RS49533B - Interferonski konjugati - Google Patents

Interferonski konjugati

Info

Publication number
RS49533B
RS49533B YU17597A YU17597A RS49533B RS 49533 B RS49533 B RS 49533B YU 17597 A YU17597 A YU 17597A YU 17597 A YU17597 A YU 17597A RS 49533 B RS49533 B RS 49533B
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
conjugate
interferon
formula
peg
daltons
Prior art date
Application number
YU17597A
Other languages
English (en)
Inventor
Pascal Sebastian Bailon
Alicia Vallejo Palleroni
Original Assignee
F.Hoffmann-La Roche Ag.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=21790006&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS49533(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by F.Hoffmann-La Roche Ag. filed Critical F.Hoffmann-La Roche Ag.
Publication of YU17597A publication Critical patent/YU17597A/sh
Publication of RS49533B publication Critical patent/RS49533B/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Fiziološki aktivni pegilovani konjugat interferona α formule gde R i R' svaki za sebe predstavljaju C1-6alkil; X je NH ili O i gde n i n' zbirno iznose od 600 do 1500; i gde prosečna molekulska težina lanca polietilenglikola u pomenutom konjugatu iznosi od 26000 do 66000 daltona. Prijava sadrži još 9 zavisnih patentnih zahteva i 4 nezavisna patentna zahteva.

Description

OBLAST PRONALASKA
Pronalazak se odnosi na fiziološki aktivan konjugat interferona alfa (IFNa) sa račvasto povezanim polietilenglikolom (PEG), postupak dobijanja konjugata i farmaceutske preparate koji sadrže konjugat (Int. Cl. 7.: A61K 47/48).
STANJE TEHNIKE
Interferon, precizinije interferon 2a, predstavlja farmakološki aktivan protein sa antivirusnim i antiproliferativnim dejstvom. Interferon se koristi, na primer u terapiji leukemije ćelija vlasi i Kapošijevog sarkoma, a pokazuje delotvornost i kod hepatitisa. U cilju poboljšanja stabilnosti i rastvorljivosti kao i smanjenja imunogenosti, farmaceutski aktivni proteini kao stoje interferon mogu se vezivati za polimer polietilen glikola (PEG).
Bioraspoloživost proteinskih lekova je često ograničena kratkim vremenom polu/.ivota u plazmi, što im onemogućava postizanje maksimalne kliničke aktivnosti. Posleđnjih godina, biomolekuli koji su konjugovani sa PEG pokazali su da poseduju korisne osobine sa aspekta kliničke upotrebe (Inada i dr. J. Bioact. and Compalible Polvmers 5, 343 (1990); Delgrado i dr., Critical Revievvs in Therapeutic Drug Carrier Svstems 9, 249 (1992); Katre, Advanced Drug Deliverv Systems 10, 91 (1993)). lMeđju njima su bolja fizička i termalna stabilnilnost, zaštita u odnosu na susceptibilnost od enzimske degradacije, povećanu rastvorljivost, duži in vivo cirkulirajući period poluživota, smanjeno oslobadjanje i poboljšana efikasnost. Primećeno je da račvasti konjugati PEG, poseduju povećanu vrednost pH i termalnu stabilnost i povećanu stabilnost prema proteolitičkoj digestiji u odnosu na linearne PEG konjugate. (EP-A 0 400 472 i Monfardini i dr., Bioconjugate Chem., 6, 62
(1995)). Ostale osobine PEG proteina su smanjena imunogeničnost i antigeničnost, kao i smanjena toksičnost. Ovo je primećeno, izmedju ostalog, kod G-CSF (Satake-Ishikavva i dr., Cell strueture and Function, 17, 157-160 (1992)), IL-2 (Katre i dr., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 1487 (1987), TNF-a (Tsutsumi i dr., Jpn. J. Cancer Res., 85, 9(1994). IL-6 (Inoue i dr., J. Lab. Clin. Med. 124, 529, (1994)) i CD--IgG(Chamovv i dr., Bioconj. Chem. 5, 133 (1994).
DETALJAN OPIS PRONALASKA
Uočeno je da i u slučaju interferona, vezivanjem za PEG opada antivirusna aktivnost in vitro ali se povećava antiproliferativna aktivnost prema humanim ćelijama tumora. Tako pronalazak ovog novog konjugata interferona sa PEG ima neočekivane osobine koje se tiču antiproliferativnog svojstva, tako da deluje intezivinije od samog interferona i drugih konjugata interferona sa PEG. Pored toga stoje antiproliferativna aktivnost znatno unapredjena kod PEG-interferona a konjugata, redukcija antivirusne aktivnosti je ostala ista. Osim toga, predmet ovog pronalaska, konjugat PEG-interfcrona-a je nennugentj. ne podstiče stvaranje antitela.
Prema tome, pronalazak se odnosi na novu klasu PEG derivata interferona (IFNa). Kao što će se videti u delu teksta koji sledi ispod, konjugat koji je obuhvaćen ovim pronalaskom, ima račvastu PEG strukturu. Prednost račvastog PEG je u tome što omogućava vezivanje 2 linearna molekula PEG na jedno mesto povećavajući na taj način masu vezanog PEG bez povećavanja mesta vezivanja PEGilacije.
U poredjenju sa nemodifikovanim IFNa (IFNa bez vezanog PEG), konjugat ima produženo cirkulirajuće vreme poluživota i vreme zadržavanja u plazmi, smanjenu imunogenost, smanjeno oslobadjanje i povećanu antiproliferatvinu aktivnost koja je praćena smanjenom antivirusnom aktivnošću in vivo. U poredjenju sa ostalim PEG-IFNa- konjugatima, konjugat iz ovog pronalaska ima mnogo veću antiproliferativnu aktivnost, što nije proporcionalno povećanju ili smanjenju inteziteta osobina, i praktično nema nikakvu imunogenost.
Fiziološki aktivan PEG-IFNa konjugat obuhvaćen ovim pronalaskom ima formulu:
Konjugat iz ovog pronalaska ima istu primenu kao i IFNa, npr. antiproliterativnu. Naročito su konjugati PEG intcrferona-a iz ovog pronalaska korisni za lećenje oboljenja u vezi sa imunomodulatornim poremećajima poput neplazme kao što je na prinier leukemija ćelija vlasi, CML, Kapošijcv sarkom i infektivna oboljenja, na isti način na koji se IFNa (posebno !FNa2a) koristi za lečcnje ovih oboljenja. U sve to, konjugat, predmet ovog pronalaska, ima poboljšane osobine uključujući izuzetnu stabilnost, povećanu rastvroljivost, produžene vreme poliuživota u cirkulaciji i produženo vreme boravka u plazmi. Pored toga, antiproliferativna aktivnost ovih konjugata superiorna je u odnosu na IFNa. Kao što jc već pomenuto, kod konjugata je izrazito razdvojeno antivirusno i antiproliferativno dejstvo. Ova osobina je od dodatne koristi za poboljšanje željene aktivnosti konjugata i istovremeno smanjivanje ili eliminisanje neželjenih efekata. Akoje na primer. nepoželjno sporedno dejstvo vezano za antivirusnu aktivnost, njeno eliminisanje će ukloniti i neželjeno dejstvo dok se antiproliferativna aktivnost zadržava. Zbog toga ovaj pronalazak sadrži farmaceutske preparate na bazi supstanci ili njihovih soli koje imaju strukturu formule i i postupke njihovog dobijanja.
Farmaceutski preparati iz ovog pronalaska namenjeni su tretiranju i prevenciji bolesti, a sastoje se od konjugata interferona opšte formule I i terapijski inertnih ili prihvatljivih, netoksičnih pomoćnih sredstava. Farmaceutski preaparati koji ćc sc koristiti, formulišu se i doziraju na način koji se zasniva na praktičnim medicinskim iskustvima, karakteristikama poremećaja, opštem stanju pacijenata , načinu davanja i propisivanja proteinskog konjugata kao i na drugim činjenicama, koje su poznate kliničarima.
Traženi konjugat je fiziološki aktivni konjugat PEG-IFNa opšte formule;
gde R i R' svaki za sebe predstavljaju Ci.„alkil; X jc NH ili 0 (X predstavlja barem jednu od funkcionalnih grupa u molekulu IFNa koji je odabran od NH., ili OH); n i n" iznose od 600 do 1 500; i gde srednja molekulska težina lanca polietilenglikola u pomenutom konjugatu iznosi od 26000 do 66000 daltona. Konjugat formule I ima račv astu strukturu jer su dva lanca PEG vezana za protein samo jednom vezom.
Vrodnosti za n i n' su odabrane tako da rezultujuci konjugat formule 1. ima fiziološku aktivnost IFNa. izraženu u i sloj ili većoj meri, ili u vidu frakcije odgovarajuće aktivnosti za nemodifikovanu IFNa. n i n" (n i n mogu da budu isti ili različiti) predstavljali broj jedinica elilenglikola u PFG. Jedna jedinica PEG. OGI FCH; ima moickulsku težinu od 44 daltona. Molekulska tećina konjugata (izuzimajući molekulsku masu IFNa) zavisi od n i n\ Zbir n i ti' u konjugatu formule 1 je od 600 do 1 500. što proizvodi konjugat sa ukupnom prosečnom molekulskom težinom za 1'I Xi jedinice od 26000 do 66000 i najbolje od 35000 do 45000 daltona, a naročito 3900Udo 45000 daltona. gde je naročito poželjno da težina bude 40000 daltona. Poželjna suma za n i n' je je od 800 do 1200. sa prosečnom sumom od 850 do 1000. i gde poželjna vrednost sume iznosi 910. Ih n ili n' može da bude 420 ili 520. ili i jedan i drugi mogu da 420 ili 520, ili 455. Poželjni odnos za n i n' je od 0.5 do 1.5 sa naročito poželjnim odnosom od0.8 do 1.2. Molekulska težina od""oko "; gde izvestan broj označava daje unutar pogodnog opsega tog broja kako je odredjeno uobičajenim analitičkim tehnikama,
Takodjc je poželjan konjugat formule I gde IFNa može da bude lFNa2a, konjugat gde su R iI<V>metil, konjugat gde X predstavlja NH, i konjugat gde n insvaki za sebe ili oba mogu da budu 420 ili 520. Naročito je poželjan takav konjugat koji ima s\e gorepornenute karakteristike.
R i R" mogu da budu bilo koji alki i. gde alki! grupa može da ima od jedan do šest atoma kao što su metil. etil. izopropil. itd. Obuhvaćeni su račvasti alkili. Poželjni alkil je metil. I i pogledu PEG grupa formule I, R i R" mogu da imaju iste ili različite vrednosti.
Ir'No- (interferona") i njegove podvrste IFNaža označava prirodni ili rekombmantni protein, po mogućstvu humani, koji se dobija iz bilo kojeg uobičajenog izvora kao što su tkiva, sinteza proteina, ćelijska kultura sa prirodnim ili rekobinantnim ćelijama. Obuhvaćen je bilo koji od proteina koji ima aktivnost za IFNa, kao što su muteini ili ostali modilikovani proteini. Dobijanje i izolovanje IFNa iz prirodnog ililekombinantnih izvora dobro je poznato (Pestka, Arch. Biochem. Biophvs. 221. 1, (1^83)). Poželjni IFNa je IFNa2a, koji jeovde naveden, dobija se poznatim postupcima ( Pestka. Sci. Am. 249. 36 (1983); Evropski patent br. 43 980)
fiziološki aktivni konjugat formule 1 poseduje aktivnost za IFNa, pod čime se podrazumcva bilo koja t'rakcija ili veliki broj poznatih aktivnosti IFNa. kako je odredjeno različitim ogledima koji su poznati u stanju tehnike. Konjugali iz ovog pronalaska poseduju aktivnost za IFNa kako je pokazano antiproliferativnom aktivnošću prema ćelijama tumora i antivirusnu aktivnost prema ćelijama koje su zaražene virusom. One predstavljaju poznale aktivnosti IFNa Ta aktivnost konjugata može na primer. cla bude odredjena pomoću niže opisanih ogleda koji su dobro poznati stručnjacima (videti takodje Rubinstein i dr., J. Virol. 37, 755 (1981): Rorden i dr.. Canc. Res. 42, 4948 (1982)). Deo pronalaska odnosi se na konjugat formule 1 koji ima veću anliproliferativnu aktivnost i manju anitivirusnu aktivnost nego za ncmodifikovani IFNa.
Konjugat fomule ! dobija se kovalentnim vezivanjem IFNu za PEG koji se aktivira zamenom PEG hidroksil sa vezivnom grupom, fonniranjem reagensa koji je PEG derivat estra N'-hidroksi sukcinamida(naročito monometoksi PEG) tormule U. Reagcns može da se dobije uobičajenim postupcima (Mondafini i dr., kao gore). Vezivanje sc vrši preko amidne ili estarske veze. Kod jednog poželjnog konjugata, vezivanje se vrši preko amidne veze (X jc NH). Deo ovog pronalaska predstavlja postupak za povećanje antiproliferativne aktivnosti IFNa. pri čemu se smanjuje antivirusna aktivnost IFNa, vezivanjem IFNa kako je opisano gore za reagens formule II da bi se dobio PEG-IFN konjugat.
X predstavlja vezivno mesto na IFNa na kojem je PEG reagens formule II kovalentno vezan za IFNa. Reagensi se vezuju za primarne amino grupe (XH = NH2) lizina ili za N-terminalni kraj od IFNa. Reagensi takodje mogu da se vezuju za hidroksilnu grupu
<XH = OH) serina.
Reagens formule II (PEG2-NHS) u kojem su 2 od ukupnog broja lanaca monometoksi grupa (m-PEG) vezani za lizin, svaki za a i e amino grupe preko veza na karbamatima (uretan) i sa karboksilnom grupom lizina aktiviranom na sukcinimidil estru, može da se dobije uobičajenim postupcima, na osnovu poznatih postupaka (Monfardini i dr., videti gore) koji se mogu primeniti na reagens sa R.grupom koja predstavlja niži alkil,1koji ima željenu vrednost za n. Reagens se može nabaviti kod Shearvvater Polvmers Inc., (Huntsvillc, Alabama). Poželjna srednja vrednost za molekulsku težinu od PEG iznosi 20000 daltona. u odnosu na ukupnu težinu PEG od 40000 daltona u PEG2-NHS (ostale molekulske težine mogu da se dobiju uobičajenim postupcima variranjem vrednosti zanza PEG alkohole kop predstavljaju polazne materijale za reagens formule II).
Reagensi formule II mogu da se vezuju za IFNa uobičajenim postupcima. Reagens formule II prvo reaguje sa jednom ili više primarnih amino grupa (na primer na N-terminalnom kraju i bočnim lancima lizina) od IFNa (na primer IFNa2a) da bi se formirala veza i zmedju IFNa i polimernog lanca PEG. Reakcija pegilaeije odigrava se i zmedju PEG2-NHS i (ukoliko ih ima) slobodnih hidroksilnih grupa (na primer serma) IFNa da bi se formirala estarska veza. Reakcioni mehanizam je prikazan niže. PEG reagens se kombinuje sa IFNa u umereno baznoj sredini na niskoj temperaturi pod usiovima koji su pogodni za nukiieofiinu substituciju kojom se dobija konjugat formule I. Ovo je takodje prikazano u gore pomenutom mehanizmu reakcije.
Vezivanje reagensa za IFNa može da se vrši pomoću uobičajenih postupaka. Mogu se koristiti PEG bilo koje molekulske težine obuhvaćene ovih pronalaskom. Reakcioni
iislovi se mogu birati tako da se dobije željeni konjugat sa reagensom koji se veže za njega. Konjugat formule 1. koji ima jedan vezani reaktant formule II, odvaja se poznatim postupcima od nemodifikovanog IFNa i konjugata za koje je vezan više od jednog molekula reagensa. Postupci prečišćavanja kao što su katjonska jonoizmenjivačka hromatografjja, mogu biti primenjeni za razdvajanje konjugata na osnovu razlika u naelektrisanju i veoma su efikasne za razdvajanje konjugata prema molekulskim masama. Sadržaj frakcija dobijenih katjonskom jonoizmenjivačkom hromatografijom može se identilikovati na osnovu molekulske mase korišćenjem uobičajenih postupaka, na primer, masene spektroskopije, SDS-PAGE elektroforeze. ili ostalih postupaka za razdvajanje molekula prema molekulskim masama. Na taj način se identi likuje frakcija koja sadrži konjugal formule I oslobodjen od nemodifikovanog IFaa i konjugata kiselom hidrolizom, tako da broj molekula lizina u hidrolizatu ukazuje na broj PEG vezanih za protein, te tako može biti titvrdjen broj molekula reagenasa vezanih za konjugat.
Primeri koji slede služe kao dalja ilustracija datog pronalaska. IFNo.2a se koristi u ovim pnmerima. Ostale vrste IFNa takodje se mogu vezati za PEG postupcima koji su ovde potkrepljen; odgovarajućim primerima.
OPIS SLIKA
Slika 1: Antitumorska aktivnost za PEG2-IFNa!fa2a kod bczdlakih (nude) miševa kome su subkutano ugradjene humane A498 ćelije bubrega. 33-ćeg dana od početka ogleda, svim životinjama subkutano je implantirano 2 x 106 humanih A498 ćelija bubrega. Nultog dana ispitivanja je započeo tretman sa IFNalfa2a. Odredjena količina (10, 20, 40 ili 100 ug) IFN alfa 2a je davana subkutano u stranu slabine koja je suprotna onoj na kojoj je tumor, jedanput nedeljno u periodu od četiri nedelje.
Slika 2: Antitumorska aktivnost za PEG2-lFNalfa2a kod bczdlakih miševa kome su
.subkutano ugradjene humane A498 ćelije bubrega. 33-ćeg dana od početka ogleda, svim životinjama subkutano je implantirano 2 x 10° hum anih A498 ćelija bubrega. Nultog dana ispitivanja je započeo tretman sa IFNalfa2a. Odredjena količina ( 10. 20. 40 ili 100 ug) IFN alta 2a je davana subkutano u stranu slabine koja je suprotna onoj na kojoj je tumor, 3 puta nedeljno u periodu od četiri nedelje.
Slika 3: Antitumorska aktivnost za PEG2-lFNalfa2a kod bczdlakih miševa kome su
subkutano ugradjene humane ACHN ćelije bubrega. 25-tog dana od početka ogleda,svim životinjama subkutano jc implantirano 2x !0<6>humanih ACILNćelijabubrega.Nultog dana ispitivanja je započeo tretman sa IFNalfa2a. Odredjena količina (30. 60. 120 ili 300 pg) PFG2-IFN alfa 2a je davana subkutano u stranu slabine koja je suprotna onoj na kojoj je tumor, jedanput nedeljno u periodu od četiri nedelje.
Slika 4: Antitumorska aktivnost za IFNalfa2a kod bezdlakih miševa kome su subkutano ugradjene humane ACHN ćelije bubrega. 25-tog dana od početka ogleda, svim životinjama subkutano je implantirano 2 x IO6 humanih A498 ćelija bubrega. Nultog dana ispitivanja je započeo tretman sa IFNalfa2a. Odredjena količina (10. 20, 40 ili 100 ug) IFN alfa 2a je davana subkutano u stranu slabine koja je suprotna onoj na kojoj je tumor, tri puta nedeljno u periodu od pet nedelja.
Slika 5: Antitumorska aktivnost za PEG2-IFNalfa2a kod bczdlakih miševa kome su subkutano ugradjene humane G402 ćelije bubrega. 45-tog dana od početka ogleda, svim životinjama subkutano je implantirano 2 x 10<A>humanih G402 ćelija bubrega. Nultog dana ispitivanja je započeo tretman sa IFNalfa2a. Odredjena količina (30. 60, 120 ili 300 ug) IFN alfa 2a je davana subkutano u stranu slabine koja je suprotna onoj na kojoj je tumor, jedanput nedeljno u periodu od pet nedelja.
Slika 6: Antitumorska aktivnost za IFNalfa2a kod bezdlakih miševa kome su subkutano ugradjene humane G402 ćelije bubrega. 45-tog dana od početka ogleda, svim životinjama subkutano je implantirano 2 x 10<6>humanih G402 ćelija bubrega. Nultog dana ispitivanja je započeo tretman sa IFNalfa2a. Odredjena količina (10. 20. 40 ili 100 ug) IFN alfa 2a je davana subkutano u stranu slabine koja je suprotna onoj na kojoj je tumor, tri puta nedeljno u periodu od pet nedelja.
P rimer 1
Pripr ema ko nj imala Formule I
Materijali
Interferon n2a je pripremljen primenom poznatih metoda (Pestka, supra). Polietilen-glikol (PEG) reagens formule II je kupljen kod Shearvvater Polvmers, Inc. (Huntsviile. Ala). FractogeKK FMD CM 650(S) smola, sa veličinom čestica od 25 - 40 pm, nabavljen je od FM Separations (Gibbstovvn, MA). Koncentrovani (10x) puferski rastvor fosfata (PBS), pFI 7,3, kupljenje od BioVVhittaker (VValkersville, MD). Već izliveni gelovi za natrijum dodecii (laurel) sulfat/poliakrilamidnu gel elektroforezu (SDS-PAGF) i pribor za elektroforezu su nabavljeni od NOVEX-a (San Diego, CA). Koncentrovana 'Fast Stain' boja za bojenje proteina PEG konjugata na SDS-PAGE je ku<p>ljen od Zoion Research , Inc. (Newion, MA). Komplet za LAL endotoksinski test je kupljen od Associates of Cape cod, Inc. (Woods hole, MA). Svi drugi upotrebljeni reagensi su bili najvišeg mogućeg kvaliteta. Pacovi sa kanilom u jugularnoj veni i BDF-1 miševi su nabavljeni od Charles River Laboratories (\Vilmington. MA).
Eksperimentalni postupci
A. SMAIJ. SCAEF. priprema konjugata Formule I
Dvesto osam miligrama (5.2 umol) reagensa Formule II (prosečne MW od 40 000 daltona) je dodato u 50 mg (2,6 umol) IFNa u 10 ml 100 mM borata, pH 8,0. Finalni odnos proteina i reagensa je bio 1:2. Reakciona smesa je mesana dva sata na 4°C. Reakcija je zaustavljena podešavanjem pH na 4,5 glacijalnom sirćetnom kiselinom.
Reakciona smesa je razblažena 50 puta vodom, propuštena kroz 0,2u liker i nanesena na Amicon kolonu pakovanu sa 100 ml (3,2x13 cm) Fractogel-a EMD CM 650(S), pri protoku od 20 ml/min. Kolona je prethodno ekvilibrisana 10 mM amonijum-acetatom, pH 4,5. Fluat sa kolone je praćen merenjem UV apsorbancc na 280 nm. Kolona je zatim ispirana ekvilibracionim puferom sve dok sc UV apsorbanca nije spustila iui osnovnu liniju. PEG-IFN konjugati sa više od jednog reagensa Formule II (PEG-IFN oligomeri) su eluirani 40 mM amonijum-acetatom, pFI 4.5 a konjugat Formule 1 je eluiran 0.12 M NaCl u 40 mM amonijuin-acetatnom puferu. Nemodifikovani IFN koji je preostao u kolonije eluiran 0,5 M NaCl u istom puferu. Kolona je regenerisana ispiranjem 1.0 M NaCl. a zatim ispiranjem ekvilibracionim .puferom Pulovane frakcije konjugata Formule 1 su koncentrovane u Amicon ćeliji za. koncentrovanje sa mešanjem, preko YM10 membrane, do koncentracije od 1 mg/ml.
Katjonska smola Fractogel CM 650(S) korišćena za prečišćavanje je efikasno adsorbovala PEG i nemodifikovani IFN. Jačina adsorpcije je zavisila od stepena PP'Gilacije. Konjugati su se vezivali manje čvrsto od nemodifikovanog lFN-a. PEG-IFN oligomeri su eluirani 40 mM amonijum acetatom. dok je konjugat Formule I eluiran 0,12 M NaCl. Nemodifikovani IFN je eluiran 0,5 M NaCl. Sve preparacije su sadržale <5EU/mg endotoksina. Finalna preparacija je sadržala >99% konjugata Formule 1 i nije sadržala nemodifikovani IFN.
B. LARGE-SCALE priprema konjugata Formule I
Šest hiljada dvesto četrdeset miligrama (156 umol) reagensa Formule II (prosečne molekulske težine od 40 000 daltona) je rastvoreno u 63 ml lmM HCL na 4°C i brzo dodato u 125 ml rastvora koji sadrži 1000 mg (52 umol) interferona u 50 mM boratnom puferu, pH 9,0.
Finalni odnos protein/reagens je bio 1:3. a finalna proteinska koncentracija reakcione smese 5.3 mg/ml. Reakciona smesa je mešana 2 sata na 4<*>C. Reakcija je zaustavljena podešavanjem pH na 4.5 pomoću glacijalne sirćetne kiseline.
Reakciona smesa je razblažena 10 puta vodom i nanesena na kolonu pakovanu sa 600 ml Fractogel-a EMD CM 650(M), prethodno ekvilibrisanu 20 mM natrijum-acetatom, pll 4,5. pri linearnoj brzini od 1,3 cm/min. Kolona je ispirana ekvilibracionim puferom, a zatim 10 mM NaCl da bi se uklonili višak reagensa. nusprodukti reakcije i PEG-IFN oligomeri. Konjugat Formule I je eluiran ekvilibracionim puferom sa 200 mM NaCl. Nemodifikovani interferon jos uvek adsorbovan na koloni je uklonjen ispiranjem 0,75 M NaCl u ekvilibracionom puferu. Konjugat Formule I, eluiran pri vrednosti od 0,3-0,5 mg/ml je dalje koncenirovan i propušten kroz. dijafilter u finalni fonnulacioni pufer - 20 mM natrijum-acetat. pll 5.0. koji je sadržao 150 mM NaCl. Ukupan prinos konjugata Formule I je bio 40-45%
Prečišćeni PEG-IFN iz LARGE-SCAEE preparacijc se sastoji >99% od konjugata Formule 1. Prosečna molekulska težina konjugata Formule I iz. ovog primera je 62 000 daltona. uključujući molekulsku težinu IFNaža koja iznosi 19 241 daltona. i prosečnu molekulsku težinu reagensa koja je izmedju 40 000 i 45 000 daltona, oko 43 000 daltona.
Primer 2
Karaktcrizaci ja konjugata Formule I
Odredjivanje proteina
Koncentracija proteina je odredjivana pomoću A280vrednosti KO za 1 mg/ml rastvor IFNa a2a.
SDS-PAGE analiza
Konjugat je analiziran natrij um dodecil (lauril) sulfat/poliakrilamidnom (8-16%) gel elektroforezom. pod redukujućim uslovima, prema metodi Laemmli-ja (Nature 227;
680 (1970)). SDS-PAGE sa PEG-konjugatima je bojena proteinskom bojom Fast Siain (Zoion Research. Inc.) prema uputstvu za upotrebu proizvodjača.
Gdredjivanje nivoa endotoksina
Nivo endotoksina je odredjen LAL metodom, prema proizvođjačevom uputstvu za upotrebu. Sve preparacije su sadržale <5 EU/mg endotoksina.
P rimer 3
//;1' Urobi oaktivnost konju gata Formule I
Antiviralna aktivnost u govedjim bubrežnim ćelijama
//; viiroantiviralna aktivnost lFNa2a i konjugata Formule 1 pripremljenog kao u Primerti l.A. su odredjene u testu u ćelijskoj kulturi, gde su korišćene Madin-Darbv govedje (MDBK) bubrežne ćelije inficirane virusom vezikularnog stomatitisa (Rubinstein i sar.. supra). Vrednosti antiviralne aktivnosti su navedene u kabeli 1. zajedno sa njihovim odgovarajućim rezidualnim aktivnostima kao procenat početnog
IFN.
In vi troantiproliferativna aktivnost u humanim tumorskim ćelijama
In vitroantiproliferativna aktivnost je testirana na humanim Daudi (Burkitt-ov limfom) ćelijama, kao što su opisali Borden i sar. Humane Daudi ćelije su čuvane kao stacionarne suspenzione kulture u RPMI 1540 obogaćenom 10% fetalnim govedjim serumom i 2 mM glutaminom (Grand Island Biologicals. Grand Island, NY). Izvršen je skrining ćelija na mikoplazmu i ustanovljeno je njeno odsustvo. Ćelije (2 x IO<4>) su dodate u bunarčiće na mikrotitar pločama (Costar, MA) u 100 ul medijuma. Različite koncentracije lFN-a i konjugata Formule 1 pripremljenog kao u Primeru l.A. su dodate u bunarčiće u zapremini od 100 ul. Ploče su inkubirane 72 sata na 37"C u 5% C(K Pomoću pulsa električne struje ćelije su tretirane sa 0.25 uCi/bunarčić 4-1-limidinom (Ne\v Fngland nuelear, Boston, MA), šesnaest časova prc žetve ćelija. Ćelije su prikupljene na staklenim filtrima i izrnerene u tečnom scintilacionom brojaču Rezultati su izraženi kao % inhibicije izračunat pomoću formule:
% inhibicije"[ (A-IVAj x 100.
gde:
.A - cpm li kontrolnoj kulturi (ćelije inkubirane samo u medijumu)
B - cpm u eksperimentalnoj kulturi
Uzorci su bili analizirani u kvadriplikatu i standardna devijacija je bila manja od 20% srednje vrednosti svih slučajeva. Eksperimenti su radjeni barem dvaput sa uporedivim rezultatima.
Antiproliferativne aktivnosti (IC50) lFN-a i konjugata su navedene u Tabeli 2. Rezultati pokazuju da postoji povećanje antiproliferativne aktivnosti od 28 puta za konjugat Formule I u poredjenju sa onim kod IFN-a.
P rimer 4
1 armakokinetika
Ženski Sprague-Davvlev pacovi, sa hirurški uvedenom jugtilarnom kanilom. sa prosečnom iclesnom težinom od 240-260 g. sa zasebnim boravkom, imali su slobodan pristup hrani i vodi i živeli su u 1 2-satnom ciklusu svetla i mraka. U okviru 4-6 sati od dolaska, jugularne kanile su isprane PBS-om. Slcdećeg dana. nakon ispiranja sa 0,1 5-0,2 ml PBS-a, ubrizgano je 2x 10P jedinica IFNa u 0.2-0.4 ml PBS-a. što je praćeno ubrizgavanjem 0,15-0.2 ml PBS-a da bi se osiguralo daje kompletna količina leka unesena u životinju. Tako je je svaka životinja primila dozu od 8x10" IFNu jedinica/kg telesne težine.
Uzorci krvi su uzimani nakon 5. 15 i 30 minuta, kao i i. 3. 5, 12 i 24 sata nakon ubrizgavanja IFN-a i konjugata Formule F Na svim vremenskimlačkania. nakon odstranjivanja prvih 0.15 - 0.2 ml krvi. uziman je alikvot od 0.5 ml krvi pomoću nove igle kroz jugtilarnu kaniiu. Uzorci su prebačeni u epruvete za odvajanje seruma na sobnoj temperaturi. Kada su svi uzorci za vremenske tačke sakupljeni, epruvete su centrifugirane na 14 000 x g u hladjenoj Fppendorf centrifugi 10 minula. Odv ojeni serum je prebačen u 1,5 ml plastične epruvete za mikrofugu i zamrznut na - 80%'. do upotrebe u biološkom testu. Uzorci seruma su razblaženi na odgovarajući način i odredjena im je antiviralna aktivnost za svaku vremensku tačkti na već opisani način. Sa grafikona vremena nasuprot aktivnosti, odredjeni su terminalni polu-život konjugata Formule 1 i IFNa, koji su navedeni u Tabeli 3, i koji takodje uključuju vremena boravka u plazmi.
Primer 5
Imunogenost
Normalnim BDF-i miševima (po deset u grupi) su intraperitonealno jedamput dnevno pet puta nedeljno ubrizgavane različite preparacije interferona sa 300 000 jedinica antiviralne aktivnosti. Nekim miševima je takodje ubrizgan agregirani oblik lFNu2a. koji je veći imunogen od monomernog oblika. Uzorci krvi su uzimani 19 dana nakon poslednjeg ubrizgavanja i serum je ispitivan na neutralizujuća antitcla.
Kao što se vidi iz Tabele 4. miševi kojima je ubrizgan lFNu2a su stvorili neutralizujuća antitela i ovaj odgovor je bio znatno povećan kod miševa sa ubrizganim mterferonskim agregatima. Kod većine životinja sa ubrizganim konjugatom iz ovog pronalaska nisu detektovana antitela.
Primer 6
Antit umorska aktivnost In Vivo
In vivoantitumorska aktivnost konjugata Formule l (PEG2-IFNalfa2a) i nemodifikovanog PEG2-IFNa!fa2a su vrednovane putem odredjivanja njihove sposobnosti smanjivanja veličine različitih humanih tumorskih ćelija subkutano usadjenih kod miša. Rezultati su prikazani na Slikama 1-6.
Postupak: Atimični bezdlaki miševi (Harlan) su primili implant od 2 x 10<s>humanih renalnih A498 ćelija ispod leve zadnje slabine (Slike 1 i 2). humane renalne ACHN ćelije (Slike 3 i 4) ili humane renalne G402 ćelije (Slike 5 i 6). 3 do 6 nedelja je ostavljeno za uspostavljanje tumora, kao što je naznačeno. Kriterijum veličine za pnbvaćenost u okvir studije je bilo 0,05 do 0,5 kubnih centimetara. Miševima su davane ukupne ncdeljne doze PEG2-lFNalfa'2a ili nemodifikovanog !FNalfa2a od 30. 60. i 20 ili 300 u<g.>U slučaju PEG2-IFNalfa2a miševi su tretirani jedampt.it nedeljnolponedeljkom) sa 30. 60, 120 i 300 ug PEG2-lFNalfa2a po tretmanu. 1. slučaju nemodifikovanog IFNalfa2a miševi su bili tretirani tri puta nedeljno (ponedeljkom. sredom i petkom) sa 10. 20. 40 ili sa 100 ug lFNalfa2apo tretmanu. Trajanje tretmana je bilo 4 do 5 nedelja u zavisnosti od agresivnosti tumora. Zapremine tumora su mercne svakog ponedeljka pre tretmana.
Rezultati: PEG2-1 FNalfa2a je pokazao značajno smanjenje veličine A498 tumora u poredjenju sa nemodilikovanim !FNalfa2a za sve nivoe testiranih nedeljnih doza. sedmog, četrnaestog, dvadeset prvog i dvadeset osmog dana nakon početka tretmana (Slike 1 i 2). Tretman se nastavljao četiri nedelje. Sedam dana nakon prekida tretmana po tri miša iz svake grupe su bila žrtvovana. Kod tri misa tretirana sa PEG2-IINal<f>a2a nisu primećeni bilo kakvi ostaci tumora. Kod miševa tretiranih nemodilikovanim IINali'a2a težine A498 tumora su bile 1.28 g, 0.62 g i 1,60 g redom kod svakog od tri miša. Težine A498 tumora kod tri kontrolna miša su bile 2.32 g. 3.37 g. i 1.94 g. Nakon 80 dana od završetka četvoronedeljnog tretmana postojanje tumora je odredjivano palpacijom kod sedam miševa. Kod svih sedam miševa palpacijom je utvrdjeno odsustvo tumorskog tkiva.
PEG2-IFNalfa2a je pokazao značajno smanjenje u veličini ACHN tumora u poredjenju sa nemodifikovanim IFNalfa2a za nedeljne doze od 60, 120 i 300 ug, na 14 dana. 21 dan, 28 dana i 35 dana (Slike 3 i 4).
PEG2-IFNaifa2a je pokazao značajno smanjenje u veličini G402 tumora u poredjenju sa nemodifikovanim IFNalfa2a za nedeljne doze od 60 i 120 ug, na 14 dana, 21 dan, 28 dana i 35 dana (Slike 5 i 6).

Claims (14)

  1. PATENTNI ZAHTEVI: 1. Fiziološki aktivni pegilovani konjugat interferona a formule gde R i R" svaki za sebe predstavljaju Ci.ćalkil; X je NH ili O i gde n i n' zbirno iznose od 600 do 1500; i gde prosečna molekulska težina lanca polietilenglikola u pomenutom konjugatu iznosi od 26000 do 66000 daltona.
  2. 2. Konjugat iz patentnog zahteva 1, naznačen time, što molekulska težina za jedinice polietilen glikola u pomenutom konjugatu iznosi od 35000 do 45000 daltona.
  3. 3. Konjugat iz patentnog zahteva 2, naznačen time, što molekulska težina za jedinice polietilenglikola iznosi 40000 daltona.
  4. 4. Konjugat iz patentnog zahteva 1, naznačen time, što R i R' predstavljaju metil.
  5. 5. Konjugat iz patentnog zahteva 1, naznačen time, što X preedstavlja NH.
  6. 6. Konjugat iz patentnog zahteva 1, naznačen time, što je interferon a predstavlja interferon o.2a.
  7. 7. Konjugat iz patentnog zahteva 1, naznačen time, što zbir n. i m iznosi izmedju 850 i 1000 daltona.
  8. S. Konjugat iz patentnog zahteva 1. naznačen time. što u njemu R i R" predstav ljaju metil; X je NH: interferon a je interferon a2a. i gde jedan ili oha n ; n' iznose 420.
  9. 9 Konjugat i/patentnog zahteva 1. naznačen time. što R i R' predstavljaju metil: X je NH; interferon o je interferon ct2a: i gde jedan ili oba n i t<f>iznose 520
  10. 10. Konjugat iz patentnog zahteva 1. naznačen time. što ima veću antiproliferativnu aktivnost u odnosu na interferon a i manju virusnu aktivnost u odnosu na interferon a.
  11. 1 1. Postupak za proizvodnju pegilovanog interferona a sa pojačanim antiproliterativnim dejstvom i slabijom antivirusnim dejstvom u poredjenju sa interferonom a. gde se pomenuti postupak sastoji od kovalentnog vezivanja reagensa formule II
    gde su R. R\ n i n' defmisani u patentnom zahtevu 1, za interferon a da bi se dobio pegilovani konjugat interferona a.
  12. 1 2. Farmaceutske kompozicije koja obuhvataju pegilovani konjugat interferona u kako je traženo prema bilo kojem patentnom zahtevu od 1 do 10 i terapeutski interni nosač.
  13. 1 3. Farmaceutske kompozicije za lečenje ili profilaksu imunomodulatornih poremećaja kao što su neoplazme ili infektivna oboljenja, koje sadrže pegilovani konjugat interferona a kako je traženo prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-10 i farmaceutski inertni nosač.
  14. 14. Upotreba pegilovanog konjugata interferona a prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-10 za proizvodnju lekova za upotrebu u lečenju ili profilakse oboljenja.
YU17597A 1996-05-31 1997-05-07 Interferonski konjugati RS49533B (sr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1883496P 1996-05-31 1996-05-31

Publications (2)

Publication Number Publication Date
YU17597A YU17597A (sh) 1999-07-28
RS49533B true RS49533B (sr) 2006-12-15

Family

ID=21790006

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
YU17597A RS49533B (sr) 1996-05-31 1997-05-07 Interferonski konjugati

Country Status (47)

Country Link
US (1) US7201897B2 (sr)
EP (1) EP0809996B1 (sr)
JP (1) JP2980569B2 (sr)
KR (1) KR100254097B1 (sr)
CN (1) CN1088721C (sr)
AR (1) AR008378A1 (sr)
AT (1) ATE235920T1 (sr)
AU (1) AU725195B2 (sr)
BG (1) BG62273B1 (sr)
BR (1) BR9703421A (sr)
CA (1) CA2203480C (sr)
CO (1) CO4950528A1 (sr)
CY (2) CY2433B1 (sr)
CZ (1) CZ292775B6 (sr)
DE (3) DE10399018I1 (sr)
DK (1) DK0809996T3 (sr)
EG (1) EG24292A (sr)
ES (1) ES2110386T3 (sr)
GR (1) GR970300063T1 (sr)
HR (1) HRP970298B1 (sr)
HU (1) HU227992B1 (sr)
IL (1) IL120902A (sr)
IS (1) IS1988B (sr)
LU (1) LU91029I2 (sr)
MA (1) MA24193A1 (sr)
MY (1) MY117909A (sr)
NL (1) NL300127I2 (sr)
NO (1) NO322964B1 (sr)
NZ (1) NZ314903A (sr)
OA (1) OA10488A (sr)
PA (1) PA8431001A1 (sr)
PL (1) PL186949B1 (sr)
PT (1) PT809996E (sr)
RS (1) RS49533B (sr)
RU (1) RU2180595C2 (sr)
SA (1) SA97180030B1 (sr)
SG (1) SG55314A1 (sr)
SI (1) SI0809996T1 (sr)
SK (1) SK284458B6 (sr)
SV (1) SV1997000049A (sr)
TJ (1) TJ328B (sr)
TN (1) TNSN97091A1 (sr)
TR (1) TR199700358A3 (sr)
TW (1) TW517067B (sr)
UA (1) UA56989C2 (sr)
UY (1) UY24572A1 (sr)
ZA (1) ZA974583B (sr)

Families Citing this family (144)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5951974A (en) * 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
US5908621A (en) * 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
EP0858343B1 (en) 1995-11-02 2004-03-31 Schering Corporation Continuous low-dose cytokine infusion therapy
US5981709A (en) * 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
US5985263A (en) * 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
US6180096B1 (en) 1998-03-26 2001-01-30 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
EP1066059B1 (en) * 1998-03-26 2005-06-15 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
PL193352B1 (pl) * 1998-04-28 2007-02-28 Applied Research Systems Koniugat poliol-interferon ß, sposób jego wytwarzania i jego zastosowanie oraz kompozycja farmaceutyczna
TWI277424B (en) 1998-05-15 2007-04-01 Schering Corp Combination therapy for eradicating detectable NCV-RNA in antiviral treatment naive patients having chronic hepatitis C infection
JP3839667B2 (ja) * 1998-06-08 2006-11-01 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 慢性Ｃ型肝炎の処置のためのＰｅｇ−ＩＮＦ−アルファ及びリバビリンの使用
US6277830B1 (en) * 1998-10-16 2001-08-21 Schering Corporation 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon
IL129299A0 (en) * 1999-03-31 2000-02-17 Mor Research Applic Ltd Monoclonal antibodies antigens and diagnosis of malignant diseases
US6923966B2 (en) 1999-04-08 2005-08-02 Schering Corporation Melanoma therapy
AR023390A1 (es) * 1999-04-08 2002-09-04 Schering Corp Terapia para la leucemia mielocitica cronica
US6362162B1 (en) 1999-04-08 2002-03-26 Schering Corporation CML Therapy
US6605273B2 (en) 1999-04-08 2003-08-12 Schering Corporation Renal cell carcinoma treatment
EP2025344B1 (en) 1999-04-08 2011-01-26 Schering Corporation Melanoma Therapy
CZ299516B6 (cs) * 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
US6313143B1 (en) * 1999-12-16 2001-11-06 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted pyrroles
WO2001051510A2 (en) 2000-01-10 2001-07-19 Maxygen Holdings Ltd G-csf conjugates
EP1908477A3 (en) * 2000-01-24 2008-06-11 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
AU2001232951A1 (en) * 2000-01-24 2001-07-31 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
NZ521257A (en) 2000-02-11 2004-10-29 Maxygen Aps Factor VII or VIIa-like molecules
US6476062B2 (en) 2000-03-30 2002-11-05 Schering Corporation Chemokine receptor antagonists
US6756037B2 (en) 2000-03-31 2004-06-29 Enzon, Inc. Polymer conjugates of biologically active agents and extension moieties for facilitating conjugation of biologically active agents to polymeric terminal groups
US6777387B2 (en) 2000-03-31 2004-08-17 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Terminally-branched polymeric linkers containing extension moieties and polymeric conjugates containing the same
AU2001255495A1 (en) 2000-04-20 2001-11-07 Schering Corporation Ribavirin-interferon alfa combination therapy for eradicating detectable hcv-rnain patients having chronic hepatitis c infection
WO2002002627A2 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Zymogenetics, Inc. Interferon-like protein zcyto21
JP4152187B2 (ja) 2001-01-30 2008-09-17 協和醗酵工業株式会社 分岐型ポリアルキレングリコール類
CZ20032526A3 (cs) 2001-02-27 2003-12-17 Maxygen Aps Nové molekuly podobné interferonu beta
DE10112825A1 (de) 2001-03-16 2002-10-02 Fresenius Kabi De Gmbh HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung
ES2291613T3 (es) 2002-01-16 2008-03-01 Biocompatibles Uk Limited Conjugados de polimeros.
KR100888371B1 (ko) * 2002-01-17 2009-03-13 동아제약주식회사 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
DE10209821A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid
DE10209822A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid
CA2490360A1 (en) 2002-06-21 2003-12-31 Novo Nordisk Health Care Ag Pegylated factor vii glycoforms
CN100337689C (zh) 2002-07-24 2007-09-19 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 聚亚烷基二醇酸加合物
US7087229B2 (en) * 2003-05-30 2006-08-08 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
CN100348618C (zh) 2002-09-11 2007-11-14 弗雷泽纽斯卡比德国有限公司 生产羟烷基淀粉衍生物的方法
ES2214166T1 (es) * 2002-09-11 2004-09-16 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Polipeptidos has-ilados, especialmente, eriptropoyetina has-ilada.
EP1681303B1 (en) * 2002-09-11 2013-09-04 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylated polypeptides, especially HASylated erythropoietin
RU2368619C2 (ru) * 2002-09-20 2009-09-27 Фармация Корпорейшн Способ получения соматотропного гормона со сниженным содержанием агрегата его изоформ, способ получения антагониста соматотропного гормона со сниженным содержанием агрегата его изоформ и общим суммарным содержанием трисульфидной примеси и/или дефенилаланиновой примеси
EP1549350B1 (en) 2002-10-08 2008-09-24 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Pharmaceutically active oligosaccharide conjugates
CA2504267A1 (en) * 2002-11-18 2004-06-03 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
US7314613B2 (en) 2002-11-18 2008-01-01 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
GB0301014D0 (en) * 2003-01-16 2003-02-19 Biocompatibles Ltd Conjugation reactions
US20050176108A1 (en) * 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
CA2458085A1 (en) 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
WO2005035565A1 (en) 2003-10-10 2005-04-21 Novo Nordisk A/S Il-21 derivatives
EP2633866A3 (en) 2003-10-17 2013-12-18 Novo Nordisk A/S Combination therapy
MXPA06008496A (es) 2004-02-02 2007-01-30 Ambrx Inc Polipeptidos de interferon humano modificados y sus usos.
CN100355784C (zh) * 2004-02-12 2007-12-19 江苏恒瑞医药股份有限公司 聚乙二醇修饰α－干扰素1b的制备方法
BRPI0508607A (pt) 2004-03-11 2007-07-31 Fresenius Kabi De Gmbh conjugados de amido de hidroxialquila e uma proteìna, preparados pela aminação redutiva
MXPA06013412A (es) * 2004-05-19 2007-01-23 Maxygen Inc Polipeptidos de interferon-alfa y conjugados.
KR20070034512A (ko) 2004-06-18 2007-03-28 암브룩스, 인코포레이티드 신규 항원-결합 폴리펩티드 및 이의 용도
AU2005260664A1 (en) * 2004-06-30 2006-01-12 Egen Corporation Pegylated interferon alpha-1b
KR20070039593A (ko) 2004-07-21 2007-04-12 암브룩스, 인코포레이티드 비천연적으로 코딩된 아미노산을 이용한 생합성 폴리펩티드
US7632491B2 (en) 2004-08-12 2009-12-15 Schering Corporation Stable pegylated interferon formulation
CA2594557C (en) 2004-12-22 2016-04-26 Ambrx, Inc. Modified human growth hormone
WO2006102659A2 (en) * 2005-03-23 2006-09-28 Nektar Therapeutics Al, Corporation CONJUGATES OF AN hGH MOIETY AND A POLYMER
US7619067B2 (en) 2005-05-18 2009-11-17 Maxygen, Inc. Evolved interferon-alpha polypeptides
US8633300B2 (en) 2005-06-17 2014-01-21 Novo Nordisk Healthcare Ag Selective reduction and derivatization of engineered proteins comprising at least one non-native cysteine
WO2007002233A2 (en) * 2005-06-20 2007-01-04 Pepgen Corporation Low-toxicity, long-circulating chimeras of human interferon- alpha analogs and interferon tau
DK1937824T3 (da) 2005-08-18 2013-04-02 Ambrx Inc Sammensætninger af tRNA og anvendelser deraf
JP4261531B2 (ja) 2005-09-06 2009-04-30 株式会社Ｎｒｌファーマ ラクトフェリン複合体及びその製造方法
CN101454461A (zh) 2005-11-16 2009-06-10 Ambrx公司 包括非天然氨基酸的方法和组合物
CN101002944B (zh) * 2006-01-17 2012-07-25 中国科学院过程工程研究所 支链聚乙二醇-干扰素结合物及其制备方法
CN100475270C (zh) 2006-01-20 2009-04-08 清华大学 一种治疗肿瘤的药物及其应用
CN101002945B (zh) 2006-01-20 2012-09-05 清华大学 一种用于肿瘤治疗的新型复合物
JPWO2007132882A1 (ja) 2006-05-16 2009-09-24 財団法人 東京都医学研究機構 Ｈｃｖ感染症を治療または予防するための医薬組成物
KR20090013816A (ko) 2006-05-24 2009-02-05 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ⅸ 유사체
AU2007292903B2 (en) 2006-09-08 2012-03-29 Ambrx, Inc. Modified human plasma polypeptide or Fc scaffolds and their uses
JP5399906B2 (ja) 2006-09-08 2014-01-29 アンブルックス，インコーポレイテッド 脊椎動物細胞用のハイブリッドサプレッサーｔｒｎａ
CN1966547B (zh) * 2006-11-06 2011-11-09 中国药科大学 双链结构的聚乙二醇衍生物的制备及其与药物分子的结合
JP5541594B2 (ja) * 2006-11-07 2014-07-09 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． 生体分子部分を含むカルバメート、チオカルバメートまたはカルバミド
KR101079993B1 (ko) 2006-11-17 2011-11-04 동아제약주식회사 폴리에틸렌글리콜 과립구 콜로니 자극인자 접합체
CN101219219B (zh) 2007-01-10 2013-02-13 北京普罗吉生物科技发展有限公司 包含血管抑素或其片段的复合物、其制备方法及应用
JP5515224B2 (ja) 2007-02-28 2014-06-11 日油株式会社 多分岐鎖ポリオキシアルキレン誘導体
DK2068909T3 (da) 2007-03-30 2012-08-06 Ambrx Inc Modificerede FGF-21-polypeptider og anvendelse heraf
CL2008002399A1 (es) * 2007-08-16 2009-01-02 Pharmaessentia Corp Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c.
CA2698396C (en) 2007-09-04 2014-01-21 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd. Interferon alpha2a modified by polyethylene glycol, the preparation and use thereof
RU2485134C2 (ru) 2007-09-04 2013-06-20 Биостид Джене Експрешен Тек. Ко., Лтд. Интерферон альфа 2в, модифицированный полиэтиленгликолем, получение препарата и его применение
CA2703830A1 (en) 2007-11-20 2009-05-28 Ambrx, Inc. Modified insulin polypeptides and their uses
EP2070950A1 (en) 2007-12-14 2009-06-17 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hydroxyalkyl starch derivatives and process for their preparation
CN107033233A (zh) * 2008-01-18 2017-08-11 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 非糖基化蛋白质的纯化
EP2596805B1 (en) * 2008-02-01 2021-10-27 Ascendis Pharma A/S Prodrug comprising a drug-linker conjugate
EP2247743B1 (en) 2008-02-08 2016-04-06 Ambrx, Inc. Modified leptin polypeptides and their uses
CA2720306C (en) 2008-04-03 2016-03-15 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd. Double-stranded polyethylene glycol modified growth hormone, preparation method and application thereof
DK2279007T3 (en) 2008-04-29 2016-08-22 Ascendis Pharma Growth Disorders Div As Pegylated recombinant relations of human growth hormone
TW201010692A (en) 2008-06-19 2010-03-16 Public Univ Corp Nagoya City Univ Pharmaceutical composition for treatment or prevention of hbv infection
PL2307367T3 (pl) 2008-07-08 2015-03-31 Univ Texas Nowe inhibitory proliferacji i aktywacji białek przekazujących sygnał i aktywujących transkrypcję (STAT)
WO2010011735A2 (en) 2008-07-23 2010-01-28 Ambrx, Inc. Modified bovine g-csf polypeptides and their uses
MX346001B (es) 2008-09-26 2017-03-01 Ambrx Inc Polipeptidos de eritropoyetina animal modificados y sus usos.
CA2738033C (en) 2008-09-26 2019-11-26 Ambrx, Inc. Non-natural amino acid replication-dependent microorganisms and vaccines
IT1399351B1 (it) 2009-06-16 2013-04-16 Fidia Farmaceutici Procedimento per la sintesi di coniugati di glicosamminoglicani (gag) con molecole biologicamente attive, coniugati polimerici e usi relativi
US20110027229A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Medtronic, Inc. Continuous subcutaneous administration of interferon-alpha to hepatitis c infected patients
EA201200650A1 (ru) 2009-10-30 2012-12-28 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Курсы комбинированного лечения вируса гепатита с, включающие bi201335, интерферон-альфа и рибавирин
JP2013513647A (ja) 2009-12-15 2013-04-22 アセンディス ファーマ エー／エス ポリマー担体に一時的に連結された乾燥成長ホルモン組成物
CN107056929A (zh) 2009-12-21 2017-08-18 Ambrx 公司 经过修饰的猪促生长素多肽和其用途
WO2011087808A1 (en) 2009-12-21 2011-07-21 Ambrx, Inc. Modified bovine somatotropin polypeptides and their uses
AU2011222883B2 (en) 2010-03-05 2016-05-26 Omeros Corporation Chimeric inhibitor molecules of complement activation
US20120135912A1 (en) 2010-05-10 2012-05-31 Perseid Therapeutics Llc Polypeptide inhibitors of vla4
CA2803093A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 Panmed Ltd. Treatment of hepatitis c virus related diseases using hydroxychloroquine or a combination of hydroxychloroquine and an anti-viral agent
RU2447083C1 (ru) * 2010-07-20 2012-04-10 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" НОВЫЙ ФУНКЦИОНАЛЬНО АКТИВНЫЙ ВЫСОКООЧИЩЕННЫЙ СТАБИЛЬНЫЙ КОНЪЮГАТ ИНТЕРФЕРОНА α С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ, ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ОДНИМ ПОЗИЦИОННЫМ ИЗОМЕРОМ ПЭГ-NαH-ИФН, С УМЕНЬШЕННОЙ ИММУНОГЕННОСТЬЮ, С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, ПРИГОДНЫЙ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ, И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ
JP2013541937A (ja) 2010-08-05 2013-11-21 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 抗ｍｈｃ抗体−抗ウイルス性サイトカイン融合タンパク質
AU2011291943B2 (en) 2010-08-17 2015-01-22 Ambrx, Inc. Modified relaxin polypeptides and their uses
US9567386B2 (en) 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
TWI480288B (zh) 2010-09-23 2015-04-11 Lilly Co Eli 牛顆粒細胞群落刺激因子及其變體之調配物
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
CN102229667A (zh) * 2011-06-03 2011-11-02 北京伟嘉人生物技术有限公司 一种聚乙二醇修饰的猪α-干扰素及其制备方法和应用
MX2014000031A (es) 2011-07-01 2014-07-09 Bayer Ip Gmbh Polipeptidos de fusion de relaxina y usos de los mismos.
MX2014001355A (es) 2011-08-03 2014-11-21 Cytheris Inmunoterapia contra el vhc.
JP2015509980A (ja) 2012-03-14 2015-04-02 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｈｃｖ−ｈｉｖ同時感染患者集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
WO2013143581A1 (en) 2012-03-28 2013-10-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for treating hcv infection in specific patient subgenotype sub-population
JP6498600B2 (ja) 2012-06-08 2019-04-10 ストロ バイオファーマ インコーポレーテッド 部位特異的な非天然アミノ酸残基を含む抗体、その調製方法、及びその使用方法
US9732161B2 (en) 2012-06-26 2017-08-15 Sutro Biopharma, Inc. Modified Fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
EP2890402B1 (en) 2012-08-31 2019-04-17 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising an azido group
EA022617B1 (ru) * 2013-03-28 2016-02-29 Илья Александрович МАРКОВ Монопегилированный интерферон-альфа разветвленной структуры и фармацевтическая композиция для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа
EA021610B1 (ru) * 2013-03-28 2015-07-30 Илья Александрович МАРКОВ Жидкое противовирусное лекарственное средство
EA023323B1 (ru) * 2013-03-28 2016-05-31 Илья Александрович МАРКОВ Разветвленный ацилазидный пегилирующий агент, способ его получения и способ получения пегилированного интерферона
ES2658039T3 (es) 2013-07-10 2018-03-08 Sutro Biopharma, Inc. Anticuerpos que comprenden múltiples residuos de aminoácidos no naturales sitio-específicos, métodos para su preparación y métodos de uso
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
EP2907512A1 (en) 2014-02-14 2015-08-19 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Inhibitors of MMP-12 as antiviral Agents
RU2554761C1 (ru) * 2014-05-13 2015-06-27 Закрытое акционерное общество "Сибирский центр фармакологии и биотехнологии" Противоэнтеровирусное и иммуностимулирующее средство
EA036697B1 (ru) 2014-10-24 2020-12-09 Бристол-Майерс Сквибб Компани Модифицированные полипептиды fgf-21 и их применение
FI3215193T3 (fi) 2014-11-06 2023-12-28 Pharmaessentia Corp Pegyloidun interferonin annostusohjelma
KR102608645B1 (ko) 2014-11-18 2023-12-01 아센디스 파마 엔도크리놀로지 디비전 에이/에스 신규한 중합체성 hGH 프로드러그
HRP20211734T8 (hr) 2014-11-21 2022-03-04 Ascendis Pharma Endocrinology Division A/S Dozni oblici dugodjelujućeg hormona rasta
BR112018009009A8 (pt) 2015-11-03 2019-02-26 Hoffmann La Roche terapia combinada de um inibidor de formação de capsídeo hbv e um interferon
CN106749608B (zh) * 2015-11-18 2021-10-15 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 干扰素α缀合物
WO2018087345A1 (en) 2016-11-14 2018-05-17 F. Hoffmann-La Roche Ag COMBINATION THERAPY OF AN HBsAg INHIBITOR, A NUCLEOS(T)IDE ANALOGUE AND AN INTERFERON
KR102670432B1 (ko) 2017-02-08 2024-05-28 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 약동학적 인핸서를 포함하는 변형된 렐락신 폴리펩티드 및 그의 용도
RU2678332C1 (ru) 2017-09-08 2019-01-28 Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "СФМ") Пегилированный интерферон лямбда, обладающий высокой биодоступностью при пероральном применении, и способ его получения
MX2021002575A (es) 2018-09-11 2021-06-08 Ambrx Inc Conjugados de polipeptidos de interleucina-2 y sus usos.
WO2020082057A1 (en) 2018-10-19 2020-04-23 Ambrx, Inc. Interleukin-10 polypeptide conjugates, dimers thereof, and their uses
KR20210136014A (ko) 2019-02-12 2021-11-16 암브룩스, 인코포레이티드 항체-tlr 작용제 콘쥬게이트를 함유하는 조성물, 방법 및 이의 용도
US12303553B2 (en) 2019-03-04 2025-05-20 Ascendis Pharma Endocrinology Division A/S Long-acting growth hormone dosage forms with superior efficacy to daily somatropin
CN115243726B (zh) 2020-03-11 2025-07-15 北京泰德制药股份有限公司 白介素-2多肽偶联物及其使用方法
KR20230073200A (ko) 2020-08-20 2023-05-25 암브룩스, 인코포레이티드 항체-tlr 작용제 접합체, 그 방법 및 용도
MX2023007516A (es) * 2020-12-23 2023-09-14 Jazz Pharmaceuticals Ireland Ltd Metodos de purificacion de proteinas de fusion con proteccion de carga.
KR20240004342A (ko) 2021-04-03 2024-01-11 암브룩스, 인코포레이티드 항-her2 항체-약물 접합체 및 이의 용도
EP4656202A1 (en) 2023-02-09 2025-12-03 Xie, Yanhui Treatment of atopic dermatitis with polyethylene glycol-modified interleukin 2, glucocorticoid and hyaluronic acid

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3380726D1 (en) 1982-06-24 1989-11-23 Japan Chem Res Long-acting composition
US4681848A (en) 1982-09-22 1987-07-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Novel peptide and use thereof
WO1984004745A1 (fr) 1983-05-31 1984-12-06 Takeda Chemical Industries Ltd Nouveaux polypeptides et leur utilisation
GB8430252D0 (en) * 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
WO1987000056A1 (en) 1985-06-26 1987-01-15 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
DE3719046A1 (de) 1987-06-06 1988-12-15 Basf Ag Verwendung von salzen von sulfonamidcarbonsaeuren als korrosionsinhibitoren in waessrigen systemen
US5122614A (en) 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5145773A (en) * 1989-05-25 1992-09-08 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Method to detect sensitivity to alpha-interferon therapy
ES2085297T3 (es) * 1989-05-27 1996-06-01 Sumitomo Pharma Procedimiento para preparar derivados de poli(etilenglicol) y proteina modificada.
US5238915A (en) 1991-02-08 1993-08-24 Wakunaga Seiyaku K.K. Aromatic composition and method for controlling aroma
US5595732A (en) 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
GB9111967D0 (en) 1991-06-04 1991-07-24 Erba Carlo Spa 2,5'-nucleotide analogs as antiviral agents
US5281698A (en) * 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
RU2006036C1 (ru) * 1991-12-27 1994-01-15 Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи РАМН Способ определения антигенов
ZA933926B (en) 1992-06-17 1994-01-03 Amgen Inc Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules
US5382657A (en) * 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
US5359030A (en) 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
HUT75533A (en) * 1993-11-10 1997-05-28 Schering Corp Improved interferon polymer conjugates
DE69521880T2 (de) * 1994-02-08 2002-01-03 Amgen Inc., Thousand Oaks Orales verabreichungssystem von chemischmodifizierten proteinen g-csf
US5824784A (en) * 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5738846A (en) * 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
TW426523B (en) 1995-04-06 2001-03-21 Hoffmann La Roche Interferon solution
CA2458085A1 (en) * 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay

Also Published As

Publication number Publication date
HU9700959D0 (en) 1997-07-28
EP0809996A2 (en) 1997-12-03
US7201897B2 (en) 2007-04-10
OA10488A (fr) 2002-04-11
EP0809996A3 (en) 1999-04-14
ZA974583B (en) 1998-11-17
TR199700358A2 (xx) 1997-12-21
DE809996T1 (de) 1998-04-09
ATE235920T1 (de) 2003-04-15
BG62273B1 (bg) 1999-07-30
IL120902A0 (en) 1997-09-30
TJ328B (en) 2001-12-24
PA8431001A1 (es) 2000-05-24
YU17597A (sh) 1999-07-28
DE69720320D1 (de) 2003-05-08
CY2005006I2 (el) 2009-11-04
LU91029I2 (fr) 2004-01-23
CN1167777A (zh) 1997-12-17
CY2433B1 (en) 2004-11-12
PT809996E (pt) 2003-06-30
CO4950528A1 (es) 2000-09-01
SI0809996T1 (en) 2003-08-31
HUP9700959A3 (en) 1998-03-30
IL120902A (en) 2004-06-20
HK1005225A1 (en) 1998-12-31
MX9704012A (es) 1997-11-29
KR100254097B1 (ko) 2000-05-01
HUP9700959A2 (hu) 1998-03-02
IS4491A (is) 1997-12-01
CY2005006I1 (el) 2009-11-04
MA24193A1 (fr) 1997-12-31
PL186949B1 (pl) 2004-04-30
DK0809996T3 (da) 2003-07-21
IS1988B (is) 2005-02-15
MY117909A (en) 2004-08-30
ES2110386T3 (es) 2003-10-01
TR199700358A3 (tr) 1997-12-21
CA2203480C (en) 2009-06-30
SA97180030B1 (ar) 2005-11-12
NL300127I2 (nl) 2003-09-01
PL320251A1 (en) 1997-12-08
TNSN97091A1 (fr) 2005-03-15
HU227992B1 (en) 2012-08-28
JPH1067800A (ja) 1998-03-10
DE69720320T2 (de) 2004-06-03
SK67397A3 (en) 1997-12-10
TJ97000465A (en) 1998-12-25
CA2203480A1 (en) 1997-11-30
NO322964B1 (no) 2006-12-18
DE10399018I1 (de) 2003-10-23
NZ314903A (en) 1998-10-28
BR9703421A (pt) 1998-09-15
SG55314A1 (en) 1998-12-21
SK284458B6 (sk) 2005-04-01
NO972480D0 (no) 1997-05-30
AU725195B2 (en) 2000-10-05
CN1088721C (zh) 2002-08-07
CZ292775B6 (cs) 2003-12-17
KR970074791A (ko) 1997-12-10
GR970300063T1 (en) 1998-01-30
UA56989C2 (uk) 2003-06-16
AR008378A1 (es) 2000-01-19
RU2180595C2 (ru) 2002-03-20
SV1997000049A (es) 1998-07-09
HRP970298B1 (en) 2003-08-31
NO972480L (no) 1997-12-01
CZ167997A3 (en) 1997-12-17
EG24292A (en) 2009-01-08
BG101540A (en) 1998-02-27
US20040030101A1 (en) 2004-02-12
HRP970298A2 (en) 1998-04-30
UY24572A1 (es) 2000-12-29
AU2372397A (en) 1997-12-04
TW517067B (en) 2003-01-11
NL300127I1 (sr) 2003-07-01
EP0809996B1 (en) 2003-04-02
ES2110386T1 (es) 1998-02-16
JP2980569B2 (ja) 1999-11-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS49533B (sr) Interferonski konjugati
JP5334347B2 (ja) 化学的に修飾した新規なエリスロポエチン刺激タンパク質組成物および方法
ES2303361T3 (es) Conjugados de interferon-alfa-polimero con actividad biologica potenciada y procedimientos de preparacion de los mismos.
JP3747070B2 (ja) 改良型インターフェロン−ポリマーコンジュゲート
EP0862455B1 (en) Interferon-polymer conjugates and process for preparing the same
KR100689212B1 (ko) Ｇｃｓｆ 결합체
HUT75533A (en) Improved interferon polymer conjugates
JP2010500390A (ja) Ｇ−ｃｓｆ部位特異的モノコンジュゲート
EP1771197A2 (en) Pegylated interferon alpha-1b
CN103228792A (zh) PEG-干扰素λ1结合物
MXPA06007848A (es) Conjugados de antagonistas del receptor de hormona del crecimiento humana modificados quimicamente.
MXPA97004012A (en) Conjugados de interfe
HK1005225B (en) Interferon conjugates