SK67397A3 - Interferon conjugate, preparation method thereof and pharmaceutical composition containing the same - Google Patents

Interferon conjugate, preparation method thereof and pharmaceutical composition containing the same Download PDF

Info

Publication number
SK67397A3
SK67397A3 SK673-97A SK67397A SK67397A3 SK 67397 A3 SK67397 A3 SK 67397A3 SK 67397 A SK67397 A SK 67397A SK 67397 A3 SK67397 A3 SK 67397A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
ifnα
peg
physiologically active
conjugate according
active peg
Prior art date
Application number
SK673-97A
Other languages
English (en)
Other versions
SK284458B6 (sk
Inventor
Pascal S Bailon
Alicia V Palleroni
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=21790006&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SK67397(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of SK67397A3 publication Critical patent/SK67397A3/sk
Publication of SK284458B6 publication Critical patent/SK284458B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka fyziologicky aktívneho konjugátu PEG-IFNa. Interferón, najmä interferón a2a je farmaceutický aktívny proteín s antivírusovým a antiproliferatívnym účinkom. Interferón sa napríklad používa na liečbu vlasových buniek leukémie a sarkómu Kaposi a pôsobí tiež proti hepatitíde. Pre zlepšenie stálosti a rozpustnosti a pre zníženie imunogenicity sa farmaceutický aktívne proteíny, ako interferón, môžu konjugovať na polymér polyetylénglykol (PEG).
Doterajší stav techniky
Biologická dostupnosť proteínových liečiv je často obmedzovaná ich krátkym polčasom životnosti v plazme, čo bráni dosiahnutiu ich maximálnej klinickej schopnosti. V posledných rokoch sa ukázalo, že biomolekuly konjugované na PEG majú klinicky užitočné vlastnosti [Inada a kol. J. Bioact. and Compatible Polymers 5, str. 343 (1990), Delgado a kol., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 9, str. 249 (1992), Katre, Advanced Drug Delivery Systems 10, str. 91 (1993)]. Medzi tieto vlastnosti patrí fyzikálna tepelná stálosť, ochrana voči náchylnosti k enzymatickej degradácii, zvýšená rozpustnosť, dlhší cirkulačný polčas životnosti in vivo, znížené vymiznutie a zlepšená potencia. Uvádza sa, že rozvetvené konjugáty PEG vykazujú zväčšenú stálosť k hodnote pH a tepelnú stálosť a väčšiu stabilitu voči proteolytickej digescii ako lineárne PEG konjugáty. [Monfardini a kol., Biočonjugate Chem. 6, str. 62 (1995)]. Inými vlastnosťami proteínov PEG sú znížená imonogenicita a antigenicita aj znížená toxicita. Iným účinkom PEGylácie určitých proteínov môže byť znížená aktivita in vitro, sprevádzaná zlepšenou aktivitou in vivo. To bolo pozorované napríklad v prípade G-CSF [Satake -Ishikawa a kol. , Celí Structure and Function 17, str. 157 až 160 (1992)], IL-2 [Katre a kol. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94, str. 1487 (1987)], TNF-a
- 2 [Tsutsumi a kol., Jpn. J. Cancer.
[Inoue a kol., J. Lab. Clin. Med.
[Chamow a kol., Bioconj. Chem. 5,
Res. 85, str. 9, (1994)], IL-6
124, str. 52.9 (1994 )] a CD4-IgG
Str.133 (1994)].
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa všeobecného vzorca I
II
ROCH2CH2(OCH2CH2)n—O-C —NH (CH2)4
L
R'OCH2CH2(OCH2CH2)n'—0—C—NH —x ,FNa o
kde znamená R a R’ na sebe nezávisle nižšiu alkylovú skupinu, X skupinu NH alebo atóm kyslíka (X je najmenej jedna funkčná skupinu v molekule IFNa zvolenej zo skupiny zahŕňajúcej NH2 alebo OH), n a n' sú čísla, ktorých súčet je 600 až 1500 a priemerná molekulová hmotnosť jednotiek polyetylénglykolu v konjugáte je približne 26000 až približne 66000 Daltonov. Konjugát všeobecného vzorca I má rozvetvenú štruktúru, pričom dva podiely PEG sú viazané na proteín jednoduchou väzbou.
S prekvapením sa totiž zistilo, že v prípade interferónu znižuje PEGylácia protivírusovú aktivitu in vitro, avšak zvyšuje antiproliferatívnu aktivitu v ľudských nádorových bunkách. Avšak nový konjugát PEG interferónu podľa vynálezu má prekvapivé vlastnosti v tom, že antiproliferatívna aktivita PEG interferónu je značne vyššia ako nielen samotného interferónu, ale aj iných PEG interferónových konjugátov. Napriek tomu, že je antiproliferatívna aktivita konjugátu značne zvýšená v porovnaní s inými PEG interferón-α konjugátmi, je zníženie protivírusovej aktivity podobné. Okrem toho PEG interferón-α konjugát podľa vynálezu je neimunogenický, nevyvoláva domnele žiadne tvorenie protilátok. Na rozdiel od toho iné PEG interferón-α konjugáty vyvolávajú obmedzenú tvorbu protilátok.
Vynález sa teda týka novej triedy PEG derivátov interferónu a (IFNa). Konjugát podľa vynálezu má rozvetvenú štruktúru PEG, ako je to ďalej uvedené. Rozvetvený PEG má tú prednosť, že dovoľuje pripojenie dvoch lineárnych molekúl PEG na osamotenom mieste, čím zdvojnásobuje hmotu pripojeného PEG bez niekoľkonásobných miest PEGylácie.
V porovnaní s nemodifikovaným IFNa (teda IFNa bez pripojeného PEG) má konjugát zvýšený cirkulačný polčas životnosti a čas zdržania v plazme, zníženú imonogenicitu, znížené vymiznutie a zvýšenú antiproliferatívnu aktivitu so sprievodnou zníženou protivírusovou aktivitou in vitro. V porovnaní s inými konjugátmi PEG-IFNa má konjugát podľa vynálezu značne väčšiu antiproliferatívnu aktivitu, neúmernú so zlepšením alebo znížením, ktoré sa vyskytuje v jeho iných vlastnostiach a domnele žiadnu imunogenicitu.
Druhy fyziologicky aktívneho konjugátu PEG-IFNa podľa vynálezu má hore uvedený všeobecný vzorec.
Konjugát podľa vynálezu má rovnaké použitie ako IFNa, napríklad antiproliferatívne využitie. Konjugáty PEG interferón-α podľa vynálezu sa hodia na liečbu imunomodulatorných ochorení, ako sú neoplastické ochorenia, napríklad leukémia vlasových buniek, CML a sarkóm Kaposi a infekčné ochorenia; na liečbu týchto chorôb sa rovnako používa IFNa (osobitne INFa2a). Avšak konjugát podľa vynálezu má zlepšené vlastnosti vrátane vynikajúcej stálosti, väčšej rozpustnosti, zvýšený cirkulačný polčas životnosti a čas rezidencie v plazme. Okrem toho majú tieto konjugáty antiproliferatívnu aktivitu podstatne väčšiu ako IFNa. Tiež, ako to už bolo uvedené, vykazuje konjugát prekvapujúcu disociáciu protivírusových a antiproliferatívnych javov. Táto vlastnosť sa prídavné hodí na zvýšenie žiadúcej aktivity konjugátu pri znižovaní alebo eliminovaní nežiaducej aktivity. Keď je napríklad nežiadúci vedlajsí účinok spojený s protivírusovým pôsobením, eliminácia tohto pôsobenia by eliminovala vedlajší účinok pri zachovaní antiproliferatívnej aktivity. Vynález teda preto zahŕňa tiež farmaceutické prostriedky na báze zlúčenín všeobecného vzorca I alebo ich solí a spôsoby ich výroby.
Farmaceutické prostriedky podlá vynálezu, používané na zvládnutie alebo prevenciu chorôb, zahŕňajú interferónový konjugát všeobecného vzorca I a terapeuticky inertný, netoxický a terapeuticky prijateľný nosič. Používané farmaceutické prostriedky môžu byť formulované a dávkované spôsobom konzistentným s dobrou lekárskou praxou pri uvážení liečeného ochorenia, stavu individuálneho pacienta, miesta podania proteínového konjugátu, spôsobu podania a iných činitelov známych z praxe.
Navrhovaným konjugátom je fyziologicky aktívny konjugát PEG IFNa všeobecného vzorca I, hore definovaný.
Čísla n a n' sú zvolené tak, že výsledný konjugát všeobecného vzorca I má fyziologickú aktivitu IFNa, ktorá môže predstavovať rovnakú, väčšiu alebo zlomok zodpovedajúcej aktivity nemodifikovaného IFNa. Čísla n a n' môžu byť rovnaké alebo rozdielne a predstavujú počet jednotiek etylénglykolu v PEG. Samotná jednotka PEG OCH2CH2 má molekulovú hmotnosť približne 44 Daltonov. Molekulová hmotnosť konjugátu (s vylúčením molekulovej hmotnosti IFNa) závisí od čísel n a n'. Súčet čísel n a n' pre konjugát všeobecného vzorca I je 600 až 1500, čo produkuje konjugát s celkovou strednou molekulovou hmotnosťou jednotiek PEG 26000 až 66000, s výhodou približne 35000 až 45000 a najmä približne 39000 až 45000 Daltonov, pričom osobitne výhodná je molekulová hmotnosť 40000 Daltonov. Výhodným súčtom čísel n a n' je približne 800 až 1200, pričom stredný súčet je približne 850 až 1000 a výhodným súčtom je 910. Každé z čísel n a n' môže byť jednotlivo 420 alebo 520, alebo môžu byť obidve 420 alebo 520, alebo môžu byť obidve 455. Výhodný pomer čísel n k n' je približne 0,5 až 1,5 a osobitne výhodný je pomer približne 0,8 až 1,2. Molekulová hmotnosť približne určité číslo znamená, že je v rozumnom rozmedzí takého čísla určeného obvyklými analytickými technikami.
Výhodným konjugátom všeobecného vzorca I, kde IFNa je IFNa2a, je konjugát kde symboly R a R' znamenajú metylovú skupinu, konjugát, kde X je NH a konjugát kde čísla n a n' sú každé samotné alebo obidve buď 4 20 alebo 520. Taký konjugát majúci všetky uvedené vlastnosti je osobitne výhodný.
Symboly R a R' môžu znamenať ktorúkoľvek nižšiu alkylovú skupinu, čím sa rozumie alkylová skupina s 1 až 6 atómami uhlíka, ako je napríklad skupina metylová, etylová a izopropylová. Zahrnuté sú rozvetvené alkyly. Výhodnou alkylovou skupinou je skupina metylová. Pokiaľ ide o dve skupiny PEG vo vzorci I môžu byť symboly R a R' rovnaké alebo rozdielne.
IFNa (interferónom a) a jeho druhom IFNa2a je mienený prírodný rekombinantný proteín, s výhodou ľudský, ktorý je získaný z bežného zdroja ako sú tkanivá, syntézy proteínov, kultivácia buniek s prírodnými alebo rekombinantnými bunkami. Zahrnutý je každý proteín majúci aktivitu IFNa, ako sú muteíny alebo inak modifikované proteíny. Získavanie a izolácia IFNa z prírodných alebo rekombinantných zdrojov sú dobre známe [Pestka, Árch. Biochem. Biophys. 221, str. 1 (1983)]. Výhodným IFNa je IFNa2a, ktorý, ako je to hore uvedené, sa získava známymi spôsobmi [Pestka, Sci. Am. 249, str. 36 (1983), európsky patentový spis číslo 43980)].
Fyziologicky aktívny konjugát všeobecného vzorca I má aktivitu IFNa, ktorou sa rozumie zlomok alebo násobok ktorejkoľvek známej aktivity IFNa, tak ako je zistená rôznymi skúškami známymi v odbore. Konjugáty podľa vynálezu majú najmä aktivitu IFNa, ako je ukázaná antiproliferatívnym pôsobením proti nádorovým bunkám a protivírusovým pôsobením proti bunkám, ktoré sú infikované ví rusom. To sú známe aktivity IFNa. Taká aktivita v konjugáte môže byť zistená skúškami dobre v odbore známymi, napríklad ďalej opísanými skúškami [napríklad Rubinstein a kol. J. Virol. 37, str.
755 (1981), Borden a kol., Canc. Res. 42, str. 4948 (1982)]. Vynález sa týka konjugátu všeobecného vzorca I, ktorý má väčšie antiproliferatívne pôsobenie a menšie protivírusové pôsobenie ako nemodifikovaný IFNa.
Konjugát všeobecného vzorca I je vytvorený kovalentnou väzbou IFNa na PEG, ktorý bol aktivovaný nahradením hydroxylu PEG väzbovou skupinou, tvoriacou reakčné činidlo, ktorým je derivát PEG esteru N-hydroxysukcínimidu (najmä monometoxy PEG) všeobecného vzorca II. Reakčné činidlo je možné získať bežnými spôsobmi (Montfardini a kol.). Väzbou je amidová alebo esterová väzba. Pri výhodnom konjugáte je väzbou amidová väzba (X je NH). Súčasťou vynálezu je spôsob zvyšovania antiproliferatívnej aktivity IFNa pri znižovaní protivírusovéj aktivity IFNa viazaním IFNa, ako je to hore opísané, na reakčné činidlo všeobecného vzorca II pre vytvorenie konjugátu PEG-IFN.
X znamená miesto pripojenia na IFNa, v ktorom je reakčné činidlo PEG všeobecného vzorca II kovalentne viazané na IFNa. Reakčné činidlá sa pripojujú k primárnym amínovým skupinám (XH = NH2) napríklad na lyzín alebo na N-zakončenie IFNa. Reakčné činidlá sa môžu pripojovať tiež na hydroxylovú skupinu (XH = OH) napríklad na serín.
ROCH2CH2(OCH2CH2)n —O-C—IjlH (CH2)4 (II)
ROCH2CH2(OCH2CH2)n--
+ XH-IFNcc o
Ο II
ROCH2CH2(OCH2CH2)n—O-C-NH (CH2)4
(I)
ROCH2CH2(OCH2CH2)n.
—X— IFNa
Reakčné činidlo všeobecného vzorca II (PEG2-NHS), kde celkom dva reťazce monometoxy PEG (m-PEG) sú viazané na lyzín, jeden na α-aminoskupinu a druhý na epsilon-aminoskupinu karbamátovými (uretanovými) väzbami a majúce lyzínkarboxylovú skupinu aktivovanú na sukcinimidylester, je možné získať bežnými spôsobmi, podľa známych postupov (Montfardini a kol.) aplikovateľnými na reakčné činidlo s R ako nižšou alkylovou skupinou a s požadovaným číslom n. Reakčné činidlo je obchodným produktom spoločnosti Shearwater Polymers, Inc. (Huntsville, Alabama). Získaná výhodná stredná molekulová hmotnosť PEG je približne 40000 Daltonov v PEG2-NHS (iné molekulové hmotnosti je možné získať menením čísla n pri východiskových materiáloch PEG-alkoholu pre reakčné činidlo všeobecného vzorca II, bežnými spôsobmi).
Reakčné činidlo všeobecného vzorca II môže byť konjugované na IFNa bežnými spôsobmi. Špecificky reaguje reakčné činidlo všeobecného vzorca II prednostne s aspoň jednou primárnou aminoskupinou IFNa (napríklad N-zakončenie a lyzínové postranné reťazce) (napríklad IFNa2a) pre vytvorenie amidovej väzby medzi IFNa a polymérovou kostrou PEG. PEGylačná reakcia môže tiež prebehnúť medzi PEG2-NHS a prípadnými voľnými hydroxylovými skupinami (napríklad serínom) IFNa pre vytvorenie esterovej väzby. Reakčný mechanizmus je uvedený hore. Podmienky reakcie sú pre pracovníka v odbore bežné a podrobne sú opísané ďalej. Reakčné činidlo PEG sa kombinuje s IFNa za mierne zásaditých podmienok pri nízkej teplote za podmienok vhodných k nukleofilnej substitúcii, ktorá vytvorí konjugát všeobecného vzorca I, ako to objasňuje hore uvedený reakčný mechanizmus.
Pripojovanie reakčných činidiel k IFNa je možné vykonávať obvyklými spôsobmi. Použiť je možné PEG akejkoľvek zvolenej molekulovej hmotnosti podľa vynálezu. Podmienky reakcie je možné voliť pre zaistenie navrhovaného konjugátu s jedným pripojeným reakčným činidlom. Konjugát všeobecného vzorca I, ktorý má pripojené jedno reakčné činidlo všeobecného vzorca II, sa oddelí od nemodifikovaného IFNa a konjugáty majúce pripojenú viacej ako jednu molekulu reakčného činidla sa oddelia bežnými spôsobmi. Na oddeľovanie konjugátov rozdielom nábojov sa dajú použiť čistiace metódy, ako je katexová chromatografia, ktorá účinne oddeľuje konjugáty na základe ich rôznej molekulovej hmotnosti. Obsah frakcií, získaných katexovou chromatografiou, môže byť identifikovaný molekulovou hmotnosťou pomocou obvyklých metód, napríklad hmotovou spektroskopiou, SDS-PAGE, alebo inými známymi metódami oddeľovania molekulových entít podľa molekulovej hmotnosti. Podľa toho je potom identifikovaná frakcia, ktorá obsahuje konjugát všeobecného vzorca I vyčistený od nemodifikovaného IFNa a od konjugátov majúcich pripojených viacej ako jedno reakčné činidlo. Okrem toho reakčné činidlá všeobecného vzorca II uvoľňujú jeden lyzín na reakčné činidlo pri kyselinovej hydrolýze, takže počet lyzínov v hydrolýze indikuje počet PEG pripojených k proteínu, a preto je možné overiť počet molekúl reakčného činidla pripojených ku konjugátu.
Vynález bližšie objasňujú, žiadnym spôsobom však neobmedzujú, nasledujúce príklady praktického rozpracovania pomocou priložených obrázkov.
Prehľad obrázkov
Na obr. 1 je znázornené protinádorové pôsobenie PEG-IFNa2a u myší, ktorým boli implantované subkutánne ľudské obličkové bunky A498.
Všetky zvieratá dostali subkutánny implant 2xl06 ľudských obličkových buniek A498 v štúdijnom dni -33. V štúdijnom dni 0 sa začalo s ošetrovaním PEG-IFNa2a. Vyznačené množstvo (30, 60, 120 alebo 300 pg) PEG-IFNa2a sa aplikovalo subkutánne pod protiľahlý bok nádoru raz týždne počas 4 týždňov.
Na ose x je počet dni a na ose y objem nádoru v cm .
A neošetrená kontrola
B ošetrenie 30 μα PEG-IFNa2a
C ošetrenie 60 μα PEG-IFNa2a
D ošetrenie 120 μα PEG-IFNa2a
E ošetrenie 300 μα PEG-IFNa2a
Na obr. 2 je znázornené protinádorové pôsobenie PEG-IFNa2a u myší, ktorým boli implantované subkutánne ľudské obličkové bunky A498. Všetky zvieratá dostali subkutánny implant 2xl06 ľudských obličkových buniek A498 v štúdijnom dni -33. V štúdijnom dni 0 sa začalo s ošetrovaním PEG-IFNa2a. Vyznačené množstvo (10, 20, 40 alebo 100 pg) PEG-IFNa2a sa aplikovalo subkutánne pod protiľahlý bok nádoru trikrát týždne počas 4 týždňov.
Na ose x je počet dni a na ose y objem nádoru v cm .
A neošetrená kontrola
B ošetrenie 10 μα PEG-IFNa2a
C ošetrenie 20 μα PEG-IFNa2a
D ošetrenie 40 μα PEG-IFNa2a
E ošetrenie 100 μα PEG-IFNa2a
Na obr. 3 je znázornené protinádorové pôsobenie PEG-IFNa2a u myší, ktorým boli implantované subkutánne ľudské obličkové bunky ACHN. Všetky zvieratá dostali subkutánny implant 2xl06 ľudských obličkových buniek ACHN v štúdijnom dni -25. V štúdijnom dni 0 sa začalo s ošetrovaním PEG-IFNa2a. Vyznačené množstvo (30, 60, 120 alebo 300 pg) PEG-IFNa2a sa aplikovalo subkutánne pod protiľahlý bok nádoru raz týždne počas 5 týždňov.
Na ose x je počet dní a na ose y objem nádoru v cm3.
A neošetrená kontrola
B ošetrenie 30 μg PEG-IFNa2a
C ošetrenie 60 μg PEG-IFNa2a
D ošetrenie 120 μ9 PEG-IFNa2a
E ošetrenie 300 μρ PEG-IFNa2a
Na obr. 4 je znázornené protinádorové pôsobenie PEG-IFNa2a u myší, ktorým boli implantované subkutánne ľudské obličkové bunky ACHN. Všetky zvieratá dostali subkutánny implant 2xl06 ľudských obličkových buniek ACHN v štúdijnom dni -25. V študijnom dni 0 sa začalo s ošetrovaním PEG-IFNa2a. Vyznačené množstvo (10, 20, 40 alebo 100 μ9) PEG-IFNa2a sa aplikovalo subkutánne pod protiľahlý bok nádoru trikrát týždne počas 5 týždňov.
Na ose x je počet dní a na ose y objem nádoru v cm3.
A neošetrená kontrola
B ošetrenie 10 μα PEG-IFNa2a
C ošetrenie 20 μα PEG-IFNa2a
D ošetrenie 40 μα PEG-IFNa2a
E ošetrenie 100 μα PEG-IFNa2a
Na obr. 5 je znázornené protinádorové pôsobenie PEG-IFNa2a u myší, ktorým boli implantované subkutánne ľudské obličkové bunky G402. Všetky zvieratá dostali subkutánny implant 2xl06 ľudských obličkových buniek G402 v štúdijnom dni -45. V štúdijnom dni 0 sa začalo s ošetrovaním PEG-IFNa2a. Vyznačené množstvo (30, 60, 120 alebo 300 μ9) PEG-IFNa2a sa aplikovalo subkutánne pod protiľahlý bok nádoru raz týždne počas 5 týždňov.
Na ose x je počet dní a na ose y objem nádoru v cm3.
A neošetrená kontrola
B ošetrenie 30 μα PEG-IFNa2a
C ošetrenie 60 μα PEG-IFNa2a
D ošetrenie 120 μα PEG-IFNa2a
E ošetrenie 300 μα PEG-IFNa2a
Na obr. 6 je znázornené protinádorové pôsobenie PEG-IFNa2a u myší, ktorým boli implantované subkutánne ľudské obličkové bunky G402.
Všetky zvieratá dostali subkutánny implant 2xl06 ľudských obličkových buniek G402 v štúdijnom dni -45. V štúdijnom dnu 0 sa začalo s ošetrovaním PEG-IFNa2a. Vyznačené množstvo (10, 20, 40 alebo 100 pg) PEG-IFNa2a sa aplikovalo subkutánne pod protiľahlý bok nádoru trikrát týždne počas 5 týždňov.
Na ose x je počet dní a na ose y objem nádoru v cm3.
A neošetrená kontrola
B ošetrenie 10 pg PEG-IFNa2a
C ošetrenie 20 pg PEG-IFNa2a
D ošetrenie 40 pg PEG-IFNa2a
E ošetrenie 100 pg PEG-IFNa2a
Príklady rozpracovania vynálezu
Príklad 1
Príprava konjugátu všeobecného vzorca I
Materiály
Interferón-a2a sa pripraví známymi spôsobmi (Pestka). Polyetylénglykol (PEG) reakčné činidlo II je obchodný produkt spoločnosti Shearwater Polymers, Inc. (Huntsville, Ala). Živica Fractogel^ EMD CM 650 (S) s časticami s veľkosťou 25 až 40 pm je obchodný produkt spoločnosti EM Separations (Gibbstown, MA). Solanka (PBS) tlmená koncentrovaným fosfátom (10X), pH 7,3 je obchodný produkt spoločnosti BioWhittaker (Walkersville, MD). Vopred naliate elektroforézne sodnododecyl(lauryl)sulfátpolyakrylové gély (SDS-PAGE) a elektroforézne jednotky sú obchodné produkty spoločnosti NOVEX (San Diego, CA). Koncentrované rýchle farbivo (Fast Stain) na proteínové farbenie konjugátov PEG na SDS-PAGE je obchodný produkt spoločnosti Zoion Research, Inc. (Newton, MA). Testovací súbor endotoxínu LAL je obchodný produkt spoločnosti Associates of Cápe Cod, Inc. (Woods Hole, MA). Všetky ostatné použité reakčné činidlá majú najvyššiu dosiahnuteľnú kvalitu. Hrdelne kanylované potkany a myši BDF-1 dodávajú Charles River Laboratories (Wilmington, MA).
Experimentálne postupy
A. Príprava konjugátu všeobecného vzorca I v malom meradle
Do 50 mg (2,6 pmol) IFNa v 10 ml 100 mM borátu s hodnotou pH 8,0 sa pridá 208 mg (5,2 pmol) reakčného činidla všeobecného vzorca II (so strednou molekulovou hmotnosťou 40000 Daltonov). Konečný pomer proteínu k reakčnému činidlu je 1:2. Reakčná zmes sa mieša počas dvoch hodín pri teplote 4°C. Reakcia sa ukončí nastavením hodnoty pH na 4,5 ladovou kyselinou octovou.
Reakčná zmes sa zriedi 50-násobne vodou, sfiltruje sa cez filter 0,2 pm a aplikuje sa na stĺpec Amicon naplnený 100 ml (3,2x13 cm) Fractogelu EMD CM 650(S) nízkou prietočnou rýchlosťou 20 ml/min. Stĺpec sa vopred uvedie do rovnovážneho stavu 10 mM amóniumacetátom s hodnotou pH 4,5. Výtok stĺpca sa monitoruje absorpciou ultrafialového svetla pri 280 nm. Stĺpec sa potom premýva vyvažovacím tlmivým roztokom, kým sa absorbancia ultrafialového svetla nevráti na základnú úroveň. Konjugáty PEG-IFN majúce pripojené viacej ako jedno reakčné činidlo všeobecného vzorca II (oligoméry PEG-IFN) sa zriedia 40 mM amóniumacetátom s hodnotou pH 4,5 a konjugát všeobecného vzorca I sa eluuje roztokom 0,12 M chloridu sodného v 40 mM amóniumacetátovom tlmivom roztoku. Nemodifikovaný IFN zvyšný v stĺpci sa eluuje roztokom 0,5 M chloridu sodného v rovnakom tlmivom roztoku. Stĺpec sa regeneruje prepláchnutím 1,0 M NaCI s následným premytím vyvažovacím tlmivým roztokom. Frakcie konjugátu všeobecného vzorca I sa skoncentrujú y koncentrátore miešaných buniek Amicon opatreným membránou YM10 na koncentráciu približne 1 mg/ml.
Katexová živica Fractogel CM 650(S) použitá na čistenie účinne adsorbuje PEG a nemodifikovaný IFN. Adsorpčná schopnosť závisí od stupňa PEGylácie. Konjugáty sú viazané menej pevne ako nemodifikovaný IFN. Oligoméry PEG-IFN sa eluujú 40 mM amóniumacetátom, zatial čo konjugát všeobecného vzorca I sa eluuje roztokom 0,12 M chloridu sodného. Nemodifikovaný IFN sa eluuje roztokom
0,5 M chloridu sodného. Všetky prípravky obsahujú < 5 EU/mg endotoxínov. Výsledný prípravok obsahuje > 99 % konjugátu všeobecného vzorce I a neobsahuje nemodifikovaný IFN.
B. Príprava konjugátu všeobecného vzorca I vo velkom meradle
V 63 ml 1 mM HC1 pri teplote 4°C sa rozpustí 6240 miligramov (156 μιηοΐ) reakčného činidla všeobecného vzorca II (stredná molekulová hmotnost 40000 Daltonov) a rýchlo sa pridá do 125 ml roztoku obsahujúceho 1000 mg (52 μιηοΐ) interferónu v 50 mM borátovom tlmivom roztoku, pH 9,0. Konečný pomer proteínu k reakčnému činidlu je 1:3 a konečná koncentrácia proteínu v reakčnej zmesi je 5,3 mg/ml. Reakčná zmes sa mieša počas dvoch hodín pri teplote 4°C. Reakcia sa ukončí nastavením hodnoty pH na 4,5 ľadovou kyselinou octovou.
Reakčná zmes sa zriedi 10-násobne vodou a aplikuje sa na stĺpec naplnený 600 ml Fractogelu EMD CM 650(M) vopred uvedeným do rovnovážneho stavu 20 mM acetátom sodným s hodnotou pH 4,5 s lineárnou prietočnou rýchlostou 1,3 cm/min. Stĺpec sa premyje vyvažovacím tlmivým roztokom nasledovaným 10 mM NaCI na odstránenie nadbytku reakčného činidla, vedľajších produktov reakcie a oligomérov PEG-IFN. Konjugát všeobecného vzorca I sa eluuje vyvažovacím tlmivým roztokom obsahujúcim 200 mM NaCI. Nemodifikovaný interferón ešte adsorbovaný v stĺpci sa odstráni premytím 0,75 M NaCI vo vyvažovacom tlmivom roztoku. Konjugát všeobecného vzorca I, ktorý bol eluovaný pri 0,3-0,5 mg/ml sa ďalej koncentruje a diafiltruje do tlmivého roztoku konečného prostriedku, 20 mM acetátu sodného, pH 5,0, obsahujúceho 150 mM NaCI. Celkový výťažok konjugátu všeobecného vzorca I je 40 až 45 %.
Vyčistený PEG-IFN z prípravy vo veľkom meradle sa skladá z >99 % konjugátu všeobecného vzorca I. Priemerná molekulová hmotnosť konjugátu všeobecného vzorca I v tomto príklade je 62000 Daltonov vrátane molekulovej hmotnosti IFNa2a, ktorá je
19241 Daltonov a priemernej molekulovej hmotnosti reakčného činidla, ktorá je 40000 až 45000, približne 43000 Daltonov.
Príklad 2
Charakterizácia konjugátu všeobecného vzorca I
Stanovenie proteínu
Koncentrácie proteínu sa zisťujú pomocou hodnoty A280 1,0 pre roztok 1 mg/ml IFNa a2a.
Analýza ADS-PAGE
Konjugát sa analyzuje gélovou elektroforézou pri použití systému nátriumdodecyl (lauryl )sulfát/polyakrylamid (8 až 16 %) za redukčných podmienok spôsobom, ktorý opísal Laemmli (Náture 227, str. 680 (1970)). SDS-PAGE obsahujúci konjugáty PEG sa vyfarbia na proteín farbivom Fast Stain (Zoion Research, Inc.) podľa inštrukcií výrobca.
Stanovenie endotoxínových hladín
Endotoxínové hladiny sa stanovia metódou LAL podía inštrukcií výrobca. Všetky prostriedky obsahujú <5 EU/mg endotoxínov.
Príklad 3
Biologické aktivity konjugátu všeobecného vzorca I in vitro
Protivírusové pôsobenie v bunkách hovädzích obličiek
Protivírusové pôsobenie IFNa2a a konjugátu všeobecného vzorca I pripraveného podía príkladu 1A in vitro sa určuje biotestom v bunečnej kultúre, ktorá používa bunky Madin-Darby hovädzích obličiek (MDBK) vyvolávajúcich reakciu vezikulárnym ví
- 15 rusom stomatitis (Rubinstein a kol). Protivírusové pôsobenie je uvedené v tabuľke I spolu so zodpovedajúcimi zvyškovými aktivitami ako percento východiskového IFN.
Tabuľka I
Protivírusové pôsobenie
Vzorky Typ PEG Celková PEG hmotnosť (kDa) # Lyz. modifik. Špecifické pôsobenie (J/mg) Zvyšková aktivita (%)
IFNa2a - - - 2,00xl08 100
Konjugát rozvetvený 40 1 1,4OX1O7 7
všeob. vz . I
In vitro antiproliferatívne pôsobenie v ľudských nádorových bunkách
Antiproliferatívne pôsobenie in vitro sa testuje v ľudských bunkách Daudi (Burkittova Lymphoma), ako ich opísal Borden a kol. Budské bunky Daudi sa získajú v podobe kultúry stacionárnej suspenzie v RPMI 1540 doplnenom 10 % teľacieho zárodočného séra a 2 mM glutamínu (Grand Island Biologicals, Grand Island, NY). Bunky sa testujú a zistí sa, že sú prosté mycoplazmy. Do jamiek mikrotitrových doštičiek sa pridajú bunky (2xl04) (Costar, MA) v 100 μΐ média. Do jamiek sa pridajú rôzne koncentrácie IFN a konjugátu všeobecného vzorca I pripraveného podľa príkladu 1A v objeme 100 μΐ. Doštičky sa inkubujú 72 hodín pri teplote 37’C v 5% oxide uhličitom. Pred zberom buniek sa bunky 16 hodín pulzujú s 0,25 μΟί/^ιιϋο 3H-tymidínu (New England Nuclear, Boston, MA). Bunky sa zoberú na sklenených filtroch a sčítajú sa v kvapalinovom scintilačnom počítači. Výsledky sa vyjadria ako percento inhibície vypočítané zo vzorca:
% inhibície = [(A-B)/A] x 100, kde
A = cpm v kontrolnej kultúre (bunky inkubované v samotnom médie) B = cpm v experimentálnej kultúre ^-16Priebeh vzoriek je štvornásobný a stredná smerodajná odchýlka je vo všetkých prípadoch menej ako 20 % priemeru. Pokusy prebiehajú najmenej dvakrát s porovnateľnými výsledkami.
Antiproliferatívne pôsobenie (IC50) a IFN konjugátu je uvedené v tabuľke II. Údaje ukazujú, že antiproliferatívne pôsobenie konjugátu všeobecného vzorca I vykazuje 28-násobné zvýšenie v porovnaní s IFN.
Tabuľka II
In vitro antiproliferatívne pôsobenie v ľudských bunečných radách
Daudi (Burkittova Lymphoma)
Vzorka Antiproliferatívne pôsobenie IC50 (ng/ml) Zvýšenie aktivity
IFNa2a 0,56 lx
Konjugát všeob . vz. I 0,02 28x
Príklad 4 Farmakokinetika
Samice potkanov Sprague Dawley, chirurgicky opatrené hrdelnou kanylou s priemernou hmotnosťou 240 až 260 g sa chovajú voľne jednotlivo v klietkach s neobmedzeným prístupom k vode a potrave pri 12-hodinovom cykle svetla a tmy. V priebehu 4 až 6 hodín po nástupe sa hrdelné kanyly vypláchnu PBS. Nasledujúci deň po vypláchnutí 0,15 až 0,2 ml PBS, sa injektuje 2xl06 jednotiek IFNa v 0,2 až 0,4 ml PBS, s následnou injekciou 0,15 až 0,2 ml PBS pre zaistenie, že sa všetka droga dostala do zvieraťa. Týmto spôsobom dostalo každé zviera dávku 8χ10θ jednotiek IFNa na kg telesnej hmotnosti.
Vzorky krvi sa odoberú po 5, 15 a 30 minútach a 1, 3, 5, 12 a 24 hodinách po injekcii IFN a konjugátu všeobecného vzorca
I. V každom časovom okamihu, po odobraní prvých 0,15 až 0,2 ml krvi sa odoberie kanylou 0,5 ml krvi pomocou čerstvej injekčnej striekačky. Vzorky sa vyprázdnia, do sérum separujúcich skúmaviek pri teplote miestnosti. Len čo sa zhromaždia všetky vzorky zo všetkých časových okamihov, skúmavky sa odstred’u j ú 10 minút pri 14000 x g v chladenej odstredivke Eppendorf. Separované sérum sa premiestni do 1,5 ml mikroskúmaviek a zmrazí sa na -80°C než sa pripraví k biotestu. Vzorky séra sa príslušne zriedia a hore opísaným spôsobom sa stanoví protivírusové pôsobení v každom časovom okamihu. Z vynesenej závislosti aktivity na čase sa stanoví konečný polčas konjugátu všeobecného vzorca I a IFNa a výsledky sú zostavené do tabuľky III, ktorá obsahuje tiež rezidenčné časy v plazme.
Tabuľka III
Konečné polčasy (t]y2) a stredný rezidenčný čas v plazme
Vzorka ti/2 (hodín) Rezidenčný čas v plazme (hodín)
IFNa2a Konjugát všeob. 2,1 vz. I 15,0 1,0 20,0
Konečný sa určí log lineárnou regresiou.
Príklad 5
Imunogenicita
Normálnym myšiam BDF-1 (desiatim na skupinu) sa injektujú intraperitoneálne raz denne päťkrát týždne rôzne interferónové prostriedky majúce 300000 jednotiek protivírusovéj aktivity. Niektorým myšiam sa injektuje agregovaná forma IFNa2a, ktorá je viacej imunogenická ako monomérna forma. Krvné vzorky sa odoberú 19 dní po poslednej injekcii a sérum sa vyhodnotí na neutralizujúce protilátky.
Ako vyplýva z tabuľky IV, produkovali myši s injekciou
IFNa2a neutralizujúce protilátky a táto odozva je silne zvýraznená u myší s injekciou interferónových agregátov. U väčšiny zvierat s injekciou konjugátu podľa vynálezu nie sú zistiteľné žiadne protilátky.
Tabuľka IV
Imunogenicita
Protilátky (INU/ml)*
Ošetrenie priemer rozsah
IFNa2a 2400 217 až 8533
Agregáty IFNa2a 42667 8000 až 768000
Konjugát všeobec. vz. I 0 0 až 1133
* Počet jednotiek neutralizujúcich interferón na ml
Príklad 6
Protinádorové pôsobení in vivo
Protinádorové pôsobenie konjugátu všeobecného vzorca I (PEG2-IFNa2a) a nemodifikovaného IFNa2a in vivo sa vyhodnocuje stanovením ich schopnosti zmenšovať, rozmery rôznych ľudských nádorových buniek implantovaných do myší. Výsledky sú patrné z obr. 1 až 6.
Postup: Atymickým myšiam (Harlan) sa do ľavého zadného boku implantuje 2xl06 ľudských obličkových buniek A498 (obr. 1 a 2), ľudských obličkových buniek ACHN (obr. 3 a 4) alebo ľudských obličkových buniek G402 (obr. 5 a 6). Na vyvinutie nádorov ako je to vyznačené, sa myši ponechajú 3 až 6 týždňov. Kritérium pre prevzatie do štúdie je veľkosť 0,05 až 0,50 cm3. Myši dostanú celkové týždenné dávky PEG2-IFNa2a alebo nemodifikovaného IFNa2a v rozsahu 30, 60, 120 alebo 300 μg. V prípade PEG2-IFNa2a sa myši ošetrovali raz týždne (v pondelok) 30, 60, 120 alebo 300 μ9 PEG2IFNa2a na jedno ošetrenie. V prípade nemodifikovaného IFNa2a sa myši ošetrovali trikrát týždne (v pondelok, v stredu a v piatok) 10, 20, 40 alebo 100 μ9 PEG2-IFNa2a na jedno ošetrenie. Ošetrovanie trvalo 4 až 5 týždňov v závislosti od agresivity nádoru. Každý pondelok sa pred ošetrením merali objemy nádorov.
Výsledky: PEG2-IFNa2a vykazuje výrazné zmenšovanie veľkosti nádoru A498 v porovnaní s nemodifikovaným IFNa2a pri všetkých týždenných testovaných dávkach po 7, 14, 21 a 28 dňoch od zahájenie testu (obr. 1 a 2). Test trval štyri týždne. 7 dní po ošetrení sa test prerušil a 3 myši z každej skupiny boli usmrtené. U troch myší, ošetrených PEG2-IFNa2a, nebol pozorovaný zvyšný nádor. U myší, ošetrených nemodifikovaným IFNa2a, vážili nádory A498 1,28 g, 0,62 g a 1,60 g u každé z troch myší. Hmotnosť nádorov A498 troch kontrolných myší bola 2,32 g, 2,37 a 1,94 g. Po 80 dňoch na konci štvortýždennej periódy ošetrovania sa existencia nádorov zisťovala palpáciou u siedmich myší. Všetkých sedem myší bolo bez nádorového tkaniva.
PEG2-IFNa2a vykazuje výrazné zmenšovanie veľkosti nádoru ACHN v porovnaní s nemodifikovaným IFNa2a pri všetkých týždenných testovaných dávkach 60, 120 a 300 μg po 14, 21 a 28 a 35 dňoch od zahájenia testu (obr. 3 a 4).
PEG2-IFNa2a vykazuje výrazné zmenšovanie veľkosti nádoru G402 v porovnaní s nemodifikovaným IFNa2a pri týždenných testovaných dávkach 60 a 120 μg po 14, 21 a 28 a 35 dňoch od zahájenia testu (obr. 5 a 6).
Priemyslová využiteľnosť
Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa2a má výhodnú kombináciu vlastností, z ktorých vyniká potlačovanie rastu ľudských nádorových buniek in vivo a hodí sa preto na výrobu farmaceutických prostriedkov.

Claims (18)

1. Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa všeobecného vzorca I
O
II
ROCH2CH2(OCH2CH2)n—O—C — NH (CH2)4 (I)
ROCH2CH2(OCH2CH2)n'—O—C —
O kde znamená R a R' na sebe nezávisle nižšiu alkylovú skupinu, X skupinu NH alebo atóm kyslíka, n a n' sú čísla, ktorých súčet je 600 až 1500 a priemerná molekulová hmotnosť jednotiek polyetylénglykolu v konjugáte je približne 26000 až približne 66000 Daltonov.
2. Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 všeobecného vzorca I s molekulovou hmotnosťou polyetylénglykolových jednotiek 35000 až 45000 Daltonov.
3. Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 2 všeobecného vzorca I s molekulovou hmotnosťou polyetylénglykolových jednotiek 40000 Daltonov.
4. Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 všeobecného vzorca I, kde znamená R a R' skupinu metylovú.
5. Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 všeobecného vzorca I, kde X znamená NH-skupinu.
6. Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 všeobecného vzorca I, pričom IFNa je IFNa2a.
7. Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 všeobecného vzorca I, kde stredný súčet čísel na n' je 850 až 1000.
8. Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 všeobecného vzorca I, kde znamená R a R' skupinu metylovú, X NH-skupinu, IFNa je IFNa2a a jedno alebo obidve čísla n a n' sú 420.
9. Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 všeobecného vzorca I, kde znamená R a R' skupinu metylovú, X NH-skupinu, IFNa je IFNa2a a jedno alebo obidve čísla n a n' sú 520.
10. Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 všeobecného vzorca I majúci väčší antiproliferatívny účinok ako IFNa a menšie antivírusové pôsobenie ako IFNa.
11. Spôsob prípravy fyziologicky aktívneho konjugátu PEG-IFNa podľa nároku 1 všeobecného vzorca I, majúceho väčší antiproliferatívny účinok ako IFNa a menšie antivírusové pôsobenie ako IFNa, vyznačujúci sa tým, že sa kovalentne viaže reakčné činidlo všeobecného vzorca II na IFNa pre vytvorenie konjugátu PEG-IFNa.
12. Farmaceutický prostriedok vyznačujúci sa tým, že obsahuje fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 až 10 všeobecného vzorca I a terapeuticky inertný nosič.
13. Farmaceutický prostriedok na ošetrovanie alebo profylaxiu imunomodulatorných ochorení ako sú neoplastické choroby alebo infekčné choroby, vyznačujúci sa tým, že obsahuje fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 až 10 všeobecného vzorca I a terapeuticky inertný nosič.
14. Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 až
10 všeobecného vzorca I na výrobu liečiv pre ošetrovanie a profylaxiu chorôb.
15. Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 až
10 všeobecného vzorca I vyrobený spôsobom podľa nároku 11.
16. Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 až
10 všeobecného vzorca I ako liečivá na ošetrovanie a profylaxiu chorôb.
17. Produkty, farmaceutické prostriedky, spôsoby výroby podľa nároku 1 až 16.
18. Spôsob ošetrovania a profylaxie imunomodulatorných ochorení, vyznačujúci sa tým, že sa podáva fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa podľa nároku 1 až 10 všeobecného vzorca I.
SK673-97A 1996-05-31 1997-05-28 Fyziologicky aktívny pegylovaný konjugát interferónu alfa, jeho použitie, spôsob jeho prípravy a farmaceutický prostriedok SK284458B6 (sk)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1883496P 1996-05-31 1996-05-31

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK67397A3 true SK67397A3 (en) 1997-12-10
SK284458B6 SK284458B6 (sk) 2005-04-01

Family

ID=21790006

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK673-97A SK284458B6 (sk) 1996-05-31 1997-05-28 Fyziologicky aktívny pegylovaný konjugát interferónu alfa, jeho použitie, spôsob jeho prípravy a farmaceutický prostriedok

Country Status (48)

Country Link
US (1) US7201897B2 (sk)
EP (1) EP0809996B1 (sk)
JP (1) JP2980569B2 (sk)
KR (1) KR100254097B1 (sk)
CN (1) CN1088721C (sk)
AR (1) AR008378A1 (sk)
AT (1) ATE235920T1 (sk)
AU (1) AU725195B2 (sk)
BG (1) BG62273B1 (sk)
BR (1) BR9703421A (sk)
CA (1) CA2203480C (sk)
CO (1) CO4950528A1 (sk)
CY (2) CY2433B1 (sk)
CZ (1) CZ292775B6 (sk)
DE (3) DE809996T1 (sk)
DK (1) DK0809996T3 (sk)
EG (1) EG24292A (sk)
ES (1) ES2110386T3 (sk)
GR (1) GR970300063T1 (sk)
HK (1) HK1005225A1 (sk)
HR (1) HRP970298B1 (sk)
HU (1) HU227992B1 (sk)
IL (1) IL120902A (sk)
IS (1) IS1988B (sk)
LU (1) LU91029I2 (sk)
MA (1) MA24193A1 (sk)
MY (1) MY117909A (sk)
NL (1) NL300127I2 (sk)
NO (1) NO322964B1 (sk)
NZ (1) NZ314903A (sk)
OA (1) OA10488A (sk)
PA (1) PA8431001A1 (sk)
PL (1) PL186949B1 (sk)
PT (1) PT809996E (sk)
RS (1) RS49533B (sk)
RU (1) RU2180595C2 (sk)
SA (1) SA97180030B1 (sk)
SG (1) SG55314A1 (sk)
SI (1) SI0809996T1 (sk)
SK (1) SK284458B6 (sk)
SV (1) SV1997000049A (sk)
TJ (1) TJ328B (sk)
TN (1) TNSN97091A1 (sk)
TR (1) TR199700358A3 (sk)
TW (1) TW517067B (sk)
UA (1) UA56989C2 (sk)
UY (1) UY24572A1 (sk)
ZA (1) ZA974583B (sk)

Families Citing this family (135)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5951974A (en) * 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
AU7473096A (en) 1995-11-02 1997-05-22 Schering Corporation Continuous low-dose cytokine infusion therapy
US5908621A (en) * 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
US5981709A (en) * 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
US5985263A (en) * 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
US6180096B1 (en) 1998-03-26 2001-01-30 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
ID28470A (id) * 1998-03-26 2001-05-24 Schering Corp Formulasi-formulasi untuk perlindungan terhadap konjugasi polietilen glikol-interferon alfa
EA003789B1 (ru) * 1998-04-28 2003-10-30 Апплайд Резеч Системз Арс Холдинг Н.В. КОНЪЮГАТЫ ПОЛИОЛ-β-ИНТЕРФЕРОН
JP5281726B2 (ja) 1998-05-15 2013-09-04 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション 慢性Ｃ型肝炎感染を有する、抗ウイルス処置を受けていない患者における、リバビリンおよびインターフェロンαを含む併用療法
ATE307597T1 (de) * 1998-06-08 2005-11-15 Hoffmann La Roche Verwendung von peg-ifn-alpha und ribavirin zur behandlung chronischer hepatitis c
US6277830B1 (en) * 1998-10-16 2001-08-21 Schering Corporation 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon
IL129299A0 (en) * 1999-03-31 2000-02-17 Mor Research Applic Ltd Monoclonal antibodies antigens and diagnosis of malignant diseases
AR023390A1 (es) * 1999-04-08 2002-09-04 Schering Corp Terapia para la leucemia mielocitica cronica
US6362162B1 (en) 1999-04-08 2002-03-26 Schering Corporation CML Therapy
US6923966B2 (en) 1999-04-08 2005-08-02 Schering Corporation Melanoma therapy
US6605273B2 (en) 1999-04-08 2003-08-12 Schering Corporation Renal cell carcinoma treatment
ATE419001T1 (de) 1999-04-08 2009-01-15 Schering Corp Melanoma therapie
CZ299516B6 (cs) * 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
US6313143B1 (en) * 1999-12-16 2001-11-06 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted pyrroles
CA2395713C (en) 2000-01-10 2012-04-10 Torben Lauesgaard Nissen G-csf conjugates
EP1908477A3 (en) * 2000-01-24 2008-06-11 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
WO2001052882A1 (en) * 2000-01-24 2001-07-26 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
WO2001058935A2 (en) 2000-02-11 2001-08-16 Maxygen Aps FACTOR VII OR VIIa-LIKE MOLECULES
US6476062B2 (en) 2000-03-30 2002-11-05 Schering Corporation Chemokine receptor antagonists
US6777387B2 (en) 2000-03-31 2004-08-17 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Terminally-branched polymeric linkers containing extension moieties and polymeric conjugates containing the same
US6756037B2 (en) 2000-03-31 2004-06-29 Enzon, Inc. Polymer conjugates of biologically active agents and extension moieties for facilitating conjugation of biologically active agents to polymeric terminal groups
AU2001255495A1 (en) 2000-04-20 2001-11-07 Schering Corporation Ribavirin-interferon alfa combination therapy for eradicating detectable hcv-rnain patients having chronic hepatitis c infection
CN100448993C (zh) 2000-06-30 2009-01-07 津莫吉尼蒂克斯公司 干扰素样蛋白质Zcyto21
ATE471956T1 (de) 2001-01-30 2010-07-15 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Verzweigte polyalkylenglykole
IL156059A0 (en) 2001-02-27 2003-12-23 Maxygen Aps NEW INTERFERON beta-LIKE MOLECULES
DE10112825A1 (de) 2001-03-16 2002-10-02 Fresenius Kabi De Gmbh HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung
EP1465933B1 (en) * 2002-01-16 2007-08-29 Biocompatibles UK Limited Polymer conjugates
KR100888371B1 (ko) * 2002-01-17 2009-03-13 동아제약주식회사 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
DE10209821A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid
DE10209822A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid
JP4634145B2 (ja) 2002-06-21 2011-02-16 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト ペジル化されたｖｉｉ因子糖形体
EP1526872A1 (en) 2002-07-24 2005-05-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Polyalkylene glycol acid additives
KR101174510B1 (ko) 2002-09-11 2012-08-16 프레제니우스 카비 도이치란트 게엠베하 하이드록시알킬전분화 폴리펩티드, 특히 하이드록시알킬전분화 에리트로포이에틴
ES2214166T1 (es) * 2002-09-11 2004-09-16 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Polipeptidos has-ilados, especialmente, eriptropoyetina has-ilada.
EP1681303B1 (en) * 2002-09-11 2013-09-04 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylated polypeptides, especially HASylated erythropoietin
DE60323756D1 (de) 2002-10-08 2008-11-06 Fresenius Kabi De Gmbh Pharmazeutisch aktive oligosaccharid-conjugate
US7314613B2 (en) 2002-11-18 2008-01-01 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
NZ540043A (en) * 2002-11-18 2007-11-30 Maxygen Inc Isolated or recombinant Interferon-alpha polypeptides and conjugates
GB0301014D0 (en) * 2003-01-16 2003-02-19 Biocompatibles Ltd Conjugation reactions
CA2458085A1 (en) 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
EP2263684A1 (en) 2003-10-10 2010-12-22 Novo Nordisk A/S IL-21 derivatives
ES2428358T3 (es) 2003-10-17 2013-11-07 Novo Nordisk A/S Terapia de combinación
JP4896745B2 (ja) 2004-02-02 2012-03-14 アンブレツクス・インコーポレイテツド 修飾されたヒトインターフェロンポリペプチドおよびこれらの使用
CN100355784C (zh) * 2004-02-12 2007-12-19 江苏恒瑞医药股份有限公司 聚乙二醇修饰α－干扰素1b的制备方法
EP2336192A1 (en) 2004-03-11 2011-06-22 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein, prepared by reductive amination
WO2005113592A2 (en) * 2004-05-19 2005-12-01 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
EP1771205B1 (en) 2004-06-18 2016-10-26 Ambrx, Inc. Novel antigen-binding polypeptides and their uses
CA2572751A1 (en) * 2004-06-30 2006-01-12 Egen Corporation Pegylated interferon alpha-1b
US7632491B2 (en) 2004-08-12 2009-12-15 Schering Corporation Stable pegylated interferon formulation
MX2007007580A (es) 2004-12-22 2007-12-11 Ambrx Inc Hormona del crecimiento humana modificada.
WO2006102659A2 (en) * 2005-03-23 2006-09-28 Nektar Therapeutics Al, Corporation CONJUGATES OF AN hGH MOIETY AND A POLYMER
WO2007044083A2 (en) 2005-05-18 2007-04-19 Maxygen, Inc. Evolved interferon-alpha polypeptides
JP5335422B2 (ja) 2005-06-17 2013-11-06 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 少なくとも１つの非天然のシステインを含んでいる操作されたタンパク質の選択的な還元および誘導体化
JP2008543943A (ja) * 2005-06-20 2008-12-04 ペプゲン コーポレイション ヒトインターフェロンアルファ類似体とインターフェロンタウの低毒性長期循環性キメラ
JP4261531B2 (ja) 2005-09-06 2009-04-30 株式会社Ｎｒｌファーマ ラクトフェリン複合体及びその製造方法
US20090018029A1 (en) 2005-11-16 2009-01-15 Ambrx, Inc. Methods and Compositions Comprising Non-Natural Amino Acids
CN101002944B (zh) * 2006-01-17 2012-07-25 中国科学院过程工程研究所 支链聚乙二醇-干扰素结合物及其制备方法
CN100475270C (zh) 2006-01-20 2009-04-08 清华大学 一种治疗肿瘤的药物及其应用
CN101002945B (zh) 2006-01-20 2012-09-05 清华大学 一种用于肿瘤治疗的新型复合物
KR20090021163A (ko) 2006-05-16 2009-02-27 도쿄 메트로폴리탄 오거니제이션 포 메디칼 리서치 Ｈｃｖ 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물
KR20090013816A (ko) 2006-05-24 2009-02-05 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ⅸ 유사체
KR20090051227A (ko) 2006-09-08 2009-05-21 암브룩스, 인코포레이티드 척추동물 세포를 위한 하이브리드 서프레서 ｔＲＮＡ
AU2007292903B2 (en) 2006-09-08 2012-03-29 Ambrx, Inc. Modified human plasma polypeptide or Fc scaffolds and their uses
CN1966547B (zh) * 2006-11-06 2011-11-09 中国药科大学 双链结构的聚乙二醇衍生物的制备及其与药物分子的结合
ATE459659T1 (de) * 2006-11-07 2010-03-15 Dsm Ip Assets Bv Carbamat, thiocarbamat oder carbamid mit einer biomolekularen gruppierung
KR101079993B1 (ko) 2006-11-17 2011-11-04 동아제약주식회사 폴리에틸렌글리콜 과립구 콜로니 자극인자 접합체
CN101219219B (zh) 2007-01-10 2013-02-13 北京普罗吉生物科技发展有限公司 包含血管抑素或其片段的复合物、其制备方法及应用
JP5515224B2 (ja) 2007-02-28 2014-06-11 日油株式会社 多分岐鎖ポリオキシアルキレン誘導体
JP2010523084A (ja) 2007-03-30 2010-07-15 アンブルックス，インコーポレイテッド 修飾ｆｇｆ−２１ポリペプチド
CL2008002399A1 (es) * 2007-08-16 2009-01-02 Pharmaessentia Corp Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c.
CN101636411B (zh) 2007-09-04 2013-01-09 厦门伯赛基因转录技术有限公司 聚乙二醇修饰的干扰素α2a及其制备方法和应用
ES2382124T3 (es) 2007-09-04 2012-06-05 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd. Interferón alfa 2b modificado con polietilenglicol y método de preparación y aplicaciones de este
US8946148B2 (en) 2007-11-20 2015-02-03 Ambrx, Inc. Modified insulin polypeptides and their uses
EP2070950A1 (en) 2007-12-14 2009-06-17 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hydroxyalkyl starch derivatives and process for their preparation
US20110034672A1 (en) * 2008-01-18 2011-02-10 Roberto Falkenstein Purification of not-glycosylated polypeptides
RU2010136023A (ru) * 2008-02-01 2012-03-10 Асцендис Фарма Ас (Dk) Пролекарство, содержащее саморасщепляемый линкер
CA2712606A1 (en) 2008-02-08 2009-08-13 Ambrx, Inc. Modified leptin polypeptides and their uses
PL2272875T3 (pl) 2008-04-03 2014-06-30 Biosteed Gene Expression Tech Co Ltd Hormon wzrostu modyfikowany dwuniciowym glikolem polietylenowym, sposoby otrzymywania i stosowania
PT2279007T (pt) * 2008-04-29 2016-08-23 Ascendis Pharma Growth Disorders Div As Compostos recombinantes e peguilados da hormona de crescimento humana
TW201010692A (en) 2008-06-19 2010-03-16 Public Univ Corp Nagoya City Univ Pharmaceutical composition for treatment or prevention of hbv infection
AU2009268841B2 (en) 2008-07-08 2014-02-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Novel inhibitors of proliferation and activation of signal transducer and activator of transcription (STATS)
NZ600382A (en) 2008-07-23 2013-11-29 Ambrx Inc Modified bovine G-CSF polypeptides and their uses
CN102232085A (zh) 2008-09-26 2011-11-02 Ambrx公司 修饰的动物促红细胞生成素多肽和其用途
KR101732054B1 (ko) 2008-09-26 2017-05-02 암브룩스, 인코포레이티드 비천연 아미노산 복제 의존성 미생물 및 백신
IT1399351B1 (it) 2009-06-16 2013-04-16 Fidia Farmaceutici Procedimento per la sintesi di coniugati di glicosamminoglicani (gag) con molecole biologicamente attive, coniugati polimerici e usi relativi
EP2459211A1 (en) 2009-07-31 2012-06-06 Medtronic, Inc. Continuous subcutaneous administration of interferon- to hepatitis c infected patients
AU2010313497B2 (en) 2009-10-30 2013-08-01 Boehringer Ingelheim International Gmbh Dosage regimens for HCV combination therapy comprising BI201335, interferon alpha and ribavirin
JP2013515080A (ja) 2009-12-21 2013-05-02 アンブルックス，インコーポレイテッド 修飾されているウシのソマトトロピンポリペプチドおよびそれらの使用
AU2010341518B2 (en) 2009-12-21 2014-01-09 Ambrx, Inc. Modified porcine somatotropin polypeptides and their uses
EP3815708A1 (en) 2010-03-05 2021-05-05 Omeros Corporation Chimeric inhibitor molecules of complement activation
EP2569331A1 (en) 2010-05-10 2013-03-20 Perseid Therapeutics LLC Polypeptide inhibitors of vla4
EP2585065A1 (en) 2010-06-24 2013-05-01 Panmed Ltd. Treatment of hepatitis c virus related diseases using hydroxychloroquine or a combination of hydroxychloroquine and an anti-viral agent
RU2447083C1 (ru) * 2010-07-20 2012-04-10 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" НОВЫЙ ФУНКЦИОНАЛЬНО АКТИВНЫЙ ВЫСОКООЧИЩЕННЫЙ СТАБИЛЬНЫЙ КОНЪЮГАТ ИНТЕРФЕРОНА α С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ, ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ОДНИМ ПОЗИЦИОННЫМ ИЗОМЕРОМ ПЭГ-NαH-ИФН, С УМЕНЬШЕННОЙ ИММУНОГЕННОСТЬЮ, С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, ПРИГОДНЫЙ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ, И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ
CN103209709A (zh) 2010-08-05 2013-07-17 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗mhc抗体抗病毒性细胞因子融合蛋白
US9567386B2 (en) 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
SG10201506443TA (en) 2010-08-17 2015-10-29 Ambrx Inc Modified relaxin polypeptides and their uses
TWI480288B (zh) 2010-09-23 2015-04-11 Lilly Co Eli 牛顆粒細胞群落刺激因子及其變體之調配物
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
CN102229667A (zh) * 2011-06-03 2011-11-02 北京伟嘉人生物技术有限公司 一种聚乙二醇修饰的猪α-干扰素及其制备方法和应用
MX2014000031A (es) 2011-07-01 2014-07-09 Bayer Ip Gmbh Polipeptidos de fusion de relaxina y usos de los mismos.
EA201490399A1 (ru) 2011-08-03 2014-06-30 Ситерис Иммунотерапия hcv (вируса гепатита c)
WO2013137869A1 (en) 2012-03-14 2013-09-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for treating hcv infection in an hcv-hiv coinfected patient population
JP2015512900A (ja) 2012-03-28 2015-04-30 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 特別な患者の遺伝子亜型分集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
AU2013270684B2 (en) 2012-06-08 2018-04-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
EP2863955B1 (en) 2012-06-26 2016-11-23 Sutro Biopharma, Inc. Modified fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
JP6826367B2 (ja) 2012-08-31 2021-02-03 ストロ バイオファーマ インコーポレーテッド アジド基を含む修飾アミノ酸
EA022617B1 (ru) * 2013-03-28 2016-02-29 Илья Александрович МАРКОВ Монопегилированный интерферон-альфа разветвленной структуры и фармацевтическая композиция для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа
EA021610B1 (ru) * 2013-03-28 2015-07-30 Илья Александрович МАРКОВ Жидкое противовирусное лекарственное средство
EA023323B1 (ru) * 2013-03-28 2016-05-31 Илья Александрович МАРКОВ Разветвленный ацилазидный пегилирующий агент, способ его получения и способ получения пегилированного интерферона
EP3019522B1 (en) 2013-07-10 2017-12-13 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US9840493B2 (en) 2013-10-11 2017-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
EP2907512A1 (en) 2014-02-14 2015-08-19 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Inhibitors of MMP-12 as antiviral Agents
RU2554761C1 (ru) * 2014-05-13 2015-06-27 Закрытое акционерное общество "Сибирский центр фармакологии и биотехнологии" Противоэнтеровирусное и иммуностимулирующее средство
TWI705071B (zh) 2014-10-24 2020-09-21 美商必治妥美雅史谷比公司 經修飾之fgf-21多肽及其用途
CA2964390A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Pharmaessentia Corporation Dosage regimen for pegylated interferon
WO2016079302A1 (en) 2014-11-21 2016-05-26 Ascendis Pharma Growth Disorders Division A/S Long-acting growth hormone dosage forms
EP3370759A1 (en) 2015-11-03 2018-09-12 H. Hoffnabb-La Roche Ag Combination therapy of an hbv capsid assembly inhibitor and an interferon
CN106749608B (zh) * 2015-11-18 2021-10-15 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 干扰素α缀合物
WO2018087345A1 (en) 2016-11-14 2018-05-17 F. Hoffmann-La Roche Ag COMBINATION THERAPY OF AN HBsAg INHIBITOR, A NUCLEOS(T)IDE ANALOGUE AND AN INTERFERON
MX2019008449A (es) 2017-02-08 2019-09-09 Bristol Myers Squibb Co Polipetidos de relaxina modificada que comprenden un mejorador farmacocinetico y sus usos.
RU2678332C1 (ru) 2017-09-08 2019-01-28 Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "СФМ") Пегилированный интерферон лямбда, обладающий высокой биодоступностью при пероральном применении, и способ его получения
DK3849614T3 (da) 2018-09-11 2024-02-26 Ambrx Inc Interleukin-2-polypeptidkonjugater og anvendelser deraf
JP2022512746A (ja) 2018-10-19 2022-02-07 アンブルックス，インコーポレイテッド インターロイキン－１０ポリペプチド複合体、その二量体、およびそれらの使用
KR20210136014A (ko) 2019-02-12 2021-11-16 암브룩스, 인코포레이티드 항체-tlr 작용제 콘쥬게이트를 함유하는 조성물, 방법 및 이의 용도
KR20220151202A (ko) 2020-03-11 2022-11-14 암브룩스, 인코포레이티드 인터류킨-2 폴리펩타이드 접합체 및 그의 사용 방법
AU2021327396A1 (en) 2020-08-20 2023-03-23 Ambrx, Inc. Antibody-TLR agonist conjugates, methods and uses thereof
AU2021410080A1 (en) * 2020-12-23 2023-06-22 Jazz Pharmaceuticals Ireland Ltd. Methods of purifying charge-shielded fusion proteins
AU2022249223A1 (en) 2021-04-03 2023-10-12 Ambrx, Inc. Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3380726D1 (en) 1982-06-24 1989-11-23 Japan Chem Res Long-acting composition
WO1984004745A1 (en) 1983-05-31 1984-12-06 Takeda Chemical Industries Ltd Novel polypeptides and their use
US4681848A (en) 1982-09-22 1987-07-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Novel peptide and use thereof
GB8430252D0 (en) * 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
WO1987000056A1 (en) 1985-06-26 1987-01-15 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
DE3719046A1 (de) 1987-06-06 1988-12-15 Basf Ag Verwendung von salzen von sulfonamidcarbonsaeuren als korrosionsinhibitoren in waessrigen systemen
US5122614A (en) 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5145773A (en) * 1989-05-25 1992-09-08 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Method to detect sensitivity to alpha-interferon therapy
ATE136315T1 (de) * 1989-05-27 1996-04-15 Sumitomo Pharma Verfahren für die herstellung von polyethylenglykolderivate und modifizierte proteine.
US5238915A (en) 1991-02-08 1993-08-24 Wakunaga Seiyaku K.K. Aromatic composition and method for controlling aroma
US5595732A (en) * 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
GB9111967D0 (en) 1991-06-04 1991-07-24 Erba Carlo Spa 2,5'-nucleotide analogs as antiviral agents
US5281698A (en) * 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
ZA933926B (en) 1992-06-17 1994-01-03 Amgen Inc Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules
US5382657A (en) * 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
US5359030A (en) 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
EP0730470B1 (en) * 1993-11-10 2002-03-27 Enzon, Inc. Improved interferon polymer conjugates
AU1916295A (en) * 1994-02-08 1995-08-29 Amgen, Inc. Oral delivery of chemically modified proteins
US5824784A (en) * 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5738846A (en) * 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
JP2758154B2 (ja) 1995-04-06 1998-05-28 エフ・ホフマン−ラ ロシユ アーゲー インターフェロンを含む液体製剤
CA2458085A1 (en) * 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay

Also Published As

Publication number Publication date
DE69720320T2 (de) 2004-06-03
ES2110386T1 (es) 1998-02-16
MX9704012A (es) 1997-11-29
IS4491A (is) 1997-12-01
HK1005225A1 (en) 1998-12-31
TJ328B (en) 2001-12-24
RS49533B (sr) 2006-12-15
SA97180030B1 (ar) 2005-11-12
HRP970298A2 (en) 1998-04-30
NO972480L (no) 1997-12-01
ES2110386T3 (es) 2003-10-01
US20040030101A1 (en) 2004-02-12
AR008378A1 (es) 2000-01-19
CN1167777A (zh) 1997-12-17
MY117909A (en) 2004-08-30
UA56989C2 (uk) 2003-06-16
CA2203480A1 (en) 1997-11-30
PT809996E (pt) 2003-06-30
HRP970298B1 (en) 2003-08-31
CZ292775B6 (cs) 2003-12-17
UY24572A1 (es) 2000-12-29
IL120902A (en) 2004-06-20
TR199700358A2 (xx) 1997-12-21
TR199700358A3 (tr) 1997-12-21
OA10488A (fr) 2002-04-11
DE10399018I1 (de) 2003-10-23
LU91029I2 (fr) 2004-01-23
SV1997000049A (es) 1998-07-09
CO4950528A1 (es) 2000-09-01
DK0809996T3 (da) 2003-07-21
HUP9700959A3 (en) 1998-03-30
DE809996T1 (de) 1998-04-09
BG62273B1 (bg) 1999-07-30
JP2980569B2 (ja) 1999-11-22
AU725195B2 (en) 2000-10-05
BG101540A (en) 1998-02-27
SI0809996T1 (en) 2003-08-31
EG24292A (en) 2009-01-08
CA2203480C (en) 2009-06-30
ATE235920T1 (de) 2003-04-15
IL120902A0 (en) 1997-09-30
KR970074791A (ko) 1997-12-10
EP0809996A2 (en) 1997-12-03
US7201897B2 (en) 2007-04-10
CY2433B1 (en) 2004-11-12
AU2372397A (en) 1997-12-04
CN1088721C (zh) 2002-08-07
SK284458B6 (sk) 2005-04-01
GR970300063T1 (en) 1998-01-30
PL186949B1 (pl) 2004-04-30
NO322964B1 (no) 2006-12-18
BR9703421A (pt) 1998-09-15
SG55314A1 (en) 1998-12-21
CY2005006I2 (el) 2009-11-04
RU2180595C2 (ru) 2002-03-20
HU227992B1 (en) 2012-08-28
NL300127I1 (sk) 2003-07-01
CY2005006I1 (el) 2009-11-04
HUP9700959A2 (hu) 1998-03-02
EP0809996A3 (en) 1999-04-14
TJ97000465A (en) 1998-12-25
IS1988B (is) 2005-02-15
TNSN97091A1 (fr) 2005-03-15
NL300127I2 (nl) 2003-09-01
NZ314903A (en) 1998-10-28
PA8431001A1 (es) 2000-05-24
CZ167997A3 (en) 1997-12-17
KR100254097B1 (ko) 2000-05-01
EP0809996B1 (en) 2003-04-02
NO972480D0 (no) 1997-05-30
DE69720320D1 (de) 2003-05-08
TW517067B (en) 2003-01-11
HU9700959D0 (en) 1997-07-28
JPH1067800A (ja) 1998-03-10
MA24193A1 (fr) 1997-12-31
ZA974583B (en) 1998-11-17
YU17597A (sh) 1999-07-28
PL320251A1 (en) 1997-12-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0809996B1 (en) Interferon conjugates
TWI232882B (en) Poly-IFN-beta conjugates
JP3747070B2 (ja) 改良型インターフェロン−ポリマーコンジュゲート
JP2989002B2 (ja) 化学修飾顆粒球コロニー刺激因子
KR100689212B1 (ko) Ｇｃｓｆ 결합체
US20060029573A1 (en) Pegylated interferon alpha-1b
HUT75533A (en) Improved interferon polymer conjugates
RU2447083C1 (ru) НОВЫЙ ФУНКЦИОНАЛЬНО АКТИВНЫЙ ВЫСОКООЧИЩЕННЫЙ СТАБИЛЬНЫЙ КОНЪЮГАТ ИНТЕРФЕРОНА α С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ, ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ОДНИМ ПОЗИЦИОННЫМ ИЗОМЕРОМ ПЭГ-NαH-ИФН, С УМЕНЬШЕННОЙ ИММУНОГЕННОСТЬЮ, С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, ПРИГОДНЫЙ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ, И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ
US8454947B1 (en) PEG-interferon lambda 1 conjugates
US20100239532A1 (en) Interferon alpha2a modified by polyethylene glycol, the preparation and use thereof
CN101448525A (zh) 聚乙二醇-干扰素α缀合物
MXPA97004012A (en) Conjugados de interfe
KR100888371B1 (ko) 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
EP1369429A1 (en) GCSF conjugates

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Expiry date: 20170528