CZ20032858A3

CZ20032858A3 - Pyrazolopyrimidines as therapeutic agents

Info

Publication number: CZ20032858A3
Application number: CZ20032858A
Authority: CZ
Inventors: Arnoldáleeád; Friedmanámichaelám; Hirstágavinác; Raffertyápaul; Ritterákurt; Calderwoodádavid; Wishartáneil
Original assignee: Abbottágmbhá@Áco@Ákg
Priority date: 2001-03-22
Filing date: 2002-03-22
Publication date: 2004-05-12
Also published as: ECSP034774A; EP1385524A4; WO2002080926A1; PL363740A1; US6921763B2; NO20034176D0; CN1520298A; KR20030088115A; CA2440724A1; PE20020967A1; ZA200306886B; AR035790A1; NO20034176L; UY27226A1; IL157642A0; SK13082003A3; EP1385524A1; CO5550444A2; MXPA03008561A; BR0205889A

Description

PYRAZOLOPYRIMIDINY JAKO TERAPEUTICKÉ PROSTŘEDKY

Dosavadní stav techniky

Existuje alespoň 400 enzymů identifikovaných jako proteinkinázy. Tyto enzymy katalyzují fosforylaci cílových proteinových substrátů. Fosforylace je obvykle reakce přenosu fosfátové skupiny z ATP na proteinový substrát. Specifická struktura v cílovém substrátu, na kterou se fosfát přenáší, je tyrosinový, serinový nebo threoninový zbytek. Protože jsou tyto aminokyselinové zbytky cílovými strukturami pro přenos fosforylu, označují se tyto proteinkinázy obvykle jako tyrosinkinázy nebo serin/threoninkinázy.

Fosforylační reakce a proti nim působící fosfatázové reakce na tyrosinových, šeřino vých a threoninových zbytcích se účastní nesčetných buněčných procesů, které jsou základem odpovědí na různé mezibuněčné signály (typicky zprostředkovávané buněčnými receptory), regulace buněčných funkcí a aktivace nebo desaktivace buněčných procesů. Kaskáda proteinkináz se obvykle účastní přenosu mezibuněčného signálu a je esenciální pro realizaci těchto buněčných procesů. Vzhledem k jejich četnosti výskytu v těchto procesech mohou být proteinkinázy nacházeny jako integrální součást plasmatické membrány nebo jako cytoplasmatické enzymy nebo lokalizované v jádře, často jako složky enzymových komplexů. V mnoha případech jsou tyto proteinkinázy nezbytným prvkem enzymu a strukturálních proteinových komplexů, které určují, kde a kdy v buňce probíhá určitý buněčný proces.

Proteinové tyrosinkinázy. Proteinové tyrosin kinázy (PTK) jsou enzymy, které katalyzují fosforylaci specifických tyrosinových zbytků v buněčných proteinech. Tato post-translační modifikace těchto substrátových proteinů, které jsou často samy enzymy, působí jako proliferace, aktivace nebo diferenciace buněk, regulující molekulární přesmyk (přehled viz Schlessinger a Ulrich, 1992, Neuron 9: 383-391). Aberantní nebo nadbytečná aktivita PTK byla pozorována u mnoha chorobných stavů zahrnujících benigní a maligní proliferativní poruchy, jakož i onemocnění, která jsou důsledkem nevhodné aktivace imunitního systému (například autoimunitních poruch), odmítání transplantátu a onemocnění hostitele versus štěp. PTK, specifické pro endotelové buňky, jako je KDR a Tie-2, navíc zprostředkovávají angiogenní proces, a tudíž se účastní podpory progrese nádorů a dalších onemocnění ··· ·· · ··· « · » · ·♦ · ···· • ······· · ··· ···· t · · ···· ·· · ·· · ·· · · · · · ^2 — zahrnujících nevhodnou vaskularizaci (například diabetické retinopatie, choroidální neovaskularizace v důsledku makulámí degenerace související s věkem, psoriasy, arthritidy, retinopatie předčasných, infantilních hemangiomů).

Tyrosin kinázy mohou být receptorového typu (s extracelulámí, transmembránovou a intracelulámí doménou) nebo non-receptorového typu (jsou plně intracelulámí).

Receptorové tyrosinkinázy (RTK). RTK zahrnují velkou skupinu transmembránových receptorů s různými biologickými aktivitami. Dosud bylo identifikováno alespoň 19 různých podskupin RTK. Skupina receptorových tyrosinkináz (RTK) zahrnuje receptory, které jsou rozhodující pro růst a diferenciaci různých buněčných typů (Yarden a Ullrich, Ann. Rev. Biochem. 57: 433-478,1988; Ullrich a Schlessinger, Cell 61: 243-254,1990). Vlastní funkce RTK je aktivována po navázání ligandu, což vede k fosforylaci receptoru a několika buněčných substrátů a následně k různým buněčným odpovědím (Ullrich & Schlessinger, 1990, Cell 61: 203-212). Přenos signálu zprostředkovaný receptorovou tyrosinkinázou je přitom zahájen extracelulámí interakcí se specifickým růstovým faktorem (ligandem), po níž typicky následuje dimerizace receptoru, stimulace vlastní aktivity proteinové tyrosinové kinázy a transfosforylace receptoru. Vytvoří se tak vazebná místa pro přenosové molekuly intracelulámího signálu a vedou k vytvoření komplexů se spektrem cytoplasmatických signálních molekul, které usnadňují adekvátní buněčnou odpověď (například buněčné dělení, diferenciaci, metabolické efekty, změny extracelulámího mikroprostředí), viz Schlessinger a Ullrich, 1992, Neuron 9: 1-20.

Proteiny s SH2 (src homologie-2) nebo fosfotyrosinovými vazebnými (PTB) doménami vážou aktivované receptory tyrosinkináz a jejich substráty s vysokou afinitou k propagaci signálů do buňky. Obě domény rozpoznávají fosfotyrosin. (Fantl et al., 1992, Cell 69: 413-423; Songyang et al., 1994, Mol.Cell. Biol. 14: 2777-2785; Songyang et al., 1993, Cell Ί2\ 7tt-TVtk, a Koch et al., 1991, Science 252: 668-678; Shoelson, Curr. Opin. Chem. Biol. (1997), 1 (2), 227234; Cowbum, Curr. Opin. Struct. Biol. (1997), 7 (6), 835838). Bylo identifikováno několik intracelulámích substrátových proteinů, které asociují s receptorovými tyrosinkinázami (RTK). Mohou být rozděleny do dvou hlavních skupin: (1) substráty, které mají katalytickou doménu, a (2) substráty, které takovou doménu nemají, ale slouží jako adaptéry a asociují s katalyticky aktivními molekulami (Songyang et al., 1993, Cell 72: 767-778). Specificita interakcí mezi receptory nebo proteiny a doménami SH2 nebo PTB jejich substrátů je určována aminokyselinovými zbytky, • · · · • · • · · · · · · · · • · · · · · ··· ······ ·· · ·· ·· ·· bezprostředně obklopujícími fosforylovaný tyrosinový zbytek. Například rozdíly ve vazebné afinitě mezi SH2 doménami a aminokyselinovými sekvencemi obklopujícími fosfotyrosinové zbytky na konkrétních receptorech korelují s pozorovanými rozdíly ve fosforylačním profilu jejich substrátů (Songyang et al., 1993, Cell 72: 767-778). Zpozorování vyplývá, že funkce každé receptorové tyrosinkinázy je určována nejen profilem její exprese a dostupností ligandů, ale i souborem transdukčních drah signálu po směru exprese, které jsou aktivovány konkrétním receptorem, jakož i načasováním a trváním těchto stimulů. Fosforylace tedy poskytuje významný regulační stupeň, který určuje selektivitu signálních drah, vyvolávaných konkrétními receptory růstového faktoru, jakož i receptory diferenciačního faktoru.

Uvádí se, že několik receptorových tyrosinkináz, jako je FGFR-1, PDGFR, TIE-2 a c-Met, a růstové faktory, které se na ně váží, hrají roli v angiogenesi, i když některé z nich mohou podporovat angiogenesi nepřímo (Mustonen a Alitalo, J. Cell Biol. 129: 895898,1995). Jedna taková receptorová tyrosinkináza, známá jako fetální jatemí kináza 1 (FLK-1), je členem podskupiny RTK typu ΠΙ. Alternativní označení pro lidskou FLK-1 je receptor obsahující doménu kinázového insertu (KDR) (Terman et al., Oncogene 6: 1677-83,1991). Další alternativní označení pro FLK-l/KDR je receptor 2 růstového faktoru vaskulámích endotelových buněk (VEGFR-2), protože s vysokou afinitou váže VEGF. Myší verze FLK1/VEGFR-2 se označuje také NYK (Oelrichs et al., Oncogene 8 (1): 11-15,1993). Byly izolovány DNA kódující myší, krysí a lidskou FLK-1 a byly popsány nukleotidové a kódované aminokyselinové sekvence (Matthews et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 88: 9026-30,1991; Terman et al., 1991, viz výše; Terman et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 187: 1579-86,1992; Sarzani et al., nyz. výše; a Millauer et al., Cell 72: 835-846,1993). Četné studie, například uvedené v Millauer et al., viz výše, naznačují, že VEGF a FLK-1/KDRNEGFR-2 tvoří dvojici ligand-receptor, která hraje významnou úlohu při proliferaci vaskulámích endotelových buněk, resp. při tvorbě a rašení cév, což se označuje jako vaskulogenese, resp. angiogenese.

Jiná RTK podskupiny typu III, označovaná tyrosin kináza-1 typu fms (Fit- 1) je příbuzná FLK-l/KDR (DeVries et al. Science 255; 989-991,1992; Shibuya et al., Oncogene 5: 519-524,1990). Alternativní označení pro Flt-1 je receptor 1 růstového faktoru vaskulámích endotelových buněk (VEGFR-1). Dosud byla exprese členů podskupin FLK-1/KDR/VEGFR-2 a Flt-l/VEGFR-1 zjišťována primárně na endotelových buňkách. Členové těchto podskupin jsou specificky stimulováni členy skupiny ligandů • ·

růstového faktoru vaskulámích endotelových buněk (VEGF) (Klagsbum a D'Amore, Cytokine & Growth Factor Reviews 7: 259270,1996). Růstový faktor vaskulámích endotelových buněk (VEGF) se váže na Flt-1 s vyšší afinitou než na FLK-l/KDR a je mitogenní vůči vaskulámím endotelovým buňkám (Terman et al., 1992, viz výše; Mustonen et al. viz výše; DeVries et al., viz výše). Má se za to, že Flt-1 je nezbytný pro organizaci endotelu během vaskulámího vývoje. Exprese Flt-1 je spojena s časným vaskulámím vývojem u myších embryí a s neovaskularizací v průběhu hojení ran (Mustonen a Alitalo, viz výše). Exprese Flt-1 v monocytech, osteoklastech a osteoblastech, stejně jako v dospělých tkáních, jako jsou glomeruly v ledvinách, naznačuje pro tento receptor další funkci, která nesouvisí s růstem buněk (Mustonen a Alitalo, viz výše).

Jak je uvedeno výše, nedávné důkazy naznačují, že VEGF hraje úlohu jak při normální, tak při patologické angiogenesí (Jakeman et al., Endocrinology 133: 848859,1993; Kolch et al., Breast Cancer Research and Treatment 36: 139-155,1995; Ferrara et al., Endocrine Reviews 18(1); 4-25,1997; Ferrara et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L. D. Goldberg a E. M. Rosen), 209-232,1997). Navíc se uvádí, že VEGF se účastní regulace a zvyšování vaskulámí permeability (Connolly, et al., J. Biol. Chem. 264 200172001720024,1989; Brown et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L. D. Goldberg a E. M. Rosen), 233-269,1997). Byly popsány různé formy VEGF, vznikající alternativním sestřihem mRNA, včetně čtyř forem, popsaných v Ferrara et al. (J. Cell. Biochem. 47: 211218,1991). Obě vylučované a převážně s buňkou související formy VEGF identifikoval Ferrara et al. viz výše, a u proteinu se ukázalo, že existuje ve formě disulfidicky spojených dimerů.

V poslední době bylo identifikováno několik příbuzných homologů VEGF. Nebyla však ještě osvětlena jejich role v normálních a chorobných fyziologických procesech. Členové rodiny VEGF jsou navíc často exprimováni v četných tkáních spolu s VEGF a jsou obecně schopni tvořit s VEGF heterodimery. Tato schopnost pravděpodobně mění receptorovou specifitu a biologické účinky heterodimerů a dále komplikuje osvětlení jejich specifických funkcí, jak je ilustrováno dále (Korpelainen a Alitalo, Curr. Opin. Cell Biol., 159164,1998 a tam citované odkazy).

Růstový faktor placenty (P1GF) má aminokyselinovou sekvenci, která vykazuje významnou homologii se sekvencí VEGF (Park et al., J. Biol. Chem. 269: 2564654,1994;

Maglione et al. Oncogene 8: 925-31,1993). Jako u VEGF vznikají z alternativního sestřihu mRNA různé typy P1GF a protein existuje v dimemí formě (Park et al., viz výše). PIGF-1

Λ · • · · ♦ · · • · r · · · • ······· · · · · ·· •· · ·· ·· ·· a P1GF-2 se vážou s vysokou afinitou na Flt-1 a P1GF-2 se rovněž ochotně váže na neuropilin-1 (Migdal et al., J. Biol. Chem. 273 (35): 22272-22278), ale žádný z nich se neváže na FLK-l/KDR (Park et al., viz výše). Uvádí se, že P1GF potencuje jak vaskulámí permeabilitu, tak mitogenní účinek VEGF na endotelové buňky, je-li VEGF přítomen v nízkých koncentracích (pravděpodobně v důsledku tvorby heterodimeru) (Park et al., viz výše).

VEGF-B je produkován ve dvou isoformách (167 a 185 zbytků), které také zjevně vážou Flt-l/VEGFR-1. Může hrát roli při regulaci degradace extracelulámí matrice, buněčné adhesi a migraci prostřednictvím modulace exprese a aktivity plasminového aktivátoru urokinázového typu a inhibitoru 1 plasminového aktivátoru (Pepper et al., Proč. Nati. Acad. Sci. U. S. A. (1998), 95 (20): 11709-11714).

VEGF-C byl původně klonován jako ligand pro VEGFR-3/Flt-4, který je primárně exprimován lymfatickými endotelovými buňkami. Ve své plně zralé formě může VEGF-C také vázat KDR/VEGFR-2 a stimulovat proliferaci a migraci endotelových buněk in vitro a angiogenesi v in vivo modelech (Lymboussaki et al., Am. J. Pathol. (1998), 153 (2): 395403; Witzenbichler et al., Am. J. Pathol. (1998), 153 (2), 381-394). Transgenní hyperexprese VEGF-C vyvolává proliferaci a zvětšení pouze u lymfatických cév, zatímco krevní cévy ovlivněny nejsou. Na rozdíl od VEGF není exprese VEGF-C vyvolávána hypoxií (Ristimaki et al., J. Biol. Chem. (1998), 273 (14), 8413-8418).

Nejnověji objevený VEGF-D je strukturně velmi podobný VEGF-C. Uvádí se, že VEGF-D váže a aktivuje alespoň dva VEGFR, VEGFR-3/Flt-4 a KDR/VEGFR-2. Původně byl klonován jako c-fos indukovatelný mitogen pro fibroblasty a přednostně je exprimován v mesenchymálních buňkách plic a kůže (Achen et al., Proč. Nati. Acad. Sci. U. S. A. (1998), 95 (2), 548-553 a tam uvedené odkazy).

Co se týče VEGF, pro VEGF-C a VEGF-D bylo nárokováno, že v Milesově testu indukují vzrůst vaskulámí permeability in vivo, jestliže se vstříknou do kutánní tkáně (PCT/US97/14696; W098/07832, Witzenbichler et al., viz výše). Fyziologická role a význam těchto ligandů při modulaci vaskulámí hyperpermeability a endotelových odpovědí ve tkáních, ve kterých nejsou exprimovány, zůstává nejistá.

Nedávno byl popsán virově kódovaný nový typ růstového faktoru vaskulámích endotelových buněk, VEGF-E (NZ-7 VEGF), který přednostně využívá receptor KDR/Flk1 receptor a má silnou mitotickou aktivitu bez vazebné domény heparinu (Meyer et al., EMBOJ. (1999), 18 (2), 363-374; Ogawa et al., J. Biol. Chem. (1998), 273 (47), 31273• · · ·

31282.). Sekvence VEGF-E mají 25% homologii se savčím VEGF a jsou kódovány virem Orf parapoxviru (OV). Tento parapoxvirus napadá ovce a kozy a příležitostně člověka a vytváří léze s angiogenesí. VEGF-E je dimer o velikosti asi 20 kDa bez bázické domény nebo afinity k heparinu, ale má charakteristickou cysteinovou uzlovou jednotku, přítomnou ve všech savčích VEGF, a bylo překvapivě zjištěno, že má účinnost a bioaktivitu podobnou jako heparin vázající isoforma VEGF165 od VEGF-A, tj. oba faktory stimulují uvolňování tkáňového faktoru (TF), proliferaci, chemotaxi a rašení kultivovaných vaskulámích endotelových buněk in vitro a angiogenesí in vivo. Podobně jako u VEGF 165, bylo u VEGF-E zjištěno, že se váže s vysokou afinitou na receptor-2 VEGF (KDR), což vede k autofosforylaci receptoru a dvoufázovému vzrůstu koncentrací volného nitrobuněčného Ca²⁺, zatímco se VEFG-E, na rozdíl od VEGF165, nevázal na receptor-1 VEGF (Flt-1).

Na základě objevujících se nálezů dalších homologů VEGF a VEGFR a precedentů heterodimerizace ligandu a receptoru může působení takových homologů VEGF zahrnovat vznik heterodimerů ligandu VEGF a/nebo heterodimerizaci receptorů, nebo vazbu na ještě neobjevený VEGFR (Witzenbichler et al., viz výše). Nedávné zprávy také naznačují, že indukce vaskulámí permeability se může účastnit neuropilin-1 (Migdal et al., viz výše) nebo VEGFR-3/Flt-4 (Witzenbichler et al., viz výše), nebo receptory jiné než KDR/VEGFR-2 (Stacker, S. A., Vítali, A., Domagala, T., Nice, E., a Wilks, A. F.,Angiogenesis and Cú«cerConference, Amer. Assoc. Cancer Res., Jan. 1998, Orlando, FL; Williams, Diabetelogia 40: S 118-120 (1997)).

Tie-2 (TEK) je člen nedávno objevené rodiny specifických receptorových tyrosinkináz endotelových buněk, který se účastní angiogenních procesů, jako je větvení, rašení, remodelování, maturace a stabilita cév. Tie-2 je první savčí receptorová tyrosinkináza, u níž byl identifikován jak agonistní ligand(y) (například Angiopoietinl (Angl), který stimuluje autofosforylaci receptoru a transdukci signálu), tak antagonistní ligand(y) (například Angiopoietin2 (Ang2)). Knock-out a transgenní manipulace exprese Tie-2 a jeho ligandů ukazuje, že přísná prostorová a časová kontrola signalizace Tie-2 je esenciální pro správný vývoj nové vaskulatury. Současný model naznačuje, že stimulace Tie-2 kinázy ligandem Angl je přímo účastna větvení, rašení a vyrůstání nových cév, a získávání a interakce periendotelových podpůrných buněk je významná při zachovávání integrity cév a zavádění klidu. Absence Angl stimulace Tie-2 nebo inhibice autofosforylace Tie-2 pomocí Ang2, který vzniká ve vysokých hladinách v místech • · · · vaskulámí regrese, může vyvolat ztrátu vaskulámí struktury a matricových kontaktů vedoucí k odumření endotelových buněk, zejména při absenci stimulů pro růst nebo přežití. Situace je však složitější, protože byly nedávno objeveny alespoň dva další ligandy Tie-2 (Ang3 a Ang4), a byla prokázána schopnost heterooligomerizace různých agonistních a antagonistních angiopoetinů, modifikující jejich aktivitu. Zaměření angiogenního terapeutického přístupu na interakce Tie-2 ligand-receptor má tedy menší přednost a preferuje se kinázová inhibiční strategie.

Rozpustná extracelulámí doména Tie-2 (ExTek) může působit ve prospěch narušování ustavování nádorové vaskulatury v modelech xenotransplantátu nádoru prsu a plicní metastasy a při oční neovaskularizaci zprostředkované nádorovými buňkami. Adenovirální infekcí je možno dosáhnout mg/ml hladin produkce ExTek in vivo u hlodavců za 7 až 10 dní bez vedlejších účinků. Tyto výsledky naznačují, že narušování signálních drah Tie-2 může být u normálních zdravých zvířat dobře tolerováno. Tyto inhibiční odpovědi Tie-2 na ExTek mohou být důsledkem sekvestrace ligand(ů) a/nebo tvorby neproduktivního heterodimem s plnou délkou Tie-2.

V nedávné době bylo zjištěno významné posílení exprese Tie-2 ve vaskulámím synoviálním panu lidských artritických kloubů, což je konzistentní s rolí při nežádoucí neovaskularizaci. Tento objev naznačuje, že Tie-2 má určitou roli při progresi revmatoidní artritidy. Ve spojení s poruchami lidské venózní malformace byly objeveny bodové mutace produkující konstitutivně aktivované formy Tie-2. Inhibitory Tie-2 se proto používají při léčbě těchto poruch a v dalších situacích nežádoucí neovaskularizace.

Nereceptorové tyrosinkinázy. Nereceptorové tyrosinkinázy představují soubor buněčných enzymů, jimž chybějí extracelulámí a transmembránové sekvence. Do současnosti bylo identifikováno dvacet čtyři jednotlivých nereceptorových tyrosinkináz, zahrnujících jedenáct (11) podrodin (Src, Frk, Btk, Csk, Abl, Zap70, Fes/Fps, Fak, Jak, Ack a FIMK). Podrodina Src nereceptorových tyrosinkináz je v současnosti tvořena největším počtem PTK a zahrnuje Src, Yes, Fyn, Lyn, Lek, Blk, Hek, Fgr a Yrk. Podrodina Src enzymů se spojuje s onkogenesí a imunitní odpovědí. Podrobnější diskusi nereceptorových tyrosinkináz poskytuje Bohlen, 1993, Oncogene 8: 2025-2031, na kteroužto práci se zde odkazuje.

Bylo zjištěno, že mnohé tyrosinkinázy, ať RTK nebo nereceptorové tyrosinkinázy, se účastní buněčných signálních drah podílejících se na četných patogenních stavech • · · · včetně rakoviny, psoriasy a dalších hyperproliferativních poruch nebo hyperimunitních odpovědí.

Vývoj sloučenin pro modulaci PTK. Vzhledem k tušenému významu PTK pro kontrolu, regulaci a modulaci buněčné proliferace, onemocnění a poruchy spojené s abnormální buněčnou proliferací byly činěny četné snahy identifikovat receptorové a nereceptorové tyrosinkinázové inhibitory pomocí různých přístupů, včetně použití mutantních ligandů (US patentová přihláška č. 4,966,849), rozpustných receptorů a protilátek (přihláška č. WO 94/10202; Kendall & Thomas, 1994, Proč. Nati. Acad. Sci 90: 10705-09; Kim et al., 1993, Nátuře 362: 841-844), RNA ligandů (Jellinek, et al., Biochemistry 33: 1045056; Takano, et al., 1993, Mol. Bio. Cell 4: 358A; Kinsella, et al. 1992, Exp. Cell Res. 199: 56-62; Wright, et al., 1992, J. Cellular Phys. 152: 448-57) a tyrosinkinázových inhibitorů (WO 94/03427; WO 92/21660; WO 91/15495; WO 94/14808; US patent č. 5,330,992; Mariani, et al., 1994, Proč. Am. Assoc. Cancer Res. 35: 2268).

V poslední době byly činěny pokusy identifikovat malé molekuly, které působí jako tyrosinkinázové inhibitory. Například bismonocyklické, bicyklické nebo heterocyklické arylové sloučeniny (PCT WO 92/20642) a vinylen-azaindolové deriváty (PCT WO 94/14808) se obecně popisují jako tyrosinkinázové inhibitory. Styrylové sloučeniny (US patent č. 5,217,999), styryl-substituované pyridylové sloučeniny (US patent č. 5,302,606), některé chinazolinové deriváty (EP č. 0 566 266 Al; Expert Opin. Ther. Pat. (1998), 8 (4): 475-478), selenoindoly a selenidy (PCT WO 94/03427), tricyklické polyhydroxylické sloučeniny (PCT WO 92/21660) a sloučeniny benzylfosfonové kyseliny (PCT WO 91/15495) se popisují jako sloučeniny pro použití jako tyrosinkinázové inhibitory pro použití při léčbě rakoviny. Anilinocinnoliny (PCT WO 97/34876) a sloučeniny chinazolinových derivátů (PCT WO 97/22596; PCT WO 97/42187) byly popsány jako inhibitory angiogenese a vaskulámí permeability.

Dále byly činěny pokusy identifikovat malé molekuly, které působí jako inhibitory serin/threoninkináz. Například bylo uvedeno, že bis(indolylmaleinimidové) sloučeniny inhibují konkrétní isoformy PKC serin/threoninkináz, jejichž funkce při transdukci signálu souvisí se změněnou vaskulámí permeabilitou při onemocněních souvisejících s VEGF (PCT WO 97/40830; PCT WO 97/40831).

• · ♦ · ·

Inhibitory Plk-1 kinázy

Plk-1 je serin/threoninkináza, která je významným regulátorem průběhu buněčného cyklu. Má kritickou roli při výstavbě a dynamické funkci aparátu mitotického vřeténka. Ukázalo se rovněž, že Plk-1 a příbuzné kinázy jsou úzce zapojeny do aktivace a inaktivace jiných regulátorů buněčného cyklu, jako jsou cyklin-dependentní kinázy. Vysoká úroveň exprese Plk-1 je spojena s proliferačními aktivitami buněk. Často se nachází v maligních nádorech různého původu. Předpokládá se, že inhibitory Plk-1 blokují proliferaci rakovinných buněk narušením procesů zahrnujících mitotická vřeténka a nesprávně aktivované cyklin-dependentní kinázy.

Inhibitory Cdc2/Cyklin B kinázy (Cdc2 je známa rovněž jako cdkl)

Cdc2/cyklin B je další serin/threonin kináza, která náleží ke skupině cyklindependentních kináz (cdk). Tyto enzymy se účastní kritického přechodu mezi různými fázemi průběhu buněčného cyklu. Má se za to, že nekontrolovaná proliferace buněk, která je známkou rakoviny, je závislá na zvýšené aktivitě cdk v těchto buňkách. Inhibice zvýšené aktivity cdk v rakovinných buňkách prostřednictvím inhibitorů cdc2/cyklin B kinázy by mohla proliferaci potlačit a nastolit normální kontrolu průběhu buněčného cyklu.

Regulace aktivace CDK je složitá, ale vyžaduje asociaci CDK se členem cyklinové skupiny regulačních podjednotek (Draetta, Trends in Cell Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Nátuře, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Cell, 3: 13-27 (1992)). Další úroveň regulace nastává jak aktivací, tak inaktivací fosforylace CDK podjednotky (Draetta, Trends in Cell Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Nátuře, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Cell, 3: 13-27 (1992); Ducommun et al., EMBO Journal, 10: 3311-3319 (1991); Gautier et al., Nátuře 339: 626-629 (1989); Gould a Nurse, Nátuře, 342: 39-45 (1989); Krek a Nigg, EMBO Journal, 10: 3331-3341 (1991); Solomon et al., Cell, 63: 1013-1024 (1990)). Koordinovaná aktivace a inaktivace různých komplexů cyklin/CDK je esenciální pro normální průběh buněčným cyklem (Pines, Trends in Biochemical Sciences, 18: 195197 (1993); Sherr, Cell, 73: 10591065 (1993)). Oba kritické přechody Gl-S a G 2-M jsou kontrolovány různými aktivitami cyklin/CDK. U G1 se má za to, že nástup S-fáze zprostředkuje jak cyklin D/CDK4, tak cyklin E/CDK2 (Matsushima et al., Molecular &

• · · · • · . . . · ·· · ..· • ······· · ··· ··«

,. , ·· ·· ··

Cellular Biology, 14: 2066-2076 (1994); Ohtsubo a Roberts, Science, 259: 19081912 (1993); Quelle et al., Genes & Development, 7: 1559-1571 (1993); Resnitzky et al., Molecular & Cellular Biology, 14: 1669-1679 (1994)). Průchod S-fází vyžaduje aktivitu cyklinu A/CDK2 (Girard et al., Cell, 67: 1169-1179 (1991); Pagano et al., EMBO Journal, 11: 961-971 (1992); Rosenblatt et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 89: 2824-2828 (1992); Walker a Maller, Nátuře, 354: 314-317 (1991); Zindy et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 182: 1144-1154 (1992)), zatímco aktivace cyklinu A/cdc2 (CDK1) a cyklinu B/cdc2 je nutná pro nástup metafáze (Draetta, Trends in Cell Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Nátuře, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Cell, 3: 13-27 (1992); Girard et al., Cell, 67: 1169-1179 (1991); Pagano et al., EMBO Journal, 11: 961-971 (1992); Rosenblatt et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 89: 2824-2828 (1992); Walker a Maller, Nátuře, 354: 314-317 (1991); Zindy et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 182: 1144-1154 (1992)). Není tedy překvapující, že ztráta kontroly regulace CDK je častým případem u hyperproliferativních onemocnění a rakoviny. (Pines, Current Opinion in Cell Biology, 4: 144-148 (1992); Lees, Current Opinion in Cell Biology, 7: 773-780 (1995); Hunter a Pines, Cell, 79: 573-582 (1994)).

Inhibitory kináz účastnící se zprostředkování nebo udržování chorobných stavů reprezentují nové terapie pro tyto poruchy. Příklady takových kináz zahrnují, ale nejsou na ně omezeny: (1) inhibici c-Src (Brickell, Critical Reviews in Oncogenesis, 3: 401-406 (1992); Courtneidge, Seminars in Cancer Biology, 5: 236-246 (1994), raf (Powis, Pharmacology & Therapeutics, 62: 57-95 (1994)) a cyklin-dependentních kináz (CDK) 1, 2 a 4 u rakoviny (Pines, Current Opinion in Cell Biology, 4: 144148 (1992); Lees, Current Opinion in Cell Biology, 7: 773-780 (1995); Hunter a Pines, Cell, 79: 573-582 (1994)), (2) inhibici CDK2 nebo PDGF-R kinázy při restenóze (Buchdunger et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 92: 2258-2262 (1995)), (3) inhibici CDK5 a GSK3 kináz u Alzheimera (Hosoi et al., Journal of Biochemistry (Tokyo), 117: 741-749 (1995); Aplin et al., Journal of Neurochemistry, 67: 699-707 (1996), (4) inhibici c-Src kinázy při osteoporóze (Tanaka et al., Nátuře, 383: 528-531 (1996), (5) inhibici GSK-3 kinázy při diabetů 2. typu (Borthwick et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 210: 738-745 (1995), (6) inhibici p38 kinázy při zánětech (Badger et al., The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 279: 1453-1461 (1996)), (7) inhibici VEGF-R 1-3 a TIE-1 a 2 kináz při onemocněních zahrnujících angiogenesi (Shawver et • · • · · · al., Drug Discovery Today, 2: 50-63 (1997)), (8) inhibici UL97 kinázy při virových infekcích (He et al., Journal of Virology, 71: 405-411 (1997)), (9) inhibici CSF-1R kinázy při kostních a hematopoetických onemocněních (Myers et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 7: 421-424 (1997) a (10) inhibici Lek kinázy při autoimunitních onemocněních a rejekci transplantátů (Myers et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 7: 417420 (1997)).

Navíc je možné, že inhibitory určitých kináz mohou být použitelné při léčbě onemocnění, kde kináza není špatně regulována, ale nicméně je esenciální pro udržování chorobného stavu. V tomto případě by inhibice kinázové aktivity působila buď jako léčba nebo paliativum pro tato onemocnění. Například četné viry, jako je lidský papilomavirus, narušují buněčný cyklus a ženou buňky do S-fáze buněčného cyklu (Vousden, FASEB Journal, 7: 8720879 (1993)). To, že se buňkám po virové infekci zabrání vstoupit do syntézy DNA inhibici aktivit iniciujících S-fázi, jako je CDK2, může přerušit životní cyklus viru zamezením virové replikace. Tentýž princip může být použit k ochraně normálních buněk těla před toxicitou cyklově specifických chemoterapeutik (Stone et al., Cancer Research, 56: 3199-3202 (1996); Kohn et al., Journal of Cellular Biochemistry, 54: 44-452 (1994)). Inhibice CDK 2 nebo 4 zabrání u normálních buněk přechodu do cyklu a omezí toxicitu cytotoxik, která působí v S-fázi, G2 nebo mitose. Dále se ukázalo, že také aktivita CDK2/cyklin E reguluje NF-kB. Inhibice aktivity CDK2 stimuluje NF-kBdependentní genovou expresi, jev zprostředkovaný interakcemi s p300 koaktivátorem (Perkins et al., Science, 275: 523-527 (1997)). NF-kB reguluje geny účastnící se zánětlivých odpovědí (jako hematopoetické růstové faktory, chemokiny a leukocytové adhesní molekuly) (Baeuerle a Henkel, Annual Review of Immunology, 12: 141-179 (1994)) a může se účastnit suprese apoptotických signálů v buňce (Beg a Baltimore, Science, 274: 782-784 (1996); Wang et al., Science, 274: 784-787 (1996); Van Antwerp et al., Science, 274: 787-789 (1996)). Inhibice CDK2 tedy může potlačovat apoptózu indukovanou cytotoxickými léčivy mechanismem, který zahrnuje NF-kB. Z toho tedy vyplývá, že inhibice aktivity CDK2 může být použitelná v případech, kde má NF-kB určitou roli v etiologii onemocnění. Další příklad může být vzat z fungálních infekcí: Aspergillóza je běžné onemocnění imunokompromitováných pacientů (Armstrong, Clinical Infectious Diseases, 16: 1-7 (1993)). Inhibice kináz Aspergillus Cdc2/CDC28 nebo Nim A (Osmani et al., EMBO Journal, 10: 2669-2679 (1991); Osmani et al., Cell, • · · · · · • · • · • · · • · · · ·

67: 283-291 (1991)) může způsobit inaktivaci nebo smrt hub, a tak zlepšit terapeutický výsledek u pacientů s těmito infekcemi.

Identifikace efektivních malých sloučenin, které specificky inhibují přenos signálu a buněčnou proliferaci modulací aktivity receptorových a nereceptorových tyrosin a serin/threoninkináz, a tak regulují a modulují abnormální nebo nesprávnou buněčnou proliferaci, diferenciaci nebo metabolismus, je tedy žádoucí. Zvláště by byla přínosnou identifikace metod a sloučenin, které by specificky inhibovaly funkci tyrosinkinázy, která je esenciální pro antigenní procesy nebo tvorbu vaskulámí hyperpermeability vedoucí k edemům, ascitům, efuzím, exudátům a makromolekulámí extravasaci a depozici matrix, jakož i k souvisejícím poruchám.

Podstata vynálezu

Vynález poskytuje sloučeniny obecného vzorce (I)

0) jejich racemické-diastereomemí směsi, optické isomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

Gje

• · · · · I • · • · · • · · ·

nebo skupina případně substituovaná substituentem Ri vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl; cykloalkyl; pyrrolidinyl; bicyklický aromatický heterocykl obsahující dusík, ve kterém má každý kruh šest atomů, např. chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, isochinolinyl a ftalazinyl; bicyklický aromatický heterocykl obsahující dusík, ve kterém má dusík charakter můstku a jeden aromatickáký kruh má pět členů a druhý aromatickáký kruh má šest členů, např. imidazo[l,2-a]pyrimidinyl; 1/7imidazo[l,2-a]imidazolyl; imidazo[2,l-ů][l,3]thiazolyl; naftyl; tetrahydronaftyl;

furanyl; thienyl; benzoxazolyl; benzoisoxazolyl; benzothiazolyl;

, XN b , thiazolyl; benzofuranyl;

2,3-dihydrobenzofuranyl; indolyl; isoxazolyl; tetrahydropyranyl; tetrahydrofuranyl; piperidinyl; pyrazolyl; pyrrolyl; pyrrolopyridinyl; 77-pyridinon; oxazolyl; isothiazolyl; oxadiazolyl; thiadiazolyl; indolinyl; indazolyl; imidazo[l,2-ď]pyridinyl; benzoisothiazolyl; 1,1-dioxybenzoisothiazolyl; pyrido-oxazolyl; pyrido-thiazolyl; pyrimido-oxazolyl; pyrimido-thiazolyl; a benzimidazolyl;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-C₆), který je případně substituován jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (Ci-Có) nebo případně substitovaný -(CH2)_n-cykloalkyl-(CH2)_n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO2, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů, při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, halogen, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina,

• · · • « · tetrazolyl, trifluormethylkarbonylaminoskupina, trifluormethylsulfonamidoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkynyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované nebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylthioskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylthioskupina, -Z¹⁰⁵C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(0)-N(R)-Z-²⁰⁰, r, a CH₂ORc;

substituent Rc při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NRaRe, -W-(CH₂)_tNRdRe, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl nebo -W-(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Có);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cď), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(C,-C₆)-fenyl;

substituenty R<j a Re při každém výskytu jsou nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Ra, Re a dusíkový atom, k němuž jsou vázány, společně tvoří 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂, nebo NRf, kde Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;

• · · · • ř · · * · · · · «·· ·« « · · <··· ·· ·· · ·« · » · · substituent R3 při každém výskytu je, nezávisle, atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-aryl, nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

A je -(Ci-C₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH2O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-; -CH₂N(C(O)OR)-;

-CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-;

-C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-N(R)-,

-N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)_n+,-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+i-C(O)-, -O-(CR₂)_n+rO-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-O-, -C(O)N(R)C(O)-;

-S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-;

-N(R)P(O)(OR_b)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O-, nebo -N(C(O)R)P(OR_b)-;

substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent R_b při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; nebo ve skupině obsahující fosfor tvoří dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a R_bspolečně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklícký kruh; nebo

A je NRSO₂ a substituenty R, R_a a dusíkový atom společně tvoří substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklícký kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z^11O-A-Z^1U dohromady jsou kovalentní vazba; a substituent R₂ je H nebo skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-C₆)-O-, -(Ci-C₆)-C(O)-, -(Ci-C₆)-C(O)O-, -(C!-C₆)-C(O)-NH-, -(C,-C₆)-C(O)-N((C,-C₆))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

·« ··

·· <

• · · · • « « · · • »··*·*· • · · · · · · #· 9 99 99

Z¹⁰² je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina mají jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cď), substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Có)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -N((Ci-C6)-OR)2, substituovaný nebo nesubstituovaný

-N(R)-(Ci-C6)-C(O)2R, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-Cg)-N(R)2, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaná nebo nesubstituovaná sulfonamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, oxoskupina, a nasycená, nenasycená nebo aromatická, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří N, O a S; kde dusíkové atomy uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(0)N(R)2, substituovaným nebo nesubstituovaným

-C(O)-(Ci-C6)-N(R)2, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylóvou skupinou, nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo substituent R2 je skupina obecného vzorce -B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo • · • · * • · · · « nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cój-azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-Cé)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo arylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná nesubstituovaná nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

a je 1 a symboly Dj, Gi, Ji, Li a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Dj, Gi, Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_amá shora definovaný význam;

b je 1 a D₂, G₂, J2, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou CR_a; nebo • · • · · · · · · ···· ·· · · • ······· · ··· ·· · · · · · · ·· · ·· ·· · b je O a jeden ze symbolů D2, G2, L2 a M2 je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G2, L2 a M2 je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoři CR_a a N, kde substituent R_amá shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s výhradou spočívající v tom, že pokud A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R2 je 3,4-dihydroxytetrahydrofůr-2-yl nebo 3,4diacyloxytetrahydrofur-2-yl, pak Z¹⁰⁰ není alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofiiranyl, piperidinyl nebo pyrrolidinyl;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R2 je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, pak A není alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)nebo -C(0)0-;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹’θ-Α-Ζ¹¹¹ dohromady jsou kovalentní vazba, pak Z¹⁰⁰ není alkyl;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹’θ-Α-Ζ¹¹¹ dohromady jsou Ci-Có alkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl; a s výhradou spočívající v tom, že pokud substituent R2 je substituovaný nebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹jsou každý kovalentní vazba, pak A není -0-, -C(0)0-, nebo -N(R)-.

V prvním provedení je substituent R₂ ve sloučeninách obecného vzorce (I) a) atom vodíku; b) substituovaný nebo nesubstituovaný trityl; c) substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl; d) azaheteroaryl substituovaný substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem; e) azacykloalkyl, který je substituován jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C₆)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -Cj-Có-alkyl-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-Ci-C6-alkyl-N(R)2, substituovaný nebo nesubstituovaný -Ci-Cňalkyl-N(R)2, substituovaný nebo nesubstituovaný Ci-Ce-alkyl-cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný tetrahydrothienyl a substituovaný nebo nesubstituovaný tetrahydrothiopyranyl; nebo f) skupina obecného vzorce (a) • ·

kde Ei je piperidinyl, piperazinyl, imidazolyl, morfolinyl, pyrrolidinyl, aminoskupina, amidoskupina, nebo tetrahydrothiazolyl, a kde E je případně substituováno jedním nebo více substituenty vybranými z -Co-Có-alkyl-OR, -Ci-C6-alkyl-C(O)OR, -Ci-C6-alkylheteroaryl, -Ci-Có-alkyl-heterocykloalkyl a -Ci-C6-alkyl-N(R)2Ve druhém provedení je substituent R2 ve sloučeninách obecného vzorce (I) skupina reprezentovaná vzorcem (a), ve kterém Ej je vybraná ze skupiny, kterou tvoří -amino-C 1 -Có-alkyl-morfolino, -piperidino-(C 1 -C6-alkyl-OR),

-imidazolyl-Ci-C6-alkyl-C(O)OR, -piperazino-Ci-Có-alkyl-OR, -amino-Ci-C6-alkyl-OR, -pyrrolidino-OR, -amino-Ci-Có-alkyl-imidazolo, -amino-Ci-C6-alkyl-N(R)2, -amido-Ci-C6-alkyl-N(R)₂, tetrahydrothiazolyl, W-di-(hydroxy-Ci-C6-alkyl)amino- a -piperizino-OR.

Ve třetím provedení je substituent R2 ve sloučeninách obecného vzorce (I) skupina reprezentovaná vzorcem (a), ve kterém Ei je vybráno ze skupiny, kterou tvoří 4-(2-hydroxyethyl)morfolino, 3-hydroxymethylpiperidino,

2-[3-(methyl-karboxy)propyl]imidizol-4-yl, 4-(2-hydroxyethyl)piperazino-,

2- hydroxyethylamino, 3-hydroxypyrrolidinoskupina, 3-imidazolopropylamino, 4-hydroxybutyl-aminoskupina, 3 -methoxypropylamino,

3- (V,V-dimethylamino)propylamino, 7V-[2-(7V,V-dimethyl)ethyl]amido, tetrahydrothiazolyl, W-di-(2-hydroxy-ethyl)amino, 4-hydroxypiperizino a 4-hydroxymethylpiperizino.

Ve čtvrtém provedení, Z^11O-A-Z^1U je -NHC(O)- ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo v kterémkoliv z provedení 1-3.

V pátém provedení je G ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo v kterémkoliv z provedení 1-4 skupina reprezentovaná následující strukturou

V šestém provedení je G ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo v kterémkoliv z provedení 1-5 skupina reprezentovaná následující strukturou • · · • · · · • · · · · ·

V sedmém provedení je substituent R₂ ve sloučeninách obecného vzorce (I) azaheteroaryl substituovaný C|-Cň alkylem, kde alkyl je případně substituován jedním nebo více substituenty vybranými z RO-, -C(O)OR, -C(O)N(R)₂ a -N(R)₂.

V osmém provedení je substituent R₂ ve sloučeninách obecného vzorce (I)

4-(2-hydroxyethyl)pyridin-2-yl, 3-aminomethylpyridin-4-yl nebo 2-methylimidazol-4-yl.

V devátém provedení je G ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo v provedeních 7 nebo 8 skupina reprezentovaná následujícím vzorcem

V desátém provedení je substituent R₂ ve sloučeninách obecného vzorce (I) pyrrolidinyl, který je substituován 2-methoxyethylem, 77,/V-dimethylaminomethylem, N, V-dimethylamino-1 -oxoethylem nebo 2-(V-methylamino)-1 -oxopropylem.

V jedenáctém provedení je G ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo v provedení 10 je skupina reprezentovaná následujícím vzorcem

Ve dvanáctém provedení je subtituent R₂ ve sloučeninách obecného vzorce (I) piperidinyl, který je substituován tetrahydrothiopyranylem, tetrahydrothienylem, 2-(V-methylamino)-2-methyl-l-oxopropylem, 2-methoxyethylem nebo cyklopropylmethylem.

Ve třináctém provedení je Z¹⁰⁰ ve sloučeninách obecného vzorce (I) pyrrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, isochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-a]pyrimidinyl, 177-imidazo[l,2-(2]imidazolyl, imidazo[2,l-Z?][l,3]thiazolyl, //-pyridinon, 1,1-dioxybenzoisothiazolyl, benzoisoxazolyl, alkyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl, pyrrolopyridinyl nebo * · • ft · · · · • ♦······ ·

-/X)

S-^/ , kde všechny z předchozích Z¹⁰⁰ skupin mohou být případně substituovány substituentem Rj.

Ve čtrnáctém provedení je Z¹⁰⁰ ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo v provedení 13 2-pyrrolidinyl, l,2-dihydro-2-oxopyridin-3-yl, benzoisoxazol-3-yl, // l,l-dioxy-benzoisothiazol-3-yl, imidazo[l,2-u]pyridin-2-yl nebo substituent R2 je 4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl.

V patnáctém provedení je Z¹¹⁰-A-Zⁿⁱ ve sloučeninách obecného vzorce (I) nebo provedeních 13 nebo 14 -NH-.

V šestnáctém provedení je Z¹⁰⁰ v obecném vzorci (I) nebo v provedení 13 skupiny pyrrolopyridinyl vybraný ze

V sedmnáctém provedení je Z¹¹⁰-A-Z*¹¹ v provedeních 13 nebo 16 -NHC(O)-.

V osmnáctém provedení je substituent R2 v obecném vzorci (I) nebo v provedeních 13, 16 nebo 17 piperdin-4-yl, V-methylpiperidin-4-yl, 7V-(prop-2-yl)piperidin-4-yl, 2V-(imidazol-4-yl-methyl)piperidin-4-yl, V-(2-methylimidazol-4-yl-methyl)piperidin-4-yl, V-(pyrazol-4-yl-methyl)piperidin-4-yl, A-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl, 7V-(fur-3-yl-methyl)piperidin-4-yl, V-(tetrahydropyran-4-yl-methyl)piperidin-4-yl, 7V-(pyrrol-2-yl-methyl)piperidin-4-yl, nebo A-(2-difluorethyl)piperidin-4-yl.

V devatenáctém provedení jsou substituenty R_a a Ri ve sloučeninách obecného vzorce (I), kde každý ze substituentů představuje jeden nebo více substituentů, při každém výskytu nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, -C(O)O-aryl, -C(O)Oheteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)_p-, a kde alespoň jeden ze substituentů R_a a Ri není atom vodíku.

• ·· ······ · · · • ·· ·· ···· ···· · * · · · · · • ······« · · · · ···· ·· · · · · · · · · • · · ·· · · · · ·

Ve dvacátém provedení je A ve sloučeninách obecného vzorce (I) -(Ci-Ce)-.

Ve dvacátém prvním provedení jsou Z^ll()-A-Z^ln dohromady ve sloučeninách reprezentovaných obecným vzorcem (I) kovalentní vazba.

Ve dvacátém druhém provedení je substituent R3 při každém výskytu ve sloučeninách reprezentovaných obecným vzorcem (I), nezávisle, substituovaný nebo nesubstituovaný

-C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-aryl, nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl.

Ve dvacátém třetím provedení je substituent R₂ skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰², kde Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-C6)-, -(Ci-C6)-O-, -(Ci-C6)-C(O)-, -(CrC6)-C(O)O-, -(Ci-C6)-C(0)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((Ci-C6))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina; a kde Z¹⁰² je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, kde uvedený substituovaný cykloalkenyl má jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydroxyl, kyanoskupína, nitroskupina, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Có), substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Ce)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -N((Ci-Cé)-OR)2, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-C(O)₂R, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-Có)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C₆)-C(O)N(R)-(Ci-C₆)-N(R)₂, substituovaná nebo nesubstituovaná sulfonamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Ce)-OR, oxoskupina, nasycená, nenasycená nebo aromatická, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří N, O, a S; kde dusíkové atomy uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-Ce)• · ···· · · · ···· • ·····«· · ··· ···· ·· · · · · · ·· · • · · ·· ·· · · ·

-N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem.

Ve ďvacátémčtvrtém provedení je substituent R₂ skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹Z¹⁰²; Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-C6)-, -(Ci-C6)-O-, -(C,-C6)-C(O)-, -(C,-C6)-C(O)O-, -(Ci-C6)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((Ci-C6))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina; Z¹⁰² je substituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedená substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří nítroskupina, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-C6), substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Có)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -N((Ci-C6)-OR)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Ce)-C(O)₂R, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Có)N(R)-(Ci-C6)- -N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří O, a S; kde dusíkové atomy uvedené heterocyklikcé skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-Ce)N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem.

Výhodná je sloučenina obecného vzorce (I), kde substituent R₃ je H, substituent Ri při každém výskytu je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří F, Cl, Br, I, CH3, NO₂,

OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF₃, -CH₂NR_<1R_;, ř-butyl, pyridyl, substituovaný nebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzensulfonyl, substituovaná nebo nesubstituovaná fenoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná • · · · · aminoskupina, karboxyl, substituovaný nebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný nebo nesubstituovaný styryl.

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H; substituent R_a při každém výskytu je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří F, Cl, Br, I, CH3, NO2, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, t-butyl, pyridyl, substituovaný nebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzensulfonyl, substituovaná nebo nesubstituovaná fenoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, karboxyl, substituovaný nebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný nebo nesubstituovaný styryl.

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorce kde n je 1,2 nebo 3.

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H, substituent R2 je skupina vzorce m

kde m je 0, 1,2 nebo 3 a substituent R_g je H nebo -(CFLjpN^jRs, kde p je celé číslo od 2 do 6 a substituenty R4 a R5 jsou každý nezávisle H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CFLjq, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CIDqO-, -(CH₂)qNH- a -(CH2)qS(O)_r-, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaná nebo nesubstituovaná část, vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl, alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl a heterocykloalkylová skupina, nebo substituenty R4, R5 a dusíkový atom, ke kterému jsou vázány, tvoří společně 3-, 4-, 5-, 6nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu.

• · • · · · ·

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R₃ je H;

substituent R₂ je skupina vzorce

kde m je 0,1,2 nebo 3;

každý z indexu a i indexu b znamená nezávisle celé číslo od 0 do 6,

Q je -ORó nebo -NR4R5;

každý ze substituentů R4 a R5 znamená nezávisle H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl nebo heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R4, R₅ a dusíkový atom, na který jsou vázány, tvoří společně 3, 4, 5, 6 nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu; a substituent Ré je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R₃ je H; substituent R2 je skupina vzorce

O' kde n je 1, 2 nebo 3; a substituent R4 je H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)q-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)qS(O)_r-, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, aryl, ··· ·· · · · · ···· · · · ··· • ······· · ··· · · • · · ·· · · · · substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R₃ je H; substituent R₂ je skupina vzorce

kde m je 0, 1,2 nebo 3;

substituent R₅ je H, azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří kovalentní vazba, -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH-, -(CH₂)_qC(O)-, -C(O)(CH₂)_q- a -(CH₂)_qS(O)_r-, kde alkylová část skupiny -(CH₂)_q-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH-, -(CH₂)_qC(O)-, -C(O)(CH₂)_q- a -(CH₂)_qS(O)_r je případně substituována halogenem, hydroxyskupinou nebo alkylskupinou, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina.

nebo Y a Z jsou společně přirozená nebo nepřirozená aminokyselina, která může být na aminovém dusíku mono- nebo di-alkylována; a substituent Rď představuje jeden nebo více substituentů, z nichž každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří vodík, hydroxyskupina, oxoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocyklyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocyklylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl a substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; s podmínkou, že uhlíkové atomy sousedící s dusíkovým atomem nejsou substituovány hydroxyskupinou.

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H;

substituent R₂ je skupina vzorce

kde substituent R4 je H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.

Další výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je taková, kde substituent R3 je H; substituent R₂ je skupina vzorce

kde m je celé číslo od 1 do 6; a substituenty R4 a R5 jsou každý nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q-,

celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R4, R5 a atom dusíku, na který jsou vázány, společně tvoří 3, 4, 5-ti, 6-ti nebo 7- člennou, substituovanou nebo • · • · · • · · • · · · « nesubstituovanou heterocyklickou nebo substituovanou nebo nesubstituovanou heterobicyklickou skupinu.

kde n je celé číslo od 0 do 4;

r je 0 a m je celé číslo od 1 do 6; nebo r je 1 a m je celé číslo od 0 do 6;

Q je -NR4R5 nebo -ORé;

každý ze substituentů R4 a R₅ je nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH2)_q-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina;

nebo substituenty R4, R5 a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; a substituent Rď je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.

kde n je celé číslo od 0 do 4;

m je celé číslo od 0 do 6;

substituent R4 je substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q, -S(O)₂-,

-C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; a substituent Rgje vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí společně substituenty R4, R₅ a atom dusíku heterocyklickou skupinu obecného vzorce

kde substituenty R7, Rg, R9, R10, Rn, R,₂, Ru a Rj₄ jsou každý, nezávisle, nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R₇ aRg;R₉a R₁₀; Rn a R_!2; nebo R_!3 a R₁₄jsou dohromady atom kyslíku; nebo alespoň jeden ze substituentů R₇ a R9 je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH2OR15 nebo CH₂NRi₅(Ri6), kde substituenty R_t5 a R16 jsou každý nezávisle vodík, azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH₂)p-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a • 999 · »· * «* · ··· · · · · · · • · r · ·· · · » * * • ·«··«·· · · » · ·«*· • v · ···« · · · ·· · ·· · · ·· ·

-(CH2)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R45, Rjó a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti, 6-ti nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo substituovanou nebo nesubstituovanou heterobicyklickou skupinu;

X je O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 nebo NR17, kde substituent R17 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)Ri7 nebo -C(O)OR,8, kde substituent Ris je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 nebo 1.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí společně substituenty R4, R₅ a atom dusíku heterocykl obecného vzorce

kde substituenty R19 a R20 jsou každý nezávisle vodík nebo nižší alkyl; nebo substituenty R19 a R20 jsou dohromady atom kyslíku.

substituenty R₂i a R22 jsou každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH₂)_P-, S(O)₂-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo ·· · I » « ► « * substituenty R21, R22 a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; m je celé číslo od 1 do 6; a n je celé číslo od 0 do 6.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí substituenty Rt, R₅ a atom dusíku společně heterocyklickou skupinu obecného vzorce

m

R23 kde m je celé číslo od 1 do 6;

substituent R23 je CH2OH, NRR', C(O)NRR' nebo COOR, kde substituenty R a R' jsou každý, nezávisle, vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.

kde substituent R₂₄ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR25, CH2OR25, CH2NR26R27 nebo C(O)NHR26, kde substituent R₂s je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloaryl; a substituenty R26 a R27 jsou každý, nezávisle, vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(Cthjp-, -S(O)2-, -C(O)O-, • « • · · · ·

-SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; substituenty R₂6, R₂7 a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec

kde

T je C(O), S, SO, SO₂, CHOŘ nebo NR, kde substituent R je vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina; a n je 0, 1 nebo 2.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec -N(R₂₈)R₂₉ a substituenty R₂₈ a R₂₉ jsou každý, nezávisle, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsuifonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný kyanoalkyl; nebo substituenty R₂₈ a R₂₉ společně s atomem dusíku mohou také tvořit 5-ti nebo 6-ti člennou heterocyklickou skupinu.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí substituenty R4, R5 a atom dusíku společně heterocykl obecného vzorce • · · · · ··· ·· · · · · ···· ·· · · ·«·· • ······· « «·· ···· • · · ·· · · ·· ·

kde substituenty R₇, Rg, R9, R10, R11, R12, R13 a R14 jsou každý, nezávisle, nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R₇ a Rg; R9 a Rioí R11 a R12; nebo R13 a R14 jsou dohromady atom kyslíku; nebo alespoň jeden ze substituentů R₇ a R9 je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH2OR15 nebo CH₂NR₁₅(R₁₆), kde substituenty R15 a Ri6 jsou každý, nezávisle, vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(ClUjp-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH, (CH2)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH2)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty Rj₅, Ri6 a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti, 6-ti nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu;

X je O, S, SO, SO2, CH2, CHORi₇nebo NRi₇, kde substituent Ri₇ je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)Rig nebo -C(O)ORig, kde substituent Rig je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 nebo 1.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí substituenty R4, R5 a atom dusíku společně heterocykl obecného vzorce • · ·

kde substituenty R49 a R20 jsou každý, nezávisle, vodík nebo nižší alkyl; nebo substituenty R19 a R₂o jsou dohromady atom kyslíku;

substituenty R21 a R22 jsou každý, nezávisle, vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH^jp-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R₂i, R22 a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; m je celé číslo od 1 do 6; a n je celé číslo od 0 do 6.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin vytvářejí substituenty R4, R₅ a atom dusíku společně heterocyklickou skupinu obecného vzorce

m

R23 kde m je celé číslo od 1 do 6; a substituent R23 je CH2OH, NRR', C(O)NRR' nebo COOR, kde substituent R je atom vodíku nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

kde substituent R24 je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR25, CH2OR25, CH2NR26R27 nebo C(O)NHR26, kde substituent R25 je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloarylová skupina; a substituenty R26 a R27 jsou každý, nezávisle, vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(ClLjp-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R26, R27 a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má alespoň jeden ze substituentů R4 a Rs obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec ^R32 kde gje 0 nebo 1;

··· · · · · · · ···· ·· * ···· • ······· · · · · ···· ·· · · · ·· · · ·

T je C(0), O, S, SO, SO₂, CH₂, CHOR47 nebo NR47, kde substituent R47 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH₂, -C(O)Ris nebo -C(O)ORis, kde substituent Ris je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R3₂ je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec -N(R₂g)R₂9, kde substituenty R₂g a R₂g jsou každý, nezávisle, substituovaný nebo nesubstituovaný karboxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný kyanoalkyl; nebo substituenty R₂8 a R₂g společně s atomem dusíku tvoří 5-ti nebo 6-ti člennou substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec N(R3o)R3i, kde substituenty R30 a R31 jsou každý, nezávisle, vodík, alkyl, alkoxykarbonyl, alkoxyalkyl, hydroxyalkyl a aminokarbonyl, kyanoskupina, alkylkarbonyl nebo arylalkyl.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec kde

X-:N

R32 • · • · • · · každé X je, nezávisle, CH nebo N; a substituent R₃₂ je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyi, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má substituent R5 obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec

R32 kde g je 0 nebo 1;

T je O, S, SO, SO2, CH₂, CHORi7 nebo NR17, kde substituent Rn je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, C(O)NH₂, -C(NH)NH₂, -C(O)Rj7 nebo -C(O)ORis, kde substituent Rig je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyi, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

Výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má substituent R₅ obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec

R32 • · · · • · • · · • · · · • · · · · • · · · · · • ·····♦· · kde gje O, 1 nebo 2; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

kde

T je C(O), O, S, SO, SO2, CH2, CHOŘ)7 nebo NR_J7, kde substituent R17 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl, arylalkyl, -C(NH)NH2, -C(O)Ri₈ nebo -C(O)ORi8, kde substituent R^ je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl;

gje 0 nebo 1; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

R33 • · · · • · · · · ··· ·· · · * · • « · « · · * ···» • ······· · · · · · · · · kde substituent R₃₂ je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, alkylkarbonyl, substituovaná nebo nesubstituovaná thioalkoxyskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R₃₃ je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, perhalogenalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.

Výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je ta, ve které substituent R3 je atom vodíku; substituent R₂ má obecný vzorec

kde mje od 0 nebo 1;

substituenty R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40 a R41 jsou každý, nezávisle, methyl nebo atom vodíku; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R34 a R35; R36 a R₃₇; R₃g a R39; nebo R40 a R41 dohromady jsou atom kyslíku;

substituent R4₂ je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde Y je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituent K(₂ má obecný vzorec • · · · • ·

kde u je 0 nebo 1;

substituenty R43, R44, R45, R46, R47, R48, R49 a R₅o jsou každý, nezávisle, methyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R43 a R44; R45 a R46; R47 a R48 ; nebo R49 a R50 dohromady jsou atom kyslíku; a substituent R51 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.

Výhodná sloučenina obecného vzorce (I) je ta, ve které substituent R3 je vodík; substituent R₂ má obecný vzorec

kde h, i, j, k a 1 jsou nezávisle 0 nebo 1;

substituenty R52, R53, R54, R55, R56, R57, R58, R59, Rg a Rh jsou každý, nezávisle, methyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R52 a R53; R54 a R55 ; R₅6 a R57; nebo R58 a R59 dohromady jsou atom kyslíku; a substituent Reo je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z, kde Y je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, • · ···· ·· · · · · · • ······· · · · · ···· ·· · ···· ·· ·

-CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo

kde v je 0 nebo 1;

substituenty Rói, Rď2, Ró3, Ró4, Rós, Róó, Ró7 a Res jsou každý, nezávisle, nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů Rói a Ró2í Ró3 a Rď4; Rós a R^; a Rň7 a dohromady jsou atom kyslíku;

substituent Ró₉ je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L, kde V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH-, -(CH₂)_p-, -S(O)₂- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 nebo 2; a L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.

Další výhodnou sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které je substituent R₃vodík; substituent R₂ je -Z¹⁰¹-Z¹⁰², kde Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-Có)-, -(Ci-Có)-O-, (C_rC₆)-C(O)-, -(C_rC₆)-C(O)O-, -(C,-C₆-C(O)-NH-, -(C,-C₆-C(O)-N((C,-C₆))- nebo substituovaný fenyl; a

Z¹⁰² je vodík, substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je Z¹⁰¹ vybráno ze skupiny sestávající • · · · * · · · · · · ···· ·· · ···· • ······· · · · · ···· se z -CH₂-C(O)O-, -CH₂-C(O)-, -CH₂-C(O)-NH-, -CH₂-C(O)-N(Me), -CH(Me)-C(O)O-, -(CH₂)₃-C(O)O-, -CH(Me)-C(O)-NH- a -(CH₂)₃-C(O)-NH-; a

Z¹⁰² je vybráno ze skupiny sestávající se z vodíku, methylu, ethylu, Λζ/V-dimethylaminoethylu, ΛζΑ-diethylaminoethylu, 2-fenyl-2-hydroxyethylu, morfolinoskupiny, piperazinylu, JV-methylpiperazinylu a 2-hydroxymethylpyrrolidinylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec

, kde Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný benzoxazolyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný benzothiazolyl.

ve kterém se vyskytuje pouze jeden substituent R_a a je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku nebo F.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je Z¹⁰¹ kovalentní vazba; a Z¹⁰² je případně substituovaný pyridyl.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec • · * · • · ··· ·· · ··· ···· ·· · ···» • ······· · ··· · ·« ·

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které je substituent R₃vodík; substituent R₂ je cyklopentyl; a G má obecný vzorec

A_A_z1!S_a__z111_z'»>

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je Z¹¹⁰ vodík; A je O; a Z¹⁰⁰ je případně substituovaný fenyl, furanyl nebo thienyl, přičemž Z¹⁰⁰ je případně substituováno jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, COOH, NO₂, OMe, -COOMe, OCF₃ a CF₃.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je Z¹¹⁰ vodík;

A je -0-, -0-(CR₂)_n-C(0)- nebo -0-(CR₂)_n-0-; n v každém případě je O až 3;

Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z cyklohexylu, fenylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, isoxazolylu a piperidinylu; přičemž Z¹⁰⁰ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající se z alkylu, alkoxyskupiny, halogenu, hydroxyskupiny a alkoxykarbonylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R₂ případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z cyklobutylu a cyklohexylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R₂ případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, alkylu, hydroxyalkylu, karboxyalkylu a fenylalkoxyalkylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je G 4-fenoxyfenyl.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je m 2; a je 0; substituent R_ó je H; b je 1 nebo 2; a substituenty R4 a R5 jsou každý H.

• « · · • » · · · · ··· • · · · · · · · · · · • ······· · ··· ···· • · · ·· · · · · ·

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je m 0, 1 nebo 2; substitutent Ró je vodík; substituent R₅ je vodík nebo Y-Z;

kde Y je kovalentní vazba, -C(O)-, -(CFEjqO-, -(ClUjq, -(CHhjqCýO)- nebo

-C(O)(CH2)_q-, kde alkylová část skupin -(CH2)_qO-, -(CH₂)_P-, -(CH2)_qC(O)- a

-C(O)(CH₂)q- je případně substituovaná halogenem, hydroxyskupinou nebo alkylovou skupinou; a

Z je vodík, alkyl, případně substituovaný alkyl, alkoxyalkyl, případně substituovaný heterocykloalkyl, případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaná aminoskupina.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je Z vybráno ze skupiny sestávající se z atomu vodíku, methylu, ethylu, hydroxymethylu, methoxyethylu, Y-methyl-piperidinylu, (t-butoxykarbonyl)(hydroxy)piperidinylu, hydroxypiperidinylu, (hydroxymethyl)piperidinylu, (hydroxy)(methyl)piperidinylu, morfolinoskupiny, (methoxyethyl)piperidinylu, methylpiperidinylu, 4-piperidinylpiperidinylu, imidazolylu, methylimidazolylu, TV-methylaminoskupiny, ΛζΑ-dimethylaminoskupiny, /V-isopropyl-aminoskupiny,

Λζ/V-diethylaminoskupiny, 2,3-dihydroxypropylaminoskupiny, 2-hydroxyethylaminoskupiny, 3-hydroxypropylaminoskupiny, methoxyethyl-aminoskupiny, ethoxykarbonylmethylaminoskupiny, fenylmethylaminoskupiny, jV-methyl-TV—U , furanylmethylaminoskupiny,

A-(2-A,7V-dimethylaminoethyl)-iV-methyl-aminoskupiny,

-methoxyaminoskupiny, piperidinylethylaminoskupiny,

2- 7V,/V-dimethyl-aminoethy]aminoskupiny, JV-methyl-7V-(/V-methyl-piperidin-4-yljaminoskupiny, 2-morfolino-ethylaminoskupiny, 3 -morfolino-propylaminoskupiny,

3- imidazolyl-propylaminoskupiny nebo 3-(2-oxopyrrolidinyl)propylaminoskupiny.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je m rovno 2; substituent R5 je Y-Z; Y

je -C(O)-; a Z má obecný vzorec R , ve kterém n je 0, 1, 2 nebo 3.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 vodík nebo methyl;

• · » · • *

A je vybráno ze skupiny sestávající se z O, -N(R)- a -N(R)C(O)-;

Z¹¹¹ je -(CH₂)n-cykloalkyl-(CH₂)n-; substituent R je vodík nebo alkyl; n je 0 až 5;

substituent R_a je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z H, OH, F, Cl, methylu a methoxyskupiny; substituent Ri je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z H, CN, F, CF₃, OCF₃, methylu, methoxyskupiny a případně substituované aminoskupiny; a kde uvedená aminoskupina je případně substituovaná jednou nebo více skupinami, přičemž každá je nezávisle vybrána ze skupiny sestávající se z alkylu, alkoxyalkylu, fenylu, substituovaného fenylu a případně substituovaného heteroarylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent Ri

4-methylfenylthioskupina nebo 2-pyridinylthioskupina.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má

-a—(q-cy-z'“

G obecný vzorec kde Z¹⁰⁰ je vybráno ze skupiny sestávající se z benzo[ů]thiofenu, furanylu a thiofenu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R_a alkoxyskupina;

A je NH-C(O)-; a mezi A a Z¹⁰⁰ je kovalentní vazba.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má • · 9 · • Β • » 9

9 999

BBB ·

99

-A— (C₀-C₆>—ζ^10θ

G obecný vzorec

A je vybráno ze skupiny sestávající se z -N(R)-C(O)-N(R)-, -(CH2)_nN(R)C(O)N(R)-, -N(R)- a -N(R)-S02-; substituent R je vodík nebo alkyl; xR,

Z¹⁰⁰ je > » > pyridinyl, thiazolyl, furanyl, benzofuranyl nebo oxazolyl;

X je S, O nebo NR¹, kde substituent R¹ v každém případě je nezávisle vodík nebo Me;

substituent R_a je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z H a F; a substituent Ri je jeden nebo více substituentů, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se zH, F, Cl, Br, NO2, CF₃, alkylu, alkoxyskupiny a alkoxykarbonylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl; m je 1, 2 nebo 3;

substituent R₅ je Y-Z, kde Y je -C(O)O-, -C(O)- nebo -C(O)-(CH2)_P-; a Z je aminoalkyl, A-alkylaminoskupina, N, A-dialkylaminoskupina nebo hydroxyalkylaminoalkyl.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl; G má obecný

O vzorec ' , kde n je 0 až 3; Ζ^Ιθθ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z indolylu, indenylu, methylindenylu, methylindolylu, dimethylaminofenylu, fenylu, cyklohexylu a benzofuranylu.

• · • · · · • ·

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec • · · · · « ···· ·· · ···· • · ···· · · · · · · · ··· ·· · · · · · ··

R.

'z

Z—A—Z—Z¹⁰⁰

Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z fenylu, imidazolylu, indolylu, furanylu, benzofuranylu a 2,3-dihydrobenzofuranylu; kde Z¹⁰⁰ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, CN, případně substituovaného alkylu, -O- (případně substituovaného alkylu), -COOH, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰ a -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰;

Z¹⁰⁵ je kovalentní vazba nebo (Ci-Cé);

Z²⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z (Ci-Cď), fenylu a -(Ci-Cfi)-fenylu;

Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý, nezávisle, kovalentní vazba nebo (C1-C3) případně substituovaná alkylem, hydroxyskupinou, COOH, CN nebo fenylem; a A je O, -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)- nebo -N(R)-C(O)-, kde substituent R je H nebo alkyl.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec y v^a—z¹⁰⁰ / , kde Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z benzoxazolylu, benzothiazolylu a benzimidazolylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl; A je -NH- ; v tomto případě je zde pouze jeden substituent R_a vybraný z H nebo F; a Z¹⁰⁰ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z alkylu, halogenu, CF3 a alkoxyskupiny.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec • · · · · · · ···· · · · ···· • ······· · ··· ···· •· · ·· ·· ·· ·

_ζϋ°_Α__ζΙϋ_ζι°°

Ζ^10θ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z fenylu, pyrrolylu, pyridylu, benzimidazolylu, naftylu a kde Z¹⁰⁰ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, Br, NO2, aminoskupiny, Nalkylaminoskupiny, W-dialkylaminoskupiny, CN, případně substituovaného alkylu, -O- (případně substituovaného alkylu) a fenylu;

Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ v každém případě je nezávisle (C0-C3) případně substituovaná případně substituovaným fenylem; a

A je -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-S(O)₂-, -N(R)-C(O)-, -N(R)- nebo -N(R)-C(O)-O-.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl a v tomto případě je zde pouze jeden substituent R_a a je to atom fluoru.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec ^R.<=\

VJÚ_zh»_a__zu,_z,«i

Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z fenylu, isoxazolylu, tetrahydronafthylu, furanylu, benzofuranylu, pyridylu a indolylu; kde Z¹⁰⁰ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybraný ze skupiny sestávající se z F, CN, NO2, C(O)H, -CONH2, -NHSO2CF3, případně substituovaného alkylu, případně substituovaného heteroarylu a -O- (případně substituované alkylové skupiny);

Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý, nezávisle, případně substituovaná skupina (C0-C3); a

A je O, -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-N(R)-, -C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)-C(O) nebo

-N(R)-.

• · · · • · * · · · · ···· · · · »··· • *······ · ··· ·····

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je substituent R4 methyl; substituent R_aje H nebo methoxyskupina; a Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý nesubstituovaný.

kde substituent R je H nebo nižší alkyl a n v každém případě je nezávisle 1 až 6. Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin je Z¹⁰⁰ substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl.

• · · · • · · · ·

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin má G obecný vzorec / , kde Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z benzoxazolylu, benzothiazolylu a benzimidazolylu.

Další výhodnější sloučeninou obecného vzorce (I) je ta, ve které v jakékoliv z výše uvedených, aplikovatelných, výhodných sloučenin n je 2; substituent Ré je H; m jel; r je 1; a substituenty R4 a R_s jsou každý vodík.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob inhibice aktivity jedné nebo více proteinkináz u pacienta, zahrnující podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi. Výhodný způsob je takový, ve kterém je proteinkináza vybrána ze skupiny sestávající se z KDR, FGFR-1, PDGFRp, PDGFRa, IGF-IR, c-Met, Flt-1, Flt-4, TIE-2, TIE-1, Lek, Src, fyn, Lyn, Blk, hek, fgr a yes. Další výhodný způsob je takový, ve kterém je proteinkináza proteinová serin/threoninkináza nebo proteinová tyrosinkináza. Výhodnější způsob je takový, ve kterém je proteinkináza TIE-2 a další výhodnější způsob je takový, ve kterém aktivita proteinkinázy zahrnuje aktivaci T-buněk, B-buněk, degranulaci žímých buněk, aktivaci monocytů, potenciaci zánětlivé odpovědi nebo jejich kombinaci.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob ovlivnění hyperproliferačních poruch u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob ovlivnění angiogeneze u pacienta, zahrnující podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi. Výhodný způsob je takový, ve kterém sloučenina nebo její fyziologicky přijatelná sůl, proléčivo nebo biologicky aktivní metabolit je podán v množství, které je schopné podporovat angiogenezi nebo vaskulogenezi. Výhodnější • · · · • · ···· ·· · ···· • ······· · ··· ····· ·· · · · · * ·· · • · · · · · · ·· · způsob je takový, ve kterém pacient trpí anémií, ischémií, infarktem, rejekcí transplantátu, zraněním, gangrénou nebo nekrózou.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob ošetření jednoho nebo více ulkusů u pacienta, zahrnující podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléěiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi. Výhodný způsob je takový, ve kterém jsou ulkus nebo ulkusy způsobeny bakteriální nebo fungální infekcí; nebo ulkus nebo ulkusy jsou Moorenovy ulkusy; nebo ulkus nebo ulkusy jsou symptomy ulcerativní kolitidy.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob ošetření onemocnění pacienta, zahrnující podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléěiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi, kde dané onemocnění je oční onemocnění, kardiovaskulární onemocnění, rakovina, syndrom Crow-Fukase (POEMS), diabetické onemocnění, srpkovitá anémie, chronický zánět, systémový lupus, glomerulonefritida, synovitida, zánětlivé střevní onemocnění, Crohnova nemoc, glomerulonefritida, revmatoidní artritida, osteoartritida, roztroušená skleróza, rejekce štěpu, Lymeská nemoc, sepse, von HippelůvLindauův syndrom, pemfigoid, psoriáza, Pagetova nemoc, polycystické onemocnění ledvin, fibróza, sarkoidóza, cirhóza, tyreoiditida, hyperviskózní syndrom, OslerovaRenduova-Weberova nemoc, chronické okluzivní onemocnění plic, astma nebo edém po popáleninách, traumat, ozáření, mrtvice, hypoxie nebo ischémie, ovariální hyperstimulační syndrom, preeklampsie, menometroragie, endometrióza nebo infekce viry Herpes simplex a Herpes zoster, virusem lidské imunodeficience, Parapoxvirusem, protozoem nebo toxoplazmózou.

Výhodný způsob je takový, ve kterém je oční onemocnění:

okulámí nebo makulámí edém, okulámí neovaskulámí onemocnění, skleritida, radiální keratotomie, uveitida, vitritida, myopie, fyziologická exkavace papily, chronické odchlípení sítnice, komplikace po ošetření laserem, konjunktivitida, Stargardtova nemoc a Ealesova nemoc, retinopatie nebo makulámí degenerace; kardiovaskulární onemocnění:

ateroskleróza, restenóza, ischémie/reperfůzní poškození, vaskulámí okluze nebo karotické obstruktivní onemocnění;

rakovina:

• · ···· ·· · · · · · • ······· · ··· ···· ·· · ·· ·· ·· · pevný nádor, sarkom, fibrosarkom, osteom, melanom, retinoblastom, rabdomyosarkom, glioblastom, neuroblastom, teratokarcinom, hematopoézní zhoubné bujení, Kaposiho sarkom, Hodgkinsova nemoc, lymfom, myelom, leukémie nebo maligní ascites; a diabetické onemocnění:

inzulin-dependentní diabetes mellitus se zeleným zákalem očí, diabetická retinopatie nebo mikroangiopatie.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob snížení fertility u pacienta, přičemž tento způsob zahrnuje podání účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivního metabolitů pacientovi.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález způsob, vyznačující se tím, že sloučenina obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelná sůl, proléčivo nebo biologicky aktivní metabolit je podávána v kombinaci s proangiogenním růstovým faktorem. Výhodný způsob je takový, ve kterém proangiogenní růstový faktor je vybrán ze skupiny sestávající se z VEGF, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, HGF, FGF-1,

FGF-2, jejich derivátů a antiidiotypických protilátek.

Detailní popis vynálezu

V rámci jednoho provedení poskytuje předložený vynález sloučeniny obecného vzorce (I) uvedené výše. Specifikace substituentů ve výhodných skupinách sloučenin obecného vzorce (I) jsou uvedeny níže.

Výhodně je substituent Ri vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, Br, I, CH3, NO2,

OCF₃, OCH3, CN, CO2CH3, CF₃, z Z-butylu, pyridylu, substituovaného nebo nesubstituovaného oxazolylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzensulfonylu, substituované nebo nesubstituované fenoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, karboxylu, substituovaného a nesubstituovaného tetrazolylu, substituovaného a nesubstituovaného styrylu, substituované a nesubstituované arylthioskupiny, substituované nebo nesubstituované thioalkoxyskupiny, substituované a nesubstituované heteroarylthioskupiny; CH2ORC kde substituent Rc je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl nebo aryl; a -W-(CH2)t-NRdRe, kde t je celé číslo od 1 do 6; W je přímá vazba, O, S, • · • · · · · · · ···· ·· · · • ······· · ··· ····· ·· · ·· ·· ·· ·

S(0), S(0)₂ nebo NRf, kde substituent Rf je vodík nebo alkyl a substituenty Rd a Re jsou nezávisle vodík, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Ra, Re a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh.

Výhodně je substituent R_a vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, Br, I, CH3, NO₂,

OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF3, í-butylu, pyridylu, substituovaného nebo nesubstituovaného oxazolylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzylu, substituovaného nebo nesubstituovaného benzensulfonylu, substituované nebo nesubstituované fenoxyskupiny, substituovaného nebo nesubstituovaného fenylu, substituované nebo nesubstituované aminoskupiny, substituované nebo nesubstituované thioalkoxyskupiny, karboxylu, substituovaného a nesubstituovaného tetrazolylu, substituovaného a nesubstituovaného styrylu, substituované a nesubstituované arylthioskupiny, substituované a nesubstituované heteroarylthioskupiny; CH₂ORc, kde substituent Rc je vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl nebo aryl; a -W-(CH₂)_t-NRdRe, kde t je celé číslo od 1 do 6; W je přímá vazba, O, S, S(O), S(O)₂ nebo NRf, kde substituent Rf je vodík nebo alkyl a substituenty Rd a Re jsou nezávisle vodík, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty R<j, Re a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat jako soli s farmaceuticky přijatelnými kyselinami. Předložený vynález zahrnuje také tyto soli. Příklady těchto solí zahrnují hydrochloridy, hydrobromidy, sulfáty, methansulfonáty, nitráty, maleáty, acetáty, citráty, fumaráty, tartráty [např. (+)-tartráty, (-)-tartráty nebo jejich směsi, včetně racemických směsí], sukcináty, benzoáty a soli s aminokyselinami, jako je glutamová kyselina. Tyto soli mohou být připraveny standardními způsoby.

Určité sloučeniny obecného vzorce (I), které mají kyselé substituenty, mohou existovat jako soli s farmaceuticky přijatelnými bázemi. Předložený vynález zahrnuje tyto soli. Příklady takových solí zahrnují sodné, draselné, lysinové a argininové soli. Tyto soli mohou být připraveny standardními způsoby.

Určité sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich soli mohou existovat ve více než jedné krystalické formě a předložený vynález zahrnuje každou tuto krystalickou formu a jejich směsi.

Určité sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich soli mohou také existovat ve formě solvátů, např. hydrátů, a předložený vynález zahrnuje každý tento solvát a jejich směsi.

• · · · · · · ···· ·· · · • ······· · ··· • · · · · · ·

Určité sloučeniny obecného vzorce (I) mohou obsahovat jedno nebo více chirálních center, a tudíž existují v různých opticky aktivních formách. Pokud sloučeniny obecného vzorce (I) obsahují jedno chirální centrum, pak sloučeniny existují ve dvou enantiomemích formách a předložený vynález zahrnuje oba enantiomery a směsi enantiomerů, např. racemické směsi. Enantiomery mohou být rozděleny standardními způsoby, např. tvorbou diastereoizomemích solí, které mohou být separovány, např. krystalizací; tvorbou diastereoizomemích derivátů nebo komplexů, které mohou být separovány, např. krystalizací, GLC nebo LC; selektivní reakcí jednoho enantiomerů s enantiomemě selektivním činidlem, např. enzymatická esterifikace; nebo GLC nebo LC v chirálním prostředí, např. na chirálním pomocném médiu, např. silikagel s vázaným chirálním ligandem nebo za přítomnosti chirálního rozpouštědla. Tam, kde požadovaný enantiomer je konvertován na jinou chemickou entitu jedním z výše uvedených způsobů, je potřeba další krok k uvolnění požadované enantiomemí formy. Nebo specifické enantiomery mohou být syntetizovány asymetrickou syntézou pomocí opticky aktivních činidel, substrátů, katalyzátorů nebo rozpouštědel nebo konvertováním jednoho enantiomerů na druhý asymetrickou transformací.

Pokud sloučenina obecného vzorce (I) obsahuje více než jedno chirální centrum, může existovat v diastereoizomemích formách. Diastereoizomemí páry mohou být separovány standardními způsoby, např. chromatografií nebo krystalizací a jednotlivé enantiomery v každém páru mohou být separovány výše uvedenými způsoby. Předložený vynález zahrnuje každý diastereoizomer sloučenin obecného vzorce (I) a jejich směsi.

Určité sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v různých tautomemích formách nebo jako různé geometrické izomery a předložený vynález zahrnuje každý tento tautomer a/nebo geometrický izomer sloučenin obecného vzorce (I) a jejich směsi.

Určité sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v různých stabilních konformačních formách, které mohou být separovatelné. Torzní asymetrie díky omezené rotaci okolo asymetrické jednoduché vazby, např. díky stérickému bránění nebo napětí kruhu, může usnadnit separaci různých konformerů. Předložený vynález zahrnuje každý tento konformační izomer sloučenin obecného vzorce (I) a jejich směsí.

Určité sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat ve formě zwitterionu a předložený vynález zahrnuje každou formu zwitterionu sloučenin obecného vzorce (I) a jejich směsí.

• · · ·

Heteroaromatické skupiny používané v předloženém vynálezu zahrnují heteroarylové kruhové systémy (např. pro názornost, nikoliv však limitující: thienyl, pyridyl, pyrazol, isoxazolyl, thiadiazolyl, oxadiazolyl, indazolyl, furany, pyrroly, imidazoly, pyrazoly, triazoly, pyrimidiny, pyraziny, thiazoly, isothiazoly, oxazolyl nebo tetrazoly) a heteroarylové kruhové systémy, ve kterých karbocyklický aromatický kruh, karbocyklický nearomatický kruh nebo heteroarylový kruh je kondenzován na jeden nebo více dalších heteroarylových kruhů (např. pro názornost, nikoliv však limitující: benzo[Z>]thienyl, benzimidazolyl, benzoxazolyl, benzothiazolyl, benzothiadiazolyl, benzoxadiazolyl, indol, tetrahydroindol, azaindol, indazol, chinolin, imidazopyridin, chinazolin, purin, pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin, pyrazolo[3,4-ď)pyrimidin) a jejich V-oxidy. Substituované heteroarylové skupiny jsou výhodně substituovány jedním nebo více substituenty, přičemž každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z halogenu, hydroxyskupiny, alkylu, alkoxyskupiny, alkyl-O-C(O)-, alkoxyalkylu, heterocykloalkylové skupiny, případně substituovaného fenylu, nitroskupiny, aminoskupiny, monosubstituované amino skupiny nebo disubstituované aminoskupiny.

Termín heterocyklická (heterocyklyl) skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na heteroarylovou i heterocykloalkylovou skupinu.

Termín heterobicyklická skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na bicyklickou skupinu mající jeden nebo více heteroatomů, které jsou nasyceny, částečně nasyceny nebo nenasyceny.

Termín arylalkylová skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na aromatický substituent, který je připojen ke sloučenině alifatickou skupinou mající jeden až asi šest atomů uhlíku. Výhodná arylalkylová skupina je benzylová skupina.

Termín heteroaralkylová skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, je heteroaromatický substituent, který je připojen na sloučeninu alifatickou skupinou mající jeden až šest atomů uhlíku.

Termín heterocykloalkylová skupina, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na nearomatický kruhový systém, jenž má 3 až 8 atomů a zahrnuje alespoň jeden heteroatom, např. atom dusíku, kyslíku nebo síry.

Alifatické skupiny nebo označení, např. „Co-Có“, zahrnují lineární, rozvětvené nebo cyklické uhlovodíky, které jsou zcela nasyceny nebo obsahují jednu nebo více jednotek nenasycenosti. Pokud je skupina Co, znamená to, že zde není žádná část nebo jinými slovy znamená vazbu.

• * · · • · «« · · · ··· · β · · a · ···· » · · ··«· • · ···· · · · · t · · »«· • · · ·· · · ·· ·

Termín aromatické skupiny (nebo arylové skupiny) zahrnují aromatické karbocyklické kruhové systémy (např. fenyl) a kondenzované polycyklické aromatické kruhové systémy (např. naftyl a 1,2,3,4-tetrahydronaftyl).

Termín acyloxyskupiny zahrnuje -OC(O)R.

Termín „přirozená aminokyselina“ se vztahuje na 23 známých přirozených aminokyselin, které jsou (označeny svými zkratkami): Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Cys-Cys,

Glu, Gin, Gly, His, Hyl, Hyp, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val.

Termín nepřirozené aminokyseliny se vztahuje na sloučeniny obecného vzorce NH₂(C(X)₂)_n-COOH, které jsou a- (pokud n je 1) nebo β- (pokud n je 2) aminokyseliny, přičemž X v každém případě je nezávisle jakákoliv část postranního řetězce, jak jistě odborník v oboru pozná; příklady nepřirozených aminokyselin zahrnují, ale není to nikterak limitováno; hydroxyprolin, homoprolin, 4-amino-fenylalanin, β-(2-naftyl)alanin, norleucin, cyklohexylalanin, β-(3-pyridinyl)alanin, β-(4-ρ}τ^^1)8ΐ3ηΐη, α-aminoisobutyrovou kyselinu, urokanovou kyselinu, VV-tetramethylamidino-histidin, A-methylalanin, /V-methyl-glycin, A-methyl-glutamovou kyselinu, terc-butylglycin, α-aminobutyrovou kyselinu, fórc-butylalanin, omithin, α-aminoisobutyrovou kyselinu, β-alanin, γ-aminobutyrovou kyselinu, 5-aminovalerovou kyselinu, 12-aminododekanovou kyselinu, 2-aminoindan-2-karboxylovou kyselinu, atd. a jejich deriváty, zejména ty, ve kterých je dusík aminové skupiny mono- nebo di-alkylovaný.

Části nebo substituenty v předloženém vynálezu jsou buď „substituované nebo nesubstituované“ nebo „případně substituované“. Pokud je část modifikována jedním z těchto termínů, znamená to, že jakákoliv část, o které je známo, že má schopnost být substituována může být substituována, což znamená jedním nebo více substituenty, a pokud je substituována více než jedním substituentem, je tento substituent nezávisle vybrán. Způsoby substituce jsou známy a/nebo mohou být využity způsoby podle předloženého vynálezu. Pro názornost, nikoliv však limitující, zahrnují příklady skupin, které jsou substituenty, následující: alkylové skupiny (které mohou být sami substituovány, např. -Ci-Có-alkyl-OR, -Ci-C6-alkyl-N(R)₂ a CF3), alkoxyskupinu (která může být sama substituována, např. -O-Ci-Có-alkyl-OR, -O-Ci-C6-alkyl-N(R)₂ a OCF3), halogen nebo halogenové skupiny (F, Cl, Br, I), hydroxyskupinu, nitroskupinu, oxoskupinu, CN, COOH,

COH, aminoskupinu, A-alkylaminoskupinu nebo Λζ/V-dialkylaminoskupinu (ve které mohou být alkylové skupiny též substituovány), estery (-C(O)-OR, kde substituent R jsou např. skupiny vybrané z alkylové skupiny, arylové skupiny, atd., které mohou být • · · ·*···· ·»· • · « · « · ··· ·«*· · · · «·· · • · »··· · » ♦ · · · · ·»· • 4 · ···· « « « • · · ·· · · «· V substituovány), arylovou skupinu (nejvýhodněji fenyl, který může být substituován) a arylalkylovou skupinu (která může být substituována).

Vhodné způsoby syntézy sloučenin obecného vzorce (I) jsou uvedeny ve schématech I-XII. Ve schématu I je uvedena konverze 3-halogen-4chlorpyrazolopyrimidinu na VI-substituovaný 3-aryl-4-aminopyrazolopyrimidin. Ve schématu Π je uvedena substituce v poloze N-l 3-halogen-4-aminopyrazolopyrimidinu a nahrazení halogenu arylovou skupinou. Ve schématu ΙΠ je uvedena substituce na V-l 3aryl-4-aminopyrazolopyrimidinu. Ve schématu IV je uvedena konverze 4-hydroxypyrazolopyrimidinu na 1-substituovaný 3-brom-4-chlorpyrazolopyrimidin. Ve schématu V je uvedena tvorba pyrazolopyrimidinového jádra. Ve schématu VI je uvedena tvorba 3-aryl-4-aminopyrazolopyrimidinu. Ve schématu VII je uvedeno další zpracování N-l substituentu. P znamená vhodnou amino chránící skupinu. Ve schématu VIII je uvedena příprava arylboronátů používaných podle schématu I. Ve schématech IX a X je uvedena modifikace V-l substituentu. Ve schématu XI je uvedena funkcionalizace 3-arylové skupiny. Ve schématech I-XI může být při provádění reakcí třeba provést chránění nebo odstranění chránících skupin z neparticipujících funkčních skupin podle standardních postupů.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mají antiangiogenní vlastnosti. Tyto antiangiogenní vlastnosti jsou způsobeny alespoň částečně inhibicí proteinových tyrosinkináz esenciálních pro angiogenní proces. Z tohoto důvodu mohou být tyto sloučeniny používány jako aktivní agens proti onemocněním, např. artritidě, ateroskléroze, restenóze, psoriáze, hemangiomům, angiogenezí myokardu, koronárním a cerebrálním kolaterálům, ischémické limbické angiogenezí, ischémii/reperfúznímu poškození, hojení ran, peptickému vředu souvisejícím s Helicobacter, virově indukovaným angiogenním poruchám, fraktuře, syndromu Crow-Fukase (POEMS), preeklampsii, menometroragii, horečce z kočičího poškrábání, rubeóze, neovaskulámímu glaukomu a retinopatiím, např. těm, které souvisejí s diabetickou retinopatií, retinopatií nedonošených, nebo makulámí degeneraci související s věkem. Dále mohou být některé z těchto sloučenin používány jako aktivní agens proti pevným nádorům, malignímu ascites, von Hippel-Lindauově nemoci, hematopoetickým rakovinám a hypeproliferačným poruchám, např. tyreotropní hyperplazii (zejména Gravesova nemoc) a cystám (např. hypervaskularita ovariální trámčiny příznačná pro polycystický ovariální syndrom (Steinův-Leventhalův syndrom a polycystické onemocnění ledvin).

• · • · • ·«

Dále mohou být některé z těchto sloučenin používány jako aktivní agens proti popáleninám, chronickému plicnímu onemocnění, mrtvici, polypům, anafýlaxi, chronickému a alergickému zánětu, zpožděnému typu hypersenzitivity, ovariálnímu hyperstimulačnímu syndromu, cerebrálnímu edému souvisejícímu s mozkovým nádorem, výškové nemoci, traumatu nebo cerebrálnímu nebo pulmonámímu edému vyvolaného hypoxií nebo traumatem, očnímu nebo makulámímu edému, ascites, glomerulonefritidě a dalším onemocněním, ve kterých je projevem onemocnění vaskulámí hyperpermeabilita, efůze, exsudáty, proteinový extravazát nebo edém. Sloučeniny budou také účinné při ošetření poruch, ve kterých proteinová extravazace povede k ukládání fibrinu a extracelulámí matrix, podpoře stromální proliferace (např. keloid, fíbróza, cirhóza a syndrom karpálního tunelu). Zvýšená tvorba VEGF potenciuje zánětlivé procesy, např. recruitment a aktivaci monocytu. Sloučeniny podle tohoto vynálezu budou také účinné při ošetření zánětlivých poruch, např. zánětlivého střevního onemocnění (IBD) a Crohnovy nemoci.

Syntéza

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být připraveny podle způsobů uvedených v následujících schématech I-XI.

• · · • · · • · · · • · · · · • · • ·

• · · · · ¹• · · · · · · • ······· · * • · · · · · • · · · · · ·

Ph₃P, DEAD_r

ROH, THF

Pd°, ArB(OH)_2t nebo ArB(OR)₂

-'->.

DME, H₂O, reflux

Schéma Π

Ph₃P, DEAD

ROH, THF

Pd°, ArB(OH)₂ neboArB(OR)₂DME, H₂O, reflux

NH, A_r

Schéma HI

• · · · · · • ·

Schéma VI ^Ar^coon ^{1)SQCI?,reflux} - ^Ar2) CH₂(CN)₂, iPr₂NEt Toluen

CN

TMSCHN,, THF Ar^A ^CN MeOH, iPr₂NEt / ^CN

MeO

HgNNHa, EtOH Reflux

NC Ar < HCONH,

Λ 180°C

N N^X

Schéma VH

Schéma VHI

1) n-BuLi, THF

Ar-Br

2) Β(Ο^!Ργ)₃,

3) HCI

Ar-B(OH)₂

Ar-Br (dppf)PdCI₂

QMF, KOAc, 80°C

• · · • · · <

• «

Schéma X • · · · · · • · · • · · • · » • · · · • · · ·

Schéma XI

NH_{2 Ar}-NH₂

NH_{2 Ar}^NH(SO₂,CO)R

•N

N R(CO,SO₂)CI _r N^x M

^..<^-1/ Pyid'n , 40°C N i.

N'

Výhodný způsob přípravy sloučenin podle předloženého vynálezu zahrnuje přípravu 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového meziproduktu (IV) (viz schéma XII). Uvedený způsob zahrnuje reakci chloridu kyseliny (Π) s (4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)anilinem (ΠΙ) v přítomnosti aprotické báze. Typicky chlorid kyseliny (II) a (4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilin (III) se rozpustí v organickém ··· ·· · · · · · ······· · · · · ···· rozpouštědle v přibližně ekvivalentních molámích množství. Do roztoku se přidá asi 1 ekviv. k asi 2 ekviv. aprotické báze. Výhodně se roztok ochladí na teplotu v rozmezí od 10° C do asi 10° C, před přidáním báze. Báze se přidává do roztoku po kapkách. Po přidání se roztok míchá při pokojové teplotě, dokud reakce nedoběhne (podle TLC, HPLC nebo jiných standardních technik). Typicky je reakce hotova po od asi 10 hodin do asi 26 hodinách.

Schéma ΧΠ: Způsob přípravy 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového meziproduktu

Kpřipravení sloučenin obecného vzorce (I) lze použít 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-ylový meziprodukt (IV), který se nechá reagovat s 3-j od-1//-pyrazolo [3,4-djpyrimidinem (V) v přítomnosti tetrakis(trifenylfosfm)palladia a uhličitanu sodného (viz schéma XIII). 3-Jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin (V) v polárním organickém • · · · rozpouštědle, např. etheru, se nechá reagovat s vodnou směsí 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-ylového meziproduktu (IV), tetrakis(trifenylfosfin)palladia a uhličitanu sodného. Typicky je 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový meziprodukt (IV) přítomen v roztoku v množství asi 1 ekviv. až asi 1,5 ekviv., tetrakis(trifenylfosfín)palladium v množství od asi 0,01 ekviv. do asi 0,1 ekviv. a uhličitan sodný v množství od 1,5 ekviv. do asi 3 ekviv. vzhledem k 3-jod-lí/-pyrazolo[3,4-d]-pyrimidinu (V). Roztok se zahřívá při teplotě v rozmezí od asi 50° C do asi 100° C. Reakce se sleduje TLC, HPLC nebo jinými standardními technikami. Typicky je reakce hotova v rozmezí od asi 16 hodin do asi 30 hodin.

r₂

Schéma ΧΠΙ: Způsob přípravy sloučenin obecného vzorce (I), ve kterých Z¹¹⁰-A-Z^1H je -NHC(O)-.

Sloučeniny obecného vzorce (Π) lze připravit reakcí karboxylové kyseliny reprezentované obecným vzorcem (VI) s oxalylchloridem v přítomnosti aprotické báze.

• ·

Ve výhodném provedení je Z¹⁰⁰ indolyl, který je případně substituovaný substituentem R¹ve způsobech ze schémat XII a ΧΠΙ a ve způsobu přípravy chloridu kyseliny (Π). Ve výhodnějším provedení je Z¹⁰⁰ l-methyl-indol-2-yl nebo l-methyl-indol-3-yl ve způsobech ze schémat ΧΠ a XIH a ve způsobu přípravy chloridu kyseliny (II).

V dalším výhodném provedení je ve způsobech ze schémat XII a ΧΙΠ a ve způsobu přípravy chloridu kyseliny (Π) Z¹⁰⁰ indolyl, který je případně substituován substituentem Ri; (4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilin je reprezentován vzorcem (VII)

a 4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-ylový meziprodukt je reprezentován vzorcem (VIII)

• · · ·

a připravené sloučeniny podle vynálezu mohou být reprezentovány vzorcem (IX)

IX.

Ve výhodnějším provedení je ve způsobech ze schémat XII a XIII a ve způsobu přípravy chloridu kyseliny Z¹⁰⁰ l-methyl-indol-2-yl nebo l-methyl-indol-3-yl; (4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilin je reprezentován vzorcem (VII); a 4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový meziprodukt je reprezentován vzorcem (X)

a připravené sloučeniny vynálezu mohou být reprezentovány vzorcem (XI)

Ra

XI.

• · · · · · · • ······· · · · ·· · ·· ··

Ve výhodnějším provedení je ve kterémkoliv z výše uvedených způsobů substituent R₂ 4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl.

VEGF jsou unikátní v tom, že jsou jedinými angiogenními růstovými faktory, o kterých se ví, že přispívají k vaskulámí hyperpermeabilitě a tvorbě edému. Zdá se, že vaskulámí hyperpermeabilita a edém, které souvisejí s expresí nebo aplikací mnoha dalších růstových faktorů, mohou být zprostředkovány tvorbou VEGF. Zánětlivé cytokiny stimulují tvorbu VEGF. Hypoxie vede ke značné nadregulaci VEGF v mnoha tkáních, a tudíž stavy zahrnující infarkt, okluzi, ischémií, anémii nebo poruchu krevního oběhu typicky využívají odpovědi zprostředkované VEGF/VPF. Vaskulámí hyperpermeabilita, související edém, změněná transendotheliální výměna a makromolekulámí extravazát, který je často doprovázen diapedézí, můžou mít za následek nadbytek depozice matrix, aberantní stromální proliferaci, fibrózu, atd. A tudíž hyperpermeabilita zprostředkovaná VEGF může výrazně přispívat k poruchám s takovými etiologickými rysy.

Protože implantace blastocytů, vývoj placenty a embryogeneze jsou závislé na angiogenezí, jsou určité sloučeniny podle předloženého vynálezu účinné jako kontraceptiva a antifertilita.

Předpokládá se, že poruchy popsané výše jsou zprostředkovány výrazným nadbytkem aktivity proteinové tyrosinkinázy zahrnující KDR/VEGFR-2 a/nebo Flt1/VEGFR-l a/nebo TIE-2 tyrosinkinázy. Inhibici aktivity těchto tyrosinkináz je inhibována progrese uvedených poruch, protože angiogenní nebo vaskulámí složka hyperpermeability onemocnění je kriticky snížena. Účinek určitých sloučenin podle předloženého vynálezu daný jejich selektivitou pro specifické tyrosinkinázy vede k minimalizaci vedlejších účinků, které by se mohly vyskytovat, pokud by byly používány inhibitory tyrosinkináz s menší selektivitou. Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou také účinnými inhibitory FGFR, PDGFR, c-Met a IGF-l-R. Tyto receptorové kinázy mohou přímo nebo nepřímo potenciovat angiogenní a hyperproliferační odpovědi při různých poruchách, a tudíž jejich inhibice může bránit progresi onemocnění.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mají inhibiční aktivitu proti proteinkinázam, což znamená, že tyto sloučeniny modulují signální transdukci proteinkináz. Sloučeniny podle předloženého vynálezu inhibují proteinkinázy z rodiny serin/threoninkináz a tyrosinkináz. Zejména tyto sloučeniny selektivně inhibují aktivitu KDR/FLK-l/VEGFR-2 tyrosinkináz. Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu také inhibují aktivitu dalších tyrosinkináz, např. Flt-l/VEGFR-1, Flt-4, Tie-1, Tie-2, FGFR,

PDGFR, IGF-1R, c-Met, Src-podrodinu kináz, např. Lek, hek, fgr, Src, fyn, yes, etc. Dále některé sloučeniny podle předloženého vynálezu signifikantně inhibují serin/threoninkinázy, např. PKC, MAP kinázy, erk, CDKs, Plk-1 nebo Raf-1, které hrají významnou roli při buněčné proliféraci a progresi buněčného cyklu. Účinnost a specifita generických sloučenin podle tohoto vynálezu zejména vůči proteinkinázam může být často změněna a optimalizována obměnami v charakteru, počtu a uspořádání substituentů (tzn. Ri, R2, R3, A a kruh 1) a konformačními restrikcemi. Navíc metabolity určitých sloučenin mohou mít také signifikantní inhibiční aktivitu proti proteinkinázam.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu, pokud jsou podávány jedincům při potřebě takové sloučeniny, inhibují vaskulámí hyperpermeabilitu a tvorbu edému u těchto jedinců. Předpokládá se, že tyto sloučeniny působí inhibici aktivity KDR tyrosinkinázy, která se zúčastňuje procesu vaskulámí hyperpermeability a tvorby edému. KDR tyrosinkináza může být také označována jako FLK-1 tyrosinkináza, NYK tyrosinkináza nebo VEGFR-2 tyrosinkináza. KDR tyrosinkináza je aktivována navázáním růstového faktoru vaskulámích endotheliálních buněk (VEGFR) nebo jiného aktivovaného ligandu (např. VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E nebo HIV Tat protein) na KDR receptorovou tyrosinkinázu, která se nachází na povrchu vaskulámích endotheliálních buněk. Po aktivaci KDR tyrosinkinázy nastane hyperpermeabilita krevních cév a tekutina putuje z krevního řečiště přes stěny krevních cév do intersticiálních prostorů, a tím vytváří oblast edému. Tuto formu odpovědi také často doprovází diapedéze. Podobně, nadbytek vaskulámí hyperpermeability může narušit normální molekulární výměnu přes endothel v kritických tkáních a orgánech (např. plíce a ledviny), čímž způsobuje makromolekulámí extravazát a depozici. Po této akutní odpovědi na stimulaci KDR, o které se předpokládá, že podporuje následující angiogenní proces, prolongovaná stimulace KDR tyrosinkinázy vede k proliféraci a chemotaxi vaskulámích endotheliálních buněk a tvorbě nových cév. Inhibici aktivity KDR tyrosinkinázy provedenou buď blokováním produkce aktivujícího ligandu, blokováním vazby aktivujícího ligandu na receptor KDR tyrosinkinázy, zabráněním dimerizace a transfosforylace receptorů, inhibici enzymové aktivity KDR tyrosinkinázy (inhibici fosforylační funkce enzymu) anebo některým jiným mechanismem, který přeruší danou downstreamovou signální dráhu (D. Mukhopedhyay et al., Cancer Res. 58A2T&1284 (1998) a související odkazy), může být inhibována a minimalizována hyperpermeabilita, jakož i s tím související extravazace, následná tvorba edému a depozice matrix a angiogenní odpovědi.

• · ···· · · · • · · · · • · · · · · • · · · ·····

9 9 · · * • · · · · · ·

Jedna skupina výhodných sloučenin podle předloženého vynálezu má schopnost inhibovat aktivitu KDR tyrosinkinázy bez signifikantní inhibice aktivity Flt-1 tyrosinkinázy (Flt-1 tyrosinkináza je také označována jako VEGFR-1 tyrosinkináza). Jak KDR tyrosinkináza, tak i Flt-1 tyrosinkináza jsou aktivovány vazbou VEGF na receptory KDR tyrosinkinázy, respektive na receptory Flt-1 tyrosinkinázy. Určité výhodné sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou jedinečné v tom smyslu, že inhibují aktivitu jedné VEGF-receptorové tyrosinkinázy (KDR), která je aktivována aktivujícími ligandy, ale neinhibují další receptorové tyrosinkinázy, např. Flt-1, které jsou také aktivovány určitými aktivujícími ligandy. Proto jsou výhodné sloučeniny podle předloženého vynálezu selektivními inhibitory aktivity tyrosinkinázy.

V rámci jednoho provedení poskytuje předložený vynález způsob ošetření stavů u pacienta, které jsou zprostředkovány proteinkinázou, zahrnujících podání terapeuticky nebo profylakticky účinného množství jedné nebo více sloučenin obecného vzorce (I) pacientovi.

Termín „ onemocnění zprostředkované proteinkinázou“ nebo „onemocnění zprostředkované aktivitou proteinkinázy“ zahrnuje nemoc, např. onemocnění nebo další nežádoucí fyzické stavy, ve kterých geneze nebo progrese závisí alespoň částečně na aktivitě alespoň jedné proteinkinázy. Proteinkináza může být např. proteinová tyrosinkináza nebo proteinová serin/threoninkináza.

Pacient, který má být ošetřován, může být jakýkoliv zvířecí subjekt, výhodně savec, např. zdomácnělá či hospodářská zvířata. Výhodně je pacientem lidský subjekt.

Termín „terapeuticky účinné množství“ je množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo kombinace dvou nebo více takových sloučenin, které inhibuje zcela nebo částečně progresi stavu nebo zlepšuje alespoň částečně jeden nebo více symptomů stavu. Terapeuticky účinné množství může být také množství, které je profylakticky účinné. Množství, které je terapeuticky aktivní bude záviset na pacientově váze, pohlaví, nemoci, která má být ošetřována, závažnosti stavu a požadovaném výsledku. Pro konkrétní pacienty bude terapeuticky účinné množství stanoveno standardním způsobem.

Způsob podle předloženého vynálezu je účinný při ošetření stavů zprostředkovaných proteinkinázou, např. jakýkoliv výše uvedený stav. V rámci jednoho provedení je stav zprostředkovaný proteinkinázou charakterizován nežádoucí angiogenezí, edémem nebo stromální depozicí. Například onemocněním může být jeden nebo více ulkusů, např. ulkusy způsobené bakteriálními nebo plísňovými infekcemi, Moorenovy ulkusy a ulcerativní kolitida. Onemocnění mohou být také způsobena mikrobiální infekcí, např. Lymskou nemocí, sepsí, septickým šokem nebo infekcí Herpes simplex, Herpes Zoster, virem způsobujícím syndrom získaného selhání imunity, protozoem, toxoplazmózou nebo Parapoxvirusem; angiogenními poruchami, např. Hippel-Lindauovou nemocí, polycystickou nemocí ledvin, pemfigoidem, Pagetovou nemocí a psoriázou; reprodukčním onemocněním, např. endometrióza, syndrom ovariální hyperstimulace, preeklampsie nebo menometroragie; fibrotickým a edémickým stavem, např. sarkoidóza, fibróza, cirhóza, tyreoiditida, systémový hyperviskózní syndrom, Oslerova-RenduovaWeberova nemoc, chronická okluzní onemocnění plic, astma a edém po traumatu, popáleniny, ozáření, mrtvice, hypoxie nebo ischémie; nebo zánětlivým/imunologickým stavem, např. systémový lupus, chronický zánět, glomerulonefritida, synovitida, zánětlivé onemocnění střev, Crohnova nemoc, revmatoidní artritida, osteoartritida, roztroušená skleróza a rejekce štěpu. Příslušné stavy zprostředkované proteinkinázou také zahrnují srpkovitou anémii, osteoporózu, osteopetrózu, hyperkalcemii indukovanou nádorem a kostní metastází. Další stavy zprostředkované proteinkinázou, které mohou být ošetřeny způsobem podle předloženého vynálezu, zahrnují onemocnění očí, např. okulámí nebo makulámí edém, okulámí neovaskulámí onemocnění, skleritida, radiální keratotomie, uveitida, vitritida, myopie, fyziologická exkavace papily, chronické odchlípení sítnice, komplikace po ošetření laserem, konjunktivitida, Stargardtova nemoc a Ealesova nemoc, kromě retinopatie a makulámí degenerace.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou také účinné při ošetření kardiovaskulárních stavů, např. aterosklerózy, restenózy, vaskulámí okluze a karotického obstruktivního onemocnění.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou také účinné při ošetření indikací souvisejících s rakovinou, např. pevné nádory, sarkom (zejména Ewingům sarkom a osteosarkom), retinoblastom, rabdomyosarkom, neuroblastom, hematopoézní zhoubná bujení, včetně leukémie a lymfomu, pleurální nebo perikardiální efuze indukované nádorem a maligní ascites.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou také účinné při ošetření syndromu Crow-Fukase (POEMS) a diabetických stavů, např. glaukomu, diabetické retinopatie a mikroangiopatie.

Rodiny Src, Tec, Jak, Map, Csk, NFkB i Syk kináz hrají stěžejní role při regulaci imunitních funkcí. Rodina Src v současnosti zahrnuje Fyn, Lek, Fgr, Fes, Lyn, Src, Yrk,

9 ··*· 9 9 9 · « · » • »

Fyk, Yes, Hek a Blk. Rodina Syk obecně zahrnuje pouze Zap a Syk. Rodina Tec zahrnuje Tec, Btk, Rlk a Itk. Rodina Janus kináz se účastní transdukce růstového faktoru a prozánětlivých signálů cytokinů za účasti mnoha receptorů. Ačkoliv role BTK a ITK, členů rodiny Tec kináz, jsou z hlediska imunobiologie menší, jejich modulace inhibitorem může mít terapeutický benefit. Rodina Csk v současné době zahrnuje Csk a Chk. Kinázy RIP, IRAK-1, IRAK-2, NIK, p38 MAP, Jnk, IKK-1 a IKK-2 se podílejí na drahách signální transdukce klíčových prozánětlivých cytokinů TNF a IL-1. Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou, díky schopnosti účinně inhibovat jednu nebo více z těchto kináz, působit jako imunomodulační agens, které jsou účinné ke stabilizaci aloštěpu a ošetření autoimunních chorob. Díky své schopnosti regulovat migraci nebo aktivaci T-buněk, B-buněk, žímých buněk, monocytů a neutrofilů, by mohly být tyto sloučeniny používány k ošetření těchto autoimunitních chorob a sepse. Prevence rejekce transplantátu, ať už reakce hostitele proti štěpu u pevných orgánů nebo reakce štěpu proti hostiteli u kostní dřeně, jsou limitovány toxicitou běžně dostupných imunosupresiv, a tudíž účinné léčivo se zlepšeným terapeutickým indexem by bylo velmi prospěšné. Experimenty zaměřené na geny ukázaly na významnou roli Src v biologii osteoklastů, což jsou buňky odpovědné za resorpci kosti. Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou být díky schopnosti regulace Src také účinné při ošetření osteoporózy, osteopetrózy, Pagetova onemocnění, hyperkalcemie indukované nádorem a při ošetření kostních metastází.

Ukázalo se, že mnoho proteinkináz funguje jako protoonkogeny. Přerušení chromozómu (v bodě přerušení Itk kinázy na chromozómu 5), translokace jako v případě Abl genu s BCR (Philadelphia chromosome), zkrácení v případech jako třeba c-Kit nebo EGFR, nebo mutace (např. Met) má za následek vytvoření dysregulačních proteinů, které zapříčiňují přeměnu protoonkogenních produktů na onkogenní produkty. V případě dalších nádorů je onkogeneze řízena autokrinními nebo parakrinními interakcemi mezi ligandem a receptorem růstového faktoru. Členové rodiny src kináz se typicky účastní downstreamové signální transdukce, čímž potenciují onkogenezi a samotné se mohou stát onkogenními díky nadměrné expresi nebo mutaci. Příslušná onemocnění lze léčit inhibici aktivity proteinkináz. Vaskulámí restenóza může zahrnovat proces FGF a/nebo proliferaci hladkého svalstva propagovanou PDGF a proliferaci endotheliálních buněk. Stimulace ligandem in vivo FGFR, PDGFR, IGF1-R a c-Met je proangiogenní a potenciuje poruchy závislé na angiogenezi. Inhibice aktivity buď samotných kináz FGFr, PDGFr, c-Met nebo IGF1-R nebo v kombinaci může být účinnou strategií zaměřenou na inhibici tohoto ·· · «· ··» · fenoménu. Tudíž sloučeniny obecného vzorce (I), které inhibují aktivitu kinázy normálních nebo aberantních c-kit, c-met, c-fms, členů rodiny src, EGFr, erbB2, erbB4, BCR-Abl, PDGFr, FGFr, IGF1-R a dalších receptorových nebo cytosolových tyrosinkináz, mohou hrát důležitou roli při ošetření benigních a neoplastických proliferačních onemocnění.

V mnoha patologických stavech (např. pevné primární nádory a metastáze, Kaposiho sarkom, revmatická artritida, slepota způsobená nepřiměřenou oční neovaskularizaci, psoriáza a ateroskleróza) je progrese onemocnění po perzistentní angiogenezi kontingentní. Polypeptidové růstové faktory často produkované nemocnou tkání nebo doprovodnými zánětlivými buňkami a jejich odpovídající specifické receptorové tyrosinkinázy endoteliálních buněk (např. KDR/VEGFR-2, Flt-l/VEGFR-1, Flt-4, Tie-2/Tek a Tie) jsou důležité pro stimulaci endoteliálního buněčného růstu, migrace, uspořádání, diferenciace a sestavení nových funkčních vaskulátorů. Předpokládá se, že v důsledku aktivity „faktoru vaskulámí permeability“ VEGF při zprostředkování vaskulámí hyperpermeability má VEGF-stimulace VEGFR kinázy důležitou roli při tvorbě nádorových ascites, cerebrálního a pulmonámího edému, pleurální a perikardiální efuzi, hypersensitivních reakcí opožděného typu, tkáňového edému a orgánové dysfunkci po traumatu, popáleninách, ischémii, diabetických komplikacích, endometrióze, syndromu respirační tísně dospělých (ARDS), hypotenzi a hyperpermeabilitě související s postkardiopulmonámím bypassem a očním edémem majícím za následek glaukom nebo oslepnutí v důsledku nepřiměřené neovaskularizace. Kromě VEGF, také v poslední době identifikované VEGF-C a VEGF-D a virově kódované VEGF-E nebo HIV-Tat protein mohou způsobovat vaskulámí hyperpermeabilní odpověď zprostředkovanou stimulací VEGFR kinázy. KDR/VEGFR-2 a/nebo Tie-2 je exprimován také v selektivní populaci buněk hematopoietického kmenu. Některé z členů této populace jsou v přírodě multifunkční a k rozlišení endotheliálních buněk a participaci při vaskulogenetických angiogenních procesech mohou být stimulovány růstovými faktory. Z tohoto důvodu byly nazvány endotheliální progenitomí buňky (EPC)(J. Clin. Investig. 103: 1231-1236 (1999)). V některých progenitorech může Tie-2 být důležité při jejich recruitmentu, adhezi, regulaci a diferenciaci (Blood, 4317-4326 (1997)). Určité sloučeniny reprezentované obecným vzorcem (I), které jsou schopné blokovat kinázovou aktivitu specifických kináz endotheliálních buněk by proto mohly inhibovat progresi onemocnění zahrnující tyto stavy.

• ·

» · * · · • · · · · · • ······· · • · · · · • · · · ·

Má se za to, že vaskulámí destabilizace antagonistického ligandu Tie-2 (Ang2) indukuje nestabilní „plastický“ stav v endotheliu. Za vysokých hladin VEGF může vést k silným angiogenním odpovědím, nicméně za absence VEGF nebo stimulu souvisejícího s VEGF může docházet k zřetelné regresi cév a endotheliální apoptóze (Genes and Devel. 13: 1055-1066 (1999)). Analogicky inhibitory Tie-2 kinázy mohou být proangiogenní nebo antiangiogenní v přítomnosti, respektive při absenci stimulu souvisejícího s VEGF. Tudíž inhibitory Tie-2 mohou být používány s příslušným proangiogenním stimulem, např. VEGF, k podpoře terapeutické angiogeneze při takových stavech jako např. léčba zranění, infarkt nebo ischémie.

Proto mohou být používány při ošetření stavů zprostředkovaných proteinkinázou, např. při výše uvedených benigních a neoplastických proliferačních onemocněních a poruch imunitního systému, sloučeniny obecného vzorce (I) nebo jejich soli nebo farmaceutické přípravky obsahující jejich terapeuticky účinné množství. Tato onemocnění zahrnují autoimunitní choroby, např. revmatickou artritidu, tyreoiditidu, diabetes l.typu, roztroušenou sklerózu, sarkoidózu, zánětlivé střevní onemocnění, Crohnovu chorobu, myastenii gravis a systémový lupus erythematosus; psoriázu, rejekci transplantovaného orgánu (např. rejekci ledvin, onemocnění štěp proti hostiteli), benigní a neoplastická proliferační onemocnění, lidské rakoviny, např. rakoviny plic, prsu, žaludku, měchýře, tlustého střeva, pankreatu, vaječníku, prostaty a konečníku a hematopoietická zhoubná bujení (leukémie a lymfom) a onemocnění zahrnující nepřiměřenou vaskularizaci, např. diabetickou retinopatii, retinopatii nedonošených, choroidální neovaskularizaci v důsledku degenerace makuly související s věkem a infantilní hemangiomy u lidských subjektů. Navíc tyto inhibitory mohou být účinné při ošetření poruch zahrnujících edém zprostředkovaný VEGF, ascites, efuze a exsudáty, včetně např. makulámího edému, cerebrálního edému, akutního plicního poranění a syndromu respirační tísně dospělých (ARDS).

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být také účinné při profylaxi výše uvedených onemocnění.

Předpokládá se, že výše uvedené poruchy jsou významně zprostředkovány aktivitou proteinových tyrosinkináz zahrnujících VEGF receptory (např. KDR, Flt-1 a/nebo Tie-2). Inhibici aktivity těchto receptorových tyrosinkináz je inhibována progrese uvedených poruch, protože angiogénní složka onemocnění je citelně potlačena. Účinek sloučenin podle předloženého vynálezu v důsledku jejich selektivity vůči specifickým tyrosinkinázám vede k minimalizaci vedlejších účinků, které by se mohly vyskytovat v případě použití méně selektivních inhibitorů tyrosinkináz.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález sloučeniny obecného vzorce (I), které jsou definovány výše, pro použití jako léčivých přípravků, zejména jako inhibitorů aktivity proteinkináz, např. aktivity proteinkinázy, serinkinázy a threoninkinázy. V ještě dalším aspektu poskytuje předložený vynález použití výše definovaných sloučenin obecného vzorce (I) při výrobě léčivého přípravku určeného k inhibicí aktivity proteinkinázy.

V předloženém vynálezu jsou používány následující termíny:

Termín „fyziologicky přijatelné soli“ se vztahuje na ty soli, které si ponechávají biologickou účinnost a vlastnosti volných bází, a které jsou připraveny reakcí s anorganickými kyselinami, např. kyselinou chlorovodíkovou, bromovodíkovou, sírovou, dusičnou, nebo organickými kyselinami, např. sulfonovou, karboxylovou nebo fosforečnou, methansulfonovou, ethansulfonovou, μ-toluensulfonovou, salicylovou, mléčnou, vinnou kyselinou, atd.

Farmaceutické formulace

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být podávány lidským nebo zvířecím subjektům jako takové nebo ve farmaceutických přípravcích, ve kterých jsou smíchány s vhodnými nosiči nebo excipienty(tem) v dávkách, které jsou dostačující k ošetření nebo zlepšení vaskulámí hyperpermeability, edému a souvisejících poruch. Směsi těchto sloučenin mohou být také podávány pacientům jako jednoduchá směs nebo ve vhodných připravených farmaceutických přípravcích. Terapeuticky účinná dávka dále označuje množství sloučeniny nebo sloučenin, které je dostačující k prevenci nebo atenuaci nepřiměřené neovaskularizace, progrese hyperproliferativních poruch, edému, hyperpermeability související s VEGF a/nebo hypotenze spojené s VEGF. Techniky přípravy a podání sloučenin mohou být nalezeny v „Remingtonů Pharmaceutical Sciences“, Mack Publishing Co., Easton, PA, poslední vydání.

Způsoby podání

Vhodné způsoby podání mohou být například perorální, ve formě očních kapek, rektální, transmukózní, místní nebo intestinální; parenterální dodání zahrnující • · · · • · • · · · · · · • ♦······ · · · • · · · · · · • · · · · · · intramuskulámí a subkutánní podání, intramedulámí injekce, jakož i intratekální, přímé intraventrikulámí, intravenózní, intraperitoneální, intranazální nebo intraokulámí injekce.

Nebo lze podávat sloučeninu spíše místním než systémovým způsobem, např. injekcí sloučeniny přímo do místa edému, často vdepotní nebo trvale uvolňující se formulaci.

Dále lze léčivo podávat jako cílově specifické podání, např. v lipozómu potaženém endotheliální, buněčně-specifickou protilátkou.

Přípravky/F ormulace

Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu mohou být vyráběny standardním způsobem, např. standardním mícháním, rozpuštěním, granulací, přípravou dražé, rozmělňováním, emulgací, enkapsulací, uzavřením nebo lyofilizací.

Farmaceutické přípravky pro použití podle předloženého vynálezu tak mohou být připraveny standardním způsobem za použití jednoho nebo více fyziologicky přijatelných nosičů obsahujících excipienty a pomocné látky, které usnadňují zpracování aktivních sloučenin do preparátů, které mohou být farmaceuticky využívány. Vlastní příprava je závislá na vybraném způsobu podání.

Pro injekce mohou být agens podle předloženého vynálezu připraveny ve vodných roztocích, výhodně ve fyziologicky kompatibilních pufrech, např. Hanksův roztok, Ringerův roztok nebo pufru na bázi fyziologického roztoku. Pro transmukózní podání jsou ve formulaci používány takové penetrátory, které jsou vhodné pro překonání dané bariéry. Tyto penetrátory jsou obecně známy.

Pro perorální podání mohou být sloučeniny snadno připraveny spojením aktivních sloučenin se standardními farmaceuticky přijatelnými nosiči. Tyto nosiče umožňují připravit sloučeniny podle předloženého vynálezu ve formě tablet, pilulí, dražé, kapslí, roztoků, gelů, sirupů, injekčních směsí, suspenzí, atd., pro perorální požití léku pacientem, který má být ošetřován. Farmaceutické preparáty pro perorální použití mohou být připraveny spojením aktivní sloučeniny s pevným excipientem, případně rozemletím výsledné směsi, a po přidání vhodných pomocných látek, pokud je třeba, zpracováním směsi granulí, čímž lze získat tablety nebo jádra dražé. Vhodné excipienty jsou zejména fillery, např. cukry, včetně laktosy, sacharosy, mannitolu nebo sorbitolu; celulosové přípravky, např. kukuřičný škrob, pšeničný škrob, rýžový škrob, bramborový škrob, • ·· ·· ··· ···· ·· · ·· • ······· · · · · · ··· ······ • · · ·· ·· ♦ · 76 želatina, tragant, methyl-celulosa, hydroxypropylmethyl-celulosa, sodná sůl karboxymethylcelulosy a/nebo polyvinylpyrrolidon (PVP). Pokud je třeba, mohou být přidány dezintegrační agens, např. zesítěný polyvinylpyrrolidon, agar nebo kyselina alginová nebo jejich soli, např. alginát sodný.

Jádra dražé jsou opatřeny vhodnými povrchovými vrstvami. Pro tento účel mohou být používány koncentrované roztoky cukrů, které mohou případně obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidon, karbopolový gel, polyethylenglykol a/nebo oxid titaničitý, roztoky šelaku a vhodná organická rozpouštědla nebo směsi rozpouštědel. Organická barviva nebo pigmenty mohou být přidány do tablet nebo potahových vrstev dražé k identifikaci nebo charakterizaci rozdílných kombinací dávek aktivní sloučeniny.

Farmaceutické preparáty, které mohou být používány perorálně zahrnují „push-fit“ kapsle vyrobené ze želatiny, jakož i měkké, uzavřené kapsle vyrobené ze želatiny a změkčovadla, např. glycerol nebo sorbitol. „Push-fit“ kapsle mohou obsahovat aktivní složky v příměsi s fillery, např. laktosou, pojivý, např. škroby, a/nebo lubrikanty, např. talek nebo stearát hořečnatý, a případně stabilizátory. V měkkých kapslích mohou být aktivní sloučeniny rozpuštěny nebo suspendovány ve vhodných roztocích, např. mastných olejích, minerálním oleji nebo tekutých polyethylenglykolech. Navíc mohou být přidávány stabilizátory. Veškeré formulace pro perorální podání by měly být v dávkách vhodných pro takový způsob podání.

Pro bukální podání mohou být přípravky ve formě tablet nebo pastilek připravených standardním způsobem.

Pro podání inhalací jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu standardně dodávány ve formě aerosolového spreje v rozprašovači nebo v balení se stlačeným obsahem s vhodným propelantem, např. dichlordifluormethanem, trichlorfluormethanem, dichlortetrafluorethanem, oxidem uhličitým nebo jinými vhodnými plyny. V případě stlačeného aerosolu může být dávkování provedeno pomocí „ventilu“, který umožní uvolnění přesného množství látky. Kapsle a catridge, např. želatina, pro použití v inhalačním přístroji nebo insuflatoru, může obsahovat práškový mix sloučeniny a vhodné práškové báze, např. laktosy nebo škrobu.

Sloučeniny mohou být připraveny pro parenterální podání injekcí, např. injekcí bolusu nebo kontinuální infuzí. Formulace pro injekce mohou být v jednotkových dávkovačích formách, např. v ampulích nebo v obalech pro více dávek, s přidanou konzervační látkou. Přípravky mohou být také ve formách suspenzí, roztoků nebo emulzí ···» ·· · · • ······· · ··· • · · ····· ·· · ·· »♦ v olejových nebo vodných nosičích a mohou obsahovat pomocné agens, např. suspendační, stabilizační a/nebo dispergační prostředky.

Farmaceutické formulace pro parenterální podání zahrnují vodné roztoky aktivních sloučenin ve formě, která je rozpustná ve vodě. Dále mohou být suspenze aktivních sloučenin připraveny jako příslušné olejovité injekční supenze. Vhodná lipofilní rozpouštědla nebo přenašeče zahrnují mastné oleje, např. sezamový olej, nebo estery syntetických mastných kyselin, např. ethyl-oleát nebo triglyceridy, nebo lipozómy.

Vodné injekční suspenze mohou obsahovat látky, které zvyšují viskozitu suspenze, např. sodná sůl karboxymethyl-celulosy, sorbitol nebo dextran. Případně suspenze mohou také obsahovat vhodné stabilizátory nebo agens, které zvyšují rozpustnost sloučenin, čímž umožňují připravit vysoce koncentrované roztoky.

Nebo může být aktivní složka ve formě prášku určeného ke smíchání s vhodným nosičem, např. sterilní vodou bez pyrogenu, před použitím.

Sloučeniny mohou být také připraveny jako rektální přípravky, např. čípky nebo retenční klyzma, obsahující standardní čípkové báze, např. kakaové máslo nebo jiné glyceridy.

Kromě výše uvedených formulací, mohou být také připraveny sloučeniny jako depotní preparát. Tyto formulace s dlouhou dobou účinku mohou být podávány implantací (např. subkutánně nebo intramuskulámě nebo intramuskulámí injekcí). Tak například, sloučeniny mohou být připraveny s vhodnými polymemími nebo hydrofóbními materiály (např. jako emulze v přijatelném oleji) nebo ionexy nebo jako těžko rozpustné deriváty, např. těžko rozpustné soli.

Příklad farmaceutického nosiče pro hydrofóbní sloučeniny podle předloženého vynálezu je systém spolurozpouštědel obsahující benzylalkohol, nepolární surfaktant nebo organický polymer mísitelný s vodou a vodná fáze. Systém spolurozpouštědel může být systém spolurozpouštědel VPD. VPD je roztok 3 obj.% benzylalkoholu, 8 obj.% nepolárního surfaktantového polysorbátu 80 a 65 obj.% polyethylenglykolu 300 doplněný na konečný objem absolutním ethanolem. Systém spolurozpouštědel VPD (VPD:5W) se sestává z VPD zředěného 1:1 5% dextrosou ve vodném roztoku. Tento systém spolurozpouštědel dobře rozpouští hydrofóbní sloučeniny a sám má po systémovém podání nízkou toxicitu. Přirozeně mohou být podíly systému spolurozpouštědel značně měněny, nicméně tak, aby se zachovaly charakteristické rysy jeho rozpustnosti a toxicity. Jednotlivé složky systému spolurozpouštědel mohou být měněny: např. místo polysorbátu 80 mohou • · • * ···· ·· · · • ······· · ··· • · · · · ·· být používány další nepolární surfaktanty o nízké toxicitě; velikost částic polyethylenglykolu může být různá; polyethylenglykol mohou nahradit další biokompatibilní polymery, např. polyvinylpyrrolidon; a další cukry nebo polysacharidy mohou nahradit dextrosu.

Nebo může být použit jiný systém dodání pro hydrofóbní farmaceutické sloučeniny. Pro hydrofóbní léčiva jsou standardními příklady přenašečů a nosičů využívaných při tomto způsobu lipozómy a emulze. Mohou být používána určitá organická rozpouštědla, např. dimethylsulfoxid, nicméně obvykle na úkor větší toxicity. Navíc sloučeniny mohou být dodávány systémem postupného uvolňování, např. semipermeabilními matricemi pevných hydrofóbní ch polymerů obsahujících terapeutické agens. V této technice jsou zavedeny různé látky s postupným uvolňováním. Kapsle s postupným uvolňováním mohou v závislosti na svém chemickém charakteru uvolňovat sloučeniny po dobu několika týdnů až 100 dnů. V závislosti na chemickém charakteru a biologické stabilitě terapeutického reagens mohou být používány další strategie pro stabilizaci proteinu.

Farmaceutické přípravky také mohou obsahovat vhodnou pevnou látku nebo nosiče nebo excipienty gelové fáze. Příklady takových nosičů nebo excipientů zahrnují, ale není to nikterak limitováno, uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, různé cukry, škroby, deriváty celulosy, želatina a polymery, např. polyethylenglykoly.

Velký počet sloučenin podle předloženého vynálezu může být ve formě soli s farmaceuticky kompatibilními protiiony. Farmaceuticky kompatibilní soli mohou být připraveny s mnoha kyselinami včetně, ale není to nikterak limitováno, kyseliny chlorovodíkové, sírové, octové, mléčné, tartarové, jablečné, sukcinové, atd. Soli mají tendenci být mnohem rozpustnější ve vodných nebo jiných protonizo váných rozpouštědlech než jejich odpovídající volné báze.

Účinná dávka

Farmaceutické přípravky vhodné pro použití v předloženém vynálezu zahrnují přípravky, ve kterých jsou aktivní složky k dosažení požadovaného účinku obsaženy v účinném množství. Zejména terapeuticky účinné množství znamená množství, které je dostatečné k prevenci nebo ke zlepšení stávajících symptomů u subjektu, který je ošetřován. Stanovení účinných množství se provádí standardním způsobem.

• · · · • ·

Pro jakoukoliv sloučeninu používanou způsobem podle předloženého vynálezu může být terapeuticky účinná dávka nejprve stanovena podle testů na buněčných kulturách. Například dávka může být testována na buněčných a zvířecích modelech k získání systémové koncentrace, která zahrnuje IC50 stanovenou podle testů na buněčných kulturách (tzn. koncentrace testované sloučeniny, která je potřebná k dosažení 50% inhibice aktivity dané proteinkinázy). V některých přípradech je vhodné stanovit hodnotu IC50 v přítomnosti 3 až 5% sérumalbuminu, poněvadž toto stanovení aproximuje vazebné efekty plazmových proteinů na sloučeninu. Tyto informace mohou být používány u lidských subjektů k přesnějšímu stanovení účinných dávek. Nejvýhodnější sloučeniny pro systémové podání účinně inhibují signalizaci proteinkináz v intaktních buňkách v hladinách, které jsou bezpečně dosažitelné v plazmě.

Terapeuticky účinná dávka znamená takové množství sloučeniny, které má za následek zlepšení symptomů u pacienta. Toxicita a terapeutická účinnost takových sloučenin může být stanovena standardními farmaceutickými způsoby na buněčných kulturách nebo experimentálních zvířatech, např. stanovení maximální tolerované dávky (MTD) a ED50 (koncentrace látky, která vyvolá 50% maximálního účinku dávky). Poměr dávek mezi toxickými a terapeutickými účinky je určen terapeutickým indexem a může být vyjádřen jako poměr mezi MTD a ED50. Výhodné jsou sloučeniny, které mají vysoké terapeutické indexy. Data získaná z testů na buněčných kulturách a studie na zvířatech mohou být používány ke stanovení rozpětí dávky určené pro lidské subjekty. Dávka takové sloučeniny je výhodně v rozmezí koncentrací v systémové cirkulaci, které zahrnují ED50 s malou nebo žádnou toxicitou. Dávka v tomto rozmezí se může lišit v závislosti na používané dávkové formě a způsobu podání. Přesná formulace, způsob podání a dávka mohou být vybrány příslušným doktorem v závislosti na stavu pacienta (viz Fingl et al., 1975, v „Pharmacological Basis of Therapeutics“, Ch. 1 pl). Při ošetření kritického stavu lze k dosažení rychlé odpovědi vyžadovat podání akutního bolusu nebo infuze kvůli dosažení MTD.

K dosažení plazmové hladiny aktivního podílu, která je dostatečná k udržení účinků modulujících kinázu nebo minimální účinné koncentrace (MEC), může být množství dávky a interval individuálně upraven. Hodnota MEC bude pro každou sloučeninu jiná, nicméně může být stanovena podle in vitro údajů; např. koncentrace potřebná k dosažení 50-90% inhibice proteinkinázy pomocí testů popsaných v předloženém vynálezu. Dávka potřebná k dosažení MEC bude záviset na jednotlivých charakteristickách a způsobu podání. Nicméně ke stanovení plazmových koncentrací může být používána HPLC nebo biotesty.

Intervaly mezi dávkami mohou být také stanoveny pomocí hodnoty MEC. Sloučeniny by měly být podávány podle režimu, kterým se udržují plazmové hladiny nad hodnotou MEC v průběhu 10-90% doby, výhodně mezi 30-90% a nejvýhodněji 50-90%, dokud není dosaženo požadovaného zlepšení daných symptomů. V případech místního podání nebo selektivního vychytávání, nemusí účinné místní koncentrace léčiva odpovídat plazmové koncentraci.

Množství podávaného přípravku bude záviset na ošetřovaném subjektu, jeho váze, závažnosti bolesti, způsobu podání a posouzení předepisujícího lékaře.

Balení

Přípravky, pokud je třeba, mohou být ve formě balení nebo zásobníku, který může obsahovat jednu nebo více forem jednotkové dávky obsahujících aktivní složku. Balení může např. obsahovat kovovou nebo plastickou fólii, např. měkké průhledné balení. Balení nebo zásobník může být distribuován společně s návodem k podání. Také mohou být připraveny přípravky obsahující sloučeninu podle předloženého vynálezu formulovanou v kompatibilním farmaceutickém nosiči, vložené do příslušného obalu a označeny pro ošetření příslušného onemocnění.

V některých formulacích může být výhodné používat sloučeniny podle předloženého vynálezu ve formě velmi malých částic získaných např. mletím pomocí energie tekutiny (fluid energy milling).

Použití sloučenin podle předloženého vynálezu při výrobě farmaceutických přípravků je uvedeno v následujícím popisu. V této popisné části znamená termín „aktivní sloučenina“ jakoukoliv sloučeninu podle předloženého vynálezu, ale zejména jakoukoliv sloučeninu, jenž je finálním produktem jednoho z výše uvedených příkladů.

a) Kapsle

Při přípravě kapslí se deagreguje a smíchá 10 hmotnostních podílů aktivní sloučeniny a 240 hmotnostních podílů laktosy. Směs se plní do tuhých želatinových kapslí, přičemž každá kapsle obsahuje jednotkovou dávku nebo podíl jednotkové dávky aktivní sloučeniny.

• · ·

b) Tablety

Tablety mohou být připraveny z následujících složek.

Hmotnostní podíly

Aktivní sloučenina 10

Laktosa 190

Kukuřičný škrob 22

Polyvinylpyrrolidon 10

Stearát hořečnatý 3

Aktivní sloučenina, laktosa a část škrobu se deagregují, smíchají a výsledná směs se granuluj ea s roztokem polyvinylpyrrolidonu v ethanolu. Suchý granulát se smíchá se stearátem hořečnatým a zbytkem škrobu. Směs se lisuje v tabletovacím stroji, přičemž každá tableta obsahuje jednotkovou dávku nebo část jednotkové dávky aktivní sloučeniny.

c) Tablety s enterosolventním potahem

Tablety se připraví způsobem popsaným výše v bodě (b). Tablety se pak enterosolventně potáhnou standardním způsobem roztokem, a to 20% acetát-ftalátem celulosy a 3% diethylftalátem ve směsi ethanolu a vody (1:1).

d) Čípky

Pří přípravě čípků se do 1300 hmotnostních dílů čípkové matrice na bázi triglyceridů vloží 100 hmotnostních dílů aktivní sloučeniny a vzniklá směs se dávkuje do čípků, přičemž každý obsahuje terapeuticky účinné množství aktivní složky.

V přípravcích podle předloženého vynálezu může být, pokud je třeba, aktivní sloučenina smíchána s dalšími kompatibilními, farmakologicky aktivními složkami. Například sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být podávány v kombinaci s jedním nebo více dalšími farmaceutickými agens, které inhibují nebo zabraňují produkci VEGF nebo angiopoietinů, zmírňují intracelulámí odpovědi na VEGF nebo angiopoietiny, blokují intracelulámí signální transdukci, inhibují vaskulámí hyperpermeabilitu, zmírňují zánět nebo inhibují nebo zabraňují tvorbě edému nebo neovaskularizace. Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být podávány před, po nebo současně s dalšími farmaceutickými agens, kterýmkoliv vhodným způsobem podání. Další farmaceutické • · · · agens zahrnují, ale není to nikterak limitováno, antiedemické steroidy, NSAIDS, inhibitory ras, anti-TNF agens, anti-IL-1 agens, antihistaminika, PAF-antagonisty, inhibitory COX-1, inhibitory COX-2, inhibitory NO synthasy, inhibitory Akt/PTB, inhibitory IGF-IR, inhibitory PKC a inhibitory PI3 kinázy. Sloučeniny podle předloženého vynálezu a další farmaceutické agens účinkují buď aditivně nebo synergisticky. Tudíž další takové kombinace látek, které inhibují angiogenezi, vaskulámí hyperpermeabilitu a/nebo inhibují tvorbu edému, mohou poskytovat větší zmírnění škodlivých účinků hyperproliferačních onemocnění, angiogeneze, vaskulámí hyperpermeability nebo edému než podání jakékoliv samotné látky. Při ošetření maligních poruch jsou předpokládány kombinace s antiproliferačními nebo cytotoxickými chemoterapiemi nebo ozařováním.

Předložený vynález také zahrnuje použití sloučenin obecného vzorce (I) jako léčivého prostředku.

V dalším aspektu předloženého vynálezu je poskytnuta sloučenina obecného vzorce (I) nebo její sůl při výrobě léčivého přípravku pro ošetření vaskulámí hyperpermeability, angiogenezi-dependentních poruch, proliferačních onemocnění a/nebo poruch imunitního systému u savců, zejména lidí.

Předložený vynález také poskytuje způsob ošetření vaskulámí hyperpermeability, nepřiměřené neovaskularizace, proliferačních onemocnění a/nebo poruch imunitního systému, který zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) savci, zejména člověku, při potřebě takového ošetření.

In vitro účinnost sloučenin při inhibicí těchto proteinkináz může být stanovena níže uvedenými způsoby.

Účinnost sloučenin může být stanovena množstvím inhibice fosforylace exogenního substrátu (např. syntetický peptid (Z. Songyang et al., Nátuře. 373:536-539) srovnáním testované sloučeniny s kontrolou.

Produkce KDR tyrosinkinázy pomocí Baculovirového systému:

Kódující sekvence pro lidskou KDR intracelulární doménu (aa789-1354) byla generována pomocí PCR a cDNA izolovaných z buněk HUVEC. Sekvence poly-His6 byla zavedena na TV-konec tohoto proteinu. Tento fragment byl klonován do transfekčního vektoru pVL1393 v místě Xbal a Not 1. Rekombinantní baculovirus (BV) byl generován kotransfekcí pomocí reagens BaculoGold Transfection reagent (PharMingen).

• · ···· ·♦ · ···· • ······· · ··· ···· ·· · ···· · · · ·· · ·· ·· ·· ·

Rekombinantní BV byl plakově purifikován a verifikován Westernovou analýzou. Za účelem produkce proteinu byly buňky SF-9 pěstovány v médiu SF-900-II při 2 x 106/ml a infikovány v množství tvořícím 0,5 plaku na buňku (MOI). Buňky byly sbírány po 48 hodinách od infekce.

Purifikace KDR

Buňky SF-9 exprimující (His)6KDR(aa789-1354) byly lyžovány přidáním 50 ml lyzovacího pufru Triton X-100 (20 mM Tris, pH 8.0, 137 mM NaCl, 10% glycerol, 1%

Triton X-100, lmM PMSF, 10 pg/ml aprotininu, 1 ug/ml leupeptinu) do buněčných pelet z 1 1 buněčné kultury. Lyzát byl centrifugován při 19,000 ot. za min. na přístroji Sorval SS-34 rotor po dobu 30 minut při teplotě 4°C. Buněčný lyzát byl aplikován do 5 ml NiCl₂chelatujícího sepharosového sloupce, ekvilibrovaného 50 mM HEPES, pH 7.5, 0.3 M NaCl. KDR byla eluována stejným pufrem obsahujícím 0,25 M imidazol. Jednotlivé frakce byly analyzovány metodami SDS-PAGE a ELISA (viz níže), pomocí nichž se dala změřit aktivita kinázy. Purifikovaná KDR byla nalita do 25mM HEPES, pH 7.5, 25mM NaCl, 5 mM pufru DTT a skladována při teplotě -80°C.

Tvorba a purifikace lidské Tie-2 kinázy

Kódující sekvence pro lidskou intracelulámí doménu Tie-2 (aa775-1124) byla generována pomocí PCR a cDNA kusů izolovaných z lidské placenty jako templátů. Sekvence poly-His₆ byla zavedena na V-konec a tento konstrukt byl klonován do transfekčního vektoru pVL 1939 v místě Xba 1 a Not 1. Rekombinantní BV byl generován kotransfekcí pomocí reagens BaculoGold Transfection reagent (PharMingen). Rekombinantní BV byl plak purifikovaný a verifikovaný Westernovou analýzou. Za účelem produkce proteinu byly buňky SF-9 pěstovány v médiu SF-900-Π při 2 x 106/ml a infikovány v 0,5 MOL Purifikace His-značené kinázy používané při screeningu byla obdobná jako u KDR.

Produkce a purifikace lidské Fit-1 tyrosinkinázy

Byl používán baculovirový expresivní vektor pVL1393 (Phar Mingen, Los Angeles, CA). Nukleotidová sekvence kódující poly-His6 byla umístněna do nukleotidové • · · · ··· ·· · ··· ···· ·· · ···· • ······· · ··· · · · · · • · · · · · · ··· ·· · ·· · · · · · 84 oblasti 5' kódující celou intracelulámí doménu kinázy lidské Flt-1 (aminokyseliny 7861338). Nukleotidová sekvence kódující oblast kinázy byla generována pomocí PCR a cDNA-knihoven izolovaných z buněk HUVEC. Histidinové zbytky umožnily afinitní purifikací proteinu obdobným způsobem jako u KDR a ZAP70. Insektované buňky SF-9 byly infikovány při 0,5 multiplicitě a sbírány po 48 hodinách od infekce.

Původ EGFR tyrosinkinázy

EGFR byla zakoupena od firmy Sigma (Cat # E-3641; 500 jednotek/50 μΐ) a ligand EGF byl získán u firmy Oncogen Research Products/Calbiochem (Cat # PF011-100).

Exprese ZAP70

Byl používán baculovirový expresívní vektor pVL1393 (PharMingen, Los Angeles,

CA). Nukleotidová sekvence kódující aminokyseliny M(H)6 LVPR9S byla umístněna do nukleotidové oblasti 5' kódující celou ZAP70 (aminokyseliny 1-619). Nukleotidová sekvence kódující oblast ZAP70 byla generována pomocí PCR a cDNA-knihoven izolovaných z T-buněk imortalizováných Jurkatem. Histidinové zbytky umožnily afinitní purifikací proteinu (vide infra). LVPR9S můstek sestával z rozpoznávacích sekvencí pro proteolytické štěpení thrombinem umožňující odstranění afinitního tágu z enzymu. Insektované buňky SF-9 byly infikovány při 0,5 multiplicitě a sbírány po 48 hodinách od infekce.

Extrakce a purifikace ZAP70

Buňky SF-9 byly lyžovány v pufru sestávající z 20 mM Tris, pH 8.0, 137 mM NaCI, 10% glycerol, 1% Triton X-100, lmM PMSF, 10 pg/ml aprotininu, 1 ug/ml leupeptinu a 1 mM orthovanadátu sodného. Rozpustný lyzát byl aplikován na chelatující sloupec sepharosy HiTrap (Pharmacia) ekvilibrovaném v 50 mM HEPES, pH 7.5, 0.3 M NaCI. Fúzní protein byl eluován s 250 mM imidazolu. Enzym byl skladován v pufru obsahujícím 25mM HEPES, pH 7.5, 50 mM NaCI, 5 mM pufru DTT.

• · · • · · · • · · · · · · • · · • · ·

Původ proteinkinázy

Lek, Fyn, Src, Blk, Csk a Lyn a jejich zkrácené formy mohou být získány z komerčních zdrojů (např. od Upstate Biotechnology lne. (Saranac Lake, N.Y.) a Santa Cruz Biotechnology hic. (Santa Cruz, Ca.)) nebo purifikovány standardními způsoby ze známých přírodních nebo rekombinantních zdrojů.

Enzymová imunoanalýza na pevné fázi (ELISA) provedená s PTK

K detekci a měření přítomnosti aktivity tyrosínkinázy byla používána enzymová imunoanalýza na pevné fázi (ELISA). ELISA byla prováděna standardním způsobem, který je popsán např. ve Voliér, et al., 1980, „Enzyme-linked Immunosorbent Assay,“ In: Manual of Clinical Immunology, 2d ed., edited by Rose and Friedman, 359-371 Am.Soc. of Microbiology, Washington, D.C.

Uvedený způsob byl upraven pro stanovení aktivity s ohledem na specifickou PTK. Například výhodné způsoby provedení ELISA experimentů jsou uvedeny níže. Úprava těchto protokolů pro stanovení aktivit sloučenin u ostatních členů rodiny receptorové PTK, jakož i nereceptorových tyrosinkináz, patří mezi standardní rutinu. Pro účely stanovení selektivity inhibitoru byl používán univerzální substrát PTK (např. nepravidelný kopolymer na bázi poly(Ghi4 Tyr) s molekulovou hmotností 20000-50000) společně s ATP (typicky 5 μΜ) v přibližně dvojnásobných koncentracích oproti Km z testů.

Ke stanovení inhibičního účinku sloučenin podle předloženého vynálezu na aktivitu KDR, Flt-1, FU-4/VEGFR-3, Tie-1, Tie-2, EGFR, FGFR, PDGFR, IGF-l-R, c-Met, Lek, Blk, Csk, Src, Lyn, Fyn a ZAP70 tyrosinkináz byl používán následující postup:

Pufřy a roztoky:

PGTPoly (Glu, Tyr) 4:1

Skladování prášku při teplotě -20°C. Rozpuštění prášku ve fyziologickém roztoku tlumeném fosfátem (PBS) na objem 50 mg/ml. Uchování 1 ml alikvótního podílu při teplotě -20°C. Pokud se připravují pláty, zředění na 250 pg/ml v Gibco PBS.

Reakční pufr: 100 mM Hepes, 20 mM MgCl₂, 4 mM MnCl₂, 5mM DTT, 0,02% BSA, 200 pMNaV0₄, pH 7,10.

• · • · · • · · · • · · · · · • · ·

ATP: Uchování alikvótních podílů 100 mM při teplotě -20°C. Zředění na objem 20 μΜ ve vodě.

Promývací pufr: PBS s 0,1% Tween 20

Protilátkový ředící pufr: 0,1% bovinní sérumalbumin (BSA)v PBS

Substrát TMB: smíchání substrátu TMB a Peroxidových roztoků 9:1 těsně před použitím nebo použití substrátu K-Blue od Neogen Blokovací roztok: 1M fosforečná kyselina

Postup

1. Příprava destiček

Zředění zásobního roztoku PGT (50 mg/ml, zmrazeného) v PBS na 250 pg/ml. Přidání (125 μΐ/jamka) do ELISA destiček s plochým dnem, majících vysokou afinitu a modifikované změní (Corning # 25805-96). Přidání 125 μΐ PBS do kontrolních jamek. Potažení těsnicí páskou a inkubace přes noc při teplotě 37°C. lx Promytí 250 μΐ promývacího pufru a sušení po dobu 2 hodin při teplotě 37°C v suchém inkubátoru. Skladování potažených destiček v uzavřené nádobě při teplotě 4°C

2. Reakce s tyrosinkinázou:

-příprava inhibičních roztoků ve čtyřnásobné koncentraci ve 20% DMSO ve vodě.

-příprava reakčního pufru

-příprava enzymového roztoku tak, aby požadované jednotky byly v 50 μΐ, např. pro KDR 1 ng/μΐ z celkových 50 ng/jamka při reakcích. Skladování v ledu.

-příprava 4xATP roztoku s koncentrací 20 μΜ ze 100 mM zásobního roztoku ve vodě. Skladování v ledu.

-přidání 50 μΐ enzymového roztoku na jamku (typicky 5-50 ng enzymu na jamku v závislosti na specifické aktivitě kinázy)

-přidání 25 μΐ 4 x inhibitoru -přidání 25 μΐ 4 x ATP při stanovení inhibice -inkubace při pokojové teplotě po dobu 10 minut -zastavení reakce přidáním 50 μΐ 0,05N HCl/jamka -promytí destiček **Finální koncentrace při reakci: 5 μΜ ATP, 5% DMSO

3. Vázání protilátek ·* ·

-zředění 1 mg/ml alikvótního podílu PY20-HRP (Pierce) protilátky (fosfotyrosinová protilátka) na 50 ng/ml v 0,1 % BSA v PBS 2 krokovým zředěním (100 x, pak 200x) -přidání 100 μΐ Ab/jamka. Inkubace při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Inkubace při teplotě 4°C po dobu 1 hodiny.

-4x promytí destiček

4. Značení

-příprava substrátu TMB a přidání 100 μΙ/jamka

-monitoring OD při 650 nm, dokud se nedosáhne hodnoty 0,6

-zastavení reakce pomocí 1M fosforečné kyseliny. Třepání na detektoru destiček.

-okamžité měření OD při 450 nm

Optimální inkubační časy a podmínky enzymové reakce se mohou nepatrně lišit a jsou empiricky stanoveny pro každou šarži.

Pro Lek byl za obdobných podmínek používán reakční pufr o složení 100 mM MOPSO, pH 6.5, 4 mM MnCl₂, 20 mM MgCl₂, 5 mM DTT, 0,2% BSA, 200 mM NaVO₄.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou být terapeuticky účinné při ošetření onemocnění zahrnujících jak identifikované, včetně těch, které zde nejsou uvedeny, tak i dosud neidentifikované proteinové tyrosinkinázy, které jsou inhibovány sloučeninami obecného vzorce (I). Všechny zde uvedené sloučeniny vykazovaly výraznou inhibici buď FGFR, PDGFR, KDR, Tie-2, Lek, Fyn, Blk, Lyn nebo Src při koncentracích 50 mikromol nebo nižších. Některé sloučeniny podle předloženého vynálezu také výrazně inhibovaly další tyrosin nebo serin/threoninkinázy, např. cdc2 (cdk 1) při koncentracích 50 mikromol nebo nižších.

Původ Cdc2

Lidský rekombinantní enzym a testovací pufr mohou být získány z komerčních zdrojů (New England Biolabs, Beverly, MA. USA) nebo standardními způsoby purifikovány ze známých přírodních nebo rekombinantních zdrojů.

Testy s Cdc2

V postupu byla používána mírně modifikovaná činidla získaná z komerčních zdrojů. Reakce byla prováděna v pufru o složení 50mM Tris pH 7.5, lOOmM NaCl, 1 mM φφ * ·

φφ ····

φ Φ Φ « φ Φ Φ Φ * * · • φ ΦΦΦ »φΦΦ«

ΦΦΦ· · >

ΦΦ ΦΦ ΦΦ ·

EGTA, 2 mM DTT, 0,01% Brij, 5% DMSO a 10 mM MgCl₂ (komerční pufr) suplementovaným čerstvým 300 μΜ ATP (31 pCi/ml) a 30 μg/ml IIIss typu histon jako finálními koncentracemi. Reakční objem činil 80 μΐ s obsaženými jednotkami enzymu.

Reakce probíhala 20 minut při teplotě 25°C za přítomnosti nebo absence inhibitoru a byla ukončena přidáním 120 μΐ 10% octové kyseliny. Substrát byl separován od neinkorporované značky nanesením směsi na fosfocelulosový papír a 5 minutovým promytím (3 x 75 mM fosforečné kyseliny). Impulsy byly měřeny za přítomnosti kapalného scintilátoru na přístroji měřícím beta-záření. Některé sloučeniny podle předloženého vynálezu výrazně inhibovaly cdc2 při koncentracích 50 μΜ nebo nižších.

Původ PKC kinázy

Katalytická podjednotka PKC může být získána z komerčních zdrojů (Calbiochem).

Testy s PKC kinázou

Použitý postup radiochemického stanovení kináz byl na bázi publikovaného způsobu viz Yasuda, I., Kirshimoto, A., Tanaka, S., Tominaga, M., Sakurai, A., Nishizuka, Y. Biochemical and Biophysical Research Communication 3:166, 1220-1227 (1990). Veškeré reakce byly prováděny v kinázovém pufru sestávajícím se z 50 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 2 mM DTT, 1 mM EGTA, 100 μΜ ATP, 8 μΜ peptidu, 5% DMSO and ³³P ATP (8 Ci/mM). Sloučenina a enzym byly smíchány v reakční baňce a reakce byla iniciována přidáním ATP a substrátové směsi. Po terminaci reakce přidáním 10 μΐ pufru zastavujícího reakci (5 mM ATP v 75 mM fosforečné kyseliny), byl určitý podíl směsi nanesen na fosfocelulosové filtry. Nanesené vzorky byly promývány (3x) v 75 mM fosforečné kyseliny při pokojové teplotě po dobu 5 až 15 minut. Inkorporace radioaktivní značky byla stanovena měřením kapalné scintilace.

Původ enzymu Erk2

Rekombinantní myší enzym a testovací pufr mohou být zakoupeny z komerčních zdrojů (New England Biolabs, Beverly MA. USA) nebo standardními způsoby purifikovány z přírodních nebo rekombinantních zdrojů.

Testy s enzymem Erk2

Reakce byla prováděna v pufru sestávajícím se z 50 mM Tris pH 7.5, 1 mM EGTA, 2 mM DTT, 0,01% Brij, 5% DMSO a 10 mM MgCb (komerční pufr) suplementovaném čerstvým 100 μΜ ATP (31 pCi/ml) a 30 μΜ myelinového bazálního proteinu za podmínek, které jsou doporučovány dodavatelem. Reakční objemy a způsob testování inkorporované radioaktivní značky jsou popsány u testů s PKC (vide supra).

In vitro modely aktivace T-buněk

Po aktivaci mitogenu nebo antigenu jsou T-buňky indukovány k sekreci IL-2, což je růstový faktor, který podporuje jejich následnou proliferační fázi. Proto lze měřit buď produkci IL-2 nebo buněčnou proliferaci primárních T-buněk nebo příslušných linií T-buněk jako náhražek z aktivace T-buněk. Oba tyto testy a jednotlivé parametry jsou dobře popsány v literatuře (v Current Protocols in Immunology, Vol 2, 7.10.1-7.11.2).

Stručně, T-buňky mohou být aktivovány společnou kultivací s allogenním stimulátorem buněk, proces, který je označovaný jako nevratná směsná reakce lymfocytu. Respondér a stimulátor periferních krevních monocytů je purifikován Ficoll-Hypaque gradientem (Pharmacia) podle návodu dodavatele. Stimulátorové buňky jsou mitoticky inaktivovány reakcí s mitomycinem C (Sigma) nebo zářením gama. Respondérové a stimulátorové buňky jsou kokultivovány v poměru 2:1 za přítomnosti nebo absence testované sloučeniny. Typicky 10⁵ respondérů je smícháno s 5 x 10⁴ stimulátory a naneseno (v objemu 200 μΐ) do mikrotitrační destičky se dnem do U (Costar Scientific). Buňky jsou kultivovány vRPMI 1640 suplementovaném buď fetálním bovinním sérem (Hyclone Laboratories) inaktivovaným záhřevem nebo poolovým lidským AB sérem od mužských dárců, 5 x 10'⁵ M 2-merkaptoethanol a 0,5% DMSO. Jeden den před odběrem (typicky tři dny) bylo do kultur zabudováno 0,5 pCi H thymidinu (Amersham). Kultury • · • · · · · · · • · · · ···· · · · ···· • ······· · · · · ····· ··· · · · · · · · •· · ·· ·· ·· » byly odebírány (Betaplate harvester, Wallac) a uptake izotopu byl vyhodnocen pomocí kapalné scintilace (Betaplate, Wallac).

Stejný kultivační systém byl používán pro stanovení aktivace T-buněk měřením produkce IL-2. Osmnáct až dvacetčtyři hodin po iniciaci kultivace byl odstraněn supematant a koncentrace IL-2 byla měřena metodou ELISA (R and D systems) podle návodu dodavatele.

In vivo modely aktivace T-buněk

In vivo účinnost sloučenin může být testována na zvířecích modelech přímým měřením aktivace T-buněk nebo T-buněk, u kterých byly prokázány efektory. T-buňky mohou být aktivovány in vivo ligací konstantní části receptoru T-buněk s monoklonální protilátkou anti-CD3 (Ab). V tomto modelu bylo myším BALB/c 2 hodiny před vykrvácením intraperitoneálně podáno 10 pg anti-CD3 Ab. Zvířata, která měla obdržet testované léčivo, byla předem ošetřena jednorázovou dávkou sloučeniny jednu hodinu před podáním anti-CD3 Ab. Sérové hladiny protizánětlivých cytokinů interferon-γ (IFN-γ) a faktoru-α (TNF-a) nádorové nekrózy, indikátorů aktivace T-buněk, byly měřeny metodou ELISA. Podobný model využívá in vivo aktivaci T-buněk se specifickým antigenem, např. hemocyanin kuželnatky (KLH), a následnou sekundární in vitro expozici drénovaných buněk mízní uzliny stejnému antigenu. Jak je uvedeno výše, ke stanovení stavu aktivace kultivovaných buněk bylo používáno měření produkce cytokinů. V nultý den byly myši C57BL/6 subkutánně imunizovány 100 pg KLH emulzifikováného v kompletním Freundově adjuvans (CFA). Zvířata byla jeden den před imunizací a následně první, druhý a třetí den po imunizaci předem ošetřena sloučeninou. Drénované mízní uzliny byly čtvrtý den odebírány a jejich buňky kultivovány v množství 6 x 10⁶ na ml v médiu ke kultivaci tkáně (RPMI 1640 suplementované fetálním bovinním sérem inaktivovaným záhřevem (Hyclone Laboratories 5 x 10'⁵ M 2-merkaptoethanolu a 0,5% DMSO) po dobu 24 i 48 hodin. V kultivačních supematantech pak byl stanoven růstový faktor Interleukin-2 (IL-2) autokrinních T-buněk a/nebo hladiny IFN-γ metodou ELISA.

Hlavně sloučeniny mohou být také testovány na zvířecích modelech simulujících lidské onemocnění, např. experimentální autoimunitní encefalomyelitida (EAE) a kolagenem indukovaná artritida (CIA). EAE modely, které napodobují aspekty lidské roztroušené sklerózy byly popsány u myší i potkanů (recenzováno FASEB J. 5:2560-2566, • · · · · · · ···· · · · · • ······· · · · · • · · ·· ·· ·«

1991 myší model: Lab. Invest. 4(3):278, 1981; model na bázi hlodavce: J. Immunol. 146(4):1163-8, 1991). Myši a potkani byly imunizovány emulzí myelinového bazického proteinu (MBP) nebo jeho neurogenními peptidovými deriváty a CFA. Akutní onemocnění mohou být indukovány přidáním bakteriálních toxinů, např. bordetella pertussis. Relapsující/ustupující onemocnění je indukováno adoptivním přenosem T-buněk ze zvířat imunizovaných MBP/peptidem.

CIA může být indukována u myší DBA/1 imunizací kolagenem typu II (J. Immunol: 142(7):2237-2243), čímž se vyvolají známky artritidy již deset dnů po expozici antigenu, které mohou být evidentní i devadesát dnů po imunizaci. U EAE i CIA modelů může být sloučenina podávána buď profylakticky nebo v době propuknutí onemocnění. Účinná léčiva by měla redukovat sílu a/nebo rozsah onemocnění.

Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu, které inhibují jednu nebo více angiogenních receptorových PTK a/nebo proteinkinázy, např. lek účastnící se zprostředkování zánětlivých odpovědí, mohou u těchto modelů redukovat sílu nebo rozsah artritidy.

Sloučeniny mohou být také testovány na myších modelech aloimplantátu kůže (recenzováno vAnn. Rev. Immunol., 10:333-58, 1992; Transplantation: 57(12):170117D6, 1994) nebo srdce (Am. J. Anat.: 113:273,1963). Kompletní epidermální štěpy byly transplantovány z myší C57BL/6 myším BALB/c. Štěpy mohou být počínaje šestým dnem kvůli rejekci denně sledovány. U myšího modelu neonatálního transplantátu srdce jsou neonatální srdce ektopicky transplantovány z myší C57BL/6 do ušních boltců dospělých myší CBA/J. Srdce začíná pracovat čtyři až sedm dní po transplantaci a rejekce může být zkoumána vizuálně disekujícím mikroskopem kvůli sledování přerušení činnosti srdce.

Testy s buněčnými receptorovými PTK

Ke stanovení hladiny aktivity a účinku různých sloučenin podle předloženého vynálezu na KDR/VEGFR2 byl používán následující buněčný test. Podobné testy receptorových PTK využívající stimulaci specifického ligandu mohou být za použití standardních technik provedeny se stejnými liniemi na dalších tyrosinkinázách.

VEGF-indukovaná fosforylace KDR u lidských endotheliálních buněk pupečníkové žíly (HUVEC) může být měřena Western blottingem:

fc · · ·· · ··· ···· · · · · · · • ······· · · · · · · •· · ·· · * ··

1. Buňky HUVEC (od poolových donorů) byly zakoupeny u Clonetics (San Diego, CA) a kultivovány podle návodu dodavatele. Pro tyto testy byly používány pouze časné pasáže (3-8). Buňky byly kultivovány ve 100 mm nádobách (Falcon for tissue culture; Becton Dickinson; Plymouth, England) s použitím kompletního EBM média (Clonetics).

2. Pro testy inhibiční aktivity sloučenin byly buňky trypsinovány a naočkovány v množství 0,5-1,0 χ 10⁵ buněk/jamka do každé jamky klastrovaných destiček (6 jamek každá)(Costar; Cambridge, MA).

3. 3-4 dny po naočkování bylo u 90-100% destiček pozorován souvislý nárůst. Médium bylo ze všech jamek odstraněno, buňky byly promývány 5-10 ml PBS a inkubovány 18-24 hodiny s 5 ml EBM bazálního média bez žádných přidaných suplementů (tzn. bez séra).

4. K buňkám byly přidány sériově zředěné inhibitory v 1 ml média EBM (25 μΜ, 5 μΜ nebo ΙμΜ konečné koncentrace) a buňky byly inkubovány po dobu 1 hodiny při teplotě 37°C. Poté byla přidána do všech jamek lidská rekombinantní VEGF 165 (R & D Systems) ve 2 ml média EBM v konečné koncentraci 50 ng/ml a v inkubaci se při teplotě 37°C pokračovalo po dobu 10 minut. Ke stanovení pozadí fosforylace a fosforylační indukce VEGF byly používány kontrolní buňky ošetřené nebo neošetřené VEGF. Všechny jamky pak byly promývány 5-10 ml studeného PBS obsahujícícho lm M orthovanadátu sodného (Sigma). Buňky byly lyžovány a setřeny ve 200 μΐ pufru RIPA (50mM Tris-HCl) pH 7, 150 mM NaCI, 1% NP-40, 0,25% deoxycholátu sodného, 1 mM EDTA) obsahujícího inhibitory proteasy (PMSF 1 mM, aprotinin 1 pg/ml, pepstatin 1 pg/ml, leupeptin 1 pg/ml, Na vanadát 1 mM, Na fluorid lmM) a 1 pg/ml Dnase (veškeré chemikálie byly od Sigma Chemical Company, St Louis, MO). Lyzát byl kvůli eliminaci jader centrifugován při 14000 ot./min. po dobu 30 minut.

Ekvivalentní množství proteinů pak bylo precipitováno přidáním studeného (-20°C) ethanolu (2 objemy) po dobu minimálně 1 hodiny a maximálně přes noc. Pelety byly rekonstituovány ve vzorkovém pufru Laemli obsahujícím 5% merkaptoethanol (BioRad Hercules, CA) a zahřívány po dobu 5 minut. Proteiny byly znovu chromatografovány gelovou elektroforézou na polyakrylamidovém gelu (6%, 1,5 mm Novex, San Deigo, CA) a přeneseny do nitrocelulosové membrány pomocí systému Novex. Po blokaci bovinním sérumalbuminem (3%) byly proteiny při teplotě 4°C značeny polyklonální protilátkou anti-KDR (C20, Santa Cruz Biotechnology; Santa Cruz, CA) nebo ···· ·· · · · · » • ·····*· · · · · ···· • · · ···· ··· • · · ·· · · ·· · monoklonální protilátkou antifosfotyrosin (4G10, Upstate Biotechnology, Lake Placid,

NY). Po promytí a inkubaci s HRP-konjugovaným F(ab)₂ kozím protikráličím nebo kozím protimyším IgG byly jednotlivé pásy vizualizovány emisní chemiluminiscencí (ECL)(Amersham Life Sciences, Arlington Height, IL). Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu výrazně inhibovaly fosforylaci buněčné KDR tyrosinkinázy indukovanou VEGF při koncentracích nižších než 50 μΜ.

In vivo model uterinního edému

Při tomto testu byla měřena kapacita sloučenin inhibovat akutní přírůstek uterinní hmotnosti u myší, který se objevil v prvních několika hodinách po stimulaci estrogenem. Je známo, že tento rychlý přírůstek uterinní hmotnosti je způsoben edémem v důsledku zvýšené permeability uterinní vaskularity. Cullinan-Bove a Koss (Endocrinology (1993), 133: 829-837) ukázaly podobný dočasný vztah mezi uterinním edémem stimulovaným estrogenem a zvýšenou expresí VEGF mRNA v děloze. Tyto výsledky byly potvrzeny použitím neutralizačních monoklonálních protilátek vůči VEGF, které výrazně redukují akutní přírůstek uterinní váhy po stimulaci estrogenem (WO 97/42187). Proto může tento systém sloužit jako model pro in vivo inhibici VEGF signalizační a asociované hyperpermeability a edému.

Látky: Všechny hormony byly zakoupeny u firmy Sigma (St. Louis, MO) nebo Cal Biochem (La Jolla, CA) jako lyofilizované prášky a připravené podle návodu dodavatele. Nosičové komponenty (DMSO, Cremaphor EL) byly zakoupeny u firmy Sigma (St. Louis, MO).

Myši (Balb/c, 8-12 týdnů staré) byly zakoupeny u firmy Taconic (Germantown, NY) a přechovávány s vyloučením pathogenů v zařízení k tomu určenému a podle „institutional Animal Care and Use Committee Guidelines“

Způsob:

l.den: myším Balb/c byla intraperitoneálně (i.p.) podána injekce 12,5 jednotek gonadotropinu ze séra březích klisen (PMSG).

3. den: myším bylo podáno 15 jednotek lidského choriogonadotropinu (hCG) i.p.

4. den: myši byly náhodně rozděleny do skupin o 5-10 kusech. Testované sloučeniny byla podávány i.p., i.v. nebo p.o. způsobem, který závisel na rozpustnosti nosiče v dávkách v rozmezí 1-100 mg/kg. Kontrolní skupina obdržela pouze nosič a dvě skupiny nebyly ošetřovány.

Po 30 minutách experimentu byla kontrolní skupině a jedné z neošetřováných skupin podána i.p. injekce 17-estradiolu (500 pg/kg). Po 2-3 hodinách byla zvířata usmrcena inhalací CO2. Po incizi vedené ve střední linii byla izolována každá děloha a odstraněna řezem vedeným pod krčkem (cervix) a v místě spojení dělohy a vejcovodů. Tlustá a pojivová tkáň byla opatrně odstraněna tak, aby se neporušila před vážením (vlhká hmotnost) integrita dělohy. Z děloh byla tlakem mezi dvěma filtračními papíry s jednolitrovou skleněnou láhví naplněnou vodou odstraněna tekutina. Dělohy byly po odstranění tekutiny zváženy (hmotnosti po odstranění tekutiny). Rozdíl ve váze před a po odstranění tekutiny byl stanoven jako množství tekutiny v děloze. Střední obsah vody ošetřovaných skupin byl porovnáván s neošetřo vánými nebo kontrolními skupinami. Statistické parametry byly stanoveny Studentovým testem. Ke sledování odpovědi na estradiol byla používána nestimulovaná kontrolní skupina.

Výsledky demonstrují, že určité sloučeniny podle předloženého vynálezu inhibují tvorbu edému, pokud jsou systematicky podávány různými způsoby.

Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu, které jsou inhibitory angiogenních receptorových tyrosinkináz mohou také vykazovat aktivitu na modelu neovaskularizace Matrigelového implantátu. Model neovaskularizace Matrigelu zahrnuje tvorbu nových krevních cév v „mramorové“ subkutánně implantované extracelulámí matrix, která je indukována přítomností proangiogenního faktoru produkovaného nádorovými buňkami (viz: Passaniti, A., et al., Lab. Investig. (1992), 67 (4), 519528; Anat. Rec. (1997), 249 (1), 63-73; Int. J. Cancer (1995), 63 (5), 694-701; Vasc. Biol. (1995), 15 (11), 1857-6). Model výhodně probíhá v průběhu 3-4 dnů a výstupy zahrnují makroskopické optické/obrazové vyhodnocení neovaskularizace, mikroskopické stanovení hustoty mikrocév a stanovení množství hemoglobinu (Drabkinova metoda) po odstranění implantátu proti kontrolám u zvířat neošetřo váných inhibitoiy. V daném modelu lze alternativně používat bFGF nebo HGF jako stimulans.

Určité sloučeniny podle předloženého vynálezu, které inhibují jednu nebo více onkogenních, protoonkogenních nebo na proliferaci dependentních proteinkináz nebo angiogenní receptorovou PTK také inhibují růst primárních myších, potkaních nebo lidských xenoimplantátových nádorů u myší nebo inhibují metastázy u myších modelů.

• · · · > · ·

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

-(1 -Benzyl-4-piperidinyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-amin (sloučenina 1)

3-Brom-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-ol (Meziprodukt A) l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-ol (10 g, 73,5 mmol) se suspenduje v 700 ml vody.

Přidá se brom (10 ml, 194 mmol) a výsledná reakční směs se zahřívá na teplotu 91°C přes noc. Po ochlazení v ledové vodě se pevný podíl spojí filtrací, čímž se získá 1,508 g 3-brom-1//-pyrazolo [3,4-(/jpyrimidin-4-olu ve formě světle žluté pevné látky. 'H NMR (DMSO) 8,06 (s 1H), 12,25 (bs, 1H), 14,06 (bs, 1H).

3-Brom-4-chlor-l //-pyrazolo [3,4-t/Jpyrimidin (Meziprodukt B)

3-Brom-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-ol (Meziprodukt A) (15,08 g, 70,5 mmol) se suspenduje v 189 ml oxychloridu fosforečného. Přidá se diethylanilin (19 ml, 119,4 mmol) a výsledná reakční směs se zahřívá na teplotu 106°C po dobu 2 hodin. Po ochlazení na pokojovou teplotu se rozpouštědlo odstraní a výsledný jantarový sirup se nalije do 300 ml ledové vody, po 20 minutách se vodná vrstva extrahuje diethyletherem (500ml x 4). Spojená organická vrstva se promyje, suší a zahušťuje, čímž se získá 6,87 g 3-brom-4chlor-1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidinu ve formě světle žluté pevné látky.’H NMR (DMSO) 8,857 (s 1H), 14,84 (bs, 1H);

LC/MS (MH⁺ = 233).

-(1 -Benzyl-4-piperidinyl)-3-brom-4-chlor-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin (Meziprodukt C) 3-Brom-4-chlor-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin (Meziprodukt B) (5,0 g, 21,42 mmol), l-benzyl-4-piperidinol (8,2 g, 42,83 mmol) a trifenylfosfin (11,23 g, 42,83 mmol) se suspendují v 250 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se ochladí v ledové lázni a po kapkách se přidá diethyl-azodikarboxylát (6,8 ml, 42,83 mmol). Po 10 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 2 hodinovém míchání se rozpouštědlo se odstraní a zbytek se převede do ethylacetátuu. Organická vrstva se promyje, suší a zahušťuje, surový produkt se protáhne přes sloupec Biotage („Biotage flash column“) za « · použití směsi dichlormethanu a ethylacetátu (90:10) jako mobilní fáze, čímž se získá 10,56 g 1 -(1 -benzyl-4-piperidinyl)-3-brom-4-chlor-l //-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidinu. Produkt s retenčním časem 12,46 minut byl podle HPLC z 61% čistý. (Podmínky HPLC: 5 až 95% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 20 minut, velikost sloupce je 3,9x150 mm, 300 A).

-(1 -Benzyl-4-piperidinyl)-3 -brom-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt D)

-(1 -Benzyl-4-piperidinyl)-3 -brom-4-chlor-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin (Meziprodukt C) (9g, 61% čistota: ) se smíchá s dioxanem (100 ml) a hydroxidem amonným (100 ml) v tlakové nádobě. Směs se zahřívá na teplotu 120°C přes noc. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií za použití ethylacetátu jako mobilní fáze, čímž se získá l-(l-benzyl-4-piperidinyl)-3-brom-l//pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin.

'H NMR (CDCb) 1,94 (d, J = 11, 23 Hz, 2H), 2,21 (m, 2H), 2,35 (m, 2H), 3,04 (d, J = 11, 48 Hz), 3,57 (s, 2H), 4,71 (m, ÍH), 5,98 (s, 2H), 7,34 (m, 5H), 8,33 (s, ÍH); LC/MS (MH⁺= 389).

l-(l-Benzyl-4-piperidinyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin 1 -(1 -Benzyl-4-piperidinyl)-3-brom-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt D) (4,3 g, 11,10 mmol), 4-fenoxyfenylboritá kyselina (Meziprodukt V) (2,61 g, 12,21 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (0,77 g, 0,67 mmol) a uhličitan sodný (2,82 g, 26,65 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (100 ml) a vodou (50 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje, suší a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií za použití směsi ethylacetát/methanol (98/2) jako mobilní fáze, čímž se získá 2,65 g l-(l-benzyl-4-piperidinyl)-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/)pyrimidin-4-aminu.

*H NMR (CDCb) 1,99 (d, J = 11,02 Hz, 2H), 2,25 (m, 2H), 2,47 (m, 2H), 3,07 (d, J = 11,12 Hz), 3,59 (s, 2H), 4,80 (m, ÍH), 5,52 (s, 2H), 7,07 (d, J = 0,67, ÍH), 7,15 (m, 3H), 7,37 (m, 6 H), 7,66 (d, J = 8,51, 2H), 8,37 (s, ÍH); LC/MS (MH+ =477).

• · · · • · · · · · ·

Příklad 2

3-(4-Fenoxyfenyl)-l -(4-piperidinyl)-1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

-(1 -Benzyl-4-piperidinyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin (Sloučenina 1) (1,224 g, 2,57 mmol), 10% palladium na aktivním uhlí (1,22 g) a mravenčan amonný (0,81 g, 12,84 mmol) se smíchají s 21 ml methanolu. Po 6 hodinovém míchání při pokojové teplotě se reakční směs filtruje a promyje horkým methanolem. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se převede do dichlormethanu a organická vrstva se promyje, suší a zahušťuje, čímž se získá 0,77 g 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperidinyl)-l//pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-aminu.

'H NMR (CDC1₃) 2,05 (d, J - 12,17 Hz, 2H), 2,26 (m, 2H), 2,87 (m, 2H), 3,29 (d, J = 12,76 Hz), 4,89 (m, IH), 5,54 (s, 2H), 7,09 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,39 (m, 2 H), 7,67 (d, J = 9,39Hz, 2H), 8,37 (s, IH); LC/MS (MH* = 387).

Příklad 3

Trimaleát l-[l-(l-methyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fěnoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-aminu (sloučenina 3)

-[l-( 1 -Methyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4í/jpyrimidin-4-amin (Meziprodukt E)

-(4-Fenoxyfenyl)-l-(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-amin (Sloučenina 2) (199 mg, 0,515 mmol), 1-methyl-4-piperidon (70 μΐ, 0,566 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (163 mg, 0,772 mmol) a ledová kyselina octová (34 mg, 0,566 mmol) se smíchají s 3 ml 1,2-dichlorethanu. Po míchání při pokojové teplotě přes noc se přidají 2 ml vody, poté pevný hydrogenuhličitan sodný, aby pH bylo asi 8. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje, suší a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií, čímž se získá 92 mg 1 - [l-( 1 -methyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl] -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/)pyrimidin4-amin.

*H NMR (DMSO) 1,47 (m, 2H), 1,72 (d, J = 11,75 Hz, 2H), 1,88 (m, 4H), 2,14 (s, 3H), 2,35 (m, 5H), 2,81 (d, J = 11,32 Hz, 2H), 3,01 (d, J = 11,26 Hz, 2H), 4,62 (m, IH), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (d, J = 8,69 Hz, 2H), 8,23 (s, IH); LC/MS (MH⁺ = 484).

Trimaleát 1 - [ 1 -(1 -methyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-čZ]pyrimidin-4-aminu

- [l-( 1 -Methyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 /7-pyrazolo [3,4J]pyrimidin-4-amin (92 mg, 0,190 mmol) se rozpustí v 25 ml horkého ethylacetátu a přidá se kyselina maleinová (66 mg, 0,571 mmol) v 5 ml horkého ethylacetátu. Po 2 hodinách při pokojové teplotě se pevné látky filtrují a suší, čímž se získá 135 mg trimaleátu 1-[1-(1methyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4aminu.

’H NMR (DMSO) 1,87 (m, 2H), 2,22 (m, 4), 2,45 (m, 2H), 2,77 (s, 3H), 2,18 (bm, 9H), 5,06 (m, 1H), 6,11 (s, 6H), 7,15 (m, 5H), 7,45 (m, 2H), 7,67 (d, J = 8,51Hz, 2H), 8,27 (s, 1H); LC/MS (MH* = 484).

Příklad 4

Trimaleát 1 - [ 1 -(1 -isopropyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (sloučenina 4)

-[ 1 -(1 -Isopropyl-4-piperidyl)-4-piperidyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 /7-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt F)

3-(4-Fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidinyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (Sloučenina 2) (221 mg, 0,572 mmol), l-isopropyl-4-piperidon (89 mg, 0,63 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (182 mg, 0,86 mmol) a ledová kyselina octová (40 μΐ, 0,63 mmol) se smíchají s 3 ml 1,2-dichlorethanu. Po míchání při pokojové teplotě přes noc se přidají 2 ml vody, poté pevný hydrogenuhličitan sodný, aby pH bylo asi 8. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje, suší a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, čímž se získá 132 mg l-[l-(l-isopropyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu. ^!H NMR (DMSO) 0,99 (d, J = 6,54 Hz, 6H), 1,42 (m, 2H), 1,72 (d, J = 11,41 Hz, 2H), 1,88 (d, J = 9,61 Hz, 2H), 2,14 (s, 3H), 2,16 (m, 6H), 2,66 (m, 2H), 2,83 (d, J = 10,98 Hz, 2H), 2,98 (d, J = 8,25 Hz, 2H), 4,62 (m, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (d, J = 8,69 Hz, 2H), 8,23 (s, 1H); LC/MS (MH* = 512)

Trimaleát 1 - [ 1 -(1 -isopropyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu • · l-[l-(l-Isopropyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt F) (132 mg, 0,258 mmol) se rozpustí v 30 ml horkého ethylacetátu a přidá se kyselina maleinová (90 mg, 0,774 mmol) v 5 ml horkého ethylacetátu. Po 2 hodinách při pokojové teplotě se pevné látky filtrují a suší, čímž se získá 205 mg trimaleátu l-[l-(l-isopropyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu. ^!H NMR (DMSO) 1,26 (d, J = 6,34 Hz, 6H), 1,90 (m, 2H), 2,23 (m, 4H), 2,50 (m, 2H), 3,53 (bm, 9H), 5,08 (m, IH), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (d, J = 8,30 Hz, 2H), 8,28 (s, IH); LC/MS (MH⁺ = 512).

Příklad 5

Trimaleát 1 - [ 1 -(1 -/erc-butoxy karbony l-4-piperidinyl)-4-piperidinyl] -3 -(4-fenoxy fenyl)l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu (sloučenina 5) l-[l-(l-7brobutoxykarbonyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt G)

3-(4-Fenoxyfeny l)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-amin (Sloučenina 2) (350 mg, 0,906 mmol), 1-férobutoxykarbonyl-4-piperidon (198mg, 0,996 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (288 mg, 1,358 mmol) a ledová kyselina octová (60 μΐ, 0,996 mmol) se smíchají s 5 ml 1,2-dichlorethanu. Po míchání při pokojové teplotě přes noc se přidají 2 ml vody, poté pevný hydrogenuhličitan sodný, aby pH bylo asiasi 8. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje, suší a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií, čímž se získá 254 mg 1 - [ 1 -(1 -fórc-butoxykarbonyl-4-piperidyl)-4-piperidyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu. ’H NMR (DMSO) 1,39 (m, 13H), 1,75 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 2,17 (m, 2H), 2,35 (m, 2H), 2,72 (m, 2H), 3,0 (m, 2H), 3,63 (m, IH), 3,98 (m, 2H), 4,63 (m, IH), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (d, J = 8,60Hz, 2H), 8,23 (s, IH); LC/MS (MH⁺ =484).

Trimaleát 1 - [ 1 -(1 -íerc-butoxykarbony 1-4-piperidiny l)-4-piperidinyl] -3 -(4-fenoxy fenyl)1//-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-aminu

- [l-( 1 - 7erc-butoxykarbonyl-4-piperidinyl)-4-piperidinyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-4-amin (254 mg, 0,446 mmol) se míchá v 25 ml 10% trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu přes noc. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se φφφ · φ φ · · · • ·······

100 rozpustí v dichlormethanu. Přidá se nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného a výsledná směs se míchá po dobu 30 minut. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormathanem. Spojená organická vrstva se promyje, suší a zahušťuje, čímž se získá 108 mg 1 - [ 1 -(4-piperidinyl)-4-piperidinyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4úQpyrimidin-4-aminu (Meziprodukt GG), který se použije bez další purifikace.

- [1 -(4-Piperidyl)-4-piperidyl] - 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 77-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-4amin (108 mg, 0,230 mmol) se rozpustí v 25 ml ethanolu a přidá se kyselina maleinová (80 mg, 0,690 mmol) v 5 ml horkého ethanolu. Po 2 hodinách při pokojové teplotě se pevné látky filtrují a suší, čímž se získá 155 mg trimaleátu l-[l-(4-piperidyl)-4-piperidyl]-3-(4fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu. 'HNMR (DMSO) 1,80 (m, 2H), 2,42 (m, 4), 2,51 (m, 2H), 2,95 (m, 3H), 3,44 (bm, 7H), 5,06 (m, IH), 6,10 (s, 6H), 7,15 (m, 5H), 7,45 (m, 2H), 7,67 (d, J = 8,51 Hz, 2H), 8,27 (s, IH); LC/MS (Mřť = 484).

Příklad 6

Dimaleát l-(/ra775-4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-aminu (sloučenina 6) l-(l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (Sloučenina 9) (Meziprodukt I)

3-(4-Fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (Sloučenina 15) (3,36 g, 11,1 mmol, l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-ol (Meziprodukt M) (5,26 g, 33,3 mmol), trifenylfosfin (5,81 g, 22,2 mmol) se suspendují v 130 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se ochladí v ledové lázni a po kapkách se přidá diethyl-azodikarboxylát (3,9 ml, 22,2 mmol). Po 10 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 2 hodinovém míchání se rozpouštědlo se odstraní a zbytek se převede do ethylacetátuu. Organická vrstva se promyje, suší a zahušťuje, surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci Biotage za použití směsi dichlormethanu a ethylacetátu (od 50:50 do 10:90) jako mobilní fáze, čímž se získá 3,829 g l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu. *H NMR (CDCI3) 1,83 (m, 2H), 1,945 (m, 2H), 2,05 (m, 2H), 2,45 (m, 2H), 3,99 (s, 4H), 4,86 (m, IH), 5,74 (bs, 2H), 7,09 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,39 (m, 2H), 7,66 (d, J = 8,70Hz, 2H), 8,37 (s, IH); LC/MS (MH⁺= 444).

• · · · · · • · · · · · ·

101

4-(4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1 -yl)-1 -cyklohexanon (Sloučenina 10) (Meziprodukt J)

-(1,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)- l/7-pyrazo]o[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (Sloučenina 9) (3,80 g, 8,57 mmol) se suspenduje v 190 ml acetonu a ochladí na teplotu 0°C. Přes nálevku se pomalu přidá 48 ml 5,ON kyseliny chlorovodíkové, ledová lázeň se odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Aceton se odstraní a vodná vrstva neutralizuje l,0N hydroxidem sodným na pH asi 10, pevné látky se filtrují a suší, čímž se získá 2,926 g 4-(4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-l-yl)-lcyklohexanonu. *H NMR (CDC1₃) 2,39 (m, 2H), 2,62 (m, 6H), 5,30 (m, ÍH), 6,08 (bs, 2H), 7,09 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,42 (m, 2H), 7,64 (d, J = 8,70Hz, 2H), 8,39 (s, ÍH); LC/MS (MH⁺ = 400).

- 7ra/í.s'-4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4 - z/] -pyrimidin-4-amin (Meziprodukt K) a l-(cA'-4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-čf|pyrimidin-4-amin (Meziprodukt 1)

4-(4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexanon (Sloučenina 10) (2,916 g, 7,30 mmol), 4-methylpiperazin (2,4 ml, 21,90 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (2,01 mg, 9,49 mmol) a ledová kyselina octová (1,3 lg, 21,90 mmol) se smíchají s 147 ml 1,2-dichlorethanu. Po míchání při pokojové teplotě po dobu 6 hodin se přidá 57 ml vody, poté 3,8 g pevného hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje, suší a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií za použití směsi dichlormethan/methanol/vodný amoniak (90/10/0,2 až 80/20/0, 5) jako mobilní fáze, čímž se získá:

(A) , 0,47 g Trazi5-l-(4-(4-methylpiperazino)cykIohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo-[3,4-J]pyrimidin-4-aminu. *H NMR (DMSO) 1,49 (m, 2H), 2,00 (m, 6H), 2,23 (s, 3H), 2,59 (m, 9H), 4,66 (m, ÍH), 7,17 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,64 (d, J - 8,69Hz, 2H), 8,23 (s, ÍH); LC/MS (MH⁺ =484).

(B) , 2,582 g l-(C/s-4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-\Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu. NMR (DMSO) 1,58 (m, 2H), 1,68 (m, 2H), 2,08 • · · · · · • · · · · · · • · ··· ···· • · · · · · · · · ·

102 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,28 (m, 11H), 4,79 (m, 1H), 7,17 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,64 (d, J = 8,69Hz, 2H), 8,23 (s, 1H); LC/MS (MH⁺ = 484).

Dimaleát 1 -(trans-4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)- 17/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-aminu

7ra«5-l-(4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-17í-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin (0,47 g, 0,972 mmol) se rozpustí v 140 ml horkého ethanolu a přidá se kyselina maleinová (0, 40 g, 2,47 mmol) v 10 ml horkého ethanolu. Po 2 hodinách při pokojové teplotě se pevné látky filtrují a suší, čímž se získá 0,62 g dimaleát 1-(/ra«.v-4-(4methylpiperazino)cyklohexyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu.

’H NMR (DMSO) 1,58 (m, 2H), 2,04 (m, 6), 2,67 (m, 3H), 2,79 (vbm, 9H), 4,70 (m, 1H),

7,41 (s, 4H), 7,17 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,66 (d, J = 8,63 Hz, 2H), 8,24 (s, 1H); LC/MS (MH⁺ = 484).

Příklad 7

Trimaleát 1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4íZ]pyrimidin-4-yl-aminu (sloučenina 7)

4- [4-Amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-1 -yl]-1 -cyklohexanon (Sloučenina 10) (Meziprodukt J) (4,45 g) v 300 ml dichlormethanu se míchá za přidávání 3,72 ml V-methylpiperazinu a 1,92 ml octové kyseliny pod atmosférou dusíku. Po 30 minutách se přidá triacetoxyborohydrid sodný (3,40 g) a směs míchá přes noc. Druhý den se přidají 2 ml A-methylpiperazinu, 1,2 ml octové kyseliny a 1,85 g triacetoxyborohydridu sodného a směs míchá přes noc. Přidají se další 2 ml A-methylpiperazinu, 1,2 ml kyseliny octové a 1,85 g triacetoxyborohydridu sodného a směs se míchá přes noc a zahušťuje za vakua. Zbytek se míchá s 250 ml vody a 100 ml 6M kyseliny chlorovodíkové a nechá stát přes noc. Směs se promyje ethylacetátem (2x), vodná vrstva se alkalizuje (přebytek vodného amoniaku), extrahuje do ethylacetátu a tento extrakt se suší a zahušťuje za vzniku 3,5 g světle hnědé gumy, která se čistí zrychlenou chromatografií mobilní fází 8:1:1 ethylacetát:ethanol:triethylamin, čímž se získá 1,2 g čistého produktu ve formě bezbarvé gumy. Reakcí ethylacetátového roztoku gumy s 0,9 g kyseliny maleinové v ethylacetátu se získá maleátová sůl ve formě amorfní pevné látky, která se spojí a promyje ethylacetátem. Sušením vzduchem, pak při teplotě 80°C/20mbar se získá 1,9 g trimaleátu l-[4-(4···· · · · · · · · • ······· · · · · · · · · ·· · ·· ·· · · ·

103 methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-4-yl-aminu ve formě 0,8 ethylacetátového solvátu. Teplota tání 169-170°C. Vypočteno pro C₄3,2H5i,4N₇Oi4,₆ C 57,5 H 5,7 N 10,9. Naměřeno C57,7 H 5,7 N 10,9.

Příklad 8

Dimaleát A7-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- 177-pyrazolo[3,4č/]pyrimidm-3-yl}-2-fluorfenyl)-4-fluor-l-benzensulfonamidu (sloučenina 8)

177-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-4-ylamin (Meziprodukt KA)

Suspenze 3-amino-4-pyrazolkarbonitrilu (26,85 g, 0,248 mol) ve formamidu (140 ml) se zahřívá při teplotě 180°C pod atmosférou dusíku po dobu 4 hodin. Precipitát vzniklý ochlazením se spojí filtrací a promyje vodou, pevné látky se suší v lyofilizátoru, čímž se získá 177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-ylamin ve formě hnědého prášku (87%, 29,25 g, 0,217 mol): *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 13,34 (br s, 1H), 8,13 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,56 (br s, 2H); TLC (dichlormethan/methanol = 9:1) Rf 0,16.

3-Jod-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-ylamin (Meziprodukt LA)

Směs 4-aminopyrazolo[3,4-í/]pyrimidinu (Meziprodukt KA) (11,75 g, 0,087 mol) a

ŤV-jodsukcinimidu (25,45 g, 0,113 mol) v dimethylformamidu (300 ml) se zahřívá při teplotě 50°C po dobu 24 hodin. Přidá se další A-jodsukcinimid (3,92 g, 0,017 mol) a v zahřívání při teplotě 50°C se pokračuje dalších 24 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a objem se sníží na 1/3 za redukovaného tlaku. Do výsledné kašovité směsi přidá se voda (500 ml) za vzniku tmavě hnědého precipitátu, který se spojí filtrací, promyje vodou a ethanolem a suší za vakua, čímž se získá 3-jod-17/-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-ylamin ve formě světle žlutého prášku (97%, 22 g, 0,084 mol): ^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 13,81 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 2,73 (s, 1H), 2,57 (s, 1H); TLC (dichlormethan/methanol = 9: 1) Rf 0,4.

l,4-Dioxaspiro[4.5]dekan-8-ol (Meziprodukt M)

Roztok monoethylenketalu 1,4-cyklohexandionu (125 g, 0,8 mol) v methanolu (21) se ochladí na teplotu 0°C, pak se v průběhu 30 minut přidává po částech borohydrid sodný (30,3 g, 0,8 mol). Reakční směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 3 hodin a rozpouštědlo se

104 odstraní za sníženého tlaku. Žlutý sirup se znovu rozpustí ve směsi dichlormethan/isopropanol (3:1, 1,5 1) a promyje 2N hydroxidem sodným (1 1), vodná vrstva se dále extrahuje směsí dichlormethanem/isopropanol (3:1) a spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší nad síranem sodným a koncentrují za sníženého tlaku, čímž se získá l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-ol ve formě bezbarvého oleje (65%, 82,4 g, 0,65 mol): *H NMR (CDC1₃ 400MHz) 3,95 (m, 4H), 3,79 (m, 1H), 1,84 (m, 4H), 1,60 (m, 4H). TLC (ethylacetát/heptan = 1: 1) Rf 0,16.

-(1,4-Dioxaspiro [4.5]dec-8-yl)-3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-ylamin (Meziprodukt N)

3-Jod-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidm-4-ylamin (Meziprodukt LA) (11 g, 0,042 mol) se suspenduje v tetrahydrofuranu (500 ml) při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do suspenze přidá se roztok 1,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-olu (Meziprodukt M) (19,98 g, 0,126 mol) v tetrahydrofuranu (50 ml) a následně trifenylfosfin (22,1 g, 0,084 mol), suspenze se ochladí na teplotu 0°C a pak se pomalu přidá diethyl-azodikarboxylát (14,67 g, 0,084 mol). Po míchání při teplotě 0°C po dobu 15 minut se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu po dobu 1 hodiny. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu (300-400 ml) a nechá stát přes noc. Vzniklý precipitát se spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší v lyofilizátoru, čímž se získá 1-(1,4dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-ylamin ve formě světle žluté pevné látky (54%, 9,12 g, 0,023 mol): ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,19 (s, 1H), 4,70 (m, 1H), 3,90 (m, 4H), 2,13 (m, 2H), 1,74 (m, 6H). TLC (dichlormethan/methanol = 9: l)R_f0,61.

7erobutyl-V-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (Meziprodukt P)

Roztok bis(trimethylsilyl)amidu sodného (l,0M roztok v tetrahydrofuranu, 270 ml, 0,27 mol) se pod atmosférou dusíku v průběhu 15 minut po kapkách přidá do roztoku 4-brom-2-fluoranilinu (24,78 g, 0,130 mol) v tetrahydrofuranu (250 ml). Po dalších 15 minutách se po částech přidá di-férc-butyl-dikarbonát (34,12 g, 0,156 mol) (pozn.: slabě exotermní reakce) a v míchání se pokračuje po dobu 4 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (300 ml) a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (150 ml), vodná vrstva se dále extrahuje ethylacetátem (2 x ···· ·· · · · · · • ··»···· · ··· · · · · • · · · · · · ·· ·

105

200 ml) a spojené organické vrstvy se suší nad síranem sodným a koncentrují za sníženého tlaku. Purifikací chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% až 15% gradientu ethylacetát/heptan se získá světle žlutá voskovitá pevná látka (Meziprodukt O) (79%, 30,0 g).’H NMR (CDC1₃, 400 MHz) δ 1,51 (9H, s), 7,22 (1H, m) a 7,24 (2H, m).

Roztok chráněného bromanilinu (Meziprodukt O) (54,0 g, 0,186 mol), bispinakolatodiboranu (56,8 g, 0,223 mol), octanu draselného (54,7 g, 0,558 mol) a [1,1’bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu (II) (4,65 g, 5,58 mmol) v dimethylformamidu (1 1) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Dimethylformamid se odstraní za sníženého tlaku a výsledný pevný zbytek (tmavý) se rozpustí v dichlormethanu (500 ml), anorganické zbytky se odstraní filtrací přes vrstvu silikagelu a filtrát se čistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití gradientu 10% až 15% ethylacetát/heptan, čímž se získá produkt ve formě žlutého viskózního oleje, který krystalizuje stáním (92%, 56,5 g)?H NMR (CDC1₃, 400 MHz) δ 1,33 (12 H, s), 1,53 (9 H, s), 6,82 (1H, br s), 7,46 (1H, d), 7,55 (1 H, br d) a 8,12 (1 H, br t).

7erc-butyl-7V-{4-[4-amino-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl]-2-fluorfenyl}karbamát (Meziprodukt Q)

Suspenze 1 -(1,4-dioxaspiro [4.5] dec-8-yl)-3 -j od-177-pyrazolo [3,4-ť7)pyrimidin-4ylaminu (Meziprodukt N) (6,5 g, 0,016 mol), /erc-butyl-N-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (Meziprodukt P) (24,3 g, 0,024 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (749 mg, 0,648 mmol) a uhličitanu sodného (4,29 g, 0,04 mol) v odplyněné vodě (50 ml) a dimethoxyethan (300 ml) se zahřívají při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, pak zředí ethylacetátem (500 ml) a solankou (500 ml). Vzniklý pevný podíl se spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší za vakua, čímž se získá řerc-butyl-V-{4-[4-amino-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yll/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenyl}karbamát ve formě hnědého pevné látky (81%, 6,38 g, 0,013 mol): *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 9,19 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,83 (t, 1H), 7,43 (m, 2H), 4,78 (m, 1H), 3,91 (m, 4H), 2,24 (m, 2H), 1,79 (m, 6H), 1,49 (s, 9H).

TLC (dichlormethan/methanol = 95:5) Rf 0,42.

4- [4-Amino-3 -(4-amino-3 -fluorfenyl)-177-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-l-yl] -1 -cyklohexanon (Meziprodukt R) • « · • · · ·

106 rerc-butyl-A-{4-[4-amino-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl-177-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenyl}karbamát (Meziprodukt Q) (6,38 g, 0,013 mol) se suspenduje v acetonu (400 ml) a ochladí na pokojovou teplotu, do této suspenze se pomalu přidá 5M kyselina chlorovodíková (96 ml). Reakční směs se pak zahřívá při teplotě 60°C po dobu 3 hodin a koncentruje za sníženého tlaku. Zbylá kyselá vrstva se upraví na pH 8 vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Vzniklý precipitát se spojí filtrací, promyje vodou a suší v lyofilizátoru, čímž se získá 4-[4-amino-3-(4-amino-3-fluorfenyl)1 //-pyrazolo[3,4-<f]pyrimidin-l-yl]-l-cyklohexanon ve formě hnědé pevné látky (91%, 4,1 g, 0,012 mol): *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,24 (s, IH), 7,20 (m, 2H), 6,89 (m, IH), 5,48 (s, IH), 5,21 (m, IH), 2,69 (m, 2H), 2,37 (m, 4H), 2,20 (m, 2H); TLC (ethylacetát/heptan) =4:1; MH⁺ 341.

Cis- a traw-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (Meziprodukty S a T)

JV-methylpiperazin (3,6 g, 0,036 mol) a octová kyselina (2,17 g, 0,036 mol) se přidají do suspenze 4-[4-amino-3-(4-amino-3-fluorťenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-lyl]-l-cyklohexanonu (Meziprodukt R) (4,1 g, 0,012 mol) v dichlorethanu (200 ml). Pak se po částech do reakční suspenze přidá triacetoxyborohydrid sodný (3,32 g, 0,016 mol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Ve dvou dávkách se v průběhu 5 dnů přidá triacetoxyborohydrid sodný (1,79 g, 0,084 mol a 1,28 g, 0,06 mol). Reakční směs se filtruje, promyje dichlorethanem (100 ml) a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá 3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin ve formě žluté pevné látky (14,5 g, 0,034 mol). Žlutá pevná látka se čistí a cis/trans izomery se separují zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (93:5:2) jako eluentu, čímž se získá trans-3-(4amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin4-amin (pomalejší složka) ve formě bílé pevné látky (115 mg, 0,27 mmol). ’H NMR (DMSO-d₆,400 MHz) 8,19 (s, IH), 7,18 (m, 2H), 6,88 (m, IH), 5,46 (s, 2H), 4,60 (m, IH), 2,35 (br m, 4H), 2,14 (s, 3H), 1,95 (br m, 6H), 1,44 (m, 2H), 1,26 (m, 4H), 0,86 (m, 2H). TLC (dichlormethan/methanol/hydroxid amonný = 95:5) Rf 0,31.

AAAA

A · ·

A · A · · « A·· • A·· ·· · ·*&· • ······« A «Α· « A A ·

AA A AA AA AA ·

107

Také se získá m-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (1,1 g, 2,59 mmol). *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,19 (s, 1H), 7,20 (m, 2H), 6,90 (m, 1H), 5,47 (s, 2H), 4,75 (m, 1H), 3,40 (m, 4H), 2,23 (m, 6H), 2,17 (m, 2H), 1,98 (s, 3H), 1,61 (m, 4H); TLC (dichlormethan/methanol/hydroxid amonný = 95:5) Rf 0,37.

Dimaleát ;V1 -(4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 /7-pyrazolo [3,47]pyrimidin-3 -yl} -2-fluorfenyl)-4-fluor-1 -benzensulfonamidu

Směs 3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt T) (107 mg, 0,252 mmol) a 4-fluorbenzensulfonylchloridu (49 mg, 0,252 mmol) v pyridinu (2,5 ml) se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 20 hodin. V průběhu 24 hodin se přidá další 4-fluorbenzensulfonylchlorid (15 mg, 0,063 mmol a 10 mg, 0,051 mmol). Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá oranžový olej (220 mg, 0,378 mmol). Surový olej se čistí preparativní RP-HPLC (Gilson Cl8) za použití gradientu octan amonný/acetonitril, čímž se získá ΛΤ-(4-{4-amino-1-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-fluorfenyl)-4-fluor-1 -benzensulfonamid (Meziprodukt U) ve formě bílé pevné látky (220 mg). Kyselina maleinová (55 mg, 0,474 mmol) a volná báze AT-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-t7]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-4-fluor-l-benzensulfonamidu (92 mg, 0,158 mmol) se rozpustí v horkém ethanolu (3 ml). Ochlazením vzniklý precipitát se spojí filtrací a suší v lyofilizátoru, čímž se získá dimaleát AT-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-4-fluor-lbenzensulfonamidu ve formě bílé pevné látky (100 mg, 0,172 mmol).’H NMR (DMSO-dó,

400 MHz) 10,42 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,86 (m, 2H), 7,41 (m, 5H), 6,16 (s, 4H), 4,67 (br m,

1H), 2,62 (br m, 6H), 2,01 (br m, 6H), 1,56 (brm, 2H); MH⁺ 583, 6.

Příklad 9 (Meziprodukt I) l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4í7]pyrimidin-4-ylamin (sloučenina 9, Meziprodukt I)

4-Fenoxyfenylboritá kyselina (Meziprodukt V) • 9 · »44444 »44

4» 4 4 · ··· ·*«· 4 4 · ·«·« • »··«··· * 4 4 · ί « · · 4

4 · 44 4 < # · ·

108

Do roztoku 4-fenoxybrombenzenu (98,2 g, 0,39 mol) v suchém THF (800 ml) pod atmosférou dusíku při teplotě -78°C se po kapkách přidá n-BuFi (2,5M roztok v hexanech) (172 ml, 0,43 mol), čímž se teplota se zvedne na -65°C. K dotažení se směs nechá míchat při teplotě -78°C po dobu 15 minut. V průběhu 30 minut se po kapkách přidá triisopropylborát (109,2 ml, 0,473 mol). Po přidání vznikne suspenze. Směs se nechá ohřát na teplotu 0°C v průběhu 1 hodiny, míchá při teplotě 0°C po dobu 4 hodin. Reakce se zastaví přidáním vody (po kapkách) (300 ml) tak, aby vnitřní teplota nepřesáhla 20°C (je třeba chlazení ledem). Směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu přes noc, pak zahušťuje do sucha. Zbytek se suspenduje ve vodě (600 ml) a okyselí opatrným přidáním koncentrované HCI. Výsledný precipitát se spojí filtrací a suší za vakua při teplotě 45°C.

Pevný podíl se rozemele nájemný prášek a trituruje petroletherem (40-60°C). Světlá pevná látka se filtruje a suší, čímž se získá 4-ťenoxyfenylboritá kyselina (68,8 g, 83%). *H NMR (250MHz, d₆-DMSO): 7,99 (1H, m), 7,91 (1H, t), 7,83 (1H, d), 7,4 (2H, m), 7,14 (1H, m), 6,92-7,07 (5H, m). Mikroanalýza: Vypočteno C (71,4%), H (5,45%). Naměřeno C (70,25%), H (4,7%).

l,4-Dioxaspiro[4.5]dekan-8-ol (Meziprodukt M) l,4-Dioxaspiro[4.5]dekan-8-on (150 g, 0,96mol) se míchá s MeOH (1200 ml) pod atmosférou dusíku do doby, dokud se nerozpustí. Směs se ochladí na teplotu -5°C v ledové lázni s acetonem a po částech se přidá NaBH4 (72,6 g, 1,82 mol) v průběhu 2 hodin. (T <

10°C). K dotažení se směs ochladí na teplotu -10°C, pak nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá přes noc při pokojové teplotě. Výsledná směs se zahušťuje a nechá reagovat s ledovým 5N NaOH (400 ml) a extrahuje CH2CI2 (2 X 500 ml), poté extrahuje směsí 4:1 dichlormethanňsopropanol (2 x 250 ml). Spojené extrakty se promyjí solankou (2 x 200 ml), suší přes noc (Na₂SO4) a zahušťují, čímž se získá bezbarvý olej, který se dále suší za vakua, čímž se získá l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-ol (141,8 g, 93% výtěžek). ^!H NMR:

CDCI3 (250 MHz) 3,91 (4H, m), 3,81 (1H, m), 1,21-1,88 (8H, m, alifatické H).

-Brom-4-chlor-1 -(1,4-dioxaspiro [4.5 ] dec - 8-y 1)-1 //-pyrazolo [3,4-í/jpyrimidin (Meziprodukt W)

Do roztoku 3-brom-4-chlorpyrazolo[3,4-</]pyrimidinu (Meziprodukt B) (7,5 g, 32 mmol), l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-olu (Meziprodukt M) (15,17 g, 96 mmol), trifenylfosfinu (16,86 g, 64 mmol) v THF (275 ml) se přidá diethyl-azodikarboxylát (11,14 ·· ···' »· ·

9· · ·

• * * » · · 9 · ί * » • ······· · · · · »·«·· • · « ···· · * · ·· · ·· ·· · ί» «

109 g, 64 mmol) v THF (50 ml) při teplotě 0°C pod atmosférou dusíku. Reakční směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 1 hodiny, ohřeje na pokojovou teplotu a míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Reakční směs se koncentruje za vakua a rozpustí v horké směsi heptan/EtOAc/DCM (5:1:5). Zrychlenou chromatografií za použití směsi heptan, heptan/EtOAc (5/1), pak heptan/EtOAc (4/1) se získá pevná látka, která se trituruje s heptanem a pevné látky se odstraní filtrací, čímž se získá 8,2 g 3-brom-4-chlor-l-(l,4dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidinu ve formě bílé pevné látky (69%) [R_f ve směsi 1:1 heptan:EtOAc = 0,5] *H NMR (400MHz, d₆-DMSO): 8,89 (1H, s), 4,92 ' (1H, m), 3,90 (4H, m), 2,16 (2H, m), 1,96 (2H, m), 1,81 (6H, m) HPLC: Tr = 17,11 minut,

96,6%

3-Brom-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-yl-amin (Meziprodukt X)

3-Brom-4-chlor-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin (Meziprodukt W) (8,2 g, 21 mmol), koncentrovaný amoniak (100 ml) a dioxan (100 ml) se zahřívají v Parrově nádobě při teplotě 120°C po dobu 20 hodin. Rozpouštědla se odtáhnou a zbytek vytřepe mezi EtOAc a vodu. Ethylacetátová vrstva se suší nad Na2SO₄, filtruje a zahušťuje, čímž se získá 3-brom-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-ylamin ve formě pevné látky (4,7 g, 61%), která se bez purifikace použije dále. ‘H NMR (400MHz, d₆-DMSO): 8,21 (1H, s), 4,71 (1H, m), 3,90 (4H, m), 2,11 (2H, m), 1,72-1,88 (6H, m) HPLC: Tr = 11,84 minut, 92,1 %

-(1,4-Dioxaspiro [4.5 ] dec - 8-y 1)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-ylamin

3-Brom-l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-yl-amin (Meziprodukt X) (4,0 g, 11,3 mmol), 4-fenoxyfenylboritá kyselina (Meziprodukt V) (2,66 g, 12 mmol), uhličitan sodný (2,87 g, 27 mmol), palladium-tetrakis(trifenylfosfin) (0,78 g,

0,6 mmol) ve směsi dimethoxyethan (120 ml)/voda (60 ml) se zahřívá při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku po dobu 4 hodin. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a nechá stát po dobu 72 hodin. Vyprecipitovaný pevný podíl se filtruje a promyje vodou a diethyletherem (100 ml pokaždé). Sušením za vakua po dobu 3 hodin se získá 4,2 g 1-(1,4dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-ylaminu ve formě béžové pevné látky (87%). *H NMR (400MHz, d₆-DMSO) 8,24 (1H, s), 7,67 (2H, ··· ·· · · · · ···· · · · «··· • ······* · · · · ···· • * · ···· ·· · • · · ·· · · »· ·

110

m), 7,45 (2H, m), 7,19 (5H, m), 4,78 (1H, m), 3,90 (4H, m), 2,25 (2H, m), 1,71-1,84 (6H, m) MS: MH⁺ = 444,2

-(1,4-Dioxaspiro [4.5 ] dec- 8 -y 1)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo [3,4-d]pyri m idin-4-ylamin Druhý způsob

4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin (Sloučenina 15) (4,9 g) v 200 ml suchého dimethylacetamidu se nechá reagovat pod atmosférou dusíku s 60% hydridem sodným (2,0 g) a míchá 30 minut. Přidá se l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl-4methyl-l-benzensulfonát (Meziprodukt Y) (15 g) a směs se zahřívá při teplotě 105°C po dobu 42 hodin. Odpařením za vakua a přidáním vody se získají pevné látky, které se spojí a pořádně promyjí vodou, pak suší na vzduchu. Pevný podíl se vaří s diethyletherem (6 x 120 ml) a filtrační roztok se zahušťuje. Promytím acetonem se získá 1-(1,4dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-ylamin ve formě bělavé pevné látky, která se spojí a promyje s acetonem, pak suší na vzduchu. Teplota tání 200-202,5°C. Vypočteno pro C25H25N5O3 C 67,7 H 5,6 N 15,8. Naměřeno C 67,6 H 5,8 N 15,4.

Příklad 10

4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-1 -yl] -1 -cyklohexanon (sloučenina 10, Meziprodukt J)

Do l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4ylaminu (Sloučenina 9) (4,2 g, 95 mmol) v acetonu (200 ml) se po kapkách přidá HCI (5N, ml). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Aceton se odpaří a alkalizuje NaOH (5N, 60 ml). Extrahuje s EtOAc (3 x 200 ml). Sušením, filtrací a odpařováním se získá pevný podíl, který se trituruje se směsí EtOAc:Et2O (1:20) a filtruje, čímž se získá 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl]-lcyklohexanon ve formě krémové pevné látky (3,4 g, 90%). Teplota tání 203-205°C. *H NMR (400MHz, d₆-DMSO) 8,28 (1H, s), 7,66 (2H, m), 7,44 (2H, m), 7,08-7,20 (5H, m),

6,1-7,3 (2H, bs), 5,26 (1H, m), 2,71 (2H, m), 2,41 (4H, m), 2,24 (2H, m) HPLC: Tr =

15,43 minut, 95% • · · ·

111

Příklad 11

7erc-butyl-4-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl1-piperazinkarboxylát (Sloučeniny 11 a 12)

Do roztoku 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-lcyklohexanonu (Sloučenina 10) (2,0 g, 5 mmol) a fórc-butoxykarbonylpiperazinu (2,8 g, 15 mmol) v dichlorethanu (200 ml) přidá se ledová kyselina octová (0,9 g, 15 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (1,59 g, 7,5 mmol). Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 20 hodin. Reakce se zastaví roztokem NaOH (2,5N, 200 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva extrahuje dichlormethanem (2 x 100 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší (Na₂SO4) a filtrují, roztok se zahušťuje, čímž se získá červený olej, který se podrobí zrychlené chromatografii na sloupci silikagelu za použití ethylacetátu až 10% MeOH/ethylacetát s 2,5% MeOH přírůstkem. Frakce odpovídající rychlejší látce (Rf ve směsi 9:1 EtOAc: MeOH = 0,27) se spojí a zahušťují, čímž se získá /erc-butyl-4-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-lyl]cyklohexyl-l-piperazinkarboxylát ve formě bílé pevné látky (1,48 g, 53%). Teplota tání 170-172°C, identifikovaná jako rá-diastereoizomer (Sloučenina 11). *H NMR (400MHz, d₆-DMSO) 8,23 (1H, s), 7,65 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,43 (2H, m), 7,12-7,20 (5H, m), 4,82 (1H, m), 3,34 (4H, m), 2,40 (4H, m), 2,30 (3H, m), 2,04 (2H, m), 1,60-1,72 (4H, m), 1,39 (9H, s), HPLC: Tr = 15,74 minut, 98,16% MS: MH⁺ = 570,1.

Frakce odpovídající pomalejší látce (Rf v 9: 1 EtOAc:MeOH = 0, 18) se spojí a zahušťují, čímž se získá terc-butyl-4-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4íf]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl-1-piperazinkarboxylát ve formě krémové pevné látky (0,5 g, 18%). Teplota tání 178-179°C, identifikovaná jako /rans-diastereoizomer, (Sloučenina 12) *H NMR (400MHz, d₆-DMSO) 8,23 (1H, s), 7,65 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,42 (2H, m), 7,117,20 (5H, m), 4,63 (1H, m), 3,34 (4H, m), 2,47 (5H, m), 1,89-2,06 (6H, m), 1,34-1,55 (11H, m) HPLC: Tr = 15,29 minut, 98, 15% MS: MH⁺ = 570,1

Příklad 12

Trimaleát cis-3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperazinocyklohexyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin4-ylaminu (sloučenina 13) ···· ·· · ···· • ······· · ··· · · · · · • · · ·· · · · · ·

112

Do m-/erc-butyl-4-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-lyl]cyklohexyl-l-piperazinkarboxylátu (sloučenina 11) (1,4 g, 2,46 mmol) v dichlormethanu (35 ml) se po kapkách při teplotě 0°C a pod atmosférou dusíku přidá TFA (6 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakce se zastaví přidáním NaOH (5N vodný roztok, 50 ml) a extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml), promyje vodou, suší (Na₂SO4), filtruje a odpařuje, čímž se získá bezbarvý olej (1,23 g), který se rozpustí v EtOAc (40 ml). Do tohoto roztoku se přidá roztok kyseliny maleinové (913 mg) v EtOAc (10 ml). Výsledná pevná látka se pod dusíkem filtruje a suší další 2 hodiny za vakua, čímž se získá 1,8 g (90%) trimaleátu cz'ó-3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperazinocyklohexyl)-lHpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-ylaminu ve formě bílé pevné látky. Teplota tání 173-175°C. *H NMR (400 MHz, d_ó-DMSO) 8,26 (IH, s), 7,67 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,42 (2H, m), 7,12-7,21 (5H, m), 6,19 (6H, s), 4,86 (IH, m), 3,18 (4H, m), 2,89 (4H, m), 2,67 (IH, m), 2,28 (2H, m), 2,05 (2H, m), 1,74-1,80 (4H, m) HPLC: Tr = 12,52 minut, 100% MS: MH⁺ = 470,3 Mikroanalýza: Vypočteno pro C39H43N7O13C: 57,3% H: 5,3% N: 12,0% Naměřeno C:

57,0% H: 5,3% N: 11,97%.

Příklad 13

7’ran5-3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperazinocyklohexyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4ylamin-trimaleát (sloučenina 14)

Do /ra«s-terc-butyl-4-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin1-yl] cyklohexyl-1-piperazinkarboxylátu (sloučenina 12) (0,5 g, 0,88 mmol) v dichlormethanu (15 ml) se po kapkách při teplotě 0°C a pod atmosférou dusíku přidá TFA (4 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 48 hodin, reakce se zastaví roztokem NaOH (5N, 25 ml) a extrahuje dichlormethanem (3 x 25 ml), promyje vodou, suší (Na₂SO4), filtruje a odpařuje, čímž se získá béžová pevná látka (0,39 g), která se rozpustí v EtOAc (20 ml). Do tohoto roztoku se přidá roztok kyseliny maleinové (290 mg) v EtOAc (5 ml). Výsledná pevná látka se filtruje pod proudem dusíku a suší další 2 hodiny za vakua, čímž se získá 0,6 g (83%) trimaleátu tra«s-3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperazinocyklohexyl)l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-ylaminu ve formě bílé pevné látky. Teplota tání 153155°C. *H NMR (400MHz, d₆-DMSO) 8,25 (IH, s), 7,65 (2H, m), 7,43 (2H, m), 7,11-7,21 (5H, m), 6,17 (6H, s), 4,69 (IH, m), 3,20 (4H, m), 2,97 (4H, m), 2,84 (IH, m), 2,04-2,09 (6H, m), 1,59 (2H, m), HPLC: Tr = 12,65 minut, 100% MS: MH⁺ = 470,1 Mikroanalýza:

• · • · · · · · · • · · ♦ ·· · · • ······· · · · · • · · ···· · ·· · ·· ·· ·«

113

Vypočteno pro C39H43N7O13 C: 57,3% H: 5,3% N: 12,0% Naměřeno C: 57,1% H: 5,4% N: 12,10%

Příklad 14

4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)- l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin (sloučenina 15)

1.4- Dioxaspiro[4.5]dekanol-8-ol (Meziprodukt M) l,4-Dioxaspiro[4.5]dekan-8-on (150 g, 0,96 mol) se míchá s MeOH ( 1200 ml) pod atmosférou dusíku do doby, dokud se nerozpustí. Reakční směs se ochladí na teplotu -5°C v ledové lázni s acetonem a po částech se v průběhu 2 hodin přidá NaBH₄ (72,6g, 1,82 mol), (T < 10°C). K dotažení se směs ochladí na teplotu -10°C a pak nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá přes noc při pokojové teplotě. Výsledná směs se zahušťuje a nechá reagovat s ledovým roztokem 5N NaOH (400 ml) a extrahuje CH2CI2 (2 X 500 ml), poté směsí 4:1 dichlormethan:isopropanol (2 x 250 ml). Spojené extrakty se promyjí solankou (2 x 200 ml), suší přes noc (Na2SO₄) a zahušťují, čímž se získá bezbarvý olej, který se dále suší za vakua (k odstranění zbytkového isopropanolu), čímž se získá 1,4dioxaspiro[4.5]dekan-8-ol 141,8 g, 93% výtěžek.’H NMR: CDCI3 (250 MHz): 3,91 (4H, m), 3,81 (1H, m), 1,21-1,88 (8H, m, alifatické H).

1.4- Dioxaspiro [4.5 ] dec- 8 -yl-4-methyl-1 -benzensulfonát (Meziprodukt Y)

Do míchaného roztoku l,4-dioxaspiro[4.5]dekan-8-olu (Meziprodukt M) (99,8 g, 0,63 mol) v pyridinu (450 ml) při teplotě 0°C a pod atmosférou dusíku se po částech přidá tosylchlorid (132,4 g, 0,69 mol) tak, aby teplota nepřesáhla 2°C. K dotažení reakce se směs nechá pomalu ohřát na pokojovou teplotu a míchá při pokojové teplotě přes noc, přidá se voda (750 ml) a provede se extrakce EtOAc (500 ml pak 2 x 250 ml). Spojené extrakty se promyjí 3N HCI (3 x 300 ml), solankou (300 ml) a suší nad Na2SO₄, filtrují a zahušťují, čímž se získá světle žlutý olej (200 g surového produktu). Tento olej se míchá s petroletherem (40-60°) (200 ml) a provede se krystalizace. l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl-4methyl-1-benzensulfonát se filtruje, promyje petroletherem (40-60°) (200 ml) a suší za vakua. Výtěžek = 181,0 g, 92%.

l,l-Dikyano-2-hydroxy-2-(4-fenoxyfenyl)ethen (Meziprodukt Z)

114

4-Fenoxybenzoová kyselina (48 g) se přidá do 100 ml thionylchloridu a zahřívá pod jemným refluxem po dobu 1 hodiny. Thionylchlorid se odstraní destilací, zbylý olej se rozpustí v toluenu a těkavý podíl se odstraní při 80°C/20mbar. Výsledný chlorid kyseliny se rozpustí v 200 ml toluenu a 35 ml tetrahydrofuranu. Přidá se 14,8 g malononitrilu a roztok se míchá při teplotě -10°C za přidávání 57,9 g diisopropylethylethylaminu v 150 ml toluenu, přičemž teplota nepřesáhne 0°C. Po 1 hodině při teplotě 0°C se směs dále míchá při teplotě 20°C přes noc. Amin-hydrochlorid se odstraní filtrací a filtrát zahušťuje za vakua. Zbytek vytřepává v ethylacetátu a promyje 1,25 M kyselinou sírovou, pak solankou a suší nad síranem sodným. Odpařením se získá a polopevný zbytek, který se míchá s malým množstvím ethylacetátu, čímž se získá 4,1 g čistého produktu ve formě bílé pevné látky. Teplota tání 160-162°C. Odpařením filtrátu se získá 56,5 g (96%) of l,l-dikyano-2hydroxy-2-(4-fenoxyfenyl)ethenu ve formě šedo-hnědé pevné látky dostatečně čisté pro další použití. ‘Η NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,18 (široké s, ÍH), 7,62 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, ÍH), 7,07 (d, 2H), 6,94 (d, 2H).

1.1- Dikyano-2-methoxy-2-(4-fenoxyfenyl)ethen (Meziprodukt AA)

1.1- Dikyano-2-hydroxy-2-(4-fenoxyfenyl)ethen (Meziprodukt Z) (56,5 g) v 780 ml acetonitrilu a 85 ml methanolu se míchá pod atmosférou dusíku při teplotě 0°C za přidávání 52,5 ml-diisopropylethylaminu, pak 150 ml 2M-trimethylsilyldiazomethanu v THF. Po 2 denním míchání při teplotě 20°C se kvůli chromatografii přidají 2 g silikagelu, čímž by mělo přestat uvolňování dusíku. Hnědo-červený roztok se zahušťuje za vakua. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu a promyje pořádně vodou, pak solankou, suší a zahušťuje. Zbytek se extrahuje diethyletherem (3x250 ml), dekantuje od nerozpustného oleje. Odpařením etherových extraktů se získá 22,5 g l,l-dikyano-2-methoxy-2-(4fenoxyfenyl)ethenu ve formě světle-oranžové pevné látky, která je podle TLC téměř čistá (3:2 ethylacetát:cyklohexan). Nerozpustný olej se čistí zrychlenou chromatografií, čímž se získá 15,0 g červeno-oranžového oleje. Spojený výtěžek (63%) ^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 7,71 (d, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,29 (m, ÍH), 7,16 (m, 4H), 3,93 (s, 3H).

3-Amino-4-kyano-5-(4-fenoxyfenyl)pyrazol (Meziprodukt AB)

1.1- Dikyano-2-methoxy-2-(4-fenoxyfenyl)ethen (Meziprodukt AA) (22,5 g) a

1.1- dikyano-2-methoxy-2-(4-fenoxyfenyl)ethenový olej (15 g) se nechá reagovat s roztokem 18 ml hydrazin-hydrátu v 25 ml ethanolu a zahřívá na parní lázni po dobu 1

115 hodiny, přidá se 15 ml ethanolu, poté 10 ml vody. Vyprecipitovaný pevný podíl spojí a promyje směsí 4:1 ethanokvoda, pak suší na vzduchu, čímž se získá 3-amino-4-kyano-5(4-fenoxyfenyl)pyrazol ve formě světle oranžové pevné látky 30,0 g (80%). Teplota tání 187-188,5^OC?H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 12,11 (široké s, 1H), 7,80 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 1H), 7,09 (m, 4H), 6,47 (široké s, 2H). Vypočteno pro C16H12N4O C 69,6 H 4,3 N 20,3. Naměřeno C 69,5 H 4,4 N 20,2.

4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin

3- Amino-4-kyano-5-(4-fenoxyfenyl)pyrazol (Meziprodukt AB) (29,5 g) se suspenduje v 300 ml formamidu a zahřívá pod atmosférou dusíku při teplotě 180°C po dobu 4 hodin, ochladí na teplotu 30°C, přidá se 300 ml vody a pevný podíl se spojí, promyje pořádně vodou, pak methanolem a suší na vzduchu, čímž se získá 24,6 g čistého produktu (80%) 4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin. Teplota tání 267-269°C ve formě světlé hnědo-šedé pevné látky. Vypočteno pro C17H13N5O C 67,3 H 4,3 N 23,1. Naměřeno C 67,0 H 4,4 N 23,1.

Příklad 15

4-Amino-l-cyklopentyl-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin (sloučenina 16)

4- Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin (Sloučenina 15) (0,91 g) v 50 ml suchého dimethylacetamidu se míchá pod atmosférou dusíku při teplotě 25°C za přidávání 60% hydridu sodného (0,20 g). Po 30 minutovém míchání se přidá bromcyklopentan (0,8 ml) a směs se míchá přes noc. Po odpařování za vakua se zbytek nechá reagovat s vodou a extrahuje do ethylacetátu. Zrychlenou chromatografií (3:2 cyklohexan: ethylacetát) se získá 0,36 g l-cyklopentyl-4-(cyklopentylamino)-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidinu ve formě bezbarvého oleje. 'H NMR (DMSO) 8,319 (s, 1H), 7,65-7,69 (m, 2H), 7,40-7,48 (m, 2H), 7,09-7,23 (m, 5H), 5,926/5,955 (d, 1H), 5,17-5,29 (kvintet, 1H), 4,44-4,52 (m, 1H), 1,86-2,12 (m, 8H), 1,39-1,72 (m, 8H). Další elucí ethylacetátem se získá 4-amino-l-cyklopentyl-3-(4-fenoxyfenyl-l//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin. Rekrystalizací z methyl(/erc-butyl)etheru se získají bezbarvé jehličky. Teplota tání 134,7-135,6°C (0,2 g, 18%). Vypočteno pro C22H21N5O C 71,2 H 5,7 N 18,9. Naměřeno C 71,05 H 5,7 N 18,8. *H NMR (DMSO) 8,237 (s, 1H), 7,64-7,68 (m,

116

2H), 7,40-7,47 (m, 2H), 7,107,22 (m, 5H), 6,85 (velmi široké s, 2H), 5,17-5,30 (kvintet, IH), 1,67-2,09 (m, 8H),

Příklad 16

3-(4-Fenoxyfenyl)-l-(tetrahydropyran-4-yl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-ylamin (sloučenina 17)

3-(4-Fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-ylamin (Sloučenina 15) (0,97 g) v 33 ml suchého dimethylacetamidu se míchá pod atmosférou dusíku za přidávání 60% hydridu sodného (0,22 g). Po 30 minutách se přidá tetrahydropyran-4-yl-tosylát (1,0 g) a směs zahřívá při teplotě 105°C po dobu 4 hodin, pak při teplotě 135°C po dobu 3,5 hodiny. Odpařováním za vakua a přidáním vody se získá světle hnědý pevný podíl, který se spojí, promyje pořádně vodou a suší na vzduchu. Zrychlenou chromatografií ve směsi 19:1 ethylacetát:triethylamin jako mobilní fází se získá 0,22 g (18%) 3-(4-fenoxyfenyl)-1(tetrahydropyran-4-yl)-l//-pyrazolo[3,4-tZ]pyrimidin-4-ylamin. Teplota tání 187-187,5°C. Vypočteno pro C22H21N5O2 C 68,2 H 5,4 N 18,1 Naměřeno C 68,1 H 5,5 N18,0.

Příklad 17

Cz'.s-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 yl}fenyl) (fenyl)methanon-dimaleát (sloučenina 18) a dimaleát Zraz?.s-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazinojcyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} fenyl) (fenyl)methanonu (sloučenina 19)

Fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanon (Meziprodukt AL)

Směs 4-brombenzofenonu (2,97 g, 0,011 mol), diboronpinakolesteru (3,47 g, 0,014 mol), [l,l'-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladia (v komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,28 g, 0,00034 mol) a octanu draselného (3,34 g, 0,034 mol) v W-dimethylformamidu (65 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichiormethan (50 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (5:95) jako mobilní fáze, čímž se získá fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl• · · · · · · · · ···· ·· · ···· • ······· · · · · · · · · ·· · · · ·· · · ·

117 l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanon (2,01 g, 0,0065 mol): *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 7,85 (d, 2H), 7,71 (m, 5H), 7,56 (d, 2H), 1,32 (s, 12H); TLC (ethylacetát/heptan 1: 9)R_f0,36.

4-(4-Amino-3-jod-17/-pyrazolo[3,4-čf]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexanon (Meziprodukt AK) l-(l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-yl-amin (Meziprodukt N) (13,12 g, 32,7 mmol) se suspenduje v acetonu (240 ml) a směs se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá vodná 5 N HCI (200 ml). Teplota se udržuje během přidávání pod 4°C. Po přidání se směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 18 hodin, zbývající pevný podíl se odstraní filtrací a filtrát neutralizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, precipitát se spojí filtrací a promyje vodou a suší za vakua, čímž se získá 4-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexanon (8,20 g, 32,8 mmol): *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,23 (s, 1H), 5,18 (m, 1H), 2,64-2,73 (m, 2H), 2,262,37 (m, 4H), 2,17-2,30 (m, 2H).

Cis- a trans-3-) od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 H-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4amin (Meziprodukty AC a AD)

Směs 4-(4-amino-3 -j od-177-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-1 -yl)-1 -cyklo-hexanonu (Meziprodukt AK) (1,32 g, 0,0037 mol), A-methylpiperazinu (1,11 g, 0,011 mol) a octové kyseliny (0,66 g, 0,011 mol) v 1,2-dichlorethanu (50 ml) se míchá po dobu 10 minut při teplotě 40°C a najednou se přidá triacetoxyborohydrid sodný (1,09 g, 0,0052 mol). Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 24 hodin a přidá se triacetoxyborohydrid sodný (0,25 g, 0,0012 mol). Směs se míchá dalších 48 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (80 ml) a chloroform (50 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje chloroformem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý olej. Sloučenina se dále purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/triethylamin/methanol (88:11:1) jako mobilní fáze, čímž se získá cz.s'-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,93 g, 0,0021 mol): *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,18 (s, 1H), 4,71 (m, 1H), 2,38-1,9 (m, 13H), 2,17 (s, 3 H), 1,631,5 (m, 4H); TLC (dichlormethan/triethylamin = 9:1) Rf 0,24 a trans’-3-jod-l-[4-(4··· ·· · ··· • · · · ·· · · · · · • ······· · ··· · · · · ·· · · · · · ·· ·

118 methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,38 g, 0,00086 mol): *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,18 (s, IH), 4,55 (m, IH), 2,38-1,9 (m, 15H), 2,15 (s, 3H), 1,42 (m, 2H); TLC (dichlormethan/triethylamin = 9:1) R_f0,11.

Dimaleát cw-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} fenyl) (fenyl)methanonu

Směs fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanonu (Meziprodukt AL) (0,241 g, 0,00078 mol), cz.s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt AC) (0,30 g, 0,00068 mol), tetrakis(trifenyl-fosfin)palladia (0,047 g, 0,000041 mol) a uhličitanu sodného (0,18 g, 0,0017 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (10 ml) a vody (5 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a ethylacetát. Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylacetátem (2x). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/triethylamin/methanol (95:4:1) jako mobilní fáze, čímž se získá cz'5-{4-[4-amino-l-(4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl-j-fenyl}(fenyl)methanon ve formě bílé pevné látky (0,195 g, 0,0004 mol), která se rozpustí v refluxujícím ethanolu (17 ml) a přidá se předem zahřátý roztok kyseliny maleinové (0,137 g, 0,0018 mol). Směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojený filtrací se promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá cz'5-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl} fenyl) (fenyl)methanon-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,221 g, 0,0003 mol): 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,28 (s, IH), 7,90 (d, 2H), 7,83 (m, 4H), 7,73 (t, IH), 7,61 (m, 2H), 6,15 (s, 4H), 4,88 (m, IH), 3,1 (br, 9H), 2,71 (s, 3H), 2,28 (m, 2H),

2,07 (m, 2H), 1,74 (m, 4H); RP HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,63 minut. MS: MH⁺

496.

* · · · · · · ···· · · · · • ······· · · · · · · · · •· · ·· ·· ·· ·

119

Dimaleát rra«ó'-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3 -yl} fenyl) (fenyl)methanonu

Podobným způsobem jako pro Zrazw-izomer se připraví trans-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}fenyl) (fenyl)methanondimaleát ve formě bílé pevné látky (0,155 g, 0,0002 mol): ^!H NMR (DMSO-dg, 400 MHz)

8,27 (s, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,83 (m, 4H), 7,73 (t, 1H), 7,61 (m, 2H), 6,17 (s, 4H), 4,77 (m,

1H), 3,1 (br, 9H), 2,68 (s, 3H), 2,05 (br, 6H), 1,61 (br, 2H)

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 25 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,59 minut. MS: MH⁺ 496.

Příklad 18

Cis-3 -(4-anilinofenyl)-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-4-amin-trimaleát (sloučenina 20)

A-fenyl-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (Meziprodukt AE)

Směs A,A-(4-bromfenyl)-fenylaminu (0,60 g, 0,0024 mol), diboron-pinakolesteru (0,74 g, 0,0029 mol), [l,l’-bis(difenylfosfmo)ferrocen]dichlorpalladnatého (v komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,059 g, 0,000073 mol) a octanu draselného (0,71 g, 0,0073 mol) v A A-dimethylťormamidu (25 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (50 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (2:98) jako mobilní fáze, čímž se získá A-fenyl-A-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,33 g, 0,0011 mol): *H NMR (DMSOdé, 400 MHz) 8,42 (s, 1H), 7,51 (d, 2H), 7,27 (m, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,01 (d, 2H), 6,83 (t,

1H), 1,27 (s, 12H); TLC (ethylacetát/heptan 1:9) Rf 0,54.

C/.s-3-(4-anilinofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin-trimaleát

Směs A-fenyl-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (Meziprodukt AE) (0,33 g, 0,0011 mol), cA-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 A-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt AC) (0,43 g, 0,00097 mol), ···· ·· · · · · · • ······· · · · · ···· • · · ·· «· ·· ·

120 tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,0067 g, 0,000058 mol) a uhličitanu sodného (0,26 g, 0,0024 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (16 ml) a vody (8 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylacetátem (2x). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým a zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/triethylamin/methanol (92:7:1) jako mobilní fáze, čímž se získá 3 -(4-anilinofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl] -1 /7-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,400 g, 0,00074 mol), která se rozpustí při refluxu v ethanolu (17 ml) a přidá se předem ohřátý roztok kyseliny maleinové (0,342 g,

0,003 mol) v ethanolu (8 ml). Směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá cw-3-(4anilinofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amintrimaleát (0,44 g, 0,00053 mol). *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,45 (s, 1H), 8,23 (s, 1H)

7,52 (d, 2H), 7,28 (m, 2H), 7,20 (m, 4H), 6,89 (t, 1H), 6,19 (s, 6H), 4,83 (m, 1H), 3,1 (br,

9H), 2,72 (s, 3H), 2,28 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 1,74 (m, 4H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,12 minut, MH⁺ 483.

Příklad 19

Cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 -(6-fenoxy-3 -pyridyl)-1 /7-pyrazolo [3,4íf]pyrimidin-4-amin-dimaleát (sloučenina 21) a maleát trans-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-3 -(6-fenoxy-3 -pyridyl)-1 /7-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4aminu (sloučenina 22)

5-Brom-2-fenoxypyridin (Meziprodukt AF)

Roztok fenolu (1,99 g, 0,021 mol) v AA-dimethylformamidu (60 ml) se ochladí na teplotu 0°C a najednou přidá se 60% suspenze hydridu sodného v parafinu (0,89 g, 0,022 mol). Směs se míchá při této teplotě po dobu 10 minut a najednou přidá se 2,4-dibrompyridin. Směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu za míchání pod atmosférou dusíku během 72 hodin a zahřívá při teplotě 70°C po dobu 24 hodin. Rozpouštědlo se • · ·

4·· · Γ * ·»· ··»· · · · »··· • ·····«· · ··· ···«

9 · · · 9 9 9 9 9

121 odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu (150 ml) a promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), solankou (80 ml), suší síranem hořečnatým a zahušťuje. Zbytek se čistí preparativní RP-LC/MS (GilsonMicromass 08, 5 pm, 130A, 21 cm, 0%-100% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 9 minut, 25 ml/min), čímž se získá 2-brom-5-fenoxypyridin ve formě žlutého oleje (1,40 g, 0,0056 mol) ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,28 (s, 1H), 8,07 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,25 (t, 1H), 7,16 (d, 2H), 7,04 (d, 1H); MS: MH⁺ 250

2-Fenoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin (Meziprodukt AG)

Směs 5-brom-2-fenoxypyridinu (1,40 g, 0,0056 mol), diboron-pinakolesteru (Meziprodukt AF) (1,71 g, 0,0067 mol), [1,1’bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladinatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,137 g, 0,00017 mol) a octanu draselného (1,65 g, 0,0168 mol) v A A-dimethylformamidu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (40 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/«-heptan (1:9) jako mobilní fáze, čímž se získá 2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridin ve formě bílé pevné látky (čistota: 93% (HPLC), 1,20 g, 0,004 mol): ^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,36 (s, 1H), 8,03 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,25 (t, 1H), 7,16 (d, 2H),

7,01 (d, 1H), 1,30 (s, 12H); MS: MH⁺ 298

-(1,4-Dioxaspiro [4.5 ]dec-8-yl)-3 -(6-fenoxy-3 -pyridyl)-1 //-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-4amin (Meziprodukt AH)

Směs 2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridinu (Meziprodukt AG) (1,1 g, 0,0037mol), l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jod-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt N) (1,29 g, 0,0032 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,22 g, 0,00019 mol) a uhličitanu sodného (0,85 g, 0,008 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (40 ml) a vody (20 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a dimethylether ethylenglykolu se odstraní za sníženého tlaku, precipitát se spojí filtrací, promyje jednou vodou, acetonitrilem (2x) a diethyletherem (2x), čímž se získá l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8» »»»· · *

122 yl)-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin ve formě bělavé pevné látky (1,03 g, 0,0023mol) :^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,36 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,03 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,22 (m, 3H), 7,16 (d, 1H), 4,81 (m, 1H), 3,93 (s, 4H), 2,24 (m, 2H), 1,88 (m, 6H); MS: MH⁺ 445

4-[4-Amino-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/|pyrimidin-l-yl]-l-cyklohexanon (Meziprodukt AI) l-(l,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt AH) (1,00 g, 0,0022 mol) se trituruje v acetonu (20 ml) a po kapkách se přidá 5N roztok kyseliny chlorovodíkové. Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin a neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, precipitát se spojí filtrací, promyje vodou (2x) a suší, čímž se získá 4-[4-amino-3-(6fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-cyklo-hexanon ve formě bělavé pevné látky (čistota: 94% (HPLC), 0,90 g, 0,0022 mol)): *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,36 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,07 (d, 1H), 7,45 (t, 2H), 7,22 (m, 3H), 7,16 (d, 1H), 5,27 (m, 1H), 2,74 (m, 2H), 2,35 (m, 6H);

RP-HPLC (Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,29 minut.

Dimaleát cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3 -(6-fenoxy-3 -pyridy 1) -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu a maleát /ra«,s-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

Směs 4-[4-amino-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-lcyklo-hexanon (Meziprodukt AI) (0,90 g, 0,0022 mol), A-methylpiperazinu (0,676 g, 0,0067 mol) a octové kyseliny (0,405 g, 0,0067 mol) v 1,2-dichlorethanu (40 ml) se míchá po dobu 10 minut a najednou se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,62 g, 0,0029 mol). Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 24 hodin a triacetoxyborohydrid sodný (0,30 g, 0,0014 mol) se přidá. Směs se míchá dalších 48 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (80 ml) a dichlormethan (50 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje dichlormethanem (2x) (50 ml). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý olej. Sloučenina se dále purifikuje zrychlenou chromatografií na • · • · · ·

123 sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/triethylamin/methanol (89:10:1) jako mobilní fáze, čímž se získá m-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3pyridyl)-l //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt AJ): TLC (dichlormethan/triethylamin = 9:1) Rf 0,29 a trans-l-[4-(4-methy lpiperazinojcyklohexy 1]3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin: TLC (dichlormethan/triethylamin = 9:1) Rf 0,14.

Roztok m-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy-3-pyridyl)-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt AJ) (0,53 g, 0,0011 mol) ve směsi ethylacetátu (25 ml) a ethanolu (4 ml) se zahřívá k refluxu. Pak se přidá předem ohřátý roztok kyseliny maleinové (0,51 g, 0,0044 mol) v ethylacetátu (15 ml) se přidá. Směs se refluxuje dalších 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá cz'.s-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(6-fenoxy3-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-</lpyrimidin-4-amin-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,61 g, 0,00084 mol): *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,38 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,46 (t, 2H), 7,22 (m, 4H), 6,15 (s, 4H), 4,85 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,70 (s, 3H), 2,25 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,74 (m, 4H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,93 minut. MS: MH⁺ 485.

Podobným způsobem jako pro /ranv-izomer se připraví maleát trans-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-3 -(6-fenoxy-3 -pyridyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4aminu ve formě bílé pevné látky (0,049 g, 0,00008 mol): ^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,35 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,46 (t, 2H), 7,22 (m, 4H), 6,21 (s, 4H), 4,70 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,69 (s, 3H), 2,05 (br, 6H), 1,61 (br, 2H):

RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100Á, 25 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,40 minut. MS: MH⁺ 485.

Příklad 20

Dimaleát Zrans-benzy 1-Λ'- {4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-z/|pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl}karbamátu (sloučenina 23) Benzyl-A-(4-brom-2-methoxyfenyl)karbamát (Meziprodukt AM) • · · ·

124

Roztok uhličitanu sodného (3,12 g, 0,0371 mol) ve vodě (35 ml) se přidá do roztoku 4-brom-2-methoxyanilinu (3,00 g, 0,0148 mol) v dioxanu (50 ml). Výsledná směs se míchá po dobu 5 minut a v průběhu 3 minut se po kapkách přidá benzyl-chloroformiát (3,8 g, 0,022 mol). Reakční směs se míchá po dobu 2 hodin, pak se dioxan odstraní za sníženého tlaku a vodná fáze se extrahuje (2x) ethylacetátem (100 ml pokaždé). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým a po filtraci koncentrují za sníženého tlaku. Výsledný zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/«-heptan (5:95) jako mobilní fáze, čímž se získá benzyl V-(4-brom-2methoxyfenyl)karbamát (3,75 g, 0,011 mol) ve formě bílé pevné látky: 'H NMR (DMSOd₆, 400 MHz) 8,72 (s, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,38 (m, 5H), 7,20 (s, 1H), 7,10 (d, 1H), 5,14 (s, 2H), 3,81 (s, 3H)

TLC (ethylacetát/heptan 1: 9) Rf 0,21

Benzyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenylkarbamát (Intemediát AN)

Směs benzyl V-(4-brom-2-methoxyfenyl)karbamátu (Meziprodukt AM) (3,0 g, 0,0089 mol), diboron-pinakolesteru (2,72 g, 0,0107 mol), [1,1’bis(difenylfosfino)ferrocen]-dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,219 g, 0,00027 mol) a octanu draselného (2,65 g, 0,027 mol) v V,V-dimethylformamidu (70 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se Čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:9) jako mobilní fáze, čímž se získá benzyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (1,6 g, 0,0042 mol) ve formě bílé pevné látky: ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,66 (s, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,38 (m, 5H), 7,25 (d, 1H), 7,17 (s, 1H), 5,15 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 1,29 (s, 12H);

TLC (ethylacetát/heptan 1: 9) Rf 0,13

Dimaleát trans-benzyi-N- {4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -\Hpyrazolo-[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl }karbamátu • · • · · ·

125

Směs benzyl-7V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (Meziprodukt AD) (1,26 g, 0,0033 mol), cw-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (1,21 g, 0,0027 mol), tetrakis-(trifenylfosfm)palladia (0,19 g, 0,00016 mol) a uhličitanu sodného (0,726 g, 0,00685 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (40 ml) a vody (20 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a ethylacetát (100 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje (2x) ethylacetátem (600 ml pokaždé). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/triethylamin/methanol (94:5:1) jako mobilní fáze, čímž se získá /rrm-benzyl N-( {4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl} karbamát (Meziprodukt AO) ve formě bílé pevné látky (1,29 g, 0,0023 mol).

Trans-benzy\-N-( {4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl}karbamát (Meziprodukt AO) (0,222 g, 0,00039 mol) se rozpustí v refluxujícím ethanolu (17 ml) a přidá se předem ohřátý roztok kyseliny maleinové (0,135 g, 0,00117 mol) v ethanolu (8 ml). Směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá dimaleát /ra«.v-benzyl-A-{4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl} karbamát ve formě bílé pevné látky (0,250 g, 0,00031 mol): *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,76 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,40 (m, 5H), 7,20 (m, 2H), 6,15 (s, 4H), 5,18 (s, 2H), 4,69 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,86 minut.

MS: MH⁺ 570.

126

Příklad 21

Trans-N- {4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl}benzamid-dimaleát (Sloučenina 24)

-(4-Amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt AP)

Do míchaného roztoku trans- benzyl-iV-(4-4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl-2-methoxyfenyl)-karbamát (Meziprodukt AO) (0,95 g, 0,00167 mol) v ethanolu (35 ml) se přidá 10% palladium na aktivním uhlí (0,33 g) a výsledná směs se hydrogenuje pod atmosférou vodíku po dobu 18 hodin, katalyzátor se odstraní filtrací přes vrstvu celitu a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,71 g, 0,00164 mol) RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 8, 81 minut.

MS: MH⁺ 437.

rra«5-A-(4-4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3-yl-2-methoxyfenyl)benzamid-dimaleát

Do míchaného roztoku3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt AP) (0,31 g, 0,00071 mol) a benzoylchlorid (0,105 g, 0,00075 mol) po kapkách přidá se v průběhu 5 minut v bezvodém dichlormethanu (10 ml) A-ethyl-AA-diisopropylamin (0,11 g, 0,00085 mol) a v míchání pod atmosférou dusíku se pokračuje další 4 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (30 ml) a vodu (25 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/triethylamin/methanol (94:5:1) jako mobilní fáze, čímž se získá truH5-A-{4{4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl } -2methoxyfenyl}benzamid ve formě bílé pevné látky (0,250 g, 0,00045 mol), která se rozpustí v refluxujícím ethanolu (17 ml). Pak se přidá předem ohřátý roztok kyseliny maleinové (0,155 g, 0,00133 mol) v ethanolu (8 ml). Směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž • · • · · · · · · · · ·· · ·* ·· ··

127 se získá trans-N- {4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyťenyl}benzamid-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,196 g, 0,000254 mol): *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 9,49 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,08 (d, 1H), 7,98 (d, 2H), 7,62 (m, 3H), 7,29 (m, 2H), 6,16 (s, 4H), 4,71 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,20 minut. MS: MH⁺ 571.

Příklad 22 yV-{4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}2-methoxyfenyl}-N ’-fenylsulfamid-dimaleát (Sloučenina 25)

-(4-Amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1//pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt AP) (0,37 g, 0,00085 mol) a triethylamin (0,086 g, 0,00085 mol) se suspendují v bezvodém acetonitrilu (15 ml) při teplotě 0°C a po kapkách se v průběhu 5 minut přidá roztok A-fenylsulfamoylchloridu (0,88 g, 0,0046 mol) v bezvodém acetonitrilu (15 ml). Směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu pod atmosférou dusíku a míchá po dobu 2,5 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin, Hypersil Cl8, 8 pm, 100Á, 25 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 % octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min) na A-{4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl }-2methoxyfenyl}-A’-fenylsulfamid (0,1 g, 0,00017 mol), který se rozpustí v refluxujícím ethylacetátu (17 ml) a přidá se předem ohřátý roztok kyseliny maleinové (0,039 g, 0,00034 mol) v ethylacetátu (8 ml). Směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá A-{4-{4amino-1- [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl } -2methoxyfenyl}-N’-fenylsulfamid-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,089 g, 0,00011 mol) *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 10,12 (s, 1H), 9,31 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,50 (d, 1H), 7,19 (m, 6H), 6,99 (m, 1H), 6,15 (s, 4H), 4,67 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,83 minut. MS: MH⁺ 592.

• · · ·

128

Příklad 23

CÁs-{4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3yl}-fenyl }(fenyl)methanon-O-methyloxim-dimaleát (Sloučenina 27)

Trans- {4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin3 -yl} -fenyl} (feny l)methanon-<9-methy loxim-dimaleát (Sloučenina 26) (4-Bromfenyl) (fenyl)methanon-O-methyloxim (Meziprodukt AQ)

Směs 4-brombenzofenonu (3,02 g, 0,0116 mol) a methoxylamin-hydrochloridu (4,83 g, 0,0578 mol) se zahřívá ve směsi ethanolu (90 ml) a pyridinu (18 ml) za refluxu po dobu 2 hodin pod atmosférou dusíku. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi vodu (150 ml) a dichlormethan (100 ml), vodná fáze se dále extrahuje (2x) dichlormethanem (80 ml pokaždé) a spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/«-heptan (2:98) jako mobilní fáze, čímž se získá (4-bromfenyl) (fenyl)methanon-O-methyloxim ve formě bezbarvého oleje (3,13 g, 0,0108 mol): ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 7,67 (d, 1H), 7,59 (d, 1H), 7,48 (m, 4H), 7,32 (m, 1H), 7,26 (m, 2H), 3,93 (s, 3H) TLC (ethylacetát/heptan l:9)R_f0,44

Fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanon-O-methyloxim (Meziprodukt AR)

Směs (4-bromfenyl) (fenyl)methanon-O-methyloximu (Meziprodukt AQ) (2,41 g, 0,0083 mol), diboron-pinakolesteru (2, 53 g, 0,010 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]-dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,203 g, 0,00025 mol) a octanu draselného (2,44 g, 0,025 mol) v N, A-dimethylformamidu (65 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (50 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (2:98) jako mobilní fáze, čímž se získá fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]methanon-č?-methyloxim (1,9 g, 0,0056 mol): ^!H NMR (DMSO-de, 400 MHz)

• · • ·

129

7,76 (d, ÍH), 7,67 (d, ÍH), 7,41 (m, 5H), 7,26 (d, 2H), 3,88 (s, 3H) 1,30 (s, 12H); TLC (ethylacetát/heptan 1: 9) Rf 0,27

Cz\-{4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-3yl} -fenyl} (feny l)methanon-č?-methyloxim-dimaleát

Směs fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-methanon-Omethyloximu (Meziprodukt AQ) (0,701 g, 0,0021 mol), cz'.v-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt AC) (0,80 g, 0,0018 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,125 g, 0,00011 mol) a uhličitanu sodného (0,48 g, 0,0045 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (40 ml) a vody (20 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a ethylacetát (100 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylacetátem (2x) (70 ml pokaždé). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/triethylamin/methanol (96:3:1) jako mobilní fáze, čímž se získá cis-{4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl}fenyl}(fenyl)methanon-O-methyloxim ve formě bílé pevné látky (0,700 g, 0,00133 mol).

Cis- {4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4 í/]pyrimidin-3-yl}-fenyl}(fenyl)methanon-O-methyloxim (0,201 g, 0,00039 mol) se rozpustí v refluxujícím ethanolu (17 ml) a přidá se předem ohřátý roztok kyseliny maleinové (0,178 g, 0,0015 mol) v ethanolu (8 ml). Směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá cis- {4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenyl}(fenyl)methanon-č?-methyloxim-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,212 g, 0,00028 mol): ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,26 (s, ÍH), 7,74 (d, ÍH), 7,66 (d, ÍH), 7,51 (m, 6H), 7,33 (d, ÍH), 6,14 (s, 4H), 4,85 (m, ÍH), 3,91 (s, 3H) 3,1 (br, 9H), 2,71 (s, 3H), 2,33 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 1,74 (m, 4H);

• · · · a a

130

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,25 minut. MS: MH⁺ 525.

Trans- {4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3 -yl} -fenyl} (fenyl)methanon- (9-methyloxim-dimaleát

Podobným způsobem jako je (c) pro /ran.s-izomer s Zrara-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminem (Meziprodukt AD) (0,317 g, 0,00072 mol) jako výchozí látkou se připraví /ran.v-{4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazinojcyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -fenyl} (fenyl)methanon(9-methyloxim-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,255 g, 0,000337 mol): *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,25 (s, IH), 7,75 (d, IH), 7,66 (d, IH), 7,51 (m, 6H), 7,33 (d, IH), 6,17 (s, 4H), 4,71 (m, IH), 3,91 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (br, 6H), 1,59 (br, 2H)

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 25 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,10 minut. MS: MH⁺ 525.

Příklad 24

7ran.s'-{4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl} fenyl} (feny l)methanon-oxim-dimaleát (Sloučenina 28) (4-Bromfenyl) (fenyl)methanon-oxim (Meziprodukt AS)

Směs 4-brombenzofenonu (10,0 g, 0,0383 mol) a hydroxylamin-hydrochloridu (13,3 g, 0,192 mol) se zahřívá ve směsi ethanolu (250 ml) a pyridinu (50 ml) za refluxu po dobu 2 hodin pod atmosférou dusíku. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi vodu (300 ml) a dichlormethan (300ml), vodná fáze se dále extrahuje dichlormethanem (2x) (180 ml pokaždé) a spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:9) jako mobilní fáze, čímž se získá (4-bromfenyl) (fenyl)methanon-oxim ve formě bílé pevné látky (9,93 g, 0,036 mol): ^JH NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 7,66 (d, IH), 7,57 (d, IH), 7,33 (m, 7H) TLC (ethylacetát/heptan 1: 5) Rf 0,38

131

Fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanon-oxim (Meziprodukt AT)

Směs (4-bromfenyl) (fenyl)methanon-oximu (1,02 g, 0,0037 mol), diboronpinakolesteru (1,13 g, 0,0044 mol), [l,l’-bis(difenylfosfmo)fenOcen]-dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,09 g, 0,00011 mol) a octanu draselného (1,09 g, 0,011 mol) v Α,Λ-dimethylformamidu (30 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (50 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:7) jako mobilní fáze, čímž se získá fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methanon-oxim (0,82 g, 0,00254 mol): ^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 11,40 (s, IH), 7,76 (d, IH), 7,66 (d, IH), 7,41 (m, 5H), 7,26 (d, 2H), 1,32 (s, 12H); TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf 0,22

Trans- {4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3 -yl} fenyl} (feny l)methanon-oxim-dimaleát

Směs fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-methanonoximu (0,357 g, 0,0011 mol), /r<m$-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyI]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt AD) (0,80 g, 0,00096 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,067 g, 0,00006 mol) a uhličitanu sodného (0,26 g, 0,0024 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (22 ml) a vody (11 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylacetátem (2x) (40 ml pokaždé). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/triethylamin/methanol (93:6:1) jako mobilní fáze, čímž se získá /ra«5-{4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl}(fenyl)methanon-oxim ve formě bílé pevné látky (0,211 g, 0,00041 mol), který se suspenduje v refluxujícím chloroformu (17 ml) a kvůli zprůhlednění reakční směsi se přidá methanol (4 ml). Přidá se předem ohřátý roztok • « • · • · · · · · ; . · · ·· · ·»· • ······· · ··· ··' • · · . · · · · · ·· · ·· ·· ··

132 kyseliny maleinové (0,096 g, 0,00082 mol) v methanolu (8 ml) a směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje v ethylacetátu a precipitát se spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá trou5'-{4-{4-amino-l-[4-(4-methyl-piperazino)cyklohexyl}-l//pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}fenyl}(fenyl)methanon-oxim-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,295 g, 0, 0004 mol): ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,26 (s, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,51 (m, 6H), 7,33 (d, 1H), 6,14 (s, 4H), 4,72 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,68 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,60 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,82 minut. MS: MH⁺ 511.

Příklad 25

Trans-1 - {4- [4-amino-3 -(4-( 1 -fenylamonio)fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -y 1] cyklohexyl}-4-methylhexahydropyrazindiium-tri[(Z)-3-karboxy-2-propenoát] (Sloučenina 29)

Podobným způsobem jako pro sloučeninu 20 vycházeje z /nms-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt AD) (0,33 g, 0,00075 mol) se získá /raz?A'-l-{4-[4-amino-3-(4-(l-fenylamonio)fenyl)-l/7pyrazolo [3,4-</]pyrim idin-1 -y l]-cyklohexyl} -4-methylhexahydropyrazindiium-tri [(Z)-3 karboxy-2-propenoát] (0,245 g, 0,00034 mol): Ή NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,43 (s, 1H), 8,22 (s, 1H) 7,51 (d, 2H), 7,28 (m, 2H), 7,20 (m, 4H), 6,89 (t, 1H), 6,17 (s, 6H), 4,67 (m, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,73 (s, 3H), 2,08 (m, 6H), 1,56 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,63 minut, MH⁺ 483.

Příklad 26

CA-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin (sloučenina 30)

5-Brom-2-fenoxypyrimidin (Meziprodukt AU)

Směs 5-brom-2-chlorpyrimidinu (5,00 g, 0,0259 mol), fenolu (3,16 g, 0,0336 mol), dibenzo-18-crown-6 (0,47 g, 0,0013 mol) a práškového hydroxidu draselného (3,51 g, • · · · • ·

133

0,0626 mol) v toluenu (75 ml) se zahřívá k refluxu po dobu 5 hodin za azeotropického odstraňování vody. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a chloroform. Vrstvy se separují a vodná fáze se extrahuje chloroformem (3x). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi n-heptan/ethylacetát (98:2) jako eluentu, čímž se získá 5-brom-2-fenoxy-pyrimidin ve formě bílé pevné látky (3,55 g, 0,0141 mol): ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,80 (s, 2H), 7,45 (t, 2H), 7,27 (t, IH), 7,22 (d 2H); TLC (nheptan/ethylacetát = 95:5) Rf 0,20

2-F enoxy-5 -(4,4,5,5 -tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyrimidin (Meziprodukt AV)

Směs 5-brom-2-fenoxy-pyrimidinu (Meziprodukt AU) (3,00 g, 0,0119 mol), diboron-pinakolesteru (3,64 g, 0,0143 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,29 g, 0,00036 mol) a octanu draselného (3,52 g, 0,0358 mol) v N,N dimethylformamidu (70 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku přes noc. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a pak se většina rozpouštědla odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá tmavý olej. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (5 ml) a přidá do heptanu (75 ml). Směs se filtruje a precipitát se míchá v heptanu (75 ml) po dobu 17 hodin. Po filtraci a sušení a suší za vakua se získá 2-fenoxy-5(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-pyrimidin ve formě šedého pevného podílu (2,95 g, 0,00989 mol): ^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,75 (s, 2H), 7,45 (t, 2H), 7,27 (t, IH), 7,20 (d, 2H), 1,31 (s, 12H)

Cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3-(2-fenoxy-5 -pyrimidinyl)-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt AW)

Směs cis-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt AC) (0,297 g, 0,000674 mol), 2-fenoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyrimidinu (Meziprodukt AV) (0,221 g, 0,000741 mol), uhličitanu sodného (0,179 g, 0,001684 mol) v 1,2-dimethoxyethanu (10 ml) a vody (20 ml) se intenzivně míchá a přidá se tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,047 g, 0,000040 mol).

134

Reakční směs se míchá 18 hodin při teplotě 80°C. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (50 ml) a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze extrahuje ethylacetátem (3 x 25 ml). Spojená organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (95:5:0,5) a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá cz.$-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l/7pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,185 g, 0,000381 mol): 'H NMR (DMSO-d₆ 400MHz) 8,79 (s, 2H), 8,24 (s, 1H), 7,48 (t, 2H), 7,28 (t, 1H), 7,27 (d, 2H), 4,81 (m, 1H), 1,55-2,56 (m, 20H); TLC (dichlormethan/methanol/hydroxid amonný = 90: 10:0,5) R_f0, 23.

Cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 -(2-fenoxy-5 -pyrimidinyl)-177-pyrazolo [3,4í7]pyrimidin-4-amin-bi s-maleát

Roztok cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 -(2-fenoxy-5 -pyrimidinyl)-1Hpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt AW) (0,193 g, 0,00040 mol) v absolutním ethanolu (15 ml) se zahřívá k refluxu. Přidá se roztok kyseliny maleinové (0,184 g, 0,00159 mol) v absolutním ethanolu (10 ml) zahřátý na teplotu 78°C a směs se zahřívá k refluxu po dobu 10 minut. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, vzniklý bílý precipitát se spojí filtrací a promyje absolutním ethanolem (2x10 ml), zbylé rozpouštědlo se odstraní za vakua, Čímž se získá l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidm-4-amin-bis-maleát ve formě bílé pevné látky (0,254 g, 0,00035 mol): ^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,81 (s, 2H), 8,26 (s, 1H), 7,49 (t, 2H), 7,28 (t, 1H), 7,26 (d, 2H), 6,14 (s, 4H), 4,87 (m, 1H), 1,60-2,85 (m, 20H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) Rt 11,12 minut. MS: MH⁺ 486.

Příklad 27

Trans-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-177-pyrazolo [3,4z7]pyrimidin-4-amin-bis-maleát (Sloučenina 31) φ φ · • · φφφφ ·· · « · φ · · ♦ • · φ · · * · • · φ · · ··»· • ΦΦΦ · · · φ φ · φ · · ·

135

Trans-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 -(2-fenoxy-5 -pyrimidinyl)-1 H-pyrazolo [3,4<7]pyrimÍdin-4-amin (Meziprodukt AX)

Směs trans-3 -j od-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 77-pyrazolo [3,4d]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt AD) (0,300 g, 0,00068 mol), 2-fenoxy-5-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyrimidinu (Meziprodukt AV) (0,304 g, 0,00102 mol), uhličitanu sodného (0,180 g, 0,00170 mol) v 1,2-dimethoxyethanu (10 ml) a vodě (20 ml) se intenzivně míchá a přidá se tetrakis(trifenylfosfm)palladium (0,047 g, 0,000040 mol). Reakční směs se míchá 18 hodin při teplotě 80°C. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (50 ml) a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (3 x 25 ml). Spojená organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (95:5:0,5). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá íran5^,-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-l//pyrazolo[3,4-óř]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,155 g, 0,00032 mol): *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,78 (s, 2H), 8,25 (s, IH), 7,48 (t, 2H), 7,28 (t, IH), 7,27 (d, 2H), 4,65 (m, IH), 1,44-2, 36 (m, 20H); TLC (dichlormethan/methanol/hydroxid amonný = 90:10:0,5) R_f0,33.

Trans-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 -(2-fenoxy-5 -pyrimidinyl)-177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-4-amin-bis-maleát (sloučenina 31)

Roztok trans-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt AX) (0,155 g, 0,00032 mol) v absolutním ethanolu (15 ml) se zahřívá k refluxu. Přidá se roztok kyseliny maleinové (0,148 g, 0,000128 mol) v absolutním ethanolu (10 ml) zahřívaný na teplotu 78°C a směs se zahřívá k refluxu po dobu 10 minut. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, vzniklý bílý precipitát se spojí filtrací a promyje absolutním ethanolem (2x10 ml), zbylé rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá trans-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(2-fenoxy-5-pyrimidinyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin4-amin-bis-maleát ve formě bílé pevné látky (0,082 g, 0,00011 mol): 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,78 (s, 2H), 8,26 (s, IH), 7,48 (t, 2H), 7,28 (t, IH), 7,26 (d, 2H), 4,70 (m, IH), 1,50-3,00 (m, 20H);

• · ·· ·

136

RP-HPLC (DeltaPak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,83 minut. MS: MH⁺ 486.

Příklad 28

Cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3 - [4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl] -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (sloučenina 32)

2-Fenoxypyrimidin (Meziprodukt AY)

Směs 5-chlorpyrimidinu (5,00 g, 0,0437 mol), fenolu (5,38 g, 57,2 mmol), dibenzo18-crown-6 (0,84g, 0,0023 mol) a práškového hydroxidu draselného (5,92 g, 0,1055 mol) v toluenu (75 ml) se zahřívá k refluxu po dobu 3 hodin za azeotropického odstraňování vody. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a chloroform. Vrstvy se separují a vodná fáze se extrahuje chloroformem (3x). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují, čímž se získá 2-fenoxypyrimidin ve formě bílého prášku (95% čistota, 4,56 g, 0,0265 mol): *H NMR (CDC1₃, 400 MHz) 8,57 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,26 (t, 1H), 7,20 (d 2H); TLC (n-heptan/ethylacetát =1:1) R_f 0,42

2-(4-Jodfenoxy)pyrimidin (Meziprodukt AZ)

Směs 2-fenoxypyrimidinu (Meziprodukt AY) (4,03 g, 0,0234 mol) a V-jodsukcinimidu (10,52 g, 0,0468 mol) v trifluoroctové kyselině (40 ml) a anhydrid kyseliny trifluoroctové (8 ml) se zahřívá k refluxu po dobu 4 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a přidá se voda (75 ml). Směs se extrahuje (3x) 50 ml. Spojené organické vrstvy se promyjí (2x) nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml), (2x) s 10% vodným roztokem thiosulfátu sodného (50 ml) a solankou (50 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a rozpouštědlo se odstraní za vakua, surový pevný podíl se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi w-heptan/ethylacetát (3:1) jako eluentu, čímž se získá 2-(4-jodfenoxy)pyrimidin ve formě světle žlutého pevného podílu (3,49 g, 0,0117 mol): 'H NMR (CDCb, 400 MHz) 8, 57 (d, 2H), 7,73 (d, 2H), 7,07 (t, 1H), 6,98 (d 2H); TLC (nheptan/ethylacetát = 1: 1) Rf 0,45

2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]pyrimidin (Meziprodukt • · · · • ·

137

BA)

Směs 2-(4-jodfenoxy)pyrimidinu (Meziprodukt AZ) (3,50 g, 0,0118 mol), diboronpinakolesteru (3,58 g, 0,0141 mol), [l,r-bis(difenylfosfmo)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,29 g, 0,00035 mol) a octanu draselného (3,46 g, 0,00346 mol) v ΛζΑ-dimethylformamidu (70 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku přes noc. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a pak se většina rozpouštědla odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá tmavý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi «-heptan/ethylacetát (2:1) jako eluentu, čímž se získá 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl1.3.2- dioxaborolan-2-yl)fenoxy]pyrimidin ve formě bílé pevné látky (2,95 g, 0,00989 mol): *H NMR (DMSO-d₆ 400MHz) 8,65 (d, 2H), 7,74 (d, 2H), 7,29 (t, 1H), 7,20 (d, 2H), 1,31 (s, 12H)

-(1,4-dioxaspiro [4.5 ] dec- 8 -yl) - 3 - [4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl] -177-pyrazolo [3,4č/]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt BB)

Směs 1 -(1,4-dioxaspiro [4.5] dec- 8 -yl) - 3 -j od-177-pyrazolo [3 ,4-č7] pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt N) (l,50g, 0,00374 mol), 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenoxy]-pyrimidinu (Meziprodukt BA) (1,23 g, 0,00412 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,26 g, 0,00022 mol) a uhličitanu sodného (0,993 g, 0,00937 mol) v 40 ml 1,2-dimethoxyethanu a 20 ml vody se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin, po kterých se přidá další l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-jod-177pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-amin (0,15 g, 0,00037 mol). Směs se míchá další hodinu, pak se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, precipitát se filtruje a promyje

1.2- dimethoxyethanem a suší za vakua, čímž se získá l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-[4-(2-pyrímidinyloxy)fenyl]-177-pyrazolo[3,4-c7]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (1,26 g, 0,00283 mol): *H NMR (DMSO-d₆ 400MHz) 8,68 (d, 2H), 8,254 (s, 1H), 7,73 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 7,31 (t, 1H), 6,30-7,20 (bs, 2H), 4,78-4,84 (m, 1H), 3,91 (s, 4H), 2,222,30 (m, 2H), 1,73-1,92 (m, 6H)

4-{4-amino-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-lyljcyklohexanon (Meziprodukt BC) • · · « · · · · · • · · · · • · · · · · • · · • · · • · · • · · · • · · ·

138

Směs l-(l,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt BB) (1,22 g, 0,00274 mol) v acetonu se ochladí na teplotu 0°C a po kapkách přidá se 5 N vodná kyselina chlorovodíková (15 ml), přičemž teplota se udržuje pod 5°C. Po přidání se směs míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin, roztok se filtruje přes celit a neutralizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vzniklý precipitát se filtruje, promyje vodou a suší za vakua přes noc, čímž se získá 4- {-4-amino-3 - [4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl] -1-pyrazolo [3,4-riJpyrimidin-l-yl} cyklohexanon ve formě bílé pevné látky (0,937 g, 0,00243 mol): ^]H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,68 (d, 2H), 8,29 (s, 1H), 7,56 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 7,31 (t, 1H), 6,30-7,20 (bs, 2H), 5,25-5,30 (m, 1H), 2,67-2,75 (m, 2H), 2,24-2,43 (m, 6H).

Cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 - [4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt BD)

Směs 4-4-amino-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-1 7/-pyrazolo[3,4-ó/Jpyrimidin-1 -yl1-cyklohexanonu (Meziprodukt BC) (0,925 g, 0,0024 mol), A-methylpiperazinu (0,721 g, 0,0072 mol) a octové kyseliny (0,432 g, 0,0072 mol) v dichlormethanu (40 ml) se intenzivně míchá a v 30 minutových intervalech se nadvakrát přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,661 g, 0,00312 mol). Reakční směs se míchá 18 hodin při pokojové teplotě, Přidá se další triacetoxyborohydrid sodný (0,300 g, 0,00142 mol) a směs se míchá další 4 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (25 ml) a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Fáze se separují a vodná fáze extrahuje dichlormethanem (3x) (25 ml). Spojená organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Cis- a řrara-izomery se separují zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/triethylamin/methanol (87:10:3). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá trans-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1] - 3 - [4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl] -1 /7-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-aminová frakce (TLC (dichlormethan/triethylamin/methanol = 90:8:2) Rf 0,45) a zbytek se rozpustí v dichlormethanu a extrahuje (2x) 1,0 M vodným roztokem uhličitanu sodného. Organická fáze se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá /ra/í.s-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,272 g, 0,00056 mol): *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,68 (d, 2H), 8,25 (s, 1H), 7,73 (d,

139

2H), 7,39 (d, 2H), 7,31 (t, IH), 6,30-6,20 (bs, 2H), 4,79-4,84 (m, IH), 2,062,75 (m, 12H), 2,24-2,43 (m, 4H).

Cis-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 -[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-1Hpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin-trismaleát

Roztok cA-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinyloxy)-fenyl]l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (Meziprodukt BD) (0,193 g, 0,0004 mol) v absolutním ethanolu (15 ml) se zahřívá k refluxu. Přidá se roztok kyseliny maleinové (0,184 g, 0,00159 mol) v absolutním ethanolu (10 ml) zahřívaný na teplotu 78°C a směs se zahřívá k refluxu po dobu 10 minut. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, vzniklý bílý precipitát se spojí filtrací a promyje absolutním ethanolem (2x10 ml), zbylé rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá cis-1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-3[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4í7]pyrimidin-4-amin-trismaleát ve formě bílé pevné látky (0,222g, 0,00027 mol): *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8 8,68 (d, 2H), 8,26 (s, IH), 7,72 (d, 2H), 7,39 (d, 2H), 7,32 (t, IH),

6.17 (s, 6H), 4,85-4,87 (m, IH), 3,85-2,85 (br, 9H), 2,71 (s, 3H), 2,23-2,43 (bs, 2H), 2,032.18 (bs, 2H), 1,712,89 (bs, 4H)

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 9,56 minut. MS: MH⁺ 486.

Trans-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 -[4-(2-pyrimidinyloxy)fenyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (Meziprodukt BE)

Podobným způsobem s /ran.s-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2pyrimidinyloxy)fenyl]-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminem (0,06 g, 0,000124 mol) jako výchozí látkou se připraví /rtzH5-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2pyrimidinyloxy)-fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-4-amin-dimaleát (Sloučenina 33) ve formě bílé pevné látky (0,06 g, 0,000084 mol). ^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,68 (d, 2H), 8,25 (s, IH), 7,71 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 7,31 (t, IH), 6,18 (s, 4 H), 4,71 (m, IH), 3,1 (br, 9 H), 2,67 (s, 3 H) 2,06 (m, 6 H) 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 9, 45 minut. MS: MH⁺ 486.

• ·

140

Příklad 29

Série 5 ml vialek uzavřených šeptem se naplní 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4piperidylmethyl)-l 77-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-ylaminem (300 mg, 0,776 mmol), triacetoxyborohydridem sodným (247 mg, 1,16 mmol) a příslušným aldehydem nebo ketonem (0,85 mmol). Postupně přidá se dichlorethan (5 ml) a ledová kyselina octová (50 μΐ, 0,87 mmol), vialky se uzavřou a třepají přes noc kruhové třepačce. Pokud podle HPLC z reakčních směsí zůstávají nezreagované výchozí látky, přidají se další podíly aldehydů nebo ketony (0,85 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (247 mg, 1,16 mmol) a ledová kyselina octová (50 ml) a výsledná směs se třepe znovu přes noc. Přidá se voda (2 ml), poté přebytek pevného hydrogenuhličitanu sodného, dokud se nepřestane uvolňovat plyn, vodná vrstva se odstraní protažením směsi přes extrakční diskovou náplň 3M Empore (Oktadecyl Cl8 SD). Surové produkty se purifikují za použití silikagelových náplní Supelco supelclean (10 g) směsí dichlormethanem/methanol (95:5) jako eluenty, čímž se získají příslušné produkty.

Podmínky analytické LC/MS:

Sloupec: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, Eluent: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min. Data z LCMS jsou detailněji uvedena níže:

Příklad 30

Cis-3 - {4-[amino(feny l)methyl] fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

a) (4-Bromfenyl) (fenyl)methanamin

Mravenčan amonný (20,1 g, 0,318 mol) se vloží do tříhrdlé baňky vybavené teplotním regulátorem , mechanickým míchadlem a chladičem a směs se zahřívá při teplotě 150°C. Najednou přidá se 4-brombenzofenon (7,2 g, 0,0276 mol), teplota se zvýší na 165°C a směs se míchá za refluxu po dobu 24 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu, trituruje v ethylacetátu (350 ml), nechá reagovat s aktivním uhlím a filtruje přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, suspenduje v koncentrované kyselině chlorovodíkové (120 ml) a zahřívá k refluxu po dobu 8 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací. Dále se trituruje ve vodě (120 ml), alkalizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a extrahuje ethylacetátem (2x

141

250 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku, čímž se získá (4-bromfenyl) (fenyl)methanamin (5,25 g, 0,02 mol) ve formě bílé pevné látky. 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,46 (d, 2H), 7,36 (m, 4H), 7,27 (t, 2H), 7,18 (t,lH), 5,07 (s, 1H),

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,54 minut.

b) Terc-butyl-A- [(4-bromfenyl) (fenyl)methyl]karbamát

Di-terc-butyl-dikarbonát (5,63 g, 0,0258 mol) se rozpustí v bezvodém dichlormethanu (150 ml), ochladí na teplotu 0°C a po kapkách se přidá roztok (4-bromfenyl) (fenyl)methanaminu (5,2 g, 0,0198 mol) v bezvodém dichlormethanu (30 ml). Směs se ohřeje až na pokojovou teplotu a míchá pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (120 ml), suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/u-heptan (7:93) jako mobilní fáze, čímž se získá /erc-butyl-V-[(4-bromfenyl) (fenyl)methyl]karbamát (5, 9 g, 0,0163 mol) ve formě bezbarvého oleje. ^!H NMR (DMSOdé, 400 MHz) δ 8,01 (d, 1H), 7,51 (d, 2H), 7,36 (m, 7H), 5,81 (d, 1H), 1,39 (s, 9H). TLC (ethylacetát/heptan 1: 9) Rf 0,24

c) 7erc-butyl-/V-{fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methyl}karbamát

Směs /erc-butyl-N- [(4-bromfenyl) (fenyl)methyl]karbamátu (4,5 g, 0,0123 mol), diboron-pinakolesteru (3,79 g, 0,0149 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,305 g, 0,000373 mol) a octanu draselného (3,66 g, 0,0373 mol) v A/V-dimethylformamidu (80 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (80 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/«-heptan (1:9) jako mobilní fáze. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá řerc-butyl-V-{fenyl[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]methyl}karbamát (3,0 g, 0,00733 « · · · • · · · · ····· · · · • · ·

142 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,01 (d, 1H), 7,61 (d, 2H), 7,33 (d, 2H), 7,28 (m, 5H), 5,81 (d, 1H), 1,39 (s, 9H), 1,27 (s, 12H). TLC (ethylacetát/heptan 1: 5) Rf 0,34

d) Cw-fórc-butyl-A-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í7]pyrimidin-3-yl} fenyl) (fenyl)methyl]karbamát

Směs fórc-butyl-A-{fenyl-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl] methyl }karbamátu (3,0 g, 0,00733 mol), ďz.v-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-ammu (2,4 g, 0,0054 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,381 g, 0,00033 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (1,69 g, 0,0136 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (80 ml) a vody (40 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (200 ml) a ethylacetát (200 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylacetátem (2x) (100 ml pokaždé). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/triethylamin/methanol (96:3:1) jako mobilní fáze, čímž se získá cw-řerc-butyl-A-[(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} fenyl) (fenyl)methyljkarbamát (2,24 g, 0,00375 mol) ve formě bílé pevné látky. ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 8,01 (d, 1H), 7,60 (d, 2H), 7,49 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,23 (t, 1H), 5,91 (d, 4H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,42 (m, 4H), 1,40 (s, 9H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,45 minut.

e) Cis-3 - {4- [amino(fenyl)methyl] fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

Cis-terc-butyl-N- [(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidm-3-yl}fenyl) (fenyl)methyl]karbamát (2,05 g, 0,00344 mol) se trituruje v bezvodém dichlormethanu (50 ml) a reakční směs se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá trifluoroctová kyselina (10 ml) a výsledný roztok se ohřeje až na

143 pokojovou teplotu a míchá pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek suspenduje ve vodě (50 ml) a alkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a dále extrahuje dichlormethanem (3x 150 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá cz's-3-{4-[amino(fenyl)rnethyl]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (1,60 g, 0,00322 mol) ve formě bělavé pevné látky. 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,23 (s, IH), 7,57 (m, 4H), 7,45 (d, 2H), 7,31 (dd, 2H), 7,20 (t, IH), 5,17 (s, IH), 4,78 (m, IH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 9,36 minut.

f) Cis-Nl -[(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3 -yl} fenyl) (fenyl)methylj-acetamid-diacetát

Cis-3- {4- [amino(feny l)methyl] fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,05 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se anhydrid kyseliny octové (0,010 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek se purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cz.s-7Vl-[(4{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} fenyl) (fenyl)methylj-acetamid-diacetát (0,015 g, 0,000021 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,84 (d, IH), 8,23 (s, IH), 7,62 (d, 2H), 7,46 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,28 (m, IH), 6,21 (d, IH), 4,78 (m, IH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,90 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,15 minut. MS: MH⁺ 539.

Příklad 31

Cis-N\ - [(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3-yl}fenyl) (fenyl)methyljbenzamid-diacetát

144

Cis-3 - {4- [amino(fenyl)methyl]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -\Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,05 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se benzoylchlorid (0,014 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek se purifikuje preparativní HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cis-N\-[(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3 ,4-í/J pyrimidin-3-yl} fenyl) (fenyl)methyljbenzamid-diacetát (0,017 g, 0,000024 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,32 (d, IH), 8,23 (s, IH), 7,96 (d, 2H), 7,62 (d, 2H), 7,58-7,29 (b, 10H), 6,51 (d, IH), 4,78 (m, IH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,53 minut. MS: MH⁺ 601.

Příklad 32

CzOV-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl}fenyl) (fenyl)methyl]methansulfonamid

Cis-3 - {4- [amino(feny l)methyl] fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,05 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se methansulfonylchlorid (0,011 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek se purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cis-N-[(4{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-3 -yl} fenyl) (fenyl)methyl]methansulfonamid-diacetát (0,021 g, 0,00003 mol) ve formě bílé pevné látky. ’H NMR (DMSO-d_ó, 400 MHz) δ 8,39 (d, IH), 8,23 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,47 (d, 2H), 7,37 (t, 2H), 7,27 (t, IH), 5,72 (d, IH), 4,78 (m, IH), 2,70 (s, 3H), 2,52,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,81 minut. MS: MH⁺ 575.

• · • ·

145

Příklad 33

Cz.s-M-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3 -yl} fenyl) (fenyl)methyl] -1 -benzensulfonamid-acetát

Cis-3 - {4- [amino(feny l)methyl] fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,05 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se benzensulfonylchlorid (0,018 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cis-Nl[(4{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl} fenyl) (fenyl)methyl]-l-benzensulfonamid-acetát (0,045 g, 0,000065 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,89 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,57-7,27 (br, 12H), 5,66 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,70 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,78 minut. MS: MH⁺ 637.

Příklad 34

CA-/Vl-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl} fenyl) (fenyl)methyl] -3 -hydroxybutanamid-acetát

Cis-3 - {4-[amino(fenyl)methyl]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin (0,05 g, 0,0001 mol) a β-butyrolakton (0,009g, 0,0001 mol) se zahřívají v dioxanu při refluxu po dobu 3 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cz.v-Nl-[(4-{4-am i no-1-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3-yl}fenyl) (fenyl)methyl]-3-hydroxybutanamid-acetát (0,027 g, 0,000042 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-d₆,400 MHz) δ 8,78 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,62 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,27 (t, 1H), 6,21 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,67 (d, 1H), 4,02 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 15H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H), 1,07 (d, 3H);

• · · · • ·

146

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,97 a 11,13 minut. MS: MH⁺ 583.

Příklad 35

C/s'-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl} fenoxy)benzamid

a) 4-(4-Bromfenoxy)benzonitril

Směs 4-bromfenolu (4,56 g, 0,0264 mol), 4-fluorbenzonitrilu ( 0,0264 mol), 18-crown-6 (0,7 g, 0,00264 mol) a 40% fluoridu draselného na alumině (10,8 g) v bezvodém acetonitrilu (100 ml) se zahřívá k refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 12 hodin, pak se ochladí pokojovou teplotu, filtruje přes vrstvu Celitu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi diethylether (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáze se dále promyje nasyceným roztokem chloridu draselného ve vodě, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (3:97) jako mobilní fáze, čímž se získá 4-(4-bromfenoxy)benzonitril (3,7 g, 0,0135 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,85 (d, 2H), 7,64 (d, 2H), 7,13 (dd, 4H). TLC (ethylacetát/heptan 3:97) R_f 0,21

b) 4- [4-(4,4,5,5 -Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitril

Směs 4-(4-bromfenoxy)benzonitrilu (4,55 g, 0,0166 mol), diboron-pinakolesteru (5,06 g, 0,020 mol), [l,L-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1)) (0,407 g, 0,000498 mol) a octanu draselného (4,88 g, 0,0498 mol) v /V,N-dimethylformamidu (90 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (120 ml) se přidá do zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/ft-heptan (5:95) jako mobilní fáze. Spojené frakce se koncentrují za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát se spojí filtrací, čímž se získá 4-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitril (2,75 g, 0,0086 mol) ve • · • · · · ···· ·· · ···· * ······· · · · · ····· •· · · · ·· ·· ·

147 formě bílé pevné látky. 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 7,85 (d, 2H), 7,64 (d, 2H), 7,13 (dd, 4H), 1,28 (s, 12H). TLC (ethylacetát/heptan 1:5) R_f 0,63

c) CL'-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3 -yl} fenoxy)benzonitril

Směs 4-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitrilu (2,63 g, 0,00819 mol), czs-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í7]pyrimidin-4-aminu (3,01 g, 0,00683 mol), tetrakis-(trifenylfosfin)palladia (0,473 g, 0,00041 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (2,12 g, 0,0171 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (80 ml) a vody (40 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (200 ml) a ethylacetát (200 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylacetátem (2x) (100 ml pokaždé). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/triethylamin/methanol (96:3:1) jako mobilní fáze, čímž se získá cis-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj- 1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzonitril (2,45 g, 0,00483 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,87 (d, 2H), 7,71 (d, 2H), 7,30 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/inin) R_t 13,04 minut.

d) Cz'.s-4-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin3 -yl} fenoxy jbenzamid

Cz.s'-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4z/]pyrimidin-3-yl} fenoxy)benzonitril (0,200 g, 0,000394 mol) se rozpustí v dioxanu (3 ml), přidá se roztok hydroxidu sodného (0,15 g, 0,00197 mol) ve vodě (2 ml), poté se přidá 30 % roztok peroxidu vodíku ve vodě (5 kapek). Reakční směs se zahřívá k refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny, ochladí na pokojovou teplotu a neutralizuje 5% roztokem kyseliny citrónové ve vodě. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek • ·

148 purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá m-4-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)benzamid (0,120 g, 0,000223 mol) ve formě bělavé pevné látky. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,93 (m, 3H), 7,68 (d, 2H), 7,30 (s, ÍH), 7,24 (d, 2H), 7,15 (d, 2H), 4,78 (m, ÍH), 2,52,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,87 minut. MS: MH⁺ 527.

Příklad 36

Cz'.s'-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl}fenoxy)benzoová kyselina

C/.s-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4z/]pyrimidin-3-yl}fer)oxy)benzonitril (0,200 g, 0,000394 mol) se rozpustí ve směsi octové kyseliny (15 ml) a 6N roztoku kyseliny chlorovodíkové ve vodě (15 ml) a roztok se zahřívá k refluxu po dobu 12 hodin, ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se rekrystalizuje z Λζ/V-dimethylformamidu, čímž se získá cis-4(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl}fenoxy)benzoová kyselina (0,100 g, 0,00019 mol) ve formě bělavé pevné látky. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,97 (d, 2H), 7,70 (d, 2H), 7,24 (d, 2H), 7,15 (d, 2H), 4,78 (m, ÍH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,95 minut. MS: MH⁺ 528.

Příklad 37 ί/Λ-ΆΊ-|4-(4-{4-amino-1-[4-(4-methylpiperazino)cyk]ohexylJ-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)benzyl] -acetamid-acetát

a) Cis-3 - {4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

• · · • · · · • · · · · · «

149

Cri-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3-yl} fenoxy)benzonitril (0,600 g, 0,00118 mol) se rozpustí ve směsi methanolu (50 ml) a koncetrovaného roztoku hydroxidu amonného ve vodě (3 ml). Přidá se 50% směs Raneyová niklu ve vodě (2 ml) a výsledná směs se hydrogenuje za atmosférického tlaku po dobu 18 hodin. Reakční směs se filtruje přes vrstvu Celitu, koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se vyextrahuje dichlormethanem (50 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým, koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suspenduje v diethyletheru (25 ml), precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá cis-3-{4[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl} -1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 7/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin (0,45 g, 0,0088 mol). ^lH NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,39 (d, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,08 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 3,73 (s, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) Rt 9,72 minut.

b) Cis-N\ - [4-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzyl]-acetamid-acetát

Cz.s'-3-{4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,051 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se anhydrid kyseliny octové (0,010 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek se purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 1060% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cis-N\[4 - (4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 yl}fenoxy)benzyl]-acetamid-acetát (0,046 g, 0,0000749 mol) ve formě bílé pevné látky. ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,38 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,31 (d, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,08 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,33 minut. MS: MH⁺ 555.

• · • · • · · ·

* · · • · · · • · · · · ·

150

Příklad 38

Cis-N- [4-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4í7]pyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzyl]methansulfonamid-acetát

Cis-3 - {4- [4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-amin (0,051 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se methansulfonylchlorid (0,011 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cz,s-V-[4-(4{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3 yl} fenoxy)benzyl]methansulfonamid-acetát (0,011 g, 0,000017 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,57 (t, 1H), 7,40 (d, 2H), 7,13 (m, 4H), 4,78 (m, 1H), 4,17 (d, 2H), 2,89 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,97 minut. MS: MH⁺ 591.

Způsoby přípravy cis-3 - {4- [3 -(aminomethyl)fenoxy]feny 1} -1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-aminu a jeho derivátů jsou stejné jako způsoby přípravy cz.s-3-{4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu a jeho derivátů za použití příslušných výchozích látek.

Příklad 39

Cz'5-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3yl} fenoxy)benzamid-diacetát a) 3-(4-Bromfenoxy)benzonitril *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,59 (m, 5H), 7,38 (m, 1H), 7,06 (d, 2H),

TLC (ethylacetát/heptan 3:97) Rf 0,19

b) 3-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitril

151 *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,65 (m, 5H), 7,41 (m, ÍH), 7,06 (d, 2H), 1,27 (s, 12H) TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf 0,56

c) Cřs-3-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3 -y 1} fenoxy)benzonitril *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,68 (d, 2H), 7,61 (m, 3H), 7,47 (m, ÍH), 7,25 (d, 2H), 4,78 (m, ÍH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,96 minut,

d) Cás'-3-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3 -yl} fenoxy)benzamid-diacetát ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 8,02 (s, ÍH), 7,68 (m, 3H), 7,60 (s, ÍH), 7,50 (t, ÍH), 7,44 (s, ÍH), 7,27 (m, ÍH), 7,15 (d, 2H), 4,78 (m, ÍH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,99 minut.

MS: MH⁺ 527.

Příklad 40

C/,s-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl}fenoxy)benzoová kyselina *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,75 (d, ÍH), 7,68 (d, 2H), 7,56 (m, 2H), 7,39 (m, ÍH), 7,20 (d, 2H), 4,78 (m, ÍH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11, 01 minut.

MS: MH⁺ 528.

• · • « • · · · • ·

152

Příklad 41

Cz.s-M-[3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lT/-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzyl] -acetamid-acetát

a) Cis-3-{4-[3 -(aminomethyl)fenoxy]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo [3,4-í/]pyrimi din-4-amin ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,15 (m, 4H), 6,96 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 3,73 (s, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 9,32 minut.

b) C/.s-7/l-[3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-z7]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)benzyl] -acetamid-acetát *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,38 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,36 (t, 1H), 7,15 (d, 2H), 7,07 (d, 1H), 7,00 (m, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,44 minut.

MS: MH⁺ 555.

Příklad 42

Cis-Nl - [3 -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzyl]benzamid ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,07 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,86 (d, 2H), 7,63 (d, 2H), 7,48 (m, 4H), 7,10 (m, 5H), 4,78 (m, 1H), 4,49 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,58 minut.

MS:MH⁺617.

• «

153

Příklad 43

Cz'.s-Vl-[3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4t/Jpyrimidin-3 -yl} fenoxy)benzyl]methansulfonamid-acetát *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, IH), 7,64 (d, 2H), 7,58 (t, IH), 7,42 (t, IH), 7,16 (m, 3H), 7,12 (s, IH), 7,03 (d, IH), 4,78 (m, IH), 4,17 (d, 2H), 2,89 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12, 12 minut.

MS: MH⁺ 591

Příklad 44

Cz.s-benzy 1-/V- {4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo-[3,4<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl} karbamát-dimaleát

Směs benzyl-/V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljkarbamátu (2,00 g, 0,0052 mol), c/,s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (1,92 g, 0,0044 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,300 g, 0,00026 mol) a uhličitanu sodného (1,35 g, 0,0109 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (70 ml) a vody (35 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (150 ml) a ethylacetát (180 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje (2x) ethylacetátem (250 ml pokaždé). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/triethylamin/methanol (96:3:1) jako mobilní fáze, čímž se získá cz5-benzyl-V-{4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl}karbamát ve formě bílé pevné látky (1,88 g, 0,0023 mol). Cz.s-benzyl-_íV-{4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl}karbamát (0,206 g, 0,00036 mol) se rozpustí v refluxujícím ethanolu (17 ml) a přidá se předem ohřátý roztok kyseliny maleinové (0,126 g, 0,00108 mol) v ethanolu (8 ml). Směs se refluxuje po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž • · • · · ·

154 se získá cw-benzyl-A-{4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazbio)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl}-karbamát-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,224 g, 0,00028 mol): ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,76 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,40 (m, 5H), 7,20 (m, 2H), 6,15 (s, 4H), 5,18 (s, 2H), 4,85 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,1 (br, 11H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 2H), 1,57 (m, 4H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,83 minut.

MS:MH⁺571.

Příklad 45

Acetát cz.s-jV-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-?/ ’-benzylmočoviny

Cz.s'-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,082 g, 0,000188 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se benzylizokyanát (0,025 g, 0,000188 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek se purifikuje preparativní HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cis-N(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl }-2methoxyfenyl)-zV-benzylmočoviny (0,009 g, 0,0000142 mol) ve formě bílé pevné látky.

‘H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,29 (d, 1H), 8,18 (m, 2H), 7,33 (m, 5H), 7,26 (t, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,13 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,33 (d, 2H), 3,91 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta PakC 18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,35 minut.

MS: MH⁺ 570.

Obecný způsob redukční alkylace cis- nebo /razis-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</|pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy A:

Směs cis- nebo /raz7.s-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (nebo jen cis nebo trans) (1 • · · • · · · • · · · · • · · · »· · ·

155 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku. Reakce se zastaví nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.

Způsob přípravy B:

Po syntéze a purifikaci (způsob přípravy A) se zbytek vyextrahuje dichlormethanem (1 ml), nanese na sloupec Trikonex (7 cm) a eluuje dichlormethanem (5 ml). Požadovaný pás (UV-detekce) se oddělí a sloučenina se extrahuje směsí dichlormethan.methanobtriethylamin = 90:5:5 (10 ml), filtruje a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje v diethyletheru (4 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší.

Příklad 46

Acetát cis-3 -[4-(benzylamino)-3 -methoxyfenyl] -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] 177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy A ‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 8,18 (s, 1H), 7,34 (m, 4H), 7,22 (t, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,99 (d, 1H), 6,55 (d, 1H), 5,90 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,40 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,81 minut.

MS: MH⁺ 527.

Příklad 47

Diacetát cri’-3-(3-methoxy-4-[4-(trifluormethyl)benzyl]aminofenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

Způsob přípravy A • 4 ·

156 ’Η NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,18 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,59 (d, 2H), 7,06 (s, 1H), 6,99 (d, 1H), 6,49 (d, 1H), 6,14 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,50 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,50 minut.

MS: MH⁺ 595.

Příklad 48

Acetát cA-3-{4-[(177-4-imidazolylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy A *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 11,85 (br, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,06 (br, 3H), 6,77 (d, 1H), 5,30 (br, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,24 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H),

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 8, 70 minut.

MS:MH⁺517.

Příklad 49

Trans-3- [4-(benzylamino)-3 -methoxyfenyl]-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1Hpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin-dimaleát

Trans-3 - [4-(benzylamino)-3 -methoxyfenyl]-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l/7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin se připraví podle způsobu přípravy A. Trans-3-[4(benzylamino)-3 -methoxyfenyl]-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin (0,190 g, 0,00036 mol) se rozpustí v ethanolu (20 ml) a roztok se zahřívá k refluxu, najednou se přidá roztok kyseliny maleinové (0,126 g, 0,00108 mol) a v refluxu se pokračuje dalších 10 minut. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu, precipitát se spojí filtrací a suší. ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,34 (m, 4H), 7,22 (t, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,99 (d, 1H), 6,55 (d, 1H), 6,16 (d, 4H), 4,68 (m, 1H), 4,40 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);

• * · ·· ··· · « « .' w · c · · · • «»····· · ··· ►.·»·· • · · · · · · · * «· · ·· ·· ·· ·

157

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) Rf 13,89 minut.

MS: MH⁺ 527.

Příklad 50

Diacetát řraH5-3-{4-[(2,6-dimethoxybenzyl)amino]-3-methoxyfenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy A ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,25 (t, 1H), 7,09 (d, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,92 (d, 1H), 6,69 (d, 2H), 4,68 (m, 1H), 4,60 (t, 1H), 4,31 (d, 2H), 3,83 (m, 9H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,87 minut.

MS: MH⁺ 587.

Příklad 51

Diacetát trans-3 - {4- [(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino]-3 -methoxyfenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy A *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,39 (m, 2H), 7,26 (t, 1H), 7,10 (d, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,86 (d, 1H), 5,21 (t, 1H), 4,68 (m, 1H), 4,31 (d, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,23 minut.

MS: MH⁺ 579.

Meziprodukt pro redukční alkylací:

Cis- a /rans-3-(4-aminofenyl)-l -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l Hpyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-amin

a) 7erc-butyl-jV-(4-bromfenyl)karbamát • · · · • ·

158

Di-Zerc-butyl-dikarbonát (16,5 g, 0,0756 mol) se rozpustí v bezvodém dichlormethanu (150 ml), ochladí na teplotu 0°C a po kapkách se přidá roztok 4-bromanilinu (9,75 g, 0,0567 mol) v bezvodém dichlormethanu (50 ml). Směs se ohřeje až na pokojovou teplotu a míchá pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (120 ml), suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/zz-heptan (3:97) jako mobilní fáze, čímž se získá rcrc-butyl-V-[(4-bromfenyl)karbamát (7,1 g, 0,0257 mol) ve formě bezbarvého oleje.

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,49 (s, 1H), 7,42 (s, 4H) 1,47 (s, 9H).

TLC (ethylacetát/heptan 1: 5) Rf 0,74

b) 7erc-butyl-jV-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát

Směs Zerc-butyl-V-[(4-bromfenyl)karbamátu (5,95 g, 0,0219 mol), diboronpinakolesteru (6,67 g, 0,0263 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1)) (0,536 g, 0,00066 mol) a octanu draselného (6,47 g, 0,066 mol) v V.V-dimethylformamidu (120 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (100 ml) se přidá do zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/zz-heptan (7:93) jako mobilní fáze. Výsledná frakce se koncentruje. Zbytek se trituruje v zz-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá /erc-butyl-V-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (6,0 g, 0,0188 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,50 (s, 1H), 7,55 (d, 2H), 7,46 (d, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,27 (s, 12H).

TLC (ethylacetát/heptan 1: 5) Rf 0,56

c) Cřs-/ez'c-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4í7]pyrimidin-3 -yl} fenyl)karbamát

Směs fe/r-butyl-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-karbamátu (3,71 g, 0,0116 mol), cz.s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4• · · ·

159 z/]pyrimidin-4-aminu (4,46 g, 0,0101 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,700 g, 0,00061 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (3,13 g, 0,0253 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (140 ml) a vody (70 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (300 ml) a ethylacetát (300 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva dále extrahuje ethylacetátem (2x) (150 ml pokaždé). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/triethylamin/methanol (95:4:1) jako mobilní fáze, čímž se získá cz'.s-/erc-butyl-A-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1//-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-3-yl} feny ljkarbamát (4,1 g, 0,0081 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,57 (s, IH), 8,21 (s, IH), 7,63 (d, 2H), 7,52 (d, 2H), 4,78 (m, IH), 2,5-2,1 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,50 (s, 9H), 1,42 (m, 4H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,41 minut.

Cis-3 -(4-aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin4-amin

Cz'.s'-/erc-butyl-A'-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}fenyl)karbamát (4,0 g, 0,0079 mol) se trituruje v bezvodém dichlormethanu (75 ml) a reakční směs se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá trifluoroctová kyselina (10 ml) a výsledný roztok se ohřeje až na pokojovou teplotu a míchá pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek suspenduje ve vodě (70 ml) a alkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, který se extrahuje dichlormethanem (3x 150 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá cz£-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (3,0 g, 0,00739 mol) ve formě bělavé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,18 (s, IH), 7,30 (d, 2H), 6,71 (d, 2H), 5,41 (s, 2H), 4,78 (m, IH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

• · · · • · ··» ·♦ «·· ···· ·· · ·« • ······· · ··· · ·· · ···· ·· • · · ·· ·· ··

160

RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300Á, 15 μπι; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 8,64 minut.

Trans-3 -(4-aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4á(]pyrimidin-4-amin se připraví způsobem, který je podobný přípravě cz.s-3-(4-aminofenyl)1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-4-aminu.

Trans-3 -(4-aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4ť/Jpyrimidin-4-amin 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,30 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,40 (s, 2H),

4,60 (m, 1H), 4,40 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,50 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 8,32 minut.

Obecný způsob redukční alkylace cis- nebo /ra«,s-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy C:

Směs cis- nebo /rau.s'-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amÍnu (buď Meziprodukt ... nebo ...) (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 eq) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, reakce se zastaví nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.

Způsob přípravy D:

Po syntéze a purifikací (způsob přípravy C) se zbytek vyextrahuje dichlormethanem (1 ml), nanese na sloupec Trikonex (7 cm) a promývá dichlormethanem (5 ml). Požadovaný pás (UV-detekce) se oddělí a sloučenina se extrahuje směsí dichlormethan:methanol:triethylamin = 90:5:5 (10 ml), filtruje a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje v diethyletheru (4 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší.

• · • ·

161

Příklad 52

Diacetát czs-3-[4-(benzylamino)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-aminu Způsob C ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,34 (m, 6H), 7,26 (t, ÍH), 6,74 (d, ÍH), 6,62 (t, ÍH), 4,78 (m, ÍH), 4,35 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,10 minut.

MS: MH⁺ 497.

Příklad 53

Diacetát cz\-3 - {4- [(2-methylbenzyl)amino]fenyl}-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklo-hexyl]1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu Způsob C 'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,37 (m, 3H), 7,18 (m, 3H), 6,75 (d, 2H), 6,43 (t, ÍH), 4,76 (m, ÍH), 4,28 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,35 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,25 minut.

MS:MH⁺511.

Příklad 54

Diacetát cz\-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(4-[2-(trifluormethyl)benzyl]aminofenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy C ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,76 (d, ÍH), 7,64 (d, 2H), 7,48 (t, ÍH), 7,36 (d, 2H), 6,75 (t, ÍH), 6,69 (d, 2H), 4,76 (m, ÍH), 4,52 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,95 minut.

162

MS: MH⁺ 565.

Příklad 55

Cis-3 - {4- [(2-chlorbenzy l)amino]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -IHpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin Způsob přípravy D ^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,38 (m, 6H), 6,74 (d, 2H), 6,55 (t, IH),

4,76 (m, IH), 4,39 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,43 minut.

MS:MH⁺531.

Příklad 56

C/.s'-3-{4-[(2-brombenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/pyrazolo [3,4 -d\ py rimidin-4-amin Způsob přípravy D

Ή NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,68 (d, IH), 7,38 (m, 4H), 7,20 (t, IH), 6,70 (m, 3H), 4,76 (m, IH), 4,39 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,76 minut.

MS: MH⁺ 576.

Příklad 57

C«-3-{4-[(2-ethoxybenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo [3,4 -</]py rim i di n-4-amin Způsob přípravy D *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,34 (d, 2H), 7,29 (s, IH), 7,20 (t, IH), 6,99 (d, IH), 6,88 (t, IH), 6,72 (d, 2H), 6,42 (t, IH), 4,76 (m, IH), 4,30 (d, 2H), 4,12 (q, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,38 (t, 3H);

163

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,71 minut.

MS: MH⁺ 541.

Příklad 58

Cz\-3-(4-[2-(difluormethoxy)benzyl]aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin Způsob přípravy D ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,33 (m, 7H), 6,83 (d, 2H), 6,62 (t, 1H)

4,76 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,25 minut.

MS: MH⁺ 563.

Příklad 59

Diacetát cz'5^,-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-(4-[2-(trifluormethoxy)benzyl]aminofenyl)-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-4-aminu Způsob C ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,38 (m, 4H), 6,73 (d, 2H), 6,64 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,40 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,33 minut.

MS: MH⁺581.

Příklad 60

Cz.s-2-[2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3-yl}anilino)methyl] fenoxy-1 -ethanol-diacetát Způsob C

164 *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,32 (m, 3H), 7,21 (t, IH), 7,00 (d, IH), 6,90 (t, IH), 6,74 (d, 2H), 6,42 (t, IH), 4,76 (m, IH), 4,33 (d, 2H), 4,07 (t, 2H), 3,78 (t, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (DeltaPak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,08 minut.

MS: MH⁺ 557.

Příklad 61

Cz5'-2-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl} anilino)methyl]benzonitril-diacetát Způsob přípravy C ‘li NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,86 (d, IH), 7,69 (t, IH), 7,59 (d, IH), 7,47 (t, IH), 7,37 (d, 2H), 6,73 (m, 3H), 4,76 (m, IH), 4,53 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,72 minut.

MS: MH⁺ 522.

Příklad 62

Czó'-3-{4-[(2,6-difluorbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-amin Způsob C *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,40 (m, 3H), 7,17 (dd, 2H), 6,82 (d, 2H), 6,38 (t, IH), 4,78 (m, IH), 4,33 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,59 minut.

MS: MH⁺ 533.

• ······· · · · · ···· ·· · ·· · · ··

165

Příklad 63

Acetát c/.s'-3-4-[(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino]fenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo[3,4-č/]pyriniidin-4-aminu Způsob C ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,41 (m, 4H), 7,30 (t, 1H), 6,84 (d, 2H), 6,29 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,36 minut.

MS: MH⁺ 549.

Příklad 64

Czs-3-(4-[2-fhior-6-(trifluormethyl)benzyl]aminofenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-z7]pyrimidin-4-amin

Způsob přípravy D ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,67 (m, 3H), 7,39 (m, 2H), 6,84 (d, 2H), 6,18 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,02 minut.

MS: MH⁺ 583.

Příklad 65

Diacetát cz.s'-3-{4-[(2-ťIuor-6-methoxybenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-aminu a) 2-fluor-6-methoxybenzaldehyd

Roztok 3-fluoranisolu (3,36 g, 0,0266 mol) v bezvodém tetrahydrofuranu se ochladí na teplotu -78°C a po kapkách přidá se 1,4M roztok zz-butyllithia v hexanech (19 ml, 0,0266 mol), přičemž teplota reakční směsi se udržuje pod -75°C. Po přidání se po kapkách přidá Ν,Ν, Ν', Ν', Α''-pentamethyldiethylentriamin a v míchání při teplotě -78°C se pokračuje pod atmosférou dusíku další 2 hodiny. Po kapkách se přidá • · • · ·

166

XA-dimethylformamid (3,89 g, 0,0532 mol) a reakční směs se pomalu ohřívá za míchání po dobu půl hodiny. Reakce se zastaví přidáním IN kyseliny chlorovodíkové (po kapkách) a vrstvy se oddělí, vodná fáze se dále extrahuje ethylacetátem (2 x 150 ml) a spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se trituruje v n-heptanu. Precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá 2-fluor-6-methoxybenzaldehyd (2,95 g, 0,0191 mol) ve formě bělavé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,31 (s, IH), 7,66 ( dd, IH), 7,06 (d, IH), 6,89 (dd, IH), 3,92 (s, 3H).

TLC (ethylacetát/heptan 5: 95) Rf 0,24

b) Diacetát cis-3-{ 4-[(2-fluor-6-methoxybenzyl)amino]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy C ‘H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,35 (m, 3H), 6,90 (m, 4H), 6,08 (t, IH),

4,76 (m, IH), 4,25 (d, 2H), 3,87 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,84 minut.

MS: MH⁺ 550.

Příklad 66

Cz'5-3-4-[(2,6-dichlorbenzyl)amino]fenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin Způsob přípravy D ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,54 (d, 2H), 7,39 (m, 3H), 6,84 (d, 2H), 6,18 (t, IH), 4,76 (m, IH), 4,44 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,20 minut.

MS: MH⁺ 566.

• · · · · · · • · · ·

167

Příklad 67

Diacetát c«-3-{4-[(2,6-dimethoxybenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu Způsob C *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,34 (d, 2H), 7,26 (t, 1H), 6,82 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,75 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,22 (d, 2H), 3,82 (s, 6H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,01 minut.

MS: MH⁺ 557.

Příklad 68

Diacetát cz5-3-{4-[(2-fluor-4-methylbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu a) 2-Fluor-4-methylbenzaldehyd

Roztok 3-fluortoluenu (2,91 g, 0,0266 mol) v bezvodém tetrahydrofuranu se ochladí na teplotu -78°C a po kapkách se přidá 1,4M roztok zz-butyllithia v hexanech (19 ml, 0,0266 mol), přičemž teplota reakční směsi se udržuje pod -75°C. Po přidání se dále po kapkách přidá A,AA’,A’,A“-pentamethyldiethylentriamin a v míchání při teplotě -78°C se pokračuje pod atmosférou dusíku další 2 hodiny. Po kapkách se přidá A,A-dimethylformamid (3,89 g, 0,0532 mol) a reakční směs se pomalu ohřeje za míchání po dobu 0,5 hodiny. Reakce se zastaví přidáním IN kyseliny chlorodovíkové (po kapkách) a vrstvy se oddělí. Vodná fáze se dále extrahuje ethylacetátem (2x 150 ml) a spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/zz-heptan (5:95) jako mobilní fáze, čímž se získá 2-fluor-4methylbenzaldehyd (0,83 g, 0,006 mol) ve formě bílé pevné látky.

*HNMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,17 (s, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,23 (m, 2H), 2,41 (s, 3H). TLC (ethylacetát/heptan 5:95) Rf 0,18 • · · · • · ·· · ·· ·· ·· ·

168

b) Diacetát cis-3 - {4- [(2-fluor-4-methylbenzyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

Způsob C 'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,33 (m, 3H), 7,00 (m, 2H), 6,74 (d, 2H), 6,52 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,32 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,34 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,58 minut.

MS: MH⁺ 529.

Příklad 69

Diacetát cz5-3-{4-[(l//-2-indolylmethyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu Způsob C *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 11,04 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,44 (d, 1H), 7,35 (m, 3H), 7,01 (t, 1H), 6,95 (t, 1H), 6,83 (d, 2H), 6,48 (t, 1H), 6,36 (s, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,46 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (DeltaPak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,75 minut. MS: MH⁺ 536.

Příklad 70

Diacetát cz.s'-3-(4-[(l-methyl-l/7-2-indolyl)methyl]aminoťenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-dpyrimidin-4-aminu Způsob C *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,49 (d, 1H), 7,41 (d, 1H), 7,33 (d, 2H), 7,11 (t, 1H), 7,00 (t, 1H), 6,87 (d, 2H), 6,50 (t, 1H), 6,43 (s, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,56 (d, 2H), 3,77 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,84 minut. MS: MH⁺ 550.

• · · • * ·

169

Příklad 71

Tris-maleát trau.s-3-[4-(benzylamino)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-aminu

7tt2ttS'-3-[4-(benzy)amino)-3-methoxyfenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]17/-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidin-4-amin se připraví podle způsobu přípravy C. Trans-3-\4(benzylamino)-3-methoxyfenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-4-amin (0,215 g, 0,00043 mol) se rozpustí v ethanolu (20 ml) a roztok se zahřívá k refluxu, najednou se přidá roztok kyseliny maleinové (0,151 g, 0,00129 mol) a v refluxu se pokračuje dalších 10 minut. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací a suší.

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,34 (m, 7H), 6,74 (d, 2H), 6,16 (s, 6H), 4,65 (m, 1H), 4,33 (s, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,09 minut.

MS: MH⁺ 497.

Příklad 72

Diacetát řrans^,-3-{4-[(2-methylbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -1 77-pyrazolo [3,4-<7]pyri m idin-4-aminu Způsob C ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,30 (t, 1H), 7,17 (m, 3H), 6,74 (d, 2H), 6,42 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,28 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,44 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,24 minut.

MS:MH⁺511.

Příklad 73

Diacetát /ra«s-3-{4-[(2,6-dimethoxybenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-4-aminu Způsob C • ····»· ··· ·· · ··· ···· ·· » ···· • ·····»· · ··· ···· ·· · ·· ·· ·· ·

170 ’Η NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,24 (t, 1H), 6,81 (d, 2H),

6,69 (d, 2H), 5,75 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,20 (d, 2H), 3,82 (s, 6H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s,

3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,15 minut.

MS: MH⁺ 557.

Příklad 74

Diacetát řran5-3-{4-[(2-chlorbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo [3,4 -<7]pyrimidin-4-aminu Způsob C *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,40 (m, 6H), 6,65 (m, 3H), 4,60 (m, 1H),

4,40 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,53 minut.

MS:MH⁺531.

Příklad 75

7rfl«5-3-{4-[(2-brombenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu Acetát

Způsob přípravy D 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,64 (d, 1H), 7,39 (m, 4H), 7,22 (t, 1H),

6,65 (m, 3H), 4,60 (m, 1H), 4,36 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s,

3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,79 minut.

MS: MH⁺ 576.

Obecný způsob redukční alkylace 3-(4-amino-fenyl)-l-[l-(l-methylpiperid-4-yl)piperid-4yl] -177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-4-aminu:

Způsob přípravy E:

• > * 4 44 4 4 * » Λ • 4 4444 4 4 · 4 4 4 · »«·

4 ·« 44 44 ·

171

Směs 3 -(4-amino-fenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperid-4-yl)piperid-4-yl] -177-pyrazolo [3,4ť/]pyrimidin-4-aminu (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 eq) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku. Reakce se zastaví nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.

Způsob přípravy F:

Po syntéze a purifikaci (způsob přípravy E) se zbytek vyextrahuje dichlormethanem (1 ml), nanese na sloupec Trikonex (7 cm) a promývá dichlormethanem (5 ml). Požadovaný pás (UV-detekce) se oddělí a sloučenina se extrahuje směsí dichlormethan:methanol:triethylamin = 90:5:5 (10 ml), filtruje a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje v diethyletheru (4 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší.

Příklad 76

Acetát 3 - [4-(benzylamino)fenyl] -1 - [ 1 -(1 -methylpiperid-4-yl)piperid-4-yl] -177-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidin-4-aminu

Způsob přípravy E ‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,22 (t, 1H), 7,07 (s, 1H),

6,98 (d, 1H), 6,54 (d, 1H), 5,89 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,39 (d, 2H), 3,89 (s, 3H), 2,98 (d,

2H), 2,79 (d, 2H), 2,25 (br, 5H), 2,15 (s, 3H), 1,91 (m, 7H), 1,69 (d, 2H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,88 minut.

MS: MH⁺ 527.

Příklad 77

Acetát 3-{4-[(2,6-dimethoxybenzyl)amino]fenyl}-l-[l-(l-methylpiperid-4-yl)piperid-4yl]-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-4-aminu

Způsob přípravy E ^Λ» · ······ ·«« • · * v ··» « t » 9 9 « « • ······» · ··· « * • · « 9 9 · υ * «

Μ» · 99 99 9·

172 ’Η NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,24 (t, ÍH), 7,12 (d, ÍH), 7,04 (s, ÍH),

6,93 (d, ÍH), 6,68 (d, 2H), 4,81 (t, ÍH), 4,60 (m, ÍH), 4,31 (d, 2H), 3,82 (s, 9H), 2,98 (d,

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,71 minut.

MS: MH⁺ 587.

Příklad 78

- {4- [(2-chlor-6-fluorbenzy l)amino]fenyl} -1- [l-( 1 -methylpiperid-4-yl)piperid-4-y 1]-1Hpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin Způsob přípravy F *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,37 (m, 2H), 7,25 (t, ÍH), 7,11 (d, ÍH),

7,07 (s, ÍH), 6,86 (d, ÍH), 5,21 (t, ÍH), 4,60 (m, ÍH), 4,49 (d, 2H), 3,83 (s, 3H), 2,98 (d,

2H), 2,79 (d, 2H), 2,25 (br, 5H), 2,15 (s, 3H), 1,89 (m, 4H), 1,69 (d, 2H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, lml/nin) R_t 13,94 minut.

MS: MH⁺ 579.

Příklad 79

Diacetát c/.$'-3-4-[benzyl(methyl)amino]fenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

a) V-benzyl-A-methyl-A-fenylamin

60% disperze hydridu sodného v minerálním oleji (2, 37 g, 0,0592 mol) se přidá při teplotě 0°C do roztoku Y-fenyl-Y-benzylaminu (10,33 g, 0,0564 mol) v bezvodém A/V-dimethylformamidu (200 ml). Reakční směs se ohřeje až na pokojovou teplotu a míchá po dobu 45 minut. Po kapkách se přidá jodmethan (7,99 g, 0,0564 mol) a v míchání při pokojové teplotě se pokračuje pod atmosférou dusíku po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (250 ml) a vodu (200 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi • ·

173 ethyl acetát/«-heptan (2:98) jako mobilní fáze, čímž se získá A-benzyl-A-methyl-Afenylamin (4,4 g, 0,0223 mol) ve formě žlutého oleje.

^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 7,30 (m, 2H), 7,20 (m, 5H), 6,70 (d, 2H), 6,60 (t, 1H), 4,55 (s, 2H), 2,99 (s, 3H);

TLC (ethylacetát/heptan 5: 95) Rf 0,53

b) A-benzyl-A-(4-bromfenyl)-A-methylamin

A-benzyl-A-fenyl-A-methylamin (4,41 g, 0,0224 mol) se rozpustí v bezvodém dichlormethanu (150 ml) a v průběhu a 30 minut se v 10 ekvivalentních podílech přidá 2,4,4,6-tetrabromcyklohexadien-l-on (9,16 g, 0,0224 mol). V míchání se pokračuje při teplotě po dobu 20 hodin. Organická fáze se postupně promyje s 0,5N roztokem hydroxidu sodného ve vodě (100 ml), IN roztokem hydroxidu sodného ve vodě (100 ml), vodou (120 ml) a solankou (120 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/«-heptan (1:99) jako mobilní fáze, čímž se získá A-benzyl-A-(4bromfenyl)-A-methylamin (3,52 g, 0,0127 mol) ve formě bezbarvého oleje.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1δ 7,27 (m, 7H), 6,65 (d, 2H), 4,55 (s, 2H), 2,99 (s, 3H); TLC (ethylacetát/heptan 5:95) Rf 0,67

c) A-benzyl-A-methyl-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin

Směs A-benzyl-A-(4-bromfenyl)-A-methylaminu (3,52 g, 0,0128 mol), diboronpinakolesteru (3,89 g, 0,0153 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]-dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,312 g, 0,00038 mol) a octanu draselného (3,72 g, 0,038 mol) v AA-dimethylformamidu (75 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (120 ml) se přidá do zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát//?-heptan (2:98) jako mobilní fáze. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá A-benzyl-A-methyl-A-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,75 g, 0,00232 mol) ve formě bílé pevné látky.

• · • · · • · · · • · · · · · · • · ·

174 *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,45 (d, 2H), 7,30 (m, 5H), 6,68 (d, 2H), 4,62 (s, 2H), 3,03 (s, 3H), 1,27 (s, 12H);

TLC (ethylacetát/heptan 5,95) Rf 0,62

d) Diacetát cis-3-{4-[benzyl(methyl)amino]fenyl}-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu

Směs A-benzyl-JV-methyl-JV-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljaminu (0,076 g, 0,000235 mol), d.s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-aminu (0,080 g, 0,000181 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,012 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,00045 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cis-3-{4[benzyl(methyl)amino] fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4í(]pyrimidin-4-aminu (0, 069g, 0,00011 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 8,19 (s, 1H), (d, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,26 (m, 3H), 6,89 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,66 (s, 2H), 3,09 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,60 minut.

MS:MH⁺511.

Příklad 80

Diacetát cis-3 - {4-[benzyl(ethyl)amino]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklobexyl]-\Hpyrazolo [3,4-</pyrimidin-4-aminu

a) A-benzyl-.V-(4-bromfenyl)-A'-ethylamin /V-benzyl-/V-fenyl-V-ethylamin (2,25 g, 0,0107 mol) se rozpustí v bezvodém dichlormethanu (80 ml) a v 6 ekvivalentních podílech se v průběhu 20 minut přidá 2,4,4,6tetrabromcyklohexadien-l-on (4, 36 g, 0,0107 mol). V míchání se pokračuje při této teplotě po dobu 20 hodin. Organická fáze se postupně promyje 0,5N roztokem hydroxidu • · • ·

175 sodného ve vodě (50 ml), IN roztokem hydroxidu sodného ve vodě (50 ml), vodou (70 ml) a solankou (75 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:99) jako mobilní fáze, čímž se získá V-benzyl-A-(4-bromfenyl)-Vethylamin (2,38 g, 0,0082 mol) ve formě bezbarvého oleje.

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,27 (m, 7H), 6,59 (d, 2H), 4,51 (s, 2H), 3,46 (q, 2H), 1,11 (t, 3H);

TLC (ethylacetát/heptan 1:99) Rf 0,23

b) V-benzyl-.V-ethyl-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin

Směs V-benzyl-V-(4-bromfenyl)-V-ethylaminu (2,22 g, 0,00765 mol), diboronpinakolesteru (2,33 g, 0,00919 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]-dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,188 g, 0,00023 mol) a octanu draselného (2,25 g, 0,023 mol) v V Λ-dimethylformamidu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (100 ml) se přidá do zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát//?-heptan (3:97) jako mobilní fáze. Výsledné frakce se koncentrují. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá V-benzyl-V-ethyl-V-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,24 g, 0,000712 mol).

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 7,42 (d, 2H), 7,30 (m, 2H), 7,20 (m, 3H), 6,63 (d, 2H), 4,57 (s, 2H), 3,48 (q, 2H), 1,27 (s, 12H), 1,09 (t, 3H);

TLC (ethylacetát/heptan 1: 99) Rf 0,14

c) Diacetát cis-3 - {4- [benzyl(ethyl)amino]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] 177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu

Směs V-benzyl-V-ethyl-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,065 g, 0,000193 mol), cz'5'-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-aminu (0,071 g, 0,000161 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,011 g, 0,00001 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,00045 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na • · · · · ·· · ···· · · • · · ·· ·· ··

176 pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát czs-3-{4-[benzyl(ethyl)amino]fenyl}1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-4-aminu (0,049 g, 0,000076 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,42 (d, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,26 (m, 3H), 6,83 (d, 2H), 4,78 (m, IH), 4,61 (s, 2H), 3,55 (q, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,19 (t, 3H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,47 minut.

MS: MH⁺ 525.

Příklad 81

Cis-N-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 yl} fenyl)-2-fenylacetamid-diacetát

Cz.s-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-methy lpiperazinojcyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4ď]pyrimidin-4-amin (0,255 g, 0,00063 mol) a fenylacetylchlorid (0,102 g, 0,00066 mol) se rozpustí v bezvodém dichlormethanu (20 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 5 minut. Po kapkách se přidá W-diisopropylethylamin (0,097 g, 0,00076 mol) a v míchání se pokračuje po dobu 16 hodin. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (25 ml), koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cis-N-(4-{ 4-amino- l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l 77pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl}fenyl)-2-fenylacetamid-diacetát (0,250 g, 0,000388 mol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,37 (s, IH), 8,20 (s, IH), 7,77 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,33 (m, 4H), 7,23 (t, IH), 4,78 (m, IH), 3,68 (s, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,86 minut.

MS: MH⁺ 525.

• ·

• · · · ·

177

Příklad 82

Diacetát m-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(fenethylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

Cis-N\ -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-2-fenylacetamid-diacetát (0,200 g, 0,00031 mol) se suspenduje v bezvodém tetrahydrofuranu (15 ml), suspenze se ochladí na teplotu 0°C a najednou se přidá lithiumaluminum-hydrid (0,177 g, 0,00416 mol). Výsledná směs se ohřeje až na pokojovou teplotu a míchá pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Reakce se zastaví přidáním vody (po kapkách). Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát m-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy l]-3 - [4-(fenethylamino)fenyl] -1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4aminu (0,039 g, 0,0000619 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,37 (d, 2H), 7,31 (m, 4H), 7,22 (m, 1H), 6,75 (d, 2H), 6,07 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 3,32 (m, 2H), 2,86 (t, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,03 minut.

MS:MH⁺511.

Příklad 83

Cis-N-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl} fenyl)-3 -feny lpropanamid-diacetát

Cis-3 -(4-aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin (0,250 g, 0,000616 mol) a 3-fenylpropanoylchlorid (0,109 g, 0,000646 mol) se rozpustí v bezvodém dichlormethanu (20 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 5 minut. Po kapkách se přidá

V,V-diisopropylethylamin (0,095 g, 0,00074 mol) a v míchání se pokračuje po dobu 16 hodin. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (25 ml), koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 • · · · · · • · · • · · · · · ······· · · • · · · · · • · · · ·

178 ml/min), čímž se získá czs-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-ylfenyl)-3-fenyl}propanamid-diacetát (0,225 g, 0,00034 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,12 (s, IH), 8,20 (s, IH), 7,77 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,29 (m, 4H), 7,19 (t, IH), 4,78 (m, IH), 2,94 (m, 2H), 2,67 (m 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,57 minut.

MS: MH⁺ 539.

Příklad 84

Cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 - {4- [(3 -fenylpropyl)amino] fenyl }-iHpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu diacetát

Czs-TV!-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3-yl}fenyl)-3-fenylpropanamid-diacetát (0,090 g, 0,000167 mol) se suspenduje v bezvodém tetrahydrofuranu (5 ml), suspenze se ochladí na teplotu 0°C a najednou se přidá lithiumaluminum-hydrid (0,01 g, 0,00025 mol). Výsledná směs se ohřeje až na pokojovou teplotu a vmíchání se pokračuje pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Reakce se zastaví přidáním vody (po kapkách). Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 1060% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cis-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-{4-[(3-fenylpropyl)amino]fenyl}-ΪΗpyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-4-aminu (0,037 g, 0,000057 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,29 (m, 7H), 6,70 (d, 2H), 6,02 (t, IH), 4,78 (m, IH), 3,08 (m, 2H), 2,71 (m, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (m, 8H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,84 minut.

MS: MH⁺ 525.

• · • · • · · • · · · • · · · · ·

179

Meziprodukt A:

3- (Benzyloxy)fenylboritá kyselina

Do směsi 3-benzyloxobrombenzenu (0,590 g, 2,24 mmol, 1 ekviv.) v THF (10 ml) o teplotě -78°C se přidá «-butyllithium (1,6 M v hexanech, 2,9 ml, 4,7 mmol, 2,1 ekviv.). Reakční směs se míchá po dobu 45 minut, pak se přidá triisopropylborát (0,77 ml, 3,4 mmol, 1,5 ekviv.). Reakční směs se míchá při teplotě -78°C po dobu 30 minut a nechá se ohřát na pokojovou teplotu v průběhu 2 hodin. Přidá se kyselina chlorovodíková (2,5M, 10 ml) a směs se intenzivně míchá po dobu 16 hodin. Organický podíl se separuje a vodná vrstva extrahuje dvěma podíly Et₂O (50 ml pokaždé). Spojené organické extrakty se suší nad MgSO₄, filtrují a koncentrují, čímž se získá hnědý olej. Zbytek se trituruje z heptanu (100 ml) a precipitát se spojí filtrací, čímž se získá 3-(benzyloxy)fenylboritá kyselina ve formě levandulové pevné látky (0,111 g, 0,486 mmol): *H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,00 (2H, bs), 7,02-7,46 (9H, m) a 5,09 (2H, s).

Meziprodukt B:

4- (4-Amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)fenol

Směs 3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (2,47 g, 6,41 mmol, 1 ekviv.), palladiové černi (0,341 g, 3,20 mmol, 0,5 ekviv.) a mravenčanu amonného (2,02 g, 32 mmol, 5 ekviv.) v ethanolu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 4 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, promyje EtOH (300 ml), filtrát se koncentruje, čímž se získá světle žlutý pevný podíl, který se čistí promytím CH₂C1₂ (200 ml). Tímto způsobem se získá 4-(4-amino-l-cyklopentyl-177-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3yl)fenol ve formě bílé pevné látky (1,89 g, 6,4 mmol): *H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (IH, s), 7,45 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,92 (2H, d, J = 8,5 Hz), 5,17-5,24 (IH, m), 2,012,10 (4H, m), 1,87-1,90 (2H, m), 1,67-1,70 (2H, m).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,13 minut. MS: MH⁺ 296.

Meziprodukt C:

7erc-butyl-A-(3-bromfenyl)karbamát • ·

180

Do směsi di-/-butyldikarbonátu (9 ml, 39 mmol, 1,3 ekviv.) v CH2CI2 (75 ml) o teplotě 0°C se přidá roztok 3-bromanilinu (3,3 ml, 30 mmol, 1 ekviv.) v CH2CI2 (75 ml). Reakční směs se nechá ohřát pomalu na pokojovou teplotu a míchá po dobu 16 hodin. Surová reakční směs se vytřepe mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a EtOAc (50 ml). Organická vrstva se oddělí a vodná vrstva extrahuje EtOAc (100 ml). Spojené organické extrakty se suší nad MgSO4, filtrují a koncentrují, čímž se získá červený olej. Purifikací chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 1 litrem 3% EtOAc/heptan a 1 litrem 5% EtOAc/heptan) se získá /erc-butyl-X-(3-bromfenyl)karbamát ve formě lepkavé žluté pevné látky (9,0 g, 33 mmol): 'H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,54 (IH, s), 7,75 (IH, s), 7,37-7,39 (IH, m), 7,12-7,22 (2H, m) a 1,47 (9H, s).

Meziprodukt D:

7erobutyl-jV-[3-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát

Směs terc-butyl-A-(3-bromfenyl)karbamátu (8,19 g, 30,1 mmol, 1 ekviv.), PdCl2(dppf)2 (0,675 g, 0,90 mmol, 0,03 ekviv.), diboronpinakolesteru (9,17 g, 36,1 mmol, 1,2 ekviv.) a octanu draselného (8,86 g, 90,3 mmol, 3,0 ekviv.) v DMF (150 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 12 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v CH2CI2 (100 ml) a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Ceiitu, promyje CH2CI2 (100 ml) a Et₂O (100 ml). Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 1 litru 5% EtOAc/heptan), čímž se získá /ercbutyl-A-[3-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát ve formě bílé pevné látky (6,77 g, 21,2 mmol): *H NMR (d₆-DMSO, 400MHz): δΗ 9,30 (IH, s), 7,85 (IH, s), 7,45-7,50 (IH, m), 7,25-7,30 (2H, m), 1,47 (9H, s) a 1,29 (12H, s).

Meziprodukt E:

CA-terc-buty 1-A-(3 - {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)karbamát

Směs cA-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (1,89 g, 4,28 mmol, 1 ekviv.), terc-butyl-A-[3-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,64 g, 5,14 mmol, 1,2 ekviv.), φ φ

181 tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,271 g, 0,257 mmol, 0,06 ekviv.) a monohydrátu uhličitanu sodného (1,28 g, 10,3 mmol, 2,4 ekviv.) ve vodě (13 ml) a DME (18 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 14 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu. Přidá se nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného roztoku (15 ml) a vodný podíl se extrahuje EtOAc (30 ml). Organický extrakt se suší nad MgSOzt, filtruje a koncentruje, čímž se získá světle žlutý pevný podíl. Purifikací chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 2 1 směsi 95:4:1 CH₂Cl2:Et₃N:MeOH) se získá cA-terc-butyl-7V-(3-{4amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-3yl}fenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (1,76 g, 3,47 mmol): *H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 9, 55 (IH, s), 8,23 (IH, s), 7,81 (IH, s), 7,40-7,52 (2H, m), 7,24 (IH, d, J = 7, 5 Hz), 4,79-4,81 (IH, m), 2,05-2,44 (11H, m), 2,14 (3H, s), 1,54-1,70 (6H, m), 1,49 (9H, s); RP HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,61 minut.

Meziprodukt F:

CA-3-(3-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin4-amin

Směs cA-tórc-butyl-/7-(3- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)karbamátu (1,7 g, 3,3 mmol, 1 ekviv.) a dichlormethanu (40 ml) se ochladí na teplotu 0°C, pak se přidá trifluoroctová kyselina (10,5 ml, 137 mmol, 41 ekviv.). Reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu v průběhu 3 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi CH₂C1₂ (50 ml) a vodu (50 ml). Organická vrstva se separuje a nechá reagovat s nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Organický extrakt se suší nad MgSO4, filtruje a koncentruje, čímž se získá cA-3-(3-aminofenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (1,34 g, 3,30 mmol): ^!H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,21 (IH, s), 7,17-7,21 (IH, m), 6,85 (IH, s), 6,72-6,74 (IH, m), 6,65-6,68 (IH, m), 5,36 (2H, bs), 4,75-4,80 (IH, m), 2,22-2,51 (11H, m), 2,20 (3H, s), 2,06-2,08 (2H, m), 1,58-1,68 (4H, m);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 9,06 minut. MS: MH⁺ 407.

• · « ·

182

Meziprodukt G:

2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitril

Směs [2-(4-bromfenoxy)fenyl](methylidyn)amonia (4,00 g, 14,6 mmol, 1 ekviv.),

PdCl2(dppf)2 (0,320 g, 0,44 mmol, 0,03 ekviv.), diboronpinakolesteru (4,45 g, 17,5 mmol, 1,2 ekviv.) a octanu draselného (4,30 g, 43,8 mmol, 3,0 ekviv.) v DMF (70 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá černé bahno. Výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, promyje CH2CI2 (200 ml) a EtOAc (200 ml), filtrát se koncentruje, čímž se získá tmavě hnědý olej, který se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 500 ml 5% MeOH/CH₂Cl₂), čímž se získá 2-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzonitril ve formě světle žlutého oleje (2,04 g, 6,35 mmol): *H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 7,92-7,94 (1H, m), 7,69-7,92 (3H, m), 7,33-7,37 (1H, m), 7,08-7,12 (3H, m) a 1,30 (12H, s).

Příklad 85 l-Cyklopentyl-3-[4-(3-methoxyfenoxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-amin

Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,195 g,

0,660 mmol, 1 ekviv.), 3-methoxyborité kyseliny (0,240 g, 1,58 mmol, 2,4 ekviv.), octanu měďného (0,180 g, 0,990 mmol, 1,5 ekviv.) a 4 Á molekulových sít v pyridinu (0,27 ml) se zahřívá k refluxu po dobu 5 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, promyje CH2CI2 (20 ml) a MeOH (20 ml), filtrát se koncentruje, čímž se získá olej ovitá zelená pevná látka, která se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 1 litrem CH2CI2, 600 ml 20% MeOH/CH₂Cl₂ a 600 ml 40 % MeOH/CH₂Cl₂), čímž se získá l-cyklopentyl-3-[4-(3methoxyfenoxy)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin ve formě žluto-hnědé pevné látky (0,072 g, 0,179 mmol): *H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,23 (1H, s), 7,67 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,34 (1H, t, J = 8,2 Hz), 7,16 (2H, d, J = 8,6 Hz), 6,78 (1H, d, J = 8,3 Hz), 6,65-6,70 (2H, m), 5,21-5,25 (1H, m), 3,76 (3H, s), 2,02-2,11 (4H, m), 1,87-1,91 (2H, m),

1,67-1,71 (2H, m);

RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 13, 35 minut. MS: MH⁺ 402.

• · · ·

183

Příklad 86

3-[4-(Benzyloxy)fenyl]-l-cyklopentyl-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Do směsi l-cyklopentyl-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (5,41 g, 17,1 mmol, 1 ekviv.) a 4-(benzyloxy)fenylborité kyseliny (4,87 g, 21,4 mmol, 1,2 ekviv.) v DME (100 ml) se přidá tetrakis(trifenylfosfin)palladium (1,19 g, 1,03 mmol, 0,06 ekviv.) a roztok monohydrátu uhličitanu sodného (5,09 g, 41 mmol, 2,4 ekviv.) ve vodě (54 ml). Směs se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 2 hodin. Přidá se další tetrakis(trifenylfosfin)palladium (1,19 g, 1,03 mmol, 0,06 ekviv.) a reakční směs se zahřívá při teplotě 85 °C po dobu 3 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a bílý krystalický pevný podíl (3,868 g) se spojí filtrací a kvůli izolaci většího množství produktu se filtrát koncentruje za vakua a zbytek se vytřepe mezi vodu (50 ml) a EtOAc (50 ml), vodná vrstva se extrahuje (3x) EtOAc (150 ml pokaždé) a spojené organické extrakty se promyjí (3x) vodou (100 ml pokaždé) a solankou (100 ml), suší nad MgSO4, filtrují a koncentrují, čímž se získá žlutý pevný podíl (0,916 g), druhý pevný podíl se spojí a rekrystalizuje z horkého EtOAc, čímž se získá 3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-cyklopentyl-177pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (3,41 g, 8,8 mmol):¹H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (1H, s), 7,19-7,62 (7H, m), 7,18 (2H, d, J = 6,9 Hz), 5,185,23 (1H, m), 5,22 (2H, s), 2,00-2,10 (4H, m), 1,87-1,89 (2H, m), 1,66-1,70 (2H, m),

RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 13,05 minut.

Příklad 87 l-Cyklopentyl-3-[4-(4-fluorfenoxy)fenyl]-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin

Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl- 17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,151 g,

0,511 mmol, 1 ekviv.), 4-(fluorfenyl)borité kyseliny (0,357 g, 2,55 mmol, 5,0 ekviv.), octanu měďnatého (0,139 g, 0,766 mmol, 1,5 ekviv.), 4Á molekulových sít v pyridinu (0,21 ml) a dichlorethanu (5 ml) se zahřívá k refluxu po dobu 48 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu za promytí MeOH (20 ml), filtrát se koncentruje, čímž se získá hnědý olej, která se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 300 ml CH2CI2, 400 ml 10% MeOH/CH₂Cl₂ a 400 ml 20 % MeOH/CH₂Cl₂), čímž se získá červený olej, který se dále • ·

184 purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 50%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min).

Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá l-cyklopentyl-3-[4-(4fluorfenoxy)fenyl]-17/-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,010 g, 0,025 mmol): ^lH NMR (d₆ CDC1₃, 400 MHz): δΗ 8,37 (1H, s), 7,65 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,03-7,26 (6H, m), 5,59 (2H, bs), 5,27-5,35 (1H, m), 2,09-2,21 (4H, m), 1,95-2,02 (2H, m),

1.68- 1,79 (2H, m);

RP-HPLC (Hypercil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min) R_t 14,63 minut. MS: MH⁺ 390.

Příklad 88 l-Cyklopentyl-3-4-[3-(trifluormethyl)fenoxy]fenyl-lZ/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl-17/-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,170 g, 0,576 mmol, 1 ekviv.), 3-(trifluormethylfenyl)borité kyseliny (0,328 g, 1,73 mmol, 3,0 ekviv.), octanu měďného (0,108 g, 0,594 mmol, 1,0 ekviv.), 4Á molekulových sít v pyridinu (0,23 ml) a dichlorethanu (5,8 ml) se zahřívá k refluxu po dobu 6 hodin. Přidá se octan měďnatý (0,050 g, 0,5 ekviv.) a reakční směs se zahřívá k refluxu po dobu 16 hodin. Přidají se další molekulová síta a 3-(trifluormethylfenyl)boritá kyselina (0,250 g, 2,3 ekviv.) a reakční směs se zahřívá k refluxu po dobu 54 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, promyje MeOH (20 ml), filtrát se koncentruje, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 400 ml heptanu, 400 ml 10% EtOAc/heptan, 400 ml 20% EtOAc/heptan a 400 ml 50% EtOAc/heptan), čímž se získá žlutý pevný podíl. Další purifikací preparativní RP-LC/MS (Gilson-Micromass Cl8, 5 pm, 130 Á, 21 cm, 0%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 9 minut, 25 ml/min), odstraněním acetonitrilu za vakua a lyofilizací vodné směsi se získá l-cyklopentyl-3-4-[3(trifluormethyl)fenoxy]fenyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin ve formě světle hnědé pevné látky (0,017 g, 0,039 mmol): *H NMR (d_ó-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,29 (1H, s),

7.68- 7,74 (3H, m), 7,65 (1H, d, J = 8,1 Hz), 7,52-7,54 (2H, m), 7,24 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,7 (2H, bs), 5,20-5,28 (1H, m), 2,03-2,11 (4H, m), 1,90-1,91 (2H, m), 1,68-1,70 (2H, m);

RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min) R_t 15,72 minut. MS: MH⁺ 440.

• · ·· · ·· ····

185

Příklad 89

-Cyklopentyl-3 - [4-(3 -nitrofenoxy)fenyl] -177-pyrazolo[3,4-íf|pyrimidin-4-amin

Směs 4-(4-amino-1-cyklopentyl-l 77-pyrazolo [3,4-<7|pyrimidin-3-yl)fenolu (0,202 g,

0,684 mmol, 1 ekviv.), 3-nitrofenylborité kyseliny (0,571 g, 3,42 mmol, 5,0 ekviv.), octanu měďnatého (0,186 g, 1,02 mmol, 1,5 ekviv.), 4Á molekulových sít v pyridinu (0,28 ml) a dichlorethanu (6,8 ml) se zahřívá k refluxu po dobu 24 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu. Dichlormethan (25 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, promyje MeOH (20 ml), filtrát se koncentruje, čímž se získá hnědá tekutina, která se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (eluci 400 ml heptanu, 400 ml 10% EtOAc/heptanu, 400 ml 20% EtOAc/heptanu a 800 ml MeOH), čímž se získá červený olej, který se dále purifikuje preparativní RPLC/MS (Gilson-Micromass 08, 5 pm, 130 Á, 21 cm, 0%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 9 minut, 25 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá l-cyklopentyl-3-[4-(3-nitrofenoxy)fenyl]-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-4-amin ve formě světle žluté pevné látky (0,034 g, 0,081 mmol): *H NMR (déDMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (1H, s), 7,28-7,74 (6H, m), 7,18 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,7 (2H, bs), 5,13-5,26 (1H, m), 2,02-2,10 (4H, m), 1,89-1,91 (2H, m), 1,68-1,70 (2H, m);

RP-HPLC (Hypercil 08, 5 pm, 100Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min) R_t 19,98 minut. MS: MH⁺ 417.

Příklad 90

-Cyklopentyl-3 -4- [4-(trifluormethoxy)fenoxy]fenyl-177-pyrazolo [3,4-í7|pyrimidin-4-amin Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,100 g,

0,339 mmol, 1 ekviv.), 4-trifhiormethoxyfenylborité kyseliny (0,349 g, 1,69 mmol, 5,0 ekviv.), octanu měďnatého (0,092 g, 0,51 mmol, 1,5 ekviv.), 4Á molekulových sít v pyridinu (0,12 ml) a dichlorethanu (3,4 ml) se zahřívá k refluxu po dobu 72 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu. Přidá se dichlormethan (25 ml) a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá hnědý olej, který se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá • ·

186 l-cyklopentyl-3-4-[4-(trifluormethoxy)fenoxy]fenyl-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0,044 mmol): ^!H NMR (dé CDC1₃, 400 MHz): δΗ 8,53 (1H, s), 7,69 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,07-7,26 (6H, m), 5,55 (2H, bs), 5,28-5,36 (1H, m), 2,16-2,21 (4H, m), 1,94-2,04 (2H, m), 1,72-1,79 (2H, m);

RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min) R_t 16,33 minut. MS: MH⁺ 456.

Příklad 91

-Cyklopentyl-3 -4- [4-(trifluormethyl)fenoxy]fenyl-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin Způsobem uvedeným pro syntézu 1-cyklopentyl-3-4-[4(trifluormethoxy)fenoxy]fenyl-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu se připraví

-cyklopentyl-3 -4- [4-(trifluormethyl)fenoxy ] lény 1-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,008 g, 0,018 mmol): *H NMR (de CDCI3, 400 MHz): δΗ 8,34 (1H, s), 7,60-7,73 (4H, m), 7,05-7,32 (4H, m), 5,89 (2H, bs), 5,27-5,34 (1H, m), 2,17-2,21 (4H, m), 2,00-2,03 (2H, m), 1,72-1,79 (2H, m);

RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min) R_t 15,77 minut. MS: MH⁺ 440.

Příklad 92

3-[3-(Benzyloxy)fenyl]-l-cyklopentyl-ljH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Do směsi l-cyklopentyl-3-j od-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,200 g,

0,631 mmol, 1 ekviv.) a 3-(benzyloxy)fenylborité kyseliny (0,110 g, 0,487 mmol, 1,0 ekviv.) v DME (6 ml) se přidá tetrakis(trifenylfosfm)palladium (0,044 g, 0,038 mmol, 0,07 ekviv.) a roztok monohydrátu uhličitanu sodného (0,187 g, 1,51 mmol, 2,4 ekviv.) ve vodě (2 ml). Směs se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 16 h, pak nechá vychladnout na pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi EtOAc (50 ml) a vodu (50 ml). Organická vrstva se suší nad MgSO₄, filtruje a koncentruje, čímž se získá olej ovitý červeno-oranžový pevný podíl. Rekrystalizací z horkého EtOAc se získá červeno-oranžový pevný podíl, který se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min).

• · • · · ·

187

Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá 3-[3(benzyloxy)fenyl]-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,023 g, 0,060 mmol):¹H NMR (dó CDCI3, 400 MHz): δΗ 8,34 (1H, s), 7,27-7,46 (8H, m), 7,07-7,10 (1H, m), 5,63 (2H, bs), 5,31 (1H, chint, J = 7,6 Hz), 5,16 (2H, s), 2,152,20 (4H, m), 1,96-2,01 (2H, m), 1,72-1,75 (2H, m);

RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min) R_t 14,00 minut. MS: MH⁺ 386.

Příklady 93-99

Obecný způsob přípravy [substituovaných (methylamino)]fenylpyrazolopyrimidinů:

Do 0,10 M roztoku cz.s-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-aminu v dichlorethanu se přidají 1,5 ekviv. substituovaného benzaldehydu, 3,8 ekviv. ledové kyseliny octové, 3,5 ekviv. triacetoxyborohydridu sodného. Tato směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidají se další 3,3 ekviv. triacetoxyborohydridu sodného (pokud je třeba). Reakční směs se míchá po dobu 1,5 hodiny a pak zředí dichlorethanem (5 ml) a nasyceným vodným roztokem NaHCCL (5 ml). Organický podíl se separuje a vodný podíl se extrahuje CH2CI2 (10 ml). Spojené organické extrakty se suší nad MgSO₄, filtrují a koncentrují. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá požadovaný produkt.

Sloučeniny připravené výše uvedeným způsobem::

Název (min)

Příklad 93

Triacetát cis-3-{ 4-[(3 -fluorbenzyl)amino]fenyl} 1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu Příklad 94

T riacetát cis-3- {4- [(2 -fluorbenzyl)amino] fenyl} 1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-4-aminu

HPLC rt (min)

13,25

13,24

M+

515,3

515,3 • · • · ·

188

Příklad 95

Diacetát cis-3- {4- [(4-methoxybenzyl)amino] fenyl} 1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- \Hpyrazolo [3,4-<7] pyrim i din-4-am i nu Příklad 96

Triacetát czs-3-{4-[(3-methoxybenzyl)amino]fenyl}1' [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo [3,4-e/]pyrimidin-4-aminu Příklad 97

Triacetát cis-3 - {4- [(4-fluorbenzyl)amino]fenyl} 1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-4-aminu Příklad 98

Cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3 -4- [(3 pyridylmethyl)amino] fenyl-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-aminu

Příklad 99

Czs-3- {4-[(2-methoxybenzyl)amino]fenyl} -1 -[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-d\ pyr· idin-4-aminu

13,08 527,3

13,12 527,3

13,35 515,3

10,19 498,5

13,57 527,4

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min)

Příklad 100

Triacetát c/.s'-3-[3-(benzylamino)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin

Do roztoku cis-3 -(3 -aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (0,104 g, 0,256 mmol, 1 ekviv.) v dichlorethanu (2 ml) se přidá benzaldehyd (0,03 ml, 0,282 mmol, 1,1 ekviv.), ledová kyselina octová (0,06 ml, 1,0 mmol, 3,9 ekviv.) a triacetoxyborohydrid sodný (0,212 g, 1,0 mmol, 3,9 ekviv.). Tato směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se nasycený vodný roztok • · · · ···· ·· · ···· • ······· · · · · ····· • · * ·· ·· · · ·

189

NaHCCh (5 ml). Organický podíl se oddělí a vodný podíl extrahuje dvěma podíly CH2CI2 (15 ml pokaždé). Spojené organické extrakty se suší nad MgS04, filtrují a koncentrují, čímž se získá žlutý olej, který se čistí (2x) preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá triacetát cis-3-[3(benzylamino)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidin4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,023 g, 0,046 mmol): NMR (de-DMSO, 400

MHz): δΗ 8,21 (1H, s), 7,40 (4H, m), 7,20-7,25 (2H, m), 6,88 (1H, s), 6,78 (1H, d, J = 7,7 Hz), 6,67-6,69 (1H, m), 6,56-6,58 (1H, m), 4,75-4,79 (1H, m), 4,32 (2H, d, J = 5,8 Hz), 2,21-2,49 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05-2,14 (2H, m), 1,89 (9H, s), 1,54-1,68 (4H, m);

RP-HPLC (Hypercil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5% 100% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min) R_t 13,04 minut. MS: MH⁺ 497.

Příklad 101

Cz.v-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-č7]pyrimidin-3 y 1} fenoxy)benzonitril

Směs cz'5^,-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidin-4-aminu (2,29 g, 5,19 mmol, 1 ekviv.), 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenoxy]benzonitrilu (2, 0 g, 6,2 mmol, 1,2 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,329 g, 0, 311 mmol, 0,06 ekviv.), DME (21 ml) a monohydrátu uhličitanu sodného (1,54 g, 12,5 mmol, 2,4 ekviv.) ve vodě (16 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 60 hodin. Přidá se další tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,100 g, 0,02 ekviv.) a reakční směs se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 6,5 hodiny. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a vytřepe mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (25 ml) a EtOAc (25 ml). Organický extrakt se suší nad MgSO4, filtruje a koncentruje. Zbytek se trituruje z Et₂O a purifikuje chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 1 litru 5% MeOH/CH₂Cl₂, 1 litr 10% MeOH/CH₂Cl₂, 1 litru 20% MeOH/CH₂Cl₂ a 1 litru 25% MeOH/CH2Cl2), čímž se získá cis-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzonitril ve formě světle žluté pevné látky (1,79 g, 3,52 mmol): *H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,24 (1H, s), 7,94 (1H, d, J = 7,7 Hz), 7,68-7,73 (3H, m), 7,31-7,34 (3H, m), 7,18 (1H, d, J = 8,5 Hz), 4,78-4,83 (1H, m), 2,21-2,51 (11H, m), 2,19 (3H, s), 2,05-2,08 (2H, m), 1,56-1,71 (4H, m);

• ·

190

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,16 minut. MS: MH⁺ 509.

Příklad 102

Cis-2-(3 - {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 yl} fenoxy)benzamid-triacetát

Směs cis-2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzonitrilu (0,111 g, 0,218 mmol, 1 ekviv.), 25% vodného hydroxidu sodného (1 ml) a 30% H2O2 (1 ml) v dioxanu (1 ml) se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 16 hodin. Přidá se další podíl 30% H2O2 (1 ml) a reakční směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 2 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a zředí CH2CI2 (15 ml). Organický podíl se separuje a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá světle žlutý pevný podíl, který se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá cis2-(3 - {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 yl}fenoxy)benzamid-triacetát ve formě bělavé pevné látky (0,020 g, 0,038 mmol): Ή NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,23 (ÍH, s), 7,75 (ÍH, d, J = 7,7 Hz), 7,64 (3H, d, J = 6,7 Hz), 7,56 (ÍH, s), 7,48 (ÍH, t, J = 7,5 Hz), 7,27 (ÍH, t, J = 7,4 Hz), 7,19 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,06 (ÍH, d, J = 7,7 Hz), 4,76-4,82 (ÍH, m), 2,20-2,50 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,04-2,08 (2H, m), 1,89 (9H, s), 1,58-1,70 (4H, m);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,79 minut. MS: MH⁺ 527.

Příklad 103

Cw-3-4-[2-(aminomethyl)fenoxy]fenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

Směs cis-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzonitrilu (0,097 g, 0,19 mmol, 1 ekviv.) a lithiumaluminumhydridu (0,036 g, 0,95 mmol, 5 ekviv.) v THF (2 ml) se zahřívá při teplotě 66°C po dobu 2 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a vytřepe mezi ledovou • ·

191 vodu (30 ml) a CH2CI2 (50 ml). Organický extrakt se suší nad MgSO₄, filtruje a koncentruje, čímž se získá žlutý pevný podíl, který se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min).

Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá cA-3-4[2-(aminomethyl)fenoxy]fenyl-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,078 g, 0,152 mmol): 'H NMR (déDMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (IH, s), 7,57-7,64 (3H, m), 7,21-7,29 (2H, m), 7,04 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,01 (IH, d, J = 7,9 Hz), 4,76-4,81 (IH, m), 3,74 (2H, s), 2,20-2,51 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05-2,08 (2H, m), 1,57-1,70 (4H, m);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 9,85 minut.

MS:MH⁺513.

Příklad 104

Diacetát czs-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-4-[2-(2H-l,2,3,4-tetraazol-5yl)fenoxy]fenyl-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin

Směs cz.s-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4z/]pyrimidin-3-yl} fenoxyjbenzonitrilu (0,070 g, 0,14 mmol, 1 ekviv.) a azidotributyl-cínu (0,8 ml, 2,4 mmol, 17 ekviv.) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 80 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a zředí EtOAc (15 ml). Výsledný precipitát se spojí filtrací, čímž se získá béžový pevný podíl, který se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin C 18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodný podíl se nechá reagovat s nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) kvůli odstranění zbylé kyseliny octové, vodná směs se extrahuje CH₂C1₂ (25 ml) a organický extrakt se suší nad MgSO₄, filtruje a koncentruje, čímž se získá diacetát cz.s-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-3-4-[2-(2//-l,2,3,4-tetraazol-5-yl)fenoxyfenyl-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,009 g, 0,016 mmol): *H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,20 (IH, s), 7,94 (IH, d, J = 7,7 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,32-7,37 (IH, m), 7,24-7,28 (IH, m), 7,11 (IH, d, J = 9,1 Hz), 6,99 (2H, d, J = 8,7

192

Hz), 4,73-4,80 (1H, m), 2,23-2,34 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05-2,07 (2H, m), 1,68 (6H, s),

1.56- 1,65 (4H, m);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,86 minut. MS: MH* 552.

Příklad 105

Diacetát cA-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-nitrofenoxy)fenyl]-lApyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-amin

Směs 4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-d] py r imidin-3-yl}-fenolu (0,200 g, 0,491 mmol, 1 ekviv.) a 60% hydridu sodného (0,020 g, 0,49 mmol, 1 ekviv.) v dioxanu (4,9 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Přidá se 2-fluomitrobenzen (0,06 ml, 0,6 mmol, 1,1 ekviv.) a reakční směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 3 hodin. Přidá se další hydrid sodný (0,010 g, 0,24 mmol, 0,5 ekviv.) a 2-fluomitrobenzen (0,02 ml, 0,2 mmol, 0,4 ekviv.) a reakční směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 3 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací promytím CH2CI2 (10 ml) a EtOAc (10 ml). Filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý polopevný podíl, který se čistí preparativní RPHPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá diacetát cz.s-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2nitrofenoxy)fenyl]-l A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,023 g, 0,043 mmol): *H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 8, 23 (1H, s), 8,10 (1H, d, J = 8,2 Hz), 7,68-7,73 (3H, m), 7,33-7,40 (1H, m), 7,31 (1H, d, J = 7,3 Hz), 7,24 (2H, d, J = 8,7 Hz), 4,764,82 (1H, m), 2,26-2,51 (11H, m), 2,24 (3H, s), 2,17-2,21 (2H, m), 2,05 (6H, s),

1.56- 1,71 (4H, m);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,09 min.

Příklad 106 č7'.y-3-[4-(2-aminofenoxy)fenyl]-l-[4-(4-methy]piperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-4-amin

193

Směs cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 - [4-(2-nitrofenoxy)fenyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,059 g, 0,091 mmol, 1 ekviv.), ledové kyseliny octové (0,03 ml, 0,5 mmol, 5 ekviv.) a 10% Pd-C (0,024 g, 0,4 hmotn. ekviv.) v ethanolu (1 ml) se míchá při pokojové teplotě pod pozitivním tlakem vodíku po dobu 16 hodin. Pevné podíly se odstraní filtrací promytím CH2CI2 (10 ml) a filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá m-3-[4-(2-aminofenoxy)fenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin ve formě bělavé pevné látky (0,018 g, 0,036 mmol): ^]H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): ÓH 8, 22 (1H, s), 7,59 (2H, d, J = 8, 6 Hz), 7,05 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,85-6,98 (3H, m), 6,58-6,61 (1H, m), 4,93 (2H, bs), 4,78-4,80 (1H, m), 2,202,50 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05-2,09 (2H, m), 1,55-1,70 (4H, m);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) Rt 12,00 minut. MS: MH⁺ 499.

Příklad 107 [2-(4-amino-1 -cyklopentyl-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl)-5 -fenoxyfenyljmethanol a) (2-Brom-5-fenoxyfenyl)methanol

Do roztoku 3-fenoxyfenylmethanolu (4,0 g, 0,020 mol) v bezvodém acetonitrilu se při pokojové teplotě přidá l-brom-2, 5-pyrrolidindion (3,73 g, 0,021 mol). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1,5 hodiny a pod atmosférou dusíku. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Tetrachlormethan (100 ml) se přidá do zbytku a směs se filtruje, filtrát koncentruje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/w-heptan (1:5) jako mobilní fáze, čímž se získá (2-brom-5fenoxyfenyl)methanol (4,7 g, 0,017 mol):

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,1 M octanem amonným, 1 ml/min) R_t 11,7 minut. TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf 0,18.

b) 5-Fenoxy-1,3-dihydro-2,1 -benzoxaborol-1 -ol

Roztok u-butyllithia v u-hexanech (2,24 M, 8,6 ml, 0, 019 mol) se pomalu přidá do roztoku (2-brom-5-fenoxy feny l)methanolu (2,21 g, 0,0079 mol) v bezvodém • · • · • · · • · · ·

194 tetrahydrofuranu (50 ml) při teplotě -78°C pod atmosférou dusíku. Reakce se míchá po dobu 30 minut při teplotě -78°C, pak míchá po dobu 20 minut při teplotě -25°C. Reakce se ochladí na teplotu -50°C a pomalu se přidá triisopropylborát (4,075 g, 0,0216 mol). Reakce se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá po dobu jedné hodiny. Ke směsi se přidá 1 N vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (20 ml) tak, aby pH bylo 5. Reakce se pak míchá při pokojové teplotě po dobu jedné hodiny. Reakční směs se extrahuje ethyletherem (3 x 40 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (60 ml) a solankou (60 ml) a suší nad síranem sodným. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá zbytek, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/zzheptan (1:5), poté ethylacetát/w-heptan (1:4) jako mobilní fáze, čímž se získá 5-fenoxy-l,3dihydro-2,l-benzoxaborol-l-ol (1,3 g, 0,0058 mol),

RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,1 M octanem amonným, 1 ml/min) R_t 10,8 minut, TLC (ethylacetát/heptan 1:2) Rf 0,24.

c) [2-(4-Amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-3-yl)-5-fenoxyfenyljmethanol

Směs l-cyklopentyl-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,36 g, 0,0011 mol), 5-fenoxy-l,3-dihydro-2,l-benzoxaborol-l-olu (0,30 g, 0,0013 mol), tetrakis(trifenylfofin)palladia (0,077 g, 0,000067 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,34 g, 0,0028 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (7 ml) a vody (5 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 17 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (20 ml) a vodný roztok nasyceného uhličitanu sodného (20 ml). Vodná vrstva se dále extrahuje ethylacetátem (3 x 20 ml). Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Ke zbytku se přidá ethylacetát (15 ml), čímž vznikne bílý precipitát. Pevný podíl se filtruje a promyje acetonem (2x15 ml) a dichlormethanem (1x15 ml), čímž se získá [2-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-5fenoxyfenyljmethanol (0,267 g, 0,00067 mol): 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,46 (m, 2H), 7,38 (m, ÍH), 7,28 (m, ÍH), 7,13 (m, 3H), 7,00 (m, ÍH), 5,28 (m, ÍH), 5,17 (m, ÍH), 4,48 (d, 2H), 2,08 (br, 2H), 1,98 (br, 2H), 1,86 (br, 2H), 1,68 (br, 2H),

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,1 M octanem amonným, 1 ml/min) R_t 10,5 minut. MS: MH⁺402 • · • · · • · · · ·

195

Příklad 108

Cis-1 -(aminomethyl)-4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -1 cyklohexanol-maleát

a) Cw-l-( 1 -oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Směs trimethyl-sulfoxonium-jodidu (0,33 g, 0,0015 mol) a hydridu sodného (60 % v oleji, 0,055 g, 0,00138 mol) v methylsulfoxidu (4 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 30 minut. Reakční směs se ochladí na teplotu 10°C a přidá se 4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-l-yl] -1-cyklohexanon (0,5 g, 0,00125 mol) v methylsulfoxidu (2 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2 hodin. Směs se vytřepe mezi vodný roztok nasyceného chloridu amonného (20 ml) a dichlormethan, vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 20 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou a suší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku na cz.v-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-3(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,527 g, 0,00125 mmol). *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 4,90 (br, 1H), 2,70 (s, 2H), 2,17 (br, 4H), 1,97 (br, 2H), 1,32 (br, 2H).

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 23 minut s 0,1 M octanem amonným, 1 ml/min) R_t 11,7 minut. MS: MH⁺ 413

b) Czj-l-(aminomethyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimi-din-lyl] -1 -cyklohexanol-maleát

Cis-1 -(1 -oxaspiro [2.5 ] okt-6-y 1)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4amin (0,62 g, 0,0015 mol) v amoniaku (2 M v methanolu, 15 ml) a roztok 20 % /V,/V-dimethylformamidu v isopropanolu (15 ml) se zahřívá při teplotě 65°C v tlakové nádobě po dobu 18 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi hydroxid amonný/methanol/dichlormethan (2:5:93), poté hydroxid amonný/methanol/dichlormethan (2:8:90) jako mobilní fáze, čímž se získá czs-1(aminomethyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-l-yl]-lcyklohexanol (0,11 g, 0,00026 mol). Sloučenina se rozpustí v ethylacetátu (10 ml) při teplotě 40°C. Přidá se předem ohřátý roztok kyseliny maleinové (0,060 g, 0,000512 mol) v ethylacetátu (2 ml). Směs se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 10 minut, ochladí na β · · ♦

196 pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá cw-l-(aminomethyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-z7]pyrimidin-l-yl]-lcyklohexanol-maleát (0,140 g, 0,00026 mol). Ή NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,73 (br, 3H), 7,64 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,13 (m, 5H), 6,01 (s, 2H), 4,94 (s, IH), 4,70 (br, IH), 2,79 (s, 2H), 2,36 (br, 2H), 1,76 (br, 4H), 1,58 (br, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,9 minut. MS: MH⁺ 431

Příklad 109

Cis-1 -(2-aminoethyl)-4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 77-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl]-1 cyklohexanol-maleát

a) Cis- {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl] -1 -hydroxycyklohexy 1} -methy lkyanid

Do směsi cz.s-1-(1 -oxaspiro [2.5 ]okt-6-yl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-ammu (4,4 g, 0,011 mol) a chloristanu lithného (l,7g, 0,016 mol) se přidá kyanid draselný (1,04 g, 0,016 mol) v acetonitrilu (600 ml). Reakční směs se refluxuje po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Směs se zředí vodou (200 ml) a extrahuje diethyletherem (2 x 300 ml). Spojené organické fáze se promyjí vodou a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá cz5-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-lhydroxycyklohexylj-methylkyanid (4,30 g, 0,0098 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,4 minut. MS: MH⁺ 441

b) Cz.s-1-(2-aminoethyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimi-din-lyl] -1 -cyklohexanol-maleát

K cis- {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-1 -y 1]-1 hydroxy-cyklohexyljmethylkyanidu (3,4 g, 0,0077 mol) v methanolu (100 ml) a hydroxidu amonnému (5 ml) se přidá Raneyův® nikl (50 % směs ve vodě, 3 ml). Směs se míchá 18 hodin pod atmosférou vodíku (1 atm). Reakční směs se filtruje přes celit a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá surový m-l-(2-aminoethyl)-4-[4-amino-3-(4-

197 fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-cyklohexanol (1,82 g, 0,0041 mol), 0,8 g surového m-l-(2-aminoethyl)-4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-cyklohexanolu se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi hydroxid amonný/methanol/dichlormethan (2:3:95), poté hydroxid amonný/ methanol/dichlormethan (2:12:86) jako mobilní fáze, čímž se získá c/y-l-(2-aminoethyl)-4[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-l-yl]-l-cyklohexanol (0,423 g, 0,00095 mol). Tato sloučenina se rozpustí v ethylacetátu (40 ml) při teplotě 40°C. Přidá se předem ohřátý roztok kyseliny maleinové (0,13 g, 0,0014 mol) v ethylacetátu (5 ml). Směs se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 10 minut, ochladí na pokojovou teplotu a precipitát spojí filtrací, promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá cz'.s-T(2-aminoethyl)-4-[4-amino3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-cyklohexanol-maleát (0,186 g, 0,00033 mol). 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,67 (m, 2H), 7,60 (br, 3H), 7,42 (m, 2H), 7,16 (m, 5H), 6,01 (s, 2H), 4,73 (br, 1H), 4,53 (s, 1H), 2,92 (br, 2H), 2,38 (br, 2H), 1,72 (br, 6H), 1,54 (br, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,1 minut. MS: MH⁺ 445

c) Cz.s-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l- hydroxycyklohexy 1} acetamid

Do směsi cis- {4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-l-y 1] -1hydroxycyklohexyljmethylkyanidu (0,972 g, 0,0022 mol) a uhličitanu draselného (1,28 g, 0,00093) v methylsulfoxidu (20 ml) se pomalu přidá 30 % roztok peroxidu vodíku ve vodě (3 ml) při teplotě 20°C. Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Reakční baňka se vloží do ledové lázně a do reakce se pomalu nalije ledová voda (20 ml). Směs se extrahuje ethylacetátem (2 x 30 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se trituruje dichlormethanem (8 ml) a pevný podíl se filtruje, čímž se získá cz.s^--2-{4-[4-amino3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-l-hydroxycyklohexyl} acetamid (0,542 g, 0,0012 mol). 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,67 (m, 2H), 7,42 (m, 3H), 7,16 (m, 5H), 7,06 (s, 1H), 4,95 (br, 1H), 4,65 (m, 1H), 2,39 (m, 2H), 2,24 (s, 2H), 1,70 (br, 6H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,6 minut. MS: MH⁺ 459.

• · · • · · « • · · · · ·

198

Příklad 110 l-(3-Azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin

a) 7erc-butyl-3-hydroxy-l-azetankarboxylát

Do směsi l-benzhydryl-3-azetanolu (7, 5 g, 0,031 mol) a di-řerc-butyl-dikarbonátu (10,3 g, 0,047 mol) se přidá 20 % hydroxid palladnatý na aktivním uhlí (1,0 g) v ethylacetátu (200 ml). Směs se třepe pod atmosférou vodíku při pokojové teplotě po dobu 20 hodin v Parrově hydrogenační aparatuře. Směs se filtruje přes Celit a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan, poté methanol/dichlormethan (5:95) jako mobilní fáze, čímž se získá Zerc-butyl-3-hydroxy-l-azetankarboxylát (5,015 g, 0,029 mol) Ή NMR (Chloroform-J, 400 MHz) δ4,59 (m, IH), 4,14 (m, 2H), 3,80 (m, 2H), 2,55 (br, IH), 1,50 (s, 9H), TLC (methanol/dichlormethan = 2:98) Rf 0,13

b) 7erc-butyl-3-[(methylsulfonyl)oxy] -1 -azetankarboxylát

Do roztoku tórc-butyl-3-hydroxy-l-azetankarboxylátu (4,0 g, 0,023 mol) v bezvodém pyridinu (50 ml) se pod atmosférou dusíku při teplotě -20°C přidá methansulfonylchlorid (5,3 g, 0,046 mol). Žlutá heterogenní směs se míchá v rozmezí teplot od -20°C do -30°C po dobu jedné hodiny, pak v rozmezí teplot od 0°C do -5°C po dobu 2 hodin. Směs se nalije do ledové vody (50 ml) a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 50 ml), 5 % roztokem kyseliny citrónové (4 x 50 ml), vodou (1 x 50 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (1 x 50 ml), solankou (1 x 50 ml) a suší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá Zerc-butyl-3[(methylsulfonyl)oxy]-l-azetankarboxylát ve formě nahnědlého oleje (4,85 g, 0,019 mol). ^!H NMR (Chloroform-d, 400 MHz) δ 5,19 (m, IH), 4,25 (m, 2H), 4,07 (m, 2H), 3,04 (s, 3H), 1,42 (s, 9H), TLC (methanol/dichlormethan = 2:98) Rf 0,28

c) 7erc-butyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin- 1-yl]-1 azetankarboxylát

Do směsi 3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (1,0 g, 0,0033 mol) a uhličitanu česného (2,14 g, 0,0066 mol) v bezvodém Λζ/V-dimethylformamidu (30 ml) se při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku přidá Zerc-butyl-3··· ·»··«· ·«· »· ♦ ··· ···· ·· · * * * • ······· · · · · ··· • · · ···· * « • · · ·* ·· ··

199 [(methylsulfonyl)oxy]-l-azetankarboxylát (1,66 g, 0,0066 mol) v bezvodém A, A-dimethylformamidu (20 ml). Směs se míchá při teplotě 75°C po dobu 22 hodin. Směs se nalije do ledové vody (50 ml) a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 70 ml) a solankou (1 x 70 ml) a suší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan, poté methanol/dichlormethan (5:95) jako mobilní fáze, čímž se získá /erobutyl-3-[4-amino-3(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-l-yl]-l-azetankarboxylát (0,81 g, 0,0018 mol). ^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 5,70 (br, 1H), 4,35 (br, 4H), 1,39 (s, 9H).

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,1 M octanem amonným, 1 ml/min) R_t 12 minut.

MS: MH⁺ 459

-(3 - Azetanyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

Do roztoku férc-butyl-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidinl-yl]-l-azetankarboxylátu (0,81 g, 0,0018 mol) v dichlormethanu (5 ml) se pomalu přidá 20% roztok trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu (10 ml) při teplotě 0°C a pod atmosférou dusíku. Směs se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, ke zbytku se při teplotě 0°C přidá vodný roztok 5 N hydroxidu sodného k upravení pH na 11 a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (2 x 30 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 60 ml) a solankou (1 x 60 ml) a suší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin (0,44 g, 0,0012 mol). ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,28 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,18 (m, 5H), 5,70 (m, 1H0,4,20 (m, 2H), 4,05 (m, 2H)

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,8 minut. MS: MH⁺ 359.

Obecný způsob: Alkylace l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin4-aminu

Do směsi 1 -(3 -azetanyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol, 1 ekviv.) a uhličitanu draselného (0,058 g, 0,00042 mol, 3 ekviv.) v « *

200 bezvodém acetonitrilu se při pokojové teplotě přidá odpovídající alkylbromid (0,00014 mol, 1 ekviv.). Směs se míchá po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá odpovídající alkylazetidiny.

Příklad 111

a) Alkylbromid: 2-brom-1 -ethanol

2- {3 - [4-Amino-3 -(4-fenoxy feny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin

-yl] -1 -azetanyl} -1 -ethanol ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,14 (m, 5H), 5,41 (m, 1H), 4,69 (br, 1H), 3,83 (m, 2H), 3,63 (m, 2H), 3,42 (m, 2H), 2,62 (m, 2H). RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,0 minut.

MS:MH⁺403.

Příklad 112

b) Alkylbromid: 2-bromethyl(methyl)ether

Acetát 1 - [l-(2-methoxyethyl)-3 -azetanyl] -3 -(4-fenoxy fenyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin4-aminu 'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,09 (br, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 21, 7,15 (m, 5H), 5,69 (m, 1H), 4,13 (m, 2H), 3,94 (m, 2H), 3,51 (m, 2H), 3,36 (s, 3H), 2,95 (m, 2H), 2,08 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,6 minut. MS: MH⁺ 417.

Příklad 113

c) Alkylbromid: 1 -brom-2-(2-methoxyethoxy)ethan ··« »····· · · » «·· ·· · · * » • C « · ·· · * * * * ·«···»· · ·»· »«·· ·· · ···· · « · ·» · ·· ·9 ♦· «

201

- {1 -[2-(2-Methoxyethoxy)ethyl] -3 -azetany 1} -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4í/jpyrimidin-4-amin ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8, 24 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,14 (m, 5H), 5,41 (m, 1H), 3,79 (m, 2H), 3,62 (m, 2H), 3,44 (br, 6H), 3,23 (s, 3H), 2,69 (br, 2H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,6 minut. MS: MH⁺ 461.

Příklad 114

- [ 1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-3 -azetanyl]-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin4-amin

Směs 1 -(3 -azetanyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,06 g, 0,00017 mol), 1-methyl-4-piperidinonu (0,057 g, 0,0005 mol) a octové kyseliny (0,03 g, 0,0005 mol) v dichlorethanu (2,5 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,072 g, 0,00034 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi hydroxid amonný/methanol/dichlormethan (2:15:83) jako mobilní fáze, čímž se získá l-[l-(l-methyl-4-piperidyl)-3-azetanyl]-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,029 g, 0,000064 mol).

‘H NMR (Chloroform-;/, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,64 (m, 1H), 5,57 (br, 2H), 3,93 (m, 2H), 3,73 (m, 2H), 2,83 (br, 2H), 2,40 (br, 3H), 2,00 (br, 1H), 1,78 (br, 4H), 1,46 (br, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,9 minut. MS: MH⁺ 456

Příklad 115

- {1 - [(1 -methyl-1 //-2-imidazoly l)methyl]-3 -acetanyl} -3 -(4-fenoxyfenyl)-1Hpyrazolo [3,4 -</] py ri midin-4-am i n

Směs 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,06 g, 0,00017 mol), 1-methyl-l//-2-imidazolkarboxylově kyseliny (0,056 g, 0,0005 mol) a octové kyseliny (0,03 g, 0,0005 mol) v dichlorethanu (2,5 ml) se míchá při pokojové ♦ · ·

202 teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,072 g, 0,00034 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 25 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá 1-{1-[(1-methyl-l/Y-2-imidazolyl)methyl]3-azetanyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,020 g, 0,000044 mol).

^!H NMR (Chloroform-J, 400 MHz) δ 8,35 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,20 (d, 3H), 7,18 (d, 2H), 6,93 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,59 (m, 3H), 3,93 (m, 6H), 3,85 (s, 3H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,5 minut. MS: MH⁺ 453.

Příklad 116

- {3-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -1 ethanon

Do směsi 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,020 g, 0,000056 mol) a uhličitanu draselného (0,016 g, 0,00012 mol) v bezvodém Ν,N,-dimethylformamidu (1 ml) se při pokojové teplotě přidá anhydrid kyseliny octové (0,009 g, 0,000084 mol). Reakční směs se míchá po dobu 1 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 5 pm, 100 x 20 mm; 20%-85% v průběhu 7,5 minut s 0,05 M octanem amonným, 251 ml/min), čímž se získá 1 - {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/|pyrimidin-1 -yl] -1 -azetanyl} -1 ethanon (0,014 g, 0,000035 mol). *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,71 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,17 (m, 5H), 5,72 (m, 1H), 4,66 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 1,84 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,9 minut. MS: MH⁺ 401.

Příklad 117

Cis-3- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl]-1 -cyklobutanol a) 3-Propylidencyklobutyl-methansulfonát * · · · ·

203

Roztok 3-propyliden-l-cyklobutanolu (0,344 g, 0,00307 mol) v pyridinu (5 ml) se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá methansulfonylchlorid (0,422 g, 0,00369 mol), přičemž teplota se udržuje pod 2°C. Směs se míchá po dobu 2 hodin, pak nalije do ledové vody (15 ml) a extrahuje ethyletherem (2 x 10 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (3 x 10 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá 3-propylidencyklobutyl-methansulfonát (0,492 g, 0,00221 mol) ve formě žlutého oleje.

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 5,25-5,29 (m, 1H), 4,98-5,04 (m, 1H), 3,17 (s, 3H), 2,98-3,16 (m, 2H), 2,78-2,96 (m, 2H), 1,86-1,91 (m, 2H), 0,91 (t, 3H).

b) 3 -(4-Fenoxyfenyl)-1 -(3 -propylidencyklobutyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-4-aminu (0,743 g, 0,00245 mol) v V A-dimethylformamidu (20 ml) se nechá reagovat s 3-propylidencyklobutylmethansulfonátem (0,699 g, 0,00367 mol) a uhličitanem česným (0,866 g, 0,00367 mol) při teplotě 70°C po dobu 3 dnů. Reakční směs se nalije do vody (30 ml) a extrahuje ethylacetátem (3 x 15 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (2 x 20 ml) a solankou (20 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (98:2). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(3 -propylidencyklobutyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4amin (0,655 g, 0,00165 mol) ve formě hnědé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,10-7,19 (m, 5H), 5,35-5,40 (m, 1H), 5,38-5,33 (m, 1H), 3,09-3,38 (m, 4 H) 1,90-1,97 (m, 2H), 0,96 (t, 3H); MS: MH⁺ 398. TLC (dichlormethan/methanol 95:5) R_f 0,52.

c) 3-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-1 -yl]-1 -cyklobutanon

Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(3-propylidencyklobutyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,156 g, 0,00039 mol) v dichlormethanu (25 ml) se ochladí na teplotu -78°C a ozon se nechá probublávat roztokem do té doby, dokud nezmodrá. Reakční směs se míchá 5 minut a plynný dusík se nechá probublávat roztokem do té doby, dokud nezmizí jeho zabarvení. Přidá se dimethylsulfid (0,12 ml, 0,097 g, 0,00157 mol) a směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá 3-[4-amino3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-cyklobutanon (0,144 g, 0,00038

204 mol) ve formě hnědé pevné látky. 'fl NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,29 (s, IH), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11- 7,22 (m, 5H), 5,61-5,66 (m, IH), 3,65-3,74 (m, 4H). MS: MH⁺372. TLC (dichlormethan/methanol= 90: 10) Rf 0,62.

C/.s-3-[4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -cyklo-butanol

Roztok 3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-cyklobutanonu (0,208 g, 0,00056 mol) v tetrahydrofuranu (10 ml) a absolutního ethanolu (5 ml) se nechá reagovat s borohydridem sodným (0,021 g, 0,00056 mol) při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Přidá se voda (5 ml) a směs se extrahuje ethylacetátem (3x15 ml). Spojené organické podíly se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (98:2). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá cis3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl] -1 -cyklobutanol (0,090 g, 0,00024 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, IH), 7,68 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11-7,22 (m, 5H), 5,31 (d, IH), 4,82-4,89 (m, IH), 4,04-4,10 (m, IH), 2,70-2,73 (m, 2H), 2,50-2,60 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,50 minut. MS: MH⁺ 374.

Příklad 118

Trans-3 -[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -1 -cyklobutanol a) 7raz7.$'-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]cyklobutyl-4nitrobenzoát

Roztok cis-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)- l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 cyklobutanolu (0,113 g, 0,000302 mol), 4-nitrobenzoové kyseliny (0,101 g, 0,000605 mol) a trifenylfosfinu (0,159 g, 0,000605 mol) v tetrahydrofuranu (5 ml) se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá diethyl-azodikarboxylát (0,096 ml, 0,159 g, 0,000605 mol), přičemž teplota se udržuje pod 10°C. Směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu v průběhu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi heptan/ethylacetát (3:1). Rozpouštědlo se odstraní za • · ···· ·· · ·· • ·«····· · ··· · ·· · ·· · · ··

205 vakua, čímž se získá rra«s-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-lyl]cyklobutyl-4-nitrobenzoát (0,081 g, 0,000164 mmol) ve formě hnědé pevné látky.

’H NMR (DMSO-d₆,400 MHz) δ 8,39 (d, 2H), 8,29 (d, 2H), 8,26 (s, lg, 7,72 (d, 2H), 7,44 (t, 2H) 7,12-7,22 (m, 5H), 5,60-5,69 (m, 1H), 3,03-3,12 (m, 2H), 2,85-2,94 (m, 2H).

Trans-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -cyklobutanol)

Roztok /nmv-3-|4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidm-lyl]cyklobutyl-4-nitrobenzoát (0,081 g, 0,000164 mol) v methanolu (5 ml) se nechá reagovat hydroxidem draselným (0,091 g, 0,00164 mol) za refluxu po dobu 1 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi vodu (10 ml) a ethylacetát (5 ml). Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2x5 ml). Spojené organické podíly se promyjí IN vodným hydroxidem sodným (5 ml) a solankou (5 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se suspenduje ve vodě a lyofilizuje, čímž se získá Pvw-3-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-l-yl]-l-cyklobutanol (0,055 g, 0,000147 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11-7,22 (m, SH), 5,43-5,52 (m, 1H), 4,53-4,65 (m, 1H), 2,75-2,80 (m, 2H), 2,39-2,44 (m, 2H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,77 minut. MS: MH⁺ 374.

Příklad 119

- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yljcyklobutyl} -4methylhexahydropyrazindiium-dimaleát

Směs 3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-cyklobutanonu (0,300 g, 0,00081 mol), A-methylpiperazinu 0,243 g, 0,00242 mol) a octové kyseliny (0,146 g, 0,00242 mol) v 1,2-dichlorethanu (20 ml) se míchá po dobu 20 minut při teplotě 40°C a v průběhu 1 hodiny se ve 3 podílech přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,223 g, 0,00105 mol). Směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě 40°C. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (30 ml) a chloroform (15 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva se dále extrahuje chloroformem (3x) ( 15 ml pokaždé). Spojené organické • ·

206 extrakty se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (97:3) jako mobilní fáze. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek (0,120 g, 0,000263 mol) se rozpustí v absolutním ethanolu (10 ml). Přidá se roztok kyseliny maleinové (0,122 g, 0,001053 mol) v absolutním ethanolu (5 ml) a směs se míchá za refluxu po dobu 15 minut, roztok se ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se filtruje a promyje absolutním ethanolem (3x5 ml). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl]cyklobutyl}-4-methylhexahydropyrazindiium-dimaleát (0,181 g, 0,000397 mmol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,25 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,10-7,20 (m, 5H), 6,14 (s, 4H), 5,05-5,16 (m, IH), 2,77 (s, IH), 2,48-3,00 (m, 5H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,35 minut. MS: MH⁺ 456.

Příklad 120

Trans-1 - {3 - [(benzyloxy)methyl]cyklobutyl} -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-amin

a) CA-3-[(benzyloxy)methyl]cyklobutyl-methansulfonát.

Roztok cz.s-3-((benzyloxy)methyl)-l-cyklobutanolu (2,50 g, 0,0130 mol) v pyridinu (50 ml) se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá methansulfonylchlorid (1,21 ml, 1,79 g, 0,0126 mol), přičemž teplota se udržuje pod 2°C. Směs se míchá po dobu 4 hodin, nalije do ledové vody (100 ml) a extrahuje ethyletherem (2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (3 x 50 ml) a solankou (50 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá cis-3[(benzyloxy)methyl]cyklobutyl-methansulfonát (2,73 g, 0,0101 mol) ve formě žlutého oleje. ’H NMR (CDC1₃, 400 MHz) δ 7,297,38 (m, 5H), 4,88-4,94 (m, IH), 4,52 (s, 2H), 3,45 (d, 2H), 2,99 (s, 3H), 2,50-2,56 (m, 2H), 2,12-2,19 (m, 3H).

b) Trans-1 - [3 - [(benzyloxy)methy 1] cyklobutyl} -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4ď]pyrimidin-4-amin

I • ·······

207

Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-4-aminu (0,452 g, 0,00149 mol) v V.Y-dimethyl formamidu (10 ml) se nechá reagovat s cis-3[(benzyloxy)methyl]cyklobutyl-methansulfonátem (0,483 g, 0,00179 mol) a uhličitanem česným (0,582 g, 0,00179 mol) při teplotě 70°C po dobu 2 dnů. Reakční směs se nalije do vody (30 ml) a extrahuje ethylacetátem (3x15 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (2 x 20 ml) a solankou (20 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (98:2). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá řra«5-l-{3-[(benzyloxy)methyl]cyklobutyl}-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-úQpyrimidin-4-amin (0,325 g, 0,000681 mol) ve formě hnědé pevné látky. ^lH NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,37-7,39 (m, 4H), 7,29-7,31 (m, ÍH), 7,11-7,21 (m, 5H), 5,42-5,47 (m, ÍH), 4,57 (s, ÍH), 3,63 (d, 2H), 2,76-2,81 (m, 2H), 2,60-2,70 (m, ÍH), 2,28-2,34 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 21, 92 minut. MS: MH⁺ 478.

Trans-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-lyljcyklobutylmethanol

Roztok trans-1 - {3 - [(benzyloxy)methyl]cyklobutyl} -3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,244 g, 0,00051 mol) v dichlormethanu (10 ml) se ochladí na teplotu -78°C a po kapkách se přidá roztok 1,0 M chloridu boritého v dichlormethanu (1,53 ml, 0,00153 mol), přičemž teplota se udržuje pod -70°C. Reakční směs se míchá 7 hodin při teplotě -78°C, po kterých se přidá 8 M roztok amoniaku v methanolu (1,5 ml). Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (93:7). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá /AW>-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-<f]pyrimidinl-yl]cyklobulylmeíhanol (0,192 g, 0,00049 mol) ve formě bílé pevné látky.

‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11-7,22 (m, 5H), 5,36-5,46 (m, ÍH), 4,70-4,80 (br, 1 H), 3,58 (d, 2H) 2,70-2,75 (m, 2H), 2,43-2,50 (m, ÍH), 2,26-2,32 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,31 minut. MS: MH⁺ 388.

I • · • · · · · ·

208

Příklady 121-137

Obecný způsob přípravy arylalkylových analog cz's-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu.

Cz.s'-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (50 mg, 0,118 mmol) se suspenduje v 1,2-dichlorethanu (4 ml) a do suspenze se přidá příslušný aldehyd (0,177 mmol), octová kyselina (35 mg, 0,59 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (50 mg, 0,236 mmol). Reakční směs se pak zahřívá při teplotě 100°C po dobu 1,5 hodiny. Pokud podle TLC a/nebo HPLC nejsou reakce skončeny, přidává se do každé reakce další triacetoxyborohydrid sodný (100 mg, 0,472 mmol) do pokaždé reaction ve dvou dávkách v průběhu celkově 3-5 dnů a v třepání směsi se pokračuje při pokojové teplotě. Pokaždé se reakce zředí dichlormethanem (4 ml), pak zastaví nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (4 ml). Pokud se vytvoří emulze, přidá se solanka (1 ml). Organická vrstva se separuje a koncentruje za sníženého tlaku. Surové vzorky se purifikují na RP-HPLC spojené s hmotnostním detektorem (Micromass/Gilson, Hypersil BDS Cl8, 5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; 0-100% acetonitril a 0,05M octan amonný, pufrovaný na pH 4,5 v průběhu 12,5 minut při teplotě 25 ml/min) nebo UV detektorem (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm gradient: 10% až 30% gradient acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný v průběhu 40 minut; Deltapak Cl8, 300 Á,15 pm, 40 x 100 mm sloupec). Požadovaná finální sloučenina se připraví v 80%100% čistotě podle analytické RP-HPLC (průtok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec).

Obecný způsob přípravy maleátových solí

Příklad 137

Maleát c/s-3 - {4-[(4-brombenzy ljamino] -3 -fluorfenyl} -1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin-trismaleátu

Volná báze cis-3 - {4- [(4-brombenzyl)amino] -3-fluorfenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (36 mg, 0,061 mmol) se rozpustí v ethanolu (2 ml) a přidá se kyselina maleinová (14 mg, 0,121 mmol). Směs se

I

209 zahřívá, čímž se získá téměř čirý roztok. Po ochlazení vznikne precipitát, který se oddělí filtrací a promyje minimálním objemem ethanolu a suší za sníženého tlaku, čímž se získá 16 mg trismaleátu c7.s-3-{4-[(4-brombenzyl)amino]-3-fluorfenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklo-hexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu.

Př.	Struktura	m/z (MH⁺)	HPLC Rt (min)
121	’Ήν	515,2	13,74
122	f	529,3	14,04
123	Φ 9	516,3	10,82
124	9 9	543,3	14,91

I • · · ·»♦♦♦· ··· ··* · · · ··· ···· ·· · ···· • ······· · ··· ·····

210

125		557,4	15,53
126	Y	545,3	13,27
127	Φ 9	591,4	15,89
128	y ψ 9	561,0	11,58

I

211

129	Y	569,3	11,27
130	i? 9	583,3	14,83
131	9 9	595,4	15,48
132	rť⁵^ Φ 9	545,3	12,91

212

133	p	516,3	10,10
134	Ρ	516,2	10,41
135	PV ί	583,3	14,78
136		573,3	13,10
137		594,8	14,61

I • · • ·

213

Příklady 138-153

Obecný způsob přípravy sulfonamidový variant cis- a řríz«.s-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu

Cís-3-(4-Amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-ídpyrimidin-4-amin (100 mg, 0,236 mmol) se rozpustí v pyridinu (3 ml), poté se přidá příslušný sulfonylchlorid (0,472 mmol) ve formě roztoku v pyridinu (0,25 ml) nebo jako pevná látka. Reakční směs se zahřívá při teplotě 40°C pod atmosférou dusíku po dobu přibližně 1-7 dnů. Pokud je třeba přidá se další sulfonylchlorid (0,5 ekviv.). Pokaždé se reakce koncentruje na polovinu původního objemu a zředí A/A-dimethylformamidem (1,5 ml). Tyto vzorky se purifikují na RP-HPLC s hmotnostní detekcí (Micromass/Gilson, Hypersil BDS Cl8, 5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; 0-100% acetonitril a 0,05M octan amonný, pufrovaný na pH 4,5 v průběhu 12,5 minut při teplotě 25 ml/min) nebo UV detekcí (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný gradient v průběhu 40 minut; Deltapak Cl8, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec). Požadovaná finální sloučenina se získá v 90%-100% čistotě: podle analytické RP-HPLC: (průtok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec). Jen v některých případech se připraví maleátové soli.

Př.	Struktura	m/z (MH⁺)	HPLC Rt (min)
140		645,1	12,22
	9
141		623,3	11,30
	9

I ι · · · · ·

214

142	č	,ΛΡ o o	610,2	11,85
143			633,2	12,50
	ti	O
		Q
144	L		624,3	11,86
		q
145		583,3	11,29
147			623,2	11,14
		θ'
		C7

I • ······· · • · · · · · • · · · · · ·

215

148	ύ Ο ι	633,2	12,38
149	W· Φ Ο Υ	643,2	12,04
150	<$ 5<*Χ rS ⁰ οΑ> Ύ	624,3	11,67
151	YU- αΛ ό φ	619,2	12,22
152	%τμ^μ φ ο Υ	633,2	13,09

I «·· · · * · · · · ······· · · · · ·····

216

153

£ v 9

649,3

12,81

Příklad 154

Czs-/V-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl}-2-fluorfenyl)-V X2,4-difluorfeny l)močovina

Cis-3 -(4-amino-3 -fluorfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-amin (100 mg, 0,236 mmol) se rozpustí v kyselině octové (6 ml), pak se pomalu při pokojové teplotě přidá 2,4-difluorfenylizokyanát (44 mg, 0,283 mmol). Po 2 dnech se reakční směs koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt ve formě světle žlutého oleje (185 mg). Surová látka se čistí na RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% gradient acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný v průběhu 40 minut; Deltapak Cl8, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec). Požadovaný produkt se získá ve formě bílé pevné látky (52 mg, 0,090 mmol). HPLC-RT: 13,19 minut, (průtok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 580,3.

Příklad 155

Monoacetát řraz25-/V-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl} -2-fluorfenyl)-A-(3 -methoxyfenyl)močovina

Trans-3 -(4-amino-3 -fluorfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-amin (77 mg, 0,182 mmol) se suspenduje v pyridinu (1 ml). Do reakční směsi se přidá roztok 3-methoxyfenylizokyanátu (30 mg, 0,200 mmol) v pyridinu (1 ml) a v míchání se pokračuje po dobu 19 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku,

I • · β ♦ « • · · ι

217 čímž se získá surový produkt ve formě světle žlutého oleje (149 mg). Surová látka se čistí na RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% gradient acetonitril/0,1M vodný octan amonný v průběhu 40 minut; Deltapak Cl8, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec), čímž se získá trans-N-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-/V-(3methoxyfenyl)močovina ve formě bílé pevné látky (76 mg, 0,133 mmol), HPLC-RT: 12,33 minut, (průtok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/0,1M vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 574,2.

Příklad 156

Monoacetát trans-N-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- l//-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-jV^<-(3-methylfenyl)močoviny se připraví stejným, shora popsaným způsobem.

HPLC-RT: 13,02 minut, (průtok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak Cl8, 300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 558,3.

Příklad 157

Cz5-A^r-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-3yl}-2-fluorfenyl)-/V'-(3-methylfenyl {močovina se připraví stejným, shora popsaným způsobem pro trans-izomer.

HPLC-RT: 13,03 minut, (průtok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/0,1M vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak 08, 300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 558,5.

Příklad 158

Cis-N-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexy 1]-1 77-pyrazolo [3,4-<Y]pyrimidin-3 yl}-2-fluorfenyl)-Methyl-A^ř'-/3-methylfenyl)močovina,

I • «······ · · · · *

4« « »··· · · ·· « ·· ·· ·»

218

a. Cis-3- [4-(ethylamino)-3 -fluorfenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo [3,4-</]py rim idin-4-am i n

Cz.s-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-l//pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-4-amin (75 mg, 0,177 mmol) se suspenduje v 1,2-dichlorethanu (6 ml). Přidá se roztok acetaldehydu (12 mg, 0,266 mmol) v 1,2-dichlorethanu (0,300 ml) a octová kyselina (42 mg, 0,708 mmol) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (75 mg, 0,354 mmol). Po 16 hodinách se přidá další triacetoxyborohydrid sodný (37 mg, 0,175 mmol) a v reakci se pokračuje dalších 3 hodin. Reakční směs se pak koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (75 ml), pak promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a solankou (100 ml). Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku. Surový produkt (80 mg) se spojí ve formě bezbarvého oleje, m/z (MH⁺) = 453,3.

b. Cis-N-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-/V-ethyl-A^r-(3-methylfenyl)močovina

Cri-3-[4-(ethylamino)-3-fluorfenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (80 mg, 0,177 mmol) se rozpustí v pyridinu (3 ml), ochladí na teplotu 0°C a do reakce se přidá zzz-tolylizokyanát (26 mg, 0,194 mmol) a v míchání se pokračuje při teplotě 0°C po dobu 2,5 hodiny. Reakční směs se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá přes noc. Do reakční směsi se přidá další zzz-tolylizokyanát (13 mg, 0,101 mmol) a v míchání se pokračuje po dobu 1 týdne. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt ve formě světle žlutého oleje (110 mg). Purifikace se provede RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 40 minut; Deltapak Cl8, 300Á, 5 pm, 40 x 100 mm sloupec). Cis-N-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-fluorfenyl)-/V-ethyl/V'-(3-methylfenyl)močovina se získá ve formě bílé pevné látky (10 mg). HPLC-RT: 13,18 minut, (průtok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak 08, 300Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 586,5.

I ·« ····

219

Příklad 159

Cis-N-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3yl}-2-fluorfenyl)-A-benzyl-A”-(2,4-difluorfenyl)močovina

Cis-3- [4-(Benzylamino)-3 -fluorfenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (28 mg, 0,054 mmol) se rozpustí v kyselině octové (3 ml), pak se v průběhu 4 dnů přidává 2,4-difluorfenylizokyanát (28 mg, 0,183 mmol). Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá světle žlutý olej (65 mg). Purifikace se provede RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 40 minut; Deltapak 08, 300Á, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec), čímž se získá c«-A-(4-{4-amino-l-[4(4-methy lpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl}-2-fluorfeny 1)-/Vbenzyl-A'-(2,4-difluorfenyl)močovina ve formě bílé pevné látky (13 mg, 0,019 mmol), HPLC-RT; 14,66 minut, (průtok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak 08, 300Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 670,1.

Příklad 160

Czs-jV-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl} fenyl)-A '-(3 -methylfenyl)močovina

Cis-3 -(4-Amino fenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 //-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin (50 mg, 0,123 mmol) se rozpustí v pyridinu (3,5 ml), pak ochladí na teplotu 0°C a přidá se /n-tolylizokyanát (18 mg, 0,135 mmol). Reakce se nechá v průběhu 16 hodin při pokojové teplotě. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá světle žlutýolej (200 mg). Purifikace se provede RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 40 minut; Deltapak Cl8, 300Á, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec). Požadovaný produkt se spojí ve formě bílé pevné látky (52 mg).

HPLC-RT: 12,58 minut, (průtok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak Cl8, 300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 540,1.

I

220

Příklads 161-164

Amidová analoga N- {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]-2fluorfenyl} -N '-(3 -methylfenyl)močoviny,

a. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl] -1 -piperidinkarboxylát

3-(4-Amino-3-fluorfenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (2,12 g, 6,48 mmol) se rozpustí ve směsi dioxan/voda (1:1) (20 ml). Do reakční směsi se přidá uhličitan sodný (1,03 g, 9,72 mmol) a di-ierc-butyl-dikarbonát (1,55 g, 7,12 mmol). Po 3 hodinách se reakce koncentruje za sníženého tlaku, zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (100 ml) a vodu (100 ml), pak extrahuje dichlormethanem (200 ml). Organická vrstvy se spojí a promyjí solankou (100 ml). Organická vrstva se pak suší nad síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá žluto-hnědá pěna (2,85 g, 6,67 mmol), HPLC-RT: 14,41 minut, (průtok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak Cl8, 300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) - 428,1.

b. 7erc-butyl-4-(4-amino-3-{3-fluor-4-[(3-toluidinokarbonyl)amino]fenyl}-l/7pyrazolo [3 ,4-í/] pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát

7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl]-l-piperidinkarboxylát (600 mg, 1,41 mmol) se rozpustí v pyridinu (25 ml) a ochladí na teplotu 0°C, přidá se wz-tolylizokyanát (206 mg, 1,54 mmol) a reakce se míchá při teplotě 0°C po dobu 2,5 hodiny. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt ve formě hnědo-žluté pěny (841 mg). Purifikací chromatografií na sloupci silikagelu za použití gradientu 25% až 50% ethylacetát/heptan, poté 5% methanol/dichlormethan jako eluentu se získá fórc-butyl-4-(4-amino-3-{3-fluor-4-[(3toluidinokarbonyl)amino]fenyl} - l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát ve formě světle žluté pevné látky (243 mg, 0,434 mmol), HPLC-RT: 17,82 minut, (průtok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak 08, 300Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z (MH⁺) =

561,4.

• · • · ··· ♦· · ··· ···· ·· · ···· • ······· · ··· ···· ·· · ·· · · · · ·

221

c. Dihydrochlorid N- {4-[4-amino-l-(4-pipetidyl)- l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]2-fluorfenyl} - N ’-(3 -methylfenyl)močoviny

7erc-butyl-4-(4-amino-3 - {3 -fluor-4-[(3 -toluidinokarbonyl)amino] fenyl }-lHpyrazolo[3,4-J]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát (117 mg, 0,209 mmol) se suspenduje v acetonu (7 ml) a ochladí na teplotu 0°C. Do reakční směsi se pomalu přidá kyselina chlorovodíková (6N, 1,6 ml). Reakční směs se ohřeje na pokojovou teplotu, pak zahřívá při teplotě 50°C po dobu 4 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, poté trituruje dichlormethanem (25 ml), čímž se získá dihydrochlorid A-{4-[4-amino-l-(4piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-fluorfenyl} -N '-(3 -methylfenyl)močoviny ve formě bělavé pevné látky (111 mg, 0,241 mmol). HPLC-RT: 11,98 minut, (průtok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak C18,300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 461,3.

d. Obecný způsob přípravy amidových analog N-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-\Hpyrazolo [ 3,4-ďjpyrim i din-3 -yl] -2-fluorfenyl} - N '-(3 -methylfenyl)močoviny.

i). Obecný způsob (A): pro nechráněné aminokyseliny.

Příklad 161

A-[4-(4-amino-l-{l-[2-(dimethylamino)acetyl]-4-piperidyl}-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin3 -yl)-2-fluorfenyl] -N- (d-methylfenyl)močo vina

Dihydrochlorid A-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]2-fluorfenyl}-A-(3-methylfenyl)močoviny (50 mg, 0,109 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (6 ml) a do reakční směsi se přidá A-ethyl-A-isopropylamin (0,095 ml), AA-dimethylglycin (14 mg, 0,136 mmol), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (15 mg, 0,109 mmol) a hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (26 mg, 0,136 mmol). Po 16 hodinách se reakční směs zředí dichlormethanem (100 ml), pak promyje vodou (50 ml) a solankou (50 ml). Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku, zbytek se trituruje diethyletherem (25 ml), čímž se získá světle žlutý pevný podíl (52 mg, 0,097 mmol).

Purifikací RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% gradient acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný v průběhu 40 minut; Deltapak 08, 300Á, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec) se získá A-[4-(4-amino-l-{l-[2• · ·

222 (dimethylamino)acetyl]-4-piperidyl} - 1 A-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3 -yl)-2-fluorfenyl] -N (3-methylfenyl)močovina ve formě bílé pevné látky (27 mg, 0,050 mmol).

HPLC-RT: 12,48 minut, (průtok: 1 ml/min λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak 08, 300Á, 5 pm, 150x3, 9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 546,0.

Příklad 162

Monoacetát A-[4-(4-amino-1 - {1 -[3-(diethylamino)propanoyl]-4-piperidyl} -1 A-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenyl]-/V-('3-methylfenyl)močoviny se připraví shora popsaným způsobem A.

HPLC-RT: 13,16 minut, (průtok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak 08, 300Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 588,2.

d. ii). Obecný způsob (B): pro íerc-butoxykarbonylem chráněné aminokyseliny.

Příklad 163

A-[4-(4-Amino-l-{l-[2-(methylamino)acetyl]-4-piperidyl}-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl)-2-fluorfenyl] -N '-(3 -methylfenyl)močovina

Dihydrochlorid A-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin-3-yl]2-fluorfenyl}-A-(3-methylfenyl)močoviny (63 mg, 0,118 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (7 ml) a do reakční směsi se přidá A-ethyl-A-isopropylamin (0,113 ml), 2-[(/erc-butoxykarbonyl) (methyl)amino]octová kyselina (28mg, 0,147 mmol), 1-hydroxy7-azabenzotriazol (16 mg, 0,118 mmol) a hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3ethylkarbodiimidu (28 mg, 0,147 mmol). Po 16 hodinách se reakční směs zředí dichlormethanem (75 ml) a promyje vodou (75 ml). Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku. Surový produkt se izoluje ve formě světle žluté pevné látky (75 mg, 0,119 mmol). Surový terc-butyl-A-{2-[4-(4-amino3 - {3 -fluor-4- [(3 -toluidinokarbonyl)amino] fenyl} -1 A-pyrazolo [3,4-d\ pyrimidin-1 yl)piperidino]-2oxoethyl}-A-methylkarbamát (75 mg, 0,119 mmol) se rozpustí v acetonu (5 ml), pak se pomalu přidá vodná kyselina chlorovodíková (6N, 1 ml). Reakční směs se • · » · · » · · · · · · ···· · · · · • ······· · ··· ···· • · · ···· ·· · • · · «· · · ·» ·

223 zahřívá při teplotě 45°C po dobu 2,5 hodiny, pak koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje dichlormethanem (25 ml), čímž se získá světle žlutý pevný podíl. Purifikací RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 10% až 30% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 40 minut; Deltapak 08, 300 Á, pm, 40 x 100 mm sloupec) se získá A^ř-[4-(4-amino-l-{l-[2-(methylamino)acetyl]-4piperidyl}-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenyl]-V'-(3-methylfenyl)močovina ve formě bílé pevné látky (40 mg, 0,075 mmol).

HPLC-RT: 12,22 minut, (průtok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak 08, 300Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 532,1.

Příklad 164

Monoacetát N- {4- [4-amino-1 -(1 - {3 - [(2-hydroxyethyl)amino]propanoyl} -4-piperidyl)-1Hpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenyl}-/V’-(3-methylfenyl)močovina

a) 3-[(/erc-Butoxykarbonyl) (2-hydroxyethyl)amino]propanová kyselina,

Komerčně dostupná 3-[(2-hydroxyethyl)amino]propanová kyselina (76 mg, 0,571 mmol) se rozpustí ve směsi dioxan/voda (1,5 ml/1,5 ml), pak se přidá uhličitan sodný (91 mg, 0,886 mmol) a di-/erc-butyl-dikarbonát (137 mg, 0,628 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 dnů, filtruje a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá 3-[(/erc-butoxykarbonyl) (2-hydroxyethyl)amino]propanová kyselina ve formě bezbarvého oleje (135 mg, 0,579 mmol). ^]H NMR (dé-DMSO): δ 1,40 (s, 9H); 2,36 (br s,

2H); 3,27 (br s, 3H); 3,46 (br s, 2H); 3,64 (br s, 2H); 5,71 (br s, IH).

b) Monoacetát N-4-{-[4-amino-1 -(1 - {3-[(2-hydroxyethyl)amino]propanoyl} -4piperidy 1) -177-pyrazolo [3,4-ť7]pyri midin-3-y l]-2-fluorfenyl} -N '-(3 -methylfenyl)močoviny se zpracovává způsobem podle d. ii) obecný způsob B.

HPLC-RT: 12,19 minut, (průtok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak 08, 300Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 576,3.

• · « · · · • ······· ·

224

Příklad 165

Cz5-3-{4-[(l-methyl-l//-benzo[3,4-z/]imidazol-2-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4-amin

a) V2-(4-bromfeny 1)-1 -methyl-1 //-benzo [</]imidazol-2-amin

Směs 2-chlor-l-methyl-benzimidazolu (0,639 g, 3,84 mmol) a 4-bromanilinu (0,710 g, 4,12 mmol) se zahřívá při teplotě 170°C po dobu 21 hodin. Výsledný hnědý pevný podíl se ochladí na pokojovou teplotu, promyje 3 x 5-ml heptanu, pak trituruje toluenem, čímž se získá ,V2-(4-bromfenyl)-l-methyl-l//-benzo[í/]imidazol-2-amin (1,120 g, 90%) ve formě hnědého prášku.

RP-HPLC (25 až 100 % CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití sloupce Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 10,85 minut, 96%; m/z 302 (MH⁺).

b) V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l -methyl-1//-benzo [č/]imidazol-2-amin

Do roztoku V2-(4-bromfenyl)-l-methyl-l//-benzo[</]imidazol-2-aminu (1,12 g, 3,71 mmol) v dimethylformamidu (15 ml) pod atmosférou dusíku se přidá bis(pinakolato)diboron (1,129 g, 4,448 mmol), octan draselný (1,204 g, 12,27 mmol) a [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatý (II) komplex s dichlormethanem (1:1) (0,334 g, 0,409 mmol). Fialový roztok se míchá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin, pak se ochladí na pokojovou teplotu. Výsledná tmavě hnědá směs se koncentruje za vakua, čímž se získá tmavě hnědý pevný podíl. Tato látka se trituruje s dichlormethanem, filtruje a filtrát se koncentruje, čímž se získá tmavě hnědý olej. Purifikací zrychlenou chromatograifí na sloupci silikagelu (mobilní fází 30% ethylacetát/heptan) se získá V2-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-1-methyl-l//-benzo[z/]imidazol-2-ainin (0,515 g, 40%) ve formě bílé prášku; ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,10 (s, 1 H), 7,88 (d, 2 H), 7,63 (d, 2H), 7,40 (m, 1 H), 7,30 (m, 1 H), 7,08 (m, 2H), 3,72 (s, 3 H), 1,29 (s, 12 H);

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití sloupce Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 11,70 minut, 90%; m/z 350 (MH⁺).

• · · · · · • ······· ·

225

c) Czs-3-{4-[(l-methyl-l//-benzo[3,4-</]imidazol-2-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin

Do roztoku cis-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,227 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (3 ml) a vody (1,5 ml) pod atmosférou dusíku se přidá /V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-l//-benzo[í/]imidazol-2-amin (0,099 g, 0,28 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladium (0,013 mg, 0,011 mmol) a uhličitan sodný (0,060 mg, 0,568 mmol). Roztok se míchá při teplotě 83°C po dobu 15 hodin. Výsledná žlutá směs se koncentruje za vakua, čímž se získá žlutý olej. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100 % CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, tr = 7,3-11,2 minut) se získá cz's-3-{4-[(lmethyl-l//-benzo[í/]imidazol-2-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklo-hexyl]I/V-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-4-amin ve formě bělavé pevné látky (0,061 g, 50 %):

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,17 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 8,08 (d, 2 H), 7,62 (d, 2 H), 7,42 (m, 1 H), 7,33 (m, 1 H), 7,08 (m, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 3,76 (s, 3 H), 2,50-2,07 (m, 12 H), 1,80-1,60 (m, 8 H);

RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) ír - 5,92 minut, 99%; m/z 537 (MH⁺).

Příklady 166-170

Amidy odvozené od czs-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-7//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

Reprezentativní způsob přípravy:

K příslušné karboxylové kyselině (0,46 mmol) v dichlormethanu (1,5 ml) se přidá oxalylchlorid (400 1, 0,2 mmol) a DMF (1 kapka). Vialky se uzavřou šeptem a k vyrovnávání tlaku se do každého septa zapíchne malá jehla. Vialky se třepají přes noc na třepačce J-Kem. Odebere se 50% roztok, přebytek oxalylchlorid a dichlormethan se pak odstraní na 12-ti kanálové vakuové pumpě Supelco za vakua pod atmosférou dusíku. Surový chlorid kyseliny (0,23 mmol) se přidá k cz'.v-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu (40 mg, 0, 09 mmol) v suchém pyridinu (800 μΐ) a míchá při pokojové teplotě. Výsledné roztoky se purifikují

226 přímo na preparativní HPLC (Hypersil BSD 08, 5 pm, 100 x 21mm, 0%-100% acetonitril/0,05M octan amonný v průběhu 10 minut, 25,0 ml/min). Výsledné produkty se dále purifikují vytřepáním mezi dichlormethan (4 ml) a 1,0 N hydroxid sodný (2 ml) a přetáhnou přes vysoce účinný extrakční diskový cartridge Empore (C18-SD oktadecyl), čímž se získají odpovídající produkty. Sloučeniny jsou detailně uvedeny níže se svými LCMS hodnotami (Sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min) data.

227

Název sloučeniny	R	Př.	Mn. (mg)	MH⁺	Rt (min)
2V2-(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexy 1]-1H- pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl } -2- methoxy fenyl)-1 //-2-indolkarboxamid	KO H	166	34	580,5	1,98
JV2-(4- {4-amino-1 -[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} ]-2- methoxy feny l)-3 -methyl-1 /7-2- indenkarboxamid	KO	167	14	593,5	3,2
VI -(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexy 1]-1H- pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-(£)-3-fenyl-2-propenamid		168	17	567,3	2,85
V2-(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxy feny 1)-1 -methyl-1 /7-2- indolkarboxamid	cHO /	169	20	594,3	3,18
N3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4- methylpiperazino)cyklohexy 1]-177- pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl }-2- methoxyfenyl)-1/7-3-indolkarboxamid	v?	170	6	580,4	2,74

Příklad 171

CÁs'-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3 -yl} -2-methoxy fenyl)-3 -fenylpropanamid

Do roztoku cis-3 -(4-amino-3-methoxyfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (75 mg, 0,17 mmol) a triethylaminu (34 mg, • ······ ··« ·· ·♦ · ··· ··· · · · · · · · ······· · ··« · · · · • ·· «· · · ·

228

0,34 mmol) v dichlormethanu (2,5 ml) se po kapkách přidá hydrocinnamoylchlorid (34 mg, 0,20 mmol) v dichlormethanu (0,5 ml). Roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 48 hodin a dále se přidá ekvivalent hydrocinnamoylchloridu. Reakční směs se míchá dalších 24 hodin. Výsledná směs se vytřepe mezi dichlormethan (4 ml) a 2N NaOH (1,5 ml) a protáhne přes extrakční cartridge Empore. Odpařením rozpouštědla se získá olejovitý pevný podíl, který se čistí chromatografií na sloupci silikagelu směsí 10 - 20% MeOH/dichlormethan, čímž se získá cz'.s-A4-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3fenylpropanamid (12 mg, 13%). *H NMR (CDCfi): δΗ 8,55 (1H, d), 8,36 (1H, s), 7,75 (1H, s), 7,25 (7H, m), 5,51 (2H, bs), 4,91 (1H, m), 3,92 (3H, s), 3,09 (2H, m), 2,76 (2H, m), 2,34-2,59 (9H, m), 2,29 (3H, s), 2,16 (2H, m), 1,85 (4H, m), 1,66 (2H, m).

LCMS (Sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, ( B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min) R_t = 1,92 minut, MH⁺ = 569,6.

Příklad 172

Trans-N\ -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-4-(dimethylamino)benzamid-trimaleát

Do roztoku trans-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (500 mg, 1,15 mmol) v pyridinu (5 ml) se po kapkách přidá 4-(dimethylamino)benzoylchlorid (420 mg, 2,28 mol). Roztok se míchá přes noc. Reakční směs se zahušťuje a zbytek se rozdělí mezi dichlormethan a roztok 2N NaOH, vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (x 3), organické podíly se suší, filtrují a zahušťují, čímž se získá pevný podíl, který se trituruje směsí EtOAc/Et2O (1:4), čímž se získá pevný podíl, který se rozpustí v EtOAc a nechá reagovat s kyselinou maleinovou (3 ekviv.) za vzniku /ra«5-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxyfenyl)-4-(dimethylamino)benzamidu (320 mg, 30%). 'H NMR (de-DMSO)): δΗ 9,05 (1H, s), 8,25 (1H, s), 8,18 (1H, d, J = 8 Hz), 7,84 (2H, d, J = 9,2 Hz), 7,29 (1H, s), 7,25 (1H, d, J = 8 Hz), 6,78 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,17 (6H, s), 4,71 (1H, m), 3,95 (3H, s), 3,01 (6H, s), 2,83-3,18 (9H, m), 2,68 (3H, s), 2,08 (6H, m),

1,56 (2H, m), HPLC (5,23 minut, 100%).

• * · • · · ·

229

Příklad 173

7V-4-[4-Amino-l-(3 -kyano-2-pyridyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenyl-A ’(3 -methy lfenyl)močovina

a) . 2-(4-Amino-3-jod-1 //-pyrazolo [3,4-Jjpyrimidin-1 -yl)-3-pyridylkyanid

Do suspenze 4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidinu (1,0 g, 3,825 mmol) v DMF (5 ml) se přidá hydrid sodný (60% disperze v minerálním oleji, 3,825 mmol, 153 mg). Po 10 minutách se přidá 2-chlor-3-kyanopyridin (531 mg) a reakce se zahřívá při leploíě 60°C po dobu 16 hodin. Výsledná tmavá směs se nalije do ledové vody (50 ml) a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá 2-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidinl-yl)-3-pyridylkyanid ve formě hnědého pevného podílu (1,1 g, 79%); *H NMR (DMSOde, 400 MHz) δ 7,82 (1 H, m), 8,29 (1 H, s), 8,64 (1 H, m) a 8,93 (1 H, m);

RP-HPLC (Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm sloupec, 0% až 100% acetonitril v 50 mM octanu amonném, pufrovaném na pH 4,5, při 3,5 ml/min), R_t 2,16 minut.

b) 2-[4-Amino-3 -(4-amino-3 -fluorfeny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-ó/jpyrimidin-1 -yl]-3 -pyridylkyanid

2-(4-Amino-3-j od-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-3-pyridylkyanid (1,35 g), fórc-butyl-A-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (1,5 g), tetrakis-trifenylfosfin palladium (253 mg) a uhličitan sodný (1,153 g) se suspendují v odplyněné vodě (10 ml) a DME (20 ml). Smě se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (200 ml) a vodu (200 ml). Výsledný pevný precipitát se odstraní a organická vrstva se oddělí, suší nad bezvodým síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se krystalizuje z minimálního množství ethylacetátu, čímž se získá řerc-butyl-V-4-[4-amino-1-( 3-kyano-2pyridyl)-l //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-fluoríěnylkarbamát ve formě bělavé pevné látky (400 mg). Do suspenze terc-butyl-V-4-[4-amino-l-(3-kyano-2-pyridyl)-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenylkarbamátu (400 mg) v dichlormethanu (4 ml) se pomalu přidá TFA (4 ml). Po 1 hodině se výsledný červený roztok koncentruje za sníženého tlaku a olej ovitý zbytek se neutralizuje nasyceným vodným roztokem uhličitanu sodného, čímž se získá 2-[4-amino-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4í/Jpyrimidin-l-ylj-3-pyridylkyanid ve formě žlutého precipitátu (300 mg); 'H NMR » ·

230 (DMSO-de, 400 MHz) δ 5,61 (2 H, br s), 6,92 (1 H, t), 7,36 (2 H, m), 7,76 (1 H, m), 8,32 (1 H, s), 8,62 (1 H, m) a 8,93 (1 H, m);

RP-HPLC (Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm sloupec, 0% až 100% acetonitril v 50 mM octanu amonném, pufrovaném na pH 4,5, při 3,5 ml/min) R_t 2,25 minut.

c) V-4-[4-amino-l-(3-kyano-2-pyridyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenylN ’-(3 -methy lfenyl)mo čo vina

Do roztoku (2-[4-amino-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-l yl]-3-pyridylkyanidu (35 mg, 0,1 mmol) v pyridinu se přidá w-tolylizokyanát (0,1 mmol) a reakce se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 dnů. Reakce se koncentruje za vakua. Purifikaci preparativní RP-HPLC s výstupem na MS (Micromass/Gilson, Hypersil BDS Cl8, 5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; 0-100% acetonitril a 0,05M octan amonný, pufrovaný na pH 4,5 v průběhu 12,5 minut při teplotě 25 ml/min) se získá zV-4-[4-amino-l-(3-kyano2-pyridyl)-177-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidin-3 -ylj-2-fluorfenyl-V ’-(3 -methylfenyl)močovina (4 mg);

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 2,30 (3H, s), 6,84 (1H, d), 7,19 (1H, t), 7,25 (1H, m), 7,33 (1H, br s), 7,58 (2H, m), 7,80 (1H, m), 8,35 (1H, s), 8,43 (1H, t), 8,65 (1 H, m), 8,80 (1H, br s), 8,95 (1 H, m) a 9,10 (1 H, br s) a

RP-HPLC (Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm sloupec; 0% až 100% acetonitril v 50 mM octanu amonném, pufrovaném na pH 4,5, při 3,5 ml/min) R_t 3,09 min.

Příklad 174-185

Obecný způsob přípravy Vl-4-(4-amino-l-{4-[l-(l-methylpiperid-4-yl)piperidyl]}-177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenyl-l-arylsulfonamidů

a) 7erc-butyl-4-(4-amino-3-4-[(/m?-butoxykarbonyl)amino]-3-fluorfenyl-l/7-pyrazolo[3,4rijpyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát

Směs Zerc-butyl-4-(4-amino-3 -j od-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylátu (8,756 g, 20,26 mmol), /erc-butyl-V-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (10,25 g, 30,38 mmol), tetrakis-trifenylfosfinpalladia (940 mg, 0,81 mmol) a uhličitanu sodného (4,20 g, 50,64 mmol) se suspenduje v odplyněné vodě (57 ml) a DME (323 ml) a zahřívá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (200 ml) a 10 % • ·

231 vodný uhličitan sodný (200 ml). Organická vrstva se dále promyje 10 % vodným uhličitanem sodným (2 x 200 ml), suší nad bezvodým síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku. Purifikací chromatografií na sloupci silikagelu směsí 1:1 ethylacetát:heptan, poté samotným ethylacetátem jako eluenty se získá nečistá frakce. Tato frakce se dále purifikuje krystalizaci z ethylacetátu, čímž se získá /erc-butyl-4-(4-amino-34- [(Zerc-butoxykarbonyl)amino]-3-fluorfenyl-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-1 piperidinkarboxylát (7,256 g, 68%); ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 1,43 (9H, s), 1,49 (9H, s), 1,93 (2H, m), 2,01 (2H, ni), 3,00 (2H, br m), 4,04 (2H, brd), 4,90 (1H, m), 7,42 (2H, m), 7,83 (1H, t), 8,24 (1H, s) a 9,17 (1 H, br s).

b) 3 -(4-amino-3 -fluorfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4-amin

Směs /erc-butyl-4-(4-amino-3 - {4- [(/erc-butoxy karbony ljamino] -3 -fluorfenyl }-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylátu (6,26 g, 11,9 mmol), 5M HCI (95 ml) a acetonu (390 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Reakce se alkalizuje uhličitanem sodným a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytky se vytřepou mezi CH2CI2 (200 ml) a vodu (200 ml) a vodná fáze se extrahuje dalším CH2CI2 (2 x 200 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad bezvodým síranem sodným a zahušťují do sucha, čímž se získá 3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4amin (3,427 g, 88%); ^!H NMR (DMSO-d_ó, 400 MHz) δ 1,85 (2H, br t), 2,06 (2H, m), 2,65 (2H, m), 3,10 (2H, tri), 4,72 (1H, m), 5,45 (2H, br s), 6,89 (1H, m), 7,22 (2H, m) a 8,19 (1 H, s).

c) VI -4-(4-amino-1 - {4-[ 1 -(1 -methylpiperid-4-yl)piperidyl]}-1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin3 -yl)-2-fluorfenylanilin

Do roztoku 3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin4-aminu (2,0 g, 6,11 mmol), V-methylpiperid-4-onu (0,69 g, 6,11 mmol, 0,8 ml) a ledové kyseliny octové (1,25 ml) v V-methylpyrrolidinonu (100 ml) pod atmosférou dusíku se přidá triacetoxyborohydrid sodný (1,5 ekviv., 1,94 g, 9,16 mmol). Roztok se míchá po dobu 18 hodin, pak se přidá další triacetoxyborohydrid sodný (0,6 ekviv., 0,78 g) a Nmethylpiperid-4-on (0,4 ekviv., 0,32 ml) a v reakci se pokračuje dalších 18 hodin. Reakce se koncentruje za vakua, rozdělí mezi dichlormethan (100 ml) a nasycený vodný roztok NaHCCb (100 ml), vodná vrstva se dále extrahuje dichlormethanem (4 x 100 ml) a spojené organické vrstvy se suší nad bezvodým síranem hořečnatým a zahušťují do sucha, čímž se ·»· ·♦ · · · “ · »····«· · · · · · · · ·

232 získá žlutá pěna (0,95 g). Purifikací chromatografií na sloupci silikagelu směsí dichlormethammethanol (4:1) jako eluentem se získá Al-4-(4-amino-l-{4-[l-(lmethylpiperid-4-yl)piperidyl]} -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl)-2-fluorfenylanilin (1,67 g, 72%); 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1,44 (2H, m), 1,69 (3H, m), 1,83 (4H, m), 2,13 (3H, s), 2,28 (4H, m), 2,78 (2H, br d), 2,98 (2H, br d), 4,58 (1H, m), 5,25 (2H, br s), 6,89 (1H, t), 7,18 (1H, d), 7,24 (1H, d) a 8,19 (1 H, s).

d) Obecný způsob sulfonylace Vl-4-(4-amino-l-{4-[l-(l-methylpiperid-4-yl)piperidyl]}1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-fluorlenylanilinu

Směs TVÍ -4-(4-amino-1 - {4- [ 1 -(1 -methylpiperid-4-yl)piperidy 1]} -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenylanilinu (100 mg, 0,236 mmol) a aryl-sulfonylchloridu (2 ekviv., 0,471 mmol) v pyridinu (2 ml) se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 3 dnů. Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Purifikací preparativní RP-HPLC s hmotnostním detektorem (Micromass/Gilson, Hypersil BDS Cl8, 5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; ΟΙ 00% acetonitril v 0,05M octan amonný, pufrovaný na pH 4,5 v průběhu 12,5 minut při teplotě 25 ml/min) se získají následující sloučeniny:

Př.	Struktura	HPLC R_t (min)	v Čistota (%)	m/z (MH⁺)
174	ά/	11,045	98,6	619,2

» ·

233

175	ó		11,982	91,6	633,1
176	Ν		10,099	77,9	601,2
	Κλ
177	Ν	AV' <Q-^α	11,059	93,9	617,2
		ϊ

• · ·

·· · · · ·· · ·

234

178	ά	z	10,332	92,5	583,5

180		AP	10,929	84,3	643,2
181	w	ΛΡ	10,074	87,1	583,2
182			11,256	90,5	633,1

• · · • ·

235

183	ά		11,807	75,7	6,492
184	v	Gy	10,617	100	610,2
185	ό		11,895	88,4	633,2

Podmínky pro analytickou RP-HPLC: 10 až 90 % CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném, pufrovaném na pH 4,5 v průběhu 12 minut při 2 ml/min za použití sloupce Waters Symmetry Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm.

Příklad 186-189

Cis-3 - {4-[amino(fenyl)methyl]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -\Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminová analoga

a. Obecný způsob přípravy sulfonamidových a karboxamidových derivátů

236

Směs cÁs'-3-{4-[amino(fenyl)methyl]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (50 mg, 0,10 mmol), odpovídajícího elektrofilu (sulfonylchlorid nebo chlorid kyseliny) (1 ekviv.) a pyridinu (1 ml) se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 24-72 h, (V některých případech je třeba přidat další podíl elektrofilu (typicky 1 ekviv.)). Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Purifikaci preparativní RP-HPLC s hmotnostním detektorem (Micromass/Gilson, Hypersil BDS Cl8, 5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; 0-100% acetonitril a 0, 05M octanem amonným, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 12,5 minut při teplotě 25 ml/min) se získají následující sloučeniny:

Př.	Struktura	HPLC R_t (min)	Čistota (%)	m/z (MH⁺)
186			15,76	94,9	721,6


	9
187		lír	13,21	94,9	697,3
		ío

• · • · · ·

237

188		1	14,20	91,30	697,4
		°T°
	/=<f Κϊ	fjO
	O r
189		jT^T⁰¹	15,30	96,8	705,3

		1 Oss^ssO
		0^0

190		s	14,00	100	675,4
		θ
		Xo
	i

238

191		12,00	99	602,4
	/«z
	9
192	9-	12,08	100	602,3
	/=< lT Ca ί/ΧΛ² ^N~\-»
	y
	<3? om^=o	13,68	100	695

• · « · * · · · • ♦ * * ··· · * · • ······« · · ♦ · · * * β

Podmínky pro analytickou RP-HPLC: 10 až 90 % CH₃CN v O,1N vodném octanu amonném, pufrováném na pH 4,5 v průběhu 12 minut při teplotě 2 ml/min za použití sloupce Waters Symmetry 08, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec.

Příklad 195

- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -3 - {4-[(fenethylamino) (fenyl)methyl]feny 1} -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin

Do roztoku cA-3-{4-[amino(fenyl)methyl]fenyl}-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (50 mg, 0,10 mmol), fenylacetaldehydu (13 mg) a ledové kyseliny octové (0,013 ml) v 1,2-dichlorethanu (1 ml) pod atmosférou dusíku se přidá triacetoxyborohydrid sodný (2 ekviv., 43 mg), roztok se míchá po dobu 18 hodin, pak se koncentruje za vakua a směs se vytřepe mezi dichlormethan (10 ml) a nasycený vodným roztok NaHCO₃ (10 ml). Organická vrstva se oddělí, vodná vrstva dále extrahuje dichlormethanem (4 x 10 ml) a spojené organické vrstvy se suší nad bezvodým síranem hořečnatým a zahušťují do sucha. Purifikací preparativní RP-HPLC s hmotnostním detektorem (Micromass/Gilson, Hypersil BDS Cl8, 5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; 0-100% acetonitril a 0,05M octanem amonným, pufřovaný na pH 4,5, v průběhu 12,5 minut při teplotě 25 ml/min) se získá l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-{4[(fenethylamino) (fenyl)methyl]fenyl}-l//-pyrazolo[3.4-ď]pyrimidin-4-amin (28 mg);

• » • · • <»····* · ··· ·»*· • » · ···»··· • · · · · · · ·· ·

240

RP-HPLC (10 až 90 % CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném, pufrovaném na pH 4,5, v průběhu 12 minut při teplotě 2 ml/min za použití sloupce Waters Symmetry 08,

250 x 4,6 mm sloupec) Rt = 12,269 minut, 95,2%; m/z (MH⁺) 601,3.

Příklad 196

N- {4- [4-amino-1 -(4-oxocyklohexy 1)-1 77-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 -yl]-2-fluorfenyl} -N (3 -methy lfenyl)močo vina zw-Tolyl-izokyanát (1,2 ekviv., 37,7 mg, 0,283 mmol) se přidá do roztoku 4-[4-amino-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-1 -yl]-1 -cyklohexanonu (80,3 mg, 0,236 mmol) v pyridinu. Po 16 hodinách při teplotě 40°C se reakce zastaví vodou (2 ml) a zahušťuje do sucha. Purifikací preparativní RP-HPLC (10% až 40% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném, pufrovaném na pH 4,5, v průběhu 60 minut při teplotě 10 ml/min za použití sloupce Waters Deltapak Cl8, 15 pm, 100 x 40 mm sloupec, λ = 254 nm) se získá jV-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4-(7]pyrimidin-3yl]-2-fluorfenyl}-tV’-(3-methylfenyl)močovina (91 mg, 84 %). ’H NMR(DMSO-d6, 400 MHz) δ 2,26 (2H, br t), 2,30 (3H, s), 2,43 (4H, m), 2,69 (2H, m), 5,26 (1H, m), 6,82 (1H, d), 7,18 (1H, t), 7,25 (1H, br d), 7,32 (1 H, br s), 7,45 (2 H, m), 8,26 (1H, s), 8,36 (1H, t),

8,72 (1H, d) a 9,05 (1 H, s) a

RP-HPLC (10 až 90 % CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném, pufrovaném na pH 4,5 v průběhu 12 minut při teplotě 2 ml/min za použití sloupe Waters Symmetry Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t = 15,433 minut, 97,9%.

Příklad 197

Ethyl-2- [4-amino-3 -(4- [(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino-3-fluorfenyl)-177-pyrazolo [3,4í/Jpyrimidin-1 -yljacetát

a) Ethyl-2-(4-amino-3 -j od-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yljacetát

Do suspenze 3-jod-17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,750 g, 2,87 mmol) v

N,A-dimethylformamidu (9 ml) se přidá hydrid sodný (60%, 0,138 g, 3,45 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny do té doby, dokud není roztok homogenní.

Přidá se ethyl-bromacetát (0,447 ml, 4,03 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a «· · *# ♦·»· · ι · «= ·· «* · · ·« · · · · · · • β»»···· · ··· *'·· • · » ···« ·· « ·· · ···· ·· ·

241 výsledný pevný podíl se trituruje postupně vodou (25 ml), pak směsí etheru a petroletheru (4:1, 50 ml), čímž se získá ethyl-2-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-lyl)acetát (0,791 g, 2,28 mmol) ve formě hnědé pevné látky: *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,21 (s, 1H), 5,17 (s, 2H), 4,15 (qt, 2H), 1,20 (t, 3H);

RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 6,87 minut.

b) Ethyl-2-(4-amino-3-4-[(fórc-butoxykarbonyl)amino]-3-fluorfenyl-1//-pyrazolo [3,4í/jpyrimidin- 1 -yl)acetát

Suspenze ethyl-2-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)acetátu (0,790 g, 2,28 mmol), /erc-butyl-/V-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l, 3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamátu (1,08 g, 3,19 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,105 g, 0,091 mmol) a uhličitanu sodného (0,478 g, 5,69 mmol) v Λζ/V-dimethylformamidu (12 ml) a vodě (2 ml) se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 14 hodin pod atmosférou dusíku. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi nasycený vodný roztok chloridu sodného (50 ml) a ethylacetát (30 ml), vodná vrstva se separuje a extrahuje dále ethylacetátem (3 x 30 ml). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a koncentrují za sníženého tlaku. Purifikací zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/heptan (9:1) jako mobilní fáze se získá ethyl-2-(4-amino-3-4-[(fórc-butoxykarbonyl)amino]-3-fluorfenyl-lZ/-pyrazolo[3,4t/]pyrimidin-l-yljacetát (0,193 g, 0,449 mmol) ve formě žlutého oleje: *H NMR (CDCI3,

400 MHz) δ 8, 41 (s, 1H), 8,30 (m, 1H), 7,47 (m, 2H), 6,81 (s, 1H), 5,47 (br, 2H), 5,20 (s,

2H), 4,25 (qt, 2H), 1,55 (s, 9H), 1,27 (t, 3H); RP-HP (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití sloupce Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,47 minut.

c) Ethyl-2- [4-amino-3 -(4- [(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino-3 -fluorfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-1 -yljacetát

Do 50 ml baňky obsahující roztok chlorovodíku v dioxanu (4 M, 6 ml) a ethanolu (6 ml) se přidá ethyl-2-(4-amino-3-4-[(terc-butoxykarbonyl)amino]-3-fluorfenyl-l/7pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)acetát (0,452 g, 1,05 mmol). K baňce se připojí chladič a směs se míchá při teplotě 50°C pod atmosférou dusíku. Po 16 hodinách se reakční směs ochladí pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe • · • · · · ·· · · · * · • ······· · ··· · · · · · • 9 · ···· · · · ·· · ·· · · · · ·

242 mezi vodný roztok kyseliny chlorovodíkové (0,5 M, 30 ml) a ether (20 ml). Organická vrstva se separuje a vylije. Vodná vrstva se alkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (30 ml) a výsledná směs se extrahuje ethylacetátem (3 x 30 ml). Spojené ethylacetátové extrakty se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a koncentrují, čímž se získá žlutý pevný podíl (0,295 g).

Tento žlutý pevný podíl přidá se do roztoku 2,3-dichlorbenzensulfonylchloridu (0,263 g, 1,07 mmol) a 4-dimethylaminopyridinu (0,005 g, 0,041 mmol) v pyridinu (5 ml) a výsledný roztok se míchá pod atmosférou dusíku po dobu 3 dnů. Přidá se směs methanolu a dichlormethanu (1:19, 100 ml) a výsledná směs se extrahuje vodným uhličitanem sodným (3x10 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje. Látka se čistí preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití sloupce 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 12,4-13,9 min), čímž se získá ethyl-2-[4-amino-3-(4-[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo-[3,4-d]pyrimidin-l-yl]acetát ve formě bílé pevné látky (0,011 g, 0,020 mmol): RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití sloupce Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,78 min. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,84 (s, 1H),

8,25 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,54 (t, 1H), 7,43 (m, 3H), 5,21 (s, 2H), 4,15 (qt,

2H), 1,20 (t, 3H); MS: MH⁺ 539.

Příklad 198

Al-4-[4-Amino-l-(2-hydroxyethyl)-l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenyl-2,3dichlor-1 -benzensulfonamid

Ethyl-2-[4-amino-3-(4-[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl] amino-3-fluorfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl]acetát (0,120 g, 0,222 mmol) se suspenduje v dimethyletheru ethylenglykolu (2 ml) a suspenze se ochladí na teplotu 0°C. Přidá se lithiumaluminum-hydrid (0,025 g, 0,660 mmol) a reakční směs se ohřeje na pokojovou teplotu. Po 24 hodinách se přebytek hydridu rozloží vodnou kyselinou chlorovodíkovou (0,5 M, 10 ml). Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2x7 ml) a organický extrakt se vylije, vodná vrstva se alkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml), nasyceným roztokem chloridu sodného a extrahuje směsí methanolu a dichlormethanu (1:9, 4 x 20 ml). Organické vrstvy se spojí, suší nad síranem hořečnatým, • · • · ·

243 filtrují a koncentrují za sníženého tlaku. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití sloupce 8 Hypersil HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 8,93-9,90 min) se získá Al-4-[4amino-l-(2-hydroxyethyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenyl-2,3-dichlor-lbenzensulfonamid ve formě bělavé pevné látky (0,004 g, 0,008 mmol): ^!H NMR (DMSOde, 400 MHz) δ 10,82 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,54 (t, 1H), 7,39 (m, 3H), 6,90 (br, 2H), 4,86 (t, 1H), 4,35 (t, 2H), 4,04 (t, 2H); MS: (M-H)' 495.

Příklad 199

NI -(4- {4-Amino-1 -[2-kyano-4-(4-methylpiperazino)fenyl]- l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl} -2-fluorfenyl)-2,3-dichlor-1 -benzensulfonamid

Suspenze 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,172 g, 0,66 mmol), hydridu sodného (60%, 0,030 g, 0,75 mmol), 2,5-difluorbenzonitrilu (0,105 g, 0,75 mmol) a N, A-dimethylformamidu (2,5 ml) se zahřívá po dobu 24 hodin při teplotě 100°C. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (50 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva se oddělí, suší nad síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje za sníženého tlaku. Tato látka (0,045 g) a uhličitan česný (0,115 g, 0,353 mmol) se suspendují v 1-methylpiperazinu (1 ml) a směs se zahřívá při teplotě 110°C v utěsněné nádobě po dobu 20 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se okyselí vodnou kyselinou chlorovodíkovou (1 M, 10 ml) a vodná fáze se extrahuje etherem (10 ml). Organická fáze se vylije a vodná fáze se alkalizuje vodným roztokem uhličitanu sodného (3 M, 10 ml), vodná fáze se extrahuje dichlormethanem (3x15 ml) a spojená organická frakce se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje za sníženého tlaku. Tato látka se zpracovává podle způsobu z bodu (b), odstraní se chrániči skupina a sulfonyluje podle způsobu z bodu (c). Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití sloupce 8μ Hypersil HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 8,4-9,4 min) se získá Al-(4-{4-amino-1-[2kyano-4-(4-methylpiperazino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-2,3dichlor-1-benzensulfonamid ve formě žluté pevné látky (0,007 g, 0,011 mmol): 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,98 (d, 1H), 7,86 (d, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,53 (m, 6H), 3,30 (m, 4H), 2,70 (m, 4H), 2,40 (s, 3H); MS (M-H)’ 650.

• ····· · ·

244

Příklad 200

Cis-Nl -fenyl-4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxybenzamid

a) 4-Brom-2-methoxybenzonitril

Suspenze methoxidu draselného (4,24 g, 60,0 mmol) v tetrahydrofuranu (40 ml) se přidá po částech do roztoku 4-brom-2-fluorbenzonitrilu (8,0 g, 40,0 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) při teplotě -50°C. Po jedné hodině se lázeň se suchým ledem odstraní a reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin. Reakční směs se nalije na vodu (250 ml) a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá 4-brom-2-methoxybenzonitril (7,85 g, 92%). 'H NMR (DMSO-dé) δ 3,94 (s, 3H), 7,32 (d, J = 8,23 Hz, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,69 (d, J = 8,23 Hz, 1H).

b) 4-Brom-2-methoxybenzoová kyselina

4-Brom-2-methoxybenzonitril (7,35 g, 35 mmol) se rozpustí v dioxanu (400 ml), přidá se hydroxid sodný (2,0 N, 200 ml) a suspenze se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 16 hodin. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná směs se filtruje a promyje vodou, filtrát se neutralizuje kyselinou chlorovodíkovou (5,ON) na pH 1 a pevný podíl spojí filtrací, čímž se získá 4-brom-2-methoxybenzoová kyselina (3 g, 37%).

'H NMR (DMSO-dé) δ 3,84 (s, 3H), 7,21 (d, J = 8,25 Hz, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,58 (d, J = 8,23 Hz, 1H).

c) 4-Brom-2-methoxy-1 -benzenkarbonylchlorid

4-Brom-2-methoxybenzoová kyselina (2,934 g, 12,70 mmol) se smíchá s uhličitanem sodným (2,2 g, 26,51 mmol), přidá se thionylchlorid (20 ml) a reakční směs se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Po oddestilování přebytku thionylchloridu se přidá heptan a pevný podíl spojí filtrací, čímž se získá 4-brom-2-methoxy-lbenzenkarbonylchlorid (3,16g, 100%). *H NMR (CDC1₃) δ 3,94 (s, 3H), 7,16 (s, 1H), 7,20 (d, J = 8,51 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 8,51 Hz, 1H).

d) Al -fenyl-4-brom-2-methoxybenzamid

Anilin (1,24 ml, 13,62 mmol) se pomalu přidá do směsi 4-brom-2-methoxy-lbenzenkarbonylchloridu (3,24 g, 12,98 mmol) a triethylaminu (2,7 ml, 19,48 mmol) v • ·

245 dichlormethanu (130 ml). Po 3 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku, přidá se ethylacetát a směs se filtruje, filtrát koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá Al-fenyl-4-brom-2methoxybenzamid (2,92 g, 74%). *H NMR (DMSO-d₆) δ 3,92 (s, 3H), 7,09 (s, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,55 (d, J - 8,15 Hz, 1H), 7,71 (m, 2H), 10,10 (s, 1H).

e) 4-(Anilinokarbonyl)-3-methoxyfenylboritá kyselina n-Butyllithium (1,6 M hexanový roztok, 5,1 ml, 8, 16 mmol) se pomalu přidá do roztoku Al-fenyl-4-brom-2-methoxybenzamidu (1, 0 g, 3,26 mmol) v tetrahydrofuranu (25 ml) při teplotě -78°C. Po 30 minutách se najednou přidá triisopropylborát (1,13 ml, 4,90 mmol). Po 15 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se kyselina chlorovodíková (2,5N, 18 ml) a směs se míchá po dobu 5 hodin. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a koncentruje. Zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá 4-(anilinokarbonyl)-3-methoxyfenylboritá kyselina (0,549 g, 62%). *H NMR (DMSO-dó) δ 3,91 (s, 3H), 7,08 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,47 (d, J = 7,57 Hz, 1H), 7,59 (m, 2H), 7,73 (d, J = 7,36Hz, 2H), 8,24 (s, 2H), 10,10 (s, 1H).

f) CA-Al -fenyl-4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxybenzamid

Cis-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4ylamin (148 mg, 0,335 mmol), 4-(anilinokarbonyl)-3-methoxyfenylboritá kyselina (100 mg, 0,369 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (23 mg, 0,020 mmol) a uhličitan sodný (85 mg, 0,845 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (4 ml) a vodou (2 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) jako mobilní fáze, čímž se získá cA-Al-fenyl-4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyk!ohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamid (125 mg, 69%). *H NMR (CDC1₃) δ 1,69 (m, 2H), 1,86 (m, 2H), 2,17 (m, 2H), 2,31 (s,

246

3H), 2,44 (m, 1H), 4,15 (s, 3H), 4,96 (m, 1H), 5,69 (bs, 2H), 7,14 (m, 1H), 7,37 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,68 (m, 2H), 8,41 (m, 2H), 9,77 (s, 1H).

LC/MS (sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH⁺= 541,2, R_t = 2,58 min.

Příklad 201

Trans-N\ -F enyl-4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4í7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxybenzamid

Trans-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4amin (266 mg, 0,604 mmol), 4-(anilinokarbonyl)-3-methoxyfenylboritá kyselina (180 mg, 0,664 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfinu (42 mg, 0,036mmol) a uhličitan sodný (154 mg, 1,449 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (8 ml) a vodou (4 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) jako mobilní fáze, čímž se získá /ra«.s-Al-fenyl-4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxybenzamid (226 mg, 69%). ’H NMR (CDC1₃) δ 1,58 (m, 4H), 2,17 (m, 7H), 2,32 (s, 3H), 2,52 (m, 2H), 2,69 (2,69,3H), 4,16 (s, 3H), 4,78 (m, 1H), 5,49 (bs, 2H), 7,14 (m, 1H), 7,43 (m, 4H), 7,69 (m, 2H), 8,44 (m, 2H), 9,77 (s, 1H). LC/MS (Sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH⁺ = 541,2, R_t =2,61 minut.

Příklad 202

Cis-Nl -benzy 1-4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxybenzamid

a) Al -Benzyl-4-brom-2-methoxybenzamid

Benzylamin (0,69 ml, 6,31 mmol) se pomalu přidá do směsi 4-brom-2-methoxy-lbenzenkarbonylchloridu (1,5 g, 6,01 mmol) a triethylaminu (1,3 ml, 9,02 mmol) v • · ··· · · · · * * ··*· «· · · · ·> · • ······· · · · · · · · · • « · ·· · · · · ·

247 dichlormethanu (60 ml). Po 3 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku, přidá se ethylacetát a směs se filtruje, filtrát koncentruje za sníženého tlaku a zbytek rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá Al-benzyl-4-brom-2methoxybenzamid (l,654g, 86%). ^!H NMR (DMSO-dó) δ 3,92 (s, 3H), 4,67 (d, J = 5,67 Hz, 32H), 7,31 (m, 7H), 8,03 (bs, 1H), 8,13 (d, J = 8,41, 1H).

b) 4-[(Benzylamino)karbonyl]-3-methoxyfenylboritá kyselina «-Butyllithium (1,6 M hexanový roztok, 8,0 ml, 12,88 mmol) se pomalu přidá do roztoku Al-benzyl-4-brom-2-methoxybenzamidu (1,65 g, 5, 15 mmol) v tetrahydrofuranu (40 ml) při teplotě -78°C. Po 30 minutách se najednou přidá triisopropylborát (1,8 ml, 7,73mmol). Po 13 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 16 hodin. Přidá se kyselina chlorovodíková (2,5N, 36 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO4, filtruje a koncentruje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) jako mobilní fáze, čímž se získá 4-[(benzylamino)karbonyl]-3-methoxyfenylboritá kyselina (0,675 g, 46%). 'fl NMR (DMSO-dó) δ 3,90 (s, 3H), 4,51 (d, J = 6,18 Hz, 2H), 7,24 (m, 1H), 7,34 (m, 4H), 7,43 (d, J = 7,55 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,69 (d, J = 7,55Hz, 1H), 8,23 (s, 2H), 8,69 (m, 1H).

c) Cis-Nl -benzyl-4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl} -2-methoxybenzamid

Cz.s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-ť/pyrimidin-4amin (141 mg, 0,319 mmol), 4-[(benzylamino)karbonyl]-3-methoxyfenylboritá kyselina (100 mg, 0,351 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (22 mg, 0,019mmol) a uhličitan sodný (81 mg, 0,765 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (4 ml) a vodou (2 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) jako mobilní fáze, čímž se získá c/.s-Al-benzyl-4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy benzamid (126 mg, 71 %). ^]H NMR (CDC1₃) δ 1,83 (m, 6H), 2,34 (s, 3H), 2,45 (m, 11H), 4,02 (s, ··· ·»···· ··· ··· ·· · ··· ·»·· · · · ···· • ······· · · · · · · · · • · · ·· · · · · ·

248

3H), 4,43 (d, J = 5,66Hz, 2H), 4,95 (m, IH), 5,52 (bs, 2H), 7,37 (m, 7H), 8,18 (m, IH), 8,41 (m, IH); LC/MS (Sloupec Micromass: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH⁺ = 555,5, R_t = 2,65 min.

Příklad 203

Cis-Nl -fenethy 1-4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4č/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxybenzamid

a) Al -Fenethyl-4-brom-2-methoxybenzamid

Fenethylamin (0,79 ml, 6,31 mmol) se pomalu přidá do směsi 4-brom-2-methoxy1-benzenkarbonylchloridu (1,5 g, 6,01 mmol) a triethylaminu (1,3 ml, 9,02 mmol) v dichlormethanu (60 ml). Po 2 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku. Přidá se ethylacetát a směs se filtruje, filtrát koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a ethylacetátu (97:3) jako mobilní fáze, čímž se získá Al-fenethyl-4-brom-2methoxybenzamid (1,81 g, 90%). *H NMR (DMSO-d₆) δ 2,83 (m, 2H), 3,50 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 7,31 (m, 7H), 7,65 (d, J = 8,28Hz, IH), 8,15 (m, IH).

b) 4-[(Fenethylamino)karbonyl]-3-methoxyfenylboritá kyselina n-Butyllithium (1, 6 M hexanový roztok, 8, 5 ml, 13,54 mmol) se pomalu přidá do roztoku Al-fenethyl-4-brom-2-methoxybenzamidu (1,81 g, 5,41 mmol) v tetrahydrofuranu (40 ml) při teplotě -78°C. Po 30 minutách se najednou přidá triisopropylborát (1,87 ml, 8,12mmol). Po 13 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 3 hodin. Přidá se kyselina chlorovodíková (2,5N, 40 ml) a směs se míchá přes noc. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSCU, filtruje a koncentruje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) ve formě mobilní fáze látky, čímž se získá 4-[(benzylamino)karbonyl]-3methoxyfenylboritá kyselina (0,916 g, 56%). *H NMR (DMSO-dé) δ 2,85 (m, 2H), 3,53 (m, 2H) 3,88 (s, 3H), 7,31 (m, 7H), 7,70 (d, J = 7,61Hz, IH), 8,19 (m, 2H), 9,10 (m, IH).

♦ · • · ·

249

c) Cis-Nl -fenethyl-4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 /7-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} -2 -methoxy benzamid

Cz.s-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4amin (154 mg, 0,349 mmol), 4-[(fenethylamino)karbonyl]-3-methoxy fenylboritá kyselina (115 mg, 0,384 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (24 mg, 0,021 mmol) a uhličitan sodný (89 mg, 0,839 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (4 ml) a vodou (2 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) ve formě mobilní fáze fáze, čímž se získá cis-Nl-fenethyl-4-{4-amino-1[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -y 1} -2methoxybenzamid (64 mg, 32%). *H NMR (CDCfi-d) δ 1,62 (m, 4H), 2,16 (m, 16H), 2,87 (m, 2H), 3,57 (m, 2H), 3,90 (s, 3H), 4,83 (m, IH), 7,31 (m, 7H), 7,95 (m, IH), 8,22 (m, 2H); LC/MS (Sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH⁺ = 569,3, R_t = 2,50 min.

Příklad 204

Cis-Nl -fenyl-4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} benzamid

a) NI -Fenyl-4-brombenzamid

Do směsi 4-brom-l-benzenkarbonylchloridu (2,0 g, 9,11 mmol) a triethylaminu (1,9 ml, 13,67 mmol) v dichlormethanu (95 ml) se pomalu přidá anilin (0,87 ml, 9,57 mmol). Po 3 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku, přidá se ethylacetát a směs se filtruje, filtrát koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá Al-fěnyl-4-brombenzamid (1,00 g, 40%). *H NMR (DMSO-d₆) δ 7,11 (m, IH), 7,38 (m, 2H), 7,76 (m, 4H), 7,92 (m, 2H), 10,30 (s, IH).

b) 4-(Anilinokarbonyl)fenylboritá kyselina n-Butyllithium (1,6 M hexanový roztok, 5,7 ml, 9,05 mmol) se pomalu přidá do roztoku Al-fenyl-4-brom-2-methoxybenzamidu (1,0 g, 3,62 mmol) v tetrahydrofuranu (27 * · •

• · 4

250 ml) při teplotě -78°C. Po 30 minutách se najednou přidá triisopropylborát (1,25 ml, 5,43 mmol). Po 13 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 6 hodin. Přidá se kyselina chlorovodíková (2,5 N, 27 ml) a směs se míchá přes noc. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSC>4, filtruje a koncentruje. Zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá 4-(anilinokarbonyl)fenylboritá kyselina (0,354 g, 40%). ’H NMR (DMSO-de) δ 7,10 (m, IH), 7,35 (m, 2H), 7,80 (m, 4H), 7,92 (m, 2H), 8,23 (s, 2H), 10,23 (s, IH).

c) Czs-Vl-fenyl-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} benzamid

Cis-3 -j od-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-z7]pyrimidin-4amin (100 mg, 0,226 mmol), 4-(anilinokarbonyl)fenylboritá kyselina (60 mg, 0,249 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (16 mg, 0,014mmol) a uhličitan sodný (58 mg, 0,544 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (3ml) a vodou (1,5 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí preparativní chromatografií za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (95:5:0,5) jako mobilní fáze, čímž se získá cz'.s-Vl-fenyl-4-14-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}benzamid (32 mg, 27%). 'H NMR (DMSO-dé) δ 1,60 (m, 4H), 1,73 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,28 (m, 11H), 4,84 (m, IH), 7,12 (m, IH), 7,38 (m, 2H), 7,81 (m, 4H), 8,16 (d, J = 8,30 Hz, 2H), 8,27 (s, IH), 10,34 (s, IH).

LC/MS (Sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH⁺ = 511,2, R_t = 2,41 min.

Příklad 205

Cis-Nl -fenethy 1-4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4í7]pyrimidin-3 -yl} benzamid

a) Vl-fenethyl-4-brombenzamid • ·

251

Fenethylamin (1,2 ml, 9,57 mmol) se pomalu přidá do směsi 4-brom-lbenzenkarbonylchloridu (2,0g, 9,11 mmol) a triethylaminu (1,9 ml, 13,67 mmol) v dichlormethanu (95 ml). Po 3 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku, přidá se ethylacetát a směs se filtruje, filtrát koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá VI-fenyl-4-brombenzamid (1,925 g, 69%), ’H NMR (DMSO-d₆) δ 2,84 (m, 2H), 3,47 (m, 2H), 7,28 (m, 5H), 7,67 (d, J - 8,59Hz, 2H), 7,76 (d, J = 8,59Hz, 4H), 8,64 (m, 1H).

b) 4-[(Fenethylamino)karbonyl]fenylboritá kyselina n-Butyllithium (1,6 M hexanový roztok, 10 ml, 15,78 mmol) se pomalu přidá do roztoku Vl-fenyl-4-brom-2-methoxybenzamidu (1,92 g, 6,31 mmol) v tetrahydrofuranu (47 ml) při teplotě -78°C. Po 30 minutách se najednou přidá triisopropylborát (2,2 ml, 9,47 mmol). Po 13 minutách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 16 hodin. Přidá se kyselina chlorovodíková (2,5 N, 47 ml) a směs se míchá po dobu 5 hodin. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a koncentruje. Zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetátu a heptanu, čímž se získá 4-(fenethylamino)karbonyl]fenylboritá kyselina (0,486 g, 28%). ’H NMR (DMSO-dé) δ 2,85 (m, 2H), 3,49 (m, 2H), 7,22 (m, 5H), 7,73 (m, 4H), 8,17 (s, 2H), 8,54 (m, 1H).

c) Cz.v-Vl-fenethyl-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl} benzamid

Cz',s'-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l V-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4amin (100 mg, 0,226 mmol), 4-[(fenethylamino)karbonyl]fenylboritá kyselina (60 mg, 0,249 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (16 mg, 0,014 mmol) a uhličitan sodný (58 mg, 0,544 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (3ml) a vodou (1,5 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí preparativní chromatografií za použití směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fáze, čímž se získá cis-VI-fenethyl-4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl}benzamid (28 mg, 23%).

• · · · • · • · · · · · · • · * · ·· · · • ······· · · · · ··· ···· · • · · · · · ·

252 ‘H NMR (DMSO-dó) δ 1,62 (m, 4H), 2,24 (m, 16H), 2,88 (m, 2H), 3,54 (m, 2H), 4,82 (m, 1H), 7,29 (m, 7H), 8,73 (d, J = 8,10Hz, 2H), 7,99 (d, 8,17Hz, 1H), 8,67 (m, 1H).

LC/MS (Sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH⁺ = 539,3, R_t = 2,50 min.

Příklad 206

Trimaleát /rau.v-A^f2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/jpyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-1 /7-2-indolkarboxamidu

a) Trans-terc-\r\xty\-N-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1/7pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)karbamát

Trans-3 - Jod-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin4-amin (4,0 g, 9,06 mmol), férc-butyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (3,48 g, 9,97 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfín (0,63 g, 0,64 mmol) a uhličitan sodný (2, 30 g, 21,75 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (100 ml) a vodou (50 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fáze, čímž se získá /rans-/erc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)karbamát (4,75 g, 98%). 'H NMR (DMSO-d₆) δ 1,48 (m, 11H), 2,02 (m, 6H), 2,15 (s, 3H), 2,35 (m, 5H), 2,53 (m, 4H), 3,87 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,20 (m, 2H), 7,90 (d, J = 8,15,1H), 8,03 (s, 1H), 8,22 (s, 1H).

b) Trans-3-(4-Amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 150 ml) se přidá do roztoku V-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}2-methoxyfenyl)karbamátu (4,75 g, 8,85 mmol) v dichlormethanu (100 ml) při teplotě 0°C. Po 2 hodinách se ledová lázeň odstraní a rozpouštědla se zahušťují a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. K upravení pH na 10 se přidá hydroxid sodný (l,0N). Pevný podíl

253 vzniklý po odstranění organického rozpouštědla se spojí filtrací, čímž se získá trans-3-{4amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin (3,85g, 100%). ^!H NMR (DMSO-d₆) δ 1,44 (m, 2H), 1,96 (m, 6H), 2,21 (s, 3H), 2,33 (m, 5H), 2,53 (m, 4H), 3,83 (s, 3H), 4,60 (m, ÍH), 5,03 (bs, 2H), 6,76 (d, J = 7,91Hz, ÍH), 6,98 (d, J = 7,89 Hz, ÍH), 7,03 (m, 2H), 8,19 (s, ÍH).

c) Atfz?.s-A2-(4-[4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-ΙΑ-2-indolkarboxamid

K ΙΑ-2-indolkarboxylové kyselině (0,738 g, 4,58 mmol) v dichlormethanu (14 ml) se přidá oxalylchlorid (4 ml, 45,8 mmol) a DMF (1 kapka). Reakční směs se míchá přes noc. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (5 ml). Při teplotě 0°C se polovina z dichlormethanového roztoku (2,5 ml) přidá do roztoku trara-3-(4-amino3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4aminu (0,50 g, 1,145 mmol) v pyridinu (6 ml). Po 30 minutách se pevný podíl spojí filtrací, k pevnému podílu se přidá voda a pH roztoku se upraví na 10 hydroxidem sodným (1,0N). Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fáze, čímž se získá tra«s-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl|-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l A-2indolkarboxamid (0,312 g, 47%). *H NMR (DMSO-d₆) δ 1,49 (m, 2H), 2,05 (m, 6H), 2,15 (s, 3H), 2,32 (m, SH), 2,51 (m, 4H), 3,97 (s, 3H), 4,66 (m, ÍH), 7,10 (m, ÍH), 7,22 (m, ÍH), 7,30 (d, J = 7,98 Hz, ÍH), 8,11 (d, J = 8,14 Hz, ÍH), 8,24 (s, ÍH), 9,44 (s, ÍH).

d) Trimaleát /ra«s-V2-(4-{ 4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 A-2-indolkarboxamidu

Trans- V2-(4-{ 4-amino- l-[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-lA-2-indolkarboxamid (312 mg, 0,539 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (35 ml) a přidá se kyselina maleinová (187 mg, 1,614 mmol) v horkém ethylacetátu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin, pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá dimaleát trans-N2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1A-2indolkarboxamidu (473 mg, 95%). *H NMR (DMSO-d₆) δ 1,60 (m, 2H), 2,09 (m, 6H), • · * ·· ···· ···· ·· · · · « · • ······· · · · · · · · * • · · · · ·· · · ·

254

2,68 (s, 3H), 2,84-3,19 (bm, 9H), 3,97 (s, 3H), 4,73 (m, 1H), 6,17 (s, 6H), 7,11 (m, 1H),

7,25 (m, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,49 (d, J = 8,21, 1H), 7,68 (d, J =

8,02 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 8,15 Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), 11,38 (s, 1H). LCMS (Sloupec Finigan: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH⁺=580,4, R_t = 2,01 min.

Příklad 207

Trimaleát frans-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu

a) Trans-N2-(A- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1//-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl} -2-methoxy fenyl)-1 -methyl-l//-2-indolkarboxalmid

Ke 1-methyl-1//-2-indolkarboxylové kyselině (0,802g, 4,58 mmol) v dichlormethanu (14 ml) se přidá oxalylchlorid (4 ml, 45,8 mmol) a DMF (1 kapka). Reakční směs se míchá přes noc. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (5 ml), polovina z dichlormethanového roztoku (2,5 ml) se přidá do roztoku /rím-3-(4-amino-3-methoxy feny l)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,50 g, 1,145 mmol) v pyridinu (6 ml) při teplotě 0°C. Po 30 minutách se pevný podíl spojí filtrací, k pevnému podílu se přidá voda a pH roztoku se upraví na 10 hydroxidem sodným (1,0 N). Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fáze, čímž se získá trans-N2-{4-{4amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-1-methyl-1/7-2-indolkarboxamid (0,545 g, 80%). 'H NMR (DMSO-dé) δ 1,49 (m, 2H), 2,02 (m, 6H), 2,17 (s, 3H), 2,36 (m, 5H), 2,55 (m, 4H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,66 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,28-7,35 (m, 4H), 7,58 (d, J = 8,42 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,96 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 8, 14,1H), 8,24 (s, 1H), 9,43 (s, 1H).

b) Trimaleát trans-N2-(4-{4-amino- l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu • ·

255

7ra«s-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid (545 mg, 0,917 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (60 ml) a přidá se kyselina maleinová (320 mg, 2,75 mmol) v horkém ethylacetátu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin a pevný se podíl spojí filtrací, čímž se získá dimaleát /‘ran.v-V2-(4-{4-aminol-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-l-methyl-l//-2-indolkarboxamidu (473 mg). 'H NMR (DMSO-dó) δ 1,60 (m, 2H), 2,06 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,83-3,57 (bm, 9H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,72 (m, IH), 6,18 (s, 6H), 7,16 (m, IH), 7,28-7,36 (m, 4H), 7,59 (d, J = 8,44 Hz, IH), 7,72 (d, J = 7,94 Hz, IH), 8,13 (d, J = 8,15,1H), 8,28 (s, IH), 9,44 (s, IH). LC/MS (Sloupec Finigan: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm. eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH⁺ = 594,4, R_t = 2,24.

Příklad 208

Trimaleát trans-Ni -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-4 (trifluormethyl)benzamidu

a) Trans-Ni -(4- {4-Amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-úQpyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamid

4-(Trifluormethyl)-l-benzenkarbonylchlorid (262 mg, 1,256 mmol) v dichlormathanu (1 ml) se přidá do roztoku /rms--3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (500 mg, 1,145 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě 0°C. Po 30 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fáze, čímž se získá /rm?.s-/Vl-(4-[4amino-1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamid (516 mg, 74%). 'H NMR (CDCb-d) δ 1,55 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 2,10-2,27 (m, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,51 (m, 4H), 2,66 (m, 3H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,78 (m, IH), 5,57 (bs, 2H), 7,30 (m, 2H), 7,79 (d, J = 8,25 Hz, 2H), 8,04 (d, J = 8,05 Hz, 2H), 8,38 (s, IH), 8,64 (s, IH), 8,68 (d, J = 8,20 Hz, IH).

• ·

256

b) Trimaleát trans-N\ -(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l Hpyrazolo [3,4-</]py rimidin-3 -yl} -2-methoxyfeny l)-4-(trifluormethyl)benzamidu

Trans-N\ -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamid (510 mg, 0,838 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (55 ml) a přidá se kyselina maleinová (292mg, 2,513 mmol) v horkém ethylacetátu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá dimaleát Zra«.s-jVl-(4-{4-amino-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-4(trifluormethyl)benzamidu (802 mg, 100%). 'H NMR (DMSO-dé) δ 1,60 (m, 2H), 2,06 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,83-3,17 (bm, 9H), 3,93 (s, 3H), 4,72 (m, IH), 6,17 (s, 6H), 7,29 (d, J = 8,12 Hz, IH), 7,33 (s, IH), 7,92 (d, J = 8,34 Hz, 2H), 8,02 (d, J = 8,12 Hz, IH), 8,17 (d, J = 8,12 Hz, 2H), 8,26 (s, IH), 9,83 (s, IH). LCMS (Sloupec Finigan: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH⁺ =609,4, R_t = 2,16 minut.

Příklad 209

Trimaleát z‘rarcs-yVl-(4-[4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamidu

a) 7rara-/Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamid

4-(Trifluormethoxy)-l-benzenkarbonylchlorid (283 mg, 1,256 mmol) v dichlormethanu (1 ml) se přidá do roztoku /raz?.s-3-(4-amino-3- methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu (500 mg, 1,145 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě 0°C. Po 30 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fáze, čímž se získá trans-Nl-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3 -y 1} -2methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamid (526 mg, 74%). *H NMR (CDCI3) δ 1,57 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 2,10-2,27 (m, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,51 (m, 4H), 2,66 (m, 3H), 4,03 (s, 3H), 4,77 (m, 3H), 5,56 (bs, 2H), 7,26-7,37 (m, 4H), 7,99 (m, 2H), 8,38 (s, IH), 8,59 (s, IH), 8,67 (d, J = 8,21 Hz, IH).

»· · ·· • v · * · · * · · • v * · ·· · · * * · • v······ · · · · » · · · « · · · · · · · · · • » 9 · * · · · · *

257

b) Trimaleát trans-Nl-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamidu

Trans-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4í7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamid (520 mg, 0,832 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (55 ml) a přidá se kyselina maleinová (290mg, 2,497 mmol) v horkém ethylacetátu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá dimaleát /rm-zs-Al-(4-{4-amino-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4(trifluormethoxy)benzamidu (780 mg, 96%). ^]H NMR (DMSO-dé) δ 1,60 (m, 2H), 2,06 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,83-3,17 (bm, 9H), 3,93 (s, 3H), 4,72 (m, 1H), 6,18 (s, 6H), 7,28 (d, J = 8, 14 Hz, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,54 (d, J = 8,47 Hz, 2H), 8,01 (d, J = 8,12 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 8,69 Hz, 2H), 8,26 (s, 1H), 9,69 (s, 1H). LCMS (Sloupec Finigan: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,0 ml/min, MH⁺= 625,4, R_t = 2,21 min.

Příklad 210

Al - {4-[4-amino-l-[l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]- l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl] -2 -methoxyfenyl} -3 -fenylpropanamid

a) 7erc-butyl/4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát

Borohydrid sodný (3,8 g, 100,4 mmol) se přidá po částech do roztoku Zerc-butyl-4oxo-l-piperidinkarboxylátu (20 g, 100,4 mmol) v methanolu (600 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin, přidá se hydroxid sodný (1,0 N, 100 ml) a organicko rozpouštědlo se odpařuje, vodná fáze se extrahuje etherem (4x). Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje, čímž se získá terc-butyl-4-hydroxy-lpiperidinkarboxylát (20,48 g, 100%). *H NMR (CDC1₃-J) 1,48 (s, 9H), 1,63 (m, 2H), 1,87 (m, 2H), 3,03 (m, 2H), 3,83 (m, 3H).

b) 7erc-butyl-4-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát

3-Jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (10 g, 38,3 mmol), /erc-butyl-4hydroxy-1-piperidinkarboxylát (16,96 g, 84,2 mmol) a trifenylfosfin (20,09 g, 76,0 mmol) ··· 44444» *· * « * 4 4 * · * · • e · · · · · · · • · ···· 4 · · 4 4 4 » ···«

44* ·····*· • · 4 4· 44 · · *

258 se suspendují v tetrahydrofuranu (425 ml). Reakční směs se ochladí v ledové lázni a o 10 minut později se po kapkách přidá diethyl-azodikarboxylát (12,09 ml, 76,0 mmol). Po 5 hodinách se reakční směs nechá ohřát na pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (65 ml). Pevný podíl se filtruje, promyje dichlormethanem (20 ml) a ethylacetátem (5x20 ml), čímž se získá směs diethyl-1,2hydrazindikarboxylátu a /erc-butyl-4-(4-amino-3-jod-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-1 -yΟΙ-piperidinkarboxylátu (1:1, 14,98 g, 63%), která se bez purifikace použije dále. ’H NMR (CDC1₃) δ 1,48 (s, 9H), 1,95 (m, 2H), 2,20 (m, 2H), 2,92 (m, 2H), 4,23 (m, 2H), 4,84 (m,

1H), 8,31 (s, 1H).

c) 3 - Jod-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin

Po 15 minutách se směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 250 ml) přidá do roztoku Vrc-butyl-4-(4-amino-3-jod-177-pyrazolo[3,4-ť7]pyrimidin-l-yl)-lpiperidinkarboxylátu (10,72 g, 24,1 mmol) v dichlormethanu (100 ml) při teplotě 0°C.

Ledová lázeň se odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědla se zahušťují a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. Přidá se kyselina chlorovodíková (5,0 N) a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (3x), k upravení pH se přidá hydroxid sodný (50%), suspenze se lyofilizuje ke snížení objemu na jednu třetinu a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá 3-jod-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin (8,109 g, 97%). ’H NMR (CDCI3) δ 1,81 (m, 2H), 1,99 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,07 (m, 2H), 4,68 (m, 1H), 8,19 (s, 1H).

d) 3-Jod-l -[1-(1 -methylpiperidin-4-yl)]-piperidin-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4amin

3-Jod-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-<7|pyrimidin-4-amin (2,00 g, 5,81 mmol), l-methyl-4-piperidon (2,14 ml, 17,42 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (2,45 g, 11,62 mmol) a ledová kyselina octová (1, 05g, 17,42 mmol) se smíchají s 1,2-dichlorethanem (75 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin a k upravení pH na asi 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá 3-jod-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)]-piperidin-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-ť7]pyrimidin4-amin (2,39 g, 93%). *H NMR (DMSO-d₆) δ 1,52 (m, 2H), 1,75 (m, 2H), 1,87 (m, 2H),

2,05 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,28 (m, 3H), 2,91 (m, 2H), 3,00 (m, 2H), 4,55 (m, 1H), 8,18 (s,

1H).

259

e) 7erc-butyl-A- {4-[4-amino-1 -[l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl]-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl} karbamát

3-Jod-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)]-piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin4-amin (2,39 g, 5,41 mmol), Zerc-butyl-A-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (2,08 g, 5,96 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (0,375 g, 0,32 mmol) a uhličitan sodný (1,38 g, 13,00 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (80 ml) a vodou (40 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (95:5:0,5) jako mobilní fáze, čímž se získá fórc-butyl-A-{4-[4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}karbamát (1,67 g, 57%). *H NMR (DMSO-dé) δ 1,48 (m, 1 ÍH), 1,71 (m, 2H) 1,86 (m, 4H), 2,14 (s, 3H), 2,18 (m, 3H), 2,32 (m, 2H), 2,80 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 4,64 (m, ÍH), 7,22 (m, 2H), 7,91 (d, J = 8, 12,ÍH), 8,03 (s, ÍH), 8,21 (s, ÍH).

f) Al -{4-[4-amino-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -3 -fenylpropanamid

3-Fenylpropanoylchlorid (77 mg, 0,458 mmol) se přidá do roztoku 3-(4-amino-3methoxy feny 1)-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4J]pyrimidin-4-aminu (100 mg, 0,229 mmol) v pyridinu (1,2 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo zahušťuje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-[l-(l-methylpiperdin-4-yl)piperidin-4-yl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-3-fenylpropanamid (24 mg, 18%). 'H NMR (CDCl₃-d) 1,70 (m, 2H), 1,85 (m, 2H), 2,04 (m, 4H), 2,30 (s, 3H), 2,41 (m, 5H), 2,75 (m, 2H), 2,97 (m, 2H), 3,08 (m, 4H), 3,90 (s, 3H), 4,75 (m, ÍH), 5,71 (bs, 2H), 7,24 (m, 8H), 7,76 (s, ÍH), 8,34 (s, ÍH), 8,52 (d, J = 8,12,1H). LCMS (Sloupec Finígan: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH⁺ = 569,5, R_t = 1,65 minut.

260

Příklad 211

Al - {4- [4-Amino-1- [l-( 1 -methylpiperidin-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3-yl]-2-methoxyfenyl}-4-(trifluormethoxy)benzamid

4-(Trifluormethoxy)-l-benzenkarbonylchlorid (103 mg, 0,458 mmol) se přidá do roztoku 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl] -1Hpyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (100 mg, 0,229 mmol) v pyridinu (1,0 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo zahušťuje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-yl)piperidin-4-yl]-lHpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1]-2-methoxyfenyl} -4-(trifluormethoxy)benzamid (40 mg, 28%). 'H NMR (CDCb-tZ) δ 1,67 (m, 2H), 1,84 (m, 2H), 1,97 (m, 2H), 2,06 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,45 (m, 5H), 2,94 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 4,77 (m, IH), 5,53 (bs, 2H), 7,34 (m, 4H), 7,98 (d, J = 8, 73 Hz, 2H), 8,38 (s, IH), 8,59 (s, IH), 8,66 (d, J = 8,73 Hz, IH). LCMS (Sloupec Finigan: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH⁺ =625,5, R_t = 2,00 min.

Příklad 212

Trimaleát Al - {4- [4-amino-l-( 1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl] -2methoxy fenyl} -4-(trifluormethyl)benzamidu

a) Al - {4- [4-amino-l-( 1 -methyl-4-piperidy 1)-1 A-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-y l]-2methoxy fenyl} -4-(trifluormethyl)benzamid

4-(Trifluormethyl)-l-benzenkarbonylchlorid (48 mg, 0,231 mmol) se přidá do roztoku 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl] -1/7pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (101 mg, 0,231 mmol) v pyridinu (1,0 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo zahušťuje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4c/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4-(trifluormethyl)benzamid (83mg, 59%). *H NMR (CDCl₃-d) δ 1,68 (m, 2H), 1,82 (m, 4H), 2,01 (m, 4H), 2,29 (s, 3H), 2,44 (m, 3H), 2,93 (m, 2H), 3,30 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 4,77 (m, IH), 5,60 s, 2H), 7,33 (m, 2H), 1,79 d, J = 8,19 Hz, 2H), 8,04 (d, J = 8,04 Hz, 2H), 8,37 (s, IH), 8,66 (m, 2H). LCMS (Sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 • ·

261 minutách,(B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH⁺=609,4, R_t = 2,50 minut.

b) Trimaleát Al-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]2-methoxyfenyl} -4-(trifluormethyl)benzamidu

Al - {4- [4-amino-l-( 1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyl}-4-(trifluormethyl)benzamid (78 mg, 0,128 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (10 ml) a přidá se kyselina maleinová (45 mg, 0,387 mmol) v horkém ethylacetátu (1 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin, rozpouštědlo se odstraní a přidá se ethylacetát. Pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá trimaleát Al - {4- [4-amino-l-( 1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -y 1] -2methoxyfenyl}-4-(trifluormethyl)benzamidu (115 mg, 94%). *H NMR (DMSO-dó) δ 1,87 (m, 2H), 2,24 (m, 4H), 2,79 (s, 3H), 3,01-3,57 (bm, 11H), 3,93 (s, 3H), 5,09 (m, 1H), 6,12 (s, 6H), 7,32 (m, 2H), 7,93 (d, J = 8,37 Hz, 2H), 8,04 (d, J = 8,11 Hz, 1H), 8,16 (d, J = 8,18 Hz, 2H), 8,29 (s, 1H), 9,84 (s, 1H). LCMS (Sloupec Micromass: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH⁺ = 609,4, R_t = 2,50 min.

Příklad 213

- [l-( 177-2-Imidazolylmethy ljtetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl]-3 -(4-fenoxyfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-úQpyrimidin-4-amin

a) 7erc-butyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl]-l-pyrrolidinkarboxylát

3-(4-Fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (0,5 g, 1,648 mmol), /erc-butyI-3-{[(4-methylťenyl)sulfonyl]oxy}-l-pyrrolidinkarboxylát (1,12 g, 3,30 mmol) a uhličitan česný (1,07 g, 3,30 mmol) v AA-dimethylformamid (12 ml) se zahřívá při teplotě 75°C přes noc. Reakční směs se nalije do ledové vody (100 ml), vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSCfr, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití ethylacetátu jako mobilní fáze, čímž se získá /<?robutyl-3-[4-amino-3(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-pyrrolidinkarboxylát (0,20 g, 28%). *H NMR (DMSO-dó) δ 1,38 (m, 9H), 2,37 (m 2H), 3,32 (s, 3H), 3,44 (m, 1H), 3,59 (m, • ·

262

1H), 3,65 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 5,44 (m, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,43 (m, 2H), 7,65 (m, 2H), 8,26 (s, 1H).

b) 3 -(4-Fenoxyfenyl)-l-tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin

Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 8 ml) se přidá do roztoku /erc-butyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl]-lpyrrolidinkarboxylátu (240 mg, 0,508 mmol) v dichlormethanu (1 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Směs se zahušťuje a zbytek se rozpustí v ethylacetátu. K upravení pH asi na 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSC>4, filtruje a zahušťuje, čímž se získá 3-(4-fenoxyfenyl)-l-tetrahydro-177-3-pyrrolyl-177pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin (0,157 mg, 91%). Ή NMR (DMSO-dé) δ 1,99-2,21 (m, 2H), 2,94 (m, 1H), 3,04-3,23 (m, 3H), 5,31 (m, 1H), 7,14 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (m, 2H), 8,24 (s, 1H).

c) 1-(1-(177-2 -Imidazolylmethyl)tetrahydro-177-3 -pyrrolyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin

3-(4-Fenoxyfenyl)-l-tetrahydro-177-3-pyrrolyl-177-pyrazolo[3,4-ť7]pyrimidin-4-amin (100 mg, 5,81 mmol), 177-2-imidazolkarbaldehyd (77 mg, 0,806 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (113 mg, 0,537 mmol) a ledová kyselina octová (48 mg, 0,806 mmol) se smíchají s 1,2-dichlorethanem (4 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin, k upravení pH asi na 9 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (90:10) jako mobilní fáze, čímž se získá 1-(1-(177-2imidazolylmethy l)tetrahydro-177-3-pyrrolyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4í7]pyrimidin-4-amin (100 mg, 83%). ^]H NMR (DMSO-dé) δ 2,33 (m, 2H), 2,81 (m, 4H), 3,15 (m, 1H), 3,69 (s, 2H), 5,38 (m, 1H), 6,90 (s, 2H), 7,15 (m, SH), 7,44 (m, 2H), 7,66 (m, 2H), 8,24 (s, 1H). LCMS (Sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH⁺ 453,4, R_t = 2,17 minut.

• ·

263

Příklad 214

Trimaleát 1 -[ 1 -(1 -methyl-4-piperidyl)tetrahydro-1 //-3-pyrrolyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-\Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu

a) 1 -[ 1 -(1 -Methyl-4-piperidyl)tetrahydro- l//-3-pyrrolyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-\Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin

3-(4-Fenoxyfenyl)-l-tetrahydro-l//-3-pyrrolyl-l//-pyrazolo[3,4-d/|pyrimidin-4-amin (150 mg, 0,403 mmol), l-methyl-4-piperidon (0,099 ml, 0,806 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (113 mg, 0,537 mmol) a ledová kyselina octová (48 mg, 0,806 mmol) se smíchají s 1,2-dichlorethanem (4 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin, k upravení pH asi na 9 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSCh, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (85:15) jako mobilní fáze, čímž se získá l-[l-(l-methyl-4-piperidyl)tetrahydrol//-3-pyrrolyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-i/]pyrimidin-4-amin (148 mg, 78%). 'H NMR (DMSO-d₆) δ 1,42 (m, 2H), 1,81 (m, 2H), 1,92 (m, 2H), 2,15 (m, 1H), 2,26 (m, 2,3H), 2,28 (m, 2H), 2,75 (m, 4H), 2,86 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 5,36 (m, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,44 (m, 2H), 7,67 (m, 2H), 8,24 (s, 1H). LCMS (Sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách,(B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH⁺= 470,4, R_t = 2,01.

b) Trimaleát 1 -[l-( 1 -Methyl-4-piperidyl)tetrahydro- l//-3-pyrrolyl]-3-(4-fenoxyfenyl)- 1Hpyrazolo[3,4-íf|pyrimidin-4-aminu

-[ 1 -(1 -Methyl-4-piperidyl)tetrahydro-1//-3-pyrrolyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-1/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (148 mg, 0,315 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (20 ml) a přidá se kyselina maleinová (110 mg, 0,946 mmol) v horkém ethylacetátu (1 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin, pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá trimaleát l-[l-methyl-4-piperidyl)tetrahydro-l//-3-pyrrolyl]-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu (230 mg, 90%). *H NMR (DMSO-de) δ 1,81 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,78 (s, 3H), 2,97-3,84 (bm, 11H), 5,63 (m, 1H, 6,12 (s, 6H), 7,17 (m, SH), 7,45 (m, 2H), 7,68 (m, 2H), 8,29 (s, 1H). LCMS (Sloupec Micromass: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B:

• · · · · · · • ·

264 acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH⁺ = 470,4, R_t = 2,01.

Příklad 215

Al -(4- {4-amino-l- [l-( 177-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl] -177-pyrazolo [3,4-č7]pyrimidin3 -yl} -2 -methoxyfenyl)-3 -fenylpropanamid

a) 1 - [1-(177-2-Imidazolylmethyl)-4-piperidyl] -3 -j od-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

3-Jod-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidin-4-amin (0,5 g, 1,45 mmol), 1772-imidazolkarbaldehyd (0,42 g, 4,34 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (0,61 g, 2,90 mmol) a ledová kyselina octová (0,26 g, 4,36 mmol) se smíchají s 1,2-dichlorethanem (20 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin a k upravení pH asi na 9 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSCfi, filtruje a zahušťuje, čímž se získá l-[l-(177-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-3-jod-177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,57 g, 92%). ’H NMR (DMSO-dó) 1,85 (m, 2H), 2,17 (m, 4H), 2,92 (m, 2H), 3,55 (s, 2H), 4,57 (m, 1H), 6,92 (s, 2H), 8,14 (s, 1H).

b) 7erc-butyl-A-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(177-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)karbamát

1- [l-( 177-2-Imidazolylmethyl)-4-piperidyl] -3 -j od-177-pyrazolo [3,4-č7]pyrimidin-4amin (127 mg, 0,299 mmol), fórc-butyl-A-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (115 mg, 0,329 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (21 mg, 0,018 mmol) a uhličitan sodný (76 mg, 0,718 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (3 ml) a vodou (1,5 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5) jako mobilní fáze, čímž se získá /vrobuty 1-A-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(177-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-177pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)karbamát (64 mg, 41%). 'H NMR (DMSO-de) δ 1,48 (m, 9H), 1,87 (m, 2H), 2,23 (m, 4H), 2,94 (m, 2H), 3,56 (s, 2H), 3,88

265 (s, 3H), 4,66 (m, 1H), 6,92 (s, 2H), 7,21 (m, 2H), 7,90 (d, J = 8,14,1H), 8,04 (s, 1H), 8,22 (s, 1H).

c) 3-(4-Amino-3-methoxyfenyl)-l-[l-(l A-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-lHpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin

Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 2 ml) se přidá do roztoku fórobutyl-V-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 A-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-1 A-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)karbamátu (55 mg, 0,106 mmol) v dichlormethanu (0,5 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Směs se zahušťuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu a k upravení pH asi na 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSCfi, filtruje a zahušťuje, čímž se získá 3-(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 A-2-imidazolylmethyl )-4-piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin (30 mg, 68%). *H NMR (CDCl₃-d) 2,20 (m, 2H), 2,44 (m, 2H), 3,04 (m, 2H), 3,75 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,01 (s, 2H), 4,80 (m, 1H), 5,58 (bs, 2H), 6,82 (m, 1H), 7,01 (m, 4H), 8,34 (s, 1H).

e) VI -(4- {4-amino-l-[l-( 1 A-2-imidazolylmethy 1)-4-piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny l)-3 -fenylpropanamid

3-Fenylpropanoylchlorid (0,011 ml, 0,0715 mmol) se přidá do roztoku 3-(4-amino3 -methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 A-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-1 A-pyrazolo [3,4í/Jpyrimidin-4-aminu (30 mg, 0,0715 mmol) v pyridinu (1,2 ml) při teplotě 0°C. Po 2 hodinách se rozpouštědlo zahušťuje a zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, čímž se získá Vl-(4-{4-amino-l-[l-(lA-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamid (20 mg, 51%). 'H NMR (CDC1₃) δ 2,27 (m, 2H), 2,61 (m, 2H), 2,76 (m, 4H), 3,09 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,07 (s, 2H), 4,96 (m, 1H), 5,61 (bs, 2H), 7,06-7,33 (m, 10 H), 7,78 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,55 (d, J = 8,15 Hz, 1H). LCMS (Sloupec Finigan: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH⁺= 552,5, R_t = 1,83 min.

266

Příklady 216-221

Amidy odvozené od cfr-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-7//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu

Reprezentativní způsob přípravy:

K příslušné karboxylové kyselině (0,46 mmol) v dichlormethanu (1,4 ml) se přidá oxalylchlorid (0,4 ml, 4,6 mmol) a DMF (1 kapka), vialky se uzavřou šeptem a k vyrovnávání tlaku se do každého septa zapíchne malá jehla. Vialky se třepají přes noc na třepačce J-Kem, 50% z roztoku se oddělí, přebytek oxalylchloridu a dichlormethanu se pak odstraní na 12-ti kanálové vakuové pumpě Supelco za vakua pod atmosférou dusíku. Surový chlorid kyseliny (0,23 mmol) se přidá do cA-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-(/]pyrimidin-4-aminu (50 mg, 0,11 mmol) v suchém pyridinu (0,6 ml) a míchá při pokojové teplotě přes noc. Výsledné roztoky se rovnou purifikují preparativní HPLC (Hypersil BSD 08, 5 pm, 100 x 21 mm, 0%-100% acetonitril/0,05M octan amonný v průběhu 10 minut, 25,0 ml/min). Výsledné produkty se dále purifikují vytřepáním mezi dichlormethan (4 ml) a 1,0 N hydroxid sodný (2 ml) a přetáhnou přes vysoce účinný extrakční diskový cartridge Empore (C18-SD oktadecyl), čímž se získají odpovídající produkty. Sloučeniny jsou podrobněji s odpovídajícími hodnotami LCMS (Sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33x4, 6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, ( B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min) uvedeny níže.

Název sloučeniny

R

Př.

Mn. (mg)

MH⁺

Rt (min)

• ·

267

Al -(4- {4-amino-1 -[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxy feny 1)-3-(2- methoxyfenyl)propanamid		216	29	599,4	2,72
Al-(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexy 1]-1H- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-y 1} -2- methoxy feny 1)-3-(4- methoxyfenyl)propanamid	bx	217	31	599,4	2,58
Al-(4-{4-amino-1-[4-(4 methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo [3,4-</]py rimidin-3 -yl} -2- methoxy fenyl)-3 -(3 - methoxyfenyl)propanamid	O	218	30	599,4	2,61
Al-(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfeny 1)-3-(4- methylfenyl)propanamid		219	33	583,4	2,70
Al -(4- {4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1} -2- methoxyfenyl)-3-(4-fluorfenyl)propanamid	-hx	220	27	587,3	2,72
Al -(4- {4-amino-1-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexy 1] -1H- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxy fenyl)-3 -(3,4- difluorfenyl)propanamid		221	34	605,3	2,80

268

Příklad 221

Cz'5^,-3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-4-amin

Směs cz.v-3-jod-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (3,41 g, 7,74 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (50 ml) se nechá reagovat s 4-(benzyloxy)fenylboritou kyselinou (1,94 g, 8,51 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,537 g, 0,464 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (1,97 g, 18,58 mmol) ve vodě (25 ml). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a do vodné vrstvy se přidá ethylacetát (300 ml). Vrstvy se rozdělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (200 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou (1 1 pokaždé), suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku. K pevnému podílu se přidá ethylacetát. Velké množství pevného podílu není v ethylacátu rozpustné a směs se filtruje, čímž se získá 2,95 g (77%) cz’s-3-[4-(benzyloxy)fenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-z7]pyrimidin-4-amin. 'H NMR (DMSOde,400 MHz) δ 8,217 (s, IH), 7,592-7,570 (m, 2H), 7,504-7,483 (m, 2H), 7,440-7,369 (m, 3H), 7,206-7,184 (m, 2H), 5,186 (s, 2H), 4,802-4,755 (m, IH), 2,497-2,354 (m, 7H), 2,256-2,228 (m, 4H), 2,151 (s, 3H), 2,076-1,989 (m, 2H), 1,694-1,673 (m, 2H), 1,6071,545 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetiy Shield RPi₈ 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t5,128 min (100%).

Příklad 222

Cz's-2-(4- { 4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3 yl}fenoxy)-6-[(3-methoxypropyl)amino]benzonitril

Cz.s-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3yl} fenol

Roztok cis-3 - [4-(benzyloxy)fenyl]-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,005 mmol) v absolutním ethanolu (25 ml) se nechá reagovat s palladiem na aktivním uhlí (10%) (0,100 g, 0,201 mmol) a mravenčanem amonným (0,317 g, 5,03 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 2 hodin a podle TLC výchozí látka vymizí. Reakční směs se filtruje přes vrstvu celitu, která se

269 promyje ethanolem (500 ml). Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku. Výsledný pevný podíl se suší přes noc za vysokého vakua, čímž se získá 0,406 g (99%) cw-4-[4amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -fenolu.

’H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 8,204-8,194 (m, 2H), 7,472-7,437 (m, 2H), 6,947-6,912 (m, 2H), 4,791-4,744 (m, 1H), 2,418 (m, 9H), 2,249-2,243 (m, 2H), 2,193 (s, 3H), 2,0772,050 (m, 2H), 1,688-1,666 (m, 2H), 1,656-1,578 (m, 2H);

HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 3,47 min (99%).

2-Fluor-6-[(2-methoxyethyl)amino]benzonitril

Roztok 2,6-difluorbenzonitrilu (3,5 g, 25,16 mmol) v dimethylformamidu (50 ml) se nechá reagovat s 3-methoxypropylaminem (2,24 g, 25,16 mmol) a uhličitanem draselným (6,94 g, 50,32 mmol). Reakční směs se míchá přes noc pod atmosférou dusíku a do reakčního roztoku se přidá voda (100 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (1,2 1). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (1,5 1), suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 7:1 heptan:ethylacetát jako eluentu, čímž se získá 3,5 g (68%) 2-fluor-6-[(2-methoxyethyl)amino]benzonitril. *H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 7,48-7,39 (m, 1H), 6,64-6,48 (m, 2H), 3,45-3,31 (m, 2H), 3,303,20 (m, 5H), 1,85-1,75 (m, 2H);

HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP]8 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 6,57 min (97%).

C/.v-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl} fenoxy)-6- [(3 -methoxypropyl)amino]benzonitril

Roztok cis-4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenolu (0,200 g, 0,491 mmol) v dimethylformamidu (25 ml) se nechá reagovat s 2-fluor-6-[(2-methoxyethyl)amino]benzonitrilem (0,124 g, 0,589 mmol) a uhličitanem draselným (0,136, 0,982 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 120°C přes noc pod atmosférou dusíku. Pokud reakce není skončena po 18 hodinách, přidá se do reakční směsi další podíl 2-fluor-6-[(2-methoxyethyl)amino]benzonitrilu (0,12 g, 0,574 mmol) a směs se míchá přes noc. Do reakční směsi se přidá ethylacetát a směs se promyje 1 N roztokem hydroxidu sodného (300 ml). Organická vrstva se promyje vodou a solankou • ·

270 (300 ml pokaždé), suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahušťuje za sníženého tlaku. Produkt se čistí zrychlenou chromatografií na silikagelovém sloupci Supelco za použití směsi 20% methanolu v dichlormethanu jako eluentu, čímž se získá 0,050 g produktu, který obsahuje určitý podíl výchozí látky. Surový produkt se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 100 x 21 mm sloupec, 5 pm, 15-100% gradient acetonitrilu v průběhu 8 minut, celková doba 10 minut, puťr - 50 mM octan amonný, 25 ml/min). Produkt ze sloupce HPLC se rozpustí v dichlormethanu, promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného k odstranění zbylého octanu amonného. Vrstvy se rozdělí za použití extrakčního diskového cartridge Empore, čímž se získá 0,010 g (3%) czs-2-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 H-pyrazolo [3,4-</]py rimidin-3 -yl} ťenoxy)6-[(3-methoxypropyl)amino]benzonitril. *H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 8,328 (s, 1H), 7,706-7,678 (m, 2H), 7,305-7,211 (m, 4H), 6,433-6,411 (d, 1H, J - 8,8 Hz), 4,925-4,904 (m, 1H), 3,574-3,547 (m, 2H), 3,400 (s, 3H), 3,389-3,343 (m, 2H), 2,441-2,418 (m, 3H), 2,382 (s, 3H), 2,25-2,10 (m, 2H), 2,031 (s, 3H), 1,973-1,944 (m, 2H), 1,851-1,829 (m, 2H), 1,700-1,679 (m, 3H), 1,355-1,200 (m, 5H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPig 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 5,185 min (100%).

Příklad 223

Tris-maleát cz5-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4ri]pyrimidin-3-yl}fenoxy)-6-[(4-methylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu

2-Fluor-6-[(4-methylťenyl)sulťanyl]benzonitril

Roztok 2,6-difluorbenzonitrilu (5,18 g, 37,26 mmol) v dimethylformamidu (100 ml) se nechá reagovat s p-thiokresolem (4,628 g, 37,26 mmol) a uhličitanem draselným (10,28 g, 74,52 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 24 hodin pod atmosťérou dusíku. Do reakční směsi se přidá voda (150 ml) a ethylacetát (250 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (500 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (1 1), suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 7:1 heptamethylacetát, čímž se získá 3,341 g (37%) 2-fluor-6-[(4methylťenyl)sulťanyl]benzonitrilu. 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,66-7,61 (m, 1H), 7,47-7,45 (m, 2H), 7,36-7,32 (m, 3H), 6,83-6,79 (m, 1H), 2,36 (s, 3H);

• · · · · • · · · · · • ······· · « · · · ·

271

HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP₁₈ 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 8,04 min (93%).

Tris-maleát m-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)-6- [(4-methylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu

Roztok cis-4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenolu (0,300 g, 0,736 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) se nechá reagovat s 2-fluor-6-[(4-methylfenyl)sulfanyl]benzonitrilem (0,447g, 1,84 mmol) a uhličitanem draselným (0,203,1,47 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 120°C přes noc pod atmosférou dusíku. Do reakěního roztoku se přidá ethylacetát (150 ml) a 1 N roztok hydroxidu sodného. Vrstvy se oddělí a organická vrstva se promyje IN roztokem hydroxidu sodného (300 ml). Organická vrstva se promyje vodou a solankou (400 ml pokaždé), suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahušťuje za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10 % methanolu v dichlormethanu jako mobilní fáze. Získaná světle hnědá pevná látka se trituruje ethylacetátem a filtruje, čímž se získá 0,050 g (11%) cis-2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)-6- [(4methylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu. Horký roztok m-2-(4-{ 4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)-6- [(4methylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu (0,050 g, 0,079 mmol) ve směsi ethylacetátu a methanolu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,028 g, 0,240 mmol) v ethylacetátu. Prakticky ihned vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku, čímž se získá 0,028 g tris-maleátu cA-2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3-yl} fenoxy)-6- [(4methylfenyl)sulfanyl]benzonitrilu. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,251 (s, 1H), 7,727,70 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,55-7,48 (m, 3H), 7,37-7,33 (m, 4H), 6,96-6,93 (d, 1H, J = 12 Hz), 6,74-6,72 (d, 1 H, J = 8 Hz), 6,18 (s, 6H), 4,85 (m, 1H), 3,15-2,90 (m, 4H), 2,85-2,75 (m, 3H), 2,38 (s, 3H), 2,051,99 (m, 2H), 1,90-1,60 (m, 5H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPi₈ 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 6,359 min (100%).

9 • ·>

272

Příklad 224

Bis-maleát cz,s-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-17/-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}fenoxy)-6-(2-pyridylsulfanyl)benzonitrilu

Bis-maleát cz\-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fénoxy)-6-(2-pyridylsulfanyl)benzonitrilu

Roztok cis-4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-177-pyrazolo [3,4t/]pyrimidin-3-yl}fenolu (0,300 g, 0,736 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) se nechá reagovat s 2-fluor-6-(2-pyridylsulfanyl)benzonitrilem (0,424g, 1,84 mmol) a uhličitanem draselným (0,203,1,47 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 120°C po dobu 2 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá ethylacetát (125 ml) a IN roztok hydroxidu sodného (50 ml). Vrstvy se oddělí a organická vrstva se promyje IN roztokem hydroxidu sodného (300 ml). Organická vrstva se promyje vodou a solankou (250 ml pokaždé), suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahušťuje za sníženého tlaku. Pevný podíl se trituruje ethylacetátem, čímž se získá 0,310 g (68%) cz.s-2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l 77-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl}fenoxy)-6-(2pyridylsulfanyl)benzonitrilu. Horký roztok cz,s-2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)-6-(2pyridylsulfanyl)benzonitrilu (0,310 g, 0,502 mmol) v ethanolu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,175 g, 1,503 mmol) v ethanolu. Ochlazením vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku, čímž se získá 0,356 g bis-maleátu cz\-2-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-z7]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)6-(2-pyridylsulfanyl)benzonitrilu. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,47-8,46 (d, 1H, J = 4 Hz), 8,26 (s, 1H), 7,79-7,72 (m, 4H), 7,53-7,51 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,38-7,34 (m, 3H), 7,28-7,24 (m, 2H), 6,14 (s, 4H), 4,85 (m, 1H), 3,60-3,10 (m, 7H), 3,1-2,85 (m, 2H), 2,712,67 (m, 2H), 2,32-2,27 (m, 3H), 2,05-1,99 (m, 2H), 1,78-1,71 (m, 4H);

HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPi₈ 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril - 0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 5,196 min (98%).

Příklad 225

Trans-3- [4-(benzyloxy)fenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-4-amin • φ ··»·

φ * * · • ΦΦΦ·» « · φ •« φ

273

Směs frww-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (1,50 g, 3,4 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (100 ml) se nechá reagovat s 4-(benzyloxy)fenylboritou kyselinou (0,853 g, 3,74 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,236 g, 0,204 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,864 g, 8,16 mmol) ve vodě (35 ml). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Do vodné vrstvy se přidá ethylacetát (100 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (300 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou (500 ml pokaždé), suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku, surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu 5% methanolem v dichlormethanu, 10% methanolem v dichlormethanu, 20% methanolem v dichlormethan mobilní fází, pak 30% methanolem v dichlormethanu, čímž se získá 0,817 g (49%) trans3 - [4-(benzyloxy)fenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4</3pyrimidin-4-aminu. *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,22 (s, IH), 7,59-7,57 (m, 2H), 7,53-7,50 (m, 2H), 7,48-7,21 (m, 3H), 7,19-7,17 (d, 2H, 7= 8 Hz), 5,18 (s, 2H), 4,65-4,60 (m, IH), 2,5 (s, 3H), 2,45-2,25 (m, 5H), 2,15 (s, 3H), 2,04-1,92 (m, 7H), 1,50-1,44 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Albánce HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 5,021 min (95%).

Příklad 226

Tris-maleát trans-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4 t/]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)-6-[(3 -methoxypropyl)amino]benzonitrilu Trans-4- {4-amino-l-[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl} fenol

Roztok trans-3 - [4-(benzy loxy)fenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0, 806 g, 1,62 mmol) v absolutním ethanolu (40 ml) se nechá reagovat s palladiem na aktivním uhlí (10%) (0,161 g, 0,324 mmol) a mravenčanem amonným (0,511 g, 8,1 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 3 hodin. Tato do byla podle TLC nedostatečná k uskutečnění reakce, proto se přidalo palladium na aktivním uhlí (10%) (0, 161 g, 0,324 mmol) a směs se míchala další hodiny. Reakce opět neprobíhala, proto se přidal další podíl mravenčanu amonného (0,204 g, 3,24 mmol) a ♦ ♦ ·

274 směs se míchá přes noc. Reakční směs se filtruje přes vrstvu celitu, která se promyje ethanolem (500 ml). Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku. Výsledný pevný podíl se trituruje ethylacetátem a suší přes noc za vysokého vakua, čímž se získá 0,491 g (75%) trau5^,-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenolu. *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,74 (s, 1H), 8,2 (s, 1H), 7,46-7,44 (d, 2H, J = 8 Hz), 6,92-6,90 (d, 2H, J = 8 Hz), 4,64-4,58 (m, 1H), 2,67-2,50 (m, 5H), 2,39-2,34 (m, 4H), 2,17 (s, 3H), 2,06-1,92 (m, 6H), 1,50-1,42 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 3,337 min (96%).

Tris-maleát trans-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)-6- [(3 -methoxypropyl)amino]benzonitrilu

Roztok /Amv-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenolu (0,100 g, 0,245 mmol) v dimethylformamidu (25 ml) se nechá reagovat s 2-fluor-6-[(2-methoxyethyl)amino]benzonitrilem (0,128 g, 0,613 mmol) a uhličitanem draselným (0,068,0,49 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 120°C přes noc pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá ethylacetát a IN hydroxid sodný. Organická vrstva se promyje IN roztokem hydroxidu sodného (1 1). Vrstvy se oddělí a organická vrstva se promyje vodou a solankou (500 ml pokaždé), suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahušťuje za sníženého tlaku, surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% methanolu v dichlormethanu jako eluentu, čímž se získá 71 mg (48%) írau5-2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)-6- [(3 methoxypropyl)amino]benzonitril. Horký roztok trans-2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)-6- [(3 methoxypropyl)amino]benzonitrilu (0,071 g, 0,119 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,042 g, 0,358 mmol) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá tris-maleát trans-2(4- {4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 yl}fenoxy)-6-[(3-methoxypropyl)amino]benzonitrilu. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,69-7,67 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,37-7,33 (m, 1H), 7,25-7,23 (d, 2H, J = 8 Hz), 6,53-6,51 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,30-6,29 (m, 1H), 6,19-6,17 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,17 (s, 6H), 4,65-4,64 (m, 1H), 3,45-3,42 (m, 2H), 3,27 (s, 3H), 2,55-2,50 (m, 4H), 2,50-2,30 (m, 5H), 2,33 (br, s, 3 H), 2,01-1,96 (m, 8 Hz), 1,84-1,80 (m, 2H), 1,49-1,46 (m, 2H); HPLC Waters

275

2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 5,181 min (95%).

Příklad 227

Tris-maleát trans-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamidu

4-Brom-2-methoxyanilin

Roztok o-anisidinu (5,46 g, 44,3 mmol) v dichlormethanu (100 ml) se nechá reagovat po částech s 2,4,4,6-tetrabrom-2,5-cyklohexadien-l-onem (18,16 g, 44,3 mmol) v průběhu 1 hodiny při teplotě -5°C, poté se přidá bromační činidlo, lázeň ze suchého ledu se odstraní a reakční směs míchá přes noc při pokojové teplotě. Do reakční směsi se přidá roztok hydroxidu sodného (1 N) a vrstvy se oddělí. Organická vrstva se promyje IN roztokem hydroxidu sodného (1 1), promyje vodou (750 ml), suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahušťuje za sníženého tlaku, čímž se získá 8,096 g (89%) 4-brom-2methoxyanilinu. 'H NMR (DMSO-d₆,400 MHz) δ 6,90 (s, 1H), 6,83-6,76 (m, 1H), 6,576,55 (m, 1H), 4,86 (s, 2H), 3,76 (s, 3H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 5,635 min (89%).

Al-(4-brom-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamid

Roztok 4-brom-2-methoxyanilinu (8,096 g, 40,04 mmol) v dichlormethanu (100 ml) se nechá reagovat s triethylaminem (6,06 g, 60,06 mmol), pak s hydrocinnamoylchloridem (7,08 g, 42,04 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 48 hodin pod atmosférou dusíku. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se ethylacetát. Precipitát se filtruje a filtrát se za sníženého tlaku zahušťuje na pevný podíl, který se rozpustí v ethylacetátu a promyje 5N roztokem kyseliny chlorovodíkové, 5N roztokem hydroxidu sodného, vodou a solankou. Surová látka (dvě tečky na TLC) se trituruje methanolem, nerozpustný pevný podíl se filtruje, čímž se získá 6 g (50%) Al-(4-brom-2-methoxyfenyl)3-fenylpropanamidu. *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,17 (s, 1H), 7,92-7,90 (m, 1H), 7,30-7,24 (m, 4H), 7,20-7,18 (m, 2H), 7,09-7,07 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,90-2,86 (m, 2H), 2,72-2,69 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitrilO, 1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t7,491 min (97%).

···· ·· · ···· • ······· · ··· · · · · • * · ···· ··· • · > ·· ·· ·· ·

276

3-methoxy-4-[(3-fenylpropanoyl)amino]fenylboritá kyselina

Roztok Vl-(4-brom-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamidu (1,004 g, 3 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (30 ml) při teplotě -78°C se nechá reagovat s roztokem 1,6 M n-butyllithia v hexanu (4,7 ml, 7,5 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě -78°C po dobu 40 minut. Do této reakční směsi se přidá tri-isopropylborát (1, 05 ml, 4,5 mmol), směs se míchá při teplotě -78°C po dobu 20 minut a lázeň se suchým ledem a acetonem se odstraní. Reakění směs se míchá po dobu 4 hodin při pokojové teplotě. Reakce se zastaví 2,5 N roztokem kyseliny chlorovodíkové (30 ml). Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a do kyselé vodné vrstvy se přidá ethylacetát. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (250 ml). Spojená organická vrstva se promyje vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým, fdtruje a zahušťuje za sníženého tlaku, surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi (1:1) dichlormethanu a ethylacetátu jako eluentu, gradient se změní na 15% methanol v dichlormethanu k odstranění bazického produktu, a čímž se získá 0,209 g (23%) 3-methoxy-4-[(3-fenylpropanoyl)amino-3-fenylborité kyseliny. ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,08 (s, 1H), 7,89-7,95 (m, 3H), 7,45-7,42 (s, 1H), 7,35-7,16 (m, 5H), 3,82 (s, 3H), 2,91-2,81 (m, 2H), 2,74-2,70 (s, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0, 1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 5,389 min (95%).

Tris-maleát /rau5-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo [3,4-íf]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxyfenyl)-3 -fenylpropanamidu

Roztok /raws-3-jod-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-4-aminu (0,268 g, 0,607 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (20 ml) se nechá reagovat s 3-methoxy-4-[(3-fenylpropanoyl)amino]fenylboritou kyselinou (0,200 g, 0,669 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,042 g, 0,036 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,154, 1,46 mmol) ve vodě (10 ml). Reakční směs se míchá po dobu 9 hodin při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku. Přidá se tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,035 g,

0,03 mmol) a směs se míchá přes noc (15 hodin). Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a přidá se ethylacetát. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (300 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% methanolu v dichlormethanu (6 1) jako eluentu. Druhou purifikací zrychlenou chromatografií na sloupci ··* ·· · ··· ···· ·· · · · · · • ······· · ··· ···· ··· ······· • · · ·· ·· ·· ·

277

Supelco za použití směsi 20% methanolu v dichlormethanu jako eluentu se získá 0,132 g (3 8%) trans-Ni -(4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxy fenyl)-3-fenylpropanamidu. Produkt se podrobí purifikaci na preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 100 x 21 mm sloupec, 5 pm, 15-100% gradient acetonitrilu v průběhu 8 minut, celková doba 10 minut, pufr - 50 mM octan amonný, 25 ml/min), čímž se získá 0,026 g tra«s-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yll-2-methoxyfenyl)-3fenylpropanamid. Horký roztok tra«s-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/lpyridin-3 -yll-2-methoxyfenyl)-3 fenylpropanamidu (0,026 g, 0,046 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,016 g, 0,137 mmol) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku za pokojové teploty a suší za vysokého vakua, čímž se získá trismaleát Zra/«-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamidu. ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,25 (s, IH), 8,23-8,19 (m, 2H), 7,33-7,27 (m, 5H), 7,23-7,18 (m, 2H), 6,17 (s, 6H), 4,72-4,69 (m, IH), 3,87 (s, 3H), 2,942,90 (m, 4H), 2,79-2,75 (m, 5H), 2,67 (s, 4H), 2,ΙΟΙ,99 (m, 8H), 1,59-1,56 (m,3H);

HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP18 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 4,844 min (90%).

Příklad 228

Cis-Ni -(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-VI -methyl-3 -fenylpropanamid VI -(4-brom-2-methoxyfenyl)-Vl -methyl-3 -fenylpropanamid

Roztok Vl-(4-brom-2-methoxyfenyl)-3-fenylpropanamidu (1,0 g, 3 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s předem promytým (3x heptanem) hydridem sodným (0,158 g, 6,6 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 1 hodiny při teplotě 0°C. Po kapkách se přidá methyl-jodid (0,511 g, 3,6 mmol) a roztok se míchá po dobu 15 minut při teplotě 0°C, ledová lázeň se odstraní a reakční směs se míchá přes noc při pokojové teplotě. Pokud není reakce kompletní, přidá se další methyljodid (0,511 g, 3,6 mmol) a reakční směs míchá přes noc. Reakce se zastaví vodou (30 ml). Přidá se ethylacetát, vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Spojené ··· ·· ···· »··· ·· · ···· • ······· · ··· ···· _{β e} ···· ·· · • · · ·· ·· ·· ·

278 organické vrstvy se promyjí vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku, surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu elucí (3:1) heptamethylacetát, čímž se získá 0,729 g (70%) NI-(4-brom-2methoxyfenyl)-Vl-methyl-3-fenylpropanamid. 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,3307,326 (s, 1H), 7,235-7,178 (m, 2H), 7,161-7,116 (m, 3H), 7,058-7,040 (m, 2H), 3,811 (s,

3H), 3,002 (s, 3H), 2,753-2,708 (m, 2H), 2,282-2,204 (m, 1H), 2,138-2,061 (m, 1H);

HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP 18 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 7,366 min (96%).

Vl-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-Vl-methyl-3fenylpropanamid

Roztok Vl-(4-brom-2-methoxyfenyl)-Vl-methyl-3-fenylpropanamidu (0,729 g,

2,09 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) se nechá reagovat s diboron-pinakolesterem (0,637 g, 2,51 mmol), octanem draselným (0,615 g, 6,27 mmol), pak s [1,1’bis(difenylfosfinoferrocen]dichlorpalladnatým komplexem s dichlormethanem (1:1) (0,052 g, 0,063 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 26 hodin, pak se přidá další diboron-pinakolester (0,318 g, 1,254 mmol), octan draselný (0,312 g, 3,135 mmol) a l,r-bis(difenylfosfinoferrocen]dichlorpalladnatý komplex s dichlormethanem (1:1) (0,025 g, 0,031 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 48 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua. K černému podílu se přidá dichlormethan a směs se filtruje přes vrstvu celitu a silikagelu. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 1:1 ethylacetátheptan jako eluentu, čímž se získá 0,290 g (35%) VI-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-Vl-methyl-3-fenylpropanamidu a 0,148 g (18%) homokopulovaného biproduktu, VI - [2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl] VI methyl-3-fenylpropanamidu: ^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 7,33 (s, 1H), 7,29-7,27 (m,

2H), 7,22-7,13 (m, 5H), 7,06-7,03 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,03-3,00 (m, 3H), 2,75-2,71 (m,

4H), 2,30-2,15 (m, 2H), 2,15-2,05 (m, 2H), 1,30 (s, 12 H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 5, 296 min (100%), homokopulovaný biprodukt: 'H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 7,374 (s, 2H), 7,293-7,276 (m, 4H), 7,258-7,188 (m, 4H), 7,142-7,107 (m, 2H), 7,067-7,049 (m, 4H), 3,921 (s, 6H), 2,992 (s, 6H), 2,7562,741 (m, 4H), 2,339-2,263 (m, 2H), 2,196-2,070 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance β ·

279

HPLC (Symmetry Shield RPi₈ 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 7,910 min (100%).

Cz'5-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-(/]pyrimidin3 -yl} -2 -methoxyfenyl)-Al -methyl-3 -fenylpropanamid

Roztok cis-3 -j od-1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu (0,293 g, 0,664 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (10 ml) se nechá reagovat s 3-methoxy-4-[methyl(3-fenylpropanoyl)amino]fenylboritou kyselinou (0, 290 g, 0,730 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladiem (0,046 g, 0,040 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,169 g, 1,59 mmol) ve vodě (5 ml). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a do vodné vrstvy se přidá ethylacetát. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (150 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku, surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 4% methanolu v dichlormethanu, 8% methanolu v dichlormethanu, pak 12% methanolu v dichlormethanu jako eluentu. Druhou zrychlenou chromatografií na sloupci Supelco směsí 30% methanolu v dichlormethanu se získá 0,037 g (10%) cis-Nl -(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexylj-1 A-pyrazolo [3,4-</}pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny 1) - Al methyl-3-fenylpropanamidu. ^!H NMR (CDC1₃, 400 MHz) δ 8,374 (s, 1H), 7,315-7,312 (m, 1H), 7,285-7,213 (m, 3H), 7,174-7,087 (m, 4H), 5,795 (br, s, 2H), 4,965-4,922 (m, 1H), 3,892 (s, 3H), 3,213 (s, 3H), 2,948-2,918 (m, 2H), 2,667 (m, 6H), 2,455-2,349 (m, 10H), 2,25-2,15 (m, 2H), 1,867-1,845 (m, 2H), 1,718-1,710 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP18 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 4,947 min (98%).

Příklad 229

Tris-maleát Al -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamidu 7erc-butyl-A-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl2-methoxyfenyl)karbamát * · ·· · ·· ···· • · · · · ·

280

Roztok 3 -j od-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo [3,4-d\pyrimidin-4-aminu (2,667 g, 6,04 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (95 ml) se nechá reagovat s terč-butyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamátem (2,32 g, 6,64 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,419 g, 0,362 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (1,54 g, 14,5 mmol) ve vodě (40 ml). Reakční směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku, přidá se ethylacetát (100 ml) a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (1 1). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (1 1) a solankou (500 ml), suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá 3,71 g surové látky. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 20% methanolu v dichlormethanu (4 1), 30% methanolu v dichlormethanu (1 1), 1:1 methanol v dichlormethanu (1 1) jako eluentu, čímž se získá 2,305 g (71%) fórobutyl-V-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl-2-methoxyfenyl)karbamátu. 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,221 (s, 1H), 8,030 (s, 1H), 7,921-7,901 (m, 1H), 7,239-7,195 (m, 2H), 4,652-4,594 (m, 1H), 3,890 (s, 3H), 2,988-2,804 (m, 2H), 2,776-2,507 (m, 2H), 2,40-2,21 (m, 5H), 2,190 (s, 3H), 1,898-1,815 (m, 4H), 1,716-1,686 (m, 2H), 1,482-1,446 (m, 11H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 4,541 min (98%); TLC (20 % methanolem v dichlormethan) R_t = 0,4.

-(4-Amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1Apyrazolo[3,4-í/]pyriniidin-4-amin

Roztok /ere-buty 1-V- [l-( 1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl-2-methoxyfenyl)karbamátu (2,298 g, 4,28 mmol) v dichlormethanu (26 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s roztokem trifluoroctové kyseliny (9,2 ml) v dichlormethanu (20 ml). Reakční roztok se míchá po dobu 20 minut při teplotě 0°C, po kterých se ledová lázeň odstraní a pak míchá další 2 hodiny při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek suší za vysokého vakua. K oleji se přidá ethylacetát (150 ml) a 5 N roztok kyseliny chlorovodíkové (100 ml). Vrstvy se oddělí a organická vrstva se extrahuje 5N roztokem kyseliny chlorovodíkové (400 ml). Spojené vodné vrstvy se ochladí na teplotu 0°C v ledové lázni a neutralizují 50% roztokem hydroxidu sodného na pH 10. Neutralizovaná vrstva se extrahuje dichlormethanem (700

281 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahušťuje za sníženého tlaku, čímž se získá 1,769 g (95%) 3-(4-amino-3-methoxy fenyl)-1-[1-(1-methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl]-17/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu. *H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 8,189 (s, IH), 7,048-7,043 (s, IH), 7,004-6,980 (d, d, IH, J = 1 Hz, J = 4 Hz), 6,775-6,755 (m, IH), 5,039 (s, 2H), 4,605-4,565 (m, IH), 3,831 (s, 3H), 2,992-2,882 (m, 2H), 2,8822,794 (m, 2H), 2,40-2,15 (m, 5H), 2,149 (s, 3H), 1,876-1,849 (m, 4H), 1,727-1,698 (m, 2H), 1,4861,448 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP_I8 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 2,83 min (99%).

Tris-maleát NI-(4-{4-amino-1 -[1-(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamidu

Roztok 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amÍnu (0,450 g, 1,03 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se po kapkách nechá reagovat s roztokem 4-(trifluormethoxy)-lbenzenkarbonylchloridu (0,231 g, 1,03 mmol) v dichlormethanu (2,5 ml). Reakční směs se míchá při teplotě -5°C po dobu 30 minut, ledová lázeň se odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin, přidá se 1 N roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Přidá se dichiormethan (10 ml) a vrstvy se oddělí na extrakčním cartridge Empore. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a surová sloučenina se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% methanolu v dichlormethanu jako eluentu, čímž se získá 0,430 g (67%) Vl-(4-{4-amino-l-[l-(lmethylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)4-(trifluormethoxy)benzamidu. Horký roztok Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4y l)piperidin-4-y 1] -177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-4(trifluormethoxy)benzamidu (0,430g, 0,688 mmol) v ethylacetátu (15 ml) se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,240 g, 2,07 mmol) v ethylacetátu. Vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá tris-maleát VI -(4-{4-amino-1 - [1 -(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-177pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamidu. ^JH NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,70 (s, IH), 8,28 (s, IH), 8,11-8,08 (m, 2H), 8,05-8,03 (m, IH), 7,56-7,54 (m, 2H), 7,34 (m, IH), 7,31-7,29 (m, IH), 6,11 (s, 6H), 5,10-5,00 (m, IH), 3,93 • · ·

282 (s, 3H), 3,54 (m, 4H), 2,99 (m, 2H), 2,79 (s, 3H), 2,22-2,19 (m, 4H), 1,84 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 4,999 min (100%).

Příklad 230

Bis-maleát 4-[4-amino-3-(4-fénoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]piperidino(4methylpiperazino)methanonu

Roztok 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,300 g, 0,780 mmol) v pyridinu (5 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s hydrochloridem 4-methyl-l-piperazinkarbonylchloridu (0,127 g, 0,780 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 5 minut při teplotě 0°C, po kterých se ledová lázeň odstraní a reakce se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se další ekvivalent hydrochloridu 4-methyl-l-piperazinkarbonylchloridu (0,127 g, 0,780 mmol) a vmíchání se pokračuje další 2 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. K pevnému podílu se přidá dichlormethan (10 ml) a nasycený roztok uhličitanu sodného (5 ml). Vrstvy se oddělí na extrakčním cartridge Empore. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá 0,417 g surové látky. Surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu elucí 8% methanolu v dichlormethanu, 15% methanolu v dichlormethanu, pak 20% methanolu v dichlormethanu jako eluentu, čímž se získá 0,178 g (45%) 4-[4-amino-3(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]piperidino(4-methylpiperazino)methanonu. Horký roztok 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-lyl]piperidino(4-methylpiperazino)methanonu (0,178 g, 0,347 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,081 g, 0,693 mmol) v ethylacetátu. Ochlazením vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá 0,124 g bis-maleátu 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]piperidino(4-methylpiperazino)methanonu. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,257 (s, IH), 7,661-7,639 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 7,441-7,42 (m, 2H), 7,210-7,112 (m, 5H), 6,142 (s, 4H), 4,963-4,908 (m, IH), 3,784-3,754 (d, 2H, J = 12 Hz), 3,7-3,2 (br, s, 11H), 3,15-3,05 (m, 2H), 2,922 (s, 3H), 2,161-2,138 (m, 2H), 1,9891,93 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 5,159 min (97%).

• ·

283

Příklad 231

Tris-maleát Al -(4-{4-amino-1 -[l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazoIo[3,4t/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxy fenyl)-4-(dimethylamino)benzamidu

Suspenze 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4yl]-l A-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-4-aminu (0,398 g, 0,912 mmol) v pyridinu (7 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem 4-(dimethylamino)-l -benzenkarbonylchloridu (0,167 g, 0,912 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs se míchá při teplotě -5°C po dobu 2,5 hodiny a ledová lázeň se odstraní. Do reakční směsi se přidá 1 N roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (15 ml). Vrstvy se oddělí na extrakčním cartridge Empore. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku, surový pevný podíl se čistí (2x) zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 12% (methanolu s 5% hydroxidem amonným) v dichlormethanu jako eluentu, čímž se získá 0,284 g (53%) Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lApyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3-y 1} -2-methoxyfenyl)-4-(dimethylamino)benzamidu. Horký roztok Al -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-y l)piperidin-4-y 1] -1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidm-3-yl}-2-methoxyfenyl)-4-(dimethylamino)benzamidu (0,284 g, 0,487 mmol) v ethylacetátu a pár kapek ethanolu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,169 g, 1,46 mmol) v ethylacetátu. Vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá 0,409 g tris-maleátu Al-(4-{4amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-4-(dimethylamino)benzamid. 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,054 (s, IH), 8,278 (s, IH), 8,215-8,194 (m, IH), 7,851-7,828 (m, 2H), 7,312-7,308 (m, IH), 7,288-7,263 (m, IH), 6,794-6,772 (m, 2H), 6,096 (s, 6H), 5,10-5,00 (m, IH), 3,951 (s, 3H), 3,538 (s, 4H), 3,061 (s, 8H), 2,215-2,183 (m, 4H), 1,90-1,81 (m, 2H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0, 1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 4,496 min (98%).

Příklady 232-237

CA-A1 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-(trifluormethyl)benzamid • · ·*«· ·· · · • ♦······ · ··· • · · «· · · ’

284

Cis-Nl -(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolof3,4-</]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-(trifluormethoxy)benzamid

Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-3-(trifluormethoxy)benzamid

Cw-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Cz,s-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-3 -(trifluormethyl)benzamid

Amidy odvozené od czs-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -7//-pyrazolo [3,4-</]pyrim idin-4-aminu

Komerčně dostupné chloridy kyselin (0,23 mmol) v dichlormethanu (100 μΐ) se přidaj í k cis-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-7Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,050 g, 0,115 mmol) v pyridinu (800 μΐ). Reakční směs se míchá přes noc. Reakce se zastaví IN roztokem hydroxidu sodného. Rozpouštědlo se odstraní na 12-ti kanálové vakuové pumpě Supelco za vakua pod atmosférou dusíku, zbývající pevný podíl se podrobí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, sloupec 100 x 21 mm, 5 pm, 15-100 % gradient acetonitrilu v průběhu 8 minut, celková doba -10 minut, pufr 50 mM octanu amonného, 25 ml/min). K pevným podílům se přidá dichlormethan a 1 N roztok hydroxidu sodného. Vrstvy se oddělí na extrakčním cartridge Empore, čímž se získají odpovídající produkty, HPLC Perkin Elmer Pecosphere C18, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 ml/min) • «

\

Název sloučeniny	R	Př.	Mn. (mg)	MH⁺	Rt (min)
C«-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-(trifluorrnethyl)benzamid	0	232	44 (63%)	609,1	2,957
Cis-N\ -(4- {4-amino-1 -[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]- \H- pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2- (trifluormethoxy {benzamid	P	233	10 (14%)	625,5	3,464
Cis-N\ -(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexy 1]-1H- pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -y 1} -2- methoxy fenyl)-3 - '(trifluormethoxy {benzamid	ςΛ Τ'? F	234	40 (56%)	625,1	3,405
CN-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -y 1} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid		235	47 (65 %)	627,5	3,405

* · • · ·

286

Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1A- pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-3-(trifluormethyl)benzamid	0 cf F r	236	41 (59%)	609,3	3,223
Cis-Nl -(4- {4-amino-l- [4-(4- methy lpiperazino)cyklohexy 1] -1A- pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-3 -y 1} -2- pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny l)-3 -fluor- 4-(trifluormethyl)benzamid	F F	237	48 (67%)	627,4	3,613

Příklad 238

CA-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 yl} -2-methoxyanilino)-2-fenyl-1 -ethanol

CA-3-(4-amino-3-methoxy feny 1)-1-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 Apyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin (0,075g, 0,000172 mol) a styren-oxid (0,029 g, 0,000172 mol) se rozpustí v isopropanolu (3 ml) a výsledná směs se zahřívá k refluxu po dobu 24 hodin. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cis-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyanilino)-2-fenyl-l-ethanol (0,005 g, 0,0000089 mol) ve formě bělavé pevné látky. ^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,36 (m, 5H), 7,06 (s, 1H), 6,91 (d, 1H), 6,36 (d, 1H), 5,55 (d, 1H), 5,20 (s, 1H) 4,78 (m, 1H), 4,43 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,74 (m, 1H), 3,58 (m,lH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitrol -0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,97 minut. MS: MH⁺ 557.

Meziprodukty:

CA-3-(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin • · ···· ·· · · • «······ · ··· • · · ·· · ·

287

7nw>-3-(4-amino-3-methoxyíěnyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-4-amin

Obecný způsob redukční alkylace cis- nebo /rms-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu:

Způsob přípravy A:

Směs cis- nebo /rms-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methyIpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4-aminu (nebo samotný cis nebo trans} (1 ekviv.), aldehyd (1 ekviv.), triacetoxyborohydrid sodný (3,4 ekviv.) a octová kyselina (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku. Reakce se zastaví nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.

Způsob přípravy B:

Po syntéze a purifikaci (způsob přípravy A) se zbytek vyextrahuje dichlormethanem (1 ml), nanese na sloupec Trikonex (7 cm) a promývá dichlormethanem (5 ml). Požadovaný pás (UV-detekce) se oddělí a sloučenina se extrahuje směsí dichlormethan:methanol:triethylamin = 90:5:5 (10 ml), filtruje a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje v diethyletheru (4 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší.

Příklad 239

Acetát cis-3 - {4- [(2-furylmethyl)amino] -3 -methoxyfenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-</)pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy A ‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, ÍH), 7,57 (s, ÍH), 7,06 (br, 2H), 6,77 (d, ÍH), 6,38 (d, ÍH), 6,32 (d, ÍH), 5,65 (t, ÍH), 4,78 (m, ÍH), 4,38 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

288

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,65 minut. MS: MH⁺ 517.

Příklad 240

CA-5-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyanilino)methyl] -2-furylmethanol-acetát Způsob přípravy A ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,06 (br, 2H), 6,77 (d, 1H), 6,23 (d, 1H), 6,19 (d, 1H), 5,63 (t, 1H), 5,18 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,35 (d, 4H), 3,88 (s, 3H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,91 minut. MS: MH⁺ 547.

Příklad 241

Dimaleát tran.s-3-{4-[(2-furylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu

7rízn5-3-{4-[(2-furylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin se připraví podle způsobu přípravy A. Trans3-{4-[(2-furylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/Zpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (1 ekviv.) se rozpustí v ethanolu (20 ml) a roztok se zahřívá k refluxu. Najednou se přidá roztok kyseliny maleinové 3 ekviv. a v refluxu se pokračuje dalších 10 minut. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu, precipitát se spojí filtrací a suší. Dimaleát /ran.s-3-{4-[(2-furylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu. 'H NMR (DMSOdé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,06 (br, 2H), 6,77 (d, 1H), 6,38 (d, 1H), 6,32 (d, 1H), 6,16 (s, 4H), 5,65 (t, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,62 minut. MS: MH⁺ 517.

• · ·

289

Příklad 242

Dimaleát /ra«.y-3-(3-methoxy-4-[(5-methyl-2-furyl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu

Připraví se stejným způsobem jako dimaleát íra«s-3-{4-[(2-furylmethyl)amino]-3methoxy fenyl-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-4aminu popsaný výše.

^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,08 (d, 2H), 6,77 (d, 1H), 6,16 (m, 5H), 5,95 (d, 1H), 5,65 (t, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,32 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,57 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,73 minut. MS: MH⁺ 531.

Obecný způsob redukční alky láce cis- nebo /ra«.s-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 A-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-aminu

Způsob C :

Směs cis- nebo Zra«.s-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu (buď meziprodukt ... nebo ...) (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku. Reakce se zastaví nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.

Příklad 243

Diacetát cz.y-2-[2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4ó/]pyrimidin-3 -yl} anilino)methyl]fenoxyoctové kyseliny Způsob C • « · · • · • · · · » · ···· ·· · · · · · • ······· · ··· ···· _ - · · · · ··· ·· · ·· ·· ·· ·

290 *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,33 (m, 3H), 7,17 (t, 1H), 6,83 (m, 4H),

4,76 (m, 1H), 4,46 (s, 2H), 4,29 (s, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,78 minut. MS: MH⁺ 571.

Příklad 244

Diacetát cis-3 - {4- [(2-furylmethyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

Způsob C ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,81 (d, 2H),

6,46 (t, 1H), 6,41 (d, 1H), 6,34 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,31 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,29 minut. MS: MH⁺ 487.

Příklad 245

Diacetát cz.s-3-(4-[(5-methyl-2-furyl)methyl]aminofěnyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu Způsob C ^]H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,79 (d, 2H), 6,43 (t, 1H),

6,21 (d, 1H), 5,98 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,24 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,86 minut.

MS:MH⁺501.

Příklad 246

Diacetát cz5-3-{4-[(3-furylmethyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-4-aminu • · • · · · • · · · • · φ ····· ·· φ

291

Způsob C ^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,64 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 6,79 (d, 2H), 6,52 (s, IH), 6,29 (t, IH), 4,76 (m, IH), 4,18 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,17 minut.

MS: MH⁺ 488.

Příklad 247

Diacetát cis-3- {4- [(benzo [ů]furan-2-ylmethyl)amino]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

Způsob C ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,58 (d, IH), 7,53 (d, IH), 7,38 (d, 2H), 7,23 (m, 2H), 6,86 (d, 2H), 6,80 (s, IH), 6,66 (t, IH), 4,78 (m, IH), 4,52 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,00 minut.

MS: MH⁺ 537.

Příklad 248

Diacetát tran5-3-{4-[(2-furylmethyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]17/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu Způsob C ^!H NMR (DMSO-dé, 400Mh) δ 8,18 (s, IH), 7,59 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 6,79 (d, 2H), 6,45 (t, IH), 6,39 (d, IH), 6,33 (d, IH), 4,60 (m, IH), 4,30 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,67 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,96 minut.

MS: MH⁺ 487.

• *

292

Obecný způsob redukční alkylace 3-(4-amino-fenyl)-l-[l-(l-methylpiperid-4-yl)piperid-4yl] -1 //-pyrazolo [3,4 -d] pyri midi n-4-am inu:

Způsob přípravy D:

Směs 3 -(4-amino-fenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperid-4-yl)piperid-4-yl]-1 //-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-aminu (1 ekviv.), aldehydu (1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku. Reakce se zastaví nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.

Příklad 249

Acetát 3 -(4- [(5 -methyl-2-furyl)methyl]aminofenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperid-4-yl)piperid-4ylj-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy D ^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,07 (br, 2H), 6,76 (d, 1H), 6,17 (d, 1H), 5,97 (d, 1H), 5,57 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,98 (d, 2H), 2,79 (d, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,25 (br, 5H), 2,15 (s, 3M, 1,91 (m, 7H), 1,69 (d, 2H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 8,97 minut.

MS:MH⁺531.

Příklad 250

Diacetát cz.s-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-{4-[(l -fenylethyl)amino]fenyl}-l//pyrazolo [3,4-<7]py rimidin-4-aminu

a) A-(4-bromfenyl)-/V-(l-fenylethyl)amin

Do roztoku A-(4-bromfenyl)-A-(l-fenylmethyliden)aminu (1,0 g, 0,00385 mol) v toluenu (30 ml) ochlazeném na teplotu -78°C se po kapkách přidá 1,4M roztok methyllithia v diethyletheru (5,5 ml), přičemž teplota se udržuje pod -75°C. Roztok se ohřeje na teplotu -40°C a míchá při této teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin.

293

Reakce se zastaví přidáním vody (po kapkách) a vrstvy se oddělí. Organická fáze se promyje solankou (50 ml), suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá V-(4-bromfenyl)-V-(l-fenylethyl)amin (1,03 g, 0,00373 mol) ve formě bělavé pevné látky. 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 7,30 (m, 4H), 7,18 (t, 1H), 7,09 (d, 2H), 6,43 (d, 2H), 6,38 (d, 1H), 4,43 (m, 1H), 1,40 (d, 3H);

TLC (ethylacetát/heptan 5,95) Rf 0,27

b) V-(l-fenylethyl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin

Směs V-(4-bromfenyl)-V-(l-fenylethyl)aminu (0,87 g, 0,00315 mol), diboronpinakolesteru (0,96 g, 0,00378 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]-dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,077 g, 0,0000945 mol) a octanu draselného (0,93 g, 0,00945 mol) v W-dimethylformamidu (20 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (60 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu a filtrát koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/z?-heptan (7:93) jako mobilní fáze. Výsledná frakce se koncentruje. Zbytek se trituruje v n-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá V-(l-fenylethyl)-V[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,3 g, 0,00093 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 7,30 (m, 6H), 7,18 (t, 1H), 6,58 (d, 1H), 6,46 (d, 2H), 4,51 (m, 1H), 1,40 (d, 3H), 1,27 (s, 12H);

TLC (ethylacetát/heptan 5,95) Rf 0,17

c) Diacetát cis-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3 - {4- [(1 -fenylethyl)amino]fenyl} 1 V-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-4-aminu

Směs V-(l-fenylethyl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,070 g, 0,000235 mol), cis-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-lVpyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (0,080 g, 0,000181 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,012 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,00045 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v • · · · ·· « • · * · • · · · · • · · ·· · ·« · • · » • » 9 · • · · · « ·

294 průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cz'.s-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy l]-3 - {4-[(1-fenylethyl)amino]fenyl} -1//-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-aminu (0,062g, 0,0000984 mol) ve formě bílé pevné látky. 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,42 (d, 2H), 7,30 (m, 4H), 7,19 (t, IH), 6,68 (d, 2H), 6,52 (d, IH), 4,78 (m, IH), 4,53 (m, IH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H),

1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,44 (d, 3H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,96 minut.

MS:MH⁺511.

Příklad 251 a 252

Cis-3 - [4-(2,3 -dihydrobenzo [ů] furan-3-y lamino) fenyl] -1 - [4-(4 methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-4-amin

Diacetát /rarcs-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-ylamino)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4 -</]pyrimidin-4-aminu

a) /V-(4-bromfenyl)-N (2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-yl)amin

Disperze (60%) hydridu sodného v minerálním oleji (0,145 g, 0,00362 mol) se přidá do roztoku trimethylsulfoxonium-jodidu (0,8 g, 0,00362 mol) v bezvodém dimethylsulfoxidu (10 ml) a výsledná směs se míchá pod atmosférou dusíku po dobu 10 minut. Po kapkách se přidá roztok 2-{[(4-bromfenyl)imino]methyl}fenolu (0,4 g, 0,00145 mol) v bezvodém dimethylsulfoxidu (5 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2,5 hodiny. Poté se nalije do ledově studené vody (100 ml) a extrahuje diethyletherem (2x50 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku, čímž se získá /V-(4-bromfenyl)-/V-(2,3dihydrobenzo[ů]furan-3-yl)amin (0,321 g, 0,0011 mol) ve formě bělavé pevné látky. ^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 7,34 (d, IH), 7,23 (m, 3H), 6,90 (m, 2H), 6,67 (d, 2H), 6,34 (d, IH), 5,23 (m, IH), 4,72 (dd, IH), 4,19 (dd, IH). TLC (ethylacetát/heptan 1:5) R_f 0,52.

b) zV-(2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-yl)-zV-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amin

Směs 7V-(4-bromfenyl)-/V-(2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-yl)aminu (1,65 g, 0,00569 mol), diboron-pinakolesteru (1,73 g, 0,00683 mol), [l,l’-bis(difenylfosfmo)ferrocen]·« · « · • « t .. · • · 9 · ·

295 dichlorpalladia v komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,139 g, 0,000171 mol) a octanu draselného (0,81 g, 0,0171 mol) v N,V-dimethylformamídu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (100 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/u-heptan (5:95) jako mobilní fáze. Výsledná frakce se koncentruje. Zbytek se trituruje v u-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá V-(2,3dihydrobenzo[/]fůran-3-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)ťenyl]amin (0,59 g, 0,00176 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,42 (d, 2H), 7,34 (d, 1H), 7,23 (t, 1H), 6,89 (m, 2H),

6,68 (d, 2H), 6,52 (d, 1H), 5,23 (m, 1H), 4,74 (dd, 1H), 4,20 (dd, 1H). TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf 0,37.

c) CN-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ó]furan-3-ylamino)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-í/pyrimidin-4-amin

Směs V-(2,3-dihydrobenzo[á]furan-3-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,080 g, 0,000237 mol), czs-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,087 g, 0,000198 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,014 g, 0,000012 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,061 g, 0,000495 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min). Následně se surový produkt rozpustí v dichlormethanu, nanese na sloupec Trikonex (7 cm) a promývá dichlormethanem (5 ml). Požadovaný pás se oddělí, produkt extrahuje směsí dichlormethan/methanol/triethylamin v poměru 90:5:5 (10 ml) a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje v diethyletheru a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá cz.v-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ó]ťuran-3ylamino)fenyl] -1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-4amin (0,02 lg, 0,00004 mol) ve formě bílé pevné látky.

·« · ·· · »· *

296 *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,40 (m, 3H), 7,25 (t, 1H), 6,90 (m, 4H), 6,50 (d, 1H), 5,35 (m, 1H), 4,80 (m, 2H), 4,28 (dd, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H),

1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,39 minut.

MS: MH⁺ 525.

Diacetát trans-3 - [4-(2,3 -dihydrobenzo [ů]furan-3 -ylamino)fenyl] -1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu

Směs A-(2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0, 089 g, 0,000265 mol), /ra«.s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,090 g, 0,000204 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,014 g, 0,000012 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,063 g, 0,00051 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát trans-3-[4-(2,3dihydrobenzo [ó] furan-3 -ylamino)fenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-4-aminu (0,078 g, 0,000121 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,40 (m, 3H), 7,25 (t, 1H), 6,90 (m, 4H), 6,50 (d, 1H), 5,33 (m, 1H), 4,79 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,28 (dd, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,49 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,05 minut.

MS: MH⁺ 525.

Příklad 253

Diacetát cis-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} anilino)-1 -fenyl-1 -ethanon

Cz'5-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin (0,6 g, 0,00148 mol) a bromacetofenon (0,295 g, 0,00148 mol) se • ·

297 rozpustí v bezvodém A, A-dimethylformamidu (30 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 5 minut. Po kapkách se přidá AA-diisopropylethylamin (0,095 g, 0,00074 mol) a v míchání pod atmosférou dusíku se pokračuje po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát cis-2-(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl} anilino)-1 -fenyl-1 ethanonu (0,410 g, 0,00064 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,99 (d, 2H), 7,75 (t, 1H), 7,61 (t, 2H), 7,29 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,41 (br, 3H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (DeltaPakC18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,16 minut.

MS:MH⁺525.

Příklad 254

Czs-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-ďjpyrimidin-3yl} anilino)-1 -fenyl-1 -ethanol-diacetát

Roztok diacetátu cis-2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l Apyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}anilino)-l-fenyl-l-ethanonu (0,050 g, 0,000077 mol) v bezvodém methanolu (5 ml) se ochladí na teplotu 0°C a najednou se přidá borohydrid sodný (0,018 g, 0,0000477 mol). Směs se za míchání pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin nechá ohřát na pokojovou teplotu. Reakce se zastaví přidáním (po kapkách) octové kyseliny. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá <?zíy-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]lA-pyrazolo[3,4-í/pyrimidin-3-yl}anilino)-l-fenyl-l-ethanol-diacetát (0,035 g, 0,000054 mol) ve formě bílé pevné látky. Ή NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,31 (m, 7H), 6,69 (d, 2H), 5,41 (br, 2H), 5,31 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 14H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetontril -0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,34 minut.

• ·

298

MS: MH⁺ 527.

Příklad 255

Acetát cA-V-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4č/Jpyrimidin-3 -yl} fenyl) (fenyl)methy 1]-N -benzylmočoviny

Cis-3- {4- [amino(fenyl)methyl]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-4-amin (0,05 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se benzylizokyanát (0,013g, 0, 0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cis-N[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidin-3yl}fenyl) (fenyl)methyl]-V-benzylmočoviny (0,015 g, 0,000022 mol) ve formě bílé pevné látky.

^lH NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,23 (s, IH), 7,62 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,57-7,27 (br, 10H), 7,04 (d, IH), 6,41 (t, IH), 6,03 (d, IH), 4,78 (m, IH), 4,25 (d, 2H), 2,70 (s, 3H), 2,52,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,39 minut.

MS: MH⁺ 630.

Příklad 256

Cis-N\ -[4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzyl]benzamid-acetát

Cz'5-3-{4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-4-amin (0,051 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se benzoylchlorid (0,014g, 0, 0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cis-Ni-\4299 (4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3 yl}fenoxy)benzyl]benzamid-acetát (0,042 g, 0,000062 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,07 (t, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (d, 2H), 7,63 (d, 2H), 7,49 (m, 3H), 7,38 (t, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,08 (d, 2H), 4,78 (m, 1H, 4,49 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,62 minut.

MS:MH⁺617.

Příklad 257

C/.v-/Vl-[4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzyl]-l-benzensulfonamid-acetát

CA-3-{4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,051 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se benzensulfonylchlorid (0,018 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cz'.s-Vl-[4(4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3yl}fenoxy)benzyl]-l-benzensulfonamid-acetát (0,042 g, 0,000048 mol) ve formě bílé pevné látky. ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,79 (d, 2H), 7,63 (m, 3H), 7,58 (t, 2H), 7,26 (d, 2H), 7,09 (d, 2H), 7,01 (d, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,01 (d, 2H), 2,52,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,31 minut.

MS:MH⁺653.

Příklad 258

Acetát cis-N- [4-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4ť/]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzyl]-V’-benzylmočoviny

300

Czs-3-{4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,051 g, 0,0001 mol) se rozpustí v bezvodém pyridinu (1 ml), přidá se benzylizokyanát (0,013 g, 0,0001 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný zbytek purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cis-N[4-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 /7-pyrazolo[3,4-</]pyrimi din-3 yl}fenoxy)benzyl]-/V’-benzylmočoviny (0,019 g, 0,000027 mol) ve formě bílé pevné látky. ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, IH), 7,63 (d, 2H), 7,27 (m, 7H), 7,13 (d, 2H), 7,09 (d, 2H), 6,46 (m, 2H), 4,78 (m, IH), 4,24 (d, 4H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,49 minut.

MS: MH⁺ 646.

Způsoby přípravy cis-3 - {4-[3 -(aminomethyl)fenoxy]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu a jeho derivátů jsou stejné jako způsoby přípravy czs-3-{4-[4-(aminomethyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/f-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu a jeho derivátů.

Příklad 259

Cis-Nl -[3 -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-1//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzyl]benzamid-diacetát

a) Cis-3- {4- [3 -(aminomethyl)fenoxy] fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo [3,4-</]pyrim idin-4-amin ^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, IH), 7,63 (d, 2H), 7,38 (m, IH), 7,15 (m, 4H), 6,96 (d, IH), 4,78 (m, IH), 3,73 (s, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

301

b) Cis-Nl -[3-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)benzyl]benzamid-diacetát *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,07 (t, ÍH), 8,23 (s, ÍH), 7,86 (d, 2H), 7,63 (d, 2H), 7,48 (m, 4H), 7,10 (m, 5H), 4,78 (m, ÍH), 4,49 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,58 minut.

MS:MH⁺617.

Příklad 260

Czs-Vl-[3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzyl]-l-benzensulfonamid-acetát *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,23 (m, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,62 (m, 5H), 7,31 (m, ÍH), 7,04 (m, 5H), 4,78 (m, ÍH), 4,03 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,36 minut.

MS:MH⁺653.

Příklad 261

Acetát cis-N- [3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4z/]pyrimidin-3 -yl} fenoxy)benzyl] -N -benzylmočoviny *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, ÍH), 7,63 (d, 2H), 7,35 (t, ÍH), 7,27-7,04 (m, 10H), 6,46 (m, 2H), 4,78 (m, ÍH), 4,25 (d, 2H), 4,22 (d, 2H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,44 minut.

MS: MH⁺ 646.

302

Příldad 262 a 263

Acetát cis-3-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolan-2-onu

Trans-3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1H-pyrazolo[3,4-pyrimidin-3yl} fenyl)-5 -fenyl-1,3 -oxazolan-2-onu

a) 2-(4-Bromanilino)-1 -fenyl-1 -ethanon

Do roztoku obsahujícího 4-bromanilin (7,42 g, 0,0431 mol) a 2-bromacetofenon (8,58 g, 0,0431 mol) v W-dimethylformamidu (200 ml) se po kapkách přidá Λζ/V-diisopropylethylamin a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi dichlormethan (150 ml) a vodu (100 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje v diethyletheru a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá 2-(4-bromanilino)-l-fenyl-l-ethanon (10,03 g, 0,0346 mol) ve formě bělavé pevné látky. 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 8,06 (d, 2H), 7,69 (t, 1H), 7,58 (m, 2H), 7,20 (d, 2H), 6,66 (d, 2H), 6,11 (t, 1H), 4,68 (d, 2H). TLC (ethylacetát/heptan 1:2) R_f 0,39

b) 2-(4-Bromanilino)-1 -fenyl-1 -ethanol

Roztok 2-(4-bromanilino)-l-fenyl-1-ethanonu (3,50 g, 0,0121 mol) v bezvodém methanolu (200 ml) se ochladí na teplotu 0°C a najednou se přidá borohydrid sodný (2,28 g, 0,0603 mol). Směs se za míchání a pod atmosférou dusíku nechá v průběhu 3 hodin ohřát na pokojovou teplotu. Reakce se zastaví přidáním (po kapkách) octové kyseliny. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (120 ml) a vodu (85 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá 2-(4-bromanilino)-l-fenyl-l-ethanol (3,49 g, 0,0117 mol) ve formě žlutého oleje. ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,39 (d, 2H), 7,33 (m, 2H), 7,24 (t, 1H), 7,17 (d, 2H), 5,81 (t, 1H), 5,47 (d, 1H), 4,71 (m, 1H), 3,18 (m, 1H), 3,07 (m, 1H). TLC (ethylacetát/heptan 1:2) Rf 0,22.

c) 3-(4-Bromfenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolan-2-on

Roztok obsahující 2-(4-bromanilino)-l-fenyl-1-ethanol (0,74 g, 0,00253 mol), W-diisopropylethylamin (1,01 g, 0,00786 mol) a W-dimethylaminopyridin (0,092 g, 0,00076 mol) v bezvodém dichlormethanu (32 ml) se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách

303 se přidá roztok trifosgenu (0,38 g, 0,00127 mol) v bezvodém dichlormethanu (8 ml). Reakční směs se za míchání a pod atmosférou dusíku v průběhu 18 hodin pomalu ohřeje až na pokojovou teplotu. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (40 ml), solankou (30 ml) a suší síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/zz-heptan (1:5) jako mobilní fáze, čímž se získá 3-(4bromfenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolan-2-on (0,62 g, 0,00192 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 7,58 (s, 4H), 7,47 (m, 5H), 5,77 (m, 1H), 4,46 (t, 1H), 4,01 (t, 1H). TLC (ethylacetát/heptan 1:2) Rf 0,28.

d) 5-Fenyl-3-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-oxazolan-2-on

Směs 3-(4-bromfenyl)-5-fenyl-l,3-oxazolan-2-onu (0,6 g, 0,00189 mol), diboronpinakolesteru (0,58 g, 0,00226 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]-dichlorpalladnatého (Π) komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,046 g, 0,000057 mol) a octanu draselného (0,56 g, 0,0057 mol) v A,A-dimethylformamidu (20 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (100 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/zz-heptan (1:5) jako mobilní fáze. Výsledná frakce se koncentruje. Zbytek se trituruje v zz-heptanu a precipitát se spojí filtrací, čímž se získá 5-fenyl-3-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-oxazolan-2-on (0,19 g, 0,00052 mol) ve formě bílé pevné látky. ^lH NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 7,69 (d, 2H), 7,62 (d, 2H), 7,47 (m, 5H), 5,77 (m, 1H), 4,46 (t, 1H), 4,01 (t, 1H), 1,27 (s, 12H). TLC (ethylacetát/heptan 1: 2) R_f0,19.

e) Acetát cz.s-3-(4- {4-amino- l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l 77-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3-yl} fenyl)-5-fenyl-1,3-oxazolan-2-onu

Směs 5-fenyl-3-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3oxazolan-2-onu (0,085 g, 0,000233 mol), cL-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]177-pyrazolo[3,4-í7|pyrimidin-4-aminu (0,086 g, 0,000194 mol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (0, 013 g, 0,000012 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,060 g, 0,000485 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (5 ml) a vody (3 ml) • · • ·

304 při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cz5-3-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-fenyl-l,3oxazolan-2-onu (0,074g, 0,000121 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,79 (d, 2H), 7,68 (d, 2H), 7,47 (m, 5H), 5,82 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,57 (t, 1H), 4,09 (t, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,84 minut.

MS:MH⁺553.

f) Trans-3 -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 L/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5-fenyl-1,3 -oxazolan-2-on

Sloučenina se připraví syntetickým způsobem podobným přípravě acetátu cis-3-(4{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolof 3,4-c/]pyrimidin-3 yl} fenyl)-5-fenyl-1,3 -oxazolan-2-onu.

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,79 (d, 2H), 7,68 (d, 2H), 7,47 (m, 5H), 5,82 (t, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,57 (t, 1H), 4,09 (t, 1H), 3,1 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,49 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,72 minut. MS: MH⁺ 553.

Příklad 264

Diacetát trans-3 -(4- { 4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4d]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-benzyl-l,3-oxazolan-2-onu

a) 1 -(4-Bromanilino)-3-fenyl-2-propanol

Směs 4-bromanilinu (1,75 g, 0,0102 mol) a 2,3-epoxypropylbenzenu (1,77 g, 0,0132 mol) v methanolu (40 ml) se zahřívá k refluxu po dobu 16 hodin. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou • · · ·

305 chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:5) jako mobilní fáze, čímž se získá l-(4-bromanilino)-3-fenyl-2-propanol (2,2 g, 0,00719 mol) ve formě bezbarvého oleje. ’H NMR (DMSO-dé, 400MHz) δ 7,33 (m, 7H), 6,50 (d, 2H, 5,76 (t, IH), 4,83 (d, IH), 3,82 (m, IH), 2,98 (m, IH), 2,90 (m, IH), 2,78 (dd, IH), 2,67 (dd, IH). TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf 0,29.

b) 5-Benzyl-3-(4-bromfenyl)-l,3-oxazolan-2-on

Roztok obsahující l-(4-bromanilino)-3-fenyl-2-propanol (1,90 g, 0,00621 mol), W-diisopropylethylamin (2,48 g, 0,0193 mol) a V Λ-dimethylaminopyridin (0,152 g, 0,00124 mol) v bezvodém dichlormethanu (64 ml) se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá roztok trifosgenu (0,92 g, 0,0031 mol) v bezvodém dichlormethanu (16 ml). Reakční směs za míchání a pod atmosférou dusíku v průběhu 18 hodin pomalu ohřeje až na pokojovou teplotu. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (70 ml), solankou (60 ml) a suší síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:5) jako mobilní fáze, čímž se získá 5-benzyl-3-(4-bromfenyl)-l,3-oxazolan-2-on (1,25 g, 0,00377 mol) ve formě bílé pevné látky. ‘H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 7,54 (d, 2H), 7,47 (d, 2H), 7,27 (m, 5H), 4,95 (m, IH), 4,12 (t, IH), 3,78 (t, IH), 3,07 (d, 2H). TLC (ethylacetát/heptan 1:3) R_f 0,37.

c) 5-Benzyl-3-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-oxazolan-2-on

Směs 5-benzyl-3-(4-bromfenyl)-l,3-oxazolan-2-onu (1,25 g, 0,00377 mol), diboron-pinakolesteru (1,15 g, 0,00452 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,092 g, 0,000114 mol) a octanu draselného (1,12 g, 0,0113 mol) v W-dimethylformamidu (30 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichiormethan (100 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:5) jako mobilní fáze. Výsledná frakce se koncentruje. Zbytek se trituruje v n-heptanu a precipitát se spojí filtrací, čímž se získá 5-benzyl-3-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-oxazolan-2-on (1,03 g, 0,0027 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,65 (d, 2H), 7,54 (d, • ·

306

2H), 7,27 (m, 5H), 4,95 (m, 1H), 4,12 (t, 1H), 3,78 (t, 1H), 3,07 (d, 2H), 1,28 (s, 12H). TLC (ethylacetát/heptan 1: 3) Rf 0,25.

d) Diacetát /rau.v-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5-benzyl-1,3 -oxazolan-2-onu

Směs 5-benzyl-3-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3oxazolan-2-onu (0,110 g, 0,00029 mol), trau.s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,080 g, 0,000181 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,012 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,00045 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát trans-3-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} feny l)-5 -benzyl-1,3oxazolan-2-onu (0,049g, 0,000072 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,65 (m, 4H), 7,32 (m, 5H), 5,02 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,19 (t, 1H), 3,85 (t, 1H), 3,11 (d, 2H), 3,1 (br, 9H), 2,17 (s, 6H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H) 1,49 (m,2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,13 minut.

MS: MH⁺ 567.

Příklad 265

Cis-Ni -(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl} fenyl)-2-methyl -2-fenylpropanamid-diacetát

Roztok obsahující cis-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazinojcyklohexylj-1/7pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,1 g, 0,000246 mol), α,α-dimethylfenyloctovou kyselinu (0,045 g, 0,000271 mol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochlorid (0,071 g, 0,000369 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,0037 g, 0,000271 mol) v bezvodém V, A-dimethylformamidu (5 ml) se míchá po dobu 5 minut. Po kapkách se přidá W-diisopropylethylamin (0,098 g, 0,00076 mol) a v míchání pod atmosférou

307 dusíku se pokračuje po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cis-NI-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl} fenyl)-2-methyl-2fenylpropanamid-diacetát (0,014 g, 0,000021 mol) ve formě bílé pevné látky.

Ή NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,29 (s, IH), 8,20 (s, IH), 7,82 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,38 (m, 4H), 7,27 (m, IH), 4,78 (m, IH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,59 (s, 6H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (DeltaPakC18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,59 minut.

MS:MH⁺553.

Příklad 266 a 267

Acetát cw-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}anilino)-4-oxo-2-fenylbutanové kyseliny

Acetát cz.s-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-cQpyrimidin-3 -yl} anilino)-4-oxo-3 -fenylbutanové kyseliny

a) l-(4-Bromfenyl)-3-fenyl-2, 5-pyrrolidindion

Roztok 4-bromanilinu (5,48 g, 0,0318 mol) a anhydridů fenylsukcinové kyseliny (5,89 g, 0,0334 mol) v bezvodém benzenu (80 ml) se zahřívá k refluxu po dobu 1,5 hodiny. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Ke zbytku acetylchloridu (60 ml) se přidá roztok zahřívaný k refluxu po dobu 1,5 hodiny. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací, promyje diethyletherem a suší, čímž se získá l-(4-bromfenyl)-3-fenyl-2,5-pyrrolidindion (8,7 g, 0,0264 mol) ve formě bělavé pevné látky. 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 7,72 (d, 2H), 7,40 (m, 7H), 4,33 (dd, IH), 3,33 (dd, IH), 2,94 (dd, IH);

TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,34.

b) 3-Fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-2,5-pyrrolidindion

Směs l-(4-bromfenyl)-3-feny 1-2,5-pyrrolidindionu (2, 00 g, 0,00602 mol), diboronpinakolesteru (1,85 g, 0,00727 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]-dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,148 g, 0,000182 mol) a octanu draselného (1,784 g, • ·

9 9 · · • · · · · · • · · · · · • · · · · ·

308

0,0182 mol) v ΛζΑ-dimethylformamidu (40 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (100 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/zz-heptan (1:4) jako mobilní fáze. Výsledná frakce se koncentruje. Zbytek se trituruje v zz-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá 3-fenyl-l-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2,5pyrrolidindion (0,78 g, 0,00207 mol) ve formě bílé pevné látky. 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 7,79 (d, 2H), 7,40 (m, 7H), 4,33 (dd, ÍH), 3,33 (dd, ÍH), 2,97 (dd, ÍH), 1,31 (s, 12H);

TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,21.

c) Acetát ez.s'-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/Y-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}anilino)-4-oxo-2-fenylbutanové kyseliny a acetát cis -4-(4-{4-amino-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-3 -yl} anilino)-4-oxo-3 fenylbutanové kyseliny

Směs 3-fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-2,5pyrrolidindionu (0,35 g, 0,00093 mol), cw-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,34 g, 0,000773 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,053 g, 0,000046 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,24 g, 0,00193 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (14 ml) a vody (7 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát cis-4-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexylj-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3 -yl} anilino)-4-oxo-2fenylbutanové kyseliny (0,150 g, 0,000233 mol) a acetát m-4-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazinojcyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} anilino)-4-oxo-3 fenylbutanové kyseliny (0,11 g, 0,000171 mol) oba ve formě bílé pevných látek.

Acetát cz.s-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}anilino)-4-oxo-2-fenylbutanové kyseliny

309 ’Η NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,37 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,73 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,25 (m, 5H), 4,76 (m, II), 4,00 (m, 1H), 3,12 (dd, 1H), 2,71 (dd, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,54 minut.

MS: MH⁺ 583.

Acetát czs-4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4c/]pyrimidin-3-yl} anilino)-4-oxo-3-fenylbutanové kyseliny *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,46 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,78 (d, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,41 (d, 5H), 7,31 (t, 2H), 7,24 (t, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,16 (m, 1H), 3,08 (dd, 1H), 2,51 (dd, ÍH), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,11 minut.

MS: MH⁺ 583.

Příklad 268

Czs-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3yl} fenyl) (fenyl)methylkyanid

a) 2-Fenyl-2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]acetonitril

Směs (4-bromfenyl) (fenyl)methylkyanidu (0,604 g, 0,00222 mol), diboronpinakolesteru (0,677 g, 0,00266 mol), [l,r-bis(difenylfosfmo)ferrocen]dichlorpalladnatého (Π) komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,054 g, 0,000067 mol) a octanu draselného (0,52 g, 0,00666 mol) v AA-dimethylformamidu (30 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (80 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použiti směsi ethylacetát/zz-heptan (1:9) jako mobilní fáze. Výsledná frakce se koncentruje. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát se spojí filtrací, čímž se získá 2-fenyl-2-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]acetonitril (0,110 g, 0,000345 mol) ve formě bílé pevné látky.

• ·

310 ’Η NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,67 (d, 2H), 7,40 (m, 7H), 5,87 (s, 1M, 1, 31 (s, 12H); TLC (ethylacetát/heptan 1:9) Rf 0,18.

b) C/.v-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-3yljfenyl) (fenyl)methylkyanid

Směs 2-fenyl-2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]acetonitrilu (0,120 g, 0,000376 mol), cw-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,083 g, 0,000188 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,013 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,058 g, 0,00047 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá cis-(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl} fenyl) (fenyl)methylkyanid (0,025g, 0,0000494 mol) ve formě bělavé pevné látky. *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,58 (d, 2H), 7,47 (m, 4H), 7,38 (t, 1H), 5,93 (s, 1H), 4,76 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,95 minut.

MS: MH⁺ 507.

Příklad 269

Diacetát cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4ó/]pyrimidin-3-yljfenyl)-1,3-benzoxazol-2-aminu a) A-(l, 3-benzoxazol-2-yl)-A-(4-bromfenyl)amin

4-Bromanilin (3,9 g, 0,0227 mol) se přidá do roztoku 2-chlorbenzoxazolu (1,16 g, 0,00755 mol) v xylenu a reakční směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 2 hodin, po kterých se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (50 ml) a vodu (50 ml). Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje v u-heptanu a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá A-(l,3-benzoxazol-2-yl)-A-(4-bromfenyl)amin (1,48 g,

0,00512 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,78 (s, 1H), 7,74 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,50 (m, 2H), 7,23 (t, 1H), 7,16 (t, 1H). TLC (ethylacetát/heptan l:3)R_f0,34.

b) N-( 1,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin

Směs V-(l,3-benzoxazol-2-yl)-V-(4-bromfenyl)aminu (0,800 g, 0,00277 mol), diboron-pinakolesteru (0,84 g, 0,00332 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,068 g, 0,000083 mol) a octanu draselného (0,81 g, 0,0083 mol) v VV-dimethylformamidu (20 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (100 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:5) jako mobilní fáze. Výsledná frakce se koncentruje. Zbytek se trituruje v «-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá V-(l,3-benz.oxazol2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,59 g, 0,00176 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,80 (s, 1H), 7,78 (d, 2H), 7,68 (d, 2H), 7,50 (d, 2H), 7,23 (t, 1H), 7,16 (t, 1H), 1,26 (s, 12H). TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf 0,29.

c) Diacetát cA-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl} fenyl)-1,3 -benzoxazol-2-aminu

Směs N-( 1,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,073 g, 0,000217 mol), cA-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]lA-pyrazolo[3,4-íť]pyrimidin-4-aminu (0, 080 g, 0,000181 mol), tetrakis-(trifenylfosfm)palladia (0,012 g, 0,000011 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,056 g, 0,000453 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), ěímž se získá diacetát cA-V2-(4-4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-ylfenyl)-l,3-benzoxazol-2aminu (0,082 g, 0,000128 mol) ve formě bílé pevné látky.

• «

312 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,66 (d, 2H), 7,51 (m, 2H), 7,25 (t, 1H), 7,15 (t, 1H), 4,78 (m, 1H), 2,5-2,1 (br, 13H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,80 minut.

MS: MH⁺ 524.

Meziprodukt A:

2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzaldehyd

Směs 2-(4-jodfenoxy)benzaldehydu (1,31 g, 4,03 mmol, 1 ekviv.), PdCl2(dppf)2 (0,092 g, 0,13 mmol, 0,03 ekviv.), diboronpinakolesteru (1,23 g, 4,84 mmol, 1,2 ekviv.) a octanu draselného (1,19 g, 12,1 mmol, 3,0 ekviv.) v DMF (15 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 5,5 hodiny. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v CH2CI2 (50 ml) a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, promyje CH2CI2 (100 ml) a Et₂O (100 ml), filtrát se koncentruje, čímž se získá hnědý olej, který se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 500 ml 5% MeOH/CíLCL), čímž se získá 2-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenoxy]benzaldehyd ve formě červeno-hnědého oleje (0,875 g, 2,70 mmol):

’H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δ10,30 (1H, s), 7,87-7,89 (1H, m), 7,69-7,75 (3H, m), 7,36-7,38 (1H, m), 7,05-7,22 (3H, m) a 1,29 (12H, s).

Příklad 270

2- [4-(4-Amino-l-cyklopentyl-1 V-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3 -yl)fenoxy]-acetamid

Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,050 g,

0,17 mmol, 1,0 ekviv.), dioxanu (1,7 ml) a hydridu sodného (60%, 0,010 g, 0,17 mmol, 1,0 ekviv.) se míchá při pokojové teplotě po dobu 10 minut. Přidá se jodacetamin (0,031 g, 0,17 mmol, 1,0 ekviv.). Reakění směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 30 minut a zahřívá při teplotě 110°C po dobu 3,5 hodiny. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací promytím CH₂C1₂ (5 ml) a EtOAc (5

313 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku za vzniku žlutého pevného podílu, který se trituruje z EtOAc, čímž se získá 2-[(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl)oxy]-acetamid ve formě béžové pevné látky (0,045 g, 0,13 mmol): *H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δ 8,22 (ÍH, s), 7,60 (2H, d), 7,12 (2H, d), 5,20-5,25 (ÍH, m), 4,50 (2H, s), 2,02-2,10 (4H, m), 1,87-1,90 (2H, m), 1,68-1,71 (2H, m);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,38 minut. MS: MH⁺ 353.

Příklad 271

Methyl-5-[4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl)fenoxy]-2-furoát

Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)fenolu (0,107 g, 0,362 mmol, 1,0 ekviv.), DMSO (0,5 ml), hydridu sodného (60%, 0,030 g, 0,72 mmol, 2,0 ekviv.) a methyl-5-nitro-2-furoátu (0,062 g, 0,36 mmol, 1,0 ekviv.) se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 3 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, nalije do ledové vody (10 ml) a extrahuje (3x) CH2CI2 (50 ml pokaždé). Spojené organické extrakty se promyjí 5% vodným KOH (50 ml) a organická vrstva se suší nad MgSCL, filtruje a koncentruje, čímž se získá červený olej, který se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (eluci 300 ml 5% MeOH/CH₂Cl2), čímž se získá methyl-5-[4-(4-amino-l-cyklopentyl-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)fenoxy]-2-furoát ve formě červené pevné látky (0,070 g, 0,17 mmol): ‘H NMR (d_ó-DMSO, 400 MHz): δ 8,24 (ÍH, s), 7,70-7,74 (2H, m), 7,35-7,39 (3H, m), 6,9 (2H, bs), 6,02 (ÍH, s), 5,22-5,26 (ÍH, m), 3,79 (3H, s), 2,01-2,11 (4H, m), 1,88-1,91 (2H,m), 1,67-1,71 (2H,m).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 18, 17 minut. MS: MH⁺ 420.

Příklad 272

- [4-(4- Amino-1 -cyklopentyl-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl)fenoxy] -2 -fůro vá kyselina

Směs methyl-5-[4-(4-amino-l-cyklopentyl- l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl)fenoxy]-2-furoátu (0,030 g, 0,072 mmol, 1 ekviv.) a hydroxidu sodného (0,020 g, 0,50 mmol, 7 ekviv.) v 50% EtOH ve vodě (1 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 6 hodin.

«· · • · · • · · · • · · · · · · • · « ·· ·

314

Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a zředí vodou (10 ml). Směs se neutralizuje přidáním 1 M HCl a extrahuje dvěma podíly CH2CI2 (20 ml pokaždé) a dvěma podíly EtOAc (20 ml pokaždé). Spojené organické extrakty se suší nad MgSO4, filtrují a koncentrují, čímž se získá žlutý olej, který se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin C18, 5 pm, 300 Á, 25 cm; 50%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá světle hnědá pevná látka (0,009 g, 0, 022 mmol): ^!H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δ 13,0 (1H, bs), 8,23 (1H, s), 7,74 (2H, d), 7,35 (2H, d), 7,29 (1H, s), 6,03 (1H, s), 5,21-5,28 (1H, m), 2,01-2,11 (4H, m), 1,89-1,90 (2H, m), 1,68-1,71 (2H, m).

RP-HPLC (Hypercil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, lmllmin) R_t 6,45 minut. MS: MH⁺ 406.

Příklad 273 l-Cyklopentyl-3-[4-(3-thienyloxy)fenyl]-lA-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-amin

Směs 4-(4-amino-l-cyklopentyl-lA-pyrazolo[3,4-č7|pyrimidin-3-yl)fenolu (0,212 g,

0,718 mmol, 1 ekviv.), uhličitanu draselného (0,060 g, 0,43 mmol, 0,6 ekviv.), práškové mědi (0,015 g, 0,24 mmol, 0,33 ekviv.) a 3-bromthiofenu (0,09 ml, 0,9 mmol, 1,3 ekviv.) v DMF (7,2 ml) se zahřívá při teplotě 153°C po dobu 24 hodin. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, koncentruje a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá 1 -cyklopentyl-3-[4-(3-thienyloxy)fenyl]-l A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin ve formě světle hnědé pevné látky (0,060 g, 0,16 mmol):

*H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δ 9,77 (1H, s), 8,46 (1H, s), 8,41 (1H, s), 7,73-7,74 (1H, m), 7,57 (2H, d, J = 4,5 Hz), 7,46-7,48 (1H, m), 7,15 (1H, d, J = 5,2 Hz), 6,96 (2H, d, J = 8,6 Hz), 5,24-5,30 (1H, m), 2,03-2,05 (4H, m), 1,89-1,93 (2H, m), 1,70-1,72 (2H, m). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 18, 76 minut. MS: MH⁺ 378.

• · • · · ·····

315

Příklad 274

Monoacetát cA-3-{3-[(benzo[ů]furan-2-ylmethyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu

Směs cz5-3-(3-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-aminu (0,107 g, 0,263 mmol, 1 ekviv.), ledové kyseliny octové (0,06 ml, 1,0 mmol, 3,8 ekviv.), benzo[ů]furan-2-karboxaldehydu (0,1 g, 0,3 mmol, 1 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (0, 212 g, 1,0 mmol, 3,8 ekviv.) a dichlorethanu (2 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 4,5 hodiny. Přidá se vodný uhličitan sodný. Organická vrstva se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dvěma podíly CH2CI2 (10 ml pokaždé). Spojené organické extrakty se suší nad MgSO₄, filtrují a koncentrují, čímž se získá žlutý olej, který se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min). Acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá monoacetát cz's-3-{3-[(benzo[ů]furan-2ylmethyl)amino] fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,017 g, 0,031 mmol):

*H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δ 8,22 (1H, s), 7,51-7,58 (2H, m), 7,22-7,28 (3H, m), 6,98 (1H, s), 6,79-6,84 (2H, m), 6,59-6,62 (1H, m), 4,76-4,81 (1H, m), 4,50 (2H, d, J - 5,6 Hz), 2,19-2,24 (14H, m), 2,05-2,07 (2H, m), 1,91 (3H, s), 1,60-1,75 (4H, m);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril -0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,99 minut. MS: MH⁺ 537.

Příklad 275

Cis-3- {3 -[di(2-fůrylmethyl)amino] fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -\Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Směs cA-3-(3-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-aminu (0,120 g, 0,296 mmol, 1 ekviv.), fůrfůralu (0,03 ml, 0,3 mmol, 1,1 ekviv.), ledové kyseliny octové (0,07 ml, 1,1 mmol, 3,8 ekviv.) a triacetoxyborohydridu sodného (0,314 g, 1,48 mmol, 5,0 ekviv.) v dichlorethanu (2 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 60 hodin. Přidá se nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (5 ml). Organická vrstva se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dvěma podíly CH2CI2 (10 ml pokaždé). Organické extrakty se suší nad MgSO₄, filtrují a koncentrují, čímž se získá žlutý • ·

316 olej. Purifikací chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 200 ml 5% MeOH/CH₂Cl₂, 100 ml 10% MeOH/CH₂Cl₂, a 300 ml 10:20:70% MeOH/Et₃N/CH₂Cl₂) se získá cw-3-{3-[di(2furylmethyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4z/jpyrimidin-4-amin ve formě bílé pevné látky (0,051 g, 0,10 mmol):

’HNMR (dé-DMSO, 400 MHz): δ 8,22 (1H, s), 7,60 (2H, s), 7,31-7,35 (1H, m), 7,19 (1H, s), 7,00 (1H, d, J = 8,4 Hz), 6,93 (1H, d, J = 7,6 Hz), 6,39 (2H, s), 6,32 (2H, s), 4,77-4,80 (1H, m), 4,60 (4H, s), 2,23-2,39 (11H, m), 2,16 (3H, s), 2,05-2,07 (2H, m), 1,59-1,71 (4H, m);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,52 minut. MS: MH⁺ 567.

Příklad 276

Cis-N-[2-(3- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzyl]trifluormethansulfonamid-diacetát

Do směsi cz.s'-3-4-[2-(aminomethyl)fenoxy]fenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,018 g, 0,035 mmol, 1 ekviv.) a pyridinu (0,4 ml) při teplotě 0°C se po kapkách v průběhu 20 sekund přidá CF₃SO₂C1 (0,05 ml, 0,04 mmol, 1,2 ekviv.). Reakční směs se pomalu nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 3 hodin. Rozpouštědlo se zahušťuje za sníženého tlaku a olejovitý žlutý zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá cz5-A-[2-(3-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-3 -yl} fenoxy )benzyl]trifluormethansulfonamid-diacetát (0,004 g, 0,006 mmol):

*H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,22 (1H, s), 7,61-7,67 (3H, m), 7,25-7,30 (2H, m), 7,19-7,23 (2H, m), 6,96-6,98 (1H, m), 4,77-4,81 (1H, m), 4,25 (2H, s), 2,09-2,54 (14H, m), 2,05-2,08 (2H, m), 1,91 (6H, s), 1,57-1,74 (4H, m);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,15 minut. MS: MH⁺ 645.

φ φ

317

Příklad 277

Cz5-2-(3-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3yl} fenoxy)benzaldehyd

Směs m-3-jod-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (0,970 g, 2,20 mmol, 1 ekviv.), 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan2-yl)fenoxy]benzaldehydu (0,842 g, 2,60 mmol, 1,2 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,186 g, 0,180 mmol, 0,08 ekviv.), DME (9 ml) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,655 g, 5,30 mmol, 2,4 ekviv.) ve vodě (7 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 7 hodin, pak nechá vychladnout na pokojovou teplotu. Přidá se nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Roztok se extrahuje EtOAc (25 ml). Organický extrakt se suší nad MgSO4, filtruje a koncentruje, čímž se získají světle hnědé pevné látky. Triturací z Et20 (35 ml) se získá cis-2-(3-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzaldehyd ve formě bělavé pevné látky (0,830 g, 1,62 mmol):

*H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 10,42 (IH, s), 8,24 (IH, s), 7,89 (IH, d, J = 7, 7 Hz), 7,697,71 (3H, m), 7,30-7,36 (IH, m), 7,29 (2H, d, J = 6,3 Hz), 7,16 (IH, d, J = 8, 2 Hz), 4,79-4,81 (IH, m), 2,18-2,55 (11H, m), 2,17 (3H, s), 2,05-2,09 (2H, m), 1,56-1,71 (4H, m); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,56 minut. MS: MH⁺ 512.

Příklad 278

Cis-3 - {3 - [2-( 1 //-2-imidazolyl) fenoxy] fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Směs c/5-2-(3-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4ú?]pyrimidin-3-yl}fenoxy)benzaldehydu (0,102 g, 0,199 mmol, 1 ekviv.), glyoxalu (0,12 ml, 0,99 mmol, 5 ekviv.) a uhličitanu amonného (0,078 g, 0,99 mmol, 5 ekviv.) v methanolu (1 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se další glyoxal (0,20 ml, 1,6 mmol, 8, 3 ekviv.) a uhličitan amonný (0,130 g, 1,66 mmol, 8,4 ekviv.) a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Surová reakční směs se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná

318 směs se lyofilizuje, čímž se získá cz\-3-{3-[2-(l//-2-imidazolyl)fenoxy]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin ve formě hnědé pevné látky (0,010 g, 0,018 mmol): NMR (d₆ DMSO, 400 MHz): δΗ 8,23 (1H, s), 8,11-8,13 (1H, dd, J = 7,7,1,9 Hz), 7,95 (1H, s), 7,66 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,34-7,39 (1H, m), 7,237,27 (3H, m), 7,07-7,19 (3H, m), 4,77-4,82 (1H, m), 2,16-2,56 (11H, m), 2,14 (3H, s), 2,05-2,11 (2H, m), 1,55-1,71 (4H, m);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,43 minut. MS: MH⁺ 550.

Příklad 279

Cis-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-2-anilinoacetamid

Směs 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,151 g, 0,356 mmol, 1 ekviv.), uhličitanu draselného (0,098 g, 0,711 mmol, 2 ekviv.) a chloracetylchloridu (0,04 ml, 0,5 mmol, 1,5 ekviv.) v DMF (1,5 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 minut, pak se přidá anilin (0,32 ml, 3,5 mmol, 10 ekviv.). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 72 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a pak extrahuje CH2CI2 (25 ml). Organický extrakt se suší nad MgSO₄, filtruje a koncentruje, čímž se získá cis-Nl-(4-{4amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)-2-anilinoacetamid ve formě žluté pevné látky (0,010 g, 0,017 mmol):

'H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,30 (1H, s), 8,35-8,38 (1H, m), 8,21 (1H, s), 7,217,23 (2H, m), 7,12-7,16 (2H, m), 6,64-6,66 (3H, m), 6,31-6,34 (1H, m), 4,77-4,81 (1H, m), 3,90 (2H, d, J = 6,0 Hz), 3,82 (3H, s), 2,21-2,51 (11H, m), 2,16 (3H, s), 2,06-2,08 (2H, m), 1,55-1,70 (4H,m);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,37 minut. MS: MH⁺ 570.

319

Příklad 280 (2S)-3 - {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -1 azetanyl} propan-1,2-diol

Do roztoku 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4aminu (0,05 g, 0,00014 mol) se při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku přidá (/?)-(+)glycidol (0,05 M v isopropanolu, 2,8 ml, 0,00014 mol). Směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 3 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi hydroxid amonný/methanol/dichlormethan (2:7:91), poté hydroxid amonný/methanol/dichlormethan (2:10:88) jako mobilní fáze, čímž se získá (2<S)-3-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-azetanyl}propan-l,2-diol (0,023 g, 0,000053 mol).

’H NMR (Chloroform-J, 400 MHz) δ 8,31 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,90 (br, 2H), 5,60 (m, 1H), 3,97 (m, 3H), 3,88 (m, 1H), 3,75 (m, 2H), 3,61 (m, 1H), 2,80 (m, 2H).

RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,1 M octanem amonným, 1 ml/min) R_t 8,6 minut.

MS: MH⁺ 433

Příklad 281 (2/?)-3 - {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-1 -yl] -1 azetanyl} propan-1,2-diol

Způsb přípravy je stejný jako pro (2S)-3-3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-azetanylpropan-l,2-diol, přičemž se použije (S)-(-)glycidol.

‘H NMR (Chloroform-J, 400 MHz) δ 8,36 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,39 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,65 (br, 3H), 4,00 (m, 3H), 3,90 (m, 1H), 3,75 (m, 2H), 3,62 (m, 1H), 2,85 (m, 2H). RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,1 M octanem amonným, 1 ml/min) R_t 8,76 minut.

MS: MH ⁺433.

• ·

320

Příklad 282

7erc-butyl-4-(3-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -1 azetanylmethyl)-4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát

a) 7erc-butyl-l-oxa-6-azaspiro[2.5]oktan-6-karboxylát

Směs trimethylsulfoxonium-jodidu (2,62 g, 0,012 mol) a hydridu sodného (0,44 g, 0,011 mol) v bezvodém dimethylsulfoxidu (30 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 30 minut. Reakční směs se ochladí na teplotu 10°C a přidá se terc-butyl-4-oxo-l-piperidinkarboxylát (2,0 g, 0,010 mol) v bezvodém dimethylsulfoxidu (10 ml). Reakční směs se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá po dobu 1,5 hodiny. Směs se nalije do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného (60 ml). Vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (2 x 100 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 60 ml) a solankou (1 x 50 ml) a suší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá fórc-butyl-l-oxa-6-azaspiro[2.5]oktan-6-karboxylát (2,12 g, 0,0099 mol). *H NMR (Chloroform-/, 400 MHz) δ 3,74 (br, 2H), 3,44 (m, 2H), 2,69 (s, 2H), 1,80 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,46 (m, 2H). TLC (ethylacetát/dichlormethan = 20:80) R_f0,57.

7erc-buty 1-4-(3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-1 -yl] -1 azetanylmethyl)-4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát

Do směsi 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (0,4 g, 0,0011 mol) v isopropanolu (40 ml) se přidá terc-butyl-l-oxa-6-azaspiro[2.5]oktan6-karboxylát (0,27 g, 0,0013 mol) při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 3,5 hodiny. Přidá se další Zerobutyl-1 -oxa-6azaspiro[2.5]oktan-6-karboxylát (0,13 g, 0,00061 mol) a směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 7 hodin. Přidá se další Vrobutyl-l-oxa-6-azaspiro[2.5]oktan-6-karboxylát (0,13 g, 0,00061 mol) a směs se míchá při teplotě 60°C po dobu 18 hodin, pak při teplotě 80°C po dobu 8 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se suspenduje ve vodě (50 ml) a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 50 ml) a solankou (1 x 50 ml) a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi methanol/dichlormethan (5:95), poté methanol/dichlormethan (10:90) jako mobilní fáze, čímž se získá /erc-butyl-4-(3-[4-amino321

-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -1 -azetanylmethyl)-4-hydroxy-lpiperidinkarboxylát (0,243 g, 0,000425 mol).

*H NMR (Chloroform-c/, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,17 (m, 3H), 7,10 (d, 2H), 5,78 (m, 1H), 5,48 (br, 2H), 4,34 (br, 2H), 4,20 (br, 2H), 3,89 (br, 2H), 3,18 (br, 2H), 2,91 (br, 2H), 1,60 (br, 2H), (s, 9H).

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 25%-100% v průběhu 10 minut s 0,1 M octanem amonným, 1 ml/min) R_t 10,7 minut.

MS: MH⁺ 572

Příklad 283

4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanylmethyl)-4piperidinol

Do roztoku férc-butyl-4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4c/]pyrimidin-l-yl]-l-azetanylmethyl)-4-hydroxy-l-piperidinkarboxylátu (0,090 g, 0,00016 mol) v dichlormethanu (2 ml) se pomalu přidá 20 % roztok trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu (10 ml) při teplotě 0°C pod atmosférou dusíku. Směs se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, k upravení pH na 11 se při teplotě 0°C přidá vodný roztok 5 N hydroxidu sodného a vodná fáze se extrahuje dichlormethanem (2 x 30 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 60 ml) a solankou (1 x 60 ml) a suší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá 4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-l-yl]-l-azetanylmethyl)-4-piperidinol (0,045 g, 0,000096 mol). ’H NMR (Chloroform-c/, 400 MHz) δ 8,37 (s, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,42 (t, 2H), 7,11 (m, 3H), 7,00 (d, 2H), 5,64 (m, 1H), 5,43 (br, 2H), 4,02 (m, 4H), 3,28 (br, 1H), 3,10 (m, 4H), 2,67 (s, 2H), 1,67 (m, 4H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,5 minut. MS: MH⁺ 472.

Příklad 284

4-(3 -[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanylmethyl)-1 methyl-4-piperidinol

• · • · • · I

322

Směs 4-(3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/jpyrimidin-l-yl] -1-azetanylmethyl)-4-piperidinolu (0,035 g, 0,000074 mol) a formaldehydu (0,006 ml, 37 % ve vodě, 0,000082 mol) v dichlorethanu (4 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,022 g, 0,000104 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Přidají se molekulová síta (0,05 g, 3Á, 4-8 mesh) a další formaldehyd (0,006 ml, 37% roztok ve vodě, 0,000082 mol) a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí na RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5% - 100% v průběhu 25 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá 4-(3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l-yl]-l-azetanylmethyl)-l-methyl-4-piperidinol (0,020 g, 0,000041 mol).

‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,63 (s, IH), 7,69 (d, 2H), 7,42 (t, 2H), 7,17 (m, 5H), 5,42 (m, IH), 3,88 (m, 2H), 3,67 (m, 2H), 2,37 (m, 2H), 2,25 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 1,90 (s, 2H), 1,50 (m, 4H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,5 minut.

MS: MH⁺ 486

Obecný způsob:

Směs 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,06 g, 0,00017 mol, 1 ekviv.), odpovídajícího chloracetamidu (0,0005 mol, 3 ekviv.) a N,Ndiisopropylethylaminu (0,033 g, 0,00026 mol, 1,5 ekviv.) v acetonitrilu (2,5 ml) se míchá při teplotě 75°C pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Směs se nalije do vody (10 ml) a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (2x10 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 10 ml) a solankou (1 x 10 ml) a suší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5% - 100% v průběhu 25 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá odpovídající amid.

Příklad 285

JV-methyl-2- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl] -1 azetanyl} acetamid

a) Chloracetamid: ŤV-methyl-2-chloracetamid • · • · · • · · · • · · · · · ·

323 *H NMR (Chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,35 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,80 (br, 2H), 5,60 (m, IH), 4,00 (m, 4H), 3,37 (s, 2H), 2,85 (s, 3H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,2 minut.

MS: MH⁺ 430.

Příklad 286

M/V-dimethyl-2- {3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 azetanyl} acetamid

b) Chloracetamid: A//V-dimethyl-2-chloracetamid *H NMR (Chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,33 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,16 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,86 (br, 2H), 5,67 (m, IH), 4,15 (m, 2H), 3,90 (m, 2H), 3,57 (s, 2H), 3,00 (s, 3H), 2,90 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,3 minut.

MS: MH⁺ 444.

Příklad 287 /V-isopropyl-2- {3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)- l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l -yl]-1 azetanyl} acetamid

c) Chloracetamid: 7V-isopropyl-2-chloracetamid *H NMR (Chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,36 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,09 (d, 2H), 6,90 (br, IH), 5,66 (m, 3H), 4,11 (m, IH), 3,99 (m, 4H), 3,39 (s, 2H), 1,19 (d, 6H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,8 minut.

MS: MH⁺ 458.

324

Příklad 288

V-(3 -hydroxypropyl)-2- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-1 yl] -1 -azetanyl} acetamid

d) Chloracetamid: V-(3-hydroxypropyl)-2-chloracetamid *H NMR (Chloroform-;/, 400 MHz) δ 8,31 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (d, 2H), 5,99 (br, 2H), 5,62 (m, 1H), 3,95 (m, 4H), 3,78 (m, 2H), 3,63 (m, 2H), 3,40 (s, 2H), 1,71 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,9 minut.

MS: MH⁺ 474.

Příklad 289

Ethyl-2- [(2- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl] -1 azetanyl} acetyl)amino]acetát (4037150)

e) Chloracetamid: ethyl-2-[(2-chloracetyl)amino]acetát ^!H NMR (Chloroform-;/, 400 MHz) δ 8,37 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,65 (br, 1H), 7,40 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,09 (d, 2H), 5,67 (m, 1H), 5,56 (br, 2H), 4,23 (m, 2H), 4,10 (m, 4H), 4,00 (m, 2H), 3,47 (s, 2H), 1,29 (t, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,9 minut.

MS: MH⁺ 502.

Příklad 290

V-benzyl-2- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl] -1 azetanyl} acetamid

f) Chloracetamid: V-benzyl-2-chloracetamid ’H NMR (Chloroform-;/, 400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,63 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,33 (m, SH), 7,16 (m, 5H), 5,72 (m, 1H), 4,49 (d, 2H), 3,97 (m, 4H), 3,44 (s, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,7 minut.

MS: MH⁺ 506.

• · • · ·

325

Příklad 291

A,A-methoxymethyl-2-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]1 -azetany 1} acetamid

g) Chloracetamid: N, A-methoxymethyl-2-chloracetamid ^!H NMR (Chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,37 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,71 (m, ÍH), 5,48 (br, 2H), 4,16 (m, 2H), 3,92 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,69 (s, 2H), 3,18 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,5 minut.

MS: MH⁺ 460.

Příklad 292

2- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -1 morfolino-1 -ethanon

h) Chloracetamid: 2-chlor-l-morfolino-1-ethanon ’H NMR (Chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,36 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,08 (d, 2H), 5,71 (m, 3H), 4,13 (m, 2H), 3,93 (m, 2H), 3,69 (br, 4H), 3,60 (br, 4H), 3,51 (s, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,3 minut.

MS: MH⁺ 486.

Příklad 293

N-(3 -methyl-5-isoxazoly l)-2- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/] pyrimidin1 -yl] -1 -azetanyl} acetamid

i) Chloracetamid: JV-(3-methyl-5-isoxazolyl)-2-chloracetamid *H NMR (Chloroform-J, 400 MHz) δ 10,10 (br, ÍH), 8,37 (s, ÍH), 7,66 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,19 (m, 3H), 7,09 (d, 2H), 6,26 (s, ÍH), 5,65 (m, ÍH), 4,07 (m, 4H), 3,54 (s, 2H), 2,28 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,3 minut.

326

MS: MH⁺ 497

Příklad 294

- { 3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2-( 1A-4imidazoly 1)-1 -ethanon

Směs l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol), 2-(lA-4-imidazolyl)acetátu sodného (0,0026 g, 0,000175 mol), l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0,0034 g, 0,000175 mol), N,Ndiisopropylethylaminu (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodém A λ-dimethylformamidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-{3-[4-amino-3(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -1 -azetanyl} -2-( 1 A-4-imidazolyl)-1 ethanon (0,018 g, 0,00004 mol). *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 11,90 (br, IH), 8,27 (s, IH), 7,71 (d, 2H), 7,53 (s, IH), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 6,92 (br, IH), 5,73 (m, IH), 4,74 (m, IH), 4,61 (m, IH), 4,42 (m, 2H), 3,42 (s, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,0 minut.

MS: MH⁺ 467.

Příklad 295

- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy feny 1)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-l-azetanyl} -3 -(1A-4imidazolyl)-1 -propanon

Směs 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0, 10 g, 0,00028 mol), 3-(lA-4-imidazolyl) propanové kyseliny (0,050 g, 0,00035 mol), l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0,0068 g, 0,00035 mol), A,Adiisopropylethylaminu (0,068 g, 0,00053 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,038 g, 0,00028 mol) v bezvodém A,A-dimethylformamidu (13 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v • 9

327 dichlormethanu (5 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-{3-[4-amino-3(4-fenoxyfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl) -3-(1 V-4-imidazolyl)-1 propanon (0,040 g, 0,00008 mol).

*H NMR (Chloroform-J, 400 MHz) δ 8,96 (s, 1H), 7,77 (br, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,17 (m, 3H), 7,08 (m, 2H), 6,90 (br, 1H), 5,78 (m, 1H), 5,56 (br, 2H), 4,76 (m, 1H), 4,57 (m, 3H), 2,98 (m, 2H), 2,55 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,0 minut.

MS: MH⁺ 481.

Obecný způsob:

Do směsi 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-lV-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol, 1 ekviv.) a uhličitanu draselného (0,039 g, 0,00028 mol, 2 ekviv.) v bezvodém N,A-dimethylformamidu se při pokojové teplotě přidá chloracetylchlorid (0,031 g, 0,00028 mol, 2 ekviv.). Před přidáním aminu (0,0014 mol, 10 ekviv.) se směs míchá po dobu 10 minut. Směs se míchá při pokojové teplotě od 1,5 hodiny do 2 dnů v závislosti na aminu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21, 1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získají odpovídající acetamidy.

Příklad 296

- {3 -[4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-l-azetanyl} -2- [(2hydroxyethy ljamino] -1 -ethanon

a) Amin: 2-amino-l-ethanol 'H NMR (Chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,37 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,08 (m, 2H), 5,83 (m, 1H), 5,57 (br, 2H), 4,82 (m, 1H), 4,65 (m, 3H), 3,71 (m, 2H), 3,45 (m, 2H), 2,92 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,7 minut.

· • · · >

• » » · · • · · » » · « · • · * • · ·

328

MS: MH⁺ 460.

Příklad 297

- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetany 1} -2- [(2methoxyethyl)amino] -1 -ethanon

b) Amin: 2-methoxy-1-ethanamin 'H NMR (Chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,38 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,83 (m, ÍH), 5,54 (br, 2H), 4,81 (m, ÍH), 4,64 (m, 2H), 4,56 (m, ÍH),

3,55 (t, 2H), 3,41 (s, 2H), 3,37 (s, 3H), 2,88 (t, 2H).

MS: MH⁺ 474.

Příklad 298

- {3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-1 -yl]-l-azetanyl} -2-[(3 hydroxypropy l)amino] -1-ethanon

c) Amin: 3-amino-l-propanol ‘H NMR (Chloroform-J, 400 MHz) δ 8,37 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,86 (m, ÍH), 5,54 (br, 2H), 4,81 (m, ÍH), 4,64 (m, 3H), 3,87 (m, 2H), 3,48 (m, 2H), 3,01 (m, 2H), 1,83 (m, 2H).

MS:MH⁺474.

Příklad 299

- {3 - [4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-l-yl]-1 -azetanyl } -2-[(2,3 dihydroxypropyl)amino]-1 -ethanon

d) Amin: 3-amino-l,2-propandiol • · · · : ······: :. : . · _:

·..· : .......

329 *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,72 (d, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,16 (m, 5H), 5,73 (m, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,59 (m, 2H), 4,37 (m, 2H), 3,53 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 3,22 (m, 2H), 2,59 (m, 1H), 2,45 (m, 1H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,6 minut.

MS: MH⁺ 490.

Příklad 300

- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy feny 1)-1 A-pyrazolo[3,4-t/] py rimi din- 1-y 1 ] -1-azetanyl} -2[(tetrahydro-2-furanylmethyl)amino]-1 -ethanon

e) Amin: tetrahydro-2-furanylmethanamin *H NMR (Chloroform-Z, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,81 (m, 1H), 5,54 (br, 2H), 4,80 (m, 1H), 4,64 (m, 2H), 4,57 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,87 (m, 1H), 3,76 (m, 1H), 3,42 (m, 2H), 2,83 (m, 1H), 2,74 (m, 1H), 2,00 (m, 1H), 1,89 (m, 2H), 1,57 (m, 1H).

MS: MH⁺ 500.

Příklad 301

f) Amin: 2-piperidino-l-ethanamin

- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4 -A] pyrimidin-1 -yl]-1 /azetanyl} -2- [(2piperidinoethyl)amino]-1 -ethanon 'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 5H), 5,73 (m, 1H), 4,60 (m, 2H), 4,36 (m, 2H), 3,24 (d, 2H), 2,60 (m, 2H), 2,36 (m, 6H), 1,49 (m, 4H), 1,36 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,4 minut.

MS: MH⁺ 527.

• ·

330

Příklad 302

g) Amin: A,A,A-trimethyl-l,2-ethandiamin l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-í-yl]-l-azetanyl}-2-[[2(dimethylamino)ethyl](methyl)amino]-1 -ethanon *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,17 (m, 5H), 5,75 (m, 1H), 4,70 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 3,22 (d, 2H), 2,75 (br, 2H), 2,61 (m, 2H), 2,47 (s, 6H), 2,29 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,4 minut.

MS:MH⁺501.

Příklad 303

h) Amin: /V,A-dimethyl-l,2-ethandiamin

- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-č(|pyrimidin-1 -y 1]-1 -azetanyl} -2- {[2(dimethylamino)ethyl] amino} -1 -ethanon-acetát *H NMR (Chloroform-J, 400 MHz) δ 8,33 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 7,11 (m, 2H), 5,81 (br, 3H), 4,81 (m, 1H), 4,59 (m, 3H), 3,38 (s, 2H), 2,89 (t, 2H),

2,68 (t, 2H), 2,43 (s, 6H), 2,05 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,0 minut.

MS: MH⁺ 487.

Příklad 304

i) Amin: A-methyl-A-(l-methyl-4-piperidyl)amin

- {3- [4-amino-3 -(4-fenoxy feny 1)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l/azetanyl} -2[methyl( 1 -methyl-4-piperidyl)amino]-1 -ethanon ’H NMR (Chloroform-//, 400 MHz) δ 8,36 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,76 (m, 1H), 5,58 (br, 2H), 4,87 (m, 1H), 4,79 (m, 1H), 4,62 (m, 1H),

4,55 (m, 1H), 3,27 (m, 2H), 2,97 (br, 2H), 2,51 (br, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,04 (br, 2H), 1,79 (br, 2H), 1,65 (br, 2H).

331

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,1 minut.

MS: MH⁺ 527.

Příklad 305

j) Amin: 2-morfolino-l-ethanamin

- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetany 1} -2- [(2morfolinoethyl)amino]-1 -ethanon ^!H NMR (Chloroform-J, 400 MHz) δ 8,38 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,19 (m, 3H), 7,09 (m, 2H), 5,86 (m, ÍH), 5,50 (br, 2H), 4,82 (m, ÍH), 4,67 (m, 3H), 3,77 (m, 4H), 3,50 (s, 2H), 2,92 (t, 2H), 2,66 (t, 2H), 2,57 (br, 4H).

MS: MH⁺ 529.

Příklad 306

k) Amin: 3-morfolino-l-propanamin

- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-íZ]pyrimidin-l-yl]-1 -azetanyl} -2- [(3 morfolinopropy l)amino] -1 -ethanon 'H NMR (Chloroform-J, 400 MHz) δ 8,38 (s, ÍH), 7,68 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,85 (m, ÍH), 5,54 (br, 2H), 4,81 (m, ÍH), 4,64 (m, 3H), 3,74 (m, 4H), 3,40 (s, 2H), 2,83 (br, 2H), 2,52 (br, 6H), 1,80 (br, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8, 9 minut.

MS: MH⁺ 543.

Příklad 307

l) Amin: 3-(l A-l-imidazolyl)-l-propanamin

- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyhenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2- {[3 (1 A-1 -imidazoy l)propy 1] amino} -1 -ethanon

332 *H NMR (Chloroform-;/, 400 MHz) δ 8,37 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,40 (m, 3H), 7,15 (m, 3H), 7,08 (m, 3H), 6,93 (s, 1H), 5,82 (m, 1H), 5,62 (br, 2H), 4,75 (m, 1H), 4,62 (m, 3H), 4,07 (t, 2H), 3,27 (s, 2H), 2,58 (t, 2H), 1,97 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,7 minut.

MS: MH⁺ 524.

Příklad 308

m) Amin: l-(3-aminopropyl)-2-pyrrolidinon

1- {3 - [(2- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-1 -yl] -1 -azetanyl} -2oxoethy l)amino]propyl} -2-pyrrolidinon ’H NMR (Chloroform-;/, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,82 (m, 1H), 5,54 (br, 2H), 4,81 (m, 1H), 4,64 (m, 3H), 3,42 (m, 6H), 2,79 (t, 2H), 2,42 (t, 2H), 2,07 (m, 2H), 1,86 (br, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,0 minut.

MS: MH⁺ 541.

Příklad 309

n) Amin: 4-piperidinol

- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-1 -y 1]-1 -azetanyl} -2-(4hydroxypiperidino)-1 -ethanon *H NMR (Chloroform-^, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,09 (m, 2H), 5,77 (m, 1H), 5,57 (br, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,63 (m, 1H),

4,56 (m, 1H), 3,73 (br, 1H), 3,18 (s, 2H), 2,91 (br, 2H), 2,38 (br, 2H), 1,95 (br, 2H), 1,62 (br, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,9 minut.

MS: MH⁺ 500.

• · · ·

333

Příklad 310

o) Amin: 4-piperidylmethanol l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-azetanyl}-2-[4(hydroxymethy l)piperidino] -1 -ethanon

H NMR (Chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,36 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,10 (m, 2H), 5,78 (m, IH), 5,64 (br, 2H), 4,89 (m, IH), 4,81 (m, IH), 4,62 (m, IH), 4,55 (m, IH), 3,49 (m, 2H), 3,13 (s, 2H), 2,97 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 1,49 (br, IH), 1,30 (m, 2H).

MS:MH⁺514.

Příklad 311

p) Amin: 1 -(2-methoxyethyl)piperazin

- {3- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2-[4-(2methoxyethyl)piperidino]-1 -ethanon ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,26 (s, IH), 7,71 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 5H),

5.69 (m, IH), 4,73 (m, 2H), 4,38 (m, 2H), 3,39 (t, 2H), 3,30 (s, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,05 (m, 2H), 2,43 (br, 8H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,0 minut.

MS: MH⁺ 543.

Příklad 312

q) Amin: morfolin l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-azetanyl}-2morfolino-1 -ethanon *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,26 (s, IH), 7,70 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,18 (m, 5H),

5.70 (m, IH), 4,73 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 3,57 (m, 4H), 3,08 (m, 2H), 2,44 (m, 4H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,6 minut.

• · • · • · • · • · • · * ; ........

: ·· · ·..· : ·· ·· ·

334

MS: ΜΗ⁺ 486.

Příklad 313

r) Amin: 1-methylpiperazin

- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</Jpyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl }-2-(4methylpiperazino)-1 -ethanon ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,16 (m, 5H),

5,70 (m, 1H), 4,70 (m, 2H), 4,35 (m, 2H), 3,29 (s, 2H), 3,06 (m, 2H), 2,45 (br, 6H), 2,16 (s, 3H).

MS: MH⁺ 499.

Příklad 314

s) Amin: 4-piperidinopiperidin

- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2-[4(piperid-1 -yl)piperidino] -1 -ethanon ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,18 (m, 5H),

5,70 (m, 1H), 4,73 (m, 2H), 4,40 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 2,88 (m, 4H), 2,38 (br, 4H), 2,13 (m, 1H), 2,00 (m, 2H), 1,61 (br, 2H), 1,43 (br, 6H), 1,34 (br, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,2 minut.

MS: MH⁺ 567.

Příklad 315

t) Amin: l//-imidazol

-{3-[4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2-( 1 Η-1 imidazolyl)-1 -ethanon • · • · · ·

335 ’Η NMR (Chloroform-í/, 400 MHz) δ 8,31 (s, 1H), 7,87 (br, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,18 (m, 4H), 7,10 (m, 3H), 5,90 (br, 2H), 5,80 (m, 1H), 4,82 (m, 1H), 4,72 (m, 3H), 4,59 (m, 1H), 4,47 (m, 1H).

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,2 minut.

MS: MH⁺ 467.

Příklad 316 l-13-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l yl]-l-azetanyl}-2(methylamino)-l-ethanon-acetát

Směs 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol), 2-[(/<?ró'-butoxykarbonyl) (methyl)amino]octové kyseliny (0,0033 g, 0,000175 mol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0,0034 g, 0,000175 mol), Λζ/V-diisopropylethylaminu (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodém A,A-dimethylformamidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x

21,1 mm; 5% - 100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá /-butyl-:V-(2- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl] -1 azetanyl} -2-oxoethyl)-A-methylkarbamát, pevný podíl se rozpustí v dichlormethanu (2 ml) a při teplotě 0°C do reakce se pomalu přidá 25 % roztok trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu (4 ml). Reakční směs se míchá po dobu 5 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, k upravení pH na 11 se při teplotě 0°C přidá 5 N vodný roztok hydroxidu sodného a vodná fáze se extrahuje dichlormethanem (2 x 30 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 60 ml) a solankou (1 x 60 ml) a suší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá l-{3-[4amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ó/Jpyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -2(imethylamino)-l-ethanon-acetát (0,022 g, 0,00004 mol).

’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,75 (m, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 3,18 (s, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,90 (s, 3H).

• · • ™ · • · · ·

336

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,9 minut.

MS: MH⁺ 430.

Příklad 317

-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl}-2(dimethylamino)-1 -ethanon-acetát

Směs 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol), 2-(dimethylamino)octové kyseliny (0,0018 g, 0,000175 mol), l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0, 0034 g, 0,000175 mol), N,Ndiisopropylethylaminu (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodém AA-dimethylformarnidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-{3-[4-amino-3(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl] -1 -azetanyl} -2-(dimethylamino)-1 ethanon-acetát (0,022 g, 0,00004 mol).

Ή NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,27 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 5,69 (m, 1H), 4,70 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 2,97 (m, 2H), 2,20 (s, 6H), 1,89 (s, 3H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,6 minut.

MS: MH⁺ 444.

Příklad 318

- {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -3 (diethylamino)-1 -propanon

Směs l-(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol), hydrochloridu 3-(diethylamino)propionové kyseliny (0,0032 g, 0,000175 mol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0,0034 g, 0,000175 mol), A/V-diisopropylethylaminu (0,068 g, 0,00053 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu • · · · ·

337 (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodém Ά',/V-dimethylťormamidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-{3[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-1 -yl] -1 -azetanyl} -3(diethylamino)-l-propanon (0,025 g, 0,00005 mol).

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,14 (m, 5H),

5,70 (m, 1H), 4,67 (m, 2H), 4,37 (m, 2H), 2,66 (m, 2H), 2,45 (m, 4H), 2,21 (m, 2H), 0,95 (m, 6H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,3 minut.

MS: MH⁺ 486.

Příklad 319

- {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-1 -y l]piperidino} -2(methylamino)-1 -ethanon-acetát

Směs 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,054 g, 0,00014 mol), 2-[terc-butoxykarbonyl) (methyl)amino]octové kyseliny (0,0033 g, 0,000175 mol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0,0034 g, 0,000175 mol), AýV-diisopropylethy laminu (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodém A/jV-dimethylformamidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x

21,1 mm; 5% - 100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá terc-butyl-7V-(2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-lyl]piperidino}-2-oxoethyl)-/V-methylkarbamát. Pevný podíl se rozpustí v dichlormethanu (2 ml) a do reakce se při teplotě 0°C pomalu přidá 25 % trifluoroctová kyselina v dichlormethanu (4 ml). Reakční směs se míchá po dobu 5 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Ke zbytku se při teplotě 0°C k upravení pH na 11 přidá 5 N vodný roztok hydroxidu sodného a vodná fáze se extrahuje

338 dichlormethanem (2 x 30 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (1 x 60 ml) a solankou (1 x 60 ml) a suší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl]piperidino}-2-(methylamino)-l-ethanon-acetát (0,010 g, 0,00002 mol). *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,25 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,13 (m, 5H), 4,94 (br, ÍH), 4,53 (br, ÍH), 3,99 (br, ÍH), 3,36 (m, 2H), 3,21 (br, ÍH), 2,85 (br, ÍH), 2,26 (s, 3H), 2,10 (br, ÍH), 1,96 (br, 3H), 1,85 (s, 3H).

MS: MH⁺ 458.

Příklad 320

- {4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yljpiperidino} -2(dimethylamino)-1 -ethanon

Směs 3 -(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,054 g, 0,00014 mol), 2-(dimethylamino)octové kyseliny (0,0018 g, 0,000175 mol), l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0,0034 g, 0,000175 mol), Ν,Νdiisopropylethylaminu (0,033 g, 0,00026 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0, 00014 mol) v bezvodém Λζ/V-dimethylformamidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-{4-[4-amino-3(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]piperdino} -2-(dimethylamino)-1 ethanon (0,031 g, 0,00007 mol).

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,25 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, 5H), 4,97 (br, ÍH), 4,50 (br, ÍH), 4,22 (br, ÍH), 3,25 (br, ÍH), 3,12 (m, 2H), 2,83 (br, ÍH), 2,21 (s, 6H), 2,16 (br, ÍH), 1,90 (br, 3H).

MS: MH⁺ 472.

• · · ·

339

Příklad 321

- {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -y l]piperidino} -3 (diethylamino)-1 -propanon-acetát

Směs 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,054 g, 0,00014 mol), hydrochloridu 3-(diethylamino)propionové kyseliny (0,0032 g, 0,000175 mol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0,0034 g, 0,000175 mol), A/V-diisopropylethy laminu (0,068 g, 0,00053 mol) a l-hydroxy-7azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodém A',A^ř-dimethylformamidu (6 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x

21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá 1 - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yljpiperidino } -3(diethylamino)-l -propanon-acetát (0,038g, 0,00006 mol).

^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,25 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,15 (m, síze 4, 97 (br, IH), 4,52 (br, IH), 4,03 (br, IH), 3,27 (br, IH), 2,80 (br, IH), 2,66 (m, 2H), 2,49 (m, 8H), 2,11 (br, IH), 1,95 (br, 3H), 1,87 (s, 3H), 0,93 (m, 6H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,7 minut.

MS:MH⁺514.

Obecný způsob

Do směsi 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00013 mol, 1 ekviv.) a uhličitanu draselného (0,036 g, 0,00026 mol, 2 ekviv.) v bezvodém Λζ/V-dimethylformamidu (3 ml) se při pokojové teplotě přidá chloracetylchlorid (0,028 g, 0,00026 mol, 2 ekviv.). Před přidáním aminu (0,0013 mol, 10 ekviv.) se směs míchá po dobu 10 minut. Směs se míchá při pokojové teplotě 3 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získají odpovídající acetamidy.

• · · · ·

340

Příklad 322

a) Amin: morfolin l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrmidin-l-yl]piperidino}-2morfolino-1 -ethanon-acetát ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,16 (m, 5H), 4,99 (m, IH), 4,47 (br, IH), 4,19 (br, IH), 3,58 (m, 4H), 3,25 (m, 2H), 3,11 (m, IH), 2,83 (br, IH), 2,43 (m, 4H), 2,25 (br, IH), 1,99 (br, 3H), 1,89 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,7 minut.

MS:MH⁺514.

Příklad 323

b) Amin: 1-methylpiperazin

1- {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yljpiperidino} -2-(4methylpiperazino)-1 -ethanon-acetát *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,16 (m, 5H), 4,99 (m, IH), 4,47 (br, IH), 4,19 (br, IH), 3,29 (m, 2H), 3,22 (m, 2H), 3,05 (m, IH), 2,80 (br, IH), 2,33 (br, 6H), 2,22 (br, IH), 2,13 (s, 3H), 1,94 (br, 3H), 1,89 (s, 3H).

MS: MH⁺ 527.

Příklad 324 a 325

Cis a trans 2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-l-yl]-lhydroxycyklohexyl} octová kyselina

a) Cis a /raz7.s-/erc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-lyl] -1 -hydroxycyklohexy 1} acetát

Suspenze kyseliny se promyje zinkovým prachem (0,350 g, 0,00535 mol) a chloridem měďným (0,053 g, 0,000535 mol) v bezvodém tetrahydrofuranu (10 ml) a směs se zahřívá k refluxu po dobu 30 minut. Zahřívání se zastaví a ihned se přidá (1 ml) roztok /erc-butyl-2-bromacetátu (0,261 g, 0,00134 mol) v tetrahydrofuranu (10 ml). Směs se

341 míchá 5 minut, pak se po kapkách přidá zbytek směsi. Směs se zahřívá k refluxu po dobu 30 minut. Směs se ochladí na pokojovou teplotu. V průběhu 5 minut se po kapkách přidá roztok 4-(4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-é/]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexanonu (0,200 g, 0,00053 mol) v bezvodém tetrahydrofuranu (5 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě 4 hodiny, nezreagovaný zinek se odstraní filtrací, promyje etherem (3x5 ml), filtrát se promyje vodou (3x5 ml) a solankou (10 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. V surové směsi byl poměr cisdrans (1:1), izomery se separují zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (98:2). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá méně polární /rans-terc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidm-l-yl]-l-hydroxycyklohexyl}acetát ve formě bílé pevné látky (0,092 g, 0,00018 mol) a polárnější cz's-terc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-l-yl]-l-hydroxycyklohexyl}acetát ve formě bílé pevné látky (0,049 g, 0,000096 mol). CA-/erc-butyl-2- {4- [4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4úQpyrimidin-1 -yl] -1 -hydroxycyklohexy 1 }acetát ‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,11-7,20 (m, 5H), 4,70-4,84 (m, 1H), 2,36 (s, 2H), 1,89-2,12 (m, 4H), 1,51-1,67 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,37-1,42 (m, 4H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 19,31 minut.

MS:MH⁺516.

Trans-terc-\)\Ay\-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-z/)pyrimidin-1 -yl]-1 hydroxycyklohexyl} acetát ‘íINMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,66 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,11-7,20 (m, 5H), 4,45-4,61 (m, 1H), 2,36 (s, 2H), 1,78-1,85 (m, 2H), 1,64-1,71 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,36-1,45 (m, 4H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 19,64 minut.

MS:MH⁺516.

Cis-2-{4-[4-amino-3 -(4-fenoxy fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -1 -hydroxycyklohexyl} octová kyselina • · • » » ·

342

Cz's-férc-butyl-2- {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-lyl]-l-hydroxycyklohexyl}acetát (0,092 g, 0,000178 mol) se nechá reagovat s roztokem 20% trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu (10 ml) při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 45 minut. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozpustí v ethylacetátu (25 ml) a promyje vodou (3 x 10 ml), suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se suspenduje ve vodě (25 ml) a lyofilizuje, čímž se získá cz's-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl]-lhydroxycyklohexyl} octová kyselina ve formě bílého prášku (0,078 g, 0,000170 mol).

'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,32 (s, ÍH), 7,66 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11-7,22 (m, 5H), 4,62-4,67 (m, ÍH), 2,39 (s, 2H), 2,27-2,43 (m, 2H), 1,55-1,90 (m, 6H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,65 minut.

MS: MH⁺ 460.

Trans-2-{4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 hydroxycyklohexyl} octová kyselina

7ra«s-terc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-lyl]-l-hydroxycyklohexyl}acetát (0,049 g, 0,000096 mol) se nechá reagovat s roztokem 20% trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu (10 ml) při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 45 minut. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozpustí v ethylacetátu (25 ml) a promyje vodou (3x10 ml), roztok se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se suspenduje ve vodě (25 ml) a lyofilizuje, čímž se získá /ra«,s-2-{ 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-lhydroxycyklohexyl}octová kyselina ve formě bílého prášku (0,038 g, 0,000083 mol).

^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,36 (s, ÍH), 7,67 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11-7,22 (m, 5H), 4,72-4,79 (m, ÍH), 1,99 (s, 2H), 1,91-2,09 (m, 6H), 1,61-1,65 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,46 minut.

MS:MH⁺ 460.

343

Příklad 326

Trans-1 - { 3 - [(benzyloxy)methyl]cyklobutyl} -3-(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-4-amin ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,37- 7,39 (m, 4H), 7,29-7,31 (m, 1H), 7,11-7,21 (m, 5H), 5,42-5,47 (m, 1H), 4,57 (s, 1H), 3,63 (d, 2H), 2,76-2,81 (m, 2H), 2,60-2,70 (m, 1H), 2,28-2,34 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R, 21,92 minut.

MS: MH⁺478

Příklad 327 [3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 (hydroxymethyl)cyklobutyl]methanol

a) Diethyl-3 - [(methylsulfonyl)oxy]-1,1 -cyklobutandikarboxylát

Roztok diethyl-3-hydroxy-l,l-cyklobutandikarboxylátu (0,268 g, 0,00116 mol) v pyridinu (7 ml) se ochladí na teplotu 0°C. Po kapkách se přidá methansulfonylchlorid (0,11 ml, 0,160 g, 0,00140 mol), přičemž teplota se udržuje pod 2°C. Směs se míchá po dobu 4 hodin, pak se nalije do ledové vody (20 ml) a extrahuje ethyletherem (2x10 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (3x10 ml) a solankou (10 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá diethyl-3[(methylsulfonyl)oxyj-1,1-cyklobutandikarboxylát (0,302 g, 0,00102 mol) ve formě žlutého oleje.

'HNMR (CDC1₃ 400MHz) 5,08-5,11 (m, 1 H), 4,23 (q, 4H), 3,01 (s, 3H), 2,983,03 (m, 2H), 2,81-2,86 (m, 2H), 1,27 (t, 6H).

b) Diethyl-3 -[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl] -1,1 -cyklobutandikarboxylát

Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,129 g, 0,00042 mmol) v N, A-dimethylformamidu (5 ml) se nechá reagovat s diethyl-3 [(methylsulfonyl)oxy]-l,l-cyklobutandikarboxylátem (0,150 g, 0,00051 mmol) a uhličitanem česným (0,166 g, 0,00051 mmol) při teplotě 70°C po dobu 5 dnů. Reakční směs se nalije do vody (20 ml) a extrahuje ethylacetátem (3x10 ml). Spojené organické

344 vrstvy se promyjí vodou (2 x 10 ml) a solankou (10 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (98:2). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá diethyl-3-[4-amino-3-(4-fenoxy-fenyl)lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l,l-cyklobutandikarboxylát (0,060g, 0,00012 mol) ve formě hnědé pevné látky.

’HNMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,67 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,12-7,21 (m, 5H), 5,38-5,42 (m, IH), 4,16-4,28 (m, 4H), 3,14-3,17 (m, 2H), 2,96-3,00 (m, 2H), 1,171,28 (m, 6H).

c) [3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-(hydroxymethyl)cyklobutyljmethanol

Do roztoku diethy 1-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-djpyrimidin-1 yl]-l,l-cyklobutandikarboxylátu (0,045 g, 0,000089 mol) v tetrahydrofuranu (10 ml) se přidá lithiumaluminum-hydrid (0,010 g, 0,000270 mol). Reakční směs se míchá 6 hodin při pokojové teplotě, po kterých se přidá voda (1,0 ml). Směs se filtruje přes vrstvu Celitu® 521. Rozpouštědlo se odstraní z filtrátu za vakua. Zbytek se vytřepe mezi vodu (15 ml) a ethylacetát (15 ml). Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (3 x 10 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky po dobu 5 minut, pak 40%-100% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 30 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá [3-[4amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-djpy rimidin-1 -yl] -l-(hydroxymethyl)cyklobutyljmethanol ve formě bílé pevné látky (0,007 g, 0,000017 mol):

Ή NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,22 (s, IH), 7,68 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,11- 7,20 (m, 5H), 5,28-5,34 (m, IH), 4,76 (t, 1 H), 4,58 (t, IH), 3,55 (d, 2H) 3,47 (d, 2H), 2,46-2,55 (m, 2H), 2,24-2,31 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,81 minut.

MS:MH⁺418.

• ·

345

Příklady 328-334

Obecný způsob přípravy arylalkylových cz,s-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-4-aminových analog.

Tyto sloučeniny se připraví podle způsobu popsaného výše pro přípravu arylalkylových cis-3 -(4-amino-3 -fluorfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Apyrazolo [3,4 -ť/]py rimidin-4-amino vých analog.

Př.	R	MH⁺	Rt (min)
329	ó? 2	505,3	12,05
330	T 9	538,4	9,27
331	A 2 9	453,2	11,16
332		519,1	12,95
333	{	535,3	10,57

• · • · · · · • · · · · · • ··· ····

346

334

555,3

14,08

Příklad 335

V2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- 1 V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3yl}-2-fluorfenyl)-5-chlor-2-thiofensulfonamid-maleát.

Tato sloučenina se připraví ve formě maleátu podle způsobu popsaného výše pro cis a řran5-3-(4-amino-3-fluorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-fljpyrimidin-4-amin

HPLC-RT: 12,39 minut, (průtok: 1 ml/min, λ - 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný gradient v průběhu 20 min.; Deltapak Cl8, 300Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z (MH) = 606,1.

Příklad 336 l-(4-{4-amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)-3-fluorfenyl]-lV-pyrazolo[3,4/Jpyrimidin-1 -yl}piperidino)-2-(dimethylamino)-1 -ethanon. a) 7brc-butyl-4-hydroxy-l-piperidinkarboxylát

7erc-butyl-4-hydroxy-l-piperidinkarboxylát (20 g, 100,4 mmol) se rozpustí v methanolu (250 ml), pak ochladí na teplotu 0°C a v průběhu 10 minut se přidá borohydrid sodný (3,8 g, 100,4 mmol). Reakční směs se ohřeje z 0°C na pokojovou teplotu. Po 4 hodinách se reakce koncentruje za sníženého tlaku a zbylý sirup se rozpustí ve směsi (3:1) dichlormethan/isopropanol (400 ml). Organická vrstva se promyje IN vodným hydroxidem sodným (200 ml). Vodná vrstva se pak extrahuje směsí (3:1) dichlormethan/isopropanol (3 x 150 ml). Organická vrstva se promyje solankou (400 ml), pak suší nad bezvodým síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá mrc-butyl-4-hydroxy-lpiperidinkarboxylát ve formě světle žlutého sirupu (20 g, 100,4 mmol).

··· ·· · ··· ···· ·· · · · · · • ······· · ··· · · · · ·· · ·· ·· ·· ·

347 ’Η NMR (dé-DMSO): δ 1,21-1,28 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,65-1,69 (m, 2H), 2,94-2,96 (m,

2H), 3,59-3,68 (m, 3H), 4,68 (d, 1H).

b) 7 erc-butyl-4-(4-amino-3 -j od-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-1 -yl)-l-piperidinkarboxylát.

3-Jod-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin (17,3 g, 66,33 mmol) se suspenduje v tetrahydrofuranu (800 ml). Přidá se roztok terc-butyl-4-hydroxy-l-piperidinkarboxylátu (20 g, 99,5 mmol) v tetrahydrofuranu (300 ml) a trifenylfosfin (34,8 g, 132,66 mmol).

Reakční směs se ochladí na teplotu 0°C a po kapkách se přidá diethyl-azodikarboxylát (23,1 g, 132,66 mmol). Po 2 hodinách při pokojové teplotě se reakce koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá surový /m?-butyl-4-(4-amino-3-jod-177-pyrazolo[3,4í7]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát ve formě oranžového oleje (69,44 g).

HPLC-RT: 14,29 minut, 19%, (průtok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný v průběhu 20 min.; sloupec Deltapak Cl8,

300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm).

c) Dihydrochlorid 3 -j od-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu.

Surový /erobutyl-4-(4-amino-3 -jod-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát (69,4 g, 156,30 mmol) se rozpustí v acetonu (900 ml) a pomalu po kapkách se přidá 6N vodná kyselina chlorovodíková (300 ml). Reakce se pak zahřívá při teplotě 45°C za vzniku precipitátu. Po 1,5 hodině se precipitát spojí vakuovou filtrací, promyje minimálním množstvím acetonu a suší v lyofilizátoru, čímž se získá dihydrochlorid 3-jod1-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu ve formě žluté pevné látky (16,61 g,

39,8 mmol).

HPLC-RT: 6,16 minut, (průtok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný gradient v průběhu 20 min.; Deltapak Cl 8, 300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 345,0.

d) 1 - [4-(4-Amino-3 -j od-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -y 1 jpiperidi no] -2-(dimethylamino)1-ethanon.

Dihydrochlorid 3-jod-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (3g,

7,19 mmol) se suspenduje v dichlormethanu (350 ml), pak se v průběhu 4 dnů přidává

A.A-dimethylglycin (1,02 g, 9,88 mmol), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (1,08 g, 7,91 mmol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochlorid (1,89 g, 9,89 mmol) • · ·

348 a Y-ethyl-yV-isopropylamin (5,06 g, 39,2 mmol). Reakce se zředí dichlormethanem (300 ml), pak promyje vodou (150 ml) a solankou (150 ml). Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá l-[4-(4-amino3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-</)pyrimidin-1 -yl)piperidino] -2-(dimethylamino)-l-ethanon ve formě hnědé pevné látky (2,74 g, 6,39 mmol).

HPLC-RT: 7,40 minut, (průtok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 430,3.

e) 1 -(4- {4-Amino-3 - [4-( 1,3 -benzoxazol-2-ylamino)-3 -fluorfenylj-1 //-pyrazolo [3,4ť/]pyrimidin-1 -yl}piperidino)-2-(dimethylamino)-1 -ethanon.

-[4-(4-Amino-3-jod-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)piperidino]-2(dimethylamino)-l-ethanon (100 mg, 0,233 mmol) se rozpustí v ethylenglykolu dimethyletheru (10 ml) a vodě (1,5 ml) a přidá se A-(l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[2-fluor-4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (103 mg, 0,291 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (13 mg, 0,051 mmol) a uhličitan sodný (62 mg, 0,583 mmol) a reakce se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 24 hodin. Reakce se koncentruje za sníženého tlaku, zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (100 ml) a minimální množství vody. Organická vrstva se koncentruje za sníženého tlaku a trituruje diethyletherem (25 ml), čímž se získá žluto-hnědá pevná látka (172 mg). Purifikací RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 15% až 35% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 40 minut; Deltapak Cl8, 300Á, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec) se získá l-(4-{4-amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)-3-fluorfenyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl}piperidino)-2-(dimethylamino)-l-ethanon ve formě bělavé pevné látky (64 mg, 0,121 mmol).

HPLC-RT: 7,27 minut, (průtok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 95% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Waters Symmetry Shield Cl8, 3,5 pm, 50 x 2, 1 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 530,2.

Příklad 337

-(4- {4-Amino-3 - [4-( 1,3 -benzothiazol-2-ylamino)-3 -fluorfeny 1]-1 //-pyrazolo [3,4ť/]pyrimidin-l -yl}piperidino)-2-(dimethy lamino)-1 -ethanon • · · · • · · · · · • · · • · · ·· ·· · · ·

349

HPLC-RT: 10,09 minut, (průtok: 1 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 5% až 85% gradient acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný v průběhu 20 min.; Deltapak 08, 300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 546,2.

Příklady 338-364

a) Reprezentativní způsob alkylace:

Hydrid sodný (60%, 0,138 g, 3,45 mmol) se přidá do suspenze 3-jod-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,750 g, 2,87 mmol) v DMF (9 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny, dokud není roztok homogenní. Přidá se alkylbromid (4,03 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledný pevný podíl se trituruje postupně vodou (25 ml), pak směsí ether/petrolether (4:1, 50 ml), čímž se získá produkt.

b) Reprezentativní způsob Suzukiho kopulace:

Suspenze aryljodidu (2,28 mmol), /erc-butyl-V-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,08 g, 3,19 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (0,105 g, 0,091 mmol), uhličitanu sodného (0,478 g, 5,69 mmol) v W-dimethylformamidu (12 ml) a vody (2 ml) se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 14 hodin pod atmosférou dusíku. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi nasycený vodný roztok chloridu sodného (50 ml) a ethylacetát (30 ml). Vodná vrstva se separuje a extrahuje dále ethylacetátem (3 x 30 ml). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a koncentrují za sníženého tlaku. Purifikací zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/heptan (9:1) jako mobilní fáze se získá chráněný anilinový produkt.

c) Reprezentativní způsob odstranění chrámcích skupin:

Do 50 ml baňky obsahující roztok chlorovodíku v dioxanu (4 M, 6 ml) a ethanol (6 ml) se přidá chráněný anilin (1,05 mmol). K baňce se připevní chladič a směs se míchá při teplotě 50°C pod atmosférou dusíku. Po 16 hodinách se reakční směs ochladí na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodnou kyselinu chlorovodíkovou (0,5 M, 30 ml) a ether (20 ml). Organická vrstva se separuje a vylije, vodná vrstva alkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného

350 (30 ml) a výsledná směs se extrahuje ethylacetátem (3 x 30 ml). Spojené ethylacetátové extrakty se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a koncentrují, čímž se získá anilinový produkt.

d) Reprezentativní způsob sulfonylace:

Anilin (1,0 mmol) se přidá do roztoku 2,3-dichlorbenzensulfonylchloridu (0,263 g, 1,07 mmol) a 4-dimethylaminopyridinu (0,005 g, 0,041 mmol) v pyridinu (5 ml) a výsledný roztok se míchá pod atmosférou dusíku po dobu 3 dnů. Přidá se směs methanolu a dichlormethanu (1:19, 100 ml) a výsledná směs se extrahuje z poloviny nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3x10 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá sulfonamidový produkt.

e) Reprezentativní způsob transesterifikace:

Ethylester (2,76 mmol) se přidá do roztoku triethylaminu (3,8 ml, 28 mmol) a methanolu (30 ml). K reakční baňce se připevní chladič a reakční směs se zahřívá při teplotě 75°C pod atmosférou dusíku. Po 24 hodinách se reakce nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá methylesterový produkt.

f) Alternativní způsob transesterifikace:

Roztok ethylesteru (0,279 mmol) a methoxidu sodného (0,015 g, 0,279 mmol) v methanolu (2 ml) se zahřívá v utěsněné nádobě při teplotě 75°C po dobu 2 hodin. Reakce se ochladí pokojovou teplotu, přidá se směs methanol/dichlormethan (1:19, 100 ml) a výsledná směs se extrahuje z poloviny nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 10 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá methylesterový produkt.

g) Reprezentativní způsob přípravy amidu:

V utěsnitelné Schlenkově baňce se suspenduje ester (0,056 mmol) v aminovém rozpouštědle (1 ml), baňky se utěsní teflonovým víčkem a směs se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 2 dnů. Reakce se ochladí pokojovou teplotu, čímž se získá amidový produkt.

h) Reprezentativní způsob přípravy primárního amidu:

• · · · · · ·

351

Utěsnitelná Schlenkova baňka se naplní methylesterem (0,086 mmol), přidá se roztok methanolu s nasyceným amoniakem (1 ml) a Schlenkova baňka se uzavře a zahřívá při teplotě 90°C po dobu 24 hodin. Reakce se ochladí pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá primární amidový produkt.

i) Reprezentativní způsob přípravy močoviny:

Anilin (0,152 mmol) se rozpustí v pyridinu (1 ml), roztok se ochladí na teplotu -20°C, přidá se w-tolylizokyanát (0,143 mmol) a roztok se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 6 hodinách se produkt koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá močovinovým produkt.

Příklad 338

Ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-177pyrazolo [3,4-c7]pyrimidin-1 -yljacetát

Postupně se použije alkylace (s ethylbromacetátem jako alkylbromidem), Suzukiho kopulace, odstranění chránících skupin a sulfonylace. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 12,4-13,9 min) se získá ethyl-2-[4amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-177-pyrazolo[3,4c/]pyrimidin-l-yljacetát ve formě bílé pevné látky (0,011 g, 0,020 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9, 78 min.

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,84 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,54 (t, 1H), 7,43 (m, 3H), 5,21 (s, 2H), 4,15 (qt, 2H), 1,20 (t, 3H); MS: MH⁺ 539.

Příklad 339

Al - {4- [4-Amino-1 -(2-morfolino-2-oxoethyl)-177-pyrazolo [3,4-<7] py rimidin-3 -y 1 ]-2fluorfenyl} -2,3 -dichlor-1 -benzensulfonamid

Ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-177pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-l-yljacetát se nechá reagovat smorfolinem za použití reprezentativního způsobu přípravy amidu. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% • · • · · · • · • · · ··· ·· · ··· ···· ·· · ···· • ······· · ··· ···· ·· · ·· ·· ·· ·

352

CH3CN v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8pm Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 9, 3- 9,8 min) se získá Al-{4-[4-amino1 -(2-morfolino-2-oxoethyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-fluorfenyl} -2,3-dichlor1-benzensulfonamid ve formě bílé pevné látky (0,005 g, 0,009 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 8,22 min.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,82 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,96 (d, 1H), 7,94 (m, 1H),

7,53 (t, 1H), 7,39 (m, 3H), 6,97 (br, 2H), 5,32 (s, 2H), 3,5 (m, 8H); MS: MH⁺ 580.

Příklad 340

Al-(4-{4-Amino-l-[2-(4-methylpiperazino)-2-oxoethyl]-lA-pyrazolo[3,4-//]pyrimidin-3yl} -2-fluorfenyl)-2,3 -dichlor-1 -benzensulfonamid

Ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]acetát se nechá reagovat s 1-methylpiperazinem za použití reprezentativního způsobu přípravy amidu. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100%

CH3CN v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 pm Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 6,4-7,0 min) se získá Al-(4-{4-amino-l[2-(4-methylpiperazino)-2-oxoethyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-2,3dichlor-1-benzensulfonamid ve formě bílé pevné látky (0,005 g, 0,009 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 6,83 min.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,96 (d, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,50 (t, 1H),

7,36 (m, 3H), 5,31 (s, 2H), 3,45 (m, 4H), 2,50 (m, 4H), 2,30 (s, 3H). MS: MH⁺ 593.

Příklad 341

Al -[(17?,25)-2-Hydroxy-1 -methyl-2-fenylethyl]-Al -methyl-2-[4-amino-3-(4- {[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl] amino} -3 -fluorfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-//] pyrimidin-1 -yl] -acetamid

Roztok (+)-pseudoefedrinu (0,037 g, 0,224 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (0,75 ml) se nechá reagovat s roztokem «-butyllithia (2,5 M v hexanech, 0,060 ml, 0,150 mmol). Po 20 minutách se tento roztoku převede pomocí kanyly do roztoku ethyl-2-[4amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lA-pyrazolo[3,4··· ······ ··· ··· · · · · · · ···· ·· · ···· • ······· · ··· ···· • · · ·· ·· · · ·

353 </]pyrimidin-l-yl] acetátu (0,040 g, 0,074 mmol) v /V,/V-dimethylformamidu (0,75 ml). Výsledný roztok se míchá při teplotě 50°C po dobu 15 hodin, po kterých se pak ochladí na pokojovou teplotu a rozdělí mezi methanol/dichlormethan (1:9, 50 ml) a vodu (15 ml). Organická vrstva se oddělí, suší nad síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje za sníženého tlaku. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8pm Hypersilu HS Cl8,

250 x 21 mm sloupec, R_t 11,88-12,65 min) se získá NI-[(IR,25j-2-hydroxy-1 -methyl-2fenyl ethyl]-VI -methyl-2-[4-amino-3-(4- {[(2,3-dichlorfenyl)sulfonylamino} -3-fluorfenyl)l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-acetamid ve formě bělavé pevné látky (0,010 g, 0,015 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,63 min; MS: (MH)

658.

Příklad 342 /Vl-[(15,25)-2-Hydroxy-l-methyl-2-fenylethyl]-/Vl-methyl-2-[4-ammo-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3-fluorfenyl)- 177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-acetamid

Použitím způsobu, který je podobný shora popsanému se smíchají (+)-efedrinhydrochlorid (0,061 g, 0,302 mmol) a ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-íluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]acetát (0,054 g, 0,10 mmol). Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 pm Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm sloupec, R_t 11,4-11,9 min) se získá/VI-[(15,25j-2-hydroxy-l-methyl-2fenylethyl]-/Vl -methyl-2-[4-amino-3-(4- {[(2,3-dichlorfenyl)sulfonylamino}-3-fluorfenyl)177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-acetamid ve formě bělavé pevné látky (0,010 g, 0,015 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,36 min; MS:

(M-H)' 656.

• · · · ·

354

Příklad 343

Al - [4-(4-Amino-1 - {2-[(25)-2-(hydroxymethyl)tetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyl]-2-oxoethyl}-l Hpyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl)-2-fluorfenyl] -2,3 -dichlor-1 -benzensulfonamid

Použitím způsobu, který je podobný shora popsanému se smíchá (R)-pyrrolidinmethanol (0,038 ml, 0,385 mmol) a ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]acetát (0,060 g, 0,111 mmol). Purifikaci preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 8,45-9,90 min) se získá Al-[4-(4-amino-l-{2-[(2S)-2(hydroxymethyl)tetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyl]-2-oxoethyl} -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl)-2-fluorfenyl]-2,3-dichlor-l-benzensulfonamid ve formě bělavé pevné látky (0,024 g, 0,040 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 8,05 min; MS: (M-H)' 592.

Příklad 344

Al -[4-(4-Amino-1 - {2-[(2/?)-2-(hydroxy methyltetrahydro-1 A-1 -pyrrolyl]-2-oxoethyl} -1Apyrazolo [3,4-</]pyrimidi n-3 -yl)-2-fluorfenyl] -2,3-dichlor-l-benzensulfonamid

Použitím způsobu, který je podobný shora popsanému se smíchá (Sj-pyrrolidinmethanol (0,038 ml, 0,385 mmol) a ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfényl)-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]acetát (0,060 g, 0,111 mmol). Purifikaci preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 8,15-9,70 min) se získá Al-[4-(4-amino-l-{2-[(2/?)-2(hydroxymethyl)tetrahydro-1 A-1 -pyrrolyl] -2-oxoethyl} -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl)-2-fluorfenyl]-2,3-dichlor-l-benzensulfonamid ve formě bělavé pevné látky (0,022 g, 0,037 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 7,98 min; MS: (M-H)' 592.

9 9 9

9 9 9 ··

9999999 9 9 9 9 9999

9 9 9 9 9 9 9 9 9

355

Příklad 345

Methyl-2- [4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl] amino} -3 -fluorfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-J]pyrimidin-1 -yl]acetát

Podle reprezentativního způsobu transesterifikace se ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]acetát (1,49 g, 2,76 mmol) konvertuje na odpovídající methylester. Surová látka se čistí preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 11,0-12,3 min), čímž se získá methy 1-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonylamino}-3-fluorfenyl)lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl]acetát ve formě bílé pevné látky (0,016 g, 0,030 mmol): RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,22 min.

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,84 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,96 (m, 2H), 7,60 (m, 1H), 7,56 (m, 3H), 5,23 (s, 2H), 3,68 (s, 3H); MS: MH⁺ 525.

Příklad 346

2-[4-Amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 -fluorfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4J]pyrimidin-l-yl]octová kyselina

V znovu utěsnitelné Schlenkově baňce se rozpustí methyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-;/]pyrimidin-l-yl]acetát (0,030 g, 0,057 mmol) ve směsi methanol/voda (1:1, 1 ml), baňky se utěsní teflonem a zahřívají při teplotě 90°C. Po 2 dnech se reakce ochladí pokojovou teplotu. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 6,3-6,7 min) se získá 2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonylamino}-3-fluorfenyl)-lApyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-l-yl]octové kyseliny ve formě bílé pevné látky (0,006 g, 0,030 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl 8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 6,42 min.

'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,13 (s, 1H), 7,97 (d, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,36 (t, 1H), 7,19 (m, 3H), 7,15 (d, 1H), 4,59 (s, 2H); MS: (M-H)’ 509.

• · ·

356

Příklad 347

Al -[2-(dimethylamino)ethyl]-2-[4-amino-3-(4- {[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3fluorfenyl)-1A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -y l]-acetamid

Při reakci methyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-l-yl]acetátu (0,035 g, 0,067 mmol) s N, A-dimethylethylendiaminem (1 ml) se použije reprezentativní způsob přípravy amidu. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 6,85-7,45 min) se získá Al-[2-(dimethylamino)ethyl]-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 -fluorfenyl)-177-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -acetamid ve formě bělavé pevné látky (0,008 g, 0,014 mmol):

^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,20 (br, IH), 8,22 (m, 2H), 7,96 (d, IH), 7,80 (d, IH), 7,45 (t, IH), 7,31 (m, 3H), 6,90 (br, 2H), 4,96 (s, 2H), 3,40 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 2,07 (s, 6H); MS: (M-H)' 579.

Příklad 348

Al - [2-(Diethylamino)ethyl] -2- [4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 fluorfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-1 -yl]-acetamid

Při reakci methyl-2-[4-amino-3-(4-{ [(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-l-yl]acetátu (0,035 g, 0,067 mmol) s Α,Α-diethylethylendiaminem (1 ml) se použije reprezentativní způsob přípravy amidu. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 7,12-7,98 min) se získá Al-[2-(diethylamino)ethyl]-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-l-yl]-acetamid ve formě bělavé pevné látky (0,017 g, 0,028 mmol):

‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,22 (s, IH), 8,12 (br, IH), 7,96 (d, IH), 7,78 (d, IH), 7,44 (t, IH), 7,31 (m, 3H); 6,95 (br, 2H), 4,96 (s, 2H), 3,35 (m, 2H), 2,82 (m, 2H), 2,50 (m, 4H), 1,05 (t, 6H); MS: (M-H)' 607.

• · · • · · · • · · · · · · • * • · ·

357

Příklad 349

2- (Dimethylamino)ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -y l]acetát

Při reakci methyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-l-yl]acetátu (0,035 g, 0,067 mmol) s VV-dimethylthanolaminem (1 ml) se použije reprezentativní způsob přípravy amidu. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t7,50-8,07 min) se získá 2-(dimethylamino)ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonylamino}-3-fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]acetát ve formě bělavé pevné látky (0,008 g, 0,014 mmol):

‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,96 (d, IH), 7,83 (d, IH), 7,48 (t, IH), 7,32 (m, 3H), 5,23 (s, 2H), 4,29 (t, 2H), 2,86 (m, 2H), 2,39 (s, 6H); MS: (M-H)' 580.

Příklad 350 /VI - [3 -(Dimethylamino)propyl] -2- [4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl] amino} -3 fluorfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-acetamid

Při reakci methyl-2- [4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-l-yl]acetátu (0,025 g, 0,048 mmol) s

3- (dimethylamino)propylaminem (1 ml) se použije reprezentativní způsob přípravy amidu. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 6,7-7,3 min) se získá /Vl-[3-(dimethylamino)propyl]-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 -fluorfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -acetamid ve formě bělavého prášku (0,015 g, 0,025 mmol):

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (m, IH), 7,96 (m, IH), 7,76 (m, IH), 7,43 (t, IH),

7,30 (m, 2H), 4,93 (s, 2H), 3,12 (m, 2H), 2,82 (m, 2H), 2,50 (s, 6H), 1,73 (m, 2H); MS (ΜΗ)' 593.

• · · · · · ···· ·· · ···· • ······· · ··· ···· ·· · ·· ·· ·· ·

358

Příklad 351

- [4 - Amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 -fluorfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-1 -yl] -acetamid

Ke konvertování methyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]acetátu (0,045 g, 0,086 mmol) na odpovídající primární amid se použije reprezentativní způsob přípravy primárního amidu. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 μ Hypersil HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t6,9-8,5 min) se získá 2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-l-yl]-acetamid ve formě bělavého prášku (0,015 g, 0,029 mmol): *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,83 (br, 2H), 8,84 (br, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,50 (m, 2H), 7,36 (m, 1H); 3,87 (s, 2H); MS (M-H)’ 508.

Příklad 352

Ethyl-2-(4-amino-3- { 3 -fluor-4- [(3 -toluidinokarbony ljamino] fenyl} -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-1 -yljacetát

Postupně se použije alkylace (s ethylbromacetátem jako alkylbromidem), Suzukiho kopulace, odstranění chráničích skupin a tvorba močoviny. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 12,1-13,5 min) se získá ethyl-2-(4-amino-3 - {3 -fluor-4- [(3 -toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l-yljacetát ve formě a žlutého prášku (0,015 g, 0,032 mmol):

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,07 (br, 1H), 8,73 (br, 1H), 8,38 (t, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,48 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,19 (t, 1H), 6,82 (d, 1H), 5,23 (s, 2H), 4,17 (qt, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,21 (t, 3H); MS: (M-H)’ 462.

Příklad 353

N- {4- [4-amino-1 -(2-morfolino-2-oxoethyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2fluorfenyl} -7V-(3 -methy lfenyljmočovina • · · • · · · · · ·«« • · · · · · · ···· • ······· » ··· ···· ··· · · · · ··· •· · ·· ·· ·· ·

359

Ethyl-2-(4-amino-3 - {3 -fluor-4- [(3 -toluidinokarbonyl)amino]fenyl }-lHpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)acetát (0,025 g, 0,054 mmol) se konvertuje na odpovídající methylester podle způsobu reprezentativní transesterifikace. Tento produkt se rozpustí v morfolinu (1 ml) a roztok se zahřívá při teplotě 50°C v utěsněné nádobě po dobu 2 dnů. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu, koncentruje a purifikuje preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 9,3-10,2 min), čímž se získá A^ř-{4-[4-amino-l-(2-morťolino-2-oxoethyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2fluorfenyl}-N’-(3methylfenyl)moěovina ve formě žluté pevné látky (0,009 g, 0,018 mmol):

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,07 (s, ÍH), 8,72 (s, ÍH), 8,37 (t, ÍH), 8,23 (s, ÍH), 7,45 (m, 2H), 7,33 (t, ÍH), 7,27 (m, ÍH), 7,19 (t, ÍH), 6,83 (d, ÍH), 5,34 (s, 2H), 3,5 (m, 8H),

2,30 (s, 3H); MS (M-H)' 503.

Příklad 354

N-(4- {4-amino-1 -[2-(4-methylpiperazino)-2-oxoethyl] -1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 yl} -2-fluorfenyl)-N''-(3 -methylfenyl)močovina

Použije se způsob podobný shora uvedenému s výjimkou toho, že se jako rozpouštědlo použije 1-methylpiperazin (1 ml) místo morfolinu, poté purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 7,1-7,8 min) se získá

N-(4- {4-amino-1 - [2-(4-methylpiperazino)-2-oxoethyl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-A^r-(3-methylfenyl)močovina ve formě bělavé pevné látky (0,008 g, 0,015 mmol):

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,07 (s, ÍH), 8,72 (s, ÍH), 8,37 (t, ÍH), 8,22 (s, ÍH), 7,45 (m, 2H), 7,32 (s, ÍH), 7,25 (m, ÍH), 7,19 (t, ÍH), 6,90 (br, 2H), 6,83 (d, ÍH), 5,33 (s, 2H),

3,39 (m, 4H), 2,40 (m, 4H), 2,30 s, 3H); MS (M-H)' 516.

Příklad 355

Ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yljpropanoát

360

Postupně se použije alkylace (s ethyl-2-brompropionátem jako alkylbromidem), Suzukiho kopulace, odstranění chránících skupin a sulfonylace. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 10,1-11,0 min) se získá ethyl-2- [4-amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonylamino} -3 -fluorfenyl)-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl]propanoát (0,016 g, 0,029 mmol) ve formě šedé pevné látky:

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,84 (br, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H),

7,54 (t, 1H); 7,41 (m, 3H), 7,0 (br, 1H), 5,61 (qt, 1H), 4,10 (qt, 2H), 1,73 (d, 3H), 1,11 (t, 3H); MS (M-H)’ 551.

Příklad 356

Methyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]propanoát (4032811)

Ke konvertování ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]propanoátu (0,400 g, 0,723 mmol) na odpovídající methylester se použije reprezentativní způsob transesterifikace. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 12,412,9 min) se získá methyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]propanoát (0,008 g, 0,015 mmol) ve formě šedé pevné látky:

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,84 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H),

7,54 (t, 1H), 7,40 (m, 3H), 4,10 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 1,73 (d, 3H); MS (MH)⁺ 539.

Příklad 357

2- [4-Amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl] amino} -3 -fluorfenyl)-1 H-pyrazolo [3,4í/jpyrimidin-1 -yljpropanamid

Ke konvertování methyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl]propanoátu (0,040 g, 0,074 mmol) na odpovídající primární amid se použije reprezentativní způsob přípravy primárního amidu.

361

Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t8,1-9,6 min) se získá 2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]propanamid (0,015 g, 0,029 mmol) ve formě bílého prášku: *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,82 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,56 (t, 1H), 7,42 (m, 3H), 7,31 (br, 1H), 7,21 (br, 1H), 5,34 (qt, 1H), 1,71 (d, 3H); MS (MH)⁺ 524.

Příklad 358

Ethyl-2-(4-amino-3 - {3 -fluor-4-[(3 -toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-1 -yl)propanoát

Postupně se použije alkylace (s ethyl-2-brompropionátem jako alkylbromidem), Suzukiho kopulace, odstranění chráničích skupin a tvorba močoviny. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 13,314,3 min) se získá ethyl-2-(4-amino-3-{3-fluor-4-[(3-toluidinokarbonyl)amino]fenyl}-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)propanoát ve formě bílé pevné látky (0,022 g, 0,046 mmol): ’HNMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,06 (s, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,37 (t, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,46 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 6,83 (d, 1H), 5,63 (qt, 1H), 4,12 (qt, 2H),

2,30 (s, 3H), 1,76 (d, 3H), 1,15 (t, 3H); MS (M-H)’ 476.

Příklad 359

2-(4-Amino-3 - {3 -fluor-4- [(3 -toluidinokarbonyl)amino] fenyl} -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-1 -yl)propanamid

Postupně se použije alkylace (s ethyl-2-brompropionátem jako alkylbromidem), Suzukiho kopulace, odstranění chráničích skupin, alternativní způsob transesterifikace, příprava primárního amidu a močoviny. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 9,1-10,1 min) se získá 2-(4-amino-3-{3fluor-4-[(3-toluidinokarbonyl)amino]fenylpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)propanamid ve formě šedé pevné látky (0,010 g, 0,022 mmol):

362 *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,08 (s, IH), 8,38 (s, IH), 8,37 (t, IH), 8,23 (s, IH), 7,46 (m, 2H), 7,33 (m, 2H), 7,24 (m, 2H), 7,12 (d, IH), 6,97 (br, 2H), 6,82 (d, IH), 5,35 (qt, IH), 2,30 (s, 3H), 1,75 (d, 3H); MS (MH)⁺ 449.

Příklad 360

Ethyl-4-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lApyrazolo[3,4-J]pyrimidin-1 -yl]butanoát

Postupně se použije alkylace (s ethyl-4-brombutyrátem jako alkylbromidem), Suzukiho kopulace, odstranění chránících skupin a sulfonylace. Purifikaci preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 12,8-13,8 min) se získá ethyl-4-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yljbutanoát (0,010 g, 0,018 mmol) ve formě bělavé pevné látky:

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,83 (s, IH), 8,23 (s, IH), 7,97 (s, IH), 7,95 (s, IH),

7,54 (t, IH), 7,40 (m, 3H), 6,95 (m, 2H), 4,35 (t, 2H), 3,97 (qt, 2H), 2,30 (t, 2H), 2,08 (m, 2H), 1,12 (t, 3H); MS (M-H)’ 565.

Příklad 361

Methyl-4-[4-amino-3-(4- {[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3-fluorfenyl)-1Hpyrazolo [3,4-ď|py rimidin-1 -yljbutanoát

Postupně se použije alkylace (s ethyl-4-brombutyrátem jako alkylbromidem), Suzukiho kopulace, odstranění chránících skupin, alternativní způsob transesterifikace a reprezentativní způsob sulfonylace. Purifikaci preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 11,7-12,2 min) se získá methyl-4-[4-amino-3(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-lyljbutanoát ve formě žluté pevné látky (0,015 g, 0,027 mmol):

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 10,84 (br, IH), 8,23 (s, IH), 7,95 (m, 2H), 7,52 (m, IH), 7,40 (m, 3H), 4,35 (t, 2H), 3,52 (s, 3H), 2,32 (t, 2H), 2,09 (m, 2H); MS (MH)⁺ 553.

• · · · · · ·

363

Příklad 362

4- [4-Amino-3 -(4- {[(2,3 -dichlorfenyl)sulfonyl]amino} -3 -fluorfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4č/]pyrimidin-1 -yl]butanamid

Ke konvertování methyl-4-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-l //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-l-yl]butanoátu (0,026 g, 0,047 mmol) na odpovídající primární amid se použije reprezentativní způsob přípravy primárního amidu. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t8,0-9,0 min) se získá 4-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]butanamid ve formě bílé pevné látky (0,007 g, 0,013 mmol):

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,82 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,95 (s, 1H),

7,54 (t, 1H), 7,45 (m, 3H), 7,24 (br, 1H), 6,93 (br, 2H), 6,73 (br, 1H), 4,31 (t, 2H), 2,05 (m, 4H); MS (M-H)’ 536.

Příklad 363

Ethyl-4-(4-amino-3 - {3 -fluor-4- [(3 -toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo[3,4í/jpyrimidin-l-yl)butanoát (4032812)

Postupně se použije alkylace (s ethyl-4-brombutyrátem jako alkylbromidem), Suzukiho kopulace, odstranění chránících skupin a tvorba močoviny. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 12,613,6 min) se získá ethyl-4-(4-amino-3-{3-fluor-4-[(3-toluidinokarbo-nyl)amino]fenyl}-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)butanoát ve formě bělavého prášku (0,015 g, 0,030 mmol): ^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,06 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,36 (t, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,22 (m, 1H), 7,19 (t, 1H), 6,82 (d, 1H), 4,37 (t, 3H), 3,99 (qt, 3H), 2,34 (t, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,11 (m, 2H), 1,13 (t, 3H);

RP-HPLC (25 až 100 % CH?CN v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 8μ Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 10,00 minut.

• · • · · ·· · · · · • · · · ·· · ····

364

Příklad 364

4-(4-Amino-3 - {3 -fluor-4- [(3 -toluidinokarbonyl)amino]fenyl} -1 A-pyrazolo [3,4óQpyrimidin-1 -yl)butanamid

Postupně se použije alkylace (s ethyl-4-brombutyrátem jako alkylbromidem), Suzukiho kopulace, odstranění chráničích skupin, alternativní způsob transesterifikace, způsob přípravy primárního amidu a tvorba močoviny. Purifikaci preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 8,4-9,1 min) se získá 4-(4amino-3-{3-fluor-4-[(3-toluidinokarbonyl)amino]fenyl}-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl)butanamid ve formě bílé pevné látky (0,010 g, 0,022 mmol): *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,08 (s, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,38 (t, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,19 (m, 1H), 6,83 (d, 1H), 6,75 (s, 1H), 4,34 (t, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,05 (m, 4H); MS (MH)⁺ 463.

Příklad 365

2-{4-Amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-lA-pyrazolo[3,4-Z]pyrimidin-l-yl}-5(4-methylpiperazino)benzonitril

Suspenze 3-jod-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,172 g, 0,66 mmol), hydridu sodného (60%, 0,030 g, 0,75 mmol), 2,5-difluorbenzonitrilu (0,105 g, 0,75 mmol) a N, A-dimethylformamidu (2,5 ml) se zahřívá po dobu 24 hodin při teplotě 100°C. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (50 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva se oddělí, suší nad síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje za sníženého tlaku.

Určitý podíl látky (0,045 g, 0,118 mmol) a uhličitanu česného (0,115 g, 0,353 mmol) se suspenduje v 1-methylpiperazinu (1 ml) a směs se zahřívá při teplotě 110°C v utěsněné nádobě po dobu 20 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se okyselí vodnou kyselinou chlorovodíkovou (1 M, 10 ml) a vodná fáze se extrahuje etherem (10 ml). Organická fáze se vylije a vodná fáze se alkalizuje vodným roztokem uhličitanu sodného (3 M, 10 ml), vodná fáze se extrahuje dichlormethanem (3x15 ml) a spojená organická frakce se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje za sníženého tlaku. Tato látka se podrobí Suzukiho kopulaci podle reprezentativního způsobu s výjimkou toho, že A-(l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5365 tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin se použije místo Zerc-butyl-A-[2-fluor-4(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu. Purifikací prepa-rativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 7,0-8,6 min) se získá 2- {4-amino-3 - [4-( 1,3 -benzoxazol-2-ylamino)fenyl] -177-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-1 -yl} -5 (4-methylpiperazino)benzonitrilu ve formě šedé pevné látky (0,009 g, 0,017 mmol):

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,93 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,98 (d, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,73 (d, 1H), 7,52 (m, 3H), 7,44 (m, 1H), 7,26 (t, 1H), 7,17 (t, 1H), 3,24 (m, 4H), 2,45 (m, 4H), 2,28 (s, 3H); MS (MH)⁺ 543.

Příklad 366

Ethyl-2- {4-amino-3 - [4-( 1,3-benzothiazol-2-ylamino)-3 -fluorfenyl] -177-pyrazolo [3,4č/]pyrimidin-1 -yl} propanoátu

Použije se reprezentativní způsob alkylace (s ethyl-2-brompropionátem jako alkylbromidem) a reprezentativní způsob Suzukiho kopulace (s výjimkou toho, že se použije A-(l,3-benzothiazol-2-yl)-A-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amin místo /erc-butyl-/V-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaboroIan-2yl)fenyl]karbamátu). Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 14,4-14,9 min) se získá ethyl-2-{4-amino-3-[4-(l,3-benzothiazol-2ylamino)-3-fluorfenyl]-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-l-yl}propanoát ve formě bělavé pevné látky (0,022 g, 0,046 mmol):

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,52 (s, 1H), 8,82 (t, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,85 (d, 1H), 7,66 (d, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,36 (t, 1H), 7,22 (t, 1H), 5,65 (qt, 1H), 4,14 (qt, 2H), 1,77 (d, 3H), 1,14 (t, 3H); MS (MH)⁺ 478.

Příklad 367

Cz5-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidin3 -yl} -2-fluorfenyl)-1,3 -benzoxazol-2-amin A2-(4-brom-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amin •· · ·· ···· ·* · ··· · · · · ♦ · ···· · · · ···· • ······· * ··· ···· ··· · · · · ··» • · · · · ·· ·· ·

366

Do roztoku 4-brom-2-fluoranilinu (1,00 g, 5,26 mmol) v toluenu (25 ml) se přidá 2-chlorbenzoxazol (0,66 ml, 5,79 mmol), růžový roztok se zahřívá k refluxu po dobu 30 minut a pak při teplotě 100°C po dobu 17 hodin. Výsledná bílá suspenze/růžový roztok se ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se filtruje, filtrační koláč se promyje 5 x 2-ml podíly heptany, čímž se získá V2-(4-brom-2-fluorfenyl)-1,3 -benzoxazol-2-amin (1,480 g, 92%) ve formě světle růžového prášku.

RP-HPLC (25 až 100% CU₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 12,87 minut, 97%; m/z 307 (MH⁺).

N2-(4-brom-2-fluorfenyl)-l,3-benzothiazol-2-amin

Do roztoku 4-brom-2-fluoranilinu (1,00 g, 5,26 mmol) v toluenu (25 ml) se přidá 2-chlorbenzothiazol (0,75 ml, 5,79 mmol), růžový roztok se zahřívá při teplotě 110-150°C v utěsnitelné nádobě po dobu 66 hodin, pak ochladí na pokojovou teplotu. Výsledný hnědý roztok se koncentruje za vzniku růžového pevného podílu, který se trituruje heptanem, čímž se získá V2-(4-brom-2-fluorfenyl)-l,3-benzothiazol-2-amin (1,699 g, 99%) ve formě světle růžového prášku.

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 13,82 minut, 95%; m/z 325 (MH⁺).

V2-(4-bromfenyl)-1,3-benzothiazol-2-amin

V2-(4-bromfenyl)-l,3-benzothiazol-2-amin se připraví z 4-bromanilinu (1,00 g,

5,81 mmol) podle způsobu používaného pro V2-(4-brom-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2amin. Sloučenina se získá ve formě světle růžového prášku (0,867 g, 49%).

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 13,32 minut, 100%; m/z 307 (MH⁺).

V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amin

Do roztoku V2-(4-brom-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-aminu (1,480 g, 4,819 mmol) v dimethylformamidu (15 ml) pod atmosférou dusíku se přidá bis(pinakolato)diboron (1,468 g, 5,781 mmol), octan draselný (1,419 g, 14,45 mmol) a • * · · · • · · · · · ·«» • · · · · · · · · · · • ·»»···· · ··· · · « · • · · · · ·» ·· ·

367 [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatý komplex s dichlormethanem (1:1) (0,119 g, 0,146 mmol). Fialový roztok se míchá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin, pak ochladí na pokojovou teplotu. Výsledná tmavě hnědá směs se koncentruje za vakua, čímž se získá tmavě hnědý pevný podíl. Tato látka se trituruje dichlormethanem, filtruje a filtrát koncentruje, čímž se získá tmavě hnědý olej. Purifikaci zrychlenou chromatograifí na sloupci silikagelu (mobilní fází 30% ethylacetát/heptan) se získá 2,28 g žlutého pevného podílu. Tato látka se trituruje heptanem a pevný podíl spojí, čímž se získá 2V2-[2-fluor-4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amin (0,961 g, 56%) ve formě bílého prášku.

RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 13,80 minut, 88%; m/z 355 (MH⁺).

V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzothiazol-2-amin

V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3benzothiazol-2-amin se připraví z V2-(4-brom-2-fluorfenyl)-l,3-benzothiazol-2-aminu (1,699 g, 5,258 mmol) podle způsobu použitého pro V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavého prášku (0,825 g, 42%).

RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 14,48 minut, 90%; m/z 371 (MH⁺).

V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzothiazol-2-amin

V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-1,3-benzothiazol-2-amin se připraví z V2-(4-bromfenyl)-l,3-benzothiazol-2-aminu (0,909 g, 2,98 mmol) podle způsobu použitého pro V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]1,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavého prášku (0,321 g, 31%). RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 13,82 minut, 92%; m/z 351 (MH⁺).

• · • · * • · · · • · · · · • ···«· · ·

368

Příklad 367

Cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl}-2-fluorfenyl)-1,3-benzoxazol-2 amin

Do roztoku cis-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-aminu (0,150 g, 0,340 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (3 ml) a vody (1,5 ml) pod atmosférou dusíku se přidá V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amin (0,151 g, 0,425 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,020 mg, 0,017 mmol) a monohydrát uhličitanu sodného (0, 105 mg, 0,850 mmol). Roztok se míchá při teplotě 83°C po dobu 19 hodin. Výsledná žlutá směs se koncentruje za vakua, čímž se získá žlutý olej. Purifikaci preparativní RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8pm Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, tr = 5,7-8,1 minut,) se získá czs-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (0,046 g, 25 %):

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,65 (s, 1 H), 8,49 (m, 1 H), 8,25 (s, 1 H), 7,53 (d, 2 H), 7,48 (d, 2 H), 7,26 (t, 1 H), 7,20 (t, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 3,51-2,50 (m, 11H), 2,33-2,32 (m, 4H), 2,09-2,06 (m, 2 H), 1,80-1,40 (m, 3 H);

RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) tR = 6,95 minut, 99%; nzlz 542 (MH⁺).

Příklad 368

Cz\-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3 -yl} -2-fluorfenyl)-1,3-benzothiazol-2-amin

Cz\-V2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzothiazol-2-amin se připraví z cz's-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,227 mmol) a V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3benzothiazol-2-aminu (0,105 g, 0,283 mmol) podle způsobu použitého pro cis-N2-(4-{4amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl} -2» · ·

9 9 • ♦ · · • · · · · · • · · »* 9 • · < » • · t · · • · · · · 9 · • · 9 · • 9 9 1

369 fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavého prášku (0,051 g,41%):

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,51 (s, 1 H), 8,80 (m, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,85 (d, 1 H), 7,65 (d, 1 H), 7,51 (m, 2 H), 7,36 (t, 1 H), 7,20 (t, 1 H), 4,82 (m, 1 H), 3,51-2,25 (m, 14 H), 2,152,10 (m, 2 H), 1,80-1,50 (m, 4 H);

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 7,63 minut, 100%; m/z 558 (MH⁺).

Příklad 369

Czs-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin3 -yl} fenyl)-1,3-benzothiazol-2-amin

Cz'5-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl} fenyl)-l,3-benzothiazol-2-amin se připraví z cz's-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,227 mmol) a 7V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-1,3-benzothiazol-2aminu (0,100 g, 0,283 mmol) podle způsobu použitého pro cz's-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]- l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl} -2-fluorfenyl)-1,3benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavého prášku (0,035 g, 28%):

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,71 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 7,98 (d, 2 H), 7,84 (d, 1 H), 7,65 (d, 3 H), 7,35 (t, 1H), 7,19 (t, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 3,50 (m, 1H), 2,67- 2,09 (m, 15 H), 1,71-1,57 (m, 4H);

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) t_R = 7,47 minut, 100%; m/z 540 (MH⁺).

Příklad 370

7ταζ7Λ·-/ν2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl} fenyl)-1,3 -benzoxazol-2-amin

7ra/zó'-jV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl} fenyl)-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z tra«5-3-jod-l-[4-(4»· · • « *9 9999 *9 · • » « · · 9 9 9 · • · ···< 9 * · 9 9 9 * ·»· • 9 · «9·· 9 9 _w •9 9 9 9 · 9 99 9

370 methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (0,036 g, 0,082 mmol) a V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l ,3-benzoxazol-2aminu (0,034 g, 0,10 mmol) podle způsobu použitého pro cz's-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavého prášku (0,021 g, 50%):

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,86 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 7,93 (d, 2 H), 7,66 (d, 2 H),

7,51 (t, 1 H), 7,25 (t, 1 H), 7,16 (t, 1 H), 4,65 (m, 1 H), 3,51 (m, 1 H), 2,67-1,91 (m, 17 H), 1,49-1,46 (m, 2 H);

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 7,17 minut, 100%; m/z 524 (MH⁺).

Příklad 371

Trans-N2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4z/]pyrimidin-3 -yl} -2-fluorfenyl)-1,3 -benzoxazol-2-amin

7razzs-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z Zró/«.s'-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,227 mmol) a V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3benzoxazol-2-aminu (0,151 g, 0,425 mmol) podle způsobu použitého pro czs-izomer. Sloučenina se připraví ve formě bílého prášku (0,053 g, 43%).

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,63 (s, 1 H), 8,45 (m, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,55-7,48 (m, 4 H), 7,25 (t, 1 H), 7,17 (t, 1 H), 4,65 (m, 1 H), 3,36 (m, 1 H), 3,31-1,93 (m, 16 H), 1,46-1,23 (m, 3 H);

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 6,73 minut, 99%; m/z 542 (MH⁺).

Příklad 372

Trans-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} -2-fluorfenyl)-1,3 -benzothiazol-2-amin • · • ·· · · · ··· ···· ·· · · · · · • ······· · · · · ···· •« · ·· · * · » *

371

Tra«s-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzothiazol-2-amin se připraví z /razz.s-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,227 mmol) a A2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3benzothiazol-2-aminu (0,105 g, 0,283 mmol) podle způsobu použitého pro czx-izomer. Sloučenina se připraví ve formě bílého prášku (0,052 g, 41%):

‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,51 (s, 1 H), 8,79 (m, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,85 (d, 1 H), 7,66 (d, 1 H), 7,51 (m, 2 H), 7,36 (t, 1 H), 7,20 (t, 1 H), 4,66 (m, 1 H), 3,69 (m, 1 H), 2,89-1,94 (m, 17 H), 1,50-1,47 (m, 2 H);

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 6,30 minut, 99%; m/z 558 (MH⁺).

Příklad 373

Cis-V2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3- yl}fenyl)-4-methyl-l,3-benzoxazol-2 amin l,l’-Thiokarbonyldi-2(l//)-pyridon (0,086 g, 0,369 mmol) se přidá do roztoku cis-3 -(4-aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin4- aminu (0,150 g, 0,369 mmol) v pyridinu (7 ml) při teplotě 0°C a směs se míchá po dobu 1 hodiny při teplotě 0°C. Výsledný oranžový roztok se vytřepe mezi dichlormethan (10 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva se separuje a promyje s 0,5 N HC1 (10 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje. 2-Amino-zw-kresol (0,045 g, 0,369 mmol) se přidá do suspenze výsledné oranžové pevné látky a toluenu (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 1 hodiny. 1,3-Dicyklohexylkarbodiimid (0,114 g, 0,554 mmol) a reakční směs se zahřívají při teplotě 80°C dalších 18 hodin. Výsledný oranžovohnědý roztok se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje, čímž se získá světle hnědá skelná pevná látka. Purifikací preparativní HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, tr = 8,1-10,3 minut,) se získá cis-N2-(4- {4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-4-methyl-1,3benzoxazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (0,024 g, 12 %):

372 'Η NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,81 (s, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,96 (d, 2 H), 7,66 (d, 2 H), 7,33 (d, 1 H), 7,06 (m, 2H), 4,80 (m, 1 H), 3,391 (m, 1 H), 2,67-2,10 (m, 18 H), 1,71-1,60 (m,4H);

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 7,57 minut, 99%; m/z 538 (MH⁺).

Příklad 374

C«-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl} fenyl)-5 -chlor-1,3 -benzoxazol-2-amin

Cz's-JV2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4t/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-chlor-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z cz's-3-(4-aminofenyl)1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,100 g,

0,246 mmol) a 2-amino-4-chlorfenolu (0,035 g, 0,246 mmol) podle způsobu použitého pro cis-N2-{4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-ť/]pyrimidin3-yl}fenyl)-4-methyl-1,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě světle žluté pevné látky (0,020 g, 15%):

^!H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,03 (s, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,92 (d, 2 H), 7,67 (d, 2 H), 7,56 (m, 2 H), 7,20 (m, 1 H), 7,16 (t, 1 H), 4,81 (m, 1 H), 3,41-1,60 (m, 20 H);

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 7,83 minut, 99%; m/z 558 (MH⁺).

Příklad 375

Cz.s'-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl}fenyl)-5-methyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Cis-N2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 Z/-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-methyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví zcis-3-(4aminofenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,057 g, 0,140 mmol) a 2-amino-p-kresolu (0,017 g, 0,140 mmol) podle způsobu použitého pro cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4o ··· ····

373 í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-methyl-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,010 g, 13%) ?H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,81 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 7,93 (d, 2 H), 7,66 (d, 2 H), 7,38 (d, 1 H), 7,30 (s, 1 H), 6,96 (d, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 2,60-2,07 (m, 12 H), 2,39 (s, 3 H), 2,15 (s, 3 H), 1,71-1,59 (m, 5 H);

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 7,48 minut, 90%; m/z 538 (MH⁺)·

Příklad 376

Cz\-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4J]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z cz'.s-3-(4aminofeny 1)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,246 mmol) a 6-amino-2,4-xylenolu (0,034 g, 0,246 mmol) podle způsobu použitého pro cis-N2-(4-{4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-methyl-l,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,031 g, 23%);

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 7,93 (d, 2 H), 7,65 (d, 2 11), 7,11 (s, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 2,60-2,17 (m, 12 H), 2,41 (s, 3 H), 2,37 (s, 3 H), 2,22 (s, 3 H), 1,71-1,59 (m, 5 H);

RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 8,00 minut, 93%; m/z 552 (MH⁺).

Příklad 377 /V2-[4-(4-amino-1 - {4- [ 1 -(1 -methy lipiperid-4-y l)piperidy 1]} -1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin3-yl)-2-fluorfenyl]-5-chlor-2-thiofensulfonamid

Tato sloučenina se připraví z AT-4-(4-amino-l-{4-[l-(l-methylpierid-4yl)piperidyl]}-l A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenylanilinu (100 mg, 0,236 mmol) podle způsobu popsaného výše, čímž se získá A2-[4-(4-amino-l{4-[l-(l• · ··· · · · · · « * · · · · · · · · · · • ······» · · · · · ··· •· · «· ·« ·« «

374 methylpiperid-4-yl)piperidyl]}-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl)-2-fluorfenyl]-5-chlor-2thiofensulfonamid (51 mg); Podmínky pro RP-HPLC: 10 až 90 % CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném, pufrovaném na pH 4,5, v průběhu 20 minut při teplotě 2 ml/min za použití sloupce Waters Symmetry 08, 300 Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm, R_t 11,219 minut, 98,5 % a m/z (MH⁺) 605,2.

Příklady 378-383

Obecný způsob přípravy močovinových a sulfonamidových analog cis-3-{4-[amino(fenyl)methyl]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- IHpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

Tato anaologa se připraví z cA-3-{4-[amino(fenyl)methyl]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu (50 mg, 0,10 mmol) podle způsobu popsaného výše, čímž se získají sloučeniny podle následující příkladů.

	13,815	100	616,3	378
1	13,122	100	659,5	379
	11,64	100	568,3	380

• · · · · tt * · ·

375

« ý r	χά. I	14,99	97,8	685,5	381
		14,43	100	676,6	382
(i-	ΓΊ rro
r
		13,68	100	695	383
v

Analytické podmínky pro RP-HPLC: 10 až 90 % CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném, pufrovaném na pH 4,5, v průběhu 20 minut při teplotě 2 ml/min za použití sloupce Waters Symmetry 08, 5 pm, 300Á, 250 x 4,6 mm.

Příklad 384

Trans-N-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4c/]pyrimidin-3 -yl} benzyl)-A '-(3 -methylfenyl)

Směs obsahující Zra/7.s-3-jod-l -[4-(4-methyliperazino)cyklohexyl]-l /7pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (850 mg, 1,93 mmol), terc-butyl-A-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzyl]karbamát (1,25 ekviv., 812 mg, 2,41 mmol), tetrakis-(trifenylfosfm)palladium (135 mg) a uhličitan sodný (2,5 ekviv., 511 mg, 4,83 mmol) v odplyněné vodě (10 ml) a DME (30 ml) se zahřívá a míchá při teplotě 85°C po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá hnědá pěna, která se čistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% methanolu a 1% hydroxidu amonného v dichlormethanu jako eluentu. Trans-terc-butyl-N-(4-{4-amino-1• · • · · · • ·

376 [4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj -1//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl} benzyl)karbamát se připraví ve formě bělavé pěny (800 mg, 80%). Roztok terc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}benzyl)karbamátu (800 mg) v TFA (4 ml) a dichlormethan (4 ml) se míchají při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a olej ovitý zbytek se alkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (3 x 20 ml), koncentruje a přidá se DMF (20 ml). Soli se odstraní filtrací a DMF se odstraní za vakua. Zbytek se čistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% methanolu v dichlormethanu jako eluentu, čímž se získá 3-[4(aminomethyl)fenyl] -1 - [4-(4-methy lpiperazinojcyklohexylj -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin4-amin ve formě žluté pevné látky (70 mg, 11 %). zw-Tolylisokyanát (1,1 ekviv., 13,7 mg, 0,1 mmol) se přidá do roztoku 3-[4-(aminomethyl)fenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</pyrimidin-4-aminu (35 mg, 0,083 mmol) v pyridinu (0,5 ml) a pak míchá po dobu 2 dnů. Reakční směs se čistí za použití preparativní RP-HPLC s hmotnostním detektorem (Micromass/Gilson, Hypersil BDS Cl8, 5 pm, 100 x 21,2 mm sloupec; 0 100% acetonitril a 0,05M octanem amonným, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 12,5 minut při teplotě 25 ml/min), čímž se získá trans-N-(4-{4amino-1 -[4-(4-methy lpiperazinojcyklohexylj -1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl} benzyl)A-(3-methylfenyljmočovina (17 mg, 37 %);

^]H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 1,46 (2H, m), 2,05 (4H, m), 2,18 (2H, m), 2,25 (3H, s), 2,33 (4H, m), 2,45-2,53 (8H, m), 4,38 (2H, br d), 4,65 (1H, m), 6,52 (1H, t), 6,66 (1H, d), 7,10 (1H, t), 7,19 (1H, brd), 7,26 (1 H, br s), 7,46 (2 H, d), 7,63 (2H, d), 8,23 (1H, s) a 8,51 (1H, s) a w/z (MH‘) 554,2.

Příklad 385

7raus-A-(4-{04-amino-1-[4-(4-methylpierazino)cyclhexy lj-1//-pyrazolo [3,4-í/jpyrimidin3 -yl} benzyl)- N-(3 -methoxy feny ljmočovina

K připravení /ra/7.s-A-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/jpyrimidin-3-yl}benzyl)-A’-(3-methoxyfenyl)močovmy se využije stejný způsob jako v příkladu 240 (17 mg, 36 %);

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 1,46 (2H, m), 2,05 (4H, m), 2,18 (2H, m), 2,35 (4H, m), 2,45-2,53 (8H, m), 3,70 (3H, s), 4,38 (2H, br d), 4,65 (1H, m), 6,49 (1H, m), 6,67 (1H, m), • ······ · · · • · ·· « ··· ··« · » · «··· ······· · · · · · · · · • «* · · · · ·

377

6,90 (ÍH, brd), 7,12 (ÍH, t), 7,17 (ÍH, m), 7,46 (2 H, d), 7,63 (2H, cl), 8,23 (ÍH, s) a 8,62 (ÍH, s) a m/z (MH⁺) 570,2.

Příklad 386

Cis-N\ -(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-2,2-dimethyl-3-fenylpropanamid

2.2- Dimethyl-3-fenylpropannitril

Roztok Λ-isopropylcyklohexy laminu (2,8 g, 19,72 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (25 ml) při teplotě -78°C se po kapkách v průběhu 15 minut nechá reagovat s 1,6 M rc-butyllithiem v hexanu (12,23 ml, 19,72 mmol). Reakční roztok se míchá po dobu 10 minut při teplotě -78°C. Roztok změní barvu ze žluté na bezbarvou. Do reakčního roztoku se přidá izobutyronitril (1,36 g, 19,72 mmol) a reakční směs se míchá dalších 10 minut při teplotě -78°C. Tento roztok se pomocí stříkačky převede do roztoku benzylchloridu (2,62 g, 20,71 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu při teplotě -78°C pod atmosférou dusíku, naěervenalý/hnědý reakční roztok se roztok míchá po dobu 1 hodiny při teplotě -78°C, pak se odstraní lázeň ze suchého ledu a roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Reakce se zastaví vodným roztokem nasyceného chloridu amonného (10 ml). K zastavení reakce se přidá ethylacetát (25 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (150 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá 3,18 g surové látky. Surová látka se vytřepe mezi 2 N roztok kyseliny chlorovodíkové a ethylacetát. Organická vrstva se promyje vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahušťuje, čímž se získá 2,18 g (69%) 2,2-dimethyl-3fenylpropannitrilu. ^]H NMR (DMSO-d₆,400 MHz) δ 7,369-7,333 (m, 2H), 7,309-7,270 (m, 3H), 2,832 (s, 2H), 1,294 (s, 6H). Tato sloučenina se bez další analýzy použije v následující reakci.

2.2- Dimethyl-3 -fenylpropanová kyselina

Roztok 2,2-dimethyl-3-fenylpropannitrilu (1,0 g, 6,28 mmol) v ethylenglykolu (5 ml) se nechá reagovat s pevným hydroxidem draselným (1,06 g, 18,84 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 48 hodin při teplotě 196°C pod atmosférou dusíku. Ethylenglykol se odstraní vakuovou destilací a k hnědému zbytku se přidá 1 N roztok hydroxidu sodného • « ·

378 (25 ml) a ethylacetát (15 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (375 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá 0,856 g (76%)

2.2- dimethyl-3-fenylpropanové kyseliny.

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 12,20 (s, 1H), 7,28-7,24 (m, 2H), 7,22-7,20 (m, 1H), 7,15-7,13 (m, 2H), 2,78 (s, 2H), 1,07 (s, 6H).

Tato sloučenina se bez další analýzy použije v následující reakci.

2.2- Dimethyl-3-fenylpropanoylchlorid

Roztok 2,2-dimethyl-3-fenylpropanové kyseliny (0,856 g, 4,8 mmol) v chloroformu (6 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s oxalylchloridem (3,05 g, 24 mmol) a 1 kapkou dimethylformamidu. Reakční roztok se míchá po dobu 1 hodiny při teplotě 0°C, ledová lázeň se odstraní a reakční směs míchá při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství

2.2- dimethyl-3-fenylpropanoylchloridu. Olej se použije přímo v následující reakci.

Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-2,2-dimethyl-3 -fenylpropanamid

Roztok cis-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1Apyrazolo[3,4-í/]pyrimidm-4-aminu (0,100 g, 0,23 mmol) v pyridinu (2,5 ml) se nechá reagovat s 2,2-dimethyl-3-fenylpropanoylchloridem (0,120 g, 0,61 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 2 hodin při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Přidá se nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a reakční směs se míchá po dobu 20 minut. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Ke zbytku se přidá dichlormethan a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se oddělí za použití extrakčního cartridge Empore. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, surová sloučenina se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% methanolu v dichlormethanu jako eluentu, čímž se získá 0,085 g (62%) cA-AT-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny 1)-2,2dimethyl-3 -fenylpropanamid.

*H NMR (CDC1₃, 400 MHz) δ 8,595-8,574 (m, 1H), 8,372 (s, 1H), 7,985 (s, 1H), 7,2927,158 (m, 7H), 4,923 (m, 1H), 3,891 (s, 3H), 3,050-3,013 (m, 1H), 2,965 (s, 2H), 2,65-2,55 (m, SH), 2,4402,346 (m, 4H), 2,244-2,166 (m, 4H), 1,854-1,823 (m, 3H), 1,688 (m, 3H), 1,334 (s, 6H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x

379 mm; 5%-95% acetonitril-0, 1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t5,517 min (100%).

Příklad 387

Tris-maleát trans-N\ -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-//]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2,2-dimethyl-3-fenylpropanamid

Roztok /-3-(4-amino-3-methoxyfeny 1)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyljlA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (0,250 g, 0,573 mmol) v pyridinu (3 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s 2,2-dimethyl-3-fenylpropanoylchloridem (0,304 g, 1,55 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 10 minut při teplotě 0°C. Ledová lázeň se odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědlo se odpařuje za sníženého tlaku do sucha. K pevnému podílu se přidá dichlormethan (15 ml) a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (5 ml). Vrstvy se oddělí na extrakčním cartridge Empore. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, surový pevný podíl se čistí zrychlenou chromatografií za použití směsi 10% methanolu v dichlormethanu, pak 15% (methanolu s 5 % hydroxidem amonným) v dichlormethanu jako eluentu. Surový pevný podíl z předešlé purifikace se rekrystalizuje za použití směsi ethylacetát a heptan, precipitát se filtruje, čímž se získá 0,201 g (59%) trans-Al-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazinojcyklohexylj-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny 1)-2,2dimethyl-3-fenylpropanamidu. Horký roztok Zraw.s’-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2,2dimethyl-3-fenylpropanamidu (0,201,0,337 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,117 g, 1,011 mmol) v ethylacetátu a precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá 0,265 g tri-maleátu trans-N\ -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2,2-dimethyl-3-fenylpropanamidu.

*H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,46 (s, 1H), 8,241 (s, 1H), 8,107-8,086 (d, 1H, J - 8,4 Hz), 7,248-7,183 (m, 7H), 6,170 (s, 6H), 4,697 (m, 1H), 3,883 (s, 3H), 2,931 (s, 3H), 2,92,75 (br, s, 4H), 2,671 (s, 3H), 2,104-1,990 (m, 7H), 1,588-1,5632 (m, 2H), 1,226 (s, 7H); HPLC Waters 2690 Albánce HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 5,413 min (95%).

• ·

380

Příklad 388

Tris-maleát tran5'-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-( 15',2S)-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamidu

Roztok rrans-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]17/-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-4-aminu (0,162 g, 0,371 mmol) v pyridinu (2 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s /ran.s-2-fenyl-l-cyklopropylkarbonylchloridem (0,134 g, 0,742 mmol) pod atmosférou dusíku. Reakční směs se míchá po dobu 20 minut při teplotě 0°C, ledová lázeň se odstraní a reakční směs míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Přidá se další rrans-2-fenyl-l-cyklopropylkarbonylchlorid (0,034 g, 0,186 mmol) a reakční směs míchá po dobu 1 hodiny. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku, pak se přidá dichlormethan (15 ml). Vrstvy se oddělí za použití extrakčního cartridge Empore. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku, surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 15% methanolu v dichlormethanu, pak 20% methanolu v dichlormethanu jako eluentu, čímž se získá 0,150 g (70%) trans-N\(4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl }-2methoxyfeny 1)-(15,2,S’)-2-fenylcyklopropan-l-karboxamidu. Horký roztok trans-Nl-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-3-y 1 }-2methoxyfenyl)-(lS',2iS)-2-fenylcyklopropan-l-karboxamidu (0,147, 0,253 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,088 g, 0,759 mmol) v ethylacetátu. Získaný precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá 0,204 g tris-maleátu /ran.s-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)(1 S^,,2S)-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamidu.

^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23-8,21 (m, 2H), 7,33-7,29 (m, 2H), 7,24-7,17 (m, 4H), 6,16 (s, 6H), 4,69-4,66 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 2,90-2,60 (m, 7H), 2,372,35 (m, 2H), 2,10-1,99 (m, 8H), 1,70-1,50 (m, 3H), 1,32 (m, 1H);

HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPj₈ 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 5,346 min (97%).

Příklad 389

C/s'-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)benzo[ů]thiofen-2-karboxamid • · A · ♦

381

Příklad 390

CA-V2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-2-thiofenkarboxamid

Příklad 391

CA-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin3 -yl} -2 -methoxy feny l)-2 -furamid

Amidy odvozené od cA-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-7 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu

Komerčně dostupné chloridy kyselin (0,23 mmol) v dichlormethanu (100 1) se přidají k cA-3-(4-amino-3 -methoxyfenyl)- l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-7Apyrazolo[3,4-</|pyrimidin-4-aminu (0,050 g, 0,115 mmol) v pyridinu (800 1). Reakční směs se míchá přes noc. Reakce se zastaví IN roztokem hydroxidu sodného. Rozpouštědlo se odstraní na 12-ti kanálové vakuové pumpě Supelco za vakua pod atmosférou dusíku, zbývající pevný podíl se podrobí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 100 x 21 mm sloupec, 5 pm, 15-100% gradient acetonitrilu v průběhu 8 minut, celková doba 10 minut, pufr 50 mM octanu amonného, 25 ml/min). K pevným podílům se přidá dichlormethan a 1 N roztok hydroxidu sodného. Vrstvy se oddělí za použití extrakčního cartridge Empore, ěímž se získají odpovídající produkty, HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) •» · ·· ···· · · · ··· ·« · ··« ···« ·· · · · · · • ······· · · · · ····

382

Název sloučeniny	R	Mn. (mg)	MH⁺	R_t (min)
C/5-A/2-(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxy feny l)benzo [ó]thiofen-2- karboxamid, Příklad 389	OH	45 (66%)	596,8	3,464
Czs-JV2-(4-{4-aniino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo [3,4-í/J py ri m i di n-3 -y 1} -2- methoxyfenyl)-2-thiofenkarboxamid, Příklad 390		47 (75%)	547,1	2,746
Cz5-tV2-(4- {4-amino-1 - [4-(4- methylpiperazino)cyklohexy 1] -1H- pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-ťuramid, Příklad 391		36 (59%)	531,3	2,626

Příklad 392

Tris-maleát trans-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3-methyl-3-fenylbutanamidu • · · · · · · • · · «· ·« ··

383

-Methyl-3 -feny lbutanoylchlorid

Roztok 3-methyl-3-fenylbutyrové kyseliny (0,508 g, 2,85 mmol) v dichlormethanu (10 ml) při teplotě -78°C se nechá reagovat s oxalylchloridem (3,62,28,5 mmol) a 1 kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se míchá při teplotě -78°C po dobu 10 minut, lázeň ze suchého ledu se odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua. Produkt se bez analýzy použije přímo v následující reakci.

Ztris-maleát trans-N\ -(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3-methyl-3-fenylbutanamidu

Roztok tra/M-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]7A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,458 mmol) v pyridinu (4 ml) při teplotě -5°C se nechá po kapkách reagovat s roztokem 3-methyl-3-fenylbutanoylchloridem (0,101 g, 0,514 mmol) v dichlormethanu (1 ml). Reakční směs se míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se lázeň ze suchého ledu odstraní a reakční směs míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Přidá se 1 N roztok hydroxidu sodného (5 ml) a směs se míchá přes noc. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, surový pevný podíl se suší za vysokého vakua. Přidá se dichlormethan (10 ml) a 1 N roztok hydroxidu sodného (10 ml). Vrstvy se oddělí na extrakčním cartridge Empore. Organické rozpouštědlo se odstraní za probublávání horní části roztoku dusíkem, čímž se získá 0,240 g (88%) trans-Nl-(4-{4amino-1- [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-<Z|pyri midin-3-y 1} -2methoxyfenyl)-3-methyl-3-fenylbutanamid. Horký roztok tra«.s-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-<Z]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3methyl-3-fenylbutanamidu (0,240 g, 0,402 mmol) v ethylacetátu a pár kapek ethanolu se nechají reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,140 g, 1,206 mmol) v ethylacetátu. Vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší na lyofilizátoru, čímž se získá 0,323 g tris-maleátu trans-N\ -(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-<Z]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny l)-3 methyl-3-fenylbutanamidu. *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,807 (s, ÍH), 8,226 (s, ÍH), 8,1098,088 (d, ÍH, J = 8,4 Hz), 7,489-7,470 (d, 2H, J = 7,6 Hz), 7,345-7,306 (m, 2H), 7,213-7,134 (m, 3H), 6,151 (s, 5H), 4,680 (m, ÍH), 3,836 (s, 3H), 3,3 (br, s, 7H), 2,655 (s, 3H), 2,541 (s, 4H), 2,085-1,989 (m, 6H), 1,574-1,551 (m, 2H), 1,431 (s, 6H);

HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RPjs 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t 5,407 min (99%).

• · • » ♦ ·

384

Příklady 393-397

Amidy odvozené od cz'5-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-7A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu

Reprezentativní způsob přípravy:

K příslušné karboxylové kyselině (0,46 mmol) v dichlormethanu (1,4 ml) se přidá oxalylchlorid (0,4 ml, 4,6 mmol) a DMF (1 kapka), vialky se uzavřou šeptem a k vyrovnávání tlaku se do každého septa zapíchne malá jehla, vialky se třepají přes noc na třepačce J-Kem. Oddělí se 50% roztok, přebytek oxalylchloridu a dichlormethan se pak odstraní na 12-ti kanálové vakuové pumpě Supelco za vakua pod atmosférou dusíku. Surový chlorid kyseliny (0,23 mmol) se přidá do cis-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (50 mg, 0,11 mmol) v suchém pyridinu (0,6 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Výsledné roztoky se rovnou purifikují preparativní HPLC (Hypersil BSD Cl8, 5 pm, 100 x 21 mm, 0%-100% acetonitril/0,05M octan amonný v průběhu 10 minut, 25,0 ml/min). Výsledné produkty se dále purifikují vytřepáním mezi dichlormethan (4 ml) a 1,0 N hydroxid sodný (2 ml) a přetáhnou přes vysoce účinný extrakční diskový cartridge Empore (C18-SD oktadecyl), čímž se získají odpovídající produkty. Sloučeniny jsou s odpovídajícími LCMS (Sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min) uvedeny níže.

Název sloučeniny

R

Mn. (mg)

MH⁺

Rt (min)

385

Al -(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxy feny l)-3 -feny lbutanamid, Příklad 393		25	583,4	2,76
Al-(4-{4-amino-l-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-methyl-3- fenylpropanamid, Příklad 394	Vq	20	583,4	2,76
A2-(4-{ 4-amino-1-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexy 1] -1H- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-1,2,3,4-tetrahydro-2- naftalenkarboxamid, Příklad 395		30	595,4	2,97
Al-(4-{4-amino-1-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexy 1]-1H- pyrazolo [3,4-í/]py rimidin-3-yl} -2- methoxyfenyl)-(3Á)-3-fenylbutanamid, Příklad 396	^ΛΛΟ	14	583,4	2,85
Al -(4- {4-amino-1 - [4-(4- methylpiperazino)cyklohexy 1] -1H- pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-(3S)-3-fenylbutanamid, Příklad 397		13	583,4	2,78

Příklad 398

CA-A4-(4-{4-Amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-3,5-dimethyl-4-isoxazolkarboxamid

a) CA-terc-butyl-A-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)karbamát • · * ·

386

Cis-3 -j od-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4amin (10 g, 22,66 mmol), /erc-butyl-A/-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (9,49 g, 27,17 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (1,57 g, l,36mmol) a uhličitan sodný (5,76 g, 54,38 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (180ml) a vodou (90 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí preparativní chromatografií za použití směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fáze, čímž se získá cz.s-/erc-butyl-V-(4{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)karbamát (10,859 g, 89%).

*H NMR (DMSO-d₆) δ 1,49 (s, 9H), 1,58 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,45 (m, 4H), 2,38 (m, 4H), 2,45 (m, 3H), 3,87 (s, 3H), 4,80 (m, ÍH), 7,22 (m, 2H), 7,91 (d, J = 8,14,ÍH), 8,04 (s, ÍH), 8,22 (s, ÍH).

b) Cz.s-3-(4-ainino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 200 ml) se přidá do roztoku 7V-(4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} 2-methoxyfenyl)karbamátu (10,85 g, 20,24 mmol) v dichlormethanu (100 ml) při teplotě 0°C. Po 2 hodinách se ledová lázeň odstraní a rozpouštědla se zahušťují a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. Přidá se hydroxid sodný (1,0 N) k upravení pH na 10. Pevný podíl vzniklý po odstranění organického rozpouštědla se spojí filtrací, čímž se získá cis-3(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-amin (8,84 g, 100%).

’H NMR (CDC1₃) 1,65 (m, 2H), 1,83 (m, 2H), 2,18 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,35-2,60 (m, 11H), 3,90 (s, 3H), 4,00 (bs, 2H), 4,89 (m, ÍH), 5,61 (bs, 2H), 6,83 (d, J = 7,78Hz, ÍH), 7,12 (m, 2H), 8,35 (s, ÍH).

c) Cz.s-V4-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-3,5-dimethyl-4-isoxazolkarboxamid

3,5-Dimethyl-4-isoxazolkarbonylchlorid (22 mg, 0,137 mmol) se přidá do roztoku cis-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4• · · ···«»· · · · ··· · · · · · · • · · · ·· · · * · · • ······· · ··· · · · · •· · ·· ·· ·· ·

387 č/]pyrimidin-4-aminii (30 mg, 0,067 mmol) v pyridinu (0,5 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo zahušťuje a zbytek rekrystalizuje z DMSO, čímž se získá m-/V4-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)-3,5-dimethyl-4-isoxazolkarboxamid (33 mg, 87%).

*H NMR (DMSO-d₆) δ 1,91 (m, 2H), 2,24 (m, 2H), 2,36 (m, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,63 (s, 3H), 2,77 (m, 3H), 3,17 (s, 3H), 3,37 (bm, 8H), 3,95 (s, 3H), 4,95 (m, 1H), 7,37 (m, 2H), 8,17 (d, J = 8,17,1H), 8,30 (s, 1H), 9,26 (s, 1H).

LC/MS (Sloupec Micromass: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm. eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min), MH⁺ =560,2, R_t = 2,44 min.

Příklad 399

Cz.s'-A3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/jpyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-5-methyl-3-isoxazolkarboxamid

5-Methyl-3-isoxazolkarbonylchlorid (20 mg, 0,137 mmol) se přidá do roztoku cis3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -177-pyrazolo [3,4č/Jpyrimidin-4-aminu (30 mg, 0,067 mmol) v pyridinu (0,5 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo zahušťuje a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil BSD Cl8, 5 pm, 100 x 21 mm, 0%-100% acetonitril/0, 05M octan amonný v průběhu 10 minut, 25,0 ml/min). Výsledný produkt se dále purifikuje vytřepáním mezi dichlormethan (4 ml) a 1,0 N hydroxid sodný (2 ml) a přetáhne přes vysoce účinný extrakční diskový cartridge Empore (C18-SD oktadecyl), čímž se získá cA-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl} -2-methoxy fenyl)-5 methyl-3-isoxazolkarboxamid (14 mg, 38%).

’H NMR (DMSO-dé) δ 1,81 (m, 2H), 2,14 (m, 2H), 2,35 (m, 2H), 2,53 (s, 3H), 2,76 (m, 3H), 3,37 (bm, 8H), 3,99 (s, 3H), 4,93 (m, 1H), 6,74 (s, 1H), 7,36 (m, 2H), 8,26 (m, 1H), 9,48 (s, 1H);

LCMS (Sloupec Finigan: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm. eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH⁺= 546,4, R_t= 1,82 min.

• · • · · · · • ····· · ·

388

Příklad 400

Dimaleát czs-Vl-[(27?)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 V-pyrazolo [3,4 -JJpyrimidi n-3 -y 1} -2 -methoxybenzamidu

Czs-Vl-[(22?)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamid (100 mg, 0,172 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (12 ml) a přidá se kyselina maleinová (60 mg, 0,515 mmol) v horkém ethylacetátu (3 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá dimaleát m-Vl-[(27?)-2-fenylpropyl]-4-{4amino-1- [4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-y 1} -2methoxybenzamidu (117 mg, 87%).

’H NMR (DMSO-dé) δ 1,25 (d, J = 6,96, 3H), 1,73 (m, 42H), 2,09 (m, 2H), 2,26 (m, 2H), 2,71 (s, 3H), 2,74 (m, 2H), 2,85-3,70 (bm, 7H), 3,89 (s, 3H), 4,85 (m, 1H), 6,14 (s, 4H), 7,20 (m, 3H), 7,31 (d, J = 4,33,4H), 8,12 (d, J = 8,17 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,20 (s, 1H). LC/MS (Sloupec Finigan: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH⁺= 583,4 R_t = 2,14 min.

Příklad 401

Trimaleát trans-N2-{4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 V-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)benzo[Z>]furan-2-karboxamidu

a) 7raz2s-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl) benzo [h]furan-2-karboxamid

K benzo[ó]furan-2-karboxylové kyselině (0,743g, 4,58 mmol) v dichlormethanu (14 ml) se přidá oxalylchlorid (4 ml, 45,8 mmol) a DMF (1 kapka). Reakční směs se míchá přes noc. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (5 ml), polovina z dichlormethanového roztoku (2,5 ml) se přidá do roztoku /razz.s-3-(4-amino-3methoxy feny 1)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4aminu (0,50 g, 1,145 mmol) v pyridinu (6 ml) při teplotě 0°C. Po 30 minutách se pevný podíl ve formě spojí filtrací, k pevnému podílu se přidá voda a pH roztoku se upraví na 10 hydroxidem sodným (1,0 N). Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSCfi, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ··· · · · · ♦ · ···· ·· · ···· • ······· · ··· ····

389 dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fáze, čímž se získá řra?«-A2-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)benzo[ů]furan-2-karboxamid (0,497 g, 75%).

*H NMR (DMSO-dé) δ 1,49 (m, 2H), 2,01 (m, 6H), 2,15 (s, 3H), 2,40 (m, 3H), 2,51 (m, 4H), 4,00 (s, 3H), 4,66 (m, IH), 7,31 (m, IH), 7,39 (m, 2H), 7,54 (m, IH), 7,81 (m, 3H),

8.24 (m, IH), 9,50 (s, IH).

b) Trimaleát trans-N2-<A-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Apyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)benzo[Z>]furan-2-karboxamidu

Tra«5^,-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4ď|pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)benzo[/)]ťuran-2-karboxamid (497 mg, 0,855 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (56 ml) a přidá se kyselina maleinová (298mg, 2,566 mmol) v horkém ethylacetátu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá trimaleát trans-A2-(4-{4-amino-1 -[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)benzo[Z>]furan-2-karboxamidu (117 mg, 92%).

'H NMR (DMSO-dé) δ 1,60 (m, 2H), 2,09 (m, 6H), 2,68 (s, 3H), 2,82-3,17 (bm, 9H), 4,00 (s, 3H), 4,69 (m, IH), 6,16 (s, 6H), 7,30-7,42 (m, 3H), 7,54 (m, IH), 7,76-7,85 (m, 3H),

8.25 (m, 2H), 9,51 (s, IH); LCMS (Sloupec Finigan: Pecosphere, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH⁺ = 581,4. R_t = 2,12 min.

Příklad 402

Trimaleát trans-Nl -[(27?)-2-fenylpropyl]-4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamid

a) 7ríZH5-Al-[(2R)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxybenzamid

K (3Á)-3-fenylbutanové kyselině (376 mg, 2,29 mmol) v dichlormethanu (7 ml) se přidá oxalylchlorid (2 ml, 22,9 mmol) a DMF (1 kapka). Reakční směs se míchá přes noc. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml), dichlormethanový roztok se přidá do roztoku Zra/7.s-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (448 mg, 1,026 • · ··· ·· · · · · « · » · ♦ · · ··»· • ······· · ··· «··· • · · ·· ·· · · ·

390 mmol) v pyridinu (6 ml) při teplotě 0°C. Po 2 hodinách se reakční směs nalije k ethylacetátu (60 ml) a pevný podíl se spojí filtrací, k pevnému podílu se přidá voda a pH roztoku se upraví na 10 hydroxidem sodným (1,0 N). Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (80:20) jako mobilní fáze, čímž se získá trans-Nl - [(2R)-2-feny lpropy 1] -4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamid (383 mg, 64%).

‘H NMR (CDCb) δ 1,40 (d, J = 6,96, 3H), 1,57 (m, 2H), 2,08-2,21 (m, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,50 (m, 5H), 2,632,74 (m, 6H), 3,40 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 4,74 (m, 1H), 5,69 (bs, 2H), 7,16-7,34 (m, 7H), 7,66 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,49 (d, J = 8, 21,1H).

b) Trimaleát /nms-Vl-[(2£)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamid rran5-Vl-[(2/?)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamid (383 mg, 0,657 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (42 ml) a přidá se kyselina maleinová (229mg, 1,971 mmol) v horkém ethylacetátu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá řran.s-Vl-[(2/?)-2-fenylpropyl]-4-{4-amino-l-[4(4-methylpiperazino (cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxybenzamid (571 mg, 93%).

'H NMR (DMSO-d₆) δ 1,25 (d, J = 6,95, 3H), 1,57 (m, 2H), 2,03 (m, 6H), 2,60-3,40 (bm, 18H), 3,89 (s, 3H), 4,67 (m, 1H), 6,16 (s, 6H), 7,20 (m, 3H), 7,31 (d, J = 4,37 Hz, 4H), 8,14 (d, J = 8,22 Hz, 1H), 8,23 (s, 1H), 9,18 (s, 1H).

LC/MS (Sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min): MH⁺ =583,2, R_t = 2,89 minut.

Příklad 403

Arc-butyl-V- {4-[4-amino-1-(1-(1 -methylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl)-1 A-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl {karbamát a) 7erobutyl-4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát • φ φ ·· · · * ♦ φ · · · Φ· · ·♦·· • ······· · φ · · φφφφφ • · · φφ Φ· φφ ·

391

Borohydrid sodný (3,8 g, 100,4 mmol) se přidá po částech do roztoku /erc-butyl-4oxo-l-piperidinkarboxylátu (20 g, 100,4 mmol) v methanolu (600 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin, přidá se hydroxid sodný (1,0 N, 100 ml) a organické rozpouštědlo se zahušťuje, vodná fáze se extrahuje etherem (4x). Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSCfi, filtruje a zahušťuje, čímž se získá terc-butyl-4-hydroxy-lpiperidinkarboxylát (20,48 g, 100%).

’HNMR (CDC1₃) δ 1,48 (s, 9H), 1,63 (m, 2H), 1,87 (m, 2H), 3,03 (m, 2H), 3,83 (m, 3H).

b) 7erc-butyl-4-(4-amino-3-jod-1 //-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát

3-Jod-1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (10 g, 38,3 mmol), /erc-butyl-4hydroxy-l-piperidinkarboxylát (16,96 g, 84,2 mmol) a trifenylfosfin (20,09 g, 76,0 mmol) se suspenduje v tetrahydrofuranu (425 ml). Reakční směs se ochladí v ledové lázni a po kapkách se přidá o 10 minut později diethyl-azodikarboxylát (12,09 ml, 76,0 mmol). Reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 5 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku a při zahřívání se přidá dichlormethan (65 ml), pevný podíl se filtruje a promyje dichlormethanem (20 ml) a dále promyje ethylacetátem (5x20 ml), čímž se získá směs diethyl-l,2-hydrazindikarboxylát a terc-butyl-4-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-l-yl)-l -piperidinkarboxylát (1:1, 14,98 g, 63%), který se bez purifikace použije dále.

^!H NMR (CDC1₃) δ 1,48 (s, 9H), 1,95 (m, 2H), 2,20 (m, 2H), 2,92 (m, 2H), 4,23 (m, 2H), 4,84 (m, IH), 8,31 (s, IH).

c) 3-Jod-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 250 ml) se přidá do roztoku /erc-buty l-4-(4-amino-3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylátu (10,72 g, 24,1 mmol) v dichlormethanu (100 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědla se zahušťují a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. Přidá se kyselina chlorovodíková (5,0 N) a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (3x), k upravení pH se přidá hydroxid sodný (50%), ke snížení objemu se suspenze lyofilizuje na jednu třetinu a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá 3-jod-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (8,109 g, 97%).

« « • · » ·

392 *H NMR (CDC1₃) δ 1,81 (m, 2H), 1,99 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,07 (m, 2H), 4,68 (m, 1H), 8,19 (s, 1H).

d) 3-Jod-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)]-piperidin-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4amin

3-Jod-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (2,00 g, 5,81 mmol), l-methyl-4-piperidon (2,14 ml, 17,42 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (2,45 g, 11,62 mmol) a ledová kyselina octová (1,05 g, 17,42 mmol) se smíchají s 1,2-dichlorethanem (75 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin a k upravení pH asi na 9 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá 3-jod-1 - [1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)]-piperidin-4-yl]-177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-4-aminu (2,39 g, 93%).

'H NMR (DMSO-dé) δ 1,52 (m, 2H), 1,75 (m, 2H), 1,87 (m, 2H), 2,05 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,28 (m, 3H), 2,91 (m, 2H), 3,00 (m, 2H), 4,55 (m, 1H), 8,18 (s, 1H).

e) Terc-butyi-N- {4- [4-amino-1 - [ 1 -methylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl] -177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}karbamát

3-Jod-l-[l-(l -methylpiperidin-4-yl)]-piperidin-4-yl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin4-amin (2,39 g, 5,41 mmol), /erc-butyl-A-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (2,08 g, 5,96 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfm (0,375 g, 0,32 mmol) a uhličitan sodný (1,38 g, 13,00 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (80 ml) a vodou (40 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (95:5:0,5) jako mobilní fáze, čímž se získá fórc-butyl-N-{4-[4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-y 1]-177-pyrazolo[3,4-ďJpy rimidin-3-y lj -2-methoxyfenyl} karbamát (1,67 g,

57%).

’H NMR (DMSO-dé) δ 1,48 (m, 11H), 1,71 (m, 2H) 1,86 (m, 4H), 2,14 (s, 3H), 2,18 (m,

3H), 2,32 (m, 2H), 2,80 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,22 (m, 2H), 7,91 (d, J =

8,12,1H), 8,03 (s, 1H), 8,21 (s, 1H).

• A AAAA

A A A

A A · «

A « * A A

A ΑΑΑΑΑ · A

393

Příklad 404

- {4-[(2-Furylmethyl)amino] -3 -methoxyfenyl} -1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4yl} -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

a) 3 -(4-Amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl] -1 A-pyrazolo [3,4-7]pyrimidin-4-amin

Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 28 ml) se přidá do roztoku terc-buty 1-V- {4- [4-amino-1 - [l-( 1 -methy lpiperidin-4-y l)-piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}karbamátu (0,914 g, 1,70 mmol) v dichlormethanu (5 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Směs se zahušťuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. K upravení pH asi na 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje, čímž se získá

3- (4-amino-3-methoxyfenyl)-1 -[l-( 1 -methy lpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,726 g, 97%).

‘H NMR (CDCb) δ 1,67 (m, 2H) 1,83 (m, 4H), 2,00 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,39 (m, 5H), 2,91 (m, 2H), 3,08 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,99 (m, 2h), 4,73 (m, 1H), 5,56 (bs, 2H), 6,82 (d, J = 7,87,1H), 7,08 (d, J = 7,84,1H), 7,13 (s, 1H), 8,34 (s, 1H).

b) 3 - {4- [(2-Furylmethyl)amino] -3-methoxyfenyl} -1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin4- y 1] -1 A-pyrazolo [3,4-7]pyrimidin-4-amin

-(4-Amino-3 -methoxyfenyl)-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl] -1Apyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (100 mg, 0,229 mmol), 2-furaldehyd (0,027 ml, 0,321 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (193 mg, 0,916 mmol) a ledová kyselina octová (55 mg, 0,916 mmol) se smíchají s 1,2-dichlorethanem (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc, k upravení pH asi na 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSCh, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (95:5:0,2) jako mobilní fáze, čímž se získá 3 - {4- [(2-furylmethyl)amino] -3 -methoxyfenyl} -1 -[l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (57 mg, 48%).

• Φ ···· φ φ φ · φ · ·* * » ««.*-» ·· · * ’ · » • · ···· · · · · · « * »»· • · · · · · · · « « • e * · · · · · · φ

394 *Η NMR (DMSO-dé) δ 1,45 (m, 2Η), 1,71 (m, 2Η), 1,87 (m, 4Η), 2,14 (s, 3H), 2,28 (m, 5H), 2,80 (m, 2H), 3,01 (m, 2H), 3,86 (s, 1H), 4,37 (d, J = 3,13, 1H), 6,76 (d, J = 8, 62,1H), 7,07 (m, 2H), 7,57 (s, 1H), 8,19 (s, 1H).

LCMS (Sloupec Finigan: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH⁺517,3, R_t = 2,28 min.

Příklad 405

Dimaleát Al-{4-[4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl}-/ran.s-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamidu

a) Al - {4- [4-Amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl}-Zran.s-2-f enylcyklopropan-1 -karboxamid

7raz?.s-2-fenyl-l-cyklopropankarbonylchlorid (42 mg, 0,231 mmol) se přidá do roztoku 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (100 mg, 0,229 mmol) v pyridinu (1,0 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo zahušťuje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-[l-(lmethylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l//pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-/rans'-2-fenylcyklopropan-l -karboxamid (80 mg, 60%).

*H NMR (CDC1₃) δ 1,42 (m, 1H), 1,77 (m, 2H), 1,85 (m, 2H), 2,06 (m, 3H), 2,36-2,45 (m, 8H), 2,62 (m, 1H), 3,00 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,75 (m, 1H), 5,54 (bs, 2H), 7,14-7,33 (m, 7H), 8,10 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,54 (d,J = 8,50, 1H).

LCMS (Sloupec Finigan: Pecosphere, Cl 8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH⁺ = 581,4, Rt = 1, 77 minut.

b) Dimaleát Al - {4-[4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl] -2-methoxyfenyl} -/ran.s-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamidu

Al - {4- [4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4í/Jpyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl}-Zran.s-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamid (75 mg,

0,129 mmol) se rozpustí v ethanolu (2 ml) a přidá se kyselina maleinová (45 mg, 0,387 mmol) v ethanolu (1 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě, po 5 hodinách se • · · ·

395 rozpouštědlo odstraní a přidá se ethylacetát. Pevný podíl spojí filtrací, čímž se získá dimaleát Al - {4-[4-amino-l -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-/ra/zs-2-fenylcyklopropan-l-karboxamidu (75 mg).

'H NMR (DMSO-dé) δ 1,17 (m, 1H), 1,32 (m, 2H), 1,48 (m, 2H), 1,48, (m, 2H), 2,19 (m, 4H), 2,37 (Μ, 1H), 2,46 (m, 1H), 2,59 (m, 1H), 2,78 (s, 3H), 2,98-3,52 (bm, 9H), 3,90 (s, 3H), 5,02 (m, 1H), 6,08 (s, 4H), 7,17-7,33 (m, 7H), 8,25 (m, 2H), 9,65 (s, 1H).

LCMS (Sloupec Finigan: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm. eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,0 ml/min): MH⁺ = 581,4, R_t = 1,77 min.

Příklady 406 a 407

Amidy odvozené od cz'5^,-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-7A-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidin-4-aminu Reprezentativní způsob přípravy:

K příslušné karboxylové kyselině (0,46 mmol) v dichlormethanu (1,5 ml) se přidá oxalylchlorid (400 μΐ, 0,2 mmol) a DMF (1 kapka), vialky se uzavřou šeptem a k vyrovnávání tlaku se do každého septa zapíchne malá jehla, vialky se třepají přes noc na třepačce J-Kem. Oddělí se 50% roztok, přebytek oxalylchloridu a dichlormethanu se pak odstraní na 12-ti kanálové vakuové pumpě Supelco za vakua a pod atmosférou dusíku. Surový chlorid kyseliny (0,23 mmol) se přidá do cA-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1-[4-(4methylpiperazíno)cyklohexyl]-lA-pyrazofo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu (40 mg, 0, 09 mmol) v suchém pyridinu (800 1) a míchá při pokojové teplotě. Výsledné roztoky se rovnou purifikují preparativní HPLC (Hypersil BSD C18, 5 pm, 100 x 21 mm, 0%-100% acetonitril/0, 05M octan amonný v průběhu 10 minut, 25,0 ml/min). Výsledné produkty se dále purifikují vytřepáním mezi dichlormethan (4 ml) a 1,0 N hydroxid sodný (2 ml) a přetáhnou přes vysoce účinný extrakční diskový cartridge Empore (C18-SD oktadecyl), čímž se získají odpovídající produkty. Sloučeniny s odpovídajícími LCMS (Sloupec Micromass: Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 0% B/A až 100% B/A v 4,5 minutách, ( B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 3,5 ml/min) jsou uvedeny níže.

• ·

396

Název sloučeniny	R	Mn. (mg)	MH⁺	Rt (min)
TV!-(4-{4-amino-1-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-3-cyklohexylpropanamid, Příklad 406	o	11	575,3	3,3
N2-(4- {4-amino-1-[4-(4- methylpiperazino)cyklohexyl]-1H- pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -y 1} -2- methoxy feny 1)-1 -methyl-1H-2- indolkarboxamid, Příklad 407	MX)	20	581,3	2,98

Příklad 408

Dihydrochlorid /V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]fenyl}5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-aminu • · · · • · • · • · « * · ·

397

Boo₂0

Nas,CO₃ dioxan/H₂0

-

a) 7erc-butyl-4-(4-amino-3-jod-1 //-pyrazolo[3A-d\pyrimidin-l-y 1)-1 -piperidinkarboxylát Di-íerobutyl-dikarbonát (0,287 g, 1,32 mmol) se přidá do směsi dihydrochloridu 3-jod-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,50 g, 1,20 mmol) a uhličitanu sodného (0,445 g, 4,20 mmol) v dioxanu (10 ml) a vodě (10 ml). Reakce se míchá po dobu 18 hodin. Přidá se dichlormethan (100 ml) a organická vrstva se promyje vodou (30 ml) a solankou (30 ml), suší (Na₂SO4) a koncentruje za vakua, čímž se získá Zerc-buty l-4-(4-amino-3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát ve formě světle žluté pevné látky (0,524 g, 98 %);

RP-HPLC 12,227 minut, 100% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 445,1.

• · · · « · · · · · · : • · · · ·· · · · • ······♦ · ··· ·

398

b) Arc-buty l-4-(4-amino-3 - {4-[(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1Hpyrazolo [3,4 -ď| pyrimidin-1 -y 1)-1 -piperidinkarboxy lát

7erc-butyl-4-(4-amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl)-1 piperidinkarboxylát (524 mg, 1,18 mmol) se rozpustí v ethylenglykolu dimethyletheru (50 ml) a vodě (10 ml), přidá se V-(l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (537 mg, 1,47 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (68 mg, 0,059 mmol) a uhličitan sodný (313 mg, 2,95 mmol) a reakce se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 19 hodin. Přidá se další boronát (188 mg, 0,515 mmol) a palladiumtetrakistrifenylfosfin (27 mg, 0,024 mmol) a reakce se zahřívá při teplotě 80°C dalších 23 hodin. Reakce se koncentruje za sníženého tlaku, zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (100 ml) a vodu (100 ml). Organická vrstva se suší (Na₂SO4), pak koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá oranžový olej (1,4 g). Purifikaci chromatografií na sloupci silikagelu gradientem 2:1 až 9:1 ethylacetát:heptan, poté gradientem 2% až 5 % methanolu v dichlormethanu se získá /erc-butyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl}-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát ve formě hnědé pevné látky (577 mg, 85%);

RP-HPLC 17,090 minut, 98% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 555,2.

c) Dihydrochlorid V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3yljfenyl} -5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-aminu

7'erc-butyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l Apyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát (142 mg, 0,256 mmol) se rozpustí v acetonu (7 ml) a 6N vodné kyselině chlorovodíkové (1,4 ml). Reakce se pak zahřívá při teplotě 45°C, čímž vznikne precipitát. Po 2,5 hodinách se precipitát spojí vakuovou filtrací, promyje minimálním množstvím acetonu a suší v lyofilizátoru, čímž se získá dihydrochlorid N2-{4- [4-amino-l-(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl]fenyl} 5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-aminu ve formě oranžového pevného podílu (130 mg, 96%);

HPLC 10,436 minut, 96% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 455,3.

< ·

399

Příklady 409-416

Obecný způsob přípravy piperidinových amidových analog 7V2-{4-[4-amino-l-(4piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu

Každá z 20 ml scintilačních vialek se naplní dihydrochloridem V2-{4-[4-amino-l(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2aminu (45 mg, 0,085 mmol), V-nechráněnou nebo TV-chráněnou aminokyselinou (1,25 ekviv.), l-hydroxy-7-azabenzotriazolem (12 mg, 0,085 mmol), l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridem (20 mg, 1,06 mmol), V-ethylΛζ/V-diisopropyl aminem (74 pl, 0,425 mmol) a dichlormethanem (5 ml). Reakce se se míchá při pokojové teplotě po dobu 2,5 dnů. Pro doběhnutí reakce lze přidat další V-ethylVV-diisopropylamin (15 pl, 0,085 mmol) a l-(3-dimethylaminopropyl)-3ethylkarbodiimid-hydrochlorid (8 mg, 0,0425 mmol). Pro lepší rozpustnost lze také přidat DMF (1 ml). Reakce se koncentrují za vakua, rozpustí v dichlormethanu (2 ml), promyjí solankou (2 ml) a vrstvy se separují přetažením přes cartridge Empore (6 ml). Organická vrstva se koncentruje za sníženého tlaku. Produkty, jejichž čistota je menší než 80%, se purifikují RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm Gradient: 15% až 35% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 40 minut; Deltapak C18, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec). TV-Zerc-butoxykarbonyl jako chránící skupina produktů (0,11 mmol) se odstraňuje 6N HCI (0,7 ml) a acetonem (3,5 ml) při teplotě 45°C po dobu 4,5 hodin. Aceton se odstraní za sníženého tlaku a produkty se purifikují RPHPLC (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 15% až 35% gradient acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 40 minut; Deltapak Cl8, 300Á, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec).

• · · ♦ ·· · ·· • ······· · ··· · • · · · · *» · ·

400

V-(9-fluorenylmethoxykarbonyl) jako chránící skupina produktů (0,126 mmol) se odstraňuje piperidinem (0,4 ml) v DMF (1,6 ml) při pokojové teplotě po dobu 3,5 hodiny. Produkty se pak purifikují RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: 15% až 35% gradient acetonitril/0,1M vodný octan amonný v průběhu 40 minut; Deltapak 08, 300 pm, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec). Následující sloučeniny se analyzují RP-HPLC (5% až 85% acetonitril/0,1M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při teplotě 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec) a hmotnostní spektrometrií.

Př.	Struktura	Vých. aminokyselina	m/z (MH⁺)	HPLC R_t (min)	Čistota
409		- Na⁺O Λ Λ	582,2	11,394	96%
	N—\ Q	V
410	m y r O	Na T 0	596,3	11,104	91%
411	r&í n v/	o °K / \	540,2	9,287	93%
	g

• · · · · · · • · « · · · ·

401

412		o.	γΌΗ	566,2	11,160	100%
413		HO^O	566,2	11,139	100%
	N V* n>		f^NFmoc u
	cř
414	Ó	X s	YOH .NFmoc	554,3	11,035	93%
	' N-.
415	r#?	HO^O	552,2	11,051	100%
	N		< NBoc
	Íj/H 'b
	X o

• · • · · · · • ····· · ·

402

416	N w Λ	HO^O ^NBoc	551,9	11,027	100%
	w _rY°

Příklad 417

Cis-4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl} fenyl-2,3 -dichlor-1 -benzensulfonát

Roztok obsahující cis-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-\Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenol (100 mg, 0,245 mmol), 2,3-dichlorbenzensulfonylchlorid (180 mg, 0,735 mmol) a triethylamin (0,34 ml, 2,45 mmol) v dichlormethanu (8 ml) se míchají při pokojové teplotě po dobu 17 hodin. Přidá se další dichlormethan (20 ml) a reakce se promyje solankou (10 ml), přidá se nasycený vodný roztok NaHCCb (10 ml), látka se suší (Na2SO₄) a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá czs-4-{4-amin-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl}fenyl-2,3-dichlor-l-benzensulfonát ve formě bílé pevné látky (135 mg, 90%); RP-HPLC 11,787 minut, 97 % čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 616,2.

• ·

403

Příklad 418

V2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 yl}benzyl)-5-methyl-1,3-thiazol-2-aminu (a) Cis-4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazinojcyklohexylj-1 //-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidin-3yl} benzaldehyd

Směs cA-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-ylaminu (5,0 g, 11,33 mmol), 4-formylfenylborité kyseliny (2,55 g, 16,98 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfmu (0,47 g, 0,4 mmol) a uhličitanu sodného (3,002 g, 28,32 mmol) v ethylenglykolu dimethyletheru (170 ml) a vodě (30 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Přidá se další boronát (1,567 ekviv.) a katalyzátor (0,0135 ekviv.) a v reakci se pokračuje dalších 40 hodin. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za vakua. Zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (300 ml) a vodu (200 ml). Výsledný precipitát se spojí filtrací a suší na lyofilizátoru, čímž se získá c/'.s-4-{4-amino-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} benzaldehyd ve formě světle hnědé pevné látky (2,1 g, 43 %);

RP-HPLC 7,003 minut, 98 % čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec);

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1,60 (2H, br t), 1,72 (2H, m), 2,06 (2H, m), 2,17 (3H, s), 2,27 (3H, m), 2,35-2,50 (6H, m), 3,39 (2H, m), 4,84 (1H, m), 7,88 (2H, d), 8,07 (2H, d), 8,26 (1H, sjalO, 11 (1H, s).

b) /V2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazinojcyklohexylj-1 //-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidin-3yl} benzy l)-5-methyl-1,3 -thiazol-2-amin

Směs obsahující czA-4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}benzaldehyd (100 mg, 0,24 mmol) a 2-amino-5methylthiazol (33 mg, 0,29 mmol) v titanium-isopropoxidu (0,48 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Přidá se methanol (2 ml), poté opatrně borohydrid sodný (13,5 mg, 0,36 mmol). Po 10 minutách šumění se reakce zastaví vodným roztokem hydroxidu sodného (0,1 N, 10 ml). Výsledná směs se nechá stát přes noc, pak filtruje přes vrstvu Celitu s další methanolem (přibližně 10 ml), filtrát se zahušťuje do sucha, pak rozpustí v dichlormethanu (50 ml) a promyje solankou (50 ml). Vodná vrstva se extrahuje ·· · ·· · • · ♦ · · • · · · · · • ······· · • · » · · * ·· · · ·

404 dále dichlormethanem (3 x 50 ml) a spojené organické vrstvy se suší (MgSO₄) a koncentrují za vakua. Purifikací RP-HPLC (Pecosphere, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm sloupec, 0% až 100% acetonitril v 50 mM octanu amonném, pufrovaném na pH 4,5, při 3,5 ml/min) se získají 2 frakce, první frakce obshauje (4-{4-amino-7-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-7A-cyklopenta[í/]pyrimidin-5-yl}fenyl)methanol (5 mg, 5 %);

RP-HPLC 6,261 minut, 82 % čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z (MH⁺) = 422,1. V druhé frakci se získá A2-(4-{4amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-J]pyrimi-din-3-yl}benzyl)5-methyl-l,3-thiazol-2-amin (4 mg, 3 %);

RP-HPLC 8,344 minut, 100 % čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec);

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 1,59 (2H, br t), 1,70 (2H, m), 2,07 (2H, m), 2,10-2,50 (9H, m), 2,16 (3H, s), 2,54 (3H, s), 3,29 (2H, m), 4,47 (2H, d), 4,80 (1H, m), 6,66 (1H, s), 7,49 (2H, d), 7,61 (2H, d), 7,88 (1H, m) a 8,23 (1H, s).

Příklad 419

7V2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-methy]piperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl}benzyl)-4-methyl-1,3-thiazol-2-amin

7V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}benzyl)-4-methyl-l,3-thiazol-2-amin se připraví podle stejného způsobu a v měřítku, které je uvedeno pro 5-methylový analog (viz výše) (11 mg, 8%);

RP-HPLC 8,177 minut, 97 % čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; δ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec);

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1,57 (2H, br t), 1,67 (2H, m), 2,07 (2H, m), 2,10-2,50 (9H, m), 2,19 (3H, s), 2,54 (3H, s), 3,29 (2H, m), 4,50 (2H, br s), 4,79 (1H, m), 6,17 (1H, s), 7,50 (2H, d), 7,62 (2H, d), 7,99 (1H, m) a 8,23 (1H, s).

• · · · • · · · · · ·

405

Příklad 420

Cis- V2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin3 -yl} fenyl)-5,7-dichlor-1,3 -benzoxazol-2-amin

a) 2-Amino-6-chlorfenol

Roztok 2-chlor-6-nitrofenolu (1,210 g, 6,972 mmol) v ethanolu (50 ml) se nechá reagovat s práškovým železem (1,947 g, 34,86 mmol) a koncentrovanou HC1 (3 ml). Žlutá směs se zahřívá k refluxu po dobu 18 hodin, pak ochladí na pokojovou teplotu. Reakční směs se filtruje přes vrstvu Celitu a filtrát se neutralizuje nasyceným vodným roztokem NaHCO3. Výsledná šedá suspenze se filtruje přes vrstvu Celitu a filtrát se extrahuje ethylacetátem (3 x 20 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí solankou, suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrují a koncentrují, čímž se získá černá pevná látka. Triturací heptanem se získá 2-amino-6-chlorfenol (0,577 g, 58 %) ve formě tmavě hnědé pevné látky.

RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 100 Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 7,30 minut, 91%; m/z 143 (MH⁺).

b) Cz.s-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dichlor-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z cz'.s-3-(4-aminofenyl)-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,245 mmol) a 2-amino-4,6-dichlorfenolu (0,044 g, 0,245 mmol) podle způsobu použitého při syntéze ez',s-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4z/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-methyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (PH4042235). Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,008 g, 6%):

RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS C18, 100 Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 8,93 minut, 95%; m/z 594 (MH⁺).

Příklad 421

Cz'.s-V2-(4-{ 4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3 -yl} fenyl)-7-methyl-1,3 -benzoxazol-2-amin a) 2-Amino-4,6-dichlorfenol • · · ·

406

2-Amino-4,6-dichlorfenol se připraví z 2,4-dichlor-6-nitrofenolu (0,625 g, 2,40 mmol) podle způsobu popsaného pro 2-amino-6-chlorfenol. Sloučenina se připraví ve formě černé pevné látky (0,044 g, 10%).

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 100 Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 9,033 minut, 74%; m/z 177 (MH⁺).

b) C/s-jV2-(4-{ 4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}fenyl)-7-methyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z czs-3-(4-aminofenyl)-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,245 mmol) a 2-amino-6-methylfenolu (0,030 g, 0,245 mmol) podle způsobu použitého při syntéze cis-N2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4ť/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-methyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (PH4052419F). Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,018 g, 14%):

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 100 Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 7,37 minut, 85%; m/z 539 (MH).

Příklad 422

Cz's^,-7V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3 -yl} fenyl)-7-chlor-1,3 -benzoxazol-2-amin

a) 2-Amino-6-methylfenol

2-Amino-6-methylfenol se připraví z 2-methyl-6-nitrofenolu (0,500 g, 3,26 mmol) podle způsobu popsaného pro 2-amino-6-chlorfenol. Sloučenina se připraví ve formě černé pevné látky (0,03 Og, 8%).

RP-HPLC (25 až 100 % CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 100 Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 5,78 minut, 86%; m/z 123 (MH⁺).

b) Cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3-yl}fenyl)-7-chlor-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z c«-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,245 • ·

407 mmol) a 2-amino-6-chlorfenolu (0,053 g, 0,367 mmol) podle způsobu použitého pri syntéze cA-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-methyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (PH4052419F). Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,018 g, 13%):

RP-HPLC (25 až 100% CH, CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut pri 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 100Á, 5 pm, 250 x 4,6 mm sloupec) ír = 7, 78 minut, 94%; do 558 (MH⁺).

Příklad 423

2- {4-Amino-3- [4-( 1,3 -benzoxazol-2-ylamino)fenyl] -1V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl} -3 pyridylkyanid

Ke kopulaci V-( 1,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan2- yl)fenyl]aminu (0,052 g, 0,155 mmol) s 2-(4-amino-3-jod-lV-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidinl-yl)-3-pyridylkyanidem (0,045 g, 0,124 mmol) se využije způsob Suzukiho kopulace použitý při přípravě ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3fluorfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidm-l-yl] acetátu. Purifikaci preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut pri 21 ml/min za použití 8p Hypersil HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 10,1-11,2 min) se získá 2-{4-amino3- [4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl}-3pyridylkyanid ve formě žlutého prášku (0,004 g, 0,009 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 8,55 min; MS (MH)⁺ 446.

Příklad 424

VI -[2-(Dimethylamino)ethyl]-2-(4-amino-3- {4-[(5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl} -1 V-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-1 -yl)propanamid

Ethyl-2-(4-amino-3-jod-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)propanoát (2,03 g, 5,62 mmol), meziprodukt popsaný pri přípravě ethyl-2-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]propanoátu se konvertuje na odpovídající methylester (1,90 g, 5,47 mmol) podle esterifikačního • · • · • · · · • · · · · ····· · · · • · · · • · ·

408 způsobu popsaného při přípravě methyl-4-[4-amino-3-(4-{[(2,3dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl]butanoátu:

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 6, 88 mi. Tento methylester (0,110 g, 0,32 mmol) se pak konvertuje na sekundární amid s N,Ndimethylethylendiaminem podle způsobu pro přípravu amidu použitého při přípravě VI{4-[4-amino-1 -(2-morfolino-2-oxoethyl)-1 A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl]-2fluorfenyl}-2,3-dichlor-l/benzensulfonamidu:

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 3,47 min.

Sekundární amid (0,12 g, 0,30 mmol) se kopuluje s V-(5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminem (0,100 g, 0,275 mmol) podle způsobu Suzukiho kopulace použitého při přípravě ethyl-2-[4amino-3-(4-{[(2,3-dichlorfenyl)sulfonyl]amino}-3-fluorfenyl)-lV-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l-yl]acetátu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 6,3-8,3 min) se získá Vl-[2-(dimethylamino)ethyl]-2-(4amino-3- {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino] fe-nyl} -1 A-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-l-yl)propanamid ve formě žlutého prášku (0,0015 g, 0,003 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 7,60 min; MS (MH)⁺514.

Příklad 425

V-(4- {4-Amino-1 -[2-kyano-4-(4-methylpiperazino)fenyl]-1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3yl}-2-fluorfenyl)-V'-(3-methylfenyl)močovina

Použije se stejný způsob jako při přípravě VI-(4-{4-amino-l-[2-kyano-4-(4methylpiperazino)fenyl] -1 V-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl} -2-fluorfenyl)-2,3 -dichlor-1 benzensulfonamidu s výjimkou toho, že finální krok používaný při přípravě močoviny k připravení ethyl-2-(4-amino-3 - {3-fluor-4-[(3 -toluidinokarbonyl)amino] fenyl} -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)acetátu zahrnuje reakci 2-[4-amino-3-(4-amino-3fluorfenyl)-1 V-pyrazolo[3,4-á]pyrimidin-1 -yl]-5-(4-methylpiperazino)benzonitrilu (0,018 • ·

409 g, 0,041 mmol) s m-tolylisokyanátem (0,005 ml, 0,040 mmol). Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8pm Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 9,3-10,3 min) se získá 7V-(4-{4-amino-l-[2-kyano-4-(4-methylpiperazino)fenyl]-lH^r-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-/V-(3-methylfenyl)močovina ve formě žlutého prášku (0,008 g, 0,014 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 8,03 min; MS (MH)⁺ 577.

Příklad 426

Ci5-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin3 -yl} fenyl)-6-chlor-1,3-benzothiazol-2-amin

Pevný 4-bromanilin (1,00 g, 5,81 mmol) a 2,6-dichlorbenzothiazol (1,18 g, 5,81 mmol) se zahřívají při teplotě 140°C po dobu 3 dnů v baňce vybavené chladičem (fuze se objeví po pár minutách za vzniku čirého roztoku, který ztuhne v průběhu 3 dnů). Reakční směs se nechá vychladnou na pokojovou teplotu, čímž se získá 7V-(4-bromfenyl)-/V-(6chlor-l,3-benzothiazol-2-yl)amin (1,97 g, 5,81 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 14,65 minut. Způsob přípravy boronátu:

Surový A-(4-bromfenyl)-/V-(6-chlor-l,3-benzothiazol-2-yl)amin (0,178 g, 0,525 mmol), bis(pinakolato)diboron (0,180 g, 0,709 mmol), octan draselný (0,154 g, 1,57 mmol) a [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatý (0,043 g, 0,053 mmol, [1:1 komplex s dichlormethanem]) v /7,/V-dimethylformamidu (3 ml) v utěsnitelné Schlenkově baňce se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 24 hodin. Směs se ochladí na pokojovou teplotu, filtruje přes Celit a surový produkt se purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/heptan (1:3), čímž se získá boronátový meziprodukt /V-(6-chlor-1,3-benzothiazol-2-yl)-/V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amin ve formě bílého prášku (0,116 g, 0,30 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 15,15 minut.

• · · · • · · ♦

410

Způsob provedení Suzukiho kopulace:

Směs V-(6-chlor-1,3-benzothiazol2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,116 g, 0,30 mmol), cz's-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-čfjpyrimidin-4-aminu (0,106 g, 0,24 mmol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,014 g, 0,012 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (3,0 ml), uhličitanu sodného (0,064 g, 0,60 mmol) a vodě (1,5 ml) v uzavřené Schlenkově baňce se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 24 hodin. Směs se ochladí, zředí vodou (10 ml) a extrahuje směsí methanolu a dichlormethanu (1:19, 3 x 20 ml). Spojená organická frakce se suší (síranem hořečnatým), filtruje, koncentruje a purifikuje preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8pm Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 7,8-10,0 min), čímž se získá cisV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3yl}fenyl)-6-chlor-l,3-benzothiazol-2-amin ve formě žlutého prášku (0,036 g, 0,062 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v O,1M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 8,42 min; MS (MH)⁺ 574.

Příklad 427

Cri-V2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-7]pyrimidin3 -yl} fenyl)-6-methoxy-1,3-benzothiazol-2-amin

Způsobem, který je podobný způsobu použitému pro přípravu cz's-V2-(4-4-amino-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-ylfenyl)-6-chlor-l,3benzothiazol-2-aminu s výjimkou toho, že se použije 2-chlor-6-methoxybenzothiazol (0,352 g, 2,05 mmol) a purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μηι Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 6,3-8,3 min) se získá cz's-V2-(4-{4-amino-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-6-methoxyl,3-benzothiazol-2-amin ve formě bílého prášku (0,046 g, 0,080 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μτη Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 7,40 min; MS (MH)⁺ 570.

• · · · «· · « · ·

411

Příklad 428

Cú-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl} fenyl)-4-ethyl-1,3-thiazoI-2-amin

Roztok fluorenylmethyloxykarbonyl-isothiokyanátu (1,36 g, 4,84 mmol, Keamy, P. C.; Femandez, M.; Flygare, J. A. J. Org. Chem, 1998,63,196-200) v dichlormethanu (40 ml) se přidá pipetou do roztoku 4-bromanilinu (0,86 g, 5,00 mmol) v dichlormethanu (10 ml), přičemž teplota se udržuje při 0°C a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 14 hodin. Reakce se zředí dichlormethanem (60 ml) a promyje vodnou kyselinou chlorovodíkovou (0,5 M, 2 x 10 ml). Organická vrstva se suší (síranem hořečnatým), filtruje a koncentruje, čímž se získá 9//-9-fluorenyl-methyl-A-[(4bromanilino)karbothioyl]karbamát (2,25 g, 4,97 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 14,25 minut. Způsob přípravy thiazolu:

9//-9-fluorenyl-methyl-A-[(4-bromanilino)karbothioyl]karbamát (0,25 g, 0,55 mmol) se rozpustí ve směsi piperidinu a Α,Α-dimethylformamidu (1:6, 3,5 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí ve směsi octové kyseliny (1 ml), ethanolu (2 ml) a dioxanu (2 ml). Přidá se l-brom-2-butanon (90%, 0,11 ml, 1,10 mmol) a směs se míchá po dobu 14 hodin při pokojové teplotě. Reakční směs se zředí polovičním objemem nasyceného vodného roztoku uhličitanu sodného (15 ml) a extrahuje směsí methanolu a dichlormethanu (1:19, 3 x 20 ml). Spojené organické vrstvy se suší (síranem hořečnatým), filtrují, koncentrují a purifikují zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/heptan (1:4), čímž se získá bromthiazol A-(4-bromfenyl)-A-(4-ethyl-l,3thiazol-2-yl)amin (0,15 g, 0,53 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 13,15 minut.

Shora připravený bromthiazolový meziprodukt se konvertuje na boronát podle způsobu použitého při přípravě A/2-(4-{4-amino-1-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-6-chlor-l,3-benzothiazol-2-aminu, čímž se získá boronátový meziprodukt A-(4-ethyl-1,3-thiazol/2-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,158 g, 0,48 mmol):

• φ » * ·

412

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v Ο,ΙΜ vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μηι Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 13,60 minut.

Boronátový meziprodukt (0,15 g, 0,45 mmol) se kopuluje s cis-3 -jod/1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidm-4-aminem (0,182 g, 0,41 mmol) podle způsobu Suzukiho kopulace popsaného při přípravě A2-(4-{4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]- l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl} fenyl)-6-chlor-1,3benzothiazol-2-aminu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití sloupce 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 7,0-8,0 min) se získá cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl} fenyl)-4-ethyl-1,3thiazol-2-amin ve formě bělavého prášku (0,069 g, 0,133 mmol);

RP-HPLC (25 až 100 % acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 7,05 min; MS (MH)⁺518.

Příklad 429

Cis-N2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- 17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl} fenyl)-4,5 -dimethyl-1,3 -thiazol-2-amin

Využije se způsob přípravy thiazolu popsaný při přípravě cz5-V2-(4-{4-amino-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl} fenyl)-4-ethyl-1,3thiazol-2-aminu s výjimkou toho, že jako alkylační činidlo se použije 3-brom-2-butanon (0,183 g, 1,21 mmol) a alkylace se provádí při teplotě 40°C po dobu 24 hodin. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8pm Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 6,7-7,7 min) se získá cri-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4,5-dimethyl-l,3-thiazol-2-amin ve formě bělavého prášku (0,069 g, 0,133 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 6,83 min; MS (MH)⁺518.

·· A • A ···· ·> A

AAA « • · » A · • · ·»·· · · • · A · • A « ··

413

Příklad 430

Czj-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-čf|pyrimidin3 -yl} fenyl)-4-fenyl-1,3-thiazol-2-amin

Využije se způsob přípravy thiazolu popsaný při přípravě czs-V2-4-{4-amino-1-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo[3,4-ďjpyrim idin-3-yl} fenyl)-4-ethyl-1,3thiazol-2-aminu s výjimkou toho, že jako alkylační činidlo se použije 2-bromacetofenon (0,131 g, 0,66 mmol). Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8pm Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 8,7-9,8 min) se získá cz\-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]- l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidm-3-yl} fenyl)-4-fenyl-1,3thiazol-2-amin ve formě žlutého prášku (0,036 g, 0,064 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 8,22 min; MS (MH)⁺ 566.

Příklad 431

Czó'-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl} fenyl)-4-(4-methylfenyl)-1,3 thiazol-2-amin

Využije se způsob přípravy thiazolu popsaný při přípravě czs-V2-(4-{4-amino-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-ethyl-l,3thiazol-2-aminu s výjimkou toho, že jako alkylační činidlo se použije 2-brom-4'methylacetofenon (0,118 g, 0,554 mmol). Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8pm Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 9,1-10,7 min) se získá cz\-V2-(4{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl}fenyl)-4-(4-methylfenyl)-l,3-thiazol-2-amin ve formě bělavého prášku (0,022 g, 0,038 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersilu HS 08,250 x 4,6 mm sloupec) R_t 8,88 min;

MS MH⁺ 580.

►· * • · <· · *

414

Příklad 432

Czs-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl}fenyl)-5-methyl-4-fenyl-l,3 thiazol-2-amin

Využije se způsob přípravy thiazolu popsaný při přípravě cis-N2-(4-{4-amino-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-<7] pyrimidin-3 -yl} fenyl)-4-ethyl-1,3thiazol-2-aminu s výjimkou toho, že jako alkylační činidlo se použije 2-brompropiofenon (0,081 ml, 0,532 mmol) a alkylace se provádí při teplotě 50°C po dobu 24 hodin. Purifikaci produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8pm Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 9,1-10,3 min) se získá cú-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-methyl-4-fenyl-l,3-thiazol-2-amin ve formě bílého prášku (0,015 g, 0,026 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v O,1M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5pm Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 8,67 min; MS (MH)⁺ 580.

Příklad 433

Tri-maleát NI -(4- {4-amino-1-(1-(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(3R)-3-fenylbutanamid (3R)-3-fenylbutanoylchlorid

Roztok R-3-fenylbutyrové kyseliny (0,755 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se třepe po dobu 15 hodin při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Reakční směs se třepe po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství (3R)-3fenylbutanoylchloridu. Olej se použije přímo v následující reakci.

Tri-maleát NI-(4-{4-amino-1 -[1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(37?)-3-fenylbutanamidu

Roztok 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1-(1-(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] lA-pyrazolo[3,4-óř]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem (3R)-3-fenylbutanoylchloridu (0,420 g, 2,3 mmol) v

415 dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se lázeň ze suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá (3R)-3-fenylbutanoylchlorid (0,210 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin, přidá se roztok hydroxidu sodného (1 N) (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin~4yl)piperidin-4-yl]-lZ/-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(3/?)-3fenylbutanamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,378 g (57%) čistého Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-(3/?)-3-fenylbutanamidu. Horký roztok Al-(4-{4-amino-l-[l-(lmethylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)(3R)-3-fenylbutanamidu (0,378 g, 0,649 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,226 g, 1,95 mmol) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá tri-maleát Al-(4-{4-amino-l-[l-(lmethylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)(3R)-3-fenylbutanamidu.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,200 (s, IH), 8,263 (s, IH), 8,1747-8,1543 (d, IH, J = 8,16 Hz), 7,312-7,282 (m, 4H), 7,235-7,232 (s, IH), 7,211-7,168 (m, 2H), 6,114 (s, 6H), 5,061 (m, IH), 3,890 (s, 3H), 3,301 (m, 4H), 2,997 (m, 2H), 2,783-2,741 (m, 6H), 2,541 (m, 8 H), 2,261-2,185 (m, 4H), 1,879 (m, 2H); HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) R_t 2,64 min (100%).

416

Příklad 434

Tri-maleát TVÍ-(4-{4-amino-l-[1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lJT-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-benzo[h]furan-2-karboxamid

Benzo[A]furan-2-karbonylchlorid

Suspenze 2-benzofurankarboxylové kyseliny (0,746 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se třepe po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství benzo[ň]furan-2-karbonylchloridu. Olej se použije přímo v následující reakci.

Tri-maleát VI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 V-pyrazolo [3,4íZJpyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-benzo[ó]furan-2-karboxamidu

Roztok 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] 17T-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem benzo[ň]furan-2-karbonylchloridu (0,415 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut pri teplotě 5°C, pak se lázeň ze suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá benzo [ň]furan-2-karbonylchlorid (0,207 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin, přidá se (1 N) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vl-(4-{4-amin-l-[l-(l-methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl]-lT/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl))-benzo[ň]furan-2karboxamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,143 g (21%) čistého VI-(4-{4amino-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl))-benzo[ů]furan-2-karboxamidu. Horký roztok Vl-(4-{4-amino-l-[l-(lmethylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l/T-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl))-benzo[ň]furan-2-karboxamidu (0,143 g, 0,246 mmol) v ethylacetátu se • · · ······ · · · • · · · · · · · · ···· · · · · · · · • ······· · ··· ····· • · · ·· ·· · * ·

417 nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,086 g, 0,739) v ethylacetátu, precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá tri-maleát VI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-benzo [ó]furan-2-karboxamidu.

‘H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,518 (s, 1H), 8,282 (s, 1H), 8,2652-8,2447 (d, 1H, J =

8,2 Hz), 7,849-7,814 (m, 2H), 7,7813-7,7603 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,562-7,523 (m, 1H), 7,418-7,369 (m, 2H), 7,338-7,313 (m, 1H), 6,088 (s, 5H), 5,10-5,00 (m, 1H), 4,003 (s, 3H),

3,529 (m, 4H), 3,314 (m, 2H), 2,971 (m, 2H), 2,778 (s, 3H), 2,497 (m, 3H), 2,209 (m, 4H),

1,909 (m, 2H);

HPLC Perkin Elmer Pecosphere C18, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%. LCMS (Sloupec Perkin Elmer, Pecosphere Cl8, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) R_t 2,73 min (100%).

Příklad 435

Tri-maleát VI-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 //-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-(35)-3 -fenylbutanamid (3S)-3-fenylbutanoylchlorid

Roztok S-3-fenylbutyrové kyseliny (0,755 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se třepe po dobu 15 hodin při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Reakční směs se třepe po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství (3S)-3fenylbutanoylchlorid. Olej se použije přímo v následující reakci.

Tri-maleát VI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(3V)-3-fenylbutanamid

Roztok 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem (3S)-3-fenylbutanoylchloridu (0,420 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se lázeň ze suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou • » · ······ ·· · • ·· · ··· ···· ·· · ···· • ······· · ··· · · · · ·· · «··· ·· · • · 4 ·· ·· ·· ·

418 dusíku. Do reakční směsi se přidá (3S)-3-fenylbutanoylchlorid (0,210 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se (IN) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlakua přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Al-(4-{4-amino-1-[1-(1-methylpiperidin-4y l)piperidin-4-y 1 ] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-(3S)-3 fenylbutanamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,455 g (68%) čistého Al -(4- {4-amino-1 - [l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl} -2-methoxy fenyl)-(3S)-3-feny lbutanamidu. Horký roztok Al-(4-{4aminol- [l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 //-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-3-y 1} -2methoxy feny 1)-(30)-3-fenylbutanamidu (0,455 g, 0,782 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,272 g, 2,35) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá tri-maleát Al-(4-{4amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-y 1] -1 //-pyrazolo[3,4-</]py rimidi n-3 -yl} -2methoxyfenyl)-(3S)-3-fenylbutanamidu.

’H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 9,199 (s, 1H), 8,261 (s, 1H), 8,1733-8,1528 (d, 1H, J =

8,2 Hz), 7,312-7,282 (m, 4H), 7,236-7,232 (m, 1H), 7,211-7,168 (m, 2H), 6,094 (s, 6H), 5,046 (m, 1H), 3,890 (s, 3H), 3,534 (m, 4H), 2,994 (m, 2H), 2,784-2,740 (m, 6H), 2,5062,470 (m, 8H), 2,442-2,200 (m, 4H), 1,855 (m, 2H);

HPLC Perkin Elmer Pecosphere Cl8, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, C3éH₄₄NéO3 (581,2), 95%. LCMS (Sloupec Perkin Elmer, Pecosphere Cl8, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) R_t 2,64 min (100%).

Příklad 436

Jerc-butyl-A-(4-{ 4-amino-l-[4-nitrofenyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)karbamát

4-Amino-1 - [4-nitrofenyl] -3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin • ·

419

Suspenze 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (2,00 g, 7,66 mmol) v dimethylformamidu (40 ml) se nechá reagovat s uhličitanem česným (3,74 g, 11,49 mmol) ap-fluomitrobenzenem (1,08 g, 7,66 mmol). Reakční směs míchá při teplotě 80°C po dobu 5 hodin pod atmosférou dusíku. Reakční směs nalije na led. Precipitát se filtruje a promyje vodou, produkt, 4-amino-l-[4-nitrofenyl]-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin, se suší v lyofilizátoru přes noc, čímž se získá 2,55 g (87%).

‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,4952-8,4720 (m, 2H), 8,4142-8,3654 (m, 3H);

LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 ml/min), t_R = 3,73 min (100%) MH⁺ 380,6.

7erc-butyl - V-(4- {4-amino-l- [4-nitrofenyl]-1 //-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)karbamát

Suspenze 4-amino-l-[4-nitrofenyl]-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-Z]pyrimidinu (0,500 g, 1,31 mmol) v dimethylformamidu (8 ml) se nechá reagovat s fórc-butyl-V-[2-methoxy-4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátem (0,915 g, 2,62 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladiem (0,091 g, 0,06 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,333 g, 3,14 mmol) ve vodě (4 ml). Reakční směs míchá při teplotě 85°C po dobu 26 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá voda, precipitát se filtruje a promyje vodou, pevný podíl se trituruje diethyletherem, čímž se získá 0,431 g (63%) tercbutyl-V-(4- {4-amino-1 - [4-nitrofenyl] -1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -yl]-2methoxyfenyl)karbamát.

‘H NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 8,6862-8,6634 (d, 2H, J = 9,12 Hz), 8,4897-8,4423 (m, 3H), 8,1117 (s, IH), 8,0074-7,9872 (d, IH, J = 8,08 Hz), 7,3743-7,3293 (m, 2H), 3,9189 (s, 3H), 1,4959 (s, 9H);

LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) t_R = 4,38 min MH⁺ 478,1.

Příklad 437

4-Amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-nitrofenyl]-l//-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin • · • · · • · · · ·

420

Suspenze /erc-buty l-A-(4-{4-amino-1 -[4-nitrofenyl]-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)karbamátu (0,386 g, 0,808 mmol) v dichlormethanu (8 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s trifluoroctovou kyselinou (1,6 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě 0°C, pak se ledová lázeň odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Reakční směs se míchá po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Kolejovitému zbytku se přidá dichlormethan (15 ml) a hydroxid sodný, vzniklý precipitát se filtruje a suší přes noc v lyofilizátoru, čímž se získá 0,286 g (94%) 4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-nitrofenyl]-lA-pyrazolo[3,4ďjpyrimidinu.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,7826-8,759 (m, 2H), 8,48928,4296 (m, 3H), 7,18617,1338 (m, 2H), 6,8320-6,8121 (d, ÍH, J = 7,96 Hz), 5,2225 (s, 2H), 3,8672 (s, 3H);

LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 ml/min), t_R = 3,48 min, MH⁺ 377,6.

Příklad 438

Di-maleát Al -(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamidu 1-Methyl-1 A-2-indolkarbonylchlorid

Suspenze l-methylindol-2-karboxylové kyseliny (0,805 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se třepe po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství 1-methyl-ΙΑ-2-indolkarbonylchloridu a olej se použije přímo v následující reakci.

Di-maleát Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl))-l-methyl-1 A-2-indolkarboxamidu

Roztok 3 -(4-amino-3 -methoxy fenyl)-1 - [l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě

-5°C se nechá reagovat s roztokem l-methyl-lA-2-indolkarbonylchloridu (0,445 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se lázeň ze suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou

421 dusíku. Do reakční směsi se přidá 1 -methyl-1//-2-indolkarbonylchlorid (0,221 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se (IN) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl] -1 A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxyfenyl))-1 -methyl-1H-2indolkarboxamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,463 g (68%) čistého Al -(4- {4-amino-l-[l-( 1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl))-l-methyl-lA-2-indolkarboxamidu. Horký roztok Al-(4-{4-amino1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl))-l-methyl-lA-2-indolkarboxamidu (0,463 g, 0,781 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,272,2,34 mmol) v ethylacetátu precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá di-maleát Al -(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-lA-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl))-1-methyl-ΙΑ-2-indolkarboxamidu.

’H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 9,4495 (s, IH), 8,2848 (s, IH), 8,1505-8,1301 (d, IH, J = 8,16 Hz), 7,7232-7,7034 (d, IH, J = 7,92 Hz), 7,6054-7,5844 (d, IH, J = 8,4 Hz), 7,35837,3012 (m, 4H), 7,1778-7,1406 (m, IH), 6,0804 (s, 4H), 5,10-5,00 (m, IH), 4,0403 (s, 3H), 3,9614 (s, 3H), 3,5336 (m, 4H), 3,1879 (m, 2H), 2,9937 (m, 2H), 2,7836 (s, 3H), 2,4979 (m, 3H), 2,2157 (m, 4H), 1,8513 (m, 2H);

HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný až acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%. LCMS (Sloupec Perkin Elmer, Pecosphere 08, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) R_t 2,76 min (100%).

Příklad 439

Di-maleát Al -(4- {4-amino-l-[l-(l -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1 A-2-indolkarboxamidu • · · ·

422

A-2-indolkarbony lchlorid

Suspenze indol-2-karboxylové kyseliny (0,742 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se třepe po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství 1A-2indolkarbonylchloridu. Olej se použije přímo v následující reakci.

Di-maleát NI-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4úQpyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1 A-2-indolkarboxamidu

Roztok 3 -(4-amino-3 -methoxy fenyl)-1 - [l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] lA-pyrazolo[3,4-/Z]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem ΙΑ-2-indolkarbonylchloridu (0,413 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (1 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C. Lázeň ze suchého ledu se odstraní a reakční směs míchá po dobu 18 hodin pod atmosférou dusíku. Přidá se ΙΑ-2-indolkarbonylchlorid (0,207 g, 1,15 mmol) a směs se míchá další 2 hodiny. Přidá se (IN) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá po dobu 30 minut. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (25 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá surový VI-(4-{4-amino-1-[1-(1-methylpiperidin-4y l)piperidin-4-y 1] -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1A-2indolkarboxamid. 1 V-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1Apyrazolo [3,4-//]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1 A-2-indolkarboxamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 15 % (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu, čímž se získá surový produkt. Druhou chromatografií gradientem 10% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) až 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) se získá 0,139 g (21%) čistý Vl-(4-{4-amino-l[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl} -2methoxy fenyl))-1 A-2-indolkarboxamid. VI -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4y 1 )piperidin-4-y 1] -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1A-2indolkarboxamid (0,139 g, 0,24 mmol) v horkém ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0, 083 g, 0,719 mmol) v ethylacetátu. Vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku, čímž se získá 0,166 g di-maleátu Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l• · • · ·

423 methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 A-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3 -yl} -2methoxy feny 1))-1A-2 -indolkarboxamidu.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,83 (s, ÍH), 9,442 (s, ÍH), 8,283 (s, ÍH), 8,154-8,134 (d, ÍH, J = 8,12 Hz), 7,694-7,674 (d, ÍH, J = 8, 04 Hz), 7,498-7,477 (d, ÍH, J = 8,20 Hz), 7,407-7,402 (m, ÍH), 7,352-7,325 (m, 2H), 7,267-7,229 (m, ÍH), 7,112-7,074 (m, ÍH), 6,078 (s, 4H), 5,10-5,00 (m, ÍH), 3,974 (s, 3H), 3,525 (m, 4H), 3,178 (m, 2H), 2,975 (m, 2H), 2,771 (s, 3H), 2,457 (s, 3H), 2,208 (m, 4H), 1,909 (m, 2H);

HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm , 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%.

LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 ml/min) R_t 2,67 min (100%).

Příklad 440

3-Fenyl-1-trityl-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin

- Jod-1 -trityl-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Suspenze 3-jod-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (3,0 g, 11,5 mmol) v dimethylformamidu (50 ml) se nechá reagovat s uhličitanem česným (5,62 g, 17,25 mmol) a trifenylmethylchloridem (3,85 g, 13,8 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 70°C po dobu 22,5 hodiny pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá uhličitan česný (3,75 g, 11,5 mmol) a trifenylmethylchlorid (3,2 g, 11,5 mmol) a směs se míchá po dobu 6,5 hodiny. Reakční směs se nalije do ledové vody, precipitát se filtruje a promyje vodou, produkt, 3-jod-l-trityl-l A-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-4-amin, se suší přes noc v lyofilizátoru. Výsledný pevný podíl se trituruje ethylacetátem, čímž se získá 3,05 g (53%) 3 -j od-1 -trityl-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu.

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 7,3190-7,1106 (m, 16H); TLC (Baker Pre-coated Hard Layer Silikagel TLC plates, S125OF254, 30% ethylacetát v heptanu) Rf = 0,33.

-F enyl-l-trityl-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

Roztok 3 -jod-l-trityl-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (1,0 g, 1,99 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) se nechá reagovat s fenylboritou kyselinou (0,485 g, 3,8 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,138 g, 0,119 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0, 506g, 4,78 mmol) ve vodě (10 ml). Reakční směs se míchá při teplotě 80°C po • · · · · · ··· ···· * · · · · · · • ······· · ··· ···· ·· · ·· ·· · · ·

424 dobu 18,5 hodiny pod atmosférou dusíku. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a přidá se voda (15 ml), precipitát se filtruje a promyje vodou, surový pevný podíl se trituruje diethyletherem (30 ml). Výsledný pevný podíl se suší přes noc v lyofilizátoru, čímž se získá 0,407 g (45%) 3-fenyl-l-trityl-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu.

^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 7,9416 (s, 1H), 7,6190-7,6011 (m, 2H), 7,5369-7,4493 (m, 3H), 7,3995-7,2248 (m, 15H); HPLC Waters 2690 Alliance HPLC (Symmetry Shield RP, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut,

0,5 ml/min) R_t = 11,813 min (97%).

Příklad 441 /Vl-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl} -(37?)-3-fenylbutanamid (3R)-3-Fenylbutanoylchlorid (2,22 g, 12,18 mmol) v dichlormethanu (10 ml) se přidá do roztoku 4-[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl]-l-cyklohexanonu (2,86 g, 8,12 mmol) v pyridinu (50 ml) při teplotě -10°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc, přidá se hydroxid sodný (1,0 N, 15 ml) a organické rozpouštědlo se zahušťuje, vodný zbytek extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSCL, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlromethan/methanol (95:5) jako mobilní fáze, čímž se získá /Vl-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-(3R)-3-fenylbutanamid (3,11 g, 77%).

*H NMR (CDC1₃) δ 1,40 (d, J - 6,97 Hz, 3H), 2,04 (m, 1 H), 2,59-2,78 (m, 9H), 3,40 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 5,28 (m, 1H), 5,70 (bs, 2H), 7,15-7, 35 (m, 7H), 7,66 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,51 (d, J = 8,18, 1H).

HPLC (Waters Alliance-Sloupec: Waters SymmetryShield, RPis, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm, eluenty: 5% B/A až 95% B/A v 9,0 minut, (B: acetonitril, A: 100 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,5 ml/min): R_t = 6,273 min.

Příklad 442 {4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]fenyl}methanol « ·

425

a) 4- [4-Amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -y ljbenzaldehyd

3-(4-Fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (2,0 g, 6,59 mmol) se smíchá s 4-fluorbenzaldehydem (1,06 ml, 9,89 mmol), uhličitanem česným (4,30 g, 13,19 mmol) v DMF (6 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 86°C přes noc. Po ochlazení na pokojovou teplotu se reakční směs nalije do ledové vody a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá 4-[4-amino-3-(4-fenoxy feny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-l-yl] benzaldehydem (2, 46g, 92%).

^!H NMR (CDCfi) δ 7,19 (m, 5H), 7,46 (m, 2H), 7,78 (d, J = 8,64 Hz, 2H), 8,10 (d,

J = 8,70 Hz, 2H), 8,44 (s, 1H), 8,59 (d, J = 8,70 Hz, 2H), 10,03 (s, 1H).

b) {4- [4-Amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl] fenyl} methanol

Borohydrid sodný (19 mg, 0,491 mmol) se přidá do roztoku 4-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]benzaldehydu (100 mg, 0,245 mmol) v methanolu (2 ml). Po 16 hodinách se přidá THF (1 ml) a další borohydrid sodný (19 mg, 0,491 mmol). Po 5 hodinách se rozpouštědlo odstraní, přidá se voda a vodná vrstva se extrahuje dichlormathanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSCL, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/dichlormethan (80:20 až 100:0) jako mobilní fáze, čímž se získá {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]fenyl} methanol (36 mg, 36 %).

’H NMR (DMSO-dé) δ 4,56 (s, 2H), 5,27 (bs, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,47 (m, 4H), 7,76 (d, J = 8,64 Hz, 2H), 8,18 (d, J = 8,52,2H), 8,37 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec : Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ =410,1, R_t = 2,43 min.

Příklad 443

- {4- [(4-Methy lpiperazino)methyl] fenyl} -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin

Do směsi 4- [4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 yl]benzaldehydu (100 mg, 0,245 mmol), 4-methylpiperazinu (37 mg, 0,369 mmol), ledové kyseliny octové (35 mg, 0,589 mmol) v dichlorethanu (4 ml) se přidá triacetoxyborohydrid

426 sodný (67 mg, 0,319 mmol). Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc, pak se přidá další triacetoxyborohydrid sodný (67 mg, 0,319 mmol) a reakční směs se míchá znovu přes noc. Přidá se voda (2 ml), poté uhličitan sodný (250 mg). Po intenzivním míchání po dobu 1 hodiny se vrstvy separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlromethan/methanol (97:3 až 80:20) jako mobilní fáze, čímž se získá l-{4-[(4-methylpiperazino)methyl]fenyl}3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (25 mg, 21%).

'H NMR (DMSO-dé) δ 2,30 (s, 3H), 2,48 (bm, 8H), 3,56 (s, 3H), 5,75 (bs, 2H), 7,11 (d, J = 8,50, 2H), 7,18 (m, 3H), 7,40 (m, 2H), 7,48 (d, J = 8,50 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 8,63 Hz, 2H), 8,12 (d, J = 8,50 Hz, 2H), 8,47 (s, 1H).

LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ = 492, 2, R_t = 2,97 min.

Příklad 444

7erc-butyl-_JV-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -5 -fluor-2-methoxyfenyl)karbamát

a) 1 -Brom-2-fluor-5-methoxy-4-nitrobenzen

Do methanolu (1,54 ml, 38,0 mmol) v THF (30 ml) při teplotě 0°C se přidá tercbutoxid draselný (1,0 N v THF, 38 ml, 38 mmol). Po 30 minutách se kalný roztok převede kanylou do roztoku l-brom-2,5-difluor-4-nitrobenzenu (9,04g, 38,0 mmol) v THF (27 ml) o teplotě -78°C. Po 30 minutách se chladicí lázeň odstraní a reakční směs se nechá ohřát na teplotu 0°C. Po 10 minutách se přidá voda (250 ml). Organické rozpouštědlo se odstraní. Pevný podíl spojí filtrací, čímž se získá l-brom-2-fluor-5-methoxy-4-nitrobenzen (9,28 g, 98%).

^lH NMR (CDC1₃) δ 3,97 (s, 3H), 7,30 (d, J = 5,48 Hz, 2H), 7,71 (d, J = 7,58 Hz, 2H).

b) 4-Brom-5-fluor-2-methoxy anilin

Ve 3 podílech se kyselý siřičitan sodný (14,7 g, 84,4 mmol) přidá do roztoku l-brom-2-fluor-5-methoxy-4-nitrobenzenu (9,28 g, 37,12 mmol) v ethanolu (180 ml) a vodě (130 ml) při teplotě 80°C. Po 5 hodinách se organické rozpouštědlo odstraní a pevný ··· ······ Β · · ··· · · · · · Β • · · · Β Β · ···· • ······· · Β · · · · · · • Β · Β Β · Β Β · · • » « ·· ΒΒ Β · ·

427 podíl ve vodné vrstvě se spojí filtrací, dále promyje směsí heptanu a ethylacetátu (3:2, 400 ml), filtrát se zahušťuje, čímž se získá 4-brom-5-fluor-2-methoxyanilin (3,29 g, 40%).

*H NMR (DMSO-de) δ 3,75 (s, 3H), 5,22 (s, 2H), 6,56 (d, J = 10,68 Hz, 2H), 6,94 (d, J =

6,57 Hz, 2H).

c) 7erc-butyl-/V-(4-brom-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát

Di-řerc-butyldikarbonát (3,42 g, 15,70 mmol) se smíchá s 4-brom-5-fluor-2methoxyanilinem (3,29 g, 14,95 mmol) v THF (30 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 65°C po dobu 3 dnů, přičemž každý den se přidává di-řerc-butyl-dikarbonát (3,42 g, 15,70 mmol). Po odstranění rozpouštědla se zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi heptan/ethylacetát (95:5 až 85:15) jako mobilní fáze, čímž se získá směs požadovaného produktu /erc-butyl-N-(4-brom-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamátu a di-terc-butyl-dikarbonátu (10,4 g). Do směsi v methanolu (30ml) při teplotě 0°C se přidá hydroxid sodný (50% roztok, 2,0 ml) a reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Po odstranění rozpouštědla se přidá voda a vodná vrstva se extrahuje heptanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje, čímž se získá Zerc-butyl-N-(4-brom-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát (4,24 g, 89%).

*H NMR (CDC1₃) δ 1,52 (s, 9H), 3,85 (s, 3H), 6,93 (d, J = 6,10 Hz, 1H), 7,06 (s, 1H), 8,01 (d, J= 10,4 Hz, 1H).

d) 7erc-butyl-N-[5-fluor-2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát

7erc-butyl-7V-(4-brom-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát (4,24 g, 13,26 mmol), diboron-pinakolester (4,04 g, 15, 91 mmol), octan draselný (3,90 g, 39,78 mmol) a [1,1’bis(difenylfosfino)-fenOcen)dichlorpalladnatý komplex s dichlormethanem (0,32 g, 0,40 mmol) v DMF (75 ml) se zahřívají při teplotě 85°C přes noc. Přidá se další podíl diboronpinakolesteru (2,02 g, 7,96 mmol) a [l,l'-bis(difenylfosfíno)ferrocen)dichlorpalladnatého (II) komplexu s dichlormethanem (0,32 g, 0,40 mmol) a v zahřívání se pokračuje dalších 5 hodin. Po odstranění rozpouštědla se černý zbytek rozpustí v dichlormethanu a filtruje přes Celit. Surová směs se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi heptan/ethylacetát (95:5 až 85:15) jako mobilní fáze, čímž se získá směs terc-butyl-N-[5-fluor-2-methoxy-4-(4,4,5,5• · ···· · · · · ♦ *· · • ······· · ··· ···· ·· · · · ·· · · ·

428 tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu a diboron-pinakolesteru (1:1 poměr,

4,23 g), která se použije v následující reakci bez další purifikace.

e) Trans-terc-butyl-N-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3-yl} -5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát

7A/tt,s-3-lodo-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin4-amin (0,60 g, 1,36 mmol), fórc-butyl-/V-[5-fluor-2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (1,0 g, 2,72 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (0,094 g, 0,082mmol) a uhličitan sodný (0,35 g, 3,27 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (14 ml) a vodou (7 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5 až 70:30) jako mobilní fáze, čímž se získá /ra«.s-/erc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát (0,264 g, 35%).

’H NMR (DMSO-de) δ 1,49 (s, 9H), 1,97 (m, 6H), 2,16 (s, 3H), 2,33 (m, 5H), 2,53 (m,

4H), 3,84 (s, 3H), 4,64 (m, IH), 7,60 (d, J = 6,78 Hz, IH), 7,83 (d, J = 11,96 Hz, IH), 8,20 (s, IH), 8,24 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLCsloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ =555, 3, R_t =

2,00 min.

Příklad 445

Am?.s-3-(4-amino-2-fluor-5-methoxyťenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo [3,4-č/]py ri midin-4-amin

Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 7 ml) se přidá do roztoku /razj5-/erc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamátu (250 mg, 0,451 mmol) v dichlormethanu (4,0 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se pak zahušťuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. K upravení pH na 8 se přidá nasycený roztok • 9 · 99 9999 99 9 • •9 99 9 999 · * 9 99 · 9 9 * 9 ······· 9 999 9 9 9 9

9 99 99 99 9

429 hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSOj, filtruje a zahušťuje, čímž se získá trans-3-(4-amino-2-fluor-5-methoxy feny l)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (179 mg, 87%).

*H NMR (CDC1₃) δ 1,56 (m, 2H), 2,15 (m, 7H), 2,31 (s, 3H), 2,51 (m, 4H), 2,67 (m, 4H),

3,88 (s, 3H), 4,16 (bs, 2H), 4,74 (m, IH), 5,64 (bs, 2H), 6,56 (d, J = 10,84 Hz, IH), 6,88 (d,

J = 6,55 Hz, IH), 8,33 (s, IH).

LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ =455,2, R_t = 0,63 min.

Příklad 446

Trans-Ni -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)-/ran.s'-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid

7ra/«'-2-fenyl-l-cyklopropankarbonylchlorid (32 mg, 0,176 mmol) v dichlormethanu (0,3 ml) se přidá do roztoku řrans-3-(4-ammo-2-fluor-5-methoxyfeny 1)-1[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (80 mg, 0,176 mmol) v pyridinu (1,5 ml) při teplotě 0°C. Po 5 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Přidá se další trans-2-tenyi-1 cyklopropankarbonylchlorid (32 mg, 0,176 mmol) k dotažení reakce. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, čímž se získá trans-Ni -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} -5 -fluor-2-methoxyfenyl)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid (93 mg, 88%).

*H NMR (DMSO-dó) δ 1,35 (m, IH), 1,50 (m, 3H), 1,98 (m, 6H), 2,19 (s, 3H), 2,37-2,68 (m, 11H), 3,87 (s, 3H), 4,64 (m, IH), 7,09 (m, IH), 7,21 (m, 3H), 7,31 (m, 2H), 8,21 (m,

2H), 9,82 (m, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ = 599,3, R_t =

1,97 min.

« φ φφφ· φ · « φ · • · * · φ φ φ ···«··· φ

430

Příklad 447

Terc-buty 1-/V- {4- [4-amino-1-(1 -methyl-4-piperidyl)-1//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3 -yl] -2methoxy feny 1} karbamát

a) 3 -Jod-l-( 1 -methyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

3-Jod-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-4-amin (0,5 g, 1,45 mmol), formaldehyd (30% ve vodě, 0,16 ml, 1,60 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,43 g, 2,03 mmol) se smíchají v dichlorethanu (5 ml). Po 4 hodinách se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného, poté hydroxid sodný (1,0 N) k upravení pH na 10, vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSCU, filtruje a zahušťuje, čímž se získá 3-jod-1-(1-methyl-4-piperidy 1)-1//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,275 g, 53%).

'H NMR (DMSO-de) δ 1,85 (m, 2H), 2,09 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,88 (m, 2H), 4,75 (m, IH), 8,19 (s, IH), 8,32 (s, IH).

b) 7erc-butyl-/V-{4-[4-amino-l-(1 -methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]2-methoxyfenyl} karbamát

- Jod-l-( 1 -methyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin (270 mg, 0,754 mmol), terc-butyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát (290 mg, 0,829 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (52 mg, 0,045 mmol) a uhličitan sodný (192 mg, 1,81 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (8 ml) a vodou (4 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (90:10 až 70:30) jako mobilní fáze, čímž se získá /erobutyl-V-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}karbamát (250 mg, 73%).

^!H NMR (DMSO-dé) δ 1,48 (s, 9H), 1,88 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,24 (m, 5H), 2,92 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 4,64 (m, IH), 7,21 (m, 2H), 7,91 (d, J = 8,16 Hz, IH), 8,04 (s, IH), 8,23 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺= 454,2, R_t = 1,67 minut.

• · · • · · • · · · • 9 9 *

431

Příklad 448

Tri-maleát Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l A-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(3/?)-3-fenylbutanamidu (3/?)-3-fenylbutanoylchlorid

Tri-maleát Al -(4-{4-amino-1 -[l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(3Á)-3-fenylbutanamidu

Roztok 3 -(4-amino-3 -methoxy feny 1)-1- [l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] 1 A-pyrazolo[3,4-í/lpyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem (37?)-3-fenylbutanoylchloridu (0,420 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se lázeň ze suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá (3R)-3-fenylbutanoylchlorid (0,210 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se (IN) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku.

Al -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(3/?)-3-fenylbutanamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,378 g (57%) čistého lA-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl]-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(3/?)-3fenylbutanamidu. Horký roztok Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4• · «· · • « · · 9 · · · <

··«'» ·· · ·«*'· • ··*···· · 9 · · ···· • · · · · · · · * 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

432 yl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(3/?)-3-fenylbutanamidu (0,378 g, 0,649 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,226 g, 1,95 mmol) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá tri-maleát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl]-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(3R)-3fenylbutanamidu.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,200 (s, ÍH), 8,263 (s, ÍH), 8,1747-8,1543 (d, ÍH, J =

8,16 Hz), 7,312-7,282 (m, 4H), 7,235-7,232 (s, ÍH), 7,211-7,168 (m, 2H), 6,114 (s, 6H),

5,061 (m, ÍH), 3,890 (s, 3H), 3,301 (m, 4H), 2,997 (m, 2H), 2,783-2,741 (m, 6H), 2,541 (m, 8 H), 2,261-2,185 (m, 4H), 1,879 (m, 2H); HPLC Perkin Elmer Pecosphere Cl8, 3 pm, x 4,6, 3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 ml/min) R_t 2,64 min (100%).

Příklad 449

Tri-maleát VI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo [3,4pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-benzo[/?]furan-2-karboxamid

Benzo[Z?]furan-2-karbonylchlorid

Suspenze 2-benzofurankarboxylové kyseliny (0,746 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se třepe po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství benzo[6]furan-2-karbonylchloridu. Olej se použije přímo v následující reakci.

Tri-maleát VI-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-benzo[6]furan-2-karboxamidu

Roztok 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem benzo[6]furan-2-karbonylchloridu (0,415 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě 5°C, pak se lázeň ze suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou • · · · · · · • t · · · · · · » * · • ······· · ··· ···· ·· · ·· · · ·* ·

433 dusíku. Do reakční směsi se přidá benzo[ó]furan-2-karbonylchlorid (0,207 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se (IN) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4y l)piperidin-4-y 1] -1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-benzo [A] furan-2karboxamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,143 g (21%) čistého lV-(4-{4amino- 1- [l-( 1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl))-benzo[ů]furan-2-karboxamidu. Horký roztok Vl-(4-{4-amino-l-[l-(lmethylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl))-benzo[ů]furan-2-karboxamidu (0,143 g, 0,246 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,086 g, 0,739) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá tri-maleát Vl-(4-{4amino-1 -[1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-benzo[ů]furan-2-karboxamidu.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,518 (s, 1H), 8,282 (s, 1H), 8,2652-8,2447 (d, 1H, J =

8, 2 Hz), 7,849-7,814 (m, 2H), 7,7813-7,7603 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,562-7,523 (m, 1H), 7,418-7,369 (m, 2H), 7,338-7,313 (m, 1H), 6,088 (s, 5H), 5,10-5,00 (m, 1H), 4,003 (s, 3H),

1,909 (m, 2H);

HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min -100% 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v 4,5 minutách, Ο₃₆Η₄₄Ν₆Ο₃ (581,2), 95%. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) R_t 2,73 min (100%).

434

Příklad 450

Tri-maleát Al -(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(35)-3-fenylbutanamidu (35)-3-fenylbutanoylchlorid

Roztok S-3-fenylbutyrové kyseliny (0,755 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se třepe po dobu 15 hodin při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Reakční směs se třepe po dobu 15 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství (35)-3fenylbutanoylchloridu. Olej se použije přímo v následující reakci.

Tri-maleát Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(3S)-3-fenylbutanamidu

Roztok 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem (35)-3-fenylbutanoylchloridu (0,420 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se lázeň ze suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá (35)-3-fenylbutanoylchlorid (0,210 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se (IN) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Al-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-(35)-3 fenylbutanamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,455 g (68%) čistého Al -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(35)-3-fenylbutanamidu. Horký roztok Al-(4-{4amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl} -2• · ·

435 methoxyfenyl)-(3S)-3-fenylbutanamidu (0,455 g, 0,782 mmol) v ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,272 g, 2,35) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá tri-maleát Al-(4-{4amino-1 -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl)-(3S)-3-fenylbutanamidu.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,199 (s, 1H), 8,261 (s, 1H), 8,1733-8,1528 (d, 1H, J = 8, 2 Hz), 7,312-7,282 (m, 4H), 7,236-7,232 (m, 1H), 7,211-7,168 (m, 2H), 6,094 (s, 6H), 5,046 (m, 1H), 3,890 (s, 3H), 3,534 (m, 4H), 2,994 (m, 2H), 2,784-2,740 (m, 6H), 2,5062,470 (m, 8H), 2,442-2,200 (m, 4H), 1,855 (m, 2H);

HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) R_t 2,64 min (100%).

Příklad 451

Arc-buty l-A-(4- {4-amino-l- [4-nitrofenyl]-lA-pyrazolo [3,4-/Z]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)karbamát

4-Amino-1 -[4-nitrofenyl] -3 -j od-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin

Suspenze 3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidin-4-aminu (2,00 g, 7,66 mmol) v dimethylformamidu (40 ml) se nechá reagovat s uhličitanem česným (3,74 g, 11,49 mmol) a p-fluomitrobenzenem (1,08 g, 7,66 mmol). Reakční směs míchá při teplotě 80°C po dobu 5 hodin pod atmosférou dusíku, pak se nalije na led. Precipitát se filtruje a promyje vodou, produkt, 4-amino-l-[4-nitrofenyl]-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin, se suší v lyofilizátoru přes noc, čímž se získá 2,55 g (87%).

’H NMR (DMSO-de,400 MHz) δ 8,4952-8,4720 (m, 2H), 8,4142-8,3654 (m, 3H);

LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) ír = 3,73 minut (100%) MH⁺ 380,6.

Terc-butyl-A-(4- {4-amino-1 - [4-nitrofenyl]-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl)karbamát ···· · · · · * * · • ······· · ··· · «·· • · · · · · · ·· · • · · ·· ·· ·· ·

436

Suspenze 4-amino-l-[4-nitrofenyl]-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidinu (0,500 g,

1,31 mmol) v dimethylformamidu (8 ml) se nechá reagovat s řerc-butyl-V-[2-methoxy-4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátem (0,915 g, 2,62 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,091 g, 0,06 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,333 g, 3,14 mmol) ve vodě (4 ml). Reakční směs míchá při teplotě 85°C po dobu 26 hodin pod atmosférou dusíku, pak se do reakční směsi přidá voda. Precipitát se filtruje a promyje vodou, pevný podíl se trituruje diethyletherem, čímž se získá 0,431 g (63%) tercbutyl-V-(4- {4-amino-1 - [4-nitrofenyl] -1 A-pyrazolo [3,4 - A] py rimidin- 3 -yl} -2methoxyfenyl)karbamátu.

^!H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 8,6862-8,6634 (d, 2H, J = 9,12 Hz), 8,4897-8,4423 (m,

3H), 8,1117 (s, IH), 8,0074-7, 9872 (d, IH, J = 8,08 Hz), 7,3743-7,3293 (m, 2H), 3,9189 (s, 3H), 1,4959 (s, 9H); LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) ír = 4,38 minut, MH⁺ 478,1.

Příklad 452

4-Amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-nitrofenyl]-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin

Suspenze /erc-butyl-A-(4-{4-amino-l-[4-nitrofenyl]-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)karbamátu (0,386 g, 0,808 mmol) v dichlormethanu (8 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s trifluoroctovou kyselinou (1,6 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě 0°C, pak se ledová lázeň odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Reakční směs se míchá po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Kolejovému zbytku se přidá dichlormethan (15 ml) a IN roztok hydroxidu sodného. Vzniklý precipitát se filtruje a suší přes noc v lyofilizátoru, čímž se získá 0,286 g (94%) 4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-nitrofenyl]-lApyrazolo [3,4-í/]pyrimidinu.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,7826-8,759 (m, 2H), 8,4892-8,4296 (m, 3H), 7,18617,1338 (m, 2H), 6,8320-6,8121 (d, IH, J = 7,96 Hz), 5,2225 (s, 2H), 3,8672 (s, 3H); LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) ír = 3,48 min MF 377,6.

437

Příklad 453

Di-maleát VI -(4-{4-amino-1 - [1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1//-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu 1-Methyl-1 //-2-indolkarbonylchlorid

Suspenze l-methylindol-2-karboxylové kyseliny (0,805 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se třepe po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství 1 -methyl-l//-2-indolkarbonylchloridu. Olej se použije přímo v následující reakci.

Di-maleát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu

Roztok 3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] lZ/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem 1-methyl-l//-2-indolkarbonylchloridu (0,445 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (3 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, pak se lázeň ze suchého ledu odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá 1-methyl-1//-2-indolkarbonylchlorid (0,221 g, 1,15 mmol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Přidá se (IN) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (20 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (125 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1 -methyl-1H-2indolkarboxamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 15% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (10 min), 20% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (15 min), 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu (7 min), čímž se získá 0,463 g (68%) čistého VI -(4- {4-amino-1 - [l-( 1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1 //-pyrazolo-3,4-pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl))-1-methyl-1//-2-indolkarboxamid. Horký roztok Vl-(4-{4-amino1 -[1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2methoxy-fenyl))-l-methyl-1//-2-indolkarboxamidu (0,463 g, 0,781 mmol) v ethylacetátu • · · · · · ·

438 se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,272,2,34 mmol) v ethylacetátu. Precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší v lyofilizátoru, čímž se získá di-maleát NI -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methy lpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] -1Hpyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxyfenyl))-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamidu.

Ή NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,4495 (s, 1H), 8,2848 (s, 1H), 8,1505-8,1301 (d, 1H, J = 8,16 Hz), 7,7232-7,7034 (d, 1H, J = 7,92 Hz), 7,6054-7,5844 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,35837,3012 (m, 4H), 7,1778-7,1406 (m, 1H), 6,0804 (s, 4H), 5,10-5,00 (m, 1H), 4,0403 (s, 3H), 3,9614 (s, 3H), 3,5336 (m, 4H), 3,1879 (m, 2H), 2,9937 (m, 2H), 2,7836 (s, 3H), 2,4979 (m, 3H), 2,2157 (m, 4H), 1,8513 (m, 2H);

HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581,2), 95%. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) R_t 2,76 min (100%).

Příklad 454

Di-maleát VI -(4-{4-amino-1 -[l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-1 A-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl))-1 A-2-indolkarboxamidu 1 V-2-indolkarbonylchlorid

Suspenze indol-2-karboxylové kyseliny (0,742 g, 4,6 mmol) v dichlormethanu (3 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (0,700 g, 5,52 mmol) a jednou kapkou dimethylformamidu. Reakční směs se třepe po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a suší za vysokého vakua, čímž se získá kvantitativní množství 1 A-2-indolkarbonylchloridu. Olej se použije přímo v následující reakci.

Di-maleát VI -(4-{4-amino-l-[l -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1 A-2-indolkarboxamidu

Roztok 3 -(4-amino-3 -methoxy fenyl)-1 - [l-( 1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl] 1 A-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,15 mmol) v pyridinu (8 ml) při teplotě -5°C se nechá reagovat s roztokem ΙΑ-2-indolkarbonylchloridu (0,413 g, 2,3 mmol) v dichlormethanu (1 ml). Reakční směs míchá po dobu 20 minut při teplotě -5°C, lázeň ze suchého ledu se odstraní a reakční směs míchá po dobu 18 hodin pod atmosférou dusíku.

• ·

439

Přidá se lV-2-indolkarbonylchlorid (0,207 g, 1,15 mmol) a směs se míchá další 2 hodiny. Přidá se (IN) roztok hydroxidu sodného (10 ml) a směs se míchá po dobu 30 minut. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (25 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a solankou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá surový Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l-methylpiperidin-4y 1 )piperidin-4-y 1 ] -1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-1H-2indolkarboxamid. VI -(4-{4-amino-l -[1 -(lmethylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-l Hpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl))-l V-2-indolkarboxamid se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 15 % (methanolu s 2% hydroxidem amonným) v dichlormethanu, čímž se získá surový produkt. Druhou chromatografií gradientem 10% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) až 50% (methanolu s 2% hydroxidem amonným) se získá 0,139 g (21%) čistého Vl-(4-{4-amino1 - [ 1 -(1 -methylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl))-177-2-indolkarboxamidu. VI -(4-{4-amino-l -[ 1 -(1 -methylpiperidin-4yl)piperidin-4-yl] -177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl))-177-2indolkarboxamid (0, 139 g, 0,24 mmol) v horkém ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,083 g, 0,719 mmol) v ethylacetátu . Vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku čímž se získá 0,166 g di-maleátu Vl-(4-{4-amino-l-[l-(lmethylpiperidin-4-yl)piperidin-4-yl]-177-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl))-177-2-indolkarboxamidu.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,83 (s, 1H), 9,442 (s, 1H), 8,283 (s, 1H), 8,154-8,134 (d, 1H, J = 8,12 Hz), 7,694-7,674 (d, 1H, J = 8,04 Hz), 7,498-7,477 (d, 1H, J = 8, 20 Hz), 7,407-7,402 (m, 1H), 7,352-7,325 (m, 2H), 7,267-7,229 (m, 1H), 7,112-7,074 (m, 1H), 6,078 (s, 4H), 5,10-5,00 (m, 1H), 3,974 (s, 3H), 3,525 (m, 4H), 3,178 (m, 2H), 2,975 (m, 2H), 2,771 (s, 3H), 2,457 (s, 3H), 2,208 (m, 4H), 1,909 (m, 2H); HPLC Perkin Elmer Pecosphere 08, 3 pm, 33 x 4,6, 3,5 ml/min 100-100% 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v 4,5 minutách, C36H44N6O3 (581, 2), 95%. LCMS (Perkin Elmer, Pecosphere 08 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 100 % 50 mM octan amonný ve vodě až 100% acetonitril v průběhu 5 minut, 3,0 až 3,5 mil/min) R_t 2,67 min (100%).

• · ·

440

Příklad 455

-Fenyl-1 -trityl-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin

- Jod-1 -trityl-1 //-pyrazolo [3,4 -d]py rimidin-4-amin

Suspenze 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-4-aminu (3,0 g, 11,5 mmol) v dimethylformamidu (50 ml) se nechá reagovat s uhličitanem česným (5,62 g, 17,25 mmol) a trifenylmethylchloridem (3,85 g, 13,8 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 70°C po dobu 22,5 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá uhličitan česný (3,75 g, 11,5 mmol) a trifenylmethylchlorid (3,2 g, 11,5 mmol) a směs se míchá po dobu 6,5 hodiny. Reakční směs se nalije do ledové vody, precipitát se filtruje a promyje vodou, produkt, 3-jod-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin, se suší přes noc v lyofilizátoru. Výsledný pevný podíl se trituruje ethylacetátem, čímž se získá 3,05 g (53%) 3-jod-1 -trityl-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu. *H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 7,3190-7,1106 (m, 16H); TLC (Baker Pre-coated Hard Layer Silikagel TLC plates, Si250F₂54, 30% ethylacetát v heptanu) Rf = 0,33.

-F enyl-1 -trityl-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

Roztok 3-jod-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (1,0 g, 1,99 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) se nechá reagovat s fenylboritou kyselinou (0,485 g, 3,8 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,138 g, 0,119 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,506g, 4,78 mmol) ve vodě (10 ml). Reakční směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 18,5 hodiny pod atmosférou dusíku. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a přidá se voda (15 ml). Precipitát se filtruje a promyje vodou. Surový pevný podíl se trituruje diethyletherem (30 ml). Výsledný pevný podíl se suší přes noc v lyofilizátoru, čímž se získá 0,407 g (45%) 3-fenyl-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,9416 (s, 1H), 7,6190-7,6011 (m, 2H), 7,5369-7,4493 (m, 3H), 7,3995-7,2248 (m, 15H); HPLC Waters 2690 Albánce HPLC (Symmetry Shield RPis 3,5 pm, 2,1 x 50 mm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 0,5 ml/min) R_t =11,813 min (97%).

• · ·

* « · · · ·

441

Příklad 456

Vl-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl} -(3 R)-3-fenylbutanamid (3R)-3-Fenylbutanoylchlorid (2,22 g, 12,18 mmol) v dichlormethanu (10 ml) se přidá do roztoku 4-[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-lyl]-l-cyklohexanonu (2,86 g, 8,12 mmol) v pyridinu (50 ml) při teplotě -10°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se hydroxid sodný (l,0N, 15 ml) a organické rozpouštědlo se zahušťuje. Vodný zbytek se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlromethan/methanol (95:5) jako mobilní fáze, čímž se získá VI - {4- [4-amino-1 -(4-oxocyklohexy 1)-1 77-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl] -2methoxyfenyl}-(3R)-3-fenylbutanamid (3,11 g, 77%).

^!H NMR (CDC1₃) δ 1,40 (d, J = 6,97 Hz, 3H), 2,04 (m, 1 H), 2,59-2,78 (m, 9H), 3,40 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 5,28 (m, 1H), 5,70 (bs, 2H), 7,15-7,35 (m, 7H), 7,66 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,51 (d, J = 8, 18,1H). HPLC (Waters Alliance-Sloupec: Waters SymmetryShield, RP18, 3,5 pm, 2,1 x 50 mm, eluenty: 5% B/A až 95% B/A v 9,0 minut,(B: acetonitril, A: 100 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,5 ml/min): R_t = 6, 273 min.

Příklad 457 {4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo [3,4-í(]pyrimidin-1 -yl]fenyl}methanol 4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfenyl)- 177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-1 -yljbenzaldehydem

3-(4-Fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidin-4-amin (2,0 g, 6,59 mmol) se smíchá s 4-fluorbenzaldehydem (1,06 ml, 9,89 mmol), uhličitanem česným (4,30 g, 13,19 mmol) v DMF (6 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 86°C přes noc. Po ochlazení na pokojovou teplotu se reakční směs nalije do ledové vody a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl-3benzaldehyd (2,46 g, 92%).

*H NMR (CDCb) δ 7,19 (m, 5H), 7,46 (m, 2H), 7,78 (d, J = 8,64 Hz, 2H), 8,10 (d, J = 8,70 Hz, 2H), 8,44 (s, 1H), 8,59 (d, J = 8,70Hz, 2H), 10,03 (s, 1H).

• ·

442

b) {4-[4-Amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl] fenyl} methanol

Borohydrid sodný (19 mg, 0,491 mmol) se přidá do roztoku 4-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]benzaldehydu (100 mg, 0,245 mmol) v methanolu (2 ml). Po 16 hodinách se přidá další THF (1 ml) a borohydrid sodný (19 mg, 0,491 mmol). Po 5 hodinách se rozpouštědlo odstraní a přidá se voda. Vodná vrstva se extrahuje dichlormathanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSCL, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/dichlormethan (80:20 až 100:0) jako mobilní fáze, čímž se získá {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl] fenyl {methanol (36 mg, 36 %).

*H NMR (DMSO-de) δ 4,56 (s, 2H), 5,27 (bs, 1H), 7,16 (m, 5H), 7,47 (m, 4H), 7,76 (d, J = 8,64 Hz, 2H), 8,18 (d, J = 8,52,2H), 8,37 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺= 410,1, R_t = 2,43 min.

Příklad 458

- {4- [(4-Methy lpiperazino)methyl]fenyl} -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 Z/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin

Triacetoxyborohydrid sodný (67 mg, 0,319 mmol) se přidá do směsi 4-[4-amino-3(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]benzaldehydu (100 mg, 0,245 mmol), 4-methylpiperazinu (37 mg, 0,369 mmol), ledové kyseliny octové (35 mg, 0,589 mmol) v dichlorethanu (4 ml). Po míchání při pokojové teplotě přes noc, se přidá další triacetoxyborohydrid sodný (67 mg, 0,319 mmol) a reakční směs se míchá přes noc. Přidá se voda (2 ml), poté uhličitan sodný (250 mg). Po 1 hodinovém intenzivním míchání se vrstvy separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSCL, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlromethan/methanol (97:3 až 80:20) jako mobilní fáze, čímž se získá l-{4-[(4-methylpiperazino)methyl]fenyl}-3-(4fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (25 mg, 21%).

*H NMR (DMSO-de) δ 2,30 (s, 3H), 2,48 (bm, 8H), 3,56 (s, 3H), 5,75 (bs, 2H), 7,11 (d, J =

8,50,2H), 7,18 (m, 3H), 7,40 (m, 2H), 7,48 (d, J = 8,50 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 8,63 Hz, 2H), ··· ·· · ··· ···· ·· · ···· • ·····*· · ··· · · · · ··· ···· ··· ·· · ·· ·· ·· ·

443

8,12 (d, J = 8,50 Hz, 2H), 8,47 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS,

Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95%

B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ = 492,2, R_t = 2,97 min.

Příklad 459

7erc-butyl-A-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3 -yl} -5 -fluor-2-methoxyfenyl)karbamát

a) l-Brom-2-fluor-5-methoxy-4-nitrobenzen

Terc-butoxid draselný (1,0 N v THF, 38 ml, 38 mmol) se přidá do methanolu (1,54 ml, 38,0 mmol) v THF (30 ml) při teplotě 0°C. Po 30 minutách se kalný roztok převede kanylou do roztoku l-brom-2,5-difluor-4-nitrobenzenu (9,04 g, 38,0 mmol) v THF (27 ml) při teplotě -78°C. Po 30 minutách se chladicí lázeň odstraní a reakční směs se nechá ohřát na teplotu 0°C. Přidá se voda (250 ml) a po 10 minutách se organické rozpouštědlo odstraní. Pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá l-brom-2-fluor-5-methoxy-4nitrobenzen (9,28 g, 98%).

^JH NMR (CDCb) δ 3,97 (s, 3H), 7,30 (d, J = 5,48 Hz, 2H), 7,71 (d, J = 7,58 Hz, 2H).

b) 4-Brom-5-fluor-2-methoxyanilin

Ve 3 podílech se při teplotě 80°C přidá kyselý siřičitan sodný (14,7 g, 84,4 mmol) do roztoku l-brom-2-fluor-5-methoxy-4-nitrobenzenu (9,28 g, 37,12 mmol) v ethanolu (180 ml) a vody (130 ml). Po 5 hodinách se organické rozpouštědlo odstraní a pevný podíl ve vodné vrstvě spojí filtrací, dále promyje směsí heptanu a ethylacetátu (3:2, 400 ml), filtrát se zahušťuje, čímž se získá 4-brom-5-fluor-2-methoxyanilin (3,29 g, 40%).

’H NMR (DMSO-dé) δ 3,75 (s, 3H), 5,22 (s, 2H), 6,56 (d, J = 10, 68 Hz, 2H), 6,94 (d, J = 6,57 Hz, 2H).

c) Terc-butyl-A-(4-brom-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát

Di-fórc-butyldikarbonát (3,42 g, 15,70 mmol) se smíchá s 4-brom-5-fluor-2methoxyanilinem (3,29 g, 14,95 mmol) v THF (30 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 65°C po dobu 3 dnů, přičemž každý den se přidává di-/erc-butyl-dikarbonát (3,42 g, 15,70 mmol). Po odstranění rozpouštědla se zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci • · ···· ·· · · · · · • ······· · ··· · · · · ·· · ·· · · ·· ·

444 silikagelu za použití směsi heptan/ethylacetát (95:5 až 85:15) jako mobilní fáze, čímž se získá směs požadovaného produktu fórc-butyl-A-(4-brom-5-fluor-2methoxyfenyl)karbamátu a di-Zerobutyl-dikarbonátu (10,4 g). Do směsi v methanolu (30ml) se při teplotě 0°C přidá hydroxid sodný (50% roztok, 2,0 ml) a reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Po odstranění rozpouštědla se přidá voda a vodná vrstva se extrahuje heptanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje, čímž se získá Zerc-butyl-A-(4-brom-5-fluor-2methoxyfenyl)karbamát (4,24 g, 89%).

^!H NMR (CDCb) δ 1,52 (s, 9H), 3,85 (s, 3H), 6,93 (d, J = 6,10 Hz, 1H), 7,06 (s, 1H), 8,01 (d, J = 10,4 Hz, 1H).

d) 7erc-butyl-A-[5-fluor-2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljkarbamát

7erc-butyl-/V-(4-brom-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát (4,24g, 13,26 mmol), diboron-pinakolester (4,04 g, 15,91 mmol), octan draselný (3,90 g, 39,78 mmol) a [1,1’bis(difenylfosfmo)-ferrocen)dichlorpalladnatý komplexu s dichlormethanem (0,32 g, 0,40 mmol) v DMF (75 ml) se zahřívá při teplotě 85°C přes noc. Přidá se diboronpinakolester (2,02 g, 7,96 mmol) a [l,l’-bis(difenylfosfino)-ferrocen)dichlorpalladnatý (Π) komplex s dichlormethanem (0,32 g, 0,40 mmol) a v zahřívání se pokračuje dalších 5 hodin. Po odstranění rozpouštědla se černý zbytek rozpustí v dichlormethanu a filtruje přes Celit.

Surová směs se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi heptan/ethylacetát (95:5 až 85:15) jako mobilní fáze, čímž se získá směs Zerobutyl-A-[5fluor-2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu a diboron-pinakolesteru (1:1 poměr, 4,23g), která se použije v následující reakci bez další purifikace.

e) 7rans-Zerc-butyl-A-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát

7ra«s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4amin (0,60 g, 1,36 mmol), Zerc-butyl-/V-[5-fluor-2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (1,0 g, 2,72 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfm (0,094 g, 0,082 mmol) a uhličitan sodný (0,35 g, 3,27 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (14ml) a vodou (7 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu • · · ·· · ··· ···· ·· · · * * · • ······· · · · · ····· ··· ···« · · » • · · ·· ·· ·· ·

445 přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5 až 70:30) jako mobilní fáze, čímž se získá trans-/erc-butyl-V-(4-{4-ammo-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamát (0,264 g, 35%).

'H NMR (DMSO-dó) δ 1,49 (s, 9H), 1,97 (m, 6H), 2,16 (s, 3H), 2,33 (m, 5H), 2,53 (m,

4H), 3,84 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,60 (d, J = 6,78 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 11,96 Hz, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,24 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLCsloupec: Genesis, Cl 8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ = 555,3, R_t =

2,00 min.

Příklad 460

7ra«ó-3-(4-amino-2-fluor-5-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l Apyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 7 ml) se přidá do roztoku trans-terc-butyl-N-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)karbamátu (250 mg, 0,451 mmol) v dichlormethanu (4,0 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se pak zahušťuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. K upravení na pH 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje, čímž se získá /ra«.s-3-(4-amino-2-fluor-5-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (179 mg, 87%).

‘H NMR (CDC1₃) 1,56 (m, 2H), 2,15 (m, 7H), 2,31 (s, 3H), 2,51 (m, 4H), 2,67 (m, 4H),

3,88 (s, 3H), 4,16 (bs, 2H), 4,74 (m, 1H), 5,64 (bs, 2H), 6,56 (d, J = 10,84 Hz, 1H), 6,88 (d,

J = 6,55 Hz, 1H), 8,33 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ =

455,2, R_t = 0,63 min.

• · • · ···· · · · · * * · • ······· · ··· ···· • · · ···· ·· ·

446

Příklad 461

7rans-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} -5-fluor-2-methoxyfeny l)-/raH5^,-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid

7ra«,s-2-fenyl-l-cyklopropankarbonylchlorid (32 mg, 0,176 mmol) v dichlormethanu (0,3 ml) se přidá do roztoku Zrau5^,-3-(4-amino-2-fluor-5-methoxyfenyl)-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (80 mg, 0,176 mmol) v pyridinu (1,5 ml) při teplotě 0°C. Po 5 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Přidá se další podíl trcms-2-fenyl-Lcyklopropankarbonylchloridu (32 mg, 0,176 mmol) kvůli dotažení reakce. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, čímž se získá trans-N\ -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid (93 mg, 88%).

’H NMR (DMSO-d₆) δ 1,35 (m, 1H), 1,50 (m, 3H), 1,98 (m, 6H), 2,19 (s, 3H), 2,37-2,68 (m, 11H), 3,87 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,09 (m, 1H), 7,21 (m, 3H), 7,31 (m, 2H), 8,21 (m, 2H), 9,82 (m, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ = 599,3, R_t = 1,97 min.

Příklad 462

7erc-butyl-V-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl} karbamát

b) 3 - Jod-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin

3-Jod-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,5 g, 1,45 mmol), formaldehyd (30% roztok ve vodě, 0,16 ml, 1,60 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,43 g, 2,03 mmol) se smíchají v dichlorethanu (5 ml). Po 4 hodinách se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného, poté hydroxid sodný (1,0 N) k upravení pH na 10. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje, čímž se získá 3-jod-l-(l-methyl-4piperidyl)-!//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,275 g, 53%).

• · • ······· · ··· · · · · ·· · · · · · · · » • · · ·· ·· · · ·

447 ’Η NMR (DMSO-de) δ 1,85 (m, 2H), 2,09 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,88 (m, 2H), 4,75 (m,

1H), 8,19 (s, 1H), 8,32 (s, 1H).

b) 7erc-butyl-A- {4-[4-amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)- l/7-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]2-methoxyfenyl} karbamát

3-Jod-l-(l-methyl-4-piperidyl)-lZ/-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin (270 mg,

0,754 mmol), terc-butyl-A-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát (290 mg, 0,829 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (52 mg, 0,045 mmol) a uhličitan sodný (192 mg, 1,81 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (8 ml) a vodou (4 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (90:10 až 70:30) jako mobilní fáze, čímž se získá terc-butyl-A-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} karbamát (250 mg, 73%).

*H NMR (DMSO-dé) δ 1,48 (s, 9H), 1,88 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,24 (m, 5H), 2,92 (m,

2H), 3,69 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,21 (m, 2H), 7,91 (d, J = 8,16 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 8,23 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis,

C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A:

mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ =454,2, R_t = 1,67 min.

Příklad 463

Diacetát trans-3-{4-[(2-chlorbenzyl)amino]-3-methoxyfenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu

Způsob přípravy A (Obecný způsob redukční alkylace tra«s-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu) *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,46 (d, 1H), 7,30 (m, 3H), 7,08 (s, 1H),

7,01 (d, 1H), 6,42 (d, 1H), 5,96 (t, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,45 (d, 2H), 3,90 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

• · » · • · · · « * * • · ··· ···· • · « · · · c • · · · »· ·

448

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,22 minut.

MS:MH⁺561.

Příklad 464

Diacetát trans-3-{3-methoxy-4-[(1,3-thiazol-2-ylmethyl)amino]fenyl}-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy A *H NMR (DMSO-dé, 400MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,76 (d, 1H), 7,59 (d, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,02 (d, 1H), 6,59 (d, 1H), 6,27 (t, 1H), 4,68 (d, 2H), 4,61 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,09 minut.

MS: MH⁺ 534.

Příklad 465

Diacetát trans-3 -(3 -methoxy-4- [(3 -methyl-1 A-4-pyrazolyl)methyl]aminofeny 1)-1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-//]pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy A ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IM, 7,47 (s, 1H), 7,06 (m, 3H), 6,74 (d, 1H), 5,08 (t, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,13 (d, 2H), 3,84 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,25 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,65 minut.

MS: MH⁺531.

Příklad 466

Acetát trans-3-{3-methoxy-4-[(2-thienylmethyl)amino]fenyl}-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy A » · « · · • · « ·· ·· ····

449 ’Η NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,36 (d, IH), 7,01 (m, 4H), 6,71 (d, IH), 5,87 (t, IH), 4,61 (m, 3H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,61 minut.

MS: MH⁺ 533.

Příklad 467

Acetát trans-3-(3-methoxy-4-[(5-methyl-2-thienyl)methyl]aminofenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy A ^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,04 (m, 2H), 6,84 (d, IH), 6,70 (d, IH), 6,62 (d, IH), 5,77 (t, IH), 4,61 (m, IH), 4,47 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,37 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (DeltaPakC18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,66 minut. MS: MH⁺ 547.

Příklad 468

Acetát řraH5-3-(4-[(5-chlor-2-thienyl)methyl]amino-3-methoxyfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4-aminu Způsob přípravy A *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,04 (m, 2H), 6,95 (s, Im, 6,69 (d, IH), 5,99 (t, IH), 4,61 (m, IH), 4,50 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O, IM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,04 minut.

MS: MH⁺ 567.

• · · • · * • · * · • · · · · • · · • · · • · · · • · · · · · • · · • · ·

450

Příklad 469

Diacetát /ra«.v-3-(3-methoxy-4-[(2-methyl-l ,3-thiazol-4-yl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu

a) 2-Methyl-1,3-thiazol-4-karbaldehyd

Do roztoku 4-chlormethyl-2-methyl-l,3-thiazolu (1,91 g, 0,0129 mol) v toluenu (50 ml) se přidá A-methylmorpolin-A-oxid (4,55 g, 0,0389 mol) a reakční směs se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 4 hodin. Přidá se A-methylmorpolin-A-oxid (1,60 g, 0,0137 mol) a v zahřívání se pokračuje další 1,5 hodiny. Směs se ochladí pokojovou teplotu, promyje vodou (3x50 ml) a koncentruje, čímž se získá 2-methyl-l,3-thiazol-4-karbaldehyd (1,40 g, 0,011 mol) ve formě hnědé tekutiny. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) a 9,87 (s, IH), 8,57 (s, IH), 2,72 (s, 3H). TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf 0,26.

b) Diacetát /rara-3-(3-methoxy-4-[(2-methyl-1,3-thiazol-4-yl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-4-aminu

Způsob přípravy A *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,21 (s, IH), 7,06 (m, 2H), 6,66 (d, IH), 5,70 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,41 (d, 2H), 3,87 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,71 minut.

MS: MH⁺ 548.

Příklad 470

Diacetát tran5^,-3-{4-[(l//-7-indolylmethyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu Způsob C (Obecný způsob redukční alkylace /ra/K-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu) ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 11,14 (s, IH), 8,18 (s, IH), 7,44 (d, IH), 7,37 (m, 3H),

7,12 (d, IH), 6,97 (t, IH), 6,77 (d, 2H), 6,55 (t, IH), 6,46 (m, IH), 4,60 (m, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

451

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,68 minut. MS: MH⁺ 536.

Příklad 471

Diacetát trans-3 - {4-[(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu Způsob C *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,41 (m, 4H), 7,29 (t, 1H), 6,83 (d, 2H), 6,26 (t, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,46 minut.

MS: MH⁺ 549.

Příklad 472

Diacetát trans-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3 -(4- [(5 -methyl-1 //-4-pyrazolyl)methyl] aminofeny 1)-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-aminu Způsob C ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,76 (d, 2H), 6,07 (t, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,06 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,21 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,15 minut.

MS: MH⁺501.

Příklad 473

Diacetát /ra«5-3-{4-[(2-aminobenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu

a) 7erc-butyl-A-[2-(hydroxymethyl)fenyl]karbamát • · · · • ·

452

Do roztoku di-terc-butyl-dikarbonátu (23,04 g, 0,106 mol) v bezvodém dichlormethanu (150 ml) při teplotě 0°C se přidá roztok 2-aminobenzylalkoholu (10,0 g, 0,0812 mol) a výsledná směs se míchá pod atmosférou dusíku při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (2 x 250 ml), suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/«-heptan (1:5) jako mobilní fáze, čímž se získá Zerc-butyl-V-[2(hydroxymethyl)fenyl]karbamát (17,2 g, 0,077 mol) ve formě bezbarvého oleje.

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,52 (s, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,22 (t, 1H), 7,04 (t, 1H), 5,42 (t, 1H), 4,51 (d, 2H), 1,46 (s, 9H). TLC (ethylacetát/heptan 1: 3) R_f 0,28.

b) 7erc-butyl-V-(2-formylfenyl)karbamát

Do roztoku fórc-butyl-V-[2-(hydroxymethyl)fenyl]karbamátu (11,0 g, 0,0493 mol) v bezvodém chloroformu se přidá 20% disperze pyridinium-chlorchromátu v bazické alumině (50 g) a výsledná suspenze se míchá pod atmosférou dusíku při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Přidá se dalších 16 g 20% disperze pyridinium-chlorchromátu v bazické alumině a v míchání se pokračuje po dobu 45 minut, po kterých se přidá dalších 15 g 20% disperze pyridinium-chlorchromátu v bazické alumině a v míchání se pokračuje po dobu 25 minut. Výsledná suspenze se filtruje přes vrstvu silikagelu, filtrát se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/«-heptan (2:98) jako mobilní fáze, čímž se získá férc-butyl-V-(2formylfenyl)karbamát (8,67 g, 0,0392 mol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 10,31 (s, 1H), 9,95 (s, 1H), 8,18 (d, 1H), 7,87 (d,

1H), 7,67 (t, 1H), 7,24 (t, 1H), 1,49 (s, 9H). TLC (ethylacetát/heptan 1:5) R_f 0,56.

c) Acetát trans-terc-butyl-N-2-[(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo [3,4 -</] py rimidin-3 -y 1} anilino)methyl] fenylkarbamátu

Způsob C *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,69 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,18 (t, 1H),

7,12 (t, 1H), 6,68 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,47 (s, 9H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,73 minut.

• · · • · · · · ·

453

d) Diacetát /nms-3-{4-[(2-aminobenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu

Acetát /ra«.s-terc-butyl-V-2-[(4-4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l/7-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-ylanilino)methylfenylkarbamátu (0,080 g, 0,000118 mol) se rozpustí v dichlormethanu (4 ml) při teplotě 0°C a po kapkách se přidá trifluoroctová kyselina (1 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny, koncentruje za sníženého tlaku a zbytek purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát /rms-3-{4-[(2-aminobenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-4-aminu (0,067 g, 0,000106 mol) ve formě bílé pevné látky.

^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 7,09 (d, IH), 6,95 (t, IH), 6,73 (d, 2H), 6,66 (d, IH), 6,53 (d, IH), 6,36 (t, IH), 4,97 (br, IH), 4,58 (m, IH), 4,13 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,87 minut.

MS:MH⁺512.

Příklad 474

Trans-Nl -2-[(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -y 1} anilino)methyl] feny lacetamid-diacetát

Do roztoku diacetátu traH5-3-{4-[(2-aminobenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,050 g, 0,000079 mol) v dichlormethanu (3 ml) při teplotě 0°C se postupně přidá W-diisopropylethylamin (0,041 g, 0,000316 mol) a anhydrid kyseliny octové (0,011 g, 0,000103 mol) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek purifikuje preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá trans-N\-2-[(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}anilino)methyl]fenyl-acetamid-diacetát (0,010 g, 0,0000148 mol) ve formě bílé pevné látky.

• · • · · · « ·

454 *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,48 (s, ÍH), 8,18 (s, ÍH), 7,35 (m, 4H), 7,20 (m, ÍH),

7,13 (m, ÍH), 6,66 (d, 2H), 6,53 (t, ÍH), 4,58 (m, ÍH), 4,29 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,67 minut.

MS: MH⁺ 554.

Příklad 475

Acetát /ra«5-3-[3-chlor-4-(2,3-dihydrobenzo[Z>]furan-3-ylamino)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-4-aminu

a) 7erc-butyl-A-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamát

Roztok 4-brom-2-chloranilinu (5,00 g, 0,0242 mol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se nechá reagovat s 1,0 M roztokem bis(trimethylsilyl)amidu sodného v tetrahydrofuranu (53,2 ml, 0,0532 mol). Směs se míchá 15 minut při pokojové teplotě, přidá se di-tercbutyl-dikarbonát (6,34 g, 0,0290 mol) a roztok se míchá po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi heptan/ethylacetát (4:1). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá férc-butyl-A-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (4,214 g, 0,0137 mol).

^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,75 (s, ÍH), 7,71 (d, ÍH), 7,54 (d, ÍH), 7,50 (dd, 5H), 1,46 (s, 9H); TLC (heptan/ethylacetát 4:1) Rf 0,54.

b) Arc-butyl-A-[2-chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát

Směs fórobutyl-A-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamátu (2,10 g, 0,00685 mol), diboron-pinakolesteru (2,09 g, 0,00822 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocenjdichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,17 g, 0,00021 mol) a octanu draselného (2,02 g, 0,02055 mol) v A,A-dimethylformamidu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje heptanem (70 ml) a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu celitu a heptan se odstraní za vakua, čímž se získá /erc-butyl-A-[2-chlor-4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát ve formě šedého pevného podílu (1,93 g, 0,00546 mol).

455 ‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,65 (s, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,56 (dd, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,29 (s, 12H).

c) rra«.s-/erc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-chlorfenyl)karbamát

Směs trans-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 77-pyrazolo[3,4-d\ pyri midin-4-aminu (2,20 g, 0,00498 mol), terc-butyl-V-[2-chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,93 g, 0,00548 mol), uhličitanu sodného (1,32 g, 0,01245 mol) v 1,2-dimethoxyethanu (50 ml) a vodě (100 ml) se intenzivně míchá, poté se přidá tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakční směs se míchá 6 hodin při teplotě 80°C, po kterých se přidá další tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakční směs se míchá dalších 16 hodin při teplotě 80°C. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (100 ml) a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (200 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (3 x 75 ml). Spojená organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (90:10:0,5). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá /ru«.s'-/erc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-chlorfenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (1,993 g, 0,00368 mol):

^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,76 (s, 2H), 8,23 (s, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,57 (dd, 1H), 4,58-4, 71 (m, 1H), 2,15 (2,3H), 1,89-2,61 (m, 15H), 1,49 (s, 9H), 1,40-1,48 (m, 2H); TLC (dichlormethan/methanol = 90:10) Rf 0,13.

MS: MH⁺ 541.

d) rra«.s'-3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l 77-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin

Trans-terc-butyl-N-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)karbamát (1,993 g, 0,00368 mol) se přidá do roztoku 20% trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu. Směs se míchá po dobu 2 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (50 ml) a promyje s 1,0 M vodným hydroxidem sodným (2 x 25 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá trans-3-(4-

456 amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazmo)cyklohexyl]-l V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin4-amin (1,564 g, 0,00355 mol) ve formě bílé pevné látky. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,45 (d, IH), 7,31 (dd, IH), 6,92 (d, IH), 4,57-4,63 (m, IH), 2,23-2,55 (m, 9H), 2,14 (s, 3H), 1,89-2,08 (m, 6H), 1,38-1,52 (m, 2H);

TLC (dichlormethan/methanol = 90:10) Rf 0,08.

MS: MH⁺ 441.

e) Acetát /rm?.s-3-[3-chlor-4-(2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-ylamino)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-4-aminu

Salicylaldehyd (0,033 g, 0,000274 mol) a /ran.s-3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-amin (0,115 g, 0,000261 mol) se smíchají v absolutním ethanolu a míchají při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suší přes noc, čímž se získá trans-2-[(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4-JJpyrimidin3-yl}-2-chlorfenyl)imino]methylfenol, který se použije bez další purifikace.

Trimethylsulfoxonium-jodid (0,110 g, 0,0005 mol) se rozpustí v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a najednou se přidá 60% disperze hydridu sodného v parafínu (0,02 g, 0005 mol). Po 10 minutách se přidá roztok tran5'-2-[(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3-yl} -2-chlorfenyl)imino]methylfenolu v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2,5 hodiny, roztok se nalije do ledově studené vody (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (2 x 40 ml). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát Zrau5^,-3-[3-chlor-4-(2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3ylamino)fenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-4aminu (0,044g, 0,000071 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,21 (s, IH), 7,55 (s, IH), 7,45 (d, IH), 7,38 (d, IH), 7,25 (t, IH), 7,11 (d, IH), 6,89 (m, 2H), 5,70 (d, IH), 5,54 (m, IH), 4,83 (t, IH), 4,61 (m, IH), 4,41 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,94 minut.

MS: MH⁺ 559.

• · · · · · • · • · • · · • · · • · · ·

457

Příklad 476

Diacetát Zra«ó’-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ó]furan-3-ylamino)-3-methoxyfenyl]-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu

Salicylaldehyd (0,034 g, 0,000282 mol) a ira«s-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-amin (0,117 g, 0,000268 mol) se smíchají v absolutním ethanolu a míchá při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suší přes noc, čímž se získá Zrfl«5'-2-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)imino]methylfenol, který se použije bez další purifikace.

Trimethylsulfoxonium-jodid (0,145 g, 0,00068 mol) se rozpustí v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a najednou se přidá 60% disperze hydridu sodného v parafinu (0,027 g, 00068 mol). Po 10 minutách se přidá roztok trans-2-{{4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-<7] pyrim i din-3 -yl} -2-methoxyfenyl)iminojmethylfenolu v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2,5 hodiny. Roztok se nalije do ledově studené vody (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (2 x 40 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá tra«s-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[Z?]furan-3-ylamino)-3methoxyfenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4amindiacetát (0,096g, 0,000142 mol) ve formě bílé pevné látky.

Ή NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,21 (s, 1H), 7,38 (d, 1H, 7,25 (t, 1H), 7,11 (m, 2H), 6,89 (m, 3H), 5,42 (m, 1H), 5,18 (d, 1H), 4,77 (t, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,37 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,16 minut.

MS: MH⁺ 555.

Příklad 477

Diacetát Pvm-3-[4-(3-methyl-5-fenyl- IH-1 -pyrazolyl)fenyl]-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-d] pyrimidin-4-aminu « · * · · · · · · «··· ·· · · * ······· · · · · • · · · · · ·

458

a) 1 -(4-Bromfenyl)-3-methyl-5-fenyl-4,5-dihydro-1 V-pyrazol

Do roztoku 1-benzoylacetonu (3,63 g, 0,0224 mol) a V,V-diisopropylethylaminu (2,88 g, 0,0224 mol) v bezvodém methanolu (160 ml) se přidá 4-bromfenylhydrazinhydrochlorid a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a výsledná směs se vytřepe mezi 5% roztok kyseliny citrónové ve vodě (200 ml) a ethylacetát (150 ml). Organická fáze se postupně promyje vodou (2 x 200 ml) a solankou (150 ml), suší síranem hořečnatým a koncentruje. Výsledný zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/«-heptan (5:95) jako mobilní fáze, čímž se získá 1-(4-bromfenyl)-3-methy 1-5fenyl-4,5-dihydro-lV-pyrazol (4,05 g, 0,0129 mol) ve formě bělavé pevné látky.

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 7,58 (d, 2H), 7,36 (m, 3H), 7,21 (d, 2H), 7,17 (d, 2H), 6,46 (s, 1H), 2,72 (s, 3H). TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf 0,41.

b) 3-Methyl-5-fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-4,5-dihydro1/7-pyrazol

Směs l-(4-bromfenyl)-3-methyl-5-fenyl-4,5-dihydro-lV-pyrazolu (2,17 g, 0,00693 mol), diboron-pinakolesteru (2,11 g, 0,00832 mol), [l,r-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,170 g, 0,000207 mol) a octanu draselného (2,03 g, 0,0207 mol) v V,V-dimethylformamidu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (7:93) jako mobilní fáze. Výsledná frakce se koncentruje. Zbytek se trituruje v H-heptanu a precipitát se spojí filtrací, čímž se získá

3-methyl-5-fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-4,5dihydro-lV-pyrazol (1,00 g, 0,00278 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 7,65 (d, 2H), 7,36 (m, 3H), 7,21 (m, 4H), 6,46 (s, 1H), 2,79 (s, 3H), 1,29 (s, 12H). TLC (ethylacetát/heptan 1:5) Rf 0,27.

c) Diacetát /raz?.s-3-[4-(3-methyl-5-fenyl-l V-l-pyrazolyl)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

459

Směs 3-methyl-5-fenyl-l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl4,5-dihydro-l V-pyrazolu (0,102g, 0,000283 mol), /ram-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,104 g, 0,000236 mol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (0,016 g, 0,000014 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,073 g, 0,00055 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát /ra/7.s-3-[4-(3-rnethyl-5-fenyl-l V-lpyrazolyl)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4aminu (0,094g, 0, 000141 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,37 (m, 7H), 6,49 (s, 1H), 4,63 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,30 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,10 minut.

MS: MH⁺ 548.

Příklad 478

Acetát trans-3 -[4-(5 -ethoxy-1 V-1 -pyrazolyl)fenyl] -1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] 1 V-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-aminu

a) 1 -(4-Bromfenyl)-1V-5 -pyrazolyl(ethyl)ether

Ethyl-acetoacetát (3,49 g, 0,02684 mol) a 4-bromfenylhydrazin-hydrochlorid (6,00 g, 0,02684 mol) se refluxují v kyselině octové (50 ml) po dobu 4 hodin, precipitát se odstraní filtrací, filtrát koncentruje za sníženého tlaku a zbytek purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (7:93) jako mobilní fáze, čímž se získá l-(4-bromfenyl)-lV-5-pyrazolyl(ethyl)ether (2,63 g, 0,00936 mol) ve formě bělavé pevné látky.

’H NMR (CDCl₃-d₆, 400 MHz) δ 7,61 (d, 2H), 7,49 (d, 2H), 7,26 (s, 1H), 5,47 (s, 1H), 4,14 (q, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,44 (t, 3H). TLC (ethylacetát/heptan 1:9) Rf 0,24.

b) 5-Ethoxy-3-methyl-1 -[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3-dioxolan-2-yl)fenyl]-1 V-pyrazol

460

Směs l-(4-bromfenyl)-lA-5-pyrazolyl(ethyl)etheru (2,22 g, 0,00791 mol), diboronpinakolesteru (2,41 g, 0,00949 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]-dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,194 g, 0,000237 mol) a octanu draselného (2,32 g, 0,0237 mol) v W-dimethylformamidu (60 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichiormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (7:93) jako mobilní fáze. Výsledná frakce se koncentruje. Zbytek se trituruje v n-heptanu a precipitát spojí filtrací, čímž se získá 5-ethoxy-3-methyl-l-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3-dioxolan-2-yl)fenyl]-lA-pyrazol (0,604 g, 0,00184 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 7,72 (s, 4H), 5,72 (s, IH), 4,18 (q, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,37 (t, 3H), 1,29 (s, 12H). TLC (ethylacetát/heptan 1:9) R_f 0,18.

c) Acetát trans-3-[4-(5-ethoxy-1 Η-1 -pyrazolyl)fenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu

Směs 5-ethoxy-3-methyl-l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3-dioxolan-2-yl)fenyl]-lHpyrazolu (0,062 g, 0,00019 mol), /ranó’-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu (0,070 g, 0,000159 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,011 g, 0,0000095 mol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,049 g, 0,000398 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (5 ml) a vody (3 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát /rans-3-[4-(5-ethoxy-lA-l-pyrazolyl)fenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-aminu (0,037 g, 0,000064 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,23 (s, IH), 7,85 (d, 2H), 7,71 (d, 2H), 5,75 (s, IH), 4,65 (m, IH), 4,21 (q, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,18 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H), 1,40 (t, 3H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,59 minut.

• · · ··· ·· · ··· ···· ·· · ···· • ······« · · * · ·«·· ·· · ·· ·· ·· ·

461

MS:MH⁺516.

Příklad 479

Diacetát trans-1 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-3 -methyl-4,5 -dihydro-1H-5 -pyrazolonu

Roztok acetátu trans-3-[4-(5-ethoxy-1 Η-1 -pyrazolyl)fenyl]-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-ammu (0,100 g, 0,000194 mol) v 30% bromovodíku v kyselině octové (2,5 ml) se zahřívá k refluxu po dobu 1,5 hodiny. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek neutralizuje koncentrovaným roztokem hydroxidu amonného ve vodě. Výsledná suspenze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 5-45% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát trans-\-(4-{4amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3-yl }fenyl)-3methyl-4,5-dihydro-l A-5-pyrazolonu (0,066 g, 0,00011 mol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,23 (s, 1H), 8,02 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 4,64 (m, 1H),

2,6-2,2 (br, 9H), 2,53 (s, 2H), 2,21 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m,2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 min., 1 ml/min) R_t 9,34 minut.

MS: MH⁺ = 488.

Příklad 480

Acetát 2-(2-amino-1 A-1 -imidazolyl)-1 - {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4ί/lpyrimidin-1 -yl] -1 -azetanyl} -1 -ethanonu

Do směsi 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol) a uhličitanu draselného (0,039 g, 0,00028 mol) v bezvodém VV-dimethylformamidu (3 ml) se při pokojové teplotě přidá chloracetylchlorid (0,0031 g,

0,00028 mol). Směs se míchá po dobu 10 minut, pak se přidá 2-aminoimidazol-sulfát (0,18 g, 0,0014 mol) a uhličitan draselný (0,19g, 0,0014 mol). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 dnů, pak zahřívá při teplotě 60°C po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou

462 (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se ěistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá acetát 2-(2-amin-l//-l-imidazolyl)-l-{3-[4amino-3-(4-fenoxyfenyl)- l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l -yl]-1 -azetanyl} 1 -ethanonu (0,006 g, 0,00001 mol).

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,27 (s, ÍH), 7,71 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 6,55 (s, ÍH), 6,36 (s, ÍH), 5,76 (m, ÍH), 5,30 (s, 2H), 4,59 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 1,90 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,1 minut.

MS: MH⁺ 482.

Příklad 481

- {3 - [4-amino-3-(4-fenoxy feny 1)-1 /7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -3 - [(2hydroxyethyl)amino] -1 -propanon

a) 7erc-butyl-V-(3 - {3- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-1 -yl] -1 azetanyl} -3 -oxopropyl)-V-(2-hydroxyethyl)karbamát

Směs 1 -(3-azetanyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00014 mol), 3-[(/erc-butoxykarbonyl) (2-hydroxyethyl)amino]propanové kyseliny (0,038 g, 0,000175 mol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0,034 g, 0,000175 mol), W-diisopropylethylaminu (0,034 g, 0,00026 mol) a 1-hydroxy7-azabenzotriazolu (0,019 g, 0,00014 mol) v bezvodém dichlormethanu (5 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se ěistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá /erc-butyl-V-(3-{3-[4-amino3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl] -1 -azetanyl} -3-oxopropyl)-V-(2hydroxyethyl)karbamát (0,040 g, 0,000070 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,3 minut.

MS: MH⁺ 574

463

b) 1 - {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -azetanyl} -3 - [(2hydroxyethy l)amino] -1 -propanon

Do směsi /erc-butyl-V-(3 - {3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-1 -yl] -1 -azetanyl} -3-oxopropyl)-V-(2-hydroxyethyl)karbamátu (0,040 g, 0,000070 mol) v acetonu (5 ml) se přidá 2 ml (6 N) vodného roztoku hydrochloridu. Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 1,5 hodiny, pak se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku. Ke zbytku se přidá voda (10 ml). Směs se lyofilizuje. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-{3-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-azetanyl}-3-[(2-hydroxyethyl)amino]-l-propanon (0,003 g, 0, 00001 mol).

^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,27 (s, ÍH), 7,69 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 5,70 (m, ÍH), 4,67 (m, ÍH), 4,57 (m, ÍH), 4,40 (m, ÍH), 4,31 (m, ÍH), 3,40 (m, 2H), 2,74 (m, 2H), 2,51 (m, 2H), 2,29 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 8 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,7 minut.

MS: MH⁺ 474

Příklad 482

Acetát 2-(2-amino-lA-l-imidazolyl)-l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4ó/]pyrimidin-1 -yl]piperidino} -1 -ethanonu

Do směsi 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00013 mol) a uhličitanu draselného (0,036 g, 0,00026 mol) v bezvodém N,Ndimethylformamidu (3 ml) se při pokojové teplotě přidá chloracetylchlorid (0,028 g, 0,00026 mol). Směs se míchá po dobu 10 minut, pak se přidá 2-aminoimidazol-sulfát (0,18 g, 0,0014 mol) a uhličitan draselný (0,19 g, 0,0014 mol). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin, pak zahřívá při teplotě 60°C po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá acetát 2-(2-amino-lA-l-imidazolyl)-l-{4-[4* · ···· ·· · · • ······· · ··· • · · · · · ·

464 amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-l-yl]piperidino } -1-ethanonu (0,015 g, 0,00003 mol).

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,17 (m, 5H), 6,52 (s, 1H), 6,38 (s, 1H), 5,49 (br, 2H), 4,99 (m, 1H), 4,76 (m, 2H), 4,59 (m, 1H), 3,99 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,20 (m, 1H), 1,99 (m, 3H), 1,90 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R 9,4 minut.

MS:MH⁺510.

Příklad 483

- {4-[4-amin-3-(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yljpiperidino} -2-[(2hydroxyethyl)amino]-1 -ethanon

Do směsi 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00013 mol) a uhličitanu draselného (0,036 g, 0,00026 mol) v bezvodém N,Ndimethylformamidu (3 ml) se při pokojové teplotě přidá chloracetylchlorid (0,028 g, 0,00026 mol). Směs se míchá po dobu 10 minut, pak se přidá ethanolamin (0,078 ml, 0,0013 mol). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (3 ml) a promyje vodou (2 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá 1-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1Apyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl]piperidino}-2-[(2-hydroxyethyl)amino]-1 -ethanon (0,022 g, 0,00005 mol).

‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,26 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,17 (m, 5H), 5,03 (br, 1H), 5,00 (br, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,87 (m, 2H), 3,64 (m, 2H), 2,96 (m, 2H), 2,92 (m, 2H), 2,17 (m, 1H), 1,90 (m, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,0 minut. MS: MH⁺ 488.

• · • · · • · · · « • · · « * · • ··· ···· • · · · · *

465

Příklad 484

Syntéza l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-17/-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-l-yl]piperidino}3-[(2-hydroxyethyl)aminoj-1 -propanonu

7erc-butyl-A-(3 - {4- [4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 yl]piperidino} -3-oxopropyl)-A-(2-hydroxyethyl)karbamát

Směs 3-(4-fenoxyfenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,05 g, 0,00013 mol), 3-[(fórc-butoxykarbonyl) (2-hydroxyethyl)amino]propanové kyseliny (0,038 g, 0,000163 mol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochloridu (0,031 g, 0,000163 mol), A,A-diisopropylethylaminu (0,031 g, 0,00024 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,018 g, 0,00013 mol) v bezvodém dichlormethanu (5 mL) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá tercbutyl-A-(3 - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yljpiperidino} 3-oxopropyl)-A-(2-hydroxyethyl)karbamát (0,050 g, 0,000083 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) Rt 10,4 minut. MS: MH⁺ 602.

b) 1 - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yljpiperidino} -3 - [(2hy droxyethy l)amino] -1 -propanon

Do směsi férc-butyl-A-(3-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4</]piperidino}-3-oxopropyl)-A-(2-hydroxyethyl)karbamátu (0,050 g, 0,000083 mol) v acetonu (5 ml) se přidají 2 ml 6 N vodného roztoku hydrochloridu. Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 1,5 hodiny a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Ke zbytku se přidá voda (10 ml). Směs se lyofilizuje. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5% - 100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá l-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin1-yljpiperidino}-3-[(2-hydroxyethyl)aminoj-l-propanon (0, 014 g, 0,00003 mol).

^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,25 (s, 1H), 7,67 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 4,98 (m, 1H), 4,52 (m, 2H), 4,04 (m, 1H), 3,31 (m, 2H), 2,81 (m, 2H), 2,78 (m, 1H), 2,74 (m, 2H), 2,58 (m, 2H), 1,99 (m, 1H), 1,90 (m, 3H).

466

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,1 minut.

MS: MH⁺ 502

Příklad 485

Syntéza 2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl]piperidino}octové kyseliny

a) 7ere-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl]piperidino} acetát

Do směsi 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-piperidyl)-l A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,10 g, 0,00026 mol, 1 ekviv.) a uhličitanu draselného (0,072 g, 0,000526 mol, 2 ekviv.) v bezvodém A,A-dimethylformamidu (8 ml) se při pokojové teplotě přidá /erc-butyl-2bromacetát (0,0768 g, 0,00039 mol, 1,5 ekviv.). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (5 ml) a promyje vodou (3 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi methanol/dichlormethan (5:95) jako mobilní fáze, čímž se získá /erc-buty 1-2-{4-[4-amino3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yljpiperidino} acetát (0,1 Og, 0,0002 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R 11,8 minut.

MS: MH⁺ 501

2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]piperidino}octová kyselina

Do směsi Zerc-butyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-1-yljpiperidino} acetátu (0,10 g, 0,0002 mol) v acetonu (5 ml) se přidají 2 ml 6 N vodného roztoku hydrochloridu. Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Ke zbytku se přidá voda (10 ml) a směs se lyofilizuje, čímž se získá 2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfeyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-lyl]piperidino}octová kyselina (0,010 g, 0,0002 mol).

467 ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,50 (s, IH), 7,69 (d, 2H), 7,43 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 5,07 (m, IH), 4,02 (s, 2H), 3,50 (br, 2H), 3,42 (br, 2H), 2,53 (br, 2H), 2,25 (br, 2H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,7 minut.

MS: MH⁺445.

Příklad 486

Vl-(lA-2-imidazolyl)-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyljpiperidino} acetamid

Směs 2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-l-yl]piperino}octové kyseliny (0,06 g, 0,00013 mol), 2-aminoimidazol-sulfátu (0,022 g, 0,000163 mol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0,031 g, 0,000163 mol), VTV-diisopropylethylaminu (0,047 g, 0,00036 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,018 g, 0,00013 mol) v bezvodém dichlormethanu (8 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Přidá se další 2-aminoimidazol-sulfát (0,022 g, 0,000163 mol), l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochlorid (0,031 g, 0,000163 mol), N,Ndiisopropylethylamin (0,047 g, 0,00036 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,018 g, 0,00013 mol) a směs se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Směs se zahřívá při teplotě 50°C po dobu 6 hodin, pak míchá při pokojové teplotě po dobu 2 dnů. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá Vl-(lA-2-imidazolyl)-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lApyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl]piperidino}acetamid (0,005 g, 0,00001 mol).

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,68 (d, 2H), 7,43 (m, 2H), 7,19 (m, 5H), 6,80 (br, IH), 6,70 (br, IH), 4,80 (br, IH), 3,06 (s, 2H), 3,05 (m, 2H), 2,43 (m, 2H), 2,33 (m, 2H), 1,92 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,2 minut.

MS:MH⁺510.

A A • · A • *

A AAAA

468

Příklad 487

Trans-N\ - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl } -2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid-maleát

a) Benzyl-4-(4-amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl)-l-piperidinkarboxylát

Do směsi dihydrochloridu 3-jod-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4aminu (13,86 g, 0,0333 mol) a uhličitanu sodného (8,4 g, 0,0999 mol) ve vodě (140 ml) se při pokojové teplotě přidá benzylchloroformiát (6,48 g, 0,0383 mol) v dioxanu (120 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin, žlutý pevný podíl se filtruje a promyje ethyletherem, čímž se získá benzy l-4-(4-amino-3-jod-1Apyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát (12 g, 0,025 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,5 minut.

MS: MH⁺ 479.

b) Benzyl-4-(4-amino-3 - {4- [(férc-butoxykarbonyl)amino] -3 -methoxyfenyl} -1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát

Směs benzyl-4-(4-amino-3 -jod-1 A-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylátu (7,0 g, 0,0146 mol), terc-butyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (6,15 g, 0,0176 mol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (1,0 g, 0,000876 mol) a uhličitanu sodného (3,9 g, 0,0365 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (170 ml) a vodě (70 ml) se zahřívá při teplotě 75°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Poté se přidá fórc-butyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (6,15 g, 0,0176 mol, 1,2 ekviv.) a tetrakis(trifenylfosfm)palladium (1,0 g, 0,000876 mol) a směs se míchá při teplotě 85°C dalších 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a dimethylether ethylenglykolu se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá nahnědlý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 20%-40% ethylacetát/dichlormethan, poté 2 %-5 % methanol/dichlormethan jako mobilní fáze, čímž se získá benzy 1-4-(4• · « · » ·

9 99 « 4 « * · · » ·«»« ·« · · « »»·«··» · · · · 9 99 9

9» 9 9 9 9 9 9 9

9 9 ·· »· · * ·

469 amino-3 - {4- [(/erc-butoxykarbonyl)amino]-3 -methoxyfenyl} -1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát (8,0 g, 0,014 mol).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 12,6 minut.

MS: MH⁺ 574.

c) Benzy 1-4- [4-amino-3 -(4-amino-3-methoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-1 -yl] -1 piperidinkarboxylát

Do směsi benzyl-4-(4-amino-3 - {4- [(/erc-butoxykarbonyl)amino] -3 -methoxyfenyl} l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylátu (7,68 g, 0,0134 mol) v dichlormethanu (10 ml) se při teplotě 0°C přidá 25 % roztok trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu. Směs se míchá pod atmosférou dusíku při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se ochladí na teplotu 0°C a alkalizuje vodným 5 N roztokem hydroxidu sodného. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 150 ml). Spojená organická vrstva se promyje vodou a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá benzyl-4- [4-amino-3 -(4-amino-3 -methoxhyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -1 piperidinkarboxylát (6,02 g, 0,0127 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,3 minut.

MS: MH⁺ 474.

d) 7ra«.$'-benzy 1-4-[4-amino-3-(3 -methoxy-4- {[(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]amino} fenyl)- 1 //-pyrazolo [3,4 -</]pyrimidin-1 -yl] -1 -piperidinkarboxylát

Do směsi benzyl-4- [4-amino-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (3,0 g, 0,0063 mol) v pyridinu (100 ml) se přidá racemický roztok tran.s-2-fenyl-cyklopropan-karbonylchloridu (1,163 g, 0,007 mol) při teplotě -5°C. Směs se míchá při teplotě -5°C po dobu 10 minut, pak ohřeje až na pokojovou teplotu a míchá po dobu 1,5 hodiny. Směs se zastaví vodným IN roztokem hydroxidu sodného. Organická rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu (200 ml) a ethylacetát (200 ml). Organická vrstva se promyje 5 % vodným roztokem kyseliny citrónové (3 x 100 ml), 1 N vodným roztokem hydrochloridu (3 x 100 ml) a vodou. Přidá se nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a

Β· ··· β · · • · * « · · * ···· • · · · * «· ·· *

470 solanka a látka se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá /raux-benzyl-4-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(2feny lcyklopropy l)karbonyl] amino} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-d] pyrimidin-1 -y 1] -1 piperidinkarboxylát (3,47 g, 0,006 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) Rt 11,5 minut.

MS:MH⁺618.

e) Trans-Nl - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl } -(1 S,2S)/(17?,27?)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid-maleát

Směs /rara-benzy 1-4-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(2-feny lcyklopropyl )karbonyl]amino}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (3,4 g, 0,0055 mol) a 20 % hydroxidu palladnatého na aktivním uhlí (0,4 g) v ethanolu (150 ml) se míchá pod atmosférou vodíku při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Směs se filtruje a rozpouštědla se odstraní. Ke zbytku se přidá 20 % hydroxid palladnatý na aktivním uhlí (0,4 g), octová kyselina (0,25 ml) v ethanolu (60 ml) a ethylacetát (40 ml). Směs se míchá pod atmosférou vodíku při pokojové teplotě dalších 18 hodin. Směs se filtruje a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 25%-50% methanol/dichlormethanu, čímž se získá trans-Nl - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3 -yl] -2methoxy fenyl)-(15,25)/( l/?,2/?)-2-fenyl-l-cyklopropan-karboxamid (1,36 g, 0,0028 mol). 7raTO-Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl)-(15,25)/( l/?,27?)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid (0,05 g, 0,000104 mol) v ethylacetátu (5 ml) se zahřívá při teplotě 40°C. Kyselina maleinová (0,00133 g, 0,000114 mol) se rozpustí v horkém ethylacetátu, pak se přidá do směsi. Směs se míchá při teplotě 40°C po dobu 10 minut, pak se ochladí na pokojovou teplotu. Bílé precipitáty se filtrují, čímž se získá /rms-jVl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl} -(15,25)/(17?,2/?)-2-fenyl-1 -cyklopropan-karboxamid-maleát (0,0044 g,

0,00001 mol).

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,65 (s, 1H), 8,26 (m, 2H), 7,25 (m, 7H), 6,01 (d, 2H),

5,09 (br, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,48 (m, 2H), 3,18 (m, 2H), 2,61 (br, 1H), 2,37 (m, 3H), 2,13 (m, 2H), 1,50 (br, 1H), 1,34 (br, 1H).

471

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,0 minut.

MS: MH⁺ 484.

Příklad 488

VI -(4-{4-amino-1-[1-(17/-2-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-l 77-pyrazolo [3,4-tí]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-( 1 S,2S)/( 1 R,2R)-2-feny 1-1 -cyklopropankarboxamid

Směs VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl}-(15,25)/( l/?,2Á)-2-feny 1-1-cyklopropankarboxamidu (0,10 g, 0,00021 mol), 2imidazolkarboxaldehydu (0,022 g, 0,00023 mol) a octové kyseliny (0,037 g, 0,0006 mol) v dichlorethanu (8 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,133 g, 0,00063 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Do směsi se přidá další kyselina octová (0,037 g, 0,0006 mol), 2-imidazol-karboxaldehyd (0,011 g, 0,00012 mol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,133 g, 0,00063 mol) a směs se míchá po dobu 18 hodin. Reakce se zastaví 5N vodným roztokem hydroxidu sodného. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Organická vrstva se promyje vodou a solankou. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá Vl-(4-{4-amino-l-[l-(177-2imidazoly lmethyl)-4-piperidyl] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)(15,25)/(lR,2R)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid (0,019 g, 0,000034 mol).

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,8 (br, 1H), 9,63 (s, 1H), 8,22 (m, 2H), 7,25 (m, 7H), 6,99 (br, 1H), 6,83 (br, 1H), 4,68 (br, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,56 (s, 2H), 2,93 (m, 2H), 2,58 (br, 1H), 2,37 (br, 1H), 2,22 (m, 3H), 1,90 (m, 3H), 1,50 (br, 1H), 1,30 (br, 1H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,4 minut.

MS: MH⁺ 564

472

Příklad 489

Al -[4-(4-amino-1 - {1 - [(1 -methyl-1 A-2-imidazolyl)methyl]-4-piperidyl} -1 A-pyrazolo [3,4úQpyrimidin-3 -yl)-2-methoxy feny l]-( 1 S,2S)/( 17?,2/?)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid

Směs Al - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl}-(lS',2S)/(lR,2R)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamidu (0,10 g, 0,00021 mol), 1methyl-2-imidazol-karboxaldehydu (0,025 g, 0,00023 mol) a octové kyseliny (0,037 g, 0,0006 mol) v dichlorethanu (8 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,133 g, 0,00063 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Reakce se zastaví 5N vodným roztokem hydroxidu sodného. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Organická vrstva se promyje vodou a solankou. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 5 %-50 % methanol/dichlormethan jako mobilní fáze, čímž se získá Al-[4-(4-amino-l-{l-[(l-methyl-lA-2imidazolyl)methyl] -4-piperidyl} -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl)-2-methoxy feny 1](1 S,2S)/(17?,2/?)-2-fenyl-l -cyklopropankarboxamid (0,070 g, 0,00012 mol).

^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,63 (s, ÍH), 8,22 (m, 2H), 7,25 (m, 7H), 7,09 (s, ÍH), 6,75 (s, ÍH), 4,68 (br, ÍH), 3,90 (s, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,20 (s, 2H), 2,93 (m, 2H), 2,58 (br, ÍH), 2,35 (br, ÍH), 2,24 (m, 4H), 1,89 (m, 2H), 1,50 (br, ÍH), 1,30 (br, ÍH).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,6 minut.

MS: MH⁺ 578.

Příklad 490

-(3 -methoxy-4- {[(5 -methyl-2-furyl)methyl]amino } fenyl)-1 -(4-piperidyl)-1Apyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

a) Benzyl-4-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(5-methyl-2-furyl)methyl]amino}fenyl)-lApyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát

Směs benzy 1-4- [4-amino-3 -(4-amino-3 -methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (3,0 g, 0,0063 mol), 5-methylfurfuralu (0,77 g, 0,007 mol) a octové kyseliny (1,15 g, 0,019 mol) v dichlorethanu (100 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid

473 sodný (4,1 g, 0,0195 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Reakce se zastaví 5N vodným roztokem hydroxidu sodného. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan, vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 200 ml) a spojená organická vrstva se promyje vodou a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 2 %5 % methanol/dichlormethan jako mobilní fáze, čímž se získá benzyl-4-[4-amino-3-(3methoxy-4- {[(5 -methyl-2-furyl)methyl]amino} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] 1-piperidinkarboxylát (2,63 g, 0,0046 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 11,59 minut.

MS: MH⁺ 568.

b) 3 -(3 -methoxy-4- {[(5 -methyl-2-furyl)methyl]amino} fenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

Směs benzyl-4- [4-amino-3 -(3 -methoxy-4- {[(5 -methyl-2-furyl)methyl]amino} -fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát (0,18 g, 0,000317 mol) a 20 % hydroxid palladnatý na aktivním uhlí (0,02 g) v ethylacetátu (10 ml) se míchají pod atmosférou vodíku při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Směs se filtruje a rozpouštědla se odstraní. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 5 %-10 % methanol/dichlormethan (2 % NH4OH), čímž se získá 3-(3-methoxy-4{[(5 -methyl-2-furyl)methyl]amino} fenyl)-l-(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidi n-4amin (0,02 g, 0,000046 mol).

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,07 (m, 2H), 6,78 (m, IH), 6,18 (s, IH), 5,97 (s, IH), 5,59 (m, IH), 4,79 (br, IH), 4,31 (m, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 2,74 (m, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,15 (m, 2H), 1,90 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,7 minut.

MS: MH⁺ 434 • · · · • ·

474

Příklad 491

-(3 -methoxy-4- {[(5 -methyl-2-furyl)methyl]amino} fenyl)-1 - {1 - [(1 -methyl-1H-2imidazolyl)methyl]-4-piperidyl} -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Směs 3 -(3 -methoxy-4- {[(5 -methyl-2-furyl)methyl]amino} fenyl)-1 -(4-piperidyl)1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,045 g, 0,0001 mol), l-methyl-2-imidazolkarboxaldehydu (0,011 g, 0, 0001 lmol) a octové kyseliny (0,018 g, 0,0003 mol) v dichlorethanu (4 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 1,5 hodiny. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,064 g, 0,0003 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Reakce se zastaví 5N vodným roztokem hydroxidu sodného. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Organická vrstva se promyje vodou a solankou. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá 3-(3-methoxy-4-{[(5-methyl-2furyl)methyl]amino} fenyl)-l- {l-[(l-methyl-1 //-2-imidazolyl)methyl] -4-piperidyl} -1 //pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,03 g, 0,00006 mol).

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,16 (s, IH), 7,06 (m, 2H), 6,86 (s, IH), 6,77 (d, IH), 6,18 (s, IH), 5,98 (s, IH), 5,59 (m, IH), 4,67 (br, IH), 4,31 (m, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,66 (s, 2H), 2,96 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,18 (m, 2H), 1,91 (m, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,5 minut.

MS: MH⁺ 528.

Příklad 492

Trans-Ni -(4- {4-amino-1 - [(4-hydroxy-4-piperidyl)methyl] -1 //-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidin-3 yl} -2-methoxyfenyl)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid

a) 7erc-butyl-4-[(4-amino-3-jod-1//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-l-yl)methyl]-4-hydroxy-1 piperidinkarboxylát

Směs 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,86 g, 0,0033 mol), terc-butyll-oxa-6-azaspiro[2.5]oktan-6-karboxylátu (0,7 g, 0,0033 mol) a uhličitanu česného (1,1 g, • · · · • ·

......._ • ······· · ·· • · · · · · ♦ • · · · · · ·

475

0,0033 mol) v bezvodém W-dimethylformamidu (30 ml) se míchá při teplotě 60°C po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan (200 ml). Organická vrstva se promyje vodou a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje s dichlormethanem a pevný podíl se filtruje, čímž se získá terc-butyl-4-[(4-amino-3-jod-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)methyl]-4-hydroxy-l-piperidinkarboxylát (0,66 g, 0,0014 mol).

MS: MH⁺ 475.

b) 7erc-butyl-4-{[4-amino-3-(4-{[(benzyloxy)karbonyl]amino}-3-methoxyfenyl)-lApyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-1 -y ljmethy 1} -4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát

Směs Zerobuty 1-4-[(4-amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-1 -yl)methyl]-4hydroxy-l-piperidinkarboxylátu (0,27 g, 0,00057 mol), benzyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (0,26 g, 0,00068 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,039 g, 0,000034 mol) a uhličitanu sodného (0,15 g, 0,0014 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (7 ml) a vodě (3 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a dimethylether ethylenglykolu se odstraní za sníženého tlaku. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 100 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Organická vrstva se filtruje přes silikagel (2x) kvůli odstranění katalyzátoru a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá /erc-butyl-4-{[4-amino-3-(4{[(benzy loxy)karbonyl] amino} -3 -methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidi η-1 -yl]methyl}-4-hydroxy-1-piperidinkarboxylát (0,1 g, 0,00017 mol).

RP-HPLC (DeltaPak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0, M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,9 minut.

MS: MH⁺ 604.

c) 7erc-butyl-4-{[4-arnino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrirnidin-lyl] methyl} -4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát

476

Směs /erc-butyl -4- {[4-amino-3 -(4- {[(benzyloxy)karbonyl] amino} -3 -methoxy fenyl)- 1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl]methyl}-4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylátu (0,1 g, 0,000017 mol) a palladia na aktivním uhlí (0,01 g) v ethanolu (2,5 ml) a tetrahydrofuran (2,5 ml) se míchají pod atmosférou vodíku a při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Směs se filtruje a přidá se další palladium na aktivním uhlí (0,01 g). Směs se míchá pod atmosférou vodíku při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Směs se filtruje přes celit a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá terc-butyl-4-{[4-amino-3-(4amino-3 -methoxyfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] methyl} -4-hydroxy-lpiperidinkarboxylát (0,08 g, 0,00017 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,8 minut.

MS: MH⁺ 470.

d) 7raz«-/erc-butyl-4-{[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]amino} fenyl)-1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]methyl} -4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát

Do směsi Zerobuty 1-4-{[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1 V-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-l-yl]methyl}-4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylátu (0,08 g, 0,00017 mol) v pyridinu (4 ml) se přidá /raz?.s-2-fenyl-cyklopropan-karbonylchlorid (0,035 g, 0,00019 mol) při teplotě -5°C. Směs se míchá při teplotě -5°C po dobu 10 minut, pak se za míchání ohřeje v průběhu 1 hodiny až na pokojovou teplotu. Reakce se zastaví IN vodným roztokem hydroxidu sodného. Pyridin se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan (50 ml). Organická vrstva se promyje vodou. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá Zrara-/erc-butyl-4-{[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]amino} fenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yljmethyl} -4-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát (0,08 g, 0,00013 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,7 minut.

MS:MH⁺614.

e) Trans-VI -(4- {4-amino-1 - [(4-hydroxy-4-piperidyl)methyl] -1 V-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid-hydrochlorid

477

Směs trans /erc-butyl-4- {[4-amino-3 -(3 -methoxy-4- {[(2-fenylcyklopropyl)karbonyl]amino} fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]methyl} -4-hydroxy-1 piperidinkarboxylátu (0,08 g, 0,00013 mol) v acetonu (12 ml) a 6 N vodného roztoku hydrochloridu (3 ml) se míchá při teplotě 40°C po dobu 2 hodin. Aceton se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se lyofilizuje, čímž se získá /ra«.v-yVl-(4-{4-amino-l-[(4-hydroxy4-piperidyl)methyl]-l A-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-fenyl-lcyklopropankarboxamid-hydrochlorid (0,07 g, 0,00012 mol).

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,65 (s, 1H), 8,71 (br, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,26 (m, 1H), 7,25 (m, 7H), 4,40 (s, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,10 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 2,51 (m, 1H), 2,34 (m, 1H), 1,89 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 1,48 (m, 1H), 1,31 (m, 1H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,7 minut.

MS:MH⁺514.

Příklad 493

VI -4- [4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxy fenyl(1 S,2«S)/ (1 Á,2Á)-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamid.

Suspenze 4-[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 yl]-l-cyklohexanonu (2,00 g, 0,00568 mol) v pyridinu (20 ml) se ochladí na teplotu -10°C. Po kapkách se přidá racemický roztok /ra«.s-2-benzylcyklopropan-l-karbonylchloridu (1,53 g, 0,00852 mol) v dichlormethanu (5 ml), přičemž teplota se udržuje pod -5°C. Reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu v průběhu 4 hodin. Přidá se vodný hydroxid sodný (1,0 M, 10 ml) a směs se míchá 1 hodinu. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (25 ml) a vodu (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (2 x 25 ml). Spojená organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá Vl-4-[4-amino-l(4-oxocyklohexyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -y 1] -2-methoxyfeny l-( 15,25)-2fenylcyklopropan-1-karboxamid ve formě bílé pevné látky (1,603 g, 0,00323 mol).

'Η N (DMSO-dg, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 7,14-7,35 (m, 7H), 5,24-5,27 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 2,65-2,78 (m, 2H), 2,56-2,63 (m, 1H), 2,34-2,37 (m, 5H), 2,20-2,30 (m, 2H), 1,45-1, 53 (m, 1H), 1,28-1,35 (m, 1H);

478

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,04 minut;

MS: MH⁺ 497.

Příklad 494

Cis-Nl -(4-{4-amino-l-[4-(amoniomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl-( 1 S,2S)/( 1 Á,2/?)-2-feny lcyklopropan-1 -karboxamidacetát

a) CM-Vl-4-[4-ammo-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl-( 15,25)-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamid

Za horka sušená baňka se naplní trimethylsulfoxonium-jodidem (0,425 g, 0,00193 mol) v dimethylsulfoxidu (5 ml), který se nechá reagovat s 60% hydridem sodným (disperze v minerálním oleji (0,071 g, 0,00193 mol)). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 30 minut, pak se ochladí na teplotu 10°C. Přidá se roztok VI-4-[4-amino-l-(4oxocyklohexy 1)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl-( 1 S,2S)/(1 R,2K)-2fenylcyklopropan-1-karboxamidu (0,800 g, 0,00161 mol) v dimethylsulfoxidu (5 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 hodin. Přidá se voda (5 ml) a směs se extrahuje ethylacetátem (3x10 ml). Organická fáze se promyje vodou (5 ml), solankou (5 ml) a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá cisVI -4- [4-amino-l-( 1 -oxaspiro [2.5]okt-6-y 1)-1 A-pyrazolo [3,4-pyrimidin-3 -yl] -2methoxy feny 1-(15,25)/( l/?,2/?)-2-fenylcyklopropan-l-karboxamid ve formě bílé pevné látky (0,820 g, 0,00160 mol):

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,64 (s, IH), 8,24 (s, IH), 8,22 (d, IH), 7,17-7,31 (m, 7H), 4,84-4,90 (m, IH), 3,92 (s, 3H), 2,70 (s, 2H), 2,56-2,63 (m, IH), 2,34-2,42 (m, IH), 2,12-2,33 (m, 4H), 1,90-1, 99 (m, 2H), 1,44-1,52 (m, IH), 1,27-1,37 (m, 3H); MS:MH⁺413.

b) Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(amoniomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-( 15,25)/( 1 Á,2/?)-2-feny lcyklopropan-1 -karboxamidacetát.

Směs cz'5'-Vl-4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin3 -yl] -2-methoxyfenyl-( 15,25)/( 17?,2/?)-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamidu (0,200 g, • ·

479

0,000391 mol) v 2-propanolu (5 ml) a hydroxidu amonném (5 ml) se zahřívá při teplotě 65°C v tlakové nádobě po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá cz,s'-A'l-(4-{4amino-1 - [4-(amoniomethyl)-4-hydroxycyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3 -y 1} -2 methoxyfeny 1)-(1 S,2S)/(l/?,2/?)-2-fenylcyklopropan-l-karboxamid-acetát ve formě bílé pevné látky (0,112 g, 0,000212 mol).

'H NM: R (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,64 (s, ÍH), 8,23 (d, ÍH), 8,22-8,24 (m, ÍH), 7,177,33 (m, 7H), 4,59-4,80 (m, ÍH), 3,91 (s, 3H), 2,28-2,65 (m, 4H), 1,88 (s, 3H), 1,68-1,72 (m, 4H), 1,47-1,51 (m, 3H), 1,30-1,33 (m, ÍH);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,11 minut;

MS: MH⁺ 528.

Příklad 495 rran5-Vl-benzyl-2-{4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-lhydroxycyklohexyl} acetamid

Suspenze trans-2-{4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-lyl]-l-hydroxycyklohexyl}octové kyseliny (0,076 g, 0,000165 mol) v dichlormethanu (2 ml) se nechá reagovat s triethylaminem (0,050 g, 0,000496 mol) a chloridem bis(2-oxo-3oxazolidinyl)fosfinové kyseliny (0,063 g, 0,000248 mol). Směs se míchá 2 hodiny při pokojové teplotě, během kterých se nerozpustí. Roztok se promyje vodou (2x2 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Surová látka se rozpustí v dichlormethanu (5 ml) a nechá reagovat s benzylaminem (0,052 g, 0,000489 mol) při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan /methanol (95:5), poté preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 60% izokraticky po dobu 5 minut, pak 60%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá řrazzs-Vl-benzyl2- {4-[4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -hydroxycyklohexyl} acetamid ve formě bílé pevné látky (0,010 g, 0,000018 mol).

* * ·

480 ‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,53 (t, IH), 8,24 (s, IH), 7,66 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,09- 7,34 (m, 10H), 5,24 (s, IH), 4,70-4,79 (m, IH), 4,30 (d, 2H), 2,02-2,18 (m, 2H), 1,91 (s, 2H), 1,86-1,98 (m, 4H), 1,56-1,64 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 16,16 minut;

MS: MH⁺ 549.

Příklad 496

-(Aminomethyl)-3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-1 -yl] -1 cyklobutanol

Roztok 3 - [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-1 -yl] -1 -cyklobutanonu (0,150 g, 0,000404 mol) v dichlormethanu (5 ml) se nechá reagovat s 1,1,1-trimethylsilylkyanidem (0,060 g, 0,000606 mol) a bezvodým jodidem zinečnatým (0,004 g, 0,000012 mol). Směs se míchá 8 hodin při refluxu. Směs se vytřepe mezi vodu (20 ml) a diethylether (10 ml). Organická vrstva se separuje a vodná vrstva se extrahuje diethyletherem (10 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a surová látka se rozpustí v bezvodém tetrahydrofuranu (10 ml) a nechá reagovat s lithiumaluminum-hydridem (0,031 g, 0,000804 mol) při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Surová látka se čistí preparativní RP-LC/MS (Gilson-Micromass Cl8, 5 pm, 130Á, 21 cm, 0%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 9 minut, 25 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá směs izomerů (4:1) l-(aminomethyl)-3-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-l V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-1-yl]-1-cyklobutanolu ve formě bílé pevné látky (0,024 g, 0,000060 mol).

^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), minoritní, 8,23 (s, IH) majoritní, 7,66-7-70 (m, 2H), 7,41-7,46 (m, 2H), 7,11- 7,21 (m, 5H), 5,45-5,50 (m, IH) minoritní, 4,87-4,96 (m, IH) majoritní, 4,30 (d, 2H), 2,34-2,72 (m, 6H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,07 minut, (minoritní) a 12, 36 min (majoritní); MS:MH⁺403.

481

Meziprodukt 1:

4-(4-Amino-3-jod-1 V-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-1 -yl)benzaldehyd

Směs 3-jod-lV-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (3,00 g, 11,5 mmol) a hydridu sodného (60%, 0,506 g, 12,6 mmol) v DMF (50 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny, pak se přidá 4-fluorbenzaldehyd (1,36 ml, 12,6 mmol). Reakění směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 21 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací, promyje DMF (30 ml) a etherem (30 ml) a suší, čímž se získá 4-(4-amino-3-j od-1 V-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-l-yl)benzaldehyd ve formě hnědé pevné látky (2,80 g, 7,61 mmol):

*H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 10,03 (1H, s), 8,46 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,39 (1H, s), 8,09 (2H, d, J = 8,8 Hz);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 9,71 minut. MS: MH⁺ 365,8.

Meziprodukt 2:

VI -{4- [4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -y 1] -2-methoxyfenyl} 2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs 4-(4-amino-3-j od-1 V-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-l-yl)benzaldehydu (0,400 g, 1,09 mmol), Vl-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluor4-(trifluormethyl)benzamidu (0,735 g, 1,20 mmol), palladium-tetrakis(trifenylfosfinu) (0,127 g, 0,110 mmol) a uhličitanu sodného (0,279 g, 2,63 mmol) v DME (10 ml) a vodě (10 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 1 hodiny. Přidá se další Vl-[2-methoxy-4(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (0,026 g, 0,059 mmol) a reakční směs se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 4 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a filtruje, zbylý pevný podíl se promyje methanolem (50 ml) a DMF (50 ml) a spojené filtráty se koncentrují, čímž se získá Vl-{4-[4-amino-l(4-formylfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2-fluor-4(trifluormethyl)benzamid ve formě béžové pevného podílu (0,402 g, 0,730 mmol):

*H NMR (dg-DMSO, 400 MHz): δΗ 10,05 (1H, s), 9,96 (1H, d, J = 4,0 Hz), 8,62 (1H, d, J = 8,4 Hz), 8,46 (1H, s), 8,39 (1H, d, J = 6,8Hz), 8,12 (2H, d, J = 8,8 Hz), 8,02-8,03 (1H, « ·

482

m), 7,84-8,00 (1H, m), 7,75-7,77 (1H, m), 7,51 (1H, s), 7,43 (1H, d, J = 8,0 Hz), 3,97 (3H, s);

RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 12,46 minut. MS: MH⁺ 551,2.

Meziprodukt 3:

2-(4-Amino-3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl)-1 -ethanol

Do roztoku 3-jod-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu (5,00 g, 19,1 mmol) v DMF (40 ml) se přidá hydrid sodný (60%, 1,53 g, 38,3 mmol) a reakční směs se míchá po dobu 20 minut. Přidá se 2-bromethanol (1,50 ml, 21,1 mmol) a reakční směs se zahřívá při teplotě 50°C po dobu 18 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje, čímž se získá hnědé bahno. Přidá se ledová voda (50 ml) a výsledný precipitát se spojí filtrací, promyje vodou (50 ml) a etherem (50 ml) a suší za vakua, čímž se získá 2-(4-amino-3-j od-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-l-yl)-l -ethanol ve formě béžového pevného podílu (4,30 g, 14,1 mmol):

*H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 8,19 (1H, s), 4,84 (1H, t, J = 5,8 Hz), 4,30 (1H, t, J = 5,8 Hz) a 3,77 (2H, app q, J = 5,6 Hz);

RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 7,35 minut.

Meziprodukt 4:

2- [4-amino-3 -(3 -methoxy-4- {[(1 -methyl-1 //-2-indolyl)karbonyl] amino} fenyl)-1Hpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yljethyl-methansulfonát

Do 0°C směsi A2-{4-[4-amino-l-(2-hydroxyethyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl]-2-methoxyfenyl}-l -methyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,343 g, 0,750 mmol) a pyridinu (7,5 ml) se po kapkách v průběhu 30 sekund přidá methansulfonylchlorid (0,14 ml, 1,8 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 2 hodin, pak se přidá ledová voda (10 ml), precipitát se spojí filtrací a suší za vakua, čímž se získá 2-[4-amino-3-(3-methoxy4- {[(1-methyl-1 //-2-indolyl)karbonyl]amino} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-lyljethyl-methansulfonát ve formě béžového pevného podílu (0,268 g, 0,500 mmol):

*H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,44 (1H, s), 8,30 (1H, s), 8,13 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,70 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8, 4 Hz), 7,31-7,38 (4H, m), 7,15 (1H, t, J = 7, 6 • · ·

483

Hz), 4,70 (3H, s), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,37 (2H, zastíněno pikem vody) a 3,12 (2H, s);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 11,22 minut.

MS: MH⁺ 536,2.

Příklad 497:

VI -(4- {4-amino-1 - [4-(morfolinomethyl)fenyl] -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), morfolinu (0,024 ml, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,409 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se další podíl morfolinu (0,012 ml, 0,14 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (0,043 g, 0,20 mmol) a octové kyseliny (0,016 ml) a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Přidá se 1 N NaOH (1 ml) a reakční směs se filtruje, čímž se získá šedý pevný podíl, který se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 21-23 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Vl-(4-{4-amino-l-[4(morfolinomethyl)fenyl] -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-2-fluor-4(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,007 g, 0,011 mmol):

*H NMR (d₆ DMSO, 400 MHz): δΗ 9,93 (1H, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,14-8,18 (2H, m), 7,978,02 (1H, m), 7,87-7,91 (1H, m), 7,73-7,76 (1H, m), 7,45-7,51 (2H, m), 7,44 (1H, s), 7,38-7,43 (1H, m), 3,41-3,59 (8H, m) a 3,36 (2H, s);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-l00% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 11, 72 minut. MS: MH⁺622,2.

Příklad 498:

VI - [4-(4-amino-1 - {4- [(4-hydroxypiperidino)methyl]fenyl} -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-monoacetát • ·

484

Směs Al - {4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 4-hydroxypiperidinu (0,028 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se další podíl 4-hydroxypiperidinu (0,028g, 0,27 mmol) a octové kyseliny (0,016 ml) a reakční směs se třepe po dobu 24 hodin. Přidá se další 4-hydroxypiperidin (0,033 g, 0,33 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,040 g, 0,19 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 72 hodin, přidá se IN NaOH (1,5 ml) a žluto-hnědý precipitát se spojí filtrací a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 21-23 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Al-[4-(4-amino-l-{4-[(4hydroxypiperidino)methyl] fenyl} -1 //-pyrazolo [3,4 -í/]pyrimidin-3 -y l)-2-methoxy fenyl] -2fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-monoacetát ve formě bílé pevné látky (0,025 g, 0,039 mmol):

’H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,95 (1H, s), 8,35-8,99 (2H, m), 8,14-8,19 (2H, m), 7,99-8,03 (1H, m), 7,89-7,93 (1H, m), 7,75-7,80 (1H, m), 7,39-7,51 (4H, m), 4,55 (1H, s), 3,96 (3H, s), 3,80 (2H, s), 2,68-2,71 (3H, m), 2,04-2,11 (2H, m), 1,85 (3H, s), 1,71-1,76 (2H, m) a 1,39-1,45 (2H, m);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,56 minut. MS: MH⁺ 636,2.

Příklad 499:

Al - {4- [4-amino-1 -(4- {[4-(2-hydroxyethyl)piperazino]methyl} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs Al-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), A-(2-hydroxy ethyl)piperazinu (0,035 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 14 hodin. Přidá se další podíl A-(2-hydroxyethyl)piperazinu (0,010 g, 0,077 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,020 g, 0,094 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 16 h, přidá se IN NaOH (1,5 ml) a precipitát se spojí filtrací a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,05 M octan amonný v • · · ·

485 průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 21,9-22,9 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Vl-{4-[4-amino-l-{[4-(2-hydroxyethyl)piperazinojmethyl} fenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,034 g, 0,051 mmol):

'H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (IH, s), 8,35-8,37 (2H, m), 8,15 (2H, d, J = 8,8 Hz), 8,00 (IH, t, J = 8, 0 Hz), 7,90 (IH, d, J = 10, 4 Hz), 7,75 (IH, d, J = 8, 0 Hz), 7,49 (IH, s), 7,46 (2H, d, J = 7,2 Hz), 7,40 (IH, d, J = 8,4 Hz), 3,96 (3H, s), 3,51 (2H, s), 3,463,49 (4H, m) a 2,35-2,44 (8H, m);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min). R_t 10,92 minut. MS: MH⁺664,7.

Příklad 500:

VI - {4-[4-amino-l-(4- {[4-(2-hydroxyethyl)piperidino]methyl} fenyl)-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-diacetát

Směs Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol),

4-piperidinethanolu (0,035 g, 0,27 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (0, 087 g, 0,41 mmol) a dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se další podíl 4-piperidinethanolu (0,040 g, 0,31 mmol)) a triacetoxyborohydridu sodného (0,053 g, 0,25 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 4 dnů. Přidá se IN NaOH (1 ml) a precipitát se spojí filtrací a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 21,1-23,5 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Vl-{4[4-amino-l-(4- {[4-(2-hydroxyethyl)piperidino]methyl} fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-diacetát ve formě bílé pevné látky. (0,015 g, 0,023 mmol):

*H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (IH, s), 8,18-8,39 (2H, m), 8,14 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,99-8,02 (IH, m), 7,90 (IH, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (IH, d, J = 7,6 Hz), 7,39-7,48 (4H, m), 4,31-3,96 (3H, s), 3,37 (2H, s), 3,37-3,50 (3H, m), 2,80-2,83 (2H, m), 1,91 (6H, m), 1,61-1,64 (2H, m), 1,35-1,37 (3H, m) a 1,15-1,18 (2H, m);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,71 minut. MS: MH⁺ 664,2.

486

Příklad 501:

NI - {4-[4-amino-1 -(4- {[3 -(hydroxymethyl)piperidino]methyl} fenyl)-1 A-pyrazolo[3,4íZ]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-monoacetát

Směs Al - {4- [4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y l]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 3-piperidinmethanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se další 3-piperidinmethanol (0,045 g, 0,39 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,090 g, 0,42 mmol) a reakční směs se třepe při pokojové teplotě po dobu 16 hodin, přidá se IN NaOH (1 ml) a precipitát se spojí filtrací a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 21-23 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá

Al - {4-[4-amino-1 -(4- {[3 -(hydroxymethyl)piperidino]methyl} fenyl)-1Apyrazolo [3,4-</]py rimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidmonoacetát ve formě bílé pevné látky. (0,007 g, 0,11 mmol):

*H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,95 (1H, s), 8,35-8,39 (2H, m), 8,14-8,17 (2H, m), 8,01-8,03 (1H, m), 7,89-7,93 (1H, m), 7,757,78 (1H, m), 7,40-7,50 (4H, m), 4,39-4,42 (1H, m), 3,97 (3H, s), 3,39-3,53 (3H, m), 3,01-3,21 (1H, m), 2,87-2,89 (1H, m), 2,75-2,77 (1H, m), 1,91 (3H, s), 1,61-1,65 (4H, m), 1,47-1,52 (1H, m) a 0,89-0,92 (1H, m);

RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10, 73 minut. MS: MH⁺650,2.

Příklad 502:

Al - {4-[4-amino-l-(4- {[2-(hydroxymethyl)piperidino]methyl}fenyl)-lA-pyrazolo[3,4t/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-monoacetát

Směs Al - {4- [4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol), 2-piperidinmethanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se další podíl 2-piperidinmethanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný « ·

487 (0,087 g, 0, 41 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 3 dnů. Znovu se přidá 2-piperidinmethanol (0,030 g, 0,26 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,073 g, 0,34 mmol), poté kyselina octová (0,1 ml). Reakční směs se třepe po dobu 5 dnů, přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje za vakua k odstranění dichlorethanu. Zbytek se rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes filtr Acrodisc stříkačkového typu a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 14,6-17,0 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Vl-{4-[4-amino-l-(4-{[2-(hydroxymethyl)piperidinojmethyl} fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl} -2-fluor-4(trifluormethyl)benzamid-monoacetát ve formě bílé pevné látky, (0,026 g, 0,040 mmol):

*H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,91 (1H, s), 8,33-8,37 (2H, m), 8,09-8,14 (2H, m), 7,96-8,00 (1H, m), 7,86-7,89 (1H, m), 7,717,74 (1H, m), 7,37-7,52 (4H, m), 4,46 (1H, bs), 4,10-4,15 (1H, m), 3,94 (3H, s), 3,64-3,67 (1H, m), 3,44-3,48 (1H, m), 2,64-2,69 (2H, m), 2,00-2,07 (1H, m), 1,94 (3H, s), 1,60-1,89 (2H, m) a 1,20-1,40 (4H, m);

RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0, 1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,59 minut. MS: MH⁺ 649,7.

Příklad 503:

Vl-{4-[4-amino-l-(4-{[(2-morfolinoethyl)amino]methyl}fenyl)-lA-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), yV-(2-aminoethyl)morfolinu (0,035 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe po dobu 16 hodin při pokojové teplotě. Přidá se další podíl lV-(2-aminoethyl)morfolinu (0,030 ml, 0,23 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 4 dnů. Přidá se IN NaOH (1 ml) a precipitát se spojí filtrací a purifikuje preparativní RPHPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 16,6-19,0 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, ěímž se získá Vl-{4-[4-amino-l-(4-[(2-morfolinoethyl)amino]methyl}fenyl)1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky, (0,014 g, 0,021 mmol):

• ·· · ·· ···· • · · · · · • · · · · · · • ······· · ··· · · · ·

-- . « · · · ·· · • · · a · · a a a ·

488 *H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,88 (1H, s), 8,29-8,93 (2H, m), 8,11-8,17 (2H, m), 7,927,97 (1H, m), 7,83-7,86 (1H, m), 7,68-7,72 (1H, m), 7,46-7,51 (2H, m), 7,39 (1H, s), 7,34-7,38 (1H, m), 3,90 (3H, s), 3,50-3,52 (4H, m), 2,61-2,62 (2H, m), 2,40-2,50 (2H, zastíněno pikem DMSO) a 2,27-2,40 (6H, m);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,96 minut. MS: MH⁺ 665,2.

Příklad 504:

VI - {4- [4-amino-1 -(4- {[4-(hydroxymethyl)piperidino]methyl} fenyl)-1 V-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-diacetát

Směs VI - {4- [4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol), 4-piperidinmethanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidá se další podíl 4-piperidinmethanolu (0,096 g, 0,83 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,085 g, 0,40 mmol), poté kyselina octová (0,1 ml). Reakční směs se třepe po dobu 5 dnů, přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes filtr Acrodisc stříkačkového typu, pak purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 17,2-18,3 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá VI-{4-[4-amino-1-(4-{[4-(hydroxymethyl)piperidino]methyl}fenyl)-l V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-diacetát ve formě bílé pevné látky (0,018 g, 0,028 mmol):

'H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, s), 8,35-8,37 (2H, m), 8,14 (2H, d, J = 8, 4 Hz), 8,00 (1H, t, J = 7, 0Hz), 7,90 (1H, d, J = 10, 4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,39-7,64 (4H, m), 4,38-4,41 (1H, m), 3,96 (3H, s), 3,50 (2H, s), 2,83 (2H, d, J = 10,8 Hz), 1,90 (6H, s), 1,63 (2H, d, J = 11, 6 Hz), 1,34-1,35 (2H, m) a 1,12-1,19 (2H, m);

RP-HPLC (Hypersil 08,5 pm, 100 Á, 15 cm; 5% - 100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,41 minut. MS: MH⁺650,2.

• ·

489

Příklad 505:

NI- {4-[4-amino-l-(4- {[4-(2-methoxyethyl)piperazino]methyl} fenyl)-1 A-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs Al - {4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-<71pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), l-(2-methoxyethyl)-piperazinu (0,039 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidá se další podíl l-(2-methoxyethyl)-piperazinu (0,10 ml) a triacetoxyborohydrid sodný (0,089 g, 0,41 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 16 hodin, IN NaOH (1 ml) a výsledný roztok se extrahuje dvěma podíly dichlormethanu (2 ml pokaždé). Spojené organické podíly se koncentrují, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 16,9-20,2 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-(4-{[4-(2methoxyethyl)piperazino]methyl}fenyl)-l-pyrazolo[3,4-í/]pyrinndin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,021 g, 0,031 mmol):

*H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (IH, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,14-8,17 (IH, m), 7,98-8,02 (IH, m), 7,89 (IH, d, J = 10,4 Hz), 7,74-7,76 (IH, m), 7,34-7,64 (6H, m), 3,96 (3H, s), 3,51 (2H, s), 3,31-3,43 (2H, m), 3,22 (3H, s) a 2,41-2,45 (10H, m);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 11,24 minut. MS: MH⁺ 678,7.

Příklad 506:

Al - {4-[4-amino-l-(4- {[(3R)-3-hydroxytetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyl]methyl} fenyl)-1Hpyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs Al-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol), (5)-3hydroxypyrrolidinu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidá se další podíl (5)-3-hydroxypyrrolidinu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,084 g, 0,40 • · · ·

490 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 3 dnů. Přidá se kyselina octová (0,1 ml) a reakční směs se třepe po dobu 4 dnů, přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje za vakua. Zbytek se rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes filtr Acrodisc stříkačkového typu a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril 0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 16,5-18,4 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-(4-{[(3/?)-3hydroxytetrahydro-l//-l-pyrrolyl]methyl}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,027 g, 0,043 mmol):

*H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,89 (1H, s), 8,30-8,33 (2H, m), 8,13-8,14 (2H, m), 7,90-7,80 (1H, m), 7,84 (1H, d, J = 10, 8 Hz), 7,70 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,35-7,59 (4H, m), 4,64 (1H, bs), 4,14-4,23 (1H, m), 3,91 (3H, s), 3,62 (2H, s), 2,61-2,62 (2H, m), 2,27-2,28 (2H, m), 2,27-2,28 (2H, m), 2,02 (1H, m) a 1,60 (1H, m);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,41 minut. MS: MH⁺ 622,2.

Příklad 507:

Al - {4-[4-amino-1 -(4- {[(3/?)-3-hydroxytetrahydro-177-1 -pyrrolyl]methyl} fenyl)- 1Hpyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs Al-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), (/?)-(+)-3-pyrrolidinolu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidá se další podíl (7?)-(+)-3-pyrrolidinolu (0,1 ml) a triacetoxyborohydrid sodný (0,084 g, 0,40 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 16 hodin, přidá se IN NaOH (1 ml), precipitát se spojí filtrací a smíchá se zbytkem z extrakce vodné vrstvy jedním podílem dichlormethanu (20 ml). Surová směs se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), příslušné frakce se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-(4{[(37?)-3-hydroxytetrahydro-IH-1 -pyrrolyl]methyl} fenyl)- lA-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-3yl] -2-methoxyfenyl }-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,034 g, 0,055 mmol):

• ·

491 *H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,93 (IH, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,15-8,19 (2H, m), 7,98-8,01 (IH, m), 7,85 (IH, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,48-7,54 (2H, m), 7,44 (IH, s), 7,40 (IH, d, J = 8,4 Hz), 4,70 (IH, bs), 4,22 (IH, s), 3,96 (3H, s), 3,63 (2H, s), 2,49-2,72 (3H, m), 2,13-2,41 (IH, m), 1,91-2,06 (IH, m) a 1,531,61 (IH, m);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,53 minut. MS: MH⁺ 622,2.

Příklad 508:

Ni -(4- {4-amino-1 -[4- {([3-(177- l-imidazolyl)propyl] amino }methyl)fenyl]- iHpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs VI - {4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)- l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), l-(3-aminopropyl)imidazolu (0,034 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidá se další podíl l-(3-aminopropyl)imidazolu (0,1 ml) a triacetoxyborohydrid sodný (0,086 g, 0,40 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 3 dnů. Přidá se kyselina octová (0,1 ml) a reakční směs se třepe po dobu 4 dnů. Přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes filtr Acrodisc stříkačkového typu a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril - 0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 14,0-15,7 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Vl-(4{4-amino-l-[4-{([3-(l/7-l-imidazolyl)propyl]amino}methyl)fenyl]-177-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,040 g, 0,061 mmol):

*H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (IH, s), 8,35-8,40 (2H, m), 8,16 (2H, d, J = 7,6 Hz), 7,99 (IH, t, J = 7,6 Hz), 7,89 (IH, d, J = 10,0 Hz), 7,75 (IH, d, J =8,4 Hz), 7,59 (IH, s), 7,52 (2H, d, J = 3,8 Hz), 6,45 (IH, s), 7,40 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,16 (IH, s), 6,87 (IH, s), 4,04 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,96 (3H, s), 3,77 (2H, s), 2,45-2,46 (2H, m), 1,91 (3H, s) a 1,86-1,90 (2H,m);

RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,28 minut. MS: MH⁺ 660,2.

• *

492

Příklad 509:

VI - {4-[4-amino-1 -(4- {[(4-hydroxybutyl)amino]methyl} fenyl)-1 V-pyrazolo[3,4/]pyrimidin-3 -y 1] -2-methoxy fenyl} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs Vl-[4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-lV-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 4-amino-l-butanolu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe po dobu 3 dnů. Přidá se další podíl 4amino-1-butanolu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,42 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 3 dnů. Přidá se kyselina octová (0,1 ml) a reakční směs se třepe po dobu 7 dnů. Přidá se další podíl triacetoxyborohydridu sodného (0,098 g, 0,46 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 16 hodin, IN NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes filtr Acrodisc stříkačkového typu a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300Á, 25 cm; 20-80% acetonitril 0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 12,5-14,8 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují na Vl-{4-[4-amino-l-(4-{[(4hydroxybutyl)amino]methyl} fenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxy fenyl} 2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky, (0,030 g, 0,048 mmol):

’H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (IH, d, J = 4,4 Hz), 8,35-8,40 (2H, m), 8,17 (2H, d, J = 8,0 Hz), 8,00 (IH, t, J = 7,4 Hz), 7,90 (IH, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (IH, d, J = 7,2 Hz), 7,53-7,57 (2H, m), 7,45 (IH, s), 7,40 (IH, d, J = 8,8 Hz), 3,96 (3H, s), 3,83 (2H, s), 3,39 (2H, t, J = 6, 2 Hz), 2,45-2,50 (2H, m) a 1,451,51 (4H, m);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 9,93 minut. MS: MH⁺ 624,3.

Příklad 510:

VI -{4- [4-amino-1 -(4- {[(3 -methoxypropyl)amino]methyl} fenyl)-1 V-pyrazolo [3,4/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs AT - {4- [4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3-y l]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 3-methoxypropylaminu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů.

• · · ·

493

Přidá se další podíly 3-methoxypropylaminu (0,1 ml, 1 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,085 g, 0,40 mmol) a směs se třepe po dobu 3 dnů. Přidá se kyselina octová (0,1 ml) a reakční směs se třepe po dobu 4 dnů. Přidá se další podíl triacetoxyborohydridu sodného (0,100 g, 0,470 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 16 hodin, přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes filtr Acrodisc stříkačkového typu a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 18,0-19,7 minutě se spojí, koncentrují a lyofílizují, čímž se získá Al-{4[4-amino-1 -(4- {[(3 -methoxypropyl)amino]methyl} fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,009 g, 0,014 mmol):

'H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,93 (ÍH, s), 8,33-8,38 (2H, m), 8,18-8,20 (2H, m), 7,978,01 (ÍH, m), 7,87-7,91 (ÍH, m), 7,73-7,76 (ÍH, m), 7,54-7,64 (5H, m), 7,31-7,45 (2H, m), 3,95 (3H, s), 3,85-3,89 (2H, m), 3,38 (2H, s), 2,55-2,68 (2H, m) a 1,70-1,74 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,58 minut. MS: MH⁺ 624,2.

Příklad 511:

Al -(4- {4-amino-l-[4- {([3-(dimethylamino)propyl]amino}methyl)fenyl]-1 A-pyrazolo [3,4<Z]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-monoacetát

Směs Al - {4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), A,A-dimethyl-l,3-propandiaminu (0,028 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidá se další podíl A,A-dimethyl-l,3-propandiaminu (0, 1 ml) a triacetoxyborohydrid sodný (0,085 g, 0,40 mmol) a směs se třepe po dobu 3 dnů. Přidá se kyselina octová (0,1 ml) a směs se třepe po dobu 4 dnů. Přidá se triacetoxyborohydrid sodný (0,096 g, 0,45 mmol) a směs se třepe po dobu 16 hodin, přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes filtr Acrodisc stříkačkového typu a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 14,3-14,9 minutě se spojí, koncentrují a lyofílizují, čímž se získá Al-(4-{4-amino-1-[4-

494 {([3 -(dimethylamino)propyl] amino} methy l)fenyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)-2-ťluor-4-(triťluormethyl)benzamid-monoacetát ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0,031 mmol):

*H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,93 (ÍH, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,13 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,00 (ÍH, t, J = 7, 2 Hz), 7,89 (ÍH, d, J = 10,0 Hz), 7,75 (ÍH, d, J = 7,6 Hz), 7,49 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,44 (ÍH, s), 7,39 (ÍH, d, J = 8,0 Hz), 3,96 (3H, s), 3,74 (2H, s), 2,21-2,25 (2H, t, J = 7,0 Hz), 2,09 (6H, s), 2,08 (3H, s), 1,86-1,87 (4H, m) a 1,54-1,58 (2H, t, J = 7,2 Hz);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,85 minut. MS: MH⁺637,3.

Příklad 512:

Methyl-(2S)-2-( {4- [4-amino-3 -(4- {[2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoyl]amino} -3 methoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-l-yl]benzyl}amino)-3-(4//-4imidazolyl)propanoát

Směs Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), dihydrochloridu methylesteru L-histidinu (0,046 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 3 dnů. Přidá se další podíl dihydrochloridu methylesteru Lhistidinu (0,100 g, 0,59 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0, 085 g, 0,40 mmol) a reakční směs se třepe po dobu 2 dnů, přidá se IN NaOH (1 ml) a hnědý precipitát se spojí filtrací, filtrát se extrahuje dichlormethanem (5 ml) a organický extrakt se koncentruje a spojí s předešlým hnědým pevným podílem. Surová směs se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 18,9-20,5 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá methyl-(25)-2-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoyljamino} -3 -methoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]benzyl} amino)-3 -(4//-4imidazolyl)propanoát ve formě bílé pevné látky, (0,029 g, 0,041 mmol): ’H NMR (déDMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (ÍH, s), 8,35-8,38 (2H, m), 8,13 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,99-8,02 (ÍH, m), 7,90 (ÍH, d, J = 10,8 Hz), 7,75 (ÍH, d, J = 8,4 Hz), 7,51 (ÍH, s), 7,39-7,45 (5H, • · · · » ·

............

. . .··· . . · · ......

495

m), 6,78 (1H, bs), 3,96 (3H, s), 3,82 (1H, d, J = 14,0 Hz), 3,59 (3H, s), 3,47 (1H, t, J = 6, 4 Hz), 2,80-2,89 (2H, m) a 1, 91 (3H, s);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5% 100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 11,15 minut. MS: MH⁺ 704,2.

Příklad 513:

NI - {4-[4-amino-1 -(4- {[(2-methoxyethyl)amino]methyl} fenyl)- 17/-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs N\ - {4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)- 17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 2-methoxyethylaminu (0,018 g, 0,24 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,106 g, 0,500 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes filtr Acrodisc stříkačkového typu a purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující při 15,0-16,2 minutě se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá 1 A- {4-[4-amino-1-(4- {[(2-methoxyethyl)amino]methyl}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl }-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,010 g, 0,016 mmol):

‘H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, d, J = 4,0 Hz), 8,35-8,37 (2H, m), 8,16 (2H, d, J = 8,0 Hz), 8,01 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,90 (1H, d, J = 10,0 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,52 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,45 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8, 8 Hz), 3,96 (3H, s), 3,80 (2H, s), 3,42-3,45 (2H, m), 3,25 (2H, m) a 2,70-2,71 (2H, m);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,23 minut. MS: MH⁺ 610,2.

Příklad 514:

Al -(4- {4-amino-1 -[4- {([2-(dimethylamino)ethyl] amino} methyl)fenyl] -1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs Al-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 2) (0,080 g, 0,14

496 mmol), N, V-dimethylaminoethylaminu (0,03 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,100 g, 0,472 mmol) v dichlorethanu (1,4 ml) se třepe při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, přidá se IN NaOH (1 ml) a reakční směs se koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje přes filtr Acrodisc stříkačkového typu a purifikuje RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min); frakce eluující z 16,5-17,8 minuty se spojí, koncentrují a lyofilizují, čímž se získá Vl-(4-{4amino-l-[4-{([2-(dimethylamino)ethyl]amino}methyl)fenyl]-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0,032 mmol):

^JH NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, d, J = 4,4 Hz), 8,35-8,37 (2H, m), 8,15 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,01 (1H, t, J = 7, 8 Hz), 7,90 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 7, 6 Hz), 7,50 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,45 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8,0 Hz), 3,96 (3H, s), 3,77 (2H, s), 2,59 (2H, t, J = 6,6 Hz), 2,35 (2H, t, J = 6,6 Hz) a 2,12 (6H, s);

RP-HPLC (Hypersil Cl 8, 5 pm, 100Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,85 minut. MS: MH⁺ 623,2.

Příklad 515:

VI - {4-[4-amino-1 -(2-hydroxy ethyl)-1 V-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} 2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs 2-(4-amino-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)ethanolu (Meziprodukt 3) (0,120 g, 0,393 mmol), Vl-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (0,190 g, 0,433 mmol), palladiumtetrakis(trifenylfosfinu) (0,045 g, 0,039 mmol) a uhličitanu sodného (0,100 g, 0,943 mmol) v DME (3,9 ml) a vodě (3,9 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a organické rozpouštědlo se odstraní za vakua, precipitát se spojí filtrací, promyje vodou (20 ml) a etherem (20 ml) a suší za vakua, čímž se získá Vl-{4-[4-amino-l-(2-hydroxyethyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid ve formě hnědé pevné látky (0,125 g, 0,254 mmol):

^!H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,89 (1H, d, J = 4,0 Hz), 8,31 (1H, d, J = 8,0 Hz),

8,25 (1H, s), 7,99 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,89 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,0 Hz),

7,34 (1H, s), 7,31 (1H, d, J = 8,4 Hz), 4,89 (1H, s), 4,40 (2H, t, J = 5,6 Hz), 3,94 (3H, s) a

3,86 (2H, t, J = 5,6 Hz);

497

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0, 1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 9,85 minut. MS: MH⁺ 491.

Příklad 516:

V2-{4-[4-amino-l-(2-hydroxyethyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamid

Směs 2-(4-amino-3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-1 -ethanolu (Meziprodukt 3) (0,364 g, 1,19 mol), V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-l -methyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,485 g, 1,19 mmol), palladiumtetrakis(trifenylfosfinu) (0,138 g, 0,119 mmol) a uhličitanu sodného (0,303 g, 2,86 mmol) v DME (12 ml) a vodě (12 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 4 hodin, pak se ochladí pokojovou teplotu, DME se odstraní za vakua a výsledný precipitát se spojí filtrací a promyje vodou (50 ml) a etherem (50 ml), čímž se získá N2-{4-[4-amino-1 -(2hydroxy ethyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl} -1 -methyl-1H-2indolkarboxamid ve formě hnědé pevné látky (0,459 g, 1,00 mmol):

'H NMR (dg-DMSO, 400 MHz): δΗ 9, 44 (1H, s), 8,26 (1H, s), 8,12 (1H, d, J = 8,0 Hz),

7,70 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,29-7,41 (6H, m), 7,15 (1H, t, J = 7,4 Hz), 4,90 (1H, t, J = 5,8 Hz), 4,41 (2H, t, J = 5,8 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s) a 3,86 (2H, q, J = 5,9 Hz);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,52 minut. MS: MH⁺ 458,2.

Příklad 517:

Trimaleát V2-(4- {4-amino-1 - [2-(4-methylpiperazino)ethyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu

Směs 2- [4-amino-3 -(3 -methoxy-4- {[(1 -methyl-1 //-2-indolyl)karbonyl]amino} fenyl)- l//-pyrazolo[3,4-í/|pyrimidin-l-yl]ethyl-methansulfonátu (Meziprodukt 4) (0,265 g, 0,495 mmol), V-methylpiperazinu (0,065 ml, 0,58 mmol) a triethylaminu (0,10 ml, 0,74 mmol) v DMF (5 ml) se zahřívá při teplotě 70°C po dobu 20 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Přidá se voda (25 ml) a výsledný precipitát se spojí filtrací, promyje vodou (25 ml) a etherem (50 ml) a suší za • · · ·

498 vakua, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí chromatografií na sloupci silikagelu, příslušné frakce se spojí a koncentrují, čímž se získá /V2-(4-{4-amino-1-[2-(4methylpiperazinojethyl] -1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methylΙΑ-2-indolkarboxamid ve formě béžového pevného podílu (0,084 g, 0,16 mmol):

‘H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,44 (1H, s), 8,26 (1H, s), 8,11 (1H, d, J = 8,4 Hz),

7.70 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,29-7,35 (4H, m), 7,15 (1H, t, J = 7, 4 Hz), 4,46 (2H, t, J = 6, 8 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 2,80 (2H, t, J = 6,6 Hz), 2,49-2,50 (2H, zastíněno pikem DMSO), 2,23-2,26 (4H, m), 2,12 (3H, s) a 0,97-0,99 (2H, m);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,24. MS: MH⁺ 540,3.

Do směsi /V2-(4- {4-amino-1 -[2-(4-methylpiperazino)ethyl]-1 A-pyrazolo[3,4(/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-l A-2-indolkarboxamidu (0,082 g, 0,15 mmol) v horkém ethylacetátu (2 mol) se přidá roztok kyseliny maleinové (0,053 g, 0,46 mmol) v horkém ethylacetátu (1 ml), čímž se ihned vytvoří precipitát. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací, promyje ethylacetátem (5 ml) a suší za vakua, čímž se získá trimaleát A2-(4-{4-amino-l-[2-(4methylpiperazino)ethyl]-lA-pyrazolo[3,4-//]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methylΙΑ-2-indolkarboxamidu ve formě béžového pevného podílu (0,090 g, 0,10 mmol):

*H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,45 (1H, s), 8,27 (1H, s), 8,12 (1H, d, J = 8,0 Hz),

7.71 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,29-7,36 (4H, m), 7,15 (1H, t, J = 7,4 Hz), 6,17 (6H, s), 4,50 (2H, t, J - 6,4 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,10-3,20 (4H, m), 2,92-2,95 (4H, m), 2,74 (3H, s) a 2,32-2,37 (2H, m);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,48 minut. MS: MH⁺ 540,3.

Příklad 518:

/V2-{4-[4-amino-l-(2-morfolinoethyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl} -1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid-dimaleát

Do směsi 2-[4-amino-3-(3-methoxy-4- {[(1 -methyl- ΙΑ-2-indo lyl)karbonyl] amino} fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-//]pyrimidin-1 -yl] ethyl-methansulfonátu (Meziprodukt 4) (0,200 g, 0,373 mmol), triethylaminu (0,052 ml, 0,37 mmol) a jodidu sodného (0,056 g, 0,37 mmol) v DMF (5 ml) se přidá morfolin (0,039 ml, 0,45 mmol). Reakční směs se • »

499 zahřívá při teplotě 60°C po dobu 60 hodin. Přidá se morfolin (0,100 ml, 1,15 mmol) a reakční směs se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 30 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za vakua, přidá se voda (5 ml) a výsledný precipitát se spojí filtrací, promyje vodou (5 ml) a etherem (10 ml) a suší za vakua, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí (2x) chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 20% MeOHCH₂C1₂); příslušné frakce se spojí a koncentrují, čímž se získá béžový pevný podíl, který se trituruje etherem a suší za vakua, čímž se získá V2-{4-[4-amino-l-(2-morfolinoethyl)-lVpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-l-methyl-lV-2-indolkarboxamid ve formě bílé pevné látky (0,048 g, 0,054 mmol):

*H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,44 (1H, s), 8,26 (1H, s), 8,11 (1H, d, J = 8,0Hz),

7.70 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,58 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,29-7,35 (4H, m), 7,15 (1H, t, J = 7,6 Hz), 4,48 (2H, t, J = 6,4 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,50-3,53 (4H, m), 2,82 (2H, t, J = 6,2 Hz) a 2,47-2,51 (4H, m);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,02 minut. MS: MH⁺ 527,3.

Do směsi N2- {4-[4-amino-1 -(2-morfolinoethyl)-1 V-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3yl]-2-methoxyfenyl}-l-methyl-lV-2-indolkarboxamidu (0,048 g, 0,091 mmol) v horkém ethylacetátu (2 ml) se přidá roztok kyseliny maleinové (0,021 g, 0,18 mmol) v horkém ethylacetátu (1 ml), čímž se okamžitě vytvoří precipitát. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací, promyje ethylacetátem (5 ml) a suší za vakua, čímž se získá V2-{4-[4-amino-l-(2-morfolinoethyl)-lV-pyrazolo[3,4ó/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-l-methyl-lV-2-indolkarboxamid-dimaleát ve formě světle hnědé pevné látky (0,030 g, 0,039 mmol):

'H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,45 (1H, s), 8,31 (1H, s), 8,15 (1H, d, J = 8,0 Hz),

7.71 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,31-7,35 (4H, m), 7,16 (1H, t, J = 7,4 Hz), 6,17 (4H, s), 4,72-4,73 (2H, m), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,72-3,79 (4H, m) a 3,103,30 (6H, zastíněno pikem vody);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 11,08 minut.

MS: MH⁺ 527, 3.

·· ·

500

Příklad 519:

7V2-[4-(4-amino-1 - {2-[(2-hydroxyethyl)amino]ethyl} -1 V-pyrazolo[3,4-cQpyrimidin-3-yl)2-methoxyfenyl]-1 -methyl- lV-2-indolkarboxamid-monomaleát

Směs 2-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(l-methyl-lV-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-lV-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl]ethyl-methansulfonátu (Meziprodukt 4) (0,080 g, 0,15 mmol), ethanolaminu (0,05 ml, 0,82 mmol), triethylaminu (0,021 ml, 0,15 mmol) a jodidu sodného (0,021 g, 0,15 mmol) v DMF (2,5 ml) se zahřívá při teplotě 70°C po dobu 15 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje, přidá se voda (5 ml) a výsledný precipitát se spojí filtrací a promyje vodou (5 ml), surový pevný podíl se čistí chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 20% MeOH-CFfCh), příslušné frakce se spojí a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá V2-[4-(4-amino-l-{2-[(2hydroxyethyl)amino]ethyl}-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-lmethyl-lV-2-indolkarboxamid ve formě bílé pevné látky (0,009 g, 0,02 mmol).

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0, 1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 9, 39 minut. MS: MH⁺501,3.

Do horkého roztoku V2-[4-(4-amino-l-{2-[(2-hydroxyethyl)amino]ethyl}-lVpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-lV-2-indolkarboxamidu (0,009 g, 0,02 mmol) v ethylacetátu (2 ml) se přidá roztok kyseliny maleinové (0,005 g, 0,04 mmol) v ethylacetátu (0,5 ml). Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací a suší za vakua, čímž se získá /V2-[4-(4-amino-l-{2-[(2hydroxyethyl)amino]ethyl}-lV-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-lmethyl-lV-2-indolkarboxamid-monomaleát ve formě bílé pevné látky (0,009 g, 0,014 mmol):

*H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,45 (1H, s), 8,69-8,74 (2H, bs), 8,31 (1H, s), 8,14 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,32-7,36 (4H, m), 7,15 (1H, t, J = 7,4 Hz), 6,07 (2H, s), 5,28 (1H, t, J = 4,2 Hz), 4,71 (2H, t, J = 5,8 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,65-3,67 (2H, m), 3,50-3,60 (2H, m) a 3,10-3,20 (2H, m);

RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 9,97 minut.

MS: MH⁺ 501, 3.

501

Příklad 520:

V2-(4-{4-amino-l-[2-(dimethylamino)ethyl]-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-1 -methyl- lV-2-indolkarboxamid-monomaleát

Směs 2-[4-amino-3-(3-methoxy-4- {[(1 -methyl-1 V-2-indolyl)karbonyl]amino} fenyl)- lV-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl]ethyl-methansulfonátu (Meziprodukt 4) (0,080 g, 0,15 mmol), dimethylaminu (2,0 M v THF, 0,07 ml, 0,15 mmol), triethylaminu (0,021 ml, 0,15 mmol) a jodidu sodného (0,021 g, 0,15 mmol) v DMF (2,5 ml) se zahřívá v utěsnitelné nádobě při teplotě 70°C po dobu 15 hodin. Přidá se další dimethylaminový roztok (0,10 ml) a reakční směs se zahřívá při teplotě 70°C po dobu 20 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za vakua, přidá se voda (5 ml) a výsledný precipitát se spojí filtrací a purifikuje chromatografií na sloupci silikagelu (elucí 20% MeOH:CH₂Cl₂ až 10:30:60 Et₃N:MeOH:CH₂Cl₂); příslušné frakce se spojí a koncentrují, čímž se získá V2-(4-{4-amino-l-[2-(dimethylamino)ethyl]-lV-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-l V-2-indolkarboxamid ve formě bílé pevné látky (0,009 g, 0,02 mmol).

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,52. MS: MH⁺ 485, 2.

Do horkého roztoku V2-(4-{4-amino-l-[2-(dimethylamino)ethyl]-l//-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-1-methyl-lV-2indolkarboxamidu (0,009 g, 0,02 mmol) v ethylacetátu (2 ml) se přidá roztok kyseliny maleinové (0,005 g, 0,04 mmol) v ethylacetátu (1 ml). Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací a suší za vakua, čímž se získá V2-(4-{4-amino-l-[2-(dimethylamino)ethyl]1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 methyl-1 V-2-indolkarboxamidmonomaleát ve formě bílé pevné látky (0,005 g, 0,008 mmol):

’H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,46 (1H, s), 8,32 (1H, s), 8,15 (1H, d, J = 8,0 Hz),

7,71 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,32-7,35 (4H, m), 7,16 (1H, t, J = 7,4 Hz), 6,06 (2H, s), 4,75 (2H, t, J = 6, 0 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,65 (2H, t, J = 5,6 Hz) a 2,88 (6H, s);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0, 1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min). R_t 10, 08 minut. MS: M⁺ 485, 2.

« *

502

Příklad 521:

Trimaleát N2-(4-{4-amino-l-[2-(l//-l-imidazolyl)ethyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu

Směs 2-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(l-methyl-l//-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]ethyl-methansulfonátu (Meziprodukt 4) (0,080 g, 0,15 mmol), imidazolu (0,011 g, 0,15 mmol), triethylaminu (0,021 ml, 0,15 mmol) ajodidu sodného (0,021 g, 0,15 mmol) v DMF (2,5 ml) se zahřívá při teplotě 70°C po dobu 15 hodin. Přidá se imidazol (0,011 g, 0,15 mmol) a reakční směs se zahřívá při teplotě 70°C po dobu 60 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a koncentruje za vakua. Přidá se voda (5 ml) a výsledný precipitát se spojí filtrací, čímž se získá béžový pevný podíl, který se vytřepává v horkém ethylacetátu, pak nechá pomalu vychladnout na pokojovou teplotu a filtrát se koncentruje, čímž se získá JV2-(4-{4-amino-1-[2-( 1H-1imidazolyl) ethyl] -1//-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfeny l)-l-methyl-1//-2indolkarboxamid (0,034 g, 0,067 mmol):

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,45 minut. MS: M+ 508,2.

Do horké směsi N2-(4-{4-amino-l-[2-(l//-l-imidazolyl)ethyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,034 g, 0,067 mmol) v ethylacetátu (2 ml) se přidá roztok kyseliny maleinové (0,016 g, 0,13 mmol) v ethylacetátu (1 ml), čímž ihned vznikne bílý precipitát. Reakční směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a precipitát se spojí filtrací a suší za vakua, čímž se získá trimaleát N2-(4-{4-amino-l-[2-(l//-l-imidazolyl)ethyl]-l//-pyrazolo[3,4-</Jpyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-l-methyl-l//-2-indolkarboxamidu ve formě žluté pevné látky (0,011 g, 0,011 mmol):

*H NMR (de-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,44 (1H, s), 8,90 (1H, s), 8,20 (1H, s), 8,12 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,58-7,63 (3H, m), 7,32-7,36 (2H, m), 7,24-7,26 (2H, m), 7,16 (1H, t, J = 7,6 Hz), 6,18 (6H, s), 4,85 (2H, t, J = 6,8 Hz), 4,71 (2H, t, J = 5,2 Hz), 4,04 (3H, s) a 4,00 (3H, s);

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 1 ml/min), R_t 10,35 minut. MS: M+ 508,2.

503

Příklad 522:

Vl-{4-[4-Amino-l-(4-oxocyklohexyl)-l A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl} -2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Roztok 2-fluor-4-trifluormethyl-l-benzenkarbonylchloridu (0,87 g, 3,83 mmol) v dichlormethanu (5 ml) se přidá do směsi pyridinu (15 ml) a 4-[4-amino-3-(4-amino-3methoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-cyklohexanonu (1,00 g, 2,56 mmol) v dichlormethanu (5 ml) při teplotě 0°C v průběhu 5 minut. Směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichiormethan, dichlormethanová vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (2x) a nasycený vodný roztok chloridu sodného roztok, suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahušťuje za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití systému Isco, čímž se získá NI-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexy 1)-1//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,95 g, 1,76 mmol) ve formě bílé pevné látky:

*H NMR -508(DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,90 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,28 (s, IH), 7,99 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,34 (s, IH), 7,30 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 5,27 (m, IH), 3,94 (s, 3H), 2,70 (m, 2H), 2,47 (m, 4H), 2,17 (m, 2H);

RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,23 minut. MS: MH⁺543.

Příklad 523:

CM-Vl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-lA-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid: a

Příklad 524:

Trans-Nl - {4- [4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2methoxy fenyl} -2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Morfolin (0,08 ml, 0,93 mmol) se přidá do směsi Vl-{4-[4-amino-l-(4oxocyklohexyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J] pyrimidin-3-yl] -2-methoxyfenyl} -2-fluor-4• ·

504 trifluormethylbenzamidu (Příklad 522) (0,42 g, 0,78 mmol) a octové kyseliny (0,11 ml, 1,86 mmol) v dichlorethanu (25 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 10 minut. Do směsi se přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,23 g, 1,09 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se voda (6 ml), poté uhličitan sodný (0,38 g, 4,53 mmol). Směs se míchá po dobu 1 hodiny a organická vrstva se oddělí, vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (20 ml), spojené organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití systému Isco, čímž se získá cis-Nl - {4- [4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,23 g, 0,37 mmol) a trans-Nl-{4-[4amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxy-fenyl} 2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,09 g, 0,14 mmol) ve formě bílý pevných látek. Data pro cis-Nl - {4-[4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid:

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H),

7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,83 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,62 (br, 4H), 1,57-2,55 (m, 10H); MS: MH⁺ 614.

Data po dobu Zrfln5-Al-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-lA-pyrazolo[3,4rijpyrimidi n-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2-fluor-4-trifluormethylbenzamid:

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,99 (t, 1H),

7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 4,67 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,59 (br, 4H), 1,48-2,69 (m, 10H); MS: MH⁺ 614.

Příklad 525:

Cz.s-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxyfenyl)-! A-pyrazolo[3,4-ůř]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoát; a

Příklad 526:

Aízz?A'-ethyl-3 -({4- [4-amino-3 -(4- {[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino} -3 methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-1 -yl]cyklohexyl} amino)propanoát • · · • · · · · · • ·

505

Podobným způsobem jako je příprava cz,s'-Vl-{4-[4-amino-l-(4morfolinocyklohexyl)-lA-pyrazolo[3,4-<T]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4trifluormethylbenzamidu a trans-Nl - {4- [4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1Hpyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu se připraví czs-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxy feny 1)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl} amino jpropanoát a transethyl-3 -({4-[4-amino-3-(4- {[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3 -methoxyfenyl)-1Apyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoát ve formě bílých pevných látek. Data pro m-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]py rimidin-1 -yljcyklohexyl} aminojpropanoát:

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,00 (t, 1H),

7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,37 (m, 1H), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,76 (m, 2H), 2,32 (m, 2H), 1,88 (m, 2H), 1,67 (m, 4H), 1,16 (t, 3H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 08, 5 pm, 100Á, 250x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0, 05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 7,92 minut. MS: MH⁺644.

Data pro řra«s-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yljcyklohexyl} aminojpropanoát:

Ή NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H),

7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,68 (m, 1H), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,82 (m, 2H), 2,46 (m, 5H), 1,91-2,07 (m, 6H), 1,18 (t, 3H);

RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 08, 5 m, 100Á, 250 x 4,6 mm, 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 7,69 minut. MS: MH⁺644.

Příklad 527:

Cz.s-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3-methoxyfenyl)-l Apyrazolo [3,4-í/jpyrimidin-1 -yljcyklohexyl} aminojpropanová kyselina

Směs czs-ethyl-3 -({4- [4-amino-3 -(4- {[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino} -3 methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yljcyklohexyl}aminojpropanoátu (Příklad 525) (0,23 g, 0,36 mmol), p-dioxanu (15 ml), hydroxidu draselného (0,10 g, 1,81 mmol) a vody (1,5 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 3 hodin. Rozpouštědla se zahušťují a • · · ·

506 zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá czs-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4trifluormethylbenzoyl]amino}-3-methoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl]cyklohexyl}amino)propanová kyselina (0,11 g, 0,18 mmol) ve formě bílé pevné látky:

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,91 (dd, ÍH), 8,31 (d, ÍH), 8,25 (s, ÍH), 8,00 (t, ÍH),

7,89 (d, ÍH), 7,75 (d, ÍH), 7,35 (s, ÍH), 7,32 (s, ÍH), 6,89 (br, 2H), 4,79 (m, ÍH), 3,95 (s, 3H), 2,46-3,00 (m, 7H), 2,29 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,80 (m, 2H);

RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitrilO, 05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 6,06 minut. MS: MH⁺616.

Příklad 528:

Trans-3 -({4- [4-amino-3 -(3 -methoxy-4- {[2-methoxy-4trifluormethylbenzoyl] amino} fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-1 yljcyklohexyl }amino)propanová kyselina

Směs /ra«5'-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoátu (Příklad 526) (0,04 g, 0,06 mmol), p-dioxanu (4 ml), hydroxidu draselného (0,02 g, 0,31 mmol) a stopových množství methanolu a vody (0,4 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 1 hodiny. Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc při teplotě 80°C po dobu 4 hodin. Rozpouštědla se zahušťují a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá trans-3-({4[4-amino-3 -(3 -methoxy-4- {[2-methoxy-4-trifluormethylbenzoyl]amino} fenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanová kyselina (0,04 g, 0,06 mmol) ve formě bílé pevné látky:

‘HNMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,72 (s, ÍH), 8,61 (d, ÍH), 8,28 (d, ÍH), 8,24 (s, ÍH), 7,61 (s, ÍH), 7,53 (d, ÍH), 7,33 (s, ÍH), 7,29 (d, ÍH), 4,72 (m, ÍH), 4,20 (s, 3H), 4,05 (s, 3H), 1,44-3,61 (m, 13H);

RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-O, 05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 6,36 minut. MS: MH⁺628.

507

Příklad 529:

NI-[4-(4- Amino-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid

A. Vl-[4-(4-Amino-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid

Směs 3-jod-l-trityl-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,10 g, 0, 19 mmol), VI[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamidu (0,13 g, 0,29 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,01 g, 0,01 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,06 mg, 0,48 mmol) ve vodě (2 ml) a dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) se zahřívá při teplotě 85°C přes noc. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku, ke zbytku se přidá voda a směs se extrahuje ethylacetátem (3x). Spojené organické podíly se promyjí nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití systému Isco, čímž se získá VI - [4-(4-amino-1 -trityl-1 A-pyrazolo[3,4-</)pyrimidin-3 -yl)-2-methoxyfenyl] -2-fluor-4trifluormethylbenzamid (0,12 g, 0,17 mmol) ve formě bílé pevné látky:

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,89 (dd, IH), 8,25 (d, IH), 8,28 (s, IH), 8, 00 (t, IH), 7,94 (s, IH), 7,88 (d, IH), 7,73 (d, IH), 7,24 (m, 15H), 3,90 (s, 3H); MS: MH⁺ 689.

Β. VI -[4-(4-Amino- lA-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid

Směs Vl-[4-(4-amino-l-trityl-l V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (2,10 g, 1,75 mmol), 6 N vodné kyseliny chlorovodíkové (10 ml), p-dioxanu (10 ml) a ethanolu (8 ml) se zahřívá při teplotě 50°C po dobu 6 hodin. Směs se filtruje a pevný podíl se promyje ethanolem, suší ve vakuové sušárně přes víkend a purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, čímž se získá Vl-[4-(4-amino-lA-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid (0,35 g, 0,78 mmol). Filtrát se koncentruje a purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu a preparativní HPLC, čímž se získá stejný produkt VI -[4-(4-amino-l A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,67 g, 1,51 mmol) ve formě bílé pevné látky:

« ·

508 ’Η NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 13,58 (s, ÍH), 9,90 (dd, ÍH), 8,30 (d, ÍH), 8,23 (s, ÍH), 8,05 (t, ÍH), 7,90 (d, ÍH), 7,75 (d, ÍH), 7,36 (s, ÍH), 7,24 (d, ÍH), 3,94 (s, 3H); MS: MH⁺447.

Příklad 530:

Al-[4-(4-Amino-l-tetrahydro-2A-4-pyranyl-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl)-2methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Diethyl-azodikarboxylát (0,07 ml, 0,45 mmol) se přidá do směsi Al-[4-(4-aminolA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (0,10 g, 0,22 mmol), trifenylfosfinu (0,12 g, 0,45 mmol) a tetrahydro-4A-pyran-4-olu (0,04 g, 0,34 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se tetrahydro-4A-pyran-4-ol (0,01 g, 0,11 mmol), trifenylfosfin (0,04 g, 0,15 mmol) a diethyl-azodikarboxylát (0,02 ml, 0,15 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědla se zahušťují a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá Al-[4-(4-amino-l-tetrahydro-2A-4-pyranyl-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,03 g, 0,06 mmol) ve formě bílé pevné látky:

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,91 (dd, ÍH), 8,30 (d, ÍH), 8,25 (s, ÍH), 8,00 (t, ÍH),

7,89 (d, ÍH), 7,75 (d, ÍH), 7,34 (s, ÍH), 7,31 (d, ÍH), 6,90 (br, 2H), 4,95 (m, ÍH), 4,02 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,56 (t, 2H), 2,22 (m, 2H), 1,89 (m, 2H); MS: MH⁺ 531.

Příklad 531:

Al - {4- [4-Amino-1 -(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-é/]pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyl} -2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

A. 4-(4-Amino-3-j od-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl)-2-cyklopenten-1 -ol

Směs tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,04 g, 0,03 mmol), 3-jod-lA-pyrazolo[3,4d]pyrimidin-4-aminu (0,30 g, 1,14 mmol) a dimethylsulfoxidu (3 ml) se míchá při pokojové teplotě ve tmě po dobu 2 minut a ochladí na teplotu 0°C. Do směsi při teplotě 0°C se přidá roztok 2,4a-dihydro-laA-cyklopenta[ó]oxirenu (0,14 g, 1,72 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 3 hodin. Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc a purifikuje preparativní HPLC, čímž se získá 4-(4-amino-3• ·

509 jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)-2-cyklopenten-l-ol (0,24 g, 0,70 mmol) ve formě bílé pevné látky:

RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-O, 05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 4,23 minut. MS: MH⁺344.

B. Al - {4- [4-Amino-1 -(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Směs 4-(4-amino-3 -j od-1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-2-cyklopenten-1 -olu (0,12 g, 0,35 mmol), Al-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (0,23 g, 0,53 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,02 g, 0,02 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,11 g, 0,88 mmol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (6 ml) a vody (3 ml) při teplotě 85°C po dobu 6 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá Al-{4-[4-amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,18 g, 0,34 mmol) ve formě bílé pevné látky:

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 6,09 (d, 1H), 5,93 (d, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,31 (m, 1H), 4,74 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,84 (m, 1H), 2,02 (m, 1H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8, 50 minut. MS: MH⁺529.

Příklad 532:

Al - {4- [4-Amino-1 -(3 -hydroxycyklopentyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-y 1 ]-2methoxy fenyl} -2-fluor-4-trifluormethy lbenzamid

Směs Al-{4-[4-amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (0,10 g, 0,19 mmol) a 10% palladia na aktivním uhlí (0,03 g) v ethanolu (10 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou vodíku přes noc. Směs se filtruje a filtrát se čistí preparativní HPLC, čímž se

510 získá NI - {4- [4-amino-1 -(3 -hydroxycyklopentyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,07 g, 0,13 mmol) ve formě bílé pevné látky:

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,91 (dd, IH), 8,31 (d, IH), 8,24 (s, IH), 8,00 (t, IH),

7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,34 (s, IH), 7,30 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 5,17 (m, IH), 4,97 (m, IH), 4,22 (m, IH), 3,94 (s, 3H), 1,79-2,41 (m, 6H); MS: MH⁺ 531.

Příklad 533:

4-(4-Amino-3-{4-[(l//-2-indolylkarbonyl)amino]-3-methoxyfenyl}-l//-pyrazolo[3,4tíQpyrimidin-1 -yl)hexahydropyridinium-acetát

Oxalylchlorid (0,06 ml, 0,60 mmol) se přidá do roztoku indol-2-karboxylové kyseliny (0,88 g, 0,546 mmol) v dichlormethanu (5 ml) a tetrahydrofuranu (5 ml) při teplotě 0°C, pak se přidá A/A-dimethylformamid (3 kapky z 0,1 ml stříkačky) a směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Rozpouštědla a přebytek činidel se zahušťuje za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe do dichlormethanu (2 ml) a výsledný roztok (1,25 ml) se přidá do roztoku /erc-butyl-4-[4amino-3-(4-amino-3-methoxy fenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl]-1 -piperidinkarboxylátu (0,12 g, 0,27 mmol) a pyridinu (0,4 ml) v dichlormethanu (1 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Přidá se trifluoroctová kyselina (1 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá 4-(4-amino-3-{4-[(l//-2indolylkarbonyl)amino]-3 -methoxyfenyl} 1 //-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-1 yl)hexahydropyridinium-acetát (0,07 g, 0,14 mmol) ve formě bílé pevné látky:

^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 11,85 (br, IH), 9,45 (s, IH), 8,24 (d, IH), 8,12 (d, IH), 7,68 (d, IH), 7,48 (d, IH), 7,40 (s, IH), 7,35 (s, IH), 7,30 (d, IH), 7,24 (t, IH), 7,09 (t, IH), 4,77 (m, IH), 3,97 (s, 3H), 3,11 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,84 (m, 2H); MS:MH⁺483.

511

Příklad 534-549:

Následující sloučeniny se připraví stejným způsobem jako 4-(4-amino-3-{4-[(l V-2indolylkarbonyljamino] -3-methoxyfenyl} -1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-1 yljhexahydropyridinium-acetát (Příklad 533).

Struktura	MS: MH⁺	HPLC R_t (min) (Hypersil Cl8, 5 pmn, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min)	Př. č.
§ /a V-» Ar 6	567	6,97	534
Λ' 1 w ^Λ°- V	486	5,89	535
* S—L ° N Xs=/ rt VQ ^Λ°- ó	497	6,28	536
V-N Á$° j “-N	513	5,61	537

• ·

512

0 r n yY li i J4 o '-Ν’	/s	497	6,39	538
o	Λ
	>		512	6,22	539
t X N o Γ Z? m y~^J	r\ r 0
TjC ⁿ b *—N		A)·
			483	5,73	540
o.F	V-N O
n yY vQ* V_N’		X
t a.	/X íl Vn		513	7,78	541
X W' ^Οζ^	s	<?
^b '-i/		Λο
	έ)		501	8,23	542
1 yi- °s-4	Vn o
n yj
ťSÁ, % ^f'l o		Λ-

513

V vs Λλ Af	Cl c? Vň	A	517	8,7	543
		a	517	8,73	544
Á ó N ys/ A,	An o	A

		i <0	513	7,83	545
	y^N
	Ό
Δ> %Ά O v		A
	ζ		511	9,07	546
	VN
d^	O
j· r OT Za		A
C	ΐ
	c		497	8,37	547
/ N °>^C	y-N o
w		A-

• · · ·

514

& Xn ° čí X 0	528	7,9	548
CpQ q r_o	559	9,5	549
Γ / n v* o íX X- o

Příklad 550:

4-[4-Amino-3-(4-{[(l-ethyl-l A-2-indolyl)karbonyl]amino}-3-methoxyfenyl)-l Apyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-1 -yl]hexahydropyridinium-acetát

Do roztoku A2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-lA-2-indolkarboxamidu (0,08 g, 0,14 mmol) v N,A-dimethylforamidu (1,0 ml) při teplotě 0°C se přidá hydrid sodný, 60% suspenze v minerálním oleji (0,006 g, 0,15 mmol). Směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Přidá se roztok ethyljodidu (0,02 g, 0,14 mmol) v A, A-dimethylforamidu (0,5 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se ethyljodid (0,01 g, 0,07 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se trifluoroctová kyselina (3 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Rozpouštědla a přebytek činidel se zahušťuje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá

4-[4-amino-3-(4- {[(l-ethyl-lA-2-indolyl)karbonyl]amino}-3-methoxyfenyl)-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]hexahydropyridinium-acetát (0,05 g, 0,09 mmol) ve formě bílé pevné látky:

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,43 (s, IH), 8,27 (s, IH), 8,14 (d, IH), 7,71 (d, IH), 7,61 (d, IH), 7,34 (s, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,15 (t, IH), 4,96 (m, IH), 4,62 (q, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,00 (m, 2H), 2,28 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,33 (t, 3H); MS: MH⁺ 511.

• · • · *

515

Příklad 551 a 552:

Následující sloučeniny se připraví stejným způsobem jako 4-[4-amino-3-(4-{[(l-ethyl-1/72indolyl)karbonyl]amino} -3 -methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-1 -yl] hexahydropyridinium-acetát (Příklad 550).

Struktura	MS: MH⁺	HPLC R_t (min) (Hypersil Cl8, 5 pmn, 100Á, 250x4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min,l ml/min)	Př. č.
O < Λ v)	523	9,12	551
⁰ tó x°0	540	6,03	552

Příklad 553:

Acetát l-(l-methyl-3-piperidyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu Racemický roztok 3 -j od-1 -(1 -methyl-3 -piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4aminu (0,050 g, 0,00014 mol) v dimethoxyethanu (2,5 ml) a vodě (5 ml) se nechá reagovat s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,033 g, 0,00015 mol), uhličitanem sodným (0,037 g, 0,00037 mol) a tetrakis(trifenylfosfm)palladiem (0,016 g, 0,000014 mol) při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Organické rozpouštědlo se odstraní za vakua a surová látka se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá acetát 1-(1methyl-3piperidyl)-3-(4-ťenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,040 g, 0,00009 mol).

• · · · • ·

516 *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,10-7,22 (m, 5H), 4,74-4,84 (m, 1H), 2,94 (dd, 1H), 2,79 (d, 1H), 2,36 (t, 1H), 2,22 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,86-2,01 (m, 3H), 1,76-1,84 (m, 1H), 1,60-1,75 (m, 1H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,74 minut; MS: MH⁺ 401.

Příklad 554:

Acetát 1 - [ 1 -(2-methoxy ethyl)-3 -piperidyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-úQpyrimidin-4-aminu BSF 4058532F.

Racemický roztok 3-jod-l -[1 -(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-l A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-aminu (0,050 g, 0, 00012 mol) v dimethoxyethanu (2,5 ml) a vodě (5 ml) se nechá reagovat s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,029 g, 0,00014 mol), uhličitanem sodným (0,033 g, 0,00031 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,014 g, 0,00001 mol) při teplotě 80°C po dobu 20 hodin. Organické rozpouštědlo se odstraní za vakua a surová látka se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá acetát 1 - [l-(2-methoxyethyl)-3 -piperidyl] -3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ť/]pyrimidin-4aminu ve formě bílé pevné látky (0,038 g, 0,00007 mol).

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,09-7,22 (m, 5H), 4,71-4,82 (m, 1H), 3,44 (t, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,04 (dd, 1H), 2,91 (d, 1H), 2,47-2,60 (m, 3H), 1,94-2,09 (m, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,75-1,84 (m, 1H), 1,57-1,74 (m, 1H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,26 minut; MS: MH⁺ 445.

Příklad 555:

Trans-l- {4- [4-amino-3 -(3 -chlor-4- {[4-(trifluormethyl)benzoyl]amino} fenyl)-1Apyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}-4-methylhexahydropyrazindiium-dimaleát

A. 7erc-butyl-/V-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamát

Roztok 4-brom-2-chloranilinu (5,00 g, 0,0242 mol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se nechá reagovat s 1,0 M roztokem bis(trimethylsilyl)amidu sodného v tetrahydrofuranu • · ·

517 (53,2 ml, 0,0532 mol). Směs se míchá 15 minut při pokojové teplotě, přidá se roztok di-terc-butyl-dikarbonátu (6, 34 g, 0,0290 mol) a směs se míchá po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi heptan/ethylacetát (4:1). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá fórc-butyl-V-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (4,214 g, 0,0137 mol).

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,75 (s, 1H), 7,71 (d, IM, 7,54 (d, 1H), 7,50 (dd, 1H),

1.46 (s, 9H); TLC (heptan/ethylacetát 4:1) Rf 0,54.

B. Arc-butyl-V-[2-chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát

Směs /erc-butyl-V-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamátu (2,10 g, 0,00685 mol), diboron-pinakolesteru (2,09 g, 0,00822 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocenjdichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,17 g, 0,00021 mol) a octanu draselného (2,02 g, 0,02055 mol) v W-di methyl formami du (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se trituruje heptanem (70 ml) a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu®521, heptan se odstraní za vakua, čímž se získá /erc-butyl-V-[2-chlor-4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát ve formě šedého pevného podílu (1,93 g, 0,00546 mol):

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,65 (s, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,56 (dd, 1H),

1.47 (s, 9H), 1,29 (s, 12H).

C. Trans-terc-bvty\-N-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-<7] py rimidin-3 -yl} -2-chlorfenyl)karbamát

Směs trans-3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-úQpyrimidin-4-aminu (2,20 g, 0,00498 mol), fórc-butyl-V-[2-chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,93 g, 0,00548 mol), uhličitanu sodného (1,32 g, 0,01245 mol) v 1,2-dimethoxyethanu (50 ml) a vodě (100 ml) se intenzivně míchá a přidá se tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakční směs se míchá 6 hodin při teplotě 80°C, po kterých se přidá další tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakční směs se míchá dalších 16 hodin při teplotě 80°C. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (100 ml) a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (200 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje • * • * • ·

518 ethylacetátem (3 x 75 ml). Spojená organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (90:10:0,5). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá trans-terc-butyl-N-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-chlorfenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (1,993 g, 0,00368 mol):

^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,76 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,80 (d, 11-1), 7,68 (d, 1H), 7,57 (dd, 1H), 4,58-4,71 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 1,89-2,61 (m, 15H), 1,49 (s, 9H), 1,40-1,48 (m, 2H); TLC (dichlormethan/methanol = 90:10) Rf 0,13. MS: M⁺ 541.

D. Tra«s-3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-amin

Trans-terc-butyl-N-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Apyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)karbamát (1,993 g, 0,00368 mol) se přidá do roztoku 20% trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu. Směs se míchá po dobu 2 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (50 ml) a promyje 1,0 M vodným roztokem hydroxidu sodného (2 x 25 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá trans-3 -(4-amino-3 -chlorfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4ť/]pyrimidin-4-amin (1,564 g, 0,00355 mol) ve formě bílé pevné látky.

Ή NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,31 (dd, 1H), 6,92 (d, 1H), 4,57-4,63 (m, 1H), 2,23-2,55 (m, 9H), 2,14 (s, 3H), 1,89-2,08 (m, 6H), 1,38-1,52 (m, 2H); TLC (dichlormethan/methanol = 90:10) Rf 0,08; MS: MH⁺ 441.

E. 7ra«.s’-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4t/]pyrimidin-3 -yl} -2-chlorfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamid-dimaleát

Do směsi 3 -(4-amino-3 -chlorfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Apyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridinu (5 ml) při teplotě -10°C se po kapkách přidá 4-(trifluormethyl)-l-benzenkarbonylchlorid (0,188 g, 0,00090 mol), přičemž teplota se udržuje pod -5°C. Směs se míchá při teplotě -10°C po dobu 15 minut, pak při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Poté se přidá IN vodný roztok hydroxidu sodného (1,0 ml) a směs se míchá 1 hodinu. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy se separují a vodná

519 fáze se extrahuje ethylacetátem (15 ml) a spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá purifikovaná volná báze (0,032 g, 0,000052 mol), která se rozpustí v absolutním ethanolu (4 ml) a zahřívá při refluxu. Poté se přidá roztok kyseliny maleinové (0,018 g, 0,000156mol) v absolutním ethanolu (1 ml) a roztok se refluxuje dalších 15 minut. Směs se ochladí pokojovou teplotu a výsledný precipitát se filtruje, promyje minimálním množstvím absolutního ethanolu, precipitát se suší za vakua, čímž se získá /ra/7.s'-A!-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamid-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0,00002 mol):

^!H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 10,42 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,20 (d, 2H), 7,96 (d, 2H), 7,80-7,83 (m, 2H), 7,46 (dd, 1H), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,13 (s, 4H), 4,61-4,73 (m, 1H), 2,522,64 (m, 4H), 2,23-2,46 (m, 5H), 2,16 (s, 3H), 1,902,10 (m, 6H), 1,42-1,56 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,97 minut; MS: MH⁺613.

Příklad 556:

Trans-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamid-dimaleát

Do směsi 3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridinu (5 ml) při teplotě -10°C se po kapkách přidá 4-(trifluormethoxy)-l-benzenkarbonylchlorid (0,203 g, 0,00091 mol), přičemž teplota se udržuje pod -5°C. Směs se míchá při teplotě -10°C po dobu 15 minut a pak při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Poté se přidá IN vodný roztok hydroxidu sodného (1,0 ml) a směs se míchá 1 hodinu. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (15 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za

520 vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá purifikovaná volná báze (0,034 g, 0,000054 mol), která se rozpustí v absolutním ethanolu (4 ml) a zahřívá k refluxu. Přidá se roztok kyseliny maleinové (0,019 g, 0,000162 mol) v absolutním ethanolu (1 ml) a roztok se refluxuje po dobu 15 minut. Směs se ochladí pokojovou teplotu a výsledný precipitát se filtruje, promyje minimálním množstvím absolutního ethanolu a suší za vakua, čímž se získá trans-N\ -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2chlorfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamid-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0,00002 mol):

NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,29 (s, IH), 8,26 (s, IH), 8,14 (d, 2H), 7,78-7,87 (m, 2H), 7,68 (dd, IH), 7,57 (d, 2H), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,11 (s, 4H), 4,65-4,77 (m, IH), 2,383,60 (m, 12H), 1,95-2,15 (m, 6H), 1,51-1,68 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,41 minut; MS: MH⁺ 629.

Příklad 557:

7raz7,s-3-(3-chlor-4-{[(5-methyl-2-furyl-methyl]amino} fenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminacetát

Směs 3 -(4-amino-3 -chlorfenyl)-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlorethanu (20 ml) se nechá reagovat s 5-methyl-2-furfuralem (0,052 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,336 g, 0,00159 mol) při pokojové teplotě. Ve dvou 24 hodinových intervalech se přidají další 2 ekvivalenty triacetoxyborohydridu sodného (0,672 g, 0,00318 mol). Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi chloroform (25 ml) a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje chloroformem (2 x 25 ml). Spojená organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá acetát traH5-3-(3-chlor-4-{[(5-methyl-2-furyl)methyl]amino}fenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,129 g, 0,00022 mol):

521 'Η NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,20 (s, ÍH), 7,51 (d, ÍH), 7,39 (dd, ÍH), 6,93 (d, ÍH), 6,20 (d, ÍH), 6,14 (t, ÍH), 5,98 (d, ÍH), 4,55-4,66 (m, ÍH), 4,38 (d, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,182,61 (m, 10 H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 5H), 1,37-1,53 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,48 minut; MS: MH⁺ 535.

Příklad 558:

Acetát trans-3- {3 -chlor-4- [(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu

Směs 3 -(4-amino-3 -chlorfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlorethanu (20 ml) se nechá reagovat s 2-chlor-6-fluorbenzaldehydem (0,076 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,336 g, 0,00159 mol) při pokojové teplotě. Ve třech 24 hodinových intervalech se přidají další 3 ekvivalenty triacetoxyborohydridu sodného (1,008 g, 0,00477 mol), po kterých veškerá výchozí látka zreaguje. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi chloroform (25 ml) a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje chloroformem (2 x 25 ml). Spojená organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá acetát Zra/«'-3-{3-chlor-4-[(2-chlor-6fluorbenzyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4ď]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,074 g, 0,00011 mol):

^]H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (s, ÍH), 7,52 (d, ÍH), 7,35-7,47 (m, 4H), 6,99 (d, ÍH), 5,75 (t, ÍH), 4,55-4,66 (m, ÍH), 4,57 (d, 2H), 2,25-2,61 (m, 11 H), 2,16 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 4H), 1,37-1,53 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,97 minut; MS: MH⁺ 583.

• · · ·

522

Příklad 559:

Trans-Nl -(4- {4-amino-1 - [l-( 1 A-2-imidazoly lkarbonyl)-4-piperidyl]-1 A-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(/rčz/í5')-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid-maleát

Směs VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3-y l]-2methoxyfenyl}-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamidu (0,200 g, 0,00041 mol) v toluenu (10 ml) se nechá reagovat s 5A,10A-diimidazo[l,5-íz:l,5-</]pyrazin-5,10-dionem (0,040 g, 0,00021 mol) za refluxu po dobu 18 hodin. Přidá se další ekvivalent 5A,10Adiimidazo[l,5-fl:l,5-</]pyrazin-5,10-dionu a směs se refluxuje dalších 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá volná báze (0,103 g, 0,00017 mol), která se rozpustí v absolutním ethanolu (10 ml) a zahřívá k refluxu. Poté se přidá roztok kyseliny maleinové (0,030 g, 0,00034 mol) v absolutním ethanolu (1 ml). Roztok se refluxuje po dobu 15 minut, po kterých vznikne precipitát. Směs se ochladí pokojovou teplotu a výsledný precipitát se filtruje, promyje minimálním množstvím absolutního ethanolu. Precipitát se suší za vakua, čímž se získá /ra«,s-Vl-(4-{4-amino-l-[l-(lA-2-imidazolylkarbonyl)-4piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy ťenyl)-(/ra«.s)-2-fenyl-1 cyklopropankarboxamid-maleát ve formě bílé pevné látky (0,055 g, 0,00008 mol):

’H NM: (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,63 (s, IH), 8,26 (s, IH), 8,22 (d, IH), 8,00 (b, IH), 7,74 (b, IH), 7,43-7,48 (m, IH), 7,16-7,33 (m, 7H), 6,21 (s, 2H), 4,97-5,13 (m, IH), 2,91-3,47 (m, 4H), 2,53-2,65 (m, IH), 2,30-2,45 (m, IH), 2,07-2,26 (m, 2H), 1,95-2,07 (m, 2H), 1,45-1,50 (m, IH), 1,28-1,32 (m, IH);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,17 minut; MS: MH⁺ 578.

Příklad 560:

Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(2-aminoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-d] py rimidin-3-yl}-2-methoxy feny l)-(/raz?.s)-2-fenyI-l -cyklopropankarboxamid-acetát A. Cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(kyanomethyl)-4-hydroxycyklobexyl] -1 A-pyrazolo [3,4íf]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-(/ra«.s')-2-fenyl-1 -cyklopropánkarboxamid • · · ·

523

Směs cis-Nl - {4- [4-amino-1 -(1 -oxaspiro [2.5]okt-6-yl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl }-(/ra«s)-2-fenylcyklopropan-l-karboxamidu (0,605 g, 0,0012 mol), chloristanu lithného (0,189 g, 0,0018 mol) a kyanidu draselného (0,116 g, 0,0018 mol) v acetonitrilu (60 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 2 dnů, ochladí na pokojovou teplotu, zředí vodou (30 ml) a extrahuje diethyletherem (3x 30 ml). Spojená organická fáze se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá cisVI-(4-{4-amino-l-[4-(kyanomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-(/ra«5)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid ve formě bílé pevné látky (0,602 g, 0,0011 mol):

^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,64 (s, ÍH), 8,23 (t, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,25 (s, ÍH), 7,17-(m, 4H), 4,61-4,62 (m, ÍH), 3,91 (s, ÍH), 2,66 (s, 2H), 2,55-2,62 (m, ÍH), 2,31-2,45 (m, 3H), 1,58-1,89 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, ÍH), 1,28-1,38 (m, ÍH);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,21 minut; MS: MH⁺ 538.

B. Cz'.s-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(2-aminoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4r/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(řra«5)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid-acetát

Do roztoku cis-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(kyanomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-1Apyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(/ra«.s)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamidu (0,200 g, 0,00037 mol) v methanolu (20 ml) a hydroxidu amonného (1 ml) se přidá Raneyův nikl (0,5 ml). Směs se míchá 18 hodin pod atmosférou vodíku (1 atm). Reakční směs se filtruje přes Celit a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá cz.s-Vl-(4-{4amino-l-[4-(2-aminoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-(/ramj-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid-acetát ve formě bílé pevné látky (0,045 g, 0,000083 mol):

‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,64 (s, ÍH), 8,23 (d, ÍH), 8,22-8,24 (m, ÍH), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,65-4,67 (m, ÍH), 3,91 (s, 3H), 2,84-2,91 (m, ÍH), 2,53-2,55 (m, ÍH), 2,33-2,40 (m, 4H), 1,85 (s, 3H), 1,35-1,80 (m, 9H), 1,30-1,33 (m, ÍH);

• · · ·

524

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,29 minut; MS: ΜΗ^4- 444.

Příklad 561:

Cis-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(2-amino-2-oxoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-(Zrazzs)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid

Do dobře míchaného roztoku czs-/Vl-(4-{4-amino-l-[4-(kyanomethyl)-4hydroxycyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-//]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-(/ratts)-2-fenyl1-cyklopropankarboxamidu (0,200 g, 0,00037 mol) v dimethylsulfoxidu (4 ml) se při pokojové teplotě přidá uhličitan draselný (0,216 g, 0,00156 mol) a po kapkách 30% vodný roztok peroxidu vodíku (0,6 ml), přičemž teplota se udržuje konstantní. Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 32 hodin. Do směsi se přidá voda (20 ml) a vzniklý precipitát se filtruje, precipitát se promyje vodou a suší za vakua, pevný podíl se čistí preparativní RPHPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá cz\-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(2-amino-2oxoethy l)-4-hydroxy cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)(Zraz7.s')-2-fenyl-l -cyklopropankarboxamid ve formě bílé pevné látky (0,117 g, 0,00021 mol):

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,43-7,48 (m, 1H), 7,15-7,35 (m, 7H), 7,05-7,10 (m, 1H), 4,97 (s, 1H), 4,61-4,71 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,24 (s, 2H), 1,55-1,81 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, 1H), 1,28-1,36 (m, 1H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,05 minut; MS: MH⁺ 556.

Příklad 562:

Czs-Vl-[4-(4-amino-l-{4-[(dimethylamino)methyl]-4-hydroxycyklohexyl}-lApyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-(/raz?,s)-2-fenyl-1 cyklopropankarboxamid-acetát

525

Do roztoku cis-NI - {4- [4-amino-l-( 1 -oxaspiro [2.5] okt-6-y 1)-1 V-pyrazolo [3,4ó/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl}-(Zra«s)-2-fenylcyklopropan-1 -karboxamidu (0,190 g, 0,000302 mol) v 2-propanolu (10 ml) a se přidá 2 M roztok dimethylaminu v methanolu (0,91 ml) a výsledná směs se zahřívá při teplotě 65°C v tlakové nádobě po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá c/.s-Vl-[4-(4-amino-l-{4 [(dimethy lamino )methyl]-4hydroxycyklohexyl} -1 V-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3 -yl)-2-methoxyfenyl]-(/r<ms)-2-feny 11-cyklopropankarboxamid-acetát ve formě bílé pevné látky (0,109 g, 0,000177 mol):

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22-8,24 (m, 1H), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,56-4,68 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,28 (s, 6H), 2,24 (s, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,63-1,78 (m, 4H), 1,44-1,58 (m, 3H), 1,28-1,36 (m, 1H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,54 minut; MS: MH⁺ 556.

Příklad 563:

7raz7.v-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l V-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-(27?)tetrahydro-1 V-2-pyrrolkarboxamid-acetát

Roztok /raz?.v-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00046 mol) v VV-dimethylformamidu (10 ml) se nechá reagovat s l-hydroxy-7-azabenzotriazolem (0,068 g, 0,00050 mol), l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridem (0,132 g, 0,00069 mol), DBoc-prolinem (0,108 g, 0,00050 mol) a W-diisopropylethylaminem (0,184 g, 0,00142 mol) při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (10 ml) a 5% vodný roztok kyseliny citrónové (20 ml). Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2x10 ml). Spojená organická fáze se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se míchá v 20% kyselině trifluoroctové v dichlormethanu po dobu 6 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 5% izokraticky po dobu 5 minut, pak 5%-40% acetonitril-0,1 M octan • φ · • v • *

526 amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá Zran.v-A2-(4-{ 4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfeny l)-(27?)-tetrahydro-1 A-2-pyrrolkarboxamidacetát (0,096 g, 0,00016 mol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 510,33 (s, 1H), 8,45 (d, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,21 (d, 1H), 4,58-4,69 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,77 (dd, 1H), 2,96-3,04 (m, 1H), 2,74-2,84 (m, 1H), 2,47-2,58 (m, 5H), 2,23-2,45 (m, 5H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,88-2,11 (m, 7H), 1,78-1, 88 (m, 1H), 1,60-1,69 (m, 2H), 1,39-1,54 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 8,47 minut; MS: MH⁺ 534.

Příklad 564:

4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl] -1 -pyridiniumolát A. 4-(4-Amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-1 -pyridiniumolát

Roztok 3-jod-1 A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (5,00 g, 0, 019 mol) v

A, A-dimethylformamidu (50 ml) se nechá reagovat s 60% hydridem sodným v oleji (0,92 g, 0,023 mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá po dobu 15 minut a přidá se 4-nitropyridin-A-oxid (5,37 g, 0,038 mol). Směs se zahřívá při teplotě 100°C, po dobu 18 hodin, vzniklý precipitát se filtruje, promyje Α,Α-dimethylformamidem a ethylacetátem, čímž se získá 4-(4-amino-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-l-yl)-l-pyridiniumolát (3,79 g, 0,011 mol) ve formě hnědé pevné látky:

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 8,34 (d, 2H), 8,24 (d, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 7,36 minut; MS: MH⁺ 355.

B. 4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl]-1 -pyridiniumolát

Suspenze 4-(4-amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-1 -yl)-1 -pyridiniumolátu (0,140 g, 0,00040 mol) v dimethoxyethanu (7 ml) a vodě (15 ml) se nechá reagovat s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,093 g, 0,00043 mol), uhličitanem sodným (0,105 g, 0,00099 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,046 g, 0,00004 mol) při teplotě 80°C po dobu 18 hodin, pevný podíl se filtruje, čímž se získá 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lApyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolát (0,138 g, 0,00035 mol) ve formě hnědé κ9 « · · * • ‘ · * · · *«*··· ·· · • · · *

9 9 9 · %» • ·»·«··· * • 9 · · · ·· 9 ··

9999

527 pevné látky, která (0,040 g, 0,00010 mol) se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky po dobu 5 minut, pak 40%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 30 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá produkt 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lV-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolát ve formě bílé pevné látky (0,013 g, 0,00003 mol).

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,44 (s, 1H), 8,34-8,41 (m, 4H), 7,77 (d, 2H), 7,45 (t, 2H), 7,13-7,24 (m, 5H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,66 minut; MS: MH⁺ 397.

Příklad 565:

-(4-F enoxyfenyl)-1 -(4-pyridyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

Suspenze 4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-l-yl] -1pyridiniumolátu (0,100 g, 0,00025 mol) a 10% palladia na aktivním uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) v kyselině octové (3 ml) se nechá reagovat s monohydrátem fosfomanu sodného (0,033 g, 0,00038 mol) při teplotě 60°C. Po 2 hodinách se přidá další 10% palladium na aktivním uhlí (0,016 g, 0,00002 mol). Směs se míchá 18 hodin, po kterých se přidá další 10% palladium na aktivním uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) a monohydrát fosfomanu sodného (0,033 g, 0,00038 mol). Směs se míchá další 24 hodin, filtruje přes Celit®521, promyje kyselinou octovou. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RPHPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky po dobu 5 minut, pak 40%100% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 30 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4pyridyl)-l V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,020 g, 0,00005 mol) ve formě bílé pevné látky:

‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,71 (d, 2H), 8,46 (s, 1H), 8,39 (dd, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,46 (t, 2H), 7,13-7,25 (m, 5H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 17,31 minut; MS: MH⁺381.

• · · ·

528

Příklad 566:

A2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-lmethyl-1 //-2-indolkarboxamid

A. A2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2 methoxyfenyl}-1methyl-1 //-2-indolkarboxamid

Suspenze 4-(4-amino-3-jod-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-pyridiniumolátu (0,500 g, 0,0014 mol) v dimethoxyethanu (15 ml) a vodě (30 ml) se nechá reagovat s A2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-l//-2indolkarboxamidem (0,631 g, 0,00155 mol), uhličitanem sodným (0,374 g, 0,0035 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)palladiem (0,163 g, 0,00014 mol) při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Pevný podíl se filtruje a promyje vodou, míchá v ethylacetátu po dobu 18 hodin, filtruje a promyje ethylacetátem. Pevný podíl se suší za vakua, čímž se získá surový 4-[4-amino-3(3 -methoxy-4- [(1 -methyl-1 //-2-indolyl)-karbonyl]aminofenyl)-1 //-pyrazolo [3,4í/pyrimidin-l-ylj-l-pyridiniumolát (0,523 g, 0,0010 mol) ve formě hnědé pevné látky: RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,92 minut; MS: MH⁺ 507.

B. N2-{4- [4-amino-1 -(4-pyridyl)-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3 -y l]-2-methoxy fenyl} -1 methyl-1 //-2-indolkarboxamid

Suspenze 4-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(l-methyl-l//-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl]-lpyridiniumolátu (0,200 g, 0,00039 mol) a 10% palladia na aktivním uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) v kyselině octové (3 ml) se nechá reagovat s monohydrátem fosfomanu sodného (0,063 g, 0,00059 mol) při teplotě 60°C po dobu 2 hodin. Přidá se další 10% palladium na aktivním uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) a fosfoman sodný (0,045 g, 0,00042 mol) a směs se míchá po dobu 24 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek míchá v methanolu po dobu 4 hodin. Směs se filtrují přes Celit®521 a promyje methanolem. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 50% izokraticky po dobu 5 minut, pak 50%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá A2-{4-[4-amino1 -(4-pyridyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-l//-2-indolkarboxamid (0,020 g, 0,00004 mol) ve formě bílé pevné látky:

529 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 948 (s, IH) 8,72 (d, 2H), 8,47 (s, IH), 8,42 (d, 2H), 8,20 (d, IH), 7,72 (d, IH), 7,60 (d, IH), 7,48 (s, IH), 7,42 (d, IH), 7,36 (s, IH) 7,34 (t, IH), 7,16 (t, IH), 4,05 (s, 3H), 3,99 (s, IH);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%- 85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 19,50 minut; MS: MH⁺ 491.

Příklady 567:

-(6-Amino-3 -pyridyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-4-amín; a

Příklad 568:

3-(4-Fenoxyfenyl)-1 -(2-pyridyl)-1 V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-amin

Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-1 V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu ( 0,200 g, 0,00079 mol) v V-methylpyrrolidinonu (10 ml) se nechá reagovat s 60% hydridem sodným v oleji (0,032 g, 0,00079 mol). Po uvolnění plynu se směs míchá při pokojové teplotě po dobu 30 minut, přidá se 5-brom-2-nitropyridin (0,161 g, 0,00079 mol) a směs se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 18 hodin. Přidá se další 60% hydrid sodný v oleji (0,032 g, 0,00079 mol) a směs se míchá další 2 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (15 ml) a vodu (25 ml). Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 15 ml). Spojené organické podíly se promyjí solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi heptan/ethylacetát (1:2) jako eluentu, čímž se získají 2 produkty.

Méně polární sloučenina, l-(6-nitro-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-lV-pyrazolo[3,4/]pyrimidin-4-amin, se suspenduje v absolutním ethanolu (10 ml) a VV-dimethylformamidu (5 ml) a přidá se 10% palladium na aktivním uhlí (0,007 g). Směs se míchá pod atmosférou vodíku (balónek) po dobu 18 hodin. Směs se filtruje přes vrstvu Celitu®521 a promyje absolutním ethanolem. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá 1 -(6-amino-3 -pyridy 1)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-/Jpyrimidin-4-amin (0,007 g, 0,00002 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 8,53 (d, IH) 8,31 (s, IH), 7,97 (dd, IH), 7,73 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,12-23 (m, 5H), 6,60 (d, IH), 6,20 (s, 2H);

530

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,38 minut; MS: MH⁺ 396.

Poláměj ší sloučenina, 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(5 -brom-2-pyridyl)-1 //-pyrazolo [3,4í/pyrimidin-4-amin, se suspenduje v absolutním ethanolu (10 ml) a V V-dimethylformamidu (5 ml) a přidá se 10% palladium na aktivním uhlí (0,007 g). Směs se míchá pod atmosférou vodíku (balónek) po dobu 18 hodin, filtruje přes vrstvu Celitu®521 a promyje absolutním ethanolem. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(2-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,030 g, 0,00007 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,60-8,64 (m, 1H) 8,37 (s, 1H), 8,20 (d, 1H), 8,038,08 (m, 1H), 7,76 (d, 2H), 7,41-7,49 (m, 3H), 7,12-7,23 (m, 5H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 16,32 minut; MS: MH⁺ 381.

Obecný způsob reduktivní aminace za použití trans-3-(4-amino-fenyl)-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu jako výchozí látky a aldehydu je popsán v příkladu 569. K připojení dalších Z¹⁰⁰ skupin může být 2-methoxy-3formyl-pyridin z příkladu 569 nahrazen jinými aldehydy.

Příklady 569:

Diacetát tran5-3-(4-[(2-methoxy-3-pyridyl)methyl]aminofenyl)-1 -[4-(4-methyl-piperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu

Směs trans-3-(4-amino-fenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]- 1 //-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (1 ekviv.), 2-methoxy-3-formyl-pyridinu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku. Reakce se zastaví nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 1060% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty, následující 2 sloučeniny se připraví podle shora uvedeného způsobu:

• · · • · · · ♦ · · • · · · » · · · • ······· * ··· • · · · · · ·

531

Diacetát /ra«.s'-3-(4-[(2-methoxy-3-pyridyl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4-methyl-piperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 8,06 (dd, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,95 (dd, 1H), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,26 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,07 minut.

MS: MH⁺ 528.

Příklad 570:

Acetát trans-3 - {4- [(1 //-2-indolylmethyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu

Acetát trans-3 - {4- [(1//-2-indolylmethyl)amino]feny 1} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohe-xyl]-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu se připraví podle způsobu z příkladu 569 s výjimkou toho, že místo 2-methoxy-3-formyl-pyridinu se použije 2-formylindol.

1HNMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,08 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,44 (d, 1H), 7,36 (d, 2H), 7,32 (d, 1H), 7,01 (t, 1H), 6,95 (t, 1H), 6,81 (d, 2H), 6,47 (t, 1H), 6,35 (s, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,45 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,74 minut. MS: MH⁺ 536.

Příklad 571:

Diacetát trans-3 - [(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} anilino)methyl] -1,2-dihydro-2-pyridinonu

Diacetát /raus-3-(4-[(2-methoxy-3-pyridyl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,105 g, 0,000199 mol) se rozpustí v 30% bromovodíku v kyselině octové (4 ml) a směs se refluxuje po dobu 1,5 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát trans-3-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazi532 no)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} anilino)methyl] -1,2-dihydro-2pyridinonu (0,0204 g, 0,0000324 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,29 (m, 4H), 6,68 (d, 2H), 6,40 (t, IH), 6,15 (m, IH), 4,60 (m, IH), 4,09 (d, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 9,40 minut. MS: MH⁺ 514.

Obecný způsob reduktivní aminace s řra/7s-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminem a aldehydem jako výchozími látkami je popsán v příkladu 572:

Příklad 572:

Diacetát trans-5-[(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyanilino)methyl]-4-chlor-l,3-thiazol-2-aminu

Směs /r<ms-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (1 ekviv.), 2-amino-4-chlor-5-formyl-1,3-thiazolu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku. Reakce se zastaví nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá požadovaný produkt.

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,19 (s, 2H), 7,06 (m, 3H), 6,68 (d, IH), 5,76 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,30 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,59 minut.

MS:MH⁺583.

Sloučeniny podle příkladů 573 a 574 se připraví podle způsobu z příkladu 572.

• · · • · · · • · · · · ·

533

Příklad 573:

Acetát trans-3-(3 -methoxy-4- [(5 -methyl-3 -isoxazolyl)methyl]aminofenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,04 (m, 2H), 6,68 (d, IH), 6,16 (s, IH), 5,86 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,37 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,40 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,53 minut.

MS: MH⁺ 532.

Příklad 574:

Acetát trans-3- {3 -methoxy-4- [(1,3 -thiazol-4-ylmethyl)amino]fenyl} -1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4 -í/]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,08 (s, IH), 8,19 (s, IH), 7,47 (s, IH), 7,06 (s, IH), 7,03 (d, IH), 6,68 (d, IH), 5,76 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,52 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,17 minut.

MS: MH⁺ 534.

Obecný způsob přípravy benzotetrahydrofuranových derivátů s trans-3-(4-aminofenyl)-1[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-aminem a 2-hydroxybenzaldehydem jako výchozími látkami je uveden v příkladě 575.

Příklad 575:

Acetát /raN.s-3-4-[(4,6-dichlor-2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-yl)amino]fenyl-l-[4-(4-methylpiperazinojcyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

7rara-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amin (1 ekviv., 0,0001-0,0002 mol) a 2-hydroxy-4,6-dichlorbenzaldehyd (1 ekviv.) se smíchají v absolutním ethanolu (5 ml) a míchají při pokojové teplotě po dobu 48

534 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suší přes noc, čímž se získá odpovídající imin, který se použije bez další purifikace.

Trimethylsulfoxonium-jodid (2,5 ekviv.) se rozpustí v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a najednou se přidá 60% disperze hydridu sodného v parafinu (2,5 ekviv.). Po 10 minutách se přidá roztok iminu v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2,5 hodiny. Roztok se nalije do ledově studené vody (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (2x40 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá finální sloučenina.

'Η NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, ÍH), 7,39 (d, 2H), 7,14 (s, ÍH), 7,07 (s, ÍH), 6,80 (d, 2H), 6,56 (d, ÍH), 5,34 (m, ÍH), 4,80 (dd, ÍH), 4,60 (m, ÍH), 4,42 (dd, ÍH), 2,62,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 16,03 minut.

MS: MH⁺ 593.

Příklad 576:

Acetát trans-3-{4-[(4-chlor-2,3-dihydrobenzo[/?]furan-3-yl)amino]fenyl}-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4 -<Z]pyrimidin-4-aminu

Acetát íra«s-3-{4-[(4-chlor-2,3-dihydrobenzo[ó]furan-3-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu se připraví podle způsobu z příkladu 575, s výjimkou toho, že 2-hydroxy-4,6-dichlorbenzaldehyd se nahradí 2-hydroxy-4-chlorbenzaldehydem.

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,20 (s, ÍH), 7,39 (d, 2H), 7,28 (t, ÍH), 6,99 (d, ÍH),

6,89 (d, ÍH), 6,81 (d, 2H), 6,53 (d, ÍH), 5,34 (m, ÍH), 4,74 (dd, ÍH), 4,60 (m, ÍH), 4,38 (dd, ÍH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,42 minut.

MS: MH⁺ 559.

535

Příklad 577:

Acetát tra«5-3-4-[(4,6-dichlor-2,3-dihydrobenzo[Z?]íůran-3-yl)amino]-3-methoxyfenyl-1 [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 Vpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu

Acetát trans-3 -4- [(4,6-dichlor-2,3 -dihydrobenzo [ů]furan-3 -yljamino] -3 -methoxyfenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu se připraví podle způsobu z příkladu 575, s výjimkou toho, že místo trans-3-(4-aminofenyl)1 [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu se použije trans-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)- l-[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl]- IVpyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-amin.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,11 (m, 4H), 6,80 (d, lm, 5,45 (m, 2H), 4,84 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,42 (dd, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 16,85 minut.

MS: MH⁺ 623.

Meziprodukt 5:

7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-lV-pyrazolo[3,4-tí(]pyrimidin-l-yl]-lpiperidinkarboxylát

A. Vrc-butyl-4-[4-amino-3 -(4- [(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-1 V-pyrazolo [3,4ďjpyrimidin-1 -yl]-1 -piperidinkarboxylát

Směs benzyl-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (9,54 g, 0,027 mol), íerc-butyl-4-(4-amino-3-jod-lV-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)-lpiperidinkarboxylátu (10,0 g, 0,0225 mol), tetrakis-(trifenylfosfin)palladia (1,56 g, 0,00135 mol) a uhličitanu sodného (5,97 g, 0,0563 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (120 ml) a vody (60 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu (150 ml) a dichlormethan (150 ml); organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje v diethyletheru a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá tera-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-lV-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-l-yl]-l -piperidinkarboxylát (10,1 g, 0,0186 mol) ve formě bílé pevné látky.

• ·

536 *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,00 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,36 (m, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 18, 58 minut.

B. Arc-butyl-4- [4-amino-3 -(4-aminofenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-1 -yl]-1 piperidinkarboxylát

Do roztoku terc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]amino fenyl)-1Apyrazolo[3,4-J]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (5,0 g, 0,0092 mol) v terahydrofuranu (150 ml) se přidá 10% palladium na aktivním uhlí (1,0 g) a reakční směs se hydrogenuje na Patrově třepačce po dobu 96 hodin, katalyzátor se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje v n-heptanu a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá terc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofeny 1)-1//pyrazolo[3,4-A]pyrimidin-l-yI]-l -piperidinkarboxylát (2,51 g, 0,0061 mol) ve formě bělavé pevné látky.

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,42 (s, 2H),

4,90 (m, 1H), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,18 min.

Příklad 578-590:

Níže je uveden obecný způsob reduktivní aminace, poté odstranění BOC-chránicích skupin, které se použilo při přípravě sloučenin podle příkladu 578-590:

Postup:

Směs /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-l-yl]-lpiperidinkarboxylátu (Meziprodukt 5) (1 ekviv.), aldehydu (1,2 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, trituruje v ethylacetátu a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové. Výsledná směs se míchá po dobu 1 hodiny, vodná fáze se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se oddělí. Organické « · « · • ·

537 fáze se koncentrují za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty. Následující sloučeniny se připraví shora uvedený způsobem:

Příklad 578:

Diacetát 3-{4-[(benzo[ů]furan-2-ylmethyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4ť/]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, ÍH), 7,57 (d, ÍH), 7,53 (d, ÍH), 7,39 (d, 2H), 7,23 (m, 2H), 6,85 (d, 2H), 6,80 (s, ÍH), 6,66 (t, ÍH), 4,70 (m, ÍH), 4,51 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,37 minut.

MS: MH⁺ 440.

Příklad 579:

Diacetát 3 -(4- [(2-methoxy-3 -pyridyl)methyl]aminofeny 1)-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4č/]pyrimidin-4-aminu ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, ÍH), 8,06 (d, ÍH), 7,61 (d, ÍH), 7,36 (d, 2H), 6,96 (dd, ÍH), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, ÍH), 4,70 (m, ÍH), 4,27 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,06 minut.

MS: MH⁺ 431.

Příklad 580:

Diacetát 3-(4-[(5-methyl-2-thienyl)methyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-aminu • · ···· · · « · » » · » *

538

NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,85 (d, 1H), 6,77 (d, 2H), 6,64 (d, 1H), 6,54 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,41 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,85 minut.

MS: MH⁺ 420.

Příklad 581:

Diacetát 3-{4-[(2-furylmethyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin4-aminu 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,77 (d, 2H), 6,46 (t, 1H), 6,39 (d, 1H), 6,34 (d, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,31 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,96 minut.

MS: MH⁺ 390.

Příklad 582:

Diacetát 3-[4-(benzylamino)fenyl]-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,34 (m, 6H), 7,24 (t, 1H), 6,73 (d, 2H), 6,60 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,33 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,32 minut.

MS: MH⁺ 400.

Příklad 583:

Diacetát 3 - {4- [(2-methoxybenzyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4-aminu • · • · *

539 ’Η NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 7,24 (m, 2H), 7,01 (d, IH),

6,90 (t, IH), 6,70 (d, 2H), 6,41 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,28 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,73 minut.

MS: MH⁺430.

Příklad 584:

Diacetát 3 - {4- [(3 -methoxybenzyl)aminolfenyl} -1 - (4-piperidyl) -1 V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu ^lH NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 7,25 (t, IH), 6,96 (m, 2H), 6,81 (d, IH), 6,72 (d, 2H), 6,59 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,30 (d, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,38 minut.

MS:MH⁺430.

Příklad 585:

Diacetát 3 - {4- [(4-methoxybenzyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,35 (m, 4H), 6,90 (d, 2H), 6,72 (d, 2H),

6,51 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,25 (d, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,37 minut.

MS: MH⁺ 430.

Příklad 586:

Diacetát 1 -(4-piperidyl)-3 -(4- [3 -(trifluormethyl)benzyl]aminofenyl)-1 V-pyrazolo [3,4/]pyrimidin-4-aminu • · · ·

540 *H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,71 (m, 2H), 7,58 (m, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,08 minut.

MS: MH⁺ 468.

Příklad 587:

Diacetát l-(4-piperidyl)-3-(4-[4-(trifluormethyl)benzyl]aminofenyl)-lA-pyrazolo[3,4ď|pyrimidin-4-aminu ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 8,19 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,23 minut.

MS: MH⁺ 468.

Příklad 588:

Diacetát 3-(4-[(2-methyl-l,3-thiazol-4-yl)methyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,41 (d, 2H), 7,26 (s, 1H), 6,73 (d, 2H),

6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,36 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,70 (s, 3H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,13 minut.

MS: MH⁺ 421.

Příklad 589:

Diacetát 3-{4-[(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu • ·

541 *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,42 (m, 4H), 7,26 (t, 1H), 6,83 (d, 2H), 6,27 (t, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,32 minut.

MS: MH⁺ 452.

Příklad 590:

Diacetát 3 -(4- [2 -fluor-4-(trifluormethyl)benzy l]aminofenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

Ή NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,61 (m, 3H), 7,38 (d, 2H), 6,73 (d, 2H), 6,68 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,47 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,83 minut.

MS: MH⁺ 486.

Příklad 591:

Diacetát 3-{4-[(benzo[ů]furan-2-ylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl}-l-(4-piperidyl)-lApyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu

Směs /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l A-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (g, mol), benzofuran-2-karbaldehydu (0,046 g, 0,000315 mol), triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,00042 mol,) a octové kyseliny (0,024 ml, 0,00042 mol) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, trituruje v ethylacetátu (4ml) a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1 ml). Výsledná směs se míchá po dobu 1 hodiny, vodná fáze se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se oddělí. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát 3-{4• · • ·

542 [(benzo[/)]furan-2-ylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl}-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4í/Jpyrimidin-4-amin (0,027 g, 0,0000457 mol).

^!H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,55 (m, 2H), 7,22 (m, 2H), 7,06 (m, 2H), 6,80 (d, IH), 6,75 (s, IH), 5,80 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,57 (d, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 min., 1 ml/min) R_t 14,83 minut.

MS: MH⁺ 470.

Příklad 592:

Acetát 3 - [4-(2,3 -dihydrobenzo [ó] furan-3 -ylamino)fenyl] -l-(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4ť/]pyrimidin-4-aminu

Salicylaldehyd (0,063 g, 0,000513 mol) a terc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát (0,200 g, 0,000489 mol) se smíchají v absolutním ethanolu (5 ml) a míchají při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suší přes noc, čímž se získá tercbutyl-4-[4-amino-3-(4-{[-l-(2-hydroxyfenyl)methyliden]amino}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l-yl]-l -piperidinkarboxylát, který se použije bez další purifikace.

Trimethylsulfoxonium-jodid (0,269 g, 0,00122 mol) se rozpustí v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a najednou se přidá 60% disperze hydridu sodného v parafinu (0,049 g, 0,00122 mol). Po 10 minutách se přidá roztok terc-butyl-4-[4-amino-3-(4-{[-1-(2hydroxyfenyl)methyliden-l-amino-l-fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl] -1 piperidinkarboxylátu v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2,5 hodiny. Roztok se nalije do ledově studené vody (70 ml) a extrahuje dichlormethanem (2x50 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku, čímž se získá surový tercbutyl-4- {4-amino-3 - [4-(2,3 -dihydrobenzo [ů] furan-3 -yl-amino)fenyl] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-l-yl}-l-piperidinkarboxylát, který se použije bez další purifikace. Surová sloučenina se rozpustí v ethylacetátu (5 ml) a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1,5 ml). Výsledná emulze se intenzivně míchá po dobu 1 hodiny, vodná vrstva se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se oddělí. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí • · · · · · · ···· · · · · • ······· · ··· ··· · · · · · • · · · · · ·

543 preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát 3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3ylamino)fenyl]-l-(4-piperidyl)-l V-pyrazolo[3,4-z7]pyrimidin-4-aminu (0,038 g, 0,000078 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,41 (m, 3H), 7,25 (t, 1H), 6,89 (m, 4H),

6,51 (t, 1H), 5,35 (m, 1H), 4,79 (m, 2H), 4,27 (m, 1H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,38 minut.

MS: MH⁺ 428.

Příklad 593:

Acetát Amv-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} anilino)-1 V-1 X⁶-benzo [<7] isothiazol-1,1 -dionu

A. 3 -Chlor-1 Η-1 X⁶-benzo[z/]isothiazol-1,1 -dion

Sacharin (10,0 g, 0,0546 mol) a chlorid fosforečný (12,6 g, 0,060mol) se zahřívají při teplotě 170°C po dobu 1,5 hodiny. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a suspenduje v diethyletheru (200 ml), precipitát se spojí filtrací, dobře promyje diethyletherem a suší, čímž se získá 3-chlor-l//-lZ⁶-benzo[</]isothiazol-1,1-dion (3,7 g, 0,0184 mol) ve formě bílé pevné látky, která se použije bez další purifikace.

MS: MH⁺ 202.

B. 3 -(4-bromanilino)-1 Η-1 Z⁶-benzo[í/]i sothiazol-1,1 -dion

Do roztoku 3-chlor-1V-l/?-benzo [dl i sothiazol-1,1-dionu (1,0 g, 0,00496 mol) v acetonu (20 ml) se najednou přidá 4-bromanilin (1,71 g, 0,00992 mol) a směs se míchá po dobu 15 minut. Směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se suspenduje ve vodě (100 ml), precipitát se spojí filtrací, dobře promyje vodou a suší, čímž se získá 3-(4-bromanilino)-lV-lZ⁶-benzo[č/]isothiazol-l,l-dion (1,57 g, 0,00467 mol) ve formě bílé pevné látky.

‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,93 (s, 1H), 8,47 (d, 1H), 8,09 (d, 1H), 7,93 (m, 4H), 7,69 (d, 2H);

··· · · · · · · ···· · · · ···· • ····»·· · · · · ···· ·· · ·· ·· · · ·

544

C. 3-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l A-lX⁶-benzo[<7]isothiazol1.1- dion

Směs 3-(4-bromanilino)-lA-lZ⁶-benzo[í7]isothiazol-l,l-dionu (1,57 g, 0,00467 mol), diboron-pinakolesteru (1,43 g, 0,00561 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,114 g, 0,00014 mol) a octanu draselného (1,37 g, 0,014 mol) v W-dimethylformamidu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Ke zbytku se přidá dichiormethan (70 ml) a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu. Filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se trituruje v diethyletheru, čímž se získá 3-[4-(4,4,5,5tetramethy 1-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino] -1 Η-1 /Ábenzo [d\ isothiazol-1,1 -dion (1,14 g,

0,00297 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,92 (br, IH), 8,51 (d, IH), 8,08 (d, IH), 7,91 (m, 4H),

7,68 (d, 2H), 1,29 (s, 12H).

D. Acetát Zra«.y-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} anilino)-1 A-1 X⁶-benzo [t/]isothiazol-1,1 -dionu

Směs 3-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l A-l ,6-benzo[ífjisothiazol-1,1-dionu (0,09 g, 0,000234 mol), /ran5-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,08 g, 0,00018 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0, 013 g, 0, 000011 mol) a uhličitanu sodného (0,048 g, 0,00045 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, ml/min), čímž se získá acetát /ra/?.s-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}anilino)-lA-lZ⁶-benzo[</]isothiazol1.1- dionu (0,075 g, 0,000119 mol) ve formě bílé pevné látky.

‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,29 (d, IH), 8,23 (s, IH), 7,91 (m, 3H), 7,79 (m, 2H),

7,66 (d, 2H), 4,65 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

545

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,27 minut.

MS: MH⁺ 572.

Příklad 594:

Diacetát cz.v-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-Jpyrimidin-3 -yl} anilino)-1 A-1 Z⁶-benzo [djisothiazol-1,1 -dion

Diacetát cis-3-(4- {4-amino-1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -lA-pyrazolo[3,4-č/|pyrimidin-3-yl}anilino)-lA-lX⁶-benzo(7/]isothiazol-l,l-dionu se připraví z 3-[4(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino] -1 A-1 Z⁶-benzo [d] isothiazol-1,1 -dionu (0,09 g, 0,000234 mol) a cA-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu způsobem, který je podobný shora uvedenému způsobu. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,42 (d, IH), 8,23 (s, IH), 7,91 (m, 3H), 7,84 (m, 2H), 7,62 (d, 2H), 4,80 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,07 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,59 minut.

MS: MH⁺ 572.

Příklad 595:

Acetát trans-N3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4t/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)benzo[ď]isoxazol-3 -aminu

A. Al -(4-bromfenyl)-2-fluorbenzamid

Roztok 2-fluorbenzoylchloridu (5,82 g, 0,0367 mol) a 4-bromanilinu (6,31 g, 0,0367 mol) v bezvodém dichlormethanu (150 ml) se ochladí na teplotu 0°C a pod atmosférou dusíku se po kapkách přidá A,A-diisopropylethylamin (5,21 g, 0,0407 mol). Výsledná směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, koncentruje a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném diethyletheru (50 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá Al-(4-bromfenyl)-2fluorbenzamid (9,6 g, 0,0326 mol) ve formě bílé pevné látky.

··· · · · ··· ···· ·· · · * · · • ······« · · · · » · · · ·· · ·· · ♦ ·· ·

546 'Η NMR (DMSO-cU, 400 MHz) 10,54 (s, 1H), 7,66 (m, 3H), 7,56 (m, 3H), 7,34 (m, 2H).

TLC (ethylacetát/heptan 1: 2) Rf 0,37.

B. NI -(4-bromfenyl)-2-fluor-1 -benzenkarbothioamid

Směs Vl-(4-bromfenyl)-2-fluorbenzamidu (3,3 g, 0,0112 mol) a 2,4-bis-(4methoxyfenyl)-l,3-dithia-2,4-difosfetan-2,4-disulfidu (2,27 g, 0,00561 mol) se zahřívá v toluenu při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:6) jako mobilní fáze, čímž se získá VI-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamid (3,1 g,

0,010 mol) ve formě žlutého pevného podílu.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 12,13 (s, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,62 (m, 3H), 7,51 (m, 1H),

7,31 (m, 2H). TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,27.

C. VI -(4-bromfenyl)-2-fluor-1 -benzenamidoxim

Směs Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamidu (1,56 g, 0,00505 mol), hydroxylamin-hydrochloridu (0,44 g, 0,00631 mol) a uhličitanu sodného (0,53 g, 0,00631 mol) se zahřívá v absolutním ethanolu (25 ml) za refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasyceným roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném diethyletheru a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá VI-(4-bromfenyl)-2-fluor-l -benzenamidoxim (1,21 g, 0,00392 mol) ve formě bělavé pevné látky. TLC (ethylacetát/heptan 1: 4) Rf 0,12.

D. V-benzo[í/]isoxazol-3-yl-V-(4-bromfenyl)amin

Do roztoku Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenamidoximu (1,51 g, 0,00489 mol) v V-methylpyrrolidinonu (25 ml) se přidá /ere-butoxidu draselný (0,54 g, 0,00513 mol) a výsledný roztok se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasyceným roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití • «

547 směsi ethylacetát/rc-heptan (1:5) jako mobilní fáze, čímž se získá A^r-benzo[ď|isoxazol-3-ylV-(4-bromfenyl)amin (0,95 g, 0,00329 mol) ve formě bílé pevné látky.

‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,72 (s, 1H), 8,13 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,61 (m, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,37 (dd, 1H). TLC (ethylacetát/heptan 1:4) R_f 0,26.

E. V-benzo[//]isoxazol-3-yl-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin

Směs V-benzo[</]isoxazol-3-yl-V-(4-bromfenyl)aminu (1,30 g, 0,0045 mol), diboron-pinakolesteru (1,37 g, 0,0054 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladia v komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,110 g, 0,000135 mol) a octanu draselného (1,32 g, 0,0135 mol) v VV-dimethylformamidu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu a filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/u-heptan (1:5) jako mobilní fáze, čímž se získá V-benzo[í(]isoxazol-3-yl-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,40 g, 0,00119 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,74 (s, 1H), 8,16 (d, 1H), 7,70 (m, 4H), 7,61 (d, 2H), 7,37 (dd, 1H), 1,29 (s, 12H). TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,21.

F. Acetát /nms'-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl} fenyl)benzo [A] i soxazol-3 -aminu

Směs A-benzo[í/]isoxazol-3-yl-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,10 g, 0,000298 mol), /ra/7.s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (0,101 g, 0,000229 mol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (0, 016 g, 0,0000137 mol) a uhličitanu sodného (0,061 g, 0,000573 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 μηι, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát /rau.s-/V3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-/Z]pyrimidin-3-yl} fenyl)benzo [Ajisoxazol-3-aminu (0,102 g, 0,000175 mol) ve formě bílé pevné látky.

* · • · · «· · • · > · · » · » « ·· · · * · · • *······ ♦ ··· ··«·· ·· · ···· ·· · „ e · ·· ·· ·· *

548 'Η NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,81 (s, ÍH), 8,23 (s, ÍH), 8,19 (d, ÍH), 7,88 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,40 (m, ÍH), 4,65 (m, ÍH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m,2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,66 minut. MS: MH⁺ 524.

Příklad 596:

Diacetát cis-N3-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4t/]pyrimidin-3 -yl} feny 1 )benzo[<7] i soxazol-3 -aminu

Diacetát cis-N3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)benzo[í/]isoxazol-3-aminu se připraví zV-benzo[</]isoxazol3-yl}-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu a czs-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu způsobem, který je podobný shora uvedenému způsobu.

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,86 (s, ÍH), 8,26 (s, ÍH), 8,24 (d, lm, 7,93 (d, 2H), 7,67 (m, 4H), 7,43 (m, ÍH), 4,83 (m, ÍH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,08 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,74 (m, 2H), 1,62 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,77 minut.

MS: MH⁺ 524.

Příklad 597:

Acetát A3-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]fenyl}benzo [</]isoxazol-3 -aminu

Směs A-benzo [</] isoxazol-3 -y l-A-[4-(4,4,5,5 -tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,087 g, 0,000258 mol), /erc-butyl-4-(4-amino-3-jod-1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-l-yl)-l -piperidinkarboxylátu (0,088 g, 0,000198 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,014 g, 0,000012 mol) a uhličitanu sodného (0,053 g, 0,000495 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi vodu a • » »1 · ·* · • » · · · · · • ► » · ·· · · • ·»·»·· · ··· »·«·· « · · · · * · * * * »· * · · · · ·· ·

549 dichlormethan. Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá surový rerc-butyl-4-{4-amino-3-[4-(benzo[J]isoxazol-3ylamino)fenyl]-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl}-l-piperidinkarboxylát, který se použije bez další purifikace. Pak se rozpustí v ethylacetátu (5 ml) a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1 ml). Výsledná emulze se intenzivně míchá po dobu 1 hodiny, vodná vrstva se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se oddělí. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát V3-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]fenyl}benzo[í/]isoxazol-3-aminu (0,009 g, 0,0000185 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,82 (s, 1H), 8,20 (m, 2H), 7,89 (d, 2H), 7,65 (m, 4H),

7,41 (t, 1H), 4,74 (m, 1H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,79 (m,

2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,20 minut. MS: MH⁺ 427.

Příklad 598:

Acetát trans-3 - [4-( 1H-3 -indazolylamino)fenyl] -1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu

A. Ni -(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbohydrazonamid

Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamid (1,50 g, 0,00485 mol) a 1M roztok hydrazinu v tetrahydrofuranu (6,3 ml, 0,0063 mol) se zahřívají v absolutním ethanolu (25 ml) za refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Přidají se další 3 ml a 1M roztok hydrazinu v tetrahydrofuranu a v míchání při refluxu se pokračuje dalších 6 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje, čímž se získá Al-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbohydrazonamid (1,54 g, 0,0050 mol) ve formě hnědé pevné látky. TLC (ethylacetát/ heptan 1:3) Rf 0,10.

B. V-(4-bromfenyl)-A-( 1 H-3 -indazolyl)amin ·· · · · · ·· *

·· · ·· ··

550

Do roztoku Al-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbohydrazonamidu (1,2 g, 0,00391 mol) v A-methylpyrrolidinonu (25 ml) se přidá /erc-butoxidu draselný (0,50 g, 0,0041 mol) a výsledný roztok se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:5) jako mobilní fáze, čímž se získá A-(4bromfenyl)-A-(lA-3-indazolyl)amin (0,29 g, 0,0010 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 12,06 (s, 1H), 9,03 (s, 1H), 7,93 (d, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,03 (dd, 1H). TLC (ethylacetát/heptan 1:3) R_f 0,26.

C. A-(lA-3-indazolyl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin

Směs A-(4-bromfenyl)-A-(lA-3-indazolyl)aminu (0,29 g, 0,00101 mol), diboronpinakolesteru (0,31 g, 0,00121 mol), [l,r-bis(difenylfosfino)ferrocen]-dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,025 g, 0,00003 mol) a octanu draselného (0,294 g, 0,003 mol) v A A-dimethylformamidu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu a filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/«-heptan (1:3) jako mobilní fáze, čímž se získá A-(lA-3-indazolyl)-A-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,064 g, 0,000191 mol) ve formě bělavého pevné látky.

^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 12,09 (s, 1H), 9,06 (s, 1H), 7,94 (d, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,35 (m, 2H), 7,03 (dd, 1H), 1,28 (s, 12H). TLC (ethylacetát/ heptan 1:3) Rf 0,21.

D. Acetát trans-3 - [4-( 1 H-3 -indazolylamino)fenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-4-aminu

Směs A-(lA-3-indazolyl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljaminu (0,064 g, 0,000191 mol), /ran.s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l Apyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,070 g, 0,000159 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia

551 (0,011 g, 0,0000095 mol) a uhličitanu sodného (0,042 g, 0,000398 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát /rarcs-3-[4-(lV-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,035 g, 0,000060 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 12,09 (s, ÍH), 9,14 (s, ÍH), 8,21 (s, ÍH), 7,99 (d, ÍH), 7,83 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,06 (t, ÍH), 4,64 (m, ÍH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,49 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,96 minut. MS: MH⁺ 523.

Příklad 599:

Acetát trans-N3-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-6-(trifluormethyl)benzo[í/]isoxazol-3-aminu

A. VI -(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Roztok 2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoylchloridu (5,05 g, 0,0223 mol) a 4-bromanilinu (3,83 g, 0,0223 mol) v bezvodém dichlormethanu (150 ml) se ochladí na teplotu 0°C a pod atmosférou dusíku se po kapkách přidá V V-diisopropylethylamin (4,26 ml, 0,0245 mol). Výsledná směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, koncentruje a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném «-heptanu (50 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá VI-(4bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (7,1 g, 0,0196 mol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,74 (s, 11-1), 7,90 (m, 2H), 7,74 (d, ÍH), 7,68 (d, 2H), 7,56 (d, 2H).

B. Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenkarbothioamid • ·

552

Směs Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (7,1 g, 0,0196 mol) a 2,4-bis-(4-methoxyfenyl)-l,3-dithia-2,4-difosfetan-2,4-disulfidu (3,97 g, 0,0098 mol) se zahřívá v toluenu při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/w-heptan (1:8) jako mobilní fáze, čímž se získá Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-lbenzenkarbothioamid (6,0 g, 0,0159 mol) ve formě žlutého pevného podílu.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 12,33 (s, IH), 7,94 (d, 2H), 7,81 (m, 2H), 7,65 (m, 3H). TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,61.

C. NI -(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenamidoxim

Směs Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenkarbothioamidu (2,50 g, 0,00663 mol), hydroxylamin-hydrochloridu (0,65 g, 0,00928 mol) a uhličitanu sodného (0,78 g, 0,00928 mol) se zahřívá v absolutním ethanolu (25 ml) za refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném n-heptanu a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)1-benzenamidoxim (2,35 g, 0,00625 mol) ve formě bělavé pevné látky. TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,12.

D. V-(4-bromfenyl)-V-[6-(trifluormethyl)benzo[ď]isoxazol-3-yl]amin

Do roztoku Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenamidoximu (2,25 g, 0,00598 mol) v V-methylpyrrolidinonu (30 ml) se přidá /erc-butoxid draselný (0,71 g, 0,00628 mol) a výsledný roztok se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 mol). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném π-heptanu a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá V-(4-bromfenyl)-V-[6-(trifluormethyl)benzo[íf]isoxazol3-yl]amin (1, 75 g, 0, 0049 mol) ve formě bělavé pevné látky.

553 ’Η NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,95 (s, IH), 8,37 (d, IH), 8,14 (s, IH), 7,78 (d, IH), 7,68 (d, 2H), 7,58 (d, 2H). TLC (ethylacetát/heptan 1:5) R_f 0,31.

E. jV-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-V-[6-(trifluormethyl)benzo[/]isoxazol-3-yl]amin

Směs V-(4-bromfenyl)-V-[6-(trifluormethyl)benzo[/]isoxazol-3-yl]aminu (1,75 g, 0,0049 mol), diboron-pinakolesteru (1,49 g, 0,0059 mol), [1,1'bis(difenylfosfino)ferrocen]-dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,120 g, 0,000147 mol) a octanu draselného (1,44 g, 0, 0144 mol) v VV-dimethylformamidu (10 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu a filtrát se koncentruje. Žlutý olej se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:6) jako mobilní fáze, čímž se získá TV-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-V-[6(trifluormethyl)benzo[/]isoxazol-3-yl]amin (0, 065 g, 0, 000161 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,97 (s, IH), 8,39 (d, IH), 8,14 (s, IH), 7,77 (d, IH), 7,71 (s, 4H), 1,29 (s, 12H).

F. Acetát trans-N3 -(4- {4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-6-(trifluormethyl)benzo[/]isoxazol-3-aminu

Směs V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-/V-[6-(trifluormethyl)benzo[/]isoxazol-3-yl]aminu (0,062 g, 0,000153 mol), trans-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidin-4-aminu (0,065 g, 0,000146 mol), tetrakis-(trifenylfosfin)palladia (0,010 g, 0,0000087 mol) a uhličitanu sodného (0,039 g, 0,000365 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-70% acetonitril 0,1 M octan amonný v průběhu 30 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát řran.s-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-6-trifluormethyl)benzo[/]isoxazol-3-aminu (0,026 g, 0,0000398 mol) ve formě bílé pevné látky.

• ·

554 *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,05 (s, 1H), 8,44 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,88 (d, 2H), 7,79 (d, 1H), 7,69 (d, 2H), 4,67 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 16,18 minut. MS: MH⁺ 592.

Příklad 600:

V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-methoxy ethyl)-4-piperidyl]-1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

A. 3-Jod-l-[l-(2-methoxyethyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3, 4 d]pyrimidin-4-amin

Do směsi dihydrochloridu 3 -jod-l-(4-piperidyl)-l //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4aminu (0,4 g, 0,00096 mol) a uhličitanu draselného (0,40 g, 0,0029 mol) v N,Ndimethylformamidu (25 ml) se při pokojové teplotě přidá 2-bromethyl(methyl)ether (0,09 ml, 0,00096 mol). Heterogenní směs se míchá při teplotě 60°C pod atmosférou dusíku po dobu 7 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a přidá se 2-bromethyl(methyl)ether (0,045 ml, 0,00048 mol). Směs se míchá při teplotě 60°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Do směsi při pokojové teplotě se kvůli dotažení reakce přidá 2-bromethyl(methyl)ether (0,019 ml, 0,00019 mol) a jodid draselný (0,008 g, 0,000048 mol). Směs se míchá při teplotě 70°C pod atmosférou dusíku po dobu 7 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (4 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-50% v průběhu 30 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá 3-jod-1 -[1 -(2-methoxyethyl)-4-piperidyl]-1 //-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-amin (0,2 g, 0,0005 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 6,4 minut. MS: MH⁺ 403.

B. 7V2-(4- {4-amino-1 - [l-(2-methoxyethyl)-4-piperidyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</jpyrimidin-3 yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin • · « · • ······· · ··· · ··· ···· ·· ·· · ·· ·· ♦ ·

555

Směs 3 -j od-1 - [ 1 -(2-methoxy ethyl)-4-piperidyl] -1 //-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4aminu (0,2 g, 0,0005 mol), 7/-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-/V-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,28 g, 0,00078 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,029 g, 0,000025 mol) a uhličitanu sodného (0,13 g, 0,00125 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (25 ml) a vody (5 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 5 hodin pod atmosférou dusíku. Přidá se další V-(5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,14 g, 0,00039 mol,) a tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,015 g, 0,0000125 mol) a směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá nahnědlý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 5 %-20 % methanol/dichlormethan jako mobilní fáze, čímž se získá V2-(4-{4-amino-1 -[1 -(2-methoxyethyl)-4-piperidyl]-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin (0,14 g, 0,00027 mol).

'H NMR (TFA-d, 400 MHz) δ 8,53 (s, 1H), 7,88 (m, 2H), 7,81 (m, 2H), 7,14 (s, 2H), 5,40 (br, 1H), 4,05 (m, 2H), 3,98 (m, 2H), 3,66 (m, 2H), 3,56 (s, 3H), 3,47 (m, 2H), 2,96 (m, 2H), 2,54 (br, 2H), 2,50 (s, 3H), 2,43 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,6 minut. MS: MH⁺ 513.

Příklad 601:

V2-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

A. 3 - Jod-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 //-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin

Do směsi dihydrochloridu 3-jod-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4aminu (0,5 g, 0,0012 mol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,36 g, 0,00168 mol) v dichlorethanu (40 ml) se při pokojové teplotě přidá formaldehydový roztok (37 % ve vodě, 0,037 ml, 0,00132 mol). Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 4 hodin. Do směsi se přidá 5 N vodný roztok hydroxidu sodného (2 ml).

···· ·· · · · · ' • «·····« · ··· ···· 4·· AAAA ···

AA · ·· ·· ** *

556

Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá pevný podíl, který se znovu podrobí stejné reakci a zpracování, které jsou uvedeny výše, čímž se získá V2-{4-(4amino-l-(l-methyl-3-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,3 g, 0,00084 mol). TLC (methanol/dichlormethan = 10:90) Rf 0,63 MS: MH⁺ 359.

B. V2-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Směs 3-jod-l-(l-methyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,2 g, 0,00056 mol), V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,2 g, 0,00056 mol), tetrakis(trifenylfosfin)-palladia (0,032 g, 0,000028 mol) a uhličitanu sodného (0,15 g, 0, 0014 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (20 ml) a vodě (5 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 3 hodin pod atmosférou dusíku. Přidá se další V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,2 g, 0,00056 mol) a tetrakis(trifenylfosfm)palladium (0,032 g, 0,000028 mol) a směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá nahnědlý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 5 %25 % methanol/dichlormethan jako mobilní fáze, čímž se získá V2-{4-[4-amino-l-(lmethyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yljfenyl} -5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-aminu (0,16 g, 0,00034 mol).

*H NMR (TFA-d, 400 MHz) δ 8,50 (s, 1H), 7,85 (m, 2H), 7,80 (m, 2H), 7,10 (s, 2H), 5,45 (br, 1H), 3,95 (br, 2H), 3,75 (br, 1H), 3,45 (br, 1H), 3,10 (s, 3H), 2,85 (br, 1H), 2,65 (br, 1H), 2,49 (br, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,42 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,7 minut. MS: MH⁺ 469 • ·

557

Příklad 602:

N2-{4- [4-amino-1-(1 -methyl-3 -piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3 -yl] fenyl} -5,7dimethyl- 1,3-benzoxazol-2-amin

A. 3 -Jod-l-(3 -piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-y lamin

Diethyl-azodikarboxylát (12 ml, 0,08 mol) se přidá do míchané suspenze 3-jod-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (10,44 g, 0,04 mol), terc-butyl-3-hydroxy-lpiperidinkarboxylátu (12,0 g, 0,0596 mol) a trifenylfosfinu (20,98 g, 0,08 mol) v tetrahydrofuranu (600 ml) při pokojové teplotě. Po 19 hodinách se přidá další diethylazodikarboxylát (12 ml, 0,08 mol) a v reakci se pokračuje další 2 hodiny. Přidá se další Zerc-butyl-3-hydroxy-l-piperidinkarboxylát (2,0 g) a trifenylfosfin (20,98 g, 0,08 mol) a v reakci se pokračuje dalších 72 hodin. Reakce se koncentruje za vakua, přidá se aceton (200 ml) a 5N vodný roztok chlorovodíku (100 ml). Roztok se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 2 hodin, aceton se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (3 x 200 ml), pak alkalizuje na pH 11 vodným roztokem hydroxidu sodného (1 N) a produkt se extrahuje do dichlormethanu (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad bezvodým síranem sodným a koncentrují, čímž se získá oranžový pevný podíl, který se trituruje ethylacetátem, čímž se získá 3-jod-l-(3-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-4-ylamin ve formě žluté pevné látky (3,82 g, 25 %);

RP-HPLC R_t 4,792 minut, 92 % čistota: (5 % až 85 % acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při teplotě 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec).

^!H NMR(400 MHz, d₆-DMSO) 1,54 (1H, m), 1,71 (1H, m), 2,01 (2H, m), 2,46 (1H, m), 2,81 (2H, m), 3,01 (1H, dd, J 11,8 a 3,4 Hz), 4,58 (1H, m) a 8,19 (1H, s).

B. 3 - Jod-1 -(1 -methyl-3 -piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-am i n

Do směsi 3-jod-1-(3-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,4 g, 0,00116 mol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,34 g, 0,00162 mol) v dichlorethanu (30 ml) se přidá formaldehydový roztok (37 % ve vodě, 0,035 ml, 0,00128 mol, 1,1 ekviv.) při pokojové teplotě. Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Přidá se další formaldehydový roztok (37 % ve vodě, 0,035 ml, 0,00128 mol, 1,1 ekviv.) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Do směsi se přidá 5 N vodný roztok hydroxidu sodného (5 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku.

* ·

558

Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku a směs se lyofilizuje, čímž se získá 3-jod-l-(l-methyl-3-piperidyl)-l V-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-amin (0, 41 g, 0,0011 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 6,0 minut. MS: MH⁺ 359.

C. V2-{4-(4-amino-l-(l-methyl-3-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl]fenyl}5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Směs 3 -j od-1 -(1 -methyl-3 -piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidin-4-aminu (0,35 g, 0,001 mol), V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,44 g, 0,0012 mol), tetrakis(trifenylfosfin)-palladia (0,058 g, 0,00005 mol) a uhličitanu sodného (0,27 g, 0,0025 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (30 ml) a vodě (6 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá nahnědlý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 2 %10 % methanol/dichlormethan jako mobilní fáze, čímž se získá V2-{4-[4-amino-l-(lmethyl -3 -piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4 -r/]pyrimi din-3 -yl] fenyl} -5,7-dimethyl-1,3benzoxazol-2-aminu (0,055 g, 0,00012 mol).

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 10,80 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,15 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,80 (br, 1H), 2,95 (br, 1H), 2,85 (br, 1H), 2,45 (br, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,00 (br, 3H), 1,80 (br, 1H), 1,70 (br, 1H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9, 7 minut. MS: MH⁺ 469.

• · · « « • · · ·

559

Příklad 603:

N2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-methoxy ethyl)-3 -piperidyl]-1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

A. 3-Jod-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-é/]pyrimidin-4-amin

Do směsi 3-jod-l-(3-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,4 g, 0,00116 mol) a uhličitanu draselného (0,48 g, 0,00348 mol) v AA-dimethylformamidu (25 ml) se přidá 2-bromethyl(methyl)ether (0,11 ml, 0,00116 mol) a jodid draselný (0,010 g, 0,000058 mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá při teplotě 65°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a přidá se další 2-bromethyl(methyl)ether (0,025 ml, 0,00027 mol). Směs se míchá při teplotě 65°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (4 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl 8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-50% v průběhu 30 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá 3-jod-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]1 A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin (0,2 g, 0,0005 mol). TLC (methanol/dichlormethan = 10: 90)R_f0,5 MS: MH⁺ 403.

B. A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Směs 3-jod-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4aminu (0,16 g, 0,0004 mol), A-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,17 g, 0,00048 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,023 g, 0,00002 mol) a uhličitanu sodného (0,11 g, 0,001 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (25 ml) a vodě (5 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá nahnědlý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za

560 použití směsi 2 %-10 % methanol/dichlormethan jako mobilní fáze, čímž se získá V2-(4{4-amino-1 - [ 1 -(2-methoxy ethyl) - 3 -piperidyl]-1 V-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3-y 1} fenyl)5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,17 g, 0,00033 mol).

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,85 (s, ÍH), 8,22 (s, ÍH), 7,95 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,14 (s, ÍH), 6,80 (s, ÍH), 4,79 (br, ÍH), 3,50 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 3,10 (br, ÍH), 2,90 (br, ÍH), 2,55 (br, 2H), 2,54 (br, ÍH), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,05 (br, 3H), 1,80 (br, ÍH), 1,70 (br, ÍH).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,9 minut. MS: MH⁺ 513.

Příklad 604:

Acetát V2-{4-[4-amino-1 -(3-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]fenyl} -5,7dimethyl-1,3-benzoxazol-2-aminu

A. Vrc-buty 1-3-(4-amino-3-jod-1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -y 1)-1 -piperidinkarboxylát

Di-řerc-butyl-dikarbonát (2,093 g, 0,00959 mol) se přidá do roztoku 3-jod-l-(3piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-ylaminu (3,00 g, 0,00872 mol) a uhličitanu sodného (3,23 g, 0,0305 mol) v 1,4-dioxanu (50 ml) a vodě (50 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin a výsledný bílý precipitát se spojí filtrací, pevný podíl se promyje vodou (10 ml) a suší na vzduchu, čímž se získá /erc-butyl-3-(4-amino-3-jod-l Vpyrazolo [3,4-ó/]pyrimidin-l-yl)-l -piperidinkarboxylát ve formě bílé pevné látky (3,40 g, 88 %);

RP-HPLC R_t 12,532 minut, 98 % čistota: (5 % až 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5 v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 mn; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec);

^!H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ 1,34 (9H, br s), 1,50 (2H, m), 2,02 (ÍH, m), 2,13 (ÍH, m), 2,97 (2H, m), 3,85 (2H, m), 4,59 (ÍH, m) a 8,21 (ÍH, s).

B. Vrc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lVpyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát

Směs /en>butyl-3-(4-amino-3-jod-1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylátu (0,6 g, 0,00135 mol), V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5• · · · • » · · · ···>· * · ·

561 tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,59 g, 0,00162 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,078 g, 0,000068 mol) a uhličitanu sodného (0,36 g, 0,00338 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (50 ml) a vodě (10 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Po ochlazení směsi na pokojovou teplotu se přidá další V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,24 g, 0,00066 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,078 g, 0,000068 mol) a směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 5 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá nahnědlý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 5 %-25 % isopropanol/dichlormethan jako mobilní fáze a produkt se trituruje N,Ndimethylformamidem, čímž se získá férc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboxylát (0,28 g, 0,00051 mol).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-O, 1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 11,9 minut. MS: MH⁺ 555.

C. Acetát N2-{4- [4-amino-1 -(3 -piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4 - A] py rimidin-3 -yl] fenyl} -5,7dimethyl- 1,3 -benzoxazol-2-aminu

Do směsi /erc-buty 1-3 -(4-amino-3 - { 4-[(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]těnyl}-l A-pyrazolo [3,4-íf]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylátu (0,28 g, 0,00051 mol) v acetonu (10 ml) se přidá 6N vodný roztok chlorovodíku (3 ml) při pokojové teplotě. Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 1 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní a směs se alkalizuje 5N vodným roztokem hydroxidu sodného. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 80 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 20 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá acetát V2-{4-[4-amino-l-(3piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,06 g, 0,00012 mol).

• · • « • · • “ · • · · ·

562 'Η NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,05 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,75 (br, 1H), 3,15 (br, 2H), 2,95 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,05 (br, 1H), 2,00 (br, 1H), 1,90 (s, 3H), 1,80 (br, 1H), 1,60 (br, 1H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,4 minut. MS: MH⁺ 455.

Příklad 605:

l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lV-pyrazolo[3,4Jjpyrimidin-1 -yl)piperidino] -2-(dimethylamino)-l-ethanon-acetát

Směs acetátu V2-{4-[4-amino-1 -(3-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3yl]fenyl}-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,04 g, 0,000078 mol), dimethylglycinu (0,01 g, 0,000097 mol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0,019 g, 0, 000097mol), W-diisopropylethylaminu (0,033g, 0,00026 mol) a 1-hydroxy7-azabenzotriazolu (0,011 g, 0,000078 mol) v bezvodém dichlormethanu (5 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem a spojené organické podíly se promyjí solankou. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 35 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá acetát l-[3-(4amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lV-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-l-yl)piperidino]-2-(dimethylamino)-1-ethanonu (0,015 g, 0, 00003 mol).

Ή NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,27 (d, 1H), 7,94 (d, 2H), 7,67 (d, 2H), 7,11 (s, 1H), 6,51 (s, 1H), 4,81-1,91 (br, 11 H), 2,40 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,22 (s,3H), 1,91 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,7 minut. MS: MH⁺ 540.

Příklad 606:

l-[3-(4-Amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]-l V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl)piperidino]-2-methyl-2-(methylamino)-l-přopanon

A. 3 - Jod-1 -(3 -piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin-dihydrochlorid • · ··· ·· ··· • · · · ·· · ·· • ·····»· · · · · · • · · ·· · · · ·

563

Do směsi fórc-butyl-3 -(4-amino-3-jod-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidinl-yl)-l-piperidinkarboxylátu (1,2 g, 0,0027 mol) v acetonu (20 ml) se při pokojové teplotě přidá 6N vodný roztok chlorovodíku (8 ml). Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 1,5 hodiny, pak při pokojové teplotě po dobu 16 hodin, precipitát se filtruje a promyje acetonem. Pevný podíl se suší, čímž se získá 3-jod-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-amindihydrochlorid (1 g, 0,0024 mol). TLC (methanol/dichlormethan = 5:95) Rf 0,14 MS: MH⁺345.

B. 9//-9-fluorenylmethyl-V-{2-[3-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-lyl)piperidino]-l ,l-dimethyl-2-oxoethyl}-V- methylkarbamát

Směs 3 -j od-l-(3 -piperidyl)-1 //-pyrazolo [34-d]pyrimidin-4-amin-dihydrochloridu (0,17 g, 0,00042 mol), 2-[[(9//-9-fluorenylmethoxy)karbonyl](methyl)amino]-2methylpropanové kyseliny (0,175 g, 0,00052 mol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3ethylkarbodiimid-hydrochloridu (0,1 g, 0,00052 mol), A/V-diisopropylethylaminu (0,23 g, 0,0018 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,057 g, 0,00042 mol) v bezvodém dichlormethanu (7 ml) se míchá po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Do reakce se přidá další 2-[[(9//-9-fluorenylmethoxy)karbonyl](methyl)amino]-2-methylpropanová kyselina (0,044 g, 0,00013 mol) a l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochlorid (0,025 g, 0,00013 mol) a směs se míchá po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi solanku a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem a spojená organická rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 20 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá 9//-9-fluorenylmethyl-V-{2[3 -(4-amino-3 -j od-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yljpiperidino] -1,1 -dimethyl-2oxoethyl}-V-methylkarbamát (0,030g, 0,00005 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 11,2 minut. MS: MH⁺ 666.

C. 9//-9-fluorenylmethyl-V-2-[3 -(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2yl)amino]fenyl} -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yljpiperidino]-1,1 -dimethyl-2-oxoethylV-methylkarbamát

Směs 9//-9-fluorenylmethyl-V-{2-(3-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin1-yljpiperidino]-l,l-dimethyl-2-oxoethyl}-V-methylkarbamátu (0,03 g, 0,000045 mol), • · · · • · • ·

564

V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,02 g, 0,000054 mol), tetrakis(trifenylfosfin)-palladia (0,003 g, 0,000002 mol) a uhličitanu sodného (0,0126 g, O, 00011 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vodě (1 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (3 x 30 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá nahnědlý pevný podíl, který se použije v následující reakci.

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,4 minut. TLC (methanol/dichlormethan = 5: 95) Rf 0,80.

D. l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l/7-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-1 -yl)piperidino]-2 methyl-2-(methylamino)-1 -propanon

Surová směs 9//-9-fluorenylmethy 1-V-2-[3 -(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3benzoxazol-2-yl)aminolfenyl} -1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-1 -y l)piperidino]-1,1 -dimethyl2-oxoethyl-V-methylkarbamátu (0,037 g, 0,00005 mol) v 25 % roztoku piperidinu v VV-dimethylformamidu (10 ml) se míchá po dobu 16 hodin při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát a vodu. Spojená organická vrstva se promyje solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v průběhu 30 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá 1 - [3 -(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 V-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidin-l-yl)piperidino]-2-methyl-2(methylamino)-l-propanon (0,011 g, 0,00002 mol).

*H NMR (Chloroform-d, 400 MHz) δ 8,35 (s, IH), 7,75 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,10 (s, IH), 6,78 (s, IH), 4,98-1,70 (br, 9 H), 2,49 (s, 3H), 2,48 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,10 (s, 6H). RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,0 minut. MS: MH⁺ 554.

• · · · • · • · • · «

565

Příklad 607:

JV2-4-[4-amino-l-(3 -azetanyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl]fenyl-5,7-dimethy 1-1,3benzoxazol-2-amin

A. 7erc-butyl-3-(4-amino-3-jod-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-azetankarboxylát

Směs 3-jod-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,73 g, 0,0028mol), /erc-butyl3-[(methylsulfonyl)oxy]-l-azetankarboxylátu (1,05 g, 0,0042 mol) a uhličitanu česného (1,4 g, 0,0042 mol) v W-dimethylformamidu (25 ml) se míchá při teplotě 70°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se ochladí na pokojovou teplotu. Do směsi se přidá další /erc-butyl-3-[(methylsulfonyl)oxy]-l-azetankarboxylát (0,35 g, 0,0014 mol) a uhličitan česný (0,46 g, 0,0014 mol). Směs se míchá při teplotě 70°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 70 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje dichlormethanem (2x3 ml), čímž se získá /erc-butyl-3-(4-amino-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-lazetankarboxylát (0,57 g, 0,0014 mol).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,4 minut. MS: MH⁺ 417.

B. 7erobutyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lApyrazolo [3,4-d]pyrimidin-l-yl)-l azetankarboxylát

Směs terc-butyl-3-(4-amino-3-jod-1 A-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-l -yl)-l-azetankarboxylátu (0,15 g, 0,00036 mol), V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,16 g, 0,00045 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,021 g, 0,000018 mol) a uhličitanu sodného (0,095 g, 0,0009 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (5 ml) a vodě (2 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu. Do směsi se přidá další tetrakis(trifenylfosfm)palladium (0,021 g, 0,000018 mol). Reakce se míchá při teplotě 80°C po dobu 3 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a • · • · · · • · < · · · • ······· ·

566 solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá nahnědlý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 5 %-50 % methanol/ dichlormethan jako mobilní fáze, čímž se získá terc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lVpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-azetankarboxylát (0,033 g, 0,00006 mol).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 11, 6 minut. MS: MH⁺ 527.

C. V2-4-[4-amino-l-(3-azetanyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]fenyl-5,7-dimethyl1,3-benzoxazol-2-amin

Do směsi /erc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l ,3-benzoxazol-2yl)amino] fenyl} -1 V-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-1 -yl)-1 -azetankarboxylátu (0,03 3 g,

0,000063 mol) v acetonu (4 ml) se při pokojové teplotě přidá 6N vodný roztok chlorovodíku (0,3 ml). Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 2 hodiny, pak při pokojové teplotě po dobu 16 hodin, pevný podíl z reakce se filtruje a kvůli odstranění nečistot promyje acetonem, pevný podíl se vytřepe mezi ethylacetát a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem a organická vrstva se promyje solankou. Rozpouštědlo se odstraní, čímž se získá JV2-4-[4-amino-l-(3azetanyl)-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl] feny 1 -5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol -2-amin (0,004 g, 0,00001 mol).

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,00 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 7,09 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 5,90 (br, 1H), 5,20 (m, 4H), 2,40 (s, 3H), 2,20 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,1 minut. MS: MH⁺ 427.

Příklad 608:

N2-{4- [4-amino-1 -(1 -methyl-3 -azetanyl)-1 V-pyrazolo [3,4-<7pyrimidin-3 -yl] fenyl} -5,7dimethyl- 1,3-benzoxazol-2-amin

A. Diacetát 1-(3-azetanyl)-3-j od-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

Ke směsi /erc-butyl-3 -(4-amino-3 -j od-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -y 1)-1azetankarboxylátu (0,41 g, 0,00099 mol) v acetonu (5 ml) se při pokojové teplotě přidá 6N vodný roztok chlorovodíku (1 ml). Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 2 hodiny.

··· · · ··;

···· ·· * · * • ······· · ··· · •· · ·· ·· ··

567

Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se alkalizuje 5N vodným roztokem hydroxidu sodného při teplotě 0°C. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml) a organická vrstva se promyje solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, vodná vrstva a zbytek z organická vrstvy se spojí. Rozpouštědla se odstraní a zbytek se suspenduje v N, V-dimethylform amidu, methanolu a octové kyselině a purifikuje RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%100% v průběhu 30 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min) na diacetát l-(3azetanyl)-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,165 g, 0,0005 mol). TLC (methanol/dichlormethan 5:95) Rf 0,29. MS: MH⁺ 317.

B. 3-Jod-1 -(1 -methyl-3-azetanyl)-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin

Do směsi diacetátu 1 -(3-azetany l)-3 -jod-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,165 g, 0, 0005mol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,15 g, 0,00073 mol) v dichlorethanu (15 ml) se přidá 37% roztok formaldehydu v 0,016 ml, 0,000572 mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin, přidá se další formaldehyd (37 % ve vodě, 0,016 ml, 0,000572 mol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,15 g, 0,00073 mol) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 dnů. Do směsi se přidá 5N vodný roztok hydroxidu sodného (1 ml). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, přičemž hlavní produkt je stále ve vodě. Vodná vrstva a zbytek z organické vrstvy se spojí. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se použije bez purifikace v následujícím kroku. TLC (methanol/dichlormethan = 10:90) Rf 0,48 MS: MH⁺ 331.

C. V2-{4-[4-amino-l-(l-methyl-3-azetanyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]fěnyl}-5,7dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Směs 3 -jod-l-(l -methyl-3-azetanyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,17 g, 0,00052 mol), V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,23 g, 0,000624 mol), tetrakis(trifenylfosfin)-palladia (0,030 g, 0,000026 mol) a uhličitanu sodného (0,14 g, 0,0013 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (20 ml) a vodě (15 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Reakce se ochladí na pokojovou teplotu. Směs se nechá vychladnout na • *

568 pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá nahnědlý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 5 %-50 % methanol/dichlormethan jako mobilní fáze, čímž se získá V2-{4-[4-amino-l-(l-methyl-3-azetanyl)-lApyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,13 g, 0,0003 mol).

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,70 (d, 2H), 7,09 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,40 (br, 1H), 3,90 (m, 2H), 3,70 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,30 (s, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5% - 95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,5 minut. MS: MH⁺ 441.

Příklad 609:

CA-2-(4-{ 4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3yl} anilino)-1,3 -benzoxazol-5 -karbonitril

A. 3-Amino-4-hydroxybenzonitril

Do směsi 4-hydroxy-3-nitrobenzonitrilu (4 g, 0,0244 mol) v ethanolu (180 ml) a vodě (90 ml) se při pokojové teplotě přidá thiosulfát sodný (17 g, 0,0976 mol). Heterogenní směs se míchá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 1 hodiny. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a ethanol se odstraní za sníženého tlaku, žlutý pevný podíl se filtruje, promyje vodou a suší za sníženého tlaku, čímž se získá 3-amino-4-hydroxybenzonitril (1,46 g, 0,011 mol).

RP-HPLC (DeltaPakC18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 4,5 minut. MS: MH⁺ 133.

B. 2-(4-Bromanilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitril

Do směsi 3-amino-4-hydroxybenzonitrilu (1,84 g, 0,0137 mol) v acetonitrilu (140 ml) se přidá 4-bromfenylisothiokyanát (2,93 g, 0,0137 mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá po dobu 16 hodin při pokojové teplotě. Do reakční směsi se přidá chlorid měďný

C I • · ·

569 (1,36 g, 0,0137 mol) a triethylamin (1,9 ml, 0,0137 mol). Směs se míchá po dobu 16 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a pevný podíl se suspenduje v methanolu. Směs se filtruje přes vrstvu Celitu za použití methanolu. Nahnědlý filtrát se nechá stát při teplotě 4°C po dobu 3 dnů, precipitát se filtruje a promyje methanolem, čímž se získá 2-(4-bromanilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitril (2,4 g, 0,0076 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 11,1 minut. MS: MH': 313.

C. 2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l,3-benzoxazol-5karbonitril

Směs 2-(4-bromanilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitrilu (1,8 g, 0,0058 mol), diboron-pinakolesteru (1,8 g, 0,007 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]-dichlorpalladia v komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,47g, 0,00058 mol) a octanu draselného (1,7 g, 0,0174 mol) v V,V-dimethylformamidu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 0 % - 40 % ethylacetát/n-heptan jako mobilní fáze, čímž se získá 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l ,3-benzoxazol-5karbonitril (0,80 g, 0,0022 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 16,9 minut. MS: MH⁺: 362.

D. Cis-2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo[3A-d\-3-pyrimidin-3-yl}anilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitril

Směs 3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4aminu (0,15 g, 0,00034 mol), 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]l,3-benzoxazol-5-karbonitrilu (0,153 g, 0,000425 mol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (0,028 g, 0,0000238 mol) a uhličitanu sodného (0,090 g, 0,00085 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (3 ml) a vodě (1 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Přidá se další 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l ,3-benzoxazol-5karbonitril (0,072 g, 0,0002 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,012 g, 0,000010 mol,

0,03 ekviv.) a směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku.

·· 9 * 9 ♦ F ·

9994

9 9 9 · f

9 9 · * * · • · · · · · fc « * ·

4 · ···· · « _φ •· · ·· ·· · » «

570

Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 2 % vodného roztoku hydroxidu amonného/5 %-20 % methanol/dichlormethan jako mobilní fáze. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21, 1 mm; 5%-50% v průběhu 30 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá cis-2-(4-{4amino-1 -[4-(4-methy lpiperazinojcyklohexylj -177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimi din-3 -yl} anilino)l,3-benzoxazol-5-karbonitril (0, 15g, 0,00027 mol).

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 11,25 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,70 (m, 4H), 4,80 (br, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,20 (br, 8H), 2,10 (br, 3H), 1,75 (br, 2H), 1,60 (br, 4H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,2 minut. MS: MH⁺ 549.

Příklad 610:

Cw-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin3 -yl} fenyl)-5-(trifluormethoxy)-1,3 -benzoxazol-2-amin

A. 2-Nitro-4-(trifluormethoxy)fenol

Do směsi 4-(trifluormethoxy)fenolu (4 g, 0,0225mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (90 ml) se přidá 0,5 M roztok nitronium-tetrafluorborátu v sulfolanu (46 ml, 0,0229 mol) při teplotě -50°C. Směs se míchá při teplotě -50°C pod atmosférou dusíku po dobu 6 hodin. Směs se filtruje přes vrstvu silikagelu, která se promyje 25 % ethylacetát/n-heptanem. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát a vodu. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou a solankou. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 0 %-50 % ethylacetát/uheptanu jako mobilní fáze, čímž se získá 2-nitro-4-(trifluormethoxy)fenol (2,5 g, 0,011 mol). TLC (ethylacetát/«-heptan = 25:75) Rf 0,50 MS: MH⁺: 222.

571

Β. 2-Amino-4-(trifluormethoxy)fenol

Do směsi 2-nitro-4-(trifluormethoxy)fenolu (2 g, 0,0089 mol) v ethanolu (50 ml) a vodě (25 ml) se přidá thiosulfát sodný (6,2 g, 0,0356 mol) při pokojové teplotě. Heterogenní směs se míchá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 1 hodiny. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a ethanol se odstraní za sníženého tlaku. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (3 x 70 ml) a organická vrstva se promyje solankou a suší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá žlutý pevný podíl 2-amino-4-(trifluormethoxy)fenolu (0,9 g, 0,005 mol). TLC (methanol/dichlormethan = 5:95) Rf 0,29 MS: MH⁺: 194.

C. V2-(4-bromfenyl)-5-(trifluormethoxy)-l ,3-benzoxazol-2-amin

Do směsi 2-amino-4-(trifluormethoxy)fenolu (0,9 g, 0,0047 mol) v tetrahydrofuranu (60 ml) se při pokojové teplotě přidá 4-bromfenylisothiokyanát (1 g, 0,0047 mol). Směs se míchá po dobu 16 hodin při pokojové teplotě. Do reakční směsi se přidá bezvodý síran měďný (7,1 g, 0,0443 mol, 9,43 ekviv.), triethylamin (0,67 ml, 0,0047 mol, 1 ekviv.) a silikagel (8,5 g). Směs se míchá po dobu 4 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Směs se filtruje přes vrstvu silikagelu za použití směsi 25 % ethylacetát/u-heptan jako mobilní fáze, čímž se získá oranžově zbarvená pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 0 % - 25 % ethylacetát/u-heptan jako mobilní fáze. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se trituruje H-heptanem, čímž se získá V2-(4-bromfenyl)-5-(trifluormethoxy)-l,3benzoxazol-2-amin (0,9 g, 0,0024 mol).

RP-HPLC (Delta PakC18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 12,2 minut. MS: MH⁺: 373.

D. V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-5-(trifluormethoxy)-1,3benzoxazol-2-amin

Směs V2-(4-bromfenyl)-5-(trifluormethoxy)-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,9 g, 0,0024 mol), diboron-pinakolesteru (0,73 g, 0,0029 mol), [1,1’bis(difenylfosfíno)fenOcen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,2 g, 0,00024 mol) a octanu draselného (0,71 g, 0,0072 mol) v VV-dimethylformamidu (25 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se • · · • · • · · • ·

572 filtruje přes vrstvu silikagelu směsí 25 % ethylacetát/n-heptan jako mobilní fáze. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se trituruje n-heptanem, čímž se získá V2-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-(trifluormethoxy)-l,3-benzoxazol-2-amin (0,68 g, 0,0016 mol).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 18,8 minut. MS: MH⁺: 421.

E. Cis-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5 -(trifluormethoxy)-1,3 -benzoxazol-2-amin

Směs 3 -j od-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4aminu (0,06 g, 0,00014 mol), V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5(trifluormethoxy)-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,071 g, 0,00017 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,011 g, 0, 00001 mol) a uhličitanu sodného (0,037,0,00035 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (3 ml) a vodě (1 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Přidá se další V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-(trifluormethoxy)-1,3-benzoxazol-2-amin (0,030 g, 0,00007 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,005 g, 0,000004 mol) a směs se míchá při teplotě 80°C po dobu 5 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 2 % vodného roztoku hydroxidu amonného/5 %-25 % methanol/dichlormethan jako mobilní fáze. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá cz.s-V2-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-úQpyri midin-3 -y 1} fenyl)-5(trifluormethoxy)-l,3-benzoxazol-2-amin (0,065 g, 0,00011 mol).

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 11,25 (s, IH), 8,20 (s, IH), 7,95 (d, 2H), 7,65 (m, 3H), 7,50 (s, IH), 7,15 (s, IH), 4,80 (br, IH), 2,60 (br, 9H), 2,49 (s, 3H), 2,20 (br, 3H), 2,10 (br, IH), 1,75 (br, 2H), 1,60 (br, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,7 minut. MS: MH⁺ 608.

* · < · ·

573

Příklad 611:

Cfi-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl} fenyl)-5-ethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

A. 4-Ethyl-2-nitrofenol

Do směsi 4-ethylfenolu (4 g, 0,0328 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (100 ml) se přidá 0,5 M roztok nitronium-tetrafluorborátu v sulfolanu (67 ml, 0,0335 mol) při teplotě -50°C. Směs se míchá při teplotě -50°C pod atmosférou dusíku po dobu 6 hodin. Směs se filtruje přes vrstvu silikagelu a promyje směsí 25 % ethylacetát/n-heptan. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát a vodu. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou a solankou. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá asi 10 g surového 4-ethyl-2nitrofenolu. Surová látka se použije bez purifikace v následujícím kroku.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,68 (s, IH), 7,71 (s, IH), 7,40 (d, IH), 7,07 (d, IH), 2,60 (q, 2H), 1,20 (t, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%- 95% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,2 minut.

B. 2-Amino-4-ethylfenol

Do směsi 4-ethyl-2-nitrofenolu (5,5 g, 0,032 mol) v ethanolu (180 ml) a vodě (90 ml) se při pokojové teplotě přidá thiosulfát sodný (23 g, 0,131 mol). Heterogenní směs se míchá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a ethanol se odstraní za sníženého tlaku. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (3 x 100 ml) a organická vrstva se promyje solankou a suší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 0 %-25 % methanol/dichlormethan jako mobilní fáze (2x). Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá 2-amino-4-ethylfenol (0,89 g, 0,006 mol).

‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,61 (br, 2H), 6,47 (d, IH), 6,37 (s, IH), 6,18 (d, IH), 2,17 (q, 2H), 1,08 (t, 3H). MS: MH’: 137.

C. V2-(4-bromfenyl)-5-ethyl-l,3-benzoxazol-2-amin • ·

574

Do směsi 2-amino-4-ethylfenolu (0,89 g, 0, 0065 mol) v tetrahydrofuranu (80 ml) se při pokojové teplotě přidá 4-bromfenylisothiokyanát (1,4 g, 0,0065mol). Směs se míchá po dobu 2 hodin při pokojové teplotě. Do reakční směsi se přidá bezvodý síran měďnatý (6,2 g, 0,039 mol), triethylamin (0,9 ml, 0,0065 mol) a silikagel (11,7 g). Směs se míchá po dobu 4 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Směs se filtruje přes vrstvu silikagelu za použití směsi 25 % ethylacetát/n-heptan jako mobilní fáze, čímž se získá hnědě zbarvená pevná látka, která se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 0 %-25 % ethylacetát/ n-heptan jako mobilní fáze. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek trituruje n-heptanem, čímž se získá V2-(4-bromfenyl)-5ethyl-l,3-benzoxazol-2-amin (0,96 g, 0,003 mol).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 12,1 minut. MS: MH⁺: 318.

D. JV2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-ethyl-l ,3-benzoxazol-2amin

Směs V2-(4-bromfenyl)-5-ethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,86 g, 0,0027 mol), diboron-pinakolesteru (0,84 g, 0,0033 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocenjdichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,22 g, 0,00027 mol) a octanu draselného (0,8 g, 0,0081 mol) v A/V-dimethylformamidu (30 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi ethylacetát a vodu. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (3 x 50 ml) a organická vrstva se promyje solankou. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 0 %-25 % ethylacetát/n-heptan jako mobilní fáze, čímž se získá V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5ethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,82 g, 0,002 mol). TLC (ethylacetát/n-heptan = 25:75) Rf 0,30. MS: MH⁺: 365.

E. C/s'-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5-ethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Směs 3 -jod-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4-/|pyrimidin-4aminu (0,06g, 0,00014 mol), V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5ethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,062 g, 0,00017 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia • · • · · • · · · · • *

575 (0,011 g, 0,00001 mol) a uhličitanu sodného (0,037,0,00035 mol) v dimethyletheru ethylenglykolu (3 ml) a vodě (1 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 x 25 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 2 % vodného roztoku hydroxidu amonného/5 %-25 % methanol/dichlormethan jako mobilní fáze. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá cN-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-ethyl-l,3-benzoxazol-2-amin (0,065 g, 0,00012 mol).

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,25 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,37 (d, 2H), 8,09 (d, 2H), 7,84 (d, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 5,22 (br, 1H), 3,13 (q, 2H), 2,52 (br, 7H), 2,69 (br, 4H), 2,64 (s, 3H), 2,49 (br, 2H), 2,11 (br, 2H), 2,01 (br, 2H), 1,63 (t, 3H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,3 minut. MS: MH⁺ 552.

Příklady 612:

Cw-/V2-(4- {4-amino-1 -[4-(dimethylamino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yll-fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin; a

Příklad 613:

Cw-A^/2-(4-{4-amino-l-[4-(dimethylamino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl}fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

A. Cis- a /raz?.s-l-[4-(dimethylamino)cyklohexyl]-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4amin

Do roztoku monohydrochloridu 4-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-lyl)-l-cyklohexanonu (2,00 g, 5,08 mmol), dimethylaminového roztoku (2 M v tetrahydrofuranu, 7,62 ml, 15,24 mmol) a octové kyseliny (0,87 ml, 15,24 mmol) v 1,2-dichlorethanu (200 ml) se při pokojové teplotě přidá triacetoxyborohydrid sodný (1,40 g, 6,61 mmol). Reakce se míchá po dobu 24 hodin a přidá se další triacetoxyborohydrid

576 sodný (0,40g). Po 24 hodinách se přidá nasycený vodný roztok NaHCCf (50 ml) a CH2CI2 (200 ml) a organická vrstva se oddělí, suší nad bezvodým Na2SO₄ a koncentruje za vakua. Produkt se čistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití gradientu 1:5:94 vodný hydroxid amonný: MeOPkCJLCL až 1:20:79 94 vodný hydroxid amonný: MeOH:CH2Cl2 jako eluentu, čímž se získá směs cis- a trans·-l-[4-(dimethylamino)cyklohexyl]-3-jod-l Apyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé krystalické pevné látky (0,87 g, 44 %);

RP-HPLC R_t 5,458 minut, 33 % čistota: , /rans-izomer; R_t 5,621 minut, 67 % čistota:

Av-izomer (5 % až 85 % acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 387 (MH⁺) pro oba cis- a trans·-izomery.

B. Cis- a trans-V2-(4-{4-amino-l-[4-(dimethylamino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4t/jpyrimidín-3-yl }fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 benzoxazol-2-amin

Směs cis- a Zrans-l-[4-(dimethylamino)cyklohexyl]-3-jod-l A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-aminu (0,50 g, 1,29 mmol), V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan2-yl)fenyl]-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,565 g, 1,55 mmol), uhličitanu sodného (0,34 g, 3,24 mmol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,075 g, 0,06 mmol) v ethylenglykolu dimethyletheru (150 ml) a vodě (25 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin. Přidá se další katalyzátor na bázi palladia (0,075 g) a A2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin (0,40 g) a v reakci se pokračuje při teplotě 80°C dalších 16 hodin. Přidá se další množství katalyzátoru na bázi palladia (0,020 g) a V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin (0,12 g) a v reakci se pokračuje při teplotě 80°C dalších 16 hodin. Reakce se koncentruje za vakua a zbytky se rozpustí v dichlormethanu (200 ml) a promyjí vodou (50 ml). Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se čistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 1 % vodného roztoku hydroxidu amonného a 10% methanolu v CH2CI2 jako eluentu, čímž se získá m-V2-(4-{4-amino-l-[4-(dimethylamino)cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyr)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin (0,08 g) a směsná frakce (0,24 g) a /ra«.s-V2-(4-{4-amino-l-[4-(dimethylamino)cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,030 g);

• · · · · · ·

577

RP-HPLC R_t 11,326 minut, 100 % čistota: (5 % až 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při teplotě 1 ml/min; 254 nm;

Deltapak Cl 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 497 (MH⁺);

’H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) 1,49 (2H, m), 2,01 (6H, m), 2,33 (7H, m), 2,35 (3H, s), 2,40 (3H, s), 4,67 (ÍH, m), 6,80 (ÍH, s), 7,11 (ÍH, s), 7,65 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,92 (2H, d, J 8,5 Hz), 8,23 (ÍH, s) a 10,85 (ÍH, s).

Cz.s-frakce vyžaduje další purifikaci

RP-HPLC, čímž se získá czs-V2-(4-{4-amino-l-[4-(dimethylamino)cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin (0,050 g). RP-HPLC R_t 11,337 minut, 100 % čistota: (5 % až 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec);

’H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) 1,61 (4H, m), 2,08 (2H, m), 2,27 (9H, m), 2,34 (3H, s), 2,40 (3H, s), 4,81 (ÍH, m), 6,80 (ÍH, s), 7,11 (ÍH, s), 7,65 (2H, d, J 8, 5 Hz), 7,92 (2H, d, J 8, 5 Hz), 8,23 (ÍH, s) a 10,85 (ÍH, s).

Příklady 614-620

Obecný způsob přípravy analog cz'.s-V2-4-[4-amino-l-(4-aminocyklohexyl)-l/7pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-yl]fenyl-l,3-benzoxazol-2-aminu. Příklady 614-620 se připraví podle tohoto způsobu.

A. V2-(4-bromfenyl)-5-chlor-l ,3-benzoxazol-2-amin

4-Bromfenylisothiokyanát (3,639 g, 17,00 mmol) se přidá do roztoku 2-amino-4chlorfenolu (2,441 g, 17,00 mmol) v acetonitrilu (20 ml) a reakce se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Pak se do suspenze peroxidu sodíku (6,04 g, 85,0 mmol) v acetonitrilu (20 ml) předem ochlazeném na teplotu 0°C v ledové lázni přidá po kapkách výsledný hnědý roztok. Po 20 minutách přestane mít reakce exotermní charakter a nechá se ohřát na pokojovou teplotu po dobu 40 minut. Po kapkách se přidá voda (120 ml) a výsledný bělavý pevný podíl se spojí filtrací, promyje další vodou (60 ml) a suší přes noc na lyofilizátoru, čímž se získá V2-(4-bromfenyl)-5-chlor-l,3-benzoxazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (4,06 g, 74 %);

RP-HPLC R_t 17,229 minut, 99 % čistota: (5 % až 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amonným pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; δ - 254 nm;

578

Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 321 (M-H)' a 323 (M-H)';

'H NMR (400MHz, d₆-DMS0) 7,17 (1H, dd, J 8,5 a 1,9 Hz), 7,53 (4H, m), 7,71 (2H, d, J 8,8 Hz) a 10,95 (1H, s).

B. V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-chlor-L3-benzoxazol-2amin

Směs obsahující A2-(4-bromfenyl)-5-chlor-l,3-benzoxazol-2-amin (4,00 g, 12,36 mmol), bis(pinakolato)diboron (3,77 g, 14,83 mmol), octan draselný (3,64 g, 37,09 mmol) a [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatý komplex s dichlormethanem (1:1) (0,61 g, 0,74 mmol) v dimethylformamidu (200 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Přidá se další katalyzátor na bázi palladia (0,61 g) a v reakci se pokračuje dalších 6 hodin. Přidá se další diboron (3,0 g) a v reakci se pokračuje dalších 16 hodin. Do reakční směsi se přidá silikagel (20 ml) a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Výsledný pevný podíl se pak purifikuje na silikagelu za použití gradientu 10% až 20% ethylacetátu v heptanu jako eluentu. Výsledný pevný podíl se trituruje heptanem, čímž se získá V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5chlor-l,3-benzoxazol-2-amin ve formě krémové pevné látky (2,40 g, 52 %);

RP-HPLC R_t 18,164 minut, 99 % čistota: (5 % až 85 % acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufřovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec);

’H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) 1,29 (12H, s), 7,17 (1H, dd, J 8,5 a 2,1 Hz), 7,56 (2H, m), 7,68 (2H, m), 7,75 (2H, m) a 10,96 (1H, s).

C. A2-(4-bromfenyl)-5-methyl-1,3-benzoxazol-2-amin

2-Amino-4-methylfenol (1,15 g, 9,34 mmol) se přidá do roztoku 4-bromfenylisothiokyanátu (2,00 g, 9,34 mmol) v tetrahydrofuranu (35 ml) a reakce se míchá při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Přidá se bezvodý síran měďnatý (14,06 g, 88, 10 mmol), silikagel (14,06 g) a triethylamin (1,3 ml, 9,34 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Reakce se koncentruje za sníženého tlaku, pak se nanese na vrstvu silikagelu a purifikuje za použití směsi 1:5 ethylacetát: heptan (2 1), poté diethyletheru jako eluentu, čímž se získá A2-(4-bromfenyl)-5-methyl-1,3-benzoxazol-2amin ve formě světle hnědé pevné látky (2,30 g, 81 %);

579

RP-HPLC R_t 16,437 minut, 94% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec);

’H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) 2,37 (3H, s), 6,94 (IH, d, J = 8,1 Hz), 7,27 (IH, s), 7,36 (IH, d, J = 8,1 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,72 (2H, d, J = 8,4 Hz) a 10,72 (IH, s).

D. jV2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-methyl-l,3-benzoxazol-2amin /V2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-methyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z /V2-(4-bromfenyl)-5-methyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (1,5 g, 4,95 mmol) podle způsobu popsaného pro přípravu V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-chlor-l,3-benzoxazol-2-aminu. Produkt se získá ve formě bílé vločkovité pevné látky (0,79 g, 46 %);

RP-HPLC R_t 17,382 minut, 98% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonným pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm;

Deltapak Cl 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec);

’H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) 1,29 (12 H, s), 2,38 (3H, s), 6,94 (IH, d, J8, 1 Hz), 7,30 (IH, s), 7,36 (IH, d, J = 8,1 Hz), 7,67 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,75 (2H, d, J = 8,5 Hz) a 10,74 (IH, s).

E. Obecný způsob přípravy cyklohexylaminových analog cřs-l-(4-aminocyklohexyl)-3j od-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu • ·

·· · · · · · » • O « · · · ·· ’· ······· · ··· · · · ·

580

4-(4-Amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-]pyrimidin-1 -yl)-1 -cyklohexanon-monohydrochlorid (5,08-7,62 mmol měřítko) se suspenduje v dichlorethanu (200300 ml) pod atmosférou dusíku, přidá se příslušný amin (3,0 ekviv.), ledová kyselina octová (3,0 ekviv.) a triacetoxyborohydrid sodný (1,3 ekviv.) a reakce se míchá při pokojové teplotě po dobu 1-2 dnů. Pokud reakce nedoběhne do konce, přidá se další triacetoxyborohydrid sodný (1,3 ekviv.) a v reakci se pokračuje další 1 nebo 2 dny. Reakce se zastaví nasyceným uhličitanem sodným (50-75 ml) a extrahují dichlormethanem (200-300 ml). Organická fáze se oddělí, suší nad bezvodým Na₂SO₄ a koncentruje za vakua, čímž se získá směs cis- a írms-produktú ve formě bílé pevné látky. Surové produkty se purifikují zrychlenou chromatografií za použití gradientu 2% methanolu a 0,2% hydroxidu amonného v dichlormethanu až 5% methanolu a 0,5% hydroxidu amonného v dichlormethanu jako • ·

581 eluentu. Frakce obsahující čisté c/s-produkty se spojí, koncentrují za sníženého tlaku a suší na lyofilizátoru, čímž se získají cyklohexylaminová analoga m-l-(4-aminocyklohexyl)-3jod-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (detaily viz tabulka

1).

Tabulka 1

Struktura	Vých.amin	Měřítko vých. cyklohexanonu (mmol)	m/z (MH⁺)	HPLC RT (min)	Čistota	% výtěžek izolovaného cz.v-izomeru
Ϊ ¹ o	ó 0	5,08	429,0	5,63	95%	8
0
W o	HgC''⁰	7,62	417,0	5,96	100%	59
3 A
Ν , li X > YA	HJK ² ch₃	7,62	373,0	5,32	100%	2
Q w /

Podmínky analýzy

RP-HPLC: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec.

··· ·· · · · • · » · · · · · ♦ ·· · • ·····*· · · · · · · · · · ·· · ·· · · · · ·

582

F. Obecný způsob přípravy analog cřs-A2-4-[4-amino-l-(4-aminocyklohexyl)-lApyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl]fenyl-l,3-benzoxazol-2-aminu

Cyklohexylaminový analog cis-l-(4-aminocy klohexyl)-3-jod-1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-aminu (0,10-0,52 mmol měřítko) se rozpustí v ethylenglykolu dimethyletheru (5-10 ml) a vodě (2,5-5 ml), přidá se příslušný substituovaný nebo nesubstituovaný V-(l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amin (1,25 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfm)palladium (0,05 ekviv.) a uhličitan sodný (2,5 ekviv.) a reakce se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 20 hodin. Pokud reakce nedoběhne do konce, přidá se další boronát (1,25 ekviv.) a katalyzátor na báz palladia (0,05 ekviv.). Pokud se objeví precipitát, přidá se do reakcí DME/H2O 2:1 (5 ml). Reakce se dále zahřívají při teplotě 80°C dalších 22-40 hodin, pak se přidá silikagel (5-8 ml) a směs se koncentruje za sníženého tlaku. Purifikací zrychlenou chromatografií na silikagelu za použití gradientu 2% až 50% methanolu obsahujícího 0,5M hydroxid amonný v dichlormethanu se připraví analoga cz'5-/V2-4-[4-amino-l-(4-aminocyklohexyl)-lApyrazolo[3,4-//]pyrimidin3-yl]fenyl-l,3-benzoxazol-2-aminu. U produktů, které nejsou tak čistí, se provede purifikace RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, průtok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: gradient 15% až 35% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný v průběhu 40 minut, pak gradient 35% až 90% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný v průběhu 150 minut; Deltapak 08, 300Á, 15 pm, 40 x 100 mm sloupec). Frakce obsahující požadované produkty se spojí a koncentrují za vakua, pak suší na lyofilizátoru, čímž se získají produkty ve formě bílých nebo hnědých pevných látek, (detaily viz tabulka 2).

583

Tabulka 2

Př.	Struktura	Vých. cyklohexylam in	Měř. (mmol )	Vých. boronát	m/z	HPLC RT (min)	Čistota	% výt.
614			Ϊ ‘ w	0,24	&	527,3	11,66	100%	32
	Γ*		0		v
	ti N	>	XX
		l^-o^Z H			4
615		NI—	1 /	0,25	ΖΛ	499,3	9,72	100%	79
		íl			eSS?/ ^řy°
	NR,		n		nh
	O	n	N O		íTi
		Q N^Z*°^Z H			V
616		«-ζθ	Q	0,33	A-	539,3	11,50	100%	28
	’Η
	Cr N	ú	0		Φ
		0

»· » • ♦ * · ·

9

584

617	NH, Cj fl	y;G % Á	N	> 0	0,12	Xí •U? η' 9	511,3	9,77	100%	60
		0				ÝJ_
618	ííHj ó	.<σ #7 f		1 > 0	0,10	α ^Νγ° NK 0	545,2	11,36	97%	97
		0				-íl·
619			Ϊ	/	0,13	ΖΛ	455,2	9,48	100%	61
			O	Λ		γ°
	NH,	A		h
	O N	dři . # /?		v z		ČL
		N·^. H				ΤΓ
620			N O	1	0,52	o
	MM,	O			y
	V	Α- Χ		/*-		Φ
		Q				n'%
						u

• '999

585

Podmínky analýzy RP-HPLC: 5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonným pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec.

Příklad 621:

C/$'-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl}fenyl)-4-(2-nitrofenyl)-l,3-thiazol-2-amin

Použije se způsob popsaný pro přípravu cis-V2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazinojcyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl} feny l)-4-ethyl-1,3thiazol-2-aminu s výjimkou toho, že jako alkylační činidlo se použije 2-brom-2'nitroacetofenon (0,126 g, 0,516 mmol). Purifikaci produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8p Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, Rt 7,0-8,0 min) se získá cis-N2-(4-{4amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-4(2nitrofenyl)-l,3-thiazol-2-amin ve formě žluté pěny (0,088 g, 0,144 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 7,72 min; MS (MH)⁺611.

Příklad 622:

Czs-V2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzothiazol-2-amin

Pyridinium-tribromid (0,894 g, 2,80 mmol) a 3,5-dimethylcyklohexanon (0,180 ml, 1,27 mmol) se suspendují v dichlormethanu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, pak zředí dichlormethanem (60 ml). Organická vrstva se extrahuje postupně vodou (10 ml) a uhličitanem sodným (10 ml), suší (síranem hořečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikaci produktu zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu (7,5% ethylacetát/heptan) se získá 2,6-dibrom-3,5-dimethyl-lcyklohexanon ve formě směsi diastereoizomerů (0,243 g, 0,855 mmol): TLC Rf (20% ethylacetát/heptan): 0,35.

• · · · · · · ···· ·· · · • ·····«· · * · · ·· · ···· · • · · · · · ·

586

Alkylace 2,6-dibrom-3,5-dimethyl-l-cyklohexanonu (0,243 g, 0,855 mmol) se provede podle způsobu popsaného pro přípravu cz'5-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3-yl} feny l)-4-ethyl-1,3thiazol-2-aminu s výjimkou toho, že alkylace se provádí při teplotě 75°C, čímž se získá V-(4-bromfenyl)-V-(5,7-dimethyl-l,3-benzothiazol-2-yl)amin (0,251 g, 0,754 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5 μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm) R_t 14,8 minut.

V-(4-Bromfenyl)-V-(5,7-dimethyl-l,3-benzothiazol-2-yl)amin (0,251 g, 0,754 mmol) se konvertuje na požadovanou sloučeninu podle způsobu popsaného pro přípravu m-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3-yl}fenyl)-4-ethyl-l,3-thiazol-2-aminu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 8,8-10,5 min) se získá cis-N2-(4{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzothiazol-2-amin ve formě bílého prášku (0,081 g, 0,143 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 8,75 min; MS (MH)⁺ 568.

Příklads 623:

CA-jV2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-4//-cyklopenta[</][l,3]thiazol-2-amin

Cyklopentanon (200 μΐ, 2,26 mmol) a pyridinium-tribromid (0,723 g, 2,26 mmol) se suspendují v dichlormethanu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc, pak zředí směsí ether/petrolether (1:1, 60 ml). Organická fáze se extrahuje postupně vodou (10 ml) a vodným roztokem uhličitanu sodného (10 ml), pak suší (síranem hořečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikací produktu zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu (25% ether/petrolether) se získá 2-bromcyklopentanon (0,220 g, 1,35 mmol) ve formě bezbarvého oleje; TLC (25% ether/petrolum ether) Rf: 0,35.

2-Bromcyklopentanon (0,220 g, 1,35 mmol) se konvertuje na požadovanou sloučeninu podle způsobu popsaného pro přípravu cis-N2-(4- {4-amino-1-[4-(4587 methylpipe-razino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4-(2-nitrofenyl)l,3-thiazol-2-aminu s výjimkou toho, že alkylace se provádí při teplotě 60°C. Purifikaci produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v O,1M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t7,8-8,8 min) se získá czs-7V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-4A-cyklopenta[(7][l,3]thiazol-2-amin ve formě hnědého prášku (0,009 g, 0,017 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 7,23 min; MS (MH)⁺ 530.

Příklad 624:

Cis-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3 -yl} fenyl)-5-ethyl-4-fenyl-1,3 -thiazol-2-amin

Ke konvertování butyrofenonu (436 μΐ, 3,00 mmol) na požadovanou sloučeninu se využije způsob přípravy cz5-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpipe-razino)cyklohexyl]-lApyrazolo [3,4-<7]pyrim idin-3 -yl} fenyl)-5,6-dihydro-4 A-cyklopenta[ď] [ 1,3 ] thiazol-2-aminu. Purifikaci produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 8, 9-11,1 min) se získá czs-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-ethyl-4-fenyll,3-thiazol-2-amin ve formě bílého prášku (0,022 g, 0,037 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,27 min; MS (MH)⁺ 594.

Příklad 625:

Cz',s-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin3-yl}fenyl)-4,5,6,7-tetrahydro-l,3 benzothiazol-2-amin

Ke konvertování cyklohexanonu (310 μΐ, 3,00 mmol) na požadovanou sloučeninu se použije způsob popsaný pro přípravu cw-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methyl588 piperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,6-dihydro-4//cyklopenta[</][l,3]thiazol-2-amin. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v O,1M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 6,8-8,6 min) se získá cz's-/V2-(4-{4-aminol-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-4,5,6,7tetrahydro-l,3-benzothiazol-2-amin ve formě oranžového prášku (0,022 g, 0,040 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 7,62 min; MS (MH)⁺ 544.

Příklad 626:

Cz.v-7/2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3 -yl} fenyl)-5 -isopropyl-4-fenyl-1,3 -thiazol-2-amin

Ke konvertování isovalerofenonu (0,484 g, 2,98 mmol) na požadovanou sloučeninu se použije způsob popsaný pro přípravu cz\-M2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,6-dÍhydro-4//cyklopenta[í/][l,3]thiazol-2-aminu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 9,5-11,7 min) se získá cis-N2-(4-{4amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5 isopropyl-4-fenyl-l,3-thiazol-2-amin ve formě růžového prášku (0,060 g, 0,099 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití sloupce 5μ Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,82 min; MS (MH)⁺ 608.

Příklad 627:

Cz'í-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl}fenyl)-4-fenyl-5-propyl-l ,3 thiazol-2-amin

Ke konvertování valerofenonu (0,488 g, 3,01 mmol) na požadovanou sloučeninu se použije způsob popsaný pro přípravu czs-?/2-(4-{4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,6-dihydro-4//• «

589 cyklopenta[í/][l,3]thiazol-2-aminu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v O,1M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 9,6-11,8 min) se získá cis-N2-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4-<dpyrimidin-3 -yl} fenyl)-4fenyl-5-propyl-l,3-thiazol-2-amin ve formě žlutého prášku (0,135 g, 0,222 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 10,08 min; MS (MH)⁺ 608.

Příklad 628:

- [4-( 1,3 -Benzoxazol -2-ylmethyl)fenyl]-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Vpyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-amin

2-Aminofenol (0,257 g, 2,36 mmol) a 4-bromfenyloctová kyselina (0,500 g, 2,36 mmol) se zahřívají v utěsněné nádobě při teplotě 200°C. Po 4 hodinách se reakční směs ochladí na pokojovou teplotu a zředí směsí methanolu a dichlormethanu (5%, 60 ml). Organická fáze se extrahuje vodným roztokem uhličitanu sodného (1 M, 10 ml), suší (síranem hořečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikací zbytku zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu (15% ethylacetát/heptan) se získá V-(l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin ve formě hnědé pevné látky (0,347 g, 1,20 mmol); (MH)⁺ 290.

V-(l,3-Benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljamin se konvertuje na 2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzyl]-l,3benzoxazol, pak na požadovanou sloučeninu podle způsobu popsaného pro přípravu cisV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l V-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3yl}fenyl)-6-chlor-l,3-benzothiazol-2-aminu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS C18, 250 x 21 mm sloupec, R_t 5,6-7,3 min) se získá 3-[4-(l,3benzoxazol-2-ylmethyl)fenyl] -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin ve formě bílého prášku (0,102 g, 0,195 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS C18, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 6,83 min; MS (MH)⁺ 523.

• ·

590

Příklad 629:

NI - [2-(Dimethylamino)ethyl] -2- {4-amino-3 -[4-(1,3 -benzoxazol-2-ylamino)fenyl] -1Hpyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -y 1 {propanamid

Použije se způsob popsaný pro přípravu Al-[2-(dimethylamino)ethyl]-2-(4-amino3 - {4-[(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 yljpropanamidu s výjimkou toho, že Suzukiho kopulace se provede s A-(l,3-benzoxazol-2yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminem. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v O,1M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 5,5-7,0 min) se získá Vl-[2-(dimethylamino)ethyl]-2-{4-amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2ylamino)fenyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl}propanamid ve formě bělavé pevné látky (0,003 g, 0,006 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS Cl 8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 6,70 min; MS (MH)⁺ 486.

Příklad 630:

Czs-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl} fenyl)-5-ethyl-4-(4-methylfenyl)-1,3-thiazol-2-amin p-Tolylboritá kyselina (0,150 g, 1,10 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladium (0,064 g, 0,055 mmol) a uhličitan česný (1,80 g, 5,52 mmol) se suspendují v toluenu (25 ml). Reakční směs se nechá probublávat intenzivním proudem dusíku po dobu 15 minut, přidá se butyrylchlorid (0,344 ml, 3,31 mmol) a reakční směs se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po dobu 24 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a zředí etherem (100 ml). Organická vrstva se extrahuje postupně vodou (10 ml), vodným roztokem uhličitanu sodného (10 ml) a vodným roztokem chloridu sodného (10 ml). Organická vrstva se suší (síranem hořečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikací zbytku zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu (7,5 % ether/petrolether) se získá l-(4methylfenyl)-l-butanon ve formě bezbarvého oleje (0,134 g, 0,827 mmol):

’H NMR (CDC1₃, 400 MHz) δ 7,86 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 2,92 (t, 2H), 2,41 (s, 3H), 1,76 (sx, 2H), 1,00 (t, 3H). 1-(4-Methylfenyl)-l-butanon (0,134 g, 0,827 mmol) se konvertuje na • · • · · · • · ·

591 požadovanou sloučeninu podle způsobu popsaného pro přípravu cis-N2-(4- {4-amino-1-[4(4-methylpiperazino)cyklohexylJ-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro4A-cyklopenta[í7][l,3]thiazol-2-amin. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v O,1M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl 8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 10,0-12,0 min) se získá cis-N2-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5 ethyl-4-(4-methylfenyl)-l,3-thiazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (0,036 g, 0,059 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 10,13 min; MS (MH)⁺ 608.

Příklad 631:

Cis-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidi n3 -yl} fenyl)-5-ethy 1-4-(2 -methylfenyl)-1,3 -thiazol-2-amin

Ke konvertování o-tolylborité kyseliny (0,200 g, 1,47 mmol) na požadovanou sloučeninu se použije způsob popsaný pro přípravu cis-N2-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl} fenyl)-5 -ethyl-4-(4methylfenyl)-l,3-thiazol-2-aminu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 9,8-11,7 min) se získá cm-/V2-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidin-3 -yl} fe-nyl)-5 ethyl-4-(2-methylfenyl)-l,3-thiazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (0,075 g, 0,123 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS 08, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,83 min; MS (MH)⁺ 608.

Příklad 632:

Cis-N2-(4- {4-Amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin3-yl}fenyl)-5-ethyl-4-(3-methylfenyl)-l,3-thiazol-2-amin

592

Ke konvertování w-tolylborité kyseliny (0,175 g, 1,29 mmol) na požadovanou sloučeninu se použije způsob popsaný pro přípravu cis-N2-(4-{4-amino-1-(4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l Vpyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-ethyl-4-(4methylfenyl)-l,3-thiazol-2-aminu. Purifikaci produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v O,1M vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 10,0-12,0 min) se získá cis-N2-(4-{4amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3-y 1} fenyl)-5 ethyl-4-(3-methylfenyl)-l,3-thiazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (0,051 g, 0,084 mmol);

Příklad 633:

Bismaleátu cis-N2-{4-(4-amino-l -(4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-l V-pyrazolo [3,4/]pyrimi din-3 -yl)-2-methoxy feny 1} -1 V-2-indolkarboxamidu

Směs cz'5-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl-lVpyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (0,50 g, 1,15 mmol) v dichlormethanu (4 ml) a pyridinu (4 ml) se ochladí na teplotu 0°C, pak nechá se reagovat s lV-2-indolkarbonylchloridem (0,27 g, 1,49 mmol) v dichlormethanu (4 ml). Směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 1 hodiny. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku, pak se zbytek vytřepe mezi dichlormethan (50 ml) a 1 N vodný roztok hydroxidu sodného. Vrstvy se separují, organický roztok se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a filtrát koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá zbytek, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/methanol (7:3) jako mobilní fáze. Pevný podíl (0,53 g) se rozpustí v ethylacetátu (60 ml) a ethanolu (35 ml) při teplotě 60°C. Přidá se kyselina maleinová (0,32 g, 2,75 mmol) v ethylacetátu (5 ml) a směs se ochladí na teplotu 0°C. Vzniklý pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá (0,70 g, 0,86 mmol) bismaleát cisN2-{4-(4-amino-1 -(4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-1 V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3 yl)-2-methoxyfenyl}-lV-2-indolkarboxamidu:

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,82 (s, IH), 9,46 (s, IH), 8,26 (s, IH), 8,10 (d, IH),

7,68 (d, IH), 7,48 (d, IH), 7,40 (s, IH), 7,33 (s, IH), 7,30 (d, IH), 7,24 (t, IH), 7,09 (t,

593

1H), 6,14 (s, 4H), 4,88 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 2,3-3,3 (m, 14H), 2,09 (m, 2H), 1,7-1,8 (m, 4H);

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 15,22 min;

MS: MH⁺ 580,3.

Příklad 634:

Bismaleát cis-NT.-{4-4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4úQpyrimidin-3-yl-2-methoxy feny 1}-1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamidu

Požadovaná sloučenina se připraví z cz's-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl-1 V-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4-aminu a 1 -methyl-1V-2indolkarbonylchloridu způsobem, který je podobný způsobu popsanému pro přípravu bismaleátu cis-N2-{4-(4-amino-1 -(4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl)-1 V-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl)-2-methoxy feny 1} -1 V-2-indolkarboxamidu:

’H NMR (DMSo-dó 400MHz) δ 9,47 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,09 (d, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,59 (d, 1H), 7,17-7,36 (m, 4H), 7,16 (t, 1H), 6,16 (s, 4H), 4,88 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,3-3,3 (m, 14H), 2,09 (m, 2H), 1,7-1,8 (m, 4H);

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 15,98 min;

MS: MH⁺ 594,3.

Příklad 635:

VI -{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl] -2-methoxyfenyl} -2fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-acetát

A. 2-Methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilin

Směs fórc-butyl-V-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (45,0 g, 129 mol) se rozpustí v dichlormethanu (270 ml), pak se roztok ochladí na teplotu 5°C v ledové lázni. V průběhu 1 hodiny se přidá směs 20% trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu, přičemž teplota se udržuje pod 5°C. Reakční směs se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá po dobu 2 hodin. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku, výsledný olej se rozpustí v dichlormethanu (250 ml) a opatrně extrahuje • · · · • · · « · · · • · · · · · ·

594

2,5 N vodným roztokem hydroxidu sodného (300 ml), pak solankou (100 ml). Organický roztok se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a fitrát koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá 2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilin (21,7 g, 67,5%) ve formě světle hnědého pevného bismaleátu:

Ή NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 7,06 (d, ÍH), 6,98 (s, ÍH), 8,09 (d, ÍH), 6,59 (d, ÍH), 5,13 (bs, 2H), 3,76 (s, 3H), 1,26 (s, 12H);

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8,5 μ, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), ír 10,85 minut.

B. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-lyl] -1 -piperidinkarboxylát

Směs /erc-buty l-4-(4-amino-3 -j od-1 V-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-1 -yl)-l-piperidinkarboxylátu (0,50 g, 11,26 mmol), 2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)anilinu (3,10 g, 12,39 mmol), uhličitanu sodného (2,90 g, 27,0 mmol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,78 g, 0,67 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (90 ml) a vodě (45 ml) se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 18 hodin. Směs se ochladí a zahušťuje za sníženého tlaku, rozdělí mezi vodu (50 ml) a dichlormethan (150 ml). Vodná vrstva se extrahuje dále dichlormethanem (2 x 50 ml), spojené organické roztoky se suší nad síranem hořečnatým a filtrují, filtrát se koncentruje a purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (96:4) jako eluentu, čímž se získá požadovaná sloučenina (4,51 g, 91%) ve formě hnědé pevné látky:

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,20 (s, ÍH), 7,04 (s, ÍH), 6,98 (d, ÍH), 6,76 (d, ÍH), 5,06 (bs, ÍH), 4,86 (m, ÍH), 4,08 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 2,90 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,90 (m, 2H), 1,43 (s, 9H);

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), ír 9,70 minut.

C. VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} 2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-acetát

Směs Vrc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (0,10 g, 0,228 mmol) v dichlormethanu (2 ml) a pyridinu (1 ml) se nechá reagovat s 2-fluor-4-trifluormethylbenzoylchloridem (0,057 g,

595

0,251 mmol), pak míchá po dobu 1 hodiny. Rozpouštědla se zahušťují a zbytek se nechá reagovat s trifluoroctovou kyselinou (1 ml) v dichlormethanu (2 ml). Směs se míchá po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě, pak se rozpouštědla zahušťují za sníženého tlaku a zbytek purifikuje preparativní RP-HPLC na sloupci Cl8 za použití směsi acetonitril-0,05 M octan amonný jako mobilní fáze. Lyofilizací se získá čistá požadovaná sloučenina:

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,90 (d, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,99 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,10 (m, 2H), 2,69 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 1,85-2,0 (m, 5H);

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ť< 17,33 min; MS: MH⁺ 530,2.

Sloučeniny podle příkladů 636-710 se připraví z terc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino3 -methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl] -1 -piperidinkarboxylátu a příslušného chloridu kyseliny podle způsobu popsaného pro přípravu Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)1 A-pyrazolo[3,4-</jpyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(triíluormethyl)benzamidacetátu (Příklad 635). V některých případech je k připravení požadované sloučeniny třeba použít záměny funkčních skupin pomocí standardních organických technik. Volné báze se získají vytřepáním látky získané z preparativní HPLC mezi vodný roztok hydroxidu sodného a dichlormethan. Organická vrstva se pak suší nad síranem hořečnatým, filtruje a filtrát koncentruje, čímž se získá požadovaný produkt.

Příklad 636:

Al - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy feny 1} -3 fluor-4-(trifluormethyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 17,12 min; MS: MH⁺ 530,2.

Příklad 637:

Al - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl] -2methoxy feny 1} benzamid-acetát • # ·

596

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 14,20 min; MS: MH⁺ 444,1.

Příklad 638:

Al - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl] -2-methoxyfenyl} -3 fenylpropanamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 14,97 min; MS: MH⁺ 472,2.

Příklad 639:

Bisacetát Al-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -3 -cyklopentylpropanamidu

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 15,95 min; MS: MH⁺ 464,2.

Příklad 640:

Bisacetát A5-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -1,3-dimethyl-1 A-5-pyrazolkarboxamidu

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 11,62 min; MS: MH⁺ 462,2.

Příklad 641:

Bisacetát Al - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl) -2-(2-thienyl)acetamidu

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 13,17 min; MS: MH⁺ 464,2.

« · • * · • · · ·«··· • · · · • · · · ·

597

Příklad 642:

VI-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfěnyl}-2fenylacetamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 13,63 min; MS: MH⁺ 458,2.

Příklad 643:

VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2(3,4-dimethoxyfenyl)acetamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 13,20 min; MS: MH⁺ 515,3.

Příklad 644:

VI - {-4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxy fenyl} -2fenoxypropanamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 15,43 min; MS: MH⁺ 488,2.

Příklad 645:

V5- {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -5isoxazolkarboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 10,93 min; MS: MH⁺ 433,1.

Příklad 646:

V2- {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl} -2pyridinkarboxamid-triacetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 13,52 min; MS: MH⁺ 445,2.

• · » » · • · · · ·

598

Příklad 647:

Bisacetát VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2methoxy fenyl} -2,4-difluorbenzamidu

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 14,65 min; MS: MH⁺ 480,1.

Příklad 648:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2,5 difluorbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 14,75 min; MS: MH⁺ 480,2.

Příklad 649:

V2- {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -2furamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 13,40 min; MS: MH⁺ 434,2.

Příklad 650:

VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -2,2dimethylpropanamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 14,53 min; MS: MH⁺ 424,2.

Příklad 651:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4kyanobenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 13,68 min; MS: MH* 469,2.

·

599

Příklad 652:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl} -1 cyklopropankarboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 11,05 min; MS: MH⁺ 408,2.

Příklad 653:

N3 - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy feny 1} -2methylenikotinamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 11,53 min; MS: MH⁺ 459,1.

Příklad 654:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4fluor-3 -methylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 15,32 min; MS: MH⁺ 476,2.

Příklad 655:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3-yl]-2-methoxy fenyl} -3(dimethylamino)benzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 14,63 min; MS: MH⁺ 487,2.

Příklad 656:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2,3 difluor-4-methylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 16,03 min; MS: MHŮ 494,2.

• » • · » · ·

600

Příklad 657:

Bisacetát V4-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl } isonikotinamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 15,77 min; MS: MH⁺ 445,1.

Příklad 658:

N3 - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl } nikotinamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 17,50 min; MS: MH⁺ 445,1.

Příklad 659:

N2-{- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 methyl-1 V-2-pyrrolkarboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-50% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 22,20 min; MS: MH⁺ 447,2.

Příklad 660:

N3 - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -6methylenikotinamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 17,97 min; MS: MH⁴ 459,2.

Příklad 661:

N2-{ 4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2pyrazinkarboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 17,63 min; MS: MH⁺ 446,1.

·· ···· « · « · · β * * ·· · · · · · « • ·«···«· · · · » .» · 9 · • · « ···· ·<ί« • r 9 9 9 Λ 9 9 9 *

601

Příklad 662:

Bisacetát Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-h]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -4-j odbenzamidu

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 16,08 min; MS: MH⁺ 570,1.

Příklad 663:

Ni - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy feny 1} -4brombenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl 8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 15,42 min; MS: MH⁺ 524,1.

Příklad 664:

Al - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxy feny 1} -4fenoxybenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 17,17 min; MS: MH⁺ 536,2.

Příklad 665:

Al -4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfeny 1-4fluorbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 13,65 min; MS: MH⁺ 462,1.

Příklad 667:

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-4chlorbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 15,57 min; MS: MH⁺ 478,2.

• · ► ·····»· a • · · · ·

602

Příklad 668:

Al - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfeny 1} -4methoxybenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 13,62 min; MS: MH⁺ 474,2.

Příklad 669:

Al - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4(trifluormethoxy)benzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 16, 30 min; MS: MH⁺ 528,2.

Příklad 670:

Al - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4nitrobenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 13,77 min; MS: MH⁺ 489,2.

Příklad 671:

A2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}benzo[ů] thiofen-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 16,12 min; MS: MH⁺ 500,2.

Příklad 672:

A2- {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl } benzo [/>] furan-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 15,70 min; MS: MH⁺ 484,2.

• · * · · • · » · · · · • ·····«· ·

603

Příklad 673:

VI -{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4methylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 15,47 min; MS: MH⁺ 458,2.

Příklad 674:

Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]

2-methoxyfenyl} -4-(íerc-butyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 17,93 min; MS: MH⁺ 500,2.

Příklad 675:

Acetát methyl-4-{(4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-3-yl]-2methoxy anilino } karbony l)benzoátu

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 14,70 min; MS: MH⁺ 502,1.

Příklad 676:

4-{(4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyanilino}karbonyl)benzoová kyselina

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 10,02 min; MS: MH⁺ 478,1.

Příklad 677:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl} -2chlorbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), t_R 7,28 min; MS: MH⁺ 478,1.

• · · · · · ··· • · · · · · · ···· • ······· · ··· ···· • · · ···· ···

604

Příklad 678:

NI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl} -2brombenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), ír 7,42 min; MS: MH⁺ 524,1.

Příklad 679:

NI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2methoxybenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), t_R 7,87 min; MS: MH⁺ 474,2.

Příklad 680:

Al - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2fenylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), ír 8,27 min; MS: MH⁺ 520,2.

Příklad 681:

Al - {4- [4-amino-l-(4-pipeiidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-//]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -2(trifluormethyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 15,07 min; MS: MH⁺ 512,2.

Příklad 682:

Al - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3-yl] -2-methoxyfenyl} -2(trifluormethoxy)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 15,77 min; MS: MH⁺ 528,2.

• ······· ·

605

Příklad 683:

VI-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-3-yl]-2-methoxyťenyl}-3methoxybenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 14,43 min; MS: MH⁺ 474,2.

Příklad 684:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl} -3 (trifluormethyl)benzamid

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), t_R 8,15 min; MS: MH⁺ 512,2.

Příklad 685:

Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2fluor-3-(trifluormethyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min), t_R 8,50 min; MS: MH⁺ 530,2.

Příklad 686:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2fluor-6-(trifluoremthyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 15,30 min; MS: MH⁺ 530,2.

Příklad 687:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2fluor-5-(trifluormethyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 14,68 min; MS: MH⁺ 530,2.

606

Příklad 688:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2fluor-5 -methylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 13,32 min; MS: MH⁺ 476,2.

Příklad 689:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy feny 1} -4chlor-2-fluorbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 16,50 min; MS: MH⁺ 496,1.

Příklad 690:

VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazlo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4benzoylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 16,33 min; MS :MH⁺ 548,2.

Příklad 691:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3-yl] -2-methoxyfenyl} -4acetylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 13,77 min; MS: MH⁺ 486,2.

Příklad 692:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-č7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4isopropylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 17,10 min; MS: MH⁺ 486,2.

607

Příklad 693:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4ethylbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 15,85 min; MS: MH⁺ 472,2.

Příklad 694:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy feny 1} -4propylbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 17,02 min; MS: MH⁺ 486,2.

Příklad 695:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4cyklohexylbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 19,55 min; MS: MH⁺ 526,2.

Příklad 696:

VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4ethoxybenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 15,28 min; MS: MH⁺ 488,2.

Příklad 697:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl} -4(methylsulfonyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 13,01 min; MS: MH⁺ 527,2.

• ·

608

Příklad 698:

Bisacetát VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl } -4-isopropoxybenzamidu

RP-HPLC (Hypersil HS Cl 8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 16,20 min; MS: MH⁺ 502,2.

Příklad 699:

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4(1 V-1 -imidazolyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 13,02 min; MS: MH⁺ 510,2.

Příklad 700:

VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2fluorbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 14,60 min; MS: MH⁺ 462,3.

Příklad 701:

V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-5methoxybenzo [Z>] furan-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 15,38 min; MS: MH⁺ 514,3.

Příklad 702:

V2- {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -5 brombenzo [ů] fůran-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 17,03 min; MS: MH⁺ 564,1.

·«· ······ ··· ··· ·· « · · ~ ··»· ·· « · · · • ······· · «·· ·«··

609

Příklad 703:

N2- í 4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -5methylbenzo[ó]furan-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 16,27 min; MS: MH⁺ 498,3.

Příklad 704:

N2-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ó/Jpyri midin-3 -yl] -2-methoxy feny 1} -3 methylbenzo[ů]furan-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 16,67 min; MS: MH⁺ 498,3.

Příklad 705:

V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-5nitrobenzo [6] furan-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 15,33 min; MS: MH⁺ 529,2.

Příklad 706:

V2-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-5aminobenzo[A]furan-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 11,93 min; MS: MH⁺ 499,3.

Příklad 707:

N2-{4- [4-(acetylamino)-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-5-(acetylamino)benzo [Z»] furan-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), t_R 12,47 min; MS: MH⁺ 583,2.

610

Příklad 708:

N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl} -5(acetylamino)benzo[ó]furan-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 11,95 min; MS: MH⁺ 541,2.

Příklad 709:

N2-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -7methylbenzo[ů]furan-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), ír 14,23 min; MS: MH⁺ 498,3.

Příklad 710:

A2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-7methoxybenzo[ó]furan-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amonný v průběhu 25 minut, 1 ml/min), tR 13,03 min; MS: MH⁺ 514,3.

Příklad 711:

rac-N2-{4-[4-amino-1 -(1 -methyltetrahydro-1A-3 -pyrrolyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin3 -yl] fenyl} -5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

A. rac-férc-butyl-3-hydroxy-1 -pyrrolidinkarboxylát

Do roztoku 3-pyrrolidinolu (3,144 g, 3,00 ml, 36,09 mmol) v 1,4-dioxanu (50 ml) a vodě (50 ml) se přidá di-terc-butyl-dikarbonát (8, 664 g, 39,70 mmol) a uhličitan sodný (10,612 g, 126,3 mmol). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin, čímž se získá bílá suspenze ve žlutém roztoku. Reakční směs se filtruje a filtrát extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojená organická fáze se promyje solankou, suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá rac-/erc-butyl-3hydroxy-l-pyrrolidinkarboxylát ve formě světle žlutého oleje (6,039 g, 89%).

• · • · · • · · · ·

611 ^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 1,51 (s, 9 H), 1,84-2,05 (m, 2 H), 2,28 (d, 1 H), 3,333,48 (m,4H), 4,43 (s, IH).

B. Monohydrochlorid rac-3 - Jod-1 -tetrahydro-1H-3 -pyrrolyl-1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin4-amin

Do roztoku 3-jod-1 V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (5,610 g, 21,49 mmol) v tetrahydrofuranu (200 ml) se přidá rac-férc-butyl-3-hydroxy-l-pyrrolidinkarboxylát (6,039 g, 32,25 mmol), trifenylfosfin (11,273 g, 42,98 mmol) a diethyl-azodikarboxylát (7,485 g, 6,77 ml, 42,98 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 6 dnů, pak koncentruje, čímž se získá oranžovo-hnědý olej. Přidá se aceton (100 ml) a 5 N roztok kyseliny chlorovodíkové (50 ml) a směs se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 18 hodin. Pak se směs ochladí na pokojovou teplotu. Výsledný žlutý precipitát se filtruje a filtrační koláč se promyje diethyletherem a suší, čímž se získá monohydrochlorid rac-3-jod-l-tetrahydro1 V-3-pyrrolyl-l Vpyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu ve formě bělavé pevné látky (5,153 g, 65%).

RP-HPLC R_t 4,079 minut, 99% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5 v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 331 (MH⁺).

C. ró/c-3-Jod-l-(l-methyltetrahydro-lV-3-pyrrolyl)-1 V-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-amin

Do roztoku monohydrochloridu rac-3 -jod-1 -tetrahydro- i H-3 -pyrrolyl-IVpyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (0,400 g, 1,09 mmol) v dichlorethanu (10 ml) se přidá formaldehyd (37% ve vodě, 0,12 ml, 1,63 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (0,578 g, 2,73 mmol) a kyselina octová (0,37 ml, 6,55 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 dnů, pak se přidá další formaldehyd (37% ve vodě, 0,12 ml, 1, 63 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (0,578 g, 2,73 mmol) a kyselina octová (0,37 ml, 6,55 mmol). Reakční směs míchá další 3 hodiny a koncentruje, čímž se získá rac-3-jod-l-(lmethyltetrahydro-lV-3-pyrrolyl)-lV-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-amin ve formě světle žluté pevné látky (0,639 g), která se použije bez další purifikace v následujících reakcích. RP-HPLC R_t 4,226 minut, 96% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5 v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 345 (MH⁺).

··· ·· · ··· • · · · ·· · ···· • ······· · ··· · · ·· ·· · · · · · ·· · • · · 9 9 9 9 9 · ·

612

D. V2-(4-Bromfenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin l,r-Thiokarbonyldi-2(lV)-pyridon (1,418 g, 6,104 mmol) se přidá do roztoku 4-bromanilinu (1,000 g, 5,813 mmol) v dichlormethanu (50 ml). Růžový roztok se míchá při pokojové teplotě po dobu 30 minut a pak promyje vodou (50 ml) a 0,5 N roztokem kyseliny chlorovodíkové (50 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá růžový pevný podíl. Přidá se 6-amino-2,4-xylenol (0,837 g, 6,104 mmol) a toluen (50 ml) a směs se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 30 minut. Přidá se 1,3-dicyklohexylkarbodiimid (1,799 g, 8,720 mmol) a roztok se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 48 hodin a pak ochladí na pokojovou teplotu. Výsledný precipitát se filtruje a filtrační koláč se promyje dichlormethanem (50 ml), čímž se získá V2-(4-bromfenyl)-5,7dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin ve formě světle oranžového pevného podílu (1,215 g, 66%).

RP-HPLC R_t 17,643 minut, 86% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5 v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 317 (MH⁺).

E. V2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-5,7-dimethyl-l,3benzoxazol-2-amin se připraví z V2-(4-bromfenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (1,215 g, 3,831 mmol) podle způsobu použitého pro přípravu V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě hnědého prášku (0,880 g, 63%).

RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t = 14,48 minut, 81%; m/z 365 (MH⁺),

F. rac-N2-{4- [4-Amino-l-( 1 -methyltetrahydro-1 V-3 -pyrrolyl)-1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] fenyl} -5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin rac-N2-{4- [4-amino-1 -(1 -methyltetrahydro-1 V-3 -pyrrolyl)-1 V-pyrazolo [3,4ď]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z rac-3-jod-l-(lmethyltetrahydro-1 V-3-pyrrolyl)-lV-pyrazlo [3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,581 mmol) a V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimethyl-l,3• · • · · · · • ·*···*· ·

613 benzoxazol-2-aminu (0,265 g, 0,726 mmol) podle způsobu použitého pro přípravu cis-N2(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě bílého prášku (0,062 g, 23%).

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 2,39 (s, 3 H), 2,32-2,40 (m, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,75-2,80 (m, 2 H), 3,08 (t, 1 H), 3,26 (s, 3 H), 5,40 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H);

RP-HPLC R_t 10,905 minut, 96% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min, λ = 254 nm; Deltapak 08, 300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 455 (MH⁺).

Příklad 712:

rac-/V2-(4-{4-Amino-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-lV-3-pyrrolyl]-lV-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)- 5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol -2 -amin

A. rac-3-Jod-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-lV-3-pyrrolyl]-l V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin

Do roztoku monohydrochloridu rac-3-jod-l-tetrahydro-lV-3-pyrrolyl-lVpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,350 g, 1,09 mmol) v VV-dimethylformamidu (10 ml) se přidá 2-bromethyl(methyl)ether (0,159 g, 0,11 ml, 1,15 mmol), uhličitan draselný (0,462 g, 3,34 mmol) a jodid draselný (0,008 g, 0,05 mmol). Reakční směs míchá při teplotě 65°C po dobu 18 hodin, pak se přidá další 2-bromethyl(methyl)ether (0,066 g, 0,040 ml, 0,48 mmol), uhličitan draselný (0,130 g, 0,940 mmol) a jodid draselný (0,008 g, 0,05 mmol). Reakční směs se míchá dalších 18 hodin, pak se koncentruje. Zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (10 ml) a vodu (10 ml). Organická fáze se oddělí, promyje solankou, suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá rac-3 -j od-1- [l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl] -1 V-pyrazolo [3,4 -d]pyrimidin-4amin ve formě žluté pevné látky (0,313 g, 84%), která se použije bez další purifikace v následující reakci.

RP-HPLC R_t 5,089 minut, 80% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 389 (MH⁺).

• · • ······ · e «

AAA · · · ··· • A A · ·· · AAA·

Α ΑΑΑΑΑ·· · ··· ···· ·· · A··· ·· « • “> · · · ·· » · ·

614

Β. rac-N2-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1H-3-pyrrolyl]-1 A-pyrazolo[3,4t/Jpyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin rac-N2-(4- {4-amino-1 -[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-1A-3-pyrrolyl]-1Apyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin se připraví z rac-3-jod-1 -[ 1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 A-3 -pyrrolyl]-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin4-aminu (0,250 g, 0,515 mmol) a V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,235 g, 0,644 mmol) podle způsobu použitého pro přípravu As-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l ,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě žlutého prášku (0,185 g, 72%).

’H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) 2,30-2,49 (m, 2 H), 2,41 (s, 3 H), 2,49 (s, 3 H), 2,66 (m, 2 H), 2,78 (m, 2 H), 3,17 (m, 2 H), 3,24 (s, 3H), 3,45 (t, 2 H), 5,40 (m, 1H), 6,80 (s, 1 H),

7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2H), 8,24 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H);

RP-HPLC R_t 11,477 minut, 96% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 499 (MH⁺).

Příklad 713:

Cz'.s-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin3 -yl} -2-fluorfenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

A. V2-(4-Brom-2-fluorfenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

V2-(4-Brom-2-fluorfenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z 4-brom-2-fluoranilinu (2, 000 g, 10,53 mmol) způsobem, který je podobný způsobu použitému při přípravě V2-(4-bromfenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě růžové pevné látky (1,916 g, 54%).

RP-HPLC R_t 17,96 minut, 95% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonným pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 337 (MH⁺).

B. V2-[2-Fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimethyl-1,3benzoxazol-2-amin • v ·«* ·· · ·»· • * · · · · » · t » 9 » ·*»··»· V ··· ·«·« * · · «··· · « t ·· · ·· ·» »· ·

615

V2-[2-Fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimethyll,3-benzoxazol-2-amin se připraví z V2-(4-brom-2-fluorfenyl)-5,7-dimethy 1-1,3benzoxazol-2-aminu (6,500 g, 19,39 mmol) podle způsobu použitého pro přípravu V2-[2fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amin.

Sloučenina se připraví ve formě růžové pevné látky(3,549 g, 48 %).

RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití Hypersilu HS Cl 8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t = 15,50 minut, 78%; m/z 383 (MH⁺).

C. Czv-V2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo[3,4-úQpyrimidin-3 -yl} -2-fluorfenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Cz'5^,-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4č/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z cis-3jod-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l V-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,453 mmol) a V2-[2-íluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-5,7dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,216 g, 0, 566 mmol) podle způsobu použitého pro přípravu cis-N2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4č/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě světle žlutého prášku (0,111 g, 43%).

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 1,56-1,83 (m, 4 H), 2,15 (s, 3 H), 2,22-2,55 (m, 12 H),

2,34 (s, 3 H), 2,41 (s, 3 H), 3,22-3,53 (m, 1 H), 4,78-4,83 (m, 1 H), 6,81 (s, 1 H), 7,10 (s, 1 H), 7,45-7,53 (m, 2 H), 8,23 (s, 1 H), 8,49 (t, 1 H), 10,59 (s, 1 H);

RP-HPLC R_t 11,873 minut, 95% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; δ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 570 (MH)⁺.

Příklad 714:

Cz's-3-(4-imidazo[l,2-čz]pyridin-2-ylfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lVpyrazolo [3,4 -d]py ri midin-4-am i n

A. 2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]imidazo[l,2-čz]pyridin

2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]imidazo[l ,2-a]pyridin se připraví z 2-(4-bromfenyl)imidazo[l,2-tz]pyridinu (0,273 g, 1,00 mmol) podle způsobu ·“ · ·· ···· ·» · • · · · » · · · « ··*» · · 9 « (ř· * * · ···· 9 · 9 « < » · «»· • 9 9 <ů · · 9 9 9 ·· · ·* ·· ·· ·

616 použitého pro přípravu V2-[2-fluor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]l,3-benzoxazoI-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě bílé pevné látky (0,250 g, 78 %). RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití sloupce Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t = 11,35 minut, 87%; m/z 321 (MH).

B. Cis-3 -(4-imidazo [ 1,2-íz]pyridin-2-ylfeny 1)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo [3,4-</]py rimidin-4-amin

Cis-3 -(4-imidazo [ 1,2-a]pyridin-2-ylfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin se připraví z cz'.s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidm-4-aminu (0,200 g, 0,453 mmol) a

2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]imidazo[l ,2-u]pyridinu (0,250 g, 0,679 mmol) podle způsobu použitého pro přípravu c«-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3benzoxazoI-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě bílého prášku (0,021 g, 9%).

'fí NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,57-1,73 (m, 4 H), 2,08-2,50 (m, 12 H), 2,16 (s, 3 H),

3,37 (m, 1 H), 4,82 (m, 1 H), 6,92 (t, 1 H), 7,27 (t, 1 H), 7,61 (d, 1 H), 7,74 (d, 2 H), 8,15 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 8,56 (d, 1 H);

RP-HPLC R_t 8,16 minut, 97% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 508 (MH⁺).

Příklad 715:

rac-1 -[3 -(4-Amino-3 - {4- [(5,7-dimethy 1-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl)tetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyl]-2-(dimethyl amino)-1 -ethanon A. rac-1 -[3-(4-Amino-3-jod-1 A-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-1 - yl)tetrahydro-1//-1 -pyrrolyl]2-(dimethylamino)-1 -ethanon

Do roztoku monohydrochloridu rac-3-jod-l-tetrahydro-l//-3-pyrrolyl-l//pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,367 g, 1,00 mmol) v dichlormethanu (10 ml) se přidá

2-(dimethylamino)octová kyselina (0,134 g, 1,30 mmol), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,150 g, 1,10 mmol), l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochlorid (0,249 g, 1,30 mmol) a diisopropylethylamin (0,65 g, 0,87 ml, 5,0 mmol). Reakční směs míchá při • · · ·

617 pokojové teplotě po dobu 18 hodin, pak se nalije do vody (10 ml). Organická fáze se separuje a promyje solankou (10 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá rac-l-[3-(4-amino-3-jod-lV-pyrazolo[3,4-Jjpyrimidin-lyl)tetrahydro-lV-l-pyrrolyl]-2-(dimethylamino)-1-ethanon ve formě žluto-oranžové pevné látky (0,278 g, 67%), která se použije bez další purifikace v následující reakci.

RP-HPLC R_t 4,881 minut, 80% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm;

Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 416 (MH⁺).

B. rac-1 - [3 -(4-Amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 V-pyrazolo [3,4-e/]pyrimidin-1 -yl)tetrahydro-1 V-1 -pyrrolyl]-2-(dimethy lamino)-1 -ethanon rac-l-[3-(4-Amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l Vpyrazo-lo [3,4-č/]pyrimidin-1 -yl)tetrahydro-1 V-1 -pyrrolyl] -2-(dimethylamino)-1 -ethanon se připraví z rac-1 - [3 -(4-amino-3 -jod-1 V-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-l-y ljtetrahydro-1 V-lpyrrolyl]-2-(dimethylamino)-l-ethanonu (0,278 g, 0,669 mmol) a JV2-[4-(4,4,5,5tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,305 g, 0,837 mmol) podle způsobu použitého pro přípravu cw-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-fluorfenyl)-1,3benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě bílého prášku (0,219 g, 62%).

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 2,17 (s, 3 H), 2,23 (s, 3 H), 2,3-2,50 (m, 4H), 2,34 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,99-4,26 (m, 4 H), 5,44-5,49 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,65 (d, 2 H), 7,92 (d, 2 H), 8,26 (s, 1 H), 10,86 (s, 1 H);

RP-HPLC R_t 10,765 minut, 96% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 526 (MH⁺).

Příklad 716:

rac-l-[3 -(4- Amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-l,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1Vpyrazolo [3,4-í/jpyrimidin-1 -y l)tetrahydro-1 V-1 -pyrrolyl] -2-methyl-2-(methylamino)-1 propanon

A. rac-9 V-9-Fluorenylmethy] -V- {2- [3 -(4-amino-3 -j od-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 yljtetrahydro-1 V-1 -pyrrolyl]-1,1 -dimethyl-2-oxoethyl} - V-methylkarbamát ···· ·· · * • ······· · ···

618

Do roztoku monohydrochloridu rac-3-jod-l-tetrahydro-l//-3-pyrrolyl-l//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,273 mmol) v dichlormethanu (5 ml) se přidá 2-[[(9//-9-fluorenylmethoxy)karbonyl](methyl)amino]-2-methylpropanová kyselina (0,120 g, 0,354 mmol), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,041 g, 0,30 mmol), l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochlorid (0,068 g, 0,35 mmol) a diisopropylethyl-amin (0,18 g, 0,24 ml, 1,4 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin, pak se nalije do vody (10 ml). Organická fáze se separuje a promyje solankou (10 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá rac-9//-9-fluorenylmethyl-V-{2-[3-(4-amino-3-jod-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-1 -yl)tetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyl] -1,1 -dimethyl-2-oxoethyl} -V-methy lkarbamát ve formě žluté pevné látky (0,223 g), která se použije bez další purifikace v následující reakci.

RP-HPLC R_t 13,688 minut, 63% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 652 (MH⁺)

B. rac-1 -[3 -(4-Amino-3 - {4-[(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-y l)amino] fenyl] -\Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yljtetrahydro-1 /7-1 -pyrrolyl]-2-methyl-2-(methylamino)-1 propanon

Do roztoku rac-9/7-9-fluorenyImethyl-V-{2-[3-(4-amino-3-jod-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-1 -yljtetrahydro-177-1-pyrroly 1]-1,1 -dimethyl-2-oxoethyl}-A-methylkarbamátu (0,178 g, 0,273 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (6 ml) a vodě (3 ml) se přidá V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2amin (0,124 g, 0,341 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,016 g, 0,014 mmol) a uhličitan sodný (0,072 g, 0,683 mmol), roztok se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin, pak ochladí na pokojovou teplotu. Reakční směs se vytřepe mezi ethylacetát (10 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva se separuje a promyje solankou (10 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá rac-9H-9fluorenylmethy l-A-2-[3 -(4-amino-3 -4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-y l)amino]fenyl1 77-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-1 -yljtetrahydro-1 Η-1 -pyrrolyl] -1,1 -dimethy 1-2-oxoethy 1-Amethylkarbamát ve formě světle hnědého oleje (0,223 g), který se použije bez purifikace v následujícím kroku. Roztok rac-9/7-9-fluorenylmethyl-M-2-[3-(4-amino-3-4-([5,7dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl-l?/-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l• · · ·

619 yl)tetrahydrolA-l-pyrrolyl]-l,l-dimethyl-2-oxoethyl-V-methylkarbamátu (0,223 g) v VV-dimethylformamidu (4 ml) se nechá reagovat s piperidinem (0,8 ml) a reakční směs míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin, zelený roztok se vytřepe mezi dichlormethan (10 ml) a vodu (10 ml). Organická fáze se separuje a promyje solankou, suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá tmavě zelený olej. Purifikaci preparativní RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 pm Hypersilu HS Cl 8, 250 x 21 mm sloupec, R_t = 6,7-8,1 min) se získá rac-l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl} -1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)tetrahydro-1 A-1 -pyrrolyl]-2-methyl-2(methylamino)-1-propanon ve formě bělavé pevné látky (0,085 g, 58%).

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) majoritní rotamer: 1,20 (s, 6 H), 1,96 (s, 3 H), 2,3-2,50 (m, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 3,17-4,44 (m, 4 H), 5,42 (s, IH), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,63 (d, 2 H), 7,91 (d, 2 H), 8,26 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H); minoritní rotamer: 1,15 (s, 6 H), 2,15 (s, 3 H), 2,3-2,50 (m, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 3,17-4,44 (m, 4 H), 5,42 (s, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,63 (d, 2 H), 7,91 (d, 2 H), 8,26 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H);

RP-HPLC R_t 10,994 minut, 95% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 540 (MH⁺).

Příklad 717:

rac-N2-[4-(4-amino-1 -tetraydro-1A-3 -pyrrolyl-1 A-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3-y ljfenyl] 5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

A. rac-řerc-Buty 1 -3 -(4-amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-1 -pyrrolidinkarboxylát

Roztok monohydrochloridu rac-3 -jod-l-tetrahydro-1 A-3 -pyrrolyl-1 A-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-aminu (0,500 g, 1,36 mmol), uhličitanu sodného (0,401 g, 4,77 mmol) a difórc-butyl-dikarbonátu (0,327 g, 1,50 mmol) v 1,4-dioxanu (8 ml) a vodě (8 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Výsledná bělavá suspenze se filtruje a filtrační koláč se promyje vodou (10 ml) a suší, čímž se získá rac-fórc-butyl-3-(4-amino-3-jod-lApyrazolo[3,4-(7]pyrimidin-l-yl)-l-pyrrolidinkarboxylát ve formě bělavé pevné látky (0,412 g, 70%); RP-HPLC R_t 11,540 minut, 100% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný • · • · · · • · • · · • · · · «

620 octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ - 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 431 (MH⁺).

B. rac-V2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-lA-3-pyrrólyl-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)ťenyl]-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Do roztoku rtzc-/erc-butyl-3-(4-amino-3-jod-l A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l -yl)-lpyrrolidinkarboxylátu (0,412 g, 0,958 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (6 ml) a vodě (3 ml) se přidá V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-5,7dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin (0,436 g, 1,20 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,055 g, 0,048 mmol) a uhličitan sodný (0,254 g, 2, 39 mmol), roztok se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 18 hodin, pak se ochladí na pokojovou teplotu. Reakční směs se vytřepe mezi ethylacetát (10 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva se separuje a promyje solankou (10 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá rac-/erc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-diemthyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}lA-pyrazolo[3,4-íf]pyrimidin-l-yl)-lpyrrolidinkarboxylát ve formě oranžové pevné látky (1,029 g), která se použije bez purifikace v následujícím kroku. Do roztoku rac-terc-butyl3-(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-l-yl)-l-pyrrolidinkarboxylátu (1,029 g) v acetonu (10 ml) se přidá 6 N kyselina chlorovodíková (10 ml) a reakční směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 5 hodin. Reakční směs se filtruje a výsledný neprůhledný filtrát se koncentruje, čímž se získá oranžový pevný podíl. Purifikací preparativní RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 N vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS 08, 250 x 21 mm sloupec, tr = 6,2-7,5 min) se získá rac-/V2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-lA-3-pyrrolyl1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)fenyl]-5,7-dimethyl-l ,3-benzoxazol-2-amin ve formě bělavé pevné látky (0,148 g, 35%).

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 2,15-2,22 (m, 2 H), 2,40 (s, 3 H), 2,50 (s, 3 H), 2,93-4,04 (m, 5 H), 5,31 (m, 1 H), 6,79 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H);

RP-HPLC R_t 10,603 min, 99% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 441 (MH⁺)· • · · • · · • · · · • · · · · · • · · • · ·

621

Příklad 718:

Diacetát c A-V2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4d]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-7-isopropyl-1,3 -benzoxazol-2-aminu

A. 2-Amino-6-isopropylfenol

Roztok 6-isopropyl-2-nitrofenolu (3,000 g, 16,56 mmol) a hydrosiřičitanu sodného (11,53 g, 66,23 mmol) v ethanolu (180 ml) a vodě (90 ml) se míchá při teplotě 80°C po dobu 20 hodin, pak ochladí na pokojovou teplotu. Výsledný, oranžový roztok se koncentruje, pak se rozdělí mezi dichlormethan (50 ml) a vodu (50 ml). Organická fáze se separuje a promyje solankou (25 ml), suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje, čímž se získá 2-amino-6-isopropylfenol ve formě oranžové pevné látky (1,792 g, 72%).

RP-HPLC R_t 8,171 minut, 92% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 150 (M-H)'.

B. V2-(4-Bromfenyl)-7-isopropyl-l ,3-benzoxazol-2-amin

Roztok 2-amino-6-isopropylfenolu (0,354 g, 2,34 mmol) a 4-bromfenylisothiokyanátu (0,500 g, 2,34 mmol) v tetrahydrofuranu (35 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Přidá se bezvodý síran měďnatý (3,361 g, 21,06 mmol), silikagel (3,361 g) a triethylamin (0,236 g, 0,33 ml, 2,34 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Reakční směs se filtruje přes vrstvu Celitu a promyje diethyletherem (3 x 50ml). Filtrát se koncentruje, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se nanese na silikagel a protáhne přes vrstvu silikagelu společně s ethylacetátem (3 x 50 ml), filtrát se koncentruje, čímž se získá V2-(4-bromfenyl)-7-isopropyl-l,3-benzoxazol-2amin (0,702 g, 91 %).

RP-HPLC R_t 18,066 minut, 86% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 333 (MH⁺).

C. V2- [4-(4,4,5,5-Tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-7-isopropyl-1,3 -benzoxazol 2-amin • · • · · • · · · «

622

A2-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-7-isopropyl-l,3benzoxazol-2-amin se připraví z A2-(4-bromfenyl)-7-isopropyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,412 g, 1,24 mmol) podle způsobu použitého pro přípravu A2-[2-fluor-4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,346 g, 74 %).

RP-HPLC R_t 18,964 minut, 79% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; δ = 254 nm;

Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 379 (MH⁺).

D. Diacetát cw-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4//]pyrimidin-3-yl}fenyl)-7-isopropyl-l,3-benzoxazol-2-aminu

Diacetát cis-N2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl}fenyl)-7-isopropyl-l,3-benzoxazol-2-aminu se připraví z cw-3jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-aminu (0,250 g, 0,566 mmol) a A2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-7-isopropyl-l,3benzoxazol-2-aminu (0,339 g, 0,708 mmol) podle způsobu použitého pro přípravu cis-N2(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidi n-3 -yl } -2fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,205 g, 64%).

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 1,36 (d, 6 H), 1,56-2,50 (m, 16 H), 1,90 (6 H), 2,15 (s, 3 H), 3,23-3,28 (m, 2 H), 4,80 (m, 1 H), 7,04 (d, 1 H), 7,18 (t, 1 H), 7,34 (d, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,96 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H);

RP-HPLC R_t 12,508 minut, 100% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 566 (MH⁺).

Příklad 719:

Monoacetát A2-(4- {4-amino-1 - [(35)-1 -(2-methoxy ethyl)tetrahydro-1A-3 -pyrrolyl] -1Apyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-y 1} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-aminu

Monoacetát A2-(4-{4-amino-l-[(35)-l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-lA-3-pyrrolyl]lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu se připraví z (ft)-(+)-3-pyrrolidinolu způsobem, který je podobný způsobu popsanému při

623 přípravě rac-A2-(4-{4-amino-1 -[1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-l A-3-pyrrolyl]-l Hpyrazolo [3,4 -</]py rimidi n-3 -y 1} fenyl)-5,7-dimethy 1-1,3 -benzoxazol -2-aminu. S loučenina se připraví ve formě růžové pevné látky(0,103 g, 53%).

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 1,89 (s, 3 H), 2,28-2,31 (m, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,65 (t, 2 H), 2,73-2,87 (m, 2 H), 3,17 (t, 2 11), 3,24 (s, 3 H), 3,45 (t, 2 H), 5,37 (m, 1 H), 6,79 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,59 (s, 2 H); RP-HPLC R_t 11,607 minut, 95% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufřovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; δ = 254 nm; Deltapak 08, 300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 499 (MH⁺)·

Příklad 720:

Monoacetát rac-A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl]-1Hpyrazolo [3,4-d]pyrimi din-3 -y 1} fenyl)-5-ethyl-1,3 -benzoxazol-2-aminu

Monoacetát rac-A2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 H-3-pyrrolyl]lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-ethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu se připraví z rac-3 -j od-1 - [ 1 -(2 -methoxy ethyl)tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl] -1 A-pyrazolo [3,4 -í/]pyrimidin4-aminu (0,200 g, 0,319 mmol) a A2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-5-ethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,145 g, 0,399 mmol) podle způsobu použitého pro přípravu čA-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě bílé pevné látky (0,082 g, 52%).

^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 1,23 (t, 3H), 1,90 (s, 3 H), 2,33-3,47 (m, 10 H), 2,66 (q, 2 H), 3,25 (s, 3 H), 5,40 (m, 1 H), 6,99 (d, 1 H), 7,33 (s, 1H), 7,40 (d, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,25 (s, 1 H), 10,81 (s, 1 H);

RP-HPLC R_t 11,781 minut, 93% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufřovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl 8, 300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 499 (MH⁺).

Příklad 721:

Monoacetát rac-N2-(4-{4-amino-1 -[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 A-3-pyrrolyl]-1Apyrazolo [3,4-</]pyrimidm-3 -y 1} fenyl)-5 -methyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

9·

624

Monoacetát rac-N2-(4-{4-amino-1 -[1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 A-3-pyrrolyl]lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-ethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu se připraví z rac-3 -j od-1 - [ 1 -(2-methoxy ethyl)tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl] -1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin4-aminu (0,200 g, 0,319 mmol) a A2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-5-methyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,145 g, 0,399 mmol) podle způsobu použitého pro přípravu eA-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo [3,4-</]py rimidin-3-yl} -2-fluorfenyl)-1,3 -benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,038 g, 16%).

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,91 (s, 3 H), 2,33 (m, 2 H), 2,39 (s, 3 H), 2,66 (m, 2 H), 2,75-2,83 (m, 3 H), 3,17 (t, 1 H), 3,29 (s, 3 H), 3,45 (t, 2 H), 5,37 (m, 1 H), 6,96 (d, 1 H), 7,30 (s, 1 H), 7,38 (d, 1 H), 7,67 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,80 (s, 1 H); RP-HPLC R_t 10,756 minut, 100% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 485 (MH⁺).

Příklad 722:

Diacetát A2-(4-{4-amino-l-[(3R)-l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-lA-3-pyrrolyl]-lA-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-aminu

Diacetát A2-(4- {4-amino-1 - [(3 A)-1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl]lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu se připraví z (5)-(-)-3-pyrrolidinolu způsobem, který je podobný způsobu popsanému při přípravě rac-N2-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl] -1Apyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,214 g, 39%).

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,89 (s, 6 H), 2,28-2,31 (m, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,65 (t, 2 H), 2,73-2,87 (m, 2 H), 3,17 (t, 2 H), 3,24 (s, 3 H), 3,45 (t, 2 H), 5,37 (m, 1 H), 6,79 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H);

RP-HPLC R_t 11,674 minut, 97% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak

Cl 8, 300Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 499 (MH⁺).

• · * · · • · · · · ···· ·· · · * · · • ······· · · · · ♦♦···

625

Příklad 723:

Monoacetát rac-//2-(4-{4-amino-l-[l-(2 -methoxyethyl)tetrahydro-l/7-3-pyrrolyl]-1/7pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5-chlor-1,3 -benzoxazol-2-aminu

Monoacetát rac-7V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-l//-3-pyrrolyl]l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5-chlor-l,3-benzoxazol-2-aminu se připraví z rac-3 -j od-1 - [ 1 -(2-methoxyethyl)tetrahydro-1 /7-3 -pyrrolyl]-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin4-aminu (0,200 g, 0,319 mmol) a 7V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-5-chlor-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,148 g, 0,399 mmol) podle způsobu použitého pro přípravu cz's-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-fluorfenyl)-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0,080 g, 50%).

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 1,91 (s, 3 H), 2,33 (m, 2 H), 2,66 (m, 2 H), 2,75-2,85 (m, 3 H), 3,17 (t, 1 H), 3,24 (s, 3 H), 3,45 (t, 2 H), 5,37 (m, 1 H), 7,18 (d, 1H), 7,55 (d, 2 H), 7,68 (d, 2 H), 7,92 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 9,80 (s, 1 H);

RP-HPLC R_t 11,337 minut, 97% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 505 (MH⁺).

Příklad 724:

Trans-Nl -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny l)-3 -fenylpropanamid

Roztok tra«5-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,700 g, 1,6 mmol) v pyridinu (11 ml) při teplotě 0°C se nechá reagovat s hydrocinnamoyl-chloridem (0,324 g, 1,92 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 20 minut, ledová lázeň se odstraní a směs se míchá při pokojové teplotě. Reakce je hotova po 5,5 hodinách. Přidá se roztok hydroxidu sodného (1 N, 20 ml) a směs se míchá po dobu 30 minut. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku. Přidá se dichlormethan (20 ml) a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (80 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití gradientu 5% methanolu v dichlormethanu až 50% methanolu v dichlormethanu na 35 g sloupce silikagelu ISCO, čímž se získá 0,569 • · ♦ ·

626 g (63 %) trans-Ni -(4- {4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-3 -fenylpropanamidu. Trans-Ni -(4- {4-amino-1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny l)-3 fenylpropanamid (0,569 g, 1 mmol) v horkém ethylacetátu se nechá reagovat s horkým roztokem kyseliny maleinové (0,384 g, 3 mmol) v ethylacetátu. Vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku a suší za vysokého vakua, čímž se získá tri-maleátová sůl.

‘H NMR (de-DMSO) δ 9,238 (s, IH), 8,2216 (s, IH), 8,1991-8,1786 (d, IH, J = 8,2 Hz), 7,3147-7,2664 (m, 4H), 7,2366-7,2330 (m, IH), 7,2026-7,1732 (dd, 2H), 6,171 (s, 6H), 4,6649-4,6083 (m, IH), 4,0948-4,0697 (m, IH), 3,8916 (s, 3H), 3,1750-3,1632 (d, 2H, J = 4,72 Hz), 2,9364-2,8984 (m, 2H), 2,7885-2,7506 (m, 2H), 2,5290 (s, 2H), 2,3905-2,3231 (m, 4H), 2,1489 (s, 3H), 2,0549-1,9243 (m, 6H), 1,4821-1,4457 (m, 2H);

LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 08, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm sloupec; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 1,75 min (100%), MH⁺ 569,4.

Příklad 725:

Trans-N2-{4-{4-amino-l- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid

Suspenze di-maleátu tra/M-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-1 V-2-indolkarboxamidu (0,200 g, 0,242 mmol) v dichlormethanu (15 ml) se nechá reagovat s IN roztokem hydroxidu sodného. Reakční směs se míchá po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Vrstvy se oddělí na extrakčním cartridge Empore. Organická vrstva se odstraní za probublávání horní části rozpouštědla dusíkem, čímž se získá 0,072 g (50%) trans-N2-(4-{4-amino-1-[4(4-methylpiperazino)cyklohexy 1]-1 V-pyraozlo[3,4-<7]pyrimidin-3 -y I} -2-methoxyfenyl)-1 methyl-1 V-2-indolkarboxamidu.

*H NMR (dé-DMSO) δ 9,4355 (s, IH), 8,2464 (s, IH), 8,1241-8,1037 (d, IH, J = 8,16 Hz), 7,7186-7,6987 (d, IH, J = 7,96 Hz), 7,6005-7,5795 (d, IH, J = 8,4 Hz), 7,3532-7,2795 (m, 4H), 7,1717-7,1343 (t, IH), 4,6833 (m, IH), 4,0560 (s, 3H), 3,9573 (s, 3H), 2,6704 (m, 6H), 2,4404 (m, 2H), 2,2953 (s, 6H), 2,1282-1,9889 (m, 5H), 1,5124 (m, 2H). Sloučenina se bez purifikace použije v následující reakci.

• « * · <· · ·· • · · * · • · · · » · ······· · • « · · » • · · · ·

627

Příklad 726:

Dimesylát řra«s-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4íf]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamidu

Horký roztok /ra«.v-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lVpyrazolo[3,4-č7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-lV-2-indolkarboxamidu (0,072 g, 0,12 mmol) v ethylacetátu (20 ml) se nechá reagovat s methansulfonovou kyselinou (0,012 g, 0,12 mmol). Pomalu vzniklý precipitát se filtruje pod atmosférou dusíku, čímž se získá 0,051 g dimesylátu trara-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lVpyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-1-methyl-1 V-2-indolkarboxamidu. Rozmezí teploty tání je 345,5 až 348,1°C.

^!H NMR (dó-DMSO) δ 9,4353 (s, 1H), 8,2461 (s, 1H), 8,1239-8,1035 (d, 1H, J = 8,16 Hz), 7,7182-7,6985 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,6004-7,5792 (d, 1H, J = 8,48 Hz), 7,3442-7,2794 (m, 4H), 7,1718-7,1349 (t, 1H), 4,6829 (m, 1H), 4,0396 (s, 3H), 3,9570 (s, 3H), 2,6703 (m, 6H), 2,5 (s, 3H), 2,2949 (s, 6H), 2,0891-2,9086 (m, 7 M, 1,5179 (m, 2H).

Příklad 727:

-(4-Amino-3 -methoxyfenyl)-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4amin

A. 3 -Jod-l-( 1 -methyl-4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4-amin

3-Jod-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-íZ]pyrimidin-4-amin (500 mg, 1,45 mmol), formaldehyd (30% roztok ve vodě, 0,16 ml, 1,60 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (430 mg, 2,03 mmol) se smíchají v 1,2-dichlorethanu (5 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin, k upravení pH asi na 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje, čímž se získá 3-jod-l-(l-methyl-4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4amin (275 mg, 53%).

^!H NMR (DMSO-dó) 1,85 (m, 2H), 2,09 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,88 (m, 2H), 4,75 (m, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,32 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLCsloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ 35,0, R_t = 0,46 minut.

• «

628

B. 7erc-butyl-V-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-l A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl]2-methoxyfenyl-l-karbamát

- Jod-l-( 1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin (270 mg, 0,754 mmol), /erc-butyl-A-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát (290 mg, 0,829 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (52 mg, 0,045 mmol) a uhličitan sodný (192 mg, 1,81 mmol) se smíchají v dimethyletheru ethylenglykolu (8 ml) a vodě (4 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc pod atmosférou dusíku. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (90:10 až 70:30) jako mobilní fáze, čímž se získá fórc-butyl-A-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3-y]]-2-methoxyfenyl}karbamát (250 mg, 73%).

*H NMR (DMSO-d₆) δ 1,48 (s, 9H), 1,88 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,24 (m, 5H), 2,92 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 4,64 (m, 1H), 7,21 (m, 2H), 7,91 (d, J = 8, 16 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 8,23 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl 8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ =454,2, R_t = 1, 67 minut.

C. 3 -(4-Amino-3 -methoxy feny 1)-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4amin

Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 7 ml) se přidá do roztoku /erc-buty 1-A- {4- [4-amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyljkarbamátu (240 mg, 0,529 mmol) v dichlormethanu (4 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Rozpouštědla se zahušťují a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. k upravení pH se přidá hydroxid sodný (1,0 N). Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (4x). Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje, čímž se získá 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l-(l-methyl-4-piperidyl)lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (178 mg, 95%), HPLC (Waters 486-Sloupec: Delta pak, 08, 5 pm, 300 Á, 150 x 3,9 mm, eluenty: 5% B/A až 95% B/A v 10 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 1,0 ml/min) R_t = 6,45 minut.

• · • ·

629

Příklad 728:

Vl-[4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl }-/rmv-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid

7A7«.$'-2-fenyl-l-cyklopropankarbonylchlorid (31 mg, 0,170 mmol) v dichlormethanu (0,3 ml) se při teplotě 0°C přidá do roztoku 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)l-(l-methyl-4-piperidyl)-ÍA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (60 mg, 0,17 mmol) v pyridinu (1,2 ml). Po 5 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny, pak se přidá další /ran.v-2-fenyl-lcyklopropankarbonylchlorid (15 mg, 0,083 mmol). Po 2 hodinách se rozpouštědlo zahušťuje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5 až 70:30) jako mobilní fáze, čímž se získá Vl-{4-[4amino-l-( 1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} /raz?.s-2-fenyl-l -cyklopropankarboxamid (75 mg, 89%).

*H NMR (CDC1₃) δ 1,42 (m, ÍH), 1,77 (m, ÍH), 1,85 (m, ÍH), 2,03 (m, ÍH), 2,24 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,46 (m, 2H), 2,62 (m, ÍH), 3,05 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,77 (m, ÍH), 5,69 (s, 2H), 7,24 (m, 7H), 8,11 (s, ÍH), 8,35 (m, ÍH), 8,45 (d, J = 8,38 Hz, ÍH).

LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ = 498,3, R_t = 1,84 minut.

Příklad 729:

VI - {4- [4-amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyl} -4-(trifluormethyl)benzamid

4-(Trifluormethyl)-l-benzenkarbonylchlorid (35 mg, 0,170 mmol) v dichlormethanu (0,3 ml) se přidá do roztoku 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1-(1-methyl-4-piperidy 1)-1Apyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-4-aminu (60 mg, 0,17 mmol) v pyridinu (1, 2 ml) při teplotě 0°C. Po 5 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny, pak se přidá další 4-(trifluormethyl)-l-benzenkarbonylchlorid (18 mg, 0,086 mmol). Po 2 hodinách se rozpouštědlo zahušťuje a zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5 až 70:30) jako mobilní fáze, čímž se získá Vl-{4-[4-amino-l-(l-methyl-4-piperidyl)-lA• · · ·

630 pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -4-(trifluormethyl)benzamid (85 mg, 95%).

*H NMR (CDCb) δ 2,10 (m, 2H), 2,37-2,59 (m, 7H), 3,15 (m, 2H), 4,02 (s, 3H), 4,83 (m, ÍH), 5,68 (s, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,80 (d, J = 8,21 Hz, 2H), 8,04 (d, J = 8,10 Hz, 2H), 8,38 (s, ÍH), 8,67 (m, 2H).

LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ = 526,3, R_t = 1,93 min.

Příklad 730:

NI - {4- [4-amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</|pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfeny 1} -4-(trifluormethoxy)benzamid

4-(Trifluormethoxy)-l-benzenkarbonylchlorid (38 mg, 0,170 mmol) v dichlormethanu (0,3 ml) se při teplotě 0°C přidá do roztoku 3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-l(l-methyl-4-piperidyl)-l A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (60 mg, 0,17 mmol) v pyridinu (1,2 ml). Po 5 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny, pak se přidá další 4-(trifluormethyl)-lbenzenkarbonylchlorid (19 mg, 0,085 mmol). Po 2 hodinách se rozpouštědlo zahušťuje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5 až 70:30) jako mobilní fáze, čímž se získá ΛΊ-{4-[4amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -4(trifluormethoxy)benzamid (70 mg, 76%).

*H NMR (CDCL3) δ 2,06 (d, J = 11,79 Hz, 2H), 2,28 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,50 (m, 2H), 3,07 (d, J = 10,8 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 4,80 (m, ÍH), 5,71 (s, 2H), 7,27 (m, 2H), 7,36 (d, J = 8,20 Hz, 2H), 7,98 (d, J = 6,20Hz, 2H), 8,37 (s, ÍH), 8,59 (s, 1), 8,67 (d, J = 8,55 Hz, ÍH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min):

MH⁺=542,3, R_t= 1,98 min.

• · · · ·

• ····· · · • · · · • · · · »

631

Příklad 731:

Cis-1 -[4-(4-Methylpiperazino)cyklohexyl] -3 - [4-( 1,3 -oxazol-5-yl)fenyl] -1 V-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-amin

A. 4- {4-Amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 yl} benzaldehyd

Cis-3 -methyl- l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin4-amin (3,0 g, 6,80 mmol), 4-formylfenylboritá kyselina (1,22 g, 8,16 mmol), palladiumtetrakistrifenylfosfin (0,47 g, 0,41 mmol) a uhličitan sodný (1,73 g, 16,31 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (70 ml) a vodou (35 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc pod atmosférou dusíku. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se filtruje a promyje vodou. Po sušení v lyofilizátoru se zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (90:10 až 70:30) jako mobilní fáze, čímž se získá 4-{4-amino1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} benzaldehyd (1,55 g, 54%).

^!H NMR (DMSO-dé) δ 1,60 (m, 2H), 1,72 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,22-2,46 (m, 11H), 4,83 (m, 1H), 7,88 (d, J = 8,13 Hz, 2H), 8,07 (d, J = 8,10 Hz, 2H), 8,21 (s, 1H), 10,11 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min):

MH⁺ 420,2, R_t = 0,70 minut.

B. Cw-l-[4-(4-Methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(l,3-oxazol-5-yl)fenyl]-l V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin

Methoxid sodný (130 mg, 2, 41 mmol) se přidá po částech do směsi 4-{4-amino-l[4-(4-methy lpiperazinojcyklohexylj -1 V-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-y 1} benzaldehydu (300 mg, 0, 715 mmol) v methanolu (20 ml). Po 5 minutách se po částech přidá (ptolylsulfonyljmethylisokyanid (tosmic) (167 mg, 0, 858 mmol) a roztok se zahřívá k refluxu po dobu 5 hodin. Za horka se přidá voda (10 ml). Po 5 minutovém chlazení ledem se pevný podíl filtruje a promyje směsí methanolu a vody (50/50, 2 ml), pak suší a filtrát se zahušťuje k odstranění organického rozpouštědla. Pevný podíl se spojí a promyje vodou. Spojený pevný podíl se nejprve purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu • ·

Λ · • ·

632 za použití směsi dichlormethanu a methanolu (90:10 až 70:30) jako mobilní fáze, pak rekrystalizuje (2x) z DMF, čímž se získá c«-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4(1,3-oxazol-5-yl)fenyl]-l V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-4-amin (90 mg, 27%).

'H NMR (DMSO-de) δ 1,61 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,44 (m, 11H), 4,82 (m, IH), 7,78 (m, 3H), 7,79 (m, 2H), 8,24 (s, II), 8,51 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ =459,2, R_t = 0,72 minut.

Příklad 733:

7ran5^,-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4/]pyrimidin-3-yl}-5-fluor-2-methoxyfenyl)-2,2-dimethyl-3-fenylpropanamid

2,2-Dimethyl-3-fenylpropanoylchlorid (52 mg, 0, 264 mmol) se přidá do roztoku /nms-3-(4-amino-2-fluor-5-methoxyfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l Vpyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (80 mg, 0, 176 mmol) v pyridinu (1, 5 ml). Po 5 hodinách se rozpouštědlo zahušťuje a zbytek se nejprve purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu chromatografuje za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5 až 85:15) jako mobilní fáze, pak preparativní LC/MS, čímž se získá transVl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3yl}-5-fluor-2-emthoxyfenyl)-2,2-dimethyl-3-fenylpropanamid (22 mg, 19%).

*H NMR (CDCb-d) δ 1,33 (s, 6H), 1,57 (m, 2H), 1,92 (m, 2H), 2,15 (m, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,49 (m, 4H), 2,66 (m, 3H), 2,95 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 4,76 (m, IH), 5,51 (bs, 2H), 6,98 (d, J = 6,86 Hz, IH), 7,15 (m, 2H), 7,23 (m, 3H), 8,01 (s, IH), 8,35 (s, IH), 8,47 (d, J = 11,88,1H).

LCMS LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺=615,3, R_t = 2,18 minut.

Příklad 734:

CA-(4-{4-Amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-/]pynmidin-3yl} fenyl) (1 V-benzo [/] imidazol-2-yl)methanol

633

A. lV-Benzo[č/]imidazol-l-ylmethanol

Formaldehyd (37% ve vodě, 1 ml, 13,3 mmol) se přidá do roztoku 1 V-benzo [ď]imidazolu (1,57 g, 13,3 mmol) v THF (60 ml). Po 10 minutách se rozpouštědlo odstraní a suší, čímž se získá lV-benzo[í/]imidazol-l-ylmethanol ve formě hnědé pevné látky, která se bez purifikace použije dále.

’H NMR (DMSO-d₆) δ 5,60 (d, J = 7,09 Hz, 2H), 6,70 (m, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,65 (d, J = 9,13 Hz, 2H), 8,26 (s, 1H).

B. Cw-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin3 -yl} fenyl) (1 V-benzo [V] imidazol-2-yl)methanol n-Butylithium (1,34M, 3,0 ml, 4 mmol) se pomalu při teplotě -78°C přidá do směsi 1 V-benzo[č/]imidazol-l-ylmethanolu (296 mg, 2,0 mmol) v THF (9,0 ml). Reakční směs se nechá ohřát na teplotu -20°C a teplota -20°C se udržuje po dobu 30 minut, pak se směs ochladí zpátky na -78°C. Pomalu se přidá cA-4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l V-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3-yl}benzaldehyd (420 mg, 1 mmol) v THF (5 ml). Po 20 minutách se lázeň suchém ledem odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se nasycený chlorid amonný, poté ether. Vrstvy se separují a vodná vrstva se neutralizuje hydroxidem sodným (1,0 N) a extrahuje dichlormethanem. Organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO₄, filtruje a zahušťuje. Zbytek se nejprve purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5 až 85:15) jako mobilní fáze, pak preparativní HPLC na reverzní fázi (Sloupec Rainin HPLC: Thermoquest, hyperprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 minutách (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min), čímž se získá cis-(4-{4-amino-1[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyri midin-3-yl} fenyl) (IVbenzo[í/]imidazol-2-yl)methanol (2 mg, 0,4%).

*H NMR (CDC1₃) δ 1,68 (m, 2H), 1,81 (m, 2H), 2,01 (m, 2H), 2,13 (m, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,42 (m, 2H), 2,64 (m, 7H), 4,68 (bs, 3H), 4,93 (m, 1H), 5,77 (bs, 2H), 6,06 (s, 1H), 7,20 (m, 2H), 7,52 (m, 2H), 7,58 (m, 4H), 8,32 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ = 538,3, R_t = 3,80 minut.

• ·

634

Příklady 735-746

Sloučeniny podle příkladů 735-746 se připraví z 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-\Hpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]benzaldehydu následuj ícím způsobem:

4- [4-Amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-ť/jpyrimidin-1 -yljbenzaldehyd (5 0 mg, 0,123 mmol), příslušný amin (0,246 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (78mg, 0,368 mmol) a ledová kyselina octová (32 mg, 0,540 mmol) se smíchají v THF (3 ml). Po třepání při pokojové teplotě přes noc na třepačce J-Kem se přidá další množství aminu (0,246 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (78mg, 0,368 mmol) a ledová kyselina octová (32 mg, 0,540 mmol) a reakční směs se třepe při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se zahušťuje a přidá se dichlormethan, poté hydroxid sodný (1,0 N). Vrstvy se separují promytím na cartridge Empore. Organická vrstva se zahušťuje a zbytek se čistí preparativní LC/MS s reverzní fází (Sloupec Micromass: Hypersil BDS, Cl8, 5 pm, 100 x 21,2 mm, eluenty: 15% B/A až 100% B/A v 7 minut, ( B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 25 ml/min). Po odstranění rozpouštědla se výsledný pevný podíl rozpustí ve směsi dichlormethan/hydroxid sodný (1,0 N) a vrstvy se oddělí. Organická vrstva se zahušťuje, čímž se získá odpovídající produkt (detaily viz následující tabulka)

Př.	Strutkura	Název sloučeniny	MH⁺	Rt (min)	Množství (mg)
735	0	2-({4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//- pyrazolo [3,4-</)pyrimidin-1 - yljbenzyl} amino)-1 -ethanol	453,2	2,05	10
736		2-( {4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)- 1H- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 - yljbenzyl} amino)-2-methyl-l-propanol	481,2	2,12	12
	o

• · • · · • · »

635

737	JrO 9 O	4-({4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA- pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 - yl]benzyl} amino)-1 -butanol	481,2	2,05	10
738	y	NI - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1H- pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-1 - yl]benzyl}-A2,A2-dimethyl-l ,2- ethandiamin	480,2	2,03	2
739	o	l-(4-{[(3- methoxypropyl)amino]methyl}fenyl)- 3 -(4-fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo [3,4- d]pyrimidin-4-amin	481,2	2,3	2
	?
740	f z°	l-(4-{[(2- methoxyethyl)amino]methyl} fenyl)-3 - (4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4- </]pyrimidin-4-amin	467,2	2,22	10
741	ύ?	3 -(4-fenoxyfenyl)-l- [4-(l,3-thiazolan-3 - ylmethyl)fenyl]-1 A-pyrazolo [3,4- t/]pyrimidin-4-amin	481,2	4,2	3
	9

• · • · · ·

636

742	0	2-[ {4-[4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-IV- pyrazolo[3,4-J]pyrimÍdin-l - yljbenzyl} (2-hydroxyethyl)amino] -1 - ethanol	497,2	2,02	2
743	€ 1	NI - {4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1H- pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-1 - yljbenzyl} - VI ,V2,V2-trimethyl-1,2- ethandiamin	494,3	2,47	8
744	d δ	1 - {4-[4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1H- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 - yljbenzyl} -4-piperidinol	493,3	2,13	2
745	jrO §	VI - {4- [4-amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1H- pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1 - yljbenzyl} -VI ,V3 ,V3 -trimethyl-1,3- propandiamin	508,3	1,78	9

β · • · · • · · · ·

637

Příklad 747:

Dimaleát Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu

VI - {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (380 mg, 0,717 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (70 ml) a v horkém ethylacetátu (3 ml) se přidá kyselina maleinová (167 mg, 1,435 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá dimaleát Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (489 mg, 90%). *H NMR (DMSO-de) δ 2,15 (m, 2H), 2,41 (m, 2H), 3,23 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 5,09 (m, IH), 6,14 (m, s, 4H), 7,33 (m, 2H), 7,76 (m, IH), 7,88 (m, IH), 7,99 (m, IH), 8,28 (s, IH), 8,33 (m, 2H), 8,70 (bs, IH), 9,92 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ = 530,2, R_t = 2,03 minut.

Meziprodukt 6:

VI -4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxy feny 1-2fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

A. 7erc-butyl-4-[4-ammo-3-(4-[2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoyl]amino-3-methoxyfenyl)1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l -yl]-l -piperidinkarboxylát

2-Fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenkarbonylchlorid (3,05 ml, 20,2 mmol) v dichlormethanu (25 ml) se přidá do roztoku /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3• · • · · · • · ♦ • · · · • · · · · ·

638 methoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (8,77 g, 20,0 mmol) v pyridinu (50 ml) při teplotě 0°C. Po 5 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Přidá se 2-fluor-4-(trifluormethyl)-lbenzenkarbonyl-chlorid (0,5 ml, 3,31 mmol) a reakční směs se míchá dalších 30 minut. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. Organická vrstva se promyje vodou, solankou, pak suší nad MgSO₄. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/dichlormethan (80:20 až 100:0) jako mobilní fáze, čímž se získá terc-butyl-4[4-amino-3-(4-[2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoyl]amino-3-methoxyfenyl)-lApyrazolo[3,4-pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát (11,2 g, 89%).

^!HNMR (CDC1₃) δ 1,48 (s, 9H), 2,04 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 4,05 (s, 3H), 4,32 (m, 2H), 4,95 (m, IH), 5,89 (bs, 2H), 7,33 (m, 2H), 7,51 (d, J = 11,62 Hz, IH), 7,61 (d, J = 8,21Hz, IH), 8,36 (m, 2H), 8,72 (d, J = 8,18 Hz, IH), 9,32 (d, J = 14,39 Hz, IH).

Β. VI -4- [4-amino-l-(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-tí]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxy fenyl-2fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Směs trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (20:80, 100 ml) se přidá do roztoku /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoyl]amino-3-methoxy fenyl)-1Apyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (11,2,17,79 mmol) v dichlormethanu (50 ml) při teplotě 0°C. Po 15 minutách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Rozpouštědla se zahušťují a zbytek se rozpustí v dichlormethanu, k upravení pH asi na 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného, suspenze se lyofilizuje, přidá se voda (100 ml) a vodná fáze se opakovaně extrahuje dichlormethanem, čímž se získá VI -4-[4-amino-1-(4-piperidyl)1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-y 1]-2-methoxy fenyl-2-ťluor-4-(trifluormethyl)benzamid (9,12 g, 97%).

*H NMR (DMSO-de) δ 1,85 (m, 2H), 2,12 (m, 2H), 2,70 (m, 2H), 3,14 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,77 (m, IH), 7,32 (m, 2H), 7,75 (d, J = 8,02 Hz, IH), 7,89 (d, J = 10,31Hz, IH), 8,00 (m, IH), 8,24 (s, IH), 8,31 (d, J = 8,16 Hz, IH), 9,90 (s, IH).

• · · · • · · · • · * · · • ····· · · • · · ·

639

Příklady 748-786

Sloučeniny podle příkladů 748-828 připravené z Vl-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lVpyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (Meziprodukt 6) podle způsobu A nebo způsobu B:

Způsob A:

Ni - {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl }-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (100 mg, 0,189 mmol), příslušný aldehyd (0,378 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (120mg, 0,567 mmol) a ledová kyselina octová (48 mg, 0,378 mmol) se smíchají v 1,2-dichlorethanu (4 ml). Po třepání při pokojové teplotě přes noc se přidá další množství aldehydu (0,378 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (120mg, 0,567) a ledová kyselina octová (48 mg, 0,378 mmol) a reakční směs se třepe při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se čistí buď zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5 až 70:30) nebo preparativní HPLC s reverzní fází (Sloupec Rainin HPLC: Thermoquest, hyperprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 minut, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min), čímž se získá odpovídající produkt (detaily viz následující tabulka).

Způsob B:

Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (100 mg, 0,189 mmol), příslušný keton nebo méně reaktivnější aldehyd (0,378 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (120mg, 0,567 mmol) a ledová kyselina octová (48 mg, 0,378 mmol) se smíchají v 1,2-dichlorethanu (4 ml). Reakční směs se třepe při teplotě 70°C po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se čistí etherem a zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5 až 70:30) nebo preparativní HPLC s reverzní fází (Sloupec Rainin HPLC: Thermoquest, hyperprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 minut, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min), čímž se získá odpovídající produkt (detaily viz následující tabulka).

Př.

Strutkura

Název sloučeniny

MH⁺

Rt (min)

Mn. (mg)

Met.

640

748	fS		NI - {4- [4-amino-1 -(1 -ethyl - 4-piperidyl)-1H- pyrazolo [3,4-</)pyrimidin-3 - yl] -2-methoxyfenyl} -2 -fluor- 4-(trifluormethyl)benzamid	MH’ 556,1	2,07	56	A
	3 Hp
749	6		NI -(4- [4-amino-l-[l- (cyklopropylmethyl)-4- piperidyl] -1 //-pyrazolo [3,4- </]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 582,1	2,22	80	A
750	š J o	f	Acetát Vl-(4-{4-amino-l-[l- (1 //-2-pyrrolylmethyl)-4- piperidyl] -1 //-pyrazolo [3,4- í/]pyrimidin-3-yl}-2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH' 607,0	2,45	60	A
751	<7 % J	rS \\~F	Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l//-2- imidazolylmethyl)-4- piperidy 1] -1 //-pyrazolo [3,4- í/]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 610,2	2,17	68	B
	o

• · · ·

641

752	TI	Acetát Al-[4-(4-amino-l-{l- [(1-methyl-l A-2- imidazolyl)methyl]-4- piperidy 1} -1 A-pyrazolo [3,4- d]pyrimidin-3-yl)-2- methoxyfenyl]-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH' 622,0	2,23	56	A
753	f	Acetát Al-[4-(4-amino-l-{l- [(2-methyl-1A-4- imidazoly l)methyl] -4- piperidyl} -1 A-pyrazolo [3,4- </]pyrimidin-3 -y l)-2 - methoxyfenyl]-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH' 622,0	2,05	32	A
754		Acetát Al-[4-(4-amino-l-{l- [(4-methyl-lA-5- imidazoly l)methyl] -4- piperidy 1} -1 A-pyrazolo [3,4- í/]pyrimidin-3 -yl)-2- methoxyfenyl]-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH' 622,0	2,08	84	A
755	f'	Al -(4- {4-amino-l- [1-(1,3- thiazol-2-ylmethyl)-4- piperidy 1] -1 A-pyrazolo[3,4- í/]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 625,1	3,15	73	A

• · · · · • · · · · • · · · · · • ······· · • · · • · · · • · · · ·

642

756	7	^rF	Al-{4-[4-amino-l-(l-{[5- (hydroxymethyl)-2- furyl]methyl} -4-piperidyl)- 1 A-pyrazolo [3,4-d] -3 - pyrimidin-3-yl]-2- methoxy fenyl} -2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 638,1	2,20	36	A
757	yd NH, \ssJ ť3O δ Cli,	i	Al - {4-[4-amino-l-(l -methyl- 4-piperidyl)-lA- pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 - yl] -2-methoxyfenyl} -2 -fluor- 4-(trifluormethyl)benzamid	MH' 542,2	2,03	67	A
758		1	Al - {4- [4-amino-1 -(1 - isopropyl-4-lA- pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 - yl] -2 -methoxyfenyl} -2-fluor- 4-(trifluormethyl)benzamid	MH' 570,1	2,0	58	B

759	J o J %		Acetát Al-{4-[4-amino-l-(l- isobuty 1-4-piperidyl)-1A- pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3 - yl] -2-methoxyfenyl} -2-fluor- 4-(trifluormethyl)benzamidu	MH' 584,0	2,43	54	A

• * • · · · · · • · · ··

643

760	J*· n-t o F ^y %	^λ’^β>-F Ρ“Ί F	Vl-(4-{4-amino-l-[l-(2- fury lmethyl)-4-piperidyl] - 1 V-pyrazolo [3,4- d]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH’ 608,1	2, 63	82	A
262	o F > X 9		VI -(4-{4-amino-l-[l-(3- furylmethyl)-4-piperidyl] - 1 V-pyrazolo [3,4- ď]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 610,2	2,43	54	A
761	w, yJ i	\V'^F F	Acetát Vl-(4-{4-amino-l-[l- (1 V-4-imidazolylmethyl)-4- piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4- J]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH- 608,0	1,90	55	A
762	ť		VI - {4- [4-amino-l-( 1 - tetrahydro-2V-4-pyranyl-4- piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4- d]pyrimidin-3 -yl] -2- methoxyfenyl}-2-fluor-4- (trifluorinethyl)benzamid	MH⁺ 614,2	2,13	91	B
	0

« * · » 9 ·

644

763	f	7erc-butyl-4- {4- [4-amino-3 - (4-{[2-fluor-4- (trifluormethy l)benzoyl] - amino} -3 -methoxyfenyl)- 1 V-pyrazolo[3,4- č/Jpyrimidin-1 -yl]-1 - piperidyl}-1 - piperidinkarboxylát	MH⁺ 713,3	2,57	74	B
764	Τ'	Vl-{4-[4-amino-l-(l- tetrahydro-3- thiofenyl-4-piperidyl)-1H- pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 - y 1] -2 -methoxyfenyl} -2-fluor- 4-(trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 616,2	2,53	102	B
765	σ’	VI - {4- [4-amino-l-( 1 -benzyl- 4-piperidyl)-l V- pyrazolo [3,4 -č/]pyrimidin-3 - yl] -2 -methoxyfenyl} -2-fluor- 4-(trifluormethyl)benzamid	MH' 618,0	2,67	69	A
766		Acetát VI-(4-{4-amino-1-[1 - (2-pyridylmethyl)-4- piperidy 1] -1 V-pyrazolo [3,4- úOpyrimidin-3 -yl} -2- methoxy fenyl)-2 -fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH' 619,1	2,32	84	A

645

767	f* A CL J B i >		Al -(4-{4-amino-l-[l-(3- pyridylmethyl)-4-piperidyl]- 1 A-pyrazolo [3,4- áQpyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 619,1	2,32	77	A
768			Al -(4- {4-amino-l- [ 1 -(4- pyridylmethyl)-4-piperidyl] - 1 A-pyrazolo [3,4- </]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 619,1	2,63	81	A
769	CX t X. /* KR	\S-P	Acetát Al-[4-(4-amino-l-{l- [(l-methyl-lA-2- pyrrolyl)methy 1] -4- piperidyl} -1 A-pyrazolo[3,4- pyrimi din-3 - y 1)-2 - methoxyfenyl]-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH' 621,2	2,52	35	B
770	i		Acetát Al-[4-(4-amino-l-{l- [(5-methyl-2-furyl)methyl]- 4-piperidyl}-lA- pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 - yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor- 4-(trifluormethyl)benzamidu	MH' 622,1	2,65	78	A

• ♦ · *« · · ♦ ··· • v * « « ·* · · · · « ·····«· « • € · · 5 · »v « ·· ··

646

771	ur	Vl-(4-{4-amino-l-[l-(2- thienylmethyl)-4-piperidyl] - lA-pyrazolo[3,4- </]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH' 624,0	3,00	57	B
772		Acetát Vl-(4-{4-amino-l-[l- (3 -thienylmethyl)-4- piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4- </]pyri midin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu	MH⁺ 626,2	2,55	87	A
773	0¾	Diacetát Vl-[4-(4-amino-l- {1 -[(l-methypiperidin-4-yl]- 4-piperidyl}-lA- pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 - yl)-2-methoxyfenyl] -2-fluor- 4-(trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 627,2	1,80	72	B
774	f	VI - {4- [4-amino-1-(1- tetrahydro-2A-4-thiopyranyl- 4-piperidyl)-lA- pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3 - yl]-2-methoxyfenyl} -2-fluor- 4-(trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 630,2	2,37	20	B

647

775	θ’	4-({4-[4-amino-3-(4-{[2- fluor-4- (trifluormethy l)benzoyl] - amino} -3 -methoxyfenyl)- lV-pyrazolo[3,4- ť/]pyrimidin-l- yljpiperidino} methyl)-1 - pyridin-V-oxid	+	2,13	93	A
776	X (i	VI -(4- {4-amino-l-[l-(2- fluorbenzyl)-4-piperidyl] - 1 V-pyrazolo[3,4- ď\|pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 638,2	3,13	84	A
777	f	Vl-(4-{4-amino-l-[l-(3- fluorbenzyl)-4-piperidyl] - l//-pyrazolo[3,4- J]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 638,2	3,25	77	A
778	F	VI -(4-{4-amino-l-[l-(4- fluorbenzyl)-4-piperidyl]- l//-pyrazolo[3,4- </]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 638,2	2,87	88	A

648

779	Μ ?	Ni -[4-(4-amino-1 - {1 - [3 - (methylsulfanyl)propyl] -4- piperidyl} -1 V-pyrazolo [3,4- t/]pymidin-3-yl)-2- methoxyfenyl]-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 618,2	2,42	76	A
780		VI - [4-(4-amino-l- {1- [(5 - methyl-2-thienyl)methyl]-4- piperidyl} -1 V-pyrazolo [3,4- J]pyrimidin-3 -y 1)-2- methoxyfenyl]-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 640,2	3,23	73	A
781	CN	VI -(4- {4-amino-l-[l-(3- kyanobenzyl)-4-piperidyl] - 1 V-pyrazolo [3,4- ďJpyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 645,2	3,28	57	A
782		Vl-(4-{4-amino-l-[l-(4- kyanobenzyl)-4-piperidyl]- lV-pyrazolo[3,4- č/]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 645,2	3,32	62	A

• · · · • · · · ·

649

783	ά.	VI -(4- {4-amino-l-[l-(2- kyanobenzyl)-4-piperidyl] - 1 A-pyrazolo[3,4- č/]pyrimidin-3 -yl} -2- methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 645,2	3,78	62	A
784		VI -(4- {4-amino-l-[l-(4- methoxybenzyl)-4- piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4- í/Jpyrimidin-3 -yl} -2 - methoxyfenyl)-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 650,2	2,63	45	A
785		VI -[4-(4-amino-l- {1-[(1- acetyl-piperidin-4-yl} -4- piperidyl} -1 A-pyrazolo [3,4- <7]pyrimidin-3-yl)-2- methoxyfenyl]-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamid	MH⁺ 655,2	2,02	71	B

• ·

650

786

Acetát Vl-[4-(4-amino-l-{l- [(3 -methyl- 1V-4- pyrazolyl)methyl]-4- piperidyl} -1 V-pyrazolo [3,4- J]pyrimidin-3-yl)-2- methoxyfenyl]-2-fluor-4- (trifluormethyl)benzamidu

MH⁺ 624,2

2,07

109

A

Příklad 787:

Methyl-2-4-[4-amino-3-(4-[2-fluor-4-(trifluorrnethyl)benzoyl]amino-3-methoxy fenyl)-1 Vpyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1-yljpiperidinoacetát

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (122 g, 0,230 mmol), methyl-2bromacetát (33 pl, 0,346 mmol) a uhličitan česný (150 mg, 0,461 mmol) se smíchají s DMF (2 ml). Směs se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 2 hodin. Podle LC/MS vzniknou dva nové píky, jeden z nich je bis-alkylovaný produkt druhý je požadovaný produkt. Surová směs se čistí preparativní HPLC s reverzní fází (Sloupec Rainin HPLC: Thermoquest, hyperprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 minut, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min), čímž se získá methyl-2-4-[4-amino-3-(4-[2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoyl]amino-3methoxyfenyl)-l V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1-yljpiperidinoacetát (60 mg, 43%).

*H NMR (DMSO-de) δ 1,91 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,42 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 3,32 (s, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 4,67 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,75 (d, J = 7,96Hz, 1H), 7,89 (d, J = 10,35 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,30 (d, J = 8,13 Hz, 1H), 9,89 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ =602,2, R_t = 2,80 minut.

651

Příklad 788:

Trans-3 - [4-( 1 A-benzo [ď]imidazol-l-ylmethyl)-3 -methoxy fenyl]-1 - [4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

A. 1 -(4-Brombenzyl)-1 A-benzo [A] imidazol l-Brom-4-(brommethyl)benzen (2,50 g, 10 mmol), 1 A-benzo[</]imidazol (1,181 g,

10,0 mmol), hydroxid draselný (0,561 g, 10,0 mmol), uhličitan draselný (1,382 g, 10,0 mmol) a tetrabutylamonnium-bromid (0,161 g, 0,5 mmol) se smíchají v xylenech (60 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 139°C přes noc, horká reakční směs se filtruje a promyje horkým xylenem. Rozpouštědlo se zahušťuje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5 až 80:20) jako mobilní fáze, čímž se získá l-(4-brombenzyl)-l A-benzo[</]imidazol (1,193 g, 42%).

’H NMR (CDC1₃) δ 5,31 (s, 2H), 7,05 (m, 2H), 7,28 (m, 3H), 7,46 (m, 2H), 7,82 (m, 1H), 7,95 (s, 1H).

Β. 1 -[4-(4,4,5,5 -T etramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzyl] -1 A- benzo [ri] imidazol

Směs 1-(4-Brombenzyl)-lA-benzo[</]imidazolu (1,193 mg, 4,15 mmol), diboronpinakolesteru (1,27 g, 4,98 mmol), [l,r-bis(difenylfosfino)fenOcen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,10 g, 0,12 mol) a octanu draselného (1,22 g, 12,46 mol) v A A-dimethylformamidu (25 ml) se zahřívá při teplotě 85°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (20 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu celitu. Filtrát se koncentruje a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (98:2 až 95:5) jako mobilní fáze, čímž se získá l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)benzyl]-lA-benzo[/Z]imidazol (1,38 g, 100%):

^!H NMR (CDCb) δ 1,27 (s, 12H), 5,33 (s, 2H), 7,06 (d, J - 8,24Hz, 2H), 7,28 (d, J = 8,34 Hz, 2H), 7,84 (d, J = 7,70Hz, 1H), 8,01 (s, 1H).

C. Trans-3- [4-( 1 A-benzo [d\ i midazol-1 -ylmethyl)-3 -methoxyfenyl]-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin • · * · • · · · · · ···· ·· · ···· • ······· · ··· · · · · •· · ·» ·· ·· ·

652

Trans-3 -jod-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4 - V] pyrimidin-4amin (200 mg, 0,453 mmol), l-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzyl]1 V-benzo[<7]imidazol (303 mg, 0,906 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (0,31 mg, 0,027 mmol) a uhličitan sodný (155 mg, 1,09 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (5 ml) a vodou (2,5 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc pod atmosférou dusíku rozpouštědlo se odstraní a zbytek se čistí preparativní HPLC s reverzní fází (Sloupec Rainin HPLC,: Thermoquest, hyperprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 minut, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min), čímž se získá řra«5-3-[4-(lV-benzo[t/)imidazol-lylmethyl)-3-methoxyfenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4(7]pyrimidin-4-aminu (35 mg, 15%).

’H NMR (DMSO-dé) δ 1,46 (m, 2H), 1,95 (m, 10H), 2,13 (s, (31-1), 2,32 (m, 5H), 4,62 (m, 1H), 5,78 (s, 2H), 7,22 (m, 2H), 7,49 (m, 2H), 7,62 (m, 4H), 8,22 (s, 1H), 8,44 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ = 522,3, R_t = 0,82 min.

Příklad 789:

Acetát VI-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(2-methoxyethyl)-4-piperidyl]-1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu

VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifhiormethyl)benzamid (100 g, 0,189 mmol), 2-bromethyl(methyl)ether (20 pl, 0,208 mmol) a uhličitan draselný (52 mg, 0,378 mmol) se smíchají v DMF (2 ml). Směs se zahřívá při teplotě 65°C přes noc, surová směs se čistí preparativní HPLC s reverzní fází (Sloupec Rainin HPLC,: Thermoquest, hyperprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,2 mm. eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 minut, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min), čímž se získá acetát Vl-(4-{4-amino1 -[ 1 -(2-methoxy ethyl)-4-piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (75 mg, 68%).

’H NMR (DMSO-d₆) δ 1,90 (m, 2H), 2,22 (m, 4H), 2,54 (m, 2H), 3,02 (m, 2H), 3,26 (s, 3H), 3,46 (m, 2H), 3,94 (m, s, 3H), 4,66 (m, 1H), 7,30 (d, J = 8,19Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,74 (d, J = 7,84Hz, 1H), 7,90 (d, J = 10,33Hz, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,30 (d, J = • · • * * • · ·

653

8,23 Hz, IH), 9,89 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Sloupec: Genesis, Cl 8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ =587,2, R_t = 2,17 minut.

Příklad 790:

Al -(4-{4-amino-l-[l-(kyanomethyl)-4-piperidyl]-l V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-vl}-2methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Ni - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl }-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (100 g, 0,189 mmol), 2-bromacetonitril (14 pl, 0,208 mmol) a uhličitan česný (52 mg, 0,378 mmol) se smíchají v DMF (2 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Surová směs se čistí preparativní HPLC s reverzní fází (Sloupec Rainin HPLC: Thermoquest, hyperprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 minut, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min), čímž se získá Al-(4-{4-amino-l-[l-(kyanomethyl)-4piperidyl]-1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3-yl} -2-methoxy fenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (68 mg, 64%).

‘H NMR (DMSO-dó) δ 1,99 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,45 (m, 2H), 2,99 (m, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,68 (m, IH), 7,30 (d, J = 8,21Hz, IH), 7,34 (s, IH), 7,75 (d, J = 8,26Hz, IH), 7,90 (d, J = 10, 51Hz, IH), 7,99 (m, IH), 8,25 (s, IH), 8,30 (d, J = 8,18 Hz, IH), 9,90 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ =569,2, R_t = 3,03 min.

Příklad 791:

Acetát Al-(4-{4-amino-l-[l-(2-amino-2-oxoethyl)-4-piperidyl]-lV-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperídyl)-lV-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid (100 g, 0,189 mmol), 2-bromacetamid (28 mg, 0,208 mmol) a uhličitan česný (123 mg, 0,378 mmol) se smíchají v DMF (2 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Surová směs se čistí preparativní HPLC s reverzní ···· · « · · « ······* · ··· · · · · · · · • · · ·· ·· ··

654 fází (Sloupec Rainin HPLC: Thermoquest, hyperprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,2 mm, eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 minut, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 21 ml/min), čímž se získá acetát Al-(4- {4-amino- l-[l-(2-amino-2oxoethyl)-4-piperidyl]-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-2-fluor-4(trifluormethyl)benzamidu (70 mg, 63%).

*H NMR (DMSO-dé) δ 1,90 (m, 5H), 2,34 (m, 4H), 2,93 (s, 2H), 2,99 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,69 (m, 1H), 7,12 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,30 (d, J = 8, 15Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,75 (d, J = 8,15Hz, 1H), 7,87 (d, J = 10,30Hz, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,31 (d, J = 8,14 Hz, 1H), 9,90 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLCSloupec: Genesis, Cl 8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ = 587,2. R_t = 2,17 min.

Příklad 792:

Acetát 1 -(1 -methyl-3 -piperidyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-aminu Racemický roztok 3 -j od-1 -(1 -methyl-3 -piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4aminu (0,050 g, 0,00014 mol) v dimethoxyethanu (2,5 ml) a vodě (5 ml) se nechá reagovat s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,033 g, 0,00015 mol), uhličitanem sodným (0,037 g, 0,00037 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,016 g, 0,000014 mol) při teplotě 80°C po dobu 18 hodin. Organické rozpouštědlo se odstraní za vakua a surová látka se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá acetát l-( 1 -methyl-3 -piperidyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ďJpy rimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,040 g, 0,00009 mol).

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,10-7,22 (m, 5H), 4,74-4,84 (m, 1H), 2,94 (dd, 1H), 2,79 (d, 1H), 2,36 (t, 1H), 2,22 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,86-2,01 (m, 3H), 1,76-1,84 (m, 1H), 1,60-1,75 (m, 1H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 8 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,74 minut; MS: MH⁺ 401.

• ·

655

Příklad 793:

Acetát l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-lV-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu

Racemický roztok 3-jod-l -[1 -(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-l V-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-4-aminu (0,050 g, 0,00012 mol) v dimethoxyethanu (2,5 ml) a vodě (5 ml) se nechá reagovat s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,029 g, 0,00014 mol), uhličitanem sodným (0,033 g, 0,00031 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,014 g, 0,00001 mol) při teplotě 80°C po dobu 20 hodin. Organické rozpouštědlo se odstraní za vakua a surová látka se purifikuje preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril 0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá acetát 1 - [ 1 -(2-methoxy ethyl)-3 -piperidy 1] - 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4íf]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,038 g, 0,00007 mol).

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,09- 7,22 (m, 5H), 4,71-4,82 (m, IM, 3,44 (t, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,04 (dd, IH), 2,91 (d, IH), 2,47-2,60 (m, 3H), 1,94-2,09 (m, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,75-1,84 (m, IH), 1,57-1,74 (m, IH);

RP-HPLC (DeltaPak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,26 minut; MS: MH⁺ 445.

Příklad 794:

Dimaleát trans-1 -{4-[4-amino-3-(3-chlor-4-{[4-(trifluormethyl)benzoyl]amino}fenyl)-1Vpyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-1 -yljcyklohexyl} -4-methylhexahydropyrazindia

A. 7erc-butyl-V-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamát

Roztok 4-brom-2-chloranilinu (5,00 g, 0,0242 mol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se nechá reagovat s 1,0 M roztokem bis(trimethylsilyl)amidu sodného v tetrahydrofuranu (53,2 ml, 0,0532 mol). Směs se míchá 15 minut při pokojové teplotě. Přidá se di-tercbutyl-dikarbonát (6,34 g, 0,0290 mol) a roztok se míchá po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi heptan/ethylacetát (4:1). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá /erc-butyl-V-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (4,214 g, 0,0137 • · · ·

656 mol). ^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,75 (s, ÍH), 7,71 (d, ÍH), 7,54 (d, ÍH), 7,50 (dd, ÍH), 1,46 (s, 9H); TLC (heptan/ethylacetát 4:1) Rf 0,54.

B. rerc-butyl-V-[2-chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát

Směs /erc-butyl-V-(4-brom-2-chlorfenyl)karbamátu (2,10 g, 0,00685 mol), diboron-pinakolesteru (2,09 g, 0,00822 mol), [1,1’bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,17 g, 0,00021 mol) a octanu draselného (2,02 g, 0,02055 mol) v V,V-dimethylfonnamidu (50 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se trituruje heptanem (70 ml) a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu®521. Heptan se odstraní za vakua, čímž se získá férc-butyl-V-[2chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát ve formě šedého pevného podílu (1,93 g, 0,00546 mol):

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,65 (s, ÍH), 7,74 (d, ÍH), 7,61 (d, ÍH), 7,56 (dd, ÍH), 1,47 (s, 9H), 1,29 (s, 12H).

C. Zra«.s-/erc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-chlorfenyl)karbamát

Směs trans-3 -jod- l-[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-4-aminu (2,20 g, 0,00498 mol), /erc-butyl-V-[2-chlor-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,93 g, 0,00548 mol), uhličitanu sodného (1,32 g, 0,01245 mol) v 1,2-dimethoxyethanu (50 ml) a vodě (100 ml) se intenzivně míchá a přidá se tetrakis(trifenylfosfm)palladium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakční směs se míchá 6 hodin při teplotě 80°C, po kterých se přidá další tetrakis(trifenylfosfin)palladium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakční směs se míchá dalších 16 hodin při teplotě 80°C. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (100 ml) a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (200 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (3 x 75 ml). Spojená organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (90:10:0,5). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá /ra«5-terc-butyl-V-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-čf]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)karbamát ve formě bílé pevné látky (1,993 g, 0,00368 mol):

• ·

657 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,76 (s, IH), 8,23 (s, IH), 7,80 (d, IH), 7,68 (d, IH), 7,57 (dd, IH), 4,58-4,71 (m, IH), 2,15 (s, 3H), 1,89-2,61 (m, 15H), 1,49 (s, 9H), 1,40-1,48 (m, 2H); TLC (dichlormethan/methanol = 90:10) Rf 0, 13. MS: MH⁺ 541.

D. 7rflMó-3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-4-amin

Trans-terc-bx&yl-N-(4-{4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)karbamát (1,993 g, 0,00368 mol) se přidá do roztoku 20% trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu. Směs se míchá po dobu 2 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se rozpustí v dichlormethanu (50 ml) a promyje 1,0 M vodným roztokem hydroxidu sodného (2 x 25 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá trans-3-(4-amino-3-chlorfenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-4-amin (1,564 g, 0,00355 mol) ve formě bílé pevné látky.

’HNMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,45 (d, IH), 7,31 (dd, IH), 6,92 (d, IH), 4,57-4,63 (m, IH), 2,23-2,55 (m, 9H), 2,14 (s, 3H), 1,89-2,08 (m, 6H), 1,38-1,52 (m, 2H); TLC (dichlormethan/methanol = 90:10) Rf 0,08; MS: MH⁺ 441.

E. Trans-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 A-pyrazolo [3,4-í/Jpyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamid-dimaleát

Do směsi 3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1Apyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridinu (5 ml) při teplotě -10°C se po kapkách přidá 4-(trifluormethyl)-l-benzenkarbonylchlorid (0,188 g, 0,00090 mol), přičemž teplota se udržuje pod -5°C. Směs se míchá při teplotě -10°C po dobu 15 minut, pak při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Po přidání IN vodného roztoku hydroxidu sodného (1,0 ml) se směs míchá 1 hodinu. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (15 ml) a spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá purifikovaná volná báze (0,032 g, 0,000052 mol), která se rozpustí v absolutním ethanolu (4 ml) a zahřívá k refluxu. Po • · · · • · · · ::

.··· ·· · ·· . ······· · ··· « . . . ........

.« , .. .· ··

658 přidání roztoku kyseliny maleinové (0,018 g, 0,000156mol) v absolutním ethanolu (1 ml) se roztok refluxuje dalších 15 minut. Směs se ochladí pokojovou teplotu a výsledný precipitát se filtruje, promyje minimálním množstvím absolutního ethanolu. Precipitát se suší za vakua, čímž se získá Zram-Vl-(4-{4-amino-1-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-chlorfenyl)-4-(trifluormethyl)benzamid-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0,00002 mol):

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,42 (s, 11-1), 8,26 (s, 1H), 8,20 (d, 2H), 7,96 (d,

2H), 7,80-7,83 (m, 2H), 7,46 (dd, 1H), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,13 (s, 4H), 4,61-4,73 (m,

1H), 2,52-2,64 (m, 4H), 2,23-2,46 (m, 5H), 2,16 (s, 3EI), 1,90-2,10 (m, 6H), 1,42-1,56 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08,5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14, 97 minut; MS: MH⁺613.

Příklad 795:

7ra/7.s-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-chlorfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamid-dimaleát

Do směsi 3-(4-amino-3-chlorfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridinu (5 ml) při teplotě -10°C se po kapkách přidá 4-(trifluormethoxy)-l-benzenkarbonylchlorid (0,203 g, 0,00091 mol), přičemž teplota se udržuje pod -5°C. Směs se míchá při teplotě -10°C po dobu 15 minut a pak při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Po přidání IN vodného roztoku hydroxidu sodného (1,0 ml) se směs míchá 1 hodinu. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy se separují a vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (15 ml) a spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá purifikovaná volná báze (0,034 g, 0,000054 mol), která se rozpustí v absolutním ethanolu (4 ml) a zahřívá k refluxu. Přidá se roztok kyseliny maleinové (0,019 g, 0,000162 mol) v absolutním ethanolu (1 ml), pak se tento roztok refluxuje po dobu 15 minut. Směs se ochladí pokojovou teplotu a výsledný precipitát se filtruje, promyje minimálním množstvím absolutního ethanolu, precipitát se • · · · ···· ·· · · · * • ······· · · · · ··· ·· · ·· ·· ··

659 suší za vakua, čímž se získá trans-N1-(4-{4-amino- l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-chlorfenyl)-4-(trifluormethoxy)benzamid-dimaleát ve formě bílé pevné látky (0,020 g, 0,00002 mol):

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,29 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,14 (d, 2H), 7,78-7,87 (m, 2H), 7,68 (dd, 1H), 7,57 (d, 2H), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,11 (s, 4H), 4,65-4,77 (m, 1H), 2,383,60 (m, 12H), 1,95-2,15 (m, 6H), 1,51-1,68 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,41 minut; MS: MH⁺ 629.

Příklad 796:

Acetát trans-3 -(3 -chlor-4- {[(5 -methyl-2-fůryl)methyl]amino} fenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu

Směs 3 -(4-amino-3 -chlorfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlorethanu (20 ml) se nechá reagovat s 5-methyl-2-furfuralem (0,052 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,336 g, 0,00159 mol) při pokojové teplotě. Přidají se další 2 ekvivalenty triacetoxyborohydridu sodného (0,672 g, 0,00318 mol) ve dvou 24 hodinových intervalech. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi chloroform (25 ml) a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje chloroformem (2 x 25 ml). Spojená organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá acetát trans-3-(3chlor-4- {[(5 -methyl-2-furyl)methyl]amino} fenyl)-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] 1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,129 g, 0,00022 mol):

^]H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,51 (d, 1H), 7,39 (dd, 1H), 6,93 (d, 1H), 6,20 (d, 1H), 6,14 (t, 1H), 5,98 (d, 1H), 4,55-4,66 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,182, 61 (m, 10 H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 5H), 1,37-1,53 (m, 2H);

• ·

660

Příklad 797:

Acetát /ra«.s-3-{3-chlor-4-[(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

Směs 3-(4-amino-3-chlorfenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlorethanu (20 ml) se nechá reagovat s 2-chlor-6-fluorbenzaldehydem (0,076 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,336 g, 0,00159 mol) při pokojové teplotě. Přidají se další 3 ekvivalenty triacetoxyborohydridu sodného (1,008 g, 0,00477 mol) ve třech 24 hodinových intervalech, po kterých zreaguje veškerá výchozí látka. Rozpouštědla se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi chloroform (25 ml) a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Fáze se separují a vodná fáze se extrahuje chloroformem (2 x 25 ml). Spojená organická fáze se suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá acetát řrai75-3-{3-chlor-4-[(2-chlor-6fluorbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-aminu ve formě bílé pevné látky (0,074 g, 0,00011 mol):

^]H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,52 (d, IH), 7,35-7,47 (m, 4H), 6,99 (d, IH), 5,75 (t, IH), 4,55-4,66 (m, IH), 4,57 (d, 2H), 2,25-2,61 (m, 11 H), 2,16 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 4H), 1,37-1,53 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,97 minut; MS: MH⁺583.

Příklad 798:

Trans-Nl -(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 A-2-imidazolylkarbony l)-4-piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny l)-(/raz«)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid-maleát

Směs VI - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl] -2-methoxyfenyl}-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamidu (0,200 g, 0,00041 mol) v toluenu (10 ml) se nechá reagovat s 5A,10A-diimidazo[l,5-a:l,5-e/]pyrazin-5,10-dionem (0,040 g, 0,00021 mol) za refluxu po dobu 18 hodin. Přidá se další ekvivalent 5A,10A-diimidazo[l,5-a:l,5• ·

661

ď]pyrazin-5,10-dionu a směs se refluxuje dalších 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril-0,IM octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá volná báze (0,103 g, 0,00017 mol), která se rozpustí v absolutním ethanolu (10 ml) a zahřívá k refluxu. Po přidání roztoku kyseliny maleinové (0,030 g, 0,00034 mol) v absolutním ethanolu (1 ml) se roztok refluxuje po dobu 15 minut, po kterých vznikne precipitát. Směs se ochladí pokojovou teplotu a výsledný precipitát se filtruje, promyje minimálním množstvím absolutního ethanolu, suší za vakua, čímž se získá trans-Nl-(4-[4amino-1 - [ 1 -(1 A-2-imidazoly lkarbony l)-4-piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl }-2methoxyfenyl)-(/nms)-2-ťenyI-l-cyklopropankarboxamid-maleát ve formě bílé pevné látky (0,055 g, 0,00008 mol):

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,63 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,22 (d, 1H), 8,00 (b, 1H), 7,74 (b, 1H), 7,43-7,48 (m, 1H), 7,16-7,33 (m, 7H), 6,21 (s, 2H), 4,97-5,13 (m, 1H), 2,913,47 (m, 4H), 2,53-2,65 (m, 1H), 2,30-2,45 (m, 1H), 2,07-2,26 (m, 2H), 1,95-2,07 (m, 2H), 1,45-1,50 (m, 1H), 1,28-1,32 (m, 1H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,17 minut; MS: MH⁺ 578.

Příklad 799:

Cis-Nl -(4-{4-amino-l-[4-(2-aminoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4ď]pyrimidin-3-yl} -2-methoxy fenyl)-(/ran.s')-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid-acetát A. Cis-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(kyanomethyl)-4-hydroxycyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-(/ra/?.v)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid

Směs cA-Al-{4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-(/ra'H5')-2-fenylcyklopropan-l-karboxamidu (0,605 g, 0,0012 mol), chloristanu lithného (0,189 g, 0,0018 mol) a kyanidu draselného (0,116 g, 0,0018 mol) v acetonitrilu (60 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 2 dnů, ochladí na pokojovou teplotu, zředí vodou (30 ml) a extrahuje diethyletherem (3x 30 ml). Spojená organická fáze se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a surový produkt se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethanu a methanolu (95:5). Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá • · » · ·*·· «· · · * • ······ * ··· · ·· · · · · · 9 9 • · 9 9 9 9 9 9 ·

662 cz'.s-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(kyanomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4čí]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(/r«n5)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid ve formě bílé pevné látky (0,602 g, 0,0011 mol):

‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,64 (s, ÍH), 8,23 (t, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,25 (s, ÍH), 7,17-(m, 4H), 4,61-4,62 (m, ÍH), 3,91 (s, ÍH), 2,66 (s, 2H), 2,55-2,62 (m, ÍH), 2,31-2,45 (m, 3H), 1,58-1,89 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, ÍH), 1,28-1,38 (m, ÍH);

B. Cz.s-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(2-aminoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(/razz5)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid-acetát

Do roztoku cis-Nl -(4- {4-amino-1 -[4-(kyanomethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l Apyrazolo [3,4-ó/]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxyfenyl)-(/razz.s)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamidu (0,200 g, 0,00037 mol) v methanolu (20 ml) a hydroxidu amonného (1 ml) se přidá Raneyův nikl (0,5 ml). Směs se míchá 18 hodin pod atmosférou vodíku (1 atm). Reakční směs se filtruje přes celit a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá czs-Vl-(4-{4amino-1- [4-(2-aminoethyl)-4-hydroxy cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl } -2methoxyfenyl)-(/7vzz7.y)-2-fenyl-l-cyklopropankarboxamid-acetát ve formě bílé pevné látky (0,045 g, 0,000083 mol),:

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,64 (s, ÍH), 8,23 (d, ÍH), 8,22-8,24 (m, ÍH), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,65-4,67 (m, ÍH), 3,91 (s, 3H), 2,84-2,91 (m, ÍH), 2,53-2,55 (m, ÍH), 2,33-2,40 (m, 4H), 1,85 (s, 3H), 1,35-1,80 (m, 9H), 1,30-1,33 (m, ÍH);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,29 minut; MS: MH⁺ 444.

Příklad 800:

Cw-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(2-amino-2-oxoethyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} -2 methoxyfenyl)-(traz?.y)-2-fenyl-1 -cyklopropankarboxamid

663

Do dobře míchaného roztoku cz.s-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(kyanomethyl)-4hydroxycyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(rra«s')-2-fenyl1-cyklopropankarboxamidu (0,200 g, 0,00037 mol) v dimethylsulfoxidu (4 ml) se při pokojové teplotě přidá uhličitan draselný (0,216 g, 0,00156 mol) a po kapkách 30% vodný roztok peroxidu vodíku (0,6 ml), přičemž teplota se udržuje konstantní. Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 32 hodin. Do směsi se přidá voda (20 ml) a vzniklý precipitát se filtruje, promyje vodou a suší za vakua. Pevný podíl se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril 0,lM octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá cz'5-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(2-amino-2-oxoethyl)-4hydroxycyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl}-2-methoxyfeny l)-(/ra«.sj-2-fenyl1-cyklopropankarboxamid ve formě bílé pevné látky (0,117 g, 0,00021 mol):

’H NMR (DMSO-d₆s 400MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,43-7,48 (m, 1H), 7,15-7,35 (m, 7H), 7,05-7,10 (m, 1H), 4,97 (s, 1H), 4,61-4,71 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,24 (s, 2H), 1,55-1,81 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, 1H), 1,28-1,36 (m, 1H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,05 minut; MS: MH⁺ 556.

Příklad 801:

Cis-Ni - [4-(4-amino-1 - {4- [(dimethy lamino)methyl] -4-hydroxycyklohexyl} -1Vpyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl)-2-methoxyfenyl]-(Zra«.s')-2-ťenyl-1 -cyklopropankarboxamid-acetát

Do roztoku cis-Ni - {4- [4-amino-l-( 1 -oxaspiro [2.5 ]okt-6-yl)-1 V-pyrazolo [3,4í/jpyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-(/ra«.s)-2-fenylcyklopropan-l-karboxamidu (0, 190 g, 0, 000302 mol) v 2-propanolu (10 ml) se přidá 2 M roztok dimethylaminu v methanolu (0,91 ml) a výsledná směs se zahřívá při teplotě 65°C v tlakové nádobě po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky po dobu 5 minut, pak 30%-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 15 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá cz'5-Vl-[4-(4-amino-l-{4-[(dimethylamino)methyl]-4664 hydroxycyklohexyl}-l//-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-(/ra«.sj-2-fenyl1-cyklopropankarboxamid-acetát ve formě bílé pevné látky (0, 109 g, 0, 000177 mol):

*H NMR (DMSO-d₆ 400MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 11-1), 8,22-8,24 (m, 1H), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,56-4,68 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,28 (s, 6H), 2,24 (s, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,63-1,78 (m, 4H), 1,44-1,58 (m, 3H), 1,28-1,3-6 (m, 1H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13, 54 minut; MS: MH⁺ 556.

Příklad 802:

Trans-N2-{4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo [3,4</jpyrimidin-3-yl}-2-emthoxyfenyl)-(27?)tetrahydro-l//-2-pyrrolkarboxamid-acetát

Roztok trans-3-(4-amino-3 -methoxyfeny 1)-1- [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0, 200 g, 0, 00046 mol) v V,V-dimethylformamidu (10 ml) se nechá reagovat s l-hydroxy-7-azabenzotriazolem (0,068 g, 0,00050 mol), l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridem (0,132 g, 0,00069 mol), D-Boc-prolinem (0,108 g, 0,00050 mol) a V,V-diisopropylethylaminem (0, 184 g, 0, 00142 mol) při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (10 ml) a 5% vodný roztok kyseliny citrónové (20 ml). Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2x10 ml). Spojená organická fáze se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se míchá v 20% trifluoroctové kyselině v dichlormethanu po dobu 6 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 5% izokraticky po dobu 5 minut, pak 5%-40% acetonitril 0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá Zra«.s-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-(2/?)tetrahydro-l//-2-pyrrolkarboxamidacetát (0,096 g, 0,00016 mol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,33 (s, 1H), 8,45 (d, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,21 (d, 1H), 4,58-4,69 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,77 (dd, 1H), 2,96-3,04 (m, 1H), 2,74-2,84 (m, 1H), 2,47-2,58 (m, 5H), 2,23-2,45 (m, 5H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,88-2,11 (m, 7H), 1,78-1,88 (m, 1H), 1,60-1,69 (m, 2H), 1,39-1,54 (m, 2H);

a · • r · · * *

665

Příklad 803:

4-|4-Amino-3-(4-fenoxyfěnyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolát

A. 4-(4-Amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-6/]pyrimidin-1 -y 1)-1 -pyridiniumolát

Roztok 3-jod-lA-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (5,00 g, 0,019 mol) v AA-dimethylformamidu (50 ml) se nechá reagovat při pokojové teplotě s 60% hydridem sodným v oleji (0,92 g, 0,023 mol). Směs se míchá po dobu 15 minut a přidá se 4-nitropyridin-A-oxid (5,37 g, 0,038 mol). Směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 18 hodin, vzniklý precipitát se filtruje, promyje AA-dimethylformamidem a ethylacetátem, čímž se získá 4-(4-amino-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-</jpyrimidin-l-yl)-l-pyridiniumolát (3,79 g, 0,011 mol) ve formě hnědé pevné látky:

^!H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 8,34 (d, 2H), 8,24 (d, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 7,36 minut; MS: MH⁺ 355.

B. 4- [4-Amino-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidin-1 -yl]-1 -pyridiniumolát

Suspenze 4-(4-amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-č/Jpyrimidin-1 -yl)-1 -pyridiniumolátu (0,140 g, 0,00040 mol) v dimethoxyethanu (7 ml) a vodě (15 ml) se nechá reagovat s 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,093 g, 0,00043 mol), uhličitanem sodným (0,105 g, 0,00099 mol) a tetrakis(trifenylfosfm)palladiem (0,046 g, 0,00004 mol) při teplotě 80°C po dobu 18 hodin, pevný podíl se filtruje, čímž se získá 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lApyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolát (0, 138 g, 0,00035 mol) ve formě hnědé pevné látky, která (0,040 g, 0,00010 mol) se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 A, 25 cm; 40% izokraticky po dobu 5 minut, pak 40%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amonný v průběhu 30 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá produkt 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4</|pyrimidin-l-yl]-lpyridiniumolát ve formě bílé pevné látky (0,013 g, 0,00003 mol).

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,44 (s, 1H), 8,34-8,41 (m, 4H), 7,77 (d, 2H), 7,45 (t,

2H), 7,13-7,24 (m, 5H);

• · • · • · · • · · • · * · • · · · · ·

666

RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,66 minut; MS: MH* 397.

Příklad 804:

3-(4-F enoxyfenyl)-1 -(4-pyridyl)-1 A-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-4-amin

Suspenze 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolátu (0,100 g, 0,00025 mol) a 10% palladia na aktivním uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) v kyselině octové (3 ml) se nechá reagovat s monohydrátem fosfomanu sodného (0,033 g, 0,00038 mol) při teplotě 60°C. Po 2 hodinách se přidá další 10% palladium na aktivním uhlí (0,016 g, 0,00002 mol). Směs se míchá 18 hodin, po kterých se přidá další 10% palladium na aktivním uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) a monohy drát fosfomanu sodného (0,033 g, 0,00038 mol). Směs se míchá dalších 24 hodin. Směs se filtruje přes Celit®521 a promyje kyselinou octovou. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky po dobu 5 minut, pak 40%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 30 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá 3-(4fenoxyfenyl)-l-(4-pyridyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,020 g, 0,00005 mol) ve formě bílé pevné látky:

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,71 (d, 2H), 8,46 (s, 1H), 8,39 (dd, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,46 (t, 2H), 7,13-7,25 (m, 5H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 17,31 minut; MS: MH⁺ 381.

Příklad 805:

N2- {4- [4-amino-l-(4-pyridyl)-1 A-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 methyl-1 A-2-indolkarboxamid

A. N2-{4- [4-amino-1 -(4-pyridyl)-1 A-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl} -1 methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Suspenze 4-(4-amino-3-jod-1 A-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-1 -yl)-1 pyridiniumolátu (0,500 g, 0,0014 mol) v dimethoxyethanu (15 ml) a vodě (30 ml) se nechá reagovat s A2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-l A-2• · · ·

667 indolkarboxamidem (0,631 g, 0,00155 mol), uhličitanem sodným (0,374 g, 0,0035 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,163 g, 0,00014 mol) při teplotě 80°C po dobu 18 hodin, pevný podíl se filtruje a promyje vodou, pak se míchá v ethylacetátu po dobu 18 hodin a filtruje, promyje ethylacetátem a suší za vakua, čímž se získá surový 4-[4-amino-3-(3methoxy-4-[(l-methyl-lV-2-indolyl)-karbonyl]aminofenyl)-lV-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidinl-yl]-l-pyridiniumolát (0,523 g, 0,0010 mol) ve formě hnědé pevné látky:

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,92 minut; MS: MH⁺ 507.

B. V2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-lmethyl-1 V-2-indolkarboxamid

Suspenze 4-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[(l-methyl-l/7-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l-pyridiniumolátu (0,200 g, 0,00039 mol) a 10% palladia na aktivním uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) v kyselině octové (3 ml) se nechá reagovat s monohydrátem fosfomanu sodného (0,063 g, 0,00059 mol) při teplotě 60°C po dobu 2 hodin. Přidá se další 10% palladium na aktivním uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) a fosfoman sodný (0,045 g, 0,00042 mol) a směs se míchá po dobu 24 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se míchá v methanolu po dobu 4 hodin. Směs se filtruje přes Celit®521 a promyje methanolem. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 50% izokraticky po dobu 5 minut, pak 50%-100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá V2-{4-[4-amino1 -(4-pyridy 1)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1V-2indolkarboxamid (0,020 g, 0,00004 mol) ve formě bílé pevné látky:

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 948 (s, IH) 8,72 (d, 2M, 8,47 (s, IH), 8,42 (d, 2H), 8,20 (d, IH), 7,72 (d, IH), 7,60 (d, IH), 7,48 (s, IH), 7,42 (d, IH), 7,36 (s, IH) 7,34 (t, IH), 7,16 (t, IH), 4,05 (s, 3H), 3,99 (s, IH);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 19,50 minut; MS: MH⁺ 491.

Příklad 806:

-(6-Amino-3 -pyridyl)-3 -(4-fenoxyfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-amin; a • · • · *

668

Příklad 807:

-(4-F enoxyfeny 1)-1 -(2-pyridyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</|pyrimidin-4-amin

Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00079 mol) v V-methyl-pyrrolidinonu (10 ml) se nechá reagovat s 60% hydridem sodným v oleji (0,032 g, 0,00079 mol). Po uvolnění plynu se směs míchá při pokojové teplotě po dobu 30 minut, přidá se 5-brom-2-nitropyridin (0,161 g, 0,00079 mol) a směs se zahřívá při teplotě 40°C po dobu 18 hodin. Přidá se další 60% hydrid sodný v oleji (0,032 g, 0,00079 mol) a směs se míchá další 2 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se vytřepe mezi dichlormethan (15 ml) a vodu (25 ml). Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2x15 ml). Spojené organické podíly se promyjí solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi heptan/ethylacetát (1:2) jako eluentu, čímž se získají 2 produkty. Méně polární sloučenina, l-(6-nitro-3-pyridyl)-3-(4fenoxyfenyl)-lV-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin se suspenduje v absolutním ethanolu (10 ml) a V, V-dimethylformamidu (5 ml) a přidá se 10% palladium na aktivním uhlí (0,007 g). Směs se míchá pod atmosférou vodíku (balónek) po dobu 18 hodin, pak filtruje přes vrstvu Celitu®521 a promyje absolutním ethanolem. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá l-(6-amino-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-lV-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4amin (0,007 g, 0,00002 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 8,53 (d, ÍH) 8,31 (s, ÍH), 7,97 (dd, ÍH), 7,73 (d, 2H), 7,44 (t, 2H), 7,12-23 (m, 5H), 6,60 (d, ÍH), 6,20 (s, 2H);

Poláměj ší sloučenina, 3 -(4-fenoxyfenyl)-1 -(5 -brom-2-pyridyl)-1 V-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-amin, se suspenduje v absolutním ethanolu (10 ml) a V V-dimethylformamidu (5 ml) a přidá se 10% palladium na aktivním uhlí (0,007 g). Směs se míchá pod atmosférou vodíku (balónek) po dobu 18 hodin, filtruje přes vrstvu Celitu®521 a promyje absolutním ethanolem. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(2-pyridyl)-l V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin (0,030 g, 0,00007 mol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,60-8,64 (m, ÍH) 8,37 (s, ÍH), 8,20 (d, ÍH), 8,03-8,08 (m, ÍH), 7,76 (d, 2H), 7,41-7,49 (m, 3H), 7,12-7,23 (m, 5H);

···· ·· · · • ······· · ··· «·« ···« · ·· · ·· ·· ·*

669

Obecný způsob reduktivní aminace s /ra«,s-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-4-aminem a aldehydem jako výchozími látkaji je uveden níže. Sloučeniny podle příkladů 808 a 809 se připraví tímto způsobem.

Postup:

Směs trans-3-(4-amino-fenyl)- l-[4-(4-methy lpiperazino)cyklohexyl] -l/Y-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidin-4-aminu (1 ekviv.), odpovídajícího aldehydu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku. Reakce se zastaví nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 25 cm; 1060% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty. Sloučenina podle příkladu 808 se připraví tímto způsobem, přičemž se použije aldehyd 2-methoxy-3-formylpyridin a sloučenina podle příkladů 809 se připraví za použití aldehydu 2-formyl-indolu.

Příklad 808:

Diacetát /rau5-3-(4-[(2-methoxy-3-pyridyl)methyl]aminofenyl)-l-[4-(4-methyl-piperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu ‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 8,06 (dd, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,95 (dd, 1H), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,26 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,07 minut. MS: MH⁺ 528.

• · · · · · • * · · · · • · · • · ♦ · • · · ·

670

Příklad 809:

Acetát trans-3-{4-[( 17/-2-indolylmethyl)amino]fenyl} -1 -[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-4-aminu ^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 11,08 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,44 (d, 1H), 7,36 (d, 2H), 7,32 (d, 1 H), 7,01 (t, 1H), 6,95 (t, 1H), 6,81 (d, 2H), 6,47 (t, 1H), 6,35 (s, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,45 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,74 minut. MS: MH⁺ 536.

Příklad 810:

Diacetát trans-3-[(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -yl} anilino)methyl] -1,2-dihydro-2-pyridinonu

Diacetát /ra/7.s-3-(4-[(2-metboxy-3-pyridyI)methyl]aminofenyl)- l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-//]pyrimidin-4-aminu (0,105 g, 0,000199 mol) se rozpustí v 30% bromovodíku v kyselině octové (4 ml) a směs se refluxuje po dobu 1,5 hodiny, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát /ra/?.s-3-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4-//]pyrimidin-3-y 1} anilino)methyl] -l,2-dihydro-2pyridinonu (0,0204 g, 0,0000324 mol) ve formě bílé pevné látky.

^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,29 (m, 4H), 6,68 (d, 2H), 6,40 (t, 1H), 6,15 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,09 (d, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (DeltaPak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 9,40 minut. MS: MH⁺ 514.

Obecný způsob reduktivní aminace s /rau.s-3-(4-amino-3-methoxy fenyl)-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-//]pyrimidin-4-aminem a aldehydem jako výchozími látkami je uveden níže.

Sloučeniny podle příkladů 811-813 se připraví tímto způsobem.

Postup:

• · · ·

671

Směs řrany-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 V-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-amin (1 ekviv.), odpovídajícího aldehydu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku. Reakce se zastaví nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a znovu koncentruje. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 25 cm; 1060% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty.

Sloučenina podle příkladu 811 se připraví za použití aldehydu 2-amino-4-chlor-5formyl-l,3-thiazolu. Sloučenina podle příkladu 812 se připraví za použití aldehydu

5-methyl-3-formyl-isoxazolu. Sloučenina podle příkladu 813 se připraví za použití aldehydu 4-formy-l,3-thiazolu.

Příklad 811:

Diacetát tra/75-5-[(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4í/Jpyrimidin-3 -yl} -2 -methoxyailino)methyl] -4-chl or-1,3 -thiazol -2-aminu ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,19 (s, 2H), 7,06 (m, 3H), 6,68 (d, 1H), 5,76 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,59 minut. MS: MH⁺ 583.

Příklad 812:

Acetát tra«5-3-(3-methoxy-4-[(5-methyl-3-isoxazolyl)methyl]aminofenyl)-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,04 (m, 2H), 6,68 (d, 1H), 6,16 (s, 1H), 5,86 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,40 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,53 minut. MS: MH⁺ 532.

t 9

672

Příklad 813:

Acetát trans-3 - {3 -methoxy-4-[( 1,3 -thiazol-4-ylmethyl)amino]fenyl} -1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,08 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,03 (d, 1H), 6,68 (d, 1H), 5,76 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,52 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,17 minut. MS: MH⁺ 534.

Obecný způsob přípravy benzotetrahydrofuranových derivátů s /rau.s-3-(4-aminofenyl)-l[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminem a příslušným 2-hydroxy-benzaldehydem jako výchozími látkami je uveden níže. Sloučeniny podle příkladů 814 a 815 se připraví tímto způsobem.

Postup:

7>mv-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-4-amin (1 ekviv., 0,0001-0,0002 mol) a odpovídající 2-hydroxy-benzaldehyd (1 ekviv.) se smíchají v absolutním ethanolu (5 ml) a míchají při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suší přes noc, čímž se získá odpovídající imin, který se použije bez další purifikace. Trimethylsulfoxonium-jodid (2,5 ekviv.) se rozpustí v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a najednou se přidá 60% disperze hydridu sodného v parafinu (2,5 ekviv.). Po 10 minutách se přidá roztok iminu v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2,5 hodiny, roztok se nalije do ledově studené vody (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (2 x 40 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá finální sloučenina.

Sloučenina podle příkladu 814 se připraví za použití 2-hydroxy-4,6-dichlorbenzaldehydu a sloučenina podle příkladu 815 se připraví za použití 2-hydroxy-4-chlorbenzaldehydu.

• · • · · • · · · <

673

Příklad 814:

Acetát tra«.s-3-4-[(4,6-dichlor-2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-yl)amino]fenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4 -/]pyrimidin-4-aminu ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,39 (d, 2H), 7,14 (s, IH), 7,07 (s, IH), 6,80 (d, 2H), 6,56 (d, IH), 5,34 (m, IH), 4,80 (dd, IH), 4,60 (m, IH), 4,42 (dd, IH), 2,62,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 16,03 minut. MS: MH⁺ 593.

Příklad 815:

Acetát řra«s-3-{4-[(4-chlor-2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,39 (d, 2H), 7,28 (t, IH), 6,99 (d, IH),

6,89 (d, IH), 6,81 (d, 2H), 6,53 (d, IH), 5,34 (m, IH), 4,74 (dd, IH), 4,60 (m, IH), 4,38 (dd, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,42 minut. MS: MH⁺ 559.

Příklad 816:

Acetát trau5-3-4-[(4,6-dichlor-2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-yl)amino]-3-methoxyfenyl-1 [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo[3,4-/Jpyrimidin-4-aminu

Acetát tr£zn5'-3-4-[(4,6-dichlor-2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3-yl)amino]-3-methoxyfenyl-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu se připraví podle způsobu z příkladů 814 a 815 za použití /ran,s-3-(4-amino-3-methoxyfenyl)]-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexylj-1 V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu a 2-hydroxy4,6-dichlorbenzaldehydu jako výchozích látek.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,11 (m, 4H), 6,80 (d, IH), 5,45 (m, 2H), 4,84 (dd, IH), 4,60 (m, IH), 4,42 (dd, IH), 3,82 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 16,85 minut. MS: MH⁺ 623.

• ·

674

Meziprodukt 7:

7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-úQpyrimidin-1 -yl] -1 piperidinkarboxylát

A. 7brc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-l A-pyrazolo[3,4</] pyrimidin-1 -yl] -1 -piperidinkarboxylát

Směs benzyl-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (9,54 g, 0,027 mol), fórc-butyl-4-(4-amino-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl)-lpiperidinkarboxylátu (10,0 g, 0,0225 mol), tetrakis-(trifenylfosfin)palladia (1,56 g, 0,00135 mol) a uhličitanu sodného (5,97 g, 0,0563 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (120 ml) a vody (60 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu (150 ml) a dichlormethan (150 ml); organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje v diethyletheru a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá Zerc-butyl-4-[4-amino-3 -(4- [(benzyloxy)karbonyl]aminofeny l)-lA-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát (10,1 g, 0,0186 mol) ve formě bílé pevné látky.

^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 20,00 (s, IH), 8,23 (s, IH), 7,64 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,36 (m, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,90 (m, IH), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 18,58 minut.

B. 7brc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]-l -piperidinkarboxylát

Do roztoku Zerc-butyl-4-[4-amino-3 -(4- [(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-1Apyrazolo[3,4-£/]pyrimidin-l-y]]-l-piperidinkarboxylátu (5,0 g, 0,0092 mol) v terahydrofuranu (150 ml) se přidá 10% palladium na aktivním uhlí (1,0 g) a reakční směs se hydrogenuje na Parrově třepačce v průběhu 96 hodin, katalyzátor se odstraní filtrací přes Celit a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje v zz-heptanu a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá Zerc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-lApyrazolo[3,4-ó/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylát (2,51 g, 0,0061 mol) ve formě bělavé pevné látky.

• · · · « ·

675 ^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,42 (s, 2H),

4,90 (m, 1H), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,18 minut.

Sloučeniny podle příkladů 817-829 se připraví podle následujícího obecného způsobu pro reduktivní aminaci, poté odstraněním BOC-chránicích skupin. Jako výchozí látka se použije /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-lyl]-l-piperidinkarboxylát a příslušný aldehyd.

Postup:

Směs /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl]-lpiperidinkarboxylátu (1 ekviv.), aldehydu (1,2 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octové kyseliny (3,4 ekviv.) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, trituruje v ethylacetátu a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové. Výsledná směs se míchá po dobu 1 hodiny; vodná fáze se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se oddělí. Organické fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získají požadované produkty. Následující sloučeniny se připraví shora uvedený způsobem:

Příklad 817:

Diacetát 3-{4-[(benzo[6]furan-2-ylmethyl)amino]fenyl}-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,23 (m, 2H), 6,85 (d, 2H), 6,80 (s, 1H), 6,66 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,51 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,37 minut.

MS: MH⁺ 440.

• · • · • · • · <

676

Příklad 818:

Diacetát 3-(4-((2-methoxy-3-pyridyl)methyl]aminofenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4cQpyrimidin-4-aminu ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,96 (dd, 1H), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,27 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,06 minut.

MS: MH⁺431.

Příklad 819:

Diacetát 3-(4-[(5-methyl-2-thienyl)methyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-4-aminu 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,85 (d, 1H), 6,77 (d, 2H), 6,64 (d, 1H), 6,54 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,41 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

MS: MH⁺ 420.

Příklad 820:

Diacetát 3-{4-[(2-furylmethyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin4-aminu ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,77 (d, 2H), 6,46 (t, 1H), 6,39 (d, 1H), 6,34 (d, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,31 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,96 minut.

MS: MH⁺ 390.

• · • # • · · • · ·

677

Příklad 821:

Diacetát 3 -[4-(benzylamino)fenyl]-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,34 (m, 6H), 7,24 (t, IH), 6,73 (d, 2H), 6,60 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,33 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,32 minut.

MS: MH⁺ 400.

Příklad 822:

Diacetát 3 - {4-[(2-methoxybenzyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 7,24 (m, 2H), 7,01 (d, IH),

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,73 minut.

MS:MH⁺430.

Příklad 823:

Diacetát 3 - {4- [(3 -methoxybenzyl)amino] fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4 - d] pyri midin-4-aminu ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 7,25 (t, IH), 6,96 (m, 2H), 6,81 (d, IH), 6,72 (d, 2H), 6,59 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,30 (d, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,38 minut.

MS: MH⁺ 430.

678

Příklad 824:

Diacetát 3 - {4- [(4-methoxybenzyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4 -d] pyri midin-4-aminu

Ή NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,35 (m, 4H), 6,90 (d, 2H), 6,72 (d, 2H),

6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,37 minut.

MS: MH⁺ 430.

Příklad 825:

Diacetát 1 -(4-piperidyl)-3 -(4- [3 -(trifluormethyl)benzyl]aminofeny 1)-1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-aminu ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,71 (m, 2H), 7,58 (m, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,08 minut.

MS: MH⁺ 468.

Příklad 826:

Diacetát 1 -(4-piperidyl)-3 -(4- [4-(trifluormethyl)benzyl]aminofeny 1)-1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-4-aminu ’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,23 minut.

MS: MH⁺ 468.

· · · · · ·

679

Příklad 827:

Diacetát 3-(4-[(2-methyl-l,3-thiazol-4-yl)methyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,41 (d, 2H), 7,26 (s, 1H), 6,73 (d, 2H),

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 10,13 minut.

MS: MH⁺ 421.

Příklad 828:

Diacetát 3-{4-[(2-chlor-6-fluorbenzyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,42 (m, 4H), 7,26 (t, 1H), 6,83 (d, 2H), 6,27 (t, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,32 minut.

MS: MH⁺ 452.

Příklad 829:

Diacetát 3-(4-[2-fluor-4-(trifluormethyl)benzyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,61 (m, 3H), 7,38 (d, 2H), 6,73 (d, 2H), 6,68 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,47 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,83 minut.

MS: MH⁺ 486.

« · · • · · • · · <

680

Příklad 830:

Diacetát 3-{4-[(benzo[ó]fůran-2-ylmethyl)amino]-3-methoxyfenyl}-l-(4-piperidyl)-lApyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4-am inu

Směs /ívobutyl-4-[4-amino-3-(4-ammo-3-methoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu (g, mol), benzofuran-2-karbaldehydu (0,046 g, 0,000315 mol), triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,00042 mol,) a octové kyseliny (0,024 ml, 0,00042 mol) se míchá v bezvodém 1,2-dichlorethanu po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku, trituruje v ethylacetátu (4ml) a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1 ml). Výsledná směs se míchá po dobu 1 hodiny; vodná fáze se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se oddělí. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá diacetát 3-{4[(benzo[ó]furan-2-ylmethyl)amino] -3 -methoxyfenyl} -1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-aminu (0,027 g, 0,0000457 mol).

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,22 (m, 2H), 7,06 (m, 2H), 6,80 (d, 1H), 6,75 (s, 1H), 5,80 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,57 (d, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 14,83 minut.

MS: MH⁺ 470.

Příklad 831:

Acetát 3-(4-(2,3-dihydrobenzo[Z>]furan-3-ylamino)fenyl]-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-aminu

Salicylaldehyd (0,063 g, 0,000513 mol) a ferc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)1 A-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-l-yl]-l -piperidinkarboxylát (0,200 g, 0,000489 mol) se smíchají v absolutním ethanolu (5 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 48 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek suší přes noc, čímž se získá Vrc-butyl-4-[4-amino-3 -(4- {[-1 -(2-hydroxyfenyl)methyliden]amino} fenyl)-1Apyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-l-yl]-l -piperidinkarboxylát, který se použije bez další

681 purifikace. Trimethylsulfoxonium-jodid (0,269 g, 0,00122 mol) se rozpustí v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a najednou se přidá 60% disperze hydridu sodného v parafinu (0,049 g, 0,00122 mol). Po 10 minutách se přidá roztok férc-butyl-4-[4-amino-3-(4-{[-l(2-hydroxyfeny l)methyliden] amino} fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-l-yl] -1piperidinkarboxylátu v bezvodém dimethylsulfoxidu (2 ml) a výsledná směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2,5 hodiny, roztok se nalije do ledově studené vody (70 ml) a extrahuje dichlormethanem (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty se suší síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku, čímž se získá surový tercbutyl-4- {4-amino-3 - [4-(2,3 -dihydrobenzo [ů] furan-3 -ylamino)fenyl] -1 //-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-l-yl}-l-piperidinkarboxylát, který se použije bez další purifikace. Surová sloučenina se rozpustí v ethylacetátu (5 ml) a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1,5 ml). Výsledná emulze se intenzivně míchá po dobu 1 hodiny; vodná vrstva se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se oddělí. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát 3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ů]furan-3ylamino)fenyl]-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu (0,038 g, 0,000078 mol) ve formě bílé pevné látky *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,41 (m, 3H), 7,25 (t, 1H), 6,89 (m, 4H),

MS: MH⁺ 428.

Příklad 832:

Trans-3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin3-yl}anilino)-l//-lX⁶-benzo[</]isothiazol-l,l-dion-acetát

A. 3 -Chlor-1 Η-1 λό-benzo [í/]isothiazol-1,1 -dion

Sacharin (10,0 g, 0,0546 mol) a chlorid fosforečný (12,6 g, 0,060 mol) se zahřívají při teplotě 170°C po dobu 1,5 hodiny. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a suspenduje v diethyletheru (200 ml), precipitát se spojí filtrací, dobře promyje • * • ♦ · · • · · · · • ······· • · · · • · · · ·

682 diethyletherem a suší, čímž se získá 3-chlor-lA-lX⁶-benzo[<7]isothiazol-l,l-dion (3,7 g, 0,0184 mol) ve formě bílé pevné látky, která se použije bez další purifikace.

MS: MH⁺ 202.

B. 3-(4-Bromanilino)-1 A-1 Z⁶-benzo [Ajisothiazol-1,1 -dion

Do roztoku 3-chlor-lA-lX⁶-benzo[</]isothiazol-l,l-dionu (1,0 g, 0,00496 mol) v acetonu (20 ml) se najednou přidá 4-bromanilin (1,71 g, 0,00992 mol) a směs se míchá po dobu 15 minut. Směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se suspenduje ve vodě (100 ml), precipitát se spojí filtrací, dobře promyje vodou a suší, čímž se získá 3-(4bromanilino)-lA-lZ⁶-benzo[J]isothiazol-l,l-dion (1,57 g, 0,00467 mol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,93 (s, 1H), 8,47 (d, 1H), 8,09 (d, 1H), 7,93 (m, 4H), 7,69 (d, 2H).

C. 3-[4-(4,4,5,5-Tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-lA-lÁ⁶-benzo[í7]isothiazol1,1-dion

Směs 3-(4-bromanilino)-lA-lZ⁶-benzo[í/]isothiazol-l,l-dionu (1,57 g, 0,00467 mol), diboron-pinakolesteru (1,43 g, 0,00561 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,114 g, 0,00014 mol) a octanu draselného (1,37 g, 0,014 mol) v W-dimethylformamidu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se trituruje v diethyletheru, čímž se získá 3-[4-(4,4,5,5tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-1 A-l X⁶-benzo[</]isothiazol-1,1 -dion (1,14 g, 0,00297 mol) ve formě bílé pevné látky.

^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,92 (br, 1H), 8,51 (d, 1H), 8,08 (d, 1H), 7,91 (m, 4H), 7,68 (d, 2H), 1,29 (s, 12H).

D. Trans-3-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl} anilino)-1 A-1 X⁶-benzo[<7] isothiazol-1,1 -dion-acetát • · ···· ·· · ···· • ······· · ··· · · · · *·· · ·· ·· ·· ·

683

Směs 3-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-1//-lZ⁶-benzo[</]isothiazol-1,1-dionu (0,09 g, 0,000234 mol), íra«s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,08 g, 0,00018 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,013 g, 0,000011 mol) a uhličitanu sodného (0,048 g, 0,00045 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 25 minut, ml/min), čímž se získá /rans-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo(3,4-(/]pyrimidin-3-yl}anilino)-1//-1 X⁶-benzo[</]isothiazol-1,1 -dion-acetát (0,075 g, 0,000119 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,29 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (m, 3H), 7,79 (m, 2H), 7,66 (d, 2H), 4,65 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m,2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,27 minut.

MS: MH⁺ 572.

Příklad 833:

Cz'5'-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-///-pyrazolo(3,4-</]pyrimidin-3y 1} anilino)- 1H-1 Z⁶-benzo[</]isothiazol-1,1 -dion-diacetát

Cis-3-(4- {4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo (3,4í/]pyrimidin-3-yl}anilino)-l//-lZ⁶-benzo[</]isothiazol-l,l-dion-diacetát se připraví z 3-[4(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-1 Η-1 Z⁶-benzo[</]isothiazol-1,1 -dionu (0,09 g, 0,000234 mol) a czs-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazíno)-cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-4-aminu způsobem, který je podobný shora uvedenému způsobu.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,42 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (m, 3H), 7,84 (m, 2H), 7,62 (d, 2H), 4,80 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,07 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

MS: MH⁺ 572.

• »

684

Příklad 835:

Acetát trans-N3 -(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl} fenyljbenzo [Jjisoxazol-3 -aminu

A. Vl-(4-bromfenyl)-2-fluorbenzamid

Roztok 2-fluorbenzoylchloridu (5,82 g, 0,0367 mol) a 4-bromanilinu (6,31 g, 0,0367 mol) v bezvodém dichlormethanu (150 ml) se ochladí na teplotu 0°C a po kapkách a pod atmosférou dusíku se přidá W-diisopropylethy lamin (5,21 g, 0,0407 mol). Výsledná směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, koncentruje a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném diethyletheru (50 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá VI-(4-bromfenyl)-2fluorbenzamid (9,6 g, 0,0326 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 10,54 (s, IH), 7,66 (m, 3H), 7,56 (m, 3H), 7,34 (m, 2H). TLC (ethylacetát/heptan 1: 2) Rf 0,37.

Β. VI -(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamid

Směs Vl-(4-bromfenyl)-2-fluorbenzamidu (3,3 g, 0, 0112 mol) a 2,4-bis-(4methoxyfenyl)-l,3-dithia-2,4-difosfetan-2,4-disulfidu (2,27 g, 0,00561 mol) se zahřívá v toluenu při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:6) jako mobilní fáze, čímž se získá Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamid (3,1 g, 0,010 mol) ve formě žluté pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 12,13 (s, IH), 7,93 (d, 2H), 7,62 (m, 3H), 7,51 (m, IH), 7,31 (m, 2H). TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,27.

C. VI -(4-bromfenyl)-2-fluor-1 -benzenamidoxim

Směs Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamidu (1,56 g, 0,00505 mol), hydroxylamin-hydrochloridu (0,44 g, 0,00631 mol) a hydrogenuhličitanu sodného (0,53 g, 0,00631 mol) se zahřívá v absolutním ethanolu (25 ml) za refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasyceným roztok hydrogenuhličitanu sodného ve

685 vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném diethyletheru a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenamidoxim (1,21 g, 0,00392 mol) ve formě bělavé pevné látky. TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,12.

D. V-benzo[tí(]isoxazol-3-yl-V-(4-bromfenyl)amin

Do roztoku Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenamidoximu (1,51 g, 0,00489 mol) v V-methylpyrrolidinonu (25 ml) se přidá řerc-butoxid draselný (0,54 g, 0,00513 mol) a výsledný roztok se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:5) jako mobilní fáze, čímž se získá V-benzo[í/]isoxazol-3-ylV-(4-bromfenyl)amin (0,95 g, 0,00329 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,72 (s, ÍH), 8,13 (d, ÍH), 7,68 (d, 2H), 7,61 (m, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,37 (dd, ÍH).

TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,26.

E. V-benzo[</]isoxazol-3-yl-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin

Směs V-benzo[c/]isoxazol-3-yl-V-(4-bromfenyl)aminu (1,30 g, 0,0045 mol), diboron-pinakolesteru (1,37 g, 0,0054 mol), [l,l’-bis(difenylfosfmo)ferrocen]dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,110 g, 0,000135 mol) a octanu draselného (1,32 g, 0,0135 mol) v N, V-dimethylformamidu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/w-heptan (1:5) jako mobilní fáze, čímž se získá V-benzo[</]isoxazol-3-yl-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,40 g, 0,00119 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,74 (s, ÍH), 8,16 (d, ÍH), 7,70 (m, 4H), 7,61 (d, 2H), 7,37 (dd, ÍH), 1,29 (s, 12H). TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,21.

686

F. Acetát trans-N3-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4</] pyrimi din-3 -y 1} fenyl)benzo [</) isoxazol-3 -aminu

Směs V-benzo[í/]isoxazol-3-yl-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,10 g, 0,000298 mol), řrau.s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,101 g, 0,000229 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,016 g, 0,0000137 mol) a uhličitanu sodného (0,061 g, 0,000573 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát řra«5-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidin-3 -yl} fenyl)benzo [ďjisoxazol3-aminu (0,102 g, 0,000175 mol) ve formě bílé pevné látky.

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,81 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,19 (d, IM, 7,88 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,40 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 13,66 minut.

MS: MH⁺ 524.

Příklad 836:

Diacetát cis-N3-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo[3,4J] pyrimidin-3 -yl} fenyl)benzo [í/]isoxazol-3 -aminu

Diacetát cis-N3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methy lpiperazinojcyklohexylj -1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)benzo[í/]isoxazol-3-aminu se připraví z V-benzo[í/Jisoxazol-3-yl-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu a cis-3j od-1 -[4-(4-methy lpiperazinoj-cyklohexyl] -1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu způsobem, který je podobný shora uvedenému způsobu.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,86 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,24 (d, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,67 (m, 4H), 7,43 (m, 1H), 4,83 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,08 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,74 (m, 2H), 1,62 (m, 2H);

··· ·· · · ;· ···· · ♦ · · · * · • ······· · ··· ····

·..· : ·..* :

687

MS: MH⁺ 524.

Příklad 837:

Acetát N3 - {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yljfenyl} benzo [d] isoxazol -3 -aminu

Směs A-benzo[</]isoxazol-3-yl-A-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]aminu (0,087 g, 0,000258 mol), férc-butyl-4-(4-amino-3-jod-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylátu (0,088 g, 0,000198 mol), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,014 g, 0,000012 mol) a uhličitanu sodného (0,053 g, 0,000495 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi vodu a dichlormethan. Organická fáze se suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá surový /erc-butyl-4-{4-amino-3-[4-(benzo[<7]isoxazol-3ylamino)fenylj-1 A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-l-yl}-l-piperidinkarboxylát, který se použije bez další purifikace. Tento surový karboxylát se rozpustí v ethylacetátu (5 ml) a nechá reagovat s 4N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1 ml). Výsledná emulze se intenzivně míchá po dobu 1 hodiny, vodná vrstva se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného ve vodě a vrstvy se oddělí. Organická fáze se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát N3{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin3 -yl] fenyl} benzo [í/]isoxazol-3 aminu (0,009g, 0,0000185 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,82 (s, 1H), 8,20 (m, 2H), 7,89 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,41 (t, 1H), 4,74 (m, 1M, 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 11,20 minut.

MS: MH⁺ 427.

• · · · • * * • * « · • · » · « · · • ·· • · · · • · · · · ······· ·

688

Příklad 838:

Acetát trans-3-[4-(177-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo [3,4 -íTJpy rimidin-4-aminu

A. VI -(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbohydrazonamid

VI-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbothioamid (1,50 g, 0,00485 mol) a 1M roztok hydrazinu v tetrahydrofuranu (6,3 ml, 0,0063 mol) se zahřívají v absolutním ethanolu (25 ml) za refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Přidají se další 3 ml 1M roztoku hydrazinu v tetrahydrofuranu a směs se míchání při refluxu dalších 6 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje, čímž se získá Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbohydrazonamid (1,54 g, 0,0050 mol) ve formě hnědé pevné látky. TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf 0,10.

B. V-(4-bromfenyl)-V-( 177-3-indazolyl)amin

Do roztoku Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-l-benzenkarbohydrazonamidu (1,2 g, 0,00391 mol) v V-methyl-pyrrolidinonu (25 ml) se přidá /erc-butoxid draselný (0,50 g, 0,0041 mol) a výsledný roztok se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:5) jako mobilní fáze, čímž se získá V-(4bromfenyl)-V-(177-3-indazolyl)amin (0,29 g, 0, 0010 mol) ve formě bílé pevné látky. ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 12,06 (s, 1H), 9,03 (s, 1H), 7,93 (d, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,03 (dd, 1H). TLC (ethylacetát/heptan 1:3) R_f 0,26.

C. V-(17f-3-indazolyl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin

Směs V-(4-bromfenyl)-V-(177-3-indazolyl)aminu (0,29 g, 0,00101 mol), diboronpinakolesteru (0,31 g, 0,00121 mol), [l,l’-bis(difenylfosfino)ferrocen]-dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,025 g, 0,00003 mol) a octanu draselného (0,294 g, 0,003 mol) v VV-dimethylformamidu (35 ml) se zahřívá při teplotě 80°C pod atmosférou • · • · · « « · · ·

689 dusíku po dobu 16 hodin. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichiormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu a filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:3) jako mobilní fáze, čímž se získá V-(l A-3-indazolyl)-V-[4(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,064 g, 0,000191 mol) ve formě bělavé pevné látky.

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 12,09 (s, IH), 9,06 (s, IH), 7,94 (d, IH), 7,64 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,35 (m, 2H), 7,03 (dd, IH), 1,28 (s, 12H). TLC (ethylacetát/heptan 1:3) R_f0,21.

D. Acetát trans-3-[4-( 1 H-3-indazolylamino)fenyl]-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]1 A-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidin-4-amin

Směs V-(lA-3-indazolyl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljaminu (0,064 g, 0,000191 mol), /ran,s-3-jod-l-[4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl]lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0, 070 g, 0, 000159 mol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (0, 011 g, 0, 0000095 mol) a uhličitanu sodného (0,042 g, 0,000398 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - 0,lM octan amonný v průběhu 25 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát /rtíH5-3-[4-(lA-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-4-aminu (0, 035 g, 0, 000060 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 12,09 (s, IH), 9,14 (s, IH), 8,21 (s, IH), 7,99 (d, IH), 7,83 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,06 (t, IH), 4,64 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,49 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 12,96 minut.

MS: MH⁺ 523.

« · · »« · * » · • » · · • · · · « « « · « « · · t« ·

690

Příklad 839:

Acetát trans-N3 -(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl] -1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-6-(trifluormethyl)benzo[í/]isoxazol-3-aminu

A. Al -(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamid

Roztok 2-fluor-4-(trifluormethyl)benzoylchloridu (5, 05 g, 0, 0223 mol) a 4-bromanilinu (3,83 g, 0,0223 mol) v bezvodém dichlormethanu (150 ml) se ochladí na teplotu 0°C a pod atmosférou dusíku se po kapkách přidá A,A-diisopropylethylamin (426 ml, 0,0245 mol). Výsledná směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin, koncentruje a zbytek se vytřepe mezi ethylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném n-heptanu (50 ml) a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá Al-(4bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluomiethyl)benzamid (7,1 g, 0,0196 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,74 (s, 1H), 7,90 (m, 2H), 7,74 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,56 (d, 2H).

B. Al -(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-1 -benzenkarbothioamid

Směs Al-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)benzamidu (7,1 g, 0,0196 mol) a 2,4-bis-(4-methoxyfenyl)-l,3-dithia-2,4-difosfetan-2,4-disulfidu (3,97 g, 0,0098 mol) se zahřívá v toluenu při refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:8) jako mobilní fáze, čímž se získá Al-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-lbenzenkarbothioamid (6,0 g, 0,0159 mol) ve formě žluté pevné látky.

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 12,33 (s, 1H), 7,94 (d, 2H), 7,81 (m, 2H), 7,65 (m, 3H). TLC (ethylacetát/heptan 1: 4) Rf 0,61

C. Al -(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenamidoxim

Směs Al -(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-1 -benzenkarbothioamidu (2,50 g, 0,00663 mol), hydroxylamin-hydrochloridu (0,65 g, 0,00928 mol) a uhličitanu sodného (0,78 g, 0,00928 mol) se zahřívá v absolutním ethanolu (25 ml) za refluxu pod atmosférou dusíku po dobu 14 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se »« · • » · · · • * * · · * » · · · « Φ « · · « · · · · »· * ♦·

691 odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném «-heptanu a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)1-benzenamidoxim (2,35 g, 0,00625 mol) ve formě bělavé pevné látky. TLC (ethylacetát/heptan 1:4) Rf 0,12.

D. V-(4-bromfenyl)-V-[6-(trifluormethyl)benzo[ť/]isoxazol-3-yl]amin

Do roztoku Vl-(4-bromfenyl)-2-fluor-4-(trifluormethyl)-l-benzenamidoximu (2,25 g, 0,00598 mol) v V-methylpyrrolidinonu (30 ml) se přidá férc-butoxid draselný (0,71 g, 0,00628 mol) a výsledný roztok se zahřívá při teplotě 100°C pod atmosférou dusíku po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného ve vodě (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje. Zbytek se suspenduje ve studeném «-heptanu a precipitát se spojí filtrací a suší, čímž se získá V-(4-bromfenyl)-V-[6-(trifluormethyl)benzo[t/]isoxazol3-yl]amin (1,75 g, 0,0049 mol) ve formě bělavé pevné látky.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,95 (s, IH), 8,37 (d, 1 H), 8,14 (s, IH), 7,78 (d, IH), 7,68 (d, 2H), 7,58 (d, 2H). TLC (ethylacetát/heptan 1:5) R_f 0,31.

E. V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-V-[6-(trifluormethyl)benzo[í/]isoxazol-3-yl]amin

Směs V-(4-bromfenyl)-V-[6-(trifluormethyl)benzo[í/]isoxazol-3-yl]aminu (1,75 g, 0,0049 mol), diboron-pinakolesteru (1,49 g, 0,0059 mol), [1,1’bis(difenylfosfino)ferrocen]-dichlorpalladnatého komplexu s dichlormethanem (1:1) (0,120 g, 0,000147 mol) a octanu draselného (1,44 g, 0,0144 mol) v V,V-dimethylforrnamidu (10 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin a pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Dichlormethan (70 ml) se přidá ke zbytku a výsledný pevný podíl se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu, filtrát se koncentruje, čímž se získá žlutý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:6) jako mobilní fáze, čímž se získá V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-V-[6·« ···· ·· · ··· ·· ·«* ·«·>· ·· · * * • »······ · · · · ·« · ··*· 9 9 ·· · ·· ·· ··

692 (trifluormethyl)benzo[íí]isoxazol-3-yl]amin (0,065 g, 0,000161 mol) ve formě bílé pevné látky.

‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,97 (s, 1H), 8,39 (d, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,77 (d, 1H), 7,71 (s, 4H), 1,29 (s, 12H).

F. Acetát trans-N3-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazno)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3-yl}fenyl)-6-(trifluormethyl)benzo[(í]isoxazol-3-aminu

Směs V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-V-[6-(trifluormethyl)benzo[č/]isoxazol-3-yl]aminu 0,062 g, 0,000153 mol), tra«5-3-jod-l-[4-(4methylpiperazino)-cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu (0,065 g, 0,000146 mol), tetrakis-(trifenylfosfin)palladia (0,010 g, 0,0000087 mol) a uhličitanu sodného (0,039 g, 0,000365 mol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 80°C po dobu 16 hodin a pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC (Hypersil Cl8, 8 pm, 25 cm; 10-70% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 30 minut, 21 ml/min), čímž se získá acetát trans-N3-(4-{4-amino-1-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl} feny l)-6(trifluormethyl)benzo[</]isoxazol-3-aminu (0,026 g, 0,0000398 mol) ve formě bílé pevné látky.

^!H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,05 (s, 1H), 8,44 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,88 (d, 2H), 7,79 (d, 1H), 7,69 (d, 2H), 4,67 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 16,18 minut.

MS: MH⁺ 592.

Příklad 840:

V2-[4-(4-amino-1 - {1 -[(2-methyl-1 V-4-imidazolyl)methyl]-4-piperidyl} -1 V-pyrazolo [3,4V]pyrimidin-3 -y l)-2-methoxyfenyl]-1 methyl-1 V-2-indolkarboxamid-dimaleát A. N2-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl} 1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid • *

....... · · · • ······· · ··· ·· . · . .......· ·· . ·· ·· ··

693

Hydrochlorid 3 -j od-1 -(4-piperidy 1)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-aminu (6,75 g, 17,73 mmol), V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-lmethyl-lA-2-indolkarboxamid (7,571 g, 18, 63 mmol), palladium-tetrakistrifenylfosfin (1,23 g, 1,06 mmol) a uhličitan sodný (8,27 g, 78,03 mmol) se smíchají s dimethyletherem ethylenglykolu (180 ml) a vodou (90 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu přes noc. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a vodná suspenze se extrahuje s velkým množstvím dichlormethanu. Spojená organická vrstva se promyje vodou, pak solankou, suší nad MgSCU, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (90:10:0,5 až 60:40:0,5) jako mobilní fáze, čímž se získá V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid (4,38 g). Vodná suspenze se filtruje, promyje vodou a suší, čímž se získá V2-{4-[4-amino1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-l-methyl-1A-2indolkarboxamid (2,77 g). Spojené pevné podíly (7,15 g, 81%).

’H NMR (DMSO-dó) δ 1,85 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,64 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,77 (m, ÍH), 7,13 (m, ÍH), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J = 8,45 Hz, ÍH), 7,71 (d, J = 7,94 Hz, ÍH), 8,12 (d, J = 8,15 Hz, ÍH), 8,25 (s, ÍH), 9,44 (s, ÍH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): R_t = 1,97 minut, MH⁺ = 497,3.

B. V2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-methyl-lA-4-imidazolyl)methyl}-4-piperidyl}-lA-pyrazolo[3,4-r/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-l A-2-indolkarboxamid

2V2- { 4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-čf]pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyl}-l-methyl-ÍA-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), 2-methyl-lA-4imidazolkarbaldehyd (83 mg, 0,755 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (159 mg, 0,755 mmol) a ledová kyselina octová (30 mg, 0,554 mmol) se smíchají v 1,2-dichlorethanu (6 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc, k upravení pH asi na 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSO4, filtruje a zahušťuje. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (95:5:0,5 až 80:20:05) jako mobilní fáze, čímž se získá V2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-methyl-lA-4• ·

694 imidazolyl)methyl]-4-piperidyl}-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-lmethyl-ΙΑ-2-indolkarboxamid (215 mg, 72%).

*H NMR (DMSO-d₆) δ 1,91 (m, 2H), 2,23 (m, 7H), 3,00 (m, 2H), 3,41 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,78 (m, 1H), 6,72 (s, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,32 (m, 4H), 7,78 (d, J = 8,43 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,92 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 7,92 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): R_t = 2, 00 minut, MH⁺ = 591,3.

C. N2-[4-(4-amino-1 - {1 - [(2-methyl-1 A-4-imidazolyl)methy 1]-4-piperidy 1} -1 A-pyrazolo [3,4-//]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl] -1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid-dimaleát

A2-4-(4-amino-1 - {1 - [(2-methyl-1 A-4-imidazolyl)methyl]-4-piperidyl} -1Apyrazolo[3,4-//]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid (210 mg, 0,355 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (25 mL) a pár kapkách ethanolu. Přidá se kyselina maleinová (83mg, 0,711 mmol) v horkém ethylacetátu (3 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá N2-[4-(4-amino-l- {1 - [(2-methyl-1 A-4-imidazolyl)methyl]-4-piperidyl} -1 A-pyrazolo [3,4//]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyf'enyl]-l-methyl-l A-2-mdolkarboxamid-dimaleát (255 mg, 87%).

*H NMR (DMSO-d₆) δ 2,12 (m, 2H), 2,43 (m, 5H), 2,92 (m, 2H), 3,38 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,99 (s, 2H), 4,04 (s, 3H), 4,93 (m, 1H), 6,13 (s, 4H), 7,16 (m, 1H), 7,34 (m, 5H), 7,60 (d, J = 8,43 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,92 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 8,15 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H), 9,44 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min):

R_t = 1,98 minut, MH⁺ = 591,3.

Příklad 841:

A2-(4- {4-amino-1 - [l-( 1 A-4-imidazolylmethyl)-4-piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4-//] pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid-dimaleát A. A2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(1 A-4-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-1 A-pyrazolo [3,4-//]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid-diacetát • · • ·· ·· · · · · ···· ·· · ··· • ······· · · · · ·· ··· ······ • · · ·· ·· ··

695

N2-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl }-l-methyl-lA-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), ΙΑ-4-imidazolkarbaldehyd (73 mg, 0,755 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (159 mg, 0,755 mmol) a ledová kyselina octová (30 mg, 0,554 mmol) se smíchají v 1,2-dichlorethanu (6 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc, k upravení pH asi na 8 se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se separují a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Spojená organická vrstva se promyje solankou, suší nad MgSCL, filtruje a zahušťuje. Zbytek se nejprve purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi dichlormethan/methanol/hydroxid amonný (95:5:0,5 až 80:20:0,5) jako mobilní fáze, pak purifikuje znovu preparativní HPLC s reverzní fází za použití směsi acetonitril/voda (50mM octan amonný pufr) jako mobilní fáze, čímž se získá A2-(4-{4amino-1 - [ 1 -(1 A-4-imidazolylmethyl)-4-piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl } -2methoxyfenyl)-l-methyl-ΙΑ-2-indolkarboxamid-diacetát (170 mg, 49%).

‘H NMR (DMSO-dé) δ 1,90 (m, 8H), 2,20 (m, 4H), 2,99 (m, 2H), 3,47 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,67 (m, ÍH), 7,15 (m, ÍH), 7,31 (m, 5H), 7,54 (s, ÍH), 7,58 (d, J = 8,43 Hz, ÍH), 7,70 (d, J = 7,95 Hz, ÍH), 8,10 (d, J = 8,14 Hz, ÍH), 8,24 (s, ÍH), 9,44 (s, ÍH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): R_t = 1,97 minut, MH⁺ = 577,3.

B. V2-(4-{4-amino-1-[1-(1 A-4-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid-dimaleát

A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 A-4-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-1 A-pyrazolo [3,4ď] pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid-diacetát (170 mg, 0,244 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (25 ml) a pár kapkách ethanolu. Přidá se kyselina maleinová (103mg, 0,884 mmol) v horkém ethylacetátu (3 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 3 hodin a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá V2-(4-{4-amino-l-[l-(lA-4-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-lA-2-indolkarboxamid-dimaleát (153 mg, 76%).

^!H NMR (DMSO-de) δ 2,19 (m, 2H), 2,49 (m, 2H), 3,19 (m, 2H), 3,52 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,21 (s, 2H), 5,02 (m, ÍH), 6,15 (s, 4H), 7,16 (m, ÍH), 7,32 (m, 5H), 7,40 (s, ÍH), 7,59 (d, J = 8,45 Hz, ÍH), 7,71 (d, J = 7,95 Hz, ÍH), 7,98 (bs, ÍH), 8,13 (d, J = 8,16 Hz, ÍH), 8,27 (s, ÍH), 9,44 (s, ÍH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, • · • · · ·

696

Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): R_t = 1,98 minut, MH⁺ = 577,3.

Příklad 842:

A2-(4- {4-amino-1 - [l-(2-fluorethyl)-4-piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -yl} -2methoxy fenyl)-1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid-dimaleát

A. A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-fluorethyl)-4-piperídyl]-lV-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl}-2methoxy fenyl)-1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid

A2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-1 -methyl- lV-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), l-brom-2-fluorethan (47 pl, 0,629 mmol), uhličitan draselný (87 mg, 0,629 mmol) a jodid sodný (10 mg, 0,066 mmol) se smíchají v DMF (3 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 80°C přes noc, surová reakční směs se čistí preparativní HPLC s reverzní fází za použití směsi acetonitril/voda (50mM octan amonný pufr) jako mobilní fáze, čímž se získá A2-(4-{4amino-1 - [ 1 -(2-fluorethyl)-4-piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-!-methyl-lV-2-indolkarboxamid (221 mg, 81%).

’H NMR (DMSO-dó) δ 1,91 (m, 2H), 2,26 (m, 4H), 2,66 (m, IH), 2,73 (m, IH), 3,05 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,61 (m, IH), 4,61 (m, IH), 4,64 (m, IH), 7,15 (m, IH), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J = 8,46 Hz, IH), 7,70 (d, J = 7,95 Hz, IH), 8,11 (d, J = 8,14 Hz, IH), 8,25 (s, IH), 9,44 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): R_t = 2,17 minut, MH⁺ = 543,3.

B. A2-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(2-fluorethyl)-4-piperidyl]-1 V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl}-2methoxy fenyl)-1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid-dimaleát

7V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-fluorethyl)-4-piperidyl]-1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 yl}-2-methoxyfenyl)-1-methyl-lV-2-indolkarboxamid (221 mg, 0,407 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (25 ml) a pár kapkách ethanolu. Přidá se kyselina maleinová (94 mg, 0,814 mmol) v horkém ethylacetátu (3 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc, ale precipitát nezvnikne. Organické rozpouštědlo se odstraní a pevný podíl se • ·

697 • · · · · • · · · · • · · « · · • ······· · trituruje ethylacetátem a pevný podíl se spojí filtrací, čímž se získá A2-(4-{4-amino-l-[l(2-fluorethyl)-4/piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl1 A-2/indolkarboxamid-dimaleát (252 mg, 80%).

’H NMR (DMSO-de) δ 2,34 (m, 2H), 2,54 (m, 2H), 3,49-3,67 (m, 6H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,81 (m, IH), 4,92 (m, IH), 5,06 (m, IH), 6,14 (s, 4H), 7,16 (m, IH), 7,34 (m, 4H), 7,60 (d, J = 8,32 Hz, IH), 7,70 (d, J = 7,95 Hz, IH), 8,14 (d, J = 8,15 Hz, IH), 8,29 (s, IH), 9,45 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): R_t = 2, 17 minut, MH⁺= 543,3.

Příklad 843:

JV2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2,2-difluorethyl)-4-piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidin-3-yl} -2methoxy fenyl)-1 -methyl-1 A-2/indolkarboxamid-dimaleát

A. V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2,2-difluorethy l)-4-piperidy 1] -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

N2-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl}-l-methyl-lA-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), 2-brom-l,l-difluorethan (91 mg, 0,629 mmol), uhličitan draselný (87 mg, 0,629 mmol) a jodid sodný (10 mg, 0,066 mmol) se smíchají v DMF (3 ml). Reakční směs se zahřívá při teplotě 80°C přes noc, přičemž podle HPLC došlo jen k 50% konverzi. Teplota lázně se sníží na 55°C a přidá se další 2-brom-l,l-difluorethan (0,1 ml). Po míchání přes noc při teplotě 55°C se přidá další 2-brom-l,l-difluorethan (0,1 ml) a reakční směs se míchá při teplotě 55°C přes noc. Podle HPLC téměř veškerá výchozí látka konvertovala na produkt. Surová reakční směs se čistí preparativní HPLC s reverzní fází za použití směsi acetonitril/voda (50 mM octan amonný pufr) jako mobilní fáze, čímž se získá V2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluorethyl)-4-piperidyl]1 A-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid (227 mg, 81%).

’H NMR (DMSO-dé) δ 1,89 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,42 (m, 2H), 2,80 (m, IH), 3,05 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,69 (m, IH), 6,17 (t t, J = 55,81 Hz, J = 4,35 Hz, IH), 7,15 (m, IH), 7,33 (m, 4H), 7,78 (d, J = 7, 94 Hz, IH), 7,70 (d, J = 7,94 Hz, IH), 8,11 (d, J = 8, 19 Hz, IH), 8,25 (s, IH), 9,44 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, • · · • · · · ·

698

Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): R_t = 3,32 minut, MH⁺ = 561,3.

B. V2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluorethyl)-4-piperidyl]-17/-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 7/-2-indolkarboxamid-dimaleát

V2-(4- {4-amino-l- [l-(2,2-difluorethyl)-4-piperidy 1] -177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin3-yl}-2-methoxyfenyl)-1-methyl-177-2-indolkarboxamid (227 mg, 0,405 mmol) se rozpustí v horkém ethylacetátu (25 ml). Přidá se kyselina maleinová (94 mg, 0,810 mmol) v horkém ethylacetátu (3 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc, přičemž precipitát nevznikne, proto se směs míchá při pokojové teplotě další 4 dny, čímž dojde ke vzniku a usazování precipitátu na dně baňky. Rozpouštědlo se dekantuje, pevný podíl se promyje ethylacetátem a suší, čímž se získá V2-(4-{4-amino-1-[1-(2,2-difluorethyl)-4piperidyl] -177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-l-methyl-177-2indolkarboxamid-dimaleát (220 mg, 68 %).

IH NMR (DMSO-dé) δ 2,05 (m, 2H), 2,40 (m, 2H), 2,84-3,32 (bm, 6H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,85 (m, 1H), 6,22 (s, 4H), 6,34 (t, J = 56,07 Hz, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,59 (d, J = 8,45 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 8,12 (d, J = 8,19 Hz, 1H), 8,28 (s, 1H), 9,45 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, 08, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): R_t = 3, 32 minut, MH⁺= 561,3.

Příklad 844:

N2- {4-[4-amino-1 -(1 -ethyl-4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidin-3 -yl] -2methoxy feny 1} -1 -methyl-177-2-indolkarboxamid

V2- {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl }-l-methyl-177-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), acetaldehyd (44 mg, 1,007 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (212 mg, 1,007 mmol) se smíchají v 1,2-dichlorethanu (6 ml). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se čistí preparativní HPLC s reverzní fází za použití směsi acetonitril/voda (50mM octan amonný pufr) jako mobilní fáze, čímž se získá V2-{4• · · ·

699 [4-amino-l-(1-ethyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-lmethyl-1 A-2-indolkarboxamid (247 mg, 93%).

*H NMR (DMSO-de) δ 1,04 ((t, J = 7,15 Hz, 3H), 1,92 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,25 (m, 2H), 2,40 (q, J = 7,15 Hz, 2H), 3,03 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,68 (m, IH), 7,13 (m, IH), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J = 8,00Hz, IH), 7,70 (d, J = 7,95 Hz, IH), 8,11 (d, J =

8,15 Hz, IH), 8,25 (s, IH), 9,44 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): R_t = 2, 08 minut, MH⁺ = 525,3.

Sloučenina podle příkladu 845 se připraví způsoby popsanými v příkladu 844.

Příklad 845:

V2-[4-(4-amino-1 - {1 - [(3 -methyl-1 A-4-pyrazolyl)methyl] -4-piperidyl} -1 A-pyrazolo [3,4J]pyrimidin-3-yl)-2-methoxy fenyl]-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid-acetát Výtěžek: 187 mg, 63% ‘H NMR (DMSO-de) 1,91 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 2,19 (m, 5H), 2,96 (m, 2H), 3,35 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,67 (m, IH), 7,17 (m, IH), 7,31 (m, 5H), 7,58 (d, J = 8,46 Hz, IH), 7,70 (d, J = 7,94 Hz, IH), 8,10 (d, J = 8,15 Hz, IH), 8,24 (s, IH), 9,44 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): R_t = 2,03 minut, MH⁺ = 591,3.

Příklad 846:

V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(3 -furylmethyl)-4-piperidyl] -1 A-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3 -yl} -2methoxy fenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid Výtěžek 233 mg, 80% 'H NMR (DMSO-de) δ 1,91 (m, 2H), 2,13-2,23 (m, 4H), 3,00 (m, 2H), 3,39 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,68 (m, IH), 6,47 (s, IH), 7,31 (m, 4H), 7,60 (m, 3H), 7,70 (d, J = 7,94 Hz, IH), 8,11 (d, J = 8,05 Hz, IH), 8,24 (s, IH), 9,44 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, • ·

.........

.. · .... ··

700 eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): R_t =2,37 minut, MH⁺ = 577,3.

Příklad 847:

A2-{4-[4-amino-l-(l-tetrahydro-2A-4-pyranyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Reakce se provádí při teplotě 70°C přes noc místo při pokojové teplotě přes noc podle způsobu popsaného v příkladu 844. Výtěžek 176 mg, 71%.

^]H NMR (DMSO-dé) δ 1,46 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 2,20 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 3,07 (m, 3H), 3,27 (m, 2H), 3,91 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,67 (m, 1H),

7,15 (m, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J = 8,44 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 8,04 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, C18, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): R_t = 2,08 minut, MH⁺ = 581,3.

Příklad 848:

zV2-(4-{4-amino-l-[(l-acetylpiperidin-4-yl)-piperidin-4-yl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Reakce se provádí při teplotě 70°C přes noc místo při pokojové teplotě přes noc podle způsobu z příkladu 844.

Výtěžek 223 mg, 71%.

'H NMR (DMSO-dé) δ 1,28 (m, 1H), 1,43 (m, 1H), 1,75 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,99 (s, 3H), 2,19 (m, 2H), 2,34 (m, 2H), 2,54 (m, 2H), 3,01 (m, 3H), 3,83 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,38 (m, 1H), 4,66 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,31 (m, 4H), 7,78 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 8,15 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min) :

R_t = 1,97 minut, MH⁺ = 622,3.

• · • · · · a · · »

701

Příklad 849:

V2-(4- {4-amino-1 - [l-(4-pyridylmethyl)-4-piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl} -2methoxy fenyl)-1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid Výtěžek 57 mg, 18%.

*H NMR (DMSO-de) δ 1,91 (m, 2H), 2,28 (m, 4H), 3,95 (m, 2H), 3,59 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,71 (m, 1H), 7,17 (m, 1H), 7,34 (m, 6H), 7,59 (d, J = 8, 03Hz, 1H), 7,71 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 8,14 Hz, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,52 (d, J = 5,78 Hz, 2H), 9,44 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Sloupec: Genesis, Cl8, 3 pm, 33 x 4,6 mm, eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minutách, (B: acetonitril, A: 50 mM pufr octanu amonného, pH 4,5), 0,8 ml/min): R_t = 2,50 minut, MH⁺ = 588,3.

Příklad 850:

V2-(4- {4-amino-l- [3 -(4-methylpiperazino)propyl]-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrhnidin-3 -yl} -2methoxy feny 1)-1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid

A. 1 -(3 -brompropyl)-3 -j od-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-4-amin

Suspenze 3-jod-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (10,00 g, 38,31 mmol) v tetrahydrofuranu (150 ml) se nechá reagovat s 3-brom-l-propanolem (15,98 g, 114,93 mmol) a trifenylfosfinem (20,1 g, 76,62 mmol). Diethyl-azodikarboxylát (13,34 g, 76,62 mmol) se pomalu přidá do reakční směsi. Reakční směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 30 minut, po kterých se ledová lázeň odstraní a směs se míchá po dobu 30 minut při pokojové teplotě. Reakční směs se opatrně koncentruje a přidá se ethylacetát (200 ml), precipitát se filtruje a filtrát se koncentruje do sucha. Surová sloučenina se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití 100% ethylacetátu jako eluentu, čímž se získá 7,8 g (53%) l-(3-brompropyl)-3-jod-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu.

’H NMR (DMSO-d₆,400 MHz) δ 8,230 (s, 1H), 4,419-4,385 (t, 2H), 3,530-3,498 (t, 2H), 2,370-2,304 (q, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 to 0,5 ml/min) R_t 2,05 min (100%), MH⁺ 422,9.

B. 3-jod-l-[3 -(4-methylpiperazino)propyl] -1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-4-amin • · • ······· · ··· ··' «·· ······ • · · ·· ·· ··

702

Suspenze l-(3-brompropyl)-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,500 g,

1,31 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) se nechá reagovat s 1-methylpiperazinem (0,157 g, 1,572 mmol) a triethylaminem (0,133 g, 1,31 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 70°C po dobu 66,25 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Přidá se dichlormethan (15 ml) a 1 N kyselina chlorovodíková (20 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (100 ml), neutralizuje na pH 13 a pak extrahuje dichlormethanem (250 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahušťuje za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití postupného gradientu; 20% methanol v dichlormethanu až 50% methanol v dichlormethanu v průběhu 55 minut na sloupci 35 g ISCO, čímž se získá 0,238 g (45%) čistého 3-jod-l-[3-(4-methylpiperazino)propyl]-lA-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4aminu.

Ή NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,191 (s, 1H), 4,308-4,273 (t, 2H), 2,262-2,228 (m, 10H), 1,944-1,877 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 to 0,5 ml/min) R_t 0,75 min (100%), MH⁺ 402,1.

C. V2-(4- {4-amino-1 - [3 -(4-methylpiperazino)propylj-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} 2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Roztok 3-jod-l-[3-(4-methylpiperazino)propyl]-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4aminu (0,188 g, 0,469 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (16 ml) se nechá reagovat s V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-lA-2indolkarboxamidem (0,209 g, 0,516 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladiem (0,033 g, 0,028 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,119 g, 1,13 mmol) ve vodě (8 ml). Reakční směs se míchá po dobu 4,5 hodiny při teplotě 80°C. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se ethylacetát (200 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (400 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití postupného gradientu 20% methanolu v dichlormethanu až 50% methanolu v dichlormethanu, čímž se získá 0,078 g (30%) čistého V2-(4- {4-amino-1 - [3 -(4-methylpiperazino)propyl] -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl} -2methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamidu.

• · . ·.···· ···

... ·· ...» ···· ·· · ... • ······· · ... ·· z .... ··

703 'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,442 (s, ÍH), 8,258 (s, ÍH), 8,122-8,1076 (d, ÍH, J =

8,16 Hz), 7,719-7,6991 (d, ÍH, J = 7,96 Hz), 7,6005-7,5793 (d, ÍH, J = 8,48 Hz), 7,3497,294 (m, 4H), 7,172-7,135 (t, ÍH), 4,405-4,371 (m, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,958 (s, 3H), 3,291 (m, 2H), 2,5 (m, 3H), 2,452,337 (m, 5H), 2,30-2,10 (m, 3H), 2,022-2,005 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,05 min (100%), MH⁺ 554,3.

Příklad 851:

N2-{4- [4-amino-l-(3 -morfolinopropyl)-1 V-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl } -1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid

A. 3-Jod-l-(3-morfolinopropyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/pyrimidin-4-amin

Suspenze l-(3-brompropyl)-3-jod-lV-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-4-aminu (0,500 g,

1,31 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) se nechá reagovat s morfolinem (0,137 g, 1,572 mmol) a triethylaminem (0,133 g, 1,31 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 70°C po dobu 66,25 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Přidá se dichlormethan (15 ml) a 1 N kyselina chlorovodíková (20 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (100 ml), vodná vrstva se neutralizuje na pH 14, pak extrahuje dichlormethanem (250 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahušťuje za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití postupného gradientu 10% methanolu v dichlormethanu až 50% methanolu v dichlormethanu v průběhu 58 minut na sloupci 35 g ISCO, čímž se získá 0,244 g (48%) čistého 3-jod-l-(3-morfolinopropyl)-1 V-pyrazolo[3,4-pyrimidin-4-aminu.

^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,194 (s, ÍH), 4,327-4,293 (t, 2H), 3,485-3,364 (m, 4H), 2,253-2,238 (m, 6H), 1,963-1,895 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 to 0,5 ml/min) R_t 0,71 min (100%), MH⁺389,0.

B. N2-{4- [4-amino-1 -(3 -morfolinopropyl)-1 V-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl } -1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid

704

Roztok 3-jod-l-(3-morfolinopropyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,244 g, 0,629 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (16 ml) se nechá reagovat s JV2-[2methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-l//-2indolkarboxamidem (0,281 g, 0,692 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,044 g, 0,038 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,160 g, 1,51 mmol) ve vodě (8 ml). Reakční směs se míchá po dobu 4,5 hodiny při teplotě 80°C. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se ethylacetát (200 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (400 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití postupného gradientu 10% methanolu v dichlormethanu až 50% methanolu v dichlormethanu jako eluentu, čímž se získá 0,191 g (56%) čistého N2-{4- [4-amino-1 -(3 -morfolinopropyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] 2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamidu.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,440 (s, 1H), 8,260 (s, 1H), 8,1229-8,1026 (d, 1H, J =

8,12 Hz), 7,7184-7,6986 (d, 1H, J = 7,92 Hz), 7,5983-7,578 (d, 1H, J = 8,08 Hz), 7,3457,290 (m, 4H), 7,172-7,133 (m, 1H), 4,421-4386 (m, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,958 (s, 3H), 3,521-3,500 (m, 4H), 2,349-2,314 (m, 6H), 2,035-2,001 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t2,05 min (100%), MH⁺ 541,3.

Příklad 852:

V2-(4- {4-amino-1 -[3 -(1 Η-1 -imidazolyl)propyl] -1 //-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2methoxyfenyl)-1 -methyl- l/f-2-indolkarboxamid

A. l-[3-(l/7-l-lmidazolyl)propyl]-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-amin

Suspenze l-(3-brompropyl)-3-jod-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidin-4-aminu (0,500 g,

1,31 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) se nechá reagovat s imidazolem (0,107 g, 1,572 mmol) a triethylaminem (0,133 g, 1,31 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 70°C po dobu 25,5 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Přidá se dichlormethan (15 ml) a 1 N kyselina chlorovodíková (20 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se promyje dichlormethanem (100 ml), vodná vrstva se neutralizuje na pH 14, pak extrahuje dichlormethanem (250 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a

705 zahušťuje za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% methanolu v dichlormethanu jako eluentu, čímž se získá 0,086 g (18%) čistého l-[3-(lA-l-imidazolyl)propyl]-3-jod-lA-pyrazolo [3,4-úQpyrimidin4-aminu.

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 8,211 (s, 1H), 7,896 (s, 1H), 7,264 (s, 1H), 6,96 (s, 1H), 4,32-4,227 (m, 2H), 4,011-3,977 (m, 2H), 2,329-2,215 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t0,46 min (100%), MH⁺ 370,0.

B. V2-(4- {4-amino-1 -[3-(1 A-1 -imidazolyl)propyl]-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2methoxy fenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Suspenze 1 - [3 -(1 A-l -imidazolyl)propyl]-3-jod-l A-pyrazolo[3,4-í(|pyrimidin-4aminu (0,086 g, 0,233 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) se nechá reagovat s V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-lA-2indolkarboxamidem (0,104 g, 0,256 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,016 g, 0,014 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,059 g, 0,56 mmol) ve vodě (2 ml). Reakční směs se míchá po dobu 24 hodin při teplotě 80°C. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan (25 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (100 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití postupného gradientu 5% methanolu v dichlormethanu až 50% methanolu v dichlormethanu na 10 g sloupce ISCO, čímž se získá 0,06 g (49%) čistého V2-(4-{4-amino-l-[3-(lA-l-imidazolyl)propyl]-lA-pyrazolo[3,4č/Jpyrimidin-3-yl}-2-methoxy fenyl)-1-methyl-1 A-2-indolkarboxamidu.

*H NMR MSO-d₆, 400 MHz) δ 9,443 (s, 1H), 8,278 (s, 1H), 8,1324-8,1121 (d, 1H, J =

8,12 Hz), 7,744-7,699 (m, 2H), 7,6-7,579 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,365-7,283 (m, 5H), 7,1727,135 (m, 1H), 6,939 (s, 1H), 4,36-4,326 (m, 2H), 4,079-4,019 (m, 5H), 3,964 (s, 3H), 2,3242,309 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,25 min (100%), MH⁺ 522, 3.

• · • ·

706

Příklad 853:

V2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-1 H-3 -pyrrólyl-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrim idin-3 -y 1)-2-methoxy fenyl] -1-methyl-1 A-2-indolkarboxamid

A. Terc-butyl-3-(4-amino-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-cf]pyrimidin-l-yl)-l-pyrrolidinkarboxylát

Suspenze 3-jod-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminu (5,0 g, 19,15 mmol) v tetrahydrofuranu (100 ml) se nechá reagovat s fórc-butyl-3-hydroxy-lpyrrolidinkarboxylátem (5,38 g, 28,73 mmol) a trifenylfosfinem (7,53 g, 28,73 mmol). Reakční směs se ochladí na teplotu 0°C v ledové lázni. Diethyl-azodikarboxylát (5,0 g, 28,73 mmol) se pomalu přidá do reakční směsi. Po 6 dnech se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku. Surový olej se použije bez další analýzy použije přímo v následující reakci.

B. Hydrochlorid 3 -j od-1 -tetrahydro-1A-3 -pyrrólyl-1 A-pyrazolo [3,4 -djpyrimidin-4-aminu

Suspenze surového /erc-butyl-3-(4-amino-3 -j od-1 A-pyrazolo [3,4-A]pyrimidin-1 -y 1)1-pyrrolidinkarboxylátu v acetonu (100 ml) se nechá reagovat s 6N kyselinou chlorovodíkovou (50 ml). Reakční směs se míchá při teplotě 40°C po dobu 15 hodin. Vzniklý precipitát se filtruje. Podle LCMS obsahoval nečistoty. Reakční směs se nechá stát přes noc při pokojové teplotě za vzniku precipitátu, který se filtruje a promyje diethyletherem, čímž se získá 2,186 g (31%) čistého hydrochloridu 3-jod-1-tetrahydro-1A3-pyrrolyl-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-4-aminu, *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,8815 (s, IH), 8,9923 (br, s, IH), 8,4803 (s, IH), 7,82 (br, s, IH), 5,5908-5,5295 (m, IH), 3,7131-3,6706 (m, IH), 3,5590-3,5003 (m, IH), 3,4466-3,4174 (m, 2H), 2,45922,4255 (m, IH), 2,4064-2,3146 (m, IH); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 1,09 min (100%), MH⁺ 331,0.

C. V2-[4-(4-amino-1 -tetrahydro-1 A-3-pyrrolyl-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3-yl)-2methoxy fenyl]-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Suspenze hydrochloridu 3 -jod-1 -tetrahydro-1 A-3 -pyrrólyl-1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-4-aminu (2,186 g, 5,96 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (50 ml) se nechá reagovat s /V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l• · · • · · · • · · · « ·

707 methyl-lV-2-indolkarboxamidem (2,66 g, 6,56 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,413 g, 0,358 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (2,65 g, 25,03 mmol) ve vodě (25 ml). Reakční směs se míchá po dobu 24 hodin při teplotě 80°C. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Přidá se dichlormethan (100 ml) a IN hydroxid sodný (50 ml). Produkt vyprecipituje z vodné vrstvy, která se zahušťuje za sníženého tlaku. Výsledný pevný podíl se promyje velkým množstvím dichlormethanu a ethylacetátu. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá 2,218 g (77%) čistého V2-[4-(4amino-l-tetrahydro-1 V-3-pyrrolyl-l V-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyíěnyl]-lmethyl-1 V-2-indolkarboxamidu.

‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,443 (s, 1H), 8,256 (s, 1H), 8,1168-8,0965 (d, 1H, J =

8,12 Hz), 7,7181-7,6983 (d, 1H, J = 7,92 Hz), 7,598-7,5778 (d, 1H, J = 8,08 Hz), 7,3497,291 (m, 4H), 7,171-7,132 (m, 1H), 5,332-5,313 (m, 1H), 4,041 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,224-3,058 (m, 3H), 2,926-2,910 (m, 1H), 2,213-2,158 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t2,09 min (100%), MH⁺ 483,3.

Příklad 854:

N2-[4-(4-amino-1 - {1 -[(1-methyl-1 V-2-imidazolyl)methyl]tetrahydro-1V-3-pyrrolyl} -1Hpyrazolo [3,4-</]pyrimi din-3 -y l)-2 -methoxyfenyl] -1 -methyl-1 V-2-indolkarboxami d

Suspenze A^A2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l V-3-pyrrolyl-l V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-lV-2-indolkarboxamidu (0,250 g, 0,518 mmol) v dichlorethanu (5 ml) se nechá reagovat s l-methyl-2-imidazolkarboxaldehydem (0,115 g, 1,04 mmol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,220 g, 1,04 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá hydroxid sodný (IN, 15 ml) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (200 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% methanolu v dichlormethanu (15 min), 15% methanolu v dichlormethanu (15 min), 20% methanolu v dichlormethanu (20 min) a 50% methanolu v dichlormethanu (5 min) jako eluentu, čímž se získá 0,060 g ··» ·♦···· ·· · ·· ·· ··

708 (20%) čistého V2-[4-(4-amino-l-{l-[(l-methyl-lV-2-imidazolyl)methyl]tetrahydro-lV-3pyrrolyl} -1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl)-2-methoxy fenyl]-l-methyl-1 V-2-indolkarboxamidu.

*H NMR (DMSO-dé, 400MHz) δ 9,446 (s, IH), 8,249 (s, IH), 8,1312-8,1108 (d, IH, J =

8,16 Hz), 7,72077,7008 (d, IH, J = 7,96 Hz), 7,6023-7,5812 (d, IH, J = 8,44 Hz), 7,3567,293 (m, 4H), 7,174-7,120 (m, 2H), 6,822 (s, IH), 5,425-5,391 (m, IH), 4,044 (s, 3H), 3,962 (s, 3H), 3,693 (m, 2H), 3,651 (s, 3H), 2,86-2,797 (m, 3H), 2,368-2,323 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,34 min (100%), MH⁺ 577,3.

Příklad 855:

N2-{4- [4-amino-1 -(1 -isopropyltetrahydro-1V-3 -pyrrolyl)-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3yl]-2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid

Suspenze V2- [4-(4-amino-1 -tetrahydro-1 V-3 -pyrrolyl-1 V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-lV-2-indolkarboxamidu (0,250 g, 0,518 mmol) v dichlorethanu (5 ml) se nechá reagovat acetonem (1,96 g, 33,15 mmol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,220 g, 1,04 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá hydroxid sodný (IN, 15 ml) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (200 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% methanolu v dichlormethanu (15 min), 15% methanolu v dichlormethanu (15 min), 20% methanolu v dichlormethanu (20 min) a 50% methanolu v dichlormethanu (5 min) jako eluentu, čímž se získá 0,123 g (44%) čistého V2- {4- [4-amino-1 -(1 -isopropyltetrahydro-1 V-3 -pyrrolyl)-1 V-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamidu.

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,449 (s, IH), 8,265 (s, IH), 8,127-8,1068 (d, IH, J = 8,08 Hz), 7,7196-7,6999 (d, IH, J = 7,88 Hz), 7,60137,5803 (d, IH, J = 8, 4 Hz), 7,3517,299 (m, 4H), 7,173-7,135 (m, IH), 5,394 (m, IH), 4,042 (s, 3H), 3,961 (s, 3H), 2,793 (m, 3H), 2,337 (m, 3H), 1,068 (br, s, 6H);

tt 9 9 9·

9

709

LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 08 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,38 min (100%), MH⁺ 525,3.

Příklad 856:

V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-lV-3-pyrrolyl]-lV-pyrazolo[3,4č/lpyrimidin-3 -yl} -2-methoxy fenyl)-1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid

Suspenze V2-[4-(4-amino-1-tetrahydro-l V-3-pyrrolyl-1 V-pyrazolo [3,4-ďjpyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-lV-2-indolkarboxamidu (0,250 g, 0,518 mmol) v dimethylformamidu (5 ml) se nechá reagovat s 2-bromethyl(methyl)etherem (0,079 g, 0,569 mmol) a uhličitanem draselným (0,143g, 1,04 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 65°C po dobu 18 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá voda (25 ml). Vzniklý precipitát se filtruje a suší v lyofilizátoru. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% methanolu v dichlormethanu (15 min), 15% methanolu v dichlormethanu (15 min), 20% methanolu v dichlormethanu (20 min) a 50% methanolu v dichlormethanu (5 min) jako eluentu, čímž se získá 0,082 g (29%) čistého V2-(4- {4-amino-l- [ 1 -(2-methoxy ethyl)tetrahydro-1V-3 -pyrrolyl] -IVpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-l V-2-indolkarboxamidu.

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,447 (s, 1H), 8,265 (s, 1H), 8,1278-8,1075 (d, 1H, J =

8,12 Hz), 7,7192-7,6993 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,5996-7,5799 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,3497,295 (m, 4H), 7,172-7,133 (m, 1H), 5,42 (m, 1H), 4,042 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,479 (m, 2H), 3,266-3,258 (m, 3H), 2,95-2,60 (m, 4H), 2,332 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 to 0,5 ml/min) R_t 2,34 min (100%), MH⁺541,3.

Příklad 857:

V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 V-4-imidazolylmethy l)tetrahydro-1 V-3 -pyrrolyl]-1 V-pyrazolo [3,4í(]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid

Suspenze V2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l V-3-pyrrolyl-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-!-methyl- 1V-2-indolkarboxamidu (0,200 g, 0,415 mmol) v

• * · • · · · β

710 dichlorethanu (5 ml) se nechá reagovat s 4-formylimidazolem (0,08 g, 0,83 mmol) a triacetoxyborohydridem sodným (0,176 g, 0,83 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá hydroxid sodný (IN, 15 ml) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (200 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% methanolu v dichlormethanu (20 min), 15% methanolu v dichlormethanu (10 min), 20% methanolu v dichlormethanu (10 min) a 50% methanolu v dichlormethanu (8 minut) jako eluentu, čímž se získá 0,074 g (25%) čistého V2-(4-{4-amino-1 -[1-(1 A-4-imidazolylmethyl)tetrahydro-1 A-3-pyrrolyl] 1 A-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamidu.

‘H NMR (DMSO-dé,400 MHz) δ 9,446 (s, 1H), 8,252 (s, 1H), 8,126-8,1082 (d, 1H, J =

8,16 Hz), 7,7198-7,7 (d, 1H, J = 7,92 Hz), 7,6-7,569 (m, 2H), 7,35-7,298 (m, 4H), 7,1717,134 (m, 1H), 6,946 (s, 1H), 5,422-5,385 (m, 1H), 4,043 (s, 3H), 3,961 (s, 3H), 3,691 (s, 2H), 3,175-3,162 (m, 2H), 2,9-2,883 (m, 3H), 2,385-2,332 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t

2,13 min (100%), MH⁺ 563,3.

Příklad 858:

N2-[4-(4-amino-1 - {1 -[(3 -methyl-1 A-4-pyrazolyl)methyl]tetrahydro-1 A-3 -pyrrolyl} -1Apyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-y 1)-2 methoxyfenyl]-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Suspenze N2-[4-(4-amino-1 -tetrahydro-1 A-3-pyrrolyl-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-lA-2-indolkarboxamidu (0,200 g, 0,415 mmol) v dichlorethanu (5 ml) se nechá reagovat s 3 -methyl- lA-pyrazol-4-karboxaldehydem (0,091 g, 0,83 mmol) a triacetoxyborohydridem sodným (0, 176 g, 0,83 mmol). Reakční směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin pod atmosférou dusíku. Do reakční směsi se přidá hydroxid sodný (IN, 15 ml) a směs se míchá po dobu 1 hodiny. Organická vrstva se odstraní za sníženého tlaku a přidá se dichlormethan. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (100 ml) a ethylacetátem (100 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku. Surová látka se

711 čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% methanolu v dichlormethanu (15 min), 15% methanolu v dichlormethanu (10 min), 20% methanolu v dichlormethanu (10 min) a 50% methanolu v dichlormethanu (8 minut) jako eluentu, čímž se získá 0,106 g (44%) čistého V2-[4-(4-amino-l{l-[(3-methyl-lA-4-pyrazolyl)methyl] tetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl} -1 A-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3 -yl)-2-methoxyfenyl] -1 -methyl1 A-2-indolkarboxamidu.

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,446 (s, ÍH), 8,247 (s, ÍH), 8,1275-8,1071 (d, ÍH, J =

8,16 Hz), 7,72-7,7003 (d, ÍH, J = 7,96 Hz), 7,6004-7,5793 (d, ÍH, J = 8,44 Hz), 7,3987,286 (m, 5H), 7,172-7,134 (m, ÍH), 5,379 (m, ÍH), 4,0443 (s, 3H), 3,962 (s, 3H), 3,492 (m, 2H), 3,1 (m, ÍH), 2,75 (m, 3H), 2,352-2,335 (m, 2H), 1,909 (s, 3H);

LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 m velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,17 min (100%), MH⁺ 577,3.

Příklad 859:

V2-(4- {4-amino-1 -[(3 A)-l-methyltetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl] -1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

A2-(4-{4-amino-l-[(3A)-l-methyltetrahydro-lA-3-pyrrolyl]-lA-pyrazolo[3,4č7]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z (5)-(-)-3pyrrolidinolu způsobem, který je podobný způsobu popsanému při přípravě rac-/V2-{4-[4amino-l-( 1 -methyltetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<Z]pyrimidin-3 -yl] fenyl} -5,7dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bílé pevné látky (0,195 g, 53%).

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 2,31-2,35 (m, 2 H), 2,32 (s, 3 H), 2,35 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,70-2,77 (m, 3 H), 3,05 (t, 1 H), 5,40 (m, 1 H), 6,80 (s, ÍH), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H);

RP-HPLC R_t 11,090 minut, 99% čistota: (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4, 5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z 455 (MH⁺).

712

Příklad 860:

V2-(4-{4-amino-l-[(3,S)-l-methyltetrahydro-lV-3-pyrrolyl]-l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidm3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

V2-(4- {4-amino-1 - [(3S)-1 -methyltetrahydro-1 H-3 -pyrrolyl]-1 V-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin se připraví z (7?)-(-)-3pyrrolidinolu způsobem, který je podobný způsobu popsanému při přípravě rac-V2-{4-[4amino-1 -(1 -methyltetrahydro-1V-3 -pyrrolyl)-1 V-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3 -yl] fenyl} 5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-aminu. Sloučenina se připraví ve formě bílé pevné látky (0,126 g, 20%).

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) 2,31-2,35 (m, 2 H), 2,31 (s, 3 H), 2,35 (s, 3H), 2,40 (s, 3 H), 2,67-2,76 (m, 3 H), 3,05 (t, ÍH), 5,40 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,84 (s, ÍH).

RP-HPLC R_t 11, 129 minut, 100% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3, 9 mm sloupec); m/z 455 (MH⁺).

Příklad 861:

rac-V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahydro-lV-3-pyrrolyl]-lV-pyrazolo[3,4J]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-7-isopropyl-5 -methy 1-1,3 -benzoxazol-2-amin rac-V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)tetrahy dro-1 V-3-pyrrolyl] -1 Vpyrazolo [3,4-</jpyrimidin-3-yl}fenyl)-7-ispropyl-l,3 -benzoxazol-2-amin se připraví z rac3-jod-1 - [ 1 -(2-methoxy ethyljtetrahydro-1 V-3 -pyrrolyl] -1 V-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-4aminu (0, 200 g, 0, 515 mmol) a V2-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-7-isopropyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0, 244 g, 0, 644 mmol) podle způsobu použitého pro přípravu cz.s-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lVpyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-fluorfenyl)-1,3 -benzoxazol-2-amin. Sloučenina se připraví ve formě bělavé pevné látky (0, 067 g, 25%).

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 1,361 (d, 6 H), 2,30 (m, 2 H), 2,66 (m, 2 H), 2,76-2,83 (m, 3 H), 3,17 (t, 1 H), 3,24 (s, 3 H), 3,38 (m, 1 H), 3,45 (t, 2 H), 5,37 (m, 1 H), 7,04 (d, 1 H), 7,18 (t, 1 H), 7,32 (d, 2 H), 7,67 (d, 2 H), 7,95 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,88 (s, 1 H);

713

RP-HPLC R_t 12,337 minut, 94% čistota: (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amonný, pufrovaný na pH 4,5, v průběhu 20 minut při 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak Cl8,300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm sloupec); m/z 513 (MH⁺).

Příklad 861:

Cz's-ethyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lApyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-1 -cyklohexankarboxylát

3-Jod-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (0,52 g, 2,0 mmol), ethyl-4hydroxycyklohexankarboxylát (0,806 ml, 5,0 mmol, trifenylfosfin (1,05 g, 4,0 mmol), diethyl-azodikarboxylát (0,628 ml, 4,0 mmol) se suspendují v tetrahydrofuranu (15 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě pod jemný tlakem dusíku po dobu 48 hodin. Směs se zředí vodou (50 ml) a extrahuje ethylacetátem (3 x 50 ml). Organická frakce se spojí, suší nad síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje. Zbytek se opatrně purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu (100% ethylacetát), čímž se získá ethyl-4-(4-amino-5jod-7A-pyrrolo[3,4-ri]pyrimidin-7-yl)-l-cyklohexankarboxylát ve formě směsi cis- a transdiastereoizomerů společeně s trifenylfosfinoxidem. Repurifikací směsi zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu deaktivovaného triethylaminem (0,5 % methanol/dichlormethan ve formě eluant) se získá požadovaný cz.s-ethyl-4-(4-amino-5-jod7//-pyrrolo[3,4-ri]pyrimidin-7-yl)-l-cyklohexankarboxylát ve formě žluté pevné látky (0,260 g, 0,625 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 8p Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,55 min; MS (MH/416.

Czs-ethyl-4-(4-amino-5-jod-7A-pyrrolo[3,4-</]pyrimidin-7-yl)-lcyklohexankarboxylát (0,10 g, 0,24 mmol) se smíchá s V-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminem (0,088 g, 0,24 mmol), uhličitanem sodným (0,064 g, 0,60 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)-palladiem (0) (0,014 g, 0,012 mmol), dimethyletherem ethylenglykolu (2 ml) a vodou (1 ml) a směs se zahřívá při teplotě 85°C v utěsnitelné Schlenkově nádobě po dobu 14 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu, zředí vodou (10 ml) a extrahuje 10% methanolem v dichlormethanu (3 x 20 ml). Organická frakce se spojí, suší nad síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje. Purifikací produktu zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu deaktivovaného • ·· · ·««· ·· · · · .......

• · ......

• .... .. .

714 triethylaminem (2,5% methanol/dichlormethan ve formě eluant) se získá cz.s-ethyl-4-(4amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-177-pyrazolo[3,4z/]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexankarboxylát ve formě bílé pevné látky (0,040 g, 0,076 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS Cl 8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 12,63 min.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,92 (d, 2H), 7,64 (d, 2H),

7.11 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,66 (m, 1H), 4,10 (qt, 2H), 3,27 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s,

3H), 2,08 (m, 6H), 1,61 (m, 2H), 1,20 (t, 3H).

Příklad 862:

Cz.s-methyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l/Ypyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)-1 -cyklohexankarboxylát

Cz',s-ethyl-4-(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl }-177pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexankarboxylát (0,030 g, 0,057 mmol), methoxid sodný (0,0033 g, 0,063 mmol) a methanol (2 ml) se smíchají a zahřívají v utěsnitelné Schlenkově nádobě po dobu 48 hodin při teplotě 75°C. Purifikaci produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 15,6-16,5 min) se získá cz\-methyl-4-(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -177pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexankarboxylát ve formě bílého prášku (0,010 g,

0,020 mmol):

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 11,82 min;

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,92 (d, 2H), 7,65 (d, 2H),

7.12 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,67 (m, 1H), 3,63 (s, 3H), 3,27 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s,

3H), 2,07 (m, 6H), 1,61 (m, 2H).

Příklad 863:

Cz.s-4-(4-amino-3- {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -177-pyrazolo [3,4í/jpyrimidin- 1 -yl)-1 -cyklohexankarboxylová kyselina • · · · • «

715

Cz'5^,-ethyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-177pyrazo-lo[3,4-<7]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexankarboxylát (0,10 g, 0,19 mmol), vodný roztok hydroxidu sodného (1 M, 2 ml, 2 mmol) a methanol (2 ml) se smíchají a zahřívají pod chladičem při teplotě 70°C po dobu 14 hodin. Zbytek se okyselí vodnou kyselinou chlorovodíkovou (3 M, 2 ml, 6 mmol) a extrahuje směsí 10% methanol/dichlormethan (3 x 20 ml). Spojená organická frakce se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a koncentruje. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 21 mm sloupec, R_t 8,8-10,9 min) se získá czs-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol2-yl)amino]fenyl}-177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexankarboxylová kyselina ve formě krémově zbarveného prášku (0,026 g, 0,052 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při průtoku 1 ml/min za použití sloupce 5μ Hypersil HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 9,03 min; MS (MH)⁺ 498.

Příklad 864:

Cis-1 -[4-(4-Methylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinylamino)fenyl]-177pyrazolo[3,4-ó7]pyrimidin-4-amin

4-Bromanilin (0,300 g, 1,74 mmol) a 2-chlorpyrimidin (0,200 g, 1,74 mmol) se zahřívají při teplotě 150°C v 25 ml baňce po dobu 2 hodin. Reakční směs se ochladí pokojovou teplotu a purifikací zbytku na preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití sloupce 8 μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm sloupec, R_t 13,8-15,9 min) se získá 7V-(4-bromfenyl)-V-(2pyrimidinyljamin ve formě žluté pevné látky (0,135 g, 0,54 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS 08,250 x 4,6 mm sloupec) R_t 11,08 min;

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,78 (s, 1H), 8,50 (d, 2H), 7,76 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 6,87 (t, 1H).

V-(4-Bromfenyl)-V-(2-pyrimidinyl)amin se konvertuje na požadovanou sloučeninu způsobem, který je podobný způsobu popsanému při přípravě cz'.s--/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ó/jpyrimidin-3 -yl} fenyl)-4-ethyl-1,3thiazol-2-aminu. Purifikací produktu preparativní HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 20 minut při 21 ml/min za použití 8 μ Hypersilu HS • * • · • ·

716

C18, 250 x 21 mm sloupec, R_t 4,0-5,0 min) se získá czs-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-3 - [4-(2-pyrimidinylamino)fenyl]-1 V-pyrazolo [3,4/]pyrimidin-4-amin ve formě bílého prášku (0,095 g, 0,196 mmol);

RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodném octanu amonném v průběhu 10 minut při 1 ml/min za použití 5μ Hypersilu HS Cl8, 250 x 4,6 mm sloupec) R_t 5,38 min; MS (MH)⁺ 485.

Příklad 865:

A2-(4-{4-amino-1-[2-(4-methylpiperazino)-4-pyridyl]-1 V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl} 2-methoxyfenyl)-1 V-2-indolkarboxamid-acetát

A. l-(2-Chlor-4-pyridyl)-3-jod-l V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-amin

Roztok 3-jod-l Vpyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (4,12 g, 0,016 mol) v N,Ndimethylformamidu (50 ml) se nechá reagovat s 60% hydridem sodným v oleji (0,75 g, 0,019 mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá po dobu 15 minut a přidá se 2-chlor-4nitropyridin (3,00 g, 0,019 mol). Směs se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 18 hodin. Směs se ochladí na pokojovou teplotu a precipitát se filtruje, promyje

A, A-dimethylformamidem (20 ml), pak míchá v ethylacetátu (50 ml) po dobu 4 hodin. Pevný podíl se filtruje a suší za vakua, čímž se získá l-(2-chlor-4-pyridyl)-3-jod-lVpyrazolo[3,4-/|pyrimidin-4-amin (2,39 g, 0,009 mol) ve formě hnědé pevné látky:

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,52 (d, IH), 8,43 (s, IH), 8,40 (d, IH), 8,25 (dd, IH); RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,29 minut;

MS: MH⁺ 373.

B. A2- {4- [4-amino-1 -(2-chlor-4-pyridyl)-1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl } -1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid

Suspenze 1 -(2-chlor-4-pyridyl)-3-jod-lV-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-4-aminu (0,95 g, 0,00256 mol) v dimethoxyethanu (30 ml) a vodě (60 ml) se nechá reagovat s A2-[2methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-l-methyl-lV-2indolkarboxamidem (1,14 g, 0,00281 mol), uhličitanem sodným (0,68 g, 0,00640 mol) a tetrakis(trifenylfosfin)palladiem (0,30 g, 0,00026 mol) při teplotě 80°C po dobu 3 dnů, pevný podíl se filtruje a promyje vodou, trituruje ethylacetátem (75 ml) po dobu 6 hodin, • · · • · · · · ·

717 filtruje a promyje ethylacetátem (20 ml). Pevný podíl se pak trituruje methanolem (75 ml) po dobu 6 hodin a filtruje, promyje methanolem (20 ml) a suší za vakua, čímž se získá surový N2-{4-[4-amino-1 -(2-chlor-4-pyridyl)-1 A-pyrazolo [3,4-/Jpyrimidin-3-yl] -2methoxyfenyl}-l-methyl-lA-2-indolkarboxamid (0,672 g, 0,00128 mol) ve formě hnědé pevné látky:

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,48 (s, 1H) 8,55-8,58 (m, 2H), 8,50 (s, 1H), 8,44 (dd, 1H), 8,21 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,49 (d, 1H), 7,43 (dd, 1H), 7,31-7,38 (m, 2H), 7,16 (t, 1H), 4,05 (s, 3H), 4,00 (s, 1H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, izokraticky při 95% po dobu 3 minut, 1 ml/min) R_t 12,70 minut;

MS: MH⁺ 525.

C. A2-(4-{4-amino-l-[2-(4-methylpiperazino)-4-pyridyl]-lA-pyrazolo[3,4-úQpyrimidin-3yl} -2-methoxyfenyl)-1 A-2-indolkarboxamid-acetát

Suspenze A2-{4-[4-amino-l-(2-chlor-4-pyridyl)-lA-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3yl]-2-methoxyfenyl}-l-methyl-1 A-2-indolkarboxamidu (0,120 g, 0,00023 mol) v 1-methylpiperazinu (5 ml) se zahřívá při teplotě 120°C po dobu 5 dnů. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se míchá v diethyletheru (25 ml) po dobu 4 hodin. Směs se filtruje, promyje diethyletherem (105 ml) a suší za vakua. Surová látka se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky po dobu 5 minut, pak 40%100% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 30 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá A2-(4-{4-amino-1-[2-(4methylpiperazino)-4-pyridyl] -1 A-pyrazolo [3,4-/]pyrim idin-3 -yl} -2 -methoxyfenyl)-1A-2 indolkarboxamid-acetát (0,030 g, 0,00005 mol) ve formě bílé pevné látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 9,47 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,12 (d, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,30-7,37 (m, 3H), 7,26 (d, 1H), 7,15 (t, 1H), 4,06 (s, 3H), 3,50-3,58 (m, 4H), 2,38-2,46 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,91 (s, 3H);

RP-HPLC (Delta Pak Cl 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 15,33 minut;

MS: MH⁺ 575.

• ·

718

Příklad 866:

V2-{4-[4-amino-l-(2-morfolino-4-pyridyl)-l A-pyrazolo[3,4-</]pyriniidin-3-yl]-2methoxyfenyl} -1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Suspenze N2-{4-[4-amino-1 -(2-chlor-4-pyridyl)-1 A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3yl]-2-methoxyfenyl}-l-methyl-ΙΑ-2-indolkarboxamidu (0,120 g, 0,00023 mol) a morfolinu (10 ml) se zahřívá při teplotě 100°C po dobu 6 dnů. Rozpouštědlo se odstraní za vakua a zbytek se míchá ve vodě (25 ml) po dobu 4 hodin. Směs se filtruje a surový pevný podíl se čistí preparativní RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 35%-80% acetonitril-0,050 M octan amonný v průběhu 20 minut, 21 ml/min), acetonitril se odstraní za vakua a vodná směs se lyofilizuje, čímž se získá V2-{4-[4-amino-l-(2-morfolino-4pyridyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-1-methyl-1A-2indolkarboxamid (0,048 g, 0,00008 mol) ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,48 (s, IH), 8,44 (s, IH), 8,27 (d, IH), 8,18 (d, IH), 7,82 (d, IH), 7,74 (dd, IH), 7,72 (d, IH), 7,60 (d, IH), 7,46 (d, lh), 7,41 (dd, IH), 7,36 (s, IH), 7,34 (t, IH), 7,16 (t, IH), 4,05 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 3,72-3,78 (m, 4H), 3,49-3,56 (m, 4H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 20 minut, 1 ml/min) R_t 17,89 minut;

MS: MH⁺ 576.

Příklad 867:

(S)-/V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-methoxyethyl)-3 -piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin A. (/?)-7i?rc-buty 1-3-hydroxy-1 -piperidinkarboxylát

Směs (7?)-3-hydroxy-piperidin-hydrochloridu (10 g, 0,073 mol), di-fórc-butyldikarbonátu (20 g, 0,091 mol) a uhličitanu sodného (19 g, 0,182 mol) v dioxanu (80 ml) a vodě (80 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vodná vrstva se extrahuje diethyletherem (2 x 200 ml). Organická vrstva se promyje solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá čirý olej (R)-terc• · · ·

719 butyl-3-hydroxy-l-piperidinkarboxylát (17,6 g, 0,087 mol). Surový produkt se použije v následující reakci.

*H NMR (Chloroform-í/, 400 MHz) δ 3,76 (m, ÍH), 3,67 (br, ÍH), 3,55 (br, ÍH), 2,92 (m, 2H), 2,75 (s, ÍH), 1,85 (br, ÍH), 1,72 (br, ÍH), 1,46 (br, 11H). GC-MS: MH⁺ 202

B. (Sj-7erc-butyl-3-(4-amino-3-jod-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-1 -piperidinkarboxylát

Do směsi 3-jod-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (2 g, 0,0077 mol), (Rftercbutyl-3-hydroxy-l-piperidinkarboxylátu (2,3 g, 0,012 mol) a trifenylfosfinu (3 g, 0,012 mol) v tetrahydrofuranu (70 ml) se při teplotě 0°C přidá diethyl-azodikarboxylát (2 g, 0,012 mol). Směs se kvůli dotažení reakce do konce míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 2 dnů. Do směsi se další (7?)-/vrc-butyl-3-hydroxy-lpiperidinkarboxylát (0,62 g, 0,003 mol), trifenylfosfin (0,81 g, 0,012 mol) a diethylazodikarboxylát (0,6 g, 0,003 mol). Směs se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku dalších 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, čímž se získá surový (5j-/erc-buty 1-3-(4-amino-3-j od-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-piperidinkarboxylát, který se surový použije v následující reakci.

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 10,0 minut.

MS: MH⁺ 445.

C. Acetát (5)-3-jod-1 -(3-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu

Do směsi (5)-terc-butyl-3-(4-amino-3-jod-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-lpiperidinkarboxylátu (3,4 g, 0,0077 mol) v acetonu (80ml) se při pokojové teplotě přidá 6N vodný roztok chlorovodíku (20 ml). Směs se míchá při teplotě 45°C po dobu 4 hodin, pak při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Aceton se odstraní za sníženého tlaku a vodná vrstva se promyje toluenem (2 x 20 ml) a dichlormethanem (2 x 20 ml). Vodná vrstva se alkalizuje 5N vodným roztokem hydroxidu sodného (25 ml) při teplotě 0°C. Vodná vrstva se koncentruje do sucha a zbytek čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 2%-30% v průběhu 15 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá acetát (5)-3-jod-l-(3-piperidyl)-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,75 g, 0,0019 mol).

720

RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,2 minut.

MS: MH⁺ 345.

D. (S)-3-jod-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amin

Do směsi acetátu (S)-3-j od-1 -(3 -piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-aminu (0,75 g, 0,0019 mol) a uhličitanu draselného (0,77 g, 0,00568mol) v A A-dimethylformamidu (30 ml) se přidá 2-bromethyl(methyl)ether (0,27 g, 0,0019 mol) a jodid draselný (0,0016 g, 0,000095 mol) při pokojové teplotě. Směs se míchá při teplotě 65°C pod atmosférou dusíku po dobu 16 hodin. Reakční směs se ochladí na pokojovou teplotu a přidá se 2-bromethyl(methyl)ether (0,27 g, 0,0019 mol) a jodid draselný (0,0016 g, 0,000095 mol). Směs se míchá při teplotě 65°C pod atmosférou dusíku po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (25 ml) a dichlormethan (50 ml). Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (4 x 50 ml). Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku a zbytek se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl 8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 2%-30% v průběhu 15 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá acetát (S)-3-jod-l-[l-(2methoxyethyl)-3-piperidyl]-l A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-4-aminu (0,64 g, 0,0014 mol). RP-HPLC (Hypersil Cl8, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,9 minut.

MS:MH⁺403.

E. (S)-A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4-//]pyrimidin3 -yl} fenyl)- 5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol -2-amin

Směs acetát (5)-3-jod-1 -[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-4-aminu (0,64 g, 0,0014 mol), A-(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]aminu (0,64 g, 0,00175 mol, 1,2 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,081 g, 0,00007 mol) a uhličitanu sodného (0,37 g, 0,0035 mol) v A A-dimethylformamidu (15 ml) a vodě (7 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 16 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu (25 ml) a dichlormethan (50 ml). Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí solankou a suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědla se • ·

721 zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá nahnědlý olej, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 2 % - 10 % methanol/dichlormethan jako mobilní fáze, čímž se získá (5)-V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-methoxyethyl)-3-piperidyl]1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl }fenyl)-5,7-dimethyl-l ,3-benzoxazol-2-amin (0,60 g, 0,0012 mol).

'H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,85 (s, IH), 8,25 (s, IH), 7,93 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,11 (s, IH), 6,80 (s, IH), 4,77 (br, IH), 3,36 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 3,04 (br, IH), 2,90 (br, IH), 2,55 (br, 2H), 2,54 (br, IH), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,02 (br, 3H), 1,80 (br, IH),

1.70 (br, IH).

RP-HPLC (Delta Pak Cl8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) Rt 11,9 minut.

MS: MH⁺513.

Příklad 868:

Cis-2-(4- {4-amino-1 - [4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl} anilino)-1,3-benzoxazol-5-karboxamid-triacetát

Do směsi cz5^,-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-y 1} anilino)-1,3-benzoxazol-5 -karbonitril-triacetátu (0,18 g, 0,00025 mol) v dioxanu (2 ml) se přidá 2N vodný roztok hydroxidu sodného (1,25 ml, 0,0025 mol) a vody (0,75 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 minut pod atmosférou dusíku, pak se přidá 30 % roztok peroxidu vodíku (0,2 ml). Směs se refluxuje po dobu 5 hodin, pak míchá při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Do směsi se přidá další 30 % roztok peroxidu vodíku (0,2 ml), směs se refluxuje dalších 6 hodin a míchá při pokojové teplotě po dobu 2 dnů. Organické rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a kvůli udržení pH 7 se přidá 5 % roztok kyseliny citrónové. Vodná vrstva se odstraní za sníženého tlaku a surový produkt se čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS Cl8, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-l 00 % v průběhu 25 minut s 0,1 M octanem amonným, 21 ml/min), čímž se získá cis-2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl}anilino)-l,3-benzoxazol-5-karboxamid-triacetát (0,11 g, 0,00015 mol).

*H NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,30 (s, IH), 8,15 (s, IH), 8,00 (m, 3H), 7,75 (m, IH),

7.70 (m, 2H), 7,60 (d, IH), 7,35 (br, IH), 4,80 (br, IH), 2,50 (br, 2H), 2,40 (br, 4H), 2,25 (br, 4H), 2,15 (s, 3H), 2,10 (br, 3H), 1,90 (s, 9H), 1,70 (br, 2H), 1,60 (br, 2H).

• · · • · · ·

722

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,1 M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,2 minut.

MS: MH⁺ 567.

Příklad 869:

VI - {4- [4-Amino-1 -(4-oxocyklohexyl)-1 V-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfeny 1}-2-íluor-4-trifluormethylbenzamid

Roztok 2-fluor-4-trifluormethyl-l-benzenkarbonylchloridu (0,87 g, 3,83 mmol) v dichlormethanu (5 ml) se přidá do směsi pyridinu (15 ml) a 4-[4-amino-3-(4-amino-3methoxyfenyl)-l V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-l-yl]-l-cyklohexanonu (1,00 g, 2,56 mmol) v dichlormethanu (5 ml) při teplotě 0°C v průběhu 5 minut. Směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě přes noc. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a dichlormethan, dichlormethanová vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (2x) a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahušťuje za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi systému Isco, čímž se získá VI-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-IVpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,95 g, 1,76 mmol) ve formě bílé pevné látky:

723 ^]H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,99 (t, 1H),

7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 5,27 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,70 (m, 2H), 2,47 (m, 4H), 2,17 (m, 2H);

RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0, 05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 9,23 minut. MS: MiH⁺543.

Příklad 870:

Cis-Nl - {4- [4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2methoxyfenyl} -2-fluor-4-trifluormethy lbenzamid; a

Příklad 871:

Trans-Nl - {4- [4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl] -2methoxy feny 1} -2-fluor-4-trifluormethy lbenzamid

Morfolin (0,08 ml, 0,93 mmol) se přidá do směsi Vl-{4-[4-amino-l-(4oxocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4trifluormethylbenzamidu (0,42 g, 0,78 mmol) a octové kyseliny (0,11 ml, 1,86 mmol) v dichlorethanu (25 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 10 minut. Do směsi se • · * · • » • · · « ·

724 přidá triacetoxyborohydrid sodný (0,23 g, 1,09 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc, přidá se voda (6 ml), poté uhličitan sodný (0,38 g, 4,53 mmol). Směs se míchá po dobu 1 hodiny a organická vrstva se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (20 ml), spojené organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku, čímž se získá surový produkt, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi systému Isco, čímž se získá cz>Vl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl]2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,23 g, 0,37 mmol) a trans-N\-{4-[4amino-l-(4-morfolinocyklohexy 1)-1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxy fenyl} -2fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,09 g, 0,14 mmol) ve formě bílých pevných látek. Data pro czó'-jVl-{4-[4-amino-l-(4-morťolinocyklohexyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl} -2-fluor-4-trifluormethy lbenzamid:

’H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H),

Data pro trans-Nl-{4-[4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin3 -yl] -2-methoxyfenyl} -2-fluor-4-trifluormethy lbenzamid:

‘H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,99 (t, 1H),

Příklad 872:

Cz.s-ethyl-3-({4- [4-amino-3 -(4- {[2-fluor-4 trifluormethylbenzoyl] amino} -3 methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yljcyklohexyl} amino)propanoát; a

Příklad 873:

7ra«s-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4- {[2-fhror-4-trifhiormethylbenzoyl]amino} -3 methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ri]py rimidin-1 -yl] cyklohexyl} amino)propanoát

725

Podobným způsobem jako je způsob přípravy m-V2-{4-[4-amino-l-(4morfolinocyklohexyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4trifluormethylbenzamidu a trans-Nl - {4- [4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyl)-1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu se připraví c/5-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-z/)pyrimidin-1 -yljcyklohexyl}amino)propanoát a transethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3-methoxy fenyl)-1 Apyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yljcyklohexyl}amino)propanoát ve formě bílých pevných látek.

Data pro czs-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{ [2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxy fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yljcyklohexyl} amino)propanoát:

7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,37 (m, 1H), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,76 (m, 2H), 2,32 (m, 2H), 1,88 (m, 2H), 1,67 (m, 4H), 1,16 (t, 3H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0, 05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 7,92 minut. MS: MH⁺644.

Data pro /razz5-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4- {[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxy fenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyri midin-1 -yljcyklohexyl} amino)propanoát:

726 *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,89 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,24 (s, IH), 8,00 (t, IH),

7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,32 (s, IH), 7,29 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 4,68 (m, IH), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,82 (m, 2H), 2,46 (m, 5H), 1,91-2,07 (m, 6H), 1,18 (t, 3H);

RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm, 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 7,69 minut. MS: MH⁺644.

Příklad 874:

Vl-[4-(4-Aminno-l-trityl-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid

Směs 3-jod-l-trityl-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,10 g, 0,19 mmol), Vl-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-2-fluor-4trifluormethylbenzamidu (0,13 g, 0,29 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (0,01 g, 0,01 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,06 mg, 0,48 mmol) ve vodě (2 ml) a dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) se zahřívá při teplotě 85°C přes noc. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku, ke zbytku se přidá voda a směs se extrahuje ethylacetátem (3x). Spojené organické podíly se promyjí nasyceným vodným roztokem chloridu sodného roztok, suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují, čímž se získá hnědý pevný podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití systému Isco, čímž se získá Vl-[4-(4-amino-l-trítyl-lV-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,12 g, 0,17 mmol) ve formě bílé pevné látky:

• · · « ··· · · · · · · ···· ·· · · · · · • ······· · ··· ···· ·· · ·· · · · · ·

727 *H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,25 (d, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,00 (t, 1H),

7,94 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,24 (m, 15H), 3,90 (s, 3H); MS: MH⁺ 689.

Příklad 875:

Cis-3 -({4- [4-amino-3 -(4- {[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino} -3 -methoxy fenyl)-1Hpyrazolo[3,4-ó7]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanová kyselina

Směs cřs-ethy 1-3-( {4-[4-amino-3-(4- {[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino} -3methoxyfeny 1)-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -yl]cyklohexyl} amino)propanoátu (0,23 g, 0,36 mmol), p-dioxanu (15 ml), hydroxidu draselného (0,10 g, 1,81 mmol) a vody (1,5 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 3 hodin. Rozpouštědla se zahušťují a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá cÁs-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4trifluormethylbenzoyl] amino} -3 -methoxy fenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidin-1 yl]cyklohexyl}amino)propanová kyselina (0,11 g, 0,18 mmol) ve formě bílé pevné látky:

*H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,00 (t, 1H),

7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 6,89 (br, 2H), 4,79 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 2,46-3,00 (m, 7H), 2,29 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,80 (m, 2H);

RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 6,06 minut. MS: MH⁺616.

• · • · • · • · · · · · · • · · · · • · · · · · • ······· ·

728

Příklad 876:

Aans-3-({4-[4-amino-3-(3-methoxy-4-{[2-methoxy-4-trifluormethylbenzoyl]amino}fenyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanová kyselina

Směs /raz7.s-ethyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluor-4-trifluormethylbenzoyl]amino}-3methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-1 -yl]cyklohexyl} amino)propanoátu (0,04 g, 0,06 mmol), /?-dioxanu (4 ml), hydroxidu draselného (0,02 g, 0,31 mmol) a stopových množství methanolu a vody (0,4 ml) se zahřívá při teplotě 80°C po dobu 1 hodiny. Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc a při teplotě 80°C po dobu 4 hodin. Rozpouštědla se zahušťují a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá Zrms-3-({4-[4-amino-3-(3methoxy-4- {[2-methoxy-4-trifluormethylbenzoyl]amino} fenyl)-1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-l-yl]cyklohexyl}amino)propanová kyselina (0,04 g, 0,06 mmol) ve formě bílé pevné látky:

*H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,72 (s, ÍH), 8,61 (d, 1M, 8,28 (d, ÍH), 8,24 (s, ÍH), 7,61 (s, ÍH), 7,53 (d, ÍH), 7,33 (s, ÍH), 7,29 (d, ÍH), 4,72 (m, ÍH), 4,20 (s, 3H), 4,05 (s, 3H), 1,44-3,61 (m, 13H);

RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0, 05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 6,36 minut. MS: MH⁺628.

• · · · • · · · • · · ♦ · • ···«· · ·

729

Příklad 877:

Al-[4-(4-Amino-l A-pyrazolo[3,4-ó7]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid

Směs Al -[4-(4-amino-1 -trityl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (2,10 g, 1,75 mmol), 6 N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové (10 ml),/?-dioxanu (10 ml) a ethanolu (8 ml) se zahřívá při teplotě 50°C po dobu 6 hodin. Směs se filtruje a pevný podíl se promyje ethanolem, suší ve vakuové sušárně přes víkend a purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu, čímž se získá Al-[4-(4-amino-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4trifluormethylbenzamid (0,35 g, 0,78 mmol). Filtrát se koncentruje a purifikuje zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu a preparativní HPLC, čímž se získá stejný produkt Al[4-(4-amino-l A-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,67 g, 1,51 mmol) ve formě bílé pevné látky:

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 13,58 (s, 1H), 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,05 (t, lm, 7,90 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,24 (d, 1H), 3,94 (s, 3H); MS: MH⁺447.

Příklad 878:

Al - [4-(4-amino-l-tetrahydro-27/-4-pyranyl-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl)-2methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid ··· ·· · ··· ···· · · · ···· • ·····«· · ··· ····

Diethyl-azodikarboxylát (0,07 ml, 0,45 mmol) se přidá do směsi Vl-[4-(4-aminolA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (0,10 g, 0,22 mmol), trifenylfosfinu (0,12 g, 0,45 mmol) a tetrahydro-4A-pyran-4-olu (0,04 g, 0,34 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se tetrahydro-4A-pyran-4-ol (0,01 g, 0,11 mmol), trifenylfosfin (0,04 g, 0,15 mmol) a diethyl-azodikarboxylát (0,02 ml, 0,15 mmol) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 5 hodin. Rozpouštědla se zahušťují a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá ΛΤ -[4-(4-amino-1 -tetrahydro-2 A-4-pyranyl-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-3-yl)-2methoxyfenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,03 g, 0,06 mmol) ve formě bílé pevné látky:

‘H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,91 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,25 (s, IH), 8,00 (t, IH),

7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,34 (s, IH), 7,31 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 4,95 (m, IH), 4,02 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,56 (t, 2H), 2,22 (m, 2H), 1,89 (m, 2H); MS: MH⁺ 531.

Příklad 879:

VI -{4-[4-amino-1 -(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-1 V-pyrazolo[3,4-J|pyrimidin-3-yl]-2methoxy feny 1} -2-fluor-4-trifluormethy lbenzamid ··· ·· · · ♦ · ···· ·· * ···« • ······· · ··· · · ♦ · ··· · · · · · · · «· · ·· ·· ·· ·

A. 4-(4-Amino-3-jod-1 V-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-1 -yl)-2-cyklopenten-1 -ol

Směs tetrakis(trifenylfosfin)palladia (0,04 g, 0,03 mmol), 3-jod-lV-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-aminu (0,30 g, 1,14 mmol) a dimethylsulfoxidu (3 ml) se míchá při pokojové teplotě ve tmě po dobu 2 minut a ochladí na teplotu 0°C. Do směsi při teplotě 0°C se přidá roztok 2,4čz-dihydro-lčzV-cyklopenta[ů]oxirenu (0,14 g, 1,72 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) a směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 3 hodin. Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc a purifikuje preparativní HPLC, čímž se získá 4-(4-amino-3jod-17/-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidin-l-yl)-2-cyklopenten-l-ol (0,24 g, 0,70 mmol) ve formě bílé pevné látky: RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 4,23 minut. MS: MH⁺ 344.

B. Vl-{4-[4-Amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxy feny 1} -2-fluor-4-trifluormethylbenzamid

Směs 4-(4-amino-3 -j od-1 V-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidin-1 -yl)-2-cyklopenten-1 -olu (0,12 g, 0,35 mmol), VI-[2 -methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (0,23 g, 0,53 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladia (0,02 g, 0,02 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,11 g, 0,88 mmol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (6 ml) a vody (3 ml) při teplotě 85°C po dobu 6 hodin pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá Vl-{4-[4-amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-lV-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidin-3-yl]2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,18 g, 0,34 mmol) ve formě bílé pevné látky:

··· · · · ··· ···· ·· · ···· • ·····«· · ·«· ···· ·· · ·· ·· ·· ·

732 ’Η NMR (DMSO-dg, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,00 (t, 1H),

7,88 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 6,09 (d, 1H), 5,93 (d,

1H), 5,76 (m, 1H), 5,31 (m, 1H), 4,74 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,84 (m, 1H), 2,02 (m, 1H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-O, 05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 8,50 minut. MS:

MH⁺ 529.

Příklad 880:

Vl-{4-[4-Amino-l-(3-hydroxycyklopentyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl} -2-fluor-4-trifluormethy lbenzamid

Směs NI - {4-[4-amino-1 -(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamidu (0,10 g, 0,19 mmol) a 10% palladia na aktivním uhlí (0,03 g) v ethanolu (10 ml) se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou vodíku přes noc. Směs se filtruje a filtrát se čistí preparativní HPLC, čímž se získá Vl-{4-[4-amino-l-(3-hydroxycyklopentyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl}-2-fluor-4-trifluormethylbenzamid (0,07 g, 0,13 mmol) ve formě bílé pevné látky:

*H NMR (DMSO-d, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H),

7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 5,17 (m, 1H), 4,97 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 1,79-2,41 (m, 6H); MS: MH⁺ 531.

733

Příklad 881:

4-(4-Amino-3-{4-[(lV-2-indolylkarbonyl)amino]-3-methoxyfenyl}-lV-pyrazolo[3,4ďjpyrimidin-1 -yl) hexahydropyridinium-acetát

Oxalylchlorid (0,06 ml, 0,60 mmol) se přidá do roztoku indol-2-karboxylové kyseliny (0,88 g, 0,546 mmol) v dichlormethanu (5 ml) a tetrahydrofuranu (5 ml) při teplotě 0°C, pak se přidá AjV-dimethylforamid (3 kapky z 0,1 ml stříkačky) a směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Rozpouštědla a přebytek činidel se zahušťuje za sníženého tlaku. Zbytek se převede do dichlormethanu (2 ml) a výsledný roztok (1,25 ml) se přidá do roztoku terc-butyl-4-[4amino-3 -(4-amino-3 -methoxy fenyl)-1 V-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-1 -y 1] -1 -piperidinkarboxylátu (0,12 g, 0,27 mmol) a pyridinu (0,4 ml) v dichlormethanu (1 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Přidá se trifluoroctová kyselina (1 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Rozpouštědla se zahušťují za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá 4-(4-amino-3-{4-[(lV-2indoly lkarbonyl)amino] -3 -methoxyfenyl} -1 V-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl)hexahydropyridinium-acetát (0,07 g, 0,14 mmol) ve formě bílé pevné látky:

³H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 11,85 (br, IH), 9,45 (s, IH), 8,24 (d, IH), 8,12 (d, IH), 7,68 (d, IH), 7,48 (d, IH), 7,40 (s, IH), 7,35 (s, IH), 7,30 (d, IH), 7,24 (t, IH), 7,09 (t, IH), 4,77 (m, IH), 3,97 (s, 3H), 3,11 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,84 (m, 2H); MS:MH⁺483.

• · · · ·

734

Příklad 882-902:

K připravení sloučenin podle příkladů 882-902 se použije stejný způsob jako při přípravě 4-(4-amino-3 - {4- [(1 V-2-indoly lkarbonyljamino] -3 -methoxyfenyl} -1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrÍmidin-l-yl)hexahydropyridinium-acetátu (Příklad 881)

Struktura	MS: MH⁺	HPLC Rt (min) (Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 min, 1 ml/min)	Př. č.
	o	£	567	6,97	882
f wο,Ρ	o
n o		o A_o-
			486	5,89	883
o r*	0
& o		Λ
	O	497	6,28	884
o	0
n		Λ-
o

• · • · ·· · · · · ··· ·· · · · · · ·····«· · · · · ····· • · · ·· · · ·

735

✓		513	5,61	885
°v4* ®
μ SrV A	A-
Q
		497	6,39	886
ytK / n-4 C>f °
n yJ	9
%rN o	A_o-
9		512	6,22	887
n C> f ° rs XeSě/ úr* Vy ů	A-
y	1	483	5,73	888
V' o P o M yJ ιΑλ., t L Λ A	1 A-

• · • · · ·· ···· • · · · · · • · · · · · * • ······· · · • · · · · · · • · · · · · ·

736

	513	7,78	889
t O	Án O
n yd		0
1 J M γ		A-
	F		501	8,23	890
	Un
({Γ	o
m yJ		9
l¹ JL “		Av

	ct		517	8,7	891
N yJ ’ϊΓΑΓΑ γ A*	L-n O	A-
		»a	517	8,73	892
/ m-	u.n o
n yJ ^’ΡΓ'Ν ^VN*		A

737

Vn n aXA	V 0 A-	513	7,83	893
c		511	9,07	894
H z ^saY
, y o Γ* °
ψ yJ ¥xÍⁿ $	A
		497	8,37	895
μ < N~V O, f o F~S
N \=<^ T ín ’~'N⁴	A-
y	1 ⁶'	528	7,9	896
Ct
0 f* O 'jT^Tjm	X- o
Q

• · · · • · · · · • ····· · ·

738

ο,Γό xP R w ^Λ°' ó <_N*	559	9,5	897
	589	7,45	898
yN (Η*Ό Λ? ϊ w
Q
oA X?	561	4,52	899
Q J^*L> ťx> A- A
	483	6,35	900
OÁ n yd ” Ί- Sn

• · · · · · · ···· ·· · · • ····»·· · ···

739

ry	483	7,05	901
	589	6,63	902

A? 1 '‘-Ν'

Příklad 903:

4-[4-Amino-3-(4-{[(1-ethyl-l A-2-indolyl)karbonyl]amino}-3-methoxy feny 1)-1 Hpyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-1 -y l]hexahydropyridinium-acetát

Do roztoku N2-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -y 1 ]-2 methoxyfenyl}-ΙΑ-2-indolkarboxamidu (0,08 g, 0,14 mmol) v N, V-dimethylforamidu (1,0 ml) při teplotě 0°C se přidá hydrid sodný (60% suspenze v minerálním oleji) (0,006 g, 0,15 mmol). Směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Přidá se roztok ethyl-jodidu (0,02 g, 0,14 mmol) v /V,V-dimethylforamidu (0,5 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se ethyl-jodid (0,01 g, 0,07 mmol) a • · · ·

740 směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se trifluoroctová kyselina (3 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 24 hodin. Rozpouštědla a přebytek činidel se zahušťuje za sníženého tlaku a zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá 4-[4amino-3 -(4- {[(1 -ethyl-1 A-2-indoly)karbonyl]amino} -3-methoxyfenyl)-1 A-pyrazolo [3,4<y]pyrimidin-l-yl]hexahydropyridinium-acetát (0,05 g, 0,09 mmol) ve formě bílé pevné látky:

’H NMR (DMSO-dó, 400MHz) δ 9,43 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,14 (d, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,34 (s, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,15 (t, 1H), 4,96 (m, 1H), 4,62 (q, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,00 (m, 2H), 2,28 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,33 (t, 3H); MS: MH⁺ 511.

Příklad 904 až 908:

K připravení sloučenin podle příkladů 904-908 se použije stejný způsob přípravy jako byl použit k přípravě 4-[4-amino-3-(4-{[(l-ethyl-lA-2-indolyl)karbonyl]amino}-3methoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-l-yl]hexahydropyridinium-acetátu (Příklad 903).

Struktura	MS: MH⁺	HPLC R, (min) (Hypersil Cl8, 5 pm, ÍOOA, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průbéhu 10 min, 1 ml/min)	Př. č.
	o	523	9,12	904
/ M °
n y Č	A
		540	6,03	905
O A	o

w* o	A-

♦ · · * • · · · · « ··«·· * · • · · « · • · · ·*.·<· • · · · «

741

'ύ' Vt y í Ό O=( o	Vn O 0 A-	555	5,30	906
		627	6,55	907

°\v	o S·⁰ 0 2
h SA, o X -« Sr-N 0	Jv
		568	7,33	908
V á/o
w yj o A	o ........./

Příklad 909:

V2-4-[4-Amino-1 -(4-piperidyl)- lV-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl-5hydroxy-1 V-2-indolkarboxamid-acetát • · · · • 9 · » « · ♦ · ····

9 * 9 9 9 9 · » · · « ······· · · > * ·*»« ·· · »» · ♦ ·· *

742

Směs A2-4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl-5-(benzyloxy)-lA-2-indolkarboxamidu (0,08 g, 0,14 mmol), 10% palladia na aktivním uhlí (0,03 g) a triflurooctové kyseliny (1 kapka) v ethanolu (12 ml) a tetrahydrofuranu (12 ml) se hydrogenuje pod atmosférou vodíku přes noc. Směs se filtruje a filtrát se čistí preparativní HPLC, čímž se získá A2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-1Apyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxyfenyl-5 -hydroxy-1 A-2-indolkarboxamid-acetát (0,02 g, 0,03 mmol) ve formě bílé pevné látky:

¹H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) δ 11,55 (s, 1H), 9,29 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,18 (d, 1H), 7,31 (m, 3H), 7,18 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,78 (dd, 1H), 5,06 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,44 (m, 2H), 3,17 (m, 2H), 2,39 (m, 2H), 2,11 (m, 2H), 1,91 (s, 3H); MS: MH⁺ 499.

Příklad 910:

A2-4-[4-Amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl-4hydroxy-1 A-2-indolkarboxamid-acetát

K připravení zV2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl-4-hydroxy-l V-2-indolkarboxamid-acetátu se použije stejný způsob přípravy jako byl použit k připravení V2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl]-2-methoxyfenyl-5-hydroxy-lV-2-indolkarboxamid-acetátu.

RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 4,60 minut. MS: MH⁺499.

Příklad 911:

V2-4-[4-Amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl-7amino-1 V-2-indolkarboxamid-acetát

• β

Hydrosiřičitan sodný (0,07 g, 0,41 mmol) se přidá do horkého roztoku A2-4-[4amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl-7-nitro-lA-2indolkarboxamid-acetátu (0,04 g, 0,07 mmol) ve vodě (2 ml) a ethanolu (2 ml). Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu, přidá se jedna kapka koncentrované kyseliny chlorovodíkové a směs se čistí preparativní HPLC, čímž se získá A2-4-[4-amino-l-(4piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl]-2-methoxy fenyl-7-amino-1A-2indolkarboxamid-acetát (0,004 g, 0,01 mmol) ve formě bílé pevné látky:

RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6mm; 25%-100% acetonitril-0, 05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 6,60 minut. MS: MH⁺498.

Příklad 912:

N3 -4 - [4 - Amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl-1 A-3 indolkarboxamid-acetát

A. V3-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l V-3-indolkarboxamid

Do roztoku indol-3-karboxylové kyseliny (0,12 g, 0,72 mmol) v dichlormethanu (4 ml) a tetrahydrofuranu (3 ml) při teplotě 0°C se přidá oxalylchlorid (0,07 ml, 0,79 mmol), pak se přidá W-dimethylforamid (3 kapky z 0,1 ml stříkačky) a směs se míchá při teplotě 0°C po dobu 10 minut a při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Rozpouštědla a přebytek činidel se zahušťuje za sníženého tlaku. Zbytek se převede do dichlormethanu (2 ml) a výsledný roztok (1,5 ml) se přidá do roztoku 2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)anilinu (0,09 g, 0,36 mmol) a pyridinu (1 ml) v dichlormethanu (2 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě přes noc. Přidá se roztok chloridu kyseliny v dichlormethanu (0,3 ml) a směs se míchá přes noc, pak se přidá voda (1 kapka). Těkavé složky se zahušťují za sníženého tlaku. Zbytek se vytřepe mezi vodu a ethylacetát, vodná vrstva se separuje a extrahuje ethylacetátem. Organické extrakty se spojí a promyjí nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a suší nad síranem hořečnatým. Směs se filtruje a rozpouštědlo z filtrátu se zahušťuje, čímž se získá surový podíl, který se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi /7-heptan: ethyl acetát (2/1) jako mobilní fáze, čímž se získá /V3-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)ťenyl]-l V-3-indolkarboxamid (0,11 g, 0,28 mmol) ve formě bílé pevné látky :

'H NMR (CDC1₃, 400 MHz) δ 8,65 (m, 3H), 8,13 (d, ÍH), 7,95 (s, ÍH), 7,50 (m, 2H), 7,33 (m, 3H), 4,02 (s, 3H), 1,36 (s, 12H); MS: MH⁺ 393.

* · · · · · ·

746

Β. Ν3 -4-[4-Amino-l-(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1]-2-methoxyfenyl-1A3 -indolkarboxamid-acetát

Směs V3-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-lA-3indolkarboxamidu (0,11 g, 0,28 mmol), hydrochloridu 3-jod-1-(4-piperidyl)-1Apyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,10 g, 0,27 mmol), tetrakis(trifenyl-fosfin)palladia (0,02 g, 0,02 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,13 g, 1,07 mmol) se zahřívá ve směsi dimethyletheru ethylenglykolu (4 ml) a vody (2 ml) při teplotě 85°C přes noc pod atmosférou dusíku. Směs se nechá vychladnout na pokojovou teplotu a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá V3-4-[4amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4 -<7]pyrimidin-3 -yl] -2 -methoxyfenyl -1 H-3 indolkarboxamid-acetát (0,09 g, 0,16 mmol) ve formě bílé pevné látky:

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,83 (br, IH), 8,92 (s, IH), 8,31 (m, 3H), 8,14 (dd, IH), 7,50 (dd, IH), 7,31 (m, 2H), 7,20 (m, 2H), 4,82 (m, IH), 3,99 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 2,73 (m, 2H), 2,15 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,88 (m, 2H); MS: MH⁺ 483.

Příklad 913:

V4-4- [4-Amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl-1A-4indolkarboxamid-acetát

K připravení V4-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl-lA-4-indolkarboxamid-acetátu se použije stejný způsob přípravy jako byl * · • · · · · · ······· · · · • · · · *

747 použit při přípravě /V3-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl-1H-3 -indolkarboxamid-acetátu.

RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil Cl8, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amonný v průběhu 10 minut, 1 ml/min) R_t 4,80 minut. MS: MH⁺483.

Příklad 914:

7ra«.5-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-177-2-indolkarboxamid

A. 1 -Methyl-177-2-indolkarbony lchlorid

Suspenze l-methylindol-2-karboxylové kyseliny (9,87 g, 56,4 mmol) v dichlormethanu (150 ml) se nechá reagovat s oxalylchloridem (8, 58 g, 67,63 mmol), přidá se DMF (0,2 ml). Poté se vytratí intenzivní průběh reakce. Směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za vakua, čímž se získá 1-methyl-177-2indolkarbonylchlorid (10,69 g, 98%) ve formě světle žluté pevné látky.

'HNMR (CDC1₃,400 MHz) δ 7,70 (d, IH), 7,66 (s, IH), 7,44 (t, IH), 7,35 (d, IH), 7,18 (t, IH), 3,98 (s, 3H).

B. V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-l 77-2indolkarboxamid

Do roztoku obsahujícího l-methyl-l/7-2-indolkarbonylchlorid (5,44 g, 0,0281 mol) a 2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilin (7,00 g, 0,0281 mol) v bezvodém dichlormethanu (150 ml) se po kapkách při teplotě 0°C přidá V-ethyl-A/Vdiisopropylamin (4,9 ml, 0,0309 mol) a výsledný roztok se míchá při pokojové teplotě pod atmosférou dusíku po dobu 18 hodin. Reakční směs se koncentruje za sníženého tlaku a zbytek se vytřepe mezi vodu (150 ml) a ethylacetát (150 ml). Organická fáze se promyje solankou, suší síranem hořečnatým a koncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetát/n-heptan (1:6) jako mobilní fáze, čímž se získá /V2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-methyl-177-2-indolkarboxamid (8,0 g, 0,0197 mol) ve formě bílé pevné látky.

748 ‘Η NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,35 (s, ÍH), 8,03 (d, ÍH), 7,69 (d, 1M, 7,57 (d, ÍH), 7,33 (m, 3H), 7,29 (s, ÍH), 7,14 (t, ÍH), 4,02 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 1,31 (s, 12H). TLC (ethylacetát/heptan 1:3) Rf 0,44.

C. Trans-N2-(4- {4-amino-l-[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-y 1} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Suspenze trans-3 -j od-1 -[4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl]-1 A-pyrazolo [3,4</)pyrimidin-4-aminu (0,100 g, 0,227 mmol) v dimethyletheru ethylenglykolu (8 ml) se nechá reagovat s A2-[2-methoxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-lmethyl-ΙΑ-2-indolkarboxamidem (0,097g, 0,238 mmol), tetrakis(trifenylfosfm)palladiem (0,016g, 0,014 mmol) a roztokem uhličitanu sodného (0,057g, 0,538 mmol) ve vodě (4 ml). Reakční směs se míchá po dobu 21,5 hodiny při teplotě 80°C, precipitát se filtruje a organická vrstva se zahušťuje za sníženého tlaku. Přidá se dichlormethan (15 ml) a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (200 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahušťují za sníženého tlaku. Surová látka se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu za použití směsi 10% methanolu v dichlormethanu až 50% methanolu v dichlormethanu vkrokém gradientu 16x ISCO CombiFlash, čímž se získá 0,083 g (68%) /rara-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4methylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-lmethyl-1 A-2-indolkarboxamid.

*H NMR (d₆-DMSO) δ 9,4316 (s, ÍH), 8,2427 (s, ÍH), 8,1207-8,1003 (d, ÍH, J = 8,16 Hz), 7,71737,6974 (d, ÍH, J = 7,96 Hz), 7,5979-7,5769 (d, ÍH, J = 8,4 Hz), 7,3507-7,2758 (m, 4H), 7,1695-7,1321 (t, ÍH), 4,6893-4,6324 (m, ÍH), 4,0400 (s, 3H), 3,9571 (s, 3H), 2,5 (m, 3H), 2,4055-2,3279 (m, 5H), 2,1606 (s, 3H), 2,1094-1,9367 (m, 6H), 1,5214-1,4624 (m, 2H);

LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis Cl8 sloupec, 3 pm velikost částic, 33 x 4,6 mm; 70 % 50 mM octan amonný ve vodě až 95% acetonitril v průběhu 6 minut, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 2,12 min (100%), M+ 594,3.

Příklad 915:

V2-{4-[4-amino-l-(2-amino-4-pyridyl)-l A-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl} -1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid • · • ·

749

Příklad 916:

A2-(4- {4-amino-1 - [2-(methylamino)-4-pyridyl]-1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidin-3 -yl} -2methoxy fenyl)-1 -methyl-1//-2-indolkarboxamid

Příklad 917:

A2-(4-{4-amino-l-[2-(dimethylamino)-4-pyridyl]-l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamid

Příklad 918:

A2-(4- {4-amino-1 - [2-(4-methylpiperazino)-4-pyridyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} 2-methoxyfenyl)-1 //-2-indolkarboxamid

Příklad 919:

Příklad 920:

N2-{4- [4-amino-1 -(2-morfolino-4-pyridyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2methoxy fenyl} -1 -methyl-1 //-2-indolkarboxamid

Příklad 921:

A2- [4-(4-amino-1 - {2- [(2-hydroxyethyl)amino] -4-pyridyl} -1 //-pyrazolo [3,4-í/upyrimidin3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl-1//-2-indolkarboxamid

Příklad 922:

A2-(4-{4-amino-l-[2-(aminomethyl)-4-pyridyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-1 -methyl-1//-2-indolkarboxamid • · · ·· · · · « ···· ·· · · · · · • ······« · ··· ···· «·· ·····»· • · · ·· ·· ·· ·

750

Příklad 923:

V2-(4-{4-amino-l-[2-(aminokarbonyl)-4-pyridyl]-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Příklad 924:

3-morfolino-l-(2-morfolino-4-pyridyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Příklad 925:

V2-{4-[4-amino-l-(4-amino-2-pyridyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxyfenyl} -1 -methyl-1 A-2-indolkarboxam id

Příklad 926:

N2- {4-[4-amino-1 -(2-oxo-1,2-dihydro-4-pyridinyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2methoxy fenyl} -1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Příklad 927:

V2-{4-[4-amino-l-(4-morfolino-2-pyridyl)-lA-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-3-yl]-2methoxy feny 1} -1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Příklad 928:

V2-(4- {4-amino-1 -[4-(4-methylpiperazino)-2 -pyridyl] -1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl} 2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Příklad 929:

V2-[4-(4-amino-l-{4-[(2-hydroxyethyl)amino]-2-pyridyl}-lA-pyrazolo[3,4-{/]pyrimidin-3yl)-2-methoxyfenyl]-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid • · • · · • · · · <

751

Příklad 930:

A2- {4-[4-amino-1 -(6-amino-3 -pyridyl)-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2methoxy fenyl} -1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Příklad 931:

A2- {4- [4-amino-1 -(6-morfolino-3 -pyridyl)-1 A-pyrazolo [3,4-//]pyrimidin-3 -yl] -2methoxy fenyl} -1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Příklad 932:

M2-(4- {4-amino-1 - [6-(4-methylpiperazino)-3 -pyridyl] -1 A-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3 -yl} 2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 A-2-indolkarboxamid

Příklad 933:

Cis-4-[4-(4-amino-3- { 3 -fluor-4- [(5 -methyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1Apyrazolo [3,4-//]pyrimidin-1 -yl)cyklohexyl] -2-piperazinon

Příklad 934:

Trans-4-[4-(4-amino-3 - {3 -fluor-4- [(5 -methyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1Apyrazolo [3,4-ďJpyrimidin-1 -y l)cyklohexyl] -2/piperazinon

Příklad 935:

CÁs'-4-[4-(4-amino-3-{4-[(5-methyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l A-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-1 -yl)cyklohexyl]-2-piperazinon

Příklad 936:

rríz«5-4-[4-(4-amino-3-{4-[(5-methyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lA-pyrazolo[3,4ďjpyrimidin-1 -yl)cyklohexyl]-2-piperazinon

752

Příklad 937:

R-N2-(4-{4-amino-1 - [ 1 -(1 -methoxy-1 -methylethyl)-3 -piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4tZ]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 938:

S-N2-(4- {4-amino-1 -[l-( 1 -methoxy-1 -methylethyl)-3-piperidyl]-1 V-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 939:

R/S-N2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 -methoxy-1 -methylethyl)-3 -piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4</] pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 940:

R-N2-(4-{4-amino-1 - [ 1 -(3 -methoxypropyl)-3 -piperidyl]-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 yl} feny l)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 941:

S- N2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(3-methoxypropyl)-3-piperidyl]-1 V-pyrazolo[3,4-</)pyrimidin-3yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Příklad 942:

R/S-N2-(4- {4-amino-l- [ 1 -(3 -methoxypropyl)-3 -piperidyl]-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Příklad 943:

R-N2-(4-{4-amino-1 - [ 1 -(2-hydroxyethyl)-3 -piperidyl]-1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol -2-amin

753

Příklad 944:

S-N2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2-hydroxy ethyl)-3 -piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4-<7] pyrimidin-3 y 1} fenyl)- 5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol -2-amin

Příklad 945

R/S-N2-(4-{4-amino-1 -[ 1 -(2-hydroxyethyl)-3 -piperidyl]-1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Příklad 946

Á-V2-(4-{4-amino-1-[ 1-(2-{1,3-dihydroxypropyl} )-3-piperidyl] -1 A-pyrazolo[3,4</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Příklad 947

S-A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2- {1,3-dihydroxypropyl} )-3 -piperidyl]-1 A-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Příklad 948

R/S-N2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2- {1,3-dihydroxypropyl} )-3 -piperidyl] -1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 949

R-2-[3 -(4-amino-3 - {4 - [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 A-pyrazolo [3,4 d]pyrimidin-1 -yl)piperidino]acetonitril

Příklad 950

S-2-[3 -(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 A-pyrazolo [3,4 </]pyrimidin-1 -yl)piperidino] acetonitril

754

Příklad 951

Á/5-2-[3 -(4-amino-3 - {4-[(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-y ljamino] fenyl} -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-1 -yl)piperidino]acetonitril

Příklad 952

7?-V2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(2-(methylsulfanyl)ethyl)-3 -piperidyl]-1 V-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Příklad 953

5-/72-(4-{4-amino-1-[ 1-(2-(methylsulfanyl)ethyl)-3-piperidyl]-1 V-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Příklad 954

7?/5-V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-(methylsulfanyl)ethyl)-3-piperidyl]-lV-pyrazolo[3,4tf]pyrimidin-3 -yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Příklad 955

R-V-methoxy-3 -(4-amino-3 - {4- [(5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol -2-yl)amino] fenyl} -1Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-1 -yl)-1 -piperidinkarboximidamid

Příklad 956

5-V-methoxy-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l Vpyrazolo[3,4-ť/]pyrimidin-l -yl)-l -piperidinkarboximidamid

Příklad 957 /?/5-V-methoxy-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lVpyrazolo [3,4 -í/]pyrimidin-1 -y 1)-1 -piperidinkarboximidamid

755

Příklad 958

7?-V2-(4-4-amino-1 - [ 1 -(1 -2,2,2-trifluorethyl)-3-piperidyl] -1 V-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3 ylfenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 959

S-V2-(4-4-amino-1 -[ 1 -(1 -2,2,2-trifluorethyl)-3 -piperidyl] -1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 ylfenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 960

7?ZS-V2-(4-4-amino-l-[l-(l-2,2,2-trifluorethyl)-3-piperidyl]-1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin3 -ylfenyl)-5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Příklad 961

V2-{4-[4-amino-l-(l V-4-imidazolylmethyl)-l V-pyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl]fenyl}-5,7dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 962

V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 V-4-(2-methyl-imidazolyl)methyl] -1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 yl) fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 963

V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 V-4-(2-amino-imidazolyl)methyl] -1 V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 yl} fenyl)- 5,7-dimethyl-1,3 -benzoxazol-2-amin

Příklad 964

V2-4-[4-amino-1 -(1 V-4-imidazolyl)-1 V-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-yl]fenyl-5,7dimethyl- 1,3 -benzoxazol-2-amin • · • · · · · ····· · · ·

756

Příklad 965

A2-(4- {4-amino-1 -[ 1 A-4-(2-amino-imidazolyl)] -1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3-yl} fenyl)-5,7-dimethyl-1,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 966

A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 A-4-(2-methyl-imidazolyl)]-1 A-pyrazolo [3,4-ri]pyrimidin-3yl}fenyl)-5,7-dimethyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Příklad 967 l-(4-{4-amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-lA-pyrazolo[3,4-í7)pyrimidin-lyl}piperidino)-2-methyl-2-(methylamino)-l-propanon

Příklad 968 l-[4-(4-amino-3-{4-[(5-methyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lA-pyrazolo[3,4ďjpyrimidin-1 -yljpiperidino] -2-methyl-2-(methy lamino)-1 -propanon

Příklad 969

- [4-(4-amino-3 - {4- [(5 -ethyl-1,3 -benzoxazol-2-yl)amino]fenyl} -1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-1 -yljpiperidino] -2-methyl-2-(methy lamino)-1 -propanon

Příklad 970 l-[4-(4-amino-3-{4-[(5-chlor-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lA-pyrazolo[3,4JJpyrimidin-1 -yl)piperidino]-2-methyl-2-(methylamino)-1 -propanon

Příklad 971 {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]fenyl}(lA-4pyrazolyljmethanon

757

Příklad 972

-(4- {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3-y l]benzoyl} -1 A-1 pyrazolyl)-1 -ethanon

Příklad 973 {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]fenyl}(l-methyl-lA-4pyrazolyl)methanon

Příklad 974 {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)- lA-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidin-3-yl]fenyl}(l -benzyl- 1A-4pyrazolyl)methanon

Příklad 975 {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-fiQpyrimidin-3-yl]fenyl}(l-benzoyl-lA-4pyrazolyl)methanon

Příklad 976 {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl] fenyl} (5 isoxazolyl)methanon

Příklad 977 {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3 -yl] fenyl} (3 -methyl-5 isoxazolyl)methanon

Příklad 978 {4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-yl] fenyl} (3 -fenyl-5isoxazolyl)methanon

758

Příklad 979

A5-{4-[4-aminoT-(4-piperidyl)-l V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl]fenyl}-3-fěnyl-5isoxazolamin

Příklad 980

N5-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-/]pyrimidin-3-yl] fenyl} -3 -

759

Příklad 981

Příklad 982

Další příklady zahrnují následující sloučeniny:

Struktura	Název
p. w, „A ⁰⁴ NHj w	N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo [3,4- <7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1 V-pyrrolo [2,3 - ó]pyridin-2-karboxamid

760

	N2-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-
	í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl} -1 -methyl-1 A-pyrrolo [2,3 -
/¾	c]pyridin-2-karboxamid
Μ


ílS
X-N
Zx	N2-{4- [4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-
	íf]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy fenyl} -1 -methyl-1 A-pyrrolo [3,2-
vX , ) CH,	c]pyridin-2-karboxamid
rA
Γ/
w, y*f
ť\|S
Q
	V2- {4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-
	úř]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxy feny 1} -1 -methyl-1 A-pyrrolo[3,2-
	Z?]pyridin-2 -karboxamid
/M_o
Í7
IjH, SyJ
ArX
0

761

V2- {4- [4-amino-1-(1 -methyl-4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4<7|pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-177-pyrrolo [2,3 ó]pyridin-2-karboxamid

JV2-{4-[4-amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4zTJpyrimi din-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-177-pyrrolo[2,3 c]pyridin-2-karboxamid

N2-{4-[4-amino-1 -(1 -methyl-4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3 -y 1] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-177-pyrrolo [3,2c]pyridin-2-karboxamid «« <· • · * « · · · • · · · * · • · · * · · ·

A2- {4- [4-amino-1-(1 -methyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [-3,4í/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1 A-pyrrolo[3,2Z?]pyridin-2 -karboxamid

762

N2-{4-[4-amino-1 -(1 -isopropyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1 A-pyrrolo [2,3 ó]pyridin-2-karboxamid

N2-{4- [4-amino-1 -(1 -isopropyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1 -Hpyrrolo[2,3-c]pyridin-2-karboxamid

N2-{4- [4-amino-1-(1 -isopropyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4t/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1 A-pyrrolo [3,2c]pyridin-2-karboxamid

763

N2-{4- [4-amino-1 -(1 -isopropyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4č/]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1 A-pyrrolo[3,2ž>]pyridin-2-karboxamid

V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 A-4-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 methyl-1 A-pyrrolo [2,3 -Z?]pyridin-2-karboxamid ··· ······ φ # * # · · • « » · · « · • ······» « · • · φ · · · · «· φ · · · φ

764

Α2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 //-4-imidazolylmethyl)-4-piperidy 1]1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-1 methyl-l//-pyrrolo[2,3-c]pyridin-2-karboxamid

A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 //-4-imidazolylmethyl)-4-piperidy 1]1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 methyl-1 //-pyrrolo [3,2-c]pyridin-2-karboxamid

A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 //-4-imidazolylmethyl)-4-piperidyl]1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl} -2 -methoxyfenyl)-1 methyl-l//-pyrrolo[3,2-Z>]pyridin-2-karboxamid

A2-[4-(4-amino-1 - {1 - [(2-methyl-1 V-4-imidazolyl)methyl] -4piperidyl} -1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -y l)-2 methoxy fenyl]-1 -methyl-1 V-pyrrolo [2,3-ó]pyridin-2karboxamid

765

A2- [4-(4-amino-1 - {1 - [(2-methyl-1 V-4-imidazolyl)methyl] -4piperidyl} -1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -y 1)-2 methoxyfenyl]-l-methyl-lV-pyrrolo[2,3-c]pyridin-2karboxamid

N2-[4-(4-amino-1 - {1 - [(2-methyl-1 V-4-imidazolyl)methyl] -4piperidyl} -1 V-pyrazolo [3,4-/]pyrimidin-3 -y 1)-2 methoxy fenyl]-1 -methyl-1 V-pyrrolo [3,2-c]pyridin-2karboxamid ··· ·· · ··· ···· ·· * ···· • ·····»· · · » · ···· «·· ···· ··· «· · · » ·· · » ·

766

N2-[4-(4-amino-1 - {1 -[(2-methyl-1 V-4-imidazoly l)methyl] -4piperidyl} -1 V-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidin-3 -yl)-2methoxy fenyl]-1 -methyl-1 V-pyrrolo [3,2-Z>] pyridin-2 karboxamid

V2-[4-(4-amino-1 - {1 - [(3 -methyl-1 V-4-pyrazolyl)methyl]-4piperidyl} -1 V-pyrazolo[3,4-tf|pyrimidin-3-yl)-2methoxy fenyl]-1 -methyl-1 V-pyrrolo [2,3-6]pyridin-2karboxamid

N2-[4-(4-amino-1 - {1 -[(3 -methyl-1 V-4-pyrazolyl)methyl] -4piperidyl} -1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -y 1)-2 methoxyfenyl]-l-methyl-lV-pyrrolo[2,3-c]pyridin-2karboxamid

V2-[4-(4-amino-1 - {1 - [(3 -methyl-1 V-4-pyrazolyl)methy 1]-4 piperidyl} -1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl)-2methoxy fenyl]-1 -methyl-1 V-pyrrolo [3,2-c]pyridin-2karboxamid ·«· ·· · · · · ···« · · · ···· • ······· · ··· ···· • · · · ·· ·· ·

767

N2-[4-(4-amino-1 - {1 - [(3 -methyl-1 V-4-pyrazolyl)methyl] -4piperidyl] -1 V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2methoxy fenyl]-1-methyl-1 V-pyrrolo [3,2-ó]pyridin-2karboxamid

V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-methoxy ethyl)-4-piperidyl]-1Vpyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl1 V-pyrrolo [2,3-6]pyridin-2-karboxamid • · ·

768

£r Γ	VtH, Ό	V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-methoxy ethyl)-4-piperidyl] -1Hpyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl1 A-pyrrolo [2,3-c]pyridin-2-karboxamid
l
	/U, 8	JV2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(2-methoxy ethyl)-4-piperidyl] -1H- pyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-
& o	o	lA-pyrrolo[3,2-í-]pyridin-2-karboxamid
w í	9
	_NW	V2-(4-{4-amino-1-[1-(2-methoxy ethyl)-4-piperidyl]-177-
	C3	pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-
&	Ό	l//-pyrrolo[3,2-/?]pyridin-2-karboxamid

w· W
w

• · · ·

769

V2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(3 -fůry lmethyl)-4-piperidyl] -1Hpyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl1 A-pyrrolo [2,3-ó]pyridin-2-karboxamid

V2-(4-{4-amino-1-[ 1-(3-furylmethyl)-4-piperidyl]-1Apyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxy feny 1)-1 -methyl1 A-pyrrolo [2,3 -c]pyridin-2-karboxamid

V2-(4- {4-amino-1 -[1 -(3-furylmethyl)-4-piperidyl]-1Apyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-1 -methyl1 A-pyrrolo [3,2-c]pyridin-2-karboxamid * · • · · « « · · · · ·

770

V2-(4- {4-amino-1 -[ 1 -(3 -furylmethyl)-4-piperidyl] -1Hpyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl1 A-pyrrolo [3,2 -ů]pyridi n-2-karboxami d

N2-{4- [4-amino-1 -(1 -tetrahydro-2 A-4-pyranyl-4-piperidyl)1 A-pyrazolo [3,4 -d] pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 methyl-1 A-pyrrolo [2,3 -Z>]pyridin-2-karboxamid

N2-{4-[4-amino-1 -(1 -tetrahydro-2 A-4-pyranyl-4-piperidyl)1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 methyl-lA-pyrrolo[2,3-c]pyridin-2-karboxamid • · · · ·

N2-{4- [4-amino-1 -(1 -tetrahydro-2 A-4-pyrany 1-4-piperidyl)1 A-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 methyl-1 A-pyrrolo [3,2-c]pyridin-2-karboxamid

771

A2-{4-[4-amino-l-(l-tetrahydro-2A-4-pyranyl-4-piperidyl)1 A-pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl] -2-methoxyfenyl }-lmethyl-1 A-pyrrolo [3,2-ň]pyridin-2-karboxamid

N2-{4- [4-amino-1 -(1 -isopropyl-4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3 -y 1] -2-methoxy fenyl} -1 -methyl-1A-2indolkarboxamid

• ·· ·· · · *

772

	V2- {4-[4-amino-1-(1 -methyl-4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-
	</]pyrimidin-3 -yl] -2-methoxyfenyl} -1 -methyl-1H-2-
Υ Jf
ptt,	indolkarboxamid
ο Γ ο
¢7
γ=^
Vv
	V2-(4-{4-amino-l -[1 -(1 V-2-pyrrolylmethyl)-4-piperidyl]-l H-
1¾^
Q	pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3 -y 1} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-
ZrC*	1 V-2-indolkarboxamid
W, Ο
%

	V2-(4-{4-amino-l -[1 -(2,2-difluorethyl)-4-piperidyl]-l H-
Μ	pyrazolo [3,4-</]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-
ΓτΛ ’	1 V-2-indolkarboxamid
0

(ύ

• « · • · · · · · ·

773

V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(177-4-imidazolylmethyl)tetrahydro-1H3 -pyrrolyl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidin-3-y 1} -2methoxy fenyl)-1 -methyl-177-2-indolkarboxamid

N2-[4-(4-amino-1 - {1 -[(2-methyl-177-4imidazoly l)methyl]tetrahydro-177-3 -pyrrolyl} -177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-yl)-2-methoxyfenyl]-l-methyl177-2-indolkarboxamid

JV2- [4-(4-amino-1 - {1 - [(3 -methyl-177-4pyrazolyl)methyl] tetrahydro-177-3 -pyrrolyl} -177-pyrazolo [3,4<7]pyrimidin-3 -yl)-2-methoxy fenyl]-1 -methyl-177-2indolkarboxamid • ·

V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 A-4-imidazolyl)-4-piperidyl]-1Hpyrazolyl[3,4-<7]pyrimidin-3-yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl1 A-2-indolkarboxamid • · · · · · · • · · · · · · · ♦ • · · « ·· ♦ ···· • ·····«· · ··· · ···

774

/V2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1,3 -oxazol-4-yl)-4 piperidyl] -1Hpyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-1 -methyl1 A-2-indolkarboxamid

JV2-(4-{4-amino-1 -[1 -(1,3-thiazol-4-yl)-4 piperidyl]-1Hpyrazolo [3,4-J]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl1 A-2-indolkarboxamid • · • · • · · • · · · • · · · ··· ·· * · • ·····«· · · · »

775

	A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1 A-2-imidazolyl)-4-piperidyl]-1Hpyrazolo [3,4-t/]pyrimidin-3 -yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl - 1 A-2-indolkarboxamid
Λ	A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1,3 -oxazol-2-yl)-4-piperidyl] -1H-
q	pyrazolo[3,4-/Z]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-1 -methyl-
	1 A-2-indolkarboxamid
„p
TO·
%
	A2-(4- {4-amino-1 - [ 1 -(1,3-thiazol-2-yl)-4-piperidyl] -1H-
Ol	pyrazolo[3,4-č/]pyrimidin-3-yl}-2-methoxyfenyl)-l-methyl-
pp	1 A-2-indolkarboxamid

o

• * · · « * · • · · ·

776

V2-(4- {4-amino-1 -[1 -(2-hydroxy-3-(4methylpiperazino)propyl] -1 V-pyrazolo [3,4-č/]py rimidin-3 yl} -2-methoxyfenyl)-1 -methyl-1 V-2-indolkarboxamid

N2-{4-[4-amino-1 -(2-hydroxy-3 -piperidinopropyl)-1Vpyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-3-y l]-2-methoxyfenyl)-1 -methyl1 V-2-indolkarboxamid

V2- {4-[4-amino-1 -(2-hydroxy-3-morfolinopropyl)-1Vpyrazolo[3,4-</]pyrimidin-3-yl]-2-methoxyfenyl)-l-methyl1 V-2-indolkarboxamid

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1.

Sloučenina obecného vzorce (I) její racemické-diastereomemí směsi, optické isomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

®=0,>.

Gje jy 1 L

W „110. „IltrUOO

Mj —Z.

R, ρ,-4-g, v
2 /(Ub kde Z¹⁰⁰ je nebo skupina případně substituovaná substituentem Ri vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl, cykloalkyl, pyrrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, isochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[ 1,2-a]pyrimidinyl, 177-imidazo[ 1,2-o]imidazolyl, imidazo[2,1 ó][l,3]thiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzothienyl, furanyl, thienyl, benzoxazolyl, benzoisoxazolyl, benzothiazolyl, • · • · · • · · · I ft· · • · • * *

779 s

dihydrobenzofuranyl, indolyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrrolyl, pyrrolopyridinyl, Hpyridinon, oxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[l,2-íz]pyridinyl, benzoisothiazolyl, 1,1dioxybenzoisothiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-thiazolyl, pyrimidooxazolyl, pyrimido-thiazolyl a benzimidazolyl;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-Có), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (Cj-Cé) nebo případně substituovaný -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů, při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, halogen, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)Oheteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluormethylkarbonylaminoskupina, trifluormethylsulfonamidoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná nebo heteroarylalkoxyskupina, substituovaná nebo thiazolyl, benzofuranyl, 2,3isoxazolyl, tetrahydropyranyl, nesubstituovaná nesubstituovaná

780 • ······ • · « · · · • · · · · · · • ·····*· · · • · arylalkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkynyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované nebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylthioskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylthioskupina, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(0)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, Rc a CH2ORc;

kde substituent R< při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂NRaRe, -W-CCHÚt-NRaRe, -W-(CH₂)_rO-alkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl, nebo -W-(CH₂)_t-0H;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Ce);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Cj-Cď), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(C|-C₆)-fenyl;

substituenty Ra a Re při každém výskytu jsou nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty R<i, Re a dusíkový atom, k němuž jsou vázány, společně tvoří 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂, nebo NRf, kde Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;

substituent R3 při každém výskytu je, nezávisle, atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)aryl, nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

• * Ir · • · · • · · · • · · · · · · • · ♦ · · · • · · · ·»·· ·· · · · · · » · · • · « »· · · · · ·

781

A je -(C,-C₆)-, -0-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-;

-CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(0)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-;

-N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)„₊₁-C(O)-, -S(O)_pN(R)-; -O-(CR₂)„₊i-C(O)-, -O-(CR₂)„₊₁-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-O-,

-C(O)N(R)C(O)-; -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-; -N(R)P(O)(OR_b)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O-, nebo -N(C(O)R)P(OR_b)-;

kde substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent R_b při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; nebo ve skupině obsahující fosfor tvoří dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a R_bspolečně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklícký kruh; nebo

A je NRSO₂ a substituenty R, R_a a dusíkový atom společně tvoří substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklícký kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z¹¹⁰-A-Z^1H dohromady jsou kovalentní vazba; a substituent R₂ je H nebo skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-Có)-, -(Ci-Cój-O-, -(Ci-C6)-C(O)-,

-(Ci-C₆)-C(O)O-, -(C,-C₆)-C(O)-NH-, -(C_rC₆)-C(O)-N((Ci-C₆))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný ·»»· • · · * · ··· · · * «»« ···· · · · · ♦ · · • ······· · ··· ··*· «· · · · · * · · ·

782 nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina mají jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cé), substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aíkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cé)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -N((Ci-C₆)-OR)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný

-N(R)-(Ci-Cé)-C(O)₂R, substituovaný nebo nesubstituovaný

-(Ci-C6)-N(R)-(Ci-Cé)-0R, substituovaný nebo nesubstituovaný

-(Ci-C6)-N(R)-(Ci-Ce)-N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný

-(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovaná nebo nesubstituovaná sulfonamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, oxoskupina, a nasycená, nenasycená nebo aromatická, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří N, O, a S; kde dusíkové atomy uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-Ce)-N(R)₂,

-C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo • ·

9 99 9

9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 · « · · • ·«*···· · ♦ · 9 9 9 9 9

783 substituent R₂ je skupina obecného vzorce -B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo

nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný nesubstituovaný (Ci-C₆)-azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný

azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-Ce)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-Cé)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-Cé)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, • · · ·*···· ·· · • · · »· ···· • · φ · ·· · · * ^β · « «··«·*· · ··· · ·♦· e» · · · ·· «* 9

784 substituovaná nebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

a je 1 a symboly D_b G_b J_b Li a Mj jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D_b G_b Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů D_b G_b Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů D_b G_b Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂a M₂ jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s výhradou spočívající v tom, že pokud A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, pak Z¹⁰⁰ není alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl nebo pyrrolidinyl;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, pak A není alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- nebo

-C(0)0-;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹¹⁰-A-Z^H1 dohromady jsou kovalentní vazba, pak Z¹⁰⁰ není alkyl;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z^1IO-A-Z^1H dohromady jsou C|-C₆ alkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl; a s výhradou spočívající v tom, že pokud substituent R₂ je substituovaný nebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba, pak A není -0-, -C(0)0-, nebo -N(R)-.

• · • * · t 999 9 9

785

2. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R₃ je H; substituent Ri při každém výskytu je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří F, Cl, Br, I, CH₃, NO₂, OCF₃, OCH₃, CN, CO₂CH₃, CF₃, -CH^RdRe, Z-butyl, pyridyl, substituovaný nebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzensulfonyl, substituovaná nebo nesubstituovaná fenoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, karboxyl, substituovaný nebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný nebo nesubstituovaný styryl.
3. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R₃ je H; substituent R_a při každém výskytu je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří F, Cl, Br, I, CH₃, NO₂, OCF₃, OCH₃, CN, CO₂CH₃, CF₃, Z-butyl, pyridyl, substituovaný nebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný nebo nesubstituovaný benzensulfonyl, substituovaná nebo nesubstituovaná fenoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, karboxyl, substituovaný nebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný nebo nesubstituovaný styryl.
4. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R₃ je H; substituent R₂ je skupina vzorce kde nje 1, 2 nebo 3.
5. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R₃ je H; substituent R₂ je skupina vzorce

RgO • · · ·

786 kde:

m je O, 1, 2 nebo 3;

substituent R_g je H nebo -(CH2)_pN(R4)R₅; p je celé číslo od 2 do 6;

substituenty R4 a R5 jsou každý nezávisle H, azabicykloalkyl nebo Y-Z;

Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)2-, -C(O)O-,

-SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; q je celé číslo od 0 do 6;

r je 0, 1 nebo 2; a

Z je substituovaná nebo nesubstituovaná část, vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl, alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl a heterocykloalkylová skupina, nebo substituenty R4, R5 a dusíkový atom, ke kterému jsou vázány, tvoří společně 3-, 4-, 5-, 6- nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu.
6. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent R₂ je skupina vzorce kde:

mje 0,1, 2 nebo 3;

každý z indexu a i indexu b je, nezávisle, celé číslo od 0 do 6;

Q je -ORó nebo -NR4R5;

každý ze substituentů R4 a R5 je, nezávisle, H, azabicykloalkyl nebo Y-Z; Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)₂-, -C(O)O-,

-SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; q je celé číslo od 0 do 6;

« · · • · · · • · · · · · • · ·

787 r je O, 1 nebo 2; a

Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl nebo heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R4, R5 a dusíkový atom, na který jsou vázány, tvoří společně 3, 4, 5, 6 nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu; a substituent R₆ je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.
7. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent R2 je skupina vzorce kde:

n je 1, 2 nebo 3;

substituent R4 je H, azabicykloalkyl nebo Y-Z;

Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)2-, -C(O)O-,

-SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-;

q je celé číslo od 0 do 6; r je 0, 1 nebo 2; a

Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina.
8. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent R₂ je skupina vzorce • · kde:

m je 0,1, 2 nebo 3;

substituent R5 je H, azabicykloalkyl nebo Y-Z;

Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří kovalentní vazba, -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)2-,

-C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH-, -(CH₂)_qC(O)-, -C(O)(CH₂)_q- a -(CH₂)_qS(O)_r-, kde alkylová část skupiny -(CH₂)_q-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH-, -(CH₂)_qC(O)-, -C(O)(CH₂)_q- a -(CH₂)_qS(O)_r je případně substituována halogenem, hydroxyskupinou nebo alkylskupinou;

q je celé číslo od 0 do 6;

r je 0, 1 nebo 2; a

Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo

Y a Z jsou společně přirozená nebo nepřirozená aminokyselina, která může být na aminovém dusíku mono- nebo di-alkylována; a substituent R$ představuje jeden nebo více substituentů, z nichž každý je, nezávisle, vybrán ze skupiny, kterou tvoří vodík, hydroxyskupina, oxoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocyklyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocyklylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl a substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl;

• · · ·

789 s podmínkou, že uhlíkové atomy sousedící s dusíkovým atomem nejsou substituovány hydroxyskupinou.
9. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R₃ je H; substituent R₂ je skupina vzorce

N kde substituent R4 je H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z;

Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)₂-, -C(O)O-,

-SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; q je celé číslo od 0 do 6;

r je 0, 1 nebo 2; a

Z je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
10. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R₃ je H; substituent R₂ je skupina vzorce m

kde:

m je celé číslo od 1 do 6; a • »

790 substituenty R4 a R₅ jsou každý, nezávisle, H, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z;

Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)₂-, -C(O)O-,

-SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-;

q je celé číslo od 0 do 6;

r je 0, 1 nebo 2; a

Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R4, R5 a atom dusíku, na který jsou vázány, tvoří společně 3, 4, 5-ti, 6ti nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo substituovanou nebo nesubstituovanou heterobicyklickou skupinu.
11. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R₃ je H; substituent R₂ je skupina vzorce kde:

n je celé číslo od 0 do 4;

r je 0 a m je celé číslo od 1 do 6; nebo r je 1 a m je celé číslo od 0 do 6;

Q je -01% nebo -NR4R5;

každý ze substituentů R4 a R5 je, nezávisle, vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z;

Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)₂-, -C(O)O-, • « » · · · » · • · ·

791

-SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; q je celé číslo od 0 do 6; r je 0,1 nebo 2; a

Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R4, R5 a atom dusíku, ke kterému jsou připojeny, společně tvoří 3, 4, 5ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; a substituent R^ je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.
12. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R3 je H; substituent R₂ je skupina vzorce kde:

n je celé číslo od 0 do 4;

m je celé číslo od 0 do 6;

substituent R4 je H, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z; Y je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -C(O)-, -(CH₂)_q, -S(O)₂-,

-C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-;

q je celé číslo od 0 do 6;

r je 0, 1 nebo 2; a

Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo • · • · · · · . . . ,···..· · · · ·

....... · ., . ·· ··

792 nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; a substituent Ró je vodík nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina.
13. Sloučenina podle nároku 10, kde substituenty R4, R5 a atom dusíku společně vytvářejí heterocyklickou skupinu obecného vzorce kde:

substituenty R₇, R₈, Rg, R₁₀, R11, R12, R13 a R14 jsou každý, nezávisle, nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R₇ a R₈; R9 a R10; R11 a R12; nebo R13 a R14 jsou dohromady atom kyslíku; nebo alespoň jeden ze substituentů R₇ a R9 je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH2OR15 nebo CH₂NRi₅(Ri₆); a substituenty Ri5 a Riňjsou každý, nezávisle, vodík, azabicykloalkyl nebo V-L;

V je vybráno ze skupiny sestávající z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)2-,

-C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; r je 0, 1 nebo 2;

L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R15, Rié a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti, 6-ti nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo substituovanou nebo nesubstituovanou heterobicyklickou skupinu;

Xje O, S, SO, SO₂, CH₂, CHORi₇nebo NR,₇;

• · · · · · • · · · · · · • · ··· ···· • · · · · · · • · · · · · ·

793 substituent R_!7 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH₂, -C(0)Ri7 nebo -C(O)ORi₈;

substituent R_t8 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 nebo 1.
14. Sloučenina podle nároku 10, kde substituenty R4, R5 a atom dusíku společně vytvářejí heterocykl obecného vzorce kde:

substituenty R19 a R₂o jsou každý, nezávisle, vodík nebo nižší alkyl; nebo substituenty R19 a R₂o jsou dohromady atom kyslíku;

substituenty R₂i a R₂₂ jsou každý, nezávisle, vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl V-L;

V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH₂)_p-, -S(O)₂-, -C(O)O-, SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-;

p je celé číslo od 0 do 6;

q je celé číslo od 0 do 6;

r je 0, 1 nebo 2; a

L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R₂i, R₂₂ a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; a m je celé číslo od 1 do 6; a • ·

794 n je celé číslo od 0 do 6.
15. Sloučenina podle nároku 10, kde substituenty R4, R5 a atom dusíku společně vytvářejí heterocyklickou skupinu obecného vzorce kde:

m je celé číslo od 1 do 6;

substituent R23 je CH2OH, NRR', C(O)NRR' nebo COOR; a substituenty R a R' jsou každý, nezávisle, vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.
16. Sloučenina podle nároku 10, kde substituenty R4, R5 a atom dusíku společně vytvářejí heterocyklickou skupinu obecného vzorce

R₂₄ kde:

substituent R24 je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR25, CH2OR25, CH2NR26R27 nebo C(O)NHR₂₆;

substituent R25 je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloaryl; a • · · · · · * • · • *

795 substituenty R₂₆ a R₂₇ jsou každý, nezávisle, vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L;

V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-;

p je celé číslo od 0 do 6;

q je celé číslo od 0 do 6;

r je 0, 1 nebo 2; a

L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R₂6, R₂₇ a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.
17. Sloučenina podle nároku 10, kde alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 má obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec kde:

T je C(O), S, SO, SO₂, CHOŘ nebo NR;

substituent R je vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a nje 0, 1 nebo 2.
18. Sloučenina podle nároku 10, kde:

alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 má obecný vzorec Y-Z;

Z má obecný vzorec -N(R₂s)R₂9; a substituenty R₂g a R₂g jsou každý, nezávisle, substituovaný nebo nesubstituovaný karboxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo • ·

796 nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný kyanoalkyl; nebo substituenty R₂₈ a R29 společně s atomem dusíku tvoří 5-ti nebo 6-ti člennou substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.
19. Sloučenina podle nároku 11, kde substituenty R4, R5 a atom dusíku společně vytvářejí heterocykl obecného vzorce kde:

substituenty R₇, R₈, Rg, R10, R11, R12, R13 a R14 jsou každý, nezávisle, nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R₇ a R₈; R9 a R10; R11 a Ri₂; nebo R13 a R14 jsou dohromady atom kyslíku; nebo alespoň jeden ze substituentů R₇ a Rg je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH2OR15 nebo CH₂NRi₅(Ri₆); a substituenty R15 a Ri6 jsou každý, nezávisle, vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L;

V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)2-, -C(O)O-, SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-;

p je celé číslo od 0 do 6;

q je celé číslo od 0 do 6;

r je 0, 1 nebo 2; a

L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R15, Rió a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti, 6-ti nebo 7-člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou nebo heterobicyklickou skupinu; a • · * · • ·

797

Xje O, S, SO, SO₂, CH₂, CHORi₇nebo NRi₇;

substituent R17 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH₂, -C(O)Ris nebo -C(O)ORi₈;

substituent Ris je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 nebo 1.
20. Sloučenina podle nároku 11, kde substituenty R4, R5 a atom dusíku společně vytvářejí heterocykl obecného vzorce kde:

substituenty R19 a R₂o jsou každý, nezávisle, vodík nebo nižší alkyl; nebo substituenty R19 a R₂o jsou dohromady atom kyslíku; a substituenty R₂i a R₂₂ jsou každý, nezávisle, vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L;

V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂-, -C(O)O-, SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-;

p je celé číslo od 0 do 6;

q je celé číslo od 0 do 6;

r je 0, 1 nebo 2;

L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituenty R₂i, R₂₂ a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu; a • · · · · · • ······· ·

798 m je celé číslo od 1 do 6; a n je celé číslo od 0 do 6.
21. Sloučenina podle nároku 11, kde substituenty R4, R5 a atom dusíku společně vytvářejí heterocyklickou skupinu obecného vzorce m

kde:

m je celé číslo od 1 do 6; a substituent R23 je CH₂OH, NRR', C(O)NRR' nebo COOR;

substituent R je atom vodíku nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
22. Sloučenina podle nároku 11, kde substituenty R4, R5 a atom dusíku společně vytvářejí heterocyklickou skupinu obecného vzorce

N24 kde:

substituent R₂₄ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR₂s, CH₂OR₂s, CH₂NR₂éR₂7 nebo C(O)NHR₂₆;

substituent R₂5 je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloarylová skupina;

799 substituenty R₂6 a R₂₇ jsou každý, nezávisle, vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L;

V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH₂)_P-,

-S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a (CH₂)_qS(O)_r-;

p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; r je 0, 1 nebo 2; a

L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituenty R₂6, R₂₇ a atom dusíku společně tvoří 3, 4, 5-ti nebo 6-ti člennou, substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.
23. Sloučenina podle nároku 11, kde alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 má obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec

XL ^R32 kde:

gje 0 nebo 1;

T je C(O), O, S, SO, SO₂, CH₂, CHORi₇ nebo NR_J7;

substituent Ri₇ je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH₂, -C(O)Ri8 nebo -C(O)ORi₈;

substituent R|₈ je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R₂₂ je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo

800 nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyi, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.
24. Sloučenina podle nároku 11, kde:

alespoň jeden ze substituentů R4 a R5 má obecný vzorec Y-Z;

Z má obecný vzorec -N(R₂g)R₂g; a substituenty R₂g a R₂9 jsou každý, nezávisle, substituovaný nebo nesubstituovaný karboxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyi, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný kyanoalkyl; nebo substituenty R₂g a R₂9 společně s atomem dusíku tvoří 5-ti nebo 6-ti člennou substituovanou nebo nesubstituovanou heterocyklickou skupinu.
25. Sloučenina podle nároku 8, kde:

substituent R5 má obecný vzorec Y-Z, kde Z má obecný vzorec N(R3o)R3i; a substituenty R30 a R31 jsou každý, nezávisle, vodík, alkyl, alkoxykarbonyl, alkoxyalkyl, hydroxyalkyi, aminokarbonyl, kyanoskupina, alkylkarbonyl nebo arylalkyl.

Sloučenina podle nároku 8, kde substituent R₅ je Y-Z, kde Z má obecný vzorec kde:

každé X je, nezávisle, CH nebo N; a substituent R3₂ je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo • · · · • · nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

801
27. Sloučenina podle nároku 8, kde substituent R5 je Y-Z, kde Z má obecný vzorec

R32 kde:

gje 0 nebo 1;

T je O, S, SO, SO₂, CH₂, CHOR₁₇ nebo NR₁₇;

substituent R17 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, C(O)NH₂, -C(NH)NH₂, -C(O)Ri7 nebo -C(O)ORi₈;

substituent Rig je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R₃₂ je vodík, kyanoskupina substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
28. Sloučenina podle nároku 8, kde substituent R5 je Y-Z, kde Z má obecný vzorec g

R32 • · v ·

802 kde:

gje 0, 1 nebo 2;

substituent R₃₂ je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
29. Sloučenina podle nároku 8, kde substituent R5 je Y-Z, kde Z má obecný vzorec kde:

T je C(O), O, S, SO, SO₂, CH₂, CHOR₁₇ nebo NR₁₇;

substituent Ri₇ je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl, arylalkyl, -C(NH)NH₂, -C(O)Ri8 nebo -C(O)ORi₈;

substituent Ri₈ je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl;

gje 0 nebo 1; a substituent R₃₂ je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.
30. Sloučenina podle nároku 8, kde substituent R5 je Y-Z, kde Z má obecný vzorec • » · • * · · • · · · · · • · « • Λ • · * * · « ' · * ♦ » » • · · · ·· ** * kde:

substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, alkylkarbonyl, substituovaná nebo nesubstituovaná thioalkoxyskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R33 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aminokarbonyl, perhalogenalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl.
31. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R3 je atom vodíku; substituent R₂ má obecný vzorec kde:

mje 0 nebo 1; a substituenty R34, R₃₅, R₃₆, R37, R38, R39, R40 a R41 jsou každý, nezávisle, methyl nebo atom vodíku; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R34 a R35; R36 a R37; R38 a R39; nebo R40 a R41 společně jsou atom kyslíku; a ·» ·

804 substituent R42 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo

Y-Z;

Y je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH2)_P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-;

p je celé číslo od 0 do 6;

q je celé číslo od 0 do 6;

r je 0, 1 nebo 2; a

Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; nebo substituent R42 má obecný vzorec kde:

u je 0 nebo 1;

substituenty R43, R44, R45, R46, R47, R48, R49 a R50 jsou každý, nezávisle, methyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R43 a R44; R45 a R46; R47 a R48 ; nebo R49 a R50 společně jsou atom kyslíku; a substituent R51 je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L;

V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-;

p je celé číslo od 0 do 6;

q je celé číslo od 0 do 6;

r je 0, 1 nebo 2; a

L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo • · · ·

805 nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
32. Sloučenina podle nároku 1, kde substituent R₃ je vodík; substituent R₂ má obecný vzorec

Reo kde:

h, i, j, k a 1 jsou, nezávisle, 0 nebo 1;

substituenty R₅₂, R₅₃, R54, R55, ϊ%6, í%7, R58, R59, Rg a R_h jsou každý, nezávisle, methyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů Rs₂ a Rs₃; R54 a R55 ; R56 a R57; nebo R58 a R59 společně jsou atom kyslíku; a substituent Róo je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo Y-Z;

Y je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH₂)_p-, -S(O)₂-, -C(O)O-, SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-;

p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 nebo 2; a

Z je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; nebo substituent Róo má obecný vzorec • · · · ·· * • ······ · · • · · · ♦ · ♦ ·· · ·· ·· kde:

v je O nebo 1;

substituenty R₆i, Ró₂, Ró3, Rď4, Ró5, Róó, Ró7 a Ró8 jsou každý, nezávisle, nižší alkyl nebo vodík; nebo alespoň jeden pár ze substituentů R^i a Ró₂; Ró3 a Rď4; Rós a R^; a Ró7 a společně jsou atom kyslíku; a substituent R^ je vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný azabicykloalkyl nebo V-L;

V je vybráno ze skupiny sestávající se z -C(O)-, -(CH₂)_p-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH-, a -(CH₂)_qS(O)_r-;

p je celé číslo od 0 do 6; q je celé číslo od 0 do 6; r je 0, 1 nebo 2; a

L je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.
33. Způsob inhibice aktivity jedné nebo více proteinkináz u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
34. Způsob podle nároku 33, vyznačující se tím, že daná proteinkináza je vybrána ze skupiny sestávající se z KDR, FGFR-1, PDGFRβ, PDGFRa, IGF-1R, c-Met, Flt-1, Flt-4, TIE-2, TIE-1, Lek, Src, fyn, Lyn, Blk, hek, fgr a yes.

• · • · · · · • · · · · · * « ♦»····· · · • · ·’ « ·· ··

807
35. Způsob ovlivnění hyperproliferační ch poruch u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
36. Způsob ovlivnění angiogenezeupacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
37. Způsob podle nároku 33, vyznačující se tím, že proteinkináza je proteinová serin/threoninkináza nebo proteinová tyrosinkináza.
38. Způsob ošetření jednoho nebo více ulkusů u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
39. Způsob podle nároku 38, vyznačující se tím, že ulkus nebo ulkusy jsou způsobeny bakteriální nebo plísňovou infekcí; nebo ulkus nebo ulkusy jsou Moorenovy ulkusy; nebo ulkus nebo ulkusy jsou symptomy ulcerativní kolitidy.
40. Způsob ošetření onemocnění u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi, kde dané onemocnění je onemocnění očí, kardiovaskulární onemocnění, rakovina, syndrom Crow-Fukaseho (POEMS), diabetické onemocnění, srpkovitá anémie, chronický zánět, systémový lupus, glomerulonefritida, synovitida, zánětlivé střevní onemocnění, Crohnova nemoc, glomerulonefritida, revmatoidní artritida, osteoartritida, roztroušená skleróza, rejekce štěpu, Lymská nemoc, sepse, von Hippel-Lindauův syndrom, pemfigoid, psoriáza, Pagetova nemoc, polycystické ledvinové onemocnění, fibróza, sarkoidóza, cirhóza, tyreoiditida, hyperviskózní syndrom, Oslerová-Renduová-Weberova nemoc, chronické okluzní onemocnění • * · ·

808 plic, astma nebo edém po popáleninách, traumatu, ozáření, mrtvice, hypoxie nebo ischémie, syndrom ovariální hyperstimulace, preeklampsie, menometroragie, endometrióza nebo infekce Herpes simplex, Herpes Zoster, virusem způsobujícím syndrom získaného selhání imunity u člověka, Parapoxvirusem, protozoem nebo toxoplazmózou.
41. Způsob podle nároku 40, vyznačující se tím, že onemocnění očí je okulámí nebo makulámí edém, okulámí neovaskulámí onemocnění, skleritida, radiální keratotomie, uveitida, vitritida, myopie, fyziologická exkavace papily, chronické odchlípení sítnice, komplikace po ošetření laserem, konjunktivitida, Stargardtova nemoc, Ealesova nemoc, retinopatie nebo makulámí degenerace.
42. Způsob podle nároku 40, vyznačující se tím, že kardiovaskulární onemocnění je ateroskleróza, restenóza, ischémie/reperfuzní poškození, vaskulámí okluze nebo karotické obstruktivní onemocnění.
43. Způsob podle nároku 40, vyznačující se tím, ž e rakovina je pevný nádor, sarkom, fibrosarkom, osteom, melanom, retinoblastom, rabdomyosarkom, glioblastom, neuroblastom, teratokarcinom, hematopoetické zhoubné bujení, Kaposiho sarkom, Hodgkinova nemoc, lymfom, myelom, leukémie nebo maligní ascites.
44. Způsob podle nároku 40, v y z n a č u j í c í se tím, že diabetické onemocnění je inzulin-dependentní diabetes mellitus s glaukomem, diabetická retinopatie nebo mikroangiopatie.
45. Způsob snížení fertility u pacienta, vyznačující se tím, že daný způsob zahrnuje krok, ve kterém dochází k podání účinného množství sloučeniny podle nároku 1 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů pacientovi.

809
46. Způsob podle nároku 36, vyznačující se tím, že sloučenina nebo její fyziologicky přijatelná sůl, proléčivo nebo biologicky aktivní metabolit je podávána v množství, které má na angiogenezi nebo vaskulogenezi podpůrný účinek.
47. Způsob podle nároku 34, vyznačující se tím, že proteinkináza je Tie-2.
48. Způsob podle nároku 46, vyznačující se tím, že sloučenina obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelná sůl, proléčivo nebo biologicky aktivní metabolit je podávána v kombinaci s proangiogenním růstovým faktorem.
49. Způsob podle nároku 48, vyznačující se tím, že proangiogenní růstový faktor je vybrán ze skupiny sestávající se z VEGF, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, HGF, FGF-1, FGF-2, jejich derivátů a antidiodotypických protilátek.
50. Způsob podle nároku 46, vyznačující se tím, že pacient trpí anémií, ischémií, infarktem, rejekcí transplantátu, zraněním, gangrénou nebo nekrózou.
51. Způsob podle nároku 33, vyznačující se tím, že aktivita proteinkinázy se podílí na aktivaci T-buněk, aktivaci B-buněk, degranulaci žímých buněk, aktivaci monocytů, potenciaci zánětlivé odpovědi nebo jejich kombinaci.
52. Sloučenina podle nároku 1, kde: substituent R₃ je vodík; substituent R₂ je -Z^W1-Z¹⁰², kde

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-C₆)-O-, -(C,-C₆)-C(O)-, -(C,-C₆)C(O)O-, -(Ci-C₆-C(O)-NH-, -(CrCg-CCOj-NCCCi-Cg))- nebo substituovaný fenyl; a

Z¹⁰² je vodík, substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina.
53. Sloučenina podle nároku 52, kde:

Z¹⁰¹ je vybráno ze skupiny sestávající se z -CH₂-C(O)O-, -CH₂-C(O)-, • * · « · · · • · · • · · · · • 9

810

-CH₂-C(O)-NH-, -CH₂-C(O)-N(Me), -CH(Me)-C(O)O-, -(CH₂)₃-C(O)O-, -CH(Me)-C(O)-NH- a -(CH₂)₃-C(O)-NH-;

Z¹⁰² je vybráno ze skupiny sestávající se z vodíku, methylu, ethylu, Λζ/V-dimethylaminoethylu, AA-diethylaminoethylu, 2-fenyl-2hydroxyethylu, morfolinoskupiny, piperazinylu, A-methylpiperazinylu a 2-hydroxymethylpyrrolidinylu.
54. Sloučenina podle nároku 53, kde Gje vybráno z:

Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný benzoxazolyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný benzothiazolyl.

» · • · ·

811 ve kterém se vyskytuje pouze jeden substituent R_a a je vybrán ze skupiny sestávající se z atomu vodíku nebo F.
56. Sloučenina podle nároku 52, kde Z¹⁰¹ je kovalentní vazba; a

Z¹⁰² je případně substituovaný pyridyl.
57. Sloučenina podle nároku 56, kde Gje
58. Sloučenina podle nároku 1, kde: substituent R₃ je vodík; substituent R₂ je cyklopentyl; a

R_a

A // »„110. „1U„1OO

Z—A—Z—Z

Gje
59. Sloučenina podle nároku 58, kde:

Z¹¹⁰ je vodík;

A je O; a

Z¹⁰⁰ je případně substituovaný fenyl, furanyl nebo thienyl, kde Z¹⁰⁰ je případně substituované jedním nebo více substituenty, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, COOH, NO₂, OMe, -COOMe, OCF₃ a CF₃.
60. Sloučenina podle nároku 58, kde Z¹¹⁰ je vodík;

A je -0-, -O-(CR₂)_n-C(O)- nebo -O-(CR₂)_n-O-; n je v každém případě O až 3;

Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z cyklohexylu, fenylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, isoxazolylu a « ·

812 piperidinylu; kde Ζ^1θθ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající se z alkylu, alkoxyskupiny, halogenu, hydroxyskupiny a alkoxykarbonylu.
61. Sloučenina podle nároku 58, kde:

substituent R₂ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z cyklobutylu a cyklohexylu.
62. Sloučenina podle nároku 61, kde:

substituent R₂ je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny sestávající se z hydroxyskupiny, alkylu, hydroxyalkylu, karboxyalkylu a fenylalkoxyalkylu.
63. Sloučenina podle nároku 62, kde G je 4-fenoxyfenyl.
64. Sloučenina podle nároku 6, kde mje 2; a je 0; substituent Ré je H; b je 1 nebo 2; a substituenty R4 a R5 jsou každý H.
65. Sloučenina podle nároku 8, kde: mje 0,1 nebo 2; substitutent Rď je vodík; substituent R5 je vodík nebo Y-Z;

Y je kovalentní vazba, -C(O)-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_q, -(CH₂)_qC(O)- nebo

-C(O)(CH₂)_q-, kde alkylová část -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_q-, -(CH₂)_qC(O)- a -C(O)(CH₂)_q- je případně substituovaná halogenem, hydroxyskupinou nebo alkylovou skupinou; a

Z je vodík, alkyl, případně substituovaný alkyl, alkoxyalkyl, případně substituovaný heterocykloalkyl, případně substituovaný heteroaryl nebo případně substituovaná aminoskupina.
66. Sloučenina podle nároku 65, kde

Z je vybráno z atomu vodíku, methylu, ethylu, hydroxymethylu, methoxyethylu, jV-methyl-piperidinylu, (Z-butoxy-karbonyl)(hydroxy)piperidinylu, hydroxypiperidinylu, (hydroxy-methyl)piperidinylu, • · (hydroxy)(methyl)piperidinylu, morfolinoskupiny, (methoxyethyl)piperizinylu, methylpiperizinylu, 4-piperidinylpiperidinylu, imidazolylu, methylimidazolylu, A-methylaminoskupiny,

A,A-dimethyl-aminoskupiny, A-isopropyl-aminoskupiny,

Α,Α-diethylaminoskupiny, 2,3-dihydroxypropylaminoskupiny,

813

2-hydroxyethylaminoskupiny, methoxyethyl-aminoskupiny, fenylmethylaminoskupiny,

3 -hydroxy-propylaminoskupiny, ethoxykarbonylmethyl-aminoskupiny, A-methyl-A-methoxyaminoskupiny, , furanylmethylamínoskupiny, piperidinylethylaminoskupiny, A-(2-A,A-dimethylaminoethyl)-A-methyl-aminoskupiny, 2-A,A-dimethyl-aminoethylaminoskupiny,

A-methyl-A-(A-methyl-piperidin-4-yl)aminoskupiny,

2- morfolino-ethylaminoskupiny, 3 -morfolino-propylaminoskupiny,

3 -imidazolyl-propylaminoskupiny nebo

3- (2-oxopyrrolidinyl)propylaminoskupiny.
67. Sloučenina podle nároku 8, kde:

m je 2; substituent R₅ je Y-Z; Y je -C(O)-; a Z má obecný vzorec R , kde n je 0, 1,2 nebo 3.
68. Sloučenina podle nároku 9, kde:

substituent R4 je vodík nebo methyl;

A je vybráno ze skupiny sestávající se z O, -N(R)- a -N(R)C(O)-; Z¹¹¹ je -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; substituent R je vodík nebo alkyl; n je 0 až 5;

• · * · * > · · · · • ··· φ#Φ φφ··

·..· :

814 substituent R_a je jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z H, OH, F, Cl, methylu a methoxyskupiny; a substituent R[ je jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z H, CN, F, CF₃, OCF₃, methylu, methoxyskupiny a případně substituované aminoskupiny; kde uvedená aminoskupina je případně substituovaná jednou nebo více skupinami, kde každá je nezávisle vybrána ze skupiny sestávající se z alkylu, alkoxyalkylu, fenylu, substituovaného fenylu a případně substituovaného heteroarylu.
69. Sloučenina podle nároku 68, kde:

substituent Ri je 4-methylfenylthioskupina nebo 2-pyridinylthioskupina.
70. Sloučenina podle nároku 9, kde:

Gje A_^^A_(C°'^C6) ^Z,W kde Z¹⁰⁰ je vybráno ze skupiny sestávající se z benzo[ů]thiofenu, furanylu a thiofenu.
71. Sloučenina podle nároku 9, kde:

substituent R_a je alkoxyskupina; A je NH-C(O)-; a mezi A a Z¹⁰⁰ je kovalentní vazba.
72. Sloučenina podle nároků 1, 8 nebo 9, kde:

A je vybráno ze skupiny sestávající se z -N(R)-C(O)-N(R)-, -(CH2)_nN(R)C(O)N(R)-, -N(R)- a -N(R)-SO2-; substituent R je vodík nebo alkyl;

Z¹⁰⁰ je

815 pyridinyl, thiazolyl, furanyl, benzofuranyl nebo oxazolyl;

X je S, O nebo NR¹, kde substituent R¹ v každém případě je nezávisle H nebo Me; substituent Ra je jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z H a F; a substituent Ri je jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z H, F, Cl, Br, NO₂, CF₃, alkylu, alkoxyskupiny a alkoxykarbonylu.
73. Sloučenina podle nároku 72, kde: substituent R4 je methyl; m je 1, 2 nebo 3; substituent R₅ je Y-Z,

Y je -C(O)O-, -C(O)- nebo -C(O)-(CH₂)_P-; a

Z je aminoalkyl, jV-alkylaminoskupina, YA-dialkylaminoskupina nebo hydroxyalkylaminoalkyl.
74,

Sloučenina podle nároku 9, kde: substituent R4 je methyl;

,100 , kde n je 0 až 3; a

Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z indolylu, indenylu, methylindenylu, methylindolylu, dimethylaminofenylu, fenylu, cyklohexylu a benzofuranylu.
75. Sloučenina podle nároku 9, kde:

• 9 • · · · ·

816

Gje

R,

Ζ^1θθ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z fenylu, imidazolylu, indolylu, furanylu, benzofuranylu a 2,3-dihydrobenzofuranylu; kde Z¹⁰⁰ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, CN, případně substituovaného alkylu, -O- (případně substituovaného alkylu), -COOH, Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰ a -Z¹⁰⁵N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰;

Z¹⁰⁵ je kovalentní vazba nebo (Ci-Có);

Z²⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z (Ci-Có), fenylu a -(C|-C₆)-fenylu;

Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý nezávisle kovalentní vazba nebo skupina (C1-C3) případně substituovaná alkylem, hydroxyskupinou, COOH, CN nebo fenylem; a

A je O, -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)- nebo -N(R)-C(O)-, kde substituent R je H nebo alkyl.
76. Sloučenina podle nároku 75, kde substituent R4 je methyl.
77. Sloučenina podle nároků 8, 9 nebo 10, kde:

Gje

R.

‘a

A—Z

100 , kde:

Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z benzoxazolylu, benzothiazolylu a benzimidazolylu.

Sloučenina podle nároku 77, kde:

substituent R4 je methyl;

A je -NH-;

v tomto případě je zde pouze jeden substituent R_a vybraný z H nebo F; a • · · · · · ·· · • · · · · · ···· ·· · ···· v ······· · ··· · · · · • · · ·· ·· · · ·

817

Ζ^1θθ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z alkylu, halogenu, CF₃ a alkoxyskupiny.
79. Sloučenina podle nároku 9, kde: Gje

Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z fenylu, pyrrolylu, pyridylu, benzimidazolylu, naftylu a N ; kde Z¹⁰ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z F, Cl, Br, NO₂, aminoskupiny, A-alkylaminoskupiny, AA-dialkylaminoskupiny, CN, případně substituovaného alkylu, -O- (případně substituovaného alkylu) a fenylu;

Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ v každém případě je nezávisle (Co-C₃) případně substituovaný případně substituovaným fenylem; a

A je -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-S(O)₂-, -N(R)-C(O)-, -N(R)- nebo

-N(R)-C(O)-O-.
80. Sloučenina podle nároku 79, kde substituent R4 je methyl a v tomto případě je zde pouze jeden substituent R_a a je F.
81. Sloučenina podle nároku 9 nebo 66, kde:

^R.<=\

V/ά-Ζ^Ζ'”

Gje / ;

Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z fenylu, isoxazolylu, tetrahydronafthylu, furanylu, benzofuranylu, pyridylu a ·»»· • ·

818 indolylu; kde Ζ^1θθ je případně substituovaná jedním nebo více substituenty, kde každý je nezávisle vybraný ze skupiny sestávající se z F, CN, NO₂,

-C(O)H, -CONH₂, -NHSO₂CF₃, případně substituovaného alkylu, případně substituovaného heteroarylu a -O- (případně substituované alkylové skupiny);

Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý nezávisle případně substituovaný (Co-C₃); a A je O, -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-N(R)-, -C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)-C(O)nebo -N(R)-.
82. Sloučenina podle nároku 81, kde:

substituent R4 je methyl; substituent R_a je H nebo methoxyskupina; a Z¹¹⁰ a Z¹¹¹jsou každý nesubstituovaný.

kde substituent R je H nebo nižší alkyl a n je v každém případě nezávisle 1 až 6.

• · · · • · ··

819
84. Sloučenina podle nároku 83, kde:
85. Sloučenina podle nároku 84, kde Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl.
86. Sloučenina podle nároků 8, 9 nebo 10, kde:

A—Z

100

G je / , kde Z¹⁰⁰ je případně substituovaná skupina vybraná ze skupiny sestávající se z benzoxazolylu, benzothiazolylu a benzimidazolylu.
87. Sloučenina podle nároku 11, kde:

n je 2; substituent R6jeH;mjel;rjel;a substituenty R4 a R5 jsou každý vodík.
88. Sloučenina podle nároku 64 nebo 87, kde Gje 4-fenoxyfenyl.
89. Sloučenina obecného vzorce (I)

R2 <D její racemické-diastereomemí směsi, optické isomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

• · * • · · • · · · ·

820

r.^F=<_¥.

Gje , _· „mumo

Mj ZtA'-Zr Z.

R,

PrA ý

2 y(Ub kde Z¹⁰⁰ je ~ nebo skupina případně substituovaná substituentem Ri vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl, cykloalkyl, pyrrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, isochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[ 1,2-u]pyrimidinyl, 17/-imidazo[ 1,2-u]imidazolyl, imidazo[2,1 b][l,3]thiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzothienyl, furanyl, thienyl, benzothiazolyl, benzoxazolyl, benzoisoxazolyl, , thiazolyl, benzofuranyl, 2,3-dihydrobenzofuranyl, indolyl, isoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrrolyl, pyrrolopyridinyl, 77-pyridinon, oxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl, benzoisothiazolyl,

1,1-dioxybenzoisothiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-thiazolyl, pyrimidooxazolyl, pyrimido-thiazolyl a benzimidazolyl;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-Cď), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (Ci-Có) nebo případně substituovaný -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty • · « · « · « « · · « ·

821 vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů, při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, halogen, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluormethylkarbonylaminoskupina, trifluormethylsulfonamidoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkynyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované nebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylthioskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylthioskupina, -Z^l05-C(O)N(R)2, -Z^I05-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z^I05-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z^I05-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, Rc a CH₂ORc; kde substituent Rc při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂NRdRc, -W-(CH₂)_rNR<iRe, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl, nebo -W(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Có);

«· ···· • · ♦ · * « * · · · • · · ·♦ ·

822

Ζ^2θθ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-C₆), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Có)-fenyl;

substituenty Rd a při každém výskytu jsou nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Ra, Re a dusíkový atom, k němuž jsou vázány, společně tvoří 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂, nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2; substituent R₃ při každém výskytu je, nezávisle, atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)aryl, nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

A je -(Ci-C₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-; -CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)„-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)_n+i-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+1-C(O)-, -O-(CR₂)„₊₁-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-O-,

C(O)N(R)C(O)-; -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; N(R)S(O)_PC(O)-; -SON(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-; -N(R)P(O)(OR_b)-; N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O-, nebo N(C(O)R)P(OR_b)-;

substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

• · • · · · • · · ·

823 substituent Rb při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; nebo ve skupině obsahující fosfor tvoří dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a Rb společně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh; nebo

A je NRSO₂ a substituenty R, R_a a dusíkový atom společně tvoří substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z^11O-A-Z^U1 dohromady jsou kovalentní vazba; a substituent R₂ je a) atom vodíku; b) substituovaný nebo nesubstituovaný trityl; c) substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl; d) azaheteroaryl substituovaný substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem; e) azacykloalkyl, který je substituován jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Céj-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -Ci-Cé-alkyl-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-Ci-C6-alkyl-N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6-alkyl-N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -Ci-C₆-alkyl-cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný tetrahydrothienyl, a substituovaný nebo nesubstituovaný tetrahydrothiopyranyl; nebo f) skupina obecného vzorce , kde Ei je piperidinyl, piperazinyl, imidazolyl, morfolinyl, pyrrolidinyl, aminoskupina, amidoskupina, nebo tetrahydrothiazolyl, a kde E je případně substituováno jedním nebo více substituenty vybranými z -Co-Cé-alkyl-OR, -Ci-C6-alkyl-C(O)OR, -Ci-Cé-alkyl-heteroarylu, -Ci-Ce-alkyl-heterocykloalkylu, a -Ci-Cé-alkyla je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo

824 a je O a jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J2, L₂aM₂jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹¹⁰-A-Z^m dohromady jsou kovalentní vazba, pak Z¹⁰⁰ není alkyl; a s výhradou spočívající v tom, že pokud Ζ^11θ-Α-Ζ^π1 dohromady jsou Ci-Có alkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl.
90. Sloučenina podle nároku 89, kde substituent R₂ je skupina reprezentovaná následující strukturou:

vn, kde:

Ei je vybráno ze skupiny, kterou tvoří -amino-Ci-C6-alkyl-morfolinoskupina, -piperidino-(Ci-C6-alkyl-OR), -imidazolyl-Ci-C6-alkyl-C(O)OR, piperazino-Ci-C6-alkyl-OR, -amino-Ci-Cé-alkyl-OR, -pyrrolidino-OR, amino-Ci-C6-alkyl-imidazoloskupina, -amino-Ci-C6-alkyl-N(R)₂, -amidoCi-C6-alkyl-N(R)₂, tetrahydrothiazolyl, yV,yV-di-(hydroxy-Ci-C6alkyl)amino- a -piperizino-OR.
91. Sloučenina podle nároku 90, kde:

Ei je vybráno ze skupiny, kterou tvoří 4-(2-hydroxyethyl)morfolinoskupina, 3-hydroxymethylpiperidinoskupina, 2-[3-(methylkarboxy)propyl]imidizol• · · • · · · ·

825

4-yl, 4-(2-hydroxyethyl)piperazino, 2-hydroxyethylaminoskupina, 3hydroxy-pyrrolidinoskupina, 3-imidazolopropylaminoskupina, 4-hydroxybutylaminoskupina, 3-methoxypropylaminoskupina, 3-(A,A-dimethylamino)propylaminoskupina, A-[2-(/V,/V-dimethyl)ethyl]arnidoskupina, tetrahydrothiazolyl, A,A-di-(2-hydroxyethyl)aminoskupina, 4-hydroxypiperizinoskupina a 4-hydroxymethylpiperizinoskupina.
92. Sloučenina podle nároku 90, kde Z^11O-A-Z^U1 je -NHC(O)-.

90, kde G je skupina reprezentována následující

Sloučenina podle nároku
94. Sloučenina podle nároku 93, kde G je reprezentováno následující strukturou:
95. Sloučenina podle nároku 89, kde substituent R₂ je azaheteroaryl substituovaný CiCe alkylem, kde alkyl je případně substituován jedním nebo více substituenty vybranými z RO-, -C(O)OR, -C(O)N(R)₂ a -N(R)₂.
96. Sloučenina podle nároku 95, kde substituent R₂ je 4-(2-hydroxyethyl)pyridin-2-yl, 3-aminomethylpyridin-4-yl nebo 2-methylimidazol-4-yl.
97. Sloučenina podle nároku 96, kde G je reprezentováno následujícím vzorcem:

O-CH_a νΛ-ΧΡ • · · ·

826
98.
99.

Sloučenina podle nároku 89, kde substituent R2 je pyrrolidinyl, který je substituovaný 2-methoxyethylem, 7/,/7-dimethylaminomethylem, N,Ndimethylamino-1 -oxoethylem, nebo 2-(/7-methylamino)-1 -oxopropylem.

Sloučenina podle nároku 98, kde Gje reprezentováno následující strukturou:
100.

Sloučenina podle nároku 89, kde substituent R2 je piperidinyl, který je substituovaný tetrahydrothiopyranylem, tetrahydrothienylem, 2-(/V-methylamino)2-methyl-l-oxopropylem, 2-methoxyethylem nebo cyklopropylmethylem.
101.

Sloučenina obecného vzorce (I) (D její racemické-diastereomemí směsi, optické isomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

Gje ¹ x

M, Z-A‘ kde Z¹⁰⁰ je pyrrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, isochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[ 1,2-u]pyrimidinyl, l//-imidazo[ 1,2-á] imidazolyl, imidazo[2,1 -έ>] [ 1,3]thiazolyl, H-pyridinon, 1,1 -dioxybenzoisothiazolyl, • « · · • ·

827 benzoisoxazolyl, alkyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl, pyrrolopyridinyl nebo , kde všechny z předchozích Z¹⁰⁰ skupin jsou případně substituovány substituentem Ri;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Cj-Có), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (C[-Cé) nebo případně substituovaný -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů, při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, halogen, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluormethylkarbonylaminoskupina, trifluormethylsulfonamidoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo • · * ·

- ·· · · .· :

. ....... · · · ·

... ..·· · .. z ·· ·*

828 nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkynyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované nebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylthioskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylthioskupina, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, Re a CH2ORe;

kde substituent Re při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂NRaRe, -W-(CH₂)_t-NR_dR_e, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl, nebo -W(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Cé);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Có), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Có)-fenyl;

substituenty Ra a Re při každém výskytu jsou nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Ra, Re a dusíkový atom, k němuž jsou vázány, společně tvoří 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂, nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2; substituent R₃ při každém výskytu je, nezávisle, atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)aryl, nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

A je -(Cf-Cg)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-; -CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-;

829

-CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(0)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)„₊₁-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)„₊₁-C(O)-, -O-(CR₂)_n+i-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-O-, -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-; -N(R)P(O)(OR_b)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O-, nebo -N(C(O)R)P(OR_b)-;

kde substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent R_b při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; nebo ve skupině obsahující fosfor tvoří dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a R_bspolečně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh; nebo

A je NRSO₂ a substituenty R, R_a a dusíkový atom společně tvoří substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z^ll0-A-Zⁱⁿ dohromadyjsou kovalentní vazba; a substituent R₂ je H nebo skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-C₆)-O-, -(Ci-C₆)-C(O)-, -(Ci-C₆)C(O)O-, -(Ci-C₆)-C(O)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N((Ci-C₆))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný • · • · · ·

830 cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina mají jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cs), substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -N((Ci-Có)-OR)2, substituovaný nebo nesubstituovaný

-N(R)-(Ci-Cé)-C(O)2R, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Cé)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaná nebo nesubstituovaná sulfonamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný N(R)-(Ci-C6)-OR, oxoskupina, a nasycená, nenasycená nebo aromatická, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří N, O, a S; kde dusíkové atomy uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)N(R)2, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-C₆)-N(R)2, -C(O)alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylóvou skupinou, nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo substituent R2 je skupina obecného vzorce -B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo • · · • * · · » *

831 nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (Cj-Cé)azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-Cé)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(Cr Ce)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Có)-N(R)-„ substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-Cé)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Dj, Gi, Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

• ·

832 b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂a M₂ jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s výhradou spočívající v tom, že pokud A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, pak Z¹⁰⁰ není alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl nebo pyrrolidinyl;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, pak A není alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- nebo -C(0)0-;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹¹⁰-A-Z^m dohromady jsou kovalentní vazba, pak Z¹⁰⁰ není alkyl;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z^H0-A-Z^H1 dohromady jsou Cj-Cé alkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrólyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl; a s výhradou spočívající v tom, že pokud substituent R₂ je substituovaný nebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba, pak A není -0-, -C(0)0-, nebo -N(R)-.
102.

Sloučenina podle nároku 101, kde Z¹⁰⁰ je 2-pyrrolidinyl, 1,2-dihydro-2-oxopyridin3-yl, benzoisoxazol-3-yl, l,l-dioxybenzoisothiazol-3-yl, imidazo[l,2-o]pyridin-2-yl nebo substituent R₂ je 4-(4-methylpiperazino)-cyklohexyl,
103. Sloučenina podle nároku 102, kde Z¹¹⁰-A-Z^nl je -NH-.
104. Sloučenina podle nároku 101, kde Z¹⁰⁰ je pyrrolopyridinyl vybraný ze skupiny

833
105. Sloučenina podle nároku 104, kde Z¹¹⁰-A-Z^m je -NHC(O)-.
106. Sloučenina podle nároku 105, kde substituent R₂ je piperidin-4-yl, A-methylpiperidin-4-yl, A-(prop-2-yl)piperidin-4-yl, 7V-(imidazol-4-yl-methyl)piperidin-4-yl,

7V-(2-methylimidazol-4-yl-methyl)piperidin-4-yl, A-(pyrazol-4-yl-methyl)piperidin-4-yl, A-(2-methoxyethyl)piperidin-4-yl, A-(fur-3-yl-methyl)pipendin-4-yl, A-(tetrahydropyran-4-yl-methyl)piperidin-4-yl, A-(pyrrol-2-yl-methyl)piperidin-4yl, nebo A-(2-difluorethyl)piperidin-4-yl.
107. Sloučenina obecného vzorce (I) její racemické-diastereomemí směsi, optické isomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

• · · ·

Gje

834

D-j-G //’ δ

2 /(¾ kde Z¹ je nebo skupina případně substituovaná substituentem

Ri vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl, cykioalkyl, pyrrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, isochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2ízjpyrimidinyl, lA-imidazo[l,2-«]imidazolyl, imidazo[2,l-Z>][l,3]thiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzothienyl, furanyl, thienyl, benzoxazolyl, benzoisoxazolyl, benzothiazolyl, thiazolyl, benzofuranyl,

2,3-dihydrobenzofuranyl, indolyl, isoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrrolyl, pyrrolopyridinyl, A-pyridinon, oxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[l,2-«]pyridinyl, benzoisothiazolyl, 1,1-dioxybenzoisothiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-thiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-thiazolyl a benzimidazolyl;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-C₆), který je případně substituován jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (Ci-Có) nebo případně substituovaný -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, • · · ·

835 substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

každý je substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů, při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, -C(O)Oaryl, -C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloaikyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)_p-, a kde alespoň jeden ze substituentů R_a a Rj není atom vodíku;

substituent R₃ při každém výskytu je, nezávisle, atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)aryl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

A je -(C,-C₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-; -CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)_n+1-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+i-C(O)-, -O-(CR₂)_n+1-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-O-, -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-; -N(R)P(O)(OR_b)-; N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O-, nebo N(C(O)R)P(OR_b)-;

• 9

9 9

836 kde substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent Rb při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; nebo ve skupině obsahující fosfor tvoří dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a Rb společně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh; nebo

A je NRSO2 a substituenty R, R_a a dusíkový atom společně tvoří substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z¹¹⁰-A-Zⁿⁱ dohromady jsou kovalentní vazba; a substituent R₂ je H nebo skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-C₆)-O-, -(Ci-C₆)-C(O)-,

-(Ci-C₆)-C(O)O-, -(Ci-C₆)-C(O)-NH-, -(C_rC₆)-C(O)-N((C,-C₆))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina mají jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný (Cj-Có), substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Có)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -N((Ci-C₆)-OR)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Có)C(O)₂R, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C₆)-OR, • · · • · · · • · · · · · • · · ·· ·

837 substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C₆)-N(R)-(Ci-C₆)-N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovaná nebo nesubstituovaná sulfonamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, oxoskupina, a nasycená, nenasycená nebo aromatická, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří N, O, a S; kde dusíkové atomy uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovaným nebo nesubstituovaným C(O)-(Ci-Cé)-N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo substituent R₂ je skupina obecného vzorce -B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aíkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Có)azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný • · ·

838 nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-C₆)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(CiCó)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(Cj-C6)-N(R)substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

a je 1 a symboly D_b G_b J_b Li a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D_b G_b J_b Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů D_b G_b Lj a Mi je NR_a, jeden ze symbolů D_b G_b Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent Ra má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D2, G2, J2, L2 a M2 jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D2, G2, J2, L2 a M2 jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D2, G2, L2 a M2 je NR_a, jeden ze symbolů D2, G2, L2 a M2 je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s výhradou spočívající v tom, že pokud A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R2 je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo • · · ·

839

3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, pak Z¹⁰⁰ není alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl nebo pyrrolidinyl;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, pak A není alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- nebo -C(0)0-;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹¹⁰-A-Z¹¹¹, dohromady jsou kovalentní vazba, pak Z¹⁰⁰ není alkyl;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹¹⁰-A-Z^1H dohromady jsou Ci-Có alkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl; a s výhradou spočívající v tom, že pokud substituent R₂ je substituovaný nebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba, pak A není -0-, -C(0)0-, nebo -N(R)-.
108. Sloučenina obecného vzorce (I) její racemické-diastereomemí směsi, optické isomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

Gje ^110 _A „li LU 00 ZÍí JTa JLt « ·

840 nebo skupina případně substituovaná substituentem Ri vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl, cykloalkyl, pyrrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, isochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2íz]pyrimidinyl, 1 A-imidazo[ 1,2-rz]imidazolyl, imidazo[2,1 -b][ 1,3]thiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzothienyl, furanyl, thienyl, benzoxazolyl, benzoisoxazolyl, thiazolyl,

2,3-dihydrobenzofuranyl,

N // benzofuranyl, indolyl, isoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrrolyl, pyrrolopyridinyl, H-pyridinon, oxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[l,2-u]pyridinyl, benzoisothiazolyl, 1,1-dioxybenzoisothiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-thiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-thiazolyl a benzimidazolyl;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-Cé), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (Ci-Ce) nebo případně substituovaný -(CH2)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů, při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, halogen, • · · · • ·

4 · « · · • · · · « • · · · • . * • · · · · • · * » · ·

841

-CN, -N0₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)Oheteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluormethylkarbonylaminoskupina, trifluormethylsulfonamidoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkynyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované nebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylthioskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylthioskupina, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵ N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z- ²⁰°,

Rc a CH₂ORc;

kde substituent Rc při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂NRdRe, -W-(CH₂)_tNR_<1Rc, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl, nebo -W(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Cé);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cé), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C₆)-fenyl;

• « · ·

842 substituenty Rd a při každém výskytu jsou nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo

SO₂-alkyl; nebo substituenty Rd, Re a dusíkový atom, k němuž jsou vázány, společně tvoří 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂, nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2; substituent R3 při každém výskytu je, nezávisle, atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)aryl, nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

A je -(Ci-C₆)-;

substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2;

substituent R₂ je H nebo skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-C₆)-O-, -(Ci-C₆)-C(O)-, -(Ci-C₆)— C(O)O-, -(Ci-C₆)-C(O)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N((Ci-C₆))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina mají jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cď), substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, ·· ···· ·· r

843 substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C₆)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -N((Ci-C₆)-OR)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6) C(O)₂R, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-Cg)-N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-Ce)-N(R)₂, substituovaná nebo nesubstituovaná sulfonamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Ce)-OR, oxoskupina, a nasycená, nenasycená nebo aromatická, substituovaná nebo nesubstituovaná heíerocyklická skupina obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří N, O, a S; kde dusíkové atomy uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovaným nebo nesubstituovaným C(O)-(Ci-C6)-N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo substituent R₂ je skupina obecného vzorce -B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo • · • · · · • · • · « • · · «

844 nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-C₆)azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(CiCó)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Cé)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂a M₂ jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NRa, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a • · · ·

845 n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Ζ^11θ-Α-Ζ^π1 dohromady jsou Ci-Cé alkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl.
109.

Sloučenina obecného vzorce (I)

W:

O) její racemické-diastereomemí směsi, optické isomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

^DC ¹ X¹

W w/A, 110 „ltl-WO JMLj A

Gje

I,

Pt+g,

A kde Z¹⁰⁰je nebo skupina případně substituovaná substituentem Ri vybraná ze skupiny, kterou tvoří pyrrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, isochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-a]pyrimidinyl, l//-imidazo[ 1,2-«]imidazolyl, imidazo[2,1 -b\ [ 1,3]thiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzothienyl, furanyl, thienyl, benzoxazolyl, benzoisoxazolyl, benzothiazolyl, • · · • · · • · · • · · -.......

• · · · · · ··· • · · · · · · • · · · · · ·

846 , thiazolyl, benzofuranyl, 2,3-dihydrobenzofuranyl, indolyl, isoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrrolyl, pyrrolopyridinyl, H-pyridinon, oxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl, benzoisothiazolyl, 1,1-dioxybenzoisothiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyridothiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-thiazolyl a benzimidazolyl; každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů, pri každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, halogen, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)Oheteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluormethylkarbonylaminoskupina, trifluormethylsulfonamidoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkylalkyi, substituovaný nebo nesubstituovaný alkynyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované nebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylthioskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylthioskupina, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)₂,

-Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, _z200

105

Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)₂-Z^zw, -Z^1U3-N(R)-C(O)-N(R)-Z _z200

Rc a CH₂ORc;

« ·

847 kde substituent 1% při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂ΝΙ%Ι%, -W-(CH₂)rNRdRe, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl, nebo -W(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Cj-Có);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Cj-Cď), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Cé)-fenyl;

substituenty 1% a R_c při každém výskytu jsou nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty 1%, 1% a dusíkový atom, k němuž jsou vázány, společně tvoří 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂, nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2; substituent R3 při každém výskytu je, nezávisle, atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)aryl, nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2;

Z¹’θ-Α-Ζ¹¹¹ dohromady jsou kovalentní vazba; a substituent R₂ je H nebo skupina obecného vzorce -Ζ’θ’-Ζ¹⁰²;

Ζ’θ’ je kovalentní vazba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-C₆)-O-, -(Ci-C₆)-C(O)-,

-(Ci-C₆)-C(O)O-, -(Ci-C₆)-C(O)-NH-, -(Ci-C6)-C(O)-N((C!-C6))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, • · · • · · • · · « • ·

848 nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina mající jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydroxyl, kyanoskupina, nítroskupina, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cé), substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cé)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -N((Ci-Có)-0R)2, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cé)C(O)₂R, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Cé) -N(R)-(Ci-Có)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-Cň)- -N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -(C]-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovaná nebo nesubstituovaná sulfonamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Ce)-OR, oxoskupina, a nasycená, nenasycená nebo aromatická, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří N, O, a S; kde dusíkové atomy uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovaným nebo nesubstituovaným C(O)-(Ci-Cé)-N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo substituent R₂ je skupina obecného vzorce -B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná • · · ·

849 aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cé)azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(CiCó)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Ce)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C₆)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo • · • · · ·

850 a je 0 a jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂a M₂ jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6.
110. Sloučenina obecného vzorce (I) její racemické-diastereomemí směsi, optické isomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

R.

D

Gje (¾ ¹ A

AIVA- JLt Z*

Dr+G, ² \\ (J,)_;

2'b kde Z¹⁰⁰je nebo skupina případně substituovaná substítuentem Ri vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl, cykloalkyl, pyrrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, isochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2• · · · ízjpyrimidinyl, 1 A-imidazo[ 1,2-a]imidazolyl, imidazo[2,1 -/?][ 1,3]thiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzothienyl, furanyl, thienyl, benzoxazolyl,

851 benzoisoxazolyl, benzothiazolyl, , thiazolyl, benzofuranyl, 2,3-dihydrobenzofuranyl, indolyl, isoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrrolyl, pyrrolopyridinyl, A-pyridinon, oxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl, benzoisothiazolyl, 1,1-dioxybenzoisothiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyridothiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-thiazolyl a benzimidazolyl;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-Có), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (Ci-C₆) nebo případně substituovaný -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů, při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, halogen, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)Oheteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluormethylkarbonylaminoskupina, trifluormethylsulfonamidoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykioalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný • · · · • ·

852 nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkynyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované nebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylthioskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylthioskupina, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, Z¹⁰⁵-N(R)C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, Rc a CH₂ORc;

kde substituent Rc při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂NRaRc, -W-(CH₂)_t-NRdRc, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl, nebo -W(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Có);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Cj-Có), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Có)-fenyl;

substituenty Rd a Re při každém výskytu jsou nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Ra, Re a dusíkový atom, k němuž jsou vázány, společně tvoří 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂, nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;

853 substituent R₃ při každém výskytu je, nezávisle, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)aryl, nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl.

A je -(Ci-C₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-; -CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)„-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)_n+i-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)„₊i-C(O)-, -O-(CR₂)_n+i-O-, -N(C(O)R)S(0)_p-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-O-, -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-; -N(R)P(O)(OR_b)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O-, nebo N(C(O)R)P(OR_b)-;

kde substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent R_b při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; nebo ve skupině obsahující fosfor tvoří dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a R_bspolečně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh; nebo

A je NRSO₂ a substituenty R, R_a a dusíkový atom společně tvoří substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z¹¹⁰-A-Z¹¹¹ dohromady jsou kovalentní vazba; a substituent R₂ je H nebo skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

• ·

854

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-Có)-, -(Ci-Céj-O-, -(Ci-Có)--C(O)-, -(Ci-Cé)-C(O)O-, -(Ci-C₆)-C(O)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N((Ci-C₆))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina mají jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný (Cj-Có), substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cé)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -N((Ci-Cé)-OR)2, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C₆)C(0)2R, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C₆)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Cé)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Cé)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)2, substituovaná nebo nesubstituovaná sulfonamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Có)-OR, oxoskupina, a nasycená, nenasycená nebo aromatická, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří N, O, a S; kde dusíkové atomy uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(0)N(R)2, substituovaným nebo nesubstituovaným C(O)-(Ci-Cé)-N(R)2, -C(O)~alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem,

855 substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo substituent R₂ je skupina obecného vzorce -B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Có)azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-Có)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-Cé)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(CiCé)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Có)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná • · · • · · · • ·

856 arylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D_b Gi, Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů Di, Gj, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂a M₂ jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s výhradou spočívající v tom, že pokud A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydroíur-2-yl nebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, pak Z¹⁰⁰ není alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl nebo pyrrolidinyl;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl nebo 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, pak A není alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- nebo -C(0)0-;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z^ll0-A-Zⁿⁱ dohromady jsou kovalentní vazba, pak Z¹⁰⁰ není alkyl;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z^I10-A-Zⁿⁱ dohromady jsou Ci-Có alkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl; a s výhradou spočívající v tom, že pokud substituent R₂ je substituovaný nebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba, pak A není -0-, -C(0)0-, nebo -N(R)-.

A A · • · · • * · · ·· · · « e · · • · · · · • · · · · · · ·

857
111. Sloučenina obecného vzorce (I) »2 (D její racemické-diastereomemí směsi, optické isomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

Q—(T)_a ^R»yj κ ^D1 \ ¹ Ál

V A

A A iJwmA

Gje

2 ,(¾ kde Z¹⁰⁰ je ‘*2 nebo skupina případně substituovaná substituentem Ri vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl, cykloalkyl, pyrrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, isochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-a]pyrimidinyl, lA-imidazo[l,2-u]imidazolyI, imidazo[2,lZ?][l,3]thiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzothienyl, furanyl, thienyl, benzoxazolyl, benzoisoxazolyl, benzothiazolyl, , 3' ,thiazolyl, benzofuranyl, 2,3dihydrobenzofuranyl, indolyl, isoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrrolyl, pyrrolopyridinyl, H• · · * • · « a • « * • · • · · • « · » «

858 pyridinon, oxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl, benzoisothiazolyl, 1,1dioxybenzoisothiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyrido-thiazolyl, pyrimidooxazolyl, pyrimido-thiazolyl a benzimidazolyl;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-Cď), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (Cj-Cď) nebo případně substituovaný -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů, při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, halogen, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)Oheteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluormethylkarbonylaminoskupina, trifluormethylsulfonamidoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný « · · · • · W « ” • · · · ·· · • · · * • a ·» *

859 alkynyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované nebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylthioskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylthioskupina, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, Z¹⁰⁵N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, Rc a CH₂ORc;

kde substituent Rc při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂NRaRc, -W-(CH₂)t-NRdRc, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl, nebo -W(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Có);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Có), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Cój-fenyl;

substituenty Ra a Re při každém výskytu jsou nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Ra, Re a dusíkový atom, k němuž jsou vázány, společně tvoří 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂, nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2;

substituent R3 při každém výskytu je, nezávisle, atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)aryl, nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

A je -(Ci-C₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-;

-CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; N(R)S(O)_P-;

860

-OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)„-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)_n+1C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+i-C(O)-, -O-(CR₂)„₊i-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-;

-N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-O-, -C(O)N(R)C(O)-;

-S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-; -N(R)P(O)(OR_b)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-;

-N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O-, nebo -N(C(O)R)P(OR_b)-; kde substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent R_b při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; nebo ve skupině obsahující fosfor tvoří dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a R_bspolečně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh; nebo

A je NRSO₂ a substituent R, R_a a dusíkový atom společně tvoří substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z¹¹⁰-A-Z^H1 dohromady jsou kovalentní vazba; a substituent R₂ je skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-Cé)-, -(Ci-Cď)-0-, -(Ci-Có)--C(O)-,

-(C,-C₆)-C(O)O-, -(Ci-C₆)-C(O)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N((Ci-C₆))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, kde uvedený substituovaný cykloalkenyl má jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cď), substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Ce)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -N((Ci-C6)-OR)₂, substituovaný nebo • · · · • · • ·

I · · · ♦ ·

861 nesubstituovaný nesubstituovaný nesubstituovaný

-N(R)-(Ci-C6)-C(O)2R, substituovaný nebo

-(Ci-C₆)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný nebo

-(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C₆)-N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Có)-C(O)N-(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovaná nebo nesubstituovaná sulfonamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Cé)-OR, oxoskupina, a nasycená, nenasycená nebo aromatická, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří N, O, a S; kde dusíkové atomy uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-Cé)-N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem;

a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů Di, Gi, Ji, Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂a M₂ jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6.

• · * • · « · » · · · · ·

862

12. Sloučenina obecného vzorce (I) její racemické-diastereomemí směsi, optické isomery, farmaceuticky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivní metabolity, kde:

Gje r ({A i L yllP*_ylUylOO

R rl

PttG₇ ^f/\ \

2 A-^b kde Z¹⁰⁰ je * * nebo skupina případně substituovaná substituentem

Ri vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl, cykloalkyl, pyrrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, isochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2ajpyrimidinyl, lA-imidazo[l,2-íz]imidazolyl, imidazo[2,l-6][l,3]thiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzothienyl, furanyl, thienyl, benzoxazolyl, benzoisoxazolyl, benzothiazolyl, _

S ,thiazolyl, benzofuranyl, 2,3-dihydrobenzofuranyl, indolyl, isoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrrólyl, pyrrolopyridinyl, A-pyridinon, oxazolyl, isothiazolyl, • · • · · · • · • ·· ·· ···· ···· ·♦ · ···· « · ···· ·· · · ** · ···· ··· ···· ··· • « · ·· ·· ·· ·

863 oxadiazolyl, thiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[l,2-íz]pyridinyl, benzoisothiazolyl, 1,1-dioxybenzoisothiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyridothiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-thiazolyl a benzimidazolyl;

Z¹¹⁰ je kovalentní vazba nebo případně substituovaný (Ci-Cď), který je případně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

Z¹¹¹ je kovalentní vazba, případně substituovaný (Ci-Có) nebo případně substituovaný -(CH2)_n-cykloalkyl-(CH2)_n-; kde případně substituované skupiny jsou případně substituovány jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří alkyl, CN, OH, halogen, NO₂, COOH, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina a substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl;

každý ze substituentů R_a a Ri představuje jeden nebo více substituentů, pri každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, halogen, -CN, -NO2, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl, -C(O)Oheteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluormethylkarbonylaminoskupina, trifhiormethylsulfonamidoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkylalkyi, substituovaný nebo nesubstituovaný alkynyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný « * • · · • · · · · • · · · · · · • ······· · • · · · · · • · · ♦ · · ·

864 nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované nebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylthioskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylthioskupina, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2,

-Z¹⁰⁵-N(R)C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)₂-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰,

Rc a CH₂ORc;

kde substituent Rc při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NRdRe, -W-(CH₂)_t-NRdRc, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂),-S-alkyl, nebo -W-(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Cé);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-C₆), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Cé)-fenyl;

substituenty Rd a Re při každém výskytu jsou nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Rd, Re a dusíkový atom, k němuž jsou vázány, společně tvoří 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂, nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhem 2; substituent R3 při každém výskytu je, nezávisle, atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)aryl, nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

A je -(C_rC₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-; -CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)-(CH₂)_n+i-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+1-C(O)-, -O-(CR₂)_n+1-O-, • · • ·

865

-N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-O-, -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(0)0-; -N(R)P(ORb)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR„)O-; -N(R)P(O)(OR_b)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O-, nebo -N(C(O)R)P(OR_b)-;

kde substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

substituent R_b při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; nebo ve skupině obsahující fosfor tvoří dusíkový atom, atom fosforu, substituenty R a R_bspolečně 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh; nebo

A je NRSO₂ a substituenty R, R_a a dusíkový atom společně tvoří substituovaný nebo nesubstituovaný 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklický kruh kondenzovaný ke kruhu 1; nebo

Z¹’θ-Α-Ζ¹¹¹ dohromady jsou kovalentní vazba; a substituent R₂ je skupina obecného vzorce -Ζ’θ’-Ζ¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-C_b)-, -(Ci-C_b)-O-, -(Ci-Cé)--C(O)-,

-(Ci-C₆)-C(O)O-, -(C,-C₆)-C(O)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N((C!-C₆))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je substituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde uvedená substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina mají jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří nitroskupina, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Cg), substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovaný nebo nesubstituovaný -N((Ci-C6)-OR)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)866

C(O)₂R, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C₆)-N(R)-(Ci-C6)-OR, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C₆)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-Cé)-N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, a substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří O, a S; kde dusíkové atomy uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)-(C|-C₆)-N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem;

a je 1 a symboly D_b G_b J_b Li a Mi jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D_b G_b J_b Li a Mi jsou CR_a; nebo a je 0 a jeden ze symbolů D_b G_b Li a Mi je NR_a, jeden ze symbolů D_b G_b Li a Mi je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent Ra má shora definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂a M₂ jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam; a n při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s výhradou spočívající v tom, že pokud A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, pak Z¹⁰⁰ není alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl nebo pyrrolidinyl;

• · ·

867 s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ jsou každý kovalentní vazba a substituent R₂ je 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, pak A není alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- nebo -C(0)0-;

s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹¹⁰-A-Z¹¹¹ dohromady jsou kovalentní vazba, pak Ζ^Ιθθ není alkyl; a s výhradou spočívající v tom, že pokud Z¹¹⁰-A-Z^nl dohromady jsou Cj-Có alkyl, pak Z¹⁰⁰ není fenyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl nebo thienyl.
113. Způsob inhibice aktivityjedné nebo více proteinkináz u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 89, 101, 107, 108, 109, 110, 111 nebo 112 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
114. Způsob podle nároku 113, vyznačující se tím, že daná proteinkináza je vybrána ze skupiny sestávající se z KDR, FGFR-1, PDGFRp, PDGFRa, IGF-1R, c-Met, Fit-1, Flt-4, TIE-2, TIE-1, Lek, Src, fyn, Lyn, Blk, hek, fgr a yes.
115. Způsob ovlivnění hyperproliferačních poruch u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 89, 101, 107, 108, 109, 110, 111 nebo 112 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
116. Způsob ovlivnění angiogenezeupacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 89, 101, 107, 108, 109, 110, 111 nebo 112 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
117. Způsob podle nároku 113, vyznačující se tím, že proteinkináza je proteinová serin/threoninkináza nebo proteinová tyrosinkináza.

868
118. Způsob ošetření jednoho nebo více ulkusů u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 89, 101, 107, 108, 109, 110, 111 nebo 112 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi.
119. Způsob podle nároku 118, vyznačující se tím, že ulkus nebo ulkusyjsou způsobeny bakteriální nebo plísňovou infekcí; nebo ulkus nebo ulkusy jsou Moorenovy ulkusy; nebo ulkus nebo ulkusy jsou symptomy ulcerativní kolitidy.
120. Způsob ošetření onemocnění u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 89, 101, 107, 108, 109, 110, 111 nebo 112 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů danému pacientovi, kde dané onemocnění je onemocnění očí, kardiovaskulární onemocnění, rakovina, syndrom Crow-Fukaseho (POEMS), diabetické onemocnění, srpkovitá anémie, chronický zánět, systémový lupus, glomerulonefritida, synovitida, zánětlivé střevní onemocnění, Crohnova nemoc, glomerulonefritida, revmatoidní artritida, osteoartritida, roztroušená skleróza, rejekce štěpu, Lymská nemoc, sepse, von Hippel-Lindauův syndrom, pemfígoid, psoriáza, Pagetova nemoc, polycystické ledvinové onemocnění, fibróza, sarkoidóza, cirhóza, tyreoiditida, hyperviskózní syndrom, Oslerová-RenduováWeberova nemoc, chronické okluzní onemocnění plic, astma nebo edém po popáleninách, traumatu, ozáření, mrtvice, hypoxie, ischémie, syndrom ovariální hyperstimulace, preeklampsie, menometroragie, endometrióza nebo infekce Herpes simplex, Herpes Zoster, virusem způsobujícím syndrom získaného selhání imunity u člověka, Parapoxvirusem, protozoem nebo toxoplazmózou.
121. Způsob podle nároku 120, vyznačující se tím, že onemocnění očí je okulámí nebo makulární edém, okulámí neovaskulámí onemocnění, skleritida, radiální keratotomie, uveitida, vitritida, myopie, fyziologická exkavace papily, chronické odchlípení sítnice, komplikace po ošetření laserem, konjunktivitida, Stargardtova nemoc, Ealesova nemoc, retinopatie nebo makulární degenerace.

869
122. Způsob podle nároku 120, vyznačující se tím, že kardiovaskulární onemocnění je ateroskleróza, restenóza, ischémie/reperfuzní poškození, vaskulámí okluze nebo karotické obstruktivní onemocnění.
123. Způsob podle nároku 120, vyznačující se tím, že rakovina je pevný nádor, sarkom, fibrosarkom, osteom, melanom, retinoblastom, rabdomyosarkom, glioblastom, neuroblastom, teratokarcinom, hematopoetické zhoubné bujení, Kaposiho sarkom, Hodgkinova nemoc, lymfom, myelom, leukémie nebo maligní ascites.
124. Způsob podle nároku 120, vyznačující se tím, že diabetické onemocnění je inzulin-dependentní diabetes mellitus s glaukomem, diabetická retinopatie nebo mikroangiopatie.
125. Způsob snížení fertility u pacienta, vyznačující se tím, že daný způsob zahrnuje krok, ve kterém dochází k podání účinného množství sloučeniny podle nároku 89, 101, 107, 108, 109, 110, 111 nebo 112 nebo její fyziologicky přijatelné soli, proléčiva nebo biologicky aktivních metabolitů pacientovi.
126. Způsob podle nároku 116, vyznačující se tím, že sloučenina nebo její fyziologicky přijatelná sůl, proléčivo nebo biologicky aktivní metabolit je podávána v množství, které má na angiogenezi nebo vaskulogenezi podpůrný účinek.
127. Způsob podle nároku 114, vyznačující se tím, že proteinkináza je Tie-2.
128. Způsob podle nároku 126, vyznačující se tím, že sloučenina obecného vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelná sůl, proléčivo nebo biologicky aktivní metabolit je podávána v kombinaci s proangiogenním růstovým faktorem.
129. Způsob podle nároku 128, vyznačující se tím, že proangiogenní růstový faktor je vybrán ze skupiny sestávající se z VEGF, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, HGF, FGF-1, FGF-2, jejich derivátů a antiidiodotypických protilátek.
130.
131.
132.

··« * · · ··· • · · · ·· · ···· « ······· · · · · ···· • · · «» · > « ♦ *

870

Způsob podle nároku 126, vyznačující se tím, že pacient trpí anémií, ischémií, infarktem, rejekcí transplantátu, zraněním, gangrénou nebo nekrózou.

Způsob podle nároku 113, vyznačující se tím, ž e aktivita proteinkinázy se podílí na aktivaci T-buněk, aktivaci B-buněk, degranulaci žímých buněk, aktivaci monocytu, potenciaci zánětlivé odpovědi nebo jejich kombinaci.

Způsob přípravy 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového meziproduktu reprezentovaného následující strukturou:

kde:

Z¹⁰⁰ je * nebo skupina případně substituovaná substítuentem Rj vybraná ze skupiny, kterou tvoří alkyl, cykloalkyl, pyrrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, isochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2njpyrimidinyl, 1 A-imidazo[ 1,2-n]imidazolyl, imidazo[2,1 -b] [ 1,3]thiazolyl, naftyl, tetrahydronaftyl, benzothienyl, furanyl, thienyl, benzoxazolyl, benzoisoxazolyl, benzothiazolyl, indolyl, isoxazolyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, pyrazolyl, pyrrolyl, pyrrolopyridinyl, H-pyridinon, oxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, indolinyl, indazolyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl, benzoisothiazolyl, 1,1-dioxybenzoisothiazolyl, pyrido-oxazolyl, pyridothiazolyl, pyrimido-oxazolyl, pyrimido-thiazolyl a benzimidazolyl;

substituenty R_a a Ri představují jeden nebo více substituentů, při každém výskytu nezávisle vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, halogen, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkyl, -C(O)O-aryl,

-C(O)O-heteroaryl, -C(O)-alkyl, -C(O)-aryl, -C(O)-heteroaryl, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, tetrazolyl, trifluormethylkarbonylaminoskupina, trifluormethylsulfonamidoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroaryloxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylalkoxyskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylalkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-S-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-S(O)_p-, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkynyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituované nebo nesubstituované amidoskupiny, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylthioskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylthioskupina, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, Rc a CH₂ORc;

• 9

872 kde substituent R< při každém výskytu je nezávisle atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, -CH₂NRaRe, -W-(CH₂)_t-NR_dR_e, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl, nebo -W(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ při každém výskytu je nezávisle kovalentní vazba nebo (Ci-Có);

Z²⁰⁰ při každém výskytu je nezávisle substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-Có), substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Cój-fenyl;

substituenty Rd a Re při každém výskytu jsou nezávisle H, alkyl, alkanoyl nebo SO₂-alkyl; nebo substituenty Rd, Re a dusíkový atom, k němuž jsou vázány, společně tvoří 5-ti nebo 6-ti členný heterocyklícký kruh;

t při každém výskytu je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W při každém výskytu je nezávisle přímá vazba nebo O, S, S(O), S(O)₂, nebo NRf, kde substituent Rf při každém výskytu je nezávisle H nebo alkyl; nebo substituent Ri je substituovaný nebo nesubstituovaný karbocyklický nebo heterocyklícký kruh kondenzovaný s kruhem 2; a substituent R při každém výskytu je nezávisle H, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 nebo 2; a b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ jsou každý nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, s podmínkou, že alespoň dva ze symbolů D₂, G₂, J₂, L₂a M₂ jsou CR_a; nebo b je 0 a jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden ze symbolů D₂, G₂, L₂ a M₂je CR_a a zbytek je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří CR_a a N, kde substituent R_a má shora definovaný význam;

vyznačující se tím, že zahrnuje krok, ve kterém dochází v přítomnosti aprotické báze k reakci chloridu kyseliny reprezentovaného následující strukturou:

• · · s (4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolanyl)anilinem reprezentovaným následující strukturou:

873 za vzniku uvedeného 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového meziproduktu.
133. Způsob podle nároku 132, vyznačující se tím, že dále zahrnuje krok, ve kterém dochází k reakci 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového meziproduktu v přítomnosti tetrakis(trifenylfosfm)palladia(0) a uhličitanu sodného s 3-jod-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidinem reprezentovaným následující strukturou:

kde:

substituent R2 je H nebo skupina obecného vzorce -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentní vazba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-C₆)~O-, -(Cj-C₆)-C(O)-,

-(C,-C₆)-C(O)O-, -(Ci-C₆)-C(O)-NH-, -(CrCéj-CÍOj-NGCrCé))- nebo substituovaná nebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je atom vodíku; substituovaná nebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná nebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterocyklická skupina; nebo substituovaná nebo nesubstituovaná, nasycená nebo nenasycená heterobicyklická skupina; kde »· · • · • · · • · ·

874 uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina mají jeden nebo více substituentů, kde každý je nezávisle vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydroxyl, kyanoskupina, nitroskupina, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný (Ci-C₆), substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovaný nebo nesubstituovaný -N((Ci-C₆)-OR)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-Ce) C(O)₂R, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-Cg)-N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovaný nebo nesubstituovaný -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovaná nebo nesubstituovaná sulfonamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná ureidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná karboxamidoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný -N(R)-(Ci-C6)-0R, oxoskupina, a nasycená, nenasycená nebo aromatická, substituovaná nebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahující jeden nebo více heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří N, O, a S; kde dusíkové atomy uvedené heterocyklické skupiny nebo heterobicyklické skupiny jsou nezávisle případně substituovány oxoskupinou, substituovaným nebo nesubstituovaným alkylem, substituovaným nebo nesubstituovaným arylem, substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylem, substituovaným nebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovaným nebo nesubstituovaným C(O)-(Ci-C6)-N(R)₂, -C(O)-alkylem, -C(O)-arylem, -C(O)-heteroarylem, substituovanou nebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou, nebo substituovaným nebo nesubstituovaným heteroarylalkylem; nebo substituent R₂ je skupina obecného vzorce -B-E, kde B je substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná nebo • · • · · · · · · ···· ·· · ···· • ······· · ··· «···· • · · ···· ·· · « · « ·· · * · · ·

875 nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylen, substituovaný nebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylenkarbonyl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný cykloaikyl, substituovaný nebo

nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný (C i -Cój-azacykloalkyl-, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný

azacykloalkylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-Cé)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-Cé)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný aryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-Cé)-N(R)-, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný nebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná nebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný aryl; a substituent R₃ při každém výskytu je, nezávisle, atom vodíku, hydroxyskupina, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný nebo nesubstituovaný • ·
134.
135.
136.

876

-C(O)-aryl, nebo substituovaný nebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl nebo substituovaná nebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

za vzniku sloučeniny reprezentované následující strukturou:

Způsob podle nároku 133, vyznačující se tím, že dále zahrnuje krok, ve kterém dochází k reakci karboxylové kyseliny reprezentovaného následující strukturou:

O s oxalylchloridem a v aprotické bázi za vzniku chloridu kyseliny reprezentované následující strukturou:

O cr z¹⁰⁰

Způsob podle nároku 132, 133 nebo 134, vyznačující se tím, že Z¹⁰⁰ je indolyl, který je případně substituovaný substituentem Rj.

Způsob podle nároku 135, vyznačující se tím, že Z¹⁰⁰je 1-methyl-indol2-ylnebo l-methyl-indol-3-yl.
137. Způsob podle nároku 136, vyznačující se tím, že (4,4,5,5-tetramethylv · · · * · «·· «··» ·· » · · · · « ·····«· · · · · ♦ fc » · • · « · · · * ·· ·

877

-l,3,2-dioxa-borolanyl)anilin je reprezentován následující strukturou:

a 4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový meziprodukt je reprezentován
138. Způsob podle nároku 137, vyznačující se tím, že substituentR₂je 4-(4-methylpiperazino)cyklohexyl.