SK13082003A3 - Pyrazolopyrimidíny ako terapeutické prostriedky - Google Patents

Pyrazolopyrimidíny ako terapeutické prostriedky Download PDF

Info

Publication number
SK13082003A3
SK13082003A3 SK1308-2003A SK13082003A SK13082003A3 SK 13082003 A3 SK13082003 A3 SK 13082003A3 SK 13082003 A SK13082003 A SK 13082003A SK 13082003 A3 SK13082003 A3 SK 13082003A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
substituted
unsubstituted
alkyl
group
independently
Prior art date
Application number
SK1308-2003A
Other languages
English (en)
Inventor
Gavin C. Hirst
Paul Rafferty
Kurt Ritter
David Calderwood
Neil Wishart
Lee D. Arnold
Michael M. Friedman
Original Assignee
Abbott Gmbh & Co. Kg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbott Gmbh & Co. Kg filed Critical Abbott Gmbh & Co. Kg
Publication of SK13082003A3 publication Critical patent/SK13082003A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/18—Feminine contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings

Description

Pyrazolopyrimidíny ako terapeutické prostriedky
Doterajší stav techniky
Existuje aspoň 400 enzýmov identifikovaných ako proteínkinázy. Tieto enzýmy katalyzujú fosforyláciu cieľových proteínových substrátov. Fosforylácia je obvykle reakcia prenosu fosfátovej skupiny z ATP na proteínový substrát. Špecifickou štruktúrou v cieľovom substráte, na ktorú sa fosfát prenáša, je tyrozínový, serínový alebo treonínový zvyšok. Pretože sú tieto aminokyselinové zvyšky cieľovými štruktúrami pre prenos fosforylu, označujú sa tieto proteínkinázy obvykle ako tyrozínkinázy alebo serín/treonínkinázy.
Fosforylačné reakcie a proti nim pôsobiace fosfatázové reakcie na tyrozínových, serínových a treonínových zvyškoch sa zúčastňujú na nespočetných bunkových procesoch, ktoré sú základom odpovedí na rôzne medzibunkové signály (typicky sprostredkovávané bunkovými receptormi), regulácie bunkových funkcií a aktivácie alebo deaktivácie bunkových procesov. Kaskáda proteínkináz sa obvykle zúčastňuje na prenose medzibunkového signálu a je esenciálna pre realizáciu týchto bunkových procesov. Vzhľadom na početnosť ich výskytu v týchto procesoch môžu byť proteínkinázy nachádzané ako integrálna súčasť plazmatickej membrány alebo ako cytoplazmatické enzýmy alebo lokalizované v jadre, často ako zložky enzýmových komplexov. V mnohých prípadoch sú tieto proteínkinázy nevyhnutným prvkom enzýmu a štrukturálnych proteínových komplexov, ktoré určujú, kde a kedy v bunke prebieha určitý bunkový proces.
Proteínové tyrozínkinázy.
Proteínové tyrozínkinázy (PTK) sú enzýmy, ktoré katalyzujú fosforyláciu špecifických tyrozínových zvyškov v bunkových proteínoch. Táto posttranslačná modifikácia týchto substrátových proteínov, ktoré sú často samotnými enzýmami, pôsobí ako molekulárny prešmyk regulujúci proliferáciu, aktiváciu alebo diferenciáciu buniek (prehľad viď Schlessinger a Ulrich, 1992, Neurón 9: 383-391). Aberantná alebo nadbytočná aktivita PTK bola pozorovaná pri mnohých chorobných stavoch zahŕňajúcich benígne a malígne proliferatívne poruchy, ako aj ochorenia, ktoré sú dôsledkom nevhodnej aktivácie imunitného systému (napríklad autoimunitné poruchy), odvrhnutie transplantátu a ochorenie hostiteľ versus štep. PTK, špecifické pre endotelové bunky, ako sú KDR a Tie-2, navyše sprostredkovávajú angiogérmy proces, a teda sa zúčastňujú na podpore progresie nádorov a ďalších ochoreniach zahŕňajúcich nevhodnú vaskularizáciu (napríklad na diabetickej retinopatii, choroidálnej neovaskularizácii v dôsledku makulámej degenerácie súvisiacej s vekom, psoriáze, artritíde, retinopatii predčasných, infantilných hemangiómov).
Tyrozínkinázy môžu byť receptorového typu (s extracelulámou, transmembránovou a intracelulámou doménou) alebo non-receptorového typu (sú celkom intraceluláme).
Receptorové tyrozínkinázy (RTK).
RTK zahŕňajú veľkú skupinu transmembránových receptorov s rôznymi biologickými aktivitami. Doteraz bolo identifikovaných aspoň 19 rôznych podskupín RTK. Skupina receptorových tyrozínkináz (RTK) zahŕňa receptory, ktoré sú rozhodujúce pre rast a diferenciáciu rôznych bunkových typov (Yarden a Ullrich, Ann. Rev. Biochem. 57: 433-478,1988; Ullrich a Schlessinger, Celí 61: 243-254,1990). Vlastná funkcia RTK je aktivovaná po naviazaní ligandu, čo vedie k fosforylácii receptora a niekoľkých bunkových substrátov a následne k rôznym bunkovým odpovediam (Ullrich & Schlessinger, 1990, Celí 61: 203-212). Prenos signálu sprostredkovaný receptorovou tyrozínkinázou sa pritom začína extracelulámou interakciou so špecifickým rastovým faktorom (ligandom), po ktorej typicky nasleduje dimerizácia receptora, stimulácia vlastnej aktivity proteínovej tyrozínkinázy a transfosforylácia receptora. Vytvoria sa tak väzbové miesta pre prenosové molekuly intracelulámeho signálu a vedú k vytvoreniu komplexov so spektrom cytoplazmatických signálnych molekúl, ktoré uľahčujú adekvátnu bunkovú odpoveď (napríklad bunkové delenie, diferenciáciu, metabolické efekty, zmeny extracelulámeho mikroprostredia), viď Schlessinger a Ullrich, 1992, Neurón 9: 1-20.
Proteíny s SH2 (src homológia-2) alebo fosfotyrozínovými väzbovými (PTB) doménami viažu aktivované receptory tyrozínkináz a ich substráty s vysokou afinitou na propagáciu signálov do bunky. Obe domény rozpoznávajú fosfotyrozin. (Fantl et al., 1992, Celí 69: 413-423; Songyang et al., 1994, Mol.Celí. Biol. 14: 2777-2785; Songyang et al., 1993, Celí 72: 767-778; a Koch et al., 1991, Science 252: 668-678; Shoelson, Curr. Opin. Chem. Biol. (1997), 1 (2), 227234; Cowbum, Curr. Opin. Struct. Biol. (1997), 7 (6), 835-838). Bolo identifikovaných niekoľko intracelulámych substrátových proteínov, ktoré asociujú s receptorovými tyrozínkináza3 mi (RTK). Môžu byť rozdelené do dvoch hlavných skupín: (1) substráty, ktoré majú katalytickú doménu, a (2) substráty, ktoré takúto doménu nemajú, ale slúžia ako adaptéry a asociujú s katalytický aktívnymi molekulami (Songyang et al., 1993, Celí 72: 767-778). Špecifická interakcií medzi receptormi alebo proteínmi a doménami SH2 alebo PTB ich substrátov je určovaná aminokyselinovými zvyškami, bezprostredne obklopujúcimi fosforylovaný tyrozínový zvyšok. Napríklad rozdiely vo väzbovej afinite medzi SH2 doménami a aminokyselinovými sekvenciami obklopujúcimi fosfotyrozínové zvyšky na konkrétnych receptoroch korelujú s pozorovanými rozdielmi vo fosforylačnom profile ich substrátov (Songyang et al., 1993, Celí 72: 767-778). Z pozorovania vyplýva, že funkcia každej receptorovej tyrozínkinázy je určovaná nielen profilom jej expresie a dostupnosťou ligandov, ale i súborom transdukčných dráh signálu v smere („downstream“) expresie, ktoré sú aktivované konkrétnym receptorom, ako aj načasovaním a trvaním týchto stimulov. Fosforylácia teda poskytuje významný regulačný stupeň, ktorý určuje selektivitu signálnych dráh, vyvolávaných konkrétnymi receptormi rastového faktora, ako aj receptormi diferenciačného faktora.
Uvádza sa, že niekoľko receptorových tyrozínkináz, ako je FGFR-1, PDGFR, TIE-2 a cMet, a rastové faktory, ktoré sa na ne viažu, hrajú úlohu v angiogenéze, aj keď niektoré z nich môžu podporovať angiogenézu nepriamo (Mustonen a Alitalo, J. Celí Biol. 129: 895898,1995). Jedna takáto receptorová tyrozínkináza, známa ako fetálna pečeňová kináza l (FLK-1), je členom podskupiny RTK typu III. Alternatívne označenie pre ľudskú FLK-1 je receptor obsahujúci doménu kinázového inzertu (KDR) (Terman et al., Oncogene 6: 167783,1991). Ďalším alternatívnym označením pre FLK-l/KDR je receptor 2 rastového faktora vaskulámych endotelových buniek (VEGFR-2), pretože s vysokou afinitou viaže VEGF. Myšacia verzia FLK1/VEGFR-2 sa označuje tiež NYK (Oelrichs et al., Oncogene 8 (1): 1115,1993). Izolovali sa DNA kódujúce myšaciu, krysiu a ľudskú FLK-1 a opísali sa nukleotidové a kódované aminokyselinové sekvencie (Matthews et al., Preč. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 9026-30,1991; Terman et al., 1991, viď vyššie; Terman et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 187: 1579-86,1992; Sarzani et al., viď vyššie; aMillauer et al., Celí 72: 835-846,1993). Početné štúdie, napríklad uvedené v Millauer et al., viď vyššie, naznačujú, že VEGF a FLKl/KDRNEGFR-2 tvoria dvojicu ligand-receptor, ktorá hrá významnú úlohu pri proliferácii vaskulámych endotelových buniek, resp. pri tvorbe a pučaní ciev, čo sa označuje ako vaskulogenéza, resp. angiogenéza.
Iná RTK podskupiny typu III, označovaná tyrozínkináza-1 typu fms (Fit- 1) je príbuzná FLK-l/KDR (DeVries et al. Science 255; 989-991,1992; Shibuya et al., Oncogene 5: 519524,1990). Alternatívne označenie pre Flt-1 je receptor 1 rastového faktora vaskulámych endotelových buniek (VEGFR-1). Doteraz bola expresia členov podskupín FLKl/KDR/VEGFR-2 a Flt-l/VEGFR-1 zisťovaná primáme na endotelových bunkách. Členy týchto podskupín sú špecificky stimulované Členmi skupiny ligandov rastového faktora vaskulámych endotelových buniek (VEGF) (Klagsbum a D'Amore, Cytokine & Growth Factor Reviews 7: 259270,1996). Rastový faktor vaskulámych endotelových buniek (VEGF) sa viaže na Flt-1 s vyššou afinitou než na FLK-l/KDR a je mitogénny proti vaskulámym endotelovým bunkám (Terman et al., 1992, viď vyššie; Mustonen et al. viď vyššie; DeVries et al., viď vyššie). Má sa za to, že Flt-1 je nevyhnutný na organizáciu endotelu počas vaskulárneho vývoja. Expresia Flt1 je spojená so skorým vaskulámym vývojom u myšacích embryí a s neovaskularizáciou v priebehu hojenia rán (Mustonen a Alitalo, viď vyššie). Expresia Flt-1 v monocytoch, osteoklastoch a osteoblastoch, rovnako ako v dospelých tkanivách, ako sú glomeruly v obličkách, naznačuje pre tento receptor ďalšiu funkciu, ktorá nesúvisí s rastom buniek (Mustonen a Alitalo, viď vyššie).
Ako je uvedené vyššie, nedávne dôkazy naznačujú, že VEGF hrá úlohu ako pri normálnej, tak pri patologickej angiogenéze (Akoeman et al., Endocrinology 133: 848-859,1993; Kolch et al., Breast Cancer Research and Treatment 36: 139-155,1995; Ferrara et al., Endocrine Reviews 18 (1); 4-25,1997; Ferrara et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L. D. Goldberg a E. M. Rosen), 209-232,1997). Navyše sa uvádza, že VEGF sa zúčastňuje na regulácii a zvyšovaní vaskulámej permeability (Connolly, et al., J. Biol. Chem. 264 20017- 2001720024,1989; Brown et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L. D. Goldberg a E. M. Rosen), 233-269,1997). Opísali sa rôzne formy VEGF, vznikajúce alternatívnym zostrihom mRNA, vrátane štyroch foriem, opísaných v Ferrara et al. (J. Celí. Biochem. 47: 211-218,1991). Obe vylučované a prevažne s bunkou súvisiace formy VEGF identifikoval Ferrara et al. viď vyššie, a pri proteíne sa ukázalo, že existuje vo forme disulfidovo spojených dimérov.
Nedávno bolo identifikovaných niekoľko príbuzných homológov VEGF. Nebola však ešte objasnená ich úloha v normálnych a chorobných fyziologických procesoch. Členy rodiny
VEGF sú navyše často exprimované v mnohých tkanivách spolu s VEGF a sú všeobecne schopné tvoriť s VEGF heterodiméry. Táto schopnosť pravdepodobne mení receptorovú špecifitu a biologické účinky heterodimérov a ďalej komplikuje objasnenie ich špecifických funkcií, ako je ilustrované ďalej (Korpelainen a Alitalo, Curr. Opin. Celí Biol., 159164,1998 a tam citované odkazy).
Rastový faktor placenty (PIGF) má aminokyselinovú sekvenciu, ktorá vykazuje významnú homológiu so sekvenciou VEGF (Park et al., J. Biol. Chem. 269: 2564654,1994; Maglione et al. Oncogene 8: 925-31,1993). Tak ako u VEGF vznikajú z alternatívneho zostrihu mRNA rôzne typy P1GF a proteín existuje v dimémej forme (Park et al., viď vyššie). PIGF-1 a P1GF-2 sa viažu s vysokou afinitou na Flt-1 a P1GF-2 sa taktiež ochotne viaže na neuropilín-1 (Migdal et al., J. Biol. Chem. 273 (35): 22272-22278), ale žiadny z nich sa neviaže na FLK1/KDR (Park et al., viď vyššie). Uvádza sa, že P1GF zosilňuje ako vaskulámu permeabilitu, tak mitogénny účinok VEGF na endotelové bunky, ak je VEGF prítomný v nízkych koncentráciách (pravdepodobne v dôsledku tvorby heterodiméru) (Park et al., viď vyššie).
VEGF-B je produkovaný v dvoch izoformách (167 a 185 zvyškov), ktoré tiež zjavne viažu Flt-l/VEGFR-1. Môže zohrávať úlohu pri regulácii degradácie extracelulámej matrice, bunkovej adhézii a migrácii prostredníctvom modulácie expresie a aktivity plazmínového aktivátora urokinázového typu a inhibítora 1 plazmínového aktivátora (Pepper et al., Preč. Natl. Acad. Sci. U. S. A. (1998), 95 (20): 11709-11714).
VEGF-C bol pôvodne klonovaný ako ligand pre VEGFR-3/Flt-4, ktorý je primáme exprimovaný lymfatickými endotelovými bunkami. Vo svojej plne zrelej forme môže VEGF-C tiež viazať KDR/VEGFR-2 a stimulovať proliferáciu a migráciu endotelových buniek in vitro a angiogenézu v in vivo modeloch (Lymboussaki et al., Am. J. Pathol. (1998), 153 (2): 395-403; Witzenbichler et al., Am. J. Pathol. (1998), 153 (2), 381-394). Transgénová hyperexpresia VEGF-C vyvoláva proliferáciu a zväčšenie iba u lymfatických ciev, zatiaľ čo krvné cievy ovplyvnené nie sú. Na rozdiel od VEGF nieje expresia VEGF-C vyvolávaná hypoxiou (Ristimaki et al., J. Biol. Chem. (1998), 273 (14), 8413-8418).
Najnovšie objavený VEGF-D je štruktúrne veľmi podobný VEGF-C. Uvádza sa. že VEGF-D viaže a aktivuje aspoň dva VEGFR, VEGFR-3/Flt-4 a KDR/VEGFR-2. Pôvodne bol klonovaný ako c-fos indukovateľný mitogén pre fibroblasty a prednostne je exprimovaný v mezenchymálnych bunkách pľúc a kože (Achen et al., Preč. Natl. Acad. Sci. U. S. A. (1998), 95 (2), 548-553 a tam uvedené odkazy).
Čo sa týka VEGF, o VEGF-C a VEGF-D sa tvrdí, že v Milesovom teste indukujú vzrast vaskulámej permeability in vivo, ak sa vstreknú do kutánneho tkaniva (PCT/US97/14696;
W098/07832, Witzenbichler et al., viď vyššie). Fyziologická úloha a význam týchto ligandov pri modulácii vaskulámej hyperpermeability a endotelových odpovedí v tkanivách, v ktorých nie sú exprimované, zostáva neistá.
Nedávno sa opísal vírusovo kódovaný nový typ rastového faktora vaskulámych endotelových buniek, VEGF-E (NZ-7 VEGF), ktorý prednostne využíva receptor KDR/Flk-1 receptor a má silnú mitotickú aktivitu bez väzbovej domény heparínu (Meyer et al., EMBO J. (1999), 18 (2), 363-374; Ogawaef a/., J. Biol. Chem. (1998), 273 (47), 31273-31282.). Sekvencie VEGF-E majú 25% homológiu s cicavčím VEGF a sú kódované vírusom Orf parapoxvírusu (OV). Tento parapoxvírus napáda ovce a kozy a príležitostne človeka a vytvára lézie s angiogenézou. VEGF-E je dimér s veľkosťou asi 20 kDa bez bázickej domény alebo afinity k heparínu, ale má charakteristickú cysteínovú uzlovú jednotku, prítomnú vo všetkých cicavčích VEGF, a prekvapivo sa zistilo, že má účinnosť a bioaktivitu podobnú ako izoforma VEGF 165 od VEGF-A viažuca heparin, t.j. oba faktory stimulujú uvoľňovanie tkanivového faktora (TF), proliferáciu, chemotaxiu a pučanie kultivovaných vaskulámych endotelových buniek in vitro a angiogenézu in vivo. Podobne ako u VEGF165, sa u VEGF-E zistilo, že sa viaže s vysokou afinitou na receptor-2 VEGF (KDR), čo vedie k autofosforylácii receptora a dvojfázovému vzrastu koncentrácií voľného vnútrobunkového Ca24, zatiaľ čo sa VEFG-E, na rozdiel od VEGF165, neviazal na receptor-1 VEGF (Flt-1).
Na základe objavov ďalších homológov VEGF a VEGFR a precendentov heterodimerizácie ligandu a receptora môže pôsobenie takých homológov VEGF zahŕňať vznik heterodimérov ligandu VEGF a/alebo heterodimerizáciu receptorov alebo väzbu na zatiaľ neobjavený VEGFR (Witzenbichler et al., viď vyššie). Nedávne správy tiež naznačujú, že indukcie vaskulámej permeability sa môže zúčastniť neuropilín-1 (Migdal et al., viď vyššie) alebo VEGFR3/Flt-4 (Witzenbichler et al., viď vyššie), alebo receptory iné než KDR/VEGFR-2 (Stacker, S. A., Vítali, A., Domagala, T., Nice, E., a Wilks, A. YAngiogenesis and Cancer Conference, Amer. Assoc. Cancer Res., Jan. 1998, Orlando, FL; Williams, Diabetelogia 40: S 118-120 (1997)).
Tie-2 (TEK) je člen nedávno objavenej rodiny špecifických receptorových tyrozínkináz endotelových buniek, ktorý sa zúčastňuje na angiogénnych procesoch, ako je vetvenie, pučanie, remodelovanie, maturácia a stabilita ciev. Tie-2 je prvá cicavčia receptorová tyrozínkináza, u ktorej bol identifikovaný ako agonistový ligand(y) (napríklad Angiopoietinl (Angl’j, ktorý stimuluje autofosforyláciu receptora a transdukciu signálu), tak antagonistový ligand(y) (napríΊ klad Angiopoietin2 (Ang2)). Knock-out a transgénová manipulácia expresie Tie-2 a jeho ligandov ukazuje, že prísna priestorová a časová kontrola signalizácie Tie-2 je esenciálna pre správny vývoj novej vaskulatúry. Súčasný model naznačuje, že stimulácia Tie-2 kinázy ligandom Angl sa priamo zúčastňuje na vetvení, pučaní a vyrastaní nových ciev, a získavanie a interakcia periendotelových podporných buniek sú významné pri zachovávaní integrity ciev a zavádzaní pokoja. Absencia Angl stimulácie Tie-2 alebo inhibície autofosforylácie Tie-2 pomocou Ang2, ktorý vzniká vo vysokých hladinách v miestach vaskulámej regresie, môže vyvolať stratu vaskulámej štruktúry a matricových kontaktov vedúcu k odumretiu endotelových buniek, najmä pri absencii stimulov pre rast alebo prežitie. Situácia je však zložitejšia, pretože boli nedávno objavené aspoň dva ďalšie ligandy Tie-2 (Ang3 a Ang4), a bola preukázaná schopnosť heterooligomerizácie rôznych agonistových a antagonistových angiopoetínov, modifikujúca ich aktivitu. Zameranie angiogénneho terapeutického prístupu na interakcie Tie-2 ligand-receptor má teda menšiu prednosť a preferuje sa kinázová inhibičná stratégia.
Rozpustná extraceluláma doména Tie-2 (ExTek) môže pôsobiť v prospech narušovania zakladania nádorovej vaskulatúry v modeloch xenotransplantátu nádoru prsníka a pľúcnej metastázy a pri očnej neovaskularizácii sprostredkovanej nádorovými bunkami. Adenovirálnou infekciou je možné dosiahnuť mg/ml hladín produkcie ExTek in vivo u hlodavcov za 7 až 10 dní bez vedľajších účinkov. Tieto výsledky naznačujú, že narušovanie signálnych dráh Tie-2 môže byť u normálnych zdravých zvierat dobre tolerované. Tieto inhibičné odpovede Tie-2 na ExTek môžu byť dôsledkom sekvestrácie ligandu(ov) a/alebo tvorby neproduktívneho heterodiméru s plnou dĺžkou Tie-2.
Nedávno bolo zistené významné posilnenie expresie Tie-2 vo vaskulámom synoviálnom pane ľudských artritických kĺbov, čo konzistentné s úlohou pri nežiaducej neovaskularizácii. Tento objav naznačuje, že Tie-2 má určitú úlohu pri progresii reumatoidnej artritídy. V spojení s poruchami ľudskej venóznej malformácie boli objavené bodové mutácie produkujúce konštitutívne aktivované formy Tie-2. Inhibítory Tie-2 sa preto používajú pri liečbe týchto porúch a v ďalších situáciách nežiaducej neovaskularizácie.
Nereceptorové tyrozínkinázy.
Nereceptorové tyrozínkinázy predstavujú súbor bunkových enzýmov, ktorým chýbajú extraceluláme a transmembránové sekvencie. Doteraz bolo identifikovaných dvadsať štyri jed8 notlivých nereceptorových tyrozínkináz, zahŕňajúcich jedenásť (11) podrodín (Src, Frk, Btk, Csk, Abl, Zap70, Fes/Fps, Fak, Ako, Ack a LIMK). Podrodina Src nereceptorových tyrozínkináz je v súčasnosti tvorená najväčším počtom PTK a zahŕňa Src, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr a Yrk. Podrodina Src enzýmov sa spája s onkogenézou a imunitnou odpoveďou. Podrobnejšiu diskusiu o nereceptorových tyrozínkináz poskytuje Bohlen, 1993, Oncogene 8: 2025-2031, na túto prácu sa tu odkazuje.
Zistilo sa, že mnohé tyrozínkinázy, či už RTK alebo nereceptorové tyrozínkinázy, sa zúčastňujú na bunkových signálnych dráhach podieľajúcich sa na mnohých patogénnych stavoch vrátane rakoviny, psoriázy' a ďalších hyperproliferatívnych poruchách alebo hyperimunitných odpovediach.
Vývoj zlúčenín na moduláciu PTK.
Vzhľadom na tušený význam PTK pre kontrolu, reguláciu a moduláciu bunkovej proliferácie, ochorenia a poruchy spojenej s abnormálnou bunkovou proliferáciou bolo uskutočnených veľa pokusov na identifikáciu receptorových a nereceptorových tyrozínkinázových inhibítorov pomocou rôznych prístupov, vrátane použitia mutantných ligandov (US patentová prihláška č. 4,966,849), rozpustných receptorov a protilátok (prihláška č. WO 94/10202; Kendall & Thomas, 1994, Preč. Natl. Acad. Sci 90: 10705-09; Kim et al., 1993, Náture 362: 841-844), RNA ligandov (Jellinek, et al., Biochemistry 33: 1045056; Takano, et al., 1993, Mol. Bio. Celí 4: 358A; Kinsella, et al. 1992, Exp. Celí Res. 199: 56-62; Wright, et al., 1992, J. Cellular Phys. 152: 448-57) a tyrozínkinázových inhibítorov (WO 94/03427; WO 92/21660; WO 91/15495; WO 94/14808; US patent č. 5,330,992; Mariani, et al., 1994, Preč. Am. Assoc. Cancer Res. 35: 2268).
Nedávno sa uskutočnili pokusy na identifikáciu malých molekúl, ktoré pôsobia ako tyrozínkinázové inhibítory. Napríklad bismonocyklické, bicyklické alebo heterocyklické arylové zlúčeniny (PCT WO 92/20642) a vinylén-azaindolové deriváty (PCT WO 94/14808) sa všeobecne opisujú ako tyrozínkinázové inhibítory. Styrylové zlúčeniny (US patent č. 5,217,999), styryl-substituované pyridylové zlúčeniny (US patent č. 5,302,606), niektoré chinazolínové deriváty (EP č. 0 566 266 Al; Expert Opin. Ther. Pat. (1998), 8 (4): 475-478), selenoindoly a selenidy (PCT WO 94/03427), tricyklické polyhydroxylové zlúčeniny (PCT WO 92/21660) a zlúčeniny benzylfosfónovej kyseliny (PCT WO 91/15495) sa opisujú ako zlúčeniny na použitie a9 ko tyrozínkinázové inhibítory na použitie pri liečbe rakoviny. Anilínocinolíny (PCT WO 97/34876) a zlúčeniny chinazolínových derivátov (PCT WO 97/22596; PCT WO 97/42187) boli opísané ako inhibítory angiogenézy a vaskulámej permeability.
Ďalej sa uskutočnili pokusy na identifikáciu malých molekúl, ktoré pôsobia ako inhibítory serín/treonínkináz. Napríklad bolo uvedené, že bis(indolylmaleínimidové) zlúčeniny inhibujú konkrétne izoformy PKC serín/treonínkináz, ktorých funkcie pri transdukcii signálu súvisia so zmenenou vaskulámou permeabilitou pri ochoreniach súvisiacich s VEGF (PCT WO 97/40830; PCT WO 97/40831).
Inhibítory Plk-1 kinázy.
Plk-1 je serín/treonínkináza, ktorá je významným regulátorom priebehu bunkového cyklu. Má kritickú úlohu pri výstavbe a dynamickej funkcii aparátu mitotického vretienka. Ukázalo sa tiež, že Plk-1 a príbuzné kinázy sú úzko zapojené do aktivácie a inaktivácie iných regulátorov bunkového cyklu, ako sú cyklín-dependentné kinázy. Vysoká úroveň expresie Plk-1 je spojená s proliferačnými aktivitami buniek. Často sa nachádza v malígnych nádoroch rôzneho pôvodu. Predpokladá sa, že inhibítory Plk-1 blokujú proliferáciu rakovinových buniek narušením procesov zahŕňajúcich mitotické vretienka a nesprávne aktivované cyklín-dependentné kinázy.
Inhibítory Cdc2/Cyklín B kinázy (Cdc2 je známa tiež ako cdkl)
Cdc2/cyklín B je ďalšia serín/treonín kináza, ktorá patrí ku skupine cyklíndependentných kináz (cdk). Tieto enzýmy sa zúčastňujú na kritickom prechode medzi rôznymi fázami priebehu bunkového cyklu. Má sa za to, že nekontrolovaná proliferácia buniek, ktorá je známkou rakoviny, je závislá od zvýšenej aktivity cdk v týchto bunkách. Inhibícia zvýšenej aktivity cdk v rakovinových bunkách prostredníctvom inhibítorov cdc2/cyklín B kinázy by mohla proliferáciu potlačiť a nastoliť normálnu kontrolu priebehu bunkového cyklu.
Regulácia aktivácie CDK je zložitá, ale vyžaduje asociáciu CDK s členom cyklínovej skupiny regulačných podjednotiek (Draetta, Trends in Celí Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Náture, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Celí, 3:
13-27 (1992)). Ďalšia úroveň regulácie nastáva ako aktiváciou, tak inaktiváciou fosforylácie CDK podjednotky (Draetta, Trends in Celí Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Náture, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Celí, 3: 13-27 (1992); Ducommun et al., EMBO Journal, 10: 3311-3319 (1991); Gautier et al., Náture 339: 626-629 (1989); Gould a Nurse, Náture, 342: 39-45 (1989); Krek a Nigg, EMBO Journal, 10: 33313341 (1991); Solomon et al., Celí, 63: 1013-1024 (1990)). Koordinovaná aktivácia ainaktivácia rôznych komplexov cyklín/CDK je esenciálna pre normálny priebeh bunkového cyklu (Pines, Trends in Biochemical Sciences, 18: 195-197 (1993); Sherr, Celí, 73: 10591065 (1993)). Obidva kritické prechody Gl-S a G 2-M sú kontrolované rôznymi aktivitami cyklín/CDK. Pri Gl sa má za to, že nástup S-fázy sprostredkuje ako cyklín D/CDK4, tak cyklín E/CDK2 (Matsushima et al., Molecular & Cellular Biology, 14: 2066-2076 (1994); Ohtsubo a Roberts, Science, 259: 19081912 (1993); Quelle et al., Genes & Development, 7: 1559-1571 (1993); Resnitzky et al., Molecular & Cellular Biology, 14: 1669-1679 (1994)). Prechod S-fázou vyžaduje aktivitu cyklínu A/CDK2 (Girard et al., Celí, 67: 1169-1179 (1991); Pagano et al., EMBO Journal, 11: 961-971 (1992); Rosenblatt et al., Preceedings of the National Academy of Science USA, 89: 2824-2828 (1992); Walker a Maller, Náture, 354: 314-317 (1991); Zindy el al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 182: 1144-1154 (1992)), zatiaľ čo aktivácia cyklínu A/cdc2 (CDK1) a cyklínu B/cdc2 je nutná pre nástup metafázy (Draetta, Trends in Celí Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Náture, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Celí, 3: 13-27 (1992); Girard et al., Celí, 67: 1169-1179 (1991); Pagano et al., EMBO Journal, 11: 961-971 (1992); Rosenblatt et al., Preceedings of the National Academy of Science USA, 89: 2824-2828 (1992); Walker a Maller, Náture, 354: 314-317 (1991); Zindy et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 182: 1144-1154 (1992)). Nie je teda prekvapujúce, že strata kontroly regulácie CDK je častým prípadom pri hyperproliferatívnych ochoreniach a rakovine. (Pines, Current Opinion in Celí Biology, 4: 144-148 (1992); Lees, Current Opinion in Celí Biology, 7: 773-780 (1995); Hunter a Pines, Celí, Ί9\ 573-582 (1994)).
Inhibítory kináz, ktoré sa zúčastňujú na sprostredkovaní alebo udržiavaní chorobných stavov, reprezentujú nové terapie pre tieto poruchy. Príklady takýchto kináz zahŕňajú, ale nie sú na ne obmedzené: (1) inhibíciu c-Src (Brickell, Critical Reviews in Oncogenesis, 3: 401-406 (1992); Courtneidge, Seminars in Cancer Biology, 5: 236-246 (1994), raf (Powis, Pharmacology & Therapeutics, 62: 57-95 (1994)) a cyklín-dependentných kináz (CDK) 1, 2 a 4 pri rakovine (Pines, Current Opinion in Celí Biology, 4: 144148 (1992); Lees, Current Opinion in Celí
Biology, Ί: 773-780 (1995); Hunter a Pines, Celí, 79: 573-582 (1994)), (2) inhibíciu CDK2 alebo PDGF-R kinázy pri restenóze (Buchdunger et al., Preceedings of the National Academy of Science USA, 92: 2258-2262 (1995)), (3) inhibíciu CDK5 a GSK3 kináz u Alzheimera (Hosoi et al., Journal of Biochemistry (Tokyo), 117: 741-749 (1995); Aplin et al., Journal of Neurochemistry, 67: 699-707 (1996), (4) inhibíciu c-Src kinázy pri osteoporóze (Tanaka et al., Náture, 383: 528-531 (1996), (5) inhibíciu GSK-3 kinázy pri diabete 2. typu (Borthwick et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 210: 738-745 (1995), (6) inhibíciu p38 kinázy pri zápaloch (Badger et al., The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 279: 1453-1461 (1996)), (7) inhibíciu VEGF-R 1-3 a TIE-1 a 2 kináz pri ochoreniach zahŕňajúcich angiogenézu (Shawver et al., Drug Discovery Today, T. 50-63 (1997)), (8) inhibíciu UL97 kinázy pri vírusových infekciách (He et al., Journal of Virology, 71: 405-411 (1997)), (9) inhibíciu CSF-1R kinázy pri kostných a hematopoetických ochoreniach (Myers et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 7: 421-424 (1997) a (10) inhibíciu Lck kinázy pri autoimunitných ochoreniach a odvrhnutí transplantátov (Myers et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,!: 417420(1997)).
Navyše je možné, že inhibítory určitých kináz môžu byť použiteľné pri liečbe ochorení, kde kináza nie je nesprávne regulovaná, ale predsa je esenciálnou na udržiavanie chorobného stavu. V tomto prípade by inhibícia kinázovej aktivity pôsobila buď ako liečba alebo paliatívum pre tieto ochorenia. Napríklad mnohé vírusy, ako je ľudský papilomavírus, narúšajú bunkový cyklus a ženú bunky do S-fázy bunkového cyklu (Vousden, FASEB Journal, 7: 8720879 (1993)). To, že sa bunkám po vírusovej infekcii zabráni vstúpiť do syntézy DNA inhibíciou aktivít iniciujúcich S-fázu, ako je CDK2, môže prerušiť životný cyklus vírusu zamedzením replikácie vírusu. Ten istý princíp sa môže použiť na ochranu normálnych buniek tela pred toxicitou cyklovo špecifických chemoterapeutík (Stone et al., Cancer Research, 56: 3199-3202 (1996); Kohn et al., Journal of Cellular Biochemistry, 54: 44-452 (1994)). Inhibícia CDK. 2 alebo 4 zabráni u normálnych buniek prechodu do cyklu a obmedzí toxicitu cytotoxík, ktoré pôsobia v Sfáze, G2 alebo mitóze. Ďalej sa ukázalo, že tiež aktivita CDK2/cykiín E reguluje NF-kB. Inhibícia aktivity CDK2 stimuluje NF-kB-dependentnú génovú expresiu, jav sprostredkovaný interakciami s p300 koaktivátorom (Perkins et al., Science, 275: 523-527 (1997)). NF-kB reguluje gény zúčastňujúce sa na zápalových odpovediach (ako hematopoetické rastové faktory, chemokíny a leukocytové adhézne molekuly) (Baeuerle a Henkel, Annual Review of Immunology, 12: 141-179 (1994)) a môže sa zúčastniť na supresii apoptotických signálov v bunke (Beg a Baltimore, Science, 274: 782-784 (1996); Wang et al., Science, 274: 784-787 (1996); Van Antwerp et al., Science, 274: 787-789 (1996)). Inhibícia CDK2 teda môže potláčať apoptózu indukovanú cytotoxickými liečivami mechanizmom, ktorý zahŕňa NF-kB. Z toho teda vyplýva, že inhibícia aktivity CDK2 môže byť použiteľná v prípadoch, kde má NF-kB určitú úlohu v etiológii ochorenia. Ďalší príklad sa môže vziať z fungálnych infekcií: Aspergillóza je bežné ochorenie imunokompromitovaných pacientov (Armstrong, Clinical Infectious Diseases, 16: 1-7 (1993)). Inhibícia kináz Aspergillus Cdc2/CDC28 alebo Nim A (Osmani et al., EMBO Journal, 10: 26692679 (1991); Osmani et al., Celí, 67: 283-291 (1991)) môže spôsobiť inaktiváciu alebo smrť húb, a tak zlepšiť terapeutický výsledok u pacientov s týmito infekciami.
Identifikácia efektívnych malých zlúčenín, ktoré špecificky inhibujú prenos signálu a bunkovú proliferáciu moduláciou aktivity receptorových a nereceptorových tyrozín a serín/treom'nkináz, a tak regulujú a modulujú abnormálnu alebo nesprávnu bunkovú proliferáciu, diferenciáciu alebo metabolizmus, je teda žiaduca. Obzvlášť by bola prínosnou identifikácia metód a zlúčenín, ktoré by špecificky inhibovali funkciu tyrozínkinázy, ktorá je esenciálna pre antigénne procesy alebo tvorbu vaskulámej hyperpermeability vedúcu k edémom, ascitom, efuziám, exsudátom a makromolekulovej extravazácii a depozícii matrix, ako aj k súvisiacim poruchám.
Podstata vynálezu
Vynález poskytuje zlúčeniny všeobecného vzorca I
ich racemické diastereoizoméme zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:
R.
E>í
G;
Λ
Gje
Κ'ζ—Α-Ζ—Ζ1ΰ> kde Ζ10θ je alebo skupina prípadne substituovaná substituentom Ri vybraná zo skupiny, ktorú tvorí alkyl; cykloalkyl; pyrolidinyl; bicyklický aromatický heterocyklus obsahujúci dusík, v ktorom má každý kruh šesť atómov, napr. chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl a ftalazinyl; bicyklický aromatický heterocyklus obsahujúci dusík, v ktorom má dusík charakter mostíka a jeden aromatický kruh má päť členov a druhý aromatický kruh má šesť členov, napr. imidazo[l,2-a]pyrimidinyl; l//-imidazo[l,2-a]imidazolyl; imid-azo[2,l-/>][!,3]tiazolyl; naftyl; tetrahydronaftyl; benzotienyl; furanyl; tienyl; benzoxazolyl; benzoizoi- U^NS.kÁ xazolyl; benzotiazolyl; ''t/ 'N ; Ά/ N ; S'' , tiazolyl; benzofuranyl;
2,3-dihydrobenzofuranyl; indolyl; izoxazolyl; tetrahydropyranyl; tetrahydrofiira-nyl; piperidinyl; pyrazolyl; pyrolyl; pyrolopyridinyl; H-pyridinón; oxazolyl; izotiazolyl; oxadiazolyl; tiadiazolyl; indolinyl; indazolyl; imidazo[l,2-n]pyridinyl; benzoizotiazolyl; 1,1-dioxybenzoizotiazolyl; pyridooxazolyl; pyridotiazolyl; pyrimidooxazolyl; pyrimidotiazolyl; a benzimidazolyl;
Z110 je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-Cô), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny, ktorú tvorí alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
Z111 je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Ci-Cô) alebo prípadne substitovaný -(CH2)n-cykloalkyl-(CH2)n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny, ktorú tvorí alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
každý zo substituentov Ra a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny, ktorú tvorí atóm vodíka, halogén, -CN, -NO2,
-C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluórmetylkarbonylaminoskupina, trifluórmetylsulfónamidoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-S(0)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkynyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované alebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryltioskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aryltioskupina, -Zl05-C(O)N(R)2, -Z'05-N(R)-C(O)-Z200, Z105-N(R)-S(O)2-Z200, -Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z-200, R, a CH2ORc;
substituent Rc pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH2-NRdRe, -W-(CH2)t-NRdRe, -W-(CH2)t-O-alkyl, -W-(CH2)t-S-alkyl alebo -W-(CH2),-OH;
Z105 pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Ci-Cô);
Z200 pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Cj-Cé), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cé)-fenyl;
substituenty Rj a R« pri každom výskyte sú nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO2-alkyl;
alebo substituenty Rd, R« a dusíkový atóm, ku ktorému sú viazané, spoločne tvoria 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh;
t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;
W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)2, alebo NRf, kde Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;
substituent R3 pri každom výskyte je, nezávisle, atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)~aryl, alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;
A je -(C,-C6)-, -O-; -S-; -S(O)P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO2R)-; -CH2O-; -CH2S-; -CH2N(R)-; -CH(NR)-; -CH2N(C(O)R))-; -CH2N(C(O)OR)-; -CH2N(SO2R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO2R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH2)„-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH2)n+i-C(O)-, -S(O)PN(R)-; -O-(CR2)n+I-C(O)-, -O-(CR2)n+I-O-, -N(C(O)R)S(O)P-; -N(R)S(O)PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH2)n-O-, -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)PN(R)C(O)-; -OS(O)PN(R)-; -N(R)S(O)PO-;
-N(R)S(O)PC(O)-; -SOPN(C(O)R)-; -N(R)SOPN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(ORb)O-; -N(R)P(ORb)-; -N(R)P(O)(ORb)O-; -N(R)P(O)(ORb)-; -N(C(O)R)P(ORb)O-; -N(C(O)R)P(ORb)-,
-N(C(O)R)P(O)(ORb)O-, alebo -N(C(O)R)P(ORb)-;
substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
substituent Rb pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
p je 1 alebo 2; alebo v skupine obsahujúcej fosfor tvoria dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a Rb spoločne 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh; alebo
A je NRSO2 a substituenty R, Ra a dusíkový atóm spoločne tvoria substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo
Ζ1 ’θ-Α-Ζ111 dohromady sú kovalentná väzba; a substituent R2 je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z101-Z102;
Z101 je kovalentná väzba, -(Ci-C6)-, -(C,-C6)-O-, -(C,-C6)-C(O)-, -(Ci-C6)-C(O)O-, -(Ci-C6)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((Ci-C6))- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;
Z je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina majú jeden alebo viacej substituentov, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvorí hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogén, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cŕ), substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovaný alebo nesubstituovaný -N((Ci-C6)-OR)2, substituovaný alebo nesubstituovaný N(R)-(Ci-C6)-C(O)2R, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaná alebo nesubstituovaná sulfónamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(C]-CÓ)-OR, oxoskupina, a nasýtená, nenasýtená alebo aromatická, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahujúca jeden alebo viacej heteroatómov vybraných zo skupiny, ktorú tvorí N, O a S; kde dusíkové atómy uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)N(R)2, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-C6)-N(R)2, -C(O)-alkylom, -C(O)-arylom, -C(0)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylpm; alebo substituent R2 je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubsttuovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cňj-azacykloalkyl-, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylN(R)-(Ci-Cô)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-Cň)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Cô)N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
a je 1 a symboly Dj, Gi, Ji, Lj a Mi sú každý nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvorí CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Di, Gi, Ji, Li a M] sú CRa; alebo a je 0 a jeden zo symbolovDi, Gi, Li a Mi je NRa, jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvorí CRa a N, kde substituent Ra má hore definovaný význam;
b je 1 a D2, G2, J2, L2 a M2 sú každý nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvorí CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolovD2, G2, J2, L2 a M2 sú CRa; alebo b je 0 a jeden zo symbolovD2, G2, L2 a M2 je NRa, jeden zo symbolovD2, G2, L2 a M2 je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvorí CRa a N, kde substituent Ra má hore definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;
s výhradou spočívajúcou v tom, že ak A je -N(R)-, Z110 a Z111 sú každý kovalentná väzba a substituent R2 je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2yl, potom Z100 nie je alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydro furanyl, piperidinyl alebo pyrolidinyl;
s výhradou spočívajúcou v tom, že ak Z110 a Z111 sú každý kovalentná väzba a substituent R2 je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z!00je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, potom A nie je alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- alebo C(0)0-;
s výhradou spočívajúcou v tom, že ak Z11O-A-ZU1 dohromady sú kovalentná väzba, potom Z100 nie je alkyl;
s výhradou spočívajúcou v tom, že ak Zll0-A-Z111 dohromady sú Ci-Cô alkyl, potom Z100 nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl; a s výhradou spočívajúcou v tom, že ak substituent R2 je substituovaný alebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z100 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, Z110 a Z111 sú každý kovalentná väzba, potom A nie je -0-, -C(0)0-, alebo -N(R)-.
V prvom uskutočnení je substituent R2 v zlúčeninách všeobecného vzorca I a) atóm vodíka; b) substituovaný alebo nesubstituovaný trityl; c) substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl; d) azaheteroaryl substituovaný substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom; e) azacykloalkyl, ktorý je substituovaný jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny, ktorú tvorí substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Côj-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -Ci-Cô-alkyl-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-Ci-Cé-alkylN(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -Ci-C6-alkyl-N(R)2, substituovaný alebo nesubsti19 tuovaný Ci-Có-alkyl-cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný tetrahydrotienyl a substituovaný alebo nesubstituovaný tetrahydrotiopyranyl; alebo f) skupina všeobecného vzorca (a) kde Ei je piperidinyl, piperazinyl, imidazolyl, morfolinyl, pyrolidinyl, aminoskupina, amidoskupina, alebo tetrahydrotiazolyl, a kde E je prípadne substituované jedným alebo viacerými substituentami vybranými z -Co-Cg-alkyl-OR, -Ci-C6-alkyl-C(O)OR, -Ci-Cé-alkyl-heteroaryl, -Ci-Cé-alkyl-heterocykloalkyl a -Ci-C6-alkyl-N(R)2.
V druhom uskutočnení je substituent R2 v zlúčeninách všeobecného vzorca I skupina reprezentovaná vzorcom (a), v ktorom Ei je vybraná zo skupiny, ktorú tvorí -amino-Ci-Cg-alkyl-morfolino, -piperidino-(Ci-C6-alkyl-OR), -imidazolyl-Ci-C6-alkyl- -C(O)OR, -piperazino-Ci-Cé-alkyl-OR, -amino-Ch-Cé-alkyl-OR, -pyrolidino-OR, -amino-Ci-Có-alkyl-imidazolo, -amino-Ci-C6-alkyl-N(R)2, -amido-Ci-C6-alkyl-N(R)2, tetrahydrotiazolyl, N,yV-di-(hydroxy-Ci-C6-alkyl)amino- a -piperizino-OR.
V treťom uskutočnení je substituent R2 v zlúčeninách všeobecného vzorca I skupina reprezentovaná vzorcom (a), v ktorom Ei je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí 4-(2-hydroxyetyl)morfolino, 3-hydroxymetylpiperidino, 2-[3-(metyl-karboxy)propyl]imidizol-4-yl, 4-(2-hydroxyetyljpiperazino-, 2-hydroxyetylamino, 3-hydroxypyrolidinoskupina, 3-imidazolopropylamino, 4-hydroxybutyl-aminoskupina, 3-metoxypropylamino, 3-(N,N-dimetylamino)propylamino, V-[2-(7v,A-dimetyl)etyl]amido, tetrahydrotiazolyl, A(jV-di-(2-hydroxyetyl)amino. 4-hydroxypiperizino a 4-hydroxymetylpiperizino.
Vo štvrtom uskutočnení, Z110-A-Zni je -NHC(O)- v zlúčeninách všeobecného vzorca I alebo v ktoromkoľvek z uskutočnení 1-3.
V piatom uskutočnení je G v zlúčeninách všeobecného vzorca I alebo v ktoromkoľvek z uskutočnení 1-4 skupina reprezentovaná nasledujúcou štruktúrou
V šiestom uskutočnení je G v zlúčeninách všeobecného vzorca I alebo v ktoromkoľvek z uskutočnení 1-5 skupina reprezentovaná nasledujúcou štruktúrou
V siedmom uskutočnení je substituent R2 v zlúčeninách všeobecného vzorca I azaheteroaryl substituovaný Ci-Cô alkylom, kde alkyl je prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami vybranými z RO-, -C(O)OR, -C(O)N(R)2 a -N(R)2.
V ôsmom uskutočnení je substituent R2 v zlúčeninách všeobecného vzorca I 4-(2hydroxyetyl)pyridín-2-yl, 3-aminometylpyridín-4-yl alebo 2-metylimidazol-4-yl.
V deviatom uskutočnení je G v zlúčeninách všeobecného vzorca I alebo v uskutočneniach 7 alebo 8 skupina reprezentovaná nasledujúcim vzorcom
V desiatom uskutočnení je substituent R2 v zlúčeninách všeobecného vzorca I pyrolidinyl, ktorý je substituovaný 2-metoxyetylom, Λζ/V-dimetylaminometylom, Λζ/V-dimetylarnino-loxoetylom alebo 2-(?/-metylamino)-l-oxopropylom.
V jedenástom uskutočnení je G v zlúčeninách všeobecného vzorca I alebo v uskutočnení 10 je skupina reprezentovaná nasledujúcim vzorcom
V dvanástom uskutočnení je subtituent R2 v zlúčeninách všeobecného vzorca I piperidinyl, ktorý je substituovaný tetrahydrotiopyranylom, tetrahydrotienylom, 2-(77-metylamino)-2metyl-l-oxopropylom, 2-metoxyetylom alebo cyklopropylmetylom.
V trinástom uskutočnení je Z100 v zlúčeninách všeobecného vzorca I pyrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-a]pyrimidinyl, lH-imidazo[l,2-a]imidazolyl, imidazo[2,l-ô][l,3]tiazolyl, H-pyridinón, 1,1-dioxy-benzoizotiazolyl, benzoizoxazolyl, alkyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl, pyrolopyridinyl alebo , kde všetkny z predchádzajúcich Z100 skupín môžu byť prípadne substituované substituentom Rp
V čtmástom uskutočnení je Z100 v zlúčeninách všeobecného vzorca I alebo v uskutočnení 13 2-pyrolidinyl, l,2-dihydro-2-oxopyridin-3-yl, benzoizoxazol-3-yl, 1,1-dioxy-benzoizotiazol-3-yl, imidazo[l,2-a]pyridin-2-yl alebo S* a substituent R2 je 4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl.
V pätnástom uskutočnení je Z11O-A-Z1U v zlúčeninách všeobecného vzorca I alebo uskutočneniach 13 alebo 14 -NH-.
V šestnástom uskutočnení je Z100 vo všeobecnom vzorci I alebo v uskutočnení 13 pyrolopyridinyl vybraný zo skupiny
CH,
N \
CH,
sp
CH, alebo
CH,
V sedemnástom uskutočnení je Z110-A-Zni v uskutočneniach 13 alebo 16 -NHC(O)-.
V osemnástom uskutočnení je substituent R2 vo všeobecnom vzorci I alebo v uskutočneniach 13, 16 alebo 17 piperidín-4-yl, N-metylpiperidín-4-yl, A'-(prop-2-yl)piperidín-4-yl, AL(imidazol-4-yl-metyl)piperidín-4-yl, /V-(2-metylimidazol-4-yl-metyl)piperidín-4-yl, A-(pyrazol-4-yl-metyl)piperidín-4-yl, Aľ-(2-metoxyetyl)piperidín-4-yl, 2V-(fur-3-yl-metyl)piperidín-4-yl, 7V-(tetrahydropyrán-4-yl-metyl)piperidín-4-yl, /V-(pyrol-2-yl-metyl)piperidín-4-yl, alebo A-(2-difluóretyl)piperidín-4-yl.
V devätnástom uskutočnení sú substituenty Ra a Ri v zlúčeninách všeobecného vzorca I, kde každý zo substituentov predstavuje jeden alebo viacej substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvorí atóm vodíka, -C(O)O-aryl, -C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)p-, a kde aspoň jeden zo substituentov Ra a Ri nie je atóm vodíka.
V dvadsiatom uskutočnení je A v zlúčeninách všeobecného vzorca I ;-(C i-C^)-.
V dvadsiatom prvom uskutočnení sú Z110-A-Z1H dohromady v zlúčeninách reprezentovaných všeobecným vzorcom I kovalentná väzba.
V dvadsiatom druhom uskutočnení je substituent R3 pri každom výskyte v zlúčeninách reprezentovaných všeobecným vzorcom I, nezávisle, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl, alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl.
V dvadsiatom treťom uskutočnení je substituent R3 skupina všeobecného vzorca -Z101-Z102, kde Z101 je kovalentná väzba, -(C,-C6)-, -(C,-C6)-O-, -(Ci-C6)-C(O)-, -(C,-C6)-C(O)O-, -(Ci-Cô)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((Ci-Cô))- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina; a kde Z102 je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, kde uvedený substituovaný cykloalkenyl má jeden alebo viacero substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvorí hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogén, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cô), substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Ce)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný
-N((Ci-C6)-OR)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-C(O)2R, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Ce)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cé)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaná alebo nesubstituovaná sulfónamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cé)-OR, oxoskupina, nasýtená, nenasýtená alebo aromatická, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahujúca jeden alebo viacero heteroatómov vybraných zo skupiny, ktorú tvorí N, O, a S; kde dusíkové atómy uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)N(R)2, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-C6)-N(R)2, -C(O)-alkylom, -C(O)-arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom.
V dvadsiatom štvrtom uskutočnení je substituent R2 skupina všeobecného vzorca -Z101-Z102; Z101 je kovalentná väzba, -(CrC6)-, -(Ci-C6)--O-, -(Ci-C6)-C(O)-, -(C ^6)-(2(0)0-, -(Ci-C6)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((Ci-C6))- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina; Z102 je substituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedená substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden alebo viacej substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvorí nitroskupina, halogén, substituovaný alebo nesubstituovaný (Cj-Cô), substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovaný alebo nesubstituovaný -N((Ci-C6)-OR)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-C(O)2R, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Côj-NfRj-fCi-Cgj-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)- -N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-Cé)-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahujúca jeden alebo viacej heteroatómov vybraných zo skupiny, ktorú tvorí O, a S; kde dusíkové atómy uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovaným alebo ne24 substituovaným -C(O)N(R)2, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-Cg)-N(R)2, -C(O)-alkylom, -C(O)-arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom.
Výhodná je zlúčenina všeobecného vzorca I, kde substituent R3 je H, substituent R] pri každom výskyte je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvorí F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, 'CH2NRaRe, /-butyl, pyridyl, substituovaný alebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný alebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný alebo nesubstituovaný benzénsulfonyl, substituovaná alebo nesubstituovaná fenoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, karboxyl, substituovaný alebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný alebo nesubstituovaný styryl.
Ďalšíiavýhodná zlúčenina všeobecného vzorca I je taká, kde substituent R3 je H; substituent Ra pri každom výskyte je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvorí F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, /-butyl, pyridyl, substituovaný alebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný alebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný alebo nesubstituovaný benzénsulfonyl, substituovaná alebo nesubstituovaná fenoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, karboxyl, substituovaný alebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný alebo nesubstituovaný styryl.
Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca I je taká, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca '0' kde nje 1, 2 alebo 3.
Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca I je taká, kde substituent R3 je H, substituent R2 je skupina vzorca
RgO kde m je 0, 1,2 alebo 3 a substituent Rg je H alebo -(CH2)pN(R4)Rs, kde p je celé číslo od 2 do 6 a substituenty R4 a Rs sú každý nezávisle H, azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí -C(O)-, -(CH2)q, -S(O)2-, -C(O)O-,-SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)f-, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0,1 alebo 2; a Z je substituovaná alebo nesubstituovaná časť, vybraná zo skupiny, ktorú tvorí alkyl, alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl a heterocykloalkylová skupina, alebo substituenty R4, R5 a dusíkový atóm, ku ktorému sú viazané, tvoria spoločne 3-, 4-, 5-, 6- alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú alebo heterobicyklickú skupinu.
Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca I je taká, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca
Q NR4R5 kde m je 0,1,2 alebo 3;
každý z indexu a aj indexu b znamená nezávisle celé číslo od 0 do 6,Q je -ORô alebo
-NR4R5;
každý zo substituentov R4 a R5 znamená nezávisle H, azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí -C(O)-, -(CH2)q, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl alebo heterocykloalkylová skupina; alebo substituenty R4, R5 a dusíkový atóm, na ktorý sú viazané, tvoria spoločne 3, 4, 5, 6 alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovaná heterocyklickú alebo heterobicyklickú skupinu; a substituent Ró je vodík alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina.
Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca I je taká, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca
R4
n kde n je 1, 2 alebo 3; a substituent R4 je H, azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca I je taká, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca
r5 kde m je 0, 1, 2 alebo 3;
substituent R5 je H, azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde Y je vybráané zo skupiny, ktorú tvorí kovalentná väzba, -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH-, -(CH2)qC(O)-, -C(O)(CH2)q- a -(CH2)qS(O)r-, kde alkylová část skupiny -(CH2)q-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH-, -(CH2)qC(O)-, -C(O)(CH2)q- a -(CH2)qS(O)ľ je prípadne substituovaná halogénom, hydroxyskupinou alebo alkylskupinou, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina.
alebo Y a Z sú spoločne prirodzená alebo neprirodzená aminokyselina, ktorá môže byť na amínovom dusíku mono- alebo dialkylovaná; a substituent predstavuje jeden alebo viacej substituentov, z ktorých každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvorí vodík, hydroxyskupina, oxoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocyklyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocyklylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl a substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; s podmienkou, že uhlíkové atómy susediace s dusíkovým atómom nie sú substituované hydroxyskupinou.
Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca I je taká, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca
kde substituent R4 je H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí -C(O)-,
-(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a Z je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný a28 ryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca I je taká, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca
z s R4 R5 kde m je celé číslo od 1 do 6; a substituenty R4 a R5 sú každý nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0,1 alebo 2; a Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkyiová skupina; alebo substituenty R4, R5 a atóm dusíka, na ktorý sú viazané, spoločne tvoria 3-, 4-, 5-, 6- alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú alebo substituovanú alebo nesubstituovanú heterobicyklickú skupinu.
Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca I je taká, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca
kde n je celé číslo od 0 do 4;
r je 0 a m je celé číslo od 1 do 6; alebo r je 1 a m je celé číslo od 0 do 6;
Q je -ORé alebo -NR4R5;
každý zo substituentov R4 a R5 je nezávisle vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina;
alebo substituenty R4, R5 a atóm dusíka, ke ktorému sú pripojené, spoločne tvoria 3, 4, 5- alebo 6-člennú, substituovanú alebo nesubstituovaná heterocyklickú skupinu; a substituent R$ je vodík alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina.
Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca I je taká, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca
kde n je celé číslo od 0 do 4;
m je celé číslo od 0 do 6;
substituent Rt je substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvorí -C(O)-, -(CH2)q, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substitu30 ovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; a substituent R/, je vodík alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín vytvárajú spoločne substituenty R4, R5 a atóm dusíka heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca
kde substituenty R7, Rs, R9, Rio, R11, R12, R13 a Ru sú každý, nezávisle, nižší alkyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R7 a R8; R9 a R10; Rn a R12; alebo R13 a R u sú dohromady atóm kyslíka; alebo aspoň jeden zo substituentov R7 a R9 je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH2OR15 alebo CH2NRi5(Rj6), kde substituenty R15 a Riô sú každý nezávisle vodík, azabicykloalkyl alebo V-L, kde V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo substituenty R15, Ri6a atóm dusíka spoločne tvoria 3-, 4-, 5-, 6- alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú alebo substituovanú alebo nesubstituovanú heterobicyklickú skupinu;
X je O, S, SO, SO2, CH2, CHORn alebo NR17, kde substituent R]7 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)Ri7 alebo -C(O)ORi8, kde substituent Rjg je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 alebo 1.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín vytvárajú spoločne substituenty R4, R5 a atóm dusíka heterocyklus všeobecného vzorca
N
kde substituenty R19 a R20 sú každý nezávisle vodík alebo nižší alkyl; alebo substituenty R19 a R20 sú dohromady atóm kyslíka.
substituenty R21 a R22 sú každý nezávisle vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L, kde V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CľDp-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; alebo substituenty R21, R22 a atóm dusíka spoločne tvoria 3-, 4-, 5- alebo 6-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu;
m je celé číslo od 1 do 6; a n je celé číslo od 0 do 6.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín vytvárajú substituenty R4, R5 a atóm dusíka spoločne heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca
N
R23 kde m je celé číslo od 1 do 6;
substituent R23 je CH2OH, NRR', C(O)NRR' alebo COOR, kde substituenty R a R' sú každý, nezávisle, vodík alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín vytvárajú spoločne substituenty R4, R5 a atóm dusíka heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca
N
kde substituent R24 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR25, CH2OR25, CH2NR26R27 alebo C(O)NHR26, kde substituent R25 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocyklus alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloaryl; a substituenty R2s a R27 sú každý, nezávisle, vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L, kde V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)p-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; substituenty R26, R27 a atóm dusíka spoločne tvorí 3-, 4-, 5- alebo 6-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má aspoň jeden zo substituentov R4 a R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec
-N
kde
T je C(O), S, SO, SO2, CHÓR alebo NR, kde substituent R je vodík alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina; a n je 0,1 alebo 2.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má aspoň jeden zo substituentov R4 a R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec -N(R28)R29 a substituenty R28 a R29 sú každý, nezávisle, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný kyanoalkyl; alebo substituenty R28 a R29 spoločne s atómom dusíka môžu tiež tvoriť 5- alebo 6- člennú heterocyklickú skupinu.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín vytvárajú substituenty R4, Rs a atóm dusíka spoločne heterocyklus všeobecného vzorca
R127\
Rn >šľ-R9 R R10 kde substituenty R7, R8, R9, Rio, Rn, Rn, R13 a Ri4 sú každý, nezávisle, nižší alkyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R7 a R8; R9 a Rio; Rn a Ri2; alebo R13 a R14 sú dohromady atóm kyslíka; alebo aspoň jeden zo substituentov R7 a Rg je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH2OR15 alebo CH2NRi5(Ri6), kde substituenty R15 a Ri6 sú každý, nezávisle, vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L, kde V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)p-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo substituenty R15, Riô a atóm dusíka spoločne tvoria 3-, 4-, 5-, 6- alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú alebo heterobicyklickú skupinu;
X je O, S, SO, SO2, CH2, CHORi7 alebo NRi7, kde substituent Ri7 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)Ri8 alebo -C(O)ORi8, kde substituent Ri8 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 alebo 1.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín vytvárajú substituenty R4, R; a atóm dusíka spoločne heterocyklus všeobecného vzorca
N
Rig R2C
kde substituenty R19 a R20 sú každý, nezávisle, vodík alebo nižší alkyl; alebo substituenty R19 a R20 sú dohromady atóm kyslíka;
substituenty R2i a R22 sú každý, nezávisle, vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L, kde V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0,1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo substituenty R2i, R22 a atóm dusíka spoločne tvoria 3-, 4-, 5- alebo 6-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu;
m je celé číslo od 1 do 6; a n je celé číslo od 0 do 6.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín vytvárajú substituenty R4, R5 a atóm dusíka spoločne heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca
R23 kde m je celé číslo od 1 do 6; a substituent R23 je CH2OH, NRR', C(O)NRR' alebo COOR, kde substituent R je atóm vodíka alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín vytvárajú substituenty R4, R5 a atóm dusíka spoločne heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca
kde substituent R24 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR2s, CH2OR25, CH2NR26R27 alebo C(O)NHR26, kde substituent R25 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloarylová skupina; a substituenty R2& a R27 sú každý, nezávisle, vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L, kde V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; alebo substituenty R26, R27 a atóm dusíka spoločne tvoria 3-, 4-, 5- alebo 6-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má aspoň jeden zo substituentov R4 a R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec
kde gje O alebo 1;
T je C(O), O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 alebo NR17, kde substituent R17 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)Rig alebo -C(O)OR)g, kde substituent Ruje vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent Rí2 je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má aspoň jeden zo substituentov R4 a R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec -N(R2g)R29, kde substituenty R2g a R29 sú každý, nezávisle, substituovaný alebo nesubstituovaný karboxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný kyanoalkyl; alebo substituenty R2g a R29 spoločne s atómom dusíka tvoria 5- alebo 6-člennú substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má substituent R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec N(R3o)R3i, kde substituenty R30 a R31 sú každý, nezávisle, vodík, alkyl, alkoxykarbonyl, alkoxyalkyl, hydroxyalkyl a aminokarbonyl, kyanoskupina, alkylkarbonyl alebo arylalkyl.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má substituent R.5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec
X-N kde každé X je, nezávisle, CH alebo N; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má substituent R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec
R32 kde g je 0 alebo 1;
T je O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 alebo NR17, kde substituent Rn je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, C(O)NH2, -C(NH)NH2, -C(0)Ri7 alebo -C(O)ORig, kde substituent Rn je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má substituent R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec
g
R32 kde g je 0, 1 alebo 2; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má substituent R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec
T r32 g
kde
T je C(O), O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 alebo NR17, kde substituent R17 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, aryl, arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)Rig alebo -C(O)ORis, kde substituent R|g je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl;
g je 0 alebo 1; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má substituent R 5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec kde substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, alkylkarbonyl, substituovaná alebo nesubstituovaná tioalkoxyskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R33 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, perhalogénalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl.
Výhodná zlúčenina všeobecného vzorca I je tá, v ktorej substituent R3 je atóm vodíka; substituent R2 má všeobecný vzorec
kde m je 0 alebo 1;
substituenty R34, R35, R36, R37, R38, R39, Rio a R41 sú každý, nezávisle, metyl alebo atóm vodíka; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R34 a R35; R36 a R37; R38 a R39; alebo R40 a R41 dohromady sú atóm kyslíka;
substituent R42 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde Y je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; alebo substituent R42 má všeobecný vzorec
,R47 ~R4a ^7\ R43 N “R49
R50 kde u je O alebo 1;
substituenty R43, R44, R45, R46, R47, R48, R49 a R50 sú každý, nezávisle, metyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R43 a R44; R45 a R46; R47 a Rtg; alebo R49 a R50 dohromady sú atóm kyslíka; a substituent R5i je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L, kde V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
Výhodná zlúčenina všeobecného vzorca I je tá, v ktorej substituent R3 je vodík; substituent R2 má všeobecný vzorec
Reo
kde h, i, j, k a 1 sú nezávisle 0 alebo 1;
substituenty R52, R53, R54, R55, R56, R57, Rsg, R59, Rg a Rh sú každý, nezávisle, metyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R52 a R53; R54 a R55; R56 a R57; alebo R58 a R59 dohromady sú atóm kyslíka; a substituent R^o je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde Y je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CHýjp-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo
kde v je 0 alebo 1;
substituenty Réi, Ró?, Rô3, Rm, Rós, Róó, R$7 a R^s sú každý, nezávisle, nižší alkyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R^i a R^; R« a R64; R^ a R^; a Rô7 a R^g dohromady sú atóm kyslíka;
substituent R^g je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L, kde V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH-, -(CH2)P-, -S(O)2- a -(CH2)qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
Ďalšou výhodnou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej je substituent R3 vodík; substituent R2 je -Zl01-Z102, kde Z101 je kovalentná väzba, -(Ci-C6)-, -(Ci-C6)-O-,
-(Ci-C6)-C(O)-, -(CrCôj-qOjO-, -(CrC6-C(O)-NH-, -(Ci-C6-C(O)-N((C,-C6))- alebo substituovaný fenyl; a Z102 je vodík, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je Z101 vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -CH2-C(O)O-, -CH2-C(O)-, -CH2-C(O)-NH-, -CH2-C(O)-N(Me), -CH(Me)-C(O)O-, -(CH2)3-C(O)O-, -CH(Me)-C(O)-NH- a -(CH2)3-C(O)-NH-; a
Z je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z vodíka, metylu, etylu, AUV-metylaminoetylu, ΛζΛί-dietylaminoetylu, 2-fenyl-2-hydroxyetylu, morfolinoskupiny, piperazinylu, JV-metylpiperazinylu a 2-hydroxymetylpyrolidinylu.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec
alebo , kde Z100 je substituovaný alebo nesubstituovaný benzoxazolyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný benzotiazolyl.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec
alebo
,ci v ktorom se vyskytuje iba jeden substituent Ra a je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka alebo F.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je Z101 kovalentná väzba; a Z102 je prípadne substituovaný pyridyl.
Ďalšou výhodnejší zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej je substituent R3 vodík; substituent R2 je cyklopentyl; a G má všeobecný vzorec
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je Zuo vodík; A je O; a Z100 je prípadne substituovaný fenyl, furanyl alebo tienyl, pričom Z100 je prípadne substituované jedným alebo viacerými substituentami, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, COOH, NO2, OMe, -COOMe, OCF3 a CF3.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je Z110 vodík; A je -0-, -0-(CR2)n-C(0)alebo -O-fCRJn-O-; n v každom prípade je O až 3; Z100 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z cyklohexylu, fenylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, izoxazolylu a piperidinylu; pričom Z100 je prípadne substituovaná jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, alkoxyskupiny, halogénu, hydroxyskupiny a alkoxykarbonylu.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je substituent R2 prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z cyklobutylu a cyklohexylu.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je substituent R2 prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, alkylu, hydroxyalkylu, karboxyalkylu a fenylalkoxyalkylu.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je G 4-fenoxyfenyl.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je m 2; a je 0; substituent R^ je H; b je 1 alebo 2; a substituenty R4 a R5 sú každý H.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je m 0, 1 alebo 2; substitutent Rg je vodík; substituent R5 je vodík alebo Y-Z; kde Y je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z kovalentnej väzby, -C(O)-, -(CH2)qO-, -(CH2)q, -(CH2)qC(O)- alebo -C(O)(CH2)q-, kde alkylová časť skupín -(CH2)qO-, -(CH2)P-, -(CH2)qC(O)- a -C(O)(CH2)q- je prípadne substituovaná halogéneín, hydroxyskupinou alebo alkylovou skupinou; a Z je vodík, alkyl, prípadne substituovaný alkyl, alkoxyalkyl, prípadne substituovaný heterocykloalkyl, prípadne substituovaný heteroaryl alebo prípadne substituovaná aminoskupina.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je Z vybrané zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, metylu, etylu, hydroxymetylu, metoxyetylu, /V-metyl-piperidinylu, (Z-butoxykarbonyl)(hydroxy)piperidinylu, hydroxypiperidinylu, (hydroxymetyl)piperidinylu, (hydroxy)(metyl)piperidinylu, morfolinoskupiny, (metoxyetyl)piperizinylu, metylpiperizinylu, 4-piperidinylpiperidinylu, imidazolylu, metylimidazolylu, vV-metylaminoskupinv, M/ť-dimetylaminoskupiny, Ar-isopropyl-aminoskupiny, ΑίΛ-dietylaminoskupiny, 2,3-dihydroxypropylaminoskupiny, 2-hydroxyetylaminoskupiny, 3-hydroxypropylaminoskupiny, metoxyetyl-aminoskupiny, etoxykarbonylmetylaminoskupiny, fenylmetylaminoskupiny, W-metyl-W-metoxyaminoskupiny, , furanylmetylaminoskupiny, piperidinyletylaminoskupiny, W-(2-W,W-dimetylaminoetyl)-jV-metyl-aminoskupiny, 2-jV,Ar-dimetyl-aminoetylaminoskupiny, jV-metyl-W-(W-metyl-piperidín-4-yl)aminoskupiny, 2-morfolinoetylaminoskupiny, 3-morfolinopropyIaminoskupiny, 3-imidazolyl-propylaminoskupiny alebo 3-(2-oxopyrolidinyl)propylaminoskupiny.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je m rovné 2; substituent R5 je Y-Z; Y je
-C(O)-; a Z má všeobecný vzorec
R , v ktorom n je 0, 1, 2 alebo 3.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je substituent R4 vodík alebo metyl;
A je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z O, -N(R)- a -N(R)C(O)-;
Z11' je -(CH2)n-cykloalkyl-(CH2)n-;
substituent R je vodík alebo alkyl;
n je 0 až 5;
substituent Ra je jeden alebo viacej substituentov, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z H, OH, F, Cl, metylu a metoxyskupiny;
substituent Ri je jeden alebo viacej substituentov, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z H, CN, F, CF3, OCF3, metylu, metoxyskupiny a prípadne substituovanej aminoskupiny; a kde uvedená aminoskupina je prípadne substituovaná jednou alebo viacerými skupinami, pričom každá je nezávisle vybraná zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, alkoxyalkylu, fenylu, substituovaného fenylu a prípadne substituovaného heteroarylu.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je substituent Ri 4-metylfenyltioskupina alebo 2-pyridinyltioskupina.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má
G všeobecný vzorec kde Z100 je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z benzoffrjtiofénu, furanylu a tiofénu.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je substituent Ra alkoxyskupina; A je NHC(O)-; a medzi A a ΖΙθθ je kovalentná väzba.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má
G všeobecný vzorec
-(Co-C^
Aje vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -N(R)-C(O)-N(R)-, -(CH2)n-N(R)C(O)N(R)-, -N(R)a -N(R)-SO2-; substituent R je vodík alebo alkyl;
lebo oxazolyl;
> pyridinyl, tiazolyl, furanyl, benzofuranyl aX je S, O alebo NR1, kde substituent R1 v každom prípade je nezávisle vodík alebo Me;
substituent Ra je jeden alebo viacej substituentov, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z H a F; a substituent Ri je jeden alebo viacej substituentov, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z H, F, Cl, Br, NO2, CF3, alkylu, alkoxyskupiny a alkoxykarbonylu.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca 1 je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je substituent R4 metyl; m je 1,2 alebo 3; substituent R5 je Y-Z, kde Y je -C(O)O-, -C(O)- alebo -C(O)-(CH2)P-; a Z je aminoalkyl, Y-alkylaminoskupina, Α,Λ-dialkylaminoskupina alebo hydroxyalkylaminoalkyl.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je substituent R4 metyl; G má všeobecný vzorec T , kde n je 0 až 3; Zloa je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z indolylu, indenylu, metylindenylu, metylindolylu, dimetylaminofenylu, fenylu, cyklohexylu a benzofuranylu.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec
400
Z100 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z fenylu, imidazolylu, indolylu, furanylu, benzofuranylu a 2,3-dihydrobenzofuranylu; kde Z100 je prípadne substituovaná jedným alebo viacerými substituentami, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, Cl, CN, prípadne substituovaného alkylu, -O- (prípadne substituovaného alkylu), -COOH, -Z105-C(O)N(R)2, -Z105-N(R)-C(0)-Z2CO, -Z105-N(R)-S(O)2-Z200 a -Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z200;
Z105 je kovalentná väzba alebo (Ci-C^);
Z200 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z (Cj-Cď), fenylu a (Ci-C6)-fenylu;
Z110 a Z111 sú každý, nezávisle, kovalentná väzba alebo (C1-C3) prípadne substituovaná alkylom, hydroxyskupinou, COOH, CN alebo fenylom; a
A je O, -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)- alebo -N(R)-C(O)-, kde substituent R je H alebo alkyl.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je substituent R4 metyl.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec
Fa-z1“ , kde Z100 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z benzoxazolylu, benzotiazolylu a benzimidazolylu.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je substituent R4 metyl; A je -NH- ; v tomto prípade je tu iba jeden substituent Ra vybraný z H alebo F; a Z100 je prípadne substituovaná jedným alebo viacerými substituentami, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, halogénu, CF3 a alkoxyskupiny.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec
Z—A—Z—ZlM
Z100 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z fenylu, pyrolylu, pyridylu, benzimidazolylu, naftylu a
S kde Z100 je prípadne substituovaná jedným alebo viacerými substituentami, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, Cl, Br, NO2, aminoskupiny, N-alkylaminoskupiny, Ar,A-dialkylaminoskupiny, CN, prípadne substituovaného alkylu, -O- (prípadne substituovaného alkylu) a fenylu;
Z110 a Z111 v každom prípade je nezávisle (C0-C3) prípadne substituovaná prípadne substituovaným fenylom; a
A je -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-S(O)2-, -N(R)-C(O)-, -N(R)- alebo -N(R)-C(O)-O-.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je substituent R4 metyl a v tomto prípade je tu iba jeden substituent Ra a je to atóm fluóru.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec
Z100 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z fenylu, izoxazolylu, tetrahydronafthylu, furanylu, benzofuranylu, pyridylu a indolylu;
kde Z100 je prípadne substituovaná jedným alebo viacerými substituentami, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, CN, NO2, C(O)H, -CONH2, -NHSO2CF3, prípadne substituovaného alkylu, prípadne substituovaného heteroarylu a -O- (prípadne substituované alkylové skupiny);
Z110 a Z111 sú každý, nezávisle, prípadne substituovaná skupina (C0-C3); a
A je O, -N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-, -C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)-C(O) alebo -N(R)-.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je substituent R4 metyl; substituent Ra je H alebo metoxyskupina; a Z110 a Z111 sú každý nesubstituovaný.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec
kde substituent R je H alebo nižší alkyl a n v každom prípade je nezávisle 1 až 6.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyš šie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyš šie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je Z100 substituovaný alebo nesubstituo vaný fenyl.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyš šie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec , kde Ζ10θ je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z benzoxazolylu, benzotiazolylu a benzimidazolylu.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je n 2; substituent Rŕ je H; m je 1; r je 1; a substituenty R4 a R5 sú každý vodík.
Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca I je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, aplikovateľných, výhodných zlúčenín je G 4-fenoxyfenyl.
V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob inhibície aktivity jednej alebo viacerých proteínkináz u pacienta zahŕňajúci podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi. Výhodný spôsob je taký, v ktorom je proteínkináza vybraná zo skupiny pozostávajúcej zKDR, FGFR-1, PDGFR3, PDGFRa, IGF-1R, c-Met, Flt-1, Flt-4, TIE-2, TIE-1, Lck, Src, fyn, Lyn, Blk, hck, fgr a yes. Ďalší výhodný spôsob je taký, v ktorom je proteínkinázou proteínová serín/treonínkináza alebo proteínová tyrozínkináza. Výhodnejší spôsob je taký, v ktorom je proteínkinázou TIE-2 a ďalší výhodnejší spôsob je taký, v ktorom aktivita proteínkinázy zahŕňa aktiváciu T-buniek, B-buniek, degranuláciu žírnych buniek, aktiváciu monocytov, potenciáciu zápalovej odpovede alebo ich kombináciu.
V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob ovplyvnenia hyperproliferačných porúch u pacienta zahŕňajúci podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.
V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob ovplyvnenia angiogenézy u pacienta zahŕňajúci podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca 1 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi. Výhodný spôsob je taký, v ktorom zlúčenina alebo jej fyziologicky prijateľná soľ, proliečivo alebo biologicky aktívny metabolit je podaný v množstve, ktoré je schopné podporovať angiogenézu alebo vaskulogenézu. Výhodnejší spôsob je taký, v ktorom pacient trpí anémiou, ischémiou, infarktom, odvrhnutím transplantátu, zranením, gangrénou alebo nekrózou.
V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob ošetrenia jedného alebo viacerých ulkusov u pacienta zahŕňajúci podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi. Výhodný spôsob je taký, v ktorom sú ulkus alebo ulkusy spôsobené bakteriálnou alebo fungálnou infekciou; alebo ulkus alebo ulkusy sú Moorenove ulkusy; alebo ulkus alebo ulkusy sú symptómami ulceratívnej kolitídy.
V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob liečenia ochorenia pacienta zahŕňajúci podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi, kde daným ochorením je očné ochorenie, kardiovaskulárne ochorenie, rakovina, syndróm Crow-Fukasa (POEMS), diabetické ochorenie, kosáčikovitá anémia, chronický zápal, systémový lupus, glomerulonefritída, synovitída, zápalové črevné ochorenie, Crohnova choroba, glomerulonefritída, reumatoidná artritída, osteoartritída, roztrúsená skleróza, odvrhnutie štepu, Lymeská choroba, sepsa, von Hippelov-Lindauov syndróm, pemfigoid, psoriáza, Pagetova choroba, polycystické ochorenie obličiek, fibróza, sarkoidóza, cirhóza, tyreoiditída, hyperviskózny syndróm, Oslerova-Renduova-Weberova choroba, chronické okluzívne ochorenie pľúc, astma alebo edém po popáleninách, trauma, ožiarenie, mŕtvica, hypoxia alebo ischémia, ovariálny hyperstimulačný syndróm, preeklampsia, menometrorágia, endometrióza alebo infekcia vírusmi Herpes simplex a Herpes zoster, vírusom ľudskej imunodeficiencie, Parapoxvírusom, protozoom alebo toxoplazmózou.
Výhodný spôsob je taký, v ktorom je očným ochorením:
okulámy alebo makulámy edém, okuláme neovaskuláme ochorenie, skleritída, radiálna keratotómia, uveitída, vitritída, myopia, fyziologická exkavácia papily, chronické odlúčenie sietnice, komplikácie po ošetrení laserom, konjunktivítída, Stargardtova choroba a Ealesova choroba, retinopatia alebo makuláma degenerácia;
kardiovaskulárnym ochorením:
ateroskleróza, restenóza, ischémia/reperfuzne poškodenie, vaskuláma oklúzia alebo karotické obštruktívne ochorenie;
rakovinou:
pevný nádor, sarkóm, fíbrosarkóm, osteóm, melanóm, retinoblastóm, rabdomyosarkóm, glioblastóm, neuroblastóm, teratokarcinóm, hematopoetické zhubné bujnenie, Kaposiho sarkóm, Hodgkinsova choroba, lymfóm, myelóm, leukémia alebo malígny ascites; a diabetické ochorenie:
inzulín-dependentný diabetes mellitus so zeleným zákalom očí, diabetická retinopatia alebo mikroangiopatia.
V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob zníženia fertility u pacienta, pričom tento spôsob zahŕňa podanie účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívneho metabolitu pacientovi.
V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob, kde sa zlúčenina všeobecného vzorca I alebo jej fyziologicky prijateľná soľ, proliečivo alebo biologicky aktívny metabolit podáva v kombinácii s proangiogénnym rastovým faktorom. Výhodný spôsob je taký, v ktorom proangiogénny rastový faktor je vybraný zo skupiny pozostávajúcej zVEGF, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, HGF, FGF-1, FGF-2, ich derivátov a antiidiotypových protilátok.
Detailný opis vynálezu
V rámci jedného uskutočnenia poskytuje predložený vynález zlúčeniny všeobecného vzorca I uvedené vyššie. Špecifikácie substituentov vo výhodných skupinách zlúčenín všeobecného vzorca I sú uvedené nižšie.
Výhodne je substituent Ri vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, z /-butylu, pyridylu, substituovaného alebo nesubstituovaného oxazolylu, substituovaného alebo nesubstituovaného benzylu, substituovaného alebo nesubstituovaného benzénsulfonylu, substituovanej alebo nesubstituovanej fenoxyskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, karboxylu, substituovaného a nesubstituovaného tetrazolylu, substituovaného a nesubstituovaného styrylu, substituovanej a nesubstituovanej aryltioskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej tioalkoxyskupiny, substituovanej a nesubstituovanej heteroaryltioskupiny; CH2ORc, kde substituent Rc je atóm vodíka alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl alebo aryl; a
-W-(CH2)t-NRdRe, kde t je celé číslo od 1 do 6; W je priama väzba, O, S, S(O), S(O)? alebo NRf, kde substituent Rf je vodík alebo alkyl a substituenty Rj a Re sú nezávisle vodík, alkyl, alkanoyl alebo SO2-alkyl; alebo substituenty Rd, Rť a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, vytvárajú 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh.
Výhodne je substituent Ra vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, t-butylu, pyridylu, substituovaného alebo nesubstituovaného oxazolylu, substituovaného alebo nesubstituovaného benzylu, substituovaného alebo nesubstituovaného benzénsulfonylu, substituovanej alebo nesubstituovanej fenoxyskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej tioalkoxyskupiny, karboxylu, substituovaného a nesubstituovaného tetrazolylu, substituovaného a nesubstituovaného styrylu, substituovanej a nesubstituovanej aryltioskupiny, substituovanej a nesubstituovanej heteroaryltioskupiny; CH2ORc, kde substituent Rc je vodík alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl alebo aryl; a -W-(CH2)t-NRdRe, kde t je celé číslo od 1 do 6; W je priama väzba, O, S, S(O), S(O)2 alebo NRf, kde substituent Rf je vodík alebo alkyl a substituenty Rd a Re sú nezávisle vodík, alkyl, alkanoyl alebo SO2-alkyl; alebo substituenty Rd, R« a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, vytvárajú 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh.
Zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu existovať ako soli s ťarmaceuticky prijateľnými kyselinami. Predložený vynález zahŕňa tiež tieto soli. Príklady týchto solí zahŕňajú hydrochloridy, hydrobromidy, sulfáty, metánsulfonáty, nitráty, maleáty, acetáty, citráty, fumaráty, tartráty [napr. (+)-tartráty, (-)-tartráty alebo ich zmesi, vrátane racemických zmesí], sukcináty, benzoáty a soli s aminokyselinami, napr. glutámová kyselina. Tieto soli môžu byť pripravené štandardnými spôsobmi.
Určité zlúčeniny všeobecného vzorca I, ktoré maj í kyslé substituenty, môžu existovať ako soli s ťarmaceuticky prijateľnými zásadami. Predložený vynález zahŕňa tieto soli. Príklady takýchto solí zahŕňajú sodné, draselné, lyzínové a arginínové soli. Tieto soli môžu byť pripravené štandardnými spôsobmi.
Určité zlúčeniny všeobecného vzorca I a ich soli môžu existovať vo viac než jednej kryštalickej forme a predložený vynález zahŕňa každú túto kryštalickú formu a ich zmesi.
Určité zlúčeniny všeobecného vzorca I a ich soli môžu tiež existovať vo forme solvátov, napr. hydrátov, a predložený vynález zahŕňa každý tento solvát a ich zmesi.
Určité zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu obsahovať jedno alebo viacero chirálnych centier, a teda existujú v rôznych opticky aktívnych formách. Keď zlúčeniny všeobecného vzorca 1 obsahujú jedno chirálne centrum, potom zlúčeniny existujú v dvoch enantiomémych formách a predložený vynález zahŕňa oba enantioméry a zmesí enantiomérov, napr. racemické zmesi. Enantioméry môžu byť rozdelné štandardnými spôsobmi, napr. tvorbou diastereoizomémych solí, ktoré môžu byť separované, napr. kryštalizáciou; tvorbou diastereoizomémych derivátov alebo komplexov, ktoré môžu byť separované, napr. kryštalizáciou, GLC alebo LC; selektívnou reakciou jedného enantioméru s enantioméme selektívnym činidlom, napr. enzymatickou esterifíkáciou; alebo GLC alebo LC v chirálnom prostredí, napr. na chiráinom pomocnom médiu, napr. silikagél s viazaným chirálnym ligandom alebo v prítomnosti chirálneho rozpúšťadla. Tam, kde je požadovaný enantiomér konvertovaný na inú chemickú entitu jedným z vyššie uvedených spôsobov, je potrebný ďalší krok na uvoľnenie požadovanej enantiomémej formy alebo môžu byť špecifické enantioméry syntetizované asymetrickou syntézou pomocou opticky aktívnych činidiel, substrátov, katalyzátorov alebo rozpúšťadiel alebo konvertovaním jedného enantioméru na druhý asymetrickou transformáciou.
Keď zlúčenina všeobecného vzorca I obsahuje viac než jedno chirálne centrum, môže existovať v diastereoizomémych formách. Diastereoizoméme páry môžu byť separované štandardnými spôsobmi, napr. chromatografiou alebo kryštalizáciou a jednotlivé enantioméry v každom páre môžu byť separované vyššie uvedenými spôsobmi. Predložený vynález zahŕňa každý diastereoizomér zlúčenín všeobecného vzorca I a ich zmesi.
Určité zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu existovať v rôznych tautomémych formách alebo ako rôzne geometrické izoméry a predložený vynález zahŕňa každý tento tautomér a/alebo geometrický izomér zlúčenín všeobecného vzorca I a ich zmesi.
Určité zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu existovať v rôznych stabilných konformačných formách, ktoré môžu byť separovateľné. Torzná asymetria vďaka obmedzenej rotácii okolo asymetrickej jednoduchej väzby, napr. kvôli stérickému bráneniu alebo napätiu kruhu, môže uľahčiť separáciu rôznych konformérov. Predložený vynález zahŕňa každý tento konformačný izomér zlúčenín všeobecného vzorca I a ich zmesí.
Určité zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu existovať vo forme zwitteriónu a predložený vynález zahŕňa každú formu zwitteriónu zlúčenín všeobecného vzorca I a ich zmesí.
Heteroaromatické skupiny používané v predloženom vynáleze zahŕňajú heteroarylové kruhové systémy (napr. pre názornosť, nie však limitujúc rozsah vynálezu: tienyl, pyridyl, pyrazol, izoxazolyl, tiadiazolyl, oxadiazolyl, indazolyl, furány, pyroly, imidazoly, pyrazoly, triazoly, pyrimidíny, pyrazíny, tiazoly, izotiazoly, oxazolyl alebo tetrazoly) a heteroarylové kruhové systémy, v ktorých karbocyklický aromatický kruh, karbocyklický nearomatický kruh alebo heteroarylový kruh je kondenzovaný na jeden alebo viacej ďalších heteroarylových kruhov (napr. pre názornosť, nie však limitujúc rozsah vynálezu: benzo[b]tienyl, benzimidazolyl, benzoxazolyl, benzotiazolyl, benzotiadiazolyl, benzoxadiazolyl, indol, tetrahydroindol, azaindol, indazol, chinolín, imidazopyridín, chinazolín, purín, pyrolo[2,3-ri]pyrimidín, pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín) a ich A’-oxidy. Substituované heteroarylové skupiny sú výhodne substituované j edným alebo viacerými substituentami, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, hydroxyskupiny, alkylu, alkoxyskupiny, alkyl-O-C(O)-, alkoxyalkylu, heterocykloalkylovej skupiny, prípadne substituovaného fenylu, nitroskupiny, aminoskupiny, monosubstituovanej aminoskupiny alebo disubstituovanej aminoskupiny.
Termín heterocyklická (heterocyklyl) skupina, ako sa používa v predloženom vynáleze, sa vzťahuje na heteroarylovú i heterocykloalkylovú skupinu.
Termín hetérobicyklická skupina, ako sa používa v predloženom vynáleze, sa vzťahuje na bicyklickú skupinu, ktorá má jeden alebo viacej heteroatómov, ktoré sú nasýtené, čiastočne nasýtené alebo nenasýtené.
Termín arylalkylovú skupina, ako sa používa v predloženom vynáleze, sa vzťahuje na aromatický substituent, ktorý je pripojený ku zlúčenine alifatickou skupinou, ktorá má jeden až asi šesť atómov uhlíka. Výhodnou arylalkylovou skupinou je benzylová skupina.
Termín heteroaralkylová skupina, ako sa používa v predloženom vynáleze, je heteroaromatický substituent, ktorý je pripojený na zlúčeninu alifatickou skupinou, ktorá má jeden až šesť atómov uhlíka.
Termín heterocykloalkylová skupina, sa používa v predloženom vynáleze, sa vzťahuje na nearomatický kruhový systém, ktorý má 3 až 8 atómov a zahŕňa aspoň jeden heteroatóm, napr. atóm dusíka, kyslíka alebo síry.
Alifatické skupiny alebo označenie, napr. „Co-Cg“, zahŕňajú lineárne, rozvetvené alebo cyklické uhľovodíky, ktoré sú úplne nasýtené alebo obsahujú jednu alebo viacej jednotiek nenasýtenosti. Keď je skupina Co, znamená to, že tu nie je žiadna časť alebo inými slovami to znamená väzbu.
Termín aromatické skupiny (alebo arylové skupiny) zahŕňajú aromatické karbocyklické kruhové systémy (napr. fenyl) a kondenzované polycyklické aromatické kruhové systémy (napr. naftyl a 1,2,3,4-tetrahydronaftyl).
Termín acyloxyskupiny zahŕňa -OC(O)R.
Termín „prirodzená aminokyselina“ sa vzťahuje na 23 známych prirodzených aminokyselín, ktoré sú (označené svojimi skratkami): Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Cys-Cys, Glu, Gin, Gly, His, Hyl, Hyp, íle, Leu, Lys, Met, Phe, Pre, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val. Termín neprirodzené aminokyseliny sa vzťahuje na zlúčeniny všeobecného vzorca NH2-(C(X)2)n-COOH, ktoré sú a(keď n je 1) alebo β- (keď n je 2) aminokyseliny, pričom X v každom prípade je nezávisle akákoľvek časť postranného reťazca, ako iste odborník v odbore pozná; príklady neprirodzených aminokyselín zahŕňajú, ale nie je to nijako limitované; hydroxyprolín, homoprolín, 4-aminofenylalanín, P-(2-naftyl)alanín, norleucín, cyklohexylalanín, P-(3-pyridinyl)alanín, P-(4-pyridinyljalanín, α-aminoizobutyrovú kyselinu, urokánovú kyselinu, N, V-tetrametylamidino-histidín, /V-metylalanín, V-metylglycín, yV-metylglutámovú kyselinu, Zerc-butylglycín, a-aminobutyrovú kyselinu, ŕerc-butylalanín, omitín, α-aminoizobutyrovú kyselinu, β-alanín, γ-aminobutyrovú kyselinu, 5-aminovalérovú kyselinu, 12-aminododekánovú kyselinu, 2-aminoindán-2-karboxylovú kyselinu, atd. a ich deriváty, najmä tie, v ktorých je dusík amínovej skupiny mono- alebo di-alkylovaný.
Ako sa tu používa, veľa častí alebo substituentov je označených buď ako „substituované alebo nesubstituované“ alebo „prípadne substituované“. Keď je časť modifikovaná jedným z týchto termínov, znamená to, že akákoľvek časť, o ktorej je v odbore známe, že má schopnosť byť substituovaná, môže byť substituovaná, čo znamená jedným alebo viacerými substituentami, a keď je substituovaná viac než jedným substituentom, je tento substituent nezávisle vybraný. Spôsoby substitúcie sú známe a/alebo môžu byť využité spôsoby podľa predloženého vynálezu. Pre názornosť, nie však limitujúc rozsah vynálezu, niektoré príklady skupín, ktoré sú substituentami, sú: alkylové skupiny (ktoré môžu byť samy substituované, napr. -Ci-Cé-alkyl-OR, -Ci-C6-alkyl-N(R)2 a CF3), alkoxyskupinu (ktorá môže byť sama substituovaná, napr.
-O-Ci-Cň-alkyl-OR, -O-Ci-C6-alkyl-N(R)2 a OCF3), halogén alebo halogénové skupiny (F, Cl, Br, 1), hydroxyskupinu, nitroskupinu, oxoskupinu, CN, COOH, COH, aminoskupinu, V-alkylaminoskupinu alebo V,Ar-dialkylaminoskupinu (v ktorej môžu byť alkylové skupiny tiež substituované), estery (-C(O)-OR, kde substituent R sú napr. skupiny vybrané z alkylovej skupiny, arylovej skupiny, atď., ktoré môžu byť substituované), arylovú skupinu (najvýhodnejšie fenyl, ktorý môže byť substituovaný) a arylalkylovú skupinu (ktorá môže byť substituovaná).
Vhodné spôsoby syntézy zlúčenín všeobecného vzorca I sú uvedené v schémach I-XII,
V schéme I je uvedená konverzia 3-halogén-4-chlórpyrazolopyrimidínu na JVl-substituovaný
3- aryl-4-aminopyrazolopyrimidín. V schéme II je uvedená substitúcia v polohe V-l 3-halogén-4-aminopyrazolopyrimidínu a nahradenie halogénu arylovou skupinou. V schéme III je uvedená substitúcia na V-l 3-aryl-4-aminopyrazolopyrimidínu. V schéme IV je uvedená konverzia
4- hydroxypyrazolopyrimidínu na 1-substituovaný 3-bróm-4-chlórpyrazolopyrimidín. V schéme
V je uvedená tvorba pyrazolopyrimidínového jadra. V schéme VI je uvedená tvorba 3-aryl-4-aminopyrazolopyrimidínu. V schéme VII je uvedené ďalšie spracovanie V-l substituenta. P znamená vhodnú skupinu chrániacu aminoskupinu. V schéme VIII je uvedená príprava arylboronátov používaných podľa schémy I. V schémach IX a X je uvedená modifikácia V-l substituenta. V schéme XI je uvedená funkcionalizácia 3-arylovej skupiny. V schémach I-XI môže byť pri uskutočňovaní reakcií potrebné uskutočniť chránenie alebo odstránenie ochranných skupín z neparticipujúcich funkčných skupín podľa štandardných postupov.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu majú antiangiogénne vlastnosti. Tieto antiangiogénne vlastnosti sú spôsobené aspoň čiastočne inhibíciou proteínových tyrozínkináz esenciálnych pre angiogénny proces. Z tohto dôvodu sa môžu tieto zlúčeniny používať ako aktívne činidlá proti ochoreniam, napr. artritíde, ateroskleróze, restenóze, psoriáze, hemangiómom, angiogenéze myokardu, koronárnym a cerebrálnym kolaterálam, ischemickej limbickej angiogenéze, ischémii/reperfúznemu poškodeniu, pri hojení rán, proti peptickému vredu súvisiacemu s Helicobacter, vírusovo indukovaným angiogénnym poruchám, fraktúre, syndrómu CrowFukase (POEMS), preeklampsii, menometrorágii, horúčke z mačacieho škrabnutia, rubeóze, neovaskulámemu glaukómu a retinopatiám, napr. tým, ktoré súvisia s diabetickou retinopatiou, retinopatiou nedonosených alebo makulámou degeneráciou súvisiacou s vekom. Dalej môžu byť niektoré z týchto zlúčenín používané ako aktívne činidlá proti pevným nádorom, malígnemu ascites, von Hippel-Lindauovej chorobe, hematopoetickým rakovinám a hyperproliferačným poruchám, napr. tyreotropnej hyperplázii (najmä Gravesova choroba) a cystám (napr. hy61 pervaskularita ovariálnej stromy príznačná pre polycystický ovariálny syndróm (SteinovLeventhalov syndróm a polycystické ochorenie obličiek).
Ďalej môžu byť niektoré z týchto zlúčenín používáné ako aktívne činidlá proti popáleninám, chronickému pľúcnemu ochoreniu, mŕtvici, polypom, anaíylaxii, chronickému a alergickému zápalu, oneskorenému typu hypersenzitivity, ovariálnemu hyperstimulačnému syndrómu, cerebrálnemu edému súvisiacemu s mozgovým nádorom, výškovej chorobe, traume alebo cerebrálnemu alebo pulmonálnemu edému vyvolaného hypoxiou alebo traumou, očnému alebo makulámemu edému, ascites, glomerulonefŕitíde a ďalším ochoreniam, pri ktorých je prejavom ochorenia vaskuláma hyperpermeabilita, eíuzia, exsudáty, proteínový extravazát alebo edém. Zlúčeniny budú tiež účinné pri liečení porúch, pri ktorých proteínová extravazácia povedie k ukladaniu fibrínu a extracelulámej matrix, podpore stromálnej proliferácie (napr. keloid, fibróza, cirhóza a syndróm karpálneho tunela). Zvýšená tvorba VEGF potenciuje zápalové procesy, napr. posilnenie a aktiváciu monocytu. Zlúčeniny podľa tohto vynálezu budú tiež účinné pri liečení zápalových porúch, napr. zápalového črevného ochorenia (IBD) a Crohnovej choroby.
Syntéza
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa môžu pripraviť podľa spôsobov uvedených v nasledujúcich schémach I-XI.
PÚ3P,DEAD.
........- ' -'— f
ROH, THF
Pd°, Arf3(OH)2j alebo Ar8(OR)2
->DME, H2O, reflux
Pd°, Ar8(OH)2 aleboArB(OR)2 DME, H2O, refiux ||^
Schéma ra
Schéma VH
Schéma V1ÍI
Ar-Br
Ar-Br
1) n-BuLi,THF
2) Β(Ο!Ργ)3,
3) HCI
(dppf)PdCI2 k-
DMF, KOAc,
80°C
At-B(OH)2
Schéma X
Na(OAc)3BH, HOAc CICHjCHjCI
Výhodný spôsob prípravy zlúčenín podľa predloženého vynálezu zahŕňa prípravu 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového medziproduktu (IV) (viď schéma XII). Uvedený spôsob zahŕňa reakciu chloridu kyseliny (II) s (4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilínom (III) v prítomnosti aprotickej zásady. Typicky chlorid kyseliny (II) a (4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilín (III) sa rozpustí v organickom rozpúšťadle v približne ekvivalentných molámych množstvách. Do roztoku sa pridá asi 1 ekviv. k asi 2 ekviv. aprotickej zásady. Výhodne sa roztok ochladí na teplotu v rozmedzí od -10 °C do asi 10 °C, pred pridaním zásady. Zásada sa pridáva do roztoku po kvapkách. Po pridaní sa roztok mieša pri izbovej teplote, pokiaľ reakcia nedobehne (podľa TLC, HPLC alebo iných štandardných techník). Typicky je reakcia hotová po od asi 10 hodín do asi 26 hodín.
SchémaXII: Spôsob prípravy 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového medziproduktu
Na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca I je možné použiť 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový medziprodukt (IV), ktorý sa nechá reagovať s 3-jód-lH-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidínom (V) v prítomnosti tetrakis(trifenylfosfín)paládia a uhličitanu sodného (viď schéma XIII). 3-Jód-lŕ/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín (V) v polárnom organickom rozpúšťadle, napr. éteri, sa nechá reagovať s vodnou zmesou 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového medziproduktu (IV), tetrakis(trifenylfosfin)paládia a uhličitanu sodného. Typicky je 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový medziprodukt (IV) prítomný v roztoku v množstve asi 1 ekviv. až asi 1,5 ekviv., tetrakis(trifenylfosfín)paládium v množstve od asi 0,01 ekviv. do asi 0,1 ekviv. a uhličitan sodný v množstve od 1,5 ekviv. do asi 3 ekviv. vzhľadom na 3-jód-l/7-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidínu (V). Roztok sa zahrieva pri teplote v rozmedzí od asi 50 °C do asi 100 °C. Reakcia sa sleduje TLC, HPLC alebo inými štandardnými technikami. Typicky je reakcia hotová po od asi 16 hodín do asi 30 hodín.
r2
Schéma XIII: Spôsob prípravy zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorých ZI1O-A-ZIH je NHC(O)-.
Zlúčeniny všeobecného vzorca (II) je možné pripraviť reakciou karboxylovej kyseliny reprezentovanej všeobecným vzorcom (VI) s oxalylchloridom v prítomnosti aprotickej zásady.
o
HO ^Zwo VI.
Vo výhodnom uskutočnení je Z100 indolyl, ktorý je prípadne substituovaný substituentom R1 v spôsoboch zo schém XII a XIII a v spôsobe prípravy chloridu kyseliny (II). Vo výhodnejšom uskutočnení je Z100 l-metyl-indol-2-yl alebo l-metyl-indol-3-yl v spôsoboch zo schém XII a XIII a v spôsobe prípravy chloridu kyseliny (II).
V ďalšom výhodnom uskutočnení je v spôsoboch zo schém XII a XIII a v spôsobe prípravy chloridu kyseliny (II) Z100 indolyl, ktorý je prípadne substituovaný substituentom Ri;
(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilín je reprezentovaný vzorcom (VII)
6Ί
a 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový medziprodukt je reprezentovaný vzorcom (VIII)
a pripravené zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť reprezentované vzorcom (IX)
IX.
Vo výhodnejšom uskutočnení je v spôsoboch zo schém XII a XIII a v spôsobe prípravy chloridu kyseliny Z100 1 -metyl-indol-2-yl alebo l-metylindol-3-yl; (4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilín je reprezentovaný vzorcom (VII); a 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový medziprodukt je reprezentovaný vzorcom (X)
a pripravené zlúčeniny vynálezu môžu byť reprezentované vzorcom (XI) o
Ha
XI.
Vo výhodnejšom uskutočnení je v ktoromkoľvek z vyššie uvedených spôsobov substituent R2 4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl.
VEGF sú unikátne v tom, že sú jedinými angiogénnymi rastovými faktormi, o ktorých sa vie, že prispievajú k vaskulámej hyperpermeabilite a tvorbe edému. Zdá sa, že vaskuláma hyperpermeabilita a edém, ktoré súvisia s expresiou alebo aplikáciou mnohých ďalších rastových faktorov, môžu byť sprostredkované tvorbou VEGF. Zápalové cytokíny stimulujú tvorbu VEGF. Hypoxia vedie k značnej nadregulácii VEGF v mnohých tkanivách, a teda stavy zahŕňajúce infarkt, oklúziu, ischémiu, anémiu alebo poruchu krvného obehu typicky využívajú od69 povede sprostredkované VEGF/VPF. Vaskuláma hyperpermeabilita, súvisiaci edém, zmenená transendoteliálna výmena a makromolekulámy extravazát, ktorý je často sprevádzaný diapedézou, môžu mať za následok nadbytok depozície matrix, aberantnú stromálnu proliferáciu, fibrózu, atď. Teda hyperpermeabilita sprostredkovaná VEGF môže výrazne prispievať k poruchám s týmito etiologickými rysmi.
Pretože implantácia blastocytov, vývoj placenty a embryogenéza sú závislé od angiogenézy, sú určité zlúčeniny podľa predloženého vynálezu účinné ako kontraceptíva a antifertilizačné činidlá.
Predpokladá sa, že poruchy opísané vyššie sú sprostredkované výrazným nadbytkom aktivity proteínovej tyrozínkinázy zahŕňajúcej KDR/VEGFR-2 a/alebo Flt-1/VEGFR-1 a/alebo TIE-2 tyrozínkinázy. Inhibíciou aktivity týchto tyrozínkináz je inhibovaná progresia uvedených porúch, pretože angiogénna zložka alebo zložka vaskulámej hyperpermeability ochorenia je kriticky znížená. Účinok určitých zlúčenín podľa predloženého vynálezu daný ich selektivitou pre špecifické tyrozínkinázy vedie k minimalizácii vedľajších účinkov, ktoré by sa mohli vyskytovať, pokiaľ by boli používané inhibítory tyrozínkináz s menšou selektivitou. Určité zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú tiež účinnými inhibítormi FGFR, PDGFR, c-Met a IGF-1-R. Tieto receptorové kinázy môžu priamo alebo nepriamo zosilňovať angiogénne a hyperproliferačné odpovede pri rôznych poruchách, a teda ich inhibícia môže brániť progresii ochorenia.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu majú inhibičnú aktivitu proti proteínkinázam, čo znamená, že tieto zlúčeniny modulujú signálnu transdukciu proteínkináz. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu inhibujú proteínkinázy z rodiny serín/treonínkináz a tyrozínkináz. Obzvlášť tieto zlúčeniny selektívne inhibujú aktivitu KDR/FLK-1/VEGFR-2 tyrozínkináz. Určité zlúčeniny podľa predloženého vynálezu tiež inhibujú aktivitu ďalších tyrozínkináz, napr. Flt-1/VEGFR-1, Flt-4, Tie-1, Tie-2, FGFR, PDGFR, IGF-1R, c-Met, Src-podrodinu kináz, napr. Lck, hck, fgr, Src, fyn, yes, etc. Ďalej niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu signifikantne inhibujú serín/treonínkinázy, napr. PKC, MAP kinázy, erk, CDKs, Plk-1 alebo Raf-1, ktoré hrajú významnú úlohu pri bunkovej proliferácii a progresii bunkového cyklu. Účinnosť a špecifita generických zlúčenín podľa tohto vynálezu najmä proti proteínkinázam môže byť často zmenená a optimalizovaná obmenami v charaktere, počte a usporiadaní substituentov (tzn. R], R2, R3, A a kruh 1) a konformačnými reštrikciami. Navyše metabolity určitých zlúčenín môžu mať tiež signifikantnú inhibičnú aktivitu proti proteínkinázam.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, keď sú podávané jedincom, ktorí takúto zlúčeninu potrebujú, inhibujú vaskulámu hyperpermeabilitu a tvorbu edému u týchto jedincov. Predpokladá sa, že tieto zlúčeniny pôsobia inhibíciou aktivity KDR tyrozínkinázy, ktorá sa zúčastňuje na procese vaskulámej hyperpermeability a tvorby edému. KDR tyrozínkináza môže byť tiež označovaná ako FLK-1 tyrozínkináza, NYK tyrozínkináza alebo VEGFR-2 tyrozínkináza. KDR tyrozínkináza je aktivovaná naviazaním rastového faktora vaskulámych endoteliálnych buniek (VEGFR) alebo iného aktivovaného Ugandu (napr. VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E alebo HIV Tat proteín) na KDR receptorovú tyrozínkinázu, ktorá sa nachádza na povrchu vaskulárnych endoteliálnych buniek. Po aktivácii KDR tyrozínkinázy nastane hyperpermeabilita krvných ciev a tekutina putuje z krvného riečiska cez steny krvných ciev do intersticiálnych priestorov, a tým vytvára oblasť edému. Túto formu odpovede tiež často sprevádza diapedéza. Podobne, nadbytok vaskulámej hyperpermeability môže narušiť normálnu molekulárnu výmenu cez endotel v kritických tkanivách a orgánoch (napr. pľúca a obličky), čím spôsobuje makromolekulámy extravazát a depozíciu. Po tejto akútnej odpovedi na stimuláciu KDR, o ktorej sa predpokladá, že podporuje nasledujúci angiogénny proces, prolongovaná stimulácia KDR tyrozínkinázy vedie k proliferácii a chemotaxii vaskulámych endoteliálnych buniek a tvorbe nových ciev. Inhibíciou aktivity KDR tyrozínkinázy uskutočnenou buď blokovaním produkcie aktivujúceho Ugandu, blokovaním väzby aktivujúceho Ugandu na receptor KDR tyrozínkinázy, zabránením dimerizácie a transfosforylácie receptora, inhibíciou enzýmovej aktivity KDR tyrozínkinázy (inhibíciou fosforylačnej funkcie enzýmu) alebo niektorým iným mechanizmom, ktorý preruší danú downstreamovú signálnu dráhu (D. Mukhopedhyay et al., Cancer Res. 55:12781284 (1998) a súvisiace odkazy), môže byť inhibovaná a minimalizovaná hyperpermeabilita, ako aj s tým súvisiaca extravazácia, následná tvorba edému a depozícia matrix a angiogénne odpovede.
Jedna skupina výhodných zlúčenín podľa predloženého vynálezu má schopnosť inhibovať aktivitu KDR tyrozínkinázy bez signifikantnej inhibície aktivity Flt-1 tyrozínkinázy (Flt-1 tyrozínkináza je tiež označovaná ako VEGFR-1 tyrozínkináza). Ako KDR tyrozínkináza, tak aj Flt-1 tyrozínkináza sú aktivované väzbou VEGF na receptory KDR tyrozínkinázy, respektíve na receptory Flt-1 tyrozínkinázy. Určité výhodné zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú jedinečné v tom zmysle, že inhibujú aktivitu jednej VEGF-receptorovej tyrozínkinázy (KDR), ktorá je aktivovaná aktivujúcimi ligandami, ale neinhibujú ďalšie receptorové tyrozínkinázy, napr. Flt-1, ktoré sú tiež aktivované určitými aktivujúcimi ligandami. Preto sú výhodné zlúčeniny podľa predloženého vynálezu selektívnymi inhibítormi aktivity tyrozínkinázy.
V rámci jedného uskutočnenia poskytuje predložený vynález spôsob liečenia ochorení u pacienta, ktoré sú sprostredkované proteínkinázou, zahŕňajúci podanie terapeuticky alebo profylaktický účinného množstva jednej alebo viacerých zlúčenín všeobecného vzorca I pacientovi.
Termín „ochorenie sprostredkované proteínkinázou“ alebo „ochorenie sprostredkované aktivitou proteínkinázy“ je choroba, ako napr. ochorenie alebo ďalšie nežiaduce fyzické stavy, v ktorých genéza alebo progresia závisia aspoň čiastočne od aktivity aspoň jednej proteínkinázy. Proteínkináza môže byť napr. proteínová tyrozínkináza alebo proteínová serín/treonínkináza.
Pacient, ktorý má byť liečený, môže byť akýkoľvek zvierací subjekt, výhodne cicavec, napr. zdomácnené alebo hospodárske zvieratá. Výhodne je pacientom ľudský subjekt.
Termín „terapeuticky účinné množstvo“ je množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo kombinácia dvoch alebo viacerých takých zlúčenín, ktoré inhibuje úplne alebo čiastočne progresiu ochorenia alebo zlepšuje aspoň čiastočne jeden alebo viac symptómov ochorenia. Terapeuticky účinné množstvo môže byť také množstvo, ktoré je profylaktický účinné. Množstvo, ktoré je terapeuticky aktívne, bude závisieť od hmotnosti pacienta, pohlavia, ochorenia, ktoré sa má liečiť, závažnosti ochorenia a požadovaného výsledku. Pre konkrétnych pacientov bude terapeuticky účinné množstvo stanovené štandardným spôsobom.
Spôsob podľa predloženého vynálezu je účinný pri liečení ochorení sprostredkovaných proteínkinázou, napr. akékoľvek vyššie uvedené ochorenie. V rámci jedného uskutočnenia je ochorenie sprostredkované proteínkinázou charakterizované nežiaducou angiogenézou, edémom alebo stromálnou depozíciou. Napríklad ochorením môže byť jeden alebo viac ulkusov, napr. ulkusy spôsobené bakteriálnymi alebo plesňovými infekciami, Moorenove ulkusy a ulceratívna kolitída. Ochorenie môže byť tiež spôsobené mikrobiálnou infekciou, napr. Lymskou chorobou, sepsou, septickým šokom alebo infekciou spôsobenou Herpes simplex, Herpes Zoster, vírusom Hl V spôsobujúcim syndróm získaného zlyhania imunity, protozoom, toxoplazmózou alebo Parapoxvírusom; angiogénnymi poruchami, napr. Hippel-Lindauovou chorobou, polycystickým ochorením obličiek, pemfigoidom, Pagetovou chorobou a psoriázou; reprodukčným ochorením, napr. endometriózou, syndrómom ovariálnej hyperstimulácie, preeklampsiou alebo menometrorágiou; fibrotickým a edémickým ochorením, napr. sarkoidózou, fibrózou, cirhózou, tyreoiditídou, systémovým hyperviskóznym syndrómom, Osler-Weber-Renduovou chorobou, chronic72 kým okluzívnym ochorením pľúc, astmou a edémom po traume, popáleninami, ožiarením, mŕtvicou, hypoxiou alebo ischémiou; alebo zápalovým/imunologickým ochorením, napr. systémový’ lupus, chronický zápal, glomerulonefritída, synovitída, zápalové ochorenie čriev, Crohnova choroba, reumatoidná artritída, osteoartritída, roztrúsená skleróza a odvrhnutie štepu. Príslušné ochorenia sprostredkované proteínkinázou tiež zahŕňajú kosáčikovitú anémiu, osteoporózu, osteopetrózu, hyperkalcémiu indukovanú nádorom a kostnou metastázou. Ďalšie ochorenia sprostredkované proteínkinázou, ktoré môžu byť liečené spôsobom podľa predloženého vynálezu, zahŕňajú ochorenia očí, napr. okulámy alebo makulámy edém, okuláme neovaskuláme ochorenie, skleritída, radiálna keratotómia, uveitída, vitritída, myopia, fyziologická exkavácia papily, chronické odlúčenie sietnice, komplikácie po ošetrení laserom, konjunktivitída, Stargardtova choroba a Ealesova choroba, na dôvažok k retinopatii a makulámej degenerácii.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú tiež účinné pri liečení kardiovaskulárnych ochorení, napr. aterosklerózy, restenózy, vaskulámej oklúzie a karotického obštruktívneho ochorenia.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú tiež účinné pri liečení indikácií súvisiacich s rakovinou, napr. pevné nádory, sarkóm (najmä Ewingov sarkóm a osteosarkóm), retinoblastóm, rabdomyosarkóm, neuroblastóm, hematopoetické zhubné bujnenie, vrátane leukémie a lymfómu, pleurálna alebo perikardiálna efúzia indukované nádorom a malígny ascites.
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú tiež účinné pri liečení Crow-Fukasovho syndrómu (POEMS) a diabetických ochorení, napr. glaukómu, diabetickej retinopatie a mikroangiopatie.
Rodiny Src, Tec, Ako, Map, Csk, NFkB i Syk kináz hrajú kľúčové úlohy pri regulácii imunitných funkcií. Rodina Src v súčasnosti zahŕňa Fyn, Lck, Fgr, Fes, Lyn, Src, Yrk, Fyk, Yes, Hck a Blk. Pri rodine Syk sa v súčasnosti rozumie, že zahŕňa iba Zap a Syk. Rodina Tec zahŕňa Tec, Btk, Rlk a Itk. Rodina Janus kináz sa zúčastňuje na transdukcii rastového faktora a prozápalových signáloch cytokínov za účasti mnohých receptorov. Hoci BTK a ITK, členovia rodiny Tec kináz, zohrávajú z hľadiska imunobiológie menšiu dobre známu úlohu, ich modulácia inhibítorom môže mať terapeutický benefit. Rodina Csk v súčasnej dobe zahŕňa Csk a Chk. Kinázy RIP, IRAK-1, IRAK-2, NIK, p38 MAP, Jnk, IKK-1 a IKK-2 sa podieľajú na dráhach signálnej transdukcie kľúčových prozápalových cytokínov TNF a IL-1. Zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu, vďaka schopnosti účinne inhibovať jednu alebo viacero z týchto kináz, pôsobiť ako imunomodulačné činidlá, ktoré sú užitočné na stabilizáciu aloštepu a liečenie autoimunitných chorôb. Vďaka svojej schopnosti regulovať migráciu alebo aktiváciu T-buniek, B-buniek, žírnych buniek, monocytov a neutrofilov, by mohli byť tieto zlúčeniny používané na liečenie týchto autoimunitných chorôb a sepsy. Prevencia odvrhnutia transplantátu, či už reakcie hostiteľa proti štepu pri pevných orgánoch alebo reakcie štepu proti hostiteľovi pri kostnej dreni, je limitovaná toxicitou bežne dostupných imunosupresív, a teda účinné liečivo so zlepšeným terapeutickým indexom by bolo veľmi prospešné. Experimenty zamerané na gény poukázali na významnú úlohu Src v biológii osteoklastov, čo sú bunky zodpovedné za resorpciu kosti. Zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu byť vďaka schopnosti regulácie Src tiež účinné pri liečení osteoporózy, osteopetrózy, Pagetovej choroby, hyperkalcémie indukovanej nádorom a pri liečení kostných metastáz.
Ukázalo sa, že veľa proteínkináz funguje ako protoonkogény. Prerušenie chromozómu (v bode prerušenia ltk kinázy na chromozóme 5), translokácia ako v prípade Abl génu s BCR (Philadelphia chromosome), skrátenie v takých prípadoch ako c-K.it alebo EGFR, alebo mutácia (napr. Met) má za následok vytvorenie dysregulačných proteínov, ktoré zapríčiňujú premenu protoonkogénnych produktov na onkogénne produkty. V prípade ďalších nádorov je onkogenéza riadená autokrinnými alebo parakrinnými interakciami medzi ligandom a receptorom rastového faktora. Členy rodiny src kináz sa typicky zúčastňujú na downstreamovej signálnej transdukcii, čím potenciujú onkogenézu a samotné sa môžu stať onkogénnymi vďaka nadmernej expresii alebo mutácii. Príslušné ochorenia je možné liečiť inhibíciou aktivity proteínkináz. Vaskuláma restenóza môže zahŕňať proces FGF a/alebo proliferáciu hladkého svalstva propagovanú PDGF a proliferáciu endoteliálnych buniek. Stimulácia ligandom in vivo FGFR, PDGFR, IGF1-R a c-Met je proangiogénna a potenciuje poruchy závislé od angiogenézy. Inhibícia aktivity buď samotných kináz FGFr, PDGFr, c-Met alebo IGF1-R alebo v kombinácii môže byť účinnou stratégiou zameranou na inhibíciu tohto fenoménu. Tak zlúčeniny všeobecného vzorca I, ktoré inhibujú aktivitu kinázy normálnych alebo aberantných c-kit, c-met, c-fms, členov rodiny src, EGFr, erbB2, erbB4, BCR-Abl, PDGFr, FGFr, IGF1-R a ďalších receptorových alebo cytosolových tyrozínkináz, môžu hrať dôležitú úlohu pri liečení benígnych a neoplastických proliferačných ochorení.
Pri mnohých patologických ochoreniach (napr. pevné primáme nádory a metastázy, Kaposiho sarkóm, reumatická artritída, slepota spôsobená neprimeranou očnou neovaskularizáciou, psoriáza a ateroskleróza) je progresia ochorenia po perzistentnej angiogenéze kontingen74 tná. Polypeptidové rastové faktory často produkované chorým tkanivom alebo sprievodnými zápalovými bunkami a ich zodpovedajúce špecifické receptorové tyrozínkinázy endoteliálnych buniek (napr. KDR/VEGFR-2, Fit-1/VEGFR-1, Flt-4, Tie-2/Tek a Tie) sú dôležité na stimuláciu endoteliálneho bunkového rastu, migráciu, usporiadanie, diferenciáciu a zostavenie nových funkčných vaskulátorov. Predpokladá sa, že v dôsledku aktivity „faktora vaskulámej permeability“ VEGF pri sprostredkovaní vaskulámej hyperpermeability má VEGF-stimulácia VEGFR kinázy dôležitú úlohu pri tvorbe nádorových ascites, cerebrálneho a pulmonálneho edému, pleurálnej a perikardiálnej efúzie, hypersenzitívnych reakcií oneskoreného typu, tkanivového edému a orgánovej dysíunkcii po traume, popáleninách, ischémii, diabetických komplikáciách, endometrióze, syndróme respiračnej tiesne dospelých (ARDS), hypotenzii a hyperpermeabilite súvisiacej s postkardiopulmonálnym bypassom a očným edémom, ktorý má za následok glaukóm alebo oslepnutie v dôsledku neprimeranej neovaskularizácie. Okrem VEGF tiež v poslednom čase identifikované VEGF-C a VEGF-D a vírusovo kódované VEGF-E alebo HIV-Tat proteín môžu spôsobovať vaskulámu hyperpermeabilnú odpoveď sprostredkovanú stimuláciou VEGFR kinázy. KDR/VEGFR-2 a/alebo Tie-2 je exprimovaný tiež v selektívnej populácii buniek hematopoietického kmeňa. Niektoré z členov tejto populácie sú v prírode multifunkčné a na rozlíšenie endoteliálnych buniek a participáciu pri vaskulogenetických angiogénnych procesoch môžu byť stimulované rastovými faktormi. Z tohto dôvodu boli nazvané endoteliálnymi progenitómymi bunkami (EPC)(J. Clin. Investig. 103: 1231-1236 (1999)). V niektorých progenitoroch môže Tie-2 byť dôležité pri ich získavaní, adhézii, regulácii a diferenciácii (Blond. 4317-4326 (1997)). Určité zlúčeniny reprezentované všeobecným vzorcom I, ktoré sú schopné blokovať kinázovú aktivitu špecifických kináz endoteliálnych buniek by preto mohli inhibovať progresiu ochorenia zahŕňajúcu tieto stavy.
Má sa za to, že vaskuláma destabilizácia antagonistického ligandu Tie-2 (Ang2) indukuje nestabilný „plastický“ stav v endotele. Pri vysokých hladinách VEGF môže viest k silným angiogénnym odpovediam, avšak za absencie VEGF alebo stimulu súvisiaceho s VEGF môže dochádzať k zreteľnej regresii ciev a endoteliálnej apoptóze (Genes and Devel. 13: 1055-1066 (1999)). Analogicky inhibítory Tie-2 kinázy môžu byť proangiogénne alebo antiangiogénne v prítomnosti, respektíve pri absencii stimulu súvisiaceho s VEGF. Tak inhibítory Tie-2 môžu byť používané s príslušným proangiogénnym stimulom, napr. VEGF, na podporu terapeutickej angiogenézy pri takých ochoreniach ako napr. liečba zranení, infarkt alebo ischémia.
Preto môžu byť používané pri liečení ochorení sprostredkovaných proteínkinázou, napr. pri vyššie uvedených benígnych a neoplastických proliferačných ochoreniach a poruchách imunitného systému, zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo ich soli alebo farmaceutické kompozície obsahujúce ich terapeuticky účinné množstvo. Tieto ochorenia zahŕňajú autoimunitné choroby, napr. reumatickú artritídu, tyreoiditídu, diabetes l.typu, roztrúsenú sklerózu, sarkoidózu, zápalové črevné ochorenie, Crohnovu chorobu, ťažkú myasténiu a systémový lupus erythematosus; psoriázu, odvrhnutie transplantovaného orgánu (napr. odvrhnutie obličiek, ochorenie štep proti hostiteľovi), benígne a neoplastické proliferačné ochorenia, ľudské rakoviny, napr. rakoviny pľúc, prsníka, žalúdka, mechúra, tlstého čreva, pankreasu, vaječníka, prostaty a konečníka a hematopoietické zhubné bujnenia (leukémie a lymfóm) a ochorenia zahŕňajúce neprimeranú vaskularizáciu, napr. diabetickú retinopatiu, retinopatiu nedonosených, choroidálnu neovaskularizáciu v dôsledku degenerácie makuly súvisiacej s vekom a infantilné hemangiómy u ľudských subjektov. Navyše tieto inhibítory môžu byť účinné pri liečení porúch zahŕňajúcich edém sprostredkovaný VEGF, ascites, efuzie a exsudáty, vrátane napr. makulámeho edému, cerebrálneho edému, akútneho pľúcneho poranenia a syndrómu respiračnej tiesne dospelých (ARDS).
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu byť tiež účinné pri profylaxii vyššie uvedených ochorení.
Predpokladá sa, že vyššie uvedené poruchy sú významne sprostredkované aktivitou proteínových tyrozínkináz zahŕňajúcich VEGF receptory (napr. KDR, Flt-1 a/alebo Tie-2). Inhibíciou aktivity týchto receptorových tyrozínkináz je inhibovaná progresia uvedených porúch, pretože angiogénna zložka ochorenia je citeľne potlačená. Účinok zlúčenín podľa predloženého vynálezu v dôsledku ich selektivity proti špecifickým tyrozínkinázam vedie k minimalizácii vedľajších účinkov, ktoré by sa mohli vyskytovať v prípade použitia menej selektívnych inhibítorov tyrozínkináz.
V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález zlúčeniny všeobecného vzorca I, ktoré sú definované vyššie, na použitie ako liečivých prípravkov, najmä ako inhibítorov aktivity proteínkináz, napr. aktivity proteínkinázy, serínkinázy a treonínkinázy. V ešte ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález použitie vyššie definovaných zlúčenín všeobecného vzorca I pri výrobe liečivého prípravku určeného na inhibíciu aktivity proteínkinázy.
V predloženom vynáleze sa používajú nasledujúce termíny:
Termín „fyziologicky prijateľné soli“ sa vzťahuje na tie soli, ktoré si ponechávajú biologickú účinnosť a vlastnosti voľných zásad, a ktoré sú pripravené reakciou s anorganickými kyselinami, ako je napr. kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, dusičná, alebo organickými kyselinami, ako je napr. kyselina sulfónová, karboxylová alebo fosforečná, metánsulfónová, etánsulfónová, /7-toluénsulfónová, salicylová, mliečna, vínna, atd.
Farmaceutické formulácie
Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu byť podávané ľudským alebo zvieracím subjektom samotné alebo vo farmaceutických kompozíciách, v ktorých sú zmiešané s vhodnými nosičmi alebo excipientmi(tom) v dávkach, ktoré sú postačujúce na liečenie alebo zlepšenie vaskulámej hyperpermeability, edému a súvisiacich porúch. Zmesi týchto zlúčenín sa môžu tiež podávať pacientom ako jednoduchá zmes alebo vo vhodných pripravených farmaceutických kompozíciách. Terapeuticky účinná dávka ďalej označuje množstvo zlúčeniny alebo zlúčenín, ktoré je postačujúce na prevenciu alebo atenuáciu neprimeranej neovaskularizácie, progresie hyperproliferatívnych porúch, edému, hyperpermeability súvisiacej s VEGF a/alebo hypotenzie spojenej s VEGF. Techniky prípravy a podania zlúčenín sa môžu nájsť v „Remington's Pharmaceutical Sciences“, Mack Publishing Co., Easton, PA, posledné vydanie.
Spôsoby podania
Vhodné spôsoby podania môžu byť napríklad perorálne, vo forme očných kvapiek, rektálne, transmukozálne, miestne alebo intestinálne; parenterálne podanie zahŕňajúce intramuskuláme a subkutánne podanie, intrameduláme injekcie, ako aj intratekálne, priame intraventrikuláme, intravenózne, intraperitoneálne, intranazálne alebo intraokuláme injekcie.
Alternatívne je možné podávať zlúčeninu skôr miestnym než systémovým spôsobom, napr. injekciou zlúčeniny priamo do miesta edému, často v depotnej alebo trvalo sa uvolňujúcej formulácii.
Ďalej je možné liečivo podávať formou cieľovo špecifického podania, napr. v lipozóme potiahnutom endoteliálnou, bunkovo-špecifickou protilátkou.
Kompozície/Formulácie
Farmaceutické kompozície podľa predloženého vynálezu sa môžu vyrábať štandardným spôsobom, napr. štandardným miešaním, rozpustením, granuláciou, prípravou dražé, rozdrobovaním, emulgáciou, enkapsuláciou, uzatvorením alebo lyofilizáciou.
Farmaceutické kompozície na použitie podľa predloženého vynálezu tak môžu byť pripravené štandardným spôsobom s použitím jedného alebo viacerých fyziologicky prijateľných nosičov obsahujúcich excipienty a pomocné látky, ktoré uľahčujú spracovanie aktívnych zlúčenín do preparátov, ktoré môžu byť farmaceutický využívané. Vlastná príprava je závislá od vybraného spôsobu podania.
Pre injekcie môžu byť agens podľa predloženého vynálezu pripravené vo vodných roztokoch, výhodne vo fyziologicky kompatibilných pufroch, ako je napr. Hanksov roztok, Ringerov roztok alebo pufer na báze fyziologického roztoku. Na transmukózne podanie sa vo formulácii používajú také penetrátory, ktoré sú vhodné na prekonanie danej bariéry. Tieto penetrátory sú všeobecne známe.
Na perorálne podanie môžu byť zlúčeniny ľahko pripravené spojením aktívnych zlúčenín so štandardnými farmaceutický prijateľnými nosičmi. Tieto nosiče umožňujú pripraviť zlúčeniny podľa predloženého vynálezu vo forme tabliet, pilúl, dražé, kapsulí, roztokov, gélov, sirupov, injekčných zmesí, suspenzií, atď., na perorálne požitie lieku pacientom, ktorý sa má liečiť. Farmaceutické preparáty na perorálne použitie sa môžu pripraviť spojením aktívnej zlúčeniny s pevným excipientom, prípadne rozomletím výslednej zmesi, a po pridaní vhodných pomocných látok, ak je to žiaduce, spracovaním zmesi granulí, čím je možné získať tablety alebo jadrá dražé. Vhodné excipienty sú najmä plnivá, napr. cukry, vrátane laktózy, sacharózy, manitolu alebo sorbitolu; celulózové prípravky, napr. kukuričný škrob, pšeničný škrob, ryžový škrob, zemiakový škrob, želatína, tragant, metylcelulóza, hydroxypropylmetylcelulóza, sodná soľ karboxymetylcelulózy a/alebo polyvinylpyrolidón (PVP). Ak je to žiaduce, môžu sa pridať dezintegračné činidlá, napr. zosieťovaný polyvinylpyrolidón, agar alebo kyselina algínová alebo ich soli, napr. alginát sodný.
Jadrá dražé sú opatrené vhodnými povrchovými vrstvami. S týmto cieľom sa môžu používať koncentrované roztoky cukrov, ktoré môžu prípadne obsahovať arabskú gumu, mastenec, polyvinylpyrolidón, karbopólový gél, polyetylénglykol a/alebo oxid titaničitý, roztoky šelaku a vhodné organické rozpúšťadlá alebo zmesi rozpúšťadiel. Organické farbivá alebo pigmenty môžu byť pridané do tabliet alebo poťahových vrstiev dražé na identifikáciu alebo charakterizáciu rozdielnych kombinácii dávok aktívnej zlúčeniny.
Farmaceutické prípravky, ktoré sa môžu používať perorálne, zahŕňajú „push-fit“ kapsule vyrobené zo želatíny, ako aj mäkké, uzavreté kapsule vyrobené zo želatíny a zmäkčovadla, napr. glycerol alebo sorbitol. „Push-fit“ kapsule môžu obsahovať aktívne zložky v prímesi s plnivami, napr. laktózou, spojivami, napr. škrobmi, a/alebo lubríkantrni, napr. mastencom alebo magnéziumstearátom, a prípadne stabilizátormi. V mäkkých kapsuliach môžu byť aktívne zlúčeniny rozpustené alebo suspendované vo vhodných roztokoch, napr. mastných olejoch, minerálnom oleji alebo tekutých polyetylénglykoloch. Navyše sa môžu pridávať stabilizátory. Všetky formulácie na perorálne podanie by mali byť v dávkach vhodných pre takýto spôsob podania.
Na bukálne podanie môžu byť kompozície vo forme tabliet alebo pastiliek pripravených štandardným spôsobom.
Na podanie inhaláciou sú zlúčeniny podľa predloženého vynálezu štandardne dodávané vo forme aerosólového spreja v rozprašovači alebo v balení so stlačeným obsahom s vhodným propelantom, napr. dichlórdifluórmetánom, trichlórfluórmetánom, dichlórtetrafluóretánom, oxidom uhličitým alebo inými vhodnými plynmi. V prípade stlačeného aerosólu môže byť dávkovanie uskutočnené pomocou „ventilu“, ktorý umožní uvoľnenie presného množstva látky. Kapsule a náplň, napr. želatína, na použitie v inhalačnom prístroji alebo insuflátore, môžu obsahovať práškový mix zlúčeniny a vhodné práškové bázy, napr. laktózu alebo škrob.
Zlúčeniny môžu byť pripravené na parenterálne podanie injekciou, napr. injekciou bolusu alebo kontinuálnou infúziou. Formulácie pre injekcie môžu byť v jednotkových dávkovacích formách, napr. v ampuliach alebo v obaloch pre viacej dávok, s pridanou konzervačnou látkou. Kompozície môžu byť tiež vo formách suspenzií, roztokov alebo emulzií v olejových alebo vodných nosičoch a môžu obsahovať formulačné činidlá, napr. suspendačné, stabilizačné a/alebo dispergačné prostriedky.
Farmaceutické formulácie na parenterálne podanie zahŕňajú vodné roztoky aktívnych zlúčenín vo forme, ktorá je rozpustná vo vode. Ďalej môžu byť suspenzie aktívnych zlúčenín pripravené ako príslušné olejovité injekčné suspenzie. Vhodné lipofilné rozpúšťadlá alebo prenášače zahŕňajú mastné oleje, napr. sezamový olej, alebo estery syntetických mastných kyselín, napr. etyloleát alebo triglyceridy, alebo lipozómy.
Vodné injekčné suspenzie môžu obsahovať látky, ktoré zvyšujú viskozitu suspenzie, napr. sodná soľ karboxymetylcelulózy, sorbitol alebo dextrán. Prípadne suspenzie môžu tiež obsahovať vhodné stabilizátory alebo činidlá, ktoré zvyšujú rozpustnosť zlúčenín, čím umožňujú pripraviť vysoko koncentrované roztoky.
Alternatívne môže byť aktívna zložka vo forme prášku určeného na zmiešanie s vhodným nosičom, napr. sterilnou vodou bez pyrogénu, pred použitím.
Zlúčeniny môžu byť tiež pripravené ako rektálne kompozície, napr. čapíky alebo retenčné klyzmy, obsahujúce štandardné čapíkové bázy, napr. kakaové maslo alebo iné glyceridy.
Okrem vyššie uvedených formulácií môžu byť tiež zlúčeniny formulované ako depotný prípravok. Tieto formulácie s dlhým časom účinku môžu byť podávané implantáciou (napr. subkutánne alebo intramuskulárne alebo intramuskulámou injekciou). Tak, napríklad, zlúčeniny môžu byť formulované s vhodnými polymémymi alebo hydrofóbnymi materiálmi (napr. ako emulzie v prijateľnom oleji) alebo ionexy alebo ako ťažko rozpustné deriváty, napr. ťažko rozpustné soli.
Príkladom farmaceutického nosiča pre hydrofóbne zlúčeniny podľa predloženého vynálezu je systém spolurozpúšťadiel obsahujúci benzylalkohol, nepolámu povrchovo aktívnu látku alebo organický polymér miešateľný s vodou a vodnú fázu. Systémom spolurozpúšťadiel môže byť systém spolurozpúšťadiel VPD. VPD je roztok 3 obj.% benzylalkoholu, 8 obj.% nepolámeho povrchovo aktívneho polysorbátu 80 a 65 obj.% polyetylénglykolu 300 doplnený na konečný objem absolútnym etanolom. Systém spolurozpúšťadiel VPD (VPD:5W) pozostáva z VPD zriedeného 1:1 5% dextrózou vo vodnom roztoku. Tento systém spolurozpúšťadiel dobre rozpúšťa hydrofóbne zlúčeniny a sám má po systémovom podaní nízku toxicitu. Prirodzene môžu byť podiely systému spolurozpúšťadiel značne menené, avšak tak, aby sa zachovali charakteristické rysy jeho rozpustnosti a toxicity. Jednotlivé zložky systému spolurozpúšťadiel môžu byť menené: napr. namiesto polysorbátu 80 sa môžu používať ďalšie nepoláme povrchovo aktívne látky s nízkou toxicitou; veľkosť častíc polyetylénglykolu môže byť rôzna; polyetylénglykol môžu nahradiť ďalšie biokompatibilné polyméry, napr. polyvinylpyrolidón; a ďalšie cukry alebo polysacharidy môžu nahradiť dextrózu.
Alternatívne sa môže použiť iný systém dodávania pre hydrofóbne farmaceutické zlúčeniny. Pre hydrofóbne liečivá sú štandardnými príkladmi prenášačov a nosičov využívaných pri tomto spôsobe lipozómy a emulzie. Môžu sa používať určité organické rozpúšťadlá, napr. dimetylsulfoxid, hoci obvykle na úkor väčšej toxicity. Navyše zlúčeniny môžu byť dodávané systémom postupného uvoľňovania, napr. semipermeabilnými matricami pevných hydrofóbnych polymérov obsahujúcich terapeutické činidlo. V tejto technike sú zavedené rôzne látky s postupným uvoľňovaním. Kapsule s postupným uvoľňovaním môžu v závislosti od svojho chemického charakteru uvoľňovať zlúčeniny počas niekoľkých týždňov až 100 dní. V závislosti od chemického charakteru a biologickej stability terapeutického reagens sa môžu používať ďalšie stratégie na stabilizáciu proteínu.
Farmaceutické kompozície tiež môžu obsahovať vhodnú pevnú látku alebo nosiče alebo excipienty gélovej fázy. Príklady takých nosičov alebo excipientov zahŕňajú, ale nie je to nijako limitované, uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, rôzne cukry, škroby, deriváty celulózy, želatína a polyméry, napr. polyetylénglykoly.
Veľký počet zlúčenín podľa predloženého vynálezu môže byť vo forme soli s farmaceutický kompatibilnými protiiónmi. Farmaceutický kompatibilné soli môžu byť pripravené s mnohými kyselinami vrátane, ale nie je to nijako limitované, kyseliny chlorovodíkovej, sírovej, octovej, mliečnej, tartarovej, jablčnej, sukcínovej, atď. Soli majú tendenciu byť oveľa rozpustnej šie vo vodných alebo iných protonizovaných rozpúšťadlách než ich zodpovedajúce voľné zásady.
Účinná dávka
Farmaceutické kompozície vhodné na použitie v predloženom vynáleze zahŕňajú kompozície, v ktorých sú aktívne zložky na dosiahnutie požadovaného účinku obsiahnuté v účinnom množstve. Konkrétnejšie, terapeuticky účinné množstvo znamená množstvo, ktoré je dostatočné na prevenciu alebo na zlepšenie existujúcich symptómov u subjektu, ktorý je liečený. Stanovenie účinných množstiev sa uskutočňuje štandardným spôsobom.
Pre akúkoľvek zlúčeninu používanú spôsobom podľa predloženého vynálezu môže byť terapeuticky účinná dávka najskôr stanovená podľa testov na bunkových kultúrach. Napríklad dávka môže byť testovaná na bunkových a zvieracích modeloch na získanie systémovej koncentrácie, ktorá zahŕňa IC50 stanovenú podľa testov na bunkových kultúrach (tzn. koncentrácia testovanej zlúčeniny, ktorá je potrebná na dosiahnutie 50% inhibície aktivity danej proteínkiná81 zy). V niektorých prípadoch je vhodné stanoviť hodnotu IC50 v prítomnosti 3 až 5% sérumalbumínu, pretože toto stanovenie aproximuje väzbové efekty plazmových proteínov na zlúčeninu. Tieto informácie môžu byť používané u ľudských subjektov na presnejšie stanovenie účinných dávok. Najvýhodnejšie zlúčeniny pre systémové podanie účinne inhibujú signalizáciu proteínkináz v intaktných bunkách v hladinách, ktoré sú bezpečne dosiahnuteľné v plazme.
Terapeuticky účinná dávka znamená také množstvo zlúčeniny, ktoré má za následok zlepšenie symptómov u pacienta. Toxicita a terapeutická účinnosť takýchto zlúčenín môže byť stanovená štandardnými farmaceutickými spôsobmi na bunkových kultúrach alebo experimentálnych zvieratách, napr. stanovenie maximálnej tolerovanej dávky (MTD) a ED50 (koncentrácia látky, ktorá vyvolá 50% maximálneho účinku dávky). Dávkový pomer medzi toxickými a terapeutickými účinkami je určený terapeutickým indexom a môže byť vyjadrený ako pomer medzi MTD a ED50. Výhodné sú zlúčeniny, ktoré majú vysoké terapeutické indexy. Údaje získané z testov na bunkových kultúrach a zo štúdie na zvieratách sa môžu používať na stanovenie rozpätia dávky určenej pre ľudské subjekty. Dávka takýchto zlúčenín je výhodne v rozmedzí koncentrácií v systémovej cirkulácii („circulating concentrations“), ktoré zahŕňajú ED50 s malou alebo žiadnou toxicitou. Dávka v tomto rozmedzí sa môže líšiť v závislosti od používanej dávkovej formy a spôsobu podania. Presná formulácia, spôsob podania a dávka môžu byť vybrané príslušným lekárom v závislosti od stavu pacienta (viď Fingl et al., 1975, v „Pharmacological Basis of Therapeutics“, Ch. 1 pl). Pri liečení kritického stavu je možné na dosiahnutie rýchlej odpovede použiť podanie akútneho bolusu alebo infúzie na dosiahnutie MTD.
Na dosiahnutie plazmovej hladiny aktívneho podielu, ktorá je dostatočná na udržanie účinkov modulujúcich kinázu alebo minimálne účinné koncentrácie (MEC), môže byť množstvo dávky a interval individuálne upravený. Hodnota MEC bude pre každú zlúčeninu iná, ale môže byť stanovená podľa in vitro údajov; napr. koncentrácia potrebná na dosiahnutie 50-90% inhibície proteínkinázy pomocou testov opísaných v predloženom vynáleze. Dávka potrebná na dosiahnutie MEC bude závisieť od jednotlivých charakteristík a spôsobu podania. Avšak na stanovenie plazmových koncentrácií sa môže používať HPLC alebo biotesty.
Intervaly medzi dávkami môžu byť tiež stanovené pomocou hodnoty MEC. Zlúčeniny by mali byť podávané podľa režimu, ktorým sa udržujú plazmové hladiny nad hodnotou MEC v priebehu 10-90% času, výhodne medzi 30-90% a najvýhodnejšie 50-90%, pokiaľ nie je dosiahnuté požadované zlepšenie daných symptómov. V prípadoch miestneho podania alebo se82 lektívneho vychytávania, nemusia účinné miestne koncentrácie liečiva zodpovedať plazmovej koncentrácii.
Množstvo podávanej kompozície bude závisieť od liečeného subjektu, jeho hmotnosti, závažnosti bolesti, spôsobu podania a posúdenia predpisujúceho lekára.
Balenie
Kompozície, ak je to žiaduce, môžu byť vo forme balenia alebo zásobníka, ktoré môžu obsahovať jednu alebo viac foriem jednotkovej dávky obsahujúcich aktívnu zložku. Balenie môže napr. obsahovať kovovú alebo plastickú fóliu, napr. mäkké priehľadné balenie. Balenie alebo zásobník môžu byť distribuované spoločne s návodom na podanie. Tiež môžu byť pripravené kompozície obsahujúce zlúčeninu podľa predloženého vynálezu formulovanú v kompatibilnom farmaceutickom nosiči, vložené do príslušného obalu a označené na liečenie príslušného ochorenia.
V niektorých formuláciách môže byť výhodné používať zlúčeniny podľa predloženého vynálezu vo forme veľmi malých častíc získaných napr. mletím pomocou energie tekutiny (fluid energy milling).
Použitie zlúčenín podľa predloženého vynálezu pri výrobe farmaceutických kompozícií je uvedené v nasledujúcom opise. V tejto opisnej časti znamená termín „aktívna zlúčenina“ akúkoľvek zlúčeninu podľa predloženého vynálezu, ale najmä akúkoľvek zlúčeninu, ktorá je finálnym produktom jedného z vyššie uvedených príkladov.
a) Kapsule
Pri príprave kapsúl sa deagreguje a zmieša 10 hmotnostných dielov aktívnej zlúčeniny a 240 hmotnostných dielov laktózy. Zmes sa plní do tuhých želatínových kapsulí, pričom každá kapsula obsahuje jednotkovú dávku alebo diel jednotkovej dávky aktívnej zlúčeniny.
b) Tablety
Tablety sa môžu pripraviť z nasledujúcich zložiek.
Hmotnostné diely
Aktívna zlúčenina 10
Laktóza 190
Kukuričný škrob 22
Polyvinylpyrolidón 10
Magnéziumstearát 3
Aktívna zlúčenina, laktóza a časť škrobu sa deagregujú, zmiešajú a výsledná zmes sa granuluje s roztokom polyvinylpyrolidónu v etanole. Suchý granulát sa zmieša s magnéziumstearátom a zvyškom škrobu. Zmes sa lisuje v tabletovacom stroji, pričom každá tableta obsahuje jednotkovú dávku alebo diel jednotkovej dávky aktívnej zlúčeniny.
c) Tablety s enterosolventným poťahom
Tablety sa pripravia spôsobom opísaným vyššie v bode (b). Tablety sa potom enterosolventne potiahnu štandardným spôsobom roztokom, a to 20% acetátftalátom celulózy a 3% dietylftalátom v zmesi etanolu a vody (1:1).
d) Čapíky
Pri príprave čapíkov sa do 1300 hmotnostných dielov čapíkovej matrice na báze triglyceridov vloží 100 hmotnostných dielov aktívnej zlúčeniny a vzniknutá zmes sa dávkuje do čapíkov, pričom každý obsahuje terapeuticky účinné množstvo aktívnej zložky.
V kompozíciách podľa predloženého vynálezu môže byť, ak je to žiaduce, aktívna zlúčenina zmiešaná s ďalšími kompatibilnými, farmakologicky aktívnymi zložkami. Napríklad zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu byť podávané v kombinácii s jedným alebo viacerými ďalšími farmaceutickými agensami, ktoré inhibujú alebo zabraňujú produkcii VEGF alebo angiopoietínov, zmierňujú intraceluláme odpovede na VEGF alebo angiopoietíny, blokujú intracelulámu signálnu transdukciu, inhibujú vaskulámu hyperpermeabilitu, zmierňujú zápal alebo inhibujú alebo zabraňujú tvorbe edému alebo neovaskularizácii. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu byť podávané pred, po alebo súčasne s ďalšími farmaceutickými agensamí, ktorýmkoľvek vhodným spôsobom podania. Ďalšie farmaceutické agensy zahŕňajú, ale nie je to nijako limitované, antiedemické steroidy, NSAIDS, inhibítory ras, anti-TNF agens, anti-IL-1 agens, antihistaminiká, PAF-antagonisty, inhibítory COX-1, inhibítory COX-2, inhibítory NO syntázy, inhibítory Akt/PTB, inhibítory IGF-1R, inhibítory PKC a inhibítory PI3 kinázy. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu a ďalšie farmaceutické agensy účinkujú buď aditívne alebo synergisticky. Teda podávanie takej kombinácie látok, ktoré inhibujú angiogenézu, vaskulámu hyperpermeabilitu a/alebo inhibujú tvorbu edému, môže poskytovať väčšie zmiernenie škodlivých účinkov hyperproliferačných porúch, angiogenézy, vaskulámej hyperpermeability alebo edému než podanie akejkoľvek samotnej látky. Pri liečení malígnych porúch sa predpokladajú kombinácie s antiproliferačnými alebo cytotoxickými chemoterapiami alebo ožarovaním.
Predložený vynález tiež zahŕňa použitie zlúčenín všeobecného vzorca I ako liečivého prípravku.
V ďalšom aspekte predloženého vynálezu je poskytnutá zlúčenina všeobecného vzorca I alebo jej soľ na výrobu liečivého prípravku na liečenie vaskulámej hyperpermeability, od angiogenézy závislých porúch, proliferačných ochorení a/alebo porúch imunitného systému u cicavcov, najmä ľudí.
Predložený vynález tiež poskytuje spôsob liečenia vaskulámej hyperpermeability, neprimeranej neovaskularizácie proliferačných ochorení a/alebo porúch imunitného systému, ktorý zahŕňa podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca I cicavcovi, najmä človeku, ktorý takéto liečenie potrebuje.
In vitro účinnosť zlúčenín pri inhibícii týchto proteínkináz môže byť stanovená nižšie uvedenými spôsobmi.
Účinnosť zlúčenín môže byť stanovená množstvom inhibície fosforylácie exogénneho substrátu (napr. syntetický peptid (Z. Songyang et al., Náture. 373:536-539) porovnaním testovanej zlúčeniny s kontrolou.
Produkcia KDR tyrozínkinázy pomocou Baculovírusového systému:
Kódujúca sekvencia pre ľudskú KDR intracelulámu doménu (aa789-1354) bola generovaná pomocou PCR a cDNA izolovaných z buniek HUVEC. Sekvencia poly-His6 bola zavedená na jV-koniec tohto proteínu. Tento fragment bol klonovaný do transfekčného vektora pVL1393 v mieste Xbal a Not 1. Rekombinantný baculovírus (BV) bol generovaný kotransfekciou pomocou reagensa BaculoGold Transfection reagent (PharMingen). Rekombinantný BV bol plakovo purifíkovanýa verifikovaný Westemovou analýzou. Na produkciu proteínu boli bunky SF-9 pestované v médiu SF-900-II pri 2 x 106/ml a infikované v množstve tvoriacom 0,5 plaku na bunku (MOI). Bunky boli zbierané po 48 hodinách od infekcie.
Purifikácia KDR
Bunky SF-9 exprimujúce (His)éKDR(aa789-1354) boli lyzované pridaním 50 ml lyzovacieho pufra X-100 (20 mM Tris, pH 8.0, 137 mM NaCl, 10% glycerol, 1% Triton X-100, lmM PMSF, 10 pg/ml apretinínu, 1 ug/ml leupeptínu) do bunkových peliet z 1 1 bunkovej kultúry. Lyzát bol centrifugovaný pri 19 000 ot. za min. na prístroji Sorval SS-34 rotor počas 30 minút pri teplote 4°C. Bunkový lyzát bol aplikovaný do 5 ml NiCl2 chelatujúceho sepharózového stĺpca, ekvilibrovaného 50 mM HEPES, pH 7.5, 0.3 M NaCl. KDR bola eluovaná rovnakým pufrom obsahujúcim 0,25 M imidazol. Jednotlivé frakcie boli analyzované metódami SDS-PAGE a ELISA (viď nižšie), pomocou ktorých sa dala zmerať aktivita kinázy. Purifikovaná KDR sa naliala do 25mM HEPES, pH 7.5, 25mM NaCl, 5 mM pufra DTT a skladovala pri teplote -80°C.
Tvorba a purifikácia ľudskej Tie-2 kinázy
Kódujúca sekvencia pre ľudskú intracelulámu doménu Tie-2 (aa775-l 124) bola generovaná pomocou PCR a cDNA kusov izolovaných z ľudskej placenty ako templátov. Sekvencia poly-Hisô bola zavedená na V-koniec a tento konštrukt bol klonovaný do transfekčného vektora pVL 1939 v mieste Xba 1 a Not 1. Rekombinantný BV bol generovaný kotransfekciou pomocou reagensu BaculoGold Transfection reagent (PharMingen). Rekombinantný BV bol plak purifikovaný a verifikovaný Westemovou analýzou. Na produkciu proteínu boli bunky SF-9 pestovanév médiu SF-900-II pri 2 x 106/ml a infikované v 0,5 MOI. Purifikácia His-značenej kinázy používanej pri screeningu bola obdobná ako u KDR.
Produkcia a purifikácia ľudskej Flt-1 tyrozínkinázy
Používal sa baculovírusový expresívny vektor pVL1393 (Phar Mingen, Los Angeles, CA). Nukleotidová sekvencia kódujúca poly-His6 bola umiestnená do nukleotidovej oblasti 5' kódujúcej celú intracelulámu doménu kinázy ľudskej Flt-1 (aminokyseliny 786-1338). Nukleotidová sekvencia kódujúca oblasť kinázy bola generovaná pomocou PCR a cDNA-knižníc izo86 lovaných z buniek HU VEC. Histidínové zvyšky umožnili afinitnú purifikáciu proteínu obdobným spôsobom ako pri KDR a ZAP70. Insektované bunky SF-9 boli infikované pri 0,5 multiplicite a zbierané po 48 hodinách od infekcie.
Pôvod EGFR tyrozínkinázy
EGFR bola zakúpená od firmy Sigma (Cat # E-3641; 500 jednotiek/50 μΐ) a ligand EGF bol získaný u firmy Oncogen Research Preducts/Calbiochem (Cat # PF011-100).
Expresia ZAP70
Používal sa baculovírusový expresívny vektor pVL1393 (PharMingen, Los Angeles, CA). Nukleotidová sekvencia kódujúca aminokyseliny M(H)6 LVPR9S bola umiestnená do nukleotidovej oblasti 5' kódujúcej celú ZAP70 (aminokyseliny 1-619). Nukleotidová sekvencia kódujúca oblasť ZAP70 bola generovaná pomocou PCR a cDNA-knižníc izolovaných zTbuniek imortalizovaných Jurkatom. Histidínové zvyšky umožnili afinitnú purifikáciu proteínu (vide infra). LVPR9S mostík tvorí rozpoznávaciu sekvenciu pre proteolytické štiepenie trombínom umožňujúce odstránenie afinitného tágu z enzýmu. Insektované bunky SF-9 boli infikované pri 0,5 multiplicite a zbierané po 48 hodinách od infekcie.
Extrakcia a purifikácia ZAP70
Bunky SF-9 boli lyzované v pufri pozostávajúcom z 20 mM Tris, pH 8.0, 137 mM NaCl, 10% glycerolu, 1% Tritonu X-100, lmM PMSF, 10 pg/ml apretinínu, 1 ug/ml leupeptínu a 1 mM ortovanadátu sodného. Rozpustný lyzát bol aplikovaný na chelatujúci stĺpec sepharózy HiTrap (Pharmacia) ekvilibrovanom v 50 mM HEPES, pH 7.5, 0.3 M NaCl. Fúzny proteín bol eluovaný s 250 mM imidazolu. Enzým bol skladovaný v pufri obsahujúcom 25mM HEPES, pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM pufra DTT.
Pôvod proteínkinázy
Lck, Fyn, Src, Blk, Csk a Lyn a ich skrátené formy sa môžu získať z komerčných zdrojov (napr. od Upstate Biotechnology Inc. (Saranac Lake, N.Y.) a Santa Cruz Biotechnology Inc. (Santa Cruz, Ca.)) alebo purifikované štandardnými spôsobmi zo známych prírodných alebo rekombinantných zdrojov.
Enzýmová imunoanalýza na pevnej fáze (ELISA) uskutočnená s PTK
Na detekciu a meranie prítomnosti aktivity tyrozínkinázy sa používala enzýmová imunoanalýza na pevnej fáze (ELISA). ELISA sa uskutočňovala štandardným spôsobom, ktorý je opísaný napr. v Voliér, et al., 1980, „Enzyme-linked Immunosorbent Assay,“ In: Manual of Clinical Immunology, 2d ed., edited by Rose and Friedman, 359-371 Am.Soc. of Microbiology, Washington, D.C.
Uvedený spôsob bol upravený na stanovenie aktivity s ohľadom na špecifickú PTK. Napríklad výhodné spôsoby uskutočnenia ELISA experimentov sú uvedené nižšie. Úprava týchto protokolov na stanovenie aktivít zlúčenín pri ostatných členoch rodiny receptorovej PTK, ako aj nereceptorových tyrozínkináz, patrí medzi štandardnú rutinu. Na stanovenie selektivity inhibítora sa používal univerzálny substrát PTK (napr. nepravidelný kopolymér na báze poly(Glu4 Tyr) s molekulovou hmotnosťou 20 000-50 000) spoločne s ATP (typicky 5 μΜ) v približne dvojnásobných koncentráciách oproti Km z testov.
Na stanovenie inhibičného účinku zlúčenín podľa predloženého vynálezu na aktivitu KDR, Flt-1, Flt-4/VEGFR-3, Tie-1, Tie-2, EGFR, FGFR, PDGFR, IGF-l-R, c-Met, Lck, Blk, Csk, Src, Lyn, Fyn a ZAP70 tyrozínkináz sa používal nasledujúcipostup:
Pufre a roztoky:
PGTPoly (Glu, Tyr) 4:1
Skladovanie prášku pri teplote -20 °C. Rozpustenie prášku vo fyziologickom roztoku tlmenom fosfátom (PBS) na objem 50 mg/ml. Uchovanie 1 ml alikvotného podielu pri teplote -20 °C. Ak sa pripravujú doštičky, zriedenie na 250 μg/ml v Gibco PBS.
Reakčný pufer: 100 mM Hepes, 20 mM MgCl2, 4 mM MnCl2, 5mM DTT, 0,02% BSA, 200 μΜΝηνθ4, pH 7,10.
ATP: Uchovanie alikvotných dielov 100 mM pri teplote -20 °C. Zriedenie na objem 20 μΜ vo vode.
Premývací pufer: PBS s 0,1% Tween 20
Protilátkový riediaci pufer: 0,1% bovinný sérumalbumín (BSA)v PBS
Substrát TMB: zmiešanie substrátu TMB a peroxidových roztokov 9:1 tesne pred použitím alebo použitie substrátu K-Blue od Neogen
Blokovací roztok: IM fosforečná kyselina
Postup
1. Príprava doštičiek
Zriedenie zásobného roztoku PGT (50 mg/ml, zmrazeného) v PBS na 250 pg/ml. Pridanie (125 pl/jamka) do ELISA doštičiek s plochým dnom, ktoré majú vysokú afinitu a modifikované zrnenie (Corning # 25805-96). Pridanie 125 pl PBS do kontrolných jamiek. Potiahnutie tesniacou páskou a inkubácia cez noc pri teplote 37°C. lx Premytie 250 pl premývacieho pufra a sušenie počas 2 hodín pri teplote 37°C v suchom inkubátore.
Skladovanie potiahnutých doštičiek v uzavretej nádobe pri teplote 4°C
2. Reakcia s tyrozínkinázou:
-príprava inhibičných roztokov v štvornásobnej koncentrácii v 20% DMSO vo vode.
-príprava reakčného pufra
-príprava enzýmového roztoku tak, aby požadované jednotky boli v 50 pl, napr. pre KDR 1 ng/pl z celkových 50 ng/jamkapri reakciách. Skladovanie v ľade.
-príprava 4xATP roztoku s koncentráciou 20 pM zo 100 mM zásobného roztoku vo vode. Skladovanie v ľade.
-pridanie 50 pl enzýmového roztoku na jamku (typicky 5-50 ng enzýmu na jamku v závislosti od špecifickej aktivity kinázy)
-pridanie 25 pl 4 x inhibítora
-pridanie 25 pl 4 x ATP na stanovenie inhibície
-inkubácia pri izbovej teplote počas 10 minút
-zastavenie reakcie pridaním 50 μΐ 0,05N HCl/jamka
-premytie doštičiek **Finálna koncentrácia pri reakcii: 5 μΜ ATP, 5% DMSO
3. V iazanie protilátok
-zriedenie 1 mg/ml alikvotného dielu PY20-HRP (Pierce) protilátky (fosfotyrozinová protilátka) na 50 ng/ml v 0,1 % BSA v PBS 2 krokovým zriedením (100 x, potom 200x)
-pridanie 100 μΐ Ab/jamka. Inkubácia pri izbovej teplote počas 1 hodiny. Inkubácia pri teplote 4 °C počas 1 hodiny.
-4x premytie doštičiek
4. Značenie
-príprava substrátu TMB a pridanie 100 μΐ/jamka
-monitoring OD pri 650 nm, kým se nedosiahne hodnota 0,6
-zastavenie reakcie pomocou IM fosforečnej kyseliny. Trepanie na detektore doštičiek.
-okamžité meranie OD pri 450 nm
Optimálne inkubačné časy a podmienky enzýmovej reakcie sa môžu nepatrne líšiť a sú empiricky stanovené pre každú šaržu.
Pre Lck bol za obdobných podmienok používaný reakčný pufer so zložením 100 mM MOPSO, pH 6.5, 4 mM MnCl2,20 mM MgCl2, 5 mM DTT, 0,2% BSA, 200 mM NaVO4.
Zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu byť terapeuticky účinné pri liečení ochorení zahŕňajúcich ako identifikované, vrátane tých, ktoré tu nie sú uvedené, tak aj doposiaľ neidentifikované proteínové tyrozínkinázy, ktoré sú inhibované zlúčeninami všeobecného vzorca I. Všetkny tu uvedené zlúčeniny vykazovali výraznú inhibíciu buď FGFR, PDGFR, KDR, Tie-2, Lck, Fyn, Blk, Lyn alebo Src pri koncentráciách 50 mikromol alebo nižších. Niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu tiež výrazne inhibovali ďalšie tyrozín alebo serín/treonínkinázy, napr. cdc2 (cdk 1) pri koncentráciách 50 mikromol alebo nižších.
Pôvod Cdc2
Ľudský rekombinantný enzým a testovací pufer môžu byť získané z komerčných zdrojov (New England Biolabs, Beverly, MA. USA) alebo štandardnými spôsobmi purifikované zo známych prírodných alebo rekombinantných zdrojov.
Testy s Cdc2
V postupe sa používali mierne modifikované činidlá získané z komerčných zdrojov. Reakcia bola uskutočňovaná v pufri so zložením 50mM Tris pH 7.5, lOOmM NaCl, 1 mM EGTA, 2 mM DTT, 0,01% Brij, 5% DMSO a 10 mM MgCl2 (komerčný pufer) suplementovaným čerstvým 300 μΜ ATP (31 pCi/ml) a 30 pg/ml IIIss typu histón ako finálnymi koncentráciami. Reakčný objem činil 80 μί s obiahnutými jednotkami enzýmu. Reakcia prebiehala 20 minút pri teplote 25 °C za prítomnosti alebo absencie inhibítora a bola ukončená pridaním 120 μί 10% octové kyseliny. Substrát bol separovaný od neinkorporovanej značky nanesením zmesi na fosfocelulózový papier a 5 minútovým premytím (3 x 75 mM fosforečnej kyseliny). Impulzy boli merané za prítomnosti kvapalného scintilátora na prístroji merajúcom beta-žiarenie. Niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu výrazne inhibovali cdc2 pri koncentráciách 50 μΜ alebo nižších.
Pôvod PKC kinázy
Katalytická podjednotka PKC sa môže získať z komerčných zdrojov (Calbiochem).
Testy s PKC kinázou
Použitý postup rádiochemického stanovenia kináz bol na báze publikovaného spôsobu viď Yasuda, I., Kirshimoto, A., Tanaka, S., Tominaga, M., Sakurai, A., Nishizuka, Y. Biocheniical and Biophysical Research Communication 3:166, 1220-1227 (1990). Všetky reakcie sa uskutočňovali vkinázovom pufri pozostávajúcom z 50 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM MgCl2, 2 mM DTT, 1 mM EGTA, 100 μΜ ATP, 8 μΜ peptidu, 5% DMSO and 33P ATP (8 Ci/mM). Zlúčenina a enzým boli zmiešané v reakčnej banke a reakcia bola iniciovaná pridaním ATP a substráte vej zmesi. Po terminácii reakcie pridaním 10 μΐ pufru zastavujúceho reakciu (5 mM ATP v 75 mM fosforečnej kyseliny), bol určitý podiel zmesi nanesený na fosfocelulózové filtre. Nanesené vzorky sa premývali (3x) v 75 mM fosforečnej kyseliny pri izbovej teplote počas 5 až 15 minút. Inkorporácia rádioaktívnej značky bola stanovená meraním kvapalnej scintilácie.
Pôvod enzýmu Erk2
Rekombinantný myšací enzým a testovací pufer môžu byť zakúpené z komerčných zdrojov (New England Biolabs, Beverly MA. USA) alebo štandardnými spôsobmi purifikované z prírodných alebo rekombinantných zdrojov.
Testy s enzýmom Erk2
Reakcia sa uskutočňovala v pufri pozostávajúcom z 50 mM Tris pH 7.5, 1 mM EGTA, 2 mM DTT, 0,01% Brij, 5% DMSO a 10 mM MgCl2 (komerčný pufer) suplementovanom čerstvým 100 μΜ ATP (31 pCi/ml) a 30 μΜ myelínového bazálneho proteínu za podmienok, ktoré sú doporučované dodávateľom. Reakčné objemy a spôsob testovania inkorporovanej rádioaktívnej značky sú opísané pri testoch s PKC (vide suprä).
In vitro modely aktivácie T-buniek
Po aktivácii mitogénu alebo antigénu sú T-bunky indukované ksekrécii IL-2, čo je rastový faktor, ktorý podporuje ich následnú prolíferačnú fázu. Preto je možné merať buď produkciu IL-2 alebo bunkovú proliferáciu primárnych T-buniek alebo príslušných línií T-buniek ako náhradiek z aktivácie T-buniek. Oba tieto testy a jednotlivé parametre sú dobre opísané v literatúre (v Current Pretocols in Immunology, Vol 2, 7.10.1-7.11.2).
Stručne, T-bunky môžu byť aktivované spoločnou kultiváciou s alogénnym stimulátorom buniek, proces, ktorý je označovaný ako nevratná zmesná reakcia lymfocytu. Respondér a stimulátor periférnych krvných monocytov je purifikovaný Ficoll-Hypaque gradientom (Pharmacia) podľa návodu dodávateľa. Stimulátorové bunky sú mitoticky inaktivovane reakciou s mitomycínom C (Sigma) alebo žiarením gama. Respondérové a stimulátorové bunky sú spoločne kultivované v pomere 2:1 za prítomnosti alebo absencie testovanej zlúčeniny. Typicky 105 respondérov je zmiešaných s 5 x 104 stimulátormi a nanesených (v objeme 200 μΐ) do mikrotitračnej doštičky s dnom do U (Costar Scientific). Bunky sú kultivované v RPMI 1640 suplementovanom buď fetálnym bovinným sérom (Hyclone Laboratories) inaktivovaným záhre92 vom alebo poolovým ľudským AB sérom od mužských darcov, 5 x 10'5 M 2-merkaptoetanol a 0,5% DMSO. Jeden deň pred odberom (typicky tri dni) bolo do kultúr zabudované 0,5 pCi 3H tymidínu (Amersham). Kultúry boli odoberané (Betaplate harvester, Wallac) a uptake izotopu bol vyhodnotený pomocou kvapalnej scintilácie (Betaplate, Wallac).
Rovnaký kultivačný systém sa používal na stanovenie aktivácie T-buniek meraním produkcie IL-2. Osemnásť až dvadsaťštyri hodín po iniciácii kultivácie bol odstránený supernatant a koncentrácia IL-2 bola meraná metódou ELISA (R and D systems) podľa návodu dodávateľa.
In vivo modely aktivácie T-buniek
In vivo účinnosť zlúčenín môže byť testovaná na zvieracích modeloch priamym meraním aktivácie T-buniek alebo T-buniek, u ktorých boli preukázané efektory. T-bunky môžu byť aktivované in vivo ligáciou konštantnej časti receptora T-buniek s monoklonálnou protilátkou anti-CD3 (Ab). V tomto modele bolo myšiam BALB/c dve hodiny pred vykrvácaním intraperitoneálne podané 10 pg anti-CD3 Ab. Zvieratá, ktoré mali dostať testované liečivo, boli vopred ošetrené jednorazovou dávkou zlúčeniny jednu hodinu pred podaním anti-CD3 Ab. Sérové hladiny protizápalových cytokínov interferón-γ (IFN-γ) a faktora-α nekrotizujúceho nádor (TNF-α), indikátorov aktivácie T-buniek, boli merané metódou ELISA. Podobný model využíva in vivo aktiváciu T-buniek so špecifickým antigénom, napr. hemocyanínon morského plža (KLH), a následnú sekundárnu in vitro expozíciu drenážnych buniek lymfatickej uzliny rovnakému antigénu. Ako je uvedené vyššie, na stanovenie stavu aktivácie kultivovaných buniek sa používalo meranie produkcie cytokínov. V nultý deň boli myši C57BL/6 subkutánne imunizované 100 pg KLH emulzifikovaného v kompletnom Freundovom adjuvans (CFA). Zvieratá boli jeden deň pred imunizáciou a následne prvý, druhý a tretí deň po imunizácii vopred ošetrené zlúčeninou. Drenážne lymfatické uzliny boli štvrtý deň odoberané a ich bunky kultivované v množstve 6 x 106 na ml v médiu na kultiváciu tkaniva (RPMI 1640 suplementované fetálnym bovinným sérom inaktivovaným záhrevom (Hyclone Laboratories 5 x 10'5 M 2-merkaptoetanolu a 0,5% DMSO) počas 24 aj 48 hodín. V kultivačných supematantoch bol potom stanovený rastový faktor interleukín-2 (IL-2) autokrinných T-buniek a/alebo hladiny IFN-γ metódou ELISA.
Hlavné zlúčeniny môžu byť tiež testované na zvieracích modeloch simulujúcich ľudské ochorenie, napr. experimentálna autoimunitná encefalomyelitída (EAE) a kolagénom indukovaná artritída (CIA). EAE modely, ktoré napodobňujú aspekty ľudskej roztrúsenej sklerózy boli opísané u myší aj potkanov (recenzované FASEB J. 5:2560-2566,1991 myšací model: Lab. Invest. 4(3):278, 1981; model na báze hlodavca: J. Immunol. 146(4):1163-8, 1991). Myši a potkany boli imunizované emulziou myelínového bázického proteínu (MBP) aiebo jeho neurogénnymi peptidovými derivátmi a CFA. Akútne ochorenia môžu byť indukované pridaním bakteriálnych toxínov, napr. bordetella pertussis. Relapsujúce/ustupujúce ochorenie je indukované adoptívnym prenosom T-buniek zo zvierat imunizovaných MBP/peptidom.
CIA môže byť indukovaná u myší DBA/1 imunizáciou kolagénom typu II (J. Immunol: 142(7):2237-2243), čím sa vyvolajú známky artritídy už desať dní po expozícii antigénu, ktoré môžu byť evidentné aj deväťdesiat dní po imunizácii U EAE i CIA modelov môže byť zlúčenina podávaná buď profylaktický alebo v čase prepuknutia ochorenia. Účinné liečivá by mali redukovať silu a/alebo rozsah ochorenia.
Určité zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, ktoré inhibujú jednu alebo viacero angiogénnych receptorových PTK a/alebo proteínkinázy, napr. lck zúčastňujúca sa na sprostredkovaní zápalových odpovedí, môžu u týchto modelov redukovať silu alebo rozsah artritídy.
Zlúčeniny sa môžu tiež testovať na myšacích modeloch aloimplantátu kože (recenzované v Ann. Rev. Immunol., 10:333-58, 1992; Transplantation: 57(12):1701-17D6, 1994) alebo srdca (Am. J. Anat.:l 13:273,1963). Kompletné epidermálne štepy boli transplantované z myší C57BL/6 myšiam BALB/c. Štepy môžu byť počínajúc šiestym dňom kvôli odvrhnutiu denne sledované. Pri myšacom modele neonatálneho transplantátu srdca, sú neonatálne srdcia ektopicky transplantované z myší C57BL/6 do ušných lalôčikov dospelých myší CBA/J. Srdce začína pracovať čtyri až sedem dní po transplantácii a odvrhnutie môže byť skúmané vizuálne disekujúcim mikroskopom kvôli sledovaniu prerušenia činnosti srdca.
Testy s bunkovými receptorovými PTK
Na stanovenie hladiny aktivity a účinku rôznych zlúčenín podľa predloženého vynálezu na KDR/VEGFR2 sa používal nasledujúci bunkový test. Podobné testy receptorových PTK využívajúce stimuláciu špecifického ligandu môžu byť s použitím štandardných techník uskutočnené s rovnakými líniami na ďalších tyrozínkinázach.
VEGF-indukovaná fosforylácia KDR pri ľudských endoteliálnych bunkách pupočníkovej žily (HUVEC) môže byť meraná Western blottingom:
1. Bunky HUVEC (od poolových donorov) boli zakúpené u Clonetics (San Diego, CA) a kultivované podľa návodu dodávateľa. Na tieto testy sa používali iba včasné pasáže (38). Bunky boli kultivované v 100 mm nádobách (Falcon for tissue culture; Becton Dickinson; Plymouth, England) s použitím kompletného EBM média (Clonetics).
2. Na testy inhibičnej aktivity zlúčenín boli bunky trypsínované a naočkované v množstve 0,5-1,0 x 105 buniek/jamka do každej jamky klastrovaných doštičiek (6 jamiek každá)(Costar; Cambridge, MA).
3. 3-4 dny po naočkovaní bol pri 90-100% doštičkách pozorovaný súvislý nárast. Médium bolo zo všetkých jamiek odstránené, bunky boli premývané 5-10 ml PBS a inkubované 18-24 hodín s 5 ml EBM bazálneho média bez žiadnych pridaných suplementov (tzn. bez séra).
4. K bunkám boli pridané sériovo zriedené inhibítory v 1 ml média EBM (25 μΜ, 5 μΜ alebo ΙμΜ konečné koncentrace) a bunky boli inkubované počas 1 hodiny pri teplote 37 °C. Potom bola pridaná do všetkých jamiek ľudská rekombinantná VEGFiôs (R & D Systems) v 2 ml média EBM v konečnej koncentrácii 50 ng/ml a v inkubácii sa pri teplote 37 °C pokračovalo počas 10 minút. Na stanovenie pozadia fosforylácie a fosforylačnej indukcie VEGF boli používané kontrolné bunky ošetrené alebo neošetrené VEGF. Všetky jamky boli potom premývané 5 - 10 ml studeného PBS obsahujúceho lm M ortovanadátu sodného (Sigma). Bunky boli lyzované a rozotreté v 200 μΐ pufra RIPA (50 mM Tris-HCl) pH 7, 150 mM NaCI, 1% NP-40, 0,25% deoxycholátu sodného, 1 mM EDTA) obsahujúceho inhibítory proteázy (PMSF i mM, apretinín 1 pg/ml, pepstatín 1 pg/ml, leupeptín 1 μμ/ιηΐ, Na vanadát l mM, Na fluorid 1 mM) a 1 μg/ml Dnase (všetky chemikálie boli od Sigma Chemical Company, St Louis, MO). Lyzát bol kvôli eliminácii jadier centrifugovaný pri 14 000 ot./min. počas 30 minút.
Ekvivalentné množstvo proteínov potom bolo precipitované pridaním studeného (-20 °C) etanolu (2 objemy) počas minimálne 1 hodiny a maximálne cez noc. Pelety boli rekonštruované vo vzorkovom pufri Laemli obsahujúcom 5% merkaptoetanol (BioRad Hercules, CA) a zahrievané počas 5 minút. Proteíny boli znovu chromatografované gélovou elektroforézou na polyakrylamidovom géle (6%, 1,5 mm Novex, San Deigo, CA) a prenesené do nitrocelulózovej membrány pomocou systému Novex. Po blokácii bovinným sérumalbumínom (3%) boli proteíny pri teplote 4 °C značené polyklonovou protilátkou anti-KDR (C20, Santa Cruz Biotechnology; Santa Cruz, CA) alebo monoklonovou protilátkou antifosfotyrozín (4G10, Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY). Po premytí a inkubácii s HRP-konjugovaným F(ab)2 kozím protikráličím alebo kozím protimyšacím IgG boli jednotlivé pásy vizualizované emisnou chemiluminiscenciou (ECL)(Amersham Life Sciences, Arlington Height, IL). Určité zlúčeniny podľa predloženého vynálezu výrazne inhibovali fosforyláciu bunkovej KDR tyrozínkinázy indukovanú VEGF pri koncentráciách nižších než 50 μΜ.
In vivo model uterinného edému
Pri tomto teste bola meraná kapacita zlúčenín na inhibíciu akútneho prírastku uterinnej hmotnosti u myší, ktorý sa objavil v prvých niekoľkých hodinách po stimulácii estrogénom. Je známe, že tento rýchly prírastok uterinnej hmotnosti je spôsobený edémom v dôsledku zvýšenej permeability uterinnej vaskulatúry. Cullinan-Bove a Koss (Endocrinology (1993), 133: 829837) ukázali podobný dočasný vzťah medzi uterinným edémom stimulovaným estrogénom a zvýšenou expresiou VEGF mRNA v maternici. Tieto výsledky boli potvrdené použitím neutralizačných monoklonových protilátok proti VEGF, ktoré výrazne redukujú akútny prírastok uterinnej váhy po stimulácii estrogénom (WO 97/42187). Preto môže tento systém slúžiť ako model pre in vivo inhibíciu VEGF signalizačnej a asociovanej hyperpermeability a edému.
Látky: Všetky hormóny boli zakúpené u firmy Sigma (St. Louis, MO) alebo Cal Biochem (La Jolla, CA) ako lyofilizované prášky a pripravené podľa návodu dodávateľa.
Nosičové komponenty (DMSO, Cremaphor EL) boli zakúpené u firmy Sigma (St. Louis, MO).
Myši (Balb/c, 8-12 týždňov staré) boli zakúpené u firmy Taconic (Germantown, N Y) a prechovávané s vylúčením patogénov v zariadení na to určenom a podľa „institutional Animal Čare and Use Committee Guidelines“
Spôsob:
l.deň: myšiam Balb/c bola intraperitoneálne (i.p.) podaná injekcia 12,5 jednotiek gonadotropínu zo séra brezivých kobýl (PMSG).
3. deň: myšiam bolo podaných 15 jednotiek ľudského choriogonadotropínu (hCG) i.p.
4. deň: myši boli náhodne rozdelené do skupín s 5 - 10 kusmi. Testované zlúčeniny boli podávané i.p., i.v. alebo p.o. spôsobom, ktorý závisel od rozpustnosti nosiča v dávkach v rozmedzí 1-100 mg/kg. Kontrolná skupina dostala iba nosič a dve skupiny neboli ošetrované.
Po 30 minútach experimentu bola kontrolnej skupine a jednej z neošetrovaných skupín podaná i.p. injekcia 17-estradiolu (500 pg/kg). Po 2-3 hodinách boli zvieratá usmrtené inhaláciou CO2. Po incízii vedenej v strednej línii bola izolovaná každá maternica a odstránená rezom vedeným pod krčkom (cervix) a v mieste spojenia maternice a vajcovodov. Tučné a spojivové tkanivo bolo opatrne odstránené tak, aby sa neporušila pred vážením (vlhká hmotnosť) integrita maternice. Z materníc bola tlakom medzi dvoma filtračnými papiermi s jednolitrovou sklenenou fľašou naplnenou vodou odstránená tekutina. Maternice boli po odstránení tekutiny zvážené (hmotnosť po odstránení tekutiny). Rozdiel v hmotnosti pred a po odstránení tekutiny bol stanovený ako množstvo tekutiny v maternici. Stredný obsah vody ošetrovaných skupín bol porovnávaný s neošetrovanými alebo kontrolnými skupinami. Štatistické parametre boli stanovené Študentovým testom. Na sledovanie odpovede na estradiol bola používaná nestimulovaná kontrolná skupina.
Výsledky demonštrujú, že určité zlúčeniny podľa predloženého vynálezu inhibujú tvorbu edému, keď sú systematicky podávané rôznymi spôsobmi.
Určité zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, ktoré sú inhibítormi angiogénnych receptorových tyrozínkináz môžu tiež vykazovať aktivitu na modele neovaskularizácie Matrigelového implantátu. Model neovaskularizácie Matrigelu zahŕňa tvorbu nových krvných ciev v „mramorovej“ subkutánne implantovanej extracelulámej matrix, ktorá je indukovaná prítomnosťou proangiogénneho faktora produkovaného nádorovými bunkami (viď: Passaniti, A., et al., Lab. Investig. (1992), 67 (4), 519528; Anat. Rec. (1997), 249 (1), 63-73; Int. J. Cancer (1995). 63 (5), 694-701; Vasc. Biol. (1995), 15 (11), 1857-6). Model výhodne prebieha počas 3 - 4 dní a výstupy zahŕňajú makroskopické optické/obrazové vyhodnotenie neovaskularizácie, mikroskopické stanovenie hustoty mikrociev a stanovenie množstva hemoglobínu (Drabkinova metóda) po odstránení implantátu oproti kontrolám u zvierat neošetrovaných inhibítormi. V danom modele je možné alternatívne používať bFGF alebo HGF ako stimulansy.
Určité zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, ktoré inhibujú jednu alebo viac onkogénnych. protoonkogénnych alebo od proliferácie závislých proteínkináz alebo angiogénnu receptoro\ú PTK tiež inhibujú rast primárnych myšacích, potkaních alebo ľudských xenoimplantátoxých nádorov u myší alebo inhibujú metastázy u myšacích modelov.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1 l-(l-Benzyl-4-piperidinyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ídpyrimidín-4-amín (zlúčenina 1)
3-Bróm-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-ol (medziprodukt A) l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-ol (10 g, 73,5 mmol) sa suspenduje v 700 ml vody. Pridá sa bróm (10 ml, 194 mmol) a výsledná reakčná zmes sa zahrieva na teplotu 91 °C cez noc. Po ochladení v ľadovej vode sa pevný podiel spojí filtráciou, čím sa získa 1,508 g 3-bróm-lHpyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-olu vo forme svetlo žltej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO) 8,06 (s 1H), 12,25 (bs, 1H), 14,06 (bs, 1H).
3-Bróm-4-chlór-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín (medziprodukt B)
3-Bróm-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-ol (medziprodukt A) (15,08 g, 70,5 mmol) sa suspenduje v 189 ml oxychloridu fosforečného. Pridá sa dietylanilín (19 ml, 119,4 mmol) a výsledná reakčná zmes sa zahrieva na teplotu 106 °C po dobu 2 hodín. Po ochladení na izbovú teplotu sa rozpúšťadlo odstráni a výsledný jantárový sirup sa naleje do 300 ml ľadovej vody, po 20 minútach sa vodná vrstva extrahuje dietyléterom (500ml x 4). Spojená organická vrstva sa premyje, suší a zahusťuje, čím sa získa 6,87 g 3-bróm-4-chlór-177-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidínu vo forme svetlo žltej pevnej látky.
*H NMR (DMSO) 8,857 (s 1H), 14,84 (bs, 1H);
LC/MS (MH+ = 233).
-(1 -Benzyl-4-piperidinyl)-3 -bróm-4-chlór-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín (medziprodukt C)
3-Bróm-4-chlór-l//-pyrazolo[3,4-čf]pyrimidín (medziprodukt B) (5,0 g, 21,42 mmol), 1-benzyl-4-piperidinol (8,2 g, 42,83 mmol) a trifenylfosfín (11,23 g, 42,83 mmol) sa suspendujú v 250 ml tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa ochladí v ľadovom kúpeli a po kvapkách sa pridá dietyl-azodikarboxylát (6,8 ml, 42,83 mmol). Po 10 minútach sa reakčná zmes nechá ohriať na izbovú teplotu. Po 2 hodinovom miešaní sa rozpúšťadlo odstráni a zvyšok sa prevedie do etylacetátu. Organická vrstva sa premyje, suší a zahusťuje, surový produkt sa pretiahne cez stĺpec Biotage ('..Biotage flash column“) s použitím zmesi dichlórmetánu a etylacetátu (90:10) ako mobilnej fázy, čím sa získa 10,56 g l-(l-benzyl-4-piperidinyl)-3-bróm-4-chlór-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidínu. Produkt s retenčným časom 12,46 minút bol podľa HPLC zo 61 % čistý. (Podmienky HPLC: 5 až 95 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút, veľkosť stĺpca je 3,9 x 150 mm, 300 Ä).
l-(l-Benzyl-4-piperidinyl)-3-bróm-lH-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-4-amín (medziprodukt D)
-(1 -Benzyl-4-piperidmyl)-3-bróm-4-chlór-1 77-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín (medziprodukt
C) (9 g, 61 % čistota) sa zmieša s dioxánom (100 ml) a hydroxidom amónnym (100 ml) v tlakovej nádobe. Zmes sa zahrieva na teplotu 120 °C cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou s použitím etylacetátu ako mobilnej fázy, čím sa získa 1 -(1 -benzyl-4-piperidinyl)-3 -bróm-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín.
'H NMR (CDCb) 1,94 (d, J = 11, 23 Hz, 2H), 2,21 (m, 2H), 2,35 (m, 2H), 3,04 (d, J = 11, 48 Hz), 3,57 (s, 2H), 4,71 (m, IH), 5,98 (s, 2H), 7,34 (m, 5H), 8,33 (s, IH); LC/MS (MH+ = 389).
l-(l-Benzyl-4-piperidinyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidín-4-amín l-(l-BenzyI-4-piperidinyl)-3-bróm-l//-pyrazolo[3,4-íZ]pyrimidín-4-amín (medziprodukt
D) (4,3 g, 11,10 mmol), 4-fenoxyfenylboritá kyselina (medziprodukt V) (2,61 g, 12,21 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (0,77 g, 0,67 mmol) a uhličitan sodný (2,82 g, 26,65 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (100 ml) a vodou (50 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom. Spojená organická vrstva sa premyje, suší a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou s použitím zmesi etylacetát/metanol (98/2) ako mobilnej fázy, čím sa získa 2,65 g l-(l-benzyl-4-piperidinyl)-3-(4-fenoxy-fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu.
‘H NMR (CDCb) L99 (d, J = 11,02 Hz, 2H), 2,25 (m, 2H), 2,47 (m, 2H), 3,07 (d, J = 11,12 Hz), 3,59 (s, 2H), 4,80 (m, IH), 5,52 (s, 2H), 7,07 (d, J = 0,67, IH), 7,15 (m, 3H), 7,37 (m, 6 H), 7,66 (d. J = 8.51, 2H), 8,37 (s. IH); LC/MS (MH+ =477).
Príklad 2
-(4-Fenoxy fény 1)-1 -(4-piperidinyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín l-(l-Benzyl-4-piperidinyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amín (zlúčenina 1) (1,224 g, 2,57 mmol), 10 % paládium na aktívnom uhlí (1,22 g) a mravenčan amónny (0,81 g, 12,84 mmol) sa zmiešajú s 21 ml metanolu. Po 6 hodinovom miešaní pri izbovej teplote sa reakčná zmes filtruje a premyje horúcim metanolom. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa prevedie do dichlórmetánu a organická vrstva sa premyje, suší sa a zahusťuje sa, čím sa získa 0,77 g 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperidinyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu.
'H NMR (CDC13) 2,05 (d, J = 12,17 Hz, 2H), 2,26 (m, 2H), 2,87 (m, 2H), 3,29 (d, J - 12,76 Hz), 4,89 (m, 1H), 5,54 (s, 2H), 7,09 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,39 (m, 2H), 7,67 (d, J - 9,39Hz, 2H), 8,37 (s, 1H); LC/MS (MH+ = 387).
Príklad 3
Trimaleát l-[l-(l-metyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-lŕ/-py-razolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (zlúčenina 3) l-[l-(l-Metyl-4-piperidinyl)-4-piperi.dinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ú]pyrimidín-4-amín (medziprodukt E)
-(4-Fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-4-amín (zlúčenina 2) (199 mg, 0,515 mmol), 1 -metyl-4-piperidón (70 μΐ, 0,566 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (163 mg, 0,772 mmol) a ľadová kyselina octová (34 mg, 0,566 mmol) sa zmiešajú s 3 ml 1,2dichlóretánu. Po miešaní pri izbovej teplote cez noc sa pridajú 2 ml vody, potom pevný hydrogenuhličitan sodný, aby pH bolo asi 8. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje, suší sa a zahusťuje sa. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou, čím sa získa 92 mg l-[l-(l-metyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu.
100 'H NMR (DMSO) 1,47 (m, 2H), 1,72 (d, J = 11,75 Hz, 2H), 1,88 (m, 4H), 2,14 (s, 3H), 2,35 (m, 5H), 2,81 (d, J = 11,32 Hz, 2H), 3,01 (d, J = 11,26 Hz, 2H), 4,62 (m, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (d, J = 8,69 Hz. 2H), 8,23 (s, 1H); LC/MS (MH+ = 484).
Trimaleát l-[l-(l-metyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l/f-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu l-[l-(l-Metyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín (92 mg, 0,190 mmol) sa rozpustí v 25 ml horúceho etylacetátu a pridá sa kyselina maleínová (66 mg, 0,571 mmol) v 5 ml horúceho etylacetátu. Po 2 hodinách pri izbovej teplote sa pevné látky filtrujú sa a sušia sa, čím sa získa 135 mg trimaleátu l-[l-(l-metyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu.
'H NMR (DMSO) 1,87 (m, 2H), 2,22 (m, 4H), 2,45 (m, 2H), 2,77 (s, 3H), 2,18 (bm, 9H), 5,06 (m, 1H), 6,11 (s, 6H), 7,15 (m, 5H), 7,45 (m, 2H), 7,67 (d, J = 8,51Hz, 2H), 8,27 (s, 1H); LC/MS (MH+ = 484).
Príklad 4
Trimaleát 1 -[ 1 -(1 -izopropyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-í/jpyrimidín-4-amínu (zlúčenina 4) l-[ 1 -(1 -izopropyl-4-piperidyl)-4-piperidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-4-amín (medziprodukt F)
3-(4-Fenoxyfenyl)-l-(4-piperidinyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/jpyrimidín-4-amin (zlúčenina 2) (221 mg, 0,572 mmol), l-izopropyl-4-piperidón (89 mg, 0,63 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (182 mg, 0,86 mmol) a ľadová kyselina octová (40 pl, 0,63 mmol) sa zmiešajú s 3 ml 1,2-dichlóretánu. Po miešaní pri izbovej teplote cez noc sa pridajú 2 ml vody, potom pevný hydrogénuhličitan sodný, aby pH bolo asi 8. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje, suší sa a zahusťuje sa. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu, čím sa získa 132 mg 1-[1-(1-izopropy 1-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l/f-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu.
101 'H NMR (DMSO) 0,99 (d, J = 6,54 Hz, 6H), 1,42 (m, 2H), 1,72 (d, J = 11,41 Hz, 2H), 1,88 (d, J = 9,61 Hz, 2H), 2,14 (s, 3H), 2,16 (m, 6H), 2,66 (m, 2H), 2,83 (d, J = 10,98 Hz, 2H), 2,98 (d, J - 8,25 Hz, 2H), 4,62 (m, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (d, J = 8,69 Hz, 2H), 8,23 (s, 1 H); LC/MS (MH+ = 512)
Trimaleát 1 - [ 1 -(1 -izopropyl-4-piperidinyl)-4-piperidiny 1] -3 -(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
- [ 1 -(1 -izopropyl-4-piperidinyl)-4-piperidiny l]-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-d\pyrimidín-4-amm (medziprodukt F) (132 mg, 0,258 mmol) sa rozpustí v 30 ml horúceho etylacetátu a pridá sa kyselina maleínová (90 mg, 0,774 mmol) v 5 ml horúceho etylacetátu. Po 2 hodinách pri izbovej teplote sa pevné látky filtrujú a sušia, čím sa získa 205 mg trimaleátu l-[l-(l-izopropyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu.
'H NMR (DMSO) 1,26 (d, J = 6,34 Hz, 6H), 1,90 (m, 2H), 2,23 (m, 4H), 2,50 (m, 2H), 3,53 (bm, 9H), 5,08 (m, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (d, J = 8,30 Hz, 2H), 8,28 (s, 1H); LC/MS (MH+ = 512).
Príklad 5
Trimaleát 1 - [ 1 -(1 -terc-butoxykarbony l-4-piperidinyl)-4-piperidinyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-4-amínu (zlúčenina 5) l-[l-(l-7’erc-butoxykarbonyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-eQpyrimidín-4-amín (medziprodukt G)
3-(4-Fenoxyfenyl)-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (zlúčenina 2) (350 mg, 0,906 mmol), l-férc-butoxykarbonyl-4-piperidón (198 mg, 0,996 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (288 mg, 1,358 mmol) a ľadová kyselina octová (60 μΐ, 0,996 mmol) sa zmiešajú s 5 ml 1,2-dichlóretánu. Po miešaní pri izbovej teplote cez noc sa pridajú 2 ml vody, potom pevný hydrogénuhličitan sodný, aby pH bolo asi 8. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje, suší a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou, čím sa získa 254 mg l-[l-(l-/erc-butoxykarbonyl-4-piperidyl)-4-piperidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu.
102 ‘H NMR (DMSO) 1,39 (m, 13H), 1,75 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 2,17 (m, 2H), 2,35 (m, 2H), 2,72 (m, 2H), 3,0 (m, 2H), 3,63 (m, 1H), 3,98 (m, 2H), 4,63 (m, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H). 7,67 (d, J = 8,60Hz, 2H), 8,23 (s, 1H); LC/MS (MH+ =484).
Trimaleát l-[l-(l-/erc-butoxykarbonyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu l-[l-(l-ďerc-butoxykarbonyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (254 mg, 0,446 mmol) sa mieša v 25 ml 10 % trifluóroctovej kyseliny v dichlórmetáne cez noc. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne. Pridá sa nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného a výsledná zmes sa mieša po dobu 30 minút. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje, suší a zahusťuje, čím sa získa 108 mg l-[l-(4-piperidinyl)-4-piperidmyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-aminu (medziprodukt GG), ktorý sa použije bez ďalšej purifíkácie.
l-[l-(4-Piperidyl)-4-piperidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-4-amín (108 mg, 0,230 mmol) sa rozpustí v 25 ml etanolu a pridá sa kyselina maleínová (80 mg, 0,690 mmol) v 5 ml horúceho etanolu. Po 2 hodinách pri izbovej teplote sa pevné látky filtrujú a sušia, čím sa získa 155 mg trimaleátu l-[l-(4-piperidyl)-4-piperidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)- 177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu.
'H NMR (DMSO) 1,80 (m, 2H), 2,42 (m, 4), 2,51 (m, 2H), 2,95 (m, 3H), 3,44 (bm, 7H), 5,06 (m, 1H), 6,10 (s, 6H), 7,15 (m, 5H), 7,45 (m, 2H), 7,67 (d, J = 8,51 Hz, 2H), 8,27 (s, 1H); LC/MS (MH+ = 484).
Príklad 6
Dimaleát l-(traz75-4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (zlúčenina 6)
-(l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxy fenyl)- 177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (zlúčenina 9) (medziprodukt I)
103
3- (4-Fenoxyfenyl)-l/f-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (zlúčenina 15) (3,36 g, 11,1 mmol, l,4-dioxaspiro[4.5]dekán-8-ol (medziprodukt M) (5,26 g, 33,3 mmol), trifenylfosfin (5,81 g, 22,2 mmol) sa suspendujú v 130 ml tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa ochladí v ľadovom kúpeli a po kvapkách sa pridá dietyl-azodikarboxylát (3,9 ml, 22,2 mmol). Po 10 minútach sa reakčná zmes nechá ohriať na izbovú teplotu. Po 2 hodinovom miešaní sa rozpúšťadlo odstráni a zvyšok sa prevedie do etylacetátu. Organická vrstva sa premyje, suší a zahusťuje, surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci Biotage s použitím zmesi dichlórmetánu a etylacetátu (od 50:50 do 10:90) ako mobilnej fázy, čím sa získa 3,829 g l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxy-fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu.
*H NMR (CDC13) 1,83 (m, 2H), 1,945 (m, 2H), 2,05 (m, 2H), 2,45 (m, 2H), 3,99 (s, 4H), 4,86 (m, IH), 5,74 (bs, 2H), 7,09 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,39 (m, 2H), 7,66 (d, J = 8,70Hz, 2H), 8,37 (s, IH); LC/MS (MH+ = 444).
4-(4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)-l-cyklohe-xanón (zlúčenina 10) (medziprodukt J)
-(1,4-Dioxaspiro [4.5]dec-8-yl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-l 7/-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-4-amín (zlúčenina 9) (3,80 g, 8,57 mmol) sa suspenduje v 190 ml acetónu a ochladí na teplotu 0 °C. Cez lievik sa pomaly pridá 48 ml 5,ON kyseliny chlorovodíkovej, ľadový kúpeľ sa odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Acetón sa odstráni a vodná vrstva neutralizuje 1,0 N hydroxidom sodným na pH asi 10, pevné látky sa filtrujú a sušia, čím sa získa 2,926 g 4-(4-amino-3-(4-fenoxyfeny 1)-1 Z7-pyrazolo[3,4-tfjpyrimidm-1 -y 1)-1 -cyklohexanónu.
'H NMR (CDC13) 2,39 (m, 2H), 2,62 (m, 6H), 5,30 (m, IH), 6,08 (bs, 2H), 7,09 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,42 (m, 2H), 7,64 (d, J = 8,70Hz, 2H), 8,39 (s, IH); LC/MS (MH+ = 400).
-(7rí7«5-4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl)-3 -(4-fenoxyfeny 1)-1 //-pyrazolo[3,4-tf]pyrimidín-4-amín (medziprodukt K) a l-(cz's-4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)- 1/7-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-4-amín (medziprodukt L)
4- (4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-tfjpyrimidín-1 -yl)-1 -cyklohexanón (zlúčenina 10) (2,916 g, 7,30 mmol), 4-metylpiperazín (2,4 ml, 21,90 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (2,01 mg, 9,49 mmol) a ľadová kyselina octová (1,3 lg, 21,90 mmol) sa zmiešajú so 147 ml 1,2-dichlóretánu. Po miešaní pri izbovej teplote po dobu 6 hodín sa pridá 57 ml vody, potom 3,8 g pevného hydrogénuhličitanu sodného. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje
104 dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje, suší a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/vodný amoniak (90/10/0,2 až 80/20/0,5) ako mobilnej fázy, čím sa získa:
(A) , 0,47 g /ran.s-l-(4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazoio[3,4-ď|pyrimidín-4-amínu.
'H NMR (DMSO) 1,49 (m, 2H), 2,00 (m, 6H), 2,23 (s, 3H), 2,59 (m, 9H), 4,66 (m, 1H), 7,17 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,64 (d, J = 8,69Hz, 2H), 8,23 (s, 1H); LC/MS (MH+ =484).
(B) , 2,582 g l-(czs-4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-lf/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu.
'H NMR (DMSO) 1,58 (m, 2H), 1,68 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,28 (m, 11H), 4,79 (m, 1H), 7,17 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,64 (d, J = 8,69Hz, 2H), 8,23 (s, 1H); LC/MS (MH+ = 484).
Dimaleát l-(Z‘ran5-4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu
7rara-l-(4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-i/|pyrimidín-4-amín (0,47 g, 0,972 mmol) sa rozpustí v 140 ml horúceho etanolu a pridá sa kyselina maleínová (0, 40 g, 2,47 mmol) v 10 ml horúceho etanolu. Po 2 hodinách pri izbovej teplote sa pevné látky filtrujú a sušia, čím sa získa 0,62 g dimaleát l-(tra/7£-4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu.
‘H NMR (DMSO) 1,58 (m, 2H), 2,04 (m, 6H), 2,67 (m, 3H), 2,79 (vbm, 9H), 4,70 (m, 1H), 7,41 (s, 4H), 7,17 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,66 (d, J = 8,63 Hz, 2H), 8,24 (s, 1H); LC/MS (MH^ = 484).
Príklad 7
Trimaleát l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyI]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-yl-amínu (zlúčenina 7)
105
4- [4-Amino-3 -(4-fenoxy fény 1)-1 A-pyrazolo [3,4-ďJpyrimidín-1 -yl] -1 -cyklohexanón (zlúčenina 10) (medziprodukt J) (4,45 g) v 300 ml dichlórmetánu sa mieša za pridávania 3,72 ml A-metylpiperazínu a 1,92 ml octovej kyseliny pod atmosférou dusíka. Po 30 minútach sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (3,40 g) a zmes sa mieša cez noc. Druhý deň sa pridajú 2 ml A-metylpiperazínu, 1,2 ml octovej kyseliny a 1,85 g triacetoxyborohydridu sodného a zmes sa mieša cez noc. Pridajú sa ďalšie 2 ml A-metylpiperazínu, 1,2 ml kyseliny octovej a 1,85 g triacetoxyborohydridu sodného a zmes sa mieša cez noc a zahusťuje vo vákuu. Zvyšok sa mieša s 250 ml vody a 100 ml 6 M kyseliny chlorovodíkovej a nechá stáť cez noc. Zmes sa premyje etylacetátom (2x), vodná vrstva sa alkalizuje (prebytok vodného amoniaku), extrahuje do etylacetátu a tento extrakt sa suší a zahusťuje za vzniku 3,5 g svetlo hnedej gumy, ktorá sa čistí zrýchlenou chromatografiou mobilnou fázou 8:1:1 etylacetát:etanol:trietylamín, čím sa získa 1,2 g čistého produktu vo forme bezfarebnej gumy. Reakciou etylacetátového roztoku gumy s 0,9 g kyseliny maleínovej v etylacetáte sa získa maleátová soľ vo forme amorfnej pevnej látky, ktorá sa spojí a premyje etylacetátom. Sušením vzduchom, potom pri teplote 80 °C/20 mbar sa získa 1,9 g trimaleátu l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-yl-amínu vo forme 0,8 etylacetátového solvátu. Teplota topenia 169 — 170 °C. Vypočítané pre €43,2^1,4^0¼^ 57,5 H 5,7 N 10,9. Namerané C 57,7 H 5,7 N 10,9.
Príklad 8
Dimaleát Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl)-4-fluór-l-benzénsulfónamidu (zlúčenina 8) l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-yl-amín (medziprodukt KA)
Suspenzia 3-amino-4-pyrazolkarbonitrilu (26,85 g, 0,248 mol) vo formamide (140 ml) sa zahrieva pri teplote 180 °C pod atmosférou dusíka po dobu 4 hodín. Precipitát vzniknutý ochladením sa spojí filtráciou a premyje vodou, pevné látky sa sušia v lyofilizátore, čím sa získa 1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-yl-amín vo forme hnedého prášku (87 %, 29,25 g, 0,217 mol):
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 13,34 (br s, 1H), 8,13 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,56 (br s, 2H); TLC (dichlórmetán/metanol = 9:1) Rf 0,16.
106
3-Jód-lL/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-4-yl-amín (medziprodukt LA)
Zmes 4-aminopyrazolo[3,4-ŕ(lpyrimidínu (medziprodukt KA) (11,75 g, 0,087 mol) a Njódsukcínimidu (25,45 g, 0,113 mol) v dimetylformamide (300 ml) sa zahrieva pri teplote 50 °C po dobu 24 hodín. Pridá sa ďalší jV-jódsukcínimid (3,92 g, 0,017 mol) a v zahrievaní pri teplote 50 °C sa pokračuje ďalších 24 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a objem sa zníži na 1/3 za redukovaného tlaku. Do výslednej kašovitej zmesi sa pridá voda (500 ml) za vzniku tmavo hnedého precipitátu, ktorý sa spojí filtráciou, premyje vodou a etanolom a suší vo vákuu, čím sa získa 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-yl-amín vo forme svetlo žltého prášku (97 %, 22 g, 0,084 mol):
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 13,81 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 2,73 (s, 1H), 2,57 (s, 1H); TLC (dichlórmetán/metanol = 9: 1) Rf 0,4.
l,4-Dioxaspiro[4.5]dekán-8-ol (medziprodukt M)
Roztok monoetylénketalu 1,4-cyklohexándiónu (125 g, 0,8 mol) v metanole (2 1) sa ochladí na teplotu 0 °C, potom sa v priebehu 30 minút pridáva po častiach borohydrid sodný (30,3 g, 0,8 mol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 3 hodín a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Žltý sirup sa znovu rozpustí v zmesi dichlórmetán/izopropanol (3:1, 1,5 1) a premyje 2 N hydroxidom sodným (1 1), vodná vrstva sa ďalej extrahuje zmesou dichlórmetán/izopropanol (3:1) a spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, sušia nad síranom sodným a koncentrujú za zníženého tlaku, čím sa získa l,4-dioxaspiro[4.5]dekán-8-ol vo forme bezfarebného oleja (65 %, 82,4 g, 0,65 mol):
’H NMR (CDC13 400MHz) 3,95 (m, 4H), 3,79 (m, 1H), 1,84 (m, 4H), 1,60 (m, 4H). TLC (etylacetát/heptán = 1: 1) Rf 0,16.
l-(l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-yl-amín (medziprodukt N)
3-Jód-l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-yl-amín (medziprodukt LA) (11 g, 0,042 mol) sa suspenduje v tetrahydrofuráne (500 ml) pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Do suspenzie sa pridá roztok l,4-dioxaspiro[4.5]dekán-8-olu (medziprodukt M) (19,98 g, 0,126 mol) v tetrahydrofuráne (50 ml) a následne trifenylfosfín (22,1 g, 0,084 mol), suspenzia sa ochladí na teplotu 0 °C a potom sa pomaly pridá dietyl-azodikarboxylát (14,67 g, 0,084 mol). Po miešaní
107 pri teplote 0 °C po dobu 15 minút sa reakčná zmes nechá ohriať na izbovú teplotu po dobu 1 hodiny. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v etylacetáte (300 - 400 ml) a nechá stáť cez noc. Vzniknutý precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom a suší v lyofilizátore, čím sa získa l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-4-yl-amín vo forme svetlo žltej pevnej látky (54 %, 9,12 g, 0,023 mol):
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,19 (s, 1H), 4,70 (m, 1H), 3,90 (m, 4H), 2,13 (m, 2H), 1,74 (m, 6H). TLC (dichlórmetán/metanol = 9: 1) Rf 0,61.
7erc-butyl-jV-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (medziprodukt P)
Roztok bis(trimetylsilyl)amidu sodného (1,0 M roztok v tetrahydrofuráne, 270 ml, 0,27 mol) sa pod atmosférou dusíka v priebehu 15 minút po kvapkách pridá do roztoku 4-bróm-2fluóranilínu (24,78 g, 0,130 mol) v tetrahydrofuráne (250 ml). Po ďalších 15 minútach sa po častiach pridá di-íerc-butyl-dikarbonát (34,12 g, 0,156 mol) (pozn.: slabo exotermná reakcia) a v miešaní sa pokračuje po dobu 4 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (300 ml) a nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného (150 ml), vodná vrstva sa ďalej extrahuje etylacetátom (2 x 200 ml) a spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom sodným a koncentrujú za zníženého tlaku. Purifikáciou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 10 % až 15 % gradientu etylacetát/heptán sa získa svetlo žltá voskovitá pevná látka (medziprodukt O) (79 %, 30,0 g).
‘H NMR (CDC13, 400 MHz) δ 1,51 (9H, s), 7,22 (1H, m) a 7,24 (2H, m).
Roztok chráneného brómanilínu (medziprodukt O) (54,0 g, 0,186 mol), bis-pinakolátodibóranu (56,8 g, 0,223 mol), octanu draselného (54,7 g, 0,558 mol) a [l,ľ-bis(difenylfosfmo)ferocén]dichlórpaládnatého (II) (II) komplexu (4,65 g, 5,58 mmol) v dimetylformamide (1 1) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Dimetylformamid sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný pevný zvyšok (tmavý) sa rozpustí v dichlórmetáne (500 ml), anorganické zvyšky sa odstránia filtráciou cez vrstvu silikagélu a filtrát sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím gradientu 10 % až 15 % etylacetát/heptán, čím sa získa produkt vo forme žltého viskózneho oleja, ktorý kryštalizuje státím (92 %, 56,5 g).
‘H NMR (CDCb, 400 MHz) δ 1,33 (12H, s), 1,53 (9H, s), 6,82 (1H, br s), 7,46 (1H, d), 7,55 (1H, br d) a 8,12 (1H, br t).
108 ľerc'-butyl-AA-{4-[4-amino-l -(1,4-dioxaspiro[4.5 Jdec-8-yl-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl}karbamát (medziprodukt Q)
Suspenzia l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-4-yl-amínu (medziprodukt N) (6,5 g, 0,016 mol), terc-butyl-.V-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (medziprodukt P) (24,3 g, 0,024 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0) (749 mg, 0,648 mmol) a uhličitanu sodného (4.29 g, 0,04 mol) v odplynenej vode (50 ml) a dimetoxyetán (300 ml) sa zahrievajú pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, potom zriedi etylacetátom (500 ml) a soľankou (500 ml). Vzniknutý pevný podiel sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom a suší vo vákuu, čím sa získa terc-butyl-ÍV-{4-[4-amino-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl-l//-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl}karbamát vo forme hnedej pevnej látky (81 %, 6,38 g, 0,013 mol):
'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 9,19 (s, 1H), 8,23 (s, 1 H), 7,83 (t, 1 H), 7,43 (m, 2H), 4,78 (m, 1H), 3,91 (m, 4H), 2,24 (m, 2H), 1,79 (m, 6H), 1,49 (s, 9H). TLC (dichlórmetán/metanol = 95:5) Rf 0,42.
4-[4-Amino-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yI]-l-cyklohexanón (medziprodukt R) rerc-butyl-V-{4-[4-amino-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yI-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl}karbamát (medziprodukt Q) (6,38 g, 0,013 mol) sa suspenduje v acetóne (400 ml) a ochladí na izbovú teplotu, do tejto suspenzie sa pomaly pridá 5M kyselina chlorovodíková (96 ml). Reakčná zmes sa potom zahrieva pri teplote 60 UC po dobu 3 hodín a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšná kyslá vrstva sa upraví na pH 8 vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Vzniknutý precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou a suší v lyofilizátore, čím sa získa 4-[4-amino-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanón vo forme hnedej pevnej látky (91 %, 4,1 g, 0,012 mol):
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,24 (s, 1H), 7,20 (m, 2H), 6,89 (m, 1H), 5,48 (s, 1H), 5,21 (m, 1H), 2,69 (m, 2H), 2,37 (m, 4H), 2,20 (m, 2H); TLC (etylacetát/heptán) =4:1; MH+ 341.
Cis- a /rans-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/jpyrimidín-4-amín (medziprodukty S a T)
109 'V-metylpiperazín (3,6 g, 0,036 mol) a octová kyselina (2,17 g, 0,036 mol) sa pridajú do suspenzie 4-[4-amino-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanónu (medziprodukt R) (4,1 g, 0,012 mol) v dichlóretáne (200 ml). Potom sa po častiach do reakčnej suspenzie pridá triacetoxyborohydrid sodný (3,32 g, 0,016 mol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. V dvoch dávkach sa v priebehu 5 dní pridá triacetoxyborohydrid sodný (1,79 g, 0,084 mol a 1,28 g, 0,06 mol). Reakčná zmes sa filtruje, premyje dichlóretánom (100 ml) a filtrát sa koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa 3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l-[4-(4-metylpÍperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín vo forme žltej pevnej látky (14,5 g, 0,034 mol). Žltá pevná látka sa čistí a cis!trans izoméry sa separujú zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (93:5:2) ako eluenta, čím sa získa irazzs-3-(4-arnino-3-fluórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (pomalšia zložka) vo forme bielej pevnej látky (115 mg, 0,27 mmol).
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,19 (s, 1H), 7,18 (m, 2H), 6,88 (m, 1H), 5,46 (s, 2H), 4,60 (m, 1H), 2,35 (br m, 4H), 2,14 (s, 3H), 1,95 (br m, 6H), 1,44 (m, 2H), 1,26 (m, 4H), 0,86 (m, 2H). TLC (dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny = 95:5) Rf 0,31.
Tiež sa získa cA-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazi-no)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (1,1 g, 2,59 mmol).
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 8,19 (s, 1H), 7,20 (m, 2H), 6,90 (m, 1H), 5,47 (s, 2H), 4,75 (m, 1H), 3,40 (m, 4H), 2,23 (m, 6H), 2,17 (m, 2H), 1,98 (s, 3H), 1,61 (m, 4H); TLC (dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny = 95:5) Rf 0,37.
Dimaleát jVl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-cf]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-4-fluór-l-benzénsulfónamidu
Zmes 3 -(4-amino-3 -fluórfenyl)-1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-íRpyrimidin-4-aminu (medziprodukt T) (107 mg, 0,252 mmol) a 4-fluórbenzénsulfonylchloridu (49 mg, 0,252 mmol) v pyridíne (2,5 ml) sa zahrieva pri teplote 40 °C po dobu 20 hodín. V priebehu 24 hodín sa pridá ďalší 4-fluórbenzénsulfonylchlorid (15 mg, 0,063 mmol a 10 mg, 0,051 mmol). Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa oranžový olej (220 mg, 0,378 mmol). Surový olej sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Gilson Cl8) s použitím gradientu octan amónny/acetonitril, čím sa získa Nl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lŕí-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-4-fluór-l-benzénsulfónamid
110 (medziprodukt U) vo forme bielej pevnej látky (220 mg). Kyselina maleínová (55 mg, 0,474 mmol) a voľná zásada Nl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lŕf-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenyl)-4-fluór-l-benzénsulfónamidu (92 mg, 0,158 mmol) sa rozpustia v horúcom etanole (3 ml). Ochladením vzniknutý precipitát sa spojí filtráciou a suší v lyofilizátore, čím sa získa dimaleát Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-4-fluór-l-benzénsulfónamidu vo forme bielej pevnej látky (100 mg, 0,172 mmol).
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 10,42 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,86 (m, 2H), 7,41 (m, 5H), 6,16 (s, 4H), 4,67 (br m, 1H), 2,62 (br m, 6H), 2,01 (br m, 6H), 1,56 (br m, 2H); MH+ 583, 6.
Príklad 9 l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-4-yl-amín (zlúčenina 9, medziprodukt I)
4-Fenoxyfenylboritá kyselina (medziprodukt V)
Do roztoku 4-fenoxybrómbenzénu (98,2 g, 0,39 mol) v suchom THF (800 ml) pod atmosférou dusíka pri teplote -78 “C sa po kvapkách pridá «-BuLi (2,5 M roztok v hexánoch) (172 ml, 0,43 mol), čím sa teplota zdvihne na -65 °C. Na dotiahnutie sa zmes nechá miešať pri teplote -78 °C po dobu 15 minút. V priebehu 30 minút sa po kvapkách pridá triizopropylborát (109,2 ml, 0,473 mol). Po pridaní vznikne suspenzia. Zmes sa nechá ohriať na teplotu 0 °C v priebehu 1 hodiny, mieša sa pri teplote 0 °C po dobu 4 hodín. Reakcia sa zastaví pridaním vody (po kvapkách) (300 ml) tak, aby vnútorná teplota nepresiahla 20 °C (je potrebné chladenie ľadom). Zmes sa nechá ohriať na izbovú teplotu cez noc, potom zahusťuje do sucha. Zvyšok sa suspenduje vo vode (600 ml) a okyslí opatrným pridaním koncentrovanej HCI. Výsledný precipitát sa spojí filtráciou a suší vo vákuu pri teplote 45 °C. Pevný podiel sa rozomelie na jemný prášok a trituruje petroléterom (40 - 60 °C). Svetlá pevná látka sa filtruje a suší, čím sa získa 4fenoxyfenylboritá kyselina (68,8 g, 83 %).
‘H NMR (250MHz, d6-DMSO): 7.99 (1H, m), 7,91 (1H, t), 7,83 (1H, d). 7,4 (2H, m), 7,14 (1H, m), 6,92 - 7,07 (5H, m). Mikroanalýza: Vypočítané C (71,4%), H (5,45 %). Namerané C (70,25 %), H (4,7 %).
111
1.4- Dioxaspiro[4.5]dekán-8-ol (medziprodukt M) l,4-Dioxaspiro[4.5]dekán-8-ón (150 g, 0,96mol) sa mieša s MeOH (1200 ml) pod atmosférou dusíka do doby, kým sa nerozpustí. Zmes sa ochladí na teplotu -5 °C v ľadovom kúpeli s acetónom a po častiach sa pridá NaBH4 (72,6 g, 1,82 mol) v priebehu 2 hodín. (T < 10 °C). Na dotiahnutie sa zmes ochladí na teplotu -10 °C, potom nechá ohriať na izbovú teplotu a mieša cez noc pri izbovej teplote. Výsledná zmes sa zahusťuje a nechá reagovať s ľadovým 5 N NaOH (400 ml) a extrahuje CH2C12 (2 x 500 ml), potom extrahuje zmesou 4:1 dichlórmetánňzopropanol (2 x 250 ml). Spojené extrakty sa premyjú soľankou (2 x 200 ml), sušia cez noc (Na2SO4) a zahusťujú, čím sa získa bezfarebný olej, ktorý sa ďalej suší vo vákuu, čím sa získa
1.4- dioxaspiro[4.5]dekán-8-ol (141,8 g, 93 % výťažok).
‘H NMR: CDC13 (250 MHz) 3,91 (4H, m), 3,81 (1H, m), 1,21 - 1,88 (8H, m, alifatické H).
3-Bróm-4-chlór-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín (medziprodukt W)
Do roztoku 3-bróm-4-chlórpyrazolo[3,4-ď]pyrimidínu (medziprodukt B) (7,5 g, 32 mmol), l,4-dioxaspiro[4.5]dekán-8-olu (medziprodukt M) (15,17 g, 96 mmol), trifenylfosfínu (16,86 g, 64 mmol) v THF (275 ml) sa pridá diéty 1-azodikarboxylát (11,14 g, 64 mmol) v THF (50 ml) pri teplote 0 °C pod atmosférou dusíka. Reakčná zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 1 hodiny, ohreje na izbovú teplotu a mieša pri izbovej teplote po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje vo vákuu a rozpustí v horúcej zmesi heptán/EtOAc/DCM (5:1:5). Zrýchlenou chromatografiou s použitím zmesi heptán, heptán/EtOAc (5/1), potom heptán/EtOAc (4/1) sa získa pevná látka, ktorá sa trituruje s heptánom a pevné látky sa odstránia filtráciou, čím sa získa 8,2 g 3-bróm-4-chlór-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidínu vo forme bielej pevnej látky (69 %) [Rf v zmesi 1:1 heptán:EtOAc = 0,5] *H NMR (400MHz, d6-DMSO): 8,89 (1H, s), 4,92 (1H, m), 3,90 (4H, m), 2,16 (2H, m), 1,96 (2H, m), 1,81 (6H, m) HPLC: Tr = 17,11 minút, 96,6 %
3-Bróm-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-yl-amín (medziprodukt X)
3-Bróm-4-chlór-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-177-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín (medziprodukt W) (8,2 g, 21 mmol), koncentrovaný amoniak (100 ml) a dioxán (100 ml) sa zahrievajú
112 v Parrovej nádobe pri teplote 120 °C po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlá sa odtiahnu a zvyšok vytrepe medzi EtOAc a vodu. Etylacetátová vrstva sa suší nad Na^SCk, filtruje a zahusťuje, čím sa získa 3-bróm-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-yl-amín vo forme pevnej látky (4,7 g, 61 %), ktorá sa bez purifikácie použije ďalej.
'H NMR (400MHz, d6-DMSO): 8,21 (1H, s), 4,71 (1H, m), 3,90 (4H, m), 2,11 (2H, m), 1,72 1,88 (6H, m) HPLC: Tr = 11,84 minút, 92,1 % l-(l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-4-yl-amín
3- Bróm-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-l//-pyrazolo[3,4-cťjpyrimidín-4-yl-amín (medziprodukt X) (4,0 g, 11,3 mmol), 4-fenoxyfenylboritá kyselina (medziprodukt V) (2,66 g, 12 mmol), uhličitan sodný (2,87 g, 27 mmol), paládium-tetrakis(trifenylfosfm) (0,78 g, 0,6 mmol) v zmesi dimetoxyetán (120 ml)/voda (60 ml) sa zahrieva pri teplote 85 °C pod atmosférou dusíka po dobu 4 hodín. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a nechá stáť po dobu 72 hodín. Vyprecipitovaný pevný podiel sa filtruje a premyje vodou a dietyléterom (100 ml zakaždým). Sušením vo vákuu po dobu 3 hodín sa získa 4,2 g l-(l,4-dioxaspiro[4.5jdec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-t7]pyrimidín-4-yl-amínu vo forme béžovej pevnej látky (87 %).
’H NMR (400MHz, dó-DMSO) 8,24 (1H, s), 7,67 (2H, m), 7,45 (2H, m), 7,19 (5H, m), 4,78 (1H, m), 3,90 (4H, m), 2,25 (2H, m), 1,71-1,84 (6H, m) MS: MII+ = 444,2 l-(l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-yl-amín
Druhý spôsob
4- Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín (zlúčenina 15) (4,9 g) v 200 ml suchého dimetylacetamidu sa nechá reagovať pod atmosférou dusíka s 60% hydridom sodným (2,0 g) a mieša 30 minút. Pridá sa l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl-4-metyl-l-benzénsulfonát (medziprodukt Y) (15 g) a zmes sa zahrieva pri teplote 105 °C po dobu 42 hodín. Odparením vo vákuu a pridaním vody sa získajú pevné látky, ktoré sa spoja a poriadne premyjú vodou, potom sa sušia na vzduchu. Pevný podiel sa varí s dietyléterom (6 x 120 ml) a filtračný roztok sa zahusťuje. Premytím acetónom sa získa l-(l,4-díoxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfény 1)-1/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-yl-amín vo forme belavej pevnej látky, ktorá sa spojí a premyje s acetónom, potom sa suší na vzduchu. Teplota topenia 200 - 202,5 °C. Vypočítané pre C25H25N5O3 C 67,7 H 5,6 N 15,8. Namerané C 67,6 H 5,8 N 15, 4.
113
Príklad 10
4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-óZ]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanón (zlúčenina 10, medziprodukt J)
Do 1 -(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-4-yl-amínu (zlúčenina 9) (4,2 g, 95 mmol) v acetóne (200 ml) sa po kvapkách pridá HCI (5 N, 50 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 24 hodín. Acetón sa odparí a alkalizuje NaOH (5 N, 60 ml). Extrahuje s EtOAc (3 x 200 ml). Sušením, filtráciou a odparovaním sa získa pevný podiel, ktorý sa trituruje so zmesou EtOAc:Et2O (1:20) a filtruje, čím sa získa 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/Jpyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanón vo forme krémovej pevnej látky (3,4 g, 90 %). Teplota topenia 203 - 205 °C.
‘H NMR (400MHz, d6-DMSO) 8,28 (1H, s), 7,66 (2H, m), 7,44 (2H, m), 7,08 - 7,20 (5H, m), 6,1 - 7,3 (2H, bs), 5,26 (1H, m), 2,71 (2H, m), 2,41 (4H, m), 2,24 (2H, m) HPLC: Tr = 15,43 minút, 95 %
Príklad 11
7enľ-butyl-4-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl-l-piperazínkarboxylát (Zlúčeniny 11 a 12)
Do roztoku 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrÍmidín-l-yl]-l-cyklohexanónu (zlúčenina 10) (2,0 g, 5 mmol) a Zerc-butoxykarbonylpiperazínu (2,8 g, 15 mmol) v dichlóretáne (200 ml) sa pridá ľadová kyselina octová (0,9 g, 15 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (1,59 g, 7,5 mmol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 20 hodín. Reakcia sa zastaví roztokom NaOH (2,5 N, 200 ml). Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva extrahuje dichlórmetánom (2 x 100 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, sušia (Na2SO4) a filtrujú, roztok sa zahusťuje, čím sa získa červený olej, ktorý sa podrobí zrýchlenej chromatografii na stĺpci silikagélu s použitím etylacetátu až 10 % MeOH/etylacetát s 2,5 % MeOH prírastkom. Frakcie zodpovedajúce rýchlejšej látke (Rf v zmesi 9:1 EtOAc: MeOH = 0,27) sa spoja a zahusťujú, čím sa získa torc-butyl-4-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl-l-piperazín-karboxylát vo forme bielej pevnej látky
114 (1.48 g, 53 %). Teplota topenia 170 - 172 °C, identifikovaná ako cL-diastereoizomér (zlúčenina 11).
'H NMR (400MHz, d6-DMSO) 8,23 (1H, s), 7,65 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,43 (2H, m), 7,12 - 7,20 (5H, m), 4,82 (1H, m), 3,34 (4H, m), 2,40 (4H, m), 2,30 (3H, m), 2,04 (2H, m), 1,60 - 1,72 (4H, m), 1,39 (9H, s), HPLC: Tr = 15,74 minút, 98,16 % MS: MH+ = 570,1.
Frakcie zodpovedajúce pomalšej látke (Rf v 9: 1 EtOAc:MeOH = 0, 18) sa spoja a zahusťujú, čím sa získa terc-butyl-4-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazoIo[3,4-</]pyrimidínl-yl]cyklohexyl-l-piperazínkarboxylát vo forme krémovej pevnej látky (0,5 g, 18 %). Teplota topenia 178 - 179 °C, identifikovaná ako /ra«.v-diastereoizomér, (zlúčenina 12) ‘H NMR (400MHz, d6-DMSO) 8,23 (1H, s), 7,65 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,42 (2H, m), 7,11 - 7,20 (5H, m), 4,63 (1H, m), 3,34 (4H, m), 2,47 (5H, m), 1,89 - 2,06 (6H, m), 1,34 - 1,55 (11H, m) HPLC: Tr =15,29 minút, 98,15 % MS: MH+ = 570,1
Príklad 12
Trimaleát cA-3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperazinocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-yl-amínu (zlúčenina 13)
Do czs-/erc-butyl-4-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl-l-piperazínkarboxylátu (zlúčenina 11) (1,4 g, 2,46 mmol) v dichlórmetáne (35 ml) sa po kvapkách pri teplote 0 °C a pod atmosférou dusíka pridá TFA (6 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 48 hodín. Reakcia sa zastaví pridaním NaOH (5 N vodný roztok, 50 ml) a extrahuje dichlórmetánom (3 x 50 ml), premyje vodou, suší (Na2SO4), filtruje sa a odparuje, čím sa získa bezfarebný olej (1,23 g), ktorý sa rozpustí v EtOAc (40 ml). Do tohto roztoku sa pridá roztok kyseliny maleínovej (913 mg) v EtOAc (10 ml). Výsledná pevná látka sa pod dusíkom filtruje a suší ďalšie 2 hodiny vo vákuu, čím sa získa 1,8 g (90 %) trimaleátu cw-3-(4-fenoxy fenyl)-l-(4-piperazinocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-yl-amínu vo forme bielej pevnej látky. Teplota topenia 173 - 175 °C.
’H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 8,26 (1H, s), 7,67 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,42 (2H, m), 7,12 - 7.21 (5H, m). 6,19 (6H, s), 4,86 (1H. m), 3,18 (4H, m), 2,89 (4H, m), 2,67 (1H, m), 2,28 (2H, m), 2,05 (2H, m), 1,74 - 1.80 (4H, m) HPLC: Tr = 12,52 minút, 100 % MS: MH+ = 470,3 Mikroa115 nalýza: Vypočítané pre C39H43N7O13C: 57,3 % H: 5,3 % N: 12,0 % Namerané C: 57,0 % H: 5,3 %N: 11,97%.
Príklad 13
7ran5'-3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperazinocykIohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-yl-amín-trimaleát (zlúčenina 14)
Do fra/íó'-ferc-buty 1-4-4-[4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-1 W-pyrazolo [3:4-<7]pyrimidín-1 -yl]cyklohexyl-l-piperazínkarboxylátu (zlúčenina 12) (0,5 g, 0,88 mmol) v dichlórmetáne (15 ml) sa po kvapkách pri teplote 0 °C a pod atmosférou dusíka pridá TFA (4 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 48 hodín, reakcia sa zastaví roztokom NaOH (5 N, 25 ml) a extrahuje dichlórmetánom (3 x 25 ml), premyje vodou, suší (Na2SO4), filtruje sa a odparuje, čím sa získa béžová pevná látka (0,39 g), ktorá sa rozpustí v EtOAc (20 ml). Do tohto roztoku sa pridá roztok kyseliny maleínovej (290 mg) v EtOAc (5 ml). Výsledná pevná látka sa filtruje pod prúdom dusíka a suší sa ďalšie 2 hodiny vo vákuu, čím sa získa 0,6 g (83 %) trimaleátu trans-3-(f-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperazinocyklohexyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-yl-amínu vo forme bielej pevnej látky. Teplota topenia 153 - 155 °C.
*H NMR (400MHz, d6-DMSO) 8,25 (1H, s), 7,65 (2H, m), 7,43 (2H, m), 7,11 - 7,21 (5H, m), 6,17 (6H, s), 4,69 (1H, m), 3,20 (4H, m), 2,97 (4H, m), 2,84 (1H, m), 2,04 - 2,09 (6H, m), 1,59 (2H, m), HPLC: Tr = 12,65 minút, 100% MS: MH+ = 470,1 Mikroanalýza: Vypočítané pre C39H43N7O13 C: 57,3 % H: 5,3 % N: 12,0 % Namerané C: 57,1 % H: 5,4 % N: 12,10 %
Príklad 14
4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l 7/-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín (zlúčenina 15) l,4-Dioxaspiro[4.5]dekán-8-ol (medziprodukt M) l,4-Dioxaspiro[4.5]dekán-8-ón (150 g, 0,96 mol) sa mieša s MeOH (1200 ml) pod atmosférou dusíka do doby, kým sa nerozpustí. Reakčná zmes sa ochladí na teplotu -5 °C v ľadovom kúpeli s acetónom a po častiach sa v priebehu 2 hodín pridá NaBH4 (72,6 g, 1,82 mol), (T < 10 °C). Na dotiahnutie sa zmes ochladí na teplotu -10 °C a potom sa nechá ohriať na izbo116 vú teplotu a mieša cez noc pri izbovej teplote. Výsledná zmes sa zahusťuje a nechá sa reagovať s ľadovým roztokom 5 N NaOH (400 ml) a extrahuje sa CH2Cb (2 x 500 ml), potom zmesou 4:1 dichlórmetámizopropanol (2 x 250 ml). Spojené extrakty sa premyjú soľankou (2 x 200 ml), sušia sa cez noc (Na^SO^ a zahusťujú sa, čím sa získa bezfarebný olej, ktorý sa ďalej suší vo vákuu (na odstránenie zvyškového izopropanolu), čím sa získa l,4-dioxaspiro[4.5]dekán-8-ol 141,8 g, 93 % výťažok.
'H NMR: CDCh (250 MHz): 3,91 (4H, m), 3,81 (1H, m), 1,21 - 1,88 (8H, m, alifatické H).
l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl 4-metyl-l-benzénsulfonát (medziprodukt Y)
Do miešaného roztoku l,4-dioxaspiro[4.5]dekán-8-olu (medziprodukt M) (99,8 g, 0,63 mol) v pyridíne (450 ml) pri teplote 0 °C a pod atmosférou dusíka sa po častiach pridá tosylchlorid (132,4 g, 0,69 mol) tak, aby teplota nepresiahla 2 °C. Na dotiahnutie reakcie sa zmes nechá pomaly ohriať na izbovú teplotu a mieša sa pri izbovej teplote cez noc, pridá sa voda (750 ml) a uskutoční sa extrakcia EtOAc (500 ml potom 2 x 250 ml). Spojené extrakty sa premyjú 3 N HCI (3 x 300 ml), soľankou (300 ml) a sušia sa nad Na2SO4, filtrujú sa a zahusťujú, čím sa získa svetlo žltý olej (200 g surového produktu). Tento olej sa mieša s petroléterom (40 60°C) (200 ml) a uskutoční sa kryštalizácia. l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl-4-metyl-l-benzénsulfonát sa filtruje, premyje sa petroléterom (40 - 60°C) (200 ml) a suší sa vo vákuu. Výťažok = 181,0 g, 92%.
l,l-Dikyano-2-hydroxy-2-(4-fenoxyfenyl)etén (medziprodukt Z)
4-Fenoxybenzoová kyselina (48 g) sa pridá do 100 ml tionylchloridu a zahrieva sa pod jemným refluxom po dobu 1 hodiny. Tionylchlorid sa odstráni destiláciou, zvyšný olej sa rozpustí v toluéne a prchavý podiel sa odstráni pri 80 °C/20mbar. Výsledný chlorid kyseliny sa rozpustí v 200 ml toluénu a 35 ml tetrahydrofuránu. Pridá sa 14,8 g malónonitrilu a roztok sa mieša pri teplote -10 °C za pridávania 57,9 g diizopropyletyletylamínu v 150 ml toluénu, pričom teplota nepresiahne 0 °C. Po 1 hodine pri teplote 0 °C sa zmes ďalej mieša pri teplote 20 °C cez noc. Amín-hydrochlorid sa odstráni filtráciou a filtrát zahusťuje vo vákuu. Zvyšok vytrepáva v etylacetáte a premyje sa 1,25 M kyselinou sírovou, potom soľankou a suší sa nad síranom sodným. Odparením sa získa polopevný zvyšok, ktorý sa mieša s malým množstvom etylacetátu, čím sa získa 4,1 g čistého produktu vo forme bielej pevnej látky. Teplota topenia 160- 162 °C. Odparením filtrátu sa získa 56.5 g (96 %) l,l-dikyano-2-hydroxy-2-(4-fenoxyfenyl)eténu vo forme šedo-hnedej pevnej látky dostatočne čistej na ďalšie použitie.
117 ‘H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) 8,18 (široké s, 1H), 7,62 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, 1H), 7,07 (d, 2H), 6,94 (d, 2H).
l,l-Dikyano-2-metoxy-2-(4-fenoxyfenyl)etén (medziprodukt AA)
1.1- Dikyano-2-hydroxy-2-(4-fenoxyfenyl)etén (medziprodukt Z) (56,5 g) v 780 ml acetonitrilu a 85 ml metanolu sa mieša pod atmosférou dusíka pri teplote 0 °C za pridávania 52,5 ml diizopropyletylamínu, potom 150 ml 2 M trimetylsilyldiazometánu v THF. Po 2 dennom miešaní pri teplote 20 °C sa kvôli chromatografii pridajú 2 g silikagélu, čím by malo prestať uvoľňovanie dusíka. Hnedo-červený roztok sa zahusťuje vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v etylacetáte a premyje poriadne vodou, potom soľankou, suší sa a zahusťuje. Zvyšok sa extrahuje dietyléterom (3 x 250 ml), dekantuje od nerozpustného oleja. Odparením éterových extraktov sa získa 22,5 g l,l-dikyano-2-metoxy-2-(4-fenoxyfenyl)eténu vo forme svetlo-oranžovej pevnej látky, ktorá je podľa TLC takmer čistá (3:2 etylacetát:cyklohexán). Nerozpustný olej sa čistí zrýchlenou chromatografiou, čím sa získa 15,0 g červeno-oranžového oleja. Spojený výťažok (63 %) 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 7,71 (d, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,29 (m, 1H), 7,16 (m, 4H), 3,93 (s, 3H).
3- Amino-4-kyano-5-(4-fenoxyfenyl)pyrazol (medziprodukt AB)
1.1- Dikyano-2-metoxy-2-(4-fenoxyfenyl)etén (medziprodukt AA) (22,5 g) a 1,1-dikyano-2-metoxy-2-(4-fenoxyfenyl)eténový olej (15 g) sa nechá reagovať s roztokom 18 ml hydrazín-hydrátu v 25 ml etanolu a zahrieva sa na parnom kúpeli po dobu 1 hodiny, pridá sa 15 ml etanolu, potom 10 ml vody. Vyprecipitovaný pevný podiel sa spojí a premyje zmesou 4:1 etanohvoda, potom suší na vzduchu, čím sa získa 3-amino-4-kyano-5-(4-fenoxyfenyl)pyrazol vo forme svetlo oranžovej pevnej látky 30,0 g (80 %). Teplota topenia 187 - 188,5 °C.
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 12,11 (široké s, 1H), 7,80 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 1H), 7,09 (m, 4H), 6,47 (široké s, 2H). Vypočítané pre C16H12N4O C 69,6 H 4,3 N 20,3. Namerané C 69,5 H 4,4 N 20,2.
4- Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín
3-Amino-4-kyano-5-(4-fenoxyfenyl)pyrazol (medziprodukt AB) (29,5 g) sa suspenduje v 300 ml formamidu a zahrieva sa pod atmosférou dusíka pri teplote 180 °C po dobu 4 hodín,
118 ochladí sa na teplotu 30 °C, pridá sa 300 ml vody a pevný podiel sa spojí, premyje poriadne vodou, potom metanolom a suší sa na vzduchu, čím sa získa 24,6 g čistého produktu (80 %) 4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín. Teplota topenia 267 - 269 °C vo forme svetlej hnedo-šedej pevnej látky. Vypočítané pre C17H13N5O C 67,3 H 4,3 N 23,1. Namerané C 67,0 H 4,4 N 23,1.
Príklad 15
4-Amino-l-cyklopentyl-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín (zlúčenina 16)
4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín (zlúčenina 15) (0,91 g) v 50 ml suchého dimetylacetamidu sa mieša pod atmosférou dusíka pri teplote 25 °C za pridávania 60 % hydridu sodného (0,20 g). Po 30 minútovom miešaní sa pridá brómcyklopentán (0,8 ml) a zmes sa mieša cez noc. Po odparovaní vo vákuu sa zvyšok nechá reagovať s vodou a extrahuje sa do etylacetátu. Zrýchlenou chromatografiou (3:2 cyklohexámetylacetát) sa získa 0,36 g 1 -cyklopentyl-4-(cykiopentylamino)-3-(4-fenoxyfenyl)-1 77-py razolo[3,4-<7]pyrimidínu vo forme bezfarebného oleja.
’H NMR (DMSO) 8,319 (s, IH). 7,65 - 7,69 (m, 2H), 7,40 - 7,48 (m, 2H), 7,09 - 7,23 (m, 5H), 5,926 - 5,955 (d, IH), 5,17 - 5,29 (kvintet, IH), 4,44 - 4,52 (m, IH), 1,86 - 2,12 (m, 8H), 1,39- 1,72 (m, 8H).
Ďalšou elúciou etylacetátom sa získa 4-amino-l-cyklopentyl-3-(4-fenoxyfenyl-17/-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín. Rekryštalizáciou z metyl(terc-butyl)éteru sa získajú bezfarebné ihličky. Teplota topenia 134,7 - 135,6 °C (0,2 g, 18%). Vypočítané pre C22H2iN5O C 71,2 H 5,7 N 18,9. Namerané C 71,05 H 5,7 N 18,8.
’H NMR (DMSO) 8,237 (s, IH). 7,64 - 7,68 (m, 2H), 7,40 - 7,47 (m, 2H), 7,10 - 7,22 (m, 5H), 6,85 (veľmi široké s, 2H), 5,17 - 5,30 (kvintet, IH), 1,67 - 2,09 (m, 8H),
Príklad 16
3-(4-Fenoxyfenyl)-l-(tetrahydropyrán-4-yl)-l//-pyrazolo[3,4-íť]pyrimidín-4-yl-amín (zlúčenina 17)
119
3-(4-Fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-yl-amín (zlúčenina 15) (0,97 g) v 33 ml suchého dimetylacetamidu sa mieša pod atmosférou dusíka za pridávania 60 % hydridu sodného (0,22 g). Po 30 minútach sa pridá tetrahydropyrán-4-yl-tosylát (1,0 g) a zmes zahrieva pri teplote 105 °C po dobu 4 hodín, potom pri teplote 135 °C po dobu 3,5 hodiny.
Odparovaním vo vákuu a pridaním vody sa získa svetlo hnedý pevný podiel, ktorý sa spojí, premyje poriadne vodou a suší na vzduchu. Zrýchlenou chromatografiou v zmesi 19:1 etylacetát:trietylamín ako mobilnej fáze sa získa 0,22 g (18 %) 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(tetrahydropyrán-4-yl)-l//-pyrazolo[3,4-cľ]pyrimidín-4-yl-amín. Teplota topenia 187 - 187,5 °C. Vypočítané pre C22H21N5O2 C 68,2 H 5,4 N 18,1 Namerané C 68,1 H 5,5 N 18,0.
Príklad 17
Cw-(4- (4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-1 TT-pyrazolo [3,4-V]pyrimidín-3 -yl} fény l)(fenyl)metanón-dimaleát (zlúčenina 18) a dimaleát trans-(4-{4-amino- l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/f-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidín-3-yl}fenyl)(fenyl)metanónu (zlúčenina 19)
Fenyl-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]metanón (medziprodukt AL)
Zmes 4-brómbenzofenónu (2,97 g, 0,011 mol), diborónpinakolesteru (3,47 g, 0,014 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládia (v komplexe s dichlórmetánom (1:1) (0,28 g, 0,00034 mol) a octanu draselného (3,34 g, 0,034 mol) v V, 77-dimetylformamidu (65 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (50 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/rt-heptán (5:95) ako mobilnej fázy, čím sa získa fenyl-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]metanón (2,01 g, 0,0065 mol):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 7,85 (d, 2H), 7,71 (m, 5H), 7,56 (d, 2H), 1,32 (s, 12H); TLC (etylacetát/heptán 1: 9) Rf 0,36.
4-(4-Amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl)-l-cyklohexanón (medziprodukt AK)
120 l-(l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidín-4-yl-amín (medziprodukt N) (13,12 g, 32,7 mmol) sa suspenduje v acetóne (240 ml) a zmes sa ochladí na teplotu 0 °C. Po kvapkách sa pridá vodná 5 N HCI (200 ml). Teplota sa udržuje počas pridávania pod 4 °C. Po pridaní sa zmes nechá ohriať na izbovú teplotu a mieša sa po dobu 18 hodín, zostávajúci pevný podiel sa odstráni filtráciou a filtrát sa neutralizuje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, precipitát sa spojí filtráciou a premyje vodou a suší sa vo vákuu, čím sa získa 4-(4-arnino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-ď)pyrirnidín-l-yl)-l-cyklohexanón (8,20 g, 32,8 mmol):
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,23 (s, 1H), 5,18 (m, 1H), 2,64 - 2,73 (m, 2H), 2,26 - 2,37 (m, 4H), 2,17-2,30 (m, 2H).
Cis- a /,rarts-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amín (medziprodukty AC a AD)
Zmes 4-(4-amino-3-jód-1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-1 -yl)-1 -cyklo-hexanónu (medziprodukt AK) (1,32 g, 0,0037 mol), A-metylpiperazínu (1,11 g, 0,011 mol) a octovej kyseliny (0,66 g, 0,011 mol) v 1,2-dichlóretáne (50 ml) sa mieša po dobu 10 minút pri teplote 40 °C a naraz sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (1,09 g, 0,0052 mol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 24 hodín a pridá sa triacetoxyborohydrid sodný (0,25 g, 0,0012 mol). Zmes sa mieša ďalších 48 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (80 ml) a chloroform (50 ml). Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva sa ďalej extrahuje chloroformom (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa žltý’ olej. Zlúčenina sa ďalej purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/trietylamín/metanol (88:11:1) ako mobilnej fázy, čím sa získa c/5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lf/-pyrazolo[3,4í/jpyrimidín-4-amin vo forme bielej pevnej látky (0,93 g, 0,0021 mol): *H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 8,18 (s, 1H), 4,71 (m, 1 H), 2,38 - 1,9 (m, 13H), 2,17 (s, 3 H), 1,63 - 1,5 (m, 4H); TLC (dichlórmetán/trietylamín = 9:1) Rf 0,24 a íra«5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (0,38 g. 0,00086 mol): ‘H NMR (DMSO-d6. 400 MHz) 8.18 (s, 1H), 4,55 (m, 1 H), 2,38 - 1,9 (m, 15H), 2.15 (s, 3H), 1,42 (m, 2H); TLC (dichlórmetán/trietylamín = 9:1) Rf0,l 1.
121
Dimaleát cis-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazinojcyklohexy 1]-1 N-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm3-yl} fenyl)(fenyl)metanónu
Zmes fenyl-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]metanónu (medziprodukt AL) (0,241 g, 0,00078 mol), cis-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lŕf-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu (medziprodukt AC) (0,30 g, 0,00068 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,047 g, 0,000041 mol) a uhličitanu sodného (0,18 g, 0,0017 mol) sa zahrieva v zmesi dinietyléteru etylénglykolu (10 ml) a vody (5 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vy trepe medzi nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (50 ml) a etylacetát. Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva ďalej extrahuje etylacetátom (2x). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/trietylamín/metanol (95:4:1) ako mobilnej fázy, čím sa získa czs-{4-[4-amino-l-(4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl)]-l/7-pyrazolo[3,4ď]py-rimidín-3-yl-]-fenyl}(fenyl)metanón vo forme bielej pevnej látky (0,195 g, 0,0004 mol), ktorá sa rozpustí v refluxujúcom etanole (17 ml) a pridá sa vopred zahriaty roztok kyseliny maleinovej (0,137 g, 0,0018 mol). Zmes sa refluxuje po dobu 10 minút, ochladí sa na izbovú teplotu a precipitát spojený filtráciou sa premyje etylacetátom a suší, čím sa získa czí-(4-{4amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)(fenyl)metanóndimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,221 g, 0,0003 mol):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,28 (s, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,83 (m, 4H), 7,73 (t, 1H), 7,61 (m, 2H), 6,15 (s, 4H), 4,88 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,71 (s, 3H), 2,28 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 1,74 (m, 4H); RP HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,63 minút. MS: MH+ 496.
Dimaleát rrarcs-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl) fenyl) (fenyl)metanónu
Podobným spôsobom ako pre Zrara-izomér sa pripraví Zra«s-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}fenyl) (fenyl)metanóndimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,155 g, 0,0002 mol):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,27 (s, 1H), 7,90 (d. 2H), 7,83 (m, 4H), 7,73 (t, 1H), 7,61 (m, 2H), 6,17 (s, 4H), 4,77 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2.68 (s. 3H), 2,05 (br, 6H), 1,61 (br, 2H)
122
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 μηι, 100 Á, 25 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,59 minút. MS: MH+ 496.
Príklad 18
C/y-3-(4-anilmofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín-trimaleát (zlúčenina 20)
JV-fenyl-/V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yI)fenyl]amín (medziprodukt AE)
Zmes N, /V-(4-brómfenyl)-fenylamínu (0,60 g, 0,0024 mol), diborón-pinakolesteru (0,74 g, 0,0029 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfmo)ferocén]dichlórpaládnatého (II) v komplexe s dichlórmetánom (1:1) (0,059 g, 0,000073 mol) a octanu draselného (0,71 g, 0,0073 mol) v Λζ/V-dimetylformamide (25 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (50 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/rc-heptán (2:98) ako mobilnej fázy, čím sa získa Aľ-fenyl-jV-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,33 g, 0,0011 mol):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,42 (s, 1H), 7,51 (d, 2H), 7,27 (m, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,01 (d, 2H), 6,83 (t, 1H), 1,27 (s, 12H); TLC (etylacetát/heptán 1:9) Rf 0,54.
CL-3-(4-anilinofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í7|pyrimidín-4-amín-trimaleát
Zmes A-fenyl-A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (medziprodukt AE) (0,33 g, 0,0011 mol), cL-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu (medziprodukt AC) (0,43 g, 0,00097 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,0067 g, 0,000058 mol) a uhličitanu sodného (0,26 g. 0,0024 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (16 ml) a vody (8 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva ďalej extra123 huje etylacetátom (2x). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým a zahusťujú sa za zníženého tlaku, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/trietylamín/metanol (92:7:1) ako mobilnej fázy, čím sa získa 3-(4-anilinofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ríjpyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (0,400 g, 0,00074 mol), ktorá sa rozpustí pri refluxe v etanole (17 ml) a pridá sa vopred ohriaty roztok kyseliny maleínovej (0,342 g, 0,003 mol) v etanole (8 ml). Zmes sa refluxuje po dobu 10 minút, ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom a suší, čím sa získa cis-3-(4-anilinofenyl)-1-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-4-amín-trimaleát (0,44 g, 0,00053 mol).
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,45 (s, IH), 8,23 (s, IH) 7,52 (d, 2H), 7,28 (m, 2H), 7,20 (m, 4H), 6,89 (t, IH), 6,19 (s, 6H), 4,83 (m, IH), 3,1 (br, 9H), 2,72 (s, 3H), 2,28 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 1,74 (m, 4H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitri 1-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,12 minút, MH+ 483.
Príklad 19
C/s’-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín4- amín-dimaleát (zlúčenina 21) a maleát /rans-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amínu (zlúčenina 22)
5- Bróm-2-fenoxypyridín (medziprodukt AF)
Roztok fenolu (1,99 g, 0,021 mol) v jV,/V-dimetylformamide (60 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C a naraz sa pridá 60 % suspenzia hydridu sodného v parafíne (0,89 g, 0,022 mol). Zmes sa mieša pri tejto teplote po dobu 10 minút a naraz sa pridá 2,4-dibrómpyridín. Zmes sa nechá ohriať na izbovú teplotu za miešania pod atmosférou dusíka počas 72 hodín a zahrieva sa pri teplote 70 °C po dobu 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v etylacetáte (150 ml) a premyje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (100 ml), soľankou (80 ml), suší sa síranom horečnatým a zahusťuje. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-LC/MS (Gilson-Micromass C18, 5 gm, 130 Á, 21 cm, 0 % -100 % acetonitril-0,1 M
124 octan amónny v priebehu 9 minút, 25 ml/min), čím sa získa 2-bróm-5-fenoxypyridín vo forme žltého oleja (1,40 g, 0,0056 mol):
'H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) 8,28 (s, 1H), 8,07 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,25 (t, 1H), 7,16 (d, 2H), 7,04 (d, 1H); MS: MH+ 250
2-Fenoxy-5-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridín (medziprodukt AG)
Zmes 5-bróm-2-fenoxypyridínu (1,40 g, 0,0056 mol), diborón-pinakolesteru (medziprodukt AF) (1,71 g, 0,0067 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,137 g, 0,00017 mol) a octanu draselného (1,65 g, 0,0168 mol) v Λ/Ν-dimetylformamide (50 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (40 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/«-heptán (1:9) ako mobilnej fázy, čím sa získa 2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)-pyridín vo forme bielej pevnej látky (čistota 93 % (HPLC), 1,20 g, 0,004 mol):
'H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) 8,36 (s, 1H), 8,03 (d, 1Η), 7,45 (t, 2H), 7,25 (t, 1H), 7,16 (d, 2H), 7,01 (d, 1H), 1,30 (s, 12H); MS: MH+ 298 l-(l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amm (medziprodukt AH)
Zmes 2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridínu (medziprodukt AG) (1,1 g, 0,0037mol), l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jód-l/7-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-4amínu (medziprodukt N) (1,29 g, 0,0032 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,22 g, 0,00019 mol) a uhličitanu sodného (0,85 g, 0,008 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (40 ml) a vody (20 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a dimetyléter etylénglykolu sa odstráni za zníženého tlaku, precipitát sa spojí filtráciou, premyje jedenkrát vodou, acetonitrilom (2x) a dietyléterom (2x), čím sa získa l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín vo forme belavej pevnej látky (1,03 g, 0,0023 mol):
125 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,36 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,03 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,22 (m, 3H), 7,16 (d, 1H), 4,81 (m, 1H), 3,93 (s, 4H), 2,24 (m, 2H), 1,88 (m, 6H); MS: Míľ 445
4-[4-Amino-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-lN-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanón (medziprodukt AI) l-(l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (medziprodukt AH) (1,00 g, 0,0022 mol) sa trituruje v acetóne (20 ml) a po kvapkách sa pridá 5 N roztok kyseliny chlorovodíkovej. Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 hodín a neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou (2x) a suší sa, čím sa získa 4-[4-amino-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanón vo forme belavej pevnej látky (čistota 94 % (HPLC), 0,90 g, 0,0022 mol)):
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,36 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,07 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,22 (m, 3H), 7,16 (d, 1H), 5,27 (m, 1H), 2,74 (m, 2H), 2,35 (m, 6H);
RP-HPLC (C 18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,29 minút.
D imaleát cis-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexy 1] -3 -(6-fenoxy-3 -pyridyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidín-4-amínu a maleát Zran.y-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu
Zmes 4-[4-amino-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-1H-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-1 -yl]-1 -cyklohexanón (medziprodukt AI) (0,90 g, 0,0022 mol), N-metylpiperazínu (0,676 g, 0,0067 mol) a octovej kyseliny (0,405 g, 0,0067 mol) v 1,2-dichlóretánu (40 ml) sa mieša po dobu 10 minút a naraz sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (0,62 g, 0,0029 mol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 24 hodín a triacetoxyborohydrid sodný (0,30 g, 0,0014 mol) sa pridá. Zmes sa mieša ďalších 48 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (80 ml) a dichlórmetán (50 ml). Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva ďalej extrahuje dichlórmetánom (2x) (50 ml). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa žltý olej. Zlúčenina sa ďalej purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/trietylamín/metanol (89:10:1) ako mobilnej fázy, čím sa získa cA-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3126 pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amín (medziprodukt AJ): TLC (dichlórmetán/trietylamín = 9:1) Rf 0,29 a /rflra?-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín: TLC (dichlórmetán/trietylamín = 9:1) Rf 0,14.
Roztok czs-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (medziprodukt AJ) (0,53 g, 0,0011 mol) v zmesi etylacetátu (25 ml) a etanolu (4 ml) sa zahrieva k refluxu. Potom sa pridá vopred ohriaty roztok kyseliny maleínovej (0,51 g, 0,0044 mol) v etylacetáte (15 ml). Zmes sa refluxuje ďalších 10 minút, ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom a suší, čím sa získa cis-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amín-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,61 g, 0,00084 mol):
‘H NMR (DMSO-dfe 400 MHz) 8,38 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,46 (t, 2H), 7,22 (m, 4H), 6,15 (s, 4H), 4,85 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,70 (s, 3H), 2,25 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,74 (m, 4H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,93 minút. MS: MH+ 485.
Podobným spôsobom ako pre /rans-izomér sa pripraví maleát /razz5-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (0,049 g, 0,00008 mol):
‘H NMR (DMSO-dň, 400 MHz) 8,35 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,46 (t, 2H), 7,22 (m, 4H), 6,21 (s, 4H), 4,70 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,69 (s, 3H), 2,05 (br, 6H), 1,61 (br, 2H):
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 25 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,40 minút. MS: MH+ 485.
Príklad 20
Dimaleát trans-bcnzy\-N- {4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl}karbamátu (zlúčenina 23)
Benzyl-/V-(4-bróm-2-metoxyfenyl)karbamát (medziprodukt AM)
127
Roztok uhličitanu sodného (3,12 g, 0,0371 mol) vo vode (35 ml) sa pridá do roztoku 4bróm-2-metoxyanilínu (3,00 g, 0,0148 mol) v dioxáne (50 ml). Výsledná zmes sa mieša po dobu 5 minút a v priebehu 3 minút sa po kvapkách pridá benzyl-chloroformiát (3,8 g, 0,022 mol). Reakčná zmes sa mieša po dobu 2 hodín, potom sa dioxán odstráni za zníženého tlaku a vodná fáza sa extrahuje (2x) etylacetátom (100 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým a po filtrácii sa koncentrujú za zníženého tlaku. Výsledný zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/rc-heptán (5:95) ako mobilnej fázy, čím sa získa benzyl jV-(4-bróm-2-metoxyfenyl)karbamát (3,75 g, 0,011 mol) vo forme bielej pevnej látky:
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,72 (s, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,38 (m, 5H), 7,20 (s, 1H), 7,10 (d, 1Η), 5,14 (s, 2H), 3,81 (s, 3H)
TLC (etylacetát/heptán 1: 9) Rf 0,21
Benzyl-jV-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenylkarbamát (medziprodukt AN)
Zmes benzyl W-(4-bróm-2-metoxyfenyl)karbamátu (medziprodukt AM) (3,0 g, 0,0089 mol), diborón-pinakolesteru (2,72 g, 0,0107 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,219 g, 0,00027 mol) a octanu draselného (2,65 g, 0,027 mol) v N,yV-dimetylformamide (70 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:9) ako mobilnej fázy, čím sa získa benzyl-V-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (1,6 g, 0,0042 mol) vo forme bielej pevnej látky:
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,66 (s, 1H), 7,80 (d, 1 H), 7,38 (m, 5H), 7,25 (d, 1H), 7,17 (s, 1H), 5,15 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 1,29 (s, 12H);
TLC (etylacetát/heptán 1: 9) Rf 0,13
Dimaleát Zraw-benzyl-V-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo-[3,4rijpy rimidín-3 -y 1} -2-metoxy fenyl} karbamátu
128
Zmes benzyl-/V-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-fenyl]karbamátu (medziprodukt AD) (1,26 g, 0,0033 mol), cA-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (1,21 g, 0,0027 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,19 g, 0,00016 mol) a uhličitanu sodného (0,726 g, 0,00685 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (40 ml) a vody (20 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vy trepe medzi nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (100 ml) a etylacetát (100 ml). Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva ďalej extrahuje (2x) etylacetátom (600 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/trietylamín/metanol (94:5:1) ako mobilnej fázy, čím sa získa /ra/w-benzyl-jV-({4-{4-amino-l-[4-(4-mety lpiperazinoj-cyklohexy 1]-1 H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfeny 1} karbamát (medziprodukt AO) vo forme bielej pevnej látky (1,29 g, 0,0023 mol).
7A/«.s-benzyl-:V-( {4- {4-amino-1 -[4-(4-mety lpiperazino)-cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4d]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl}karbamát (medziprodukt AO) (0,222 g, 0,00039 mol) sa rozpustí v refluxujúcom etanole (17 ml) a pridá sa vopred ohriaty roztok kyseliny maleínovej (0,135 g, 0,00117 mol) v etanole (8 ml). Zmes sa refluxuje po dobu 10 minút, ochladí sa na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom a suší, čím sa získa dimaleát tra/75-benzyl-V-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-l//-pyrazolo[3,4-c7|pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl}-karbamát vo forme bielej pevnej látky (0,250 g, 0,00031 mol):
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,76 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,40 (m, 5H), 7,20 (m, 2H), 6,15 (s, 4H), 5,18 (s, 2H), 4,69 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,86 minút. MS: MH+ 570.
Príklad 21
7rarts-/V-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl}benzamid-dimaleát (zlúčenina 24)
129
3-(4-Amino-3-rnetoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyriniidín-4-amín (medziprodukt AP)
Do miešaného roztoku ŕra«,y-benzyl-.N-(4-4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl-2-metoxyfenyl)-karbamát (medziprodukt AO) (0,95 g, 0,00167 mol) v etanole (35 ml) sa pridá 10 % paládium na aktívnom uhlí (0,33 g) a výsledná zmes sa hydrogenuje pod atmosférou vodíka po dobu 18 hodín, katalyzátor sa odstráni filtráciou cez vrstvu celitu a filtrát sa koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/í-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (0,71 g, 0,00164 mol):
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 8, 81 minút.
MS: MH+ 437.
7ra«j'-Aľ-(4-4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl-2-metoxyfenyljbenzamid-dimaleát
Do miešaného roztoku 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu (medziprodukt AP) (0,31 g, 0,00071 mol) a benzoylchloridu (0,105 g, 0,00075 mol) sa po kvapkách pridá v priebehu 5 minút v bezvodom dichlórmetáne (10 ml) A-etyl-ACV-diizopropylamín (0,11 g, 0,00085 mol) a v miešaní pod atmosférou dusíka sa pokračuje ďalšie 4 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (30 ml) a vodu (25 ml). Organická fáza sa suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/trietylamín/metanol (94:5:1) ako mobilnej fázy, čím sa získa ŕraA?.y-/V-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yI}-2-metoxyfenyl}benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,250 g, 0,00045 mol), ktorá sa rozpustí v refluxujúcom etanole (17 ml). Potom sa pridá vopred ohriaty roztok kyseliny maleínovej (0,155 g, 0,00133 mol) v etanole (8 ml). Zmes sa refluxuje po dobu 10 minút, ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom a suší, čím sa získa tra«5--/V-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl}benzamid-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,196 g, 0,000254 mol):
130 ‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 9,49 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,08 (d, 1H), 7,98 (d, 2H), 7,62 (m, 3H), 7,29 (m, 2H), 6,16 (s, 4H), 4,71 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,20 minút. MS: MH+ 571.
Príklad 22
N- {4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenylj -.<V’-fenylsulfamid-dimaleát (zlúčenina 25)
3-(4-Amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/Y-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (medziprodukt AP) (0,37 g, 0,00085 mol) a trietylamín (0,086 g, 0,00085 mol) sa suspendujú v bezvodom acetonitrile (15 ml) pri teplote 0 °C a po kvapkách sa v priebehu 5 minút pridá roztok N-fenylsulfamoylchloridu (0,88 g, 0,0046 mol) v bezvodom acetonitrile (15 ml). Zmes sa nechá ohriať na izbovú teplotu pod atmosférou dusíka a mieša sa po dobu 2,5 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok purifikuje preparatívnou RPHPLC (Rainin, Hypersil C18, 8 pm, 100 Ä, 25 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 % octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min) na /V-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl}-jV’-fenylsulfamid (0,1 g, 0,00017 mol), ktorý sa rozpustí v refluxujúcom etylacetáte (17 ml) a pridá sa vopred ohriaty roztok kyseliny maleínovej (0,039 g, 0,00034 mol) v etylacetáte (8 ml). Zmes sa refluxuje po dobu 10 minút, ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom a suší, čím sa získa Λ-{4{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl}-/V’-fenylsulfamid-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,089 g, 0,00011 mol):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 10,12 (s, 1H), 9,31 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,50 (d, 1H), 7,19 (m, 6H), 6,99 (m, 1H), 6,15 (s, 4H), 4,67 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,1 ( br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 11,83 minút. MS: MH+ 592.
131
Príklad 23
Cis- {4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1N-pyrazolo [3,4-<i]pyrimidín-3 -yl} -fenyl} (fenyl)metanón-O-metyloxím-dimaleát (zlúčenina 27)
7ra«5-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-3-yl}-fenyl} (fény l)metanón-O-metyloxím-dimaleát (zlúčenina 26) (4-Brómfenyl)(fenyl)metanón-č>-metyloxím (medziprodukt AQ)
Zmes 4-brómbenzofenónu (3,02 g, 0,0116 mol) a metoxylamín-hydrochloridu (4,83 g, 0,0578 mol) sa zahrieva v zmesi etanolu (90 ml) a pyridínu (18 ml) za refluxu po dobu 2 hodín pod atmosférou dusíka. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi vodu (150 ml) a dichlórmetán (100 ml), vodná fáza sa ďalej extrahuje (2x) dichlórmetánom (80 ml zakaždým) a spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/w-heptán (2:98) ako mobilnej fázy, čím sa získa (4-brómfenyl)(fenyl)metanón-č?-metyloxím vo forme bezfarebného oleja (3,13 g, 0,0108 mol):
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 7,67 (d, 1H), 7,59 (d, 1H), 7,48 (m, 4H), 7,32 (m, 1H), 7,26 (m, 2H), 3,93 (s, 3H) TLC (etylacetát/heptán 1:9) Rf 0,44
Fenyl-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]metanón-0-metyloxím (medziprodukt AR)
Zmes (4-brómfenyl)(fenyl)metanón-ť3-metyloxímu (medziprodukt AQ) (2,41 g, 0,0083 mol), diborón-pinakolesteru (2,53 g, 0,010 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,203 g, 0,00025 mol) a octanu draselného (2,44 g, 0,025 mol) v Ν,Ν-dimetylformamidu (65 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (50 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/«-heptán (2:98) ako mobilnej fázy, čím sa získa fény l-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]metanón-O-metyloxím (1,9 g, 0,0056 mol):
132 ’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 7.76 (d, IH). 7,67 (d, IH), 7,41 (m, 5H), 7,26 (d, 2H), 3,88 (s, 3H) 1,30 (s, 12H); TLC (etylacetát/heptán 1: 9) Rr0,27
C7s'-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyriinidín-3-yl}-fenyl}(feny])metanón-O-rnetyloxím-dirnaleát
Zmes fenyl-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-metanón-č?-metyloxímu (medziprodukt AQ) (0,701 g, 0,0021 mol), czs-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-arnínu (medziprodukt AC) (0,80 g, 0,0018 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,125 g, 0,00011 mol) a uhličitanu sodného (0,48 g, 0,0045 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (40 ml) a vody (20 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a etylacetát (100 ml). Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva ďalej extrahuje etylacetátom (2x) (70 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/trietylamín/metanol (96:3:1) ako mobilnej fázy, čím sa získa czT-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l 7/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl} fenyl} (fenyl)metanón-ť9-metyloxím vo forme bielej pevnej látky (0,700 g, 0,00133 mol).
C;T-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-3-yl}-fenyl} (fenyl)metanón-O-metyloxím (0,201 g, 0,00039 mol) sa rozpustí v refluxujúcom etanole (17 ml) a pridá sa vopred ohriaty roztok kyseliny maleínovej (0,178 g, 0,0015 mol) v etanole (8 ml). Zmes sa refluxuje po dobu 10 minút, ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom a suší, čím sa získa cis-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 77-pyrazolo [3,4-ďJpyrimidín-3-yl} fenyl} (fenyl)metanón-(3-mety loxím-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,212 g, 0,00028 mol):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,26 (s, IH), 7,74 (d, IH), 7,66 (d, IH), 7,51 (m, 6H), 7,33 (d, IH), 6,14 (s, 4H), 4,85 (m, IH), 3,91 (s, 3H) 3,1 (br, 9H), 2,71 (s, 3H), 2,33 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 1,74 (m, 4H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14.25 minút. MS: MH+ 525.
1-1 -í rra«s-{4-{4-amino-l-[4-(4-rnetylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrirnidín-3-yl}-fenyl} (fenyl)metanón-<9-metyloxím-dimaleát
Podobným spôsobom ako je (c) pre /rans-izomér s /ra«í-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amínom (medziprodukt AD) (0,317 g, 0,00072 mol) ako východiskovou látkou sa pripraví /raní-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-fenyl}(fenyl)metanón-0-metyloxím-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,255 g, 0,000337 mol):
’H NMR (DMSO-dň, 400 MHz) 8,25 (s, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,66 (d, 1H), 7,51 (m, 6H), 7,33 (d, 1H), 6,17 (s, 4H), 4,71 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (br, 6H), 1,59 (br, 2H)
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 25 cm; 5 % - 85 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 14,10 minút. MS: MH+ 525.
Príklad 24
Trans-{4-(4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl}(fenyl)metanón-oxím-dimaleát (zlúčenina 28) (4-Brómfenyl)(fenyl)metanón-oxím (medziprodukt AS)
Zmes 4-brómbenzofenónu (10,0 g, 0,0383 mol) a hydroxylamín-hydrochloridu (13,3 g, 0,192 mol) sa zahrieva v zmesi etanolu (250 ml) a pyridínu (50 ml) za refluxu po dobu 2 hodín pod atmosférou dusíka. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi vodu (300 ml) a dichlórmetán (300ml), vodná fáza sa ďalej extrahuje dichlórmetánom (2x) (180 ml zakaždým) a spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/«-heptán (1:9) ako mobilnej fázy, čím sa získa (4-brómfenyl) (fenyl)metanón-oxím vo forme bielej pevnej látky (9,93 g, 0,036 mol):
‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 7,66 (d, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,33 (m, 7H) TLC (etylacetát/heptán 1: 5) Rf0,38
134
FenyI-[4-(4,4,5,5-tetrametyI-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]metanón-oxím (medziprodukt AT)
Zmes (4-brómfenyl)(fenyl)metanón-oxímu (1,02 g, 0,0037 mol), diborón-pinakolesteru (1,13 g, 0,0044 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,09 g, 0,00011 mol) a octanu draselného (1,09 g, 0.011 mol) v N,Ndimetylformamide (30 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (50 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/rc-heptán (1:7) ako mobilnej fázy, čím sa získa fenyl-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]metanón-oxím (0,82 g, 0,00254 mol):
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 11,40 (s, 1H), 7,76 (d, 1H), 7,66 (d, 1H), 7,41 (m, 5H), 7,26 (d, 2H), 1,32 (s, 12H); TLC (etylacetát/heptán 1:5) Rf 0,22
Trans- {4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3 -yl} fenyl} (fenyl)metanón-oxím-dimaleát
Zmes fenyl-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-metanón-oxímu (0,357 g, 0,0011 mol), /ra/;s-3-jód-l-[4-(4-mctylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (medziprodukt AD) (0,80 g, 0,00096 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,067 g, 0,00006 mol) a uhličitanu sodného (0,26 g, 0,0024 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (22 ml) a vody (11 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva ďalej extrahuje etylacetátom (2x) (40 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/trietylamín/metanol (93:6:1) ako mobilnej fázy, čím sa získa /ra/75-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl} fenyl} (fenyl)metanón-oxím vo forme bielej pevnej látky (0,211 g, 0,00041 mol), ktorý sa suspenduje v refluxujúcom chloroforme (17 ml) a kvôli spriehľadneniu reakčnej zmesi sa pridá metanoi (4 ml). Pridá sa vopred ohriaty
135 roztok kyseliny maleínovej (0,096 g, 0,00082 mol) v metanole (8 ml) a zmes sa refluxuje po dobu 10 minút, ochladí na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa suspenduje v etylacetáte a precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom a suší, čím sa získa trans- {4- {4-amino-1 -[4-(4-metyl-piperazino)cyklohexyl} -1 H-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl}(fenyl)metanón-oxím-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,295 g, 0,0004 mol):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,26 (s, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,51 (m, 6H), 7,33 (d, 1H), 6,14 (s, 4H), 4,72 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,68 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,60 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,82 minút. MS: MH+ 511.
Príklad 25
7ran5-l-{4-[4-amino-3-(4-(l-fenylamonio)fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ7]pyrimidín-l-yl]-cyklohexyl}-4-metylhexahydropyrazíndium-tri[(Z)-3-karboxy-2-propenoát] (zlúčenina 29)
Podobným spôsobom ako pre zlúčeninu 20 vychádzajúc z íra«5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (medziprodukt AD) (0,33 g, 0,00075 mol) sa získa /'ra«5-l-{4-[4-amino-3-(4-(l-fenylamonio)fenyl)-17/-pyrazolo[3,4<7]pyrimidín-l-yl]-cyklohexyl}-4-metylhexahydropyrazíndium-tri[(Z)-3-karboxy-2-propenoát] (0,245 g, 0,00034 mol):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,43 (s, 1H), 8,22 (s, 1H) 7,51 (d, 2H), 7,28 (m, 2H), 7,20 (m, 4H), 6,89 (t, 1H), 6,17 (s, 6H), 4,67 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,73 (s, 3H), 2,08 (m, 6H), 1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,63 minút, MH+ 483.
Príklad 26
CA-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l/7-pyrazolo[3,4-(7]pyrimidín-4-amín (zlúčenina 30)
136
5-Bróm-2-fenoxypyrimidín (medziprodukt AU)
Zmes 5-bróm-2-chlórpyrimidínu (5,00 g, 0,0259 mol), fenolu (3,16 g, 0,0336 mol), dibenzo-18-crown-6 (0,47 g, 0,0013 mol) a práškového hydroxidu draselného (3,51 g, 0,0626 mol) v toluéne (75 ml) sa zahrieva k refluxu po dobu 5 hodín za azeotropického odstraňovania vody. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a chloroform. Vrstvy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje chloroformom (3 x). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi n-heptán/etylacetát (98:2) ako eluenta, čím sa získa 5-bróm-2-fenoxy-pyrimidín vo forme bielej pevnej látky (3,55 g, 0,0141 mol):
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 8,80 (s, 2H), 7,45 (t, 2H), 7,27 (t, 1H), 7,22 (d 2H);
TLC («-heptán/etylacetát = 95:5) Rf 0,20
2-Fenoxy-5-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyrimidín (medziprodukt AV)
Zmes 5-bróm-2-fenoxy-pyrimidínu (medziprodukt AU) (3,00 g, 0,0119 mol), diborónpinakolesteru (3,64 g, 0,0143 mol), [l,ľ-bis(difenyl-fosfino)ferocén]dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,29 g, 0,00036 mol) a octanu draselného (3,52 g, 0,0358 mol) v N,N-dimetylformamide (70 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka cez noc. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a potom sa väčšina rozpúšťadla odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa tmavý olej. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (5 ml) a pridá do heptánu (75 ml). Zmes sa filtruje a precipitát sa mieša v heptáne (75 ml) po dobu 17 hodín. Po filtrácii a sušení a sušení vo vákuu sa získa 2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)-pyrimidín vo forme šedého pevného podielu (2,95 g, 0,00989 mol):
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,75 (s, 2H), 7,45 (t, 2H), 7,27 (t, 1H), 7,20 (d, 2H), 1,31 (s, 12H)
C/5-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l//-pyrazolo[3,4<7]pyrimidín-4-amín (medziprodukt AW)
137
Zmes cN-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-aminu (medziprodukt AC) (0,297 g, 0,000674 mol), 2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyrimidínu (medziprodukt AV) (0,221 g, 0,000741 mol), uhličitanu sodného (0,179 g, 0,001684 mol) v 1,2-dimetoxyetáne (10 ml) a vody (20 ml) sa intenzívne mieša a pridá sa tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,047 g, 0,000040 mol). Reakčná zmes sa mieša 18 hodín pri teplote 80 °C. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (50 ml) a nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného (50 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza extrahuje etylacetátom (3 x 25 ml). Spojená organická fáza sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (95:5:0,5) a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa ci5-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (0,185 g, 0,000381 mol):
'H NMR (DMSO-dô 400MHz) 8,79 (s, 2H), 8,24 (s, 1H), 7,48 (t, 2H), 7,28 (t, 1H), 7,27 (d, 2H), 4,81 (m, 1H), 1,55 -2,56 (m, 20H); TLC (dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny = 90:10:0,5) Rf 0,23.
CN-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-4-amín-bis-maleát
Roztok czA-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (medziprodukt AW) (0,193 g, 0,00040 mol) v absolútnom etanole (15 ml) sa zahrieva k refluxu. Pridá sa roztok kyseliny maleínovej (0,184 g, 0,00159 mol) v absolútnom etanole (10 ml) zahriaty na teplotu 78 °C a zmes sa zahrieva k refluxu po dobu 10 minút. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu, vzniknutý biely precipitát sa spojí filtráciou a premyje absolútnym etanolom (2x10 ml), zvyšné rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa 1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3 -(2-fenoxy-5 -pyrimidinyl)-1 H-pyrazolo [3,4-íf]pyrimidín-4-amín-bis-maleát vo forme bielej pevnej látky (0,254 g, 0,00035 mol):
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 8,81 (s, 2H), 8,26 (s, 1H), 7,49 (t, 2H), 7,28 (t, 1H), 7,26 (d, 2H), 6,14 (s, 4H), 4,87 (m, 1H), 1,60 - 2,85 (m, 20H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,12 minút. MS: MH+ 486.
138
Príklad 27
Trans-\-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amín-bis-maleát (zlúčenina 31)
Trans-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín (medziprodukt AX)
Zmes íran5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lŕ/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (medziprodukt AD) (0,300 g, 0,00068 mol), 2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyrimidínu (medziprodukt AV) (0,304 g, 0,00102 mol), uhličitanu sodného (0,180 g, 0,00170 mol) v 1,2-dimetoxyetáne (10 ml) a vode (20 ml) sa intenzívne mieša a pridá sa tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,047 g, 0,000040 mol). Reakčná zmes sa mieša 18 hodín pri teplote 80 °C. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vy trepe medzi etylacetát (50 ml) a nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného (50 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (3 x 25 ml). Spojená organická fáza sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (95:5:0,5). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa /ra«y-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (0,155 g, 0,00032 mol):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,78 (s, 2H), 8,25 (s, 1H), 7,48 (t, 2H), 7,28 (t, 1H), 7,27 (d, 2FI), 4,65 (m, 1H), 1,44 - 2,36 (m, 20H);
TLC (dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny = 90:10:0,5) Rf 0,33.
7ra/7ó-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín-bis-maleát (zlúčenina 31)
Roztok trans-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu (medziprodukt AX) (0,155 g, 0,00032 mol) v absolútnom etanole (15 ml) sa zahrieva k refluxu. Pridá sa roztok kyseliny maleinovej (0,148 g, 0,000128 mol) v absolútnom etanole (10 ml) zahrievaný na teplotu 78 °C a zmes sa zahrieva k refluxu po dobu 10 minút. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu, vzniknutý biely precipitát sa spojí fil139 tráciou a premyje absolútnym etanolom (2x10 ml), zvyšné rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa tra«ó'-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l//-pyrazolo[3,4-cf]pyrimidín-4-amín-bis-maleát vo forme bielej pevnej látky (0,082 g, 0,00011 mol):
'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 8,78 (s, 2H), 8,26 (s, 1H), 7,48 (t, 2H), 7,28 (t, 1H), 7,26 (d, 2H), 4,70 (m, 1H), 1,50 - 3,00 (m, 20H);
RP-HPLC (DeltaPak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,83 minút. MS: MH+ 486.
Príklad 28
C2.?-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (zlúčenina 32)
2-Fenoxypyrimidín (medziprodukt AY)
Zmes 5-chlórpyrimidínu (5,00 g, 0,0437 mol), fenolu (5,38 g, 57,2 mmol), dibenzo-18-crown-6 (0,84g, 0,0023 mol) a práškového hydroxidu draselného (5,92 g, 0,1055 mol) v toluéne (75 ml) sa zahrieva k refluxu po dobu 3 hodín za azeotropického odstraňovania vody. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a chloroform. Vrstvy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje chloroformom (3x). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa, čím sa získa 2-fenoxypyrimidín vo forme bieleho prášku (95 % čistota, 4,56 g, 0,0265 mol):
'H NMR (CDC13,400 MHz) 8,57 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,26 (t, 1H), 7,20 (d 2H);
TLC (u-heptán/etylacetát = 1:1) Rf 0,42
2-(4-Jódfenoxy)pyrimidín (medziprodukt AZ)
Zmes 2-fenoxypyrimidínu (medziprodukt AY) (4,03 g, 0,0234 mol) a N-jódsukcínimidu (10,52 g, 0,0468 mol) v trifluóroctovej kyseline (40 ml) a anhydrid kyseliny trifluóroctovej (8 ml) sa zahrieva k refluxu po dobu 4 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a pridá sa voda (75 ml). Zmes sa extrahuje (3x) 50 ml. Spojené organické vrstvy sa premyjú (2x) nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (50 ml), (2x) s 10 % vodným rozto140 kom tiosulfátu sodného (50 ml) a soľankou (50 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, surový pevný podiel sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi n-heptán/etylacetát (3:1) ako eluenta, čím sa získa 2-(4-jódfenoxy)pyrimidín vo forme svetlo žltého pevného podielu (3,49 g, 0,0117 mol):
'H NMR (CDC13, 400 MHz) 8, 57 (d, 2H), 7,73 (d, 2H), 7,07 (t, 1H), 6,98 (d 2H);
TLC (n-heptán/etylacetát = 1: 1) Rf 0,45
2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]pyrimidín (medziprodukt BA)
Zmes 2-(4-jódfenoxy)pyrimidínu (medziprodukt AZ) (3,50 g, 0,0118 mol), diborónpinakolesteru (3,58 g, 0,0141 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,29 g, 0,00035 mol) a octanu draselného (3,46 g, 0,00346 mol) v ALV-dimetylformamide (70 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka cez noc. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a potom sa väčšina rozpúšťadla odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa tmavý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi rc-heptán/etylacetát (2:1) ako eluenta, čím sa získa 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]pyrimidín vo forme bielej pevnej látky (2,95 g, 0,00989 mol):
’H NMR (DMSO-d6 400MHz) 8,65 (d, 2H), 7,74 (d, 2H), 7,29 (t, 1H), 7,20 (d, 2H), 1,31 (s, 12H) l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín (medziprodukt BB)
Zmes 1 -(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jód-1 /ŕ-pyrazolop ,4-í/]pyrimidín-4-amínu (medziprodukt N) (l,50g, 0,00374 mol), 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]-pyritnidínu (medziprodukt BA) (1,23 g, 0,00412 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,26 g, 0,00022 mol) a uhličitanu sodného (0,993 g, 0,00937 mol) v 40 ml 1,2-dimetoxyetánu a 20 ml vody sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín, po ktorých sa pridá ďalší l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín (0,15 g, 0,00037 mol). Zmes sa mieša ďalšiu hodinu, potom sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu, precipitát sa filtruje a
141 premyje 1,2-dimetoxyetánom a suší vo vákuu, čím sa získa l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyriniidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (1,26 g, 0,00283 mol):
’H NMR (DMSO-dg 400MHz) 8,68 (d, 2H), 8,254 (s, 1H), 7,73 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 7,31 (t, 1H), 6,30 - 7,20 (bs, 2H), 4,78 - 4,84 (m, 1H), 3,91 (s, 4H), 2,22 - 2,30 (m, 2H), 1,73 - 1,92 (m, 6H)
4- {4-amino-3 - [4-(2-pyrimidiny loxy)fenyl] -177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-1 -yl} cyklohexanón (medziprodukt BC)
Zmes l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (medziprodukt BB) (1,22 g, 0,00274 mol) v acetóne sa ochladí na teplotu 0 °C a po kvapkách sa pridá 5 N vodná kyselina chlorovodíková (15 ml), pričom teplota sa udržuje pod 5 °C. Po pridaní sa zmes mieša pri izbovej teplote po dobu 3 hodín, roztok sa filtruje cez celit a neutralizuje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, vzniknutý precipitát sa filtruje, premyje vodou a suší vo vákuu cez noc, čím sa získa 4-{-4-amino-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-í-yl}-cyklohexanón vo forme bielej pevnej látky (0,937 g, 0,00243 mol):
'H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) 8,68 (d, 2H), 8,29 (s, 1H), 7,56 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 7,31 (t, 1H), 6.30 - 7,20 (bs, 2H), 5,25 - 5,30 (m, 1H), 2,67 - 2,75 (m, 2H), 2,24 - 2,43 (m, 6H).
CA-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4íf]pyrimidín-4-amín (medziprodukt BD)
Zmes 4-4-amino-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í71pyrimidín-l-yl-l-cyklohexanónu (medziprodukt BC) (0,925 g, 0,0024 mol), N-metylpiperazínu (0,721 g, 0,0072 mol) a octovej kyseliny (0,432 g, 0,0072 mol) v dichlórmetáne (40 ml) sa intenzívne mieša a v 30 minútových intervaloch a nadvakrát sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (0,661 g, 0,00312 mol). Reakčná zmes sa mieša 18 hodín pri izbovej teplote. Pridá sa ďalší triacetoxyborohydrid sodný (0,300 g, 0,00142 mol) a zmes sa mieša ďalšie 4 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (25 ml) a nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Fázy sa separujú a vodná fáza extrahuje dichlórmetánom (3x) (25 ml). Spojená organická fáza sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Cis- a iransizoméry sa separujú zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlór142 metán/trietylamín/metanol (87:10:3). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa trans-\~ [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínová frakcia (TLC (dichlórmetán/trietylamín/metanol - 90:8:2) Rf 0,45) a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne a extrahuje (2x) 1,0 M vodným roztokom uhličitanu sodného. Organická fáza sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa Zra«s-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (0,272 g, 0,00056 mol):
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 8,68 (d, 2H), 8,25 (s, 1 H), 7,73 (d, 2H), 7,39 (d, 2H), 7,31 (t, 1H), 6,30 - 6,20 (bs, 2H), 4,79 - 4,84 (m, 1H), 2,06 - 2,75 (m, 12H), 2,24 - 2,43 (m, 4H).
Czs-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amín-trismaleát
Roztok cz5-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)-fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ťi]pyrimidín-4-amínu (medziprodukt BD) (0,193 g, 0,0004 mol) v absolútnom etanole (15 ml) sa zahrieva k refluxu. Pridá sa roztok kyseliny maleinovej (0,184 g, 0,00159 mol) v absolútnom etanole (10 ml) zahrievaný na teplotu 78 °C a zmes sa zahrieva k refluxu po dobu 10 minút. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu, vzniknutý biely precipitát sa spojí filtráciou a premyje absolútnym etanolom (2x10 ml), zvyšné rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa czx-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-3[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín-trismaleát vo forme bielej pevnej látky (0,222g, 0,00027 mol):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,68 (d, 2H), 8,26 (s, 1H), 7,72 (d, 2H), 7,39 (d, 2H), 7,32 (t, 1H), 6,17 (s, 6H), 4,85 - 4,87 (m, 1H), 3,85 - 2,85 (br, 9H), 2,71 (s, 3H), 2,23 - 2,43 (bs, 2H), 2,03 - 2,18 (bs, 2H), 1,71 - 2,89 (bs, 4H)
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 9,56 minút. MS: MH+ 486.
rra«j-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-4-amín (medziprodukt BE)
Podobným spôsobom s /ra/7s-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínom (0,06 g, 0,000124 mol) ako východiskovou látkou sa pripraví Zraw’-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)143
-fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín-dimaleát (zlúčenina 33) vo forme bielej pevnej látky (0,06 g, 0,000084 mol):
'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,68 (d, 2H), 8,25 (s, 1H), 7,71 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 7,31 (t, 1H), 6,18 (s, 4H), 4,71 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H) 2,06 (m, 6H) 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 μπι, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 9, 45 minút. MS: MH+ 486.
Príklad 29
Séria 5 ml liekoviek uzavretých šeptom sa naplní 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperidylmetyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-yl-amínom (300 mg, 0,776 mmol), triacetoxyborohydridom sodným (247 mg, 1,16 mmol) a príslušným aldehydom alebo ketónom (0,85 mmol). Postupne sa pridá dichlóretán (5 ml) a ľadová kyselina octová (50 μΐ, 0,87 mmol), liekovky sa uzavrú a trepú cez noc v kruhovej trepačke. Pokiaľ podľa HPLC z reakčných zmesí zostávajú nezreagované východiskové látky, pridajú sa ďalšie podiely aldehydov alebo ketóny (0,85 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (247 mg, 1,16 mmol) a ľadová kyselina octová (50 μΐ) a výsledná zmes sa trepe znovu cez noc. Pridá sa voda (2 ml), potom prebytok pevného hydrogenuhličitanu sodného, kým sa neprestane uvoľňovať plyn, vodná vrstva sa odstráni pretiahnutím zmesi cez extrakčnú diskovú náplň 3M Empore (Oktadecyl 08 SD). Surové produkty sa purifikujú s použitím silikagélových náplní Supelco supelclean (10 g) so zmesou dichlórmetán/metanol (95:5) ako eluentami, čím sa získajú príslušné produkty.
Podmienky analytickej LC/MS:
Stĺpec: Pecosphere, 08, 3 μπι, 33 x 4,6 mm, Eluent: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min. Údaje z LCMS sú detailnejšie uvedené nižšie:
Príklad 30
Cis-3 - {4- [amino (fény l)mety 1] fény 1} -1 - [4-(4-mety lpiperazino)-cyklohexy 1]-1 H-py razolo [3,4-ď]pyrimidín-4-amín
144
a) (4-Brómfenyl)(fenyl)metánamín
Mravenčan amónny (20,1 g, 0,318 mol) sa vloží do trojhrdlovej banky vybavenej teplotným regulátorom, mechanickým miešačom a chladičom a zmes sa zahrieva pri teplote 150 °C. Naraz sa pridá 4-brómbenzofenón (7,2 g, 0,0276 mol), teplota sa zvýši na 165 °C a zmes sa mieša za refluxu po dobu 24 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, trituruje v etylacetáte (350 ml), nechá reagovať s aktívnym uhlím a filtruje cez vrstvu Celitu, filtrát sa koncentruje, suspenduje v koncentrovanej kyseline chlorovodíkovej (120 ml) a zahrieva k refluxu po dobu 8 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou. Ďalej sa trituruje vo vode (120 ml), alkalizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a extrahuje etylacetátom (2x 250 ml). Spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku, čím sa získa (4-brómfenyl)(fenyl)metánamín (5,25 g, 0,02 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,46 (d, 2H), 7,36 (m, 4H), 7,27 (t, 2H), 7,18 (t, 1H), 5,07 (s, 1H),
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,54 minút.
b) 7erc-butyl-/V-[(4-brómfenyl)(fenyl)metyl]karbamát
Di-terc-butyl-dikarbonát (5,63 g, 0,0258 mol) sa rozpustí v bezvodom dichlórmetáne (150 ml), ochladí na teplotu 0 °C a po kvapkách sa pridá roztok (4-brómfenyl)(fenyl)metánamínu (5,2 g, 0,0198 mol) v bezvodom dichlórmetáne (30 ml). Zmes sa ohreje až na izbovú teplotu a mieša pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Organická fáza sa premyje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode (120 ml), suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (7:93) ako mobilnej fázy, čím sa získa fôrc-butyl-/V-[(4-brómfenyl)(fenyl)metyl]karbamát (5,9 g, 0,0163 mol) vo forme bezfarebného oleja.
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,01 (d, 1H), 7,51 (d. 2H), 7,36 (m, 7H), 5,81 (d, 1H), 1,39 (s, 9H). TLC (etylacetát/heptán T. 9) Rf 0,24
c) 7erc-butyl-/V-{fenyl-[4-(4,4.5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]metyl}karbamát
145
Zmes /erc-butyl-V-[(4-brómfenyl)(fenyl)metyl]karbamátu (4,5 g, 0,0123 mol), diborónpinakolesteru (3,79 g, 0,0149 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfmo)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,305 g, 0,000373 mol) a octanu draselného (3.66 g, 0,0373 mol) v N, V-dimetylformamide (80 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (80 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/rc-heptán (1:9) ako mobilnej fázy. Výsledné frakcie sa koncentrujú. Zvyšok sa trituruje v n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou, čím sa získa /erc-butyl-V-{fenyl-[4-(4,4,5,5-te-trametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]metyl}karbamát (3,0 g, 0,00733 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,01 (d, IH), 7,61 (d, 2H), 7,33 (d, 2H), 7,28 (m, 5H), 5,81 (d, IH), 1,39 (s, 9H), 1,27 (s, 12H). TLC (etylacetát/heptán 1: 5) Rf 0,34
d) Czs-fórc-butyl-V-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-py-razolo[3,4-<ŕ|pyrimidín-3-yl} fenyl)(fenyl)metyl]karbamát
Zmes terc-butyl-N- {fenyl-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]metyl}karbamátu (3,0 g, 0,00733 mol), ci5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l/í-pyrazoIo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (2,4 g, 0,0054 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,381 g, 0,00033 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (1,69 g, 0,0136 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (80 ml) a vody (40 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (200 ml) a etylacetát (200 ml). Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva ďalej extrahuje etylacetátom (2x) (100 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/trietylamín/metanol (96:3:1) ako mobilnej fázy, čím sa získa czs-terc-butyl-V-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-íflpyrimidín-3-yl}fenyl)(fenyl)-metyl]karbamát (2,24 g, 0,00375 mol) vo forme bielej pevnej látky.
146 ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s. 1H), 8,01 (d, 1H), 7,60 (d, 2H), 7,49 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,23 (t. 1H), 5,91 (d, 4H), 4,78 (m, III), 2,5 - 2,1 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,42 (m, 4H), 1,40 (s, 9H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,45 minút.
e) Cri-3-{4-[amino(fenyl)metyl]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
C/5-/erc-butyl-A-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)(fenyl)metyl]karbamát (2,05 g, 0,00344 mol) sa trituruje v bezvodom dichlórmetáne (50 ml) a reakčná zmes sa ochladí na teplotu 0 °C. Po kvapkách sa pridá trifluóroctová kyselina (10 ml) a výsledný roztok sa ohreje až na izbovú teplotu a mieša pod atmosférou dusíka po dobu 1,5 hodiny. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok suspenduje vo vode (50 ml) a alkalizuje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a ďalej extrahuje dichlórmetánom (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa cis-3-{4-[amino(fenyl)mety 1]fény 1} -1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-1 A-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-4-amín (1,60 g, 0,00322 mol) vo forme belavej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 8,23 (s, 1H), 7,57 (m, 4H), 7,45 (d, 2H), 7,31 (dd, 2H), 7,20 (t, 1H), 5,17 (s, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 9,36 minút.
f) CA-jVl-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)(fenyl)metyl]-acetamid-diacetát
Czs-3-{4-[amino(fenyl)metyl]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-A|pyrimidín-4-amín (0,05 g, 0,0001 mol) sa rozpustí v bezvodom pyridíne (1 ml), pridá sa anhydrid kyseliny octovej (0,010 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný zvyšok sa purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18. 8 pm, 25 cm; 10 - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min). čím sa získa čA-A4-[(4-{4-arnino-l-[4-(4-metylpipe147 razino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)(fenyl)metyl]-acetamid-diacetát (0,015 g, 0,000021 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,84 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,62 (d, 2H), 7,46 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,28 (m, 1H), 6,21 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,90 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,15 minút. MS: MH+ 539.
Príklad 31
Cz's-?/l-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-y 1} fenyl)(fenyl)metyl]benzamid-diacetát
Cis-3- {4- [amino(feny l)metyl]feny 1} -1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (0,05 g, 0,0001 mol) sa rozpustí v bezvodom pyridíne (1 ml), pridá sa benzoylchlorid (0,014 g, 0,0001mol) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný zvyšok sa purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa czs-/Vl-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)(fenyl)me-tyl]benzamid-diacetát (0,017 g, 0,000024 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,32 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,96 (d, 2H), 7,62 (d, 2H), 7,58 7,29 (b, 10H), 6,51 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,53 minút. MS: MH+ 601.
148
Príklad 32
Cís-N-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylJ-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl} fenyl)(fenyl)metyl]metánsulfónamid
Cis-3-{ 4-[amino(fenyl)metyl] fenyl} -1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 N-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (0,05 g, 0,0001 mol) sa rozpustí v bezvodom pyridíne (1 ml), pridá sa metánsulfonylchlorid (0,011 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný zvyšok sa purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa czk-N-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)(fenyl)metyl]metánsulfónamid-diacetát (0,021 g, 0,00003 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,39 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,47 (d, 2H), 7,37 (t, 2H), 7,27 (t, 1H), 5,72 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,70 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 611), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,81 minút. MS: MH+ 575.
Príklad 33
CN-Nl-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl} fenyl)(fenyl)metyl] -1 -benzénsulfónamid-acetát
CN-3-{4-famino(fenyl)metyl]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (0,05 g, 0,0001 mol) sa rozpustí v bezvodom pyridíne (1 ml), pridá sa benzénsulfonylchlorid (0,018 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný zvyšok purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa cis-Nl-[(4{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazi149 no)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl}fenyl)(fenyl)metyl]-l-benzénsulfónamid-acetát (0,045 g, 0,000065 mol) vo forme bielej pevnej látky.
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,89 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,57 - 7,27 (br, 12H), 5,66 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,70 (s, 3H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,78 minút. MS: MH+ 637.
Príklad 34
Cw-Nl-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lŕf-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-3-yl}fenyl)(fenyl)metyl]-3-hydroxybutánamid-acetát
Cw-3-{4-[amino(fenyl)metyl]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (0,05 g, 0,0001 mol) a β-butyrolaktón (0,009g, 0,0001 mol) sa zahrievajú v dioxáne pri refluxe po dobu 3 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný zvyšok purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10 - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa czs-JV!-[(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl} fenyl)(fenyl)metyl]-3-hydroxybutánamid-acetát (0,027 g, 0,000042 mol) vo forme bielej pevnej látky.
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,78 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,62 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,27 (t, 1H), 6,21 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,67 (d, 1H), 4,02 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 15H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H), 1,07 (d, 3H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,97 a 11,13 minút. MS: MH+ 583.
Príklad 35
673-4-(4- {4-amino-1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)benzamid
150
a) 4-(4-Brómfenoxy)benzonitril
Zmes 4-brómfenolu (4,56 g, 0,0264 mol), 4-fluórbenzonitrilu (0,0264 mol), 18-crown-6 (0,7 g, 0,00264 mol) a 40 % fluoridu draselného na alumíne (10,8 g) v bezvodom acetonitrile (100 ml) sa zahrieva k refluxu pod atmosférou dusíka po dobu 12 hodín, potom sa ochladí na izbovú teplotu, filtruje cez vrstvu Celitu a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi dietyléter (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáza sa ďalej premyje nasýteným roztokom chloridu draselného vo vode, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (3:97) ako mobilnej fázy, čím sa získa 4-(4-brómfenoxy)benzonítril (3,7 g, 0,0135 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,85 (d, 2H), 7,64 (d, 2H), 7,13 (dd, 4H).
TLC (etylacetát/heptán 3:97) Rf 0,21
b) 4-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitril
Zmes 4-(4-brómfenoxy)benzonitrilu (4,55 g, 0,0166 mol), diborónpinakolesteru (5,06 g, 0,020 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,407 g, 0,000498 mol) a octanu draselného (4,88 g, 0,0498 mol) v /VzY-dimetylformamide (90 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (120 ml) sa pridá do zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (5:95) ako mobilnej fázy. Spojené frakcie sa koncentrujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje v «-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou, čím sa získa 4-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitril (2,75 g, 0,0086 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,85 (d, 2H), 7,64 (d, 2H), 7,13 (dd, 4H), 1,28 (s, 12H);
TLC (etylacetát/heptán 1:5) Rf0,63
c) C/5-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-y 1} fenoxy jbenzonitril
151
Zmes 4-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitrilu (2,63 g, 0,00819 mol), cz5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amínu (3,01 g, 0,00683 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,473 g, 0,00041 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (2,12 g, 0,0171 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (80 ml) a vody (40 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (200 ml) a etylacetát (200 ml). Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva ďalej extrahuje etylacetátom (2x) (100 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/trietylamín/metanol (96:3:1) ako mobilnej fázy, čím sa získa cz'5-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl} fenoxy)benzonitril (2,45 g, 0,00483 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,87 (d, 2H), 7,71 (d, 2H), 7,30 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,04 minút.
d) Cri-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl} fenoxy)benzamid
Cz5-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzonitril (0,200 g, 0,000394 mol) sa rozpustí v dioxáne (3 ml), pridá sa roztok hydroxidu sodného (0,15 g, 0,00197 mol) vo vode (2 ml), potom sa pridá 30 % roztok peroxidu vodíka vo vode (5 kvapiek). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu pod atmosférou dusíka po dobu 1,5 hodiny, ochladí sa na izbovú teplotu a neutralizuje 5 % roztokom kyseliny citrónovej vo vode. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa cz's-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzamid (0,120 g, 0,000223 mol) vo forme belavej pevnej látky.
152 ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,93 (m, 3H), 7,68 (d, 2H), 7,30 (s, 1H), 7,24 (d, 2H), 7,15 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,87 minút. MS: MH+ 527.
Príklad 36
Cz5-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-c7|pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzoová kyselina
CN-4-(4-{4-anúno-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-3-yl}fenoxy)benzonitril (0,200 g, 0,000394 mol) sa rozpustí v zmesi octovej kyseliny (15 ml) a 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej vo vode (15 ml) a roztok sa zahrieva k refluxu po dobu 12 hodín, ochladí na izbovú teplotu a koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa rekryštalizuje z Α,/V-dimetylformamidu, čím sa získa cz'5-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzoová kyselina (0,100 g, 0,00019 mol) vo forme belavej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,97 (d, 2H), 7,70 (d, 2H), 7,24 (d, 2H), 7,15 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,95 minút. MS: MH+ 528.
Príklad 37
Cz'5-jVl-[4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzyl]-acetamid-acetát
a) Cz's-3-{4-[4-(aminometyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
153
Cz'5-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzonitril (0,600 g, 0,00118 mol) sa rozpustí v zmesi metanolu (50 ml) a koncentrovaného roztoku hydroxidu amónneho vo vode (3 ml). Pridá sa 50 % zmes Raneyovho niklu vo vode (2 ml) a výsledná zmes sa hydrogenuje za atmosférického tlaku po dobu 18 hodín. Reakčná zmes sa filtruje cez vrstvu Celitu, koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa vyextrahuje dichlórmetánom (50 ml). Organická fáza sa suší síranom horečnatým, koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok suspenduje v dietyléteri (25 ml), precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa czk-3-{4-[4-(aminometyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín (0,45 g, 0,0088 mol).
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,39 (d, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,08 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 3,73 (s, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 9,72 minút.
b) Cis-Nl -[4-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -y 1} fenoxy)benzyl]-acetamid-acetát
C/5-3-{4-[4-(aminometyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (0,051 g, 0,0001 mol) sa rozpustí v bezvodom pyridíne (1 ml), pridá sa anhydrid kyseliny octovej (0,010 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný zvyšok sa purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa cz's-M-[4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzyl]-acetamid-acetát (0,046 g, 0,0000749 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,38 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,31 (d, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,08 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 11,33 minút. S: MH+ 555.
154
Príklad 38
C/j-N-[4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzyl]metánsulfónamid-acetát
CA-3-{4-[4-(aminometyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-čZJpyrimídín-4-amín (0,051 g, 0,0001 mol) sa rozpustí v bezvodom pyridíne (1 ml), pridá sa metánsulfonylchlorid (0,011 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný zvyšok purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa cA-N-[4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzyl]metánsulfónamid-acetát (0,011 g, 0,000017 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'HNMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,57 (t, 1H), 7,40 (d, 2H), 7,13 (m, 4H), 4,78 (m, 1H), 4,17 (d, 2H), 2,89 (s, 3H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,97 minút. MS: MH+ 591.
Spôsoby prípravy czó-3-{4-[3-(aminometyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylJ-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu a jeho derivátov sú rovnaké ako spôsoby prípravy c/s-3-{4-[4-(aminometyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amínu a jeho derivátov s použitím príslušných východiskových látok.
Príklad 39
Cz'5-3-(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4-c(]pyrimidín-3-yl} fenoxy)benzamid-diacetát
a) 3-(4-Brómfenoxy)benzonitril 'll NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 7,59 (m, 5H), 7,38 (m, 1H), 7,06 (d, 2H), TLC (etylacetát/heptán 3:97) Rr0,19
155
b) 3-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitril 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,65 (m, 5H), 7,41 (m, 1H), 7,06 (d, 2H), 1,27 (s, 12H)
TLC (etylacetát/heptán 1:5) Rf0,56
c) Czs-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl} fenoxy)benzonitril 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,61 (m, 3H), 7,47 (m, 1H), 7,25 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,96 minút,
d) Czs-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-y 1} fenoxy)benzamid-diacetát ‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,68 (m, 3H), 7,60 (s, 1H), 7,50 (t, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,15 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H),
1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,99 minút. MS: MH+ 527.
Príklad 40
Czs-3-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidín-3-yl} fenoxy)benzoová kyselina ’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,56 (m, 2H), 7,39 (m, 1H), 7,20 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11, 01 minút. MS: MH+ 528.
156
Príklad 41
C/5'-?/l-[3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidm-3-yl} fenoxy)benzyl]-acetamid-acetát
a) Czs-3-{4-[3-(aminometyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,15 (m, 4H), 6,96 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 3,73 (s, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 9,32 minút.
b) CA-tV1-[3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzyl]-acetamid-acetát 'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 8,38 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,36 (t, 1H), 7,15 (d, 2H), 7,07 (d, 1H), 7,00 (m, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H),
1,91 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,44 minút. MS: MH+ 555.
Príklad 42
CA-zVl-[3-(4- {4-amino-l-[4-(4-metylpiperazÍno)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl} fenoxy)benzyl]benzamid 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,07 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,86 (d, 2H), 7,63 (d, 2H), 7,48 (m, 4H), 7,10 (m, 5H), 4,78 (m, 1H), 4,49 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 13,58 minút. MS: MH+ 617.
157
Príklad 43
Cis-Nt - [3 -(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzyl]metánsulfónamid-acetát ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,58 (t, 1H), 7,42 (t, 1H), 7,16 (m, 3H), 7,12 (s, 1H), 7,03 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,17 (d, 2H), 2,89 (s, 3H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 12, 12 minút. MS: MH+ 591.
Príklad 44
Czs-benzyl-/V-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo-[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl}karbamát-dimaleát
Zmes benzyl-W-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)-fenyl]karbamátu (2,00 g, 0,0052 mol), crí-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu (1,92 g, 0,0044 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,300 g, 0,00026 mol) a uhličitanu sodného (1,35 g, 0,0109 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (70 ml) a vody (35 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (150 ml) a etylacetát (180 ml). Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva ďalej extrahuje (2x) etylacetátom (250 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/trietylamín/metanol (96:3:1) ako mobilnej fázy, čím sa získa cz5-benzyl-/V-{4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3.4-ď]pyrimidm-3-yl}-2-metoxyfenyl}karbamát vo forme bielej pevnej látky (1,88 g, 0,0023 mol). Crí-benzy 1-/V- {4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4ď|pyri-midín-3-yl}-2-metoxyfenyl}karbamát (0,206 g, 0,00036 mol) sa rozpustí v refluxujúcom etanole (17 ml) a pridá sa vopred ohriaty roztok kyseliny maleínovej (0,126 g, 0,00108 mol) v
158 etanole (8 ml). Zmes sa refluxuje po dobu 10 minút, ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom a suší, čím sa získa czs-benzyl-A-{4-{4-amino-l-[4-(4metyl-piperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl}-karbamátdimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,224 g, 0,00028 mol):
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,76 (s, IH), 8,23 (s, IH), 7,89 (d, IH), 7,40 (m, 5H), 7,20 (m, 2H), 6,15 (s, 4H), 5,18 (s, 2H), 4,85 (m, IH), 3,87 (s, 3H), 3,1 (br, 1 IH), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 2H), 1,57 (m, 4H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,83 minút. MS: MH+ 571.
Príklad 45
Acetát cri-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-V’-benzy lmočoviny
Czs-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl j-1 //-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-4-amín (0,082 g, 0,000188 mol) sa rozpustí v bezvodom pyridíne (1 ml), pridá sa benzylizokyanát (0,025 g, 0,000188 mol) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný zvyšok sa purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát cžs-jV-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-V-benzylmočoviny (0,009 g, 0,0000142 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,29 (d, IH), 8,18 (m, 2H), 7,33 (m, 5H), 7,26 (t, IH), 7,19 (s, IH), 7,13 (d, IH), 4,78 (m, IH), 4,33 (d, 2H), 3,91 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C 18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12.35 minút. MS: MH+ 570.
Všeobecný spôsob redukčnej alkylácie cis- alebo Zra«5-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-17/-pyrazolo[3,4-Jlpyrimidín-4-amínu
159
Spôsob prípravy A:
Zmes cis- alebo Zra«.s-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidm-4-amínu (alebo len cis alebo trans) (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku. Reakcia sa zastaví nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty.
Spôsob prípravy B:
Po syntéze a purifikácii (spôsob prípravy A) sa zvyšok vyextrahuje dichlórmetánom (1 ml), nanesie na stĺpec Trikonex (7 cm) a eluuje dichlórmetánom (5 ml). Požadovaný pás (UV-detekcia) sa oddelí a zlúčenina sa extrahuje zmesou dichlórmetán:metanol:trietylamín 90:5:5 (10 ml), filtruje a filtrát sa koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa suspenduje v dietyléteri (4 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a suší.
Príklad 46
Acetát cŕs-3-[4-(benzylamino)-3-metoxyfenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕir]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy A 'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 8,18 (s, 1H), 7,34 (m, 4H), 7,22 (t, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,99 (d, 1H), 6,55 (d, 1H), 5,90 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,40 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,81 minút. MS: MH+ 527.
160
Príklad 47
Diacetát c/s-3-(3-mctoxy-4-[4-(trifluórmetyl)benzyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ú]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy A 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,18 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,59 (d, 2H), 7,06 (s, 1H), 6,99 (d, 1H), 6,49 (d, 1H), 6,14 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,50 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 μιη, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 15,50 minút. MS: MH+ 595.
Príklad 48
Acetát cL-3-{4-[(l/7-4-imidazolylmetyl)amino]-3-metoxyfenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy A 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 11,85 (br, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,06 (br, 3H), 6,77 (d, 1H), 5,30 (br, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,24 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H),
1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 μιη, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 8, 70 minút. MS: MH+ 517.
Príklad 49
7?č/w-3-[4-(benzylamino)-3-metoxyfenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín-dimaleát
161
7ra/w-3-[4-(benzylamino)-3-metoxyfenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín sa pripraví podľa spôsobu prípravy A. 7ra«s-3-[4-(benzylamino)-3-metoxyfenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-4-amín (0,190 g, 0,00036 mol) sa rozpustí v etanole (20 ml) a roztok sa zahrieva k refluxu, naraz sa pridá roztok kyseliny maleínovej (0,126 g, 0,00108 mol) a v refluxe sa pokračuje ďalších 10 minút. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, precipitát sa spojí filtráciou a suší.
‘H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,34 (m, 4H), 7,22 (t, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,99 (d, 1H), 6,55 (d, 1H), 6,16 (d, 4H), 4,68 (m, 1H), 4,40 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rf 13,89 minút. MS: MH+ 527.
Príklad 50
Diacetát /rans-3-{4-[(2,6-dimetoxybenzyl)amino]-3-metoxyfenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy A 'H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,25 (t, 1H), 7,09 (d, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,92 (d, 1H), 6,69 (d, 2H), 4,68 (m, 1H), 4,60 (t, 1H), 4,31 (d, 2H), 3,83 (m, 9H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,87 minút. MS: MH+ 587.
Príklad 51
Diacetát trans-3 - {4-[(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino]-3 -metoxyfenyl} -1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy A
162 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,39 (m, 2H), 7,26 (t, 1H), 7,10 (d, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,86 (d, 1H), 5,21 (t, 1H), 4,68 (m, 1H), 4,31 (d, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm m, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,23 minút. MS: MH+ 579.
Medziprodukt pre redukčnú alkyláciu:
Cis- a /r«z25-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amín
a) 7erc-butyl-?V-(4-brómfenyl)karbamát
Di-/erc-butyl-dikarbonát (16,5 g, 0,0756 mol) sa rozpustí v bezvodom dichlórmetáne (150 ml), ochladí sa na teplotu 0 °C a po kvapkách sa pridá roztok 4-brómanilínu (9,75 g, 0,0567 mol) v bezvodom dichlórmetáne (50 ml). Zmes sa ohreje na izbovú teplotu a mieša pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Organická fáza sa premyje nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného vo vode (120 ml), suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/u-heptán (3:97) ako mobilnej fázy, čím sa získa /erc-butyl-zV-[(4-brómfenyljkarbamát (7,1 g, 0,0257 mol) vo forme bezfarebného oleja.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,49 (s, 1H), 7,42 (s, 4H) 1,47 (s, 9H).
TLC (etylacetát/heptán 1: 5) Rf0,74
b) 7erc-butyl-/V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát
Zmes ferc-butyl-V-[(4-brómfenyl)karbamátu (5,95 g, 0,0219 mol), diborónpinakolesteru (6,67 g, 0,0263 mol), [1,1’-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,536 g, 0,00066 mol) a octanu draselného (6,47 g, 0,066 mol) v ALV-dimetylformamide (120 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (100 ml) sa pridá do zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu. Filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej. ktorý sa čistí zrýchlenou chro163 matografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/zz-heptán (7:93) ako mobilnej fázy. Výsledná frakcia sa koncentruje. Zvyšok sa trituruje v zz-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou, čím sa získa Zerc-butyl-.V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1.3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (6,0 g, 0,0188 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ) δ 9,50 (s, 1H), 7,55 (d, 2H), 7,46 (d, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,27 (s, 12H).
TLC (etylacetát/heptán 1: 5) Rf 0,56
c) Cz5-/erc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidín-3 -y 1} fény l)karbamát
Zmes Zerc-butyl-/V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (3,71 g, 0,0116 mol), cz's-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín4-amínu (4,46 g, 0,0101 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,700 g, 0,00061 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (3,13 g, 0,0253 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (140 ml) a vody (70 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vy trepe medzi nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (300 ml) a etylacetátu (300 ml). Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva ďalej extrahuje etylacetátom (2x) (150 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/trietylamín/metanol (95:4:1) ako mobilnej fázy, čím sa získa cz'5-zerc-butyl-/V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)karbamát (4,1 g, 0,0081 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 9,57 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,52 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5 - 2,1 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,50 (s, 9H), 1,42 (m, 4H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,41 minút.
Cz's-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
164
Cz5-/erc-butyl-W-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl}fenyl)karbamát (4,0 g, 0,0079 mol) sa trituruje v bezvodom dichlórmetáne (75 ml) a reakčná zmes sa ochladí na teplotu 0 °C. Po kvapkách sa pridá trifluóroctová kyselina (10 ml) a výsledný roztok sa ohreje až na izbovú teplotu a mieša pod atmosférou dusíka po dobu 1,5 hodiny. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok suspenduje vo vode (70 ml) a alkalizuje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, ktorý sa extrahuje dichlórmetánom (3x 150 ml). Spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa czj-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amín (3,0 g, 0,00739 mol) vo forme belavej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,18 (s, 1H), 7,30 (d, 2H), 6,71 (d, 2H), 5,41 (s, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 8,64 minút.
7ratt5-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cykIohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-(/|pynmidín-4-amín sa pripraví spôsobom, ktorý je podobný príprave cN-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-íí]pyrimidín-4-amínu.
7rons-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,30 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,40 (s, 2H), 4,60 (m, 1H), 4,40 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,50 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 8,32 minút.
Všeobecný spôsob redukčnej alkylácie cis- alebo /ro«í-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
165
Zmes cis- alebo /ra«5-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-4-amínu (buď medziprodukt...alebo...) (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, reakcia sa zastaví nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty.
Spôsob prípravy D:
Po syntéze a purifikácii (spôsob prípravy C) sa zvyšok vyextrahuje dichlórmetánom (1 ml), nanesie na stĺpec Trikonex (7 cm) a premýva dichlórmetánom (5 ml). Požadovaný pás (UV-detekcia) sa oddelí a zlúčenina sa extrahuje zmesou dichlórmetán:metanol:trietylamín = 90:5:5 (10 ml), filtruje a filtrát sa koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa suspendúje v dietyléteri (4 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a suší.
Príklad 52
Diacetát cis-3-[4-(benzylamino)feny 1]-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,34 (m, 6H), 7,26 (t, 1H), 6,74 (d, 1H), 6,62 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,35 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H),
1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 13,10 minút. MS: MH+ 497.
Príklad 53
Diacetát č73-3-{4-[(2-metylbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
166
Spôsob príprav}- C:
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,37 (m, 3H), 7,18 (m, 3H), 6,75 (d, 2H), 6,43 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,28 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,35 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H). 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,25 minút. MS: MH+ 511.
Príklad 54
Diacetát cz5--l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(4-[2-(trifluórmetyl)benzyl]aminofenyl)-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,76 (d, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,48 (t, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,75 (t, 1H), 6,69 (d, 2H), 4,76 (m, 1H), 4,52 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,95 minút. MS: MH+ 565.
Príklad 55
Czs-3-{4-[(2-chlórbenzyl)ammo]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín
Spôsob prípravy' D:
‘H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,38 (m, 6H), 6,74 (d, 2H), 6,55 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4.39 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1.65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,43 minút. MS: MH+ 531.
167
Príklad 56
Cz'5-3-{4-[(2-brómbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimi dín-4-amín
Spôsob prípravy D:
*H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,38 (m, 4H), 7,20 (t, 1H), 6,70 (m, 3H), 4,76 (m, 1H), 4,39 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,76 minút.MS: MH+ 576.
Príklad 57
Cis-3 - {4- [(2-etoxybenzy l)amino] fenyl} -1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín
Spôsob prípravy D:
*H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,34 (d, 2H), 7,29 (s, 1H), 7,20 (t, 1H), 6,99 (d, 1H), 6,88 (t, 1H), 6,72 (d, 2H), 6,42 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 4,12 (q, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,38 (t, 3H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,71 minút.
MS: MH+ 541.
Príklad 58
CN-3-(4-[2-(difluórmetoxy)benzyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín
168
Spôsob prípravy D:
]H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,33 (m, 7H), 6,83 (d, 2H), 6,62 (t, 1H) 4,76 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,25 minút.
MS: MH+ 563.
Príklad 59
Diacetát cN-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(4-[2-(trifluórmetoxy)benzyl]aminofenyl)-l/ŕ-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,38 (m, 4H), 6,73 (d, 2H), 6,64 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,40 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H),
1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,33 minút.
MS: MH+581.
Príklad 60
Cz5-2-[2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/ŕ-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}anilino)metyl]fenoxy-l-etanol-diacetát
Spôsob prípravy C:
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,32 (m, 3H), 7,21 (t, 1H), 7,00 (d. 1H), 6.90 (t, 1H), 6.74 (d, 2H), 6,42 (t, 1H), 4,76 (m, IH), 4,33 (d, 2H), 4.07 (t. 2H), 3,78 (t, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2.17 (s, 3H), 1,91 (s. 6H), 1,65 (m, 2H), 1.58 (m, 2H);
169
RP-HPLC (DeltaPak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,08 minút.
MS: MH+ 557.
Príklad 61
Cis-2-[(4- {4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3 -yl}anilino)metyl]benzonitril-diacetát
Spôsob prípravy C:
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,86 (d, IH), 7,69 (t, IH), 7,59 (d, IH), 7,47 (t, IH), 7,37 (d, 2H), 6,73 (m, 3H), 4,76 (m, IH), 4,53 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,72 minút.
MS: MH+ 522.
Príklad 62
Cz's-3-{4-[(2,6-difluórbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/ŕ-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín
Spôsob prípravy C:
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,40 (m, 3H), 7,17 (dd, 2H), 6,82 (d, 2H), 6,38 (t, IH), 4,78 (m, IH), 4,33 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H),
1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,59 minút.
MS: MH+ 533.
170
Príklad 63
Acetát czs-3-4-[(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino]fenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
*H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,41 (m, 4H), 7,30 (t, 1H), 6,84 (d, 2H), 6,29 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,65 (m, 2H),
1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,36 minút.
MS: MH+ 549.
Príklad 64
Czj-3-(4-[2-fluór-6-(trifluóimetyl)benzyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]\H-pyrazolo[3,4-í7Jpyrimidín-4-amin
Spôsob prípravy D:
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,67 (m, 3H), 7,39 (m, 2H), 6,84 (d, 2H), 6,18 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 311), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,02 minút.
MS: Mlť 583.
171
Príklad 65
Diacetát m-3-{4-[(2-fluór-6-metoxybenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 F-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
a) 2-fluór-6-metoxybenzaldehyd
Roztok 3-fluóranizolu (3,36 g, 0,0266 mol) v bezvodom tetrahydrofuráne sa ochladí na teplotu -78 °C a po kvapkách sa pridá 1,4 M roztok n-butyllítia v hexánoch (19 ml, 0,0266 mol), pričom teplota reakčnej zmesi sa udržuje pod -75 °C. Po pridaní sa po kvapkách pridá
N, Ν,Ν',Ν',Ν''-pentametyldietyléntriamín a v miešaní pri teplote -78 °C sa pokračuje pod atmosférou dusíka ďalšie 2 hodiny. Po kvapkách sa pridá A/N-dimetylformamid (3,89 g,
O, 0532 mol) a reakčná zmes sa pomaly ohrieva za miešania po dobu pol hodiny. Reakcia sa zastaví pridaním 1 N kyseliny chlorovodíkovej (po kvapkách) a vrstvy sa oddelia, vodná fáza sa ďalej extrahuje etylacetátom (2 x 150 ml) a spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa trituruje v u-heptáne. Precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa 2-fluór-6-metoxybenzaldehyd (2,95 g, 0,0191 mol) vo forme belavej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,31 (s, 1H), 7,66 ( dd, 1H), 7,06 (d, 1H), 6,89 (dd, 1H), 3,92 (s, 3H).
TLC (etylacetát/heptán 5: 95) Rf 0,24
b) Diacetát c/5-3-{4-[(2-fluór-6-metoxybenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 ŕ/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,35 (m, 3H), 6,90 (m, 4H), 6,08 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 3,87 (s, 3H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H),
1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,84 minút.
172
MS: MH+ 550.
Príklad 66
C/5-3-4-[(2,6-dichlórbenzyl)amino]fenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ď]pynmidín-4-amín
Spôsob prípravy D:
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,54 (d, 2H), 7,39 (m, 3H), 6,84 (d, 2H), 6,18 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,20 minút.
MS: MH+ 566.
Príklad 67
Diacetát cri-3-{4-[(2,6-dimetoxybenzyl)ammo]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimídín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,34 (d, 2H), 7,26 (t, 1H), 6,82 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,75 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,22 (d, 2H), 3,82 (s, 6H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,01 minút.
MS: MH+ 557.
173
Príklad 68
Diacetát czy-3-{4-[(2-fluór-4-metylbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 N-pyrazolo [3,4-íZ]pyrimidín-4-amínu
a) 2-fluór-4-metylbenzaldehyd
Roztok 3-fluórtoluénu (2,91 g, 0,0266 mol) v bezvodom tetrahydrofuráne sa ochladí na teplotu -78 °C a po kvapkách sa pridá 1,4 M roztok n-butyllítia v hexánoch (19 ml, 0,0266 mol), pričom teplota reakčnej zmesi sa udržuje pod -75 °C. Po pridaní sa ďalej po kvapkách pridá N,A(N’,N’,N“-pentametyldietyléntriamín a v miešaní pri teplote -78 °C sa pokračuje pod atmosférou dusíka ďalšie 2 hodiny. Po kvapkách sa pridá Ν,Ν-dimetylformamid (3,89 g, 0,0532 mol) a reakčná zmes sa pomaly ohreje za miešania po dobu 0,5 hodiny. Reakcia sa zastaví pridaním 1 N kyseliny chlorovodíkovej (po kvapkách) a vrstvy sa oddelia. Vodná fáza sa ďalej extrahuje etylacetátom (2x 150 ml) a spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (5:95) ako mobilnej fázy, čím sa získa 2-fluór-4-metylbenzaldehyd (0,83 g, 0,006 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,17 (s, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,23 (m, 2H), 2,41 (s, 3H).
TLC (etylacetát/heptán 5:95) Rf 0,18
b) Diacetát cN-3-{4-[(2-fluór-4-metylbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 N-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,33 (m, 3H), 7,00 (m, 2H), 6,74 (d, 2H), 6,52 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,32 (d, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,34 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,58 minút.
MS: MH+ 529.
174
Príklad 69
Diacetát czk-3-{4-[(l//-2-indolylmetyl)arnino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazmo)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 11,04 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,44 (d, 1H), 7,35 (m, 3H), 7,01 (t, 1H), 6,95 (t, 1H), 6,83 (d, 2H), 6,48 (t, 1H), 6,36 (s, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,46 (d, 2H), 2,5 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (DeltaPak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,75 minút.
MS: MH+ 536.
Príklad 70
Diacetát cm-3-(4-[(1-metyl-17/-2-indolyI)metyľ]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,49 (d, 1H), 7,41 (d, 1 H), 7,33 (d, 2H), 7,11 (t, 1H), 7,00 (t, 1H), 6,87 (d, 2H), 6,50 (t, 1H), 6,43 (s, 1H), 4,76 (m, III), 4,56 (d, 2H), 3,77 (s, 3H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,84 minút.
MS: MH+ 550.
175
Príklad 71
Tris-maleát /ra«5-3-[4-(benzylamino)fcnyl]-l-[4-(4-metylpipcrazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-4-amínu
7ra«s-3-[4-(benzy lamino)-3 -metoxyfeny 1] -1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-4-amín sa pripraví podľa spôsobu prípravy C. 7roní-3-[4-(benzylamino)-3-metoxyfenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amín (0,215 g, 0,00043 mol) sa rozpustí v etanole (20 ml) a roztok sa zahrieva k refluxu, naraz sa pridá roztok kyseliny maleínovej (0,151 g, 0,00129 mol) a v refluxe sa pokračuje ďalších 10 minút. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou a suší.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,34 (m, 7H), 6,74 (d, 2H), 6,16 (s, 6H), 4,65 (m, 1H), 4,33 (s, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,09 minút.
MS: MH+ 497.
Príklad 72
Diacetát /ratts-3-{4-[(2-metylbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lí/-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
'H NMR (DMSO-ds, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,30 (t, 1H), 7,17 (m, 3H), 6,74 (d, 2H), 6,42 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,28 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,44 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,24 minút.
MS:MH+511.
176
Príklad 73
Diacetát írara-3-{4-[(2,6-dimetoxybenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolop,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,24 (t, 1H), 6,81 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,75 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,20 (d, 2H), 3,82 (s, 6H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,15 minút.
MS: MH+ 557.
Príklad 74
Diacetát fratts-3-{4-[(2-chlórbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
lH NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,40 (m, 6H), 6,65 (m, 3H), 4,60 (m, 1H), 4,40 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 μηι, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,53 minút.
MS: MH+ 531.
Príklad 75
Acetát /ra/7J-3-{4-[(2-brómbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
177
Spôsob prípravy D:
‘H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,64 (d, 1H), 7,39 (m, 4H), 7,22 (t, 1H), 6,65 (m, 3H), 4,60 (m, 1H), 4,36 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,79 minút.
MS: MH+ 576.
Všeobecný spôsob redukčnej alkylácie 3-(4-amino-fenyl)-l-[l-(l-metylpiperid-4-yl)piperid-4-y 1] -1 ŕ/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu:
Spôsob prípravy E:
Zmes 3-(4-amino-fenyl)-l-[l-(l-metylpiperid-4-yl)piperid-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-4-amínu (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku. Reakcia sa zastaví nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10 - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty.
Spôsob prípravy F:
Po syntéze a purifikácii (spôsob prípravy E) sa zvyšok vyextrahuje dichlórmetánom (1 ml), nanesie na stĺpec Trikonex (7 cm) a premýva dichlórmetánom (5 ml). Požadovaný pás (UV-detekcia) sa oddelí a zlúčenina sa extrahuje zmesou dichlórmetán:metanol:trietylamín = 90:5:5 (10 ml), filtruje a filtrát sa koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa suspenduje v dietyléteri (4 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a suší.
Príklad 76
Acetát 3-[4-(benzylamino)fenyl]-l-[l-(l-metylpiperid-4-yl)piperid-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-4-amínu
178
Spôsob prípravy E:
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,33 (m, 4H), 7,22 (t, IH), 7,07 (s. IH), 6,98 (d, IH), 6,54 (d, IH), 5,89 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,39 (d, 2H), 3,89 (s, 3H), 2,98 (d, 2H), 2,79 (d, 2H), 2,25 (br, 5H), 2,15 (s, 3H), 1,91 (m, 7H), 1,69 (d. 2H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,88 minút.
MS: MH* 527.
Príklad 77
Acetát 3-{4-[(2,6-dimetoxybenzyl)amino]fenyl}-l-[l-(l-metylpiperid-4-yl)piperid-4-yl]-lH-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy E:
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,24 (t, IH), 7,12 (d, IH), 7,04 (s, IH), 6,93 (d, IH), 6,68 (d, 2H), 4,81 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,31 (d, 2H), 3,82 (s, 9H), 2,98 (d, 2H), 2,79 (d, 2H), 2,25 (br, 5H), 2,15 (s, 3H), 1,91 (m, 7H), 1,69 (d, 2H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,71 minút.
MS: MH+ 587.
Príklad 78
3-{4-[(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino]fenyl}-l-[l-(l-metylpiperid-4-yl)piperid-4-yl]-l//-pyrazolo[3.4-c/]pyrimidín-4-amín
Spôsob prípravy F:
179 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,37 (m, 2H), 7,25 (t, 1H), 7,11 (d, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,86 (d, 1H), 5,21 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,49 (d, 2H), 3,83 (s, 3H), 2,98 (d, 2H), 2,79 (d, 2H), 2,25 (br, 5H), 2,15 (s, 3H), 1.89 (m, 4H), 1,69 (d, 2H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,94 minút.
MS: MH+ 579.
Príklad 79
Diacetát c;3-3-4-[benzyl(metyl)amino]fenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu
a) yV-benzyl-/V’-metyl-A-fenylamín % disperzia hydridu sodného v minerálnom oleji (2,37 g, 0,0592 mol) sa pridá pri teplote 0 °C do roztoku N-fenyl-N-benzylamínu (10,33 g, 0,0564 mol) v bezvodom N,Ndimetylformamide (200 ml). Reakčná zmes sa ohreje na izbovú teplotu a mieša po dobu 45 minút. Po kvapkách sa pridá jódmetán (7,99 g, 0,0564 mol) a v miešaní pri izbovej teplote sa pokračuje pod atmosférou dusíka po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi etylacetát (250 ml) a vodu (200 ml). Organická fáza sa suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (2:98) ako mobilnej fázy, čím sa získa iV-benzyl-jV-metyl-N-fenylamín (4.4 g, 0,0223 mol) vo forme žltého oleja.
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,30 (m, 2H), 7,20 (m, 5H), 6,70 (d, 2H), 6,60 (t, 1H), 4,55 (s, 2H), 2,99 (s, 3H);
TLC (etylacetát/heptán 5: 95) R/· 0.53
b) TV-benzy 1 -;V-(4-brómfeny 1) -jV-mety 1 amín
N-benzyl-ľV-fenyl-N-metylamín (4,41 g, 0,0224 mol) sa rozpustí v bezvodom dichlórmetáne (150 ml) a v priebehu 30 minút sa v 10 ekvivalentných podieloch pridá 2,4,4,6tetrabrómcyklohexadién-l-ón (9,16 g, 0,0224 mol). V miešaní sa pokračuje pri izbovej teplote
180 po dobu 20 hodín. Organická fáza sa postupne premyje s 0,5 N roztokom hydroxidu sodného vo vode (100 ml), 1 N roztokom hydroxidu sodného vo vode (100 ml), vodou (120 ml) a soľankou (120 ml). Organická fáza sa suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/rz-heptán (1:99) ako mobilnej fázy, čím sa získa jV-benzyl-jV-(4-brómfenyl)-?/-metylamín (3,52 g, 0,0127 mol) vo forme bezfarebného oleja.
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 1δ 7,27 (m, 7H), 6,65 (d, 2H), 4,55 (s, 2H), 2,99 (s, 3H);
TLC (etylacetát/heptán 5:95) Rf 0,67
c) V-benzyl-V-metyl-/V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín
Zmes ?/-benzyl-V-(4-brómfenyl)-/V-metylamínu (3,52 g, 0,0128 mol), diborónpinakolesteru (3,89 g, 0,0153 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,312 g, 0,00038 mol) a octanu draselného (3,72 g, 0,038 mol) v ΆίΛ -dimetylformamide (75 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (120 ml) sa pridá do zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu. Filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/«-heptán (2:98) ako mobilnej fázy. Výsledné frakcie sa koncentrujú. Zvyšok sa trituruje v n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou, čím sa získa /V-benzyl-/ť-metyl-/V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,75 g, 0,00232 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,45 (d, 2H), 7,30 (m, 5H), 6,68 (d, 2H), 4,62 (s, 2H), 3,03 (s, 3H), 1,27 (s, 12H);
TLC (etylacetát/heptán 5,95) Rf 0,62
d) Diacetát C7's-3-{4-[benzyl(metyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/í-pyrazolo[3,4-rfJpyrimidín-4-amínu
Zmes Aľ-benzyl-A-metyl-7V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljamínu (0,076 g, 0,000235 mol), cA-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4ŕ(]pyrimidín-4-amínu (0,080 g, 0.000181 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,012 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,00045 mol) sa zahrieva v zmesi
181 dimetyléteru etylénglykolu (5 ml) a vody (3 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát cis-3-{4-[benzyl(metyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu (0, 069g, 0,00011 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 8,19 (s, 1H), (d, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,26 (m, 3H), 6,89 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,66 (s, 2H), 3,09 (s, 3H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,60 minút.
MS:MH+511.
Príklad 80
Diacetát ur's-3-{4-[benzyl(etyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu
a) 7V-benzyl-V-(4-brómfenyl)-V-etylamín yV-benzyl-TV-fenyl-V-etylamín (2,25 g, 0,0107 mol) sa rozpustí v bezvodom dichlórmetáne (80 ml) a v 6 ekvivalentných podieloch sa v priebehu 20 minút pridá 2,4,4,6tetrabrómcyklohexadién-l-ón (4, 36 g, 0,0107 mol). V miešaní sa pokračuje pri tejto teplote po dobu 20 hodín. Organická fáza sa postupne premyje 0,5 N roztokom hydroxidu sodného vo vode (50 ml), 1 N roztokom hydroxidu sodného vo vode (50 ml), vodou (70 ml) a soľankou (75 ml). Organická fáza sa suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/u-heptán (1:99) ako mobilnej fázy, čím sa získa jV-benzyl-V-(4-brómfenyl)-jV-etylamín (2,38 g, 0,0082 mol) vo forme bezfarebného oleja.
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,27 (m, 7H), 6,59 (d, 2H), 4,51 (s, 2H), 3,46 (q, 2H), 1,11 (t,
3H);
182
TLC (etylacetát/heptán 1:99) Rf 0,23
b) V-benzyl-Ar-etyl-/V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljamín
Zmes yV-benzyl-jV-(4-brómŕenyl)-A-ctylamínu (2,22 g, 0,00765 mol), diborónpinakolesteru (2,33 g, 0,00919 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,188 g, 0,00023 mol) a octanu draselného (2,25 g, 0,023 mol) v /V,V-dimetylformamide (50 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (100 ml) sa pridá do zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu. Filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/zz-heptán (3:97) ako mobilnej fázy. Výsledné frakcie sa koncentrujú. Zvyšok sa trituruje v zz-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou, čím sa získa 77-benzyl-V-etyl-/V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,24 g, 0,000712 mol).
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 7,42 (d, 2H), 7,30 (m, 2H), 7,20 (m, 3H), 6,63 (d, 2H), 4,57 (s, 2H), 3,48 (q, 2H), 1,27 (s, 12H), 1,09 (t, 3H);
TLC (etylacetát/heptán 1: 99) Rf0,14
c) Diacetát cz.s-3-{4-[benzyl(etyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-(7]pyrimidín-4-amínu
Zmes V-benzyl-zV-etyl-?/-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-amínu (0,065 g, 0,000193 mol), czj-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4z/]pyrimidín-4-amínu (0,071 g, 0,000161 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,011 g, 0,00001 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,00045 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (5 ml) a vody (3 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Llypersil C18, 5 pm, 25 cm; 10-60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát czs-3-{4-[benzyl(etyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,049 g, 0,000076 mol) vo forme bielej pevnej látky.
183 ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,42 (d, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,26 (m, 3H), 6,83 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,61 (s, 2H), 3,55 (q, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,19 (t, 3H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,47 minút.
MS: MH+ 525.
Príklad 81
Cí5-N-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl}fenyl)-2-fenylacetamid-diacetát
CYy-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (0,255 g, 0,00063 mol) a fenylacetylchlorid (0,102 g, 0,00066 mol) sa rozpustí v bezvodom dichlórmetáne (20 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 5 minút. Po kvapkách sa pridá jVjV-diizopropyletylamín (0,097 g, 0,00076 mol) a v miešaní sa pokračuje po dobu 16 hodín. Organická fáza sa premyje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode (25 ml), koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparativnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa czs-N-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl}fenyl)-2-fenylacetamid-diacetát (0,250 g, 0,000388 mol) vo forme bielej pevnej látky.
!H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 10,37 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,77 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,33 (m, 4H), 7,23 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 3,68 (s, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,86 minút.
MS: MH+ 525.
184
Príklad 82
Diacetát cz'y-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(fenetylamino)fenyl]-l/í-pyrazolo[3,4ď|pyrimidín-4-amínu
Cis-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 7/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-2-fenylacetamid-diacetát (0,200 g, 0,00031 mol) sa suspenduje v bezvodom tetrahydrofuráne (15 ml), suspenzia sa ochladí na teplotu 0 °C a naraz sa pridá lítiumalumínumhydrid (0,177 g, 0,00416 mol). Výsledná zmes sa ohreje na izbovú teplotu a mieša sa pod atmosférou dusíka po dobu 18 hodín. Reakcia sa zastaví pridaním vody (po kvapkách). Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát cis-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(fenetylamino)fenyl]-1 77-pyrazolo[3,4-úQpyrimidín-4-amínu (0,039 g, 0,0000619 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,37 (d, 2H), 7,31 (m, 4H), 7,22 (m, 1H), 6,75 (d, 2H), 6,07 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 3,32 (m, 2H), 2,86 (t, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,03 minút.
MS:MH+511.
Príklad 83
Cw-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ri]pyrimídín-3-yl} fenyl)-3-fenylpropánamid-diacetát
C/5-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amín (0,250 g, 0,000616 mol) a 3-fenylpropanoylchlorid (0,109 g, 0,000646 mol) sa rozpustí v bezvodom dichlórmetáne (20 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 5 minút. Po kvapkách sa pridá VľV-diizopropyletylamín (0,095 g, 0,00074 mol) a v miešaní sa pokračuje po dobu 16 hodín. Organická fáza sa premyje nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného vo vode (25 ml), koncentruje za zníženého tlaku a
185 zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10 - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa czs-N-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-ylfenyl)-3-fenyl}propánamid-diacetát (0,225 g, 0,00034 mol) vo forme bielej pevnej látky.
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,12 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,77 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,29 (m, 4H), 7,19 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,94 (m, 2H), 2,67 (m 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,57 minút.
MS: MH+ 539.
Príklad 84
Diacetát cis-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3- {4-[(3 -fenylpropyl)amino] fenyl} -1 /7-pyrazolo[3,4-ŕ(]pyrimidín-4-amínu
Cis-Ni -(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}fenyl)-3-fenylpropánamid-diacetát (0,090 g, 0,000167 mol) sa suspenduje v bezvodom tetrahydrofuráne (5 ml), suspenzia sa ochladí na teplotu 0 °C a naraz sa pridá lítiumalumíniumhydrid (0,01 g, 0,00025 mol). Výsledná zmes sa ohreje na izbovú teplotu a v miešaní sa pokračuje pod atmosférou dusíka po dobu 18 hodín. Reakcia sa zastaví pridaním vody (po kvapkách). Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát czs-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-{4-[(3-fenylpropyl)amino]fenyl}-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,037 g, 0,000057 mol) vo forme bielej pevnej látky.
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,29 (m, 7H), 6,70 (d, 2H), 6,02 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 3,08 (m, 2H), 2,71 (m, 2H), 2,5 - 2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (m, 8H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
186
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,84 minút.
MS: MH+ 525.
Medziprodukt A
3- (Benzyloxy)fenylboritá kyselina
Do zmesi 3-benzyloxobrómbenzénu (0,590 g, 2,24 mmol, 1 ekviv.) v THF (10 ml) o teplote -78 °C sa pridá «-butyllítium (1,6 M v hexánoch, 2,9 ml, 4,7 mmol, 2,1 ekviv.). Reakčná zmes sa mieša po dobu 45 minút, potom sa pridá triizopropylborát (0,77 ml, 3,4 mmol, 1,5 ekviv.). Reakčná zmes sa mieša pri teplote -78 °C po dobu 30 minút a nechá sa ohriať na izbovú teplotu v priebehu 2 hodín. Pridá sa kyselina chlorovodíková (2,5 M, 10 ml) a zmes sa intenzívne mieša po dobu 16 hodín. Organický podiel sa separuje a vodná vrstva extrahuje dvoma podielmi Et2O (50 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa sušia nad MgSO4, filtrujú sa a koncentrujú, čím sa získa hnedý olej. Zvyšok sa trituruje z heptánu (100 ml) a precipitát sa spojí filtráciou, čím sa získa 3-(benzyloxy)fenylboritá kyselina vo forme levanduľovej pevnej látky (0,111 g, 0,486 mmol):
'H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): ÔH 8,00 (2H, bs), 7,02 - 7,46 (9H, m) a 5,09 (2H, s).
Medziprodukt B
4- (4-Amino-1 -cyklopentyl-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl)fenol
Zmes 3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-cyklopentyl-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (2,47 g, 6,41 mmol, 1 ekviv.), paládiovej černi (0,341 g, 3,20 mmol, 0,5 ekviv.) a mravenčanu amónneho (2,02 g, 32 mmol, 5 ekviv.) v etanole (50 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 4 hodín. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, premyje EtOH (300 ml), filtrát sa koncentruje, čím sa získa svetlo žltý pevný podiel, ktorý sa čistí premytím CH2C12 (200 ml). Týmto spôsobom sa získa 4-(4-amino-l-cyklopentyl-lH-pyrazolo[3,4-rf]pyrimidm-3-yl)fenol vo forme bielej pevnej látky (1,89 g, 6,4 mmol):
187 ’H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (1H, s), 7,45 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,92 (2H, d, J = 8,5 Hz), 5,17 - 5,24 (1H, m), 2,01 - 2,10 (4H, m), 1,87 - 1,90 (2H, m), 1,67 - 1,70 (2H, m).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,13 minút. MS; MH+ 296.
Medziprodukt C
7erc-butyl-7V-(3-brómfenyl)karbamát
Do zmesi di-Z-butyldikarbonátu (9 ml, 39 mmol, 1,3 ekviv.) v CH2CI2 (75 ml) s teplotou 0 °C sa pridá roztok 3-brómanilínu (3,3 ml, 30 mmol, 1 ekviv.) v CH2CI2 (75 ml). Reakčná zmes sa nechá ohriať pomaly na izbovú teplotu a mieša po dobu 16 hodín. Surová reakčná zmes sa vytrepe medzi nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (50 ml) a EtOAc (50 ml). Organická vrstva sa oddelí a vodná vrstva extrahuje EtOAc (100 ml). Spojené organické extrakty sa sušia nad MgSO4, filtrujú sa a koncentrujú, čím sa získa červený olej. Purifikáciou chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 1 litrom 3 % EtOAc/heptán a 1 litrom 5 % EtOAc/heptán) sa získa Zerc-butyl-N-(3-brómfenyl)karbamát vo forme lepkavej žltej pevnej látky (9,0 g, 33 mmol):
*H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,54 (1H, s), 7,75 (1H, s), 7,37 - 7,39 (1H, m), 7,12 - 7,22 (2H, m) a 1,47 (9H, s).
Medziprodukt D
7erc-butyl-/V-[3-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát
Zmes ferobutyl-A-(3-brómfenyl)karbamátu (8,19 g, 30,1 mmol, 1 ekviv.), PdCl2(dppf)2 (0,675 g, 0,90 mmol, 0,03 ekviv.), diborónpinakolesteru (9,17 g, 36,1 mmol, 1,2 ekviv.) a octanu draselného (8,86 g, 90,3 mmol, 3,0 ekviv.) v DMF (150 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 12 hodín. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v CH2CI2 (100 ml) a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, premyje CH2C12 (100 ml) a Et2O (100 ml). Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 1 litra 5 % EtOAc/heptán), čím sa získa rerc-butyl-N-[3-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljkarbamát vo forme bielej pevnej látky (6,77 g, 21,2 mmol):
188 ’H NMR (dô-DMSO, 400MHz): δΗ 9,30 (1H, s), 7,85 (1H, s), 7,45 - 7,50 (1H, m), 7,25 - 7,30 (2H, m), 1,47 (9H, s) a 1,29 (12H, s).
Medziprodukt E
Cw-férc-buty]-N-(3-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-y 1} fény ljkarbamát
Zmes cA-3-jód-l-[4-(4-metylpíperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (1,89 g, 4,28 mmol, 1 ekviv.), Zerc-butyl-jV-[3-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,64 g, 5,14 mmol, 1,2 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,271 g, 0,257 mmol, 0,06 ekviv.) a monohydrátu uhličitanu sodného (1,28 g, 10,3 mmol, 2,4 ekviv.) vo vode (13 ml) a DME (18 ml) sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 14 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu. Pridá sa nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného roztoku (15 ml) a vodný podiel sa extrahuje EtOAc (30 ml). Organický extrakt sa suší nad MgS04, filtruje a koncentruje, čím sa získa svetlo žltý pevný podiel. Purifikáciou chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 2 1 zmesi 95:4:1 CH2Cl2:Et3N:MeOH) sa získa cw-Zerc-butyl-jV-(3 - {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3 -yl} fenyl)karbamát vo forme bielej pevnej látky (1,76 g, 3,47 mmol):
’H NMR (d6-DMSO, 400 ΜΗζ): δΗ 9, 55 (IH, s), 8,23 (1H, s), 7,81 (1H, s), 7,40 - 7,52 (2H, m), 7,24 (1H, d, J = 7, 5 Hz), 4,79 - 4,81 (1H, m), 2,05 - 2,44 (11H, m), 2,14 (3H, s), 1,54 - 1,70 (6H, m), 1,49 (9H, s); RP HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,61 minút.
Medziprodukt F
CA-3-(3-aminofenyl)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín
Zmes cA-Zerc-butyl-?/-(3-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}fenyl)karbamátu (1,7 g, 3,3 mmol, 1 ekviv.) a dichlórmetánu (40 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C, potom sa pridá trifluóroctová kyselina (10,5 ml, 137 mmol, 41 ekviv.). Reakčná zmes sa nechá ohriať na izbovú teplotu v priebehu 3 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi CH2C12 (50 ml) a vodu (50 ml). Organická vrstva sa separuje a nechá reagovať s nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (50 ml).
189
Organický extrakt sa suší nad MgSO4, filtruje a koncentruje, čím sa získa czs-3-(3-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (1,34 g, 3,30 mmol):
'H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,21 (1H, s), 7,17 - 7,21 (1H, m), 6,85 (1H, s), 6,72 - 6,74 (1H, m), 6,65 - 6,68 (1H, m), 5,36 (2H, bs), 4,75 - 4,80 (1H, m), 2,22 - 2,51 (11H, m), 2,20 (3H, s), 2,06 - 2,08 (2H, m), 1,58 - 1,68 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 9,06 minút.
MS: MH“ 407.
Medziprodukt G
2- [4-(4,4,5,5 -tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitril
Zmes [2-(4-brómfenoxy)fenyl](metylidín)amónia (4,00 g, 14,6 mmol, 1 ekviv.), PdCl2 (dppf)2 (0,320 g, 0,44 mmol, 0,03 ekviv.), diborónpinakolesteru (4,45 g, 17,5 mmol, 1,2 ekviv.) a octanu draselného (4,30 g, 43,8 mmol, 3,0 ekviv.) v DMF (70 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa čierne bahno. Výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, premyje CH2C12 (200 ml) a EtOAc (200 ml), filtrát sa koncentruje, čím sa získa tmavo hnedý olej, ktorý sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 500 ml 5 % MeOH/CH2C12), čím sa získa 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]ben-zonitril vo forme svetlo žltého oleja (2,04 g, 6,35 mmol):
’H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 7,92 - 7,94 (1H, m), 7,69 - 7,92 (3H, m), 7,33 - 7,37 (1H, m), 7,08 - 7,12 (3H, m) a 1,30 (12H, s).
Príklad 85
-Cyklopenty 1-3 - [4 - (3 -metoxyfenoxyjfenyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-4-amín
Zmes 4-(4-amino-l-cyklopentyl-lŕ/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)fenolu (0,195 g, 0,660 mmol, 1 ekviv.), 3-metoxyboritej kyseliny (0,240 g, 1,58 mmol, 2,4 ekviv.), octanu meď190 ného (0,180 g, 0,990 mmol, 1,5 ekviv.) a 4 Á molekulových sít v pyridíne (0,27 ml) sa zahrieva k refluxu po dobu 5 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, premyje CH2CI2 (20 ml) a MeOH (20 ml), filtrát sa koncentruje, čím sa získa olejovitá zelená pevná látka, ktorá sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 1 litrom CH2CI2, 600 ml 20 % MeOH/C^CU a 600 ml 40 % MeOH/CH2Cl2), čím sa získa l-cyklopentyl-3-[4-(3-metoxyfenoxy)fenyl]-lN-pyrazolo[3,4-Jjpyrimidín-4-amín vo forme žlto-hnedej pevnej látky (0,072 g, 0,179 mmol):
‘H NMR (dg-DMSO, 400 MHz): ÓH 8,23 (1H, s), 7,67 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,34 (1H, t, J = 8,2 Hz), 7,16 (2H, d, J - 8,6 Hz), 6,78 (1H, d, J - 8,3 Hz), 6,65 - 6,70 (2H, m), 5,21 - 5,25 (1H, m), 3,76 (3H, s), 2,02-2,11 (4H, m), 1,87-1,91 (2H, m), 1,67-1,71 (2H, m);
RP-HPLC (Hypercil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 13, 35 minút.
MS: MH+ 402.
Príklad 86
3-[4-(Benzyloxy)fenyl]-l-cyklopentyl-lN-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín
Do zmesi l-cyklopentyl-3-jód-lN-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (5,41 g, 17,1 mmol, 1 ekviv,) a 4-(benzyloxy)fenylboritej kyseliny (4,87 g, 21,4 mmol, 1,2 ekviv.) v DME (100 ml) sa pridá tetrakis(trifenylfosfín)paládium (1,19 g, 1,03 mmol, 0,06 ekviv.) a roztok monohydrátu uhličitanu sodného (5,09 g, 41 mmol, 2,4 ekviv.) vo vode (54 ml). Zmes sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 2 hodín. Pridá sa ďalšie tetrakis(trifenylfosfín)paládium (1,19 g, 1,03 mmol, 0,06 ekviv.) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 3 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a biely kryštalický pevný podiel (3,868 g) sa spojí filtráciou a kvôli izolácii väčšieho množstva produktu sa filtrát koncentruje vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi vodu (50 ml) a EtOAc (50 ml), vodná vrstva sa extrahuje (3x) EtOAc (150 ml zakaždým) a spojené organické extrakty sa premyjú (3x) vodou (100 ml zakaždým) a soľankou (100 ml), sušia nad MgSOq, filtrujú sa a koncentrujú, čím sa získa žltý- pevný podiel (0,916 g), druhý pevný podiel sa spojí a re kryštál i žuje z horúceho EtOAc, čím sa získa 3-[4-(benzyloxy)fenyl]191
-1 -cyklopentyl-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (3,41 g, 8,8 mmol):
'H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (IH, s), 7,19 - 7,62 (7H, m), 7,18 (2H, d, J = 6,9 Hz), 5,18 - 5,23 (IH, m), 5,22 (2H, s), 2,00 - 2,10 (4H, m), 1,87 - 1,89 (2H, m), 1,66 - 1,70 (2H, m),
RP-HPLC (Hypercil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % -100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 13,05 minút.
Príklad 87 l-Cyklopentyl-3-[4-(4-fluórfenoxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-íí]pyrimidín-4-amín
Zmes 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)fenolu (0,151 g, 0,511 mmol, 1 ekviv.), 4-(fluórfenyl)boritej kyseliny (0,357 g, 2,55 mmol, 5,0 ekviv.), octanu meďnatého (0,139 g, 0,766 mmol, 1,5 ekviv.), 4Á molekulových sít v pyridíne (0,21 ml) a dichlóretáne (5 ml) sa zahrieva k refluxu po dobu 48 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu za premytia MeOH (20 ml), filtrát sa koncentruje, čím sa získa hnedý olej, ktorý sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 300 ml CH2C12, 400 ml 10 % MeOH/CHaCb a 400 ml 20 % MeOH/CH2C12), čím sa získa červený olej, ktorý sa ďalej purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 50 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min).
Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa l-cyklopentyl-3-[4-(4-fluórfenoxy)fenyl]-l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (0,010 g, 0,025 mmol):
*H NMR (d6 CDCb, 400 MHz): δΗ 8,37 (IH, s), 7,65 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,03 - 7,26 (6H, m), 5,59 (2H, bs), 5,27 - 5,35 (IH, m), 2,09 - 2,21 (4H, m), 1,95 - 2,02 (2H, m), 1,68 - 1,79 (2H, m);
RP-HPLC (Hypercil C18, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min) Rt 14,63 minút.
192
MS: MH+ 390.
Príklad 88 l-Cyklopentyl-3-4-[3-(trifluórmetyl)fenoxy]fenyl-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín
Zmes 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl)fenolu (0,170 g, 0,576 mmol, 1 ekviv.), 3-(trifluórmetylfenyl)boritej kyseliny (0,328 g, 1,73 mmol, 3,0 ekviv.), octanu med’ného (0,108 g, 0,594 mmol, 1,0 ekviv.), 4Ä molekulových sít v pyridíne (0,23 ml) a dichlóretáne (5,8 ml) sa zahrieva k refluxu po dobu 6 hodín. Pridá sa octan meďnatý (0,050 g, 0,5 ekviv.) a reakčná zmes sa zahrieva k refluxu po dobu 16 hodín. Pridajú sa ďalšie molekulové sitá a 3-(trifluórmetylfenyl)boritá kyselina (0,250 g, 2,3 ekviv.) a reakčná zmes sa zahrieva k refluxu po dobu 54 hodín. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, premyje MeOH (20 ml), filtrát sa koncentruje, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 400 ml heptánu, 400 ml 10 % EtOAc/heptán, 400 ml 20 % EtOAc/heptán a 400 ml 50 % EtOAc/heptán), čím sa získa žltý pevný podiel. Ďalšou purifikáciou preparatívnou RP-LC/MS (Gilson-Micromass C18, 5 pm, 130 Ä, 21 cm, 0% - 100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 9 minút, 25 ml/min), odstránením acetonitrilu vo vákuu a lyofilizáciou vodnej zmesi sa získa l-cyklopentyl-3-4-[3-(trifluórmetyl)fenoxy]fenyl-17/-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín vo forme svetlo hnedej pevnej látky (0,017 g, 0,039 mmol):
‘H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,29 (1H, s), 7,68 - 7,74 (3H, m), 7,65 (1H, d, J = 8,1 Hz), 7,52 - 7,54 (2H, m), 7,24 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,7 (2H, bs), 5,20 - 5,28 (1H, m), 2,03 - 2,11 (4H, m), 1,90 - 1,91 (2H, m), 1,68 - 1,70 (2H, m);
RP-HPLC (Hypercil 08, 5 μηι, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min) Rt 15,72 minút.
MS: MH+ 440.
Príklad 89 l-Cyklopentyl-3-[4-(3-nitrofenoxy)fenylJ-l /Y-pvrazolo[3.4-(/]pyrimidín-4-amín
193
Zmes 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l/í-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl)fenolu (0,202 g, 0,684 mmol, 1 ekviv.), 3-nitrofenylboritej kyseliny (0,571 g, 3,42 mmol, 5,0 ekviv.), octanu meďnatého (0,186 g, 1,02 mmol, 1,5 ekviv.), 4Á molekulových sít v pyridíne (0,28 ml) a dichlóretánu (6,8 ml) sa zahrieva k refluxu po dobu 24 hodín. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu. Dichlórmetán (25 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, premyje MeOH (20 ml), filtrát sa koncentruje, čím sa získa hnedá tekutina, ktorá sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 400 ml heptánu, 400 ml 10 % EtOAc/heptánu, 400 ml 20 % EtOAc/heptánu a 800 ml MeOH), čím sa získa červený olej, ktorý sa ďalej purifikuje preparatívnou RP-LC/MS (Gilson-Micromass C18, 5 gm, 130 Ä, 21 cm, 0 % -100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 9 minút, 25 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa l-cyklo-pentyl-3-[4-(3nitrofenoxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín vo forme svetlo žltej pevnej látky (0,034 g, 0,081 mmol):
'H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (1H, s), 7,28 - 7,74 (6H, m), 7,18 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,7 (2H, bs), 5,13 - 5,26 (1H, m), 2,02 - 2,10 (4H, m), 1,89 - 1,91 (2H, m), 1,68 - 1,70 (2H, m);
RP-HPLC (Hypercil C18, 5 gm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min) Rt 19,98 minút.
MS:MH+417.
Príklad 90 l-Cyklopentyl-3-4-[4-(trifluórmetoxy)fenoxy]fenyl-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín
Zmes 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)fenolu (0,100 g, 0,339 mmol, 1 ekviv.), 4-trifluórmetoxyfenylboritej kyseliny (0,349 g, 1,69 mmol, 5,0 ekviv.), octanu meďnatého (0,092 g, 0,51 mmol, 1,5 ekviv.), 4Á molekulových sít v pyridíne (0,12 ml) a dichlóretánu (3,4 ml) sa zahrieva k refluxu po dobu 72 hodín. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu. Pridá sa dichlórmetán (25 ml) a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa hnedý olej, ktorý sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 gm, 300 Ä, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a
194 vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa l-cyklopentyl-3-4-[4-(trifluórmetoxy)fenoxy]fenyl-l//-pyrazolo[3,4-ff]pyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (0,020 g, 0,044 mmol):
!H NMR (d6 CDCb, 400 MHz): ÔH 8,53 (1H, s), 7,69 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,07 - 7,26 (6H, m), 5,55 (2H, bs), 5,28 - 5,36 (1H, m), 2,16-2,21 (4H, m), 1,94-2,04 (2H, m), 1,72-1,79 (2H, m);
RP-HPLC (Hypercil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % -100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min) Rt 16,33 minút.
MS:MH+456.
Príklad 91 l-Cyklopentyl-3-4-[4-(trifluórmetyl)fenoxy]fenyl-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín
Spôsobom uvedeným pre syntézu l-cyklopentyl-3-4-[4-(trifluórmetoxy)fenoxy]fenyll//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-ammu sa pripraví l-cyklopentyl-3-4-[4-(trifluórmetyl)fenoxy]fenyl-l//-pyrazolo[3,4-fiQpyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (0,008 g, 0,018 mmol):
'H NMR (d6 CDCb, 400 MHz): ÔH 8,34 (1H, s), 7,60 - 7,73 (4H, m), 7,05 - 7,32 (4H, m), 5,89 (2H, bs), 5,27 - 5,34 (1H, m), 2,17 - 2,21 (4H, m), 2,00 - 2,03 (2H, m), 1,72 - 1,79 (2H, m);
RP-HPLC (Hypercil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min) Rt 15,77 minút. MS: MH+ 440.
Príklad 92
3-[3-(Benzyloxy)fenyl]-l-cyklopentyl-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amm
Do zmesi l-cyklopentyl-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ú/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,631 mmol, 1 ekviv.) a 3-(benzyloxy)fenylboritej kyseliny (0,110 g, 0,487 mmol, 1,0 ekviv.) v DME (6 ml) sa pridá tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,044 g, 0.038 mmol, 0,07 ekviv.) a roztok monohydrátu uhličitanu sodného (0,187 g, 1,51 mmol, 2,4 ekviv.) vo vode (2 ml). Zmes sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 16 h, potom nechá vychladnúť na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa
195 odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi EtOAc (50 ml) a vodu (50 ml). Organická vrstva sa suší nad MgSOzí, filtruje a koncentruje, čím sa získa olejovitý červeno-oranžový pevný podiel. Rekryštalizáciou z horúceho EtOAc sa získa červeno-oranžový pevný podiel, ktorý sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min).
Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa 3-[3-(benzyloxy)fenyi]-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (0,023 g, 0,060 mmol):
’H NMR (d6 CDCb, 400 MHz): δΗ 8,34 (1H, s), 7,27 - 7,46 (8H, m), 7,07 - 7,10 (1H, m), 5,63 (2H, bs), 5,31 (1H, chint, J = 7,6 Hz), 5,16 (2H, s), 2,15 - 2,20 (4H, m), 1,96 - 2,01 (2H, m), 1,72- 1,75 (2H, m);
RP-HPLC (Hypercil C18, 5 pm, 100 A, 15 cm; 5 % -100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min) Rt 14,00 minút.
MS: MH+ 386.
Príklady 93 - 99
Všeobecný spôsob prípravy [substituovaných (metylamino)]fenylpyrazolopyrimidínov:
Do 0,10 M roztoku c;s-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-lí/-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-4-amínu v dichlóretáne sa pridajú 1,5 ekviv. substituovaného benzaldehydu, 3,8 ekviv. ľadovej kyseliny octovej, 3,5 ekviv. triacetoxyborohydridu sodného. Táto zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 16 hodín. Pridajú sa ďalšie 3,3 ekviv. triacetoxyborohydridu sodného (pokiaľ je to potrebné). Reakčná zmes sa mieša po dobu 1,5 hodiny a potom zriedi dichlóretánom (5 ml) a nasýteným vodným roztokom NaHCCb (5 ml). Organický podiel sa separuje a vodný podiel sa extrahuje CH2CI2 (10 ml). Spojené organické extrakty sa sušia nad MgSO4, filtrujú sa a koncentrujú. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa požadovaný produkt.
196
HPLC rt M+ (min)
Zlúčeniny pripravené vyššie uvedeným spôsobom:
Názov (min)
Príklad 93 Triacetát czs-3-{4-{(3-fluórbenzyl)amino]fenyl}- 13,25 515,3
-1 -[4-(4-metylpiperazino)cy klohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4-č/Jpyrimidín-4-ammu
Príklad 94 Triacetát cz's-3-{4-[(2-fluórbenzyl)amino]fenyl}- 13,24 515,3
-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 Lf-pyrazolo [3,4-cf]pyrimidín-4-amínu
Príklad 95 Diacetá; czs-3-{4-[(4-metoxybenzyl)amino]fenyl}- 13,08 527,3
-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ŕ/jpyrimidín-4-amínu
Príklad 96 Triacetát czs-3-{4-[(3-metoxybenzyl)amino]fenyl}- 13,12 -1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu
Príklad 97 Triacetát czs-3-{4-[(4-fluórbenzyl)amino]fenyl}- 13,35
-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Príklad 98 Czs-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-4-[(3- 10,19
-pyridylmetyl)amino]fenyl-l//-pyrazolo[3,4-íZ]pyrimidín-4-amínu
527,3
515,3
498,5
Príklad 99 Czs-3-{4-[(2-metoxybenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4- 13,57 527,4
-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1 H-pyrazolo[3,4-ri] pyrimidín-4-amínu
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny priebehu 20 minút, 1 ml/min)
Príklad 100
Triacetát czs-3-[3-(benzylamino)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4 -<7]pyrimidín-4-amín
197
Do roztoku cz\-3-(3-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ríjpyrimidín-4-amínu (0,104 g, 0,256 mmol, 1 ekviv.) v dichlóretáne (2 ml) sa pridá benzaldehyd (0,03 ml, 0,282 mmol, 1,1 ekviv.), ľadová kyselina octová (0,06 ml, 1,0 mmol, 3,9 ekviv.) a triacetoxyborohydrid sodný (0,212 g, 1,0 mmol, 3,9 ekviv.). Táto zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 16 hodín. Pridá sa nasýtený vodný roztok NaHCCb (5 ml). Organický podiel sa oddelí a vodný podiel extrahuje dvoma podielmi CH2CI2 (15 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa sušia nad MgSO4, filtrujú sa a koncentrujú, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí (2x) preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Ä, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa triacetát cz's-3-[3-(benzylamino)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (0,023 g, 0,046 mmol):
‘H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): ÔH 8,21 (1H, s), 7,40 (4H, m), 7,20 - 7,25 (2H, m), 6,88 (1H, s), 6,78 (1H, d, J = 7,7 Hz), 6,67 - 6,69 (1H, m), 6,56 - 6,58 (1H, m), 4,75 - 4,79 (1H, m), 4,32 (2H, d, J = 5,8 Hz), 2,21 - 2,49 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05 - 2,14 (2H, m), 1,89 (9H, s), 1,54 1,68 (4H, m);
RP-HPLC (Hypercil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min) Rt 13,04 minút.
MS: MH+ 497.
Príklad 101
Cz‘s-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1 A-pyrazolo [3,4-rí] pyrimidín-3 -yl} fenoxy )benzoni trií
Zmes cis-3 -j ód-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (2,29 g, 5,19 mmol, 1 ekviv.), 2-(4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxyjbenzonitrilu (2,0 g, 6,2 mmol, 1,2 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfm)paládia (0,329 g, 0, 311 mmol, 0,06 ekviv.), DME (21 ml) a monohydrátu uhličitanu sodného (1,54 g, 12,5 mmol, 2,4 ekviv.) vo vode (16 ml) sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 60 hodín. Pridá sa ďalšie tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,100 g, 0,02 ekviv.) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 85 °C
198 po dobu 6,5 hodiny. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a vytrepe medzi nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (25 ml) a EtOAc (25 ml). Organický extrakt sa suší nad MgSO4, filtruje a koncentruje. Zvyšok sa trituruje z Et2O a purifikuje chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 1 litra 5 % MeOH/CH2Cl2, 1 liter 10 % MeOH/CH2Cl2, 1 litra 20 % MeOH/CH2Cl2 a 1 litra 25 % MeOH/CH2Cl2), čím sa získa cw-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzonitril vo forme svetlo žltej pevnej látky (1,79 g, 3,52 mmol):
*H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,24 (1H, s), 7,94 (1H, d, J = 7,7 Hz), 7,68 - 7,73 (3H, m), 7,31-7,34 (3H, m), 7,18 (1H, d, J = 8,5 Hz), 4,78 -4,83 (1H, m), 2,21-2,51 (11H, m), 2,19 (3H, s), 2,05 - 2,08 (2H, m), 1,56-1,71 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,16 minút.
MS: MH+ 509.
Príklad 102
Cŕs-2-(3-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzamid-triacetát
Zmes cA-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/)pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzonitrilu (0,111 g, 0,218 mmol, 1 ekviv.), 25% vodného hydroxidu sodného (1 ml) a 30 % H2O2 (1 ml) v dioxáne (1 ml) sa zahrieva pri teplote 100 °C po dobu 16 hodín. Pridá sa ďalší podiel 30 % H2O2 (1 ml) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 100 °C po dobu 2 hodín. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a zriedi CH2C12 (15 ml). Organický podiel sa separuje a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku, čím sa získa svetlo žltý pevný podiel, ktorý sa čistí preparativnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čim sa získa cz's-2-(3-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17í-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzamid-triacetát vo forme belavej pevnej látky (0,020 g, 0.038 mmol):
199 ’H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,23 (1H, s), 7,75 (1H, d, J = 7,7 Hz), 7,64 (3H, d, J = 6,7 Hz), 7,56 (1H, s), 7,48 (1H, t, J = 7,5 Hz), 7,27 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,19 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,06 (1H, d, J = 7,7 Hz), 4,76 - 4,82 (1H, m), 2,20 - 2,50 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,04 - 2,08 (2H, m), 1,89 (9H, s), 1,58 - 1,70 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,79 minút.
MS: MH+ 527.
Príklad 103
Cz.y-3-4-[2-(aminometyl)fenoxy]fenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín
Zmes cis-2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzonitrilu (0,097 g, 0,19 mmol, 1 ekviv.) a lítiumalumínium-hydridu (0,036 g, 0,95 mmol, 5 ekviv.) v THF (2 ml) sa zahrieva pri teplote 66 °C po dobu 2 hodín. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a vytrepe medzi ľadovú vodu (30 ml) a CH2CI2 (50 ml). Organický extrakt sa suší nad MgSO4, filtruje a koncentruje, čím sa získa žltý pevný podiel, ktorý sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10 % 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa cz'5-3-4-[2-(aminometyl)fenoxy]fenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lí/-pyrazolo[3,4-tf]pyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (0,078 g, 0,152 mmol):
’H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (1H, s), 7,57 - 7,64 (3H, m), 7,21 - 7,29 (2H, m), 7,04 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,01 (1H, d, J = 7,9 Hz), 4,76 - 4,81 (1H, m), 3,74 (2H, s), 2,20 - 2,51 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05 - 2,08 (2H, m), 1,57 - 1,70 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 9,85 minút.
MS:MH+513.
200
Príklad 104
Diacetát cz3-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-4-[2-(2H-l,2,3,4-tetraazol-5-yl)fenoxy]fenyl-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
Zmes cz3-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzonitrilu (0,070 g, 0,14 mmol, 1 ekviv.) a azidotributyl-cínu (0,8 ml, 2,4 mmol, 17 ekviv.) sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 80 hodín. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a zriedi EtOAc (15 ml). Výsledný precipitát sa spojí filtráciou, čím sa získa béžový pevný podiel, ktorý sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C 18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodný podiel sa nechá reagovať s nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (10 ml) kvôli odstráneniu zvyšnej kyseliny octovej, vodná zmes sa extrahuje CH2CI2 (25 ml) a organický extrakt sa suší nad MgSOq, filtruje a koncentruje, čím sa získa diacetát cz3-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyľj-3-4-[2-(2//-l,2,3,4-tetraazol-5-yl)fenoxyfenyl-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (0,009 g, 0,016 mmol):
'H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): ÓH 8,20 (1H, s), 7,94 (1H, d, J = 7,7 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,32 - 7,37 (1H, m), 7,24 - 7,28 (1H, m), 7,11 (1H, d, J = 9,1 Hz), 6,99 (2H, d, J = 8,7 Hz), 4,73 - 4,80 (1H, m), 2,23 - 2,34 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05 - 2,07 (2H, m), 1,68 (6H, s), 1,56 1,65 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,86 minút.
MS: MH+ 552.
Príklad 105
Diacetát cz3-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-nitrofenoxy)fenyl]-l/7-pyrazolo[3,4-r/Jpyrimidín-4-amín
Zmes 4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyll-lŕ/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-fenolu (0,200 g, 0,491 mmol, 1 ekviv.) a 60 % hydridu sodného (0,020 g, 0,49 mmol, 1
201 ekviv.) v dioxáne (4,9 ml) sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 minút. Pridá sa 2fluómitrobenzén (0,06 ml, 0,6 mmol, 1,1 ekviv.) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 100 °C po dobu 3 hodín. Pridá sa ďalší hydrid sodný (0,010 g, 0,24 mmol, 0,5 ekviv.) a 2fluómitrobenzén (0,02 ml, 0,2 mmol, 0,4 ekviv.) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 100 °C po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou premytím CH2CI2 (10 ml) a EtOAc (10 ml). Filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý polopevný podiel, ktorý sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa diacetát cw-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-nitrofenoxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (0,023 g, 0,043 mmol):
’H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 8, 23 (IH, s), 8,10 (IH, d, J = 8,2 Hz), 7,68 - 7,73 (3H, m), 7,33 - 7,40 (IH, m), 7,31 (IH, d, J = 7,3 Hz), 7,24 (2H, d, J = 8,7 Hz), 4,76 - 4,82 (IH, m), 2,26 -2,51 (11H, m), 2,24 (3H, s), 2,17-2,21 (2H, m), 2,05 (6H, s), 1,56-1,71 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,09 min.
Príklad 106
Cz5-3-[4-(2-aminofenoxy)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
Zmes cz's-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-nitrofenoxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,059 g, 0,091 mmol, 1 ekviv.), ľadovej kyseliny octovej (0,03 ml, 0,5 mmol, 5 ekviv.) a 10 % Pd-C (0,024 g, 0,4 hmotn. ekviv.) v etanole (1 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod pozitívnym tlakom vodíka po dobu 16 hodín. Pevné podiely sa odstránia filtráciou premytím CH2CI2 (10 ml) a filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa czs-3-[4-(2-aminofenoxy)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-l/7-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amín vo forme belavej pevnej látky (0,018 g, 0,036 mmol):
202 *H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 8, 22 (1H, s), 7,59 (2H, d, J = 8, 6 Hz), 7,05 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,85 - 6,98 (3H, m), 6,58 - 6,61 (1Η, m), 4,93 (2H, bs), 4,78 - 4,80 (1H, m), 2,20 - 2,50 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05 - 2,09 (2H, m), 1,55 - 1,70 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 μηι, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,00 minút.
MS: MH+ 499.
Príklad 107 [2-(4-amino-l-cyklopentyl-17/-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidm-3-yl)-5-fenoxyfenyl]metanol
a) (2-Bróm-5-fenoxyfenyl)metanol
Do roztoku 3-fenoxyfenylmetanolu (4,0 g, 0,020 mol) v bezvodom acetonitrile sa pri izbovej teplote pridá l-bróm-2,5-pyrolidíndión (3,73 g, 0,021 mol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 1,5 hodiny a pod atmosférou dusíka. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Tetrachlórmetán (100 ml) sa pridá do zvyšku a zmes sa filtruje, filtrát koncentruje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/zi-heptán (1:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa (2-bróm-5-fenoxyfenyl)metanol (4,7 g, 0,017 mol):
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % v priebehu 10 minút s 0,1 M octanom amónnym, 1 ml/min) Rt 11,7 minút.
TLC (etylacetát/heptán 1:5) Rf 0,18.
b) 5-Fenoxy-1,3 -dihydro-2,1 -benzoxaborol-1 -ol
Roztok /7-butyllítia v n-hexánoch (2,24 M, 8,6 ml, 0, 019 mol) sa pomaly pridá do roztoku (2-bróm-5-fenoxyfenyl)metanolu (2,21 g, 0,0079 mol) v bezvodom tetrahydrofuráne (50 ml) pri teplote -78 °C pod atmosférou dusíka. Reakcia sa mieša po dobu 30 minút pri teplote -78 °C, potom mieša po dobu 20 minút pri teplote -25 °C. Reakcia sa ochladí na teplotu -50 °C a pomaly sa pridá triizopropylborát (4,075 g, 0,0216 mol). Reakcia sa ohreje na izbovú teplotu a mieša po dobu 1 hodiny. Ku zmesi sa pridá 1 N vodný roztok, kyseliny chlorovodíkovej (20
203 ml) tak, aby pH bolo 5. Reakcia sa potom mieša pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny. Reakčná zmes sa extrahuje etyléterom (3 x 40 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou (60 ml) a soľankou (60 ml) a sušia nad síranom sodným. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa zvyšok, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:5), potom etylacetát/n-heptán (1:4) ako mobilnej fázy, čím sa získa 5-fenoxy-l,3-dihydro-2,l-benzoxaborol-l-ol (1,3 g, 0,0058 mol),
RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % v priebehu 10 minút s 0,1 M octanom amónnym, 1 ml/min) Rt 10,8 minút;
TLC (etylacetát/heptán 1:2) Rr 0,24.
c) [2-(4-Amino-1 -cyklopentyl-1 N-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-3-yl)-5-fenoxyfenyl]metanol
Zmes l-cyklopentyl-3-jód-lN-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-4-amínu (0,36 g, 0,0011 mol), 5-fenoxy-l,3-dihydro-2,l-benzoxaborol-l-olu (0,30 g, 0,0013 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,077 g, 0,000067 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,34 g, 0,0028 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (7 ml) a vody (5 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 17 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (20 ml) a vodný roztok nasýteného uhličitanu sodného (20 ml). Vodná vrstva sa ďalej extrahuje etylacetátom (3 x 20 ml). Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Ku zvyšku sa pridá etylacetát (15 ml), čím vznikne biely precipitát. Pevný podiel sa filtruje a premyje acetónom (2x15 ml) a dichlórmetánom (1 x 15 ml), čím sa získa [2-(4-amino-l-cyklopentyl-lN-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-3-yl)-5-fenoxyfenyljmetanol (0,267 g, 0,00067 mol):
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,46 (m, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,28 (m, 1H), 7,13 (m, 3H), 7,00 (m, 1H), 5,28 (m, 1H), 5,17 (m, 1H), 4,48 (d, 2H), 2,08 (br, 2H), 1,98 (br, 2H), 1,86 (br, 2H), 1,68 (br, 2H),
RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % v priebehu 10 minút s 0,1 M octanom amónnym, 1 ml/min) Rt 10,5 minút.
MS: MH^402
204
Príklad 108
Cz'5-l-(aminometyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanol-maleát
a) Czs-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-4-amín
Zmes trimetyl-sulfoxónium-jodídu (0,33 g, 0,0015 mol) a hydridu sodného (60 % v oleji, 0,055 g, 0,00138 mol) v metylsulfoxide (4 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 30 minút. Reakčná zmes sa ochladí na teplotu 10 °C a pridá sa 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanón (0,5 g, 0,00125 mol) v metylsulfoxide (2 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 2 hodín. Zmes sa vytrepe medzi vodný roztok nasýteného chloridu amónneho (20 ml) a dichlórmetán, vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 20 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou a sušia nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku na cz5-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-£Í]pyrimidín-4-amín (0,527 g, 0,00125 mmol).
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 4,90 (br, 1H), 2,70 (s, 2H), 2,17 (br, 4H), 1,97 (br, 2H), 1,32 (br, 2H).
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % v priebehu 23 minút s 0,1 M octanom amónnym, 1 ml/min) Rt 11,7 minút.
MS: MH+413
b) Cžs-l-(aminometyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanol-maleát
Czí-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (0,62 g, 0,0015 mol) v amoniaku (2 M v metanole, 15 ml) a roztok 20 % N,Ndimetylformamidu v izopropanole (15 ml) sa zahrieva pri teplote 65 °C v tlakovej nádobe po dobu 18 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi hydroxid amónny/metanol/dichlórmetán (2:5:93), potom hydroxid amónny/metanol/dichlórmetán (2:8:90) ako mobilnej fázy', čím sa získa ci's-l-(aminornetyl)-4-[4-arnino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanol (0,11 g, 0,00026 mol). Zlúčenina sa
205 rozpustí v etylacetáte (10 ml) pri teplote 40 °C. Pridá sa vopred ohriaty roztok kyseliny maleínovej (0,060 g, 0,000512 mol) v etylacetáte (2 ml). Zmes sa zahrieva pri teplote 40 °C po dobu 10 minút, ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom a suší, čím sa získa c,z's-l-(aminometyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanol-maleát (0,140 g, 0,00026 mol).
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,73 (br, 3H), 7,64 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,13 (m, 5H), 6,01 (s, 2H), 4,94 (s, 1H), 4,70 (br, 1H), 2,79 (s, 2H), 2,36 (br, 2H), 1,76 (br, 4H), 1,58 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,9 minút.
MS: MH+ 431
Príklad 109
Cis-1 -(2-aminoetyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 77-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-1 -ylj-1 -cyklohexanol-maleát
a) Cis-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo f 3,4-ó/jpyrimidín-1 -y 1 ]-1 -hydroxycyklohexyl} mety lky anid
Do zmesi cz's-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazoIo[3,4-<7]pyrimidín-4-amínu (4,4 g, 0,011 mol) a chloristanu lítneho (1,7g, 0,016 mol) sa pridá kyanid draselný (1,04 g, 0,016 mol) v acetonitrile (600 ml). Reakčná zmes sa refluxuje po dobu 6 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zmes sa zriedi vodou (200 ml) a extrahuje dietyléterom (2 x 300 ml). Spojené organické fázy sa premyjú vodou a soľankou a sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa czs-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-č7|pyrimidín-1 -ylj-1 -hydroxycyklohexyl}metylkyanid (4,30 g, 0,0098 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,4 minút.
MS: MH+ 441
206
b) CB-l-(2-aminoetyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanol-maleát
K czv-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-hydroxy-cyklohexyl (metylkyanidu (3,4 g, 0,0077 mol) v metanole (100 ml) a hydroxidu amónnemu (5 ml) sa pridá Raneyov® nikel (50 % zmes vo vode, 3 ml). Zmes sa mieša 18 hodín pod atmosférou vodíka (1 atm). Reakčná zmes sa filtruje cez celit a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa surový c/j-l-(2-aminoetyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanol (1,82 g. 0,0041 mol), 0,8 g surového c/v-l-(2-aminoetyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanolu sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi hydroxid amónny/metanol/dichlórmetán (2:3:95), potom hydroxid amónny/metanol/dichlórmetán (2:12:86) ako mobilnej fázy, čím sa získa cis-1 -(2-aminoetyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-1 -yl]-1 -cyklohexanol (0,423 g, 0,00095 mol). Táto zlúčenina sa rozpustí v etylacetáte (40 ml) pri teplote 40 °C. Pridá sa vopred ohriaty roztok kyseliny maleínovej (0,13 g, 0,0014 mol) v etylacetáte (5 ml). Zmes sa zahrieva pri teplote 40 °C po dobu 10 minút, ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom a suší, čím sa získa c;.?-l-(2-aminoetyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanol-maleát (0,186 g, 0,00033 mol).
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,67 (m, 2H), 7,60 (br, 3H), 7,42 (m, 2H), 7,16 (m, 5H), 6,01 (s, 2H), 4,73 (br, 1H), 4,53 (s, IH), 2,92 (br, 2H), 2,38 (br, 2H), 1,72 (br, 6H), 1,54 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,1 minút.
MS: MH+ 445
c) CA-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-l-yl]-l-hydroxy-cyklohexyl} acetamid
Do zmesi cí5-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidín-l-yl]-l-hydroxycyklohexyl] metylkyanidu (0.972 g, 0,0022 mol) a uhličitanu draselného (1,28 g, 0,00093) v metylsulfoxide (20 ml) sa pomaly pridá 30 % roztok peroxidu vodíka vo vode (3 ml) pri teplote 20 °C. Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Reakčná banka sa vlo207 ží do ľadového kúpeľa a do reakcie sa pomaly naleje ľadová voda (20 ml). Zmes sa extrahuje etylacetátom (2 x 30 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou a soľankou a sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa trituruje dichlórmetánom (8 ml) a pevný podiel sa filtruje, čím sa získa cA-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ťí|pyrimidín-l-y 1]-1-hydroxycyklohexyl}acetamid (0,542 g, 0,0012 mol).
’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,67 (m, 2H), 7,42 (m, 3H), 7,16 (m, 5H), 7,06 (s, 1 H), 4,95 (br, 1H), 4,65 (m, 1H), 2,39 (m, 2H), 2,24 (s, 2H), 1,70 (br, 6H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,6 minút.
MS: MH+ 459.
Príklad 110 l-(3-Azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/lpyrimidín-4-amín
a) 7erc-butyl-3-hydroxy-l-azetankarboxylát
Do zmesi l-benzhydryl-3-azetanolu (7,5 g, 0,031 mol) a di-fórc-butyl-dikarbonátu (10,3 g, 0,047 mol) sa pridá 20 % hydroxid paládnatý na aktívnom uhlí (1,0 g) v etylacetáte (200 ml). Zmes sa trepe pod atmosférou vodíka pri izbovej teplote po dobu 20 hodín v Parrovej hydrogenačnej aparatúre. Zmes sa filtruje cez Celit a filtrát sa koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán, potom metanol/dichlórmetán (5:95) ako mobilnej fázy, čím sa získa terc-butyl-3-hydroxy-1azetankarboxylát (5,015 g, 0,029 mol) *H NMR (Chloroform-cZ, 400 MHz) δ 4,59 (m, 1H), 4,14 (m, 2H), 3,80 (m, 2H), 2,55 (br, 1H), 1,50 (s, 9H),
TLC (metanol/dichlórmetán = 2:98) Rf 0,13
b) 7erc-butyl-3-[(metylsulfonyl)oxy]-l-azetankarboxylát
208
Do roztoku /erc-butyl-3-hydroxy-l-azetankarboxylátu (4,0 g, 0,023 mol) v bezvodom pyridíne (50 ml) sa pod atmosférou dusíka pri teplote -20 °C pridá metánsulfonylchlorid (5,3 g, 0,046 mol). Žltá heterogénna zmes sa mieša v rozmedzí teplôt od -20 °C do -30 °C po dobu 1 hodiny, potom v rozmedzí teplôt od 0 °C do -5 °C po dobu 2 hodín. Zmes sa naleje do ľadovej vody (50 ml) a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou (1 x 50 ml), 5 % roztokom kyseliny citrónovej (4 x 50 ml), vodou (1 x 50 ml), nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (1 x 50 ml), soľankou (1 x 50 ml) a sušia nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa fôrc-butyl-3-[(metylsulfonyl)oxy]-l-azetankarboxylát vo forme hnedastého oleja (4,85 g, 0,019 mol).
’H NMR (Chloroform-č/, 400 MHz) δ 5,19 (m, 1H), 4,25 (m, 2H), 4,07 (m, 2H), 3,04 (s, 3H), 1,42 (s, 911),
TLC (metanol/dichlórmetán = 2:98) Rf 0,28
c) 7évc-butyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfeny1)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl]-l-azetankarboxylát
Do zmesi 3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (1,0 g, 0,0033 mol) a uhličitanu cezného (2,14 g, 0,0066 mol) v bezvodom /Y,'V-dimetylformamide (30 ml) sa pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka pridá Zerc-butyl-3-[(metylsulfonyl)oxy]-l-azetankarboxylát (1,66 g, 0,0066 mol) v bezvodom .'V,.'V-dimetylformamide (20 ml). Zmes sa mieša pri teplote 75 °C po dobu 22 hodín. Zmes sa naleje do ľadovej vody (50 ml) a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou (1 x 70 ml) a soľankou (1 x 70 ml) a sušia nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán, potom metanol/dichlórmetán (5:95) ako mobilnej fázy, čím sa získa terc-butyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl]-l-azetankarboxylát (0,81 g, 0,0018 mol).
lH NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 5,70 (br, 1H), 4,35 (br, 4H), 1,39 (s, 9H).
RP-HPLC (Hypersil Cl 8, 5 μιη. 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % v priebehu 10 minút s 0,1 M octanom amónnym, 1 ml/min) Rt 12 minút.
MS:MH+459
209 l-(3-Azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-íf|pyrimidín-4-amín
Do roztoku rerc-butyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]-l-azetankarboxylátu (0,81 g, 0,0018 mol) v dichlórmetáne (5 ml) sa pomaly pridá 20 % roztok trifluóroctovej kyseliny v dichlórmetáne (10 ml) pri teplote 0 °C a pod atmosférou dusíka. Zmes sa ohreje na izbovú teplotu a mieša po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, ku zvyšku sa pri teplote 0 °C pridá vodný roztok 5 N hydroxidu sodného na upravenie pH na 11 a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (2 x 30 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou (1 x 60 ml) a soľankou (1 x 60 ml) a sušia nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-17f-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amín (0,44 g, 0,0012 mol).
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,28 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,18 (m, 5H), 5,70 (m, 1H), 4,20 (m, 2H), 4,05 (m, 2H)
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,8 minút.
MS: MH+ 359.
Všeobecný spôsob:
Alkylácia l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕf|pyrimidín-4-amínu
Do zmesi l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,05 g, 0,00014 mol, 1 ekviv.) a uhličitanu draselného (0,058 g, 0,00042 mol, 3 ekviv.) v bezvodom acetonitrile sa pri izbovej teplote pridá zodpovedajúci alkylbromid (0,00014 mol, 1 ekviv.). Zmes sa mieša po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % -100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získajú zodpovedajúce alkylazetidíny.
Príklad 111
a) Alkylbromid: 2-bróm-l-etanol
210
2-{3-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lŕ/-pyrazolo[3,4-rf]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-l-etanol ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,14 (m, 5H), 5,41 (m, 1H). 4,69 (br, 1H), 3,83 (m, 2H), 3,63 (m, 2H), 3,42 (m, 2H), 2,62 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,0 minút.
MS:MH +403.
Príklad 112
b) Alkylbromid: 2-brómetyl(metyl)éter
Acetát l-[l-(2-metoxyetyl)-3-azetanyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu ‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,09 (br, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,69 (m, 1H), 4,13 (m, 2H), 3,94 (m, 2H), 3,51 (m, 2H), 3,36 (s, 3H), 2,95 (m, 2H), 2,08 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,6 minút.
MS:MH+417.
Príklad 113
c) Alkylbromid: l-bróm-2-(2-metoxyetoxy)etán l-{l-[2-(2-Metoxyetoxy)etyl]-3-azetanyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8, 24 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,14 (m, 5H), 5,41 (m, 1H). 3.79 (m, 2H), 3,62 (m. 2H), 3,44 (br, 6H), 3,23 (s, 3H), 2,69 (br, 2H).
211
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,6 minút.
MS:MH+461.
Príklad 114
- [ 1 -(1 -metyl-4-piperidyl)-3 -azetanyl]-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-4-amín
Zmes l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-4-amínu (0,06 g, 0,00017 mol), l-metyl-4-piperidinónu (0,057 g, 0,0005 mol) a octovej kyseliny (0,03 g, 0,0005 mol) v dichlóretáne (2,5 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 1,5 hodiny. Do zmesi sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (0,072 g, 0,00034 mol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi hydroxid amónny/metanol/dichlórmetán (2:15:83) ako mobilnej fázy, čím sa získa l-[l-(l-mety 1-4-piperidyl)-3-azetanyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-1 f/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (0,029 g, 0,000064 mol).
*H NMR (Chloroform-J, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,64 (m, 1H), 5,57 (br, 2H), 3,93 (m, 2H), 3,73 (m, 2H), 2,83 (br, 2H), 2,40 (br, 3H), 2,00 (br, 1H), 1,78 (br, 4H), 1,46 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,9 minút.
MS: MH+ 456
Príklad 115
- {1 - [(1 -metyl-17L-2-imidazolyl)metyl]-3-acetanyl} -3-(4-fenoxyfenyl)-1 77-pyrazolo [3,4-zťjpyrimidín-4-amín
212
Zmes l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,06 g, 0,00017 mol), 1-metyl-l//-2-imidazolkarboxylovej kyseliny (0,056 g, 0,0005 mol) a octovej kyseliny (0,03 g, 0,0005 mol) v dichlóretáne (2,5 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 1,5 hodiny. Do zmesi sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (0,072 g, 0,00034 mol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 25 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa l-{ l-[(l-metyl-l//-2-imidazolyl)metyl]-3-azetanyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amtn (0,020 g, 0,000044 mol).
‘H NMR (Chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,35 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,20 (d, 3H), 7,18 (d, 2H), 6,93 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,59 (m, 3H), 3,93 (m, 6H), 3,85 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,5 minút.
MS: MH+ 453.
Príklad 116
- {3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-1 -y 1]-1 -azetany 1} -1 -etanón
Do zmesi 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidín-4-amínu (0,020 g, 0,000056 mol) a uhličitanu draselného (0,016 g, 0,00012 mol) v bezvodom AjyV-dimetylformamide (1 ml) sa pri izbovej teplote pridá anhydrid kyseliny octovej (0,009 g, 0,000084 mol). Reakčná zmes sa mieša po dobu 1 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 5 pm, 100 x 20 mm; 20 % - 85 % v priebehu 7,5 minút s 0,05 M octanom amónnym, 251 ml/min), čím sa získa l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-l-etanón (0,014 g, 0,000035 mol). 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,71 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,17 (m, 5H), 5,72 (m, 1H), 4,66 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 1,84 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8. 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,9 minút.
213
MS: MH+ 401.
Príklad 117
Cri-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í7|pyrimidín-l-yl]-l-cyklobutanol
a) 3-Propylidéncyklobutyl-metánsulfonát
Roztok 3-propylidén-l-cyklobutanolu (0,344 g, 0,00307 mol) v pyridíne (5 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C. Po kvapkách sa pridá metánsulfonylchlorid (0,422 g, 0,00369 mol), pričom teplota sa udržuje pod 2°C. Zmes sa mieša po dobu 2 hodín, potom naleje do ľadovej vody (15 ml) a extrahuje etyléterom (2x10 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (3 x 10 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa 3-propylidéncyklobutý 1-metánsulfonát (0,492 g, 0,00221 mol) vo forme žltého oleja.
*H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 5,25 - 5,29 (m, 1H), 4,98 - 5,04 (m, 1H), 3,17 (s, 3H), 2,98 3,16 (m, 2H), 2,78 - 2,96 (m, 2H), 1,86-1,91 (m, 2H), 0,91 (t, 3H).
b) 3 -(4-Fenoxyfenyl)-1 -(3 -propylidéncyklobutyl)-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amín
Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (0,743 g, 0,00245 mol) v N, A-dimetylformamide (20 ml) sa nechá reagovať s 3-propylidéncyklobutyl-metánsulfonátom (0,699 g, 0,00367 mol) a uhličitanom céznym (0,866 g, 0,00367 mol) pri teplote 70 °C po dobu 3 dní. Reakčná zmes sa naleje do vody (30 ml) a extrahuje etylacetátom (3x15 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (2 x 20 ml) a soľankou (20 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografíou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (98:2). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čim sa získa 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(3-propylidéncyklobutyl)-l A-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (0,655 g, 0,00165 mol) vo forme hnedej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7.10 - 7,19 (m, 5H), 5,35 - 5,40 (m, 1H), 5,38 - 5,33 (m, 1H), 3,09 - 3,38 (m, 4H) 1,90 - 1,97 (m, 2H), 0,96 (t, 3H);
MS: MH+ 398.
214
TLC (dichlórmetán/metanol 95:5) Rf 0,52.
c) 3-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklobutanón
Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(3-propylidéncyklobutyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amínu (0,156 g, 0,00039 mol) v dichlórmetáne (25 ml) sa ochladí na teplotu -78 °C a ozón sa nechá prebublávať roztokom do tej doby, kým nezmodrá. Reakčná zmes sa mieša 5 minút a plynný dusík sa nechá prebublávať roztokom do tej doby, kým nezmizne jeho zafarbenie. Pridá sa dimetylsulfid (0,12 ml, 0,097 g, 0,00157 mol) a zmes sa nechá ohriať na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa 3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklobutanón (0,144 g, 0,00038 mol) vo forme hnedej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 8,29 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11 - 7,22 (m, 5H), 5,61 - 5,66 (m, 1H), 3,65 - 3,74 (m, 4H).
MS: MH+ 372.
TLC (dichlórmetán/metanol = 90: 10) Rf 0,62.
Cw-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-íť]pyrimidín-l-yl]-l-cyklobutanol
Roztok 3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklobutanónu (0,208 g, 0,00056 mol) v tetrahydrofuráne (10 ml) a absolútneho etanolu (5 ml) sa nechá reagovať s borohydridom sodným (0,021 g, 0,00056 mol) pri izbovej teplote po dobu 4 hodín. Pridá sa voda (5 ml) a zmes sa extrahuje etylacetátom (3x15 ml). Spojené organické podiely sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (98:2). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa cA-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklobutanol (0,090 g, 0,00024 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dg, 400 ΜΗζ) δ 8,23 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11 - 7,22 (m, 5H), 5,31 (d, 1H), 4,82 - 4,89 (m, 1H), 4,04 - 4,10 (m, 1H), 2,70 - 2,73 (m, 2H), 2,50 - 2,60 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,50 minút.
MS: MH+ 374.
215
Príklad 118 fra«s-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-l-yl]-l-cyklobutanol
a) 7'ra«5-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]cyklobutyl-4-nitrobenzoát
Roztok czs-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 N-pyrazolo[3,4-ď]pyriniidín-1 -yl]-1 -cyklobutanolu (0,113 g, 0,000302 mol), 4-nitrobenzoovej kyseliny (0,101 g, 0,000605 mol) a trifenylfosfínu (0,159 g, 0,000605 mol) v tetrahydrofuráne (5 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C. Po kvapkách sa pridá diéty 1-azodikarboxylát (0,096 ml, 0,159 g, 0,000605 mol), pričom teplota sa udržuje pod 10 °C. Zmes sa nechá ohriať na izbovú teplotu v priebehu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi heptán/etylacetát (3:1). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa íra«5-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidm-l-yl]cyklobutyl-4-nitrobenzoát (0,081 g, 0,000164 mmol) vo forme hnedej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) Ô 8,39 (d, 2H), 8,29 (d, 2H), 8,26 (s, 1H), 7,72 (d, 2H), 7,44 (t, 2H) 7,12 - 7,22 (m, 5H), 5,60 - 5,69 (m, 1H), 3,03 - 3,12 (m, 2H), 2,85 - 2,94 (m, 2H).
Trans-3- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 N-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-1 -y lj-1 -cyklobutanol
Roztok ŕratt£-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]cyklobutyl-4-nitrobenzoát (0,081 g, 0,000164 mol) v metanole (5 ml) sa nechá reagovať s hydroxidom draselným (0,091 g, 0,00164 mol) za refluxu po dobu 1 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi vodu (10 ml) a etylacetát (5 ml). Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (2x5 ml). Spojené organické podiely sa premyjú 1 N vodným hydroxidom sodným (5 ml) a soľankou (5 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa suspenduje vo vode a lyofilizuje, čím sa získa /ra«5-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-ylj-lcyklobutanol (0,055 g, 0,000147 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11 - 7,22 (m, 5H), 5,43 - 5,52 (m, 1H), 4,53 - 4,65 (m, 1H), 2,75 - 2,80 (m, 2H), 2,39 - 2,44 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,77 minút.
216
MS:MH+ 374.
Príklad 119 l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidín-l-yl]cyklobutyl}-4metylhexahydropyrazíndium-dimaleát
Zmes 3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-lcyklobutanónu (0,300 g, 0,00081 mol), jV-metylpiperazínu (0,243 g, 0,00242 mol) a octovej kyseliny (0,146 g, 0,00242 mol) v 1,2-dichlóretáne (20 ml) sa mieša po dobu 20 minút pri teplote 40 °C a v priebehu 1 hodiny sa vo 3 podieloch pridá triacetoxyborohydrid sodný (0,223 g, 0,00105 mol). Zmes sa mieša po dobu 18 hodín pri teplote 40 °C. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (30 ml) a chloroform (15 ml). Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva sa ďalej extrahuje chloroformom (3x) ( 15 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (97:3) ako mobilnej fázy. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok (0,120 g, 0,000263 mol) sa rozpustí v absolútnom etanole (10 ml). Pridá sa roztok kyseliny maleínovej (0,122 g, 0,001053 mol) v absolútnom etanole (5 ml) a zmes sa mieša za refluxu po dobu 15 minút, roztok sa ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa filtruje a premyje absolútnym etanolom (3x5 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]cyklobutyl}-4-metylhexahydropyrazíndium-dimaleát (0,181 g, 0,000397 mmol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,10 - 7,20 (m, 5H), 6,14 (s, 4H), 5,05 - 5,16 (m, 1H), 2.77 (s, 1H), 2,48 - 3,00 (m, 5H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 13,35 minút.
MS: MH+456.
217
Príklad 120
Trans-1 - {3 -[(benzyloxy)metyl]cyklobutyl} -3-(4-fenoxy fény 1)-177-pyrazolo [3,4-d\ py rimidín-4-amín
a) C/5-3-[(benzyloxy)metyl]cyklobutyl-metánsulfonát.
Roztok cz's-3-((benzyloxy)metyl)-l-cyklobutanolu (2,50 g, 0,0130 mol) v pyridíne (50 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C. Po kvapkách sa pridá metánsulfonylchlorid (1,21 ml, 1,79 g, 0,0126 mol), pričom teplota sa udržuje pod 2°C. Zmes sa mieša po dobu 4 hodín, naleje do ľadovej vody (100 ml) a extrahuje etyléterom (2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (3 x 50 ml) a soľankou (50 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa cz's-3-[(benzyloxy)metyl]cyklobutyl-metánsulfonát (2,73 g, 0,0101 mol) vo forme žltého oleja.
'H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 7,297,38 (m, 5H), 4,88 - 4,94 (m, 1H), 4,52 (s, 2H), 3,45 (d, 2H), 2,99 (s, 3H), 2,50 - 2,56 (m, 2H), 2,12 - 2,19 (m, 3H).
b) 7ratt5-l-[3-[(benzyloxy)metyl]cyklobutyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amín
Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-z7]pyrimidín-4-amínu (0,452 g, 0,00149 mol) v MTV-dimetylformamide (10 ml) sa nechá reagovať s czs-3-[(benzyloxy)metyl]cyklobutylmetánsulfonátom (0,483 g, 0,00179 mol) a uhličitanom céznym (0,582 g, 0,00179 mol) pri teplote 70 °C po dobu 2 dní. Reakčná zmes sa naleje do vody (30 ml) a extrahuje etylacetátom (3x15 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (2 x 20 ml) a soľankou (20 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (98:2). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa rra«s-l-{3-[(benzyloxy)metyl]cyklobutyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amín (0,325 g, 0,000681 mol) vo forme hnedej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,37 - 7,39 (m, 4H), 7,29 - 7,31 (m, 1H), 7,11 - 7,21 (m, 5H), 5,42 - 5,47 (m, 1H), 4,57 (s, 1H), 3,63 (d, 2H), 2,76 2,81 (m, 2H), 2,60 - 2,70 (m, 1H), 2,28 - 2,34 (m, 2H).
218
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 21, 92 minút.
MS: MH+ 478.
7ra/75-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-1 -yl]cyklobutylmetanol
Roztok tra«5-l-{3-[(benzyloxy)metyl]cyklobutyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,244 g, 0,00051 mol) v dichlórmetáne (10 ml) sa ochladí na teplotu -78 °C a po kvapkách sa pridá roztok 1,0 M chloridu boritého v dichlórmetáne (1,53 ml, 0,00153 mol), pričom teplota sa udržuje pod -70 °C. Reakčná zmes sa mieša 7 hodín pri teplote -78 °C, po ktorých sa pridá 8 M roztok amoniaku v metanole (1,5 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (93:7). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa /ra«s’-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/jpyrimidín-l-yl]cyklobutylmetanol (0,192 g, 0,00049 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11 - 7,22 (m, 5H), 5,36 - 5,46 (m, 1H), 4,70 - 4,80 (br, 1 H), 3,58 (d, 2H) 2,70 - 2,75 (m, 2H), 2,43 - 2,50 (m, 1H), 2,26 - 2,32 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,31 minút.
MS: MH+ 388.
Príklady 121 - 137
Všeobecný spôsob prípravy arylalkylových analógov cA-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3.4-ď]pyrimidín-4-amínu.
Cz's-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-íZJpyrimidín-4-amín (50 mg, 0,118 mmol) sa suspenduje v 1,2-dichlóreláne (4 ml) a do suspenzie sa pridá príslušný aldehyd (0,177 mmol). octová kyselina (35 mg, 0,59 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (50 mg, 0,236 mmol). Reakčná zmes sa potom zahrieva pri teplote 100 °C po dobu 1,5 hodiny. Pokiaľ podľa TLC a/alebo HPLC nie sú reakcie ukončené, pridáva sa do kaž219 dej reakcie ďalší triacetoxyborohydrid sodný (100 mg, 0,472 mmol) vo dvoch dávkach v priebehu celkovo 3 - 5 dní a v trepaní zmesi sa pokračuje pri izbovej teplote. Každá reakcia sa zriedi dichlórmetánom (4 ml), potom zastaví nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (4 ml). Pokiaľ sa vytvorí emulzia pridá sa soľanka (1 ml). Organická vrstva sa separuje a koncentruje za zníženého tlaku. Surové vzorky sa purifikujú na RP-HPLC spojenej s hmotnostným detektorom (Micromass/Gilson, Hypersil BDS Cl 8, 5 pm, 100 x 21,2 mm stĺpec; 0 - 100 % acetonitril a 0,05M octan amónny, pufrovaný na pH 4,5 v priebehu 12,5 minút pri teplote 25 ml/min) alebo UV detektorom (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm gradient: 10 % - 30 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 40 minút; Deltapak C18, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm stĺpec). Požadovaná finálna zlúčenina sa pripraví v 80 % 100 % čistote podľa analytickej RP-HPLC (prietok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm stĺpec).
Všeobecný spôsob prípravy maleátových solí
Príklad 137
Maleát cz's-3-{4-[(4-brómbenzyl)amino]-3-fluórfenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amín-trismaleátu
Voľná báza cz'y-3-{4-[(4-brómbenzyl)amino]-3-fluórfenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (36 mg, 0,061 mmol) sa rozpustí v etanole (2 ml) a pridá sa kyselina maleínová (14 mg, 0,121 mmol). Zmes sa zahrieva, čím sa získa takmer číry roztok. Po ochladení vznikne precipitát, ktorý sa oddelí filtráciou a premyje minimálnym objemom etanolu a suší za zníženého tlaku, čím sa získa 16 mg trismaleátu czí-3-{4-[(4-brómbenzy l)amino] -3 -fluórfenyl} -1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-ď] pyrimidí n-4-amínu.
220
Pr. Štruktúra m/z (MH+) HPLC Rt (min)
121 3 vx Y; s^N V^y1- 515,2 13,74
122 y Λ 529,3 14,04
123 o 516,3 10,82
124 «5# 9 543,3 14,91
221
125 cY0 557,4 15,53
126 jcf 9 9 545,3 13,27
127 X 9 9 591,4 15,89
128 Φ ô r 561,0 11,58
222
129 λ/? 9 569,3 11,27
130 y“' a#· 9 9 583,3 14,83
131 . ČX>' 9 9 595,4 15,48
132 ... {/ 9 9 545,3 12,91
223
133 4? Q 516,3 10,10
134 J P 516,2 10,41
135 f 583,3 14,78
136 & 573,3 13,10
137 5 5 594,8 14,61
224
Príklady 138-153
Všeobecný spôsob prípravy sulfónamidového variantu cis- a /ra«5-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lT/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidíii-4-amínu
CB-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (100 mg, 0,236 mmol) sa rozpustí v pyridíne (3 ml), potom sa pridá príslušný sulfonylchlorid (0,472 mmol) vo forme roztoku v pyridíne (0,25 ml) alebo ako pevná látka. Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 40 °C pod atmosférou dusíka po dobu približne 1 7 dní. Pokiaľ je to potrebné pridá sa ďalší sulfonylchlorid (0,5 ekviv.). Každá reakcia sa koncentruje na polovicu pôvodného objemu a zriedi sa W-dimetylformamidom (1,5 ml). Tieto vzorky sa purifikujú na RP-HPLC s hmotnostnou detekciou (Micromass/Gilson, Hypersil BDS C18, 5 pm, 100 x 21,2 mm stĺpec; 0-100 % acetonitril a 0,05 M octan amónny, pufrovaný na pH 4,5 v priebehu 12,5 minút pri teplote 25 ml/min) alebo UV detekciou (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10 % - 30 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny gradient v priebehu 40 minút; Deltapak C18, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm stĺpec). Požadovaná finálna zlúčenina sa získa v 90 % - 100% čistote: podľa analytickej RP-HPLC: (prietok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec). Len v niektorých prípadoch sa pripravia maleátové soli.
Pr. Štruktúra m/z (MH+) HPLC Rt (min)
140 645,1 12,22
ς
225
141 623,3 11,30
c C? 9
142 é o Q· 610,2 11,85
143 i .β-φ O· Q 633,2 12,50
144 ex ó*# q 624,3 11,86
145 £ yýVP Q 583,3 11,29
226
147 κ 7 623,2 11,14
148 X £3-, 9 9 633,2 12,38
149 /-/'vCD 9 9 643,2 12,04
150 Φ ďa. ° cAo Ύ 624,3 11,67
227
151 Φ ô r 619,2 12,22
152 Φ 633,2 13,09
153 t T 9 649,3 12,81
Príklad 154
Cis-N-(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 Lf-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-3-y 1} -2-fluórfenyl)-/V '-(2,4-difluórfenyl)rnočovina
Cis-3 -(4-amino-3 -fluórfeny 1)-1 - [4-(4-mety Ipiperazino)cyklohexy 1] -177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4-amín (100 mg, 0,236 mmol) sa rozpustí v kyseline octovej (6 ml), potom sa pomaly pri izbovej teplote pridá 2,4-difluórfenylizokyanát (44 mg, 0,283 mmol). Po 2 dňoch sa reakčná zmes koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa surový produkt vo forme svetlo žltého oleja (185 mg). Surová látka sa čistí na RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10 % - 30 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v
228 priebehu 40 minút; Deltapak C18, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm stĺpec). Požadovaný produkt sa získa vo forme bielej pevnej látky (52 mg, 0,090 mmol). HPLC-RT: 13,19 minút, (prietok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 580,3.
Príklad 155
Monoacetát /ra/w-JV-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazoIo[3,4-ť/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-V-(3-metoxyfenyl)močovina
7/Y/m-3-(4-arnino-3-fluórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylJ-l/f-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (77 mg, 0,182 mmol) sa suspenduje v pyridíne (1 ml). Do reakčnej zmesi sa pridá roztok 3-metoxyfenylizokyanátu (30 mg, 0,200 mmol) v pyridíne (1 ml) a v miešaní sa pokračuje po dobu 19 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa surový produkt vo forme svetlo žltého oleja (149 mg). Surová látka sa čistí na RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10 % - 30 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 40 minút; Deltapak C18, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm stĺpec), čím sa získa Zranó-jV-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrímidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-jV-(3-metoxyfenyl)močovina vo forme bielej pevnej látky (76 mg, 0,133 mmol), HPLC-RT: 12,33 minút, (prietok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH+) =- 574,2.
Príklad 156
Monoacetát /rart5,-A-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-/V'-(3-metylfenyl)močoviny sa pripraví rovnakým, vyššie opísaným spôsobom.
HPLC-RT: 13,02 minút, (prietok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak 08, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); n;/z(MH> 558,3.
229
Príklad 157
C'z.s-/V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-zV'-(3-metylfenyl)močovina sa pripraví rovnakým, vyššie opísaným spôsobom pre /ram’-izomér.
HPLC-RT: 13,03 minút, (prietok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 558,5.
Príklad 158
Cz3-zV-(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 /7-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidm-3 -y 1} -2-fluórfeny l)-V-etyl-/V'-(3 -mety lfeny l)močovina,
a. Cz3-3-[4-(etylamino)-3-fluórfenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
Cz3-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (75 mg, 0,177 mmol) sa suspenduje v 1,2-dichlóretáne (6 ml). Pridá sa roztok acetaldehydu (12 mg, 0,266 mmol) v 1,2-dichlóretáne (0,300 ml) a octová kyselina (42 mg, 0,708 mmol) a zmes sa mieša po dobu 1 hodiny. Do zmesi sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (75 mg, 0,354 mmol). Po 16 hodinách sa pridá ďalší triacetoxyborohydrid sodný (37 mg, 0,175 mmol) a v reakcii sa pokračuje ďalšie 3 hodiny. Reakčná zmes sa potom koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (75 ml), potom premyje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (100 ml) a soľankou (100 ml). Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a koncentruje za zníženého tlaku. Surový produkt (80 mg) sa spojí vo forme bezfarebného oleja, m/z (MH+) = 453,3.
b. Cz3-/V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl} -2-fluórfenyl)-7V-etyl-/V'-(3 -mety lfeny l)močovina
Cz5-3-[4-(etylamino)-3-fluórfenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/Y-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (80 mg, 0,177 mmol) sa rozpustí v pyridíne (3 ml), ochladí na teplotu 0 °C a do reakcie sa pridá zn-tolylizokyanát (26 mg, 0,194 mmol) a v miešaní sa pokračuje
230 pri teplote 0 °C po dobu 2,5 hodiny. Reakčná zmes sa ohreje na izbovú teplotu a mieša cez noc. Do reakčnej zmesi sa pridá ďalší /w-tolylizokyanát (13 mg, 0,101 mmol) a v miešaní sa pokračuje po dobu 1 týždňa. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa surový produkt vo forme svetlo žltého oleja (110 mg). Purifikácia sa uskutoční RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10 % - 30 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 40 minút; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 40 x 100 mm stĺpec). C/j-iV-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-/V-etyl-/V'-(3-metylfenyl)močovina sa získa vo forme bielej pevnej látky (10 mg). HPLC-RT: 13,18 minút, (prietok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 586,5.
Príklad 159
Cí\-N-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/f-pyrazolo[3,4-ď]pynmidín-3-yl}-2-fIuórfenyl)-Aľ-benzyl-N’-(2,4-difluórfenyl)močovina
C/v-3-[4-(Benzylamino)-3-fluórfenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (28 mg, 0,054 mmol) sa rozpustí v kyseline octovej (3 ml), potom sa v priebehu 4 dní pridáva 2,4-difluórfenylizokyanát (28 mg, 0,183 mmol). Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa svetlo žltý olej (65 mg). Purifikácia sa uskutoční RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10 % - 30 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 40 minút; Deltapak C18, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm stĺpec), čím sa získa cz5-A/-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-Wbenzyl-yV’-(2,4-difluórfenyl)močovina vo forme bielej pevnej látky (13 mg, 0,019 mmol), HPLC-RT; 14,66 minút, (prietok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3, 9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 670,1.
231
Príklad 160
Cis-N-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-Aí '-(3 -mety lfeny l)močo vina
CA-3-(4-ammofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (50 mg, 0,123 mmol) sa rozpustí v pyridíne (3,5 ml), potom ochladí na teplotu 0 °C a pridá sa w-tolylizokyanát (18 mg, 0,135 mmol). Reakcia sa nechá v priebehu 16 hodín pri izbovej teplote. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa svetlo žltý olej (200 mg). Purifikácia sa uskutoční RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10 % - 30 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 40 minút; Deltapak C18, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm stĺpec). Požadovaný produkt sa spojí vo forme bielej pevnej látky (52 mg). HPLC-RT: 12,58 minút, (prietok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 540,1.
Príklads 161 -164
Amidový analóg N- {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 H-py razolo [3,4-J]pyrimidín-3 -yl]-2-fluórfenyl} -N '-(3 -mety lfeny l)močoviny,
а. 7brc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidm-l-yl]-l-piperidínkarboxylát
3-(4-Amino-3-fluórfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (2,12 g, б, 48 mmol) sa rozpustí v zmesi dioxán/voda (1:1) (20 ml). Do reakčnej zmesi sa pridá uhličitan sodný (1,03 g, 9,72 mmol) a di-Zerc-butyl-dikarbonát (1,55 g, 7,12 mmol). Po 3 hodinách sa reakcia koncentruje za zníženého tlaku, zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (100 ml) a vodu (100 ml), potom extrahuje dichlórmetánom (200 ml). Organické vrstvy sa spoja a premyjú soľankou (100 ml). Organická vrstva sa potom suší nad síranom sodným a koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa žlto-hnedá pena (2,85 g, 6,67 mmol), HPLC-RT: 14,41 minút, (prietok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak Cl 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 428,1.
232
b. 7erc-butyl-4-(4-amino-3-{3-fluór-4-[(3-toluidinokarbonyl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-djpyrimidín-1 -y 1)-1 -piperidínkarboxylát
7crc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát (600 mg, 1,41 mmol) sa rozpustí v pyridíne (25 ml) a ochladí na teplotu 0 °C, pridá sa m-tolylizokyanát (206 mg, 1,54 mmol) a reakcia sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 2,5 hodiny. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa surový produkt vo forme hnedo-žltej peny (841 mg). Purifikáciou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím gradientu 25 % - 50 % etylacetát/heptán, potom 5 % mctanol/dichlórmetán ako eluenta sa získa ŕerc-butyl-4-(4-ammo-3-{3-fluór-4-[(3-toluidinokarbonyl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát vo forme svetlo žltej pevnej látky (243 mg, 0,434 mmol), HPLC-RT: 17,82 minút, (prietok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak C18, 300 Á, 5 gm, 150 x 3, 9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 561,4.
c. Dihydrochlorid A-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfeny 1} -N ’-(3 -mety lfeny l)močoviny
7erc-butyl-4-(4-amino-3 - {3-fluór-4-[(3-toluidinokarbony l)amino] fény 1} -1 /7-py razolo[3,4-ďjpyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát (117 mg, 0,209 mmol) sa suspenduje v acetóne (7 ml) a ochladí na teplotu 0 °C. Do reakčnej zmesi sa pomaly pridá kyselina chlorovodíková (6 N, 1,6 ml). Reakčná zmes sa ohreje na izbovú teplotu, potom zahrieva pri teplote 50 °C po dobu 4 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, potom trituruje dichlórmetánom (25 ml), čím sa získa dihydrochlorid V-{4-[4-ammo-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín3-yl]-2-fluórfenyl}-.V'-(3-metylfenyl)močoviny vo forme belavej pevnej látky (111 mg, 0,241 mmol). HPLC-RT: 11,98 minút, (prietok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak C 18,300 Á, 5 gm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 461,3.
d. Všeobecný spôsob prípravy amidových analógov Af-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl}-/V'-(3-mety lfeny ljmočoviny.
i). Všeobecný spôsob (A): pre nechránené aminokysliny.
233
Príklad 161
V-[4-(4-amino-l-{l-[2-(dimetylamino)acetyl]-4-piperidyl}-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl)-2 -fluórfenyl] -N-(3 -mety lfeny l)močovina
Dihydrochlorid V-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</}pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl}-jV-(3-metylfenyl)močoviny (50 mg, 0,109 mmol) sa rozpustí v dichlórmetáne (6 ml) a Do reakčnej zmesi sa pridá jV-etyl-V-izopropylamín (0,095 ml), 7V,A-dimetylglycín (14 mg, 0,136 mmol), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (15 mg, 0,109 mmol) a hydrochlorid l-(3dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu (26 mg, 0,136 mmol). Po 16 hodinách sa reakčná zmes zriedi dichlórmetánom (100 ml), potom premyje vodou (50 ml) a soľankou (50 ml). Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a koncentruje za zníženého tlaku, zvyšok sa trituruje dietyléterom (25 ml), čím sa získa svetlo žltý pevný podiel (52 mg, 0,097 mmol). Purifikáciou RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 mi/min, λ = 254 nm, gradient: 10 % 30 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 40 minút; Deltapak 08, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm stĺpec) sa získa iV-[4-(4-amino-l-{l-[2-(dimetylamino)acetyl]-4-piperidyl}-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenyl]-V'-(3-metylfenyl)močovina vo forme bielej pevnej látky (27 mg, 0,050 mmol). HPLC-RT: 12,48 minút, (prietok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 546,0.
Príklad 162
Monoacetát A-[4-(4-amino-l - {1 -[3 -(diéty lamino)propanoy 1] -4-piperidyl} -1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenyl]-A'-(3-metylfenyl)močoviny sa pripraví vyššie opísaným spôsobom A.
HPLC-RT: 13,16 minút, (prietok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 588,2.
ii). Všeobecný spôsob (B): pre fôrc-butoxykarbonylom chránené aminokysliny.
234
Príklad 163 ?/-[4-(4-AmÍno-l-{l-[2-(metylamino)acetyl]-4-piperidyl}-l A-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-3-yl)-2-fluórfenyl]-A'-(3-metylfenyl)močovina
Dihydrochlorid A-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l A-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl}-A-(3-metylfenyl)močoviny (63 mg, 0,118 mmol) sa rozpustí v dichlórmetáne (7 ml) a do reakčnej zmesi sa pridá A-etyl-A-izopropylamín (0,113 ml), 2-[(férc-butoxykarbonyl)(metyl)amino]octová kyselina (28 mg, 0,147 mmol), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (16 mg, 0,118 mmol) a hydrochlorid l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu (28 mg, 0,147 mmol). Po 16 hodinách sa reakčná zmes zriedi dichlórmetánom (75 ml) a premyje vodou (75 ml). Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a koncentruje za zníženého tlaku. Surový produkt sa izoluje vo forme svetlo žltej pevnej látky (75 mg, 0,119 mmol). Surový terc-butyl-A-{2-[4-(4-amino-3-{3-fluór-4-[(3-toluidinokarbonyl)aminoJfenyl}-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl)piperidino]-2oxoetyl}-N-metylkarbamát (75 mg, 0,119 mmol) sa rozpustí v acetóne (5 ml), potom sa pomaly pridá vodná kyselina chlorovodíková (6 N, 1 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 45 °C po dobu 2,5 hodiny, potom koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje dichlórmetánom (25 ml), čím sa získa svetlo žltý' pevný podiel. Purifikáciou RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10 % - 30 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 40 minút; Deltapak C18, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm stĺpec) sa získa N-[4-(4-amino-l-{l-[2-(metylamino)acetyl]-4-piperidyl}-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenyl]-A'-(3-metylfenyl)močovina vo forme bielej pevnej látky (40 mg, 0,075 mmol). HPLC-RT: 12,22 minút, (prietok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak CIS, 300 Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 532,1.
Príklad 164
Monoacetát N- {4-[4-amino-1 -(1 - {3-[(2-hydroxyetyl)amino]propanoyl j -4-piperidy 1)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-fluórfenyl}-A’-(3-metylfenyl)močoviny
a) 3-[(7erc-butoxykarbonyl)(2-hydroxyetyl)amino]propánová kyselina,
235
Komerčne dostupná 3-[(2-hydroxyetyl)amino]propánová kyselina (76 mg, 0,571 mmol) sa rozpustí v zmesi dioxán/voda (1,5 ml/1,5 ml), potom sa pridá uhličitan sodný (91 mg, 0,886 mmol) a di-terc-butyl-dikarbonát (137 mg, 0,628 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2 dní, filtruje a koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa 3-[(/erc-butoxykarbonyl)(2-hydroxyetyl)amino]propánová kyselina vo forme bezfarebného oleja (135 mg, 0,579 mmol).
'H NMR (dó-DMSO): δ 1,40 (s, 9H); 2,36 (br s, 2H); 3,27 (br s, 3H); 3,46 (br s, 2H); 3,64 (br s, 2H);5,71 (brs, 1H).
b) Monoacetát N-4-{-[4-amino-1 -(1 - { 3 -[(2-hydroxyety l)amino]propanoyl} -4-piperidy 1)-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl}-V'-(3-metylfenyl)močoviny sa spracováva spôsobom podľa d. ii) všeobecný spôsob (B).
HPLC-RT: 12,19 minút, (prietok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 576,3.
Príklad 165
Cis-3-{4- [(1 -metyl-1 //-benzo[3,4-d] imidazol-2-yl)amino]fenyl} -1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amín
a) V2-(4-brómfeny 1)-1 -metyl-1 //-benzo[H] imidazol-2-amín
Zmes 2-chlór-l-metyl-benzimidazolu (0,639 g, 3,84 mmol) a 4-brómanilínu (0,710 g, 4,12 mmol) sa zahrieva pri teplote 170 °C po dobu 21 hodín. Výsledný hnedý pevný podiel sa ochladí na izbovú teplotu, premyje 3 x 5 ml heptánu, potom trituruje toluénom, čím sa získa 7V2-(4-brómfenyl)-l-metyl-l//-benzo[ŕ/]imidazol-2-amín (1,120 g, 90 %) vo forme hnedého prášku. RP-HPLC (25 - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím stĺpca Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) ír = 10,85 minút, 96 %; m/z 302 (MH+).
b) V2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-l//-benzo[í/]imidazol-2-amín
236
Do roztoku Af2-(4-brómfenyl)-l-metyl-177-benzo[í7]imidazol-2-ammu (1,12 g, 3,71 mmol) v dimetylformamide (15 ml) pod atmosférou dusíka sa pridá bis(pinakolato)diborón (1,129 g, 4,448 mmol), octan draselný (1,204 g, 12,27 mmol) a [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatý (II) komplex s dichlórmetánom (1:1) (0,334 g, 0,409 mmol). Fialový roztok sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín, potom sa ochladí na izbovú teplotu. Výsledná tmavo hnedá zmes sa koncentruje vo vákuu, čím sa získa tmavo hnedý pevný podiel. Táto látka sa trituruje s dichlórmetánom, filtruje a filtrát sa koncentruje, čím sa získa tmavo hnedý olej. Purifikáciou zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu (mobilnou fázou 30 % etylacetát/heptán) sa získa /V2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-l//-benzo[<7]imidazol-2-amín (0,515 g, 40 %) vo forme bieleho prášku:
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,10 (s, 1H), 7,88 (d, 2H), 7,63 (d, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,08 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 1,29 (s, 12H);
RP-HPLC (25 - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím stĺpca Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) ír = 11,70 minút, 90 %; m/z 350 (MH+).
c) C/s-3-{4-[(l-metyl-l//-benzo[3,4-í7]imidazol-2-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
Do roztoku ew-3-jód-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-i7]pyľimidín-4-amínu (0,100 g, 0,227 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (3 ml) a vody (1,5 ml) pod atmosférou dusíka sa pridá V2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-l/7-benzo[t7]imidazol-2-amín (0,099 g, 0,28 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0) (0,013 mg, 0,011 mmol) a uhličitan sodný (0,060 mg, 0,568 mmol). Roztok sa mieša pri teplote 83 °C po dobu 15 hodín. Výsledná žltá zmes sa koncentruje vo vákuu, čím sa získa žltý olej. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, tr = 7,3 - 11,2 minút) sa získa cL'-3-{4-[(l-metyl-177-benzo[t/]imidazol-2-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazoío[3,4-(7]pyrimidm-4-amín vo forme belavej pevnej látky (0,061 g, 50 %):
237 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,17 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,08 (d, 2H), 7,62 (d, 2H), 7,42 (m, 1H), 7,33 (m, 1H), 7,08 (m, 1H), 4,80 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 2,50-2,07 (m, 12H), 1,80 1,60 (m, 8H);
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) ír = 5,92 minút, 99 %; m/z 537 (MH+).
Príklady 166 -170
Amidy odvodené od cL-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-melylpiperazino)cyklohexyl]-777py razolo [3,4-ri] pyrimidí n-4 -amínu
Reprezentatívny spôsob prípravy:
K príslušnej karboxylovej kyseline (0,46 mmol) v dichlórmetáne (1,5 ml) sa pridá oxalylchlorid (400 1, 0,2 mmol) a DMF (1 kvapka). Liekovky sa uzatvoria šeptom a na vyrovnávanie tlaku sa do každého septa zapichne malá ihla. Liekovky sa trepú cez noc na trepačke J-Kem. Odoberie sa 50 % roztok, prebytok oxalylchloridu a dichlórmetánu sa potom odstráni na 12 kanálovej vákuovej pumpe Supelco vo vákuu pod atmosférou dusíka. Surový chlorid kyseliny (0,23 mmol) sa pridá k cz's-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu (40 mg, 0, 09 mmol) v suchom pyridíne (800 μΐ) a mieša sa pri izbovej teplote. Výsledné roztoky sa purifíkujú priamo na preparatívnej HPLC (Hypersil BSD C18, 5 pm, 100 x 21 mm, 0 % - 100 % acetonitril/0,05 M octan amónny v priebehu 10 minút, 25,0 ml/min). Výsledné produkty sa ďalej purifikujú vy trepaním medzi dichlórmetán (4 ml) a 1,0 N hydroxid sodný (2 ml) a pretiahnu cez vysoko účinnú extrakčnú diskovú cartridge Empore (C18-SD oktadecyl), čím sa získajú zodpovedajúce produkty. Zlúčeniny sú detailne uvedené nižšie so svojimi LCMS hodnotami (Stĺpec Micromass: Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min).
238
Názov zlúčeniny R Pr. Mn. (mg) MH+ Rt (min)
W2-(4-{4-amino-1-(4-(4- mety lpiperazino)cyklohexy 1]-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidm-3-yl}-2metoxyfenyl)-l//-2-indolkarboxamid o^fO 166 34 580,5 1,98
772-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]- IHpyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-3-metyl-1H-2indénkarboxamid 167 14 593,5 3,2
Ni -(4- {4-amino-1 - [4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]- IHpyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-(£)-3-fenyl-2-propénamid yJO O 168 17 567,3 2,85 í 1
7V2-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-1 -metyl-1H-2indolkarboxamid oMčO 169 20 594,3 3,18
yV3-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo [3,4-J] py rim i dín-3 -y 1} -2- metoxyfenyl)-l//-3-indolkarboxamid N? 170 6 580,4 2,74
239
Priklad 171
CH-Ari-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidm-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamid
Do roztoku cis-3 -(4-amino-3 -metoxyfeny 1)-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cykl ohexy 1] -1H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (75 mg, 0,17 mmol) a trietylamínu (34 mg, 0,34 mmol) v dichlórmetáne (2,5 ml) sa po kvapkách pridá hydrocinamoylchlorid (34 mg, 0,20 mmol) v dichlórmetáne (0,5 ml). Roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 48 hodín a ďalej sa pridá ekvivalent hydrocinamoylchloridu. Reakčná zmes sa mieša ďalších 24 hodín. Výsledná zmes sa vytrepe medzi dichlórmetán (4 ml) a 2 N NaOH (1,5 ml) a pretiahne cez extrakčnú cartridge Empore. Odparením rozpúšťadla sa získa olejovitý pevný podiel, ktorý sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu zmesou 10 - 20 % MeOH/dichlórmetán, čím sa získa cri-Vl-(4-{4-amino-l[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamid (12 mg, 13 %).
’H NMR (CDC13): δΗ 8,55 (IH, d), 8,36 (IH, s), 7,75 (IH, s), 7,25 (7H, m), 5,51 (2H, bs), 4,91 (IH, m), 3,92 (3H, s), 3,09 (2H, m), 2,76 (2H, m), 2,34 - 2,59 (9H, m), 2,29 (3H, s), 2,16 (2H, m), 1,85 (4H, m), 1,66 (2H, m).
LCMS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min) Rt = 1,92 minút, MH+ = 569,6.
Príklad 172
Trans-N\-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -yl}-2-metoxyfenyl)-4-(dimetylamino)benzamid-trimaleát
Do roztoku trans-3 -(4-amino-3-metoxyfenyl)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-1H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (500 mg, 1,15 mmol) v pyridíne (5 ml) sa po kvapkách pridá 4-(dimetylamino)benzoylchlorid (420 mg, 2,28 mol). Roztok sa mieša cez noc. Reakčná zmes sa zahusťuje a zvyšok sa rozdelí medzi dichlórmetán a roztok 2 N NaOH, vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (x 3), organické podiely sa sušia, filtrujú sa a zahusťujú sa, čím sa získa pevný podiel, ktorý sa trituruje zmesou EtOAc/EtzO (1:4), čím sa získa pevný podiel, kto240 rý sa rozpustí v EtOAc a nechá reagovať s kyselinou maleinovou (3 ekviv.) za vzniku trans-Nt-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-V|pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(dimetylamino)benzamidu (320 mg, 30 %).
‘H NMR (d6-DMSO)): δΗ 9,05 (1H, s), 8,25 (1H, s), 8,18 (1H, d, J = 8 Hz), 7,84 (2H, d, J = 9,2 Hz), 7,29 (1H, s), 7,25 (1H, d, J = 8 Hz), 6,78 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,17 (6H. s), 4,71 (1H, m), 3,95 (3H, s), 3,01 (6H, s), 2,83 - 3,18 (9H, m), 2,68 (3H, s), 2,08 (6H, m), 1,56 (2H, m), HPI.C (5,23 minút, 100 %).
Príklad 173
V-4-[4-Amino-l-(3-kyano-2-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl-V’-(3-mety lfeny l)močovina
a) ,2-(4-Amino-3-jód-1 //-pyrazolo[3,4-cQpyrimidín-1 -y l)-3-pyridylkyanid
Do suspenzie 4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-íť]pyrimidmu (1,0 g, 3,825 mmol) v DMF (5 ml) sa pridá hydrid sodný (60 % disperzia v minerálnom oleji, 3,825 mmol, 153 mg). Po 10 minútach sa pridá 2-chlór-3-kyanopyridín (531 mg) a reakcia sa zahrieva pri teplote 60 °C po dobu 16 hodín. Výsledná tmavá zmes sa naleje do ľadovej vody (50 ml) a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa 2-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-l-yl)-3-pyridylkyanid vo forme hnedého pevného podielu (1,1 g, 79 %);
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,82 (1H, m), 8,29 (1H, s), 8,64 (1H, m) a 8,93 (1H, m);
RP-HPLC (Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm stĺpec, 0 % - 100 % acetonitril v 50 mM octane amónnom, pufrovanom na pH 4,5, pri 3,5 ml/min), Rt 2,16 minút.
b) 2-[4-Amino-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-l-yl]-3-pyridyl-kyanid
2-(4-Amino-3-jód-lŕ/-pyrazolo[3,4-íf|pyrimidín-l-yl)-3-pyridylkyanid (1,35 g), terc-butyl-/V-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (1.5 g), tetrakistrifenvlfosfín paládium (253 mg) a uhličitan sodný (1,153 g) sa suspendujú v odplynenej vode (10 ml) a DME (20 ml). Zmes sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 16 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (200 ml) a vodu (200 ml). Výsledný pevný precipitát sa odstráni a organická vrstva sa oddelí, suší nad bezvodým síranom sodným a
241 koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa kryštalizuje z minimálneho množstva etylacetátu, čím sa získa terc-butyl-N-4-[4-amino-l-(3-kyano-2-pyridyl)-lN-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3yl]-2-fluórfenylkarbamát vo forme belavej pevnej látky (400 mg). Do suspenzie Arobutvl-A-4-[4-amino-l-(3-kyano-2-pyridyl)-lN-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenylkarbamátu (400 mg) v dichlórmetáne (4 ml) sa pomaly pridá TFA (4 ml). Po 1 hodine sa výsledný červený roztok koncentruje za zníženého tlaku a olejovitý zvyšok sa neutralizuje nasýteným vodným roztokom uhličitanu sodného, čím sa získa 2-[4-amino-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]-3-pyridylkyanid vo forme žltého precipitátu (300 mg);
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 5,61 (2H, br s), 6,92 (1H, t), 7,36 (2H, m), 7,76 (1H, m), 8,32 (1H, s), 8,62 (1H, m) a 8,93 (1H, m);
RP-HPLC (Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm stĺpec, 0 % - 100 % acetonitril v 50 mM octane amónnom, pufrovanom na pH 4,5, pri 3,5 ml/min) Rt 2,25 minút.
c) V-4-[4-amino-1 -(3-kyano-2-pyridy 1)-1 N-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfeny 1-/V ’-(3-mety lfeny l)močovina
Do roztoku (2- [4-amino-3-(4-amino-3 -fluórfeny 1)-1 N-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-1 -y 1]-3pyridylkyanidu (35 mg, 0,1 mmol) v pyridíne sa pridá w-tolylizokyanát (0,1 mmol) a reakcia sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2 dní. Reakcia sa koncentruje vo vákuu. Purifikáciou preparatívnou RP-HPLC s výstupom na MS (Micromass/Gilson, Hypersil BDS 08, 5 pm, 100 x 21,2 mm stĺpec; 0 % - 100 % acetonitril a v 0,05 M octane amónnom, pufrovanom na pH 4,5 v priebehu 12,5 minút pri teplote 25 ml/min) sa získa N-4-[4-amino-l-(3-kyano-2-pyridyl)-lNpy-razolo[3,4-í/]pyrimidm-3-yl]-2-fluórfenyl-N'-(3-metylfenyl)močovina (4 mg);
!H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 2,30 (3H, s), 6,84 (1H, d), 7,19 (1H, t), 7,25 (1H, m), 7,33 (1H, br s), 7,58 (2H, m), 7,80 (1H, m), 8,35 (1H, s), 8,43 (1H, t), 8,65 (1H, m), 8,80 (1H, br s), 8,95 (1H, m) a 9,10 (1H, br s) a
RP-HPLC (Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm stĺpec; 0 % -100 % acetonitril v 50 mM octane amónnom, pufrovanom na pH 4,5, pri 3,5 ml/min) Rt 3,09 min.
Príklad 174-185
Všeobecný spôsob prípravy Vl-4-(4-amino-l-{4-[l-(l-metylpiperid-4-yl)piperidyl]}-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenyl-l-arylsulfónamidov
242
a) Terc-butyl-4-(4-amino-3-4-[(Zez-c-butoxykarbonyl)amino]-3-íluórfenyl-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1 -yl)-1 -piperidínkarboxylát
Zmes /erc-butyl-4-(4-amino-3-jód-l/7-pyrazolo[3,4-ífjpyrimidín-l-yl)-l-piperidírikarboxylátu (8,756 g, 20,26 mmol), Zerc-butyl-A/-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (10,25 g, 30,38 mmol), tetrakis-trifenylfosfín paládia (940 mg, 0,81 mmol) a uhličitanu sodného (4,20 g, 50,64 mmol) sa suspenduje v odplynenej vode (57 ml) a DME (323 ml) a zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (200 ml) a 10 % vodný uhličitan sodný (200 ml). Organická vrstva sa ďalej premyje 10 % vodným uhličitanom sodným (2 x 200 ml), suší nad bezvodým síranom sodným a koncentruje za zníženého tlaku. Purifikáciou chromatografiou na stĺpci silikagélu zmesou 1:1 etylacetát:heptán, potom samotným etylacetátom ako eluentami sa získa nečistá frakcia. Táto frakcia sa ďalej purifikuje kryštalizáciou z etylacetátu, čím sa získa Zerc-butyl-4-(4-amino-3-4-[(Zerc-butoxykarbonyl)amino]-3-fluórfenyl-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-l-yl)-l -piperidínkarboxylát (7,256 g, 68 %);
'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 1,43 (9H, s), 1,49 (9H, s), 1,93 (2H, m), 2,01 (2H, ni), 3,00 (2H, br m), 4,04 (2H, br d), 4,90 (1H, m), 7,42 (2H, m), 7,83 (1H, t), 8,24 (1H, s) a 9,17 (1H, br s).
b) 3-(4-amino-3-fluórfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 /7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
Zmes Zerc-butyl-4-(4-amino-3-{4-[(Zerc-butoxykarbonyl)amino]-3-fluórfenyl}-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylátu (6,26 g, 11,9 mmol), 5 M HCl (95 ml) a acetónu (390 ml) sa mieša pri izbovej teplote po dobu 16 hodín. Reakcia sa alkalizuje uhličitanom sodným a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšky sa vy trepú medzi CH2CI2 (200 ml) a vodu (200 ml) a vodná fáza sa extrahuje ďalším CH2C12 (2 x 200 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad bezvodým síranom sodným a zahusťujú sa do sucha, čím sa získa 3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-íf|pyrimidín-4-amín (3,427 g, 88 %);
*H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 1.85 (2H, br t), 2,06 (2H, m), 2,65 (2H, m), 3,10 (2H, m), 4,72 (1H, m), 5,45 (2H, br s), 6.89 (1H, m), 7,22 (2H, m) a 8,19 (1 H, s).
c) ΛΤ-4-(4-amino-1 -{4-[ 1 -(1 -metylpiperid-4-yl)pipcridyl]}- 17T-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)2-fluórfenylanilín
243
Do roztoku 3-(4-amino-3-fluórfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 7/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (2,0 g, 6,11 mmol), V-metylpiperid-4-ónu (0,69 g, 6,11 mmol, 0,8 ml) a ľadovej kyseliny octovej (1,25 ml) v V-metylpyrolidinóne (100 ml) pod atmosférou dusíka sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (1,5 ekviv., 1,94 g, 9,16 mmol). Roztok sa mieša po dobu 18 hodín, potom sa pridá ďalší triacetoxyborohydrid sodný (0,6 ekviv., 0,78 g) a V-metylpiperid-4-όη (0,4 ekviv., 0,32 ml) a v reakcii sa pokračuje ďalších 18 hodín. Reakcia sa koncentruje vo vákuu, rozdelí medzi dichlórmetán (100 ml) a nasýtený vodný roztok NaHCCB (100 ml), vodná vrstva sa ďalej extrahuje dichlórmetánom (4 x 100 ml) a spojené organické vrstvy sa sušia nad bezvodým síranom horečnatým a zahusťujú sa do sucha, čím sa získa žltá pena (0,95 g). Purifikáciou chromatografiou na stĺpci silikagélu zmesou dichlórmetán:metanol (4:1) ako eluentom sa získa Vl-4-(4-amino-l-{4-[l-(l-metylpiperid-4-yl)piperidyl]}-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenylanilín (1,67 g, 72 %);
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 1,44 (2H, m), 1,69 (3H, m), 1,83 (4H, m), 2,13 (3H, s), 2,28 (4H, m), 2,78 (2H, br d), 2,98 (2H, br d), 4,58 (1H, m), 5,25 (2H, br s), 6,89 (1H, t), 7,18 (1H,
d), 7,24(1 H, d) a 8,19(1 H, s).
d) Všeobecný spôsob sulfonylácie Vl-4-(4-amino-l-{4-[l-(l-metylpiperid-4-yl)piperidyl]}-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenylanilínu
Zmes VI -4-(4-amino-1 - {4-[ 1 -(1 -metylpiperid-4-yl)piperidy 1]} -1 ŕ/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenylanilínu (100 mg, 0,236 mmol) a aryl-sulfonylchloridu (2 ekviv., 0,471 mmol) v pyridíne (2 ml) sa zahrieva pri teplote 40 °C po dobu 3 dní. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Purifikáciou preparatívnou RP-HPLC s hmotnostným detektorom (Micromass/Gilson, Hypersil BDS C18, 5 pm, 100 x 21,2 mm stĺpec; 0 % -100 % acetonitril v 0,05 M octane amónnom, pufrovanom na pH 4,5 v priebehu 12,5 minút pri 25 ml/min) sa získajú nasledujúce zlúčeniny:
244
Pr. Štruktúra HPLC R, (min) Čistota (%) m/z (MH+)
174 M j^rV ry f \—-P F T 11,045 98,6 619,2
O ΎΙ' tf
175 rVy r 11,982 91,6 633,1
ry
176 ) 10,099 77,9 601,2
N ¢/ r
fí^%r O H Á,
9
245
177
11,059
93,9
617,2
178
10,332
92,5
583,5
180
10,929
84,3
643,2
246
181 Ó A-p ry 10,074 87,1 583,2
182 V A? 11,256 90,5 633,1
183 ύ 11,807 75,7 6,492
184 P »o 10,617 100 610,2
247
Podmienky pre analytickú RP-HPLC: 10 % - 90 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom, pufrovanom na pH 4,5 v priebehu 12 minút pri 2 ml/min s použitím stĺpca Waters Symmetry C18, 5 pm, 250 x 4,6 mm.
Príklad 186-189
CB-3-{4-[amino(fenyl)metyl]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/í-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-4-amínový analóg
a. Všeobecný spôsob prípravy sulfónamidových a karboxamidových derivátov
Zmes cis-3-{4-[amino(fenyl)metyl]fenyl}-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu (50 mg, 0,10 mmol), zodpovedajúceho elektrofilu (sulfonylchlorid alebo chlorid kyseliny) (1 ekviv.) a pyridínu (1 ml) sa zahrieva pri teplote 40 °C po dobu 24 - 72 h, (V niektorých prípadoch je potrebné pridať ďalší podiel elektrofilu (typicky 1 ekviv.)). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Purifikáciou preparatívnou RP-HPLC s hmotnostným detektorom (Micromass/Gilson, Hypersil BDS C18, 5 pm, 100 x 21,2 mm stĺpec; 0 % -100 % acetonitril a 0,05M octanom amónnym, pufrovaným na pH 4,5, v priebehu 12,5 minút pri 25 ml/min) sa získajú nasledujúce zlúčeniny:
248
Pr. Štruktúra HPLC Rt (min) Čistota (%) m/z (MH+)
186 i? 15,76 94,9 721,6
187 y 13,21 94,9 697,3
188 r 14,20 91,30 697,4
249
189 Ó 9C □e=j=»O 15,30 96,8 705,3
jO
190 o' 14,00 100 675,4
x C Λο
9 z
191 Y 12,00 99 602,4
rf h f yuus
9
192 1 12,08 100 602,3
h Ô N“x Ύ a? Ju
r
250
<9 f 13,68 100 695
x 12,08 100 100
Podmienky pre analytickú RP-HPLC: 10 % - 90 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom, pufrovanom na pH 4,5 v priebehu 12 minút pri 2 ml/min s použitím stĺpca Waters Symmetry C18, 5 pm, 250 x 4,6 mm stĺpec.
Príklad 195
- [4-(4-mety lpiperazinojcyklohexy 1] -3 - {4- l(fenetylamino)(fenyl)mety 1] fény 1} -1 //-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amín
Do roztoku c/í-3-{4-[amino(fenyl)metyl]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17f-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-ammu (50 mg, 0,10 mmol), fenylacetaldehydu (13 mg) a ľadovej kyseliny octovej (0,013 ml) v 1,2-dichlóretáne (1 ml) pod atmosférou dusíka sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (2 ekviv., 43 mg), roztok sa mieša po dobu 18 hodín, potom sa koncentruje vo vákuu a zmes sa vytrepe medzi dichlórmetán (10 ml) a nasýtený vodný roztok
251
NaHCCb (10 ml). Organická vrstva sa oddelí, vodná vrstva d’alej extrahuje dichlórmetánom (4 x 10 ml) a spojené organické vrstvy sa sušia nad bezvodým síranom horečnatým a zahusťujú sa do sucha. Purifikáciou preparatívnou RP-HPLC s hmotnostným detektorom (Micromass/Gilson, Hypersil BDS 08, 5 pm, 100 x 21,2 mm stĺpec; 0 % -100 % acetonitril a 0,05 M octanom amónnym, pufrovaným na pH 4,5, v priebehu 12,5 minút pri 25 ml/min) sa získa l-[4(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-{4-[(fenetylamino)(fenyl)metyl]fenyl}-lH-pyrazolo[3,4ňQpyrimidín-4-amín (28 mg);
RP-HPLC (10 % - 90 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom, pufrovanom na pH 4,5, v priebehu 12 minút pri 2 ml/min s použitím stĺpca Waters Symmetry 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt - 12,269 minút, 95,2 %; m/z (MH+) 601,3.
Príklad 196
N- {4-[4-amino-1 -(4-oxocyklohexyl)-1 H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimÍdín-3 -yl] -2-fluórfenyl} -N ’-(3-metylfenyl)močovina m-Tolyl-izokyanát (1,2 ekviv., 37,7 mg, 0,283 mmol) sa pridá do roztoku 4-[4-amino-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanónu (80,3 mg, 0,236 mmol) v pyridíne. Po 16 hodinách pri teplote 40 °C sa reakcia zastaví vodou (2 ml) a zahusťuje do sucha. Purifikáciou preparatívnou RP-HPLC (10 % - 40 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom, pufrovanom na pH 4,5, v priebehu 60 minút pri 10 ml/min s použitím stĺpca Waters Deltapak C18, 15 pm, 100 x 40 mm stĺpec, λ = 254 nm) sa získa H-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-1 H-py razolo [3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl} -N ’-(3 -mety lfeny l)močo vina (91 mg, 84 %).
lH NMR(DMSO-d6,400 MHz) δ 2,26 (2H, br t), 2,30 (3H, s), 2,43 (4H, m), 2,69 (2H, m), 5,26 (1H, m), 6,82 (1H, d), 7,18 (1H, t), 7,25 (1H, br d), 7,32 (1H, br s), 7,45 (2H, m), 8,26 (1H, s), 8,36 (1H, t), 8,72 (1H, d) a 9,05 (1H, s) a
RP-HPLC (10 % - 90 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom, pufrovanom na pH 4,5 v priebehu 12 minút pri 2 ml/min s použitím stĺpca Waters Symmetry C18, 5 pm, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt = 15,433 minút, 97,9 %.
252
Príklad 197
Etyl-2-[4-amino-3-(4-[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino-3-fluórfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]acetát
a) Etyl-2-(4-amino-3-jód-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)acetát
Do suspenzie 3-jód-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,750 g, 2,87 mmol) v Λ/Ν-dimetylformamide (9 ml) sa pridá hydrid sodný (60 %, 0,138 g, 3,45 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny do tej doby, kým nie je roztok homogénny. Pridá sa etyl-brómacetát (0,447 ml, 4,03 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 14 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný pevný podiel sa trituruje postupne vodou (25 ml), potom zmesou éteru a petroléteru (4:1, 50 ml), čím sa získa etyl-2-(4-amino-3-jód-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)acetát (0,791 g, 2,28 mmol) vo forme hnedej pevnej látky:
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,21 (s, 1H), 5,17 (s, 2H), 4,15 (qt, 2H), 1,20 (t, 3H);
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím stĺpca Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 6,87 minút.
b) Etyl-2-(4-amino-3-4-[(/e/-c-butoxykarbonyl)amino]-3-fluórfenyl-177-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín~l-yl)acetát
Suspenzia etyl-2-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)acetátu (0,790 g, 2,28 mmol), ŕerc-butyl-jV-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,08 g, 3,19 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,105 g, 0,091 mmol) a uhličitanu sodného (0,478 g, 5,69 mmol) v rVpV-dimetylformamide (12 ml) a vode (2 ml) sa zahrieva pri teplote 90 °C po dobu 14 hodín pod atmosférou dusíka. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený vodný roztok chloridu sodného (50 ml) a etylacetát (30 ml), vodná vrstva sa separuje a extrahuje ďalej etylacetátom (3 x 30 ml). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a koncentrujú za zníženého tlaku. Purifikáciou zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/heptán (9:1) ako mobilnej fázy sa získa etyl-2-(4-amino-3-4-[(íerc-butoxykarbonyl)amino]-3-fluórfenyl-l//pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)acetát (0,193 g, 0,449 mmol) vo forme žltého oleja:
253 *H NMR (CDC13, 400 MHz) δ 8, 41 (s, 1H), 8,30 (m, 1H), 7,47 (m, 2H), 6,81 (s, 1H), 5,47 (br, 2H), 5,20 (s, 2H), 4,25 (qt, 2H), 1,55 (s, 9H), 1,27 (t, 3 H);
RP-HP (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím stĺpca Hypersil HS C18,250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 9,47 minút.
c) Etyl-2-[4-amino-3-(4-[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino-3-fluórfenyl)-lŕ/-pyrazolo[3,4-<í]pyrimidín-1 -yl]acetát
Do 50 ml banky obsahujúcej roztok chlorovodíka v dioxáne (4 M, 6 ml) a etanolu (6 ml) sa pridá etyl-2-(4-amino-3-4-[(/erc-butoxykarbonyl)amino]-3-fluórfenyl-17/-pyrazolo[3,4d] pyrimidín-l-yl)acetát (0,452 g, 1,05 mmol). K banke sa pripojí chladič a zmes sa mieša pri teplote 50 °C pod atmosférou dusíka. Po 16 hodinách sa reakčná zmes ochladí na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodný roztok kyseliny chlorovodíkovej (0,5 M, 30 ml) a éter (20 ml). Organická vrstva sa separuje a vyleje. Vodná vrstva sa alkalizuje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (30 ml) a výsledná zmes sa extrahuje etylacetátom (3 x 30 ml). Spojené etylacetátové extrakty sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a koncentrujú, čím sa získa žltý pevný podiel (0,295 g). Tento žltý pevný podiel sa pridá do roztoku 2,3-dichlórbenzénsulfonylchloridu (0,263 g, 1,07 mmol) a 4-dimetylaminopyridínu (0,005 g, 0,041 mmol) v pyridíne (5 ml) a výsledný roztok sa mieša pod atmosférou dusíka po dobu 3 dní. Pridá sa zmes metanolu a dichlórmetánu (1:19, 100 ml) a výsledná zmes sa extrahuje vodným uhličitanom sodným (3x10 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a koncentruje. Látka sa čistí preparativnou HPLC (25 % 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím stĺpca 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 12,4 - 13,9 min), čím sa získa etyl-2-[4-amino-3-(4-[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino-3-fluórfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-c(]pyrimidín1 -yljacetát vo forme bielej pevnej látky (0,011 g, 0,020 mmol):
RP-HPLC (25 % -100 % CH3CN v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím stĺpca Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 9,78 min.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,84 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,54 (t, 1H), 7,43 (m, 3H), 5,21 (s, 2H), 4,15 (qt, 2H), 1,20 (t, 3 H);
MS: MH+ 539.
254
Príklad 198
Al-4-[4-Amino-l-(2-hydroxyetyl)-lí/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl-2,3-dichlór1 -benzénsulfónamid
Etyl-2-[4-amino-3-(4-[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4t/Jpyrimidín-l-yljacetát (0,120 g, 0,222 mmol) sa suspenduje v dimetyléteri etylénglykolu (2 ml) a suspenzia sa ochladí na teplotu 0 °C. Pridá sa lítiumalumínium-hydrid (0,025 g, 0,660 mmol) a reakčná zmes sa ohreje na izbovú teplotu. Po 24 hodinách sa prebytok hydridu rozloží vodnou kyselinou chlorovodíkovou (0,5 M, 10 ml). Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (2 x 7 ml) a organický extrakt sa vyleje, vodná vrstva sa alkalizuje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (10 ml), nasýteným roztokom chloridu sodného a extrahuje zmesou metanolu a dichlórmetánu (1:9, 4 x 20 ml). Organické vrstvy sa spoja, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a koncentrujú za zníženého tlaku. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím stĺpca 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, R, 8,93 - 9,90 min) sa získa 7V1-4[4-amino-1 -(2-hydroxyetyl)-17/-pyrazolo[3,4-úQpyrimidín-3-ylj-2-fluórfenyl-2,3-dichlór-l -benzénsulfónamid vo forme belavej pevnej látky (0,004 g, 0,008 mmol):
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,82 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,54 (t, 1H), 7,39 (m, 3H), 6,90 (br, 2H), 4,86 (t, 1H), 4,35 (t, 2H), 4,04 (t, 2H); MS: (M-H)' 495.
Príklad 199 jVl-(4-{4-Amino-l-[2-kyano-4-(4-metylpiperazino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-2,3 - di chlór-1 -benzénsulfónamid
Suspenzia 3-jód-l/Y-pyrazolo[3,4-</jpyrimidín-4-amínu (0,172 g, 0,66 mmol), hydridu sodného (60 %, 0,030 g, 0,75 mmol), 2,5-difluórbenzonitrilu (0,105 g, 0,75 mmol) a VA-dimetylformamidu (2,5 mi) sa zahrieva po dobu 24 hodín pri teplote 100 °C. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (50 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva sa oddelí, suší nad síranom horečnatým, filtruje a koncentruje za zníženého tlaku. Táto látka (0,045 g) a uhličitan cézny (0,115 g, 0,353 mmol) sa suspendujú v 1-metylpiperazíne (1 ml) a zmes sa zahrieva pri teplote 110 °C v uteš255 nenej nádobe po dobu 20 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa okyslí vodnou kyselinou chlorovodíkovou (1 M, 10 ml) a vodná fáza sa extrahuje éterom (10 ml). Organická fáza sa vyleje a vodná fáza sa alkalizuje vodným roztokom uhličitanu sodného (3 M, 10 ml), vodná fáza sa extrahuje dichlórmetánom (3x15 ml) a spojená organická frakcia sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a koncentruje za zníženého tlaku. Táto látka sa spracováva podľa spôsobu z bodu (b), odstráni sa chrániaca skupina a sulfonyluje sa podľa spôsobu z bodu (c). Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím stĺpca 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 8,4 - 9,4 min) sa získa M-(4-{4-amino-1 -[2-kyano-4-(4-metylpiperazino)fenyl] -177-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3 -yl} -2-fluórfenyl)-2,3-dichlór-l-benzénsulfónamid vo forme žltej pevnej látky (0,007 g, 0,011 mmol):
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,98 (d, 1H), 7,86 (d, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,53 (m, 6H), 3,30 (m, 4H), 2,70 (m, 4H), 2,40 (s, 3H); MS (M-H)' 650.
Príklad 200
Cis-NI -fenyl-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín- 3-yl} -2-metoxy benzamid
a) 4-Bróm-2-metoxybenzonitril
Suspenzia metoxidu draselného (4,24 g, 60,0 mmol) v tetrahydrofuráne (40 ml) sa pridá po častiach do roztoku 4-bróm-2-fluórbenzonitrilu (8,0 g, 40,0 mmol) v tetrahydrofuráne (50 ml) pri teplote -50 °C. Po 1 hodine sa kúpeľ so suchým ľadom odstráni a reakčná zmes sa nechá ohriať na izbovú teplotu a mieša pri izbovej teplote po dobu 6 hodín. Reakčná zmes sa naleje na vodu (250 ml) a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa 4-bróm-2-metoxybenzonitril (7,85 g, 92%).
’H NMR (DMSO-dň) δ 3,94 (s, 3H), 7,32 (d, J = 8,23 Hz, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,69 (d, J = 8,23 Hz, 1H).
b) 4-Bróm-2-metoxybenzoová kyselina
256
4-Bróm-2-metoxybenzonitril (7,35 g, 35 mmol) sa rozpustí v dioxáne (400 ml), pridá sa hydroxid sodný (2,0 N, 200 ml) a suspenzia sa zahrieva pri teplote 100 °C po dobu 16 hodín.
Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná zmes sa filtruje a premyje vodou, filtrát sa neutralizuje kyselinou chlorovodíkovou (5,0 N) na pH 1 a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa 4-bróm-2-metoxybenzoová kyselina (3 g, 37 %).
‘H NMR (DMSO-dé) δ 3,84 (s, 3H), 7,21 (d, J = 8,25 Hz, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,58 (d, J = 8,23 Hz, 1H).
c) 4-Bróm-2-metoxy-1 -benzénkarbonylchlorid
4-Bróm-2-metoxybenzoová kyselina (2,934 g, 12,70 mmol) sa zmieša s uhličitanom sodným (2,2 g, 26,51 mmol), pridá sa tionylchlorid (20 ml) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín. Po oddestilovaní prebytku tionylchloridu sa pridá heptán a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa 4-bróm-2-metoxy-l-benzénkarbonylchlorid (3,16 g, 100
%).
'H NMR (CDC13) δ 3,94 (s, 3H), 7,16 (s, 1H), 7,20 (d, J = 8,51 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 8,51 Hz, 1H).
d) ΛΊ -fenyl-4-bróm-2-metoxybenzamid
Anilín (1,24 ml, 13,62 mmol) sa pomaly pridá do zmesi 4-bróm-2-metoxy-l-benzénkarbonylchloridu (3,24 g, 12,98 mmol) a trietylamínu (2,7 ml, 19,48 mmol) v dichlórmetáne (130 ml). Po 3 hodinách sa rozpúšťadlo odstráni za zníženého tlaku, pridá sa etylacetát a zmes sa filtruje, filtrát koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa rekryštalizuje zo zmesi etylacetátu a heptánu, čím sa získa Aľl-fenyl-4-bróm-2-metoxybenzamid (2,92 g, 74 %).
*H NMR (DMSO-dô) δ 3,92 (s, 3H), 7,09 (s, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,55 (d, J = 8,15 Hz, 1H), 7,71 (m, 2H), 10,10 (s, 1H).
e) 4-(Anilinokarbonyl)-3-metoxyfenylboritá kyselina n-Butyllítium (1,6 M hexánový roztok. 5,1 ml. 8,16 mmol) sa pomaly pridá do roztoku M-fenyl-4-bróm-2-metoxybenzamidu (1,0 g, 3,26 mmol) v tetrahydrofuráne (25 ml) pri teplote -78 °C. Po 30 minútach sa naraz pridá tríizopropylborát (1,13 ml, 4,90 mmol). Po 15 minútach sa reakčná zmes nechá ohriať na izbovú teplotu a mieša pri izbovej teplote po dobu 16 hodín.
257
Pridá sa kyselina chlorovodíková (2,5 N, 18 ml) a zmes sa mieša po dobu 5 hodín. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSCb, filtruje a koncentruje. Zvyšok sa rekryštalizuje zo zmesi etylacetátu a heptánu, čím sa získa 4-(anilinokarbonyl)-3-metoxyfenylboritá kyselina (0,549 g, 62 %).
'H NMR (DMSO-dô) δ 3,91 (s, 3H), 7,08 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,47 (d, J = 7,57 Hz, 1H), 7,59 (m, 2H), 7,73 (d, J = 7,36Hz, 2H), 8,24 (s, 2H), 10,10 (s, 1H).
f) Cis-Nl -fény 1-4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/ŕ-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2-metoxybenzamid
Cz3-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-V]pyrimidín-4-ylamín (148 mg, 0,335 mmol), 4-(anilinokarbonyl)-3-metoxyfenylboritá kyselina (100 mg, 0,369 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (23 mg, 0,020 mmol) a uhličitan sodný (85 mg, 0,845 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (4 ml) a vodou (2 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa cis-Nl-fenyl-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-íí]pyrimidín-3-yl}-2-metoxybenzamid (125 mg, 69 %).
’H NMR (CDCb) δ 1,69 (m, 2H), 1,86 (m, 2H), 2,17 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,44 (m, 1H), 4,15 (s, 3H), 4,96 (m, 1H), 5,69 (bs, 2H), 7,14 (m, 1H), 7,37 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,68 (m, 2H), 8,41 (m, 2H), 9,77 (s, 1H). LC/MS (stĺpec Micromass: Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH+ = 541,2, Rt = 2,58 min.
Príklad 201
Trans-Nl -Fenyl-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxybenzamid
7ratt5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (266 mg, 0,604 mmol), 4-(anilinokarbonyl)-3-metoxyfenylboritá kyselina (180 mg, 0,664
258 mmol), paládium-tetrakistrifenylí'osfín (42 mg, 0,036 mmol) a uhličitan sodný (154 mg, 1,449 mmol) sa zmiešajú s dimetylčterom etylénglykolu (8 ml) a vodou (4 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa ŕrans-AT-fenyl-4-{4-ammo-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-íflpyrimidín-3-yl}-2-metoxybenzamid (226 mg, 69 %).
'H NMR (CDC13) δ 1,58 (m, 4H), 2,17 (m, 7H), 2,32 (s, 3H), 2,52 (m, 2H), 2,69 (m, 3H), 4,16 (s, 3H), 4,78 (m, 1H), 5,49 (bs, 2H), 7,14 (m, 1H), 7,43 (m, 4H), 7,69 (m, 2H), 8,44 (m, 2H), 9,77 (s, 1H). LC/MS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH+ = 541,2, Rt -2,61 minút.
Príklad 202
Cis-Nl -benzyl-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lŕ/-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxybenzamid
a) Al -Benzyl-4-bróm-2-metoxybenzamid
Benzylamín (0,69 ml, 6,31 mmol) sa pomaly pridá do zmesi 4-bróm-2-metoxy-l-benzénkarbonylchloridu (1,5 g, 6,01 mmol) a trietylamínu (1,3 ml, 9,02 mmol) v dichlórmetáne (60 ml). Po 3 hodinách sa rozpúšťadlo odstráni za zníženého tlaku, pridá sa etylacetát a zmes sa filtruje, filtrát koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok rekryštalizuje zo zmesi etylacetátu a heptánu, čím sa získa Al-benzyl-4-bróm-2-metoxybenzamid (1,654 g, 86 %).
’H NMR (DMSO-dé) δ 3,92 (s, 3H), 4,67 (d, J = 5,67 Hz, 32H), 7,31 (m, 7H), 8,03 (bs, 1H), 8.13 (d, J = 8,41, 1H).
b) 4-[(Benzylamino)karbonyl]-3-metoxyfenylboritá kyselina n-Butyllítium (1,6 M hexánový roztok, 8,0 ml, 12,88 mmol) sa pomaly pridá do roztoku Al-benzyl-4-bróm-2-metoxybenzamidu (1,65 g, 5, 15 mmol) v tetrahydrofuráne (40 ml) pri
259 teplote -78 °C. Po 30 minútach sa naraz pridá tri izopropylborát (1,8 ml, 7,73mmol). Po 13 minútach sa reakčná zmes nechá ohriať na izbovú teplotu a mieša po dobu 16 hodín. Pridá sa kyselina chlorovodíková (2,5 N, 36 ml) a zmes sa mieša cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSCfi, filtruje a koncentruje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa 4[(benzylamino)karbonyl]-3-metoxyfenylboritá kyselina (0,675 g, 46 %).
’H NMR (DMSO-d6) δ 3,90 (s, 3H), 4,51 (d, J = 6,18 Hz, 2H), 7,24 (m, 1H), 7,34 (m, 4H), 7,43 (d, J = 7,55 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,69 (d, J = 7,55Hz, 1H), 8,23 (s, 2H), 8,69 (m, 1H).
c) Cz5-Vl-benzyl-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-t(lpyrimidín-3 -yl} -2-metoxybenzamid
Cis-3 -j ód-1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-t/jpy rimidm-4-amín (141 mg, 0,319 mmol), 4-[(benzylamino)karbonyl]-3-metoxyfenylboritá kyselina (100 mg, 0,351mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfm (22 mg, 0,019mmol) a uhličitan sodný (81 mg, 0,765 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (4 ml) a vodou (2 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa ŕfij-Vl-benzyI-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ŕ7]pyrimidín3-yl}-2-metoxybenzamid (126 mg, 71 %).
’H NMR (CDC13) δ 1,83 (m, 6H), 2,34 (s, 3H), 2,45 (m, 11H), 4,02 (s, 3H), 4,43 (d, J = 5,66Hz, 2H), 4,95 (m, 1H), 5,52 (bs, 2H), 7,37 (m, 7H), 8,18 (m, 1H), 8,41 (m, 1H); LC/MS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, Cl 8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH+ = 555,5, Rt = 2,65 min.
Príklad 203
CA-Vl-fenetyl-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ú7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxybenzamid
260
a) /VI -Fenetyl-4-bróm-2-metoxybenzamid
Fenetylamín (0,79 ml, 6,31 mmol) sa pomaly pridá do zmesi 4-bróm-2-metoxy-lbenzénkarbonylchloridu (1,5 g, 6,01 mmol) a trietylamínu (1,3 ml, 9,02 mmol) v dichlórmetáne (60 ml). Po 2 hodinách sa rozpúšťadlo odstráni za zníženého tlaku. Pridá sa etylacetát a zmes sa filtruje, filtrát koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a etylacetátu (97:3) ako mobilnej fázy, čím sa získa N\ -fenetyl-4-bróm-2-metoxybenzamid (1,81 g, 90 %).
’H NMR (DMSO-dé) δ 2,83 (m, 2H), 3,50 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 7,31 (m, 7H), 7,65 (d, J = 8,28Hz, 1H), 8,15 (m, 1H).
b) 4-[(Fenetylamino)karbonyl]-3-metoxyfenylboritá kyselina n-Butyllítium (1,6 M hexánový roztok, 8,5 ml, 13,54 mmol) sa pomaly pridá do roztoku Vl-fenetyl-4-bróm-2-metoxybenzamidu (1,81 g, 5,41 mmol) v tetrahydrofuráne (40 ml) pri teplote -78 °C. Po 30 minútach sa naraz pridá triizopropylborát (1,87 ml, 8,12mmol). Po 13 minútach sa reakčná zmes nechá ohriať na izbovú teplotu a mieša po dobu 3 hodín. Pridá sa kyselina chlorovodíková (2,5 N, 40 ml) a zmes sa mieša cez noc. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a koncentruje. Zvyšok sa e istí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa 4-[(benzylamino)karbonyl]-3-metoxyfenylboritá kyselina (0,916 g, 56 %).
‘H NMR (DMSO-dé) δ 2,85 (m, 2H), 3,53 (m, 2H) 3,88 (s, 3H), 7,31 (m, 7H), 7,70 (d, J = 7,61 Hz, 1H), 8,19 (m, 2H), 9,10 (m, 1H).
c) Cis-Nl-fenetyl-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxybenzamid
Czk-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidín-4-amín (154 mg, 0,349 mmol), 4-[(fenetylamino)karbonyl]-3-metoxyfenylboritá kyselina (115 mg. 0,384 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (24 mg, 0,021 mmol) a uhličitan sodný (89 mg. 0,839 mmol) sa zmiešajú s dimetylčterom etylénglykolu (4 ml) a vodou (2 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľan261 kou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa cA-Vl-fenetyl-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxybenzamid (64 mg, 32 %).
’H NMR (CDCb-d) δ 1,62 (m, 4H), 2,16 (m, 16H), 2,87 (m, 2H), 3,57 (m, 2H), 3,90 (s, 3H), 4,83 (m, 1H), 7,31 (m, 7H), 7,95 (m, 1H), 8,22 (m, 2H); LC/MS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: O % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH+ = 569,3, Rt = 2,50 min.
Príklad 204
Cis-N\ -fenyl-4- {4-amino-1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín3- yl}benzamid
a) Vl-Fenyl-4-brómbenzamid
Do zmesi 4-bróm-l-benzénkarbonylchloridu (2,0 g, 9,11 mmol) a trietylamínu (1,9 ml, 13,67 mmol) v dichlórmetáne (95 ml) sa pomaly pridá anilín (0,87 ml, 9,57 mmol). Po 3 hodinách sa rozpúšťadlo odstráni za zníženého tlaku, pridá sa etylacetát a zmes sa filtruje, filtrát koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa rekryštalizuje zo zmesi etylacetátu a heptánu, čím sa získa yVl-fenyl-4-brómbenzamid (1,00 g, 40 %).
'H NMR (DMSO-d6) δ 7,11 (m, 1H), 7,38 (m, 2H), 7,76 (m, 4H), 7,92 (m, 2H), 10,30 (s, 1H).
b) 4-(Anilinokarbonyl)fenylboritá kyselina n-Butyllítium (1,6 M hexánový roztok, 5,7 ml, 9,05 mmol) sa pomaly pridá do roztoku Vl-fenyl-4-bróm-2-metoxybenzamidu (1,0 g, 3,62 mmol) v tetrahydrofuráne (27 ml) pri teplote -78 °C. Po 30 minútach sa naraz pridá triizopropylborát (1,25 ml, 5,43 mmol). Po 13 minútach sa reakčná zmes nechá ohriať na izbovú teplotu a mieša po dobu 6 hodín. Pridá sa kyselina chlorovodíková (2,5 N, 27 ml) a zmes sa mieša cez noc. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a koncentruje. Zvyšok sa rekryštalizuje zo zmesi etylacetátu a heptánu, čím sa získa
4- (anilinokarbonyl)fenylboritá kyselina (0,354 g, 40 %).
262 ’H NMR (DMSO-d6) δ 7,10 (m, 1H), 7,35 (m, 2H), 7,80 (m, 4H), 7,92 (m, 2H), 8,23 (s, 2H), 10,23 (s, 1H).
c) CA-zVl-fenyl-4-{4-amino-l-[4-(4-metyIpiperazmo)cykIohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-y1} benzamid
CA-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín (100 mg, 0,226 mmol), 4-(anilinokarbonyl)fenylboritá kyselina (60 mg, 0,249 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (16 mg, 0,014 mmol) a uhličitan sodný (58 mg, 0,544 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (3ml) a vodou (1,5 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí preparatívnou chromatografiou s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (95:5:0,5) ako mobilnej fázy, čím sa získa cis-ΝΪ-fenyl-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yljbenzamid (32 mg, 27 %).
‘H NMR (DMSO-d6) δ 1,60 (m, 4H), 1,73 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,28 (m, 11 H), 4,84 (m, 1H), 7,12 (m, 1H), 7,38 (m, 2H), 7,81 (m, 4H), 8,16 (d, J - 8,30 Hz, 2H), 8,27 (s, 1H), 10,34 (s, 1H).LC/MS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH+ = 511,2, Rt = 2,41 min.
Príklad 205
CA-jVl-fenetyl-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}benzamid
a) jVl-fenetyl-4-brómbenzamid
Fenetylamín (1,2 ml, 9,57 mmol) sa pomaly pridá do zmesi 4-bróm-l-benzénkarbonylchloridu (2,0 g, 9,11 mmol) a trietylamínu (1,9 ml, 13,67 mmol) v dichlórmetáne (95 ml). Po 3 hodinách sa rozpúšťadlo odstráni za zníženého tlaku, pridá sa etylacetát a zmes sa filtruje, filtrát koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa rekryštalizuje zo zmesi etylacetátu a heptánu, čím sa získa A'l-fenyl-4-brómbenzamid (1,925 g, 69 %),
263 ‘H NMR (DMSO-d6) δ 2,84 (m, 2H), 3,47 (m, 2H), 7,28 (m, 5H), 7,67 (d, J = 8,59Hz, 2H), 7,76 (d, J = 8,59Hz, 4H), 8,64 (m, IH).
b) 4-[(Fenetylamino)karbonyl]fenylboritá kyselina «-Butyllítium (1,6 M hexánový roztok, 10 ml, 15,78 mmol) sa pomaly pridá do roztoku Nl-fenyl-4-bróm-2-metoxybenzamidu (1,92 g, 6,31 mmol) v tetrahydrofuráne (47 ml) pri teplote -78 °C. Po 30 minútach sa naraz pridá triizopropylborát (2,2 ml, 9,47 mmol). Po 13 minútach sa reakčná zmes nechá ohriať na izbovú teplotu a mieša po dobu 16 hodín. Pridá sa kyselina chlorovodíková (2,5 N, 47 ml) a zmes sa mieša po dobu 5 hodín. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a koncentruje. Zvyšok sa rekryštalizuje zo zmesi etylacetátu a heptánu, čím sa získa 4-(fenetylamino)karbonyl]fenylboritá kyselina (0,486 g, 28 %).
'H NMR (DMSO-d6) δ 2,85 (m, 2H), 3,49 (m, 2H), 7,22 (m, 5H), 7,73 (m, 4H), 8,17 (s, 2H), 8,54 (m, IH).
c) Czs-Vl-fenetyl-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-(/]pyrinndí n-3 -y 1} benzamid
Czs-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7Jpyrimidín-4-amín (100 mg, 0,226 mmol), 4-[(fenetylamino)karbonyl]fenylboritá kyselina (60 mg, 0,249 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (16 mg, 0,014 mmol) a uhličitan sodný (58 mg, 0,544 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (3ml) a vodou (1,5 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí preparatívnou chromatografiou s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (80:20) ako mobilnej fázy, čím sa získa cz5-AT-fenetyl-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}benzamid (28 mg, 23 %).
'H NMR (DMSO-d6) δ 1,62 (m, 4H), 2,24 (m, 16H), 2,88 (m, 2H), 3,54 (m, 2H), 4,82 (m, IH), 7,29 (m, 7H), 8,73 (d, J = 8,10Hz, 2H), 7,99 (d, 8,17Hz, IH), 8,67 (m. IH). LC/MS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH+ = 539,3, Rt = 2,50 min.
264
Príklad 206
Trimaleát /ra«5-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ŕ7]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxy fenyl)-1 77-2-indolkarboxamidu
a) 7rans-/e/-c-butyl-Aľ-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)karbamát
7ram-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín (4,0 g, 9,06 mmol), ŕerc-butyl-N-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljkarbamát (3,48 g, 9,97 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (0,63 g, 0,64 mmol) a uhličitan sodný (2,30 g, 21,75 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (100 ml) a vodou (50 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (80:20) ako mobilnej fázy, čím sa získa /ra«5-/f;rc-butyl-.'V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)karbamát (4,75 g, 98 %).
‘H NMR (DMSO-dg) δ 1,48 (m, 11H), 2,02 (m, 6H), 2,15 (s, 3H), 2,35 (m, 5H), 2,53 (m, 4H), 3,87 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,20 (m, 2H), 7,90 (d, J = 8,15, 1H), 8,03 (s, 1H), 8,22 (s, 1 H).
b) 7’nms-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidm-4-amín
Zmes trifluóroctovej kyseliny a dichlórmetánu (20:80, 150 ml) sa pridá do roztoku N-(4{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfe-nyljkarbamátu (4,75 g, 8,85 mmol) v dichlórmetáne (100 ml) pri teplote 0 °C. Po 2 hodinách sa ľadový kúpeľ odstráni a rozpúšťadlá sa zahusťujú a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne. Na upravenie pH na 10 sa pridá hydroxid sodný (1,0 N). Pevný podiel vzniknutý Po odstránení organického rozpúšťadla sa spojí filtráciou, čím sa získa /ra«.s--3-(4-amino-3metoxyfenyl)-1-[4-(4-metylpiperazÍno)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-4-amín (3,85 g, 100 %).
265 ’H NMR (DMSO-dô) δ 1,44 (m, 2H), 1,96 (m, 6H), 2,21 (s, 3H), 2,33 (m, 5H), 2,53 (m, 4H), 3,83 (s, 3H), 4,60 (m, IH), 5,03 (bs, 2H), 6,76 (d, J = 7,91Hz, IH), 6,98 (d, J = 7,89 Hz, IH), 7,03 (m, 2H), 8,19 (s, IH).
c) 7rans-/ť2-(4-[4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-3-y 1} - 2 -metoxy fény 1) -1H-2 -indolkarboxamid
K l//-2-indolkarboxylovej kyseline (0,738 g, 4,58 mmol) v dichlórmetáne (14 ml) sa pridá oxalylchlorid (4 ml, 45,8 mmol) a DMF (1 kvapka). Reakčná zmes sa mieša cez noc. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (5 ml). Pri teplote 0 °C sa polovica z dichlórmetánového roztoku (2,5 ml) pridá do roztoku íra«s-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-(/|pyrimidín-4-amínu (0,50 g, 1,145 mmol) v pyridíne (6 ml). Po 30 minútach sa pevný podiel spojí filtráciou, k pevnému podielu sa pridá voda a pH roztoku sa upraví na 10 hydroxidom sodným (1,0 N). Vodná fáza sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSCb, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (80:20) ako mobilnej fázy, čím sa získa trans-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-17/-2-indolkarboxamid (0,312 g, 47 %).
’H NMR (DMSO-de) δ 1,49 (m, 2H), 2,05 (m, 6H), 2,15 (s, 3H), 2,32 (m, 5H), 2,51 (m, 4H), 3,97 (s, 3H), 4,66 (m, IH), 7,10 (m, IH), 7,22 (m, IH), 7,30 (d, J = 7,98 Hz, IH), 8,11 (d, J = 8,14 Hz, IH), 8,24 (s, IH), 9,44 (s, IH).
d) Trimaleát trcins-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)- 17/-2-indolkarboxamidu
7r<ms-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-177-2-indolkarboxamid (312 mg, 0,539 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (35 ml) a pridá sa kyselina maleínová (187 mg, 1,614 mmol) v horúcom etylacetáte (5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín, pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa dimaleát trans-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]- l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)- 1/7-2-indolkarboxamidu (473 mg, 95 %).
266 'H NMR (DMSO-d6) δ 1,60 (m, 2H), 2,09 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,84 - 3,19 (bm, 9H), 3,97 (s, 3H), 4,73 (m, 1H), 6,17 (s, 6H),7,11 (m, 1 H), 7,25 (m, 1 H), 7,30 (m, 1 H), 7,34 (s, 1 H), 7,41 (s, 1H), 7,49 (d, J = 8,21, 1H), 7,68 (d, J = 8,02 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 8,15 Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), 11,38 (s, 1H). LCMS (Stĺpec Finigan: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH+ =580,4, Rt = 2,01 min.
Príklad 207
Trimaleát trans-N2-(4- {4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-cfjpyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfeny 1)-1 -metyl-1 Ν-2-indolkarboxamidu
a) Tran5-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 Ν-2-indolkarboxamid
Ku l-metyl-lN-2-indolkarboxylovej kyseline (0,802 g, 4,58 mmol) v dichlórmetáne (14 ml) sa pridá oxalylchlorid (4 ml, 45,8 mmol) a DMF (1 kvapka). Reakčná zmes sa mieša cez noc. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (5 ml), polovica z dichlórmetánového roztoku (2,5 ml) sa pridá do roztoku /ram-3-(4-amino-3-metoxyfenylj-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-4-amínu (0,50 g, 1,145 mmol) v pyridíne (6 ml) pri teplote 0 °C. Po 30 minútach sa pevný podiel spojí filtráciou, k pevnému podielu sa pridá voda a pH roztoku sa upraví na 10 hydroxidom sodným (1,0 N). Vodná fáza sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSCU, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (80:20) ako mobilnej fázy, čím sa získa trans-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 N-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3 -yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-lN-2-indolkarboxamid (0,545 g, 80 %).
’H NMR (DMSO-d6) δ 1,49 (m, 2H), 2,02 (m, 6H), 2,17 (s, 3H), 2,36 (m, 5H), 2,55 (m, 4H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,66 (m, IFI), 7,15 (m, 1H), 7,28 - 7,35 (m, 4H), 7,58 (d, J = 8,42 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,96 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 8, 14,1H), 8,24 (s, 1H), 9,43 (s, 1H).
b) Trimaleát /ram>-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenvl)-1 -metyl-1 Ν-2-indolkarboxamidu
267 ľrans-A'2-(4-{4-ammo-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid (545 mg, 0,917 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (60 ml) a pridá sa kyselina maleínová (320 mg, 2,75 mmol) v horúcom etylacetáte (5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa dimaleát írarts-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl} -2-metoxy fény 1)-1 -mety 1-1 //-2-indolkarboxamidu (473 mg).
’H NMR (DMSO-dé) δ 1,60 (m, 2H), 2,06 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,83 - 3,57 (bm, 9H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,72 (m, 1H), 6,18 (s, 6H), 7,16 (m, 1H), 7,28 - 7,36 (m, 4H), 7,59 (d, J = 8,44 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 8,15,1H), 8,28 (s, 1H), 9,44 (s, 1H). LC/MS (Stĺpec Finigan: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm. eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH+ = 594,4, R, = 2,24.
Príklad 208
Trimaleát rrara-/Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4 (trifluórmetyl)benzamidu
a) Trans-N\ -(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(trifluórmetyl)benzamid
4-(Trifluórmetyl)-l-benzénkarbonylchlorid (262 mg, 1,256 mmol) v dichlórmetáne (1 ml) sa pridá do roztoku rra/75-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu (500 mg, 1,145 mmol) v pyridíne (8 ml) pri teplote 0 °C. Po 30 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 1,5 hodiny. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (80:20) ako mobilnej fázy, čím sa získa trans-N\ -(4-[4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4rijpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(trifluórmetyl)benzamid (516 mg, 74 %).
268 'H NMR (CDCb-d) δ 1,55 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 2,10 - 2,27 (m, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,51 (m, 4H), 2,66 (m, 3H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,78 (m, 1H), 5,57 (bs, 2H), 7,30 (m, 2H), 7,79 (d, J = 8,25 Hz, 2H), 8,04 (d, J = 8,05 Hz, 2H), 8,38 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,68 (d, J = 8,20 Hz, 1H).
b) Trimaleát ŕraws-M-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4c/]py-rimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(trifluórmetyl)benzamidu
Trans-Ni -(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-t/jpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(trifluórmetyl)benzamid (510 mg, 0,838 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (55 ml) a pridá sa kyselina maleínová (292 mg, 2,513 mmol) v horúcom etylacetáte (5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín a pevný podiel sa spojí filtráciou, čim sa získa dimaleát ŕrans-jVl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazmo)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(trifluórmetyl)benzamidu (802 mg, 100 %).
’H NMR (DMSO-d6) δ 1,60 (m, 2H), 2,06 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,83 - 3,17 (bm, 9H), 3,93 (s, 3H), 4,72 (m, 1H), 6,17 (s, 6H), 7,29 (d, J = 8,12 Hz, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,92 (d, J = 8,34 Hz, 2H), 8,02 (d, J = 8,12 Hz, 1H), 8,17 (d, J = 8,12 Hz, 2H), 8,26 (s, 1H), 9,83 (s, 1H). LCMS (Stĺpec Finigan: Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH+ =609,4, Rt = 2,16 minút.
Príklad 209
Trimaleát /ranó,-Aľl-(4-[4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamidu
a) Trans-N\-(4- {4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamid
4-(Trifluórmetoxy)-l-benzénkarbonylchlorid (283 mg, 1,256 mmol) v dichlórmetáne (1 ml) sa pridá do roztoku /rau5-3-(4-amino-3- metoxy fény l)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (500 mg, 1,145 mmol) v pyridíne (8 ml) pri teplote 0 °C. Po 30 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 1,5 hodiny. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na
269 stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (80:20) ako mobilnej fázy, čím sa získa z‘ra»5-Wl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cykIohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamid (526 mg, 74 %).
'H NMR (CDC13) δ 1,57 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 2,10 - 2,27 (m, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,51 (m, 4H), 2,66 (m, 3H), 4,03 (s, 3H), 4,77 (m, 3H), 5,56 (bs, 2H), 7,26 - 7,37 (m, 4H), 7,99 (m, 2H), 8,38 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,67 (d, J - 8,21 Hz, 1H).
b) Trimaleát tranv-A/l-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfeny l)-4-(trifluórmetoxy)benzamidu ľrans-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-c/jpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamid (520 mg, 0,832 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (55 ml) a pridá sa kyselina maleínová (290 mg, 2,497 mmol) v horúcom etylacetáte (5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa dimaleát trans-Ni-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1 /7-pyrazolo [3,4-í7)pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfeny l)-4-(trifluórmetoxy)benzamidu (7 80 mg, 96 %).
'H NMR (DMSO-dô) δ 1,60 (m, 2H), 2,06 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,83 - 3,17 (bm, 9H), 3,93 (s, 3H), 4,72 (m, 1H), 6,18 (s, 6H), 7,28 (d, J = 8, 14 Hz, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,54 (d, J = 8,47 Hz, 2H), 8,01 (d, J = 8,12 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 8,69 Hz, 2H), 8,26 (s, 1H), 9,69 (s, 1H). LCMS (Stĺpec Finigan: Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,0 ml/min, MH+ = 625,4, Rt ~ 2,21 min.
Príklad 210
Al-{4-[4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -3 -fenylpropánamid
a) Terc-butyl/4-hydroxy-l-piperidínkarboxylát
Borohydrid sodný (3,8 g, 100,4 mmol) sa pridá po častiach do roztoku terc-butyl-4-οχο-1-piperidínkarboxylátu (20 g, 100,4 mmol) v metanole (600 ml) pri teplote 0 °C. Po 15 minú270 tach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 3 hodín, pridá sa hydroxid sodný (1,0 N, 100 ml) a organické rozpúšťadlo sa odparuje, vodná fáza sa extrahuje éterom (4x). Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje, čím sa získa Zerc-butyl-4-hydroxy-l-piperidínkarboxylát (20,48 g, 100%).
‘H NMR (CDCb-ó/) 1,48 (s, 9H), 1,63 (m, 2H), 1,87 (m, 2H), 3,03 (m, 2H), 3,83 (m, 3H).
b) 7erc-butyl-4-(4-amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát
3-Jód-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín (10 g, 38,3 mmol), Zerobutyl-4-hydroxy-l-piperidínkarboxylát (16,96 g, 84,2 mmol) a trifenylfosfín (20,09 g, 76,0 mmol) sa suspendujú v tetrahydrofuráne (425 ml). Reakčná zmes sa ochladí v ľadovom kúpeli a o 10 minút neskôr sa po kvapkách pridá diéty 1-azodikarboxylát (12,09 ml, 76,0 mmol). Po 5 hodinách sa reakčná zmes nechá ohriať na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (65 ml). Pevný podiel sa filtruje, premyje dichlórmetánom (20 ml) a etylacetátom (5 x 20 ml), čím sa získa zmes dietyl-l,2-hydrazíndikarboxylátu a Zerc-butyl-4-(4-amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylátu (1:1, 14,98 g, 63 %), ktorá sa bez purifikácie použije ďalej.
'H NMR (CDC13) δ 1,48 (s, 9H), 1,95 (m, 2H), 2,20 (m, 2H), 2,92 (m, 2H), 4,23 (m, 2H), 4,84 (m, 1H), 8,31 (s, 1H).
c) 3-Jód-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amín
Po 15 minútach sa zmes trifluóroctovej kyseliny a dichlórmetánu (20:80, 250 ml) pridá do roztoku Zerc-butyl-4-(4-amino-3 -jód-1 H-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-1 -yl)-1 -piperidínkarboxylátu (10,72 g, 24,1 mmol) v dichlórmetáne (100 ml) pri teplote 0 °C. Ľadový kúpeľ sa odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín. Rozpúšťadlá sa zahusťujú a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne. Pridá sa kyselina chlorovodíková (5,0 N) a vodná vrstva sa premyje dichlórmetánom (3x), Na upravenie pH sa pridá hydroxid sodný (50 %), suspenzia sa lyofilizuje na zníženie objemu na jednu tretinu a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa 3-jód-1-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-cf)pyrimidín-4-amín (8,109 g, 97 %).
'H NMR (CDCb) δ 1,81 (m, 2H), 1,99 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,07 (m, 2H), 4,68 (m, 1H), 8,19 (s, 1H).
271
d) 3 - Jód-1 - [1-( 1 -metylpiperidín-4-y l)]-piperidín-4-y 1] -1 //-pyrazol o [3,4-c/]pyrimidín-4-amín
3-jód-l-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo (3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (2,00 g, 5,81 mmol), l-metyl-4-piperidón (2,14 ml, 17,42 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (2,45 g, 11,62 mmol) a ľadová kyselina octová (1,05g, 17,42 mmol) sa zmiešajú s 1,2-dichlóretánom (75 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 6 hodín a na upravenie pH na asi 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa 3-jód-l-[l(l-metylpiperidín-4-yl)]-piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amm (2,39 g, 93 %).
*H NMR (DMSO-d6) δ 1,52 (m, 2H), 1,75 (m, 2H), 1,87 (m, 2H), 2,05 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,28 (m, 3H), 2,91 (m, 2H), 3,00 (m, 2H), 4,55 (m, 1H), 8,18 (s, 1H).
e) Terc-butyl-//-{4-[4-amino-1-(1-(1 -metylpiperidín-4-yl)-piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}karbamát
3-Jód-l-(l-(l-metylpiperidín-4-yl)]-piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidín-4-amín (2,39 g, 5,41 mmol), Zerc-butyl-/V-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljkarbamát (2,08 g, 5,96 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (0,375 g, 0,32 mmol) a uhličitan sodný (1,38 g, 13,00 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (80 ml) a vodou (40 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (95:5:0,5) ako mobilnej fázy, čím sa získa Zerc-butyl-/V-{4-[4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)-piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}karbamát (1,67 g, 57 %).
'H NMR (DMSO-dô) δ 1,48 (m, 11H), 1,71 (m, 2H) 1,86 (m, 4H), 2,14 (s, 3H), 2,18 (m, 3H), 2,32 (m, 2H), 2,80 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,22 (m, 2H), 7,91 (d, J = 8, 12,1 H), 8,03 (s, 1H), 8,21 (s, 1H).
f) ΛΠ - {4-[4-amino-1 -[1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l //-pyrazolo(3,4-d]pyrimidín-3-y l]-2-metoxyfenyl} -3 -fenylpropánamid
3-Fenylpropanoylchlorid (77 mg, 0,458 mmol) sa pridá do roztoku 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)-piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amínu
272 (100 mg, 0,229 mmol) v pyridíne (1,2 ml). Po 5 hodinách sa rozpúšťadlo zahusťuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu, čím sa získa Al-{4-[4-amino-l-[l-(l-metylpiperdm-4-yl)piperidm-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-3-fenylpropánamid (24 mg, 18 %).
’H NMR (CDCb-d) 1,70 (m, 2H), 1,85 (m, 2H), 2,04 (m, 4H), 2,30 (s, 3H), 2,41 (m, 5H), 2,75 (m, 2H), 2,97 (m, 2H), 3,08 (m, 4H), 3,90 (s, 3H), 4,75 (m, 1H), 5,71 (bs, 2H), 7,24 (m, 8H), 7,76 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,52 (d, J = 8,12,1H). LCMS (Stĺpec Finigan: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH+= 569,5, Rt = 1,65 minút.
Príklad 211
Al-{4-[4-Arnino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrirnidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-(trifluórmetoxy)benzamid
4-(Trifluórmetoxy)-l-benzénkarbonylchlorid (103 mg, 0,458 mmol) sa pridá do roztoku 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)-piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-í7)pyrimidín-4-amínu (100 mg, 0,229 mmol) v pyridíne (1,0 ml). Po 5 hodinách sa rozpúšťadlo zahusťuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu, čím sa získa Al -{4-[4-amino-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-y 1]-1 //-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-(trifluórmetoxy)benzamid (40 mg, 28 %).
’H NMR (CDCh-J) δ 1,67 (m. 2H), 1,84 (m, 2H), 1,97 (m, 2H), 2,06 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2.45 (m, 5H), 2,94 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 4,77 (m, 1H), 5,53 (bs, 2H), 7,34 (m, 4H), 7,98 (d, J = 8, 73 Hz, 2H), 8,38 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,66 (d, J = 8,73 Hz, 1H). LCMS (Stĺpec Finigan: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH+ =625,5, Rt = 2,00 min.
273
Príklad 212
Trimaleát NI - {4-[4-amino-1 -(1 -mety 1-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-(trifluórmetyl)benzamidu
a) Ni- {4- [4-amino-1 -(1 -metyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-y l]-2metoxyfenyl}-4-(trifluórmetyl)benzamid
4-(Trifluórmetyl)-l-benzénkarbonylchlorid (48 mg, 0,231 mmol) sa pridá do roztoku 3(4-amino-3 -metoxyfeny 1)-1 - [ 1 -(1 -metylpiperidín-4-y 1)-piperidí η-4-y 1]-1 //-pyrazolo [3,4-d\ py rimidín-4-amínu (101 mg, 0,231 mmol) v pyridíne (1,0 ml). Po 5 hodinách sa rozpúšťadlo zahusťuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu, čím sa získa Ni-{4-[4amino-1 -(1 -metyl-4-piperidy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfeny 1} -4-(trifluórmetyljbenzamid (83mg, 59 %).
‘H NMR (CDCb-d) δ 1,68 (m, 2H), 1,82 (m, 4H), 2,01 (m, 4H), 2,29 (s, 3H), 2,44 (m, 3H), 2,93 (m, 2H), 3,30 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 4,77 (m, 1H), 5,60 s, 2H), 7,33 (m, 2H), 1,79 d, J = 8,19 Hz, 2H), 8,04 (d, J = 8,04 Hz, 2H), 8,37 (s, 1H), 8,66 (m, 2H). LCMS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach,(B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH+ =609,4, Rt - 2,50 minút.
b) Trimaleát Nl-{4-[4-amino-l -(1 -metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-6/|pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -4-(trifluórmetyl)benzamidu
ΛΤ - {4- [4-amino-1 -(1 -metyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl}-4-(trifluórmetyl)benzamid (78 mg, 0,128 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (10 ml) a pridá sa kyselina maleínová (45 mg, 0,387 mmol) v horúcom etylacetáte (1 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín, rozpúšťadlo sa odstráni a pridá sa etylacetát. Pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa trimaleát iVl-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-nr[pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-(trifluórmetyl)benzamidu (115 mg, 94 %).
*H NMR (DMSO-d6) δ 1,87 (m, 2H), 2,24 (m, 4H), 2,79 (s, 3H), 3,01 - 3,57 (bm, 11H), 3,93 (s, 3H), 5,09 (m, 1H), 6,12 (s, 6H), 7,32 (m, 2H), 7,93 (d, J = 8,37 Hz, 2H), 8,04 (d, J = 8,11 Hz,
274
1Η), 8,16 (d, J = 8,18 Hz, 2H), 8,29 (s, 1H), 9,84 (s, 1H). LCMS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: O % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH+ = 609,4, Rt = 2,50 min.
Príklad 213 l-[l-(l//-2-Imidazolylmetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-4-amm
a) Fcrc-butyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]-l-pyrolidínkarboxylát
3-(4-Fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,5 g, 1,648 mmol), tercbutyl-3-{[(4-metylfenyl)sulfonyl]oxy}-l-pyrolidínkarboxylát (1,12 g, 3,30 mmol) a uhličitan cézny (1,07 g, 3,30 mmol) v V,V-dimetylformamide (12 ml) sa zahrieva pri teplote 75 °C cez noc. Reakčná zmes sa naleje do ľadovej vody (100 ml), vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetátu ako mobilnej fázy, čím sa získa /‘erc-butyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl]-l-pyrolidínkarboxylát (0,20 g, 28 %).
‘H NMR (DMSO-dô) δ 1,38 (m, 9H), 2,37 (m 2H), 3,32 (s, 3H), 3,44 (m, 1H), 3,59 (m, 1H), 3,65 (m, IH), 3,75 (m, 1H), 5,44 (m, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,43 (m, 2H), 7,65 (m, 2H), 8,26 (s, 1H).
b) 3-(4-Fenoxyfenyl)-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín
Zmes trifluóroctovej kyseliny a dichlórmetánu (20:80, 8 ml) sa pridá do roztoku tercbuty 1-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfeny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidí n-1 -yl] -1 -pyrolidínkarboxylátu (240 mg, 0,508 mmol) v dichlórmetáne (1 ml) pri teplote 0 °C. Po 15 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín. Zmes sa zahusťuje a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte. Na úpravu pH asi na 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje, čím sa získa 3-(4-fenoxyfenyl)-l-tctrahydro-l//-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín (0,157 mg, 91 %).
275 'H NMR (DMSO-d6) δ 1,99 - 2,21 (m, 2H), 2,94 (m, 1H), 3,04 - 3,23 (m, 3H), 5,31 (m, 1H), 7,14 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (m, 2H), 8,24 (s, 1H).
c) 1 - [1 -(177-2-Imidazolylmetyl)tetrahydro-177-3-pyrolyl]-3-(4-fenoxy fenyl)-177-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-4-amín
-(4-Fenoxyfenyl)-1 -tetrahydro-177-3-py roly 1-177-pyrazolo [3,4-<7]py rimidín-4-amín (100 mg, 5,81 mmol), 177-2-imidazolkarbaldehyd (77 mg, 0,806 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (113 mg, 0,537 mmol) a ľadová kyselina octová (48 mg, 0,806 mmol) sa zmiešajú s 1,2dichlóretánom (4 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 6 hodín, na úpravu pH asi na 9 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (90:10) ako mobilnej fázy, čím sa získa l-[l-(177-2-imidazolylmetyl)tetrahydro-177-3-pyrolyl]-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-ď] pyrimidín-4-amín (100 mg, 83 %).
'H NMR (DMSO-de) δ 2,33 (m, 2H), 2,81 (m, 4H), 3,15 (m, 1H), 3,69 (s, 2H), 5,38 (m, 1H), 6,90 (s, 2H), 7,15 (m, SH), 7,44 (m, 2H), 7,66 (m, 2H), 8,24 (s, 1H). LCMS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH+ 453,4, Rt = 2,17 minút.
Príklad 214
Trimaleát l-[l-(l-metyl-4-piperidyl)tetrahydro-177-3-pyrolyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-4-amínu
a) l-[l-(l-Metyl-4-piperidyl)tetrahydro-177-3-pyrolyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín
-(4-F enoxy fény 1)-1 -tetrahydro-177-3 -pyrolyl-177-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (150 mg, 0,403 mmol), l-metyl-4-piperidón (0,099 ml, 0,806 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (113 mg, 0,537 mmol) a ľadová kyselina octová (48 mg, 0,806 mmol) sa zmiešajú s 1,2dichlóretánom (4 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 6 hodín, na úpravu
276 pH asi na 9 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSCb, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (85:15) ako mobilnej fázy, čím sa získa l-[l-(l-metyl-4-piperidyl)tetrahydro-1H-3-pyrolyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-1H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (148 mg, 78 %).
’H NMR (DMSO-dé) δ 1,42 (m, 2H), 1,81 (m, 2H), 1,92 (m, 2H), 2,15 (m, 1H), 2,26 (m, 2,3H), 2,28 (m, 2H), 2,75 (m, 4H), 2,86 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 5,36 (m, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (m, 2H), 8,24 (s, 1H). LCMS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach,(B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH+ = 470,4, Rt = 2,01.
b) Trimaleát 1 - [l-( 1 -Mety l-4-piperidy ljtetrahydro-1 H-3 -pyroly 1] -3 -(4-fenoxy fény 1)-1 H-pyrazolo[3,4-<f]pyrimidín-4-amínu
- [ 1 -(1 -Metyl-4-piperidy l)tetrahydro-1 Η-3-pyrolyl] -3-(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-c/jpyrimidín-4-amín (148 mg, 0,315 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (20 ml) a pridá sa kyselina maleínová (110 mg, 0,946 mmol) v horúcom etylacetáte (1 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín, pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa trimaleát l-[l-metyl-4-piperidyl)tetrahydro-lH-3-pyrolyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-íŕ]pyrimidín-4-amínu (230 mg, 90 %).
‘H NMR (DMSO-dé) δ 1,81 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,78 (s, 3H), 2,97 - 3,84 (bm, 11H), 5,63 (m, 1H), 6,12 (s, 6H), 7,17 (m, 5H), 7,45 (m, 2H), 7,68 (m, 2H), 8,29 (s, 1H). LCMS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH+ = 470,4, R, = 2,01.
Príklad 215
N\-(4-{4-amino- l-[l-(lH-2-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamid
a) !-[!-(lH-2-Imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín
277
3-Jód-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (0,5 g, 1,45 mmol), ΪΗ-2-imidazolkarbaldehyd (0,42 g, 4,34 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (0,61 g, 2,90 mmol) a ľadová kyselina octová (0,26 g, 4,36 mmol) sa zmiešajú s 1,2-dichlóretánom (20 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 6 hodín a na úpravu pH asi na 9 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSCU, filtruje a zahusťuje, čím sa získa 1-(1-(177-2-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidín-4-amínu (0,57 g, 92 %).
‘H NMR (DMSO-dô) 1,85 (m, 2H), 2,17 (m, 4H), 2,92 (m, 2H), 3,55 (s, 2H), 4,57 (m, 1H), 6,92 (s, 2H), 8,14 (s, 1H).
b) 7erc-butyl-A-(4-{4-amino-l-[l-(l/7-2-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-17/-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)karbamát
1-(1-(17/-2-Imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-3-j ód-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amín (127 mg, 0,299 mmol), fórc-butyl-A-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (115 mg, 0,329 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (21 mg, 0,018 mmol) a uhličitan sodný (76 mg, 0,718 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (3 ml) a vodou (1,5 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa íerc-butyl-A-(4-{4-amino-l-[l-(17/-2-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-c7|pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)karbamát (64 mg, 41 %).
*H NMR (DMSO-dô) δ 1,48 (m, 9H), 1,87 (m, 2H), 2,23 (m, 4H), 2,94 (m, 2H), 3,56 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 4,66 (m, 1H), 6,92 (s, 2H), 7,21 (m, 2H), 7,90 (d, J = 8,14,1 H), 8,04 (s, 1H), 8,22 (s, 1H).
c) 3 -(4-Amino-3 -metoxyfenyl)-1-(1-(1 //-2-imidazolylmetyl)-4-piperidy 1]-177-py razolo[3,4-ť7]pyrimidín-4-amín
Zmes trifluóroctovej kyseliny a dichlórmetánu (20:80, 2 ml) sa pridá do roztoku terc-butyl-A-(4-{4-amino-l-[l-(l//-2-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-177-pyrazolo(3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)karbamátu (55 mg, 0,106 mmol) v dichlórmetáne (0,5 ml) pri teplote 0 °C. Po 15 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po
278 dobu 5 hodín. Zmes sa zahusťuje a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne a na úpravu plí asi na 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSOq, filtruje a zahusťuje, čím sa získa 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[l-(l//-2-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-4-amín (30 mg, 68 %).
‘H NMR (CDCb-d) 2,20 (m, 2H), 2,44 (m, 2H), 3,04 (m. 2H), 3,75 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,01 (s, 2H), 4,80 (m, 1H), 5,58 (bs, 2H), 6,82 (m, 1H), 7,01 (m, 4H), 8,34 (s, 1H).
d) JVl-(4-{4-amino-l-[l-(l/7-2-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamid
3-Fenylpropanoylchlorid (0,011 ml, 0,0715 mmol) sa pridá do roztoku 3-(4-amino-3-metoxyfeny 1)-1 - [ 1 -(1 //-2-imidazolylmetyl)-4-piperidy 1]- 1/7-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amínu (30 mg, 0,0715 mmol) v pyridíne (1,2 ml) pri teplote 0 °C. Po 2 hodinách sa rozpúšťadlo zahusťuje a zvyšok čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu, čím sa získa VI-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 //-2-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-1 /7-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamid (20 mg, 51 %).
'H NMR (CDCb) δ 2,27 (m, 2H), 2,61 (m, 2H), 2,76 (m, 4H), 3,09 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,07 (s, 2H), 4,96 (m, 1H), 5,61 (bs, 2H), 7,06 - 7,33 (m, 10 H), 7,78 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,55 (d, J = 8,15 Hz, 1H). LCMS (Stĺpec Finigan: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100 % B/A v 4 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH+ = 552,5, Rt = 1,83 min.
Príklady 216-221
Amidy odvodené od c/í-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-7//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
Reprezentatívny spôsob prípravy:
K príslušnej karboxylovej kyseline (0,46 mmol) v dichlórmetáne (1,4 ml) sa pridá oxalylchlorid (0,4 ml, 4,6 mmol) a DMF (1 kvapka), liekovky sa uzavrú šeptom a na vyrovnávanie tlaku sa do každého septa zapichne malá ihla. Liekovky sa trepú cez noc na trepačke J-Kem, 50
279 % z roztoku sa oddelí, prebytok oxalylchloridu a dichlórmetánu sa potom odstráni na 12 kanálovej vákuovej pumpe Supelco vo vákuu pod atmosférou dusíka. Surový chlorid kyseliny (0,23 mmol) sa pridá do cA-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (50 mg, 0,11 mmol) v suchom pyridíne (0,6 ml) a mieša pri izbovej teplote cez noc. Výsledné roztoky sa rovno purifikujú preparatívnou HPLC (Hypersil BSD C18, 5 pm, 100 x 21 mm, 0 % - 100 % acetonitril/0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 25,0 ml/min). Výsledné produkty sa ďalej purifikujú vytrepaním medzi dichlórmetán (4 ml) a 1,0 N hydroxid sodný (2 ml) a pretiahnu cez vysoko účinnú extrakčnú diskovú cartridge Empore (C18-SD oktadecyl), čím sa získajú zodpovedajúce produkty. Zlúčeniny sú podrobnejšie opísané na druhej strane listu so zodpovedajúcimi hodnotami LCMS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, C18, 3 pm, 33x4, 6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min) uvedené nižšie.
Názov zlúčeniny R Pr. Mn. (mg) MH+ Rt (min)
VI-(4-{4-amino-1-(4-(4metylpiperazino)cyklohexy 1] -1Hpyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl} -2metoxyfenyl)-3-(2- metoxyfenyl)propánamid 216 29 599,4 2,72
VI -(4- {4-amino-1-(4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l 77pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3 -y 1} -2metoxyfenyl)-3 -(4- metoxyfenyl)propánamid Vo, 217 31 599,4 2,58
280
Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyí)-3 -(3- metoxyfenyljpropánamid 218 30 599,4 2,61
VI-(4-{4-amino-1-[4-(4- metylpiperazino)cyklohexyl]-l 77pyrazolo [3,4 - cZj pyrimidín-3 -y 1} -2metoxyfenyl)-3-(4-metylfenyl)propánamid 0 x 219 33 583,4 2,70
VI-(4-{4-amino-1-[4-(4- metylpiperazinojcyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyl)-3-(4-fluórfenyl)propánamid 0 X TXF 220 27 587,3 2,72
Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo [3,4-t7]pYrimidín-3 -yl} -2metoxyfenyl)-3-(3,4- difluórfenyl)propánamid 0 x 221 34 605,3 2,80
Príklad 221
Cz5-3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-z7]pyrimidín-4-amín
Zmes cz5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (3,41 g, 7,74 mmol) v dimetylétere etylénglykolu (50 ml) sa nechá reagovať s 4-(benzyloxy)fenylboritou kyselinou (1,94 g, 8,51 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,537 g, 0,464 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (1,97 g, 18,58 mmol) vo vode (25 ml). Reakčná zmes sa mieša cez noc pri teplote 85 °C pod atmosférou dusíka. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a do vodnej vrstvy sa pridá etylacetát (300 ml). Vrstvy sa rozdelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (200 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou a soľankou (1 1 zakaždým), sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku. K pevnému podielu sa pridá etylacetát. Veľké množstvo pevného podielu nie je v etylacetáte rozpustné a zmes sa filtruje, čím sa získa 2,95 g (77 %) czs-3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amm.
'H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,217 (s, 1H), 7,592 - 7,570 (m, 2H), 7,504 - 7,483 (m, 2H), 7,440 - 7,369 (m, 3H), 7,206 - 7,184 (m. 2H), 5,186 (s, 2PI), 4,802 - 4,755 (m, 1H), 2,497 281
2,354 (m, 7H), 2,256 - 2,228 (m, 4H), 2,151 (s, 3H), 2,076 - 1,989 (m, 2H), 1,694 - 1,673 (m, 2H), 1,607 - 1,545 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP1S 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 5,128 min (100%).
Príklad 222
C/s-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}fenoxy)-6-[(3-metoxypropyl)amino]benzonitril
Crí-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-čí]pyrimidín-3-yl}fenol
Roztok czT-3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,005 mmol) v absolútnom etanole (25 ml) sa nechá reagovať s paládiom na aktívnom uhlí (10 %) (0,100 g, 0,201 mmol) a mravenčanom amónnym (0,317 g, 5,03 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 2 hodín a podľa TLC východisková látka vymizne. Reakčná zmes sa filtruje cez vrstvu celitu, ktorá sa premyje etanolom (500 ml). Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku. Výsledný pevný podiel sa suší cez noc vo vysokom vákuu, čím sa získa 0,406 g (99 %) czs-4-[4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-cflpyrimidín-3-yl}-fenolu.
*H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,204-8,194 (m, 2H), 7,472-7,437 (m, 2H), 6,947-6,912 (m, 2H), 4,791-4,744 (m, IH), 2,418 (m, 9H), 2,249-2,243 (m, 2H), 2,193 (s, 3H), 2,077-2,050 (m, 2H), 1,688-1,666 (m, 2H), 1,656-1,578 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig 3,5, pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 3,47 min (99 %).
2-fluór-6-[(2-metoxyetyl)amino]benzonitril
Roztok 2,6-difluórbenzonitrilu (3,5 g, 25,16 mmol) v dimetylformamide (50 ml) sa nechá reagovať s 3-metoxypropylamínom (2,24 g, 25,16 mmol) a uhličitanom draselným (6,94 g, 50,32 mmol). Reakčná zmes sa mieša cez noc pod atmosférou dusíka a do reakčného roztoku sa pridá voda (100 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (1,2 1). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (1,5 1), sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku. Surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silika282 gélu s použitím zmesi 7:1 heptán:etylacetát ako eluenta, čím sa získa 3,5 g (68 %) 2-fluór-6- [(2-metoxyety ljaminojbenzoni trií.
’H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 7,48 - 7,39 (m, 1H), 6,64 - 6,48 (m, 2H), 3,45 - 3,31 (m, 2H), 3,30 - 3,20 (m, 5H), 1,85 - 1,75 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP18 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 6,57 min (97 %).
C'/.s-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -yl} fenoxy)-6-[(3-metoxypropyl)amino]benzonitril
Roztok czs-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklotiexyl]-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}fenolu (0,200 g, 0,491 mmol) v dimetylformamide (25 ml) sa nechá reagovať s 2fluór-6-[(2-metoxyetyl)amino]benzonitrilom (0,124 g, 0,589 mmol) a uhličitanom draselným (0,136, 0,982 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 120 °C cez noc pod atmosférou dusíka. Pokiaľ reakcia nie je skončená po 18 hodinách, pridá sa do reakčnej zmesi ďalší podiel 2-fluór-6-[(2-metoxyetyl)amino]benzonitrilu (0,12 g, 0,574 mmol) a zmes sa mieša cez noc. Do reakčnej zmesi sa pridá etylacetát a zmes sa premyje 1 N roztokom hydroxidu sodného (300 ml). Organická vrstva sa premyje vodou a soľankou (300 ml zakaždým), suší nad síranom horečnatým, filtruje a zahusťuje za zníženého tlaku. Produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na silikagélovom stĺpci Supelco s použitím zmesi 20 % metanolu v dichlórmetáne ako eluente, čím sa získa 0,050 g produktu, ktorý obsahuje určitý podiel východiskovej látky. Surový produkt sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 100 x 21 mm stĺpec, 5 pm, 15 % - 100 % gradient acetonitrilu v priebehu 8 minút, celková doba 10 minút, pufer - 50 mM octan amónny, 25 ml/min). Produkt zo stĺpca HPLC sa rozpustí v dichlórmetáne, premyje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného na odstránenie zvyšného octanu amónneho. Vrstvy sa rozdelia s použitím extrakčnej diskovej cartridge Empore, čím sa získa 0,010 g (3 %) cis-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3 -yl} fenoxy)-6[(3-metoxypropyl)amino]benzonitril.
‘H NMR (CDClj, 400 MHz) δ 8,328 (s, 1H), 7,706-7,678 (m, 2H), 7,305-7,211 (m, 4H), 6,4336,411 (d. 1H, J = 8,8 Hz), 4,925-4,904 (m, 1H), 3,574-3,547 (m, 2H), 3,400 (s, 3H), 3,3893,343 (m, 2H), 2,441-2,418 (m, 3H), 2,382 (s, 3H), 2,25-2,10 (m, 2H), 2,031 (s. 3H), 1,9731,944 (m, 2H), 1,851-1,829 (m. 2H), 1,700-1,679 (m, 3H). 1,355-1,200 (m, 5H); HPLC Waters
283
2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 5,185 min (100 %).
Príklad 223
Tris-maleát cA-2-(4- {4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}fenoxy)-6-[(4-metylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu
2-fluór-6-[(4-metylfenyl)sulfanyl]benzonitril
Roztok 2,6-difluórbenzonitrilu (5,18 g, 37,26 mmol) v dimetylfbrmamide (100 ml) sa nechá reagovať sp-tiokrezolom (4,628 g, 37,26 mmol) a uhličitanom draselným (10,28 g, 74,52 mmol). Reakčná zmes sa mieša po dobu 24 hodín pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá voda (150 ml) a etylacetát (250 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (500 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (1 1), sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku. Surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 7:1 heptán:etylacetát, čím sa získa 3,341 g (37 %) 2-fluór-6-[(4-metylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu.
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,66-7,61 (m, 1H), 7,47-7,45 (m, 2H), 7,36-7,32 (m, 3H), 6,83-6,79 (m, 1H), 2,36 (s, 3H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPi8 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 8,04 min (93 %).
Tris-maleát cA-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl}fenoxy)-6-[(4-metylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu
Roztok cA-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}fenolu (0,300 g, 0,736 mmol) v dimetylformamide (20 ml) sa nechá reagovať s 2-fluór-6-[(4-metylfenyl)sulfanyl]benzonitrilom (0,447 g, 1,84 mmol) a uhličitanom draselným (0,203, 1,47 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 120 °C cez noc pod atmosférou dusíka. Do reakčného roztoku sa pridá etylacetát (150 ml) a 1 N roztok hydroxidu sodného. Vrstvy sa oddelia a organická vrstva sa premyje 1 N roztokom hydroxidu sodného (300 ml). Organická vrstva sa premyje vodou a soľankou (400 ml zakaždým), suší nad síranom horečnatým, filtruje a zahusťuje za zníženého tlaku. Surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 10 % metanolu v dichlórmetáne ako mobilnej fázy. Získaná svetlo284 hnedá pevná látka sa trituruje etylacetátom a filtruje, čím sa získa 0,050 g (11 %) czh-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}fenoxy)-6-[(4metylfenyljsulfanyljbenzonitrilu. Horúci roztok crí-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohcxyl]-lH-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}fenoxy)-6-[(4-metylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu (0,050 g, 0,079 mmol) v zmesi etylacetátu a metanolu sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,028 g, 0,240 mmol) v etylacetáte. Prakticky ihned vzniknutý precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka, čím sa získa 0,028 g tris-maleátu crí-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}fenoxy)-6-[(4-metylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu.
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,251 (s, 1H), 7,72-7,70 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,55-7,48 (m, 3H), 7,37-7,33 (m, 4H), 6,96-6,93 (d, 1H, J = 12 Hz), 6,74-6,72 (d, 1 H, J = 8 Hz), 6,18 (s, 6H), 4,85 (m, 1H), 3,15-2,90 (m, 4H), 2,85-2,75 (m, 3H), 2,38 (s, 3H), 2,05-1,99 (m, 2H), 1,90-1,60 (m, 5H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPjg 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 6,359 min (100 %).
Príklad 224
Bis-maleát cz's-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrímidín-3-yl}fenoxy)-6-(2-pyridylsulfanyl)benzonitrilu
Bis-maleát crí-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidí n-3 -y 1} fenoxy) -6-(2 -py ridy lsulfany l)benzonitri lu
Roztok cf's-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}fenolu (0,300 g, 0,736 mmol) v dimetylformamide (20 ml) sa nechá reagovať s 2-fluór-6-(2-pyridylsulfanyl)benzonitrilom (0,424 g, 1,84 mmol) a uhličitanom draselným (0,203 ,1,47 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 120 °C po dobu 2 hodín pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá etylacetát (125 ml) a 1 N roztok hydroxidu sodného (50 ml). Vrstvy sa oddelia a organická vrstva sa premyje 1 N roztokom hydroxidu sodného (300 ml). Organická vrstva sa premyje vodou a soľankou (250 ml zakaždým), suší nad síranom horečnatým, filtruje a zahusťuje za zníženého tlaku. Pevný podiel sa trituruje etylacetátom, čím sa získa 0,310 g (68 %) cz's-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}fenoxy)-6-(2-pyridylsulfanyl)benzonitrilu. Horúci roztok cz'y-2-(4-{4-amino-l-[4285 (4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}fenoxy)-6-(2-pyridylsulfanyl)benzonitrilu (0,310 g, 0,502 mmol) v etanole sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,175 g, 1,503 mmol) v etanole. Ochladením vzniknutý precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka, čím sa získa 0,356 g bis-maleátu cŕs-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenoxy)-6-(2-pyridylsulfanyl)benzonitrilu.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,47-8,46 (d, 1H, J = 4 Hz), 8,26 (s, 1H), 7,79-7,72 (m, 4H), 7,53-7,51 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,38-7,34 (m, 3H), 7,28-7,24 (m, 2H), 6,14 (s, 4H), 4,85 (m, 1H), 3,60-3,10 (m, 7H), 3,1-2,85 (m, 2H), 2,71-2,67 (m, 2H), 2,32-2,27 (m, 3H), 2,05-1,99 (m, 2H), 1,78-1,71 (m, 4H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 5,196 min (98 %).
Príklad 225
7’ra«ó-3-[4-(benzyIoxy)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín
Zmes trans-3 -jód-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 N-py razolo[3,4-rí]py rimidín-4-amínu (1,50 g, 3,4 mmol) v dimetylétere etylénglykolu (100 ml) sa nechá reagovať s 4-(benzyloxy)fenylboritou kyselinou (0,853 g, 3,74 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,236 g, 0,204 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,864 g, 8,16 mmol) vo vode (35 ml). Reakčná zmes sa mieša cez noc pri teplote 85 °C pod atmosférou dusíka. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Do vodnej vrstvy sa pridá etylacetát (100 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (300 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou a soľankou (500 ml zakaždým), sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku, surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu eluovaním 5 % metanolom v dichlórmetáne, 10 % metanolom v dichlórmetáne, 20 % metanolom v dichlórmetáne a potom 30 % metanolom v dichlórmetáne, čím sa získa 0,817 g (49 %) trans-3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-ŕ/3pyrimidín-4-amínu.
286 ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,22 (s, 1H), 7,59-7,57 (m, 2H), 7,53-7,50 (m, 2H), 7,48-7,21 (m, 3H), 7,19-7,17 (d, 2H, 7= 8 Hz), 5,18 (s, 2H), 4,65-4,60 (m, 1H), 2,5 (s, 3H), 2,45-2,25 (m, 5H), 2,15 (s, 3H), 2,04-1,92 (m, 7H), 1,50-1,44 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig 3,5 gm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 5,021 min (95 %).
Príklad 226
Tris-maleát /ratts-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl}fenoxy)-6-[(3-metoxypropyl)amino]benzonitrilu
71ra/i5-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-3-yl}fenol
Roztok /ra/75-3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,806 g, 1,62 mmol) v absolútnom etanole (40 ml) sa nechá reagovať s paládiom na aktívnom uhlí (10 %) (0,161 g, 0,324 mmol) a mravenčanom amónnym (0,511 g, 8,1 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 3 hodín. Táto doba bola podľa TLC nedostatočná na uskutočnenie reakcie, preto sa pridalo paládium na aktívnom uhlí (10 %) (0,161 g, 0,324 mmol) a zmes sa miešala ďalšie hodiny. Reakcia opäť neprebiehala, preto sa pridal ďalší podiel mravenčanu amónneho (0,204 g, 3,24 mmol) a zmes sa mieša cez noc. Reakčná zmes sa filtruje cez vrstvu celitu, ktorá sa premyje etanolom (500 ml). Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku. Výsledný pevný podiel sa trituruje etylacetátom a suší cez noc vo vysokom vákuu, čím sa získa 0,491 g (75 %) /rans-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenolu.
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,74 (s, 1H), 8,2 (s, 1H), 7,46-7,44 (d, 2H, J = 8 Hz), 6,926,90 (d, 2H, J = 8 Hz), 4,64-4,58 (m, 1H), 2,67-2,50 (m, 5H), 2,39-2,34 (m, 4H), 2,17 (s, 3H), 2,06-1,92 (m, 6H), 1,50-1,42 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 gm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 3,337 min (96 %).
Tris-maleát /rm7s-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenoxy)-6-[(3-metoxypropyl)amino]benzonitrilu
287
Roztok /ra«í-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl}fenolu (0,100 g, 0,245 mmol) v dimetylformamide (25 ml) sa nechá reagovať s 2-fluór-6-[(2-metoxyetyl)amino)benzonitrilom (0,128 g, 0,613 mmol) a uhličitanom draselným (0,068, 0,49 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 120 °C cez noc pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá etylacetát a 1 N hydroxid sodný. Organická vrstva sa premyje 1 N roztokom hydroxidu sodného (1 1). Vrstvy sa oddelia a organická vrstva sa premyje vodou a soľankou (500 ml zakaždým), suší nad síranom horečnatým, filtruje a zahusťuje za zníženého tlaku, surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 10 % metanolu v dichlórmetáne ako eluenta, čím sa získa 71 mg (48 %) /ra«í-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl}fenoxy)-6-[(3-metoxypropyl)amino]benzonitril. Horúci roztok Zrans-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3 -yl}fenoxy)-6-[(3-metoxypropyl)amino]benzoniírilu (0,071 g, 0,119 mmol) v etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,042 g, 0,358 mmol) v etylacetáte. Precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa tris-maleát /rarc.v-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í7Jpyrimidín-3-yl}fenoxy)-6-[(3-metoxypropyl)amino]benzonitrilu.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,69-7,67 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,37-7,33 (m, 1H), 7,25-7,23 (d, 2H, J = 8 Hz), 6,53-6,51 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,30-6,29 (m, 1H), 6,19-6,17 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,17 (s, 6H), 4,65-4,64 (m, 1H), 3,45-3,42 (m, 2H), 3,27 (s, 3H), 2,55-2,50 (m, 4H), 2,50-2,30 (m, 5H), 2,33 (br, s, 3H), 2,01-1,96 (m, 8 Hz), 1,84-1,80 (m, 2H), 1,49-1,46 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 5,181 min (95 %).
Príklad 227
Tris-maleát /ra«s-Vl-(4-(4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamidu
4-Bróm-2-metoxyanilín
Roztok o-anízidínu (5,46 g, 44,3 mmol) v dichlórmetáne (100 ml) sa nechá reagovať po častiach s 2,4,4,6-tetrabrom-2,5-cyklohexadién-l-ónom (18,16 g, 44,3 mmol) v priebehu 1 hodiny pri teplote -5 °C, potom sa pridá bromačné činidlo, kúpeľ zo suchého ľadu sa odstráni a
288 reakčná zmes mieša cez noc pri izbovej teplote. Do reakčnej zmesi sa pridá roztok hydroxidu sodného (1 N) a vrstvy sa oddelia. Organická vrstva sa premyje 1 N roztokom hydroxidu sodného (1 lj, premyje vodou (750 ml), suší nad síranom horečnatým, filtruje a zahusťuje za zníženého tlaku, čím sa získa 8,096 g (89 %) 4-bróm-2-metoxyanilinu.
'H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 6,90 (s, 1H), 6,83-6,76 (m, 1H), 6,57-6,55 (m, 1H), 4,86 (s, 2H), 3,76 (s, 3H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP!8 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 5,635 min (89 %).
Al-(4-bróm-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamid
Roztok 4-bróm-2-metoxyanilínu (8,096 g, 40,04 mmol) v dichlórmetáne (100 ml) sa nechá reagovať s trietylamínom (6,06 g, 60,06 mmol), potom s hydrocinamoyl-chloridom (7,08 g, 42,04 mmol). Reakčná zmes sa mieša po dobu 48 hodín pod atmosférou dusíka. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa etylacetát. Precipitát sa filtruje a filtrát sa za zníženého tlaku zahusťuje na pevný podiel, ktorý sa rozpustí v etylacetáte a premyje 5 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej, 5 N roztokom hydroxidu sodného, vodou a soľankou. Surová látka (dve bodky na TLC) sa trituruje metanolom, nerozpustný pevný podiel sa filtruje, čím sa získa 6 g (50 %) M-(4-bróm-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamidu.
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,17 (s, 1H), 7,92-7,90 (m, 1H), 7,30-7,24 (m, 4H), 7,20-7,18 (m, 2H), 7,09-7,07 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,90-2,86 (m, 2H), 2,72-2,69 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 7,491 min (97 %).
3-metoxy-4-[(3-fenylpropanoyl)amino]fenylboritá kyselina
Roztok jVl-(4-bróm-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamidu (1,004 g, 3 mmol) v bezvodom tetrahydrofuráne (30 ml) pri teplote -78 °C sa nechá reagovať s roztokom 1,6 M n-butylítia v hexáne (4,7 ml, 7,5 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote -78 °C po dobu 40 minút. Do tejto reakčnej zmesi sa pridá triizopropylborát (1,05 ml, 4,5 mmol), zmes sa mieša pri teplote 78 °C po dobu 20 minút a kúpeľ sa suchým ľadom a acetónom sa odstráni. Reakčná zmes sa mieša po dobu 4 hodín pri izbovej teplote. Reakcia sa zastaví 2,5 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej (30 ml). Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku a do kyslej vodnej vrstvy sa pridá etylacetát. Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (250 ml). Spojená
289 organická vrstva sa premyje vodou a soľankou, suší nad síranom horečnatým, filtruje a zahusťuje za zníženého tlaku, surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi (1:1) dichlórmetánu a etylacetátu ako eluenta, gradient sa zmenil na 15 % metanol v dichlórmetáne na odstránenie bázického produktu, a čím sa získa 0,209 g (23 %) 3-metoxy-4-[(3-fenylpropanoyl)amino-3-fenylboritej kyseliny.
*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,08 (s, 1H), 7,89-7,95 (m, 3H), 7,45-7,42 (s, 1H), 7,35-7,16 (m, 5H), 3,82 (s, 3H), 2,91-2,81 (m, 2H), 2,74-2,70 (s, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 5,389 min (95 %).
Tris-maleát /raní-771-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-c(]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamidu
Roztok ímns-3-jód-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-177-pyrazolo[3,4-íTJpyrimidín-4-amínu (0,268 g, 0,607 mmol) v dimetylétere etylénglykolu (20 ml) sa nechá reagovať s 3-metoxy-4-[(3-fenylpropanoyl)amino]fenylboritou kyselinou (0,200 g, 0,669 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,042 g, 0,036 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,154, 1,46 mmol) vo vode (10 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 9 hodín pri teplote 85 °C pod atmosférou dusíka. Pridá sa tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,035 g, 0,03 mmol) a zmes sa mieša cez noc (15 hodín). Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa etylacetát. Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (300 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou a soľankou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 10 % metanolu v dichlórmetáne (6 1) ako eluenta. Druhou purifikáciou zrýchlenou chromatografiou na stĺpci Supelco s použitím zmesi 20 % metanolu v dichlórmetáne ako eluenta sa získa 0,132 g (3 8 %) trans-N\ -(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-d]pyrimidm-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamidu. Produkt sa podrobí purifikácii preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 100 x 2lmm stĺpec, 5 pm, 15 % - 100 % gradient acetonitrilu v priebehu 8 minút, celková doba 10 minút, pufer-50 mM octan amónny, 25 ml/min), čím sa získa 0,026 g trans-N\ -(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidm-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamid. Horúci roztok ŕrara-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-6/lpyridín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamidu (0,026 g, 0,046 mmol) v etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleinovej (0,016 g. 0,137 mmol) v etylacetáte. Precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka pri izbovej
290 teplote a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa trismaleát /ran.y-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamidu.
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,25 (s, 1H), 8,23-8,19 (m, 2H), 7,33-7,27 (m, 5H), 7,23-7,18 (m, 2H), 6,17 (s, 6H), 4,72-4,69 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 2,94-2,90 (m, 4H), 2,79-2,75 (m, 5H), 2,67 (s, 4H), 2,10-1,99 (m, 8H), 1,59-1,56 (m, 3H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPjg 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 4,844 min (90 %).
Príklad 228
Cŕs-AT-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-Vl-metyl-3-fenylpropánamid
Vl-(4-bróm-2-metoxyfenyl)-Vl-metyl-3-fenyIpropánamid
Roztok Vl-(4-bróm-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamidu (1,0 g, 3 mmol) v dimetylformamide (20 ml) pri teplote 0 °C sa nechá reagovať s vopred premytým (3x heptánom) hydridom sodným (0,158 g, 6,6 mmol). Reakčná zmes sa mieša po dobu 1 hodiny pri teplote 0 °C. Po kvapkách sa pridá metyl-jodid (0,511 g, 3,6 mmol) a roztok sa mieša po dobu 15 minút pri teplote 0 °C, ľadový kúpeľ sa odstráni a reakčná zmes sa mieša cez noc pri izbovej teplote. Pokiaľ nie je reakcia kompletná, pridá sa ďalší metyljodid (0,511 g, 3,6 mmol) a reakčná zmes mieša cez noc. Reakcia sa zastaví vodou (30 ml). Pridá sa etylacetát, vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou a soľankou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku, surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu elúciou (3:1) heptámetylacetát, čím sa získa 0,729 g (70 %) Vl-(4-bróm-2-metoxyfenyl)-Vl-metyl-3-fenylpropánamid.
’HNMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,330-7,326 (s, 1H), 7,235-7,178 (m, 2H), 7,161-7,116 (m, 3H), 7,058-7,040 (m, 2H), 3,811 (s, 3H), 3,002 (s, 3H), 2,753-2,708 (m, 2H), 2,282-2,204 (m, 1H), 2,138-2,061 (m, 1H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 7,366 min (96 %).
291
Arl-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]'Vl -metyl-3-fenylpropánamid
Roztok 7Vl-(4-bróm-2-metoxyfenyl)-/ťl-metyl-3-fenylpropánamidu (0,729 g, 2,09 mmol) v dimetylformamide (10 ml) sa nechá reagovať s diborón-pinakolesterom (0,637 g, 2,51 mmol), octanom draselným (0,615 g, 6,27 mmol), potom s [l,ľ-bis(difenylfosfinoferocen]dichlórpaládnatým (II) komplexom s dichlórmetánom (1:1) (0,052 g, 0,063 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 26 hodín, potom sa pridá ďalší diborón-pinakolester (0,318 g, 1,254 mmol), octan draselný (0,312 g, 3,135 mmol) a l,ľ-bis(difenylfosfmoferocén]dichlórpaládnatý (II) komplex s dichlórmetánom (1:1) (0,025 g, 0,031 mmol). Reakčná zmes sa mieša po dobu 48 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a suší vo vysokom vákuu. K čiernemu podielu sa pridá dichlórmetán a zmes sa filtruje cez vrstvu celitu a silikagélu. Surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 1:1 etylacetáťheptán ako eluenta, čím sa získa 0,290 g (35 %) ΝΪ-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-/Vl-metyl-3-fenylpropánamidu a 0,148 g (18 %) homokopulovaného bi-produktu, jVl-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2yl)fe-nyl]jVl -metyl-3 -fény lpropánamidu:
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 7,33 (s, 1H), 7,29-7,27 (m, 2H), 7,22-7,13 (m, 5H), 7,06-7,03 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,03-3,00 (m, 3H), 2,75-2,71 (m, 4H), 2,30-2,15 (m, 2H), 2,15-2,05 (m, 2H), 1,30 (s, 12 H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP,g 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 5, 296 min (100 %), homokopulovaný bi-produkt: *H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 7,374 (s, 2H), 7,293-7,276 (m, 4H), 7,258-7,188 (m, 4H), 7,142-7,107 (m, 2H), 7,067-7,049 (m, 4H), 3,921 (s, 6H), 2,992 (s, 6H), 2,756-2,741 (m, 4H), 2,339-2,263 (m, 2H), 2,196-2,070 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 7,910 min (100 %).
CA-Aľl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-Vl-metyl-3-fenylpropánamid
292
Roztok cžs-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/ŕ-pyrazolo[3,4-</]pyrimídín-4-amínu (0,293 g, 0,664 mmol) v dimetylétere etylénglykolu (10 ml) sa nechá reagovať s 3-metoxy-4-[metyl(3-fenylpropanoyl)amino]fenylboritou kyselinou (0,290 g, 0,730 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,046 g, 0,040 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,169 g, 1,59 mmol) vo vode (5 ml). Reakčná zmes sa mieša cez noc pri teplote 85 °C pod atmosférou dusíka. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a do vodnej vrstvy sa pridá etylacetát. Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (150 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou a soľankou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku, surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 4 % metanolu v dichlórmetáne, 8 % metanolu v dichlórmetáne, potom 12 % metanolu v dichlórmetáne ako eluenta. Druhou zrýchlenou chromatografiou na stĺpci Supelco zmesou 30 % metanolu v dichlórmetáne sa získa 0,037 g (10 %) cz'5-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-Vl -metyl-3-fenylpropánamidu.
*H NMR (CDC13, 400 MHz) δ 8,374 (s, 1H), 7,315-7,312 (m, 1H), 7,285-7,213 (m, 3H), 7,1747,087 (m, 4H), 5,795 (br, s, 2H), 4,965-4,922 (m, 1H), 3,892 (s, 3H), 3,213 (s, 3H), 2,948-2,918 (m, 2H), 2,667 (m, 6H), 2,455-2,349 (m, 10H), 2,25-2,15 (m, 2H), 1,867-1,845 (m, 2H), 1,7181,710 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP]8 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 4,947 min (98 %).
Príklad 229
Tris-maleát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidm-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxy fény l)-4-(trifluórmetoxy)benzamidu
7,crc-butyl-V-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-17/-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidín-3-yl-2-metoxyfenyl)karbamát
Roztok 3-jód-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-í71pyrimidín-4-amínu (2,667 g, 6,04 mmol) v dimetylétere etylénglykolu (95 ml) sa nechá reagovať s tercbutyl-V-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátom (2,32 g, 6,64 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,419 g, 0,362 mmol) a roztokom uhličitanu sod293 ného (1,54 g, 14,5 mmol) vo vode (40 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 18 hodín pri teplote 85 °C pod atmosférou dusíka. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku, pridá sa etylacetát (100 ml) a vrstvy sa oddelia. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (1 1). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (1 1) a soľankou (500 ml), sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku, čím sa získa 3,71 g surovej látky. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 20 % metanolu v dichlórmetáne (4 1), 30 % metanolu v dichlórmetáne (1 1), 1:1 metanol v dichlórmetáne (1 1) ako eluenta, čím sa získa 2,305 g (71 %) rerc-butyl-V-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l/7-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl-2-metoxyfenyl)karbamátu.
*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,221 (s, IH), 8,030 (s, IH), 7,921-7,901 (m, IH), 7,2397,195 (m, 2H), 4,652-4,594 (m, IH), 3,890 (s, 3H), 2,988-2,804 (m, 2H), 2,776-2,507 (m, 2H), 2,40-2,21 (m, 5H), 2,190 (s, 3H), 1,898-1,815 (m, 4H), 1,716-1,686 (m, 2H), 1,482-1,446 (m, 1 IH); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 gm, 2,1 x 50 mm; 5 % 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 4,541 min (98 %); TLC (20 % metanolom v dichlórmetán) Rt = 0,4.
3-(4-Amino-3-metoxyfenyl)-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1 //-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-4-amín
Roztok /erc-butyl-V-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl-2-metoxyfenyl)karbamátu (2,298 g, 4,28 mmol) v dichlórmetáne (26 ml) pri teplote 0 °C sa nechá reagovať s roztokom trifluóroctovej kyseliny (9,2 ml) v dichlórmetáne (20 ml). Reakčný roztok sa mieša po dobu 20 minút pri teplote 0 °C, po ktorých sa ľadový kúpeľ odstráni a potom mieša ďalšie 2 hodiny pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok suší vo vysokom vákuu. K oleju sa pridá etylacetát (150 ml) a 5 N roztok kyseliny chlorovodíkovej (100 ml). Vrstvy sa oddelia a organická vrstva sa extrahuje 5N roztokom kyseliny chlorovodíkovej (400 ml). Spojené vodné vrstvy sa ochladia na teplotu 0 °C v ľadovom kúpeli a neutralizujú 50 % roztokom hydroxidu sodného na pH 10. Neutralizovaná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (700 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a zahusťuje za zníženého tlaku, čím sa získa 1,769 g (95 %) 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[l(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu.
'H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,189 (s, IH), 7,048-7,043 (s, IH), 7,004-6,980 (d, d, IH, J = 1 Hz, J = 4 Hz), 6,775-6,755 (m, IH), 5,039 (s, 2H), 4,605-4,565 (m, IH), 3,831 (s, 3H), 2,992294
2,882 (m, 2H), 2,882-2,794 (m, 2H), 2,40-2,15 (m, 5H), 2,149 (s, 3H), 1,876-1,849 (m, 4H), 1,727-1,698 (m, 2H), 1,4861,448 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig 3,5 gm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 2,83 min (99 %).
Tris-maleát Aľl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l/7-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamidu
Roztok 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,450 g, 1,03 mmol) v pyridíne (8 ml) pri teplote -5 °C sa po kvapkách nechá reagovať s roztokom 4-(trifluórmetoxy)-l-benzénkarbonylchloridu (0,231 g, 1,03 mmol) v dichlórmetáne (2,5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri teplote -5 °C po dobu 30 minút, ľadový kúpeľ sa odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 3 hodín, pridá sa 1 N roztok hydroxidu sodného (10 ml) a zmes sa mieša po dobu 1 hodiny. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Pridá sa dichlórmetán (10 ml) a vrstvy sa oddelia na extrakčnej cartridge Empore. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a surová zlúčenina sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 10 % metanolu v dichlórmetáne ako eluenta, čím sa získa 0,430 g (67 %) TVl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidin-4-yl)piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamidu. Horúci roztok /Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidm-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamidu (0,430 g, 0,688 mmol) v etylacetáte (15 ml) sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleinovej (0,240 g, 2,07 mmol) v etylacetáte. Vzniknutý precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa tris-maleát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l 7/-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamidu.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,70 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,11-8,08 (m, 2H), 8,05-8,03 (m, 1H), 7,56-7,54 (m, 2H), 7,34 (m, 1H), 7,31-7,29 (m, 1H), 6,11 (s, 6H), 5,10-5,00 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,54 (m, 4H), 2,99 (m, 2H), 2,79 (s, 3H), 2,22-2,19 (m, 4H), 1,84 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 gm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 4,999 min (100 %).
295
Príklad 230
Bis-maleát 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]piperidino(4-metylpiperazino)metanónu
Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-ammu (0,300 g, 0,780 mmol) v pyridine (5 ml) pri teplote 0 °C sa nechá reagovať s hydrochloridom 4-metyl-1-piperazínkarbony Ichloridu (0,127 g, 0,780 mmol). Reakčná zmes sa mieša po dobu 5 minút pri teplote 0 °C, po ktorých sa ľadový kúpeľ odstráni a reakcia sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa ďalší ekvivalent hydrochloridu 4-metyl-l-piperazínkarbonylchloridu (0,127 g, 0,780 mmol) a v miešaní sa pokračuje ďalšie 2 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. K pevnému podielu sa pridá dichlórmetán (10 ml) a nasýtený roztok uhličitanu sodného (5 ml). Vrstvy sa oddelia na extrakčnej cartridge Empore. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa 0,417 g surovej látky. Surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu elúciou 8 % metanolu v dichlórmetáne, 15 % metanolu v dichlórmetáne, potom 20 % metanolu v dichlórmetáne ako eluenta, čím sa získa 0,178 g (45 %) 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]piperidino(4-metylpiperazino)metanónu. Horúci roztok 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-lyl]piperidino(4-metylpiperazino)metanónu (0,178 g, 0,347 mmol) v etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleinovej (0,081 g, 0,693 mmol) v etylacetáte. Ochladením vzniknutý' precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa 0,124 g bis-maleátu 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-l-yl]piperidino(4-metylpiperazino)metanónu.
'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 8,257 (s, 1H), 7,661-7,639 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 7,441-7,42 (m, 2H), 7,210-7,112 (m, 5H), 6,142 (s, 4H), 4,963-4,908 (m, 1H), 3,784-3,754 (d, 2H, J = 12 Hz), 3,7-3,2 (br, s, 11H), 3,15-3,05 (m, 2H), 2,922 (s, 3H), 2,161-2,138 (m, 2H), 1,989-1,93 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPjg 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 5,159 min (97 %).
296
Príklad 231
Tris-maleát Al -(4- {4-amino-1 -[l-( 1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4-t/Jpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(dimetylamino)benzamidu
Suspenzia 3-(4-amino-3-metoxy fény 1)-1-[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l H-pyrazolo[3,4-íRpyrimidín-4-amínu (0,398 g, 0,912 mmol) v pyridíne (7 ml) pri teplote -5 °C sa nechá reagovať s roztokom 4-(dimetylamino)-l-benzénkarbonylchloridu (0,167 g, 0,912 mmol) v dichlórmetáne (3 ml). Reakčná zmes sa mieša pri teplote -5 °C po dobu 2,5 hodiny a ľadový kúpeľ sa odstráni. Do reakčnej zmesi sa pridá IN roztok hydroxidu sodného (10 ml) a zmes sa mieša po dobu 1 hodiny. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (15 ml). Vrstvy sa oddelia na extrakčnej cartridge Empore. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku, surový pevný podiel sa čistí (2 x) zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 12 % (metanolu s 5 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne ako eluenta, čím sa získa 0,284 g (53 %) Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4-4]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(dirnetylamino)benzamidu. Horúci roztok Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-ylj-lA-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-4-(dimetylamino)benzamidu (0,284 g, 0,487 mmol) v etylacetáte a pár kvapiek etanolu sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,169 g, 1,46 mmol) v etylacetáte. Vzniknutý precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa 0,409 g tris-maleátu Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l A-pyrazolo[3,4-ti]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfcnyl)-4-(dimetylamino)benzamid.
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,054 (s, 1H), 8,278 (s, 1H), 8,215-8,194 (m, 1Η), 7,8517,828 (m, 2H), 7,312-7,308 (m, 1H), 7,288-7,263 (m, 1H), 6,794-6,772 (m, 2H), 6,096 (s, 6H), 5,10-5,00 (m, 1H), 3,951 (s, 3H), 3,538 (s, 4H), 3,061 (s, 8H), 2,215-2,183 (m, 4H), 1,90-1,81 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) R, 4,496 min (98 %).
297
Príklady 232-237
C/s-M-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrinudín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-(trifluórmetyl)benzamid
Crí-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-(trifluórmetoxy)benzamid
Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexylj-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfenyl)-3-(trifluórmetoxy jbenzamid
Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexy 1] -177-pyrazolo [3,4-ď]py rimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Cis-Nl -(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-(trifluórmetyl)benzamid
Amidy odvodené od cA-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-7//-pyrazolo[3,4-í7]pyi'imidín-4-amínu
Komerčne dostupné chloridy kyselín (0,23 mmol) v dichlórmetáne (100 μΐ) sa pridajú k cis-3(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-7//-pyrazolo[3,4-íZJpyri-midín4-amínu (0,050 g, 0,115 mmol) v pyridíne (800 pi). Reakčná zmes sa mieša cez noc. Reakcia sa zastaví IN roztokom hydroxidu sodného. Rozpúšťadlo sa odstráni na 12 kanálovej vákuovej pumpe Supelco vo vákuu pod atmosférou dusíka, zvyšný pevný podiel sa podrobí preparatívnej HPLC (Hypersil C18, stĺpec 100 x 21 mm, 5 pm, 15 % -100 % gradient acetonitrilu v priebehu 8 minút, celková doba -10 minút, pufer 50 mM octanu amónneho, 25 ml/min). K pevným podielom sa pridá dichlórmetán a 1 N roztok hydroxidu sodného. Vrstvy sa oddelia na extrakčnej cartridge Empore, čím sa získajú zodpovedajúce produkty, HPLC Perkin Elmer Pecosphere C18, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100 % -100 % 50 mM octan amónny acetonitril v 4,5 minútach, C36H44N6O3 (581,2), 95 %. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere C18 stĺpec, 3 pm veľkosť
298 častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5
Názov zlúčeniny R Pr. Mn. (mg) MH+ R, (min)
Cis-Nl -(4- {4-amino-l -[4-(4metylpiperazino)cy klohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-y 1}-2- metoxyfenyl)-2-(trifluórmetyl)benzamid o 232 44 (63 %) 609,1 2,957
Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4mety lpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-(trifluórmetoxy)benzamid •v 233 10(14%) 625,5 3,464
Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-3-(trifluórmetoxy)benzamid qó Vf F 234 40 (56 %) 625,1 3,405
Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4metylpiperazinojcyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid ψοί' F 235 47 (65 %) 627,5 3,405
299
Cis-Nl -(4-{4-amino-1-[4-(4mety lpiperazinojcyklohexyl]-1Hpyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3 -y 1} -2metoxyfenyl)-3 -(tri fluórmetyljbenzamid ť 236 41 (59%) 609,3 3,223
CÍ5-/Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4mety lpiperazinojcyklohexyl]-1Hpyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3 -yl} -2pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-3-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid F F 237 48 (67 %) 627,4 3,613
Príklad 238
Cis-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-py razolo [3,4-ď]pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyanilino)-2-fenyl-1 -etanol
Cz's-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amín (0,075 g, 0,000172 mol) a styren-oxid (0,029 g, 0,000172 mol) sa rozpustí v izopropanole (3 ml) a výsledná zmes sa zahrieva k refluxu po dobu 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok purifíkuje preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa cz\-2-(4-{4-amino-1-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyanilino)-2-fenyl-l-etanol (0,005 g, 0,0000089 mol) vo forme belavej pevnej látky.
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 58,18 (s, 1H), 7,36 (m, 5H), 7,06 (s, 1H), 6,91 (d, 1H), 6,36 (d, 1H), 5,55 (d, 1H), 5,20 (s, 1H) 4,78 (m, 1H), 4,43 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,74 (m, 1H), 3,58 (m,lH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetónitrol -0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,97 minút. MS: MH+ 557.
Medziprodukty:
C/s-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-4-amín
7rara,-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidín-4-amín
300
Všeobecný spôsob redukčnej alkylácie cis- alebo /ra«s-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu:
Spôsob prípravy A:
Zmes cis- alebo fra«j-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpipe-razino)cykk)hexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-aminu (alebo samotný cis alebo trans) (1 ekviv.), aldehyd (1 ekviv.), triacetoxyborohydrid sodný (3,4 ekviv.) a octová kyselina (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku. Reakcia sa zastaví nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty.
Spôsob prípravy B:
Po syntéze a purifikácii (spôsob prípravy A) sa zvyšok vyextrahuje dichlórmetánom (1 ml), nanesie na stĺpec Trikonex (7 cm) a premýva dichlórmetánom (5 ml). Požadovaný pás (UV-detekcia) sa oddelí a zlúčenina sa extrahuje zmesou dichlórmetán:metanol:trietylamín = 90:5:5 (10 ml), filtruje a filtrát sa koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa suspenduje v dietyléteri (4 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a suší.
Príklad 239
Acetát cis-3 - {4- [(2-furylmetyl)amino]-3 -metoxyfenyl} -1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy A *H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,06 (br, 2H), 6,77 (d, 1H), 6,38 (d, 1H), 6,32 (d, 1H), 5,65 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H),
2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,65 minút. MS: MH4 517.
301
Príklad 240
CB-5-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyanilino)metyl]-2-furylmetanol-acetát
Spôsob prípravy A 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,06 (br, 2H), 6,77 (d, 1H), 6,23 (d, 1H), 6,19 (d, 1H), 5,63 (t, 1H), 5,18 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,35 (d, 4H), 3,88 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H),
2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H). RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,91 minút. MS: MH+ 547.
Príklad 241
Dimaleát /ra«5-3-{4-[(2-furylmetyl)amino]-3-metoxyfenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
7>zz/«--3-{4-[(2-furylmetyl)amino]-3-metoxyfenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl|-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín sa pripraví podľa spôsobu prípravy A. 7ra«í-3-{4-[(2furylmetyl)amino]-3-metoxyfenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (1 ekviv.) sa rozpustí v etanole (20 ml) a roztok sa zahrieva k refluxu. Naraz sa pridá roztok kyseliny maleínovej 3 ekviv. a v refluxe sa pokračuje ďalších 10 minút. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, precipitát sa spoja filtráciou a sušia. Dimaleát ŕrara-3-{4[(2-furylmetyl)amino]-3-metoxyfenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-4-amínu. *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,06 (br, 2H), 6,77 (d, 1H), 6,38 (d, 1H), 6,32 (d, 1H), 6,16 (s, 4H), 5,65 (t, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,62 minút. MS: MH+ 517.
302
Príklad 242
Dimaleát /rara-3-(3-metoxy-4-[(5-metyl-2-furyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrímidín-4-amínu
Pripraví sa rovnakým spôsobom ako dimaleát írazjs-3-{4-[(2-furylmetyl)amino]-3-metoxyfenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu opísaný vyššie.
lH NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ)δ8,18 (s, 1H), 7,08 (d, 2H), 6,77 (d, 1H), 6,16 (m, 5H), 5,95 (d, 1H), 5,65 (t, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,32 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,73 minút. MS: MH+ 531.
Všeobecný spôsob redukčnej alkylácie cis- alebo ŕra«s-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C: :
Zmes cis- alebo /ran.v-3-(4-amino-íenyl)-l-[4-(4-metylpipcrazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (buď medziprodukt ... alebo ...) (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku. Reakcia sa zastaví nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty.
Príklad 243
Diacetát cz3-2-[2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl}anilino)metyl]fenoxyoctovej kyseliny
303
Spôsob prípravy C:
‘H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ)δ8,18 (s, IH), 7,33 (m, 3H), 7,17 (t, 1H), 6,83 (m, 4H), 4,76 (m,
1H), 4,46 (s, 2H), 4,29 (s, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,78 minút. MS: MH+ 571.
Príklad 244
Diacetát cw-3-{4-[(2-furylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
‘H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ)δ8,18 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,81 (d, 2H), 6,46 (t, 1H), 6,41 (d, 1H), 6,34 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,31 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,29 minút. MS: MH+ 487.
Príklad 245
Diacetát cz5-3-(4-[(5-metyl-2-furyl)metyl]aminofenyl)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 N-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
’H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ)δ8,18 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,79 (d, 2H), 6,43 (t, 1H), 6,21 (d, 1H), 5,98 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,24 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
304
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, l ml/min) R; 12,86 minút.
MS: MH+ 501.
Príklad 246
Diacetát c/s--3-{4-[(3-furylmetyl)arnino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ8,18 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 6,79 (d, 2H), 6,52 (s, 1H), 6,29 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,18 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,17 minút.
MS: MH+488.
Príklad 247
Diacetát cw-3-{4-[(benzo[á]furán-2-ylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,58 (d, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,38 (d, 2H), 7,23 (m, 2H), 6,86 (d, 2H), 6,80 (s, 1H), 6,66 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,52 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H),
2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,00 minút.
305
MS: MH+ 537.
Príklad 248
Diacetát /rans-3-{4-[(2-furylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
'H NMR (DMSO-dé, 400Mh) δ 8,18 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,79 (d, 2H), 6,45 (t, 1H), 6,39 (d, 1H), 6,33 (d, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,96 minút.
MS: MH+ 487.
Všeobecný spôsob redukčnej alkylácie 3-(4-amino-fenyl)-l-[l-(l-metylpiperid-4-yl)piperid-4yl]-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu:
Spôsob prípravy D:
Zmes 3-(4-amino-fenyl)-l-[l-(l-metylpiperid-4-yl)piperid-4-yl]-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amínu (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku. Reakcia sa zastaví nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 gm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty.
Príklad 249
Acetát 3-(4-[(5-metyl-2-furyl)metyl]aminofenyl)-l-[l-(l-metylpiperid-4-yl)piperid-4-yl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-ammu
306
Spôsob prípravy D:
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz)S8,18 (s, 1H), 7,07 (br, 2H), 6,76 (d, 1H), 6,17 (d, 1H), 5,97 (d, 1H), 5,57 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,98 (d, 2H), 2,79 (d, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,25 (br, 5H), 2,15 (s, 3M, 1,91 (m, 7H), 1,69 (d, 2H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 8,97 minút.
MS: Μ1Γ 531.
Príklad 250
Diacetát cis-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-{4-[( 1 -fenyletyl)amino]fenyl}-1 //-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu
a) V-(4-brómfenyl)-V-(I-fenyIetyl)amín
Do roztoku /V-(4-brómfenyl)-V-(l-fenylmetyliden)amínu (1,0 g, 0,00385 mol) v toluéne (30 ml) ochladenom na teplotu -78 °C sa po kvapkách pridá 1,4M roztok metylítia v dietyléterí (5,5 ml), pričom teplota sa udržuje pod -75 °C. Roztok sa ohreje na teplotu -40 °C a mieša pri tejto teplote pod atmosférou dusíka po dobu 3 hodín. Reakcia sa zastaví pridaním vody (po kvapkách) a vrstvy sa oddelia. Organická fáza sa premyje soľankou (50 ml), suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa V-(4-brómfenyl)-V-(l-fenyl-etyl)amín (1,03 g, 0,00373 mol) vo forme belavej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,30 (m, 4H), 7,18 (t, 1H), 7,09 (d, 2H), 6,43 (d, 2H), 6,38 (d, 1H), 4,43 (m, 1H), 1,40 (d, 3H);
TLC (etylacetát/heptán 5,95) Rf 0,27
b) V-(l-fenyletyl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín
Zmes V-(4-brómfenyl)-V-(l-fenyletyl)amínu (0,87 g, 0,00315 mol), diborón-pinakolesteru (0,96 g, 0,00378 mol), [l,ľ-bis(diťenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,077 g, 0,0000945 mol) a octanu draselného (0,93 g, 0,00945 moľ)
307 v Λ/Ν-dimetylformamide (20 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (60 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu a filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (7:93) ako mobilnej fázy. Výsledná frakcia sa koncentruje. Zvyšok sa trituruje v π-heptáne a precipitát spojí filtráciou, čím sa získa A-(l-fenyletyl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,3 g, 0,00093 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 7,30 (m, 6H), 7,18 (t, 1H), 6,58 (d, 1H), 6,46 (d, 2H), 4,51 (m, 1H), 1,40 (d, 3H), 1,27 (s, 12H);
TLC (etylacetát/heptán 5,95) Rf 0,17
c) Diacetát cz's-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-{4-[(l-fenyletyl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo [3,4-d\ pyrimidín-4-amínu
Zmes V-(l -fenyletyl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-amínu (0,070 g, 0,000235 mol), cz's-3-jód-l-[4-(4-metyIpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4c/jpyrimidín-4-amínu (0,080 g, 0,000181 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,012 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,00045 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (5 ml) a vody (3 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát czs-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-{4-[(l-fenyletyl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,062g, 0,0000984 mol) vo forme bielej pevnej látky.
NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,42 (d, 2H), 7,30 (m, 4H), 7,19 (t, 1H), 6,68 (d, 2H), 6,52 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,53 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,44 (d, 3H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,96 minút.
MS:MH+511.
308
Príklad 251 a 252
C/j-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[7]furán-3-ylamino)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo[3,4-<7|pyrimidín-4-amin
Diacetát ŕra«.v-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[Z?]furán-3-ylamino)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/ŕ-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
a) V-(4-brómfenyl)-N (2,3-dihydrobenzo[ó]furán-3-yl)amín
Disperzia (60 %) hydridu sodného v minerálnom oleji (0,145 g, 0,00362 mol) sa pridá do roztoku trimetylsulfoxonium-jodidu (0,8 g, 0,00362 mol) v bezvodom dimetylsulfoxide (10 ml) a výsledná zmes sa mieša pod atmosférou dusíka po dobu 10 minút. Po kvapkách sa pridá roztok 2-{[(4-brómfenyl)imino]metyl}fenolu (0,4 g, 0,00145 mol) v bezvodom dimetylsulfoxide (5 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2,5 hodiny. Potom sa naleje do ľadovo studenej vody (100 ml) a extrahuje dietyléterom (2x50 ml). Spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku, čím sa získa V-(4-brómfenyl)-V-(2,3-dihydrobenzo[7]furán-3-yl)amín (0,321 g, 0,0011 mol) vo forme belavej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,34 (d, 1H), 7,23 (m, 3H), 6,90 (m, 2H), 6,67 (d, 2H), 6,34 (d, 1H), 5,23 (m, 1H), 4,72 (dd, 1H), 4,19 (dd, 1H). TLC (etylacetát/heptán 1:5) Rf 0,52.
b) V-(2,3-dihydrobenzo[ô]furán-3-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljamín
Zmes V-(4-brómfenyl)-V-(2,3-dihydrobenzo[6]furán-3-yl)amínu (1,65 g, 0,00569 mol), diborón-pinakolesteru (1,73 g, 0,00683 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládia v komplexe s dichlórmetánom (1:1) (0,139 g, 0,000171 mol) aoctanu draselného (0,81 g, 0,0171 mol) v VJV-dimetylformamide (35 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (100 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (5:95) ako mobilnej fázy. Výsledná frakcia sa koncentruje. Zvyšok sa trituruje v n-heptáne a precipitát spojí
309 filtráciou, čím sa získa JV-(2,3-dihydrobenzo[á]furán-3-yl)-jV-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,59 g, 0,00176 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ) δ 7,42 (d, 2H), 7,34 (d, 1H), 7,23 (t, 1H), 6,89 (m, 2H), 6,68 (d, 2H), 6,52 (d, 1H), 5,23 (m, 1H), 4,74 (dd, 1H), 4,20 (dd, 1H). TLC (etylacetát/heptán 1:5) Rf 0,37.
c) Ciy-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[h]ťurán-3-ylannno)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-ďpyrimidín-4-amín
Zmes V-(2,3-dihydrobenzo[6]furán-3-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,080 g, 0,000237 mol), cz's-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (0,087 g, 0,000198 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,014 g, 0,000012 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,061 g, 0,000495 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (5 ml) a vody (3 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 25 cm; 10 % 60% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min). Následne sa surový produkt rozpustí v dichlórmetáne, nanesie na stĺpec Trikonex (7 cm) a premýva dichlórmetánom (5 ml). Požadovaný pás sa oddelí, produkt extrahuje zmesou dichlórmetán/metanol/trietylamín v pomere 90:5:5 (10 ml) a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje v dietyléteri a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa c/ä,-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[Z>]furán-3 -ylamino)fenyl]-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-4-amín (0,021 g, 0,00004 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 ΜΗζ) δ 8,23 (s, 1H), 7,40 (m, 3H), 7,25 (t, 1H), 6,90 (m, 4H), 6,50 (d, 1H), 5,35 (m, 1H), 4,80 (m, 2H), 4,28 (dd, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,39 minút.
MS: MH+ 525.
Diacetát Zra«í-3-[4-(2.3-dihydrobenzo[/]furán-3-ylamino)fenyl]-l-[4-(4metylpiperazino)cyklo-hexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
310
Zmes 77-(2,3-dihydrobenzo[6]furán-3-yl)-7/-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0, 089 g, 0,000265 mol), zra«5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7)pyrimidín-4-amínu (0,090 g, 0,000204 mol), tetrakis-(trifenylfosfm)paládia (0,014 g, 0,000012 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,063 g, 0,00051 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (5 ml) a vody (3 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil Cl 8, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát trans-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[7]furán-3-ylamino)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,078 g, 0,000121 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ)δ8,23 (s, 1H), 7,40 (m, 3H), 7,25 (t, IH), 6,90 (m, 4H), 6,50 (d, IH), 5,33 (m, IH), 4,79 (dd, IH), 4,60 (m, IH), 4,28 (dd, IH), 3,1 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,49 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,05 minút.
MS: MH+ 525.
Príklad 253
Di acetát cis-2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cykl ohexy 1] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3 -yl} anilino)-1 -fenyl-1 -etanón
Cr'5'-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperaz.ino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (0,6 g, 0,00148 mol) a bróniacetofenón (0,295 g, 0,00148 mol) sa rozpustia v bezvodom Λ/77-dimetylformamide (30 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 5 minút. Po kvapkách sa pridá Λ/Ν-diizopropyletylamm (0,095 g, 0,00074 mol) a v miešaní pod atmosférou dusíka sa pokračuje po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát crí-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-métylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}anilino)-l-fenyl-l-etanónu (0,410 g, 0,00064 mol) vo forme bielej pevnej látky.
311 'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,99 (d, 2H), 7,75 (t, 1H), 7,61 (t, 2H), 7,29 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,41 (br, 3H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (DeltaPak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,16 minút.
MS:MH+525.
Príklad 254
CN-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3yl} ani-lino)-1 -fenyl-1 -etanol-diacetát
Roztok diacetátu cz'5-2-(4-{4-amino-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-z7]pyrimidín-3-yl}anilino)-l-fenyl-l-etanónu (0,050 g, 0,000077 mol) v bezvodom metanole (5 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C a naraz sa pridá borohydrid sodný (0,018 g, 0,0000477 mol). Zmes sa za miešania pod atmosférou dusíka po dobu 3 hodín nechá ohriať na izbovú teplotu. Reakcia sa zastaví pridaním (po kvapkách) octovej kyseliny. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C 18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa cis-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -1 N-pyrazolo [3,4-dpyrimidín-3-yl} anilino)-l-fenyl-1-etanol-diacetát (0,035 g, 0,000054 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,31 (m, 7H), 6,69 (d, 2H), 5,41 (br, 2H), 5,31 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 14H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetóntril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,34 minút.
MS: MH+ 527.
312
Príklad 255
Acetát cw-A-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidín-3-yl) fenyl) (fenyl)metyl]-A’-benzylmočoviny
C7y-3-{4-[amino(fenyl)metyl]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amín (0,05 g, 0,0001 mol) sa rozpustí v bezvodom pyridíne (1 ml), pridá sa benzylizokyanát (0,013g, 0,0001 mol) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný zvyšok purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 gm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát cw-jV-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl) (fenyl)metylj-jV’-benzylmočoviny (0,015 g, 0,000022 mol) vo forme bielej pevnej látky.
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, IH), 7,62 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,57-7,27 (br, 1 OH), 7,04 (d, IH), 6,41 (t, IH), 6,03 (d, IH), 4,78 (m, IH), 4,25 (d, 2H), 2,70 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,39 minút.
MS: MH+ 630.
Príklad 256
C«-/Vl-[4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzyl]benzamid-acetát
C/s-3-{4-[4-(aminometyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-4-amín (0,051 g, 0,0001 mol) sa rozpustí v bezvodom pyridíne (1 ml), pridá sa benzoylchlorid (0,014g, 0,0001mol) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný zvyšok purifíkuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18. 8 gm, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amónny v
313 priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa c/s-M-[4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzyl]benzamid-acetát (0,042 g, 0,000062 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,07 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (d, 2H), 7,63 (d, 2H), 7,49 (m, 3H), 7,38 (t, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,08 (d, 2H), 4,78 (m, 1H, 4,49 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,62 minút.
MS:MH+617.
Príklad 257
Cis-Ni - [4-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo [3,4-ď|py rimidín-3-yl}fenoxy)benzyl]-l-benzénsulfónamid-acetát
Cis-3-{4- [4-(aminometyl)fenoxy]fenyl} -1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (0,051 g, 0,0001 mol) sa rozpustí v bezvodom pyridíne (1 ml), pridá sa benzénsulfonylchlorid (0,018 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný zvyšok purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa cL-jVl-[4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1] -1 77-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-y 1} fenoxy )benzy 1] -1 -benzénsulfón-amid-acetát (0,042 g, 0,000048 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 ΜΗζ)δ8,23 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,79 (d, 2H), 7,63 (m, 3H), 7,58 (t, 2H), 7,26 (d, 2H), 7,09 (d, 2H), 7,01 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,01 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,31 minút.
MS: MH+ 653.
314
Príklad 258
Acetát cw-V-[4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3.4-d]pyrimidín-3 -y l} ŕenoxy )benzy ľ]-V ’-benzy lmočoviny
CA-3-{4-[4-(amÍnometyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]~l//-pyrazolo[3,4-cfipyrimidín-4-amín (0,051 g, 0,0001 mol) sa rozpustí v bezvodom pyridíne (1 ml), pridá sa benzylizokyanát (0,013 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný zvyšok purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát cw-V-[4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metyl-piperazinú)cyklohe.\yl]-l/7-pyrazoÍo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzylj-.V’-benzy!močoviny (0,019 g, 0,000027 mol) vo forme bielej pevnej látky. ’H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ)δ8,23 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,27 (m, 7H), 7,13 (d, 2H), 7,09 (d, 2H), 6,46 (m, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,24 (d, 4H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,49 minút.
MS: MH+ 646.
Spôsoby prípravy cw-3-{4-[3-(aminometyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu a jeho derivátov sú rovnaké ako spôsoby prípravy cA-3-{4-[4-(aminometyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)-cykiohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu a jeho derivátov.
Príklad 259
Czj-Vl-[3-(4-{4-amíno-I-[4-(4-metyÍpiperazino)cyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď)pyrimídín-3yl}fenoxy)benzyl]benzamid-diacetát
a) CA-3-{4-[3-(aminometyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín
315 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,15 (m, 4H), 6,96 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 3,73 (s, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 9,32 minút.
b) C/s-jVl-[3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzyl]benzamid-diacetát 'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,07 (t, IH), 8,23 (s, 1H), 7,86 (d, 2H), 7,63 (d, 2H), 7,48 (m, 4H), 7,10 (m, 5H), 4,78 (m, IH), 4,49 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,58 minút.
MS:MH+617.
Príklad 260
Cis-Nl - [3-(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-3-yl} fenoxy)benzy 1]-1 -benzénsulfónamid-acetát *H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ8,23 (m, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,62 (m, 5H), 7,31 (m, IH), 7,04 (m, 5H), 4,78 (m, IH), 4,03 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,36 minút.
MS: MH+ 653.
Príklad 261
Acetát cA-A-[3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-ri]pyrimi dín-3 -yl} fenoxy)benzy 1] -N ’-benzy lmočo viny
316 'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ8,23 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,35 (t, 1H), 7,27-7,04 (m, 10H), 6,46 (m, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 4,22 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,44 minút.
MS: MH+ 646.
Príklad 262 a 263
Acetát cz'5-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolán-2-ónu
7>ww-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-pyrimidni-3yl}fenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolán-2-ónu
a) 2-(4-Brómanilino)-l-fenyl-l-etanón
Do roztoku obsahujúceho 4-brómanilín (7,42 g, 0,0431 mol) a 2-brómacetofenón (8,58 g, 0,0431 mol) v jV,jV-dimetylformamide (200 ml) sa po kvapkách pridá Λ/77-diizopropyletylamín a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi dichlórmetán (150 ml) a vodu (100 ml). Organická fáza sa suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa suspenduje v dietyléteri a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa 2-(4-brómanilino)-l-fenyl-l-etanón (10,03 g, 0,0346 mol) vo fonne belavej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,06 (d, 2H), 7,69 (t, 1H), 7,58 (m, 2H), 7,20 (d, 2H), 6,66 (d, 2H), 6,11 (t, 1H), 4,68 (d, 2H). TLC (etylacetát/heptán 1:2) Rf0,39
b) 2-(4-Brómanilino)-l-fenyl-l -etanol
Roztok 2-(4-brómanilino)-l-fenyl-1-etanónu (3,50 g, 0,0121 mol) v bezvodom metanole (200 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C a naraz sa pridá borohydrid sodný (2,28 g, 0,0603 mol). Zmes sa za miešania a pod atmosférou dusíka nechá v priebehu 3 hodín ohriať na izbovú teplotu. Reakcia sa zastaví pridaním (po kvapkách) octovej kyseliny. Reakčná zmes sa koncentruje
317 za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (120 ml) a vodu (85 ml). Organická fáza sa suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa 2-(4-brómanilino)-l-fenyl-1-etanol (3,49 g, 0,0117 mol) vo forme žltého oleja.
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,39 (d, 2H), 7,33 (m, 2H), 7,24 (t, 1H), 7,17 (d, 2H), 5,81 (t, 1H), 5,47 (d, 1H), 4,71 (m, 1H), 3,18 (m, 1H), 3,07 (m, 1H). TLC (etylacetát/heptán 1:2) Rf 0,22.
c) 3-(4-Brómfenyl)-5-fenyl-l ,3-oxazolán-2-ón
Roztok obsahujúci 2-(4-brómanilino)-l-fenyl-1 -etanol (0,74 g, 0,00253 mol), N,N-diizopropyletylamín (1,01 g, 0,00786 mol) a 7V,W-dimetylaminopyridín (0,092 g, 0,00076 mol) v bezvodom dichlórmetáne (32 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C. Po kvapkách sa pridá roztok trifosgénu (0,38 g, 0,00127 mol) v bezvodom dichlórmetáne (8 ml). Reakčná zmes sa za miešania a pod atmosférou dusíka v priebehu 18 hodín pomaly ohreje až na izbovú teplotu. Organická fáza sa premyje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode (40 ml), soľankou (30 ml) a suší síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa 3-(4-brómfenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolán-2-ón (0,62 g, 0,00192 mol) vo forme bielej pevnej látky. ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,58 (s, 4H), 7,47 (m, 5H), 5,77 (m, 1H), 4,46 (t, 1H), 4,01 (t, 1H). TLC (etylacetát/heptán 1:2) Rf 0,28.
d) 5-Fenyl-3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-oxazolán-2-ón
Zmes 3-(4-brómfenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolán-2-ónu (0,6 g, 0,00189 mol), diborónpinakolesteru (0,58 g, 0,00226 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,046 g, 0,000057 mol) a octanu draselného (0,56 g, 0,0057 mol) v λ/V-dimetylformamide (20 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (100 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/tt-heptán (1:5) ako mobilnej fázy. Výsledná frakcia sa koncentruje. Zvyšok sa trituruje v n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou, čím sa získa 5-fenyl-3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-oxazolán-2-ón (0,19 g, 0,00052 mol) vo forme bielej pevnej látky.
318 ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,69 (d, 2H), 7,62 (d, 2H), 7,47 (m, 5H), 5,77 (m, 1H), 4,46 (t, 1H), 4,01 (t, 1H), 1,27 (s, 12H). TLC (etylacetát/heptán 1:2) Rf 0,19.
e) Acetát c/5-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolán-2-ónu
Zmes 5-fenyl-3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-oxazolán-2-ónu (0,085 g, 0,000233 mol), c«-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-<7)pyrimidín-4-ammu (0,086 g, 0,000194 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0, 013 g, 0,000012 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,060 g, 0,000485 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (5 ml) a vody (3 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát cw-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-cf]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolán-2-ónu (0,074g, 0,000121 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,79 (d, 2H), 7,68 (d, 2H), 7,47 (m, 5H), 5,82 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,57 (t, 1H), 4,09 (t, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,84 minút.
MS: MH+ 553.
f) 2ratt£-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolán-2-ón
Zlúčenina sa pripraví syntetickým spôsobom podobným príprave acetátu cw-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolán-2-ónu.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 08,23 (s, 1H), 7,79 (d, 2H), 7,68 (d, 2H), 7,47 (m, 5H), 5,82 (t, 1H), 4,64 (m. 1H), 4,57 (t. 1H). 4,09 (t, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,49 (m, 2H);
319
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,72 minút. MS: MH+ 553.
Príklad 264
Diacetát /ra«5-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yí}fenyI)-5-benzyl-l,3-oxazolán-2-ónu
a) 1 -(4-Brómanilino)-3-fenyl-2-propanol
Zmes 4-brómanilínu (1,75 g, 0,0102 mol) a 2,3-epoxypropylbenzénu (1,77 g, 0,0132 mol) v metanole (40 ml) sa zahrieva k refluxu po dobu 16 hodín. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa l-(4-brómanilino)-3-fenyl-2-propanol (2,2 g, 0,00719 mol) vo forme bezfarebného oleja.
’H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ 7,33 (m, 7H), 6,50 (d, 2H, 5,76 (t, 1H), 4,83 (d, 1H), 3,82 (m, 1H), 2,98 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 2,78 (dd, 1H), 2,67 (dd, 1H). TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf 0,29.
b) 5-Benzyl-3-(4-brómfenyl)-l,3-oxazolán-2-ón
Roztok obsahujúci l-(4-brómanilino)-3-fenyl-2-propanol (1,90 g, 0,00621 mol), V, V-diizopropyletylamín (2,48 g, 0,0193 mol) a jV,V-dimetylaminopyridín (0,152 g, 0,00124 mol) v bezvodom dichlórmetáne (64 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C. Po kvapkách sa pridá roztok trifosgénu (0,92 g, 0,0031 mol) v bezvodom dichlórmetáne (16 ml). Reakčná zmes za miešania a pod atmosférou dusíka v priebehu 18 hodín pomaly ohreje až na izbovú teplotu. Organická fáza sa premyje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode (70 ml), soľankou (60 ml) a suší síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/wheptán (1:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa 5-benzyl-3-(4-brómfenyl)-l,3-oxazolán-2-ón (1,25 g, 0,00377 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,54 (d, 2H), 7,47 (d, 2H), 7,27 (m, 5H), 4,95 (m, 1H), 4,12 (t, 1H), 3,78 (t, 1H), 3,07 (d. 2H). TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf 0,37.
320
c) 5-Benzyl-3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-oxazolán-2-ón
Zmes 5-benzyl-3-(4-brómfenyl)-l,3-oxazolán-2-ónu (1,25 g, 0,00377 mol), diborónpinakolesteru (1,15 g, 0,00452 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,092 g, 0,000114 mol) a octanu draselného (1,12 g, 0,0113 mol) v Λ',/V-dimetylformamide (30 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (100 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:5) ako mobilnej fázy. Výsledná frakcia sa koncentruje. Zvyšok sa trituruje v n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou, čím sa získa 5-benzyl-3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-oxazolán-2-ón (1,03 g, 0,0027 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 7,65 (d, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,27 (m, 5H), 4,95 (m, IH), 4,12 (t, IH), 3,78 (t, IH), 3,07 (d, 2H), 1,28 (s, 12H). TLC (etylacetát/heptán 1: 3) Rf 0,25.
d) Diacetát Zraz75-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-benzyl-l,3-oxazolán-2-ónu
Zmes 5-benzyl-3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-oxazolán-2-ónu (0,110 g, 0,00029 mol), Zrans-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-£Í)pyrimidín-4-amínu (0,080 g, 0,000181 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,012 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,00045 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (5 ml) a vody (3 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitríl-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát trans-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-1 //-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl }fenyl)-5 -benzyl-l,3-oxazolán-2-ónu (0,049g, 0,000072 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, IH), 7,65 (m, 4H), 7,32 (m, 5H), 5,02 (m, IH), 4,64 (m, IH), 4.19 (t, IH), 3,85 (t, IH), 3,11 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,17 (s, 6H), 2,05 (m, 6H), 1.91 (s, 6H) 1,49 (m, 2H);
321
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,13 minút.
MS: MH+ 567.
Príklad 265
Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4-<7]py rimidín-3 -yl} fény l)-2-mety 1-2-fenylpropánamid-diacetát
Roztok obsahujúci cí3-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amín (0,1 g, 0,000246 mol), α,α-dimetylfenyloctovú kyselinu (0,045 g, 0,000271 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (0,071 g, 0,000369 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,0037 g, 0,000271 mol) v bezvodom A/N-dimetylformamide (5 ml) sa mieša po dobu 5 minút. Po kvapkách sa pridá Ä/zV-diizopropyletylamín (0,098 g, 0,00076 mol) a v miešaní pod atmosférou dusíka sa pokračuje po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa cz3-jVl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}fenyl)-2-metyl-2-fenylpropánamid-diacetát (0,014 g, 0,000021 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,29 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,82 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,38 (m, 4H), 7,27 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), l,59(s,6H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (DeltaPakC 18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,59 minút.
MS: MH+ 553.
322
Príklad 266 a 267
Acetát cw-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-lN-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-3-yl}anilino)-4-oxo-2-fenylbutánovej kyseliny
Acetát cA-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-ó/jpyrimidín-3-yl}anilino)-4-oxo-3-fenylbutánovej kyseliny
a) 1 -(4-Brómfenyl)-3-fenyl-2,5-pyrolidíndión
Roztok 4-brómanilínu (5,48 g, 0,0318 mol) a anhydridu fenylsukcínovej kyseliny (5,89 g, 0,0334 mol) v bezvodom benzéne (80 ml) sa zahrieva k refluxu po dobu 1,5 hodiny. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje za zníženého tlaku. Ku zvyšku acetylchloridu (60 ml) sa pridá roztok zahrievaný k refluxu po dobu 1,5 hodiny. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje dietyléterom a suší, čím sa získa l-(4-brómfenyl)-3-fenyl-2,5-pyrolidíndión (8,7 g, 0,0264 mol) vo forme belavej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 7,72 (d, 2H), 7,40 (m, 7H), 4,33 (dd, 1H), 3,33 (dd, 1H), 2,94 (dd, 1H);
TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,34.
b) 3-Fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-2,5-pyrolidíndión
Zmes l-(4-brómfenyl)-3-fenyl-2,5-pyrolidíndíónu (2, 00 g, 0,00602 mol), diborónpinakolesteru (1,85 g, 0,00727 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,148 g, 0,000182 mol) a octanu draselného (1,784 g, 0,0182 mol) v N,N-dimetylformamide (40 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (100 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:4) ako mobilnej fázy. Výsledná frakcia sa koncentruje. Zvyšok sa trituruje v n-heptáne a precipitát spojí filtráciou, čím sa získa 3-fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenylj-2,5pyrolidíndión (0,78 g, 0,00207 mol) vo forme bielej pevnej látky.
323 ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 7,79 (d, 2H), 7,40 (m, 7H), 4,33 (dd, IH), 3,33 (dd, IH), 2,97 (dd, IH), 1,31 (s, 12H);
TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,21.
c) Acetát cz's-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}anilino)-4-oxo-2-fenylbutánovej kyseliny a acetát czs-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}anilino)-4-oxo-3-fenylbutánovej kyseliny
Zmes 3-fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-2,5-pyrolidíndiónu (0,35 g, 0,00093 mol), cz's-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,34 g, 0,000773 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,053 g, 0,000046 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,24 g, 0,00193 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (14 ml) a vody (7 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát cz'5-4-(4-{4-amino-l- [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1] -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3 -yl} anilino)-4-oxo-2-feny 1butánovej kyseliny (0,150 g, 0,000233 mol) a acetát cžs-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}anilino)-4-oxo-3-fenylbutánovej kyseliny (0,11 g, 0,000171 mol) oba vo forme biele pevných látok.
Acetát cz's-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}anilino)-4-oxo-2-fenylbutánovej kyseliny ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,37 (s, IH), 8,21 (s, IH), 7,73 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,25 (m, 5H), 4,76 (m, IH), 4,00 (m, IH), 3,12 (dd, IH), 2,71 (dd, IH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,54 minút.
MS: MH+ 583.
Acetát czs-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-y 1} ani lino)-4-oxo-3 -fénylbutánovej kyseliny
324 ’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,46 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,78 (d, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,41 (d, 5H), 7,31 (t, 2H), 7,24 (t, IH), 4,76 (m, 1H), 4,16 (m, lH),3,08(dd, 1H), 2,51 (dd, 1H), 2,52,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 11,11 minút.
MS: MH+ 583.
Príklad 268
C/.v-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-3-yl}fenyl)
-(fenyl)metylkyanid
a) 2-Fenyl-2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]acetonitril
Zmes (4-brómfenyl)(fenyl)metylkyanidu (0,604 g, 0,00222 mol), diborón-pinakolesteru (0,677 g, 0,00266 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,054 g, 0,000067 mol) a octanu draselného (0,52 g, 0,00666 mol) v NN-dimetylformamide (30 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (80 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:9) ako mobilnej fázy. Výsledná frakcia sa koncentruje. Zvyšok sa trituruje v «-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou, čím sa získa 2-fenyl-2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]acetonitril (0,110 g, 0,000345 mol) vo forme bielej pevnej látky.
]HNMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ7,67 (d, 2H), 7,40 (m, 7H), 5,87 (s, IM, 1,31 (s, 12H);
TLC (etylacetát/heptán 1:9) Rf0,18.
b) Cŕy-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<yjpyrimidín-3-yl}fenyl)(fenyl)metylkyanid
325
Zmes 2-fenyl-2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]acetonitrilu (0,120 g, 0,000376 mol), cA-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,083 g, 0,000188 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,013 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,058 g, 0,00047 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (5 ml) a vody (3 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa c/s-(4-{4-amino-1-[4-(4-mety lpiperazino) cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-cQpyrimidín-3 -yl} fenyl)(fenyl)metyl-kyanid (0,025g, 0,0000494 mol) vo forme belavej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,58 (d, 2H), 7,47 (m, 4H), 7,38 (t, 1H), 5,93 (s, 1H), 4,76 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 12,95 minút.
MS: MH+ 507.
Príklad 269
Diacetát cA-A2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3 -y 1 )feny 1) -1,3 -benzoxazol-2-amínu
a) N-( 1, 3 -benzoxazol-2-yl)-A-(4-brómfenyl)amín
4-Brómanilín (3,9 g, 0,0227 mol) sa pridá do roztoku 2-chlórbenzoxazolu (1,16 g, 0,00755 mol) v xyléne a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 100 °C po dobu 2 hodín, po ktorých sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (50 ml) a vodu (50 ml). Organická fáza sa suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje v n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa jV-(l,3-benzoxazol-2-yl)-A-(4-brómfenyl)amín (1,48 g, 0,00512 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,78 (s, 1H), 7,74 (d, 2H). 7,57 (d, 2H), 7,50 (m, 2H), 7,23 (t, 1H), 7,16 (t, 1H). TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf 0,34.
326
b) 7V-(1,3-benzoxazol-2-yl)-JV-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín
Zmes Ä/-(l,3-benzoxazo!-2-yl)-N-(4-brómfenyl)amínu (0,800 g, 0,00277 mol), diborónpinakolesteru (0,84 g, 0,00332 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,068 g, 0,000083 mol) a octanu draselného (0,81 g, 0,0083 mol) v VN-dimetylformamide (20 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (100 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:5) ako mobilnej fázy. Výsledná frakcia sa koncentruje. Zvyšok sa trituruje v n-heptáne a precipitát spojí filtráciou, čím sa získa Ar-(l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljamín (0,59 g, 0,00176 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,80 (s, 1H), 7,78 (d, 2H), 7,68 (d, 2H), 7,50 (d, 2H), 7,23 (t, 1H), 7,16 (t, 1H), 1,26 (s, 12H). TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf 0,29.
c) Diacetát c/5-Az2-(4-{4-ammo-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl} fenyl)-l,3-benzoxazol-2-amínu
Zmes ,V-(l,3-benzoxazol-2-yl)-?vr-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljamínu (0,073 g, 0,000217 mol), cz'5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amínu (0, 080 g, 0,000181 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,012 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,000453 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (5 ml) a vody (3 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát cis-N2-(4-4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lR-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-3-ylfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,082 g, 0,000128 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,66 (d, 2H), 7,51 (m, 2H), 7,25 (t, 1H), 7,15 (t, 1H), 4,78 (m, 1H). 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).
327
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,80 minút.
MS: MH+ 524.
Medziprodukt A:
2-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzaldehyd
Zmes 2-(4-jódfenoxy)benzaldehydu (1,31 g, 4,03 mmol, 1 ekviv.), PdCl2(dppf)2 (0,092 g, 0,13 mmol, 0,03 ekviv.), diborónpinakolesteru (1,23 g, 4,84 mmol, 1,2 ekviv.) a octanu draselného (1,19 g, 12,1 mmol, 3,0 ekviv.) v DMF (15 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 5,5 hodiny. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v CH2CI2 (50 ml) a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, premyje CH2CI2 (100 ml) a Et2O (100 ml), filtrát sa koncentruje, čím sa získa hnedý olej, ktorý sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 500 ml 5 % MeOH/CH2Cl2), čím sa získa 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzaldehyd vo forme červenohnedého oleja (0,875 g, 2,70 mmol):
‘H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δ10,30 (1H, s), 7,87-7,89 (1H, m), 7,69-7,75 (3H, m), 7,367,38 (1H, m), 7,05-7,22 (3H, m) a 1,29 (12H, s).
Príklad 270
2-[4-(4-Amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)fenoxy]-acetamid
Zmes 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl)fenolu (0,050 g, 0,17 mmol, 1,0 ekviv.), dioxánu (1,7 ml) a hydridu sodného (60 %, 0,010 g, 0,17 mmol, 1,0 ekviv.) sa mieša pri izbovej teplote po dobu 10 minút. Pridá sa jódacetamín (0,031 g, 0,17 mmol, 1,0 ekviv.). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 30 minút a zahrieva pri teplote 110 °C po dobu 3,5 hodiny. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou premytím CH2C12 (5 ml) a EtOAc (5 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku za vzniku žltého pevného podielu, ktorý sa trituruje z EtOAc, čím sa získa 2[(4328
-amino-1-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)oxy]-acetamid vo forme béžovej pevnej látky (0,045 g, 0,13 mmol): 'H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δ 8,22 (1H, s), 7,60 (2H, d), 7,12 (2H, d), 5,20-5,25 (1H, m), 4,50 (2H, s), 2,02-2,10 (4H, m), 1,87-1,90 (2H, m), 1,68-1,71 (2H, m);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,38 minút. MS: MH+ 353.
Príklad 271
Metyl-5-[4-(4-amino-l-cyklopentyl-í//-pyrazolo[3,4-ä()pyrimidm-3-yl)fenoxy]-2-furoát
Zmes 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)fenolu (0,107 g, 0,362 mmol, 1,0 ekviv.), DMSO (0,5 ml), hydridu sodného (60 %, 0,030 g, 0,72 mmol, 2,0 ekviv.) a metyl-5-nitro-2-furoátu (0,062 g, 0,36 mmol, 1,0 ekviv.) sa zahrieva pri teplote 90 °C po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu, naleje do ľadovej vody (10 ml) a extrahuje (3x) CH2CI2 (50 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa premyjú 5 % vodným KOH (50 ml) a organická vrstva sa suší nad MgSO4, filtruje a koncentruje, čím sa získa červený olej, ktorý sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 300 ml 5 % MeOH/CH2CI2), čím sa získa metyl-5-[4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidín-3yl)fenoxy]-2-furoát vo forme červenej pevnej látky (0,070 g, 0,17 mmol):
’H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δ 8,24 (1H, s), 7,70-7,74 (2H, m), 7,35-7,39 (3H, m), 6,9 (2H, bs), 6,02 (1H, s), 5,22-5,26 (1H, m), 3,79 (3H, s), 2,01-2,11 (4H, m), 1,88-1,91 (2H, m), 1,671,71(211, m).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 18,17 minút. MS: MH+ 420.
Príklad 272
5-[4-(4-Amino-1-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)fenoxy]-2-furová kyselina
329
Zmes metyl-5-[4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl)fenoxy]-2-furoátu (0,030 g, 0,072 mmol, 1 ekviv.) a hydroxidu sodného (0,020 g, 0,50 mmol, 7 ekviv.) v 50 % EtOH vo vode (1 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 6 hodín. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a zriedi vodou (10 ml). Zmes sa neutralizuje pridaním 1 M HCI a extrahuje dvoma podielmi CH2CI2 (20 ml zakaždým) a dvoma podielmi EtOAc (20 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa sušia nad MgSO4, filtrujú sa a koncentrujú, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 5 gm, 300 Á, 25 cm; 50 % 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa svetlo hnedá pevná látka (0,009 g, 0, 022 mmol):
‘H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 13,0 (1H, bs), 8,23 (1H, s), 7,74 (2H, d), 7,35 (2H, d), 7,29 (1H, s), 6,03 (1H, s), 5,21-5,28 (1H, m), 2,01-2,11 (4H, m), 1,89-1,90 (2H, m), 1,68-1,71 (2H, m).
RP-HPLC (Hypercil 08, 5 gm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min) Rt 6,45 minút. MS: MH+ 406.
Príklad 273
-Cyklopentyl-3 - [4-(3-tieny loxy)fenyl] -1 //-pyrazolo [3,4-č/|pyrimidín-4-amín
Zmes 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)fenolu (0,212 g, 0,718 mmol, 1 ekviv.), uhličitanu draselného (0,060 g, 0,43 mmol, 0,6 ekviv.), práškovej medi (0,015 g, 0,24 mmol, 0,33 ekviv.) a 3-brómtiofénu (0,09 ml, 0,9 mmol, 1,3 ekviv.) v DMF (7,2 ml) sa zahrieva pri teplote 153°C po dobu 24 hodín. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu, koncentruje a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin Cl 8, 8 gm, 300 Á. 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa l-cyklopentyl-3-[4-(3tienyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ú]pyrimidín-4-amín vo forme svetlo hnedej pevnej látky (0,060 g, 0,16 mmol):
330 'H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δ 9,77 (1H, s), 8,46 (1H. s), 8,41 (1H, s), 7,73-7,74 (1H, m), 7,57 (2H, d, J = 4,5 Hz), 7,46-7,48 (1H, m), 7,15 (1H, d, J = 5,2 Hz), 6,96 (2H, d, J = 8,6 Hz), 5,24-5,30 (1H, m), 2,03-2,05 (4H, m), 1,89-1,93 (2H, m), 1,70-1,72 (2H, m).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 18, 76 minút. MS: MH+ 378.
Príklad 274
Monoacetát cA-3-{3-[(benzo[6]fúrán-2-ylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-1 H-pyrazoIo [3,4-<7]pyrimidín-4-amínu
Zmes cA-3-(3-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-(7]pyrimidín-4-amínu (0,107 g, 0,263 mmol, 1 ekviv.), ľadovej kyseliny octovej (0,06 ml, 1,0 mmol, 3,8 ekviv.), benzo[6]fúrán-2-karboxaldehydu (0,1 g, 0,3 mmol, 1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (0, 212 g, 1,0 mmol, 3,8 ekviv.) a dichlóretánu (2 ml) sa mieša pri izbovej teplote po dobu 4,5 hodiny. Pridá sa vodný uhličitan sodný. Organická vrstva sa oddelí a vodná vrstva sa extrahuje dvoma podielmi CH2CI2 (10 ml zakaždým). Spojené organické extrakty sa sušia nad MgSO4, filtrujú sa a koncentrujú, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa monoacetát cw-3-{3-[(benzo[6]furán-2-ylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (0,017 g, 0,031 mmol):
'H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δ 8,22 (1H, s), 7,51-7,58 (211, m), 7,22-7,28 (3H, m), 6,98 (1H, s), 6,79-6,84 (2H, m), 6,59-6,62 (1H, m), 4,76-4,81 (1H, m), 4,50 (2H, d, J = 5,6 Hz), 2,19-2,24 (14H, m), 2,05-2,07 (2H, m), 1,91 (3H, s), 1,60-1,75 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril -0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,99 minút. MS: MH+537.
331
Príklad 275
Cz.y-3-{3-[di(2-furylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín
Zmes c«'-3-(3-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/y-pyrazolo[3,4-<Y]pyrimidín-4-amínu (0,120 g, 0,296 mmol, 1 ekviv.), furfuralu (0,03 ml, 0,3 mmol, 1,1 ekviv.), ľadovej kyseliny octovej (0,07 ml, 1,1 mmol, 3,8 ekviv.) a triacetoxyborohydridu sodného (0,314 g, 1,48 mmol, 5,0 ekviv.) v dichlóretáne (2 ml) sa mieša pri izbovej teplote po dobu 60 hodín. Pridá sa nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (5 ml). Organická vrstva sa oddelí a vodná vrstva sa extrahuje dvoma podielmi CH2CI2 (10 ml zakaždým). Organické extrakty sa sušia nad MgSO4, filtrujú sa a koncentrujú, čím sa získa žltý olej. Purifikáciou chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 200 ml 5 % MeOH/CPLCh, 100 ml 10 % MeOH/CPLCh, a 300 ml 10:20:70 % MeOH/EtaN/CFLCL) sa získa czs-3-{3-[di(2-furylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amín vo forme bielej pevnej látky (0,051 g, 0,10 mmol):
’H NMR (dé-DMSO, 400 ΜΗζ): δ 8,22 (1H, s), 7,60 (2H, s), 7,31-7,35 (1H, m), 7,19 (1H, s), 7,00 (1H, d, J = 8,4 Hz), 6,93 (1H, d, J = 7,6 Hz), 6,39 (2H, s), 6,32 (2H, s), 4,77-4,80 (1H, m), 4,60 (4H, s), 2,23-2,39 (11H, m), 2,16 (3H, s), 2,05-2,07 (2H, m), 1,59-1,71 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 14,52 minút. MS: MH+ 567.
Príklad 276
Cis-N- [2-(3- {4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3 -y 1} fenoxy )benzyl]trifluórmetánsulfónamid-diacetát
Do zmesi cz3-3-4-[2-(aminometyl)fenoxy]fenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,018 g, 0,035 mmol, 1 ekviv.) a pyridínu (0,4 ml) pri teplote 0 °C sa po kvapkách v priebehu 20 sekúnd pridá CF3SO2CI (0,05 ml, 0,04 mmol, 1,2 ekviv.). Reakčná zmes sa pomaly nechá ohriať na izbovú teplotu a mieša po dobu 3 hodín. Rozpúšťadlo sa zahusťuje za zníženého tlaku a olejovitý žltý zvyšok sa čistí preparatívnou RPHPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v prie332 behu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa czs-/V-[2-(3-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzyl]trifluórmetánsulfónamid-diacetát (0,004 g, 0,006 mmol):
‘H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (1H, s), 7,61-7,67 (3H, m), 7,25-7,30 (2H, m), 7,197,23 (2H, m), 6,96-6,98 (1H, m), 4,77-4,81 (1H, m), 4,25 (2H, s), 2,09-2,54 (14H, m), 2,052,08 (2H, m), 1,91 (6H, s), 1,57-1,74 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,15 minút. MS: MH+ 645.
Príklad 277
Cz.v-2-(3-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-y 1} fenoxy)benzaldehyd
Zmes cz5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu (0,970 g, 2,20 mmol, 1 ekviv.), 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxyjbenzaldehydu (0,842 g, 2,60 mmol, 1,2 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,186 g, 0,180 mmol, 0,08 ekviv.), DME (9 ml) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,655 g, 5,30 mmol, 2,4 ekviv.) vo vode (7 ml) sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 7 hodín, potom nechá vychladnúť na izbovú teplotu. Pridá sa nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (50 ml). Roztok sa extrahuje EtOAc (25 ml). Organický extrakt sa suší nad MgSO4, filtruje a koncentruje, čím sa získa svetlohnedá pevná látka. Trituráciou z Et2O (35 ml) sa získa cz‘s-2-(3-{4amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ú]pyrimidín-3-yl}fenoxy)benzaldehyd vo forme belavej pevnej látky (0,830 g, 1,62 mmol):
'H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 10,42 (1H, s), 8,24 (1H, s), 7,89 (1H, d, J = 7, 7 Hz), 7,697,71 (3H, m), 7,30-7,36 (1H, m), 7,29 (2H, d, J = 6,3 Hz), 7,16 (1H, d, J = 8, 2 Hz), 4,794,81 (1H, m), 2,18-2,55 (11H, m), 2,17 (3H, s), 2.05-2,09 (2H, m), 1,56-1,71 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,56 minút. MS: MH+ 512.
333
Príklad 278
Cis-3 - {3- [2-( 177-2-imidazoly l)fenoxy] fenyl} -1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amín
Zmes cz's-2-(3-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-i7]pyrimidm-3-yl}fenoxy)benzaldehydu (0,102 g, 0,199 mmol, 1 ekviv.),-glyoxalu (0,12 ml, 0,99 mmol, 5 ekviv.) a uhličitanu amónneho (0,078 g, 0,99 mmol, 5 ekviv.) v metanole (1 ml) sa mieša pri izbovej teplote po dobu 16 hodín. Pridá sa ďalší glyoxal (0,20 ml, 1,6 mmol, 8, 3 ekviv.) a uhličitan amónny (0,130 g, 1,66 mmol, 8,4 ekviv.) a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 24 hodín. Surová reakčná zmes sa čistí preparativnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 gm, 300 Á, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa cz's-3-{3-[2-(1 77-2-imidazolyl)fenoxy] fenyl} -1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-ri] py rimidín-4-amín vo forme hnedej pevnej látky (0,010 g, 0,018 mmol):
'H NMR (d6 DMSO, 400 MHz): δΗ 8,23 (1H, s), 8,11-8,13 (1H, dd, J = 7,7,1,9 Hz), 7,95 (1H, s), 7,66 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,34-7,39 (1H, m), 7,23-7,27 (3H, m), 7,07-7,19 (3H, m), 4,77-4,82 (1H, m), 2,16-2,56 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05-2,11 (2H, m), 1,55-1,71 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,43 minút. MS: MH+ 550.
Príklad 279
Cis-N\ -(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-2-anilinoacetamid
Zmes 3 -(4-amino-3 -metoxyfenyl)-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-z7]pyrimidín-4-amínu (0,151 g, 0,356 mmol, 1 ekviv.), uhličitanu draselného (0,098 g, 0,711 mmol, 2 ekviv.) a chlóracetylchloridu (0,04 ml, 0,5 mmol, 1,5 ekviv.) v DMF (1,5 ml) sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 minút, potom sa pridá anilín (0,32 ml, 3,5 mmol, 10 ekviv.). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 72 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparativnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa od334 stráni vo vákuu a vodná zmes sa premyje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (10 ml) a potom extrahuje CH2C12 (25 ml). Organický extrakt sa suší nad MgSCU, filtruje a koncentruje, čím sa získa cw-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-íZjpyrimidin-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-anilinoacetamid vo forme žltej pevnej látky (0,010 g, 0,017 mmol):
'H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,30 (1H, s), 8,35-8,38 (1H, m), 8,21 (1H, s), 7,21-7,23 (2H, m), 7,12-7,16 (2H, m), 6,64-6,66 (3H, m), 6,31-6,34 (1H, m), 4,77-4,81 (1H, m), 3,90 (2H, d, J = 6,0 Hz), 3,82 (3H, s), 2,21-2,51 (11H, m), 2,16 (3H, s), 2,06-2,08 (2H, m), 1,55-1,70 (4H, m);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 12,37 minút. MS: MH+ 570.
Príklad 280 (2S)-3-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-l-yl]-l-azetanyl}propán-1,2-diol
Do roztoku l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,05 g, 0,00014 mol) sa pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka pridá (Ä)-(+)-g]ycidol (0,05 M v izopropanole, 2,8 ml, 0,00014 mol). Zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 3 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi hydroxid amónny/metanol/dichlórmetán (2:7:91), potom hydroxid amónny/metanol/dichlórmetán (2:10:88) ako mobilnej fázy, čím sa získa (2S)-3-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/ŕ-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidín-l-yI]-l-azetanyI}propán-l,2-diol (0,023 g, 0,000053 mol).
'H NMR (Chloroform-r/, 400 MHz) δ 8,31 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,90 (br, 2H), 5,60 (m, 1H), 3,97 (m, 3H), 3,88 (m, 1H), 3,75 (m, 2H), 3,61 (m, 1H), 2,80 (m, 2H).
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % v priebehu 10 minút s 0,1 M octanom amónnym, 1 ml/min) Rt 8,6 minút.
335
MS: ΜΗ* 433
Príklad 281 (2/()-3 - {3 -[4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ŕ/Jpyrimidín-1 -yl]-1 -azetanyl} propán-1,2-diol
Spôsob prípravy je rovnaký ako pre (25)-3-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-ylj-l-azetanylpropán-l,2-diol, pričom sa použije (S)-(-)-glycidol.
‘H NMR (Chloroform-rí, 400 MHz) δ 8,36 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,39 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,65 (br, 3H), 4,00 (m, 3H), 3,90 (m, IH), 3,75 (m, 2H), 3,62 (m, IH), 2,85 (m, 2H).
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 gm, 250 x 4,6 mm; 25 % -100 % v priebehu 10 minút s 0,1 M octanom amónnym, 1 ml/min) Rt 8,76 minút.
MS: MH +433.
Príklad 282
7erc-butyl-4-(3 -[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-1 -yl]-1 -azetanylmety l)-4-hy droxy-1 -piperidínkarboxylát
a) 7erc-butyl-l-oxa-6-azaspiro[2.5]oktán-6-karboxylát
Zmes trimetylsulfoxonium-jodídu (2,62 g, 0,012 mol) a hydridu sodného (0,44 g, 0,011 mol) v bezvodom dimetylsulfoxide (30 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 30 minút. Reakčná zmes sa ochladí na teplotu 10 °C a pridá sa /erc-butyl-4-oxo-lpiperidínkarboxylát (2,0 g, 0,010 mol) v bezvodom dimetylsulfoxide (10 ml). Reakčná zmes sa ohreje na izbovú teplotu a mieša po dobu 1,5 hodiny. Zmes sa naleje do nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho (60 ml). Vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (2 x 100 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou (1 x 60 ml) a soľankou (1 x 50 ml) a sušia nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa /erc-butyl-1 -oxa-6-azaspiro[2.5]oktán-6-karboxylát (2,12 g, 0,0099 mol).
336 'H NMR (Chloroform-ď, 400 MHz) δ 3,74 (br, 2H), 3,44 (m, 2H), 2,69 (s, 2H), 1,80 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,46 (m, 2H). TLC (etylacetát/dichlórmetán = 20:80) Rf 0,57.
Terc-butyl-4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolof3,4-ď]pyrimidín-l-yl]-l-azetanylmetyl)-4-hydroxy-l-piperidínkarboxylát
Do zmesi l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,4 g, 0,0011 mol) v izopropanole (40 ml) sa pridá terc-butyl-l-oxa-6-azaspiro[2.5]oktán-6-karboxylát (0,27 g, 0,0013 mol) pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 3,5 hodiny. Pridá sa ďalší terc-butyl-l-oxa-6-azaspiro[2.5]oktán-6-karboxylát (0,13 g, 0,00061 mol) a zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 7 hodín. Pridá sa ďalší ŕerc-butyl-l-oxa-6-azaspiro[2.5]oktán-6-karboxylát (0,13 g, 0,00061 mol) a zmes sa mieša pri teplote 60 °C po dobu 18 hodín, potom pri teplote 80 °C po dobu 8 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa suspenduje vo vode (50 ml) a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou (1 x 50 ml) a soľankou (1 x 50 ml) a sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi metanol/dichlórmetán (5:95), potom metanol/dichlórmetán (10:90) ako mobilnej fázy, čím sa získa ŕerc-butyl-4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1 -ylj-1 -azetanylmetyl)-4-hydroxy-1 -piperidínkarboxylát (0,243 g, 0,000425 mol).
’H NMR (Chloroform-ď, 400 MHz) δ 8,38 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,17 (m, 3H), 7,10 (d, 2H), 5,78 (m, IH), 5,48 (br, 2H), 4,34 (br, 2H), 4,20 (br, 2H), 3,89 (br, 2H), 3,18 (br, 2H), 2,91 (br, 2H), 1,60 (br, 2H), (s, 9H).
RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % v priebehu 10 minút s 0,1 M octanom amónnym, 1 ml/min) Rt 10,7 minút.
MS: MH+ 572
Príklad 283
4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyImetyl)-4-piperidinol
337
Do roztoku terc-butyl-4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl]-l-azetanylmetyl)-4-hydroxy-l-piperidínkarboxylátu (0,090 g, 0,00016 mol) v dichlórmetáne (2 ml) sa pomaly pridá 20 % roztok trifluóroctovej kyseliny v dichlórmetáne (10 ml) pri teplote 0 °C pod atmosférou dusíka. Zmes sa ohreje na izbovú teplotu a mieša po dobu 4 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, na úpravu pH na 11 sa pri teplote 0 °C pridá vodný roztok 5 N hydroxidu sodného a vodná fáza sa extrahuje dichlórmetánom (2x30 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou (1 x 60 ml) a soľankou (1 x 60 ml) a sušia nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa 4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í(]pyrimidín-l-yl]-l-azetanylmetyl)-4-piperidinol (0,045 g, 0,000096 mol). ’H NMR (Chloroform-rí, 400 MHz) δ 8,37 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,42 (t, 2H), 7,11 (m, 3H), 7,00 (d, 2H), 5,64 (m, 1H), 5,43 (br, 2H), 4,02 (m, 4H), 3,28 (br, 1H), 3,10 (m, 4H), 2,67 (s, 2H), 1,67 (m, 4H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,5 minút. MS: MH+ 472.
Príklad 284
4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lJ7-pyrazolo[3,4-ífjpyrimidín-l-yl]-l-azetanylmetyl)-l-metyl4-piperidinol
Zmes 4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanylmetyl)-4-piperidinolu (0,035 g, 0,000074 mol) a formaldehydu (0,006 ml, 37 % vo vode, 0,000082 mol) v dichlóretáne (4 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 1 hodiny. Do zmesi sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (0,022 g, 0,000104 mol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 18 hodín. Pridajú sa molekulové sitá (0,05 g, 3 Á, 4 - 8 mesh) a ďalší formaldehyd (0,006 ml, 37 % roztok vo vode, 0,000082 mol) a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí na RP-HPLC (Hypersil HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % 100 % v priebehu 25 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa 4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-djpyrimidín-1 -yl]-1 -azetanylmetyl)-1 -metyl-4-piperidinol (0,020 g, 0,000041 mol).
338 'H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ)δ8,63 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,42 (t, 2H), 7,17 (m, 5H), 5,42 (m, 1H), 3,88 (m, 2H), 3,67 (m, 2H), 2,37 (m, 2H), 2,25 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 1,90 (s, 2H), 1,50 (m, 4H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,5 minút.
MS: MH+ 486
Všeobecný spôsob:
Zmes l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,06 g, 0,00017 mol, 1 ekviv.), zodpovedajúceho chlóracetamidu (0,0005 mol, 3 ekviv.) a Λ’,Α-diizopropyletylamínu (0,033 g, 0,00026 mol, 1,5 ekviv.) v acetonitrilu (2,5 ml) sa mieša pri teplote 75 °C pod atmosférou dusíka po dobu 3 hodín. Zmes sa naleje do vody (10 ml) a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (2x10 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou (1 x 10 ml) a soľankou (1x10 ml) a sušia nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 25 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa zodpovedajúci amid.
Príklad 285 jV-metyl-2-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/í-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}acetamid
a) Chlóracetamid: N-metyl-2-chlóracetamid *H NMR (Chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,35 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,80 (br, 2H), 5,60 (m, 1H), 4,00 (m, 4H), 3,37 (s, 2H), 2,85 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,2 minút.
MS: MH+430.
339
Príklad 286
N, vV-dimety 1-2- {3- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-1 -y 1] -1 -azetanyl} acetamid
b) Chlóracetamid: A/yV-dimetyl-2-chlóracetamid 'H NMR (Chloroform-í/, 400 ΜΗζ)δ8,33 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,16 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,86 (br, 2H), 5,67 (m, 1H), 4,15 (m, 2H), 3,90 (m, 2H), 3,57 (s, 2H), 3,00 (s, 3H), 2,90 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,3 minút.
MS: MH+ 444.
Príklad 287 yV-zzopropyl-2-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl {acetamid
c) Chlóracetamid: 7V-zzopropyl-2-chlóracetamid ‘H NMR (Chloroform-t/, 400 ΜΗζ)δ8,36 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,09 (d, 2H), 6,90 (br, 1H), 5,66 (m, 3H), 4,11 (m, 1H), 3,99 (m, 4H), 3,39 (s, 2H), 1,19 (d, 6H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,8 minút.
MS: MH+ 458.
340
Príklad 288
V-(3-hydroxypropyl)-2-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-£Í]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl} acetamid
d) Chlóracetamid: V-(3-hydroxypropyl)-2-chlóracetamid ’H NMR (Chloroform-7, 400 MHz) δ 8,31 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (d, 2H), 5,99 (br, 2H), 5,62 (m, 1H), 3,95 (m, 4H), 3,78 (m, 2H), 3,63 (m, 2H), 3,40 (s, 2H), 1,71 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,9 minút.
MS: MH+ 474.
Príklad 289
Etyl-2-[(2-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}acetyl)amino] acetát (4037150)
e) Chlóracetamid: etyl-2-[(2-chlóracetyl)amino]acetát ’H NMR (Chloroform-rf, 400 MHz) δ 8,37 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,65 (br, 1H), 7,40 (m, 2H),
7,18 (m, 3H), 7,09 (d, 2H), 5,67 (m, 1H), 5,56 (br, 2H), 4,23 (m. 2H), 4,10 (m, 4H), 4,00 (m, 2H), 3,47 (s, 2H), 1,29 (t, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,9 minút.
MS: Μ1Γ 502.
341
Príklad 290
N-benzy 1-2- { 3 -[4-amino-3 -(4-fenoxyfeny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-1 -y 1] -1 -azetanyl} acetamid
f) Chlóracetamid: N-benzyl-2-chlóracetamid *H NMR (Chloroform-ď, 400 MHz)Ô8,25 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,33 (m, SH), 7,16 (m, 5H), 5,72 (m, 1H), 4,49 (d, 2H), 3,97 (m, 4H), 3,44 (s, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,7 minút.
MS: MH+ 506.
Príklad 291
N, N-metoxymety 1-2- {3 -[4-amino-3 -(4-fenoxyfeny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-1 -y 1] -1 -azetanyl} acetamid
g) Chlóracetamid: N,N-metoxymetyl-2-chlóracetamid ‘H NMR (Chloroform-J, 400 MHz) δ 8,37 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,71 (m, 1H), 5,48 (br, 2H), 4,16 (m, 2H), 3,92 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,69 (s, 2H),
3,18 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,5 minút.
MS:MH+ 460.
342
Príklad 292
2-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidm-l-yl]-l-azetanyl }-l-morfolino-l-etanón
h) Chlóracetamid: 2-chIór-l-morfolino-l-etanón ‘H NMR (Chloroform-eť, 400 MHz) δ 8,36 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,71 (m, 3H), 4,13 (m, 2H), 3,93 (m, 2H), 3,69 (br, 4H), 3,60 (br, 4H), 3,51 (s, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,3 minút.
MS: MH+ 486.
Príklad 293
V-(3-metyl-5-izoxazolyl)-2-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]-1 -azetanyl} acetamid
i) Chlóracetamid: V-(3-metyl-5-izoxazolyl)-2-chlóracetamid ‘H NMR (Chloroform-ď, 400 ΜΗζ)δ10,10 (br, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,40 (m, 2H),
7,19 (m, 3 H), 7,09 (d, 2H), 6,26 (s, 1H), 5,65 (m, 1H), 4,07 (m, 4H), 3,54 (s, 2H), 2,28 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,3 minút.
MS: MH+ 497
343
Príklad 294
- {3 -[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 77-pyrazoIo [3,4-</]pyrimidín-1 -yl] -1 -azetanyl} -2-( 177-4-imidazolyl)-1 -etanón
Zmes l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amínu (0,05 g, 0,00014 mol), 2-(177-4-imidazolyl)acetátu sodného (0,0026 g, 0,000175 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (0,0034 g, 0,000175 mol), A/N-diizopropyletylamínu (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodom A/N-dimetylformamide (6 ml) sa mieša po dobu 18 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-(177-4-imidazolyl)-l-etanón (0,018 g, 0,00004 mol). JH NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 11,90 (br, IH), 8,27 (s, IH), 7,71 (d, 2H), 7,53 (s, IH), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 6,92 (br, IH), 5,73 (m, IH), 4,74 (m, IH), 4,61 (m, IH), 4,42 (m, 2H), 3,42 (s, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,0 minút.
MS: MH* 467.
Príklad 295
- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-1 -yl]-1 -azetanyl} -3 -(177-4-imidazolyl)-1 -propanón
Zmes l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,10 g,
0,00028 mol), 3-(177-4-imidazolyl) propánovej kyseliny (0,050 g, 0,00035 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (0,0068 g, 0,00035 mol), /V./V-diizopropyletylamínu (0,068 g, 0,00053 mol) a 1-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,038 g, 0,00028 mol) v bezvodom ACV-dimetylformamide (13 ml) sa mieša po dobu 18 hodín pri izbovej teplote. Roz344 púšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (5 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazoIo[3,4-</]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-3-(lN-4-imidazolyl)-l-propanón (0,040 g, 0,00008 mol).
’H NMR (Chlorofórm-d, 400 MHz) δ 8,96 (s, 1H), 7,77 (br, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,17 (m, 3H), 7,08 (m, 2H), 6,90 (br, 1H), 5,78 (m, 1H), 5,56 (br, 2H), 4,76 (m, 1H), 4,57 (m, 3H), 2,98 (m, 2H), 2,55 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,0 minút.
MS: MH+ 481.
Všeobecný spôsob:
Do zmesi l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-ammu (0,05 g, 0,00014 mol, 1 ekviv.) a uhličitanu draselného (0,039 g, 0,00028 mol, 2 ekviv.) v bezvodom W-dimetylformamide sa pri izbovej teplote pridá chlóracetylchlorid (0,031 g, 0,00028 mol, 2 ekviv.). Pred pridaním amínu (0,0014 mol, 10 ekviv.) sa zmes mieša po dobu 10 minút. Zmes sa mieša pri izbovej teplote od 1,5 hodiny do 2 dnov v závislosti na amínu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21, 1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získajú zodpovedajúci acetamidy.
Príklad 296 l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-[(2-hydroxyetyl)amino]-l -etanón
a) Amín: 2-amino-l-etanol
345 ‘H NMR (Chloroform-ri, 400 MHz) δ 8,37 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,08 (m, 2H), 5,83 (m, 1H), 5,57 (br, 2H), 4,82 (m, 1H), 4,65 (m, 3H), 3,71 (m, 2H), 3,45 (m, 2H), 2,92 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,7 minút.
MS: MH+ 460.
Príklad 297
-{3-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-1 -yl]-1 -azetanyl} -2-[(2-metoxyetyl)amino]-1 -etanón
b) Amín: 2-metoxy-1-etánamín 'H NMR (Chloroform-J, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H),
7,10 (m, 2H), 5,83 (m, 1H), 5,54 (br, 2H), 4,81 (m, 1H), 4,64 (m, 2H), 4,56 (m, 1H), 3,55 (t, 2H), 3,41 (s, 2H), 3,37 (s, 3H), 2,88 (t, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,0 minút.
MS: MH+ 474.
Príklad 298 l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-[(3-hydroxypropyl)amino] -1 -etanón
c) Amín: 3-amino-1-propanol lH NMR (Chloroform-ri, 400 ΜΗζ)δ8,37 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H),
7,10 (m, 2H), 5.86 (m, 1H), 5,54 (br, 2H), 4,81 (m, 1H), 4,64 (m, 3H), 3,87 (m, 2H), 3,48 (m, 2H). 3,01 (m,2H), 1,83 (m, 2H).
346
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,7 minút.
MS: MH+474.
Príklad 299 l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-[(2,3-dihydroxypropyl)amino]-1 -etanón
d) Amín: 3-amino-l,2-propandiol 'H NMR (DMS0-d6, 400 ΜΗζ)δ8,27 (s, 1H), 7,72 (d, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,16 (m, 5H), 5,73 (m, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,59 (m, 2H), 4,37 (m, 2H), 3,53 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 3,22 (m, 2H), 2,59 (m, 1H), 2,45 (m, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,6 minút.
MS: MH+ 490.
Príklad 300
- {3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyI)-l H-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-1 -yl]-1 -azetanyl} -2[(tetrahydro-2-furanylmetyl)amino]-l-etanón
e) Amín: tetrahydro-2-furanylmetánamín ’H NMR (Chloroform-ď, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H),
7,10 (m, 2H), 5,81 (m, 1H), 5,54 (br, 2H), 4,80 (m, 1H), 4,64 (m, 2H), 4.57 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,87 (m, 1H), 3,76 (m, 1H), 3,42 (m, 2H), 2,83 (m, 1H), 2,74 (m, 1H), 2,00 (m, 1H), 1,89 (m, 2H), 1,57 (m, 1H).
347
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,3 minút.
MS: MH+ 500.
Príklad 301
f) Amín: 2-piperidino-l-etánamín
- { 3- [4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-cf] py rimidín-1 -y 1]-1 /azetany 1} -2- [(2-piperidinoetyl)amino] -1 -etanón ’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 5H), 5,73 (m, 1H), 4,60 (m, 2H), 4,36 (m, 2H), 3,24 (d, 2H), 2,60 (m, 2H), 2,36 (m, 6H), 1,49 (m, 4H), 1,36 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,4 minút.
MS: MH+ 527.
Príklad 302
g) Amín: N,N,N-trimetyl-l,2-etándiamín l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-[[2-(dimetylamino)etyl](metyl)amino]-l -etanón ’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,17 (m, 5H), 5,75 (m, 1H), 4,70 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 3,22 (d, 2H), 2,75 (br, 2H), 2,61 (m, 2H), 2,47 (s, 6H), 2,29 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,4 minút.
348
MS:MH+501.
Príklad 303
h) Amín: A,V-dimetyl-l,2-etándiamín
- {3-[4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-1 -y 1]-1 -azetanyl} -2- {[2-(dimetylamino)etyl]amino} -1 -etanón-acetát ’H NMR (Chloroform-^ 400 MHz) δ 8,33 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 3H),
7,11 (m, 2H), 5,81 (br, 3H), 4,81 (m, IH), 4,59 (m, 3H), 3,38 (s, 2H), 2,89 (t, 2H), 2,68 (t, 2H), 2,43 (s, 6H), 2,05 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,0 minút.
MS: MH+ 487.
Príklad 304
i) Amín: /V-metyl-V-(l-metyl-4-piperidyl)amín l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimÍdín-l-yl]-l/azetanyl}-2-[metyl(l-mety l-4-piperidyl)amino]-1 -etanón 'H NMR (Chloroform-rí, 400 ΜΗζ)δ8,36 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H),
7,10 (m, 2H), 5,76 (m, IH), 5,58 (br, 2H), 4,87 (m, IH), 4,79 (m, IH), 4,62 (m, IH), 4,55 (m, IH), 3,27 (m, 2H), 2,97 (br, 2H), 2,51 (br, IH), 2,35 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,04 (br, 2H), 1,79 (br,2H), 1,65 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,1 minút.
MS: MH+ 527.
349
Príklad 305
j) Amín: 2-morfolino-l-etánamín
- {3- [4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-1 -yl]-1 -azetanyl }-2-[(2-morfolinoetyl)amino]-1 -etanón ’H NMR (Chloroform-ri, 400 ΜΗζ)δ8,38 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,19 (m, 3H), 7,09 (m, 2H), 5,86 (m, 1H), 5,50 (br, 2H), 4,82 (m, 1H), 4,67 (m, 3H), 3,77 (m, 4H), 3,50 (s, 2H), 2,92 (t, 2H), 2,66 (t, 2H), 2,57 (br, 4H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,1 minút.
MS: MH+ 529.
Príklad 306
k) Amín: 3-morfolino-l-propanamín l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-[(3-morfolinopropy l)amino]-1 -etanón 'H NMR (Chloroform-ri, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H),
7,10 (m, 2H), 5,85 (m, 1H), 5,54 (br, 2H), 4,81 (m, 1H), 4,64 (m, 3H), 3,74 (m, 4H), 3,40 (s, 2H), 2,83 (br, 2H), 2,52 (br, 6H), 1,80 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8, 9 minút.
MS: MH+ 543.
350
Príklad 307
1) Amín: 3-(1 A-l-imidazolyl)-l-propánamín
- {3-[4-amino-3-(4-fenoxyhenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1 -yl]-1 -azetanyl} -2- {[3-(l H-1 -imidazoyl)propyl]amino} -1 -etanón 'H NMR (Chloroform-ď, 400 ΜΗζ)δ8,37 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,40 (m, 3H). 7,15 (m, 3H), 7.08 (m. 3H), 6,93 (s, IH), 5.82 (m, IH), 5,62 (br, 2H), 4,75 (m, IH), 4,62 (m, 3H). 4,07 (t, 2H), 3,27 (s, 2H), 2,58 (t, 2H), 1.97 (m. 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18. 5 pm. 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,7 minút.
MS: Mkf 524.
Príklad 308
m) Amín: l-(3-aminopropvl)-2-pyrolidinón l-{3-[(2-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-«7]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-oxoetyl )amino]propy 1} -2-pyrolidinón 'H NMR (Chloroform-d, 400 ΜΗζ)δ8,38 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H). 7,18 (m, 3H),
7,10 (m, 2H), 5,82 (m, IH). 5,54 (br, 2H), 4,81 (m, IH), 4,64 (m, 3H), 3,42 (m, 6H), 2,79 (t, 2H), 2,42 (t, 2H), 2,07 (m. 2H), 1,86 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,0 minút.
MS: MH+ 541.
351
Príklad 309
n) Amín: 4-piperidinol
- {3- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-1 -yl]-1 -azetanyl} -2-(4-hydroxypiperidino)-1-etanón ’H NMR (Chloroform-ίή 400 MHz) δ 8,38 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,09 (m, 2H), 5,77 (m, 1H), 5,57 (br, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,63 (m, 1H), 4,56 (m, IH), 3,73 (br, 1H), 3,18 (s, 2H), 2,91 (br, 2H), 2,38 (br, 2H), 1,95 (br, 2H), 1,62 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,9 minút.
MS: MH+ 500.
Príklad 310
o) Amín: 4-piperidylmetanol l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l#-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-[4-(hydroxymetyl)piperidino]-1 -etanón
H NMR (Chloroform-c/, 400 ΜΗζ)δ8,36 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,78 (m, IH), 5,64 (br, 2H), 4,89 (m, IH), 4,81 (m, IH), 4,62 (m, IH), 4,55 (m, IH), 3,49 (m, 2H), 3,13 (s, 2H), 2,97 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 1,49 (br, IH), 1,30 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,0 minút.
MS: ΜΡΓ514.
352
Príklad 311
p) Amín: l-(2-metoxyetyl)piperazín l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-[4-(2-metoxyetyl)piperidino]-1 -etanón ‘H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ)δ8,26 (s, 1H), 7,71 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 5H), 5,69 (m, 1H), 4,73 (m, 2H), 4,38 (m, 2H), 3,39 (t, 2H), 3,30 (s, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,05 (m, 2H), 2,43 (br, 8H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,0 minút.
MS: MH+ 543.
Príklad 312
q) Amín: morfolín l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-morfolino-1-etanón 'H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ)δ8,26 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 5H), 5,70 (m, 1H), 4,73 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 3,57 (m, 4H), 3,08 (m, 2H), 2,44 (m, 4H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,6 minút.
MS: MH+ 486.
Príklad 313
r) Amín: 1 -metylpiperazín
353
- {3- [4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-1 -yl]-1 -azetanyl} -2-(4-metylpiperazino)-1 -etanón *H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ)δ8,26 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,16 (m, 5H), 5,70 (m, 1H), 4,70 (m, 2H), 4,35 (m, 2H), 3,29 (s, 2H), 3,06 (m, 2H), 2,45 (br, 6H), 2,16 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,0 minút.
MS: MH+ 499.
Príklad 314
s) Amín: 4-piperidinopiperidín l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-[4-(piperid-1 -y l)piperidino]-1 -etanón ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,18 (m, 5H), 5,70 (m, 1H), 4,73 (m, 2H), 4,40 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 2,88 (m, 4H), 2,38 (br, 4H), 2,13 (m, 1H), 2,00 (m, 2H), 1,61 (br, 2H), 1,43 (br, 6H), 1,34 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,2 minút.
MS: MH+ 567.
Príklad 315
t) Amín: 1/7-imidazol
- {3 -[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)- l//-pyrazolo[3,4-f/]pyrimidín-1 -yl]-1 -azetanyl} -2-( 1 H-1 -imidazolyl)-! -etanón
354 *H NMR (Chloroform-ŕ/, 400 MHz) δ 8,31 (s, 1H), 7,87 (br, 1H), 7.65 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 4H), 7,10 (m, 3H), 5,90 (br, 2H), 5,80 (m, 1H), 4,82 (m, 1H), 4,72 (m, 3H), 4,59 (m, 1H), 4,47 (m, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,2 minút.
MS: MH+ 467.
Príklad 316 l-13-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-(metylamino)-1 -etanón-acetát
Zmes l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (0,05 g, 0,00014 mol), 2-[(terc-butoxykarbonyl)(metyl)amino]octovej kyseliny (0,0033 g, 0,000175 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (0,0034 g, 0,000175 mol), VV-diizopropyletylamínu (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodom VV-dimetylformamide (6 ml) sa mieša po dobu 18 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl 8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa /-butyl-V-(2-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-oxoetyl)-Af-metylkarbamát, pevný podiel sa rozpustí v dichlórmetáne (2 ml) a pri teplote 0 °C do reakcie sa pomaly pridá 25 % roztok trifluóroctovej kyseliny v dichlórmetáne (4 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 5 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, na úpravu pH na 11 sa pri teplote 0 °C pridá 5 N vodný roztok hydroxidu sodného a vodná fáza sa extrahuje dichlórmetánom (2 x 30 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou (1 x 60 ml) a soľankou (1 x 60 ml) a sušia nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-zť] py rimidín-1 -y 1] -1 -azetanyl} -2-(imetv lamino)-1 -etanón-acetát (0,022 g, 0,00004 mol).
355 'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 8,27 (s, 1Η), 7,69 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,75 (m, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 3,18 (s, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,90 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,9 minút. MS: MH+ 430.
Príklad 317 l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-(dimetylamino)-1 -etanón-acetát
Zmes l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,05 g, 0,00014 mol), 2-(dimetylamino)octovej kyseliny (0,0018 g, 0,000175 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (0, 0034 g, 0,000175 mol), Λ/jV-diizopropyletylamínu (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodom //Y-dimetylformamide (6 ml) sa mieša po dobu 18 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-2-(dimetylamino)-l-etanón-acetát (0,022 g, 0,00004 mol).
’H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 8,27 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,69 (m, 1H), 4,70 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 2,97 (m, 2H), 2,20 (s, 6H), 1,89 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,6 minút.
MS: MH+ 444.
356
Príklad 318 l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-3-(dietylamino)-1-propanón
Zmes l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (0,05 g, 0,00014 mol), hydrochloridu 3-(dietylamino)propiónovej kyseliny (0,0032 g, 0,000175 mol), 1(3-dimetylaminopropyI)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (0,0034 g, 0,000175 mol), Λζ/Vdiizopropyletylamínu (0,068 g, 0,00053 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodom Λ/'V-dimetylformamide (6 ml) sa mieša po dobu 18 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 gm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-l-yI]-l-azetanyl}-3-(dietylammo)-l-propanón (0,025 g, 0,00005 mol).
‘H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ)δ8,26 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,14 (m, 5H), 5,70 (m, 1H), 4,67 (m, 2H), 4,37 (m, 2H), 2,66 (m, 2H), 2,45 (m, 4H), 2,21 (m, 2H), 0,95 (m, 6H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) R( 9,3 minút.
MS: MH+486.
Príklad 319
- {4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 Z/-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-1 -yljpiperidino} -2-(metylamino)-1 -etanón-acetát
Zmes 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,054 g, 0,00014 mol), 2-[/crc-butoxykarbonyl) (metyl)aminojoctovej kyseliny (0,0033 g, 0,000175 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (0,0034 g, 0,000175 mol), Aj/V-duzopropyletylamínu (0,033 g, 0.00026 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0.019 g, 0.00014 mol) v bezvodom yV.N-dimetylformamide (6 ml) sa mieša po dobu 18 hodín pri izbovej
357 teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa Zerc-butyl-/7-(2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-l-yl]piperidino}-2-oxoetyl)-Aľ-metylkarbamát. Pevný podiel sa rozpustí v dichlórmetáne (2 ml) a do reakcie sa pri teplote 0 °C pomaly pridá 25 % trifluóroctová kyselina v dichlórmetáne (4 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 5 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Ku zvyšku sa pri teplote 0 °C na úpravu pH na 11 pridá 5N vodný roztok hydroxidu sodného a vodná fáza sa extrahuje dichlórmetánom (2 x 30 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou (1 x 60 ml) a soľankou (1 x 60 ml) a sušia nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa l-{4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-1 -yljpiperidino} -2-(metylamino)-1 -etanón-acetát (0,010 g, 0,00002 mol). *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,25 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,13 (m, 5H), 4,94 (br, IH), 4,53 (br, IH), 3,99 (br, IH), 3,36 (m, 2H), 3,21 (br, IH), 2,85 (br, IH), 2,26 (s, 3H), 2,10 (br, IH), 1,96 (br, 3H), 1,85 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,1 minút.
MS: MH+ 458.
Príklad 320
- {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-1 -yljpiperidino} -2-(dimetylamino)-l-etanón
Zmes 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu (0,054 g, 0,00014 mol), 2-(dimetylamino)octovej kyseliny (0,0018 g, 0,000175 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (0,0034 g, 0,000175 mol), /'//V-diizopropyletylamínu (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0, 00014 mol) v bezvodom jV,N-dimetylformamide (6 ml) sa mieša po dobul8 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom a358 mónnym, 21 ml/min), čím sa získa l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo|3,4-í/Jpyrimidín-l-yl]piperdino}-2-(dimetylamino)-l-etanón (0,031 g, 0,00007 mol).
lH NMR (DMSO-d6. 400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 4,97 (br, 1H), 4,50 (br, 1H), 4,22 (br, 1H), 3,25 (br, III), 3,12 (m, 2H), 2,83 (br, 1H), 2,21 (s, 6H), 2,16 (br, 1H), 1,90 (br, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,3 minút.
MS: MH’ 472.
Príklad 321 l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-íŕ]pyrinndín-l-yl]piperidino}-3-(dietylamino)-1 -propanón-acetát
Zmes 3-(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu (0,054 g, 0,00014 mol), hydrochloridu 3-(dietylamino)propiónovej kyseliny (0,0032 g, 0,000175 mol), 1(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodumid-hydrochloridu (0,0034 g, 0,000175 mol), A.A-diizopropyletylamínu (0,068 g, 0,00053 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodom AjV-dimetylformamide (6 ml) sa mieša po dobu 18 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 ni:n; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym. 21 ml/min), čím sa získa l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazoIo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]piperidino}-3-(dietylamino)-l-propanón-acetát (0,038g, 0,00006 mol).
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, size 4, 97 (br, 1H), 4,52 (br, 1H), 4,03 (br, 1H), 3,27 (br, 1H), 2,80 (br, 1H), 2,66 (m, 2H), 2,49 (m, 8H), 2,11 (br, 1H), 1.95 (br, 3H). 1,87 (s, 3H), 0,93 (m, 6H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,7 minút.
359
MS:MH+514.
Všeobecný spôsob
Do zmesi 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,05 g, 0,00013 mol, 1 ekviv.) a uhličitanu draselného (0,036 g, 0,00026 mol, 2 ekviv.) v bezvodom N, V-dimetylformamide (3 ml) sa pri izbovej teplote pridá chlóracetylchlorid (0,028 g, 0,00026 mol, 2 ekviv.). Pred pridaním amínu (0,0013 mol, 10 ekviv.) sa zmes mieša po dobu 10 minút. Zmes sa mieša pri izbovej teplote 3 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 gm, 250 x 21,1 mm; 5 % 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získajú zodpovedajúci acetamidy.
Príklad 322
a) Amín: morfolín
- {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfeny 1)-1 H-pyrazolo [3,4-V]pyrimidín-1 -y ljpiperidino} -2-morfolino-1-etanón-acetát ‘H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ)δ8,24 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,16 (m, 5H), 4,99 (m, 1H), 4,47 (br, 1H), 4,19 (br, 1H), 3,58 (m, 4H), 3,25 (m, 2H), 3,11 (m, 1H), 2,83 (br, 1H), 2,43 (m, 4H), 2,25 (br, 1H), 1,99 (br, 3H), 1,89 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,7 minút.
MS: Míľ 514.
Príklad 323
b) Amín: 1 -metylpiperazín
360 l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/lpyriniidín-l-yl]piperidino}-2-(4-metylpiperazino)-1 -etanón-acetát 'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,16 (m, 5H), 4,99 (m, 1H), 4,47 (br, 1H), 4,19 (br, 1H), 3,29 (m, 2H), 3,22 (m, 2H). 3,05 (m, 1H), 2,80 (br, 1H), 2,33 (br, 6H), 2,22 (br, 1H), 2,13 (s, 3H), 1,94 (br, 3H), 1,89 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) R, 9,3 minút.
MS: MH+ 527.
Príklad 324 a 325
Cis a trans 2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-l-yl]-l-hydroxycyklohexyl} octová kyselina
a) Cis a rran5-fôrc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-1 -hydroxycyklohexy 1} acetát
Suspenzia kyseliny sa premyje zinkovým prachom (0,350 g, 0,00535 mol) a chloridom meďným (0,053 g, 0,000535 mol) v bezvodom tetrahydrofuráne (10 ml) a zmes sa zahrieva k refluxu po dobu 30 minút. Zahrievanie sa zastaví a ihned sa pridá (1 ml) roztok Zerc-butyl-2-brómacetátu (0,261 g, 0,00134 mol) v tetrahydrofuráne (10 ml). Zmes sa mieša 5 minút, potom sa po kvapkách pridá zvyšok zmesi. Zmes sa zahrieva k refluxu po dobu 30 minút. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu. V priebehu 5 minút sa po kvapkách pridá roztok 4-(4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l-yl)-l-cykk)hexanónu (0,200 g, 0,00053 mol) v bezvodom tetrahydrofuráne (5 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote 4 hodiny, nezreagovaný zinok sa odstráni filtráciou, premyje éterom (3x5 ml), filtrát sa premyje vodou (3x5 ml) a soľankou (10 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. V surovej zmesi bol pomer cis:trans (1:1), izoméry sa separujú zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (98:2). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa menej polárny n-nnv-/erc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-hydroxycyklohexyljacetát vo forme bielej pevnej látky (0.092 g, 0,00018 mol) a polárnejší 67v-/erc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyra361 zolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-hydroxycyklohexyl}acetát vo forme bielej pevnej látky (0,049 g, 0,000096 mol). Cí's-ŕerc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-1 -y 1]-1 -hydroxy cyklohexyl} acetát ’H NMR (DMSO-de, 400 ΜΗζ)δ8,23 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,11-7,20 (m, 5H), 4,70-4,84 (m, 1H), 2,36 (s, 2H), 1,89-2,12 (m, 4H), 1,51-1,67 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,37-1,42 (m, 4H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 19,31 minút.
MS:MH+516.
Trans-terc-buty 1-2- {4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1 -yl] -1 -hy droxycyklohexyl] acetát ’HNMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,11-7,20 (m, 5H), 4,45-4,61 (m, 1H), 2,36 (s, 2H), 1,78-1,85 (m, 2H), 1,64-1,71 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,36-1,45 (m, 4H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 19,64 minút.
MS:MH+516.
Cis-2-{4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazoIo [3,4-ď]pyrimidín-1 -yl]-1 -hydroxy cyklohexyl} octová kyselina
CA-/erc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-hydroxycyklohexyljacetát (0,092 g, 0,000178 mol) sa nechá reagovať s roztokom 20 % trifluóroctovej kyseliny v dichlórmetáne (10 ml) pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 45 minút. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte (25 ml) a premyje vodou (3x10 ml), suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa suspenduje vo vode (25 ml) a lyofilizuje, čím sa získa cA-2-{4-[4-ammo-3-(4-feno362 xyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl]-l-hydroxycyklohexyl}octová kyselina vo forme bieleho prášku (0,078 g, 0,000170 mol).
'H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ)δ8,32 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11-7,22 (m, 5H), 4,62-4,67 (m, 1H), 2,39 (s, 2H), 2,27-2,43 (m, 2H), 1,55-1,90 (m, 6H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,65 minút.
MS: MH+ 460.
Trans-2-{4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1 -yl]-1 -hydroxycyklohexyl} octová kyselina
7ra«.y-n.Y6‘-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l //-pyrazolo[3,4-<7)pyrimidín-l-yl]1-hydroxycyklohexyljacetát (0,049 g, 0,000096 mol) sa nechá reagovať s roztokom 20% trifluóroctovej kyseliny v dichlórmetáne (10 ml) pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 45 minút. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte (25 ml) a premyje vodou (3x10 ml), roztok sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa suspenduje vo vode (25 ml) a lyofilizuje, čím sa získa Zram-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfeny 1)-17/-pyrazolo[3,4-ť/Jpyrimidín-1 -y 1]-1 -hydroxycyklohexyl} octová kyselina vo forme bieleho prášku (0,038 g, 0,000083 mol).
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,36 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11-7,22 (m, 5H), 4,72-4,79 (m, 1H), 1,99 (s, 2H), 1,91-2,09 (m, 6H), 1,61-1,65 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 13,46 minút.
MS: MH+ 460.
363
Príklad 326
7ra«s-l-{3-[(benzyloxy)metyl]cyklobutyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrinndín-4-amín ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,37- 7,39 (m, 4H), 7,29-7,31 (m, 1H), 7,11-7,21 (m, 5H), 5,42-5,47 (m, 1H), 4,57 (s, 1H), 3,63 (d, 2H), 2,76-2,81 (m, 2H), 2,60-2,70 (m, 1H), 2,28-2,34 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 21,92 minút.
MS:MH+478
Príklad 327 [3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l-yl]-l-(hydroxymetyl)cyklobutyljmetanol
a) Diéty l-3-[(metylsulfonyl)oxy]-1,1 -cyklobutándikarboxylát
Roztok dietyl-3-hydroxy-l,l-cyklobutándikarboxylátu (0,268 g, 0,00116 mol) v pyridíne (7 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C. Po kvapkách sa pridá metánsulfonylchlorid (0,11 ml, 0,160 g, 0,00140 mol), pričom teplota sa udržuje pod 2°C. Zmes sa mieša po dobu 4 hodín, potom sa naleje do ľadovej vody (20 ml) a extrahuje etyléterom (2x10 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (3x10 ml) a soľankou (10 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa dietyl-3-[(metylsulfonyl)oxy]-1,1-cyklobutándikarboxylát (0,302 g, 0,00102 mol) vo forme žltého oleja.
lHNMR (CDCb 400MHz) 5,08-5,11 (m, 1 H), 4,23 (q, 4H), 3,01 (s, 3H), 2,983,03 (m, 2H), 2,81-2,86 (m, 2H), 1,27 (t, 6H).
b) Dietyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl]-l,l-cyklobutándikarboxylát
364
Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,129 g, 0,00042 mmol) v Λ/Λ'-dimetylformamide (5 ml) sa nechá reagovať s dietyl-3-[(metylsulfonyl)oxy]-l,l-cyklobutándikarboxylátom (0,150 g, 0,00051 mmol) a uhličitanom céznym (0,166 g, 0,00051 mmol) pri teplote 70 °C po dobu 5 dní. Reakčná zmes sa naleje do vody (20 ml) a extrahuje etylacetátom (3x10 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (2x10 ml) a soľankou (10 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (98:2). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa dietyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxy-feny 1)-17/-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-1 -yl]-1,1 -cyklobutándikarboxylát (0,060g, 0,00012 mol) vo forme hnedej pevnej látky.
’HNMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,12-7,21 (m, 5H), 5,38-5,42 (m, 1H), 4,16-4,28 (m, 4H), 3,14-3,17 (m, 2H), 2,96-3,00 (m, 2H), 1,17-1,28 (m, 6H).
c) [3- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-1 -yl]-1 -(hydroxymetyl)-cyklobutyl]metanol
Do roztoku dietyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-c7]pyrimidín-l-yl]-1,1-cyklobutándikarboxylátu (0,045 g, 0,000089 mol) v tetrahydrofuráne (10 ml) sa pridá lítiumalumínium-hydrid (0,010 g, 0,000270 mol). Reakčná zmes sa mieša 6 hodín pri izbovej teplote, po ktorých sa pridá voda (1,0 ml). Zmes sa filtruje cez vrstvu Celitu® 521. Rozpúšťadlo sa odstráni z filtrátu vo vákuu. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu (15 ml) a etylacetát (15 ml). Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (3x10 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí preparatívnou RPHPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 40 % 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 30 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa [3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-(hydroxymetyl)cyklo-butyl]metanol vo forme bielej pevnej látky (0,007 g, 0,000017 mol):
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,22 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11- 7,20 (m, 5H), 5,28-5,34 (m, 1H), 4,76 (t, 1 H), 4,58 (t, 1H), 3,55 (d, 2H) 3,47 (d, 2H), 2,46-2,55 (m, 2H), 2,24-2,31 (m, 2H).
365
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,81 minút.
MS:MH+418.
Príklady 328 - 334
Všeobecný spôsob prípravy arylalkylových cA-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-r/]pyrimÍdín-4-amínových analógov.
Tieto zlúčeniny sa pripravia spôsobom opísaným vyššie na prípravu arylalkylových cis-3 -(4-amino-3 -fluórfenyl)-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazoIo[3,4-<71pyrimidín-4-amínových analógov.
Pr. R MH+ Rt (min)
329 < 505,3 12,05
330 T Ó 538,4 9,27
331 ž í 453,2 11,16
366
332 9 519,1 12,95
333 í 535,3 10,57
334 555,3 14,08
Príklad 335
JV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-5-chlór-2-tiofensulfónamid-maleát.
Táto zlúčenina sa pripraví vo forme maleátu podľa spôsobu opísaného vyššie pre cis a Zra«s-3-(4-amino-3-ŕluórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]~lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín
HPLC-RT: 12,39 minút, (prietok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny gradient v priebehu 20 min.; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH) = 606,1.
367
Príklad 336
-(4- {4-amino-3-[4-(l ,3-benzoxazol-2-ylamino)-3-fluórfenyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-1 -yl}piperidino)-2-(dimetylamino)-l-etanón.
a) 7erc-butyl-4-hydroxy-l -piperidínkarboxylát
Terc-butyl-4-hydroxy-l-piperidínkarboxylát (20 g, 100,4 mmol) sa rozpustí v metanole (250 ml), potom ochladí na teplotu 0 °C a v priebehu 10 minút sa pridá borohydrid sodný (3,8 g, 100,4 mmol). Reakčná zmes sa ohreje z 0 °C na izbovú teplotu. Po 4 hodinách sa reakcia koncentruje za zníženého tlaku a zvyšný sirup sa rozpustí v zmesi (3:1) dichlórmetán/izopropanol (400 ml). Organická vrstva sa premyje IN vodným hydroxidom sodným (200 ml). Vodná vrstva sa potom extrahuje zmesou (3:1) dichlórmetán/izopropanol (3 x 150 ml). Organická vrstva sa premyje soľankou (400 ml), potom suší nad bezvodým síranom sodným a koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa /crc-butyl-4-hydroxy-l-piperidínkarboxylát vo forme svetlo žltého sirupu (20 g, 100,4 mmol).
’H NMR (d6-DMSO):ôl,21-l,28 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,65-1,69 (m, 2H), 2,94-2,96 (m, 2H), 3,59-3,68 (m, 3H), 4,68 (d, IH).
b) 7erc-butyl-4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát.
3-jód-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amín (17,3 g, 66,33 mmol) sa suspenduje v tetrahydrofuráne (800 ml). Pridá sa roztok /erc-butyl-4-hydroxy-l-piperidínkarboxylátu (20 g, 99,5 mmol) v tetrahydrofuráne (300 ml) a trifenylfosfín (34,8 g, 132,66 mmol). Reakčná zmes sa ochladí na teplotu 0 °C a po kvapkách sa pridá dietyl-azodikarboxylát (23,1 g, 132,66 mmol). Po 2 hodinách pri izbovej teplote sa reakcia koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa surový Zerc-butyl-4-(4-amino-3 -j ód-1 /í-pyrazolo [3,4-č/Jpyrimidín-1 -yl)-1 -piperidínkarboxylát vo forme oranžového oleja (69,44 g).
HPLC-RT: 14,29 minút, 19 %, (prietok: 1 ml/min, λ - 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; stĺpec Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm).
c) Dihydrochlorid 3-jód-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu.
368
Surový ŕerc-butyi-4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-<7Jpyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxyiát (69,4 g, 156,30 mmol) sa rozpustí v acetóne (900 ml) a pomaly po kvapkách sa pridá 6N vodná kyselina chlorovodíková (300 ml). Reakcia sa potom zahrieva pri teplote 45 °C za vzniku precipitátu. Po 1,5 hodine sa precipitát spojí vákuovou filtráciou, premyje minimálnym množstvom acetónu a suší v lyofilizátore, čím sa získa dihydrochlorid 3-jód-l-(4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu vo forme žltej pevnej látky (16,61 g, 39,8 mmol).
HPLC-RT: 6,16 minút, (prietok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny gradient v priebehu 20 min.; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 345,0.
d) l-[4-(4-Ammo-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-l-yl)piperidino]-2-(dimetylamino)-l -etanón.
Dihydrochlorid 3-jód-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu (3g, 7,19 mmol) sa suspenduje v dichlórmetáne (350 ml), potom sa v priebehu 4 dní pridáva N,N-dimetylglycín (1,02 g, 9,88 mmol), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (1,08 g, 7,91 mmol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (1,89 g, 9,89 mmol) a W-etyl-JV-ízopropylamín (5,06 g, 39,2 mmol). Reakcia sa zriedi dichlórmetánom (300 ml), potom premyje vodou (150 ml) a soľankou (150 ml). Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa l-[4-(4-amino-3-jód-l/í-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-l-yl)piperidino]-2-(dimetylamino)-l-etanón vo forme hnedej pevnej látky (2,74 g, 6,39 mmol).
HPLC-RT: 7,40 minút, (prietok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 430,3.
e) l-(4-{4-Amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)-3-fluórfeny]]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-1 -yl} piperidino)-2-(dimetylamino)-l -etanón.
l-[4-(4-Amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-l -yl)piperidino]-2-(dimetylamino)1-etanón (100 mg, 0,233 mmol) sa rozpustí v etylénglykole dimetyléteru (10 ml) a vode (1.5 ml) a pridá sa rV-(l,3-benzoxazol-2-yl)-Ar-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljamín (103 mg, 0,291 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (13 mg, 0,051 mmol) a uhličitan sodný (62 mg, 0,583 mmol) a reakcia sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 24 hodín. Reak369 cia sa koncentruje za zníženého tlaku, zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (100 ml) a minimálne množstvo vody. Organická vrstva sa koncentruje za zníženého tlaku a trituruje dietyléterom (25 ml), čím sa získa žltohnedá pevná látka (172 mg). Purifikáciou RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 15 % až 35 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 40 minút; Deltapak 08, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm stĺpec) sa získa 1 -(4- {4-amino-3 -[4-( 1,3-benzoxazol-2-ylamino)-3 -fluórfenyl] -1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl}piperidino)-2-(dimetylamino)-l-etanón vo forme belavej pevnej látky (64 mg, 0,121 mmol).
HPLC-RT: 7,27 minút, (prietok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5 % až 95 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Waters Symmetry Shield 08, 3,5 pm, 50 x 2, 1 mm stĺpec); m/z (MH+) = 530,2.
Príklad 337
-(4- {4-Amino-3-[4-( 1,3-benzotiazol-2-ylamino)-3-fluórfenyl]-1 //-pyrazolo [3,4-e/]pyrimidín-1 -yl} piperidino)-2-(dimety lamino)-1 -etanón
HPLC-RT: 10,09 minút, (prietok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5 % - 85 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 20 min.; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 546,2.
Príklady 338 - 364
a) Reprezentatívny spôsob alkylácie:
Hydrid sodný (60 %, 0,138 g, 3,45 mmol) sa pridá do suspenzie 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (0,750 g, 2,87 mmol) v DMF (9 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny, kým nie je roztok homogénny. Pridá sa alkylbromid (4,03 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 14 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledný pevný podiel sa trituruje postupne vodou (25 ml), potom zmesou éter/petroléter (4:1, 50 ml), čím sa získa produkt.
370
b) Reprezentatívny spôsob Suzukiho kopulácie:
Suspenzia aryljodidu (2,28 mmol), /erc-butyl-jV-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,08 g, 3,19 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,105 g, 0,091 mmol), uhličitanu sodného (0,478 g, 5,69 mmol) v XAMimetylformamide (12 ml) a vody (2 ml) sa zahrieva pri teplote 90 °C. po dobu 14 hodín pod atmosférou dusíka. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený vodný roztok chloridu sodného (50 ml) a etylacetát (30 ml). Vodná vrstva sa separuje a extrahuje ďalej etylacetátom (3x30 ml). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a koncentrujú za zníženého tlaku, Purifikáciou zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesí etylacetát/heptán (9:1) ako mobilnej fázy sa získa chránený anilínový produkt.
c) Reprezentatívny spôsob odstránenia chrániacich skupín:
Do 50 ml banky obsahujúcej roztok chlorovodíka v dioxáne (4 M, 6 ml) a etanol (6 ml) sa pridá chránený anilín (1,05 mmol). K banke sa pripevní chladič a zmes sa mieša pri teplote 50 °C pod atmosférou dusíka. Po 16 hodinách sa reakčná zmes ochladí na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodnú kyselinu chlorovodíkovú (0,5 M, 30 ml) a éter (20 ml). Organická vrstva sa separuje a vyleje, vodná vrstva alkalizuje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (30 ml) a výsledná zmes sa extrahuje etylacetátom (3 x 30 ml). Spojené etylacetátové extrakty sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a koncentrujú, čím sa získa anilínový produkt.
d) Reprezentatívny spôsob sulfonylácie:
Anilín (1,0 mmol) sa pridá do roztoku 2,3-dichlórbenzénsulfonylchloridu (0,263 g, 1,07 mmol) a 4-dimetylaminopyridínu (0,005 g. 0,041 mmol) v pyridíne (5 ml) a výsledný roztok sa mieša pod atmosférou dusíka po dobu 3 dní. Pridá sa zmes metanolu a dichlórmetánu (1:19, 100 ml) a výsledná zmes sa extrahuje z polovice nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (3x10 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa sulfónamidový produkt.
e) Reprezentatívny spôsob transesterifikácie:
Etylester (2,76 mmol) sa pridá do roztoku trietylamínu (3,8 ml, 28 mmol) a metanolu (30 ml). K reakčnej banke sa pripevní chladič a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 75 °C pod
371 atmosférou dusíka. Po 24 hodinách sa reakcia nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa metylesterový produkt.
f) Alternatívny spôsob transesterifikácie:
Roztok etylesteru (0,279 mmol) a metoxidu sodného (0,015 g, 0,279 mmol) v metanole (2 ml) sa zahrieva v utesnenej nádobe pri teplote 75 °C po dobu 2 hodín. Reakcia sa ochladí na izbovú teplotu, pridá sa zmes metanol/dichlórmetán (1:19, 100 ml) a výsledná zmes sa extrahuje z polovice nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (3x10 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa metylesterový produkt.
g) Reprezentatívny spôsob prípravy amidu:
V utesniteľnej Schlenkovej banke sa suspenduje ester (0,056 mmol) v amínovom rozpúšťadle (1 ml), banky sa utesnia teflónovým viečkom a zmes sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 2 dní. Reakcia sa ochladí na izbovú teplotu, čím sa získa amidový produkt.
h) Reprezentatívny spôsob prípravy primárneho amidu:
Utesniteľná Schlenkova banka sa naplní metylesterom (0,086 mmol), pridá sa roztok metanolu s nasýteným amoniakom (1 ml) a Schlenkova banka sa uzavrie a zahrieva pri teplote 90 °C po dobu 24 hodín. Reakcia sa ochladí na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa primárny amidový produkt.
i) Reprezentatívny spôsob prípravy močoviny:
Anilín (0,152 mmol) sa rozpustí v pyridine (1 ml), roztok sa ochladí na teplotu -20 °C, pridá sa wi-tolylizokyanát (0,143 mmol) a roztok sa nechá ohriať na izbovú teplotu. Po 6 hodinách sa produkt koncentruje za zníženého tlaku, Čím sa získa močovinovým produkt.
Príklad 338
Etyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-1 -yljacetát
Postupne sa použije alkylácia (s etylbrómacetátom ako alkylbromidom), Suzukiho kopulácie, odstránenie chrániacich skupín a sulfonylácia. Purifikáciou preparatívnou HPLC
372 (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersil HS C18. 250 x 21 mm stĺpec, R, 12,4-13,9 min) sa získa etyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]acetát vo forme bielej pevnej látky (0,011 g, 0,020 mmol):
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) R, 9, 78 min.
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,84 (s, IH), 8,25 (s, IH), 7,97 (s, IH), 7,95 (s, IH), 7,54 (t, IH), 7,43 (m, 3H), 5,21 (s, 2H), 4,15 (qt, 2H), 1,20 (t, 3H); MS: MH+ 539.
Príklad 339
Nl-{4-[4-Amino-l-(2-morfoIino-2-oxoetyl)-17/-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl}-2,3-dichlór-1 -benzénsulfónamid
Etyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-l-yl]acetát sa nechá reagovať smorfolínom s použitím reprezentatívneho spôsobu prípravy amidu. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100% CH3CN v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, R, 9,3 - 9,8 min) sa získa M-{4-[4-amino-l-(2-morfolino-2-oxoetyl)-l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl}-2,3-dichlór-l-benzénsulfónamid vo forme bielej pevnej látky (0,005 g, 0,009 mmol):
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 8,22 min.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,82 (s, IH), 8,21 (s, IH), 7,96 (d, IH), 7,94 (m, IH), 7,53 (t, IH), 7,39 (m, 3H), 6,97 (br, 2H), 5,32 (s, 2H), 3,5 (m, 8H); MS: MH+ 580.
Príklad 340 /Vl-(4-{4-Amino-l-[2-(4-metylpiperazino)-2-oxoetyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2-íluórfenyl)-2.3-dichlór-l-benzénsulfónamid
373
EtyI-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyI)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l-yl]acetát sa nechá reagovať s l-metylpiperazínom s použitím reprezentatívneho spôsobu prípravy amidu. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100% CH3CN v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 6,4 - 7,0 min) sa získa Vl-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)-2-oxoetyl]-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-2,3-dichlór-l-benzénsuIfónamid vo forme bielej pevnej látky (0,005 g, 0,009 mmol):
RP-HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/mín s použitím Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 6,83 min.
'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ8,20 (s, 1H), 7,96 (d, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,50 (t, 1H), 7,36 (m, 3H), 5,31 (s, 2H), 3,45 (m, 4H), 2,50 (m, 4H), 2,30 (s, 3H). MS: MH+ 593.
Príklad 341
VI-[(17?,25)-2-Hydroxy-1 -metyl-2-fenyletyl]-M-mety l-2-[4-amino-3-(4- {[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]-acetamid
Roztok (+)-pseudoefedrínu (0,037 g, 0,224 mmol) v dimetylétere etylénglykolu (0,75 ml) sa nechá reagovať s roztokom n-butylítia (2,5 M v hexánoch, 0,060 ml, 0,150 mmol). Po 20 minútach sa tento roztoku prevedie pomocou kanyly do roztoku etyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrÍmidín-l-yl]acetátu (0,040 g, 0,074 mmol) v V V-dimetylformamide (0,75 ml). Výsledný roztok sa mieša pri teplote 50 °C po dobu 15 hodín, po ktorých sa potom ochladí na izbovú teplotu a rozdelí medzi metanol/dichlórmetán (1:9, 50 ml) a vodu (15 ml). Organická vrstva sa oddelí, suší nad síranom horečnatým, filtruje a koncentruje za zníženého tlaku. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 11,88-12,65 min) sa získa Vl-[(lR,2,S)-2-hydroxy1 -metyl-2-fenyletyl]-Vl -metyl-2-[4-amino-3-(4- {[(2,3-dichlórfenyl)sulfonylamino} -3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrímidín-l-yl]-acetamid vo forme belavej pevnej látky (0,010 g, 0,015 mmol):
374
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) R, 9,63 min; MS: (MH) 658.
Príklad 342
Nl-[(lS,2S)-2-Hydroxy-l-metyl-2-fenyIetyl]-yVl -metyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l/7-pyrazoIo[3,4-í7]pyrimidín-l-yl]-acetamid
Použitím spôsobu, ktorý je podobný vyššie opísanému sa zmiešajú (+)-efedrín-hydrochlorid (0,061 g, 0,302 mmol) a etyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3- fluórfenyl)-! 77-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-l-yl]acetát (0,054 g, 0,10 mmol). Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 11,4-11,9 min) sa získa A4-[(LS\2S)-2-hydroxy-l-metyl-2-íényletyl]-/Vl-metyl-2-[4-amino-3-(4-[[(2,3-dichlórfenyl)sulfonylamino}-3-fluórfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-acetamid vo forme belavej pevnej látky (0,010 g, 0,015 mmol):
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 9,36 min; MS: (M-H)' 656.
Príklad 343
Ni -[4-(4-Amino-1 - (2-[(2S)-2-(hydroxymetyl)tetrahydro-177-1 -pyrolyl]-2-oxoetyl} -177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenyl]-2,3-dichIór-l-benzénsulfónamid
Použitím spôsobu, ktorý je podobný vyššie opísanému sa zmieša (Ä)-pyrolidinmetanol (0,038 ml, 0,385 mmol) a etyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-l-yl]acetát (0,060 g, 0,111 mmol). Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μι Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 8,45 - 9,90 min) sa získa Aľl-[4-(4-amino-l-{2-[(2S)-2-(hydroxymetyl)tetrahydro-177-l-pyrolyl]-2-oxoetyl}-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenyl]-2,3-dichlór-l-benzénsulfónamid vo forme belavej pevnej látky (0,024 g, 0,040 mmol):
375
RP-HPLC (25 % -100 % CH3CN v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 8,05 min; MS: (M-H)' 592.
Príklad 344
Al - [4-(4-Amino -1 - {2-[(2 P)-2-(hy droxymety l)tetrahy dro-1 H-1 -pyrolyl] -2 -oxoetyl} -1 A-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidin-3 -yl)-2-fluórfeny 1] -2,3 -dichlór-1 -benzénsulfónamid
Použitím spôsobu, ktorý je podobný vyššie opísanému sa zmieša (5)-pyrolidinmetanol (0,038 ml, 0,385 mmol) a etyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1-yljacetát (0,060 g, 0,111 mmol). Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm stĺpec, R( 8,15-9,70 min) sa získa Al-[4-(4-amino-l - {2-[(2R)-2-(hydroxymetyl)tetrahydro-1 A-l-pyrolyl]-2-oxoetyl}-1 A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenyl]-2,3-dichlór-l-benzénsulfónamid vo forme belavej pevnej látky (0,022 g, 0,037 mmol):
RP-HPLC (25 % -100 % CH3CN v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 7,98 min; MS: (M-H)‘ 592.
Príklad 345
Metyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-úQpyrimidín-1 -yljacetát
Podľa reprezentatívneho spôsobu transesterifikácie sa etyl-2-[4-amino-3-(4-([(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l A-pyrazolo [3,4-rí]pyrimidín-l-yl]acetát (1,49 g,
2,76 mmol) konvertuje na zodpovedajúci metylester. Surová látka sa čistí preparatívnou HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 11,0 -12,3 min), čím sa získa metyl2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonylamino}-3-fluórfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]acetát vo forme bielej pevnej látky (0,016 g, 0,030 mmol):
376
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 9,22 min.
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,84 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,96 (m, 2H), 7,60 (m, 1H), 7,56 (m, 3H), 5,23 (s, 2H), 3,68 (s, 3H); MS: MH+ 525.
Príklad 346
2-[4-Amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/Jpyrimidín-l-yl]octová kyselina
V znovu utesniteľnej Schlenkovej banke sa rozpustí metyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimÍdín-l-yl]acetát (0,030 g, 0,057 mmol) v zmesi metanol/voda (1:1, 1 ml), banky sa utesnia teflonom a zahrievajú pri teplote 90 °C. Po 2 dňoch sa reakcia ochladí na izbovú teplotu. Purifíkáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 6,3-6,7 min) sa získa 2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonylamino}-3-íluórfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]octovej kyseliny vo forme bielej pevnej látky (0,006 g, 0,030 mmol):
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 6,42 min.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,13 (s, 1H), 7,97 (d, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,36 (t, 1H), 7,19 (m, 3H), 7,15 (d, 1H), 4,59 (s, 2H); MS: (M-H)' 509.
Príklad 347
Arl-[2-(dimetylamino)etyl]-2-[4-ammo-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-1-yl]-acetamid
Pri reakcii metyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]acetátu (0,035 g. 0,067 mmol) s ALV-dimetyletyléndiamínom (1 ml) sa použije reprezentatívny spôsob prípravy amidu. Purifíkáciou preparatívnou
377
HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 6,85-7,45 min) sa získa Nl-[2-(dimetylamino)etyl]-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimÍdín-l-yl]-acetamid vo forme belavej pevnej látky (0,008 g, 0,014 mmol):
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,20 (br, 1H), 8,22 (m, 2H), 7,96 (d, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,45 (t, 1H), 7,31 (m, 3H), 6,90 (br, 2H), 4,96 (s, 2H), 3,40 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 2,07 (s, 6H); MS: (M-H)' 579.
Príklad 348
Nl-[2-(Dietylamino)etyl]-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-1//-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidm-1 -yl]-acetamid
Pri reakcii metyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/jpyrimidín-l-yl]acetátu (0,035 g, 0,067 mmol) s ΛζΝ-dietyletyléndiamínom (1 ml) sa použije reprezentatívny spôsob prípravy amidu. Purifíkáciou preparatívnou HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 7,12 - 7,98 min) sa získa Nl-[2-(dietylamino)etyl]-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazoIo[3,4-ď|pyrimidín-l-yl]-acetamid vo forme belavej pevnej látky (0,017 g, 0,028 mmol):
'H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 8,22 (s, 1H), 8,12 (br, 1H), 7,96 (d, 1H), 7,78 (d, 1H), 7,44 (t, 1H), 7,31 (m, 3H); 6,95 (br, 2H), 4,96 (s, 2H), 3,35 (m, 2H), 2,82 (m, 2H), 2,50 (m, 4H), 1,05 (t, 6H); MS: (M-H)' 607.
Príklad 349
2-(Dimetylamino)etyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-1 -yljacetát
Pri reakcii metyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l-yl]acetátu (0,035 g, 0,067 mmol) s N,N-dimetyltanolamínom (1 ml) sa použije reprezentatívny spôsob prípravy amidu. Purifíkáciou preparatívnou HPLC
378 (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 7,50 - 8,07 min) sa získa 2-(dimetylamino)etyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfényl)sulfonylamino) -3-fluórfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-c/jpyrimidín-l-yljacetát vo forme belavej pevnej látky (0,008 g, 0,014 mmol):
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,96 (d, 1H), 7,83 (d, 1H), 7,48 (t, 1H), 7,32 (m, 3H), 5,23 (s, 2H), 4,29 (t, 2H), 2,86 (m, 2H), 2,39 (s, 6H); MS: (M-H)' 580.
Príklad 350
Nl-[3-(Dimetylamino)propyl]-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfeny 1)-1 H-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-1 -yl]-acetamid
Pri reakcii metyl-2-[4-amino-3-(4-{ [(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]acetátu (0,025 g, 0,048 mmol) s 3-(dimetylamino)propylamínom (1 ml) sa použije reprezentatívny spôsob prípravy amidu. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 6,7 - 7,3 mín) sa získa jV1-[3-(dimetylarnino)propyl]-2-[4-arnino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]-acetamid vo forme belavého prášku (0,015 g, 0,025 mmol):
‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (m, 1H), 7,96 (m, 1H), 7,76 (m, 1H), 7,43 (t, 1H), 7,30 (m, 2H), 4,93 (s, 2H), 3,12 (m, 2H), 2,82 (m, 2H), 2,50 (s, 6H), 1,73 (m, 2H); MS (M-H)' 593.
Príklad 351
2-[4-Amino-3-(4- {[(2,3 -dichlórfenyl)sulfonyl]amino} -3 -fluórfenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl]-acetamid
Na konvertovanie metyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]acetátu (0,045 g, 0,086 mmol) na zodpovedajúci primárny amid sa použije reprezentatívny spôsob prípravy primárneho amidu. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 mi379 nút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 6,9 - 8,5 min) sa získa 2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-l-yl]-acetamid vo forme belavého prášku (0,015 g, 0,029 mmol):
*H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ) δ 9,83 (br, 2H), 8,84 (br, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,50 (m, 2H), 7,36 (m, 1H); 3,87 (s, 2H); MS (M-H)' 508.
Príklad 352
Ety l-2-(4-amino-3 - {3 -fluór-4-[(3 -toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo[3,4-z/] pyrim idín-l-yl)acetát
Postupne sa použije alkylácia (s etylbrómacetátom ako alkylbromidom), Suzukiho kopulácia, odstránenie chrániacich skupín a tvorba močoviny. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 12,1 - 13,5 min) sa získa etyl-2-(4-amino-3 - {3 -fluór-4- [(3 -toluidinokarbonyljamino] fenyl} -1 //-pyrazolo [3,4-d] pyrimidín-1 -yljacetát vo forme a žltého prášku (0,015 g, 0,032 mmol):
'H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ) δ 9,07 (br, 1H), 8,73 (br, 1H), 8,38 (t, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,48 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,19 (t, 1H), 6,82 (d, 1H), 5,23 (s, 2H), 4,17 (qt, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,21 (t, 3H); MS: (M-H)' 462.
Príklad 353 /V-{4-[4-amino-l-(2-morfolino-2-oxoetyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl}-/V'-(3-metylfenyl)močovina
EtyI-2-(4-amino-3 - {3 -fluór-4-[(3-toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo [3,4-ŕ/Jpyrimidín-1 -yljacetát (0,025 g, 0,054 mmol) sa konvertuje na zodpovedajúci metylester podľa spôsobu reprezentatívnej transesterifikácie. Tento produkt sa rozpustí v morfolíne (1 ml) a roztok sa zahrieva pri teplote 50 °C v utesnenej nádobe po dobu 2 dní. Reakcia sa ochladí na izbovú teplotu, koncentruje a purifikuje preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M
380 vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS Cl 8, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 9,3 - 10,2 min), čím sa získa yV-{4-[4-amino-l-(2-morfolino-2-oxoetyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yI]-2-fluórfenyl)-/V’-(3metylfenyl)močovina vo forme žltej pevnej látky (0,009 g, 0,018 mmol):
'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,07 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,37 (t, 1H), 8,23 (s, 111), 7,45 (m, 2H), 7,33 (t, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 6,83 (d, 1H), 5,34 (s, 2H), 3,5 (m, 8H), 2,30 (s, 3H);MS (M-H)' 503.
Príklad 354
N-(4- {4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)-2-oxoetyl]-l //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-yl }-2-fluórfenyl)-N-(3-metylfenyl)močovina
Použije sa spôsob podobný vyššie uvedenému s výnimkou toho, že sa ako rozpúšťadlo použije 1-metylpiperazín (1 ml) miesto morfolínu, potom purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18. 250 x 21 mm stĺpec, Rt 7,1 - 7,8 min) sa získa M-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)-2-oxoetyl]-l//-pyrazoIo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-/V'-(3-metylfenyl)močovina vo forme belavej pevnej látky (0,008 g, 0,015 mmol):
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,07 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,37 (t, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 6,90 (br, 2H), 6,83 (d, 1H), 5,33 (s, 2H), 3,39 (m, 4H), 2,40 (m, 4H), 2,30 s, 3H); MS (M-H)' 516.
Príklad 355
Etyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-1 -yljpropanoát
Postupne sa použije alkylácia (s etyl-2-brómpropionátom ako alkylbromidom), Suzukiho kopulácia, odstránenie chrániacich skupín a sulfonylácia. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 10,1 - 11,0 min) sa získa etyl-2-[4381
-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonylamino}-3-fluórfenyl)-l/7-pyrazolo[3!4-í71pyrimidín-l-yljpropanoát (0,016 g, 0,029 mmol) vo forme šedej pevnej látky:
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,84 (br, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,54 (t, 1H); 7,41 (m, 3H), 7,0 (br, 1H), 5,61 (qt, 1H), 4,10 (qt, 2H), 1,73 (d, 3H), 1,11 (t, 3H); MS (M-H)'551.
Príklad 356
Metyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yljpropanoát (4032811)
N a konvertovanie ety 1-2- [4-amino-3 -(4- {[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl] amino} -3 -fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]propanoátu (0,400 g, 0,723 mmol) na zodpovedajúci metylester sa použije reprezentatívny spôsob transesterifikácie. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 12,4 - 12,9 min) sa získa metyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-1 -yljpropanoát (0,008 g, 0,015 mmol) vo forme šedej pevnej látky:
’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 10,84 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,54 (t, 1H), 7,40 (m, 3H), 4,10 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 1,73 (d, 3H); MS (MH)+ 539.
Príklad 357
2-[4-Amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyľ)-lŕ/-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-1 -yljpropánamid
Na konvertovanie metyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]propanoátu (0,040 g, 0,074 mmol) na zodpovedajúci primárny amid sa použije reprezentatívny spôsob prípravy primárneho amidu. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 8,1 - 9,6 min) sa
382 získa 2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-eTjpyrimidín-l-yljpropánamid (0,015 g, 0,029 mmol) vo forme bieleho prášku:
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,82 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,56 (t, 1H), 7,42 (m, 3H), 7,31 (br, 1H), 7,21 (br, 1H), 5,34 (qt, 1H), 1,71 (d, 3H); MS (MH)+ 524.
Príklad 358
Etyl-2-(4-amino-3- {3 -fluór-4-[(3 -toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1 N-pyrazolo[3,4-tí)pyrimidín-1 -yljpropanoát
Postupne sa použije alkylácia (s etyl-2-brómpropionátom ako alkylbromidom), Suzukiho kopulácia, odstránenie chrániacich skupín a tvorba močoviny. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 13,3 - 14,3 min) sa získa etyl2-(4-amino-3-{3-fluór-4-[(3-toluidinokarbonyl)amino]fenyl}-lN-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yljpropanoát vo forme bielej pevnej látky (0,022 g, 0,046 mmol):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,06 (s, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,37 (t, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,46 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 6,83 (d, 1H), 5,63 (qt, 1H), 4,12 (qt, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,76 (d. 3H), 1,15 (t, 3H); MS (M-H)'476.
Príklad 359
2-(4-Amino-3 - {3-fluór-4-[(3 -toluidinokarbony l)amino]fenyl} -1 N-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-1 -yl)propánamid
Postupne sa použije alkylácia (s etyl-2-brómpropionátom ako alkylbromidom), Suzukiho kopulácia, odstránenie chrániacich skupín, alternatívny spôsob transesterifikácie, príprava primárneho amidu a močoviny. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v
0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu
HS Cl 8, 250 x 21 mm stĺpec, R, 9,1 - 10,1 min) sa získa 2-(4-amino-3-{3-fluór-4-[(3-toluidino383 karbonyľ)amino]fenylpyrazolo[3,4-<í]pyrimidín-l-yl)propánamid vo forme šedej pevnej látky (0,010 g, 0,022 mmol):
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,08 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,37 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,46 (m, 2H), 7,33 (m, 2H), 7,24 (m, 2H), 7,12 (d, 1H), 6,97 (br, 2H), 6,82 (d, 1H), 5,35 (qt, 1H), 2,30 (s, 3H), 1,75 (d, 3H); MS (MH)+ 449.
Príklad 360
Etyl-4-[4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlórfenyl)sulfonyl]amino} -3-fluórfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ď]py rimidín-1 -yljbutanoát
Postupne sa použije alkylácia (s etyl-4-brombutyrátom ako alkylbromidom), Suzukiho kopulácia, odstránenie chrániacich skupín a sulfonylácia. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 12,8 - 13,8 min) sa získa etyl-4-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-lZ/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yljbutanoát (0,010 g, 0,018 mmol) vo forme belavej pevnej látky:
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,83 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,54 (t, 1H), 7,40 (m, 3H), 6,95 (m, 2H), 4,35 (t, 2H), 3,97 (qt, 2H), 2,30 (t, 2H), 2,08 (m, 2H), 1,12 (t, 3H); MS (M-H)' 565.
Príklad 361
Metyl-4-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-1 -yljbutanoát
Postupne sa použije alkylácia (s etyl-4-brombutyrátom ako alkylbromidom), Suzukiho kopulácia, odstránenie chrániacich skupín, alternatívny spôsob transesterifikácie a reprezentatívny spôsob sulfonylácie. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS C18,
250 x 21 mm stĺpec. Rt 11,7 - 12,2 min) sa získa metyl-4-[4-amino-3-(4-{[(2,3-díchlór384 fenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]butanoát vo forme žltej pevnej látky (0,015 g, 0,027 mmol):
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,84 (br, IH), 8,23 (s, IH), 7,95 (m, 2H), 7,52 (m, IH), 7,40 (m, 3H), 4,35 (t, 2H), 3,52 (s, 3H), 2,32 (t, 2H), 2,09 (m, 2H); MS (MH) 553.
Príklad 362
4-[4-Amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</)pyrimÍdúl-1 -yljbutánamid
Na konvertovanie metyl-4-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrÍmidín-l-ylJbutanoátu (0,026 g, 0,047 mmol) na zodpovedajúci primárny amid sa použije reprezentatívny spôsob prípravy primárneho amidu. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 8,0 - 9,0 min) sa získa 4-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidíii-l-yl]butánamid vo forme bielej pevnej látky (0,007 g, 0,013 mmol):
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,82 (s, IH), 8,24 (s, IH), 7,97 (s, IH), 7,95 (s, IH), 7,54 (t, IH), 7,45 (m, 3H), 7,24 (br, IH), 6,93 (br, 2H), 6,73 (br, IH), 4,31 (t, 2H), 2,05 (m, 4H); MS (M-H)’ 536.
Príklad 363
Etyl-4-(4-amino-3-{3-fluór-4-[(3-toluidinokarbonyl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)butanoát (4032812)
Postupne sa použije alkylácia (s etyl-4-brombutyrátom ako alkylbromidom), Suzukiho kopulácia, odstránenie chrániacich skupín a tvorba močoviny. Purifikáciou preparatívnou
HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 12,6 - 13,6 min) sa získa etyl385
-4-(4-amino-3- {3-fluór-4-[(3 -toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1 7/-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-1 -yl)butanoát vo forme belavého prášku (0,015 g, 0,030 mmol):
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,06 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,36 (t, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,22 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 6,82 (d, 1H), 4,37 (t, 3H), 3,99 (qt, 3H), 2,34 (t, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,11 (m, 2H), 1,13 (t, 3H);
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 8μ Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 10,00 minút.
Príklad 364
4-(4-Amino-3 - {3 -fluór-4-[(3 -toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -177-pyrazolo[3,4-t/jpyrimidín-1 -yl)butánamid
Postupne sa použije alkylácia (s etyl-4-brombutyrátom ako alkylbromidom), Suzukiho kopulácia, odstránenie chrániacich skupín, alternatívny spôsob transesterifikácie, spôsob prípravy primárneho amidu a tvorba močoviny. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 8,4 - 9,1 min) sa získa 4-(4-amino-3-{3-fluór-4-[(3-toluidinokarbonyl)amino]fenyl}-177-pyrazolo[3,4-í71pyrimidín-l-yl)butánamid vo forme bielej pevnej látky (0,010 g, 0,022 mmol): *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,08 (s, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,38 (t, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,19 (m, 1H), 6,83 (d, 1H), 6,75 (s, 1H), 4,34 (t, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,05 (m, 4H); MS (MH)+ 463.
Príklad 365
2-{4-Amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-l-yl} -5-(4-metylpiperazino)benzonitril
Suspenzia 3-jód-l/7-pyrazolo[3,4-cí]pyrimidín-4-amínu (0,172 g, 0,66 mmol), hydridu sodného (60 %, 0,030 g, 0,75 mmol), 2,5-difluórbenzonitrilu (0,105 g, 0,75 mmol) a VV-dimetylformamidu (2,5 ml) sa zahrieva po dobu 24 hodín pri teplote 100 °C. Reakčná zmes sa
386 ochladí na izbovú teplotu a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (50 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva sa oddelí, suší nad síranom horečnatým, filtruje a koncentruje za zníženého tlaku.
Určitý podiel látky (0,045 g, 0,118 mmol) a uhličitanu cezného (0,115 g, 0,353 mmol) sa suspenduje v 1-metylpiperazíne (1 ml) a zmes sa zahrieva pri teplote 110 °C v utesnenej nádobe po dobu 20 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa okyslí vodnou kyselinou chlorovodíkovou (1 M, 10 ml) a vodná fáza sa extrahuje éterom (10 ml). Organická fáza sa vyleje a vodná fáza sa alkalizuje vodným roztokom uhličitanu sodného (3 M, 10 ml), vodná fáza sa extrahuje dichlórmetánom (3x15 ml) a spojená organická frakcia sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a koncentruje za zníženého tlaku. Táto látka sa podrobí Suzukiho kopulácii podľa reprezentatívneho spôsobu s výnimkou toho, že A/-(l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín sa použije miesto /erc-butyl-íV-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu. Purifikáciou preparativnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 7,0 - 8,6 min) sa získa 2-{4-amino-3-[4-(l ,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ťf]pyrimídín-l-yl}-5-(4-metylpiperazino)benzonitrilu vo forme šedej pevnej látky (0,009 g, 0,017 mmol):
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,93 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,98 (d, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,73 (d, 1H), 7,52 (m, 3H), 7,44 (m, 1H), 7,26 (t, 1H), 7,17 (t, 1H), 3,24 (m, 4H), 2,45 (m, 4H), 2,28 (s, 3H); MS (MH)+ 543.
Príklad 366
Ľtyl-2-{4-amino-3-[4-(l,3-benzotiazol-2-ylamino)-3-fluórfenyl]-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-l-yl}propanoátu
Použije sa reprezentatívny spôsob alkylácie (s etyl-2-brómpropionátom ako alkylbromidom) a reprezentatívny spôsob Suzukiho kopulácie (s výnimkou toho, že sa použije ?V-(l,3-benzotiazol-2-yl)-/V-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín miesto terc-butyl-N-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu). Purifikáciou preparativnou HPLC (25 %- 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu
387 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 14,4 - 14,9 min) sa získa etyl-2-{4-amino-3-[4-(l,3-benzotiazol-2-ylamino)-3-fluórfenyl]-l//-pyrazolo[3,4-<Y]pyrimidín-l-yl}propanoát vo forme belavej pevnej látky (0,022 g, 0,046 mmol):
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,52 (s, 1H), 8,82 (t, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,85 (d, 1H), 7,66 (d, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,36 (t, 1H), 7,22 (t, 1H), 5,65 (qt, 1H), 4,14 (qt, 2H), 1,77 (d, 3H), 1,14 (t, 3H); MS (MH)+ 478.
Príklad 367
Cis-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-3-yl} -2-fluórfenyl)-1,3-benzoxazol-2-amín
V2-(4-bróm-2-fluórfenyl)-1,3-benzoxazol-2-amín
Do roztoku 4-bróm-2-fluóranilínu (1,00 g, 5,26 mmol) v toluéne (25 ml) sa pridá 2-chlórbenzoxazol (0,66 ml, 5,79 mmol), ružový roztok sa zahrieva k refluxu po dobu 30 minút a potom pri teplote 100 °C po dobu 17 hodín. Výsledná biela suspenzia/ružový roztok sa ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa filtruje, filtračný koláč sa premyje 5 x 2-ml podielmi heptánu, čím sa získa V2-(4-bróm-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amín (1,480 g, 92 %) vo forme svetlo ružového prášku.
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) ír = 12,87 minút, 97 %; m/z 307 (MH+).
yV2-(4-bróm-2-fluórfenyl)-1,3-benzotiazol-2-amín
Do roztoku 4-bróm-2-fluóranilínu (1,00 g, 5,26 mmol) v toluéne (25 ml) sa pridá 2-chlórbenzotiazol (0,75 ml, 5,79 mmol), ružový roztok sa zahrieva pri teplote 110 - 150 °C v utesniteľnej nádobe po dobu 66 hodín, potom ochladí na izbovú teplotu. Výsledný hnedý roztok sa koncentruje za vzniku ružového pevného podielu, ktorý sa trituruje heptánom, čím sa získa yV2-(4-bróm-2-fluórfenyl)-l,3-benzotiazol-2-amín (1,699 g, 99 %) vo forme svetlo ružového prášku.
388
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 mL/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) tR = 13,82 minút, 95 %; m/z 325 (MH+).
V2-(4-brómfenyl)-l,3-benzotiazol-2-amín
V2-(4-brómfenyl)-l,3-benzotiazol-2-amín sa pripraví z 4-brómanilínu (1,00 g, 5,81 mmol) podľa spôsobu používaného pre V2-(4-bróm-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amín. Zlúčenina sa získa vo forme svetlo ružového prášku (0,867 g, 49 %).
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) tR = 13,32 minút, 100 %; m/z 307 (MH+).
V2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amín
Do roztoku V2-(4-bróm-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amínu (1,480 g, 4,819 mmol) v dimetylformamide (15 ml) pod atmosférou dusíka sa pridá bis(pinakolato)diborón (1,468 g, 5,781 mmol), octan draselný (1,419 g, 14,45 mmol) a [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatý (II) komplex s dichlórmetánom (1:1) (0,119 g, 0,146 mmol). Fialový roztok sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín, potom ochladí na izbovú teplotu. Výsledná tmavohnedá zmes sa koncentruje vo vákuu, čím sa získa tmavo hnedý pevný podiel. Táto látka sa trituruje dichlórmetánom, filtruje a filtrát koncentruje, čím sa získa tmavo hnedý olej. Purifikáciou zrýchlenou chromatograifí na stĺpci silikagélu (mobilní fází 30 % etylacetát/heptán) sa získa 2,28 g žitého pevného podielu. Táto látka sa trituruje heptánom a pevný podiel spojí, čím sa získa V2- [2-fluór-4-(4,4,5,5 -tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l ,3 -benzoxazol-2-amín (0,961 g. 56 %) vo forme bieleho prášku.
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) tR = 13,80 minút, 88 %; m/z 355 (MH+).
V2-[2-fluór-4-(4,4,5.5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzotiazoi-2-amín
V2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yI)fenyl]-l,3-benzotiazoI-2-amín sa pripraví z JV2-(4-bróm-2-fluórfenyl)-l,3-benzotiazol-2-aminu (1,699 g, 5,258 mmol) podľa
389 spôsobu použitého pre JV2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amín. Zlúčenina sa pripraví vo forme belavého prášku (0,825 g, 42 %).
RP-HPLC (25 % -100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) tR = 14,48 minút, 90 %; m/z 371 (MH+).
JV2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzotiazol-2-amín
JV2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzotiazol-2-amín sa pripraví z ÍV2-(4-brómfenyl)-l,3-benzotiazol-2-amínu (0,909 g, 2,98 mmol) podľa spôsobu použitého pre //2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amín. Zlúčenina sa pripraví vo forme belavého prášku (0,321 g, 31 %).
RP-HPLC (25 % -100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) tR = 13,82 minút, 92 %; m/z 351 (MH+).
Príklad 367
Cis-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazinojcyklohexy 1] -17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3 -yl} -2-fluórfeny 1)-1,3 -benzoxazol-2 amín
Do roztoku cL-3-jód-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,150 g, 0,340 mmol) v dimetylétere etylénglykolu (3 ml) a vody (1,5 ml) pod atmosférou dusíka sa pridá 7V2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amín (0,151 g, 0,425 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,020 mg, 0,017 mmol) a monohydrát uhličitanu sodného (0, 105 mg, 0,850 mmol). Roztok sa mieša pri teplote 83 °C po dobu 19 hodín. Výsledná žltá zmes sa koncentruje vo vákuu, čím sa získa žltý olej. Purifikáciou preparatívnou RP-HPLC (25 % -100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, tr = 5,7-8,1 minút,) sa získa czs-//2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-lŕ/-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amín vo forme belavej pevnej látky (0,046 g, 25 %):
390 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,65 (s, 1H), 8,49 (m, 1 H), 8,25 (s, 1H), 7,53 (d, 2H), 7,48 (d, 2H), 7,26 (t, 1H). 7,20 (t, 1H), 4,80 (m, 1H), 3,51-2,50 (m, 1H), 2,33-2,32 (m, 4H), 2,092,06 (m, 2H), 1,80-1,40 (m, 3H);
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) ír = 6,95 minút, 99 %; nzlz 542 (MH+).
Príklad 368
Cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-y 1} -2-fluórfenyl)-l,3-benzotiazol-2-amín
Cri-7V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzotiazol-2-amín sa pripraví zc/s-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-4-amínu (0,100 g, 0,227 mmol) a 772-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzotiazol-2-amínu (0,105 g, 0,283 mmol) podľa spôsobu použitého pre cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amm. Zlúčenina sa pripraví vo forme belavého prášku (0,051 g, 41 %):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,51 (s, 1H), 8,80 (m, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,85 (d, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,51 (m, 2H), 7,36 (t, 1H), 7,20 (t, 1H), 4,82 (m, 1 H), 3,51-2,25 (m, 14H), 2,15-2,10 (m, 2H), 1,80-1,50 (m, 4H);
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm stĺpec) ír = 7,63 minút, 100 %; m/z 558 (MH+).
Príklad 369
Cw-7V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metyIpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidm-3-y 1} fenyl)-1,3-benzotiazol-2-amín
C/x-jV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ííjpyrimidín-3-yl}fenyl)-l,3-benzotiazol-2-amín sa pripraví z m-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazíno)cyklo391 hexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu (0,100 g, 0,227 mmol) a N2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-l,3-benzotiazol-2-amínu (0,100 g, 0,283 mmol) podľa spôsobu použitého pre cw-.'Y2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</)pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amín. Zlúčenina sa pripraví vo forme belavého prášku (0,035 g, 28 %):
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,71 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,98 (d, 2H), 7,84 (d, 1H), 7,65 (d, 3H), 7,35 (t, 1H), 7,19 (t, 1H), 4,80 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 2,67- 2,09 (m, 15H), 1,71-1,57 (m, 4H);
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) ír = 7,47 minút, 100 %; m/z 540 (MH4).
Príklad 370
Trans-N2-(ý-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-3 -yl} fenyl)-1,3-benzoxazol-2-amín
7?a«,s-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z /rara-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rf]pyrimidín-4-amínu (0,036 g, 0,082 mmol) a N2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,034 g, 0,10 mmol) podľa spôsobu použitého pre c/s-A72-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amín. Zlúčenina sa pripraví vo forme belavého prášku (0,021 g, 50 %):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,86 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 7,93 (d, 2 H), 7,66 (d, 2 H), 7,51 (t, 1 H), 7,25 (t, 1 H), 7,16 (t, 1 H), 4,65 (m, 1 H), 3,51 (m, 1 H), 2,67-1,91 (m, 17 H), 1,49-1,46 (m, 2 H);
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) tR = 7,17 minút, 100 %; m/z 524 (MH4).
392
Príklad 371
7ranj-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-y 1} -2-fluórfenyl)-1,3 -benzoxazol-2-amín
Trans-772-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4-z/] py rimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z ŕra/«-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cykIohexyl]-l/7-pyrazolo(3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,100 g, 0,227 mmol) a 7V2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,151 g, 0,425 mmol) podľa spôsobu použitého pre cL-izomér. Zlúčenina sa pripraví vo forme bieleho prášku (0,053 g, 43 %).
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,63 (s, 1 H), 8,45 (m, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,55-7,48 (m, 4 H), 7,25 (t, 1 H), 7,17 (t, 1 H), 4,65 (m, l H), 3,36 (m, 1 H), 3,31-1,93 (m, 16 H), 1,46-1,23 (m, 3 H);
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) ír = 6,73 minút, 99 %; m/z 542 (MH+).
Príklad 372
7ranó,-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrirnÍdín-3-yl} -2-fluórfenyl)-1,3 -benzotiazol-2-amín
Trans-V2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 77-pyrazolo [3,4-ť7]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzotiazol-2-amín sa pripraví z /ra/7v-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-t7]pyrimidín-4-amínu (0,100 g, 0,227 mmol) a V2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzotiazol-2-amínu (0,105 g, 0,283 mmol) podľa spôsobu použitého pre czs-izomér. Zlúčenina sa pripraví vo forme bieleho prášku (0,052 g, 41 %):
393 lH NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ)δ 10,51 (s, 1 H), 8,79 (m, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,85 (d, 1 H), 7,66 (d, 1 H), 7,51 (m, 2 H), 7,36 (t, 1 H), 7,20 (t, 1 H), 4,66 (m, 1 H), 3,69 (m, 1 H), 2,89-1,94 (m, 17 H), 1,50-1,47 (m, 2 H);
RP-HPLC (25 % -100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) ír = 6,30 minút, 99%; m/z 558 (MH+).
Príklad 373
C/í-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-metyl-l,3-benzoxazol-2 amín l,ľ-Tiokarbonyldi-2(l//)-pyridon (0,086 g, 0,369 mmol) sa pridá do roztoku cis-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohcxyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,150 g, 0,369 mmol) v pyridíne (7 ml) pri teplote 0 °C a zmes sa mieša po dobu 1 hodiny pri teplote 0 °C. Výsledný oranžový roztok sa vytrepe medzi dichlórmetán (10 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva sa separuje a premyje s 0,5 N HCl (10 ml), suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje. 2-Amino-m-krezol (0,045 g, 0,369 mmol) sa pridá do suspenzie výslednej oranžovej pevnej látky a toluénu (10 ml) a zmes sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 1 hodiny. 1,3-Dicyklohexylkarbodiimid (0,114 g, 0,554 mmol) a reakčná zmes sa zahrievajú pri teplote 80 °C ďalších 18 hodín. Výsledný oranžovo-hnedý roztok sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje, čím sa získa svetlo hnedá sklená pevná látka. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 %-100% CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, tr = 8,1-10,3 minút,) sa získa cíí-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-metyl-l,3-benzoxazol-2-amín vo forme belavej pevnej látky (0,024 g, 12 %):
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,81 (s, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,96 (d, 2 H), 7,66 (d, 2 H), 7,33 (d, 1 H), 7,06 (m, 2H), 4,80 (m, 1 H), 3,391 (m, 1 H), 2,67-2,10 (m, 18 H), 1,71-1,60 (m, 4 H);
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) ír = 7,57 minút, 99 %; m/z 538 (MH+).
394
Príklad 374
Cis-N2-(4-{4-emmo-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1 H-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3 -yl}fenyl)-5-chlór-l,3-benzoxazol-2-amín
CA-?Z2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-chlór-l,3-benzoxazoI-2-amín sa pripraví z czs-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,100 g, 0,246 mmol) a 2-amino-4-chlórfenolu (0,035 g, 0,246 mmol) podľa spôsobu použitého pre cw-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-metyl-l,3-benzoxazol-2-amín. Zlúčenina sa pripraví vo forme svetlo žltej pevnej látky (0,020 g, 15 %):
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,03 (s, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,92 (d, 2 H), 7,67 (d, 2 H), 7,56 (m, 2 H), 7,20 (m, 1 H), 7,16 (t, 1 H), 4,81 (m, 1 H), 3,41-1,60 (m, 20 H);
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) ír = 7,83 minút, 99%; m/z 558 (MH+).
Príklad 375
CL-V2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-metyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l H-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-metyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z cis-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,057 g, 0,140 mmol) a 2-amino-/?-krezolu (0,017 g, 0,140 mmol) podľa spôsobu použitého pre cz'5-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-metyl-l,3-benzoxazol-2-amín. Zlúčenina sa pripraví vo forme belavej pevnej látky (0,010 g, 13 %) :*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10.81 (s, 1 H), 8.23 (s. 1 H), 7,93 (d, 2 H), 7,66 (d, 2 H), 7,38 (d, 1 H), 7,30 (s. 1 H), 6,96 (d, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 2,60-2,07 (m, 12 H), 2.39 (s, 3 H), 2,15 (s, 3 H). 1,71-1,59 (m, 5 H);
395
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) tR = 7,48 minút, 90 %; m/z 538 (MH+).
Príklad 376
Cz.y-,V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-nietylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Crí-ľV2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z <ri.?-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-l//-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidín-4-amínu (0,100 g, 0,246 mmol) a 6-amino-2,4-xylenolu (0,034 g, 0,246 mmol) podľa spôsobu použitého pre cri-jV2-(4-(4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]- 17/-pyrazolo[3,4-cť]py rimidín-3 -y 1} fenyl)-4-metyl-1,3-benzoxazol-2-amín. Zlúčenina sa pripraví vo forme belavej pevnej látky (0,031 g, 23 %):
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 7,93 (d, 2 H), 7,65 (d, 2 1-1), 7,11 (s, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 2,60-2,17 (m, 12 H), 2,41 (s, 3 H), 2,37 (s, 3 H), 2,22 (s, 3 H), 1,71-1,59 (m, 5 H);
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Ír - 8,00 minút, 93 %; m/z 552 (MH+).
Príklad 377
7V2-[4-(4-amino-1 - {4- [ 1 -(1 -mety lipiperid-4-yl)piperidyl]} -1 //-pyrazolof 3,4-</]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenyl]-5-chlór-2-tiofensulfónamid
Táto zlúčenina sa pripraví zAT-4-(4-amino-l-{4-[l-(l-metylpierid-4-yl)piperidyl]}-17/-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenylanilínu (100 mg, 0,236 mmol) podľa spôsobu opísaného vyššie, čím sa získa jV2-[4-(4-amino-l {4-[l-(l-metylpiperid-4-yl)piperidyl]}-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)-2-fluórfenyl]-5-chlór-2-tiofensulfónamid (51 mg); Podmienky pre RPHPLC: 10 až 90 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom, puferovaném na pH 4,5, v prie396 behu 20 minút pri teplote 2 ml/min s použitím stĺpca Waters Symmetry 08, 300 Á, 5pm, 250 x 4,6 mm, Rt 11,219 minút, 98,5 % a m/z (MH+) 605,2.
Príklady 378 - 383
Všeobecný spôsob prípravy močovinových a sulfónamidových analógov cŕs--3-{4-[amino(fenyl)metyí]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-ŕ(Jpyrimidín-4-amín
Tento anaológ sa pripraví z cik-3-{4-[amino(fenyl)metyljfenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-ammu (50 mg, 0,10 mmol) podľa spôsobu opísaného vyššie, čím sa získajú zlúčeniny podľa nasledujúcich príkladov.
OA Q f 13,815 100 616,3 378
''XJA 9 13,122 100 659,5 379
99°· 9 P 11,64 100 568,3 380
397
AÄ 14,99 97,8 685,5 381
ŕ 14,43 100 676,6 382
CO 13,68 100 695 383
Analytické podmienky pre RP-HPLC: 10 až 90 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom, pufrovanom na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri teplote 2 ml/min s použitím stĺpca Waters Symmetry C18, 5 pm, 300 Á, 250 x 4,6 mm.
Príklad 384
Trans-N-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl} benzy l)-A '-(3 -mety lfenyl)
Zmes obsahujúca /rara,-3-jód-l-[4-(4-metyliperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-úf]pyrimidm-4-amín (850 mg, 1,93 mmol), fórc-butyl-JV-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxa-borolan-2-yl)benzyl]karbamát (1,25 ekviv., 812 mg, 2,41 mmol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládium (135 mg) a uhličitan sodný (2,5 ekviv., 511 mg, 4,83 mmol) v odplynenej vode (10 ml) a DME (30 ml) sa zahrieva a mieša pri teplote 85 °C po dobu 16 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa hnedá pena, ktorá sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu s
398 použitím zmesi 10 % metanolu a 1 % hydroxidu amónneho v dichlórmetáne ako eluenta. Trans/erc-butyl-A-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazÍno)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyri-midín3-yl}benzyl)karbamát sa pripraví vo forme belavej peny (800 mg, 80 %). Roztok terc-butyl-Aľ-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazmo)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}benzyl)karbamátu (800 mg) v TFA (4 ml) a dichlórmetán (4 ml) sa miešajú pri izbovej teplote po dobu 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a olejovitý zvyšok sa alkalizuje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a vodná vrstva sa premyje dichlórmetánom (3 x 20 ml), koncentruje a pridá sa DMF (20 ml). Soli sa odstránia filtráciou a DMF sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 10 % metanolu v dichlórmetáne ako eluenta, čím sa získa 3-[4-(aminometyí)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<Y]pyrimidín-4-amín vo forme žltej pevnej látky (70 mg, 11 %). m-Tolylisokyanát (1,1 ekviv., 13,7 mg, 0,1 mmol) sa pridá do roztoku 3-[4-(aminometyl)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-r/pyrimidín-4-amínu (35 mg, 0,083 mmol) v pyridíne (0,5 ml) a potom mieša po dobu 2 dní. Reakčná zmes sa čistí s použitím preparatívnej RP-HPLC s hmotnostným detektorom (Micromass/Gilson, Hypersil BDS Cl8, 5 pm, 100 x 21,2 mm stĺpec; 0 až 100 % acetonitril a 0,05 M octanom amónnym, pufrovaným na pH 4,5, v priebehu 12,5 minút pri teplote 25 ml/min), čím sa získa trans-N-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}benzyI)-A/-(3-metylfenyl)močovina (17 mg, 37 %);
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 1,46 (2H, m), 2,05 (4H, m), 2,18 (2H, m), 2,25 (3H, s), 2,33 (4H, m), 2,45-2,53 (8H, m), 4,38 (2H, br d), 4,65 (1H, m), 6,52 (1H, t), 6,66 (1H, d), 7,10 (1H, t), 7,19 (1H, brd), 7,26 (1 H, br s), 7,46 (2 H, d), 7,63 (2H, d), 8,23 (1H, s) a 8,51 (1H, s) a m/z (MH+) 554,2.
Príklad 385
7raw-./V-(4-{04-ammo-l-[4-(4-metylpierazmo)cykÍohexyl]-l//-pyrazo]o[3,4-í/]pyrimÍdín-3-yl}benzyl)-A-(3-metoxyfenyl)močovina
Na prípravu /ra«v-A-(4-{4-amino-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l H-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yljbenzyl)-A’-(3-metoxyfenyl)močoviny sa využije rovnaký spôsob, ako v príklade 240 (17 mg, 36 %);
399 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 1,46 (2H, m), 2,05 (4H, m), 2,18 (2H, m), 2,35 (4H, m), 2,45-2,53 (8H, m), 3,70 (3H, s), 4,38 (2H, br d), 4,65 (1H, m), 6,49 (1H, m), 6,67 (1H, m), 6,90 (1H, brd), 7,12 (1H, t), 7,17 (1H, m), 7,46 (2 H, d), 7,63 (2H, cl), 8,23 (1H, s) a 8,62 (1H, s) a m/z (MH+) 570,2.
Príklad 386
Cis-Nl -(4- {4-amino- l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2,2-dimetyl-3-fenylpropánamid
2.2- Dimetyl-3-fenylpropánnitril
Roztok N-z'zopropylcyklohexylamínu (2,8 g, 19,72 mmol) v bezvodom tetrahydrofuráne (25 ml) pri teplote -78 °C sa po kvapkách v priebehu 15 minút nechá reagovať s 1,6 M nbutyllítiom v hexáne (12,23 ml, 19,72 mmol). Reakčný roztok sa mieša po dobu 10 minút pri teplote -78 °C. Roztok zmení farbu zo žltej na bezfarebnú. Do reakčného roztoku sa pridá izobutyronitril (1,36 g, 19,72 mmol) a reakčná zmes sa mieša ďalších 10 minút pri teplote -78 °C. Tento roztok sa pomocou striekačky prevedie do roztoku benzylchloridu (2,62 g, 20,71 mmol) v bezvodom tetrahydrofuráne pri teplote -78 °C pod atmosférou dusíka, načervenalý/hnedý reakčný roztok sa mieša po dobu 1 hodiny pri teplote -78 °C, potom sa odstráni kúpeľ zo suchého ľadu a roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín. Reakcia sa zastaví vodným roztokom nasýteného chloridu amónneho (10 ml). Na zastavenie reakcie sa pridá etylacetát (25 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (150 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou a soľankou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku, čím sa získa 3,18 g surovej látky. Surová látka sa vytrepe medzi 2 N roztok kyseliny chlorovodíkovej a etylacetát. Organická vrstva sa premyje vodou a soľankou, suší nad síranom horečnatým, filtruje a zahusťuje, čím sa získa 2,18 g (69%) 2,2-dimetyl-3-fenylpropánnitrilu. ‘H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 7,369-7,333 (m, 2H), 7,309-7,270 (m, 3H), 2,832 (s, 2H), 1,294 (s, 6H). Táto zlúčenina sa bez ďalšej analýzy použije v nasledujúcej reakcii.
2.2- Dimetyl-3-fenylpropánová kyselina
Roztok 2,2-dimetyl-3-fenylpropánnitrilu (1,0 g, 6,28 mmol) v etylénglykole (5 ml) sa nechá reagovať s pevným hydroxidom draselným (1,06 g, 18,84 mmol). Reakčná zmes sa mieša
400 po dobu 48 hodín pri teplote 196°C pod atmosférou dusíka. Etylénglykol sa odstráni vákuovou destiláciou a k hnedému zvyšku sa pridá 1 N roztok hydroxidu sodného (25 ml) a etylacetát (15 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (375 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou a soľankou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku, čím sa získa 0,856 g (76 %) 2,2-dimetyl-3-fenylpropánovej kyseliny.
*H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 12,20 (s, IH), 7,28-7,24 (m, 2H), 7,22-7,20 (m, IH), 7,157,13 (m, 2H), 2,78 (s, 2H), 1,07 (s, 6H).
Táto zlúčenina sa bez ďalšej analýzy použije v nasledujúcej reakcii.
2.2- Dimetyl-3 -fenylpropanoylchlorid
Roztok 2,2-dimetyI-3-fenylpropánovej kyseliny (0,856 g, 4,8 mmol) v chloroforme (6 ml) pri teplote 0 °C sa nechá reagovať s oxalylchloridom (3,05 g, 24 mmol) a 1 kvapkou dimetylformamidu. Reakčný roztok sa mieša po dobu 1 hodiny pri teplote 0 °C, ľadový kúpeľ sa odstráni a reakčná zmes mieša pri izbovej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa kvantitatívne množstvo 2,2-dimetyl-3-fenylpropanoylchloridu. Olej sa použije priamo v nasledujúcej reakcii.
Cis-Nl -(4-{4-amino-1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-2,2-dimetyl-3-fenylpropánamid
Roztok cí'ó-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,100 g, 0,23 mmol) v pyridíne (2,5 ml) sa nechá reagovať s
2.2- dimetyl-3-fenylpropanoyIchloridom (0,120 g, 0,61 mmol). Reakčná zmes sa mieša po dobu 2 hodín pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Pridá sa nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného (10 ml) a reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Ku zvyšku sa pridá dichlórmetán a nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vrstvy sa oddelia s použitím extrakčnej cartridge Empore. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, surová zlúčenina sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 10 % metanolu v dichlórmetáne ako eluenta, čím sa získa 0,085 g (62 %) cis-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2,2-dimetyl-3-fenylpropánamid.
401 'H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8,595-8,574 (m, 1H), 8,372 (s, 1H), 7,985 (s, 1H), 7,292-7,158 (m, 7H), 4,923 (m, 1H), 3,891 (s, 3H), 3,050-3,013 (m, 1H), 2,965 (s, 2H), 2,65-2,55 (m, SH), 2,4402,346 (m, 4H), 2,244-2,166 (m, 4H), 1,854-1,823 (m, 3H), 1,688 (m, 3H), 1,334 (s, 6H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPjs 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 5,517 min (100 %).
Príklad 387
Tris-maleát trans-N\ -(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2,2-dimetyl-3-fenylpropánamid
Roztok /ra«5-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidín-4-amínu (0,250 g, 0,573 mmol) v pyridíne (3 ml) pri teplote 0 °C sa nechá reagovať s 2,2-dimetyl-3-fenylpropanoylchloridom (0,304 g, 1,55 mmol). Reakčná zmes sa mieša po dobu 10 minút pri teplote 0 °C. Ľadový kúpeľ sa odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín. Rozpúšťadlo sa odparuje za zníženého tlaku do sucha. K pevnému podielu sa pridá dichlórmetán (15 ml) a nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného (5 ml). Vrstvy sa oddelia na extrakčnej cartridge Empore. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, surový pevný podiel sa čistí zrýchlenou chromatografiou s použitím zmesi 10 % metanolu v dichlórmetáne, potom 15 % (metanolu s 5 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne ako eluenta. Surový pevný podiel z predošlej purifíkácie sa rekryštalizuje s použitím zmesi etylacetát a heptán, precipitát sa filtruje, čím sa získa 0,201 g (59%) tra«í-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2,2-dimetyl-3-fenylpropánamidu. Horúci roztok trans-.Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2,2-dimetyl-3-fenylpropánamidu (0,201,0,337 mmol) v etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,117 g, 1,011 mmol) v etylacetáte a precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa 0,265 g tri-maleátu ŕron5-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2,2-dimetyl-3-fenylpropánamidu.
Ή NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,46 (s, 1H), 8,241 (s, 1H), 8,107-8,086 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,248-7,183 (m, 7H), 6,170 (s, 6H), 4,697 (m, 1H), 3,883 (s, 3H), 2,931 (s, 3H). 2,9-2,75 (br, s,
402
4Η), 2,671 (s, 3H), 2,104-1,990 (m, 7H), 1,588-1,5632 (m, 211), 1,226 (s, 7H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP]8 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 5,413 min (95 %).
Príklad 388
Tris-maleát íram-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-( 1 S,25)-2-feny lcyklopropán-1 -karboxamidu
Roztok Zraus'-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,162 g, 0,371 mmol) v pyridíne (2 ml) pri teplote 0 °C sa nechá reagovať s /raz?s-2-fenyl-l-cyklopropylkarbonylchloridom (0,134 g, 0,742 mmol) pod atmosférou dusíka. Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote 0 °C, ľadový kúpeľ sa odstráni a reakčná zmes mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín. Pridá sa ďalší /ra/«’-2-fenyl-1-cyklopropy lkarbony lchlorid (0,034 g, 0,186 mmol) a reakč · á zmes mieša po dobu 1 hodiny. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku, potom sa pridá dichlórmetán (15 ml). Vrstvy sa oddelia s použitím extrakčnej cartridge Empore. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku, surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 15 % metanolu v dichlórmetáne, potom 20 % metanolu v dichlórmetáne ako eluenta, čím sa získa 0,150 g (70%) Zrara-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfenyl)-( 1 S, 2S)-2-feny lcyklopropán-1 -karboxamidu. Horúci roztok trans-Ni-(4-{4-amino- l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lŕľ-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(lS,2S)-2-fenylcyklopropán-l-karboxamidu (0,147, 0,253 mmol) v etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,088 g, 0,759 mmol) v etylacetáte. Získaný precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší vo -vysokom vákuu, čím sa získa 0,204 g tris-maleátu íra/75-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lWpyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(15',25)-2-fenylcyklopropán-l-karboxamidu.
*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23-8,21 (m, 2H), 7,33-7,29 (m, 2H), 7,24-7,17 (m, 4H), 6,16 (s, 6H), 4,69-4.66 (m, 1H), 3,90 (s, 3H). 2,90-2,60 (m, 7H), 2,37-2,35 (m, 2H), 2,10-1,99 (m, 8H), 1,70-1,50 (m, 3H), 1,32 (m, 1H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP|8 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0.1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Ri 5,346 min (97 %).
403
Príklad 389
Cís-/V2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo[3,4-<7jpyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)benzo[7]tiofen-2-karboxamid
Príklad 390
Cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-2-tiofenkarboxamid
Príklad 391
C«-iV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpipcrazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7|pyrimidíri-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-furamid
Amidy odvodené od cfs-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-777-pyrazolo[3,4-í7)pyrimidín-4-amínu
Komerčne dostupné chloridy kyselín (0,23 mmol) v dichlórmetáne (100 1) sa pridajú k cA-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-777-pyrazolo[3,4-í7jpyrimidín-4-amínu (0,050 g, 0,115 mmol) v pyridíne (800 1). Reakčná zmes sa mieša cez noc. Reakcia sa zastaví IN roztokom hydroxidu sodného. Rozpúšťadlo sa odstráni na 12 kanálovej vákuovej pumpe Supelco vo vákuu pod atmosférou dusíka, zvyšný pevný podiel sa podrobí preparatívnej HPLC (Hypersil 08, 100 x 21 mm stĺpec, 5 pm, 15-100% gradient acetonitrilu v priebehu 8 minút, celková doba 10 minút, pufer 50 mM octanu amónneho, 25 ml/min). K pevným podielom sa pridá dichlórmetán a IN roztok hydroxidu sodného. Vrstvy sa oddelia s použitím extrakčnej cartridge Empore, čím sa získajú zodpovedajúce produkty, HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100 % 50 mM octan amónny acetonitril v 4,5 minútach, C36H44N6O3 (581,2), 95 %. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 mil/min)
404
Názov zlúčeniny R Mn. (mg) MH+ Rt (min)
C;k-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4mety lpiperazino)cyklohexy l]-1Hpyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyl)benzo[6]tiofen-2karboxamid, Príklad 389 OH 45 (66 %) 596,8 3,464
Cw-V2-(4- {4-aniino-1 -[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyl)-2-tiofenkarboxamid, Príklad 390 47 (75 %) 547,1 2,746
C«-7V2-(4-{4-amino-1-[4-(4mety lpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo [3,4-ó7|pyrimidín-3 -yl} -2metoxyfenyl)-2-furamid, Príklad 391 oX 36 (59 %) 531,3 2,626
Príklad 392
Tris-maleát /zzMS-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-metyl-3-fenylbutánamidu
-Mety 1-3 -fény lbutanoy lchlorid
Roztok 3-metyl-3-fenylbutyrovej kyseliny (0,508 g, 2,85 mmol) v dichlórmetáne (10 ml) pri teplote -78 °C sa nechá reagovať s oxalylchloridom (3,62,28,5 mmol) a 1 kvapkou dimetylformamidu. Reakčná zmes sa mieša pri teplote -78 °C po dobu 10 minút, kúpeľ zo suché405 ho ľadu sa odstráni a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a suší vo vysokom vákuu. Produkt sa bez analýzy použije priamo v nasledujúcej reakcii.
Ttris-maleát /ra«5-Vl-(4-(4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl) -2-metoxyfenyl)-3-metyl-3-fenylbutánamidu
Roztok /ra«5-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-777-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,458 mmol) v pyridíne (4 ml) pri teplote -5 °C sa nechá po kvapkách reagovať s roztokom 3-metyl-3-fenylbutanoylchloridom (0,101 g, 0,514 mmol) v dichlórmetáne (1 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote -5 °C, potom sa kúpeľ zo suchého ľadu odstráni a reakčná zmes mieša pri izbovej teplote po dobu 4 hodín. Pridá sa IN roztok hydroxidu sodného (5 ml) a zmes sa mieša cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, surový pevný podiel sa suší vo vysokom vákuu. Pridá sa dichlórmetán (10 ml) a IN roztok hydroxidu sodného (10 ml). Vrstvy sa oddelia na extrakčnej cartridge Empore. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za prebublávania hornej časti roztoku dusíkom, čím sa získa 0,240 g (88%) /ra«5-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ŕ7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-metyl-3-fenylbutánamid. Horúci roztok trans-N\(4-(4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lŕ7-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-metyl-3-fenylbutánamidu (0,240 g, 0,402 mmol) v etylacetáte a pár kvapiek etanolu sa nechajú reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,140 g, 1,206 mmol) v etylacetáte. Vzniknutý precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší na lyofilizátore, čím sa získa 0,323 g tris-maleátu /rfi?nv-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimídín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-metyl-3-fenylbutánamidu. *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,807 (s, 1H), 8,226 (s, 1H), 8,1098,088 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,489-7,470 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,345-7,306 (m, 2H), 7,213-7,134 (m, 3H), 6,151 (s, 5H), 4,680 (m, 1H), 3,836 (s, 3H), 3,3 (br, s, 7H), 2,655 (s, 3H), 2,541 (s, 4H), 2,085-1,989 (m, 6H), 1,574-1,551 (m, 2H), 1,431 (s, 6H);
HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP]8 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt 5,407 min (99 %).
406
Príklady 393 - 397
Amidy odvodené od cA-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-7H-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amínu
Reprezentatívny spôsob prípravy:
K príslušnej karboxylovej kyseline (0,46 mmol) v dichlórmetáne (1,4 ml) sa pridá oxalylchlorid (0,4 ml, 4,6 mmol) a DMF (1 kvapka), vialky sa uzavrú šeptom a na vyrovnávanie tlaku sa do každého septu zapichne malá ihla, vialky sa trepú cez noc na trepačke J-Kem. Oddelí sa 50 % roztok, prebytok oxalylchloridu a dichlórmetán sa potom odstráni na 12 kanálovej vákuovej pumpe Supelco vo vákuu pod atmosférou dusíka. Surový chlorid kyseliny (0,23 mmol) sa pridá do c/s-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (50 mg, 0,11 mmol) v suchom pyridíne (0,6 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Výsledné roztoky sa rovno purifikujú preparatívnou HPLC (Hypersil BSD C18, 5 pm, 100 x 21 mm, 0 % - 100 % acetonitril/0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 25,0 ml/min). Výsledné produkty sa ďalej purifikujú vytrepaním medzi dichlórmetán (4 ml) a 1,0 N hydroxid sodný (2 ml) a pretiahnu cez vysoko účinnú extrakčnú diskovú cartridge Empore (C18-SD oktadecyl), čím sa získajú zodpovedajúce produkty. Zlúčeniny sú so zodpovedajúcimi LCMS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónne-
Názov zlúčeniny R Mn. (mg) MH+ R, (min)
407
Nl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-rí]pyrimidín3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylbutánamid, Príklad 393 25 583,4 2,76
Al -(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín3 -yl} -2-metoxyfenyl)-2-metyl-3fenylpropánamid, Príklad 394 Vo 20 583,4 2,76
//2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrí-midín-3yl} -2-metoxyfenyl)-1,2,3,4-tetrahydro-2naftalenkarboxamid, Príklad 395 Vo 30 595,4 2,97
JV1 -(4- {4-amino-1 -[4-(4mety lpiperazino)cyklohexy I]-1 //-pyrazolo [3,4rí]py-rimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-(3/?)-3 fenylbutánamid, Príklad 396 14 583,4 2,85
//l-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4rí]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(3S)-3fenylbutánamid, Príklad 397 Vo 13 583,4 2,78
Príklad 398
Cw-/V4-(4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3,5-dimetyl-4-izoxazolkarboxamid
a) Cis-terc-buty\-N-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-JJpyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)karbamát
C«-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amín (10 g, 22,66 mmol), terc-butyl-/V-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljkarbamát (9,49 g, 27,17 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (1,57 g, l,36mmol) a uhličitan sodný (5,76 g, 54,38 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (180ml) a vodou (90 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí preparatívnou chromatografiou s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (80:20) ako mobilnej fázy, čím sa získa czj-/ez-c-butyl-2V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)karbamát (10,859 g, 89 %).
408 'H NMR (DMSO-d6) δ 1,49 (s, 9H), 1,58 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 2,08 (m. 2H), 2,17 (s, 3H), 2,45 (m, 4H), 2,38 (m, 4H), 2,45 (m, 3H), 3,87 (s, 3H), 4,80 (m, 1H), 7,22 (m, 2H), 7,91 (d, J = 8, 14,1H), 8,04 (s, 1H), 8,22 (s, 1H).
b) Cis-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-4-amín
Zmes trifluóroctovej kyseliny a dichlórmetánu (20:80, 200 ml) sa pridá do roztoku M-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)karbamátu (10,85 g, 20,24 mmol) v dichlórmetáne (100 ml) pri teplote 0 °C. Po 2 hodinách sa ľadový kúpeľ odstráni a rozpúšťadlá sa zahusťujú a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne. Pridá sa hydroxid sodný (1,0 N) na úpravu pH na 10. Pevný podiel vzniknutý po odstránení organického rozpúšťadla sa spojí filtráciou, čím sa získa cA-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (8,84 g, 100 %).
*H NMR (CDC13) δ 1,65 (m, 2H), 1,83 (m, 2H), 2,18 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,35-2,60 (m, 11H), 3,90 (s, 3H), 4,00 (bs, 2H), 4,89 (m, 1H), 5,61 (bs, 2H), 6,83 (d, J = 7,78Hz, 1H), 7,12 (m, 2H), 8,35 (s, 1H).
c) CN-yV4-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-y 1} -2-metoxyfeny l)-3,5 -dimetyl-4-izoxazolkarboxamid
3,5-Dimetyl-4-izoxazolkarbonylchlorid (22 mg, 0,137 mmol) sa pridá do roztoku cis-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4 metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu (30 mg, 0,067 mmol) v pyridíne (0,5 ml). Po 5 hodinách sa rozpúšťadlo zahusťuje a zvyšok rekryštalizuje z DMSO, čím sa získa cis-N4-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3,5-dimetyl-4-izoxazolkarboxamid (33 mg, 87 %).
’H NMR (DMSO-dô) δ 1,91 (m, 2H), 2,24 (m, 2H), 2,36 (m, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,63 (s, 3H), 2,77 (m, 3H), 3,17 (s, 3H), 3,37 (bm, 8H), 3,95 (s, 3H), 4,95 (m, 1H), 7,37 (m, 2H), 8,17 (d, J = 8,17,1H), 8,30 (s, 1H),9,26 (s, 1H).
LC/MS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm. eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min), MH+ =560,2, R, = 2,44 min.
409
Príklad 399
Cis-N3 -(4- {4-amino-1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexylj-1 V-pyrazolo [3,4-ďjpyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-5-metyl-3-izoxazolkarboxamid
5-Metyl-3-izoxazolkarbonylchlorid (20 mg, 0,137 mmol) sa pridá do roztoku c?w-3-(4-amino-3 -metoxy fenyl)-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pvrazolo [3,4-c/]pyrimidín-4-amínu (30 mg, 0,067 mmol) v pyridíne (0,5 ml). Po 5 hodinách sa rozpúšťadlo zahusťuje a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil BSD 08, 5 pm, 100 x 21 mm, 0 % - 100 % acetonitril/O, 05M octan amónny v priebehu 10 minút, 25,0 ml/min). Výsledný produkt sa ďalej purifikuje vytrepaním medzi dichlórmetán (4 ml) a 1,0 N hydroxid sodný (2 ml) a pretiahne cez vysoko účinnú extrakčnú diskovú cartridge Empore (C18-SD oktadecyl), čím sa získa cis-N3(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1 H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-5-metyl-3-izoxazolkarboxamid (14 mg, 38 %).
’H NMR (DMSO-dé) δ 1,81 (m, 2H), 2,14 (m, 2H), 2,35 (m, 2H), 2,53 (s, 3H), 2,76 (m, 3H), 3,37 (bm, 8H), 3,99 (s, 3H), 4,93 (m, IH), 6,74 (s, IH), 7,36 (m, 2H), 8,26 (m, IH), 9,48 (s, IH);
LCMS (Stĺpec Finigan: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm. eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH+ = 546,4, Rt = 1,82 min.
Príklad 400
Dimaleát cis-Nl. -[(27?)-2-fenylpropyl]-4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo [3,4-ď]py rimidín-3 -y 1} -2-metoxybenzami du
Cri-Vl-[(2Ä)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lL/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxybenzamid (100 mg, 0,172 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (12 ml) a pridá sa kyselina maleínová (60 mg, 0,515 mmol) v horúcom etylacetáte (3 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa dimaleát cží-Vl-[(2/?)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxybenzamidu (117 mg, 87 %).
410 'H NMR (DMSO-d6) δΐ,25 (d, J = 6,96, 3H), 1,73 (m, 42H), 2,09 (m, 2H), 2,26 (m, 2H), 2,71 (s, 3H), 2,74 (m, 2H), 2,85-3,70 (bm, 7H), 3,89 (s, 3H), 4,85 (m, 1H), 6,14 (s, 4H), 7,20 (m, 3H), 7,31 (d, J = 4,33,4H), 8,12 (d, J = 8,17 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,20 (s, 1H).
LC/MS (Stĺpec Finigan: Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH+ = 583,4 Rt = 2,14 min.
Príklad 401
Trimaleát /ra/zy-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)benzo[ó]furán-2-karboxamidu
a) 7'ra«5-/72-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo [3,4-V]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl) benzo [ó]furán-2-karboxamid
K benzo[ó]furán-2-karboxylovej kyseline (0,743g, 4,58 mmol) v dichlórmetáne (14 ml) sa pridá oxalylchlorid (4 ml, 45,8 mmol) a DMF (1 kvapka). Reakčná zmes sa mieša cez noc. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (5 ml), polovica z dichlórmetánového roztoku (2,5 ml) sa pridá do roztoku tran5-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ŕZjpyrimidín-4-amínu (0,50 g, 1,145 mmol) v pyridíne (6 mí) pri teplote 0 °C. Po 30 minútach sa pevný podiel spojí filtráciou, k pevnému podielu sa pridá voda a pH roztoku sa upraví na 10 hydroxidom sodným (1,0 N). Vodná fáza sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (80:20) ako mobilnej fázy, čím sa získa trans-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metyIpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-o]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)benzo[ó]furán-2-karboxamid (0,497 g, 75 %).
'H NMR (DMSO-dé) δ 1,49 (m. 2H), 2,01 (m, 6H), 2,15 (s, 3H), 2,40 (m, 3H), 2,51 (m, 4H), 4,00 (s, 3H), 4,66 (m, 1H), 7,31 (m, 1H), 7,39 (m, 2H), 7.54 (m, 1H), 7,81 (m, 3H), 8,24 (m, 1H), 9,50 (s, 1H).
411
b) Trimaleát Zra/7s-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)benzo[ó]fúrán-2-karboxamidu
Trans-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)benzo[á]furán-2-karboxamid (497 mg, 0,855 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (56 ml) a pridá sa kyselina maleínová (298mg, 2,566 mmol) v horúcom etylacetáte (5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa trimaleát Zrons-7V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidm-3-y 1} -2-metoxyfenyl)be-nzo [Ŕ]fúrán-2-karboxamidu (117 mg, 92 %).
‘H NMR (DMSO-dá) 81,60 (m, 2H), 2,09 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,82-3,17 (bm, 9H), 4,00 (s, 3H), 4,69 (m, 1H), 6,16 (s, 6H), 7,30-7,42 (m, 3H), 7,54 (m, 1H), 7,76-7,85 (m, 3H), 8,25 (m, 2H), 9,51 (s, 1H); LCMS (Stĺpec Finigan: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH+ = 581,4. R, = 2,12 min.
Príklad 402
Trimaleát /ra/2s-Nl-[(27?)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohe-xyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxybenzamid
a) 7ra77.?-/Vl-[(2R)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7pyrazo-lo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2-metoxybenzamtd
K (37?)-3-fenylbutánovej kyseline (376 mg, 2,29 mmol) v dichlórmetáne (7 ml) sa pridá oxalylchlorid (2 ml, 22,9 mmol) a DMF (1 kvapka). Reakčná zmes sa mieša cez noc. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml), dichlórmetánový roztok sa pridá do roztoku Zra/«-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (448 mg, 1,026 mmol) v pyridíne (6 ml) pri teplote 0 °C. Po 2 hodinách sa reakčná zmes naleje k etylacetátu (60 ml) a pevný podiel sa spojí filtráciou, k pevnému podielu sa pridá voda a pH roztoku sa upraví na 10 hydroxidom sodným (1,0 N). Vodná fáza sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na
412 stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (80:20) ako mobilnej fázy, čím sa získa trans-Nl -[(2/?)-2-fenylpropyl]-4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l H-pyrazolo[3,4-</jpyrimidín-3-yl}-2-metoxybenzamid (383 mg, 64 %).
‘H NMR (CDC13) δ 1,40 (d, J = 6,96, 3H), 1,57 (m, 2H), 2,08-2,21 (m, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,50 (m, 5H), 2,632,74 (m, 6H), 3,40 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 4,74 (m, 1 H), 5,69 (bs, 2H), 7,16-7,34 (m, 7H), 7,66 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,49 (d, J = 8, 21,1H).
b) Trimaleát /ra«s,-//l-[(2R)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-c/] pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxybenzamid
Tra/75-7Vl-[(2/?)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazmo)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxybenzamid (383 mg, 0,657 mmol) sa rozpusti v horúcom etylacetáte (42 ml) a pridá sa kyselina maleínová (229mg, 1,971 mmol) v horúcom etylacetáte (5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa /ra«5,-M-[(2/?)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl{-2-metoxybenzamid (571 mg, 93 %).
lH NMR (DMSO-dé) δ 1,25 (d, J = 6,95, 3H), 1,57 (m, 2H), 2,03 (m, 6H), 2,60-3,40 (bm, 18H), 3,89 (s, 3H), 4,67 (m, 1H), 6,16 (s, 6H), 7,20 (m, 3H), 7,31 (d, J = 4,37 Hz, 4H), 8,14 (d, J = 8,22 Hz, 1H), 8,23 (s, 1H), 9,18 (s, 1H).
LC/MS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, C.18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH+=583,2, R, = 2,89 minút.
Príklad 403
7erc-butyl-jV-{4-[4-amino-l-(l-(l-metylpiperidín-4-yl)-piperidín-4-yl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}karbamát
a) Terc-butyl-4-hydroxy-1 -piperidínkarboxylát
Borohydrid sodný (3,8 g, 100,4 mmol) sa pridá po častiach do roztoku Zerc-butyl-4-οχο-1-piperidínkarboxylátu (20 g, 100,4 mmol) v metanole (600 ml) pri teplote 0 °C. Po 15 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 3 hodín, pri413 dá sa hydroxid sodný (1,0 N, 100 ml) a organické rozpúšťadlo sa zahusťuje, vodná fáza sa extrahuje éterom (4x). Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSCh, filtruje a zahusťuje, čím sa získa fôrc-butyl-4-hydroxy-l-piperídínkarboxylát (20,48 g, 100 %).
'H NMR (CDCh)ôl,48 (s, 9H), 1,63 (m, 2H), 1,87 (m, 2H), 3,03 (m, 2H), 3,83 (m, 3H).
b) 7erc-butyl-4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát
3-Jód-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (10 g, 38,3 mmol), ŕe/-obutyl-4-hydroxy-l-piperidínkarboxylát (16,96 g, 84,2 mmol) a trifenylfosfín (20,09 g, 76,0 mmol) sa suspenduje v tetrahydrofuráne (425 ml). Reakčná zmes sa ochladí v ľadovom kúpeli a po kvapkách sa pridá o 10 minút neskôr dietyl-azodikarboxylát (12,09 ml, 76,0 mmol). Reakčná zmes sa nechá ohriať na izbovú teplotu. Po 5 hodinách sa rozpúšťadlo odstráni za zníženého tlaku a pri zahrievaní sa pridá dichlórmetán (65 ml), pevný podiel sa filtruje a premyje dichlórmetánom (20 ml) a ďalej premyje etylacetátom (5x20 ml), čím sa získa zmes dietyl-l,2-hydrazindikarboxylát a terc-butyl-4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát (1:1, 14,98 g, 63 %), ktorý sa bez purifikácie použije ďalej.
'H NMR (CDC13) δ 1,48 (s, 9H), 1,95 (m, 2H), 2,20 (m, 2H), 2,92 (m, 2H), 4,23 (m, 2H), 4,84 (m, 1H), 8,31 (s, 1 H).
c) 3-Jód-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-4-amín
Zmes trifluóroctovej kyseliny a dichlórmetánu (20:80, 250 ml) sa pridá do roztoku terc-butyI-4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylátu (10,72 g, 24,1 mmol) v dichlórmetáne (100 ml) pri teplote 0 °C. Po 15 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín. Rozpúšťadlá sa zahusťujú a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne. Pridá sa kyselina chlorovodíková (5,0 N) a vodná vrstva sa premyje dichlórmetánom (3x), na úpravu pH sa pridá hydroxid sodný (50 %), na zníženie objemu sa suspenzia lyofilizuje na jednu tretinu a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa 3-jód-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-6/)pyrimidín-4-amínu (8,109 g, 97 %).
'H NMR (CDC13) δ 1,81 (m, 2H), 1,99 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,07 (m, 2H), 4,68 (m, 1H), 8,19 (s, 1H).
d) 3-Jód-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)]-piperidm-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín
414
3-Jód-l-(4-piperidyl)-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (2,00 g, 5,81 mmol), 1rnetyl-4-piperidón (2,14 ml, 17,42 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (2,45 g, 11,62 mmol) a ľadová kyselina octová (1,05 g, 17,42 mmol) sa zmiešajú s 1,2-dichlóretánom (75 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 6 hodín a na úpravni pH asi na 9 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa 3-jód-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)]-piperidín-4-yl]-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (2,39 g, 93 %).
’H NMR (DMSO-dô) δ 1,52 (m, 2H), 1,75 (m, 2H), 1,87 (m, 2H), 2,05 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,28 (m, 3H), 2,91 (m, 2H), 3,00 (m, 2H), 4,55 (m, 1H), 8,18 (s, 1H).
e) ľé/'c-buty l-N- {4- [4-amino-1 - [ 1 -metylpiperidm-4-yl)-piperidín-4-y 1] -1 N-pyrazolo [3,4-d] py r imidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}karbamát
3-Jód-1 -[l-( 1 -metylpiperidín-4-yl)]-piperidín-4-yl]-1 N-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-4-amín (2,39 g, 5,41 mmol), fórc-butyl-N-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljkarbamát (2,08 g, 5,96 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (0,375 g, 0,32 mmol) a uhličitan sodný (1,38 g, 13,00 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (80 ml) a vodou (40 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO<i, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (95:5:0,5) ako mobilnej fázy, čím sa získa fórc-butyl-N-{4-[4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-y 1 )-p iperidí η-4-y 1] -1 N-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3 -y l]-2-metoxyfenyl} karbamát (1,67 g, 57 %).
‘H NMR (DMSO-dô) δ 1,48 (m, 11H), 1,71 (m, 2H) 1,86 (m, 4H), 2,14 (s, 3H), 2,18 (m, 3H), 2,32 (m, 2H), 2,80 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,22 (m, 2H), 7,91 (d, J = 8,12,1H), 8,03 (s, 1H), 8,21 (s, 1H).
Príklad 404
3-{4-[(2-Furylmetyl)amino]-3-metoxyfenyl}-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1N-pyrazolo[3,4-<i]pyrimidín-4-amín
415
a) 3-(4-Amino-3-metoxyfenyl)-l-[I-(l-metylpiperidín-4-yl)-piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amín
Zmes trifluóroctovej kyseliny a dichlórmetánu (20:80, 28 ml) sa pridá do roztoku terc-buty l-/V-{4-[4-amino-1-(1-(1-metylpiperidín-4-yl)-piperidín-4-yl]-l//-pyrazoIo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}karbamátu (0,914 g, 1,70 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) pri teplote 0 °C. Po 15 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín. Zmes sa zahusťuje a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne. Na úpravu pH asi na 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje, čím sa získa 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)-piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-rijpyrimidín-4-amín (0,726 g, 97 %).
’H NMR (CDC13) δ 1,67 (m, 2H) 1,83 (m, 4H), 2,00 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,39 (m, 5H), 2,91 (m, 2H), 3,08 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,99 (m, 2h), 4,73 (m, 1H), 5,56 (bs, 2H), 6,82 (d, J = 7,87, 1H), 7,08 (d, J = 7,84,1H), 7,13 (s, 1H), 8,34 (s, 1H).
b) 3-{4-[(2-Furylmetyl)amino]-3-metoxyfenyl}-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l/ípyrazoIo[3,4-ri]pyrimidín-4-amín
3-(4-Amino-3-metoxyfenyl)-1-(1-(1 -metylpiperidín-4-yl)-piperidín-4-yl]-l //-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amín (100 mg, 0,229 mmol), 2-furaldehyd (0,027 ml, 0,321 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (193 mg, 0,916 mmol) a ľadová kyselina octová (55 mg, 0,916 mmol) sa zmiešajú s 1,2-dichlóretánom (5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc, na úpravu pH asi na 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (95:5:0,2) ako mobilnej fázy, čím sa získa 3-{4-[(2-furylmetyl)amino]-3-metoxyfenyl}-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amín (57 mg, 48 %).
'H NMR (DMSO-dé) δ 1,45 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 1,87 (m, 4H), 2,14 (s, 3H), 2,28 (m, 5H), 2,80 (m, 2H), 3,01 (m, 2H), 3,86 (s, 1H), 4,37 (d, J = 3,13, 1H), 6,76 (d, J = 8, 62,1H), 7,07 (m, 2H), 7,57 (s, 1H), 8,19(s, 1H).
416
LCMS (Stĺpec Finigan: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4.6 mm. eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH+ 517,3, Rt = 2,28 min.
Príklad 405
Dimaleát Al-{4-(4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-lA-pyrazolo[3,4-č7Jpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-ŕrans-2-fenylcykíopropán-l-karboxamidu
a) Al -{4-[4-Amino-1-(1-(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-y 1] -1 A-pyrazolo [3,4-ífjpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-/ra«5-2-fenyIcyklopropán-l-karboxamid
7rans-2-fenyl-l-cyklopropánkarbonylchlorid (42 mg, 0,231 mmol) sa pridá do roztoku 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-(1-( l-metylpiperidín-4-yl)-piperidín-4-yl]-1 A-pyrazolo (3,4-d]pyrimidín-4-amínu (100 mg, 0,229 mmol) v pyridíne (1,0 ml). Po 5 hodinách sa rozpúšťadlo zahusťuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu, čím sa získa Al-{4-[4-amino-l-[l-(lmetylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yľ)-2-metoxyfenyl}-«Yz/?.v-2-fenylcyklopropán-l-karboxamid (80 mg, 60 %).
'H NMR(CDC13) δ 1,42 (m, IH), 1,77 (m, 2H), 1,85 (m, 2H), 2,06 (m, 3H), 2,36-2,45 (m, 8H), 2,62 (m, IH), 3,00 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,75 (m, IH), 5,54 (bs, 2H), 7,14-7,33 (m, 7H), 8,10 (s, IH), 8,36 (s, IH), 8,54 (d, J = 8,50, IH).
LCMS (Stĺpec Finigan: Pecosphere, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 %
B/A v 4 minútach, (B: acetonitril. A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH+= 581,4, Rt= 1,77 minút.
b) Dimaleát Al-{4-(4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l A-pyrazolo[3,4-cf]pyrÍmidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-/ra«.y-2-fenylcyklopropán-l-karboxamidu
Al -{4-[4-amino-1 -(l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidm-4-yl]-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-ŕrans-2-fenylcyklopropán-l-karboxamid (75 mg, 0,129 mmol) sa rozpustí v etanole (2 ml) a pridá sa kyselina maleínová (45 mg, 0,387 mmol) v etanole (1 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote, po 5 hodinách sa rozpúšťadlo odstráni a pridá sa etylacetát. Pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa dimaleát Al-{4-[4-amino-l-[l-(l-metyl417 piperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l/7-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-ylj-2-metoxyfenyl}-/>ran5-2-fenylcyklopropán-l-karboxamidu (75 mg).
‘H NMR (DMSO-dé) δ 1,17 (m, IH), 1,32 (m, 2H), 1,48 (m, 2H), 1,48, (m, 2H), 2,19 (m, 4H), 2,37 (M, IH), 2,46 (m, IH), 2,59 (m, IH), 2,78 (s, 3H), 2,98-3,52 (bm, 9H), 3,90 (s, 3H), 5,02 (m, IH), 6,08 (s, 4H), 7,17-7,33 (m, 7H), 8,25 (m, 2H), 9,65 (s, IH).
LCMS (Stĺpec Finigan: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm. eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH+ = 581,4, Rt = 1,77 min.
Príklady 406 a 407
Amidy odvodené od cA-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-7//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Reprezentatívny spôsob prípravy:
K príslušnej karboxylovej kyseline (0,46 mmol) v dichlórmetáne (1,5 ml) sa pridá oxalylchlorid (400pl, 0,2 mmol) a DMF (1 kvapka), vialky sa uzavrú šeptom a na vyrovnávanie tlaku sa do každého septu zapichne malá ihla, vialky sa trepú cez noc na trepačke J-Kem. Oddelí sa 50 % roztok, prebytok oxalylchloridu a dichlórmetánu sa potom odstráni na 12 kanálovej vákuovej pumpe Supelco vo vákuu a pod atmosférou dusíka. Surový chlorid kyseliny (0,23 mmol) sa pridá do cz's-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amínu (40 mg, 0, 09 mmol) v suchom pyridíne (800 1) a mieša pri izbovej teplote. Výsledné roztoky sa rovno purifikujú preparatívnou HPLC (Hypersil BSD C18,5 pm, 100 x 21 mm, 0 % -100 % acetonitril/O, 05M octan amónny v priebehu 10 minút, 25,0 ml/min). Výsledné produkty sa ďalej purifikujú vy trepaním medzi dichlórmetán (4 ml) a 1,0 N hydroxid sodný (2 ml) a pretiahnu cez vysoko účinnú extrakčnú diskovú cartridge Empore (C18-SD oktadecyl), čím sa získajú zodpovedajúce produkty. Zlúčeniny so zodpovedajúcimi LCMS (Stĺpec Micromass: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0 % B/A až 100 % B/A v 4,5 minútach, ( B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 3,5 ml/min) sú uvedené nižšie.
418
q
Názov zlúčeniny R Mn. (mg) MH+ Rt (min)
Al -(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3cyklohexylpropánamid, Príklad 406 O 11 575,3 3,3
N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl1 Α-2-indolkarboxamid, Príklad 407 ΚΌ 20 581,3 2,98
Príklad 408
Dihydrochlorid A2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amínu
419
BúCaO
NajCO, dioxán/HjO
a) rerc-butyl-4-(4-ammo-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-</)pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát
Di-/erc-butyl-dikarbonát (0,287 g, 1,32 mmol) sa pridá do zmesi dihydrochloridu 3-jód-1-(4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,50 g, 1,20 mmol) a uhličitanu sodného (0,445 g, 4,20 mmol) v dioxáne (10 ml) a vode (10 ml). Reakcia sa mieša po dobu 18 hodín. Pridá sa dichlórmetán (100 ml) a organická vrstva sa premyje vodou (30 ml) a soľankou (30 ml), suší (Na2SO4) a koncentruje vo vákuu, čím sa získa /erc-butyl-4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxy lát vo forme svetlo žltej pevnej látky (0,524 g, 98 %);
RP-HPLC 12,227 minút, 100 % čistota: (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 445,1.
b) 7erc-butyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-1 -y 1)-1 -piperidínkarboxy lát
7’<?rc-butyl-4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát (524 mg, 1,18 mmol) sa rozpustí v etylénglykole dimetyléteru (50 ml) a vode (10 ml), pridá sa V-(l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (537 mg, 1,47 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (68 mg, 0,059 mmol) a uhličitan sodný
420 (313 mg, 2,95 mmol) a reakcia sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 19 hodín. Pridá sa ďalší boronát (188 mg, 0,515 mmol) a paládium-tetrakistrifenylfosfín (27 mg, 0,024 mmol) a reakcia sa zahrieva pri teplote 80 °C ďalších 23 hodín. Reakcia sa koncentruje za zníženého tlaku, zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (100 ml) a vodu (100 ml). Organická vrstva sa suší (NaíSOb, potom koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa oranžový olej (1,4 g). Purifikáciou chromatografiou na stĺpci silikagélu gradientom 2:1 až 9:1 etylacetát:heptán, potom gradientom 2 % až 5 % metanolu v dichlórmetáne sa získa terc-butyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát vo forme hnedej pevnej látky (577 mg, 85 %);
RP-HPLC 17,090 minút, 98 % čistota: (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 gm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 555,2.
c) Dihydrochlorid N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidy 1)-1 J7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu
7erc-butyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát (142 mg, 0,256 mmol) sa rozpustí v acetóne (7 ml) a 6N vodnej kyseline chlorovodíkovej (1,4 ml). Reakcia sa potom zahrieva pri teplote 45 °C, čím vznikne precipitát. Po 2,5 hodinách sa precipitát spojí vákuovou filtráciou, premyje minimálnym množstvom acetónu a suší v lyofilizátore, čím sa získa dihydrochlorid V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol2-amínu vo forme oranžového pevného podielu (130 mg, 96 %);
HPLC 10,436 minút, 96 % čistota: (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 gm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH~) = 455,3.
Príklady 409-416
Všeobecný spôsob prípravy piperidinových amidových analógov A/2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amínu
421
Amino kys. 11.25 ekviv ) EDO (1.2S ekviv.)
HOAt
DIPEA (S.Q ekviv.) CHjCij
Každá z 20 ml scintilačných vialiek sa naplní dihydrochloridom A/2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-(í]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (45 mg, 0,085 mmol), Λ'-nechránenou alebo A-chránenou aminokyslinou (1,25 ekviv.), 1-hydroxy-7-azabenzotriazoIom (12 mg, 0,085 mmol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochloridom (20 mg, 1,06 mmol), A-etyl-A'W-diizopropylamínom (74 μΐ, 0,425 mmol) a dichlórmetánom (5 ml). Reakcia sa sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2,5 dňa. Pre dobehnutí reakcie je možné pridať ďalší A-etyl-A/A-diizopropylamín (15 μΐ, 0,085 mmol) a l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (8 mg, 0,0425 mmol). Na lepšiu rozpustnosť je možné tiež pridať DMF (1 ml). Reakcie sa koncentrujú vo vákuu, rozpustia v dichlórmetáne (2 ml), premyjú soľankou (2 ml) a vrstvy sa separujú pretiahnutím cez cartridge Empore (6 ml). Organická vrstva sa koncentruje za zníženého tlaku. Produkty, ktorých čistota je menšia než 80 %, sa purifikujú RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm Gradient: 15 % až 35 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 40 minút; Deltapak C18, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm stĺpec). A-Zerc-butoxykarbonyl ako chrániaca skupina produktov (0,11 mmol) sa odstraňuje 6 N HCI (0,7 ml) a acetónom (3,5 ml) pri teplote 45 °C po dobu 4,5 hodín. Acetón sa odstráni za zníženého tlaku a produkty sa purifikujú RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 15 % až 35 % gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 40 minút; Deltapak 08, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm stĺpec).
A’-(9-fluorenylmetoxykarbonyl) ako chrániaca skupina produktov (0,126 mmol) sa odstraňuje piperidínom (0,4 ml) v DMF (1,6 ml) pri izbovej teplote po dobu 3,5 hodiny. Produkty sa potom purifikujú RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 15 % až 35 % gradient acetonitril/0.1 M vodný octan amónny v priebehu 40 minút; Deltapak 08, 300 Ä, 15 pm, 40 x 100 mm stĺpec). Nasledujúce zlúčeniny sa analyzujú RP-HPLC (5 % 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri
422 teplote 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec) a hmotnostnou spektrometriou.
Pr. Štruktúra Východisková aminokyslina m/z (MH+) HPLC R, (min) Čistota
409 /2? ,.ó L o - O Λ° 0 582,2 11,394 96%
410 pH „p A° Na4- T 0 596,3 11,104 91 %
j
411 /H p 3? 0 Λκ 540,2 9,287 93 %
l· r
412 pH „ ô A ΟγΌΗ 566,2 11,160 100%
v r--/ ° ΑΆ
423
413 rH N «Y HO^O ^^NFrrtoc 566,2 11,139 100 %
σ
414 h# N ' ή^-ΟΗ ^NFmoc 554,3 11,035 93 %
415 ó? A HO^O V^NBoc V/ 552,2 11,051 100 %
416 .W w r?° o o O oW x 551,9 11,027 100%
Príklad 417
Cz3-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ŕ7]pynmidín-3-yl}fenyl2,3 -dichlór-1 -benzénsulfonát
Roztok obsahujúci cis-4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cykl ohexy 1] -1 H-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}fenol (100 mg, 0,245 mmol). 2,3-dichlórbenzén-sulfonylchlorid (180
424 mg, 0,735 mmol) a trietylamín (0,34 ml, 2,45 mmol) v dichlórmetáne (8 ml) sa miešajú pri izbovej teplote po dobu 17 hodín. Pridá sa ďalší dichlórmetán (20 ml) a reakcia sa premyje soľankou (10 ml), pridá sa nasýtený vodný roztok NaHCCL (10 ml), látka sa suší (Na2SO4) a koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa cri-4-{4-amín-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl-2,3-dichlór-l-benzénsulfonát vo forme bielej pevnej látky (135 mg, 90 %);
RP-HPLC 11,787 minút, 97 % čistota: (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min;Z= 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 616,2.
NH,
N
C,
O-B
V
kat. Pd(PPb3)„ Na-CO,
DME HaO 80 eC
Príklad 418 //2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1 H-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-yl} benzyl)-5-metyl-l ,3-tiazol-2-amínu (a) Cri-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ď|pyrímidín-3-yljbenzaldehyd
Zmes cz5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-ylamínu (5,0 g. 11,33 mmol), 4-formylfenylboritej kyseliny (2,55 g, 16,98 mmol), paládiumtetrakistrifenylfosfínu (0,47 g, 0,4 mmol) a uhličitanu sodného (3,002 g, 28,32 mmol) v etylénglykole dimetyléteru (170 ml) a vode (30 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín. Pridá sa ďalší boronát (1,567 ekviv.) a katalyzátor (0,0135 ekviv.) a v reakcii sa pokračuje ďalších 40 hodín. Reakcia sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje vo vákuu. Zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (300 ml) a vodu (200 ml). Výsledný precipitát sa spojí filtráciou a suší na lyo425 filizátore, čím sa získa c/5-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-t/jpyrimidín-3-yljbenzaldehyd vo forme svetlohnedej pevnej látky (2,1 g, 43 %);
RP-HPLC 7,003 minút, 98 % čistota: (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec);
’H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ1,60 (2H, br t), 1,72 (2H, m), 2,06 (2H, m), 2,17 (3H, s), 2,27 (3H, m), 2,35-2,50 (6H, m), 3,39 (2H, m), 4,84 (IH, m), 7,88 (2H, d), 8,07 (2H, d), 8,26 (IH, s) a 10, 11 (IH, s).
b) V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl} benzyl)-5 -metyl-1,3-tiazol-2-amín
Zmes obsahujúca cis-4-{4-amino- l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohcxyl]-l/7pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}benzaldehyd (100 mg, 0,24 mmol) a 2-amino-5-metyltiazol (33 mg, 0,29 mmol) v titanium-izopropoxide (0,48 ml) sa mieša pri izbovej teplote po dobu 4 hodín. Pridá sa metanol (2 ml), potom opatrne borohydrid sodný (13,5 mg, 0,36 mmol). Po 10 minútach šumenia sa reakcia zastaví vodným roztokom hydroxidu sodného (0,1 N, 10 ml). Výsledná zmes sa nechá stáť cez noc, potom filtruje cez vrstvu Celitu s ďalší metanolom (približne 10 ml), filtrát sa zahusťuje do sucha, potom rozpustí v dichlórmetáne (50 ml) a premyje soľankou (50 ml). Vodná vrstva sa extrahuje ďalej dichlórmetánom (3 x 50 ml) a spojené organické vrstvy sa sušia (MgSCfi) a koncentrujú vo vákuu. Purifikáciou RP-HPLC (Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm stĺpec, 0 % -100 % acetonitril v 50 mM octane amónnom, pufrovanom na pH 4,5, pri 3,5 ml/min) sa získajú 2 frakcie, prvá frakcia obshauje (4-{4-amino-7-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-7//-cyklopenta[í/]pyrimidín-5-yl}fenyl)metanol (5 mg, 5 %);
RP-HPLC 6,261 minút, 82 % čistota: (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z (MH+) = 422,1. V druhej frakcii sa získa V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-3-yl}benzyl)-5-metyl-l,3-tiazol-2-amín (4 mg, 3 %);
426
RP-HPLC 8,344 minút, 100 % čistota: (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec);
'H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 1,59 (2H, br t), 1,70 (2H, m), 2,07 (2H, m), 2,10-2,50 (9H, m), 2,16 (3H, s), 2,54 (3H, s), 3,29 (2H, m), 4,47 (2H, d), 4,80 (1H, m), 6,66 (1H, s), 7,49 (2H, d), 7,61 (2H, d), 7,88 (1H, m) a 8,23 (1H, s).
Príklad 419 yV2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrir idín-3-yl}benzyl)-4-metyl-1,3-tiazol-2-amín
772-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</jpyrimidín-3-yl}benzyl)-4-metyl-l,3-tiazol-2-amín sa pripraví podľa rovnakého spôsobu a v rozsahu, ktoré sú uvedené pre 5-metylový analóg (viď vyššie) (l 1 mg, 8 %);
RP-HPLC 8,177 minút, 97 % čistota: (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ= 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec);
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 1,57 (2H, br t), 1,67 (2H, m), 2,07 (2H, m), 2,10-2,50 (9H, m), 2,19 (3H, s), 2,54 (3H, s), 3,29 (2H, m), 4,50 (2H, br s), 4,79 (1H, m), 6,17 (1H, s), 7,50 (2H, d), 7,62 (2H, d), 7,99 (1H, m) a 8,23 (1H, s).
Príklad 420
Czs-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyi]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dichlór-l,3-benzoxazol-2-amín
a) 2-Amino-6-chlórfenol
Roztok 2-chlór-6-nitrofenolu (1,210 g, 6,972 mmol) v etanole (50 ml) sa nechá reagovať s práškovým železom (1,947 g, 34,86 mmol) a koncentrovanou HCI (3 ml). Žltá zmes sa za427 krieva k refluxu po dobu 18 hodín, potom ochladí na izbovú teplotu. Reakčná zmes sa filtruje cez vrstvu Celitu a filtrát sa neutralizuje nasýteným vodným roztokom NaHCO3. Výsledná šedá suspenzia sa filtruje cez vrstvu Celitu a filtrát sa extrahuje etylacetátom (3 x 20 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú soľankou, sušia nad bezvodým síranom horečnatým, filtrujú sa a koncentrujú, čím sa získa čemá pevná látka. Trituráciou heptánom sa získa 2-amino-6chlórfenol (0,577 g, 58 %) vo forme tmavohnedej pevnej látky.
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 100 Ä, 5 pm, 250 x 4,6 mm stĺpec) tR = 7,30 minút, 91 %; m/z 143 (MH+).
b) Cz'5-;V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dichlór-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z cw-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,100 g, 0,245 mmol) a 2-amino-4,6-dichlórfenolu (0,044 g, 0,245 mmol) podľa spôsobu použitého pri syntéze cis-N2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cykl ohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-y 1} fenyl)-4-metyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (PH4042235). Zlúčenina sa pripraví vo forme belavej pevnej látky (0,008 g, 6 %):
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 100 Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm stĺpec) tR = 8,93 minút, 95 %; m/z 594 (MH+).
Príklad 421
C i5-772-(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1/7-pyrazolo[3,4-tf] py rim i dí n-3 -yl}fenyl)-7-metyl-l,3-benzoxazol-2-amín
a) 2-Amino-4,6-dichlórfenol
2-Amino-4,6-dichlórfenol sa pripraví z 2,4-dichlór-6-nitrofenolu (0,625 g, 2,40 mmol) podľa spôsobu opísaného pre 2-amino-6-chlórfenol. Zlúčenina sa pripraví vo forme čiernej pevnej látky (0,044 g, 10 %).
428
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 100 Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm stĺpec) tR = 9,033 minút. 74%; m/z 177 (MH+).
b) CA-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}fenyl)-7-metyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví zc/j-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklobexyl]-lA-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-4-amínu (0,100 g, 0,245 mmol) a 2-amino-6-metylfenolu (0,030 g, 0,245 mmol) podľa spôsobu použitého pri syntéze cis-N2-(4-(4-amino- l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylJ-lA-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-metyl-1,3-benzoxazol-2-amínu (PH4052419F). Zlúčenina sa pripraví vo forme belavej pevnej látky (0,018 g, 14 %):
RP-HPLC (25 % -100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 100 Ä, 5 pm, 250 x 4,6 mm stĺpec) tR = 7,37 minút, 85 %; m/z 539 (MH).
Príklad 422
Cis-N2-(4-{4-amino-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-py razolo [3,4-d]pyrimidín-3-y 1} fenyl)-7-chlór-1,3 -benzoxazol-2-amí n
a) 2-Amino-6-metylfenol
2-Amino-6-metylfenol sa pripraví z 2-metyl-6-nitrofenolu (0,500 g, 3,26 mmol) podľa spôsobu opísaného pre 2-amino-6-chlórfenol. Zlúčenina sa pripraví vo forme čiernej pevnej látky (0,030g, 8 %).
RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 100 Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm stĺpec) ír = 5,78 minút, 86 %; m/z 123 (MH+).
b) Cz.v-A2-(4- {4-amino- í -[4-(4-metyIpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-7-chlór-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z cA-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu (0,100 g, 0,245 mmol) a 2-amino-6-chlórfenolu (0,053 g, 0,367 mmol) podľa spôsobu použitého pri syntéze cA-A2-(4-{4-ami429 no-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-metyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (PH4052419F). Zlúčenina sa pripraví vo forme belavej pevnej látky (0,018 g, 13 %):
RP-HPLC (25 % -100 % CH, CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 100 Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm stĺpec) tR = 7, 78 minút, 94 %; do 558 (MH+).
Príklad 423
2-{4-Amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl}-3-pyridylkyanid
Na kopuláciu /V-(l,3-benzoxazol-2-yl)-//-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,052 g, 0,155 mmol) s 2-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)-3-pyridylkyanidom (0,045 g, 0,124 mmol) sa využije spôsob Suzukiho kopulácie použitý pri príprave etyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</)pyrimidín-l-yl]acetátu. Purifikáciou preparatívnou HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8p Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 10,1-11,2 min) sa získa 2-{4-amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl}-3-pyrtdylkyanid vo forme žltého prášku (0,004 g, 0,009 mmol):
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5p Hypersilu HS 08,250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 8,55 min; MS (MH)+ 446.
Príklad 424 jVl-[2-(DimetyIamino)etyl]-2-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-1 //-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidm-1 -yl)propánamid
Etyl-2-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)propanoát (2,03 g, 5,62 mmol), medziprodukt opísaný pri príprave etyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]propanoátu sa konvertuje na zod430 povedajúci metylester (1,90 g, 5,47 mmol) podľa esterifikačného spôsobu opísaného pri príprave metyl-4-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-í7Jpyrimidín-l-yl]butanoátu:
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 6, 88 mi. Tento metylester (0,110 g, 0,32 mmol) sa potom konvertuje na sekundárny amid s A/A-dimetyletyléndiamínom podľa spôsobu prípravy amidu použitého pri príprave Al-{4-[4-amino-l-(2-morfolino-2-oxoetyl)-17/-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl]-2-fluórfenyl}-2,3-dichlór-l-benzénsulfónamidu:
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 3,47 min.
Sekundárny amid (0,12 g, 0,30 mmol) sa kopuluje s A-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-Ar-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínom (0,100 g, 0,275 mmol) podľa spôsobu Suzukiho kopulácie použitého pri príprave etyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlórfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluórfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-l-yl]acetátu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 6,3-8,3 min) sa získa Al-[2-(dimetylamino)etyl]-2-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-177-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-l-yl)propánamid vo forme žltého prášku (0,0015 g, 0,003 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 7,60 min; MS (MH)+ 514.
Príklad 425
AL(4-{4-Amino-l-[2-kyano-4-(4-metylpÍperazino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenylj-.V '-(3-metylfenyl)močovina
Použije sa rovnaký spôsob ako pri príprave Al-(4-(4-amino-l-[2-kyano-4-(4-metylpiperazino)fenyl]-l/í-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-2,3-dichlór-l-benzénsulfónamidu s výnimkou toho, že finálny krok používaný pri príprave močoviny na prípravu etyl
431
-2-(4-amino-3 - {3-fluór-4- [(3-toluidinokarbonyl)amino] fenyl} -1 //-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-1 -yl)acetátu zahrnuje reakciu 2-[4-amino-3-(4-amino-3-fluórfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]-5-(4-metylpiperazino)benzonitrilu (0,018 g, 0,041 mmol) s w-tolylisokyanátom (0,005 ml, 0,040 mmol). Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 9,3-10,3 min) sa získa N-(4-{4-amino-l-[2-kyano-4-(4-metylpiperazino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-M-(3-metylfenyl)močovina vo forme žltého prášku (0,008 g, 0,014 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 8,03 min; MS (MH)+ 577.
Príklad 426
Cz5-jV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazmo)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-y 1} fenyl)-6-chlór-1,3-benzotiazol-2-amín
Pevný 4-brómanilín (1,00 g, 5,81 mmol) a 2,6-dichlórbenzotiazol (1,18 g, 5,81 mmol) sa zahrievajú pri teplote 140 °C po dobu 3 dní v banke vybavenej chladičom (fúzia sa objaví po pár minútach za vzniku čirého roztoku, ktorý stuhne v priebehu 3 dní). Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu, čím sa získa M-(4-brómfenyl)-ÍV-(6-chlór-l,3-benzotiazol-2-yl)amín (1,97 g, 5,81 mmol):
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 14,65 minút.
Spôsob prípravy boronátu:
Surový /V-(4-brómfenyl)-7V-(6-chlór-l,3-benzotiazol-2-yl)amín (0,178 g, 0,525 mmol), bis(pinakolato)diborón (0,180 g, 0,709 mmol), octan draselný (0,154 g, 1,57 mmol) a [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatý (II) (0,043 g, 0,053 mmol, [1:1 komplex s dichlórmetánom]) v A/M-dimetylformamide (3 ml) v utesniteľnej Schlenkovej banke sa zahrieva pri teplote 90 °C po dobu 24 hodín. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu, filtruje cez Celit a surový produkt sa purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/heptán (1:3), čím sa získa boronátový medziprodukt M-(6-chlór-l,3-benzotiazol-2-yl)-?/432
-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenylJamín vo forme bieleho prášku (0,116 g, 0,30 mmol):
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 15,15 minút.
Spôsob vykonania Suzukiho kopulácie:
Zmes AL(6-chlór-l,3-benzotiazol2-yl)-jV-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,116 g, 0,30 mmol), c;k-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazmo)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu (0,106 g, 0,24 mmol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,014 g, 0,012 mmol) v dimetylétere etylénglykolu (3,0 ml), uhličitanu sodného (0,064 g, 0,60 mmol) a vody (1,5 ml) v uzavretej Schlenkovej banke sa zahrieva pri teplote 90 °C po dobu 24 hodín. Zmes sa ochladí, zriedi vodou (10 ml) a extrahuje zmesou metanolu a dichlórmetánu (1:19, 3 x 20 ml). Spojená organická frakcia sa suší (síranom horečnatým), filtruje, koncentruje a parifikuje preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 7,8-10,0 min), čím sa získa cí's-N2-(4-{4-ammo-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-6-chlór-l,3-benzotiazol-2-amín vo forme žltého prášku (0,036 g, 0,062 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 8,42 min; MS (MH)+ 574.
Príklad 427
Cis-N2-(4- {4-Amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín- 3 -yl}fenyl)-6-metoxy-l,3-benzotiazol-2-amín
Spôsobom, ktorý je podobný spôsobu použitému na prípravu cís-N2-(4-4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-ylfenyl)-6-chlór-l,3-benzotiazol-2-amínu s výnimkou toho, že sa použije 2-chlór-6-metoxybenzotiazol (0,352 g, 2.05 mmol) a purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18. 250 x 21
433 mm stĺpec, Rt 6,3-8,3 min) sa získa cz'5-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}fenyl)-6-metoxy-l,3-benzotiazol-2-amín vo forme bieleho prášku (0,046 g, 0,080 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 7,40 min; MS (MH)+ 570.
Príklad 428
Cz.r-/V2-(4-{4-ammo-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl} fenyl)-4-ety 1-1,3 -tiazoI-2-amín
Roztok fluorenylmetyloxykarbonyl-izotiokyanátu (1,36 g, 4,84 mmol, Keamy, P. C.; Femandez, M.; Flygare, J. A. J. Org. Chem, 1998,63,196-200) v dichlórmetáne (40 ml) sa pridá pipetou do roztoku 4-brómanilínu (0,86 g, 5,00 mmol) v dichlórmetáne (10 ml), pričom teplota sa udržuje pri 0 °C a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 14 hodín. Reakcia sa zriedi dichlórmetánom (60 ml) a premyje vodnou kyselinou chlorovodíkovou (0,5 M, 2 x 10 ml). Organická vrstva sa suší (síranom horečnatým), filtruje a koncentruje, čím sa získa 9//-9-fluorenyl-metyl-//-[(4-brómanilino)karbotioyl]karbamát (2,25 g, 4,97 mmol):
RP-HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 14,25 minút.
Spôsob prípravy tiazolu:
9//-9-fluorenyl-metyl-A-[(4-brómanilino)karbotioyl]karbamát (0,25 g, 0,55 mmol) sa rozpustí v zmesi piperidínu a N,//-dimetylformamidu (1:6, 3,5 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozpustí v zmesi octovej kyseliny (1 ml), etanolu (2 ml) a dioxánu (2 ml). Pridá sa 1 -bróm-2-butanón (90 %, 0,11 ml, 1,10 mmol) a zmes sa mieša po dobu 14 hodín pri izbovej teplote. Reakčná zmes sa zriedi polovičným objemom nasýteného vodného roztoku uhličitanu sodného (15 ml) a extrahuje zmesou metanolu a dichlórmetánu (1:19, 3 x 20 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia (síranom horečnatým), filtrujú, koncentrujú a purifikujú zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/heptán (1:4), čím sa získa bromtiazol A-(4-brómfenyl)-//-(4-etyl-l,3-tiazol-2-yl)amín (0,15 g, 0,53 mmol):
434
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) R, 13,15 minút.
Vyššie pripravený bromtiazolový medziprodukt sa konvertuje na boronát podľa spôsobu použitého pri príprave Aľ2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-6-chlór-l,3-benzotiazol-2-amínu, čím sa získa boronátový medziprodukt A-(4-etyl-l,3-tiazol/2-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,158 g, 0,48 mmol):
RP-HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 13,60 minút.
Boronátový medziprodukt (0,15 g, 0,45 mmol) sa kopuluje s c;k-3-jod/l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínom (0,182 g, 0,41 mmol) podľa spôsobu Suzukiho kopulácie opísaného pri príprave A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidm-3-yl}fenyl)-6-chlór-l,3-benzotiazol-2-amínu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím stĺpca 8μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 7,0-8,0 min) sa získa cw-JV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-etyl-l,3-tiazol-2-amín vo forme belavého prášku (0,069 g, 0,133 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 7,05 min; MS (MH)+ 518.
Príklad 429
C/5-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl} fény l)-4,5-dimetyl-l,3-tiazol-2-amín
Využije sa spôsob prípravy tiazolu opísaný pri príprave c/s-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í7|pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-etyl-l,3-tiazol-2-amínu s výnimkou toho, že ako alkylačné činidlo sa použije 3-bróm-2-butanón (0,183 g, 1,21 mmol) a alkylácia sa vykonáva pri teplote 40 °C po dobu 24 hodín. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21
435 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 6,7-7,7 min) sa získa cis-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl} fenyl)-4,5-dimetyl-1.3-tiazol-2-amín vo forme belavého prášku (0,069 g, 0,133 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 6,83 min; MS (MH)+ 518.
Príklad 430
Cis-N2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidín-3 -yl}fenyl)-4-fenyl-l,3-tiazol-2-amín
Využije sa spôsob prípravy tiazolu opísaný pri príprave c/.s'-A'2-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimi dín-3 -yl} fenyl)-4-ety 1-1,3 -tiazol-2-amínu s výnimkou toho, že ako alky lačné činidlo sa použije 2-brómacetofenón (0,131 g, 0,66 mmol). Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersil HS Cl 8, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 8,7-9,8 min) sa získa cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]- 1/Z-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-fenyl-l,3-tiazol-2-amín vo forme žltého prášku (0,036 g, 0,064 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 8,22 min; MS (MH)+ 566.
Príklad 431
CA-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-(4-metylfenyl)-l,3 tiazol-2-amín
Využije sa spôsob prípravy tiazolu opísaný pri príprave c/s-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-etyl-l,3-tiazol-2-amínu s výnimkou toho, že ako alkylačné činidlo sa použije 2-bróm-4'-metylacetofenón (0,118 g, 0,554 mmol). Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom
436 octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu IIS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 9,1-10,7 min) sa získa cw-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-(4-metylfenyl)-l,3-tiazol-2-amín vo forme belavého prášku (0,022 g, 0,038 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) R( 8,88 min;
MS MH+ 580.
Príklad 432
Cis-N2-(A- {4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3 -yl} fényl)-5-metyl-4-fenyl-1,3 tiazol-2-amín
Využije sa spôsob prípravy tiazolu opísaný pri príprave cL-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-1 H-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-etyl-1,3-tiazol-2-amínu s výnimkou toho, že ako alkylačné činidlo sa použije 2-brómpropiofenón (0,081 ml, 0,532 mmol) a alkylácia sa vykonáva pri teplote 50 °C po dobu 24 hodín. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 9,1-10,3 min) sa získa cis-V2-(4-{4-amino-1-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1] -1 H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-yl} fenyl)-5-metyl-4-fenyl-l,3-tiazol-2-amín vo forme bieleho prášku (0,015 g, 0,026 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 8,67 min; MS (MH)+ 580.
Príklad 433
Tri-maleát M-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(3Ä)-3-fenylbutánamid (3Ä)-3 -fény lbutanoy lchlorid
437
Roztok 72-3-fenylbutyrovej kyseliny (0,755 g, 4,6 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) sa nechá reagovať s oxalylchloridom (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kvapkou dimetylformamidu. Reakčná zmes sa trepe po dobu 15 hodín pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Reakčná zmes sa trepe po dobu 15 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa kvantitatívne množstvo (372)-3-fenylbutanoylchloridu. Olej sa použije priamo v nasledujúcej reakcii.
Tri-maleát NI -(4-{4-amino-1-(1-(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-17/-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-(372)-3-fenylbutánamidu
Roztok 3 -(4-amino-3 -metoxyfeny 1)-1 - [l-( 1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1 N-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridíne (8 ml) pri teplote -5 °C sa nechá reagovať s roztokom (372)-3-fenylbutanoylchloridu (0,420 g, 2,3 mmol) v dichlórmetáne (3 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote -5 °C, potom sa kúpeľ zo suchého ľadu odstráni a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá (37?)-3-fenylbutanoylchlorid (0,210 g, 1,15 mmol) a zmes sa mieša po dobu 2 hodín, pridá sa roztok hydroxidu sodného (1 N) (10 ml) a zmes sa mieša cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (20 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (125 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. NI-(4-{4-amino-1-[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-(372)-3-fenylbutánamid sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 15 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (10 min), 20 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (15 min), 50 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (7 min), čím sa získa 0,378 g (57 %) čistého NI-(4-{4-amino-1-[1(1-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(372)-3-fenylbutánamidu. Horúci roztok NI-(4-{4-amino-1-[1-(1-metylpiperidín-4-y l)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(37?)-3-fenylbutánamidu (0,378 g, 0,649 mmol) v etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,226 g, 1,95 mmol) v etylacetáte. Precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší v lyofilizátore, čím sa získa tri-maleát NI-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-17/-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(372)-3-fenylbutánamidu.
438 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,200 (s, 1H), 8,263 (s, 1H), 8,1747-8,1543 (d, 1 H, J = 8,16 Hz), 7,312-7,282 (m, 4H), 7,235-7,232 (s, 1H), 7,211-7,168 (m, 2H), 6,114 (s, 6H), 5,061 (m, 1H), 3,890 (s, 3H), 3,301 (m, 4H), 2,997 (m, 2H), 2,783-2,741 (m, 6H), 2,541 (m, 8 H), 2,2612,185 (m, 4H), 1,879 (m, 2H); HPLC Perkin Elmer Pecosphere C18, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100 % 50 mM octan amónny acetonitril v 4,5 minútach, C36H44N6O3 (581,2), 95 %. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 mil/min) Rt 2,64 min (100 %).
Príklad 434
Tri-maleát JVl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpÍperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-rf]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-benzo[ó]furán-2-karboxamid
Benzo[ó]furán-2-karbonylchlorid
Suspenzia 2-benzofurankarboxylovej kyseliny (0,746 g, 4,6 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) sa nechá reagovať s oxalylchloridom (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kvapkou dimetylformamidu. Reakčná zmes sa trepe po dobu 15 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa kvantitatívne množstvo benzo[á]furán-2-karbonylchloridu. Olej sa použije priamo v nasledujúcej reakcii.
Tri-maleát M-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-benzo[ó]furán-2-karboxamidu
Roztok 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridíne (8 ml) pri teplote -5 °C sa nechá reagovať s roztokom benzo[č>]furán-2-karbonylchloridu (0,415 g, 2,3 mmol) v dichlórmetáne (3 mi). Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote 5 °C, potom sa kúpeľ zo suchého ľadu odstráni a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá benzo [ájfurán-2-karbonylchlorid (0,207 g, 1,15 mmol) a zmes sa mieša po dobu 2 hodín, pridá sa (1 N) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a zmes sa mieša cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (20 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (125 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vo439 dou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. ΛΊ-(4- {4-amín-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1 H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl))-benzo[ó]furán-2-karboxamid sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 15 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (10 min), 20 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (15 min), 50 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (7 min), čím sa získa 0,143 g (21 %) čistého Nl-(4- {4-amino-1 - [1 -(1 -mety lpiperidín-4-y 1) piper i d í η-4-y 1 ] -1 H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimÍdín-3 -yl} -2-metoxyfenyl))-benzo[ó]furán-2-karboxamidu. Horúci roztok Hl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyľ))-benzo[6]furán-2-karboxamidu (0,143 g, 0,246 mmol) v etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,086 g, 0,739) v etylacetáte, precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší v lyofilizátore, čím sa získa tri-maleát Hl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-y 1]-1 H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-y 1} -2-metoxyfenyl)-benzo[ň] furán-2-karboxamidu.
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ, 9,518 (s, 1H), 8,282 (s, 1H), 8,2652-8,2447 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,849-7,814 (m, 2H), 7,7813-7,7603 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,562-7,523 (m, 1H), 7,418-7,369 (m, 2H), 7,338-7,313 (m, 1H), 6,088 (s, 5H), 5,10-5,00 (m, 1H), 4,003 (s, 3H), 3,529 (m, 4H), 3,314 (m, 2H), 2,971 (m, 2H), 2,778 (s, 3H), 2,497 (m, 3H), 2,209 (m, 4H), 1,909 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100 % 50 mM octan amónny až acetonitril v 4,5 minútach, C36H44N6O3 (581,2), 95 %. LCMS (Stĺpec Perkin Elmer, Pecosphere C18, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 mil/min) Rt 2,73 min (100 %).
Príklad 435
Tri-maleát Hl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfeny 1)-(35)-3 -fenylbutánamid (35)-3-fenylbutanoylchlorid
Roztok 5-3-fenylbutyrovej kyseliny (0,755 g, 4,6 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) sa nechá reagovať s oxalylchloridom (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kvapkou dimetylformamidu. Reakčná zmes sa trepe po dobu 15 hodín pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Reakčná
440 zmes ša trepe po dobu 15 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa kvantitatívne množstvo (35)-3-fenylbutanoylchlorid. Olej sa použije priamo v nasledujúcej reakcii.
Tri-maleát 7/1 -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yljpiperidín-4-y 1]-1 H-pyrazolo [3,4-čfjpyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-(3S)-3 -fenylbutánamid
Roztok 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l -[1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-y 1]-1 H-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridíne (8 ml) pri teplote -5 °C sa nechá reagovať s roztokom (3S)-3-fenylbutanoylchloridu (0,420 g, 2,3 mmol) v dichlórmetáne (3 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote -5 °C, potom sa kúpeľ zo suchého ľadu odstráni a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá (35)-3-fenylbutanoylchlorid (0,210 g, 1,15 mmol) a zmes sa mieša po dobu 2 hodín. Pridá sa (IN) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a zmes sa mieša cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (20 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (125 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. M-(4-{4-amino-l-[1-(1-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-ylj-1 tf-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(3S)-3-fenylbutánamid sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 15 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (10 min), 20 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (15 min), 50 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (7 min), čím sa získa 0,455 g (68 %) čistého Ni -(4-{4-amino- I-[l-(1 -metylpipcridín-4-y l)piperidín-4-yl]-1 H-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxy fenyl)-(35)-3-fénylbutánamidu. Horúci roztok JVl-(4- {4-aminol-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-lH-pyrazolo[3,4-V]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(35)-3-fenylbutánamidu (0,455 g, 0,782 mmol) v etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,272 g, 2,35) v etylacetáte. Precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší v lyofilizátore, čím sa získa tri-maleát Nl -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(3S)-3-fenylbutánamidu.
'H NMR (DMSO-dft,400 MHz) δ 9,199 (s, 1H), 8,261 (s, 1H), 8,1733-8,1528 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,312-7,282 (m, 4H), 7,236-7,232 (m, 1H), 7,211-7,168 (m, 2H), 6,094 (s, 6H), 5,046 (m, 1H), 3,890 (s, 3H), 3,534 (m, 4H), 2,994 (m, 2H), 2,784-2,740 (m, 6H), 2,506-2,470 (m, 8H), 2,442-2,200 (m, 4H), 1,855 (m, 2H);
441
HPLC Perkin Elmer Pecosphere C18, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100 % 50 mM octan amónny až acetonitril v 4,5 minútach, C36H44N6O3 (581,2), 95 %. LCMS (Stĺpec Perkin Elmer, Pecosphere C18, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 mil/min) Rt 2,64 min (100 %).
Príklad 436
Terc-buty 1-77-(4-{4-amino-1 -[4-nitroťenyl]-177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl} -2-metoxy ťenyl)karbamát
4-Amino-l-[4-nitroťenyl]-3-jód-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín
Suspenzia 3-jód-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amínu (2,00 g, 7,66 mmol) v dimetylťormamide (40 ml) sa nechá reagovať s uhličitanom céznym (3,74 g, 11,49 mmol) a /?-fluórnitrobenzénom (1,08 g, 7,66 mmol). Reakčná zmes mieša pri teplote 80 °C po dobu 5 hodín pod atmosťérou dusíka. Reakčná zmes naleje na ľad. Precipitát sa filtruje a premyje vodou, produkt, 4-amino-l-[4-nitroťenyl]-3-jód-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín, sa suší v lyofilizátore cez noc, čím sa získa 2,55 g (87 %).
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,4952-8,4720 (m, 2H), 8,4142-8,3654 (m, 3H);
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl 8 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 ml/min), ír = 3,73 min (100 %) MH+ 380,6.
7erc-butyl-77-(4-{4-amino-1-[4-nitroťenyl]-l 77-pyrazolo [3,4-c/]pyrimi dín-3-yl}-2-metoxyťenyl)karbamát
Suspenzia 4-amino-l-[4-nitroťenyl]-3-jód-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidínu (0,500 g, 1,31 mmol) v dimetylťormamide (8 ml) sa nechá reagovať s terc-butyl-77-[2-metoxy-4-(4,·4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)ťenyl]karbamátom (0,915 g, 2,62 mmol), tetrakis(triťenylťosťín)paládiom (0,091 g, 0,06 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,333 g, 3,14 mmol) vo vode (4 ml). Reakčná zmes mieša pri teplote 85 °C po dobu 26 hodín pod atmosťérou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá voda, precipitát sa filtruje a premyje vodou, pevný podiel sa trituruje
442 dietyléterom, čím sa získa 0,431 g (63 %) íerc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-nitrofenyl]-l/ŕ-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl)karbamát.
‘H NMR (DMSO-dg,400 MHz) δ 8,6862-8,6634 (d, 2H, J - 9,12 Hz), 8,4897-8,4423 (m, 3H), 8,1117 (s, 1H), 8,0074-7,9872 (d, 1H, J = 8,08 Hz), 7,3743-7,3293 (m, 2H), 3,9189 (s, 3H), 1,4959 (s, 9H);
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 mil/min) tR = 4,38 min MH+ 478,1.
Príklad 437
4-Amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-nitrofenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/)pyrimidín
Suspenzia terc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-nitrofenyl]-l//-pyrazoIo[3,4-6/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)karbamátu (0,386 g, 0,808 mmol) v dichlórmetáne (8 ml) pri teplote 0 °C sa nechá reagovať s trifluóroctovou kyselinou (1,6 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote 0 °C, potom sa ľadový kúpeľ odstráni a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Reakčná zmes sa mieša po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. K olejovitému zvyšku sa pridá dichlórmetán (15 ml) a hydroxid sodný, vzniknutý precipitát sa filtruje a suší cez noc v lyofilizátore, čím sa získa 0,286 g (94 %) 4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-nitrofenyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidínu.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,7826-8,759 (m, 2H), 8,48928,4296 (m, 3H), 7,1861-7,1338 (m, 2H), 6,8320-6,8121 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 5,2225 (s, 2H), 3,8672 (s, 3H);
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 ml/min), tR = 3,48 min, MH+ 377,6.
443
Príklad 438
Di-maleát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamidu
1-Metyl-1 //-2-indolkarbony Ichlorid
Suspenzia l-metylindol-2-karboxylovej kyseliny (0,805 g, 4,6 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) sa nechá reagovať s oxalylchloridom (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kvapkou dimetylformamidu. Reakčná zmes sa trepe po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa kvantitatívne množstvo 1 -mety 1-1 //-2-indolkarbony 1chloridu a olej sa použije priamo v nasledujúcej reakcii.
Di-maleát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfenyl))-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamidu
Roztok 3 -(4-amino-3 -metoxyfenyl)-1 -[l-( 1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-y 1] -1 //-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridíne (8 ml) pri teplote -5 °C sa nechá reagovať s roztokom 1-metyl-1//-2-indolkarbonylchloridu (0,445 g, 2,3 mmol) v dichlórmetáne (3 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote -5 °C, potom sa kúpeľ zo suchého ľadu odstráni a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá 1-metyl-1//-2-indolkarbonyIchlorid (0,221 g, 1,15 mmol) a zmes sa mieša po dobu 2 hodín. Pridá sa (IN) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a zmes sa mieša cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (20 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (125 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. VI-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl))-1-metyl-l//-2-indolkarboxamid sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 15 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (10 min), 20 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (15 min), 50 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (7 min), čím sa získa 0,463 g (68 %) čistého VI(4- {4-amino-1 -[l-( 1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l //-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl))-l-metyl-1//-2-indolkarboxamidu. Horúci roztok Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1 //-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl))-1 -metyl-1 H-2-indolkarboxamidu (0,463 g, 0,781 mmol) v etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,272,2,34 mmol) v etylacetáte precipitát sa filtruje pod atmosférou
444 dusíka a suší v lyofilizátore, čím sa získa di-maleát Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-ylj-17/-pyrazolo[3,4-c/]pyrinúdín-3-yl}-2-metoxyfenyl))-l-metyl-1/7-2-indolkarboxamidu.
‘H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 9,4495 (s, IH), 8,2848 (s, IH), 8,1505-8,1301 (d, IH, J = 8,16 Hz), 7,7232-7,7034 (d, IH, J = 7,92 Hz), 7,6054-7,5844 (d, IH, J = 8,4 Hz), 7,3583-7,3012 (m, 4H), 7,1778-7,1406 (m, IH), 6,0804 (s, 4H), 5,10-5,00 (m, IH), 4,0403 (s, 3H), 3,9614 (s, 3H), 3,5336 (m, 4H), 3,1879 (m, 2H), 2,9937 (m, 2H), 2,7836 (s, 3H), 2,4979 (m, 3H), 2,2157 (m, 4H), 1,8513 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100 % 50 mM octan amónny až acetonitril v 4,5 minútach, C36H44N6O3 (581,2), 95 %. LCMS (Stĺpec Perkin Elmer, Pecosphere C18, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 mil/min) Rt 2,76 min (100 %).
Príklad 439
Di-maleát /71-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl))-177-2-indolkarboxamidu
17/-2-indolkarbonylchlorid
Suspenzia indol-2-karboxylovej kyseliny (0,742 g, 4,6 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) sa nechá reagovať s oxalylchloridom (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kvapkou dimetylformamidu. Reakčná zmes sa trepe po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa kvantitatívne množstvo 1/7-2-indolkarbonylchloridu. Olej sa použije priamo v nasledujúcej reakcii.
Di-maleát 771-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-17/-pyrazolo[3,4-c7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl))-17ŕ-2-indolkarboxamidu
Roztok 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-1 -[l-( 1 -metyIpiperidín-4-yl)piperidίη-4-y 1 ]-177-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridíne (8 ml) pri teplote -5 °C sa nechá reagovať s roztokom 17/-2-indolkarbonylchloridu (0,413 g, 2,3 mmol) v dichlórmetáne (1 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote -5 °C. Kúpeľ zo suchého ľadu sa odstráni
445 a reakčná zmes mieša po dobu 18 hodín pod atmosférou dusíka. Pridá sa l Α-2-indolkarbonylchlorid (0,207 g, 1,15 mmol) a zmes sa mieša ďalšie 2 hodiny. Pridá sa (IN) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a zmes sa mieša po dobu 30 minút. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (25 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou a soľankou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku, čím sa získa surový Al-(4-{4-amino-1-(1-(1 -mety Ip iperidí η-4-y l)pip eri dí η-4-y 1] -1 A-pyrazolo[3,4-<ďjpyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfeny 1))-1 Α-2-indolkarboxamid. 1 A-(4- {4-amino-1-(1-(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl j-1H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl))-l Α-2-indolkarboxamid sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 15 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne, čím sa získa surový produkt. Druhou chromatografiou gradientom 10 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) až 50 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) sa získa 0,139 g (21 %) čistý Al-(4-{4-amino-l-(l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-lA-pyrazolo(3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl))-lA-2-indolkarboxamid. Al-(4-{4-amino -1-(1-(1 -metylpiperidin-4-y l)piperi dí n-4-y 1 ] -1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl))-lA-2-indolkarboxamid (0,139 g, 0,24 mmol) v horúcom etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0, 083 g, 0,719 mmol) v etylacetáte. Vzniknutý precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka, čím sa získa 0,166 g di-maleátu Al-(4-{4-amino-l-(l-(1 -mety lpiperidín-4-y l)piperidín-4-yl] -1 A-pyrazolo (3,4-ď]pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfeny 1)) -1 Α-2-indolkarboxamidu.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 11,83 (s, IH), 9,442 (s, IH), 8,283 (s, IH), 8,154-8,134 (d, IH, J = 8,12 Hz), 7,694-7,674 (d, IH, J = 8, 04 Hz), 7,498-7,477 (d, IH, J = 8,20 Hz), 7,4077,402 (m, IH), 7,352-7,325 (m, 2H), 7,267-7,229 (m, IH), 7,112-7,074 (m, IH), 6,078 (s, 4H), 5,10-5,00 (m, IH), 3,974 (s, 3H), 3,525 (m, 4H), 3,178 (m, 2H), 2,975 (m, 2H), 2,771 (s, 3H), 2,457 (s, 3H), 2,208 (m, 4H), 1,909 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere C18, 3 pm , 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100 % 50 mM octan amónny acetonitril v 4,5 minútach, C36H44N6O3 (581,2), 95 %.
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 ml/min) Rt 2,67 min (100 %).
446
Príklad 440
3-Fenyl-l-trityl-177-pyrazolo[3,4-í7|pyrimidín-4-amín
3-Jód-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidm-4-amín
Suspenzia 3-jód-177-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (3,0 g, 11,5 mmol) v dimetylformamide (50 ml) sa nechá reagovať s uhličitanom céznym (5,62 g, 17,25 mmol) a trifenylmetylchloridom (3,85 g, 13,8 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 70 °C po dobu 22,5 hodiny pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá uhličitan cézny (3,75 g, 11,5 mmol) a trifenylmetylchlorid (3,2 g, 11,5 mmol) a zmes sa mieša po dobu 6,5 hodiny. Reakčná zmes sa naleje do ľadovej vody, precipitát sa filtruje a premyje vodou, produkt, 3-jód-1 -trityl-177-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-4-amín, sa suší cez noc v lyofilizátore. Výsledný pevný podiel sa trituruje etylacetátom, čím sa získa 3,05 g (53 %) 3-jód-l-trityl-177-pyrazolo[3,4-í7jpyrimidín-4-amínu.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 7,3190-7,1106 (m, 16H); TLC (Baker Pre-coated Hard Layer Silikagél TLC plates, Si250F 254, 30 % etylacetát v heptáne) Rf - 0,33.
3-Fenyl-l-trityl-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín
Roztok 3-jód-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amínu (1,0 g, 1,99 mmol) v dimetylformamide (20 ml) sa nechá reagovať s fenylboritou kyselinou (0,485 g, 3,8 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,138 g, 0,119 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0, 506g, 4,78 mmol) vo vode (10 ml). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 18,5 hodiny pod atmosférou dusíka. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a pridá sa voda (15 ml), precipitát sa filtruje a premyje vodou, surový pevný podiel sa trituruje dietyléterom (30 ml). Výsledný pevný podiel sa suší cez noc v lyofilizátore, čím sa získa 0,407 g (45 %) 3-fenyl-1-trityl-177-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu.
*H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 7,9416 (s, IH), 7,6190-7,6011 (m, 2H), 7,5369-7,4493 (m, 3H), 7,3995-7,2248 (m, 15H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP, 3,5 gm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min) Rt= 11,813 min (97%).
447
Príklad 441
VI - {4-[4-amino-1 -(4-oxocyklohexyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl] (3Ä)-3-fenylbutánamid (3R)-3-Fenylbutanoylchlorid (2,22 g, 12,18 mmol) v dichlórmetáne (10 ml) sa pridá do roztoku 4-[4-amino-3-(4-amino-3 -metoxyfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-e/]pyrimidín-1 -yl]-1 -cyklohexanónu (2,86 g, 8,12 mmol) v pyridíne (50 ml) pri teplote -10 °C. Po 15 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc, pridá sa hydroxid sodný (1,0 N, 15 ml) a organické rozpúšťadlo sa zahusťuje, vodný zvyšok extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSOq, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol (95:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa Vl-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-(3Ä)-3-fenylbutánamid (3,11 g, 77 %).
‘H NMR (CDClj)ôl,40 (d, J = 6,97 Hz, 3H), 2,04 (m, 1 H), 2,59-2,78 (m, 9H), 3,40 (m, IH), 3,98 (s, 3H), 5,28 (m, IH), 5,70 (bs, 2H), 7,15-7,35 (m, 7H), 7,66 (s, IH), 8,38 (s, IH), 8,51 (d, J = 8,18, IH).
HPLC (Waters Alliance-Stípec: Waters Symmetry Shield, RPig, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm, eluenty: 5 % B/A až 95 % B/A v 9,0 minút, (B: acetonitril, A: 100 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,5 ml/min): Rt = 6,273 min.
Príklad 442 {4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-1 -yl] fenyl [metanol
a) 4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]benzaldehyd
3-(4-Fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-rf]pyrimidín-4-amín (2,0 g, 6,59 mmol) sa zmieša s 4-fluórbenzaldehydom (1,06 ml, 9,89 mmol), uhličitanom céznym (4,30 g, 13,19 mmol) v DMF (6 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 86 °C cez noc. Po ochladení na izbovú teplotu sa reakčná zmes naleje do ľadovej vody a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl] benzaldehydom (2, 46g, 92 %).
448 ’H NMR (CDCL) δ 7.19 (m, 5H), 7,46 (m, 2H), 7,78 (d, J = 8,64 Hz, 2H), 8,10 (d, J = 8,70 Hz, 2H), 8,44 (s, 1H), 8,59 (d, J = 8,70 Hz, 2H), 10,03 (s, 1H).
b) {4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1 -yIjfenyl}metanol
Borohydrid sodný (19 mg, 0,491 mmol) sa pridá do roztoku 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l-yl]benzaldehydu (100 mg, 0,245 mmol) v metanole (2 ml). Po 16 hodinách sa pridá THF (1 ml) a ďalší borohydrid sodný (19 mg, 0,491 mmol). Po 5 hodinách sa rozpúšťadlo odstráni, pridá sa voda a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/dichlórmetán (80:20 až 100:0) ako mobilnej fázy, čím sa získa {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<ď]pyrimidín-l-yl]fenyl} metanol (36 mg, 36 %).
‘H NMR (DMSO-d6) δ 4,56 (s, 2H), 5,27 (bs, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,47 (m, 4H), 7,76 (d, J = 8,64 Hz, 2H), 8,18 (d, J = 8,52,2H), 8,37 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec : Genesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ =410,1, Rt = 2,43 min.
Príklad 443 l-{4-[(4-Metylpiperazino)metyl]fenyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín
Do zmesi 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl]benzaIdehydu (100 mg, 0,245 mmol), 4-metylpiperazínu (37 mg, 0,369 mmol), ľadovej kyseliny octovej (35 mg, 0,589 mmol) v dichlóretáne (4 ml) sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (67 mg, 0,319 mmol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc, potom sa pridá ďalší triacetoxyborohydrid sodný (67 mg, 0,319 mmol) a reakčná zmes sa mieša znovu cez noc. Pridá sa voda (2 ml), potom uhličitan sodný (250 mg). Po intenzívním miešaní po dobu 1 hodiny sa vrstvy separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol (97:3 až 80:20) ako mobilnej fázy, čím sa získa 1449
-{4-[(4-metylpiperazino)metyl]fenyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amín (25 mg, 21 %).
‘H NMR (DMSO-de) δ 2,30 (s, 3H), 2,48 (bm, 8H), 3,56 (s, 3H), 5,75 (bs, 2H), 7,11 (d, J = 8,50, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,40 (m, 2H), 7,48 (d, J = 8,50 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 8,63 Hz, 2H), 8,12 (d, J = 8,50 Hz, 2H), 8,47 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min); MH+ = 492, 2, Rt = 2,97 min.
Príklad 444
7erc-butyl-N-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3 -y 1} -5-fluór-2-metoxyfenyl)karbamát
a) 1 -Bróm-2-fluór-5-metoxy-4-nitrobenzén
Do metanolu (1,54 ml, 38,0 mmol) v THF (30 ml) pri teplote 0 °C sa pridá Zerc-butoxid draselný (1,0 N v THF, 38 ml, 38 mmol). Po 30 minútach sa kalný roztok prevedie kanylou do roztoku l-bróm-2,5-difluór-4-nitrobenzénu (9,04g, 38,0 mmol) v THF (27 ml) o teplote -78 °C. Po 30 minútach sa chladiaci kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa nechá ohriať na teplotu 0 °C. Po 10 minútach sa pridá voda (250 ml). Organické rozpúšťadlo sa odstráni. Pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa l-bróm-2-fluór-5-metoxy-4-nitrobenzén (9,28 g, 98 %).
'H NMR (CDCb) δ 3,97 (s, 3H), 7,30 (d, J = 5,48 Hz, 2H), 7,71 (d, J = 7,58 Hz, 2H).
b) 4-Bróm-5-fluór-2-metoxyanilín
Vo 3 podieloch sa kyslý siričitan sodný (14,7 g, 84,4 mmol) pridá do roztoku l-bróm-2-fluór-5-metoxy-4-nitrobenzénu (9,28 g, 37,12 mmol) v etanole (180 ml) a vode (130 ml) pri teplote 80 °C. Po 5 hodinách sa organické rozpúšťadlo odstráni a pevný podiel vo vodnej vrstve sa spojí filtráciou, ďalej premyje zmesou heptánu a etylacetátu (3:2, 400 ml), filtrát sa zahusťuje, čím sa získa 4-bróm-5-fluór-2-metoxy anilín (3,29 g, 40 %).
450 ‘H NMR (DMSO-d6) δ 3,75 (s, 3H), 5,22 (s, 2H), 6,56 (d, J = 10,68 Hz, 2H), 6,94 (d, J = 6,57 Hz, 2H).
c) 7erc-butyl-N-(4-bróm-5-fluór-2-metoxyfenyl)karbamát
Di-terc-butyldikarbonát (3,42 g, 15,70 mmol) sa zmieša s 4-bróm-5-fluór-2-metoxyanilínom (3,29 g, 14,95 mmol) v THF (30 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 65 °C po dobu 3 dní, pričom každý deň sa pridáva di-ŕerc-butyl-dikarbonát (3,42 g, 15,70 mmol). Po odstránení rozpúšťadla sa zvyšok čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi heptán/etylacetát (95:5 až 85:15) ako mobilnej fázy, čím sa získa zmes požadovaného produktu /erc-butyl-N-(4-bróm-5-fluór-2-metoxyfenyl)karbamátu a di-terc-butyl-dikarbonátu (10,4 g). Do zmesi v metanole (30ml) pri teplote 0 °C sa pridá hydroxid sodný (50 % roztok, 2,0 ml) a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Po odstránení rozpúšťadla sa pridá voda a vodná vrstva sa extrahuje heptánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje, čím sa získa /<?rc-butyl-;V-(4-bróm-5-fluór-2-metoxyfenyljkarbamát (4,24 g, 89 %).
'H NMR (CDC13) δ 1,52 (s, 9H), 3,85 (s, 3H), 6,93 (d, J = 6,10 Hz, 1H), 7,06 (s, 1H), 8,01 (d, J = 10,4 Hz, 1H).
d) 7erc-butyl-N-[5-fluór-2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-karbamát
7erc-butyl-N-(4-bróm-5-fluór-2-metoxyfenyl)karbamát (4,24 g, 13,26 mmol), diborónpinakolester (4,04 g, 15, 91 mmol), octan draselný (3,90 g, 39,78 mmol) a [l,ľ-bis(difenylfosfino)-ferocén)dichlórpaládnatý (II) komplex s dichlórmetánom (0,32 g, 0,40 mmol) v DMF (75 ml) sa zahrievajú pri teplote 85 °C cez noc. Pridá sa ďalší podiel diborónpinakolesteru (2,02 g, 7,96 mmol) a [l,ľ-bis(difenylfosfmo)-ferocén)dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (0,32 g, 0,40 mmol) a v zahrievaní sa pokračuje ďalších 5 hodín. Po odstránení rozpúšťadla sa čierny zvyšok rozpustí v dichlórmetáne a filtruje cez Celit. Surová zmes sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi heptán/etylacetát (95:5 až 85:15) ako mobilnej fázy, čim sa získa zmes /erc-butyl-N-[5-fluór-2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu a diborón-pinakolesteru (1:1 pomer, 4.23 g), ktorá sa použije v nasledujúcej reakcii bez ďalšej purifíkácie.
451
e) Tran5-ťerc-butyl-./V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazmo)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-djpyrim idín-3 -y 1} -5 -fluór-2-metoxyfeny l)karbamát
Tľans-3-\odo-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyk! ohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4amín (0,60 g, 1,36 mmol), Zerc-butyl-/V-[5-fluór-2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (1,0 g, 2,72 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (0,094 g, 0,082mmol) a uhličitan sodný (0,35 g, 3,27 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (14 ml) a vodou (7 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5 až 70:30) ako mobilnej fázy, čím sa získa /‘ra«.v-/<?rc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<ŕJpyrimidín-3-yl}-5-fluór-2-metoxyfenyľ)karbamát (0,264 g, 35 %).
‘H NMR (DMSO-dé) δ 1,49 (s, 9H), 1,97 (m, 6H), 2,16 (s, 3H), 2,33 (m, 5H), 2,53 (m, 4H), 3,84 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,60 (d, J = 6,78 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 11,96 Hz, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,24 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ =555, 3, Rt = 2,00 min.
Príklad 445
7rm7s-3-(4-amino-2-fluór-5-metoxyfenyl)-1-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amín
Zmes trifluóroctovej kyseliny a dichlórmetánu (20:80, 7 ml) sa pridá do roztoku trans/erobutyl-A-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl}-5-fluór-2-metoxyfenyl)karbamátu (250 mg, 0,451 mmol) v dichlórmetáne (4,0 ml) pri teplote 0 °C. Po 15 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 4 hodín. Rozpúšťadlo sa potom zahusťuje a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne. Na úpravu pH na 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSCL, filtruje a zahusťuje, čím sa získa /ran,s-3-(4-ammo-2-fluór-5-metoxyfe452 nyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (179 mg, 87 %).
‘H NMR (CDC13) δ 1,56 (m, 2H), 2,15 (m, 7H), 2,31 (s, 3H), 2,51 (m, 4H), 2,67 (m, 4H), 3,88 (s, 3H), 4,16 (bs, 2H), 4,74 (m, 1H), 5,64 (bs, 2H), 6,56 (d, J = 10,84 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 6,55 Hz, 1H), 8,33 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Firmigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MlT =455,2, Rt = 0,63 min.
Príklad 446
Trans-N\ -(4-{4-amino- l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-3-yl} -5-fluór-2-metoxyfenyl)-Zra«í-2-fenyl-1 -cyklopropánkarboxamid
7ran.y-2-fenyl-l-cyklopropánkarbonylchlorid (32 mg, 0,176 mmol) v dichlórmetáne (0,3 ml) sa pridá do roztoku Zra«í-3-(4-amino-2-fluór-5-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidín-4-amínu (80 mg, 0,176 mmol) v pyridíne (1,5 ml) pri teplote 0 °C. Po 5 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 3 hodín. Pridá sa ďalší Zra«5'-2-fenyl-l-cyklopropánkarbonylchlorid (32 mg, 0,176 mmol) na dotiahnutie reakcie. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu, čím sa získa Zra«y-jVl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-5-fluór-2-metoxyfenyl)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid (93 mg, 88 %).
*H NMR (DMSO-d6) δ 1,35 (m, 1H), 1,50 (m, 3H), 1,98 (m, 6H), 2,19 (s, 3H), 2,37-2,68 (m, 11H), 3,87 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,09 (m, 1H), 7,21 (m, 3H), 7,31 (m, 2H), 8,21 (m, 2H), 9,82 (m, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+= 599,3, Rt = 1,97 min.
453
Príklad 447
7ere-butyl-A-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3.4-ó/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}karbamát
a) 3-Jód-1 -(1 -metyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín
3-Jód-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (0,5 g, 1,45 mmol), formaldehyd (30 % vo vode, 0,16 ml, 1,60 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,43 g, 2,03 mmol) sa zmiešajú v dichlóretáne (5 ml). Po 4 hodinách sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného, potom hydroxid sodný (1,0 N) na úpravu pH na 10, vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSCb, filtruje a zahusťuje, čím sa získa 3-jód-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (0,275 g, 53 %).
’H NMR (DMSO-dô) δ 1,85 (m, 2H), 2,09 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,88 (m, 2H), 4,75 (m, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,32 (s, 1H).
b) Terc-butyl-TV-{4-[4-amino-1 -(1 -mety 1-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} karbamát
3-Jód-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-4-amín (270 mg, 0,754 mmol), Zerc-butyl-//-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (290 mg, 0,829 mmol), paládium-tetrakistrifenylfbsfín (52 mg, 0,045 mmol) a uhličitan sodný (192 mg, 1,81 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (8 ml) a vodou (4 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a Zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (90:10 až 70:30) ako mobilnej fázy, čím sa získa Zerc-butyl-/V-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}karbamát (250 mg, 73 %).
’H NMR (DMSO-dô) δ 1,48 (s, 9H), 1,88 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,24 (m, 5H), 2,92 (m, 2H),
3,69 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,21 (m, 2H), 7,91 (d, J = 8,16 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 8,23 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
454
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MII+ = 454,2, Rt = 1,67 minút.
Príklad 448
Tri-maleát Al -(4- {4-amino-1 -[1-(1 -mety lpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4-zť] pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfeny 1)-(3 A)-3 -fény lbutánamidu (3R)-3-fenylbutanoylchlorid
Roztok R-3-fenylbutyrovej kyseliny (0,755 g, 4,6 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) sa nechá reagovať s oxalylchloridom (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kvapkou dimetylformamidu. Reakčná zmes sa trepe po dobu 15 hodín pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Reakčná zmes sa trepe po dobu 15 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa kvantitatívne množstvo (3R)-3-fenylbutanoylchloridu. Olej sa použije priamo v nasledujúcej reakcii.
Tri-maleát Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-(3Ä)-3-fenylbutánamidu
Roztok 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l A-pyrazolo[3,4-ŕ/lpyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridíne (8 ml) pri teplote -5 °C sa nechá reagovať s roztokom (3R)-3-fenylbutanoylchloridu (0,420 g, 2,3 mmol) v dichlórmetáne (3 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote -5 °C, potom sa kúpeľ zo suchého ľadu odstráni a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá (37?)-3-fenylbutanoylchIorid (0,210 g, 1,15 mmol) a zmes sa mieša po dobu 2 hodín. Pridá sa (1 N) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a zmes sa mieša cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (20 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (125 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku.
Al -(4- (4-amino-1-(1-(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l A-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(3R)-3-fenylbutánamid sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 15 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (10 min), 20 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (15 min), 50 % (metanolu
455 s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (7 min), čím sa získa 0,378 g (57 %) čistého IV-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(3R)-3-fenylbutánamidu. Horúci roztok VI-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-y l)piperidín-4-yl] -1 77-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-(37?)-3-fenylbutánamidu (0,378 g, 0,649 mmol) v etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,226 g, 1,95 mmol) v etylacetáte. Precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší v lyofilizátore, čím sa získa tri-maleát VI-(4-{4-amino-1-[1-(1-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(3R)-3-fenylbutánamidu.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,200 (s, 1H), 8,263 (s, 1H), 8,1747-8,1543 (d, 1H, J = 8,16 Hz), 7,312-7,282 (m, 4H), 7,235-7,232 (s, 1H), 7,211-7,168 (m, 2H), 6,114 (s, 6H), 5,061 (m, 1H), 3,890 (s, 3H), 3,301 (m, 4H), 2,997 (m, 2H), 2,783-2,741 (m, 6H), 2,541 (m, 8 H), 2,2612,185 (m, 4H), 1,879 (m, 2H); HPLC Perkin Elmer Pecosphere C18, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100 % 50 mM octan amónny acetonitril v 4,5 minútach, C36H44N6O3 (581,2), 95 %. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 ml/min) Rt 2,64 min (100%).
Príklad 449
Tri-maleát VI -(4-{4-amino-1 -[ 1-(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-benzo[ú]furán-2-karboxamid
B enzo [ú] furán-2 -karbony lchlorid
Suspenzia 2-benzofurankarboxylovej kyseliny (0,746 g, 4,6 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) sa nechá reagovať s oxalylchloridom (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kvapkou dimetylformamidu. Reakčná zmes sa trepe po dobu 15 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa kvantitatívne množstvo benzo[ď]furán-2-karbonylchloridu. Olej sa použije priamo v nasledujúcej reakcii.
Tri-maleát VI-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-benzo[ú]furán-2-karboxamidu
456
Roztok 3-(4-amino-3-metoxyfeny 1)-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yľ)piperidín-4-y 1]-1 V-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridíne (8 ml) pri teplote -5 °C sa nechá reagovať s roztokom benzo[ó]furán-2-karbonylchloridu (0,415 g, 2,3 mmol) v dichlórmetáne (3 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote 5 °C, potom sa kúpeľ zo suchého ľadu odstráni a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá benzo[&]furán-2-karbonylchlorid (0,207 g, 1,15 mmol) a zmes sa mieša po dobu 2 hodín. Pridá sa (1 N) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a zmes sa mieša cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (20 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (125 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. VI-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1 H-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl))-benzo[ó]furán-2-karboxamid sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 15 % (metanolu s 2 % hydroxídom amónnym) v dichlórmetáne (10 min), 20 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (15 min), 50 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (7 min), čím sa získa 0,143 g (21 %) čistého IV-(4-{4-amino- l-[l-( 1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1 H-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl))-benzo[Z>]furán-2-karboxamidu. Horúci roztok Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl))-benzo[Ď]furán-2-karboxamidu (0,143 g, 0,246 mmol) v etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,086 g, 0,739) v etylacetáte. Preč i pitá; sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší v lyofilizátore, čím sa získa tri-maleát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-ylj-1 H-pyrazolo [3,4-V]pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfenyl)-benzo[ú] furán-2-karboxamidu.
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,518 (s, 1H), 8,282 (s, 1H), 8,2652-8,2447 (d, 1H, J = 8, 2 Hz), 7,849-7,814 (m, 2H), 7,7813-7,7603 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,562-7,523 (m, 1H), 7,418-7,369 (m, 2H), 7,338-7,313 (m, 1H), 6,088 (s, 5H), 5,10-5,00 (m, 1H), 4,003 (s, 3H), 3,529 (m, 4H), 3,314 (m, 2H), 2,971 (m, 2H), 2,778 (s, 3H), 2,497 (m, 3H), 2,209 (m, 4H), 1,909 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min -100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v 4,5 minútach, C36H44N6O3 (581,2), 95 %. LCMS (Perkin Elmer,
Pecosphere C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 mil/min) Rt 2,73 min (100 %).
457
Príklad 450
Tri-maleát 771 -(4-{4-amino-1 -[1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-rTJpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(35)-3-fenylbutánamidu (35)-3-fenylbutanoylchlorid
Roztok 5-3-fény lbutyro vej kyseliny (0,755 g, 4,6 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) sa nechá reagovať s oxalylchloridom (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kvapkou dimetylformamidu. Reakčná zmes sa trepe po dobu 15 hodín pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Reakčná zmes sa trepe po dobu 15 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa kvantitatívne množstvo (35)-3-fenylbutanoylchloridu. Olej sa použije priamo v nasledujúcej reakcii.
Tri-maleát 771 -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(35)-3-fenylbutánamidu
Roztok 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridíne (8 ml) pri teplote -5 °C sa nechá reagovať s roztokom (35)-3-fenylbutanoylchloridu (0,420 g, 2,3 mmol) v dichlórmetáne (3 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote -5 °C, potom sa kúpeľ zo suchého ľadu odstráni a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá (35)-3-fenylbutanoylchlorid (0,210 g, 1,15 mmol) a zmes sa mieša po dobu 2 hodín. Pridá sa (IN) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a zmes sa mieša cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (20 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (125 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. 771-(4-{4-amino-1-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-17ľ-pyrazolo[3,4-ť7jpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(35)-3-fenylbutánamid sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 15 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (10 min), 20 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (15 min), 50 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (7 min), čím sa získa 0,455 g (68 %) čistého Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-ylj-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(35)-3-fenylbutánamidu. Horúci roztok 771-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(35)-3-fenylbutánamidu (0,455 g. 0,782 mmol) v etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,272 g.
458
2,35) v etylacetáte. Precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší v lyofilizátore, čím sa získa tri-maleát Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(3ť?)-3-fenylbutánamidu.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,199 (s, 1H), 8,261 (s, 1H), 8,1733-8,1528 (d, 1H, J = 8, 2 Hz), 7,312-7,282 (m, 4H), 7,236-7,232 (m, 1H), 7,211-7,168 (m, 2H), 6,094 (s, 6H), 5,046 (m, 1H), 3,890 (s, 3H), 3,534 (m, 4H), 2,994 (m, 2H), 2,784-2,740 (m, 6H), 2,506-2,470 (m, 8H), 2,442-2,200 (m, 4H), 1,855 (m, 211);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere C18, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v 4,5 minútach, C36H44N6O3 (581,2), 95 %. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 mil/min) Rt 2,64 min (100 %).
Príklad 451
7ere-butyl-M-(4-{4-amino-l-[4-nitrofenyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í7)pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)karbamát
4-Amino-l-[4-nitrofenyl]-3-jód-l/7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidm
Suspenzia 3-jód-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amínu (2,00 g, 7,66 mmol) v dimetylformamíde (40 ml) sa nechá reagovať s uhličitanom céznym (3,74 g, 11,49 mmol) a pfluómitrobenzénom (1,08 g, 7,66 mmol). Reakčná zmes mieša pri teplote 80 °C po dobu 5 hodín pod atmosférou dusíka, potom sa naleje na ľad. Precipitát sa filtruje a premyje vodou, produkt, 4-amino-l-[4-nitrofenyl]-3-j ód-177-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín, sa suší v lyofilizátore cez noc, čím sa získa 2,55 g (87 %).
'H NMR (DMSO-dô,400 MHz) δ 8,4952-8,4720 (m, 2H), 8,4142-8,3654 (m, 3H);
LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 mil/min) ír = 3,73 minút (100 %) MH+ 380,6.
459
7erc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-nitrofenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)karbamát
Suspenzia 4-amino-l-[4-nitrofenyl]-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidínu (0,500 g, 1,31 mmol) v dimetylformamide (8 ml) sa nechá reagovať s íerc-butyl-/vr-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátom (0,915 g, 2,62 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,091 g, 0,06 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,333 g, 3,14 mmol) vo vode (4 ml). Reakčná zmes mieša pri teplote 85 °C po dobu 26 hodín pod atmosférou dusíka, potom sa do reakčnej zmesi pridá voda. Precipitát sa filtruje a premyje vodou, pevný podiel sa trituruje dietyléterom, čím sa získa 0,431 g (63 %) fórc-butyl-/V-(4-{4-amino-l-[4-nitrofenyl]-1 //-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)karbamátu.
'H NMR (DMSO-dé,400 ΜΗζ) δ 8,6862-8,6634 (d, 2H, J = 9,12 Hz), 8,4897-8,4423 (m, 3H), 8,1117 (s, 1H), 8,0074-7, 9872 (d, 1H, J = 8,08 Hz), 7,3743-7,3293 (m, 2H), 3,9189 (s, 3H), 1,4959 (s, 9H); LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 mil/min) tR - 4,38 minút, MH+ 478,1.
Príklad 452
4-Amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-1 -[4-nitro'fenyl]-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín
Suspenzia férc-butyl-Y-(4- {4-amino-1 -[4-nitrofeny 1]-1 //-pyrazolo [3,4-ďJpyrimidín-3 -yl}-2-metoxyfenyl)karbamátu (0,386 g, 0,808 mmol) v dichlórmetáne (8 ml) pri teplote 0 °C sa nechá reagovať s trifluóroctovou kyselinou (1,6 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote 0 °C, potom sa ľadový kúpeľ odstráni a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Reakčná zmes sa mieša po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. K olejovému zvyšku sa pridá dichlórmetán (15 ml) a IN roztok hydroxidu sodného. Vzniknutý precipitát sa filtruje a suší cez noc v lyofilizátore, čím sa získa 0,286 g (94 %) 4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-nitrofenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidínu.
'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 8,7826-8,759 (m, 2H), 8,4892-8,4296 (m, 3H), 7,18617,1338 (m, 2H), 6,8320-6,8121 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 5,2225 (s, 2H), 3,8672 (s, 3H); LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan
460 amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 mil/min) tR = 3,48 min MF 377,6.
Príklad 453
Di-maleát Hl-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 -mety lpiperidín-4-yl)piperidín-4-y 1]-1 H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-y 1} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 Η-2-indolkarboxamidu l-Metyl-lH-2-indolkarbonylchlorid
Suspenzia 1 -metylindol-2-karboxylovej kyseliny (0,805 g, 4,6 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) sa nechá reagovať s oxalylchloridom (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kvapkou dimetylformamidu. Reakčná zmes sa trepe po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa kvantitatívne množstvo l-metyl-lH-2-indolkarbonylchloridu. Olej sa použije priamo v nasledujúcej reakcii.
Di-maleát Hl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidin-4-yl)piperidín-4-yl]-lŕŕ-pyrazolo[3,4-íf|pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl))-l-metyl-lH-2-indolkarboxamidu
Roztok 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1 H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridíne (8 ml) pri teplote -5 °C sa nechá reagovať s roztokom l-metyl-lH-2-indolkarbonylchloridu (0,445 g, 2,3 mmol) v dichlórmetáne (3 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote -5 °C, potom sa kúpeľ zo suchého ľadu odstráni a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá 1-metyl-ΙΗ-2-indolkarbonylchlorid (0,221 g, 1,15 mmol) a zmes sa mieša po dobu 2 hodín. Pridá sa (IN) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a zmes sa mieša cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (20 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (125 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Hl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl))-1-metyl-ΙΗ-2-indolkarboxamid sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 15 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (10 min), 20% (metanolu s 2% hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (15 min), 50 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne (7 min), čím sa získa 0,463 g
461 (68 %) čistého Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo-3,4-pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfeny 1))-1-metyl-1//-2-indolkarboxamidu. Horúci roztok VI-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1 //-pyrazolo[3,4-úQpyrimidín-3-yl} -2-metoxyfeny 1))-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamidu (0,463 g, 0,781 mmol) v etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,272,2,34 mmol) v etylacetáte. Precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší v lyofilizátore, čím sa získa di-maleát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(1 -metylpiperidín-4-y l)piperidín-4-yl] -1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl))-1 -metyl-l//-2-indolkarboxamidu.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,4495 (s, IH), 8,2848 (s, IH), 8,1505-8,1301 (d, IH, J = 8,16 Hz), 7,7232-7,7034 (d, IH, J = 7,92 Hz), 7,6054-7,5844 (d, IH, J = 8,4 Hz), 7,35837,3012 (m, 4H), 7,1778-7,1406 (m, IH), 6,0804 (s, 4H), 5,10-5,00 (m, IH), 4,0403 (s, 3H), 3,9614 (s, 3H), 3,5336 (m, 4H), 3,1879 (m, 2H), 2,9937 (m, 2H), 2,7836 (s, 3H), 2,4979 (m, 3H), 2,2157 (m, 4H), 1,8513 (m, 2H);
HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v 4,5 minútach, C36H44N6O3 (581,2), 95 %. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 mil/min) Rt 2,76 min (100 %).
Príklad 454
Di-maleát VI-(4-{4-amino-1 -[1-(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-£/|pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl))-l//-2-indolkarboxamidu //-2-indolkarbonylchlorid
Suspenzia indol-2-karboxylovej kyseliny (0,742 g, 4,6 mmol) v dichlórmetáne (3 ml) sa nechá reagovať s oxalylchloridom (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kvapkou dimetylformamidu. Reakčná zmes sa trepe po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa kvantitatívne množstvo l//-2-indolkarbonylchloridu. Olej sa použije priamo v nasledujúcej reakcii.
Dimaleát VI -(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-l //-pyrazolo[3,4-c/]pyrlmidín-3-yl}-2-metoxyfenyl))-l//-2-indolkarboxamidu
462
Roztok 3-(4-amino-3-metoxyíenyl)-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-lN-pyrazolo[3,4-e/jpyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridíne (8 ml) pri teplote -5 °C sa nechá reagovať s roztokom ΙΝ-2-indolkarbonylchloridu (0,413 g, 2,3 mmol) v dichlórmetáne (1 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút pri teplote -5 °C, kúpeľ zo suchého ľadu sa odstráni a reakčná zmes sa mieša po dobu 18 hodín pod atmosférou dusíka. Pridá sa ΙΝ-2-indolkarbonylchlorid (0,207 g, 1,15 mmol) a zmes sa mieša ďalšie 2 hodiny. Pridá sa (1 N) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a zmes sa mieša po dobu 30 minút. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (25 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou a soľankou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku, čím sa získa surový Nl-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl] -1 N-pyrazolo [3,4-N] py rimidí n- 3-y 1} -2-metoxyfenyl))- 1 Ν-2-indolkarboxamid. VI -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-1N-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl))-lN-2-indolkarboxamid sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 15 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) v dichlórmetáne, čím sa získa surový produkt. Druhou chromatografiou gradientom 10 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) až 50 % (metanolu s 2 % hydroxidom amónnym) sa získa 0,139 g (21 %) čistého Nl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-lN-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidm-3-yl}-2-metoxyfenyl))-lN-2-indolkarboxamidu. Nl-(4-{4-amino-l-[l-(l-metylpiperidín-4-yl)piperidín-4-yl]-lN-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl))-lN-2-indolkarboxamid (0, 139 g, 0,24 mmol) v horúcom etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,083 g, 0,719 mmol) v etylacetáte. Vzniknutý precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka čím sa získa 0,166 g di-maleátu Nl-(4-{4-amino-l-[ 1 -(1 -metylpiperidín-4-yl)piperídín-4-yl]-1 N-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfeny 1))-1 Ν-2-indolkarboxamidu.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 11,83 (s, 1H), 9,442 (s, 1H), 8,283 (s, 1H), 8,154-8,134 (d, 1H, J = 8,12 Hz), 7,694-7,674 (d, 1H, J = 8,04 Hz), 7,498-7,477 (d, 1H, J = 8, 20 Hz), 7,4077,402 (m, 1H), 7,352-7,325 (m, 2H), 7,267-7,229 (m, 1H), 7,112-7,074 (m, 1H), 6,078 (s, 4H), 5,10-5,00 (m, 1H), 3,974 (s, 3H), 3,525 (m, 4H), 3,178 (m, 2H), 2,975 (m, 2H), 2,771 (s, 311), 2,457 (s, 3H), 2,208 (m, 4H), 1,909 (m, 2H); HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm. 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v 4,5 minútach, C36H44N6O3 (581, 2), 95 %. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amónny vo vode až 100 % acetonitril v priebehu 5 minút, 3,0 až 3,5 mil/min) Rt 2,67 min (100 %).
463
Priklad 455
-F enyl-1 -trityl-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4-amín
3-Jód-1 -trityl-1 //-pyrazolo [3,4-ŕ/Jpyrimidín-4-amín
Suspenzia 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amínu (3,0 g, 11,5 mmol) v dimetylformamide (50 ml) sa nechá reagovať s uhličitanom céznym (5,62 g, 17,25 mmol) a trifenylmetylchloridom (3,85 g, 13,8 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 70 °C po dobu 22,5 hodín pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá uhličitan cézny (3,75 g, 11,5 mmol) a trifenylmetylchlorid (3,2 g, 11,5 mmol) a zmes sa mieša po dobu 6,5 hodiny. Reakčná zmes sa naleje do ľadovej vody, precipitát sa filtruje a premyje vodou, produkt, 3-jód-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín, sa suší cez noc v lyofilizátore. Výsledný pevný podiel sa trituruje etylacetátom, čím sa získa 3,05 g (53 %) 3-jód-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4amínu. *H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 7,3190-7,1106 (m, 16H); TLC (Baker Pre-coated Hard Layer Silikagél TLC plates, SÍ250F254, 30 % etylacetát v heptáne) Rf = 0,33.
-F enyl-1 -trityl-1 //-pyrazolo [3,4-t/] pyrimidm-4-amín
Roztok 3-jód-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (1,0 g, 1,99 mmol) v dimetylformamide (20 ml) sa nechá reagovať s fenylboritou kyselinou (0,485 g, 3,8 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,138 g, 0,119 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,506g, 4,78 mmol) vo vode (10 ml). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 18,5 hodiny pod atmosférou dusíka. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a pridá sa voda (15 ml). Precipitát sa filtruje a premyje vodou. Surový pevný podiel sa trituruje dietyléterom (30 ml). Výsledný pevný podiel sa suší cez noc v lyofilizátore, čím sa získa 0,407 g (45 %) 3-fény 1-1-trityl-l//-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidín-4-amínu.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,9416 (s, IH), 7,6190-7,6011 (m, 2H), 7,5369-7,4493 (m,
3H), 7,3995-7,2248 (m, 15H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig 3,5 gm, 2,1 x 50 mm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 0,5 ml/min)
R, =11,813 min (97%).
464
Príklad 456
Al-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-3-yl]-2-metoxyfenyl}(3/?)-3-fenylbutánamid (3Ä)-3-Fenylbutanoylchlorid (2,22 g, 12,18 mmol) v dichlórmetáne (10 ml) sa pridá do roztoku 4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanónu (2,86 g, 8,12 mmol) v pyridíne (50 ml) pri teplote -10 °C. Po 15 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa hydroxid sodný (l,0N, 15 ml) a organické rozpúšťadlo sa zahusťuje. Vodný zvyšok sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSCL, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol (95:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa Al-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-(3/?)-3-fenylbutánamid (3,11 g, 77 %).
‘H NMR (CDCb) δ 1,40 (d, J = 6,97 Hz, 3H), 2,04 (m, 1 H), 2,59-2,78 (m, 9H), 3,40 (m, IH), 3,98 (s, 3H), 5,28 (m, IH), 5,70 (bs, 2H), 7,15-7,35 (m, 7H), 7,66 (s, IH), 8,38 (s, IH), 8,51 (d, J = 8, 18,1 PI). HPLC (Waters Alliance-Stípec: Waters SymmetryShield, RP18, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm, eluenty: 5 % B/A až 95 % B/A v 9,0 minút,(B: acetonitril, A: 100 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,5 ml/min): Rt = 6, 273 min.
Príklad 457 {4-[4-Amino-3 -(4-fenoxyfeny 1)-1 A-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidí n-1 -yl] fenyl} metanol
4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-l-yl]benzaldehydom
3-(4-Fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (2,0 g, 6,59 mmol) sa zmieša s 4-fluórbenzaldehydom (1,06 ml, 9,89 mmol), uhličitanom céznym (4,30 g, 13,19 mmol) v DMF (6 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 86 °C cez noc. Po ochladení na izbovú teplotu sa reakčná zmes naleje do ľadovej vody a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidín-l-yl-3-benzaldehyd (2,46 g, 92 %).
‘H NMR (CDCb) δ 7,19 (m, 5H), 7,46 (m, 2H), 7,78 (d, J - 8,64 Hz, 2H), 8,10 (d, J = 8,70 Hz, 2H), 8,44 (s, III), 8,59 (d, J = 8,70IIz, 2H), 10,03 (s, IH).
465
b) {4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l-yl]fenyl}metanol
Borohydrid sodný (19 mg, 0,491 mmol) sa pridá do roztoku 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-íi]pyrimidín-l-yl]benzaldehydu (100 mg, 0,245 mmol) v metanole (2 ml). Po 16 hodinách sa pridá ďalší THF (1 ml) a borohydrid sodný (19 mg, 0,491 mmol). Po 5 hodinách sa rozpúšťadlo odstráni a pridá sa voda. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSCfi, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/dichlórmetán (80:20 až 100:0) ako mobilnej fázy, čím sa získa {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidm-l-yl]fenyl}metanol (36 mg, 36 %).
'H NMR (DMSO-d6) δ 4,56 (s, 2H), 5,27 (bs, IH), 7,16 (m, 5H), 7,47 (m, 4H), 7,76 (d, J = 8,64 Hz, 2H), 8,18 (d, J = 8,52,2H), 8,37 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ = 410,1, Rt = 2,43 min.
Príklad 458 l-{4-[(4-Metylpiperazino)metyl]fenyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín
Triacetoxyborohydrid sodný (67 mg, 0,319 mmol) sa pridá do zmesi 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]benzaldehydu (100 mg, 0,245 mmol), 4-metylpiperazínu (37 mg, 0,369 mmol), ľadovej kyseliny octovej (35 mg, 0,589 mmol) v dichlóretáne (4 ml). Po miešaní pri izbovej teplote cez noc sa pridá ďalší triacetoxyborohydrid sodný (67 mg, 0,319 mmol) a reakčná zmes sa mieša cez noc. Pridá sa voda (2 ml), potom uhličitan sodný (250 mg). Po 1 hodinovom intenzívnom miešaní sa vrstvy separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSOq, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol (97:3 až 80:20) ako mobilnej fázy, čím sa získa l-{4-[(4-metylpiperazino)metyl]fenyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín (25 mg, 21 %).
Ή NMR (DMSO-dé) δ 2,30 (s, 3H), 2,48 (bm, 8H), 3,56 (s, 3H), 5,75 (bs, 2H), 7,11 (d, J = 8,50,2H), 7,18 (m, 3H), 7,40 (m, 2H), 7,48 (d, J = 8,50 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 8,63 Hz, 2H), 8,12
466 (d, J = 8,50 Hz, 2H), 8,47 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Gcnesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ = 492,2, Rt = 2,97 min.
Príklad 459
7erc-butyl-N-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-3-yl} -5-fluór-2-metoxyfenyl)karbamát
a) l-Bróm-2-fluór-5-metoxy-4-nitrobenzén
7Lrc-butoxid draselný (1,0 N v THF, 38 ml, 38 mmol) sa pridá do metanolu (1,54 ml, 38,0 mmol) v THF (30 ml) pri teplote 0 °C. Po 30 minútach sa kalný roztok prevedie kanylou do roztoku l-bróm-2,5-difluór-4-nitrobenzénu (9,04 g, 38,0 mmol) v THF (27 ml) pri teplote -78 °C. Po 30 minútach sa chladiaci kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa nechá ohriať na teplotu 0 °C. Pridá sa voda (250 ml) a po 10 minútach sa organické rozpúšťadlo odstráni. Pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa l-bróm-2-fluór-5-metoxy-4-nitrobenzén (9,28 g, 98 %).
‘H NMR (CDCb) δ 3,97 (s, 3H), 7,30 (d, J = 5,48 Hz, 2H), 7,71 (d, J = 7,58 Hz, 2H).
b) 4-Bróm-5-fluór-2-metoxyanilín
V 3 podieloch sa pri teplote 80 °C pridá kyslý siričitan sodný (14,7 g, 84,4 mmol) do roztoku l-bróm-2-fluór-5-metoxy-4-nitrobenzénu (9,28 g, 37,12 mmol) v etanole (180 ml) a vody (130 ml). Po 5 hodinách sa organické rozpúšťadlo odstráni a pevný podiel vo vodnej vrstve sa spojí filtráciou, ďalej premyje zmesou heptánu a etylacetátu (3:2, 400 ml), filtrát sa zahusťuje, čím sa získa 4-bróm-5-fluór-2-metoxyanilín (3,29 g, 40 %).
'H NMR (DMSO-d6) δ 3,75 (s, 3H), 5,22 (s, 2H), 6,56 (d, J = 10, 68 Hz, 2H), 6,94 (d, J = 6,57 Hz, 2H).
c) 7erobutyl-jV-(4-bróm-5-fluór-2-metoxyfenyl)karbamát
Di-fórc-butyldikarbonát (3,42 g, 15,70 mmol) sa zmieša s 4-bróm-5-fluór-2-metoxyanilínom (3,29 g, 14,95 mmol) v THF (30 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 65 °C po
467 dobu 3 dní, pričom každý deň sa pridáva di-ŕm?-butyl-dikarbonát (3,42 g, 15,70 mmol). Po odstránení rozpúšťadla sa zvyšok čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi heptán/etylacetát (95:5 až 85:15) ako mobilnej fázy, čím sa získa zmes požadovaného produktu í‘erc-butyl-yV-(4-bróm-5-fluór-2-metoxyfenyl)karbamátu a di-íerc-butyl-dikarbonátu (10,4 g). Do zmesi v metanole (30ml) sa pri teplote 0 °C pridá hydroxid sodný (50 % roztok, 2,0 ml) a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Po odstránení rozpúšťadla sa pridá voda a vodná vrstva sa extrahuje heptánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSCU, filtruje a zahusťuje, čím sa získa /erc-butyl-7ť-(4-bróm-5-fluór-2-metoxyfenyl)karbamát (4,24 g, 89 %).
*H NMR (CDCh) δ 1,52 (s, 9H), 3,85 (s, 3H), 6,93 (d, J = 6,10 Hz, 1H), 7,06 (s, 1H), 8,01 (d, J = 10,4 Hz, 1H).
d) 7erc-butyl-?/-[5-fluór-2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát
7erc-butyl-jV-(4-bróm-5-fluór-2-metoxyfenyl)karbamát (4,24 g, 13,26 mmol), diborónpinakolester (4,04 g, 15,91 mmol), octan draselný (3,90 g, 39,78 mmol) a [l,ľ-bis(difenylfosfino)-ferocén)dichlórpaládnatý (II) komplex s dichlórmetánom (0,32 g, 0,40 mmol) v DMF (75 ml) sa zahrieva pri teplote 85 °C cez noc. Pridá sa diborónpinakolester (2,02 g, 7,96 mmol) a [l,ľ-bis(difenylfosfino)-ferocén)dichlórpaládnatý (II) komplex s dichlórmetánom (0,32 g, 0,40 mmol) a v zahrievaní sa pokračuje ďalších 5 hodín. Po odstránení rozpúšťadla sa čierny zvyšok rozpustí v dichlórmetáne a filtruje cez Celit. Surová zmes sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi heptán/etylacetát (95:5 až 85:15) ako mobilnej fázy, čím sa získa zmes férc-butyl-//-[5-fluór-2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljkarbamátu a diborón-pinakolesteru (1:1 pomer, 4,23 g), ktorá sa použije v nasledujúcej reakcii bez ďalšej purifikácie.
e) Trans-terc-buty[-N-(4-{ 4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4rf]py-rimidín-3-yl}-5-fluór-2-metoxyfenyl)karbamát
7ratt.y-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3.4-í/jpyrimidín-4-amín (0,60 g, 1,36 mmol), Zerc-butyl-/V-[5-fluór-2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (1,0 g, 2,72 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (0,094 g, 0,082 mmol) a uhličitan sodný (0,35 g, 3,27 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (14 ml) a vodou (7 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za
468 zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5 až 70:30) ako mobilnej fázy, čím sa získa trans-terc-b\Ayl-A-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-5-fluór-2-metoxyfenyl)karbamát (0,264 g, 35 %).
'H NMR (DMSO-dé) δ 1,49 (s, 9H), 1,97 (m, 6H), 2,16 (s, 3H), 2,33 (m, 5H), 2,53 (m, 4H), 3,84 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,60 (d, J = 6,78 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 11,96 Hz, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,24 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ = 555,3, Rt = 2,00 min.
Príklad 460
7ra«s-3-(4-amino-2-fluór-5-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cykIohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-4-amín
Zmes trifluóroctovej kyseliny a dichlórmetánu (20:80, 7 ml) sa pridá do roztoku trans/erc-butyl-A-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-5-fluór-2-metoxyfenyl)karbamátu (250 mg, 0,451 mmol) v dichlórmetáne (4,0 ml) pri teplote 0 °C. Po 15 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 4 hodín. Rozpúšťadlo sa potom zahusťuje a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne. Na úpravu na pH 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje, čím sa získa fran$-3-(4-amino-2-fluór-5-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amm (179 mg, 87 %).
’H NMR (CDCb) δ 1,56 (m, 2H), 2,15 (m, 7H), 2,31 (s, 3H), 2.51 (m, 4H), 2,67 (m, 4H), 3,88 (s, 3H), 4,16 (bs, 2H), 4,74 (m, 1H), 5,64 (bs, 2H), 6,56 (d, J = 10,84 Hz, 1 H), 6,88 (d, J = 6,55 Hz, 1H), 8,33 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ = 455,2, R, = 0,63 min.
469
Príklad 461
7ra«s-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidm-3-yl}-5-fluór-2-metoxyfenyl)-Zra«í-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid
Frans-2-fenyl-l-cyklopropánkarbonylchlorid (32 mg, 0,176 mmol) v dichlórmetáne (0,3 ml) sa pridá do roztoku íran.s'-3-(4-amino-2-fluór-5-meíoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/ŕ-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidín-4-amínu (80 mg, 0,176 mmol) v pyridíne (1,5 ml) pri teplote 0 °C. Po 5 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 3 hodín. Pridá sa ďalší podiel Zra«5-2-fenyl-l-cyklopropánkarbonylchloridu (32 mg, 0,176 mmol) kvôli dotiahnutiu reakcie. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu, čím sa získa ŕra«s-jVl-(4-{4-arnino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-5-fluór-2-metoxyfenyl)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid (93 mg, 88 %).
’H NMR (DMSO-dQól,35 (m, 1H), 1,50 (m, 3H), 1,98 (m, 6H), 2,19 (s, 3H), 2,37-2,68 (m, 11H), 3,87 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,09 (m, 1H), 7,21 (m, 3H), 7,31 (m, 2H), 8,21 (m, 2H), 9,82 (m, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ = 599,3, Rt = 1,97 min.
Príklad 462
7erc-butyl-?/-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} karbamát
a) 3 -Jód-1 -(1 -metyl-4-piperidy 1)-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
3-Jód-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-4-amín (0,5 g, 1,45 mmol), formaldehyd (30 % roztok vo vode, 0,16 ml, 1,60 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,43 g, 2,03 mmol) sa zmiešajú v dichlóretáne (5 ml). Po 4 hodinách sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného, potom hydroxid sodný (1,0 N) na úpravu pH na 10. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje, čím sa získa 3-jód-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amín (0,275 g, 53 %).
470 *H NMR (DMSO-dé) δ 1,85 (m, 2H), 2,09 (m. 4H), 2,22 (s, 3H), 2,88 (m, 2H), 4,75 (m, IH), 8,19 (s, IH), 8,32 (s, IH).
b) 7erc-butykV-{4-[4-amino-l-(l-rnetyl-4-piperidyl)-lŕ7-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrímidín-3-yl]-2-metoxyfenyl {karbamát
3-Jód-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (270 mg, 0,754 mmol), /erc-butyl-N-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (290 mg, 0,829 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfln (52 mg, 0,045 mmol) a uhličitan sodný (192 mg, 1,81 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (8 ml) a vodou (4 ml). Reakčná zmes sa zahrieva k refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSOzí, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (90:10 až 70:30) ako mobilnej fázy, čím sa získa torc-butyl-yV-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl{ karbamát (250 mg, 73 %).
*H NMR (DMSO-dé) δ 1,48 (s, 9H), 1,88 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,24 (m, 5H), 2,92 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 4,64 (m, IH), 7,21 (m, 2H), 7,91 (d, J = 8,16 Hz, IH), 8,04 (s, IH), 8,23 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, Cl 8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ =454,2, Rt = 1,67 min.
Príklad 463
Diacetát z,ra/75-3-{4-[(2-chlórbenzyl)amino]-3-metoxyfenyl{-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy A (Všeobecný spôsob redukčnej alkylácie ?rans-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/'pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu)
471 ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,46 (d, 1H), 7,30 (m, 3H), 7,08 (s, 1H), 7,01 (d, 1H), 6,42 (d, 1H), 5,96 (t, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,45 (d, 2H), 3,90 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H),
2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,22 minút.
MS: MH+ 561.
Príklad 464
Diacetát /ra«5-3-{3-metoxy-4-[(l,3-tiazol-2-ylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy A ‘H NMR (DMSO-dé, 400MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,76 (d, 1H), 7,59 (d, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,02 (d, 1H), 6,59 (d, 1H), 6,27 (t, 1H), 4,68 (d, 2H), 4,61 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,09 minút.
MS: MH+ 534.
Príklad 465
Diacetát /ra«s-3-(3-metoxy-4-[(3-metyl-l//-4-pyrazolyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy A 'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ8,19 (s, IM, 7,47 (s, 1H), 7,06 (m, 3H), 6,74 (d, 1H), 5,08 (t, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,13 (d, 2H), 3,84 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,25 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
472
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,65 minút.
MS: MPf 531.
Príklad 466
Acetát trans-3 - {3 -metoxy-4- [(2-tieny Imety l)amino] fény 1} -1 - [4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy A ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,36 (d, 1H), 7,01 (m, 4H), 6,71 (d, 1H), 5,87 (t, 1H), 4,61 (m, 3H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,61 minút.
MS:MH+ 533.
Príklad 467
Acetát rra«v-3-(3-metoxy-4-[(5-metyl-2-tienyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-ammu
Spôsob prípravy A *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,04 (m, 2H), 6,84 (d, 1H), 6,70 (d, 1H), 6,62 (d, 1H), 5,77 (t, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,47 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,37 (s, 3H),
2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (DeltaPakCIS, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,66 minút. MS: MII+ 547.
473
Príklad 468
Acetát /ratts-3-(4-[(5-chlór-2-tienyl)metyl]amino-3-rn.etoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy A ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,04 (m, 2H), 6,95 (s, Im, 6,69 (d, 1H), 5,99 (t, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,50 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-O, IM octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,04 minút.
MS: MH+ 567.
Príklad 469
Diacetát trans-3 -(3 -metoxy-4 - [(2-metyl-1,3-tiazol-4-yl)metyl]aminofenyl)-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
a) 2-Metyl-1,3-tiazol-4-karbaldehyd
Do roztoku 4-chlórmetyl-2-metyl-l,3-tiazolu (1,91 g, 0,0129 mol) v toluéne (50 ml) sa pridá jV-metylmorfolín-A-oxid (4,55 g, 0,0389 mol) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 90 °C po dobu 4 hodín. Pridá sa V-metylmorpolin-V-oxid (1,60 g, 0,0137 mol) a v zahrievaní sa pokračuje ďalšiu 1,5 hodinu. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu, premyje vodou (3x50 ml) a koncentruje, čím sa získa 2-metyl-l,3-tiazol-4-karbaldehyd (1,40 g, 0,011 mol) vo forme hnedej tekutiny. ’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,87 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 2,72 (s, 3H). TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf0,26.
b) Diacetát /ra«.s-3-(3-metoxy-4-[(2-metyl-l,3-tiazol-4-yl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazinojcyklohexyl] -177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy A
474 ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz)Ô8,19 (s, IH), 7,21 (s, IH), 7,06 (m, 2H), 6,66 (d, IH). 5.70 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,41 (d, 2H), 3,87 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 gm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,71 minút.
MS: MH+ 548.
Príklad 470
Diacetát trans-3 - {4-[( 1//-7-indolylmetyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
(Všeobecný spôsob redukčnej alkylácie /ra«í-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazinojcyklohexylj-1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-4-amínu) ’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 11,14 (s, 1 H), 8,18 (s, IH), 7,44 (d, IH), 7,37 (m, 3H), 7,12 (d, IH), 6,97 (t, IH), 6,77 (d, 2H), 6,55 (t, IH), 6,46 (m, IH), 4,60 (m, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H),
2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,68 minút. MS: MH+ 536.
Príklad 471
Diacetát /razí5,-3-{4-[(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
475 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,41 (m, 4H), 7,29 (t, 1H), 6,83 (d, 2H), 6,26 (t, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,46 minút.
MS: MH+ 549.
Príklad 472
Diacetát trans-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-(4-[(5-metyl-1 H-4-pyrazolyl)metyl]aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Spôsob prípravy C:
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,76 (d, 2H), 6,07 (t, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,06 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,21 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,15 minút.
MS: MH+ 501.
Príklad 473
Diacetát í'ranx-3-{4-[(2-aminobenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-c?]pyrimidín-4-amínu
a) 7erc-butyl-/V-[2-(hydroxymetyl)fenyl]karbamát
Do roztoku di-férc-butyl-dikarbonátu (23,04 g, 0,106 mol) v bezvodom dichlórmetáne (150 ml) pri teplote 0 °C sa pridá roztok 2-aminobenzylalkoholu (10,0 g, 0,0812 mol) a výsledná zmes sa mieša pod atmosférou dusíka pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Organická fáza
476 sa premyje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode (2 x 250 ml), suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa /erc-butyl-V-[2-(hydroxymetyl)fenyl]karbamát (17,2 g, 0,077 mol) vo forme bezfarebného oleja.
'H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,52 (s, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,22 (t, 1H), 7,04 (t, 1H), 5,42 (t, 1H), 4,51 (d, 2H), 1,46 (s, 9H). TLC (etylacetát/heptán 1: 3) Rf 0,28.
b) 7erc-butyl-N-(2-formy 1 fényl)karbamát
Do roztoku /erc-butyl-V-[2-(hydroxymetyl)fenyl]karbamátu (11,0 g, 0,0493 mol) v bezvodom chloroforme sa pridá 20 % disperzia pyridínium-chlórchromátu v bázickej alumine (50 g) a výsledná suspenzia sa mieša pod atmosférou dusíka pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny. Pridá sa ďalších 16 g 20 % disperzie pyridínium-chlórchromátu v bázickej alumine a v miešaní sa pokračuje po dobu 45 minút, po ktorých sa pridá ďalších 15 g 20 % disperzie pyridíniumchlórchromátu v bázickej alumine a v miešaní sa pokračuje po dobu 25 minút. Výsledná suspenzia sa filtruje cez vrstvu silikagélu, filtrát sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (2:98) ako mobilnej fázy, čím sa získa /erc-butyl-77-(2-formylfenyl)karbamát (8,67 g, 0,0392 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’HNMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,31 (s, 1H), 9,95 (s, 1H), 8,18 (d, 1 H), 7,87 (d,
1H), 7,67 (t, 1H), 7,24 (t, 1H), 1,49 (s, 9H). TLC (etylacetát/heptán 1:5) Rf 0,56.
c) Acetát /ra«s-/erc-butylW-2-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}anilino)metyl]fenylkarbamátu
Spôsob prípravy C:
'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ8,69 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,18 (t, 1H), 7,12 (t, 1H), 6,68 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,47 (s, 9H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,73 minút.
477
d) Diacetát íranj-3-{4-[(2-aminobenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyri m i dín-4-amínu
Acetát ZraH5-/erc-butyl-jV-2-[(4-4-amino-l-[4-(4-metylpiperazinn)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidín-3-ylanilino)metylfenylkarbamátu (0,080 g, 0,000118 mol) sa rozpustí v dichlórmetáne (4 ml) pri teplote 0 °C a po kvapkách sa pridá trifluóroctová kyselina (1 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 1,5 hodiny, koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát /ram-3-{4-[(2-aminobenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,067 g, 0,000106 mol) vo forme bielej pevnej látky.
*H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ)δ8,18 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,09 (d, 1H), 6,95 (t, 1H), 6,73 (d, 2H), 6,66 (d, 1H), 6,53 (d, 1H), 6,36 (t, 1H), 4,97 (br, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,13 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,87 minút.
MS:MH+512.
Príklad 474
Trans-N\ -2-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-3 -yl} anilinojmety 1] fenylacetamid-diacetát
Do roztoku diacetátu Zrarts-3-{4-[(2-aminobenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,050 g, 0,000079 mol) v dichlórmetáne (3 ml) pri teplote 0 °C sa postupne pridá NN-diizopropyletylamín (0,041 g, 0,000316 mol) a anhydrid kyseliny octovej (0,011 g, 0,000103 mol) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 18 hodín. Zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok purifikuje preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa Zra«s-Nl-2-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}anilino)metyl]fenyl-acetamid-diacetát (0,010 g, 0,0000148 mol) vo forme bielej pevnej látky.
478 'H NMR (DMSO-dg, 400 ΜΗζ) δ 9,48 (s, 1Η), 8,18 (s, 1H), 7,35 (m, 4H), 7,20 (m, 1H), 7,13 (m, 1H), 6,66 (d, 2H), 6,53 (t, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,29 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,67 minút.
MS: MH+ 554.
Príklad 475
Acetát rranó'-3-[3-chlór-4-(2,3-dihydrobenzo[ó]furán-3-ylamino)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu
a) 7erc-butyl-jV-(4-bróm-2-chlórfenyl)karbamát
Roztok 4-bróm-2-chlóranilínu (5,00 g, 0,0242 mol) v tetrahydrofuráne (50 ml) sa nechá reagovať s 1,0 M roztokom bis(trimetylsilyl)amidu sodného v tetrahydrofuráne (53,2 ml, 0,0532 mol). Zmes sa mieša 15 minút pri izbovej teplote, pridá sa di-Zerc-butyl-dikarbonát (6,34 g, 0,0290 mol) a roztok sa mieša po dobu 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi heptán/etylacetát (4:1). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa fórc-butyl-/V-(4-bróm-2-chlórfenyl)karbamát vo forme bielej pevnej látky (4,214 g, 0,0137 mol).
'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 8,75 (s, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,50 (dd, 5H), 1,46 (s, 9H); TLC (heptán/etylacetát 4:1) Rf 0,54.
b) 7erc-butyl-/V-[2-chlór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát
Zmes Zcvx’-butyl-A’-(4-bróm-2-chlórfenyl)karbamátu (2,10 g, 0,00685 mol), diborónpinakolesteru (2,09 g, 0,00822 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,17 g, 0.00021 mol) a octanu draselného (2,02 g, 0,02055 mol) v A//V-dimetylformamide (50 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 6 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje heptánom (70 ml) a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu celitu a heptán sa odstráni vo vá479 kuu, čím sa získa /e/'c-butyl-V-[2-chlór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát vo forme šedého pevného podielu (1,93 g, 0,00546 mol).
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,65 (s, IH), 7,74 (d, IH), 7,61 (d, IH), 7,56 (dd, IH), 1,47 (s, 9H), 1,29 (s, 12H).
c) 7rans-fórc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)karbamát
Zmes trans-3 -j ód-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4-ďjpyrimidín-4-amínu (2,20 g, 0,00498 mol), terc-butyl-JV-[2-chlór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,93 g, 0,00548 mol), uhličitanu sodného (1,32 g, 0,01245 mol) v 1,2-dimetoxyetáne (50 ml) a vode (100 ml) sa intenzívne mieša, potom sa pridá tetrakis(trifenylfosfin)paládium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakčná zmes sa mieša 6 hodín pri teplote 80 °C, po ktorý ch sa pridá ďalší tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakčná zmes sa mieša ďalších 16 hodín pri teplote 80 °C. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (100 ml) a nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného (200 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (3 x 75 ml). Spojená organická fáza sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (90:10:0,5). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa /rans--/erc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-l//-pyrazolo[3,4-ídpyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)karbamát vo forme bielej pevnej látky (1,993 g, 0,00368 mol):
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,76 (s, 2H), 8,23 (s, IH), 7,80 (d, IH), 7,68 (d, IH), 7,57 (dd, IH), 4,58-4, 71 (m, IH), 2,15 (2,3H), 1,89-2,61 (m, 15H), 1,49 (s, 9H), 1,40-1,48 (m, 2H); TLC (dichlórmetán/metanol = 90:10) Rf 0,13.
MS:MH+541.
d) Trans-3 -(4-amino-3 -chlórfenyl)-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4-djpyrimidín-4-amín
7ran.s-/erobutyl-Ar-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)karbamát (1,993 g, 0,00368 mol) sa pridá do roztoku 20% trifluóroctovej kyseliny v dichlórmetáne. Zmes sa mieša po dobu 2 hodín pri izbovej teplote.
480
Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (50 ml) a premyje s 1,0 M vodným hydroxidom sodným (2 x 25 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa írans-3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-4-amín (1,564 g, 0,00355 mol) vo forme bielej pevnej látky. ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,31 (dd, 1H), 6.92 (d, 1H), 4,57-4,63 (m, 1H), 2,23-2,55 (m, 9H), 2,14 (s, 3H), 1,89-2,08 (m, 6H), 1,38-1,52 (m, 2H);
TLC (dichlórmetán/metanol = 90:10) Rf 0,08.
MS: MH+ 441.
e) Acetát /ra/75-3-[3-chlór-4-(2,3-dihydrobenzo[ó]furán-3-ylamino)fenyl]-l-[4-(4-metyl-piperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-4-amínu
Salicylaldehyd (0,033 g, 0,000274 mol) a /rans-3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (0,115 g, 0,000261 mol) sa zmiešajú v absolútnom etanole a miešajú pri izbovej teplote po dobu 48 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok suší cez noc, čím sa získa /ra«.v-2-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)imino]metylfenol, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie.
Trimetylsulfoxonium-jodid (0,110 g, 0,0005 mol) sa rozpustí v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a naraz sa pridá 60 % disperzia hydridu sodného v parafíne (0,02 g, 0005 mol). Po 10 minútach sa pridá roztok /ra«.v-2-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)imino]metylfenolu v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 2,5 hodiny, roztok sa naleje do ľadovo studenej vody (50 ml) a extrahuje dichlórmetánom (2 x 40 ml). Spojené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 gm, 25 cm; 10%-60% acetonitril 0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát /raw-3-[3-chlór-4(2,3-dihydrobenzo[ô]furán-3-ylamino)fenylj-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,044g, 0,000071 mol) vo forme bielej pevnej látky.
481 ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,21 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,38 (d, 1H), 7,25 (t, 1H), 7,11 (d, 1H), 6,89 (m, 2H), 5,70 (d, 1H), 5,54 (m, 1H), 4,83 (t, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,94 minút.
MS: MH+ 559.
Príklad 476
Diacetát /rattv-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ô]furán-3-ylamino)-3-metoxyfenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-4-amínu
Salicylaldehyd (0,034 g, 0,000282 mol) a /ro/«-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (0,117 g, 0,000268 mol) sa zmiešajú v absolútnom etanole a miešajú pri izbovej teplote po dobu 48 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok suší cez noc, čím sa získa Zra«í-2-[(4-{4-amino-l-[4-(4-mety lpiperazinojcyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)imino]metylfenol, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie.
Trimetylsulfoxonium-jodid (0,145 g, 0,00068 mol) sa rozpustí v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a naraz sa pridá 60 % disperzia hydridu sodného v parafíne (0,027 g, 00068 mol). Po 10 minútach sa pridá roztok /raM5-2-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)imino]metylfenoIu v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 2,5 hodiny. Roztok sa naleje do ľadovo studenej vody (50 ml) a extrahuje dichlórmetánom (2 x 40 ml). Spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa Zrara-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[á]furán-3-ylamino)-3-metoxyfenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amindiacetát (0,096g, 0,000142 mol) vo forme bielej pevnej látky.
482 ‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,21 (s, 1H), 7,38 (d, 1H), 7,25 (t, 1H), 7,11 (m, 2H), 6,89 (m, 3H), 5,42 (m, 1H), 5,18 (d, 1H), 4,77 (t, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,37 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,62,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,16 minút.
MS: MHh 555.
Príklad 477
Diacetát Zrara-3-[4-(3-metyl-5-fenyl-1 H-1 -pyrazolyl)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu
a) l-(4-Brómfenyl)-3-metyl-5-fenyl-4,5-dihydro-17/-pyrazol
Do roztoku l-benzoylacetónu (3,63 g, 0,0224 mol) a MW-diizopropyletylamínu (2,88 g, 0,0224 mol) v bezvodom metanole (160 ml) sa pridá 4-brómfenylhydrazín-hydrochlorid a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a výsledná zmes sa vytrepe medzi 5 % roztok kyseliny citrónovej vo vode (200 ml) a etylacetát (150 ml). Organická fáza sa postupne premyje vodou (2 x 200 ml) a soľankou (150 ml), suší síranom horečnatým a koncentruje. Výsledný zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/«-heptán (5:95) ako mobilnej fázy, čím sa získa l-(4-brómfenyl)-3-metyl-5-fenyl-4,5-dihydro-l/7-pyrazol (4,05 g, 0,0129 mol) vo forme belavej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 7,58 (d, 2H), 7,36 (m, 3H), 7,21 (d, 2H), 7,17 (d, 2H), 6,46 (s, 1H), 2,72 (s, 3H). TLC (etylacetát/heptán 1:5) Rf 0,41.
b) 3-Metyl-5-feny 1-1-(4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-4,5-dihydro-l77-pyrazol
Zmes l-(4-brómfenyl)-3-metyl-5-fenyl-4,5-dihydro-17/-pyrazolu (2,17 g, 0,00693 mol), diborón-pinakolesteru (2,11 g, 0,00832 mol), [1,1’-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,170 g, 0,000207 mol) a octanu draselného (2,03 g, 0,0207 mol) v M,Λ-dimetylformamide (50 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou
483 dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (7:93) ako mobilnej fázy. Výsledná frakcia sa koncentruje. Zvyšok sa trituruje v n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou, čím sa získa 3-metyl-5-fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-4,5-dihydro-l//-pyrazol (1,00 g, 0,00278 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,65 (d, 2H), 7,36 (m, 3H), 7,21 (m, 4H), 6,46 (s, IH), 2,79 (s, 3H), 1,29 (s, 12H). TLC (etylacetát/heptán 1:5) Rf 0,27.
c) Diacetát /rara-3-[4-(3-metyl-5-fenyl-l//-l-pyrazolyl)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-ri] pyrimidín-4-amínu
Zmes 3-metyl-5-fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-4,5-dihydro-l/Z-pyrazolu (0,102g, 0,000283 mol), /ra«5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amínu (0,104 g, 0,000236 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,016 g, 0,000014 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,073 g, 0,00055 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (5 ml) a vody (3 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 gm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 'M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát trans-3- [4 - (3 -metyl-5-fenyl-1 H-1 -pyrazolyl)feny 1] -1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu (0,094g, 0, 000141 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ)δ8,23 (s, IH), 7,64 (d, 2H), 7,37 (m, 7H), 6,49 (s, IH), 4,63 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,30 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 gm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,10 minút.
MS: MH+ 548.
484
Príklad 478
Acetát íra/7s-3-[4-(5-etoxy-l//-l-pyrazolyl)feny]]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
a) l-(4-Brómfenyl)-l//-5-pyrazolyl(etyl)éter
Etyl-acetoacetát (3,49 g, 0,02684 mol) a 4-brómfenylhydrazín-hydrochlorid (6,00 g, 0,02684 mol) sa refluxujú v kyseline octovej (50 ml) po dobu 4 hodín, precipitát sa odstráni filtráciou, filtrát koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/u-heptán (7:93) ako mobilnej fázy, čím sa získa l-(4-brómfenyl)-l/7-5-pyrazolyl(etyl)éter (2,63 g, 0,00936 mol) vo forme belavej pevnej látky.
'H NMR (CDCb-dô, 400 ΜΗζ)δ7,61 (d, 2H), 7,49 (d, 2H), 7,26 (s, IH), 5,47 (s, IH), 4,14 (q, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,44 (t, 3H). TLC (etylacetát/heptán 1:9) Rf0,24.
b) 5-Etoxy-3-metyl-l-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3-dioxolan-2-yl)fenyl]-17/-pyrazol
Zmes l-(4-brómfenyl)-l//-5-pyrazolyl(etyl)éteru (2,22 g, 0,00791 mol), diborón-pinakolesteru (2,41 g, 0,00949 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,194 g, 0,000237 mol) a octanu draselného (2,32 g, 0,0237 mol) v A/jV-dimetylformamide (60 ml) sa zahrieva pri teplote 80 CC pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/zz-heptán (7:93) ako mobilnej fázy. Výsledná frakcia sa koncentruje. Zvyšok sa trituruje v n-heptáne a precipitát spojí filtráciou, čím sa získa 5-etoxy-3-metyl-l-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3-dioxolan-2-yl)fenyl]-lŕ/-pyrazol (0,604 g, 0,00184 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,72 (s, 4H), 5,72 (s, IH), 4,18 (q, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,37 (t, 3H), 1,29 (s, 12H). TLC (etylacetát/heptán 1:9) Rf0,18.
c) Acetát Rw75-3-[4-(5-etoxy-l//-l-pyrazolyl)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
485
Zmes 5-etoxy-3-metyl-l-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3-dioxolan-2-yl)fenyl]-177-pyrazolu (0,062 g, 0,00019 mol), nvw.s-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidín-4-amínu (0,070 g, 0,000159 mol), tetrakis(trifenylfosfín)palád:a (0,011 g, 0,0000095 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,049 g, 0,000398 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (5 ml) a vody (3 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/mín), čím sa získa acetát trans-3- [4-(5-etoxy-1 H-1 -pyrazoly l)fenyl] -1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidín-4-amínu (0,037 g, 0,000064 mol) vo forme bielej pevnej látky.
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,85 (d, 2H), 7,71 (d, 2H), 5,75 (s, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,21 (q, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,18 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H), 1,40 (t, 3H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,59 minút.
MS: MH+516.
Príklad 479
Diacetát ŕram'-l-(4-{4-ammo-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}fenyl)-3-metyl-4,5-dihydro-177-5-pyrazolonu
Roztok acetátu /ra«s-3-[4-(5-etoxy-177-l-pyrazolyl)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,100 g, 0,000194 mol) v 30 % bromovodíku v kyseline octovej (2,5 ml) sa zahrieva k refluxu po dobu 1,5 hodiny. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok neutralizuje koncentrovaným roztokom hydroxidu amónneho vo vode. Výsledná suspenzia sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 5-45 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát írans-l-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}fenyl)-3-metyl-4,5-dihydro-177-5-pyrazolonu (0,066 g, 0,00011 mol) vo forme bielej pevnej látky.
486 'H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ)δ8,23 (s, 1H), 8,02 (d, 2H). 7,65 (d, 2H), 4,64 (m, 1H), 2.6-2,2 (br, 9H), 2,53 (s, 2H), 2,21 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 min., 1 ml/min) Rt 9,34 minút.
MS:MH+ = 488.
Príklad 480
Acetát 2-(2-amino-lH-1 -imidazolyl)-1 - {3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-1 -yl]-1 -azetanyl} -1 -etanónu
Do zmesi l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-e/|pyrimidín-4-amínu (0,05 g, 0,00014 mol) a uhličitanu draselného (0,039 g, 0,00028 mol) v bezvodom H,H-dimetylformamide (3 ml) sa pri izbovej teplote pridá chlóracetylchlorid (0,0031 g, 0,00028 mol). Zmes sa mieša po dobu 10 minút, potom sa pridá 2-aminoimidazol-sulfát (0,18 g, 0,0014 mol) a uhličitan draselný (0,19g, 0,0014 mol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2 dní, potom zahrieva pri teplote 60 °C po dobu 6 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl 8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa acetát 2-(2-amín-1 H-1 -imidazolyl)-1 - {3-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-py razolo[3,4-í/Jpyrimidín- 1-ylj-1-azetanyl}1-etanónu (0,006 g, 0,00001 mol).
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,71 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 6,55 (s, 1H), 6,36 (s, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,30 (s, 2H), 4,59 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 1,90 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,1 minút.
MS: MH+ 482.
487
Príklad 481 l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-3-[(2-hydroxyetyl)amino] -1 -propanón
a) 7erc-butyl-A/-(3-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl} -3 -oxopropyl)-7V-(2-hydroxyetyl)karbamát
Zmes l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,05 g, 0,00014 mol), 3-[(fórc-butoxy karbonyl) (2-hydroxyetyl)amino]propánovej kyseliny (0,038 g, 0,000175 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (0,034 g, 0,000175 mol), /V./V-diizopropyletylamínu (0,034 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodom dichlórmetáne (5 ml) sa mieša po dobu 18 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa fóre-butyl-?/-(3-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-3-oxopropyl)-//-(2-hydroxyetyl)karbamát (0,040 g, 0,000070 mol).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,3 minút.
MS: MH' 574
b) l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-Jjpyrimidín-l-yl]-l-azetanyl}-3-[(2-hydroxyety l)amino]-1 -propanón
Do zmesi /erc-butyl-V-(3-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/Z-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1-y 1]-1-azetanyl}-3-oxopropy ľ)-V-(2-hydroxy ety l)karbamátu (0,040 g, 0,000070 mol) v acetóne (5 ml) sa pridá 2 ml (6 N) vodného roztoku hydrochloridu. Zmes sa mieša pri teplote 45 °C po dobu 1,5 hodiny, potom sa rozpúšťadlo odstráni za zníženého tlaku. Ku zvyšku sa pridá voda (10 ml). Zmes sa lyofilizuje. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa 1-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-(7]pyrimidín-l-yl]-l-azetanyl }-3-[(2-hydroxyetyl)amino]-l-propanón (0,003 g, 0, 00001 mol).
488 'H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ)δ8,27 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 5,70 (m, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,57 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,31 (m, 1H), 3,40 (m, 2H), 2,74 (m, 2H), 2,51 (m, 2H), 2,29 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 8 μιη, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,7 minút.
MS: MH+ 474
Príklad 482
Acetát 2-(2-amino-l//-l-imidazolyl)-l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-1 -yl]piperidino} -1 -etanónu
Do zmesi 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,05 g, 0,00013 mol) a uhličitanu draselného (0,036 g, 0,00026 mol) v bezvodom N,N-dimetylformamide (3 ml) sa pri izbovej teplote pridá chlóracetylchlorid (0,028 g, 0,00026 mol). Zmes sa mieša po dobu 10 minút, potom sa pridá 2-aminoimidazol-sulfát (0,18 g, 0,0014 mol) a uhličitan draselný (0,19 g, 0,0014 mol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 18 hodín, potom zahrieva pri teplote 60 °C po dobu 6 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa acetát 2-(2-amino-1 H-1 -imidazolyl)-1 -{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-l-yl]piperidino}-l-etanónu (0,015 g, 0,00003 mol).
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,17 (m, 5H), 6,52 (s, 1H), 6,38 (s, 1H), 5,49 (br, 2H), 4,99 (m, 1H), 4,76 (m, 2H), 4,59 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,20 (m, 1H), 1,99 (m, 3H), 1,90 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 μπι, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) R 9,4 minút.
MS: MH+ 510.
489
Príklad 483 l-{4-[4-amín-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]piperidino}-2-[(2-hydroxyetyl)amino]-l -etanón
Do zmesi 3 -(4-fenoxyfeny 1)-1 -(4-piperidy 1) -1 //-pyrazolo [3,4-UJpy rirnidín-4-amínu (0,05 g, 0,00013 mol) a uhličitanu draselného (0,036 g, 0,00026 mol) v bezvodom N,Ndimetylformamide (3 ml) sa pri izbovej teplote pridá chlóracetylchlorid (0,028 g, 0,00026 mol). Zmes sa mieša po dobu 10 minút, potom sa pridá etanolamín (0,078 ml, 0,0013 mol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (3 ml) a premyje vodou (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % 100% v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-l-yl]piperidino}-2-[(2-hydroxyetyl)amino]-l-etanón (0,022 g, 0,00005 mol).
lH NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ8,26 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,17 (m, 5H), 5,03 (br, 1H), 5,00 (br, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,87 (m, 2H), 3,64 (m, 2H), 2,96 (m, 2H), 2,92 (m, 2H), 2,17 (m, 1H), 1,90 (m, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,0 minút. MS: MH+ 488.
Príklad 484
Syntéza 1 - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-1 -yljpiperidino} -3 -[(2hydroxyetyljamino]-1 -propanónu
7erc-buty l-/V-(3 - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-1 -yljpiperidino} -3-oxopropyl)-yV-(2-hydroxyetyl)karbamát
Zmes 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu (0,05 g, 0,00013 mol), 3-[(/<?rc-butoxykarbonyl) (2-hydroxyetyl)amino]propánovej kyseliny (0,038 g, 0,000163 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (0,031 g, 0,000163 mol), A/V-diizopropyletylamínu (0,031 g, 0,00024 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,018
490 g, 0,00013 mol) v bezvodom dichlórmetáne (5 ml) sa mieša po dobu 18 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa /erc-butyl-N-(3-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]piperidino}-3-oxopropyl)-jV-(2-hydroxyetyl)karbamát (0,050 g, 0,000083 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,4 minút. MS: MH+ 602.
b) l-{4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]piperidino}-3-[(2-hydroxyetyljamino]-1 -propanón
Do zmesi Z'erc-butyl-N-(3-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-í/]piperidino}-3-oxopropyl)-N-(2-hydroxyetyl)karbamátu (0,050 g, 0,000083 mol) v acetóne (5 ml) sa pridajú 2 ml 6 N vodného roztoku hydrochloridu. Zmes sa mieša pri teplote 45 °C po dobu 1,5 hodiny a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Ku zvyšku sa pridá voda (10 ml). Zmes sa lyofilizuje. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]piperidmo}-3-[(2-hydroxyetyl)amino]-1-propanón (0, 014 g, 0,00003 mol).
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz)58,25 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 4,98 (m, 1H), 4,52 (m, 2H), 4,04 (m, 1H), 3,31 (m, 2H), 2,81 (m, 2H), 2,78 (m, 1H), 2,74 (m, 2H), 2,58 (m, 2H), 1,99 (m, 1H), 1,90 (m, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,1 minút.
MS: MH+ 502
Príklad 485
Syntéza 2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfeny 1)-1 N-pyrazolo[3,4-r/jpyrimidín-1 -yl]piperidi-no(octovej kyseliny
491
a) 7erc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]piperidino} acetát
Do zmesi 3-(4-fenoxyfenyl)-l -(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,10 g, 0,00026 mol, 1 ekviv.) a uhličitanu draselného (0,072 g, 0,000526 mol, 2 ekviv.) v bezvodom 7777-dimetylformamide (8 ml) sa pri izbovej teplote pridá fórc-butyl-2-brómacetát (0,0768 g, 0,00039 mol, 1,5 ekviv.). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (5 ml) a premyje vodou (3 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi metanol/dichlórmetán (5:95) ako mobilnej fázy, čím sa získa /erc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-67]pyrimidín-l-yl]piperidino}acetát (0,1 Og, 0,0002 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) R 11,8 minút.
MS: MH+ 501
2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yljpiperidino} octová kyselina
Do zmesi Zerc-butyl-2- {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]py rimidín-1 -yljpiperidino} acetátu (0,10 g, 0,0002 mol) v acetóne (5 ml) sa pridajú 2 ml 6 N vodného roztoku hydrochloridu. Zmes sa mieša pri teplote 45 °C po dobu 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Ku zvyšku sa pridá voda (10 ml) a zmes sa lyofilizuje, čím sa získa 2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfeyl)-177-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-1 -yljpiperidino}octová kyselina (0,010 g, 0,0002 mol).
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,50 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,43 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 5,07 (m, 1H), 4,02 (s, 2H), 3,50 (br, 2H), 3,42 (br, 2H), 2,53 (br, 2H), 2,25 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,7 minút.
MS: MH+ 445.
492
Príklad 486
Al-(lA-2-imidazolyl)-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lŕ/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-l-yl]piperidino j acetamid
Zmes 2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]piperidino} octovej kyseliny (0,06 g, 0,00013 mol), 2-aminoimidazol-sulfátu (0,022 g, 0,000163 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (0,031 g, 0,000163 mol), A,A-diizopropyletylamínu (0,047 g, 0,00036 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,018 g, 0,00013 mol) v bezvodom dichlórmetáne (8 ml) sa mieša po dobu 18 hodín pri izbovej teplote. Pridá sa ďalší 2-aminoimidazol-sulfát (0,022 g, 0,000163 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (0,031 g, 0,000163 mol), A/A-diizopropyletylamín (0,047 g, 0,00036 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,018 g, 0,00013 mol) a zmes sa mieša po dobu 18 hodín pri izbovej teplote. Zmes sa zahrieva pri teplote 50 °C po dobu 6 hodín, potom mieša pri izbovej teplote po dobu 2 dní. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RPHPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa Al-(l//-2-imidazolyl)-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-l-yl]piperidino}acetamid (0,005 g, 0,00001 mol).
’H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ8,24 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,43 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 6,80 (br, 1H), 6,70 (br, 1H), 4,80 (br, 1H), 3,06 (s, 2H), 3,05 (m, 2H), 2,43 (m, 2H), 2,33 (m, 2H), 1,92 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,2 minút.
MS: MH+510.
Príklad 487
7ra«j-jVl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fenyl-1 -cyklopropánkarboxamid-maleát
a) Benzyl-4-(4-amino-3-jód-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát
493
Do zmesi dihydrochloridu 3-jód-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (13,86 g, 0,0333 mol) a uhličitanu sodného (8,4 g, 0,0999 mol) vo vode (140 ml) sa pri izbovej teplote pridá benzylchloroformiát (6,48 g, 0,0383 mol) v dioxáne (120 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 18 hodín, žltý pevný podiel sa filtruje a premyje etyléterom, čím sa získa benzyl-4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidm-l-yl)-l-piperidínkarboxylát (12 g, 0,025 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,5 minút.
MS: MH+ 479.
b) Benzyl-4-(4-amino-3-{4-[(/er<?-butoxykarbonyl)amino]-3-metoxyfenyl}-17/-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-1 -yl)-1 -piperidínkarboxylát
Zmes benzyl-4-(4-amino-3 -jód- l/7-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín- 1-y 1)-1 -piperidín-karboxylátu (7,0 g, 0,0146 mol), ŕerc-butyl-/7-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (6,15 g, 0,0176 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (1,0 g, 0,000876 mol) a uhličitanu sodného (3,9 g, 0,0365 mol) v dimetylétere etylénglykolu (170 ml) a vode (70 ml) sa zahrieva pri teplote 75 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Potom sa pridá íerc-butyl-W-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (6,15 g, 0,0176 mol, 1,2 ekviv.) a tetrakis(trifenylfosfín)paládium (1,0 g, 0,000876 mol) a zmes sa mieša pri teplote 85 °C ďalších 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a dimetyléter etylénglykolu sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou a suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedastý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 20 %-40 % etylacetát/dichlórmetán, potom 2 %-5 % metanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy, čím sa získa benzyl-4-(4-amino-3-{4-[(/ere-butoxykarbonyl)amino]-3-metoxyfenyl}-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-1 -yl)-1 -piperidínkarboxylát (8,0 g, 0,014 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 12,6 minút.
MS: MH+ 574.
494
c) Benzyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát
Do zmesi benzyl-4-(4-ammo-3-{4-[(/e/r-butoxykarbonyl)ammo]-3-metoxyfenyl] -1/7-pyrazo]o[3,4-</Jpyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylátu (7,68 g, 0,0134 mol) v dichlórmetáne (10 ml) sa pri teplote 0 °C pridá 25 % roztok trifluóroctovej kyseliny v dichlórmetáne. Zmes sa mieša pod atmosférou dusíka pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa ochladí na teplotu 0 °C a alkalizuje vodným 5N roztokom hydroxidu sodného. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 150 ml). Spojená organická vrstva sa premyje vodou a soľankou a suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku, čím sa získa benzyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/jpyrimidín-1 -yl]-1 -piperidínkarboxylát (6,02 g, 0,0127 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) R, 10,3 minút.
MS: MH+ 474.
d) 7ra/7.v-benzyl-4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{ [(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]amino} fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-d\ pyrimidín-1 -yl]-1 -piperidínkarboxylát
Do zmesi benzyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (3,0 g, 0,0063 mol) v pyridine (100 ml) sa pridá racemický roztok Zrarcs-2-fenyl-cyklopropán-karbonylchloridu (1,163 g, 0,007 mol) pri teplote -5 °C. Zmes sa mieša pri teplote -5 °C po dobu 10 minút, potom ohreje až na izbovú teplotu a mieša po dobu 1,5 hodiny. Zmes sa zastaví vodným IN roztokom hydroxidu sodného. Organické rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu (200 ml) a etylacetát (200 ml). Organická vrstva sa premyje 5 % vodným roztokom kyseliny citrónovej (3 x 100 ml), IN vodným roztokom hydrochloridu (3 x 100 ml) a vodou. Pridá sa nasýtený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a soľanka a látka sa suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku, čim sa získa /rans-benzyl-4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]amino} fenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-c/Jpyrimidín-1 -yl]-1 -piperidínkarboxylát (3,47 g, 0,006 mol).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) R, 11,5 minút.
495
MS: MH+618.
e) Trans-Al-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-(lS,2S)/(l/?,2Ä)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-maleát
Zmes írfl«s-benzyl-4-[4-ammo-3-(3-metoxy-4-{[(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]-amino}fenyl)-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (3,4 g, 0,0055 mol) a 20 % hydroxidu paládnatého na aktívnom uhlí (0,4 g) v etanole (150 ml) sa mieša pod atmosférou vodíka pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Zmes sa filtruje a rozpúšťadlá sa odstránia. Ku zvyšku sa pridá 20 % hydroxid paládnatý na aktívnom uhlí (0,4 g), octová kyselina (0,25 ml) v etanole (60 ml) a etylacetát (40 ml). Zmes sa mieša pod atmosférou vodíka pri izbovej teplote ďalších 18 hodín. Zmes sa filtruje a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 25 %-50 % metanol/dichlór-metánu, čím sa získa ŕra«s-Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-(15',2S)/(l/?,2/?)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid (1,36 g, 0,0028 mol). 7’ra«s-Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy-enyl}-(15,25)/(lÄ,2/?)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid (0,05 g, 0,000104 mol) v etylacetáte (5 ml) sa zahrieva pri teplote 40 °C. Kyselina maleínová (0,00133 g, 0,000114 mol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte, potom sa pridá do zmesi. Zmes sa mieša pri teplote 40 °C po dobu 10 minút, potom sa ochladí na izbovú teplotu. Biele precipitáty sa filtrujú, čím sa získa /ra«í-Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-(lS,,2S)/(l/?,27?)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-maleät (0,0044 g, 0,00001 mol).
*H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ)δ9,65 (s, IH), 8,26 (m, 2H), 7,25 (m, 7H), 6,01 (d, 2H), 5,09 (br, IH), 3,90 (s, 3H), 3,48 (m, 2H), 3,18 (m, 2H), 2,61 (br, IH), 2,37 (m, 3H), 2,13 (m, 2H), 1,50 (br, IH), 1,34 (br, IH).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,0 minút.
MS: MH4 484.
496
Príklad 488
Hl-(4-{4-amino-l-[l-(lH-2-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-( 15,25)/( lÄ,2/?)-2-fenyl-1 -cyklopropánkarboxamid
Zmes Hl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-rnetoxyfenyl}-(15,25)/(l/?,2Ä)-2-fenyl-l-cykiopropánkarboxamidu (0,10 g, 0,00021 mol), 2-imidazolkarboxaldehydu (0,022 g, 0,00023 mol) a octovej kyseliny (0,037 g, 0,0006 mol) v dichlóretáne (8 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 1,5 hodiny. Do zmesi sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (0,133 g, 0,00063 mol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 18 hodín. Do zmesi sa pridá ďalšia kyselina octová (0,037 g, 0,0006 mol), 2-imidazol-karboxaldehyd (0,011 g, 0,00012 mol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,133 g, 0,00063 mol) a zmes sa mieša po dobu 18 hodín. Reakcia sa zastaví 5N vodným roztokom hydroxidu sodného. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Organická vrstva sa premyje vodou a soľankou. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa Hl-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 Η-2-imidazoly lmetyl)-4-piperidyl]-1 H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-(15,25)/(lR,2Ä)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid (0,019 g, 0,000034 mol).
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,8 (br, 1H), 9,63 (s, 1H), 8,22 (m, 2H), 7,25 (m, 7H), 6,99 (br, 1H), 6,83 (br, 1H), 4,68 (br, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,56 (s, 2H), 2,93 (m, 2H), 2,58 (br, 1H), 2,37 (br, 1H), 2,22 (m, 3H), 1,90 (m, 3H), 1,50 (br, 1H), 1,30 (br, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,4 minút.
MS: MH+ 564
Príklad 489
Hl-[4-(4-amino-l-{l-[(l-melyl-lH-2-imidazolyl)metyl]-4-piperidyl}-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-(15.25)./(l/?,2/?)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid
497
Zmes Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-(lS,2S)/(lÄ,2Ä)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamidu (0,10 g, 0,00021 mol), l-metyl-2-imidazol-karboxaldehydu (0,025 g, 0,00023 mol) a octovej kyseliny (0,037 g, 0,0006 mol) v dichlóretáne (8 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 1,5 hodiny. Do zmesi sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (0,133 g, 0,00063 mol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 18 hodín. Reakcia sa zastaví 5N vodným roztokom hydroxidu sodného. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Organická vrstva sa premyje vodou a soľankou. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 5 %-50 % metanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy, čím sa získa Vl-[4-(4-amino-l-{l-[(l-metyl-1 //-2-imidazoly l)metyl] -4-piperidy 1} -1 //-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-3 -y l)-2-metoxyfeny 1]-(1 S,2S)/(l/?,2/?)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid (0,070 g, 0,00012 mol).
*H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 9,63 (s, IH), 8,22 (m, 2H), 7,25 (m, 7H), 7,09 (s, IH), 6,75 (s, IH), 4,68 (br, IH), 3,90 (s, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,20 (s, 2H), 2,93 (m, 2H), 2,58 (br, IH), 2,35 (br, IH), 2,24 (m, 4H), 1,89 (m, 2H), 1,50 (br, IH), 1,30 (br, IH).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,6 minút.
MS; MH+ 578.
Príklad 490
-(3 -Metoxy-4- {[(5 -mety l-2-furyl)metyl]amino} fenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amín
a) Benzyl-4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(5-metyl-2-furyl)metyl]amino}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidín-1 -yl] -1 -piperidínkarboxylát
Zmes benzyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3 -metoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-1 -yl]-l-pipei idínkarboxylátu (3,0 g, 0,0063 mol), 5-metylfurfuralu (0,77 g, 0,007 mol) a octovej kyseliny (1,15 g, 0,019 mol) v dichlóretáne (100 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 1,5 hodiny. Do zmesi sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (4,1 g, 0,0195 mol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 18 hodín. Reakcia sa
498 zastaví 5N vodným roztokom hydroxidu sodného. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán, vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 200 ml) a spojená organická vrstva sa premyje vodou a soľankou a suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 2 %-5 % metanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy, čím sa získa benzyl-4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(5-metyl-2-furyl)metyl]amino} fenyl)-1/Z-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidm-l-yl]-l-piperidínkarboxylát (2,63 g, 0,0046 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 11,59 minút.
MS: MH+ 568.
b) 3-(3-Metoxy-4-{[(5-metyl-2-furyl)metyl]amino} fenyl)-1 -(4-piperidy 1)-1 //-pyrazolo[3,4-č/|pyrimidín-4-amín
Zmes benzyl-4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(5-metyl-2-furyl)metyl]ammo}-fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát (0,18 g, 0,000317 mol) a 20 % hydroxid paládnatý na aktívnom uhlí (0,02 g) v etylacetáte (10 ml) sa miešajú pod atmosférou vodíka pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Zmes sa filtruje a rozpúšťadlá sa odstránia. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 5 %-10 % metanol/dichlórmetán (2 % NH4OH), čím sa získa 3-(3-metoxy-4-{[(5-metyl-2-furyl)metyl]amino}fenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidm-4-amín (0,02 g, 0,000046 mol).
lH NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,07 (m, 2H), 6,78 (m, 1H), 6,18 (s, 1H), 5,97 (s, 1H), 5,59 (m, 1H), 4,79 (br, 1H), 4,31 (m, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 2,74 (m, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,15 (m, 2H), 1,90 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,7 minút.
MS: MH+434.
499
Príklad 491
-(3-Metoxy-4-{[(5-metyl-2-furyl)mety ljamino} fény 1)-1 -{1 - [(1 -metyl-1A-2-imidazoIyl)mety 1] -4-piperidyl} -1 A-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-4-amín
Zmes 3-(3 -metoxy-4- {[(5-metyl-2-furyl)metyl]amino} fenyľ)-l -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidm-4-amínu (0,045 g, 0,0001 mol), l-metyl-2-imidazol-karboxaldehydu (0,011 g, 0, 0001 lmol) a octovej kyseliny (0,018 g, 0,0003 mol) v dichlóretáne (4 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 1,5 hodiny. Do zmesi sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (0,064 g, 0,0003 mol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 18 hodín. Reakcia sa zastaví 5N vodným roztokom hydroxidu sodného. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Organická vrstva sa premyje vodou a soľankou. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa 3-(3-metoxy-4-{[(5-metyl-2furyl)metyl]amino} fenyl)-1 - {1-[(1-metyl-1 A-2-imidazolyl)mety 1]-4-piperidyl} -1Apyrazolo[3,4-ŕ/jpyrimidín-4-amín (0,03 g, 0,00006 mol).
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,06 (m, 2H), 6,86 (s, 1H), 6,77 (d, 1H), 6,18 (s, 1H), 5,98 (s, 1H), 5,59 (m, 1H), 4,67 (br, 1H), 4,31 (m, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,66 (s, 2H), 2,96 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,18 (m, 2H), 1,91 (m, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,5 minút.
MS: MH+ 528.
Príklad 492
7ra«s-Al-(4-{4-amino-l-[(4-hydroxy-4-piperidyl)metyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-feny l-1 -cyklopropánkarboxamid
a) Lerc-buty l-4-[(4-amino-3 -j ód-1 A-pyrazolo [3,4-Jjpyrimidín-1 -yl)metyl] -4-hy droxy-1 -piperidínkarboxylát
500
Zmes 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-aniínu (0,86 g, 0,0033 mol), Zerc-butyl-1-oxa-6-azaspiro[2.5]oktán-6-karboxylátu (0,7 g, 0,0033 mol) a uhličitanu cezného (1,1 g, 0,0033 mol) v bezvodom NV-dimetylformamide (30 ml) sa mieša pri teplote 60 CC po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán (200 ml). Organická vrstva sa premyje vodou a soľankou a suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje s dichlórmetánom a pevný podiel sa filtruje, čím sa získa /erc-butyl-4-[(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)metyl]-4-hydroxy-l-piperidínkarboxylát (0,66 g, 0,0014 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,7 minút.
MS: MH+ 475.
b) /erc-butyl-4-{[4-amino-3-(4-{[(benzyloxy)karbonyljamino} -3-metoxyfény 1)-177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-1 -y ljmetyl} -4-hydroxy-1 -piperidínkarboxylát
Zmes Zerc-butyl-4- [(4-amino-3-j ód-1 //-pyrazolo [3,4-t/J pyrimidín-1 -y ljmetyl] -4-hydroxy-l-piperidínkarboxylátu (0,27 g, 0,00057 mol), benzyl-N-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (0,26 g, 0,00068 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,039 g, 0,000034 mol) a uhličitanu sodného (0,15 g, 0,0014 mol) v dimetylétere etylénglykolu (7 ml) a vode (3 ml) sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a dimetyléter etylénglykolu sa odstráni za zníženého tlaku. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2 x 100 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou a sušia nad síranom horečnatým. Organická vrstva sa filtruje cez silikagél (2x) kvôli odstráneniu katalyzátoru a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl 8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa Z‘erc-butyl-4-{[4-amino-3-(4- {[(benzy loxy)karbonyl]amino] -3 -metoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-cQpyrimidín-1 -y ljmetyl} -4-hydroxy-1-piperidínkarboxylát (0,1 g, 0,00017 mol).
RP-HPLC (DeltaPak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0, M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) R, 10,9 minút.
MS: MH+ 604.
501
c) Lerc-butyl-4-{[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrirnidín-l-yl]metyl} -4-hy droxy-1 -piperidínkarboxylát
Zmes Zerc-butyl-4-{[4-amino-3-(4-{[(benzyloxy)karbonyl]amino}-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidín-l-yl]metyl}-4-hydroxy-l-piperidínkarboxylátu (0,1 g, 0,000017 mol) a paládia na aktívnom uhlí (0,01 g) v etanole (2,5 ml) a tetrahydrofurán (2,5 ml) sa miešajú pod atmosférou vodíka a pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Zmes sa filtruje a pridá sa ďalší paládium na aktívnom uhlí (0,01 g). Zmes sa mieša pod atmosférou vodíka pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Zmes sa filtruje cez celit a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku, čím sa získa fô/r-butyl-4-{[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]metyl}-4-hydroxy-l-piperidínkarboxylát (0,08 g, 0,00017 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) R, 8,8 minút.
MS: MH+ 470.
d) 7ra/7s-íerc-butyl-4- {[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]ami-no} fenyl)- 1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-1 -yljmetyl} -4-hydroxy-1 -piperidínkarboxylát
Do zmesi terc-butyl-4-{[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]metyl}-4-hydroxy-l-piperidínkarboxylátu (0,08 g, 0,00017 mol) v pyridíne (4 ml) sa pridá Zra«5-2-fenyl-cyklopropán-karbonylchlorid (0,035 g, 0,00019 mol) pri teplote -5 °C. Zmes sa mieša pri teplote -5 °C po dobu 10 minút, potom sa za miešania ohreje v priebehu 1 hodiny až na izbovú teplotu. Reakcia sa zastaví IN vodným roztokom hydroxidu sodného. Pyridín sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán (50 ml). Organická vrstva sa premyje vodou. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa Zrara-Zerc-butyl-4-{[4-amino-3-(3-metoxy-4- {[(2-feny lcyklopropyljkarbony l]ami-no} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-c/]py rimidín-1 -yljmetyl} -4hydroxy-1-piperidínkarboxylát (0,08 g, 0,00013 mol).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,7 minút.
502
MS: MH+614.
e) Trans-N\-(4-{4-amino-l-[(4-hydroxy-4-piperÍdyl)metyl]-l//-pyrazolo[3,4-<i]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fenyl-l-cykIopropánkarboxamid-hydrochlorid
Zmes trans /erc-butyl-4-{[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]amino}fenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidfn-1 -y ljmety 1} -4-hydroxy-1 -piperidínkarboxylátu (0,08 g, 0,00013 mol) v acetóne (12 ml) a 6 N vodného roztoku hydrochloridu (3 ml) sa mieša pri teplote 40 °C po dobu 2 hodín. Acetón sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa lyofilizuje, čím sa získa Zra/75-Al-(4-{4-amino-l-[(4-hydroxy-4-piperidyl)metyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-hydrochlorid (0,07 g, 0,00012 mol).
'H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ)δ9,65 (s, III), 8,71 (br, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,26 (m, 1H), 7,25 (m, 7H), 4,40 (s, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,10 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 2,51 (m, 1H), 2,34 (m, 1H), 1,89 (m, 2H), 1,71 (m, 211), 1,48 (m, 1H), 1,31 (m, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,7 minút.
MS:MH+514.
Príklad 493 /Vl-4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-metoxyfenyl-(1 S,25)/(lÄ,2/?)-2-fenylcyklopropán-1 -karboxamid.
Suspenzia 4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</lpyrimidín-l-yl]-1-cyklohexanónu (2,00 g, 0,00568 mol) v pyridíne (20 ml) sa ochladí na teplotu -10 °C. Po kvapkách sa pridá racemický roztok /rara-2-benzylcyklopropán-l-karbonylchloridu (1,53 g, 0,00852 mol) v dichlórmetáne (5 ml), pričom teplota sa udržuje pod -5 °C. Reakčná zmes sa nechá ohriať na izbovú teplotu v priebehu 4 hodín. Pridá sa vodný hydroxid sodný (1,0 M, 10 ml) a zmes sa mieša 1 hodinu. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (25 ml) a vodu (50 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (2 x 25 ml). Spojená organická fáza sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo
503 vákuu, čím sa získa Arl-4-[4-ammo-l-(4-oxocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-äf]pyrimidín-3-yl]2-metoxyfenyl-(l.S',25)-2-fenylcyklopropán-l-karboxamid vo forme bielej pevnej látky (1,603 g, 0,00323 mol).
’H N (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,64 (s, IH), 8,27 (s, IH), 8,23 (d, IH), 7,14-7,35 (m, 7H), 5,245,27 (m, IH), 3,90 (s, 3H), 2,65-2,78 (m, 2H), 2,56-2,63 (m, IH), 2,34-2,37 (m, 5H), 2,20-2,30 (m, 2H), 1,45-1, 53 (m, IH), 1,28-1,35 (m, IH);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,04 minút;
MS: MH+ 497.
Príklad 494
Cis-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(amoniometyl)-4-hydroxycyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-</jpyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfenyl-( 1 S,2S)/( 1 R,2Ä)-2-fenylcyklopropán-1 -karboxamid-acetát
a) Cz's-Nl-4-[4-amino-l -(1 -oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl-( 15',2.S)-2-feny lcyklopropán-1 -karboxamid
Za horúca sušená banka sa naplní trimetylsulfoxonium-jodidom (0,425 g, 0,00193 mol) v dimetylsulfoxide (5 ml), ktorý sa nechá reagovať s 60 % hydridom sodným (disperzia v minerálnom oleji (0,071 g, 0,00193 mol)). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 30 minút, potom sa ochladí na teplotu 10 °C. Pridá sa roztok 7Vl-4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/lpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-(15',25)/(lÄ,2/?)-2-fenylcyklopropán-l-karboxamidu (0,800 g, 0,00161 mol) v dimetylsulfoxide (5 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 6 hodín. Pridá sa voda (5 ml) a zmes sa extrahuje etylacetátom (3 x 10 ml). Organická fáza sa premyje vodou (5 ml), soľankou (5 ml) a suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa cz'5-Arl-4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-l/í-pyrazolo[3,4-pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-(lS,2S)/(l/?,2P)-2-fenylcyklopropán-l-karboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,820 g, 0,00160 mol):
504 'H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ)δ9,64 (s, IH), 8,24 (s, IH), 8,22 (d, IH), 7,17-7,31 (m, 7H), 4,84-4,90 (m, IH), 3,92 (s, 3H), 2,70 (s, 2H), 2,56-2,63 (m, IH), 2,34-2,42 (m, IH), 2,12-2,33 (m, 4H), 1,90-1,99 (m, 2H), 1,44-1,52 (m, IH), 1,27-1,37 (m, 3H);
MS:MH+413.
b) Czs-M-(4-{4-amino-l-[4-(amoniometyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c(]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-( 15,25)/( 17?,2/?)-2-fenylcyklopropán-1 -karboxamid-acetát.
Zmes cN-jVl-4-[4-arnino-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-(15,25)/(lR,2R)-2-fenylcyklopropán-l-karboxamidu (0,200 g. 0,000391 mol) v 2-propanole (5 ml) a hydroxide amónnom (5 ml) sa zahrieva pri teplote 65 °C v tlakovej nádobe po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 %60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa cis-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(amoniometyl)-4-hydroxycyklohexyl]-1//-pyraz.olo[3,4-</]pyrimidín3 -yl} -2-metoxyfenyl)-( 15,25)/(1 R,2R)-2-íenylcyklopropán-1-karboxamid-acetát vo forme bielej pevnej látky (0,112 g, 0,000212 mol).
'H NM: R (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,64 (s, IH), 8,23 (d, IH), 8,22-8,24 (m, IH), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,59-4,80 (m, IH), 3,91 (s, 3H), 2,28-2,65 (m, 4H), 1,88 (s, 3H), 1,68-1,72 (m, 4H), 1,471,51 (m, 3H), 1,30-1,33 (m, IH);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,11 minút;
MS: MH+ 528.
Príklad 495
Trans-Nl -benzyl-2- {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-r/]pyrimidín-1 -yl]-1 -hydroxycyklohexyl} acetamid
Suspenzia /ranj-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidín-l-yl]-l-hydroxycyklohexyl] octovej kyseliny (0,076 g, 0,000165 mol) v dichlórmetáne (2 ml) sa nechá
505 reagovať s trietylamínom (0,050 g, 0,000496 mol) a chloridom bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)fosfínovej kyseliny (0,063 g, 0,000248 mol). Zmes sa mieša 2 hodiny pri izbovej teplote, počas ktorých sa nerozpustí. Roztok sa premyje vodou (2x2 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Surová látka sa rozpustí v dichlórmetáne (5 ml) a nechá reagovať s benzylamínom (0,052 g, 0,000489 mol) pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán /metanol (95:5), potom preparativnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 60 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 60 % -100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa /ra/2s-/Vl-benzyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-l-yl]-l-hydroxycyklohexyl}acetamid vo forme bielej pevnej látky (0,010 g, 0,000018 mol).
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,53 (t, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,097,34 (m, 10H), 5,24 (s, 1H), 4,70-4,79 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 2,02-2,18 (m, 2H), 1,91 (s, 2H), 1,86-1,98 (m, 4H), 1,56-1,64 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 16,16 minút;
MS: MH+ 549.
Príklad 496
-(Aminometyl)-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-177-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-1 -yl]-1 cyklobutanol
Roztok 3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl]-l-cyklobutanónu (0,150 g, 0,000404 mol) v dichlórmetáne (5 ml) sa nechá reagovať s 1,1,1-trimetylsilylkyanidom (0,060 g, 0,000606 mol) a bezvodým jodidom zinočnatým (0,004 g, 0,000012 mol). Zmes sa mieša 8 hodín pri refluxe. Zmes sa vytrepe medzi vodu (20 ml) a dietyléter (10 ml). Organická vrstva sa separuje a vodná vrstva sa extrahuje dietyléterom (10 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú soľankou a suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a surová látka sa rozpustí v bezvodom tetrahydrofuráne (10 ml) a nechá reagovať s lí506 tiumalumínium-hydridom (0,031 g, 0,000804 mol) pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Surová látka sa čistí preparatívnou RP-LC/MS (Gilson-Micromass C.18, 5 pm, 130Á, 21 cm, 0%100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 9 minút, 25 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa zmes izomérov (4:1) l-(aminometyl)-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-l-yl]-l-cyklobutanolu vo forme bielej pevnej látky (0,024 g, 0,000060 mol).
'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ8,24 (s, 1H), minoritní, 8,23 (s, 1H) majoritní, 7,66-7-70 (m, 2H), 7,41-7,46 (m, 2H), 7,11- 7,21 (m, 5H), 5,45-5,50 (m, 1H) minoritní, 4,87-4,96 (m, 1 H) majoritní, 4,30 (d, 2H), 2,34-2,72 (m, 6H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,07 minút, (minoritní) a 12, 36 min (majoritní);
MS: MH+403.
Medziprodukt 1:
4-(4-Amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-dj pyrimidín- l-yl)benzaldehyd
Zmes 3-jód-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (3,00 g, 11,5 mmol) a hydridu sodného (60 %, 0,506 g, 12,6 mmol) v DMF (50 ml) sa mieša pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny, potom sa pridá 4-fluórbenzaldehyd (1,36 ml, 12,6 mmol). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 100 °C po dobu 21 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje DMF (30 ml) a éterom (30 ml) a suší, čím sa získa 4-(4-amino-3-jód-lHpyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-l-yl)benzaldehyd vo forme hnedej pevnej látky (2,80 g, 7,61 mmol):
‘H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 10,03 (1H, s), 8,46 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,39 (1H, s), 8,09 (2H, d, J = 8,8 Hz);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 9,71 minút. MS: MH+ 365,8.
Medziprodukt 2
Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-úQpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
507
Zmes 4-(4-amino-3-jód-lN-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl)benzaldehydu (0,400 g, 1,09 mmol), Nl-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yľ)fenyl]-2-fluór-4-(triíluórmetyl)benzamidu (0,735 g, 1,20 mmol), paládium-tetrakis(trifenylfosfinu) (0,127 g, 0,110 mmol) a uhličitanu sodného (0,279 g, 2,63 mmol) v DME (10 ml) a vode (10 ml) sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 1 hodiny. Pridá sa ďalší Nl-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluór-4-(trifluómietyl)benzamid (0,026 g, 0,059 mmol) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 4 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a filtruje, zvyšný pevný podiel sa premyje metanolom (50 ml) a DMF (50 ml) a spojené filtráty sa koncentrujú, čím sa získa Nl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme béžového pevného podielu (0,402 g, 0,730 mmol):
’H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 10,05 (1H, s), 9,96 (1H, d, J = 4,0 Hz), 8,62 (1H, d, J = 8,4 Hz), 8,46 (1H, s), 8,39 (1H, d, J = 6,8Hz), 8,12 (2H, d, J = 8,8 Hz), 8,02-8,03 (1H, m), 7,848,00 (1H, m), 7,75-7,77 (1H, m), 7,51 (1H, s), 7,43 (1H, d, J = 8,0 Hz), 3,97 (3H, s);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % -100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 12,46 minút. MS: MH+ 551,2.
Medziprodukt 3
2-(4-Amino-3-j ód-1 N-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-1 -yl)-1 -etanol
Do roztoku 3-jód-lN-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (5,00 g, 19,1 mmol) v DMF (40 ml) sa pridá hydrid sodný (60 %, 1,53 g, 38,3 mmol) a reakčná zmes sa mieša po dobu 20 minút. Pridá sa 2-brómetanol (1,50 ml, 21,1 mmol) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 50 °C po dobu 18 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje, čím sa získa hnedé bahno. Pridá sa ľadová voda (50 ml) a výsledný precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou (50 ml) a éterom (50 ml) a suší vo vákuu, čím sa získa 2-(4-amino-3-jód-lN-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-etanol vo forme béžového pevného podielu (4,30 g, 14,1 mmol):
’H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,19 (1H, s), 4,84 (1H, t, J = 5,8 Hz), 4,30 (1H, t, J = 5,8 Hz) a 3,77 (2H, app q, J = 5,6 Hz);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 7,35 minút.
508
Medziprodukt 4
2-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(1 -metyl-1 //-2-indolyl)karbonyljamino j fenyl)-1 TZ-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl]etyl-metánsulfonát
Do 0 °C zmesi V2-{4-[4-amino-l-(2-hydroxyetyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,343 g, 0,750 mmol) a pyridínu (7,5 ml) sa po kvapkách v priebehu 30 sekúnd pridá metánsulfonylchlorid (0,14 ml, 1,8 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 2 hodín, potom sa pridá ľadová voda (10 ml), precipitát sa spojí filtráciou a suší vo vákuu, čím sa získa 2-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(l-metyl-l/7-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]etyl-metánsulfonát vo forme béžového pevného podielu (0,268 g, 0,500 mmol):
’H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,44 (1H, s), 8,30 (1H, s), 8,13 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,70 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8, 4 Hz), 7,31-7,38 (4H, m), 7,15 (1H, t, J = 7, 6 Hz), 4,70 (3H, s), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,37 (2H, zastíneno píkom vody) a 3,12 (2H, s);
RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 11,22 minút.
MS: MH+ 536,2.
Príklad 497
Vl-(4-{4-amino-l-[4-(morfolinometyl)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Zmes Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-íluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), morfolinu (0,024 ml, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,409 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 16 hodín. Pridá sa ďalší podiel morfolinu (0,012 ml, 0,14 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (0,043 g. 0,20 mmol) a octovej kyseliny (0,016 ml) a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 24 hodín. Pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa filtruje, čím sa získa šedý pevný podiel, ktorý sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 0 8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25
509 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 21-23 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Ni -(4- {4-amino-1 - [4-(morfolinomety 1)fény 1 ] -1 /ŕ-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidí n-3 -y 1} -2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,007 g, 0,011 mmol):
'H NMR (d6 DMSO, 400 MHz): δΗ 9,93 (1H, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,14-8,18 (2H, m), 7,978,02 (1H, m), 7,87-7,91 (1H, m), 7,73-7,76 (1H, m), 7,45-7,51 (2H, m), 7,44 (1H, s), 7,387,43 (1H, m), 3,41-3,59 (8H, m) a 3,36 (2H, s);
RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % -100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 11,72 minút. MS: MH+622,2.
Príklad 498
Ni -[4-(4-amino-1 - {4- [(4-hydroxypiperidino)metyl]fenyl} -1 /ŕ-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3 -yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-monoacetát
Zmes jVI - {4- [4-amino-1 -(4-formylfeny 1)-1//-pyrazolo [3,4-e/]pyrimidín-3 -y l]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 4-hydroxypiperidínu (0,028 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 16 hodín. Pridá sa ďalší podiel 4-hydroxypiperidínu (0,028g, 0,27 mmol) a octovej kyseliny (0,016 ml) a reakčná zmes sa trepe po dobu 24 hodín. Pridá sa ďalší 4-hydroxypiperidín (0,033 g, 0,33 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,040 g, 0,19 mmol) a reakčná zmes sa trepe po dobu 72 hodín, pridá sa IN NaOH (1,5 ml) a žltohnedý precipitát sa spojí filtráciou a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Ä, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 21-23 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa //l-[4-(4-amino-l-{4-[(4-hydroxypiperidino)metyl]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-monoacetát vo forme bielej pevnej látky (0,025 g, 0,039 mmol):
'H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,95 (1H, s), 8,35-8,99 (2H, m), 8,14-8,19 (2H, m), 7,998,03 (1H, m), 7,89-7,93 (1H, m), 7,75-7,80 (1H, m), 7,39-7,51 (4H, m), 4,55 (1H, s), 3,96 (3H, s), 3,80 (2H, s), 2,68-2,71 (3H, m), 2,04-2,11 (2H, m), 1,85 (3H, s), 1,71-1,76 (2H, m) a 1,391,45 (2H, m);
510
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,56 minút. MS: MH+ 636,2.
Príklad 499 /VI - {4-[4-amino-1 -(4- {[4-(2-hydroxyetyl)piperazino]metyl} fenyl)-1 77-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -y 1]-2-metoxy fény l}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Zmes Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), V-(2-hydroxyetyl)piperazínu (0,035 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 14 hodín. Pridá sa ďalší podiel N-(2-hydroxyetyljpiperazínu (0,010 g, 0,077 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,020 g, 0,094 mmol) a reakčná zmes sa trepe po dobu 16 h, pridá sa IN NaOH (1,5 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10 % 60 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 21,9-22,9 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Vl-{4-[4-amino-l-{[4-(2-hydroxyetyl)piperazino]metyl}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,034 g, 0,051 mmol):
’H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, s), 8,35-8,37 (2H, m), 8,15 (2H, d, J = 8,8 Hz), 8,00 (1H, t, J = 8, 0 Hz), 7,90 (1 H, d, J = 10, 4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8, 0 Hz), 7,49 (1H, s), 7,46 (2H, d, J = 7,2 Hz), 7,40 (1H, d, J = 8,4 Hz), 3,96 (3H, s), 3,51 (2H, s), 3,46-3,49 (4H, m) a 2,35-2,44 (8H, m);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min). Rt 10,92 minút. MS: MH+664,7.
Príklad 500
VI - {4-[4-amino-1 -(4- {[4-(2-hydroxyetyl)piperidino]metyl} fenyl)-17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-diacetát
511
Zmes /71-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol), 4-piperidinetanolu (0,035 g, 0,27 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (0, 087 g, 0,41 mmol) a dichlóretánu (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 16 hodín. Pridá sa ďalší podiel 4-piperidinetanolu (0,040 g, 0,31 mmol)) a triacetoxyborohydridu sodného (0,053 g, 0,25 mmol) a reakčná zmes sa trepe po dobu 4 dní. Pridá sa IN NaOH (1 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 21,1-23,5 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa 771-{4-[4-amino-l-(4-{[4-(2-hydroxyetyl)piperidino]metyl}fenyl)-177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-diacetát vo forme bielej pevnej látky. (0,015 g, 0,023 mmol):
‘H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,94 (IH, s), 8,18-8,39 (2H, m), 8,14 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,99-8,02 (IH, m), 7,90 (IH, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (IH, d, J = 7,6 Hz), 7,39-7,48 (4H, m), 4,313,96 (3H, s), 3,37 (2H, s), 3,37-3,50 (3H, m), 2,80-2,83 (2H, m), 1,91 (6H, m), 1,61-1,64 (2H, m), 1,35-1,37 (3H, m) a 1,15-1,18 (2H, m);
RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,71 minút. MS: MH+ 664,2.
Príklad 501
Ni -{4-[4-amino-1 -(4- {[3-(hydroxymetyl)piperidinojmetyl} fenyl)-177-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-monoacetát
Zmes /Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 3-piperidínmetanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 16 hodín. Pridá sa ďalší 3piperidínmetanol (0,045 g, 0,39 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,090 g, 0,42 mmol) a reakčná zmes sa trepe pri izbovej teplote po dobu 16 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 21-23 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa ?71-{4-[4-amino-l-(4-{[3512
-(hydroxymetyl)piperidino]metyl}fenyl)-177-pyrazolo[3,4-ŕ7]pyrimidin-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-monoacetát vo forme bielej pevnej látky. (0,007 g, 0,11 mmol):
‘H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): H 9,95 (1H, s), 8,35-8,39 (2H, m), 8,14-8,17 (2H, m), 8,018,03 (1H, m), 7,89-7,93 (1H, m), 7,75-7,78 (1H, m), 7,40-7,50 (4H, m), 4,39-4,42 (1H, m), 3,97 (3H, s), 3,39-3,53 (3H, m), 3,01-3,21 (1H, m), 2,87-2,89 (1H, m), 2,75-2,77 (1H, m), 1,91 (3H, s), 1,61-1,65 (4H, m), 1,47-1,52 (1H, m) a 0,89-0,92 (1H, m):
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10, 73 minút. MS: MH+650,2.
Príklad 502 /71 - {4-[4-amino-1 -(4- {[2-(hydroxymetyl)piperidino]mctyl} fenyl)-177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-monoacctát
Zmes jVl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-ŕluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol), 2-piperidínmetanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 16 hodín. Pridá sa ďalší podiel 2-piperidínmctanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,087 g, 0, 41 mmol) a reakčná zmes sa trepe po dobu 3 dní. Znovu sa pridá 2-piperidínmetanol (0,030 g, 0,26 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,073 g, 0,34 mmol), potom kyselina octová (0,1 ml). Reakčná zmes sa trepe po dobu 5 dní, pridá sa 1 N NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje vo vákuu na odstránenie dichlóretánu. Zvyšok sa rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez filter Acrodisc striekačkového typu a purifikuje preparativnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20 - 80 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 14,6-17,0 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa 771-{4-[4-amino-l-(4-{[2-(hydroxymetyl)piperidi-no]metyí} fény 1)-177-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-3-yl]-2 -metoxyfenyl }-2-ŕluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-monoacetát vo forme bielej pevnej látky, (0,026 g, 0,040 mmol):
‘H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,91 (1H, s), 8,33-8,37 (2FI, m), 8,09-8,14 (2H, m), 7,968,00 (1H, m), 7,86-7,89 (1 H, m), 7,717,74 (1H, m), 7,37-7,52 (4H, m), 4,46 (1H, bs), 4,10-4,15
513 (IH, m), 3,94 (3H, s), 3,64-3,67 (IH, m), 3,44-3,48 (IH, m), 2,64-2,69 (2H, m), 2,00-2,07 (IH, m), 1,94 (3H, s), 1,60-1,89 (2H, m) a 1,20-1,40 (4H, m);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 gm, 100 Ä, 15 cm; 5 % -100 % acetonitril-0, 1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,59 minút. MS: MH+ 649,7.
Príklad 503
VI - {4-[4-amino-1 -(4- {[(2-morfolmoetyl)amino] metyl} fenyl)-1 V-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -y 1] -2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Zmes VI-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yľ|-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), V-(2-aminoetyl)morfolínu (0,035 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe po dobu 16 hodín pri izbovej teplote. Pridá sa ďalší podiel IV-(2-aminoetyl)morfolínu (0,030 ml, 0,23 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) a reakčná zmes sa trepe po dobu 4 dní. Pridá sa IN NaOH (1 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a purifíkuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 gm, 300 Á, 25 cm; 20 - 80 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 16,6-19,0 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Vl-{4-[4-amino-l-(4-[(2-morfólinoety l)amino]mety I} fenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxy fény 1} -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky, (0,014 g, 0,021 mmol):
*H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,88 (IH, s), 8,29-8,93 (2H, m), 8,11-8,17 (2H, m), 7,927,97 (IH, m), 7,83-7,86 (IH, m), 7,68-7,72 (IH, m), 7,46-7,51 (2H, m), 7,39 (IH, s), 7,347,38 (IH, m), 3,90 (3H, s), 3,50-3,52 (4H, m), 2,61-2,62 (2H, m), 2,40-2,50 (2H, zastíneno píkom DMSO) a 2,27-2,40 (6H, m);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 gm, 100 Á, 15 cm; 5 % -100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,96 minút. MS: MH+ 665,2.
514
Príklad 504
Nl-{4-[4-amino-l-(4-{[4-(hydroxymetyl)piperidino]metyl}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxy fenyl} -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-diacetát
Zmes /Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol), 4-piperídínmetanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 3 dní. Pridá sa ďalší podiel 4-piperidínmetanolu (0,096 g, 0,83 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,085 g, 0,40 mmol), potom kyselina octová (0,1 ml). Reakčná zmes sa trepe po dobu 5 dní, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez filter Acrodisc striekačkového typu, potom purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20 % - 80 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 17,2-18,3 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Al-{4-[4-amino-l-(4-{[4-(hydroxymetyl)piperidinojmetyl} fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trÍfluórmetyl)benzamid-diacetát vo forme bielej pevnej látky (0,018 g, 0,028 mmol):
’H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, s), 8,35-8,37 (2H, m), 8,14 (2H, d, J = 8, 4 Hz), 8,00 (1H,t, J - 7, 0Hz), 7,90 (1H, d, J = 10, 4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,39-7,64 (4H, m), 4,38-4,41 (1H, m), 3,96 (3H, s), 3,50 (2H, s), 2,83 (2H, d, J = 10,8 Hz), 1,90 (6H, s), 1,63 (2H, d, J = 11, 6 Hz), 1,34-1,35 (2H, m) a 1,12-1,19 (2H, m);
RP-HPLC (Hypersil C 18,5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,41 minút. MS: MH+650,2.
Príklad 505
Nl-{4-[4-amino-l-(4-{[4-(2-metoxyetyl)piperazmo]metyl}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Zmes AT-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l/ŕ-pyrazolo[3,4-ďlpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 1-(2-metoxyetyl )-piperazínu (0,039 g. 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 3 dní. Pridá sa ďalší podiel l-(2-me515 toxyetylj-piperazínu (0,10 ml) a triacetoxyborohydrid sodný (0,089 g, 0,41 mmol) a reakčná zmes sa trepe po dobu 16 hodín, IN NaOH (1 ml) a výsledný roztok sa extrahuje dvoma podielmi dichlórmetánu (2 ml zakaždým). Spojené organické podiely sa koncentrujú, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C 18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20 % - 80 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 16,9-20,2 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Al-{4-[4-amino-l-(4- {[4-(2-metoxyetyl)piperazino]metyl} fenyl)-1 -pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxy fenyl} -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,021 g, 0,031 mmol):
lH NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,14-8,17 (1H, m), 7,988,02 (1H, m), 7,89 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,74-7,76 (1H, m), 7,34-7,64 (6H, m), 3,96 (3H, s), 3,51 (2H, s), 3,31-3,43 (2H, m), 3,22 (3H, s) a 2,41-2,45 (10H, m);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 11,24 minút. MS: MH+ 678,7.
Príklad 506
Al-{4-[4-amino-l-(4-{[(37?)-3-hydroxytetrahydro-lA-l-pyrolyl]metyl}fenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Zmes Al-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol), (S)-3-hydroxypyrolidinu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 3 dní. Pridá sa ďalší podiel (S)-3-hydroxypyrolidinu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,084 g, 0,40 mmol) a reakčná zmes sa trepe po dobu 3 dní. Pridá sa kyselina octová (0,1 ml) a reakčná zmes sa trepe po dobu 4 dní, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez filter Acrodisc striekačkového typu a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Ä, 25 cm; 20 % - 80 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 16,5-18,4 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Al - {4-[4-amino-1 -(4- {[(37?)-3-hydroxytetrahydro-1 H-1 -pyrolyl]metyl} fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(triíluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,027 g, 0,043 mmol):
516 ‘H NMR (dô-DMSO, 400 ΜΗζ): δΗ 9,89 (1Η, s), 8,30-8,33 (2H, m), 8,13-8,14 (2H, m), 7,907,80 (1 H, m), 7,84 (1H, d, J = 10, 8 Hz), 7,70 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,35-7,59 (4H, m), 4,64 (1H, bs), 4,14-4,23 (1H, m), 3,91 (3H, s), 3,62 (2H, s), 2,61-2,62 (2H, m), 2,27-2,28 (2H, m), 2,272,28 (2H, m), 2,02 (1H, m) a 1,60 (1H, m);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,41 minút. MS: MH+ 622,2.
Príklad 507
Nl-{4-[4-ammo-l-(4-{[(3/?)-3-hydroxytetrahydro-l//-l-pyrolyl]metyl}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Zmes /71-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), (7?)-(+)-3-pyrolidinolu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 3 dní. Pridá sa ďalší podiel (R)-(+)-3pyrolidinolu (0,1 ml) a triacetoxyborohydrid sodný (0,084 g, 0,40 mmol) a reakčná zmes sa trepe po dobu 16 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml), precipitát sa spojí filtráciou a zmieša sa zvyškom z extrakcie vodnej vrstvy jedným podielom dichlórmetánu (20 ml). Surová zmes sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Ä, 25 cm; 20 % - 80 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), príslušné frakcie sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa A/l-{4-[4-amino-l-(4-{[(3R)-3-hydroxytetrahydro-lŕ/-l-pyrolyl]metyl}fenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,034 g, 0,055 mmol):
*H NMR (d6-DMSO, 400 ΜΗζ): δΗ 9,93 (1H, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,15-8,19 (2H, m), 7,988,01 (1H, m), 7,85 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,48-7,54 (2H, m), 7,44 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8,4 Hz), 4,70 (1H, bs), 4,22 (1H, s), 3,96 (3H, s), 3,63 (2H, s), 2,49-2,72 (3H, m), 2,13-2,41 (1H, m), 1,91-2,06 (1H, m) a 1,531,61 (1H, m);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), R, 10,53 minút. MS: MH+ 622,2.
517
Príklad 508
AH-(4-{4-amino-l-[4-{([3-(lH-l-imidazolyl)propyl]amino}metyl)fenyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Zmes Hl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluónnetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), l-(3-aminopropyl)imidazolu (0,034 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 3 dní. Pridá sa ďalší podiel l-(3-aminopropyl)imidazolu (0,1 ml) a triacetoxyborohydrid sodný (0,086 g, 0,40 mmol) a reakčná zmes sa trepe po dobu 3 dní. Pridá sa kyselina octová (0,1 ml) a reakčná zmes sa trepe po dobu 4 dní. Pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez filter Acrodisc striekačkového typu a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20 % - 80 % acetonitril - 0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 14,0-15,7 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa /Vl-(4-{4-amino-l-[4-{([3-(lH-l-imidazolyl)propyl]amino}metyl)fenyľ)-lH-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,040 g, 0,061 mmol):
'H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, s), 8,35-8,40 (2H, m), 8,16 (2H, d, J = 7,6 Hz), 7,99 (1H, t, J = 7,6 Hz), 7,89 (1H, d, J = 10,0 Hz), 7,75 (1H, d, J =8,4 Hz), 7,59 (1H, s), 7,52 (2H, d, J = 3,8 Hz), 6,45 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,16 (1H, s), 6,87 (1H, s), 4,04 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,96 (3H, s), 3,77 (2H, s), 2,45-2,46 (2H, m), 1,91 (3H, s) a 1,86-1,90 (2H, m);
RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,28 minút. MS: MH+ 660,2.
Príklad 509
Hl - {4-[4-amino-1 -(4- {[(4-hydroxybutyl)amino]metyl} fenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Zmes Hl - {4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 4-amino-lbutanolu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichló518 retáne (1,4 ml) sa trepe po dobu 3 dní. Pridá sa ďalší podiel 4-amino-l-butanolu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,42 mmol) a reakčná zmes sa trepe po dobu 3 dní. Pridá sa kyselina octová (0,1 ml) a reakčná zmes sa trepe po dobu 7 dní. Pridá sa ďalší podiel triacetoxyborohydridu sodného (0,098 g, 0,46 mmol) a reakčná zmes sa trepe po dobu 16 hodín, IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez filter Acrodisc striekačkového typu a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20 % - 80 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 12,5 - 14,8 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú na Al-{4-[4-amino-l-(4-{[(4-hydroxybutyl)amino]metyl}fenyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky, (0,030 g, 0,048 mmol):
’H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, d, J = 4,4 Hz), 8,35-8,40 (2H, m), 8,17 (2H, d, J = 8,0 Hz), 8,00 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,90 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 7,2 Hz), 7,53-7,57 (2H, m), 7,45 (1H, s), 7,40 (III, d, J = 8,8 Hz), 3,96 (3H, s), 3,83 (2H, s), 3,39 (2H, t, J = 6, 2 Hz), 2,45-2,50 (2H, m) a 1,451,51 (4H, m);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 9,93 minút. MS: MH+ 624,3.
Príklad 5 í 0
Al-{4-[4-amino-l-(4-{[(3-rnetoxypropyl)amino]metyI}fenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Zmes Al-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 3-metoxypropylamínu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 3 dní. Pridá sa ďalší podiel 3-metoxypropylamínu (0,1 ml, 1 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,085 g, 0,40 mmol) a zmes sa trepe po dobu 3 dní. Pridá sa kyselina octová (0,1 ml) a reakčná zmes sa trepe po dobu 4 dní. Pridá sa ďalší podiel triacetoxyborohydridu sodného (0,100 g, 0,470 mmol) a reakčná zmes sa trepe po dobu 16 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez filter Acrodisc striekačkového typu a purifikuje preparatívnou RPHPLC (Rainin C18, 8 pm. 300 Á, 25 cm; 20 % - 80 % acetonitril-0,05 M octan amónny v prie519 behu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 18,0 - 19,7 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa ?/l-{4-[4-amino-l-(4-{[(3-metoxypropyl)amino]metyl}fenyl)-l/?-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(tlifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,009 g, 0,014 mmol):
’H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,93 (IH, s), 8,33-8,38 (2H, m), 8,18-8,20 (2H, m), 7,978,01 (IH, m), 7,87-7,91 (IH, m), 7,73-7,76 (IH, m), 7,54-7,64 (5H, m), 7,31-7,45 (2H, m), 3,95 (3H, s), 3,85-3,89 (2H, m), 3,38 (2H, s), 2,55-2,68 (2H, m) a 1,70-1,74 (2H, m);
RP-HPLC (Hypersil 08, 5 gm, 100 Á, 15 cm; 5 % -100 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,58 minút. MS: MH+ 624,2.
Príklad 511
AT-(4-{4-amino-l-[4-{([3-(dimetylamino)propyl]amino}metyl)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-monoacetát
Zmes ÄT-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), N.N-dimetyl-l,3-propándiamínu (0,028 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 3 dní. Pridá sa ďalší podiel MN-dimetyl-l,3-propándiamínu (0, 1 ml) a triacetoxyborohydrid sodný (0,085 g, 0,40 mmol) a zmes sa trepe po dobu 3 dní. Pridá sa kyselina octová (0,1 ml) a zmes sa trepe po dobu 4 dní. Pridá sa triacetoxyborohydrid sodný (0,096 g, 0,45 mmol) a zmes sa trepe po dobu 16 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez filter Acrodisc striekačkového typu a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 gm, 300 Á, 25 cm; 20 % - 80 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 14,3 - 14,9 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa JVl-(4- {4-amino-1 -[4- {([3 -(dimetylamino )propy ljamino} metyljfenyl] -1 //-pyrazolo [3,4-ďJpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-monoacetát vo forme bielej pevnej látky (0,020 g, 0,031 mmol):
'H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,93 (IH, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,13 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,00 (IH, t, J = 7, 2 Hz), 7,89 (IH, d, J = 10,0 Hz), 7,75 (IH, d, J = 7,6 Hz), 7,49 (2H, d, J = 8,0
520
Hz), 7,44 (1 H, s), 7,39 (1H, d, J = 8,0 Hz), 3,96 (3H, s), 3,74 (2H, s), 2,21-2,25 (2H, t, J = 7,0 Hz), 2,09 (6H, s), 2,08 (3H, s), 1,86-1,87 (4H, m) a 1,54-1,58 (2H, t, J = 7,2 Hz);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,85 minút. MS: MH'637,3.
Príklad 512
Metyl-(2S)-2-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-l-yl]benzyl}amino)-3-(4N-4-imidazolyl)propanoát
Zmes 7Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2-rnetoxyfenyl }-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), dihydrochloridu metylesteru L-histidínu (0,046 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 3 dní. Pridá sa ďalší podiel dihydrochloridu metylesteru L-histidínu (0,100 g, 0,59 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0, 085 g, 0,40 mmol) a reakčná zmes sa trepe po dobu 2 dní, pridá sa IN NaOH (1 ml) a hnedý precipitát sa spojí filtráciou, filtrát sa extrahuje dichlórmetánom (5 ml) a organický extrakt sa koncentruje a spojí s predošlým hnedým pevným podielem. Surová zmes sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin CIS, 8 pm, 300 Ä, 25 cm; 20 % - 80 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 18,9 - 20,5 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa metyl-(25)-2-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino)-3-metoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]benzyl}amino)-3-(4N-4-imidazolyl)propanoát vo forme bielej pevnej látky, (0,029 g, 0,041 mmol):
'H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, s), 8,35-8,38 (2H, m), 8,13 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,99-8,02 (1H, m), 7,90 (1H, d, J = 10,8 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,51 (1H, s), 7,39-7,45 (5H, m), 6,78 (1H, bs), 3,96 (3H, s), 3,82 (1H, d, J = 14,0 Hz), 3,59 (3H, s), 3,47 (1H, t, J = 6, 4 Hz), 2,80-2,89 (2H, m) a 1, 91 (3H, s);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 A, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 11,15 minút. MS: MH' 704,2.
521
Príklad 513
VI - {4- [4-amino-1 -(4- {[(2-metoxyetyl)amino] metyl} fenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-cQ pyr imidín-3 -y 1] -2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Zmes VI - {4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)- lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 2-metoxyetylamínu (0,018 g, 0,24 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,106 g, 0,500 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 24 hodín, pridá sa 1 N NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez filter Acrodisc striekačkového typu a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20 % - 80 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 15,0 - 16,2 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa lV-{4-[4-amino-l-(4-{[(2-metoxyetyl)amino]metyl}fenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,010 g, 0,016 mmol):
’H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, d, J = 4,0 Hz), 8,35-8,37 (2H, m), 8,16 (2H, d, J = 8,0 Hz), 8,01 (1 H, t, J = 7,4 Hz), 7,90 (1H, d, J = 10,0 Hz), 7,75 (1H, d, J - 8,0 Hz), 7,52 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,45 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8, 8 Hz), 3,96 (3H, s), 3,80 (2H, s), 3,42-3,45 (2H, m), 3,25 (2H, m) a 2,70-2,71 (2H, m);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,23 minút. MS: MH+ 610,2.
Príklad 514
VI -(4- {4-amino-1 -[4- {([2-(dimetylamino)etyl]amino} metyl)fenyl] -1 H-pyrazolo [3,4-ďjpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzainid
Zmes VI - {4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,080 g, 0,14 mmol), W-dimetylaminoetylamínu (0,03 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,100 g, 0,472 mmol) v dich !óretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote po dobu 24 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez filter Acrodisc striekačkového typu a purifikuje RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20 % - 80 % acetonitril-0,05 M octan
522 amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min); frakce eluujúci z 16,5-17.8 minúty sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Nl-(4-{4-amino-l-[4-{([2-(dimetylamino)etyl]amino}metyl)fenyl]-l//-pyrazoio[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,020 g, 0,032 mmol):
’H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,94 (1H, d, J = 4,4 Hz), 8,35-8,37 (2H, m), 8,15 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,01 (1H, t, J = 7, 8 Hz), 7,90 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 7, 6 Hz), 7,50 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,45 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8,0 Hz), 3,96 (3H, s), 3,77 (2H, s), 2,59 (2H, t, J = 6,6 Hz), 2,35 (2H, t, J = 6,6 Hz) a 2,12 (6H, s);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,85 minút. MS: MH+ 623,2.
Príklad 515
Nl-{4-[4-amino-l -(2-hydroxyetyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Zmes 2-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-l-yl)etanolu (medziprodukt 3) (0,120 g, 0,393 mmol), Nl-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (0,190 g, 0,433 mmol), paládium-tetrakis(trifenylfosfinu) (0,045 g, 0,039 mmol) a uhličitanu sodného (0,100 g, 0,943 mmol) v DME (3,9 ml) a vode (3,9 ml) sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a organické rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou (20 ml) a éterom (20 ml) a suší vo vákuu, čím sa získa Nl-{4-[4-amino-l-(2-hydroxyetyl)-l//-pyrazolo[3,4-riJpyrimídín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme hnedej pevnej látky (0,125 g, 0,254 mmol):
’H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,89 (1H, d, J = 4,0 Hz), 8,31 (1H, d, J = 8,0 Hz), 8,25 (1H, s), 7,99 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,89 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,34 (1H, s), 7,31 (1H, d, J = 8,4 Hz), 4,89 (1H, s), 4,40 (2H, t, J = 5,6 Hz), 3,94 (3H, s) a 3,86 (2H, t, J = 5,6 Hz);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0, 1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), R, 9,85 minút. MS: MiL 491.
523
Príklad 516
N2-{4-[4-amino-1 -(2-hydroxyetyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-3-yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl- 1 Α-2-indolkarboxamid
Zmes 2-(4-amino-3-j ód-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-etanolu (medziprodukt 3) (0,364 g, 1,19 mol), A2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-lA-2-indolkarboxamidu (0,485 g, 1,19 mmol), paládium-tetrakis(trifenylfosfínu) (0,138 g, 0,119 mmol) a uhličitanu sodného (0,303 g, 2,86 mmol) v DME (12 ml) a vode (12 ml) sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 4 hodín, potom sa ochladí na izbovú teplotu, DME sa odstráni vo vákuu a výsledný precipitát sa spojí filtráciou a premyje vodou (50 ml) a éterom (50 ml), čím sa získa A2-{4-[4-amino-l-(2-hydroxyetyl)-lA-pyrazolo[3,4-ŕ/lpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-lA-2-indolkarboxamid vo forme hnedej pevnej látky (0,459 g, 1,00 mmol):
'H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 9, 44 (IH, s), 8,26 (IH, s), 8,12 (IH, d, J - 8,0 Hz), 7,70 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (IH, d, J = 8,4 Hz), 7,29-7,41 (6H, m), 7,15 (IH, t, J - 7,4 Hz), 4,90 (IH, t, J = 5,8 Hz), 4,41 (2H, t, J = 5,8 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s) a 3,86 (2H, q, J = 5,9 Hz);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,52 minút. MS: MH4 458,2.
Príklad 517
Trimaleát A2-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)etyl]-lA-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 Α-2-indolkarboxamidu
Zmes 2- [4-amino-3 -(3 -metoxy-4-{ [(1 -metyl-1 A-2-indolyl)karbonyl]amino} fenyl)-1Apyrazolo[3,4-</]pyrímidín-l-yl]etyl-metánsulfonátu (medziprodukt 4) (0,265 g, 0,495 mmol), A-metylpiperazínu (0,065 ml, 0,58 mmol) a trietylamínu (0,10 ml, 0,74 mmol) v DMF (5 ml) sa zahrieva pri teplote 70 °C po dobu 20 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Pridá sa voda (25 ml) a výsledný precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou (25 ml) a éterom (50 ml) a suší vo vákuu, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu, príslušné frakcie sa spoja a koncentrujú, čím sa získa A2-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)etyl]-lA-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}-2-me524 toxyfcnyl)-1 -metyl-l//-2-indolkarboxamid vo forme béžového pevného podielu (0,084 g, 0,16 mmol):
‘H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,44 (IH, s), 8,26 (IH, s), 8,11 (IH, d, J = 8,4 Hz), 7,70 (IH, d, J = 8,4 Hz), 7,29-7,35 (4H, m), 7,15 (IH, t, J = 7, 4 Hz), 4,46 (2H, t, J = 6, 8 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 2,80 (2H, t, J = 6,6 Hz), 2,49-2,50 (2H, zastíneno píkom DMSO), 2,232,26 (4H, m), 2,12 (3H, s) a 0,97-0,99 (2H, m);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,24. MS: MH+ 540,3.
Do zmesi V2-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)etyl]-l//-pyrazolo[3,4-</)pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,082 g, 0,15 mmol) v horúcom etylacetáte (2 mol) sa pridá roztok kyseliny maleínovej (0,053 g, 0,46 mmol) v horúcom etylacetáte (1 ml), čím sa ihned vytvorí precipitát. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom (5 ml) a suší vo vákuu, čím sa získa trimaleát /V2-(4- {4-amino-1 -[2-(4-metylpiperazino)etyl] -17/-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-l-metyl-1//-2-indolkarboxamidu vo forme béžového pevného podielu (0,090 g, 0,10 mmol):
’H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,45 (IH, s), 8,27 (IH, s), 8,12 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (IH, d, J - 8,0 Hz), 7,59 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,29-7,36 (4H, m), 7,15 (IH, t, J = 7,4 Hz), 6,17 (6H, s), 4,50 (2H, t, J = 6,4 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,10-3,20 (4H, m), 2,92-2,95 (4H, m), 2,74 (3H, s) a 2,32-2,37 (2H, m);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,48 minút. MS: MH+ 540,3.
Príklad 518
V2-{4-[4-amino-l-(2-morfolinoetyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-mety 1-1 //-2-indolkarboxamid-dimaleát
Do zmesi 2-[4-amíno-3-(3 -metoxy-4- {[(1 -metyl-1 //-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidin-l-yljctyl-metánsulfonátu (medziprodukt 4) (0,200 g, 0,373
525 mmol), trietylamínu (0,052 ml, 0,37 mmol) a jodidu sodného (0,056 g, 0,37 mmol) v DMF (5 ml) sa pridá morfolín (0,039 ml, 0,45 mmol). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 60 °C po dobu 60 hodín. Pridá sa morfolín (0,100 ml, 1,15 mmol) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 30 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje vo vákuu, pridá sa voda (5 ml) a výsledný precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou (5 ml) a éterom (10 ml) a suší vo vákuu, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí (2x) chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 20 % MeOH-CFLCh); príslušné frakcie sa spoja a koncentrujú, čím sa získa béžový pevný podiel, ktorý sa trituruje éterom a suší vo vákuu, čím sa získa N2-{4-[4-amino-l-(2-morfolinoetyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ(]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,048 g, 0,054 mmol):
’H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,44 (1H, s), 8,26 (1H, s), 8,11 (1H, d, J = 8,0Hz), 7,70 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,58 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,29-7,35 (4H, m), 7,15 (1H, t, J = 7,6 Hz), 4,48 (2H, t, J = 6,4 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,50-3,53 (4H, m), 2,82 (2H, t, J = 6,2 Hz) a 2,472,51 (4H, m);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,02 minút. MS: MH+ 527,3.
Do zmesi //2-{4-[4-amino-l-(2-morfolinoetyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-1/7-2-indolkarboxamidu (0,048 g, 0,091 mmol) v horúcom etylacetáte (2 ml) sa pridá roztok kyseliny maleínovej (0,021 g, 0,18 mmol) v horúcom etylacetáte (1 ml), čím sa okamžite vytvorí precipitát. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom (5 ml) a suší vo vákuu, čím sa získa M2-{4-[4-amino-l-(2-morfolinoetyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimÍdín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid-dimaleát vo forme svetlo hnedej pevnej látky (0,030 g, 0,039 mmol):
’H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,45 (1H, s), 8,31 (1H, s), 8,15 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,31-7,35 (4H, m), 7,16 (1H, t, J = 7,4 Hz), 6,17 (4H, s), 4,72-4,73 (2H, m), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,72-3,79 (4H, m) a 3,10-3,30 (6H, zatienené píkom vody);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 11,08 minút.
MS: MH+ 527, 3.
526
Príklad 519 á/2-[4-(4-amino-1 - {2- [(2-hy droxy etyl)amino]etyl} -1 //-pyrazolo [3,4-c/] pyrinii dí n-3-y l)-2-metoxyfenyl]-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid-monomaleát
Zmes 2-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(l-metyl-l//-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-l//-pyrazoIo[3,4-</|pyrimidín-l-yl]etyl-metánsulfbnátu (medziprodukt 4) (0,080 g, 0,15 mmol), etanolamínu (0,05 ml, 0,82 mmol), trietylamínu (0,021 ml, 0,15 mmol) a jodidu sodného (0,021 g, 0,15 mmol) v DMF (2,5 ml) sa zahrieva pri teplote 70 °C po dobu 15 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje, pridá sa voda (5 ml) a výsledný precipitát sa spojí filtráciou a premyje vodou (5 ml), surový pevný podiel sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 20 % MeOH-CPbCh), príslušné frakcie sa spoja a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa /V2-[4-(4-amino-l-(2-[(2-hydroxyetyl)amino]etyI}-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yI)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,009 g, 0,02 mmol).
RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-O, 1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 9,39 minút. MS: MH+5O1,3.
Do horúceho roztoku A/2-[4-(4-amino-l-{2-[(2-hydroxyetyl)amino]etyl}-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l -metyl-1//-2-indolkarboxamidu (0,009 g, 0,02 mmol) v etylacetáte (2 ml) sa pridá roztok kyseliny maleinovej (0,005 g, 0,04 mmol) v etylacetáte (0,5 ml). Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou a suší vo vákuu, čím sa získa ÍV2-[4-(4-amino-l-{2-[(2-hydroxyetyl)amino]etyl}-l//-pyrazolo [3,4 -r/|pyrimidín- 3 -yl) -2-metoxyfenyl] -1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid-monomaleát vo forme bielej pevnej látky (0,009 g, 0,014 mmol):
’H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,45 (1H, s), 8,69-8,74 (2H, bs), 8,31 (1H, s), 8,14 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,32-7,36 (4H, m), 7,15 (1H, t, J = 7,4 Hz), 6,07 (2H, s), 5,28 (III, t, J = 4,2 Hz), 4,71 (2H, t, J = 5,8 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,65-3,67 (2H, m), 3,50-3,60 (2H, m) a 3,10-3,20 (2H, m);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), R, 9,97 minút.
MS: Mif 501,3.
527
Príklad 520 ?/2-(4-{4-amino-l-[2-(dimetylamino)etyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid-monomaleát
Zmes 2-[4-amino-3 -(3 -metoxy-4- {[(1 -metyl-1 //-2-indoly l)karbonyl] amino} fenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]etyl-metánsulfonátu (medziprodukt 4) (0,080 g, 0,15 mmol), dimetylamínu (2,0 M v THF, 0,07 ml, 0,15 mmol), trietylamínu (0,021 ml, 0,15 mmol) a jodidu sodného (0,021 g, 0,15 mmol) v DMF (2,5 ml) sa zahrieva v utesniteľnej nádobe pri teplote 70 °C po dobu 15 hodín. Pridá sa ďalší dimetylamínový roztok (0,10 ml) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 70 °C po dobu 20 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje vo vákuu, pridá sa voda (5 ml) a výsledný precipitát sa spojí filtráciou a purifikuje chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou 20% MeOH:CH2Cl2 až 10:30:60 Et3N:MeOH:CH2Cl2); príslušné frakcie sa spoja a koncentrujú, čím sa získa N2-(4-{4-amino-1- [2-(dimetylamino)etyl]-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl} -2-metoxy fenyl)-1 -metyl-1 Η-2-mdolkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,009 g, 0,02 mmol).
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,l M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,52. MS: MH+ 485,2.
Do horúceho roztoku /V2-(4-{4-amino-l-[2-(dimetylamino)etyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-lŕŕ-2mdolkarboxamidu (0,009 g, 0,02 mmol) v etylacetáte (2 ml) sa pridá roztok kyseliny maleinovej (0,005 g, 0,04 mmol) v etylacetáte (1 ml). Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou a suší vo vákuu, čím sa získa /V2-(4-{4-amino-l-[2-(dimetylamino)etyl]-l//-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-lmetyl-l//-2-indolkarboxamid-monomaleát vo forme bielej pevnej látky (0,005 g, 0,008 mmol):
’H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,46 (1H, s), 8,32 (1H, s), 8,15 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,32-7,35 (4H, m), 7,16 (1H, t, J = 7,4 Hz), 6,06 (2H, s), 4,75 (2H, t, J = 6, 0 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,65 (2H, t, J = 5,6 Hz) a 2,88 (6H, s);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0, 1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min). Rt 10, 08 minút. MS: M+ 485, 2.
528
Príklad 521
Trimaleát V2-(4-{4-amino-l-[2-(l//-l-imidazolyl)etyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu
Zmes 2-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(l-metyl-l//-2-indolyl)karbonyl]ammo}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-l-yl]etyl-metánsulfonátu (medziprodukt 4) (0,080 g, 0,15 mmol), imidazolu (0,011 g, 0,15 mmol), trietylamínu (0,021 ml, 0,15 mmol) a jodidu sodného (0,021 g, 0,15 mmol) v DMF (2,5 ml) sa zahrieva pri teplote 70 °C po dobu 15 hodín. Pridá sa imidazol (0,011 g, 0,15 mmol) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 70 °C po dobu 60 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje vo vákuu. Pridá sa voda (5 ml) a výsledný precipitát sa spojí filtráciou, čím sa získa béžový pevný podiel, ktorý sa vytrepává v horúcom etylacetáte, potom nechá pomaly vychladnúť na izbovú teplotu a filtrát sa koncentruje, čím sa získa /72-(4-{4-amino-1 -[2-( 1 H-1 -imidazolyl) etyl]-1//-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxyfenyl)-1-metyl-l//-2-indoIkarboxamid (0,034 g, 0,067 mmol):
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,45 minút. MS: M+ 508,2.
Do horúcej zmesi 7V2-(4-{4-amino-l-[2-(l//-l-imidazolyl)etyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1//-2-indolkarboxamidu (0,034 g, 0,067 mmol) v etylacetáte (2 ml) sa pridá roztok kyseliny maleínovej (0,016 g, 0,13 mmol) v etylacetáte (1 ml), čím ihned vznikne biely precipitát. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou a suší vo vákuu, čím sa získa trimaleát 772-(4-{4-amino-l-[2-(l//-l-imidazolyl)etyl]-1 //-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamidu vo forme žltej pevnej látky (0,011 g, 0,011 mmol):
'H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): ÓH 9,44 (1H, s), 8,90 (1H, s), 8,20 (1H, s), 8,12 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,58-7,63 (3H, m), 7,32-7,36 (2H, m), 7,24-7,26 (2H, m), 7,16 (1H, t, J = 7,6 Hz), 6,18 (6H, s), 4,85 (2H, t, J = 6,8 Hz), 4,71 (2H, t, J = 5,2 Hz), 4,04 (3H, s) a 4,00 (3H, s);
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min), Rt 10,35 minút. MS: M+ 508,2.
529
Príklad 522
Vl-{4-[4-Amino-l-(4-oxocyklohexyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid
Roztok 2-fluór-4-trifluórmetyl-l-benzénkarbonylchloridu (0,87 g, 3,83 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) sa pridá do zmesi pyridínu (15 ml) a 4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-lV-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanónu (1,00 g, 2,56 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) pri teplote 0 °C v priebehu 5 minút. Zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 10 minút a pri izbovej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán, dichlórmetánová vrstva sa premyje nasýteným vodným roztokom chloridu amónneho (2x) a nasýtený vodný roztok chloridu sodného roztok, suší nad síranom horečnatým, filtruje a zahusťuje za zníženého tlaku, čím sa získa surový produkt, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím systému Isco, čím sa získa VI-{4- [4-amino-1 -(4-oxocyklohexyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</Jpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfeny 1} -2-íluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,95 g, 1,76 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
‘H NMR -508(DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,90 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,28 (s, IH), 7,99 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,34 (s, IH), 7,30 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 5,27 (m, IH), 3,94 (s, 3H), 2,70 (m, 2H), 2,47 (m, 4H), 2,17 (m, 2H);
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 gm, 100 Á, 250x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,23 minút. MS: MH+ 543.
Príklad 523
Cis-Nl - {4- [4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3 -yl j -2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid: a
Príklad 524
7’ran5-Vl-{4-[4-amino-l-(4-moľfolinocyklohexyl)-lV-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl]-2-meto·· xyfeny 1} -2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid
530
Morfolín (0,08 ml, 0,93 mmol) sa pridá do zmesi 771-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)17/-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (Príklad 522) (0,42 g, 0,78 mmol) a octovej kyseliny (0,11 ml, 1,86 mmol) v dichlóretáne (25 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 10 minút. Do zmesi sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (0,23 g, 1,09 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa voda (6 ml), potom uhličitan sodný (0,38 g, 4,53 mmol). Zmes sa mieša po dobu 1 hodiny a organická vrstva sa oddelí, vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (20 ml), spojené organické podiely sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku, čím sa získa surový produkt, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím systému Isco, čím sa získa cz5-Nl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidín-3-yI]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetyIbenzamid (0,23 g, 0,37 mmol) a Zran5-iVl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexy 1)-177-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,09 g, 0,14 mmol) vo forme bielych pevných látok. Dáta pre cw-771-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4-c7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid:
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,91 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,24 (s, IH), 8,00 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,33 (s, IH), 7,30 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 4,83 (m, IH), 3,94 (s, 3H), 3,62 (br, 4H), 1,57-2,55 (m, 10H); MS: MH+ 614.
Údaje pre trans-N\ -{4-[4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4-<7|pyrimi-dín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid:
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,90 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,24 (s, IH), 7,99 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,32 (s, IH), 7,29 (s, IH), 4,67 (m, IH), 3,94 (s, 3H), 3,59 (br, 4H), 1,482,69 (m, 10H); MS: MH+614.
Príklad 525
Cis-ety 1-3-( {4-[4-amino-3-(4-{ [2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ŕ7jpyrimidín-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoát; a
531
Príklad 526
7ra/7s-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-l/Y-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoát
Podobným spôsobom ako je príprava czs-Vl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu a trans-;Vl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-17/-pyrazolo[3,4-ó/]pyrÍmidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu sa pripraví czk-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor4-trifluórmety lbenzoyljamino} -3 -metoxy fenyl)-177-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-1 -yl] cyklohexyl} amino)propanoát a ŕra«s-etyl-3 -({4- [4-amino-3-(4-{[2-fiuór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino} -3-metoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-l-yljcyklohexyl }amino)propanoát vo forme bielych pevných látok. Údaje pre czk-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino} -3 -metoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ť/jpyrimidín-1 -yljcyklohexyl} amino)propanoát:
'H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,37 (m, 1H), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,76 (m, 2H), 2,32 (m, 2H), 1,88 (m, 2H), 1,67 (m, 4H), 1,16 (t, 3H);
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 7,92 minút. MS: MH+ 644.
Údaje pre /rízzzs-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyljamino}-3-metoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-e7]pyrimidín-1 -yljcyklohexyl} aminojpropanoát:
’H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ9,89 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,68 (m, 1H), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,82 (m, 2H), 2,46 (m, 5H), 1,91-2,07 (m, 6H), 1,18 (t, 3H);
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm, 25 % -100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 7,69 minút. MS: MH+ 644.
532
Príklad 527
Czs-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl}amino)propánová kyselina
Zmes cík-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4- {[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoy 1]amino} -3-metoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl}amino)piOpanoátu (Príklad 525) (0,23 g, 0,36 mmol),//-dioxánu (15 ml), hydroxidu draselného (0,10 g, 1,81 mmol) a vody (1,5 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 3 hodín. Rozpúšťadlá sa zahusťujú a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa c/k-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfeny 1)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-1 -y ljcyklohexyl} amino)propánová kyselina (0,11 g, 0,18 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 6,89 (br, 2H), 4,79 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 2,463,00 (m, 7H), 2,29 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,80 (m, 2H);
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 6,06 minút. MS: MH+ 616.
Príklad 528
7raHS-3-({4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[2-metoxy-4-trifltiórmetylbenzoyl]amino}fenyl)-l A-pyrazolo [3,4-í/jpyrimidín-l -yljcyklohexy 1} aminojpropánová kyselina
Zmes tram-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4- {[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino} -3-metoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í7jpyrimidín-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoátu (Príklad 526) (0,04 g, 0,06 mmol),//-dioxánu (4 ml), hydroxidu draselného (0,02 g, 0,31 mmol) a stopových množstiev metanolu a vody (0,4 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 1 hodiny. Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc pri teplote 80 °C po dobu 4 hodín. Rozpúšťadlá sa zahusťujú a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa Zrans-3-({4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[2-metoxy-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}fenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-l-yl]cyklohexyl) aminojpropánová kyselina (0,04 g, 0,06 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
533 ’HNMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,72 (s, 1H), 8,61 (d, 1H), 8,28 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,20 (s, 3H), 4,05 (s, 3H), 1,44-3,61 (m, 13H);
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % aceton.itril-0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 6,36 minút. MS: MH+ 628.
Príklad 529
Hl-[4-(4-Amino-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid
A. Hl-[4-(4-Amino-lH-pyrazolo[3,4-í71pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid
Zmes 3-jód-l-trityl-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,10 g, 0, 19 mmol), Hl-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,13 g, 0,29 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,01 g, 0,01 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,06 mg, 0,48 mmol) vo vode (2 ml) a dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) sa zahrieva pri teplote 85 °C cez noc. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku, ku zvyšku sa pridá voda a zmes sa extrahuje etylacetátom (3x). Spojené organické podiely sa premyjú nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím systému Isco, čím sa získa Hl-[4-(4-amino-l-trityl-lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,12 g, 0,17 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,25 (d, 1H), 8,28 (s, 1H), 8, 00 (t, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,24 (m, 15H), 3,90 (s, 3H); MS: MH+ 689.
B. Hl - [4-(4-Amino-1 H-pyrazolo [3,4-ď] pyrimidín-3 -yl)-2-metoxyfeny 1] -2-fluór-4-trifluórmety 1benzamid
534
Zmes Aľl-[4-(4-amino-l -trityl- lŕ/-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (2,10 g, 1,75 mmol), 6N vodnej kyseliny chlorovodíkovej (10 ml), p-dioxánu (10 ml) a etanolu (8 ml) sa zahrieva pri teplote 50 °C po dobu 6 hodín. Zmes sa filtruje a pevný podiel sa premyje etanolom, suší vo vákuovej sušiarni cez víkend a purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu, čím sa získa A4-[4-(4-amino-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,35 g, 0,78 mmol). Filtrát sa koncentruje a purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu a preparatívnou HPLC, čím sa získa rovnaký produkt Nl-[4-(4-amino-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl)-2-rnetoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluormetylbenzamid (0,67 g, 1,51 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
‘H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ) δ 13,58 (s, 1H), 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,05 (t, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,24 (d, 1H), 3,94 (s, 3H); MS: MH+ 447.
Príklad 530
A/l-[4-(4-Amino-l-tetrahydro-2//-4-pyranyl-l/7-pyrazolo[3,4-ó/]pyrÍmidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid
Dietyl-azodikarboxylát (0,07 ml, 0,45 mmol) sa pridá do zmesi Al-[4-(4-amino-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,10 g, 0,22 mmol), trifenylfosfínu (0,12 g, 0,45 mmol) a tetrahydro-4//-pyrán-4-olu (0,04 g, 0,34 mmol) v tetrahydrofuráne (5 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa tetrahydro-4//-pyran-4-ol (0,01 g, 0,11 mmol), trifenylfosfín (0,04 g, 0,15 mmol) a dietyl-azodikarboxylát (0,02 ml, 0,15 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín. Rozpúšťadlá sa zahusťujú a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa Al-[4-(4-amino-l-tetrahydro-2//-4-pyranyl-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,03 g, 0,06 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
‘H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 9,91 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,31 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,95 (m, 1H), 4,02 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,56 (t, 2H), 2,22 (m, 2H), 1,89 (m, 2H); MS: MH+ 531.
535
Príklad 531
Ν1 - {4- [4-Amino-1 -(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl] -2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-trifluórmety lbenzamid
A. 4-(4-Amino-3-jód-1 //-pyrazolo[3,4-d)pyrimidín-1 -yl)-2-cyklopentén-1 -ol
Zmes tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,04 g, 0,03 mmol), 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,30 g, 1,14 mmol) a dimetylsulfoxidu (3 ml) sa mieša pri izbovej teplote vo tme po dobu 2 minút a ochladí na teplotu 0 °C. Do zmesi pri teplote 0 °C sa pridá roztok 2,4a-dihydro-la//-cyklopenta[Z>]oxirénu (0,14 g, 1,72 mmol) v tetrahydrofuráne (3 ml) a zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 3 hodín. Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc a purifikuje preparatívnou HPLC, čím sa získa 4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)-2-cyklopentén-l-ol (0,24 g, 0,70 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 4,23 minút. MS: MH+ 344.
B. Ml-{4-[4-amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fény 1} -2-fluór-4-trifluórmety lbenzamid
Zmes 4-(4-amino-3-jód-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-1 -yl)-2-cyklopentén-1 -olu (0,12 g, 0,35 mmol), 7Vl-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,23 g, 0,53 mmol), tetrakis(trifenyl-fosfm)paládia (0,02 g, 0,02 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,11 g, 0,88 mmol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (6 ml) a vody (3 ml) pri teplote 85 °C po dobu 6 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa 7V!-{4-[4-am.ino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidĹn-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,18 g, 0,34 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 6,09 (d, 1H), 5,93 (d, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,31 (m, 1H), 4,74 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,84 (m, 1H), 2,02 (m, 1H);
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18. 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,50 minút. MS: MH+ 529.
536
Príklad 532
Α/Ί - {4- [4-Amino-1 -(3 -hydroxycyklopentyl)-177-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-trifluórmety lbenzamid
Zmes jVl-{4-[4-amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidm-3' -yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,10 g, 0,19 mmol) a 10% paládia na aktívnom uhlí (0,03 g) v etanole (10 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou vodíka cez noc. Zmes sa filtruje a filtrát sa čistí preparativnou HPLC, čím sa získa Aľl-{4-[4-amino-l-(3~ -hydroxycyklopentyl)-l//-pyrazolo[3,4-č(]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmety lbenzamid (0,07 g, 0,13 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 5,17 (m, 1H), 4,97 (m, 1H), 4,22 (m, III), 3,94 (s, 3H), 1,79-2,41 (m, 6H); MS: MH+ 531.
Príklad 533
4-(4-Amino-3-{4-[(17/-2-indolylkarbonyl)amino]-3-metoxyfenyl}-17/-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-1 -y l)hexahydropyridínium-acetát
Oxalylchlorid (0,06 ml, 0,60 mmol) sa pridá do roztoku indol-2-karboxylovej kyseliny (0,88 g, 0,546 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) a tetrahydrofuránu (5 ml) pri teplote 0 °C, potom sa pridá N,//-dimetylformamid (3 kvapky z 0,1 ml striekačky) a zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 10 minút a pri izbovej teplote po dobu 20 minút. Rozpúšťadlá a prebytok činidiel sa odparuje za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe do dichlórmetánu (2 ml) a výsledný roztok (1,25 ml) sa pridá do roztoku férc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-l-yl]-l-piperidín-karboxylátu (0,12 g, 0,27 mmol) a pyridínu (0,4 ml) v dichlórmetáne (1 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2 hodín. Pridá sa trifluóroctová kyselina (1 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2 hodín. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparativnou HPLC, čím sa získa 4-(4-amino-3-{4-[(l//-2-indolylkarbonyl)amino]-3-metoxyfenyl j 177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-l-yl)hexahydropyridínium-acetát (0,07 g, 0,14 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
537 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,85 (br, 1H), 9,45 (s, 1H), 8,24 (d, 1H), 8,12 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,24 (t, 1H), 7,09 (t, 1H), 4,77 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,11 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,84 (m, 2H); MS: MH+483.
Príklad 534 - 549
Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia rovnakým spôsobom ako 4-(4-amino-3-{4-[(l//-2-indoly lkarbony l)amíno]-3-metoxyfeny 1} -1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-1 -yl)hexahydropyridínium-acetát (Príklad 533).
Štruktúra MS: MH+ HPLC Rt (min) (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Pr. č.
F 'T έ í ty A í W A Q 567 6,97 534
o b A? X- o '-N1 486 5,89 535
, $ rs u o I X * '' a b 497 6,28 536
538
✓ 0 9 y η X 0 513 5,61 537
& 0 o N “ ιι , N ' n KP ''N* 497 6,39 538
SF ô á Λ a-X ° Óq* ^° fc 512 6,22 539
P y-n f N~“Í °V< ° pp s 99 A,0 483 5,73 540
°O J ľF, ( ^,f< ^ϋ- N 11 0 513 7,78 541
539
é Λ?' j A 0 501 8,23 542
Ó o Γ- ° aP j -¾ 517 8,7 543
/ / , Φ> A>- 0 517 8,73 544
vXý A b VN* 513 7,83 545
A & W iS A, 0 511 9,07 546
540
CG J, 0 497 8,37 547
y °- Óí A ô 528 7,9 548
D \=x/ M vt ° A- G 559 9,5 549
Príklad 550
4- [4-Amino-3 -(4- {[(1 -ety 1-1 Η-2-indoly l)karbony 1] amino} -3 -metoxyfenyl)-1 H-py razolo [3,4-d\pyrimidin-1 -yljhexahydropyridínium-acetát
Do roztoku V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-lH-2-indolkarboxamide (0,08 g, 0,14 mmol) v N,N-dimetylforamide (1,0 ml) pri teplote 0 °C sa pridá hydrid sodný, 60 % suspenzia v minerálnom oleji (0,006 g, 0,15 mmol). Zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 10 minút a pri izbovej teplote po dobu 20 minút. Pridá sa roztok etyljodidu (0,02 g, 0,14 mmol) v N,N-dimetylforamide (0,5 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa etyljodid (0,01 g, 0,07 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa trifluóroctová kyselina (3 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 24 hodín. Rozpúšťadlá a prebytok činidiel sa odparuje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa 4-[4-amino-3-(4-{[(l-etyl-lH-2-indolyl)karbonyl]amino}-3541
-metoxyfenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-ďlpyrimidm-l -yljhexahydropyridínium-acetát (0,05 g, 0,09 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
’HNMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,43 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,14 (d, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,34 (s, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,15 (t, 1H), 4,96 (m, 1H), 4,62 (q, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,00 (m, 2H), 2,28 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,33 (t, 3H); MS: MH+ 511.
Príklad 551 a 552
Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia rovnakým spôsobom ako 4-[4-amino-3-(4-{[(l-etyl-l//~2-indolyl)karbonyl]amino}-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrímidín-l-yl] hexahydropyridínium-acetát (Príklad 550).
Štruktúra MS: MH+ HPLC Rt (min) (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % -100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min,l ml/min) Pr. č.
K χτ i Q 523 9,12 551
Pp .X? i. 0 540 6,03 552
Príklad 553
Acetát l-(l-metyl-3-piperidyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amínu
542
Racemický roztok 3-jód-1 -(1 -metyl-3-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (0,050 g, 0,00014 mol) v dimetoxyetáne (2,5 ml) a vode (5 ml) sa nechá reagovať s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,033 g, 0,00015 mol), uhličitanom sodným (0,037 g, 0,00037 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,016 g, 0,000014 mol) pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín. Organické rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a surová látka sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 %-60 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa acetát l-(l-metyl-3-piperidyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-é/]pyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (0,040 g, 0,00009 mol).
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,10-7,22 (m, 5H), 4,74.4,84 (m, 1H), 2,94 (dd, 1H), 2,79 (d, 1H), 2,36 (t, 1H), 2,22 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,862,01 (m, 3H), 1,76-1,84 (m, 1H), 1,60-1,75 (m, 1H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,74 minút; MS: MH+ 401.
Príklad 554
Acetát l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l A-py razolo [3,4-t/]pyrimidín-4-amínu BSF 4058532F.
Racemický roztok 3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-l A-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (0,050 g, 0, 00012 mol) v dimetoxyetáne (2,5 ml) a vode (5 ml) sa nechá reagovať s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,029 g, 0,00014 mol), uhličitanom sodným (0,033 g, 0,00031 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,014 g, 0,00001 mol) pri teplote 80 °C po dobu 20 hodín. Organické rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a surová látka sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa acetát l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-é/]pyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (0,038 g, 0,00007 mol).
543 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,09-7,22 (m, 5H), 4,71-4,82 (m, 1H), 3,44 (t, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,04 (dd, 1H), 2,91 (d, 1H), 2,47-2,60 (m, 3H), 1,94-2,09 (m, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,75-1,84 (m, 1H), 1,57-1,74 (m, 1H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,26 minút; MS: MH+ 445.
Príklad 555
7ra«.?-l-{4-[4-amino-3-(3-chlór-4-{[4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7] py rimidín-1 -y 1 ]cy klohexyl} -4-metylhexahydropyrazindium-dimaleát
A. 7erc-butyl-/V-(4-bróm-2-chlórfenyl)karbamát
Roztok 4-bróm-2-chlóranilínu (5,00 g, 0,0242 mol) v tetrahydrofuráne (50 ml) sa nechá reagovať s 1,0 M roztokom bis(trimetylsilyl)amidu sodného v tetrahydrofuráne (53,2 ml, 0,0532 mol). Zmes sa mieša 15 minút pri izbovej teplote, pridá sa roztok di-Zerc-butyldikarbonátu (6, 34 g, 0,0290 mol) a zmes sa mieša po dobu 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi heptán/etylacetát (4:1). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa /erc-butyl-A-(4-bróm-2-chlórfenyl)karbamát vo forme bielej pevnej látky (4,214 g, 0,0137 mol).
‘H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ)δ8,75 (s, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,50 (dd, 1H), 1,46 (s, 9H); TLC (heptán/etylacetát 4:1) Rf 0,54.
B. 7erc-butyl-A-[2-chlór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát
Zmes terc-butyl-A/-(4-bróm-2-chlórfenyl)karbamátu (2,10 g, 0,00685 mol), diborónpinakolesteru (2,09 g, 0,00822 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfmo)ferocén]dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,17 g, 0,00021 mol) a octanu draselného (2,02 g, 0,02055 mol) v jV./V-dimetylformamide (50 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 6 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa trituruje heptánom (70 ml) a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu®521, heptán sa odstráni vo vákuu, čím sa získa /erc-butyI-/'7-[2-chlór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát vo forme šedého pevného podielu (1,93 g, 0,00546 mol):
544 ‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,65 (s, IH), 7,74 (d, IH), 7,61 (d, III), 7,56 (dd, IH), 1,47 (s, 9H), 1,29 (s, 12H).
C. rra«5-/erc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-aQpyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)karbamát
Zmes Zro«í-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amínu (2,20 g, 0,00498 mol), íerc-butyl-N-[2-chlór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yI)fenyl]karbamátu (1,93 g, 0,00548 mol), uhličitanu sodného (1,32 g, 0,01245 mol) v 1,2-dimetoxyetáne (50 ml) a vode (100 ml) sa intenzívne mieša a pridá sa tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakčná zmes sa mieša 6 hodín pri teplote 80 °C, po ktorých sa pridá ďalší tetrakis(trifenylfosfin)paíádium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakčná zmes sa mieša ďalších 16 hodín pri teplote 80 °C. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (100 ml) a nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného (200 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (3 x 75 ml). Spojená organická fáza sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (90:10:0,5). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa Zra«í-íerc-butyl-/V-(4-{4-amino-l[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)karbamát vo forme bielej pevnej látky (1,993 g, 0,00368 mol):
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,76 (s, IH), 8,23 (s, IH), 7,80 (d, 11-1), 7,68 (d, IH), 7,57 (dd, IH), 4,58-4,71 (m, IH), 2,15 (s, 3H), 1,89-2,61 (m, 15H), 1,49 (s, 9H), 1,40-1,48 (m, 2H); TLC (dichlórmetán/metanol = 90:10) Rf0,13. MS: M+ 541.
D. 7ran.y-3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amm
7,raz75-/crc-butyl-/ť-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)karbamát (1,993 g, 0,00368 mol) sa pridá do roztoku 20% trifluóroctovej kyseliny v dichlórmetáne. Zmes sa mieša po dobu 2 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (50 ml) a premyje 1,0 M vodným roztokom hydroxidu sodného (2 x 25 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa trarcs-3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4545
-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (1,564 g, 0,00355 mol) vo forme bielej pevnej látky.
lH NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,31 (dd, 1H), 6,92 (d, 1H), 4,574,63 (m, 1H), 2,23-2,55 (m, 9H), 2,14 (s, 3H), 1,89-2,08 (m, 6H), 1,38-1,52 (m, 2H); TLC (dichlórmetán/metanol = 90:10) Rf 0,08; MS: MH+ 441.
E. Trans-Ni -(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ŕ/jpyrimidm-3-yI}-2-chlórfenyl)-4-(trifluórmetyl)benzamid-dimaleát
Do zmesi 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridíne (5 ml) pri teplote -10 °C sa po kvapkách pridá 4-(trifluórmetyl)-l -benzénkarbonylchlorid (0,188 g, 0,00090 mol), pričom teplota sa udržuje pod -5 °C. Zmes sa mieša pri teplote -10 °C po dobu 15 minút, potom pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Potom sa pridá IN vodný roztok hydroxidu sodného (1,0 ml) a zmes sa mieša 1 hodinu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (15 ml) a spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 %-60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa purifikovaná voľná báza (0,032 g, 0,000052 mol), ktorá sa rozpustí v absolútnom etanole (4 ml) a zahrieva pri refluxe. Potom sa pridá roztok kyseliny maleinovej (0,018 g, 0,000156mol) v absolútnom etanole (1 ml) a roztok sa refluxuje ďalších 15 minút. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a výsledný precipitát sa filtruje, premyje minimálnym množstvom absolútneho etanolu, precipitát sa suší vo vákuu, čím sa získa trans-N\ -(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)-4-(trifluórmetyl)benzamid-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,020 g, 0,00002 mol):
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,42 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,20 (d, 2H), 7,96 (d, 2H), 7,807,83 (m, 2H), 7,46 (dd, 1H), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,13 (s, 4H), 4,61-4,73 (m, 1H), 2,52-2,64 (m, 4H), 2,23-2,46 (m, 5H), 2,16 (s, 3H), 1,902,10 (m, 6H), 1,42-1,56 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,97 minút; MS: MH4613.
546
Príklad 556
7rara-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamid-dimaleát
Do zmesi 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridíne (5 ml) pri teplote -10 °C sa po kvapkách pridá 4-(trifl uórm etoxy )-l-benzénkarbony Ichlorid (0,203 g, 0,00091 mol), pričom teplota sa udržuje pod -5 °C. Zmes sa mieša pri teplote -10 °C po dobu 15 minút a potom pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Potom sa pridá IN vodný roztok hydroxidu sodného (1,0 ml) a zmes sa mieša 1 hodinu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (15 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa purifikovaná voľná báza (0,034 g, 0,000054 mol), ktorá sa rozpustí v absolútnom etanole (4 ml) a zahrieva k refluxu. Pridá sa roztok kyseliny maleínovej (0,019 g, 0,000162 mol) v absolútnom etanole (1 ml) a roztok sa refluxuje po dobu 15 minút. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a výsledný precipitát sa filtruje, premyje minimálnym množstvom absolútneho etanolu a suší vo vákuu, čím sa získa /ra«5'-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}-2chlórfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamid-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,020 g, 0,00002 mol):
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,29 (s, IH), 8,26 (s, IH), 8,14 (d, 2H), 7,78-7,87 (m, 2H), 7,68 (dd, IH), 7,57 (d, 2H), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,11 (s, 4H), 4,65-4,77 (m, IH), 2,38-3,60 (m, 12H), 1,95-2,15 (m, 6H), 1,51-1,68 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,41 minút; MS: MH+ 629.
547
Príklad 557 rrans'-3-(3-chlór-4-{[(5-metyl-2-furyl-metyl]amino}fcnyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-aminacetát
Zmes 3 -(4-amíno-3 -chlórfenyl)-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlóretáne (20 ml) sa nechá reagovať s 5-metyl-2-furfuralom (0,052 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridom sodným (0,336 g, 0,00159 mol) pri izbovej teplote. Vo dvoch 24 hodinových intervaloch sa pridajú ďalšie 2 ekvivalenty triacetoxyborohydridu sodného (0,672 g, 0,00318 mol). Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi chloroform (25 ml) a nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného (50 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje chloroformom (2 x 25 ml). Spojená organická fáza sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa acetát ŕran,y-3-(3-chlór-4-{[(5-metyl-2-furyl)metyl]amino}fenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyk!ohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (0,129 g, 0,00022 mol):
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,51 (d, IH), 7,39 (dd, IH), 6,93 (d, IH), 6,20 (d, IH), 6,14 (t, IH), 5,98 (d, IH), 4,55-4,66 (m, IH), 4,38 (d, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,18-2,61 (m, 10 H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 5H), 1,37-1,53 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,48 minút; MS: MH+ 535.
Príklad 558
Acetát trans-3 - {3 -chlór-4- [(2 -chlór-6-fluórbenzyl)amino] fény 1} -1 - [4-(4-mety lpiperazino) cy klohexyl]-1 H-py razolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amínu
Zmes 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlóretáne (20 ml) sa nechá reagovať s 2chlór-6-fluórbenzaldehydom (0,076 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol)
548 a triacetoxyborohydridom sodným (0,336 g, 0,00159 mol) pri izbovej teplote. V troch 24 hodinových intervaloch sa pridajú ďalší 3 ekvivalenty triacetoxyborohydridu sodného (1,008 g, 0,00477 mol), po ktorých všetka východisková látka zreaguje. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi chloroform (25 ml) a nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného (50 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje chloroformom (2 x 25 ml). Spojená organická fáza sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa acetát /raní-3-{3-chlór-4-[(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l V-pyrazolo[3,4-č/jpyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (0,074 g, 0,00011 mol):
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,52 (d, IH), 7,35-7,47 (m, 4H), 6,99 (d, IH), 5,75 (t, IH), 4,55-4,66 (m, IH), 4,57 (d, 2H), 2,25-2,61 (m, 11 H), 2,16 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 4H), 1,37-1,53 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,97 minút; MS: MH+ 583.
Príklad 559
Trans-Ni. -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 V-2-imidazolylkarbonyl)-4-piperidy 1]-1 V-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl} -2-meto xyfeny l)-(/raz?j)-2-fenyl-1 -cyklopropánkarboxamid-maleát
Zmes jVl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl }-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamidu (0,200 g, 0,00041 mol) v toluéne (10 ml) sa nechá reagovať s 5V,10V-diimidazo[l,5-a:l,5-t/]pyrazín-5,10-diónom (0,040 g, 0,00021 mol) za refluxu po dobu 18 hodín. Pridá sa ďalší ekvivalent 5V,10V-diimidazo[l,5-o:l,5-ďjpyrazín-5,10-diónu a zmes sa refluxuje ďalších 6 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min). acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa voľná báza (0,103 g. 0,00017 mol), ktorá sa rozpustí v absolútnom etanole (10 ml) a zahrieva k refluxu. Potom sa pridá roztok kyseliny maleínovej (0,030 g, 0,00034 mol) v absolútnom etanole (1 ml). Roztok sa reílu549 xuje po dobu 15 minút, po ktorých vznikne precipitát. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a výsledný precipitát sa filtruje, premyje minimálnym množstvom absolútneho etanolu. Precipitát sa suší vo vákuu, čím sa získa /raní-Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l/7-2-imidazolylkarbonyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(/rai7v)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-maleát vo forme bielej pevnej látky (0,055 g, 0,00008 mol):
’H NM: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,63 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,22 (d, 1H), 8,00 (b, 1H), 7,74 (b, 1H), 7,43-7,48 (m, 1H), 7,16-7,33 (m, 7H), 6,21 (s, 2H), 4,97-5,13 (m, 1H), 2,91-3,47 (m, 4H), 2,53-2,65 (m, 1H), 2,30-2,45 (m, 1H), 2,07-2,26 (m, 2H), 1,95-2,07 (m, 2H), 1,45-1,50 (m, 1H), 1,28-1,32 (m, 1H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,17 minút; MS: MH+ 578.
Príklad 560
Cis-Nl-(4-{4-amino- l-[4-(2-aminoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(/rans)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-acetát
A. CA-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(kyanometyl)-4-hydroxycyklobexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(/ran5)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid
Zmes Cí\-Vl-{4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ7|pyrirnidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-(ŕrart5,)-2-fenylcyklopropán-l-karboxamidu (0,605 g, 0,0012 mol), chloristanu lítneho (0,189 g, 0,0018 mol) a kyanidu draselného (0,116 g, 0,0018 mol) v acetonitrile (60 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 2 dní, ochladí sa na izbovú teplotu, zriedi vodou (30 ml) a extrahuje dietyléterom (3 x 30 ml). Spojená organická fáza sa suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa c/s-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(kyanometyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(/ran5)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,602 g, 0,0011 mol):
550 'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (t, 2H), 7,31 (ΐ, 2H), 7,25 (s, 1H), 7,17-(m, 4H), 4,61-4,62 (m, 1H), 3,91 (s, 1H), 2,66 (s, 2H), 2,55-2,62 (m, 1H), 2,31-2,45 (m, 3H), 1,581,89 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, 1H), 1,28-1.38 (m, 1H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,21 minút; MS: MH+ 538.
B. Cw-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(2-aminoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(rra/w)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-acetát
Do roztoku cis-Nl-(4-{4-amino-1 -[4-(kyanometyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(ír6m)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamidu (0,200 g, 0,00037 mol) v metanole (20 ml) a hydroxidu amónneho (1 ml) sa pridá Raneyov nikel (0,5 ml). Zmes sa mieša 18 hodín pod atmosférou vodíka (1 atm). Reakčná zmes sa filtruje cez Celite a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa cN-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(2-aminoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]lN-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(/ra/7s)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamídacetát vo forme bielej pevnej látky (0,045 g, 0,000083 mol):
‘H NMR (DMSO-de, 400 ΜΗζ) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1 H), 8,22-8,24 (m, 1H), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,65-4,67 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,84-2,91 (m, 1H), 2,53-2,55 (m, 1H), 2,33-2,40 (m, 4H), 1,85 (s, 3H), 1,35-1,80 (m, 9H), 1,30-1,33 (m, 1H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,29 minút; MS: MH+ 444.
Príklad 561
CN-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(2-amino-2-oxoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(/rans)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid
Do dobre miešaného roztoku cz'j-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(kyanometyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(/rara)-2-fenyl-l-cyklopropánkarbox551 amidu (0,200 g, 0,00037 mol) v dimety lsulfoxide (4 ml) sa pri izbovej teplote pridá uhličitan draselný (0,216 g, 0,00156 mol) a po kvapkách 30 % vodný roztok peroxidu vodíka (0,6 ml), pričom teplota sa udržuje konštantná. Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 32 hodín. Do zmesi sa pridá voda (20 ml) a vzniknutý precipitát sa filtruje, precipitát sa premyje vodou a suší vo vákuu, pevný podiel sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa cri-jVl-(4-{4-amino-l-[4-(2-amino-2-oxoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(rran5)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,117 g, 0,00021 mol):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,43-7,48 (m, 1H), 7,15-7,35 (m, 7H), 7,05-7,10 (m, 1H), 4,97 (s, 1H), 4,61-4,71 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,24 (s, 2H), 1,55-1,81 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, 1H), 1,28-1,36 (m, 1H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,05 minút; MS: MH+ 556.
Príklad 562
Cri'-A4-[4-(4-amino-l-{4-[(dimetylamino)metyl]-4-hydroxycyklohexyl}-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-(/ra«s)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-acetát
Do roztoku czs-7/l-{4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-l/7-pyrazolo[3,4-i/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-(/rans)-2-fenylcyklopropán-l-karboxamidu (0,190 g, 0,000302 mol) v 2-propanole (10 ml) a pridá sa 2 M roztok dimetylamínu v metanole (0,91 ml) a výsledná zmes sa zahrieva pri teplote 65 °C v tlakovej nádobe po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 : i/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa cis-NI -[4-(4-amino-l-{4[(dimetylamino)metyl]-4-hydroxycyklohexyl}-17/-pyrazolo[3,4-í(]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-(Zran5)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-acetát vo forme bielej pevnej látky (0,109 g, 0,000177 mol):
552 ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHzjô 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22-8,24 (m, 1H), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,56-4,68 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,28 (s, 6H), 2,24 (s, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,63-1,78 (m, 4H), 1,44-1,58 (m, 3H), 1,28-1,36 (m, 1H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,54 minút; MS: Mlť 556.
Príklad 563
Trans-N2-(4- {4-amino-l-[4-(4-metylpiperaztno)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(2R)tetrahydro-l//-2-pyrolkarboxamid-acetát
Roztok /ratts-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00046 mol) v A/H-dimetylformamide (10 ml) sa nechá reagovať s l-hydroxy-7-azabenzotriazolom (0,068 g, 0,00050 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridom (0,132 g, 0,00069 mol), D-Boc-prolínom (0,108 g, 0,00050 mol) a H,N-diizopropyletylamínom (0,184 g, 0,00142 mol) pri izbovej teplote po dobu 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (10 ml) a 5 % vodný roztok kyseliny citrónovej (20 ml). Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2 x 10 ml). Spojená organická fáza sa premyje nasýteným vodným rokokom hydrogénuhličitanu sodného (15 ml) a suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa mieša v 20 % kyseline trifluóroctovej v dichlórmetáne po dobu 6 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Ä, 25 cm; 5 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 5 % - 40 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa trans-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(2Ä)-tetrahydro-lH-2-pyrolkarboxamid-acetát (0,096 g, 0,00016 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,33 (s, 1H), 8,45 (d, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,21 (d, 1H), 4,58-4,69 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,77 (dd, 1H), 2,96-3,04 (m, 1H), 2,74-2,84 (m, 1H), 2,47-2,58 (m. 5H), 2,23-2,45 (m, 5H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,88-2,11 (m, 7H), 1,78-1,88 (m, 1H), 1,60-1,69 (m, 2H), 1,39-1,54 (m, 2H);
553
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 8,47 minút; MS: MH+ 534.
Príklad 564
4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolát
A. 4-(4-Amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl)-l-pyridíniumolát
Roztok 3-jód-l H-py razolo [3,4-cQpyrimidín-4-amínu (5,00 g, 0,019 mol) v YV-dimetylformamide (50 ml) sa nechá reagovať s 60 % hydridom sodným v oleji (0,92 g, 0,023 mol) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša po dobu 15 minút a pridá sa 4-nitropyridín-V-oxid (5,37 g, 0,038 mol). Zmes sa zahrieva pri teplote 100 °C, po dobu 18 hodín, vzniknutý precipitát sa filtruje, premyje Λ/V-dimetylformamidom a etylacetátom, čím sa získa 4-(4-amino-3-jód-lH-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín- 1-yl)- 1-pyridíniumolát (3,79 g, 0,011 mol) vo forme hnedej pevnej látky:
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 8,34 (d, 2H), 8,24 (d, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 7,36 minút; MS: MH+ 355.
B. 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolát
Suspenzia 4-(4-amino-3 -j ód-1 H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1 -yl)-1 -pyridíniumolátu (0,140 g, 0,00040 mol) v dimetoxyetáne (7 ml) a vode (15 ml) sa nechá reagovať s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,093 g, 0,00043 mol), uhličitanom sodným (0,105 g, 0,00099 mol) a tetrakis(trifenylfosfm)paládiom (0,046 g, 0,00004 mol) pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín, pevný podiel sa filtruje, čím sa získa 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-6/jpyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolát (0,138 g, 0,00035 mol) vo forme hnedej pevnej látky, ktorá (0,040 g, 0,00010 mol) sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 40 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 30 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa produkt 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolát vo forme bielej pevnej látky (0,013 g, 0,00003 mol).
554 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,44 (s, 1H), 8,34-8,41 (m, 4H), 7,77 (d, 2H), 7,45 (t, 2H), 7,13-7,24 (m, 5H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,66 minút; MS: MH+ 397.
Príklad 565
3-(4-Fenoxyfenyl)-l-(4-pyridyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
Suspenzia 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lŕ/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolátu (0,100 g, 0,00025 mol) a 10 % paládia na aktívnom uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) v kyseline octovej (3 ml) sa nechá reagovať s monohydrátom fosfornanu sodného (0,033 g, 0,00038 mol) pri teplote 60 °C. Po 2 hodinách sa pridá ďalšie 10 % paládium na aktívnom uhlí (0,016 g, 0,00002 mol). Zmes sa mieša 18 hodín, po ktorých sa pridá ďalšie 10 % paládium na aktívnom uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) a monohydrát fosfornanu sodného (0,033 g, 0,00038 mol). Zmes sa mieša ďalších 24 hodín, filtruje cez Celit®521, premyje kyselinou octovou. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Ä, 25 cm; 40 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 40 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 30 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,020 g, 0,00005 mol) vo forme bielej pevnej látky:
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,71 (d, 2H), 8,46 (s, III), 8,39 (dd, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,46 (t, 2H), 7,13-7,25 (m, 5H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 17,31 minút; MS: MH+381.
Príklad 566 jV2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-1/í-2-indolkarboxamid
555
A. N2-[4-[4-amino-1 -(4-pyridy 1)-1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxyfeny 1} -1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
Suspenzia 4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl)-l-pyridíniumolátu (0,500 g, 0,0014 mol) v dimetoxyetáne (15 ml) a vode (30 ml) sa nechá reagovať s N2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidom (0,631 g, 0,00155 mol), uhličitanom sodným (0,374 g, 0,0035 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,163 g, 0,00014 mol) pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín. Pevný podiel sa filtruje a premyje vodou, mieša v etylacetáte po dobu 18 hodín, filtruje a premyje etylacetátom. Pevný podiel sa suší vo vákuu, čím sa získa surový 4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-[(l-metyl-1 //-2-indolyl)-karbonyl]aminofenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-1 -yl]-1 -pyridíniumolát (0,523 g, 0,0010 mol) vo forme hnedej pevnej látky:
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,92 minút; MS: MH+ 507.
B. N2- (4- [4-amino-1 - (4-py ridy 1) -1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl} -1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
Suspenzia 4- [4-amino-3 -(3 -metoxy-4- {[(1 -metyl-1 //-2-indolyl)karbonyl]amino} fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolátu (0,200 g, 0,00039 mol) a 10% paládia na aktívnom uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) v kyseline octovej (3 ml) sa nechá reagovať s monohydrátom fosfomanu sodného (0,063 g, 0,00059 mol) pri teplote 60 °C po dobu 2 hodín. Pridá sa ďalšie 10 % paládium na aktívnom uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) a fosfoman sodný (0,045 g, 0,00042 mol) a zmes sa mieša po dobu 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok mieša v metanole po dobu 4 hodín. Zmes sa filtruje cez Celit®521 a premyje metanolom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 50 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 50 % -100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa/ť2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/[pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l//-2-indol-karboxamid (0,020 g, 0,00004 mol) vo forme bielej pevnej látky:
'H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ) δ 948 (s, 1H) 8,72 (d, 2H), 8,47 (s, 1H), 8,42 (d, 2H), 8,20 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 7,36 (s, 1H) 7,34 (t, 1H), 7,16 (t, 1H), 4,05 (s, 3H), 3,99 (s, 1H);
556
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 %- 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 19,50 minút; MS: MH+ 491.
Príklady 567 l-(6-Amino-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín; a
Príklad 568
3-(4-Fenoxyfenyl)-l-(2-pyridyl)-lA-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín
Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00079 mol) v A-metylpyrolidinónu (10 ml) sa nechá reagovať s 60 % hydridom sodným v oleji (0,032 g, 0,00079 mol). Po uvoľnení plynu sa zmes mieša pri izbovej teplote po dobu 30 minút, pridá sa 5-bróm-2-nitropyridín (0,161 g, 0,00079 mol) a zmes sa zahrieva pri teplote 40 °C po dobu 18 hodín. Pridá sa ďalší 60 % hydrid sodný v oleji (0,032 g, 0,00079 mol) a zmes sa mieša ďalšie 2 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (15 ml) a vodu (25 ml). Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2x15 ml). Spojené organické podiely sa premyjú soľankou a sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi heptán/etylacetát (1:2) ako eluenta, čím sa získajú 2 produkty.
Menej polárna zlúčenina, l-(6-nitro-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-4-amín, sa suspenduje v absolútnom etanole (10 ml) a Λ/Α-dimetylformamide (5 ml) a pridá sa 10 % paládium na aktívnom uhlí (0,007 g). Zmes sa mieša pod atmosférou vodíka (balónik) po dobu 18 hodín. Zmes sa filtruje cez vrstvu Celitu®521 a premyje absolútnym etanolom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa l-(6-amino-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-4-amín (0,007 g, 0,00002 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,53 (d, 1 H) 8,31 (s, 1H), 7,97 (dd, 1H), 7,73 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,12-23 (m, 5H), 6,60 (d, 1H), 6,20 (s, 2H);
557
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,38 minút; MS: MH+ 396.
Polámejšia zlúčenina, 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(5-bróm-2-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín, sa suspenduje v absolútnom etanole (10 ml) a //V-dimetylformamide (5 ml) a pridá sa 10% paládium na aktívnom uhlí (0,007 g). Zmes sa mieša pod atmosférou vodíka (balónik) po dobu 18 hodín, filtruje cez vrstvu Celitu®521 a premyje absolútnym etanolom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(2-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amín (0,030 g, 0,00007 mol) vo forme bielej pevnej látky.
*H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,60-8,64 (m, 1H) 8,37 (s, 1H), 8,20 (d, 1H), 8,03-8,08 (m, 1H), 7,76 (d, 2H), 7,41-7,49 (m, 3H), 7,12-7,23 (m, 5H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 16,32 minút; MS: MH+ 381.
Všeobecný spôsob reduktívnej aminácie s použitím /ra«5-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu ako východiskovej látky a aldehydu je opísaný v príklade 569. Na pripojenie ďalších Z100 skupín môže byť 2-metoxy-3-formyl-pyridín z príkladu 569 nahradený inými aldehydmi.
Príklady 569
Diacetát /ranj-3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metyl-piperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-4-amínu
Zmes /ratts-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (1 ekviv.), 2-metoxy-3-formyl-pyridíne (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku. Reakcia sa zastaví nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v
558 priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty, nasledujúci 2 zlúčeniny sa pripraví podľa vyššie uvedeného spôsobu:
Diacetát rran5-3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metyl-piperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-4-amínu ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 8,06 (dd, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,95 (dd, 1H), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,26 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,62,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,07 minút.
MS: MH+ 528.
Príklad 570
Acetát trans-3-{4- [(177-2-indoly Imety ljamino] fenyl} -1 -[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexy 1] -17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Acetát ŕra77S-3-{4-[(l//-2-indolylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazmo)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu sa pripraví podľa spôsobu z príkladu 569 s výnimkou toho, že miesto 2-metoxy-3-formyl-pyridínu sa použije 2-formyl-indol.
1HNMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 11,08 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,44 (d, 1H), 7,36 (d, 2H), 7,32 (d, 1H), 7,01 (t, 1H), 6,95 (t, 1H), 6,81 (d, 211), 6,47 (t, 1H), 6,35 (s, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,45 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm. 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,74 minút. MS: MH+ 536.
Príklad 571
Diacetát /rara-3-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl) anilinojmety l]-1.2-dihydro-2-pyridinónu
559
Diacetát //w?.y-3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,105 g, 0,000199 mol) sa rozpustí v 30 % bromovodíku v kyseline octovej (4 ml) a zmes sa refluxuje po dobu 1,5 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát Zram,-3-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazi-no)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}anilino)metyl]-l,2-dihydro-2-pyridinónu (0,0204 g, 0,0000324 mol) vo forme bielej pevnej látky.
4H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,29 (m, 4H), 6,68 (d, 2H), 6,40 (t, IH), 6,15 (m, IH), 4,60 (m, IH), 4,09 (d, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 9,40 minút. MS: MH+ 514.
Všeobecný spôsob reduktívnej aminácie s PYZ«s-3-(4-ammo-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínom a aldehydom ako východiskovými látkami je opísaný v príklade 572.
Príklad 572
Diacetát //u«5-5-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyanilino)metyl]-4-chlór-l,3-tiazol-2-amínu
Zmes íra«5-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 /7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (1 ekviv.), 2-amino-4-chlór-5-formyl-l,3-tiazolu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku. Reakcia sa zastaví nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa požadovaný produkt.
560 ‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,19 (s, 2H), 7,06 (m, 3H), 6,68 (d, IH), 5,76 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,30 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,59 minút.
MS: MH+ 583.
Zlúčeniny podľa príkladov 573 a 574 sa pripravia podľa spôsobu z príkladu 572.
Príklad 573
Acetát /ra«s-3-(3-metoxy-4-[(5-metyl-3-izoxazolyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metyl-piperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-4-amínu 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,04 (m, 2H), 6,68 (d, IH), 6,16 (s, IH), 5,86 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,37 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,40 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,53 minút.
MS: MH+ 532.
Príklad 574
Acetát ?ra«5-3-{3-metoxy-4-[(l,3-tiazol-4-ylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu *H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,08 (s, IH), 8,19 (s, IH), 7,47 (s, IH), 7,06 (s, IH), 7,03 (d. IH), 6,68 (d. IH), 5,76 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,52 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m. 2H);
561
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,17 minút.
MS: MH+ 534.
Všeobecný spôsob prípravy benzotetrahydrofuránových derivátov s /ra«.v-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínom a 2-hydroxybenzaldehydom ako východiskovými látkami je uvedený v príklade 575.
Príklad 575
Acetát Zra«.s'-3-4-[(4,6-dichlór-2,3-dihydrobenzo[/)]furán-3-yl)amino]fenyl-l-[4-(4-metyl-piperazino)cyklohexyl]-1 /ŕ-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
7ra«5-3-(4-amino fenyl)- l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď}pyrimidín-4-amín (1 ekviv., 0,0001 - 0,0002 mol) a 2-hydroxy-4,6-dichlórbenzaldehyd (1 ekviv.) sa zmiešajú v absolútnom etanole (5 ml) a miešajú pri izbovej teplote po dobu 48 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa suší cez noc, čím sa získa zodpovedajúci imín, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie.
Trimetylsulfoxónium-jodid (2,5 ekviv.) sa rozpustí v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a naraz sa pridá 60 % disperzia hydridu sodného v parafíne (2,5 ekviv.). Po 10 minútach sa pridá roztok iminu v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 2,5 hodiny. Roztok sa naleje do ľadovo studenej vody (50 ml) a extrahuje dichlórmetánom (2 x 40 ml). Spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa finálna zlúčenina.
*H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,14 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,80 (d, 2H), 6,56 (d, 1H), 5,34 (m, 1H), 4,80 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,42 (dd, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
562
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä. 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 16,03 minút.
\-lS: Μ1Γ 593.
Príklad 576
Acetát /rattY-3-{4-[(4-chlór-2,3-dihydrobenzo[ú]furán-3-yl)ammo]fenyl}-l-[4-(4-metyl-piperazinojcyklohexy 1]-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Acetát /ra«5--3-{4-[(4-chlór-2,3-d!hydrobenzo[ú]fnrán-3-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-4-amínu sa pripraví podľa spôsobu z príkladu 575, s výnimkou toho, že 2-hydroxy-4,6-dichlórbenzaldehyd sa nahradí 2-hydroxy-4-chlórbenzaldehydom.
'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ 8,20 (s, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,28 (t, 1H), 6,99 (d, 1H), 6,89 (d, 1H), 6,81 (d, 2H), 6,53 (d, 1H), 5,34 (m, 1H), 4,74 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,38 (dd, 1H), 2,62,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 14,42 minút.
MS: Μ1Γ 559.
Príklad 577
Acetát /ra«5-3-4-[(4,6-dichlór-2,3-dihydrobenzo[Z?]fúrán-3-yl)amino]-3-metoxyfenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Acetát /rara-3-4-[(4,6-dichlór-2,3-dihydrobenzo[Z>]furán-3-yl)amino]-3-metoxyfenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu sa pripraví podľa spôsobu z príkladu 575, s výnimkou toho, že miesto /rans-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-í7[pyrimidín-4-amínu sa použije /razM-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-4-amín.
563 ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,11 (m, 4H), 6,80 (d, 1H), 5,45 (m, 2H), 4,84 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,42 (dd, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 16,85 minút.
MS: MH+ 623.
Medziprodukt 5 rerc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát
A. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-1 -yl]-1 -piperidínkarboxylát
Zmes benzyl-yV-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (9,54 g, 0,027 mol), Zerc-butyl-4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylátu (10,0 g, 0,0225 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (1,56 g, 0,00135 mol) a uhličitanu sodného (5,97 g, 0,0563 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (120 ml) a vody (60 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu (150 ml) a dichlórmetán (150 ml); organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje v dietyléteri a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát (10,1 g, 0,0186 mol) vo forme bielej pevnej látky.
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,00 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,36 (m, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 18,58 minút.
B. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l.ŕ/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát
564
Do roztoku Zerc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-ltf-pyrazolo[3,4-ďjpyrim.idín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (5,0 g, 0,0092 mol) v terahydroíuráne (150 ml) sa pridá 10 % paládium na aktívnom uhlí (1,0 g) a reakčná zmes sa hydrogenuje na Parrovej trepačke po dobu 96 hodín, katalyzátor sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu a filtrát sa koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje v n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa fcrc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát (2,51 g, 0,0061 mol) vo forme belavej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,42 (s, 2H), 4,90 (m, IH). 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,18 min.
Príklad 578 - 590
Nižšie je uvedený všeobecný spôsob reduktívnej aminácie, potom odstránenie BOCchrániacich skupín, ktoré sa použilo pri príprave zlúčenín podľa príkladu 578 - 590.
Postup
Zmes /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-lH-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (medziprodukt 5) (1 ekviv.), aldehydu (1,2 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretánu po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, trituruje v etylacetáte a nechá reagovať s 4 N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej. Výsledná zmes sa mieša po dobu 1 hodiny, vodná fáza sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa oddelia. Organické fáze sa koncentrujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 gm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty. Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia vyššie uvedeným spôsobom:
565
Príklad 578
Diacetát 3-{4-[(benzo[ó]furán-2-ylmetyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-cZ]pyrimidín-4-amínu 'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,23 (m, 2H), 6,85 (d, 2H), 6,80 (s, 1H), 6,66 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,51 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,37 minút.
MS: MH+ 440.
Príklad 579
Diacetát 3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-4-amínu ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,96 (dd, 1H), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,27 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,06 minút.
MS:MH+ 431.
Príklad 580
Diacetát 3-(4-[(5-metyl-2-thienyl)metyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
566 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,36 (d, 2H), 6,85 (d. IH), 6,77 (d, 2H), 6,64 (d, IH), 6,54 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,41 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 12,85 minút.
MS: MH+ 420.
Príklad 581
Diacetát 3-{4-[(2-furylmetyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyI)-lŕ/-pyrazolo[3,4-cfjpyrimídm-4-aminu 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,59 (s, IH), 7,36 (d, 2H), 6,77 (d, 2H), 6,46 (t, IH), 6,39 (d, IH), 6,34 (d, IH), 4,70 (m, IH), 4,31 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,96 minút.
MS: MH+ 390.
Príklad 582
Diacetát 3-[4-(benzylamino)fenyl]-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,34 (m, 6H), 7,24 (t, IH), 6,73 (d, 2H), 6,60 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,33 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,32 minút.
MS: MH+ 400.
567
Príklad 583
Diacetát 3 - {4-[(2-metoxybenzyl)amino] fény 1} -1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-rí]pyrimidín-4-amínu ‘H NMR (DMSO-de, 400 ΜΗζ)δ 8,19 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 7,24 (m, 2H), 7,01 (d, IH), 6,90 (t, IH), 6,70 (d, 2H), 6,41 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,28 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,73 minút.
MS: MH+430.
Príklad 584
Diacetát 3- {4-[(3-metoxybenzyl)aminolfenyl}-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-4-amínu ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 7,25 (t, IH), 6,96 (m, 2H), 6,81 (d, IH), 6,72 (d, 2H), 6,59 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,30 (d, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,38 minút.
MS: MH+ 430.
Príklad 585
Diacetát 3-{4-[(4-metoxybenzyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu
568 ‘H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ 8,19 (s, IH), 7,35 (m. 4H), 6,90 (d, 2H), 6,72 (d, 2H), 6,51 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,25 (d, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,37 minút.
MS: MH+ 430.
Príklad 586
Diacetát l-(4-piperidyl}-3-(4-[3-(trifluórmetyl)benzyl]aminofenyl)-l A-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu 'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ 8,19 (s, IH), 7,71 (m, 2H), 7,58 (m, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, IH), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,08 minút.
MS: MIL 468.
Príklad 587
Diacetát 1 -(4-piperidyl)-3 -(4- [4-(trifluórmetyl)benzyl] aminofeny 1)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-4-amínu ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,19 (s, IH), 7,70 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, IH), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 14,23 minút.
569
MS: MH+ 468.
Príklad 588
Diacetát 3-(4-[(2-metyl-l,3-tiazol-4-yl)metyI]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amínu 'H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,41 (d, 2H), 7,26 (s, 1H), 6,73 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,36 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,70 (s, 3H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 10,13 minút.
MS:MH+421.
Príklad 589
Diacetát 3 - {4- [(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino] fenyl} -1 -(4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidín-4-amínu ’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,42 (m, 4H), 7,26 (t, 1H), 6,83 (d, 2H), 6,27 (t, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,32 minút.
MS: MH+ 452.
Príklad 590
Diacetát 3-(4-[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
570 'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ 8,19 (s, 1H), 7,61 (m, 3H), 7,38 (d, 2H), 6,73 (d, 2H), 6,68 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,47 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 211), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,83 minút.
MS: MH+ 486.
Príklad 591
Diacetát 3- {4- [(benzo [ú]furán-2-ylmety ljamino] -3 -metoxy fenyl} -1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Zmes Zerc-butyI-4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (g, mol), benzofurán-2-karbaldehydu (0,046 g, 0,000315 mol), triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,00042 mol,) a octovej kyseliny (0,024 ml, 0,00042 mol) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, trituruje v etylacetáte (4ml) a nechá reagovať s 4 N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej (1 ml). Výsledná zmes sa mieša po dobu 1 hodiny, vodná fáza sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa oddelia. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát 3-{4-[(benzo[ú]furán-2-ylmetyl)amino]-3-metoxyfenyl)-l-(4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (0,027 g, 0,0000457 mol).
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,22 (m, 2H), 7,06 (m, 2H), 6,80 (d, 1H), 6,75 (s, 1H), 5,80 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,57 (d, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 min., 1 ml/min) Rt 14,83 minút.
MS: Μ1Γ 470.
571
Príklad 592
Acetát 3-(4-(2,3 -dihydrobenzo [6] furán-3 -ylamino)feny 1]-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo (3,4-cQpyrimidín-4-amínu
Salicylaldehyd (0,063 g, 0,000513 mol) a Zerc-butyI-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát (0,200 g, 0,000489 mol) sa zmiešajú v absolútnom etanole (5 ml) a miešajú pri izbovej teplote po dobu 48 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok suší cez noc, čím sa získa Zerc-butyl-4-[4-amino-3-(4- {(-1 -(2-hydroxyfenyl)metylidén]amino} fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-djpyrimidín-1 -yl] -1 -piperidínkarboxylát, ktorý sa použije bez ďalšej purifíkácie.
Trimetylsulfoxónium-jodid (0,269 g, 0,00122 mol) sa rozpustí v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a naraz sa pridá 60 % disperzia hydridu sodného v parafíne (0,049 g, 0,00122 mol). Po 10 minútach sa pridá roztok fórc-butyl-4-[4-amino-3-(4-{[-l-(2-hydroxyfenyl)metylidén-1 -amino-1 -fenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1 -yl]-l -piperidínkarboxylátu v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 2,5 hodiny. Roztok sa naleje do ľadovo studenej vody (70 ml) a extrahuje dichlórmetánom (2x50 ml). Spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku, čím sa získa surový fôrc-butyl-4-{4-amino-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ó]furán-3-yl-amino)fenyl]-lA-pyrazolo(3,4-t/]pyrimidín-l-yl}-l-piperidínkarboxylát, ktorý sa použije bez ďalšej purifíkácie. Surová zlúčenina sa rozpustí v etylacetáte (5 ml) a nechá reagovať s - N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej (1,5 ml). Výsledná emulzia sa intenzívne mieša po dobu 1 hodiny, vodná vrstva sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa oddelia. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 5 gm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát 3-(4-(2,3-dihydrobenzo [&] furán-3 -ylamino)feny 1] -1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (0,038 g, 0,000078 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,41 (m, 3H), 7,25 (t, 1H), 6,89 (m, 4H), 6,51 (t, 1H), 5,35 (m, 1H), 4,79 (m, 2H), 4,27 (m, 1H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s,3H), 1,79 (m, 2H);
572
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,38 minút.
MS: MH+ 428.
Príklad 593
Acetát /rau5-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpÍperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-3 -yl} anilino)-1 H-1 X6-benzo [ď] izotiazol-1,1 -diónu
A. 3-Chlór-1 H-1 X6-benzo [čŕ]izotiazol-1,1 -dión
Sacharín (10,0 g, 0,0546 mol) a chlorid fosforečný (12,6 g, 0,060mol) sa zahrievajú pri teplote 170 °C po dobu 1,5 hodiny. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a suspenduje v dietyléteri (200 ml), precipitát sa spojí filtráciou, dobre premyje dietyléterom a suší, čím sa získa 3-chlór-l//-lZ6-benzo[ď]izotiazol-l,l-dión (3,7 g, 0,0184 mol) vo forme bielej pevnej látky, ktorá sa použije bez ďalšej purifikácie.
MS: MH+ 202.
B. 3-(4-brómanilino)-1 H-1 Z6-benzo[ý/]izotiazol-l, 1 -dión
Do roztoku 3-chlór-l//-lX6-benzo[d]izotiazol-l,l-diónu (1,0 g, 0,00496 mol) v acetóne (20 ml) sa naraz pridá 4-brómanilín (1,71 g, 0,00992 mol) a zmes sa mieša po dobu 15 minút. Zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa suspenduje vo vode (100 ml), precipitát sa spojí filtráciou, dobre premyje vodou a suší, čím sa získa 3-(4-brómanilino)-l//-lX6-benzo[ďjizotiazol-l,l-dión (1,57 g, 0,00467 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,93 (s, 1H), 8,47 (d, 1H), 8,09 (d, 1H), 7,93 (m, 4H), 7,69 (d, 2H);
C. 3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l//-l\6-benzo[ď]izotiazol-l,l-dión
Zmes 3-(4-brómanilino)-l//-lÄ6-benzo[ŕ/]izotiazol-l,l-dióiiu (1,57 g, 0,00467 mol), diborónpinakolesteru (1,43 g, 0,00561 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0.114 g, 0,00014 mol) a octanu draselného (1,37 g,
573
0,014 mol) v VjV-dimetylformamide (35 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Ku zvyšku sa pridá dichlórmetán (70 ml) a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu. Filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa trituruje v dietyléterí, čím sa získa 3-(4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilíno]-l//-lX6-benzo[t/]izotiazol-l,l-dión (1,14 g, 0,00297 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,92 (br, IH), 8,51 (d, IH), 8,08 (d, IH), 7,91 (m, 4H), 7,68 (d, 2H), 1,29 (s, 12H).
D. Acetát /ra«.s'-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3 -y 1} anilino)-1 H-1 Z6-benzo[e/]izotiazol-1,1 -diónu
Zmes 3-(4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilinoj-1/7-1,6-benzo-[e/]izotiazol-1,1-diónu (0,09 g, 0,000234 mol), /ran.v-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu (0,08 g, 0,00018 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,013 g, 0,000011 mol) a uhličitanu sodného (0,048 g, 0,00045 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát trans-3-(4-{4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]py rimidín-3 -y 1} anilino)-1H-lX6-benzo[</]izotiazol-l,l-diónu (0,075 g, 0,000119 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,29 (d, IH), 8,23 (s, IH), 7,91 (m, 3H), 7,79 (m, 2H), 7,66 (d, 2H), 4,65 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,27 minút.
MS: MH+ 572.
574
Príklad 594
Diacetát ds-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cykiohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7pyrimidm-3 -yl} anilino)-1 H-1 X6-benzo [d] izo tiazol-1,1 -dión
Diacetát c7's-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidm-3-yl}anilino)-l//-lZ6-benzo[</]izotiazol-l,l-diónu sa pripraví z 3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l/7-lX6-benzo[í7]izotiazol-l,l-díónu (0,09 g,
0,000234 mol) a cw-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazoIo[3,4-t/|pyrimidín-4-amínu spôsobom, ktorý je podobný vyššie uvedenému spôsobu.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,42 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (m, 3H), 7,84 (m, 2H), 7,62 (d, 2H), 4,80 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,07 (m, 4H), 1,91 (s, 6H). 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,59 minút.
MS: MH+ 572.
Príklad 595
Acetát fra«5-jV3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimid ín-3 -yl} fény l)benzo [t/] izoxazol-3 -amínu
A. Ml -(4-brómfenyl)-2-fluórbenzamid
Roztok 2-fluórbenzoylchloridu (5,82 g, 0,0367 mol) a 4-brómanilínu (6,31 g, 0,0367 mol) v bezvodom dichlórmetáne (150 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C a pod atmosférou dusíka sa po kvapkách pridá MM-diizopropyletylamín (5,21 g, 0,0407 mol). Výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 24 hodín, koncentruje a zvyšok sa rozdelí medzi etylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom dietyléteri (50 ml) a precipitát sa spojí filtráciou
575 a suší, čím sa získa /Vl-(4-brómfenyl)-2-fluórbenzamid (9,6 g, 0,0326 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 10,54 (s, IH), 7,66 (m, 3H), 7,56 (m, 3H), 7,34 (m, 2H). TLC (etylacetát/heptán 1: 2) Rf 0,37.
B. /VI-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbotioamid
Zmes 7Vl-(4-brómfenyl)-2-fluórbenzamidu (3,3 g, 0,0112 mol) a 2,4-bis-(4-metoxyfenyl)-l,3-ditia-2,4-difosfetán-2,4-disulfidu (2,27 g, 0,00561 mol) sa zahrieva v toluéne pri refluxe pod atmosférou dusíka po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:6) ako mobilnej fázy, čím sa získa /VI-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbotioamid (3,1 g, 0,010 mol) vo forme žltého pevného podielu.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 12,13 (s, IH), 7,93 (d, 2H), 7,62 (m, 3H), 7,51 (m, IH), 7,31 (m, 2H). TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,27.
C. /Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénamidoxím
Zmes /Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbotioamidu (1,56 g, 0,00505 mol), hydroxylamín-hydrochloridu (0,44 g, 0,00631 mol) a uhličitanu sodného (0,53 g, 0,00631 mol) sa zahrieva v absolútnom etanole (25 ml) za refluxu pod atmosférou dusíka po dobu 14 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom dietyléteri a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa NI-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénamidoxím (1,21 g, 0,00392 mol) vo forme belavej pevnej látky. TLC (etylacetát/heptán 1: 4) Rf 0,12.
D. 7V-benzo[ť/]izoxazol-3-yl-/V-(4-brómfenyl)amín
Do roztoku 7Vl-(4-brómfenyľ)-2-fluór-l-benzénamidoxímu (1,51 g, 0,00489 mol) v /V-metylpyrolidinóne (25 ml) sa pridá fórc-butoxid draselný (0,54 g, 0,00513 mol) a výsledný roztok sa zahrieva pri teplote 100 °C pod atmosférou dusíka po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýteným roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Orga576 nická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/rc-heptán (1:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa 7\7-benzo[ri]izoxazol-3-yl-AA-(4-brómfenyl)amín (0,95 g, 0,00329 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,72 (s, 1H), 8,13 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,61 (m, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,37 (dd, 1H). TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf0,26.
Ľ. jV-benzo[ri]izoxazol-3-yl-Ar-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljamín
Zmes jV-benzo[ď]izoxazol-3-yl-jV-(4-brómfenyl)ammu (1,30 g, 0,0045 mol), diborónpinakolesteru (1,37 g, 0,0054 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfmo)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,110 g, 0,000135 mol) a octanu draselného (1,32 g, 0,0135 mol) v JV,/V-dimetylformamide (35 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu a filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/rc-heptán (1:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa 7/-benzo[</]izoxazol-3-yl-Aľ-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,40 g, 0,00119 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,74 (s, 1H), 8,16 (d, 1H), 7,70 (m, 4H), 7,61 (d, 2H), 7,37 (dd, 1H), 1,29 (s, 12H). TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf0,21.
F. Acetát rrans-//3-(4-[4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-íť|pyrimidín-3-yl}fenyI)benzo[í/jizoxazol-3-amínu
Zmes A-benzo [ď] izoxazol-3 -y 1-7/- [4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-y l)fenyljamínu (0,10 g, 0,000298 mol), Zranó-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,101 g, 0,000229 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,016 g, 0,0000137 mol) a uhličitanu sodného (0,061 g, 0,000573 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát tľans-N3-(f-{4577
-amino-l-[4-(4-metylpiperaziiio)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ŕ(]pyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[</]izoxazol-3-amínu (0,102 g, 0,000175 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,81 (s, IH), 8,23 (s, IH), 8,19 (d, IH), 7,88 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,40 (m, IH), 4,65 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,66 minút. MS: MH+ 524.
Príklad 596
Diacetát cA-A3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metyípiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-cŕ]pyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[úf]izoxazol-3-amínu
Diacetát cis-N3-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[c7]izoxazol-3-amínu sa pripraví zA-benzo[<7]izoxazol-3-yl}-A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu a c«-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu spôsobom, ktorý je podobný vyššie uvedenému spôsobu.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,86 (s, IH), 8,26 (s, IH), 8,24 (d, lm, 7,93 (d, 2H), 7,67 (m, 4H), 7,43 (m, IH), 4,83 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,08 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,74 (m, 2H), 1,62 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,77 minút.
MS: MH+ 524.
Príklad 597
Acetát N3 - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-d]py rimidín-3 -y 1] fenyl} benzofrij izoxazol-3-amínu
578
Zmes V-benzo[í/]izoxazol-3-yl-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,087 g, 0,000258 mol), /erc-butyl-4-(4-amino-3-jód-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylátu (0,088 g, 0,000198 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,014 g, 0,000012 mol) a uhličitanu sodného (0,053 g, 0,000495 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi vodu a dichlórmetán. Organická fáza sa suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa surový fórc-butyl-4-{4-amino-3-[4-(benzo[č/]izoxazol-3-ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl}-l-piperidínkarboxylát, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie. Potom sa rozpustí v etylacetáte (5 ml) a nechá reagovať s 4 N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej (1 ml). Výsledná emulzia sa intenzívne mieša po dobu 1 hodiny, vodná vrstva sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa oddelia. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát V3-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]fenyl}benzo[ď]izoxazol-3-amínu (0,009 g, 0,0000185 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,82 (s, 1H), 8,20 (m, 2H), 7,89 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,41 (t, 1H), 4,74 (m, 1 H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,20 minút. MS: MH+ 427.
Príklad 598
Acetát ŕrarc.s'-3-[4-(l/7-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-4-amínu
A. VI -(4-brómfenyl)-2-fluór-1 -benzénkarbohydrazónamid
Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbotioamid (1,50 g, 0,00485 mol) a 1 M roztok hydrazínu v tetrahydrofuráne (6,3 ml, 0,0063 mol) sa zahrievajú v absolútnom etanole (25 ml) za refluxu pod atmosférou dusíka po dobu 14 hodín. Pridajú sa ďalšie 3 ml a 1 M roztok hydra579 zínu v tetrahydrofuráne a v miešaní pri refluxe sa pokračuje ďalších 6 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje, čím sa získa Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbohydrazónamid (1,54 g, 0,0050 mol) vo forme hnedej pevnej látky. TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf0,10.
B. V-(4-brómfenyl)-V-(lH-3-indazolyl)amín
Do roztoku Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbohydrazonamidu (1,2 g, 0,00391 mol) v V-metylpyrolidinóne (25 ml) sa pridá ŕerc-butoxid draselný (0,50 g, 0,0041 mol) a výsledný roztok sa zahrieva pri teplote 100 °C pod atmosférou dusíka po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/«heptán (1:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa V-(4-brómfenyl)-V-(lH-3-indazolyl)amín (0,29 g, 0,0010 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,06 (s, 1H), 9,03 (s, 1H), 7,93 (d, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,03 (dd, 1H). TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf 0,26.
C. V-(lH-3-indazolyl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín
Zmes V-(4-brómfenyl)-V-(lH-3-indazolyl)amínu (0,29 g, 0,00101 mol), diborónpinakolesteru (0,31 g, 0,00121 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,025 g, 0,00003 mol) a octanu draselného (0,294 g, 0,003 mol) v V V-dimetylformamide (35 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu a filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:3) ako mobilnej fázy, čím sa získa V-(lH-3-indazolyl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,064 g, 0,000191 mol) vo forme belavej pevnej látky.
580 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 12,09 (s, IH), 9,06 (s, IH), 7,94 (d, IH), 7,64 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,35 (m, 2H), 7,03 (dd, IH), 1,28 (s, 12H). TLC (etylacetát/ heptán 1:3) Rf 0,21.
D. Acetát /rart5-3-[4-(l/7-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu
Zmes W-(l//-3-indazolyl)-/V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,064 g, 0.000191 mol), /raz75-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,070 g, 0,000159 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,011 g, 0,0000095 mol) a uhličitanu sodného (0,042 g, 0,000398 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát /ra/zs-3-[4-(177-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,035 g, 0,000060 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,09 (s, IH), 9,14 (s, IH), 8,21 (s, IH), 7,99 (d, IH), 7,83 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,06 (t, 1 H), 4,64 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,49 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,96 minút. MS: MH+ 523.
Príklad 599
Acetát trans-N3-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metyipiperazino)cyklohexylj-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-6-(trifluórmetyl)benzo[č/]izoxazol-3-amínu
A. /71 -(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyI)benzamid
Roztok 2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoylchloridu (5,05 g, 0,0223 mol) a 4-brómanilínu (3,83 g, 0,0223 mol) v bezvodom dichlórmetáne (150 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C a pod atmosférou dusíka sa po kvapkách pridá //N-diizopropyletylamín (4,26 ml, 0,0245 mol). Výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 24 hodín, koncentruje a zvyšok sa vytrepe medzi
581 etylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom n-heptáne (50 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa Nl-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórrnetyl)benzamid (7,1 g, 0,0196 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 10,74 (s, 1H), 7,90 (m, 2H), 7,74 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,56 (d, 2H).
B. Arl-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluónnetyl)-l-benzénkarbotioamid
Zmes yVl-(4-brómfcnyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (7,1 g, 0,0196 mol) a 2,4-bis-(4-metoxyfenyl)-l,3-ditia-2,4-difosfetán-2,4-disulfidu (3,97 g, 0,0098 mol) sa zahrieva v toluéne pri refluxe pod atmosférou dusíka po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/«-heptán (1:8) ako mobilnej fázy, čím sa získa JVl-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbotioamid (6,0 g, 0,0159 mol) vo forme žltého pevného podielu.
lH NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ) δ 12,33 (s, 1H), 7,94 (d, 2H), 7,81 (m, 2H), 7,65 (m, 3H). TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf0,61.
C. //l-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénamidoxím
Zmes yVl-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbotioamidu (2,50 g, 0,00663 mol), hydroxylamín-hydrochloridu (0,65 g, 0,00928 mol) a uhličitanu sodného (0,78 g, 0,00928 mol) sa zahrieva v absolútnom etanole (25 ml) za refluxu pod atmosférou dusíka po dobu 14 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa jVl-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluómietyl)-l-benzénamidoxím (2,35 g, 0.00625 mol) vo forme belavej pevnej látky. TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,12.
D. /Y-(4-brómfenyl)-7V-[6-(trifluórmetyl)benzo[</]izoxazol-3-yl]amín
Do roztoku /Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénamidoxímu (2,25 g, 0,00598 mol) v A/-metylpyrolidinóne (30 ml) sa pridá Zerc-butoxid draselný (0,71 g,
582
0,00628 mol) a výsledný roztok sa zahrieva pri teplote 100 °C pod atmosférou dusíka po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 mol). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom /-z-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa N-(4-brómfenyl)-/V-[6-(trifluórmetyl)benzo[d]izoxazol-3-yl]amín (1,75 g, 0,0049 mol) vo forme belavej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,95 (s, 1H), 8,37 (d, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,78 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,58 (d, 2H). TLC (etylacetát/heptán 1:5) Rf 0,31.
E. N-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-jV-[6-(trifluórmetyl)benzo[í/]izoxazol-3-yl]amín
Zmes N-(4-brómfenyl)-N-[6-(trifluórmetyl)benzo[íf]izoxazol-3-yl]arnínu (1,75 g, 0,0049 mol), diborónpinakolesteru (1,49 g, 0,0059 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,120 g, 0,000147 mol) a octanu draselného (1,44 g, 0,0144 mol) v T/N-dimetylformamide (10 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou ccz vrstvu Celitu a filtrát sa koncentruje. Žltý olej sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/tt-heptán (1:6) ako mobilnej fázy, čím sa získa Ar-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-L3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-/V-[6-(trifluórmetyl)benzo[<7]izoxazol-3-yl]anún (0,065 g, 0,000161 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,97 (s, 1H), 8,39 (d, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,77 (d, 1H), 7,71 (s, 4H), 1,29 (s, 12H).
F. Acetát /rara-jV3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}fenyl)-6-(trifluórmetyl)benzo[r/]izoxazol-3-amínu
Zmes /V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-?/-[6-(trifluórmetyl)benzo[J]izoxazol-3-yl]amínu (0,062 g, 0,000153 mol), /rara-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-t7]pyrimidín-4-amínu (0,065 g, 0,000146 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,010 g, 0,0000087 moľ) a uhličitanu sodného (0,039 g, 0,000365 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod
583 atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 70 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 30 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát trans-N3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-6-trifluórmetyl)benzo[d]izoxazol-3-amínu (0,026 g, 0,0000398 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,05 (s, 1H), 8,44 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,88 (d, 2H), 7,79 (d, 1H), 7,69 (d, 2H), 4,67 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 16,18 minút. MS: MH+ 592.
Príklad 600
N2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2-metoxyety 1)-4-piper i dy l ] -1 H-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3 -y 1} fenyl)-5,7-dimetyl-1,3 -benzoxazol-2-amín
A. 3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)-4-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
Do zmesi dihydrochloridu 3-jód-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amínu (0,4 g, 0,00096 mol) a uhličitanu draselného (0,40 g, 0,0029 mol) v A/H-dimetylformamide (25 ml) sa pri izbovej teplote pridá 2-brómetyl(metyi)éter (0,09 ml, 0,00096 mol). Heterogénna zmes sa mieša pri teplote 60 °C pod atmosférou dusíka po dobu 7 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a pridá sa 2-brómetyl(metyl)éter (0,045 ml, 0,00048 mol). Zmes sa mieša pri teplote 60 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Do zmesi pri izbovej teplote sa kvôli dotiahnutiu reakcie pridá 2-brómetyl(metyl)éter (0,019 ml, 0,00019 mol) a jodid draselný (0,008 g, 0,000048 mol). Zmes sa mieša pri teplote 70 °C pod atmosférou dusíka po dobu 7 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (4 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm;
584 % - 50 % v priebehu 30 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa 3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (0,2 g, 0,0005 mol).
RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 6,4 minút. MS: MH+ 403.
B. /72-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2-metoxyetyl)-4-piperidyl]-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Zmes 3-jód-l-[1 -(2-metoxyetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu (0,2 g, 0,0005 mol), A/-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-A/-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,28 g, 0,00078 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,029 g, 0,000025 mol) a uhličitanu sodného (0,13 g, 0,00125 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (25 ml) a vody (5 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 5 hodín pod atmosférou dusíka. Pridá sa ďalší /7-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-/7-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljamín (0,14 g, 0,00039 mol,) a tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,015 g, 0,0000125 mol) a zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedastý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 5 % - 20 % metanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy, čím sa získa /V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,14 g, 0,00027 mol).
'H NMR (TFA-d, 400 MHz) δ 8,53 (s, 1H), 7,88 (m, 2H), 7,81 (m, 2H), 7,14 (s, 2H), 5,40 (br, 1H), 4,05 (m, 2H), 3,98 (m, 2H), 3,66 (m, 2H), 3,56 (s, 3H), 3,47 (m, 2H), 2,96 (m, 2H), 2,54 (br, 2H), 2,50 (s, 3H), 2,43 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,6 minút. MS: MH+ 513.
585
Príklad 601
JV2-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-1,3 -benzoxazol-2-amín
A. 3-jód-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidín-4-amín
Do zmesi dihydrochloridu 3-jód-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,5 g, 0,0012 mol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,36 g, 0,00168 mol) v dichlóretáne (40 ml) sa pri izbovej teplote pridá formaldehydový roztok (37 % vo vode, 0,037 ml, 0,00132 mol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 4 hodín. Do zmesi sa pridá 5 N vodný roztok hydroxidu sodného (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa pevný podiel, ktorý sa znovu podrobí rovnakej reakcii a spracovaniu, ktoré sú uvedené vyššie, čím sa získa N2-{4-(4-amino-l-(l-metyl-3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,3 g, 0,00084 mol). TLC (metanol/dichlórmetán = 10:90) Rf 0,63 MS: MH+ 359.
B. N2-{4-[4-amino-1 -(1 -metyl-4-piperidyl)-l //-pyrazolo [3,4-c/|pyrimidín-3-yl]fenyl} -5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín
Zmes 3-jód-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,2 g, 0,00056 mol), N-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-N-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl] amínu (0,2 g, 0,00056 mol), tetrakis(trifenylfosfín)-paládia (0,032 g, 0,000028 mol) a uhličitanu sodného (0,15 g, 0, 0014 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (20 ml) a vode (5 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 3 hodín pod atmosférou dusíka. Pridá sa ďalší N-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-N-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljamín (0,2 g, 0,00056 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,032 g, 0,000028 mol) a zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou a suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedastý pevný
586 podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 5 % - 25 % metanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy, čím sa získa N2-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-lN-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyI-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,16 g, 0,00034 mol).
‘H NMR (TFA-d, 400 MHz) δ 8,50 (s, 1H), 7,85 (m, 2H), 7,80 (m, 2H), 7,10 (s, 2H), 5,45 (br, 1H), 3,95 (br, 2H), 3,75 (br, 1H), 3,45 (br, 1H), 3,10 (s, 3H), 2,85 (br, 1H), 2,65 (br, 1H), 2,49 (br, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,42 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,7 minút. MS: Mff 469
Príklad 602
N2-{4-[4-amino-l-(l-metyl-3-piperidyl)-lN-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl1,3-benzoxazol-2-amín
A. 3 -j ód-1 -(3 -p i per i dy 1) -1 N-pyrazolo [3,4-dJ pyrimidín-4-y 1-amín
Dietyl-azodikarboxylát (12 ml, 0,08 mol) sa pridá do miešanej suspenzie 3-jód-lN-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (10,44 g, 0,04 mol), terc-butyl-3-hydroxy-lpiperidínkarboxylátu (12,0 g, 0,0596 mol) a trifenylfosfínu (20,98 g, 0,08 mol) v tetrahydrofúráne (600 ml) pri izbovej teplote. Po 19 hodinách sa pridá ďalší dietyl-azodikarboxylát (12 ml, 0,08 mol) a v reakcii sa pokračuje ďalšie 2 hodiny. Pridá sa ďalší fórc-butyl-3-hydroxy-lpiperidínkarboxylát (2,0 g) a trifenylfosfín (20,98 g, 0,08 mol) a v reakcii sa pokračuje ďalších 72 hodín. Reakcia sa koncentruje vo vákuu, pridá sa acetón (200 ml) a 5 N vodný roztok chlorovodíka (100 ml). Roztok sa zahrieva pri teplote 40 °C po dobu 2 hodín, acetón sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa premyje dichlórmetánom (3 x 200 ml), potom alkalizuje na pH 11 vodným roztokom hydroxidu sodného (1 N) a produkt sa extrahuje do dichlórmetánu (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad bezvodým síranom sodným a koncentrujú, čím sa získa oranžový· pevný podiel, ktorý sa trituruje etylacetátom, čím sa získa 3-jód-l -(3-piperidyl)-lN-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-yl-amín vo forme žltej pevnej látky (3,82 g, 25 %);
587
RP-HPLC Rt 4,792 minút, 92 % čistota: (5 % až 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 gm, 150 x 3,9 mm stĺpec).
’H NMR(400 MHz, d6-DMSO) 1,54 (IH, m), 1,71 (IH, m), 2,01 (2H, m), 2,46 (IH, m), 2,81 (2H, m), 3,01 (IH, dd, J 11,8 a 3,4 Hz), 4,58 (IH, m) a 8,19 (IH, s).
B. 3-jód-l-(l-metyl-3-piperidyľ)-l/7-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-4-anun
Do zmesi 3-jód-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,4 g, 0,00116 mol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,34 g, 0,00162 mol) v dichlóretáne (30 ml) sa pridá formaldehydový roztok (37 % vo vode, 0,035 ml, 0,00128 mol, 1,1 ekviv.) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 18 hodín. Pridá sa ďalší formaldehydový roztok (37 % vo vode, 0,035 ml, 0,00128 mol, 1,1 ekviv.) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2 hodín. Do zmesi sa pridá 5 N vodný roztok hydroxidu sodného (5 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou a sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku a zmes sa lyofilizuje, čím sa získa 3-jód-l-(l-metyl-3-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (0,41 g, 0,0011 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 6,0 minút. MS: MH+ 359.
C. V2-{4-(4-amino-l-(l-metyl-3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín
Zmes 3-jód-l-(l-metyl-3-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,35 g, 0,001 mol), V-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,44 g, 0,0012 mol), tetrakis(trifenylfosfín)-paládia (0,058 g, 0,00005 mol) a uhličitanu sodného (0,27 g, 0,0025 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (30 ml) a vode (6 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou a sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hne588 dastý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 2 % - 10 % metanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy, čím sa získa 7V2-{4-[4-amino-l-(l-metyl-3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-ylJfenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,055 g, 0,00012 mol).
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 10,80 (s, IH), 8,22 (s, IH), 7,95 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,15 (s,
IH), 6,80 (s, 1 H), 4,80 (br, IH), 2,95 (br, IH), 2,85 (br, IH), 2,45 (br, IH), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s,
3H), 2,25 (s, 3H), 2,00 (br, 3H), 1,80 (br, IH), 1,70 (br, IH).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,7 minút. MS: MH+ 469.
Príklad 603 /V2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2-metoxyetyl)-3-piperidylj-1 V-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl} fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
A. 3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyľ|-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
Do zmesi 3-jód-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidm-4-amínu (0,4 g, 0,00116 mol) a uhličitanu draselného (0,48 g, 0,00348 mol) v tV,//-dimetylformamide (25 ml) sa pridá 2-brómetyl(metyl)éter (0,11 ml, 0,00116 mol) a jodid draselný (0,010 g, 0,000058 mol) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša pri teplote 65 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a pridá sa ďalší 2-brómetyl(metyl)éter (0,025 ml, 0,00027 mol). Zmes sa mieša pri teplote 65 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (4 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou a sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl 8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 50 % v priebehu 30 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa 3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (0,2 g, 0,0005 mol). TLC (metanol/dichlórmetán = 10: 90) Rf0,5 MS: MH 403.
B. V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-lV-pyrazolo[3,4-<Y]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
589
Zmes 3-jód-l -[1 -(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidín-4-amínu (0,16 g, 0,0004 mol), JV-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-.V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yľ)fenyl]amínu (0,17 g, 0,00048 mol), tetrakis(trifenylfosfin)paládia (0,023 g, 0,00002 mol) a uhličitanu sodného (0,11 g, 0,001 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (25 ml) a vode (5 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedastý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 2 % - 10 % metanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy, čím sa získa /V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,17 g, 0,00033 mol).
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz} δ 10,85 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,14 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,79 (br, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 3,10 (br, 1H), 2,90 (br, 1H), 2,55 (br, 2H), 2,54 (br, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,05 (br, 3H), 1,80 (br, 1H), 1,70 (br, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,9 minút. MS: MH+ 513.
Príklad 604
Acetát V2- {4-[4-amino-1 -(3-piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]fenyl} -5,7-dimetyl1,3-benzoxazol-2-amínu
A. 7erc-butyl-3-(4-amino-3-jód-1 //-pyrazolo[3,4-c/jpyrimidín-1 -yl)-l -piperidínkarboxylát
Di-terobutyl-dikarbonát (2,093 g, 0,00959 mol) sa pridá do roztoku 3-jód-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-yl-amínu (3,00 g, 0,00872 mol) a uhličitanu sodného (3,23 g, 0,0305 mol) v 1,4-dioxánu (50 ml) a vode (50 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2 hodín a výsledný biely precipitát sa spojí filtráciou, pevný podiel sa premyje vodou (10 ml) a suší na vzduchu, čím sa získa Zerc-butyl-3-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-1 -yl)-l-piperidínkarboxylát vo forme bielej pevnej látky (3,40 g, 88 %);
590
RP-HPLC Rt 12,532 minút, 98 % čistota: (5 % až 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5 v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec);
'H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1,34 (9H, br s), 1,50 (2H, m), 2,02 (1H, m), 2,13 (1H, m). 2,97 (2H, m), 3,85 (2H, m), 4,59 (1H, m) a 8,21 (1H, s).
B. 7erc-butyl-3-(4-amino-3- {4-[(5,7-dimetyl-1,3 -benzoxazol-2-y ljamino] fenyl} -1 A-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-1 -yl)-1 -piperidínkarboxylát
Zmes terc-butyl-3-(4-amino-3-jód-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylátu (0,6 g, 0,00135 mol), A-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,59 g, 0,00162 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,078 g, 0,000068 mol) a uhličitanu sodného (0,36 g, 0,00338 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (50 ml) a vode (10 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Po ochladení zmesi na izbovú teplotu sa pridá ďalší A-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,24 g, 0,00066 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,078 g, 0,000068 mol) a zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 5 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedastý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 5 % - 25 % izopropanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy a produkt sa trituruje Α,Μ-dimetylformamidom, čím sa získa /erc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát (0,28 g, 0,00051 mol).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 11,9 minút. MS: MH+ 555.
C. Acetát A2-{4-[4-amino-l-(3-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-<i]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu
Do zmesi fórc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-1 A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylátu (0,28 g, 0,00051 mol) v acetóne
591 (10 ml) sa pridá 6 N vodný roztok chlorovodíka (3 ml) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša pri teplote 45 °C po dobu 1 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni a zmes sa alkalizuje 5 N vodným roztokom hydroxidu sodného. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 80 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % -100 % v priebehu 20 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa acetát V2-{4-[4-amino-l-(3-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ŕ7]pyrimidm-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,06 g, 0,00012 mol).
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,05 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,75 (br, 1H), 3,15 (br, 2H), 2,95 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,05 (br, 1H), 2,00 (br, 1H), 1,90 (s, 3H), 1,80 (br, 1H), 1,60 (br, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,4 minút. MS: MH+ 455.
Príklad 605 l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-177-pyrazolo[3,4-c71pyrimidín-1 -yl)piperidino]-2-(dimety lamino)-1 -etanón-acetát
Zmes acetát N2- {4-[4-amino-1 -(3 -piperidy 1)-177-pyrazolo [3,4-</)pyrimidín-3 -y 1] fenyl} -5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,04 g, 0,000078 mol), dimetylglycínu (0,01 g, 0,000097 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (0,019 g, 0,000097 mol), A/V-diizopropyletylamínu (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,011 g, 0,000078 mol) v bezvodom dichlórmetáne (5 ml) sa mieša po dobu 18 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom a spojené organické podiely sa premyjú soľankou. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % -100 % v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa acetát l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino] fenyl} -177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-1 -yl)piperidino]-2-(dimety lamino)-1 -etanónu (0,015 g, 0, 00003 mol).
592 'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,27 (d, 1H), 7,94 (d, 2H), 7,67 (d, 2H), 7,11 (s, 1H), 6,51 (s, 1H), 4,81-1,91 (br, 11 H), 2,40 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,91 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,7 minút. MS: MH+ 540.
Príklad 606 l-[3-(4-Amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lH-pyrazolo[3,4-úQpyrimidín-1 -y l)piperidino]-2-metyI-2-(metylamino)-1 -propanón
A. 3-jód-1 -(3-piperidyl)-1 H-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-4-amín-dihydrochlorid
Do zmesi fórc-butyl-3-(4-amino-3-jód-1 H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1 -yl)-1 -piperidínkarboxylátu (1,2 g, 0,0027 mol) v acetóne (20 ml) sa pri izbovej teplote pridá 6 N vodný roztok chlorovodíka (8 ml). Zmes sa mieša pri teplote 45 °C po dobu 1,5 hodiny, potom pri izbovej teplote po dobu 16 hodín, precipitát sa filtruje a premyje acetónom. Pevný podiel sa suší, čím sa získa 3-jód-l-(3-piperidyI)-lH-pyrazoIo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín-dihydrochlorid (1 g, 0,0024 mol). TLC (metanol/dichlórmetán = 5:95) Rf 0,14 MS: MH+ 345.
B. 9H-9-fluóreny lmetyl-H- {2- [3 -(4-amino-3 -j ód-1 H-pyrazolo [3,4-d\ pyrimidín-1 -y l)piperidino] -1,1 -dimetyl-2-oxoetyl} -H-metylkarbamát
Zmes 3 -jód-1 -(3 -piperidyl)-1 H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amín-dihydrochloridu (0,17 g, 0,00042 mol), 2-[[(9H-9-fluórenylmetoxy)karbonyl](metyl)amino]-2-metylpropánovej kyseliny (0,175 g, 0,00052 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (0,1 g, 0,00052 mol), A/H-dfizopropyletylamínu (0,23 g, 0,0018 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,057 g, 0,00042 mol) v bezvodom dichlórmetáne (7 ml) sa mieša po dobu 18 hodín pri izbovej teplote. Do reakcie sa pridá ďalšia 2-[[(9H-9-fluórenylmetoxy)karbonyl](metyl)amino]-2-metylpropánová kyselina (0,044 g, 0,00013 mol) a l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (0,025 g, 0,00013 mol) a zmes sa mieša po dobu 16 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi soľanku a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom a spojené organické rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl 8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v
593 priebehu 20 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa 9H-9-fluórenylmetylV-{2-[3-(4-amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)piperidino]-l,l-dimetyl-2-oxoetyl}-V-metylkarbamát (0,030g, 0,00005 mol).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 11,2 minút. MS: MH+ 666.
C. 9H-9-fluórenylmetyl-jV-2-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]feny 1} -1 H-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-1 -y l)piperid ino] -1,1 -dimety 1-2-oxoetyl-V-metylkarbamát
Zmes 9H-9-Í1 uórenylmetyl-V- {2-(3 -(4-amino-3 -j ód-1 H-pyrazolo[3,4-<Ljpy rimidín-1 -yl)piperidino]-l,l-dimetyl-2-oxoetyl}-V-metylkarbamátu (0,03 g, 0,000045 mol), H-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,02 g, 0,000054 mol), tetrakis(trifenylfosfín)-paládia (0,003 g, 0,000002 mol) a uhličitanu sodného (0,0126 g, 0,00011 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (4 ml) a vode (1 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (3 x 30 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou a sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedastý pevný podiel, ktorý sa použije v nasledujúcej reakcii.
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,4 minút. TLC (metanol/dichlórmetán = 5:95) Rf 0,80.
D. l-[3-(4-ammo-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lH-pyrazolo[3,4-í(jpyrimidín-1 -yl)piperidino]-2-metyl-2-(metylamino)-1 -propanón
Surová zmes 9H-9-fluórenylmetyl-V2-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)aminolfenyl} - lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-1 -y ljpiperidino] -1,1 -dimetyl-2-oxoetyl-V-metylkarbamátu (0,037 g, 0,00005 mol) v 25 % roztoku piperidínu v V .V-dimetylformamide (10 ml) sa mieša po dobu 16 hodín pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát a vodu. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou a suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % -100 % v priebehu 30 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2594
-yl)amino] fenyl }-l A-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidín-l-yl)piperidino]-2-metyl-2(metylamino)-l-propanón (0,011 g, 0,00002 mol).
'H NMR (Chloroform-ri, 400 MHz) δ 8,35 (s, 1H), 7,75 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,10 (s, 1H), 6,78 (s, 1 H), 4,98-1,70 (br, 9 H), 2,49 (s, 3H), 2,48 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,10 (s, 6H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 gm, 300 Ä, 15 cm; 5 %- 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,0 minút. MS: MH+ 554.
Príklad 607
A2-4-[4-amino-l-(3-azetanyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď[pyrimidín-3-yl]fenyl-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
A. 7e/-c-butyl-3-(4-amino-3-jód-l A-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-l-yl)-l-azetankarboxylát
Zmes 3-jód-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidm-4-amínu (0,73 g, 0,0028mol), /erc-butyl-3-[(metylsulfonyl)oxy]-l-azetankarboxylátu (1,05 g, 0,0042 mol) a uhličitanu cézneho (1,4 g, 0,0042 mol) v N, A-dimetylformamide (25 ml) sa mieša pri teplote 70 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Do zmesi sa pridá ďalší terc-butyl-3-[(metylsulfonyl)oxyj-l-azetankarboxylát (0,35 g, 0,0014 mol) a uhličitan cézny (0,46 g, 0,0014 mol). Zmes sa mieša pri teplote 70 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 70 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou a sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje dichlórmetánom (2x3 ml), čím sa získa /erc-butyl-3-(4-amino-3-jód-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-azetankarboxylát (0,57 g, 0,0014 mol).
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,4 minút. MS: MH+ 417.
B. 7brť-butyl-3-(4-amino-3-(4-[(5,7-dimctyl-l,3-bcnzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lA-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-1 -yl)-1 -azetankarboxylát
Zmes /í?rc-butyl-3-(4-amino-3-jód-lA-pyrazolo[3.4-ŕ/]pyrimidín-l-yl)-l-azetankarboxylátu (0,15 g, 0,00036 mol). V-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-;V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2595
-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,16 g, 0,00045 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,021 g, 0,000018 mol) a uhličitanu sodného (0,095 g, 0,0009 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (5 ml) a vode (2 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Reakcia sa ochladí na izbovú teplotu. Do zmesi sa pridá ďalšie tetrakis(trifenylfosfm)paládium (0,021 g, 0,000018 mol). Reakcia sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 3 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedastý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 5 % - 50 % metanol/ dichlórmetán ako mobilnej fázy, čím sa získa férc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-l-yl)-l-azetankarboxylát (0,033 g, 0,00006 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 11, 6 minút. MS: MH+527.
C. /72-4-[4-amino-l-(3-azetanyl)-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-3-yl]fenyl-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Do zmesi /erc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-azetankarboxylátu (0,033 g, 0,000063 mol) v acetóne (4 ml) sa pri izbovej teplote pridá 6 N vodný roztok chlorovodíka (0,3 ml). Zmes sa mieša pri teplote 45 °C po dobu 2 hodiny, potom pri izbovej teplote po dobu 16 hodín, pevný podiel z reakcie sa filtruje a kvôli odstráneniu nečistôt sa premyje acetónom, pevný podiel sa vytrepe medzi etylacetát a nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom a organická vrstva sa premyje soľankou. Rozpúšťadlo sa odstráni, čím sa získa 772-4-[4-amino-l -(3-azetanyl)- l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]fenyl-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín (0,004 g, 0,00001 mol).
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,85 (s, IH), 8,45 (s, IH), 8,00 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 7,09 (s, IH), 6,80 (s, IH), 5,90 (br, IH), 5,20 (m, 4H), 2,40 (s, 3H), 2,20 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,1 minút. MS: MH+ 427.
596
Príklad 608
V2-{4-[4-amino-l-(l-metyl-3-azetanyl)-lŕ/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
A. Diacetát 1 -(3-azetanyl)-3-jód-1 //-pyrazolo[3,4-V]pyrimidín-4-amínu
Ku zmesi fôrc-butyl-3-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-l-yl)-l-azetankarboxylátu (0,41 g, 0,00099 mol) v acetóne (5 ml) sa pri izbovej teplote pridá 6 N vodný roztok chlorovodíka (1 ml). Zmes sa mieša pri teplote 45 °C po dobu 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa alkalizuje 5 N vodným roztokom hydroxidu sodného pri teplote 0 °C. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 50 ml) a organická vrstva sa premyje soľankou a suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, vodná vrstva a zvyšok z organickej vrstvy sa spoja. Rozpúšťadlá sa odstránia a zvyšok sa suspenduje v AUV-dimetylformamide, metanole a octovej kyseline a purifikuje RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 nim; 5 % - 100 % v priebehu 30 minút s 0.1 M octanom amónnym, 21 ml/min) na diacetát l-(3-azetanyl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-c/jpyrimidín-4-amínu (0,165 g, 0,0005 mol). TLC (metanol/dichlórmetán 5:95) Rf 0,29. MS: MH+ 317.
B. 3-jód-l-(l-metyl-3-azetanyl)-l/í-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín
Do zmesi diacetátu l-(3-azetanyl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/)pyrimidín-4-amínu (0,165 g, 0,0005mol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,15 g, 0,00073 mol) v dichlóretáne (15 ml) sa pridá 37 % roztok formaldehydu v 0,016 ml, 0,000572 mol pri izbovej teplote. Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín, pridá sa ďalší formaldehyd (37 % vo vode, 0,016 ml, 0,000572 mol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,15 g, 0,00073 mol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2 dní. Do zmesi sa pridá 5 N vodný roztok hydroxidu sodného (1 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, pričom hlavný produkt je stále vo vode. Vodná vrstva a zvyšok z organickej vrstvy sa spoja. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa použije bez purifikácie v nasledujúcom kroku. TLC (metanol/dichlórmetán = 10:90) Rf 0,48 MS: MH+ 331.
597
C. N2- {4-[4-amino-1 -(1 -mety 1-3-azetanyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-y 1]fény 1}-5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín
Zmes 3-jód-l-(l-metyl-3-azetanyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ(]pyrimidín-4-umínu (0,17 g, 0,00052 mol), A/-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,23 g, 0,000624 mol), tetrakis(trifenylfosfín)-paládia (0,030 g, 0,000026 mol) a uhličitanu sodného (0,14 g, 0,0013 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (20 ml) a vode (15 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Reakcia sa ochladí na izbovú teplotu. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedastý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 5 % - 50 % metanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy, čím sa získa 7/2-{4-[4-amino-l-(l-metyl-3-azetanyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,13 g, 0,0003 mol).
*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,70 (d, 2H), 7,09 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,40 (br, 1H), 3,90 (m, 2H), 3,70 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,30 (s, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,5 minút. MS: MH+ 441.
Príklad 609
C/s-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-3 -yl} anilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitril
A. 3-Amino-4-hydroxybenzonitril
Do zmesi 4-hydroxy-3-nitrobenzonitrilu (4 g, 0,0244 mol) v etanole (180 ml) a vode (90 ml) sa pri izbovej teplote pridá tiosulfát sodný (17 g, 0,0976 mol). Heterogénna zmes sa mieša pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 1 hodiny. Reakčná zmes sa ochladí na
598 izbovú teplotu a etanol sa odstráni za zníženého tlaku, žltý pevný podiel sa filtruje, premyje vodou a suší sa za zníženého tlaku, čím sa získa 3-amino-4-hydroxybenzonitril (1,46 g, 0,011 mol).
RP-HPLC (DeltaPak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 4,5 minút. MS: MH+ 133.
B. 2-(4-Brómanilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitril
Do zmesi 3-amino-4-hydroxybenzonitrilu (1,84 g, 0,0137 mol) v acetonitrile (140 ml) sa pridá 4-brómfenylizotiokyanát (2,93 g, 0,0137 mol) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša po dobu 16 hodín pri izbovej teplote. Do reakčnej zmesi sa pridá chlorid meďný (1,36 g, 0,0137 mol) a trietylamín (1,9 ml, 0,0137 mol). Zmes sa mieša po dobu 16 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pevný podiel sa suspenduje v metanole. Zmes sa filtruje cez vrstvu Celitu s použitím metanolu. Hnedastý filtrát sa nechá stáť pri teplote 4 °C po dobu 3 dní, precipitát sa filtruje a premyje metanolom, čím sa získa 2-(4-brómanilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitril (2,4 g, 0,0076 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 11,1 minút. MS: MH': 313.
C. 2-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l,3-benzoxazol-5-karbonitril
Zmes 2-(4-brómanilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitrilu (1,8 g, 0,0058 mol), diborónpinakolesteru (1,8 g, 0,007 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládia v komplexe s dichlórmetánom (1:1) (0,47 g, 0,00058 mol) a octanu draselného (1,7 g, 0,0174 mol) v N,N-áimetylformamide (50 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 0 % - 40 % etylacetát/n-heptán ako mobilnej fázy, čím sa získa 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l,3-benzoxazol-5-karbonitril (0,80 g, 0,0022 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 16,9 minút. MS: MH+: 362.
D. CA-2-(4- {4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]-3-pyrimidín-3-yl}anilino)-l,3-bcnzoxazol-5-karbonitriI
599
Zmes 3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amínu (0,15 g, 0,00034 mol), 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l,3-benzoxazol-5-karbonitrilu (0,153 g, 0,000425 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,028 g, 0,0000238 mol) a uhličitanu sodného (0,090 g, 0,00085 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (3 ml) a vode (1 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín. Pridá sa ďalší 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l,3-benzoxazol-5-karbonitril (0,072 g, 0,0002 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,012 g, 0,000010 mol, 0,03 ekviv.) a zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 2 % vodného roztoku hydroxidu amónneho/5 % - 20 % metanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21, 1 mm; 5 % - 50 % v priebehu 30 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa cis-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í7|pyrimidín-3-yl} anilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitril (0,15 g, 0,00027 mol).
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,25 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,70 (m, 4H), 4,80 (br, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,20 (br, 8H), 2,10 (br, 3H), 1,75 (br, 2H), 1,60 (br, 4H).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,2 minút. MS: MH+ 549.
Príklad 610
CA-7V2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-r7]pyrimidín-3-ylj fenyl)-5-(trifluórmetoxy)-l ,3-benzoxazol-2-amín
A. 2-Nitro-4-(trifluórmetoxy)fenol
Do zmesi 4-(trifluórmetoxy)fenolu (4 g, 0,0225mol) v dimetyléteri etylénglykolu (90 ml) sa pridá 0,5 M roztok nitrónium-tetrafluórborátu v sulfolane (46 ml, 0,0229 mol) pri
600 teplote -50 °C. Zmes sa mieša pri teplote -50 °C pod atmosférou dusíka po dobu 6 hodín. Zmes sa filtruje cez vrstvu silikagélu, ktorá sa premyje 25 % etylacetát/n-heptánom. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát a vodu. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom. Organická vrstva sa premyje vodou a soľankou. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 0 % - 50 % etylacetát/n-heptánu ako mobilnej fázy. čím sa získa 2-nitro-4~(trifluórmetoxyjfenol (2,5 g, 0,011 mol). TLC (etylacctát/n-hcptán = 25:75) Rf 0,50 MS: MH+: 222.
B. 2-Amino-4-(trifluórmetoxy)fenol
Do zmesi 2-nitro-4-(trifluórmetoxy)fenolu (2 g, 0,0089 mol) v etanole (50 ml) a vody (25 ml) sa pridá tiosulfát sodný (6,2 g, 0,0356 mol) pri izbovej teplote. Heterogénna zmes sa mieša pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 1 hodiny. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a etanol sa odstráni za zníženého tlaku. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (3 x 70 ml) a organická vrstva sa premyje soľankou a suší nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa žltý pevný podiel 2-amino-4-(trifluórmetoxy)fenolu (0,9 g, 0,005 mol). TLC (metanol/dichlórmetán = 5:95) Rf 0,29 MS: MH+: 194.
C. 7ť2-(4-brómfenyl)-5-(trifluórmetoxy)-1,3-benzoxazol-2-amín
Do zmesi 2-amino-4-(triŕluórmetoxy)fenolu (0,9 g, 0,0047 mol) v tetrahydrofuráne (60 ml) sa pri izbovej teplote pridá 4-brómfenylizotiokyanát (1 g, 0,0047 mol). Zmes sa mieša po dobu 16 hodín pri izbovej teplote. Do reakčnej zmesi sa pridá bezvodý síran med’ný (7,1 g, 0,0443 mol, 9,43 ekviv.), trietylamín (0,67 ml, 0,0047 mol, 1 ekviv.) a silikagél (8,5 g). Zmes sa mieša po dobu 4 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zmes sa filtruje cez vrstvu silikagélu s použitím zmesi 25 % etylacetát/n-heptán ako mobilnej fázy, čím sa získa oranžovo sfarbená pevná látka, ktorá sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 0 % - 25 % etylacetát/n-heptán ako mobilnej fázy. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa trituruje n-heptánom, čím sa získa A'2-(4-brómfenyl)-5-(trifluórmetoxy)-1.3-benzoxazol-2-amín (0,9 g, 0,0024 mol).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 gm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 12,2 minút. MS: MH+: 373.
D. 7ť2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-(trifluórmetoxy)-l,3-benzoxazol-2-amín
601
Zmes A2-(4-brómfenyl)-5-(trifluórmetoxy)-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,9 g, 0,0024 mol), diborónpinakolesteru (0,73 g, 0,0029 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,2 g, 0,00024 mol) a octanu draselného (0,71 g, 0,0072 mol) v A,A-dimetylformamide (25 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa filtruje cez vrstvu silikagélu zmesí 25 % etylacetát/«-heptán ako mobilnej fázy. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa trituruje «-heptánom, čím sa získa A2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-(trifluórmetoxy)-1,3-benzoxazol-2-amín (0,68 g, 0,0016 mol).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 18,8 minút. MS: MH+: 421.
E. Crs-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ŕf]pyrimidín-3-y 1} fenyl )-5 -(trifluórmetoxy)-1,3 -benzoxazol-2-amín
Zmes 3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,06 g, 0,00014 mol), A2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-(trifluórmetoxy)-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,071 g, 0,00017 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,011 g, 0,00001 mol) a uhličitanu sodného (0,037, 0,00035 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (3 ml) a vode (1 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín. Pridá sa ďalší A2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-(trifluórmetoxy)-l ,3-benzoxazol-2-amín (0,030 g, 0,00007 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,005 g, 0,000004 mol) a zmes sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 5 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 2 % vodného roztoku hydroxidu amónneho/ 5 % - 25 % metanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa cri-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-3-yl}fenyl)-5-(trifluórmetoxy)-l,3-benzoxazol-2-amm (0,065 g, 0,00011 mol).
602 'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,25 (s, IH), 8,20 (s, 1H), 7,95 (d. 2H), 7,65 (m, 3H), 7,50 (s, IH), 7,15 (s, IH), 4,80 (br, IH), 2,60 (br, 9H), 2,49 (s, 3H), 2,20 (br, 3H), 2,10 (br, IH), 1,75 (br, 2H), 1,60 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,7 minút. MS: MH+ 608.
Príklad 611
Cz5-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amín
A. 4-Etyl-2-nitrofenol
Do zmesi 4-etylfenolu (4 g, 0,0328 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (100 ml) sa pridá 0,5 M roztok nitrónium-tetrafluórborátu v sulfolane (67 ml, 0,0335 mol) pri teplote -50 °C. Zmes sa mieša pri teplote -50 °C pod atmosférou dusíka po dobu 6 hodín. Zmes sa filtruje cez vrstvu silikagélu a premyje zmesou 25 % etylacetát/n-heptán. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát a vodu. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom. Organická vrstva sa premyje vodou a soľankou. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa asi 10 g surového 4-etyl-2-nitrofenolu. Surová látka sa použije bez purifikácie v nasledujúcom kroku.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,68 (s, IH), 7,71 (s, IH), 7,40 (d, IH), 7,07 (d, IH), 2,60 (q, 2H), 1,20 (t,3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 %- 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,2 minút.
B. 2-Amino-4-etylfenol
Do zmesi 4-etyl-2-nitrofenolu (5,5 g, 0,032 mol) v etanole (180 ml) a vode (90 ml) sa pri izbovej teplote pridá tiosulfát sodný (23 g, 0,131 mol). Heterogénna zmes sa mieša pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a etanol sa odstráni za zníženého tlaku. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (3 x 100 ml) a organická vrstva sa premyje soľankou a suší nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za
603 zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 0 % - 25 % metanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy (2x). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa 2-amino-4-etylfenol (0,89 g, 0,006 mol).
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,61 (br, 2H), 6,47 (d, 1H), 6,37 (s, 1H), 6,18 (d, 1H), 2,17 (q, 2H), 1,08 (t, 3H). MS: MH’: 137.
C. V2-(4-brómfenyl)-5-etyl-l ,3-benzoxazol-2-amín
Do zmesi 2-amino-4-etylfenolu (0,89 g, 0, 0065 mol) v tetrahydrofuráne (80 ml) sa pri izbovej teplote pridá 4-brómfenylizotiokyanát (1,4 g, 0,0065mol). Zmes sa mieša po dobu 2 hodín pri izbovej teplote. Do reakčnej zmesi sa pridá bezvodý síran meďnatý (6,2 g, 0,039 mol), trietylamín (0,9 ml, 0,0065 mol) a silikagél (11,7 g). Zmes sa mieša po dobu 4 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zmes sa filtruje cez vrstvu silikagélu s použitím zmesi 25 % etylacetát/«-heptán ako mobilnej fázy, čím sa získa hnedo sfarbená pevná látka, ktorá sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 0 % - 25 % etylacetát/ n-heptán ako mobilnej fázy. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok trituruje «-heptánom, čím sa získa V2-(4-brómfenyl)-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,96 g, 0,003 mol).
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 °/o - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 12,1 minút. MS: MH+: 318.
D. V2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-etyl-l ,3-benzoxazol-2-amín
Zmes V2-(4-brómfenyl)-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,86 g, 0,0027mol), diborónpinakolesteru (0,84 g, 0,0033 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,22 g, 0,00027 mol) a octanu draselného (0,8 g, 0,0081 mol) v W-dimetylformamide (30 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát a vodu. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (3 x 50 ml) a organická vrstva sa premyje soľankou. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 0 % - 25 % etylacetát/n-heptán ako mobilnej fázy, čím sa získa V2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0.82 g, 0,002 mol). TLC (etylacetát/«-heptán = 25:75) Rf 0,30. MS: MH+: 365.
604
E. CAs-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Zmes 3 -j ód-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidín-4-amínu (0,06 g, 0,00014 mol), N2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,062 g, 0,00017 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,011 g, 0,00001 mol) a uhličitanu sodného (0,037, 0,00035 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (3 ml) a vode (1 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (2 x 25 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 2 % vodného roztoku hydroxidu amónne ho/5 % - 25 % metanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa cA-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,065 g, 0,00012 mol).
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 11,25 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,37 (d, 2H), 8,09 (d, 2H), 7,84 (d, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 5,22 (br, 1H), 3,13 (q, 2H), 2,52 (br, 7H), 2,69 (br, 4H), 2,64 (s, 3H), 2,49 (br, 2H), 2,11 (br, 2H), 2,01 (br, 2H), 1,63 (t, 3H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm. 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,3 minút. MS: Mľf 552.
Príklady 612
Cw-jV2-(4-{4-amino-l-[4-(dimety;lamino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín; a
Príklad 613
CA-N2-(4-{4-amino-l-[4-(dimetylamino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín
605
A. Cis- a /ram-l-[4-(dimetyIamino)cyklohexyl]-3-jód-l//-pyrazolo[3;4-ď|pyrimidín-4-amín
Do roztoku monohydrochloridu 4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-cyklohexanónu (2,00 g, 5,08 mmol), dimetylamínového roztoku (2 M v tetrahydrofuráne, 7,62 ml, 15,24 mmol) a octovej kyseliny (0,87 ml, 15,24 mmol) v 1,2-dichlóretáne (200 ml) sa pri izbovej teplote pridá triacetoxyborohydrid sodný (1,40 g, 6,61 mmol). Reakcia sa mieša po dobu 24 hodín a pridá sa ďalší triacetoxyborohydrid sodný (0,40g). Po 24 hodinách sa pridá nasýtený vodný roztok NaHCCb (50 ml) a CH2C12 (200 ml) a organická vrstva sa oddelí, suší nad bezvodým Na2SO4 a koncentruje vo vákuu. Produkt sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím gradientu 1:5:94 vodný hydroxid amónny: MeOH:CH2Cl2 až 1:20:79 94 vodný hydroxid amónny: MeOH:CH2Cl2 ako eluenta, čím sa získa zmes cis- a Zra«s-l-[4-(dimetylamino)cyklohexyl]-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-4-amínu vo forme bielej kryštalickej pevnej látky (0,87 g, 44 %);
RP-HPLC Rt 5,458 minút, 33 % čistota, Zrans-izomér; Rt 5,621 minút, 67 % čistota, cL-izomér (5 % až 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ= 254 nm; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 387 (MH+) pre oba cis- a trans-izoméry.
B. Cis- a Zrans-/V2-(4-{ 4-amino-l-[4-(dimetylamino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín- 3 -y 1} fenyl)-5,7-dimetyl-1,3 -benzoxazol-2-amín
Zmes cis- a Zrara-l-(4-(dimetylamino)cyklohexyl]-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,50 g, 1,29 mmol), /72-(4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,565 g, 1,55 mmol), uhličitanu sodného (0,34 g, 3,24 mmol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,075 g, 0,06 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (150 ml) a vode (25 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín. Pridá sa ďalší katalyzátor na báze paládia (0,075 g) a 772-(4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,40 g) a v reakcii sa pokračuje pri teplote 80 °C ďalších 16 hodín. Pridá sa ďalšie množstvo katalyzátora na báze paládia (0,020 g) a /72-(4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,12 g) a v reakcii sa pokračuje pri teplote 80 °C ďalších 16 hodín. Reakcia sa koncentruje vo vákuu a zvyšky sa rozpustia v dichlórmetáne (200 ml) a premyjú vodou (50 ml). Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 1 % vodného roztoku hydroxidu amónneho a 10 % metanolu v CH2CL
606 ako eluenta, čím sa získa cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(dimetylamino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-č/jpyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,08 g) a zmesná frakcia (0,24 g) a Zra«s'-M2-(4-{4-amino-l-[4-(dimetylamino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c(|pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín(0,030 g);
RP-HPLC Rt 11,326 minút, 100 % čistota (5 % až 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; 254 nm;
Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 497 (MH+);
'H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 1,49 (2H, m), 2,01 (6H, m), 2,33 (7H, m), 2,35 (3H, s), 2,40 (3H, s), 4,67 (1H, m), 6,80 (1H, s), 7,11 (1H, s), 7,65 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,92 (2H, d, J 8,5 Hz), 8,23(1 H, s) a 10,85(1 H, s).
Czk-frakcia vyžaduje ďalšiu purifikáciu RP-HPLC, čím sa získa cis-N2-(4-{4-amino- l-[4-(dimetylamino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3 -y 1} fény l)-5,7-dimetyl-1,3 -benzoxazol-2-amín (0,050 g).
RP-HPLC Rt 11,337 minút, 100 % čistota (5 % až 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5. v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec);
‘H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 1,61 (4H, m), 2,08 (2H, m), 2,27 (9H, m), 2,34 (3H, s), 2,40 (3H, s), 4,81 (1H, m), 6,80 (1H, s), 7,11 (1H, s), 7,65 (2H, d, J 8,5 Hz), 7,92 (2H, d, J 8,5 Hz), 8,23 (1H, s) a 10,85 (1H, s).
Príklady 614 - 620
Všeobecný spôsob prípravy analógov cz's-M2-4-[4-amino-l-(4-aminocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl]fenyl-l,3-benzoxazol-2-amínu. Príklady 614 - 620 sa pripravia podľa tohto spôsobu.
A. M2-(4-brómfenyl)-5-chlór-l,3-benzoxazol-2-amín
4-Brómfenylizotiokyanát (3,639 g, 17,00 mmol) sa pridá do roztoku 2-amino-4-chlórfenolu (2.441 g. 17,00 mmol) v acetonitrile (20 ml) a reakcia sa mieša pri izbovej teplote po dobu
607 hodín. Potom sa do suspenzie peroxidu sodíka (6,04 g, 85,0 mmol) v acetonitrile (20 ml) vopred ochladenom na teplotu 0 °C v ľadovom kúpeli pridá po kvapkách výsledný hnedý roztok. Po 20 minútach prestane mať reakcia exotermický charakter a nechá sa ohriať na izbovú teplotu po dobu 40 minút. Po kvapkách sa pridá voda (120 ml) a výsledný belavý pevný podiel sa spojí filtráciou, premyje ďalšou vodou (60 ml) a suší cez noc na lyofilizátore, čím sa získa N2-(4-brómfenyl)-5-chlór-l,3-benzoxazol-2-amín vo forme belavej pevnej látky (4,06 g, 74 %);
RP-HPLC Rt 17,229 minút, 99 % čistota (5 % až 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ= 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 321 (M-H)’ a 323 (M-H)’;
lH NMR (400MHz, d6-DMS0) 7,17 (1H, dd, J 8,5 a 1,9 Hz), 7,53 (4H, m), 7,71 (2H, d, J 8,8 Hz) a 10,95 (1H, s).
B. N2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-chlór-l,3-benzoxazol-2-amín
Zmes obsahujúca N2-(4-brómfenyl)-5-chlór-l,3-benzoxazol-2-amín (4,00 g, 12,36 mmol), bis(pinakolato)diborón (3,77 g, 14,83 mmol), octan draselný (3,64 g, 37,09 mmol) a [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatý (II) komplex s dichlórmetánom (1:1) (0,61 g, 0,74 mmol) v dimetylformamide (200 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Pridá sa ďalší katalyzátor na báze paládia (0,61 g) a v reakcii sa pokračuje ďalších 6 hodín. Pridá sa ďalší diborón (3,0 g) a v reakcii sa pokračuje ďalších 16 hodín. Do reakčnej zmesi sa pridá silikagél (20 ml) a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Výsledný pevný podiel sa potom purifikuje na silikagéli s použitím gradientu 10 % až 20 % etylacetátu v heptáne ako eluenta. Výsledný pevný podiel sa trituruje heptánom, čím sa získa N2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-chlór-l,3-benzoxazol-2-amín vo forme krémovej pevnej látky (2,40 g, 52 %);
RP-HPLC Rt 18,164 minút, 99 % čistota (5 % až 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 μηι, 150 x 3,9 mm stĺpec);
'H NMR (400 MHz, dĎ-DMSO) 1,29 (12H, s), 7,17 (1H, dd, J 8,5 a 2,1 Hz), 7,56 (2H, m), 7,68 (2H, m), 7,75 (2H, m) a 10,96 (1H, s).
C. N2-(4-brómfenyl)-5-metyl-1,3-benzoxazol-2-amín
608
2-Amino-4-metylfenol (1,15 g, 9,34 mmol) sa pridá do roztoku 4-brómfenylizotiokyanátu (2,00 g, 9,34 mmol) v tetrahydrofuráne (35 ml) a reakcia sa mieša pri izbovej teplote po dobu 16 hodín. Pridá sa bezvodý síran meďnatý (14,06 g, 88,10 mmol), silikagél (14,06 g) a trietylamín (1,3 ml, 9,34 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 24 hodín. Reakcia sa koncentruje za zníženého tlaku, potom sa nanesie na vrstvu silikagélu a purifikuje s použitím zmesi 1:5 etylacetát: heptán (2 1), potom dietyléteru ako eluenta, čím sa získa V2-(4-brómfenyl)-5-metyl-l,3-benzoxazol-2-amín vo forme svetlo hnedej pevnej látky (2,30 g, 81 %);
RP-HPLC Rt 16,437 minút, 94 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec);
*H NMR (400 MHz, dŔ-DMSO) 2,37 (3H, s), 6,94 (IH, d, J = 8,1 Hz), 7,27 (IH, s), 7,36 (IH, d, J = 8,1 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,72 (2H, d, J - 8,4 Hz) a 10,72 (IH, s).
D. V2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-metyl-l,3-benzoxazol-2-amín /V2-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-metyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z V2-(4-brómfenyl)-5-metyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (1,5 g, 4,95 mmol) podľa spôsobu opísaného na prípravu V2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-chlór-l,3-benzoxazol-2-amínu. Produkt sa získa vo forme bielej vločkovitej pevnej látky (0,79 g, 46%);
RP-HPLC Rt 17,382 minút, 98 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónnym pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec);
*H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 1,29 (12 H, s), 2,38 (3H, s), 6,94 (IH, d, J = 8,1 Hz), 7,30 (IH, s), 7,36 (IH, d, J = 8,1 Hz), 7,67 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,75 (2H, d, J = 8,5 Hz) a 10,74 (IH, s).
E. Všeobecný spôsob prípravy cyklohexylamínových analógov cis-l-(4-aminocyklohexyl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amínu
609
4-(4-Amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-]pyrimidín-l-yl)-l-cyklohexanón-monohydrochlorid (5,08 - 7,62 mmol meradlo) sa suspenduje v dichlóretáne (200 - 300 ml) pod atmosférou dusíka, pridá sa príslušný amín (3,0 ekviv.), ľadová kyselina octová (3,0 ekviv.) a triacetoxyborohydrid sodný (1,3 ekviv.) a reakcia sa mieša pri izbovej teplote po dobu 1-2 dní. Pokiaľ reakcia nedobehne do konca, pridá sa ďalší triacetoxyborohydrid sodný (1,3 ekviv.) a v reakcii sa pokračuje ďalšie 1 alebo 2 dni. Reakcia sa zastaví nasýteným uhličitanom sodným (50 - 75 ml) a extrahuje dichlórmetánom (200 - 300 ml). Organická fáza sa oddelí, suší nad bezvodým Na2SO4 a koncentruje vo vákuu, čím sa získa zmes cis- a frau.v-produktov vo forme bielej pevnej látky. Surové produkty sa purifikujú zrýchlenou chromatografiou s použitím gradientu 2 % metanolu a 0,2 % hydroxidu amónneho v dichlórmetáne až 5 % metanolu a 0,5 % hydroxidu
610 amónneho v dichlórmetáne ako eluenta. Frakcie obsahujúce čisté cA-produkty sa spoja, koncentrujú za zníženého tlaku a sušia na lyofilizátore, čím sa získajú cyklohexylamínové analógy czs-l-(4-aminocyklohexyl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (detaily viď tabuľka 1).
Tabuľka 1
Štruktúra Vých. amín Meradlo vých. cyklohexanónu (mmol) m/z (MH+) HPLC RT (min) Čistota % výťažok izolovaného czs-izoméru
H 5,08 429,0 5,63 95% 8
1 1 o 0
v o
ΐ 1 o Η,Ν^ H3c 7,62 417,0 5,96 100 % 59
W a
'O
Ϊ ' h2n^ 2 CHS 7,62 373,0 5,32 100 % 2
AA <\
/n
Podmienky analýzy
RP-HPLC: 5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Ä, 5 gm, 150 x 3,9 mm stĺpec.
611
F. Všeobecný spôsob prípravy analógov cz5-V2-4-[4-amino-l-(4-aminocyklohexyl)-lV-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl]fenyl-l,3-benzoxazol-2-amínu
Cyklohexylamínový analóg cis-1 -(4-aminocyklohexyl)-3-jód-1 V-pyrazolo[3,4-rí}pyrimidín-4-amínu (0,10 - 0,52 mmol meradlo) sa rozpustí v dimetyléteri etylénglykolu (5-10 ml) a vode (2,5 - 5 ml), pridá sa príslušný substituovaný alebo nesubstituovaný 7V-(l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (1,25 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfm)paládium (0,05 ekviv.) a uhličitan sodný (2,5 ekviv.) a reakcia sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 20 hodín. Pokiaľ reakcia nedobehne do konca, pridá sa ďalší boronát (1,25 ekviv.) a katalyzátor na báze paládia (0,05 ekviv.). Pokiaľ sa objaví precipitát, pridá sa do reakcií DME/H2O 2:1 (5 ml). Reakcie sa ďalej zahrievajú pri teplote 80 °C ďalších 22 - 40 hodín, potom sa pridá silikagél (5-8 ml) a zmes sa koncentruje za zníženého tlaku. Purifikáciou zrýchlenou chromatografiou na silikagéli s použitím gradientu 2 % až 50 % metanolu obsahujúceho 0,5 M hydroxid amónny v dichlórmetáne sa pripraví analóg czs-JV2-4-[4-amino-l-(4-aminocyklohexyl)-lV-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín3-yl]fenyl-l,3-benzoxazol-2-amínu. U produktov, ktoré nie sú tak čisté, sa uskutoční purifikácia RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 15 % až 35 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 40 minút, potom gradient 35 % až 90 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny v priebehu 150 minút; Deltapak C18, 300 Á, 15 gm, 40 x 100 mm stĺpec). Frakcie obsahujúce požadované produkty sa spoja a koncentrujú vo vákuu, potom sušia na lyofilizátore, čím sa získajú produkty vo forme bielych alebo hnedých pevných látok, (detaily viď tabuľka 2).
Tabuľka 2
Pr. Štruktúra Vých. cyklohexylamín Mer. (mmol) Vých. boronát m/z HPLC RT (min) Čistota % výťažku
614 Ϊ /' 0,24 527,3 11,66 100 % 32
mh, 0 NH
W ty H v A- 0 f
612
615 r»-,-,to o X x x H Ϊ ,- γ 7 N 0,25 Q κγΰ P,H J 499,3 9,72 100% 79
616 K-/V HnX XU Ä p Ά ó 0 H-'SX t X/1 % 0 0,33 x N,, X NH A tol <X? -Ή- 539,3 11,50 100% 28
617 yO nh, yd W A N-~ o iX Sto x 0 0,12 O «λ ň t (3 to 511,3 9,77 100% 60
618 .toto, o r X. ój X 0 0,10 0 x y NH Φ A to- 545,2 11,36 97% 97
613
Podmienky analýzy RP-HPLC: 5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónnym pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec.
Príklad 621
Cw-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl} fény l)-4-(2-nitro fenyl)-1,3 -tiazol-2-amín
Použije sa spôsob opísaný na prípravu cw-JV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-etyl-l,3-tiazol-2-amínu s výnimkou toho, že ako alky lačné činidlo sa použije 2-bróm-2'-nitroacetofenón (0,126 g, 0,516 mmol). Purifikáciou produktu preparativnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8p Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 7,0 - 8,0 min) sa získa cw-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177614
-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-y 1}fenyl)-4-(2-nitrofenyl)-l,3-tiazol-2-amín vo forme žltej peny (0,088 g, 0,144 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) R, 7,72 min; MS (MH)+611.
Príklad 622
Czs-?/2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/ŕ-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl} fenyl)-5,7-dimetyl-1,3-benzotiazol-2-amín
Pyridínium-tribromid (0,894 g, 2,80 mmol) a 3,5-dimetylcyklohexanón (0,180 ml, 1,27 mmol) sa suspendujú v dichlórmetáne (5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 24 hodín, potom zriedi dichlórmetánom (60 ml). Organická vrstva sa extrahuje postupne vodou (10 ml) a uhličitanom sodným (10 ml), suší (síranom horečnatým), filtruje a koncentruje. Purifíkáciou produktu zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu (7,5 % etylacetát/heptán) sa získa 2,6-dibróm-3,5-dimetyl-l-cyklohexanón vo forme zmesi diastereoizomérov (0,243 g, 0,855 mmol): TLC Rf (20 % etylacetát/heptán): 0,35.
Alkylácia 2,6-dibróm-3,5-dimetyl-l-cyklohexanónu (0,243 g, 0,855 mmol) sa uskutoční podľa spôsobu opísaného na prípravu cA-iV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-etyl-l,3-tiazol-2-amínu s výnimkou toho, že alkylácia sa vykonáva pri teplote 75 °C, čím sa získa N-(4-brómfenyl)-N-(5,7-dimetyl-1,3-benzotiazol-2-yl)amín (0,251 g, 0,754 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5 μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm) Rt 14,8 minút.
Aľ-(4-Brómfenyl)-7/-(5,7-dimetyl-l,3-benzotiazol-2-yl)amín (0,251 g, 0,754 mmol) sa konvertuje na požadovanú zlúčeninu podľa spôsobu opísaného na prípravni ciT-Az2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidín-3-yl}fenyl)-4-etyl-l ,3-tiazol-2-amínu. Purifíkáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 8,8 - 10,5 min) sa získa m-iV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazi615 no)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzotiazol-2-amín vo forme bieleho prášku (0.081 g, 0,143 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 8,75 min; MS (MH)4 568.
Príklady 623
Cw-/V2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-c/Jpyrimidín-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-4//-cyklopenta[</][l,3]tiazol-2-amín
Cyklopentanón (200 μί, 2,26 mmol) a pyridínium-tribromid (0,723 g, 2,26 mmol) sa suspendujú v dichlórmetáne (5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc, potom zriedi zmesou éter/petroléter (1:1, 60 ml). Organická fáza sa extrahuje postupne vodou (10 ml) a vodným roztokom uhličitanu sodného (10 ml), potom suší (síranom horečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikáciou produktu zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu (25 % éter/petroléter) sa získa 2-brómcyklopentanón (0,220 g, 1,35 mmol) vo forme bezfarebného oleja; TLC (25 % éter/petroléter) Rf: 0,35.
2-Brómcyklopentanón (0,220 g, 1,35 mmol) sa konvertuje na požadovanú zlúčeninu podľa spôsobu opísaného na prípravu cw-Aľ2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-(2-nitrofenyl)-l,3-tiazol-2-amínu s výnimkou toho, že alkylácia sa vykonáva pri teplote 60 °C. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 7,8 - 8,8 min) sa získa cis-N2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-3-y 1} fenyl)-5,6-dihydro-4//-cyklopenta[ť/][l,3]tiazol-2-amín vo forme hnedého prášku (0,009 g, 0,017 mmol);
RP-HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 7,23 min; MS (MH)4 530.
616
Príklad 624
C/OW2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-rí]pyrirnidín-3-yl} fenyl)-5-etyl-4-fenyl-1,3-tiazol-2-amín
Na konvertovanie butyrofenónu (436 pl, 3,00 mmol) na požadovanú zlúčeninu sa využije spôsob prípravy czv-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpipe-razino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-477-cyklopenta[rí][l,3]tiazol-2-amínu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8p Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 8,9-11,1 min) sa získa crí-V2-(4-{4-arnino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l.ŕ/-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-fenyl-l,3-tiazol-2-amín vo forme bieleho prášku (0,022 g, 0,037 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5p Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 9,27 min; MS (MH)+ 594.
Príklad 625
Ci5-/72-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17Y-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4,5,6,7-tetrahydro-l,3-benzotiazol-2-amín
Na konvertovanie cyklohexanónu (310 pl, 3,00 mmol) na požadovanú zlúčeninu sa použije spôsob opísaný na prípravu cw-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metyl-piperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-4//-cyklopenta[íf)[l,3]tiazol-2-amín. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8p Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 6,8 - 8,6 min) sa získa cz>V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4,5,6,7-tetrahydro-l ,3-benzotiazol-2-amín vo forme oranžového prášku (0,022 g, 0,040 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5p Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 7,62 min; MS (MH)+ 544.
617
Príklad 626
Cz5-H2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-izopropyl-4-fenyl-l,3-tiazol-2-amín
Na konvertovanie izovalerofenónu (0,484 g, 2,98 mmol) na požadovanú zlúčeninu sa použije spôsob opísaný na prípravu cíú-N2-(4-{4-ammo-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-4H-cyklopenta[ď][l,3]tiazol-2-amínu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 9,5 - 11,7 min) sa získa cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-\H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-izopropyl-4-fenyl-l,3-tiazol-2-amín vo forme ružového prášku (0,060 g, 0,099 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím stĺpca 5μ Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 9,82 min; MS (MH)+ 608.
Príklad 627
Cz5-zV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl }fenyl)-4-fenyl-5-propyl-1,3 tiazol-2-amín
Na konvertovanie valerofenónu (0,488 g, 3,01 mmol) na požadovanú zlúčeninu sa použije spôsob opísaný na prípravu cri-H2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3-y 1} fényl)-5,6-dihydro-4H-cyklopenta[</] [ 1,3 ]tiazol-2-amínu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 %-100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 9,6 - 11,8 min) sa získa czú-H2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-7]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-fenyl-5-propyl-l,3-tiazol-2-amín vo forme žltého prášku (0,135 g, 0,222 mmol);
618
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 10,08 min; MS (MH)+ 608.
Príklad 628
3-[4-(l,3-Benzoxazol-2-ylmetyl)fenyľ]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/jpyrimidín-4-amín
2-Aminofenol (0,257 g, 2,36 mmol) a 4-brómfenyloctová kyselina (0,500 g, 2,36 mmol) sa zahrievajú v utesnenej nádobe pri teplote 200 °C. Po 4 hodinách sa reakčná zmes ochladí na izbovú teplotu a zriedi zmesou metanolu a dichlórmetánu (5 %, 60 ml). Organická fáza sa extrahuje vodným roztokom uhličitanu sodného (IM, 10 mi), suší (síranom horečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikáciou zvyšku zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu (15 % etylacetát/heptán) sa získa /7-(l,3-benzoxazol-2-yl)-Ar-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín vo forme hnedej pevnej látky (0,347 g, 1,20 mmol); (MH)+ 290.
Aľ-(l,3-Benzoxazol-2-yl)-jV-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín sa konvertuje na 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzylJ-l,3-benzoxazol, potom na požadovanú zlúčeninu podľa spôsobu opísaného na prípravu crs-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidín-3-yl}fenyl)-6-chlór-l,3-benzotiazol-2-amínu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 5,6 - 7,3 min) sa získa 3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylmetyl)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l 77-pyrazolo [3,4-c/] pyrimidín-4-amín vo forme bieleho prášku (0,102 g, 0,195 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 6,83 min; MS (MH)+ 523.
Príklad 629 jVl-[2-(Dimetylamino)etyl]-2-{4-amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/Jpyrimidín-1 -yl} propánamid
619
Použije sa spôsob opísaný na prípravu Nl-[2-(dimetylamino)etyl]-2-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 N-pyrazolo [3,4-äQpyrimidín-1 -y Ijpropánamidu s výnimkou toho, že Suzukiho kopulácia sa uskutoční s N-(l,3-benzoxazol-2-yl)-N-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínom. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 5,5 - 7,0 min) sa získa N1 - [2-(dimetylamino)ety l] -2- {4-amino-3 -[4-( 1,3 -benzoxazol-2-y l-amino)feny 1]-1 N-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl}propánamid vo forme belavej pevnej látky (0,003 g, 0,006 mmol);
RP-HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 6,70 min; MS (MH)+ 486.
Príklad 630
Cis-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-1 N-pyrazolo [3,4-č/|pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-(4-metylfenyl)-l,3-tiazol-2-amín /»-Tolylboritá kyselina (0,150 g, 1,10 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,064 g, 0,055 mmol) a uhličitan cézny (1,80 g, 5,52 mmol) sa suspendujú v toluéne (25 ml). Reakčná zmes sa nechá prebublávať intenzívnym prúdom dusíka po dobu 15 minút, pridá sa butyrylchlorid (0,344 ml, 3,31 mmol) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 100 °C pod atmosférou dusíka po dobu 24 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a zriedi éterom (100 ml). Organická vrstva sa extrahuje postupne vodou (10 ml), vodným roztokom uhličitanu sodného (10 ml) a vodným roztokom chloridu sodného (10 ml). Organická vrstva sa suší (síranom horečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikáciou zvyšku zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu (7,5 % éter/petroléter) sa získa l-(4-metylfenyl)-l-butanón vo forme bezfarebného oleja (0,134 g, 0,827 mmol):
’H NMR (CDCb, 400 MHz) δ 7,86 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 2,92 (t, 2H), 2,41 (s, 3H), 1,76 (sx, 2H), 1,00 (t, 3H).
l-(4-Metylfenyl)-l-butanón (0,134 g, 0,827 mmol) sa konvertuje na požadovanú zlúčeninu podľa spôsobu opísaného na prípravu cZx-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-4N-cyklopenta[ď][l,3]tiazol-2620
-amín. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 10,0 - 12,0 min) sa získa c/s-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-(4-metylfenyl)-l,3-tiazol-2-amín vo forme belavej pevnej látky (0,036 g, 0,059 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 10,13 min; MS (MH)* 608.
Príklad 631
CA-Az2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ďlpyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-(2-metylfenyl)-l,3-tiazol-2-amín
Na konvertovanie o-tolylboritej kyseliny (0,200 g, 1,47 mmol) na požadovanú zlúčeninu sa použije spôsob opísaný na prípravu cí5--A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-rf]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-(4-metylfenyl)-l,3-tiazol-2-amínu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 9,8 - 11,7 min) sa získa cw-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-(2-metylfenyl)-l,3-tiazol-2-amín vo forme belavej pevnej látky (0,075 g, 0,123 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 9,83 min; MS (MH)4 608.
Príklad 632
C/s-M2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-(3-metylfenyl)-1.3-tiazol-2-amín
Na konvertovanie w-tolylboritej kyseliny (0,175 g, 1,29 mmol) na požadovanú zlúčeninu sa použije spôsob opísaný na prípravu c/5-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohe621 xyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-(4-metylfenyl)-l,3-tiazol-2-amínu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25%-100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 10,0 - 12,0 min) sa získa cz's-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-z/]pyrirmdín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-(3-metylfenyl)-l,3-tiazol-2-amín vo forme belavej pevnej látky (0,051 g, 0,084 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri l ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS Cl 8, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 10,13 min; MS (MH)+ 608.
Príklad 633
Bismaleát cis-N2- {4-(4-amino-1 -(4-(4-mety lpiperazino)cyklohexy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-<7] py rimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl}-l//-2-indolkarboxamidu
Zmes crt-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amínu (0,50 g, 1,15 mmol) v dichlórmetáne (4 ml) a pyridínu (4 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C, potom nechá sa reagovať s l//-2-indolkarbonylchloridom (0,27 g, 1,49 mmol) v dichlórmetáne (4 ml). Zmes sa nechá ohriať na izbovú teplotu a mieša po dobu 1 hodiny. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, potom sa zvyšok vytrepe medzi dichlórmetán (50 ml) a 1 N vodný roztok hydroxidu sodného. Vrstvy sa separujú, organický roztok sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a filtrát koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa zvyšok, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol (7:3) ako mobilnej fázy. Pevný podiel (0,53 g) sa rozpustí v etylacetáte (60 ml) a etanole (35 ml) pri teplote 60 °C. Pridá sa kyselina maleínová (0,32 g, 2,75 mmol) v etylacetáte (5 ml) a zmes sa ochladí na teplotu 0 °C. Vzniknutý pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa (0,70 g, 0,86 mmol) bismaleát czs-V2-{4-(4-amino-l-(4-(4-metylpiperazino)cykIohexyl)-l/7-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3 -yl)-2-metoxyfenyl} -1 //-2-indolkarboxamidu:
'H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ) δ 11,82 (s, 1H), 9,46 (s. 1H), 8,26 (s, 1H), 8,10 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,24 (t, 1H), 7,09 (t, 1H), 6,14 (s, 4H), 4,88 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 2,3-3,3 (m, 14H), 2,09 (m, 2H), 1,7-1,8 (m, 4H);
622
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 15,22 min;
MS: MH+ 580,3.
Príklad 634
Bismaleát c/5-V2-{4-4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3 -yl-2-metoxyfenyl}-1 -metyl-1 Η-2-indolkarboxamidu
Požadovaná zlúčenina sa pripraví z cw-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu a 1-metyl-ΙΗ-2-indolkarbonylchloridu spôsobom, ktorý je podobný spôsobu opísanému na prípravu bismaleátu cis-N2-{4-(4-amino-1-(4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl)-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl}-1 Η-2-indolkarboxamidu:
'H NMR (DMSo-d6 400MHz) 8 9,47 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,09 (d, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,59 (d, 1H), 7,17-7,36 (m, 4H), 7,16 (t, 1H), 6,16 (s, 4H), 4,88 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,3-3,3 (m, 14H), 2,09 (m, 2H), 1,7-1,8 (m, 4H);
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 15,98 min;
MS: MH* 594.3.
Príklad 635
Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-úQpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-acetát
A. 2-Metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-díoxaborolan-2-yl)anilín
Zmes /erc-butyl-V-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (45,0 g. 129 mol) sa rozpustí v dichlórmetáne (270 ml), potom sa roztok ochladí na teplotu 5 °C v ľadovom kúpeli. V priebehu 1 hodiny sa pridá zmes 20 % trifluóroctovej kyseli623 ny v dichlórmetáne, pričom teplota sa udržuje pod 5 °C. Reakčná zmes sa ohreje na izbovú teplotu a mieša po dobu 2 hodín. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku, výsledný olej sa rozpustí v dichlórmetáne (250 ml) a opatrne extrahuje 2,5 N vodným roztokom hydroxidu sodného (300 ml), potom soľankou (100 ml). Organický roztok sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a filtrát koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa 2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilín (21,7 g, 67,5 %) vo forme svetlo hnedého pevného bismaleátu:
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,06 (d, 1H), 6,98 (s, 1H), 8,09 (d, 1H), 6,59 (d, 1H), 5,13 (bs, 2H), 3,76 (s, 3H), 1,26 (s, 12H);
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min), ír 10,85 minút.
B. Terc-buty 1-4- [4-amino-3 -(4-amino-3-metoxyfenyl)-1 77-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidín-1 -y 1] -1 -piperidínkarboxylát
Zmes Zerc-butyl-4-(4-amino-3-j ód-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidín-1 -yl)-1 -piperidín-karboxylátu (0,50 g, 11,26 mmol), 2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilínu (3,10 g, 12,39 mmol), uhličitanu sodného (2,90 g, 27,0 mmol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,78 g, 0,67 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (90 ml) a vode (45 ml) sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 18 hodín. Zmes sa ochladí a zahusťuje za zníženého tlaku, rozdelí medzi vodu (50 ml) a dichlórmetán (150 ml). Vodná vrstva sa extrahuje ďalej dichlórmetánom (2 x 50 ml), spojené organické roztoky sa sušia nad síranom horečnatým a filtrujú, filtrát sa koncentruje a purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (96:4) ako eluenta, čím sa získa požadovaná zlúčenina (4,51 g, 91 %) vo forme hnedej pevnej látky:
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,98 (d, 1H), 6,76 (d, 1H), 5,06 (bs, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,08 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 2,90 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,90 (m, 2H), 1,43 (s, 9H);
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min), ír 9,70 minút.
C. VI-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-t7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-acetát
624
Zmes terc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-lŕ/-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (0,10 g, 0,228 mmol) v dichlórmetáne (2 ml) a pyridínu (1 ml) sa nechá reagovať s 2-fluór-4-trifluórmetylbenzoylchloridom (0,057 g, 0,251 mmol), potom sa mieša po dobu 1 hodiny. Rozpúšťadlá sa zahusťujú a zvyšok sa nechá reagovať s trifluóroctovou kyselinou (1 ml) v dichlórmetáne (2 ml). Zmes sa mieša po dobu 1 hodiny pri izbovej teplote, potom sa rozpúšťadla zahusťujú za zníženého tlaku a zvyšok purifikuje preparatívnou RPHPLC na stĺpci 08 s použitím zmesi acetonitril-0,05 M octan amónny ako mobilnej fázy. Lyofilizáciou sa získa čistá požadovaná zlúčenina:
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,90 (d, IH), 8,31 (d, IH), 8,24 (s, IH), 7,99 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,33 (s, IH), 7,30 (d, IH), 4,78 (m, IH), 3,94 (s, 3H), 3,10 (m, 2H), 2,69 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 1,85-2,0 (m, 5H);
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 gm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 17,33 min; MS: MH+ 530,2.
Zlúčeniny podľa príkladov 636 - 710 sa pripravia z /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pynmidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu a príslušného chloridu kyseliny podľa spôsobu opísaného na prípravu Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-acetátu (príklad 635). V niektorých prípadoch je na prípravu požadovanej zlúčeniny potrebné použiť zámeny funkčných skupín pomocou štandardných organických techník. Voľné bázy' sa získajú vytrepaním látky získanej z preparatívnej HPLC medzi vodný roztok hydroxidu sodného a dichlórmetán. Organická vrstva sa potom suší nad síranom horečnatým, filtruje a filtrát koncentruje, čím sa získa požadovaný produkt.
Príklad 636
AT-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-3-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 gm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 17,12 min; MS: MH+ 530,2.
625
Príklad 637
Ml - {4-[4-amino-1 -(4-piperidy 1)-1 M-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxy fény 1}benzamid-acetát ,
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 14,20 min; MS: MH+ 444,1.
Príklad 638
Ml-{4-[4-amino-l-(4-piperÍdyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-3-fenylpropánamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 14,97 min; MS: MH+ 472,2.
Príklad 639
Bisacetát Nl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/)pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -3-cyklopenty lpropánamidu
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 15,95 min; MS: MH+ 464,2.
Príklad 640
Bisacetát M5-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -l,3-dimetyl-lL/-5-pyrazolkarboxamidu
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 11,62 min; MS: MH+ 462,2.
626
Príklad 641
Bisacetát N\-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyI}· -2-(2-tienyl)acetamidu
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 13,17 min; MS: MH+ 464,2.
Príklad 642
Nl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fenylacetamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 13,63 min; MS: MH+ 458, 2.
Príklad 643
Nl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-(3,4-dimetoxyfenyl)acetamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 13,20 min; MS: MH+ 518,3.
Príklad 644
NI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxyfeny 1} -2-fenoxypropánamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 15,43 min; MS: MH+ 488,2.
627
Príklad 645
V5-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-5-izoxazolkarboxamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 10,93 min; MS: MH+ 433,1.
Príklad 646
JV2-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -2-pyridínkarboxamid-triacetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 13,52 min; MS: MH+ 445,2.
Príklad 647
Bisacetát Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2,4-difluórbenzamidu
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-O,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), Ír 14,65 min; MS: MH+ 480,1.
Príklad 648
VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-t/)pyrímidín-3-yl] -2-metoxyfenyl} -2,5-difluórbenzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-O,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 14,75 min; MS: MH+ 480,2.
628
Príklad 649
A'2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-furamid·
-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-O,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 13,40 min; MS: MH+ 434,2.
Príklad 650
7/l-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2,2-dimetylpropánamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-O,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 14,53 min; MS: MH+ 424, 2.
Príklad 651
771-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-kyanobenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-O,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 13,68 min; MS: MH+ 469,2.
Príklad 652 /71-{4-[4-amÍno-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-cykIopropánkarboxamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-O,05 M oc ta;, amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 11,05 min; MS: MH+ 408,2.
629
Príklad 653
A3 - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]py rimidín-3 -y l]-2-metoxyfenyl} -2-metylnikotínamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 gm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 11,53 min; MS: MH 459,1.
Príklad 654
Al - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-e/]pyrimidín-3 -y 1] -2-metoxyfenyl} -4-fluór-3 -metylbenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 gm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 15,32 min; MS: MH+ 476,2.
Príklad 655
Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyI)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyI}-3-(dimetylamino)benzamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 gm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 14,63 min; MS: MH+ 487,2.
Príklad 656
Al - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2,3-difluór-4-metylbenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 gm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 16,03 min; MS: MH+ 494,2.
630
Príklad 657
Bisacetát A4-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-c(|pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyljizonikotínamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 15,77 min; MS: MH+ 445,1.
Príklad 658
A3-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} nikotínamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 17,50 min; MS: MH+ 445,1.
Príklad 659
A2- {-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl-1 Α-2-pyrolkarboxamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 5 %-50 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 22,20 min; MS: MH+ 447,2.
Príklad 660
N3 - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -6-mety Inikotínamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 17,97 min; MS: MH+ 459,2.
631
Príklad 661
N2- {4- [4-amino-1 -(4-piperidy 1) -1 //-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl] -2-metoxyfenyl} -2-pyrazínkarboxamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 17,63 min; MS: MH+ 446,1.
Príklad 662
Bisacetát /VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -4-jódbenzamidu
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc· tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 16,08 min; MS: MH+ 570,1.
Príklad 663 /VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-rí]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -4-brómbenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 15,42 min; MS: MH+ 524,1.
Príklad 664 /VI -{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxyfenyl} -4-fenoxybenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 17,17 min; MS: MH+ 536,2.
632
Príklad 665
2/l-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ň/]pyrimidm-3-yl]-2-metoxyfenyl-4-fluórbenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 13,65 min; MS: MH+ 462,1.
Príklad 667 /VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ú]pyrimidín-3-yl] -2-metoxyfeny 1} -4-chlórbenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 15,57 min; MS: MH+ 478,2.
Príklad 668 iVl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-metoxybenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 13,62 min; MS: MH+ 474,2.
Príklad 669 yVl-{4-[4-amino-l -(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-(trifluór metoxy)benzamid
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 16, 30 min; MS: MH+ 528,2.
633
Príklad 670
Ml - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3 -y l]-2-metoxyfeny 1 }-4-nitrobenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc· tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 13,77 min; MS: MH+ 489,2.
Príklad 671
M2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}benzo[ó]tiofén-2-karboxamid
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 16,12 min; MS: MH+ 500,2.
Príklad 672
M2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}benzo[Z>]furán-2-karboxamid
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 15,70 min; MS: MH+ 484,2.
Príklad 673
Ml - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -4-metylbenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 15,47 min; MS: MH+ 458,2.
634
Príklad 674
M-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-(terc-butyl)benzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS Cl 8, 5 gm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, l ml/min), ír 17,93 min; MS: MH+ 500,2.
Príklad 675
Acetát metyl-4-{(4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyanilino} karbony l)benzoátu
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 gm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), Ír 14,70 min; MS: MH+ 502,1.
Príklad 676
4-{(4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕf]pyriniidín-3-yl]-2-metoxy-anilino}karbonyl)benzoová kyselina
RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 gm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 10,02 min; MS: MH+ 478,1.
Príklad 677 jVl-{4-[4-amino-l -(4-piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4-úQpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-chlórbenzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 gm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min), ír 7,28 min; MS: MH+ 478,1.
635
Príklad 678
VI - [4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}~2-brómbenzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % -100 % acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min), ír 7,42 min; MS: MH+ 524,1.
Príklad 679
VI -{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxyfenyl} -2-metoxybenzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min), ír 7,87 min; MS: MH+ 474, 2.
Príklad 680
VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2-fenylbenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min), ír 8,27 min; MS: MH+ 520,2.
Príklad 681
VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl] -2-metoxyfenyl} -2-(trifluórmetyl)benzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitrii-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 15,07 min; MS: MH+ 512,2.
636
Príklad 682
NI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-yl] -2-metoxyfenyl} -2-(trifluórmetoxy)benzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 15,77 min; MS: MH+ 528,2.
Príklad 683
NI -{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidín-3-yl] -2-metoxyfenyl} -3 -metoxy benzamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 14,43 min; MS: MH+ 474,2.
Príklad 684
NI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-úQpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -3-(trifluórmetyl)benzamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min), tR 8,15 min; MS: MH+ 512,2.
Príklad 685
NI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</[pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-3-(trifluórmetyl)benzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min), tR 8,50 min; MS: MH+ 530,2.
637
Príklad 686
Vl-{4-[4-ammo-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-<y]pyrimidín-3-yl]-2-rnetoxyfenyl}-2-fluór-6-(trifluórmetyl)benzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS Cl 8, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc· tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 15,30 min; MS: MH+ 530, 2.
Príklad 687
VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 77-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl} -2-fluór-5-(trifluórmetyl)benzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc· tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 14,68 min; MS: MH+ 530,2.
Príklad 688
VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxy fenyl} -2-fluór-5-metylbenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 13,32 min; MS: MH+ 476,2.
Príklad 689
Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-chlór-2-fluórbenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 16,50 min; MS: MH+ 496,1.
638
Príklad 690
M-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimÍdín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-benzoylbenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 16,33 min; MS :MH+ 548,2.
Príklad 691 zVl-{4-[4-ammo-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-acetylbenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 13,77 min; MS: MH+ 486,2.
Príklad 692 //l-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-izopropylbenzamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 17,10 min; MS: MH- 486,2.
Príklad 693
M-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxy fenyl}-4-etylbenzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 15,85 min; MS: MH+ 472,2.
639
Príklad 694 /Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-propylbenzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-O,05 M oc· tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 17,02 min; MS: MH+ 486,2.
Príklad 695 /71-(4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxyfenyl} -4-cyklohexylbenzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-O,05 M oc· tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 19,55 min; MS: MH+ 526,2.
Príklad 696 /VI - (4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxyfenyl} -4-etoxybenzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-O,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 15,28 min; MS: MH+ 488,2.
Príklad 697 /71-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidm-3-yl]-2-nietoxyfenyl}-4-(metylsulfonyl)benzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-O,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 13,01 min; MS: MH+ 527,2.
640
Príklad 698
Bisacetát JVl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}· -4-izopropoxybenzamidu
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 16,20 min; MS: MH+ 502,2.
Príklad 699 jVl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-(l//-l-imidazolyl)benzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 13,02 min; MS: MH+ 510,2.
Príklad 700
7Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluórbenzamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 14,60 min; MS: MH+ 462,3.
Príklad 701
AA2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-c/jpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -5-metoxybenzo[ó]furán-2-karboxamid
RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 15,38 min; MS: MH+ 514,3.
641
Príklad 702
N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxyfenyl} -5 -brómbenzo[ó]furán-2-karboxamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 gm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 17,03 min; MS: MH+ 564,1.
Príklad 703
N2- {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxyfenyl} -5-metylbenzo[/>]furán-2-karboxamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 gm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 16,27 min; MS: MH+ 498,3.
Príklad 704
N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-Jjpyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -3-metylbenzo [ó] furán-2-karboxamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 gm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc· tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 16,67 min; MS: MH+ 498,3.
Príklad 705
N2- {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxyfenyl} -5nitrobenzo [/>] furán-2 -karboxamid
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 gm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 15,33 min; MS: MH+ 529,2.
642
Príklad 706
N2- {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 N-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3 -y 1]-2-metoxyfenyl}-5-aminobenzo [ó] furán-2 -karboxami d-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 11,93 min; MS: MH+ 499,3.
Príklad 707
N2-{4-[4-(acetylamino)-l-(4-piperidyl)-lN-pyazolo[3,4-í/]pyrimtdín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-5-(acetylamino)benzo[Z?]furán-2-karboxamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 12,47 min; MS: MH+ 583,2.
Príklad 708
N2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-5-(acetylamino)benzo[ó]furán-2-karboxamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), tR 11,95 min; MS: MH+ 541,2.
Príklad 709
N2-{ 4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 N-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxyfenyl} -7-metylbenzo[ô]furán-2-karboxamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % - 100 % acetonitril-0,05 M oc tan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), Ír 14,23 min; MS: MH+ 498,3.
643
Príklad 710
A2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-cf]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-7-metoxybenzo [7] furán-2-karboxamid-acetát
RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 5 % -100 % acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 minút, 1 ml/min), ír 13,03 min; MS: MH+ 514,3.
Príklad 711
Rac-N2- {4-[4-amino-1 -(1 -metyltetrahydro-177-3 -pyrolyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3 -yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
A. Ttoc-terc-butyl-3-hydroxy-1 -pyrolidínkarboxylát
Do roztoku 3-pyrolidinolu (3,144 g, 3,00 ml, 36,09 mmol) v 1,4-dioxáne (50 ml) a vode (50 ml) sa pridá di-/erc-butyl-dikarbonát (8, 664 g, 39,70 mmol) a uhličitan sodný (10,612 g, 126,3 mmol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 18 hodín, čím sa získa biela suspenzia vo žltom roztoku. Reakčná zmes sa filtruje a filtrát extrahuje etylacetátom (2 x 50 ml). Spojená organická fáza sa premyje soľankou, suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa rac-/erc-buty 1-3-hydroxy-1 -pyrolidínkarboxylát vo forme svetlo žltého oleja (6,039 g, 89 %).
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 1,51 (s, 9H), 1,84-2,05 (m, 2H), 2,28 (d, 1H), 3,33-3,48 (m, 4H), 4,43 (s, 1H).
B. Monohydrochlorid rac-3 -j ód-1 -tetrahy dro-1A-3 -pyrolyl-1 A-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidín-4-amín
Do roztoku 3-jód-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-ammu (5,610 g, 21,49 mmol) v tetrahydrofuráne (200 ml) sa pridá rac-/e7-c-butyl-3-hydroxy-l-pyrolidínkarboxylát (6,039 g,
32,25 mmol), trifenylfosfín (11,273 g, 42,98 mmol) a dietyl-azodikarboxylát (7,485 g, 6,77 ml,
42,98 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 6 dni, potom sa koncentruje, čím sa získa oranžovo-hnedý olej. Pridá sa acetón (100 ml) a 5 N roztok kyseliny chlorovodí644 kovej (50 ml) a zmes sa zahrieva pri teplote 40 UC po dobu 1S hodín. Potom sa zmes ochladí na izbovú teplotu. Výsledný žltý precipitát sa filtruje a filtračný koláč sa premyje dietyléterom a suší, čím sa získa monohydrochlorid rac-3-jód-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4-(Yjpyrimidín-4-amínu vo forme belavej pevnej látky (5,153 g, 65 %).
RP-HPLC Rt 4,079 minút, 99 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5 v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 331 (MffjC. Rac-3 -j ód-1 -(1 -metyltetrahydro-1 H-3 -pyroly 1)-1 //-py razolo [3,4-ri]pyrimidín-4-amín
Do roztoku monohydrochloridu rac-3-jód-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu (0,400 g, 1,09 mmol) v dichlóretáne (10 ml) sa pridá formaldehyd (37 % vo vode, 0,12 ml, 1,63 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (0,578 g, 2,73 mmol) a kyselina octová (0,37 ml, 6,55 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 3 dní, potom sa pridá ďalší formaldehyd (37% vo vode, 0,12 ml, 1,63 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (0,578 g, 2,73 mmol) a kyselina octová (0,37 ml, 6,55 mmol). Reakčná zmes mieša ďalšie 3 hodiny a koncentruje sa, čím sa získa rac-3-jód-l-(l-metyltetrahydro-l//-3-pyrolyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amín vo forme svetlo žltej pevnej látky (0,639 g), ktorá sa použije bez ďalšej purifikácie v nasledujúcich reakciách.
RP-HPLC Rt 4,226 minút, 96% čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5 v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 345 (MH+).
D. V2-(4-Brómfenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín l,ľ-Tiokarbonyl-di-2(l//)-pyridón (1,418 g, 6,104 mmol) sa pridá do roztoku 4-brómanilínu (1,000 g, 5,813 mmol) v dichlórmetáne (50 ml). Ružový roztok sa mieša pri izbovej teplote po dobu 30 minút a potom premyje vodou (50 ml) a 0,5 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej (50 ml), suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa ružový pevný podiel. Pridá sa 6-amino-2,4-xylenol (0,837 g, 6,104 mmol) a toluén (50 ml) a zmes sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 30 minút. Pridá sa 1,3-dicyklohexylkarbodiimid (1,799 g. 8,720 mmol) a roztok sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 48 hodín a potom ochladí na izbovú teplotu. Výsledný precipitát sa filtruje a filtračný koláč sa premyje dichlórmetánom
645 (50 ml), čím sa získa V2-(4-brómfenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín vo forme svetlo oranžového pevného podielu (1,215 g, 66 %).
RP-HPLC Rt 17,643 minút, 86 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5 v priebehu 20 minút pri 1 ml/min;X.= 254 nm; Deltapak Cl 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 317 (MH+).
E. V2-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín yV2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z V2-(4-brómfenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (1,215 g, 3,831 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu V2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme hnedého prášku (0,880 g, 63 %).
RP-HPLC (25 % -100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt = 14,48 minút, 81 %; m/z 365 (MH+),
F. Rac-N2-{ 4- [4-amino-1 -(1 -metyl tetrahydro-1 Η-3-pyrolyl)- l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Rac-N2-{4- [4-amino-1 -(1 -metyltetrahydro-1H-3 -pyroly 1)-1 H-py razolo[3,4-ď]pyrimidín3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z rac-3-jód-l-(l-metyltetrahydrolH-3-pyrolyl)-lH-pyrazlo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,581 mmol) a V2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,265 g, 0,726 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu cri-H2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme bieleho prášku (0,062 g, 23 %).
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 2,39 (s, 3H), 2,32-2,40 (m, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,75-2,80 (m, 2H), 3,08 (t, 1H), 3,26 (s, 3H), 5,40 (m, 1H), 6,80 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,93 (d, 2H), 8,24 (s, 1H), 10,85 (s, 1H);
646
RP-HPLC R| 10,905 minút, 96 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min, λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 455 (MH+).
Príklad 712
Rac-N2-{4- {4-amino- l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-lH-3-pyrolyi]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
A. Rac-3-jód-1 -[ 1 -(2-metoxyetyl)tetrahydro-l H-3 -pyrolyl]-1 H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
Do roztoku monohydrochloridu rac-3-jód-l-tetrahydro-lH-3-pyrolyl-lH-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-4-amínu (0,350 g, 1,09 mmol) v H,H-dimetylformamide (10 ml) sa pridá 2-brómetyl(metyl)éter (0,159 g, 0,11 ml, 1,15 mmol), uhličitan draselný (0,462 g, 3,34 mmol) a jodid draselný (0,008 g, 0,05 mmol). Reakčná zmes mieša pri teplote 65 °C po dobu 18 hodín, potom sa pridá ďalší 2-brómetyl(metyl)éter (0,066 g, 0,040 ml, 0,48 mmol), uhličitan draselný (0,130 g, 0,940 mmol) a jodid draselný (0,008 g, 0,05 mmol). Reakčná zmes sa mieša ďalších 18 hodín, potom sa koncentruje. Zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (10 ml) a vodu (10 ml). Organická fáza sa oddelí, premyje soľankou, suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa rac-3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-lH-3-pyrolyl]-lH-pyrazolo[3,4-<2]pyrimidín-4-amín vo forme žltej pevnej látky (0,313 g, 84%), ktorá sa použije bez ďalšej purifikácie v nasledujúcej reakcii.
RP-HPLC Rt 5,089 minút, 80 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 389 (MH+)·
B. jRac-H2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-lH-3-pyrolyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyI)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Rac-N2-(4-{4-amino-1 - [1 -(2-metoxyety ljtetrahy dro-1 Η-3-pyrolyl]-1 H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z rac-3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-lH-3-pyrolyl]-l H-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (0,250 g, 0,515 mmol) a H2-[4-(4,4,5,5-tctrametyl-1.3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-1,3-benzo647 xazol-2-amínu (0,235 g, 0,644 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu cw-JV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme žltého prášku (0,185 g, 72 %).
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 2,30-2,49 (m, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,49 (s, 3H), 2,66 (m, 2H), 2,78 (m, 2H), 3,17 (m, 2H), 3,24 (s, 3H), 3,45 (t, 2H), 5,40 (m, 1H), 6,80 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,93 (d, 2H), 8,24 (s, 1H), 10,85 (s, 1H);
RP-HPLC Rt 11,477 minút, 96 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 499 (MH+).
Príklad 713
Cz's-7V2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl} -2-fluórfenyl)-5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín
A. 7/2-(4-Bróm-2-fluórfenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín zV2-(4-Bróm-2-fluórfenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z 4-bróm-2-fluóranilínu (2,000 g, 10,53 mmol) spôsobom, ktorý je podobný spôsobu použitému pri príprave zV2-(4-brómfenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme ružovej pevnej látky (1,916 g, 54 %).
RP-HPLC Rt 17,96 minút, 95 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónnym pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min;Z= 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 337 (MH+).
B. 7V2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Aľ2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl- 1,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z zV2-(4-bróm-2-fluórfenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (6,500 g, 19,39 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu 7/2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amín. Zlúčenina sa pripraví vo forme ružovej pevnej látky(3,549 g, 48 %).
648
RP-HPLC (25 %- 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt = 15,50 minút, 78 %; m/z 383 (MH+)·
C. CA-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -1//-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidm-3-yl}-2-fluórfenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
CA-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z cA-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-<3ľJpyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,453 mmol) a N2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,216 g, 0,566 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu czs-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfényl)-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme svetlo žltého prášku (0,111 g, 43 %).
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 1,56-1,83 (m, 4H), 2,15 (s, 3H), 2,22-2,55 (m, 12H), 2,34 (s, 311), 2,41 (s, 3H), 3,22-3,53 (m, 1H), 4,78-4,83 (m, 1H), 6,81 (s, IH), 7,10 (s, 1H), 7,45-7,53 (m, 2H), 8,23 (s, IH), 8,49 (t, IH), 10,59 (s, IH);
RP-HPLC Rt 11,873 minút, 95 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min;^ 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 570 (MH)+.
Príklad 714
CA-3-(4-imidazo[l,2-a]pyridín-2-ylfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín
A. 2-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]imidazo[l,2-ri|pyridín
2-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]imidazo[l,2-č7]pyridín sa pripraví z 2-(4-brómfenyl)imidazo[l,2-a]pyridínu (0,273 g, 1,00 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu N2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyI-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme bielej pevnej látky (0,250 g, 78 %).
649
RP-HPLC (25 % -100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím stĺpca Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt = 11,35 minút, 87 %; m/z 321 (MH).
B. C/s-3-(4-imidazo[l,2-cr]pyridín-2-ylfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín
CA-3-(4-imidazo[l,2-a]pyridín-2-ylfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-4-amín sa pripraví z c/j-3-jód-l-[4-(4-metyI-piperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-c/]pyrímidm-4-amínu (0,200 g, 0,453 mmol) a 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]imidazo[l,2-a]pyridínu (0,250 g, 0,679 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu cA-jV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidin-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme bieleho prášku (0,021 g, 9 %).
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 1,57-1,73 (m, 4H), 2,08-2,50 (m, 12H), 2,16 (s, 3H), 3,37 (m, 1H), 4,82 (m, 1H), 6,92 (t, 1H), 7,27 (t, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,74 (d, 2H), 8,15 (d, 2H), 8,24 (s, 1H), 8,56 (d, 1H);
RP-HPLC Rt 8,16 minút, 97 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 508 (MH+).
Príklad 715
7?oc-l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-1 -yl)tetrahydro-1 H-1 -pyrolyl]-2-(dimetylamino)-1 -etanón
A. Rac-1 -[3-(4-amino-3-jód-1 //-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidm-1 -yl)tetrahydro-1 H-1 -pyroly 1]-2-(dimetylamino)-1 -etanón
Do roztoku monohydrochloridu rac-3-jód-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,367 g, 1,00 mmol) v dichlórmetáne (10 ml) sa pridá 2-(dimetylamino)octová kyselina (0,134 g, 1,30 mmol), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,150 g, 1,10 mmol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (0,249 g, 1,30 mmol) a
650 diizopropyletylamín (0,65 g, 0,87 ml, 5,0 mmol). Reakčná zmes mieša pri izbovej teplote po dobu 18 hodín, potom sa naleje do vody (10 ml). Organická fáza sa separuje a premyje soľankou (10 ml), suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa rac-1[3-(4-amino-3-jód-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-l-yl)tetrahydro-177-l-pyroIyl]-2-(dimetylamino)-1-etanón vo forme žlto-oranžovej pevnej látky (0,278 g, 67%), ktorá sa použije bez ďalšej purifikácie v nasledujúcej reakcii.
RP-HPLC Rt 4,881 minút, 80 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 416 (MH+)·
B. /?ac-l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-l-yljtetrahy dro -1 H- l-pyrolyl]-2-(dimety lamino)-1 -etanón
7N;c-l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)tetrahydro-l/M-pyrolyl]-2-(dimetylamino)-1 -etanón sa pripraví z rac1 -[3-(4-amino-3 -jód-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1 -yl)tetrahydro-1 H-1 -pyrolyl]-2-(dimety 1amino)-l-etanňnu (0,278 g, 0,669 mmol) a N2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,305 g, 0,837 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu c/5-/72-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme bieleho prášku (0,219 g, 62 %).
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 2,17 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,3-2,50 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,99-4,26 (m, 4H), 5,44-5,49 (m, IH), 6,80 (s, IH), 7,11 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,92 (d, 2H), 8,26 (s, IH), 10,86 (s, IH);
RP-HPLC Rt 10,765 minút, 96 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 526 (MH+).
Príklad 716
7taď-l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4c/]pyrimidín-l-yl)tetrahydro-177-1 -pyrolyl]-2-metyl-2-(metylamtno)-l-propanón
651
A. J?ac-9//-9-fluorenylmetyl-iV- {2-[3-(4-amino-3-jód-l/ŕ-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl)tetrahydro-1 H-1 -pyrolyl] -1,1 -dimety 1-2-oxoety 1} -A-metylkarbamát
Do roztoku monohydrochloridu rac-3-jód-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,100 g, 0,273 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) sa pridá 2-[[(9//-9-fluorenylmetoxy)karbonyl](metyl)amino]-2-metylpropánová kyselina (0,120 g, 0,354 mmol), 1-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,041 g, 0,30 mmol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochlorid (0,068 g, 0,35 mmol) a diizopropyletylamín (0,18 g, 0,24 ml, 1,4 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín, potom sa naleje do vody (10 ml). Organická fáza sa separuje a premyje soľankou (10 ml), suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa rac-9//-9-fluorenylmetyl-M-{2-[3-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-1 -yl)tetrahydro-1 H-1 -pyrolyl] -1,1 -dimetyl-2-oxoety 1} -N-metylkarbamát vo forme žltej pevnej látky (0,223 g), ktorá sa použije bez ďalšej purifikácie v nasledujúcej reakcii.
RP-HPLC Rt 13,688 minút, 63 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 652 (MH+)
B. /?ac-l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-1 -yl)tetrahydro-l H-1 -pyrolyl]-2-metyl-2-(metylamino)-1 -propanón
Do roztoku rac-9//-9-fluoreny Imety I-/V- {2- [3-(4-amino-3-jód-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-1 -yl)tetrahydro-1 H-1 -pyrolyl]-1,1 -dimetyl-2-oxoetyl} -M-metylkarbamátu (0,178 g, 0,273 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (6 ml) a vode (3 ml) sa pridá N2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,124 g, 0,341 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiurn (0,016 g, 0,014 mmol) a uhličitan sodný (0,072 g, 0,683 mmol), roztok sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín, potom ochladí na izbovú teplotu. Reakčná zmes sa vytrepe medzi etylacetát (10 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva sa separuje a premyje soľankou (10 ml), suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa rac-9//-9-ŕluorenylmetyl-N-2-[3-(4-amino-3-4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl-I//-pyrazolo[3,4-c/lpyrimidín-l-yl)tetrahydro-l//-l-pyrolyl]-l,l-dimetyl-2-oxoetyl-M-metylkarbamát vo forme svetlo hnedého oleja (0,223 g), ktorý sa použije bez purifikácie v nasledujúcom kroku. Roztok rac-9/7-9-fluorenylmetyl-N-2-[3-(4-amino-3-4-([5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino] fenyl-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-1 -y l)tetrahydro 1 H-1 -pyrolyl] -1,1-dimetyl-2-oxoetyl-M-metylkarbamátu (0,223 g) v A/M-dimetylformamide (4 ml) sa nechá rea652 govať s piperidínom (0,8 ml) a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 18 hodín, zelený roztok sa vytrepe medzi dichlórmetán (10 ml) a vodu (10 ml). Organická fáza sa separuje a premyje soľankou, suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa tmavo zelený olej. Purifikáciou preparatívnou RP-HPLC (25 % - 100 % CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 pm Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt = 6,7 - 8,1 min) sa získa rac-l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-177-pyrazolo[3,4-djpyrimidín-l-yl)tetrahydro-lH-l-pyrolyl]-2-metyl-2-(metylamino)-l-propanón vo forme belavej pevnej látky (0,085 g, 58 %).
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) majoritný rotamér: 1,20 (s, 6H), 1,96 (s, 3H), 2,3-2,50 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 3,17-4,44 (m, 4H), 5,42 (s, IH), 6,80 (s, IH), 7,11 (s, IH), 7,63 (d, 2H), 7,91 (d, 2H), 8,26 (s, IH), 10,85 (s, IH); minoritný rotamér: 1,15 (s, 6H), 2,15 (s, 3H), 2,32,50 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 3,17-4,44 (m, 4H), 5,42 (s, IH), 6,80 (s, IH), 7,11 (s, IH), 7,63 (d, 2H), 7,91 (d, 2H), 8,26 (s, IH), 10,85 (s, IH);
RP-HPLC Rt 10,994 minút, 95 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 540 (MH+).
Príklad 717
Äflc-V2-[4-(4-amino-l-tctrahydro-l//-3-pyroIyl-l//-pyrazoIo[3,4-rí]pyrimÍdín-3-yl)fenyI]-5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín
A. Rac-terc-butyl-3-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-<ŕ|pyrimidín-l-yl)-l-pyrolidín-karboxylát
Roztok monohydrochloridu rac-3-jód-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,36 mmol), uhličitanu sodného (0,401 g, 4,77 mmol) a di-/crc-butyl-dikarbonátu (0,327 g, 1,50 mmol) v 1,4-dioxáne (8 ml) a vode (8 ml) sa mieša pri izbovej teplote po dobu 3 hodín. Výsledná belavá suspenzia sa filtruje a filtračný koláč sa premyje vodou (10 ml) a suší, čím sa získa rac-/erc-butyl-3-(4-amino-3-jód-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)-l-pyrolidínkarboxylát vo forme belavej pevnej látky (0,412 g, 70 %);
653
RP-HPLC Rt 11,540 minút, 100 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 gm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 431 (MH+).
B. Rac-N2-[4-(4-amino-1 -tetrahydro-1H-3 -pyrolyl-1 //-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-3 -y l)feny 1] -5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Do roztoku rac-fórobutyl-3-(4-amino-3-jód-1 //-pyrazolo[3,4-djpyrimidín-1 -y 1)-1 -pyrolidínkarboxylátu (0,412 g, 0,958 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (6 ml) a vode (3 ml) sa pridá 7/2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,436 g, 1,20 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,055 g, 0,048 mmol) a uhličitan sodný (0,254 g, 2, 39 mmol), roztok sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín, potom sa ochladí na izbovú teplotu. Reakčná zmes sa vytrepe medzi etylacetát (10 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva sa separuje a premyje soľankou (10 ml), suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa rac-/erc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino] fény 1} -1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-1 -y 1)-1 -pyrolidínkarboxy lát vo forme oranžovej pevnej látky (1,029 g), ktorá sa použije bez purifikácie v nasledujúcom kroku. Do roztoku rac-Zerc-buty 1-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimety 1-1,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl) -l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl)-l-pyrolidínkarboxylátu (1,029 g) v acetóne (10 ml) sa pridá 6 N kyselina chlorovodíková (10 ml) a reakčná zmes sa mieša pri teplote 45 °C po dobu 5 hodín. Reakčná zmes sa filtruje a výsledný nepriehľadný filtrát sa koncentruje, čím sa získa oranžový pevný podiel. Purifikáciou preparatívnou RP-HPLC (25 %- 100% CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8gm Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, tr = 6,2 - 7,5 min) sa získa rac-A2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l//-3pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-3-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín vo forme belavej pevnej látky (0,148 g, 35 %).
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 2,15-2,22 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,50 (s, 3H), 2,93-4,04 (m, 5H), 5,31 (m, IH), 6,79 (s, IH), 7,11 (s, IH), 7,66 (d, 2H), 7,93 (d, 2H), 8,24 (s, IH), 10,85 (s, IH);
RP-HPLC Rt 10,603 min, 99 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ - 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 gm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 441 (MH+).
654
Príklad 718
Diacetát cú'-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-rnetylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-<7jpynmidín-3-yl}fenyl)-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amínu
A. 2-Amino-6-izopropylfenol
Roztok 6-izopropyl-2-nitro fenolu (3,000 g, 16,56 mmol) a hydrosiričitanu sodného (11,53 g, 66,23 mmol) v etanole (180 ml) a vode (90 ml) sa mieša pri teplote 80 °C po dobu 20 hodín, potom ochladí na izbovú teplotu. Výsledný, oranžový roztok sa koncentruje, potom sa rozdelí medzi dichlórmetán (50 ml) a vodu (50 ml). Organická fáza sa separuje a premyje soľankou (25 ml), suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa 2amino-6-izopropylfenol vo forme oranžovej pevnej látky (1,792 g, 72 %).
RP-HPLC Rt 8,171 minút, 92 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 150 (M-H)'.
B. 7V2-(4-Brómfenyl)-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Roztok 2-amino-6-izopropylfenolu (0,354 g, 2,34 mmol) a 4-bróm-fenylizotiokyanátu (0,500 g, 2,34 mmol) v tetrahydrofuráne (35 ml) sa mieša pri izbovej teplote po dobu 3 hodín. Pridá sa bezvodý síran meďnatý (3,361 g, 21,06 mmol), silikagél (3,361 g) a trietylamín (0,236 g, 0,33 ml, 2,34 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Reakčná zmes sa filtruje cez vrstvu Celitu a premyje dietyléterom (3 x 50ml). Filtrát sa koncentruje, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa nanesie na silikagél a pretiahne cez vrstvu silikagélu spoločne s etylacetátom (3 x 50 ml), filtrát sa koncentruje, čím sa získa V2-(4-brómfenyl)-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,702 g, 91 %).
RP-HPLC Rt 18,066 minút, 86 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 333 (MH+).
C. /V2-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yI)fenyl]-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amín
655
N2-[4-(4,4,5,5-T etrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-7-izopropy 1-1,3 -benzoxazol-2-amín sa pripraví z 7V2-(4-brómfenyl)-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,412 g,
1.24 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu N2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme belavej pevnej látky (0,346 g, 74 %).
RP-HPLC Rt 18,964 minút, 79 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 gm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 379 (MH+).
D. Diacetát cz's-//2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amínu
Diacetát cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-1 //-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amínu sa pripraví z rá-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,250 g, 0,566 mmol) a N2-[4-(4,4,5,5 -tetramety 1-1,3,2-dioxaborolan-2-y l)feny 1]-7-izopropyl-1,3-benzoxazol-2-amínu (0,339 g, 0,708 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu cz'5-/Z2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-3 -y 1} -2-fluórfeny 1)-1,3 -benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme belavej pevnej látky (0,205 g, 64 %).
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 1,36 (d, 6H), 1,56-2,50 (m, 16H), 1,90 (6H), 2,15 (s, 3H), 3,233,28 (m, 2H), 4,80 (m, IH), 7,04 (d, IH), 7,18 (t, IH), 7,34 (d, IH), 7,66 (d, 2H), 7,96 (d, 2H),
8.24 (s, IH);
RP-HPLC R, 12,508 minút, 100 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 gm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 566 (MH+).
Príklad 719
Monoacetát //2-(4- (4-amino-1 -[(3S)-1 -(2-metoxyetyl)tetrahydro-1 //-3-pyrolyl]-1 ŕŕ-pyrazolo[3,4-J]pyrimÍdín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu
656
Monoacetát /72-(4-{4-amino-1 -[(3S)-1 -(2-metoxyetyl)tetrahydro-lH-3-pyroLy 1]-1 /7-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu sa pripraví z (/?)-(+)3-pyrolidinolu spôsobom, ktorý je podobný spôsobu opísanému pri príprave rac-/72-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(2-metoxyetyl)tetrahydro-1 /7-3 -pyrol y 1]-1 H-py razolo[3,4-6/]pyrimidín-3-yl} fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme ružovej pevnej látky (0,103 g, 53%).
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 1,89 (s, 3H), 2,28-2,31 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,65 (t, 2H), 2,73-2,87 (m, 2H), 3,17 (t, 2H), 3,24 (s, 3H), 3,45 (t, 2H), 5,37 (m, 1H), 6,79 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,93 (d, 2H), 8,24 (s, 1H), 10,59 (s, 2H);
RP-HPLC Rt 11,607 minút, 95 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min;X= 254 nm; Deltapak 08, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 499 (MH+).
Príklad 720
Monoacetát rac-/72-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-l ,3-benzoxazol-2-amínu
Monoacetát rac-/72-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amínu sa pripraví z rac-3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,319 mmol) a /72-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-etyl-l,3-benzoxazol2-amínu (0,145 g, 0,399 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu <ris-/72-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-bcnzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme bielej pevnej látky (0,082 g, 52 %).
lH NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 1,23 (t, 3H), 1,90 (s, 3H), 2,33-3,47 (m, 10H), 2,66 (q, 2H),
3.25 (s, 3H), 5,40 (m, 1H), 6,99 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,40 (d, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,93 (d, 2H),
8.25 (s, 1H), 10,81 (s, 1H);
RP-HPLC Rt 11,781 minút, 93 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 499 (MII+).
657
Príklad 721
Monoacetát rac-A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-lA-3-pyrolyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-nietyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Monoacetát rac-N2-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(2-metoxyetyl)tetrahydro-1 Α-3-pyrolyl]-1 A-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amínu sa pripraví z rac-3-jód-1 -[ 1 (2-metoxyetyl)tetrahydro-lA-3-pyrolyl]-l A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,319 mmol) a A2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-metyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,145 g, 0,399 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu cw-7V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme belavej pevnej látky (0,038 g, 16 %).
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 1,91 (s, 3H), 2,33 (m, 2H), 2,39 (s, 3H), 2,66 (m, 2H), 2,752,83 (m, 3H), 3,17 (t, IH), 3,29 (s, 3H), 3,45 (t, 2H), 5,37 (m, IH), 6,96 (d, IH), 7,30 (s, IH), 7,38 (d, IH), 7,67 (d, 2H), 7,93 (d, 2H), 8,24 (s, IH), 10,80 (s, IH);
RP-HPLC Rt 10,756 minút, 100 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ ~ 254 nm; Deltapak C18, 300 A, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 485 (MH+).
Príklad 722
Diacetát A2-(4-{4-amino-l-[(3/?)-l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-lA-3-pyrolyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu
Diacetát 7V2-(4- {4-amino-1 -[(37?)-1 -(2-metoxyetyl)tetrahydro-1 Α-3-pyrolyl]-1 A-pyrazolo[3,4-z7]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu sa pripraví z (0)-(-)-3-pyrolidinolu spôsobom, ktorý je podobný spôsobu opísanému pri príprave rac-A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-lA-3-pyrolyl]-lA-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidm-3-yl}fenyl)-5,7-dimety l-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme belavej pevnej látky (0,214 g, 39 %).
658 ‘H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ) 1,89 (s, 6H), 2,28-2,31 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,40 (s, 3H). 2,65 (t, 2H), 2,73-2,87 (m, 2H), 3,17 (t, 2H), 3,24 (s, 3H), 3,45 (t, 2H), 5,37 (m, IH), 6,79 (s, IH), 7,11 (s, IH), 7,66 (d, 2H), 7,93 (d, 2H), 8,24 (s, IH);
RP-HPLC Rt 11,674 minút, 97 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 499 (MH+).
Príklad 723
Monoacetát rac-/V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-lŕ/-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-chlór-l,3-benzoxazol-2-amínu
Monoacetát rac-/V2-(4-{4-amino-l-[1 -(2-metoxyetyl)tetrahydro-1 //-3-pyroly 1]-1 //-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}lenyl)-5-chlór-l,3-benzoxazol-2-amínu sa pripraví z rac-3-jód-l-[1 -(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,319 mmol) a jV2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-chlór-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,148 g, 0,399 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu cw-IV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazoI-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme belavej pevnej látky (0,080 g, 50 %).
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 1,91 (s, 3H), 2,33 (m, 2H), 2,66 (m, 2H), 2,75-2,85 (m, 3H), 3,17 (t, III), 3,24 (s, 3H), 3,45 (t, 2H), 5,37 (m, IH), 7,18 (d, IH), 7,55 (d, 2H), 7,68 (d, 2H), 7,92 (d, 2H), 8,24 (s, IH), 9,80 (s, IH);
RP-HPLC Rt 11,337 minút, 97 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 505 (MH+).
Príklad 724
Trans-Nl -(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fenyl)-3-fenylpropánamid
659
Roztok ŕrans-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-4-amínu (0,700 g, 1,6 mmol) v pyridíne (11 ml) pri teplote 0 °C sa nechá reagovať s hydrocinamoylchloridom (0,324 g, 1,92 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 20 minút, ľadový kúpeľ sa odstráni a zmes sa mieša pri izbovej teplote. Reakcia je hotová po 5,5 hodinách. Pridá sa roztok hydroxidu sodného (1 N, 20 ml) a zmes sa mieša po dobu 30 minút. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku. Pridá sa dichlórmetán (20 ml) a vrstvy sa oddelia. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (80 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím gradientu 5 % metanolu v dichlórmetáne až 50 % metanolu v dichlórmetáne na 35 g stĺpci silikagélu ISCO, čím sa získa 0,569 g (63 %) trans-Nl-(4-{4-amino-1-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamidu. 7ra«v-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cykIohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamid (0,569 g, 1 mmol) v horúcom etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,384 g, 3 mmol) v etylacetáte. Vzniknutý precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka a suší vo vysokom vákuu, čím sa získa trimaleátová soľ.
’H NMR (d6-DMSO) δ 9,238 (s, IH), 8,2216 (s, IH), 8,1991-8,1786 (d, IH, J = 8,2 Hz), 7,3147-7,2664 (m, 4H), 7,2366-7,2330 (m, IH), 7,2026-7,1732 (dd, 2H), 6,171 (s, 6H), 4,66494,6083 (m, IH), 4,0948-4,0697 (m, IH), 3,8916 (s, 3H), 3,1750-3,1632 (d, 2H, J = 4,72 Hz), 2,9364-2,8984 (m, 2H), 2,7885-2,7506 (m, 2H), 2,5290 (s, 2H), 2,3905-2,3231 (m, 4H), 2,1489 (s, 3H), 2,0549-1,9243 (m, 6H), 1,4821-1,4457 (m, 2H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm stĺpec; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 1,75 min (100 %), MH+ 569,4.
Príklad 725
Trans-N2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4 -rijpy rimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
660
Suspenzia dimaleátu trans-A2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1Apyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-l Α-2-indolkarboxamidu (0,200 g, 0,242 mmol) v dichlórmetáne (15 ml) sa nechá reagovať s 1 N roztokom hydroxidu sodného. Reakčná zmes sa mieša po dobu 1 hodiny pri izbovej teplote. Vrstvy sa oddelia na extrakčnej cartridge Empore. Organická vrstva sa odstráni za prebublávania hornej časti rozpúšťadla dusíkom, čím sa získa 0,072 g (50%) /raní-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyraozlo[3,4-c7Jpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-l Α-2-indolkarboxamidu.
'H NMR (dé-DMSO) δ 9,4355 (s, 1H), 8,2464 (s, 1H), 8,1241-8,1037 (d, 1H, J = 8,16 Hz), 7,7186-7,6987 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,6005-7,5795 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,3532-7,2795 (m, 4H), 7,1717-7,1343 (t, 1H), 4,6833 (m, 1H), 4,0560 (s, 3H), 3,9573 (s, 3H), 2,6704 (m, 6H), 2,4404 (m, 2H), 2,2953 (s, 6H), 2,1282-1,9889 (m, 5H), 1,5124 (m, 2H). Zlúčenina sa bez purifíkácie použije v nasledujúcej reakcii.
Príklad 726
Dimesylát /ra/«-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-l A-pyrazolo[3,4-tf|pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 Α-2-indolkarboxamidu
Horúci roztok /ra«s-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazíno)cyklohexyl]-lA-pyrazc>lo[3,4-<Y]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-lA-2-indolkarboxamidu (0,072 g, 0,12 mmol) v etylacetáte (20 ml) sa nechá reagovať s metánsulfónovou kyselinou (0,012 g, 0,12 mmol). Pomaly vzniknutý precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka, čím sa získa 0,051 g dimesylátu rra/7S-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-<Y]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1-metyl-ΙΑ-2-indolkarboxamidu. Rozmedzie teploty topenia je 345,5 až 348,1 °C.
‘H NMR (d6-DMSO) δ 9,4353 (s, 1H), 8,2461 (s, 1H), 8,1239-8,1035 (d, 1H, J = 8,16 Hz), 7,7182-7,6985 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,6004-7,5792 (d, 1H, J = 8,48 Hz), 7,3442-7,2794 (m, 4H), 7,1718-7,1349 (t, 1H), 4,6829 (m, 1H), 4,0396 (s, 3H), 3,9570 (s, 3H), 2,6703 (m, 6H), 2,5 (s, 3H), 2,2949 (s, 6H), 2,0891-2,9086 (m, 7H), 1,5179 (m, 2H).
661
Príklad 727
3-(4-Amino-3-metoxyfeny 1)-1 -(1 -metyl-4-piperidyl)-1 /7-py razolo [3,4-c/]pyrimi dín-4-am ín
A. 3-jód-1 -(1 -metyl-4-piperidy 1)-177-pyrazoIo[3,4-d]pyrimidín-4-amín
3-jód-l-(4-píperidyl)-lŕ/-pyrazolo[3,4-</lpyrimidín-4-amín (500 mg, 1,45 mmol), formaldehyd (30 % roztok vo vode, 0,16 ml, 1,60 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (430 mg, 2,03 mmol) sa zmiešajú v 1,2-dichlóretáne (5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 4 hodín, na úpravu pH asi na 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje, čím sa získa 3-jód-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/jpyrimidín-4-amín (275 mg, 53 %).
‘H NMR (DMSO-dô) 1,85 (m, 2H), 2,09 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,88 (m, 2H), 4,75 (m, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,32 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ 35,0, Rt = 0,46 minút.
B. 7’erc-butyl-V-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-fi?]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl} karbamát
-jód-1 -(1 -metyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4-amín (270 mg,
0,754 mmol), /erc-butyl-/V-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (290 mg, 0,829 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (52 mg, 0,045 mmol) a uhličitan sodný (192 mg, 1,81 mmol) sa zmiešajú v dimetyléteri etylénglykolu (8 ml) a vode (4 ml). Reakčná zmes sa zahrieva do refluxu cez noc pod atmosférou dusíka. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (90:10 až 70:30) ako mobilnej fázy, čím sa získa /erc-butyl-jV-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}karbamát (250 mg, 73 %).
'H NMR (DMSO-dô) δ 1,48 (s, 9H), 1,88 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,24 (m, 5H), 2,92 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,21 (m, 2H), 7,91 (d, J = 8, 16 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 8,23 (s, 1H).
662
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ =454,2, R, = 1, 67 minút.
C. 3-(4-Amino-3-metoxyfenyl)-l-(l-metyl-4-piperidyl)-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín
Zmes trifluóroctovej kyseliny a dichlórmetánu (20:80, 7 ml) sa pridá do roztoku /erc-butyl-N-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-lN-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyljkarbamátu (240 mg, 0,529 mmol) v dichlórmetáne (4 ml) pri teplote 0 °C. Po 15 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 4 hodín. Rozpúšťadlá sa zahusťujú a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne. Na úpravu pH sa pridá hydroxid sodný (1,0 N). Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (4x). Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSCU, filtruje a zahusťuje, čím sa získa 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-(l-metyl-4-piperidyl)-lN-pyrazolo[3,4-d]pyri;nidín-4-amín (178 mg, 95 %), HPLC (Waters 486-Stípec: Delta Pak, 08, 5 pm, 300 Á, 150 x 3,9 mm, eluenty: 5 % B/A až 95 % B/A v 10 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 1,0 ml/min) Rt = 6,45 minút.
Príklad 728
Nl-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-lN-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-/ra«.y-2-fenyl-1 -cyklopropánkarboxamid
Tra/w-2-fenyI-l-cyklopropánkarbonylchlorid (31 mg, 0,170 mmol) v dichlórmetáne (0,3 ml) sa pri teplote 0 °C pridá do roztoku 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-(l-metyl-4-piperidyl)-lN-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (60 mg, 0,17 mmol) v pyridíne (1,2 ml). Po 5 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny, potom sa pridá ďalší ŕrau5-2-fenyl-l-cyklopropánkarbonylchlorid (15 mg, 0,083 mmol). Po 2 hodinách sa rozpúšťadlo zahusťuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5 až 70:30) ako mobilnej fázy, čím sa získa Nl-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-lN-pyrazolo[3,4-rf]pyrimidín-3-ylj-2-metoxyfenyl j-?rans-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid (75 mg, 89 %).
663 'H NMR (CDC13) δ 1,42 (m, 1Η), 1,77 (m, 1H), 1,85 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 2,24 (m, 2H), 2,37 (s. 3H), 2,46 (m, 2H), 2,62 (m, 1H), 3,05 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,77 (m, 1H), 5,69 (s, 2H), 7,24 (m, 7H), 8,11 (s, 1H), 8,35 (m, 1H), 8,45 (d, J = 8,38 Hz, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ - 498,3, Rt = 1,84 minút.
Príklad 729
Al - {4- [4-amino-1 -(1 -metyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-úQpyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfeny 1} -4-(trifluórmetyl)benzamid
4-(Trifluórmetyl)-l-benzénkarbonylchlorid (35 mg, 0,170 mmol) v dichlórmetáne (0,3 ml) sa pridá do roztoku 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-(l-metyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (60 mg, 0,17 mmol) v pyridíne (1, 2 ml) pri teplote 0 °C. Po 5 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny, potom sa pridá ďalší 4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbonylchlorid (18 mg, 0,086 mmol). Po 2 hodinách sa rozpúšťadlo zahusťuje a zvyšok čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5 až 70:30) ako mobilnej fázy, čím sa získa Al - {4- [4-amino-1 -(1 -mety 1 -4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidm-3 -y 1] -2-metoxyfenyl} -4-(trifluórmetyl)benzamid (85 mg, 95 %).
*H NMR (CDCI3) δ 2,10 (m, 2H), 2,37-2,59 (m, 7H), 3,15 (m, 2H), 4,02 (s, 3H), 4,83 (m, 1H), 5,68 (s, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,80 (d, J = 8,21 Hz, 2H), 8,04 (d, J = 8,10 Hz, 2H), 8,38 (s, 1H), 8,67 (m, 2H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ = 526,3, Rt = 1,93 min.
664
Príklad 730 yVl-{4-[4-ammo-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-(trifluórmetoxy)benzamid
4-(Trifluórmetoxy)-l -benzénkarbonylchlorid (38 mg, 0,170 mmol) v dichlórmetáne (0,3 ml) sa pri teplote 0 °C pridá do roztoku 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-(l-metyl-4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidm-4-amínu (60 mg, 0,17 mmol) v pyridíne (1,2 ml). Po 5 minútach sa ľadový' kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny, potom sa pridá ďalší 4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbonylchlorid (19 mg, 0,085 mmol). Po 2 hodinách sa rozpúšťadlo zahusťuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5 až 70:30) ako mobilnej fázy, čím sa získa /Vl-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazoIo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-(trifluórmetoxy)benzamid (70 mg, 76 %).
’H NMR (CDC13) δ 2,06 (d, J = 11,79 Hz, 2H), 2,28 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,50 (m, 2H), 3,07 (d, J = 10,8 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 4,80 (m, 1 H), 5,71 (s, 2H), 7,27 (m, 2H), 7,36 (d, J = 8,20 Hz, 2H), 7,98 (d, J = 6,20Hz, 2H), 8,37 (s, 1H), 8,59 (s. 1H), 8,67 (d, J = 8,55 Hz, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min):
MH+=542,3, R, = 1,98 min.
Príklad 731
Cz.5'-l-[4-(4-metylpiperazmo)cyklohexyl]-3-[4-(l,3-oxazol-5-yl)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrímidín-4-amín
A. 4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohcxyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl] benzaldehyd
665
CA-3-metyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-fiGpyrimidín-4-amín (3,0 g, 6,80 mmol), 4-formylfenylboritá kyselina (1,22 g, 8,16 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (0,47 g, 0,41 mmol) a uhličitan sodný (1,73 g, 16,31 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (70 ml) a vodou (35 ml). Reakčná zmes sa zahrieva do refluxu cez noc pod atmosférou dusíka. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa filtruje a premyje vodou. Po sušení v lyofilizátore sa zvyšok čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (90:10 až 70:30) ako mobilnej fázy, čím sa získa 4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl}benzaldehyd (1,55 g, 54 %).
’H NMR (DMSO-d6) δ 1,60 (m, 2H), 1,72 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,22-2,46 (m, 11H), 4,83 (m, 1H), 7,88 (d, J = 8,13 Hz, 2H), 8,07 (d, J = 8,10 Hz, 2H), 8,21 (s, 1H), 10,11 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min):
MH+ 420,2, Rt = 0,70 minút.
B. CA-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(l,3-oxazol-5-yl)fenyl]-17/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amín
Metoxid sodný (130 mg, 2, 41 mmol) sa pridá po častiach do zmesi 4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}benzaldehydu (300 mg, 0,715 mmol) v metanole (20 ml). Po 5 minútach sa po častiach pridá (p-tolylsulfonyl)metylizokyanid (tosmic) (167 mg, 0,858 mmol) a roztok sa zahrieva do refluxu po dobu 5 hodín. Za horúca sa pridá voda (10 ml). Po 5 minútovom chladení ľadom sa pevný podiel filtruje a premyje zmesou metanolu a vody (50/50, 2 ml), potom suší a filtrát sa zahusťuje na odstránenie organického rozpúšťadla. Pevný podiel sa spojí a premyje vodou. Spojený pevný podiel sa najskôr purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (90:10 až 70:30) ako mobilnej fázy, potom rekryštalizuje (2x) z DMF, čím sa získa c?A-l-[4-(4-mctylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(l ,3-oxazol-5-yl)fenyl]-l/7-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amín (90 mg, 27 %).
666 ‘H NMR (DMSO-dé) δ 1,61 (m. 2H), 1,71 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,44 (m, 11H), 4,82 (m, 1H), 7,78 (m, 3H), 7,79 (m, 2H), 8,24 (s, 1H), 8,51 (s, 1 H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ =459,2, Rt = 0,72 minút.
Príklad 733
7,ran5-jVl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl}-5-fluór-2-metoxyfenyl)-2,2-dimetyl-3-fenylpropánamid
2,2-Dimetyl-3-fenylpropanoylchlorid (52 mg. 0.264 mmol) sa pridá do roztoku trans-3-(4-amino-2-fluór-5-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-4-amínu (80 mg, 0,176 mmol) v pyridíne (1,5 ml). Po 5 hodinách sa rozpúšťadlo zahusťuje a zvyšok sa najskôr purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5 až 85:15) ako mobilnej fázy, potom preparatívnou LC/MS, čím sa získa ŕranx-ΛΤ-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-5-fluór-2-metoxyfenyl)-2,2-dimetyl-3-fenylpropánamid (22 mg, 19%).
‘H NMR (CDCL-d) δ 1,33 (s, 6H), 1,57 (m, 2H), 1,92 (m, 2H),2,15(m, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,49 (m, 4H), 2,66 (m, 3H), 2,95 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 4,76 (m, 1H), 5,51 (bs, 2H), 6,98 (d, J = 6,86 Hz, 1H), 7,15 (m, 2H), 7,23 (m, 3H), 8,01 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,47 (d, J = 11,88 Hz, 1H).
LCMS LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+=615,3, Rt = 2,18 minút.
Príklad 734
CA-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo{3,4-ď|pyrimidín-3-yl} fenyl) (17/-benzo[í7]imidazol-2-yl)metanol
667
A. lA-Benzo[ďJimidazol-l-ylmetanol
Formaldehyd (37% vo vode, 1 ml, 13,3 mmol) sa pridá do roztoku lA-benzo[d]imidazolu (1,57 g, 13,3 mmol) v THF (60 ml). Po 10 minútach sa rozpúšťadlo odstráni a suší, čím sa získa lA-benzo[ó/]imidazol- 1-ylmetanol vo forme hnedej pevnej látky, ktorá sa bez purifikácie použije ďalej.
’H NMR (DMSO-dé) δ 5,60 (d, J = 7,09 Hz, 2H), 6,70 (m, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,65 (d, J = 9,13 Hz, 2H), 8,26 (s, 1H).
B. CA-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl} fenyl)( 1 A-benzo [J] imidazol-2-yl)metanol n-Butylítium (1,34 M, 3,0 ml, 4 mmol) sa pomaly pri teplote -78 °C pridá do zmesi 1 A-benzo[e/]imidazol-l-ylm.etanolu (296 mg, 2,0 mmol) v THF (9,0 ml). Reakčná zmes sa nechá ohriať na teplotu -20 °C a teplota -20 °C sa udržuje po dobu 30 minút, potom sa zmes ochladí späť na -78 °C. Pomaly sa pridá c«-4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyľ]-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}benzaldehyd (420 mg, 1 mmol) v THF (5 ml). Po 20 minútach sa kúpeľ so suchým ľadom odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa nasýtený chlorid amónny, potom éter. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa neutralizuje hydroxidom sodným (1,0 N) a extrahuje dichlórmetánom. Organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa najskôr purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5 až 85:15) ako mobilnej fázy, potom preparatívnou HPLC na reverznej fáze (Stĺpec Rainin HPLC: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5 % B/A až 100 % B/A v 25 minútach (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 21 ml/min), čím sa získa cA-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-1 A-pyrazolo[3,4-</]py rimidín-3-y 1} fenyl)(l A-benzo[ď]imidazol-2-yl)metanol (2 mg, 0,4 %).
’H NMR (CDC13) δ 1,68 (m, 2H), 1,81 (m, 2H), 2,01 (m, 2H), 2,13 (m, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,42 (m, 2H), 2,64 (m, 7H), 4,68 (bs, 3H), 4,93 (m, 1H), 5,77 (bs, 2H), 6,06 (s, 1H), 7,20 (m, 2H), 7,52 (m, 2H), 7,58 (m, 4H), 8,32 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ - 538,3, Rt = 3,80 minút.
668
Príklady 735 - 746
Zlúčeniny podľa príkladov 735-746 sa pripravia z 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]benzaldehydu nasledujúcim spôsobom:
4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ďlpyrimidm-l-yl]benzaldehyd (50 mg, 0,123 mmol), príslušný amín (0,246 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (78mg, 0,368 mmol) a ľadová kyselina octová (32 mg, 0,540 mmol) sa zmiešajú v THF (3 ml). Po trepaní pri izbovej teplote cez noc na trepačke J-Kem sa pridá ďalšie množstvo amínu (0,246 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (78mg, 0,368 mmol) a ľadová kyselina octová (32 mg, 0,540 mmol) a reakčná zmes sa trepe pri izbovej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a pridá sa dichlórmetán, potom hydroxid sodný (1,0 N). Vrstvy sa separujú premytím na cartridge Empore. Organická vrstva sa zahusťuje a zvyšok sa čistí preparatívnou LC/MS s reverznou fázou (Stĺpec Micromass: Hypersil BDS, C18, 5 pm, 100 x 21,2 mm, eluenty: 15 % B/A až 100 % B/A v 7 minút, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 25 ml/min). Po odstránení rozpúšťadla sa výsledný pevný podiel rozpustí v zmesi dichlórmetán/hydroxid sodný (1,0 N) a vrstvy sa oddelia. Organická vrstva sa zahusťuje, čím sa získa zodpovedajúci produkt (detaily viď nasledujúca tabuľka)
Pr. Štruktúra Názov zlúčeniny MH' Rt (min) Množstvo (mg)
735 rO óf 2-({4- [4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1H- -pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1 -yljben- zyl} amino)-1 -etanol 453,2 2,05 10
Ί 0
669
736 to o 2-({4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7- -pyrazolo [3,4-rf]pyrimidín-1 -yl]ben- zyl} amino)-2-mety l-1 -propanol 481,2 2,12 12
737 pO < i o 4-({4- [4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1H- -pyrazolo [3,4-d\ pyrimidín-1 -yl] benzyl } amino)-1 -butanol 481,2 2,05 10
738 7V1 -{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177- -pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl]ben- zyl}-/V2,A2-dimetyl-l ,2-etándiamín 480,2 2,03 2
739 < 9 í 1 -(4-{ [(3-metoxypropyl)amino]me- tyl} fenyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-17/-pyra- zolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín 481,2 2,3 2
670
740 Ρ'Ο ,0 TO í' ζ° 1 -(4- {f(2-metoxyetyl)amino]metyl} fény l)-3-(4-feno xyfenyl)-l V-pyrazo- lo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín 467,2 2,22 10
741 ς* 3-(4-fenoxyfenyl)-1 -[4-(l,3-tiazolan-3- -ylmetyl)fenyl]-1//-pyrazolo [3,4-ďJpy- rimidín-4-amm 481,2 4,2 3
742 oSy ο 2-[{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//- -pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-1 -yljben- zy 1} (2-hydroxy etyl)amino]-1 -etanol 497,2 2,02 2
743 € 1 VI - {4- [4-amino-3-(4-fenoxy fény 1)-1H- -pyrazolo[3,4-cZ]pyrimidín-l-yl]ben- zyl} -VI ,V2,V2-trimetyl-1,2-etándi- amín 494,3 2,47 8
671
744 r1 M' Q 0 >3 1 - {4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1H- -pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-1 -yljben- zyl}-4-piperidinol 493,3 2,13 2
745 *-0 x? z i Vl-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//- -pyrazolo[3,4-cQpyrimidín-1 -y ljben- zyl}-Vl ,V3,V3-trimety 1-1,3-propándi- amín 508,3 1,78 9
746 ro 4 (l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//- -pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-1 -yljben- zyl}-4-piperidyl)metanol 507,3 2,12 9
Príklad 747
Dimaleát N\-{ 4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-(trifluórmetyI)benzamidu
VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-r/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (380 mg, 0,717 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (70 ml) a v horúcom etylacetáte (3 ml) sa pridá kyselina maleínová (167 mg, 1,435 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 3 hodín a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím
672 sa získa dimaleát AT-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (489 mg, 90 %).
'H NMR (DMSO-dô) δ 2,15 (m, 2H), 2,41 (m, 2H), 3,23 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 5,09 (m, 1H), 6,14 (m, s, 4H), 7,33 (m, 2H), 7,76 (m, 1H), 7,88 (m, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,33 (m, 2H), 8,70 (bs, 1H), 9,92 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ = 530,2, Rt = 2,03 minút.
Medziprodukt 6
N1 -4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-2-fluór-4- . -(trifluórmetyl)benzamid
A. 7brc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát
2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbonylchlorid (3,05 ml, 20,2 mmol) v dichlórmetáne (25 ml) sa pridá do roztoku /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (8,77 g, 20,0 mmol) v pyridíne (50 ml) pri teplote 0 °C. Po 5 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes mieša pri izbovej teplote po dobu 1 hodiny. Pridá sa 2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbonyl-chlorid (0,5 ml, 3,31 mmol) a reakčná zmes sa mieša ďalších 30 minút. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne. Organická vrstva sa premyje vodou, soľankou, potom suší nad MgSO4. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/dichlórmetán (80:20 až 100:0) ako mobilnej fázy, čím sa získa /árc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino-3-metoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát (11,2 g, 89 %).
'HNMR (CDCb-d) δ 1,48 (s, 9H), 2,04 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 4,05 (s, 3H), 4,32 (m, 2H), 4,95 (m, 1H), 5,89 (bs, 2H), 7,33 (m, 2H),7,51 (d, J = 11,62 Hz, 1 H), 7,61 (d, J = 8,21 Hz, 1H), 8,36 (m, 2H), 8,72 (d, J = 8,18 Hz, 1H), 9,32 (d, J = 14,39 Hz, 1H).
B. yVl-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/í-pyrazolo[3,4-i/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
673
Zmes trifluóroctovej kyseliny a dichlórmetánu (20:80, 100 ml) sa pridá do roztoku Zerc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino-3-metoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-íf)pyrimidín-l-yll-l-piperidínkarboxylátu (11,2, 17,79 mmol) v dichlórmetáne (50 ml) pri teplote 0 °C. Po 15 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 3 hodín. Rozpúšťadlá sa zahusťujú a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne, na úpravu pH asi na 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného, suspenzia sa lyofilizuje, pridá sa voda (100 ml) a vodná fáza sa opakovane extrahuje dichlórmetánom, čím sa získa 7ťl-4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)- 17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid (9,12 g, 97 %).
’H NMR (DMSO-d6) δ 1,85 (m, 2H), 2,12 (m, 2H), 2,70 (m, 2H), 3,14 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,77 (m, IH), 7,32 (m, 2H), 7,75 (d, J = 8,02 Hz, IH), 7,89 (d, J = 10,31 Hz, IH), 8,00 (m, IH), 8,24 (s, IH), 8,31 (d, J = 8,16 Hz, IH), 9,90 (s, IH).
Príklady 748 - 786
Zlúčeniny podľa príkladov 748 - 828 pripravené z /Vl-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-Lŕ/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 6) podľa spôsobu A alebo spôsobu B:
Spôsob A:
Ni - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)- 1/Z-pyrazolo [3,4-ď]pyrímidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (100 mg, 0,189 mmol), príslušný aldehyd (0,378 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (120 mg, 0,567 mmol) a ľadová kyselina octová (48 mg, 0,378 mmol) sa zmiešajú v 1,2-dichlóretáne (4 ml). Po trepaní pri izbovej teplote cez noc sa pridá ďalšie množstvo aldehydu (0,378 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (120 mg, 0,567 mmol) a ľadová kyselina octová (48 mg, 0,378 mmol) a reakčná zmes sa trepe pri izbovej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa čistí buď zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5 až 70:30) alebo preparatívnou HPLC s reverznou fázou (Stĺpec Rainin HPLC: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 gm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5 % B/A až 100 % B/A v 25 minút, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 21 ml/min), čím sa získa zodpovedajúci produkt (detaily viď nasledujúca tabuľka).
674
Spôsob B:
Ml -{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (100 mg, 0,189 mmol), príslušný ketón alebo menej reaktívnejší aldehyd (0,378 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (120mg, 0,567 mmol) a ľadová kyselina octová (48 mg, 0,378 mmol) sa zmiešajú v 1,2-dichlóretáne (4 ml). Reakčná zmes sa trepe pri teplote 70 °C po dobu 4 hodín. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa čistí éterom a zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5 až 70:30) alebo preparatívnou HPLC s reverznou fázou (Stĺpec Rainin HPLC: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5 % B/A až 100 % B/A v 25 minút, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 21 ml/min), čím sa získa zodpovedajúci produkt (detaily viď nasledujúca tabuľka).
Pr. Štruktúra Názov zlúčeniny MH+ R, (min) Mn. (mg) Met.
748 W p r σ ro iy/ Ml - {4-[4-amino-1 -(1 -ety 1-4- -piperidy 1)-1 M-pyrazolo[3,4- -ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy- fenyl} -2-fluór-4-(trifluórme- tyl)benzamid MtT 556,1 2,07 56 A
749 Ml-(4-{4-amino-l-[l-(cyklo- propylmetyl)-4-piperidyl]-lM- -pyrazolo [3,4-c/j pyrimidín-3 - -yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór- -4-(trifluórmetyl)benzamid MH' 582,1 2,22 80 A
675
750 ZS w V7 Ž o jf ,V VS A”F Acetát Vl-(4-{4-amino-l-[l- -(177-2-pyroly lmetyl)-4-piperi- dy I] -177-pyrazolo [ 3,4-c/] py rimidín- 3 -y l} -2-metoxyfenyl)- -2-fluór-4-(trifluórmetyl)ben- zamidu MH’ 607,0 2,45 60 A
751 Y? Z tí' #7 VA V-F M-(4-{4-amino-l-[l-(177-2- -imidazolylmetyl)-4-piperi- dyl] -177-pyrazolo [3,4-d\ py ri - midín-3-yl} -2-metoxyfenyl)- -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benz- amid MH+6 10,2 2,17 68 B
752 i ť »1 Acetát Vl-[4-(4-amino-l-{l- [(1 -metyl-177-2-imidazoly l)mety 1] -4-piperidyl} -177- -pyrazolo[3,4-ó7]pyrimÍdín-3- -yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4- -(trifluórmetyl)benzamidu MH’ 622,0 2,23 56 A
6Ί6
753 ’<Ό M w 0 Acetát JVl-[4-(4-amino-l-{l- [(2-metyl-l//-4-imidazo- lyl)metyl]-4-piperidyl} -1H- -pyrazolo[3,4-ri]pyrimidm-3- -yl)-2-metoxyfenylJ-2-fluór-4- -(trifluórmetyl)benzamidu MH' 622,0 2,05 32 A
754 R1 M-X x u Acetát Vl-[4-(4-amino-l-{l- -[(4-metyl-l//-5-imidazo- ly l)metyl]-4-piperidy 1} -1H- -pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3- -yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4- -(trifluórmetyl)benzamidu MH' 622,0 2,08 84 A
755 fí / w, o ' 9 Z4* V3 VI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1,3 -ti- azol-2-ylmetyl)-4-piperidyl]- -1 H-py razolo[3,4-eť]pyrimi- dín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-2- -fluór-4-(tri fluórmetyl)benz- amid MH' 625,1 3,15 73 A
756 y-v γ/ \VF 9 75 [i/ Vl-{4-[4-amino-l-(l-{[5- -(hydroxymetyl)-2-furyl]me- tyl} -4-piperidyl)-1 //-pyrazo- lo[3,4-ŕ/]-3-pyrimidín-3-yl]- -2-metoxyfenyl} -2-fluór-4- -(trifluórmetyl)benzamid MH' 638,1 2,20 36 A
677
757 i· r Fr W b CH, Nl - {4-[4-amino-1 -(1 -metyl-4- -piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4- -í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy- fenyl} -2-fluór-4-(trifluórme- tyl)benzamid MH' 542,2 2,03 67 A
758 «J J Hl - {4-[4-amino-1 -(1 -izopro- MH' 2,0 58 B
M pyl-4- lH-pyrazolo[3,4-d]pyri- midín-3 -yl j-2-metoxyfenyl} - 570,1
w -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benz-
G amid
X HC^
759 f f Acetát Ar 1-{4-[4-amino-1-(1- MH' 2,43 54 A
ιΦ Gr -izobutyl-4-piperidyl)-1 H-py- razolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl]- 584,0
A -2-metoxyfeny 1}-2-fluór-4- -(trifluórmetyl)benzamidu
3 t*,
760 p. j? r Hl -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-furyl- MH’ 2, 63 82 A
M, metyl)-4-piperidyl] -1 H-pyra- zolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -yl} -2- 608,1
ύξ E -metoxyfenyl)-2-fluór-4-(tri- fluórmetyl)benzamid
678
262 Hl -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(3 -furyl- metyl)-4-piperidyl]-lH-pyra- zolo[3,4-ď|pyrimidín-3 -y 1} -2- -metoxyfenyl)-2-fluór-4-(tri- íluórmetyl)benzamid ΜΤΓ6 10,2 2,43 54 A
761 y- Acetát Hl-(4-{4-amino-l-[l- -(lH-4-imidazolylmetyl)-4-pi- per idy 1 ] -1 H-pyrazolo [3,4- -</]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxy- fenyl)-2-fluór-4-(trifluórme- tyl)benzamidu MH- 608,0 1,90 55 A
762 W Z Q Hl - {4- [4-amino-1 -(1 -tetra- hydro-2H-4-pyranyl-4-piperi- dy 1)-1 H-pyrazolo [3,4-7]pyri- midín-3-yl]-2-metoxyfenyl} - -2-fluór-4-(trifluórmetyl)ben- zamid ΜΙ-Γ6 14,2 2,13 91 B
763 b °»Z 7erc-butyl-4-{4-[4-amino-3- -(4- {[2-fluór-4-(trifluórme- tyl)benzoy l]-amino} -3 -meto- xyfeny 1)-1 H-pyrazolo [3,4- -í/]pyrimidín-l-yl]-l -piperidyl } -1 -piperidínkarboxylát MH+ 713,3 !.. 2,57 74 B
679
764 «jj ÚA % Al - {4- [4-amino -1 -(1 -tetra- hydro-3-tiofenyl-4-piperidyl)- -l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimi- dín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2- -fluór-4-(trifluórmetyl)benz- amid MH 616,2 2,53 102 B
765 Al - {4-[4-amino-1 -(1 -benzyl- -4-piperidy 1) -1//-pyrazolo[3,4- -ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-(trifluórme- tyl)benzamid MH' 618,0 2,67 69 A
o
766 x Acetát Al -(4- {4-amino- l-[l - -(2-pyridylmetyl)-4-piperi- dyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/)pyri- midín-3-yl} -2 -metoxy fény l)- -2-fluór-4-(trifluórmetyl)ben- zamidu MH' 619,1 2,32 84 A
767 u / \Sŕ\ Al -(4- {4-amino-1 - [1 -(3 -pyri- dylmetyl)-4-piperidyl]-1 //-pyrazolo [3 ,4-í/Jpyrimidin-3 -y 1} - -2-metoxyfenyl)-2-fluór-4- -(trifluórmetyl)benzamid MH' 619,1 2,32 77 A
• o
680
768 Cr) á jVl-(4-{4-amino-l-[l-(4-pyri- dylmetyl)-4-piperidyl]-l//-py- razolo[3,4-ď|pyrimidm-3-yl}- -2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(tri- fluórmetyl)benzamid MH' 619,1 2,63 81 A
769 Acetát Ad-[4-(4-amino-l-{l- MH' 2,52 35 B
-[(1 -metyl-1 //-2-pyrolyl)me- tyl ]-4-piperidyl} -1 H-pyrazo- 621,2
lo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)-2- -metoxyfenyl]-2-fluór-4-(tri- ŕluórmetyl)benzamidu
,vw
o
770 « J ľ Acetát Afí-[4-(4-amino-l-{l- MH' 2,65 78 A
o w i -[(5-metyl-2-furyl)metyl]-4- -piperidyl}-l//-pyrazolo[3,4- 622,1
óí ŕ -í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxy- fenyl]-2-fluór-4-(trifluórme-
9 tyl)benzamidu
«As
771 /pri f Al-(4-{4-amino-l-[l-(2-ti- MH' 3,00 57 B
i enylmetyl)-4-piperidyl]-1H- -pyrazolo[3,4-£Í|pyrimidín-3- 624,0
ó> -yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-
O -4-(trifluórmetyl)benzamid
9
681
772 (X Acetát NI-(4- {4-amino-1-[1 - -(3-tienylmetyl)-4-piperidyl]- -1 //-pyrazolo [3,4-ď] pyrimi- dín-3 -yl} -2-metoxy fény l)-2- -fluór-4-(trifluórmetyl)benz- amidu MH+6 26,2 2,55 87 A
773 ó O’, Diacetát Nl-[4-(4-amino-l-{l- - [(1 -methypiperidín-4-y I]-4- -piperidyl} -1 //-pyrazolo [3,4- -d]pyrimidín-3-yl)-2-metoxy- fenyl]-2-fluór-4-(trifluórme- tyl)benzamid MH* 627,2 1,80 72 B
774 'ľ ^*3 NI - {4-[4-amino-1 -(1 -tetra- hydro-2//-4-tiopyranyl-4-pipe- ridy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-ŕ/J pyri- mi di n- 3 -y 1 ] -2 -met oxy fény 1 } - 2-fluór-4-(trifluórmetyl)ben- zamid MI f 6 30,2 2,37 20 B
6S2
775 CjX-i □ Q. 6 d c' 4-({4-[4-amino-3-(4-{ [2-fluór- -4-(trifluórmetyl)benzoyl]- -amino} -3 -metoxy fény 1)-1H- -pyrazolo[3,4-ŕf]pyrimidín-l- -yljpiperidino} metyl)-1 -py r i - dín-A-oxid MfT 637,2 2,13 93 A
776 pi, ľ AT -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2-fluór- MH+6 3,13 84 A
Wá benzyl)-4-piperidy 1]-1 A-pyra- 38,2
rP P zolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-
yľ> -metoxyfenyl)-2-fluór-4-(tri-
d d. fluórmetyl)benzamid
777 w, / f Al -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(3-fluór- Mff 3,25 77 A
yí q benzyl)-4-piperidyl]-1 A-pyra- 638,2
w, yd \S~F zolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl} -2-
s -metoxyfenyl)-2-fluór-4-(tri- fl uórmety l)benzamid
778 f*» Λ j Al -(4- {4-amino-l -[1 -(4-fluór- MfT 2,87 88 A
Wá benzyl)-4-piperidyl]-1 A-pyra- 638,2
£ _r zolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-2-
% -metoxyfenyi)-2-fluór-4-(tri- fluórmetyl)benzamid
0 r
683
779 uvs N\ -[4-(4-amino-l - {1 -[3-(me- tylsulfanyl)propyl]-4-piperi- dyl} - l//-pyrazolo[3,4-</]pyri- midín-3 -y l)-2-metoxyfenyl] -2- fluór-4-(trifluórmetyl)benz- amid MH* 618,2 2,42 76 A
TO- ? t*. •r
780 jj N\ - [4-(4-amino-1 - {1 - [(5-me- MH*6 3,23 73 A
Q tyl-2-tienyl)metyl]-4-piperi- 40,2
w» yJ f > dyl} -1//-pyrazolo[3,4-z/]pyri- midín-3 -y l)-2-metoxy fenyl]-2- fluór-4-(trifluórmetyl)benz- amid
781 P·» L· //1 -(4- {4-amino-l -[ 1 -(3-kya- MH 3,28 57 A
Q nobenzyl)-4-piperidyl]-1 //-py- 645,2
X* j V razolo[3,4-í/]pyrimidm-3-yl}-
-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4- -(trifluórmetyl)benzamid
CH
782 /** tr U Nl -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(4-kya- MH* 3,32 62 A
Q nobenzy l)-4-piperidyl]-1 //-py- 645,2
X? razolo [3,4-í/]pyrimidm-3 -yl} - -2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(tri- fluórmetyl)benzamid
»e
684
783 X ι; p PF Jl f O* 7*4 A á r> 'h d VI-(4-{ 4-amino-1 -[ 1 -(2-kya- nobenzyl)-4-piperidyl]-1 //-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidín-3-yl} - -2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(tri- fluórmetyl)benzamid MH 645,2 3,78 62 A
784 Ä Vl-(4-{4-amino-l-[l-(4-meto- xybenzy l)-4-piperidyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidm-3-yl} - MH’6 50,2 2,63 45 A
í < -2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(tri- fluórmetyl)benzamid
p
785 w VI -[4-(4-amino-1 - {1 -[(1 -ace- MHr6 2,02 71 B
tyl-piperidín-4-y 1} -4-piperi- dyl} -1 //-pyrazolo[3,4-</J py ri- 55,2
vr
c Ϊ midín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2- -fluór-4-(trifluórmetyl)benz- amid
Y 0'
685
786 ,9 . Acetát Al-[4-(4-amino-l-{l- -[(3-metyl-lA-4-pyrazo- lyl)mety l]-4-pi peridyl} -1 H- MH 624,2 2,07 109 A
F -pyrazolo [3,4-í/jpyrimidín-3-
-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-
N -(trifluórmetyl)benzamidu
Príklad 787
Metyl-2-4-[4-amino-3-(4-[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino-3-metoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-l-yl]piperidinoacetát
Al - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl] -2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (122 g, 0,230 mmol), metyl-2-brómacetát (33 μΐ, 0,346 mmol) a uhličitan cézny (150 mg, 0,461 mmol) sa zmiešajú s DMF (2 ml). Zmes sa zahrieva pri teplote 85 °C po dobu 2 hodín. Podľa LC/MS vzniknú dva nové piky, jeden z nich je bis-alkylovaný produkt druhý je požadovaný produkt. Surová zmes sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou (Stĺpec Rainin HPLC: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5 % B/A až 100 % B/A v 25 minút, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 21 ml/min), čím sa získa metyl-2-4-[4-ammo-3-(4-[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino-3-metoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]piperidinoacetát (60 mg, 43 %).
‘H NMR (DMSO-d6) δ 1,91 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,42 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 3,32 (s, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 4,67 (m, IH), 7,32 (m, 2H), 7,75 (d, J = 7,96Hz, IH), 7,89 (d, J = 10,35 Hz, IH), 8,00 (s, IH), 8,24 (s, IH), 8,30 (d, J = 8,13 Hz, IH), 9,89 (s, IH).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ =602,2, Rt = 2,80 minút.
686
Príklad 788
Trans-3 - [4-( 177-benzo [c/jimidazol-1 -ylmetyl)-3-metoxyfenyl] -1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohe\xylj-l/7-pyrazolo[3,4-í7jpynmidín-4-amín
A. l-(4-Brómbenzyl)-l//-benzo[c/|imidazol l-Bróm-4-(brómmetyl)benzén (2,50 g, 10 mmol), 177-benzo[í7]imidazol (1,181 g, 10,0 mmol), hydroxid draselný (0,561 g, 10,0 mmol), uhličitan draselný (1,382 g, 10,0 mmol) a tetrabutylamóniumbromid (0,161 g, 0,5 mmol) sa zmiešajú v xylénoch (60 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 139°C cez noc, horúca reakčná zmes sa filtruje a premyje horúcim xylénom. Rozpúšťadlo sa zahusťuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5 až 80:20) ako mobilnej fázy, čím sa získa 1-(4-brómbenzyl)-177-benzo[ď]imidazol (1,193 g, 42 %).
‘H NMR (CDClj) δ 5,31 (s, 2H), 7,05 (m, 2H), 7,28 (m, 3H), 7,46 (m, 2H), 7,82 (m, IH), 7,95 (s, IH).
B. l-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzyl]-17/- benzofc/]imidazol
Zmes l-(4-Brómbenzyl)-177-benzo[í7]imidazolu (1,193 mg, 4,15 mmol), diborónpinakolesteru (1,27 g, 4,98 mmol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,10 g, 0,12 mol) a octanu draselného (1,22 g, 12,46 mol) v N,N-áimetylformamide (25 ml) sa zahrieva pri teplote 85 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (20 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celíte. Filtrát sa koncentruje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (98:2 až 95:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa l-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzyl]-l/7-benzo[ŕ/]imidazol (1,38 g, 100%):
‘H NMR (CDCfi) δ 1,27 (s, 12H), 5,33 (s, 2H), 7,06 (d, J = 8,24Hz, 2H), 7,28 (d, J = 8,34 Hz, 2H), 7,84 (d, J = 7,70Hz, IH), 8,01 (s, 1 H).
687
C. Trans-3 - [4-( 1//-benzo [d]imidazol-1 -y lmetyl)-3 -metoxy fény 1]-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-4-amín
7rany-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amm (200 mg, 0,453 mmol), l-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzyl]-l//-benzo[</]imidazol (303 mg, 0,906 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (0,31 mg, 0,027 mmol) a uhličitan sodný (155 mg, 1,09 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (5 ml) a vodou (2,5 ml). Reakčná zmes sa zahrieva do refluxu cez noc pod atmosférou dusíka rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou (Stĺpec Rainin HPLC,: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5 % B/A až 100 % B/A v 25 minút, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 21 ml/min), čím sa získa trans-3-[4-( 1 //-benzo [</] imidazol-1 -y lmetyl)-3 -metoxyfeny 1]-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexy 1]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amínu (35 mg, 15 %).
'H NMR (DMSO-d6) δ 1,46 (m, 2H), 1,95 (m, 10H), 2,13 (s, 3H), 2,32 (m, 5H), 4,62 (m, 1H), 5,78 (s, 2H), 7,22 (m, 2H), 7,49 (m, 2H), 7,62 (m, 4H), 8,22 (s, 1H), 8,44 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Stĺpec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ = 522,3, Rt = 0,82 min.
Príklad 789
Acetát Ni -(4-{4-amino-1 -[ 1 -(2-metoxyety 1)-4-piperidy 1 ]-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu
VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-z/|pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (100 g, 0,189 mmol), 2-brómetyl(metyl)éter (20 pl, 0,208 mmol) a uhličitan draselný (52 mg, 0,378 mmol) sa zmiešajú v DMF (2 ml). Zmes sa zahrieva pri teplote 65 °C cez noc, surová zmes sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou (Stĺpec Rainin HPLC,: Thermoquest, hyperprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,2 mm. eluenty: 5 % B/A až 100% B/A v 25 minút, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 21 ml/min), čím sa získa acetát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-4-piperidyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ŕ/Jpyrímidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (75 mg, 68 %).
688 'H NMR (DMSO-dQ δ 1,90 (m, 2H), 2,22 (m, 4H), 2,54 (m, 2H), 3,02 (m, 2H), 3,26 (s, 3H), 3,46 (m, 2H), 3,94 (m, s, 3H), 4,66 (m, 1H), 7,30 (d, J = 8,19 Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,74 (d, J = 7,84 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 10,33 Hz, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,30 (d, J = 8,23 Hz, 1H),
9,89 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Stĺpec: Genesis, C18, 3 gm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ =587,2, Rt = 2,17 minút.
Príklad 790
Al-(4-{4-amino-l-[l-(kyanometyl)-4-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Al - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrímidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (100 g, 0,189 mmol), 2-brómacetonitril (14 gl, 0,208 mmol) a uhličitan cézny (52 mg, 0,378 mmol) sa zmiešajú v DMF (2 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Surová zmes sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou (Stĺpec Rainin HPLC: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 gm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5 % B/A až 100 % B/A v 25 minút, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 21 ml/min), čím sa získa Al-(4-{4-amino-l-[l-(kyanometyl)-4-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluór-metyl)benzamid (68 mg, 64 %).
'H NMR (DMSO-d6) δ 1,99 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,45 (m, 2H), 2,99 (m, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,68 (m, 1H), 7,30 (d, J = 8,21 Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,75 (d, J = 8,26 Hz, 1H),
7,90 (d, J = 10, 51 Hz, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,25 (s, 1 H), 8,30 (d, J = 8,18 Hz, 1H), 9,90 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 gm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ =569,2, Rt = 3,03 min.
689
Príklad 791
Acetát Al-(4-{4-amino-l-[l-(2-amino-2-oxoetyľ)-4-piperidyl]-lN-pyrazolo[3,4-</]pyrímidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu
Al - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 N-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl } -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (100 g, 0,189 mmol), 2-brómacetamid (28 mg, 0,208 mmol) a uhličitan cézny (123 mg, 0,378 mmol) sa zmiešajú v DMF (2 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Surová zmes sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou (Stĺpec Rainin HPLC: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5 % B/A až 100 % B/A v 25 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 21 ml/min), čím sa získa acetát Al-(4-{4-amino-l-[l-(2-amino-2-oxoetyl)-4-piperidyl]-lN-pyrazolo[3,4-ď)pyrímidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trífluórmetyl)benzamidu (70 mg, 63 %).
'H NMR (DMSO-dô) δ 1,90 (m, 5H), 2,34 (m, 4H), 2,93 (s, 2H), 2,99 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,69 (m, 1H), 7,12 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,30 (d, J = 8,15 Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,75 (d, J = 8,15 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 10,30 Hz, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,31 (d, J = 8,14 Hz, 1H),
9,90 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH+ = 587,2. Rt = 2,17 min.
Príklad 792
Acetát 1 -(1 -metyl-3 -p iperidy 1)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 N-pyrazolo[3,4-<i]pyrimidín-4-amínu
Racemický roztok 3-jód-l-(l-metyl-3-piperidyl)-lN-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,050 g, 0,00014 mol) v dimetoxyetáne (2,5 ml) a vode (5 ml) sa nechá reagovať s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,033 g, 0,00015 mol), uhličitanom sodným (0,037 g, 0,00037 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,016 g, 0,000014 mol) pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín. Organické rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a surová látka sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Ä, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % ace690 tonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa acetát l-(l-metyl-3-piperidyl)-3-(4-fenoxytenyl)-l//-pyrazolo[3,4-z/Jpyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (0,040 g, 0,00009 mol).
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,10-7,22 (m, 5H), 4,74-4,84 (m, IH), 2,94 (dd, IH), 2,79 (d, IH), 2,36 (t, IH), 2,22 (s, 3H), 1,89 (s, 3H). 1,862,01 (m, 3H), 1,76-1,84 (m, IH), 1,60-1,75 (m, IH);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 8 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,74 minút; MS: MH+ 401.
Príklad 793
Acetát l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4amínu
Racemický roztok 3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-17/-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (0,050 g, 0,00012 mol) v dimetoxyetáne (2,5 ml) a vode (5 ml) sa nechá reagovať s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,029 g, 0,00014 mol), uhličitanom sodným (0,033 g, 0,00031 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paíádiom (0,014 g, 0,00001 mol) pri teplote 80 °C po dobu 20 hodín. Organické rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a surová látka sa purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Ä, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril 0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa acetát l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperiidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (0,038 g, 0,00007 mol).
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,09- 7,22 (m, 5H), 4,71-4,82 (m, IM, 3,44 (t, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,04 (dd, IH), 2,91 (d, IH), 2,47-2,60 (m, 3H), 1,94-2,09 (m, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,75-1,84 (m, IH), 1,57-1,74 (m, IH);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 A, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 14,26 minút; MS: MH+ 445.
691
Príklad 794
Trans-1 - {4- [4-amino-3-(3-chlór-4- {[4-(trifluórmetyl)benzoy ljamino} fenyl)-17/-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl}-4-metylhexahydropyrazíndium dimaleát
A. 7erc-butyl-V-(4-bróm-2-chlórfenyl)karbamát
Roztok 4-bróm-2-chlóranilínu (5,00 g, 0,0242 mol) v tetrahydrofuráne (50 ml) sa nechá reagovať s 1,0 M roztokom bis(trimetylsilyl)amidu sodného v tetrahydrofuráne (53,2 ml, 0,0532 mol). Zmes sa mieša 15 minút pri izbovej teplote. Pridá sa di-/erc-butyl-dikarbonát (6,34 g, 0,0290 mol) a roztok sa mieša po dobu 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi heptán/etylacetát (4:1). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa ŕerc-butyl-V-(4-bróm-2-chlórfenyljkarbamát vo forme bielej pevnej látky (4,214 g, 0,0137 mol).
‘H NMR (DMSO-dň, 400 MHz) δ 8,75 (s, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,50 (dd, 1H), 1,46 (s, 9H); TLC (heptán/etylacetát 4:1) Rf 0,54.
B. 7erc-butyl-V-[2-chlór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát
Zmes terc-butyl-V-(4-bróm-2-chlórfenyl)karbamátu (2,10 g, 0,00685 mol), diborónpinakolesteru (2,09 g, 0,00822 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,17 g, 0,00021 mol) a octanu draselného (2,02 g, 0,02055 mol) v VV-dimetylformamide (50 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 6 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa trituruje heptánom (70 ml) a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celite®521. Heptán sa odstráni vo vákuu, čím sa získa férc-butyl-V-[2-chlór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát vo forme šedého pevného podielu (1,93 g, 0,00546 mol):
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,65 (s, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,56 (dd, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,29 (s, 12H).
C. 7ra«5'-/erc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-d] pyrimidín-3 -y 1} -2-chlórfenyl)karbamát
692
Zmes /ra«s-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lŕf-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (2,20 g, 0,00498 mol), /erc-butyl-7ť-[2-chlór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,93 g, 0,00548 mol), uhličitanu sodného (1,32 g, 0,01245 mol) v 1,2-dimetoxyetáne (50 ml) a vode (100 ml) sa intenzívne mieša a pridá sa tetrakis(trlfenylfosfín)paládium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakčná zmes sa mieša 6 hodín pri teplote 80 °C, po ktorých sa pridá ďalší tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0) (0,345 g, 0,00030 mol). Reakčná zmes sa mieša ďalších 16 hodín pri teplote 80 °C. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (100 ml) a nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného (200 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (3 x 75 ml). Spojená organická fáza sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (90:10:0,5). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa /rans-/erc-butyl-jV-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)karbamát vo forme bielej pevnej látky (1,993 g, 0,00368 mol):
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,76 (s, IH), 8,23 (s, IH), 7,80 (d, IH), 7,68 (d, IH), 7,57 (dd, IH), 4,58-4,71 (m, IH), 2,15 (s, 3H), 1,89-2,61 (m, 15H), 1,49 (s, 9H), 1,40-1,48 (m, 2H); TLC (dichlórmetán/metanol = 90:10) Rf 0, 13. MS: MH+ 541.
D. rra«5-3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-4-amín
7ra«s-/‘erc-butyl-N-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-J)pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)karbamát (1,993 g, 0.00368 mol) sa pridá do roztoku 20% trifluóroctovej kyseliny v dichlórmetáne. Zmes sa mieša po dobu 2 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (50 ml) a premyje 1,0 M vodným roztokom hydroxidu sodného (2 x 25 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa /ra«y-3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (1,564 g, 0,00355 mol) vo forme bielej pevnej látky.
lHNMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,45 (d, IH), 7,31 (dd, IH), 6,92 (d, IH), 4,574,63 (m, IH), 2,23-2,55 (m. 9H), 2,14 (s, 3H), 1,89-2,08 (m, 6H), 1,38-1,52 (m, 2H); TLC (dichlórmetán/metanol = 90:10) Rf0,08; MS: MH1 441.
693
E. 7ra«s,-Ml-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-3 -yl} -2-chlórfenyl)-4-(trifluórmety l)benzamid-dimaleát
Do zmesi 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-mety’,piperazino)cyklohexyl]-l/í-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridíne (5 ml) pri teplote -10 °C sa po kvapkách pridá 4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbonylchlorid (0,188 g, 0,00090 mol), pričom teplota sa udržuje pod -5 °C. Zmes sa mieša pri teplote -10 °C po dobu 15 minút, potom pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Po pridaní 1 N vodného roztoku hydroxidu sodného (1,0 ml) sa zmes mieša 1 hodinu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (15 ml) a spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 %-60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa purifikovaná voľná báza (0,032 g, 0,000052 mol), ktorá sa rozpustí v absolútnom etanole (4 ml) a zahrieva do refluxu. Po pridaní roztoku kyseliny maleínovej (0,018 g, 0,000156mol) v absolútnom etanole (1 ml) sa roztok refluxuje ďalších 15 minút. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a výsledný precipitát sa filtruje, premyje minimálnym množstvom absolútneho etanolu. Precipitát sa suší vo vákuu, čím sa získa ŕra«s-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidm-3-yl}-2-chlórfenyl)-4-(trifluórmetyl)benzamid-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,020 g, 0,00002 mol):
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,42 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,20 (d, 2H), 7,96 (d,2H), 7,807,83 (m, 2H), 7,46 (dd, 1H), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,13 (s, 4H), 4,61-4,73 (m,lH), 2,52-2,64 (m, 4H), 2,23-2,46 (m, 5H), 2,16 (s, 3H), 1,90-2,10 (m, 6H), 1,42-1,56 (m, 2H) ;
RP-HPLC (Delta Pak C18,5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14, 97 minút; MS: MH+613.
Príklad 795
Trans-N\ -(4- {4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamid-dimaleát
694
Do zmesi 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amínu (0.200 g, 0,00045 mol) v pyridíne (5 ml) pri teplote -10 °C sa po kvapkách pridá 4-(trifluórmetoxy)-l-benzénkarbonylchlorid (0,203 g, 0,00091 mol), pričom teplota sa udržuje pod -5 °C. Zmes sa mieša pri teplote -10 °C po dobu 15 minút a potom pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Po pridaní IN vodného roztoku hydroxidu sodného (1,0 ml) sa zmes mieša 1 hodinu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (15 ml) a spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa purifikovaná voľná báza (0,034 g, 0,000054 mol), ktorá sa rozpustí v absolútnom etanole (4 ml) a zahrieva do refluxu. Pridá sa roztok kyseliny maleínovej (0,019 g, 0,000162 mol) v absolútnom etanole (1 ml), potom sa tento roztok refluxuje po dobu 15 minút. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a výsledný precipitát sa filtruje, premyje minimálnym množstvom absolútneho etanolu, precipitát sa suší vo vákuu, čím sa získa /rarc.v-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamid-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,020 g, 0,00002 mol):
'H NMR (DMSO-dň, 400 MHz) δ 10,29 (s, IH), 8,26 (s, IH), 8,14 (d, 2H), 7,78-7,87 (m, 2H), 7,68 (dd, IH), 7,57 (d, 2H), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,11 (s, 4H), 4,65-4,77 (m, IH), 2,38-3,60 (m, 12H), 1,95-2,15 (m, 6H), 1,51-1,68 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,41 minút; MS: MH+ 629.
Príklad 796
Acetát Zrart5-3-(3-chlór-4-{[(5-metyl-2-fúryl)metyl]amino}fenvl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
Zmes 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ŕ/Jpyrimidín-4-atnínu (0,200 g. 0,00045 mol) v 1,2-dichlóretáne (20 ml) sa nechá reagovať s 5-metyl-2-furfuralom (0,052 g. 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a tria695 cetoxyborohydridom sodným (0,336 g, 0,00159 mol) pri izbovej teplote. Pridajú sa ďalšie 2 ekvivalenty triacetoxyborohydridu sodného (0,672 g, 0,00318 mol) vo dvoch 24 hodinových intervaloch. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi chloroform (25 ml) a nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného (50 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje chloroformom (2 x 25 ml). Spojená organická fáza sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa acetát /ratts-3-(3-chlór-4-{[(5-metyl-2-furyl)metyl]amino}fenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/jpyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (0,129 g, 0,00022 mol):
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,51 (d, 1H), 7,39 (dd, 1H), 6,93 (d, 1H), 6,20 (d, 1H), 6,14 (t. 1H), 5,98 (d, 1H), 4,55-4,66 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,18-2, 61 (m, 10 H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 5H), 1,37-1,53 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,48 minút; MS: MH+ 535.
Príklad 797
Acetát z'ran.s-3-{3-chlór-4-[(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu
Zmes 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlóretáne (20 ml) sa nechá reagovať s 2-chlór-6-fluórbenzaldehydom (0,076 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridom sodným (0,336 g, 0,00159 mol) pri izbovej teplote. Pridajú sa ďalšie 3 ekvivalenty triacetoxyborohydridu sodného (1,008 g, 0,00477 mol) v troch 24 hodinových intervaloch, po ktorých zreaguje celá východisková látka. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi chloroform (25 ml) a nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje chloroformom (2 x 25 ml). Spojená organická fáza sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Ä, 25 cm; 30 % izokraticky po
696 dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa acetát /ra/w-3-{3-chlór-4-[(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (0,074 g, 0,00011 mol):
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,52 (d, IH), 7,35-7,47 (m, 4H), 6,99 (d, IH), 5.75 (t, IH), 4,55-4,66 (m, IH), 4,57 (d, 2H), 2,25-2,61 (m, 11H), 2,16 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 4H), 1,37-1,53 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,97 minút; MS: MH+583.
Príklad 798
7rans-Al-(4-{4-amino-l-[l-(l//-2-imidazolylkarbonyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]-pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(/r6'??f)-2-fenyl-l-cyklopropánk;;rboxamid-maleát
Zmes Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamidu (0,200 g, 0,00041 mol) v toluéne (10 ml) sa nechá reagovať s 5//,10//-diÍmidazo[l,5-n:l,5-í/jpyrazín-5,l0-diónom (0,040 g, 0,00021 mol) za refluxu po dobu 18 hodín. Pridá sa ďalší ekvivalent 5//,10//-diimidazo[l,5-a:l,5-ŕ/]pyrazín-5,10-diónu a zmes sa refluxuje ďalších 6 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa voľná báza (0,103 g, 0,00017 mol), ktorá sa rozpustí v absolútnom etanole (10 ml) a zahrieva do refluxu. Po pridaní roztoku kyseliny maleínovej (0,030 g, 0,00034 mol) v absolútnom etanole (1 ml) sa roztok refluxuje po dobu 15 minút, po ktorých vznikne precipitát. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a výsledný precipitát sa filtruje, premyje minimálnym množstvom absolútneho etanolu, suší vo vákuu, čim sa získa //•«n.?-Al-(4-{4-amino-l-[ 1-(1//-2-imidazolylkarbonyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(/ran5)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-maleát vo forme bielej pevnej látky (0,055 g. 0,00008 mol):
697 ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,63 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,22 (d, 1H), 8,00 (b, 1H), 7,74 (b, 1H), 7,43-7,48 (m, ÍH), 7,16-7,33 (m, 7H), 6,21 (s, 2H), 4,97-5,13 (m, 1H), 2,91-3,47 (m, 4H), 2,53-2,65 (m, 1H), 2,30-2,45 (m, 1H), 2,07-2,26 (m, 2H), 1,95-2,07 (m, 2H), 1,45-1,50 (m, 1H), 1,28-1,32 (m, 1H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,17 minút; MS: MH+ 578.
Príklad 799
Cis-NI -(4- {4-amino-1 - [4-(2-aminoetyl)-4-hydroxycyklohexyl] -1 H-pvrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3 -yl}-2-metoxyfenyl)-(/ran5,)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-acetát
A. Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(kyanometyl)-4-hydroxy cyklohexyl] -1 H-pyrazolo[3,4-č/Jpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(/raní)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid
Zmes cis-Nl -{4-[4-amino-1 -(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-1 H-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl]-(/ra/«)-2-fenylcyklopropán-l-karboxamidu (0,605 g, 0,0012 mol), chloristanu lítneho (0,189 g, 0,0018 mol) a kyanidu draselného (0,116 g, 0,0018 mol) v acetonitrile (60 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 2 dní, ochladí na izbovú teplotu, zriedi vodou (30 ml) a extrahuje dietyléterom (3x 30 ml). Spojená organická fáza sa suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetánu a metanolu (95:5). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa cz's-Hl-(4-{4-amino-l-[4-(kyanometyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfeny l)-(/razw)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,602 g, 0,0011 mol):
’H NMR (DMSO-d5, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (t, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,25 (s, 1H), 7,17 (m, 4H), 4,61-4,62 (m, 1H), 3,91 (s, 1H), 2,66 (s, 2H), 2,55-2,62 (m, 1H), 2,31-2,45 (m, 3H), 1,581,89 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, 1H), 1,28-1,38 (m, 1H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,21 minút; MS: MH+ 538.
698
B. Cis-Nl -(4-{4-amino- l-[4-(2-aminoetyl)-4-hydroxy cyklohexvlj-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(ri'«Hs)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-acetát
Do roztoku cz5-Al-(4-{4-amino-l-[4-(kyanometyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-J)pyrimidín-3-yI}-2-metoxyfenyl)-(?rara-)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamidu (0,200 g, 0,00037 mol) v metanole (20 ml) a hydroxidu amónneho (1 ml) sa pridá Raneyov nikel (0,5 ml). Zmes sa mieša 18 hodín pod atmosférou vodíka (1 atm). Reakčná zmes sa filtruje cez Celite a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 gm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa czs-Al-(4-{4-amino-l-[4-(2-aminoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]1 /7-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-(/ra«.’>)-2-fenyl -1 -cyklopropánkarboxamidacetát vo forme bielej pevnej látky (0,045 g, 0,000083 mol):
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22-8,24 (m, 1H), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,65-4,67 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,84-2,91 (m, 1H), 2,53-2,55 (m, 1H), 2,33-2,40 (m, 4H), 1,85 (s, 3H), 1,35-1,80 (m, 9H), 1,30-1,33 (m, 1H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 13,29 minút; MS: MH+ 444.
Príklad 800
CH-Al-(4-{4-amino-l-[4-(2-amino-2-oxoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyl)-(/zvws)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid
Do dobre miešaného roztoku czs-Al-(4-{4-amino-l-[4-(kyanometyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(/raz«)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamidu (0,200 g, 0,00037 mol) v dimetylsulfoxide (4 ml) sa pri izbovej teplote pridá uhličitan draselný (0,216 g, 0,00156 mol) a po kvapkách 30 % vodný roztok peroxidu vodíka (0,6 ml), pričom teplota sa udržuje konštantná. Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 32 hodín. Do zmesi sa pridá voda (20 ml) a vzniknutý precipitát sa filtruje, premyje vodou a suší vo vákuu. Pevný podiel sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 gm, 300 Ä, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 mi699 nút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa cisAl-(4-{4-amino-l-[4-(2-amino-2-oxoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(//'a«s)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,117 g, 0,00021 mol):
’H NMR (DMSO-d6s 400MHz) δ 9,64 (s, IH), 8,23 (d, IH), 8,22 (s, IH), 7,43-7,48 (m, IH), 7,15-7,35 (m, 7H), 7,05-7,10 (m, IH), 4,97 (s, IH), 4,61-4,71 (m, IH), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, IH), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,24 (s, 2H), 1,55-1,81 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, IH), 1,28-1,36 (m, IH);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,05 minút; MS: MH+ 556.
Príklad 801
Cis-Nl -[4-(4-ámino-1 - {4-[(dimetylamino)metyl] -4-hydroxycyklohexyl} -1 A-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-(/raH5,)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-acetát
Do roztoku cis-Nl - {4-[4-amino-1 -(I -oxaspiro[2.5] okt-6-yl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-(ŕra«s)-2-fenylcyklopropán-l-karboxamidu (0, 190 g, 0, 000302 mol) v 2-propanole (10 ml) sa pridá 2 M roztok dimetylamínu v metanole (0,91 ml) a výsledná zmes sa zahrieva pri teplote 65 °C v tlakovej nádobe po dobu 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 30 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa cA-Al-[4-(4-amino-l-(4-[(dimetylamino)metyl]-4-hydroxycyklohexyl}-lA-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-yl)-2-mctoxyfcnyl]-(/ra«.?)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-acetát vo forme bielej pevnej látky (0,109 g, 0,000177 mol):
'H NMR (DMSO-d6 400MHz). δ 9,64 (s, IH), 8,23 (d, IH), 8,22-8,24 (m, IH), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,56-4,68 (m, IH), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, IH), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,28 (s, 6H), 2,24 (s, 2H), 1,91 (s,3H), 1,63-1,78 (m,4H), 1,44-1,58 (m, 3H), 1,28-1,3-6 (m, IH);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 13, 54 minút; MS: MH+ 556.
700
Príklad 802
7>w.s'-A'2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l /7-pyrazolo[3,4-V]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-(27?)tetrahydro-1 Η-2-pyrolkarboxamid-acetát
Roztok trans-3-(4-amino-3-metoxyfény 1)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1 H-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00046 mol) v NpV-dimetylformamide (10 ml) sa nechá reagovať s l-hydroxy-7-azabenzotriazolom (0,068 g, 0,00050 mol), l-(3-dímetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridom (0,132 g, 0,00069 mol), D-Boc-prolínom (0,108 g, 0,00050 mol) a ΛζΗ-diizopropyletylamínom (0, 184 g, 0, 00142 mol) pri izbovej teplote po dobu 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (10 ml) a 5 % vodný roztok kyseliny citrónovej (20 ml). Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2x10 ml). Spojená organická fáza sa premyje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (15 ml) a suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa mieša v 20 % trifluóroctovej kyseline v dichlórmetáne po dobu 6 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Ä, 25 cm; 5 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 5 %-40 % acetonitril 0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa /ra«5-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(2Á)tetrahydro-l//-2-pyrolkarboxamid-acetát (0,096 g, 0,00016 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,33 (s, 1H), 8,45 (d, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,21 (d, 1H), 4,58-4,69 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,77 (dd, 1H), 2,96-3,04 (m, 1H), 2,74-2,84 (m, 1H), 2,47-2,58 (m, 5H), 2,23-2,45 (m, 5H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,88-2,11 (m, 7H), 1,78-1,88 (m, 1H), 1,60-1,69 (m, 2H), 1,39-1,54 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 8,47 minút; MS: MH+ 534.
Príklad 803
4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolát
701
A. 4-(4-Amino-3-jód-lN-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl)-l-pyridíniumolát
Roztok 3-jód-lN-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (5,00 g, 0,019 mol) v AA-dimetylformamide (50 ml) sa nechá reagovať pri izbovej teplote s 60 % hydridom sodným v oleji (0,92 g, 0,023 mol). Zmes sa mieša po dobu 15 minút a pridá sa 4-nitropyridín-A-oxid (5,37 g, 0,038 mol). Zmes sa zahrieva pri teplote 100 °C po dobu 18 hodín, vzniknutý precipitát sa filtruje, premyje Α,Α-dimetylformamidom a etylacetátom, čím sa získa 4-(4-amino-3-jód-lN-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl)-l-pyridíniumolát (3,79 g, 0,011 mol) vo forme hnedej pevnej látky:
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 8,34 (d, 2H), 8,24 (d, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 7,36 minút; MS: MH+ 355.
B. 4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolát
Suspenzia 4-(4-amino-3 -j ód-1 N-pyrazolo [3,4-c/Jpyrimidín-1 -y 1)-1 -pyridíniumolátu (0,140 g, 0,00040 mol) v dimetoxy etáne (7 ml) a vode (15 ml) sa nechá reagovať s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,093 g, 0,00043 mol), uhličitanom sodným (0,105 g, 0,00099 mol) a tetrakis(trifenylfbsfín)paládiom (0,046 g, 0,00004 mol) pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín, pevný podiel sa filtruje, čím sa získa 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-</]pyrirnidín-l-yl]-l-pyridíniumolát (0, 138 g, 0,00035 mol) vo forme hnedej pevnej látky, ktorá (0,040 g, 0,00010 mol) sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 40 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 30 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa produkt 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolát vo forme bielej pevnej látky (0,013 g, 0,00003 mol).
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,44 (s, 1H), 8,34-8,41 (m, 4H), 7,77 (d, 2H), 7,45 (t, 2H), 7,13-7,24 (m, 5H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,66 minút; MS: MH+ 397.
702
Príklad 804
3-(4-Fenoxy fenyl)-l-(4-pyridy 1)-1//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-4-amín
Suspenzia 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yI]-l-pyridíniumolátu (0,100 g, 0,00025 mol) a 10 % paládia na aktívnom uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) v kyseline octovej (3 ml) sa nechá reagovať s monohydrátom fosfomanu sodného (0,033 g, 0,00038 mol) pri teplote 60 °C. Po 2 hodinách sa pridá ďalšie 10 % paládium na aktívnom uhlí (0,016 g, 0,00002 mol). Zmes sa mieša 18 hodín, po ktorých sa pridá ďalšie 10 % paládium na aktívnom uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) a monohydrát fosfomanu sodného (0,033 g, 0,00038 mol). Zmes sa mieša ďalších 24 hodín. Zmes sa filtruje cez Celite®521 a premyje kyselinou octovou. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 40 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 30 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa 3-(4-fenoxyfeny 1)-1 -(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-r/Jpyrimidín-4-amín (0,020 g, 0,00005 mol) vo forme bielej pevnej látky:
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,71 (d, 2H), 8,46 (s, IH), 8,39 (dd, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,46 (t, 2H), 7,13-7,25 (m, 5H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 17,31 minút; MS: MH4 381.
Príklad 805
V2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l -metyl-IH-2-indolkarboxamid
A. V2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-ylJ-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid
Suspenzia 4-(4-amino-3 -j ód-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-1 -y 1)-1 pyridíniumolátu (0,500 g, 0,0014 mol) v dimetoxyetáne (15 ml) a vode (30 ml) sa nechá reagovať s V2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidom
703 (0,631 g, 0,00155 mol), uhličitanom sodným (0,374 g, 0,0035 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,163 g, 0,00014 mol) pri teplote 80 °C po dobu 18 hodín, pevný podiel sa filtruje a premyje vodou, potom sa mieša v etylacetáte po dobu 18 hodín a filtruje, premyje etylacetátom a suší vo vákuu, čím sa získa surový 4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-[(l-mety 1-177-2-indolyl)-karbonyl] aminofeny 1)-177-pyrazolo [3,4-c7]pyrimidín-1 -y 1]-1 -pyridíniumolát (0,523 g, 0,0010 mol) vo forme hnedej pevnej látky:
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,92 minút; MS: MH* 507.
B. N2-{4- [4-amino-1 -(4-pyridyl)-177-pyrazolo [3,4-ď] pyrimidín-3 -yl] -2-metoxyfenyl} -1 -metyl-177-2-indolkarboxamid
Suspenzia 4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(l-metyl-17/-2-indolyl)karbonyl]ami-no}fenyl)177-pyrazolo[3,4-c7|pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolátu (0,200 g, 0,00039 mol) a 10 % paládia na aktívnom uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) v kyseline octovej (3 ml) sa nechá reagovať s monohydrátom fosfomanu sodného (0,063 g, 0,00059 mol) pri teplote 60 °C po dobu 2 hodín. Pridá sa ďalšie 10% paládium na aktívnom uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) a fosfoman sodný (0,045 g, 0,00042 mol) a zmes sa mieša po dobu 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa mieša v metanole po dobu 4 hodín. Zmes sa filtruje cez Celite®521 a premyje metanolom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 50 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 50 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa iyofilizuje, čím sa získa jV2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-1-metyl-177-2-indolkarboxamid (0,020 g, 0,00004 mol) vo forme bielej pevnej látky:
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 948 (s, IH) 8,72 (d, 2M, 8,47 (s, IH), 8,42 (d, 2H), 8,20 (d, IH), 7,72 (d, IH), 7,60 (d, IH), 7,48 (s, IH), 7,42 (d, IH), 7,36 (s, IH), 7,34 (t, IH), 7,16 (t, IH), 4,05 (s, 3H), 3,99 (s, IH);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 19,50 minút; MS: MH+ 491.
704
Príklad 806 l-(6-Amino-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidín-4-amín; a
Príklad 807
3-(4-Fenoxyfenyl)-l-(2-pyridyl)-17/-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-4-amín
Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-4-amínu (0,200 g, 0,00079 mol) v jV-metyl-pyrolidinónu (10 ml) sa nechá reagovať s 60 % hydridom sodným v oleji (0,032 g, 0,00079 mol). Po uvoľnení plynu sa zmes mieša pri izbovej teplote po dobu 30 minút, pridá sa 5-bróm-2-nitropyridín (0,161 g, 0,00079 mol) a zmes sa zahrieva pri teplote 40 °C po dobu 18 hodín. Pridá sa ďalší 60 % hydrid sodný v oleji (0,032 g, 0,00079 mol) a zmes sa mieša ďalšie 2 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (15 ml) a vodu (25 ml). Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2x15 ml). Spojené organické podiely sa premyjú soľankou a sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi heptán/etyl acetát (1:2) ako eluenta, čím sa získajú 2 produkty. Menej polárna zlúčenina, l-(6-nitro-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-4-amín, sa suspenduje v absolútnom etanole (10 ml) a VV-dimetylformamide (5 ml) a pridá sa 10 % paládium na aktívnom uhlí (0,007 g). Zmes sa mieša pod atmosférou vodíka (balónik) po dobu 18 hodín, potom filtruje cez vrstvu Celite®521 a premyje absolútnym etanolom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa l-(6-amino-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-lŕ/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (0,007 g, 0,00002 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8,53 (d, IH) 8,31 (s, IH), 7,97 (dd, IH), 7,73 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,12-23 (m, 5H), 6,60 (d, IH), 6,20 (s, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 15,38 minút; MS: MH+ 396.
Polámejšia zlúčenina, 3-(4-fenoxyfenyl)-1-(5-bróm-2-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-4-arnín, sa suspenduje v absolútnom etanole (10 ml) a W-dimetylformamide (5 ml) a
705 pridá sa 10% paládium na aktívnom uhlí (0,007 g). Zmes sa mieša pod atmosférou vodíka (balónik) po dobu 18 hodín, filtruje cez vrstvu Celite®521 a premyje absolútnym etanolom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(2-pyridyl)-lA-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-4-amín (0,030 g, 0,00007 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,60-8,64 (m, 1H) 8,37 (s, 1H), 8,20 (d, 1H), 8,03-8,08 (m, 1H), 7,76 (d, 2H), 7,41-7,49 (m, 3H), 7,12-7,23 (m, 5H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 16,32 minút; MS: MH+ 381.
Všeobecný spôsob reduktívnej aminácie s /ra/w-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amínom a aldehydom ako východiskovými látkami je uvedený nižšie. Zlúčeniny podľa príkladov 808 a 809 sa pripravia týmto spôsobom.
Postup:
Zmes /ra«s-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (1 ekviv.), zodpovedajúceho aldehydu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku. Reakcia sa zastaví nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty. Zlúčenina podľa príkladu 808 sa pripraví týmto spôsobom, pričom sa použije aldehyd 2-metoxy-3-formylpyridín a zlúčenina podľa príkladov 809 sa pripraví s použitím aldehydu 2-formyl-indolu.
Príklad 808
Diacetát /ra«5-3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl]ammofenyl)-l-[4-(4-metyl-piperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu
706 ‘H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ) δ 8,18 (s, IH), 8,06 (dd, IH), 7,61 (d, IH), 7,35 (d, 2H), 6,95 (dd, IH), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,26 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,62,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 12,07 minút. MS: MH+ 528.
Príklad 809
Acetát /ro«5-3-{4-[(l/ŕ-2-indolylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-4-amínu ’H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 11,08 (s, IH), 8,19 (s, IH), 7,44 (d, IH), 7,36 (d, 2H), 7,32 (d, 1 H), 7,01 (t, IH), 6,95 (t, IH), 6,81 (d, 2H), 6,47 (t, IH), 6,35 (s, IH), 4,60 (m, IH), 4,45 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,74 minút. MS: MH+ 536.
Príklad 810
Diacetát /ran5-3-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidín-3 -yl} anilino)metyl]-1,2-dihydro-2-pyridinónu
Diacetát //•<3n5,-3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lŕ/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,105 g, 0,000199 mol) sa rozpustí v 30 % bromovodíku v kyseline octovej (4 ml) a zmes sa refluxuje po dobu 1,5 hodiny, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát rrazw-3-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-3-yl}amlino)metyl]-l,2-dihydro-2-pyridinónu (0,0204 g, 0,0000324 mol) vo forme bielej pevnej látky.
707 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,29 (m, 4H), 6,68 (d, 2H), 6,40 (t, 1H), 6,15 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,09 (d, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (DeltaPak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 9,40 minút. MS: MH+ 514.
Všeobecný spôsob reduktívnej aminácie s /ron5-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lŕ/-pyrazolo[3,4-cf]pyrimidín-4-amínom a aldehydom ako východiskovými látkami je uvedený nižšie.
Zlúčeniny podľa príkladov 811 - 813 sa pripravia týmto spôsobom.
Postup:
Zmes gw?s-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín (1 ekviv.), zodpovedajúceho aldehydu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku. Reakcia sa zastaví nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparativnou HPLC (Hypersil C18, 5 gm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty.
Zlúčenina podľa príkladu 811 sa pripraví s použitím aldehydu 2-amino-4-chlór-5-formyl-l,3-tiazolu. Zlúčenina podľa príkladu 812 sa pripraví s použitím aldehydu
5-mety 1-3-formyl-izoxazolu. Zlúčenina podľa príkladu 813 sa pripraví s použitím aldehydu 4-formy-l,3-tiazolu.
Príklad 811
Diacetát frartí-5-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyanilino)metyl]-4-chlór-1,3-tiazol-2-amínu
708 ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,19 (s, 2H), 7,06 (m, 3H), 6,68 (d, 1H), 5,76 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,59 minút. MS: MH+ 583.
Príklad 812
Acetát /raw>-3-(3-metoxy-4-[(5-metyl-3-izoxazolyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metyl-piperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,04 (m, 2H), 6,68 (d, 1H), 6,16 (s, 1H), 5,86 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,40 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,53 minút. MS: MH+ 532.
Príklad 813
Acetát Zra«.y-3-{3-metoxy-4-[(l,3-tiazol-4-ylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-ammu 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,08 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,03 (d, 1H), 6,68 (d, 1H), 5,76 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,52 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,17 minút. MS: MH+ 534.
Všeobecný spôsob prípravy benzotetrahydrofuránových derivátov s írans-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazmo)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3.4-í/]pyrimidín-4-amínom a prísluš709 ným 2-hydroxy-benzaldehydom ako východiskovými látkami je uvedený nižšie. Zlúčeniny podľa príkladov 814 a 815 sa pripravia týmto spôsobom.
Postup:
Trans-3 -(4-aminofenyl)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyI]-1 7/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (1 ekviv., 0,0001-0,0002 mol) a zodpovedajúci 2-hydroxy-benzaldehyd (1 ekviv.) sa zmiešajú v absolútnom etanole (5 ml) a miešajú pri izbovej teplote po dobu 48 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok suší cez noc, čím sa získa zodpovedajúci imín, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie. Trimetylsulfoxóniumjodid (2,5 ekviv.) sa rozpustí v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a naraz sa pridá 60 % disperzia hydridu sodného v parafíne (2,5 ekviv.). Po 10 minútach sa pridá roztok imínu v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 2,5 hodiny, roztok sa naleje do ľadovo studenej vody (50 ml) a extrahuje dichlórmetánom (2 x 40 ml). Spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa finálna zlúčenina.
Zlúčenina podľa príkladu 814 sa pripraví s použitím 2-hydroxy-4,6-dichlórbenzaldehydu a zlúčenina podľa príkladu 815 sa pripraví s použitím 2-hydroxy-4-chlórbenzaldehydu.
Príklad 814
Acetát /rans-3-4-[(4,6-dichlór-2,3-dihydrobenzo[ó]furán-3-yl)amino]fenyl-l-[4-(4-metyl-piperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amínu 'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,39 (d, 2H), 7,14 (s, IH), 7,07 (s, IH), 6,80 (d, 2H), 6,56 (d, IH), 5,34 (m, IH), 4,80 (dd, IH), 4,60 (m, IH), 4,42 (dd, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 16,03 minút. MS: MH+ 593.
710
Príklad 815
Acetát ŕrans-3-{4-[(4-chlór-2,3-dihydrobenzo[á]furán-3-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metyl-piperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-aminu ‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,28 (t, 1H), 6,99 (d, 1H), 6,89 (d, 1H), 6,81 (d, 2H), 6,53 (d, 1H), 5,34 (m, 1H), 4,74 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,38 (dd, 1H), 2,62,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,42 minút. MS: MH+ 559.
Príklad 816
Acetát Zra«s-3-4-[(4,6-dichlór-2,3-dihydrobenzo[ó]furán-3-yl)arnino]-3-metoxyfenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyI]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimid:n-4-amínu
Acetát Zra«v-3-4-[(4,6-dichlór-2,3-dihydrobenzo[ó]furán-3-yl)amino]-3-metoxyfenyl-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu sa pripraví podľa spôsobu z príkladov 814 a 815 s použitím íra«s,-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidm-4-amínu a 2-hydroxy-4,6-dichlórbenzaldehydu ako východiskových látok.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,11 (m, 4H), 6,80 (d, 1H), 5,45 (m, 2H), 4,84 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,42 (dd, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 16,85 minút. MS: MH+ 623.
Medziprodukt 7
7’erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-1 /ŕ-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-1 -yl]-1 -piperidínkarboxylát
711
A. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]ammofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-1 -yl]-1 -piperidínkarboxylát
Zmes benzyl-77-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (9,54 g, 0,027 mol), /erc-butyl-4-(4-amino-3 -j ód-1 //-pyrazolo [3,4-7]pyrimidín-1 -y 1)-1 -piperidínkarboxylátu (10,0 g, 0,0225 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (1,56 g, 0,00135 mol) a uhličitanu sodného (5,97 g, 0,0563 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (120 ml) a vody (60 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu (150 ml) a dichlórmetán (150 ml); organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje v dietyléteri a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát (10,1 g, 0,0186 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 20,00 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,36 (m, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 18,58 minút.
B. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/|pyrimidín-l-yl]-l-piperidmkarboxylát
Do roztoku /erc-butyl-4-[4-armno-3-(4-[(benzyIoxy)karbonyl]aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (5,0 g, 0,0092 mol) v terahydrofuráne (150 ml) sa pridá 10 % paládium na aktívnom uhlí (1,0 g) a reakčná zmes sa hydrogenuje na Parrovej trepačke v priebehu 96 hodín, katalyzátor sa odstráni filtráciou cez Celíte a filtrát sa koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje v «-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát (2,51 g, 0,0061 mol) vo forme belavej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,42 (s, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H);
712
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,18 minút.
Zlúčeniny podľa príkladov 817 - 829 sa pripravia podľa nasledujúceho všeobecného spôsobu na reduktívnu amináciu, nasledovaného odstránením BOC-chrániacich skupín. Ako východisková látka sa použije fórc-butyl-4-|4-amino-3-(4-aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát a príslušný aldehyd.
Postup:
Zmes /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (1 ekviv.), aldehydu (1,2 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, trituruje v etylacetáte a nechá reagovať s 4 N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej. Výsledná zmes sa mieša po dobu 1 hodiny; vodná fáza sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa oddelia. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty. Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia vyššie uvedený spôsobom:
Príklad 817
Diacetát 3- {4-[(benzo[ó]íurán-2-ylmetyl)amino]fenyl}-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,23 (m, 2H), 6,85 (d, 2H), 6,80 (s, 1H), 6,66 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,51 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,37 minút.
MS: Mff 440.
713
Príklad 818
Diacetát 3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,96 (dd, 1H), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,27 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,06 minút.
MS: MH' 431.
Príklad 819
Diacetát 3 -(4- [(5 -mety 1-2-tieny l)mety ljaminofenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 H-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,85 (d, 1H), 6,77 (d, 2H), 6,64 (d, 1H), 6,54 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,41 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,85 minút.
MS: MH+ 420.
Príklad 820
Diacetát 3- {4-[(2-furylmetyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 H-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu
714 ‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,59 (s, III), 7,36 (d, 2H), 6.77 (d, 2H), 6,46 (t, 1H), 6,39 (d, 1H), 6,34 (d, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,31 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 10,96 minút.
MS: MH+ 390.
Príklad 821
Diacetát 3-[4-(benzylamino)fenyl]-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu ’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,34 (m, 6H), 7,24 (t, 1H), 6,73 (d, 2H), 6,60 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,33 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,32 minút.
MS: MH+ 400.
Príklad 822
Diacetát 3-{4-[(2-metoxybenzyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidín-4-amínu ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,24 (m, 2H), 7,01 (d, 1H), 6,90 (t, 1H), 6,70 (d, 2H), 6,41 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,28 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,73 minút.
MS: ΜΡΓ 430.
715
Príklad 823
Diacetát 3-{4-[(3-metoxybenzyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-lN-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidm-4-amínu ’H NMR (DMSO-d5,400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,25 (t, 1H), 6,96 (m, 2H), 6,81 (d, 1H), 6,72 (d, 2H), 6,59 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,38 minút.
MS: MH+ 430.
Príklad 824
Diacetát 3-{4-[(4-metoxybenzyl)amino]fenyl}-1 -(4-piperidyl)-1 N-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidín-4-amínu ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,35 (m, 4H), 6,90 (d, 2H), 6,72 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,37 minút.
MS: MH+ 430.
Príklad 825
Diacetát l-(4-piperidyl)-3-(4-[3-(trifluórmetyl)benzyl]amino fenyl)-1 N-pyrazolo [3,4-e/Jpyrimidín-4-amínu
Ί\6 *Η NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,71 (m, 2H), 7,58 (m, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, IH), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m,2H);
RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,08 minút.
MS: MH+ 468.
Príklad 826
Diacetát l-(4-piperídyl)-3-(4-[4-(trifluórmetyl)benzyl]aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í7jpyrimidín-4-amínu *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,70 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, IH), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,23 minút.
MS: MH+ 468.
Príklad 827
Diacetát 3-(4-[(2-metyl-l,3-tiazol-4-yl)metyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-ammu ‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,41 (d, 2H), 7,26 (s, IH), 6,73 (d, 2H), 6,51 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,36 (d. 2H), 3,07 (m, 2H), 2,70 (s, 3H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08. 5 pm. 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) R, 10,13 minút.
717
MS: MH+ 421.
Príklad 828
Diacetát 3-{4-[(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino]fény 1}-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu ’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,42 (m, 4H), 7,26 (t, IH), 6,83 (d, 2H), 6,27 (t, IH), 4,72 (m, IH), 4,37 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,32 minút.
MS: MH+ 452.
Príklad 829
Diacetát 3-(4-[2-fluór-4-(trifluónnetyl)benzyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amínu ’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,61 (m, 3H), 7,38 (d, 2H), 6,73 (d, 2H), 6,68 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,47 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,83 minút.
MS:MH+486.
Príklad 830
Diacetát 3 - {4-[(benzo [b] furán-2-ylmetyl)amino]-3-metoxyfenyl} -1 -(4-piperidyl)-177pyrazolo [3 ,4-í7]pyrimidín-4-amínu
718
Zmes Zerc-butyl’4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í(lpyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (g, mol), benzofurán-2-karbaldehydu (0,046 g, 0,000315 mol), triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,00042 mol,) a octovej kyseliny (0,024 ml, 0,00042 mol) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, trituruje v etylacetáte (4 ml) a nechá reagovať s 4 N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej (1 ml). Výsledná zmes sa mieša po dobu 1 hodiny; vodná fáza sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa oddelia. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparativnou HPLC (Hypersil 0 8, 8 gm, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa diacetát 3-{4-[(benzo[ú]furán-2-ylmetyl)amino]-3-metoxyfenyl}-l-(4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-íYJpyrimidín-4-amínu (0,027 g, 0,0000457 mol).
*H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,22 (m, 2H), 7,06 (m, 2H), 6,80 (d, 1H), 6,75 (s, 1H), 5,80 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,57 (d, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 14,83 minút.
MS: MH+ 470.
Príklad 831
Acetát 3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ú]furán-3-ylamino)fenyl]-l-(4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-ammu
Salicylaldehyd (0,063 g, 0,000513 mol) a fôrc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát (0,200 g, 0,000489 mol) sa zmiešajú v absolútnom etanole (5 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 48 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok suší cez noc, čím sa získa terc-butyl-4-[4-amino-3-(4- {[-1 -(2-hydroxyfenyl)metylidén]amino} fenyl)-177-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-1 -y 1 ] -1 -piperidínkarboxylát, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie. Trimetylsulfoxóniumjodid (0,269 g, 0,00122 mol) sa rozpustí v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a naraz sa pridá 60 % disperzia hydridu sodného v parafíne (0.049 g. 0,00122 mol). Po 10 minútach sa pridá roztok /erc-butyl719
-4-[4-amino-3-(4-{[-l-(2-hydroxyfenyl)metylidén]amino}fenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 2,5 hodiny, roztok sa naleje do ľadovo studenej vody (70 ml) a extrahuje dichlórmetánom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku, čím sa získa surový Zerc-butyl-4-{4-amino-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ú]furán-3-ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidín-l-yl}-1-piperidínkarboxylát, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie. Surová zlúčenina sa rozpustí v etylacetáte (5 ml) a nechá reagovať s 4N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej (1,5 ml). Výsledná emulzia sa intenzívne mieša po dobu 1 hodiny; vodná vrstva sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa oddelia. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát 3-[4-(2,3-dihydrobenzo[/>]furán-3-ylamino)fenyl]-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu (0,038 g, 0,000078 mol) vo forme bielej pevnej látky ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,41 (m, 3H), 7,25 (t, IH), 6,89 (m, 4H), 6,51 (t, IH), 5,35 (m, IH), 4,79 (m, 2H), 4,27 (m, IH), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s,3H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,38 minút.
MS: MH+ 428.
Príklad 832
Trans-3-(4- (4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-e/|pyrimidín-3-y 1} ani 1 ino)-1 /7-1 /Abenzo [</] i zotiazo 1-1,1 -dión-acetát
A. 3-Chlór-1 H-1 Ä6-benzo[rijizotiazol-1,1 -dión
Sacharín (10,0 g, 0,0546 mol) a chlorid fosforečný (12,6 g, 0,060 mol) sa zahrievajú pri teplote 170 °C po dobu 1,5 hodiny. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a suspenduje v dietyléteri (200 ml), precipitát sa spojí filtráciou, dobre premyje dietyléterom a suší, čím sa zís720 ka 3-chlór-17/-lX6-benzo[ď]izotiazol-l,l-dión (3,7 g, 0,0184 mol) vo forme bielej pevnej látky, ktorá sa použije bez ďalšej purifikácie.
MS: MH+ 202.
B. 3-(4-Brómanilino)-1 H-1 X6-benzo[ď]izotiazol-1,1 -dión
Do roztoku 3-chlór-l//-lZ6-benzo[ď]izotiazol-l,l-diónu (1,0 g, 0,00496 mol) v acetóne (20 ml) sa naraz pridá 4-brómanilín (1,71 g, 0,00992 mol) a zmes sa mieša po dobu 15 minút. Zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa suspenduje vo vode (100 ml), precipitát sa spojí filtráciou, dobre premyje vodou a suší, čím sa získa 3-(4-brómanilino)-lH-l/.6-bcnzo[ď]izotiazol-1,1 -dión (1,57 g, 0,00467 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,93 (s, IH), 8,47 (d, IH), 8,09 (d, IH), 7,93 (m, 4H), 7,69 (d, 2H).
C. 3-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l//-lZ6-benzo[ď]izotiazol-l,l-dión
Zmes 3-(4-brómanilino)-l/MX6-benzo[ď]izotiazol-l,l-diónu (1,57 g, 0,00467 mol), diborónpinakolesteru (1,43 g, 0,00561 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,114 g, 0,00014 mol) a octanu draselného (1,37 g, 0,014 mol) v A'jV-dimetylformamide (35 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celíte, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa trituruje v dietyléteri, čím sa získa 3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-17/-lZ6-benzo[ď]izotiazol-l,l-dión (1,14 g, 0,00297 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,92 (br, IH), 8,51 (d, IH), 8,08 (d, IH), 7,91 (m, 4H), 7,68 (d, 2H), 1,29 (s, 12H).
D. 7ra«s-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/í-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl} anilino)-1 H-1 Ä6-benzo[ď]izotiazol-1,1 -dión-acetát
Zmes 3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilinoj-177-1 Ä6-benzo[ď]izotiazol-l.l-diónu (0.09 g, 0,000234 mol), Zraw-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexylJ-l/7721
-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-4-amínu (0,08 g, 0,00018 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,013 g, 0,000011 mol) a uhličitanu sodného (0,048 g, 0,00045 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa írans-3-(4-{4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cykl ohexy 1]-1 A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl} anilino)-1 H-1 λ6benzo|//]izotiazol-l,l-dión-acetát (0,075 g, 0,000119 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,29 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (m, 3H), 7,79 (m, 2H), 7,66 (d, 2H), 4,65 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,27 minút.
MS: MH+572.
Príklad 833
Cis-3-(4- {4-amino-1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexy 1] -1 A-pyrazolo [3,4-č/jpyrimidí n-3 -yl} anilino)-1 A-1 k6-benzo [z/] i zoti azol -1,1 -dión-diacetát
Cŕs-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-čí|pyrimidm-3-yl}anilino)-lA-lk6-benzo[cT]izotiazol-l,l-dión-diacetát sa pripraví z 3-[4-(4,4,5,5-tetrametyI-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-lA-lk6-benzo[(7]izotiazol-l,l-diónu (0,09 g,
0,000234 mol) a c75'-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu spôsobom, ktorý je podobný vyššie uvedenému spôsobu.
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,42 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (m, 3H), 7,84 (m, 2H), 7,62 (d, 2H), 4,80 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,07 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,59 minút.
722
MS: MH+ 572.
Príklad 835
Acetát trans-N3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[d]izoxazol-3-ammu
A. Nl -(4-brómfenyl)-2-fluórbenzamid
Roztok 2-fluórbenzoylchloridu (5,82 g, 0,0367 mol) a 4-brómanilínu (6,31 g, 0,0367 mol) v bezvodom dichlórmetáne (150 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C apo kvapkách a pod atmosférou dusíka pridá sa 7V,V-diizopropyletylamín (5,21 g, 0,0407 mol). Výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 24 hodín, koncentruje a zvyšok sa rozdelí medzi etylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom dietyléteri (50 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa jVl-(4-brómfenyl)-2-fluórbenzamid (9,6 g, 0,0326 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-dé, 400 ΜΗζ) δ 10,54 (s, IH), 7,66 (m, 3H), 7,56 (m, 3H), 7,34 (m, 2H). TLC (etylacetát/heptán 1: 2) Rf 0,37.
B. Nl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbotioamid
Zmes AT-(4-brómfenyl)-2-fluórbenzamidu (3,3 g, 0, 0112 mol) a 2,4-bis-(4-metoxyfenyl)-l ,3-ditia-2,4-difosfetán-2,4-disulfidu (2,27 g, 0,00561 mol) sa zahrieva v toluéne pri refluxe pod atmosférou dusíka po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:6) ako mobilnej fázy, čím sa získa AT-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbotioamid (3,1 g, 0,010 mol) vo forme žltej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 12,13 (s, IH), 7,93 (d, 2H), 7,62 (m, 3H), 7,51 (m, IH), 7,31 (m, 2H). TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf- 0,27.
C. Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénamidoxím
723
Zmes Hl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbotioamidu (1,56 g, 0,00505 mol), hydroxylamín hydrochloridu (0,44 g, 0,00631 mol) a hydrogénuhličitanu sodného (0,53 g, 0,00631 mol) sa zahrieva v absolútnom etanole (25 ml) pri refluxe pod atmosférou dusíka po dobu 14 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom dietyléteri a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa Hl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénamidoxím (1,21 g, 0,00392 mol) vo forme belavej pt- nej látky. TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf0,12.
D. H-benzo[ŕ/]izoxazol-3-yl-H-(4-brómfenyl)amín
Do roztoku Hl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénamidoxímu (1,51 g, 0,00489 mol) vH-metylpyrolidinóne (25 ml) sa pridá /erc-butoxid draselný (0,54 g, 0,00513 mol) a výsledný roztok sa zahrieva pri teplote 100 °C pod atmosférou dusíka po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/«-heptán (1:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa H-benzo[t/]izoxazol-3-yl-H-(4-brómfenyl)amín (0,95 g, 0,00329 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,72 (s, 1H), 8,13 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,61 (m, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,37 (dd, 1H). TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,26.
E. H-benzo[ď]izoxazol-3-yl-H-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín
Zmes H-benzo[ŕ/]izoxazol-3-yl-H-(4-brómfenyl)amínu (1,30 g, 0,0045 mol), diborónpinakolesteru (1,37 g, 0,0054 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,110 g, 0,000135 mol) a octanu draselného (1,32 g, 0,0135 mol) v A/N-dimetylformamide (35 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celite, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:5) ako
724 mobilnej fázy, čím sa získa A-benzo[ŕ/]izoxazol-3-yl-A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,40 g, 0,00119 mol) vo forme bielej pevnej látky.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,74 (s, IH), 8,16 (d, IH), 7,70 (m, 4H), 7,61 (d, 2H), 7,37 (dd, IH), 1,29 (s, 12H). TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,21.
F. Acetát trans-N3-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexylj-1 A-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[č/]izoxazol-3-amínu
Zmes A-benzo[(7]izoxazol-3-yl-jV-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljamínu (0,10 g, 0,000298 mol), ŕra«5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,101 g, 0.000229 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,016 g, 0,0000137 mol) a uhličitanu sodného (0,061 g, 0,000573 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát ŕra«í-A3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[č/]izoxazol-3-amínu (0,102 g, 0,000175 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,81 (s, IH), 8,23 (s, IH), 8,19 (d, IM, 7,88 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,40 (m, IH), 4,65 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,66 minút.
MS: MH+ 524.
Príklad 836
Diacetát cACV3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[rí]izoxazol-3-ammu
Diacetát cA-A3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[rf]izoxazol-3-amínu sa pripraví z A-benzo[<7]izoxazol-3-yl725
-H-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu a cA-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu spôsobom, ktorý je podobný vyššie uvedenému spôsobu.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,86 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,24 (d, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,67 (m, 4H), 7,43 (m, 1H), 4,83 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,08 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,74 (m, 2H), 1,62 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 13,77 minút.
MS: MH+ 524.
Príklad 837
Acetát N3 - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl) -1 H-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3 -yl] fenyl} benzof/] izoxazol-3-amínu
Zmes H-benzo[ŕ/]izoxazol-3-yl-H-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,087 g, 0,000258 mol), íerc-butyl-4-(4-amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylátu (0,088 g, 0,000198 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,014 g, 0,000012 mol) a uhličitanu sodného (0,053 g, 0,000495 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi vodu a dichlórmetán. Organická fáza sa suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa surový /erc-butyl-4-{4-amino-3-[4-(benzo[ď| izoxazol-3 -y l-amino)fenyl]-1 H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-1 -yl} -1 -piperidínkarboxylát, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie. Tento surový karboxylát sa rozpustí v etylacetáte (5 ml) a nechá reagovať s 4 N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej (1 ml). Výsledná emulzia sa intenzívne mieša po dobu 1 hodiny, vodná vrstva sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa oddelia. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10 % - 60 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát H3-{4-[4726
-amino- l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ďlpyrimidín3-yl]fenyl}benzo[ď]izoxazol-3-amínu (0,009 g, 0,0000185 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,82 (s, 1H), 8,20 (m, 2H), 7,89 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,41 (t, 1H), 4,74 (m, 1 H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,79 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 11,20 minút.
MS: MH+ 427.
Príklad 838
Acetát Zram-3-[4-(17/-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidín-4-amínu
A. ΛΊ -(4-brómfenyl)-2-fluór-l -benzénkarbohydrazónamid
Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbotioamid (1,50 g, 0,00485 mol) a 1 M roztok hydrazínu v tetrahydrofuráne (6,3 mi, 0,0063 mol) sa zahrievajú v absolútnom etanole (25 ml) za refluxu pod atmosférou dusíka po dobu 14 hodín. Pridajú sa ďalšie 3 ml IM roztoku hydrazinu v tetrahydrofuráne a zmes sa mieša pri refluxe ďalších 6 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje, čím sa získa yVl-(4-brómfenyl)-2-fluór-1-benzénkarbohydrazónamid (1,54 g, 0,0050 mol) vo forme hnedej pevnej látky. TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf0,10.
B. /V-(4-brómfenyl)-A-(l//-3-indazolyl)amín
Do roztoku JVl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbohydrazónamidu (1,2 g, 0,00391 mol) v JV-metyl-pyrolidinóne (25 ml) sa pridá terobutoxid draselný (0,50 g, 0,0041 mol) a výsledný roztok sa zahrieva pri teplote 100 °C pod atmosférou dusíka po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje.
727
Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/rcheptán (1:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa A-(4-brómfenyl)-A-(l//-3-indazolyl)amín (0,29 g, 0, 0010 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,06 (s, 1H), 9,03 (s, 1H), 7,93 (d, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,03 (dd, 1H). TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf0,26.
C. A-( 1 H-3-indazolyl)-#-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín
Zmes A-(4-brómfenyl)TV-(l/7-3-indazolyl)amínu (0,29 g, 0,00101 mol), diborónpinakolesteru (0,31 g, 0,00121 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,025 g, 0,00003 mol) a octanu draselného (0,294 g, 0,003 mol) v Λ/V-dimetylformamide (35 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celite a filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:3) ako mobilnej fázy, čím sa získa 7V-(l//-3-indazolyl)-/V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,064 g, 0,000191 mol) vo forme belavej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 12,09 (s, 1H), 9,06 (s, 1H), 7,94 (d, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,35 (m, 2H), 7,03 (dd, 1H), 1,28 (s, 12H). TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf 0,21.
D. Acetát trans-3-[4-( 1 H-3-indazolylamino)feny 1]-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidm-4-amín
Zmes /V-(l//-3-indazolyl)-/V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,064 g, 0,000191 mol), ?raH5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0, 070 g, 0,000159 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,011 g, 0,0000095 mol) a uhličitanu sodného (0,042 g, 0,000398 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10%-60% acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 25 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát /rans-3-[4-(l//-3-indazolylamino)fenyI]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,035 g, 0,000060 mol) vo forme bielej pevnej látky.
728 'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,09 (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,99 (d, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,06 (t, 1H), 4,64 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,49 (m, 2H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 12,96 minút.
MS: MH+ 523.
Príklad 839
Acetát /ranj--A3-(4-{4-arnino-l-[4-(4-metylpiperazmo)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrirnidín-3-yl}fenyl)-6-(trifluórmetyl)benzo[d]izoxazol-3-amínu
A. Al -(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid
Roztok 2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoylchloridu (5, 05 g, 0, 0223 mol) a 4-brómanilínu (3,83 g, 0,0223 mol) v bezvodom dichlórmetáne (150 ml) sa ochladí na teplotu 0 °C a pod atmosférou dusíka sa po kvapkách pridá A,A-diizopropyletylamín (426 ml, 0,0245 mol). Výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 24 hodín, koncentruje a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom n-heptáne (50 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa Al-(4-brómfenyI)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (7,1 g. 0,0196 mol) vo forme bielej pevnej látky.
lH NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,74 (s, 1H), 7,90 (m, 2H), 7,74 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,56 (d, 2H).
B. Al -(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-1 -benzénkarbotioamid
Zmes Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (7,1 g, 0,0196 mol) a 2,4-bis-(4-metoxyfenyl)-l,3-dithia-2,4-difosfetán-2,4-disulfidu (3,97 g, 0,0098 mol) sa zahrieva v toluéne pri refluxe pod atmosférou dusíka po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:8) ako mobilnej fázy, čím sa
729 získa Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbotioamid (6,0 g, 0,0159 mol) vo forme žltej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 12,33 (s, IH), 7,94 (d, 2H), 7,81 (m, 2H), 7,65 (m, 3H). TLC (etylacetát/heptán 1: 4) Rf 0,61
C. Al -(4 -brómfenyl)-2-fluór-4-(trifiuórmetyl)-1 -benzénamidoxím
Zmes Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbotioamidu (2,50 g, 0,00663 mol), hydroxylamín hydrochloridu (0,65 g, 0,00928 mol) a uhličitanu sodného (0,78 g, 0,00928 mol) sa zahrieva v absolútnom etanole (25 ml) za refluxu pod atmosférou dusíka po dobu 14 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l -benzénamidoxím (2,35 g, 0,00625 mol) vo forme belavej pevnej látky. TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,12.
D. A-(4-brómfenyl)-A-[6-(trifluórmetyl)benzo[ť/]izoxazol-3-yl]amín
Do roztoku Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénamidoxímu (2,25 g, 0,00598 mol) v A-metylpyrolidinóne (30 ml) sa pridá /erc-butoxid draselný (0,71 g, 0,00628 mol) a výsledný roztok sa zahrieva pri teplote 100 °C pod atmosférou dusíka po dobu 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa A-(4-brómfenyl)-A-[6-(trifluórmetyl)benzo[</|izoxazol-3-yl]amín (1,75 g, 0,0049 mol) vo forme belavej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,95 (s, IH), 8,37 (d, 1 H), 8,14 (s, IH), 7,78 (d, IH), 7,68 (d, 2H), 7,58 (d, 2H). TLC (etylacetát/heptán 1:5) Rf 0,31.
E. A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-A-[6-(trifluórmetyl)benzo[d]izoxazol-3-yljamín
730
Zmes V-(4-brómfenyl)-V-[6-(trifluórmetyl)benzo[c/]izoxazol-3-yl]amínu (1,75 g, 0,0049 mol), diborónpinakolesteru (1,49 g, 0,0059 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,120 g. 0,000147 mol) a octanu draselného (1,44 g, 0,0144 mol) v Λ/Λ'-dimetylformamide (10 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín a pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celíte, filtrát sa koncentruje, čím sa získa žltý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:6) ako mobilnej fázy, čím sa získa V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-V-[6-(trifluórmetyI)benzo[í/]izoxazol-3-yl]amín (0,065 g, 0,000161 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz)Q9,97 (s, IH), 8,39 (d, IH), 8,14 (s, IH), 7,77 (d, IH), 7,71 (s, 4H), 1,29 (s, 12H).
F. Acetát /rň »-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í7]pynmidín-3-yl}fcnyl)-6-(trifluórmetyl)benzo[íi]izoxazol-3-amínu
Zmes V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-V-[6-(trifluór-metyl)benzo[rí]izoxazol-3-yl]amínu (0,062 g, 0,000153 mol), Zra«5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-4-amínu (0,065 g, 0,000146 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,010 g, 0,0000087 mol) a uhličitanu sodného (0,039 g, 0,000365 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín a pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-70 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 30 minút, 21 ml/min), čím sa získa acetát trans-N3(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidm-3-yl}fenyl)-6-(trifluórmetyl)benzo[ť/]izoxazol-3-amínu (0,026 g, 0,0000398 mol) vo forme bielej pevnej látky.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,05 (s, IH), 8,44 (d, IH), 8,23 (s, IH), 8.16 (s, IH), 7,88 (d, 2H), 7,79 (d, IH), 7,69 (d. 2H), 4,67 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 311), 1,46 (m, 211);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 16,18 minút.
731
MS: MH+ 592.
Príklad 840
7V2-[4-(4-amino-1 - {1 - [(2-metyl-l 7/-4-imidazolyl)metyl]-4-piperidyl}-l 7/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l -metyl- 177-2-indolkarboxamid-dimaleát
A. N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl- 1 77-2-indolkarboxamid
Hydrochlorid 3-jód-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amínu (6,75 g, 17,73 mmol), 772-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-1-metyl-177-2-indolkarboxamid (7,571 g, 18, 63 mmol), paládium-tetrakistrifenylfosfín (1,23 g, 1,06 mmol) a uhličitan sodný (8,27 g, 78,03 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (180 ml) a vodou (90 ml). Reakčná zmes sa zahrieva do refluxu cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná suspenzia sa extrahuje s veľkým množstvom dichlórmetánu. Spojená organická vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO<4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (90:10:0,5 až 60:40:0,5) ako mobilnej fázy, čím sa získa N2- {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ď[pyrimidín-3 -y l]-2-metoxy fény 1} -1 -metyl-177-2-indolkarboxamid (4,38 g). Vodná suspenzia sa filtruje, premyje vodou a suší, čím sa získa N2-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -y 1] -2-metoxy fenyl} -1 -metyl-177-2-indolkarboxamid (2,77 g). Spojené pevné podiely (7,15 g, 81 %).
‘H NMR (DMSO-dô) δ 1,85 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,64 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,77 (m, IH), 7,13 (m, IH), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J = 8,45 Hz, IH), 7,71 (d, J = 7,94 Hz, IH), 8,12 (d, J = 8,15 Hz, IH), 8,25 (s, IH), 9,44 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): Rt = 1,97 minút, MH+ = 497,3.
B. V2-[4-(4-ammo-1 -{1 -[(2-metyl-l 77-4-imidazolyl)metyl)-4-piperidyl}-177-pyrazolo[3,4-t7|pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l -metyl- 177-2-indolkarboxamid
732
N2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimÍdín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-1/7-2-indoIkarboxamíd (250 mg, 0,503 mmol). 2-metyl-17/-4-imidazoIkarbaídehyd (83 mg, 0,755 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (159 mg, 0,755 mmol) a ľadová kyselina octová (30 mg, 0,554 mmol) sa zmiešajú v 1,2-dichlóretáne (6 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc, na úpravu pH asi na 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (95:5:0,5 až 80:20:05) ako mobilnej fázy, čím sa získa V2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-metyl-17/-4-imidazolyl)metyl]-4-piperidyl}-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl1/7-2-indolkarboxamid (215 mg. 72 %).
'H NMR (DMSO-d6) δ 1,91 (m, 2H), 2,23 (m, 7H), 3,00 (m, 2H), 3,41 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4.04 (s, 3H), 4,78 (m, IH), 6,72 (s, IH), 7,15 (m, IH), 7,32 (m, 4H), 7,78 (d, J = 8,43 Hz, IH), 7,70 (d, J = 7,92 Hz, IH), 8,11 (d, J = 7,92 Hz, IH), 8,24 (s, IH), 9,44 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): Rt = 2, 00 minút, MH+ = 591,3.
C. jV2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-metyl-l/7-4-imidazolyl)metyl]-4-piperidyl}-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid-dimaleát
N2-4-(4-amino-1 - {1 -[(2-metyl-1 //-4-imidazoly ljmetyl]-4-piperidyl} -1 //-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-1//-2-indolkarboxamid (210 mg, 0,355 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (25 ml) a pár kvapkách etanolu. Pridá sa kyselina maleínová (83 mg, 0,711 mmol) v horúcom etylacetáte (3 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 3 hodín a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa N2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-metyl-1//-4-imidazolyl)metyl]-4-piperidyl} -1//-pyrazolo[3,4-h]pyrimidín-3-y l)-2-metoxy fenyl]-1 -metyl-1/7-2-indolkarboxamid-dimaleát (255 mg, 87 %).
'H NMR (DMSO-d6) δ 2,12 (m, 2H), 2,43 (m, 5H), 2,92 (m, 2H), 3,38 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,99 (s, 2H), 4,04 (s, 3H), 4,93 (m, 1 H), 6,13 (s, 4H), 7,16 (m, IH), 7,34 (m, 5H), 7,60 (d, J = 8,43 Hz, IH), 7,70 (d, J = 7,92 Hz, IH), 7,72 (d, J = 8,15 Hz, IH), 8,27 (s, IH), 9,44 (s, IH).
733
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min):
R, = 1,98 minút, MH+ = 591,3.
Príklad 841 /72-(4- { 4-amino-1 -[ 1 -(1 7/-4-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-177-pyrazolo [3,4-d] pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-177-2-indolkarboxamid-dimaleát
A. /72-(4- {4-amino-1 -[1 -(177-4-imidazoly lmetyl)-4-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-177-2-indolkarboxamid-diacetát
N2-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3 -y 1] -2-metoxyfenyl} -1 -metyl-177-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), 177-4-imidazolkarbaldehyd (73 mg, 0,755 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (159 mg, 0,755 mmol) a ľadová kyselina octová (30 mg, 0,554 mmol) sa zmiešajú v 1,2-dichlóretáne (6 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc, na úpravu pH asi na 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahusťuje. Zvyšok sa najskôr purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (95:5:0,5 až 80:20:0,5) ako mobilnej fázy, potom purifikuje znovu preparatívnou HPLC s reverznou fázou s použitím zmesi acetonitril/voda (50 mM octan amónny pufer) ako mobilnej fázy, čím sa získa/V2-(4-{4-amino-l-[l-(177-4-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4í7jpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-177-2-indolkarboxamid-diacetát (170 mg, 49 %).
*H NMR (DMSO-dô) δ 1,90 (m, 8H), 2,20 (m, 4H), 2,99 (m, 2H), 3,47 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,67 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,31 (m, 5H), 7,54 (s, 1H), 7,58 (d, J = 8,43 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,95 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 8,14 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-stípec: Genesis, C18, 3 um, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): Rt = 1,97 minút, MH+ = 577,3.
734
B. jV2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-3-y 1} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid-dimaleát
V2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/lpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid-diacetát (170 mg, 0,244 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (25 ml) a pár kvapkách etanolu. Pridá sa kyselina maleínová (103 mg, 0,884 mmol) v horúcom etylacetáte (3 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 3 hodín a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa V2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4-imidazolylmetyl j-4-piperidyl]-1 //-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfenyl)-1 -rnetyl-l//-2-indolkarboxamid-dimaleát (153 mg, 76 %).
'H NMR (DMSO-d&)02,19 (m, 2H), 2,49 (m, 2H), 3,19 (m, 2H), 3,52 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,21 (s, 2H), 5,02 (m, 1H), 6,15 (s, 4H), 7,16 (m, 1H), 7,32 (m, 5H), 7,40 (s, 1H), 7,59 (d, J = 8,45 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 7,95 Hz, 1H), 7,98 (bs, III), 8,13 (d, J = 8,16 Hz, 1H), 8,27 (s. 1H), 9,44 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan PIPLC-stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): Rt = 1,98 minút, MH+ = 577,3.
Príklad 842
V2-(4- {4-amino-1 -[1 -(2-fluóretyl)-4-piperidylj-1 //-pyrazolo[3,4-ríjpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)- 1 -metyl-1 V-2-indolkarboxamid-dimaleát
A. V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-fluóretyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfeny 1)-1 -metyl-1 V-2-indolkarboxamid
N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-r/]pyrimidín-3 -y 1] -2-metoxyfenyl} -1 -metyl-l//-2-indolkarboxainid (250 mg, 0,503 mmol), l-bróm-2-fluoretán (47 pl, 0,629 mmol), uhličitan draselný (87 mg, 0,629 mmol) a jodid sodný (10 mg, 0,066 mmol) sa zmiešajú v DMF (3 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 80 °C cez noc, surová reakčná zmes sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou s použitím zmesi acetonitril/voda (50 mM pufer octanu amónneho) ako mobilnej fázy, čím sa získa V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-fluóretyl)-4-piperidyl]-l//735
-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3 -yl }-2-metoxy fenyl)-1 -metyl-1 Η-2-indolkarboxamid (221 mg,
%).
'H NMR (DMSO-d(081,91 (m, 2H), 2,26 (m, 4H), 2,66 (m, 1H), 2,73 (m, 1H), 3,05 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,61 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J = 8,46 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,95 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 8,14 Hz, 1H), 8,25 (s, 1H), 9,44 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): Rt = 2,17 minút, MH+ = 543,3.
B. H2-(4-{4-amino-l-[l-(2-fluóretyl)-4-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fenyl)-1 -metyl-1 Η-2-indolkarboxamid-dimaleát
H2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2-fluóretyľ)-4-piperidyl] -1 H-py razolo[3,4-í/]pyrimidín-3 -yl }-2-metoxyfenyl)-l-metyl-ΙΗ-2-indolkarboxamid (221 mg, 0,407 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (25 ml) a pár kvapkách etanolu. Pridá sa kyselina maleínová (94 mg, 0,814 mmol) v horúcom etylacetáte (3 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc, ale precipitát nevznikne. Organické rozpúšťadlo sa odstráni a pevný podiel sa trituruje etylacetátom a pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa H2-(4-{4-amino-l-[l-(2-fluóretyl)-4/piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyľ)-l-metyl-lH-2/indolkarboxamid-dimaleát (252 mg, 80 %).
lH NMR (DMSO-dé) δ 2,34 (m, 2H), 2,54 (m, 2H), 3,49-3,67 (m, 6H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,81 (m, 1H), 4,92 (m, 1H), 5,06 (m, 1H), 6,14 (s, 4H), 7,16 (m, 1H), 7,34 (m, 4H), 7,60 (d, J = 8,32 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,95 Hz, 1H), 8,14 (d, J = 8,15 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H), 9,45 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pFI 4,5), 0,8 ml/min): Rt = 2, 17 minút, MH+ = 543,3.
736
Príklad 843
N2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2,2-difluóretyl)-4-piperidyl] -1/7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-l -metyl- 1/7-2-indolkarboxaniid-dimaleát
A. M2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluóretyl)-4-piperidyl]-l/y-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1 -metyl-177-2-indo lkarboxamid
N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ť7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfeny 1} -1 -metyl-1/7-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), 2-bróm-l,l-difluóretán (91 mg, 0,629 mmol), uhličitan draselný (87 mg, 0,629 mmol) a jodid sodný (10 mg, 0,066 mmol) sa zmiešajú v DMF (3 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 80 °C cez noc, pričom podľa HPLC došlo len k 50 % konverzii. Teplota kúpeľa sa zníži na 55 °C a pridá sa ďalší 2-bróm1,1-difluóretán (0,1 ml). Po miešaní cez noc pri teplote 55 °C sa pridá ďalší 2-bróm-l,l-difluóretán (0,1 ml) a reakčná zmes sa mieša pri teplote 55 °C cez noc. Podľa HPLC takmer všetka východisková látka konvertovala na produkt. Surová reakčná zmes sa čistí preparatívnou FIPLC s reverznou fázou s použitím zmesi acetonitril/voda (50 mM octan amónny pufer) ako mobilnej fázy, čím sa získa M2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluóretyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid (227 mg, 81 %).
‘H NMR (DMSO-d6) δ 1,89 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,42 (m, 2H), 2,80 (m, 1H), 3,05 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,69 (m, 1H), 6,17 (t t, J = 55,81 Hz, J = 4,35 Hz, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,78 (d, J = 7, 94 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 8, 19 Hz, 1H), 8,25 (s, 1H), 9,44 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): Rt = 3,32 minút, MH+ = 561,3.
B. jV2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluóretyl)-4-piperidyl{-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid-dimaleát
N2-(4-{4-amino-1-[1-(2,2-difhióretyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid (227 mg, 0,405 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (25 ml). Pridá sa kyselina maleínová (94 mg, 0,810 mmol) v horúcom etylacetáte
737 (3 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc, pričom precipitát nevznikne, preto sa zmes mieša pri izbovej teplote ďalšie 4 dni, čím dôjde ku vzniku a usadzovaniu precipitátu na dne banky. Rozpúšťadlo sa dekantuje, pevný podiel sa premyje etylacetátom a suší, čím sa získa //2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluóretyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyl)-1-metyl-177-2-indolkarboxamid-dimaleát (220 mg, 68 %).
’H NMR (DMSO-dó) δ 2,05 (m, 2H), 2,40 (m, 2H), 2,84-3,32 (bm, 6H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,85 (m, 1H), 6,22 (s, 4H), 6,34 (t, J = 56,07 Hz, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,59 (d, J = 8,45 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 8,12 (d, J = 8,19 Hz, 1H), 8,28 (s, 1H), 9,45 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 gm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): Rt = 3, 32 minút, MH+ = 561,3.
Príklad 844
N2-{4-[4-amino-1 -(1 -ety 1-4-piperidy 1)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl- 1/7-2-indo lkarboxamid
N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl- 1/7-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), acetaldehyd (44 mg, 1,007 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (212 mg, 1,007 mmol) sa zmiešajú v 1,2-dichlóretáne (6 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou s použitím zmesi acetonitril/voda (50mM octan amónny pufer) ako mobilnej fázy, čím sa získa 7/2-{4-[4-amino-l-(l-etyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-1/7-2-indolkarboxamid (247 mg, 93 %).
‘H NMR (DMSO-d6) δ 1,04 ((t, J = 7,15 Hz, 3H), 1,92 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,25 (m, 2H), 2,40 (q, J = 7,15 Hz, 2H), 3,03 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,68 (m, 1H), 7,13 (m, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J = 8,00Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,95 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 8,15 Hz, 1H), 8,25 (s, 1H), 9,44 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 gm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): R, = 2, 08 minút, MH+ = 525,3.
738
Zlúčenina podľa príkladu 845 sa pripraví spôsobmi opísanými v príklade 844.
Príklad 845
A2-[4-(4-amino-l-{l-[(3-metyl-lN-4-pyrazolyl)metyl]-4-piperidyl}-lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrÍmidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-lN-2-indolkarboxamid-acetát
Výťažok: 187 mg, 63 % 'H NMR (DMSO-dô) 1,91 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 2,19 (m, 5H), 2,96 (m, 2H), 3,35 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,67 (m, 1H), 7,17 (m, 1H), 7,31 (m, 5H), 7,58 (d, J = 8,46 Hz, 1H), 7,70 (d. J = 7,94 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 8,15 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): Rt = 2,03 minút, MH+ = 591,3.
Príklad 846
A2-(4-{4-amino-l-[l-(3-furylmetyl)-4-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-lH-2-indolkarboxamid
Výťažok 233 mg, 80 % ‘H NMR (DMSO-de) δ 1,91 (m, 2H), 2,13-2,23 (m, 4H), 3,00 (m, 2H), 3,39 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,68 (m, 1H), 6,47 (s, 1 H), 7,31 (m, 4H), 7,60 (m, 3H), 7,70 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 8,05 Hz, 1 H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): Rt =2,37 minút, MH+ = 577,3.
739
Príklad 847
A2-{4-[4-amino-l-(l-tetrahydro-2//-4-pyranyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/lpyrimidm-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l //-2-indolkarboxamid
Reakcia sa vykonáva pri teplote 70 °C cez noc namiesto pri izbovej teplote cez noc podľa spôsobu opísaného v príklade 844.
Výťažok 176 mg, 71 %.
’H NMR (DMSO-d6) δ 1,46 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 2,20 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 3,07 (m, 3H), 3,27 (m, 2H), 3,91 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,67 (m, IH), 7,15 (m, IH), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J = 8,44 Hz, IH), 7,70 (d, J = 7,94 Hz, IH), 8,10 (d, J = 8,04 Hz, 1 H), 8,24 (s, IH), 9,44 (s, IH).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Stĺpec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): Rt = 2,08 minút, MH+ = 581,3.
Príklad 848
A2-(4- {4-amino-1 - [(1 -acetylpiperidín-4-yl)-piperidín-4-y 1]-1 //-pyrazolo [3,4-t/jpyrimidín-3-y 1} -2-metoxyfenyl)-1-metyl-1//-2-indolkarboxamid
Reakcia sa vykonáva pri teplote 70 °C cez noc namiesto pri izbovej teplote cez noc podľa spôsobu z príkladu 844.
Výťažok 223 mg, 71 %.
'H NMR (DMSO-dô) δ 1,28 (m, IH), 1,43 (m, IH), 1,75 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,99 (s, 3H), 2,19 (m, 2H), 2,34 (m, 2H), 2,54 (m, 2H), 3,01 (m, 3H), 3,83 (m, IH), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,38 (m, IH), 4,66 (m, IH), 7,15 (m, IH), 7,31 (m, 4H), 7,78 (d, J = 7,94 Hz, IH), 7,70 (d, J = 7,94 Hz, IH), 8,11 (d, J = 8,15 Hz, IH), 8,24 (s, IH), 9,44 (s, IH).
740
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x
4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min) :
R, = 1,97 minút, MH+= 622,3.
Príklad 849
A2-(4-{4-amino-l-[l-(4-pyridylmetyl)-4-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 Α-2-indolkarboxamid
Výťažok 57 mg, 18 %.
’H NMR (DMSO-dé) δ 1,91 (m, 2H), 2,28 (m, 4H), 3,95 (m, 2H), 3,59 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,71 (m, 1H), 7,17 (m, 1H), 7,34 (m, 6H), 7,59 (d, J = 8, 03Hz, 1H), 7,71 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 8,14 Hz, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,52 (d, J = 5,78 Hz, 2H), 9,44 (s, 1H).
LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan FIPLC-Stípec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30 % B/A až 95 % B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): Rt = 2,50 minút, MH+ = 588,3.
Príklad 850
A2-(4-(4-amino-l-[3-(4-metylpiperazino)propyl]-17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-3-yl} -2-metoxyfenyl)- 1 -metyl-1 Α-2-indolkarboxamid
A. l-(3-brómpropyl)-3-jód-177-pyrazolo[3,4-í7|pyrimidín-4-amín
Suspenzia 3-jód-lA-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-4-amínu (10,00 g, 38,31 mmol) v tetrahydrofuráne (150 ml) sa nechá reagovať s 3-bróm-l-propanolom (15,98 g, 114,93 mmol) a trifenylfosfinom (20,1 g, 76,62 mmol). Dietyl-azodikarboxylát (13,34 g, 76,62 mmol) sa pomaly pridá do reakčnej zmesi. Reakčná zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 30 minút, po ktorých sa ľadový' kúpeľ odstráni a zmes sa mieša po dobu 30 minút pri izbovej teplote. Reakčná zmes sa opatrne koncentruje a pridá sa etylacetát (200 ml), precipitát sa filtruje a filtrát sa koncentruje
741 do sucha. Surová zlúčenina sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím 100 % etylacetátu ako eluenta, čím sa získa 7,8 g (53 %) l-(3-brómpropyl)-3-jód-l//-pyrazolo [3,4-</|pyrimidín-4-amínu.
’H NMR (DMSO-d6,400 ΜΗζ) δ 8,230 (s, IH), 4,419-4,385 (t, 2H), 3,530-3,498 (t, 2H), 2,3702,304 (q, 2H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 08 Stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) R, 2,05 min (100 %), MH+ 422,9.
B. 3-jód-l-[3-(4-metylpiperazino)propyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín
Suspenzia l-(3-brómpropyl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (0,500 g,
1,31 mmol) v dimetylformamide (10 ml) sa nechá reagovať s 1-metylpiperazínom (0,157 g,
1,572 mmol) a trietylamínom (0,133 g, 1,31 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 70 °C po dobu 66,25 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Pridá sa dichlórmetán (15 ml) a 1 N kyselina chlorovodíková (20 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa premyje dichlórmetánom (100 ml), neutralizuje na pH 13 a potom extrahuje dichlórmetánom (250 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a zahusťuje za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím postupného gradienta; 20 % metanol v dichlórmetáne až 50 % metanol v dichlórmetáne v priebehu 55 minút na stĺpci 35 g ISCO, čím sa získa 0,238 g (45 %) čistého 3-jód-l-[3-(4-metylpiperazino)propyl]-1 //-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidín-4-amínu.
’H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 8,191 (s, IH), 4,308-4,273 (t, 2H), 2,262-2,228 (m, 10H), 1,944-1,877 (m, 2H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 Stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 0,75 min (100 %), MH+ 402,1.
C. /V2-(4-{4-amino-1 -[3-(4-metylpiperazino)propy 1]-1 //-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3-y 1} -2-metoxyfeny l)- 1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
Roztok 3-jód-l-[3-(4-metylpiperazino)propyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,188 g, 0,469 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (16 ml) sa nechá reagovať s V2-[2-metoxy742
-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidom (0,209 g, 0,516 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,033 g, 0,028 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,119 g, 1,13 mmol) vo vode (8 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 4,5 hodiny pri teplote 80 °C. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa etylacetát (200 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrs'va sa extrahuje etylacetátom (400 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím postupného gradientu 20 % metanolu v dichlórmetáne až 50 % metanolu v dichlórmetáne, čím sa získa 0,078 g (30 %) čistého /V2-(4-{4<.mino-l-[3-(4-metylpiperazino)propyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamidu.
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,442 (s, IH), 8,258 (s, IH), 8,122-8,1076 (d, IH, J = 8,16 Hz), 7,719-7,6991 (d, IH, J = 7,96 IIz), 7,6005-7,5793 (d, IH, J = 8,48 Hz), 7,349-7,294 (m, 4H), 7,172-7,135 (t, IH), 4,405-4,371 (m, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,958 (s, 3H), 3,291 (m, 2H), 2,5 (m, 3H), 2,452,337 (m, 5H), 2,30-2,10 (m, 3H), 2,022-2,005 (m, 2H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl 8 Stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) R( 2,05 min (100 %), MH+ 554,3.
Príklad 851
N2-{4-[4-amino-1 -(3 -morfolinopropyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl}-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
A. 3-jód-l-(3-morfolinopropyl)-l//-pyrazolo[3,4-ripyrimidín-4-amín
Suspenzia l-(3-brómpropyl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidín-4-amínu (0,500 g,
1,31 mmol) v dimetylformamide (10 ml) sa nechá reagovať s morfolínom (0,137 g,
1,572 mmol) a trietylamínom (0,133 g, 1,31 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 70 °C po dobu 66,25 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Pridá sa dichlórmetán (15 ml) a 1 N kyselina chlorovodíková (20 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa premyje dichlórmetánom (100 ml), vodná vrstva sa neutralizuje na pH 14, potom extrahuje dichlórmetánom (250 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a zahusťuje za zníže743 ného tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím postupného gradientu 10 % metanolu v dichlórmetáne až 50 % metanolu v dichlórmetáne v priebehu 58 minút na stĺpci 35 g ISCO, čím sa získa. 0,244 g (48 %) čistého 3-jód-l-(3-morfolinopr< ρ yl)- i A-pyrazolo [3,4-dJ pyrimidín-4-amínu.
*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,194 (s, 1H), 4,327-4,293 (t, 2H), 3,485-3,364 (m, 4H), 2,253-2,238 (m, 6H), 1,963-1,895 (m, 2H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 08 Stĺpec, 3 gm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 0,71 min (100 %), MH+ 389,0.
B. A2-{4-[4-amino-l-(3-morfolinopropyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-1 -metyl-ΙΑ-2-indolkarboxamid
Roztok 3-jód-l-(3-morfolinopropyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,244 g, 0,629 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (16 ml) sa nechá reagovať s V2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-lA-2-indolkarboxamidom (0,281 g, 0,692 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)paládiom (0,044 g, 0,038 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,160 g, 1,51 mmol) vo vode (8 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 4,5 hodiny pri teplote 80 °C. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa etylacetát (200 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (400 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom hi rečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím postupného gradientu 10 % metanolu v dichlórmciúne až 50 % metanolu v dichlórmetáne ako eluenta, čím sa získa 0,191 g (56%) čistého A2-{4-[4-amino-l-(3-morfolinopropyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl-1 Α-2-indolkarboxamidu.
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,440 (s, 1H), 8,260 (s, 1H), 8,1229-8,1026 (d, 1H, J = 8,12 Hz), 7,7184-7,6986 (d, 1H, J = 7,92 Hz), 7,5983-7,578 (d, 1H, J = 8,08 Hz), 7,345-7,290 (m, 4H), 7,172-7,133 (m, 1H), 4,421-4386 (m, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,958 (s, 3H), 3,521-3,500 (m, 4H), 2,349-2,314 (m, 6H), 2,035-2,001 (m, 2H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 Stĺpec, 3 gm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,05 min (100 %), MH+ 541,3.
744
Príklad 852 /72-(4- {4-amino-1 -[3-( 1 H-1 -imidazoly ljpropyl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-177-2-indolkarboxamid
A. l-[3-(177-l-Intidazolyl)propyl]-3-jód-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín
Suspenzia l-(3-brómpropyl)-3-jód-177-pyrazolo[3,4-c7|pyrimidín-4-amínu (0,500 g,
1,31 mmol) v dimetylformamide (10 ml) sa nechá reagovať s imidazolom (0,107 g,
1,572 mmol) a trietylamínom (0,133 g, 1,31 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 70 °C po dobu 25,5 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Pridá sa dichlórmetán (15 ml) a 1 N kyselina chlorovodíková (20 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa premyje dichlórmetánom (100 ml), vodná vrstva sa neutralizuje na pH 14, potom extrahuje dichlórmetánom (250 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a zahusťuje za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 10 % metanolu v dichlórmetáne ako eluenta, čím sa získa 0,086 g (18 %) čistého l-[3-(177-l-imidazolyl)propyl]-3-jód-177-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu.
‘H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,211 (s, 1H), 7,896 (s, 1H), 7,264 (s, 1H), 6,96 (s, 1H), 4,32-4,227 (m, 2H), 4,011-3,977 (m, 2H), 2,329-2,215 (m, 2H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 Stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) R, 0,46 min (100 %), MH+ 370,0.
B. /72-(4-{4-amino-l-[3-(177-l-imidazolyl)propyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1 -metyl-177-2-indolkarboxamid
Suspenzia l-[3-(177-l-imidazolyl)propyl]-3-jód-177-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu (0,086 g, 0,233 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (4 ml) sa nechá reagovať s 772-[2-metoxy4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-177-2-indolkarboxamidom (0,104 g, 0,256 mmol), tetrakis(lrifenylfosfin)paládiom (0,016 g. 0,014 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,059 g, 0,56 mmol) vo vode (2 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 24 hodín pri teplote 80 °C. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (25 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (100 ml). Spojené orga745 nické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím postupného gradientu 5 % metanolu v dichlórmetáne až 50 % metanolu v dichlórmetáne na 10 g stĺpci ISC.O, čím sa získa 0,06 g (49 %) čistého A'2-(4-{4-amino-l-[3-(l//-l-imidazolyl)propyl]-l//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-y 1} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 Η-2-indolkarboxam idu.
’H NMR MSO-dé, 400 MHz) δ 9,443 (s, 1H), 8,278 (s, 1H), 8,1324-8,1121 (d, 1H, J = 8,12 Hz), 7,744-7,699 (m, 2H), 7,6-7,579 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,365-7,283 (m, 5H), 7,172-7,135 (m, 1H), 6,939 (s, 1H), 4,36-4,326 (m, 2H), 4,079-4,019 (m, 5H), 3,964 (s, 3H), 2,3242,309 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 Stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) R, 2,25 min (100 %), MH+ 522, 3.
Príklad 853
N2-[4-(4-amino-1 -tetrahydro-1 H-3 -pyroly 1-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3 -y 1)-2-metoxyfenyl] -1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
A. 7erc-butyl-3-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-6/|pyrimidín-l-yl)-l-pyrolidínkarboxylát
Suspenzia 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (5,0 g, 19,15 mmol) v tetrahydrofuráne (100 ml) sa nechá reagovať s íerc-butyl-3-hydroxy-l- pyrolidínkarboxylátom (5,38 g, 28,73 mmol) a trifenylfosfínom (7,53 g, 28,73 mmol). Reakčná zmes sa ochladí na teplotu 0 °C v ľadovom kúpeli. Dietyl-azodikarboxylát (5,0 g, 28,73 mmol) sa pomaly pridá do reakčnej zmesi. Po 6 dňoch sa rozpúšťadlo odstráni za zníženého tlaku. Surový olej sa bez ďalšej analýzy použije priamo v nasledujúcej reakcii.
B. Hydrochlorid 3-jód-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4-</)pyrimidm-4-amínu
Suspenzia surového /erc-butyl-3-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/jpyrimidín-l-yl)-l-pyrolidínkarboxylátu v acetóne (100 ml) sa nechá reagovať s 6 N kyselinou chlorovodíkovou (50 ml). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 40 °C po dobu 15 hodín. Vzniknutý precipitát sa filtruje. Podľa LCMS obsahoval nečistoty. Reakčná zmes sa nechá stáť cez noc pri izbovej teplote za vzniku precipitátu, ktorý sa filtruje a premyje dietyléterom, čím sa získa 2,186 g
746 (31 %) čistého hydrochloridu 3-jód-1 -tetrahydro-1 H-3-pyrolyl-1 H-pyrazolo[3,4-<ľ]pyrimidín-4-amínu.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,8815 (s, III), 8,9923 (br, s, 1H), 8,4803 (s, 1H), 7,82 (br, s, 1H), 5,5908-5,5295 (m, 1H), 3,7131-3,6706 (m, 1H), 3,5590-3,5003 (m, 1H), 3,4466-3,4174 (m, 2H), 2,4592-2,4255 (m, 1H), 2,4064-2,3146 (m, 1 H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 Stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 1,09 min (100 %), MH+ 331,0.
C. H2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-lH-3-pyrolyl-lH-pyrazolo[3,4-/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-ΙΗ-2-indolkarboxamid
Suspenzia hydrochloridu 3-jód-1 -tetrahydro-1 H-3-pyrolyl-1 H-pyrazolo[3,4-ŕ/lpyrimidín-4-amínu (2,186 g, 5,96 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (50 ml) sa nechá reagovať s H2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l -metyl-ΙΗ-2-indolkarboxamidom (2,66 g, 6,56 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,413 g, 0,358 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (2,65 g, 25,03 mmol) vo vode (25 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 24 hodín pri teplote 80 °C. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Pridá sa dichlórmetán (100 ml) a IN hydroxid sodný (50 ml). Produkt vyprecipituje zvodnej vrstvy, ktorá sa zahusťuje za zníženého tlaku. Výsledný pevný podiel sa premyje veľkým množstvom dichlórmetánu a etylacetátu. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa 2,218 g (77%) čistého H2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-lH-3-pyrolyl-lH-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l -metyl-ΙΗ-2-indolkarboxamidu.
*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,443 (s, 1H), 8,256 (s, 1H), 8,1168-8,0965 (d, 1H, J = 8,12 Hz), 7,7181-7,6983 (d, 1H, J = 7,92 Hz), 7,598-7,5778 (d, 1H, J = 8,08 Hz), 7,349-7,291 (m, 4H), 7,171-7,132 (m, 1H), 5,332-5,313 (m, 1H), 4,041 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,224-3,058 (m, 3H), 2,926-2,910 (m, 1H), 2,213-2,158 (m, 2H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 Stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) R, 2,09 min (100 %), MH+ 483,3.
747
Príklad 854
N2-[4-(4-amino-1-{1-[(1 -metyl-1 //-2-imidazoly l)metyl]tetrahydro-1 H-3 -pyrolyl} -1 //-pyrazolo [3 ,4-í/] pyrimidín-3 -yl)-2-metoxyfenyl] -1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
Suspenzia Az2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l -metyl- l//-2-indolkarboxamidu (0,250 g, 0,518 mmol) v dichlóretáne (5 ml) sa nechá reagovať s 1-mety 1-2-imidazolkarboxaldehydom (0,115 g, 1,04 mmol) a triacetoxyborohydridom sodným (0,220 g, 1,04 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 18 hodín pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá hydroxid sodný (1 N, 15 ml) a zmes sa mieša po dobu 1 hodiny. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán. Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (200 mi). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 10% metanolu v dichlórmetáne (15 min), 15% metanolu v dichlórmetáne (15 min), 20 % metanolu v dichlórmetáne (20 min) a 50 % metanolu v dichlórmetáne (5 min) ako eluenta, čím sa získa 0,060 g (20%) čistého /V2-[4-(4-amino-l-{l-[(l-metyl-l//-2-imidazolyl)metyljtetrahydro-1 H-3 -pyrolyl} -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -y l)-2-metoxy fenyl]-1 -metyl-1H-2-indol-karboxamidu.
*H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ 9,446 (s, 1H), 8,249 (s, 1H), 8,1312-8,1108 (d, 1H, J = 8,16 Hz), 7,7207-7,7008 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,6023-7,5812 (d, 1H, J = 8,44 Hz), 7,356-7,293 (m, 4H), 7,174-7,120 (m, 2H), 6,822 (s, 1H), 5,425-5,391 (m, 1H), 4,044 (s, 3H), 3,962 (s, 3H), 3,693 (m, 2H), 3,651 (s, 3H), 2,86-2,797 (m, 3H), 2,368-2,323 (m, 2H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 Stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,34 min (100 %), MH+ 577,3.
Príklad 855
N2-{4- [4-amino-1 -(1 -izopropyltetrahydro-1 H-3 -pyrolyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ŕ/[pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-! -metyl-1 //-2-indolkarboxamíd
748
Suspenzia V2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-17/-3-pyrolyl-17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-l/ŕ-2-indolkarboxamidu (0,250 g, 0,518 mmol) v dichlóretáne (5 ml) sa nechá reagovať acetónom (1,96 g, 33,15 mmol) a triacctoxyborohydridom sodným (0,220 g, 1,04 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 18 hodín pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá hydroxid sodný (IN, 15 ml) a zmes sa mieša po dobu 1 hodiny. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán. Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (200 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 10 % metanolu v dichlórmetáne (15 min), 15% metanolu v dichlórmetáne (15 min), 20% metanolu v dichlórmetáne (20 min) a 50 % metanolu v dichlórmetáne (5 min) ako eluenta, čím sa získa 0,123 g (44 %) čistého V2-{4-[4-amino-l-(l-izopropyltetrahydro-177-3-pyrolyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidm-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,449 (s, IH), 8,265 (s, IH), 8,127-8,1068 (d, IH, J = 8,08 Hz), 7,7196-7,6999 (d, IH, J = 7,88 Hz), 7,60137,5803 (d, IH, J = 8, 4 Hz), 7,351-7,299 (m, 4H), 7,173-7,135 (m, IH), 5,394 (m, IH), 4,042 (s, 3H), 3,961 (s, 3H), 2,793 (m, 3H), 2,337 (m, 3H), 1,068 (br, s, 6H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 Stĺpec, 3 gm veľkosť častíc, 33 x 4,6 nim; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,38 min (100 %), MH+ 525,3.
Priklad 856 ľV2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-lŕŕ-pyrazolo[3,4-íflpyrimidín-3-y 1} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
Suspenzia V2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l/7-3-pyrolyl-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl- 177-2-indolkarboxamidu (0,250 g, 0,518 mmol) v dimetylformamide (5 ml) sa nechá reagovať s 2-brómetyI(metyl)éterom (0,079 g, 0,569 mmol) a uhličitanom draselným (0,143 g, 1,04 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 65 °C po dobu 18 hodín pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá voda (25 ml). Vzniknutý precipitát sa filtruje a suší v lyofilizátore. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu
749 s použitím zmesi 10 % metanolu v dichlórmetáne (15 min), 15 % metanolu v dichlórmetáne (15 min), 20 % metanolu v dichlórmetáne (20 min) a 50 % metanolu v dichlórmetáne (5 min) ako eluenta, čím sa získa 0,082 g (29%) čistého jV2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-1 //-3 -pyrolyl] -177-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl- 177-2-indolkarboxamidu.
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,447 (s, IH), 8,265 (s, IH), 8,1278-8,1075 (d, IH, J = 8,12 Hz), 7,7192-7,6993 (d, IH, J = 7,96 Hz), 7,5996-7,5799 (d, IH, J = 7,88 Hz), 7,349-7,295 (m, 4H), 7,172-7,133 (m, IH), 5,42 (m, IH), 4,042 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,479 (m, 2H), 3,2663,258 (m, 3H), 2,95-2,60 (m, 4H), 2,332 (m, 2H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 08 Stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 to 0,5 ml/min) R, 2,34 min (100 %), MH+ 541,3.
Príklad 857
A2-(4- (4-amino-1-(1-(17/-4-imidazoly lmetyl)tetrahydro-177-3-pyrolyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3 -yl) -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-177-2-indolkarboxamid
Suspenzia N2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-17/-3-pyrolyl-lT/-pyrazolo[3,4-í71pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-1-metyl-177-2-indolkarboxamidu (0,200 g, 0,415 mmol) v dichlóretáne (5 ml) sa nechá reagovať s 4-formylimidazolom (0,08 g, 0,83 mmol) a triacetoxyborohydridom sodným (0,176 g, 0,83 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 24 hodín pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá hydroxid sodný (1 N, 15 ml) a zmes sa mieša po dobu 1 hodiny. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán. Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (200 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 10 % metanolu v dichlórmetáne (20 min), 15 % metanolu v dichlórmetáne (10 min), 20 % metanolu v dichlórmetáne (10 min) a 50 % metanolu v dichlórmetáne (8 minút) ako eluenta, čím sa získa 0,074 g (25 %) čistého 772-(4- {4-ammo-l-[1 -(177-4-imidazolylmetyl)tetrahydro-177-3-pyroIyl]-177-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-y 1} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-177-2-indolkarboxamidu.
750 'H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 9,446 (s, IH), 8,252 (s, IH), 8,126-8,1082 (d, 1 H, J - 8.16 Hz), 7,7198-7,7 (d, IH, J = 7,92 Hz), 7,6-7,569 (m, 2H), 7,35-7,298 (m, 4H), 7,171-7,134 (m, IH), 6,946 (s, IH), 5,422-5,385 (m, IH), 4,043 (s, 3H), 3,961 (s, 3H), 3,691 (s, 2H), 3,1753,162 (m, 2H), 2,9-2,883 (m, 3H), 2,385-2,332 (m, 2H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 08 Stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) R, 2,13 min (100 %), MH+ 563,3.
Príklad 858 /V2-[4-(4-amino-l-{l-[(3-metyl-l//-4-pyrazolyI)metyl]tetrahydro-l//-3-pyrolyl}-l//-pyrazolo[3,4-7]pyrimidín-3-yl)-2 metoxyfenyl]-1-metyl-l//-2-indolkarboxamid
Suspenzia A2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyI]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,200 g, 0,415 mmol) v dichlóretáne (5 ml) sa nechá reagovať s 3-metyl-l//-pyrazol-4-karboxaldehydom (0,091 g, 0,83 mmol) a triacetoxyborohydridom sodným (0, 176 g, 0,83 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 24 hodín pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá hydroxid sodný (1 N, 15 ml) a zmes sa mieša po dobu 1 hodiny. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán. Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (100 ml) a etylacetátom (100 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 10 % metanolu v dichlórmetáne (15 min), 15 % metanolu v dichlórmetáne (10 min), 20 % metanolu v dichlórmetáne (10 min) a 50 % metanolu v dichlórmetáne (8 minút) ako eluenta, čím sa získa 0,106 g (44%) čistého A2-[4-(4-amino-l {l-[(3-metyl-l//4-pyrazo 1 yl )mety 1] tetrahydro -1 /7-3-py roly 1} -1 H-py razolo[3,4-ďjpyrimidín-3 -y l)-2-metoxyfenyl]-1 -metyl-1//-2-indolkarboxamidu.
lH NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,446 (s, III), 8,247 (s, IH), 8,1275-8,1071 (d, IH, J = 8,16 Hz), 7.72-7.7003 (d, IH, J = 7,96 Hz), 7,6004-7,5793 (d, IH, J = 8,44 Hz), 7,398-7.286 (m. 5H), 7,172-7,134 (m, IH), 5,379 (m, IH), 4,0443 (s, 3H), 3,962 (s, 3H), 3,492 (m, 2H), 3,1 (m. III), 2,75 (m. 3Π), 2,352-2,335 (m, 2H), 1,909 (s, 311);
751
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 08 Stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) R, 2,17 min (100 %), MH+ 577,3.
Príklad 859
A2-(4-{4-amino-l-[(37?)-l-metyitetrahydro-lN-3-pyrolyl]-lN-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
7/2-(4- {4-amino-1 -[(37?)-1 -metyltetrahydro-1Ν-3-pyrolylj-1 N-pyrazolo [3,4-c/jpyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z (5)-(-)-3-pyrolidinolu spôsobom, ktorý je podobný spôsobu opisnému pri príprave rac-A2-{4-[4-amino-l-(l-metyltetrahydro- 1N-3 -py roly 1)-1 N-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]fenyl} -5,7-dimetyI-1,3-benzoxazol-2-amín. Zlúčenina sa pripraví vo forme bielej pevnej látky (0,195 g, 53 %).
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 2,31-2,35 (m, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,70-2,77 (m, 3H), 3,05 (t, 1H), 5,40 (m, 1H), 6,80 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2H), 8,24 (s, 1H), 10,85 (s, 1H);
RP-HPLC Rt 11,090 minút, 99 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4, 5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm stĺpec); m/z 455 (MH+).
Príklad 860
A2-(4-{4-amino-l-[(35)-l-metyltetrahydro-lN-3-pyrolyl]-lN-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl} fenyl)-5,7-dimetyl-1,3 -benzoxazol-2-amín
A2-(4- {4-amino-1 -[(35)-1 -metyltetrahydro-1 H-3 -pyroly 1]-1 N-pyrazolo [3,4-<XJ py rimidí n-3-yl}fenyI)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z (7?)-(-)-3-pyrolidinolu spôsobom, ktorý' je podobný spôsobu opísanému pri príprave rac-A2-{4-[4-amino-l-(l-metyltetrahydro-lN-3-pyrolyl)-lN-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme bielej pevnej látky (0,126 g, 20 %).
752 ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 2,31-2,35 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 2,67-2,76 (m, 3H), 3,05 (t, IH), 5,40 (m, IH), 6,80 (s, IH). 7,11 (s, 111), 7,66 (d, 2H), 7,93 (d, 2H), 8,24 (s, IH), 10,84 (s, IH).
RP-HPLC Rt 11, 129 minút, 100 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3, 9 mm stĺpec); m/z 455 (MH+)·
Príklad 861
Rac-N2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2-metoxyety l)tetrahydro-1 //-3-pyrolyl]-17/-pyrazolo[3,4-r/)pyrimidín-3-yl}fenyl)-7-izopropyl-5-metyl-l,3-benzoxazol-2-amín rac-N2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2-metoxyetyl )tetrahydro-1 H- 3-py ro ly 1 ]-1 Tŕ-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl}fenyl)-7-ispropyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z rac-3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,515 mmol) a V2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yI)fenyl]-7-izopropyI-1,3-benzoxazol-2-amínu (0,244 g, 0,644 mmol) podľa spôsobu použitého na prípravu cN-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa pripraví vo forme belavej pevnej látky (0,067 g, 25 %).
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 1,361 (d, 6H), 2,30 (m, 2H), 2,66 (m, 2H), 2,76-2,83 (m, 3H), 3,17 (t, IH), 3,24 (s, 3H), 3,38 (m, IH), 3,45 (t, 2H), 5,37 (m, IH), 7,04 (d, IH), 7,18 (t, IH), 7,32 (d, 2H), 7,67 (d, 2H), 7,95 (d, 2H), 8,24 (s, IH), 10,88 (s, 1 H);
RP-HPLC R, 12,337 minút, 94 % čistota (5 % - 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C 18,300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 513 (MH+).
Príklad 861
Crí-etyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-yl)amino] fenyl}-1/7-pyrazolo[3,4-ríj pyrimidín-1 -yl)-1 -cyklohexánkarboxylát
753
3-jód-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidm-4-amín (0,52 g, 2,0 mmol), etyl-4-hydroxycyklohexánkarboxylát (0,806 ml, 5,0 mmol, trifenylfosfín (1,05 g, 4,0 mmol), dietylazodikarboxylát (0,628 ml, 4,0 mmol) sa suspendujú v tetrahydrofuráne (15 ml) a zmes sa mieša pri izbovej tep.ote pod jemným tlakom dusíka po dobu 48 hodín. Zmes sa zriedi vodou (50 ml) a extrahuje etylacetátom (3 x 50 ml). Organické frakcie sa spoja, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a koncentrujú. Zvyšok sa opatrne purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu (100 % etylacetát), čím sa získa etyl-4-(4-amino-5-jód-7A-pyrolo[3,4-J]pyrÍmidín-7-yl)-l-cyklohexánkarboxylát vo forme zmesi cis- a /ram-diastereoizomérov spoločne s trifenylfosfínoxidom. Repurifikáciou zmesi zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu deaktivovaného trietylamínom (0,5 % metanol/dichlórmetán vo forme eluenta) sa získa požadovaný c/k-etyl-4(4-amino-5-jód-7A-pyrolo[3,4-č/]pyrimidín-7-yl)-l-cyklohexánkarboxylát vo forme žltej pevnej látky (0,260 g, 0,625 mmol):
RP-HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5 μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 9,55 min; MS (MH)+ 416.
CA-etyl-4-(4-amino-5-jód-7A-pyrolo[3,4-í7]pyrímidín-7-yl)-l-cyklohexánkarboxylát (0,10 g, 0,24 mmol) sa zmieša s A-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínom (0,088 g, 0,24 mmol), uhličitanom sodným (0,064 g, 0,60 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)-paládiom (0) (0,014 g, 0,012 mmol), dimetyléterom etylénglykolu (2 ml) a vodou (1 ml) a zmes sa zahrieva pri teplote 85 °C v utesniteľnej Schlenkovej nádobe po dobu 14 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, zriedi vodou (10 ml) a extrahuje 10 % metanolom v dichlórmetáne (3 x 20 ml). Organické frakcie sa spoja, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a koncentrujú. Purifikáciou produktu zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu deaktivovaného trietylamínom (2,5 % metanol/dichlórmetán vo forme eluenta) sa získa zf?-etyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-(7jpyrimidín-l-yl)-l-cyklohexánkarboxylát vo forme bielej pevnej látky (0,040 g, 0,076 mmol);
RP-HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 12,63 min.
*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,92 (d, 2H), 7,64 (d, 2H), 7,11 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,66 (m, 1H), 4,10 (qt, 2H), 3,27 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,08 (m, 6H), 1,61 (m, 2H), 1,20 (t, 3H).
754
Príklad 862
Cz\y-metyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-tf]pyrimidín-l-yl)-l-cyklohexánkarboxylát
CE-etyl-4-(4-ammo-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-l-yl)-l-cyklohexánkarboxylát (0,030 g, 0,057 mmol), metoxid sodný (0,0033 g, 0,063 mmol) a metanol (2 ml) sa zmiešajú a zahrievajú v utesniteľnej Schlenkovej nádobe po dobu 48 hodín pri teplote 75 °C. Purifíkáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, R, 15,6 - 16,5 min) sa získa cŕs-metyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-l-yl)-l-cyklohexánkarboxylát vo forme bieleho prášku (0,010 g, 0,020 mmol):
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 11,82 min;
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,92 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,12 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,67 (m, 1H), 3,63 (s, 3H), 3,27 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,07 (m, 6H), 1,61 (m, 2H).
Príklad 863
CL--4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyI-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-1 -yl)-1 -cyklohexánkarboxy lová kyselina
Cw-etyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl)-l-cyklohexánkarboxylát (0,10 g, 0,19 mmol), vodný roztok hydroxidu sodného (1 M, 2 ml, 2 mmol) a metanol (2 ml) sa zmiešajú a zahrievajú pod chladičom pri teplote 70 °C po dobu 14 hodín. Zvyšok sa okyslí vodnou kyselinou chlorovodíkovou (3 M, 2 ml, 6 mmol) a extrahuje zmesou 10 % metanol/dichlórmetán (3 x 20 ml). Spojená organická frakcia sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a koncentruje. Purifíkáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri
755 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 8,8 - 10,9 min) sa získa cri-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl)-l-cyklohexánkarboxylová kyselina vo forme krémovo sfarbeného prášku (0,026 g, 0,052 mmol); RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri prietoku 1 ml/min s použitím stĺpca 5μ Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt9,03 min; MS (MH)+498.
Príklad 864
Czs-l-[4-(4-metylpiperazmo)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amín
4-Brómanilín (0,300 g, 1,74 mmol) a 2-chlórpyrimidín (0,200 g, 1,74 mmol) sa zahrievajú pri teplote 150 °C v 25 ml banke po dobu 2 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a purifíkáciou zvyšku preparatívnou HPLC (25 % -100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím stĺpca 8μ Hypersil HS 08,250 x 21 mm stĺpec, Rt 13,8 - 15,9 min) sa získa N-(4-brómfenyl)-N-(2-pyrimidinyl)amín vo forme žltej pevnej látky (0,135 g, 0,54 mmol);
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 11,08 min;
'H NMR (DMSO-ds, 400 MHz) δ 9,78 (s, IH), 8,50 (d, 2H), 7,76 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 6,87 (t, IH).
N-(4-Brómfenyl)-N-(2-pyrimidinyl)amm sa konvertuje na požadovanú zlúčeninu spôsobom, ktorý je podobný spôsobu opísanému pri príprave cw-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ef]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-etyl-l,3-tiazol-2-amínu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 % - 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 4,0 - 5,0 min) sa získa czs-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amín vo forme bieleho prášku (0,095 g, 0,196 mmol);
756
RP-HPLC (25 % - 100 % acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 5,38 min; MS (MH)+ 485.
Príklad 865
H2-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)-4-pyridyl]-lH-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1 //-2-indolkarboxamid-acetát
A. l-(2-ChIór-4-pyridyl)-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-ŕ(]pyrimidín-4-amín
Roztok 3-jód-lH-pyrazolo[3,4~c/]pyrimidín-4-ammu (4,12 g, 0,016 mol) v A/N-dimetylformamide (50 ml) sa nechá reagovať so 60 % hydridom sodným v oleji (0,75 g, 0,019 mol) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša po dobu 15 minút a pridá sa 2-chlór-4-nitropyridín (3,00 g, 0,019 mol). Zmes sa zahrieva pri teplote 100 °C po dobu 18 Lodín. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa filtruje, premyje A/N-dimetylformamidom (20 ml), potom mieša v etylacetáte (50 ml) po dobu 4 hodín. Pevný podiel sa filtruje a suší vo vákuu, čím sa získa l-(2-chlór-4-pyridyl)-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-(f]pyrimidín-4-amín (2,39 g, 0,009 mol) vo forme hnedej pevnej látky:
'H NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ)δ 8,52 (d, 1H), 8,43 (s, III), 8,40 (d, 1H), 8,25 (dd, 1H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,29 minút;
MS: MH+ 373.
B. A’2- {4-[4-amino-1 -(2-chlór-4-pyridyl)-1 H-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfeny 1} -1 -metyl-1 Η-2-indolkarboxamid
Suspenzia l-(2-chlór-4-pyridyl)-3-jód-lH-pyrazoio[3,4-í/)pyrimidín-4-amínu (0,95 g, 0,00256 mol) v dimetoxyetáne (30 ml) a vode (60 ml) sa nechá reagovať s H2-[2-metoxy-4-(4,4,5.5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-l-metyl-lH-2-indolkarboxamidom (1,14 g, 0,00281 mol), uhličitanom sodným (0,68 g, 0,00640 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,30 g. 0,00026 mol) pri teplote 80 °C po dobu 3 dní, pevný podiel sa filtruje a premyje vodou, trituruje etylacetátom (75 ml) po dobu 6 hodín, filtruje a premyje etylacetátom (20 ml). Pevný podiel sa potom trituruje metanolom (75 ml) po dobu 6 hodín a filtruje, premyje metanolom
757 (20 ml) a suší vo vákuu, čím sa získa surový 7/2-{4-[4-amino-l-(2-chlór-4-pyridyl)-l//pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-1//-2-indolkarboxamid (0,672 g, 0,00128 mol) vo forme hnedej pevnej látky:
’H NMR (DMSO-J6, 400 ΜΗζ) δ 9,48 (s, IH) 8,55-8,58 (m, 2H), 8,50 (s, IH), 8,44 (dd, IH), 8,21 (d, IH), 7,72 (d, IH), 7,60 (d, IH), 7,49 (d, IH), 7,43 (dd, IH), 7,31-7,38 (m, 2H), 7,16 (t, IH), 4,05 (s, 3H), 4,00 (s, IH);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, izokraticky pri 95 % po dobu 3 minút, 1 ml/min) Rt 12,70 minút;
MS: MH+ 525.
C. //2-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)-4-pyridyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fenyl)-1 //-2-indolkarboxamid-acetát
Suspenzia //2-{4-[4-amino-l-(2-chlór-4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,120 g, 0,00023 mol) v 1-metylpiperazíne (5 ml) sa zahrieva pri teplote 120 °C po dobu 5 dní. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa mieša v dietyléteri (25 ml) po dobu 4 hodín. Zmes sa filtruje, premyje dietyléterom (105 ml) a suší vo vákuu. Surová látka sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40 % izokraticky po dobu 5 minút, potom 40 % - 100 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 30 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa JV2-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)-4-pyridyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/Ipyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l//-2-indolkarboxamid-acetát (0,030 g, 0,00005 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 9,47 (s, IH), 8,44 (s, IH), 8,12 (d, IH), 7,77 (s, IH), 7,72 (d, IH), 7,68 (d, IH), 7,60 (d, IH), 7,30-7,37 (m, 3H), 7,26 (d, IH), 7,15 (t, IH), 4,06 (s, 3H), 3,503,58 (m, 4H), 2,38-2,46 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,91 (s, 3H);
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 15,33 minút;
MS: MH+ 575.
758
Príklad 866
N2-{4- [4-amino-1 -(2-morfolino-4-pyridyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidm-3 -y 1] -2-metoxyfenyl} -1 -metyl-177-2-indolkarboxamid
Suspenzia N2-{4-[4-amino-1 -(2-chlór-4-pyridyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l77-2-indolkarboxamidu (0,120 g, 0,00023 mol) a morfolínu (10 ml) sa zahrieva pri teplote 100 °C po dobu 6 dní. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa mieša vo vode (25 ml) po dobu 4 hodín. Zmes sa filtruje a surový pevný podiel sa čistí preparativnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 gm, 300 Á, 25 cm; 35 %-80 % acetonitril-0,050 M octan amónny v priebehu 20 minút, 21 ml/min), acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa V2-{4-[4-amino-l-(2-morfolino-4-pyridyl)-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-177-2-indolkarboxamid (0,048 g, 0,00008 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,48 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,27 (d, 1H), 8,18 (d, 1H), 7,82 (d, 1H), 7,74 (dd, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,46 (d, 1H), 7,41 (dd, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,34 (t, 1H), 7,16 (t, 1H), 4,05 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 3,72-3,78 (m, 4H), 3,49-3,56 (m, 4H);
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 minút, 1 ml/min) Rt 17,89 minút;
MS: MH+576.
Príklad 867 (5)-/V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
A. (7?)-7erc-butyl-3-hydroxy-l-piperidínkarboxylát
Zmes (7?)-3-hydroxy-piperidín-hydrochloridu (10 g, 0,073 mol), di-Zerc-butyldikarbonátu (20 g, 0,091 mol) a uhličitanu sodného (19 g, 0,182 mol) v dioxáne (80 ml) a vode (80 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 18 hodín. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Vodná vrstva sa extrahuje dietyléterom (2 x 200 ml).
759
Organická vrstva sa premyje soľankou a suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa číry olej (R)-íerc-butyl-3-hydroxy-l-piperidínkarboxylát (17,6 g, 0,087 mol). Surový produkt sa použije v nasledujúcej reakcii.
'H NMR (Chloroform-ď, 400 MHz) δ 3,76 (m, 1H), 3,67 (br, 1H), 3,55 (br, 1H), 2,92 (m, 2H), 2,75 (s, 1H), 1,85 (br, 1H), 1,72 (br, 1H), 1,46 (br, 11H). GC-MS: MH+ 202
B. (S)-7erc-butyl-3 -(4-amino-3 -j ód-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-1 -yl)-1 -piperidín-karboxylát
Do zmesi 3-jód-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (2 g, 0,0077 mol), (R)-ŕerc-butyl-3-hydroxy-1-piperidínkarboxylátu (2,3 g, 0,012 mol) a trifenylfosfinu (3 g, 0,012 mol) v tetrahydrofuráne (70 ml) sa pri teplote 0 °C pridá dietylazodikarboxylát (2 g, 0,012 mol). Zmes sa kvôli dotiahnutiu reakcie do konca mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 2 dní. Do zmesi sa pridá ďalší (R)-/erc-butyl-3-hydroxy-l-piperidínkarboxylát (0,62 g, 0,003 mol), trifenylfosfín (0,81 g, 0,012 mol) a dietylazodikarboxylát (0,6 g, 0,003 mol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka ďalších 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa surový (5)-foz'c-butyl-3-(4-anúno-3-jód-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát, ktorý sa surový použije v nasledujúcej reakcii.
RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 10,0 minút.
MS: MH+ 445.
C. Acetát (5)-3-jód-l-(3-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrirnidín-4-amínu
Do zmesi (S)-fôrc-butyl-3-(4-amino-3-jód-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)-lpiperidínkarboxylátu (3,4 g, 0,0077 mol) v acetóne (80ml) sa pri izbovej teplote pridá 6 N vodný roztok chlorovodíka (20 ml). Zmes sa mieša pri teplote 45 °C po dobu 4 hodín, potom pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Acetón sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa premyje toluénom (2 x 20 ml) a dichlórmetánom (2 x 20 ml). Vodná vrstva sa alkalizuje 5 N vodným roztokom hydroxidu sodného (25 ml) pri teplote 0 °C. Vodná vrstva sa koncentruje do sucha a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 gm, 250 x 21,1 mm; 2 %-30 % v priebehu 15 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa acetát (S)-3-jód-l-(3-piperidyl)-! A-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,75 g, 0,0019 mol).
760
RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,2 minút.
MS: MH+ 345.
D. (S)-3-jód-1 -[ 1 -(2-metoxyetyl)-3-piperidy 1]-1 //-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amín
Do zmesi acetátu (S)-3-jód-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-ammu (0,75 g, 0,0019 mol) a uhličitanu draselného (0,77 g, 0,00568mol) v //.//-dimetylformamide (30 ml) sa pridá 2-brómetyl(metyl)éter (0,27 g, 0,0019 mol) a jodid draselný (0,0016 g, 0,000095 mol) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša pri teplote 65 °C pod atmosférou dusíka po dobu 16 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a pridá sa 2-brómetyl(metyl)éter (0,27 g, 0,0019 mol) a jodid draselný (0,0016 g, 0,000095 mol). Z: es sa mieša pri teplote 65 °C pod atmosférou dusíka po dobu 4 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného (25 ml) a dichlórmetán (50 ml). Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (4 x 50 ml). Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 gm, 250 x 21,1 mm; 2 % - 30 % v priebehu 15 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa acetát (5)-3 -j ód-1 -[ 1 -(2-metoxyetyl)-3-piperidylj-17/-pyrazoIo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,64 g, 0,0014 mol).
RP-HPLC (Hypersil 08, 5 gm, 250 x 4,6 mm; 5 % - 85 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,9 minút.
MS: MH+ 403.
E. (S)-JV2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Zmes acetát (<S)-3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-4-amínu (0,64 g, 0,0014 mol), //-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-/V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,64 g, 0,00175 mol. 1,2 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,081 g, 0,00007 mol) a uhličitanu sodného (0,37 g, 0,0035 mol) v ΛζΛ-dimetylformamide (15 ml) a vode (7 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu (25 ml) a dichlórmetán (50 ml). Vodná vrstva sa extrahuje
761 dichlórmetánom (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú soľankou a sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku, čím sa získa hnedastý olej, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 2 % - 10 % metanol/dichlórmetán ako mobilnej fázy, čím sa získa (S)-/72-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidm-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l)3-benzoxazol-2-amín (0,60 g, 0,0012 mol).
’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,11 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,77 (br, 1H), 3,36 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 3,04 (br, 1H), 2,90 (br, 1H), 2,55 (br, 2H), 2,54 (br, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,02 (br, 3H), 1,80 (br, 1H), 1,70 (br, 1H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 11,9 minút.
MS:MH+513.
Príklad 868
C/s-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl} anilino)-l ,3-benzoxazol-5-karboxamid-triacetát
Do zmesi crí-2-(4- {4-amino-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]- 1/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}anilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitril-triacetátu (0,18 g, 0,00025 mol) v dioxáne (2 ml) sa pridá 2 N vodný roztok hydroxidu sodného (1,25 ml, 0,0025 mol) a vody (0,75 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2 minút pod atmosférou dusíka, potom sa pridá 30 % roztok peroxidu vodíka (0,2 ml). Zmes sa refluxuje po dobu 5 hodín, potom mieša pri izbovej teplote po dobu 18 hodín. Do zmesi sa pridá ďalší 30 % roztok peroxidu vodíka (0,2 ml), zmes sa refluxuje ďalších 6 hodín a mieša pri izbovej teplote po dobu 2 dní. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a kvôli udržaniu pH 7 sa pridá 5 % roztok kyseliny citrónovej. Vodná vrstva sa odstráni za zníženého tlaku a surový produkt sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5 % - 100 % v priebehu 25 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa crí-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lŕŕ-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}anilino)-l,3-benzoxazol-5-karboxamid-triacetát (0,11 g, 0,00015 mol).
Ί&2 'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,30 (s, IH), 8,15 (s, IH), 8,00 (m, 3H), 7,75 (m, IH), 7,70 (m, 2H), 7,60 (d, IH), 7,35 (br, IH), 4,80 (br, IH), 2,50 (br, 2H), 2,40 (br, 4H), 2,25 (br, 4H), 2,15 (s, 3H), 2,10 (br, 3H), 1,90 (s, 9H), 1,70 (br, 2H), 1,60 (br, 2H).
RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5 % - 95 % acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) R( 8,2 minút.
MS: MH+ 567.
Príklad 869
Al - {4-[4-amino-1 -(4-oxocyklohexyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidm-3 -y l]-2-metoxyfenyl }-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid
Roztok 2-fluór-4-trifluórmetyl-l-benzénkarbonylchloridu (0,87 g, 3,83 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) sa pridá do zmesi pyridínu (15 ml) a 4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)1 A-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-l-yl]-l-cyklohexanónu (1,00 g, 2,56 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) pri teplote 0 °C v priebehu 5 minút. Zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 10 minút a pri izbovej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán, dichlórmetánová vrstva sa premyje nasýteným vodným roztokom chloridu amónneho (2x) a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, suší nad síranom horečnatým, filtruje a zahusťuje za zníženého tlaku, čím sa získa surový produkt, ktorý sa čistí
763 zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi systému Isco, čím sa získa
Ml - {4-[4-amino-1 -(4-oxocyklohexyl)-1 M-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl }-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,95 g, 1,76 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
(m, 2H), 2,47 (m, 4H), 2,17 (m, 2H);
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0, 05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 9,23 minút. MS: MiH+ 543.
Príklad 870
Cis-Nl - {4-[4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1 //-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl] -2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid; a
Príklad 871
Trans-Nl-{4-[4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)- l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid
764
Morfolín (0,08 ml, 0,93 mmol) sa pridá do zmesi ;Vl-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-l/7-pyrazolo[3,4-č7jpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,42 g, 0,78 mmol) a octovej kyseliny (0,11 ml, 1,86 mmol) v dichlóretáne (25 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 10 minút. Do zmesi sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (0,23 g, 1,09 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc, pridá sa voda (6 ml), potom uhličitan sodný (0,38 g, 4,53 mmol). Zmes sa mieša po dobu 1 hodiny a organická vrstva sa oddelí. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (20 ml), spojené organické podiely sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku, čím sa získa surový produkt, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi systému Isco, čím sa získa c75-Vl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-l//-pyrazoIo[3,4-c7jpyrimidín-3-ylJ-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,23 g, 0,37 mmol) a írúv;.v-Wl-{4-[4-amÍno-l-(4-morfolinocyklohexyl)-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-tri fluórmetylbenzamid (0,09 g, 0,14 mmol) vo forme bielych pevných látok.
Údaje pre cw-Wl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid:
‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,91 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,24 (s, IH), 8,00 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,33 (s, IH), 7,30 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 4,83 (m, IH), 3,94 (s, 3H), 3,62 (br, 4H), 1,57-2,55 (m, 10H); MS: MH+ 614.
Údaje pre Zrau5-Vl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid:
'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,90 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,24 (s, IH), 7,99 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,32 (s, IH), 7,29 (s, IH), 4,67 (m, IH), 3,94 (s, 3H), 3,59 (br, 4H), 1,482,69 (m, 10H); MS:MH+614.
Príklad 872
Czs-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoát; a
765
Príklad 873
7ra«5'-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-177-pyrazolo[3.4-ď)pyrimÍdm-l-yl]cyklohexyl}arnino)propanoát
Podobným spôsobom, ako je spôsob prípravy c/5-/72-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo [3,4-z/Jpyrimidín-3 -y 1] -2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu a /ra«s-/Vl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-17/-pyrazolo[3,4-ŕ7|pyrimidín-3-yl]-2-nietoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluór-metylbenzamidu, sa pripraví rá-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluór-metylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-l-yljcyklohexyl} aminojpropanoát a /ra«í-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluór-metylbenzoyl]amino} -3 -metoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-t7]pyrimidín-1 -yl]cyklohexyl} aminojpropanoát vo forme bielych pevných látok.
Údaje pre c«-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoát:
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,37 (m, 1H), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,76 (m, 2H), 2,32 (m, 2H), 1,88 (m, 2H), 1,67 (m, 4H), 1,16 (t, 3H);
766
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 7,92 minút. MS: MH+ 644.
Údaje pre /ra«j-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluónnetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-/]pyrimidín-l-yl]cykIohexyl}amino)propanoát:
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H). 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,68 (m, 1H), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,82 (m, 2H), 2,46 (m, 5H), 1,91-2,07 (m, 6H), 1,18 (t, 3H);
RP-IIPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm, 25 % - 100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 7,69 minút. MS: MH+ 644.
Príklad 874 jVl-[4-(4-amino-l-trityl-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid
Zmes 3-jód-l-trityl-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,10 g, 0,19 mmol), Hl-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,13 g, 0,29 mmol), tetrakis(trifenylfos-fin)paládia (0,01 g, 0,01 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,06 mg, 0,48 mmol) vo vode (2 ml) a dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) sa zahrieva pri teplote 85 °C cez noc. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku, ku zvyšku sa pridá voda a zmes sa extrahuje etylacetátom (3x). Spojené organické podiely sa premyjú nasýteným vodným roztokom chloridu sodného roztok, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a
767 zahusťujú sa, čím sa získa hnedý pevný podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím systému Isco, čím sa získa Al-[4-(4-amino-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-eŕ]pyrimidm-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,12 g, 0,17 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
’H NMR (DMSO-d6,400 ΜΗζ)δ 9,89 (dd, IH), 8,25 (d, IH), 8,28 (s, IH), 8,00 (t, IH), 7,94 (s, IH), 7,88 (d, IH), 7,73 (d, IH), 7,24 (m, 15H), 3,90 (s, 3H); MS: MH+ 689.
Príklad 875
Czv-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-l/7-pyrazolo [3,4-rijpyrimidín-1 -yljcyklohexyl} amino)propánová kyselina
Zmes cw-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-íf]pyrimÍdín-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoátu (0,23 g, 0,36 mmol), _p-dioxánu (15 ml), hydroxidu draselného (0,10 g, 1,81 mmol) a vody (1,5 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 3 hodín. Rozpúšťadlá sa zahusťujú a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa czA3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl}amino)propánová kyselina (0,11 g, 0,18 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
76S 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 6,89 (br, 2H), 4,79 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 2,463,00 (m, 7H), 2,29 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,80 (m, 2H);
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl 8, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 6,06 minút. MS: MH+ 616.
Príklad 876
T'ra/75-3-({4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[2-metoxy-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}fenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yljcyklohexyl}amino)propánová kyselina
Zmes traní-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl}ammo)propanoátu (0,04 g, 0,06 mmol), /?-dioxánu (4 ml), hydroxidu draselného (0,02 g, 0,31 mmol) a stopových množstiev metanolu a vody (0,4 ml) sa zahrieva pri teplote 80 °C po dobu 1 hodiny. Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc a pri teplote 80 °C po dobu 4 hodín. Rozpúšťadlá sa zahusťujú a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa ŕra/w-3-({4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[2-metoxy-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}fenyl)-lŕ/-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl}amino)propánová kyselina (0,04 g, 0,06 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
'H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,72 (s, 1H), 8,61 (d, IM, 8,28 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,61 (s,
1H), 7,53 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 4,72 (m, 1H). 4,20 (s, 3H), 4,05 (s. 3H), 1,44-3,61 (m, 13H):
769
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 6,36 minút. MS: MH+ 628.
Príklad 877
Al-[4-(4-amino-lA-pyrazolo[3,4-í/Jpyrimidin-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid
Zmes Al -[4-(4-amino-1 -trityl-1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (2,10 g, 1,75 mmol), 6 N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkovej (10 ml),/?-dioxánu (10 ml) a etanolu (8 ml) sa zahrieva pri teplote 50 °C po dobu 6 hodín. Zmes sa filtruje a pevný podiel sa premyje etanolom, suší vo vákuovej sušiarni cez víkend a purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu, čím sa získa Al-[4-(4-amino-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,35 g, 0,78 mmol). Filtrát sa koncentruje a purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu a preparatívnou HPLC, čím sa získa rovnaký produkt Al-[4-(4-amino-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetyl-benzamid (0,67 g, 1,51 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 13,58 (s, IH), 9,90 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,23 (s, IH), 8,05 (t, IH), 7,90 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,36 (s, IH), 7,24 (d, IH), 3,94 (s, 3H); MS: MH+ 447.
Príklad 878
Al-[4-(4-amino-l-tetrahydro-2A-4-pyranyl-lA-pyrazolo[3,4-íŕjpyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid
770
Dietyl-azodikarboxylát (0,07 ml, 0,45 mmol) sa pridá do zmesi Vl-[4-(4-amino-l/7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluór-metylbenzamidu (0,10 g, 0,22 mmol), trifenylfosfínu (0,12 g, 0,45 mmol) a tetrahydro-4/7-pyrán-4-olu (0,04 g, 0,34 mmol) v tetrahydrofuráne (5 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa tetrahydro-4//-pyrán-4-ol (0,01 g, 0,11 mmol), trifenylfosfín (0,04 g, 0,15 mmol) a dietylazodikarboxylát (0,02 ml, 0,15 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 5 hodín. Rozpúšťadlá sa zahusťujú a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa Vl-[4-(4-amino-1 -tetrahydro-2//-4-pyranyl-1 //-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl)-2-metoxy fenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,03 g, 0,06 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
'H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,91 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,25 (s, IH), 8,00 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,34 (s, IH), 7,31 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 4,95 (m, IH), 4,02 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,56 (t, 2H), 2,22 (m, 2H), 1,89 (m, 2H); MS: MH+ 531.
Príklad 879
Vl-{4-[4-amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid
771
A. 4-(4-amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl)-2-cyklopentén-l-ol
Zmes tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,04 g, 0,03 mmol), 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amínu (0,30 g, 1,14 mmol) a dimetylsulfoxidu (3 ml) sa mieša pri izbovej teplote v tme po dobu 2 minút a ochladí na teplotu 0 °C. Do zmesi pri teplote 0 °C sa pridá roztok 2,4a-dihydro-la//-cyklopenta[ó]oxirénu (0,14 g, 1,72 mmol) v tetrahydrofuráne (3 ml) a zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 3 hodín. Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc a purifikuje preparatívnou HPLC, čím sa získa 4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl)-2-cyklopentén-l-ol (0,24 g, 0,70 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) R, 4,23 minút. MS: MH+ 344.
B. Ml-{4-[4-amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid
Zmes 4-(4-amino-3-jód-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-1 -yl)-2-cyklopentén-1 -olu (0.12 g, 0,35 mmol), Ml-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,23 g, 0,53 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,02 g, 0,02 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,11 g, 0,88 mmol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (6 ml) a vody (3 ml) pri teplote 85 °C po dobu 6 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa Ml-{4-[4-amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,18 g, 0,34 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
772 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8.31 (d, 1H), 8,26 (s, 1H). 8,00 (t. 1H), 7,88 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 6,09 (d, 1H), 5,93 (d. 1H), 5,76 (m, 1H), 5,31 (m, 1H), 4,74 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,84 (m, 1H), 2,02 (m, 1H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 8,50 minút. MS:
MH+ 529.
Príklad 880
Al-{4-[4-amino-l-(3-hydroxycyklopentyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfeny 1} -2-fluór-4-trifluórmety lbenzamid
Zmes Al-{4-[4-amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,10 g, 0,19 mmol) a 10% paládia na aktívnom uhlí (0,03 g) v etanole (10 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou vodíka cez noc. Zmes sa filtruje a filtrát sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa Al-{4-[4-amino-l-(3-hydroxycyklopentyl)-lA-pyrazolo[3,4-í7Jpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluór-metylbenzamid (0,07 g, 0,13 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
'H NMR (DMSO-d, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 5,17 (m, 1H), 4,97 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 1,79-2,41 (m, 6H); MS: MH+ 531.
773
Príklad 881
4-(4-Amino-3-{4-[(l//-2-indolylkarbonyl)amino]-3-metoxyfenyl}-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-1 -yl)-hexahydropyridínium-acetát
Oxalylchiorid (0,06 ml, 0,60 mmol) sa pridá do roztoku indol-2-karboxylovej kyseliny (0,88 g, 0,546 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) a tetrahydrofuráne (5 ml) pri teplote 0 °C, potom sa pridá Λζ/V-dimetylforamid (3 kvapky z 0,1 ml striekačky) a zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 10 minút a pri izbovej teplote po dobu 20 minút. Rozpúšťadlá a prebytok činidiel sa zahusťujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa prevedie do dichlórmetánu (2 ml) a výsledný roztok (1,25 ml) sa pridá do roztoku fórc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (0,12 g, 0,27 mmol) a pyridínu (0,4 ml) v dichlórmetáne (1 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2 hodín. Pridá sa trifluóroctová kyselina (1 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 2 hodín. Rozpúšťadlá sa zahusťujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa 4-(4-amino-3-{4[(l//-2-indolylkarbonyl)amino]-3-metoxyfenyl}-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl)hexahydropyridínium-acetát (0,07 g, 0,14 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
‘H NMR (DMSO-de, 400 ΜΗζ) δ 11,85 (br, IH), 9,45 (s, IH), 8,24 (d, IH), 8,12 (d, IH), 7,68 (d, IH), 7,48 (d, IH), 7,40 (s, IH), 7,35 (s, IH), 7,30 (d, IH), 7,24 (t, IH), 7,09 (t. IH), 4,77 (m, IH), 3,97 (s, 3H), 3,11 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,84 (m, 2H); MS: MH+483.
774
Príklad 882 - 902
Na prípravu zlúčenín podľa príkladov 882 - 902 sa použije rovnaký spôsob, ako pri pri pravé 4-(4-amino-3-{4-[(1 H-2-indolylkarbonyl)amino]-3-metoxyfenyl}-1 H-pyrazolo[3,4-djpy rimidín-1 -yl)hexahydropyridínium-acetátu (Príklad 881)
Štruktúra MS: MH+ HPLC Rt (min) (Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Pr. č.
p JL _ A ýn ň A 7 ° Oľ'« Ao- ’t '“•N* 567 6,97 882
rO oA A? Λ- Am* 486 5,89 883
775
ý? ° Λ- A* 497 6,28 884
z Vn ΆΓ ° Ή Λ'6 513 5,61 885
aV\i w/ ^° A* 497 6,39 886
θγ-Α° w A- o 'N* 512 6,22 887
776
Ή j*/ ty N o C d rs Λ Q 483 5,73 888
ty / n*-4 äP 5 1 ^O“ Ň ty o <N· 513 7,78 889
F p ° ’íP'Ta •P'n* b 501 8,23 890
cr y-N θ n ‘‘yd q íýQ ^° 0 517 8,7 891
777
_,α CX duy° Ϊ J 9 o ‘—N* 517 8,73 892
\ ^.0 y-n Q F* O vi 0 513 7,83 893
b \X ° -M X b 511 9,07 894
S' t K.-4 O O % x '“N* 497 8,37 895
778
75, r <u ° <Cr4 Ô ľ r 0 528 7,9 896
oj ° aP λ n •-ι/ 559 9,5 897
s° ľď° όί Λ°- x* 589 7,45 898
O../ X? CZ ox ví 0 561 4,52 899
779
Príklad 903
4-[4-Amino-3-(4- {[(1 -etyl-1 W-2-indolyl)karbony]]amino} -3-metoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-l-yl]hexahydropyridínium-acetát
780
Do roztoku A2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-17/-2-indolkarboxamidu (0,08 g, 0,14 mmol) v Α,Λ-dimetylforamide (1,0 ml) pri teplote 0 °C sa pridá hydrid sodný (60 % suspenzia v minerálnom oleji) (0,006 g, 0,15 mmol). Zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 10 minút a pri izbovej teplote po dobu 20 minút. Pridá sa roztok etyljodidu (0,02 g, 0,14 mmol) v N,N-dimetylforamide (0,5 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa etyljodid (0,01 g, 0,07 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa trifluóroctová kyselina (3 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 24 hodín. Rozpúšťadlá a prebytok činidiel sa zahusťuje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa 4-[4-amino-3-(4-{[(l-etyl-l//-2-indoly)karbonyl]amino}-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-l-yl]hexahydropyridínium-acetát (0,05 g, 0,09 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
'H NMR (DMSO-dô, 400MHz) δ 9,43 (s, IH), 8,27 (s, IH), 8,14 (d, IH), 7,71 (d, IH), 7,61 (d, IH), 7,34 (s, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,15 (t, IH), 4,96 (m, IH), 4,62 (q, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,00 (m, 2H), 2,28 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,33 (t, 3H); MS: MH+ 511.
Príklad 904 - 908
Na prípravu zlúčenín podľa príkladov 904 - 908 sa použije rovnaký spôsob prípravy, ako bol použitý na prípravu 4-[4-amino-3-(4-{[(l-etyl-l//-2-indolyl)karbonyl]amino}-3-metoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-l-yl]hexahydropyridínium-acetátu (Príklad 903).
781
Štruktúra MS: MH+ HPLC R, (min) (Hypersil C18, 5 gm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Pr. č.
p M 2 0 523 9,12 904
oj* o A? A kN^N ° 0 540 6,03 905
± r ° V$ X 0 555 5,30 906
782
P Λ Yv Á Λ SN Y Ô 627 6,55 907
, Y- AC ° 1 ó? Λ0 568 7,33 908
Príklad 909
7V2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-(7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-5-hydroxy-1/7-2-indolkarboxamid-acetát
Zmes yV2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-5-(benzyloxy)-l//-2-indolkarboxamidu (0,08 g, 0,14 mmol), 10 % paládia na aktívnom uhlí (0,03 g) a trifluóroctovej kyseliny (1 kvapka) v etanole (12 ml) a tetrahydrofuráne (12 ml) sa hydrogenuje pod atmosférou vodíka cez noc. Zmes sa filtruje a filtrát sa čistí preparatívnou
783
HPLC, čím sa získa 7V2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-ŕ7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-5-hydroxy-177-2-indolkarboxamid-acetát (0,02 g, 0,03 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,55 (s, 1H), 9,29 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,18 (d, 1H), 7,31 (m, 3H), 7,18 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,78 (dd, 1H), 5,06 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,44 (m, 2H), 3,17 (m, 2H), 2,39 (m, 2H), 2,11 (m, 2H), 1,91 (s, 3H); MS: MH+ 499.
Príklad 910
7V2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-4-hydroxy-1 //-2-indolkarboxamid-acetát
Na prípravu JV2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-4-hydroxy-177-2-indolkarboxamid-acetátu sa použije rovnaký spôsob prípravy, ako bol použitý na prípravu N2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í(]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-5-hydroxy-l//-2-indolkarboxamid-acetátu.
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 gm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 4,60 minút. MS: MH+ 499.
Príklad 911
N2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-fi(]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-7-amino-l//2-indolkarboxamid-acetát
784
νη2+
Ο
Hydrosiričitan sodný (0,07 g, 0,41 mmol) sa pridá do horúceho roztoku V2-4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-y l]-2-metoxyfenyl-7-nitro-l//-2-indolkarboxamid-acetátu (0,04 g, 0,07 mmol) vo vode (2 ml) a etanole (2 ml). Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu, pridá sa jedna kvapka koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej a zmes sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa V2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ríjpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfcnyl-7-amino-l//-2-indolkarboxamid-acetát (0,004 g, 0,01 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0, 05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 6,60 minút. MS: MH* 498.
Príklad 912
V3-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-1/7-pyr ’Zolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-177-3-indolkarboxamid-acetát
O
785
A. A3-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-lA-3-indolkarboxamid
Do roztoku indol-3-karboxylovej kyseliny (0,12 g, 0,72 mmol) v dichlórmetáne (4 ml) a tetrahydrofuráne (3 ml) pri teplote 0 °C sa pridá oxalylchlorid (0,07 ml, 0,79 mmol), potom sa pridá A,A-dimetylforamid (3 kvapky z 0,1 ml striekačky) a zmes sa mieša pri teplote 0 °C po dobu 10 minút a pri izbovej teplote po dobu 20 minút. Rozpúšťadlá a prebytok činidiel sa zahusťuje za zníženého tlaku. Zvyšok sa prevedie do dichlórmetánu (2 ml) a výsledný roztok (1,5 ml) sa pridá do roztoku 2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilínu (0,09 g, 0,36 mmol) a pyridínu (1 ml) v dichlórmetáne (2 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa roztok chloridu kyseliny v dichlórmetáne (0,3 ml) a zmes sa mieša cez noc, potom sa pridá voda (1 kvapka). Prchavé zložky sa zahusťujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát, vodná vrstva sa separuje a extrahuje etylacetátom. Organické extrakty sa spoja a premyjú nasýteným vodným roztokom chloridu sodného a sušia nad síranom horečnatým. Zmes sa filtruje a rozpúšťadlo z filtrátu sa zahusťuje, čím sa získa surový podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi «-heptán:etylacetát (2/1) ako mobilnej fázy, čím sa získa A3-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l Α-3-indolkarboxamid (0,11 g, 0,28 mmol) vo forme bielej pevnej látky :
’H NMR (CDCb, 400 MHz) δ 8,65 (m, 3H), 8,13 (d, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,50 (m, 2H), 7,33 (m, 3H), 4,02 (s, 3H), 1,36 (s, 12H); MS: MH+ 393.
B. A3-4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-1H-3-indolkarboxamid-acetát
Zmes N3 -[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl] -1H-3indolkarboxamidu (0,11 g, 0,28 mmol), hydrochloridu 3-jód-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amínu (0,10 g, 0,27 mmol), tetrakis(trifenyl-fosfin)paládia (0,02 g, 0,02 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,13 g, 1,07 mmol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 85 °C cez noc pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa A3-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-l Α-3-indolkarboxamid-acetát (0,09 g, 0,16 mmol) vo forme bielej pevnej látky:
786
Ή NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 11,83 (br, 1H), 8,92 (s, 1H), 8,31 (m, 3H), 8,14 (dd, 1H), 7,50 (dd, 1H), 7,31 (m, 2H), 7,20 (m, 2H), 4,82 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 2,73 (m, 2H), 2,15 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,88 (m, 2H); MS: MH* 483.
Príklad 913
V4-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-l//-4-índolkarboxamid-acetát
Na prípravu V4-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-l//-4-indolkarboxamid-acetátu sa použije rovnaký spôsob prípravy, ako bol použitý pri príprave V3-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-l//-3-indolkarboxamidacetátu.
RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250 x 4,6 mm; 25 % - 100 % acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 minút, 1 ml/min) Rt 4,80 minút. MS: MH+ 483.
Príklad 914
7ran.?-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l.ŕ/-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
A. 1-Metyl-l//-2-indolkarbonylchlorid
787
Suspenzia l-metylindol-2-karboxylovej kyseliny (9,87 g, 56,4 mmol) v dichlórmetáne (150 ml) sa nechá reagovať s oxalylchloridom (8,58 g, 67,63 mmol), pridá sa DMF (0,2 ml). Potom sa vytratí intenzívny priebeh reakcie. Zmes sa mieša pri izbovej teplote po dobu 4 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, Čím sa získa l-metyl-l//-2-indolkarbonylchlorid (10,69 g, 98 %) vo forme svetlo žltej pevnej látky.
‘H NMR (CDC13, 400 MHz) δ 7,70 (d, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,44 (t, 1H), 7,35 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 3,98 (s, 3H).
B. /V2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l -metyl-l//-2-indolkarboxamid
Do roztoku obsahujúceho l-metyl-l//-2-indolkarbonylchlorid (5,44 g, 0,0281 mol) a 2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilín (7,00 g, 0,0281 mol) v bezvodom dichlórmetáne (150 ml) sa po kvapkách pri teplote 0 °C pridá V-etyl-AjAr-diizopropylamín (4,9 ml, 0,0309 mol) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka po dobu 18 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi vodu (150 ml) a etylacetát (150 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi etylacetát/n-heptán (1:6) ako mobilnej fázy, čím sa získa 7V2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)feny 1]-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid (8,0 g, 0,0197 mol) vo forme bielej pevnej látky.
’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,35 (s, 1H), 8,03 (d, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,33 (m, 3H), 7,29 (s, 1H), 7,14 (t, 1H), 4,02 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 1,31 (s, 12H). TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf 0,44.
C. /ra«5-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
Suspenzia /ra«s-3-jód-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-c/jpyrimidín-4-amínu (0,100 g, 0,227 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (8 ml) sa nechá reagovať s 7V2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidom (0,097g, 0,238 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)paládiom (0,016g, 0,014 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,057g, 0,538 mmol) vo vode (4 ml). Reakčná zmes sa mieša po dobu 21,5 hodiny pri teplote 80 °C, precipitát sa filtruje a organická vrstva sa zahusťuje za zníženého
788 tlaku. Pridá sa dichlórmetán (15 ml) a vrstvy sa oddelia. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (200 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahusťujú sa za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím zmesi 10% metanolu v dichlórmetáne až 50% metanolu v dichlórmetáne v krokovom gradiente 16x ISCO CombiFlash, čím sa získa 0,083 g (68 %) trans-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-mety 1-1 Ν-2-indolkarboxamidu.
'H NMR (dô-DMSO) δ 9,4316 (s, 1H), 8,2427 (s, 1H), 8,1207-8,1003 (d, 1H, J = 8,16 Hz), 7,7173-7,6974 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,5979-7,5769 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,3507-7,2758 (m, 4H), 7,1695-7,1321 (t, 1H), 4,6893-4,6324 (m, 1H), 4,0400 (s, 3H), 3,9571 (s, 3H), 2,5 (m, 3H), 2,4055-2,3279 (m, 5H), 2,1606 (s, 3H), 2,1094-1,9367 (m, 6H), 1,5214-1,4624 (m, 2H);
LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 08 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amónny vo vode až 95 % acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) R, 2,12 min (100 %), M+ 594,3.
Príklad 915
A2-{4-[4-amino-1-(2-amino-4-pyridyl)-1 N-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl1 -metyl-ΙΝ-2-indolkarboxamid
Príklad 916
A2-(4-{4-amino-l-[2-(metylamino)-4-pyridyl]-lN-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfeny 1)-1 -metyl-1 Ν-2-indolkarboxami d
Príklad 917
A2-(4-{4-amino-l-[2-(dimetylamino)-4-pyridyl]-lN-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1-mety 1-1 Ν-2-indolkarboxamid
789
Príklad 918
7/2-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)-4-pyridyl]-lA-pyrazolo[3,4-</|pyrimidín-3-yl}-2-me· toxyfenyl)-1 Α-2-indolkarboxamid
Príklad 919
A2-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)-4-pyridyl]-lA-pyrazolo[3,4-6?]pyrimidín-3-yl}-2-me· toxyfenyl)-! Α-2-indolkarboxamid
Príklad 920
7V2- {4-[4-amino-1 -(2-morfolino-4-pyridy 1)-1 A-pyrazolo [3,4-ŕZ]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxyfeny l}-1-metyl-1 Α-2-indolkarboxamid
Príklad 921
7/2-[4-(4-amino-l-{2-[(2-hydroxyetyl)amino]-4-pyridyl}-lA-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl)-2· -metoxyfenyl] -1 -metyl-1 Α-2-indolkarboxamid
Príklad 922
7/2-(4- {4-amino-l-[2-(aminometyl)-4-pyridyl]-lA-pyrazolo[3,4-cdpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfe nyl)-1 -metyl-1 Α-2-indolkarboxamid
Príklad 923
ΝΊ-(4-(4-amino-l-[2-(aminokarbonyl)-4-pyridyl]-l A-pyrazolo[3,4-t7Jpyrimidín-3-yl] -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 Α-2-indolkarboxamid
790
Príklad 924
3-morfolino-l-(2-morfolino-4-pyridyl)-lH-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín
Príklad 925
H2- {4-[4-amino-1 -(4-amino-2-pyridy 1)-1 H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fény 1} -1 -metyl-ΙΗ-2-indolkarboxamid
Príklad 926
H2-{4-[4-amino-l-(2-oxo-l,2-dihydro-4-pyridínyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metO' xyfeny 1} -1 -metyl-1 Η-2-indolkarboxamid
Príklad 927
H2-{4-[4-amino-l-(4-morfolino-2-pyridyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-ΙΗ-2-indolkarboxamid
Príklad 928
N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)-2-pyridyl]-lH-pyrazolo[3,4-í(]pyrimidín-3-yl}-2-me toxyfenyl)-1 -metyl-1 Η-2-indolkarboxamid
Príklad 929
Ar2-[4-(4-amino-l-{4-[(2-hydroxyetyl)amino]-2-pyridyl}-lH-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidm-3-yl)-2
-metoxyfenyl]-! -metyl-ΙΗ-2-indolkarboxamid
791
Príklad 930
N2-{ 4-[4-amino-1 -(6-amino-3 -pyridyl)-1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
Príklad 931 //2-{4-[4-amino-l-(6-morfolino-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
Príklad 932 //2-(4- {4-amino-1 -[6-(4-mety lpiperazino)-3 -pyridyl] -1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-3 -yl} -2-me toxyfeny 1)-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
Príklad 933
Cis-A-[4-(4-amino-3 - {3 -fluór-4- [(5-mety 1-1,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo[3,4-č/]py rimidín-1 -yl)cyklohexyl]-2-piperazinón
Príklad 934
7ra«.s'-4-[4-(4-amino-3-{3-ŕluór-4-[(5-metyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lZ/-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-l-yl)cyklohexyl]-2-piperazinón
Príklad 935
CM-4-[4-(4-amino-3-{4-[(5-metyl-l,3-benzoxazol-2-yl)ammo]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-1-yl)cyklohexy 1]-2-piperazinón
792
Príklad 936
7ra?«-4-[4-(4-amino-3-{4-[(5-metyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-1 -yl)cyklohexyl]-2-piperazinón
Príklad 937
Ä-A2-(4-{4-amino-l-[l-(l-metoxy-l-metyletyl)-3-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-ŕŕ]pyrimidm-3-yl} fenyl)-5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 938
S-A2-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 -metoxy-1 -metyletyl)-3-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 939
Á/S-A2-(4-{4-amino-l-[l-(l-metoxy-l-metyletyl)-3-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3 -yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 940
7?-A2-(4-{4-amino-l-[l-(3-metoxypropyi)-3-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-1,3 -benzoxazol-2-amín
Príklad 941
S-A2-(4-{4-amino-1-[1-(3-metoxypropyl)-3-piperidyl]-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-y 1} fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín
793
Príklad 942
R/S-N2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(3 -metoxypropy l)-3 -piperidyl] -1 //-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3 -y 1} fe· nyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 943 /?-/72-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-hydroxyetyl)-3-piperidyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl} fenyl) -5,7 -dimety 1-1,3 -benzox azol -2-amí n
Príklad 944
8-/72-(4- {4-amino-l-[l-(2-hydroxyetyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidín-3-yl} fenyl) -5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 945 /?/8-/V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-hydroxyetyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 946
R -/72-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2- {1,3 -dibydroxy propy 1} )-3 -piperidyl] -1 //-pyrazolo [3,4-ďjpy rimidín -3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 947
8-/72-(4- {4-amino-1 -[1 -(2- {1,3-dihydroxypropyl})-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín·
-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-1.3-benzoxazol-2-amm
Príklad 948
R/S-N2-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(2- {1,3-dihydroxypropyl} )-3 -piperidyl]-1 H-pyrazolo[3,4-7]pyrimidín-3-yl} fenyl)-5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 949
Ä-2-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-1-yl)piperidino]acetonitril
Príklad 950
S-2-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyri niidín-l-yl)piperidmo]acetonitril
Príklad 951
Ä/5-2-[3 -(4-amino-3 - {4-[(5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-yl)amino] fenyl} -1 H-pyrazolo [3,4-7] pyrimidín-1 -yl)piperidino]acetonitľil
Príklad 952
Á-H2-(4-{4-amino-l-[l-(2-(metylsulfanyl)etyl)-3-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidín-3-yl} fenyl)-5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 9o3
S-A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-(metylsulfanyl)etyl)-3-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4-7]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín
795
Príklad 954
R/S-N2-(4-{4-amino-1 -[1 -(2-(metylsulfanyl)etyl)-3-piperidyl]-1 //-pyrazol o[3,4-d]pyrimidín-3-y 1} fény l)-5,7-dimety 1-1,3 -benzoxazol-2-amín
Príklad 955 /?-N-metoxy-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-í/}pyrimidín-1 -yl)-1 -piperidínkarboximidamid
Príklad 956
S-N-metoxy-3 -(4-amino-3 - {4-[(5,7-dimetyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboximidamid
Príklad 957
7?ZS’-N-metoxy-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo [3,4-ď)pyrimidín-1 -yl)-1 -piperidínkarboximidamid
Príklad 958
Ä-N2-(4-4-amino-1 - [ 1 -(1 -2,2,2-trifluóretyl)-3 -piperidyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3 -y lfenyl)-5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín
Príklad >59
5'-N2-(4-4-amino-l-[l-(l-2,2,2-trifluóretyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-ylfenyl)-5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín
796
Príklad 960
Ä/S-A2-(4-4-amino-l-[l-(l-2,2,2-triíluóretyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/[pyrimidín-3-ylfe nyl)-5,7-dimetyl-1,3 -benzoxazol-2-amín
Príklad 961
N2- {4- [4-amino-1 -(1//-4-imidazolylmetyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-y 1] fenyl} -5,7-dime tyl-1,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 962
7V2-(4-{4-amino-l-[l//-4-(2-metyl-imidazolyľ)metyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 963 lV2-(4-{4-amino-l-[l//-4-(2-amino-imidazolyl)metyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 964
7V2-4-[4-amino-l-(l//-4-imidazolyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidín-3-yl]fenyl-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 965 ?V2-(4-{4-amino-l-[l//-4-(2-amino-imidazolyl)]-l//-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7 -dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín
Ί9Ί
Príklad 966
M2-(4-{4-amino-l-[l//-4-(2-metyl-imidazolyl)]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yI}fenyl)-5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín
Príklad 967 l-(4-{4-amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl}piperidino)-2-metyl-2-(metylamino)-l-propanón
Príklad 968 l-[4-(4-amino-3-{4-[(5-metyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl)piperidino]-2-metyl-2-(metylamino)-l-propanón
Príklad 969 l-[4-(4-amino-3-{4-[(5-etyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrímidín-l-yl)piperidino]-2-metyl-2-(metylamino)-l-propanón
Príklad 970
1-[4-(4-amino-3-{4-[(5-chlór-1,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrímidín-1 -y l)piperidino] -2-mety l-2-(metylamino)-1 -propanón
Príklad 971 {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl]fenyl}(l//-4-pyrazolyl)metanón
798
Príklad 972
1-(4-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3.4-<7)pyrimidín-3-yl]benzoyl}-1/7-1 -pyrazolyl)-1-etanón
Príklad 973 {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-17ŕ-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl]fenyl}(l-metyl-177-4-pyrazolyl)metanón
Príklad 974 {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3 -yl] fenyl} (1 -benzyl-177-4-pyrazolyl)metanón
Príklad 975 {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)- 177-pyrazolo [3,4-ď)pyrimidín-3-yl]fenyl} (1 -benzoyl-177-4-pyrazolyl)metanón
Príklad 976 {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl]fenyl} (5-izoxazolyl)metanón
Príklad 977 {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ŕ7]pyrimidín-3-yl]fenyl}(3-metyl-5-izoxazolyl)metanón
799
Príklad 978 {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l.ŕ/-pyrazolo[3,4-</[pyrimidín-3-yl]fenyl}(3-fenyl-5-izoxazolyl)metanón
Príklad 979 yV5-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl]fenyl}-3-fenyl-5-izoxazol amín
Príklad 980 íV5-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)4//-pyrazolo[3,4-čí]pyrimidm-3-yl]fenyl}-3-(trifluórmetyl)-5
-izoxazolamín
800
Príklad 981
Príklad 982
Ďalšie príklady zahrnujú nasledujúce zlúčeniny
801
Štruktúra
Názov
jV2-[4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3 -yl] -2-metoxyfenyl} -1 -mety 1-1 //-pyrolo [2,3-A]pyridín-2-karboxamid
N2- {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-d]py rimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l//-pyrolo[2,3-c]pyridín-2-karboxamid
N2- {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl-1 //-pyrolo [3,2-c]pyridín-2-karboxamid
802
yV2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-r7]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl-177-pyrolo[3,2-ó]pyridín-2-karboxamid
yV2-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ŕ7]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxy fenyl} -1 -metyl-177-pyroLo[2,3-6]pyridín-2-karboxamid
N2-{4-[4-amino-1 -(1 -mety 1-4-pip eridy 1)-177-pyrazolo[3,4-ŕ7]pyrimidín-3 -y l]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl-177-pyrolo [2,3-c]pyridín-2-karboxamid
803
772- {4-[4-amino-1 -(1 -metyl-4-piperidyl)-1 77-pvrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l//-pyrolo[3,2-c]pyridín-2-karboxamid
/72- {4-[4-amino-1 -(1 -mety 1-4-piperidy 1)-1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl-1 /7-pyrolo[3,2-á]pyridín-2-karboxamid
/72- {4-[4-amino-1 -(1 -izopropyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-J)pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl-1 H-pyrolo[2,3 -5]pyridín-2 -karboxamid
804
A2-{4-[4-amino-1 -(1 -izopropy 1-4-piperidyl)-1 H-pyrazolo[3,4-č/jpyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l//-pyrolo [2,3 -c]pyridín-2-karboxamid
N2-{4-[4-amino-1 -(1 -izopropyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl- 1/7-pyrolo[3,2-c]pyridín-2-karboxamid
N2-{4- [4-amino-1 -(1 -izopropy 1-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidm-3-yl]-2-inetoxyfenyl} -1 -metyl-1 H-pyrolo[3,2-ó]pyridín-2-karboxamid
805
//2-(4-{4-amino-l-[ 1-(1 H-4-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-l//-pyrolo[2,3-/]pyridín-2-karboxamid
//2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 //-4-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-1 //-pyrazolo [3,4-ŕ/}pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 //-pyrolo [2,3 -c]py ridín-2-karboxamid
O
M' //2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(l//-4-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-cf|pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-l//-pyrolo[3,2-c]pyridín-2-karboxamid
806
/72-(4- {4-amino-1-(1-(1 //-4-imidazolylmetyl)-4-piperidy 1] -1 /7-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3 -yl} -2-metoxyfenyl )-l-metyl-l//-pyrolo[3,2-7]pyridín-2-karboxamid
/72-[4-(4-amino-l-{l-[(2-metyl-l//-4-imidazolyl)metyl]-4-piperidyl}-17/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidm-3-yl)-2-metoxyfenyl]-!-metyl-l//-pyiOlo[2,3-ó]pyridín-2-karboxamid
HP
772-[4-(4-amino-l-{ l-[(2-metyl-l H-4-imidazolyl)metyl]-4-piperidyl}-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidm-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-l/7-pyrolo[2,3-c]pyridín-2-karboxamid
H?
807
h
V2-[4-(4-amino-1 - {1 -[(2-metyl-1 //-4-imidazolyl)metyl]-4-piperidy 1} -1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-3 -y l)-2 -metoxyfenyl]- 1 -metyl-l//-pyrolo[3,2-c]pyridín-2-karboxamid
N2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-metyl-l//-4-imidazolyl)metyI]-4-piperidyl}-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-l//-pyrolo[3,2-Z>]pyridín-2-karboxamid
Hp·
7V2-[4-(4-amino-1 -{1 -[(3-metyl- l//-4-pyrazolyl)metyl]-4-piperidy 1} -1 //-pyrazo lo [3,4-J] pyrimidín- 3 -yl)-2-metoxyfeny 1]-1 -metyl-1 //-pyrolo[2,3 -6]pyridín-2-karboxamid •V
808
H2-[4-(4-amino-1 - {1 -[(3-metyi-1 H-4-pyrazolyl)metyl]-4-piperidyl}-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-lH-pyrolo[2,3-c]pyridín-2-karboxamid
H2-[4-(4-amino-l-{l-[(3-metyl-lH-4-pyrazolyl)metyl]-4-piperidyl}-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-! -metyl-lH-pyrolo[3,2-c]pyridín-2-karboxamid jV2-[4-(4-amino-l-{ l-[(3-metyl-lH-4-pyrazolyl)metyl]-4-piperidyl} -1 H-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3 -yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-lH-pyrolo[3,2-ó]pyridín-2-karboxamid
809
810
W, ňA, N J c F A P r tíAj V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-4-piperidyl]-l//-py- razolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -y 1} -2-metoxy fenyl)-1 -mety 1-1H- -pyrolo[3,2-/]pyridín-2 -karboxamid
A, V2-(4-{4-amino-l-[l-(3-furylmetyl)-4-piperidyl]-l//-py-
a razolo[3,4-VJpyrimidm-3-yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 H-
r P J o -pyrolo[2,3-/]pyridín-2-karboxamid
r Λ
W, ZŽS
r?
^0
y?^*W \ ϋ 7/2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(3 -furylmetyl)-4-piperidyl]-1 //-py-
/¾ ’> razolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-l//-
\>Λ<
A W, -pyroIo[2,3-c]pyridín-2-karboxamid
Ύ J 0
w,
ϊΓί n
> ~\
v kQ
811
A2-(4-{4-amino-l-[l-(3-furylmetyl)-4-piperidyl]-l A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3 -y 1 } -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1H-pyrolo[3,2-c]pyridín-2-karboxamid //2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(3-furylmetyl)-4-piperidyl]-1 A-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-1A-py ro lo [3,2-ó] py ridín-2 -karboxamid
A2- {4-[4-amino-1 -(1 -tetrahydro-2 A-4-pyranyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-e?]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-1-metyl-lA-pyrolo[2,3-ó]pyridín-2-karboxamid
812
Ν2-{4-[4-amino-1-(1 -tetrahydro-2 Α-4-pyrany 1-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-1 -metyl-1 A-pyrolo [2,3 -c]pyridín-2-karboxamid
A2-{4-[4-amino-l-(l-tetrahydro-2A-4-pyranyl-4-piperídyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-1-metyl-lA-pyrolo[3,2-c]pyridín-2-karboxamid
N2-{4-[4-amino-1 -(1 -tetrahydro-2 A-4-pyranyl-4-piperidyl)-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-1 -metyl-1 A-pyrolo [3,2-ó]pyridín-2-karboxamid
813
/72-{4-[4-amino-l-(l-izopropyl-4-piperidyl)-l//-pyrazo1α [3,4-</]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl-1H-2-indolkarboxamid
772- {4-[4-amino-1 -(1 -metyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
772-(4- {4-amino-1 -[1 -(1//-2-pyrolylmetyl)-4-piperidyl]-1//-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidm-3-yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
814
N2-(4-{4-ammo-l-[l-(2,2-difluóretyl)-4-piperidylJ-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1-metyl-1//-2-indolkarboxamid
N2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4-imidazolylmetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//-pyrazo’o[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-! -metyl-1//-2-indolkarboxamid
N2-[4-(4-amino-1 - {1 -[(2-metyl-1 //-4-imidazolyl)metyl]tetrahydro- l//-3-pyrolyl} -1 //-pyrazolo [3.4-ď]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
815
V2-[4-(4-amino-l-{l-[(3-metyl-l//-4-pyrazolyl)metyl]tetrahydro-1H-3 -pyrolyl} -1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3yl)-2-metoxyfenyl]-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
//2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 //-4-imidazoly l)-4-piperidyl]-1 //-pyrazolyl[3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-1 //-2-indolkarboxamid
V2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1,3 -oxazol-4-yl)-4-piperidyl]-1H-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid
816
N2-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1,3-tiazol-4-y l)-4-piperidy 1] -1 77-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1-metyl-1/7-2-indolkarboxamid
/72-(4- {4-amino-l - [ 1 -(177-2-imidazolyl)-4-piperidyl] -177-pyrazolo[3,4-rí]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-1 -metyl- 177-2-indolkarboxamid
A2-(4-{4-amino-l-[l-(l,3-oxazol-2-yl)-4-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4-(7]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)- 1-metyl-177-2-indolkarboxamid
817
A2-(4-{4-amino-l-[l-(l,3-tiazol-2-yl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo [3,4-</jpyrimidín-3-yl} -2-metoxyfeny 1)-1 -metyl-1 Η-2-indolkarboxamíd
7V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-hydroxy-3 -(4-mety lpiperazino)propyl]-l/7-pyrazolo[3,4-tjľ]pyrimidín-3-yl}-2-nietoxyfenyl)-1 -metyl-1 Ν-2-indolkarboxamid
A2- {4-[4-amino-1 -(2-hydroxy-3-piperidinopropyl)-lN-pyrazolo[3,4-<f]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl)-l -metyl- 1N-2-indolkarboxamid

Claims (136)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) jej racemické-diastereoméme zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:
    G je
    Ai (% \
    „110. „111-100
    Mj Z—A—Z—Z kde Z100 je ^2 alebo skupina prípadne substituovaná substituentom Ri vybraná zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, cykloalkyl, pyrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-«]pyrimidinyl, l//-imidazo[l,2-#]imidazolyl, imidazo[2,l-Z>][l,3]tiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzotienyl, furanyl, tienyl, benzoxazolyl, benzoizoxazolyl, benzotiazolyl,
    S , tiazolyl,
    820 benzofuranyl, 23-dihydrobenzofuranyl, indolyl, izoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrolyl, pyrolopyridinyl, H-pyridinón, oxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, tiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[1,2-c?]pyridinyl, benzoizotiazolyl, 1,1-dioxybenzoizotiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-tiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-tiazolyl a benzimidazolyl;
    Z110 je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-Cô), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    Z111 je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Ci-Cď) alebo prípadne substituovaný (CH2)n-cykloalkyl-(CH2)n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    každý zo substituentov Ra a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny, ktorú tvoria atóm vodíka, halogén, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluórmetylkarbonylaminoskupina, trifluórmetylsulfónamidoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkinyl, substituovaná alebo nesubstituovaná
    821 aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované alebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryltioskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aryltioskupina, -Z105-C(O)N(R)2, -Z105-N(R)-C(O)-Z200, -Z105-N(R)-S(O)2-Z200, -Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z200, Rc a CH2ORc;
    kde substituent Rc pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH2-NRdRe, -W-ÍCH^t-NRdRe, -W-(CH2)rO-alkyl, -W-(CH2)t-S-alkyl, alebo -W-(CH2)rOH;
    Z105 pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (C|-Cô);
    Z200 pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-CQ, substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cô)-fenyl;
    substituenty Rd a Rc pri každom výskyte sú nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO2-alkyl; alebo substituenty Rd, Re a dusíkový atóm, ku ktorému sú viazané, spoločne tvoria 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh;
    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;
    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)2, alebo NRf, kde Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Rt je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;
    substituent R3 pri každom výskyte je, nezávisle, atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl, alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;
    A je -(C,-C6)-, -O-; -S-; -S(O)P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO2R)-; -CH2O-; -CH2S-; -CH2N(R)-; -CH(NR)-; -CH2N(C(O)R))-; -CH2N(C(O)OR)-; -CH2N(SO2R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO2R)-;
    822
    -CH(NHC(0)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(0)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH2)n+i-C(O)-, -S(O)PN(R)-; -O-(CR2)n+1-C(O)-, -O-(CR2)n+i-O-, -N(C(O)R)S(O)P-; -N(R)S(O)PN(R)-;
    -N(R)-C(O)-(CH2)n-O-, -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)PN(R)C(O)-; -OS(O)PN(R)-; -N(R)S(O)PO-; -N(R)S(O)PC(O)-; -SOPN(C(O)R)-; -N(R)SOPN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(ORb)O-; -N(R)P(OR„)-; -N(R)P(O)(ORb)O-; -N(R)P(O)(ORb)-;
    -N(C(O)R)P(ORb)O-; -N(C(O)R)P(ORb)-; -N(C(O)R)P(O)(ORb)O-, alebo
    -N(C(O)R)P(ORb)-;
    kde substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    substituent Rb pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    p je 1 alebo 2; alebo v skupine obsahujúcej fosfor tvoria dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a Rb spoločne 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh; alebo
    A je NRSO2 a substituenty R, Ra a dusíkový atóm spoločne tvoria substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo
    Z1 ’θ-Α-Ζ111 dohromady sú kovalentná väzba; a substituent R2 je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z10l-Z102;
    Z101 je kovalentná väzba, -(C,-C6)-, -(C,-C6)-O-, -(C,-C6)-C(O)-, -(C,-C6)-C(O)O-, -(Ci-C6)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((C]-C6))- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;
    1 Q-)
    Z je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný alebo
    823 nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina majú jeden alebo viac substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogén, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cé), substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cé)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -N((Ci-Cô)-OR)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cô) -C(0)2R, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-Cé)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(C]-C6)-N(R)2, substituovaná alebo nesubstituovaná sulfónamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cé)-OR, oxoskupina, a nasýtená, nenasýtená alebo aromatická, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahujúca jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny, ktorú tvoria N, O, a S; kde dusíkové atómy uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)N(R)2, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-C6)-N(R)2, -C(O)-alkylom, -C(O)-arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom; alebo substituent R2 je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný
    824 azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný (C]-C6)-azacykloalkyl-, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(C]-Cé)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Cé)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    a je 1 a symboly D], Gi, Jj, L| a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D), Gj, J], L] a Mi sú CRa; alebo
    825 a je O a jeden zo symbolov Di, Gi, Li a M, je NRa, jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam;
    b je 1 a symboly D2, G2, J2, L2 a M2 sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D2, G2, J2, L2 a M2 sú CRa; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je NRa, jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď A je -N(R)-, Z110 a Z111 sú každý kovalentná väzba a substituent R2 je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, potom Z100 nie je alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl alebo pyrolidinyl;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Z110 a Z111 sú každý kovalentná väzba a substituent R2 je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z100 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, potom A nie je alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- alebo -C(0)0-;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Z'^-A-Z111 dohromady sú kovalentná väzba, potom Z100 nie je alkyl;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Z110-A-Z1H dohromady sú Ci-C6 alkyl, potom Z100 nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl; a s výhradou spočívajúcou v tom, že keď substituent R2 je substituovaný alebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z100 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, Z110 a Z111 sú každý kovalentná väzba, potom A nie je -0-, -C(0)0-, alebo -N(R)-.
    826
  2. 2. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent Rj pri každom výskyte je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3. CN, CO2CI-I3, CF3, -CH2NR<jRc, /-butyl, pyridyl, substituovaný alebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný alebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný alebo nesubstituovaný benzénsulfonyl, substituovaná alebo nesubstituovaná fenoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, karboxyl, substituovaný alebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný alebo nesubstituovaný styryl.
  3. 3. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent Ra pri každom výskyte je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, /-butyl, pyridyl, substituovaný alebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný alebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný alebo nesubstituovaný benzénsulfonyl, substituovaná alebo nesubstituovaná fenoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, karboxyl, substituovaný alebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný alebo nesubstituovaný styryl.
  4. 4. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca kde nje 1,2 alebo 3.
  5. 5. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca zn
    RgO kde:
    mje 0, 1, 2 alebo 3;
    substituent Rg je H alebo -(CH2)PN(R4)R5;
    p je celé číslo od 2 do 6;
    substituenty R4 a R5 sú každý nezávisle H, azabicykloalkyl alebo Y-Z;
    Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvoria -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    Zje substituovaná alebo nesubstituovaná časť, vybraná zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl a heterocykloalkylová skupina, alebo substituenty R4, R5 a dusíkový atóm, ku ktorému sú viazané, tvoria spoločne 3-, 4-, 5-, 6- alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú alebo heterobicyklickú skupinu.
  6. 6.
    Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca
    828 kde:
    m je O, 1.2 alebo 3;
    každý z indexu a i indexu b je, nezávisle, celé číslo od 0 do 6;
    Q je -ORô alebo -NR4R5;
    každý zo substituentov R4 a R5 je, nezávisle, H, azabicykloalkyl alebo Y-Z;
    Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvoria -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl alebo heterocykloalkylová skupina; alebo substituenty R4, R5 a dusíkový atóm, na ktorý sú viazané, tvoria spoločne 3-, 4-, 5-, 6alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú alebo heterobicyklickú skupinu; a substituent Rô je vodík alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina.
  7. 7.
    Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca
    829 kde:
    n je 1, 2 alebo 3;
    substituent R4 je H, azabicykloalkyl alebo Y-Z;
    Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvoria -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina.
  8. 8. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca kde:
    m je 0, 1,2 alebo 3;
    substituent R5 je H, azabicykloalkyl alebo Y-Z;
    830
    Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvoria kovalentná väzba, -C(O)-. -(CH2)q-, -S(O)2-,
    -C(O)O-, -SCUNH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH-, -(CH2)qC(O)-,
    -C(O)(CH2)q- a -(CH2)qS(O)r-, kde alkylová časť skupiny -(CH2)q-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH-, -(CH2)qC(O)-, -C(O)(CH2)q- a -(CII2)qS(O)r- je prípadne substituovaná halogénom, hydroxyskupinou alebo alkylskupinou;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; alebo
    Y a Z sú spoločne prirodzená alebo neprirodzená aminokyselina, ktorá môže byť na amínovom dusíku mono- alebo di-alkylovaná; a substituent predstavuje jeden alebo viac substituentov, z ktorých každý je, nezávisle, vybraný zo skupiny, ktorú tvoria vodík, hydroxyskupina, oxoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocyklyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocyklylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl a substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl;
    s podmienkou, že uhlíkové atómy susediace s dusíkovým atómom nie sú substituované hydroxyskupinou.
  9. 9.
    Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca
    831 kde:
    substituent R4 je H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z;
    Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvoria -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    Zje vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
  10. 10. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca kde:
    m je celé číslo od 1 do 6; a
    832 substituenty R4 a R, sú každý, nezávisle, H. substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z;
    Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvoria -C(O)-. -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    Zje substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; alebo substituenty R4, R5 a atóm dusíka, na ktorý sú viazané, tvoria spoločne 3-, 4-, 5-, 6alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú alebo substituovanú alebo nesubstituovanú heterobicyklickú skupinu.
    Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca kde:
    n je celé číslo od 0 do 4;
    r je 0 a m je celé číslo od 1 do 6; alebo
    833 r je 1 a m je celé číslo od 0 do 6;
    Q je -ORô alebo -NR4R5;
    každý zo substituentov Rj a R5 je, nezávisle, vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z;
    Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvoria -C(O)-, -(CH2)q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    Zje substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; alebo substituenty R4, R5 a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, spoločne tvoria 3-, 4-, 5alebo 6- člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu; a substituent je vodík alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina.
  11. 12. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorca kde:
    834 n je celé číslo od 0 do 4;
    m je celé číslo od 0 do 6;
    substituent R4 je H, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z;
    Y je vybrané zo skupiny, ktorú tvoria -C(O)-, -(CH2)q, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    Zje substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; a substituent R6 je vodík alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina.
  12. 13. Zlúčenina podľa nároku 10, kde substituenty R4, R5 a atóm dusíka spoločne vytvárajú heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca kde:
    substituenty R?. Rg, R9. R)0, Rjj, Rj2, R13 a R)4 sú každý, nezávisle, nižší alkyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R7 a R8; R9 a R|0; R11 a Rt2; alebo RB a Rw sú dohromady atóm kyslíka; alebo
    835 aspoň jeden zo substituentov R7 a R9 je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH2OR,5 alebo CH2NRi5(Ri6); a substituenty R[5 a R^sú každý, nezávisle, H, azabicykloalkyl alebo V-L;
    V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -CH2)qS(O)r-;
    p je celé číslo od 0 do 6;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2;
    L je substituovaný alebo nesubstituovanýs alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo substituenty R]5, Rjô a atóm dusíka spoločne tvoria 3-, 4-, 5-, 6- alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú alebo substituovanú alebo nesubstituovanú heterobicyklickú skupinu;
    X je O, S, SO, SO2, CH2, CHORp alebo NR,7;
    substituent Ri7 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)R,7 alebo -C(O)ORU;
    substituent Rj8 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 alebo 1.
  13. 14. Zlúčenina podľa nároku 10, kde substituenty R4, R5 a atóm dusíka spoločne vytvárajú heterocyklus všeobecného vzorca
    836 kde:
    substituenty R19 a R2o sú každý, nezávisle, vodík alebo nižší alkyl; alebo substituenty R19 a R2o sú dohromady atóm kyslíka;
    substituenty R2i a R22 sú každý, nezávisle, vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L;
    V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)p-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-;
    p je celé číslo od 0 do 6;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; alebo substituenty R2j, R22 a atóm dusíka spoločne tvoria 3-, 4-, 5- alebo 6- člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu; a m je celé číslo od 1 do 6; a n je celé číslo od 0 do 6.
  14. 15. Zlúčenina podľa nároku 10, kde substituenty R4, Rs a atóm dusíka spoločne vytvárajú heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca
    837
    N kde:
    m je celé číslo od 1 do 6;
    substituent R23 je CH2OH, NRR', C(O)NRR' alebo COOR; a substituenty R a R' sú každý, nezávisle, vodík alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl.
  15. 16. Zlúčenina podľa nároku 10, kde substituenty R4, R5 a atóm dusíka spoločne vytvárajú heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca
    N kde:
    substituent R24 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR25, CH2OR2s, CH2NR26R?7 alebo C(O)NHR26;
    substituent R2s je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloaryl; a
    838 substituenty R2r, a R27 sú každý, nezávisle, vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L;
    V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-; -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-;
    p je celé číslo od 0 do 6;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo substituenty R26, R27 a atóm dusíka spoločne tvoria 3-, 4-, 5- alebo 6- člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu.
  16. 17. Zlúčenina podľa nároku 10, kde aspoň jeden zo substituentov R4 a R5 má všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec
    N T kde:
    Tje C(O), S, SO, SO2. CHÓR alebo NR;
    substituent R je vodík alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a n je 0, 1 alebo 2.
    839
  17. 18. Zlúčenina podľa nároku 10, kde:
    aspoň jeden zo substituentov R4 a R5 má všeobecný vzorec Y-Z;
    Z má všeobecný vzorec -N(R28)R29; a substituenty R28 a R29 sú každý, nezávisle, substituovaný alebo nesubstituovaný karboxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný kyanoalkyl; alebo substituenty R28 a R29 spoločne s atómom dusíka tvoria 5- alebo 6- člennú substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu.
  18. 19. Zlúčenina podľa nároku 11, kde substituenty R4, R5 a atóm dusíka spoločne vytvárajú heterocyklus všeobecného vzorca kde:
    substituenty R7, R8, R9, Rio, Ru, R[2, RJ3 a R14 sú každý, nezávisle, nižší alkyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R7 a R8; R9 a Rio; Ru a Rj2; alebo Ri3 a Ru sú dohromady atóm kyslíka; alebo aspoň jeden zo substituentov R7 a R9 je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH2ORi, alebo CH2NR,5(Ri6); a
    840 substituenty R15 a R^ sú každý, nezávisle, vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L;
    V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-;
    p je celé číslo od 0 do 6;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo substituenty R15, Ri& a atóm dusíka spoločne tvoria 3-, 4-, 5-, 6- alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú alebo heterobicyklickú skupinu; a
    X je O, S, SO, SO2, CH2, CHOR[7 alebo NR,7;
    substituent Rn je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)R,g alebo -C(O)OR18;
    substituent Rig je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 alebo 1.
  19. 20. Zlúčenina podľa nároku 11, kde substituenty R4, Rs a atóm dusíka spoločne vytvárajú heterocyklus všeobecného vzorca
    841 kde:
    substituenty R19 a R20 sú každý, nezávisle, vodík alebo nižší alkyl; alebo substituenty R19 a R2o sú dohromady atóm kyslíka; a substituenty R2i a R22 sú každý, nezávisle, vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L;
    V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2),O-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)t-;
    p je celé číslo od 0 do 6;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2;
    L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo substituenty R2i, R22 a atóm dusíka spoločne tvoria 3-, 4-, 5- alebo 6- člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu; a m je celé číslo od 1 do 6; a n je celé číslo od 0 do 6.
    842
  20. 21. Zlúčenina podľa nároku 11, kde substituenty R4, R5 a atóm dusíka spoločne vytvárajú heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca kde:
    m je celé číslo od 1 do 6; a substituent R23 je CH2OH, NRR', C(O)NRR' alebo COOR;
    substituent R je atóm vodíka alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aryl alkylová skupina.
  21. 22. Zlúčenina podľa nároku 11, kde substituenty R4, R3 a atóm dusíka spoločne vytvárajú heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca
    IM
    R24 kde:
    substituent R24 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR23, CH2OR?s, CH2NR2ôR27 alebo C(O)NHR26;
    substituent R25 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl,
    843 substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloarylová skupina;
    substituenty R2ô a R27 sú každý, nezávisle, vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L;
    V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-;
    p je celé číslo od 0 do 6;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; alebo substituenty R2ŕ, R27 a atóm dusíka spoločne tvoria 3-, 4-, 5- alebo 6- člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu.
  22. 23. Zlúčenina podľa nároku 11, kde aspoň jeden zo substituentov R4 a R5 má všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec kde:
    T je C(O), O, S, SO, SO2, CH2, CHOR,7 alebo NR17;
    g je 0 alebo 1;
    844 substituent R17 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)R,8 alebo -C(O)OR]8;
    substituent Rig je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl.
  23. 24. Zlúčenina podľa nároku 11, kde:
    aspoň jeden zo substituentov R4 a R5 má všeobecný vzorec Y-Z;
    Z má všeobecný vzorec -N(R28)R29; a substituenty R28 a R29 sú ka/dý, nezávisle, substituovaný alebo nesubstituovaný karboxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný kyanoalkyl; alebo substituenty R28 a R29 spoločne s atómom dusíka tvoria 5- alebo 6- člennú substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu.
  24. 25. Zlúčenina podľa nároku 8, kde:
    substituent R5 má všeobecný vzorec Y-Z, kde
    Z má všeobecný vzorec N(R3o)R3i; a
    845 substituenty R30 a R3i sú každý, nezávisle, vodík, alkyl, alkoxykarbonyl, alkoxyalkyl, hydroxyalkyl, aminokarbonyl, kyanoskupina, alkylkarbonyl alebo arylalkyl.
  25. 26. Zlúčenina podľa nároku 8, kde substituent R5 je Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec
    X-N kde:
    každé X je, nezávisle, CH alebo N; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
  26. 27. Zlúčenina podľa nároku 8, kde substituent R5 je Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec
    -N
    R32 kde:
    T je O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 alebo NRI7;
    g je 0 alebo 1;
    846
  27. 28.
    28.
    substituent Rn je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, C(O)NH?, -C(NH)NH2, -C(O)R,7 alebo -C(O)ORlg;
    substituent Ruje vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
    Zlúčenina podľa nároku 8, kde substituent Rs je Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec R32 kde:
    g je 0, 1 alebo 2;
    substituent R3? je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
  28. 29. Zlúčenina podľa nároku 8, kde substituent R> je Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec
    847 kde:
    T je C(0), O, S, SO, SO2, CH2, CHOR,7 alebo NRi7;
    substituent Rj7 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, aryl, arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)R18 alebo -C(O)OR,S;
    substituent Ri« je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl. substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl;
    g je 0 alebo 1; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
  29. 30. Zlúčenina podľa nároku 8, kde substituent R5 je Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec
    R33 kde:
    substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl,
    848 substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, alkylkarbonyl, substituovaná alebo nesubstituovaná tioalkoxyskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R33 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, perhalogénalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl.
  30. 31. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je atóm vodíka; substituent R2 má všeobecný vzorec kde:
    m je 0 alebo 1; a substituenty R34, R35, R36, R37, R38, R39, R,40 a R41 sú každý, nezávisle, metyl alebo atóm vodíka; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R34 a R35; R36 a R37; R38 a R39; alebo Rw a R41 spoločne sú atóm kyslíka; a substituent Rj2 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo YZ;
    Y je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-. -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-;
    849 p je celé Číslo od 0 do 6;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; alebo substituent R42 má všeobecný vzorec kde:
    u je 0 alebo 1;
    substituenty R43, R44, R45, R46, R47, Rig, R49 a R50 sú každý, nezávisle, metyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R43 a R44; R45 a R46; R47 a R48; alebo R49 a R50 spoločne sú atóm kyslíka; a substituent R51 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L;
    V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH?)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SCLNH-, -CONH-, (CH2)qO-, <CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-;
    p je celé číslo od 0 do 6;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    850 r je 0, 1 alebo 2; a
    L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
  31. 32. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je vodík; substituent R2 má všeobecný vzorec h, i, j, k a 1 sú, nezávisle. 0 alebo 1;
    substituenty R52, R53, R54, R55, R56, R57, Rjg, R59, Rg a Rh sú každý, nezávisle, metyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R52 a R53; R54 a R55 ; R?ď a R57; alebo R58 a R59 spoločne sú atóm kyslíka; a substituent R^o je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z;
    Y je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO?NH-, -CONH-, -(CH2)qO-, -(CH2)t,NH- a -(CH2)qS(O)r-;
    p je celé číslo od 0 do 6.
    q je celé číslo od 0 do 6 a
    851 r je 0,1 alebo 2; a
    Zje substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aivl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo substituent Réo má všeobecný vzorec kde:
    v je 0 alebo 1;
    substituenty Rét, Ró2, Ró3, Ró4, Rŕs, Ró6, Ró7 a Rég sú každý, nezávisle, nižší alkyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R$i a R62; Ró3 a Rô4; Ró5 a Róóí a Rg? a R68 spoločne sú atóm kyslíka; a substituent R^ je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L;
    V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH2)P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH2)qNH- a -(CH2)qS(O)r-;
    p je celé číslo od 0 do 6;
    q je celé číslo od 0 do 6;
    r je 0, 1 alebo 2; a
    852
    L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
  32. 33. Spôsob inhibície aktivity jednej alebo viac proteínkináz u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 1 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.
  33. 34. Spôsob podľa nároku 33, vyznačujúci sa tým, že daná proteínkináza je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z KDR, FGFR-1, PDGFRp, PDGFRa, IGF-1R, c-Met, Flt-1, Flt-4, TIE-2, TIE-1, Lck, Src, fyn, Lyn, Blk, hck, fgr a yes.
  34. 35. Spôsob ovplyvnenia hyperproliferačných porúch u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 1 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.
  35. 36. Spôsob ovplyvnenia angiogenézy u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 1 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.
  36. 37. Spôsob podľa nároku 33, vyznačujúci sa tým, že proteínkináza je proteínová serín/treonínkináza alebo proteínová tyrozínkináza.
    853
  37. 38. Spôsob ošetrenia jedného alebo viac ulkusov u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 1 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.
  38. 39. Spôsob podľa nároku 38, vyznačujúci sa tým, že ulkus alebo ulkusy sú spôsobené bakteriálnou alebo pliesňovou infekciou; alebo ulkus alebo ulkusy sú Moorenove ulkusy; alebo ulkus alebo ulkusy sú symptómy ulceratívnej kolitídy.
  39. 40. Spôsob ošetrenia ochorenia u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 1 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi, kde dané ochorenie je ochorenie očí, kardiovaskulárne ochorenie, rakovina, syndróm Crow-Fukaseho (POEMS), diabetické ochorenie, kosáčikovitá anémia, chronický zápal, systémový lupus, glomerulonefritída, synovitída, zápalové črevné ochorenie, Crohnova choroba, glomerulonefritída, reumatoidná artritída, osteoartritída, roztrúsená skleróza, r. lekcia štepu, Lymská choroba, sepsa, von Hippelov-Lindauov syndróm, pemfigoid, psoriáza, Pagetova choroba, polycystické obličkové ochorenie, fibróza, sarkoidóza, cirhóza, tyreoiditída, hyperviskózny syndróm, Oslerova-Renduova-Weberova choroba, chronické oklúzne ochorenie pľúc, astma alebo edém po popáleninách, traume, ožiarení, mŕtvica, hypoxia alebo ischémia, syndróm ovariálnej hyperstimulácie, preeklampsia, menometrorágia, endometrióza alebo infekcia Herpes simplex, Herpes Zoster, vírusom HIV spôsobujúcim syndróm získaného zlyhania imunity, Parapoxvírusom, protozoom alebo toxoplazmózou.
  40. 41. Spôsob podľa nároku 40, vyznačujúci sa tým, že ochorenie očí je okulárny alebo makulárny edém, okulárne neovaskulárne ochorenie, skleritída, radiálna keratotómia, uveitída, vitritída, myopia, fyziologická exkavácia papily, chronické odlúčenie sietnice, komplikácie po ošetrení laserom, konjunktivitída, Stargardtova choroba, Ealesova choroba, retinopatia alebo makulárna degenerácia.
    854
  41. 42. Spôsob podľa nároku 40, vyznačujúci sa tým, že kardiovaskulárne ochorenie je ateroskleróza. restenóza, ischémia/reperfúzne poškodenie, vaskulárna oklúzia alebo karotické obštruktívne ochorenie.
  42. 43. Spôsob podľa nároku 40, vyznačujúci sa tým, že rakovina je pevný nádor, sarkóm, fibrosarkóm, osteóm, melanóm, retinoblastóm, rabdomyosarkóm, glioblastóm, neuroblastóm, teratokarcinóm, hematopoetické zhubné bujnenie, Kaposiho sarkóm, Hodgkinova choroba, lymfóm, myelóm, leukémia alebo malígny ascites.
  43. 44. Spôsob podľa nároku 40, vyznačujúci sa tým, že diabetické ochorenie je inzulíndependentný diabetes mellitus s glaukómom, diabetická retinopatia alebo mikroangiopatia.
  44. 45. Spôsob zníženia fertility u pacienta, vyznačujúci sa tým, že daný spôsob zahrnuje krok, v ktorom dochádza k podaniu účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 1 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov pacientovi.
  45. 46. Spôsob podľa nároku 36, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina alebo jej fyziologicky prijateľná soľ. proliečivo alebo biologicky aktívny metabolit je podávaná v množstve, ktoré má na angiogenézu alebo vaskulogenézu podporný účinok.
  46. 47. Spôsob podľa nároku 34, vyznačujúci sa tým, že proteínkinázaje Tie-2.
    855
  47. 48. Spôsob podľa nároku 46, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina všeobecného vzorca (I) alebo jej fyziologicky prijateľná soľ, proliečivo alebo biologicky aktívny metabolit je podávaná v kombinácii s proangiogénnym rastovým faktorom.
  48. 49. Spôsob podľa nároku 48, vyznačujúci sa tým, že proangiogénny rastový faktor je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z VEGF, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, HGF, FGF-1, FGF-2, ich derivátov a antiidiotypových protilátok.
  49. 50. Spôsob podľa nároku 46, vyznačujúci sa tým, že pacient trpí anémiou, ischémiou, infarktom, rejekciou transplantátu, zranením, gangrénou alebo nekrózou.
  50. 51. Spôsob podľa nároku 33, vyznačujúci sa tým, že aktivita proteínkinázy sa podieľa na aktivácii T-buniek, aktivácii B-buniek, degranulácii žírnych buniek, aktivácii monocytu, potenciách zápalovej odpovede alebo ich kombinácii.
  51. 52. Zlúčenina podľa nároku 1, kde:
    substituent Raje vodík;
    substituent R2 je -ZI01-Z102, kde
    Z101 je kovalentná väzba, -(Ci-Cô)-, -(Ci-Cô)-O-, -(Ci-Cô)-C(O)-, -(Ci-Cô)-C(O)O-, -(C,-C6-C(O)-NH-, -(CrC6-C(O)-N((Ci-C6))- alebo substituovaný fenyl; a
    Z102 je vodík, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina.
    856
  52. 53. Zlúčenina podľa nároku 52, kde:
    Z101 je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -CH2-C(O)O-, -CH2-C(O)-,
    -CH2-C(O)-NH-. -CH2-C(O)-N(Me), -CH(Me)-C(O)O-, -(CH2)3-C(O)O-,
    -CH(Me)-C(O)-NH- a -(CH2)3-C(O)-NH-;
    Z102 je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z vodíka, metylu, etylu, MA-dimetylaminoetylu, Λ',/V-díetylaminoetylu, 2-fenyl-2-hydroxyetylu, morfolinoskupiny, piperazinylu, Af-metyl-piperazinylu a 2-hydroxymetylpyrolidinylu.
  53. 54. Zlúčenina podľa nároku 53, kde G je vybrané z
    Z100 je substituovaný alebo nesubstituovaný benzoxazolyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný benzotiazolyl.
  54. 55. Zlúčenina podľa nároku 8,9, 10 alebo 53, kde G je vybrané z
    857 v ktorom sa vyskytuje iba jeden substituent Ra a ten je atóm vodíka alebo F.
  55. 56. Zlúčenina podľa nároku 52, kde Z101 je kovalentná väzba; a Z102 je prípadne substi tuovaný pyridyl.
  56. 57. Zlúčenina podľa nároku 56, kde G je
  57. 58. Zlúčenina podľa nároku 1, kde substituent R3 je vodík;
    substituent R2 je cyklopentyl; a
    Gje
  58. 59. Zlúčenina podľa nároku 58, kde
    858
    Z110 je vodík;
    A je O; a
    Z100 je prípadne substituovaný fenyl, furanyl alebo tienyl, kde Z100 je prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, COOH, NO2, OMe, -COOMe. OCF3 a CF3.
  59. 60. Zlúčenina podľa nároku 58, kde:
    Z110 je vodík;
    A je -0-, -O-(CR2)n-C(O)- alebo -O-(CR2)n-O-;
    n je v každom prípade O až 3;
    Z100 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z cyklohexylu, fenylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, izoxazolylu a piperidinylu; kde Z100 je prípadne substituovaná jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, alkoxyskupiny, halogénu, hydroxyskupiny a alkoxykarbonylu.
  60. 61. Zlúčenina podľa nároku 58, kde substituent R2 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z cyklobutylu a cyklohexylu.
  61. 62. Zlúčenina podľa nároku 61, kde substituent R2 je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, alkylu, hydroxyalkylu, karboxyalkylu a fenylalkoxyalkylu.
  62. 63. Zlúčenina podľa nároku 62, kde G je 4-fenoxyfenyl.
    859
  63. 64. Zlúčenina podľa nároku 6, kde m je 2; a je 0; substituent R6 je H; b je 1 alebo 2; a substituenty R; a R5 sú každý H.
  64. 65. Zlúčenina podľa nároku 8, kde m je 0,1 alebo 2;
    substitutent R6 je vodík;
    substituent R5 je vodík alebo Y-Z;
    Y je kovalentná väzba, -C(O)-, -(CH2)qO-, -(CH2)q-, -(CH2)qC(O)- alebo -C(O)(CH2)q-, kde alkylová časť -(CH2)qO-, -(CH2)q-, -(CH2)qC(O)- a -C(O)(CH2)q-je prípadne substituovaná halogénom, hydroxyskupinou alebo alkylovou skupinou; a
    Z je vodík, alkyl, prípadne substituovaný alkyl, alkoxyalkyl, prípadne substituovaný heterocykloalkyl, prípadne substituovaný heteroaryl alebo prípadne substituovaná aminoskupina.
  65. 66. Zlúčenina podľa nároku 65, kde:
    Zje atóm vodíka, metyl, etyl, hydroxymetyl, metoxyetyl, Λ-metyl-piperidinyl, (ŕ-butoxy-karbonyl)(hydroxy)piperidinyl, hydroxy-piperidinyl, (hydroxy-metyl)piperidinyl, (hydroxy)(metyl)pi-peridinyl, morfolino-skupina, (metoxyetyl)piperizinyl, metylpiperizinyl, 4-piperidinylpiperidinyl, imidazolyl, metylimidazolyl, Nmetylaminoskupina, MjM-dimetyl-aminoskupina, M-izopropyl-aminoskupina, Λ; M-diety lamino skupina, 2,3-dihydroxypropyl-aminoskupina, 2-hydroxyetylaminoskupina, 3-hydroxypropyl-aminoskupina, metoxyetylaminoskupina, etoxykarbonylmetyl-aminoskupina, fenylmetylaminoskupina, ÍV-metyl-M-metoxy- aminoskupina, --- , furanylmetylaminoskupina, piperidinyletylaminoskupina, M-(2-M,Af-dimetylaminoetyl)-M-metylaminoskupina, 2-M,M-dimetylaminoetylaminoskupina, .Y-metyl-A-(/V-metyl-pipeiidín-4-yl)aniinoskupina,
    860
    2-morfolino-etylaminoskupina, 3-morfolino-propylaminoskupina, 3-imidazolylpropylaminoskupina alebo 3 -(2-oxopyrolidinyl)propylamino-skupina.
  66. 67. Zlúčenina podľa nároku 8, kde m je 2; substituent Rs je Y-Z; Y je -C(O)-; a Z má všeobecný vzorec R , kde n je 0, 1,2 alebo 3.
  67. 68. Zlúčenina podľa nároku 9, kde substituent R4 je vodík alebo metyl;
    A je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z O, -N(R)- a -N(R)C(O)-;
    Z111 je -(CH2)n-cykloalkyl-(CH2)„-;
    substituent R je vodík alebo alkyl;
    n je 0 až 5;
    substituent Ra je jeden alebo viac substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z H, OH, F, Cl, metylu a metoxy skupiny; a substituent R( je jeden alebo viac substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z H, CN, F, CF3, OCF3, metylu, metoxyskupiny a prípadne substituovanej aminoskupiny; kde uvedená aminoskupina je prípadne substituovaná jednou alebo viac skupinami, kde každá je nezávisle vybraná zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, alkoxyalkylu, fenylu, substituovaného fenylu a prípadne substituovaného heteroarylu.
    861
  68. 69.
  69. 70.
    Zlúčenina podľa nároku 68. kde substituent R, je 4-metylfenyltioskupina alebo 2-pyridinyltioskupina.
    Zlúčenina podľa nároku 9, kde kde Z100 je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z benzo[7]tiofénu, furanylu a tiofénu.
  70. 71.
  71. 72.
    Zlúčenina podľa nároku 9, kde substituent Ra je alkoxyskupina; Aje NH-C(O)-; a medzi A a Z100 je kovalentná väzba.
    Zlúčenina podľa nárokov 1, 8 alebo 9, kde
    G je
    A—(C„-Ct)—Z
    100
    Aje vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -N(R)-C(0)-N(R)-, -(CH2)n-N(R)C(O)N(R)-, -N(R)- a -N(R)-SO2-; substituent R je vodík alebo alkyl;
    Z100 je > » > pyridinyl, tiazolyl, furanyl, benzofuranyl alebo oxazolyl;
    X je S, O alebo NR1, kde R1 v každom prípade je nezávisle H alebo Me;
    substituent Ra je jeden alebo viac substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z H a F; a
    862 substituent Ri je jeden alebo viac substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z H, F, Cl, Br, NCT, CF3, alkylu, alkoxyskupiny a alkoxykarbonylu.
  72. 73. Zlúčenina podľa nároku 72, kde:
    substituent R4 je metyl;
    m je 1,2 alebo 3;
    substituent R5 je Y-Z,
    Y je -C(O)O-, -C(O)- alebo -C(O)-(CH2)P-; a
    Z je aminoalkyl, H-alkylaminoskupina, Η,Ν-dialkylaminoskupina alebo hydroxyalkylaminoalkyl.
  73. 74. Zlúčenina podľa nároku 9, kde substituent Raje metyl;
    G je I , kde n je 0 až 3; a
    Z100 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z indolylu, indenylu, metylindenylu, metylindolylu, dimetylaminofenylu, fenylu, cyklohexylu a benzofuranylu.
  74. 75. Zlúčenina podľa nároku 9, kde:
    G je
    Z—A—Z—Z100
    863
    Z100 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z fenylu, imidazolylu, indolylu, furanylu, benzofuranylu a 2,3-dihydrobenzofuranylu; kde Z100 je prípadne substituovaná jedným alebo viac substituentmi, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, Cl, CN, prípadne substituovaného alkylu, -O-(prípadne substituovaného alkylu), -COOH, -Zl05-C(O)N(R)2, -Zl05-N(R)-C(O)-Z2Q0, -Z105-N(R)-S(O)2-Z20<) a -Z'05-N(R)-C(O)-N(R)-Z2W;
    Z10’ je kovalentná väzba alebo (Ci-Cŕ);
    Z200 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z (C|-C6), fenylu a -(Ci-Céj-fenylu;
    Z110 a Z111 sú každý nezávisle kovalentná väzba alebo skupina (C1-C3) prípadne substituovaná alkyiom, hydroxyskupinou, COOH, CN alebo fenylom; a
    A je O, -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)- alebo -N(R)-C(O)-, kde substituent R je H alebo alkyl.
  75. 76. Zlúčenina podľa nároku 75, kde substituent R4 je metyl.
  76. 77. Zlúčenina podľa nárokov 8, 9 alebo 10, kde
    G je ' , kde:
    Z100 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z benzoxazolylu, benzotiazolylu a benzimidazolylu.
  77. 78. Zlúčenina podľa nároku 77, kde:
    substituent R4 je metyl;
    864
    Aje-NH-;
    v tomto prípade je tu iba jeden substituent Ra vybraný z H alebo F; a
    Z100 je prípadne substituovaná jedným alebo viac substituentmi, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, halogénu, CF3 a alkoxyskupiny.
  78. 79. Zlúčenina podľa nároku 9, kde:
    G je
    Z100 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z fenylu, pyrolylu, pyridylu, benzinudazolylu, naftylu a N ; kde z100 je prípadne substituovaná jedným alebo viac substituentmi, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, Cl, Br, NO2, aminoskupiny, jV-alkylaminoskupiny, Ä/yV-dialkylaminoskupiny, CN, prípadne substituovaného alkylu, -O-(prípadne substituovaného alkylu) a fenylu;
    Z110 a Z111 v každom prípade je nezávisle (C0-C3) prípadne substituovaný prípadne substituovaným fenylom; a
    A je -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-S(O)2-, -N(R)-C(O)-, -N(R)- alebo
    -N(R)-C(O)-O-.
  79. 80. Zlúčenina podľa nároku 79, kde substituent R4 je metyl a v tomto prípade je tu iba jeden substituent Ra a je F.
  80. 81. Zlúčenina podľa nároku 9 alebo 66, kde
    865
    V_AzUSa_zU!z'»»
    Gje ' ;
    Z100 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z fenylu, izoxazolylu, tetrahydronafthylu, furanylu, benzofuranylu, pyridylu a indolylu; kde Z100 je prípadne substituovaná jedným alebo viac substituentmi, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, CN, NO2, -C(O)H, -CONH2, -NHSO2CF3, prípadne substituovaného alkylu, prípadne substituovaného heteroarylu a -O-(prípadne substituovanej alkylovej skupiny);
    Z110 a Z111 sú každý nezávisle prípadne substituovaný (C0-C3); a
    A je O, -N(R)-C(O)-(CH2)„-N(R)-, -C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)-C(O)- alebo -N(R)-.
  81. 82. Zlúčenina podľa nároku 81, kde substituent R4 je metyl; substituent Ra je H alebo metoxyskupina; a Z110 a Z111 sú každý nesubstituovaný.
  82. 83. Zlúčenina podľa nároku 9, kde G je
    866
    Ο kde substituent R je H alebo nižší alkyl a n je v každom prípade nezávisle 1 až 6.
  83. 84. Zlúčenina podľa nároku 83, kde
  84. 85. Zlúčenina podľa nároku 84, kde Z100 je substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl
  85. 86. Zlúčenina podľa nárokov 8, 9 alebo 10, kde
    867
  86. 87.
    87.
  87. 88.
    88.
  88. 89.
    89.
    G je
    A-Z
    100 , kde Z100 je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z benzoxazolylu, benzotiazolylu a benzimidazolylu.
    Zlúčenina podľa nároku 11, kde n je 2; substituent Ró je H; m je 1; r je 1; a substituenty R4 a R5 sú každý vodík.
    Zlúčenina podľa nároku 64 alebo 87, kde G je 4-fenoxyfenyl.
    Zlúčenina všeobecného vzorca (I)
    N.
    (I) jej racemické-diastereoméme zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:
    θ je
    868 vybraná zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, cykloalkyl, pyrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl. chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-a]pyrimidinyl, lA-imidazo[l,2-fl]imidazolyl, imidazo[2,l-ó][l,3]tiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzotienyl, furanyl, tienyl, benzoxazolyl, benzoizoxazolyl, benzotiazolyl, , tiazolyl, benzofuranyl, 2,3-dihydrobenzo-furanyl, indolyl, izoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrolyl, pyrolopyridinyl, A-pyridinón, oxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, tiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[1,2-ajpyridinyl, benzoizotíazolyl, 1,1-dioxybenzoizotiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-tiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-tiazolyl a benzimidazolyl;
    Z110 je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-Cé), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN. OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    Z111 je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Ci-Ce) alebo prípadne substituovaný (CH2)n-cykloalkyl-(CH2)n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOII. substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    každý zo substituentov R3 a Rj predstavuje jeden alebo viac substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny, ktorú tvoria atóm vodíka, halogén, -CN, -NO2, -C(O)OH. -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl. trifluórmetylkarbonylamino869 skupina, trifluórmetylsulfónamidoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-S(O)p, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkinyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované alebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryltioskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aryltioskupina, -ZlíbC(O)N(R)2, -Z105-N(R)-C(O)-Z200, -Z'05-N(R)-S(O)2-Z20(), -Z105-N(R)-C(O)N(R)-Z200, Rc a CH2ORc; kde substituent Rc pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH2-NRdRe, -W-CCHijt-NRdRe, -W-(CH2)t-O-alkyl, -W-(CH2)t-S-alkyl, alebo -W-(CH2)t-OH;
    Z105 pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Ci-Cg);
    Z200 pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Cj-Cô), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cô)-fenyl;
    substituenty Ra a Re pri každom výskyte sú nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO2-alkyl; alebo substituenty Rd, Re a dusíkový atóm, ku ktorému sú viazané, spoločne tvoria 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh;
    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;
    870
    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)2, alebo NRf, kde Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;
    substituent R3 pri každom výskyte je, nezávisle, atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl, alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;
    A je -(CrC6)-, -O-; -S-; -S(O)P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO2R)-; -CH2O-; -CH2S-; -CH2N(R)-; -CH(NR)-; -CH2N(C(O)R))-; -CH2N(C(O)OR)-; -CH2N(SO2R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO2R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH2)n+1-C(O)-, -S(O)PN(R)-; -O-(CR2)n+1-C(O)-, -O-(CR2)n+1-O-, -N(C(O)R)S(O)P-; -N(R)S(O)PN(R)-;
    -N(R)-C(O)-(CH2)„-O-, -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)PN(R)C(O)-; -OS(O)PN(R)-; -N(R)S(O)PO-; -N(R)S(O)PC(O)-; -SOPN(C(O)R)-; -N(R)SOPN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(ORh)O-; -N(R)P(ORb)-; -N(R)P(O)(ORb)O-; -N(R)P(O)(ORb)-;
    -N(C(O)R)P(ORb)O-; -N(C(O)R)P(ORb)-; -N(C(O)R)P(O)(OR„)O-, alebo
    -N(C(O)R)P(ORb)-;
    substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    substituent Rb pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    p je 1 alebo 2; alebo
    871 v skupine obsahujúcej fosfor tvoria dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a Rb spoločne 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh; alebo
    A je NRSO2 a substituenty R, Ra a dusíkový atóm spoločne tvoria substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo
    Z110-A-ZIH dohromady sú kovalentná väzba; a substituent R2 je a) atóm vodíka; b) substituovaný alebo nesubstituovaný tri tyl; c) substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl; d) azaheteroaryl substituovaný substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom; e) azacykloalkyl, ktorý je substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-CQ-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -Ci-Cô-alkyl-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-Ci-Cô-alkyl-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cg-alkyl-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -Ci-Cô-alkyl-cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný tetrahydrotienyl, a substituovaný alebo nesubstituovaný tetrahydrotiopyranyl; alebo f) skupina všeobecného vzorca E’, kde Ei je piperidinyl, piperazinyl, imidazolyl, morfolinyl, pyrolidinyl, aminoskupina, amidoskupina, alebo tetrahydrotiazolyl, a kde E je prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými z -Co-C6-alkyl-OR, -C]-C6-alkyl-C(O)OR, -C]-C6-alkyl-heteroarylu, -Ci-C6-alkylheterocykloalkylu, a -Ci-Cô-alkyl-N(R)2;
    a je 1 a symboly Db Gj, J), L] a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Db Gb Jb Li a Mi sú CRa; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Db Gi, L, a Mi je NRa, jeden zo symbolov Db Gi, L] a M] je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam;
    872
  89. 90.
    90.
    b je 1 a symboly D?, G2, J2, L2 a M2 sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D2, G2, J2, L2 a M? sú CRa; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D2, G?, L2 a M2 je NRa, jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Z'^-A-Z111 dohromady sú kovalentná väzba, potom Z100 nie je alkyl; a s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Zll0-A-Z111 dohromady sú Ci-Cŕ alkyl, potom Z100 nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl.
    Zlúčenina podľa nároku 89, kde substituent R2 je skupina reprezentovaná nasledujúcou štruktúrou:
    kde:
    Ei je vybrané zo skupiny, ktorú tvoria -amino-Ci-Cé-alkyl-morfolinoskupina, -piperidino-(Ci-Cô-alkyl-OR), -imidazolyl-Ci-C6-alkyl-C(0)OR, -piperazino-Ci-Cé-alkyl-OR, -amino-Ci-Cé-alkyl-OR, -pyrolidino-OR, -amino-Ci-Cé-alkylimidazoloskupina, amino-Ci-C.6-alkyI-N(R)2, -amido-Ci-C6-alkyl-N(R)2, tetrahydrotiazolyl, 7V,A-di-(hydroxy-Ci-C6-alkyl)amino- a -piperizino-OR.
    Zlúčenina podľa nároku 90, kde;
    873
    E] je vybrané zo skupiny, ktorú tvoria 4-(2-hydroxyetyl)morfolino-skupina, 3-hydroxymetylpiperidinoskupina, 2-[3-(metylkarbo-xy)propyl]imidizol-4-yl, 4-(2-hydroxyetyljpiperazino, 2-hydroxy-etylaminoskupina, 3-hydroxy-pyrolidinoskupina, 3-imidazolo-propylaminoskupina, 4-hydroxy-butylaminoskupina, 3-metoxy-propylaminoskupina, 3-(A,A’-dimetyl-amino)propylaminoskupina, N-[2-(N,Ndimetyljetyljamidoskupina, tetrahydrotiazolyl, jV,yV-di-(2-hydroxyetyl)aminoskupina, 4-hydroxy-piperizinoskupina a 4-hydroxymetylpiperizinoskupina.
  90. 92. Zlúčenina podľa nároku 90, kde ZIK)-A-Z111 je -NHC(O)-.
  91. 93. Zlúčenina podľa nároku 90, kde G je skupina reprezentovaná nasledujúcou štruktúrou:
  92. 94. Zlúčenina podľa nároku 93, kde G je reprezentované nasledujúcou štruktúrou:
    CF,
  93. 95. Zlúčenina podľa nároku 89, kde substituent R2 je azaheteroaryl substituovaný Cj-Cg alkylom, kde alkyl je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými z RO-, -C(O)OR, -C(O)N(R)2 a -N(R)2.
  94. 96. Zlúčenina podľa nároku 95, kde substituent R2 je 4-(2-hydroxyetyl)pyridín-2-yl, 3-aminometylpyridín-4-yl alebo 2-metylimidazol-4-yl.
    874
  95. 97. Zlúčenina podľa nároku 96, kde G je reprezentované nasledujúcim vzorcom:
  96. 98. Zlúčenina podľa nároku 89, kde substituent R? je pyrolidinyl, ktorý je substituovaný 2-metoxyetylom, A/lV-dimetylaminometylom, A/lV-dimetylamino-l-oxoetylom alebo 2-7/-metylamino)-1 -oxopropylom.
  97. 99.
    Zlúčenina podľa nároku 98, kde G je reprezentované nasledujúcou štruktúrou:
  98. 100. Zlúčenina podľa nároku 89, kde substituent R2 je piperidinyl, ktorý je substituovaný tetrahydrotiopyranylom, tetrahydrotienylom, 2-(jV-metylamino)-2-metyl-l-oxopropylom, 2-metoxyetylom alebo cyklopropylmetylom.
  99. 101. Zlúčenina všeobecného vzorca (I)
    875
    d) jej racemické-diastereoméme zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:
    G je DÍV./£ •M1 kde Z100 je pyrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-a|pyrimidinyl, l/f-imidazo[l,2-a]imidazolyl, imidazo[2,l-&][l,3]tiazolyl, H-pyridinón, 1,1-dioxybenzoizotiazolyl, benzoizoxazolyl, alkyl, imida- zo[l,2-a]pyridinyl, pyrolopyridinyl alebo S , kde všetky z predchádzajúcich Z100 skupín sú prípadne substituované substituentom Rj;
    Z110 je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-C6), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    Z111 je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Ci-Cg) alebo prípadne substituovaný (CH2)n-cykloalkyl-(CH2)n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    876 každý zo substituentov Ra a Rj predstavuje jeden alebo viac substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny, ktorú tvoria atóm vodíka, halogén, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluórmetylkarbonylaminoskupina, trifluórmetylsulfónamidoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina. substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylS(O)P-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkinyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované alebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryltioskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aryltioskupina, -Z105-C(O)N(R)2, -Z105-N(R)-C(O)-Z200, -Z105-N(R)-S(O)2-Z20t), -Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z200, ÍU a CH2ORc;
    kde substituent Rc pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH2-NRdR<,, -W-(CH2)t-NRdRc. -W-(CH2)t-O-alkyl, -W-(CHz)rS-alkyl, alebo -W-(CH2)t-OH;
    Z105 pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Ci-Cé);
    Z200 pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-C&). substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-feny 1;
    877 substituenty FQ a Rc pri každom výskyte sú nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO2-alkyl; alebo substituenty Rd, Rc a dusíkový atóm, ku ktorému sú viazané, spoločne tvoria 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh;
    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;
    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)2, alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;
    substituent R3 pri každom výskyte je, nezávisle, atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl, alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;
    A je -(C,-C6)-, -O-; -S-; -S(O)P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO2R)-; -CH2O-; -CH2S-; -CH2N(R)-; -CH(NR)-; -CH2N(C(O)R))-; -CH2N(C(O)OR)-; -CH2N(SO2R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO2R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH2)n4l-C(O)-, -S(O)PN(R)-; -O-(CR2)n+i-C(O)-, -O-(CR2)n+1-O-, -N(C(O)R)S(O)P-; -N(R)S(O)PN(R)-;
    -N(R)-C(O)-(CH2)n-O-, -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)PN(R)C(O)-; -OS(O)PN(R)-; -N(R)S(O)PO-; -N(R)S(O)PC(O)-; -SOPN(C(O)R)-; -N(R)SOpN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR„)O-; -N(R)P(ORb)-; -N(R)P(O)(ORb)O-; -N(R)P(O)(ORb>;
    -N(C(O)R)P(ORb)O-; -N(C(O)R)P(ORb)-; -N(C(O)R)P(O)(ORb)O-, alebo
    -(C(O)R)P(ORb)-;
    kde substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    878 substituent Rh pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl:
    p je 1 alebo 2; alebo v skupine obsahujúcej fosfor tvoria dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a Rb spoločne 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh; alebo
    A je NRSO2 a substituenty R, Ra a dusíkový atóm spoločne tvoria substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo
    Z1IO-A-Z1H dohromady sú kovalentná väzba; a substituent R2 je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z101-Z102;
    Z101 je kovalentná väzba, -(Ci-C6)-, -(C,-C6)-O-, -(CrC6)-C(O)-. -(C,-C6)-C(O)O-, -(Ci-C6)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((C|-C6))- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;
    Z102 je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená hetcrocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná. nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina majú jeden alebo viac substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogén, substituovaný alebo nesubstituovaný (C]-C&), substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cô)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný N((Ci-Cô)-OR)2. substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(C|-C6)-C(O)2R. substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C{l)-N(R)-(Ci-C6)-OR. substituovaný
    879 alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)X(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cô)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaná alebo nesubstituovaná sulfónamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(C!-C6)-0R, oxoskupina, a nasýtená, nenasýtená alebo aromatická, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahujúca jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny, ktorú tvoria N, O, a S; kde dusíkové atómy uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(0)N(R)2, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-Cô)-N(R)2, -C(O)-alkylom, -C(O)-arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom; alebo substituent R2 je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cej-azacykloalkyl-, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-Ce)-.
    880 substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(C|-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(C]-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-(C]-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Cô)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-Cf,)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alky lkarbóny 1, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    a je 1 a symboly Dj, G,, Ji, Li a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Di, Gi, Jj, Li a Mi sú CRa; alebo a je 0 a jeden zo symbolov D), G], L] a Mi je NRa, jeden zo symbolov Dj, Gi, L] a Mi je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam;
    b je 1 a symboly D2, G2, J2, L2 a M2 sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D2, G2, J2, L2 a M2 sú CRa; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je NRa, jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď A je -N(R)-, Ζ11ϋ a Z111 sú každý kovalentná väzba a substituent R? je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4881 diacylxytetrahydrofur-2-yl, potom Zlon nie je alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl alebo pyrolidinyl;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Z110 a Z111 sú každý kovalentná väzba a substituent R? je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z100 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, potom A nie je alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- alebo -C(0)0-;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Z110-A-Zln dohromady sú kovalentná väzba, potom Z100 nie je alkyl;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Z’^-A-Z111 dohromady sú Cj-Cé alkyl, potom
    Z100 nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrímidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl; a s výhradou spočívajúcou v tom, že keď substituent R2 je substituovaný alebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z100 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, Z110 a Z111 sú každý kovalentná väzba, potom A nie je -0-, -C(0)0-, alebo -N(R)-.
  100. 102. Zlúčenina podľa nároku 101, kde Z100 je 2-pyrolidinyl, l,2-dihydro-2-oxopyridín-3-yl, benzoizoxazol-3-yl, l,l-dioxybenzoizotiazol-3-yl, imidazo[l,2-ŕ7]pyridín-2-yl alebo substituent R2 je 4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl.
  101. 103. Zlúčenina podľa nároku 102, kde Ζ^θ-Α-Ζ111 je-NH-.
  102. 104. Zlúčenina podľa nároku 101, kde Z100 je pyrolopyridinyl vybraný zo skupiny
    882
  103. 105. Zlúčenina podľa nároku 104, kde Zll0-A-Zni je -NHC(O)-.
  104. 106. Zlúčenina podľa nároku 105, kde substituent R2 je piperidín-4-yl, JV-metylpiperidín-4-yl, ;V-(prop-2-yl)piperidín-4-yl, yV-(imidazol-4-yl-metyl)piperidín-4-yl, ľV-(2-metylimidazol-4-yl-metyl)piperidín-4-yl, //-(pyrazol-4-yl-metyl)piperidín-4-yl, A-(2-metoxyetyl)piperidín-4-yl, A-(fur-3-yl-metyl)piperidín-4-yl, yV-(tetrahydropyrán-4-yl-metyl)piperidín4-yl, jV-(pyrol-2-yl-metyl)piperidín-4-yl, alebo JV-(2-difluór-etyl)piperidín-4-yl.
  105. 107. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) jej racemické-diastereomérne zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:
    883
    Gje kde Z100 je alebo skupina prípadne substituovaná substituentom R] vybraná zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, cykloalkyl, pyrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-o]pyrimidinyl, l//-imidazo[l,2-a]imidazolyl, imidazo[2,l-7?][l,3]tiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzotienyl, furanyl, tienyl, benzoxazolyl, benzoizoxazolyl, benzotiazolyl, tiazolyl, benzofuranyl, 2,3-dihydrobenzo-furanyl, indolyl, izoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrolyl, pyrolopyridinyl, //-pyridinón, oxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, tiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[l,2-fl]pyridinyl, benzoizotiazolyl, 1,1-dioxy-benzoizotiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-tiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-tiazolyl a benzimidazolyl;
    Z110 je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-C6), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    Z111 je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Ci-Céj alebo prípadne substituovaný -(CH2)n-cykloalkyl-(CH2)n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    8S4 každý zo substituentov Ra a Rj predstavuje jeden alebo viac substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny, ktorú tvoria atóm vodíka, -C(O)O-aryl, -C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkyI, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylalkoxy-skupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)p-, a kde aspoň jeden zo substituentov Ra a Ri nie je atóm vodíka;
    substituent R3 pri každom výskyte je, nezávisle, atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;
    A je -(C,-C6)-, -O-; -S-; -S(O)P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO2R)-; -CH2O-; -CH2S-; -CH2N(R)-; -CH(NR)-; -CH2N(C(O)R))-; -CH2N(C(O)OR)-; -CH2N(SO2R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO2R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH2)n+i-C(O)-, -S(O)PN(R)-; -O-(CR2)n+1-C(O)-, -O-(CR2)n+1-O-, -N(C(O)R)S(O)p-; -N(R)S(O)pN(R)-;
    -N(R)-C(O)-(CH2)n-O-, -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)PN(R)C(O)-; -OS(O)PN(R)-; -N(R)S(O)PO-; -N(R)S(O)PC(O)-; -SOPN(C(O)R)-; -N(R)SOPN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(ORb)O-; -N(R)P(ORb)-; -N(R)P(O)(ORb)O-; -N(R)P(O)(ORb)-;
    -N(C(O)R)P(ORb)O-; -N(C(O)R)P(ORb)-; -N(C(O)R)P(O)(ORb)O-, alebo
    -(C(O)R)P(ORb)-;
    kde substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    885 substituent Rb pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    p je 1 alebo 2; alebo v skupine obsahujúcej fosfor tvoria dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a Rb spoločne 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh; alebo
    A je NRSO2 a substituenty R, Ra a dusíkový atóm spoločne tvoria substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo
    Z110-A-Zni dohromady sú kovalentná väzba; a substituent R2 je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z10,-Zll)2;
    Z101 je kovalentná väzba, -(CrC6)-, -(Ci-C6)-O-, -(C|-C6)-C(O)-, -(Ci-C6)-C(O)O-, -(Ci-C6)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((Ci-C6))- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;
    Z102 je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina majú jeden alebo viac substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogén, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cô), substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovaný alebo nesubstituovaný -N((Ci-C6)-OR)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(C)-C6)-C(O)2R, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný
    886 alebo nesubstituovaný -(Ci-Cé)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -(C|-Cď)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaná alebo nesubstituovaná sulfónamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(C)-C6)-0R, oxoskupina, a nasýtená, nenasýtená alebo aromatická, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahujúca jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny, ktorú tvoria N, O, a S; kde dusíkové atómy uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)N(R)2, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-C6)-N(R)2, -C(O)-alkylom, -C(O)-arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom; alebo substituent R2 je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cé)-azacykloalkyl-. substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl. substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)887
    -(Ci-Cô)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-Cô)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-Cg)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-(C)-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-C6)-N(R)-substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-Cé)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituova-ná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    a je 1 a symboly Dj, Gi, Ji, Li a M] sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D], Gi, Ji, Lj a Mi sú CRa; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Dj, Gi, Li a Mi je NRa, jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam;
    b je 1 a symboly D2, G2, J2, L2 a M2 sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D2, G2, J2, L2 a M2 sú CRa; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je NRa, jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď A je -N(R)-, Z110 a Zlu sú každý kovalentná väzba a substituent R2 je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4888 diacyloxytetrahydroíur-2-yl, potom Z100 nie je alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl alebo pyrolidinyl;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Z110 a Z111 sú každý kovalentná väzba a substituent R2 je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z100 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, potom A nie je alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- alebo -C(0)0-;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Zll0-A-Zin dohromady sú kovalentná väzba, potom Z100 nieje alkyl;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď ZIIO-A-Z1U dohromady sú Ci-Cď alkyl, potom Z100 nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl; a s výhradou spočívajúcou v tom, že keď substituent R2 je substituovaný alebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z100 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, Z° a Z111 sú každý kovalentná väzba, potom A nie je -0-, -C(0)0-, alebo -N(R)-.
  106. 108. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) jej racemické-diastereomérne zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:
    889 kdeZ100je alebo skupina prípadne substituovaná substituentom R] vybraná zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, cykloalkyl, pyrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-tf]pyrimidinyl, lN-imidazo[l,2-a]imidazolyl, imidazo[2,l-Z>][l,3]tiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzotienyl, furanyl, tienyl, benzoxazolyl, benzoizoxazolyl, benzotiazolyl, tiazolyl, benzofuranyl,
    2,3-dihy drobenzofurany 1,
    -xe indolyl, izoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrolyl, pyrolopyridinyl, H-pyridinón, oxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, tiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl, benzoizotiazolyl, 1,1-dioxybenzoizotiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-tiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimidotiazolyl a benzimidazolyl;
    Z110 je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (C|-Cô), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    Z111 je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Cι-Ce) alebo prípadne substituovaný (CH2)n-cykloalkyl-(CH2)n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    890 každý zo substituentov Ra a R] predstavuje jeden alebo viac substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny, ktorú tvoria atóm vodíka, halogén, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyh -C(O)O-aryl, -C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluórmetylkarbonylaminoskupina, trifluórmetylsulfónamidoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylS(O)P-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkinyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované alebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryltioskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aryltioskupina, -Z105-C(O)N(R)2, -Z,D5-N(R)-C(O)-Z200, -Z105-N(R)-S(O)2-Z200, -ZllJ5-N(R)-C(O)-N(R)-Z200, Rc a CH2OR<;
    kde substituent Rc pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH2-NRdRe, W-(CH2)tNRdRc, -W-(CH2)t-O-alkyl, -W-(CH2)t-S-alkvl, alebo -W-(CH2)t-OH;
    Z103 pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Cj-Cé);
    Z200 pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Cj-Cô), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Cj-Cej-fenyl;
    891 substituenty R<i a Re pri každom výskyte sú nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO2-alkyl; alebo substituenty Ra, Re a dusíkový atóm, ku ktorému sú viazané, spoločne tvoria 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh;
    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;
    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)2, alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent R] je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyl lický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;
    substituent R3 pri každom výskyte je, nezávisle, atóm vodíka, hydroxy skupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl, alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;
    Aje -(Ci-C6)-;
    substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    p je 1 alebo 2;
    substituent R2 je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z101-Z102;
    Z101 je kovalentná väzba, -(CrC6)-, -(C,-C6)-O-, -(Ci-C6)«C(O)-, -(C,-C6)~C(O)O-, -(C|-C6)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((C|-C6))- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;
    Z102 je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl. substituovaný
    892 cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina majú jeden alebo viac substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogén, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cé), substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -N((Ci-Cé)-OR)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6) -C(O)2R, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cé)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaná alebo nesubstituovaná sulfónamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Cj-C6)-OR, oxoskupina, a nasýtená, nenasýtená alebo aromatická, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahujúca jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny, ktorú tvoria N, O, a S; kde dusíkové atómy uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným hetero ary lom, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)N(R)2, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-Cé)-N(R)2, -C(0)-alkylom, -C(O)-arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom; alebo substituent R2 je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl. substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituot aná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný
    893 alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Céj-azacykloalkyl-, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-Cô)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-Cé)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-Ce)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-(C]-Cé)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    a je 1 a symboly Dj, Gi, Jj, Lj a M( sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Dj, Gi, Ji, Li a Mi sú CRa; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Dj, Gi, Li a Mi je NRa, jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam;
    894 b je 1 a symboly D2, G2, J2, L2 a M2 sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D2, G2, J2, h2 a M2 sú CRa; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M? je NRa, jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Z110-A-Z'11 dohromady sú Cj-Cé alkyl, potom Z100 nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl.
  107. 109. Zlúčenina všeobecného vzorca (I)
    0) jej racemické-diastereomérne zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:
    θ je
  108. 110
    895 alebo skupina prípadne substituovaná substituentom R] vybraná zo skupiny, ktorú tvoria pyrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-a]pyrimidinyl, lH-imidazo[l,2-a]imidazolyl, imidazo[2,l-A][l,3]tiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzotienyl, furanyl, tienyl, benzoxazolyl, benzoizoxazolyl, benzotiazolyl, tiazolyl, benzofuranyl, 2,3-dihydrobenzofuranyl, indolyl, izoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrolyl, pyrolopyridinyl, //-pyridinón, oxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, tiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[1,2-a]pyridinyl, benzoizotiazolyl, 1,1-dioxybenzoizotiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-tiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-tiazolyl a benzimidazolyl;
    každý zo substituentov Ra a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny, ktorú tvoria atóm vodíka, halogén, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)Oheteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluórmetylkarbonylaminoskupina, trifluórmetylsulfónamidoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylS(O)P-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo
    896 nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný aiebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkinyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované alebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryltioskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aryltioskupina, -Z105-C(O)N(R)2, -Z105-N(R)-C(O)-Z200, -Z105-N(R)-S(O)2-Z200, -Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z200, Rc a CH2ORc;
    kde substituent Rc pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH2-NRdRc, -W-CCHzj.-NRdRc, -W-(CH2)t-O-alkyl, -W-(CH2)rS-alkyl, alebo -W-(CH2)t-OH;
    Zlto pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Cj-Cô):
    Z200 pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cô), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cô)-fenyl;
    substituenty Rd a Re pri každom výskyte sú nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO2-alkyl; alebo substituenty R<j, Re a dusíkový atóm, ku ktorému sú viazané, spoločne tvoria 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh;
    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;
    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)2, alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;
    substituent R3 pri každom výskyte je, nezávisle, atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyI, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl, alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;
    897 substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    p je 1 alebo 2;
    Z11O-A-Z1U dohromady sú kovalentná väzba; a substituent R2 je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z101-Z102;
    Z101 je kovalentná väzba, -(Ci-C6)-, -(Ci-C6)-O-, -(C!-C6)-C(O)-, -(Ci-C6)~C(O)O-, -(Ci-C6)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((Ci-C6))- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;
    Z102 je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina majú jeden alebo viac substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogén, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cg), substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cé)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -N((Ci-Cô)-OR)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-C(O)2R, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6) -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaná alebo nesubstituovaná sulfónamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cé)-OR, oxoskupina, a nasýtená, nenasýtená alebo aromatická, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická skupina
    898 obsahujúca jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny, ktorú tvoria N, O, a S; kde dusíkové atómy uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)N(R)2, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-C6)-N(R)2, -C(O)-alkylom, -C(O)arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom; alebo substituent R2 je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroeykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný (Cj-Côj-azacykloalkyl-, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(C|-Cô)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-Cô)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Cô)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(C|-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbon\l, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný
    899 heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Di,Gi,Ji,LiaMiSÚ CRa; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je NRa, jeden zo symbolov Db Gj, Li a Mi je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam;
    b je 1 a symboly D2, G2, J2, L2 a M2 sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D2, G2, J2, L2 a M2 sú CRa; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je NRa, jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6.
    110. Zlúčenina všeobecného vzorca (I)
    900 jej racemické-diastereoméme zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:
    R,
    Ď
    Gje / 1 L ’W /A ~110Α
    Mj Z—A-Z—Z kde Z100 je
    2 alebo skupina prípadne substituovaná substituentom R] vybraná zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, cykloalkyl, pyrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-«]pyrimidinyl, 17/-imidazo[l,2-«]imidazolyl, imidazo[2,l-7][l,3]tiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzotienyl, furanyl, tienyl, benzoxazolyl, benzoizoxazolyl, benzoN tiazolyl, /
    , tiazolyl, benzofuranyl, 2,3-dihydrobenzofuranyl, indolvl, izoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrolyl, pyrolopyridinyl, A-pyridinón, oxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, tiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[1,2-n]pyridinvl, benzoizotiazolyl, 1,1-dioxybenzoizotiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-tiazolyl. pyrimido-oxazolyl, pyrimido-tiazolyl a benzimidazolyl:
    901
    Z110 je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Cj-Cŕ), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    Z111 je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Ci-Cô) alebo prípadne substituovaný -(CH2)n-cykloalkyl-(CH2)n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    každý zo substituentov Ra a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny, ktorú tvoria atóm vodíka, halogén, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)Oheteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluórmetylkarbonylaminoskupina, trifluórmetylsulfónamidoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroary], substituovaný alebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylS(O)P-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkinyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl. substituované alebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryltioskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aryltioskupina, -Z105-C(O)N(R)2, -Z105-N(R)C(0)-Z200, -Z105-N(R)-S(O)2-Z200, -Z105-N(R)-C(O)N(R)-Z200, Rt a CH2ORc;
    902 kde substituent Rc pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH2-NRdRe, -W-CCHjjt-NRJQ, -W-(CH2)t-O-alkyl, -W-(CH2)rS-alkyl, alebo -W-(CH2)rOH;
    Z105 pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (C]-Cb);
    Z200 pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-C6), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cé)-fenyl;
    substituenty Rj a R^ pri každom výskyte sú nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO2-alkyl; alebo substituenty Rd, Re a dusíkový atóm, ku ktorému sú viazané, spoločne tvoria 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh;
    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;
    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)2, alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;
    substituent R3 pri každom výskyte je, nezávisle, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl, alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(ľ(O)-heteroaryl;
    A je -(C,-C6)-, -O-; -S-; -S(O)P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO2R)-; -CH2O-; -CH2S-; -CH2N(R)-; -CH(NR)-; -CH2N(C(O)R))-; -CH2N(C(O)OR)-; -CH2N(SO2R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO2R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH2)n+1-C(O)-, -S(O)PN(R)-; -O-(CR2)n+1-C(O)-, -O-(CR2)n+1-O-, -N(C(O)R)S(O)P-; -N(R)S(O)PN(R)-;
    -N(R)-C(O)-(CH2)„-O-, -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)pN(R)C(O)-; -OS(O)pN(R)-; -N(R)S(O)PO-; -N(R)S(O)PC(O)-; -SOPN(C(O)R)-; -N(R)SOPN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(ORb)O-; -N(R)P(ORb)-; -N(R)P(O)(ORb)O-; -N(R)P(O)(ORb)-;
    903
    -N(C(O)R)P(ORb)O-; -N(C(O)R)P(ORb)-; -N(C(O)R)P(O)(ORb)O-, alebo
    -N(C(O)R)P(ORb)-;
    kde substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    substituent Rb pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    p je 1 alebo 2; alebo v skupine obsahujúcej fosfor tvoria dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a Rb spoločne 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh; alebo
    A je NRSO2 a substituenty R, Ra a dusíkový atóm spoločne tvoria substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo
    Z1 ’θ-Α-Ζ111 dohromady sú kovalentná väzba; a substituent R2 je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z101-Z102;
    Z101 je kovalentná väzba, -(CrC6)-, -(C,-C6)-O-, -(Ci-C6)-C(O)-, -(C,-C6)-C(O)O-, -(Ci-C6)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((Ci-C6))- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;
    Z102 je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina majú jeden alebo viac substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogén,
    904 substituovaný alebo nesubstituovaný (C|-Cg), substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -N((CrC6)-OR)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(C|-C6)-C(O)2R, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cô)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cô)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaná alebo nesubstituovaná sulfónamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cô)-OR, oxoskupina, a nasýtená, nenasýtená alebo aromatická, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahujúca jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny, ktorú tvoria N, O, a S; kde dusíkové atómy uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroaryloín, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)N(R)2, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-C6)-N(R)2, -C(O)-alkylom, -C(O)-arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom; alebo substituent R2 je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná
    905 aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cé)-azacykloalkyl-, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Cé)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Cj-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    a je 1 a symboly Di, Gj, Jj, Li a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Dj, Gi, J], Li a Mi sú CRa; alebo a je 0 a jeden zo symbolov D), Gi, Li a Mi je NRa, jeden zo symbolov Di, Gj, Li a Mi je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam;
    b je 1 a symboly D2, G2, J2, L2 a M2 sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D2, G2, J2, L2 a M2 sú CRa; alebo
    906 b je 0 a jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M? je NRa, jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď A je -N(R)-, Z110 a Zll! sú každý kovalentná väzba a substituent R2 je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, potom Z100 nie je alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydro furanyl, piperidinyl alebo pyrolidinyl;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Z110 a Z111 sú každý kovalentná väzba a substituent R2 je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z100 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, potom A nie jc alkyl, -0-, -C(O)-, -NHC(O)- alebo -C(O)O-;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Ζ11θ-Α-Ζ,Η dohromady sú kovalentná väzba, potom Z100 nie je alkyl;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Z11O-A-Z1U dohromady sú Ci-Cô alkyl, potom Z100 nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, p\ ridazinyl, furyl alebo tienyl; a s výhradou spočívajúcou v tom, že keď substituent R2 je substituovaný alebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z100 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, Z110 a Z111 sú každý kovalentná väzba, potom A nie je -0-, -C(0)0-, alebo -N(R)-.
  109. 111. Zlúčenina všeobecného vzorca (I)
    907
    k.
    (D jej racemické-diastereoméme zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:
    1
    W ,ΖΧτΠΟχ ,-,111,-,100 -M, Z—A—Z—Z
    Gje //A
    2 /Hl kde Z100 je alebo skupina prípadne substituovaná substituentom Ri vybraná zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, cykloalkyl, pyrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-a]pyrimidinyl, l//-imidazo[l,2-a]imidazolyl, imidazo[2,l-ú][l,3]tiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzotienyl, furanyl, tienyl, benzoxazolyl, benzoizoxazolyl, benzo
    tiazolyl, ; IN , IN , b , tiazolyl, benzofuranyl, 2,3-dihydrobenzo-furanyl, indolyl, izoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrolyl, pyrolopyridinyl, H-pyridinón, oxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, tiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[1,2-njpyridmyl, benzoizotiazolyl, 1,1-dioxybenzoizo-tiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-tiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-tiazolyl a benzimidazolyl;
    908
    Ζ1,θ je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-C6), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    Z111 je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Cj-Cô) alebo prípadne substituovaný (CH2)n-cykloalkyl-(CH2)n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    každý zo substituentov Ra a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny, ktorú tvoria atóm vodíka, halogén, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)Oheteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluórmetylkarbonylaminoskupina, trifluórmetylsulfónamidoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný a!kyl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-S(O)P-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylS(O)P-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkinyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované alebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryltioskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aryltioskupina, -Z105-C(O)N(R)2, -Z105-N(R)-C(O)-Z200, -Z105-N(R)-S(O)2-Z200, -Zl05-N(R)-C(O)-N(R)-Z20n, Rc a CH2ORc;
    909 kde substituent Rc pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH2-NRdRe, W-CCHijt-NRdRe, -W-(CH2)rO-alkyl, -W-(CH2),-S-alkyl, alebo -W-(CH2)t-OH;
    Z103 pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Ci-Cé);
    Z200 pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cô), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cé)-fenyl;
    substituenty R<j a Re pri každom výskyte sú nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO2-alkyl; alebo substituenty Rd, Re a dusíkový atóm, ku ktorému sú viazané, spoločne tvoria 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh;
    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;
    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)2, alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent R] je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;
    substituent R3 pri každom výskyte je, nezávisle, atóm vodíka, hydroxy skupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl, alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;
    A je -(C,-C6)-, -O-; -S-; -S(O)p-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO2R)-; -CH2O-; -CH2S-; -CH2N(R)-; -CH(NR)-; -CH2N(C(O)R))-; -CH2N(C(O)OR)-; -CH2N(SO2R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO2R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH2)n+,-C(O)-. -S(O)PN(R)-; -O-(CR2)n+i-C(O)-, -O-(CR2)n+1-O-, -N(C(O)R)S(O)P-; -N(R)S(O)PN(R)-;
    -N(R)-C(O)-(CH2)n-O-, -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)PN(R)C(O)-; -OS(O)PN(R)-; -N(R)S(O)PO-; -N(R)S(O)PC(O)-; -SOPN(C(O)R)-; -N(R)SOPN(R)-; -C(O)O-;
    910
    -N(R)P(ORb)O-; -N(R)P(ORb)-; -N(R)P(O)(ORb)O-; -N(R)P(O)(ORb)-;
    -N(C(O)R)P(ORb)O-; -N(C(O)R)P(OR„)-; -N(C(O)R)P(O)(ORb)O-, alebo
    -N(C(O)R)P(ORb)-;
    kde substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    substituent Rb pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    p je 1 alebo 2; alebo v skupine obsahujúcej fosfor tvoria dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a Rb spoločne 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh; alebo
    A je NRSO2 a substituenty R, Ra a dusíkový atóm spoločne tvoria substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo
    ZJ 'θ-Α-Ζ111 dohromady sú kovalentná väzba; a substituent R2 je skupina všeobecného vzorca -Zl01-Z102;
    Z101 je kovalentná väzba, -(Ci-C6)-, -(C,-C6)-O-, -(Ci-C6)-C(O)-, -(Ci-C6)-C(O)O-, (C|-C6)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((Ci-C6))- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;
    Z102 je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, kde uvedený substituovaný cykloalkenyl má jeden alebo viac substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogén, substituovaný alebo nesubstituovaný (Cj-Cŕ), substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(C|-Cô)-OR. substituovaný alebo nesubstituovaný -N((Ci-C6)-OR)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-C(O)2R,
    911 substituovaný alebo nesubstituovaný -(C]-C6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -(C]-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N-(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaná alebo nesubstituovaná sulfónamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cô)-OR, oxoskupina, a nasýtená, nenasýtená alebo aromatická, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahujúca jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny, ktorú tvoria N, O, a S; kde dusíkové atómy uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)N(R)2, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)-(C]-C6)-N(R)2, -C(O)-alkylom, -C(O)-arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom;
    a je 1 a symboly Db Gb J), Li a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Db Gi, Ji, Li a Mi sú CRa; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Db Gb Li a Mi je NRa, jeden zo symbolov Db Gb Li a Mi je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam;
    b je 1 a symboly D2, G2, J2, L2 a M2 sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D2, G2, J2, L2 a M2 sú CRa; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je NRa, jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6.
    912
  110. 112. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) jej racemické-diastereoméme zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:
    Gje
    D' 1 L ‘W K no, „ni„wo
    Mj Z—A—Z—Z íx-4-gz f 2 >,».
    M—L·
    4 alebo skupina prípadne substituovaná substituentom Rj vybraná zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, cykloalkyl, pyrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-a]pyrimidinyl, l//-imidazo[l,2-o]imídazolyi, imidazo[2,l-6][l,3]tiazolyl, naftyl, tetrahydronaftvl, benzotienyl, furanyl, tienyl, benzoxazolyl, benzoizoxazolyl, benzotiazolyl, kde Z100 je
    N . N S , tiazolyl, bcnzofuranyl, 2,3-dihydrobcnzo-furanyl, indolyl, izoxazolyl, tetrahydropyranyl. tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrolyl, pyrolopyridinyl, //-pyridinón,
    913 oxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, tiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl, benzoizotiazolyl, 1,1-dioxybenzoizo-tiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-tiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-tiazolyl a benzimidazolyl;
    Z110 je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Cj-Có), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    Z111 je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Ci-Cg) alebo prípadne substituovaný (CH2)n-cykloalkyl-(CH2)n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, CN, OH, halogén, NO2, COOH, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl;
    každý zo substituentov Ra a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny, ktorú tvoria atóm vodíka, halogén, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryI, -C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluórmetylkarbonylaminoskupina, trifluórmetylsulfónamidoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylS(O)P-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkinyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované alebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná
    914 alebo nesubstituovaná heteroaryltioskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aryltioskupina, -Z105-C(O)N(R)2, -Z105-N(R)C(O)-Z200, -Z1C5-N(R)-S(O)2-Z200, -Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z200, Rc a CH2ORc;
    kde substituent Rc pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH2-NRdRe, -W-(CH2)t-NRdRc, -W-(CH2)t-O-alkyl, -W-(CH2),-S-alkyl, alebo -W-(CH2)t-OH;
    Z105 pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Ci-C^);
    Z200 pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Cj-Cé), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cô)-fenyl;
    substituenty Rd a Re pri každom výskyte sú nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO2-alkyl; alebo substituenty Rd, Re a dusíkový atóm, ku ktorému sú viazané, spoločne tvoria 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh;
    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;
    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)2, alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;
    substituent R3 pri každom výskyte je, nezávisle, atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl, alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;
    A je -(Ci-C6)-, -O-; -S-; -S(O)P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO2R)-; -CH2O-; -CH2S-; -CH2N(R)-; -CH(NR)-; -CH2N(C(O)R))-; -CH2N(C(O)OR)-; -CH2N(SO2R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-: -CH(NHSO2R)-;
    -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)P-; -OC(O)N(R)-;
    915
    -N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH2)n+1-C(O)-, -S(O)PN(R)-; -O-(CR2)n+1-C(O)-, -O-(CR2)n+i-O-, -N(C(O)R)S(O)P-; -N(R)S(O)PN(R)-;
    -N(R)-C(O)-(CH2)n-O-, -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)PN(R)C(O)-; -OS(O)PN(R)-; -N(R)S(O)PO-; -N(R)S(O)PC(O)-; -SOPN(C(O)R)-; -N(R)SOPN(R)-; -C(0)0-; -N(R)P(OR„)O-; -N(R)P(ORb)-; -N(R)P(O)(ORb)O-; -N(R)P(O)(ORb)-;
    -N(C(O)R)P(ORb)O-; -N(C(O)R)P(ORb)-; -N(C(O)R)P(O)(ORb)O-, alebo
    -N(C(O)R)P(ORb)-;
    kde substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    substituent Rb pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    p je 1 alebo 2; alebo v skupine obsahujúcej fosfor tvoria dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a Rb spoločne 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh; alebo
    A je NRSO2 a substituenty R, Ra a dusíkový atóm spoločne tvoria substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo
    Z110-A-ZHI dohromady sú kovalentná väzba; a substituent R2 je skupina všeobecného vzorca -Z101-Z102;
    Z101 je kovalentná väzba, -(Ci-Cé)-, -(Cj-Côj-O-, -(Ct-C6)-C(O)-, -(C]-C6)-C(O)O-, -(Ci-C6)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((C,-C6))- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;
    Z102 je substituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedená substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina majú jeden alebo viac substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú
    916 tvoria nitroskupina, halogén, substituovaný alebo nesubstituovaný (Cj-Cé), substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyI, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovaný alebo nesubstituovaný
    -N((Ci-C6)-OR)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-C(O)2R, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Cj-C6)-N(R)-(Ci-Cô)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -(C]-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, a substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahujúca jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny, ktorú tvoria O, a S; kde dusíkové atómy uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstítuovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstítuovaným arylom, substituovaným alebo nesubstítuovaným heteroarylom, substituovaným alebo nesubstítuovaným -C(O)N(R)2, substituovaným alebo nesubstítuovaným -C(O)-(Ci-C6)-N(R)2, -C(O)-alkylom, -C(O)-arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, alebo substituovaným alebo nesubstítuovaným heteroarylalkylom;
    a je 1 a symboly Dj, G,, J|, Lj a Mj sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Di, Gi, Ji, L] a Mi sú CRa; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Di, Gi, Lt a Mt je NRa, jeden zo symbolov Di, Gj, Li a Mi je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam;
    b je 1 a symboly D2, G2, J2, L2 a M2 sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D2, G2, J2, L2 a M2 sú CRa; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D2, G2, L? a M2 je NRa, jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam; a
    917 n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď A je -N(R)-, Z110 a Z111 sú každý kovalentná väzba a substituent R2 je 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, potom Z100 nie je alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl alebo pyrolidinyl;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Z110 a Z111 sú každý kovalentná väzba a substituent R2 je 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z100 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, potom A nie je alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- alebo -C(0)0-;
    s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Zno-A-Zul dohromady sú kovalentná väzba, potom Z100 nie je alkyl; a s výhradou spočívajúcou v tom, že keď Z110-A-Zni dohromady sú Ci-Cŕ alkyl, potom Z100 nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl.
  111. 113. Spôsob inhibície aktivity jednej alebo viac proteínkináz u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 89, 101, 107, 108, 109,110,111 alebo 112 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.
  112. 114. Spôsob podľa nároku 113, vyznačujúci sa tým, že daná proteínkináza je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z KDR, FGFR-1, PDGFRp, PDGFRcx, IGF-1R, c-Met, Flt-1, Flt-4, TIE-2, TIE-1, Fck, Src, fyn, Fyn, Blk, hck, fgr a yes.
  113. 115. Spôsob ovplyvnenia hyperproliferačných porúch u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 89, 101, 107, 108, 109, 110, 111 alebo 112 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.
    918
  114. 116. Spôsob ovplyvnenia angiogenézy u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 89, 101, 107, 108, 109, 110, 111 alebo 112 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečivá alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.
  115. 117. Spôsob podľa nároku 113, vyznačujúci sa tým, že proteínkináza je proteínová serín/treonínkináza alebo proteínová tyrozínkináza.
  116. 118. Spôsob ošetrenia jedného alebo viac ulkusov u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 89, 101, 107, 108, 109, 110, 111 alebo 112 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečivá alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.
  117. 119. Spôsob podľa nároku 118, vyznačujúci sa tým, že ulkus alebo ulkusy sú spôsobené bakteriálnou alebo pliesňovou infekciou; alebo ulkus alebo ulkusy sú Moorenove ulkusy; alebo ulkus alebo ulkusy sú symptómy ulceratívnej kolitídy.
  118. 120. Spôsob ošetrenia ochorenia u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 89, 101, 107, 108, 109, 110, 111 alebo 112 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečivá alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi, kde dané ochorenie je ochorenie očí, kardiovaskulárne ochorenie, rakovina, syndróm Crow-Fukaseho (POEMS), diabetické ochorenie, kosáčikovitá anémia, chronický zápal, systémový lupus, glomerulonefritída, synovitída, zápalové črevné ochorenie, Crohnova choroba, glomerulonefritída, reumatoidná artritída, osteoartritída, roztrúsená skleróza, rejekcia štepu, Lymská choroba, sepsa, von Hippelov-Lindauov syndróm, pemfígoid, psoriáza, Pagetova choroba, polycystické obličkové ochorenie, fibróza, sarkoidóza, cirhóza, tyreoiditída,
    919 hyperviskózny syndróm, Oslerova-Renduova-Weberova choroba, chronické oklúzne ochorenie pľúc, astma alebo edém po popáleninách, traume, ožiarení, mŕtvica, hypoxia, ischémia, syndróm ovariálnej hyperstimulácie, preeklampsia, menometrorágia, endometrióza alebo infekcia Herpes simplex, Herpes Zoster, vírusom HIV spôsobujúcim syndróm získaného zlyhania imunity, Parapoxvírusom, protozoom alebo toxoplazmózou.
  119. 121. Spôsob podľa nároku 120, vyznačujúci sa tým, že ochorenie očí je okulámy alebo makulámy edém, okuláme neovaskuláme ochorenie, skleritída, radiálna keratotómia, uveitída, vitritída, myopia, fyziologická exkavácia papily, chronické odlúčenie sietnice, komplikácie po ošetrení laserom, konjunktivitída, Stargardtova choroba, Ealesova choroba, retinopatia alebo makuláma degenerácia.
  120. 122. Spôsob podľa nároku 120, vyznačujúci sa tým, že kardiovaskulárne ochorenie je ateroskleróza, restenóza, ischémia/reperfúzne poškodenie, vaskulárna oklúzia alebo karotické obštruktívne ochorenie.
  121. 123. Spôsob podľa nároku 120, vyznačujúci sa tým, že rakovina je pevný nádor, sarkóm, fibrosarkóm, osteóm, melanóm, retinoblastóm, rabdomyosarkóm, glioblastóm, neuroblastóm, teratokarcinóm, hematopoetické zhubné bujnenie, Kaposiho sarkóm, Hodgkinova choroba, lymfóm, myelóm, leukémia alebo malígny ascites.
  122. 124. Spôsob podľa nároku 120, vyznačujúci sa tým, že diabetické ochorenie je inzulíndependentný diabetes mellitus s glaukómom, diabetická retinopatia alebo mikroangiopatia.
  123. 125. Spôsob zníženia fertility u pacienta, vyznačujúci sa tým, že daný spôsob zahrnuje krok, v ktorom dochádza k podaniu účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 89, 101, 107,
    920
    108, 109, 110, 111 alebo 112 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov pacientovi.
  124. 126. Spôsob podľa nároku 116, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina alebo jej fyziologicky prijateľná soľ, proíiečivo alebo biologicky aktívny metabolit je podávaná v množstve, ktoré má na angiogenézu alebo vaskulogenézu podporný účinok.
  125. 127. Spôsob podľa nároku 114, vyznačujúci sa tým, že proteínkináza je Tie-2.
  126. 128. Spôsob podľa nároku 126, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina všeobecného vzorca (I) alebo jej fyziologicky prijateľná soľ, proíiečivo alebo biologicky aktívny metabolit je podávaná v kombinácii s proangiogénnym rastovým faktorom.
  127. 129. Spôsob podľa nároku 128, vyznačujúci sa tým, že proangiogénny rastový faktor je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z VEGF, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, HGF, FGF-1, FGF-2, ich derivátov a antiidiotypových protilátok.
  128. 130. Spôsob podľa nároku 126, vyznačujúci sa tým, že pacient trpí anémiou, ischémiou, infarktom, rejekciou transplantátu, zranením, gangrénou alebo nekrózou.
  129. 131. Spôsob podľa nároku 113. vyznačujúci sa tým, že aktivita proteínkinázy sa podieľa na aktivácii T-buniek, aktivácii B-buniek, degranulácii žírnych buniek, aktivácii monocytu, potenciách zápalovej odpovede alebo ich kombinácii.
  130. 132. Spôsob prípravy 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového medziproduktu reprezentovaného nasledujúcou štruktúrou:
    921 kde:
    Z100 je alebo skupina prípadne substituovaná substituentom Ri vybraná zo skupiny, ktorú tvoria alkyl, cykloalkyl, pyrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-a]pyrimidinyl, lA-imidazo[l,2-a]imidazolyl, imidazo[2,l-7][l,3]tiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzotienyl, furanyl, tienyl, benzoxazolyl, benzoizoxazolyl, benzo- tiazolyl, IN , IN , tiazolyl, benzofuranyl, 2,3-dihydrobenzo-furanyl, indolyl, izoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrolyl, pyrolopyridinyl, A-pyridinón, oxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, tiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[1,2-čz]pyridinyl, benzoizotiazolyl, 1,1-dioxybenzoizo-tiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-tiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-tiazolyl a benzimidazolyl;
    substituenty Ra a Ri predstavujú jeden alebo viac substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny, ktorú tvoria atóm vodíka, halogén, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(0)0-heteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná alebo nesubstituovaná
    922 karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluórmetylkarbonylamino-skupina, trifluórmetylsulfónamidoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroary lalkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-S(O)p-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylS(O)P-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkinyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované alebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroaryltioskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aryltioskupina, -ZI05-C(O)N(R)2, -Z105-N(R)-C(O)-Z200, -Z,05-N(R)-S(O)2-Z200, -Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z20<), Rc a CH2ORc;
    kde substituent Rc pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH2-NRdRc, -W-(CH2)t-NRdRe, -W-(CH2)t-O-alkyl, -W-(CH2)t-S-alkyl, alebo -W-(CH2)t-OH;
    Z105 pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Cj-Cď);
    Z200 pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cď), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cô)-fenyl;
    substituenty Rd a Re pri každom výskyte sú nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO2-alkyl; alebo substituenty Rj, Rc a dusíkový atóm, ku ktorému sú viazané, spoločne tvoria 5- alebo 6-členný heterocyklický kruh;
    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;
    923
    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)2, alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Rj je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocy klický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2; a substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;
    p je 1 alebo 2; a b je 1 a symboly D2, G2, J2, L2 a M2 sú každý nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D2, G2, J2, L2 a M2 sú CRa; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je NRa, jeden zo symbolov D2, G2, L2 a M2 je CRa a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria CRa a N, kde substituent Ra má vyššie definovaný význam;
    vyznačujúci sa tým, že zahrnuje krok, v ktorom dochádza v prítomnosti aprotickej bázy k reakcii chloridu kyseliny reprezentovaného nasledujúcou štruktúrou:
    o
    Cl'^^'Z100 so (4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolanyl)anilínom reprezentovaným nasledujúcou štruktúrou:
    924 za vzniku uvedeného 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového medziproduktu.
  131. 133. Spôsob podľa nároku 132. vyznačujúci sa tým, že ďalej zahrnuje krok, v ktorom dochádza k reakcii 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového medziproduktu v prítomnosti tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0) a uhličitanu sodného s 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-íí]pyrimidínom reprezentovaným nasledujúcou štruktúrou:
    kde:
    substituent R2 je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z101-Z102;
    Z101 je kovalentnú väzba, -(Ct-C6)-, -(Ci-C6)-O-, -(C,-C6)~C(O)-, -(C,-C6)-C(O)O-, -(Ci-C6)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((Ci-C6))- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;
    Z je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklickú skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklickú skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklickú a substituovaná heterobicyklickú skupina majú jeden alebo viac substituentov, kde každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvoria hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogén, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Có), substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(C|-C6)-OR. substituovaný alebo nesubstituovaný
    925
    -N((Ci-C6)-OR)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-C(O)2R, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaná alebo nesubstituovaná sulfónamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, oxoskupina, a nasýtená, nenasýtená alebo aromatická, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahujúca jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny, ktorú tvoria N, O, a S; kde dusíkové atómy uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)N(R)2, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-C6)-N(R)2, -C(O)-alkylom, -C(O)-arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom; alebo substituent R2 je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cé)-azacykloalkyl-, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo
    926 nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Cg)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-Cô)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl; a substituent R3 pri každom výskyte je, nezávisle, atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl, alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(0)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;
    za vzniku zlúčeniny reprezentovanej nasledujúcou štruktúrou:
    927
  132. 134. Spôsob podľa nároku 133, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahrnuje krok, v ktorom dochádza k reakcii karboxylovej kyseliny reprezentovanej nasledujúcou štruktúrou:
    O
    X s oxalylchloridom a v aprotickej báze za vzniku chloridu kyseliny reprezentovaného nasledujúcou štruktúrou:
    O x
  133. 135. Spôsob podľa nároku 132, 133 alebo 134, vyznačujúci sa tým, že Z100 je indolyl, ktorý je prípadne substituovaný substituentom Rf.
  134. 136. Spôsob podľa nároku 135, vyznačujúci sa tým, že Z100 je 1-metyl-indol-2-yl alebo l-metyl-indol-3-yl.
  135. 137. Spôsob podľa nároku 136, vyznačujúci sa tým, že (4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolanyljanilín je reprezentovaný nasledujúcou štruktúrou:
    928 a 4,4,5,5-tetrametyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-ylový medziprodukt nasledujúcou štruktúrou;
    reprezentovaný
  136. 138. Spôsob podľa nároku 137, vyznačujúci sa tým, že substituent R2 je 4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl.
SK1308-2003A 2001-03-22 2002-03-22 Pyrazolopyrimidíny ako terapeutické prostriedky SK13082003A3 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/815,310 US6921763B2 (en) 1999-09-17 2001-03-22 Pyrazolopyrimidines as therapeutic agents
PCT/US2002/009104 WO2002080926A1 (en) 2001-03-22 2002-03-22 Pyrazolopyrimidines as therapeutic agents

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK13082003A3 true SK13082003A3 (sk) 2004-07-07

Family

ID=25217419

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1308-2003A SK13082003A3 (sk) 2001-03-22 2002-03-22 Pyrazolopyrimidíny ako terapeutické prostriedky

Country Status (21)

Country Link
US (1) US6921763B2 (sk)
EP (1) EP1385524A4 (sk)
JP (1) JP2004531513A (sk)
KR (1) KR20030088115A (sk)
CN (1) CN1520298A (sk)
AR (1) AR035790A1 (sk)
BG (1) BG108269A (sk)
BR (1) BR0205889A (sk)
CA (1) CA2440724A1 (sk)
CO (1) CO5550444A2 (sk)
CZ (1) CZ20032858A3 (sk)
EC (1) ECSP034774A (sk)
IL (1) IL157642A0 (sk)
MX (1) MXPA03008561A (sk)
NO (1) NO20034176L (sk)
PE (1) PE20020967A1 (sk)
PL (1) PL363740A1 (sk)
SK (1) SK13082003A3 (sk)
UY (1) UY27226A1 (sk)
WO (1) WO2002080926A1 (sk)
ZA (1) ZA200306886B (sk)

Families Citing this family (213)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060258686A1 (en) * 1998-05-29 2006-11-16 Cheresh David A Method of treatment of myocardial infarction
US20030130209A1 (en) * 1999-12-22 2003-07-10 Cheresh David A. Method of treatment of myocardial infarction
MXPA01007099A (es) 1999-01-13 2002-03-27 Univ New York State Res Found Metodo novedoso para disenar inhibidores de la proteina cinasa.
US7223724B1 (en) 1999-02-08 2007-05-29 Human Genome Sciences, Inc. Use of vascular endothelial growth factor to treat photoreceptor cells
DE69912808T2 (de) 1999-12-08 2004-09-30 Centre National De La Recherche Scientifique (C.N.R.S.) Verwendung von Hymenialdisin und dessen Derivaten zur Herstellung therapeutischer Mittel
AU8473401A (en) * 2000-08-04 2002-02-18 Human Genome Sciences, Inc. Vascular endothelial growth factor 2
MXPA03008560A (es) * 2001-03-22 2004-06-30 Abbot Gmbh & Co Kg Pirazolopirimidinas como agentes terapeuticos.
CA2444632A1 (en) * 2001-04-13 2002-10-24 Human Genome Sciences, Inc. Vascular endothelial growth factor 2
US20050232921A1 (en) * 2001-04-13 2005-10-20 Rosen Craig A Vascular endothelial growth factor 2
CA2444624A1 (en) * 2001-04-13 2002-10-24 Human Genome Sciences, Inc. Vascular endothelial growth factor 2
JP4623962B2 (ja) * 2001-10-22 2011-02-02 ザ・リサーチ・ファウンデーション・オブ・ステイト・ユニバーシティ・オブ・ニューヨーク タンパク質キナーゼおよびホスファターゼ阻害剤、それらを設計する方法、ならびにそれらを使用する方法
US7005445B2 (en) 2001-10-22 2006-02-28 The Research Foundation Of State University Of New York Protein kinase and phosphatase inhibitors and methods for designing them
US20030199525A1 (en) * 2002-03-21 2003-10-23 Hirst Gavin C. Kinase inhibitors
AU2003246972A1 (en) 2002-08-06 2004-02-23 Astrazeneca Ab Condensed pyridines and pyrimidines with tie2 (tek) activity
DK1599468T3 (da) 2003-01-14 2008-02-04 Arena Pharm Inc 1,2,3-trisubstituerede aryl- og heteroarylderivater som modulatorer af metabolisme og forebyggelse og behandling af forstyrrelser forbundet dermed såsom diabetes og hyperglykæmi
JP4960085B2 (ja) * 2003-03-19 2012-06-27 エクセリクシス， インク． Ｔｉｅ−２モジュレータと使用方法
WO2004100868A2 (en) * 2003-04-23 2004-11-25 Abbott Laboratories Method of treating transplant rejection
US7429596B2 (en) * 2003-06-20 2008-09-30 The Regents Of The University Of California 1H-pyrrolo [2,3-D] pyrimidine derivatives and methods of use thereof
AR045037A1 (es) 2003-07-10 2005-10-12 Aventis Pharma Sa Tetrahidro-1h-pirazolo [3,4-c] piridinas sustituidas, composiciones que las contienen y su utilizacion.
EP2287166A3 (en) * 2003-07-14 2011-06-22 Arena Pharmaceuticals, Inc. Fused-aryl and heteroaryl derivatives as modulators of metabolism and the prophylaxis and treatment of disorders related thereto
DE10344223A1 (de) * 2003-09-24 2005-04-21 Merck Patent Gmbh 1,3-Benzoxazolylderivate als Kinase-Inhibitoren
GB0401334D0 (en) * 2004-01-21 2004-02-25 Novartis Ag Organic compounds
JP2007520559A (ja) * 2004-02-03 2007-07-26 アボット・ラボラトリーズ 治療薬としてのアミノベンゾオキサゾール類
JP2008520744A (ja) * 2004-11-19 2008-06-19 ザ・レジェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・カリフォルニア 抗炎症性ピラゾロピリミジン
DOP2006000009A (es) * 2005-01-13 2006-08-15 Arena Pharm Inc Procedimiento para preparar eteres de pirazolo [3,4-d] pirimidina
PT3424932T (pt) * 2005-02-16 2021-05-19 Anacor Pharmaceuticals Inc Boronoftalidas para utilização terapêutica
EP1932839A4 (en) 2005-09-06 2014-09-10 Shionogi & Co INDOLECARBOXYLATE ACID DERIVATIVE HAVING ANTAGONIST EFFECT OF THE PGD2 RECEPTOR
EP2385053B1 (en) * 2005-11-17 2013-10-02 OSI Pharmaceuticals, Inc. Intermediates for the preparation of fused bicyclic mTOR inhibitors
TWI468162B (zh) 2005-12-13 2015-01-11 英塞特公司 作為傑納斯激酶（ＪＡＮＵＳ ＫＩＮＡＳＥ）抑制劑之經雜芳基取代之吡咯并〔２，３-ｂ〕吡啶及吡咯并〔２，３-ｂ〕嘧啶
BRPI0621027A2 (pt) * 2006-01-13 2011-11-29 Pharmacyclics Inc composto, composição farmacêutica
EP1981890A2 (en) * 2006-01-25 2008-10-22 OSI Pharmaceuticals, Inc. UNSATURATED mTOR INHIBITORS
EP2001880A2 (en) 2006-03-07 2008-12-17 Array Biopharma, Inc. Heterobicyclic pyrazole compounds and methods of use
NZ571182A (en) * 2006-04-04 2010-09-30 Univ California Pyrazolo[3,4-d]pyrimidines
US20080125587A1 (en) * 2006-05-25 2008-05-29 Chimmanamada Dinesh U Synthesis of triazole compounds that modulate HSP90 activity
US7838542B2 (en) 2006-06-29 2010-11-23 Kinex Pharmaceuticals, Llc Bicyclic compositions and methods for modulating a kinase cascade
EP2054045B1 (en) * 2006-08-16 2011-05-18 Action Medicines, S.L. Use of 2,5-dihydroxybenzene derivatives for the treatment of arthritis and pain
BRPI0622054B8 (pt) 2006-09-22 2021-05-25 Oxford Amherst Llc composto e composição farmacêutica
ES2403546T3 (es) * 2006-11-03 2013-05-20 Pharmacyclics, Inc. Sonda de actividad de la tirosina-cinasa de Bruton y procedimiento de utilización
WO2008070994A1 (en) * 2006-12-14 2008-06-19 Nps Pharmaceuticals, Inc. Use of d-serine derivatives for the treatment of anxiety disorders
US20100150863A1 (en) 2006-12-20 2010-06-17 Bayer Pharmaceuticals Corporation Hydroxy methyl phenyl pyrazolyl urea compound useful in treatment of cancer
DK2099442T3 (en) * 2006-12-26 2015-02-16 Pharmacyclics Inc Method of using histone deacetylase inhibitors and monitoring biomarkers in combination therapy
EP2125895B1 (en) * 2007-02-02 2015-04-08 Vegenics Pty Ltd Vegf receptor antagonists for treating organ transplant alloimmunity and arteriosclerosis
US20120101113A1 (en) 2007-03-28 2012-04-26 Pharmacyclics, Inc. Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
WO2008153701A1 (en) * 2007-05-24 2008-12-18 Schering Corporation Compounds for inhibiting ksp kinesin activity
SG10201509887UA (en) 2007-06-13 2016-01-28 Incyte Corp Salts of the janus kinase inhibitor (r)-3-(4-(7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1h-pyrazol-1-yl)-3-cyclopentylpropanenitrile
US20110160232A1 (en) 2007-10-04 2011-06-30 Pingda Ren Certain chemical entities and therapeutic uses thereof
CA2709918A1 (en) * 2007-12-21 2009-06-25 The Scripps Research Institute Benzopyrans and analogs as rho kinase inhibitors
US20110038835A1 (en) * 2007-12-21 2011-02-17 The Scripps Research Institute Anilides and analogs as rho kinase inhibitors
US8193182B2 (en) 2008-01-04 2012-06-05 Intellikine, Inc. Substituted isoquinolin-1(2H)-ones, and methods of use thereof
NZ587051A (en) 2008-01-04 2012-12-21 Intellikine Llc Isoquinolinone derivatives, compositions and methods of inhibiting phosphatidyl inositol-3 kinase (pi3 kinase)
WO2009111644A2 (en) * 2008-03-05 2009-09-11 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for diagnosing and treating pancreatic cancer
US8637542B2 (en) 2008-03-14 2014-01-28 Intellikine, Inc. Kinase inhibitors and methods of use
WO2009114874A2 (en) 2008-03-14 2009-09-17 Intellikine, Inc. Benzothiazole kinase inhibitors and methods of use
KR20110017845A (ko) * 2008-03-19 2011-02-22 오에스아이 파마슈티컬스, 인코포레이티드 Ｍｔｏｒ 억제자 염 형태
US20100101977A1 (en) * 2008-06-05 2010-04-29 United Comb & Novelty Corporation Stackable Packaging For Lipped Containers
US20110224223A1 (en) 2008-07-08 2011-09-15 The Regents Of The University Of California, A California Corporation MTOR Modulators and Uses Thereof
BRPI0915231A2 (pt) 2008-07-08 2018-06-12 Intellikine Inc compostos inibidores de quinase e métodos de uso
MX2011000661A (es) * 2008-07-16 2011-05-25 Pharmacyclics Inc Inhibidores de tirosina cinasa de bruton para el tratamiento de tumores solidos.
US8703778B2 (en) 2008-09-26 2014-04-22 Intellikine Llc Heterocyclic kinase inhibitors
ES2570429T3 (es) * 2008-10-16 2016-05-18 Univ California Inhibidores de heteroaril quinasa de anillo condensado
AU2009308687A1 (en) * 2008-11-03 2010-05-06 Chemocentryx, Inc. Compounds for the treatment of osteoporosis and cancers
US8476282B2 (en) 2008-11-03 2013-07-02 Intellikine Llc Benzoxazole kinase inhibitors and methods of use
US8426428B2 (en) * 2008-12-05 2013-04-23 Principia Biopharma, Inc. EGFR kinase knockdown via electrophilically enhanced inhibitors
CA2760791C (en) 2009-05-07 2017-06-20 Intellikine, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
SG176111A1 (en) 2009-05-22 2011-12-29 Incyte Corp 3-[4-(7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-1h-pyrazol-1-yl]octane- or heptane-nitrile as jak inhibitors
EA025520B1 (ru) 2009-05-22 2017-01-30 Инсайт Холдингс Корпорейшн N-(ГЕТЕРО)АРИЛПИРРОЛИДИНОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРАЗОЛ-4-ИЛ-ПИРРОЛО[2,3-d]ПИРИМИДИНОВ И ПИРРОЛ-3-ИЛ-ПИРРОЛО[2,3-d]ПИРИМИДИНОВ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ ЯНУС-КИНАЗЫ
US8765747B2 (en) 2009-06-12 2014-07-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Fused 2-aminothiazole compounds
MX2012002066A (es) 2009-08-17 2012-03-29 Intellikine Inc Compuestos heterociclicos y usos de los mismos.
WO2011028685A1 (en) 2009-09-01 2011-03-10 Incyte Corporation Heterocyclic derivatives of pyrazol-4-yl-pyrrolo[2,3-d]pyrimidines as janus kinase inhibitors
CN102869775A (zh) 2009-09-30 2013-01-09 哈佛大学校长及研究员协会 通过调节自噬抑制基因产物调节自噬的方法
US7718662B1 (en) 2009-10-12 2010-05-18 Pharmacyclics, Inc. Pyrazolo-pyrimidine inhibitors of bruton's tyrosine kinase
WO2011047384A2 (en) 2009-10-16 2011-04-21 The Regents Of The University Of California Methods of inhibiting ire1
IN2012DN03312A (sk) * 2009-10-22 2015-10-23 Fibrotech Therapeutics Pty Ltd
US20110130711A1 (en) * 2009-11-19 2011-06-02 Follica, Inc. Hair growth treatment
EP2519517B1 (en) 2009-12-29 2015-03-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Type ii raf kinase inhibitors
ES2937386T3 (es) 2010-01-27 2023-03-28 Arena Pharm Inc Procesos para la preparación de ácido (R)-2-(7-(4-ciclopentil-3-(trifluorometil)benciloxi)-1,2,3,4-tetrahidrociclopenta[b]indol-3-il)acético y sales del mismo
RU2012139491A (ru) * 2010-02-11 2014-03-20 Вандербилт Юниверсити Бензизоксазолы и азабензизоксазолы как аллостерические потенциаторы mglur4, композиции и способы лечения неврологических дисфункций
MX347851B (es) 2010-03-10 2017-05-16 Incyte Corp Derivados de piperidin-4-il azetidina como inhibidores de janus cinasa 1 (jak1).
EP2560640A1 (en) 2010-04-19 2013-02-27 Synta Pharmaceuticals Corp. Cancer therapy using a combination of a hsp90 inhibitory compounds and a egfr inhibitor
EP2574168B9 (en) 2010-05-21 2016-10-05 Incyte Holdings Corporation Topical formulation for a jak inhibitor
ES2593256T3 (es) 2010-05-21 2016-12-07 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Compuestos químicos, composiciones y métodos para las modulaciones de cinasas
CN102906074A (zh) * 2010-05-24 2013-01-30 东亚荣养株式会社 稠合咪唑衍生物
IL300955A (en) 2010-06-03 2023-04-01 Pharmacyclics Llc (R)-1-(3-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-H1-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)prop-2-en-1- Indicated for use as a drug to treat chronic lymphocytic leukemia or small lymphocytic lymphoma
AU2011276955B2 (en) * 2010-07-09 2014-11-06 The Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Research Protein kinase inhibitors and methods of treatment
SG188548A1 (en) 2010-09-22 2013-04-30 Arena Pharm Inc Modulators of the gpr119 receptor and the treatment of disorders related thereto
WO2012064973A2 (en) 2010-11-10 2012-05-18 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
WO2012068450A1 (en) 2010-11-19 2012-05-24 Incyte Corporation Cyclobutyl substituted pyrrolopyridine and pyrrolopyrimidine derivatives as jak inhibitors
CN103648499B (zh) 2011-01-10 2017-02-15 无限药品股份有限公司 用于制备异喹啉酮的方法及异喹啉酮的固体形式
US9295673B2 (en) 2011-02-23 2016-03-29 Intellikine Llc Combination of mTOR inhibitors and P13-kinase inhibitors, and uses thereof
CA2839767A1 (en) 2011-06-20 2012-12-27 Incyte Corporation Azetidinyl phenyl, pyridyl or pyrazinyl carboxamide derivatives as jak inhibitors
EP2726634B1 (en) 2011-07-01 2017-02-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Discovery of a somatic mutation in myd88 gene in lymphoplasmacytic lymphoma
KR20140048968A (ko) 2011-07-13 2014-04-24 파마시클릭스, 인코포레이티드 브루톤형 티로신 키나제의 억제제
EP2548877A1 (en) * 2011-07-19 2013-01-23 MSD Oss B.V. 4-(5-Membered fused pyridinyl)benzamides as BTK-inhibitors
CA2842190A1 (en) 2011-07-19 2013-01-24 Infinity Pharmaceuticals Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
SI3689878T1 (sl) 2011-07-19 2021-12-31 Merck Sharp & Dohme B.V. 4-imidazopiridazin-1-il-benzamidi in 4-imidazotriazin-1-il-benzamidi kot Btk-zaviralci
EP2734520B1 (en) 2011-07-19 2016-09-14 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
TW201313721A (zh) 2011-08-18 2013-04-01 Incyte Corp 作為ｊａｋ抑制劑之環己基氮雜環丁烷衍生物
WO2013032591A1 (en) 2011-08-29 2013-03-07 Infinity Pharmaceuticals Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
CA2846496C (en) * 2011-09-02 2020-07-14 The Regents Of The University Of California Substituted pyrazolo[3,4-d]pyrimidines and uses thereof
UA111854C2 (uk) 2011-09-07 2016-06-24 Інсайт Холдінгс Корпорейшн Способи і проміжні сполуки для отримання інгібіторів jak
CN103917231B (zh) 2011-09-13 2016-09-28 药品循环有限责任公司 组蛋白脱乙酰酶抑制剂与苯达莫司汀的联合制剂及其用途
CA2853799A1 (en) 2011-11-02 2013-05-10 Synta Pharmaceuticals Corp. Cancer therapy using a combination of hsp90 inhibitors with topoisomerase i inhibitors
CA2853806C (en) 2011-11-02 2020-07-14 Synta Pharmaceuticals Corp. Combination therapy of hsp90 inhibitors with platinum-containing agents
US9402831B2 (en) 2011-11-14 2016-08-02 Synta Pharmaceutical Corp. Combination therapy of HSP90 inhibitors with BRAF inhibitors
EP2822935B1 (en) 2011-11-17 2019-05-15 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of c-jun-n-terminal kinase (jnk)
DK2780015T3 (en) 2011-11-18 2017-03-27 Heptares Therapeutics Ltd M1 MUSCARINRECEPTORAGONISTER
US8377946B1 (en) 2011-12-30 2013-02-19 Pharmacyclics, Inc. Pyrazolo[3,4-d]pyrimidine and pyrrolo[2,3-d]pyrimidine compounds as kinase inhibitors
JP5985658B2 (ja) * 2012-01-31 2016-09-06 ナンジン アルゲン ファルマ カンパニー リミテッドＮａｎｊｉｎｇ Ａｌｌｇｅｎ Ｐｈａｒｍａ Ｃｏ． Ｌｔｄ． ブルトンチロシンキナーゼ阻害薬としての環状分子
WO2013130654A1 (en) 2012-02-29 2013-09-06 Coyote Pharmaceuticals, Inc. Gga and gga derivatives, compositions thereof and methods for treating neurodegenerative diseases including paralysis including them
US8940742B2 (en) 2012-04-10 2015-01-27 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US9193733B2 (en) 2012-05-18 2015-11-24 Incyte Holdings Corporation Piperidinylcyclobutyl substituted pyrrolopyridine and pyrrolopyrimidine derivatives as JAK inhibitors
US9796716B2 (en) 2012-05-31 2017-10-24 Pharmascience, Inc. Selective inhibitors of Tec and Src protein kinase families
UA114421C2 (uk) 2012-06-04 2017-06-12 Фармасайклікс Ллс Кристалічна форма інгібітору тирозинкінази брутона
US8828998B2 (en) 2012-06-25 2014-09-09 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Treatment of lupus, fibrotic conditions, and inflammatory myopathies and other disorders using PI3 kinase inhibitors
GB201211309D0 (en) * 2012-06-26 2012-08-08 Fujifilm Mfg Europe Bv Process for preparing membranes
CN104704129A (zh) 2012-07-24 2015-06-10 药品循环公司 与对布鲁顿酪氨酸激酶(btk)抑制剂的抗性相关的突变
EP2878601B1 (en) * 2012-07-27 2018-03-28 Riken Agent for treating or controlling recurrence of acute myelogenous leukemia
JP2015532287A (ja) 2012-09-26 2015-11-09 ザ・リージエンツ・オブ・ザ・ユニバーシテイー・オブ・カリフオルニア Ｉｒｅ１の調節
US9119808B1 (en) 2012-10-08 2015-09-01 Coyote Pharmaceuticals, Inc. Treating neurodegenerative diseases with GGA or a derivative thereof
EP2909194A1 (en) 2012-10-18 2015-08-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (cdk7)
WO2014063061A1 (en) * 2012-10-19 2014-04-24 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hydrophobically tagged small molecules as inducers of protein degradation
US10000483B2 (en) 2012-10-19 2018-06-19 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bone marrow on X chromosome kinase (BMX) inhibitors and uses thereof
MX2015006168A (es) 2012-11-15 2015-08-10 Pharmacyclics Inc Compuestos de pirrolopirimidina como inhibidores de quinasas.
BR112015010663B1 (pt) 2012-11-15 2022-12-06 Incyte Holdings Corporation Formas de dosagem oral de liberação sustentada, e uso de ruxolitinib ou de sal farmaceuticamente aceitável do mesmo
WO2014113942A1 (en) * 2013-01-23 2014-07-31 Merck Sharp & Dohme Corp. Btk inhibitors
WO2014122474A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 Takeda Pharmaceutical Company Limited Piperidin-1 -yl and azepin-1 -yl carboxylates as muscarinic m4 receptor agonists
CN105189509B (zh) 2013-03-06 2017-12-19 因赛特公司 用于制备jak抑制剂的方法及中间体
US9925240B2 (en) 2013-03-06 2018-03-27 Genentech, Inc. Methods of treating and preventing cancer drug resistance
TWI629275B (zh) * 2013-03-13 2018-07-11 賽諾菲公司 Ｎ－（４－（氮雜吲唑－６－基）－苯基）－磺醯胺及其作為醫藥之用途
US9481667B2 (en) 2013-03-15 2016-11-01 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Salts and solid forms of isoquinolinones and composition comprising and methods of using the same
WO2014153509A1 (en) 2013-03-22 2014-09-25 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Combination of catalytic mtorc 1/2 inhibitors and selective inhibitors of aurora a kinase
GB201311891D0 (en) 2013-07-03 2013-08-14 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compound
GB201311888D0 (en) 2013-07-03 2013-08-14 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compounds
TWI649081B (zh) 2013-08-02 2019-02-01 製藥公司 治療固態腫瘤之方法
RS60469B1 (sr) 2013-08-07 2020-07-31 Incyte Corp Dozni oblici sa produženim oslobađanjem za jak1 inhibitor
US9415050B2 (en) 2013-08-12 2016-08-16 Pharmacyclics Llc Methods for the treatment of HER2 amplified cancer
MA38961A1 (fr) 2013-09-30 2018-05-31 Pharmacyclics Llc Composés 3-phenyl-1h-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-ylamine substitués inhibiteurs de la tyrosine kinase de bruton utilisés pour traiter par exemple les maladies auto-immunes, respiratoires et inflammatoires, cancer, mastocytose et osteoporose
WO2015051241A1 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
CA2925944C (en) 2013-10-04 2023-01-10 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US20160264551A1 (en) 2013-10-18 2016-09-15 Syros Pharmaceuticals, Inc. Heteroaromatic compounds useful for the treatment of prolferative diseases
EP3057956B1 (en) 2013-10-18 2021-05-05 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Polycyclic inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (cdk7)
JP2016538270A (ja) 2013-10-25 2016-12-08 ファーマサイクリックス エルエルシー 移植片対宿主病を処置し予防する方法
CA2931431A1 (en) 2013-12-05 2015-06-11 Acerta Pharma B.V. Therapeutic combination of a pi3k inhibitor and a btk inhibitor
US10272083B2 (en) 2014-01-21 2019-04-30 Acerta Pharma B.V. Methods of treating chronic lymphocytic leukemia and small lymphocytic leukemia using a BTK inhibitor
JP6162904B2 (ja) 2014-02-03 2017-07-12 カディラ ヘルスケア リミティド 新規複素環式化合物
JP2017512183A (ja) 2014-02-13 2017-05-18 リガンド・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド プロドラッグ化合物およびそれらの使用
EP4066834A1 (en) 2014-03-19 2022-10-05 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds for use in the treatment of pi3k-gamma mediated disorders
WO2015143400A1 (en) 2014-03-20 2015-09-24 Pharmacyclics, Inc. Phospholipase c gamma 2 and resistance associated mutations
US9937171B2 (en) 2014-04-11 2018-04-10 Acerta Pharma B.V. Methods of blocking the CXCR-4/SDF-1 signaling pathway with inhibitors of bruton's tyrosine kinase
WO2015160975A2 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
WO2015164604A1 (en) 2014-04-23 2015-10-29 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hydrophobically tagged janus kinase inhibitors and uses thereof
WO2015164614A1 (en) 2014-04-23 2015-10-29 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Janus kinase inhibitors and uses thereof
WO2015184305A1 (en) 2014-05-30 2015-12-03 Incyte Corporation TREATMENT OF CHRONIC NEUTROPHILIC LEUKEMIA (CNL) AND ATYPICAL CHRONIC MYELOID LEUKEMIA (aCML) BY INHIBITORS OF JAK1
GB201410430D0 (en) 2014-06-11 2014-07-23 Redx Pharma Ltd Compounds
CN107073121A (zh) 2014-06-13 2017-08-18 基因泰克公司 治疗及预防癌症药物抗性的方法
WO2015193740A2 (en) 2014-06-17 2015-12-23 Acerta Pharma B.V. Therapeutic combinations of a btk inhibitor, a pi3k inhibitor and/or a jak-2 inhibitor
CA2959602A1 (en) 2014-08-01 2016-02-04 Pharmacyclics Llc Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
BR112017002231A2 (pt) 2014-08-07 2018-07-17 Pharmacyclics Llc novas formulações de um inibidor de tirosina cinase de bruton
PL3179991T3 (pl) 2014-08-11 2022-02-14 Acerta Pharma B.V. Kombinacje terapeutyczne inhibitora btk i inhibitora bcl-2
WO2016054491A1 (en) 2014-10-03 2016-04-07 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US10196397B2 (en) 2014-11-19 2019-02-05 Sun Pharmaceutical Industries Limited Process for the preparation of ibrutinib
WO2016105528A2 (en) 2014-12-23 2016-06-30 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (cdk7)
WO2016106628A1 (en) * 2014-12-31 2016-07-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Btk inhibitors
EP3242666A1 (en) 2015-01-06 2017-11-15 Arena Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating conditions related to the s1p1 receptor
CN105481862B (zh) * 2015-01-21 2018-08-21 中国科学院合肥物质科学研究院 Flt3激酶的新型抑制剂及其用途
WO2016115869A1 (zh) * 2015-01-21 2016-07-28 中国科学院合肥物质科学研究院 Flt3激酶的新型抑制剂及其用途
SG11201707122QA (en) 2015-03-03 2017-09-28 Pharmacyclics Llc Pharmaceutical formulations of bruton's tyrosine kinase inhibtor
MA41828A (fr) * 2015-03-27 2018-01-30 Pharmacyclics Llc Co-cristaux d'un inhibiteur de la tyrosine kinase de bruton
US10550121B2 (en) 2015-03-27 2020-02-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinases
WO2016161248A1 (en) * 2015-04-02 2016-10-06 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Targeting pim kinases in combination with btk inhibition
WO2016201370A1 (en) 2015-06-12 2016-12-15 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Combination therapy of transcription inhibitors and kinase inhibitors
JP6838744B2 (ja) 2015-06-22 2021-03-03 アリーナ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｓ１Ｐ１レセプター関連障害における使用のための（Ｒ）−２−（７−（４−シクロペンチル−３−（トリフルオロメチル）ベンジルオキシ）−１，２，３，４−テトラヒドロシクロペンタ［ｂ］インドール−３−イル）酢酸（化合物１）の結晶性Ｌ−アルギニン塩
MA50817B1 (fr) 2015-07-02 2021-10-29 Acerta Pharma Bv Formes et formulations solides de (s)-4-(8-amino-3-(1-(but-2-ynoyl)pyrrolidin-2-yl)imidazo[1,5-a]pyrazin-1-yl)-n-(pyridin-2-yl)benzamide
EP4019515A1 (en) 2015-09-09 2022-06-29 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinases
CN108349985A (zh) 2015-09-14 2018-07-31 无限药品股份有限公司 异喹啉酮的固体形式、其制备方法、包含其的组合物及其使用方法
EP4116303A1 (en) 2015-09-16 2023-01-11 Loxo Oncology, Inc. Pyrazolopyrimidine derivatives as btk inhibitors for the treatment of cancer
PE20220507A1 (es) 2015-12-16 2022-04-07 Loxo Oncology Inc Compuestos utiles como inhibidores de cinasa
US10793566B2 (en) 2016-01-21 2020-10-06 Zibo Biopolar Changsheng Pharmaceutical Co. Ltd. Bruton's tyrosine kinase inhibitors
MX2018008815A (es) 2016-01-21 2019-03-28 Zibo Biopolar Changsheng Pharmaceutical Co Ltd Inhibidores de tirosina quinasa de bruton.
EP3423446B1 (de) 2016-03-03 2020-09-16 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Neue 2-substituierte indazole, verfahren zu ihrer herstellung, pharmazeutische präparate die diese enthalten, sowie deren verwendung zur herstellung von arzneimitteln
CN115746000A (zh) 2016-03-11 2023-03-07 嘉兴和剂药业有限公司 用于调节布鲁顿酪氨酸激酶的化合物及方法
US10759806B2 (en) 2016-03-17 2020-09-01 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Isotopologues of isoquinolinone and quinazolinone compounds and uses thereof as PI3K kinase inhibitors
US10525060B2 (en) 2016-04-29 2020-01-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. HCK as a therapeutic target in MYD88 mutated diseases
CN105820184A (zh) * 2016-05-06 2016-08-03 蚌埠中实化学技术有限公司 一种4-苯氧基苯硼酸的制备方法
US10919914B2 (en) 2016-06-08 2021-02-16 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
WO2017223422A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
GB201617454D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Heptares Therapeutics Limited Pharmaceutical compounds
EP3559002A4 (en) 2016-12-23 2021-02-17 Arvinas Operations, Inc. CHEMERICAL MOLECULES TARGETING EGFR PROTEOLYSIS AND RELATED METHODS OF USE
US11014873B2 (en) 2017-02-03 2021-05-25 Certa Therapeutics Pty Ltd. Anti-fibrotic compounds
KR20190116416A (ko) 2017-02-16 2019-10-14 아레나 파마슈티칼스, 인크. 원발 담즙성 담관염을 치료하기 위한 화합물 및 방법
MX2019014411A (es) 2017-06-01 2020-02-05 Bristol Myers Squibb Co Compuestos que contienen nitrogeno sustituido.
EP3669279A4 (en) 2017-08-14 2021-05-05 Epizyme, Inc. METHOD OF TREATMENT OF CANCER BY INHIBITION OF SETD2
CN107550905B (zh) * 2017-09-11 2020-07-17 浙江永宁药业股份有限公司 多取代吡咯并吡啶类化合物的药物用途及其制备方法
US10596161B2 (en) 2017-12-08 2020-03-24 Incyte Corporation Low dose combination therapy for treatment of myeloproliferative neoplasms
EP3733265B1 (en) * 2017-12-27 2023-09-27 Renaissance Energy Research Corporation Method and apparatus both for removing co2
US11970482B2 (en) 2018-01-09 2024-04-30 Ligand Pharmaceuticals Inc. Acetal compounds and therapeutic uses thereof
WO2019152374A1 (en) 2018-01-30 2019-08-08 Incyte Corporation Processes for preparing (1 -(3-fluoro-2-(trifluoromethyl)isonicotinyl)piperidine-4-one)
MX2022012285A (es) 2018-03-30 2023-08-15 Incyte Corp Tratamiento de la hidradenitis supurativa mediante el uso de inhibidores de actividad de la cinasa janus (jak).
GB201810239D0 (en) 2018-06-22 2018-08-08 Heptares Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
US11427591B2 (en) 2018-10-17 2022-08-30 Insilico Medicine Ip Limited Kinase inhibitors
CN113272302A (zh) 2018-11-12 2021-08-17 德彪药业国际股份公司 抗生素化合物、其制造方法、包含其的药物组合物及其用途
GB201819960D0 (en) 2018-12-07 2019-01-23 Heptares Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
CN111454268B (zh) * 2019-01-18 2023-09-08 明慧医药（上海）有限公司 作为布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂的环状分子
SG11202109194UA (en) * 2019-02-27 2021-09-29 Optikira Llc Pyrazolopyridine compounds for ire1 inhibition
JP2022534650A (ja) * 2019-05-31 2022-08-03 海思科医▲薬▼有限公司 Ｂｔｋ阻害薬環誘導体、その調製方法及びその医薬品適用
CN110511225B (zh) * 2019-08-19 2023-07-18 杭州中美华东制药有限公司 一种伊布替尼中间体的合成方法
WO2021038540A1 (en) 2019-08-31 2021-03-04 Sun Pharma Advanced Research Company Limited Cycloalkylidene carboxylic acids and derivatives as btk inhibitors
AU2020436612A1 (en) 2020-03-16 2022-09-01 Flash Therapeutics, Llc Compounds for treating or inhibiting recurrence of acute myeloid leukemia
US11833155B2 (en) 2020-06-03 2023-12-05 Incyte Corporation Combination therapy for treatment of myeloproliferative neoplasms
WO2022081512A1 (en) * 2020-10-12 2022-04-21 Synubi Pharmaceuticals Llc Compositions and methods of treatment of neuroinflammatory diseases with bruton's tyrosine kinase inhibitors
US11912668B2 (en) 2020-11-18 2024-02-27 Deciphera Pharmaceuticals, Llc GCN2 and perk kinase inhibitors and methods of use thereof
CN114751927B (zh) * 2022-03-08 2023-10-31 中山大学 一种硼酸化合物、制备方法及用途
CN115124486A (zh) * 2022-07-07 2022-09-30 武汉理工大学 苯并噁唑衍生物及其制备方法与应用

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4966849A (en) 1985-09-20 1990-10-30 President And Fellows Of Harvard College CDNA and genes for human angiogenin (angiogenesis factor) and methods of expression
US5217999A (en) 1987-12-24 1993-06-08 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Styryl compounds which inhibit EGF receptor protein tyrosine kinase
US5646128A (en) 1989-09-15 1997-07-08 Gensia, Inc. Methods for treating adenosine kinase related conditions
CA2078214C (en) 1990-04-02 1995-03-28 Robert Lee Dow Benzylphosphonic acid tyrosine kinase inhibitors
US5302606A (en) 1990-04-16 1994-04-12 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Styryl-substituted pyridyl compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase
DK0584222T3 (da) 1991-05-10 1998-02-23 Rhone Poulenc Rorer Int Bis-mono- og bicycliske aryl- og heteroarylforbindelser, som inhiberer EGF- og/eller PDGF-receptor-tyrosinkinase
CA2108889A1 (en) 1991-05-29 1992-11-30 Robert Lee Dow Tricyclic polyhydroxylic tyrosine kinase inhibitors
GB9300059D0 (en) 1992-01-20 1993-03-03 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
RU2155187C2 (ru) 1992-08-06 2000-08-27 Варнер-Ламберт Компани Производные индола, их таутомеры, смеси их изомеров или отдельные изомеры и фармацевтически приемлемые соли, фармацевтическая композиция с антиопухолевой или ингибирующей протеин-тирозинкиназу активностью и способ торможения зависящего от протеин-тирозинкиназы заболевания или борьбы с аберрантным ростом клеток млекопитающего или человека.
US5330992A (en) 1992-10-23 1994-07-19 Sterling Winthrop Inc. 1-cyclopropyl-4-pyridyl-quinolinones
ATE348110T1 (de) 1992-10-28 2007-01-15 Genentech Inc Hvegf rezeptor als vegf antagonist
GB9226855D0 (en) 1992-12-23 1993-02-17 Erba Carlo Spa Vinylene-azaindole derivatives and process for their preparation
WO1994018215A1 (en) 1993-02-03 1994-08-18 Gensia, Inc. Adenosine kinase inhibitors comprising lyxofuranosyl derivatives
US5593997A (en) * 1995-05-23 1997-01-14 Pfizer Inc. 4-aminopyrazolo(3-,4-D)pyrimidine and 4-aminopyrazolo-(3,4-D)pyridine tyrosine kinase inhibitors
DE19538708A1 (de) 1995-10-18 1997-04-24 Boehringer Mannheim Gmbh Heterocyclische Dioxetan-Substrate, Verfahren zur Herstellung und Verwendung
GB9624482D0 (en) 1995-12-18 1997-01-15 Zeneca Phaema S A Chemical compounds
WO1997034876A1 (en) 1996-03-15 1997-09-25 Zeneca Limited Cinnoline derivatives and use as medicine
CA2253608A1 (en) 1996-05-01 1997-11-06 Louis Vignati Therapeutic treatment for vegf related diseases
UA54427C2 (uk) 1996-05-01 2003-03-17 Елі Ліллі Енд Компані Спосіб лікування очних захворювань, які пов'язані з фактором васкулярного ендотеліального росту
GB9707800D0 (en) 1996-05-06 1997-06-04 Zeneca Ltd Chemical compounds
ES2251740T3 (es) 1996-08-23 2006-05-01 Ludwig Institute For Cancer Research Factor de crecimiento de celulas de endotelio vascular d recombinante (vegf-d).
SK3812002A3 (en) * 1999-09-17 2003-09-11 Abbott Gmbh & Co Kg Pyrazolopyrimidines as therapeutic agents
MXPA03008560A (es) * 2001-03-22 2004-06-30 Abbot Gmbh & Co Kg Pirazolopirimidinas como agentes terapeuticos.

Also Published As

Publication number Publication date
EP1385524A4 (en) 2006-02-01
BR0205889A (pt) 2004-11-09
JP2004531513A (ja) 2004-10-14
NO20034176L (no) 2003-11-21
EP1385524A1 (en) 2004-02-04
ECSP034774A (es) 2003-12-24
PE20020967A1 (es) 2002-10-30
CO5550444A2 (es) 2005-08-31
ZA200306886B (en) 2004-07-16
WO2002080926A1 (en) 2002-10-17
PL363740A1 (en) 2004-11-29
CA2440724A1 (en) 2002-10-17
AR035790A1 (es) 2004-07-14
NO20034176D0 (no) 2003-09-19
UY27226A1 (es) 2002-10-31
CZ20032858A3 (en) 2004-05-12
IL157642A0 (en) 2004-03-28
KR20030088115A (ko) 2003-11-17
BG108269A (en) 2004-12-30
US6921763B2 (en) 2005-07-26
MXPA03008561A (es) 2004-06-30
CN1520298A (zh) 2004-08-11
US20020156081A1 (en) 2002-10-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK13082003A3 (sk) Pyrazolopyrimidíny ako terapeutické prostriedky
ES2207552T3 (es) Pirazolopirimidinas como agentes terapeuticos.
SK13122003A3 (sk) Pyrazolopyrimidíny ako terapeutické prostriedky
AU753555C (en) Pyrrolopyrimidines as protein kinase inhibitors
US6713474B2 (en) Pyrrolopyrimidines as therapeutic agents
WO2001072751A1 (en) Pyrrolopyrimidines as tyrosine kinase inhibitors
SK3792002A3 (en) Kinase inhibitors as therapeutic agents
BG108286A (bg) Използване на азитромицин за получаване на фармацевтично средство за лечение на възпалителни неинфекциозни заболявания
AU2002316030A1 (en) Pyrazolopyrimidines as therapeutic agents
AU2002258590A1 (en) Pyrazolopyrimidines as Therapeutic Agents
MXPA01002785A (en) Pyrrolopyrimidines as protein kinase inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
FC9A Refused patent application