KR20090021163A

KR20090021163A - Ｈｃｖ 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물

Info

Publication number: KR20090021163A
Application number: KR1020087030189A
Authority: KR
Inventors: 미치노리 고하라; 다쿠야 우메하라; 마사유키 수도
Original assignee: 도쿄 메트로폴리탄 오거니제이션 포 메디칼 리서치; 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤
Priority date: 2006-05-16
Filing date: 2007-05-16
Publication date: 2009-02-27
Also published as: EP2042188A1; AU2007250739A1; JPWO2007132882A1; CN101489580A; WO2007132882A1; EP2042188A4; CA2652333A1

Abstract

본 발명자들은, HCV 서브게놈 레플리콘 세포 FLR3-1 또는 HCV 감염 키메라 마우스를 사용하여, SPT 저해제 및/또는 인터페론의 항HCV 효과를 검토하였다. 그 결과, SPT 저해제인 미리오신(myriocin) 또는 화학식 III의 화합물이 HCV 감염증의 신치료제가 될 수 있는 것, 및, 이 SPT 저해제 및 인터페론을 병용함으로써, 보다 높은 HCV 복제 저해효과가 얻어지는 것이 명확해졌다.

Description

ＨＣＶ 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물{Pharmaceutical composition for treating or preventing HCV infection}

본 발명은 미리오신 및 인터페론을 유효성분으로서 함유하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물, 및 그의 이용에 관한 것이다.

C형 간염(HCV) 감염증은 통상, 만성간염을 유발하여, 종종 간경변 또는 간세포암에 이른다. 보인자의 수는, 현재 전세계 인구의 약 3%(~1억 7천만명)에 이른다. HCV는 아직 명확하지 않은 원인에 의해 숙주의 면역기구를 회피하기 때문에, 면역기구가 발달된 성인에게 감염된 경우에도 지속감염이 성립하는 경우가 많아, 만성간염, 간경변, 간암으로 진행하여, 수술에 의해 적출하더라도, 비암부에서 계속해서 발생하는 염증 때문에 간암이 재발하는 환자가 많은 것도 알려져 있다.

현재 HCV 감염증에 대한 가장 유효한 치료방법으로서, PEG화 인터페론(PEG-IFN)과 리바비린(비특허문헌 1, 2)의 병용이 알려져 있다. 그러나, 인터페론 치료가 유효한 환자는, 전체 환자의 1/3 정도에 한정되어 있고, 특히 HCV 유전자형 1b에 대한 인터페론의 주효율은 매우 낮다. 따라서, 인터페론을 대신하거나, 또는 이것과 병용할 수 있는 항HCV약의 개발이 요망되고 있다. 그 중에서도, 항염증제에 의해 염증을 억제하는 대증요법과는 별도로, 환부인 간장에 있어서 HCV를 줄이거나 또는 근절시키는 약제의 개발이 강하게 요망되고 있다.

HCV는, 플라비바이러스과(Flaviviridae)에 속하는 단일가닥 RNA 바이러스(single stranded RNA virus)이다. RNA 게놈은 10개 이상의 바이러스 단백질을 생산하고, 이것에는 구조 및 비구조(NS) 단백질이 포함된다. 전자는 HCV 입자의 형성에 관여하고 있다. 후자는, HCV 게놈 복제에 있어서 중요한 역할을 하고 있다(비특허문헌 3). 일반적으로, NS 단백질의 복합체는 골지 및 소포체막 상의 지질 라프트(lipid raft)에 회합(會合)하여, 여기에서 HCV 감염이 일어나는 것이 용인되고 있다(비특허문헌 4, 5). 이와 같이, 지질 라프트 집합체가 파괴되면, HCV 복제의 억제가 일어날 가능성이 있다.

미리오신(ISP-1)은, 스핑고지질 생합성경로의 제1단계 효소인 세린 팔미토일 트랜스페라아제(serine palmitoyltransferase, SPT)의 특이적 저해제이다(도 1; 비특허문헌 6, 7). 미리오신은, 스핑고신에 대한 그의 구조적 유사성 때문에 SPT 활성을 저해하고, 이것에 의해 세포내 스핑고미엘린 및 그의 중간체인 디히드로스핑고신, 스핑고신, 세라미드, 및 스핑고신-1-포스페이트(도 1)의 감소가 발생한다. 스핑고미엘린은 지질 라프트 집합체의 중요한 성분 중 하나이기 때문에, 미리오신에 의해 SPT가 저해되면, 최종적으로 지질 라프트의 파괴가 일어나는 것으로 생각된다(비특허문헌 8).

최근, 사카모토 등은, HCV의 서브게놈 레플리콘의 복제를 억제하는 화합물 NA255를 단리하였다(비특허문헌 9, 특허문헌 1). NA255는 미리오신과 구조적으로 유사하여, SPT의 효소활성을 저해하고, 이것에 의해 HCV NS3(프로테아제 및 헬리카 아제) 또는 NS5B(RNA 의존적 RNA 폴리머라아제)의 효소활성에 영향을 미치지 않고, HCV 복제의 억제가 일어나는 것을 알 수 있었다. 이와 같이, HCV 서브게놈 레플리콘의 복제는, 스핑고지질, 세라미드, 및 스핑고미엘린의 양의 감소에 반응하여 NA255에 의해 억제되었다. 이들 지견(知見)은, NA255가 HCV NS 단백질과 회합한 지질 라프트 집합체를 파괴하는 것을 시사하고 있다.

상기 결과에 의해, 미리오신이 항HCV 효과를 나타내는 것이 시사되어 왔는데, 미리오신 및 인터페론의 병용이, HCV의 복제 저해에 어떠한 효과를 나타내는지에 대해서는, 지금까지 명확하게 되어 오지 않았다.

또한, 본 출원의 발명에 관련된 선행기술 문헌정보를 이하에 나타낸다.

발명의 개시

발명이 해결하고자 하는 과제

본 발명은 이러한 상황을 감안하여 이루어진 것으로, 그 목적은, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론을 조합해서 되는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 제공하는 것에 있다. 또한, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론을 대상에 투여하는 공정을 포함하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법의 제공도 목적으로 한다.

과제를 해결하기 위한 수단

상기 과제를 해결하기 위해 본 발명자들은, 먼저 HCV 서브게놈 레플리콘 세포 FLR3-1에 있어서의 미리오신의 항HCV 작용 및 세포독성을 조사하였다. 그 결과, 미리오신의 투여에 의해, 세포생존율 또는 세포증식에는 영향이 발생하지 않음에도 불구하고, HCV 복제활성이 용량 의존적으로 크게 감소하는 것이 명확해졌다(도 2A).

다음으로, 스핑고리피드 대사물과 HCV 복제와의 상관을 조사하기 위해, 미리오신의 존재하에서의 FLR3-1 세포에 의한 데노보(de novo) 스핑고지질 생합성을 모니터링하였다. 그 결과, 세라미드 및 스핑고미엘린의 생산은 모두, 용량 의존적으로 저해되었으나, 스핑고신의 대사물인 포스파티딜에탄올아민 및 포스파티딜세린의 생산은, 영향을 받지 않았다(도 2B). 또한, HCV 서브게놈 레플리콘 복제의 억제가 스핑고리피드 고갈에 의해 유발되는지 여부를 확인하기 위해, 스핑고지질 생합성경로의 중간체의 존재하에서 미리오신의 항HCV 효과를 조사하였다. 그 결과, 미리오신에 의한 HCV 복제의 억제는, 스핑고지질 생합성의 억제가 원인인 것이 명확해졌다.

다음으로, HCV 유전자형 1a 또는 1b에 감염된 인간화 간장을 갖는 키메라 마우스를 사용하여, 미리오신 및/또는 인터페론의 항HCV 효과를 검토하였다. 구체적으로는, 키메라 마우스에 미리오신 및/또는 인터페론을 투여하고, 혈청 및 간장 중의 HCV RNA 레벨을 검출하였다. 그 결과, 미리오신은 인간화 간장에서 발현된 h-Alb에 영항을 미치지 않고 HCV의 복제를 억제하는 것이 명확해졌다. 또한, 미리오신과 PEG-IFN을 병용함으로써, 경도(輕度)의 간손상을 나타내면서도 HCV의 복제가 상승적(相乘的)으로 억제되는 것이 명확해졌다.

또한, HCV 유전자형 1b에 감염된 키메라 마우스를 사용하여, 화학식 III로 표시되는 화합물 및 인터페론의 항HCV 효과를, 동일한 방법으로 검토하였다. 그 결과, 화학식 III의 화합물의 투여로도 HCV의 복제가 억제되고, 또한 화학식 III의 화합물 및 PEG-IFN을 병용함으로써, HCV의 복제는 상승적으로 억제되는 것이 명확해졌다.

즉, 본 발명자들은, SPT 저해제인 미리오신 또는 화학식 III의 화합물이 HCV 감염증의 신치료제가 될 수 있는 것, 및, 이 SPT 저해제 및 인터페론을 병용함으로써, 보다 높은 HCV 복제 저해효과가 얻어지는 것을 발견하고, 이것에 의해 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명은, 보다 구체적으로는 이하의 (1)~(42)를 제공한다.

(1) 스핑고미엘린(sphingomyelin)의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론을 조합해서 되는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물.

(2) HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물이, 배합제인 것을 특징으로 하는 (1)에 기재의 의약 조성물.

(3) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과, 인터페론이 병용되는 것을 특징으로 하는, (1)에 기재의 의약 조성물.

(4) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과, 인터페론이 동시에 또는 순차로 투여되는 것을 특징으로 하는, (3)에 기재의 의약 조성물.

(5) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과, 인터페론이 따로 따로 투여되는 것을 특징으로 하는, (3)에 기재의 의약 조성물.

(6) 인터페론과 병용하는 것을 특징으로 하는, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물을 유효성분으로서 함유하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물.

(7) 인터페론과 동시에 투여하는 것을 특징으로 하는, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물을 유효성분으로서 함유하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물.

(8) 인터페론의 투여 전 또는 투여 후에 투여하는 것을 특징으로 하는, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물을 유효성분으로서 함유하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물.

(9) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과 병용하는 것을 특징으로 하는, 인터페론을 유효성분으로서 함유하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물.

(10) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과 동시에 투여하는 것을 특징으로 하는, 인터페론을 유효성분으로서 함유하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물.

(11) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물의 투여 전 또는 투여 후에 투여하는 것을 특징으로 하는, 인터페론을 유효성분으로서 함유하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물.

(12) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물이, 팔미토일 CoA로부터 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물인, (1) 내지 (11) 중 어느 하나에 기재의 의약 조성물.

(13) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물이, 이하 (a) 또는 (b)인, (1) 내지 (11) 중 어느 하나에 기재의 의약 조성물.

(a) 팔미토일 CoA로부터 3-케토디히드로스핑고신(3-ketodihydrosphingosine)의 생합성에 관여하는, 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해22하는 화합물

(b) 세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물

(14) 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물이 미리오신(myriocin), 스핑고펀긴(sphingofungin), 이하의 화학식 I으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, (13)에 기재의 의약 조성물.

화학식 I:

[화학식 I]

[화학식 중, A는 -(CH₂)_n-를 나타내고, 여기서 n은 0~10의 정수를 나타내며;

B는 -CH₂-, -(C=O)-, -CH(OH)-, -CH(NH₂)-, 또는 -C(=NOR)-를 나타내고, 여기서 R은 수소원자, 탄소수 1~8의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기(탄소수 1~4의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기로 모노 또는 디 치환되어 있어도 되는 아미노기로 치환되어 있어도 된다)를 나타내며;

D는 -(CH₂)_m-R'를 나타내고, 여기서 m은 0~10의 정수를 나타내며, R'는 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 시클로알킬기, 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 복소환식기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, -OX기(여기서, X는 수소원자 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 시클로알킬기, 또는 치환되어 있어도 되는 아릴기를 나타낸다), 또는 할로겐원자를 나타내고;

E는 수소원자 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기를 나타내며;

G는 -(CH₂)_p-J를 나타내고, 여기서 p는 0~4의 정수를 나타내며, J는 수소, OH기, SH기, 메틸티오기, 카르복실기, 카르바모일기, 아미노기, 구아니디노기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 시클로알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 복소환식기, 또는 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기를 나타내고;

결합 Q는 단일결합 또는 이중결합을 나타내며; 그리고

R¹, R², 및 R³는 동일 또는 상이하여, 수산기, 아미노기(탄소수 1~4의 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기로 모노 또는 디 치환되어 있어도 된다), -OL, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기를 나타내고, 여기서 L은 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기를 나타낸다.]

(15) 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물이, 이하의 화학식 II~XII 중 어느 하나로 표시되는 화합물, 또는 그들의 약학적으로 허용되는 염인, (13)에 기재의 의약 조성물.

[화학식 II]

[화학식 III]

[화학식 IV]

[화학식 V]

[화학식 VI]

[화학식 VII]

[화학식 VIII]

[화학식 IX]

[화학식 X]

[화학식 XI]

[화학식 XII]

(16) 세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물이, 이하의 (a) 또는 (b)인, (13)에 기재의 의약 조성물.

(a) 세린 팔미토일 전이효소를 코드하는 DNA의 전사산물과 상보적인 RNA

(b) 세린 팔미토일 전이효소를 코드하는 DNA의 전사산물을 특이적으로 개열(開裂)하는 리보자임 활성을 갖는 RNA

(17) 인터페론이, 페그화 인터페론인, (1) 내지 (11) 중 어느 하나에 기재의 의약 조성물.

(18) HCV 감염증이, C형 간염, 간경변, 간섬유화, 또는 간암인, (1) 내지 (11) 중 어느 하나에 기재의 의약 조성물.

(19) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론을 대상에 투여하는 공정을 포함하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

(20) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론을, 대상에 동시에 투여하는 것을 특징으로 하는, (19)에 기재의 HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

(21) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론을, 대상에 따로 따로 투여하는 것을 특징으로 하는, (19)에 기재의 HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

(22) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물이, 팔미토일 CoA로부터 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물인, (19)에 기재의 HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

(23) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물이, 이하 (a) 또는 (b)인, (19)에 기재의 HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

(a) 팔미토일 CoA로부터 3-케토디히드로스핑고신의 생합성에 관여하는, 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물

(b) 세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물

(24) 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물이 미리오신, 스핑고펀긴, 이하의 화학식 I으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, (23)에 기재의 HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

화학식 I:

[화학식 I]

결합 Q는 단일결합 또는 이중결합을 나타내며; 그리고

(25) 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물이, 이하의 화학식 II~XII 중 어느 하나로 표시되는 화합물, 또는 그들의 약학적으로 허용되는 염인, (23)에 기재의 HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

[화학식 II]

[화학식 III]

[화학식 IV]

[화학식 V]

[화학식 VI]

[화학식 VII]

[화학식 VIII]

[화학식 IX]

[화학식 X]

[화학식 XI]

[화학식 XII]

(26) 세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물이, 이하의 (a) 또는 (b)인, (23)에 기재의 HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

(b) 세린 팔미토일 전이효소를 코드하는 DNA의 전사산물을 특이적으로 개열하는 리보자임 활성을 갖는 RNA

(27) 인터페론이, 페그화 인터페론인, (19)에 기재의 HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

(28) HCV 감염증이, C형 간염, 간경변, 간섬유화, 또는 간암인, (19)에 기재의 HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

(29) HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 제조하기 위한, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론의 사용.

(30) 인터페론과 병용하여 HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 제조하기 위한, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물의 사용.

(31) 인터페론과 동시에 투여하여 HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 제조하기 위한, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물의 사용.

(32) 인터페론의 투여 전 또는 투여 후에 투여하여 HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 제조하기 위한, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물의 사용.

(33) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과 병용하여 HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 제조하기 위한, 인터페론의 사용.

(34) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과 동시에 투여하여 HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 제조하기 위한, 인터페론의 사용.

(35) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물의 투여 전 또는 투여 후에 투여하여 HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 제조하기 위한, 인터페론의 사용.

(36) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물이, 팔미토일 CoA로부터 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물인, (29) 내지 (35) 중 어느 하나에 기재의 사용.

(37) 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물이, 이하 (a) 또는 (b)인, (29) 내지 (35) 중 어느 하나에 기재의 사용.

(b) 세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물

(38) 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물이 미리오신, 스핑고펀긴, 이하의 화학식 I으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, (37)에 기재의 사용.

화학식 I:

[화학식 I]

결합 Q는 단일결합 또는 이중결합을 나타내며; 그리고

(39) 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물이, 이하의 화학식 II~XII 중 어느 하나로 표시되는 화합물, 또는 그들의 약학적으로 허용되는 염인, (37)에 기재의 사용.

[화학식 II]

[화학식 III]

[화학식 IV]

[화학식 V]

[화학식 VI]

[화학식 VII]

[화학식 VIII]

[화학식 IX]

[화학식 X]

[화학식 XI]

[화학식 XII]

(40) 세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물이, 이하의 (a) 또는 (b)인, (37)에 기재의 사용.

(41) 인터페론이, 페그화 인터페론인, (29) 내지 (35) 중 어느 하나에 기재의 사용.

(42) HCV 감염증이, C형 간염, 간경변, 간섬유화, 또는 간암인, (29) 내지 (35) 중 어느 하나에 기재의 사용.

도면의 간단한 설명

도 1은 스핑고지질의 생합성경로를 나타내는 도면이다. 세린 팔미토일트랜스페라아제(SPT)는 경로에 있어서의 초기효소(primary enzyme)이다.

도 2는 HCV 레플리콘 세포에 있어서의 미리오신의 항HCV 효과를 나타내는 도면 및 사진이다. (A) 미리오신의 존재하에 있어서의 FLR3-1 레플리콘 세포의 루시페라아제 활성 및 세포생존율을 나타내는 도면이다. 실험은 독립적으로 3회 이상 행하였다. (B) 데노보 스핑고리피드 생합성을 TLC에 의해 모니터링한 결과를 나타내는 사진이다. Cer: 세라미드, PS: 포스파티딜세린, PE: 포스파티딜에탄올아민, 및 SM: 스핑고미엘린.

도 3은 미리오신 존재하에서 HCV 단백질의 발현을 나타내는 사진이다. (A) HCV 레플리콘 세포에 미리오신을 첨가한 경우, NS3 단백질의 발현이 억제된 것을 나타내는 웨스턴 블롯의 사진이다. (B) HCV 레플리콘 세포에 미리오신을 첨가한 경우, NS3 단백질이 억제된 것을 나타내는 면역염색의 사진이다.

도 4는 HCV 유전자형 1b로 감염시킨 키메라 마우스에 있어서의 미리오신의 항HCV 효과를 나타내는 도면이다. (A) 키메라 마우스의 혈청 중의 HCV RNA 레벨을 나타내는 도면이다. 별표는 HCV RNA가 검출되지 않은 것을 나타낸다. (B) 키메라 마우스의 혈청 중의 인간 알부민 농도를 나타내는 도면이다.

도 5는 미리오신 처치 키메라 마우스의 간장에 있어서의 HCV RNA 및 코어 단백질의 검출결과를 나타내는 도면 및 사진이다. HCV RNA 및 코어 단백질은, HCV 유전자형 1a로 감염시킨 키메라 마우스의 간장에 있어서 검출되었다. 1a-1: 무처치, 1a-2: 무처치 및 비감염, 1a-3: PEG-1FN 처치, 및 1a-4: 미리오신 처치. (A) 총RNA 1 ㎍당 HCV RNA의 카피 수 및 총 단백질 1 ㎎당 HCV 코어 단백질의 발현 레벨을 나타내는 도면이다. 별표는 HCV RNA 또는 코어 단백질이 검출되지 않은 것을 나타낸다. (B) 키메라 마우스 간장에 있어서의 HCV 코어 단백질 및 인간 간세포의 면역형광염색 결과를 나타내는 사진이다. 왼쪽으로부터 각각, 인간 간세포, HCV 코어 단백질, 및 핵을 염색한 결과를 나타낸다.

도 6은 HCV 유전자형 1b로 감염시킨 키메라 마우스에 있어서의 화학식 III의 화합물의 항HCV 효과를 나타내는 도면이다. 각 투여군에 있어서의 키메라 마우스의 8일째 및 14일째의 혈청 중의 HCV RNA 레벨을 나타낸다.

발명을 실시하기 위한 최선의 형태

본 발명은 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론을 조합해서 되는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 「스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론을 조합해서 되는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물」이란, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론을, HCV 감염증의 치료 또는 예방에 있어서 동시에, 따로 따로, 또는 순차로 투여하기 위해 조합한 의약 조성물이면 된다. 본 발명의 의약 조성물은, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과 인터페론을 동일 의약 조성물 중에 함유하는 배합제여도 되고, 또한 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과 인터페론을 각각의 의약 조성물에 함유하는 것이어도 된다. 또한, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물을 함유하는 의약 조성물과 인터페론을 함유하는 의약 조성물을 키트로 한 것이어도 된다.

여기에서, 상기 「조합해서 되는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물」에 있어서, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과 인터페론이 각각의 의약 조성물에 함유되는 경우에는, 2개의 별개의 제제의 제형은 동일해도 되고, 각각이어도 된다. 예를 들면, 어느 한쪽 또는 양쪽이, 비경구제제, 주사제, 점적제, 정맥내 점적제여도 된다.

전술한 바와 같은, HCV 감염증의 치료 또는 예방에 있어서 사용하는 상기 조합 제제에 대해, 추가적으로 1개 이상의 제제를 조합한 것도, 상기 「조합해서 되는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물」에 포함된다.

또한, 본 발명은 인터페론과 병용하는 것을 특징으로 하는, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물을 유효성분으로서 함유하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물에 관한 것이다. 본 의약 조성물을 인터페론과 병용할 때는, 인터페론과 동시에 투여해도 되고, 인터페론의 투여 전 또는 투여 후에 본 의약 조성물을 투여해도 된다.

또한, 본 발명은 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과 병용하는 것을 특징으로 하는, 인터페론을 유효성분으로서 함유하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물에 관한 것이다. 인터페론을 본 의약 조성물과 병용할 때는, 본 의약 조성물과 동시에 투여해도 되고, 본 의약 조성물의 투여 전 또는 투여 후에 인터페론을 투여해도 된다.

본 발명에 있어서, 스핑고미엘린의 생합성과정으로서는, 보다 바람직하게는 팔미토일 CoA로부터 스핑고미엘린의 생합성과정(도 1)을 들 수 있다.

본 발명에 있어서, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물이란, 팔미토일 CoA로부터 스핑고미엘린의 생합성과정에 관여하는 생체내 반응을, 직접적 또는 간접적으로 저해하는 것이라면 어떠한 화합물이어도 된다. 스핑고미엘린의 생합성과정에 관여하는 효소의 활성을 저해하는 화합물, 생합성에 관여하는 효소의 발현을 저해하는 화합물이어도 되고, 또한, 이들 저해제를 생성 또는 증가시키는 화합물로서, 생합성에 관여하는 효소를 간접적으로 저해하는 화합물이어도 된다.

본 발명의 화합물이 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는지 여부는, 스핑고미엘린 생합성의 50% 저해농도(IC₅₀)값을 측정함으로써 판단할 수 있다. 당해 화합물은, 한정하는 것은 아니지만, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단한 결과, 최종적으로 통상의 스핑고미엘린 생합성에 대한 IC₅₀값이, 바람직하게는 1 μM 이하, 더욱 바람직하게는 100 nM 이하, 가장 바람직하게는 50 nM 이하인 화합물이면 된다. 스핑고미엘린 생합성의 IC₅₀값은, 당업자에게 임의의 측정방법으로 측정할 수 있으나, 예를 들면, 세포에 (¹⁴C)세린을 넣고, 그 지질 중의 양을 측정하는 방법(Nat Chem Biol. 2005 Nov; 1(6):333-7. Epub 2005 Oct 16.), 또는 HCV 서브게놈 레플리콘 세포를 사용하여, 루시페라아제 어세이에 의해 당해 화합물의 HCV RNA 복제의 저해활성을 측정하는 방법(실시예 1, Nat Chem Biol. 2005 Nov; 1(6):333-7. Epub 2005 Oct 16.) 등을 들 수 있다.

본 발명에 있어서, 스핑고미엘린의 생합성과정에 관여하는 효소로서는, 세린 팔미토일 전이효소, 3-케토디히드로스핑고신 환원효소, 디히드로스핑고신-N-아실 전이효소, 디히드로세라미드 불포화화 효소, 스핑고미엘린 합성효소 등이 있는데(도 1), 바람직하게는 세린 팔미토일 전이효소를 들 수 있다.

본 발명의 화합물로서는, 스핑고지질 생합성과정의 첫단계인, 팔미토일 CoA로부터 3-케토디히드로스핑고신의 생합성과정을 차단하는 화합물을 들 수 있다. 이 생합성과정을 차단하는 화합물로서는, 이 생합성에 관여하는 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물, 또는 세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물을 들 수 있다.

본 발명의, 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물로서는, 이 효소활성을 저해하는 것이라면 어떠한 것이어도 된다.

본 발명의 화합물이 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는지 여부는, 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성의 50% 저해농도(IC₅₀)값을 측정함으로써 판단할 수 있다. 당해 화합물은, 한정하는 것은 아니지만, 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성에 대한 IC₅₀값이 바람직하게는 1 μM 이하, 더욱 바람직하게는 100 nM 이하, 가장 바람직하게는 50 nM 이하인 화합물이면 된다. 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성의 IC₅₀값은, 당업자에게 임의의 측정방법으로 측정할 수 있으나, 예를 들면, 세포에 (¹⁴C)세린을 넣고, 그 지질 중의 양을 측정하는 방법(Nat Chem Biol. 2005 Nov; 1(6):333-7. Epub 2005 Oct 16.)을 들 수 있다.

본 발명의, 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물로서 바람직하게는 미리오신, 스핑고펀긴, 이하의 화학식 I으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 들 수 있다.

화학식 I:

[화학식 I]

화학식 중, A는 -(CH₂)_n-를 나타내고, 여기서 n은 0~10의 정수를 나타내며;

D는 -(CH₂)_m-R'를 나타내고, 여기서 m은 0~10의 정수를 나타내며, R'는 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 시클로알킬기, 치환되어 있어도 되는 복소환식기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, -OX기(여기서, X는 수소원자 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 시클로알킬기, 또는 치환되어 있어도 되는 아릴기를 나타낸다), 또는 할로겐원자를 나타내고;

결합 Q는 단일결합 또는 이중결합을 나타내며; 그리고

R¹, R², 및 R³는 동일 또는 상이하여, 수산기, 아미노기(탄소수 1~4의 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기로 모노 또는 디 치환되어 있어도 된다), -OL, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기를 나타내고, 여기서 L은 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기를 나타낸다.

본 발명에 있어서는, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기란, 특별히 본 명세서 중에서 정의하고 있는 경우를 제외하고, 탄소수 1~12의 직쇄 또는 분지쇄상의 탄화수소기를 의미하고, 바람직하게는 탄소수 1~7의 직쇄 또는 분지쇄상의 탄화수소기를 의미한다. 예를 들면, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기, n-부틸기, 이소부틸기, t-부틸기, 펜틸기, 헵틸기 등을 들 수 있다. 또한 시클로알킬기란, 탄소수 3~8의 환상 탄화수소기를 의미한다. 예를 들면, 시클로펜틸기, 시클로헥실기, 시클로헵틸기, 시클로헥세닐기 등을 들 수 있다. 또한, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기는, 탄소수 2~8의 직쇄 또는 분지쇄상의 탄화수소기로서, 하나 이상의 이중결합을 포함하는 것을 의미한다. 예를 들면, 비닐기, 1-프로페닐기, 알릴기, 2-부테닐기, 2-에테닐-2-부테닐기 등을 들 수 있다. 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기란, 탄소수 2~8의 직쇄 또는 분지쇄상의 탄화수소기로서, 하나 이상의 삼중결합을 포함하는 것을 의미한다. 예를 들면, 에티닐기, 1-프로피닐기, 2-프로피닐기, 1-부티닐기, 3-부티닐기, 2-펜티닐기, 3-펜티닐기, 4-펜티닐기, 2-헥시닐기, 4-헥시닐기, 2-데시닐기, 6,6-디메틸-헵타-2,4-디인-1-일기 등을 들 수 있다.

또한, 본 명세서에 있어서 기재되는 복소환식기란, 질소원자, 황원자, 및 산소원자로부터 독립적으로 선택되는 헤테로원자 1~4개(바람직하게는 1 또는 2개)를 환원(環員)으로서 포함하는 4~6원의 단환(單環) 또는 7~10원의 이환(二環)의 환상기(바람직하게는 단환기)로서, 하나 이상의 이중결합을 가지고 있어도 되는 기를 의미하고, 구체적으로는 피란, 모르폴린, 테트라히드로푸란, 디히드로푸란, 테트라히드로피란, 디히드로피란, 1,3-디옥산, 피페라진, 피페리딘, 티오모르폴린 등으로부터 유도되는 기를 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 기재되는 아릴기는, 방향족성을 갖는 단환(單環) 또는 다환(多環)의 탄화수소기를 의미한다. 구체적으로는, 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 플루오렌 등으로부터 유도되는 기를 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 기재되는 헤테로아릴기는, 방향족성을 갖고, 질소원자, 황원자, 및 산소원자로부터 독립적으로 선택되는 헤테로원자 1~4개(바람직하게는 1 또는 2개)를 환원으로서 포함하는 4~6원의 단환 또는 7~10원의 이환의 환상기(바람직하게는 단환기)를 의미한다. 구체적으로는, 푸란, 티오펜, 피롤, 디아졸, 피리딘, 티아졸, 이미다졸, 피리미딘, 인돌, 퀴놀린, 옥사졸, 이속사졸, 피라진, 트리아졸, 티아디아졸, 테트라졸, 피라졸 등으로부터 유도되는 기를 들 수 있다.

본 명세서에 있어서 기재되는 아랄킬기는, 상기 아릴기로 치환되어 있는 상기 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기를 의미하고, 구체적으로는 벤질기, 페네틸기 등을 들 수 있다

본 명세서에 있어서 기재되는 헤테로아릴알킬기는, 상기 헤테로아릴기로 치환되어 있는 상기 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기를 의미한다.

본 명세서에 있어서 기재되는 아실기는, 카르보닐기를 매개로 결합하고 있는, 상기 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 아릴기, 헤테로아릴기, 또는 복소환식기를 의미한다.

본 명세서에 있어서 기재되는 「치환되어 있어도 되는」은, 특별히 본 명세서 중에서 정의되어 있는 경우를 제외하고, 이와 같이 부기(附記)되어 있는 기가, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알콕시기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐옥시기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐옥시기, 시클로알킬기, 시클로알킬옥시기, 시아노기, 니트로기, 트리플루오로메틸기, 트리플루오로메톡시기, 할로겐원자, 아릴기, 아릴옥시기, 헤테로아릴기, 헤테로아릴옥시기, 아랄킬기, 아랄킬옥시기, 아미노기(직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기로 모노 또는 디 치환되어 있어도 된다), 아실기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬설포닐기, 카르바모일기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬티오기, 카르복실기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬카르보닐기, 포르밀기, 아미노설포닐기 등의 기로 치환되어 있어도 되는 것을 의미한다. 이들 치환기에 포함되는 아릴 및 헤테로아릴 부분은, 추가적으로 할로겐원자, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알콕시기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐옥시기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐옥시기, 시클로알킬기, 시클로알킬옥시기, 시아노기, 니트로기, 트리플루오로메틸기, 트리플루오로메톡시기, 할로겐원자, 아릴기, 아릴옥시기, 헤테로아릴기, 아랄킬기, 아랄킬옥시기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기로 모노 또는 디 치환되어 있어도 되는 아미노기, 아실기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬설포닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알콕시기, 카르바모일기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬티오기, 카르복실기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬카르보닐기, 포르밀기, 아미노설포닐기 등에 의해 모노, 디 또는 트리 치환되어 있어도 된다.

또한, 화학식 I으로 표시되는 화합물의 약학적으로 허용되는 염은, 당해 화합물과, 의약품의 제조에 사용 가능한 산 또는 염기를 접촉시킴으로써 제조된다. 상기 염으로서는 약리학적으로 허용되는 것이라면 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 염산, 황산, 질산, 인산, 브롬화수소산 등의 무기산과의 염; 초산, 타르타르산, 젖산, 구연산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, 톨루엔설폰산, 나프탈렌설폰산, 캄퍼설폰산 등의 유기산과의 염; 나트륨, 칼륨, 칼슘 등의 알칼리금속 또는 알칼리토류금속 등과의 염 등을 들 수 있다.

또한, 당해 염에는 당해 화합물이 형성하고 있어도 되는 수화물 또는 용매화물을 포함한다. 화학식 I으로 표시되는 화합물이 프리체로서 얻어지는 경우, 당해 화합물이 형성하고 있어도 되는 염 또는 그들의 수화물 또는 용매화물의 상태로, 통상적인 방법에 따라 변환할 수 있다.

본 발명의 화학식 I으로 표시되는 화합물은, 국제공개공보 WO2004/071503, WO2005/005372, 또는 WO2006/016657에 기재된 방법으로 합성할 수 있다.

본 발명의 화학식 I으로 표시되는 화합물의 바람직한 예로서는, 이하의 화합물을 들 수 있다.

본 발명의 화학식 I으로 표시되는 화합물의 보다 바람직한 예로서는, 화학식 II~XII 중 어느 하나로 표시되는 화합물을 들 수 있다.

[화학식 II]

[화학식 III]

[화학식 IV]

[화학식 V]

[화학식 VI]

[화학식 VII]

[화학식 VIII]

[화학식 IX]

[화학식 X]

[화학식 XI]

[화학식 XII]

본 발명의, 세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물로서는, 세린 팔미토일 전이효소를 코드하는 DNA의 전사산물과 상보적인 RNA, 또는 이 전사산물을 특이적으로 개열(開裂)하는 리보자임을 들 수 있다. 본 발명에 있어서, 발현을 억제하는 세린 팔미토일 전이효소의 유래는 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 포유동물 유래이고, 보다 바람직하게는 인간 유래이다. 세린 팔미토일 전이효소를 코드하는 DNA로서는 서열번호: 3 또는 5(LCB1 또는 LCB2)에 기재된 염기서열로 되는 DNA, 서열번호: 4 또는 6에 기재된 아미노산서열로 되는 단백질을 코드하는 DNA, 및 서열번호: 4 또는 6에 기재된 아미노산서열에 있어서 1 또는 복수의 아미노산이 치환, 결실, 부가, 및/또는 삽입된 아민노산서열로 되는 단백질을 코드하는 천연 유래의 DNA 등도 포함된다. 「1 또는 복수의 아미노산이 치환, 결실, 부가, 및/또는 삽입된 아민노산서열로 되는 단백질」은, 천연형의 단백질과 동등한 기능을 가지며, 또한 높은 상동성을 갖는 것이다. 높은 상동성이란, 아미노산서열 전체에서, 적어도 50% 이상, 보다 바람직하게는 70% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상(예를 들면, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상)의 서열의 동일성을 가리킨다.

상기 천연 유래의 DNA는, 서열번호: 3 또는 5에 기재된 염기서열로 되는 DNA로 하이브리다이즈하는 DNA이다. 하이브리다이제이션에 있어서의 조건은 당업자라면 적절히 선택할 수 있으나, 하이브리다이제이션 후의 세정에 있어서, 예를 들면 42℃, 5×SSC, 0.1% SDS의 조건이며, 바람직하게는 50℃, 5×SSC, 0.1% SDS의 조건이다. 보다 바람직한 하이브리다이제이션의 조건으로서는, 예를 들면 65℃, 0.1×SSC 및 0.1% SDS의 조건이다.

본 발명의 「효소의 발현을 억제」라는 기재에는, 유전자의 전사의 억제 및 단백질로의 번역의 억제가 포함된다. 또한, DNA의 발현의 완전한 정지 뿐 아니라 발현의 감소도 포함된다.

세린 팔미토일 전이효소를 코드하는 DNA의 전사산물과 상보적인 RNA로서는, 보다 바람직하게는 서열번호: 1 및 2로 나타내는 siRNA를 들 수 있다.

본 발명의 「효소를 코드하는 DNA의 전사산물과 상보적인 RNA」의 하나의 태양은, 효소를 코드하는 DNA의 전사산물과 상보적인 안티센스 RNA이다.

안티센스 핵산이 표적 유전자의 발현을 억제하는 작용으로서는, 이하와 같은 복수의 요인이 존재한다. 즉, 삼중가닥 형성에 의한 전사개시 저해, RNA 폴리머라아제에 의해 국소적으로 오픈 루프구조가 만들어진 부위와의 하이브리드 형성에 의한 전사 억제, 합성이 진행되고 있는 RNA와의 하이브리드 형성에 의한 전사 저해, 인트론과 엑손의 접합점에서의 하이브리드 형성에 의한 스플라이싱 억제, 스플라이세오솜(spliceosome) 형성부위와의 하이브리드 형성에 의한 스플라이싱 억제, mRNA와의 하이브리드 형성에 의한 핵으로부터 세포질로의 이행 억제, 캡핑부위나 폴리(A) 부가부위와의 하이브리드 형성에 의한 스플라이싱 억제, 번역개시인자 결합부위와의 하이브리드 형성에 의한 번역개시 억제, 개시코돈 근방의 리보솜 결합부위와의 하이브리드 형성에 의한 번역 억제, mRNA의 번역영역이나 폴리솜 결합부위와의 하이브리드 형성에 의한 펩티드사슬의 신장 저지, 및 핵산과 단백질의 상호작용부위와의 하이브리드 형성에 의한 유전자발현 억제 등이다. 이들은, 전사, 스플라이싱, 또는 번역의 과정을 저해하여, 표적 유전자의 발현을 억제한다.

본 발명에서 사용되는 안티센스 서열은, 상기 중 어느 작용으로 표적 유전자의 발현을 억제해도 된다. 하나의 태양으로서는, 유전자의 mRNA의 5'말단 근방의 비번역영역에 상보적인 안티센스 서열을 설계하면, 유전자의 번역 저해에 효과적일 것이다. 그러나, 코드영역 또는 3'측의 비번역영역에 상보적인 서열도 사용 가능하다. 이와 같이, 유전자의 번역영역 뿐 아니라 비번역영역의 서열의 안티센스 서열을 포함하는 DNA도, 본 발명에서 이용되는 안티센스 DNA에 포함된다. 사용되는 안티센스 DNA는, 적당한 프로모터의 하류에 연결되고, 바람직하게는 3'측에 전사종결 시그날을 포함하는 서열이 연결된다. 이와 같이 하여 조제된 DNA는, 공지의 방법으로, 목적하는 식물로 형질전환할 수 있다. 안티센스 DNA의 서열은, 형질전환하는 식물이 갖는 내재성 유전자 또는 그의 일부와 상보적인 서열인 것이 바람직하나, 유전자의 발현을 유효하게 저해할 수 있는 한, 완전하게 상보적이지 않아도 된다. 전사된 RNA는, 표적으로 하는 유전자의 전사산물에 대해 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 상보성을 갖는다. 안티센스 서열을 사용하여, 효과적으로 표적 유전자의 발현을 저해하는데는, 안티센스 DNA의 길이는, 적어도 15 염기 이상이고, 바람직하게는 100 염기 이상이며, 더욱 바람직하게는 500 염기 이상이다. 통상, 사용되는 안티센스 DNA의 길이는 5 kb 보다도 짧고, 바람직하게는 2.5 kb 보다도 짧다.

「효소를 코드하는 DNA의 전사산물과 상보적인 RNA」의 다른 하나의 태양은, 효소를 코드하는 DNA의 전사산물과 상보적인 dsRNA이고, RNAi 기술을 포함한다. RNAi는 표적 유전자 서열과 동일 또는 유사한 서열을 갖는 이중가닥 RNA(이하 dsRNA)를 세포내에 도입하면, 도입된 외래유전자 및 표적 내재성 유전자의 발현이 모두 억제되는 현상이다. 세포에 약 40~수백 염기쌍의 dsRNA가 도입되면, 헬리카제 도메인을 갖는 다이서(Dicer)로 불리는 RNaseIII 유사 뉴클레아제가 ATP 존재하에서, dsRNA를 3'말단으로부터 약 21~23 염기쌍씩 잘라내, siRNA(short interference RNA)를 생성한다. 이 siRNA에 특이적인 단백질을 결합하고, 뉴클레아제 복합체(RISC: RNA-induced silencing complex)가 형성된다. 이 복합체는 siRNA와 동일한 서열을 인식하여 결합하고, RNaseIII 유사 효소활성에 의해 siRNA의 중앙부에서 표적 유전자의 mRNA를 절단한다. 또한, 이 경로와는 별도로 siRNA의 안티센스 가닥이 mRNA에 결합하고 RNA 의존성 RNA 폴리머라아제(RsRP)의 프라이머로서 작용하여, dsRNA가 합성된다. 이 dsRNA가 다시 다이서의 기질이 되어, 새로운 siRNA를 생성하여 작용을 증폭시키는 경로도 생각되고 있다.

본 발명의 RNA는, 표적 유전자 mRNA 중 어느 하나의 영역에 대한 안티센스 RNA를 코드한 안티센스코드 DNA와, 표적 유전자 mRNA 중 어느 하나의 영역의 센스 RNA를 코드한 센스코드 DNA로부터 발현시킬 수 있다. 또한, 이들 안티센스 RNA 및 센스 RNA로부터 dsRNA를 제작하는 것도 가능하다.

본 발명의 dsRNA의 발현 시스템을, 벡터 등에 보지(保持)시키는 경우의 구성으로서는, 동일 벡터로부터 안티센스 RNA, 센스 RNA를 발현시키는 경우와, 상이한 벡터로부터 각각 안티센스 RNA, 센스 RNA를 발현시키는 경우가 있다. 예를 들면, 동일한 벡터로부터 안티센스 RNA, 센스 RNA를 발현시키는 구성으로서는, 안티센스코드 DNA 및 센스코드 DNA의 상류에 각각 pol III계와 같은 짧은 RNA를 발현 가능한 프로모터를 연결시킨 안티센스 RNA 발현 카세트, 센스 RNA 발현 카세트를 각각 구축하고, 이들 카세트를 동방향으로 또는 역방향으로 벡터에 삽입함으로써 구성할 수 있다. 또한, 상이한 가닥 상에 대향하도록 안티센스코드 DNA와 센스코드 DNA를 반대방향으로 배치한 발현 시스템을 구성하는 것도 가능하다. 이 구성에서는, 안티센스 RNA 코드 가닥과 센스 RNA 코드 가닥이 쌍으로 된 하나의 이중가닥 DNA(siRNA 코드 DNA)가 구비되어, 그 양쪽에 각각의 가닥으로부터 안티센스 RNA, 센스 RNA를 발현 가능하도록 프로모터를 대향하여 구비한다. 이 경우에는, 센스 RNA, 안티센스 RNA의 하류에 여분의 서열이 부가되는 것을 피하기 위해, 각각의 가닥(안티센스 RNA 코드 가닥, 센스 RNA 코드 가닥)의 3'말단에 터미네이터를 각각 구비하는 것이 바람직하다. 이 터미네이터는, A(아데닌) 염기를 4개 이상 연결시킨 서열 등을 사용할 수 있다. 또한, 이 팔린드롬 스타일의 발현 시스템(palindromic expression system)에서는, 2개의 프로모터의 종류를 상이하게 하는 것이 바람직하다.

또한, 상이한 벡터로부터 안티센스 RNA, 센스 RNA를 발현시키는 구성으로서는, 예를 들면, 안티센스코드 DNA 및 센스코드 DNA의 상류에 각각 pol III계와 같은 짧은 RNA를 발현 가능한 프로모터를 연결시킨 안티센스 RNA 발현 카세트, 센스 RNA 발현 카세트를 각각 구축하여, 이들 카세트를 상이한 벡터에 보지(保持)시킴으로써 구성할 수 있다.

본 발명의 RNAi에 있어서는, dsRNA로서 siRNA가 사용된 것이어도 된다. 「siRNA」는, 세포내에서 독성을 나타내지 않는 범위의 단쇄(短鎖)로 되는 이중가닥 RNA를 의미하고, 예를 들면 15~49 염기쌍과, 적합하게는 15~35 염기쌍과, 더욱 적합하게는 21~30 염기쌍으로 할 수 있다. 또는, 발현되는 siRNA가 전사되어 최종적인 이중가닥 RNA 부분의 길이가, 예를 들면, 15~49 염기쌍, 적합하게는 15~35 염기쌍, 더욱 적합하게는 21~30 염기쌍으로 할 수 있다.

RNAi에 사용하는 DNA는, 표적 유전자와 완전히 동일할 필요는 없지만, 적어도 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열의 상동성을 갖는다.

dsRNA에 있어서의 RNA끼리가 대합(對合)한 이중가닥 RNA의 부분은, 완전히 대합하고 있는 것에 한정되지 않고, 미스매치(대응하는 염기가 상보적이지 않음), 벌지(한쪽 가닥에 대응하는 염기가 없음) 등에 의해 부대합부분이 포함되어 있어도 된다. 본 발명에 있어서는, dsRNA에 있어서의 RNA끼리가 대합하는 이중가닥 RNA영역 중에, 벌지 및 미스매치 양쪽이 포함되어 있어도 된다.

본 발명의 「효소의 발현의 억제」는, 또한, 리보자임을 코드하는 DNA를 이용해서 행하는 것도 가능하다. 리보자임이란 촉매활성을 갖는 RNA 분자를 말한다. 리보자임에는 각종 활성을 갖는 것이 있는데, 그 중에서도 RNA를 절단하는 효소로서의 리보자임의 연구에 의해, RNA의 부위 특이적인 절단을 목적으로 하는 리보자임의 설계가 가능해졌다. 리보자임에는, 그룹 I 인트론형이나, RNaseP에 포함되는 M1RNA와 같이 400 뉴클레오티드 이상의 크기인 것도 있으나, 해머헤드형이나 헤어핀형으로 불리는 40 뉴클레오티드 정도의 활성 도메인을 갖는 것도 있다.

예를 들면, 해머헤드형 리보자임의 자기절단 도메인은, G13U14C15의 C15의 3'측을 절단하는데, 활성에는 U14가 9번 위치의 A와 염기쌍을 형성하는 것이 중요하고, 15 위치의 염기는 C 외에 A 또는 U에서도 절단되는 것이 나타내어져 있다. 리보자임의 기질 결합부를 표적 부위 근방의 RNA 서열과 상보적이 되도록 설계하면, 표적 RNA 중의 UC, UU 또는 UA라는 서열을 인식하는 제한효소적인 RNA 절단 리보자임을 제작하는 것이 가능하다. 예를 들면, 저해 표적이 되는 본 발명의 효소의 코드영역 중에는 표적이 될 수 있는 부위가 복수 존재한다.

또한, 헤어핀형 리보자임도, 본 발명의 목적을 위해 유용하다. 헤어핀형 리보자임은, 예를 들면 타바코 링스팟 바이러스(Tobacco ringspot virus)의 위성 RNA의 마이너스 가닥에 발견된다(J. M. Buzayan Nature 323:349, 1986). 이 리보자임도 표적 특이적인 RNA 절단을 일으키도록 설계할 수 있는 것이 나타내어져 있다.

표적을 절단할 수 있도록 설계된 리보자임은, 식물세포 중에서 전사되도록 꽃양배추 모자이크 바이러스의 35S 프로모터 등의 프로모터 및 전사종결서열에 연결된다. 그러나, 이 때, 전사된 RNA의 5'말단이나 3'말단에 여분의 서열이 부가되어 있으면, 리보자임의 활성이 상실되어 버리는 경우가 있다. 이러한 경우, 전사된 리보자임을 포함하는 RNA로부터 리보자임 부분만을 정확하게 잘라내기 위해, 리보자임 부분의 5'측이나 3'측에, 트리밍을 행하기 위한 시스로 작용하는 별도의 트리밍 리보자임을 배치시키는 것도 가능하다(K. Taira et al. (1990) Protein Eng. 3:733, A. M. Dzianottand J. J. Bujarski (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 86: 4823, C. A. Grosshansand R. T. Cech (1991) Nucleic Acids Res. 19:3875, K. Taira et al. (1991) Nucleic Acids Res. 19:5125). 또한, 이러한 구성단위를 직렬로 늘어놓고, 표적 유전자 내의 복수의 부위를 절단할 수 있도록 하여, 보다 효과를 높이는 것도 가능하다(N. Yuyama et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 186:1271, 1992). 이러한 리보자임을 사용하여 본 발명에서 표적이 되는 유전자의 전사산물을 특이적으로 절단하여, 이 유전자의 발현을 억제할 수 있다.

본 발명에 있어서, 「인터페론」이란, 바이러스, 이중가닥 RNA, 렉틴 등에 의해 동물세포로부터 유발되는 항바이러스작용을 가진 단백질 또는 당단백질의 총칭을 의미한다. 항바이러스작용 외에, 세포증식 억제작용, 면역조절작용을 갖는다. 생산세포, 특이적 수용체와의 결합능, 생물·물리화학적 성질로부터 수종의 타입으로 분류되고, 주요한 것으로서는 α, β, γ가 있는데, 이 외에, IFNω, IFNτ의 존재가 알려져 있다. 또한 인터페론 α에는 20종 이상의 서브타입의 존재가 알려져 있다. 현재, 천연형 뿐 아니라, PEG화, 콘센서스 인터페론 등의 각종 유전자 재조합형 제제가 개발·시판되고 있다.

본 발명에 있어서의 인터페론은, 상기 타입 중 어느 것이어도 되지만, 바람직하게는 α 또는 γ이다. 또한, 본 발명에 있어서의 인터페론은, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과의 병용으로 HCV 증식 억제능을 증강시키는 한, 천연형, 인공적으로 변이된 유전자 재조합형, 천연에 존재하는 변이체, 융합 단백질, 또는 이들의 단편 등 중 어느 것이어도 된다. 또한, 본 발명의 인터페론은 PEG(폴리에틸렌글리콜)화 되어 있어도 된다. 인터페론의 PEG화는 당업자에게 공지의 방법(특허2980569호)으로 행할 수 있다.

본 발명에 있어서의 인터페론의 유래에 특별히 제한은 없고, 예를 들면, 인간, 침팬지, 오랑우탄, 개, 말, 양, 염소, 당나귀, 돼지, 고양이, 마우스, 기니피그, 랫트, 토끼 등을 유래로 할 수 있으나, 이들에 한정되지 않고 기타 포유동물을 유래로 할 수 있다. 바람직하게는 인간 유래의 인터페론이다.

인간 인터페론 α 또는 γ의 아미노산서열은 공지로, 예를 들면 인터페론 α라면 GenBank:NM_0240013에 기재된 아미노산서열을 사용할 수 있고, 인터페론 γ라면 GenBank:NM_000619에 기재된 아미노산서열을 사용할 수 있다. 인터페론 α의 아미노산서열을 서열번호: 7에, 염기서열을 서열번호: 8에, 인터페론 γ의 아미노산서열을 서열번호: 9에, 동 γ의 염기서열을 서열번호: 10에 나타낸다. 상기 인터페론은, 당업자에게 주지의 방법으로 조제 가능하다. 예를 들면, 인간 유래의 인터페론 생산세포로부터 주지 수단에 의해 mRNA를 조제하여 cDNA 라이브러리를 제작하고, 이 cDNA 라이브러리 중에서, 서열번호: 8 또는 서열번호: 10에 기재된 염기서열의 전부 또는 일부의 염기서열로 되는 프로브와 스트린젠트한 조건에서 하이브리다이즈하는 cDNA를 선택하여, 이 cDNA를 적당한 숙주·벡터계를 사용해서 발현시키고, 얻어진 단백질을 정제함으로써 조제 가능하다. 숙주·벡터계는, 후술하는, 항체의 제조에 사용 가능한 숙주·벡터계의 예 중에서 사용해도 된다. 또는, 서열번호: 8 또는 서열번호: 10에 기재된 염기서열을 토대로 프라이머를 설계하고, 인간 유래의 인터페론 생산세포로부터 조제한 mRNA를 주형으로 하여 상기 프라이머를 사용하여 RT-PCR을 실시하고, 얻어진 cDNA를 발현시켜서 조제하는 것도 가능하다.

상기 스트린젠트한 하이브리다이제이션 조건은, 당업자라면 적절히 선택할 수 있다. 일례를 나타내자면, 25% 포름아미드, 보다 엄격한 조건에서는 50% 포름아미드, 4×SSC, 50 mM Hepes pH 7.0, 10×덴하르트용액, 20 ㎍/㎖ 변성 연어정자 DNA를 포함하는 하이브리다이제이션 용액 중, 42℃에서 하룻밤 프리하이브리다이제이션을 행한 후, 표지한 프로브를 첨가하여, 42℃에서 하룻밤 보온함으로써 하이브리다이제이션을 행한다. 그 후의 세정에 있어서의 세정액 및 온도 조건은, 「1×SSC, 0.1% SDS, 37℃」정도이고, 보다 엄격한 조건으로서는 「0.5×SSC, 0.1% SDS, 42℃」정도이며, 더욱 엄격한 조건으로서는 「0.2×SSC, 0.1% SDS, 65℃」정도에서 실시할 수 있다. 이와 같이 하이브리다이제이션의 세정 조건이 엄격해질수록 프로브 서열과 높은 상동성을 갖는 폴리뉴클레오티드의 단리를 기대할 수 있다. 단, 상기 SSC, SCS 및 온도 조건의 조합은 예시이고, 당업자라면, 하이브리다이제이션의 스트린젠시를 결정하는 상기 또는 다른 요소(예를 들면, 프로브 농도, 프로브의 길이, 하이브리다이제이션 반응시간 등)를 적절히 조합함으로써, 상기와 동일한 스트린젠시를 실현하는 것이 가능하다.

이러한 하이브리다이제이션 기술을 이용하여 단리되는 폴리뉴클레오티드가 코드하는 폴리펩티드는, 통상, 본 발명자들에 의해 동정된 폴리펩티드와 아미노산서열에 있어서 높은 상동성을 갖는다. 높은 상동성이란, 적어도 40% 이상, 바람직하게는 60% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 적어도 95% 이상, 더욱 바람직하게는 적어도 97% 이상(예를 들면, 98~99%)의 서열의 상동성을 가리킨다. 아미노산서열의 동일성은, 예를 들면, Karlin and Altschul에 의한 알고리즘 BLAST(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877, 1993)에 의해 결정할 수 있다. 이 알고리즘을 토대로, BLASTX로 불리는 프로그램이 개발되어 있다(Altschul et al. J. Mol. Biol. 215:403-410, 1990). BLASTX에 의해 아미노산서열을 해석하는 경우에는, 파라미터는 예를 들면 score=50, wordlength=3으로 한다. BLAST와 Gapped BLAST 프로그램을 사용하는 경우에는, 각 프로그램의 디폴트 파라미터를 사용한다. 이들 해석방법의 구체적인 수법은 공지이다(http://www.ncbi.nlm.nih.gov.).

또한 상기 서열의 인터페론에 한정되지 않고, 상기 서열의 인터페론과 유사한 폴리펩티드도, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과의 병용으로 HCV 증식 억제능을 증강시키는 한, 본 발명에 있어서 적합하게 사용할 수 있다. 이러한 폴리펩티드로서, 서열번호: 7에 기재된 아미노산서열에 있어서, 1 또는 복수의 아미노산이 결실, 치환, 부가 또는/및 삽입된 아미노산서열을 포함하는 폴리펩티드로서, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과의 병용으로 높은 HCV 증식 억제능을 갖는 폴리펩티드, 서열번호: 9에 기재된 아미노산서열에 있어서, 1 또는 복수의 아미노산이 결실, 치환, 부가 또는/및 삽입된 아미노산서열을 포함하는 폴리펩티드로서, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과의 병용으로 높은 HCV 증식 억제능을 갖는 폴리펩티드, 서열번호: 8에 기재된 염기서열과 스트린젠트한 조건에서 하이브리다이즈하는 염기서열에 의해 코드되는 아미노산서열을 포함하는 폴리펩티드로서, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과의 병용으로 높은 HCV 증식 억제능을 갖는 폴리펩티드, 서열번호: 10에 기재된 염기서열과 스트린젠트한 조건에서 하이브리다이즈하는 염기서열에 의해 코드되는 아미노산서열을 포함하는 폴리펩티드로서, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과의 병용으로 높은 HCV 증식 억제능을 갖는 폴리펩티드를 들 수 있다.

이러한 폴리펩티드는, 당업자에게 주지의 방법으로 조제할 수 있다. 예를 들면, 서열번호: 8 또는 10에 기재된 염기서열의 전부 또는 일부를 프로브로 하고, 인터페론 생산세포로부터 조제한 cDNA 라이브러리 중에서 하이브리다이즈할 클론을 선택하여, 발현시킴으로써 조제할 수 있다. 또는, 서열번호: 8 또는 10에 기재된 염기서열에, PCR에 의한 변이 도입법이나 카세트 변이법 등의 당업자에게 주지의 유전자 개변방법을 행하여, 부위 특이적으로 또는 랜덤으로 변이를 도입함으로써, 조제할 수 있다. 또는 서열번호: 8 또는 10에 기재된 염기서열에 변이를 도입한 서열을, 시판의 핵산 합성장치에 의해 합성하는 것도 가능하다.

본 명세서에 있어서 「치료」라는 기재는, 본 발명의 약물을 피험자에게 투여함으로써, HCV를 소멸 또는 경감시키는 것, 추가적인 HCV의 확산을 억제하는 것, HCV의 감염에 의한 증상을 경감하는 것을 의미한다. 또한 「예방」이라는 기재는, HCV의 감염 전에, 피험자에게 투여되어, HCV의 감염을 방지하거나, 증식을 억제시키는 것을 의미한다. HCV의 감염에 의한 증상으로서는, C형 간염, 간경변, 간섬유화, 간암 등을 들 수 있다.

본 발명에 있어서 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과 인터페론의 병용은, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과 인터페론을 함께 투여 또는 사용(이하, 간단히 「투여」라고 기재한다.)하는 것을 의미하고, 투여순서나 투여간격 등으로 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 화합물과 인터페론을 조합한 키트로서 실시해도 된다. 또한, 본 발명의 화합물과 인터페론을 병용하는 경우는, 어느 하나를 단독으로 사용하는 경우에 비해, 목적에 따라 각각의 투여량을 적게 하는 것도 가능하다.

본 발명의 화합물과 인터페론의 투여순서는, 상기 화합물의 투여 후에 인터페론을 투여, 상기 화합물과 인터페론을 동시에 투여, 인터페론 투여 후에 상기 화합물을 투여, 중 어느 순서여도 된다.

본 발명의 화합물과 인터페론을 따로 따로 투여하는 경우, 상기 화합물과 인터페론의 투여간격은 특별히 한정되지 않고, 투여 경로나 제형 등의 요인을 고려하여 설정할 수 있다. 굳이 투여간격의 일례를 들자면, 통상, 0시간~168시간이고, 바람직하게는 0시간~72시간이며, 더욱 바람직하게는 0시간~24시간이고, 더욱 바람직하게는 0시간~12시간이다.

또한, 인터페론의 투여간격으로서는, 한정되는 것은 아니지만, 통상 하루에 1회~한달에 1회이고, 바람직하게는 주 1회이다. 또한, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물의 투여간격으로서는, 한정되는 것은 아니지만, 통상 하루에 1회~두달에 1회, 바람직하게는 하루에 1회~한달에 1회이다.

또한, 본 발명의 화합물과 인터페론을 따로 따로 투여하는 경우, 투여방법이나 1일당 투여횟수는 동일해도 되고 상이해도 된다. 또한, 본 발명의 화합물과 인터페론의 중량비도 특별히 한정되지 않는다.

본 발명의 화합물은, 그대로, 또는 그의 약리학적으로 허용되는 염으로서 의약에 사용할 수 있다. 상기 염으로서는 약리학적으로 허용되는 것이라면 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 염산, 황산, 질산, 인산, 브롬화수소산 등의 무기산과의 염; 초산, 타르타르산, 젖산, 구연산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, 톨루엔설폰산, 나프탈렌설폰산, 캄퍼설폰산 등의 유기산과의 염; 나트륨, 칼륨, 칼슘 등의 알칼리금속 또는 알칼리토류금속 등과의 염 등을 들 수 있다.

상기 의약 제제에 포함되는 유효성분 화합물의 양은, 특별히 한정되지 않고 광범위하게 적절히 선택되나, 예를 들면, 0.1~99.5 중량%, 바람직하게는 0.5~90 중량%이다.

본 발명의 화합물을 통상적인 방법에 따라 주약으로서, 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 교미교취제, 용해보조제, 현탁제, 코팅제 등의 의약의 제제 기술분야에 있어서 통상 사용 가능한 기지의 보조제를 사용하여 제제화할 수 있다. 정제의 형태로 성형할 때는, 담체로서 이 분야에서 종래 공지의 것을 넓게 사용할 수 있고, 예를 들면 젖당, 백당, 염화나트륨, 글루코오스, 요소, 전분, 탄산칼슘, 카올린, 결정 셀룰로오스, 규산 등의 부형제; 물, 에탄올, 프로판올, 단미시럽, 글루코오스액, 전분액, 젤라틴용액, 카르복시메틸셀룰로오스, 쉘락, 메틸셀룰로오스, 인산칼륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제; 건조전분, 알길산나트륨, 한천 분말, 라미나란 분말, 탄산수소나트륨, 탄산칼슘, 폴리옥시에틸렌소르비탄지방산에스테르, 라우릴황산나트륨, 스테아르산모노글리세리드, 전분, 젖당 등의 붕괴제; 백당, 스테아린, 카카오버터, 수소 첨가유 등의 붕괴 억제제; 제4급 암모늄염류, 라우릴황산나트륨 등의 흡수 촉진제; 글리세린, 전분 등의 보습제; 전분, 젖당, 카올린, 벤토나이트, 콜로이드상 규산 등의 흡착제; 정제 탈크, 스테아르산염, 붕산 분말, 폴리에틸렌글리콜 등의 윤택제 등을 예시할 수 있다.

또한 정제는, 필요에 따라, 통상의 제피(劑皮)를 행한 정제, 예를 들면, 당의정, 젤라틴 피포정(被包錠), 장용피정, 필름 코팅정 또는 이중정, 다층정으로 할 수 있다. 환제의 형태로 성형할 때는, 담체로서 이 분야에서 종래 공지의 것을 넓게 사용할 수 있고, 예를 들면 글루코오스, 젖당, 카카오버터, 전분, 경화식물유, 카올린, 탈크 등의 부형제; 아라비아고무 분말, 트래거캔스 분말, 젤라틴, 에탄올 등의 결합제; 라미나란 한천 등의 붕괴제 등을 예시할 수 있다. 좌제의 형태로 성형할 때는, 담체로서 이 분야에서 종래 공지의 것을 넓게 사용할 수 있고, 예를 들면 폴리에틸렌글리콜, 카카오버터, 고급 알코올, 고급 알코올의 에스테르류, 젤라틴, 반합성 글리세리드 등을 들 수 있다. 주사제로서 조제되는 경우에는, 액제 및 현탁제는 살균되고, 또한 혈액과 등장인 것이 바람직하며, 이들 액제, 유제 및 현탁제의 형태로 성형할 때는, 희석제로서 이 분야에서 관용되고 있는 것을 모두 사용할 수 있고, 예를 들면, 물, 에탄올, 프로필렌글리콜, 에톡시화 이소스테아릴알코올, 폴리옥시화 이소스테아릴알코올, 폴리옥시에틸렌소르비탄지방산에스테르류 등을 들 수 있다. 또한, 이 경우, 등장성 용액을 조제하는데 충분한 양의 식염, 글루코오스, 또는 글리세린을 의약 제제 중에 함유시켜도 되고, 또한 통상의 용해 보조제, 완충제, 무통화제 등을 첨가해도 된다. 또한 필요에 따라 착색제, 보존제, 향료, 풍미제, 감미제 등이나 다른 의약품을 함유하는 것도 가능하다.

상기 의약 조성물은, 투여단위 형태로 투여하는 것이 바람직하고, 경구투여, 조직내 투여(피하투여, 근육내 투여, 정맥내 투여 등), 국소투여(경피투여 등) 또는 경직장적으로 투여할 수 있다. 상기 의약 조성물은, 이들 투여방법에 적합한 제형으로 투여되는 것은 당연하다.

본 발명의 화합물 등 또는 그것의 제제상 허용 가능한 염을 의약으로서 투여하는 경우, 항바이러스제로서의 용량은, 연령, 체중 등의 환자의 상태, 투여경로, 병의 성질과 정도 등을 고려하여 조정하는 것이 바람직하나, 통상은, 사람에 대해서는, 성인에 대해 본 발명의 유효 성분량으로서, 1일당 0.1~2000 ㎎의 범위이다. 상기 범위 미만의 용량으로 족한 경우도 있으나, 반대로 상기 범위를 초과하는 용량을 필요로 하는 경우도 있다. 다량으로 투여할 때는, 1일 수회로 분할하여 투여하는 것이 바람직하다.

상기 경구투여는 고형, 분말 또는 액상의 용량단위로 행할 수 있고, 예를 들면, 분말제, 산제, 정제, 당의제, 캡슐제, 드롭제, 설하제(舌下劑), 기타 제형 등으로 행할 수 있다.

상기 조직내 투여는, 예를 들면, 용액이나 현탁제 등의 피하, 근육내 또는 정맥내 주사용 액상 용량단위 형태를 사용함으로써 행할 수 있다. 이들 것은, 본 발명의 화합물 또는 그의 제제상 허용되는 염의 일정량을, 예를 들면, 수성이나 유성의 매체 등의 주사 목적에 적합한 비독성의 액상 담체에 현탁 또는 용해하고, 이어서 상기 현탁액 또는 용액을 멸균함으로써 제조된다.

상기 국소투여(경피투여 등)는, 예를 들면, 액제, 크림제, 분말제, 페이스트제, 겔제, 연고제 등의 외용 제제의 형태를 사용함으로써 행할 수 있다. 이들의 것은, 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 일정량을, 외용 제제의 목적에 적합한 향료, 착색료, 충전제, 계면활성제, 보습제, 피부연화제, 겔화제, 담체, 보존제, 안정제 등 중 1종 이상과 조합함으로써 제조된다.

상기 경직장적 투여는 본 발명의 화합물 또는 그의 제제상 허용되는 염의 일정량을, 예를 들면, 팔미트산 미리스틸에스테르 등의 고급 에스테르류, 폴리에틸렌글리콜, 카카오버터, 이들의 혼합물 등으로 되는 저융점 고체에 혼입한 좌제 등을 사용해서 행할 수 있다.

상기 투여는, 예를 들면 용액이나 현탁제 등의 피하, 근육내 또는 정맥내 주사용 액상 용량단위 형태를 사용함으로써 행할 수 있다. 이들 것은, 본 발명의 화합물 또는 그의 제제상 허용되는 염의 일정량을, 예를 들면, 수성이나 유성의 매체 등의 주사 목적에 적합한 비독성의 액상 담체에 현탁 또는 용해하고, 이어서 상기 현탁액 또는 용액을 멸균함으로써 제조된다.

또한, 본 명세서에 있어서 인용된 모든 선행기술문헌은, 참조로서 본 명세서에 포함된다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 더욱 구체적으로 설명하나 본 발명은 이들 실시예에 제한되는 것은 아니다.

[실시예 1] SPT 저해제 미리오신의 항HCV 작용

본 발명자들은, HCV 서브게놈 레플리콘 세포 FLR3-1에 있어서의, 미리오신의 항HCV 작용 및 세포독성을 조사하였다.

먼저, 미리오신(Sigma, St. Louis, MO, USA)을, HCV 서브게놈 레플리콘 세포 FLR3-1(유전자형 1b; Con-1; Sakamoto, H. et al., Nat Chem Biol, 1, 333-337(2005))의 증식배지에 최종농도 0.2, 1.0, 3.9, 15.6, 또는 62.5 nM이 되도록 첨가하였다. 72시간 인큐베이트한 후, 본 발명자들은 Bright-Glo 루시페라아제 어세이 키트(Promega, Madison, WI, USA)를 사용해서 루시페라아제 어세이를 행하였다.

또한, 미리오신을 FLR3-1 세포에 첨가하고, 72시간 인큐베이트한 후에, Tetra Color One 키트(Seikagakukogyo, Tokyo, Japan)를 사용해서 제조원의 설명서에 따라 세포생존율을 측정하였다.

그 결과, 루시페라아제 활성은, 미리오신에 의해, 세포생존율(도 2A) 또는 세포증식(데이터는 나타내지 않음)에 영향을 미치지 않고 용량 의존적으로 크게 감소하는 것이 명확해졌다. 최대 저해율은 62.5 nM의 미리오신의 존재하에서 약 80%였으나(도 2A), 50% 저해농도(IC₅₀)는 약 5.8 nM이었다(표 1).

HCV 복제에 있어서 중요한 역할을 하는 NS3 단백질의 감소도 마찬가지로, 이뮤노블로팅 분석 및 면역형광염색에 의해 확인되어, 미리오신이 강력한 항HCV 효과를 갖는 것이 시사되었다(도 3).

[실시예 2] 스핑고지질 대사물과 HCV 복제와의 상관

스핑고지질 대사물과 HCV 복제와의 상관을 조사하기 위해, 본 발명자들은 미리오신의 존재하에서의 FLR3-1 세포에 의한 데노보 스핑고지질 생합성을 모니터링하였다.

먼저, FLR3-1 세포를 Opti-MEM(Invitrogen)에 있어서 [¹⁴C]세린(0.5 μCi/㎖)과 함께 2시간 인큐베이트하였다. 세포를 0.1% SDS에 의해 용해한 후, 총지질을 클로로포름/메탄올(1:2 v/v)로 추출하였다. 추출물을 실리카겔 60 박층 크로마토그래피(TLC)플레이트(Merck, Darmstadt, Germany)에 스폿하여, 초산메틸/1-프로판올/클로로포름/메탄올/0.25% KCl(25:25:25:10:9, v/v)에 의해 크로마토그래프하였다. 방사활성 스폿을 BAS 2000에 의해 검출하였다(Fuji Film, Kanagawa, Japan).

그 결과, 세라미드 및 스핑고미엘린의 생산은 모두, 용량 의존적으로 저해되었으나, 스핑고신의 대사물인 포스파티딜에탄올아민 및 포스파티딜세린의 생산은, 영향을 받지 않는 것이 명확해졌다(도 2B).

HCV 서브게놈 레플리콘 복제의 억제가 스핑고지질의 고갈에 의해 일어나는지 여부를 확인하기 위해, 본 발명자들은 스핑고지질 생합성경로의 중간체인 디히드로스핑고신, 스핑고신, 또는 스핑고신-1-포스페이트의 존재하에서 미리오신의 항HCV 효과를 조사하였다(도 1).

FLR3-1 세포를 1 또는 2.5 μM 스핑고지질 중간체(디히드로스핑고신, 스핑고신, 또는 스핑고신-1-포스페이트)와 함께 인큐베이트하고, 연속 희석한 미리오신을 첨가하였다. 72시간 후, 각 조합의 IC₅₀을 루시페라아제 어세이에 의해 측정하였다.

HCV 레플리콘의 복제능은, 스핑고지질 생합성의 중간체 분자의 보완에 의해 회복되는 것이 명확해졌다(표 1). 이들 결과로부터, 미리오신에 의한 복제의 억제는, 스핑고지질 생합성의 억제가 원인인 것이 명확해졌다.

[실시예 3] HCV에 감염된 키메라 마우스에 있어서의 미리오신 및 PEG-IFN의 항HCV 효과

HCR6(유전자형 1b)에 감염시킨, 인간화 간장을 갖는 키메라 마우스를 사용하여, 미리오신의 저해능을 조사하였다. 키메라 마우스는, 구입한 것(주식회사 페닉스바이오, 히로시마, 일본)을 사용하였다.

구체적으로는, 표 2에 따라 미리오신 및/또는 PEG-IFN(Chugai, Tokyo, Japan)을, HCV 유전자형 1b(HCR6, 액세션번호 AY045702) 감염 마우스에 복강내 또는 피하주사에 의해 투여하고, 혈액을 채취하였다.

표 2에 있어서, B, I, 및 M은 각 조작이 필요에 따라 행해진 것, 및 시약의 투여가 0일째부터 시작된 것을 나타내고 있다. PEG-IFN을 30 ㎍/㎏으로 주사하였다. 주사한 미리오신의 양은, 마우스의 체중에 따라 조절하였다. 투여는 1 ㎎/㎏(M)으로 개시하고, 체중이 10% 감소하였을 때, 용량을 0.5 ㎎/㎏(M_1/2)으로 감소시켰다. 체중이 20% 감소하면, 투여를 중지하였다.

다음으로, 총RNA를 AGPC법을 사용하여 키메라 마우스로부터 채취한 혈청 또는 간조직 1 ㎕로 정제하였다. HCV RNA를, 당업자에게 공지의 방법(Takeuchi, T. et al., Gastroenterology, 116, 636-642(1999))으로 실시간 PCR에 의해 정량하였다.

그 결과, 미리오신 처치군에 있어서, HCV RNA 레벨은 8일간에 혈청 중에 있어서 3×10⁶~1×10⁷ copies/㎖에서 6×10⁵~1×10⁴ copies/㎖까지 감소하는(약 1/10~1/100배 감소) 것이 명확해졌다. 동 레벨의 감소가, 임상치료에 있어서 사용되는 경우(30 ㎍/㎏ 체중)보다 10배 다량의 PEG-IFN을 주사한 PEG-IFN 처치군에서 확인되었다. 또한, 미리오신과 PEG-IFN의 병용치료에 의해, HCV RNA 레벨은 대조 레벨의 1/1000 미만으로 감소하고, 마우스 3마리 중 2마리(1b-7 및 1b-9)에서는 HCV RNA는 8일째에 전혀 검출되지 않았다(도 4A).

동시에, 본 발명자들은 인간 알부민(h-Alb) 농도를 모니터링하였다. 인간 알부민 농도는, Alb-II 키트(Eiken Chemical, Tokyo, Japan)를 사용하여 제조원의 설명서에 따라 혈청 2 ㎕에서 측정하였다. 그 결과, 병용치료군에 한하여 인간 알부민 농도의 약간의 감소가 확인되었다(도 4B).

이들 결과로부터, 미리오신이 인간화 간장으로부터 발현된 h-Alb에 영향을 미치지 않고 intact HCV의 복제를 억제하는 것이 명확해졌다. 또한, 미리오신과 PEG-IFN의 병용에 의해, 경도의 간손상을 나타내면서도 HCV 복제가 상승적으로 억제되는 것이 명확해졌다.

[실시예 4] 키메라 마우스의 간장에 있어서의 HCV RNA 및 코어 단백질의 검출

HCV가 미리오신에 의해 인간화 간장으로부터 감소되는지 여부를 명확하게 하기 위해, 본 발명자들은 다른 하나의 HCV 유전자형인 1a(HCG9)에 감염시킨 키메라 마우스의 간장을 조사하였다. 본 마우스의 혈청 중의 RNA 레벨은, 약 1×10⁸ copies/㎖에 달하여, HCV 1b(HCR6)의 값보다 10배 높다(도 5A). 이 사실로부터, 간세포에 있어서의 HCV 코어 단백질은, 면역형광염색에 의해 용이하게 검출되는 것으로 생각되었다. 본 발명자들은 키메라 1a-4 마우스에 2 ㎎/㎏ 미리오신을 매일 6일간 투여하고, 간장을 적출하였다. 비교를 위해, 무처치(1a-1), 비감염(1a-2), 및 PEG-IFN 처치(1a-3) 마우스의 간장도 동일하게 적출하였다. 간조직을 RIPA에 있어서 호모지나이즈하고, 총단백질 100 ㎍을, Ortho HCV 코어 단백질 ELISA 키트(Eiken Chemical)를 사용하여 코어 단백질의 검출을 위해 사용하였다.

다음으로, 키메라 마우스 간조직의 면역형광염색을 행하였다. 1a-1 및 1a-4 마우스로부터의 간 절편을, 1차 항체로서 비오틴화 항HCV 코어 단백질 단일클론항체 및 인간 간세포 단일클론항체(Dako, Glostrup, Denmark)에 의해 프로빙한 후, 스트렙토아비딘-Alexa 488(Invitrogen) 및 항마우스 IgG-Alexa-546(Invitrogen)에 의해 프로빙하였다. 또한, 핵을 DAPI에 의해 염색하였다.

상기 방법에 의해, 키메라 마우스의 간장에 있어서의 HCV RNA 및 코어 단백질의 발현으로의, 미리오신 처리의 영향을 확인하였다.

그 결과, 미리오신 처치 후, 1a-4 마우스의 혈청 중의 HCV RNA 레벨은, 1×10⁵ copies/㎖까지 감소하는 것이 명확해졌다(도 5A). 또한, 간장에 있어서의 HCV 1a RNA 및 코어 단백질의 양을 정량한 바, 혈청 중의 경우와 동일하게 감소하고 있었다(도 5A). 면역형광염색에 의해, 1×10⁸ copies/㎖ 혈청이었던 무처치 마우스 1a-1의 코어 단백질이 인간 간세포 부분을 발현하나(도 5A), 1a-4 마우스의 코어 단백질은 소실되는(도 5B) 것이 판명되었다. 이들 결과로부터, 미리오신이 HCV 유전자형 1b를 감소시킬 뿐 아니라, HCV 유전자형 1a도 감소시켜, 간장으로부터 HCV를 소실시키는 것이 명확해졌다.

[실시예 5] HCV에 감염된 키메라 마우스에 있어서의 화학식 III의 화합물 및 PEG-IFN의 항HCV 효과

정맥내 주사에 의해, HCR6(HCV 유전자형 1b, 액세션번호: AY045702)을 10⁶ copies/mouse로, 키메라 마우스에 투여하였다. 4주간 후, HCV 1b RNA의 레벨은, 마우스 혈청 내에 있어서 10⁶~10⁸ copies/mL의 레벨에 달해 있었다.

화학식 III의 화합물 및/또는 PEG-IFN의 투여는 이하와 같이 행하였다.

화학식 III의 화합물은 하기의 식으로 표시되는 화합물이다.

[화학식 III]

상기 화합물은, WO2005/005372의 실시예 4에 기재된 방법으로 합성할 수 있다.

PEG-IFN(Pegasys; PEG화 인터페론 α-2a)은 1주일에 2회, 30 ㎍/㎏을 피하투여하였다. 화학식 III의 화합물은, 매일 5, 10 또는 20 ㎎/㎏을 정맥투여하였다. 또한, 화학식 III의 화합물 및 PEG-IFN을 병용하는 경우에는, 화학식 III의 화합물 10 ㎎/㎏ 및 PEG-IFN 30 ㎍/㎏을 피하투여하였다. 화학식 III의 화합물 및/또는 PEG-IFN을 HCV 유전자형 1b로 감염시킨 마우스에 투여하고, 경시적으로 혈액을 채취하였다.

항HCV 활성의 평가는, HCV RNA를 실시간 PCR에 의해 정량함으로써 행하였다. 키메라 마우스의 혈청 1 μL로부터 전 RNA를 정제하고, HCV RNA를 실시간 PCR에 의해 정량하였다.

8일간 처치한 군에서는, 5 ㎎/㎏ 투여군의 HCV 역가는 -1.0~-1.1 log로 감소하고 있었다(마우스 1 및 2). 10 ㎎/㎏ 투여군에서는, 최대효과는 -1.2~-1.8 log로 측정되었다(마우스 3~5). 20 ㎎/㎏ 투여군에서는, HCV 역가는 -1.8~-2.8 log로 감소하고 있었다(마우스 6~8). PEG-IFN만을 투여한 군에서는 -0.3~-2 log의 감소인 것에 반하여(마우스 12~16), 화학식 III의 화합물 10 ㎎/㎏과 PEG-IFN을 병용한 투여군에서는, -2.6~-4.1 log의 감소에까지 이르렀다(마우스 9~11)(도 6). 이들 결과로부터, 화학식 III의 화합물이 PEG-IFN과의 병용으로 항HCV 활성에 대해 상승효과를 나타내는 것이 명확해졌다. 14일간 처치한 군에서는, 저용량으로의 처치인 경우에는 용량 의존적인 바이러스의 감소가 보였으나, 고용량 처리군에서는 보이지 않았다.

본 발명자들은 인 비트로에서의 SPT 저해제에 의한 HCV 복제의 저해 메커니즘을 해명하여, SPT 저해제가 인간화 간장을 갖는 키메라 마우스 모델에 있어서 HCV 복제를 저해하는 것을 명확하게 하였다. 본 발명자들의 결과는, SPT가 HCV 복제를 저해하도록 설계된 약물의 유효한 표적이 되는 것, 및 SPT 저해제가 신규 항HCV제의 개발에 있어서의 리드 화합물로 되는 것을 나타내고 있다.

또한, SPT 저해제와 인터페론을 병용함으로써, HCV의 복제가 상승적으로 억제되는 것이 명확해진 것으로부터, 이들 두 성분으로 되는 의약 조성물은, 보다 안전성이 높고, 보다 유효성이 높은 HCV를 치료하기 위한 신규 약제로 될 수 있는 것이 시사되었다.

SEQUENCE LISTING <110> TOKYO METROPOLITAN ORGANIZATION FOR MEDICAL RESEARCH CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA <120> A pharmaceutical composition for treating or preventing HCV infection <130> C1-A0608P <150> JP 2006-136992 <151> 2006-05-16 <160> 10 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> An artificially synthesized siRNA sequence <220> <221> misc_feature <222> (20)..(21) <223> n indicates dT <400> 1 caucguuuca ggcccuccan n 21 <210> 2 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> An artificially synthesized siRNA sequence <220> <221> misc_feature <222> (20)..(21) <223> n indicates dT <400> 2 ugacauggcu gaccucgagn n 21 <210> 3 <211> 2742 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (9)..(1550) <400> 3 ggctaact atg gcg acc gcc acg gag cag tgg gtt ctg gtg gag atg gta 50 Met Ala Thr Ala Thr Glu Gln Trp Val Leu Val Glu Met Val 1 5 10 cag gcg ctt tac gag gct cct gct tac cat ctt att ttg gaa ggg att 98 Gln Ala Leu Tyr Glu Ala Pro Ala Tyr His Leu 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435 440 445 Ser Cys Val His His Gln Gly Gly Ser Pro Gly Arg Pro Ala Leu Gly 450 455 460 Arg Val Pro Gly Pro Trp Pro Pro Ala Thr Gln His Ala Glu Arg Thr 465 470 475 480 Gln Asp Ser Arg Trp Pro Trp Ser Gly Leu Lys Glu Ser Lys Asn Met 485 490 495 Trp Ile Phe Asp Arg Ile Val Thr Lys Trp Cys Gln Tyr Gly Pro Ile 500 505 510 Val <210> 5 <211> 7250 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (189)..(1877) <400> 5 ccttggccga gaccggtcct ctgcggagag ggccccgccc tctgtgaagg cccgcccggg 60 aattggcggc ggcgctgcag ccatttccgg tttcggggag gtgggtgggg tgcggagcgg 120 gacttggagc agccgccgcc gctgccaccg cctacagagc ctgccttgcg cctggtgctg 180 ccaggaag atg cgg ccg gag ccc gga ggc tgc tgc tgc cgc cgc acg gtg 230 Met Arg Pro Glu Pro Gly Gly Cys Cys Cys Arg Arg Thr Val 1 5 10 cgg gcg aat ggc tgc gtg gcg aac ggg gaa gta cgg aac ggg tac gtg 278 Arg Ala Asn Gly Cys Val Ala Asn Gly Glu Val Arg Asn Gly Tyr Val 15 20 25 30 agg agc agc gct gca gcc gca gcc gca gcc gcc gcc ggc cag atc cat 326 Arg Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Ile His 35 40 45 cat gtt aca caa aat gga gga cta tat aaa aga ccg ttt aat gaa gct 374 His Val Thr Gln Asn Gly Gly Leu Tyr Lys Arg Pro Phe Asn Glu Ala 50 55 60 ttt gaa gaa aca cca atg ctg gtt gct gtg ctc acg tat gtg ggg tat 422 Phe Glu Glu Thr Pro Met Leu Val Ala Val Leu Thr Tyr Val Gly Tyr 65 70 75 ggc gta ctc acc ctc ttt gga tat ctt cga gat ttc ttg agg tat tgg 470 Gly Val Leu Thr Leu Phe Gly Tyr Leu Arg Asp Phe Leu Arg Tyr Trp 80 85 90 aga att gaa aag tgt cac cat gca aca gaa aga gaa gaa caa aag gac 518 Arg Ile Glu Lys Cys His His Ala Thr Glu Arg Glu Glu Gln Lys Asp 95 100 105 110 ttt gtg tca ttg tat caa gat ttt gaa aac ttt tat aca agg aat ctg 566 Phe Val Ser Leu Tyr Gln Asp Phe Glu Asn Phe Tyr Thr Arg Asn Leu 115 120 125 tac atg agg ata aga gac aac tgg aat cgg cca atc tgt agt gtg cct 614 Tyr Met Arg Ile Arg Asp Asn Trp Asn Arg Pro Ile Cys Ser Val Pro 130 135 140 gga gcc agg gtg gac atc atg gag aga cag tct cat gat tat aac tgg 662 Gly Ala Arg Val Asp Ile Met Glu Arg Gln Ser His Asp Tyr Asn Trp 145 150 155 tcc ttc aag tat aca ggg aat ata ata aag ggt gtt ata aac atg ggt 710 Ser Phe Lys Tyr Thr Gly Asn Ile Ile Lys Gly Val Ile Asn Met Gly 160 165 170 tcc tac aac tat ctt gga ttt gca cgg aat act gga tca tgt caa gaa 758 Ser Tyr Asn Tyr Leu Gly Phe Ala Arg Asn Thr Gly Ser Cys Gln Glu 175 180 185 190 gca gcc gcc aaa gtc ctt gag gag tat gga gct gga gtg tgc agt act 806 Ala Ala Ala Lys Val Leu Glu Glu Tyr Gly Ala Gly Val Cys Ser Thr 195 200 205 cgg cag gaa att gga aac ctg gac aag cat gaa gaa cta gag gag ctt 854 Arg Gln Glu Ile Gly Asn Leu Asp Lys His Glu Glu Leu Glu Glu Leu 210 215 220 gta gca agg ttc tta gga gta gaa gct gct atg gcg tat ggc atg gga 902 Val Ala Arg Phe Leu Gly Val Glu Ala Ala Met Ala Tyr Gly Met Gly 225 230 235 ttt gca acg aat tca atg aac att cct gct ctt gtt ggc aaa ggt tgc 950 Phe Ala Thr Asn Ser Met Asn Ile Pro Ala Leu Val Gly Lys Gly Cys 240 245 250 ctg att ctg agt gat gaa ctg aat cat gca tca ctg gtt ctg gga gcc 998 Leu Ile Leu Ser Asp Glu Leu Asn His Ala Ser Leu Val Leu Gly Ala 255 260 265 270 aga ctg tca gga gca acc att aga atc ttc aaa cac aac aat atg caa 1046 Arg Leu Ser Gly Ala Thr Ile Arg Ile Phe Lys His Asn Asn Met Gln 275 280 285 agc cta gag aag cta ttg aaa gat gcc att gtt tat ggt cag cct cgg 1094 Ser Leu Glu Lys Leu Leu Lys Asp Ala Ile Val Tyr Gly Gln Pro Arg 290 295 300 aca cga agg ccc tgg aag aaa att ctc atc ctt gtg gaa gga ata tat 1142 Thr Arg Arg Pro Trp Lys Lys Ile Leu Ile Leu Val Glu Gly Ile Tyr 305 310 315 agc atg gag gga tct att gtt cgt ctt cct gaa gtg att gcc ctc aag 1190 Ser Met Glu Gly Ser Ile Val Arg Leu Pro Glu Val Ile Ala Leu Lys 320 325 330 aag aaa tac aag gca tac ttg tat ctg gat gag gct cac agc att ggc 1238 Lys Lys Tyr Lys Ala Tyr Leu Tyr Leu Asp Glu Ala His Ser Ile Gly 335 340 345 350 gcc ctg ggc ccc aca ggc cgg ggt gtg gtg gag tac ttt ggc ctg gat 1286 Ala Leu Gly Pro Thr Gly Arg Gly Val Val Glu Tyr Phe Gly Leu Asp 355 360 365 ccc gag gat gtg gat gtt atg atg gga acg ttc aca aag agt ttt ggt 1334 Pro Glu Asp Val Asp Val Met Met Gly Thr Phe Thr Lys Ser Phe Gly 370 375 380 gct tct gga gga tat att gga ggc aag aag gag ctg ata gac tac ctg 1382 Ala Ser Gly Gly Tyr Ile Gly Gly Lys Lys Glu Leu Ile Asp Tyr Leu 385 390 395 cga aca cat tct cat agt gca gtg tat gcc acg tca ttg tca cct cct 1430 Arg Thr His Ser His Ser Ala Val Tyr Ala Thr Ser Leu Ser Pro Pro 400 405 410 gta gtg gag cag atc atc acc tcc atg aag tgc atc atg ggg cag gat 1478 Val Val Glu Gln Ile Ile Thr Ser Met Lys Cys Ile Met Gly Gln Asp 415 420 425 430 ggc acc agc ctt ggt aaa gag tgt gta caa cag tta gct gaa aac acc 1526 Gly Thr Ser Leu Gly Lys Glu Cys Val Gln Gln Leu Ala Glu Asn Thr 435 440 445 agg tat ttc agg aga cgc ctg aaa gag atg ggc ttc atc atc tat gga 1574 Arg Tyr Phe Arg Arg Arg Leu Lys Glu Met Gly Phe Ile Ile Tyr Gly 450 455 460 aat gaa gac tct cca gta gtg cct ttg atg ctc tac atg cct gcc aaa 1622 Asn Glu Asp Ser Pro Val Val Pro Leu Met Leu Tyr Met Pro Ala Lys 465 470 475 att ggc gcc ttt gga cgg gag atg ctg aag cgg aac atc ggt gtc gtt 1670 Ile Gly Ala Phe Gly Arg Glu Met Leu Lys Arg Asn Ile Gly Val Val 480 485 490 gtg gtt gga ttt cct gcc acc cca att att gag tcc aga gcc agg ttt 1718 Val Val Gly Phe Pro Ala Thr Pro Ile Ile Glu Ser Arg Ala Arg Phe 495 500 505 510 tgc ctg tca gca gct cat acc aaa gaa ata ctt gat act gct tta aag 1766 Cys Leu Ser Ala Ala His Thr Lys Glu Ile Leu Asp Thr Ala Leu Lys 515 520 525 gag ata gat gaa gtt ggg gac cta ttg cag ctg aag tat tcc cgt cat 1814 Glu Ile Asp Glu Val Gly Asp Leu Leu Gln Leu Lys Tyr Ser Arg His 530 535 540 cgg ttg gta cct cta ctg gac agg ccc ttt gac gag acg acg tat gaa 1862 Arg Leu Val Pro Leu Leu Asp Arg Pro Phe Asp Glu Thr Thr Tyr Glu 545 550 555 gaa aca gaa gac tga gcctttttgg tgctccctca gaggaactct ccctcaccca 1917 Glu Thr Glu Asp 560 ggacagcctg tggcctttgt gagccagttc caggaaccac acttctgtgg ccatctcacg 1977 tgaaagacat tgcctcagct actgaaggtg gccacctcca ctctaaatga cattttgtaa 2037 atagtaaaaa actgcttcta atccttcctt tgctaaatct cacctttaaa aacgaaggtg 2097 actcactttg ctttttcagt ccattaaaaa aacattttat tttgcaacca ttctacttgt 2157 gaaatcacgc tgaccctagc ctgtctctgg ctaaccacac aggccattcc cctctcccag 2217 caccttgcag acttgggccc atcaagagct actgctggcc ctggctccgc agcctggata 2277 cttacctggc cctcctccct agggagcaag tgccttccac ttacttccca tccaggtctc 2337 agaggtctca aggccaacct tggaatcctt atttaaccat tcaagtaatc aacggaagtt 2397 ttcacccttt aatcttaagt ttagcctttt aagaaaaaca gtaagcgatg actgctgaaa 2457 ggctcattgt gtaatctccc aagggtttgg tcttattcca ttttcttctg gtcaccagat 2517 gatttcttcc tttaccatca aatacttctt cataatggtc acagtctgag gatgtgcgca 2577 aattctggtt cttcccaagc tctaaccgta acacgtccca cccccttttt aaagcactta 2637 ctgttttcag agcacccata tcccaccctg gtgagaaggc cactctcaca tctgagtgtt 2697 gggtacaaag ctgctccgta gagtgatgtg cactcctggt gggtgagggg caggggcagt 2757 ggcagtgtgc aaagaattga ttactccttg cagagcctgt ggcttgcatt tcctactgct 2817 ttctacgttt gaaaattatg acagtctctg gctaggtctg ggtccagatt aggatttaaa 2877 ctgataaagg aaactgttgg taaatcctct gctcagaaag catttatcat gttcctattt 2937 aaggattagg tttattaatt taggcctctt agaagctaac ccacttaaat attactcttc 2997 tgaatgctag ttctctttta ttcttgatgt cctaagtcaa ttgaatctgg catctggggc 3057 tagggtctgc ctgtctacat attttttatt tttttctgag aaattctgaa cacatagatc 3117 tctttcctaa actgacattt tctattttga ctgttttcat actataacca ggtaaaggga 3177 cttctttcag agagctttat actgcctgac caaagaacaa atctgaaaat caccatttta 3237 aagttatttt ttcagttgaa ccaaagttta agtgaagagg acttttggca tattataccc 3297 aggatcagtt tgtctttttg tatccatcaa gtattacagg agaaggattg ggaacagaat 3357 ggaaaaacag tgtatgaaag tcatgttaca ggccgagtgc ggtggctcac acctgtaatc 3417 ctagcacttt gggaggctga ggcaggtggc tcacttgagg tcaggaattc aagaccagcc 3477 tggccaacat ggtgaaaccc cgtctctact aaaaagacaa aaaattagct gggcgtggtg 3537 gcgggcacct ataatcccac ctacttggta ggctgaggca ggagaatcgc ttgaacccag 3597 gaggcggagg ttgcagtgag acgagattgt gccactgcac tctagcctgg gtgacagagc 3657 aaaactgtgt ctcaaaaaaa aaagtcatgt tacacattta agtttttgaa attgctcctt 3717 ttatcggtaa agattctcaa tccaaattct cctgggtgtg ttgtcatcag ctgtgatatg 3777 tttgtgcaca ttacgtatag cagaggatgt aagcaatatt attgtttgtg aagttttgtt 3837 tttaatgtct tgagtatgag ttatgtttag tcactgtcag catctgagaa ctttaataag 3897 cccttgagat attccaaagt tttattttac ttttttaaag aacagaaaaa gatgaatgaa 3957 agaaccaagg agagatgcag agactatatt tagcatgtat aggttaaagt aagaaggagg 4017 ttgtggtaac taaataggag tcctataaaa tcaaatacat tgtcaacctt ttctgcacat 4077 ctagtttcct accatagaat cccactggaa taccacatag cttttgcact gcagttacta 4137 tttactaatg taaacgtagg gtttgtaaaa gtcacaaact tataagcaat gaacttacct 4197 gctagtcttt ttattttggc ttgcatgaag tcactgcaaa ttcaaatgtc agtaccggca 4257 tttaaaatat atctatatca ctttgttggt acaaagttat ttcaagataa gtgtaatttt 4317 gttacaagtt tattttgaag agacaaatct cctgtgatct atgcaggacc tctgtacttt 4377 ctaaagaaca aaatgttatg tagacattat acatggttgg ttgtctcttc ttgaaactgt 4437 aatgtaaatc tagggtccag tcatatccta ggtatcatca tttatccaag tacttggagg 4497 aatacaagta tatataaata cagtcattga gaataagtcg atttgaggca tacaagagta 4557 gtttcttaca cagtttaaca cggcctgatt caagactctg ataggattca aacagatacc 4617 ggttaaccat gactaccaaa actgatcatc tgagtcgatt gatagaggtg tgactagtcc 4677 ttagcacttt ttctcattcc tctttttatt cagcattgct gttacctatt tcaggtttat 4737 aagacctctt tcagcagatc acatcagaag ccaggaaatg catagctagg agatgtcaaa 4797 agcccatatg aggagtggac caagcagcag tggcggtttc tcctcgcatc tttttttttt 4857 taagctttaa cttagcaggg gcatggactt tatagcactt tttcaacttt ttgctttgct 4917 ttggataaga aatccttacc tttaaaaaaa gcttctagtc tccataaccc ccaaagtact 4977 gcttatttgt ttgaagaatc cagccatcgt agtgctttag tcactatcgt aaacattcat 5037 gatagggcaa ggattttaaa acaggattct tgcttctgta gtcatcaagg tgaacagaag 5097 catcctacac aaccactaag ggctctatgt ttgtgtcatg cctcttcaaa caccaaggag 5157 ttgaacatgc ttccagtgat ttgtctccgt aatgccttct tcctttattt ggcctttctt 5217 tctttctgta ccttcaagtt cttgattttt aaaattccaa ctctagagaa aaccaatata 5277 tggtggtgct gggctttgaa gatagcatat cagacgcctt ggttctgttt gtacacttag 5337 ccttacattt caggaggagg cttttcatta ggggcttaag ctagctcctt tggcttttaa 5397 aaaaaatttt ttttcaaatt tcttcattac ctaagggagc ctgcatctaa atttctcaac 5457 tagttcagcc tagctgaatt ttctagtgtg taatacactt tgcttccttc ttattggtga 5517 aaaccagggg gatgagtggc ttccatggag agatttcctg atttctcagg gaggaaaaaa 5577 gtgatgacat ttaccactac ttttatgttt ttcccctttt tccaaattga taaggatttc 5637 tggttcctag tgatccggga ttgggcaaca gtgcagaact gccagtcatg ccgtaggccg 5697 tgaagaaaga atgtgagtaa ctgttgtttt gcaaggattt gtagggttat gggcagttgt 5757 tgtttgaagc attgctatga cctaattccc aaggtatctt tcctctcttg gtgttctagg 5817 taagccaatg agctttaatc tctacttgct ataaccgtgt gcttagaaaa agaggtgaga 5877 gtagtggttt tccttcaaac tgtccacatt catgaagatt atgaattgtt aggacagcca 5937 gggcaagata gaccctgtct ctacaaaaat ttttttctaa attaaccggg catggtggtg 5997 cctgcctgta gtcccacctg tgtgggagaa tcacttgagc ctgggaggtc aaggctgcag 6057 tgagccatga ttgcacccct gcactccagc ctgggtgaca gagtgagacc ctggctcaat 6117 aagaggggga aaaaaaattg ttaggagctg ggtgcggatg cagcctgcaa tcccagctac 6177 ttgagaggct gaggccggag gattgcttaa acccaagaat ttgagcgtag cctgggcaac 6237 acagcaagac cccatctaag aaaaaaatgt tttttaaatc agcttagccc aaaggggttg 6297 tgaatgggga ggtataaaaa gcaaagatta ttttttggct actaagccaa gaacttacag 6357 ggattttttt tttcagtccc agaacctaca gataccctgc tacttgcttc acgtggatgc 6417 tcagtgccca gcagccatct taatacatta aaccagttta aaaaatacct tccatgtgga 6477 gaaaaacatg tctttttctc gcctcaactt tatccacatg aaatgtgtgc ccatggctgg 6537 gcgcagtggc tcacctgtaa tcccaacact ttgggaggct gaagcaggca gattgcttga 6597 ggccaggagt tcgagaacag tctggccaac atggcgaaac ctcatctcta ctaaaattac 6657 aaaaattagc cgggcatggt ggcacatgcc tgtaatccca gctacgtcag gaggctgagg 6717 cacaggaatt gcttgaaccc aagaggcaga ggatgcaatg agccaagatc acaccactgc 6777 actccagcct tggcgacaga gggagactct gtctcaaaaa aaaaaaaaaa aggtgtgccc 6837 aggcccctag ccattgccat gtgcccagcc agagagccaa attagagggc tggcttccct 6897 atcacacaga ataaatgcta gtgctagcca atgatccctt tgcttttaat gtatagaaaa 6957 tactgttgtt ccttttgtca tttccagtga catctgtttt ctaagcagct cttttctagg 7017 gaggaaacca aaggggctag gttaagaccc taatagaaat gttttttcta atctctggtg 7077 agtctggaag tgtcacattc acagtccacc cttgggagtg gcttggtgga gctggggaca 7137 aggttttgtt tactacatag tgcacatgat aaatggcctt aaactgtgat tctttctggt 7197 aggataagtt ataataaact gaccctaaag aatgcaaaaa aaaaaaaaaa aaa 7250 <210> 6 <211> 562 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Arg Pro Glu Pro Gly Gly Cys Cys Cys Arg Arg Thr Val Arg Ala 1 5 10 15 Asn Gly Cys Val Ala Asn Gly Glu Val Arg Asn Gly Tyr Val Arg Ser 20 25 30 Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Ile His His Val 35 40 45 Thr Gln Asn Gly Gly Leu Tyr Lys Arg Pro Phe Asn Glu Ala Phe Glu 50 55 60 Glu Thr Pro Met Leu Val Ala Val Leu Thr Tyr Val Gly Tyr Gly Val 65 70 75 80 Leu Thr Leu Phe Gly Tyr Leu Arg Asp Phe Leu Arg Tyr Trp Arg Ile 85 90 95 Glu Lys Cys His His Ala Thr Glu Arg Glu Glu Gln Lys Asp Phe Val 100 105 110 Ser Leu Tyr Gln Asp Phe Glu Asn Phe Tyr Thr Arg Asn Leu Tyr Met 115 120 125 Arg Ile Arg Asp Asn Trp Asn Arg Pro Ile Cys Ser Val Pro Gly Ala 130 135 140 Arg Val Asp Ile Met Glu Arg Gln Ser His Asp Tyr Asn Trp Ser Phe 145 150 155 160 Lys Tyr Thr Gly Asn Ile Ile Lys Gly Val Ile Asn Met Gly Ser Tyr 165 170 175 Asn Tyr Leu Gly Phe Ala Arg Asn Thr Gly Ser Cys Gln Glu Ala Ala 180 185 190 Ala Lys Val Leu Glu Glu Tyr Gly Ala Gly Val Cys Ser Thr Arg Gln 195 200 205 Glu Ile Gly Asn Leu Asp Lys His Glu Glu Leu Glu Glu Leu Val Ala 210 215 220 Arg Phe Leu Gly Val Glu Ala Ala Met Ala Tyr Gly Met Gly Phe Ala 225 230 235 240 Thr Asn Ser Met Asn Ile Pro Ala Leu Val Gly Lys Gly Cys Leu Ile 245 250 255 Leu Ser Asp Glu Leu Asn His Ala Ser Leu Val Leu Gly Ala Arg Leu 260 265 270 Ser Gly Ala Thr Ile Arg Ile Phe Lys His Asn Asn Met Gln Ser Leu 275 280 285 Glu Lys Leu Leu Lys Asp Ala Ile Val Tyr Gly Gln Pro Arg Thr Arg 290 295 300 Arg Pro Trp Lys Lys Ile Leu Ile Leu Val Glu Gly Ile Tyr Ser Met 305 310 315 320 Glu Gly Ser Ile Val Arg Leu Pro Glu Val Ile Ala Leu Lys Lys Lys 325 330 335 Tyr Lys Ala Tyr Leu Tyr Leu Asp Glu Ala His Ser Ile Gly Ala Leu 340 345 350 Gly Pro Thr Gly Arg Gly Val Val Glu Tyr Phe Gly Leu Asp Pro Glu 355 360 365 Asp Val Asp Val Met Met Gly Thr Phe Thr Lys Ser Phe Gly Ala Ser 370 375 380 Gly Gly Tyr Ile Gly Gly Lys Lys Glu Leu Ile Asp Tyr Leu Arg Thr 385 390 395 400 His Ser His Ser Ala Val Tyr Ala Thr Ser Leu Ser Pro Pro Val Val 405 410 415 Glu Gln Ile Ile Thr Ser Met Lys Cys Ile Met Gly Gln Asp Gly Thr 420 425 430 Ser Leu Gly Lys Glu Cys Val Gln Gln Leu Ala Glu Asn Thr Arg Tyr 435 440 445 Phe Arg Arg Arg Leu Lys Glu Met Gly Phe Ile Ile Tyr Gly Asn Glu 450 455 460 Asp Ser Pro Val Val Pro Leu Met Leu Tyr Met Pro Ala Lys Ile Gly 465 470 475 480 Ala Phe Gly Arg Glu Met Leu Lys Arg Asn Ile Gly Val Val Val Val 485 490 495 Gly Phe Pro Ala Thr Pro Ile Ile Glu Ser Arg Ala Arg Phe Cys Leu 500 505 510 Ser Ala Ala His Thr Lys Glu Ile Leu Asp Thr Ala Leu Lys Glu Ile 515 520 525 Asp Glu Val Gly Asp Leu Leu Gln Leu Lys Tyr Ser Arg His Arg Leu 530 535 540 Val Pro Leu Leu Asp Arg Pro Phe Asp Glu Thr Thr Tyr Glu Glu Thr 545 550 555 560 Glu Asp <210> 7 <211> 189 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Met Ala Ser Pro Phe Ala Leu Leu Met Val Leu Val Val Leu Ser Cys 1 5 10 15 Lys Ser Ser Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Glu Thr His Ser Leu 20 25 30 Asp Asn Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Ser Arg Ile Ser 35 40 45 Pro Ser Ser Cys Leu Met Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu 50 55 60 Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Pro Ala Ile Ser Val Leu 65 70 75 80 His Glu Leu Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Thr Thr Lys Asp Ser 85 90 95 Ser Ala Ala Trp Asp Glu Asp Leu Leu Asp Lys Phe Cys Thr Glu Leu 100 105 110 Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Met Gln Glu Glu Arg 115 120 125 Val Gly Glu Thr Pro Leu Met Asn Ala Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys 130 135 140 Lys Tyr Phe Arg Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser 145 150 155 160 Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser 165 170 175 Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu Arg Leu Arg Arg Lys Glu 180 185 <210> 8 <211> 570 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 8 atggcctcgc cctttgcttt actgatggtc ctggtggtgc tcagctgcaa gtcaagctgc 60 tctctgggct gtgatctccc tgagacccac agcctggata acaggaggac cttgatgctc 120 ctggcacaaa tgagcagaat ctctccttcc tcctgtctga tggacagaca tgactttgga 180 tttccccagg aggagtttga tggcaaccag ttccagaagg ctccagccat ctctgtcctc 240 catgagctga tccagcagat cttcaacctc tttaccacaa aagattcatc tgctgcttgg 300 gatgaggacc tcctagacaa attctgcacc gaactctacc agcagctgaa tgacttggaa 360 gcctgtgtga tgcaggagga gagggtggga gaaactcccc tgatgaatgc ggactccatc 420 ttggctgtga agaaatactt ccgaagaatc actctctatc tgacagagaa gaaatacagc 480 ccttgtgcct gggaggttgt cagagcagaa atcatgagat ccctctcttt atcaacaaac 540 ttgcaagaaa gattaaggag gaaggaataa 570 <210> 9 <211> 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Met Lys Tyr Thr Ser Tyr Ile Leu Ala Phe Gln Leu Cys Ile Val Leu 1 5 10 15 Gly Ser Leu Gly Cys Tyr Cys Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu 20 25 30 Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val Ala Asp Asn 35 40 45 Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp 50 55 60 Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe Tyr Phe Lys Leu Phe 65 70 75 80 Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln Lys Ser Val Glu Thr Ile 85 90 95 Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg 100 105 110 Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val 115 120 125 Gln Arg Lys Ala Ile His Glu Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser 130 135 140 Pro Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg 145 150 155 160 Gly Arg Arg Ala Ser Gln 165 <210> 10 <211> 501 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 10 atgaaatata caagttatat cttggctttt cagctctgca tcgttttggg ttctcttggc 60 tgttactgcc aggacccata tgtaaaagaa gcagaaaacc ttaagaaata ttttaatgca 120 ggtcattcag atgtagcgga taatggaact cttttcttag gcattttgaa gaattggaaa 180 gaggagagtg acagaaaaat aatgcagagc caaattgtct ccttttactt caaacttttt 240 aaaaacttta aagatgacca gagcatccaa aagagtgtgg agaccatcaa ggaagacatg 300 aatgtcaagt ttttcaatag caacaaaaag aaacgagatg acttcgaaaa gctgactaat 360 tattcggtaa ctgacttgaa tgtccaacgc aaagcaatac atgaactcat ccaagtgatg 420 gctgaactgt cgccagcagc taaaacaggg aagcgaaaaa ggagtcagat gctgtttcga 480 ggtcgaagag catcccagta a 501

Claims

스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론을 조합해서 되는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물.
제1항에 있어서,

HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물이, 배합제인 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
제1항에 있어서,

스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과, 인터페론이 병용되는 것을 특징으로 하는, 의약 조성물.
제3항에 있어서,

스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과, 인터페론이 동시에 또는 순차로 투여되는 것을 특징으로 하는, 의약 조성물.
제3항에 있어서,

스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과, 인터페론이 따로 따로 투여되는 것을 특징으로 하는, 의약 조성물.
인터페론과 병용하는 것을 특징으로 하는, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물을 유효성분으로서 함유하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물.
스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과 병용하는 것을 특징으로 하는, 인터페론을 유효성분으로서 함유하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,

스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물이, 팔미토일 CoA로부터 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물인, 의약 조성물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,

스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물이, 이하 (a) 또는 (b)인, 의약 조성물.

(a) 팔미토일 CoA로부터 3-케토디히드로스핑고신의 생합성에 관여하는, 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물

(b) 세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물
제9항에 있어서,

세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물이 미리오신, 스핑고펀긴, 이하의 화학식 I으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, 의약 조성물.

화학식 I:

[화학식 I]

[화학식 중, A는 -(CH₂)_n-를 나타내고, 여기서 n은 0~10의 정수를 나타내며;

B는 -CH₂-, -(C=O)-, -CH(OH)-, -CH(NH₂)-, 또는 -C(=NOR)-를 나타내고, 여기서 R은 수소원자, 탄소수 1~8의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기(탄소수 1~4의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기로 모노 또는 디 치환되어 있어도 되는 아미노기로 치환되어 있어도 된다)를 나타내며;

D는 -(CH₂)_m-R'를 나타내고, 여기서 m은 0~10의 정수를 나타내며, R'는 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 시클로알킬기, 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 복소 환식기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, -OX기(여기서, X는 수소원자 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 시클로알킬기, 또는 치환되어 있어도 되는 아릴기를 나타낸다), 또는 할로겐원자를 나타내고;

E는 수소원자 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기를 나타내며;

G는 -(CH₂)_p-J를 나타내고, 여기서 p는 0~4의 정수를 나타내며, J는 수소, OH기, SH기, 메틸티오기, 카르복실기, 카르바모일기, 아미노기, 구아니디노기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 시클로알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 복소환식기, 또는 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기를 나타내고;

결합 Q는 단일결합 또는 이중결합을 나타내며; 그리고

R¹, R², 및 R³는 동일 또는 상이하여, 수산기, 아미노기(탄소수 1~4의 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기로 모노 또는 디 치환되어 있어도 된다), -OL, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기를 나타내고, 여기서 L은 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기를 나타낸다.]
제9항에 있어서,

세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물이, 이하의 화학식 II~XII 중 어느 하나로 표시되는 화합물, 또는 그들의 약학적으로 허용되는 염인, 의약 조성물.

[화학식 II]

[화학식 III]

[화학식 IV]

[화학식 V]

[화학식 VI]

[화학식 VII]

[화학식 VIII]

[화학식 IX]

[화학식 X]

[화학식 XI]

[화학식 XII]
제9항에 있어서,

세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물이, 이하의 (a) 또는 (b)인, 의약 조성물.

(a) 세린 팔미토일 전이효소를 코드하는 DNA의 전사산물과 상보적인 RNA

(b) 세린 팔미토일 전이효소를 코드하는 DNA의 전사산물을 특이적으로 개열(開裂)하는 리보자임 활성을 갖는 RNA
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,

인터페론이, 페그화 인터페론인, 의약 조성물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,

HCV 감염증이, C형 간염, 간경변, 간섬유화, 또는 간암인, 의약 조성물.
스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론을 대상에 투여하는 공정을 포함하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.
제15항에 있어서,

스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론을, 대상에 동시에 투여하는 것을 특징으로 하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.
제15항에 있어서,

스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론을, 대상에 따로 따로 투여하는 것을 특징으로 하는, HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.
제15항에 있어서,

스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물이, 팔미토일 CoA로부터 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물인, HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방 법.
제15항에 있어서,

스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물이, 이하 (a) 또는 (b)인, HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

(a) 팔미토일 CoA로부터 3-케토디히드로스핑고신의 생합성에 관여하는, 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물

(b) 세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물
제19항에 있어서,

세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물이 미리오신, 스핑고펀긴, 이하의 화학식 I으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

화학식 I:

[화학식 I]

[화학식 중, A는 -(CH₂)_n-를 나타내고, 여기서 n은 0~10의 정수를 나타내며;

B는 -CH₂-, -(C=O)-, -CH(OH)-, -CH(NH₂)-, 또는 -C(=NOR)-를 나타내고, 여기서 R은 수소원자, 탄소수 1~8의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기(탄소수 1~4의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기로 모노 또는 디 치환되어 있어도 되는 아미노기로 치환되어 있어도 된다)를 나타내며;

D는 -(CH₂)_m-R'를 나타내고, 여기서 m은 0~10의 정수를 나타내며, R'는 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 시클로알킬기, 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 복소환식기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, -OX기(여기서, X는 수소원자 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 시클로알킬기, 또는 치환되어 있어도 되는 아릴기를 나타낸다), 또는 할로겐원자를 나타내고;

E는 수소원자 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기를 나타내며;

G는 -(CH₂)_p-J를 나타내고, 여기서 p는 0~4의 정수를 나타내며, J는 수소, OH기, SH기, 메틸티오기, 카르복실기, 카르바모일기, 아미노기, 구아니디노기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 시클로알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 복소환식기, 또는 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기를 나타내고;

결합 Q는 단일결합 또는 이중결합을 나타내며; 그리고

R¹, R², 및 R³는 동일 또는 상이하여, 수산기, 아미노기(탄소수 1~4의 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기로 모노 또는 디 치환되어 있어도 된다), -OL, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기를 나타내고, 여기서 L은 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기를 나타낸다.]
제19항에 있어서,

세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물이, 이하의 화학식 II~XII 중 어느 하나로 표시되는 화합물, 또는 그들의 약학적으로 허용되는 염인, HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

[화학식 II]

[화학식 III]

[화학식 IV]

[화학식 V]

[화학식 VI]

[화학식 VII]

[화학식 VIII]

[화학식 IX]

[화학식 X]

[화학식 XI]

[화학식 XII]
제19항에 있어서,

세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물이, 이하의 (a) 또는 (b)인, HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.

(a) 세린 팔미토일 전이효소를 코드하는 DNA의 전사산물과 상보적인 RNA

(b) 세린 팔미토일 전이효소를 코드하는 DNA의 전사산물을 특이적으로 개열하는 리보자임 활성을 갖는 RNA
제15항에 있어서,

인터페론이, 페그화 인터페론인, HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.
제15항에 있어서,

HCV 감염증이, C형 간염, 간경변, 간섬유화, 또는 간암인, HCV 감염증을 치료 또는 예방하는 방법.
HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 제조하기 위한, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물 및 인터페론의 사용.
인터페론과 병용하여 HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 제조하기 위한, 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물의 사용.
스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물과 병용하여 HCV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 제조하기 위한, 인터페론의 사용.
제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,

스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물이, 팔미토일 CoA로부터 스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물인, 사용.
제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,

스핑고미엘린의 생합성과정을 차단하는 화합물이, 이하 (a) 또는 (b)인, 사용.

(a) 팔미토일 CoA로부터 3-케토디히드로스핑고신의 생합성에 관여하는, 세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물

(b) 세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물
제29항에 있어서,

세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물이 미리오신, 스핑고펀긴, 이하의 화학식 I으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, 사용.

화학식 I:

[화학식 I]

[화학식 중, A는 -(CH₂)_n-를 나타내고, 여기서 n은 0~10의 정수를 나타내며;

B는 -CH₂-, -(C=O)-, -CH(OH)-, -CH(NH₂)-, 또는 -C(=NOR)-를 나타내고, 여기서 R은 수소원자, 탄소수 1~8의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기(탄소수 1~4의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기로 모노 또는 디 치환되어 있어도 되는 아미노기로 치환되어 있어도 된다)를 나타내며;

D는 -(CH₂)_m-R'를 나타내고, 여기서 m은 0~10의 정수를 나타내며, R'는 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 시클로알킬기, 시클로알케닐기, 치환되어 있어도 되는 복소환식기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기, -OX기(여기서, X는 수소원자 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 시클로알킬기, 또는 치환되어 있어도 되는 아릴기를 나타낸다), 또는 할로겐원자를 나타내고;

E는 수소원자 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기를 나타내며;

G는 -(CH₂)_p-J를 나타내고, 여기서 p는 0~4의 정수를 나타내며, J는 수소, OH기, SH기, 메틸티오기, 카르복실기, 카르바모일기, 아미노기, 구아니디노기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 시클로알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 치환되어 있어도 되는 아릴기, 치환되어 있어도 되는 복소환식기, 또는 치환되어 있어도 되는 헤테로아릴기를 나타내고;

결합 Q는 단일결합 또는 이중결합을 나타내며; 그리고

R¹, R², 및 R³는 동일 또는 상이하여, 수산기, 아미노기(탄소수 1~4의 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기로 모노 또는 디 치환되어 있어도 된다), -OL, 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기를 나타내고, 여기서 L은 직쇄 또는 분지쇄상의 알킬기, 직쇄 또는 분지쇄상의 알케닐기, 또는 직쇄 또는 분지쇄상의 알키닐기를 나타낸다.]
제29항에 있어서,

세린 팔미토일 전이효소의 효소활성을 저해하는 화합물이, 이하의 화학식 II~XII 중 어느 하나로 표시되는 화합물, 또는 그들의 약학적으로 허용되는 염인, 사용.

[화학식 II]

[화학식 III]

[화학식 IV]

[화학식 V]

[화학식 VI]

[화학식 VII]

[화학식 VIII]

[화학식 IX]

[화학식 X]

[화학식 XI]

[화학식 XII]
제29항에 있어서,

세린 팔미토일 전이효소의 발현을 억제하는 화합물이, 이하의 (a) 또는 (b)인, 사용.

(a) 세린 팔미토일 전이효소를 코드하는 DNA의 전사산물과 상보적인 RNA

(b) 세린 팔미토일 전이효소를 코드하는 DNA의 전사산물을 특이적으로 개열하는 리보자임 활성을 갖는 RNA
제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,

인터페론이, 페그화 인터페론인, 사용.
제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,

HCV 감염증이, C형 간염, 간경변, 간섬유화, 또는 간암인, 사용.