PL186949B1 - Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-alfa, sposób jego wytwarzania oraz zawierające go kompozycjefarmaceutyczne - Google Patents

Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-alfa, sposób jego wytwarzania oraz zawierające go kompozycjefarmaceutyczne

Info

Publication number
PL186949B1
PL186949B1 PL97320251A PL32025197A PL186949B1 PL 186949 B1 PL186949 B1 PL 186949B1 PL 97320251 A PL97320251 A PL 97320251A PL 32025197 A PL32025197 A PL 32025197A PL 186949 B1 PL186949 B1 PL 186949B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
ifn
conjugate
peg
formula
activity
Prior art date
Application number
PL97320251A
Other languages
English (en)
Other versions
PL320251A1 (en
Inventor
Pascal S. Bailon
Alicia V. Palleroni
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=21790006&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL186949(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of PL320251A1 publication Critical patent/PL320251A1/xx
Publication of PL186949B1 publication Critical patent/PL186949B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

1. Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN- a o wzorze 1, w którym R i R' oznaczaja niezaleznie C 1-C6 alkil; X oznacza NH albo O; n i n' sa liczbami calkowitymi, których suma wynosi od 600 do 1500; zas sredni ciezar czasteczkowy jednostek poliglikolu etylenowego w koniugacie wynosi od okolo 26000 do okolo 66000. 11. Sposób wytwarzania koniugatu PEG-IFN- a o zwiekszonej aktywnosci antyproliferacyjnej i zmniejszonej aktywnosci przeciwwirusowej w porównaniu z IFN- a, znam ienny tym, ze reagent o wzorze 2 wiaze sie kowalencyjnie z IFN- a do wytworzenia koniugatu PEG-IFN- a. 12. Kompozycje farmaceutyczne, znamienne tym, ze zawieraja koniugat PEG-IFN- a okreslony w zastrz. 1 oraz terapeutycznie obojetny nosnik. 13. Kompozycje farmaceutyczne do leczenia al- bo zapobiegania zaburzeniom immunomodulacji, takim jak choroby nowotworowe, znamienne tym, ze zawieraja koniugat PEG-IFN- a okreslony w za- strz. 1 oraz terapeutycznie obojetny nosnik. WZÓR 1 PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-α, sposób jego wytwarzania oraz zawierające go kompozycje farmaceutyczne.
Interferon, a w szczególności interferon-α2a, jest białkiem aktywnym farmaceutycznie, wykazującym działanie przeciwwirusowe i antyproliferacyjne. Przykładowo, interferon jest stosowany w leczeniu białaczki włochatokomórkowej i mięsaka Kaposi'ego oraz wykazuje działanie w zapaleniu wątroby. W celu polepszenia stabilności i rozpuszczalności oraz zmniejszenia immunogenności, białka farmaceutycznie czynne takie jak interferon mogą być sprzęgane z polimerem - poliglikolem etylenowym (PEG).
Biodostępność leków białkowych jest często ograniczona z powodu ich krótkiego półokresu trwania w osoczu, co uniemożliwia wykorzystanie ich maksymalnego działania klinicznego. W ostatnich latach wykazano, że cząsteczki biologiczne sprzęgnięte z PEG wykazują właściwości przydatne klinicznie (Inada i in., J. Bioact. and Compatible Polymers 5, 343 (1990); Delgado i in., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 9, 249 (1992); Katre i in., Advanced Drug Delivery Systems 10, 91 (1993)). Wśród nich można wymienić lepszą stabilność fizyczną i cieplną, oporność na rozkład enzymatyczny, zwiększoną rozpusz186 949 czalność, dłuższy półokres krążenia in vivo, zmniejszony klirens i zwiększona siła działania. Opisywano, że koniugaty z rozgałęzionym PEG wykazują większą stabilność cieplną i wobec pH oraz większą odporność na rozkład proteolityczny w porównaniu z koniugatami z liniowym PEG (Monfardini i in., Bioconjugate Chem. 6, 62 (1995)). Innymi właściwościami koniugatów białek z PEG są zmniejszona immunogenność i antygenowość, jak również zmniejszona toksyczność. Innym wpływem PEGylacji pewnych białek może być mniejsza aktywność in vitro połączona ze zwiększoną aktywnością in vivo. Obserwowano to zjawisko
m.in. w przypadku G-CSF (Satake-Ishikawa i in., Cell Structure and Function 17, 157-160 (1992)), IL-2 (Katre i in., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 1487 (1987)), TNF-α (Tsutsumi i in., Jpn. J. Cancer Res. 85, 9 (1994)), IL-6 (Inoue i in., J. Lab. Glin. Med. 124, 529 (1994)) i CD4-IgG (Chamów i in., Bioconjugate Chem. 5, 133 (1994)).
Obecnie zaobserwowano, że w przypadku interferonu PEGy-lacja zmniejsza aktywność przeciwwirusową in vitro ale zwiększa działanie antyproliferacyjne wobec ludzkich komórek nowotworowych. Jednakże, nowe koniugaty interferonu i PEG według wynalazku, wykazują nieoczekiwane właściwości polegające na tym, że ich działanie antyproliferacyjne jest nie tylko znacznie silniejsze od interferonu ale również od innych koniugatów interferonu z PEG. Jakkolwiek działanie antyproliferacyjne koniugatu jest znacznie wyższe niż działanie innych koniugatów interferonu-α z PEG, zmniejszenie aktywności przeciwwirusowej jest podobne. Oprócz tego, koniugat interferonu-a z PEG według wynalazku nie jest immunogenny i praktycznie nie powoduje tworzenia przeciwciał. W przeciwieństwie, inne koniugaty interferonu-a z PEG powodują ograniczone tworzenie przeciwciał.
Nawiązując, wynalazek stanowi nowa klasa pochodnych PEG interferonu-α (IFN-a). Koniugat według wynalazku ma budowę rozgałęzionego PEG, jak to widać poniżej. Rozgałęziony PEG ma tę zaletę, że umożliwia przyłączenie dwóch liniowych cząsteczek PEG w pojedynczym miejscu, podwajając w ten sposób ilość PEG bez konieczności występowania licznych miejsc PEGylacji.
W porównaniu z niemodyfikowanym IFN-α (tj. IFN-α bez przyłączonego PEG), koniugat ma przedłużony półokres krążenia i czas pozostawania w osoczu, obniżoną immunogenność, zmniejszony klirens i zwiększoną aktywność antyproliferacyjną przy zmniejszonej aktywności przeciwwirusowej in vitro. W porównaniu z innymi koniugatami PEG-IFN-a., koniugat według wynalazku wykazuje znacznie wyższe działanie antyproliferacyjne, nieproporcjonalne do innych różnic w jego charakterystyce, oraz praktycznie brak immunogenności.
Fizjologicznie czynny rodzaj koniugatów PEG-IFN-α według wynalazku ma przedstawiony na rysunku wzór 1.
Koniugat według wynalazku ma te same zastosowania co IFN-α, przykładowo zastosowania antyproliferacyjne. W szczególności, koniugaty interferonu-α z PEG według wynalazku są przydatne w leczeniu chorób immunomodulacyjnych takich jak choroby nowotworowe, przykładowo, białaczka włochatokomórkowa, CML i mięsak Kaposi'ego, i choroby zakaźne, w taki sam sposób jak stosuje się IFN-α (a zwłaszcza IFNa2a). Jednakże, koniugaty według wynalazku wykazują ulepszoną charakterystykę, w tym lepszą stabilność, większą rozpuszczalność, wydłużony półokres krążenia i wydłużony czas pozostawania w osoczu. Oprócz tego, koniugaty te wykazują działanie antyproliferacyjne silniejsze niż IFN-a. Jak to również zaznaczono, koniugaty wykazują nieoczekiwane oddzielenie działań przeciwwirusowych i antyproliferacyjnych. Ta właściwość jest dodatkowo przydatna w celu zwiększania pożądanego działania koniugatu, przy zmniejszaniu albo eliminowaniu działania niepożądanego. Przykładowo, jeżeli niepożądany efekt uboczny związany jest z działaniem przeciwwirusowym, eliminacja tego działania powinna wyeliminować te działanie uboczne, zachowując działanie antyproliferacyjne. Stąd, niniejszy wynalazek obejmuje również kompozycje farmaceutyczne oparte na związkach o wzorze 1 albo ich solach, i sposoby ich wytwarzania.
Kompozycje farmaceutyczne według niniejszego wynalazku stosowane do kontrolowania albo zapobiegania chorób, obejmują koniugat interferonu o ogólnym wzorze 1 i terapeutycznie bierny, nietoksyczny i dopuszczalny terapeutycznie nośnik. Stosowane kompozycje farmaceutyczne mogą być wytwarzane i dozowane w sposób zgodny z dobrą praktyką me4
186 949 dyczną, uwzględniającą leczoną chorobę, stan indywidualny pacjenta, miejsce podawania koniugatu białka, sposób podawania i inne czynniki znane specjalistom.
Zastrzegany koniugat jest fizjologicznie czynnym koniugatem PEG-IFN-α o wzorze 1, w którym R i R' niezależnie oznaczają Ci-Cć alkil; X oznacza NH albo O (X oznacza przynajmniej jedną grupę funkcyjną w cząsteczce IFNa, wybraną z grupy obejmującej NH2 albo OH); n i n' oznaczają liczby całkowite, których suma stanowi od 600 do 1500; zaś średni ciężar cząsteczkowy jednostek poliglikolu etylenowego w koniugacie wynosi od około 26000 Da do około 66000 Da. Koniugat o wzorze 1 ma budowę rozgałęzioną w taki sposób, że dwie cząsteczki PEG są przyłączone do białka wiązaniem pojedynczym.
Liczby n i n' wybrano w ten sposób, że powstały koniugat o wzorze 1 ma aktywność fizjologiczną IFN-α, która to aktywność jest taka sama, większa albo stanowi frakcję odpowiedniej aktywności niemodyfikowanego IFN-a. n i n' (wartości n i n' mogą być takie same albo różne) oznaczają liczbę jednostek glikolu etylenowego w PEG. Pojedyncza jednostka PEG - OCH2 CH2, ma ciężar cząsteczkowy równy około 44 Da. Ciężar cząsteczkowy koniugatu (z wyłączeniem ciężaru cząsteczkowego IFN-a) zależy od liczb n i n'. Suma n i n' dla koniugatu o wzorze 1 zawiera się od 600 do 1500, dając koniugat o całkowitym ciężarze cząsteczkowym jednostek PEG od około 26000 do 66000, zaś korzystnie od około 35000 do 45000 Da, a zwłaszcza od 39000 do 45000 Da, przy czym 40000 Da jest szczególnie korzystne. Korzystna suma n i n', zawiera się od około 800 do 1200, przy czym średnia suma równa się od około 850 do 1000, zaś korzystna suma wynosi 910. Zarówno n jak i n' mogą wynosić 420 albo 520, albo obie mogą wynosić 420 albo 520, albo obie mogą wynosić 455. Korzystny stosunek n do n' zawiera się od około 0,5 do około 1,5, zaś szczególnie korzystny stosunek wynosi od około 0,8 do 1,2. Ciężar cząsteczkowy „około” konkretnej liczby oznacza, że zawiera się w rozsądnym zakresie tej liczby jak się to określa konwencjonalnymi metodami analitycznymi.
Korzystny jest również koniugat o wzorze 1, w którym IFN-α oznacza IFN-a2, koniugat w którym R i R' oznaczają metyl, koniugat w którym X oznacza NH i koniugat w którym n i n' osobno albo oba wynoszą 420 albo 520. Szczególnie korzystny jest koniugat o wszystkich powyższych charakterystykach.
R i R' mogą być dowolnym Ci-Cć alkilem, przez co rozumie się grupę alkilową posiadającą od jednego do sześciu atomów węgla, taką jak grupa metylowa, etylowa, izopropylowa itd. Obejmuje to grupy alkilowe rozgałęzione. Korzystną grupą alkilową jest grupą metylowa. W odniesieniu do dwóch grup PEG we wzorze 1, R i R' może być taka sama albo różna.
Przez IFN-α (interferon a) i jego rodzaj IFN-a2a, rozumie się białko naturalne albo rekombinowane, korzystnie ludzkie uzyskane z dowolnego konwencjonalnego źródła takiego jak tkanki, synteza białka, hodowla komórkowa komórek naturalnych albo rekombinowanych. Objęte tym jest dowolne białko wykazujące aktywność IFN-α, takie jak muteiny albo białka modyfikowane w inny sposób. Otrzymywanie i izolowanie IFN-α ze źródeł naturalnych i rekombinowanych jest dobrze znane (Pestka, Arch. Biochem. Biophys. 221, 1 (1983)). Korzystnym IFN-α jest IFN-a2a, który można otrzymać znanymi sposobami (Pestka, Sci. Am. 249, 36 (1983); europejski opis patentowy nr 43980)).
Aktywny fizjologicznie koniugat o wzorze 1 ma aktywność IFN-α, przez co rozumie się dowolną frakcję albo liczne aktywności spośród znanych aktywności IFN-a, co jest możliwe są stwierdzenia różnymi znanymi testami. W szczególności, koniugaty według wynalazku wykazują aktywność IFN-a, co wykazano aktywnością antyproliferacyjną wobec różnych komórek nowotworowych i aktywność przeciwwirusową wobec komórek zakażonych wirusem. Są to znane aktywności IFN-a. Aktywność taka w koniugacie może być określona znanymi testami, przykładowo testami opisanymi poniżej (patrz również, Rubinstein i in., J. Virol. 37, 755 (1981); Borden i in., Canc. Res. 42, 4948 (1982)). Część wynalazku stanowi koniugat o wzorze 1, wykazujący większą aktywność antyproliferacyjną i niższą aktywność przeciwwirusową niż niemodyfikowany IFN-a.
Koniugat o wzorze 1 wytwarzany jest przez wiązanie kowalencyjne IFN-α z PEG, który aktywowano przez podstawienie grupy hydroksylowej PEG przez grupę wiążącą, tworząc reagent, który jest pochodną estrową N-hydroksylo-bursztynianową PEG (w szczególności
186 949 monometoksy-PEG) o wzorze 2. Reagent może być otrzymany metodami konwencjonalnymi (Monfardini i in., wyżej). Wiązanie zachodzi dzięki wiązaniu amidowemu albo estrowemu. W korzystnym koniugacie, wiązanie zachodzi dzięki wiązaniu amidowemu (X oznacza NH). Częścią wynalazku jest sposób zwiększania aktywności antyproliferacyjnej IFN-α, przy zmniejszaniu przeciwwirusowej aktywności IFN-a, przez sprzęganie go, jak to opisano wyżej, z reagentem o wzorze 2 tworząc koniugat PEG-IFN.
X oznacza miejsce przyłączania na IFN-α, w którym odczynnik PEG o wzorze 2 jest związany kowalencyjnie z IFN-a. Reagenty wiążą się z pierwszorzędowymi grupami aminowymi XH = NH2) przykładowo na lizynie albo na końcu N IFN-a. Reagenty mogą się również wiązać z grupą hydroksylową (XH = OH) przykładowo na serynie.
Reagent o wzorze 2 (PEG2-NHS), w którym ogółem dwa łańcuchy mono-metoksy PEG (m-PEG) związane są z lizyną, z których jeden przez grupę aminową a, zaś drugi przez grupę aminową e wiązaniami karbaminowymi (uretanowymi), i mające grupę karboksylową lizyny aktywowaną do estru sukcynimidylowego, może być otrzymywany metodami konwencjonalnymi, według znanych procedur (Monfardini i in., wyżej) nadających się do stosowania w przypadku reagentu z Ci-Cć alkilem i pożądaną liczbą n. Reagent może być uzyskany od Shearwater Polymers, Inc. (Huntsville, Alabama). Korzystny średni MW uzyskanego PEG wynosi około 20000 Da, zapewniając całkowity ciężar PEG wynoszący około 40000 Da w PEG2-NHS (inne MW mogą być uzyskiwane przez zmianę n dla substratów alkoholu PEG dla reagentu o wzorze 2 metodami konwencjonalnymi).
Reagent o wzorze 2 może być sprzęgany z IFN-α metodami konwencjonalnymi. Konkretnie, reagent o wzorze I przede wszystkim reaguje z pierwszorzędowymi grupami aminowymi (przykładowo z N-końcowymi i łańcuchami bocznymi lizyny) IFN-α (przykładowo IFN-a2a), tworząc wiązanie amidowe pomiędzy IFN-α i szkieletem polimeru PEG. Reakcja PEGylacji może również zachodzić pomiędzy PEG2-NHS i wolnymi (jeżeli występują) grupami hydroksylowymi (przykładowo seryny) IFN-α tworząc wiązanie estrowe. Mechanizm reakcji przedstawiono na schemacie na rysunku. Warunki reakcji są konwencjonalne dla specjalisty i przedstawiono je szczegółowo poniżej. Reagent PEG jest łączony z IFN-a w warunkach lekko zasadowych w niskiej temperaturze, w warunkach odpowiednich do podstawienia nukleofilowego, które powoduje powstanie koniugatu o wzorze 1. Jest to również pokazane na schemacie reakcji.
Przyłączanie reagentu do IFN-α może być osiągnięte metodami konwencjonalnymi. PEG o różnych MW mogą być zastosowane według wynalazku. Warunki reakcji mogą być dobrane tak, by dawały koniugat z przyłączonym jednym reagentem. Koniugat o wzorze 1, z przyłączonym jednym reagentem o wzorze 2 jest oddzielany od niemodyfikowanego IFN-a i koniugatów z przyłączoną więcej niż jedną cząsteczką reagentu metodami konwencjonalnymi. Sposoby oczyszczania takie jak chromatografia kationowymienna, mogą być zastosowane w celu rozdzielenia koniugatów na zasadzie różnic w ładunku, co skutecznie rozdziela koniugaty według ciężarów cząsteczkowych. Zawartość frakcji uzyskanych przez chromatografię kationowymienną może być określana na podstawie ciężaru cząsteczkowego przez zastosowanie metod konwencjonalnych, przykładowo, spektrometrii masowej, SDS-PAGE albo inną znaną metodą rozdziału cząsteczek na podstawie ich ciężaru cząsteczkowego. Następnie, identyfikowana jest frakcja, która zawiera koniugat o wzorze 1 wolny od niemodyfikowanego IFN-α i koniugatów o przyłączonym więcej niż jednym reagencie. Oprócz tego, reagent o wzorze 2 pod wpływem hydrolizy kwaśnej uwalnia jedną lizynę na cząsteczkę reagentu tak, że liczba lizyn w produkcie hydrolizy wskazuje na liczbę PEG przyłączonych do białka, tak więc w ten sposób może zostać sprawdzona liczba cząsteczek reagentu związanych z koniugatem.
Poniższe przykłady przedstawiono w celu zilustrowania wynalazku, nie zaś w celu ograniczania go. W przykładach tych stosowano IFN-a2a. Inne rodzaje IFN-α mogą być również sprzęgane z PEG przykładowo podanymi sposobami.
Opis rysunków
Figura 1: Aktywność przeciwnowotworowa PEG2-IFN-a2a u myszy nagich, którym wszczepiono podskórnie ludzkie komórki nerkowe A498. Wszystkie zwierzęta otrzymały
186 949 podskórny wszczep 2x106 ludzkich komórek nerkowych A498 w dniu badania -33. W dniu badania 0 rozpoczęto leczenie PEG2-IFN-(x2a. Zaznaczone ilości (30, 60, 120 i 300 pg) PEG2-IFN-a2a podawano podskórnie po przeciwnej stronie co guz, raz w tygodniu przez okres czterech tygodni.
Figura 2: Aktywność przeciwnowotworowa PEG2-IFN-a2a u myszy nagich, którym wszczepiono podskórnie ludzkie komórki nerkowe A498. Wszystkie zwierzęta otrzymały podskórny wszczep 2x106 ludzkich komórek nerkowych A498 w dniu badania -33. W dniu badania 0 rozpoczęto leczenie PEG2-IFN-a2a. Zaznaczone ilości (10, 20, 40 i 100 pg) PEG2IFN-a2a podawano podskórnie po przeciwnej stronie co guz, 3 razy w tygodniu przez okres czterech tygodni.
Figura 3: Aktywność przeciwnowotworowa PEG2-IFN-a2a u myszy nagich, którym wszczepiono podskórnie ludzkie komórki nerkowe ACHN. Wszystkie zwierzęta otrzymały podskórny wszczep 2x106 ludzkich komórek nerkowych ACHN w dniu badania -25. W dniu badania 0 rozpoczęto leczenie PEG2-IFN-a2a. Zaznaczone ilości (30, 60, 120 i 300 pg) PEG2-IFN-a2a podawano podskórnie po przeciwnej stronie co guz, raz w tygodniu przez okres pięciu tygodni.
Figura 4: Aktywność przeciwnowotworowa PEG2-IFN-a2a u myszy nagich, którym wszczepiono podskórnie ludzkie komórki nerkowe ACHN. Wszystkie zwierzęta otrzymały podskórny wszczep 2x106 ludzkich komórek nerkowych ACHN w dniu badania -25. W dniu badania 0 rozpoczęto leczenie PEG2-IFN-a2a. Zaznaczone ilości (10, 20, 40 i 100 pg) PEG2IFN-tx2a podawano podskórnie po przeciwnej stronie co guz, 3 razy w tygodniu przez okres pięciu tygodni.
Figura 5: Aktywność przeciwnowotworowa PEG2-IFN-a2a u myszy nagich, którym wszczepiono podskórnie ludzkie komórki nerkowe G402. Wszystkie zwierzęta otrzymały podskórny wszczep 2x106 ludzkich komórek nerkowych G402 w dniu badania -45. W dniu badania 0 rozpoczęto leczenie PEG2-IFN-a2a. Zaznaczone ilości (30, 60, 120 i 300 pg) PEG2-IFN-a.2a podawano podskórnie po przeciwnej stronie co guz, raz w tygodniu przez okres pięciu tygodni.
Figura 6: Aktywność przeciwnowotworowa PEG2-E7N-a2a u myszy nagich, którym wszczepiono podskórnie ludzkie komórki nerkowe G402. Wszystkie zwierzęta otrzymały podskórny wszczep 2x106 ludzkich komórek nerkowych G402 w dniu badania -45. W dniu badania 0 rozpoczęto leczenie PEG2-IFN-a2a. Zaznaczone ilości (10, 20, 40 i 100 pg) PEG2IFN-cx2a podawano podskórnie po przeciwnej stronie co guz, 3 razy w tygodniu przez okres pięciu tygodni.
Przykład I. Wytwarzanie koniugatu o wzorze 1
Materiały
Interferon-a2a wytworzono znanym sposobem (Pestka, wyżej). Reagent poliglikolu etylenowego (PEG) o wzorze 2 nabyto z Shearwater Polymers, Inc. (Huntsville, Alabama). Żywicę Fractogel® EMD CM 650 (S), o cząsteczkach wielkości 25-40 pm zakupiono w EM Separations (Gibbstown, MA). Stężony (lOx) roztwór soli buforowany fosforanem (PBS) zakupiono w BioWhittaker (Walkersville, MD). Uprzednio przygotowane żele do SDS-PAGE i urządzenia do elektroforezy zakupiono w NOVEX (San Diego, CA). Stężony Fast Stain do barwienia białka koniugatów PEG na SDS-PAGE nabyto w Zoion Research, Inc. (Newton, MA). Zestaw do testu na endotoksynę LAL zakupiono w Associates of Cape Cod, Inc. (Woods Hole, MA). Pozostałe zastosowane odczynniki były możliwie najwyższej dostępnej jakości. Szczury z kaniulowanymi żyłami obojczykowymi oraz myszy BDF-1 zakupiono w Charles River Laboratories (Wilmington, MA).
Procedury doświadczalne
A. Wytwarzanie koniugatu o wzorze 1 na małą skalę
208 miligramów (5,2 (tmol) reagentu o wzorze 2 (średni MW rzędu 40000 Da) dodano do 50 mg (2,6 pmol) IFN-a w 10 ml 100 mM boranu, pH 8,0. Końcowy stosunek molowy białka do reagentu wynosił 1:2. Mieszaninę reakcyjną mieszano w 4°C przez 2 godziny. Reakcję zatrzymano przez ustalenie pH na 4,5 przy użyciu lodowatego kwasu octowego.
186 949
Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono 50-krotnie wodą, filtrowano przez filtr 0,2 pm i wprowadzono do kolumny Amicon wypełnionej 100 ml (3,2x13 cm) Fractogel EMD CM 650(S), przy przepływie 20 ml/min. Kolumnę zrównoważono uprzednio 10 mM octanem amonu, pH 4,5. Eluent opuszczający kolumnę badano przez pomiar absorbancji UV przy długości fali 280 nm. Następnie, kolumnę przemywano buforem równoważącym dopóki absorbancja UV nie powróciła do poziomu podstawowego. Koniugaty PEG-IFN z przyłączonym więcej niż jednym reagentem o wzorze 2 (oligomery PEG-IFN) eluowano 40 mM octanem amonu, pH 4,5 zaś koniugat o wzorze 1 eluowano 0,12 M NaCl w buforze 40 mM octanu amonu. Niemodyfikowany IFN pozostający w kolumnie eluowano 0,5 M NaCl w tym samym buforze. Kolumnę regenerowano przemywaniem 1,0 M NaCl a następnie przemywaniem buforem równoważącym. Połączone frakcje koniugatu o wzorze 1 stężano w komorze Amicon z mieszalnikiem, wyposażonej w membranę YM10 do stężenia około 1 mg/ml.
Zastosowana do oczyszczania żywica kationowymienna Fractogel CM 650(S) skutecznie adsorbowała PEG i niemodyfikowany IFN. Siła adsorpcji zależała od stopnia PEGylacji. Koniugaty wiązały się słabiej niż niemodyfikowany IFN. Oligomery PEG-IFN eluowano 40 mM octanem amonu, podczas gdy koniugaty o wzorze 1 eluowano 0,12 M NaCl. Niemodyfikowany IFN eluowano 0,5 M NaCl. Wszystkie preparaty zawierały endotoksyny w ilości <5EU/mg. Powstałe preparaty zawierały >99% koniugatu o wzorze 1 i były pozbawione niemodyfikowanego IFN.
B. Wytwarzanie koniugatu o wzorze 1 na wielką skalę
6240 miligramów (156 pmol) reagentu o wzorze 2 (średni ciężar cząsteczkowy rzędu 40000 Da) rozpuszczono w 63 ml 1 mM HCl w 4°C poczym szybko dodano 125 ml roztworu zawierającego 1000 mg (52 pmol) interferonu w buforze 50 mM boranu, pH 9,0. Końcowy stosunek białka do reagentu wynosił 1:3 zaś końcowe stężenie białka w mieszaninie reakcyjnej wynosiło 5,3 mg/ml. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w 4°C. Reakcję zatrzymano przez ustalenie pH reakcji na 4,5 przy użyciu lodowatego kwasu octowego.
Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono 10-krotnie wodą i wprowadzono do kolumny wypełnionej 600 ml Fractogel EMD CM 650(M), zrównoważonej uprzednio 20 mM octanem sodu, pH 4,5, z liniową prędkością 1,3 cm/min. Kolumnę przemyto buforem równoważącym a następnie 10 mM NaCl w celu usunięcia nadmiaru reagentu, produktów ubocznych i oligomerów PEG-IFN. Koniugat o wzorze 1 eluowano buforem równoważącym zawierającym 200 mM NaCl. Niemodyfikowany IFN adsorbowany na kolumnie usunięto przez przemywanie 0,75 M NaCl w buforze równoważącym. Koniugat o wzorze 1 eluowany w stężeniu 0,3-0,5 mg/ml był dalej stężany i diafiltrowany w buforze końcowym, 20 mM octanie sodu, pH 5,0, zawierającym 150 mM NaCl. Całkowity uzysk koniugatu o wzorze wynosił 40-45%.
Oczyszczony PEG-IFN z wytwarzania na wielką skalę składał się w >99% z koniugatu o wzorze 1. Średni ciężar cząsteczkowy koniugatu o wzorze 1 według przykładu wynosił 62000 Da, z czego ciężar cząsteczkowy IFN-a2a wynosił 19241 Da, zaś średni ciężar cząsteczkowy reagentu, zawierający się od 40000 Da do 45000 Da, wynosił 43000 Da.
Przykład II. Charakteryzacja koniugatu o wzorze 1
Oznaczanie białka
Stężenia białka określono stosując wartość A280 równą 1,0 dla roztworu IFN-α2a 1 mg/ml.
Analiza SDS-PAGE
Koniugat analizowano przez elektroforezę na żelu SDS-poliakrylamidowym (8-16%) w warunkach redukujących, według metody Laemmli (Nature 227, 680 (1970)). SDS-PAGE zawierający koniugaty PEG zabarwiono stosując Fast Stain (Zoion Research, Inc.) według instrukcji producenta.
Określanie ilości endotoksyny
Stężenie endotoksyny określono stosując metodę LAL, według instrukcji producenta. Wszystkie preparaty zawierały endotoksynę w ilości >5 EU/mg.
Przykład III. Aktywności biologiczne in vitro koniugatu o wzorze 1
Aktywność przeciwwirusowa wobec komórek nerki bydlęcej
186 949
Aktywność przeciwwirusową in vitro IFN-α2a i koniugatu o wzorze 1, jaki wytworzono w przykładzie I.A., badano w teście biologicznym na hodowli komórkowej stosując komórki nerki bydlęcej Madin-Darby (MDBK) eksponowane na wirusa pryszczycy pyska (Rubinstein i in., wyżej). Aktywności przeciwwirusowe podano w tabeli 1, wraz z ich odpowiednimi aktywnościami resztkowymi, jako procent wyjściowego IFN.
Tabela 1
Aktywności przeciwwirusowe
Próbki Rodzaj PEG Całkowita ilość PEG (kDa) Liczba modyf. Lys Aktywność właściwa (U/mg) Aktywność resztkowa (%)
IFN-o.2a - - - 2,00 x 108 100
Koniugat o wzorze 1 rozgałęziony 40 1 1,40 x 107 7
Aktywność antyproliferacyjna wobec ludzkich komórek nowotworowych in vitro
Aktywności antyproliferacyjne in vitro badano wobec ludzkich komórek Daudi (chłoniak Burkitta) jak to opisano w Borden i in. Ludzkie komórki Daudi utrzymywano jako stacjonarne hodowle w zawiesinie wRPMI 1640 z dodatkiem 10% surowicy płodowej bydlęcej i 2 mM glutaminy (Grand Island Biologicals, Grand Island, NY). Komórki badano w kierunku mykoplazm i stwierdzono, że nie są zakażone. Komórki (2x104) wysiano do studzienek płytek do mikromiareczkowania (Costar, MA) w 100 pl pożywki. Do studzienek dodano różne stężenia IFN i koniugatu o wzorze 1, jaki wytworzono w przykładzie I.A., w objętości 100 μΐ. Płytki inkubowano w 37°C w 5% CO2 przez 72 godziny. Komórki pulsowano 0,25 pCi/studzienkę 3H-tymidyny (New England Nuclear, Boston, MA), szesnaście godzin przed zbieraniem komórek. Komórki zebrano na filtry szklane i liczono w liczniku scyntylacyjnym. Wyniki podano jako % zahamowania wyliczony według wzoru:
% zahamowania = [(A-B)/A] x 100, gdzie;
A = cpm w hodowli kontrolnej (komórki inkubowane w samej pożywce)
B = cpm w hodowli doświadczalnej
Próbki badano w poczwórnym powtórzeniu, a odchylenie standardowe było niższe niż 20% średniej z wszystkich przepadków. Doświadczenia wykonywano przynajmniej dwukrotnie z porównywalnymi wynikami.
Aktywności antyproliferacyjne (IC50) IFN i koniugatu podano w tabeli 2. Dane wskazują na 28-krotny wzrost aktywności antyproliferacyjnej dla koniugatu o wzorze 1, w porównaniu z IFN.
Tabela 2
Aktywności antyproliferacyjne in vitro wobec ludzkiej linii komórkowej Daudi (chłoniak Burkitta)
Próbka Antypro l iferacyjna IC50 (ng/ml) Wzrost aktywności
IFN(x2a 0,56 1x
Koniugat o wzorze 1 0,02 28x
Przykład IV. Farmakokinetyka
Samice szczurów Sprague Dawley, z chirurgicznie wszczepionymi kaniulami w żyłach podobojczykowych, o średnim ciężarze ciała 240-260 g, trzymano osobno, przy swobodnym dostęoie do pożywienia i wody, w 12-godzinnym cyklu dzień-noc. W ciągu 4-6 godzin po przybyciu, kaniule podobojczykowe przepłukano PBS. Następnego dnia po przepłukaniu 0,150,2 ml PBS, wstrzyknięto 2x106 jednostek IFN-α w 0,2-0,4 ml PBS, a następnie 0,15-0,2 ml PBS w celu upewnienia się cały lek został podany zwierzęciu. Tak więc każde ze zwierząt otrzymało dawkę 8x1(0’ jednostek IFN-α na kilogram ciężaru ciała.
186 949
Próbki krwi pobierano w 5, 15 i 30 minut, oraz 1, 3, 5, 12 i 24 godziny po wstrzyknięciu IFN oraz koniugatu o wzorze 1. We wszystkich punktach czasu, po usunięciu pierwszych 0,15-0,2 ml krwi, świeżą strzykawką pobierano porcję 0,5 ml krwi przez kaniulę podobojczykową. Próbki rozdzielano do probówek do oddzielania surowicy w temperaturze pokojowej. Po zebraniu próbek dla wszystkich punktów czasu, probówki odwirowano przy 14000xg w chłodzonej wirówce Eppendorfa przez 10 minut. Oddzieloną surowicę przeniesiono do 1,5 ml probówek mikrowirownicz.ych i zamrożono w-80°C do momentu wykorzystania w teście biologicznym. Próbki surowicy odpowiednio rozcieńczono i badano aktywność przeciwwirusową w każdym punkcie czasu, jak to opisano. Z wykresu czasu w stosunku do aktywności, określono końcowy półokres trwania koniugatu o wzorze 1 i IFN-α, i podano go w tabeli 3 wraz z czasem przebywania w osoczu.
Tabela 3
Końcowy półokres trwania (t]/2) i średni czas pozostawania w osoczu
Próbka tj/2 (godziny) Okres pozostawania w osoczu (godziny)
IFN-a2a 2,1 1,0
Koniugat o wzorze 1 15,0 20,0
Końcowy t1/2 określono przez regresję liniową.
Przykład V. Immunogenność
Normalnym myszom BDF-1 (dziesięć na grupę), wstrzykiwano dootrzewnowo raz dziennie przez pięć dni w tygodniu różne preparaty interferonu w ilości 300000 jednostek aktywności przeciwwirusowej. Niektórym myszom wstrzykiwano również agregowaną postać IFN-a2a, która jest bardziej immunogenna niż postać monomeryczna. Próbki krwi pobierano 19 dni po ostatnim wstrzyknięciu zaś surowice badano pod kątem przeciwciał neutralizujących.
Jak to widać na tabeli 4, myszy, którym wstrzykiwano IFN-a2a wytworzyły przeciwciała neutralizujące, zaś odpowiedź ta była znacznie wzmożona u myszy, którym wstrzykiwano agregat interferonu. Nie wykrywano przeciwciał u większości zwierząt, którym wstrzykiwano koniugat według wynalazku.
Tabela 4 Immunogenność
Przeciwciała (INU/ml)*
Leczenie Mediana
IFN-a2a 2400
Agregaty IFN-a2a 42667
Koniugat o wzorze 1 0
Zakres
217-8533
8000-768000
0-1133 *Jednostki neutralizujące interferon/ml
Przykład VI. Aktywność przeciwnowotworowa in vivo
Aktywność przeciwnowotworowa in vivo koniugatu o wzorze 1 (PEG2-IFN-a2a) i niezmodyfikowanego IFN-a2a badano przez określanie ich zdolności do zmniejszania guzów z różnych ludzkich komórek nowotworowych wszczepionych podskórnie myszom. Wyniki pokazano na rysunkach fig. 1-6.
Procedura: bezgrasicze myszy nagie (Harlan) otrzymały podskórny wszczep w lewy bok z 2x106 ludzkich komórek nerkowych A498 (Fig. 1 i 2), ludzkich komórek nerkowych ACHN (Fig. 3 i 4) albo ludzkich komórek nerkowych G402 (Fig. 5 i 6). Nowotwory pozostawiono do wzrostu w ciągu 3-6 tygodni, jak to zaznaczono. Kryterium wielkości do włączenia do badania wynosiło 0,05-0,5 centymetrów sześciennych. Myszom podawano cotygodniowe dawki PEG2-IFN-a2a albo niezmodyfikowanego IFN-α2a wielkości 30, 60, 120 albo 300 pg. W przypadku PEG2-IFN-a2a myszy leczono raz tygodniu (poniedziałek) dawką 30, 60, 120
186 949 albo 300 ug na dawkę. W przypadku niezmodyfikowanego IFN-a2a myszom podawano go trzy razy w tygodniu (poniedziałek, środa, piątek) w ilości 10, 20, 40 albo 100 (Lig na dawkę. Czas trwania leczenia wynosił 4-5 tygodni w zależności od agresywności nowotworu. Objętość guzów mierzono co poniedziałek przed leczeniem.
Wyniki: PEG2-IFN-a2a wykazywał znaczne zmniejszenie wielkości guza A498 w porównaniu z niezmodyfikowanym IFN-a2a w każdej ze stosowanych dawek w 7, 14, 21 oraz 28 dni po rozpoczęciu leczenia (Fig. 1 i 2). Leczenie kontynuowano przez cztery tygodnie. Siedem dni po przerwaniu leczenia zabito po trzy myszy w grupie. Nie obserwowano resztkowego guza u trzech myszy leczonych PEG2-IFN-a2a. U myszy leczonych niezmodyfikowanym IFN-a2a ciężar guzów A498 wynosił 1,28, 0,62 i 1,6 gramów odpowiednio u każdej z trzech myszy. Ciężar guzów A498 u trzech myszy kontrolnych wynosił odpowiednio 2,32, 2,37 i 1,94 grama. W 80 dni po zakończeniu leczenia istnienie guzów palpacyjnie u 7 myszy. Wszystkie myszy były wolne od nowotworu.
PEG2-IFN-a2a spowodował znaczne zmniejszenie wielkości guzów ACHN w porównaniu z niezmodyfikowanym IFN-a2a dla dawek tygodniowych 60, 120 i 300 jjg w dniu 14, 21, 28 i 35 (Fig. 3 i 4).
PEG2-IFN-a2a spowodował znaczne zmniejszenie wielkości guzów G402 w porównaniu z niezmodyfikowanym IFN-a2a w dawce 60 i 120 pg w dniu 14, 21, 28 i 35 (Fig. 5 i 6).
186 949 d
LL
><
1
CM 0=0
X X/
o — θ\χ xz
0 = 0 1
I 0=0
O
E
CM z X
o CM CM Z
Z o
o o CM Z o
CM Z o
o CM CM Z
Z o
o o CE CM Z o o
oi
186 949
X
Z0=0
I o
O
X o
o o
X o
c\
X o
o
Di
z u_ I
1 X I
1
CM ,0=0
X 1/
-o—o \;
0=0
I o
O e
X o
o
Di
Schemat
186 949
Έ α
( luo) εζηΒ 3SOłdfqo ε
186 949
186 949
186 949
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
-----0.5
0.0
Objętość guza (cm )
A Kontrola nieleczona B 10pg/leczenie, PEG2-IFN alfa-2a C 20pg/leczenie, PEG2-IFN alfa-2a D 4(^g/leczenie, PEG2-IFN alfa-2a E lOOpg/leczenie, PEG2-IFN alfa-2a
o 7 14 21 28 35
Dni
Fig.4
186 949
Fig. 5
186 949
Fig.6
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz. Cena 4,00 zł.

Claims (13)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-α o wzorze 1, w którym R i R' oznaczają niezależnie C1-C6 alkil; X oznacza NH albo O; n i n' są liczbami całkowitymi, których suma wynosi od 600 do 1500; zaś średni ciężar cząsteczkowy jednostek poliglikolu etylenowego w koniugacie wynosi od około 26000 do około 66000.
  2. 2. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że ciężar cząsteczkowy jednostek poliglikolu etylenowego wynosi od około 35000 do około 45000.
  3. 3. Koniugat według zastrz. 2, znamienny tym, że ciężar cząsteczkowy jednostek poliglikolu etylenowego wynosi około 40000.
  4. 4. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że R i R' oznacza metyl.
  5. 5. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że X oznacza NH.
  6. 6. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że IFN-α oznacza IFN-α 2a.
  7. 7. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że średnia suma n in' wynosi od 850 do 1000.
  8. 8. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że R i R' oznacza metyl; X oznacza NH; IFN-α oznacza IFN-a2a; zaś jeden lub oba z n i n' wynoszą 420.
  9. 9. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że R i R' oznacza metyl; X oznacza NH; IFN-α oznacza IFN-α2a; zaś jeden lub oba z n i n' wynoszą 520.
  10. 10. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że ma większą aktywność antyproliferacyjnąniż IFN-α i mniejszą aktywność przeciwwirusową niż IFN-α.
  11. 11. Sposób wytwarzania koniugatu PEG-IFN-α o zwiększonej aktywności antyproliferacyjnej i zmniejszonej aktywności przeciwwirusowej w porównaniu z IFN-α, znamienny tym, że reagent o wzorze 2 wiąże się kowalencyjnie z IFN-α do wytworzenia koniugatu PEGIFN-α .
  12. 12. Kompozycje farmaceutyczne, znamienne tym, że zawierają koniugat PEG-IFN-α określony w zastrz. 1 oraz terapeutycznie obojętny nośnik.
  13. 13. Kompozycje farmaceutyczne do leczenia albo zapobiegania zaburzeniom immunomodulacji, takim jak choroby nowotworowe, znamienne tym, że zawierają koniugat PEGIFN-α określony w zastrz. 1 oraz terapeutycznie obojętny nośnik.
PL97320251A 1996-05-31 1997-05-28 Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-alfa, sposób jego wytwarzania oraz zawierające go kompozycjefarmaceutyczne PL186949B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1883496P 1996-05-31 1996-05-31

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL320251A1 PL320251A1 (en) 1997-12-08
PL186949B1 true PL186949B1 (pl) 2004-04-30

Family

ID=21790006

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL97320251A PL186949B1 (pl) 1996-05-31 1997-05-28 Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-alfa, sposób jego wytwarzania oraz zawierające go kompozycjefarmaceutyczne

Country Status (47)

Country Link
US (1) US7201897B2 (pl)
EP (1) EP0809996B1 (pl)
JP (1) JP2980569B2 (pl)
KR (1) KR100254097B1 (pl)
CN (1) CN1088721C (pl)
AR (1) AR008378A1 (pl)
AT (1) ATE235920T1 (pl)
AU (1) AU725195B2 (pl)
BG (1) BG62273B1 (pl)
BR (1) BR9703421A (pl)
CA (1) CA2203480C (pl)
CO (1) CO4950528A1 (pl)
CY (2) CY2433B1 (pl)
CZ (1) CZ292775B6 (pl)
DE (3) DE69720320T2 (pl)
DK (1) DK0809996T3 (pl)
EG (1) EG24292A (pl)
ES (1) ES2110386T3 (pl)
GR (1) GR970300063T1 (pl)
HR (1) HRP970298B1 (pl)
HU (1) HU227992B1 (pl)
IL (1) IL120902A (pl)
IS (1) IS1988B (pl)
LU (1) LU91029I2 (pl)
MA (1) MA24193A1 (pl)
MY (1) MY117909A (pl)
NL (1) NL300127I2 (pl)
NO (1) NO322964B1 (pl)
NZ (1) NZ314903A (pl)
OA (1) OA10488A (pl)
PA (1) PA8431001A1 (pl)
PL (1) PL186949B1 (pl)
PT (1) PT809996E (pl)
RS (1) RS49533B (pl)
RU (1) RU2180595C2 (pl)
SA (1) SA97180030B1 (pl)
SG (1) SG55314A1 (pl)
SI (1) SI0809996T1 (pl)
SK (1) SK284458B6 (pl)
SV (1) SV1997000049A (pl)
TJ (1) TJ328B (pl)
TN (1) TNSN97091A1 (pl)
TR (1) TR199700358A2 (pl)
TW (1) TW517067B (pl)
UA (1) UA56989C2 (pl)
UY (1) UY24572A1 (pl)
ZA (1) ZA974583B (pl)

Families Citing this family (145)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5919455A (en) * 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5951974A (en) * 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
US5908621A (en) 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
CA2236591C (en) 1995-11-02 2012-01-03 Schering Corporation Continuous low-dose cytokine infusion therapy
US5985263A (en) * 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
US5981709A (en) * 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
US6180096B1 (en) 1998-03-26 2001-01-30 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
SK285284B6 (sk) * 1998-03-26 2006-10-05 Schering Corporation Vodný prostriedok umožňujúci stabilizáciu PEG-interferón alfa konjugátov, spôsob výroby lyofilizovaného prášku a výrobok s jeho obsahom
BR9910023A (pt) * 1998-04-28 2000-12-26 Applied Research Systems Conjugados de poliol-ifn-beta
KR100694345B1 (ko) 1998-05-15 2007-03-12 쉐링 코포레이션 리바비린 및 인터페론 알파를 포함하는, 만성 ｃ형 간염에 걸린 항-바이러스 치료에 대한 나이브 환자의 치료용 약제학적 조성물
TR200003635T2 (tr) * 1998-06-08 2001-04-20 F.Hoffmann-La Roche Ag Peg-IFN-ALFA ve ribavirinin kronik hepatit C tedavisinde kullanılması.
US6277830B1 (en) * 1998-10-16 2001-08-21 Schering Corporation 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon
IL129299A0 (en) * 1999-03-31 2000-02-17 Mor Research Applic Ltd Monoclonal antibodies antigens and diagnosis of malignant diseases
US6362162B1 (en) 1999-04-08 2002-03-26 Schering Corporation CML Therapy
US6923966B2 (en) 1999-04-08 2005-08-02 Schering Corporation Melanoma therapy
US6605273B2 (en) 1999-04-08 2003-08-12 Schering Corporation Renal cell carcinoma treatment
CO5170411A1 (es) * 1999-04-08 2002-06-27 Schering Corp Terapia para la leucemia mielocitica cronica
CA2303992A1 (en) 1999-04-08 2000-10-08 Schering Corporation Melanoma therapy
CZ299516B6 (cs) * 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
US6313143B1 (en) * 1999-12-16 2001-11-06 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted pyrroles
SK11672002A3 (sk) 2000-01-10 2002-12-03 Maxygen Holdings Ltd. Polypeptidový konjugát, spôsob jeho výroby, farmaceutický prostriedok s jeho obsahom a jeho použitie
EP1908477A3 (en) * 2000-01-24 2008-06-11 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
EP1251866A1 (en) * 2000-01-24 2002-10-30 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
PL204285B1 (pl) 2000-02-11 2009-12-31 Bayer Healthcare Llc Koniugat polipeptydowy, polipeptyd, sekwencja nukleotydowa, wektor ekspresyjny, komórka gospodarz, sposób wytwarzania koniugatu polipeptydowego, środek farmaceutyczny i zastosowanie koniugatu polipeptydowego
US6476062B2 (en) 2000-03-30 2002-11-05 Schering Corporation Chemokine receptor antagonists
US6756037B2 (en) 2000-03-31 2004-06-29 Enzon, Inc. Polymer conjugates of biologically active agents and extension moieties for facilitating conjugation of biologically active agents to polymeric terminal groups
US6777387B2 (en) 2000-03-31 2004-08-17 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Terminally-branched polymeric linkers containing extension moieties and polymeric conjugates containing the same
WO2001081359A1 (en) 2000-04-20 2001-11-01 Schering Corporation Ribavirin-interferon alfa combination therapy for eradicating detectable hcv-rna in patients having chronic hepatitis c infection
CN100448993C (zh) 2000-06-30 2009-01-07 津莫吉尼蒂克斯公司 干扰素样蛋白质Zcyto21
DE60236796D1 (de) 2001-01-30 2010-08-05 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Verzweigte polyalkylenglykole
JP2004534523A (ja) 2001-02-27 2004-11-18 マキシゲン・エイピーエス 新規なインターフェロンβ様分子
DE10112825A1 (de) 2001-03-16 2002-10-02 Fresenius Kabi De Gmbh HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung
WO2003062290A1 (en) 2002-01-16 2003-07-31 Biocompatibles Uk Limited Polymer conjugates
KR100888371B1 (ko) * 2002-01-17 2009-03-13 동아제약주식회사 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
DE10209821A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid
DE10209822A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid
ATE503498T1 (de) 2002-06-21 2011-04-15 Novo Nordisk Healthcare Ag Pegylierte glykoformen von faktor vii
WO2004012773A1 (en) 2002-07-24 2004-02-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Polyalkylene glycol acid additives
US7087229B2 (en) * 2003-05-30 2006-08-08 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
RU2329274C2 (ru) * 2002-09-11 2008-07-20 Фрезениус Каби Дойчланд Гмбх Способ получения производных гидроксиалкилкрахмала
EP1681303B1 (en) * 2002-09-11 2013-09-04 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylated polypeptides, especially HASylated erythropoietin
EP1400533A1 (en) * 2002-09-11 2004-03-24 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylated polypeptides, especially HASylated erythropoietin
TWI318629B (en) * 2002-09-20 2009-12-21 Pharmacia Corp Process for decreasing aggregate levels of pegylated protein
ES2314238T3 (es) 2002-10-08 2009-03-16 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugados de oligosacaridos farmaceuticamente activos.
WO2004046365A2 (en) * 2002-11-18 2004-06-03 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
US7314613B2 (en) 2002-11-18 2008-01-01 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
GB0301014D0 (en) * 2003-01-16 2003-02-19 Biocompatibles Ltd Conjugation reactions
US20050176108A1 (en) * 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
CA2458085A1 (en) 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
EP1673387B1 (en) 2003-10-10 2010-09-15 Novo Nordisk A/S Il-21 derivatives
ES2428358T3 (es) 2003-10-17 2013-11-07 Novo Nordisk A/S Terapia de combinación
US8778880B2 (en) 2004-02-02 2014-07-15 Ambrx, Inc. Human growth hormone modified at position 35
CN100355784C (zh) * 2004-02-12 2007-12-19 江苏恒瑞医药股份有限公司 聚乙二醇修饰α－干扰素1b的制备方法
CA2558738C (en) 2004-03-11 2013-02-05 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein, prepared by reductive amination
US7318918B2 (en) 2004-05-19 2008-01-15 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
KR101699142B1 (ko) 2004-06-18 2017-01-23 암브룩스, 인코포레이티드 신규 항원-결합 폴리펩티드 및 이의 용도
WO2006004959A2 (en) * 2004-06-30 2006-01-12 Egen Corporation Pegylated interferon alpha-1b
US7638299B2 (en) 2004-07-21 2009-12-29 Ambrx, Inc. Biosynthetic polypeptides utilizing non-naturally encoded amino acids
CA2576549C (en) 2004-08-12 2011-01-18 Schering Corporation Stable pegylated interferon formulation
EP2284191A3 (en) 2004-12-22 2011-07-20 Ambrx, Inc. Process for the preparation of hGH
EP1861125A2 (en) * 2005-03-23 2007-12-05 Nektar Therapeutics Al, Corporation Conjugates of an hgh moiety and peg derivatives
BRPI0609809A2 (pt) 2005-05-18 2011-10-11 Maxygen Inc polipeptìdeo isolado ou recombinante, conjugado, composição, polinucleotìdeo isolado ou recombinante, célula hospedeira, vetor, métodos para preparar o polipeptìdeo, para preparar um conjugado, para inibir replicação de um vìrus em células infectadas com o vìrus para reduzir o numero de cópias de um vìrus em células infectadas com o vìrus, para reduzir o nìvel de rna de hcv no soro de um paciente infectado com hcv, para reduzir o nìvel de dna de hbv em soro de um paciente infectado com hbv e para reduzir o nìvel de rna de hiv em soro de um paciente infectado com hiv, e, uso do polipeptìdeo ou do conjugado
JP5335422B2 (ja) 2005-06-17 2013-11-06 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 少なくとも１つの非天然のシステインを含んでいる操作されたタンパク質の選択的な還元および誘導体化
CN101257925A (zh) * 2005-06-20 2008-09-03 派普根公司 人干扰素α类似物和干扰素τ的低毒长循环的嵌合体
WO2007021297A1 (en) 2005-08-18 2007-02-22 Ambrx, Inc. COMPOSITIONS OF tRNA AND USES THEREOF
JP4261531B2 (ja) 2005-09-06 2009-04-30 株式会社Ｎｒｌファーマ ラクトフェリン複合体及びその製造方法
US20090018029A1 (en) 2005-11-16 2009-01-15 Ambrx, Inc. Methods and Compositions Comprising Non-Natural Amino Acids
CN101002944B (zh) * 2006-01-17 2012-07-25 中国科学院过程工程研究所 支链聚乙二醇-干扰素结合物及其制备方法
CN101002945B (zh) 2006-01-20 2012-09-05 清华大学 一种用于肿瘤治疗的新型复合物
CN100475270C (zh) 2006-01-20 2009-04-08 清华大学 一种治疗肿瘤的药物及其应用
AU2007250739A1 (en) 2006-05-16 2007-11-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Pharmaceutical composition for treating or preventing HCV infection
KR20090013816A (ko) 2006-05-24 2009-02-05 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ⅸ 유사체
DK2615108T3 (en) 2006-09-08 2017-01-30 Ambrx Inc Modified human plasma polypeptide or fc scaffolds and their applications
PT2061878E (pt) 2006-09-08 2014-04-22 Ambrx Inc Supressor híbrido arnt para células de vertebrados
CN1966547B (zh) * 2006-11-06 2011-11-09 中国药科大学 双链结构的聚乙二醇衍生物的制备及其与药物分子的结合
ATE459659T1 (de) * 2006-11-07 2010-03-15 Dsm Ip Assets Bv Carbamat, thiocarbamat oder carbamid mit einer biomolekularen gruppierung
KR101079993B1 (ko) 2006-11-17 2011-11-04 동아제약주식회사 폴리에틸렌글리콜 과립구 콜로니 자극인자 접합체
CN101219219B (zh) 2007-01-10 2013-02-13 北京普罗吉生物科技发展有限公司 包含血管抑素或其片段的复合物、其制备方法及应用
JP5515224B2 (ja) 2007-02-28 2014-06-11 日油株式会社 多分岐鎖ポリオキシアルキレン誘導体
PL2068909T3 (pl) 2007-03-30 2012-09-28 Ambrx Inc Modyfikowane polipeptydy fgf-21 i ich zastosowanie
CL2008002399A1 (es) * 2007-08-16 2009-01-02 Pharmaessentia Corp Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c.
EP2186830B1 (en) 2007-09-04 2012-03-07 Biosteed Gene Expression Tech. CO., LTD. Polyethylene glycol modified interferon alpha 2b and preparation method and applicatioins thereof
PT2196475E (pt) 2007-09-04 2012-09-07 Biosteed Gene Expression Tech Co Ltd Interferão alfa-2a modificado por polietilenoglicol, seu processo de síntese e aplicação
US8946148B2 (en) 2007-11-20 2015-02-03 Ambrx, Inc. Modified insulin polypeptides and their uses
EP2070950A1 (en) 2007-12-14 2009-06-17 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hydroxyalkyl starch derivatives and process for their preparation
EP2245044A2 (en) * 2008-01-18 2010-11-03 F. Hoffmann-La Roche AG Purification of non-glycosylated proteins
CN101980725B (zh) * 2008-02-01 2013-06-12 阿森迪斯药物股份有限公司 包含可自裂解的连接体的前药
US9938333B2 (en) 2008-02-08 2018-04-10 Ambrx, Inc. Modified leptin polypeptides and their uses
BRPI0822530B1 (pt) 2008-04-03 2022-03-22 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd Método de preparação de um hormônio de crescimento humano glicolado por polietileno (modificado por peg), hormônio do crescimento humano modificado por peg de menor peso molecular aparente e seu uso, preparação de hormônio do crescimento humano modificado por peg de menor peso molecular aparente e seu método de preparação e composição
DK2279007T3 (en) * 2008-04-29 2016-08-22 Ascendis Pharma Growth Disorders Div As Pegylated recombinant relations of human growth hormone
TW201010692A (en) 2008-06-19 2010-03-16 Public Univ Corp Nagoya City Univ Pharmaceutical composition for treatment or prevention of hbv infection
UA103492C2 (ru) 2008-07-08 2013-10-25 Борд Оф Риджентс, Дзе Юниверсити Оф Техас Систем Ингибиторы пролиферации и активации переносчика сигнала и активатора транскрипции (stats)
PL2318029T3 (pl) 2008-07-23 2018-03-30 Elanco Us Inc. Zmodyfikowane polipeptydy bydlęcego G-CSF i ich zastosowania
CA2738033C (en) 2008-09-26 2019-11-26 Ambrx, Inc. Non-natural amino acid replication-dependent microorganisms and vaccines
US8278418B2 (en) 2008-09-26 2012-10-02 Ambrx, Inc. Modified animal erythropoietin polypeptides and their uses
IT1399351B1 (it) 2009-06-16 2013-04-16 Fidia Farmaceutici Procedimento per la sintesi di coniugati di glicosamminoglicani (gag) con molecole biologicamente attive, coniugati polimerici e usi relativi
US20110027229A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Medtronic, Inc. Continuous subcutaneous administration of interferon-alpha to hepatitis c infected patients
PH12012500827A1 (en) 2009-10-30 2013-01-07 Boehringer Ingelheim Int Dosage regimens for hcv combination therapy comprising bi201335, interferon alpha and ribavirin
DK2512450T3 (en) 2009-12-15 2018-04-23 Ascendis Pharma Endocrinology Div A/S Dry growth hormone composition transiently bound to a polymer carrier
US20120283172A1 (en) 2009-12-21 2012-11-08 Ambrx, Inc. Modified porcine somatotropin polypeptides and their uses
BR112012015461A2 (pt) 2009-12-21 2017-01-10 Ambrx Inc polipeptídeos de somatotropina boviina modificados e seus usos
AU2011222883B2 (en) 2010-03-05 2016-05-26 Omeros Corporation Chimeric inhibitor molecules of complement activation
WO2011143274A1 (en) 2010-05-10 2011-11-17 Perseid Therapeutics Polypeptide inhibitors of vla4
AU2011268498A1 (en) 2010-06-24 2013-01-31 Genoscience Pharma Sas Treatment of hepatitis C virus related diseases using hydroxychloroquine or a combination of hydroxychloroquine and an anti-viral agent
RU2447083C1 (ru) * 2010-07-20 2012-04-10 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" НОВЫЙ ФУНКЦИОНАЛЬНО АКТИВНЫЙ ВЫСОКООЧИЩЕННЫЙ СТАБИЛЬНЫЙ КОНЪЮГАТ ИНТЕРФЕРОНА α С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ, ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ОДНИМ ПОЗИЦИОННЫМ ИЗОМЕРОМ ПЭГ-NαH-ИФН, С УМЕНЬШЕННОЙ ИММУНОГЕННОСТЬЮ, С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, ПРИГОДНЫЙ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ, И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ
BR112013002532A2 (pt) 2010-08-05 2016-05-31 Hoffmann La Roche proteína de fusão de citocina anti-viral do anticorpo anti-mhc
EP3572091B1 (en) 2010-08-17 2023-12-13 Ambrx, Inc. Modified relaxin polypeptides and their uses
US9567386B2 (en) 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
AR083006A1 (es) 2010-09-23 2013-01-23 Lilly Co Eli Formulaciones para el factor estimulante de colonias de granulocitos (g-csf) bovino y variantes de las mismas
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
CN102229667A (zh) * 2011-06-03 2011-11-02 北京伟嘉人生物技术有限公司 一种聚乙二醇修饰的猪α-干扰素及其制备方法和应用
RU2014103288A (ru) 2011-07-01 2015-08-10 Байер Интеллектчуал Проперти Гмбх Слитые полипептиды релаксина и их применение
US20140377218A1 (en) 2011-08-03 2014-12-25 Cytheris Hcv immunotherapy
WO2013137869A1 (en) 2012-03-14 2013-09-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for treating hcv infection in an hcv-hiv coinfected patient population
WO2013143581A1 (en) 2012-03-28 2013-10-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for treating hcv infection in specific patient subgenotype sub-population
ES2718478T3 (es) 2012-06-08 2019-07-02 Sutro Biopharma Inc Anticuerpos que comprenden restos de aminoácidos no naturales de localización específica, métodos para su preparación y métodos para su uso
DK2863955T3 (en) 2012-06-26 2017-01-23 Sutro Biopharma Inc MODIFIED FC PROTEINS, INCLUDING LOCATION-SPECIFIC NON-NATURAL AMINO ACID RESIDUES, CONJUGATES THEREOF, METHODS OF PRODUCING ITS AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
SG11201501464TA (en) 2012-08-31 2015-03-30 Sutro Biopharma Inc Modified amino acids comprising an azido group
EA023323B1 (ru) * 2013-03-28 2016-05-31 Илья Александрович МАРКОВ Разветвленный ацилазидный пегилирующий агент, способ его получения и способ получения пегилированного интерферона
EA021610B1 (ru) * 2013-03-28 2015-07-30 Илья Александрович МАРКОВ Жидкое противовирусное лекарственное средство
EA022617B1 (ru) * 2013-03-28 2016-02-29 Илья Александрович МАРКОВ Монопегилированный интерферон-альфа разветвленной структуры и фармацевтическая композиция для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа
US9764039B2 (en) 2013-07-10 2017-09-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
EP2907512A1 (en) 2014-02-14 2015-08-19 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Inhibitors of MMP-12 as antiviral Agents
RU2554761C1 (ru) * 2014-05-13 2015-06-27 Закрытое акционерное общество "Сибирский центр фармакологии и биотехнологии" Противоэнтеровирусное и иммуностимулирующее средство
CN107108710B (zh) 2014-10-24 2022-02-15 百时美施贵宝公司 修饰的fgf-21多肽及其用途
US11559567B2 (en) 2014-11-06 2023-01-24 Pharmaessentia Corporation Dosage regimen for pegylated interferon
US10799563B2 (en) 2014-11-18 2020-10-13 Ascendis Pharma Endocrinology Division Polymeric hGH prodrugs
PL3220892T3 (pl) 2014-11-21 2022-01-31 Ascendis Pharma Endocrinology Division A/S Postacie dawkowane długo działającego hormonu wzrostu
MX377531B (es) 2015-11-03 2025-03-10 Hoffmann La Roche Terapia de combinación de un inhibidor del ensamble de la cápside del hbv y un interferón.
CN106749608B (zh) * 2015-11-18 2021-10-15 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 干扰素α缀合物
WO2018087345A1 (en) 2016-11-14 2018-05-17 F. Hoffmann-La Roche Ag COMBINATION THERAPY OF AN HBsAg INHIBITOR, A NUCLEOS(T)IDE ANALOGUE AND AN INTERFERON
PE20191716A1 (es) 2017-02-08 2019-12-05 Bristol Myers Squibb Co Polipeptidos de relaxina modificada que comprenden un mejorador farmacocinetico y sus usos
RU2678332C1 (ru) 2017-09-08 2019-01-28 Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "СФМ") Пегилированный интерферон лямбда, обладающий высокой биодоступностью при пероральном применении, и способ его получения
DK3849614T3 (da) 2018-09-11 2024-02-26 Ambrx Inc Interleukin-2-polypeptidkonjugater og anvendelser deraf
WO2020082057A1 (en) 2018-10-19 2020-04-23 Ambrx, Inc. Interleukin-10 polypeptide conjugates, dimers thereof, and their uses
AU2020223031B2 (en) 2019-02-12 2024-08-29 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods and uses of antibody-TLR agonist conjugates
SG11202108735QA (en) 2019-03-04 2021-09-29 Ascendis Pharma Endocrinology Div A/S Long-acting growth hormone dosage forms with superior efficacy to daily somatropin
MX2022011163A (es) 2020-03-11 2022-10-18 Ambrx Inc Conjugados de polipeptidos de interleucina-2 y sus usos.
AU2021327396A1 (en) 2020-08-20 2023-03-23 Ambrx, Inc. Antibody-TLR agonist conjugates, methods and uses thereof
KR20230125179A (ko) * 2020-12-23 2023-08-29 재즈 파마슈티칼즈 아일랜드 리미티드 전하-차폐 융합 단백질의 정제 방법
EP4313163A1 (en) 2021-04-03 2024-02-07 Ambrx, Inc. Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof
EP4656202A1 (en) 2023-02-09 2025-12-03 Xie, Yanhui Treatment of atopic dermatitis with polyethylene glycol-modified interleukin 2, glucocorticoid and hyaluronic acid
WO2026043823A2 (en) 2024-08-19 2026-02-26 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of preparation and uses thereof

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4609546A (en) * 1982-06-24 1986-09-02 Japan Chemical Research Co., Ltd. Long-acting composition
US4681848A (en) 1982-09-22 1987-07-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Novel peptide and use thereof
WO1984004745A1 (fr) 1983-05-31 1984-12-06 Takeda Chemical Industries Ltd Nouveaux polypeptides et leur utilisation
GB8430252D0 (en) * 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
US4766106A (en) * 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
DE3676670D1 (de) 1985-06-26 1991-02-07 Cetus Corp Solubilisierung von proteinen fuer pharmazeutische zusammensetzungen mittels polymerkonjugierung.
DE3719046A1 (de) * 1987-06-06 1988-12-15 Basf Ag Verwendung von salzen von sulfonamidcarbonsaeuren als korrosionsinhibitoren in waessrigen systemen
US5122614A (en) * 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5145773A (en) * 1989-05-25 1992-09-08 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Method to detect sensitivity to alpha-interferon therapy
ES2085297T3 (es) * 1989-05-27 1996-06-01 Sumitomo Pharma Procedimiento para preparar derivados de poli(etilenglicol) y proteina modificada.
US5238915A (en) * 1991-02-08 1993-08-24 Wakunaga Seiyaku K.K. Aromatic composition and method for controlling aroma
US5595732A (en) * 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
GB9111967D0 (en) 1991-06-04 1991-07-24 Erba Carlo Spa 2,5'-nucleotide analogs as antiviral agents
US5281698A (en) * 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
RU2006036C1 (ru) * 1991-12-27 1994-01-15 Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи РАМН Способ определения антигенов
ZA933926B (en) 1992-06-17 1994-01-03 Amgen Inc Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules
US5382657A (en) * 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
US5359030A (en) * 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5919455A (en) * 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
HUT75533A (en) * 1993-11-10 1997-05-28 Schering Corp Improved interferon polymer conjugates
DK1090645T3 (da) * 1994-02-08 2006-03-27 Amgen Inc Oral tilförsel af kemisk modificerede proteiner
US5824784A (en) * 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5738846A (en) * 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
TW426523B (en) 1995-04-06 2001-03-21 Hoffmann La Roche Interferon solution
CA2458085A1 (en) * 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay

Also Published As

Publication number Publication date
DK0809996T3 (da) 2003-07-21
KR100254097B1 (ko) 2000-05-01
SI0809996T1 (en) 2003-08-31
MY117909A (en) 2004-08-30
CZ292775B6 (cs) 2003-12-17
DE69720320T2 (de) 2004-06-03
HK1005225A1 (en) 1998-12-31
HRP970298B1 (en) 2003-08-31
AU725195B2 (en) 2000-10-05
US20040030101A1 (en) 2004-02-12
YU17597A (sh) 1999-07-28
DE69720320D1 (de) 2003-05-08
TR199700358A3 (tr) 1997-12-21
NO972480L (no) 1997-12-01
CN1167777A (zh) 1997-12-17
CO4950528A1 (es) 2000-09-01
HU9700959D0 (en) 1997-07-28
AU2372397A (en) 1997-12-04
ZA974583B (en) 1998-11-17
PT809996E (pt) 2003-06-30
BG62273B1 (bg) 1999-07-30
TW517067B (en) 2003-01-11
AR008378A1 (es) 2000-01-19
SK67397A3 (en) 1997-12-10
JPH1067800A (ja) 1998-03-10
GR970300063T1 (en) 1998-01-30
CZ167997A3 (en) 1997-12-17
NO322964B1 (no) 2006-12-18
CY2433B1 (en) 2004-11-12
EP0809996B1 (en) 2003-04-02
CN1088721C (zh) 2002-08-07
IS4491A (is) 1997-12-01
NL300127I1 (pl) 2003-07-01
UY24572A1 (es) 2000-12-29
RS49533B (sr) 2006-12-15
CA2203480C (en) 2009-06-30
CY2005006I1 (el) 2009-11-04
PL320251A1 (en) 1997-12-08
US7201897B2 (en) 2007-04-10
UA56989C2 (uk) 2003-06-16
SV1997000049A (es) 1998-07-09
IS1988B (is) 2005-02-15
TJ97000465A (en) 1998-12-25
RU2180595C2 (ru) 2002-03-20
KR970074791A (ko) 1997-12-10
TJ328B (en) 2001-12-24
SG55314A1 (en) 1998-12-21
ES2110386T1 (es) 1998-02-16
TR199700358A2 (xx) 1997-12-21
NZ314903A (en) 1998-10-28
IL120902A0 (en) 1997-09-30
IL120902A (en) 2004-06-20
HUP9700959A3 (en) 1998-03-30
TNSN97091A1 (fr) 2005-03-15
HUP9700959A2 (hu) 1998-03-02
SK284458B6 (sk) 2005-04-01
BR9703421A (pt) 1998-09-15
ES2110386T3 (es) 2003-10-01
ATE235920T1 (de) 2003-04-15
PA8431001A1 (es) 2000-05-24
MX9704012A (es) 1997-11-29
JP2980569B2 (ja) 1999-11-22
SA97180030B1 (ar) 2005-11-12
CA2203480A1 (en) 1997-11-30
LU91029I2 (fr) 2004-01-23
EG24292A (en) 2009-01-08
EP0809996A2 (en) 1997-12-03
HRP970298A2 (en) 1998-04-30
NL300127I2 (nl) 2003-09-01
DE10399018I1 (de) 2003-10-23
BG101540A (en) 1998-02-27
CY2005006I2 (el) 2009-11-04
NO972480D0 (no) 1997-05-30
OA10488A (fr) 2002-04-11
HU227992B1 (en) 2012-08-28
DE809996T1 (de) 1998-04-09
EP0809996A3 (en) 1999-04-14
MA24193A1 (fr) 1997-12-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL186949B1 (pl) Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-alfa, sposób jego wytwarzania oraz zawierające go kompozycjefarmaceutyczne
JP2859105B2 (ja) インターフエロン抱合体
HUT75533A (en) Improved interferon polymer conjugates
US20070219356A1 (en) G-CSF conjugates
US20060029573A1 (en) Pegylated interferon alpha-1b
CZ298579B6 (cs) Konjugát polyolu a interferonu-beta
CN103228792A (zh) PEG-干扰素λ1结合物
JP2009536963A (ja) ポリエチレングリコール−インターフェロンα結合体
KR100888371B1 (ko) 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
KR100480432B1 (ko) Ｇ-ｃｓｆ와 폴리에틸렌글리콜 유도체의 배합체
HK1005225B (en) Interferon conjugates
MXPA97004012A (en) Conjugados de interfe
KR100761652B1 (ko) 단백질 또는 펩타이드에 결합되는 다가지의 고분자유도체와 접합체
KR20030045414A (ko) 인터페론-베타와 폴리에틸렌글리콜 유도체의 배합체
HK1131345A (en) Polyethylene glycol-interferon alpha conjugate
KR20070110162A (ko) 폴리에틸렌 글리콜-인터페론 알파 접합체