenidos se evaluaron en los modelos de sangrado porcinoex vivoein vivodescritos anteriormente en el presente documento.

[0156] Las estructuras portadoras fibrosas usadas fueron:

• SW: SURGICEL® SNoW

• SURGICEL® NU-KNIT®/ SURGICEL® SNoW™-Híbrido

[0157] Estas estructuras portadoras fibrosas se impregnaron con 1,4 gramos de polvo usando un dispositivo de agitación neumático. La lámina de portador fibroso se hizo vibrar verticalmente. El motor del tipo de carrera larga (NTK 25 AL L, ex Netter Vibration GmbH) se accionó a 6 bares, 11 Hz y una amplitud de 30 mm. Se utilizaron cuatro ciclos de 15 segundos para dispersar el polvo en la estructura portadora fibrosa. Los granulados se distribuyeron a través del grosor completo de las láminas. Asimismo, la distribución sobre la superficie de las láminas fue homogénea.

[0158] Se evaluaron siete granulados de polímero reactivo diferentes. Estos granulados contenían un polímero electrofílico soluble en agua y un agente de reticulación nucleofílico. La preparación de estos granulados se ha descrito anteriormente en el presente documento.

[0159] Los granulados que se evaluaron se enumeran a continuación:

• NHS-POx / NU-POx

• NHS-POx / NU-POx conteniendo P188 (2,5 %)

• NHS-POx / NU-POx conteniendo carbonato y P188 (2,5 %)

• NHS-POx / RXL (alto contenido en sal)

• NHS-POx / RXL (alto contenido en sal) conteniendo carbonato

• NHS-POx / RXL (bajo contenido en sal)

• NHS-POx / RXL (bajo contenido en sal) conteniendo carbonato

[0160] Las diferentes combinaciones de estructura portadora fibrosa y polvos de polímero reactivo que se evaluaron se muestran en la tabla 3.

Tabla 3

[0161] Los parches que contenían granulado con P188 se fijaron a 65 °C durante 10 minutos para permitir que el P188 fundiera y fijara el granulado dentro del portador reduciendo así la friabilidad (es decir, la pérdida de granulado del portador debido al transportar y/o la manipulación). Las características de manipulación mecánica no se vieron influidas negativamente por el uso de una fijador polimérico de punto de fusión de baja temperatura como el P188.

[0162] Los resultados obtenidos con estos parches en los modelos de sangrado porcinoex vivoein vivose resumen en la tabla 4.

Tabla 4

Ejemplo 5

[0163] Se impregnaron parches hemostáticos (SURGICEL® SNoW™; 5,1 x 10,2 cm, peso promedio de 0,37 g) con un granulado de NHS-POX/NU-POx (1:1) o una mezcla en polvo de polvo de NHS-POx y polvo de NU-POx.

[0164] La mezcla en polvo de NHS-POx y NU-POx se preparó mezclando los dos polímeros como polvos secos usando un mortero. La relación molar entre NHS-POx y NU-POx en esta mezcla en polvo fue de 1:1, refiriéndose dicha relación molar a la relación entre el número de grupos NHS proporcionados por el NHS-POx y el número de grupos amino proporcionados por el NU-POx.

[0165] Los parches hemostáticos se impregnaron con 1,2 gramos del granulado o de la mezcla en polvo agitándolos en la tamizadora vibratoria AS 300 (Retsch) durante dos periodos consecutivos de 5 minutos cada uno. A continuación, los parches hemostáticos se envasaron en bolsas de aluminio conteniendo 1 g de sílice, y se sellaron al vacío.

[0166] Los parches se cortaron en trozos de 2 x 2 cm y se evaluaron (n=3) en el modeloex vivode hígado perfundido. Se determinaron el tiempo hasta la hemostasia después de 1 minuto de presión (TTH), la capacidad hemostática y la adhesión. Los resultados se muestran en la tabla 5.

Tabla 5

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Lámina hemostática biocompatible y flexible que comprende:

• una estructura portadora fibrosa cohesiva que comprende un espacio intersticial interconectado tridimensional; y

• distribuidas en el espacio intersticial, una pluralidad de partículas de polímero reactivo que comprenden (i) un polímero electrofílico soluble en agua que contiene al menos tres grupos electrofílicos reactivos que son capaces de reaccionar con grupos amino en el tejido y sangre bajo la formación de un enlace covalente, y (ii) un agente de reticulación nucleofílico que contiene al menos dos grupos nucleofílicos reactivos que son capaces de reaccionar con los grupos electrofílicos reactivos del polímero electrofílico bajo la formación de un enlace covalente, teniendo dichas partículas de polímero reactivo un diámetro comprendido entre 0,5 y 100 |_im y estando presentes en una cantidad de al menos el 3 % en peso de la estructura portadora fibrosa.

2. Lámina hemostática según la reivindicación 1, donde las fibras en la estructura portadora fibrosa tienen un diámetro medio de 1 a 500 |_im.

3. Lámina hemostática según la reivindicación 1 o 2, donde la estructura portadora fibrosa es una estructura de fieltro, una estructura tejida o una estructura de punto, preferiblemente una estructura de fieltro.

4. Lámina hemostática según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el polímero electrofílico se selecciona de polioxazolinas, polietilenglicoles, polivinilpirrolidonas, poliuretanos y combinaciones de los mismos.

5. Lámina hemostática según la reivindicación 4, donde el polímero electrofílico que comprende grupos electrofílicos reactivos es una polioxazolina.

6. Lámina hemostática según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde los grupos electrofílicos reactivos se seleccionan de ésteres de ácido carboxílico, ésteres de sulfonato, ésteres de fosfonato, ésteres de pentafluorofenilo, ésteres de p-nitrofenilo, ésteres de p-nitrotiofenilo, grupos haluro ácidos, anhídridos, cetonas, aldehídos, isocianato, tioisocianato, isociano, epóxidos, grupos hidroxilo activados, olefinas, ésteres glicidílicos, carboxilo, ésteres succinimidílicos, ésteres sulfo succinimidílicos, maleimido (maleimidilo), etenosulfonilo, ésteres de imido, acetoacetato, haloacetal, disulfuro de ortopiridilo, derivados de dihidroxifenilo, vinilo, acrilato, acrilamida, yodoacetamida y combinaciones de los mismos.

7. Lámina hemostática según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde las partículas de polímero reactivo contienen al menos un 10 % en peso del polímero electrofílico.

8. Lámina hemostática según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la estructura portadora fibrosa comprende fibras que contienen un polímero fibroso seleccionado de celulosa, celulosa modificada, carboximetildextrano, poli(ácido láctico-co-glicólico) (PLGA), hialuronato/carboximetilcelulosa de sodio, alcohol polivinílico y combinaciones de los mismos.

9. Lámina hemostática según la reivindicación 8, donde la estructura portadora fibrosa contiene al menos un 50 % en peso del polímero fibroso.

10. Lámina hemostática según la reivindicación 8 o 9, donde el polímero fibroso es celulosa oxidada, preferiblemente celulosa regenerada oxidada.

11. Lámina hemostática según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el agente de reticulación nucleofílico se selecciona de polioxazolina nucleofílicamente activada; polietilenglicol aminofuncionalizado; quitosano; derivados de quitosano; polietileniminas; polivinilamina; polialilamina; poli(met)acrilatos aminofuncionalizados; sacáridos que contengan fracciones aminofuncionales; polipéptidos que comprendan dos o más residuos de aminoácidos seleccionados de lisina, ornitina, cisteína, arginina y combinaciones de los mismos; y combinaciones de los mismos.

12. Lámina hemostática según la reivindicación 11, donde el agente de reticulación nucleofílico se selecciona de polioxazolina nucleofílicamente activada, gelatina, colágeno y combinaciones de los mismos.

13. Lámina hemostática según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde las partículas de polímero reactivo son aglomerados de partículas que comprenden: (i) partículas electrofílicas que contienen el polímero electrofílico soluble en agua; y (ii) partículas nucleofílicas que contienen el agente de reticulación nucleofílico.

14. Envase sellado que contiene una o más láminas hemostáticas según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13.

15. Método de preparación de una lámina hemostática, comprendiendo dicho método:

• proporcionar una lámina de estructura portadora fibrosa cohesiva como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3;

• proporcionar partículas de polímero reactivo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1, 4 a 7, y 11 a 13; y

• distribuir las partículas de polímero reactivo en el espacio intersticial de la estructura portadora fibrosa.