SK13122003A3 - Pyrazolopyrimidíny ako terapeutické prostriedky - Google Patents

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka pyrazolopyrimidínov ako terapeutických prostriedkov.

Doterajší stav techniky

Existuje aspoň 400 enzýmov identifikovaných ako proteínkinázy. Tieto enzýmy katalyzujú fosforyláciu cieľových proteínových substrátov. Fosforylácia je obvykle reakcia prenosu fosfátovej skupiny z ATP na proteínový substrát. Špecifická štruktúra v cieľovom substráte, na ktorú sa fosfát prenáša, je tyrozínový, serínový alebo treonínový zvyšok. Pretože sú tieto aminokyselinové zvyšky cieľovými štruktúrami pre prenos fosforylu, označujú sa tieto proteínkinázy obvykle ako tyrozínkinázy alebo serín/treonínkinázy.

Fosforylačné reakcie a proti nim pôsobiace fosfatázové reakcie na tyrozínových, serínových a treonínových zvyškoch sa zúčastňujú nespočetných bunkových procesov, ktoré sú základom odpovedí na rôzne medzibunkové signály (typicky sprostredkovávané bunkovými receptormi), regulácie bunkových funkcií a aktivácie alebo dezaktivácie bunkových procesov. Kaskáda proteínkináz sa obvykle zúčastňuje na prenose medzibunkového signálu a je nevyhnutná na realizáciu týchto bunkových procesov. Vzhľadom k početnosti ich výskytu v týchto procesoch môžu byť proteínkinázy nachádzané ako integrálna súčasť plazmatickej membrány alebo ako cytoplazmatické enzýmy alebo lokalizované v jadre, často ako zložky enzýmových komplexov. V mnohých prípadoch sú tieto proteínkinázy nevyhnutným prvkom enzýmu a štrukturálnych proteínových komplexov, ktoré určujú, kde a kedy v bunke prebieha určitý bunkový proces.

Proteínové tyrozínkinázy. Proteínové tyrozín kinázy (PTK) sú enzýmy, ktoré katalyzujú fosforyláciu špecifických tyrozínových zvyškov v bunkových proteínoch. Táto post-translačná modifikácia týchto substrátových proteínov, ktoré sú často samotné enzýmami, pôsobí ako proliferácia, aktivácia alebo diferenciácia buniek, regulujúca molekulárny prešmyk (prehľad viď Schlessinger a Ulrich, 1992, Neurón 9: 383-391). Aberantná alebo nadbytočná aktivita PTK bola pozorovaná pri mnohých chorobných stavoch zahrnujúcich benígne a malígne proliferatívne poruchy, ako aj ochorenia, ktoré sú dôsledkom nevhodnej aktivácie imunitného systému (napríklad autoimunitných porúch), odmietania transplantátu a reakcie hostiteľa proti štepu. PTK, špecifické pre endotelové bunky, ako je KDR a Tie-2, navyše sprostredkovávajú angiogénny proces, a teda sa zúčastňujú pri podpore progresie nádorov a ďalších ochorení zahrnujúcich nevhodnú vaskularizáciu (napríklad diabetickej retinopatie, choroidálnej neovaskularizácie v dôsledku makulárnej degenerácie súvisiacej s vekom, psoriázy, artritídy, retinopatie nedonosených, infantilných hemangiómov).

Tyrozínkinázy môžu byť receptorového typu (s extracelulámou, transmembránovou a intracelulámou doménou) alebo non-receptorového typu (sú plne intraceluláme).

Receptorové tyrozínkinázy (RTK). RTK zahrnujú veľkú skupinu transmembránových receptorov s rôznymi biologickými aktivitami. Doposiaľ bolo identifikovaných aspoň 19 rôznych podskupín RTK. Skupina receptorových tyrozínkináz (RTK) zahrnuje receptory, ktoré sú rozhodujúce pre rast a diferenciáciu rôznych bunkových typov (Yarden a Ullrich, Ann. Rev. Biochem. 57: 433-478,1988; Ullrich a Schlessinger, Celí 61: 243-254,1990). Vlastná funkcia RTK je aktivovaná po naviazaní ligandu, čo vedie k fosforylácii receptora a niekoľkých bunkových substrátov a následne k rôznym bunkovým odpovediam (Ullrich & Schlessinger, 1990, Celí 61: 203-212). Prenos signálu sprostredkovaný receptorovou tyrozínkinázou je pritom zahájený extracelulámou interakciou so špecifickým rastovým faktorom (ligandom), po ktorej typicky nasleduje dimerizácia receptora, stimulácia vlastnej aktivity proteínovej tyrozínovej kinázy a transfosforylácia receptora. Vytvoria sa tak väzbové miesta pre prenosové molekuly intracelulámeho signálu a vedú k vytvoreniu komplexov so spektrom cytoplazmatických signálnych molekúl, ktoré uľahčujú adekvátnu bunkovú odpoveď (napríklad bunkové delenie, diferenciáciu, metabolické efekty, zmeny extracelulárneho mikroprostredia), viď Schlessinger a Ullrich, 1992, Neurón 9: 1-20.

Proteíny s SH2 (src homológia-2) alebo fosfotyrozínovými väzbovými (PTB) doménami viažu aktivované receptory tyrozínkináz a ich substráty s vysokou afinitou k propagácii signálov do bunky. Obe domény rozpoznávajú fosfotyrozín. (Fantl et al., 1992, Celí 69: 413-423; Songyang et al., 1994, Mol.Celí. Biol. 14: 2777-2785; Songyang et al., 1993, Celí 72: 767-778; a Koch et al., 1991, Science 252: 668-678; Shoelson, Curr. Opin. Chem. Biol. (1997), (2), 227234; Cowburn, Curr. Opin. Struct. Biol. (1997), 7 (6), 835-838). Bolo identifikovaných niekoľko intracelulárnych substrátových proteínov, ktoré asociujú s receptorovými tyrozínkinázami (RTK). Môžu byť rozdelené do dvoch hlavných skupín: (1) substráty, ktoré majú katalytickú doménu, a (2) substráty, ktoré takú doménu nemajú, ale slúžia ako adaptéry a asociujú s katalytický aktívnymi molekulami (Songyang et al., 1993, Celí 72: 767-778). Špecificita interakcií medzi receptormi alebo proteínmi a doménami SH2 alebo PTB ich substrátov je určovaná aminokyselinovými zvyškami, bezprostredne obklopujúcimi fosforylovaný tyrozínový zvyšok. Napríklad rozdiely vo väzbovej afinite medzi SH2 doménami a aminokyselinovými sekvenciami obklopujúcimi fosfotyrozínové zvyšky na konkrétnych receptoroch korelujú s pozorovanými rozdielmi vo fosforylačnom profile ich substrátov (Songyang et al., 1993, Celí 72: 767-778). Z pozorovania vyplýva, že funkcia každej receptorovej tyrozínkinázy je určovaná nielen profilom jej expresie a dostupností ligandov, ale aj súborom transdukčných dráh signálu po smere expresie, ktoré sú aktivované konkrétnym receptorom, ako aj načasovaním a trvaním týchto stimulov. Fosforylácia teda poskytuje významný regulačný stupeň, ktorý určuje selektivitu signálnych dráh, vyvolávaných špecifickými receptormi rastového faktora, ako aj receptormi diferenciačného faktora.

Uvádza sa, že niekoľko receptorových tyrozínkináz, ako je FGFR-1, PDGFR, TIE-2 a c-Met, a rastové faktory, ktoré sa na ne viažu, hrajú rolu v angiogenéze, aj keď niektoré z nich môžu podporovať angiogenézu nepriamo (Mustonen a Alitalo, J. Celí Biol. 129: 895-898,1995). Jedna taká receptorová tyrozínkináza, známa ako fetálna pečeňová kináza 1 (FLK-1), je členom podskupiny RTK typu III. Alternatívne označenie pre ľudskú FLK-1 je receptor obsahujúci doménu kinázového inzertu (KDR) (Terman et al., Oncogene 6: 1677-83,1991). Ďalšie alternatívne označenie pre FLK-l/KDR je receptor 2 rastového faktora vaskulárnych endotelových buniek (VEGFR-2), pretože s vysokou afinitou viaže VEGF. Myšia verzia FLK1/VEGFR-2 sa označuje tiež NYK (Oelrichs et al., Oncogene 8 (1): 1 1-15,1993). Boli izolované DNA kódujúce myšiu, potkaniu a ľudskú FLK-1 a boli opísané nukleotidové a kódované aminokyselinové sekvencie (Matthews et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 9026-30,1991; Terman et al., 1991, viď vyššie; Terman et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 187: 1579-86,1992; Sarzani et al., viď vyššie; a Millauer et al., Celí 72: 835-846,1993). Početné štúdie, napríklad uvedené v Millauer et al., viď vyššie, naznačujú, že VEGF a FLKl/KDRNEGFR-2 tvoria dvojicu ligand-receptor, ktorá hraje významnú úlohu pri proliferácii vaskulárnych endotelových buniek, resp. pri tvorbe a rašení ciev, čo sa označuje ako vaskulogenéza, resp. angiogenéza.

Iná RTK podskupiny typu III, označovaná tyrozín kináza-1 typu fms (Fit- 1) je príbuzná FLK-l/KDR (DeVries et al. Science 255; 989-991,1992; Shibuya et al., Oncogene 5: 519-524,1990). Alternatívne označenie pre Flt-1 je receptor 1 rastového faktoru vaskulárnych endotelových buniek (VEGFR-1). Doposiaľ bola expresia členov podskupín FLK-l/KDR/VEGFR-2 a Flt1/VEGFR-l zisťovaná primárne na endotelových bunkách. Členy týchto podskupín sú špecificky stimulované členmi skupiny ligandov rastového faktora vaskulárnych endotelových buniek (VEGF) (Klagsburn a D'Amore, Cytokine <é Growth Factor Reviews 7: 259-270, 1996). Rastový faktor vaskulárnych endotelových buniek (VEGF) sa viaže na Flt-1 s vyššou afinitou než na FLK-l/KDR a je mitogénny voči vaskulárnym endotelovým bunkám (Terman et al., 1992, viď vyššie; Mustonen et al. viď vyššie; DeVries et al., viď vyššie). Má sa za to, že Flt-1 je nevyhnutný pre organizáciu endotelu počas vaskulárneho vývoja. Expresia Flt-1 je spojená so skorým vaskulárnym vývojom u myších embryí a s neovaskularizáciou v priebehu hojenia rán (Mustonen a Alitalo, viď vyššie). Expresia Flt-1 v monocytoch, osteoklastoch a osteoblastoch, rovnako ako v dospelých tkanivách, ako sú glomeruly v obličkách, naznačuje pre tento receptor ďalšiu funkciu, ktorá nesúvisí s rastom buniek (Mustonen a Alitalo, viď vyššie).

Ako je uvedené vyššie, nedávne dôkazy naznačujú, že VEGF hraje úlohu ako pri normálnej, tak pri patologickej angiogenéze (Jakeman et al., Endocrinology 133: 848-859,1993; Kolch et al., Breast Cancer Research and Treatment 36: 139-155,1995; Ferrara et al., Endocrine Reviews 18 (1); 425,1997; Ferrara et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L. D. Goldberg a E. M. Rosen), 209-232,1997). Navyše sa uvádza, že VEGF sa zúčastňuje pri regulácii a zvyšovaní vaskulárnej permeability (Connolly, et al., J. Biol. Chem. 264 20017- 20017-20024, 1989; Brown et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L. D. Goldberg a E. M. Rosen), 233-269, 1997). Boli opísané rôzne formy VEGF, vznikajúce alternatívnym zostrihom mRNA, vrátane štyroch foriem, opísaných vo Ferrara et al. (J. Celí. Biochem. 47: 211-218,1991). Obe vylučované a prevažne s bunkou súvisiace formy VEGF identifikoval Ferrara et al. viď vyššie, a u proteínu sa ukázalo, že existuje vo forme disulfidicky spojených dimérov.

V poslednej dobe bolo identifikovaných niekoľko príbuzných homológov VEGF. Nebola však ešte osvetlená ich rola v normálnych a chorobných fyziologických procesoch. Členy rodiny VEGF sú navyše často koexprimované v početných tkanivách spolu s VEGF a sú všeobecne schopné tvoriť s VEGF heterodiméry. Táto schopnosť pravdepodobne mení receptorovú špecifitu a biologické účinky heterodimérov a ďalej komplikuje osvetlenie ich špecifických funkcií, ako je ilustrované ďalej (Korpelainen a Alitalo, Curr. Opin. Celí Biol., 159164,1998 a tam citované odkazy).

Rastový faktor placenty (PIGF) má aminokyselinovú sekvenciu, ktorá vykazuje významnú homológiu so sekvenciou VEGF (Park et al., J. Biol. Chem. 269: 25646-54,1994; Maglione et al. Oncogene 8. 925-31,1993). Ako u VEGF vznikajú z alternatívneho zostrihu mRNA rôzne typy P1GF a proteín existuje v dimérnej forme (Park et al., viď vyššie). PIGF-1 a P1GF-2 sa viažu s vysokou afinitou na Flt-1 a P1GF-2 sa tiež ochotne viaže na neuropilín-1 (Migdal et al., J. Biol. Chem. 273 (35): 22272-22278), ale žiadny z nich sa neviaže na FLK1/KDR (Park et al., viď vyššie). Uvádza sa, že P1GF potencuje ako vaskulárnu permeabilitu, tak aj mitogénny účinok VEGF na endotelové bunky, ak je VEGF prítomný v nízkych koncentráciách (pravdepodobne v dôsledku tvorby heterodiméru) (Park et al., viď vyššie).

VEGF-B je produkovaný vo dvoch izoformách (167 a 185 zvyškov), ktoré tiež zjavne viažu Flt-l/VEGFR-1. Môže hrať rolu pri regulácii degradácie extracelulárnej matrice, bunkovej adhézii a migrácii prostredníctvom modulácie expresie a aktivity plazminogén-aktivátora urokinázového typu a inhibítora 1 plazminogén-aktivátora (Pepper et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. (1998), 95 (20): 11709-1 1714).

VEGF-C bol pôvodne klonovaný ako ligand pre VEGFR-3/Flt-4, ktorý je primárne exprimovaný lymfatickými endotelovými bunkami. Vo svojej plne zrelej forme môže VEGF-C tiež viazať KDR/VEGFR-2 a stimulovať proliferáciu a migráciu endotelových buniek in vitro a angiogenézu v in vivo modeloch (Lymboussaki et al., Am. J. Pathol. (1998), 153 (2): 395-403, Witzenbichler et al., Am. J. Pathol. (1998), 153 (2), 381-394). Transgénna hyperexpresia VEGF-C vyvoláva proliferáciu a zväčšenie iba u lymfatických ciev, zatiaľ čo krvné cievy ovplyvnené nie sú. Na rozdiel od VEGF nie je expresia VEGF-C vyvolávaná hypoxiou (Ristimaki et al., J. Biol. Chem. (1998), 273 (14), 8413-8418).

Najnovšie objavený VEGF-D je štruktúrne veľmi podobný VEGF-C. Uvádza sa, že VEGF-D viaže a aktivuje aspoň dva VEGFR, VEGFR-3/Flt-4 a KDR/VEGFR-2. Pôvodne bol klonovaný ako c-fos indukovateľný mitogén pre fibroblasty a prednostne je exprimovaný v mezenchymálnych bunkách pľúc a kože (Achen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. (1998), 95 (2), 548-553 a tam uvedené odkazy).

Co sa týka VEGF, pre VEGF-C a VEGF-D bolo nárokované, že v Milesovom teste indukujú vzrast vaskulárnej permeability in vivo, keď sa vstreknú do kutánneho tkaniva (PCT/US97/14696; W098/07832, Witzenbichler et al., viď vyššie). Fyziologická rola a význam týchto ligandov pri modulácii vaskulárnej hyperpermeability a endotelových odpovedí v tkanivách, v ktorých nie sú exprimované, zostáva neistá.

Nedávno bol opísaný vírusovo kódovaný nový typ rastového faktora vaskulámych endotelových buniek, VEGF-E (NZ-7 VEGF), ktorý prednostne využíva receptor KDR/Flk-1 receptor a má silnú mitotickú aktivitu bez väzbovej oblasti heparínu (Meyer et al., EMBO J. (1999), 18 (2), 363-374; Ogawa et al., J. Biol. Chem. (1998), 273 (47), 31273-31282.). Sekvencie VEGF-E majú 25% homológiu s cicavčímVEGF a sú kódované vírusom Orf parapoxvírusu (OV). Tento parapoxvírus napadá ovce a kozy a príležitostne človeka a vytvára lézie s angiogenézou. VEGF-E je dimér s veľkosťou asi 20 kDa bez bázickej domény alebo afinity k heparínu, ale má charakteristickú cysteínovú uzlovú jednotku, prítomnú vo všetkých cicavčích VEGF, a bolo prekvapivo zistené, že má účinnosť a bioaktivity podobné ako heparín viažuca izoforma VEGF165 od VEGF-A, t.j. oba faktory stimulujú uvoľňovanie tkanivového faktora (TF), proliferáciu, chemotaxiu a rašenie kultivovaných vaskulámych endotelových buniek in vitro a angiogenézu in vivo. Podobne ako u VEGF165, bolo u VEGF-E zistené, že sa viaže s vysokou afinitou na receptor-2 VEGF (KDR), čo vedie k autofosforylácii receptora a dvojfázovému vzrastu koncentrácií voľného vnútrobunkového Ca²⁺, zatiaľ čo sa VEFG-E, na rozdiel od VEGF165, neviazal na receptor-1 VEGF (Flt-1).

Na základe objavujúcich sa nálezov ďalších homológov VEGF a VEGFR a precedentov heterodimerizácie ligandu a receptora môže pôsobenie takých homológov VEGF zahrnovať vznik heterodimérov ligandu VEGF a/alebo heterodimerizáciu receptorov, alebo väzbu na ešte neobjavený VEGFR (Witzenbichler et al., viď vyššie). Nedávne správy tiež naznačujú, že pri indukcii vaskulámej permeability sa môže zúčastniť neuropilín-1 (Migdal et al., viď vyššie) alebo VEGFR-3/Flt-4 (Witzenbichler et al., viď vyššie), alebo receptory iné než KDR/VEGFR-2 (Stacker, S. A., Vitali, A., Domagala, T., Nice, E., a Wilks, A. EAngiogenesis and Cancer Coníerence, Amer. Assoc. Cancer Res., Jan. 1998, Orlando, FL; Williams, Diabetelogia 40: S 118-120 (1997)).

Tie-2 (TEK) je člen nedávno objavenej rodiny špecifických receptorových tyrozínkináz endotelových buniek, ktorý sa zúčastňuje na kritických angiogénnych procesoch, ako je vetvenie, rašenie, remodelovanie, maturácia a stabilita ciev. Tie-2 je prvá cicavčia receptorová tyrozínkináza, u ktorej bol identifikovaný ako agonistný ligand(y) (napríklad Angiopoietinl (Angl), ktorý stimuluje autofosforyláciu receptora a transdukciu signálu), tak antagonistný ligand(y) (napríklad Angiopoietin2 (Ang2)). Knock-out a transgénna manipulácia expresie Tie-2 a jeho ligandov ukazuje, že prísna priestorová a časová kontrola signalizácie Tie-2 je nevyhnutná pre správny vývoj novej vaskulatúry. Súčasný model naznačuje, že stimulácia Tie-2 kinázy ligandom Angl je priamo účastná na vetvení, rašení a vyrastaní nových ciev, a získavanie a interakcia periendotelových podporných buniek je významná pri zachovávaní integrity ciev a zavádzanie pokoja. Absencia Angl stimulácie Tie2 alebo inhibícia autofosforylácie Tie-2 pomocou Ang2, ktorý vzniká vo vysokých hladinách v miestach vaskulámej regresie, môže vyvolať stratu vaskulámej štruktúry a matricových kontaktov vedúcu k odumretiu endotelových buniek, najmä pri absencii stimulov pre rast alebo prežitie. Situácia je však zložitejšia, pretože boli nedávno objavené aspoň dva ďalšie ligandy Tie-2 (Ang3 a Ang4), a bola preukázaná schopnosť heterooligomerizácie rôznych agonistných a antagonistných angiopoetínov, modifikujúca ich aktivitu. Zameranie angiogénneho terapeutického prístupu na interakcie Tie-2 ligand-receptor má teda menšiu prednosť a preferuje sa kinázová inhibičná stratégia.

Rozpustná extraceluláma doména Tie-2 (ExTek) môže pôsobiť v prospech narušovania ustavovania nádorovej vaskulatúry v modeloch xenotransplantátu nádoru prsníka a pľúcnej metastázy a pri očnej neovaskularizácii sprostredkovanej nádorovými bunkami. Infekciou adenovírusu je možné dosiahnuť mg/ml hladiny produkcie ExTek in vivo u hlodavcov za 7 až 10 dní bez vedľajších účinkov. Tieto výsledky naznačujú, že narušovanie signálnych dráh Tie-2 môže byť u normálnych zdravých zvierat dobre tolerované. Tieto inhibičné odpovede Tie-2 na ExTek môžu byť dôsledkom sekvestrácie ligandu(ov) a/alebo tvorby neproduktívneho heterodiméru s plnou dĺžkou Tie-2.

V nedávnej dobe bolo zistené významné posilnenie expresie Tie-2 vo vaskulámom synoviálnom pane ľudských artritických kĺbov, čo je konzistentné s rolou pri nežiaducej neovaskularizácii. Tento objav naznačuje, že Tie-2 má určitú rolu pri progresii reumatoidnej artritídy. V spojení s poruchami ľudskej venóznej malformácie boli objavené bodové mutácie produkujúce konštitutívne aktivované formy Tie-2. Inhibítory Tie-2 sa preto používajú pri liečbe týchto porúch a v ďalších situáciách nežiaducej neovaskularizácie.

Nereceptorové tyrozínkinázy. Nereceptorové tyrozínkinázy predstavujú súbor bunkových enzýmov, ktorým chýbajú extracelulárne a transmembránové sekvencie. Do súčasnosti bolo identifikovaných dvadsaťštyri jednotlivých nereceptorových tyrozínkináz, zahrnujúcich jedenásť (11) podrodín (Src, Frk, Btk, Csk, Abl, Zap70, Fes/Fps, Fak, Jak, Ack a LIMK). Podrodina Src nereceptorových tyrozínkináz je v súčasnosti tvorená najväčším počtom PTK a zahrnuje Src, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr a Yrk. Podrodina Src enzýmov sa spojuje s onkogenézou a imunitnou odpoveďou. Podrobnejšiu diskusiu nereceptorových tyrozínkináz poskytuje Bohlen, 1993, Oncogene 8: 2025-2031, na ktorú prácu sa tu odkazuje.

Bolo zistené, že mnohé tyrozínkinázy, či už RTK alebo nereceptorové tyrozínkinázy, sa zúčastňujú na bunkových signálnych dráhach podieľajúcich sa na početných patogénnych stavoch vrátane rakoviny, psoriázy a ďalších hyperproliferatívnych porúch alebo hyperimunitných odpovedí.

Vývoj zlúčenín pre moduláciu PTK.

Vzhľadom k tušenému významu PTK pre kontrolu, reguláciu a moduláciu bunkovej proliferácie, ochorenia a poruchy spojené s abnormálnou bunkovou proliferáciou vynakladalo sa úsilie identifikovať receptorové a nereceptorové tyrozínkinázové inhibítory pomocou rôznych prístupov, vrátane použitia mutantných ligandov (US patentová prihláška č. 4,966,849), rozpustných receptorov a protilátok (prihláška č. WO 94/10202, Kendall & Thomas, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci 90: 10705-09; Kim et al., 1993, Náture 362: 841-844), RNA ligandov (Jellinek, et al., Biochemistry 33: 10450-56; Takano, et al., 1993, Mol. Bio. Celí 4: 358A; Kinsella, et al. 1992, Exp. Celí Res. 199: 56-62; Wright, et al., 1992, J. Cellular Phys. 152: 448-57) a tyrozínkinázových inhibítorov (WO 94/03427; WO 92/21660; WO 91/15495; WO 94/14808; US patent č. 5,330,992; Mariani, et al., 1994, Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 35: 2268).

V poslednej dobe boli robené pokusy identifikovať malé molekuly, ktoré pôsobia ako inhibítory tyrozínkinázy. Napríklad bismonocyklické, bicyklické alebo heterocyklické arylové zlúčeniny (PCT WO 92/20642) a vinylénazaindoiové deriváty (PCT WO 94/14808) sa všeobecne opisujú ako tyrozínkinázové inhibítory. Styrylové zlúčeniny (US patent č. 5,217,999), styryl-substituované pyridylové zlúčeniny (US patent č. 5,302,606), niektoré chinazolínové deriváty (EP č. 0 566 266 Al; Expert Opin. Ther. Pat. (1998), 8 (4): 475-478), selenoindoly a selenidy (PCT WO 94/03427), tricyklické polyhydroxylické zlúčeniny (PCT WO 92/21660) a zlúčeniny benzylfosfónové kyseliny (PCT WO 91/15495) sa opisujú ako zlúčeniny na použitie ako tyrozínkinázové inhibítory s použitím pri liečbe rakoviny. Anilinochinolíny (PCT WO 97/34876) a zlúčeniny chinazolínových derivátov (PCT WO 97/22596; PCT WO 97/42187) boli opísané ako inhibítory angiogenézy a vaskulárnej permeability.

Dalej boli robené pokusy identifikovať malé molekuly, ktoré pôsobia ako inhibítory serín/treonínkináz. Napríklad bolo uvedené, že bis(indolylmaleínimidové) zlúčeniny inhibujú konkrétne izoformy PKC serín/treonínkináz, ktorých funkcia pri transdukcii signálu súvisí so zmenenou vaskulárnou permeabilitou pri ochoreniach súvisiacich s VEGF (PCT WO 97/40830; PCT WO 97/40831).

Inhibítory Plk-1 kinázy

Plk-1 je serín/treonínkináza, ktorá je významným regulátorom priebehu bunkového cyklu. Má kritickú rolu pri výstavbe a dynamickej funkcii aparátu mitotického vretienka. Ukázalo sa tiež, že Plk-1 a príbuzné kinázy sú úzko zapojené do aktivácie a inaktivácie iných regulátorov bunkového cyklu, ako sú na cyklíne závisiace kinázy. Vysoké hladiny expresie Plk-1 sú spojené s proliferačnými aktivitami buniek. Často sa nachádza v malígnych nádoroch rôzneho pôvodu. Predpokladá sa, že inhibítory Plk-1 blokujú proliferáciu rakovinových buniek narušením procesov zahrnujúcich mitotické vretienka a nesprávne aktivované na cyklíne závisiace kinázy.

Inhibítory Cdc2/Cyklín B kinázy (Cdc2 je známa tiež ako cdkl)

Cdc2/cyklín B je ďalšia serín/treonín kináza, ktorá patrí ku skupine na cyklíne závislých kináz (cdk). Tieto enzýmy sa zúčastňujú na kritickom prechode medzi rôznymi fázami priebehu bunkového cyklu. Má sa za to, že nekontrolovaná proliferácia buniek, ktorá je známkou rakoviny, je závislá na zvýšenej aktivite cdk v týchto bunkách. Inhibícia zvýšenej aktivity cdk v rakovinových bunkách prostredníctvom inhibítorov cdc2/cyklín B kinázy by mohla proliferáciu potlačiť a nastoliť normálnu kontrolu priebehu bunkového cyklu.

Regulácia aktivácie CDK je zložitá, ale vyžaduje asociáciu CDK s členom cyklínovej skupiny regulačných podjednotiek (Draetta, Trends in Celí Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Náture, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Celí, 3: 13-27 (1992)). Ďalšia úroveň regulácie nastáva ako aktiváciou, tak inaktiváciou fosforylácie CDK podjednotky (Draetta, Trends in Celí Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Náture, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Celí, 3: 13-27 (1992); Ducommun et al., EMBO Journal, 10: 3311-3319 (1991); Gautier et al., Náture 339: 626-629 (1989); Gould a Nurse, Náture, 342: 39-45 (1989); Krek a Nigg, EMBO Journal, 10: 3331-3341 (1991); Solomon et al., Celí, 63: 1013-1024 (1990)). Koordinovaná aktivácia a inaktivácia rôznych komplexov cyklín/CDK je nevyhnutná pre normálny priebeh bunkovým cyklom (Pines, Trends in Biochemical Sciences, 18: 195-197 (1993); Sherr, Celí, 73: 1059-1065 (1993)). Oba kritické prechody Gl-S a G2M sú kontrolované rôznymi aktivitami cyklín/CDK. U Gl sa má za to, že nástup S-fázy sprostredkuje ako cyklín D/CDK4, tak cyklín E/CDK2 (Matsushima et al., Molecular & Cellular Biology, 14: 2066-2076 (1994); Ohtsubo a Roberts, Science, 259: 1908-1912 (1993); Quelle et al., Genes & Development, 7: 1559-1571 (1993); Resnitzky et al., Molecular & Cellular Biology, 14: 1669-1679 (1994)). Prechod S-fázou vyžaduje aktivitu cyklínu A/CDK2 (Girard et al., Celí, 67: 1169-1 179 (1991); Pagano et al., EMBO

Journal, 11: 961-971 (1992); Rosenblatt et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 89: 2824-2828 (1992); Walker a Maller, Náture, 354: 314-317 (1991); Zindy et al., Biochemical & Biophysical Research

Communications, 182: 1144-1154 (1992)), zatiaľ čo aktivácia cyklínu A/cdc2 (CDK1) a cyklínu B/cdc2 je nutná pre nástup metafázy (Draetta, Trends in Celí Biology, 3: 287-289 (1993)); Murray a Kirschner, Náture, 339: 275-280 (1989); Solomon et al., Molecular Biology of the Celí, 3: 13-27 (1992); Girard et al., Celí, 6Ί\ 1169-1179 (1991); Pagano et al., EMBO Journal, 11: 961-971 (1992); Rosenblatt et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 89: 2824-2828 (1992); Walker a Maller, Náture, 354: 314-317 (1991); Zindy et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 182: 1144-1154 (1992)). Nie je teda prekvapujúce, že strata kontroly regulácie CDK je častým prípadom u hyperproliferatívnych ochorení a rakoviny. (Pines, Current Opinion in Celí Biology, 4: 144-148 (1992); Lees, Current Opinion in Celí Biology, 7: 773-780 (1995); Hunter a Pines, Celí, 79: 573-582 (1994)).

Inhibítory kináz zúčastňujúce sa na sprostredkovaní alebo udržovaní chorobných stavov reprezentujú nové terapie pre tieto poruchy. Príklady takých kináz zahrnujú, ale nie sú na ne obmedzené: (1) inhibíciu c-Src (Brickell, Critical Reviews in Oncogenesis, 3: 401-406 (1992); Courtneidge, Seminars in Cancer Biology, 5: 236-246 (1994), raf (Powis, Pharmacology & Therapeutics, 62: 57-95 (1994)) a na cyklíne závisiacich kináz (CDK) 1, 2 a 4 pri rakovine (Pines, Current Opinion in Celí Biology, 4: 144-148 (1992); Lees, Current Opinion in Celí Biology, 7: 773-780 (1995); Hunter a Pines, Celí, 79: 573-582 (1994)), (2) inhibíciu CDK2 alebo PDGF-R kinázy pri restenóze (Buchdunger et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 92: 2258-2262 (1995)), (3) inhibíciu CDK5 a GSK3 kináz pri Alzheimerovej chorobe (Hosoi et al., Journal of Biochemistry (Tokyo), 117: 741-749 (1995); Aplin et al., Journal of Neurochemistry, 67: 699-707 (1996), (4) inhibíciu c-Src kinázy pri osteoporóze (Tanaka et al., Náture, 383: 528-531 (1996), (5) inhibíciu GSK-3 kinázy pri diabete 2. typu (Borthwick et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 210: 738-745 (1995), (6) inhibíciu p38 kinázy pri zápaloch (Badger et al., The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 279: 1453-1461 (1996)), (7) inhibíciu VEGF-R 1-3 a TIE-1 a 2 kináz pri ochoreniach zahrnujúcich angiogenézu (Shawver et al., Drug Discovery Today, 2: 50-63 (1997)), (8) inhibíciu UL97 kinázy pri vírusových infekciách (He et al., Journal of Virology, 71: 405-411 (1997)), (9) inhibíciu CSF-1R kinázy pri kostných a hematopoetických ochoreniach (Myers et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 7: 421-424 (1997) a (10) inhibíciu Lck kinázy pri autoimunitných ochoreniach a odhojovaní transplantátov (Myers et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 7: 417420 (1997)).

Navyše je možné, že inhibítory niektorých kináz môžu byť použiteľné pri liečbe ochorení, ak nie je kináza zle regulovaná, avšak je nevyhnutná pre udržovanie chorobného stavu. V tomto prípade by inhibícia kinázovej aktivity pôsobila buď ako liečba alebo paliatívum pre tieto ochorenia. Napríklad početné vírusy, ako je ľudský papilomavírus, narušujú bunkový cyklus a ženú bunky do S-fázy bunkového cyklu (Vousden, FASEB Journal, 7: 8720879 (1993)). To, že sa bunkám po vírusovej infekcii zabráni vstúpiť do syntézy DNA inhibíciou aktivít iniciujúcich S-fázu, ako je CDK2, môže prerušiť životný cyklus vírusu zamedzením vírusovej replikácie. Ten istý princíp môže byť použitý na ochranu normálnych buniek tela pred toxicitou cyklovo špecifických chemoterapeutík (Stone et al., Cancer Research, 56: 3199-3202 (1996); Kohn et al., Journal of Cellular Biochemistry, 54: 44-452 (1994)). Inhibícia CDK 2 alebo 4 zabráni u normálnych buniek prechodu do cyklu a obmedzí toxicitu cytotoxík, ktorá pôsobí v S-fáze, G2 alebo mitóze. Dalej sa ukázalo, že tiež aktivita CDK2/cyklín E reguluje NF-kB. Inhibícia aktivity CDK2 stimuluje NF-kB-závislú expresiu génu, jav sprostredkovaný interakciami s p300 koaktivátorom (Perkins et al., Science, 275: 523-527 (1997)). NF-kB reguluje gény zúčastňujúce sa na zápalových odpovediach (ako hematopoetické rastové faktory, chemokíny a leukocytové adhézne molekuly) (Baeuerle a Henkel, Annual Review of Immunology, 12: 141-179 (1994)) a môže sa zúčastniť na supresii apoptotických signálov v bunke (Beg a Baltimore, Science, 274: 782-784 (1996); Wang et al., Science, 274: 784-787 (1996); Van Antwerp et al., Science, 2Ί4\ 787-789 (1996)). Inhibícia CDK2 teda môže potlačovať apoptózu indukovanú cytotoxickými liečivami mechanizmom, ktorý zahrnuje NF-kB. Z toho teda vyplýva, že inhibícia aktivity CDK2 môže byť použiteľná v prípadoch, kde má NF-kB určitú rolu v etiológii ochorenia. Ďalší príklad môže byť vzatý z fungálnych infekcií: Aspergilóza je bežné ochorenie imunokompromitovaných pacientov (Armstrong, Clinical Infectious Diseases, 16: 1-7 (1993)). Inhibícia kináz Aspergillus Cdc2/CDC28 alebo Nim A (Osmani et al., EMBO Journal, 10: 2669-2679 (1991); Osmani et al., Celí, 67: 283-291 (1991)) môže spôsobiť inaktiváciu alebo smrť húb, a tak zlepšiť terapeutický výsledok u pacientov s týmito infekciami.

Identifikácia efektívnych malých zlúčenín, ktoré špecificky inhibujú prenos signálu a bunkovú proliferáciu moduláciou aktivity receptorových a nereceptorových tyrozín a serín/treonínkináz, a tak regulujú a modulujú abnormálnu alebo nesprávnu bunkovú proliferáciu, diferenciáciu alebo metabolizmus, je teda žiaduca. Obzvlášť by bola prínosnou identifikácia metód a zlúčenín, ktoré špecificky inhibujú funkciu tyrozínkinázy, ktorá je nevyhnutná pre antigénne procesy alebo vznik vaskulárnej hyperpermeability vedúcej k edémom, ascitom, efúziám, exudátom a makromolekulárnej extravazácii a matricovej depozícii, ako aj k súvisiacim poruchám.

Podstata vynálezu

Predložený vynález sa týka zlúčenín všeobecného vzorca (I)

ich racemických-diastereomérnych zmesí, optických izomérov, farmaceutický prijateľných solí, proliečiv alebo biologicky aktívnych metabolitov, kde:

r.D’f

Z-A-Z—Z

100

Gje

kde Z¹⁰⁰ je alebo skupina prípadne substituovaná substituentom

Ri vybraná zo skupiny pozostávajúcej z alkylu; cykloaikylu; pyrolidinylu; bicyklického aromatického heterocyklu obsahujúceho dusík, v ktorom každý kruh má šesť atómov, napr. chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu a ftalazinylu; bicyklického aromatického heterocyklu obsahujúceho dusík, v ktorom sa dusík podieľa na vytvorení mostíka a jeden aromatický kruh má päť členov a druhý aromatický kruh má šesť členov, napr. imidazo[l,2-a]pyrimidinyl; l/7-imidazo[l,2-a]imidazolyl; imidazo[2,Ιό] [ 1,3 jtiazoly 1; naftyl; tetrahydronaftyl; benzotienyl; furanyl; tienyl;

benzoxazolyl; benzoizoxazolyl; benzotiazolyl;

; tiazolyl; benzofuranyl; 2,3-dihydrobenzofuranyl; indolyl;

izoxazolyl; tetrahydropyranyl; tetrahydrofuranyl; piperidinyl; pyrazolyl; pyrolyl; pyrolopyridinyl; //-pyridinón; oxazolyl; izotiazolyl; oxadiazolyl; tiadiazolyl; indolinyl; indazolyl; imidazo[l,2-a]pyridinyl; benzoizotiazolyl; 1,1-dioxybenzoizotiazolyl; pyrido-oxazolyl; pyrido-tiazolyl; pyrimidooxazolyl; pyrimido-tiazolyl; a benzimidazolyl;

Z¹¹⁰ je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-Cô), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO2, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

Z¹¹¹ je kovalentná väzba, prípadne substituovaný Ci-Cô alebo prípadne substituovaný -(CH2)_n-cykloalkyl-(CH2)_n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO2, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

každý zo substituentov R_a a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny pozostávajúcej z atóm vodíka, halogénu, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)- alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluórmetylkarbony lamino skupiny, trifluórmetyl sulfónamidoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkenylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroarylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej arylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S-, substituovanej alebo nesubstituovanej aryl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryl-S(0)_p-, substituovaného alebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkinylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných alebo nesubstituovaných amidoskupín, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryltioskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aryltioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, R_c a CH₂OR_c;

substituent R_c pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NR_dR_e, -W-(CH₂)t-NRdR_e, -W-(CH₂)t-O-alkyI, -W-(CH₂)_t-S-alkyl alebo -W-(CH₂)_t-OH;

Z¹⁰⁵ pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Ci-Cô);

Z²⁰⁰ pri každom výskyte je nezávisle substituované alebo nesubstituované (Ci-Cé), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cé)fenyl;

substituenty Rd a R_e pri každom výskyte sú nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SCh-alkyl; alebo substituenty Rj, R_e a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, vytvárajú 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh;

t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)₂ alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;

substituent R₃ pri každom výskyte je, nezávisle, atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl a substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

A je-(Ci-C₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-;-CH₂N (C(O)R))-;

-CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-;

-CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-;

-N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)C(O)-(CH₂)_n-N(R)-, -N(R)C(O)O-; -N(R)(CH₂)_n+i-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+1-C(O)-, -O-(CR₂)_n+1-O-,

-N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)(CH₂)_n-O-, -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-; -N(R)S(O)_PC(O)-;

-SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; N(R)P(O)(OR_b)O-; -N(R)P(O)(OR„)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-: -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O- alebo -N(C(O)R)P(OR_b)-;

substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

substituent Rb pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

p je 1 alebo 2; alebo v skupine obsahujúcej fosfor vytvárajú dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a Rb spoločne 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh; alebo

A je NRSO2 a substituenty R, R_a a atóm dusíka spoločne vytvárajú substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo

Z¹¹⁰-A-Zⁱⁿ dohromady vytvárajú kovalentnú väzbu; a substituent R2 je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

Z¹⁰¹ je kovalentná väzba, -(Cj-Ce)-, -(Ci-C₆)- -0-, -(Ci-C₆)- -C(0)-, -(Cj-Ce)- -C(0)0-, -(Ci-C₆)-C(O)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N((Ci-C₆))- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;

Z¹⁰² je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden alebo viac substituentov každý nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogénu, substituovanej alebo nesubstituovanej (Ci-Cô), substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného -C(O)-alkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -N((Ci-C₆)-OR)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-C(O)₂R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C₆)-OR, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cô)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C₆)-C(O)N(R)(Ci-Cŕ)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej sulfónamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej ureidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-0R, oxoskupiny, nasýtenej, nenasýtenej alebo aromatickej, substituovanej alebo nesubstituovanej heterocyklickej skupiny obsahujúcej jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny pozostávajúcej z N, O, a S; kde atómy dusíka uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)N(R)₂, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)(Ci-Cô)-N(R)2, -C(O)-alkylom, -C(O)-arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom; alebo substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Côj-azacykloalkyl-, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-Cé)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(CiCg)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Cô)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

a je 1 a symboly Di, Gi, Jj, Lj a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Di, Gi, Ji, Li a Mi sú CR_a; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam;

b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú CR_a; alebo b je O a jeden zo symbolov D2, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

s podmienkou, že pokiaľ A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4diacyloxytetrahydrofur-2-yl, potom Z¹⁰⁰ nie je alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl alebo pyrolidinyl;

s podmienkou, že pokiaľ Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, potom A nie je alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- alebo -C(0)0-;

s podmienkou, že pokiaľ Z¹¹⁰-A-Zⁱⁿ sú dohromady kovalentná väzba, potom Z¹⁰⁰ nie je alkyl;

s podmienkou, že pokiaľ Z¹¹⁰-A-Zⁿⁱ sú dohromady Ci-Cô alkyl, potom Z¹⁰⁰ nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl; a s podmienkou, že pokiaľ R₂ je substituovaný alebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z¹⁰⁰ je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba, potom A nie je -0-, -C(0)0- alebo -N(R)-.

V prvom uskutočnení je substituent R₂ v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) a) atóm vodíka; b) substituovaný alebo nesubstituovaný trityl; c) substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl; d) azaheteroaryl substituovaný substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom; e) azacykloalkyl, ktorý je substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo substituovaného alebo nesubstituovaného -(Ci-Cňj-alkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného-Ci-Có-alkyl-OR, substituovanej alebo nesubstituovanej -C(O)-Ci-C6-alkyl-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej Ci-C6-alkyl-N(R)₂, substituovaného alebo nesubstituovaného

-Ci-Có-alkyl-cykloalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného tetrahydrotienylu a substituovaného alebo nesubstituovaného tetrahydrotiopyranylu; alebo f) skupina všeobecného vzorca (a) (a) kde Ei je piperidinyl, piperazinyl, imidazolyl, morfolinyl, pyrolidinyl, aminoskupina, amidoskupina alebo tetrahydrotiazolyl, a kde E je prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými z -Co-Cé-alkyl-OR, Ci-C6-alkyl-C(O)OR, -C i-Cô-alkyl-heteroarylu, -Ci-Cô-alkyl-heterocykloalkylu a -Ci-C₆-alkyl-N(R)₂.

V druhom uskutočnení je substituent R₂ v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) skupina reprezentovaná všeobecným vzorcom (a), v ktorom Ei je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z amino-Ci-Cô-alkyl-morfolinoskupiny, -piperidino-Ci-Có-alkyl-OR, -imidazolyl-Ci-C6alkyl-C(O)OR, -piperazino-CiCô-alkyl-OR, -amino-Ci-Cô-alkyl-OR, -pyrolidino-OR, -amino-Ci-Cô-alkylimidazoloskupiny, -amino-Ci-C6-alkyl-N(R)₂, -amido-Ci-C6-alkyl-N(R)₂, tetrahydrotiazolylu, N,A-di-(hydroxy-Ci-C6-alkyl)amino- a -piperizino-OR.

V treťom uskutočnení je substituent R₂ v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) skupina reprezentovaná všeobecným vzorcom (a), v ktorom Ei je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z 4-(2-hydroxyetyl)morfolinoskupiny,

3- hydroxy metylpiperidino skupiny, 2-[3-(metylkarboxy)propyl]imidizol-4-ylu,

4- (2-hydroxyetyl)piperazinoskupiny, 2-hydroxy-etylamino sku piny, 3-hydroxypyrolidino skupiny, 3-imidazolopropyl-amino skupiny, 4-hydroxybutylaminoskupiny, 3-metoxypropylamino skupiny, 3-(A, A-dimetylamino)propylaminoskupiny, A-[2-(A,A-dimetyl)etyl]amidoskupiny, tetrahydrotiazolylu, A,A-di-(2hydroxyetyl)aminoskupiny, 4-hydroxypiperizinoskupiny, a 4-hydroxymetylpip er i zino skupiny.

Vo štvrtom uskutočnení má Z¹¹⁰-A-Z^1H význam -NHC(O)- v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) alebo v ktoromkoľvek z uskutočnení laž 3.

V piatom uskutočnení je G v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) alebo v ktoromkoľvek z uskutočnení 1 až 4 skupina reprezentovaná nasledujúcim všeobecným vzorcom

V šiestom uskutočnení je G v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) alebo v ktoromkoľvek z uskutočnení 1-5 skupina reprezentovaná štruktúrou s nasledujúcim vzorcom

F

V siedmom uskutočnení je substituent R₂ v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) azaheteroaryl substituovaný s Ci-Cô alkylom, kde alkyl je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými z RO-, -C(O)OR, -C(O)N(R)₂ a -N(R)₂.

V ôsmom uskutočnení je substituent R₂ v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) 4-(2-hydroxyetyl)pyridín-2-yl, 3-aminometylpyridín-4-yl alebo 2metylimidazol-4-yl.

V deviatom uskutočnení je G v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) alebo v uskutočneniach 7 alebo 8 skupina reprezentovaná nasledujúcim vzorcom

V desiatom uskutočnení je substituent R2 v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) pyrolidinyl, ktorý je substituovaný 2-metoxyetylom, N,Ndimetylaminometylom, N, TV-dimetylamino-1 -oxoetylom alebo 2-(Wmetylamino)-l-oxopropylom.

V jedenástom uskutočnení je G v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) alebo v uskutočnení 10 skupina reprezentovaná nasledujúcim vzorcom

V dvanástom uskutočnení je substituent R2 v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) piperidinyl, ktorý je substituovaný tetrahydrotiopyranylom, tetrahydrotienylom, 2-(JV-metylamino)-2-metyl-l-oxopropylom, 2-metoxyetylom alebo cyklopropylmetylom.

V trinástom uskutočnení je Z¹⁰⁰ v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) pyrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-a]pyrimidinyl, l//-imidazo[l, 2-a] imidazolyl, imidazo[2,1ň] [ 1,3 jtiazoly 1, ZZ-pyridinón, 1,1-dioxybenzoizotiazolyl, benzoizoxazolyl,

VX>

alkyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl, pyrolopyridinyl alebo ^s , kde všetky vyššie uvedené skupiny Z¹⁰⁰ môžu byť prípadne substituované substituentom Ri.

V štrnástom uskutočnení je Z¹⁰⁰ v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) alebo v uskutočnení 13 2-pyrolidinyl, l,2-dihydro-2-oxopyridín-3-yl, benzoizoxazol-3-yl, l,l-dioxybenzoizotiazol-3-yl, imidazo[l,2-a]pyridín-2-yl alebo substituent R2 je 4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl.

V pätnástom uskutočnení je Z¹¹⁰-A-Z^m v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) alebo v uskutočnení 13 alebo 14 -NH-.

V šestnástom uskutočnení je Z¹⁰⁰ vo všeobecnom vzorci (I) alebo v uskutočnení 13 pyrolopyridinyl vybraný z

V sedemnástom uskutočnení je

Z¹¹⁰-A-Zⁿⁱ v uskutočnení 13 alebo 16

-NHC(O)-.

V osemnástom uskutočnení je substituent R2 vo všeobecnom vzorci (I) alebo v uskutočneniach 13, 16 alebo 17 piperidín-4-yl, V-metylpiperidín-4-yl, 77-(prop-2-yl)piperidín-4-yl, A^r-(imidazol-4-yl-metyl)piperidín-4-yl, N-(2metylimidazol-4-yl-metyl)piperidín-4-yl, V-(pyrazol-4-yl-metyl)piperidín-4-yl, W-(2-metoxyetyl)piperidín-4-yl, A7-(fur-3-yl-metyl)piperidín-4-yl, N(tetrahydropyrán-4-yl-metyl)piperidín-4-yl, 7V-(pyrol-2yl-metyl)piperidín-4-yl alebo N-(2-difluóretyl)piperidín-4-yl.

V devätnástom uskutočnení každý zo substituentov R_a a Rj v zlúčeninách všeobecného vzorca (I) reprezentuje jeden alebo viac substituentov pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka,

-C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)-alkylu, C(O)-arylu, -C(0)heteroarylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroarylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej arylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S-, substituovanej alebo nesubstituovanej aryl-S(O)_p~, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryl -S(O)_P-, a kde aspoň jeden zo substituentov R_a a Ri nie je atóm vodíka.

V dvadsiatom uskutočnení je A v zlúčeninách všeobecného vzorca (I)

-(Cj-Ce)-.

V dvadsiatom prvom uskutočnení je Z¹¹⁰-A-Zⁱⁿ dohromady kovalentná väzba v zlúčeninách reprezentovaných všeobecným vzorcom (I).

V dvadsiatom druhom uskutočnení substituent R3 pri každom výskyte v zlúčeninách reprezentovaných všeobecným vzorcom (I) je, nezávisle, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(0)heteroaryl.

V dvadsiatom treťom uskutočnení je substituent R₂ skupina všeobecného vzorca -Z¹⁰¹-Z¹⁰², kde z¹⁰¹ je kovalentná väzba, -(Ci-C6)-, -(Ci-C6)- -0-, -(CiC6)- -C(0)-, -(Ci-C6)-C(O)O-, -(C,-C6)-C(0)-NH-, -(C]-C6)-C(O)-N((Ci-C6))alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina; a kde Z¹⁰² je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, kde uvedený substituovaný cykloalkenyl má jeden alebo viac substituentov každý nezávisle vybraných zo skupiny pozostávajúcej z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogénu, substituovanej alebo nesubstituovanej (Ci-C6), substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného -C(0)alkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C₆)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -N((Ci-C6)-OR)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C₆)-C(O)₂R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C₆)-N(R)27 (Ci-C6)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C₆)-N(R)-(Ci-C6)N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C₆)-C(O)N(R)-(Ci-C6)N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej sulfónamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej ureidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-Cg)-OR, oxoskupiny a nasýtená, nenasýtená alebo aromatická, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická skupina obsahujúca jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny pozostávajúcej z N, O, a S; kde atómy dusíka uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)N(R)₂, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)(Cj-C6)-N(R)₂, -C(O)alkylom, -C(O)-arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom.

V dvadsiatom štvrtom uskutočnení je substituent R₂ skupina všeobecného vzorca -Z¹⁰¹-Z¹⁰²; Z¹⁰¹ je kovalentná väzba, -(Ci-Cô)-, -(Ci-Cô)- -0-, -(Ci-Cô)-C(0)-, -(C1-C6)- -C(0)0-, -(C^Cej-CÍOj-NH-, -(Cj-Cej-CCOj-NGCi-CJ)alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina; Z¹⁰² je substituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedená substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden alebo viac substituentov každý nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z nitroskupiny, halogénu, substituovanej alebo nesubstituovanej (Ci-Có), substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného -C(O)-alkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)(Ci-Cô)-OR, substituovanej alebo nesubstituovanej -N((Ci-Cô)-OR)2, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-C(O)₂R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-Cg)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C₆)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-0R, a substituovanej alebo nesubstituovanej heterocyklickej skupiny obsahujúcej jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny pozostávajúcej z O a S; kde atómy dusíka uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(0)N(R)2, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(0)-(Ci-Ce)-N(R)2, -C(O)-alkyIom, -C(O)-arylom, -C(O)heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom.

Výhodná je zlúčenina všeobecného vzorca (I), v ktorej substituent R₃ je H, substituent Ri pri každom výskyte je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvorí F, Cl, Br, I, CH₃, NO₂, OCF₃, OCH₃, CN, CO₂CH₃, CF₃, -CH₂NR_dRe, /-butyl, pyridyl, substituovaný alebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný alebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný alebo nesubstituovaný benzénsulfonyl, substituovaná alebo nesubstituovaná fenoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, karboxyl, substituovaný alebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný alebo nesubstituovaný styryl.

Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R₃ je H; substituent R_a pri každom výskyte je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvorí F, Cl, Br, I, CH₃, NO₂, OCF₃, OCH₃, CN, CO₂CH₃, CF₃, /-butyl, pyridyl, substituovaný alebo nesubstituovaný oxazolyl, substituovaný alebo nesubstituovaný benzyl, substituovaný alebo nesubstituovaný benzénsulfonyl, substituovaná alebo nesubstituovaná fenoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, karboxyl, substituovaný alebo nesubstituovaný tetrazolyl a substituovaný alebo nesubstituovaný styryl.

Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R₃ je H; substituent R2 je skupina vzorca '0' kde η je 1, 2 alebo 3.

Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R3 je H; substituent R₂ je skupina vzorca

RflG

m kde m je O, 1, 2 alebo 3 a substituent R_g je H alebo -(CH₂)pN(R4)Rs, kde p je celé číslo od 2 do 6 a substituenty R4 a R5 sú každý nezávisle H, azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde význam Y je vybraný zo skupiny, ktorú tvorí -C(0)-, -(CH₂)_q, -S(0)2-, -C(0)0-

číslo od O do 6; a r je O, 1 alebo 2; a Z je substituovaná alebo nesubstituovaná časť, vybraná zo skupiny, ktorú tvorí alkyl, alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl a heterocykloalkylová skupina, alebo R4, Rs a dusíkový atóm, ku ktorému sú pripojené, tvoria spoločne 3-, 4-, 5-, 6- alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú alebo heterobicyklickú skupinu.

Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R₃ je H; substituent R₂ je skupina vzorca

Q

NR4R5 kde m je 0, 1, 2 alebo 3, každé z a a b znamená nezávisle celé číslo od 0 do 6,

Q je -OR₆ alebo -NR4R5;

každý zo substituentov R4 a R5 znamená nezávisle H, azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde význam Y je vybraný zo skupiny, ktorú tvorí -C(O)-, -(CH₂)_q, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, aminoskupina, aryl, heteroaryl alebo heterocykloalkylová skupina; alebo substituenty R4, R5 a dusíkový atóm, ku ktorému sú pripojené, spoločne vytvárajú 3, 4, 5, 6 alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú alebo heterobicyklická skupinu; a substituent Ré je vodík alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina.

Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R3 je H; substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca

kde n je 1, 2 alebo 3; a substituent R4 je H, azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde význam Y je vybraný zo skupiny, ktorú tvorí -C(O)-, -(CH₂),-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-, kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.

Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R3 je H; substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca

Rs kde m je 0, 1,2 alebo 3;

substituent R5 je H, azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde význam Y je vybraný zo skupiny, ktorú tvorí kovalentná väzba, -C(O)-, -(CH₂)_q-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH-, -(CH₂)_qC(O)-, -C(O)(CH₂)_q- a -(CH₂)_qS(O)_r-, kde alkylová časť skupiny -(CH₂)_q-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH-, -(CH₂)_qC(O)-, -C(O)(CH₂)_q- a -(CH₂)_qS(O)_r je prípadne substituovaná halogénom, hydroxyskupinou alebo alkylskupinou; kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkyiová skupina;

alebo Y a Z sú spoločne prirodzená alebo neprirodzená aminokyselina, ktorá môže byť na amínovom dusíku mono- alebo di-alkylovaná; a substituent Rô predstavuje jeden alebo viac substituentov, z ktorých každý je nezávisle vybraný zo skupiny, ktorú tvorí vodík, hydroxyskupina, oxoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocyklyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocyklylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl a substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; s podmienkou, že uhlíkové atómy susediace s dusíkovým atómom nie sú substituované hydroxyskupinou.

Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R₃ je H; substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca

N kde substituent R₄ je H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde význam Y je vybraný zo skupiny, ktorú tvorí -C(O)-, -(CH2)_q-, -S(O)2-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 alebo 2; a Z je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.

Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R₃ je H; substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca

kde m je celé číslo od 1 do 6; a substituenty R₄ a R5 sú každý nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde význam Y je vybraný zo skupiny, ktorú tvorí

-C(0)-, -(CH₂),-, -S(0)₂-, -C(0)0-, -SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNHa -(CH₂)_qS(O)_r-; kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a Zje substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; alebo substituenty R₄, R₅ a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, spoločne vytvárajú 3, 4, 5, 6 alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovaná heterocyklickú alebo substituovanú alebo nesubstituovaná heterobicyklická skupinu.

Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R₃ je H; substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca

kde n je celé číslo od 0 do 4;

r je 0 a m je celé číslo od 1 do 6; alebo r je 1 a m je celé číslo od 0 do 6;

Q je -NR4R5 alebo -ORô;

každý zo substituentov R₄ a R5 je nezávisle vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde význam Y je vybraný zo skupiny, ktorú tvorí -C(O)-, -(CH₂),-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde q je celé čislo od 0 do 6; a r je 0, alebo 2; a Zje substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina;

alebo substituenty R4, R5 a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, spoločne vytvárajú 3, 4, 5 alebo 6-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu; a substituent Rň je vodík alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina.

Ďalšia výhodná zlúčenina všeobecného vzorca (I) je taká, kde substituent R3 je H; substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca

kde n je celé číslo od 0 do 4;

m je celé číslo od 0 do 6;

substituent R4 je substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde význam Y je vybraný zo skupiny, ktorú tvorí -C(O)-, -(CH₂)_q, -S(O)₂, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, -(CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde q je celé číslo od 0 do 6; a r je 0, 1 alebo 2; a Zje substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; a substituent Rô je vodík alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín vytvárajú

substituenty R4, R5 všeobecného vzorca	a atóm dusíka	spoločne heterocyklickú skupinu
	t R14J	I	R/
		r	VRe
	^12/ R11		>rRe R10

kde substituenty R7, Rs, R9, Rio, R11, R12, R13 a R14 sú každý nezávisle nižší alkyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R7 a Rg; R9 a Rio; R11 a R12; alebo R13 a R14 sú dohromady atóm kyslíka; alebo aspoň jeden zo substituentov R7 a R9 je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH2OR15 alebo CH₂NRi₅(Ri₆), kde substituenty R15 a Riô sú každý nezávisle vodík, azabicykloalkyl alebo V-L, kde význam V je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo substituenty Ri₅, Rie a atóm dusíka spoločne vytvárajú 3, 4, 5, 6 alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú alebo substituovanú alebo nesubstituovanú heterobicyklickú skupinu;

X je O, S, SO, SO₂, CH₂, CHOR17 alebo NR17, kde substituent R_!7 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl,

-C(NH)NH₂, -C(0)Ri7 alebo -C(O)ORis, kde substituent Ri« je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 alebo 1.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín vytvárajú substituenty R4, R5 a atóm dusíka spoločne heterocyklus všeobecného vzorca

N

Rig·

R20*

kde substituenty R19 a R20 sú každý nezávisle vodík alebo nižší alkyl; alebo substituenty R19 a R20 sú dohromady atóm kyslíka;

substituenty R₂i a R₂₂ sú každý nezávisle vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl V-L, kde význam V je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH2)qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; alebo substituenty R21, R22 a atóm dusíka spoločne vytvárajú 3, 4, 5 alebo 6-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu;

m je celé číslo od 1 do 6; a n je celé číslo od 0 do 6.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín vytvárajú substituenty R4, R₅ a atóm dusíka spoločne heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca

R23 kde m je celé číslo od 1 do 6; a substituent R23 je CH2OH, NRR', C(O)NRR' alebo COOR, kde substituenty R a R' sú každý nezávisle vodík alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín vytvárajú substituenty R4, R5 a atóm dusíka spoločne heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca

kde substituent R₂4 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR₂5, CH₂OR₂5, CH₂NR₂₆R₂7 alebo C(O)NHR₂6, kde substituent R25 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocyklus alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloaryl; a substituenty R₂6 a R₂7 sú každý nezávisle vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L, kde význam V je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -C(0)-, -(CH₂)_p-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo substituenty R₂6, R₂7 a atóm dusíka spoločne vytvárajú 3, 4, 5 alebo 6-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má aspoň jeden zo substituentov R4 a R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec

kde

T je C(O), S, SO, SO₂, CHÓR alebo NR, kde substituent R je vodík alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a n je 0, 1 alebo 2.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má aspoň jeden zo substituentov R4 a R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec -N(R₂g)R₂9, kde každý zo substituentov R₂g a R29 je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný karboxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný kyanoalkyl; alebo substituenty R₂g a R₂₉ spoločne s atómom dusíka vytvárajú 5 alebo 6-člennú substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín vytvárajú spoločne substituenty R4, R5 a atóm dusíka heterocyklus všeobecného vzorca

kde substituenty R7, Rs, R9, Rio, R11, R12, R13 a R14 sú každý nezávisle nižší alkyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R7 a Rg; R₉ a Rio; R11 a Ri₂; alebo R13 a R14 sú dohromady atóm kyslíka; alebo aspoň jeden zo substituentov R7 a R₉ je kyanoskupina, CONHR15, COOR15, CH₂ORi5 alebo CH₂NRi5(Riô), kde substituenty R15 a Rió sú každý nezávisle vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L, kde význam V je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)<,NH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo substituenty R15, Riô a atóm dusíka spoločne vytvárajú 3, 4, 5, 6 alebo 7-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú alebo heterobicyklickú skupinu;

X je O, S, SO, SO₂, CH₂, CHOR17 alebo NR17, kde substituent R17 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH₂, -C(O)Ri8 alebo -C(O)ORi₈, kde substituent Rig je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a t je 0 alebo 1.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín vytvárajú substituenty R4, R5 a atóm dusíka spoločne heterocyklus všeobecného vzorca

kde substituenty R19 a R20 sú každý nezávisle vodík alebo nižší alkyl; alebo substituenty R19 a R20 sú dohromady atóm kyslíka;

substituenty R21 a R22 sú každý nezávisle vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L, kde význam V je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-,

-CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo substituenty R21, R22 a atóm dusíka spoločne vytvárajú 3, 4, 5 alebo 6-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu;

m je celé číslo od 1 do 6; a n je celé číslo od 0 do 6.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín vytvárajú substituenty R₄, R₅ a atóm dusíka spoločne heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca

R23 kde m je celé číslo od 1 do 6; a substituent R23 je CH₂OH, NRR', C(O)NRR' alebo COOR, kde substituent R je vodík alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín vytvárajú substituenty R₄, R5 a atóm dusíka spoločne heterocyklickú skupinu všeobecného vzorca

kde substituent R24 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, karboxyl, kyanoskupina, C(O)OR₂5, CH₂OR₂5, CH2NR26R27 alebo C(O)NHR₂6, kde substituent R25 je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná heterocyklická alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloarylová skupina; a substituenty R₂6 a R₂7 sú každý nezávisle vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L, kde V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH₂)_p-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNHa -(CH₂)_qS(O)r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 alebo 2, a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; alebo substituenty R₂6, R₂7 a atóm dusíka spoločne vytvárajú 3, 4, 5 alebo 6-člennú, substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má aspoň jeden zo substituentov R4 a R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec vz ^R32 kde g je 0 alebo 1;

T je C(O), O, S, SO, SO₂, CH₂, CHOR₁₇ alebo NR₁₇, kde substituent R₁₇ je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, -C(NH)NH₂, -C(O)Ri8 alebo -C(O)ORis, kde substituent Rig je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R3₂ je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má aspoň jeden zo substituentov R4 a R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec -N(R₂8)R₂9, kde substituenty R₂g a R29 sú každý nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný karboxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný kyanoalkyl; alebo substituenty R₂8 a R₂9 spoločne s atómom dusíka tvoria 5- alebo 6člennú substituovanú alebo nesubstituovanú heterocyklickú skupinu.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má substituent R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec N(R3o)R3i, kde substituenty R30 a R31 sú každý nezávisle vodík, alkyl, alkoxykarbonyl, alkoxyalkyl, hydroxyalkyl, aminokarbonyl, kyanoskupina, alkylkarbonyl alebo arylalkyl.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má substituent R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec kde

X-N

R32 každé X je nezávisle CH alebo N; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má substituent R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec λΛ

-N T νχ ^R32 kde g je 0 alebo 1;

T je O, S, SO, SO2, CH₂, CHOR17 alebo NR17, kde substituent R17 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, C(O)NH₂, -C(NH)NH₂, -C(0)Ri7 alebo -C(0)0Ri8, kde substituent Ris je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má substituent R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec

v ktorom g je 0, 1 alebo 2; a substituent R32 je vodík, kyanoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má substituent R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec

kde

T je C(O), O, S, SO, SO2, CH2, CHOR17 alebo NR17, kde substituent R17 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, aryl, arylalkyl, -C(NH)NH₂, -C(O)Ri8 alebo -C(O)ORi8, kde substituent Ris je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl;

g je 0 alebo 1; a substituent R₃₂ je vodík, kyanoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná arylalkylová skupina.

Výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má substituent R5 všeobecný vzorec Y-Z, kde Z má všeobecný vzorec

R33 kde substituent R₃₂ je vodík, kyanoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný hydroxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, alkylkarbonyl, substituovaná alebo nesubstituovaná tioalkoxyskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl; a substituent R₃₃ je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxykarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aminokarbonyl, perhalogénalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkenyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl.

Výhodná zlúčenina všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej substituent R₃ je atóm vodíka; substituent R₂ má všeobecný vzorec

kde m je O alebo 1;

substituenty R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40 a R41 sú každý nezávisle metyl alebo atóm vodíka; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R34 a R35; R36 a R37; R38 a R39; alebo R40 a R41 spoločne sú atóm kyslíka;

substituent R42 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde význam Y je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH₂)_p-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_f ; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 alebo 2; a Z je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná heterocykloalkylová skupina; alebo substituent R₄₂ má všeobecný vzorec

kde u je 0 alebo 1;

substituenty R43, R44, R45, R46, R47, R48, R49 a R₅o sú každý nezávisle metyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R43 a R44; R45 a R46; R47 a R48 ; alebo R49 a R50 spoločne sú atóm kyslíka; a substituent R51 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L, kde V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.

Výhodná zlúčenina všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej substituent R₃ je vodík; substituent R₂ má všeobecný vzorec \ R54i'h/-\ \ R57/

Rt.

(rss/ ' R52

J

Reo •Rse _kN' \ /₍ kde h, i, j, k a 1 sú nezávisle 0 alebo 1;

substituenty Rs₂, R53, R54, R55, R56, R57, Rís, R59, R_g a Rh sú každý nezávisle metyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov R₅₂ a R53; R54 a R55 ; R₅₆ a R57; alebo Rss a R59 spoločne sú atóm kyslíka; a substituent Róo je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo Y-Z, kde význam Y je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -(CH₂)_p-, -S(O)₂-, -C(O)O-, -SO₂NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH- a -(CH₂)_qS(O)_r; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 alebo 2; a Z substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl; alebo substituent Réo má všeobecný vzorec

kde v je 0 alebo 1;

substituenty Rói, Ró2, Rô3, Ró4, Rós, Rôó, Ró7 a R₆s sú každý nezávisle nižší alkyl alebo vodík; alebo aspoň jeden pár zo substituentov Réi a R62; Ró3 a R₆4', Rós a Ró6; a R67 a Rôs spoločne sú atóm kyslíka;

substituent Rô9 je vodík, substituovaný alebo nesubstituovaný azabicykloalkyl alebo V-L, kde V je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -C(O)-, -C(O)O-, -SO2NH-, -CONH-, (CH₂)_qO-, -(CH₂)_qNH-, -(CH₂)_P-, -S(O)₂- a -(CH₂)_qS(O)_r-; kde p je celé číslo od 0 do 6, q je celé číslo od 0 do 6 a r je 0, 1 alebo 2; a L je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl.

Ďalšou výhodnou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej je substituent R3 vodík; substituent R₂ -Z¹⁰¹-Z¹⁰², kde z¹⁰¹ je kovalentná väzba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-C₆)-O-, -(Ci-C₆)-C(O)-, -(Ci-C₆)-C(O)O-, -(Cj-C₆)-C(O)-NH-, -(Ci-C6-C(O)-N((Ci-C6))- alebo substituovaný fenyl; a

Z¹⁰² je vodík, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je Z¹⁰¹ vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -CH2-C(O)O-, -CH2-C(O)-, -CH2-C(O)NH-, -CH₂-C(0)-N(Me), -CH(Me)-C(0)0-, -(CH₂)₃-C(O)O-, -CH(Me)-C(O)NH- a -(CH₂)₃-C(O)-NH-; a

Z¹⁰² je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z vodíku, metylu, etylu, N,Ndimetylaminoetylu, #,7V-dietylaminoetylu, 2-fenyl-2-hydroxyetylu, morfolinoskupiny, piperazinylu, N-metylpiperazinylu a 2-hydroxymetylpyrolidinylu.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má G

všeobecný vzorec

, kde Z¹⁰⁰ je nesubstituovaný benzoxazolyl alebo substituovaný benzotiazolyl.

substituovaný alebo alebo nesubstituovaný

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec

v ktorom sa vyskytuje iba jeden substituent R_a a je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka alebo F.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je Z¹⁰¹ kovalentná väzba; a Z¹⁰² je prípadne substituovaný pyridyl.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej je substituent R3 vodík; substituent R₂ je cyklopentyl; a G má všeobecný vzorec

Z-A-Z—z'°°

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je Z¹¹⁰ vodík;

A je O; a Z¹⁰⁰ je prípadne substituovaný fenyl, furanyl alebo tienyl, pričom Z¹⁰⁰ je prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, COOH, NO₂, OMe, -COOMe, OCF₃ a CF₃.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je Z¹¹⁰ vodík;

A je -0-, -0-(CR₂)„-C(0)- alebo -0-(CR2)„-0-; n v každom prípade je O až 3;

Z¹⁰⁰ je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z cyklohexylu, fenylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, izoxazolylu a piperidinylu; pričom Z¹⁰⁰ je prípadne substituovaná jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, alkoxyskupiny, halogénu, hydroxyskupiny a alkoxykarbonylu.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je substituent R prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z cyklobutylu a cyklohexylu.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je substituent R prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z hydroxyskupiny, alkylu, hydroxyalkylu, karboxyalkylu a fenylalkoxyalkylu.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je G 4-fenoxyfenyl.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je m 2; a je 0; substituent Rg je H; b je 1 alebo 2; a substituenty R₄ a R5 sú každý H.

V ,

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je m 0, 1 alebo 2; substitutent R.6 je vodík; substituent Rs je vodík alebo Y-Z;

kde Y je kovalentná väzba, -C(O)-, -(CH₂)_q0-, -(CH₂)_q, -(CH₂)_qC(O)alebo -C(O)(CH₂)_q-, kde alkylová časť skupín -(CH₂)_q0-, -(CH₂)_P-, -(CH₂)_qC(O)- a -C(O)(CH₂)_q- je prípadne substituovaná halogénom, hydroxyskupinou alebo alkylovou skupinou; a

Z je vodík, alkyl, prípadne substituovaný alkyl, alkoxyalkyl, prípadne substituovaný heterocykloalkyl, prípadne substituovaný heteroaryl alebo prípadne substituovaná aminoskupina.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je Z atóm vodíka, metyl, etyl, hydroxymetyl, metoxyetyl, TV-metyl-piperidinyl, (Z-butoxykarbonyl)(hydroxy)piperidinyl, hydroxypiperidinyl, (hydroxymetyl)piperidinyl, (hydroxy)(metyl)piperidinyl, morfolinoskupina, (metoxyetyl)piperizinyl, metylpiperizinyl, 4-piperidinylpiperidinyl, imidazolyl, metylimidazolyl, TV-metylaminoskupina, Ν,Ν-dimetylaminoskupina,

TV-izopropyl-amino skupina, N, TV-di etyl amino skupina, 2,3-dihydroxypropylaminoskupina, 2-hydroxyetyl amino skupina, 3-hydroxy-propylaminoskupina, metoxyetyl-aminoskupina, etoxykarbonylmetylaminoskupina, fény Imety lamino skupina, jV-metyl-ľV-metoxy amino skupina, furanylmetylamino skupina, piperidinyletylaminoskupina, N-(2-N,Ndimetylaminoetyl)-7/-metyl-aminoskupina, 2-TV, TV-dimetyl-ami noetyl aminoskupina, ľV-metyl-7ý-(jV-metyl-piperidín-4-yl)aminoskupina, 2-morfolinoetylamino skupina, 3-morfolino-propylamino skupina, 3-imidazoly 1-propylaminoskupiny alebo 3-(2-oxopyrolidinyl)propylaminoskupiny.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je m rovné

η

2; substituent R5 je Y-Z; Y je -C(0)-; a Z má všeobecný vzorec R ktorom n je 0, 1, 2 alebo 3.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je substituent R4 vodík alebo metyl;

G je

R,

A je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z O, -N(R)- a -N(R)C(O)-;

Z¹¹¹ je -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)n-; substituent R je vodík alebo alkyl;

n je 0 až 5;

substituent R_a je jeden alebo viac substituentov, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z H, OH, F, Cl, metylu a metoxyskupiny;

substituent Ri je jeden alebo viac substituentov, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z H, CN, F, CF₃, OCF₃, metylu, metoxyskupiny a prípadne substituovanej aminoskupiny; a kde uvedená aminoskupina je prípadne substituovaná jednou alebo viac skupinami, pričom každá je nezávisle vybraná zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, alkoxyalkylu, fenylu, substituovaného fenylu a prípadne substituovaného heteroarylu.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je substituent Ri 4-metylfenyltioskupina alebo 2-pyridinyltioskupina.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má

G všeobecný vzorec kde Z¹⁰⁰ je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z benzo[ň]tiofenu, furanylu a tiofenu.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je substituent R_a alkoxyskupina;

A je NH-C(O)-; a medzi A a Z¹⁰⁰ je kovalentná väzba.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má

G všeobecný vzorec

100

A je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -N(R)-C(0)-N(R)-, -(CHújnN(R)C(0)N(R)-, -N(R)- a -N(R)-SO2-; substituent R je vodík alebo alkyl;

Z¹⁰⁰ je

N

> pyridinyl, tiazolyl, furanyl, benzofuranyl alebo oxazolyl;

X je S, O alebo NR¹, kde substituent R¹ v každom prípade je nezávisle vodík alebo Me;

substituent R_a je jeden alebo viac substituentov, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z H a F; a substituent Ri je jeden alebo viac substituentov, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z H, F, Cl, Br, NO2, CF3, alkylu, alkoxyskupiny a alkoxykarbonylu.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je substituent R4 metyl; m je 1, 2 alebo 3;

substituent R5 je Y-Z, kde Y je -C(O)O-, -C(O)- alebo -C(0)-(CH2)_p-; a Z je aminoalkyl, jV-alkylaminoskupina, N.ľV-dialkylaminoskupina alebo hydroxyalkylaminoalkyl.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je

.100 substituent R₄ metyl; G má všeobecný vzorec I , kde n je 0 až 3; Z¹⁰⁰ je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z indolylu, indenylu, metylindenylu, metylindolylu, dimetylaminofenylu, fenylu, cyklohexylu a benzofuranylu.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má G

R všeobecný vzorec ^/'^SZ—A—Z—Z¹⁰⁰

Z¹⁰⁰ je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z fenylu, imidazolylu, indolylu, furanylu, benzofuranylu a 2,3dihydrobenzofuranylu;

Z¹⁰⁰ je prípadne substituovaná jedným alebo viac substituentmi, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, Cl, CN, prípadne substituovaného alkylu, -O- (prípadne substituovaného alkylu), -COOH, -Z¹⁰⁵57

C(O)N(R)₂, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)₂-Z²⁰⁰ a -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)N(R)-Z²⁰⁰;

Z¹⁰⁵ je kovalentná väzba alebo (Ci-Có);

Z²⁰⁰ je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej sa zo skupiny (Ci-C₆), fenylu a -(Ci-Côj-fenylu;

Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý nezávisle kovalentná väzba alebo skupina (C1-C3) prípadne substituovaná alkylom, hydroxyskupinou, COOH, CN alebo fenylom; a

A je O, -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)- alebo -N(R)-C(O)-, kde substituent R je H alebo alkyl.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je substituent R4 metyl.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má G '‘Oa-z·” všeobecný vzorec ' , kde Z¹⁰⁰ je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z benzoxazolylu, benzotiazolylu a benzimidazolylu.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je substituent R4 metyl; A je -NH- ; v tomto prípade je tu iba jeden substituent R_a vybraný z H alebo F; a Z¹⁰⁰ je prípadne substituovaná jedným alebo viac substituentmi, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, halogénu, CF3 a alkoxyskupiny.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec

Z¹⁰⁰ je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z fenylu, pyrolylu, pyridylu, benzimidazolylu, naftylu a

kde Z¹⁰⁰ je prípadne substituovaná jedným alebo viac substituentmi, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, Cl, Br, NO₂, aminoskupiny, jV-alkylaminoskupiny, N,JV-dialkylaminoskupiny, CN, prípadne substituovaného alkylu, -O- (prípadne substituovaného alkylu) a fenylu;

Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ v každom prípade je nezávisle (C0-C3) prípadne substituovaná prípadne substituovaným fenylom; a

A je -N(R)-C(O)-N(R)-, -N(R)-S(O)₂-, -N(R)-C(O)-, -N(R)- alebo -N(R)C(O)-O-.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je substituent R4 metyl a v tomto prípade je tu iba jeden substituent R_a vybraný z atómu flóru.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má G

Z¹⁰⁰ je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z fenylu, izoxazolylu, tetrahydronafthylu, furanylu, benzofuranylu, pyridylu a indolylu;

kde Z¹⁰⁰ je prípadne substituovaná jedným alebo viac substituentmi, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, CN, NO₂, C(O)H, CONH2, -NHSO2CF3, prípadne substituovaného alkylu, prípadne substituovaného heteroarylu a -O- (prípadne substituovanej alkylové skupiny);

Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý nezávisle prípadne substituovaná skupina (C0-C3); a

A je O, -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-N(R)-, -C(O)-N(R)-, -N(R)-C(O)-O-, -N(R)C(O) alebo -N(R)-.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je substituent R4 metyl; substituent R_a je H alebo metoxyskupina; a Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý nesubstituovaný.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec

alebo kde substituent R je H alebo nižší alkyl a n v každom prípade je nezávisle 1 až 6.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec

100

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je Z¹⁰⁰ substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín má G všeobecný vzorec / , kde Z¹⁰⁰ je prípadne substituovaná skupina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z benzoxazolylu, benzotiazolylu a benzimidazolylu.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je n 2; substituent Rô je H; m je 1; r je 1; a substituenty R4 a R5 sú každý vodík.

Ďalšou výhodnejšou zlúčeninou všeobecného vzorca (I) je tá, v ktorej v akejkoľvek z vyššie uvedených, použiteľných, výhodných zlúčenín je G 4-fenoxyfenyl.

V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob inhibície aktivity jednej alebo viac proteínkináz u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej fyziologicky aktívnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi. Výhodný spôsob je taký, v ktorom je proteínkináza vybraná zo skupiny pozostávajúcej z KDR, FGFR-1, PDGFRP, PDGFRa, IGF-1R, c-Met, Flt-1, Flt-4, TIE-2, TIE-1, Lck, Src, fyn, Lyn, Blk, hck, fgr a yes. Ďalší výhodný spôsob je taký, v ktorom je proteínkináza proteínová serín/treonínkináza alebo proteínová tyrozínkináza. Výhodnejší spôsob je taký, v ktorom je proteínkináza TIE-2 a ďalší výhodnejší spôsob je taký, v ktorom aktivita proteínkinázy sa zúčastňuje na aktivácii T-buniek, B-buniek, degranulácii žírnych buniek, aktivácii monocytov, potenciácii zápalovej odpovede alebo ich kombinácii.

V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob ovplyvnenia hyperproliferačných porúch u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečivá alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.

V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob ovplyvnenia angiogenézy u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečivá alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi. Výhodný spôsob je taký, v ktorom zlúčenina alebo jej fyziologicky prijateľná soľ, proliečivo alebo biologicky aktívny metabolit je podaný v množstve, ktoré je schopné podporovať angiogenézu alebo vaskulogenézu. Výhodnejší spôsob je taký, v ktorom pacient trpí anémiou, ischémiou, infarktom, rejekciou transplantátu, zranením, gangrénou alebo nekrózou.

V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob liečenia jedného alebo viac ulkusov u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečivá alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi. Výhodný spôsob je taký, v ktorom sú ulkus alebo ulkusy spôsobené bakteriálnou alebo fungálnou infekciou; alebo ulkus alebo ulkusy sú Moorenove ulkusy; alebo ulkus alebo ulkusy sú symptómy ulceratívnej kolitídy.

V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob liečenia ochorenia pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečivá alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi, kde dané ochorenie je očné ochorenie, kardiovaskulárne ochorenie, rakovina, syndróm Crowa-Fukaseho (POEMS), diabetické ochorenie, kosáčikovitá anémia, chronický zápal, systémový lupus, glomerulonefritída, synovitída, zápalové črevné ochorenie, Crohnova choroba, glomerulonefritída, reumatoidná artritída, osteoartritída, roztrúsená skleróza, rejekcia štepu, Lymeská choroba, sepsa, von Hippelov-Lindauov syndróm, pemfigoid, psoriáza, Pagetova choroba, polycystické ochorenie obličiek, fibróza, sarkoidóza, cirhóza, tyreoiditída, hyperviskózny syndróm, Oslerova-WeberovaRenduova choroba, chronické okluzivne ochorenie pľúc, astma alebo edém po popáleninách, traume, radiácii, mŕtvica, hypoxia alebo ischémia, ovariálny hyperstimulačný syndróm, preeklampsia, menometrorágia, endometrióza alebo infekcie vírusmi Herpes simplex a Herpes zoster, vírusom ľudskej imunodeficiencie, Parapoxvírusom, protozoom alebo toxoplazmózou.

Výhodný spôsob je taký, v ktorom očné ochorenie je:

okulárny alebo makulárny edém, okulárne neovaskulárne ochorenie, skleritída, radiálna keratotómia, uveitída, vitritída, myopia, fyziologická exkavácia papily, chronické odlúčenie sietnice, komplikácie po liečení laserom, konjunktivitída, Stargardtova choroba a Ealesova choroba, retinopatia alebo makuláma degenerácia;

kardiovaskulárne ochorenie je:

ateroskleróza, restenóza, ichémia/reperfúzne poškodenie, vaskulárna oklúzia alebo karotické obštruktívne ochorenie;

rakovina je:

pevný nádor, sarkóm, fibrosarkóm, osteóm, melanóm, retinoblastóm, rabdomyosarkóm, glioblastóm, neuroblastóm, teratokarcinóm, hematopoézne zhubné bujnenie, Kaposiho sarkóm, Hodgkinsova choroba, lymfom, myelóm, leukémia alebo malígny ascites; a diabetické ochorenie je:

na inzulíne závisiaci díebetes mellitus so zeleným zákalom očí, diabetická retinopatia alebo mikroangiopatia.

V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob zníženia fertility u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívneho metabolitu pacientovi.

V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález spôsob, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina všeobecného vzorca (I) alebo jej fyziologicky prijateľná soľ, proliečivo alebo biologicky aktívny metabolit je podávaná v kombinácii s proangiogénnym rastovým faktorom. Výhodný spôsob je taký, v ktorom proangiogénny rastový faktor je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z VEGF, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, HGF, FGF-1, FGF-2, ich derivátov a antijódtypickych protilátok.

Detailný opis vynálezu

V rámci jedného uskutočnenia poskytuje predložený vynález zlúčeniny všeobecného vzorca (I) uvedené vyššie. Špecifikácie substituentov vo výhodných skupinách zlúčenín všeobecného vzorca (I) sú uvedené nižšie.

Výhodne je substituent Ri vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, Cl, Br, I, CH3, NO₂, OCF3, OCH3, CN, CO2CH3, CF₃, t-butylu, pyridylu, substituovaného alebo nesubstituovaného oxazolylu, substituovaného alebo nesubstituovaného benzylu, substituovaného alebo nesubstituovaného benzénsulfonylu, substituovanej alebo nesubstituovanej fenoxyskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, karboxylu, substituovaného a nesubstituovaného tetrazolylu, substituovaného a usubstituovaného styrylu, substituovanej a nesubstituovanej aryltioskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej tioalkoxyskupiny, substituovanej a nesubstituovanej heteroaryltioskupiny; CH₂OR_c, kde substituent R_c je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka alebo substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu alebo arylu; a -W-(CH₂)_t-NRdR_e, kde t je celé číslo od 1 do 6; W je priama väzba, O, S, S(O), S(O)₂ alebo NRf, kde substituent Rf je vodík alebo alkyl a substituenty Rd a R_e sú nezávisle vodík, alkyl, alkanoyl alebo SO₂alkyl; alebo substituenty Rd, R_e a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, vytvárajú 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh.

Výhodne je substituent R_a vybraný zo skupiny pozostávajúcej z F, Cl, Br, I, CH3, NO₂, OCF3, OCH3, CN, CO₂CH₃, CF₃, /-butylu, pyridylu, substituovaného alebo nesubstituovaného oxazolylu, substituovaného alebo nesubstituovaného benzylu, substituovaného alebo nesubstituovaného benzénsulfonylu, substituovanej alebo nesubstituovanej fenoxyskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej tioalkoxyskupiny, karboxylu, substituovaného a nesubstituovaného tetrazolylu, substituovaného a usubstituovaného styrylu, substituovanej a nesubstituovanej aryltioskupiny, substituovanej a nesubstituovanej heteroaryltioskupiny; CH₂OR_c, kde substituent R_c je vodík alebo substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl alebo aryl; a -W-(CH₂)_t-NRdR_e, kde t je celé číslo od 1 do 6; W je priama väzba, O, S, S(O), S(O)₂ alebo NRf, kde substituent Rf je vodík alebo alkyl a substituenty Rd a R_e sú nezávisle vodík, alkyl, alkanoyl alebo SO₂-alkyl; alebo substituenty Rd, R_e a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, vytvárajú 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu existovať ako soli s farmaceutický prijateľnými kyselinami. Predložený vynález zahrnuje tiež tieto soli. Príklady týchto solí zahrnujú hydrochloridy, hydrobromidy, sulfáty, metánsulfonáty, nitráty, maleáty, acetáty, citráty, fumaráty, tartráty [napr. (+)tartráty, (-)-tartráty alebo ich zmesi, vrátane racemických zmesí], sukcináty, benzoáty a soli s aminokyselinami, ako je napr. glutámová kyselina. Tieto soli môžu byť pripravené štandardnými spôsobmi podľa stavu techniky.

Niektoré zlúčeniny všeobecného vzorca (I), ktoré majú kyslé substituenty, môžu existovať ako soli s farmaceutický prijateľnými bázami. Predložený vynález zahrnuje tieto soli. Príklady takých solí zahrnujú sodné, draselné, lyzínové a arginínové soli. Tieto soli môžu byť pripravené štandardnými spôsobmi podľa stavu techniky.

Niektoré zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich soli môžu existovať vo viac než jednej kryštalickej forme a predložený vynález zahrnuje každú túto kryštalickú formu a ich zmesi.

Niektoré zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich soli môžu tiež existovať vo forme solvátov, napr. hydrátov, a predložený vynález zahrnuje každý tento solvát a ich zmesi.

Niektoré zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu obsahovať jedno alebo viac chirálnych centier, a teda existujú v rôznych opticky aktívnych formách. Pokiaľ zlúčeniny všeobecného vzorca (I) obsahujú jedno chirálne centrum, potom zlúčeniny existujú vo dvoch enantiomérnych formách a predložený vynález zahrnuje oba enantioméry a zmesi enantiomérov, napr. racemické zmesi. Enantioméry môžu byť rozdelené štandardnými spôsobmi, napr. tvorbou diastereoizomérnych solí, ktoré môžu byť separované, napr. kryštalizáciou; tvorbou diastereoizomérnych derivátov alebo komplexov, ktoré môžu byť separované, napr. kryštalizáciou, GLC alebo LC; selektívnou reakciou jedného enantiomeru s enantiomérne selektívnym činidlom, ako je napr. enzymatická esterifikácia; alebo GLC alebo LC v chirálnom prostredí, napr. na chirálnom pomocnom médiu, ako je napr. silikagél s viazaným chirálnym ligandom alebo za prítomnosti chirálneho rozpúšťadla. Tam, kde požadovaný enantiomér je konvertovaný na inú chemickú entitu jedným z vyššie uvedených spôsobov, je potrebný ďalší krok na uvoľnenie požadovanej enantiomérnej formy.

Alternatívne špecifické enantioméry . môžu byť syntetizované asymetrickou syntézou pomocou opticky aktívnych činidiel, substrátov, katalyzátorov alebo rozpúšťadiel alebo konvertovaním jedného enantioméru na druhý asymetrickou transformáciou.

Pokiaľ zlúčenina všeobecného vzorca (I) obsahuje viac než jedno chirálne centrum, môže existovať v diastereoizomérnych formách. Diastereoizomérne páry môžu byť separované štandardnými spôsobmi podľa stavu techniky, napr. chromatografiou alebo kryštalizáciou a jednotlivé enantioméry v každom páre môžu byť separované vyššie uvedenými spôsobmi. Predložený vynález zahrnuje každý diastereoizomér zlúčenín všeobecného vzorca (I) a ich zmesi.

Niektoré zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu existovať v rôznych tautomérnych formách alebo ako rôzne geometrické izoméry a predložený vynález zahrnuje každý tento tautomér a/alebo geometrický izomér zlúčenín všeobecného vzorca (I) a ich zmesi.

Niektoré zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu existovať v rôznych stabilných konformačných formách, ktoré môžu byť separovateľné. Torzná asymetria vďaka obmedzenej rotácii okolo asymetrickej jednoduchej väzby, napr. vďaka stérickému bráneniu alebo napätiu kruhu, môže uľahčiť separáciu rôznych konformérov. Predložený vynález zahrnuje každý tento konformačný izomér zlúčenín všeobecného vzorca (I) a ich zmesí.

Niektoré zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu existovať vo forme zwitteriónu a predložený vynález zahrnuje každú formu zwitteriónu zlúčenín všeobecného vzorca (I) a ich zmesí.

Heteroaromatické skupiny používané v predloženom vynáleze zahrnujú heteroarylová kruhové systémy (napr. pre názornosť, nie však limitujúco: tienyl, pyridyl, pyrazol, izoxazolyl, tiadiazolyl, oxadiazolyl, indazolyl, furány, pyroly, imidazoly, pyrazoly, triazoly, pyrimidíny, pyrazíny, tiazoly, izotiazoly, oxazolyl alebo tetrazoly) a heteroarylové kruhové systémy, v ktorých karbocyklický aromatický kruh, karbocyklický nearomatický kruh alebo heteroarylový kruh je kondenzovaný k jednému alebo viac ďalším heteroarylovým kruhom (napr. pre názornosť, nie však limitujúco: benzo[ó]tienyl, benzimidazolyl, benzoxazolyl, benzotiazolyl, benzotiadiazolyl, benzoxadiazolyl, indol, tetrahydroindol, azaindol, indazol, chinolín, imidazopyridín, chinazolín, purín, pyrolo[2,3-í/]pyrimidin, pyrazolo[3,467 ríjpyrimidín) a ich A-oxidy. Substituované heteroarylová skupiny sú výhodne substituované jedným alebo viac substituentmi, pričom každý je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, hydroxyskupiny, alkylu, alkoxyskupiny, alkyl-O-C(O)-, alkoxyalkylu, heterocykloalkylu, prípadne substituovaného fenylu, nitroskupiny, aminoskupiny, monosubstituovanej aminoskupiny alebo disubstituovanej aminoskupiny.

Termín heterocyklická (heterocyklyl)skupina, ako je používaný v predloženom vynáleze, sa vzťahuje na heteroarylovou i heterocykloalkylovou skupinu.

Termín heterobicyklická skupina, ako je používaný v predloženom vynáleze, sa vzťahuje na bicyklickú skupinu majúcu jeden alebo viac heteroatómov, ktorá je nasýtená, čiastočne nasýtená alebo nenasýtená.

Termín arylalkylová skupina, ako je používaný v predloženom vynáleze, sa vzťahuje na aromatický substituent, ktorý je pripojený k zlúčenine alifatickou skupinou majúcou jeden až asi šesť atómov uhlíka. Výhodná arylalkylová skupina je benzylová skupina.

Termín heteroaralkylová skupina, ako je používaný v predloženom vynáleze, je heteroaromatický substituent, ktorý je pripojený na zlúčeninu alifatickou skupinou majúcou jeden až šesť atómov uhlíka.

Termín heterocykloalkylová skupina, ako je používaný v predloženom vynáleze, sa vzťahuje na nearomatický kruhový systém, ktorý má 3 až 8 atómov a zahrnuje aspoň jeden heteroatóm, napr. atóm dusíka, kyslíka alebo síry.

Tu použité alifatické skupiny alebo označenia, napr. „Co-Cg“, zahrnujú lineárne, rozvetvené alebo cyklické uhľovodíky, ktoré sú celkom nasýtené alebo obsahujú jedmu alebo viac jednotiek nenasýtenosti. Pokiaľ je skupinou Co, znamená to, že tu nie je žiadna časť alebo inými slovami znamená väzbu.

Tu použitý termín aromatické skupiny (alebo arylové skupiny) zahrnujú aromatické karbocyklické kruhové systémy (napr. fenyl) a kondenzované polycyklické aromatické kruhy (napr. naftyl a 1,2,3,4-tetrahydronaftyl).

Tu použitý termín „prirodzená aminokyselina“ sa vzťahuje na 23 známych prirodzených aminokyselín, ktoré sú (označené svojimi skratkami): Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Cys-Cys, Glu, Gin, Gly, His, Hyl, Hyp, íle, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr a Val. Termín neprirodzené aminokyseliny sa vzťahuje na zlúčeniny všeobecného vzorca NH2-(C(X)2)_n-COOH, ktoré sú a-(pokiaľ n je 1) alebo P-(pokiaľ n je 2) aminokyseliny, pričom X v každom prípade je nezávisle akákoľvek časť postranného reťazca; príklady neprirodzených aminokyselín zahrnujú, ale nie je to nijako limitované; hydroxyprolín, homoprolín, 4-amino-fenylalanín, 3-(2-naftyl)alanín, norleucín, cyklohexylalanín, P-(3-pyridinyl)alanín, 0-(4-pyridinyl)alanín, a-aminoizomaslovú kyselinu, urokánovú kyselinu, //.//-tetrametylamidino-histidín, Nmetyl-alanín, //-metyl-glycín, ŤV-metyl-glutámovú kyselinu, Zerc-butylglycín, α-aminomaslovú kyselinu, ŕerc-butylalanín, ornitín, a-aminoizomaslovú kyselinu, β-alanín, γ-aminomaslovú kyselinu, 5-aminovalérovú kyselinu, 12aminododekánovú kyselinu, 2-aminoindán-2-karboxylovú kyselinu, atď. a ich deriváty, najmä tie, v ktorých je dusík amínovej skupiny mono- alebo dialkylovaný.

Bolo uvedené, že mnoho častí alebo substituentov je buď „substituovaných alebo nesubstituovaných“ alebo „prípadne substituovaných“. Pokiaľ je časť modifikovaná jedným z týchto termínov, znamená to, že akákoľvek časť majúca schopnosť byť substituovaná môže byť substituovaná, čo zahrnuje jeden alebo viac substituentov, pričom pokiaľ je substituovaná viac než jedným substituentom, je tento substituent nezávisle vybraný. Spôsoby substutitúcie sú dobre známe a/alebo môžu byť využité podľa predloženého opisu. Pre názornosť, nie však limitujúco, zahrnujú niektoré príklady skupín, ktoré sú substituentmi, nasledujúce: alkylové skupiny (ktoré môžu byť samotné substituované, napr. -Ci-Cg-alkyl-OR, -Ci-C6-alkyl-N(R)₂ a CF₃), alkoxyskupiny (ktoré môžu byť samotné substituované, napr. -O-Ci-Có-alkylOR, -O-Ci-Cé-alkyl-N(R)₂ a OCF₃), halogén alebo halogénové skupiny (F, Cl, Br, I), hydroxyskupinu, nitroskupinu, oxoskupinu, CN, COOH, COH, aminoskupinu, //-alkylaminoskupinu alebo //,//-dialkylaminoskupinu (v ktorej môžu byť alkylové skupiny substituované), estery (-C(O)-OR, kde substituent

R zahrnuje napr. skupiny vybrané z alkylovej skupiny, arylovej skupiny, atď., ktoré môžu byť substituované), aryl (najvýhodnejšie fenyl, ktorý môže byť substituovaný) a arylalkylová skupinu (ktorá môže byť substituovaná).

Vhodné spôsoby syntézy zlúčenín všeobecného vzorca (I) sú uvedené na schémach I-XII. Na schéme I je uvedená konverzia 3-halogén-4chlórpyrazolopyrimidínu na N1 -substituovaný 3-aryl-4-aminopyrazolopyrimidín. Na schéme II je uvedená substitúcia v polohe N-\ 3-halogénu-4aminopyrazolopyrimidínu a nahradenie halogénu arylovou skupinou. Na schéme III je uvedená substitúcia na N-l 3-aryl-4-aminopyrazolopyrimidínu. Na schéme IV je uvedená konverzia 4-hydroxypyrazolopyrimidínu na 1substituovaný 3-bróm-4-chlórpyrazolopyrimidín. Na schéme V je uvedená tvorba pyrazolopyrimidínového jadra. Na schéme VI je uvedená tvorba 3-aryl4-aminopyrazolopyrimidínu. Na schéme VII je uvedené ďalšie spracovanie Ν-Ί substituenta. P znamená vhodnú amino-chrániacu skupinu. Schéma VIII ilustruje uvedenú prípravu arylboronátov používaných podľa schémy I. Na schémach IX a X je uvedená modifikácia N-l substituenta. Na schéme XI je uvedená funkcionalizácia 3-arylovej skupiny. V schémach I-XI môže byť pri uskutočňovaní reakcií potrebné vhodné chránenie/odstránenie chrániacich skupín z neparticipujúcich funkčných skupín podľa štandardných postupov.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu majú antiangiogénne vlastnosti. Tieto antiangiogénne vlastnosti sú spôsobené aspoň čiastočne inhibíciou proteínových tyrozínkináz esenciálnych pre angiogénne procesy. Z tohto dôvodu môžu byť tieto zlúčeniny používané ako aktívne agens proti ochoreniam, napr. artritíde, ateroskléroze, restenóze, psoriáze, hemangiómom, angiogenéze myokardu, koronárnym a cerebrálnym kolaterálam, ischemickej limbickej angiogenéze, ischémii/reperfúznemu poškodeniu, pri hojení rán, proti peptickému vredu súvisiacemu s Helicobacter, vírusovo indukovaným angiogénnym poruchám, fraktúre, syndrómu Crowa-Fukaseho (POEMS), preeklampsii, menometrorágii, horúčke z mačacieho škrabnutia, rubeóze, neovaskulárnemu glaukómu a retinopatiám, napr. tým, ktoré súvisia s diabetickou retinopatiou, retinopatiou nedonosených alebo makulárnou degeneráciou súvisiacou s vekom. Ďalej môžu byť niektoré z týchto zlúčenín používané ako aktívne agens proti pevným nádorom, malígnemu ascites, von Hippelovej-Lindauovej chorobe, hematopoetickým rakovinám a hypeproliferačným poruchám, napr. tyreotropnej hyperplázii (najmä Gravesova choroba) a cystám (napr. hypervaskularita ovariálnej stromy príznačná pre polycystický ovariálny syndróm (Steinov-Leventhalov syndróm).

Ďalej môžu byť niektoré z týchto zlúčenín používané ako aktívne agens proti popáleninám, chronickému pľúcnemu ochoreniu, mŕtvici, polypom, anafylaxii, chronickému a alergickému zápalu, oneskorenému typu hypersenzitivity, ovariálnemu hyperstimulačnému syndrómu, cerebrálnemu edému súvisiacemu s mozgovým nádorom, výškovej chorobe, traume alebo cerebrálnemu alebo pulmonárnemu edému vyvolanému hypoxiou alebo traumou, očnému alebo makulárnemu edému, ascites, glomerulonefritíde a ďalším ochoreniam, v ktorých je prejavom ochorenia vaskulárna hyperpermeabilita, efúzie, exsudáty, proteínový extravazát alebo edém. Zlúčeniny budú tiež účinné pri liečení porúch, v ktorých proteínová extravazácia povedie k ukladániu fibrínu a extracelulárnej matrix, podpore stromálnej proliferácie (napr. keloid, fibróza, cirhóza a syndróm karpálneho tunelu). Zvýšená produkcia VEGF potenciuje zápalové procesy, napr. posilnenie a aktiváciu monocytu. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu budú tiež účinné pri liečení zápalových porúch, napr. zápalového črevného ochorenia (IBD) a Crohnovej choroby.

Syntéza

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu byť pripravené spôsobmi uvedenými na schémach I-XI.

Schéma I

Schéma II

Ph_aP, DEAD_r

ROH. THF

Pd°, ArB(OH)_a, aleboArB(QR)^ n DME, H₂O, reflux ”

Schéma III

2) RBľaleboROTs

Schéma IV

Schéma V

Schéma VI

CN

CN

Ar_CQ0H JhSpCI₂jOflux_^ Ar 2) CH₂(CN)₂, iPr₂NEt Toluén

TMSCHN_P, THF

MeOH, iPr₂NEt

Ar-.

CN

MeO

Schéma VIII

Ar-Br

1) n-BuLi, THF

2) B(OiPr)₃

3) HCI

Ar-Br (dppf)PdCI₂

DMF, KOAc 80°C

Ar-B(OH)₂

Schéma IX

Schéma X

R R

CICH_gCH_gCI

Na(OAc)₃BH, HOAe

Pd°, ArB(OH)_g«teboArB(OR)_g *jj ' DME, H_g0. reflux*

Λ-r

R

Schéma XI

NH(SO₂.CO)R

Výhodný spôsob prípravy zlúčenín podľa predloženého vynálezu zahrnuje prípravu 4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-ylového medziproduktu (IV) (viď schéma XII). Spôsob zahrnuje reakciu chloridu kyseliny (II) so (4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilínom (E) v prítomnosti aprotickej bázy. Typicky sa chlorid kyseliny a (4,4,5,5-tetrametyl1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilín (III) rozpustí v organickom rozpúšťadle v približne ekvimolárnych množstvách. Do roztoku sa pridá asi 1 ekviv. na asi ekviv. aprotickej bázy. Výhodne sa roztok ochladí na teplotu -10°C až asi 10°C pred pridaním bázy, pričom báza sa do roztoku pridáva po kvapkách. Po pridaní bázy sa roztok mieša pri izbovej teplote, dokým nie je reakcia hotová (podľa TLC, HPLC alebo iných štandardných analytických techník). Typicky je reakcia hotová po asi 10 hodinách až asi 26 hodinách.

Schéma XII

Spôsob prípravy 4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-ylového medziproduktu

4,4,5,5-Tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový medziprodukt (IV) môže byť používaný na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca (I) svojou reakciou s 3-jód- 17/-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidínom (V) v prítomnosti tetrakis(trifenylfosfínjpaládia a uhličitanu sodného (viď schéma XIII). 3-Jód-ltf-pyrazolo[3,4ŕ/jpyrimidín (V) v polárnom organickom rozpúšťadle, napr. éteri, sa nechá reagovať s vodnou zmesou 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového medziproduktu (IV), tetrakis(trifenylfosfín)paládia a uhličitanu sodného. Typicky je 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový medziprodukt (IV) prítomný v roztoku v množstve od asi 1 ekviv. do asi 1,5 ekviv., tetrakis(trifenylfosfín)paládium v množstve od asi 0,01 ekviv. do asi 0,1 ekviv. a uhličitan sodný v množstve od asi 1,5 ekviv. do asi 3 ekviv. vzhľadom k 3-jód-177-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidínu (V). Roztok sa zahrieva na teplotu asi 50°C až asi 100°C. Reakcia sa sleduje na TLC, HPLC alebo inou štandardnou technikou. Typicky je reakcia hotová po asi 16 hodinách áž asi 30 hodinách.

Schéma XIII

Spôsob prípravy zlúčenín všeobecného vzorca (I), v ktorom Z¹¹⁰-A-Z^H1 je -NHC(O)-.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (II) môžu byť pripravené reakciou karboxylovej kyseliny reprezentovanej všeobecným vzorcom (VI) s oxalylchloridom v prítomnosti aprotickej bázy.

Ί6

Ο

Vo výhodnom uskutočnení je Z¹⁰⁰ indolyl, ktorý je prípadne substituovaný substituentom Ri v spôsoboch zo schém XII a XIII a v spôsobe prípravy chloridu kyseliny (II). Vo výhodnom uskutočnení je Z¹⁰⁰ 1-metylindol-2-yl alebo l-metyl-indol-3-yl v spôsoboch zo schém XII a XIII a v spôsobe prípravy chloridu kyseliny (II).

V ďalšom výhodnom uskutočnení, v spôsoboch zo schém XII a XIII a v spôsobe prípravy chloridu kyseliny (II), je Z¹⁰⁰ indolyl, ktorý je prípadne substituovaný substituentom Ri; (4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)anilín je reprezentovaný vzorcom (VII)

H₃CO

NH₂

\_J

VH.

a 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylový medziprodukt je reprezentovaný všeobecným vzorcom (VIII)

a pripravené zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu byť reprezentované všeobecným vzorcom (IX)

IX.

Vo výhodnejšom uskutočnení, v spôsoboch zo schém XII a XIII a v spôsobe prípravy chloridu kyseliny (II), je Ζ*^θ° 1 -metyl-indol-2-yl alebo 1metyl-indol-3-yl; (4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilín je reprezentovaný vzorcom (VII); a 4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-ylový medziprodukt je reprezentovaný vzorcom (X)

a pripravené zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu byť reprezentované všeobecným vzorcom (XI)

XI.

Vo výhodnejšom uskutočnení je substituent R2 4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl v ktoromkoľvek z vyššie opísaných spôsobov.

VEGF sú iba angiogénnymi rastovými faktormi a prispievajú k vaskulámej hyperpermeabilite a tvorbe edému, čím sú unikátne. Zdá sa, že vaskulárna hyperpermeabilita a edém, ktorý súvisí s expresiou alebo aplikáciou mnohých ďalších rastových faktorov, môžu byť sprostredkované produkciou VEGF. Zápalové cytokíny stimulujú tvorbu VEGF. Hypoxia vedie k značnému posilneniu VEGF v mnohých tkanivách, a teda stavy zahrnujúce infarkt, oklúziu, ischémiu, anémiu alebo poruchu krvného obehu typicky využívajú odpovede sprostredkované VEGF/VPF. Vaskulárna hyperpermeabilita, súvisiaci edém, zmení transendoteliálnu výmenu a makromolekulárny extravazát, ktorý je často sprevádzaný diapedézou, môže vyústiť do nadbytku depozície matrix, aberantnej stromálnej proliferácie, fibrózy, atď. Teda hyperpermeabilita sprostredkovaná VEGF môže výrazne prispievať k poruchám s týmito etiologickými rysmi.

Pretože implantácia blastocytov, vývoj placenty a embryogenéza sú závislé na angiogenéze, sú niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu účinné ako kontraceptíva a antifertilitné agens.

Predpokladá sa, že vyššie uvedené poruchy sú sprostredkované výrazným nadbytkom aktivity proteínovej tyrozínkinázy zahrnujúcej KDR/VEGFR-2 a/alebo Flt-l/VEGFR-1 a/alebo TIE-2 tyrozínkináz. Inhibíciou aktivity týchto tyrozínkináz je inhibovaná progresia uvedených porúch, pretože angiogénna alebo vaskulárna zložka hyperpermeability chorobného stavu je kriticky znížená. Účinok niektorých zlúčenín podľa predloženého vynálezu daný ich selektivitou pre špecifické tyrozínkinázy vedie k minimalizácii vedľajších účinkov, ktoré by sa mohli vyskytovať, pokiaľ by boli používané inhibítory tyrozínkináz s menšou selektivitou. Niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú tiež účinnými inhibítormi FGFR, PDGFR, c-Met a IGF-l-R. Tieto receptorové kinázy môžu priamo alebo nepriamo potenciovať angiogénne a hyperproliferačné odpovede pri rôznych poruchách, a teda ich inhibícia môže brániť progresii ochorenia.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu majú inhibičnú aktivitu proti proteínkinázam, čo znamená, že tieto zlúčeniny modulujú prenos signálu proteínkináz. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu inhibujú proteínkinázy z rodiny serín/treonínkináz a tyrozínkináz. Najmä tieto zlúčeniny selektívne inhibujú aktivitu KDR/FLK-l/VEGFR-2 tyrozínkináz. Niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu tiež inhibujú aktivitu ďalších tyrozínkináz, napr. Flt-l/VEGFR-1, Flt-4, Tie-1, Tie-2, FGFR, PDGFR, IGF-1R, c-Met, Srcpodrodinu kináz, napr. Lck, hck, fgr, Src, fyn, yes, etc. Ďalej niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu signifikantne inhibujú serín/treonínkinázy, napr. PKC, MAP kinázy, erk, CDK, Plk-1 alebo Raf-1, ktoré hrajú významnú rolu pri bunkovej proliferácii a progresii bunkového cyklu. Účinnosť a špecifita generických zlúčenín tohto vynálezu najmä voči konkrétnym proteínkinázam môže byť často zmenená a optimalizovaná obmenami v charaktere, počte a usporiadaní substituentov (tzn. R_b R₂, R3, A a kruh 1) a konformačnými reštrikciami. Navyše metabolity niektorých zlúčenín môžu mať tiež signifíkantnú inhibičnú aktivitu proti proteínkinázam.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, pokiaľ sú podávané recipientom pri potrebe takej zlúčeniny, inhibujú vaskulárnu hyperpermeabilitu a tvorbu edému u týchto recipientov. Predpokladá sa, že tieto zlúčeniny pôsobia inhibíciou aktivity KDR tyrozínkinázy, ktorá sa zúčastňuje na procese vaskulárnej hyperpermeability a tvorby edému. KDR tyrozínkináza môže byť tiež označovaná ako FLK-1 tyrozínkináza, NYK tyrozínkináza alebo VEGFR-2 tyrozínkináza. KDR tyrozínkináza je aktivovaná naviazaním rastového faktora vaskulámych endoteliálnych buniek (VEGFR) alebo ďalší aktivačný ligand (napr. VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E alebo HIV Tat proteín) sa viaže na receptor KDR tyrozínkinázy, ktorý sa nachádza na povrchu vaskulámych endoteliálnych buniek. Po aktivácii KDR tyrozínkinázy nastane hyperpermeabilita krvných ciev a tekutina putuje z krvného riečišťa cez steny krvných ciev do intersticiálnych priestorov, a tým vytvára oblasť edému. Túto formu odpovede tiež často sprevádza diapedéza. Podobne, nadbytok vaskulárnej hyperpermeability môže narušiť normálnu molekulárnu výmenu cez endotel v kritických tkanivách a orgánoch (napr. pľúca a obličky), čím spôsobuje makromolekulárny extravazát a depozíciu. Po tejto akútnej odpovedi na stimuláciu KDR, o ktorej sa predpokladá, že podporuje nasledujúci angiogénny proces, vedie predĺžená stimulácia KDR tyrozínkinázy k proliferácii a chemotaxii vaskulámych endoteliálnych buniek a tvorbe nových ciev. Inhibíciou aktivity KDR tyrozínkinázy uskutočnenou buď blokovaním produkcie aktivovaného ligandu, blokovaním väzby aktivovaného ligandu na receptor KDR tyrozínkinázy, zabránením dimerizácie a transfosforylácie receptora, inhibíciou enzýmovej aktivity KDR tyrozínkinázy (inhibíciou fosforylačnej funkcie enzýmu) alebo niektorým iným mechanizmom, ktorý preruší danú signálnu dráhu po prúde (D. Mukhopedhyay et al., Cancer Res.

55:1278-1284 (1998) a súvisiace odkazy), môže byť inhibovaná a minimalizovaná hyperpermeabilita, ako aj s tým súvisiaca extravazácia, následná tvorba edému a depozícia matrix a angiogénne odpovede.

Jedna skupina výhodných zlúčenín podľa predloženého vynálezu má schopnosť inhibovať aktivitu KDR tyrozínkinázy bez signifikantnej inhibície aktivity Flt-1 tyrozínkinázy (Flt-1 tyrozínkináza je tiež označovaná ako VEGFR-1 tyrozínkináza). Ako KDR tyrozínkináza, tak i Flt-1 tyrozínkináza sú aktivované väzbou VEGF na receptory KDR tyrozínkinázy, respektíve na receptory Flt-1 tyrozínkinázy. Niektoré výhodné zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú jedinečné v tom zmysle, že inhibujú aktivitu jednej VEGFreceptorovej tyrozínkinázy (KDR), ktorá je aktivovaná aktivovanými ligandmi, ale neinhibujú ďalšie receptorové tyrozínkinázy, napr. Flt-1, ktoré sú tiež aktivované niektorými aktivovanými ligandmi. Preto sú výhodné zlúčeniny podľa predloženého vynálezu selektívnymi inhibítormi aktivity tyrozínkinázy.

V rámci jedného uskutočnenia poskytuje predložený vynález spôsob liečenia stavov u pacienta, ktoré sú sprostredkované proteínkinázou, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky alebo profylaktický účinného množstva jednej alebo viac zlúčenín všeobecného vzorca (I) pacientovi.

Termín „stav sprostredkovaný proteínkinázou“ alebo „stav sprostredkovaný aktivitou proteínkinázy“ zahrnuje chorobu, napr. ochorenie alebo ďalšie nežiaduce fyzické stavy, v ktorých genéza alebo progresia závisí aspoň čiastočne na aktivite aspoň jednej proteínkinázy. Proteínkináza môže byť napr. proteínová tyrozínkináza alebo proteínová serín/treonínkináza.

Pacient, ktorý má byť ošetrovaný, môže byť akýkoľvek živočíšny subjekt, výhodne cicavec, napr. zdomácnené či hospodárske zvieratá. Výhodnejšie je pacientom ľudský subjekt.

Termín „terapeuticky účinné množstvo“ je množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo kombinácia dvoch alebo viac takých zlúčenín, ktoré inhibuje celkom alebo čiastočne progresiu stavu alebo zlepšuje aspoň čiastočne jeden alebo viac symptómov stavu. Terapeuticky účinné množstvo môže byť tiež množstvo, ktoré je profylaktický účinné. Množstvo, ktoré je terapeuticky aktívne bude závisieť od pacientovej váhy, pohlavia, choroby, ktorá má byť ošetrovaná, závažnosti stavu a požadovaného výsledku. Pre jednotlivých pacientov bude terapeuticky účinné množstvo stanovené štandardným spôsobom podľa stavu techniky.

Spôsob podľa predloženého vynálezu je účinný pri liečení stavov sprostredkovaných proteínkinázou, ako je napr. akýkoľvek vyššie uvedený stav. V rámci jedného uskutočnenia je stav sprostredkovaný proteínkinázou charakterizovaný nežiaducou angiogenézou, edémom alebo stromálnou depozíciou. Napríklad stavom môže byť jeden alebo viac ulkusov, ako sú napr. ulkusy spôsobené bakteriálnymi alebo pliesňovými infekciami, Moorenove ulkusy a ulceratívna kolitída. Ochorenie môže byť tiež spôsobené mikrobiálnou infekciou, napr. Lymskou chorobou, sepsou, septickým šokom alebo infekciou Herpes simplex, Herpes Zoster, vírusom spôsobujúcim syndróm získaného zlyhania imunity, protozoom, toxoplazmózou alebo parapoxvírusom; angiogénnymi poruchami, napr. Hippelovou-Lindauovou chorobou, polycystickou chorobou obličiek, pemfigoidom, Pagetovou chorobou a psoriázou; reprodukčným ochorením, ako je napr. endometrióza, syndróm ovariálnej hyperstimulácie, preeklampsia alebo menometrorágia; fibrotickým a edémickým stavom, ako je napr. sarkoidóza, fibróza, cirhóza, tyreoiditída, systémový hyperviskózny syndróm, Oslerova-Weberova-Renduova choroba, chronické oklúzne ochorenie pľúc, astma a edém po traume, popáleninách, radiácii, mŕtvica, hypoxia alebo ischémia; alebo zápalovým/imunologickým stavom, ako je napr. systémový lupus, chronický zápal, glomerulonefritída, synovitída, zápalové ochorenie čriev, Crohnova choroba, reumatoidná artritída, osteoartritída, roztrúsená skleróza a rejekcia štepu. Príslušné stavy sprostredkované proteínkinázou tiež zahrnujú kosáčikovitú anémiu, osteoporózu, osteopetrózu, hyperkalcémiu indukovanú nádorom a kostnou metastázou. Dalšie stavy sprostredkované proteínkinázou, ktoré môžu byť ošetrené spôsobom podľa predloženého vynálezu, zahrnujú ochorenia očí, ako sú napr. okulárny alebo makulárny edém, okulárne neovaskulárne ochorenia, skleritída, radiálna keratotómia, uveitída, vitritída, myopia, fyziologická exkavácia papily, chronické odlúčenie sietnice, komplikácie po liečení laserom, konjunktivitída, Stargardtova choroba a Ealesova choroba, navyše k retinopatii a makulárnej degenerácii.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú tiež účinné pri liečení kardiovaskulárnych stavov, napr. aterosklerózy, restenózy, vaskulárnej oklúzie a karotického obštruktívneho ochorenia.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú tiež účinné pri liečení indikácií súvisiacich s rakovinou, ako sú napr. pevné nádory, sarkóm (najmä Ewingov sarkóm a osteosarkóm), retinoblastóm, rabdomyosarkóm, neuroblastóm, hematopoézne zhubné bujnenia, vrátane leukémie a lymfómu, pleurálne alebo perikardiálne efúzie indukované nádorom a malígny ascites.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú tiež účinné pri liečení syndrómu Crowa-Fukaseho (POEMS) a diabetických stavov, napr. glaukómu, diabetickej retinopatie a mikroangiopatie.

Rodiny Src, Tec, Jak, Map, Csk, NFkB i Syk kináz hrajú kľúčové roly pri regulácii imunitných funkcií. Rodina Src bežne zahrnuje Fyn, Lck, Fgr, Fes, Lyn, Src, Yrk, Fyk, Yes, Hck a Blk. Rodina Syk všeobecne zahrnuje iba Zap a Syk. Rodina Tec zahrnuje Tec, Btk, Rlk a Itk. Rodina Janus kináz sa zúčastňuje v transdukcii rastového faktora a prozápalových signálov cytokínov za účasti mnohých receptorov. Hoci roly BTK a ITK, členov rodiny Tec kináz, sú z hľadiska imunobiológie menšie, ich modulácia inhibítorom môže mať terapeutický prospech. Rodina Csk v súčasnej dobe zahrnuje Csk a Chk. Kinázy RIP, IRAK-1, IRAK-2, NIK, p38 MAPkináz, Jnk, IKK-1 a IKK-2 sa podieľajú na dráhach signálnej transdukcie kľúčových prozápalových cytokínov, napr. TNF a IL-1. Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu, vďaka schopnosti účinne inhibovať jednu alebo viac z týchto kináz, pôsobiť ako imunomodulačné agens, ktoré sú účinné na stabilizáciu aloštepu, pri liečení autoimúnnych porúch a sepsy a septického šoku. Vďaka svojej schopnosti regulovať migráciu alebo aktiváciu T-buniek, B-buniek, žírnych buniek, monocytov a neutrofilov, by mohli byť tieto zlúčeniny používané na liečení týchto autoimunitných chorôb a sepsy. Prevencia rejekcie transplantátu, či už reakcie hostiteľa proti štepu u pevných orgánov alebo reakcie štepu proti hostiteľovi u kostnej drene, sú limitované toxicitou bežne dostupných imunosupresív, a teda účinné liečivo so zlepšeným terapeutickým indexom by bolo veľmi prospešné. Experimenty zamerané na gény ukázali na významnú rolu Src v biológii osteoklastov, čo sú bunky zodpovedné za resorpciu kosti. Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu byť vďaka schopnosti regulácie Src tiež účinné pri liečení osteoporózy, osteopetrózy, Pagetovej choroby, hyperkalcémie indukovanej nádorom a pri liečení kostných metastáz.

Ukázalo sa, že mnoho proteínkináz funguje ako protoonkogény. Prerušenie chromozómu (v bode prerušenia ltk kinázy na chromozóme 5), translokácia ako v prípade Abl génu s BCR (Philadelphia chromosome), skrátenie v prípadoch ako c-Kit alebo EGFR, alebo mutácia (napr. Met) má za následok vytvorenie dysregulačných proteínov, ktoré zapríčiňujú premenu protoonkogénnych produktov na onkogénne produkty. V prípade ďalších nádorov je onkogenéza riadená autokrinnými alebo parakrinnými interakciami medzi ligandom a receptorom rastového faktora. Členy rodiny src kináz sa typicky zúčastňujú v signálnej transdukcii v smere toku, čím potenciujú onkogenézu a samotné sa môžu stať onkogénnymi vďaka nadmernej expresii alebo mutácii. Inhibíciou aktivity proteínkináz týchto proteínov môžu byť liečené príslušné choroby. Vaskulárna restenóza môže zahrnovať proliferáciu hladkého svalstva propagovanú PDGF a/alebo PDGF a proliferáciu endoteliálnych buniek. Stimulácia ligandu FGFR, PDGFR, IGF1-R a c-Met in vivo je proangiogénna a potenciuje poruchy závislé na angiogenéze. Inhibícia aktivity buď jednotlivých kináz FGFr, PDGFr, c-Met alebo IGF1-R alebo v kombinácii môže byť účinnou stratégiou inhibície tohto fenoménu. Teda zlúčeniny všeobecného vzorca (I), ktoré inhibujú aktivitu kinázy normálnych alebo aberantných c-kit, c-met, c-fms, členov rodiny src, EGFr, erbB2, erbB4, BCR-Abl, PDGFr, FGFr, IGF1-R a ďalších receptorových alebo cytosólových tyrozínkináz, môžu hrať dôležitú rolu pri liečení benígnych a neoplastických proliferačných ochorení.

V mnohých patologických stavoch (ako sú napr. pevné primárne nádory a metastázy, Kaposiho sarkóm, reumatoidná artritída, slepota spôsobená neprimeranou očnou neovaskularizáciou, psoriáza a ateroskleróza) je progresia ochorenia po perzistentnú angiogenézu kontingentná. Polypeptidové rastové faktory často produkované chorobným tkanivom alebo sprievodnými zápalovými bunkami a ich zodpovedajúce špecifické receptorové tyrozínkinázy endoteliálnych buniek (napr. KDR/VEGFR-2, Flt-l/VEGFR-1, Flt-4, Tie-2/Tek a Tie) sú dôležité pre stimuláciu endoteliálneho bunkového rastu, migrácie, organizácie, diferenciácie a zostavenia nových funkčných vaskulátorov. Predpokladá sa, že v dôsledku aktivity „faktora vaskulámej permeability“ VEGF pri sprostredkovaní vaskulámej hyperpermeability má VEGF-stimulácia VEGFR kinázy dôležitú rolu pri tvorbe nádorových ascites, cerebrálneho a pulmonárneho edému, pleurálnej a perikardiálnej efúzie, hypersenzitívnych reakcií oneskoreného typu, tkanivového edému a orgánovej dysfunkcie po traume, popáleninách, ischémie, diabetických komplikácií, endometrióze, syndróme respiračnej nedostatočnosti dospelých (ARDS), hypotenzii a hyperpermeabilite súvisiacej s post kardiopulmonárnym bypassom a očným edémom majúcim za následok glaukóm alebo oslepnutie v dôsledku neprimeranej neóvaskularizácie. Popri VEGF, tiež v poslednej dobe identifikované VEGF-C a VEGF-D a vírusovo kódovaný VEGF-E alebo HIVTat proteín môžu spôsobovať vaskulárnu hyperpermeabilnú odpoveď sprostredkovanú stimuláciou VEGFR kinázy. KDR/VEGFR-2 a/alebo Tie-2 sú exprimované tiež v selektívnej populácii buniek hematopoietického kmeňa. V prírode sú niektoré z členov tejto populácie multifunkčné a môžu byť stimulované rastovými faktormi na rozlíšenie endoteliálnych buniek a participáciu pri vaskulogenetických angiogénnych procesoch. Z tohto dôvodu /

boli nazvané endoteliálnymi progenitornými bunkami (EPC)(J. Clin. Investig. 103: 1231-1236 (1999)). V niektorých progenitoroch môže Tie-2 byť dôležitý pri ich posilnení, adhézii, regulácii a diferenciácii {Blood, 4317-4326 (1997)). Niektoré zlúčeniny reprezentované všeobecným vzorcom (I) schopné blokovať kinázovú aktivitu špecifických kináz endoteliálnych buniek by preto mohli inhibovať progresiu ochorenia zahrnujúceho tieto stavy.

Predpokladá sa, že vaskulárna destabilizácia antagonistického ligandu Tie-2 (Ang2) indukuje nestabilný „plastický“ stav v endoteli. Vysoké hladiny VEGF môžu spôsobiť silné angiogénne odpovede, avšak bez VEGF alebo VEGF-súvisiaceho stimulu môže dochádzať k zreteľnej regresii ciev a endoteliálnej apoptóze (Genes and Devel. 13: 1055-1066 (1999)). Analogicky môžu inhibítory Tie-2 kinázy byť proangiogénne alebo antiangiogénne v prítomnosti, respektíve bez VEGF-súvisiaceho stimulu. Teda inhibítory Tie-2 môžu byť používané s príslušným proangiogénnym stimulom, napr. VEGF, na podporu terapeutickej angiogenézy pri takých stavoch ako sú napr. liečba zranení, infarkt alebo ischémia.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo ich soli alebo farmaceutické prípravky obsahujúce ich terapeuticky účinné množstvo môžu byť používané pri liečení stavov sprostredkovaných proteínkinázou, napr. pri vyššie uvedených benígnych a neoplastických proliferačných ochoreniach a poruchách imunitného systému. Tieto ochorenia zahrnujú autoimunitné choroby, napr. reumatoidnú artritídu, tyreoiditídu, diabetes 1. typu, roztrúsenú sklerózu, sarkoidózu, zápalové črevné ochorenie, Crohnovu chorobu, myasteniu gravis a systémový lupus erythematosus; psoriázu, rejekciu transplantovaného orgánu (napr. rejekciu obličiek, reakciu štepu proti hostiteľovi), benígne a neoplastické proliferačné ochorenia, ľudské rakoviny, ako je rakovina pľúc, prsníka, žalúdka, mechúra, hrubého čreva, pankreasu, vaječníkov, prostaty a konečníka a hematopoietické zhubné bujnenia (leukémia a lymfom) a ochorenia zahrnujúce neprimeranú vaskularizáciu, napr. diabetickú retinopatiu, retinopatiu nedonosených, choroidálnu neovaskularizáciu v dôsledku degenerácie makuly súvisiacej s vekom a infantilné hemangiómy u ľudských subjektov. Navyše tieto inhibítory môžu byť účinné pri liečení porúch zahrnujúcich edém sprostredkovaný VEGF, ascites, efúzie a exsudáty, vrátane napr. makulárneho edému, cerebrálneho edému, akútneho pľúcneho poranenia a syndrómu respiračnej nedostatočnosti dospelých (ARDS).

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu byť tiež účinné pri profylaxii vyššie uvedených ochorení.

Predpokladá sa, že vyššie uvedené poruchy sú významne sprostredkované aktivitou proteínových tyrozínkináz zahrnujúcich receptory VEGF (napr. KDR, Flt-1 a/alebo Tie-2). Inhibíciou aktivity týchto receptorových tyrozínkináz je inhibovaná progresia uvedených porúch, pretože angiogénny komponent ochorenia je silne potlačený. Účinok zlúčenín podľa predloženého vynálezu vďaka ich selektivite voči špecifickým tyrozínkinázám vedie k minimalizácii vedľajších účinkov, ktoré by sa mohli vyskytovať, pokiaľ by boli používané menej selektívne inhibítory tyrozínkináz.

V ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález zlúčeniny všeobecného vzorca (I), ktoré sú definované vyššie, na použitie ako liečivé prípravky, najmä ako inhibítory aktivity proteínkináz, napr. aktivity tyrozínkinázy, serínkinázy a treonínkinázy. V ešte ďalšom aspekte poskytuje predložený vynález použitie vyššie definovaných zlúčenín všeobecného vzorca (I) pri výrobe liečivého prípravku určeného na inhibíciu aktivity proteínkinázy.

V predloženom vynáleze sú používané nasledujúce termíny:

Termín „fyziologicky prijateľné soli“ sa vzťahuje na tie soli, ktoré si ponechávajú biologickú účinnosť a vlastnosti voľných báz, a ktoré sú pripravené reakciou anorganických kyselín, napr. kyseliny chlorovodíkovej, bromovodíkovej, sírovej, dusičnej, fosforečnej alebo organických kyselín, napr. sulfónovej, karboxylovej alebo organickej fosforečnej, metánsulfónovej, etánsulfónovej, /Moluénsulfónovej, salicylovej, mliečnej, vínnej kyseliny, atď.

Farmaceutické formulácie

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu byť podávané ľudským subjektom ako také alebo vo farmaceutických prípravkoch, v ktorých sú zmiešané s vhodnými nosičmi alebo excipientami(tom) v dávkach, ktoré sú dostačujúce na liečenie alebo zlepšenie vaskulárnej hyperpermeability, edému a súvisiacich porúch. Zmesi týchto zlúčenín môžu byť tiež podávané pacientom ako jednoduchá zmes alebo vo vhodných pripravených farmaceutických prípravkoch. Terapeuticky účinná dávka ďalej označuje množstvo zlúčeniny alebo zlúčenín, ktoré je dostačujúce na prevenciu alebo atenuáciu neprimeranej neovaskularizácie, progresie hyperproliferatívnych porúch, edému, hyperpermeability súvisiacej s VEGF a/alebo hypotenzie spojenej s VEGF. Techniky prípravy a podania zlúčenín možno nájsť v „Remington’s Pharmaceutical Sciences“, Mack Publishing Co., Easton, PA, posledné vydanie.

Spôsoby podania

Vhodné spôsoby podania môžu byť napríklad perorálne, vo forme očných kvapiek, rektálne, transmukózne, miestne alebo intestinálne; parenterálne dodanie zahrnujúce intramuskulárne, subkutánne podanie, intramedulárne injekcie, ako aj intratekálne, priame intraventrikulárne, intravenózne, intraperítoneálne, intranazálne alebo intraokulárne injekcie.

Alternatívne možno podávať zlúčeninu skôr miestnym než systémovým spôsobom, napr. injekciou zlúčeniny priamo do miesta edému, často v depotnej alebo trvalo sa uvoľňujúcej formulácii.

Ďalej možno liečivo podávať ako cieľovo špecifické podanie, napr. v lipozóme potiahnutom endoteliálnou, bunkovo-špecifickou protilátkou.

Prípravky/Formulácie

Farmaceutické prípravky podľa predloženého vynálezu môžu byť vyrábané štandardným spôsobom, napr. štandardným miešaním, rozpustením, granuláciou, prípravou dražé, rozmeľňovaním, emulgáciou, zapuzdrením, uzavretím alebo lyofilizáciou.

Farmaceutické prípravky na použitie podľa predloženého vynálezu tak môžu byť pripravené štandardným spôsobom s použitím jedného alebo viac fyziologicky prijateľných nosičov obsahujúcich excipienty a pomocné látky, ktoré uľahčujú zapracovanie aktívnych zlúčenín do preparátov používaných farmaceutickým spôsobom. Vlastná príprava je závislá od vybraného spôsobu podania.

Pre injekcie môžu byť agens podľa predloženého vynálezu pripravené vo vodných roztokoch, výhodne vo fyziologicky kompatibilných pufroch, ako je napr. Hanksov roztok, Ringerov roztok alebo pufer na báze fyziologického roztoku. Pre transmukózne podanie sú vo formulácii používané tiež penetrátory, ktoré sú vhodné na prekonanie danej bariéry. Tieto penetrátory sú všeobecne známe.

Pre perorálne podanie môžu byť zlúčeniny ľahko pripravené spojením aktívnych zlúčenín s farmaceutický prijateľnými nosičmi dobre známymi v odbore. Tieto nosiče umožňujú pripraviť zlúčeniny podľa predloženého vynálezu vo forme tabliet, piluliek, dražé, kapsúl, roztokov, gélov, sirupov, injekčných zmesí, suspenzií, atd’., pre perorálne požitie lieku pacientom, ktorý má byť ošetrovaný. Farmaceutické preparáty pre perorálne použitie môžu byť pripravené zmiešaním aktívnej zlúčeniny s pevným excipientom, prípadne rozomletím výslednej zmesi, a po pridaní vhodných pomocných látok, pokiaľ je potrebné, spracovaním zmesi granúl za vzniku tabliet alebo dražé. Vhodné excipienty sú najmä plnivá, napr. cukry, vrátane laktózy, sacharózy, manitolu alebo sorbitolu; celulózové prípravky, napr. kukuričný škrob, pšeničný škrob, ryžový škrob, zemiakový škrob, želatína, tragant, metyl-celulóza, hydroxypropylmetyl-celulóza, sodná soľ karboxymetylcelulózy a/alebo polyvinylpyrolidón (PVP). Ak je potrebné, môžu byť pridané agens zaisťujúce rozpad tablety po požití, napr. zosietený polyvinylpyrolidón, agar alebo kyselina algínová alebo jej soli, napr. alginát sodný.

Jadrá dražé sú vybavené vhodnými povrchovými vrstvami. Na tento účel môžu byť používané koncentrované roztoky cukrov, ktoré môžu prípadne obsahovať arabskú gumu, mastenec, polyvinylpyrolidón, karbopolový gél, polyetylénglykol a/alebo oxid titaničitý, roztoky šelaku a vhodné organické rozpúšťadlá alebo zmesi rozpúšťadiel. Organické farbivá alebo pigmenty môžu byť pridané do tabliet alebo poťahových vrstiev dražé na identifikáciu alebo charakterizáciu rozdielnych kombinácií dávok aktívnej zlúčeniny.

Farmaceutické preparáty, ktoré môžu byť používané perorálne, zahrnujú zasunovacie kapsuly vyrobené zo želatíny, ako aj mäkké, uzavreté kapsuly vyrobené zo želatíny a zmäkčovadla, ako je napr. glycerol alebo sorbitol. Zasunovacie kapsuly môžu obsahovať aktívne zložky v prímesi s plnivami, napr. laktózou, spojivami, napr. škrobmi, a/alebo lubrikantami, ako je napr. mastenec alebo stearát horečnatý, a prípadne stabilizátormi. V mäkkých kapsulách môžu byť aktívne zlúčeniny rozpustené alebo suspendované vo vhodných roztokoch, napr. mastných olejoch, minerálnom oleji alebo tekutých polyetylénglykoloch. Navyše môžu byť pridávané stabilizátory. Všetky formulácie pre perorálne podanie by mali byť v dávkach vhodných pre taký spôsob podania.

Pre bukálne podanie môžu byť prípravky vo forme tabliet alebo pastiliek pripravených štandardným spôsobom.

Pre podanie inhaláciou sú zlúčeniny podľa predloženého vynálezu štandardne dodávané vo forme aerosólového spreja v rozprašovači alebo v balení so stlačeným obsahom s vhodným propelentom, napr. dichlórdifluórmetánom, trichlórfluórmetánom, dichlórtetrafluóretánom, oxidom uhličitým alebo inými vhodnými plynmi. V prípade stlačeného aerosólu môže byť dávkovacia jednotka poskytnutá prostredníctvom ventilu, ktorý umožní uvoľnenie presného množstva látky. Kapsuly a kazety, napr. želatína, pre použitie v inhalačnom prístroji alebo insuflátori môžu byť pripravené spoločne s práškovou zmesou zlúčeniny a vhodnej práškovej bázy, napr. laktózy alebo škrobu.

Zlúčeniny môžu byť pripravené pre parenterálne podanie injekciou, napr. ako bolusová injekcia alebo kontinuálna infúzia. Formulácie pre injekcie môžu byť v jednotkových dávkovacích formách, napr. v ampulách alebo v obaloch pre viac dávok, s pridanou konzervačnou látkou. Prípravky môžu byť tiež vo formách suspenzie, roztokov alebo emulzií v olejových alebo vodných nosičoch a môžu obsahovať pomocné agens, napr. suspendačné, stabilizačné a/alebo dispergačné prostriedky.

Farmaceutické formulácie pre parenterálne podanie zahrnujú vodné roztoky aktívnych zlúčenín vo forme, ktorá je rozpustná vo vode. Ďalej môžu byť suspenzie aktívnych zlúčenín pripravené ako príslušné oiejovité injekčné suspenzie. Vhodné lipofilné rozpúšťadlá alebo prenášače zahrnujú mastné oleje, napr. sezamový olej, alebo estery syntetických mastných kyselín, napr. etyl-oleát alebo triglyceridy, alebo lipozómy.

Vodné injekčné suspenzie môžu obsahovať látky, ktoré zvyšujú viskozitu suspenzie, ako je napr. sodná soľ karboxymetyl-celulózy, sorbitol alebo dextrán. Prípadne môžu suspenzie tiež obsahovať vhodné stabilizátory alebo agens, ktoré zvyšujú rozpustnosť zlúčenín, čím umožňujú pripraviť vysoko koncentrované roztoky.

Alternatívne môže byť aktívna zložka pred použitím vo forme prášku určeného na spojenie s vhodným nosičom, ako je napr. sterilná voda bez pyrogénu.

Zlúčeniny môžu byť tiež pripravené ako rektálne prípravky, napr. čapíky alebo retenčné klyzma, napr. obsahujúce štandardné čapíkové bázy, napr. kakaové maslo alebo iné glyceridy.

Okrem vyššie uvedených formulácií môžu byť tiež pripravené zlúčeniny vo forme depotného preparátu. Tieto formulácie s dlhou dobou účinku môžu byť podávané implantáciou (napr. subkutánne alebo intramuskulárne podanie alebo intramuskulárnou injekciou). Týmto spôsobom môžu byť pripravené zlúčeniny s vhodnými polymérnymi alebo hydrofóbnymi materiálmi (napr. ako emulzia v prijateľnom oleji) alebo ionexami alebo ako ťažko rozpustné deriváty, napr. ťažko rozpustné soli.

Príklad farmaceutického nosiča pre hydrofóbne zlúčeniny podľa predloženého vynálezu je systém spolurozpúšťadiel obsahujúci benzylalkohol, nepolárny surfaktant alebo organický polymér miešateľný s vodou a vodnú fázu. Systém spolurozpúšťadiel môže byť systém spolurozpúšťadiel VPD. VPD je roztok 3 obj.% benzylalkoholu, 8 obj.% nepolárneho surfaktantového polysorbátu 80 a 65 obj.% polyetylénglykolu 300 doplnený na konečný objem absolútnym etanolom. Systém spolurozpúšťadiel VPD (VPD:5W) pozostáva z VPD zriedeného 1:1 5% dextrózou vo vodnom roztoku. Tento systém spolurozpúšťadiel dobre rozpúšťa hydrofóbne zlúčeniny a sám má po systémovom podaní nízku toxicitu. Prirodzene môžu byť podiely systému spolurozpúšťadiel značne menené, avšak tak, aby sa zachovali charakteristické rysy jeho rozpustnosti a toxicity. Jednotlivé zložky systému spolurozpúšťadiel môžu byť menené: napr. miesto polysorbátu 80 môžu byť používané ďalšie nepoláme surfaktanty s nízkou toxicitou; veľkosť častíc polyetylénglykolu môže byť menená; polyetylénglykol môžu nahradiť ďalšie biokompatibilné polyméry, napr. polyvinylpyrolidón; a ďalšie cukry alebo polysacharidy môžu nahradiť dextrózu.

Alebo pre hydrofóbne farmaceutické zlúčeniny môže byť použitý iný systém dodania. Pre hydrofóbne liečivá sú dobre známymi príkladmi prenášačov a nosičov využívaných pri tomto spôsobe lipozómy a emulzie. Môžu byť používané niektoré organické rozpúšťadlá, napr. dimetylsulfoxid, avšak obvykle na úkor väčšej toxicity. Navyše zlúčeniny môžu byť dodávané systémom postupného uvoľňovania, napr. semipermeabilnými matricami pevných hyd.rofóbnych polymérov obsahujúcich terapeutické agens. V tejto technike sú zavedené rôzne látky s postupným uvoľňovaním. Kapsuly s postupným uvoľňovaním môžu v závislosti od svojho chemického charakteru uvoľňovať zlúčeniny počas niekoľkých týždňov až 100 dní. V závislosti od chemického charakteru a biologickej stability terapeutického reagens môžu byť používané ďalšie stratégie stabilizácie proteínu.

Farmaceutické prípravky tiež môžu obsahovať vhodnú pevnú látku alebo nosiče alebo excipienty gélovej fázy. Príklady takých nosičov alebo excipientov zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, rôzne cukry, škroby, deriváty celulózy, želatínu a polyméry, napr. polyetylénglykoly.

Mnohé zo zlúčenín podľa predloženého vynálezu môžu byť vo forme soli s farmaceutický kompatibilnými protiiónmi. Farmaceutický kompatibilné soli môžu byť pripravené s mnohými kyselinami vrátane, ale nie je to nijako limitované, kyseliny chlorovodíkovej, sírovej, octovej, mliečnej, tartarovej, jablčnej, sukcínovej, atď. Soli majú tendenciu byť oveľa rozpustnejšie vo vodných alebo iných protonizovaných rozpúšťadlách než ich zodpovedajúce voľné bázy.

Účinná dávka

Farmaceutické prípravky vhodné na použitie v predloženom vynáleze zahrnujú prípravky, v ktorých sú aktívne zložky na dosiahnutie požadovaného účinku obsiahnuté v účinnom množstve. Predovšetkým terapeuticky účinné množstvo znamená množstvo, ktoré je dostatočné na zabránenie alebo na zlepšenie existujúcich symptómov u subjektu, ktorý je liečený. Stanovenie účinných množstiev sa uskutočňuje štandardným spôsobom podľa stavu techniky.

Pre akúkoľvek zlúčeninu používanú v spôsobe podľa predloženého vynálezu môže byť terapeuticky účinná dávka najprv stanovená podľa testov na bunkových kultúrach. Napríklad dávka môže byť testovaná na bunkových a zvieracích modeloch na získanie obehovej koncentrácie, ktorá zahrnuje IC50 stanovenú podľa testov na bunkových kultúrach (tzn. koncentrácia testovanej zlúčeniny, ktorá je potrebná na dosiahnutie 50% inhibicie aktivity danej proteínkinázy). V niektorých prípadoch je vhodné stanoviť hodnotu IC50 v prítomnosti 3 až 5% sérumalbumínu, pretože toto stanovenie aproximuje väzbové efekty plazmových proteínov na zlúčeninu. Tieto informácie môžu byť používané u ľudských subjektov na presnejšie stanovenie účinných dávok. Najvýhodnejšie zlúčeniny pre systémové podanie účinne inhibujú signalizáciu proteínkináz v intaktných bunkách v hladinách, ktoré sú bezpečne dosiahnuteľné v plazme.

Terapeuticky účinná dávka znamená také množstvo zlúčeniny, ktoré má za následok zlepšenie symptómov u pacienta. Toxicita a terapeutická účinnosť takých zlúčenín môže byť stanovená štandardnými farmaceutickými spôsobmi na bunkových kultúrach alebo experimentálnych zvieratách, ako je napr. stanovenie maximálnej tolerovanej dávky (MTD) a ED50 (koncentrácia látky, ktorá vyvolá 50% maximálneho účinku dávky). Dávkový pomer medzi toxickými a terapeutickými účinkami je určený terapeutickým indexom a môže byť vyjadrený ako pomer medzi MTD a ED50· Zlúčeniny, ktoré majú vysoké terapeutické indexy, sú výhodné. Dáta získané z testov na bunkových kultúrach a štúdie na zvieratách môžu byť používané na stanovenie rozpätia dávky pre použitie u ľudských subjektov. Dávka takých zlúčenín sa pohybuje výhodne v rozmedzí koncentrácií v systémovej cirkulácii, ktoré zahrnujú ED50 s malou alebo žiadnou toxicitou. Množstvo dávky môže byť v tomto rozmedzí rôzne v závislosti od používanej dávkovej formy a spôsobu podania. Presná formulácia, spôsob podania a dávka môžu byť vybrané príslušným lekárom v závislosti od stavu pacienta (viď Fingl et al., 1975, v „Pharmacological Basis of Therapeutics“, kapitola 1 str. 1). V kríži môže byť na dosiahnutie rýchlej odpovede použité podanie akútneho bolusu alebo infúzie na dosiahnutie MTD.

Na dosiahnutie plazmovej hladiny aktívneho podielu, ktorá je dostatočná na udržanie účinkov modulujúcich kinázu alebo minimálnej účinnej koncentrácie (MEC) môže byť množstvo dávky a interval individuálne upravený. Hodnota MEC bude pre každú zlúčeninu iná, avšak môže byť stanovená podľa in vitro údajov; napr. koncentrácia potrebná na dosiahnutie 50-90% inhibície proteínkinázy pomocou stanovení opísaných v predloženom vynáleze. Dávka potrebná na dosiahnutie MEC bude závisieť od jednotlivých charakteristík a od spôsobu podania. Jednako však na stanovenie plazmových koncentrácií môže byť používaná HPLC alebo biotesty.

Intervaly medzi dávkami môžu byť tiež stanovené pomocou hodnoty MEC. Zlúčeniny by mali byť podávané podľa režimu, ktorým sa udržujú plazmové hladiny nad hodnotou MEC v priebehu 10-90% doby, výhodne medzi 30-90% a najvýhodnejšie 50-90%, dokým nie je dosiahnuté požadované zlepšenie daných symptómov. V prípadoch miestneho podania alebo selektívneho vychytávania, nemusí účinná miestna koncentrácia liečiva zodpovedať plazmovej koncentrácii.

Množstvo podávaného prípravku bude závisieť od ošetrovaného subjektu, jeho váhy, závažnosti bolesti, spôsobu podania a posúdenia lekára.

Technika balenia

Prípravky, pokiaľ je potrebné, môžu byť vo forme balenia alebo zásobníka, ktorý môže obsahovať jednu alebo viac jednotkových dávkovacích foriem obsahujúcich aktívnu zložku. Balenie môže napr. obsahovať kovovú alebo plastickú fóliu, napr. mäkké priehľadné balenie. Balenie alebo zásobník môže byť distribuovaný spoločne s návodom na podanie. Tiež môžu byť pripravené prípravky obsahujúce zlúčeninu podľa predloženého vynálezu spoločne s kompatibilným farmaceutickým nosičom, ktorý je vpravený do príslušného obalu a označené pre liečenie daného ochorenia.

V niektorých formuláciách môže byť výhodné používať zlúčeniny podľa predloženého vynálezu vo forme veľmi malých častíc získaných napr. mletím využívajúcim energiu tekutiny.

Použitie zlúčenín podľa predloženého vynálezu pri výrobe farmaceutických prípravkov je uvedené v nasledujúcom opise. V tejto opisnej časti znamená termín „aktívna zlúčenina“ akúkoľvek zlúčeninu podľa predloženého vynálezu, ale najmä akúkoľvek zlúčeninu, ktorá je finálnym produktom jedného z uvedených príkladov.

a) Kapsuly

Pri príprave kapsúl môže byť 10 hmotnostných podielov aktívnej zlúčeniny a 240 hmotnostných podielov laktózy deagregovaných a zmiešaných. Zmes môže byť plnená do tuhých želatínových kapsúl, pričom každá kapsula obsahuje jednotkovú dávku alebo podiel jednotkovej dávky aktívnej zlúčeniny.

b) Tablety

Tablety môžu byť pripravené z nasledujúcich zložiek.

Hmotnostné podiely

Aktívna zlúčenina 10

Laktóza 190

Kukuričný škrob 22

Polyvinylpyrolidón 10

Stearát horečnatý 3

Aktívna zlúčenina, laktóza a časť škrobu môžu byť deagregované, zmiešané a výsledná zmes môže byť granulovaná s roztokom polyvinylpyrolidónu v etanole. Suchý granulát môže byť zmiešaný so stearátom horečnatým a zvyškom škrobu. Zmes potom môže byť lisovaná v tabletovacom stroji, pričom každá tableta obsahuje jednotkovú dávku alebo časť jednotkovej dávky aktívnej zlúčeniny.

c) Tablety s enterosolventnými poťahmi

Tablety môžu byť pripravené spôsobom opísaným vyššie v bode (b). Tablety potom môžu byť enterosolventne potiahnuté štandardným spôsobom roztokom 20% acetát-ftalátu celulózy a 3% dietylftalátu v zmesi etanolu a vody (1:1).

d) Čapíky

Pri príprave čapíkov môže byť 100 hmotnostných dielov aktívnej zlúčeniny inkorporované do 1300 hmotnostných dielov čapíkovej matrice na báze triglyceridov a vzniknutá zmes sa môže dávkovať do čapíkov, pričom každý obsahuje terapeuticky účinné množstvo aktívnej zložky.

V prípravkoch podľa predloženého vynálezu môže byť, pokiaľ je treba, aktívna zlúčenina zmiešaná s ďalšími kompatibilnými, farmakologicky aktívnymi zložkami. Napríklad zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu byť podávané v kombinácii s jedným alebo viac ďalšími farmaceutickými agens, ktoré inhibujú alebo zabraňujú produkcii VEGF alebo angiopoietínov, zmierňujú intracelulárne odpovede na VEGF alebo angiopoietíny, blokujú intracelulárnu signálnu transdukciu, inhibujú vaskulárnu hyperpermeabilitu, zmierňujú zápal alebo inhibujú alebo zabraňujú tvorbe edému alebo neovaskularizácie. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu byť podávané pred, po alebo súčasne s ďalším farmaceutickým agens, ktorýmkoľvek vhodným spôsobom podania. Dalšie farmaceutické agens zahrnujú, ale nie je to nijako limitované, antiedemické steroidy, NSAIDS, inhibítory ras, anti-TNF agens, anti-IL-1 agens, antihistaminiká, PAF-antagonisty, inhibítory COX-1, inhibítory COX-2, inhibítory NO syntázy, inhibítory Akt/PTB, inhibítory IGF1R, inhibítory PKC a inhibítory PI3 kinázy. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu a ďalšie farmaceutické agens účinkujú buď aditívne alebo synergicky. Teda ďalšie také kombinácie látok, ktoré inhibujú angiogenézu, vaskulárnu hyperpermeabilitu a/alebo inhibujú tvorbu edému, môžu poskytovať podstatne väčšie zmiernenie škodlivých účinkov hyperproliferačných ochorení, angiogenézy, vaskulárnej hyperpermeability alebo edému ako podanie ktorejkoľvek samotnej látky. Pri liečení malígnych porúch sú predpokladané kombinácie s antiproliferačnými alebo cytotoxickými chemoterapiami alebo ožarovaním.

Predložený vynález tiež zahrnuje použitie zlúčenín všeobecného vzorca (I) ako liečivého prostriedku.

V ďalšom aspekte predloženého vynálezu je poskytnutá zlúčenina všeobecného vzorca (I) alebo jej soľ pri výrobe liečivého prípravku na liečenie vaskulárnej hyperpermeability, na angiogenéze závisiacich porúch, proliferačných ochorení a/alebo porúch imunitného systému u cicavcov, najmä ľudí.

Predložený vynález tiež poskytuje spôsoby liečenia vaskulárnej hyperpermeability, neprimeranej neovaskularizácie, proliferačných ochorení a/alebo porúch imunitného systému, ktoré zahrnujú podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca (I) cicavcovi, najmä ľuďom, pri potrebe takého ošetrenia.

In vitro účinnosť zlúčenín pri inhibícii týchto proteínkináz môže byť stanovená nižšie uvedenými spôsobmi.

Účinnosť zlúčenín môže byť stanovená množstvom inhibície fosforylácie exogénneho substrátu (napr. syntetický peptid (Z. Songyang et al., Náture. 373:536-539) porovnaním testovanej zlúčeniny s kontrolou.

Produkcia KDR tyrozínkinázy pomocou bakulovírusového systému:

Kódujúca sekvencia pre ľudskú KDR intracelulárnu doménu (aa7891354) bola generovaná pomocou PCR a cDNA izolovanej z buniek HUVEC. Sekvencia poly-His6 bola zavedená na N-koniec tohto proteínu. Tento fragment bol klonovaný do transfekčneho vektora pVL1393 v mieste Xbal a Not 1. Rekombinantný bakulovírus (BV) bol generovaný kotransfekciou pomocou reagens BakuloGold Transfection reagent (PharMingen). Rekombinantný BV bol plak purifikovaný a verifikovaný Western blottingom. S cieľom produkcie proteínu boli bunky SF-9 pestované v médiu SF-900-Π pri 2 x 106/ml a infikované v množstve 0,5 jednotiek tvoriacich plak na bunku (MOI). Bunky boli zberané po 48 hodinách od infekcie.

Purifikácia KDR

Bunky SF-9 exprimujúce (His)éKDR(aa789-1354) boli lýzované pridaním 50 ml lýzovacieho pufru Triton X-100 (20 mM Tris, pH 8,0, 137 mM NaCl, 10% glycerol, 1% Triton X-100, lmM PMSF, 10 pg/ml aprotinínu, 1 ug/ml leupeptinu) do bunkových peliet z 1 1 bunkovej kultúry. Lyzát bol centrifugovaný pri 19,000 ot. za min. na prístroji Sorval SS-34 rotor počas 30 minút pri teplote 4°C. Bunkový lyzát bol aplikovaný do 5 ml NiCl₂ chelatujúceho sepharózového stĺpca, ekvilibrovaného 50 mM HEPES, pH 7,5, 0,3 M NaCl. KDR bola eluovaná rovnakým pufrom obsahujúcim 0,25 M imidazolu. Jednotlivé frakcie boli analyzované metódami SDS-PAGE a ELISA (viď nižšie), pomocou ktorých sa dala zmerať aktivita kinázy. Purifikovaná KDR bola naliata do 25mM HEPES, pH 7,5, 25mM NaCl, 5 mM pufru DTT a skladovaná pri teplote -80°C.

Produkcia a purifikácia ľudskej Tie-2 kinázy

Kódujúca sekvencia pre ľudskú intracelulárnu doménu Tie-2 (aa7751124) bola generovaná pomocou PCR a cDNA izolovaných z ľudskej placenty ako templátov. Sekvencia poly-Hisô bola zavedená do V-konca a tento konštrukt bol klonovaný do transfekčného vektora pVL 1939 v mieste Xba 1 a Not 1. Rekombinantný BV bol generovaný kotransfekciou pomocou reagens BakuloGold Transfection reagent (PharMingen). Rekombinantný BV bol plak purifikovaný a verifikovaný Western blottingom. S cieľom produkcie proteínu boli bunky SF-9 pestované v médiu SF-900-II pri 2 x 106/ml a infikované v MOI 0:5. Purifikácia používanej His-značenej kinázy pri skríningu bola obdobná ako u KDR.

Produkcia a purifikácia ľudskej Flt-1 tyrozínkinázy

Bol používaný bakulovírusový expresívny vektor pVL1393 (Phar Mingen, Los Angeles, CA). Nukleotidová sekvencia kódujúca poly-Hisó bola umiestnená do 5 -konca nukleotidovej sekvencie kódujúcej celú intracelulárnu doménu kinázy ľudskej Flt-1 (aminokyseliny 786-1338). Nukleotidová sekvencia kódujúca kinázovú doménu bola generovaná pomocou PCR a cDNAknižníc izolovaných z buniek HUVEC. Histidínové zvyšky umožnili afinitnú purifikáciu proteínu obdobným spôsobom ako u KDR a ZAP70. Insektované bunky SF-9 boli infikované s 0,5 multiplicitou a zberané po 48 hodinách od infekcie.

Pôvod EGFR tyrozínkinázy

EGFR bola zakúpená od firmy Sigma (Cat # E-3641; 500 jednotiek/50 μΐ) a ligand EGF bol získaný od firmy Oncogen Research Products/Calbiochem (Cat # PF011-100).

Expresia ZAP70

Bol používaný bakulovírusový expresívny vektor pVL1393 (Phar Mingen, Los Angeles, CA). Nukleotidová sekvencia kódujúca aminokyseliny M(H)6 LVPR9S bola umiestnená na 5'-koniec nukleotidovej sekvencie kódujúcej celú ZAP70 (aminokyseliny 1-619). Nukleotidová sekvencia kódujúca oblasť ZAP70 bola generovaná pomocou PCR a cDNA-knižníc izolovaných z T-buniek imortalizovaných podľa Jurkata. Histidínové zvyšky umožnili afinitnú purifikáciu proteínu (viď nižšie). LVPR9S mostík tvorí rozpoznávaciu sekvenciu pre proteolytické štiepenie trombínom umožňujúcu odstránenie afinitného tágu z enzýmu. Insektované bunky SF-9 boli infikované s 0,5 multiplicitou a zberané po 48 hodinách od infekcie.

Extrakcia a purifikácia ZAP70

Bunky SF-9 boli lýzované v pufre pozostávajúcom z 20 mM Tris, pH 8,0, 137 mM NaCI, 10% glycerolu, 1% Triton X-100, lmM PMSF, 10 pg/ml aprotinínu, 1 ug/ml leupeptínu a 1 mM ortovanadátu sodného). Rozpustný lyzát bol aplikovaný na chelatujúci stĺpec sepharózy HiTrap (Pharmacia) ekvilibrovaný v 50 mM HEPES, pH 7,5, 0,3 M NaCI. Fúzny protein bol eluovaný s 250 mM imidazolu. Enzým bol skladovaný v pufre obsahujúcom 50 mM HEPES, pH 7,5, 50 mM NaCI, 5 mM pufru DTT.

100

Pôvod proteínkinázy

Lck, Fyn, Src, Blk, Csk a Lyn a ich skrátené formy môžu byť získané z komerčných zdrojov (napr. od Upstate Biotechnology Inc. (Saranac Lake, N.Y.) a Santa Cruz Biotechnology Inc. (Santa Cruz, Ca.) alebo purifikované štandardnými spôsobmi zo známych prírodných alebo rekombinantných zdrojov.

Enzýmová imunoanalýza na pevnej fáze (ELISA) uskutočnená s PTK

Na detekciu a meranie prítomnosti aktivity tyrozínkinázy bola používaná enzýmová imunoanalýza na pevnej fáze (ELISA). ELISA bola uskutočňovaná štandardným spôsobom, ktorý je opísaný napr. vo Voliér, et al., 1980, „Enzyme-linked Immunosorbent Assay,“ In: Manual of Clinical Immunology, 2d ed., editori Rose a Friedman, 359-371 Am.Soc. of Microbiology, Washington, D.C.

Uvedený spôsob bol upravený pre stanovenie aktivity vzhľadom na špecifickú PTK. Napríklad výhodné spôsoby uskutočnenia ELISA experimentov sú uvedené nižšie. Úprava týchto protokolov pre stanovenie aktivít zlúčenín u ostatných členov rodiny receptorovej PTK, ako aj nereceptorových tyrozínkináz, patrí mezi bežné rutinné práce. Na účely stanovenia selektivity inhibítora bol používaný univerzálny substrát PTK (napr. nepravidelný kopolymér na báze poly(Glu₄ Tyr) s molekulovou hmotnosťou 20000-50000) spoločne s ATP (typicky 5 μΜ) v približne dvojnásobných koncentráciách oproti Km z testov.

Na stanovenie inhibičneho účinku zlúčenín podľa predloženého vynálezu na aktivitu KDR, Flt-1, Flt-4/VEGFR-3, Tie-1, Tie-2, EGFR, FGFR, PDGFR, IGF-l-R, c-Met, Lck, Blk, Csk, Src, Lyn, Fyn a ZAP70 tyrozínkináz bol používaný nasledujúci postup:

Pufry a roztoky:

PGTPoly (Glu, Tyr) 4:1

101

Skladovanie prášku pri teplote -20°C. Rozpustenie prášku vo fyziologickom roztoku tlmenom fosfátom (PBS) na objem 50 mg/ml. Uchovanie 1 ml alikvotného podielu pri teplote -20°C. Pokiaľ sa pripravujú pláty, zriedenie na 250 pg/ml v Gibco PBS.

Reakčný pufer: 100 mM Hepes, 20mM MgCl₂, 4 mM MnCl₂, 5mM DTT, 0,02% BSA, 200 μΜ NaVO₄, pH 7,10.

ATP: Uchovanie alikvotných podielov 100 mM pri teplote -20°C. Zriedenie na objem 20 μΜ vo vode.

Premývací pufer: PBS s 0,1% Tween 20

Protilátkový riediaci pufer: 0,1% bovinný sérumalbumín (BSA) v PBS

Substrát TMB: zmiešanie substrátu TMB a Peroxidového roztoku 9:1 tesne pred použitím alebo použitie substrátu K-Blue od Neogen

Blokovací roztok: IM fosforečná kyselina

Postup

1. Príprava doštičiek

Zriedenie zásobného roztoku PGT (50 mg/ml, zmrazeného) v PBS na 250 pg/ml. Pridanie (125 μΐ/jamka) do ELISA doštičiek Corning s plochým dnom, majúcich vysokú afinitu a modifikované ploché dno (Corning # 25805-96). Pridanie 125 μΐ PBS do slepých jamiek. Potiahnutie tesniacou páskou a inkubácia cez noc pri teplote 37°C. Ix premytie 250 μΐ premývacieho pufra a sušenie počas 2 hodín pri teplote 37°C v suchom inkubátore.

Skladovanie potiahnutých doštičiek v uzavretej nádobe pri teplote 4°C.

2. Reakcia s tyrozínkinázou:

- príprava inhibičných roztokov vo štvornásobnej koncentrácii v 20% DMSO vo vode.

102

- príprava reakčného pufru

- príprava enzýmového roztoku tak, aby požadované jednotky boli v 50 μΐ, napr. pre KDR 1 ng/μΙ z celkových 50 ng/jamka pri reakciách. Skladovanie v ľade.

- príprava 4xATP roztoku s koncentráciou 20 μΜ zo 100 mM zásobného roztoku vo vode. Skladovanie v ľade.

- pridanie 50 μΐ enzýmového roztoku na jamku (typicky 5-50 ng enzýmu na jamku v závislosti od špecifickej aktivity kinázy)

- pridanie 25 μΐ 4 x inhibítora

- pridanie 25 μΐ 4 x ATP pri stanovení inhibície

- inkubácia pri izbovej teplote počas 10 minút

- zastavenie reakcie pridaním 50 μΐ 0,05N HCl/jamka

- premytie doštičiek **Finálna koncentrácia pri reakcii: 5 μΜ ATP, 5% DMSO

3. Naviazanie protilátok

- zriedenie 1 mg/ml alikvotného podielu PY20-HRP (Pierce) protilátky (fosfotyrozínová protilátka) na 50 ng/ml v 0,1 % BSA v PBS 2-krokovým zriedením (100 x, potom 200x)

- pridanie 100 μΐ Ab/jamka. Inkubácia pri izbovej teplote počas 1 hodiny. Inkubácia pri teplote 4°C počas 1 hodiny.

- 4x premytie doštičiek

4. Značenie - farebná reakcia

-príprava substrátu TMB a pridanie 100 μΙ/jamka

- monitoring OD pri 650 nm, dokým sa nedosiahne hodnota 0,6

- zastavenie reakcie pomocou IM fosforečnej kyseliny. Trepanie na detektore doštičiek.

- okamžité meranie OD pri 450 nm.

Optimálne inkubačné časy a podmienky enzýmovej reakcie sa môžu nepatrne líšiť a sú empiricky stanovené pre každú šaržu.

103

Pre Lck bol za obdobných podmienok používaný reakčný pufer so zložením 100 mM MOPSO, pH 6,5, 4 mM MnCb, 20 mM MgCb, 5 mM DTT, 0,2% BSA, 200 mM NaVCM.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu byť terapeuticky účinné pri liečení ochorení zahrnujúcich ako doposiaľ identifikované, vrátane tých, ktoré tu nie sú uvedené, tak i doposiaľ neidentifikované proteínové tyrozínkinázy, ktoré sú inhibované zlúčeninami všeobecného vzorca (I). Všetky tu uvedené zlúčeniny vykazovali výraznú inhibíciu buď FGFR, PDGFR, KDR, Tie-2, Lck, Fyn, Blk, Lyn alebo Src pri koncentráciách 50 mikromólov alebo nižších. Niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu tiež výrazne inhibovali ďalšie tyrozín alebo serín/treonínkinázy, napr. cdc2 (cdk 1) pri koncentráciách 50 mikromólov alebo nižších.

Pôvod Cdc2

Ľudský rekombinantný enzým a testovací pufer môžu byť získané z komerčných zdrojov (New England Biolabs, Beverly, MA. USA) alebo štandardnými spôsobmi purifikované zo známych prírodných alebo rekombinantných zdrojov.

Testy s Cdc2

V postupe boli používané mierne modifikované činidlá získané z komerčných zdrojov. Reakcia bola uskutočňovaná v pufre so zložením 50mM Tris pH 7,5, 100 mM NaCl, 1 mM EGTA, 2 mM DTT, 0,01% Brij, 5% DMSO a 10 mM MgCb (komerčný pufer) suplementovaný čerstvým 300 μΜ ATP (31 pCi/ml) a 30 pg/ml IIIss typu histón ako finálna koncentrácia. Reakčný objem činil 80 μΐ s obsiahnutými jednotkami enzýmu. Reakcia prebiehala 20 minút pri teplote 25°C za prítomnosti alebo absencie inhibítora a bola ukončená pridaním 120 μΐ 10% octovej kyseliny. Substrát bol separovaný od neinkorporovanej značky nanesením zmesi na fosfocelulózový papier a 5 minútovým premytím (3 x 75 mM fosforečnej kyseliny). Impulzy boli merané za prítomnosti kvapalného scintilátora na prístroji merajúcom beta-žiarenie. Niektoré zlúčeniny podľa

104 predloženého vynálezu výrazne inhibovali cdc2 pri koncentráciách 50 μΜ alebo nižších.

Pôvod PKC kinázy

Katalytická podjednotka PKC môže byť získaná z komerčných zdrojov (Calbiochem).

Testy s PKC kinázou

Bol použitý postup rádiochemického stanovenia kináz podľa Yasuda, I., Kirshimoto, A., Tanaka, S., Tominaga, M., Sakurai, A., Nishizuka, Y. Biochemical and Biophysical Research Communication 3:166, 1220-1227 (1990). Všetky reakcie boli uskutočňované v kinázovom pufre pozostávajúcom z 50 mM Tris-HCl pH 7,5, 10 mM MgCl₂, 2 mM DTT, 1 mM EGTA, 100 μΜ ATP, 8 μΜ peptidu, 5% DMSO and ³³P ATP (8 Ci/mM). Zlúčenina a enzým boli zmiešané v reakčnej banke a reakcia bola iniciovaná pridaním ATP a substrátovej zmesi. Po terminácii reakcie pridaním 10 μΐ pufru zastavujúceho reakciu (5 mM ATP v 75 mM fosforečnej kyseliny), bol určitý podiel zmesi nanesený na fosfocelulózový filter. Nanesené vzorky boli premývané (3x) v 75 mM fosforečnej kyseliny pri izbovej teplote počas 5 až 15 minút. Inkorporácia rádioaktívnej značky bola stanovená meraním kvapalnej scintilácie.

Pôvod enzýmu Erk2

Rekombinantný myší enzým a testovací pufer môžu byť zakúpené z komerčných zdrojov (New England Biolabs, Beverly MA. USA) alebo štandardnými spôsobmi purifikované z prírodných alebo rekombinantných zdrojov.

Testy s enzýmom Erk2

Reakcia bola uskutočňovaná v pufre pozostávajúcom z 50 mM Tris pH 7,5, 1 mM EGTA, 2 mM DTT, 0,01% Brij, 5% DMSO a 10 mM MgCl₂

105 (komerčný pufer) suplementovanom čerstvým 100 μΜ ATP (31 gCi/ml) a 30 μΜ myelínového bázického proteínu za podmienok, ktoré sú doporučované dodávateľom. Reakčné objemy a spôsob testovania inkorporovanej rádioaktívnej značky sú opísané pri testoch s PKC (viď nižšie).

In vitro modely aktivácie T-buniek

Po aktivácii mitogénu alebo antigénu sú T-bunky indukované k sekrécii IL-2, čo je rastový faktor, ktorý podporuje ich následnú proliferačnú fázu. Preto možno merať buď produkciu IL-2 alebo bunkovú proliferáciu primárnych T-buniek alebo príslušných línií T-buniek ako náhrad za aktiváciu T-buniek. Oba tieto testy a jednotlivé parametre sú dobre opísané v literatúre (v Current Protocols in Immunology, Vol 2, 7.10.1-7.11.2).

T-bunky môžu byť aktivované kokultiváciou s alogénnym stimulátorom buniek, proces, ktorý je označovaný ako nevratná zmesná reakcia lymfocytu. Respondér a stimulátor pefiférnych krvných monocytov sú purifikované FicollHypaque gradientom (Pharmacia) podľa návodu dodávateľa. Stimulátorové bunky sú mitoticky inaktivované reakciou s mitomycínom C (Sigma) alebo žiarením gama. Respondérové a stimulátorové bunky sú kokultivované v pomere 2:1 za prítomnosti alebo absencie testovanej zlúčeniny. Typicky 10⁵ respondérov je zmiešané s 5 x 10 stimulátormi a nanesené (v objeme 200 μΐ) do mikrotitračnej doštičky s dnom do U (Costar Scientific). Bunky sú kultivované v RPMI 1640 suplementovanom buď fetálnym bovinným sérom (Hyclone Laboratories) inaktivovaným záhrevom alebo poolovým ľudským AB sérom od mužských darcov, 5 x 10 ⁵ M 2-merkaptoetanol a 0,5% DMSO. Jeden deň pred odberom (typicky tri dni) bolo do kultúr zabudované 0,5 gCi ³H tymidínu (amersham). Kultúry boli odoberané (Betaplate harvester, Wallac) a zabudovanie izotopu bolo vyhodnotené pomocou kvapalnej scintilácie (Betaplate, Wallac).

Rovnaký kultivačný systém bol používaný na stanovenie aktivácie Tbuniek meraním produkcie IL-2. Osemnásť až dvadsaťštyri hodín po iniciácii kultivácie bol odstránený supernatant a koncentrácia IL-2 bola meraná metódou ELISA (R a D systémy) podľa návodu dodávateľa.

106

In vivo modely aktivácie T-buniek ln vivo účinnosť zlúčenín môže byť testovaná na zvieracích modeloch priamym meraním aktivácie T-buniek alebo T-buniek, u ktorých boli preukázané efektory. T-bunky môžu byť aktivované in vivo ligáciou konštantnej časti receptora T-buniek s monoklonálnou protilátkou anti-CD3 (Ab). V tomto modeli bolo myšiam BALB/c 2 hodiny pred vykrvácaním intraperitoneálne podané 10 pg anti-CD3 Ab. Zvieratá, ktoré mali obdržať testované liečivo, boli vopred ošetrené jednorazovou dávkou zlúčeniny jednu hodinu pred podaním anti-CD3 Ab. Sérové hladiny protizápalových cytokínov interferónu-γ (IFN-γ) a faktoru-α (TNF-a) nádorovej nekrózy, indikátorov aktivácie T-buniek, boli merané metódou ELISA. Podobný model využíva in vivo aktiváciu T-buniek so špecifickým antigénom, napr. hemokyanínom kužeľnatky (KLH), a následnú sekundárnu in vitro expozíciu drénovaných buniek miechovej uzliny rovnakému antigénu. Ako je uvedené vyššie, na stanovenie stavu aktivácie kultivovaných buniek bolo používané meranie produkcie cytokínov. V nultý deň boli myši C57BL/6 subkutánne imunizované 100 pg KLH emulzifikovaného v kompletnom Freundovom adjuvans (CFA). Zvieratá boli jeden deň pred imunizáciou a následne prvý, druhý a tretí deň po imunizácii vopred ošetrené zlúčeninou. Drénované miechové uzliny boli na štvrtý deň odoberané a ich bunky boli kultivované v množstve 6 x 10⁶ na ml v médiu na kultiváciu tkaniva (RPMI 1640 suplementované fetálnym bovinným sérom inaktivovaným záhrevom (Hyclone Laboratories 5 x 10 ⁵ M 2-merkaptoetanolu a 0,5% DMSO) počas 24 i 48 hodín. V kultivačných supernatantoch bol potom stanovený rastový faktor Interleukín-2 (IL-2) autokrinných T-buniek a/alebo hladiny IFN-γ metódou ELISA.

Zlúčeniny môžu byť tiež testované na zvieracích modeloch simulujúcich ľudské ochorenia, ako je experimentálna autoimunitná encefalomyelitída (EAE) a kolagénom indukovaná artritída (CIA). EAE modely, ktoré mimikujú aspekty ľudskej roztrúsenej sklerózy boli opísané u myší i potkanov (recenzované FASEB J. 5:2560-2566, 1991 myší model: Lab. Invest. 4(3):278, 1981; model na báze hlodavca: J. Immunol. 146(4):1 163-8, 1991). Myši a potkany boli imunizované emulziou myelínového bázického proteinu (MBP) alebo jeho

107 neurogénnymi peptidovými derivátmi a CFA. Akútne ochorenie môže byť indukované pridaním bakteriálnych toxínov, ako je napr. bordetella pertussis. Relapsujúce/ustupujúce ochorenie je indukované adoptívnym prenosom T-buniek zo zvierat imunizovaných MBP/peptidom.

CIA môže byť indukovaná u myší DBA/1 imunizáciou kolagénom typu II (J. Immunol: 142(7):2237-2243), čím sa vyvolajú známky artritídy už desať dní po expozícii antigénu, ktoré môžu byť evidentné aj deväťdesiat dní po imunizácii. U EAE i CIA modelov môže byť zlúčenina podávaná buď profylaktický alebo v dobe prepuknutia ochorenia. Účinné liečivá by mali redukovať silu a/alebo rozsah ochorenia.

Niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, ktoré inhibujú jednu alebo viac angiogénnych receptorových PTK a/alebo proteínkinázu, napr. lck zúčastňujúcu sa na sprostredkovaní zápalových odpovedí, môžu u týchto modelov redukovať silu alebo rozsah artritídy.

Zlúčeniny môžu byť tiež testované na myších modeloch aloimplantátu kože (recenzované v Ann. Rev. Immunol., 10:333-58, 1992; Transplantation: 57(12): 1701-17D6, 1994) alebo srdce (Am. J. Anat.:l 13:273,1963). Kompletné epidermálne štepy boli transplantované z myší C57BL/6 myšiam BALB/c. Štepy môžu byť počínajúc šiestym dňom denne sledované kvôli rejekcii. U myšieho modelu neonatálneho transplantátu srdca, sú neonatálne srdcia ektopicky transplantované z myší C57BL/6 do ušných lalokov dospelých myší CBA/J. Srdce začína pracovať štyri až sedem dní po transplantácii a rejekcia môže byť skúmaná vizuálne disekujúcim mikroskopom s cieľom sledovania prerušenia činnosti srdca.

Testy s bunkovými receptorovými PTK

Na stanovenie miery aktivity a účinku rôznych zlúčenín podľa predloženého vynálezu na KDR/VEGFR2 bol používaný nasledujúci bunkový test. Podobné testy receptorových PTK využívajúce stimuláciu špecifického ligandu môžu byť spoločne s rovnakými bunkovými líniami využívané u ďalších tyrozínkináz.

108

VEGF-indukovaná fosforylácia KDR u ľudských endoteliálnych buniek pupočníkovej žily (HUVEC) môže byť meraná Western blottingom:

1. Bunky HUVEC(od poolových donorov) boli zakúpené od Clonetics (San Diego, CA) a kultivované podľa návodu dodávateľa. Na tieto testy boli používané iba skoré pasáže (3-8). Bunky boli kultivované v 100 mm nádobách (Falcon for tissue culture; Becton Dickinson; Plymouth, England) kompletným EBM médiom (Clonetics).

2. Na vyhodnotenie inhibičnej aktivity zlúčenín boli bunky trypsínované a naočkované v množstve 0,5-1,0 x 10^{4 5} buniek/jamka do každej jamky klastrovaných doštičiek (6 jamiek každá) (Costar; Cambridge, MA).

3. 3-4 dni po naočkovaní bol u 90-100% doštičiek pozorovaný súvislý nárast. Médium bolo zo všetkých jamiek odstránené, bunky boli premývané 510 ml PBS a inkubované 18-24 hodín s 5 ml EBM základného média bez žiadnych pridaných suplementov (tzn. starvácia séra).

4. K bunkám bolo pridané sériové zriedenie inhibítorov v 1 ml média EBM (25 μΜ, 5 μΜ alebo ΙμΜ konečnej koncentrácie) a bunky boli inkubované počas 1 hodiny pri teplote 37°C. Potom bola pridaná do všetkých jamiek ľudská rekombinantná VEGFi₆5 (R & D Systems) v 2 ml média EBM v konečnej koncentrácii 50 ng/ml a v inkubácii sa pri teplote 37°C pokračovalo počas 10 minút. Na stanovenie pozadia fosforylácie a fosforylačnej indukcie VEGF boli používané kontrolné bunky ošetrené alebo neošetrené VEGF. Všetky jamky potom boli premývané 5-10 ml studeného PBS obsahujúceho 1 mM ortovanadátu sodného (Sigma). Bunky boli lýzované a zotreté v 200 μΐ pufru RIPA (50mM Tris-HCl) pH 7, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0,25% deoxycholátu sodného, 1 mM EDTA) obsahujúceho inhibítory proteázy (PMSF 1 mM, aprotinín 1 pg/ml, pepstatin 1 pg/ml, leupeptin 1 pg/ml, Na vanadát 1 mM, Na fluorid lmM) a 1 pg/ml Dnázy (všetky chemikálie boli zakúpené od Sigma Chemical Company, St Louis, MO). Lyzát bol kvôli eliminácii jadier centrifugovaný pri 14000 ot./min. počas 30 minút.

109

Ekvivalentné množstvo proteínov potom bolo precipitované pridávaním studeného (-20°C) etanolu (2 objemy) počas minimálne 1 hodiny alebo maximálne cez noc. Pelety boli rekonštituované vo vzorkovom pufri Laemliho obsahujúcom 5% 2-merkaptoetanolu (BioRad Hercules, CA) a zahrievané počas 5 minút. Proteíny boli znovu chromatografované gólovou elektroforézou na polyakrylamidovom géli (6%, l,5mm Novex, San Deigo, CA) a prenesené do nitrocelulózovej membrány pomocou systému Novex. Po blokácii bovinným sérumalbumínom (3%) boli proteíny pri teplote 4°C značené polyklonálnou protilátkou anti-KDR (C20, Santa Cruz Biotechnology; Santa Cruz, CA) alebo monoklonálnou protilátkou antifosfotyrozín (4G10, Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY). Po premytí a inkubácii s HRP-konjugovaným F(ab)₂ kozím protikráličím alebo kozím protimyším IgG boli jednotlivé pásy vizualizované emisnou chemiluminiscenciou (ECL)(Amersham Life Sciences, Arlington Height, IL). Niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu výrazne inhibovali fosforyláciu bunkovej KDR tyrozínkinázy indukovanú VEGF pri koncentráciách nižších než 50 μΜ.

In vivo model edému maternice

Pri tomto teste bola meraná schopnosť zlúčenín inhibovať akútny prírastok hmotnosti maternice u myší, ktorý sa objavil v prvých niekoľkých hodinách po stimulácii estrogénom. Je známe, že tento rýchly prírastok hmotnosti maternice je spôsobený edémom v dôsledku zvýšenej permeability uterinnej vaskularity. Cullinan-Bove a Koss (Endocrinology (1993), 133: 829837) ukázali podobný dočasný vzťah medzi uterinným edémom stimulovaným estrogénom a zvýšenou expresiou VEGF mRNA v maternici. Tieto výsledky bolo potvrdené použitím neutralizačnej monoklonálnej protilátky voči VEGF, ktorá výrazne redukovala akútny prírastok hmotnosti maternice po stimulácii estrogénom (WO 97/42187). Preto môže tento systém slúžiť ako model pre in vivo inhibíciu VEGF signalizácie a súvisiacej hyperpermeability a edému.

Látky: Všetky hormóny boli zakúpené od firmy Sigma (St. Louis, MO) alebo Cal Biochem (La Jolla, CA) ako lyofilizované prášky a pripravené podľa návodu dodávateľa.

110

Nosičové komponenty (DMSO, Cremaphor EL) boli zakúpené od firmy Sigma (St. Louis, MO).

Myši (Balb/c, vo veku 8-12 týždňov) boli zakúpené od firmy Taconic (Germantown, NY) a prechovávané s vylúčením patogénov v zariadení na to určenom a podľa „Institutional Animal Čare and Use Committee Guidelines“

Spôsob:

l.deň: myšiam Balb/c bola intraperitoneálne (i.p.) podaná injekcia

12,5 jednotiek gonadotropínu zo séra žrebných kobýl (PMSG).

3. deň: myšiam bolo podaných 15 jednotiek ľudského chorogonadotropínu (hCG) i.p.

4. deň: myši boli náhodne rozdelené do skupín obsahujúcich 5-10 kusov. Testované zlúčeniny boli podávané i.p., i.v. alebo p.o. spôsobom, ktorý závisel od rozpustnosti nosiča v dávkach v rozmedzí 1-100 mg/kg. Kontrolná skupina obdržala iba nosič a dve skupiny neboli ošetrované.

Po 30 minútach experimentu bola kontrolnej skupine a jednej z neošetrovaných skupín podaná i.p. injekcia 17-estradiolu (500 pg/kg). Po 2-3 hodinách boli zvieratá usmrtené inhaláciou CO2. Po reze vedenom v strednej línii bola izolovaná každá maternica a odstránená rezom vedeným pod krčkom (cervix) a v mieste spojenia maternice a vajíčkovodov. Tučné a spojivové tkanivo bola opatrne odstránené tak, aby sa pred vážením (vlhká váha) neporušila intergrita maternice. Z materníc bola odstránená tekutina tlakom medzi dvoma filtračnými papiermi s jednolitrovou sklenenou fľašou naplnenou vodou. Maternice b.oli po odstránení tekutiny zvážené (hmotnosť po odstránení tekutiny). Rozdiel v hmotnosti pred a po odstránení tekutiny bol stanovený ako množstvo tekutiny v maternici. Priemerný obsah vody u ošetrovaných skupín v

bol porovnávaný s neošetrovanými alebo kontrolnými skupinami. Štatistické parametre boli stanovené podľa Študentovho testu. Na sledovanie odpovede na estradiol bola používaná nestimulovaná kontrolná skupina.

111

Výsledky demonštrujú, že niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu inhibujú tvorbu edému, pokiaľ sú systematicky podávané rôznymi spôsobmi.

Niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, ktoré sú inhibítormi angiogénnych receptorových tyrozínkináz môžu tiež vykazovať aktivitu na modeli neovaskularizácie Matrigelového implantátu. Model neovaskularizácie Matrigelu zahrnuje tvorbu nových krvných ciev bez subkutánne implantovanej „mramorovej“ extracelulárnej matrix, ktorá je indukovaná prítomnosťou proangiogénneho faktoru produkovaného nádorovými bunkami (viď: Passaniti, A., et al., Lab. Investig. (1992), 67 (4), 519528; Anat. Rec. (1997), 249 (1), 6373; Iní. J. Cancer (1995), 63 (5), 694-701; Vasc. Biol. (1995), 15 (11), 18576). Model je výhodne použiteľný v priebehu 3-4 dní a výstupy zahrnujú makroskopické optické/obrazové vyhodnotenie neovaskularizácie, mikroskopické stanovenie hustoty mikrociev a stanovenie množstva hemoglobínu (Drabkinova metóda) a následne odstránenie implantátu proti kontrolám na zvieratách neošetrovaných inhibítormi. V danom modeli možno ako stimulans alternatívne používať bFGF alebo HGF.

Niektoré zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, ktoré inhibujú jednu alebo viac onkogénnych, protoonkogénnych alebo na proliferácii závisiacich proteínkináz alebo angiogénne receptorové PTK, tiež inhibujú rast primárnych myších, potkaních alebo ľudských xenoimplantátových nádorov u myší alebo inhibujú metastázy na myších modeloch.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Medziprodukt 1

4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl)benzaldehyd

Zmes 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (3,00 g, 11,5 mmol) a hydridu sodného (60%, 0,506 g, 12,6 mmol) v DMF (50 ml) sa mieša pri

112 izbovej teplote počas 1 hodiny, potom sa pridá 4-fluórbenzaldehyd (1,36 ml, 12,6 mmol). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 100°C počas 21 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje DMF (30 ml) a éterom (30 ml), suší, čím sa získa 4-(4-amino-3-jódl//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)benzaldehyd vo forme hnedej pevnej látky (2,80 g, 7,61 mmol): ‘h NMR (dó-DMSO, 400 MHz): ÔH 10,03 (IH, s), 8,46 (2H, d, J - 8,4 Hz), 8,39 (IH, s), 8,09 (2H, d, J = 8,8 Hz); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 9,71 min. MS: MH⁺ 365,8.

Medziprodukt 2

Wl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl} -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid

Zmes 4-(4-amino-3-jód-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l -yl)benzaldehydu (0,400 g, 1,09 mmol), 7V1 -[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan2- yl)fenyl]-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (0,735 g, 1,20 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,127 g, 0,110 mmol) a uhličitanu sodného (0,279 g, 2,63 mmol) v DME (10 ml) a vode (10 ml) sa zahrieva pri teplote 85°C počas 1 hodiny. Pridá sa ďalší Wl-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (0,026 g, 0,059 mmol) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 85°C počas 4 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a filtruje. Zostávajúci pevný podiel sa premyje metanolom (50 ml) a DMF (50 ml) a spojené filtráty sa koncentrujú, čím sa získa 7Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín3- yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme béžovej pevnej látky (0,402 g, 0,730 mmol): *H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): ÔH 10,05 (IH, s), 9,96 (IH, d, J = 4,0 Hz), 8,62 (IH, d, J = 8,4 Hz), 8,46 (IH, s), 8,39 (IH, d, J = 6,8 Hz), 8,12 (2H, d, J = 8,8 Hz), 8,02-8,03 (IH, m), 7,84-8,00 (IH, m), 7,75-7,77 (IH, m), 7,51 (IH, s), 7,43 (IH, d, J = 8,0 Hz), 3,97 (3H, s); RPHPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 12,46 min. MS: MH 551,2.

113

Medziprodukt 3

2-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-etanol

Do roztoku 3-jód-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amínu (5,00 g, 19,1 mmol) v DMF (40 ml) sa pridá hydrid sodný (60%, 1,53 g, 38,3 mmol) a reakčná zmes sa mieša počas 20 min. Pridá sa 2-brómetanol (1,50 ml, 21,1 mmol) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 50°C počas 18 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje, čím sa získa hnedá kaša. Pridá sa ľadová voda (50 ml) a výsledný precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou (50 ml) a éterom (50 ml), suší vo vákuu, čím sa získa 2-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-etanol vo forme béžovej pevnej látky (4,30 g, 14,1 mmol): *H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): ÔH 8,19 (1H, s), 4,84 (1H, t, J = 5, 8 Hz), 4,30 (1H, t, J = 5,8 Hz) a 3,77 (2H, app q, J = 5,6 Hz); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-l00% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 7,35 min.

Medziprodukt 4

2-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(1 -metyl-l//-2-indolyl)karbonyl] amino} fenyl)-1//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l -yljetyl-metánsulfonát

Do zmesi N2-{4-[4-amino-l-(2-hydroxyetyl)-17/-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l -metyl-1/7-2-indolkarboxamidu (0,343 g, 0,750 mmol) a pyridínu (7,5 ml) s teplotou 0°C sa pridáva po kvapkách v priebehu 30 sekúnd metánsulfonylchlorid (0,14 ml, 1,8 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 0°C počas 2 hodín, potom sa pridá ľadová voda (10 ml). Precipitát sa spojí filtráciou a suší vo vákuu, čím sa získa 2-[4-amino-3-(3metoxy-4-{ [(1 -mety 1-1 H-2-indolyl)karbonyl] amino} fenyl)-1//-pyrazolo [3,4č/]pyrimidín-l-yljetyl-metánsulfonát vo forme béžovej pevnej látky (0,268 g, 0,500 mmol): 'h NMR (dó-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,44 (1H, s), 8,30 (1H, s), 8,13 (1H, d, J - 8,0 Hz), 7,70 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,31-7,38 (4H, m), 7,15 (1H, t, J = 7,6 Hz), 4,70 (3H, s), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,37 (2H, tienené piky vody) a 3,12 (2H, s); RP-HPLC (Hypersil 08,

114 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 15 min 1 ml/min). Rt 11,22 min. MS: M+ 536,2.

Príklad 1

VI -(4-{4-amino-l -[4-(morfolinometyl)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid

Zmes Nl -{4-[4-amino-l-(4-formylfeny 1)-1 //-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), morfolínu (0,024 ml, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,409 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 16 hodín. Pridajú sa ďalšie podiely morfolínu (0,012 ml, 0,14 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (0,043 g, 0,20 mmol) a octovej kyseliny (0,016 ml) a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 24 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa filtruje, čím sa získa šedá pevná látka, ktorá sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 21-23 minúte sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Vl-(4-{4-amino-l-[4-(morfolinomety])fenyl]-l//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfényl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,007 g, 0,011 mmol): 'h NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,93 (1H, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,14-8,18 (2H, m), 7,97-8,02 (1H, m), 7,877,91 (1H, m), 7,73-7,76 (1H, m), 7,45-7,51 (2H, m), 7,44 (1H, s), 7,38-7,43 (1H, m), 3,41-3,59 (8H, m) a 3,36 (2H, s); RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 11,72 min. MS: MH⁺ 622,2.

Príklad 2 /Vl-[4-(4-amino-l-{4-[(4-hydroxypiperidino)metyl]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-3-y l)-2-metoxy fenyl ]-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidmonoacetát

115

Zmes /VI -{4-[4-amino-1 -(4-formylfeny 1)-177-pyrazolo [3,4-ť7]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 4-hydroxypiperidínu (0,028 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 16 hodín. Pridajú sa ďalšie podiely 4hydroxypiperidínu (0,028 g, 0,27 mmol) a pridá sa kyselina octová (0,016 ml) a reakčná zmes sa trepe počas 24 hodín. Pridá sa ďalší 4-hydroxypiperidín (0,033 g, 0,33 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,040 g, 0,19 mmol) a reakčná zmes sa trepe počas 72 hodín, pridá sa IN NaOH (1,5 ml) a žltohnedý precipitát sa spojí filtráciou a purifikuje preparativnou RP HPLC (Rainin Cl8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 21-23 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa 7Vl-[4-(4-amino-l-{4-[(4-hydroxypiperidino)metyl]fenyl}-l/7-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-monoacetát vo forme bielej pevnej látky (0,025 g, 0,039 mmol): *H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,95 (1H, s), 8,35-8,99 (2H, m), 8,14-8,19 (2H, m), 7,99-8,03 (1H, m), 7,89-7,93 (1H, m), 7,75-7,80 (1H, m),

7,39-7,51 (4H, m), 4,55 (1H, s), 3,96 (3H, s), 3,80 (2H, s), 2,68-2,71 (3H, m),

2,04-2,11 (2H, m), 1,85 (3H, s), 1,71-1,76 (2H, m) a 1,39-1,45 (2H, m); RPHPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,56 min. MS: MH⁺ 636,2.

Príklad 3 /VI-{4-[4-amino-l-(4-{[4-(2-hydroxyetyl)piperazino]metyl} fenyl)-177pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-y l]-2-metoxy fenyl} -2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid

Zmes /Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl }-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), /V-(2-hydroxyetyl)piperazínu (0,035 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 14 hodín. Pridajú sa ďalšie podiely N-(2hydroxyetyl)piperazínu (0,010 g, 0,077 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného

116 (0,020 g, 0,094 mmol) a reakčná zmes sa trepe počas 16 hodín, pridá sa IN NaOH (1,5 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a purifikuje preparatívnou RPHPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 21,9-22,9 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa //l-{4-[4-amino-l-(4-{[4-(2hy droxyetyl)piperazino ]metyl}-l-fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-y 1]-2metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,034 g, 0,051 mmol): ’h NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, s), 8,358,37 (2H, m), 8,15 (2H, d, J = 8,8 Hz), 8,00 (1H, t, J = 8,0 Hz), 7,90 (1H, d, J=10,4Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,49 (1H, s), 7,46 (2H, d, J = 7,2 Hz), 7,40 (1H, d, J = 8,4 Hz), 3,96 (3H, s), 3,51 (2H, s), 3,46-3,49 (4H, m) a 2,35-2,44(8H, m); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5%-100% acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,92 min. MS: MH⁺ 664,7.

Príklad 4

7/1-{4-[4-amino-1 -(4-{[4-(2-hydroxyetyl)piperidino]metyl}fenyl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid-diacetát

Zmes Nl -{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ú?]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-2-fIuór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol),

4-piperidínetanolu (0,035 g, 0,27 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) a dichlóretánu (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 16 hodín. Pridajú sa ďalšie podiely 4-piperidínetanolu (0,040 g, 0,31 mmol)) a triacetoxyborohydridu sodného (0,053 g, 0,25 mmol) a reakčná zmes sa trepe počas 4 dní, pridá sa IN NaOH (1 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 10-60% acetonitril - 0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 21,1-23,5 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa jVI - {4-[4-amino-1 -(4-{ [4-(2-hy droxy ety ljpiperidino] metyl} fény 1) -1//-pyrazolop,4-í/]pyrimidí n-3-y 1]-2-metoxy fenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid117 diacetát vo forme bielej pevnej látky. (0,015 g, 0,023 mmol): 'h NMR (dôDMSO, 400 MHz): ÔH 9,94 (1H, s), 8,18-8,39 (2H, m), 8,14 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,99-8,02 (1H, m), 7,90 (1H, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,39-7,48 (4H, m), 4,31-3,96 (3H, s), 3,37 (2H, s), 3,37-3,50 (3H, m), 2,802,83 (2H, m), 1,91 (6H, m), 1,61-1,64 (2H, m), 1,35-1,37 (3H, m) a 1,15-1,18 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5%-100% acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,71 min. MS: MH⁺ 664,2.

Príklad 5

Nl -{4-[4-amino-1 -(4-{[3-(hydroxymetyl)piperidino]metyl}fenyl)-177pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid-monoacetát

Zmes VI-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-1/í-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 3-piperidínmetanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 16 hodín. Pridá sa ďalší 3-piperidínmetanol (0,045 g, 0,39 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,090 g, 0,42 mmol) a reakčná zmes sa trepe pri izbovej teplote počas 16 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C 18, 8 pm, 300 Ä, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 21-23 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Vl-{4-[4-amino-l-(4-{[3-(hydroxymetyl)piperidinojmety 1} fenyl)-l/Z-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidí η-3-yl]-2-metoxy fenyl }-2-fluór4-(trifluórmetyl)benzamid-monoacetát vo forme bielej pevnej látky, (0,007 g, 0,11 mmol): ‘h NMR (dô-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,95 (1H, s), 8,35-8,39 (2H, m), 8,14-8,17 (2H, m), 8,01-8,03 (1H, m), 7,89-7,93 (1H, m), 7,757,78 (1H, m), 7,40-7,50 (4H, m), 4,39-4,42 (1H, m), 3,97 (3H, s), 3,39-3,53 (3H, m), 3,01-3,21 (1H, m), 2,87-2,89 (1H, m), 2,75-2,77 (1H, m), 1,91 (3H, s), 1,611,65 (4H, m), 1,47-1,52 (1H, m) a 0,89-0,92 (1H, m); RP-HPLC (Hypersil 08,

118 μπι, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,73 min. MS: MH 650,2.

Príklad 6

Nl-{4-[4-amino-l-(4-{[2-(hydroxymetyl)piperidino]metyl}fenyl)-l//pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxy fenyl }-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid-monoacetát

Zmes Nl -{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l/ŕ-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol), 2-piperidínmetanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 16 hodín. Pridajú sa ďalšie podiely 2-piperidínmetanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) a reakčná zmes sa trepe počas 3 dní. Pridá sa ďalší 2-piperidínmetanol (0,030 g, 0,26 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,073 g, 0,34 mmol), potom octová kyselina (0,1 ml). Reakčná zmes sa trepe počas 5 dní, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje vo vákuu na odstránenie dichlóretánu. Zvyšok sa rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez Acrodisc syringe-tip filter a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin 0 8, 8 μιη, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 14,617,0 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Al-{4-[4-amino-l(4-{[2-(hydroxymetyl)piperidino]metyl}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl} - 2-fluór-4-(trifluórmetyl) b enzamid-mono acetát vo forme bielej pevnej látky, (0,026 g, 0,040 mmol): 'h NMR (dé-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,91 (1H, s), 8,33-8,37 (2H, m), 8,09-8,14 (2H, m), 7,96-8,00 (1H, m), 7,867,89 (1H, m), 7,717,74 (1H, m), 7,37-7,52 (4H, m), 4,46 (1H, bs), 4,10-4,15 (1H, m), 3,94 (3H, s), 3,64-3,67 (1H, m), 3,44-3,48 (1H, m), 2,64-2,69 (2H,

m), 2,00-2,07 (1H, m), 1,94 (3H, s), 1,60-1,89 (2H, m) a 1,20-1,40 (4H, m);

RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10, 59 min. MS: MH⁺ 649,7.

119

Príklad 7 /Vl-{4-[4-amino-l-(4-{[(2-morfolinoetyl)amino]metyl}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4t/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl }-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid

Zmes /Vl-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 7V-(2-aminoetyl)morfolínu (0,035 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe počas 16 hodín pri izbovej teplote. Pridajú sa ďalšie podiely 1 N-(2aminoetyl)morfolínu (0,030 ml, 0,23 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) a reakčná zmes sa trepe počas 4 dní. IN NaOH (1 ml) sa pridá a precipitát sa spojí filtráciou a purifíkuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 16,6-19,0 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa /Vl-{4-[4-amino-l-(4-{[(2morfolinoetyl)amino)metyl} fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky, (0,014 g, 0,021 mmol): *H NMR (de-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,88 (1H, s), 8,298,93 (2H, m), 8,11-8,17 (2H, m), 7,92-7,97 (1H, m), 7,83-7,86 (1H, m), 7,687,72 (1H, m), 7,46-7,51 (2H, m), 7,39 (1H, s), 7,34-7,38 (1H, m), 3,90 (3H, s), 3,50-3,52 (4H, m), 2,61-2,62 (2H, m), 2,40-2,50 (2H, tienený píkom DMSO) a 2,27-2,40 (6H, m); RP-HPLC (Hypersil 0 8, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10, 96 min. MS: MH⁺ 665,2.

Príklad 8 jVl-{4-[4-amino-l-(4-{[4-(hydroxymetyl)piperidino]metyl}fenyl)-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid-di acetát

Zmes /VI -{4-[4-amino -1 -(4-formylfenyl)-1//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol),

120

4-piperidínmetanolu (0,031 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 3 dní. Pridajú sa ďalšie podiely 4-piperidínmetanolu (0,096 g, 0,83 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,085 g, 0,40 mmol), potom octová kyselina (0,1 ml). Reakčná zmes sa trepe počas 5 dní, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez Acrodisc syringe-tip filter, potom purifíkuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C 18,8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 17,2-18,3 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa 7Vl-(4-[4-amino-l-(4-{[4-(hydroxymetyl)piperidino jmetyl} fény 1)-17/-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxyfenyl }-2-fluór4-(trifluórmetyl)benzamid-diacetát vo forme bielej pevnej látky (0,018 g, 0,028 mmol): 'h NMR (dó-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,94 (IH, s), 8,35-8,37 (2H, m), 8,14 (2H, d, J=8,4 Hz), 8,00 (IH, t, J = 7,0 Hz), 7,90 (IH, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,39-7,64 (4H, m), 4,38-4,41 (IH, m), 3,96 (3H, s), 3,50 (2H, s), 2,83 (2H, d, J = 10,8 Hz), 1,90 (6H, s), 1,63 (2H, d, J = 11,6 Hz), 1,341,35 (2H, m) a 1,12-1,19 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5% - 100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,41 min. MS: MH 650,2.

Príklad 9

Al-{4-[4-amino-l-(-{[4-(2-metoxyetyl)piperazino]metyl}fenyl)-l/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid

Zmes /Vl-{4-[4-amino-l-(4-formyIfenyl)-177-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), l-(2-metoxyetyl)-piperazínu (0,039 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 3 dní. Pridajú sa ďalšie podiely l-(2metoxyetyl)-piperazínu (0,10 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,41 mmol) a reakčná zmes sa trepe počas 16 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml) a výsledný roztok sa extrahuje dvomi podielmi dichlórmetánu (2 ml každý raz).

121

Spojené organické podiely sa koncentrujú, čím sa získa hnedá pevná látka, ktorá sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 2080% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 16,9-20,2 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa .Wl-{4-[4-amino-l-(4-{[4-(2-metoxyetyl)piperazino]metyl}fenyl)-ltf-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,021 g, 0,031 mmol): *H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,94 (IH, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,14-8,17 (IH, m), 7,98-8,02 (IH, m), 7,89 (IH, d, J = 10,4 Hz), 7,74-7,76 (IH, m), 7,34-7,64 (6H, m), 3,96 (3H, s), 3,51 (2H, s), 3,31-3,43 (2H, m), 3,22 (3H, s) a 2,41-2,45 (10H, m); RPHPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 11,24 min. MS: MH⁺ 678,7.

Príklad 10

A^rl-{4-[4-amino-l-(4-[[(3/?)-3-hydroxytetrahydro-l//-l-pyrolyl]metyl}fenyl)1//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxy fenyl}-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzaniid

Zmes Al -{4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 //-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (0,075 g, 0,14 mmol), (5)-3-hydroxypyrolidínu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 3 dní. Pridajú sa ďalšie podiely (5)-3-hydroxypyrolidínu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,084 g, 0,40 mmol) a reakčná zmes sa trepe počas 3 dní. Pridá sa octová kyselina (0,1 ml) a reakčná zmes sa trepe počas 4 dní, pridá sa IN NaOH (1 mi) a reakčná zmes sa koncentruje vo vákuu. Zvyšok sa rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez Acrodisc syringe-tip filter a purifikuje preparatívnou RP HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 16,518,4 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Al-{4-[4-amino-l(4-{[(3Ä)-3-hydroxytetrahydro-l//-l-pyrolyl]metyl}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme

122 bielej pevnej látky (0,027 g, 0,043 mmol): *H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,89 (IH, s), 8,30-8,33 (2H, m), 8,13-8,14 (2H, m), 7,90-7,80 (IH, m), 7,84 (IH, d, J - 10,8 Hz), 7,70 (IH, d, J = 7,6 Hz), 7,35-7,59 (4H, m), 4,64 (IH, bs), 4,14-4,23 (IH, m), 3,91 (3H, s), 3,62 (2H, s), 2,61-2,62 (2H, m), 2,27-2,28 (2H, m), 2,27-2,28 (2H, m), 2,02 (IH, m) a 1,60 (IH, m); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,41 min. MS: MH 622,2.

Príklad 11

Nl -{4-[4-amino-l-(4-{[(37()-3-hydroxy tetrahydro-\H-1 -py roly ljmetyl} fény ΟΙ //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxy fenyl }-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid

Zmes 7VT-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3y 1]-2-metoxy fény 1} -2-fluór-4-(trifluórmetyl )benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), (7?)-(+)-3-pyrolidinolu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 3 dní. Pridajú sa ďalšie podiely (7?)-(+)-3pyrolidinolu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,084 g, 0,40 mmol) a reakčná zmes sa trepe počas 16 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a spojí so zvyškom získaným z extrakcie vodnej vrstvy s jedným podielom dichlórmetánu (20 ml). Surová zmes sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min). Príslušná frakcia sa spojí, koncentruje a lyofilizuje, čím sa získa yVl-{4-[4-amino-l-(4-{[(37?)-3-hydroxytetrahydro1 H-1-pyrolyl] metyl} fenyl)- 177-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl }2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,034 g, 0,055 mmol): ’H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,93 (IH, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,15-8,19 (2H, m), 7,98-8,01 (IH, m), 7,85 (IH, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,48-7,54 (2H, m), 7,44 (IH, s), 7,40 (IH, d, J = 8,4 Hz), 4,70 (IH, bs), 4,22 (IH, s), 3,96 (3H, s), 3,63 (2H, s), 2,49-2,72 (3H, m), 2,13-2,41 (IH, m), 1,91-2,06 (IH, m) a 1,531,61 (IH, m); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100

123

Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0, 1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,53 min. MS: MH⁺ 622,2.

Príklad 12 /Vl-(4-{4-amino-l-[4-{([3-(l//-l -imidazolyl)propyl]amino}metyl)fenyl]-l//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid

Zmes N1 -{4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), l-(3-aminopropyl)imidazolu (0,034 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 3 dní. Pridajú sa ďalšie podiely l-(3aminopropyl)imidazolu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,086 g, 0,40 mmol) a reakčná zmes sa trepe počas 3 dní. Pridá sa kyselina octová (0,1 ml) a reakčná zmes sa trepe počas 4 dní, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez Acrodisc syringe-tip filter a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 gm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 14,0-15,7 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa tVI -(4-{4-amino-l-[4-{([3-(l//-l-imidazolyl)propyl]amino}metyl)fenyl]1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,040 g, 0,061 mmol): 'h NMR (dó-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (1H, s), 8,35-8,40 (2H, m), 8,16 (2H, d, J = 7,6 Hz), 7,99 (1H, t, J - 7,6 Hz), 7,89 (1H, d, J = 10,0 Hz), 7,75 (1H, d, J =8,4 Hz), 7,59 (1H, s), 7,52 (2H, d, J = 3,8 Hz), 6,45 (1H, s), 7,40 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,16 (1H, s), 6,87 (1H, s), 4,04 (2H, t, J = 7,0 Hz), 3,96 (3H, s), 3,77 (2H, s), 2,45-2,46 (2H, m), 1,91 (3H, s) a 1,86-1,90 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil 0 8, 5 gm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 minút, 1 ml/min). Rt 10,28 min. MS: MH⁺ 660,2.

124

Príklad 13

Al-{4-[4-amino-l -(4-{[(4-hydroxybuty l)amino]metyl} fény 1)-1 Η-pyr azolo [3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid

Zmes Al -{4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3yl]-2-metoxy fény 1}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 4-amino-l-butanolu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe počas 3 dní. Pridajú sa ďalšie podiely 4-amino-l-butanolu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,42 mmol) a reakčná zmes sa trepe počas 3 dní, pridá sa kyselina octová (0,1 ml) a reakčná zmes sa trepe počas 7 dní. Pridá sa ďalší podiel triacetoxyborohydridu sodného (0,098 g, 0,46 mmol) a reakčná zmes sa trepe počas 16 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez Acrodisc syringe-tip filter a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 12,5-14,8 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Al -{4-[4-amino-1 -(4-{[(4-hydroxybutyl)amino]metyl} fény l)-lH-pyrazolo [3,4-c/jpy rimidín-3-y 1]-2-metoxy fenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky, (0,030 g, 0,048 mmol): *H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,94 (IH, d, J = 4,4 Hz), 8,35-8,40 (2H, m), 8,17 (2H, d, J = 8,0 Hz), 8,00 (IH, t, J = 7,4 Hz), 7,90 (IH, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (IH, d, J = 7,2 Hz), 7,53-7,57 (2H, m), 7,45 (IH, s), 7,40 (IH, d, J = 8,8 Hz), 3,96 (3H, s), 3,83 (2H, s), 3,39 (2H, t, J = 6,2 Hz), 2,45-2,50 (2H, m) a 1,45-1,51 (4H, m); RPHPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 9,93 min. MS: MH⁺ 624,3.

Príklad 14

Al-{4-[4-amino-l-(4-{[(3-metoxypropyl)amino]metyl}fenyl)-lH-pyrazolo[3,4c/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid

125

Zmes Λ4 -{4-[4-amino-1 -(4-formylfenyl)-1/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 3-metoxypropylamínu (0,024 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 3 dní. Pridajú sa ďalšie podiely 3metoxypropylamínu (0,1 ml, 1 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,085 g, 0,40 mmol) a zmes sa trepe počas 3 dní, octová kyselina (0,1 ml) sa pridá a reakčná zmes sa trepe počas 4 dní. Pridá sa ďalší podiel triacetoxyborohydridu sodného (0,100 g, 0,470 mmol) a reakčná zmes sa trepe počas 16 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez Acrodisc syringe-tip filter a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 18,0-19,7 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Al-{4-[4-amino-l-(4-{[(3metoxypropyl)amino]metyl}fenyl)-l/Z-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,009 g, 0,014 mmol): *H NMR (dô-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,93 (1H, s), 8,338,38 (2H, m), 8,18-8,20 (2H, m), 7,97-8,01 (1H, m), 7,87-7,91 (1H, m), 7,737,76 (1H, m), 7,54-7,64 (5H, m), 7,31-7,45 (2H, m), 3,95 (3H, s), 3,85-3,89 (2H, m), 3,38 (2H, s), 2,55-2,68 (2H, m) a 1,701,74 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,58 min. MS: MH⁺ 624,2.

Príklad 15

N1 -(4-{4-amino-l-[4-{([3-(dimetylamino)propyl]amino}metyl)fenyl]-l/7pyrazolo [3,4-6/]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fenyl)-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid-monoacetát

Zmes Al-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl }-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), ΛζΑ-dimetyl-l,3-propándiamínu (0,028 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 3 dní. Pridajú sa ďalšie podiely JV,7V-dimetyl126

1,3-propándiamínu (0,1 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,085 g, 0,40 mmol) a zmes sa trepe počas 3 dní, pridá sa octová kyselina (0,1 ml) a zmes sa trepe počas 4 dní. Pridá sa triacetoxyborohydrid sodný (0,096 g, 0,45 mmol) a zmes sa trepe počas 16 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez Acrodisc syringe-tip filter a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 14,3-14,9 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Al-(4-{4-amino-l -[4-{([3-(dimetylamino)propyl]amino}metyl)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidmonoacetát vo forme bielej pevnej látky (0,020 g, 0,031 mmol): *H NMR (d6DMSO, 400 MHz): ÔH 9,93 (1H, s), 8,34-8,37 (2H, m), 8,13 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,00 (1H, t, J=7,2Hz), 7,89 (1H, d, J = 10,0 Hz), 7,75 (1H, d, J=7,6Hz), 7,49 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,44 (1H, s), 7,39 (1H, d, J = 8,0 Hz), 3,96 (3H, s), 3,74 (2H, s), 2,21-2,25 (2H, t, J = 7,0 Hz), 2,09 (6H, s), 2,08 (3H, s), 1,86-1,87 (4H, m) a 1,54-1,58 (2H, t, J = 7,2 Hz); RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,85 min. MS: MH⁺ 637,3.

Príklad 16

Mety 1-(25)-2-( {4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino}-3metoxy fény l)-l//-pyrazolo [3,4-ď] pyrimidín-l-yl] benzyl} amino)-3-(4//-4imidazolyl)propanoát

Zmes Al-{4-[4-amino-l-(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), dihydrochloridu metylesteru L-histidínu (0,046 g, 0,27 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0, 087 g, 0,41 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 3 dní. Pridajú sa ďalšie podiely dihydrochloridu metylesteru L-histidínu (0,100 g, 0,59 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,085 g, 0,40 mmol) a reakčná zmes sa trepe počas 2 dní, pridá sa IN NaOH (1 ml) a hnedý precipitát sa spojí filtráciou. Filtrát sa extrahuje dichlórmetánom (5 ml) a organický extrakt sa koncentruje a

127 spojí s vyššie uvedenou hnedou pevnou látkou. Surová zmes sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 ^tm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 18,920,5 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa metyl-(2S)-2-({4[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl] amino}-3-metoxy fenyl)-1 Hpyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]benzyl}amino)-3-(4#-4-imidazolyl)propanoát vo forme bielej pevnej látky, (0,029 g, 0,041 mmol): *H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,94 (1H, s), 8,35-8,38 (2H, m), 8,13 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,99-8,02 (1H, m), 7,90 (1H, d, J = 10,8 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,51 (1H, s), 7,397,45 (5H, m), 6,78 (1H, bs), 3,96 (3H, s), 3,82 (1H, d, J = 14,0 Hz), 3,59 (3H, s), 3,47 (1H, t, J = 6,4 Hz), 2,80-2,89 (2H, m) a 1,91 (3H, s); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 11,15 min. MS: MH⁺ 704,2.

Príklad 17

AH-{4-[4-amino-l -(4-{[(2-metoxy ety l)amino]metyl} fenyl)-l//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-y 1]-2-metoxyfenyl }-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid

Zmes Nl-{4-[4-amino-l-(4-formy lfeny l)-lH-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3yl]-2-metoxy fény l}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,075 g, 0,14 mmol), 2-metoxyetylamínu (0,018 g, 0,24 mmol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,106 g, 0,500 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 24 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez Acrodisc syringe-tip filter a purifikuje preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 15,0-16,2 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa Nl-{4-[4-amino-l-(4-{[(2-metoxyetyl)amino]metyl}fenyl)-lH-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej látky (0,010 g, 0,016 mmol): *H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,94 (1H, d, J = 4,0 Hz), 8,35-8,37 (2H, m), 8,16 (2H, d, J = 8,0 Hz), 8,01 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,90 (1H, d, J = 10,0 Hz), 7,75 (1H, d, J = 8,0 Hz),

128

7,52 (2Η, d, J = 8,0 Hz), 7,45 (IH, s), 7,40 (IH, d, J = 8,8 Hz), 3,96 (3H, s), 3,80 (2H, s), 3,42-3,45 (2H, m), 3,25 (2H, m) a 2,70-2,71 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil 08, 5 μιη, 100 Ä, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,23 min. MS: MH 610,2.

Príklad 18

NI-(4-{4-amino·-1 -[4-{([2-(dimetylamino)etyl] amino} mety l)fenyl]-l Hpyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxy fény l)-2-fluór-4(triŕluórmetyl)benzamid

Zmes NI -{4-[4-amino-l -(4-formylfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 2) (0,080 g, 0,14 mmol), N,N-dimetylaminoetylamínu (0,03 ml) a triacetoxyborohydridu sodného (0,100 g, 0,472 mmol) v dichlóretáne (1,4 ml) sa trepe pri izbovej teplote počas 24 hodín, pridá sa IN NaOH (1 ml) a reakčná zmes sa koncentruje, rozpustí v DMF (2 ml), filtruje cez Acrodisc syringe-tip filter a purifikuje RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 20-80% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min); frakcie eluujúce pri 16,5-17,8 minút sa spoja, koncentrujú a lyofilizujú, čím sa získa NI-(4-{4-amino-l-[4-{([2-(dimetylamino)etyl]amino}metyl)fenyl]-lN-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme bielej pevnej iátky (0,020 g, 0,032 mmol): *H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,94 (IH, d, J = 4,4 Hz), 8,35-8,37 (2H, m), 8,15 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,01 (IH, t, J = 7,8 Hz), 7,90 (IH, d, J = 10,4 Hz), 7,75 (IH, d, J = 7,6 Hz), 7,50 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,45 (IH, s), 7,40 (IH, d, J = 8,0 Hz), 3,96 (3H, s), 3,77 (2H, s), 2,59 (2H, t, J = 6,6 Hz), 2,35 (2H, t, J = 6,6 Hz) a 2,12 (6H, s); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,85 min. MS: MH⁺ 623,2.

Príklad 19

NI -{4-[4-amino- l-(2-hydroxyetyl)-lN-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl}-2-fluór-4-(trífluórmetyl) benzamid

129

Zmes 2-(4-amino-3-j ód-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-l-yl)-l-etanolu (medziprodukt 3) (0,120 g, 0,393 mmol), Nl-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (0,190 g, 0,433 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,045 g, 0,039 mmol) a uhličitanu sodného (0,100 g, 0,943 mmol) v DME (3,9 ml) a vode (3,9 ml) sa zahrieva pri teplote 85°C počas 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a organické rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou (20 ml) a éterom (20 ml), suší vo vákuu, čím sa získa /Vl-{4-[4amino-l-(2-hydroxyetyl)-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl}-2fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid vo forme hnedej pevnej látky (0,125 g, 0,254 mmol): *H NMR (de-DMSO, 400 ΜΗζ): δΗ 9,89 (IH, d, J = 4,0 Hz), 8,31 (IH, d, J=8,0Hz), 8,25 (IH, s), 7,99 (IH, t, J=7,4Hz), 7,89 (IH, d, J= 10,4 Hz), 7,75 (IH, d, J=8,0Hz), 7,34 (IH, s), 7,31 (IH, d, J=8,4 Hz), 4,89 (IH, s), 4,40 (2H, t, J = 5,6 Hz), 3,94 (3H, s) a 3,86 (2H, t, J = 5,6 Hz); RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril -0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 9,85 min. MS: MH⁺ 491.

Príklad 20

N2-{4-[4-amino-l-(2-hydroxyetyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid

Zmes 2-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl)-l-etanolu (medziprodukt 3) (0,364 g, 1,19 mol), N2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,485 g, 1,19 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,138 g, 0,119 mmol) a uhličitanu sodného (0,303 g, 2,86 mmol) v DME (12 ml) a vode (12 ml) sa zahrieva pri teplote 85°C počas 4 hodín, potom ochladí na izbovú teplotu. DME sa odstráni vo vákuu a výsledný precipitát sa spojí filtráciou a premyje vodou (50 ml) a éterom (50 ml), čím sa získa N2-{4-[4-amino-l-(2-hydroxyetyl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl}-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid vo forme hnedej pevnej látky (0,459 g, 1,00 mmol): *H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,44 (IH, s), 8,26 (IH, s), 8,12 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,70 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (IH, d, J = 8,4 Hz), 7,29-7,41 (6H, m), 7,15 (IH, t, J = 7,4 Hz),

130

4,90 (IH, t, J = 5,8 Hz), 4,41 (2H, t, J = 5,8 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s) a 3,86 (2H, q, J = 5,9 Hz); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,52 min. MS: MH 458,2.

Príklad 21

7V2-(4-{ 4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)etyl]-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3yl}-2-metoxyfenyl)-1 -metyl-l//-2-indolkarboxamid-trimaleát

Zmes 2-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(l-metyl-l//-2-indolyl)karbonyl]amino} -fenyl)-l//-pyrazolo [3,4-í/] pyrimidín-1-y 1] ety 1-metánsulfonátu (medziprodukt 4) (0,265 g, 0,495 mmol), A-metylpiperazínu (0,065 ml, 0,58 mmol) a trietylamínu (0,10 ml, 0,74 mmol) v DMF (5 ml) sa zahrieva pri teplote 70°C počas 20 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a rozpúšťadlo odstráni vo vákuu. Pridá sa voda (25 ml) a výsledný precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou (25 ml) a éterom (50 ml), suší vo vákuu, čím sa získa hnedá pevná látka, ktorá sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu. Príslušné frakcie sa spoja a koncentrujú, čím sa získa /V2-(4-{4-amino-l-[2-(4mety lpiperazino)etyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]py rimidí n-3-y 1}-2-metoxy fenyl)-1 metyl-1//-2-indolkarboxamid vo forme béžovej pevnej látky (0,084 g, 0,16 mmol): *H NMR (dó-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,44 (IH, s), 8,26 (IH, s), 8,11 (IH, d, J = 8,4 Hz), 7,70 (IH, d, J = 8,4 Hz), 7,29-7,35 (4H, m), 7,15 (IH, t, J = 7,4 Hz), 4,46 (2H, t, J = 6,8 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 2,80 (2H, t, J = 6,6 Hz), 2,49-2,50 (2H, tienený píkom DMSO), 2,23-2,26 (4H, m), 2,12 (3H, s) a 0,97-0,99 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,24. MS: MH⁺ 540,3.

Do zmesi /V2-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)etyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fenyl)-1 -metyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,082 g, 0,15 mmol) v horúcom acetáte (2 ml) sa pridá roztok kyseliny maleínovej (0,053 g, 0,46 mmol) v horúcom acetáte (1 ml), čím okamžite vznikne precipitát. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a

131 precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom (5 ml), suší vo vákuu, Čím sa získa /V2-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)etyl]-17/-pyrazolo[3,4ó/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-17/-2-indolkarboxamid-írÍmaleát vo forme béžovej pevnej látky (0,090 g, 0,10 mmol): ^JH NMR (dô-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,45 (IH, s), 8,27 (IH, s), 8,12 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,29-7,36 (4H, m), 7,15 (IH, t, J = 7,4 Hz), 6,17 (6H, s), 4,50 (2H, t, J = 6,4 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,10-3,20 (4H, m), 2,92-2,95 (4H, m), 2,74 (3H, s) a 2,32-2,37 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,48 min. MS: M⁺ 540,3.

Priklad 22

N2-{4-[4-amino-l-(2-morfolinoetyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl}-1 -metyl- 1/7-2-indolkarboxamid-dimaleát

Do zmesi 2-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(l-metyl-l/7-2-indolyl)karbony ljamino} fenyl)-1/7-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidín-1-yl] etyl-metánsulfonátu (medziprodukt 4) (0,200 g, 0,373 mmol), trietylamínu (0,052 ml, 0,37 mmol) a jodidu sodného (0,056 g, 0,37 mmol) v DMF (5 ml) sa pridá morfolín (0,039 ml, 0,45 mmol). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 60°C počas 60 hodín. Pridá sa morfolín (0,100 ml, 1,15 mmol) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 80°C počas 30 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje vo vákuu. Pridá sa voda (5 ml) a výsledný precipitát sa spojí filtráciou, premyje vodou (5 ml) a éterom (10 ml), suší vo vákuu, čím sa získa hnedá pevná látka, ktorá sa čistí (2x) chromatografiou na silikagéli (elúciou s 20% MeOHCH2CI2). Príslušné frakcie sa spoja a koncentrujú, čím sa získa béžová pevná látka, ktorá sa trituruje z éteru a suší vo vákuu, čím sa získa A2-{4-[4-amino-l(2-morfolinoetyl)-l/7-pyrazoIo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl1/7-2-indolkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,048 g, 0,054 mmol): ^!H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,44 (IH, s), 8,26 (IH, s), 8,11 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,70 (IH, d, J = 7,6 Hz), 7,58 (IH, d, J = 7,6 Hz), 7,29-7,35 (4H, m), 7,15 (IH, t, J = 7,6 Hz), 4,48 (2H, t, J = 6,4 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,503,53 (4H, m), 2,82 (2H, t, J = 6,2 Hz) a 2,47-2,51 (4H, m); ); RP-HPLC

132 (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril -0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,02 min. MS: M⁺ 527,3.

Do zmesi V2-{4-[4-amino-l-(2-morfolinoetyl)-177-pyrazolo[3,4č/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,048 g, 0,091 mmol) v horúcom acetáte (2 ml) sa pridá roztok kyseliny maleínovej (0,021 g, 0,18 mmol) v horúcom acetáte (1 ml), čím okamžite vznikne precipitát. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť aa izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou, premyje etylacetátom (5 ml), suší vo vákuu, čím sa získa V2(4-[4-amino-l-(2-morfolinoetyl)-177-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}- 1-metyl-1/7-2-indolkarboxamid-dimaleát vo forme svetlohnedej pevnej látky (0,030 g, 0,039 mmol): ^]H NMR (d₆-DMSO, 400 MHz): δΗ 9,45 (1H, s), 8,31 (1H, s), 8,15 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,31-7,35 (4H, m), 7,16 (1H, t, J = 7,4 Hz), 6,17 (4H, s), 4,72-4,73 (2H, m), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,72-3,79 (4H, m) a 3,10-3,30 (6H, tienené piky vody); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). R_t 11,08 min. MS: M⁺ 527,3.

Príklad 23

V2-[4-(4-amino - l-{2-[(2-hydroxyetyl)amino]etyl}-l//-pyrazolo[3,4ďjpyrimidí n-3-yl)-2-metoxy fenyl]-1 -metyl- 1/7-2-indolkarboxamid-monomaleát

Zmes 2-[4-amino-3-(3 -metoxy-4- {[(1 -metyl- 177-2-indoly 1) kar b onyl] amino} fenyl)-l77-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín- 1-y 1] ety 1-metánsulfonátu (medziprodukt 4) (0,080 g, 0,15 mmol), etanolamínu (0,05 ml, 0,82 mmol), trietylamínu (0,021 ml, 0,15 mmol) a jodidu sodného (0,021 g, 0,15 mmol) v DMF (2,5 ml) sa zahrieva pri teplote 70°C počas 15 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje. Pridá sa voda (5 ml) a výsledný precipitát sa spojí filtráciou a premyje vodou (5 ml). Surová pevná látka sa čistí chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou s 20% MeOH-CH₂Cl₂). Príslušné frakcie sa spoja a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa V2-[4-(4amino-l-{ 2-[(2-hydroxyety ljamino] etyl}-177-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3 -y f)-2133 metoxyfenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,009 g, 0,02 mmol). RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 9,39 min. MS: M⁺ 501,3.

Do horúceho roztoku /V2-[4-(4-amino-l-{2-[(2-hydroxyetyl)amino]etyl}1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl)-2-metoxy fenyl]-1 -mety 1-1//-2-indolkarboxamidu (0,009 g, 0,02 mmol) v etylacetáte (2 ml) sa pridá roztok kyseliny maleínovej (0,005 g, 0,04 mmol) v etylacetáte (0,5 ml). Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou a suší vo vákuu, čím sa získa JV2-[4-(4-amino-l-{2-[(2-hydroxyetyl)amino]etyl}-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidmonomaleát vo forme bielej pevnej látky (0,009 g, 0,014 mmol): *H NMR (dóDMSO, 400 MHz): δΗ 9,45 (IH, s), 8,69-8,74 (2H, bs), 8,31 (IH, s), 8,14 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (IH, d, J = 8,0 Hz), 7,59 (IH, d, J=8,4 Hz), 7,32-7,36 (4H, m), 7,15 (IH, t, J = 7,4 Hz), 6,07 (2H, s), 5,28 (IH, t, J = 4,2 Hz), 4,71 (2H, t, J = 5,8 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,65-3,67 (2H, m), 3,50-3,60 (2H, m) a 3,10-3,20 (2H, m); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%- 100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 9,97 min. MS: M⁺501,3.

Príklad 24 //2-(4-{4-amino-l-[2-(dimetylamino)etyl]-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-y 1}2-metoxyfenyl)-1 -metyl-1H-2-indolkarboxamid-monomaleát

Zmes 2-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(1-metyl-l//-2-indolyl)karbonyl] amino}-fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-1-yl] ety 1-metánsulfonátu (medziprodukt 4) (0,080 g, 0,15 mmol), dimetylamínu (2,0 M v THF, 0,07 ml, 0,15 mmol), trietylamínu (0,021 ml, 0,15 mmol) a jodidu sodného (0,021 g, 0,15 mmol) v DMF (2,5 ml) sa zahrieva v utesnenej banke pri teplote 70°C počas 15 hodín. Pridá sa ďalší roztok dimetylamínu (0,10 ml) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 70°C počas 20 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje vo vákuu. Pridá sa voda (5 ml) a výsledný precipitát sa spojí

134 filtráciou a purifikuje chromatografiou na stĺpci silikagélu (elúciou s 20% MeOH:CH₂Cl₂ až 10:30:60 Et₃N:MeOH:CH₂Cl₂). Príslušné frakcie sa spoja a koncentrujú, čím sa získa N2-(4-{4-amino-l-[2-(dimetylamino)etyl]-l/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l -metyl-1/7-2-indolkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,009 g, 0,02 mmol). RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,52. MS: M⁺ 485,2.

Do horúceho roztoku N2-(4-{4-amino-l-[2-(dimetylamino)etyl]-l/7pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fenyl)-1 -metyl-1/7-2-indolkarboxamidu (0,009 g, 0,02 mmol) v etylacetáte (2 ml) sa pridá roztok kyseliny maleinovej (0,005 g, 0,04 mmol) v etylacetáte (1 ml). Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou a suší vo vákuu, čím sa získa N2-(4-{4-amino-l-[2-(dimetylamino)etyl]-l/7-pyrazolo[3,4d] pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1 -metyl- 1/7-2-indolkarboxamid-monomaleát vo forme bielej pevnej látky (0,005 g, 0,008 mmol): ’H NMR (dé-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,46 (1H, s), 8,32 (1H, s), 8,15 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,71 (1H, d, J = 7,6 Hz), 7,59 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,32-7,35 (4H, m), 7,16 (1H, t, J - 7,4 Hz), 6,06 (2H, s), 4,75 (2H, t, J = 6,0 Hz), 4,04 (3H, s), 3,96 (3H, s), 3,65 (2H, t, J = 5,6 Hz) a 2,88 (6H, s); RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). R_t 10,08 min. MS: M⁺ 485,2.

Príklad 25

N2-(4-{ 4-amino-l-[2-(l 77-l-imidazolyl)etyl]-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3yl}-2-metoxy fény 1)-1-metyl-1/7-2-indolkarboxamid-tri maleát

Zmes 2-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{ [(1 - metyl - 177-2-indo lyl)karb onyl] amino}-fenyl)- l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l -yl]etyl-metánsulfonátu (medziprodukt 4) (0,080 g, 0,15 mmol), imidazolu (0,011 g, 0,15 mmol), trietylamínu (0,021 ml, 0,15 mmol) a jodidu sodného (0,021 g, 0,15 mmol) v DMF (2,5 ml) sa zahrieva pri teplote 70°C počas 15 hodín. Pridá sa imidazol (0,011 g, 0,15 mmol) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 70°C počas 60 hodín. Reakčná

135 zmes sa ochladí na izbovú teplotu a koncentruje vo vákuu. Pridá sa voda (5 ml) a výsledný precipitát sa spojí filtráciou, čím sa získa béžová pevná látka, ktorá sa vytrepáva v horúcom etylacetáte, potom sa nechá pomaly vychladnúť na izbovú teplotu. Filtrát sa koncentruje, čím sa získa V2-(4-{4-amino-l-[2-(l//-limidazolyl)etyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl1 //-2-indolkarboxamid (0,034 g, 0,067 mmol): RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 15 cm; 5%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,45 min. MS: M⁺ 508,2.

Do horúcej zmesi V2-(4-{4-amino-l-[2-(l//-l-imidazolyl)etyl]-l//py razolo [3,4-t/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxy fenyl)-1 -mety 1-1 //-2-indolkarboxamidu (0,034 g, 0,067 mmol) v etylacetáte (2 ml) sa pridá roztok kyseliny maleínovej (0,016 g, 0,13 mmol) v etylacetáte (1 ml), čím sa okamžite vytvorí biely precipitát. Reakčná zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a precipitát sa spojí filtráciou a suší vo vákuu, čím sa získa V2-(4-{4-amino-l[2-( 1 H-\-imidazolyl) etyl]- l//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény 1)l-metyl-l//-2-indolkarboxamid-trimaleát vo forme žltej pevnej látky (0,011 g, 0,011 mmol): 'h NMR (de-DMSO, 400 MHz): ÔH 9,44 (1H, s), 8,90 (1H, s), 8,20 (1H, s), 8,12 (1H, d, J=8,0 Hz), 7,71 (1H, d, J=8,0 Hz), 7,58-7,63 (3H, m), 7,32-7,36 (2H, m), 7,24-7,26 (2H, m), 7,16 (1H, t, J = 7,6 Hz), 6,18 (6H, s), 4,85 (2H, t, J = 6,8 Hz), 4,71 (2H, t, J = 5,2 Hz), 4,04 (3H, s) a 4,00 (3H, s); RP-HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 100 Ä, 15 cm; 5%-100% acetonitril - 0,lM octan amónny v priebehu 15 min, 1 ml/min). Rt 10,35 min. MS: M⁺ 508,2.

Príklad 26

Vl-{4-[4-Amino-l-(4-oxocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid

Roztok 2-fluór-4-trifluórmetyl-l-benzénkarbonylchloridu (0,87 g, 3,83 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) sa pridá do zmesi pyridínu (15 ml) a 4-[4-amino3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l -yl]-l-cyklohexanónu (1,00 g, 2,56 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) pri teplote 0°C v priebehu 5 minút. Zmes sa mieša pri teplote 0°C počas 10 minút a pri izbovej teplote cez

136 noc. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Dichlórmetánová vrstva sa premyje nasýteným vodným roztokom chloridu amónneho (2x) a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, suší nad síranom horečnatým, filtruje a odparuje za zníženého tlaku, čím sa získa surový produkt. Surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu v systéme Isco, čím sa získa Al-{4-[4amino-l-(4-oxocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,95 g, 1,76 mmol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,99 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 5,27 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,70 (m, 2H), 2,47 (m, 4H), 2,17 (m, 2H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100Á, 250 x 4,6mm; 25%-100% acetonitril - 0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min). Rt 9,23 min. MS: MH⁺ 543.

Príklad 27

Cis-Nl -{4-[4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexyI)-177-pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín3-yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid: a

Príklad 28

7ran.y-Al-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4c/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid

Do zmesi Al-{4-[4-amino-l-(4-oxocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4a?]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,42 g, 0,78 mmol) a octovej kyseliny (0,11 ml, 1,86 mmol) v dichlóretáne (25 ml) sa pridá morfolín (0,08 ml, 0,93 mmol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 10 minút. Pridá sa triacetoxyborohydrid sodný (0,23 g, 1,09 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa voda (6 ml), potom hydrogénuhličitan sodný (0,38 g, 4,53 mmol). Zmes sa mieša počas 1 hodiny a organická vrstva sa separuje. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (20

137 ml). Spojené organické podiely sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a odparujú za zníženého tlaku, čím sa získa surový produkt. Surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu v systéme Isco, čím sa získa cis-Nl- {4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-l 77-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,23 g, 0,37 mmol) a 7ran5-771-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,09 g, 0,14 mmol) vo forme bielych pevných látok.

Dáta pre cz5-Vl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid: *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,83 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,62 (br, 4H), 1,57-2,55 (m, 10H); MS: MH⁺ 614.

Dáta pre rra«5-Vl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4ŕ7]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxy fenyl }-2-fluór-4-trifluórmety lbenzamid: *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,99 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 4,67 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,59 (br, 4H), 1,48-2,69 (m, 10H); MS: MH⁺ 614.

Príklad 29

Cz'5'-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3metoxy fenyl)-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-l -y l)cyklohexyl}amino)propanoát; a

Príklad 30

7Yan,s-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3metoxy fény 1)-177-pyrazolo [3,4-ŕ7]pyrimidín-1 -y 1] cyklohexyl }amino)propanoát

Podobným spôsobom prípravy ako cz'y-Vl-{4-[4-amino-l-(4morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2fluór-4-trifluórmetylbenzamidu a trans-Nl- {4- [4-amino-l-(4-morfolino138 cyklohexyl)-1//-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl }-2-fluór-4trifluórmetylbenzamidu sa získa cz'5-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4trifluórmety lbenzoyl] amino}-3-metoxy fény 1)-1//-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidí n-1 yl]cyklohexyl}amino)propanoát a /rfl«5-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4trifluórmety lbenzoyl] amino}-3-metoxy fény l)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidi n-1 yl]cyklohexyl}amino)propanoát vo forme bielych pevných látok.

Dáta pre cis-ety 1-3-( {4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmety lbenzoyl] amino} -3-metoxy fény 1)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-1-yl] cyklohexyl }amino)propanoát: *H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,90 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,23 (s, IH), 8,00 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,33 (s, IH), 7,30 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 4,37 (m, IH), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,76 (m, 2H), 2,32 (m, 2H), 1,88 (m, 2H), 1,67 (m, 4H), 1,16 (t, 3H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 7,92 min. MS: MH⁺ 644.

Dáta pre /rans-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{ [2-fluór-4-trifluórmetyl-benzoyl]amino}-3-metoxy fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-1-yl] cyklohexyl }amino)propanoát: ‘h NMR (DMSO-dô, 400 MHz) 09,89 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,24 (s, IH), 8,00 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,32 (s, IH), 7,29 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 4,68 (m, IH), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,82 (m, 2H), 2,46 (m, 5H), 1,91-2,07 (m, 6H), 1,18 (t, 3H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100Á, 250x4,6mm, 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 7,69 min. MS: MH 644.

Príklad 31

Cz's-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmety lbenzoyl] amino} -3metoxy fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-l -yl] cyklohexyl} amino)propánová kyselina

Zmes cis-ety 1-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-tri fluórmety lbenzoyl] amino}-3-metoxy-fenyl)-l //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidí n-1 -y 1] cyklohexyl }amino)propanoátu (0,23 g, 0,36 mmol), p-dioxánu (15 ml), hydroxidu draselného

139 (0,10 g, 1,81 mmol) a vody (1,5 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 3 hodín. Rozpúšťadlá sa odparujú a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa cis-3-( {4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-! //-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidín-l -yljcyklohexyl }amino)propánová kyselina (0,11 g, 0,18 mmol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9, 91 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 6,89 (br, 2H), 4,79 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 2,46-3,00 (m, 7H), 2,29 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,80 (m, 2H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 gm, 100Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 6,06 min. MS: MH⁺ 616.

Príklad 32

7^,ra«5'-3-({4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[2-metoxy-4-trifluórmetylbenzoyljamino } fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-lyljcyklohexyl) amino)propánová kyselina

Zmes Zríi«5-etyl-3-({ 4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórm ety lbenzoyljamino }-3-metoxyfenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín- 1-yl] cyklohexyl}amino)propanoátu (0,04 g, 0,06 mmol), p-dioxánu (4 ml), hydroxidu draselného (0,02 g, 0,31 mmol) a stopovýeh množstiev metanole a vody (0,4 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 1 hodiny. Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc pri teplote 80°C počas 4 hodín. Rozpúšťadlá sa odparujú a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa Zzans-3-({4-[4-amino-3-(3metoxy-4-{[2-metoxy-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl)amino)propánová kyselina (0,04 g, 0,06 mmol) vo forme bielej pevnej látky: ’H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,72 (s, 1H), 8,61 (d, 1H), 8,28 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,20 (s, 3H), 4,05 (s, 3H), 1,44-3,61 (m, 13H); RPHPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 0 8, 5 gm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 6,36 min. MS: MH⁺ 628.

140

Príklad 33

Ν1 - [4-(4-Amino-1//-pyrazolo [3,4-c/]pyrim idín-3-y l)-2-metoxy fenyl]-2-fluór-4trifluórmety lbenzamid

A. Al -[4-(4-Amino-1//-pyrazolo [3,4-</]py rimidín-3-yl)-2-metoxy fenyl]-2fluór-4-trifluórmety lbenzamid

Zmes 3-jód-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,10 g, 0,19 mmol), Al-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,13 g, 0,29 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,01 g, 0,01 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,06 mg, 0,48 mmol) vo vode (2 ml) a dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) sa zahrieva pri teplote 85°C cez noc. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Do zvyšku sa pridá voda a zmes sa extrahuje etylacetátom (3x). Spojené organické podiely sa premyjú nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a odparujú, čím sa získa hnedá pevná látka, ktorá sa čisti zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu v systéme Isco, čím sa získa 7V1 - [4-(4-amino-1-trity 1-1//-pyrazolo [3,4-rí]py rimidín-3-y 1)-2-metoxy fenyl]-2fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,12 g, 0,17 mmol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,25 (d, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,24 (m, 15H), 3,90 (s, 3H); MS: MH⁺ 689.

B. Al -[4-(4-Amino-1//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2fluór-4-trifluórmetylbenzamid

Zmes Al - [4-(4-amino-1-trityl-1//-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-3-yl)-2metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (2,10 g, 1,75 mmol), 6N vodnej kyseliny chlorovodíkovej (10 ml), p-dioxánu (10 ml) a etanolu (8 ml) sa zahrieva pri teplote 50°C počas 6 hodín. Zmes sa filtruje a pevný podiel sa premyje etanolom, suší vo vákuovej sušiarni cez víkend a purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu, čím sa získa Al-[4-(4-amino-l//pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,35 g, 0,78 mmol). Filtrát sa koncentruje a purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu a preparatívnou HPLC, čím sa získa

141 rovnaký produkt 7\71-[4-(4-amino-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-3-yl)-2metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,67 g, 1,51 mmol) vo forme bielej pevnej látky: NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 13,58 (s, 1H), 9,90 (dd,

1H), 8,30 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,05 (t, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,24 (d, 1H), 3,94 (s, 3H); MS: MH⁺ 447.

Príklad 34 /Vl-[4-(4-Amino-l-tetrahydro-2//-4-pyranyl-l//'-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid

Dietylazodikarboxylát (0,07 ml, 0,45 mmol) sa pridá do zmesi 7/l-[4-(4amino-1 H-pyrazolo [3,4-tf]pyrimidín-3-y l)-2-metoxy fenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,10 g, 0,22 mmol), trifenylfosfínu (0,12 g, 0,45 mmol) a tetrahydro-4//-pyrán-4-olu (0,04 g, 0,34 mmol) v tetrahydrofuráne (5 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa tetrahydro-4//-pyrán-4-ol (0,01 g, 0,11 mmol), trifenylfosfín (0,04 g, 0,15 mmol) a dietylazodikarboxylát (0,02 ml, 0,15 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 5 hodín. Rozpúšťadlá sa odparujú a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa 7/1-[4-(4-amino-l-tetrahydro-2//-4-pyranyl-177-py razolo [3,4-č/]pyrimidín-3-yl)2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,03 g, 0,06 mmol) vo forme bielej pevnej látky: ‘h NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,31 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,95 (m, 1H), 4,02 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,56 (t, 2H), 2,22 (m, 2H), 1,89 (m, 2H); MS: MH⁺ 531.

Príklad 35

7Vl-{4-[4-Amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid

A. 4-(4-Amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l -yl)-2-cyklopentén-l-ol

142

Zmes tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,04 g, 0,03 mmol), 3-jód-l/Zpyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu (0,30 g, 1,14 mmol) a dimetylsulfoxidu (3 ml) sa mieša pri izbovej teplote v tme počas 2 minút a ochladí sa na teplotu 0°C. Roztok 2,4í7-dihydro-la//-cyklopenta[Z>]oxirénu (0,14 g, 1,72 mmol) v tetrahydrofuráne (3 ml) sa pridá do zmesi pri teplote 0°C a mieša pri teplote 0°C počas 3 hodín. Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc a purifikuje preparatívnou HPLC, čím sa získa 4-(4-amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-l-yI)-2-cyklopentén-l-ol (0,24 g, 0,70 mmol) vo forme bielej pevnej látky: RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100Á,

250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 4,23 min. MS: MH⁺ 344.

B. /Vl-{4-[4-Amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l/7-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid

Zmes 4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l -yl)-2-cyklopentén-l-olu (0,12 g, 0,35 mmol), N\-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,23 g, 0,53 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,02 g, 0,02 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,11 g, 0,88 mmol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (6 ml) a vody (3 ml) pri teplote 85°C počas 6 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa ΛΠ -{4-[4-amino-l -(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-lH-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,18 g, 0,34 mmol) vo forme bielej pevnej látky: 'h NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ) δ 9,89 (dd, IH), 8,31 (d, IH), 8,26 (s, IH), 8,00 (t, 1Η), 7,88 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,32 (s, 1Ή), 7,29 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 6,09 (d, IH), 5,93 (d, IH), 5,76 (m, IH), 5,31 (m, IH), 4,74 (m, IH), 3,94 (s, 3H), 2,84 (m, IH), 2,02 (m, IH); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 8,50 min. MS: MH⁺ 529.

143

Príklad 36

Al-{4-[4-Amino-1 -(3-hydroxycyklopentyl)-l A-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl]2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid

Zmes Al -{4-[4-amino-l -(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l A-pyrazolo[3,4c/]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxyfenyl }-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,10 g, 0,19 mmol) a 10% paládia na aktívnom uhlí (0,03 g) v etanole (10 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou vodíka cez noc. Zmes sa filtruje a filtrát sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa Al-{4-[4-amino-l-(3hydroxycyklopentyl)-l A-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-metoxy fenyl}-2fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,07 g, 0,13 mmol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,91 (dd, IH), 8,31 (d, IH), 8,24 (s,

IH), 8,00 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,34 (s, IH), 7,30 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 5,17 (m, IH), 4,97 (m, IH), 4,22 (m, IH), 3,94 (s, 3H), 1,79-2,41 (m,

6H); MS: MH⁺ 531.

Príklad 37

4-(4-Amino-3-{4-[(l A-2-indolylkarbonyl)amino]-3-metoxyfenyl}-l Hpyrazolo[3,4-J]pyrimidín-1 -y l)hexahy dropyridínium-acetát

Oxalylchlorid (0,06 ml, 0,60 mmol) sa pridá do roztoku indol-2karboxylovej kyseliny (0,88 g, 0,546 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) a tetrahydrofuránu (5 ml) pri teplote 0°C, potom sa pridá A,A-dimetylformamid (3 kvapky z 0,1 ml striekačky) a zmes sa mieša pri teplote 0°C počas 10 minút a pri izbovej teplote počas 20 minút. Rozpúšťadlá a prebytok činidiel sa odparujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa prevedie do dichlórmetánu (2 ml) a výsledný roztok (1,25 ml) sa pridá do roztoku ierc-butyl-4-[4-amino-3-(4amino-3-metoxy fenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-l -yl]-l -piperidínkarboxylátu (0,12 g, 0,27 mmol) a pyridínu (0,4 ml) v dichlórmetáne (1 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 2 hodín. Pridá sa trifluóroctová kyselina (1 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 2 hodín. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa 4-(4144 amino-3-{4-[(l //-2-indolylkarbonyl)amino]-3-metoxyfenyl}-1 H-pyrazolo [3,4ď]pyrimidín-l-yl)hexahydropyridínium-acetát (0,07 g, 0,14 mmol) vo forme bielej pevnej látky: ’h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,85 (br, 1H), 9,45 (s,

1H), 8,24 (d, 1H), 8,12 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,24-(t, 1H), 7,09 (t, 1H), 4,77 (m, 1H), 3,97 (s, 3H),

3,11 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,84 (m, 2H); MS: MH⁺

483.

Príklady 38-53

Použitím rovnakého spôsobu prípravy ako u 4-(4-amino-3-{4-[(lH-2indolylkarbonyl)amino]-3-metoxy fenyl} -1 H-pyrazolo [3,4-d] pyrimidí n-1yl)hexahydropyridínium-acetátu sa pripravia nasledujúce zlúčeniny

145

Štruktúra	MS: MH+	HPLC Rt (min) (Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min)	Príklad č.
x Λ Q	567	6,97	38
'Ôq* Λ 0	486	5,89	39
.3 <A- 0	497	6,28	40
.'ý /k Q	513	5,61	41

146

.Á 0 ľ o	497	6,39	42
n y=^ w 0	Λ-
á	-F	512	6,22	43
N u J N 0	Λ-
		483	5,73	44
*Vn o'r\° N ΊγΑι x <N*	O 1
\ _ θΌ Cn xX° n y^ TO ô '-N*	0 A„-	513	7,78	45
h		501	8,23	46
i«? O.J 0 n y—7 N'S<» II J N Sr~N 0	Λ-

147

&	517	8,7	47
ό γΛ N Ô 0	A
	,α	517	8,73	48
Cn m
n yP N''S-'λ. U Λ N b	Λ-
	b	513	7,83	49
\-N θ,/ο
n y~f w 0	Λ-
έ		511	9,07	50
, „r °y-i °
N O Ó5 StV Q	Λ-
O		497	8,37	51
, u °z^S 0 ó> N w	Λ-

148

Príklad 54

4-[4-Amino-3-(4-{[(1-ety 1-1/7-2-indolyl)karbonyl] amino}-3-metoxy fény 1)-1//pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-l-yljhexahydropyridínium-acetát

Hydrid sodný, 60% suspenzia v minerálnom oleji (0,006 g, 0,15 mmol). sa pridá do roztoku N2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l//-2-indolkarboxamidu (0,08 g, 0,14 mmol) v N,N-dimetylformamide (1,0 ml) pri teplote 0°C. Zmes sa mieša pri teplote 0°C počas 10 minút a pri izbovej teplote počas 20 minút. Pridá sa roztok etyljodidu (0,02 g, 0,14 mmol) v N,N-dimetylformamide (0,5 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa etyljodid (0,01 g, 0,07 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa trifluóroctová kyselina (3 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 24 hodín. Rozpúšťadlá a prebytok činidiel sa odparujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa 4-[4-amino-3-(4-{[(l-etyl-l//-2-indolyl)karbonyl]amino}-3metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l -yljhexahydropyridínium-acetát (0,05 g, 0,09 mmol) vo forme bielej pevnej látky: ’h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ. 9,43 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,14 (d, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,34 (s, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,15 (t, 1H), 4,96 (m, 1H), 4,62 (q, 2H), 3,96 (s,

149

3Η), 3,00 (m, 2H), 2,28 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,33 (t, 3H); MS: MH⁺ 511.

Príklady 55 a 56

Použitím rovnakého spôsobu prípravy ako u 4-[4-amino-3-(4-{[(l-etyllH-2-indolyl)karbonyl]amino}-3-metoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-lyljhexahydropyridínium-acetátu sa pripravia nasledujúce zlúčeniny

Štruktúra	MS: MH+	HPLC Rt (min) (Hypersil 0 8, 5 pm, 100 Ä, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min)	Príklad č.
A? A- '“N	523	9,12	55
, A ó° A? Λ· Q	540	6,03	56

Príklad 57

1-(1 -metyl-3-piperidyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-1 H-py razolo [3,4-c/]pyrimidín-4amín-acetát

Racemický roztok 3-jód-l-(l-metyl-3-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-amínu (0,050 g, 0,00014 mol) v dimetoxyetáne (2,5 ml) a vode (5 ml) sa nechá reagovať so 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,033 g, 0,00015 mol), uhličitanom sodným (0,037 g, 0,00037 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,016 g, 0,000014 mol) pri teplote 80°C počas 18 hodín. Organické rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Surová látka sa čisti

150 preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa l-(l-metyl-3-piperidyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín-acetát vo forme bielej pevnej látky (0,040 g, 0,00009 mol). ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,10- 7,22 (m, 5H), 4,74-4,84 (m, IH), 2,94 (dd, IH), 2,79 (d, IH), 2,36 (t, IH), 2,22 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,86-2,01 (m, 3H), 1,76-1,84 (m, IH), 1,60-1,75 (m, IH); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,74 min; MS: MH⁺ 401.

Príklad 58

- [1 -(2-metoxy ety l)-3-piperidyl]-3-(4-fenoxy fenyl)-1//-pyrazolo [3,4í/jpyrimidín-4-amin-acetát BSF 4058532F.

Racemický roztok 3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-l//pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,050 g, 0,00012 mol) v dimetoxyetáne (2,5 ml) a vode (5 ml) sa nechá reagovať so 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,029 g, 0,00014 mol), uhličitanom sodným (0,033 g, 0,00031 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,014 g, 0,00001 mol) pri teplote 80°C počas 20 hodín. Organické rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Surová látka sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa 1 -[1 ~(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)l//-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amín-acetát vo forme bielej pevnej látky (0,038 g, 0,00007 mol), 'h NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,24 (s, IH), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,09- 7,22 (m, 5H), 4,71-4,82 (m, IH), 3,44-(t, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,04 (dd, IH), 2,91 (d, IH), 2,47-2,60 (m, 3H), 1,94-2,09 (m, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,75-1,84 (m, IH), 1,57-1,74 (m, IH); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á,

151 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,26 min; MS: MH⁺ 445.

Príklad 59

Trflns-l-{4-[4-amino-3-(3-chlór-4-{[4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino}fenyl)1 H-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-1-yl] cyklohexyl}-4-metylhexahy dropyrazíndiiumdimaleát

A. 7’erc-butyl-A-(4-bróm-2-chlórfenyl)karbamát

Roztok 4-bróm-2-chlóranilínu (5,00 g, 0,0242 mol) v tetrahydrofuráne (50 ml) sa nechá reagovať s 1,0 M roztokom bis(trimetylsilyl)amidu sodného v tetrahydrofuráne (53,2 ml, 0,0532 mol). Zmes sa mieša 15 minút pri izbovej teplote. Pridá sa di-ferc-butyl-dikarbonát (6,34 g, 0,0290 mol) a roztok sa mieša počas 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu heptán/etylacetát (4:1). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa ŕerc-butyl-N-(4-bróm-2chlórfenyl)karbamát vo forme bielej pevnej látky (4,214 g, 0,0137 mol). ^!H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,75 (s, IH), 7,71 (d, IH), 7,54 (d, IH), 7,50 (dd, IH), 1,46 (s, 9H); TLC (heptán/etylacetát 4: 1) Rf 0,54.

B. 7erc-butyl-/V-[2-chlór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]karbamát

Zmes ferc-butyl-/V-(4-bróm-2-chlórfenyl)karbamátu (2,10 g, 0,00685 mol), diboronpinakolesteru (2,09 g, 0,00822 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferro-cen]dichlórpaládnatého komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,17 g, 0,00021 mol) a octanu draselného (2,02 g, 0,02055 mol) v N,Ndimetylformamide (50 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 6 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa trituruje heptánom (70 ml) a výsledné pevné látky sa odstránia filtráciou cez vrstvu Celitu (R) 521. Heptán sa odstráni vo vákuu, čím sa získa ferc-butyl-/V-[2-chlór-4(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát vo forme šedej

152 pevnej látky (1,93 g, 0,00546 mol): ’h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,65 (s, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,56 (dd, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,29 (s, 12H).

C. 7rtzn.y-/Yrc-butyl-/V-(4-{4-amino-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]1//-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-3-yl] -2-chlórfenyljkarbamát

Zmes tr ans-3 -j ó d-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cykl ohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4ó/Jpyrimidín-4-amínu (2,20 g, 0,00498 mol), terc-butyl-/V-[2-chlór-4-(4,4,5,5tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,93 g, 0,00548 mol), uhličitanu sodného (1,32 g, 0,01245 mol) v 1,2-dimetoxyetáne (50 ml) a vode (100 ml) sa intenzívne mieša a pridá sa tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakčná zmes sa mieša 6 hodín pri teplote 80°C, po ktorých sa pridá ďalší tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakčná zmes sa mieša ďalších 16 hodín pri teplote 80°C. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (100 ml) a nasýtený vodný hydrogénuhličitan sodný (200 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (3 x 75 ml). Spojené organické fázy sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (90:10:0,5). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa /rnns-Zerc-butyl7V-(4-{4-amino-1 -[4-(4-mety lpiperazinojcyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)karbamát vo forme bielej pevnej látky (1,993 g, 0,00368 mol): ’h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,76 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,57 (dd, 1H), 4,58-4,71 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 1,89-2,61 (m, 15H), 1,49 (s, 9H), 1,40-1,48 (m, 2H); TLC (dichlórmetán/metanol = 90: 10) Rf 0, 13. MS: M⁺ 541.

D. Z’raz7s-3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4~(4-metylpiperazino)cyklohexyl]1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4-amín

7rans-ŕerc-butyI-jV-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)karbamát (1,993 g, 0,00368 mol) sa pridá do roztoku 20% trifluóroctovej kyseliny v dichlórmetáne. Zmes sa mieša počas 2 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (50 ml) a premyje 1,0 M vodným roztokom

153 hydroxidu sodného (2 x 25 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa /ra«5^,-3-(4-amino3-chlórfeny 1)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4</]pyrimidín-4-amín (1,564 g, 0,00355 mol) vo forme bielej pevnej látky, 'h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,45 (d, IH), 7,31 (dd, IH), 6,92 (d, IH), 4,57-4,63 (m, IH), 2,23-2,55 (m, 9H), 2,14 (s, 3H), 1,89-2,08 (m, 6H), 1, 381,52 (m, 2H); TLC (dichlórmetán/metanol = 90:10) Rf 0,08; MS: MH⁺ 441.

E. 7rtfns-//l-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)-4-(trifluórmetyl)benzamiddimaleát

Do zmesi 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridíne (5 ml) pri teplote -10°C sa po kvapkách pridá 4-(trifluórmetyl)-lbenzénkarbonylchlorid (0,188 g, 0,00090 mol), pričom teplota sa udržuje pod -5°C. Zmes sa mieša pri teplote -10°C počas 15 minút, potom pri izbovej teplote počas 18 hodín. Po pridaní IN vodného roztoku hydroxidu sodného (1,0 ml) sa zmes mieša jednu hodinu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (15 ml) a spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa purifikovaná voľná báza (0,032 g, 0,000052 mol). Voľná báza sa rozpustí v absolútnom etanole (4 ml) a zahrieva k refluxu. Po pridaní roztoku kyseliny maleínovej (0,018 g, 0,000156mol) v absolútnom etanole (1 ml) sa roztok refluxuje ďalších 15 minút. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a výsledný precipitát sa filtruje, premyje minimálnym množstvom absolútneho etanolu. Precipitát sa suší vo vákuu, čím sa získa trans-N\-(4-{4amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3yl}-2-chlórfenyl)-4-(trifluórmetyl)benzamid-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,020 g, 0, 00002 mol): ’h NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,42 (s, IH),

154

8,26 (s, IH), 8,20 (d, 2H), 7,96 (d, 2H), 7,80-7,83 (m, 2H), 7,46 (dd, IH), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,13 (s, 4H), 4,61-4,73 (m, IH), 2,52-2,64 (m, 4H), 2,232,46 (m, 5H), 2,16 (s, 3H), 1,902,10 (m, 6H), 1,42-1,56 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,97 min; MS: MH⁺ 613.

Príklad 60

Trans-NI -(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl }-2-chlórfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamid-dimaleát

Do zmesi 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]lN-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridíne (5 ml) pri teplote -10°C sa po kvapkách pridá 4-(trifluórmetoxy)-l-benzénkarbonylchlorid (0,203 g, 0,00091 mol), pričom teplota sa udržuje pod -5°C. Zmes sa mieša pri teplote -10°C počas 15 minút, potom pri izbovej teplote počas 18 hodín. Po pridaní IN vodného roztoku hydroxidu sodného (1,0 ml) sa zmes mieša jednu hodinu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (15 ml) a spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa purifikovaná voľná báza (0,034 g, 0,000054 mol). Voľná báza sa rozpustí v absolútnom etanole (4 ml) a zahrieva k refluxu. Roztok kyseliny maleínovej (0,019 g, 0,000162 mol) v absolútnom etanole (1 ml) sa pridá a roztok sa refluxuje počas 15 minút. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a výsledný precipitát sa filtruje, premyje minimálnym množstvom absolútneho etanolu. Precipitát sa suší vo vákuu, čím sa získa ŕrurcs-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-lN-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)4-(trifluórmetoxy)benzamid-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,020 g, 0,00002 mol): *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,29 (s, IH), 8,26 (s, IH), 8,14 (d, 2H), 7,78-7,87 (m, 2H), 7,68 (dd, IH), 7,57 (d, 2H), 6,80-7,20 (b, 2H),

155

6,11 (s, 4H), 4,65-4,77 (m, 1H), 2,38-3,60 (m, 12H), 1,95-2,15 (m, 6H), 1,511,68 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 15,41 min; MS; MH⁺ 629.

Príklad 61

7ra«.y-3-(3-chlór-4-{[(5-metyl-2-furyl)metyl]amino}fenyl)-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-e7]pyrimidín-4-amínacetát

Zmes 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlóretáne (20 ml) sa nechá reagovať s 5-metyl-2-furfuralom (0,052 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridom sodným (0,336 g, 0,00159 mol) pri izbovej teplote. Pridajú sa ďalšie 2 ekvivalenty triacetoxyborohydridu sodného (0,672 g, 0,00318 mol) vo dvoch 24 hodinových intervaloch. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi chloroform (25 ml) a nasýtený vodný hydrogénuhličitan sodný (50 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje chloroformom (2 x 25 ml). Spojené organické fázy sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa /ra«s-3-(3-chlór-4-{[(5-metyl-2fury l)mety ljamino} fény 1)-1-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1/7pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amín-acetát vo forme bielej pevnej látky (0,129 g, 0,00022 mol): ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ. 8,20 (s, 1H), 7,51 (d, 1H), 7,39 (dd, 1H), 6,93 (d, 1H), 6,20 (d, 1H), 6,14-(t, 1H), 5,98 (d, 1H), 4,55-4,66 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,18-2,61 (m, 10 H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 5H), 1,37-1,53 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,48 min; MS: MH⁺ 535.

156

Príklad 62 rran5-3-{3-chlór-4-[(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino]fenyl}'l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín-acetát

Zmes 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlóretáne (20 ml) sa nechá reagovať s 2-chlór-6-fluórbenzaldehydom (0,076 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridom sodným (0,336 g, 0,00159 mol) pri izbovej teplote. Pridajú sa ďalšie tri ekvivalenty triacetoxyborohydridu sodného (1,008 g, 0,00477 mol) v troch 24 hodinových intervaloch, po ktorých zreaguje všetka východisková látka. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi chloroform (25 ml) a nasýtený vodný hydrogénuhličitan sodný (50 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje chloroformom (2 x 25 ml). Spojené organické fázy sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitrl - 0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa /ra«s-3-{3-chlór-4-[(2-chlór-6fluórbenzyl)amino]fenyl}-l - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín-acetát vo forme bielej pevnej látky (0,074 g, 0,0001 1 mol): 'h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,52 (d, 1H), 7,35-7,47 (m, 4H), 6,99 (d, 1H), 5,75 (t, 1H), 4,55-4,66 (m, 1H), 4,57 (d, 2H), 2,25-2,61 (m, 11 H), 2,16 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 4H), 1,37-1,53 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril0,lM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 15,97 min; MS: MH⁺ 583.

Príklad 63

77ύζ«0'-ΛΊ -(4-{4-amino-1 -[1-(1 H-2-imidazolylkarbonyl)-4-piperidyl]-lŕ/pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxy fenyl )-(trans)-2-fenyl-1 cyklopropánkarboxamid-maleát

157

Zmes N1 -{4-[4-amino-l-(4-pipendyl)-l-pyrazolo[3,4-(7]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamidu (0,200 g, 0,00041 mol) v toluéne (10 ml) sa nechá reagovať s 5/7,10/7-diimidazo[l,5-a:l,5-ď]pyrazín5,10-diónom (0,040 g, 0,00021 mol) a refluxuje sa počas 18 hodín. Pridá sa ďalší ekvivalent 5/7,10/7-diimidazo[l,5-ň:l,5-<7]pyrazín-5,10-diónu a zmes sa refluxuje ďalších 6 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 0 8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril - 0,lM octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa voľná báza (0,103 g, 0,00017 mol). Voľná báza sa rozpustí v absolútnom etanole (10 ml) a zahrieva k refluxu. Po pridaní roztoku kyseliny maleinovej (0,030 g, 0,00034 mol) v absolútnom etanole (1 ml) sa zmes refluxuje počas 15 minút, po ktorých vznikne precipitát. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a výsledný precipitát sa filtruje, premyje minimálnym množstvom absolútneho etanolu. Precipitát sa suší vo vákuu, čím sa získa trans-N\ -(4-{4-amino-1 -(1-(1/7-2-imidazolylkarbonyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény l)-(tra«5)-2-feny 1-1-cyklopropánkarboxamid-maleát vo forme bielej pevnej látky (0,055 g, 0,00008 mol): *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,63 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,22 (d, 1H), 8,00 (b, 1H), 7,74-(b, 1H), 7,43-7,48 (m, 1H), 7,16-7,33 (m, 7H), 6,21 (s, 2H), 4,97-5,13 (m, 1H), 2,91-3,47 (m, 4H), 2,53-2,65 (m, 1H), 2,30-2,45 (m, 1H), 2,07-2,26 (m, 2H), 1,95-2,07 (m, 2H), 1,45-1,50 (m, 1H), 1,28-1,32 (m, 1H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,17 min; MS: MH⁺ 578.

Príklad 64

Cis-N\-(4-{4-amino-l-[4-(2-aminoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(trans')-2-fenyl-lcyklopropánkarboxamid-acetát

A. Cis- N\ -(4-{4-amino-l-[4-(kyanometyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fenyl)-(/^,r/3«j)-2-fenyl-l -cyklopropánkarboxamid

158

Zmes cis-Nl -{4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-(ŕrans)-2-fenylcyklopropán-1 -karboxamidu (0,605 g, 0,0012 mol), chloristanu lítneho (0,189 g, 0,0018 mol) a kyanidu draselného (0,116 g, 0,0018 mol) v acetonitrile (60 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas dvoch dní, ochladí sa na izbovú teplotu, zriedi vodou (30 ml) a extrahuje dietyléterom (3 x 30 ml). Spojené organické fázy sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu dichlórmetán/metanol (95:5). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa cz's-jVT-(4-{4-amino-l-[4(kyanometyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyl)-(/ra«5)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,602 g, 0,0011 mol): ’h NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,64 (s, IH, 8,23 (t, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,25 (s, IH), 7,17 (m, 4H), 4,61-4,62 (m, IH), 3,91 (s, IH), 2,66 (s, 2H), 2,55-2,62 (m, IH), 2,31-2,45 (m, 3H), 1,58-1,89 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, IH), 1,28-1,38 (m, IH); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 15,21 min; MS: MH⁺ 538.

B. Cz5-Al-(4-{4-amino-l-[4-(2-aminoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3 -y 1}-2-metoxy fenyl)-(/rtzzzs)-2-feny 1-1cyklopropánkarboxamid-acetát

Do roztoku cis-Nl-(4-{4-amino-1 -[4-(kyanomety l)-4-hydr oxy cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény l)-(/ro/75)-2-feny 1-1 cyklopropán-karboxamidu (0,200 g, 0,00037 mol) v metanole (20 ml) a hydroxidu amónneho (1 ml) sa pridá Raneyov nikel (0,5 ml). Zmes sa mieša 18 hodín pod atmosférou vodíka (1 atm). Reakčná zmes sa filtruje cez Celit a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-0,1M octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa cisNl -(4-{4-amino-l -[4-(2-aminoetyl)-4-hydr oxy cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(/rczzzs)-2-fenyl-1 -cyklopropánkarboxamidacetát vo forme bielej pevnej látky (0,045 g, 0,000083 mol): 'h NMR (DMSO159 de, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22-8,24 (m, 1H), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,65-4,67 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,84-2,91 (m, 1H), 2,53-2,55 (m, 1H), 2,33-2,40 (m, 4H), 1,85 (s, 3H), 1,35-1,80 (m, 9H), 1,30-1,33 (m, 1H); RPHPLC (Delta Pak 0 8, 5 gm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,29 min; MS: MH⁺ 444.

Príklad 65

Cis-Nl -(4-{4-amino-l-[4-(2-amino-2-oxoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(fraHs)-2-fenyl-lcyklopropánkarboxamid

Do intenzívne miešaného roztoku sa pri izbovej teplote pridá cis-Nl-(4{4-amino-l-[4-(kyanometyl)-4-hydroxycyklohexylj-l//-pyrazolo[3,4-Jjpyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(ŕra«.s)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid (0,200 g, 0,00037 mol) v dimetylsulfoxide (4 ml) a uhličitan draselný (0,216 g, 0,00156 mol). Po kvapkách sa pridá 30% vodný roztok peroxidu vodíka (0,6 ml), pričom teplota sa udržuje konštantná. Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 32 hodín. Pridá sa voda (20 ml), čím vznikne precipitát, ktorý sa filtruje. Precipitát sa premyje vodou a suší vo vákuu. Pevný podiel sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 0 8, 8 gm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa c/s-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(2-amino-2-oxoetyl)-4hydroxycyklohexylj-1//-pyrazolo [3,4-</jpyrimidín-3-y 1}-2-metoxyfeny 1)(ŕra«s)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,117 g, 0,00021 mol): *Η NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,43-7,48 (m, 1H), 7,15-7,35 (m, 7H), 7,05-7,10 (m, 1H), 4,97 (s, 1H), 4,61-4,71 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,24 (s, 2H), 1,55-1,81 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, 1H), 1,28-1,36 (m, 1H); RPHPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,05 min; MS: MH⁺ 556.

160

Príklad 66

Cz's-Al-[4-(4-amino-l-{4-[(dimetylamino)metyl]-4-hydroxycyklohexyl}-l//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-(z‘ra«ó')-2-fenyl-lcyklopropánkarboxami d-acetát

Do roztoku cis Al-{4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-l//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-(/ra/?s)-2-fenylcyklopropán-lkarboxamidu (0,190 g, 0,000302 mol) vo 2-propanole (10 ml) sa pridá 2 M roztok dimetylamínu v metanole (0,91 ml) a výsledná zmes sa zahrieva pri teplote 65°C v tlakovej nádobe počas 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-0,lM octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa czs-Al-[4-(4-amino-l-{4[(dimetylamino)metyl]-4-hydroxycyklohexyl}-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3yl)-2-metoxyfenyl]-(Zrans)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-acetát vo forme bielej pevnej látky (0,109 g, 0,000177 mol), ‘h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22-8,24 (m, 1H), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,56-4,68 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,28 (s, 6H), 2,24 (s, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,63-1,78 (m, 4H), 1,44-1,58 (m, 3H), 1,28-1,36 (m, 1H); RP-HPLC (Delta Pak C18,5pm, 300Ä, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 13, 54 min; MS: MH⁺ 556.

Príklad 67

7?an.y-.A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyr azolo [3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(27?)tetrahydro-l//-2-pyrolkarboxamid-acetát

Roztok trans-3-(4-amino-3-metoxyfény 1)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00046 mol) v N,Ndimetylformamide (10 ml) sa nechá reagovať s 1 -hydroxy-7-azabenzotriazolom (0,068 g, 0,00050 mol), 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochloridom (0,132 g, 0,00069 mol), D-Boc-prolínom (0,108 g, 0,00050

161 mol) a 7V,7V-diizopropyletylamínom (0,184 g, 0,00142 mol) pri izbovej teplote počas 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (10 ml) a 5% vodný roztok kyseliny citrónovej (20 ml). Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2 x 10 ml). Spojené organické fázy sa premyjú nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (15 ml), sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa mieša v 20% trifluóroctovej kyseline v dichlórmetáne počas 6 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 5% izokraticky počas piatich minút, potom 5%-40% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa /ra«j-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy-fenyl)-(2Ä)tetrahydro-l/f-2-pyrolkarboxamid-acetát (0,096 g, 0,00016 mol) vo forme bielej pevnej látky. ^!H NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ) δ 10,33 (s, IH), 8,45 (d, IH), 8,22 (s, IH), 7,25 (s, IH), 7,21 (d, IH), 4,58-4,69 (m, IH), 3,93 (s, 3H), 3,77 (dd, IH), 2,96-3,04 (m, IH), 2,74-2,84 (m, IH), 2,47-2,58 (m, 5H), 2,23-2,45 (m, 5H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,88-2,11 (m, 7H), 1,78-1,88 (m, IH), 1,601,69 (m, 2H), 1,39-1,54 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 8,47 min; MS: MH⁺ 534.

Príklad 68

4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-lpyridíniumolát

A. 4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)-l-pyridíniumolát

Roztok 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (5,00 g, 0,019 mol) v N,N-dimetylformamide (50 ml) sa nechá reagovať so 60% hydridom sodným v oleji (0,92 g, 0,023 mol) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša počas 15 minút a pridá sa 4-nitropyridín-7V-oxid (5,37 g, 0,038 mol). Zmes sa zahrieva pri teplote 100°C počas 18 hodín. Vzniknutý precipitát sa filtruje, premyje N,N162 dimetylformamidom a etylacetátom, čím sa získa 4-(4-amino-3-jód-lHpyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-l-yl)-l-pyridíniumolát (3,79 g, 0,011 mol) vo forme hnedej pevnej látky: ’h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,38 (s, IH), 8,34 (d, 2H), 8,24 (d, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 7,36 min; MS: MH⁺ 355.

B. 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrímidín-l-yl]-lpyridíniumolát

Suspenzia 4-(4-amino-3-jód- lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l -y 1)-1 pyridíniumolátu (0,140 g, 0,00040 mol) v dimetoxyetáne (7 ml) a vode (15 ml) sa nechá reagovať so 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,093 g, 0,00043 mol), uhličitanom sodným (0,105 g, 0,00099 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,046 g, 0,00004 mol) pri teplote 80°C počas 18 hodín. Pevné látky sa filtrujú, čím sa získa 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl]1-pyridíniumolát (0,138 g, 0,00035 mol) vo forme hnedej pevnej látky. Tento podiel (0,040 g, 0,00010 mol) sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Ä, 25 cm; 40% izokraticky počas piatich minút, potom 40%-100% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 30 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa produkt 4-[4amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l -yl]-l-pyridíniumolát vo forme bielej pevnej látky (0,013 g, 0,00003 mol), 'h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ. 8,44 (s, IH), 8,34-8,41 (m, 4H), 7,77 (d, 2Η), 7,45 (t, 2Η), 7,13-7,24 (m, 5H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitrilΟ,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,66 min; MS: MH⁺ 397.

Príklad 69

3-(4-fenoxyfenyl)-l -(4-pyridyl)-lH-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amín

Suspenzia 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-lyl]-l-pyridíniumolátu (0,100 g, 0,00025 mol) a 10% paládia na aktívnom uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) v octovej kyseline (3 ml) sa nechá reagovať

163 s monohydrátom fosfornanu sodného (0,033 g, 0,00038 mol) pri teplote 60°C. Po 2 hodinách sa pridá ďalšie 10% paládium na aktívnom uhlí (0,016 g, 0,00002 mol). Zmes sa mieša 18 hodín, po ktorých sa pridá ďalšie 10% paládium na aktívnom uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) a monohydrát fosfornanu sodného (0,033 g, 0,00038 mol). Zmes sa mieša počas ďalších 24 hodín. Zmes sa filtruje cez Celit®521, premyje kyselinou octovou. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 0 8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky počas piatich minút, potom 40%-100% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 30 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-pyridyl)-lHpyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amín (0,020 g, 0,00005 mol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,71 (d, 2H), 8,46 (s, 1H), 8,39 (dd, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,46 (t, 2H), 7,13-7,25 (m, 5H); RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril - 0,lM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 17,31 min; MS: MH⁺ 381.

Príklad 70

N2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l -metyl-l//-2-indolkarboxamid

A. N2-{ 4-[4-amino-1-(4-pyridyl)-1//-pyrazolo [3,4-íť]pyrimidín-3-y l]-2metoxyfenyl}-l -metyl-1H-2-indolkarboxamid

Suspenzia 4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-1-yl)-1-pyridíniumolátu (0,500 g, 0,0014 mol) v dimetoxyetáne (15 ml) a vode (30 ml) sa nechá reagovať s N2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-l-metyl-ΙΗ-2-indolkarboxamidom (0,631 g, 0,00155 mol), uhličitanom sodným (0,374 g, 0,0035 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,163 g, 0,00014 mol) pri teplote 80°C počas 18 hodín. Pevné látky sa filtrujú a premyjú vodou. Pevný podiel sa mieša v etylacetáte počas 18 hodín a filtruje, premyje etylacetátom, suší vo vákuu, čím sa získa surový 4-[4-amino-3-(3metoxy-4-[(l-metyl-l//-2-indolyl)-karbonyl]aminofenyl)-l//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolát (0,523 g, 0,0010 mol) vo forme hnedej

164 pevnej látky: RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 10,92 min; MS: MH⁺ 507.

B. V2-{4-[4-amino- l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl} -1 -metyl-1//-2-indolkarboxamid

Suspenzia 4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(l-metyl-l//-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolátu (0,200 g, 0,00039 mol) a 10% paládia na aktívnom uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) v octovej kyseline (3 ml) sa nechá reagovať s monohydrátom fosfornanu sodného (0,063 g, 0,00059 mol) pri teplote 60°C počas 2 hodín. Pridá sa ďalšie 10% paládium na aktívnom uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) a fosfornan sodný (0,045 g, 0,00042 mol ) a zmes sa mieša počas 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa mieša v metanole počas 4 hodín. Zmes sa filtruje cez Celit®521 a premyje metanolom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C 18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 50% izokraticky počas piatich minút, potom 50%-100% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa V2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl-1//-2-indolkarboxamid (0,020 g, 0,00004 mol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,48 (s, 1H) 8,72 (d, 2H), 8,47 (s, 1H), 8,42 (d, 2H), 8,20 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 7,36 (s, 1H) 7,34-(t, 1H), 7,16 (t, 1H), 4,05 (s, 3H), 3,99 (s, 1H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%- 85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 19,50 min; MS: MH⁺ 491.

Príklad 71 l-(6-amino-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín;

a

165

Príklad 72

3-(4-fenoxyfenyl)-l-(2-pyridyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín

Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00079 mol) v N-metyl-pyrolidinóne (10 ml) sa nechá reagovať so 60% hydridom sodným v oleji (0,032 g, 0,00079 mol). Po skončení uvoľňovania plynu sa zmes mieša pri izbovej teplote počas 30 minút a pridá sa 5-bróm-2nitropyridín (0,161 g, 0,00079 mol) a zmes sa zahrieva pri teplote 40°C počas 18 hodín. Pridá sa ďalší 60% hydrid sodný v oleji (0,032 g, 0,00079 mol) a zmes sa mieša ďalšie 2 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (15 ml) a vodu (25 ml). Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2x15 ml). Spojené organické podiely sa premyjú soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu heptán/etylacetát (1: 2) ako mobilnou fázou, čím sa získajú dva produkty. Menej polárna zlúčenina, 1 -(6-nitro-3-pyridyl)-3-(4-fenoxy fenyl)-l Hpyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín, sa suspenduje v absolútnom etanole (10 ml) a N,N-dimetylformamide (5 ml) a pridá sa 10% paládium na aktívnom uhlí (0,007 g). Zmes sa mieša pod atmosférou vodíka (balónik) počas 18 hodín. Zmes sa filtruje cez vrstvu Celitu®521, premyje absolútnym etanolom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa l-(6-amino-3-pyridyl)-3-(4fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (0,007 g, 0,00002 mol) vo forme bielej pevnej látky. *H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ. 8,53 (d, IH) 8,31 (s, IH), 7,97 (dd, IH), 7,73 (d, 2H), 7,44-(t, 2H), 7,12-23 (m, 5H), 6,60 (d, IH), 6,20 (s, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 15,38 min; MS: MH⁺ 396.

Polárnej šia zlúčenina, 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(5-bróm-2-pyridyl)-l Hpyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín, sa suspenduje v absolútnom etanole (10 ml) a N,N-dimetylformamide (5 ml) a pridá sa 10% paládium na aktívnom uhlí (0,007 g). Zmes sa mieša pod tlakom vodíka v balóniku počas 18 hodín. Zmes sa filtruje cez vrstvu Celitu®521 a premyje absolútnym etanolom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(2-pyridyl)-l H166 pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (0,030 g, 0,00007 mol) vo forme bielej pevnej látky. ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,60-8,64 (m, IH) 8,37 (s, IH), 8,20 (d, IH), 8,038,08 (m, IH), 7,76 (d, 2H), 7,41-7,49 (m, 3H), 7,12-7,23 (m, 5H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 16,32 min; MS: MH 381.

Všeobecný spôsob redukčnej aminácie s použitím frnns-3-(4-aminofenyl)-l -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-4amínu ako východiskovej látky a aldehydu je opísaný v príklade 73. 2-Metoxy3-formyl-pyridín z príkladu 73 môže byť nahradený inými aldehydmi s cieľom pripojenia ďalších Z*⁰⁰ skupín.

Príklad 73

7’rn«5-3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín-diacetát

Zmes tra«í-3-(4-amino-fény 1)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (1 ekviv.), 2-metoxy-3-formyl-pyridínu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne počas 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, zháša nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty. Nasledujúce dve zlúčeniny sa pripravia podľa vyššie uvedeného spôsobu: /r<3Hs-3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín-diacetát. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 8,06 (dd, IH), 7,61 (d, IH), 7,35 (d, 2H), 6,95 (dd, IH), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,26 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min). Rt 12,07 min. MS: MH⁺ 528.

167

Príklad 74 rran5-3-{4-[(l//-2-indolylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín-acetát

7rtf«s-3-{4-[(l//-2-indolymetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín-acetát sa pripraví podľa spôsobu z príkladu 569 s výnimkou toho, že namiesto 2-metoxy-3-formylpyridínu sa použije 2-formyl-indol. *H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 11,08 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,44 (d, 1H), 7,36 (d, 2H), 7,32 (d, 1H), 7,01 (t, 1H), 6,95 (t, 1H), 6,81 (d, 2H), 6,47 (t, 1H), 6,35 (s, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,45 (d, 2H), 2,62,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,74 min. MS: MH⁺ 536.

Príklad 75 rrans-3-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl}anilino)metyl]-l,2-dihydro-2-pyridinón-diacetát

7’rn«í-3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-6/]pyrimidín-4-amín-diacetát (0,105 g, 0,000199 mol) sa rozpustí v 30% HBr v kyseline octovej (4 ml) a zmes sa refluxuje počas 1,5 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa trans-3 -[(4-{4-amino-1- [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}anlino)metyl]-l,2-dihydro-2-pyridinón-diacetát (0,0204 g, 0,0000324 mol) vo forme bielej pevnej látky. *H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,29 (m, 4H), 6,68 (d, 2H), 6,40 (t, 1H), 6,15 (m, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,09 (d, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 9,40 min. MS: MH⁺ 514.

168

Všeobecný spôsob redukčnej aminácie s trans-3-(4-amino-3metoxy fenyl)-1-[4-(4-metyIpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4í/jpyrimidín-4-amínom a aldehydom ako východiskovými látkami je opísaný v príklade 76:

Príklad 76

7>a«.y-5-[(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyanilino)metyl]-4-chlór-l ,3-tiazol-2-amín-diacetát

Zmes tr ans-3-(4-amino-3-metoxy fény 1)-1 -[4 -(4-mety lpiper azino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (1 ekviv.), 2-amino-4-chlór-5formyl-1,3-tiazolu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne počas 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, zháša nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril0,1 M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa požadovaný produkt. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,19 (s, 2H), 7,06 (m, 3H), 6,68 (d, IH), 5,76 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,30 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 2,62,2 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Ä, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 11,59 min. MS: MH⁺ 583.

Zlúčeniny podľa príkladov 77 a 78 sa pripravia podľa spôsobu z príkladu 76:

Príklad 77

Trans-3-(3-metoxy-4-[(5-metyl-3-izoxazolyl)m etyl] amino fenyl)-1-[4-(4mety lpiperazino)cy klohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-4-amín-acetát 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,04 (m, 2H), 6,68 (d, IH), 6,16 (s, IH), 5,86 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,37 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H),

169

2,40 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 11,53 min. MS: MH⁺ 532.

Príklad 78

7ran5-3-{3-metoxy-4-[(l,3-tiazol-4-ylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín-acetát ’H NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ) δ 9,08 (s, IH), 8,19 (s, IH), 7,47 (s, IH), 7,06 (s, IH), 7,03 (d, IH), 6,68 (d, IH), 5,76 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,52 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 11,17 min.MS: MH⁺ 534.

Všeobecný spôsob syntézy benzotetrahydrofuránových derivátov s trans3-(4-aminofenyl)-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-amínom a 2-hydroxybenzaldehydom ako východiskovými látkami je uvedený v príklade 79.

Príklad 79

7Vnns-3-4-[(4,6-dichlór-2,3-dihydrobenzo[Z>]furán-3-yl)amino]fenyl-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4-amín-acetát

7’ra«5^,-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín (1 ekviv., 0,0001-0,0002 mol) a 2-hydroxy4,6-dichlórbenzaldehyd (1 ekviv.) sa zmiešajú v absolútnom etanole (5 ml) a miešajú pri izbovej teplote počas 48 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa suší cez noc, čím sa získa zodpovedajúci imín, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie. Trimetylsulfoxónium-jodid (2,5 ekviv.) sa rozpustí v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a naraz sa pridá 60% disperzia hydridu sodného v parafíne (2,5 ekviv.). Po 10 minútach sa pridá roztok imínu v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej

170 teplote pod atmosférou dusíka počas 2,5 hodiny. Roztok sa naleje do ľadovej vody (50 ml) a extrahuje dichlórmetánom (2 x 40 ml). Spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 5 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril0,lM octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa finálna zlúčenina.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,14 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,80 (d, 2H), 6,56 (d, 1H), 5,34 (m, 1H), 4,80 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,42 (dd, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril0,lM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 16,03 min.

MS: MH⁺ 593.

Príklad 80

7ra«s-3-{4-|i(4-chlór-2,3-dihydrobenzo[Z>]furán-3-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4mety lpiperazinojcyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-4-amín-acetát

7^,ra«5'-3-{4-[(4-chlór-2,3-dihydrobenzo[á]furán-3-yl)amino]fenyl}-l-[4(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín-acetát sa pripraví spôsobom podľa príkladu 79 s výnimkou toho, že 2-hydroxy-4,6dichlórbenzaldehyd sa nahradí 2-hydroxy-4-chlórbenzaldehydom.

‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ. 8,20 (s, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,28 (t, 1H), 6,99 (d, 1H), 6,89 (d, 1H), 6,81 (d, 2H), 6,53 (d, 1H), 5,34 (m, 1H), 4,74 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,38 (dd, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,42 min.

MS: MH⁺ 559.

Príklad 81

7ra«s-3-4-[(4,6-dichlór-2,3-dihydrobenzo[/>]furán-3-yl)amino]-3-metoxyfenyll-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínacetát

171

7ζ·αη.ϊ-3-4-[(4,6-dichlór-2,3-dihy drobenzo[/>]furán-3-yI)amino]-3-metoxyfenyll-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l 77-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4-amínacetát sa pripraví spôsobom podľa príkladu 79 s výnimkou toho, že trans-3-(4amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexy 1] -177-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-4-amín sa použije namiesto ŕran,s-3-(4-aminofenyl)-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,11 (m, 4H), 6,80 (d, 1H), 5,45 (m, 2H), 4,84 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,42 (dd, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 16,85 min.

MS: MH⁺ 623.

Medziprodukt 5

7’erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-177-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl]-lpiperidínkarboxylát

A. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl] aminofenyl)-l 77pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát

Zmes benzyl-/V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (9,54 g, 0,027 mol), ŕerc-butyl-4-(4-amino-3-jód-177-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylátu (10,0 g, 0,0225 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (1,56 g, 0,00135 mol) a uhličitanu sodného (5,97 g, 0,0563 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (120 ml) a vody (60 ml) pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu (150 ml) a dichlórmetán (150 ml); organické fázy sa premyjú soľankou, sušia sa síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje v dietyléteri a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa ŕerc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-l-yl]-l -piperidínkarboxylát (10,1 g, 0,0186 mol) vo forme bielej pevnej látky.

172 *H NMR (DMS0-d6, 400 MHz) δ 10,00 (s, IH), 8,23 (s, IH), 7,64 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,36 (m, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,90 (m, IH), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 18,58 min.

B. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-ly I] -1 -piperidínkarboxylát

Do roztoku ferc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l -y 1] -1 -piperidí nkarboxylátu (5,0 g, 0,0092 mol) v tetrahydrofuráne (150 ml) sa pridá 10% paládium na aktívnom uhlí (1,0 g) a reakčná zmes sa hydrogenuje v Parrovej trepačke počas 96 hodín. Katalyzátor sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu a filtrát sa koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje v «-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa Zerc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4c/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát (2,51 g, 0,0061 mol) vo forme belavej pevnej látky.

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,42 (s, 2H), 4,90 (m, IH), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,18 min.

Príklady 82-94

Všeobecný spôsob redukčnej aminácie a po nej nasledujúce odstránenie BOC skupiny, ktoré sa použije na prípravu zlúčenín podľa príkladov 82-94, je uvedený nižšie.

Postup:

Zmes /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l/ŕ-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (medziprodukt 5) (1 ekviv.), aldehydu (1,2 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne počas 16 hodín. Reakčná zmes sa

173 koncentruje za zníženého tlaku, trituruje v etylacetáte a nechá reagovať so 4N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej. Výsledná zmes sa mieša počas 1 hodiny, vodná fáza sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa separujú. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty.

Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia podľa vyššie uvedeného spôsobu:

Príklad 82

3- {4-[(benzo[6]furán-2-ylmetyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-4-amín-diacetát ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,23 (m, 2H), 6,85 (d, 2H), 6,80 (s, 1H), 6,66 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,51 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0 IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,37 min.

MS: MH⁺ 440.

Príklad 83

3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl]aminofenyl)-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-4-amín-diacetát *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,96 (dd, 1H), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,27 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 11,06 min. MS: MH⁺ 431.

174

Príklad 84

3-(4-[(5-mety l-2-tienyl)mety ljamino fény 1)-1-(4-piperidyl)-1//-pyr azolo [3,4<7jpyrimidín-4-amín-diacetát ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,85 (d, 1H), 6,77 (d, 2H), 6,64 (d, 1H), 6,54-(t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,41 (d, 2H), 3,07 (m, 2H),

2,65 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,85 min.

MS: MH⁺ 420.

Príklad 85

3-{4-[(2-furylmetyl)aminojfenyl}-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4Jjpyrimidín-4-amín-di acetát 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,77 (d, 2H), 6,46 (t, 1H), 6,39 (d, 1H), 6,34 (d, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,31 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 10,96 min.

MS: MH⁺ 390.

Príklad 86

3-[4-(benzylamino)fenyl]-l -(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-ŕ/jpyrimidín-4-amíndiacetát *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,34 (m, 6H), 7,24-(t, 1H), 6,73 (d, 2H), 6,60 (, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,33 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,32 min.

MS: MH⁺ 400.

175

Príklad 87

3-{4-[(2-metoxybenzyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-amín-diacetát ‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 7,24 (m, 2H), 7,01 (d, lh), 6,90 (t, IH), 6,70 (d, 2H), 6,41 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,28 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,73 min.

MS: MH⁺ 430.

Príklad 88

3-{4-[(3-metoxybenzyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4ť/]pyrimidín-4-amín-diacetát *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 7,25 (t, IH), 6,96 (m, 2H), 6,81 (d, IH), 6,72 (d, 2H), 6,59 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,30 (d, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,38 min.

MS: MH⁺ 430.

Príklad 89

3-{4-[(4-metoxybenzyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo [3,4ri]pyrimidín-4-amín-diacetát ^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,35 (m, 4H), 6,90 (d, 2H), 6,72 (d, 2H), 6,51 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,25 (d, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,07 (m, 2H),

2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

176

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O, 1M octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,37 min.

MS: MH⁺ 430.

Príklad 90 l-(4-piperidyl)-3-(4-[3-(trifluórmetyl)benzyl]aminofenyl)-lH-pyrazolo[3,4č/]pyrimidín-4-amín-diacetát *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,71 (m, 2H), 7,58 (m, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,08 min.

MS: MH⁺ 468.

Príklad 91

-(4-piperidyl)-3-(4-[4-(trifluórmetyl)benzyl]aminofenyl)-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-4-amín-diacetát *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,23 min.

MS: MH⁺ 468.

Príklad 92

3-(4-[(2-metyl-l,3-tiazol-4-yl)metyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-lHpyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín-diacetát \ΊΊ

NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,41 (d, 2H), 7,26 (s, IH), 6,73 (d, 2H), 6,51 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,36 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,70 (s, 3H),

2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 10,13 min.

MS:MH⁺ 421.

Príklad 93

3-{4-[(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-amín-diacetát 'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,42 (m, 4H), 7,26 (t, IH), 6,83 (d, 2H), 6,27 (t, IH), 4,72 (m, IH), 4,37 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,32 min.

MS:MH⁺ 452.

Príklad 94

3-(4-[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-lApyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín-diacetát *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,61 (m, 3H), 7,38 (d, 2H), 6,73 (d, 2H), 6,68 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,47 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,83 min.

MS: MH⁺ 486.

178

Príklad 95

3-{4-[(benzo[ô]furán-2-y lmetyl)aminoj-3-metoxy fenyl}-1-(4-piperidy 1)-1//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín-diacetát

Zmes terc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (g, mol), benzofurán-2karbaldehydu (0,046 g, 0,000315 mol), triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,00042 mol) a octovej kyseliny (0,024 ml, 0,00042 mol) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne počas 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, trituruje v etylacetáte (4 ml) a nechá reagovať so 4N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej (1 ml). Výsledná zmes sa mieša počas 1 hodiny, vodná fáza sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa separujú. Organické fázy sa koncentrujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa 3-{4-[(benzo[b]furán-2-ylmetyl)amino]-3-metoxy fenyl}-1-(4piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-4-amín-diacetát (0,027 g, 0,0000457 mol).

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,55 (m, 2H), 7,22 (m, 2H), 7,06 (m, 2H), 6,80 (d, IH), 6,75 (s, IH), 5,80 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,57 (d, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,83 min.

MS: MH⁺ 470.

Príklad 96

3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ó]furán-3-ylamino)fenyl]-l-(4-piperidyl)-l//~ pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amín-acetát

Salicylaldehyd (0,063 g, 0,000513 mol) a terc-butyl-4-[4-amino-3-(4aminofeny 1)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-1 -y 1 ] -1 -piperidínkar boxy lát (0,200

179 g, 0,000489 mol) sa zmiešajú v absolútnom etanole (5 ml) a miešajú pri izbovej teplote počas 48 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa suší cez noc, čím sa získa /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-{[-l-(2hy droxy fény l)metylidén]amino} fény 1)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-l-yl]-l piperidínkarboxylát, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie. Trimetylsulfoxónium-jodid (0,269 g, 0,00122 mol) sa rozpustí v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a naraz sa pridá 60% disperzia hydridu sodného v parafíne (0,049 g, 0,00122 mol). Po 10 minútach sa pridá roztok íerc-butyl-4[4-amino-3-(4-{[l-(2-hydroxy fenyl)metylidén]amino} fenyl)-1//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-l-yl]-l-piperidinkarboxylátu v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka počas 2,5 hodín. Roztok sa naleje do ľadovej vody (70 ml) a extrahuje dichlórmetánom (2x50 ml). Spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku, čím sa získa surový /erc-butyl-4-{4-amino-3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ž>]furán-3-ylamino)fenyl]-l//pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl}-l-piperidínkarboxylát, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie. Surová zlúčenina sa rozpustí v etylacetáte (5 ml) a nechá reagovať so 4N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej (1,5 ml). Výsledná emulzia sa intenzívne mieša počas 1 hodiny; vodná vrstva sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa separujú. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa 3-[4-(2,3dihy drobenzo [Z>]furán-3-ylamino)fenyl]~ 1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4-amín-acetát (0,038 g, 0,000078 mol) vo forme bielej pevnej látky *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,41 (m, 3H), 7,25 (t, 1H), 6,89 (m, 4H), 6,51 (t, 1H), 5,35 (m, 1H), 4,79 (m, 2H), 4,27 (m, 1H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Ä, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 11,38 min.

MS: MH⁺ 428.

180

Príklad 97

7r íz«.s-3-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4</]pyrimidín-3-yl}anilino)-l//-lk⁶-benzo [d] izotiazol-1,1 -dión-acetát

A. 3-chlór-l//-l Z⁶-benzo[ŕ/]izotiazol-l ,1 -dión

Sachar9n (10,0 g, 0,0546 mol) a chlorid fosforečný (12,6 g, 0, 060mol) sa zahrievajú pri teplote 170°C počas 1,5 hodiny. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, potom suspenduje v dietyléteri (200 ml). Precipitát sa spojí filtráciou, premyje dietyléterom a suší, čím sa získa 3-chlór-l//-lX⁶benzo[ŕ/]izotiazol-l,1-dión (3,7 g, 0,0184 mol) vo forme bielej pevnej látky, ktorá sa použije bez ďalšej purifikácie.

MS: MH⁺ 202.

B. 3-(4-brómanilino)-l//-lX⁶-benzo [í/] izotiazol-1,1-dión

Do roztoku 3-chlór-l//-lX⁶-benzo[</Jizotiazol-l,l-diónu (1,0 g, 0,00496 mol) v acetóne (20 ml) sa naraz pridá 4-brómanilín (1,71 g, 0,00992 mol) a zmes sa mieša počas 15 minút. Zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa suspenduje vo vode (100 ml). Precipitát sa spojí filtráciou, poriadne premyje vodou a suší, čím sa získa 3-(4-brómanilino)-l//-l λ⁶benzo[J]izotiazol-l,1-dión (1,57 g, 0,00467 mol) vo forme bielej pevnej látky. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,93 (s, 1H), 8,47 (d, 1H), 8,09 (d, 1H), 7,93 (m, 4H), 7,69 (d, 2H);

C. 3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l//-lX⁶benzo [J] izotiazol-1,1-dión

Zmes 3-(4-brómanilino)-l//-lX⁶-benzo[í/]izotiazol-l,l-diónu (1,57 g, 0,00467 mol), diboronpinakolesteru (1,43 g, 0,00561 mol), [1,1'bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (II) komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,114 g, 0,00014 mol) a octanu draselného (1,37 g, 0,014 mol) v N,N-dimetylformamide (35 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku

181 zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu. Filtrát sa koncentruje za vzniku žltého oleja, ktorý sa trituruje v dietyléteri, čím sa získa 3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l//-lX⁶benzo[ď]izotiazol-l,l-dión (1,14 g, 0,00297 mol) vo forme bielej pevnej látky. ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,92 (br, 1H), 8,51 (d, 1H), 8,08 (d, 1H), 7,91 (m, 4H), 7,68 (d, 2H), 1,29 (s, 12H).

D. 7’ra«5-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl} anilino)-1/7-1 Ä⁶-benzo [ď] izotiazol-1,1-diónacetát

Zmes 3 - [4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-1/7-1 λ⁶benzo[í/]izotiazol-l, 1-diónu (0,09 g, 0,000234 mol), trazis-3-jód-l-[4-(4metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-4-amínu (0,08 g, 0,00018 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,013 g, 0,000011 mol) a uhličitanu sodného (0,048 g, 0,00045 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa ŕra«s-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidin-3-yl} anilino)-1/7-1 Ä⁶-benzo[í/]izotiazol-1,1-dión-acetát (0,075 g, 0,000119 mol) vo forme bielej pevnej látky. ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,29 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (m, 3H), 7,79 (m, 2H), 7,66 (d, 2H), 4,65 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 11,27 min.

MS: MH⁺ 572.

Príklad 98

Cz'5'-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl} anilino)-1/7-1 Ä⁶-benzo [</] izotiazol-1,1-dión-diacetát

182

Cz'5-3-(4-{4-amino-1 - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl}anilino)-l//-lX⁶-benzo[ŕ/]izotiazol-l,l-dión-diacetát sa pripraví z 3-(4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l//-lX⁶benzo[č/]izotiazol-l ,1-diónu (0,09 g, 0,000234 mol) a cz's-3-jód-l-[4-(4mety lpiperazino)-cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4-amínu podľa podobného spôsobu ako je uvedený vyššie.

‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,42 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (m, 3H), 7,84 (m, 2H), 7,62 (d, 2H), 4,80 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,07 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 gm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 11,59 min.

MS: MH⁺ 572.

Príklad 99 a«.y-./V3-(4-{ 4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l 77-pyrazolo [3,4</]pyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[d]izoxazol-3-amín-acetát

A. N1 -(4-brómfenyl)-2-fluórbenzamid

Roztok 2-fluórbenzoylchloridu (5,82 g, 0,0367 mol) a 4-brómanilínu (6,31 g, 0,0367 mol) v bezvodom dichlórmetáne (150 ml) sa ochladí na teplotu 0°C a pod atmosférou dusíka sa po kvapkách pridá V,V-diizopropyletylamín (5,21 g, 0,0407 mol). Výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 24 hodín, koncentruje a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organické fázy sa premyjú soľankou, sušia síranom horečnatým a koncentrujú. Zvyšok sa suspenduje v studenom dietyléteri (50 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa VI-(4-brómfenyl)-2-fluórbenzamid (9,6 g, 0,0326 mol) vo forme bielej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,54 (s, 1H), 7,66 (m, 3H), 7,56 (m, 3H), 7,34 (m, 2H). TLC (etylacetát/heptán 1: 2) Rf 0,37.

B. Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l -benzénkarbotioamid

183

Zmes Al-(4-brómfenyl)-2-fluórbenzamidu (3,3 g, 0,0112 mol) a 2,4-bis(4-metoxyfenyl)-l,3-ditia-2,4-difosfetán-2,4-disulfidu (2,27 g, 0,00561 mol) sa zahrieva v toluéne pri refluxe pod atmosférou dusíka počas 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/n-heptánu (1: 6) ako mobilnej fázy, čím sa získa Al-(4-brómfenyl)2-fluór-l-benzénkarbotioamid (3,1 g, 0,010 mol) vo forme žltej pevnej látky.

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 12,13 (s, IH), 7,93 (d, 2H), 7,62 (m, 3H), 7,51 (m, IH), 7,31 (m, 2H). TLC (etylacetát/heptán 1: 4) Rf 0,27.

C. Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénamidoxím

Zmes Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbotioamidu (1,56 g, 0,00505 mol), hydroxylamín-hydrochloridu (0,44 g, 0,00631 mol) a hydrogénuhličitanu sodného (0,53 g, 0,00631 mol) sa zahrieva v absolútnom etanole (25 ml) pri refluxe pod atmosférou dusíka počas 14 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetátu (50 ml). Organické fázy sa premyjú soľankou, sušia síranom horečnatým a koncentrujú. Zvyšok sa suspenduje v studenom dietyléterí a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-lbenzénamidoxím (1,21 g, 0,00392 mol) vo forme belavej pevnej látky.

TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,12.

D. A-benzo[J]izoxazol-3-yl-A-(4-brómfenyl)amín

Do roztoku Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-l -benzénamidoxímu (1,51 g, 0,00489 mol) v N-metylpyrolidinóne (25 ml) sa pridá /erc-butoxid draselný (0,54 g, 0,00513 mol) a výsledný roztok sa zahrieva pri teplote 100°C pod atmosférou dusíka počas 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetátu (50 ml). Organické fázy sa premyjú soľankou, sušia síranom horečnatým a koncentrujú. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím

184 etylacetát/n-heptánu (1:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa V-benzo[í/]izoxazol3-yl-V-(4-brómfenyl)amín (0,95 g, 0,00329 mol) vo forme bielej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,72 (s, 1H), 8,13 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,61 (m, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,37 (dd, 1H).

TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,26.

E. V-benzo[t/]izoxazol-3-y 1-/V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amín

Zmes V-benzo[ó/]izoxazol-3-yl-V-(4-brómfenyl)amínu (1,30 g, 0,0045 mol), diboronpinakolesteru (1,37 g, 0,0054 mol), [l,ľbis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,110 g, 0,000135 mol) a octanu draselného (1,32 g, 0,0135 mol) v N,Ndimetylformamide (35 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledné pevné látky sa odstránia filtráciou cez vrstvu Celitu. Filtrát sa koncentruje za vzniku žltého oleja, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/n-heptánu (1: 5) ako mobilnej fázy, čím sa získa V-benzo[í/]izoxazol-3-yl-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,40 g, 0,00119 mol) vo forme bielej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,74 (s, 1H), 8,16 (d, 1H), 7,70 (m, 4H), 7,61 (d, 2H), 7,37 (dd, 1H), 1,29 (s, 12H).

TLC (etylacetát/heptán 1: 4) Rf 0,21.

F. rran5-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[ŕ/]izoxazol-3-amín-acetát

Zmes V-benzo[í/]izoxazol-3-yl-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,10 g, 0,000298 mol), /rans-3-jód-l-[4-(4metylpiperazino)-cyklohexyl]-1/í-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-4-amínu (0,101 g, 0,000229 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,016 g, 0,0000137 mol) a uhličitanu sodného (0,061 g, 0,000573 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80°C počas 16 hodín pod

185 atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min, čím sa získa /ra«5-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[í/]izoxazol-3amín-acetát (0,102 g, 0,000175 mol) vo forme bielej pevnej látky. ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ. 9,81 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,19 (d, 1H), 7,88 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,40 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O, IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,66 min.

MS: MH⁺ 52.

Príklad 100

C/s-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[í/]izoxazol-3-amín-diacetát

C/5-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidin-3-yl}fenyl)benzo[í/]izoxazol-3-amin-diacetát sa pripraví z V-benzo[ŕZ]izoxazol-3-yl-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amínu a cz5^,-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu podľa podobného spôsobu ako je vyššie uvedený spôsob.

’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ. 9,86 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,24 (d, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,67 (m, 4H), 7,43 (m, 1H), 4,83 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,08 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,74 (m, 2H), 1,62 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) R_t 13,77 min.

MS: MH⁺ 524.

186

Príklad 101

A3-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3yl] fenyl} benzo [ď] izoxazol-3-amín-acetát

Zmes A-benzo [ď] izoxazol-3-y 1-7V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,087 g, 0,000258 mol), ferc-butyl-4-(4-amino-3-jódlA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylátu (0,088 g, 0,000198 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,014 g, 0,000012 mol) a uhličitanu sodného (0,053 g, 0,000495 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Organické fázy sa sušia síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku, čím sa získa surový ferc-butyl-4-{4-amino-3-[4(benzo[ď]izoxazol-3-ylamino)fenyl]-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l -yl}-lpiperidínkarboxylát, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie, rozpustí sa v etylacetáte (5 ml) a nechá sa reagovať so 4N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej (1 ml). Výsledná emulzia sa intenzívne mieša počas 1 hodiny, vodná vrstva sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa separujú. Organické fázy sa koncentrujú za zníženého tlaku a zvyšok sa Čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa N3{4-[4-amino-l -(4-piperidyl)-1 A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]fenyl}benzo[ď]izoxazol-3-amín-acetát (0,009 g, 0,0000185 mol) vo forme bielej pevnej látky. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,82 (s, IH), 8,20 (m, 2H), 7,89 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,41 (t, IH), 4,74 (m, IH), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,79 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 11,20 min. MS: MH⁺ 427.

Príklad 102

7ra«s-3-[4-(lA-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]1 A-pyrazol o [3,4-ď]pyrimidín-4-amín-acetát

187

A. 7/l-(4-brómfenyl)-2-fluór-l -benzénkarbohydrazónamid

7/l-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbotioamid (1,50 g, 0,00485 mol) a IM roztok hydrazínu v tetrahydrofuráne (6,3 ml, 0,0063 mol) sa zahrieva v absolútnom etanole (25 ml) pri refluxe pod atmosférou dusíka počas 14 hodín. Pridajú sa ďalšie 3 ml IM roztoku hydrazínu v tetrahydrofuráne a v miešaní pri refluxe sa pokračuje ďalších 6 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje, čím sa získa 7/l-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbohydrazónamid (1,54 g, 0,0050 mol) vo forme hnedej pevnej látky. TLC (etylacetát/ heptán 1:3) Rf 0,10.

B. 7/-(4-brómfenyl)-7/-(l.ŕ/-3-indazolyl)amín

Do roztoku 7/l-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbohydrazónamidu (1,2 g, 0,00391 mol) v N-metylpyrolidinóne (25 ml) sa pridá ferc-butoxid draselný (0,50 g, 0,0041 mol) a výsledný roztok sa zahrieva pri teplote 100°C pod atmosférou dusíka počas 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/«-heptánu (1: 5) ako mobilnej fázy, čím sa získa 7/-(4-brómfenyl)-7/(17/-3-indazolyl)amín (0,29 g, 0,0010 mol) vo forme bielej pevnej látky. ^lH NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 12,06 (s, 1H), 9,03 (s, 1H), 7,93 (d, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,03 (dd, 1H). TLC (etylacetát/heptán 1: 3) Rf 0,26.

C. 7/-(1//-3-indazolyl)-7/-[4-(4,4,5,5-tetramety 1-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amín

Zmes A7-(4-brómfenyl)-7/-(l//-3-indazolyl)amínu (0,29 g, 0,00101 mol), diboronpinakolesteru (0,31 g, 0,00121 mol), [1 ,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,025 g, 0,00003 mol) a octanu draselného (0,294 g, 0,003 mol) v N,N-dimetylformamide (35 ml) sa

188 zahrieva pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledné pevné látky sa odstránia filtráciou cez vrstvu Celitu. Filtrát sa koncentruje za vzniku žltého oleja, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/«heptánu (1:3) ako mobilnej fázy, čím sa získa A-(l/ŕ-3-indazolyl)-A-[4(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,064 g, 0,000191 mol) vo forme belavej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12,09 (s, 1H), 9,06 (s, 1H), 7,94 (d, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,35 (m, 2H), 7,03 (dd, 1H), 1,28 (s, 12H). TLC (etylacetát/ heptán 1: 3) Rf 0,21.

D. 7’rŕzn5’-3-[4-(l/7-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín-acetát

Zmes A-( 1/7-3-indazolyl)-N-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amínu (0,064 g, 0,000191 mol), tra«5’-3-jód-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,070 g, 0,000159 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,011 g, 0,0000095 mol) a uhličitanu sodného (0,042 g, 0,000398 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa tríZHj-3-[4-(l//-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín-acetát (0,035 g, 0,000060 mol) vo forme bielej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 12,09 (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,99 (d, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,06 (t, 1H), 4,64 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,49 (m, 2H); RPHPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,96 min.

MS: MH⁺ 523.

189

Príklad 103

7>aMs-JV3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4í/|pyrimidín-3-yl}fenyl)-6-(trifluórmetyl)benzo[í/]Ízoxazol-3-amín-acetát

A. 7/1 -(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid

Roztok 2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoylchloridu (5,05 g, 0,0223 mol) a 4-brómanilínu (3,83 g, 0,0223 mol) v bezvodom dichlórmetáne (150 ml) sa ochladí na teplotu 0°C a pod atmosférou dusíka po kvapkách sa pridá N,Ndiizopropyletylamín (4,26 ml, 0,0245 mol). Výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 24 hodín, koncentruje a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom n-heptáne (50 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa 7/l-(4-brómfenyl)-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid (7,1 g, 0,0196 mol) vo forme bielej pevnej látky.

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,74 (s, IH), 7,90 (m, 2H), 7,74 (d, IH), 7,68 (d, 2H), 7,56 (d, 2H).

B. ŤVl-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbotioamid

Zmes 7/l-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (7,1 g, 0,0196 mol) a 2,4-bis-(4-metoxyfenyl)-l,3-ditia-2,4-difosfetán-2,4-disulfidu (3,97 g, 0,0098 mol) sa zahrieva v toluéne pri refluxe pod atmosférou dusíka počas 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/n-heptánu (1: 8) ako mobilnej fázy, čím sa získa 7/l-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbotioamid (6,0 g, 0,0159 mol) vo forme žltej pevnej látky.

'H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 12,33 (s, IH), 7,94 (d, 2H), 7,81 (m, 2H), 7,65 (m, 3H). TLC (etylacetát/heptán 1: 4) Rf 0,61.

C. 7Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l -benzénamidoxím

Zmes 7Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbotioamidu (2,50 g, 0,00663 mol), hydroxylamín-hydrochloridu (0,65 g, 0,00928 mol) a

190 hydrogénuhličitanu sodného (0,78 g, 0,00928 mol) sa zahrieva v absolútnom etanole (25 ml) pri refluxe pod atmosférou dusíka počas 14 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-4(trifluórmetyl)-l-benzénamidoxím (2,35 g, 0,00625 mol) vo forme belavej pevnej látky.

TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,12.

D. A-(4-brómfenyl)-A-[6-(trifluórmetyl)benzo[ri]izoxazol-3-yl]amín

Do roztoku Al -(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénamidoxímu (2,25 g, 0,00598 mol) v N-metylpyrolidinóne (30 ml) sa pridá tercbutoxid draselný (0,71 g, 0,00628 mol) a výsledný roztok sa zahrieva pri teplote 100°C pod atmosférou dusíka počas 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa A-(4-brómfenyl)-A-[6(trifluórmetyl)benzo[t/]izoxazol-3-yl]amín (1,75 g, 0,0049 mol) vo forme belavej pevnej látky.

‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,95 (s, IH), 8,37 (d, IH), 8,14 (s, IH), 7,78 (d, IH), 7,68 (d, 2H), 7,58 (d, 2H). TLC (etylacetát/heptán 1: 5) Rf 0,31.

E. A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-A-[6(trifluórmetyl)benzo[í/]izoxazol-3-yl]amín

Zmes A-(4-brómfenyl)-A-[6-(trifluórmetyl)benzo[ri]izoxazol-3-yl] aminu (1,75 g, 0,0049 mol), diboronpinakolesteru (1,49 g, 0,0059 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,120 g, 0,000147 mol) a octanu draselného (1,44 g, 0,0144 mol) v N,Ndimetylformamide (10 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka

191 počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledné pevné látky sa odstránia filtráciou cez vrstvu Celitu. Filtrát sa koncentruje za vzniku žltého oleja, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/«-heptánu (1:6) ako mobilnej fázy, čím sa získa A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-/V-[6(trifluórmetyl)benzo[í/]izoxazol-3-yl]amín (0,065 g, 0,000161 mol) vo forme bielej pevnej látky. *H NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ) δ 9,97 (s, IH), 8, 39 (d, IH), 8,14 (s, IH), 7,77 (d, IH), 7,71 (s, 4H), 1,29 (s, 12H).

F. 7>ans-N3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-J]pyrimidin-3-yl}fenyl)-6-(trifluórmetyl)benzo[í/]izoxazol-3amín-acetát

Zmes jV-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-?/-[6(trifluór-metyl)benzo[í/]izoxazol-3-yl]amínu (0,062 g, 0,000153 mol), trans-3jód-1 -[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4amínu (0,065 g, 0,000146 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,010 g, 0,0000087 mol) a uhličitanu sodného (0,039 g, 0,000365 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-70% acetonitril - 0,lM octan amónny v priebehu 30 min, 21 ml/min), čím sa získa /ran5-jV3-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-6(trifluórmetyl)benzo[r/]izoxazol-3-amín-acetát (0,026 g, 0,0000398 mol) vo forme bielej pevnej látky. *H NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ) δ 10,05 (s, IH), 8,44 (d, IH), 8,23 (s, IH), 8,16 (s, IH), 7,88 (d, 2H), 7,79 (d, IH), 7,69 (d, 2H), 4,67 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitrilΟ,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 16,18 min. MS: MH⁺ 592.

192

Príklad 104 _JV2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

A. 3-jód-l-[l-(2-metoxyety l)-4-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4amín

Do zmesi 3-jód-l-(4~piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amíndihydrochloridu (0,4 g, 0,00096 mol) a uhličitanu draselného (0,40 g, 0,0029 mol) v N,N-dimetylformamide (25 ml) sa pridá 2-brómetyl(metyl)éter (0,09 ml, 0,00096 mol) pri izbovej teplote. Heterogénna zmes sa mieša pri teplote 60°C pod atmosférou dusíka počas 7 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a pridá sa 2-brómetyl(metyl)éter (0,045 ml, 0,00048 mol). Zmes sa mieša pri teplote 60°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Do zmesi s izbovou teplotou sa kvôli dokončeniu reakcie pridá 2-brómetyl(metyl)éter (0,019 ml, 0,00019 mol) a jodid draselný (0,008 g, 0,000048 mol). Zmes sa mieša pri teplote 70°C pod atmosférou dusíka počas 7 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (4 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 μηι, 250 x 21,1 mm; 5%-50% v priebehu 30 min s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa 3-jód-l-[1-(2-metoxyetyl)-4piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (0,2 g, 0,0005 mol). RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 6,4 min.

MS: MH⁺ 403.

B. /V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Zmes 3-jód-l - [1 -(2-metoxy etyl)-4-piperidyl ]-l//-py razolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,2 g, 0,0005 mol), ;V-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,28 g, 0,00078 mol),

193 tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,029 g, 0,000025 mol) a uhličitanu sodného (0,13 g, 0,00125 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (25 ml) a vode (5 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 5 hodín pod atmosférou dusíka. Pridá sa ďalší ÍV-(5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-yl)-N-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amin (0,14 g, 0,00039 mol,) a tetrakis(trifenyl-fosfin)paládium (0,015 g, 0,0000125 mol) a zmes sa mieša pri teplote 80°C počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku za vzniku nahnedlej pevnej látky, ktorá sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s 5%-20% metanol/dichlórmetánom ako mobilnou fázou, čím sa získa V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-4piperi dyl] -1//-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-3-yl} fenyl)-5,7-dimetyl-1,3benzoxazol-2-amin (0,14 g, 0,00027 mol). ^!H NMR (TFA-d, 400 MHz) δ 8,53 (s, IH), 7,88 (m, 2H), 7,81 (m, 2H), 7,14 (s, 2H), 5,40 (br, IH), 4,05 (m, 2H), 3,98 (m, 2H), 3,66 (m, 2H), 3,56 (s, 3H), 3,47 (m, 2H), 2,96 (m, 2H), 2,54-(br, 2H), 2,50 (s, 3H), 2,43 (s, 3H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 9,6 min. MS: MH⁺ 513.

Príklad 105

N2-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amin

A. 3-jód-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Do zmesi 3-jód-1 -(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amí ndihydrochloridu (0,5 g, 0,0012 mol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,36 g, 0,00168 mol) v dichlóretáne (40 ml) sa pridá roztok formaldehydu (37% vo vode, 0,037 ml, 0,00132 mol) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka počas 4 hodín. Do zmesi sa pridá 5 N vodný

194 roztok hydroxidu sodného (2 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku za vzniku pevnej látky, ktorá sa znovu podrobí rovnakej reakcii a spracovaniu ako vyššie, čím sa získa 3-jód-l-(l-metyl-4-piperidyl)l//-pyrazolo[3,4-</|pyrimidín-4-amín (0,3 g, 0,00084 mol). TLC (metanol/dichlórmetán = 10: 90) Rf 0,63 MS: MH 359.

B. N2-{4-[4-amino-1-(1 -metyl-4-piperidyI)-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Zmes 3-jód-l -(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-ď|pyrimidín-4amínu (0,2 g, 0,00056 mol), N-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-N-[4(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,2 g, 0,00056 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,032 g, 0,000028 mol) a uhličitanu sodného (0,15 g, 0,0014 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (20 ml) a vody (5 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 3 hodín pod atmosférou dusíka. Pridá sa ďalší N-(5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-yl)-N-[4-(4,4,5,5-tetrametyI-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,2 g, 0,00056 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,032 g, 0,000028 mol) a zmes sa mieša pri teplote 80°C počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku za vzniku nahnedlej pevnej látky, ktorá sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 5%-25% metanol/dichlórmetánom ako mobilnou fázou, čím sa získa N2-{4-[4-amino-l -(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,16 g, 0,00034 mol). *H NMR (TFA-d, 400 MHz) δ 8,50 (s, 1H), 7,85 (m, 2H), 7,80 (m, 2H), 7,10 (s, 2H), 5,45 (br, 1H), 3,95 (br, 2H), 3,75 (br, 1H), 3,45 (br, 1H), 3,10 (s, 3H), 2,85 (br, 1H), 2,65 (br, 1H), 2,49 (br, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,42 (s, 3H).

195

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 10,7 min. MS: MH⁺ 469.

Príklad 106 /V2-{4-[4-amino-l -(l-metyl-3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimídín-3yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

A. 3-Jód-l-(3-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-4-ylamín

Dietylazodikarboxylát (12 ml, 0,08 mol) sa pridá do miešanej suspenzie 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (10,44 g, 0,04 mol), terc-butyl-3hydroxy-l-piperidínkarboxylátu (12,0 g, 0,0596 mol) a trifenylfosfínu (20,98 g, 0,08 mol) v tetrahydrofuráne (600 ml) pri izbovej teplote. Po 19 hodinách sa pridá ďalší dietylazodikarboxylát (12 ml, 0,08 mol) a pokračuje sa ďalšie 2 hodiny. Pridá sa ďalší ferc-butyl-3-hydroxy-l-piperidínkarboxylát (2,0 g) a trifenylfosfín (20,98 g, 0,08 mol) a pokračuje sa ďalších 72 hodín.

Reakcia sa koncentruje vo vákuu, pridá sa acetón (200 ml) a vodný roztok 5N chlorovodíka (100 ml) a roztok sa zahrieva pri teplote 40°C počas 2 hodín. Acetón sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa premyje dichlórmetánom (3 x 200 ml). Vodná vrstva sa potom alkalizuje na pH 11 vodným roztokom hydroxidu sodného (1 N) a produkt sa extrahuje do dichlórmetánu (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad bezvodým síranom sodným a koncentrujú, čím sa získa oranžová pevná látka. Pevné látky sa triturujú etylacetátom, čím sa získa 3-jód-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-ylamín vo forme žltej pevnej látky (3,82 g, 25%); RP-HPLC Rt 4,792 min, 92% čistota (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 min pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); 'h NMR (400 MHz, dó-DMSO) 1,54 (1H, m), 1,71 (1H, m), 2,01 (2H, m), 2,46 (1H, m), 2,81 (2H, m), 3,01 (1H, dd, J 11, 8 a 3, 4 Hz), 4,58 (1H, m) a 8,19 (1H, s).

196

B. 3-jód-l-(l-metyl-3-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín

Do zmesi 3-jód-1-(3-piperidyl)-1 H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,4 g, 0,00116 mol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,34 g, 0,00162 mol) v dichlóretáne (30 ml) sa pridá roztok formaldehydu (37% vo vode, 0,035 ml, 0,00128 mol, 1,1 ekviv.) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka počas 18 hodín. Pridá sa ďalší roztok formaldehydu (37% vo vode, 0,035 ml, 0,00128 mol, 1,1 ekviv.) a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 2 hodín. Do zmesi sa pridá 5N vodný roztok hydroxidu sodného (5 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 150 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku a zmes sa lyofilizuje, čím sa získa 3-jód-l-(l-tnetyl-3-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín (0,41 g, 0,0011 mol). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 6,0 min. MS: MH⁺ 359.

C. H2-{ 4-[4-amino-1-(1-mety 1-3-piperidyl)-l H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Zmes 3-j ód-1 -(1 -metyl-3-piperidyl)-1 H-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4amínu (0,35 g, 0,001 mol), H-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-H-[4-(4,4,5,5tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,44 g, 0,0012 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,058 g, 0,00005 mol) a uhličitanu sodného (0,27 g, 0,0025 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (30 ml) a vode (6 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku za vzniku nahnedlej pevnej látky, ktorá sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 2%-l 0% metanol/dichlórmetánom ako mobilnou fázou, čím sa získa N2-{ 4- [4-amino-1 -(1-m ety 1-3-piperidyl)-1 H-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3\9Ί yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,055 g, 0,00012 mol). NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,80 (s, IH), 8,22 (s, IH), 7,95 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,15 (s, IH), 6,80 (s, IH), 4,80 (br, IH), 2,95 (br, IH), 2,85 (br, IH), 2,45 (br, IH), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,00 (br, 3H), 1,80 (br, IH), 1,70 (br, IH). RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitrilO,1M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 9,7 min. MS: MH⁺ 469.

Príklad 107

JV2-(4-{ 4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

A. 3-jód-l -[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4amín

Do zmesi 3-jód-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,4 g, 0,00116 mol) a uhličitanu draselného (0,48 g, 0,00348 mol) v Ν,Νdimetylformamide (25 ml) sa pridá 2-brómetyl(metyl)éter (0,11 ml, 0,00116 mol) a jodid draselný (0,010 g, 0,000058 mol) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša pri teplote 65°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a pridá sa ďalší 2-brómetyl(metyl)éter (0,025 ml, 0,00027 mol). Zmes sa mieša pri teplote 65°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (4 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí RPHPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-50% v priebehu 30 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa 3-jód-l-[l-(2metoxyetyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (0,2 g, 0,0005 mol). TLC (metanol/dichlórmetán = 10: 90) Rf 0,5. MS: MH 403.

B. V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Zmes 3-jód-1 - [l-(2-metoxy ety l)-3-piperidy 1]-1//-pyrazolo [3,4-í/jpyrimidín-4-amínu (0,16 g, 0,0004 mol), V-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-/V-[4198 (4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,17 g, 0,00048 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,023 g, 0,00002 mol) a uhličitanu sodného (0,11 g, 0,001 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (25 ml) a vode (5 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku za vzniku nahnedlej pevnej látky, ktorá sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 2%-10% metanol/dichlórmetánom ako mobilnou fázou, čím sa získa V2-(4-{4-amino-1-[1 -(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-1/7-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,17 g, 0,00033 mol), 'h NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,14 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,79 (br, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 3,10 (br, 1H), 2,90 (br, 1H), 2,55 (br, 2H), 2,54-(br, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,05 (br, 3H), 1,80 (br, 1H), 1,70 (br, 1H). RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 9,9 min. MS: MH⁺ 513.

Príklad 108

V2-{4-[4-amino-l -(3-piperidyl)-l//-py razolo [3,4-d]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín-acetát

A. /erc-Butyl-3-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l -y 1)-1 piperidínkarboxylát

Di-/erc-butyl-dikarbonát (2,093 g, 0,00959 mol) sa pridá do roztoku 3jód-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-yIamínu (3,00 g, 0,00872 mol) a uhličitanu sodného (3,23 g, 0,0305 mol) v 1,4-dioxáne (50 ml) a vode (50 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 2 hodín a výsledný biely precipitát sa spojí filtráciou. Pevné látky sa premyjú vodou (10 ml), sušia na vzduchu, čím sa získa /erc-butyl-3-(4-amino-3-jód-1 //-pyrazolo[3,4199 ďjpyrimidín-1 -yl)-1 -piperidínkarboxylát vo forme bielej pevnej látky (3,40 g, 88%); RP-HPLC R_t 12,532 min, 98% čistota (5% až 85% acetonitril/0,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri teplote 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); ^lH NMR (400 MHz, d₆-DMSO) 1,34 (9H, br s), 1,50 (2H, m), 2,02 (1H, m), 2,13 (1H, m), 2,97 (2H, m), 3,85 (2H, m), 4,59 (1H, m) a 8,21 (1H, s).

B. /erc-Butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylát

Zmes Zerc-butyl-3-(4-amino-3-jód-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)-lpiperidínkarboxylátu (0,6 g, 0,00135 mol), A-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,59 g, 0,00162 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,078 g, 0,000068 mol) a uhličitanu sodného (0,36 g, 0,00338 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (50 ml) a vode (10 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Po ochladení zmesi na izbovú teplotu sa pridá ďalší A-(5,7-dimetyl-l,3b enzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl] amín (0,24 g, 0,00066 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,078 g, 0,000068 mol) a zmes sa mieša pri teplote 80°C počas 5 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku za vzniku nahnedlého oleja, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 5%-25% izopropanol/dichlórmetánom ako mobilnou fázou a produkt sa trituruje N,Ndimetylformamidom, čím sa získa /erc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyll,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)-lpiperidínkarboxylát (0,28 g, 0,00051 mol). RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 μηι, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) R_t 11,9 min.

MS: MH⁺ 555.

200

C. /V2-{4-[4-amino-l-(3-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín-acetát

Do zmesi /arc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l-yl)-l -piperidínkarboxylátu (0,28 g, 0,00051 mol) v acetóne (10 ml) sa pridá 6N vodný roztok chlorovodíka (3 ml) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša pri teplote 45°C počas 1 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni a zmes sa alkalizuje vodným roztokom 5N hydroxidu sodného. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 80 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21, 1 mm; 5%-100% v priebehu 20 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa W2-{4~[4-amino-l-(3-piperidyl)-l//pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-yl] fenyl}-5,7-dimety 1-1,3-benzoxazol-2-amínacetát (0,06 g, 0,00012 mol), 'h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,05 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,75 (br, 1H), 3,15 (br, 2H), 2,95 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,05 (br, 1H), 2,00 (br, 1H), 1,90 (s, 3H), 1,80 (br, 1H), 1,60 (br, 1H). RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril - 0,1 M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 9,4 min. MS: MH⁺ 455.

Príklad 109 l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l -yl)piperidino]-2-(dimetylamino)-l-etanón-acetát

Zmes N2-{4-[4-amino-1 -(3 -piperidyl) -1 //-pyrazolo [3,4-zQpyrimidín-3 yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín-acetátu (0,04 g, 0,000078 mol), dimetylglycínu (0,01 g, 0,000097 mol), 1 -(3-dimetylaminopropyl)-3etylkarbodiimid-hydrochloridu (0,019 g, 0,000097mol), M-V-diizopropyletylamínu (0,033g, 0,00026 mol) a 1-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,011 g, 0,000078 mol) v bezvodom dichlórmetáne (5 ml) sa mieša počas 18 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom a spojené organické rozpúšťadlo sa premyje soľankou. Rozpúšťadlo sa odstráni

201 za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v priebehu 35 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl}-lŕ/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)piperidino]-2-(dimetylamino)-l-etanón-acetát (0,015 g, 0,00003 mol). ^!H NMR (DMSO-dé, 400 MHz) Ô 10,85 (s, IH), 8,27 (d, IH), 7,94 (d, 2H), 7,67 (d, 2H), 7,11 (s, IH), 6,51 (s, IH), 4,81-1,91 (br, 11 H), 2,40 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,91 (s, 3H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Ä, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) R_t 9,7 minút. MS. MH⁺ 540.

Príklad 110 l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)piperidino]-2-metyl-2-(metylamino)-l-propanón

A. 3-jód-l-(3-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amíndihydrochlorid

Do zmesi /erc-butyl-3-(4-amino-3-jód-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-lyl)-l-piperidínkarboxylátu (1,2 g, 0,0027 mol) v acetóne (20 ml) sa pridá vodný roztok 6N chlorovodíka (8 ml) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša pri teplote 45°C počas 1,5 hodiny, potom pri izbovej teplote počas 16 hodín, Precipitát sa filtruje a premyje acetónom. Pevný podiel sa suší, čím sa získa 3j ód-1-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín-dihydrochlorid (1 g, 0,0024 mol). TLC (metanol/dichlórmetán = 5:95) Rf 0,14 MS: MH⁺ 345.

B. 9//-9-fluorenylmetyl-7/-f2-[3-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín- 1-y l)piperidino]-l, 1-dimetyl-2-oxoetyl}-//-mety lkarbamát

Zmes 3-jód-l-(3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín-dihydrochloridu (0,17 g, 0,00042 mol), 2-[[(9//-9-fluorenylmetoxy)karbonyl](metyl)amino]-2-metylpropánovej kyseliny (0,175 g, 0,00052 mol), l-(3dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu (0,1 g, 0,00052 mol), N,//-diizopropyletylaminu (0,23 g, 0,0018 mol) a l-hydroxy-7-azabenzotriazolu

202 (0,057 g, 0,00042 mol) v bezvodom dichlórmetáne (7 ml) sa mieša počas 18 hodín pri izbovej teplote. Pridá sa ďalší 2-[[(9/f-9fluorenylmetoxy)karbonyl](metyl)amino]-2-metylpropánová kyselina (0,044 g, 0,00013 mol) a l-(3-dimetylaminopropyI)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (0,025 g, 0,00013 mol) do reakcie a mieša sa počas 16 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi soľanku a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom a spojené organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21, 1 mm; 5%-100% v priebehu 20 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa 9//-9-fluorenylmetyl-A-{2-[3-(4-amino-3jód-lZ/-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-l-yl)piperidino]-l, l-dimetyl-2-oxoetyl}-Ametylkarbamát (0,030g, 0,00005 mol). RP-HPLC (Delta Pak C 18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) R_t 11,2 min. MS: MH⁺ 666.

C. 9//-9-fluorenylmetyl-A-2-[3-(4-amino-3- {4-[(5,7-dimetyl-1,3benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)piperidino]1,1-dimetyl-2-oxoetyl-jV-metylkarbamát

Zmes 9//-9-fluorenylmetyl-A-/'2-[3-(4-amino-3-jód-177-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-l-yl)piperidino]-l, l-dimetyl-2-oxoetyl }-A-metylkarbamátu (0,03 g, 0,000045 mol), A-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,02 g, 0,000054 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,003 g, 0,000002 mol) a uhličitanu sodného (0,0126 g, 0,00011 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (4 ml) a vode (1 ml) sa zahrievajú pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (3 x 30 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku za vzniku nahnedlej pevnej látky, ktorá sa použije v nasledujúcej reakcii. RP-HPLC (DeltaPak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) R_t 10,4 min.

203

TLC (metanol/dichlórmetán = 5: 95) Rf 0,80.

D. l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)piperidino]-2-metyl-2-(metylamino)-l-propanón

Surová zmes 9//-9-fluorenylmetyl-V-2-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyll,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-lyl)piperidino]-l,l-dimetyl-2-oxoetyl-V-metylkarbamátu (0,037 g, 0,00005 mol) v 25% roztoku piperidínu v N,N-dimetylformamide (10 ml) sa mieša počas 16 hodín pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát a vodu. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21, 1 mm; 5%100% v priebehu 30 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l -yl)piperidino]-2-metyl-2-(metylamino)-l-propanón (0,011 g, 0,00002 mol). *H NMR (Chlorform-d, 400 MHz) δ 8,35 (s, IH), 7,75 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,10 (s, IH), 6,78 (s, IH), 4,981,70 (br, 9 H), 2,49 (s, 3H), 2,48 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,10 (s, 6H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - 0,lM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 10,0 min. MS: MH⁺ 554.

Príklad 111

V2-4-[4-amino-l -(3-azetanyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl]fenyl-5,7dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín

A. ŕerc-Butyl-3-(4-amino-3-jód-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-l-yl)-lazetánkarboxylát

Zmes 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,73 g, 0,0028mol), ferc-butyl-[(metylsulfonyl)oxy]-l-azetánkarboxylátu (1,05 g, 0,0042 mol) a uhličitanu cézneho (1,4 g, 0,0042 mol) v N,N-dimetylformamide (25 ml) sa mieša pri teplote 70°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu. Pridá sa ďalší Zerc-butyl-3-[(metylsulfonyl)oxy]-l204 azetánkarboxylát (0,35 g, 0,0014 mol) a uhličitan cézny (0,46 g, 0,0014 mol) do zmesi. Zmes sa mieša pri teplote 70°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 70 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje dichlórmetánom (2x3 ml), čím sa získa ŕerc-butyl-3-(4-amino-3-jód-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-l-azetánkarboxylát (0,57 g, 0,0014 mol). RPHPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 9,4 min. MS: MH⁺ 417.

B. Zerc-Butyl-3-(4-amino-3- {4-[(5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2y l)amino] fenyl}-1 H-pyrazolo [3,4-J]pyrimidí n-1 -y 1)-1 -azetánkarboxylát

Zmes Zerc-butyl-3-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-l-yl)-lazetánkarboxylátu (0,15 g, 0,00036 mol), V-(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazoI-2-yl)V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yľ)fenyl]amínu (0,16 g, 0,00045 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,021 g, 0,000018 mol) a uhličitanu sodného (0,095 g, 0,0009 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (5 ml) a vode (2 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Reakcia sa ochladí na izbovú teplotu. Pridá sa ďalší tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,021 g, 0,000018 mol) do zmesi a reakcia sa mieša pri teplote 80°C počas 3 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku za vzniku nahnedlej pevnej látky, ktorá sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 5%-5O% metanol/dichlórmetánom ako mobilnou fázou, čím sa získa Zerc-butyl-3-(4amino-3- (4-[(5,7-dimetyl -1,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-1//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-l-yl)-l-azetánkarboxylát (0,033 g, 0,00006 mol). RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 11,6 min. MS: MH⁺ 527.

205

C. 772-4-[4-amino-l-(3-azetany 1)-l//-pyrazolo [3,4-ďJpy rimidín-3-y ljfenyl5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

Do zmesi ŕerc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)-l-azetánkarboxylatu (0,033 g, 0,000063 mol) v acetóne (4 ml) sa pridá vodný roztok 6N chlorovodíka (0,3 ml) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša pri teplote 45°C počas 2 hodín, potom pri izbovej teplote počas 16 hodín. Pevný podiel z reakcie sa filtruje a premyje acetónom kvôli odstráneniu niektorých nečistôt. Pevné látky sa vytrepú medzi etylacetát a nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom a organická vrstva sa premyje soľankou. Rozpúšťadlo sa odstráni, čím sa získa 7V2-4-[4-amino-l-(3-azetanyl)-177-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl]fenyl-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,004 g, 0,00001 mol). ^lH NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,00 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 7,09 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 5,90 (br, 1H), 5,20 (m, 4H), 2,40 (s, 3H), 2,20 (s, 3H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) R_t 9,1 min. MS: MH⁺ 427.

Príklad 112

7V2-{4-[4-amino-l-(l-metyl-3-azetanyl)-l//-pyrazolo[3,4-ďJpyrimidín-3yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

A. l-(3-azetanyl)-3-jód-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amín-diacetát

Do zmesi /erc-butyl-3-(4-amino-3-jód-17/-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-lyl)-l-azetánkarboxylátu (0,41 g, 0,00099 mol) v acetóne (5 ml) sa pri izbovej teplote pridá 6N vodný roztok chlorovodíka (1 ml). Zmes sa mieša pri teplote 45°C počas 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa alkalizuje 5N vodným roztokom hydroxidu sodného pri teplote 0°C. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 50 ml) a organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Vodná vrstva a zvyšok z organickej vrstvy sa spoja. Rozpúšťadlá sa

206 odstránia a zvyšok sa suspenduje v Ν,Ν-dimetylformamide, metanole a octovej kyseline a purifikuje RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v priebehu 30 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min) na l-(3azetanyl)-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amín-diacetát (0,165 g, 0,0005 mol). TLC (metanol/dichlórmetán 5: 95) Rf 0,29. MS: MH 317.

B. 3-jód-l-(l-metyl-3-azetanyI)-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín

Do zmesi l-(3-azetanyl)-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amíndiacetátu (0,165 g, 0,0005 mol) a triacetoxyborohydridu sodného (0,15 g, 0,00073 mol) v dichlóretáne (15 ml) sa pri izbovej teplote pridá 37% roztok formaldehydu v 0,016 ml, 0,000572 mol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Pridá sa ďalší formaldehyd (37% roztok vo vode, 0,016 ml, 0,000572 mol) a triacetoxyborohydrid sodný (0,15 g, 0,00073 mol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 2 dní. Do zmesi sa pridá 5N vodný roztok hydroxidu sodného (1 ml). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku. Majoritný produkt prejde do vodnej vrstvy. Vodná vrstva a zvyšok z organickej vrstvy sa spoja. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa použije v nasledujúcom kroku bez purifikácie. TLC (metanol/dichlórmetán 10: 90) Rf 0,48. MS: MH⁺ 331.

C. V2-{4-[4-amino-l - (1 -metyl-3-azetanyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

Zmes 3-jód-l-(l-metyl-3-azetanyl)-lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu (0,17 g, 0,00052 mol), V-(5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,23 g, 0,000624 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,030 g, 0,000026 mol) a uhličitanu sodného (0,14 g, 0,0013 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (20 ml) a vode (15 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Reakcia sa ochladí na izbovú teplotu. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a

207 dichlórmetán. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku za vzniku nahnedlej pevnej látky, ktorá sa Čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 5%-50% metanol/dichlórmetán ako mobilnou fázou, čím sa získa V2-{4-[4-amino-l-(lmetyl-3-azetanyl)-177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidín-3-y 1] fenyl }-5,7-dimetyl-l ,3benzoxazol-2-amín (0,13 g, 0,0003 mol). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,70 (d, 2H), 7,09 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,40 (br, 1H), 3,90 (m, 2H), 3,70 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,30 (s, 3H). RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%95% acetonitril0,lM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 9,5 min. MS: MH⁺ 441.

Príklad 113

Cz'5-2-(4-{4-amino-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4í7]pyrimidín-3 -yl} anilino)-1,3-benzoxazol-5-karbonitril

A. 3-amino-4-hydroxybenzonitril

Do zmesi 4-hydroxy-3-nitrobenzonitrilu (4 g, 0,0244 mol) v etanole (180 ml) a vode (90 ml) sa pridá tiosíran sodný (17 g, 0,0976 mol) pri izbovej teplote. Heterogénna zmes sa mieša pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 1 hodiny. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a etanol sa odstráni za zníženého tlaku. Žltý pevný podiel sa filtruje, premyje vodou, suší za zníženého tlaku, čím sa získa 3-amino-4-hydroxybenzonitril (1,46 g, 0,011 mol). RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 4,5 min. MS: MH⁺ 133.

B. 2-(4-brómanilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitril

Do zmesi 3-amino-4-hydroxybenzonitrilu (1,84 g, 0,0137 mol) v acetonitrile (140 ml) sa pri izbovej teplote pridá 4-brómfenylizotiokyanát (2,93 g, 0,0137 mol). Zmes sa mieša počas 16 hodín pri izbovej teplote. Do reakčnej zmesi sa pridajú chlorid meďný (1,36 g, 0,0137 mol) a trietylamín (1,9 ml,

208

0,0137 mol). Zmes sa mieša počas 16 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pevný podiel sa suspenduje v metanole. Zmes sa filtruje cez vrstvu Celitu s metanolom. Nahnedlý filtrát sa skladoval počas 3 dní pri teplote 4°C. Precipitát sa filtruje a premyje metanolom, čím sa získa 2(4-brómanilino)-l,3-benzoxazol-5-karbonitril (2,4 g, 0,0076 mol). RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 11,1 min. MS: MH 313.

C. 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l,3benzoxazol-5-karbonitril

Zmes 2-(4-brómanilino)-l ,3-benzoxazol-5-karbonitrilu (1,8 g, 0,0058mol), diboronpinakolesteru (1,8 g, 0,007 mol), [1,1’bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,47g, 0,00058 mol) a octanu draselného (1,7 g, 0,0174 mol) v N,Ndimetylformamide (50 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 0%-40% etylacetát/n-heptánom ako mobilnou fázou, čím sa získa 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l ,3-benzoxazol5-karbonitril (0,80 g, 0,0022 mol). RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril - 0,lM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 16,9 min. MS: MH⁺ 362.

D. c/5-2-(4-{4-amino-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl} anilino)-! ,3-benzoxazol-5-karbonitril

Zmes 3 -jód-1 -[4-(4-metylpiperazino)cy kl ohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-4-amínu (0,15 g, 0,00034 mol), 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2dioxaboroIan-2-yl)anilino]-l ,3-benzoxazol-5-karbonitrilu (0,153 g, 0,000425 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,028 g, 0,0000238 mol) a uhličitanu sodného (0,090g, 0,00085 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (3 ml) a vode (1 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 16 hodín. Pridá sa ďalší 2-[4-(4,4,5,5tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l,3-benzoxazol-5-karbonitril (0,072 g, 0,0002 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,012 g, 0,000010 mol,

209

0,03 ekviv.) a zmes sa mieša pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 2% vodným roztokom hydroxidu amónneho 5%-20% metanol/dichlórmetán ako mobilnou fázou. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 gm, 250 x 21,1 mm; 5%-50% v priebehu 30 minút s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa czj-2-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}anilino)-l ,3benzoxazol-5-karbonitril (0,15g, 0,00027 mol). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,25 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,70 (m, 4H), 4,80 (br, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,20 (br, 8H), 2,10 (br, 3H), 1,75 (br, 2H), 1,60 (br, 4H). RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 gm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 9,2 min. MS: MH⁺ 549.

Príklad 114

Czs-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-(trifluórmetoxy)-l,3-benzoxazol-2-amín

A. 2-nitro-4-(trifluórmetoxy)fenol

Do zmesi 4-(trifluórmetoxy)fenolu (4 g, 0,0225mol) v dimetyléteri etylénglykolu (90 ml) sa pridá 0,5 M roztok nitrónium-tetrafluórboritanu v sulfoláne (46 ml, 0,0229 mol) pri teplote -50°C. Zmes sa mieša pri teplote -50°C pod atmosférou dusíka počas 6 hodín. Zmes sa filtruje cez vrstvu silikagélu a vrstva sa premyje 25% etylacetát/zz-heptánom. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát a vodu. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom. Organická vrstva sa premyje vodou a soľankou. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 0%-50% etylacetát/zz-heptánom

210 ako mobilnou fázou, čím sa získa 2-nitro-4-(trifluórmetoxy)fenol (2,5 g, 0,011 mol). TLC (etylacetát/n-heptán = 25:75) Rf 0,50 MS: MH 222.

B. 2-amino-4-(trifluórmetoxy)fenol

Do zmesi 2-nitro-4-(trifluórmetoxy)fenolu (2 g, 0,0089 mol) v etanole (50 ml) a vode (25 ml) sa pri izbovej teplote pridá tiosíran sodný (6,2 g, 0,0356 mol). Heterogénna zmes sa mieša pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 1 hodiny. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a etanol sa odstráni za zníženého tlaku. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (3 x 70 ml) a organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa žltý pevný podiel 2-amino-4(trifluórmetoxy)fenolu (0,9 g, 0,005 mol). TLC (metanol/dichlórmetán = 5: 95) Rf 0,29. MS: MH⁺: 194.

C. N2-(4-brómfenyl)-5-(trifluórmetoxy)-l,3-benzoxazol-2-amín

Do zmesi 2-amino-4-(trifluórmetoxy)fenolu (0,9 g, 0,0047 mol) v tetrahydrofuráne (60 ml) sa pridá 4-brómfenyl-izotiokyanát (1 g, 0,0047 mol) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša počas 16 hodín pri izbovej teplote. Bezvodý síran med’ný (7,1 g, 0,0443 mol, 9,43 ekviv.), trietylamín (0,67 ml, 0,0047 mol, 1 ekviv.) a silikagél (8,5 g) sa pridajú do reakčnej zmesi. Zmes sa mieša počas 4 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zmes sa filtruje cez vrstvu silikagélu 25% etylacetát/n-heptánom ako mobilnou fázou, čím sa získa oranžovo sfarbená pevná látka, ktorá sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 0%-25% etylacetát/n-heptánom ako mobilnou fázou. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa trituruje «-heptánom, čím sa získa N2-(4-brómfenyl)-5-(trifluórmetoxy)-l,3-benzoxazol-2-amín (0,9 g, 0,0024 mol). RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 12,2 min. MS: MH⁺: 373.

D. N2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5(trifluórmetoxy)-1,3-benzoxazol-2-amín

211

Zmes H2-(4-brómfenyl)-5-(trifluórmetoxy)-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,9 g, 0,0024 mol), diboronpinakolesteru (0,73 g, 0,0029 mol), [l,ľbis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,2 g, 0,00024 mol) a octanu draselného (0,71 g, 0,0072 mol) v N,Ndimetylformamide (25 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa filtruje cez vrstvu silikagélu 25% etylacetát/H-heptánom ako mobilnou fázou. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa trituruje «-heptánom, čím sa získa H2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-(trifluórmetoxy)-l,3-benzoxazol-2-amín (0,68 g, 0,0016 mol). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 18,8 min. MS: MH⁺: 421.

E. cz's^,-H2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-(trifluórmetoxy)-l ,3-benzoxazol-2amín

Zmes 3-jód-l-[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-l H-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-4-amínu (0,06 g, 0,00014 mol), H2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-(trifluórmetoxy)-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,071 g, 0,00017 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,011 g, 0,00001 mol) a uhličitanu sodného (0,037, 0,00035 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (3 ml) a vode (1 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 16 hodín. Pridá sa ďalší H2-[4(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-(trifluórmetoxy)-l ,3benzoxazol-2-amín (0,030 g, 0,00007 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,005 g, 0,000004 mol) a zmes sa mieša pri teplote 80°C počas 5 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou, sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 2% vodným roztokom hydroxidu amónneho/5%-25%

212 metanolom/dichlórmetánom ako mobilnou fázou. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa czs-V2-(4{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-6/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-(trifluórmetoxy)l,3-benzoxazol-2-amín (0,065 g, 0,00011 mol). H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,25 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,95 (d, 2H), 7,65 (m, 3H), 7,50 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 4,80 (br, 1H), 2,60 (br, 9H), 2,49 (s, 3H), 2,20 (br, 3H), 2,10 (br, 1H), 1,75 (br, 2H), 1,60 (br, 2H). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 10,7 min. MS: MH⁺ 608.

Príklad 115

C/5-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cykIohexyl]-l//^r-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amín

A. 4-etyl-2-nitrofenol

Do zmesi 4-etylfenolu (4 g, 0,0328 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (100 ml) sa pridá 0,5 M roztok nitrónium-tetrafluórboritanu v sulfoláne (67 ml, 0,0335 mol) pri teplote -50°C. Zmes sa mieša pri teplote -50°C pod atmosférou dusíka počas 6 hodín. Zmes sa filtruje cez vrstvu silikagélu a vrstva sa premyje 25% etylacetát/«-heptánom. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát a vodu. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom. Organická vrstva sa premyje vodou a soľankou. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa asi 10 g surového 4-etyl-2nitrofenolu. Surová látka sa použije v nasledujúcom kroku bez purifíkácie. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10, 68 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,40 (d, 1H), 7,07 (d, 1H), 2,60 (q, 2H), 1,20 (t, 3H). RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%95% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 10,2 min.

B. 2-amino-4-etylfenol

Do zmesi 4-etyl-2-nitrofenolu (5,5 g, 0,032 mol) v etanole (180 ml) a vode (90 ml) sa pridá tiosíran sodný (23 g, 0,131 mol) pri izbovej teplote.

213

Heterogénna zmes sa mieša pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a etanol sa odstráni za zníženého tlaku. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (3 x 100 ml) a organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 0%-25% metanolom/dichlórmetánom ako mobilnou fázou (x 2). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa 2-amino-4etylfenol (0,89 g, 0,006 mol), ’h NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,61 (br, 2H), 6,47 (d, IH), 6,37 (s, IH), 6,18 (d, IH), 2,17 (q, 2H), 1,08 (t, 3H). MS: MH': 137.

C. 7V2-(4-brómfenyl)-5-etyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Do zmesi 2-amino-4-etylfenolu (0,89 g, 0,0065 mol) v tetrahydrofuráne (80 ml) sa pridá 4-brómfenyl-izotiokyanát (1,4 g, 0,0065mol) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša počas 2 hodín pri izbovej teplote. Bezvodý síran meďnatý (6,2 g, 0,039 mol), trietylamín (0,9 ml, 0,0065 mol) a silikagél (11,7 g) sa pridajú do reakčnej zmesi. Zmes sa mieša počas 4 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zmes sa filtruje cez vrstvu silikagélu 25% etylacetát/«-heptánom ako mobilnou fázou, čím sa získa hnedo sfarbená pevná látka, ktorá sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 0%-25% etylacetát/ «-heptánom ako mobilnou fázou. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa trituruje n-heptánom, čím sa získa V2-(4-brómfenyl)-5etyl-1,3-benzoxazol-2-amín (0,96 g, 0,003 mol). RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 12,1 min. MS: MH : 318.

D. JV2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-ety 1-1,3 benzoxazol-2-amín

Zmes V2-(4-brómfenyl)-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-aminu (0,86 g, 0,0027 mol), diborónpinakolesteru (0,84 g, 0,0033 mol), [1 ,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,22 g, 0,00027 mol) a octanu draselného (0,8 g, 0,0081 mol) v Ν,Ν-dimetylformamide (30 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín.

214

Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát a vodu. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (3 x 50 ml) a organická vrstva sa premyje soľankou. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 0%-25% etylacetát/n-heptánom ako mobilnou fázou, čím sa získa N2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,82 g, 0,002 mol).

TLC (etylacetát/n-heptán = 25: 75) Rf 0, 30. MS: MH⁺: 365.

E. czs-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amín

Zmes 3-jód-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,06 g, 0,00014 mol), N2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,062 g, 0,00017 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,011 g, 0,00001 mol) a uhličitanu sodného (0,037, 0,00035 mol) v dimetyléteri etylénglykolu (3 ml) a vode (1 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (2 x 25 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu 2% vodným roztokom hydroxidu amónneho/5%-25% metanolom/dichlórmetánom ako mobilnou fázou. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa czs-N2-(4-{4-amino1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}fenyl)5-etyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,065 g, 0,00012 mol). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,25 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,37 (d, 2H), 8,09 (d, 2H), 7,84 (d, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 5,22 (br, 1H), 3,13 (q, 2H), 2,52 (br, 7H), 2,69 (br, 4H), 2,64 (s, 3H), 2,49 (br, 2H), 2,11 (br, 2H), 2,01 (br, 2H), 1,63 (t, 3H). RPHPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 10,3 min. MS: MH⁺ 552.

215

Príklad 116

Cz5-/V2-(4-{4-amino- l-[4-(dimetylamino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l, 3-benzoxazol-2-amín; a

Príklad 117

Cz\y-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(dimetylamino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4d] pyrimidín-3-yl}feny 1)-5,7-dimetyl-l ,3 -benzoxazol-2-amín

A. Cis- a Zrazzs-l-[4-(dimetylamino)cyklohexyl]-3-jód-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-amín

Do roztoku 4-(4-amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)-lcyklohexanón-monohydrochloridu (2,00 g, 5,08 mmol), roztoku dimetylamínu (2 M v tetrahydrofuráne, 7,62 ml, 15,24 mmol) a octovej kyseliny (0,87 ml, 15,24 mmol) v 1,2-dichlóretáne (200 ml) pri izbovej teplote sa pridá triacetoxyborohydrid sodný (1,40 g, 6,61 mmol). Reakcia sa mieša počas 24 hodín a pridá sa ďalší triacetoxyborohydrid sodný (0,40g). Po ďalších 24 hodinách sa pridá nasýtený vodný roztok NaHCO3 (50 ml) a CH₂C1₂ (200 ml) a organická vrstva sa separuje, suší nad bezvodým Na₂SC>4 a koncentruje vo vákuu. Produkt sa čistí stĺpcovou chromatografiou s použitím gradientu 1:5:94 vodného roztoku hydroxidu amónneho:MeOH:CH₂Cl₂ až 1:20:79 94 vodného roztoku hydroxidu amónneho:MeOH.CH₂Cl₂ ako mobilnou fázou, čím sa získa zmes cis- a írazzs-l-[4-(dimetylamino)cyklohexyl]-3-jód-lH-pyrazolo[3,4d]pyrimidín-4-amínu vo forme bielej kryštalickej pevnej látky (0,87 g, 44%); RP-HPLC Rt 5,458 min, 33% čistota, ŕrazz^-izomér; R_t 5,621 min, 67% čistota, cz's-izomér (5% až 85% acetonitril/O,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ - 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9mm stĺpec); m/z 387 (MH⁺) bol pozorovaný pre oba cis- a transizoméry.

B. Cis- a Zz'zz«Á-jV2-(4-{4-amino-l-[4-(dimetylamino)cyklohexyl]-]//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-di metyl- l,3-benzoxazol-2-amín

216

Zmes cis- a /ra«s-l-[4-(dimetylamino)cyklohexyl]-3-jód-l/7pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (0,50 g, 1,29 mmol), N2-[4-(4,4,5,5tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,565 g, 1,55 mmol), uhličitanu sodného (0,34 g, 3,24 mmol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,075 g, 0,06 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (150 ml) a vode (25 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 16 hodín. Pridá sa ďalší katalyzátor na báze paládia (0,075 g) a N2-[4-(4,4,5,5tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazoI-2-amín (0,40 g) a v reakcii sa pokračuje pri teplote 80°C počas ďalších 16 hodín. Pridá sa ďalší podiel katalyzátora na báze paládia (0,020 g) a N2-[4-(4,4,5,5tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,12 g) a v reakcii sa pokračuje pri teplote 80°C počas ďalších 16 hodín. Reakcia sa koncentruje vo vákuu a zvyšky sa rozpustia v dichlórmetáne (200 ml) a premyjú vodou (50 ml). Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí stĺpcovou chromatografiou na silikagéli s použitím 1% vodného roztoku hydroxidu amónneho a 10% metanolu v CH2CI2 ako mobilnej fázy, čím sa získa cis-N2-{4{4-amino-l-[4-(dimetylamino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,08 g), zmesná frakcia (0,24 g) a tr ans-N2-(4-{ 4-amino-l-[4-(dimety lamino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4J]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,030 g); RPHPLC Rt 11,326 min, 100% čistota (5% až 85% acetonitril/0,1 vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); tn/z 497 (MH⁺);^!H NMR (400 MHz, dé-DMSO) 1,49 (2H, m), 2,01 (6H, m), 2,33 (7H, m), 2,35 (3H, s), 2,40 (3H, s), 4,67 (1H, m), 6,80 (1H, s), 7,11 (1H, s), 7,65 (2H, d, J 8, 5 Hz), 7,92 (2H, d, J 8, 5 Hz), 8,23 (1H, s) a 10,85 (1H, s).

Czs-frakcia vyžadovala ďalšiu purifikáciu s RP-HPLC, čím sa získal cisN2-(4-{4-amino -1 -[4-(dimetyl amino)cyklohexyl] - 1/Z-pyrazolo [3,4-<7] pyrimidín3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,050 g). RP-HPLC R_t 11,337 min, 100% čistota (5% až 85% acetonitril/0, IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ= 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); ^JH NMR (400 MHz, dg-DMSO) 1,61

217 (4Η, m), 2,08 (2H, m), 2,27 (9H, m), 2,34 (3H, s), 2,40 (3H, s), 4,81 (IH, m), 6,80 (IH, s), 7,11 (IH, s), 7,65 (2H, d, J 8, 5 Hz), 7,92 (2H, d, J 8, 5 Hz), 8,23 (IH, s) a 10,85 (IH, s).

Príklady 614-620

Všeobecný spôsob syntézy analógov cz'j-V2-4-[4-amino-l-(4aminocyklohexyl)-1//-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-yl] fenyl-1,3-benzoxazol-2amínu. Zlúčeniny podľa príkladov 118-124 sa pripravia použitím tohto spôsobu.

A. _JV2-(4-Brómfenyl)-5-chlór-l ,3-benzoxazol-2-amín

4-Brómfenyl-izotiokyanát (3,639 g, 17,00 mmol) sa pridá do roztoku 2-amino-4-chlórfenolu (2,441 g, 17,00 mmol) v acetonitrile (20 ml) a reakcia sa mieša pri izbovej teplote počas 2 hodín. Výsledný hnedý roztok sa potom pridá po kvapkách prikvapkávačkou do suspenzie peroxidu draselného (6,04 g, 85,0 mmol) v acetonitrile (20 ml) vopred ochladeného na teplotu 0°C v ľadovom kúpeli. Po 20 minútach počiatočná exotermná reakcia ustane a reakcia sa počas 40 minút nechá ohriať na izbovú teplotu. Po kvapkách sa pridá voda (120 ml) a výsledný belavý pevný podiel sa spojí filtráciou, premyje ďalšou vodou (60 ml), suší cez noc v lyofilizátore, čím sa získa 7V2-(4-brómfenyl)-5chlór-l,3-benzoxazol-2-amín vo forme belavej pevnej látky (4,06 g, 74%); RPHPLC Rt 17,229 min, 99% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 321 (M-H) a 323 (MH)';’h NMR (400 MHz, dó-DMSO) 7,17 (IH, dd, J 8, 5 a 1, 9 Hz), 7,53 (4H, m), 7,71 (2H, d, J 8, 8 Hz) a 10*95 (IH, s).

B. N2-[4-(4,4,5,5-Tetramety 1-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl] - 5-chlór-1,3benzoxazol-2-amín

Zmes obsahujúca V2-(4-brómfenyl)-5-chlór-l,3-benzoxazol-2-amín (4,00 g, 12,36 mmol), bis(pinakoláto)diborón (3,77 g, 14,83 mmol), octan draselný (3,64 g, 37,09 mmol) a [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatý

218 komplex s dichlórmetánom (1:1) (0,61 g, 0,74 mmol) v dimetylformamide (200 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C pod dusíkom počas 16 hodín. Pridá sa ďalší katalyzátor na báze paládia (0,61 g) a v reakcii sa pokračuje ďalších 6 hodín. Pridá sa ďalší diborón (3,0 g) a reakcia sa nechá bežať ďalších 16 hodín. Do reakčnej zmesi sa pridá silikagél (20 ml) a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Výsledný pevný podiel sa potom purifikuje na vrstve silikagélu gradientom 10% až 20% etylacetátu v heptáne ako mobilnou fázou. Výsledný pevný podiel sa trituruje heptánom, čím sa získa A2-[4-(4,4,5,5tetram etyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-chlór-l,3-benzoxazol-2-amín vo forme krémovej pevnej látky (2,40 g, 52%); RP-HPLC Rt 18,164 min, 99% čistota (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ - 254 nm; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); *H NMR (400 MHz, dó-DMSO) 1,29 (12H, s), 7,17 (IH, dd, J 8, 5 a 2,1 Hz), 7,56 (2H, m), 7,68 (2H, m), 7,75 (2H, m) a 10,96 (IH, s).

C. A2-(4-brómfenyl)-5-metyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

2-Amino-4-metylfenol (1,15 g, 9,34 mmol) sa pridá do roztoku 4brómfenyl-izotiokyanátu (2,00 g, 9,34 mmol) v tetrahydrofuráne (35 ml) a reakcia sa mieša pri izbovej teplote počas 16 hodín. Pridá sa bezvodý síran meďnatý (14,06 g, 88,10 mmol), silikagél (14, 06 g) a trietylamín (1,3 ml, 9,34 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 24 hodín. Reakcia sa koncentruje za zníženého tlaku a nanesie na vrstvu silikagélu a purifikuje 1: 5 etylacetát:heptánom (2 1), potom dietyléterom ako mobilnou fázou, čím sa získa A2-(4-brómfenyl)-5-metyl-l ,3-benzoxazol-2-amín vo forme svetlohnedej pevnej látky (2,30 g, 81%); RP-HPLC Rt 16,437 min, 94% čistota (5% až 85% acetonitril/O,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); 'H NMR (400 MHz, dó-DMSO) 2,37 (3H, s), 6,94 (IH, d, J8, 1Hz), 7,27 (IH, s), 7,36 (IH, d, J 8,1 Hz), 7,54 (2H, d, J 8, 4 Hz), 7,72 (2H, d, J 8, 4 Hz) a 10, 72 (IH, s).

219

D. V2-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-metyl-l,3benzoxazol-2-amín

V2-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-metyl-l,3benzoxazol-2-amín sa pripraví z V2-(4-brómfenyl)-5-metyl-l,3-benzoxazol-2amínu (1,5 g, 4,95 mmol) spôsobom opísaným na prípravu V2-[4-(4,4,5,5tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-chlór-l,3-benzoxazol-2-amínu. Produkt je vo forme bielych pevných vločiek (0,79 g, 46%); RP-HPLC Rt 17,382 min, 98% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); *H NMR (400 MHz, dó-DMSO) 1,29 (12 H, s), 2,38 (3H, s), 6,94 (1H, d, J 8, 1 Hz), 7,30 (1H, s), 7,36 (1H, d, J 8, 1 Hz), 7,67 (2H, d, J 8, 5 Hz), 7,75 (2H, d, J 8, 5 Hz) a 10,74 (1H, s).

E. Všeobecný spôsob syntézy cyklohexylamínových analógov cz's-l-(4aminocyklohexyl)-3-j ód-177-pyrazolo [3,4-z7]pyrimidín-4-amínu

220

4-(4-Amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-1 -yl)-l-cyklohexanónmonohydrochlorid (5,08-7,62 mmol) sa suspenduje v dichlóretáne (200-300 ml) pod atmosférou dusíka. Príslušný amín (3,0 ekviv.), ľadová kyselina octová (3,0 ekviv.) a triacetoxyborohydrid sodný (1,3 ekviv.) sa pridajú a reakcia sa mieša pri izbovej teplote počas 1-2 dní. Kvôli dokončeniu reakcie sa pridá ďalší triacetoxyborohydrid sodný (1,3 ekviv.) a v reakcii sa pokračuje ďalší 1 alebo 2 dni. Reakcie sa zhášajú nasýteným roztokom uhličitanu sodného (50 75 ml) a extrahujú dichlórmetánom (200-300 ml). Organické fázy sa separujú, sušia nad bezvodým Na2SO4 a koncentrujú vo vákuu, čím sa získa zmes cis- a Zra/M-produktov vo forme bielej pevnej látky. Surové produkty sa purifikujú zrýchlenou chromatografiou gradientom 2% metanolu a 0,2% hydroxidu amónneho v dichlórmetáne až 5% metanolu a 0,5% hydroxidu amónneho v dichlórmetáne ako mobilnou fázou. Frakcie obsahujúce čisté czs-produkty sa spoja, koncentrujú za zníženého tlaku, sušia v lyofilizátore, čím sa získajú cyklohexylamínové analógy cH-1 -(4-aminocyklohexyl)-3-jód-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-amínu vo forme bielej pevnej látky (výťažky a analýza vid tabuľka 1).

221

TABUĽKA 1

Štruktúra	Výcho- diskový amín	Množstvo východisko- vého cyklohexa- nónu (mmol)	m/z (MH+)	HPLC RT (min)	Čistota	% Výťažok izolovaného cisizoméru
	H	5,08	429,0	5,63	95%	8
N o	Q
'a o
03 Q N	h2n^ H3C0	7,62	417,0	5,96	100%	59
M US	HnNs.	7,62	373,0	5,32	100%	2
2 ch3
θ zN

Podmienky RP-HPLC: 5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec.

F. Všeobecný spôsob syntézy analógov cz\y-V2-4-[4-amino-l-(4aminocyklohexy 1)-1//-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-3-yl] fenyl-1,3-benzoxazol-2amínu

Cyklohexylamínový analóg cis-l-(4-aminocyklohexyl)-3-jód-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,10-0,52 mmol) sa rozpustí v dimetyléteri etylénglykolu (5-10 ml) a vode (2,5-5 ml). Príslušný substituovaný alebo

222 nesubstituovaný 7/-(1,3-benzoxazol-2-yl)-7/-[4-(4,4,5,5-tetramety 1-1,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (1,25 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,05 ekviv.) a uhličitan sodný (2,5 ekviv)) sa pridajú a reakcia sa zahrieva pri teplote 80°C počas 20 hodín. Kvôli dokončeniu reakcie sa pridá ďalší boronát (1,25 ekviv.) a katalyzátor na báze paládia (0,05 ekviv ). Pri precipitácii sa do reakcie pridá navyše DME/H₂0 2:1 (5 ml) a reakcie sa znovu zahrievajú pri teplote 80°C počas ďalších 22-40 hodín. Do reakcie sa pridá silikagél (5-8 ml) a zmes sa koncentruje za zníženého tlaku. Purifikáciou zrýchlenou chromatografiou na silikagéli gradientom 2% až 50% metanolu obsahujúceho 0,5M hydroxid amónny v dichlórmetáne sa získajú analógy czs-7/2-4-[4-aminol-(4-aminocyklohexyl)-l/7-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]fenyl-l,3benzoxazol-2-amínu. U produktov s nedostatočnou čistotou sa vzorky ďalej purifikujú na RP-HPLC (Waters PrepLC 4000, prietok: 10 ml/min, λ = 254 nm, gradient: gradient 15% až 3 5% acetonitril/0,IM vodného octanu amónneho v priebehu 40 minút, potom gradient 35% až 90% acetonitril/0,IM vodného octanu amónneho v priebehu 150 minút; Deltapak C18, 300 Á, 15 pm, 40 x 100 mm stĺpec). Frakcie obsahujúce požadované produkty sa spoja a koncentrujú vo vákuu, potom sušia v lyofilizátore, čím sa získajú produkty vo forme bielych alebo hnedých pevných látok (výťažky a analýza viď tabuľka 2).

223

TABUĽKA 2

Pr.	Štruktúra	Východiskový cyklohexylamín	Výcho- diskový boronát	m/z (MH+)	HPLC RT (min)	Čis- tota	% Vý- ťažok
Štruktú- ra	Množ- stvo (mmol)
118	NM,	óó j. >>	0,24		527,3	11,66	100%	32
				Pl·
119	w, yJ	«M	0,25	P Ny.o T	499,3	9,72	100%	79
	t X' N k	P ''O7 Z		Φ
	k“'			Pl·
120	nh, y*	ΐ 1 w N T#	0,33	ď γ	539,3	11,50	100%	28
	W N 5Í	0		$
	0			pl·
121	„-ζθ nh, y55^ T o ^*0	ód- P O	0,12	Pl·	511,3	9,77	100%	60

224

122	NH, ii χ,Ν 4 o	6 0	0,10	i? Νγ° NH 6	545,2	11,36	97%	27
123	NH, O 05 6 h~~	64 §	0,13	a	455,2	9,48	100%	61
124	NH, 7^ 4 9-	64 N^- /	0,52	h Νγ°

Podmienky RP-HPLC: 5% až 85% acetonitril/O,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec.

Príklad 125 cz'5'-A2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl} fény 1)-4-(2-nitro fenyl)- l,3-tiazol-2-amín

Použije sa spôsob opísaný na prípravu c/s-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl} fenyl)-4-etyll,3-tiazol-2-amínu sa s výnimkou toho, že ako alkylačné činidlo sa použije 2bróm-2'-nitroacetofenón (0,126 g, 0,516 mmol). Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom

225 v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 7,0-8,0 min) sa získa cz's-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-(2nitrofenyl)-l,3-tiazol-2-amín vo forme žltej peny (0,088 g, 0,144 mmol); RPHPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS 0 8, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 7,72 min; MS (MH)⁺611.

Príklad 126 czs-A2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzotiazol-2-amín

Pyridínium-tribromid (0,894 g, 2,80 mmol) a 3,5-dimetylcyklohexanón (0,180 ml, 1,27 mmol) sa suspendujú v dichlórmetáne (5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 24 hodín, potom sa zriedi dichlórmetánom (60 ml). Organická vrstva sa extrahuje postupne vodou (10 ml) a hydrogenuhličitanom sodným (10 ml), suší (síranom horečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikáciou produktu zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou (7,5% etylacetát/heptán) sa získa 2,6-dibróm-3,5-dimetyl-l-cyklohexanón vo forme zmesi diastereoizomérov (0,243 g, 0,855 mmol): TLC Rf (20% etylacetát/heptán): 0,35.

Alkylácia 2,6-dibróm-3,5-dimetyl-l-cyklohexanónu (0,243 g, 0,855 mmol) sa uskutoční podľa alkylačneho spôsobu opísaného na prípravu cis-N2(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-etyl-l,3-tiazol-2-amínu s výnimkou toho, že alkylácia sa uskutočňuje pri teplote 75°C, čím sa získa A-(4-brómfenyl)-A-(5,7-dimetyl-l,3benzotiazol-2-yl)amín (0,251 g, 0,754 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 14,8 min.

A-(4-Brómfenyl)-A-(5,7-dimetyl-1,3-benzotiazol-2-yl)amín (0,251 g, 0,754 mmol) sa konvertuje na požadovanú zlúčeninu spôsobom opísaným na

226 prípravu cis-N2-(4-{ 4-amino-1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyr azolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-etyl-l,3-tiazol-2-amínu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 8,8-10,5 min) sa získa ci£-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4mety lpiperazino)cyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl} fenyl)-5,7dimetyl-1,3-benzotiazol-2-amín vo forme bieleho prášku (0,081 g, 0,143 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 8,75 min; MS (MH) 568.

Príklad 127 ďs-jV2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4t/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5, 6-dihydro-4//-cyklopenta[</][l,3]tiazol-2-amín

Cyklopentanón (200 μΐ, 2,26 mmol) a pyridínium-bromid (0,723 g, 2,26 mmol) sa suspendujú v dichlórmetáne (5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc, potom sa zriedi éter/petroléterom (1:1, 60 ml). Organická fáza sa postupne extrahuje vodou (10 ml) a vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (10 ml), potom sa suší (síranom horečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikáciou produktu zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou (25% éter/petroléter) sa získa 2-brómcyklopentanón (0,220 g, 1,35 mmol) vo forme bezfarebného oleja; TLC (25% éter/petroléter) Rf: 0,35.

2-Brómcyklopentanón (0,220 g, 1,35 mmol) sa konvertuje na požadovanú zlúčeninu spôsobom opísaným na prípravu cz^-5-jV2-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-y 1} fény 1)-4-(2nitrofenyl)-l,3-tiazol-2-amínu s výnimkou toho, že alkylácia sa uskutočňuje pri teplote 60°C. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min pomocou 8μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 7,8-8,8 min) sa získa c/5-jV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-4//-cyklopenta[</][ 1,3]tiazol-2-amín vo

227 forme hnedého prášku (0,009 g, 0,017 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 7,23 min; MS (MH)⁺ 530.

Príklad 128 cí5-/V2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-fenyl-l ,3-tiazol-2-amín

Spôsob prípravy cz\y-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-ť/]pyrimidín-3-yl} fenyl)-5,6-dihydro-4//-cyklopenta[J][l,3]tiazol-2-amínu sa použije na konvertovanie butyrofenónu (436 μΐ, 3,00 mmol) na požadovanú zlúčeninu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min pomocou 8μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 8,911,1 min) sa získa cíí-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-fenyl-l,3-tiazol-2-amin vo forme bieleho prášku (0,022 g, 0,037 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 9,27 min; MS (MH)⁺ 594,

Príklad 129 cz'5'-//2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4,5,6,7-tetrahydro-l,3-benzotiazol-2-amín

Spôsob prípravy cís-7/2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-3-yl} fenyl)-5,6-dihydro-4//-cyklopenta[J][l,3]tiazol-2-amínu sa použije na konvertovanie cyklohexanónu (310 μΐ, 3,00 mmol) na požadovanú zlúčeninu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 6,8-8,6 min) sa získa cz\y-7V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]228

H-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-y 1} fény 1)-4,5,6,7-tetrahydro-1,3-benzotiazol-2amín vo forme oranžového prášku (0,022 g, 0,040 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5 pm Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 7,62 min; MS (MH)⁺ 544.

Príklad 130 cz'5'-/V2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-izopropyl-4-fenyl-1,3 tiazo 1-2-amín

Spôsob prípravy czs-H2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo [3,4-r/]pyrimidín-3-y 1} fény l)-5,6-dihydro-4H-cyklopenta[t/][l,3]tiazol-2-amínu sa použije na konvertovanie izovalerofenónu (0,484 g, 2,98 mmol) na požadovanú zlúčeninu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8p Hypersil HS 0 8, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 9,5-11,7 min) sa získa czs-H2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 H-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-y 1} fény l)-5-izopropyl-4-feny 1-1,3tiazol-2-amín vo forme ružového prášku (0,060 g, 0,099 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5 pm Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 9,82 min; MS (MH)⁺ 608.

Príklad 131 cz'í-H2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-fenyl-5-propyl-1,3-tiazol-2-amín

Spôsob prípravy cz5^,-H2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l H-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,6-dihydro-4H-cyklopenta[J][l,3]tiazol-2-amínu sa použije na konvertovanie valerofenónu (0,488 g, 3,01 mmol) na požadovanú zlúčeninu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20

229 minút pri 21 ml/min pomocou 8μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, R_t 9,611,8 min) sa získa czs-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-fenyl-5-propyl-l,3-tiazol-2-amín vo forme žlté prášku (0,135 g, 0,222 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,lM vodný octan amónny v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) R_t 10,08 min; MS (MH)⁺ 608.

Príklad 132

3-[4-(l,3-Benzoxazol-2-ylmetyl)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyljl/7-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amín

2-Aminofenol (0,257 g, 2,36 mmol) a 4-brómfenyloctová kyselina (0,500 g, 2,36 mmol) sa zahrievajú v uzavretej nádobe pri teplote 200°C. Po 4 hodinách sa reakčná zmes ochladí na izbovú teplotu a zriedi metanol/dichlórmetánom (5%, 60 ml). Organická fáza sa extrahuje vodným roztokom uhličitanu sodného (1 M, 10 ml), suší (síranom horečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikáciou zvyšku zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou (15% etylacetát/heptán) sa získa V-(l,3-benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín vo forme hnedej pevnej látky (0,347 g, 1,20 mmol); (MH)⁺ 290.

V-( 1,3-B enzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amín sa konvertuje na 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)benzyl]-l,3-benzoxazol, a potom na požadovanú zlúčeninu spôsobom opísaným na prípravu czs-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}fenyl)-6-chlór-l,3-benzotiazol-2amínu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, R_t 5,6-7,3 min) sa získa 3-[4-(l,3benzoxazol-2-ylmetyl)fenyl]-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-fi?]pyrimidín-4-amín vo forme bieleho prášku (0,102 g, 0,195 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v

230 priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím a 5μ Hypersil HS C 18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 6,83 min; MS (MH) 523.

Príklad 133

Al-[2-(Dimetylamino)etyl]-2-{4-amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl}propánamid

Použije sa spôsob opísaný na prípravu Al-[2-(dimetylamino)etyl]-2-(4amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lH-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-1-yl)propánamidu s výnimkou toho, že pri Suzukiho kopulácii sa použije N-( 1, 3-benzoxazol-2-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan2-yl)fenyl]amín. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 5,5-7,0 min) sa získa Al-[2-(dimetylamino)etyl]-2-{4-amino-3-[4-(l ,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl}propánamid vo forme belavej pevnej látky (0,003 g, 0,006 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5 pm Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 6,70 min; MS (MH)⁺ 486.

Príklad 134 cz's-A2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-(4-metylfenyl)-l ,3-tiazol-2-amín p-Tolylboritá kyselina (0,150 g, 1,10 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,064 g, 0,055 mmol) a uhličitan cézny (1,80 g, 5,52 mmol) sa suspendujú v toluéne (25 ml). Reakčná zmes sa proplachuje silným prúdom dusíka počas 15 minút. Pridá sa butyrylchlorid (0,344 ml, 3,31 mmol) a reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 100°C pod atmosférou dusíka počas 24 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a zriedi éterom (100 ml). Organická vrstva sa extrahuje postupne vodou (10 ml), vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (10 ml) a vodným roztokom chloridu sodného (10

231 ml). Organická vrstva sa suší (síranom horečnatým), filtruje a koncentruje. Purifikáciou zvyšku zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou (7,5% éter/petroléter) sa získa l-(4-metylfenyl)-l-butanón vo forme bezfarebného oleja (0,134 g, 0,827 mmol): ’h NMR (CDC13, 400 MHz) δ 7,86 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 2,92 (t, 2H), 2,41 (s, 3H), 1,76 (sx, 2H), 1,00 (t, 3H).

1-(4-Metylfenyl)-l-butanón (0,134 g, 0,827 mmol) sa konvertuje na požadovanú zlúčeninu spôsobom opísaným na prípravu cz'.y-zV2-(4-{4-amino-l[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}fenyl)5,6-dihydro-4J7-cyklopenta[<7][l,3]tiazol-2-amínu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersil HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 10,0-12,0 min) sa získa cz\s-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-<f|pyrimidín-3-y 1} fény l)-5-etyl4-(4-metylfenyl)-l,3-tiazol-2-amín vo forme belavej pevnej látky (0,036 g, 0,059 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5 gm Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 10,13 min; MS (MH)⁺ 608.

Príklad 135 czj-jV2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-(2-metylfenyl)-l ,3-tiazol-2-amín

Spôsob prípravy cz'5^,-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l 77-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-ety l-4-(4-metylfeny 1)-1,3 tiazol-2-amínu sa použije na konvertovanie o-tolylboritej kyseliny (0,200 g,

I, 47 mmol) na požadovanú zlúčeninu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min pomocou 8g Hypersil HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 9,8II, 7 min) sa získa cz,s-zV2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3 -y 1} fenyl)-5-ety 1-4-(2-mety lfenyl)-l ,3-tiazol-2amín vo forme belavej pevnej látky (0,075 g, 0,123 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1

232 ml/min s použitím 5 pm Hypersil HS C 18, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 9,83 min; MS (MH)⁺ 608.

Príklad 138 cz's-jV2-(4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4t/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-4-(3-metylfenyl)-l,3-tiazol-2-amín

Spôsob prípravy cz's-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1] -1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3-y 1} fény l)-5-ety l-4-(4-mety lfenyl)-1,3tiazol-2-amínu sa použije na konvertovanie m-tolylboritej kyseliny (0,175 g, 1,29 mmol) na požadovanú zlúčeninu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min pomocou 8p Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 10,0-12,0 min) sa získa cz's-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-y 1} fenyl)-5-ety 1-4-(3-mety lfeny 1)-1,3tiazol-2-amín vo forme belavej pevnej látky (0,051 g, 0,084 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5 μηι Hypersil HS 08,250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 10,13 min; MS (MH) 608.

Príklad 139

Czs-V2-{4-(4-amino-l-(4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-yl)-2-metoxy fenyl} -l//-2-indolkarboxamid-bismaleát

Zmes cz's-3-(4-amino-3-metoxy fenyl)-1-[4-(4-metylpiperazino)cy klohexyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,50 g, 1,15 mmol) v dichlórmetáne (4 ml) a pyridíne (4 ml) sa ochladí na teplotu 0°C, potom nechá reagovať s l//-2-indolkarbonylchloridom (0,27 g, 1,49 mmol) v dichlórmetáne (4 ml). Zmes sa nechá ohriať na izbovú teplotu a mieša počas jednej hodiny. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku, potom sa zvyšok vytrepe medzi dichlórmetán (50 ml) a 1 N vodný roztok hydroxidu sodného. Vrstvy sa separujú, potom sa organický roztok suší nad síranom horečnatým, filtruje a

233 filtrát koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa zvyšok, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím dichlórmetán/metanolu (7: 3) ako mobilnej fázy. Pevný podiel (0,53 g) sa rozpustí v etylacetáte (60 ml) a etanole (35 ml) zahriatím na teplotu 60°C. Pridá sa kyselina maleínová (0,32 g, 2,75 mmol) v etylacetáte (5 ml) a zmes sa ochladí na teplotu 0°C. Vzniknutý pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa (0,70 g, 0,86 mmol) cz's-/V2-{4-(4-amino-l-(4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl)177-pyrazolo[3,4-<YJ pyrimidí n-3-y l)-2-metoxyfenyl}-l//-2-indolkarboxamidbismaleát: ^JH NMR (DMSO-d₆, 400 ΜΗζ)δ 11,82 (s, 1H), 9,46 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,10 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,40 (s, 1H), 7, 33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,24-(t, 1H), 7,09 (t, 1H), 6,14 (s, 4H), 4,88 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 2,3-3,3 (m, 14H), 2,09 (m, 2H), 1,7-1,8 (m, 4H); RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Ä, 250 X 4,6 mm; 5% až 100% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,22 min; MS: MH⁺ 580,3.

Príklad 140

CžJ-7V2-{4-4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/í-pyrazolo[3,46?]pyrimidín-3-yl-2-metoxyfenyl}-l-metyl-lŕ/-2-indolkarboxamid-bi s maleát

Požadovaná zlúčenina sa pripraví z cžs--3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4(4-metylpiperazino)cyklohexyl-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu a 1metyl-l/7-2-indolkarbonylchloridu podobným spôsobom ako je opísaný na prípravu cz'j-7V2-{4-(4-amino-l-(4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl)-lZ/pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl}-l//-2-indolkarboxamidbismaleátu: NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,47 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,09 (d, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,59 (d, 1H), 7,17-7,36 (m, 4H), 7,16 (t, 1H), 6,16 (s, 4H), 4,88 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,3-3,3 (m, 14H), 2,09 (m, 2H), 1,7-1,8 (m, 4H); RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) t_r 15,98 min;

MS: MH⁺ 594,3.

234

Príklad 141

VI -{4-[4-amino-1-(4-piperidy 1)-1 V-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-acetát

A. 2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilín

Zmes íerc-butyl-V-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan2-yl)fenyl]karbamátu (45,0 g, 129 mol) sa rozpustí v dichlórmetáne (270 ml), potom sa roztok ochladí na teplotu 5°C v ľadovom kúpeli. Zmes 20% trifluóroctovej kyseliny v dichlórmetáne sa po kvapkách pridá v priebehu jednej hodiny, pričom teplota sa udržuje < 5°C. Reakčná zmes sa ohreje na izbovú teplotu a mieša počas 2 hodín. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku, potom sa výsledný olej rozpustí v dichlórmetáne (250 ml) a opatrne extrahuje 2,5 N vodným roztokom hydroxidu sodného (300 ml), potom soľankou (100 ml). Organický roztok sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a fitrát koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa 2-metoxy-4-(4,4,5,5tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilín (21,7 g, 67,5%) vo forme svetlohnedej pevnej látky ako bismaleát: *Η NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 7,06 (d, IH), 6,98 (s, IH), 8,09 (d, IH), 6,59 (d, IH), 5,13 (bs, 2H), 3,76 (s, 3H), 1,26 (s, 12H); RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 25%100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) tr 10,85 min.

B. zerc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxy fény 1)-1 V-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-l -yl]-l -piperidínkarboxylát

Zmes ŕerc-butyl-4-(4-amino-3-jód-l V-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl)-lpiperidínkarboxylátu (0,50 g, 11,26 mmol), 2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilínu (3,10 g, 12,39 mmol), uhličitanu sodného (2,90 g, 27,0 mmol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,78 g, 0,67 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (90 ml) a vody (45 ml) sa zahrieva pri teplote 85°C počas 18 hodín. Zmes sa ochladí a odparuje za zníženého tlaku, potom vytrepe medzi vodu (50 ml) a dichlórmetán (150 ml). Vodná vrstva sa extrahuje ďalším dichlórmetánom (2 X 50 ml), potom sa spojené organické podiely sušia nad

235 síranom horečnatým a filtrujú. Filtrát sa koncentruje a purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu dichlórmetán/metanolom (96: 4) ako mobilnou fázou, čím sa získa požadovaná zlúčenina (4,51 g, 91%) vo forme hnedej pevnej látky: ’h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,98 (d, 1H), 6,76 (d, 1H), 5,06 (bs, 1H), 4,86 (m, 1H), 4,08 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 2,15-2,90 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,90 (m, 2H), 1,43 (s, 9H); RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) tr 9,70 min.

C. Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-acetát

Zmes ter c-buty 1-4 -[4-amino -3-(4-amino-3-metoxy fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď)pyrimidín-l-yl]-l -piperidínkarboxylátu (0,10 g, 0,228 mmol) v dichlórmetáne (2 ml) a pyridíne (1 ml) sa nechá reagovať s 2-fluór-4trifluórmetylbenzoylchloridom (0,057 g, 0,251 mmol), potom sa mieša počas 1 hodiny. Rozpúšťadlá sa odparujú, potom sa zvyšok nechá reagovať s trifluóroctovou kyselinou (1 ml) v dichlórmetáne (2 ml). Zmes sa mieša počas 1 hodiny pri izbovej teplote, potom sa rozpúšťadlá odparujú za zníženého tlaku a zvyšok purifikuje preparatívnou RP-HPLC na C18 s použitím acetonitril-0,05 M octanu amónneho ako mobilnej fázy. Lyofilizáciou sa získa čistá požadovaná zlúčenina: *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,90 (d, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,99 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 4,78 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,10 (m, 2H), 2,69 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 1,85-2,0 (m, 5H); RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 17,33 min; MS: MH⁺ 530,2.

Zlúčeniny podľa príkladov 142-216 sa pripravia z terc-butyl-4-[4-amino3-(4-amino-3-metoxy fenyl)- 1/7-pyrazolo [3,4-d] pyrimidín-1 -yl] -1 -piperidínkarboxylátu a príslušného chloridu kyseliny podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-acetátu. Na pripravenie požadovanej zlúčeniny sú v niektorých prípadoch potrebné štandardné operácie s funkčnými skupinami. Voľné bázy sa pripravia

236 po purifikácii na preparatívnej HPLC ich vytrepaním medzi vodný roztok hydroxidu sodného a dichlórmetánu. Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, potom filtruje a filtrát sa koncentruje, čím sa získa požadovaný produkt.

Príklad 143

7/1-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3-y l]-2metoxyfenyl}-3-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 17,12 min; MS: MH⁺ 530,2.

Príklad 144

7/1 -{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/jpyrimi dín-3-yl]-2metoxyfenyl}benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 14,20 min; MS: MH⁺ 444,1.

Príklad 145

7Vl-{4-[4-amino-l -(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl)-3-fenylpropánamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 14,97 min; MS: MH⁺ 472,2.

237

Príklad 146

VI-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl}-3-cyklopentylpropánamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15,95 min; MS; MH⁺ 464,2.

Príklad 147

N5-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l ,3-dimetyl-177-5-pyrazolkarboxamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 11,62 min; MS: MH⁺ 462,2.

Príklad 148

VI-{ 4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-(2-tienyl)acetamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS C 18 Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 13,17 min; MS: MH⁺ 464,2.

Príklad 149

VI -{4-[4-amino-l -(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl} -2-fenylacetamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 13,63 min;

MS: MH⁺ 458,2.

238

Príklad 150 /VI -{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-(3,4-dimetoxyfenyl)acetamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 13,20 min; MS: MH⁺ 518,3.

Príklad 151

771- {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-fenoxypropánamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4, 6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15,43 min; MS: MH⁺ 488,2.

Príklad 152

775-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1/7-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-5-izoxazolkarboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 10,93 min; MS: MH⁺ 433,1.

Príklad 153

772- {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-pyridínkarboxamid-triacetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Ä, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 13,52 min;

MS: MH⁺ 445,2.

239

Príklad 154 /VI -{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-2,4-difluórbenzamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 14,65 min; MS: MH⁺ 480,1.

Príklad 155 /VI -{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3-y l]-2metoxyfenyl}-2,5-difluórbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 14,75 min; MS: MH⁺ 480,2.

Príklad 156 /V2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-furamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr Í3,40 min; MS: MH⁺ 434,2.

Príklad 157 /VI-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2,2-dimetylpropánamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 14,53 min;

MS: MH⁺ 424,2.

240

Príklad 158

TVl-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-lN-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-4-kyanobenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 13,68 min; MS: MH⁺ 469,2.

Príklad 159

N1-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l-cyklopropánkarboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 11,05 min; MS: MH⁺ 408,2.

Príklad 160

N3-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-metylnikotínamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 11,53 min; MS: MH⁺ 459,1.

Príklad 161

N1-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/] pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-4-fluór-3-metylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15,32 min;

MS: MH⁺ 476,2.

241

Príklad 162

Al-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl}-3-(dimetylamino)benzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 14,63 min; MS: MH⁺ 487,2.

Príklad 163

Al-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2,3-difluór-4-metylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 16,03 min; MS: MH⁺ 494,2.

Príklad 164

A4-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lŕ/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}izonikotínamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15,77 min; MS: MH⁺ 445,1.

Príklad 165

A3-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}nikotínamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 17,50 min;

MS: MH⁺ 445,1.

242

Príklad 166

Λ/2-{-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl} -1 -metyl-1 //-2-pyrolkarboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-50% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 22,20 min; MS: MH⁺ 447,2.

Príklad 167

7/3-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-6-metylnikotínamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 17,97 min; MS: MH⁺ 459,2.

Príklad 168

7/2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl}-2-pyrazínkarboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 17,63 min; MS: MH⁺ 446,1.

Príklad 169

7/1 -{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-4-jódbenzamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 16,08 min;

MS: MH⁺ 570,1.

243

Príklad 170

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-ΙΗ-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-4-brómbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15,42 min; MS: MH⁺ 524,1.

Príklad 171

Al-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-4-fenoxybenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 17,17 min; MS: MH⁺ 536,2.

Príklad 172

Al-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl-4-fluórbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 13,65 min; MS: MH⁺ 462,1.

Príklad 173

Al -{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-4-chlórbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 mlJmin) tr 15,57 min;

MS: MH⁺ 478,2.

244

Príklad 174

Nl-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyr azolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-4-metoxybenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 13,62 min; MS: MH⁺ 474,2.

Príklad 175

Nl -{4-[4-amino-1-(4-piperidy 1)-1//-pyrazolo [3,4-c/jpyrimidí n-3-y 1]-2metoxyfenyl}-4-(trifluórmetoxy)benzamid

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 16,30 min; MS: MH⁺ 528,2.

Príklad 176

Nl -{4-[4-amino-1 -(4-piperidy 1)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidí n-3-y 1]-2metoxyfenyl}-4-nitrobenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 13,77 min; MS: MH⁺ 489,2.

Príklad 177

N2-{4-[4-amino-l -(4-piperidy 1)-1//-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidí n-3-y 1]-2metoxyfenyl} benzo [Z>]tiofén-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 16,12 min;

MS: MH⁺ 500,2.

245

Príklad 178

A2-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl }benzo [ó] furán-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 μηι, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15,70 min; MS: MH⁺ 484,2.

Príklad 179

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fény 1}-4-mety lbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15,47 min; MS: MH⁺ 458,2.

Príklad 180

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-4-(/erc-butyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C 18 Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 17,93 min; MS: MH⁺ 500,2.

Príklad 181

Metyl-4-{(4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2metoxy anilino }karbonyl)benzoát-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 14,70 min; MS: MH⁺ 502,1.

246

Príklad 182

4-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-^ň0pyrimidín-3-yl]-2metoxyanilino}karbonyl)benzoová kyselina

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 μηι, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) t_r 10,02 min; MS: MH⁺ 478,1.

Príklad 183 jVl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-íi]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-chlórbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 μηι, 100Á, 250 X 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) t_r 7,28 min; MS: MH⁺ 478,1.

Príklad 184

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-brómbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 μιη, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) t_r 7,42 min; MS: MH⁺ 524,1.

Príklad 185

Al-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)- lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-metoxybenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 μιη, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) t_r 7,87 min; MS: MH⁺ 474,2.

247

Príklad 186

Al -{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-fenylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) tr 8,27 min; MS: MH⁺ 520,2.

Príklad 187

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-(trifluórmetyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15,07 min; MS: MH⁺512,2.

Príklad 188

Al -{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-(trifluórmetoxy)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15,77 min; MS: MH⁺ 528,2.

Príklad 189

Al-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-lA-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-3-metoxybenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 14,43 min; MS: MH⁺ 474,2.

248

Príklad 190

Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-3-(trifluórmetyl)benzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) tr 8,15 min; MS: MH⁺ 512,2.

Príklad 191

VI -{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-y 1]-2metoxy fenyl}-2-fluór-3-(trifluórmetyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 25%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) tr 8,50 min; MS: MH⁺ 530,2.

Príklad 192

Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl}-2-fluór-6-(trifluórmetyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15,30 min; MS: MH⁺ 530,2.

Príklad 193

VI -{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-fluór-5-(trifluórmety])benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 14,68 min;

MS: MH⁺ 530,2.

249

Príklad 194

7Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-fluór-5-metylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 13,32 min; MS: MH⁺ 476,2.

Príklad 195

7Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-4-chlór-2-fluórbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 16,50 min; MS: MH⁺ 496,1.

Príklad 196

7V1 - {4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-4-benzoylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 16,33 min; MS: MH⁺ 548,2.

Príklad 197

ΛΠ-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-4-acetylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 13,77 min;

MS: MH⁺ 486,2.

250

Príklad 198

Vl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-4-izopropylbenzamid

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 17,10 min; MS: MH⁺ 486,2.

Príklad 199

VI-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-lV-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-4-etylbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15,85 min; MS: MH⁺ 472,2.

Príklad 200

VI-{4-[4-amino-l -(4-piperidyl)-lV-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-4-propylbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 17,02 min; MS: MH⁺ 486,2.

Príklad 201

VI -{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lV-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-4-cyklohexylbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 19,55 min;

MS: MH⁺ 526,2.

251

Príklad 202

VI - {4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl }-4-etoxybenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15,28 min; MS: MH⁺ 488,2.

Príklad 203

VI-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-4-(metylsulfonyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 13,01 min; MS: MH⁺ 527,2.

Príklad 204

VI-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-y l]-2metoxyfenyl}-4-izopropoxybenzamid-bisacetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 16,20 min; MS: MH⁺ 502,2.

Príklad 205

VI-{4-[4-amino-1-(4-piperidy 1)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-y l]-2metoxyfenyl}-4-(1//-1 -imidazolyl)benzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 13,02 min;

MS: MH⁺ 510,2.

252

Príklad 206

7V1-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-fluórbenzamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS C18, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 14,60 min; MS: MH⁺ 462,3.

Príklad 207 ?/2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-5-metoxybenzo[Z>]furán-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15,38 min; MS: MH⁺ 514,3.

Príklad 208

TV2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-5-brómbenzo[á]furán-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 17,03 min; MS: MH⁺ 564,1.

Príklad 209

N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl}-5-mety lbenzo[Z>]furán-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 16,27 min;

MS: MH⁺ 498,3.

253

Príklad 210

7V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-17/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-3-metylbenzo[6]furán-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 gm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 16,67 min; MS: MH⁺ 498,3.

Príklad 211

V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-5-nitrobenzo[á]furán-2-karboxamid

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 gm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 15, 33 min; MS: MH⁺ 529,2.

Príklad 212

A/2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-5-aminobenzo[7]furán-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 gm, 100Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 11,93 min; MS: MH⁺ 499,3.

Príklad 213 /V2-{4-[4-(acetylamino)-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-5-(acetylamino)benzo[ó]furán-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 gm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-0,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 12,47 min; MS: MH⁺ 583,2.

254

Príklad 214

N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-í/]py rimidín-3-y l]-2metoxyfenyl}-5-(acetylamino)benzo[ó]furán-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 0 8, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 11,95 min; MS: MH⁺ 541,2.

Príklad 215 //2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-7-metylbenzo[ó]furán-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 14,23 min; MS: MH⁺ 498,3.

Príklad 216 /V2-{ 4-[4-amino-l -(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-7-metoxybenzo[ó]furán-2-karboxamid-acetát

RP-HPLC (Hypersil HS 08, 5 pm, 100 Á, 250 X 4,6 mm; 5%-100% acetonitril-O,05 M octan amónny v priebehu 25 min, 1 ml/min) tr 13,03 min; MS: MH⁺ 514,3.

Príklad 217 rac-jV2-{4-[4-Amino-l-(l-metyltetrahydro-l//-3’pyrolyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

A. rac-fer c-butyl-3-hydroxy-1 -pyrolidínkarboxylát

255

Do roztoku 3-pyrolidinolu (3,144 g, 3,00 ml, 36,09 mmol) v 1,4-dioxáne (50 ml) a vody (50 ml) sa pridá di-ŕerc-butyl-dikarbonát (8,664 g, 39,70 mmol) a hydrogenuhličitan sodný (10,612 g, 126,3 mmol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 18 hodín, čím sa získa biela suspenzia v žltom roztoku. Reakčná zmes sa filtruje a filtrát sa extrahuje etylacetátom (2 x 50 ml). Spojené organické fázy sa premyjú soľankou, sušia nad bezvodým síranom horečnatým, filtrujú a koncentrujú, čím sa získa rac-/erc-butyl-3-hydroxy-lpyrolidínkarboxylát vo forme svetložltého oleja (6,039 g, 89%). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 1,51 (s, 9 H), 1,84-2,05 (m, 2 H), 2,28 (d, 1 H), 3,333,48 (m, 4 H), 4,43 (s, 1H).

B. rac-3 -Jód-1 -tetrahydro-177-3-pyrolyl-177-pyrazolo [3,4-£/]pyrimidín-4amín-monohydrochlorid

Do roztoku 3-jód-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu (5,610 g, 21,49 mmol) v tetrahydrofuráne (200 ml) sa pridá rac-íerc-butyl-3-hydroxy-lpyrolidínkarboxylát (6,039 g, 32,25 mmol), trifenylfosfín (11,273 g, 42,98 mmol) a dietylazodikarboxylát (7,485 g, 6,77 ml, 42,98 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 6 dní, potom sa koncentruje, čím sa získa oranžovohnedý olej. Pridá sa acetón (100 ml) a 5 N kyselina chlorovodíková (50 ml) a roztok sa zahrieva pri teplote 40°C počas 18 hodín, potom sa ochladí na izbovú teplotu. Výsledný žltý precipitát sa filtruje a filtračný koláč sa premyje dietyléterom a suší sa, čím sa získa rac-3-jód-l-tetrahydro-177-3pyrolyl-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín-monohydrochlorid vo forme belavej pevnej látky (5,153 g, 65%). RP-HPLC Rt 4,079 min, 99% čistota (5% až 85% acetonitril/0,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 331 (MH⁺).

C. rac-3-Jód-l -(1 -mety ltetrahydro-177-3-pyrolyl)-l 77-pyrazolo [3,4ŕ/]pyrimidín-4-amín

Do roztoku rac-3-jód-l-tetrahydro-177-3-pyrolyl-177-pyrazolo[3,4fi?]pyrimidín-4-amín-monohydrochloridu (0,400 g, 1,09 mmol) v dichlóretáne (10 ml) sa pridá formaldehyd (37% vo vode, 0,12 ml, 1,63 mmol),

256 triacetoxyborohydrid sodný (0,578 g, 2,73 mmol) a kyselina octová (0,37 ml, 6,55 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 3 dní, potom sa pridá ďalší formaldehyd (37% vo vode, 0,12 ml, 1,63 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (0,578 g, 2,73 mmol) a kyselina octová (0,37 ml, 6,55 mmol). Reakčná zmes sa mieša počas ďalších 3 hodín, potom sa koncentruje, čím sa získa rnc-3-jód-l-(l-metyltetrahydro-l//-3-pyrolyl)-l//pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín vo forme svetložltej pevnej látky (0,639 g), ktorá sa použije bez purifikácie v nasledujúcich reakciách. RP-HPLC Rt 4,226 min, 96% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 345 (MH⁺).

D. 7V2-(4-Brómfenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín l,ľ-Tiokarbonyldi-2-(17/)-pyridón (1,418 g, 6,104 mmol) sa pridá do roztoku 4-brómanilínu (1,000 g, 5,813 mmol) v dichlórmetáne (50 ml). Ružový roztok sa mieša pri izbovej teplote počas 30 minút, potom sa premyje vodou (50 ml) a 0,5 N kyselinou chlorovodíkovou (50 ml), suší sa nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa ružová pevná látka. Pridá sa 6-amino-2,4-xylenol (0,837 g, 6,104 mmol) a toluén (50 ml) a zmes sa zahrieva pri teplote 80°C počas 30 minút. Pridá sa 1,3-dicyklohexylkarbodiimid (1,799 g, 8,720 mmol) a roztok sa zahrieva pri teplote 80°C počas 48 hodín, potom sa ochladí na izbovú teplotu. Výsledný precipitát sa filtruje a filtračný koláč sa premyje dichlórmetánom (50 ml), čím sa získa 7V2-(4-brómfenyl)-5,7dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín vo forme svetlo oranžovej pevnej látky (1,215 g, 66%). RP-HPLC Rt 17,643 min, 86% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 317 (MH⁺).

E. N2-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-y l)fenyl-5,7-dimety 11,3-benzoxazol-2-amín

N2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl1,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z jV2-(4-brómfenyl)-5,7-dimetyl-l ,3benzoxazol-2-amínu (1,215 g, 3,831 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný

257 postupu opísanému na prípravu N2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme hnedého prášku (0,880 g, 63%). RP-HPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,1 N vodnom roztoku octanu amónneho v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) R_t = 14,48 min, 81%, m/z 365 (MH⁺).

F. rac-N2-{4-[4-Amino-l-(l-metyltetrahydro-l//-3-pyrolyl)-l//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidí n-3-yl]fenyl}-5,7-di metyl-1,3-benzoxazol rac-N2-{4-[4-Amino-l-(l-metyltetrahydro-l//-3-pyrolyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z rac-3-jód-1-(1 -mety ltetrahydro-lZ/-3-pyrolyl)-l//-pyrazolo [3,4-Jjpyrimidín4-amínu (0,200 g, 0,581 mmol) a N2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,265 g, 0,726 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu c/s-N2-(4-{4-aminol-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-2fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme bieleho prášku (0,062 g, 23%). *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 2,39 (s, 3 H), 2,32-2,40 (m, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,75-2,80 (m, 2 H), 3,08 (t, 1 H), 3,26 (s, 3 H), 5,40 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1H), 10,85 (s, 1 H);

RP-HPLC Rt 10,905 min, 96% čistota (5% až 85% acetonitril/O,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; 254 nm; Deltapak C18, 300 Ä, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 455 (MH⁺).

Príklad 218 r<zc-N2-(4-{4-Amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//pyrazolo[3,4-í/jpyrimidín-3-yljfenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amin

A. rac-3-jód-1-[1 -(2-metoxy etyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl j-177-pyrazolo [3,4č/]pyrimidín-4-amín

Do roztoku rízc-3-jód-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4ň?jpyrimidín-4-amín-monohydrochloridu (0,350 g, 1,09 mmol) v N,N258 dimetylformamide (10 ml) sa pridá 2-brómetyl(metyl)éter (0,159 g, 0,11 ml, 1,15 mmol), uhličitan draselný (0,462 g, 3,34 mmol) a jodid draselný (0,008 g, 0,05 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 65°C počas 18 hodín, potom sa pridá ďalší 2-brómetyl(metyl)éter (0,066 g, 0,040 ml, 0,48 mmol), uhličitan draselný (0,130 g, 0,940 mmol) a jodid draselný (0,008 g, 0,05 mmol). Reakčná zmes sa mieša ďalších 18 hodín a koncentruje. Zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (10 ml) a vodu (10 ml). Organická fáza sa separuje, premyje soľankou, suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa rac-3-jód-l - [1 -(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-lHpyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amín vo forme žltej pevnej látky (0,313 g, 84%), ktorá sa použije bez purifikácie v nasledujúcich reakciách. RP-HPLC Rt 5,089 min, 80% čistota (5% až 85% acetonitril/0,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 0 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 389 (MH⁺).

B. rac-A2-(4-{4-Amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l/7pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazo 1-2-amín rízc-A2-(4-{4-Amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l/7-3-pyrolyl]-lHpyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z rac-3-jód-l -[1 -(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-\Hpyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,250 g, 0,515 mmol) a A2-[4-(4,4,5,5tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amínu (0,235 g, 0,644 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu cz'5-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-y 1}-2-fluórfeny 1)-1,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme žltého prášku (0,185 g, 72%). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 2,30-2,49 (m, 2 H), 2,41 (s, 3 H), 2,49 (s, 3 H), 2,66 (m, 2 H), 2,78 (m, 2 H), 3,17 (m, 2 H), 3,24 (s, 3H), 3,45 (t, 2 H), 5,40 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2H), 8,24 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H); RP-HPLC Rt 1 1,477 min, 96% čistota (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; 254 nm; Deltapak 0 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 499 (MH⁺).

259

Príklad 219

Cz'5^,-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}-2-fluórfenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

A. A2-(4-Bróm-2-fluórfenyl)-5,7-dimetyl-l, 3-b enzoxazol-2-amí n

A2-(4-Bróm-2-fluórfeny l)-5,7-dimetyl-l, 3-b enzoxazol-2-amí n sa pripraví zo 4-bróm-2-fluóranilínu (2,000 g, 10,53 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu A2-(4-brómfenyl)-5,7-dimetyl-l,3benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme ružovej pevnej látky (1,916 g, 54%). RP-HPLC R_t 17,96 min, 95% čistota (5% až 85% acetonitril/O,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min;X= 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 337 (MH⁺).

B. A2-[2-Fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

A2-[2-Fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l, 3,2-dioxaborolan-2-y l)fenyl]-5,7dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z A2-(4-bróm-2-fluórfenyl)-5,7dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (6,500 g, 19,39 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu A2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyll,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme ružovej pevnej látky (3,549 g, 48%). RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,1 N vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) R_t = 15,50 min, 78%; m/z 383 (MH⁺).

C. Czs-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfeny 1)-5,7-dimety 1-1,3-benzoxazol-2amín

Cz'j-A2-(4-{4-amíno-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-z/]pyrimidín-3-y 1}-2-fluórfeny 1)-5,7-dimetyl-l, 3-benzoxazol-2amín sa pripraví z cz's-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,453 mmol) a A2-[2-fluór-4260 (4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl- 1,3-benzoxazol2-amínu (0,216 g, 0,566 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu cz'5-7/2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2amínu. Zlúčenina sa získa vo forme svetložltého prášku (0,111 g, 43%). Ή NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 1,56-1,83 (m, 4 H), 2,15 (s, 3 H), 2,22-2,55 (m, 12 H), 2,34 (s, 3 H), 2,41 (s, 3 H), 3,22-3,53 (m, 1 H), 4,78-4,83 (m, 1 H), 6,81 (s, 1 H), 7,10 (s, 1 H), 7,45-7,53 (m, 2 H), 8,23 (s, IH), 8,49 (t, 1 H), 10,59 (s, 1 H); RP-HPLC R_t 11,873 min, 95% čistota (5% až 85% acetonitril/0,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ= 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 570 (MH⁺).

Príklad 220

C/5'-3-(4-imidazo[l,2-a]pyridín-2-ylfenyl)-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ú?]pyrimidín-4-amín

A. 2-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl) fenyl] i mid azo [1,2ajpyridín

2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl) fenyl ]imidazo[ 1,2ajpyridín sa pripraví z 2-(4-brómfenyl)imidazo[l,2-íz]pyridinu (0,273 g, 1,00 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu 7V2-[2fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l ,3-benzoxazol-2amínu. Zlúčenina sa získa vo forme bielej pevnej látky (0,250 g, 78%). RPHPLC (25 až 100% CH₃CN v 0,lN vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím Hypersil HS C18, 250 x 4,6 mm stĺpec) R_t = 11,35 min, 87%; m/z 321 (MH⁺).

B. Czs-3-(4-imidazo[ 1,2-a]pyridín-2-ylfenyl)-1 ~[4-(4met y lpiperazi no)cyklohexyl]- l//-pyrazolo[3,4-íŕ]pyrimidin-4-amín

Cz5^,-3-(4-imidazo[l,2-čz]pyridín-2-ylfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amín sa pripraví z cis-3 -jód-1 -[4-(4261 metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,453 mmol) a 2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]imidazo[l,2-a]pyridínu (0,250 g, 0,679 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu cz's-7/2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-ďJpyrimidín-3-yl}-2-fíuórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme bieleho prášku (0,021 g, 9%). 'h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,57-1,73 (m, 4 H), 2,08-2,50 (m, 12 H), 2,16 (s, 3 H), 3,37 (m, 1 H), 4,82 (m, 1 H), 6,92 (t, 1 H), 7,27 (t, 1 H), 7,61 (d, 1 H), 7,74 (d, 2 H), 8,15 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 8,56 (d, 1 H); RP-HPLC Rt 8,16 min, 97% čistota (5% až 85% acetonitril/0,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri lrnL/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 508 (MH⁺).

Príklad 221 rac-l-[3-(4-Amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l -yl)tetrahydro-\H-\ -pyroly l]-2-(dimetylamino)-letanón

A. rac-l-[3-(4-Amino-3-jód-l/7-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl)tetrahydro1/7-1-pyrolyl]-2-(dimety lamino)-l-etanón

Do roztoku rac-3-jód-l-tetrahydro-l/7-3-pyrolyl-l/7-pyrazolo[3,4c7]pyrimidín-4-amín-monohydrochloridu (0,367 g, 1,00 mmol) v dichlórmetáne (10 ml) sa pridá 2-(dimetylamino)octová kyselina (0,134 g, 1,30 mmol), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,150 g, 1,10 mmol), 1-(3-dimetylaminopropyl)3-etylkarbodiimid-hydrochlorid (0,249 g, 1,30 mmol) a diizopropyletyl-amín (0,65 g, 0,87 ml, 5,0 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 18 hodín, potom sa naleje do vody (10 ml). Organická fáza sa separuje a premyje soľankou (10 ml), suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa rac-l-[3-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)tetrahydro-1/7-1 -pyrolyl]-2-(dimetylamino)-l-etanón vo forme žltooranžovej pevnej látky (0,278 g, 67%), ktorá sa použije bez purifikácie v nasledujúcich reakciách. RP-HPLC Rt 4,881 min, 80% čistota (5% až 85%

262 acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 416 (MH ).

B. rac-l-[3-(4-Amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl}-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl)tetrahydro-l H-1-pyrolyl]-2(dimetylamino)-1 -etanón rac-l-[3-(4-Amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l -yl)tetrahydro-lH-l -pyrolyl]-2-(dimetylamino)-l-etanón sa pripraví z rac-l-[3-(4-amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-l -yl)tetrahydro-lH-l -pyrolyl]-2-(dimetylamino)-l-etanónu (0,278 g, 0,669 mmol) a A2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amínu (0,305 g, 0,837 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu cíj-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl} -2-fluórfenyl)1,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme bieleho prášku (0,219 g, 62%). ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 2,17 (s, 3 H), 2,23 (s, 3 H), 2,3-2,50 (m, 4H), 2,34 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,99-4,26 (m, 4 H), 5,44-5,49 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,65 (d, 2 H), 7,92 (d, 2 H), 8,26 (s, 1 H), 10,86 (s, 1 H); RP-HPLC Rt 10,765 min, 96% čistota (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min;X= 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 526 (MH⁺).

Príklad 222 rtfc-l-[3-(4-Amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lHpyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l -y 1) tetrahydro - IH-1 -pyrolyl]-2-metyl-2(metylamino)-1 -propanón

A. rac-9H-9-Fluorenylmetyl-H-/2-[3-(4-amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4d]pyrimidín-l -yl)tetrahydro-l H-1 -pyrolyl]-1,1 -dimetyl-2-oxoetyl}-Ametylkarbamát

263

Do roztoku rac-3-jód-l -tetrahydro-lH-3-pyrolyl-lH-pyrazolo[3,4ďJpyrimidín-4-amín-monohydrochloridu (0,100 g, 0,273 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) sa pridá 2-[[(9H-9-fluorenylmetoxy)karbonyl](metyl)amino]-2metylpropánová kyselina (0,120 g, 0,354 mmol), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,041 g, 0,30 mmol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochlorid (0,068 g, 0,35 mmol) a diizopropyletylamín (0,18 g, 0,24 ml, 1,4 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 5 hodín, potom sa naleje do vody (10 ml). Organická fáza sa separuje a premyje soľankou (10 ml), suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa rac-9H-9fluorenylmetyl-H-f2-[3-(4-amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4ífjpyrimidín-1-yl)tetrahydro-1 H-1 -pyrolyl]-1,1-dimetyl-2-oxoetyl}-H-metylkarbamát vo forme žltej pevnej látky (0,223 g), ktorá sa použije bez purifikácie v nasledujúcich reakciách. RP-HPLC Rt 13,688 min, 63% čistota (5% až 85% acetonitril/0,1 M vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 652 (MH⁺).

B. rnc-l-[3-(4-Amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl}-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)tetrahydro-lH-l-pyrolyl]-2metyl-2-(metylamino)-l -propanón

Do roztoku rac-9H-9-fluorenylmetyl-H-/'2-[3-(4-amino-3-jód-lHpyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-l-yl)tetrahydro-lH-l-pyrolyl]-l ,l-dimetyl-2oxoetyl}-H-metylkarbamátu (0,178 g, 0,273 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (6 ml) a vode (3 ml) sa pridá H2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín (0,124 g, 0,341 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,016 g, 0,014 mmol) a uhličitan sodný (0,072 g, 0,683 mmol). Roztok sa zahrieva pri teplote 80°C počas 18 hodín a potom sa ochladí na izbovú teplotu. Reakčná zmes sa vytrepe medzi etylacetát (10 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva sa separuje a premyje soľankou (10 ml), suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa rac-9H9-fluorenylmetyl-H-2-[3-(4-amino-3-4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino] fenyl-1 H-pyrazolo [3,4-t/upyrimidín-1 -yl)tetrahy dro-ΙΗ-1-pyrolyl]264

1, l-dimetyl-2-oxoetyl-A-metylkarbamát vo forme svetlohnedého oleja (0,223 g), ktorý sa bez purifikácie použije v nasledujúcom kroku.

Roztok rac-9A-9-fluorenylmetyl-A-2-[3-(4-amino-3-4-[(5,7-dimetyl-l,3benzoxazol-2-yl)amino]fenyl-lA-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl)tetrahydro-1H1- pyrolyl] -1, l-dimetyl-2-oxoetyl-A-metylkarbamátu (0,223 g) v N,Ndimetylformamide (4 ml) sa nechá reagovať s piperidínom (0,8 ml) a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 18 hodín. Zelený roztok sa vytrepe medzi dichlórmetán (10 ml) a vodu (10 ml). Organická fáza sa separuje a premyje soľankou, suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa tmavozelený olej. Purifikáciou preparatívnou RPHPLC (25 až 100% CH3CN v 0,lN vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8 pm Hypersil HS 0 8, 250 x 21 mm stĺpec, R_t = 6,7-8,1 min) sa získa rac-l-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol2- y 1) ami no] fenyl} -1 A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín- l-yl)tetrahydro-lA-1-pyr oly 1]2-metyl-2-(metylamino)-l-propanón vo forme belavej pevnej látky (0,085 g, 58%). *H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) Majoritný rotamér: 1,20 (s, 6 H), 1,96 (s, 3 H), 2,3-2,50 (m, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 3,17-4,44 (m, 4 H), 5,42 (s, IH), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,63 (d, 2 H), 7,91 (d, 2 H), 8,26 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H); Minoritný rotamér: 1,15 (s, 6 H), 2,15 (s, 3 H), 2,3-2,50 (m, 3 H), 2,34 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 3,17-4,44 (m, 4 H), 5,42 (s, 1 H), 6,80 (s, IH), 7,11 (s, 1 H), 7,63 (d, 2 H), 7,91 (d, 2H), 8,26 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H); RPHPLC Rt 10,994 min, 95% čistota (5% až 85% acetonitril/O, IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 3 00 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 540 (MH⁺).

Príklad 223 rac-A2-[4-(4-Amino-1 -tetrahydro - 1A-3-pyr oly 1- lA-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyr i mi d in3-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

A. rac-/erc-butyl-3-(4-amino-3-jód-lA-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín- l-yl)-lpyrolidínkarboxylát

265

Roztok rac-3-j ód-1 -tetrahydro-1/7-3-pyrolyl- l/7-pyrazolo[3,4íť]pyrimidín-4-amín-monohydrochloridu (0,500 g, 1,36 mmol), hydrogénuhličitanu sodného (0,401 g, 4,77 mmol) a di-terc-butyl-dikarbonátu (0,327 g, 1,50 mmol) v 1,4-dioxáne (8 ml) a vode (8 ml) sa mieša pri izbovej teplote počas 3 hodín. Výsledná belavá suspenzia sa filtruje a filtračný koláč sa premyje vodou (10 ml) a suší, čím sa získa rac-/erc-butyl-3-(4-amino-3-jódl/7-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl)-l-pyrolidínkarboxylát vo forme belavej pevnej látky (0,412 g, 70%). RP-HPLC R_t 11,540 min, 100% čistota (5% až 85% acetonitril/O,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 431 (MH⁺).

B. rac-A^r2-[4-(4-Amino-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-177-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

Do roztoku rac-/erc-butyl-3-(4-amino-3-jód-l/7-pyrazolo[3,4ť/]pyrimidín-l-yl)-l-pyrolidínkarboxylátu (0,412 g, 0,958 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (6 ml) a vode (3 ml) sa pridá 772-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,436 g, 1,20 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,055 g, 0,048 mmol) a uhličitan sodný (0,254 g, 2,39 mmol). Roztok sa zahrieva pri teplote 80°C počas 18 hodín a potom sa ochladí na izbovú teplotu. Reakčná zmes sa vytrepe medzi etylacetát (10 ml) a vodu (10 ml). Organická vrstva sa separuje a premyje soľankou (10 ml), suší nad bezvodým síranom horečnatým, filtruje a koncentruje, čím sa získa rac-/erc-butyl-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l/7-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l-yl)-lpyrolidínkarboxylát vo forme oranžovej pevnej látky (1,029 g), ktorá sa bez purifikácie použije v nasledujúcom kroku.

6N Kyselina chlorovodíková (10 ml) sa pridá do roztoku rac-ŕerc-butyl3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l/7pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l-yl)-l-pyrolidínkarboxylátu (1,029 g) v acetóne (10 ml) a reakčná zmes sa mieša pri teplote 45°C počas 5 hodín. Reakčná zmes sa filtruje a výsledný zakalený filtrát sa koncentruje, čím sa získa oranžová pevná látka. Purifikáciou preparativnou RP-HPLC (25 až 100% CH3CN v 0,lN

266 vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8p Hypersil HS 0 8, 250 x 21 mm stĺpec, tr = 6,2-7,5 min) sa získa rac-V2-[4-(4amino-l-tetrahydro-lH-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl)fenyl]-5,7dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín vo forme belavej pevnej látky (0,148 g, 35%). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 2,15-2,22 (m, 2 H), 2,40 (s, 3 H), 2,50 (s, 3 H), 2,93-4,04 (m, 5 H), 5,31 (m, 1 H), 6,79 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H); RP-HPLC Rt 10,603min, 99% čistota (5% až 85% acetonitril/O,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 0 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 441 (MH⁺).

Príklad 224

Cz'ó'-N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4z/Jpyrimidín-3-yl}fenyl)-7-izopropyl-l ,3-benzoxazol-2-amín-diacetát

A. 2-Amino-6-izopropylfenol

Roztok 6-izopropyl-2-nitrofenolu (3,000 g, 16,56 mmol) a hydrogensiričitanu sodného (11,53 g, 66,23 mmol) v etanole (180 ml) a vode (90 ml) sa mieša pri teplote 80°C počas 20 hodín a potom sa ochladí na izbovú teplotu. Výsledný oranžový roztok sa koncentruje a potom sa vytrepe medzi dichlórmetán (50 ml) a vodu (50 ml). Organické fázy sa separujú a premyjú soľankou (25 ml), sušia nad bezvodým síranom horečnatým, filtrujú a koncentrujú, čím sa získa 2-amino-6-izopropylfenol vo forme oranžovej pevnej látky (1,792 g, 72%). RP-HPLC Rt 8,171 min, 92% čistota (5% až 85% acetonitril/O,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 150 (M-H)'.

B. V2-(4-Brómfenyl)-7-izopropyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Roztok 2-amino-6-izopropylfenolu (0,354 g, 2,34 mmol) a

4-brómfenylizotiokyanátu (0,500 g, 2,34 mmol) v tetrahydrofuráne (35 ml) sa mieša pri izbovej teplote počas 3 hodín. Pridá sa bezvodý sulfát meďnatý

267 (3,361 g, 21,06 mmol), silikagél (3,361 g) a trietylamín (0,236 g, 0,33 ml, 2, 34 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 18 hodín. Reakčná zmes sa filtruje cez vrstvu Celitu a premyje dietyléterom (3 x 50 ml). Filtrát sa koncentruje, čím sa získa hnedá pevná látka, ktorá sa zmieša so silikagélom a nanesie na vrstvu silikagélu, ktorá sa premyje etylacetátom (3 x 50 ml). Filtrát sa koncentruje, čím sa získa /V2-(4-brómfenyl)-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2amín (0,702 g, 91%). RP-HPLC Rt 18,066 min, 86% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 333 (MH⁺).

C. N2-[4-(4,4,5,5-Tetramety 1-1,3,2-dioxaborolan-2-y l)fenyl]-7-izopropyll,3-benzoxazol-2-amín

7V2-[4-(4,4,5,5-Tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-7-izopropyll,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z V2-(4-brómfenyl)-7-izopropyl-l,3benzoxazol-2-amínu (0,412 g, 1,24 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu 7V2-[2-fluór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme belavej pevnej látky (0,346 g, 74%). RP-HPLC Rt 18,964 min, 79% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 08, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 379 (MH ).

D. Cz'5-/V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}fenyl)-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amíndiacetát

Cz.y-./V2-(4-{4-amino-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amín-diacetát sa pripraví z cis-3-j ód-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo [3,4</]pyrimidín-4-amínu (0,250 g, 0,566 mmol) a (V2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-7-izopropyl-l,3-benzoxazol-2-amínu (0,339 g, 0,708 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu cis-N2(4-{4-amino-1-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-í/jpyrimi268 dín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme belavej pevnej látky (0,205 g, 64%). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,36 (d, 6 H), 1,56-2,50 (m, 16 H), 1,90 (6 H), 2,15 (s, 3 H), 3,23-3,28 (m, 2 H), 4,80 (m, 1 H), 7,04 (d, 1 H), 7,18 (t, 1 H), 7,34 (d, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,96 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H); RP-HPLC Rt 12,508 min, 100% čistota (5% až 85% acetonitril/0,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 566 (MH⁺).

Príklad 225

V2-(4-{4-Amino-l-[(35')-l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amínmonoacetát

V2-(4-{4-Amino-l-[(35')-l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínmonoacetát sa pripraví z (7?)-(+)-3-pyrolidinolu spôsobom analogickým na prípravu rnc-V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme ružovej pevnej látky (0,103 g, 53%). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,89 (s, 3 H), 2,28-2,31 (m, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 2,40 (s,

H), 2,65 (t, 2 H), 2,73-2,87 (m, 2 H), 3,17 (t, 2 H), 3,24 (s, 3 H), 3,45 (t, 2

H), 5,37 (m, 1 H), 6,79 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,59 (s, 2 H); RP-HPLC Rt 11,607 min, 95% čistota (5% až 85% acetonitril/0,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 0 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 499 (MH⁺).

Príklad 226 rac-V2-(4-{4-Amino-l - [1 -(2-metoxy etyl)tetrahy dro -1//-3-pyrolyl] -1 //-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl} fény l)-5-etyl-1,3-benzoxazol-2-amín-monoacetát

269 rac-A2-(4-{4-Amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-etyl-l,3-benzoazol-2-amín-monoacetát sa pripraví z rnc-3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l/7-3-pyrolyl]-l//pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,319 mmol) a A2-[4-(4,4,5,5tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-etyl-l ,3-benzoxazol-2-amínu (0,145 g, 0,399 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu cis-N2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo [3,4-ť/]pyrimidín-3-y l}-2-fluórfeny 1)-1,3-benzoxazol-2-amín. Zlúčenina sa získa vo forme bielej pevnej látky (0,082 g, 52%). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,23 (t, 3H), 1,90 (s, 3 H), 2,33-3,47 (m, 10 H), 2,66 (q, 2 H), 3,25 (s, 3 H), 5,40 (m, 1 H), 6,99 (d, 1 H), 7,33 (s, 1 H), 7,40 (d, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,25 (s, 1 H), 10,81 (s, 1 H); RP-HPLC Rt 11,781 min, 93% čistota (5% až 85% acetonitril/0,IM vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; X = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 499 (MH⁺).

Príklad 228 rac-A2-(4-{4-Amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//pyrazolo [3,4-ť/]pyrimidín-3-yl} fenyl)-5-mety 1-1,3-benzoxazol-2-amí nmonoacetát rac-A2-(4-{4-Amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l/7pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-yl} fenyl)-5-etyl-1,3-benzoxazol-2-amín-monoacetát sa pripraví z z'ac-3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l/ľpyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,319 mmol) a A2-[4-(4,4,5,5tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-metyl-l ,3-benzoxazol-2-amínu (0,145 g, 0,399 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu c/j-A2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l ,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme belavej pevnej látky (0,038 g, 16%). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,91 (s, 3 H), 2,33 (m, 2 H), 2,39 (s, 3 H), 2,66 (m, 2 H), 2,75-2,83 (m, 3 H), 3,17 (t, 1 H), 3, 29 (s, 3 H), 3,45 (t, 2 H), 5,37 (m, 1 H), 6,96 (d, 1 H), 7,30 (s, 1 H), 7,38 (d, 1 H), 7,67 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,80 (s, 1

270

H); RP-HPLC Rt 10,756 min, 100% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak 0 8, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 485 (MH ).

Príklad 229

V2-(4- {4-Amino-1-[(37?)-1-(2-metoxy ety l)tetrahy dro-1/7-3-pyrolyl]-177pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-yl} fenyl)-5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amí ndiacetát

V2-(4-{4-Amino-1 -[(37?)-1-(2-metoxy ety l)tetrahydro-1/7-3-pyrolyl]-177pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amí ndiacetát sa pripraví z (5)-(-)-3-pyrolidinolu spôsobom analogickým na prípravu rac-N2-(4-{4-amino-1-[1 -(2-metoxyetyl)tetrahydro-1/7-3-pyrolyl]-177pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl} fenyl)-5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme belavej pevnej látky (0,214 g, 39%). *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,89 (s, 6 H), 2,28-2,31 (m, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,65 (t, 2 H), 2,73-2,87 (m, 2 H), 3,17 (t, 2 H), 3,24 (s, 3 H), 3,45 (t, 2 H), 5,37 (m, 1H), 6,79 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H); RP-HPLC Rt 11,674 min, 97% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 499 (MH⁺).

Príklad 230

R ac-N2-(4-{4-Amino-1 -[1 -(2-metoxyetyl)tetrahydro-177-3 -pyrolyl]-177pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-y 1} fenyl)-5-chlór-1,3-benzoxazol-2-amínmonoacetát rac-V2-(4-{4-Amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-177-3-pyrolyl]-177pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5-chlór-l ,3-benzoxazol-2-amínmonoacetát sa pripraví z rac-3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-177-3pyrolyl]-177-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,319 mmol) a 7V2-[4(4,4,5,5-tetrametyl -1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-5-chlór-1,3-benzoxazol-2271 amínu (0,148 g, 0,399 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu cz\y-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-fluórfenyl)-l,3-benzoxazol-2amínu. Zlúčenina sa získa vo forme belavej pevnej látky (0,080 g, 50%). ^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,91 (s, 3 H), 2,33 (m, 2 H), 2,66 (m, 2 H), 2,752,85 (m, 3 H), 3,17 (t, 1 H), 3,24 (s, 3 H), 3,45 (t, 2 H), 5,37 (m, 1 H), 7,18 (d, 1 H), 7,55 (d, 2 H), 7,68 (d, 2 H), 7,92 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 9,80 (s, 1 H); RP-HPLC Rt 1 1,337 min, 97% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 505 (MH⁺).

Príklad 231 /ra«Ä-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fenyl)-3-fény lpropánamid

Roztok /ra«Ä-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amínu (0,700 g, 1,6 mmol) v pyridíne (11 ml) sa pri teplote 0°C nechá reagovať s hydrocinnamoylchloridom (0,324 g, 1,92 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 0°C počas 20 minút a ľadový kúpeľ sa odstráni kvôli miešaniu pri izbovej teplote. Reakcia dobehne za 5,5 hodiny. Pridá sa roztok hydroxidu sodného (1 N, 20 ml) a zmes sa mieša počas 30 minút. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku. Pridá sa dichlórmetán (20 ml) a vrstvy sa rozdelia. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (80 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a odparujú za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu gradientom 5% metanolu v dichlórmetáne až 50% metanolu v dichlórmetáne na 35 g ISCO silikagélovom stĺpci, čím sa získa 0,569 g (63%) /rans-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamidu. Trans-N\ -(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-3-fenylpropánamid (0,569 g, 1 mmol) v horúcom etylacetáte sa nechá reagovať s horúcim roztokom kyseliny maleínovej (0,384 g, 3 mmol) v etylacetáte. Vzniknutý

272 precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka, suší za vysokého vákua, čím sa získa tri-maleátová soľ. *H NMR (dó-DMSO) δ 9,238 (s, 1H), 8,2216 (s, 1H), 8,1991-8,1786 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,3147-7,2664 (m, 4H), 7,2366-7,2330 (m, 1H), 7,2026-7,1732 (dd, 2H), 6,171 (s, 6H), 4,6649-4,6083 (m, 1H), 4,09484,0697 (m, 1H), 3,8916 (s, 3H), 3,1750-3,1632 (d, 2H, J = 4,72 Hz), 2,93642,8984 (m, 2H), 2,7885-2,7506 (m, 2H), 2,5290 (s, 2H), 2,3905-2,3231 (m, 4H), 2,1489 (s, 3H), 2,0549-1,9243 (m, 6H), 1,4821-1,4457 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA singl-quad MS, Genesis C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM amónium-acetát vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 1,75 min (100%), M 569,4.

Príklad 232

Zraw.y-7V2-(4-{ 4-amino-l-[4-(4-mety lpiperazinojcyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4d]pyrimidín-3-y l}-2-metoxy fény 1)-1-mety 1-1//-2-indolkarboxamid

Suspenzia /rfl«5-7V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]1//-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-y l}-2-metoxy fenyl)-1-mety 1-1//-2-indolkarboxamid-di-maleátu (0,200 g, 0,242 mmol) v dichlórmetáne (15 ml) sa nechá reagovať s IN hydroxidom sodným. Reakčná zmes sa mieša počas 1 hodiny pri izbovej teplote. Vrstvy sa rozdelia pomocou extrakčnej patróny Empore. Organická vrstva sa odstráni prebubláváním dusíka na povrchu rozpúšťadla, čím sa získa 0,072 g (50%) trans-7V2-(4-{4-amino-l-[4-(4mety lpiperazinojcyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2-met oxyfenyl)-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu. 'h NMR (dó-DMSO) δ 9,4355 (s, 1H), 8,2464 (s, 1H), 8,1241-8,1037 (d, 1H, J = 8,16 Hz), 7,7186-7,6987 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,6005-7,5795 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,3532-7,2795 (m, 4H), 7,17177,1343 (t, 1H), 4,6833 (m, 1H), 4,0560 (s, 3H), 3,9573 (s, 3H), 2,6704 (m, 6H), 2,4404 (m, 2H), 2,2953 (s, 6H), 2,1282-1,9889 (m, 5H), 1,5124 (m, 2H). Zlúčenina sa bez purifikácie použije priamo v nasledujúcej reakcii.

273

Príklad 233

Zra»í-7/2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4d]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid-di-mesylát

Horúci roztok tra»s-Ä^ľ2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1-mety l-l//-2-indolkarboxamidu (0,072 g, 0,12 mmol) v etylacetáte (20 ml) sa nechá reagovať s metánsulfónovou kyselinou (0,012 g, 0,12 mmol). Pomaly vzniknutý precipitát sa filtruje pod atmosférou dusíka, čím sa získa 0,051 g íra«s-7V2-(4-{4-aminol-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyl)-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid-dimesylátu. Teplota topenia sa pohybuje medzi 345,5 až 348,1°C. ^JH NMR (d₆-DMSO) δ 9,4353 (s, IH), 8,2461 (s, IH), 8,1239-8,1035 (d, IH, J = 8,16 Hz), 7,7182-7,6985 (d, IH, J = 7,88 Hz), 7,6004-7,5792 (d, IH, J = 8,48 Hz), 7,34427,2794 (m, 4H), 7,17187,1349 (t, IH), 4,6829 (m, IH), 4,0396 (s, 3H), 3,9570 (s, 3H), 2,6703 (m, 6H), 2,5 (s, 3H), 2,2949 (s, 6H), 2,0891-2,9086 (m, 7 H), 1,5179 (m, 2H).

Príklad 234

3-(4-Amino-3-metoxy fény 1)-1-( 1-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4J]pyrimidín-4-amín

A. 3-Jód-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín

3-Jód-l-(4-piperidyl)-lZ/-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amín (500 mg, 1,45 mmol), formaldehyd (30% roztok vo vode, 0,16 ml, 1,60 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (430 mg, 2,03 mmol) sa zmiešajú v 1,2dichlóretáne (5 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 4 hodín. Pridá sa nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného na upravenie pH na asi 8. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO₄, filtruje a odparuje, čím sa získa 3-jód-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (275 mg, 53%). ^JH NMR (DMSO-d₆) δ 1,85 (m, 2H), 2,09 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 2,88 (m, 2H), 4,75 (m, IH), 8,19 (s, IH), 8,32 (s, IH), LCMS

274 (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, 0 8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 minútach, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH 359,0, Rt = 0,46 minút.

B. /erc-Butyl-A-_í''4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}karbamát

- Jód-1 -(1-mety 1-4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4-amín (270 mg, 0,754 mmol), /erc-butyl-A-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát (290 mg, 0,829 mmol), tetrakistrifenylfosfinpaládium (52 mg, 0,045 mmol) a uhličitan sodný (192 mg, 1,81 mmol) sa zmiešajú v dimetyléteri etylénglykolu (8 ml) a vode (4 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri refluxe cez noc pod atmosférou dusíka.

Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou, potom soľankou, sušia nad MgSO4, filtrujú a odparujú. Zvyšok sa čistí zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím dichlórmetán/metanolu (90:10 až 70:30) ako mobilnej fázy, čím sa získa ŕerc-butyl-jV-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4piperidy 1)-1//-pyrazolo [3,4-í/]py rimidín-3-y 1]-2-metoxy fény Qkarbamát (250 mg, 73%). 'H NMR (DMSO-dó) Ô 1,48 (s, 9H), 1,88 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,24 (m, 5H), 2,92 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 4,64 (m, IH), 7,21 (m, 2H), 7,91 (d, J=8,16 Hz, IH), 8,04 (s, IH), 8,23 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ = 454,2, Rt = 1,67 minút.

C. 3-(4-Amino-3-metoxy fenyl)-1 -(l-metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-amín

Zmes trifluóroctovej kyseliny/dichlórmetánu (20:80,7 ml) sa pridá do roztoku /erc-buty 1-A-/4-[4-amino-1 -(1-mety 1-4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4ť/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}karbamátu (240 mg, 0,529 mmol) v dichlórmetáne (4 ml) pri teplote 0°C. Po 15 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni

275 a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 4 hodín. Rozpúšťadlá sa odparujú a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne. Na upravenie pH na asi 10 sa pridá hydroxid sodný (l,0N). Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (4x). Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a odparuje, čím sa získa 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-(lmetyl-4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amín (178 mg, 95%). HPLC (Waters 486-Stípec: Delta Pak, C18, 5 gm, 300 Á, 150x3,9 mm, Eluenty: 5% B/A až 95% B/A v 10 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 1,0 ml/min.) Rt = 6,45 min.

Príklad 235

Vl-{4-[4-Amino-l - (1 -metyl-4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-trans-2-fenyl-1 -cyklopropánkarboxamid

7¹ran5-2-fenyl-l-cyklopropánkarbonylchlorid (31 mg, 0,170 mmol) v dichlórmetáne (0,3 ml) sa pridá do roztoku 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-(lmetyl-4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu (60 mg, 0,17 mmol) v pyridíne (1,2 ml) pri teplote 0°C. Po 5 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 1 hodiny, potom sa pridá ďalší trans-2-fenyl-l-cyklopropánkarbonylchlorid (15 mg, 0,083 mmol). Po 2 hodinách sa rozpúšťadlo odparuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím dichlórmetán/metanolu (95: 5 až 70: 30) ako mobilnej fázy, čím sa získa Vl-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-177pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fény l}-/rans-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid (75 mg, 89%). *H NMR (CDCb) δ 1,42 (m, 1H), 1,77 (m, 1H), 1,85 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 2,24 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,46 (m, 2H), 2,62 (m, 1H), 3,05 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,77 (m, 1H), 5,69 (s, 2H), 7,24 (m, 7H), 8,11 (s, 1H), 8,35 (m, 1H), 8,45 (d, J=8,38 Hz, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 um, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min): MH⁺ = 498,3, Rt = 1,84 minút.

276

Príklad 236

Al-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl }-4-(trifluórmetyl)benzamid

4-(Trifluórmetyl)-l-benzénkarbonylchlorid (35 mg, 0,170 mmol) v dichlórmetáne (0,3 ml) sa pridá do roztoku 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-(1metyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu (60 mg, 0,17 mmol) v pyridíne (1,2 ml) pri teplote 0°C. Po 5 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 1 hodiny, potom sa pridá ďalší 4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbonylchlorid (18 mg, 0,086 mmol), po 2 hodinách sa rozpúšťadlo odparuje a zvyšok čistí zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím dichlórmetán/metanolu (95:5 až 70:30) ako mobilnej fázy, čím sa získa Al -{4-[4-amino -1 -(1 -metyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-4-(trifluórmetyl)benzamid (85 mg, 95%). *H NMR (CDCb) δ 2,10 (m, 2H), 2,37-2,59 (m, 7H), 3,15 (m, 2H), 4,02 (s, 3H), 4,83 (m, 1H), 5,68 (s, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,80 (d, J=8,21 Hz, 2H), 8,04 (d, J=8,10 Hz, 2H), 8,38 (s, 1H), 8,67 (m, 2H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Stĺpec: Genesis, C18,3 um, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ = 526,3, Rt = 1,93 minút.

Príklad 237

Al-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-4-(trifluórmetoxy)benzamid

4-(Trifluórmetoxy)-l-benzénkarbonylchlorid (38 mg, 0,170 mmol) v dichlórmetáne (0,3 ml) sa pridá do roztoku 3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-l-(lmetyl-4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín~4-amínu (60 mg, 0,17 mmol) v pyridíne (1,2 ml) pri teplote 0°C. Po 5 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 1 hodiny, potom sa pridá ďalší 4-(trifluórmetyl)-1-benzénkarbonylchlorid (19 mg, 0,085 mmol). Po 2 hodinách sa rozpúšťadlo odparuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím dichlórmetán/metanolu (95: 5 až 70: 30) ako

277 mobilnej fázy, čím sa získa Vl-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4-piperidyl)-l//pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-4-(trifluórmetoxy)benzamid (70 mg, 76%). ’H NMR (CDCb) δ 2,06 (d, J=11,79 Hz, 2H), 2,28 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,50 (m, 2H), 3,07 (d, J=10,8 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 4,80 (m, 1H), 5,71 (s, 2H), 7,27 (m, 2H), 7,36 (d, J=8,20 Hz, 2H), 7,98 (d, J=6,20Hz, 2H), 8,37 (s, 1H), 8,59 (s, 1), 8,67 (d, J=8,55 Hz, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Stĺpec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ = 542,3, Rt = 1,98 minút.

Príklad 238

Cis-l -[4-(4-Metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(l ,3-oxazol-5-yl)fenyl]-l//pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín

A. 4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4c/]pyrimidín-3-yl}benzaldehyd

Cis-3-Mety 1-1- [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1 //-pyrazolo [3,4J]pyrimidín-4-amín (3,0 g, 6,80 mmol), 4-formylfenylboritá kyselina (1,22 g, 8,16 mmol), tetrakistrifenylfosfin-paládium (0,47 g, 0,41 mmol) a uhličitan sodný (1,73 g, 16,31 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (70 ml) a vodou (35 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri refluxe cez noc pod atmosférou dusíka. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa filtruje a premyje vodou. Po sušení na lyofilizátore sa zvyšok čistí zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím dichlórmetán/metanolu (90:10 až 70:30) ako mobilnej fázy, čím sa získa 4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidín-3-yl}benzaldehyd (1,55 g, 54%). *H NMR (DMSO-dó) δ 1,60 (m, 2H), 1,72 (m, 2H), 2,07 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,22-2,46 (m, 11H), 4,83 (m, 1H), 7,88 (d, J=8,13 Hz, 2H), 8,07 (d, J=8,10 Hz, 2H), 8,21 (s, 1H), 10,11 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ = 420,2, Rt = 0,70 minút.

278

B. Czs-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(l,3-oxazol-5-yl)fenyl]1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-4-amí n

Metoxid sodný (130 mg, 2,41 mmol) sa pridá po častiach do zmesi 4-{4amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3yl}benzaldehydu (300 mg, 0,715 mmol) v metanole (20 ml). Po 5 minútach sa po častiach pridá (p-tolylsulfonyl)metylizokyanid (tosmic) (167 mg, 0,858 mmol). Roztok sa zahrieva pri refluxe počas 5 hodín. Pridá sa voda (10 ml), pričom roztok zostáva stále horúci. Po 5 minútovém chladení ľadom sa pevné látky filtrujú a premyjú zmesou metanol/voda (50/50, 2 ml) a sušia. Filtrát sa odparuje na odstránenie organického rozpúšťadla a pevné látky sa spoja a premyjú vodou. Spojené pevné látky sa najprv purifikujú zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím dichlórmetán/metanolu (90:10 až 70:30) ako mobilnej fázy, potom rekryštalizujú (2x) z DMF, čím sa získa cz'5-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-( 1,3-oxazol- 5-y l)fenyl]-l //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-4-amín (90 mg, 27%). 'h NMR (DMSO-dó) δ 1,61 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,44 (m, 11H), 4,82 (m, 1H), 7,78 (m, 3H), 7,79 (m, 2H), 8,24 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), FCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/minút): MH⁺ = 459,2, Rt = 0,72 minút.

Príklad 239 rrazzí-/Vl-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazoio[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-5-fluór-2-metoxyfenyl)-2,2-dimetyl-3-fenylpropánamid

2,2-Dimetyl-3-fenylpropanoylchlorid (52 mg, 0,264 mmol) sa pridá do roztoku trans-3-(4-amino-2-fluór-5-metoxy fenyl)-1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (80 mg, 0,176 mmol) v pyridíne (1,5 ml). Po 5 hodinách sa rozpúšťadlo odparuje a zvyšok sa najprv purifíkuje zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím dichlórmetán/metanolu (95: 5 až 85: 15) ako mobilnej fázy, potom preparatívnou FC/MS, čím sa získa trans-N\-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l H2Ί9 pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-5-fluór-2-metoxyfenyl)-2,2-dimetyl-3-fenylpropánamid (22 mg, 19%). ^!H NMR (CDCb-ď) δ 1,33 (s, 6H), 1,57 (m, 2H), 1,92 (m, 2H), 2,15 (m, 6H), 2,30 (s, 3H), 2,49 (m, 4H), 2,66 (m, 3H), 2,95 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 4,76 (m, 1H), 5,51 (bs, 2H), 6,98 (d, J=6,86Hz, 1H), 7,15 (m, 2H), 7,23 (m, 3H), 8,01 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,47 (d, J=11, 88,1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, 0 8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ = 615,3, Rt = 2,18 minút.

Príklad 240

Cz5-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)(l/7-benzo[ď]imidazol-2-yl)metanol

A. l//-Benzo[ŕ/]imidazol-l-ylmetanol

Formaldehyd (37% vo vode, 1 ml, 13,3 mmol) sa pridá do roztoku \Hbenzo[ŕ/]imidazolu (1,57 g, 13,3 mmol) v THF (60 ml). Po 10 minútach sa rozpúšťadlo odstráni, suší, čím sa získa l//-benzo[í/]imidazol-l-ylmetanol vo forme hnedej pevnej látky, ktorá sa použije ďalej bez akejkoľvek purifikácie. ’H NMR (DMSO-dó) δ 5,60 (d, J=7,09Hz, 2H), 6,70 (m, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,65 (d, J=9,13Hz, 2H), 8,26 (s, 1H).

B. Cz'5-(4-{4-Amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)(l//-benzo[ď]imidazol-2-yl)metanol n-Butyllítium (1,34M, 3,0 ml, 4 mmol) sa pomaly pridá do zmesi 1/7benzo[<7]imidazol-l-ylmetanolu (296 mg, 2,0 mmol) v THF (9,0 ml) pri teplote -78°C. Reakčná zmes sa nechá ohriať až na teplotu -20°C a udržuje pri teplote -20°C počas 30 minút, potom sa ochladí späť na -78°C. Pomaly sa pridá cis-4{4-amino-l-[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexy 1]-1//-pyr azolo [3,4-ŕ/|py rimidín-3yl}benzaldehyd (420 mg, 1 mmol) v THF (5 ml). Po 20 minútach sa odstráni suchý ľadový kúpeľ a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa nasýtený roztok chloridu amónneho a potom éter. Vrstvy sa separujú a vodná

280 vrstva sa neutralizuje hydroxidom sodným (l,0N) a extrahuje dichlórmetánom. Organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a odparuje. Zvyšok sa najprv purifikuje zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím dichlórmetán/metanolu (95:5 až 85:15) ako mobilnej fázy, potom preparatívnej HPLC s reverznou fázou (Rainin HPLC, stĺpec: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 pm, 250x21, 2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 minút. (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 21 ml/min.), čím sa získa cis-(4-{4-amino-l-[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo [3,4J]pyrimidín-3-yl}fenyl)(l//-benzo[ť/]imidazol-2-yl)metanol (2 mg, 0,4%). *Η NMR (CDCb) δ 1,68 (m, 2H), 1,81 (m/2H), 2,01 (m, 2H), 2,13 (m, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,42 (m, 2H), 2,64 (m, 7H), 4,68 (bs, 3H), 4,93 (m, 1H), 5,77 (bs, 2H), 6,06 (s, 1H), 7,20 (m, 2H), 7,52 (m, 2H), 7,58 (m, 4H), 8,32 (s, 1H). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm. Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ = 538,3, Rt - 3,80 minút.

Príklady 241-252

Zlúčeniny podľa príkladov 241-252 sa pripravia zo 4-[4-amino-3-(4fenoxy fény 1)-1//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-l-y ljbenzaldehydu s použitím nasledujúceho spôsobu: 4-[4-Amino-3-(4-fenoxyfeny l)-l//-py razolo [3,4í/]pyrimidín-l-yl]benzaldehyd (50 mg, 0,123 mmol), príslušný amín (0,246 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (78 mg, 0,368 mmol) a ľadová kyselina octová (32 mg, 0,540 mmol) sa zmiešajú v THF (3 ml). Po trepaní pri izbovej teplote cez noc na trepačke J-Kem sa pridá ďalšie množstvo amínu (0,246 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (78 mg, 0,368 mmol) a ľadovej kyseliny octovej (32 mg, 0,540 mmol) a reakčná zmes sa trepe pri izbovej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa odparuje a pridá sa dichlórmetán, potom hydroxid sodný (l,0N). Vrstvy sa separujú na patróne Empore. Organická vrstva sa odparuje a zvyšok sa čistí preparatívnou LC/MS s reverznou fázou (Stĺpec Micromass: Hypersil BDS, 08, 5 pm, 100x21,2 mm, Eluenty: 15% B/A až 100% B/A v 7 min, ( B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 25 ml/min.).

281

Po odstránení rozpúšťadla sa výsledné pevné látky rozpustia v zmesi dichlórmetánu a hydroxidu sodného (1,ON) a vrstvy sa separujú. Organická vrstva sa odparuje, čím sa získa zodpovedajúci produkt. Detaily sú uvedené v nasledujúcej tabuľke.

Pr.	Štruktúra	Názov zlúčeniny	MH+	Rt (min)	Qty (mg)
241	o	2-({4-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4ďjpyrimidín-lyljbenzyl} amino)-1 -etanol	453,2	2,05	10
242	k 0	2-({4-[4-amino-3-(4- fenoxyfenyl)-lA-pyrazolo[3,4- í/]pyrimidin-l- yl]benzyl}amino)-2-metyl-l- propanol	481,2	2,12	12
243	l	4-({4-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4ŕ/jpyrimidín-1yl]benzyl}amino)-l-butanol	481,2	2,05	10
244	š	Al-{4-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-l A-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-l-yl]benzyl}N2, A2-dimetyl-1,2-etándiamín	480,2	2,03	2
245	6? 9 *	l-(4-{[(3-metoxypropyl)amino]mety 1} fény l)-3-(4-fenoxy fény 1)1 A-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4amín	481,2	2,3	2
246	-o i	1 -(4- {[(2-metoxyetyl)amino]metyl}fenyl)-3-(4fenoxy fenyl)-1 A-pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-4-amín	467,2	2,22	10

282

247	.0° 1 Q	3-(4-fenoxyfenyl)-l-[4-(l ,3tiazolan-3-ylmetyl)fenyl]-1Hpyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4amín	481,2	4,2	3
248	y? % 0	2-[{4-[4-amino-3-(4fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-l -yl] benzyl} (2hydroxyetyl)amino]-l-etanol	497,2	2,02	2
249	% •«.K	Al-{4-[4-amino-3-(4fenoxy fény l)-lH-pyrazolo [3,4c/]pyrimidín-1-yljbenzyl} Nl, A2,A2-trimetyl-l,2etándiamín	494,3	2,47	8
250	xi? $ o 0	1-{4-[4-amino-3-(4fenoxy fény l)-lH-pyrazolo [3,4 J]pyrimidín-1 -y 1] benzyl} -4piperidinol	493,3	2,13	2
251	N J	Al-{4-[4-amino-3-(4fenoxy fenyl)-1/7-pyrazolo [3,4c/]pyrimidín-l -yl]benzyl} A/,A3,A3-trimetyl-l,3propándiamín	508,3	1,78	9
252	7 $ P	(1 - {4-[4-amino-3-(4fenoxy fény 1)- lH-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-l-yl]benzyl}-4piperidyl)metanol	507,3	2,12	9

Príklad 253 dimaleátová soľ 771 -{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-1 H-pyrazolo[3,4-ú]pyrimidín3-yl]-2-metoxy fény i}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-y l]-2metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (380 mg, 0,717 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (70 ml) a pridá sa kyselina maleínová (167 mg, 1,435 mmol) v horúcom etylacetáte (3 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej

283 teplote počas 3 hodín. Pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa dimaleátová soľ Nl-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-1//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (489 mg, 90%). *H NMR (DMSO-dó) δ 2,15 (m, 2H), 2,41 (m, 2H), 3,23 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 5,09 (m, IH), 6,14 (m, s, 4H), 7,33 (m, 2H), 7,76 (m, IH), 7,88 (m, IH), 7,99 (m, IH), 8,28 (s, IH), 8,33 (m, 2H), 8,70 (bs, IH), 9,92 (s, IH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, 0 8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 mlJmin.): MH⁺ = 530,2, Rt = 2,03 minút.

Medziprodukt 6

7/1-4-[4-amino-1-(4-piperidy 1)-1//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid

A. /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino-3metoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-l-y l]-l-piperidínkarboxylát

2-Fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbonylchlorid (3,05 ml, 20,2 mmol) v dichlórmetáne (25 ml) sa pridá do roztoku /‘erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino3-metoxy fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-l-y l]-l-piperidínkarboxy latu (8,77 g, 20,0 mmol) v pyridíne (50 ml) pri teplote 0°C. Po 5 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 1 hodiny. Pridá sa 2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbonylchlorid (0,5 ml, 3,31 mmol) a reakčná zmes sa mieša ďalších 30 minút. Rozpúšťadlo sa odparuje a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne. Organická vrstva sa premyje vodou, soľankou, potom suší nad MgSO4. Rozpúšťadlo sa odparuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím etylacetát/dichlórmetánu (80:20 až 100:0) ako mobilnej fázy, čím sa získa Zerc-butyl-4-[4-amino-3-(4[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidinkarboxylát (11,2 g, 89%). *H NMR (CDCb-d) δ 1,48 (s, 9H), 2,04 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 4,05 (s, 3H), 4,32 (m, 2H), 4,95 (m, IH), 5,89 (bs, 2H), 7,33 (m, 2H), 7,51 (d, J=11,62 Hz, IH), 7,61

284 (d, J=8,21Hz, 1H), 8,36 (m, 2H), 8,72 (d, J=8,18 Hz, 1H), 9,32 (d, J=14,39 Hz, 1H).

B. Hl-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l H-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid

Zmes trifluóroctovej kyseliny a dichlórmetánu (20:80, 100 ml) sa pridá do roztoku /erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino-3-metoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (11,2, 17,79 mmol) v dichlórmetáne (50 ml) pri teplote 0°C. Po 15 minútach sa ľadový kúpeľ odstráni a reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 3 hodín. Rozpúšťadlá sa odparujú a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne. Na upravenie pH na asi 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Suspenzia sa lyofilizuje. Pridá sa voda (100 ml) a vodná fáza sa opakovane extrahuje dichlórmetánom, čím sa získa Hl-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lHpyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (9,12 g, 97%). *H NMR (DMSO-dó) 1,85 (m, 2H), 2,12 (m, 2H), 2,70 (m, 2H), 3,14 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,77 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,75 (d, J=8,02 Hz, 1H), 7,89 (d, J=10,31Hz, 1H), 8,00 (m, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,31 (d, J=8,16 Hz, 1H), 9,90 (s, 1H).

Príklady 254-293

Zlúčeniny podľa príkladov 254-293 sa pripravia z JV1 -4-[4-amino-l-(4piperidy 1)-1 H-pyrazolo [3,4-ď]py rimidín-3-y 1]-2-metoxy fény l-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamidu (medziprodukt 6) podľa spôsobu A alebo spôsobu B:

Spôsob A:

Hl-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-ylj-2metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (100 mg, 0,189 mmol). Príslušný aldehyd (0,378 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (120 mg, 0,567 mmol) a ľadová kyselina octová (48 mg, 0, 378 mmol) sa zmiešajú v 1,2dichlóretáne (4 ml). Po trepaní pri izbovej teplote cez noc sa pridá ďalšie množstvo aldehydu (0,378 mmol), triacetoxyborohydridu sodného (120 mg,

285

0,567) a ľadovej kyseliny octovej (48 mg, 0,378 mmol) a reakčná zmes sa trepe pri izbovej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa odparuje a zvyšok sa čistí buď zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím dichlórmetán/metanolu (95: 5 až 70: 30) alebo preparatívnej HPLC s reverznou fázou (Rainin HPLC, Stĺpec: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 pm, 250x21, 2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 21 ml/min.), čím sa získa zodpovedajúci produkt. Detaily sú uvedené v tabuľke nižšie.

Spôsob B:

VI-{4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-t7]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (100 mg, 0,189 mmol), príslušný ketón alebo nejaký menej reaktívny aldehyd (0,378 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (120 mg, 0,567 mmol) a ľadová kyselina octová (48 mg, 0,378 mmol) sa zmiešajú v 1,2-dichlóretáne (4 ml). Reakčná zmes sa trepe pri teplote 70°C počas 4 hodín. Rozpúšťadlo sa odparuje a zvyšok sa čistí buď zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím dichlórmetán/metanolu (95: 5 až 70: 30) alebo preparatívnej HPLC s reverznou fázou (Rainin HPLC, Stĺpec: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 pm, 250x21, 2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 min. (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 21 ml/min.), čím sa získa zodpovedajúci produkt. Detaily sú uvedené v tabuľke nižšie.

Pr.	Štruktúra	Názov zlúčeniny	MH+	Rt (min)	Qty (mg)	Spôsob
254	o % > KC	Vl-{4-[4-amino-l-(l-etyl- 4-piperidyl)-177- pyrazolo[3,4- íť]pyrimidín-3-yl]-2- metoxyfenyl}-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH 556.1	2,07	56	A

286

255	n.	VI -(4-{4-amino-l-[l(cy klopropy lmety I)-4piperidylj-1/7pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl)-2metoxyfenyl)-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid	MH' 582,1	2,22	80	A
256	y	2Vl-(4-{4-amino-l-[l-(177- 2-pyrolylmetyl)-4- piperidyl]-177- pyrazolo[3,4- <7]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid- acetát	MH 607,0	2,45	60	A
257	y V»	7V1-(4-{4-amino-l-(1-(1772-imidazoly lmety l)-4piperidyl]-177pyrazolo[3,4č/]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4(trifl uórmety l)benzamid	MH+ 610,2	2,17	68	B
258	e cis	acetát 7V1-[4-(4-amino-l{l-[(l-metyl-l/7-2imidazolyl)metyl]-4piperidyl} -177pyrazolo[3,4<7]pyrimidín-3-yl)-2- metoxy fenyl]-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamidu	MH' 622	2,23	56	A
259	ó	acetát Arl-[4-(4-amino-l{1-[(2-metyl-177-4imidazolyl)metyl]-4piperidyl }-177pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-yl)-2- metoxy fenyl]-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamidu	MH' 622,0	2,05	32	A
260	«n v** y's** w ô V	acetát ΛΊ-[4-(4-amino-l{l-[(4-metyl-177-5imidazolyl)metyl]-4piperídyl}-177pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-yl)-2- metoxyfenyl]-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamidu	MH' 622	2,08	84	A

287

261	f	Vl-(4-{4-amino-l-[l-(l ,3tiazol-2-ylmetyl)-4piperidyl]-17/pyrazolo[3,4d]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyl)-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid	MH' 625,1	3,15	73	A
262	y	Vl-{4-[4-amino-l-(l-{[5(hy droxymety l)-2furyl]metyl}-4piperidyl)-l//pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-3-yl]-2- metoxyfenyl} -2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid	MH' 638,1	2,20	36	A
263	CH, -í/ í4 Γ	VI -{4-[4-amino-1-(1 metyl-4-piperidyl)-lVpyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl} -2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid	MH' 542,2	2,03	67	A
264	T »*	VI -{4-[4-amino-1 -(1 izopropy 1-4-piperidy ΟΙ//-pyrazolo [3,4t/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl} -2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid	MH' 570,1	2,08	58	B
265	«TrO	acetát Vl-{4-[4-amino-l(l-izobutyl-4-piperidyl)l/7-pyrazolo[3,4d]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl} -2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamidu	MH' 584,0	2,43	54	A
266		Vl-(4-{4-amino-l-[l-(2- furylmetyl)-4-piperidyl]- l//-pyrazolo[3,4- d]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH' 608,1	2,63	82	A

288

267	to % ý	Al-(4-{4-amino-l-[l-(3- furylmetyl)-4-piperidyl]- lH-pyrazolo[3,4- ri]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH+ 610,2	2,43	54	A
268	tol Xi u	Acetát N1 -(4-{4-aminol-[l-(lH-4imidazolylmetyl)-4piperidyl]-lHpyrazolo[3,4ri]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamidu	MH' 608,0	1,90	55	A
269	6^· % ô	Al-{4-[4-amino-l-(l- tetrahydro-2H-4-pyranyl- 4-piperidyl)-lH- pyrazolo[3,4- í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl}-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid	MH+ 614,2	2,13	91	B
270	¾ -x	Zcrc-butyl-4-{4-[4amino-3-(4-{[2-fluór-4(trifluórmetyl)benzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)lH-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-l-yl]-l piperidyl}-l- piperidínkarboxylát	MH+ 713,3	2,57	74	B
271	o to	Al -{4-[4-amino-l-(ltetrahydro-3 -tiofenyl-4piperidyl)-lHpyrazolo[3,4- t/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl} -2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid	MH+ 616,2	2,53	102	B
272	W toto ’A	Al-{4-[4-amino-l-(l- benzyl-4-piperidyl)-lH- pyrazolo[3,4- ri]pyrimidín-3-yl]-2- metoxyfenyl}-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH' 618,0	2,67	69	A

289

273	% ď	acetát Vl-(4-{4-amino-l[l-(2-pyridylmetyl)-4piperidyl]-lVpyrazolo[3,4d]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamidu	MH' 619,1	2,32	84	A
274	v d	Vl-(4-{4-amino-l-[l-(3- pyridylmetyl)-4- piperidyl]-lV- pyrazolo[3,4- ď]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH 619,1	2,32	77	A
275	d	VI -(4-{4-amino-l-[l-(4pyridylmetyl)-4piperidyl]-1Hpyrazolo[3,4ď]pyrimidín-3-yl} -2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH' 619,1	2,63	81	A
276	M	acetát Vl-[4-(4-amino-l{l-[(l-metyl-lV-2pyrolyl)metyl]-4piperidyl}-l/fpyrazolo[3,4ď]pyrimidín-3-yl)-2- metoxyfenyl]-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamidu	MH' 621,2	2,52	35	B
277	j* J}	acetát Vl-[4-(4-amino-l{l-[(5-metyl-2furyl)metyl]-4piperidyl}-lVpyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl)-2- metoxyfenyl]-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamidu	MH' 622,1	2,65	78	A
278	M Ov* c?	Vl-(4-{4-amino-l-[l-(2- tienylmetyl)-4- piperidyl]-lV- pyrazolo[3,4- í/]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH' 624,0	3,00	57	B

290

279	Μ 03·	acetát Ni-(4-{4-amino-l[1 -(3-tienylmetyl)-4piperidyl]-l//pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamidu	MH+ 626,2	2,55	87	A
280	.Μ 7ί) <Η	diacetát 7VT-[4-(4-aminol-{ l-[(l-metylpiperidín4-yl]-4-piperidyl}-l//pyrazolo[3,4e/)pyrimidín-3-yl)-2metoxyfenyl]-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamidu	MH+ 627,2	1,80	72	B
281	Μ ί	7/1 -{4-[4-amino-1-(1 tetrahy dro-2/7-4 tiopyranyl-4-piperidyl)l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid	MH+ 630,2	2,37	20	B
282	f θ'	4-({4-[4-amino-3-(4-{[2- fluór-4- (tr ifluórmetyl)benzoy ljamino}-3-metoxy fény 1)l//-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-1 yl]piperidino}-l -pyridíntV-oxid	MH+ 637,2	2,13	93	A
283	W ΧΓ	7VT-(4-{4-amino-1-(1-(2fluórbenzyl)-4piperidyl]-l/7pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH+ 638,2	3,13	84	A
284	ι5Γ	#l-(4-{4-amino-l-[l-(3- fluórbenzyl)-4piperidyl]-l//pyrazolo[3,4t/]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyl)-2-fluór-4(trifluórmety Jbenzamid	MH+ 638,2	3,25	77	A

291

285	'V	VI-(4-{4-amino-1-(1-(4fluórbenzyl)-4piperidyl]-1Hpyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH+ 638,2	2,87	88	A
286	?	Vl-[4-(4-amino-l-{l-[3- (metylsulfanyl)propyl]-4- piperidyl}-177- pyrazolo[3,4- ď]pyrimidín-3-yl)-2- metoxyfenyl]-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH+ 618,2	2,42	76	A
287	M d	Vl-[4-(4-amino-l-{l-[(5- metyl-2-tienyl)metyl]-4- piperidyl}-l//- pyrazolo[3,4- í/]pyrimidín-3-yl)-2- metoxyfenyl]-2-fluór-4- (trifiuórmetyl)benzamid	MH+ 640,2	3,23	73	A
288	i	Vl-(4-{4-amino-l-[l-(3kyanobenzyl)-4piperidyl] -1Hpyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH+ 645,2	3,28	57	A
289	ty* d ie	VI-(4-{4-amino-1-(1-(4 kyanobenzyl)-4piperidyl]-lJ/pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH+ 645,2	3,32	62	A
290	ά	VI -(4-{4-amino-l-[l-(2kyanobenzyl)-4piperidyl]-l//pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH+ 645,2	3,78	62	A

292

291	CH NM %	Al-(4-{4-amino-l-[l-(4metoxybenzyl)-4piperidyl]-lApyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-2-fluór-4- (trifluórmetyl)benzamid	MH+ 650,2	2,63	45	A
292	Ô '-N Λ·	Al-[4-(4-amino-l-{l-[(lacetyl-piperidín-4-yl]-4piperidyl)-lApyrazolo[3,4d]pyrimidín-3-yl)-2metoxy fenyl]-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid	MH+ 655,2	2,02	71	B
293	f	acetát Al-[4-(4-amino-l {1-[(3-metyl-l A-4pyrazolyl)metyl]-4piperidylj-lApyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl)-2- metoxy-fenyl]-2-fluór-4- (trifluór- metyl)benzamidu	MH+ 624,2	2,07	109	A

Príklad 294

Metyl-2-4-[4-amino-3-(4-[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino-3metoxy fény l)-lA-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yljpiperidino-acetát

Al-{4-[4-amino-l-(4-piperidyI)-l/ŕ-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy-fenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (122 g, 0,230 mmol), metyl2-bróm-acetát (33 pl, 0,346 mmol) a uhličitan cézny (150 mg, 0,461 mmol) sa zmiešajú s DMF (2 ml). Zmes sa zahrieva na teplotu 85°C počas 2 hodín. Podľa LC/MS ide o dva nové piky, z ktorých jeden je bis-alkylovaný produkt a druhý požadovaný produkt. Surová zmes sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou (Rainin HPLC, Stĺpec: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 pm, 250x21, 2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 21 ml/min.), čím sa získa metyl-2-4-[4-amino-3-(4[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoyl] amino-3-metoxy fény l)-l//-pyr azolo [3,4í/]pyrimidín-l-yljpiperidino-acetát (60 mg, 43%). 'h NMR (DMSO-dó) δ 1,91

293 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,42 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 3,32 (s, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 4,67 (m, IH), 7,32 (m, 2H), 7,75 (d, J=7,96Hz, IH), 7,89 (d, J=1O,35 Hz, IH), 8,00 (s, IH), 8,24 (s, IH), 8,30 (d, J=8,13 Hz, IH), 9,89 (s, IH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, 0 8, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ = 602,2. Rt = 2,80 minút.

Príklad 295

7’ran5-3-[4-(17/-benzo[</]imidazol-l-ylmetyl)-3-metoxyfenyl]-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amln

A. l-(4-Brómbenzyl)-l//-benzo [í/] imidazol l-Bróm-4-(brómmetyl)benzén (2,50 g, 10 mmol), ΙΗ-benzo [J] imidazol (1,181 g, 10,0 mmol), hydroxid draselný (0,561 g, 10,0 mmol), uhličitan draselný (1,382 g, 10,0 mmol) a tetrabutylamónium-bromid (0,161 g, 0,5 mmol) sa zmiešajú v xyléne (60 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 139°C cez noc. Horúca reakčná zmes sa filtruje a premyje horúcim xylénom. Rozpúšťadlo sa odparuje a zvyšok sa čistí zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím dichlórmetán/metanolu (95:5 až 80:20) ako mobilnej fázy, čím sa získa l-(4brómbenzyl)-l/f-benzo[ŕ/]imidazol (1,193 g, 42%). *H NMR (CDCb) δ 5,31 (s, 2H), 7,05 (m, 2H), 7,28 (m, 3H), 7,46 (m, 2H), 7,82 (m, IH), 7,95 (s, IH).

B. l-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzyl]-l/7benzo [í/] imidazol

Zmes l-(4-brómbenzyl)-lH-benzo[í/]imidazolu (1,193 mg, 4,15 mmol), diboronpinakolesteru (1,27 g, 4,98 mmol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlór-paládnatého komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,10 g, 0,12 mol) a octanom draselným (1,22 g, 12,46 mol) v N,N-dimetylformamide (25 ml) sa zahrieva pri teplote 85°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (20 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa

294 odstráni filtráciou cez vrstvu celitu. Filtrát sa koncentruje a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím dichlórmetán/metanolu (98:2 až 95:5) ako mobilnej fázy, čím sa získa l-[4(4,4,5,5-tetramety 1-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzyl]-l//-benzo [djimidazol (1,38 g, 100%): *H NMR (CDCb) δ 1,27 (s, 12H), 5,33 (s, 2H), 7,06 (d, J=8,24Hz, 2H), 7,28 (d, J=8,34 Hz, 2H), 7,84 (d, J=7,70Hz, 1H), 8,01 (s, 1H).

C. 7’ranó^,-3-[4-(l//-benzo[í/]imidazol-l-ylmetyl)-3-metoxyfenyl]-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-4-amí n

Trans-3-jód-l-[4-(4-mety lpiperazino)cy klohexyl]-l //-pyrazolo [3,4J]pyrimidín-4-amín (200 mg, 0,453 mmol), l-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)benzyl]-l//-benzo[í/]imidazol (303 mg, 0,906 mmol), tetrakistrifenylfosfín-paládium (0,31 mg, 0,027 mmol) a uhličitan sodný (155 mg, 1,09 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (5 ml) a vodou (2,5 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri refluxe cez noc pod atmosférou dusíka. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou (Rainin HPLC, Stĺpec: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 pm, 250x21,2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 21 ml/min.), čím sa získa trans-3-[4-(\Hbenzo [Jjimidazol-1-y lmetyl)-3-metoxy fenyl]-l-[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin (35 mg, 15%).

’H NMR (DMSO-dó) δ 1,46 (m, 2H), 1,95 (m, 10H), 2,13 (s, (3H), 2,32 (m, 5H), 4,62 (m, 1H), 5,78 (s, 2H), 7,22 (m, 2H), 7,49 (m, 2H), 7,62 (m, 4H), 8,22 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Stĺpec: Genesis, C18,3 um, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ = 522,3, Rt = 0,82 minút.

Príklad 296 acetát N\ -(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4c/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu

295

Al-{4-[4-amino-1-(4-piperidy 1)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (100 g, 0,189 mmol), 2brómetyl(metyl)éter (20 pl, 0,208 mmol) a uhličitan draselný (52 mg, 0,378 mmol) sa zmiešajú v DMF (2 ml). Zmes sa zahrieva pri teplote 65°C cez noc. Surová zmes sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou (Rainin HPLC, Stĺpec: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 pm, 250x21, 2 mm Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH

4,5), 21 ml/min.), čím sa získa acetát Al-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-4piperidy 1]-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fenyl)-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamidu (75 mg, 68%). *H NMR (DMSO-dó) δ 1,90 (m, 2H),

2,22 (m, 4H), 2,54 (m, 2H), 3,02 (m, 2H), 3,26 (s, 3H), 3,46 (m, 2H), 3,94 (m, s, 3H), 4,66 (m, IH), 7,30 (d, J=8,19Hz, IH), 7,34 (s, IH), 7,74 (d, J=7,84Hz, IH), 7,90 (d, J=10,33Hz, IH), 7,99 (m, IH), 8,24 (s, IH), 8,30 (d, J=8,23 Hz, IH), 9,89 (s, IH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Stĺpec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ =587,2, Rt = 2,17 minút.

Príklad 297

Al-(4-{4-amino-l-[l-(kyanometyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidín3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid

Ni -{4-[4-amino-1 -(4-piperidy l)-l-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (100 g, 0,189 mmol), 2brómacetonitril (14 pl, 0,208 mmol) a uhličitan cézny (52 mg, 0,378 mmol) sa zmiešajú v DMF (2 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Surová zmes sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou (Rainin HPLC, Stĺpec: Thermoquest, hyperprep HS 0 8, 8 pm, 250x21,2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH

4,5), 21 ml/min.), čím sa získa Al-(4-{4-amino-l-[l-(kyanometyl)-4piperidyl]-l//-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fény l)-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid (68 mg, 64%). *H NMR (DMSO-dó) δ 1,99 (m, 2H),

296

2,27 (m, 2H), 2,45 (m, 2H), 2,99 (m, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,68 (m, 1H), 7,30 (d, J=8,21Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,75 (d, J=8,26Hz, 1H), 7,90 (d, J=10,51Hz, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,30 (d, J=8,18 Hz, 1H), 9,90 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, 0 8, 3 pm, 33x4,6 mm Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 mllmin.): MH⁺ =569,2, Rt =3,03 minút.

Príklad 298 acetát VI-(4-{4-amino-l-[l-(2-amino-2-oxoetyl)-4-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4c7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu

VI -{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-č7|pyrimidín-3-yl]-2metoxy-fenyl} -2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid (100 g, 0,189 mmol), 2brómacetamid (28 mg, 0,208 mmol) a uhličitan cézny (123 mg, 0,378 mmol) sa zmiešajú v DMF (2 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Surová zmes sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou (Rainin HPLC, Stĺpec: Thermoquest, hyperprep HS C18, 8 pm, 250x21,2 mm, Eluenty: 5% B/A až 100% B/A v 25 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH

4,5), 21 ml/min.), čím sa získa acetát Vl-(4-{4-amino-l-[l-(2-amino-2oxoetyl)-4-piperidyl]-l 77-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidí n-3-y 1}-2-metoxy fenyl)-2fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (70 mg, 63%). *H NMR (DMSO-dó) δ 1,90 (m, 5H), 2,34 (m, 4H), 2,93 (s, 2H), 2,99 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,69 (m, 1H), 7,12 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,30 (d, J=8,15Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,75 (d, J=8,15Hz, 1H), 7,87 (d, J=10,30Hz, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,31 (d, J=8,14 Hz, 1H), 9,90 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): MH⁺ =587,2. Rt =2,17 min.

297

Príklad 299

-(l-metyl-3-piperidyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4amín-acetát

Racemický roztok 3-jód-l-(l-metyl-3-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,050 g, 0,00014 mol) v dimetoxyetáne (2,5 ml) a vode (5 ml) sa nechá reagovať so 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,033 g, 0,00015 mol), uhličitanom sodným (0,037 g, 0,00037 mol) a tetrakís(trifenylfosfín)paládiom (0,016 g, 0,000014 mol) pri teplote 80°C počas 18 hodín. Organické rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Surová látka sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-0,1M octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa 1-(1metyl-3-piperidyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínacetát vo forme bielej pevnej látky (0,040 g, 0,00009 mol).

*H NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ)δ 8,24 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,107,22 (m, 5H), 4,74-4,84 (m, 1H), 2,94 (dd, 1H), 2,79 (d, 1H), 2,36 (t, 1H), 2,22 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,86-2,01 (m, 3H), 1,76-1,84 (m, 1H), 1,60-1,75 (m, 1H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,74 min; MS: MH⁺ 401.

Príklad 300 l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo [3,4</]pyrimidín-4-amín-acetát

Racemický roztok 3-jód-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-l//pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-4-amínu (0,050 g, 0,00012 mol) v dimetoxyetáne (2,5 ml) a vode (5 ml) sa nechá reagovať so 4-fenoxyfenylboritou kyselinou (0,029 g, 0,00014 mol), uhličitanom sodným (0,033 g, 0,00031 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,014 g, 0,00001 mol) pri teplote 80°C počas 20 hodín. Organické rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Surová látka sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky

298 počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-3-(4-fenoxyfenyl)l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín-acetát vo forme bielej pevnej látky (0,038 g, 0,00007 mol).

*HNMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,24 (s, 1H), 7,65 (d, 2H), 7,43 (t, 2H), 7,097,22 (m, 5H), 4,71-4,82 (m, 1H), 3,44-(t, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,04 (dd, 1H), 2,91 (d, 1H), 2,47-2,60 (m, 3H), 1,94-2,09 (m, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,75-1,84 (m, 1H), 1,57-1,74 (m, 1H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) R_t 14,26 min; MS: MH⁺ 445.

Príklad 301

7rans-l-{4-[4-amino-3-(3-chlór-4-{[4-(trifluórmetyl)benzoyl]amino} fény ΟΙ //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidí n- 1-y ljcyklohexyl}-4-mety lhexahy dropy razí ndiiumdimaleát

A. Tcrc-butyl-A-(4-bróm-2-chlórfenyl)karbamát

Roztok 4-bróm-2-chlóranilínu (5,00 g, 0,0242 mol) v tetrahydrofuráne (50 ml) sa nechá reagovať s 1,0 M roztokom bis(trimetylsilyl)amidu sodného v tetrahydrofuráne (53,2 ml, 0,0532 mol). Zmes sa mieša 15 minút pri izbovej teplote. Pridá sa di-/erc-butyl-dikarbonát (6,34 g, 0,0290 mol) a roztok sa mieša počas 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu heptán/etylacetát (4:1). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa /crc-butyl-A-(4-bróm-2chlórfenyl)karbamát vo forme bielej pevnej látky (4,214 g, 0,0137 mol). ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,75 (s, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,50 (dd, 1H), 1,46 (s, 9H); TLC (heptán/etylacetát 4:1) Rf 0,54.

B. Terc-butyl-A-[2-chlór-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2y l)feny 1] karbamát

299

Zmes ŕerc-butyl-/V-(4-bróm-2-chlórfenyl)karbamátu (2,10 g, 0,00685 mol), diboronpinakolesteru (2,09 g, 0,00822 mol), [l,ľbis(difenylfosfino)ferocén]dichlór-paládnatého komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,17 g, 0,00021 mol) a octanu draselného (2,02 g, 0,02055 mol) v N,Ndimetylformamide (50 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 6 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa trituruje heptánom (70 ml) a výsledné pevné látky sa odstránia filtráciou cez vrstvu Celitu®521. Heptán sa odstráni vo vákuu, čím sa získa terc-butyl-7V-[2-chlór-4-(4,4,5,5tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamát vo forme šedej pevnej látky (1,93 g, 0,00546 mol): ’h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,65 (s, 1H), 7,74 (d, 1Η), 7,61 (d, 1H), 7,56 (dd, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,29 (s, 12H).

C. rran5-terc-butyl-jV-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)karbamát

Zmes trans-3-jód-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1 //-pyrazolo[3,4ť/]pyrimidín-4-amínu (2,20 g, 0,00498 mol), terc-butyl-7V-[2-chlór-4-(4,4,5,5tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (1,93 g, 0,00548 mol), uhličitanu sodného (1,32 g, 0,01245 mol) v 1,2-dimetoxyetáne (50 ml) a vode (100 ml) sa intenzívne mieša a pridá sa tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakčná zmes sa mieša 6 hodín pri teplote 80°C, po ktorých sa pridá ďalší tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,345 g, 0,00030 mol). Reakčná zmes sa mieša ďalších 16 hodín pri teplote 80°C. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (100 ml) a nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (200 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (3 x 75 ml). Spojené organické fázy sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu mobilnou fázou so zložením dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (90:10:0,5). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa /ran,r-rerc-butyl-7V-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2chlórfenyl)karbamát vo forme bielej pevnej látky (1,993 g, 0,00368 mol): *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,76 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,57 (dd, 1H), 4,58-4,71 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 1,89-2,61 (m, 15H), 1,49

300 (s, 9H), 1,401,48 (m, 2H); TLC (dichlórmetán/metanol = 90: 10) Rf 0,13. MS: M⁺541.

D. 7r«ns-3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín

Trízn5-/erc-butyl-V-(4-{4-amino-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)karbamát (1,993 g, 0,00368 mol) sa pridá do roztoku 20% trifluóroctovej kyseliny v dichlórmetáne. Zmes sa mieša počas 2 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (50 ml) a premyje 1,0 M vodným roztokom hydroxidu sodného (2 x 25 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa fra«Ä-3-(4-amino3-chlórfenyl)-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amín (1,564 g, 0,00355 mol) vo forme bielej pevnej látky, 'h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,31 (dd, 1H), 6,92 (d, 1H), 4,57-4,63 (m, 1H), 2,23-2,55 (m, 9H), 2,14 (s, 3H), 1,89-2,08 (m, 6H), 1,381,52 (m, 2H); TLC (dichlórmetán/metanol = 90:10) Rf 0,08; MS: MH 441.

E. Trans-Nl -(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)-4-(trifluórmetyl)benzamiddimaleát

Do zmesi 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridíne (5 ml) pri teplote -10°C sa po kvapkách pridá 4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbonylchlorid (0,188 g, 0,00090 mol), pričom teplota sa udržuje pod -5°C. Zmes sa mieša pri teplote -10°C počas 15 minút, a potom pri izbovej teplote počas 18 hodín. Po pridaní IN vodného roztoku hydroxidu sodného (1,0 ml) sa zmes mieša jednu hodinu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (15 ml) a spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparativnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-0,1M octan amónny v priebehu 15 min, 21

301 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa purifikovaná voľná báza (0,032 g, 0,000052 mol). Voľná báza sa rozpustí v absolútnom etanole (4 ml) a zahrieva k refluxu. Po pridaní roztoku kyseliny maleínovej (0,018 g, 0,000156mol) v absolútnom etanole (1 ml) sa roztok refluxuje ďalších 15 minút. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a výsledný precipitát sa filtruje, premyje minimálnym množstvom absolútneho etanolu. Precipitát sa suší vo vákuu, čím sa získa /ran5-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)4-(trifluórmetyl)benzamid-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,020 g, 0,00002 mol): *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,42 (s, IH), 8,26 (s, IH), 8,20 (d, 2H), 7,96 (d, 2H), 7,80-7,83 (m, 2H), 7,46 (dd, IH), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,13 (s, 4H), 4,61-4,73 (m, IH), 2,52-2,64 (m, 4H), 2,23-2,46 (m, 5H), 2,16 (s, 3H), 1,90-2,10 (m, 6H), 1,42-1,56 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,97 min;

MS: MH⁺ 613.

Príklad 302 rra«J-Al-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-3-yl}-2-chlórfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamid-dimaleát

Do zmesi 3-(4-amino-3-chlórfeny l)-l-[4-(4-mety lpiper azino)cyklohexyl]l//-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00045 mol) v pyridíne (5 ml) pri teplote -10°C sa po kvapkách pridá 4-(trifluórmetoxy)-lbenzénkarbonylchloridu (0,203 g, 0,00091 mol), pričom teplota sa udržuje pod -5°C. Zmes sa mieša pri teplote -10°C počas 15 minút, a potom pri izbovej teplote počas 18 hodín. Po pridaní IN vodného roztoku hydroxidu sodného (1,0 ml) sa zmes mieša jednu hodinu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (15 ml) a vodu (30 ml). Vrstvy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje etylacetátom (15 ml) a spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 5 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-0,IM octan amónny v

302 priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa purifikovaná voľná báza (0,034 g, 0,000054 mol). Voľná báza sa rozpustí v absolútnom etanole (4 ml) a zahrieva k refluxu. Roztok kyseliny maleínovej (0,019 g, 0,000162 mol) v absolútnom etanole (1 ml) sa pridá a roztok sa refluxuje počas 15 minút. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a výsledný precipitát sa filtruje a premyje minimálnym množstvom absolútneho etanolu. Precipitát sa suší vo vákuu, čím sa získa trans-N\-(4-{4amino-1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3yl}-2-chlórfenyl)-4-(trifluórmetoxy)benzamid-dimaleát vo forme bielej pevnej látky (0,020 g, 0,00002 mol): ’h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,29 (s, IH), 8, 26 (s, IH), 8, 14 (d, 2H), 7,78-7,87 (m, 2H), 7,68 (dd, IH), 7,57 (d, 2H), 6,80-7,20 (b, 2H), 6,11 (s, 4H), 4,65-4,77 (m, IH), 2,38-3,60 (m, 12H), 1,952,15 (m, 6H), 1,51-1,68 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 15,41 min; MS: MH⁺ 629.

Príklad 303 rratt5-3-(3-chlór-4-{[(5-metyl-2-furyl)metyl]amino}fenyl)-l-[4-(4mety lpiperazino)cyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-4-amín-acetát

Zmes 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlóretáne (20 ml) sa pri izbovej teplote nechá reagovať s 5-metyl-2-furfuralom (0,052 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridom sodným (0,336 g, 0,00159 mol). Pridajú sa ďalšie dva ekviv. triacetoxyborohydridu sodného (0,672 g, 0,00318 mol) vo dvoch 24 hodinových intervaloch. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi chloroform (25 ml) a nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (50 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje chloroformom (2 x 25 ml). Spojené organické fázy sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 A, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-0,1M octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa

303 odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa /ra«5-3-(3-chlór-4{[(5-metyl-2-fúry l)metyl] amino} fenyl)-l-[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]177-pyrazolo[3,4-c7]pyrimidín-4-amín-acetát vo forme bielej pevnej látky (0,129 g, 0,00022 mol): ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,51 (d, 1H), 7,39 (dd, 1H), 6,93 (d, 1H), 6,20 (d, 1H), 6,14-(t, 1H), 5,98 (d, 1H), 4,55-4,66 (m, 1H), 4,38 (d, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,18-2,61 (m, 10 H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 5H), 1,37-1,53 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, ml/min) R_t 14, 48 min;

MS: MH⁺ 535.

Príklad 304

7ra/íS-3-{3-chlór-4-[(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín-acetát

Zmes 3-(4-amino-3-chlórfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00045 mol) v 1,2-dichlóretáne (20 ml) sa nechá reagovať s 2-chlór-6-fluórbenzaldehydom (0,076 g, 0,00048 mol), octovou kyselinou (0,095 g, 0,00159 mol) a triacetoxyborohydridom sodným (0,336 g, 0,00159 mol) pri izbovej teplote. Pridajú sa ďalšie tri ekviv. triacetoxyborohydridu sodného (1,008 g, 0,00477 mol) v troch 24 hodinových intervaloch, po ktorých zreaguje všetka východisková látka. Rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi chloroform (25 ml) a nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného (50 ml). Fázy sa separujú a vodná fáza sa extrahuje chloroformom (2 x 25 ml). Spojené organické fázy sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa /ra«y-3-{3-chlór-4-[(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino]fenyl}-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l 77-pyrazolo [3,4-t7]pyrimidín4-amín-acetát vo forme bielej pevnej látky (0,074 g, 0,00011 mol): ’H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) Ô 8, 20 (s, 1H), 7,52 (d, 1H), 7,35-7,47 (m, 4H), 6,99 (d,

304

1Η), 5,75 (t, 1H), 4,55-4,66 (m, 1H), 4,57 (d, 2H), 2,25-2,61 (m, 11 H), 2,16 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,87-2,09 (m, 4H), 1,37-1,53 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 15, 97 min;

MS: MH⁺ 583.

Príklad 305

Trans-N\ -(4-{4-amino-l-[l-(l//-2-imidazolylkarbonyl)-4-piperidyl]-l//pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fenyl)-(/r tf«s)-2-feny 1-1cyklopropánkarboxamid-maleát

Zmes Al- {4-[4-amino-1 -(4-piperidy 1)-1//-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3 yl]-2-metoxyfenyl}-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamidu (0,200 g, 0,00041 mol) v toluéne (10 ml) sa nechá reagovať s 5H, 10//-diimidazo[l ,5-a: 1,5-<7]pyrazín5,10-diónom (0,040 g, 0,00021 mol) a refluxuje sa počas 18 hodín. Pridá sa ďalší ekviv. 5//,10//-diimidazo[l,5-a:l,5-ď]pyrazín-5,10-diónu a zmes sa refluxuje ďalších 6 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 0 8, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa voľná báza (0,103 g, 0,00017 mol). Voľná báza sa rozpustí v absolútnom etanole (10 ml) a zahrieva k refluxu. Po pridaní roztoku kyseliny maleínovej (0,030 g, 0,00034 mol) v absolútnom etanole (1 ml) sa roztok refluxuje počas 15 minút, po ktorých vznikne precipitát. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a výsledný precipitát sa filtruje, premyje minimálnym množstvom absolútneho etanolu. Precipitát sa suší vo vákuu, čím sa získa trans-N1 -(4-{4-amino-1-[1-(1 //-2-imidazolylkarbonyl)-4-piperidyl]-l //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidí n-3-yl}-2-metoxy fény l)-(/rans)-2-feny 1-1 -cyklopropánkarboxamid-maleát vo forme bielej pevnej látky (0,055 g, 0,00008 mol): *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,63 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,22 (d, 1H), 8,00 (b, 1H), 7,74-(b, 1H), 7,43-7,48 (m, 1H), 7,16-7,33 (m, 7H), 6,21 (s, 2H), 4,975,13 (m, 1H), 2,91-3,47 (m, 4H), 2,53-2,65 (m, 1H), 2,30-2,45 (m, 1H), 2,072,26 (m, 2H), 1,95-2,07 (m, 2H), 1,45-1,50 (m, 1H), 1,28-1,32 (m, 1H); RP305

HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,17 min;

MS: MH⁺ 578.

Príklad 306

Cz'5-Al-(4-{4-amino-l-[4-(2-aminoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lApyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fenyl)-(/rtf«s)-2-feny 1-1 cyklopropánkarboxamid-acetát

A. Cz'j-Al-(4-{4-amino-l-[4-(kyanometyl)-4-hydroxycyklohexyl]-lApyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-metoxy fenyl)-(ŕr a«.y)-2-feny 1-1cyklopropánkarboxamid

Zmes cz's^,-Al-{4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-lA-pyrazolo[3,4íf]pyrimidxn-3-yl]-2-metoxy fenyl }-(rrazz5)-2-fenylcyklopropán-l -karboxamidu (0,605 g, 0,0012 mol), chloristanu lítneho (0,189 g, 0,0018 mol) a kyanidu draselného (0,116 g, 0,0018 mol) v acetonitrile (60 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas dvoch dní, ochladí sa na izbovú teplotu, zriedi vodou (30 ml) a extrahuje dietyléterom (3x 30 ml). Spojené organické fázy sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu dichlórmetán/metanolom (95: 5). Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa cz'j^,-Al-(4-{4-amino-l-[4(kyanometyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyl)-(/razw)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,602 g, 0,0011 mol): *H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,64 (s, IH), 8,23 (t, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,25 (s, IH), 7,17 (m, 4H), 4,61-4,62 (m, IH), 3,91 (s, IH), 2,66 (s, 2H), 2,55-2,62 (m, IH), 2,312,45 (m, 3H), 1,58-1,89 (m, 6H), 1,45-1,53 (m, IH), 1,28-1,38 (m, IH); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 15,21 min;

MS: MH⁺ 538.

306

B. Cis-Ni -(4-{4-amino- l-[4-(2-aminoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-y 1}-2-metoxy fény l)-(Zra«5)-2-fenyl-lcyklopropánkarboxamid-acetát

Do roztoku cis-N\-(4-{4-amino-1 -[4-(ky anometyl)-4-hydroxy cyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fenyl)-(/ra«j)-2-fenyl-1 cyklopropán-karboxamidu (0,200 g, 0,00037 mol) v metanole (20 ml) a hydroxidu amónneho (1 ml) sa pridá Raneyov nikel (0,5 ml). Zmes sa mieša 18 hodín pod atmosférou vodíka (1 atm). Reakčná zmes sa filtruje cez Celit a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-0,1M octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa cisΝΊ-(4-{4-amino-l-[4-(2-aminoety l)-4-hydroxy cyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4</]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény l)-(/rans)-2-feny 1-1 cyklopropánkarboxamidacetát vo forme bielej pevnej látky (0,045 g, 0,000083 mol),: ^!H NMR (DMSOdó, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22-8,24 (m, 1H), 7,17-7,33 (m, 7H), 4,65-4,67 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,84-2,91 (m, 1H), 2,53-2,55 (m, 1H), 2,33-2,40 (m, 4H), 1,85 (s, 3H), 1,35-1,80 (m, 9H), 1,30-1, 33 (m, 1H); RPHPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,29 min;

MS: MH⁺ 444.

Príklad 307

Cis-Nl-(4-{4-amino- l-[4-(2-amino-2-oxoetyl)-4-hydroxycyklohexyl]-l//pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény l)-(Zra Hs)-2-fenyl-1 cyklopropánkarboxamid

Do intenzívne miešaného roztoku cz'5-Nl-(4-{4-amino-l-[4-(kyanometyl)4-hydroxy cyklohexyl]-l //-pyrazolo [3,4-d] pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény I)(Zro«5)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamidu (0,200 g, 0,00037 mol) v dimetylsulfoxide (4 ml) sa pri izbovej teplote pridá uhličitan draselný (0,216 g, 0,00156 mol). Po kvapkách sa pridá 30% vodný roztok peroxidu vodíka (0,6

307 ml), pričom teplota sa udržuje konštantná. Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 32 hodín. Pridá sa voda (20 ml) do zmesi a vzniknutý precipitát sa filtruje. Precipitát sa premyje vodou, suší vo vákuu. Pevné látky sa čistia preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa cz\s-Vl-(4-{4-amino-l-[4-(2-amino-2-oxoetyl)-4hydroxycyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-y l}-2-metoxy fény 1)(Zrans)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid vo forme bielej pevnej látky (0,117 g, 0,00021 mol): *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,64 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,43-7,48 (m, 1H), 7,15-7,35 (m, 7H), 7,05-7,10 (m, 1H), 4,97 (s, 1H), 4,61-4,71 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, 1H), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,24 (s, 2H), 1,55-1,81 (m, 6H), 1,451,53 (m, 1H), 1,28-1,36 (m, 1H); RPHPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,05 min;

MS: MH⁺ 556.

Príklad 308

C/5^,-A71-[4-(4-amino-l-{4-[(dimetylamino)metyl]-4-hydroxycyklohexyl}-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-(Zran£)-2-fenyl-lcyklopropánkarboxamid-acetát

Do roztoku c/5-A^ľl-{4-[4-amino-l-(l-oxaspiro[2.5]okt-6-yl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl]-2-metoxyfenyl}-(Zrans)-2-fenylcyklopropán-lkarboxamidu (0,190 g, 0,000302 mol) v 2-propanole (10 ml) sa pridá 2 M roztok dimetylamínu v metanole (0,91 ml) a výsledná zmes sa zahrieva pri teplote 65°C v tlakovej nádobe počas 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 30% izokraticky počas piatich minút, potom 30%-60% acetonitril - 0,lM octan amónny v priebehu 15 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa czs-//l-[4-(4-amino-l-{4[(dimetylamino)metyl]-4-hydroxycyklohexyl}-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl)-2-metoxyfenyl]-(Zrnn5)-2-fenyl-l-cyklopropánkarboxamid-acetát vo forme

308 bielej pevnej látky (0,109 g, 0,000177 mol): *H NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ)δ 9,64 (s, IH), 8,23 (d, IH), 8,22-8,24 (m, IH), 7,177,33 (m, 7H), 4,56-4,68 (m, IH), 3,91 (s, 3H), 2,54-2,64 (m, IH), 2,30-2,44 (m, 3H), 2,28 (s, 6H), 2,24 (s, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,63-1,78 (m, 4H), 1,44-1,58 (m, 3H), 1,28-1,36 (m, IH); RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 m, 300Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,54 min;

MS: MH⁺ 556.

Príklad 310

A2-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4</]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-(2Ä)-tetrahydro-l//-2-pyrolkarboxamidacetát

Roztok trans-3 - (4-amino-3-metoxy fenyl)-1- [4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,00046 mol) v N,Ndimetylformamide (10 ml) sa nechá reagovať s 1-hydroxy-7-azabenzotriazolom (0,068 g, 0,00050 mol), l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochloridom (0,132 g, 0,00069 mol), D-Boc-prolínom (0,108 g, 0,00050 mol) a N,V-diizopropyletylamínom (0,184 g, 0,00142 mol) pri izbovej teplote počas 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (10 ml) a 5% vodný roztok kyseliny citrónovej (20 ml). Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2 x 10 ml). Spojené organické fázy sa premyjú nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (15 ml), sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa mieša v 20% trifluóroctovej kyseline v dichlórmetáne počas 6 hodín pri izbovej teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin 08, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 5% izokraticky počas piatich minút, potom 5%-40% acetonitril-0,1M octan amónny v priebehu 20 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa /rans-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4-ť/]pyrimidín-3-y l}-2-metoxy fenyl)-(2Ä)-tetrahydro-l//2-pyrolkarboxamid-acetát (0,096 g, 0,00016 mol) vo forme bielej pevnej látky. 'H NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ)δ10,33 (s, IH), 8,45 (d, IH), 8,22 (s, IH), 7,25

309 (s, 1H), 7,21 (d, 1H), 4,58-4,69 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,77 (dd, 1H), 2,96-3,04 (m, 1H), 2,74-2,84 (m, 1H), 2,47-2,58 (m, 5H), 2,23-2,45 (m, 5H), 2,14 (s, 3H), 1,91 (s, 3H), 1,88-2,11 (m, 7H), 1,78-1,88 (m, 1H), 1,60-1,69 (m, 2H), 1,39-1,54 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 8,47 min;

MS: MH⁺ 534.

Príklad 311

4-[4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-l-y 1]-1pyridíniumolát

A. 4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-l-yl)-l-pyridíniumolát

Roztok 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (5,00 g, 0,019 mol) v N,N-dimetylformamide (50 ml) sa nechá reagovať so 60% hydridom sodným v oleji (0,92 g, 0,023 mol) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša počas 15 minút a pridá sa 4-nitropyridín-V-oxid (5,37 g, 0,038 mol). Zmes sa zahrieva pri teplote 100°C počas 18 hodín. Vzniknutý precipitát sa filtruje, premyje N,Ndimetylformamidom a etylacetátom, čím sa získa 4-(4-amino-3-jód-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)-l-pyridíniumolát (3,79 g, 0,011 mol) vo forme hnedej pevnej látky: *H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,38 (s, 1H), 8,34 (d, 2H), 8,24 (d, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 7,36 min;

MS: MH⁺ 355.

B. 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-1-y 1]-1pyridíniumolát

Suspenzia 4-(4-amino-3-jód-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-1-y 1)-1pyridíniumolátu (0,140 g, 0,00040 mol) v dimetoxyetáne (7 ml) a vode (15 ml) sa nechá reagovať so 4-fenoxyfenyiboritou kyselinou (0,093 g, 0,00043 mol), uhličitanom sodným (0,105 g, 0,00099 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,046 g, 0,00004 mol) pri teplote 80°C počas 18 hodín. Pevný podiel sa filtruje, čím sa získa 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4310 ŕ/]pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolát (0,138 g, 0,00035 mol) vo forme hnedej pevnej látky. Podiel (0,040 g, 0,00010 mol) sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky počas piatich minút, potom 40%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 30 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa produkt 4-[4-amino-3-(4-fenoxy fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-l-y l]-lpyridíniumolát vo forme bielej pevnej látky (0,013 g, 0,00003 mol), 'h NMR (DMSO-dó, 400 MHz)5. 8,44 (s, IH), 8,34-8,41 (m, 4H), 7,77 (d, 2H), 7,45 (t, 2H), 7,13-7,24 (m, 5H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,66 min;

MS: MH⁺ 397.

Príklad 312

-(4-fenoxy fenyl)-1- (4-pyr idy 1) -1 //-pyrazolo [3,4-d]py r imidín-4-amín

Suspenzia 4-[4-amino-3-(4-fenoxyfény 1)-1//-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-1ylj-1 -pyridíniumolátu (0,100 g, 0,00025 mol) a 10% paládia na aktívnom uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) v kyseline octovej (3 ml) sa nechá reagovať s monohydrátom hypofosfitu sodného (0,033 g, 0,00038 mol) pri teplote 60°C. Po 2 hodinách sa pridá ďalšie 10% paládium na aktívnom uhlí (0,016 g, 0,00002 mol). Zmes sa mieša 18 hodín, po ktorých sa pridá ďalšie 10% paládium na aktívnom uhlí (0,016 g, 0,00002 mol) a monohydrát hypofosfitu sodného (0,033 g, 0,00038 mol). Zmes sa mieša ďalších 24 hodín, filtruje cez Celit®521 a premyje kyselinou octovou. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky počas piatich minút, potom 40%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 30 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-amín (0,020 g, 0,00005 mol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,71 (d, 2H), 8,46 (s, IH), 8,39 (dd, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,46 (t, 2H), 7,13-7,25 (m, 5H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300

311

Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 17,31 min;

MS: MH⁺ 381.

Príklad 313

A2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l-metyl-1//-2-indolkarboxamid

A. A2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl}-1-metyl-1//-2-indolkarboxamid

Suspenzia 4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l -y 1)-1 pyridíniumolátu (0,500 g, 0,0014 mol) v dimetoxyetáne (15 ml) a vode (30 ml) sa nechá reagovať s A2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidom (0,631 g, 0,00155 mol), uhličitanom sodným (0,374 g, 0,0035 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,163 g, 0,00014 mol) pri teplote 80°C počas 18 hodín. Pevný podiel sa filtruje a premyje vodou, mieša v etylacetáte počas 18 hodín, filtruje a premyje etylacetátom. Pevný podiel sa suší vo vákuu, čím sa získa surový 4-[4-amino-3(3-metoxy-4-[(l-mety 1-1 //-2-indolyl)-karbonyl]aminofenyl)-l //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolát (0,523 g, 0,0010 mol) vo forme hnedej pevnej látky: RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 10,92 min;

MS: MH⁺ 507.

B. A2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l-metyl-1//-2-indolkarboxamid

Suspenzia 4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[(l-metyl-l//-2-indolyl)karbonyl]amino}fenyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-l-yl]-l-pyridíniumolátu (0,200 g, 0,00039 mol) a 10% paládia na aktívnom uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) v kyseline octovej (3 ml) sa nechá reagovať s monohydrátom hypofosfitu sodného (0,063 g, 0,00059 mol) pri teplote 60°C počas 2 hodín. Pridá sa ďalšie 10% paládium na aktívnom uhlí (0,042 g, 0,00004 mol) a hypofosfit sodný

312 (0,045 g, 0,00042 mol ) a zmes sa mieša počas 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa mieša v metanole počas 4 hodín. Zmes sa filtruje cez Celite®521 a premyje metanolom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 50% izokraticky počas piatich minút, potom 50%-100% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa H2-{4-[4-amino-l-(4-pyridyl)-lHpyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl} -1 -mety Ι-ΙΗ-2-indolkarboxamid (0,020 g, 0,00004 mol) vo forme bielej pevnej látky: ^JH NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,48 (s, 1H) 8,72 (d, 2H), 8,47 (s, 1H), 8,42 (d, 2H), 8,20 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 7,36 (s, 1H) 7,34-(t, 1H), 7,16 (t, 1H), 4,05 (s, 3H), 3,99 (s, 1H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 19, 50 min;

MS: MH⁺ 491.

Príklad 314

-(6-amino-3-pyridyl)-3-(4-fenoxy fény 1)-1 H-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-4-amí n; a

Príklad 315

3-(4-fenoxy fenyl)-l-(2-pyridyl)-l H-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-4-amín

Roztok 3-(4-fenoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu ( 0,200 g, 0,00079 mol) v N-metyl-pyrolidinóne (10 ml) sa nechá reagovať so 60% hydridom sodným v oleji (0,032 g, 0,00079 mol). Po skončení uvoľňovania plynu sa zmes mieša pri izbovej teplote počas 30 minút a pridá sa 5-bróm-2nitropyridín (0,161 g, 0,00079 mol) a zmes sa zahrieva pri teplote 40°C počas 18 hodín. Pridá sa ďalší 60% hydrid sodný v oleji (0,032 g, 0,00079 mol) a zmes sa mieša ďalšie 2 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa vytrepe medzi dichlórmetán (15 ml) a vodu (25 ml). Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (2x15 ml). Spojené organické podiely sa

313 premyjú soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu heptán/etylacetátom (1: 2) ako mobilnou fázou, čím sa získajú dva produkty. Menej polárna zlúčenina, l-(6-nitro-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)-l/7pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín, sa suspenduje v absolútnom etanole (10 ml) a pridá sa 77,77-dimetylformamid (5 ml) a 10% paládium na aktívnom uhlí (0,007 g). Zmes sa mieša pod tlakom vodíka v balóniku počas 18 hodín. Zmes sa filtruje cez vrstvu Celitu®521, premyje absolútnym etanolom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa l-(6-amino-3-pyridyl)-3-(4-fenoxyfenyl)l/7-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (0,007 g, 0,00002 mol) vo forme bielej pevnej látky. *Η NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,53 (d, 1H) 8,31 (s, 1H), 7,97 (dd, 1H), 7,73 (d, 2H), 7,44-(t, 2H), 7,12-23 (m, 5H), 6,60 (d, 1H), 6,20 (s, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 15,38 min; MS: MH⁺ 396.

Polárnejšia zlúčenina, 3-(4-fenoxyfenyl)-l -(5-bróm-2-pyridyl)-177pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amín, sa suspenduje v absolútnom etanole (10 ml) a pridá sa 77,77-dimetylformamid (5 ml) a 10% paládium na aktívnom uhlí (0,007 g). Zmes sa mieša pod tlakom vodíka v balóniku počas 18 hodín. Zmes sa filtruje cez vrstvu Celitu®521 a premyje absolútnym etanolom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa 3-(4-fenoxyfenyl)-l-(2-pyridyl)-17/pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (0,030 g, 0,00007 mol) vo forme bielej pevnej látky. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,60-8,64 (m, 1H) 8,37 (s, 1H), 8,20 (d, 1H), 8,038,08 (m, 1H), 7,76 (d, 2H), 7,41-7,49 (m, 3H), 7,12-7,23 (m, 5H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 16,32 min;

MS: MH⁺ 381.

Všeobecný spôsob redukčnej aminácie s /razí5-3-(4-amino-fenyl)-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-177-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-4-amínom a aldehydom ako východiskovými látkami je uvedený nižšie. Zlúčeniny podľa príkladov 316 a 317 sa pripravia pomocou tohto spôsobu.

314

Postup:

Zmes Zrnn5-3-(4-amino-fenyl)-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (1 ekviv.), zodpovedajúceho aldehydu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne počas 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, zháša nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty. Zlúčenina podľa príkladu 316 sa pripraví podľa tohto spôsobu použitím aldehydu 2-metoxy-3formyl-pyridínu a zlúčenina podľa príkladu 317 sa pripraví použitím aldehydu 2-formyl-indolu.

Príklad 316 rrnn5-3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín-diacetát *H NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ) δ 8,18 (s, IH), 8,06 (dd, IH), 7,61 (d, IH), 7,35 (d, 2H), 6,95 (dd, IH), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, IH), 4,60 (m, IH), 4,26 (d, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,07 min.

MS: MH⁺ 528.

Príklad 317

7>a«s-3-{4-[(l//-2-indolylmetyl)amino]fenyl}-l - [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-4-amín-acetát ’H NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ) δ 11,08 (s, IH), 8,19 (s, IH), 7,44 (d, IH), 7,36 (d, 2H), 7,32 (d, IH), 7,01 (t, IH), 6,95 (t, IH), 6,81 (d, 2H), 6,47 (t, IH), 6,35 (s, IH), 4,60 (m, IH), 4,45 (d, 2H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m,

315

6Η), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,74 min.

MS: MH⁺ 536.

Príklad 318

7r an.y-3-[(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl}anilino)metyl]-l ,2-dihydro-2-pyridinón-diacetát rra«5-3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl]aminofenyl)-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amín-diacetát (0,105 g, 0,000199 mol) sa rozpustí v 30% HBr v kyseline octovej (4 ml) a zmes sa refluxuje počas 1,5 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa trans-3 - [(4-{4-amino-1 -[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-l //-pyrazolo [3,4ť/)pyrimidín-3-yl}anilino)metyl]-l ,2-dihydro-2-pyridinón-diacetát (0,0204 g, 0,0000324 mol) vo forme bielej pevnej látky.

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,18 (s, IH), 7,29 (m, 4H), 6,68 (d, 2H), 6,40 (t, IH), 6,15 (m, IH), 4,60 (m, IH), 4,09 (d, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 9,40 min. MS: MH⁺ 514.

Všeobecný spôsob redukčnej aminácie s ŕrans-3-(4-amino-3metoxyfenyl)-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-amínom a aldehydom ako východiskovými látkami je uvedený nižšie.

Zlúčeniny podľa príkladov 319-321 sa pripravia podľa tohto spôsobu.

Postup:

316

Zmes tran s-3-(4-amino-3-metoxy fény 1)-1 -[4-(4-mety lpiperazí no)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-(l ekviv.), zodpovedajúceho aldehydu (1,05 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne počas 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, zháša nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a znovu koncentruje. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty.

Zlúčenina podľa príkladu 319 sa pripraví z aldehydu 2-amino-4-chlór-5formyl-1,3-tiazolu. Zlúčenina podľa príkladu 320 sa pripraví z aldehydu 5metyl-3-formylizoxazolu. Zlúčenina podľa príkladu 321 sa pripraví z aldehydu

4-formy-l ,3-tiazolu.

Príklad 319

7ra«s-5 - [(4-{ 4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyanilino)metyl]-4-chlór-1,3-tiazol-2-amín-diacetát *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8, 19 (s, 1H), 7,19 (s, 2H), 7,06 (m, 3H), 6,68 (d, 1H), 5,76 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,30 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 6H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 11,59 min.

MS: MH⁺ 583.

Príklad 320

7ra«s-3-(3-metoxy-4-[(5-metyl-3-izoxazolyl)metyl]aminofenyI)-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazol o [3,4-ó/]pyrimidín-4-amín-acetát *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,04 (m, 2H), 6,68 (d, 1H), 6,16 (s, 1H), 5,86 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H),

317

2,40 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 11,53 min.

MS; MH⁺ 532.

Príklad 321

7’ríz«J-3-{3-metoxy-4-[(l,3-tiazol-4-ylmetyl)amino]fenyl}-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l 77-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-4-amín-acetát ‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,08 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,03 (d, 1H), 6,68 (d, 1H), 5,76 (t, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,52 (d, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 11,17 min.

MS: MH⁺ 534.

Všeobecný spôsob syntézy benzotetrahydrofuránových derivátov s trans3-(4-aminofenyl)-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l 77-pyrazolo [3,4í7]pyrimidín-4-amínom a príslušným 2-hydroxy-benzaldehydom ako východiskovými látkami je uvedený nižšie. Zlúčeniny podľa príkladov 322 a 323 sa pripravia podľa tohto spôsobu.

Postup:

7raw.y-3-(4-aminofenyl)-l -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-177pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín (1 ekviv., 0,0001-0,0002 mol) a zodpovedajúci 2-hydroxy-benzaldehyd (1 ekviv.) sa spoja v absolútnom etanole (5 ml) a miešajú pri izbovej teplote počas 48 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa suší cez noc, čím sa získa zodpovedajúci imín, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie. Trimetylsulfoxónium-jodid (2,5 ekviv.) sa rozpustí v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a naraz sa pridá 60% disperzia hydridu sodného v parafíne (2,5 ekviv.). Po 10 minútach sa sa pridá roztok imínu v bezvodom

318 dimetylsulfoxide (2 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka počas 2,5 hodiny. Roztok sa naleje do ľadovej vody (50 ml) a extrahuje dichlórmetánom (2x40 ml). Spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa finálna zlúčenina.

Zlúčenina podľa príkladu 322 sa pripraví z 2-hydroxy-4,6dichlórbenzaldehydu a zlúčenina podľa príkladu 323 sa pripraví z 2-hydroxy-4chlo'rbenzaldehydu.

Príklad 322

7raHs-3-4-[(4,6-dichlór-2,3-dihydrobenzo[ó]furán-3-yl)amino]fenyl-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín-acetát 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,39 (d, 2H), 7,14 (s, IH), 7,07 (s, IH), 6,80 (d, 2H), 6,56 (d, IH), 5,34 (m, IH), 4,80 (dd, IH), 4,60 (m, IH), 4,42 (dd, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitrilΟ,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 16,03 min.

MS: MH⁺ 593.

Príklad 323 /’rnn5-3-{4-[(4-chlór-2,3-dihydrobenzo[b]furán-3-yl)amino]fenyl}-l-[4-(4mety lpiperazino)cyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín-acetát ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (s, IH), 7,39 (d, 2H), 7,28 (t, IH), 6,99 (d, IH), 6,89 (d, IH), 6,81 (d, 2H), 6,53 (d, IH), 5, 34 (m, IH), 4,74 (dd, IH), 4,60 (m, IH), 4,38 (dd, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,42 min.

319

MS: MH⁺ 559.

Príklad 324

7ran5-3-4-[(4,6-dichlór-2,3-dihydrobenzo[á]furán-3-yl)amino]-3-metoxyfenyll-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínacetát

7ra«.y-3-4-[(4,6-dichlór-2,3-dihydrobenzo[&]furán-3-yl)amino]-3metoxy fenyl-l-[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-4-amín-acetát sa pripraví spôsobom podľa príkladov 322 a 323 z trans-3-(4-amino-3-metoxy fenyl)-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl] -IVpyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-4-amínu a 2-hydroxy-4,6-dichlórbenzaldehydu ako východiskových látok.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,11 (m, 4H), 6,80 (d, 1H), 5,45 (m, 2H), 4,84 (dd, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,42 (dd, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 16,85 min.

MS: MH⁺ 623.

Medziprodukt 7

7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-lpiperidínkarboxylát

A. 7’erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-lVpyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-l-yl]-l -piperidínkarboxylát

Zmes benzyl-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]karbamátu (9,54 g, 0,027 mol), /erc-butyl-4-(4-amino-3-jód-lV-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-l-yl)-l-piperidínkarboxylátu (10,0 g, 0,0225 mol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (1,56 g, 0,00135 mol) a uhličitanu sodného (5,97 g, 0,0563 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (120 ml) a vody

320 (60 ml) pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu (150 ml) a dichlórmetán (150 ml); organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje v dietyléteri a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa ŕcrc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-l//pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát (10,1 g, 0,0186 mol) vo forme bielej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,00 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,36 (m, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 18,58 min.

B. ľerc-buty 1-4-[4-amino-3-(4-amino fenyl)-17/-py razolo [3,4-J]pyrimidí n-1 yl]-1 -piperidínkarboxylát

Do roztoku Zerc-butyl-4-[4-amino-3-(4-[(benzyloxy)karbonyl]aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]-lpiperidínkarboxylátu (5,0 g, 0,0092 mol) v tetrahydrofuráne (150 ml) sa pridá 10% paládium na aktívnom uhlí (1,0 g) a reakčná zmes sa hydrogenuje v Parrovej trepačke počas 96 hodín. Katalyzátor sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu a filtrát sa koncentruje za zníženého tlaku. Zvyšok sa trituruje v n-heptánoch a precipitát sa spojí filtráciou a suší sa, čím sa získa ferc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-lí/pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylát (2,51 g, 0,0061 mol) vo forme belavej pevnej látky.

’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,20 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 6,69 (d, 2H), 5,42 (s, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,08 (br, 2H), 3,00 (br, 2H), 2,02 (m, 4H), 1,42 (s, 9H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,18 min.

Zlúčeniny podľa príkladov 325-337 sa pripravia podľa nasledujúceho spôsobu pre redukčnú amináciu, potom odstránením BOC chrániacej skupiny. 7erc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l -y 1] -1 piperidínkarboxylát a príslušný aldehyd sa používajú ako východiskové látky.

321

Postup:

Zmes Zerc-butyl-4-[4-amino-3-(4-aminofenyl)-l//-pyrazolo [3,4J]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (1 ekviv.), aldehydu (1,2 ekviv.), triacetoxyborohydridu sodného (3,4 ekviv.) a octovej kyseliny (3,4 ekviv.) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne počas 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, trituruje v etylacetáte a nechá sa reagovať so 4N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej. Výsledná zmes sa mieša počas 1 hodiny, vodná fáza sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa separujú. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril - O,1M octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získajú požadované produkty.

Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia podľa vyššie uvedeného spôsobu:

Príklad 325

3- {4-[(benzo[6]furán-2-ylmetyl)amino]fenyl} -1 -(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4</]pyrimidín-4-amín-diacetát ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,23 (m, 2H), 6,85 (d, 2H), 6,80 (s, 1H), 6,66 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,51 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,37 min.

MS: MH⁺ 440.

Príklad 326

3-(4-[(2-metoxy-3-pyridyl)metyl] amino fény 1)-1-(4-piperidy 1)-1//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-4-amín-diacetát ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,36 (d, 2H), 6,96 (dd, 1H), 6,69 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,27 (d, 2H),

322

3,94 (s, 3H), 3.07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, albumín) Rt 11,06 min.

MS: MH⁺ 431.

Príklad 327

3-(4-[(5-metyl-2-tienyl)metyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-amín-diacetát *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,36 (d, 2H), 6,85 (d, IH), 6,77 (d, 2H), 6,64 (d, IH), 6,54-(t, IH), 4,70 (m, IH), 4,41 (d, 2H), 3,07 (m, 2H),

2,65 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,85 min.

MS: MH⁺ 420.

Príklad 328

3- {4-[(2-furylmetyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín4- amín-diacetát 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,59 (s, IH), 7,36 (d, 2H), 6,77 (d, 2H), 6,46 (t, IH), 6,39 (d, IH), 6,34 (d, IH), 4,70 (m, IH), 4,31 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 10,96 min.

MS: MH⁺ 390.

Príklad 329

3-[4-(benzylamino)fenyl]-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amíndiacetát

323 ‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,34 (m, 6H), 7,24-(t, IH), 6,73 (d, 2H), 6,60 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,33 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,32 min.

MS: MH⁺ 400.

Príklad 330

3-{4-[(2-metoxybenzyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidín-4-amín-diacetát *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 7,24 (m, 2H), 7,01 (d, IH), 6,90 (t, IH), 6,70 (d, 2H), 6,41 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,28 (d, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,73 min.

MS: MH⁺ 430.

Príklad 331

3-{4-[(3-metoxybenzyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-4-amín-diacetát ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ. 8,19 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 7,25 (t, IH), 6,96 (m, 2H), 6,81 (d, IH), 6,72 (d, 2H), 6,59 (t, IH), 4,70 (m, IH), 4,30 (d, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,38 min.

MS: MH⁺ 430.

324

Príklad 332

3-{4-[(4-metoxybenzyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-amin-diacetát ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,35 (m, 4H), 6,90 (d, 2H), 6,72 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,25 (d, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,07 (m, 2H),

2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,37 min.

MS: MH⁺ 430.

Príklad 333 l-(4-piperidyl)-3-(4-[3-(trifluórmetyl)benzyl]aminofenyl)-lí/-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-amín-diacetát *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,71 (m, 2H), 7,58 (m, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,08 min.

MS: MH⁺ 468.

Príklad 334 l-(4-piperidyl)-3-(4-[4-(trifluórmetyl)benzyl]aminofenyl)-l/7-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-4-amín-diacetát 'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,70 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,72 (m, 3H), 4,70 (m, 1H), 4,44 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1M octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,23 min.

MS: MH⁺ 468.

325

Príklad 335

3-(4-[(2-metyl-l ,3-tiazol-4-yl)metyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-l/7pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-4-amín-diacetát ^!H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,41 (d, 2H), 7,26 (s, 1H), 6,73 (d, 2H), 6,51 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,36 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,70 (s, 3H),

2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 10,13 min.

MS: MH⁺ 421.

Príklad 336

3-{4-[(2-chlór-6-fluórbenzyl)amino]fenyl}-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-4-amín-diacetát ‘H NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ)δ 8,19 (s, 1H), 7,42 (m, 4H), 7,26 (t, 1H), 6,83 (d, 2H), 6,27 (t, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,37 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,32 min.

MS: MH⁺ 452.

Príklad 337

3-(4-[2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzyl]aminofenyl)-l-(4-piperidyl)-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín-diacetát ’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,61 (m, 3H), 7,38 (d, 2H), 6,73 (d, 2H), 6,68 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,47 (d, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak°C 18, 5 pm, 300 Ä, 15, cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 mi/min) Rt 12,83 min.

MS: MH⁺ 486.

326

Príklad 338

3- {4-[(benzo[ó]furán-2-ylmetyl)amino]-3-metoxyfenyl} -1 -(4-piperidyl)-lHpyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amín-diacetát

Zmes ŕerc-butyl-4-[4-amino-3-(4-amino-3-metoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu (g, mol), benzofurán-2karbaldehydu (0,046 g, 0,000315 mol); triacetoxyborohydridu sodného (0,089 g, 0,00042 mol,) a octovej kyseliny (0,024 ml, 0,00042 mol) sa mieša v bezvodom 1,2-dichlóretáne počas 16 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku, trituruje v etylacetáte (4 ml) a nechá sa reagovať so 4N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej (1 ml). Výsledná zmes sa mieša počas 1 hodiny, vodná fáza sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa separujú. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa 3-{4-[(benzo[ú]furán-2-ylmetyl)amino]-3metoxyfenyl}-l -(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-4-amín-diacetát (0,027 g, 0,0000457 mol).

*H NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ)δ 8,19 (s, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,22 (m, 2H), 7,06 (m, 2H), 6,80 (d, 1H), 6,75 (s, 1H), 5,80 (t, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,57 (d, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 6H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 0 8, 5 pm, 300 Ä, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 14,83 min.

MS: MH⁺ 470.

Príklad 33 9

3-[4-(2,3-dihydrobenzo[Ŕ]furán-3-ylamino)fenyl]-l-(4-piperidyl)-lHpyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín-acetát

Salicylaldehyd (0,063 g, 0,000513 mol) a íerc-butyl-4-[4-amino-3-(4aminofeny 1) -1 H-pyrazolo [3,4-t/]py rimidí n-1 -yl]-l -piperidínkarboxylát (0,200

327 g, 0,000489 mol) sa spoja v absolútnom etanole (5 ml) a miešajú sa pri izbovej teplote počas 48 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa suší cez noc, čím sa získa ŕerc-butyl-4-[4-amino-3-(4-{[-l-(2hydroxyfenyl)metylidén]amino}fenyl)-l/í-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl]-lpiperidínkarboxylát, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie. Trimetylsulfoxónium-jodid (0,269 g, 0,00122 mol) sa rozpustí v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a naraz sa pridá 60% disperzia hydridu sodného v parafíne (0,049 g, 0,00122 mol). Po 10 minútach sa pridá roztok terc-butyl-4[4-amino-3-(4-{[-l-(2-hydroxyfenyl)metylidén]amino}fenyl)-l/í-pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-l-yl]-l-piperidínkarboxylátu v bezvodom dimetylsulfoxide (2 ml) a výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka počas 2,5 hodiny. Roztok sa naleje do ľadovej vody (70 ml) a extrahuje dichlórmetánom (2 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa sušia síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku, čím sa získa surový terc-butyl-4-{4-amino-3[4-(2,3-dihydrobenzo[ó]furán-3-ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidínl-yl}-l-piperidínkarboxylát, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie. Surová zlúčenina sa rozpustí v etylacetáte (5 ml) a nechá sa reagovať so 4N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej (1,5 ml). Výsledná emulzia sa intenzívne mieša počas 1 hodiny, vodná vrstva sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa separujú. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa 3-[4-(2,3-dihydrobenzo[ó]furán-3-ylamino)fenyl]-l(4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4-<T]pyrimidín-4-amín-acetát (0,038 g, 0,000078 mol) vo forme bielej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,19 (s, 1H), 7,41 (m, 3H), 7,25 (t, 1H), 6,89 (m, 4H), 6,51 (t, 1H), 5,35 (m, 1H), 4,79 (m, 2H), 4,27 (m, 1H), 3,07 (m, 2H),

2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,79 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 11,38 min.

MS: MH⁺ 428.

328

Príklad 340

7’r <3H,y-3-(4-{4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lA-pyrazolo [3,4í/]pyrimidin-3-yl}anilino)-l A-lX⁶-benzo[ď]izotiazol-l ,1-dión-acetát

A. 3-chlór-l A-lX⁶-benzo[ď]izotiazol-l ,1 -dión

Sacharín (10,0 g, 0,0546 mol) a chlorid fosforečný (12,6 g, 0,060 mol) sa zahrievajú pri teplote 170°C počas 1,5 hodiny. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a suspenduje v dietyléteri (200 ml). Precipitát sa spojí filtráciou, poriadne premyje dietyléterom, suší, čím sa získa 3-chlór-lH-\λ⁶benzo[ď]izotiazol-l,l-dión (3,7 g, 0,0184 mol) vo forme bielej pevnej látky, ktorá sa použije bez ďalšej purifikácie.

MS: MH⁺ 202.

B. 3-(4-brómanilino)-l A-l Z⁶-benzo[ď]izotiazol-l ,1 -dión

Do roztoku 3-chlór-lA-lX⁶-benzo[ď]izotiazol-l,1-diónu (1,0 g, 0,00496 mol) v acetóne (20 ml) sa naraz pridá 4-brómanilín (1,71 g, 0,00992 mol) a zmes sa mieša počas 15 min. Zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa suspenduje vo vode (100 ml). Precipitát sa spojí filtráciou, poriadne premyje vodou a suší, čím sa získa 3-(4-brómanilino)-lA-lA⁶-benzo[ď]izotiazol-l,ldión (1,57 g, 0,00467 mol) vo forme bielej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,93 (s, IH), 8,47 (d, IH), 8,09 (d, IH), 7,93 (m, 4H), 7,69 (d, 2H);

C. 3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilino]-l A-l λ⁶benzo[ď]izotiazol-l ,1 -dión

Zmes 3-(4-brómanilino)-lA-lX⁶-benzo[ď]izotiazol-l,l-diónu (1,57 g, 0,00467 mol), diboronpinakolesteru (1,43 g, 0,00561 mol), [l,ľbis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého (v komplexe s dichlórmetánom (1:1) (0,114 g, 0,00014 mol) a octanu draselného (1,37 g, 0,014 mol) v N,Ndimetylformamide (35 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a

329 výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu. Filtrát sa koncentruje za vzniku žltého oleja, ktorý sa trituruje v dietyléteri, čím sa získa 3 - [4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-y l)anilino]-\H- lX⁶-benzo [J] izotiazol-1,1-dión (1,14 g, 0,00297 mol) vo forme bielej pevnej látky.

’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,92 (br, IH), 8,51 (d, IH), 8,08 (d, IH), 7,91 (m, 4H), 7,68 (d, 2H), 1,29 (s, 12H).

D. 7raM5-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}anilino)-l/7-lÄ⁶-benzo[í/]izotiazol-l ,1-diónacetát

Zmes 3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl) anilino] -1/7-1 λ⁶benzo[</]izotiazol-l,l-diónu (0,09 g, 0,000234 mol), /ra«5-3-jód-l-[4-(4metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (0,08 g, 0,00018 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,013 g, 0,000011 mol) a uhličitanu sodného (0,048 g, 0,00045 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa Zra«5-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-17/-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl} anilino)-1/7-1 λ⁶benzo[</]izotiazol-l,l-dión-acetát (0,075 g, 0,000119 mol) vo forme bielej pevnej látky ’H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,29 (d, IH), 8,23 (s, IH), 7,91 (m, 3H), 7,79 (m, 2H), 7,66 (d, 2H), 4,65 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) R_t 11,27 min.MS: MH⁺ 572.

Príklad 341

Cz's-3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4t/]pyrimidín-3-yl} anilino)-177-1 X⁶-b enzo [í/] izotiazol-1,1-dión-di acetát

330

Cis-3-(4-{4-amino- l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}anilino)-l//-lX⁶-benzo[J]izotiazol-l, 1-dión-diacetát sa pripraví z 3 - [4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-y l)anilino]-l//-l λ⁶benzo[J]izotiazol-l,l-diónu (0,09 g, 0,000234 mol) a cz's-3-jód-l-[4-(4metylpiperazino)-cyklohexyl]-l V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4-amínu podľa podobného spôsobu ako je uvedený vyššie.

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 08,42 (d, IH), 8,23 (s, IH), 7,91 (m, 3H), 7,84 (m, 2H), 7,62 (d, 2H), 4,80 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,07 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,65 (m, 2H), 1,58 (m, 2H);

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,1 M octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 11,59 min MS: MH⁺ 572.

Príklad 342

7’ran5-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[č/]izoxazol-3-amín-acetát

A. Ni -(4-brómfenyl)-2-fluórbenzamid

Roztok 2-fluórbenzoylchloridu (5,82 g, 0,0367 mol) a 4-brómanilínu (6,31 g, 0,0367 mol) v bezvodom dichlórmetáne (150 ml) sa ochladí na teplotu 0°C a pod atmosférou dusíka sa po kvapkách pridá N,V-diizopropyletylamín (5,21 g, 0,0407 mol). Výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 24 hodín, koncentruje a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom dietyléteri (50 ml) a precipitát sa spojí filtráciou, suší, čím sa získa VI-(4-brómfenyl)-2-fluórbenzamid (9,6 g, 0,0326 mol) vo forme bielej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,54 (s, IH), 7,66 (m, 3H), 7,56 (m, 3H), 7,34 (m, 2H).

TLC (etylacetát/heptán 1:2) Rf 0,37

331

B. 7Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbotioamid

Zmes N\-(4-brómfenyl)-2-fluórbenzamidu (3,3 g, 0,0112 mol) a 2,4-bis(4-metoxyfenyl)-l ,3-ditia-2,4-difosfetán-2,4-disulfidu (2,27 g, 0,00561 mol) sa zahrieva v toluéne pri refluxe pod atmosférou dusíka počas 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/n-heptánu (1: 6) ako mobilnej fázy, čím sa získa 7Vl-(4-brómfenyl)2-fluór-l-benzénkarbotioamid (3,1 g, 0,010 mol) vo forme žltej pevnej látky.

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 12,13 (s, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,62 (m, 3H), 7,51 (m, 1H), 7,31 (m, 2H),

TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,27.

C. Nl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénamidoxím

Zmes ΛΠ-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbotioamidu (1,56 g, 0,00505 mol), hydroxylamín-hydrochloridu (0,44 g, 0,00631 mol) a hydrogénuhličitanu sodného (0,53 g, 0,00631 mol) sa zahrieva v absolútnom etanole (25 ml) pri refluxe pod atmosférou dusíka počas 14 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom dietyléteri a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-lbenzénamidoxím (1,21 g, 0,00392 mol) vo forme belavej pevnej látky.

TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,12.

D. 7V-benzo[</]izoxazol-3-yl-/V-(4-brómfenyl)amín

Do roztoku 7Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénamidoxímu (1,51 g, 0,00489 mol) v N-metylpyrolidinóne (25 ml) sa pridá ŕerc-butoxid draselný (0,54 g, 0,00513 mol) a výsledný roztok sa zahrieva pri teplote 100°C pod atmosférou dusíka počas 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organické fázy sa premyjú soľankou, sušia síranom horečnatým a koncentrujú.

332

Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/n-heptánu (1: 5) ako mobilnej fázy, čím sa získa Nbenzo[<7]izoxazol-3-yl-jV-(4-brómfenyl)amín (0,95 g, 0,00329 mol) vo forme bielej pevnej látky.

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,72 (s, 1H), 8,13 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,61 (m, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,37 (dd, 1H).

TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,26.

E. V-benzo[í/]izoxazol-3-y 1-7V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amín

Zmes 7V-benzo[J]izoxazol-3-yl-jV-(4-brómfenyl)amínu (1,30 g, 0,0045 mol), diboronpinakolesteru (1,37 g, 0,0054 mol), [1,1’-bis-(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,110 g, 0,000135 mol) a octanu draselného (1,32 g, 0,0135 mol) v N,Ndimetylformamide (35 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledné pevné látky sa odstránia filtráciou cez vrstvu Celitu. Filtrát sa koncentruje za vzniku žltého oleja, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/«-heptánu (1: 5) ako mobilnej fázy, čím sa získa JV-benzo[í/]izoxazol-3-yl-7V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,40 g, 0,00119 mol) vo forme bielej pevnej látky. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,74 (s, 1H), 8,16 (d, 1H), 7,70 (m, 4H), 7,61 (d, 2H), 7,37 (dd, 1H), 1,29 (s, 12H).

TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,21.

F. Trans-N3-(4-{ 4-amino-1 -[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l 77pyrazolo [3,4-<7]pyrimidí n-3-y 1} fény l)benzo[d]izoxazol-3-amín-acetát

Zmes 7V-benzo[<7]izoxazol-3-y 1-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,10 g, 0,000298 mol), franj-3-jód-l-[4-(4metylpiperazino)-cyklohexyl]-177-pyrazolo[3,4-č7]pyrimidín-4-amínu (0,101 g, 0,000229 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,016 g, 0,0000137 mol) a uhličitanu sodného (0,061 g, 0,000573 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru

333 etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil 08, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa /ranj-N3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-1//-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-yl} fény l)benzo [í/] izoxazol-3 amín-acetát (0,102 g, 0,000175 mol) vo forme bielej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,81 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,19 (d, 1H), 7,88 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,40 (m, 1H), 4,65 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,66 min.

MS: MH⁺ 524.

Príklad 343

Czs-N3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)benzo[</]izoxazol-3-amín-diacetát

Cis-N3-(4-(4-amino-l-[4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -1 //-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-y l}fenyl)benzo[ŕ/]izoxazol-3-amín-diacetát sa pripraví z N-benzo[í/]izoxazol-3-yl-N-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyljamínu a cz5'-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4d]pyrimidín-4-amínu podľa podobného spôsobu ako je vyššie uvedený spôsob. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,86 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,24 (d, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,67 (m, 4H), 7,43 (m, 1H), 4,83 (m, 1H), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,08 (m, 4H), 1,91 (s, 6H), 1,74 (m, 2H), 1,62 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril - O,1M octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 13,77 min.

MS: MH⁺ 524.

334

Príklad 344

A3-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3yl]fenyl}benzo[í/]izoxazol-3-amín-acetát

Zmes V-benzo [d] izoxazol-3-yl-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínu (0,087 g, 0,000258 mol), ferc-butyl-4-(4-amino3-jód-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l -yl)-l-piperidínkarboxylátu (0,088 g, 0,000198 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,014 g, 0,000012 mol) a uhličitanu sodného (0,053 g, 0,000495 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Organická fáza sa suší síranom horečnatým a koncentruje za zníženého tlaku, čím sa získa surový Zerc-butyl-4-{4-amino-3-[4(benzo[£/]izoxazol-3-ylamino)fenyl]-lH-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-l-yl}-lpiperidínkarboxylát, ktorý sa použije bez ďalšej purifikácie, rozpustí sa v etylacetáte (5 ml) a nechá sa reagovať so 4N vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej (1 ml). Výsledná emulzia sa intenzívne mieša počas 1 hodiny, vodná vrstva sa neutralizuje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného vo vode a vrstvy sa separujú. Organická fáza sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-60% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa N3{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3yl]fenyl}benzo[í/]izoxazol-3-amín-acetát (0,009 g, 0,0000185 mol) vo forme bielej pevnej látky.

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,82 (s, IH), 8,20 (m, 2H), 7,89 (d, 2H), 7,65 (m, 4H), 7,41 (t, IH), 4,74 (m, IH), 3,07 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,79 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rf 11,20 min.

MS: MH⁺ 427.

335

Príklad 345

Trans-3- [4-(1//-3-indazolylamino)fenyl]-l- [4-(4-metylpiperazino)cyklohexy 1]l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín-acetát

A. Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbohydrazónamid

Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbotioamid (1,50 g, 0,00485 mol) a IM roztok hydrazínu v tetrahydrofuráne (6,3 ml, 0,0063 mol) sa zahrieva v absolútnom etanole (25 ml) pri refluxe pod atmosférou dusíka počas 14 hodín. Pridajú sa ďalšie 3 ml IM roztok hydrazínu v tetrahydrofuráne a v refluxe sa pokračuje ďalších 6 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje, čím sa získa Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbohydrazónamid (1,54 g, 0,0050 mol) vo forme hnedej pevnej látky.

TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf 0,10.

B. A-(4-brómfenyl)-A-(l//-3-indazolyl)amín

Do roztoku Al-(4-brómfenyl)-2-fluór-l-benzénkarbohydrazónamidu (1,2 g, 0,00391 mol) v N-metyl-pyrolidinóne (25 ml) sa pridá ŕerc-butoxid draselný (0,50 g, 0,0041 mol) a výsledný roztok sa zahrieva pri teplote 100°C pod atmosférou dusíka počas 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/«-heptánu (1: 5) ako mobilnej fázy, čím sa získa A-(4-brómfenyl)-A(l//-3-indazolyl)amín (0,29 g, 0,0010 mol) vo forme bielej pevnej látky.

’H NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ) δ 12,06 (s, IH), 9,03 (s, IH), 7,93 (d, IH), 7,65 (d, 2H), 7,35 (m, 4H), 7,03 (dd, IH).

TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf 0,26.

336

C. V-(/H-3-indazolyl)-V-[4-(4,4,5,5-tetramety 1-1 ,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amín

Zmes V-(4-brómfenyl)-jV-(lH-3-indazolyl)amínu (0,29 g, 0,00101 mol), diboronpinakolesteru (0,31 g, 0,00121 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]dichlórpaládnatého komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,025 g, 0,00003 mol)) a octanu draselného (0,294 g, 0,003 mol) v N,N-dimetylformamide (35 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez a vrstvu Celitu. Filtrát sa koncentruje za vzniku žltého oleja, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/«-heptánu (1: 3) ako mobilnej fázy, čím sa získa 7V-(l/ŕ-3-indazolyl)V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amín (0,064 g,

0,000191 mol) vo forme belavej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 12,09 (s, 1H), 9,06 (s, 1H), 7,94 (d, 1H), 7,64 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,35 (m, 2H), 7,03 (dd, 1H), 1,28 (s, 12H).

TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf 0,21.

D. Trfl«í-3-[4-(l//-3-indazolylamino)fenyl]-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín-acetát

Zmes V-( 1H-3-indazolyl)-N-[4-(4,4,5,5-tetramety 1-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]amínu (0,064 g, 0,000191 mol), Zra«5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,070 g, 0,000159 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,011 g, 0,0000095 mol) a uhličitanu sodného (0,042 g, 0,000398 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 1060% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 25 min, 21 ml/min), čím sa získa Zra«s-3-[4-(l//-3-indazolylamino)fenyl]-l - [4-(4-mety lpiperazino)cy klohexyl]-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-4-amín-acetát (0,035 g, 0,000060 mol) vo forme bielej pevnej látky.

337 ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 12,09 (s, IH), 9,14 (s, IH), 8,21 (s, IH), 7,99 (d, IH), 7,83 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,06 (t, IH), 4,64 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,49 (m, 2H); RPHPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 12,96 min.

MS: MH⁺ 523.

Príklad 346

7¹ran5-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lV-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-6-(trifluórmetyl)benzo[d]izoxazol-3-amín-acetát

A. VI -(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamid

Roztok 2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzoylchloridu (5,05 g, 0,0223 mol) a

4-brómanilínu (3,83 g, 0,0223 mol) v bezvodom dichlórmetáne (150 ml) sa ochladí na teplotu 0°C a pod atmosférou dusíka sa po kvapkách pridá N,Ndiizopropyletylamín (4,26 ml, 0,0245 mol). Výsledná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 24 hodín, koncentruje a zvyšok sa vytrepe medzi etylacetát (120 ml) a vodu (100 ml). Organické fázy sa premyjú soľankou, sušia síranom horečnatým a koncentrujú. Zvyšok sa suspenduje v studenom n-heptáne (50 ml) a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa Vl-(4-brómfenyl)-2-fluór-4(trifluórmetyl)benzamid (7,1 g, 0,0196 mol) vo forme bielej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,74 (s, IH), 7,90 (m, 2H), 7,74 (d, IH), 7,68 (d, 2H), 7,56 (d, 2H).

B. Vl-(4-brómfenyi)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l -benzénkarbotioamid

Zmes VI-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)benzamidu (7,1 g, 0,0196 mol) a 2,4-bis-(4-metoxyfenyl)-l,3-ditia-2,4-difosfetán-2,4-disulfidu (3,97 g, 0,0098 mol) sa zahrieva v toluéne pri refluxe pod atmosférou dusíka počas 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/n-heptánu (1: 8) ako mobilnej fázy, čím

338 sa získa NT -(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbotioamid (6,0 g, 0,0159 mol) vo forme žltej pevnej látky.

'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 12,33 (s, 1H), 7,94 (d, 2H), 7,81 (m, 2H), 7,65 (m, 3H).

TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,61

C. Nl -(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénamidoxím

Zmes NT-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-l-benzénkarbotioamidu (2,50 g, 0,00663 mol), hydroxylamín-hydrochloridu (0,65 g, 0,00928 mol) a hydrogénuhličitanu sodného (0,78 g, 0,00928 mol) sa zahrieva v absolútnom etanole (25 ml) pri refluxe pod atmosférou dusíka počas 14 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa N1 -(4-brómfenyl)-2-fluór-4(trifluórmetyl)-l-benzénamidoxím (2,35 g, 0,00625 mol) vo forme belavej pevnej látky.

TLC (etylacetát/heptán 1:4) Rf 0,12.

D. N-(4-brómfenyl)-N-[6-(trifluórmetyl)benzo[ŕ/]izoxazol-3-yl]amín

Do roztoku Nl-(4-brómfenyl)-2-fluór-4-(trifluórmetyl)-lbenzénamidoxímu (2,25 g, 0,00598 mol) v N-metylpyrolidinóne (30 ml) sa pridá íerc-butoxid draselný (0,71 g, 0,00628 mol) a výsledný roztok sa zahrieva pri teplote 100°C pod atmosférou dusíka počas 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného vo vode (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická fáza sa premyje soľankou, suší síranom horečnatým a koncentruje. Zvyšok sa suspenduje v studenom n-heptáne a precipitát sa spojí filtráciou a suší, čím sa získa N-(4-brómfenyl)-N-[6(trifluórmetyl)benzo[<7]izoxazol-3-yl]amín (1,75 g, 0,0049 mol) vo forme belavej pevnej látky.

339 ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,95 (s, 1H), 8,37 (d, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,78 (d, 1H), 7,68 (d, 2H), 7,58 (d, 2H).

TLC (etylacetát/heptán 1:5) Rf 0,31.

E. A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-A-[6(trifluórmetyl)benzo[í/]izoxazol-3-yl]amín

Zmes A-(4-brómfenyl)-A-[6-(trifluórmetyl)benzo[í/]izoxazol-3-yl]amínu (1,75 g, 0,0049 mol), diborónpinakolesteru (1,49 g, 0,0059 mol), [l,ľ-bis(difenylfosfino)ferocén]-dichlórpaládnatého komplexu s dichlórmetánom (1:1) (0,120 g, 0,000147 mol) a octanu draselného (1,44 g, 0,0144 mol) v N,Ndimetylformamide (10 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Dichlórmetán (70 ml) sa pridá ku zvyšku a výsledný pevný podiel sa odstráni filtráciou cez vrstvu Celitu. Filtrát sa koncentruje za vzniku žltého oleja, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/n-heptánu (1: 6) ako mobilnej fázy, čím sa získa A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-A-[6(trifluórmetyl)benzo[J]izoxazol-3-yl]amín (0,065 g, 0,000161 mol) vo forme bielej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,97 (s, 1H), 8,39 (d, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,77 (d, 1H), 7,71 (s, 4H), 1,29 (s, 12H).

F. Tranj-A3-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lApyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-6 (trifluórmetyl)benzo [J] izoxazol-3amín-acetát

Zmes A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-A-[6(trifluór-metyl)benzo[ŕ/]izoxazol-3-yl]amínu (0,062 g, 0,000153 mol), trans-3jód-l-[4-(4-metylpiperazino)-cyklohexyl]-l A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4amínu (0,065 g, 0,000146 mol), tetrakis-(trifenylfosfín)paládia (0,010 g, 0,0000087 mol) a uhličitanu sodného (0,039 g, 0,000365 mol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou

340

HPLC (Hypersil C18, 8 pm, 25 cm; 10-70% acetonitril 0,1 M octan amónny v priebehu 30 min, 21 ml/min), čím sa získa írans-V3-(4-{4-amino-l-[4-(4metylpiperazino)cyklohexy 1]-1//-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-3-y 1} fenyl)-6(trifluórmetyl)benzo[</]izoxazol-3-amín-acetát (0,026 g, 0,0000398 mol) vo forme bielej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,05 (s, IH), 8, 44 (d, IH), 8, 23 (s, IH), 8, 16 (s, IH), 7,88 (d, 2H), 7,79 (d, IH), 7,69 (d, 2H), 4,67 (m, IH), 2,6-2,2 (br, 9H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (m, 6H), 1,91 (s, 3H), 1,46 (m, 2H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 16,18 min.

MS: MH⁺ 592.

Príklad 347 dimaleátová soľ 7V2-[4-(4-amino-l -{1 -[(2-metyl-l//-4-imidazolyl)metyl]-4piperidyl}-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-1//-2indolkarboxamidu

A. jV2-{4-[4-amino-l -(4-piperidy 1)-1//-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimi dín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l -metyl-l//-2-indolkarboxamid

3-Jód-l -(4-piperidy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-4-amín-hydrochlorid (6,75 g, 17,73 mmol), JV2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan2-yl)fenyl]-l-metyl-l/Z-2-indolkarboxamid (7,571 g, 18,63 mmol), tetrakistrifenylfosfínpaládium (1,23 g, 1,06 mmol) a uhličitan sodný (8,27 g, 78,03 mmol) sa zmiešajú s dimetyléterom etylénglykolu (180 ml) a vodou (90 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri refluxe cez noc. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vodná suspenzia sa extrahuje s veľkým množstvom dichlórmetánu. Spojená organické vrstva sa premyje vodou, potom soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a odparuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím dichlórmetánu/metanolu/hydroxidu amónneho (90:10:0,5 až 60:40:0,5) ako mobilnej fázy, čím sa získa 7V2-{4-[4amino-1 - (4-piperidy l)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl} -1metyl-l//-2-indolkarboxamid (4,38 g). Vodná suspenzia sa filtruje, premyje

341 vodou a suší, čím sa získa V2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//'-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-1/7-2-indolkarboxamid (2,77 g).

Spojený pevný podiel (7,15 g, 81%). 'h NMR (DMSO-dó) 1,85 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,64 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,77 (m, 1H), 7,13 (m, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J=8,45 Hz, 1H), 7,71 (d, J=7,94 Hz, 1H), 8,12 (d, J=8,l 5 Hz, 1H), 8,25 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =1,97 min. MH⁺ = 497,3.

B. 7V2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-metyl-l//-4-imidazolyl)metyl]-4-piperidyl}-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-l/f-2-indolkarboxamid //2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ó/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), 2-metyll//-4-imidazolkarbaldehyd (83 mg, 0,755 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (159 mg, 0,755 mmol) a ľadová kyselina octová (30 mg, 0,554 mmol) sa zmiešajú v 1,2-dichlóretáne (6 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Na upravenie pH na asi 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje s dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSO4, filtruje a odparuje. Zvyšok sa čistí zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (95: 5: 0,5 až 80: 20: 05) ako mobilnej fázy, čím sa získa V2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-metyl-l//-4imidazolyl)metyl]-4-piperidyl}-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl)-2metoxyfenyl]-l-metyl-l/7-2-indolkarboxamid (215 mg, 72%). *H NMR (DMSOdó) δ 1,91 (m, 2H), 2,23 (m, 7H), 3,00 (m, 2H), 3,41 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,78 (m, 1H), 6,72 (s, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,32 (m, 4H), 7,78 (d, J=8,43 Hz, 1H), 7,70 (d, J=7,92 Hz, 1H), 8,11 (d, J=7,92 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =2, 00 min, MH⁺ = 591,3.

342

C. dimaleátová soľ A2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-metyl-l//-4-imidazolyl)metyl]4-piperidyl} -1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-y l)-2-metoxyfenyl]-l-mety 1-1//-2indolkarboxamidu

A2-[4-(4-amino-l - {l-[(2-metyl-l//-4-imidazolyl)metyl]-4-piperidyl}-l//pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxy fény l]-l-mety 1-1//-2-indolkarboxamid (210 mg, 0,355 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (25 ml) a pár kvapkách etanolu. Pridá sa kyselina maleínová (83 mg, 0,711 mmol) v horúcom etylacetáte (3 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 3 hodín. Pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa dimaleátová soľ A2-[4-(4-aminol-{ 1-[(2-metyl-l//-4-imidazoly ljmetyl]-4-piperidyl}-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu (255 mg, 87%).

‘H NMR (DMSO-dó) δ 2,12 (m, 2H), 2,43 (m, 5H), 2,92 (m, 2H), 3,38 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,99 (s, 2H), 4,04 (s, 3H), 4,93 (m, IH), 6,13 (s, 4H), 7,16 (m, IH), 7,34 (m, 5H), 7,60 (d, J=8,43 Hz, IH), 7,70 (d, J=7,92 Hz, IH), 7,72 (d, J=8,15 Hz, IH), 8,27 (s, IH), 9,44 (s, IH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Stĺpec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.):

Rt =1,98 min, MH⁺ = 591,3.

Príklad 348 dimaleátová soľ A2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-l//pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fenyl)-1 -mety 1-1//-2indolkarboxamidu

A. diacetátová soľ A2-(4-[4-amino-l-[l-(l//-4-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]1//-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény 1)-1 -mety 1-1//-2indolkarboxamidu

N2-{ 4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), 1//-4imidazolkarbaldehyd (73 mg, 0,755 mmol), triacetoxyborohydrid sodný (159

343 mg, 0,755 mmol) a ľadová kyselina octová (30 mg, 0,554 mmol) sa zmiešajú v 1,2-dichlóretáne (6 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Na upravenie pH na asi 8 sa pridá nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného. Vrstvy sa separujú a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom. Spojená organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad MgSCH, filtruje a odparuje. Zvyšok sa najprv purifíkuje zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou s použitím zmesi dichlórmetán/metanol/hydroxid amónny (95: 5: 0,5 až 80: 20: 05) ako mobilnej fázy, potom sa purifíkuje znovu preparatívnou HPLC s reverznou fázou s použitím zmesi acetonitril/voda (50mM pufer octanu amónneho) ako mobilnej fázy, čím sa získa diacetátová soľ V2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu (170 mg, 49%). ’h NMR (DMSO-dó) δ 1,90 (m, 8H), 2,20 (m, 4H), 2,99 (m, 2H), 3,47 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,67 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,31 (m, 5H), 7,54 (s, 1H), 7,58 (d, J=8,43 Hz, 1H), 7,70 (d, J=7,95 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,14 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =1, 97 min, MH⁺ = 577,3.

B. dimaleátová soľ 7V2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4-imidazolylmetyl)-4piperidy l]-l//-pyrazolo [3,4-c/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fény 1)-1-mety 1-1J/-2indolkarboxamidu

Diacetátová soľ //2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4-imidazolylmetyl)-4piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1-metyl-1//-2indolkarboxamidu (170 mg, 0,244 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (25 ml) a pár kvapkách etanolu. Pridá sa kyselina maleínová (103 mg, 0,884 mmol) v horúcom etylacetáte (3 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 3 hodín. Pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa dimaleátová soľ //2-(4{4-amino-l-[l-(l//-4-imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l -metyl-l//-2-indolkarboxamidu (153 mg, 76%). *H NMR (DMSO-dó) δ 2,19 (m, 2H), 2,49 (m, 2H), 3,19 (m, 2H), 3,52 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,21 (s, 2H), 5,02 (m, 1H), 6,15 (s, 4H),

344

7,16 (m, 1H), 7,32 (m, 5H), 7,40 (s, 1H), 7,59 (d, J=8,45 Hz, 1H), 7,71 (d, J=7,95 Hz, 1H), 7,98 (bs, 1H), 8,13 (d, J=8,16 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =1,98 min, MH⁺= 577,3.

Príklad 349 dimaleátová soľ 772-(4-{4-amino-1 - [1 -(2-fluóretyl)-4-piperidyl]-l 77pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fenyl)-1 -mety 1-177-2indolkarboxamidu

A. 772-(4-{4-amino-l-[l-(2-fluóretyl)-4-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény 1)-1 -mety 1-177-2-indolkarboxamid

772-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l-metyl-177-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), l-bróm-2fluóretán (47 pl, 0,629 mmol), uhličitan draselný (87 mg, 0,629 mmol) a jodid sodný (10 mg, 0,066 mmol) sa zmiešajú v DMF (3 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote 80°C cez noc. Surová reakčná zmes sa čistí preparativnou HPLC s reverznou fázou s použitím zmesi acetonitril/voda (50mM pufer octanu amónneho) ako mobilnej fázy, čím sa získa 772-(4-{4-amino-l-[l-(2-fluóretyl)4-piperidy 1] -177-pyrazolo [3,4-d] pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény 1)-1 -mety 1-177-2indolkarboxamid (221 mg, 81%). *H NMR (DMSO-dó) δ 1,91 (m, 2H), 2,26 (m, 4H), 2,66 (m, 1H), 2,73 (m, 1H), 3,05 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,61 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J=8,46 Hz, 1H), 7,70 (d, J=7,95 Hz, 1H), 8,11 (d, J=8,14 Hz, 1H), 8,25 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLCStípec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =2,17 min, MH⁺ = 543,3.

345

B. dimaleátová soľ A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-fluóretyl)-4-piperidyl]-l/ŕpyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fenyl)-1 -mety 1-1H-2indolkarboxamidu

A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-fluóretyl)-4-piperidyl]-l/7-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény 1)-1-metyl-1//-2-indolkarboxamid (221 mg,

0,407 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (25 ml) a pár kvapkách etanolu. Pridá sa kyselina maleínová (94 mg, 0,814 mmol) v horúcom etylacetáte (3 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc, čím sa vytvorí precipitát. Organické rozpúšťadlo sa odstráni a pevný podiel sa trituruje etylacetátom. Pevný podiel sa spojí filtráciou, čím sa získa dimaleátová soľ A2-(4-{4-amino1 - [l-(2-fluóretyl)-4-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyl)-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu (252 mg, 80%). 'h NMR (DMSO-dó) δ 2,34 (m, 2H), 2,54 (m, 2H), 3,49-3,67 (m, 6H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,81 (m, IH), 4,92 (m, IH), 5,06 (m, IH), 6,14 (s, 4H), 7,16 (m, IH), 7,34 (m, 4H), 7,60 (d, J=8,32 Hz, IH), 7,70 (d, J=7,95 Hz, IH), 8,14 (d, J=8,l5 Hz, IH), 8,29 (s, IH), 9,45 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =2,17 min, MH⁺ = 543,3.

Príklad 350 dimaleátová soľ A2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluóretyl)-4-piperidyl]-l//pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fenyl)-1 -metyl-1/7-2indolkarboxamidu

A. A2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluóretyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4ú?]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény 1)-1 -metyl -1 //-2-indolkarboxamid

A2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl}-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), 2-bróm1,1-difluóretán (91 mg, 0,629 mmol), uhličitan draselný (87 mg, 0,629 mmol) a jodid sodný (10 mg, 0,066 mmol) sa zmiešajú v DMF (3 ml). Reakčná zmes sa

346 zahrieva pri teplote 80°C cez noc (podľa HPLC došlo len k 50% konverzii, preto sa teplota kúpeľa znížila na 55°C a pridal sa ďalší 2-bróm-l,1-difluóretán (0,1 ml), po miešaní cez noc pri teplote 55°C sa pridá ďalší 2-bróm-l,1difluóretán (0,1 ml) a reakčná zmes sa mieša pri teplote 55°C cez noc, podľa HPLC väčšina východiskovej látky skonvertovala na produkt). Surová reakčná zmes sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou s použitím zmesi acetonitril/voda (50 mM pufer octanu amónneho) ako mobilnej fázy, čím sa získa V2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluóretyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l -mety 1-1 Η-2-indolkarboxamid (227 mg, 81%). *H NMR (DMSO-dó) δ 1,89 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,42 (m, 2H), 2,80 (m, IH), 3,05 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,69 (m, IH), 6,17 (t t, J=55,81 Hz, J=4,35 Hz, IH), 7,15 (m, IH), 7,33 (m, 4H), 7,78 (d, J=7,94 Hz, IH), 7,70 (d, J=7,94 Hz, IH), 8,11 (d, J=8,19 Hz, IH), 8,25 (s, IH), 9,44 (s, IH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =3,32 min, MH⁺ = 561,3.

B. dimaleátová soľ V2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluóretyl)-4-piperidyl]-l//pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-mety 1-1/7-2indolkarboxamidu

V2-(4-{4-amino-l-[l-(2,2-difluóretyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l -mety 1-1 //-2-indolkarboxamid (227 mg, 0,405 mmol) sa rozpustí v horúcom etylacetáte (25 ml). Pridá sa kyselina maleínová (94 mg, 0,810 mmol) v horúcom etylacetáte (3 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Precipitát nevznikne. Po miešaní pri izbovej teplote počas 4 dní vznikne na dne banky precipitát. Rozpúšťadlo sa dekantuje. Pevné látky sa premyjú etylacetátom a sušia, čím sa získa dimaleátová soľ N2(4-{4-amino-1 - [1 -(2,2-difluóretyl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo [3,4-d] pyrimidín3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu (220 mg, 68%).

’H NMR (DMSO-dó) δ 2,05 (m, 2H), 2,40 (m, 2H), 2,84-3,32 (bm, 6H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,85 (m, IH), 6,22 (s, 4H), 6,34-(t, J=56,07 Hz, IH), 7,15 (m, IH), 7,33 (m, 4H), 7,59 (d, J=8,45 Hz, IH), 7,70 (d, J=7,94 Hz, IH), 8,12

347 (d, J=8,19 Hz, IH), 8,28 (s, IH), 9,45 (s, IH), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): R_t =3, 32 min, MH⁺ = 561,3.

Príklad 351

A2-{4-[4-amino-l-(l-etyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l-metyl-ΙΑ-2-indolkarboxamid

A2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l A-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l-metyl-lA-2-indolkarboxamid (250 mg, 0,503 mmol), acetaldehyd (44 mg, 1,007 mmol) a triacetoxyborohydrid sodný (212 mg, 1,007 mmol) sa zmiešajú v 1,2-dichlóretáne (6 ml). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC s reverznou fázou s použitím zmesi acetonitril/voda (50mM pufer octanu amónneho) ako mobilnej fázy, čím sa získa A2-{4-[4amino-l-(l-etyl-4-piperidyl)-lA-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l-metyl-lA-2-indolkarboxamid (247 mg, 93%). *H NMR (DMSO-de) δ 1,04 ((t, >7,15 Hz, 3H), 1,92 (m, 2H), 2,08 (m, 2H), 2,25 (m, 2H), 2,40 (q, J=7,1 5 Hz, 2H), 3,03 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,68 (m, IH), 7,13 (m, IH), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, >8,00Hz, IH), 7,70 (d, >7,95 Hz, IH), 8,11 (d, >8,15 Hz, IH), 8,25 (s, IH), 9,44 (s, IH). LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, 08, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4, 5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): R_t =2,08 min, MH⁺ = 525,3.

Zlúčeniny podľa príkladov 352-356 sa pripravia podľa spôsobov opísaných v príklade 351.

348

Príklad 352

Acetát N2-[4-(4-amino-l-{ 1 -[(3-metyl- 177-4-pyrazolyl)metyl]-4-piperidyl}-l77pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxy fenyl] -1 -mety 1-1H-2indolkarboxamidu

Výťažok: 187 mg, 63%.

‘H NMR (DMSO-dó) δ 1,91 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 2,19 (m, 5H), 2,96 (m, 2H), 3,35 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,67 (m, 1H), 7,17 (m, 1H), 7,31 (m, 5H), 7,58 (d, J=8,46 Hz, 1H), 7,70 (d, J=7,94 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,l5 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 gm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =2, 03 min, MH⁺ = 591,3.

Príklad 353

N2-(4-{ 4-amino-l-[l-(3-fúry lmety l)-4-piperidyl]-l 77-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín3-y l}-2-metoxy fény 1)-1 -mety 1-177-2-indolkarboxamid

Výťažok 233 mg, 80%.

^!H NMR (DMSO-dó) δ 1,91 (m, 2H), 2,13-2,23 (m, 4H), 3,00 (m, 2H), 3,39 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,68 (m, 1H), 6,47 (s, 1H), 7,31 (m, 4H), 7,60 (m, 3H), 7,70 (d, J=7,94 Hz, 1H), 8,11 (d, J=8,05 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 gm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =2, 37 min, MH⁺ = 577,3.

Príklad 354

N2-{4-[4-amino-l-(l-tetrahydro-277-4-pyranyl-4-piperidyl)-177-pyrazolo[3,4í7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl - 177-2-indolkarboxamid

349

Reakcia sa uskutočňuje pri teplote 70°C cez noc namiesto pri izbovej teplote cez noc podľa spôsobu opísaného v príklade 351.

Výťažok 176 mg, 71%.

*H NMR (DMSO-dó) δ 1,46 (m, 2H), 1,71 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 2,20 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 3,07 (m, 3H), 3,27 (m, 2H), 3,91 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,67 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,58 (d, J=8,44 Hz, 1H), 7,70 (d, J=7,94 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,04 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =2,08 min, MH⁺ = 581,3.

Príklad 355

V2-(4-{4-amino-l-[(l-acetylpiperidín-4-yl)-piperidín-4-yl]-177-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fény 1)-1-metyl-17Z-2-indolkarboxamid

Reakcia sa uskutočňuje pri teplote 70°C cez noc namiesto pri izbovej teplote cez noc podľa spôsobu opísaného v príklade 351.

Výťažok 223 mg, 71%.

'H NMR (DMSO-dó) δ 1,28 (m, 1H), 1,43 (m, 1H), 1,75 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,99 (s, 3H), 2,19 (m, 2H), 2,34 (m, 2H), 2,54 (m, 2H), 3,01 (m, 3H), 3,83 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,38 (m, 1H), 4,66 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,31 (m, 4H), 7,78 (d, J=7,94 Hz, 1H), 7,70 (d, J=7,94 Hz, 1H), 8,11 (d, J=8,15 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC Stĺpec: Genesis, C18, 3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =1,97 min, MH⁺ = 622,3.

350

Príklad 356

H2-(4-{4-amino-l-[l-(4-pyridylmetyl)-4-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény 1)-1 -mety 1-1 Η-2-indolkarboxamid

Výťažok 57 mg, 18%.

'H NMR (DMSO-dó) δ 1,91 (m, 2H), 2,28 (m, 4H), 3,95 (m, 2H), 3,59 (s, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 4,71 (m, 1H), 7,17 (m, 1H), 7,34 (m, 6H), 7,59 (d, J=8,03Hz, 1H), 7,71 (d, J=7,94 Hz, 1H), 8,11 (d, J=8,14 Hz, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,52 (d, J=5,78 Hz, 2H), 9,44 (s, 1H), LCMS (Thermoquest AQA single Quad MS, Finnigan HPLC-Stípec: Genesis, C18,3 pm, 33x4,6 mm, Eluenty: 30% B/A až 95% B/A v 4,5 min, (B: acetonitril, A: 50 mM pufer octanu amónneho, pH 4,5), 0,8 ml/min.): Rt =2,50 min, MH⁺ = 588,3.

Príklad 357

H2-(4-{ 4-amino-1-[3-(4-metylpiperazino)propyl]-l H-pyrazolo [3,4-č/]pyrimidín3-y 1}-2-metoxy fény 1)-1 -mety 1-1 H-2-indolkarboxamid

A. 1 -(3-brómpropyl)-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amin

Suspenzia 3-jód-lH-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (10,00 g, 38,31 mmol) v tetrahydrofuráne (150 ml) sa nechá reagovať s 3-bróm-l-propanolom (15,98 g, 114,93 mmol) a trifenylfosfínom (20,1 g, 76,62 mmol). Do reakčnej zmesi sa pomaly pridá dietylazodikarboxylát (13,34 g, 76,62 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 0°C počas 30 minút, po ktorých sa ľadový kúpeľ odstráni a mieša sa počas 30 minút pri izbovej teplote. Reakčná zmes sa čiastočne koncentruje a pridá sa etylacetát (200 ml). Precipitát sa filtruje a filtrát sa koncentruje do sucha. Surová zlúčenina sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím 100% etylacetátu ako mobilnej fázy, čím sa získa 7,8 g (53%) l-(3-brómpropyl)-3-jód-lH-pyrazolo[3,4ďjpyrimidín-4-amínu. ‘h NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 8,230 (s, 1H), 4,4194,385 (t, 2Η), 3,530-3,498 (t, 2H), 2,370-2,304-(q, 2H); LCMS (Thermoquest

351

AQA single-quad MS, Genesis 0 8 stĺpec, veľkosť častíc 3 pm, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 minút, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,05 min (100%), MH⁺ = 422,9.

B. 3-jód-l -[3-(4-mety lpiperazino)propyl]-l//-pyrazolo [3,4-t/]pyrimidín-4amín

Suspenzia 1 -(3-brómpropyl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,31 mmol) v dimetylformamide (10 ml) sa nechá reagovať s 1metylpiperazínom (0,157 g, 1,572 mmol) a trietylamínom (0,133 g, 1,31 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 70°C počas 66,25 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Pridá sa dichlórmetán (15 ml) a IN kyselina chlorovodíková (20 ml). Vrstvy sa rozdelia a vodná vrstva sa premyje dichlórmetánom (100 ml). Vodná vrstva sa neutralizuje na pH 13, a potom extrahuje dichlórmetánom (250 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a odparuje za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím prerušovaného gradientu; 20% metanol v dichlórmetáne až 50% metanol v dichlórmetáne v priebehu 55 minút na 35 g ISCO stĺpca, čím sa získa 0,238 g (45%) čistého 3-jód-l-[3-(4-metylpiperazino)propyl]-l/í-pyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-4-amínu.

'H NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 8,191 (s, 1H), 4,308-4,273 (t, 2H), 2,2622,228 (m, 10H), 1,944-1,877 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 0,75 min (100%), MH⁺ = 402,1.

C. A2-(4-{4-amino-l-[3-(4-metylpiperazino)propyl]-17/-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxy fenyl)-1 -metyl-l//-2-indolkarboxamid

Roztok 3-jód-l -[3-(4-metylpiperazino)propyl]-l//'-pyrazolo[3,4d]pyrimidín-4-amínu (0,188 g, 0,469 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (16 ml) sa nechá reagovať s A2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidom (0,209 g, 0,516 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,033 g, 0,028 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,119 g, 1,13 mmol) vo vode (8 ml). Reakčná zmes sa

352 mieša počas 4,5 hodiny pri teplote 80°C. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa etylacetát (200 ml). Vrstvy sa rozdelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (400 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a odparujú za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu pomocou prerušovaného gradientu 20% metanolu v dichlórmetáne až 50% metanolu v dichlórmetáne, čím sa získa 0,078 g (30%) čistého V2-(4-{4-amino-l-[3-(4metylpiperazino)propyl]-l V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidí n-3-y 1}-2-metoxy fenyl)-1metyl-1 V-2-indolkarboxamidu. ’h NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 9,442 (s, 1H), 8,258 (s, 1H), 8,122-8,1076 (d, 1H, J = 8,16 Hz), 7,719-7,6991 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,6005-7,5793 (d, 1H, J = 8,48 Hz), 7,349-7,294 (m, 4H), 7,172-7,135 (t, 1H), 4,405-4,371 (m, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,958 (s, 3H), 3,291 (m, 2H), 2,5 (m, 3H), 2,452,337 (m, 5H), 2,30-2,10 (m, 3H), 2,022-2,005 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,05 min (100%), MH⁺ = 554,3.

Príklad 358

V2-{4-[4-amino-l-(3-morfolinopropyl)-l V-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl} -1 -metyl-1//-2-indolkarboxamid

A. 3-jód-l-(3-morfolinopropyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín

Suspenzia l-(3-brómpropyl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,31 mmol) v dimetylformamide (10 ml) sa nechá reagovať s morfolínom (0,137 g, 1,572 mmol) a trietylamínom (0,133 g, 1,31 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 70°C počas 66,25 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Pridá sa dichlórmetán (15 ml) a IN kyselina chlorovodíková (20 ml). Vrstvy sa rozdelia a vodná vrstva sa premyje dichlórmetánom (100 ml). Vodná vrstva sa neutralizuje na pH 14, a potom extrahuje dichlórmetánom (250 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a odparuje za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím prerušovaného

353 gradientu 10% metanolu v dichlórmetáne až 50% metanolu v dichlórmetáne v priebehu 58 minút na 35 g ISCO stĺpca, čím sa získa 0,244 g (48%) čistého 3-j ó d-1-(3-morfolinopropyl)-1 V-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-4-amínu. *Η NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,194 (s, IH), 4,327-4,293 (t, 2H), 3,485-3,364 (m, 4H), 2,253-2,238 (m, 6H), 1,963-1,895 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 0,71 min (100%), MH⁺ = 389,0.

B. V2-{4-[4-amino-1-(3-morfolinopropyl)-l V-pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl-1 V-2-indolkarboxamid

Roztok 3-j ód-1-(3-morfolinopropyl)-1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4amínu (0,244 g, 0,629 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (16 ml) sa nechá reagovať s V2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]1-metyl-l V-2-indolkarboxamidom (0,281 g, 0,692 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,044 g, 0,038 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,160 g, 1,51 mmol) vo vode (8 ml). Reakčná zmes sa mieša počas 4,5 hodiny pri teplote 80°C. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa etylacetát (200 ml). Vrstvy sa rozdelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (400 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a odparujú za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu pomocou prerušovaného gradientu 10% metanolu v dichlórmetáne až 50% metanolu v dichlórmetáne ako mobilnou fázou, čím sa získa 0,191 g (56%) čistého V2-{4-[4-amino-l-(3morfolinopropyl)-l V-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l -metyl1 V-2-indolkarboxamidu. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,440 (s, IH), 8,260 (s, IH), 8,1229-8,1026 (d, IH, J = 8,12 Hz), 7,7184-7,6986 (d, IH, J = 7,92 Hz), 7,5983-7,578 (d, IH, J = 8,08 Hz), 7,345-7,290 (m, 4H), 7,172-7,133 (m, IH), 4,421-4386 (m, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,958 (s, 3H), 3,521-3,500 (m, 4H), 2, 349-2, 314 (m, 6H), 2,035-2,001 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA singlequad MS, Genesis C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt = 2,05 min (100%), MH⁺ 541,3.

354

Príklad 359 /V2-(4-{4-amino-l-[3-(l//-l -imidazoly l)propyl]-l//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín3-yl}-2-metoxyfenyl)-l -metyl-l//-2-indolkarboxamid

A. 1-[3-(1//-l-imidazolyl)pr opy 1]-3-jód-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-4amín

Suspenzia 1 -(3-brómpropyl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amínu (0,500 g, 1,31 mmol) v dimetylformamide (10 ml) sa nechá reagovať s imidazolom (0,107 g, 1,572 mmol) a trietylamínom (0,133 g, 1,31 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 70°C počas 25,5 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Pridá sa dichlórmetán (15 ml) a IN kyselina chlorovodíková (20 ml). Vrstvy sa rozdelia a vodná vrstva sa premyje dichlórmetánom (100 ml). Vodná vrstva sa neutralizuje na pH 14, a potom extrahuje dichlórmetánom (250 ml). Organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, filtruje a odparuje za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu pomocou 10% metanolu v dichlórmetáne ako mobilnou fázou, čím sa získa 0,086 g (18%) čistého l-[3(l//-l-imidazolyl)propyl]-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu. 'h

NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,211 (s, 1H), 7,896 (s, 1H), 7,264 (s, 1H), 6,96 (s, 1H), 4,32-4,227 (m, 2H), 4,011-3,977 (m, 2H), 2,329-2,215 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt = 0,46 min (100%), MH = 370,0.

B. V2-(4-{4-amino-l-[3-(l//-l-imidazolyl)propyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-y l}-2-metoxy fény 1)-1 -metyl-l//-2-indolkarboxamid

Suspenzia 1 -[3-(1//-1 -imidazolyl)propyl]-3-jód-l//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-4-amínu (0,086 g, 0,233 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (4 ml) sa nechá reagovať s V2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidom (0,104 g, 0,256 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,016 g, 0,014 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,059 g, 0,56 mmol) vo vode (2 ml). Reakčná zmes sa mieša počas 24

355 hodín pri teplote 80°C. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán (25 ml). Vrstvy sa rozdelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (100 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a odparujú za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím prerušovaného gradientu 5% metanolu v dichlórmetáne až 50% metanolu v dichlórmetáne na 10 g ISCO stĺpca, čím sa získa 0,06 g (49%) čistého 7V2-(4-{4-amino-l-[3-(l//l-imidazolyl)propyl]-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-y l)-2-metoxyfenyl)-lmetyl-l//-2-indolkarboxamidu.

’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,443 (s, 1H), 8,278 (s, 1H), 8,1324-8,1121 (d, 1H, J = 8,12 Hz), 7,7447,699 (m, 2H), 7,6-7,579 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,3657,283 (m, 5H), 7,172-7,135 (m, 1H), 6,939 (s, 1H), 4,36-4,326 (m, 2H), 4,0794,019 (m, 5H), 3,964 (s, 3H), 2,3242,309 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 08 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,25 min (100%), MH⁺ 522,3.

Príklad 360

V2-[4-(4-amino-1-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl)2-metoxy fény 1]-1-mety 1-1//-2-indolkarboxamid

A. /erc-butyl-3-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-1-yl)-1pyrolidínkarboxylát

Suspenzia 3-jód-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-4-amínu (5,0 g, 19,15 mmol) v tetrahydrofuráne (100 ml) sa nechá reagovať s Zerc-butyl-3-hydroxy-lpyrolidínkarboxylátom (5,38 g, 28,73 mmol) a trifenylfosfínom (7,53 g, 28,73 mmol). Reakčná zmes sa ochladí na teplotu 0°C v ľadovom kúpeli. Pomaly sa do reakčnej zmesi pridá dietylazodikarboxyát (5,0 g, 28,73 mmol). Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku po 6 dňoch. Surový olej sa bez ďalšej analýzy použije priamo v nasledujúcej reakcii.

356

B. 3-jód-l -tetrahydro- 1H-3-pyroly 1-1/f-pyrazolo [3,4-</]pyrimidí n-4-amínhydrochlorid

Suspenzia surového ŕerc-butyl-3-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4č/]pyrimidín-l-yl)-l-pyrolidínkarboxylátu v acetóne (100 ml) sa nechá reagovať so 6N kyselinou chlorovodíkovou (50 ml). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 40°C počas 15 hodín. Precipitát sa filtruje a podľa LCMS obsahuje nečistoty. Reakčná zmes sa nechá stáť pri izbovej teplote, čím v priebehu dňa vznikne precipitát, ktorý sa filtruje a premyje dietyléterom. Filtráciou sa získa 2,186 g (3 1%) čistého 3-jód-1 -tetrahydro- 1H-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4amín-hydrochloridu. ’H NMR (DMSO-d_ó, 400 MHz) δ 9,8815 (s, 1H), 8,9923 (br, s, 1H), 8,4803 (s, 1H), 7,82 (br, s, 1H), 5,5908-5,5295 (m, 1H), 3,71313,6706 (m, 1H), 3,5590-3,5003 (m, 1H), 3,4466-3,4174 (m, 2H), 2,45922,4255 (m, 1H), 2,4064-2,3146 (m, 1H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) R_t 1,09 min (100%), MH⁺ 331,0.

C. N2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl - l//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín3- yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl- l//-2-indolkarboxamid

Suspenzia 3-jód-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín4- amín-hydrochloridu (2,186 g, 5,96 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (50 ml) sa nechá reagovať s N2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidom (2,66 g, 6,56 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,413 g, 0,358 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (2,65 g, 25,03 mmol) vo vode (25 ml). Reakčná zmes sa mieša počas 24 hodín pri teplote 80°C. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Pridá sa dichlórmetán (100 ml) a IN hydroxid sodný (50 ml). Produkt vyprecipituje z vodnej vrstvy. Vodná vrstva sa odparuje za zníženého tlaku. Výsledné pevné látky sa premyjú veľkým množstvom dichlórmetánu a etylacetátu. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa 2,218 g (77%) čistého 7V2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l//pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3-yl)-2-metoxyfenyl] - 1-m etyl-l//-2-indol karboxamidu. ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,443 (s, 1H), 8,256 (s, 1H), 8,1168357

8,0965 (d, 1H, J = 8,12 Hz), 7,7181-7,6983 (d, 1H, J = 7,92 Hz), 7,5987,5778 (d, 1H, J = 8,08 Hz), 7,349-7,291 (m, 4H), 7,171-7,132 (m, 1H), 5,332-5,313 (m, 1H), 4,041 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,224-3,058 (m, 3H), 2,926-2,910 (m, 1H), 2,213-2,158 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 0 8 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,09 min (100%), MH⁺ 483,3.

Príklad 361

V2-[4-(4-amino-l-{l-[(l-metyl-177-2-imidazolyl)metyl]tetrahydro-177-3pyrolyl}-177-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-1/7-2indolkarboxamid

Suspenzia V2-[4-(4-amino-l -tetrahydro-177-3-pyrolyl-177-pyrazolo [3,4<7]pyrimi-din-3-yl)-2-metoxy fény 1] -1 -metyl- 177-2-indolkarboxamidu (0,250 g, 0,518 mmol) v dichlóretáne (5 ml) sa nechá reagovať s l-metyl-2imidazolkarboxaldehydom (0,115 g, 1,04 mmol) a triacetoxyborohydridom sodným (0,220 g, 1,04 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 18 hodín pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá hydroxid sodný (IN, 15 ml) a zmes sa mieša počas 1 hodiny. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán. Vrstvy sa rozdelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (200 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a odparujú za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím 10% metanolu v dichlórmetáne (15 min), 15% metanolu v dichlórmetáne (15 min), 20% metanolu v dichlórmetáne (20 min) a 50% metanolu v dichlórmetáne (5 min) ako mobilnej fázy, čím sa získa 0,060 g (20%) čistého V2-[4-(4-amino-l-{ 1[(l-metyl-l/7-2-imidazolyl)metyl]tetrahydro-1/7-3-pyrolyl}-177-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-3-y l)-2-metoxy fenyl] -1 -metyl- 177-2-indolkarboxamidu. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,446 (s, 1H), 8,249 (s, 1H), 8,1312-8,1108 (d, 1H, J= 8,16 Hz), 7,72077,7008 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,6023-7,5812 (d, 1H, J = 8,44 Hz), 7,356-7,293 (m, 4H), 7,174-7,120 (m, 2H), 6,822 (s, 1H), 5,425-5,391 (m, 1H), 4,044 (s, 3H), 3,962 (s, 3H), 3,693 (m, 2H), 3,651 (s, 3H), 2,86-2,797 (m,

358

3Η), 2, 368-2, 323 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,34 min (100%), MH⁺ 577,3.

Príklad 362 /V2-{4-[4-amino-l-(l-izopropyltetrahydro-l//-3-pyrolyl)-177-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l -metyl-177-2-indolkarboxamid

Suspenzia 7V2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-177-pyrazolo[3,4í/]pyrimi-din-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l -metyl-177-2-indolkarboxamidu (0,250 g, 0,518 mmol) v dichlóretáne (5 ml) sa nechá reagovať s acetónom (1,96 g, 33,15 mmol) a triacetoxyborohydridom sodným (0,220 g, 1,04 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 18 hodín pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá hydroxid sodný (IN, 15 ml) a zmes sa mieša počas 1 hodiny. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán. Vrstvy sa rozdelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (200 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a odparujú za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím 10% metanolu v dichlórmetáne (15 min), 15% metanolu v dichlórmetáne (15 min), 20% metanolu v dichlórmetáne (20 min) a 50% metanolu v dichlórmetáne (5 min) ako mobilnou fázou, čím sa získa 0,123 g (44%) čistého A2-{4-[4-amino-1 -(1-izopropyltetrahydro-177-3-pyrolyl)-177pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l -metyl-177-2-indolkarboxamidu. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,449 (s, 1H), 8,265 (s, 1H), 8,1278,1068 (d, 1H, J = 8,08 Hz), 7,7196-7,6999 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,60137,5803 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,351-7,299 (m, 4H), 7,173-7,135 (m, 1H), 5,394 (m, 1H), 4,042 (s, 3H), 3,961 (s, 3H), 2,793 (m, 3H), 2,337 (m, 3H), 1,068 (br, s, 6H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,38 min (100%), MH⁺ = 525,3.

359

Príklad 363

N2-(4-{4-amino-l-[l -(2-metoxyetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//-pyrazolo [3,4J]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1-metyl-l//-2-indolkarboxamid

Suspenzia N2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l//-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimi-din-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l -metyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,250 g, 0,518 mmol) v dimetylformamide (5 ml) sa nechá reagovať s 2brómetyl(metyl)éterom (0,079 g, 0,569 mmol) a uhličitanom draselným (0,143 g, 1,04 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri teplote 65°C počas 18 hodín pod atmosférou dusíka. Pridá sa voda (25 ml) do reakčnej zmesi. Vzniknutý precipitát sa filtruje a suší v lyofilizátore. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím 10% metanolu v dichlórmetáne (15 min), 15% metanolu v dichlórmetáne (15 min), 20% metanolu v dichlórmetáne (20 min) a 50% metanolu v dichlórmetáne (5 min) ako mobilnej fázy, čím sa získa 0,082 g (29%) čistého N2-(4-{4-amino-l-[l-(2metoxy ety l)tetrahydro-1/7-3-pyrolyl]-l//-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidí η-3-yl} -2metoxyfenyl)-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu. ’h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,447 (s, 1H), 8,265 (s, 1H), 8,1278-8,1075 (d, 1H, J = 8,12 Hz), 7,71927,6993 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,5996-7,5799 (d, 1H, J = 7,88 Hz), 7,3497,295 (m, 4H), 7,172-7,133 (m, 1H), 5,42 (m, 1H), 4,042 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,479 (m, 2H), 3,266-3,258 (m, 3H), 2,95-2,60 (m, 4H), 2,332 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis C18 stĺpec, 3 gm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,34 min (100%), MH⁺ 541,3.

Príklad 364

N2-(4-{4-amino-1 - [1 -(l//-4-imidazolylmetyl)tetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fény 1)-1 -metyl-l//-2-indolkarboxamid

Suspenzia N2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l//-3-pyrolyl-l/7-pyrazolo[3,4J]pyrimi-din-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,200 g, 0,415 mmol) v dichlóretáne (5 ml) sa nechá reagovať so 4-formylimidazolom

360 (0,08 g, 0,83 mmol) a triacetoxyborohydridom sodným (0,176 g, 0,83 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 24 hodín pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá hydroxid sodný (IN, 15 ml) a zmes sa mieša počas 1 hodiny. Organická vrstva sa odstráni za zníženého tlaku a pridá sa dichlórmetán. Vrstvy sa rozdelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (200 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a odparujú za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím 10% metanolu v dichlórmetáne (20 min), 15% metanolu v dichlórmetáne (10 min), 20% metanolu v dichlórmetáne (10 min) a 50% metanolu v dichlórmetáne (8 min) ako mobilnej fázy, čím sa získa 0,074 g (25%) čistého A2-(4-{4-amino-l-[l-(l/7-4-imidazolylmetyl)tetrahydro-l/7-3pyroly 1] -177-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény 1)-1-mety i-1/7-2indolkarboxamidu. *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,446 (s, 1H), 8,252 (s, IH), 8,126-8,1082 (d, 1H, J = 8,16 Hz), 7,7198-7,7 (d, 1H, J = 7,92 Hz), 7,67,569 (m, 2H), 7,35-7,298 (m, 4H), 7,171-7,134 (m, IH), 6,946 (s, IH), 5,4225,385 (m, IH), 4,043 (s, 3H), 3,961 (s, 3H), 3,691 (s, 2H), 3,175-3,162 (m, 2H), 2,9-2,883 (m, 3H), 2,385-2,332 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA singlquad MS, Genesis C18 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,13 min (100%), MH⁺ 563,3.

Príklad 365

A2-[4-(4-amino-l-{ 1-[(3-metyl-1/7-4-pyrazolyl)metyl]tetrahydro-1/7-3pyrolyl}-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-1/7-2indolkarboxamid

Suspenzia A2-[4-(4-amino-l-tetrahydro-l/7-3-pyrolyl-l/7-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,200 g, 0,415 mmol) v dichlóretáne (5 ml) sa nechá reagovať s 3-metyl-l/7-pyrazol-4karboxaldehydom (0,091 g, 0,83 mmol) a triacetoxyborohydridom sodným (0, 176 g, 0,83 mmol). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 24 hodín pod atmosférou dusíka. Do reakčnej zmesi sa pridá hydroxid sodný (IN, 15 ml) a zmes sa mieša počas 1 hodiny. Organická vrstva sa odstráni za zníženého

361 tlaku a pridá sa dichlórmetán. Vrstvy sa rozdelia a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (100 ml) a etylacetátom (100 ml). Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a odparujú za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím 10% metanolu v dichlórmetáne (15 min), 15%> metanolu v dichlórmetáne (10 min), 20% metanolu v dichlórmetáne (10 min) a 50% metanolu v dichlórmetáne (8 min) ako mobilnej fázy, čím sa získa 0,106 g (44%) čistého V2-[4-(4-amino-l{l-[(3-metyl-l//-4-pyrazolyl)mety l]tetrahydro-l//-3-pyrolyl }-l//-pyrazolo [3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxy fenyl] -1 -mety 1-1 //-2-indolkarboxamidu. ^lH NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,446 (s, 1H), 8,247 (s, 1H), 8,1275-8,1071 (d, 1H, J= 8,16 Hz), 7,72-7,7003 (d, 1H, J = 7,96 Hz), 7,6004-7,5793 (d, 1H, J = 8,44 Hz), 7,3987,286 (m, 5H), 7,172-7,134 (m, 1H), 5,379 (m, 1H), 4,0443 (s, 3H), 3,962 (s, 3H), 3,492 (m, 2H), 3,1 (m, 1H), 2,75 (m, 3H), 2,352-2,335 (m, 2H), 1,909 (s, 3H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 08 stĺpec, 3 pm veľkosť častíc, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM octan amónny vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,17 min (100%), MH⁺ 577,3.

Príklad 366

V2-(4-{4-amino-l-[(3/?)-l-metyltetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

A2-(4-{4-amino-l-[(3/?)-l-metyltetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z (S)-(-)-3-pyrolidinolu spôsobom analogickým na prípravu rac-N2-{4[4-amino-l-(l-metyltetrahydro-l//-3-pyrolyl)-l//-pyrazolo[3,4-ť/]pyrimidín-3yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme bielej pevnej látky (0,195 g, 53%). ’h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 2,31-2,35 (m, 2 H), 2,32 (s, 3 H), 2,35 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,70-2,77 (m, 3 H), 3,05 (t, 1 H), 5,40 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,85 (s, 1 H); RP-HPLC Rt 11,090 min, 99% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20

362 minút pri 1 ml/min; 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 455 (MH ).

Príklad 367

7V2-(4-{ 4-amino-l- [(35)-1 -metyltetrahydro-l//-3-pyrolyl]-l/7-pyrazolo[3,4č/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

7/2-{4-amino-l-[(35)-1 -metyltetrahy dro-1 H-3-pyrolyl]-1 //-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z (/?)-()-3-pyrolidinolu spôsobom analogickým na prípravu rac-A2-{4-[4-amino-l-(lmetyltetrahydro-l//-3-pyrolyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]fenyl}-5,7dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme bielej pevnej látky (0,126 g, 20%). ‘h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 2,31-2,35 (m, 2 H), 2,31 (s, 3 H), 2,35 (s, 3H), 2,40 (s, 3 H), 2,67-2,76 (m, 3 H), 3,05 (t, 1 H), 5,40 (m, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,66 (d, 2 H), 7,93 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,84 (s, 1 H); RP-HPLC Rt 11,129 min, 100% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 455 (MH ).

Príklad 368 rac-A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)tetrahydro-17/-3-pyrolyl]-l//pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-7-izopropyl-5-metyl-l,3-benzoxazol-2amín

7čac-A2-(4-{4-amino-1-[1 -(2-metoxyetyl)tetrahy dro-177-3-pyrolyl]-177pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-3-yl} fény l)-7-izopropy 1-1,3-benzoxazol-2-amín sa pripraví z rac-3-j ód-1 -[l-(2-metoxy ety l)tetrahy dro -17/-3-pyrolyl] - \Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (0,200 g, 0,515 mmol) a A2-[4-(4,4,5,5tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-7-izopropyl-l ,3-benzoxazol-2-amínu (0,244 g, 0,644 mmol) podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu cis-N2-(4- {4-amino -1 -[4-(4-metylpiperazino)cy klohexyl]-! H363 pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-fluórfenyl)-l ,3-benzoxazol-2-amínu. Zlúčenina sa získa vo forme belavej pevnej látky (0,067 g, 25%). ’h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) 1,361 (d, 6 H), 2,30 (m, 2 H), 2,66 (m, 2 H), 2,76-2,83 (m, 3 H), 3,17 (t, IH), 3,24 (s, 3 H), 3,38 (m, 1 H), 3,45 (t, 2 H), 5,37 (m, 1 H), 7,04 (d, 1 H), 7,18 (t, 1 H), 7,32 (d, 2 H), 7,67 (d, 2 H), 7,95 (d, 2 H), 8,24 (s, 1 H), 10,88 (s, 1 H); RP-HPLC Rt 12,337 min, 94% čistota (5% až 85% acetonitril/Ο,ΙΜ vodný octan amónny, pufrovaný na pH 4,5, v priebehu 20 minút pri 1 ml/min; λ = 254 nm; Deltapak C18, 300 Á, 5 pm, 150 x 3,9 mm stĺpec); m/z 513 (MH ).

Príklad 369

Cís-etyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lHpyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l -yl)-l -cyklohexánkarboxylát

3-Jód-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín (0,52 g, 2,0 mmol), etyl-4hydroxycyklohexánkarboxylát (0,806 ml, 5,0 mmol, trifenylfosfín (1,05 g, 4,0 mmol), dietylazodikarboxylát (0,628 ml, 4,0 mmol) sa suspendujú v tetrahydrofuráne (15 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote pod miernym tlakom dusíka počas 48 hodín. Zmes sa zriedi vodou (50 ml) a extrahuje etylacetátom (3 x 50 ml). Organické frakcie sa spoja, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a koncentrujú. Zvyšok sa čiastočne purifikuje zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou (100% etylacetát), čím sa získa etyl-4-(4-amino-5jód-7H-pyrolo[3,4-í/]pyrimidín-7-yl)-l-cyklohexánkarboxylát vo forme zmesi cis- a /rans-diastereomérov spoločne s trifenylfosfín-oxidom. Opätovnou purifikáciou zmesi zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou na silikagéli deaktivovanom trietylamínom (0,5% metanol/dichlórmetán ako mobilná fáza) sa získa požadovaný ci5-etyl-4-(4-amino-5-jód-7H-pyrolo[3,4-í/]pyrimidín-7yl)-lcyklohexánkarboxylát vo forme žltej pevnej látky (0,260 g, 0,625 mmol): RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5p Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 9,55 min; MS (MH)⁺ 416.

364

Cz's-etyl-4-(4-amino-5-jód-7//-pyrolo[3,4-í/]pyrimidin-7-yl)-l-cyklohexán-karboxylát (0,10 g, 0,24 mmol) sa zmieša s zV-(5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol2-yl)-A-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]amínom (0,088 g, 0,24 mmol), uhličitanom sodným (0,064 g, 0,60 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,014 g, 0,012 mmol), dimetyléterom etylénglykolu (2 ml) a vodou (1 ml) a zmes sa zahrieva pri teplote 85°C v uzavierateľnej Schlenkovej banke počas 14 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu, zriedi vodou (10 ml) a extrahuje 10% metanolu v dichlórmetáne (3 x 20 ml). Organické frakcie sa spoja, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a koncentrujú. Purifikáciou produktu zrýchlenou stĺpcovou chromatografiou na silikagéli deaktivovanom trietylamínom (2,5% metanol/dichlórmetán ako mobilná fáza) sa získa cz'.y-etyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol2-yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl)-l cyklohexánkarboxylát vo forme bielej pevnej látky (0,040 g, 0,076 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5 pm Hypersil HS 0 8, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 12,63 min; 'h NMR (DMSO-dó,400 MHz) δ 10, 85 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,92 (d, 2H), 7,64 (d, 2H), 7,11 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,66 (m, 1H), 4,10 (qt, 2H), 3,27 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,08 (m, 6H), 1,61 (m, 2H), 1,20 (t, 3H).

Príklad 370

Cz'5'-metyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}1//-pyrazolo [3,4-c/] pyrimidín-1 -yl)-l -cyklohexánkarboxylát

Cz'5-etyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl}-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l -y 1) -1 -cyklohexánkarboxylát (0,030 g, 0,057 mmol), metoxid sodný (0,0033 g, 0,063 mmol) a metanol (2 ml) sa zmiešajú a zahrievajú v uzavierateľnej Schlenkovej banke počas 48 hodín pri teplote 75°C. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8p Hypersil HS 08, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 15,6-16,5 min) sa získa cz's-metyl-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l, 3-benzoxazol-2-yl) amino] fenyl} l/7-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l -yl)-l-cyklohexánkarboxylát vo forme bieleho

365 prášku (0,010 g, 0,020 mmol): RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5 μ Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 11,82 min; ‘h NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10, 85 (s, IH), 8,23 (s, IH), 7,92 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,12 (s, IH), 6,80 (s, IH), 4,67 (m, IH), 3,63 (s, 3H), 3,27 (m, IH), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,07 (m, 6H), 1,61 (m, 2H).

Príklad 371

Czs-4-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lApyrazolo[3,4-ď|pyrimidín-l-yl)-l-cyklohexánkarboxylová kyselina

Czs-etyl-4-(4-amíno-3-{4-[(5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl}-l A-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-l-yl)-l-cyklohexánkarboxylát (0,10 g, 0,19 mmol), vodný roztok hydroxidu sodného (1 M, 2 ml, 2 mmol) a metanol (2 ml) sa zmiešajú a zahrievajú pod chladičom pri teplote 70°C počas 14 hodín. Zvyšok sa okyslí vodnou kyselinou chlorovodíkovou (3 M, 2 ml, 6 mmol) a extrahuje zmesou 10% metanol/dichlórmetán (3 x 20 ml). Spojené organické frakcie sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a koncentrujú. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min pomocou 8μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 8,8-10,9 min) sa získa cz's-4-(4amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino] fenyl}-1 A-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-l-yl)-l-cyklohexánkarboxylová kyselina vo forme krémovo sfarbeného prášku (0,026 g, 0,052 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS 0 8, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 9,03 min; MS (MH)⁺ 498.

Príklad 372

Cz'j-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3-[4-(2-pyrimidinylamino)fenyl]-lApyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín

366

4-Brómanilín (0,300 g, 1,74 mmol) a 2-chlórpyrimidín (0,200 g, 1,74 mmol) sa zahrieva pri teplote 150°C v 25 ml banke počas 2 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a purifikáciou zvyšku preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min pomocou 8μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 13,8-15,9 min) sa získa H-(4-brómfenyl)-H-(2-pyrimidinyl)amín vo forme žltej pevnej látky (0,135 g, 0,54 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS 08, 250 x 4,6 mm stĺpec) Rt 11,08 min;¹H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,78 (s, 1H), 8,50 (d, 2H), 7,76 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 6,87 (t, 1H).

H-(4-Brómfenyl)-H-(2-pyrimidinyl)amín sa konvertuje na požadovanú zlúčeninu podľa spôsobu, ktorý je podobný postupu opísanému na prípravu cisH2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4č/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-4-etyl-l ,3-tiazol-2-amínu. Purifikáciou produktu preparatívnou HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 20 minút pri 21 ml/min s použitím 8μ Hypersil HS C18, 250 x 21 mm stĺpec, Rt 4,0-5,0 min) sa získa cz\y-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-3[4-(2-pyrimidinylamino)fenyl]-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín vo forme bieleho prášku (0,095 g, 0,196 mmol); RP-HPLC (25 až 100% acetonitril v 0,1 M vodnom octane amónnom v priebehu 10 minút pri 1 ml/min s použitím 5μ Hypersil HS 08, 250 x 4, 6 mm stĺpec) Rt 5,38 min; MS (MH) 485.

Príklad 373

H2-(4-{4-amino-l-[2-(4-metyipiperazino)-4-pyridyl]-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-y 1}-2-metoxy fény l)-lH-2-indolkarboxamid-acetát

A. 1-(2-chlór-4-py ridy l)-3-j ód-1 H-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-4-amín

Roztok 3-jód-lH-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-4-amínu (4,12 g, 0,016 mol) v N,N-dimetylformamide (50 ml) sa nechá reagovať so 60% hydridom sodným v oleji (0,75 g, 0,019 mol) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša počas 15 minút a pridá sa 2-chlór-4-nitropyridín (3,00 g, 0,019 mol). Zmes sa zahrieva pri

367 teplote 100°C počas 18 hodín. Zmes sa ochladí na izbovú teplotu a precipitát sa filtruje, premyje /V,7/-dimetylformamidom (20 ml), a potom mieša s etylacetátom (50 ml) počas 4 hodín. Pevný podiel sa filtruje a suší vo vákuu, čím sa získa l-(2-chlór-4-pyridyl)-3-jód-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-4-amín (2,39 g, 0,009 mol) vo forme hnedej pevnej látky: ’h NMR (DMSO-dô, 400 ΜΗζ)δ.8,52 (d, IH), 8,43 (s, IH), 8,40 (d, IH), 8,25 (dd, IH); RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 gm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 10,29 min; MS: MH⁺ 373.

B. 7/2-{4-[4-amino-l -(2-chlór-4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3yl]-2-metoxyfenyl} -1 -metyl- l//-2-indolkarboxamid

Suspenzia 1 -(2-chlór-4-pyridy l)-3-j ód-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-4amínu (0,95 g, 0,00256 mol) v dimetoxyetáne (30 ml) a vode (60 ml) sa nechá reagovať s N2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyll-metyl-l//-2-indolkarboxamidom (1,14 g, 0,00281 mol), uhličitanom sodným (0,68 g, 0,00640 mol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,30 g, 0,00026 mol) pri teplote 80°C počas 3 dní. Pevný podiel sa filtruje a premyje vodou, trituruje etylacetátom (75 ml) počas 6 hodín a filtruje, premyje etylacetátom (20 ml). Pevný podiel sa potom trituruje metanolom (75 ml) počas 6 hodín a filtruje, premyje metanolom (20 ml). Pevný podiel sa suší vo vákuu, čím sa získa surový 7/2-{4-[4-amino-l-(2-chlór-4-pyridyl)-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3yl]-2-metoxyfenyl}-l-metyl-l//-2-indolkarboxamid (0,672 g, 0, 00128 mol) vo forme hnedej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,48 (s, IH) 8,55-8,58 (m, 2H), 8,50 (s, IH), 8,44 (dd, IH), 8,21 (d, IH), 7,72 (d, IH), 7,60 (d, IH), 7,49 (d, IH), 7,43 (dd, IH), 7,31-7,38 (m, 2H), 7,16 (t, IH), 4,05 (s, 3H), 4,00 (s, IH);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 10 min, izokraticky pri 95% počas 3 min, 1 ml/min) Rt 12,70 min; MS: MH⁺ 525.

C. 7V2-(4-{4-amino- l-[2-(4-metylpiperazino)-4-pyridyl]-l//-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l//-2-indolkarboxamid-acetát

368

Suspenzia A2-{4-[4-amino-l-(2-chlór-4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l -metyl-l//-2-indolkarboxamidu (0,120 g, 0,00023 mol) v 1 -metylpiperazíne (5 ml) sa zahrieva pri teplote 120°C počas 5 dní. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa mieša v dietyléteri (25 ml) počas 4 hodín. Zmes sa filtruje, premyje dietyléterom (105 ml) a suší vo vákuu. Surová látka sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 40% izokraticky počas piatich minút, potom 40%-100% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 30 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa A2-(4-{4-amino-l-[2-(4metylpiperazino)-4-pyridyl]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-l//-2-indolkarboxamid-acetát (0,030 g, 0,00005 mol) vo forme bielej pevnej látky.

^]H NMR (DMSO-dó, 400 MHz)δ. 947 (s, IH), 8,44 (s, IH), 8,12 (d, IH), 7,77 (s, IH), 7,72 (d, IH), 7,68 (d, IH), 7,60 (d, IH), 7,30-7,37 (m, 3H), 7,26 (d, IH), 7,15 (t, IH), 4,06 (s, 3H), 3,50-3,58 (m, 4H), 2,38-2,46 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,91 (s, 3H);

RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 15,33 min; MS: MH⁺ 575.

Príklad 374

A2-{ 4-[4-amino-l-(2-morfolino-4-pyridyl)-l//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-y 1]2-metoxyfenyl} -1 -metyl-1/7-2-indolkarboxamid

Suspenzia 7/2-{4-[4-amino-l-(2-chlór-4-pyridyl)-l/7-pyrazolo[3,4<7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l -metyl-1/7-2-indolkarboxamidu (0,120 g, 0,00023 mol) a morfolínu (10 ml) sa zahrieva pri teplote 100°C počas 6 dní. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa mieša vo vode (25 ml) počas 4 hodín. Zmes sa filtruje a surový pevný podiel sa čistí preparatívnou RP-HPLC (Rainin C18, 8 pm, 300 Á, 25 cm; 35%-8O% acetonitril-0,050 M octan amónny v priebehu 20 min, 21 ml/min). Acetonitril sa odstráni vo vákuu a vodná zmes sa lyofilizuje, čím sa získa A2-{4-[4-amino-l-(2-morfolino-4-pyridyl)-l/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l -metyl-1//-2-indolkarboxamid (0,048 g, 0,00008 mol) vo forme bielej pevnej látky.

369 *Η NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ) δ 9,48 (s, IH), 8,44 (s, IH), 8,27 (d, IH), 8,18 (d, IH), 7,82 (d, IH), 7,74 (dd, IH), 7,72 (d, IH), 7,60 (d, 1H), 7,46 (d, IH), 7,41 (dd, IH), 7,36 (s, IH), 7,34-(t, IH), 7,16 (t, IH), 4,05 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 3,72-3,78 (m, 4H), 3,493,56 (m, 4H); RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 20 min, 1 ml/min) Rt 17,89 min; MS: MH 576.

Príklad 375 (5)-A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

A. (R)-terc-butyl-3-hydroxy-l-piperidínkarboxylát

Zmes (7?)-3-hydroxy-piperidín-hydrochloridu (10 g, 0,073 mol), di-tercbutyl-dikarbonátu (20 g, 0,091 mol) a uhličitanu sodného (19 g, 0,182 mol) v dioxáne (80 ml) a vode (80 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka počas 18 hodín. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Vodná vrstva sa extrahuje dietyléterom (2 x 200 ml). Organická vrstva sa premyje soľankou, suší nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa číry olej (J?)-ŕerc-butyl-3-hydroxy-lpiperidínkarboxylát (17,6 g, 0,087 mol). Surový produkt sa použije v nasledujúcej reakcii.

*H NMR (Chlorform-d, 400 ΜΗζ) δ 3,76 (m, IH), 3,67 (br, IH), 3,55 (br, IH), 2,92 (m, 2H), 2,75 (s, IH), 1,85 (br, IH), 1,72 (br, IH), 1,46 (br, 11H)

GC-MS: MH⁺ 202.

B. (5)-7erc-butyl-3-(4-amino-3-jód-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)-lpiperidínkarboxylát

Do zmesi 3-jód-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amínu (2 g, 0,0077 mol), (7?)-terc-butyl-3-hydroxy-l-piperidínkarboxylátu (2,3 g, 0,012 mol) a trifenylfosfínu (3 g, 0,012 mol) v tetrahydrofuráne (70 ml) sa pridá pri teplote 0°C dietylazodikarboxylát (2 g, 0,012 mol). Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka počas 2 dní. Do zmesi sa pridá ďalší (Jč)-ŕerc-butyl-3370 hydroxy-l-piperidínkarboxylát (0,62 g, 0,003 mol) a trifenylfosfin (0,81 g, 0,012 mol) a dietylazodikarboxylát (0,6 g, 0,003 mol) kvôli dokončeniu reakcie. Zmes sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka ďalších 18 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa surový (S)/erc-butyl-3-(4-amino-3-jód-l V-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l -y 1)-1 piperidínkarboxylát, ktorý sa v nasledujúcej reakcii použije surový. RP-HPLC (Delta Pak C18, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 10,0 min.

MS: MH⁺ 445.

C. (S)-3-j ód-l-(3-piperidy 1)-1 V-pyrazolo [3,4-e/]pyrimidín-4-amín-acetát

Do zmesi (S)-/crc-butyl-3-(4-amino-3-jód-1 V-pyrazoIo[3,4-ď]pyrimidín1-yl)-l-piperidínkarboxylátu (3,4 g, 0,0077 mol) v acetóne (80 ml) sa pridá vodný 6N roztok chlorovodíka (20 ml) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša pri teplote 45°C počas 4 hodín, potom pri izbovej teplote počas 18 hodín. Acetón sa odstráni za zníženého tlaku a vodná vrstva sa premyje toluénom (2 x 20 ml) a dichlórmetánom (2 x 20 ml). Vodná vrstva sa alkalizuje vodným roztokom 5N hydroxidu sodného (25 ml) pri teplote 0°C. Vodná vrstva sa koncentruje do sucha a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 08, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 2%-30% v priebehu 15 min s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa (5)-3-j ód-1 -(3-piperidyl)-l V-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amín-acetát (0,75 g, 0,0019 mol). RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 5%-85% acetonitril-0,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 8,2 min.

MS: MH⁺ 345.

D. (5)-3-jód-l - [1 -(2-metoxyety l)-3-piperidy 1] -1 V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín4-amín

Do zmesi (5)-3-jód-1 -(3-piperidyl)-1 V-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínacetátu (0,75 g, 0,0019 mol) a uhličitanu draselného (0,77 g, 0,00568 mol) v V,V-dimetylformamide (30 ml) sa pridá 2-brómetyl(metyl)éter (0,27 g, 0,0019 mol) a jodid draselný (0,0016 g, 0,000095 mol) pri izbovej teplote. Zmes sa mieša pri teplote 65°C pod atmosférou dusíka počas 16 hodín. Reakčná zmes sa ochladí na izbovú teplotu a pridá sa 2-brómetyl(metyl)éter (0,27 g,

371

0,0019 mol) a jodid draselný (0,0016 g, 0,000095 mol). Zmes sa mieša pri teplote 65°C pod atmosférou dusíka počas 4 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného (25 ml) a dichlórmetán (50 ml). Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (4 x 50 ml). Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS 0 8, 8 pm, 250 x 21, 1 mm; 2%30% v priebehu 15 min s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min) až (5)-3-jód-l[1 -(2-metoxy etyl)-3-piperidyl]-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-4-amín-acetát (0,64 g, 0,0014 mol). RP-HPLC (Hypersil 08, 5 pm, 250 x 4,6 mm; 5%-85% acetonitril-O,IM octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 8,9 min. MS: MH⁺ 403

E. (5)-V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-3-yl}fenyl-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

Zmes (5)-3-j ód-1 - [1 -(2-metoxyetyl)-3-piperidyl]-177-pyrazolo [3,4J]pyrimidín-4-amín-acetátu (0,64 g, 0,0014 mol), V-(5,7-dimetyl-l,3benzoxazol-2-yl)-V-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl] amínu (0,64 g, 0,00175 mol, 1,2 ekviv.), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,081 g, 0,00007 mol) a uhličitanu sodného (0,37 g, 0,0035 mol) v N,Ndimetylformamide (15 ml) a vode (7 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 16 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu (25 ml) a dichlórmetán (50 ml). Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú soľankou, sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku za vzniku nahnedlého oleja, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu zmesou 2%-l0% metanol/dichlórmetán ako mobilnou fázou, čím sa získa (5)-V2-(4-{4amino-1-[ 1-(2-metoxy ety l)-3-piperidyl]-177-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3 yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín (0,60 g, 0,0012 mol).

‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 10,85 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,11 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,77 (br, 1H), 3,36 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 3,04-(br, 1H), 2,90 (br, 1H), 2,55 (br, 2H), 2,54-(br, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,02 (br, 3H), 1,80 (br, 1H), 1,70 (br, 1H).

372

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300 Á, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 11,9 min.

MS: MH⁺ 513.

Príklad 376

Triacetát cz's-2-(4-{4-amino-1 - [4-(4-mety lpiperazino)cyklohexyl] -1Hpyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}anilino)-l ,3-benzoxazol-5-karboxamidu

Do zmesi triacetátu cz's-2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}anilino)-l ,3-benzoxazol-5-karbonitrilu (0,18 g, 0,00025 mol) v dioxáne (2 ml) sa pridá 2N vodný roztok hydroxidu sodného (1,25 ml, 0,0025 mol) a voda (0,75 ml). Pred pridaním 30% roztoku peroxidu vodíka (0,2 ml) sa zmes mieša pri izbovej teplote počas 2 minút pod atmosférou dusíka. Zmes sa refluxuje počas 5 hodín, potom sa mieša pri izbovej teplote počas 18 hodín. Do zmesi sa pridá ďalšie množstvo 30% roztoku peroxidu vodíka (0,2 ml) a zmes sa refluxuje ďalších 6 hodín, potom sa mieša pri izbovej teplote počas 2 dní. Organické rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a na udržanie pH = 7 sa pridá roztok 5% kyseliny citrónovej. Vodná vrstva sa odstráni za zníženého tlaku a surová látka sa čistí RP-HPLC (Hypersilprep HS C18, 8 pm, 250 x 21,1 mm; 5%-100% v priebehu 25 min s 0,1 M octanom amónnym, 21 ml/min), čím sa získa triacetát cz5^,-2-(4-{4-aminol-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4-ri]pyrimidín-3yl}anilino)-l,3-benzoxazol-5-karboxamidu (0,11 g, 0,00015 mol).

’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 8,30 (s, IH), 8,15 (s, IH), 8,00 (m, 3H), 7,75 (m, IH), 7,70 (m, 2H), 7,60 (d, IH), 7,35 (br, IH), 4,80 (br, IH), 2,50 (br, 2H), 2,40 (br, 4H), 2,25 (br, 4H), 2,15 (s, 3H), 2,10 (br, 3H), 1,90 (s, 9H), 1,70 (br, 2H), 1,60 (br, 2H).

RP-HPLC (Delta Pak 08, 5 pm, 300Ä, 15 cm; 5%-95% acetonitril-Ο,ΙΜ octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 8,2 min.

MS: MH⁺ 567.

373

Príklad 377

Vl-{4-[4-Amino-l-(4-oxocyklohexyl)-lH-pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid

Roztok 2-fluór-4-trifluórmetyl-l-benzénkarbonylchloridu (0,87 g, 3,83 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) sa pridá do zmesi pyridínu (15 ml) a 4-[4-amino3-(4-amino-3-metoxy fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-ó/]pyrimidín-1-y l]-l-cyklohexanónu (1,00 g, 2,56 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) pri teplote 0°C v priebehu 5 minút. Zmes sa mieša pri teplote 0°C počas 10 minút a pri izbovej teplote cez noc. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a dichlórmetán. Dichlórmetánová vrstva sa premyje nasýteným vodným roztokom chloridu amónneho (2x) a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, suší nad síranom horečnatým, filtruje a odparuje za zníženého tlaku, čím sa získa surový produkt. Surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu v systéme Isco, čím sa získa Vl-{4-[4amino-1 -(4-oxocyklohexy 1)-1//-pyrazolo [3,4-</]py rimidín-3-y l]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,95 g, 1,76 mmol) vo forme bielej pevnej látky: ’h NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,90 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,28 (s, IH), 7,99 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,34 (s, IH), 7,30 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 5,27 (m, IH), 3,94 (s, 3H), 2,70 (m, 2H), 2,47 (m, 4H), 2,17 (m, 2H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 9,23 min. MS: MH⁺ 543.

374

Príklad 378

Czs-Vl-{4-[4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexy 1)-1 H-py razolo [3,4-djpyrimidín3-y 1]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid; a

Príklad 379

7rčz«s-jVl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl} -2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid

Morfolín (0,08 ml, 0,93 mmol) sa pridá do zmesi Vl-{4-[4-amino-l-(4oxocyklohexy l)-l//-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxy fenyl}-2-fluór-4trifluórmetylbenzamidu (0,42 g, 0,78 mmol) a octovej kyseliny (0,11 ml, 1,86 mmol) v dichlóretáne (25 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 10 minút. Pridá sa triacetoxyborohydrid sodný (0,23 g, 1,09 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa voda (6 ml), potom hydrogenuhličitan sodný (0,38 g, 4,53 mmol). Zmes sa mieša počas 1 hodiny a organická vrstva sa separuje. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (20 ml). Spojené organické podiely sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a odparujú za zníženého tlaku, čím sa získa surový produkt. Surový produkt sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu v systéme Isco, čím sa získa cis-Nl- {4-[4-amino-l -(4-morfolinocyklohexyl)-l//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl} -2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,23 g, 0,37 mmol) a /r<rn.s-Vl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-l//375 pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl }-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,09 g, 0,14 mmol) vo forme bielych pevných látok.

Dáta pre cis-Ni -{4-[4-amino-1 -(4-morfolinocyklohexy 1)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxy fenyl }-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid:

’H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,91 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,83 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,62 (br, 4H), 1,57-2,55 (m, 10H); MS: MH⁺ 614.

Dáta pre ŕra«5^,-Vl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxy fény l}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid: *H NMR (DMSO-dô 400 MHz) δ 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,99 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 4,67 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,59 (br, 4H), 1,48-2,69 (m, 10H); MS: MH⁺ 614.

Príklad 380

Cz'5'-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3metoxy fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoát; a

Príklad 381

7’ra«5-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3metoxy fenyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl}amino)propanoát

376

Podobným spôsobom ako príprava cz'5-?71-{4-[4-amino-l-(4morfolinocyklohexy 1)-177-pyrazolo [3,4-í/]py r imidín-3-y 1]-2-metoxy fenyl}-2fluór-4-trifluórmetylbenzamidu a Zran5-Vl-{4-[4-amino-l-(4-morfolinocyklohexyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]py rimidín-3-y 1]-2-metoxy fenyl }-2-fluór-4trifluórmetylbenzamidu sa získa cz's-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4trifluórmety lbenzoyl] amino}-3-metoxy fenyl)-177-pyrazolo [3,4-í/]py rimidín-1yl]cyklohexyl}amino)propanoát a /rzzzzj-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-Duór-4trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-z/]pyrimidín-l yl]cyklohexyl}amino)propanoát vo forme bielych pevných látok.

Dáta pre <?z'j-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3-metoxyfenyl)-177-pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-l -yl]cyklohexyl}amino)propanoát:

'H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,90 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,37 (m, 1H), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,76 (m, 2H), 2,32 (m, 2H), 1,88 (m, 2H), 1,67 (m, 4H), 1,16 (t, 3H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 7,92 min. MS: MH⁺ 644.

Dáta pre trans-Qty 1-3-({4-[4-amino-3-(4 -{[2-fluór-4-trifluórmety lbenzoyl] amino }i-3-metoxy fény 1)-177-pyrazolo [3,4-<7]py rimidín- 1-y I] cyklohexyl }amino)propanoát:

377 ’H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 4,68 (m, 1H), 4,08 (q, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,82 (m, 2H), 2,46 (m, 5H), 1,91-2,07 (m, 6H), 1,18 (t, 3H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm, 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 7,69 min. MS: MH⁺ 644.

Príklad 382

N1 -[4-(4-Amino-l-trityl-1 //-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-yl)-2-metoxy fény l]-2fluór-4-trifluórmetylbenzamid

Zmes 3-jód-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-aminu (0,10 g, 0,19 mmol), Nl-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl-2fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,13 g, 0,29 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,01 g, 0,01 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,06 mg, 0,48 mmol) vo vode (2 ml) a dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) sa zahrieva pri teplote 85°C cez noc. Rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Do zvyšku sa pridá voda a zmes sa extrahuje etylacetátom (3x). Spojené organické podiely sa premyjú nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a odparujú, čím sa získa hnedá pevná látka, ktorá sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu v systéme Isco, čím sa získa N1 -[4-(4-amino-l-trityl-1 //-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-yl)-2-metoxy fenyl]-2fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,12 g, 0,17 mmol) vo forme bielej pevnej

378 látky: ^JH NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ) δ 9,89 (dd, IH), 8,25 (d, IH), 8,28 (s, IH), 8,00 (t, IH), 7,94 (s, IH), 7,88 (d, IH), 7,73 (d, IH), 7,24 (m, 15H), 3,90 (s, 3H); MS: MH⁺ 689.

Príklad 383

C/j-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino}-3metoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl}amino)propánová kyselina

Zmes cz',y-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{ [2-fluór-4-trifluórmetylbenzoy 1] amino}-3-metoxy fény l)-lH-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-l -yl]cyklohexyl}amino)propanoátu (0,23 g, 0,36 mmol), p-dioxánu (15 ml), hydroxidu draselného (0,10 g, 1,81 mmol) a vody (1,5 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 3 hodín. Rozpúšťadlá sa odparujú a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa cz.y-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmety lbenzoy 1] amino}-3-metoxyfenyl)-lH-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl]cykIohexyl}amino)propánová kyselina (0,11 g, 0,18 mmol) vo forme bielej pevnej látky: ^!H NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ) δ 9,91 (dd, IH), 8,31 (d, IH), 8,25 (s, IH), 8,00 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,35 (s, IH), 7,32 (s, IH), 6,89 (br, 2H), 4,79 (m, IH), 3,95 (s, 3H), 2,46-3,00 (m, 7H), 2,29 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,80 (m, 2H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 6,06 min. MS: MH⁺ 616.

379

Príklad 384

7rtf«s-3-({4-[4-amino-3-(3-metoxy-4-{[2-metoxy-4trifluórmetylbenzoyl]amino}fenyl)-lA-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-lyl]cyklohexyl}amino)propánová kyselina

Zmes rranj-etyl-3-({4-[4-amino-3-(4-{[2-fluór-4-trifluórmetylbenzoyl]amino }-3-metoxy fenyl)-1 A-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l -yl]cyklohexyl}amino)propanoátu (0,04 g, 0,06 mmol), p-dioxánu (4 ml), hydroxidu draselného (0,02 g, 0,31 mmol) a stopových množstiev metanolu a vody (0,4 ml) sa zahrieva pri teplote 80°C počas 1 hodiny. Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc pri teplote 80°C počas 4 hodín. Rozpúšťadlá sa odparujú a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa Zra«5'-3-({4-[4-amino-3-(3metoxy-4-{[2-metoxy-4-trifluórmetylbenzoyl] amino} fény 1)-1 A-pyrazolo[3,4c/]pyrimidín-l-yl]cyklohexyl}amino)propánová kyselina (0,04 g, 0,06 mmol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ)δ 10,72 (s, IH), 8,61 (d, IH), 8,28 (d, IH), 8,24 (s, IH), 7,61 (s, IH), 7,53 (d, IH), 7,33 (s, IH), 7,29 (d, !H), 4,72 (m, IH), 4,20 (s, 3H), 4,05 (s, 3H), 1,44-3,61 (m, 13H); RPHPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 0 8, 5 pm, 100 Á, 250x4, 6mm; 25%-100% acetonitril-O,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 6,36 min. MS: MH⁺ 628.

380

Príklad 385

Al - [4-(4-Amino-1//-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4trifluórmety lbenzamid

Zmes Al-[4-(4-amino-l-trityl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2metoxy-fenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (2,10 g, 1,75 mmol), 6N vodnej kyseliny chlorovodíkovej (10 ml), p-dioxánu (10 ml) a etanolu (8 ml) sa zahrieva pri teplote 50°C počas 6 hodín. Zmes sa filtruje a pevný podiel sa premyje etanolom, suší vo vákuovej sušiarni cez víkend a purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu, čím sa získa Al-[4-(4-amino-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,35 g, 0,78 mmol). Filtrát sa koncentruje a purifikuje zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu a preparatívnou HPLC, čím sa získa rovnaký produkt Al -[4-(4-amino-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,67 g, 1,51 mmol) vo forme bielej pevnej látky:

^!H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 13,58 (s, IH), 9,90 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,23 (s, IH), 8,05 (t, IH), 7,90 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,36 (s, IH), 7,24 (d, IH), 3,94 (s, 3H); MS: MH⁺ 447.

Príklad 386

Al-[4-(4-Amino-l-tetrahydro-2//-4-pyranyl-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl)2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid

381

Dietylazodikarboxylát (0,07 ml, 0,45 mmol) sa pridá do zmesi 7Vl-[4-(4amino-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl)-2-metoxy fenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,10 g, 0,22 mmol), trifenylfosfínu (0,12 g, 0,45 mmol) a tetrahydro-4/Z-pyrán-4-olu (0,04 g, 0,34 mmol) v tetrahydrofuráne (5 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa tetrahydro-4Z/-pyrán-4-ol (0,01 g, 0,11 mmol), trifenylfosfín (0,04 g, 0,15 mmol) a dietylazodikarboxylát (0,02 ml, 0,15 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 5 hodín. Rozpúšťadlá sa odparujú a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa Vl-[4-(4-amino-l-tetrahydro-2//-4-pyranyl-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)2-metoxyfenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,03 g, 0,06 mmol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,91 (dd, IH), 8,30 (d, IH), 8,25 (s, IH), 8,00 (t, IH), 7,89 (d, IH), 7,75 (d, IH), 7,34 (s, IH), 7,31 (d, IH), 6,90 (br, 2H), 4,95 (m, IH), 4,02 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,56 (t, 2H), 2,22 (m, 2H), 1,89 (m, 2H); MS: MH⁺ 531.

Príklad 387

7/l-{4-[4-Amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin3-yl]-2-metoxyfenyl)-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid

F

382

A. 4. (4-Amino-3-j ód-1//-pyrazolo [3,4-újpyrimidín-1-yl)-2-cyklopentén-l -ol

Zmes tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,04 g, 0,03 mmol), 3-jód-l//pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-4-amínu (0,30 g, 1,14 mmol) a dimetylsulfoxidu (3 ml) sa mieša pri izbovej teplote v tme počas 2 minút a ochladí sa na teplotu 0°C. Roztok 2,4u-dihydro-lu//-cyklopenta[á]oxirénu (0,14 g, 1,72 mmol) v tetrahydrofuráne (3 ml) sa pridá do zmesi pri teplote 0°C a mieša sa pri teplote 0°C počas 3 hodín. Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc a purifikuje preparatívnou HPLC, čím sa získa 4-(4-amino-3-jód-l//-pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-l-yl)-2-cyklopentén-l-ol (0,24 g, 0,70 mmol) vo forme bielej pevnej látky: RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 4,23 min. MS: MH 344.

B. jVl-{4-[4-Amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid

Zmes 4-(4-amino-3-j ód -1//-pyrazolo [3,4-t/]py rimidín-1 -y 1)-2cyklopentén-l-olu (0,12 g, 0,35 mmol), Nl-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,23 g, 0,53 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,02 g, 0,02 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,11 g, 0,88 mmol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (6 ml) a vody (3 ml) pri teplote 85°C počas 6 hodín pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa 7Vl-{4-[4-amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,18 g, 0,34 mmol) vo forme bielej pevnej látky:

‘H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,89 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,29 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 6,09 (d, 1H), 5,93 (d, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,31 (m, 1H), 4,74 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 2,84 (m, 1H), 2,02 (m, 1H); RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil 08, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 8,50 min. MS: MH⁺ 529.

383

Príklad 388

Nl-{4-[4-Amino-l-(3-hydroxycyklopentyl)-177-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]2-metoxyfenyl }-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamid

OH

Zmes Nl-{4-[4-amino-l-(4-hydroxy-2-cyklopentenyl)-177-pyrazolo[3,4í7]pyrimi-din-3-yl]-2-metoxyfenyl}-2-fluór-4-trifluórmetylbenzamidu (0,10 g, 0,19 mmol) a 10% paládia na aktívnom uhlí (0,03 g) v etanole (10 ml) sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou vodíka cez noc. Zmes sa filtruje a filtrát sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa Nl-{4-[4-amino-l-(3hy droxycyklopenty 1)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl}-2fluór-4-trifluórmetylbenzamid (0,07 g, 0,13 mmol) vo forme bielej pevnej látky: ^JH NMR (DMSO-dó, 400 ΜΗζ)δ. 9,91 (dd, 1H), 8,31 (d, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,00 (t, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 6,90 (br, 2H), 5,17 (m, 1H), 4,97 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 1,79-2,41 (m, 6H); MS: MH⁺ 531.

Príklad 389

4-(4-Amino-3- {4-[(l 7/-2-indolylkarbonyl)amino]-3-metoxyfenyl} -177pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-l -yl)hexahydropyridínium-acetát

384

Ο

Oxalylchlorid (0,06 ml, 0,60 mmol) sa pridá do roztoku indol-2karboxylovej kyseliny (0,88 g, 0,546 mmol) v dichlórmetáne (5 ml) a tetrahydrofuráne (5 ml) pri teplote 0°C. Potom sa pridá N,A-dimetylformamid (3 kvapky cez 0,1 ml striekačku) a zmes sa mieša pri teplote 0°C počas 10 minút a pri izbovej teplote počas 20 minút. Rozpúšťadlá a prebytok činidiel sa odparuje za zníženého tlaku. Zvyšok sa prevedie do dichlórmetánu (2 ml) a výsledný roztok (1,25 ml) sa pridá do roztoku ŕerc-b-b4-[4-amino-3-(4amino-3-metoxyfenyl)-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-l -yl]-l -piper idínkarboxylátu (0,12 g, 0,27 mmol) a pyridínu (0,4 ml) v dichlórmetáne (1 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 2 hodín. Pridá sa trifluóroctová kyselina (1 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 2 hodín. Rozpúšťadlá sa odparujú za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa 4-(4-amino-3-{4-[(l//-2-indolylkarbonyl)amino]-3-metoxyfenyl}-l/ípyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)hexahydropyridínium-acetát (0,07 g, 0,14 mmol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,85 (br, 1H), 9,45 (s, 1H), 8,24 (d, 1H), 8,12 (d, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,24-(t, 1H), 7,09 (t, 1H), 4,77 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,11 (m, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,84 (m, 2H); MS: MH⁺ 483.

Príklady 390-410

Na prípravu zlúčenín podľa príkladov 390-410 sa použije rovnaký postup ako na prípravu 4-(4-amino-3-{4-[(l//'-2-indolylkarbonyl)amino]-3385 metoxyfenyl} -1 V-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-1-y l)hexahydropyridínium-acetátu (príklad 881).

Štruktúra	MS: MH+	HPLC Rt (min) (Hypersil C18, 5pm, 100Á, 250x4,6mm;25%-l 00% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min)	Príklad č.
F fo4-f J; ä λ o	567	6,97	390
.'.v5 op o i? A0	486	5,89	391
J á? A Q	497	6,28	392
x Ú Λ. V? 0 Q	513	5,61	393

386

β 0 Σ' 0 N VH Ο Α- 0	497	6,39	394
Μ 0	512	6,22	395
Λ Ν n yJ ο Ν τ4ι jx - L AW N ° b	483	5,73	396
\ _ °Ό CX oTO0 Ν γ*** g TO Λ°0	513	7,78	397
J? J n-4 Ó NtfV Λ - W ^0 0	501	8,23	398

387

α ξ! ϊ ν ° W -Α,- 0	517	8,7	399
CI 8 f Nv Λ- Ο	517	8,73	400
ό ο F*ο < Λ0	513	7,83	401
J Ä? ’ Λ- Q	511	9,07	402
7 ή Ν η '< Λ· 0	497	8,37	403

388

	528	7,9	404
N V	t to or o 6 A- b
	fto	559	9,5	405
N nS S?	\=7 M 0 P 0 ΪΊ o L„ A- 0
	fi°	589	7,45	406
	, to $v
í	£ Λα
	0
	o..y 13	561	4,52	407
N N	yN Ό ď Λ-
	Q
	ď	483	6,35	408
ζΟ- 2-
ť	VSj k
	Q

389

XS»	483	7,05	409
m ó? X- Hŕ	589	6,63	410

Príklad 411

4-[4-Amino-3-(4-{[(1 -etyl-l//-2-indolyl)karbonyl]amino}-3-metoxy fény 1)-1//pyrazolo [3,4-tíf]pyrimidín-l-yl]hexahydropyridínium-acetát

Hydrid sodný, 60% suspenzia v minerálnom oleji (0,006 g, 0,15 mmol), sa pridá do roztoku N2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy-fenyl}-l//-2-indolkarboxamidu (0,08 g, 0,14 mmol) v N,N-dimetylformamide (1,0 ml) pri teplote 0°C. Zmes sa mieša pri teplote 0°C počas 10 minút a pri izbovej teplote počas 20 minút. Pridá sa roztok etyljodidu (0,02 g, 0,14 mmol) v N,N-dimetylformamide (0,5 ml) a zmes

390 sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa etyljodid (0,01 g, 0,07 mmol) a zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa trifluóroctová kyselina (3 ml) a zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 24 hodín. Rozpúšťadlá a prebytok činidiel sa odparuje za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa 4-[4-amino-3-(4-{[(l-etyl-l//-2-indolyl)karbonyl]amino}-3metoxyfeny 1)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-l-y ljhexahydropyridínium-acetát (0,05 g, 0,09 mmol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 9,43 (s, IH), 8,27 (s, IH), 8,14 (d, IH), 7,71 (d, IH), 7,61 (d, IH), 7,34 (s, 2H), 7,31 (t, 2H), 7,15 (t, IH), 4,96 (m, IH), 4,62 (q, 2H), 3,96 (s, 3H), 3,00 (m, 2H), 2,28 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,33 (t, 3H); MS: MH⁺ 511.

Príklady 412 až 416

Na prípravu zlúčenín podľa príkladov 412-416 sa použije rovnaký postup ako na prípravu 4-[4-amino-3-(4-{ [(1-etyl-l//-2-indolyl)karbonyl]amino}-3metoxy fenyl)-1 //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-1 -y ljhexahydropyridínium-acetátu (príklad 903).

Štruktúra	MS: MH+	HPLC Rt (min) (Hypersil C18, 5pm, 100Á, 250x4,6mm;25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min)	Príklad č.
A A? x b	523	9,12	412

391

or* 0 ó? A 0	540	6,03	413
o z ύ-ζ ^=o o 1	555	5,30	414
«Α $vX° Ar A °	627	6,55	415
cu? M f X? A w A°' Q	568	7,33	416

Príklad 417 acetát V2-4-[4-Amino-l-(4-piperidyl)-177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl-5-hydroxy-177-2-indolkarboxamidu

392

Zmes Α2-4-[4-amino-l-(4-piperidy 1)-1 //-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidín~3-yl]2-metoxy-fenyl-5-(benzyloxy)-l//-2-indolkarboxamidu (0,08 g, 0,14 mmol), 10% paládia na aktívnom uhlí (0,03 g) a trifluóroctovej kyseliny (kvapka) v etanole (12 ml) a tetrahydrofuráne (12 ml) sa hydrogenuje pod atmosférou vodíka cez noc. Zmes sa filtruje a filtrát čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa acetát A2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-y 1]2-metoxyfenyl-5-hydroxy-l//-2-indolkarboxamidu (0,02 g, 0,03 mmol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (DMSO-dó 400 MHz) δ 11,55 (s, IH), 9,29 (s, IH), 8,88 (s, IH), 8,28 (s, IH), 8,18 (d, IH), 7,31 (m, 3H), 7,18 (s, IH), 6,94 (s,° IH), 6,78 (dd, IH), 5,06 (m, IH), 3,97 (s, 3H), 3,44 (m, 2H), 3,17 (m, 2H), 2,39 (m, 2H), 2,11 (m, 2H), 1,91 (s, 3H); MS: MH⁺ 499.

Príklad 418 acetát A2-4-[4-Amino-l -(4-piperidyl)- l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl-4-hydroxy-l//-2-indolkarboxamidu

393

Na prípravu acetátu 7V2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-4-hydroxy-l//-2-indolkarboxamidu sa použije rovnaký postup ako bol použitý na prípravu acetátu /V2-4-[4-amino-l-(4piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fény 1-5-hydroxy-1//-2indolkarboxamidu. RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-O,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 4,60 min. MS: MH⁺ 499.

Príklad 419 acetát /V2-4-[4-Amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2 metoxy fenyl-7-amino-l//-2-indolkarboxamidu

Do horúceho roztoku acetátu /V2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//· pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-7-nitro-l//-2-indolkarboxamidu

394 (0,04 g, 0,07 mmol) vo vode (2 ml) a etanole (2 ml) sa pridá ditioničitan sodný (0,07 g, 0,41 mmol). Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu, pridá sa jedna kvapka koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej a zmes sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa acetát V2-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lHpyrazolo[3,4-djpyrimi dín-3-y 1]-2-metoxyfeny 1-7-amino-1 H-2-indolkarboxamidu (0,004 g, 0,01 mmol) vo forme bielej pevnej látky: RP-HPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 μιη, 100Á, 250x4, 6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) Rt 6,60 min. MS: MH⁺ 498.

Príklad 420 acetát V3-4-[4-Amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl-l//-3-indolkarboxamidu

A. V3-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l//-3indolkarboxamid

Oxalylchlorid (0,07 ml, 0,79 mmol) sa pridá do roztoku indol-3karboxylovej kyseliny (0,12 g, 0,72 mmol) v dichlórmetáne (4 ml) a tetrahydrofuráne (3 ml) a pri teplote 0°C ďalej sa pridá V,/V-dimetylformamid (3 kvapky cez 0,1 ml striekačku) a zmes sa mieša pri teplote 0°C počas 10 minút a pri izbovej teplote počas 20 minút. Rozpúšťadlá a prebytok činidiel sa odparujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa prevedie do dichlórmetánu (2 ml) a výsledný roztok (1,5 ml) sa pridá do roztoku 2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl1,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilínu (0,09 g, 0,36 mmol) a pyridínu (1 ml) v

395 dichlórmetáne (2 ml). Zmes sa mieša pri izbovej teplote cez noc. Pridá sa roztok chloridu kyseliny v dichlórmetáne (0,3 ml) a zmes sa mieša cez noc. Pridá sa voda (kvapka) a prchavé zložky sa odparujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa vytrepe medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa separuje a extrahuje etylacetátom. Organické extrakty sa spoja a premyjú nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, sušia nad síranom horečnatým. Zmes sa filtruje a rozpúšťadlo z filtrátu sa odparuje, čím sa získa surový podiel, ktorý sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu zmesou n-heptán:etylacetát (2/1) ako mobilnou fázou, čím sa získa 7V3-[2-metoxy-4(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l//-3-indolkarboxamid (0,11 g, 0,28 mmol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (CDCb, 400 MHz) δ 8,65 (m, 3H), 8,13 (d, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,50 (m, 2H), 7,33 (m, 3H), 4,02 (s, 3H), 1,36 (s, 12H); MS: MH⁺ 393.

B. A3-4-[4-Amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy-fenyl-17/-3-indolkarboxamid-acetát

Zmes A3-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2yl)fenyl]-l//-3-indolkarboxamidu (0,11 g, 0,28 mmol), 3-jód-l-(4-piperidyl)l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-4-amín-hydrochloridu (0,10 g, 0,27 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládia (0,02 g, 0,02 mmol) a monohydrátu uhličitanu sodného (0,13 g, 1,07 mmol) sa zahrieva v zmesi dimetyléteru etylénglykolu (4 ml) a vody (2 ml) pri teplote 85°C cez noc pod atmosférou dusíka. Zmes sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu a rozpúšťadlá sa odstránia za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí preparatívnou HPLC, čím sa získa acetát A3-4-[4-amino1-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo [3,4-ó/jpy rimidín-3-yl]-2-metoxy fény 1-1//-3indolkarboxamidu (0,09 g, 0,16 mmol) vo forme bielej pevnej látky: *H NMR (DMSO-dó, 400 MHz) δ 11,83 (br, 1H), 8,92 (s, 1H), 8,31 (m, 3H), 8,14 (dd, 1H), 7,50 (dd, 1H), 7,31 (m, 2H), 7,20 (m, 2H), 4,82 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,16 (m, 2H), 2,73 (m, 2H), 2,15 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,88 (m, 2H); MS: MH⁺ 483.

396

Príklad 421 acetát H4-4-[4-Amino-l-(4-piperidy 1)-1 H-py razolo [3,4-d] pyrimidí n-3-y 1]-2metoxyfenyl-lH-4-indolkarboxamidu

O

Na prípravu acetátu H4-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lH-pyrazolo[3,4č/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-lH-4-indolkarboxamidu sa použije rovnaký postup ako bol použitý pre acetát H3-4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-lHpyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl-lH-3-índolkarboxamidu. RPHPLC (Hitachi HPLC, Hypersil C18, 5 pm, 100 Á, 250x4,6mm; 25%-100% acetonitril-0,05M octan amónny v priebehu 10 min, 1 ml/min) R_t 4,80 min. MS: MH⁺ 483.

Príklad 422

7ra«s-H2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lH-pyrazolo[3,4d] pyrimidí n-3-yl}-2-metoxy fény 1)-1 -metyl-ΙΗ-2-indolkarboxamid

A. l-metyl-lH-2-indolkarbonylchlorid

Suspenzia 1-metylindol-2-karboxylovej kyseliny (9,87 g, 56,4 mmol) v dichlórmetáne (150 ml) sa nechá reagovať s oxalylchloridom (8,58 g, 67,63 mmol), pridá sa DMF (0,2 ml), čím dôjde ku speneniu. Zmes sa mieša pri izbovej teplote počas štyroch hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, čím sa získa l-metyl-lH-2-indolkarbonylchlorid (10,69 g, 98%) vo forme svetložltej pevnej látky.

397 *H NMR (CDC13, 400 MHz) δ 7, 70 (d, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,44 (t, 1H), 7,35 (d, 1H), 7,18 (t, 1H), 3,98 (s, 3H).

B. H2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl]-lmetyl-1 Η-2-indolkarboxamid

Do roztoku obsahujúceho l-metyl-lH-2-indolkarbonylchlorid (5,44 g, 0,0281 mol) a 2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)anilín (7,00 g, 0,0281 mol) v bezvodom dichlórmetáne (150 ml) sa po kvapkách pri teplote 0°C pridá H-etyl-H.H-diizopropylamín (4,9 ml, 0,0309 mol) a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote pod atmosférou dusíka počas 18 hodín. Reakčná zmes sa koncentruje za zníženého tlaku a zvyšok sa vytrepe medzi vodu (150 ml) a etylacetát (150 ml). Organické fázy sa premyjú soľankou, sušia síranom horečnatým a koncentrujú za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím etylacetát/n-heptánu (1: 6)) ako mobilnej fázy, čím sa získa H2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl1.3.2- dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l-metyl-lH-2-indolkarboxamid (8,0 g, 0,0197 mol) vo forme bielej pevnej látky.

*H NMR (DMSO-dô, 400 MHz) δ 9,35 (s, 1H), 8,03 (d, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,33 (m, 3H), 7,29 (s, 1H), 7,14-(t, 1H), 4,02 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 1,31 (s, 12H). TLC (etylacetát/heptán 1:3) Rf 0,44.

C. 7’ran5^,-H2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-yl}-2-metoxy fény 1)-1 -mety Ι-ΙΗ-2-indolkarboxamid

Suspenzia /ra«5-3-jód-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lHpyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-4-amínu (0,100 g, 0,227 mmol) v dimetyléteri etylénglykolu (8 ml) sa nechá reagovať s H2-[2-metoxy-4-(4,4,5,5-tetrametyl1.3.2- dioxaborolan-2-yl)fenyl]-l -metyl-lH-2-indolkarboxamidom (0,097 g, 0,238 mmol), tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0,016 g, 0,014 mmol) a roztokom uhličitanu sodného (0,057 g, 0,538 mmol) vo vode (4 ml). Reakčná zmes sa mieša počas 21,5 hodín pri teplote 80°C. Precipitát sa filtruje a organická vrstva sa odparuje za zníženého tlaku. Pridá sa dichlórmetán (15 ml) a vrstvy sa rozdelia. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (200 ml).

398

Spojené organické vrstvy sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú a odparujú za zníženého tlaku. Surová látka sa čistí zrýchlenou chromatografiou na stĺpci silikagélu s použitím 10% metanolu v dichlórmetáne až 50% metanolu v dichlórmetáne krokovým gradientom na Sq 16x ISCO CombiFlash, čím sa získa 0,083 g (68%) ŕra«.s’-V2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)cyklohexyl]-lVpyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l -metyl-1 V-2-indolkarboxamid. ’H NMR (dó-DMSO) δ 9,4316 (s, IH), 8,2427 (s, IH), 8,1207-8,1003 (d, IH, J= 8,16 Hz), 7,717-37,6974 (d, IH, J = 7,96 Hz), 7,5979-7,5769 (d, IH, J = 8,4 Hz), 7,3507-7,2758 (m, 4H), 7,1695-7,1321 (t, IH), 4,6893-4,6324 (m, IH), 4,0400 (s, 3H), 3,9571 (s, 3H), 2,5 (m, 3H), 2,4055-2,3279 (m, 5H), 2,1606 (s, 3H), 2,1094-1,9367 (m, 6H), 1,52141,4624 (m, 2H); LCMS (Thermoquest AQA single-quad MS, Genesis 0 8 stĺpec, veľkosť častíc 3 pm, 33 x 4,6mm; 70% 50 mM amónium-acetát vo vode až 95% acetonitril v priebehu 6 min, 0,8 až 0,5 ml/min) Rt 2,12 min (100%), M 594,3.

Príklad 423

7V2-{4-[4-amino-1-(2-amino-4-pyridyl)-1 V-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín-3-y 1]-2metoxyfenyl-} 1 -metyl-1 V-2-indolkarboxamid

Príklad 424

V2-(4-{4-amino-l-[2-(metylamino)-4-pyridyl]-l V-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-3yl}-2-metoxyfenyl) -1 -metyl-1 V-2-indolkarboxamid

Príklad 425

V2-(4-{4-amino-l-[2-(dimetylamino)-4-pyridyl]-l V-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín3-yl}-2-metoxyfenyl) -1 -metyl -1 V-2-indolkarboxamid

Príklad 426

V2-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)-4-pyridyl]-lV-pyrazolo[3,4d]pyrimidín-3-y l}-2-metoxy fény 1)-1 V-2-indolkarboxamid

399

Príklad 427

A2-(4-{4-amino-l-[2-(4-metylpiperazino)-4-pyridyl]-l//-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény 1)-1//-2-indolkarboxamid

Príklad 428

N2-{4-[4-amino- l-(2-morfolino-4-pyridyl)-l //-pyrazolo [3,4-</]pyrimidín-3-yl]

2- metoxyfenyl} -1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid

Príklad 429

A2-[4-(4-amino-l-{2-[(2-hydroxyetyl)amino]-4-pyridyl}-l/7-pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l-metyl-1//-2-indolkarboxamid

Príklad 430

A2-(4-{4-amino- l-[2-(aminomety l)-4-pyridyl]-l//-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3 yl}-2-metoxyfenyl)-1-metyl-1//-2-indolkarboxamid

Príklad 431

A2-(4-{4-amino- l-[2-(aminokarbonyl)-4-pyridyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fény 1)-1 -mety 1-1//-2-indolkarboxamid

Príklad 432

3- morfolino-l-(2-morfolino-4-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-4-amín

Príklad 433

A2-{4-[4-amino-l-(4-amino-2-pyridyl)-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l -metyl-1//-2-indolkarboxamid

Príklad 434

A2-{4-[4-amino-1 -(2-oxo-l,2-dihydro-4-pyridinyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-y 1]-2-metoxy fény 1}-1 -metyl-1 //-2-indolkarboxamid

400

Príklad 435

N2- {4-[4-amino-1 -(4-morfo lino-2-pyr idy 1)-177-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-y 1]2-metoxy fenyl} -1 -metyl- 177-2-indolkarboxamid

Príklad 436

N2-(4-{4-amino-l-[4-(4-metylpiperazino)-2-pyridyl]-177-pyrazolo[3,4í7]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l-mety 1-177-2-indolkarboxamid

Príklad 437

N2-[4-(4-amino-l-{4-[(2-hydroxyetyl)amino]-2-pyridyl} -177-pyrazolo [3,4t/jpyrimidín-3-y l)-2-metoxy fény 1] -1 -mety 1-177-2-indolkarboxamid

Príklad 438

N2-{4-[4-amino-l -(6-amino-3-pyridyl)-177-pyrazolo [3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l -metyl-177-2-indolkarboxamid

Príklad 439

N2-{4-[4-amino-l-(6-morfolino-3-pyridyl)-177-pyrazolo [3,4-í7]py rimidín-3-yl]2-metoxyfenyl}-l -metyl- 177-2-indolkarboxamid

Príklad 440

N2-(4-{4-amino-l-[6-(4-metyípiperazino)-3-pyridyl]-177-pyrazolo[3,4<7]pyrimidín-3-y l}-2-metoxy fény 1)-1-metyl-177-2-indolkarboxamid

Príklad 441

Cz\y-4-[4-(4-amino-3-{3-fluór-4-[(5-metyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}177-pyrazolo [3,4-í7]pyrimidín-l-yljcyklohexyl]-2-piperazinón

Príklad 442

7’rflH5-4-[4-(4-amino-3-{3-fluór-4-[(5-metyl-l ,3-benzoxazol-2-y ljamino] fenyl} 177-pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín-l -y ljcyklohexyl]-2-piperazinón

401

Príklad 443

Cz's-4-[4-(4-amino-3-{4-[(5-metyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l Hpyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-l-yl)cyklohexyl]-2-piperazinón

Príklad 444 rrans-4-[4-(4-amino-3-{4-[(5-metyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lApyrazolo [3,4-z/]pyrimidín-1-y l)cyklohexyl]-2-piperazinón

Príklad 445

R-A2-(4-{4-amino-l - [1 -(1 -metoxy-l-metyletyl)-3-piperidyl]-l A-pyrazolo[3,4 z/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 446

S-A2-(4-{4-amino-l - [1 -(1 -metoxy-1-metyletyl)-3-piperidyl]-lA-pyrazolo [3,4 d]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 447

R/S-A2-(4-{4-amino-l-[l-(l-metoxy-l-metyletyl)-3-piperidyl]-lApyrazolo[3,4-ď]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 448

R-A2-(4-{4-amino-l-[l-(3-metoxypropyl)-3-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amin

Príklad 449

S-A2-(4-{4-amino-l-[l-(3-metoxypropyl)-3-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 450

R/S-A2-(4-{4-amino-l-[l-(3-metoxypropyl)-3-piperidyl]-lA-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

402

Príklad 45 1

R-jV2-(4-{4-amino- 1 - [l-(2-hydroxyetyl)-3-piperidyl]-l/7-pyrazolo[3,4t/]pyrimidín-3 -y l}fenyl)-5,7-dimetyl-1,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 452

S-7/2-(4-{4-amino-l-[l-(2-hydroxyetyl)-3-piperidyl]-177-pyrazolo[3,4c/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 453

R/S-7V2-(4-{4-amino-l-[l-(2-hydroxyetyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 454

R-7/2-(4-{4-amino-l - [1 -(2-{ l,3-dihydroxypropyl})-3-piperidyl]-l/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl} fény l)-5,7-dimety 1-1,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 455

S-tV2-(4-{4-amino-l -[1 -(2-{ 1,3-dihydroxypropyl})-3-piperidyl]-177pyrazolo[3,4-rf]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 456

R/S-7V2-(4-{4-amino-l - [1 -(2-{ 1,3-dihydroxypropyl})-3-piperidyl]-l/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 457

7?-2-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-\H pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)piperidino]acetonitril

Príklad 458

S-2-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-177· pyrazolo [3,4-<7]pyrimidín- 1-y l)piperidino] acetonitril

403

Príklad 459

7?/5'-2-[3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-lHpyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l-yl)piperidino] acetonitril

Príklad 460

R-A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-(metylsulfanyl)etyl)-3-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-y 1} fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 461

S-A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-(metylsulfanyl)etyl)-3-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl} fény l)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 462

R/S-A2-(4-{4-amino-l-[l-(2-(metylsulfanyl)etyl)-3-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-3-y 1} fény l)-5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 463

R-A-metoxy-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}lH-pyrazolo[3,4-c/]pyrimidín-l -yl)-l -piperidínkarboximidamid

Príklad 464

S-A-metoxy-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl }lH-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-l -y 1)-1 -piperidínkarboximidamid

Príklad 465

R/S-A-metoxy-3-(4-amino-3-{4-[(5,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2yl)amino]fenyl} -1 H-pyrazolo[3,4-£/]pyrimidín-1 -yl)-1-piperidínkarboximidamid

Príklad 466

R-A2-(4-4-amino-l-[l-(l-2,2,2-trifluóretyl)-3-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-3-y lfeny l)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

404

Príklad 467

S-N2-(4-4-amino-l-[l-(l-2,2,2-trifluóretyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-ylfenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 960

R/S-N2-(4-4-amino-l-[l-(l-2,2,2-trifluóretyl)-3-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4č/]pyrimidín-3-ylfenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 468

N2-{ 4-[4-amino-l-(l//-4-imidazolylmetyl)-l//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidin-3yl]fenyl}-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 469

N2-(4-{4-amino-l-[l//-4-(2-metyl-imidazolyl)metyl]-l//-pyrazolo[3,4c/]pyrimidín-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 470

N2-(4-{4-amino-l-[l//-4-(2-amino-imidazolyl)metyl]-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidin-3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 471

N2-4-[4-amino-l-( l//-4-imidazolyl)-l //-pyrazolo [3,4-z/]pyrimidín-3-y 1] fény 15,7-dimetyl-l,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 472

N2-(4-{ 4-amino-1-[1 //-4-(2-amino-imidazo ly 1)]-1//-pyrazolo [3,4-ď]pyrimidín 3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

Príklad 473

N2-(4-{4-amino-l-[l//-4-(2-amino-imidazolyl)]-l//-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin 3-yl}fenyl)-5,7-dimetyl-l ,3-benzoxazol-2-amín

405

Príklad 474 l-(4-{4-amino-3-[4-(l,3-benzoxazol-2-ylamino)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4ŕ/]pyrimidín-l-yl}piperidino)-2-metyl-2-(metylamino)-l-propanón

Príklad 475 l-[4-(4-amino-3-{4-[(5-metyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l/7pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-l-yl)piperidino]-2-metyl-2-(metylamino)-l-propanón

Príklad 476 l-[4-(4-amino-3-{4-[(5-etyl-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l//pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l -yl)piperidino]-2-metyl-2-(metylamino)-l -propanón

Príklad 477 l-[4-(4-amino-3-{4-[(5-chlór-l,3-benzoxazol-2-yl)amino]fenyl}-l/7pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-l-yl)piperidino]-2-metyl-2-(metylamino)-l-propanón

Príklad 478 {4-[4-amino-l-(4-piperidy l)-l//-pyrazolo [3,4-ť/]pyrimidín-3-yl] fenyl} (1/7-4pyrazolyl)metanón

Príklad 479

1-(4-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yljbenzoyl}1 H-1 -pyrazolyl)-1 -etanón

Príklad 480 {4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l/7-pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]fenyl}(l-metyl177-4-pyrazolyl)metanón

Príklad 481 {4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]fenyl}(l benzyl-l/7-4-pyrazolyl)metanón

406

Príklad 482 {4-[4-amino -1 -(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]fenyl}(l benzoyl- l//-4-pyrazolyl)metanón

Príklad 483 {4-[4-amino-1-(4-piperidy 1)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-y 1] fenyl} (5izoxazolyl)metanón

Príklad 484 { 4-[4-amino-1-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]fenyl} (3-metyl 5-izoxazolyl)metanón

Príklad 485 {4-[4-amino-1-(4-piperidy 1)-1//-pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl]fenyl} (3-fenyl 5-izoxazolyl)metanón

Príklad 486

V5-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl] fenyl}-3fenyl-5-izoxazolamín

Príklad 487

V5-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4-t/]pyrimidín-3-yl]fenyl}-3(trifluórmetyl)-5-izoxazolamín

407

Príklad 488

Príklad 489

408

Ďalšie príklady zahrnujú nasledujúce zlúčeniny:

Štruktúra	Názov
	N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-IHpyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l-metyl-l/ípyrolo[2,3-ú]pyridín-2-karboxamid
	N2-{4-[4-amino-l-(4-piperidyl)-l//- pyrazolo[3,4-e/]pyrimidín-3-yl]-2- metoxyfenyl}-l-metyl-lH- pyrolo[2,3-c]pyridín-2-karboxamid
	N2-{4-[4-amino-l -(4-piperidy 1)-1//pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2metoxy fény 1} -1 -mety 1-1Hpyrolo[3,2-c]pyridín-2-karboxamid
	N2-{4-[4-amino-1 -(4-piperidyl)-\Hpyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfeny 1} -1 -metyl-1//pyrolo [3,2-Z>]pyridín-2-karboxamid
	V2-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl} -1 metyl-l//-pyrolo [2,3-ú]pyridín-2karboxamid

409

	A2-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4piperidyl)-1 //-pyrazolo [3,4ď]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-lmetyl-l//-pyrolo[2,3-c]pyridín-2karboxamid
	A2-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4J]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l metyl-l//-pyrolo[3,2-c]pyridín-2karboxamid
	A2-{4-[4-amino-l-(l-metyl-4piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l metyl-l//-pyrolo[3,2-&]pyridín-2karboxamid
ηρ’	A2-{4-[4-amino-l-(l-izopropyl-4piperidy 1)-1//-pyrazolo [3,4d]pyrimidín-3-yl]-2-metoxy fenyl}-1 - metyl-1/Z-pyrolo [2,3-ô]pyridín-2karboxamid
Τ' /	A2-{4-[4-amino-l-(l-izopropyl-4piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l - metyl-l//-pyrolo[2,3-c]pyridín-2karboxamid

410

Γ/V «ŕ*·	7V2-{4-[4-amino-l-(l-izopropyl-4piperidyl)-l//-pyrazolo[3,4c/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl)-lmety 1-1//-pyrolo [3,2-c]pyridín-2karboxamid
O	7/2-{4-[4-amino-l-(l-izopropyl-4-
	piperidyl)-1//-pyrazolo [3,4-
Cn	</]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-l-
0	metyl-l//-pyrolo[3,2-ô]pyridín-2-
	karboxamid
n.	JV2-(4-{4-amino-l-[l-(1//-4-
	imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-l//- pyrazolo[3,4-<7]pyrimidín-3-yl}-2-
p //	metoxyfenyl)-1-metyl-1//-
	pyrolo [2,3-Z?]pyridín-2-karboxamid
a	V2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4- imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-l//-
Cn	pyrazolo[3,4-í/]pyrimidin-3-yl}-2-
Xs*/	metoxyfenyl)-1 -metyl-\H-
3’	pyrolo[2,3-c]pyridín-2-karboxamid
0	7V2-(4-{4-amino-l-[l-(1//-4-
W	imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-l//- pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2-
Γ r	metoxyfenyl)-l -metyl-1//-
3	pyrolo[3,2-c]pyridín-2-karboxamid

411

CrV” w w	V2-(4-{4-amino-l-fl-(177-4- imidazolylmetyl)-4-piperidyl]-177- pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-l-metyl-177- pyrolo[3,2-Ď]pyridín-2-karboxamid
Cp Wi	W2-[4-(4-amino-l-{ 1-[(2-metyl-1/7- 4-imidazolyl)metyl]-4-piperidyl}- 177-pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl)- 2-metoxyfenyl]-l-metyl-177- pyrolo[2,3-ó]pyridín-2-karboxamid
CrV' y y·*	N2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-metyl-1H-4imidazolyl)metyl]-4-piperidyl}-177pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-y l)-2metoxy fenyl]-1 -metyl-1Hpyrolo[2,3-c]pyridín-2-karboxamid
CrV yt W	N2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-metyl-177-4imidazolyl)metyl]-4-piperidyl}-177pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl)-2metoxyfenyl]-l-metyl-177pyrolo[3,2-c]pyridín-2-karboxamid
f d	772-[4-(4-amino-l-{ l-[(2-metyl-177- 4-imidazolyl)metyl]-4-piperidyll-177- pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl)-2- metoxyfenyl]-l-metyl-177- pyrolo[3,2-6]pyridín-2-karboxamid

412

Γ r	V2-[4-(4-amino-l-{l-[(3-metyl-l//-4- pyrazolyl)metyl]-4-piperidyl}-l//- pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl)-2- metoxyfenyl]-l-metyl-l//- pyrolo[2,3-b]pyridín-2-karboxamid
	V2-[4-(4-amino-l-{l-[(3-metyl-1//-4pyrazolyl)metyl]-4-piperidyl}-l//-
Γζζ	pyrazolo [3,4-d]pyrimidín-3-y l)-2-
m	metoxyfenyl]-1 -metyl-1//-
ú	pyrolo[2,3-c]pyridín-2-karboxamid
	V2-[4-(4-amino-l-{ l-[(3-metyl-l//4-pyrazolyl)metyl]-4-piperidyl}-l//pyrazolo[3,4-d]pyrimidín-3-yl)-2-
P r*	metoxyfenyl] -1 -metyl-\H-
v	pyrolo[3,2-c]pyridín-2-karboxamid
	V2-[4-(4-amino- l-{l-[(3-metyl-l//4-pyrazolyl)metyl]-4-piperidyl}-l/Z-
M	pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl)-2-
P /	metoxyfenyl] -1 -metyl-IH-
\r	pyrolo[3,2-Z?]pyridín-2-karboxamid
	V2-(4-{ 4-amino-1 - [l-(2metoxyetyl)-4-piperidyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2-
yv Γ1	metoxyfenyl)-1 -metyl-X H-
1	pyrolo[2,3-ó]pyridín-2-karboxamid

413

	H2-(4-{4-amino-l-[l-(2metoxyetyl)-4-piperidyl]- 1Hpyrazolo[3,4-č/]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyl)-l-metyl-lHpyrolo[2,3-c]pyridín-2-karboxamid
	H2-(4-{4-amino-l-[l-(2- metoxyetyl)-4-piperidyl]-lH- pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-l-metyl-lH- pyrolo[3,2-c]pyridín-2-karboxamid
Τ' / *	N2-(4-{4-amino-l-[l-(2metoxyetyl)-4-piperidyl]-lHpyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}-2metoxy fenyl)-1 -metyl-1Hpyrolo[3,2-Z?]pyridín-2-karboxamid
c	H2-(4-{4-amino-l-[l-(3-furylmetyl)4-piperidyl]-1 H-pyrazolo [3,4J]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fenyl)-1 metyl-lH-pyrolo [2,3-Ď]pyridín-2karboxamid
	H2-(4-{4-amino-1-[1 -(3-fúry lmetyl)4-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fenyl)-1 metyl-lH-pyrolo[2,3-c]pyridín-2karboxamid

414

	A2-(4-{4-amino-l-[l-(3-furylmetyl)4-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-l metyl-lH-pyrolo[3,2-c]pyridín-2karboxamid
	A2-(4-{4-amino-l-[l-(3-furylmetyl)4-piperidyl]-lH-pyrazolo[3,4č/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-lmetyl-lH-pyrolo[3,2-ô]pyridín-2karboxamid
(JU \s*/	A2-{4-[4-amino-l-(l-tetrahydro-2H- 4-pyranyl-4-piperidyl)-lH- pyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl]-2- metoxyfenyl}-l-metyl-lH- pyrolo[2,3-6]pyridín-2-karboxamid
T r*	A2-{4-[4-amino-l-(l-tetrahydro-2H- 4-pyranyl-4-piperidyl)-lH- pyrazoIo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2- metoxyfenyl}-l-metyl-lH- pyrolo[2,3-c]pyridín-2-karboxamid
f	A2-{4-[4-amino-l-(l-tetrahydro-2H- 4-pyranyl-4-piperidyl)-lH- pyrazoIo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2- metoxyfenyl}-l-metyl-lH- pyrolo[3,2-c]pyridín-2-karboxamid

415

1	/72- {4-[4-amino-1 -(1 -tetrahydro-2/74-pyrany 1-4-piperidyl)-177pyrazolo [3,4-í/]pyrimidín-3-yl]-2metoxyfenyl}-l-metyl-177pyrolo[3,2-6]pyridín-2-karboxamid
CrV P / v**	772-{4-[4-amino-l-(l-izopropyl-4piperidyl)-177-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-lmetyl-177-2-indolkarboxamid
	772-{4-[4-amino-1-(1-mety 1-4piperidy 1)-177-pyrazolo [3,4ť/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-lmetyl-177-2-indolkarboxamid
m? P r*	772-(4-{4-amino-l-[l-(177-2- pyrolylmetyl)-4-piperidyl]-177- pyrazolo[3,4-í7]pyrimidín-3-yl}-2- metoxy fenyl)-1 -metyl-177-2indolkarboxamid
	772-(4-{4-amino-l-[l-(2,2difluórety l)-4-piperidyl]-l 77pyrazolo [3,4-í7]pyrimidín-3-y 1}-2metoxy fenyl)-1 -metyl-177-2indolkarboxamid

416

J* rA** 0	jV2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4imidazolylmetyl)tetrahydro-1//-3pyrolyl] -1 //-pyrazolo [3,4t/]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1- metyl-1//-2-indolkarboxamid
y*' Hŕ	V2-[4-(4-amino-l-{l-[(2-metyl-l//4-imidazolyl)metyl]tetrahydro-l//-3pyrolyl}-l//-pyrazolo[3,4í/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-lmetyl-1//-2-indolkarboxamid
	/V2-[4-(4-amino-l-{l-[(3-metyl-l//- 4-pyrazolyl)metyl]tetrahydro-l//-3- pyrolyl}-l//-pyrazolo[3,4- ŕ/]pyrimidín-3-yl)-2-metoxyfenyl]-l- metyl-l//-2-indo!karboxamid
	7/2-(4-{4-amino-l-[l-(l//-4imidazolyl)-4-piperidyl]-l//pyrazolo[3,4-</]pyrimidín-3-yl}-2metoxyfenyl)-l-metyl-1//-2indolkarboxamid
m? *Γ /*	7/2-(4-{4-amino-l-[l-(l,3-oxazol-4yl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4</]pyrimidín-3-yl}-2-metoxyfenyl)-1 metyl-l//-2-indolkarboxamiď

417

Τ' r*	A2-(4-{4-amino-l-[l-(l,3-tiazol-4yl)-4-piperidyl]-lÄ-pyrazolo[3,4ď]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fenyl)-1metyl-l//-2-indolkarboxamid
	A2-(4-{4-amino-l-[l-(l/7-2- imidazolyl)-4-piperidyl]-l/7- pyrazolo[3,4-í/]pyrimidín-3-yl}-2- metoxyfenyl)-l-metyl-l#-2- indolkarboxamid
	A2-(4-{4-amino-1-[1-(1,3-oxazol-2yl)-4-piperidyl]-l//-pyrazolo[3,4d]pyrimidín-3-yl} -2-metoxyfenyl)-l metyl-l//-2-indolkarboxamid
	A2-(4-{4-amino-l-[l-(l,3-tiazol-2yl)-4-piperidyl]-l#-pyrazolo[3,4d]pyrimidín-3-y 1}-2-metoxy fenyl)-1metyl-l//-2-indolkarboxamid
•H	A2-(4-{4-amino-l-(2-hydroxy-3-(4metylpiperazino)propyl]-l//pyrazolo[3,4-J]pyrimidín-3-yl}-2metoxy fenyl)-1-metyl-1 ŕ/-2indolkarboxamid

418

frV jn W	V2-{4-[4-amino-l-(2-hydroxy-3piperidinopropyl)-! V-pyrazolo [3,4t/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-lmetyl-1 V-2-indolkarboxamid
Γ r	V2-{4-[4-amino-l-(2-hydroxy-3morfolinopropyl)-l V-pyrazolo [3,4í/]pyrimidín-3-yl]-2-metoxyfenyl}-lmetyl-1 V-2-indolkarboxamid
	V2-(4-{4-amino-l -[2-hydroxy-3(lV-l-imidazolyl)propyl]-lVpyrazolo[3,4-ŕ/]pyrimidín-3-yl}-2metoxy fenyl)-1 -metyl-1V-2indolkarboxamid

γγ

Claims (44)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) jej racemické-diastereomérne zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:

   ^:σ,)_β

   G je kde Z¹⁰⁰ je alebo skupina prípadne substituovaná substituentom Ri vybraná zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, cykloalkylu, pyrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu a ftalazinylu, imidazo[l,2-a]pyrimidinylu, ΪΗimidazo[l,2-a]imidazolylu, imidazo[2,l-Z>][l,3]tiazolylu, nafty lu, tetrahydronaftylu, benzotienylu, furanylu, tienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu, benzotiazolylu, > 9

   N , tiazolylu, benzofuranylu, 2,3-dihydrobenzofuranylu,

   420 indolylu, izoxazolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrazolylu, pyrolylu, pyrolopyridinylu, //-pyridinónu, oxazolylu, izotiazolylu, oxadiazolylu, tiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, imidazo[l,2-a]pyridinylu, benzoizotiazolylu, 1,1dioxybenzoizotiazolylu, pyrido-oxazolylu, pyrido-tiazolylu, pyrimidooxazolylu, pyrimido-tiazolylu a benzimidazolylu,

   Z¹¹⁰ je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-Cô), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

   Z¹¹¹ je kovalentná väzba, prípadne substituovaný Ci-Có alebo prípadne substituovaný -(CH₂)n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

   každý zo substituentov R_a a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)-alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamido skupiny, tetrazolylu, trifluórmetylkarbo nyl aminoskupiny, trifluórmetylsulfónamidoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkenylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroarylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej arylalkoxyskupiny, substituovanej alebo

   421 nesubstituovanej alkyl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S-, substituovanej alebo nesubstituovanej aryl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného nesubstituovaného nesubstituovaného substituovaného substituovaného substituovaného alebo alebo alebo alebo nesubstituovaného arylalkylu, nesubstituovaného heteroarylalkylu, cykloalkylalkylu, alkinylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných alebo ne substituovaný ch amidoskupín, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryltioskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aryltioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)₂, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, ,200 r 1 05

   200

   Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z^z’^JU, -Z^J3-N(R)-C(O)-N(R)-Z^2UU, Rc a CH₂OR_c;

   kde substituent R_c pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NRaR_e, -W-(CH₂)_t-NRdR_e, -W-(CH₂)_t-Oalkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl alebo -W-(CH₂)_t-OH;

   Z¹⁰⁵ pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Cj-Có);

   Z²⁰⁰ pri každom výskyte je nezávisle substituované alebo nesubstituované (Ci-Ce), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cô)fenyl;

   substituenty Rd a R_e pri každom výskyte sú nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO₂-alkyl; alebo substituenty Ra, R_e a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, vytvárajú 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh;

   t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

   W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)₂ alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;

   422 substituent R3 pri každom výskyte je, nezávisle, atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

   A je -(Cj-Ce)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-; CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-; -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH-CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)C(O)-(CH₂)„-N(R)-, -N(R)C(O)O-;

   -N(R)-(CH₂)_n+,-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+1-C(O)-, -O-(CR₂)_n+1-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)(CH₂)_n-O-,

   -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-;

   -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-; -N(R)P(O)(OR_b)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O- alebo -N(C(O)R)P(OR_b)-;

   substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

   substituent R_b pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

   p je 1 alebo 2; alebo v skupine obsahujúcej fosfor vytvárajú spoločne dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a R_b 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh; alebo

   423

   A je NRSO2 a substituenty R, R_a a atóm dusíka spoločne vytvárajú substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo

   Z¹¹⁰-A-Z¹¹¹ dohromady vytvárajú kovalentnú väzbu; a substituent R₂ je a) atóm vodíka; b) substituovaný alebo nesubstituovaný trityl; c) substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl; d) azaheteroaryl substituovaný substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom; e) azacykloalkyl, ktorý je substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo substituovaného alebo nesubstituovaného -(Ci-Cój-alkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného -Ci-Ce-alkylOR, substituovanej alebo nesubstituovanej -C(O)-Ci-C6-alkyl-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej Ci-C6-alkyl-N(R)₂, substituovaného alebo nesubstituovaného -Ci-C6-alkyl-cykloalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného tetrahydrotienylu a substituovaného alebo nesubstituovaného tetrahydrotiopyranylu; alebo f) skupina všeobecného vzorca kde Ei je piperidinyl, piperazinyl, imidazolyl, morfolinyl, pyrolidinyl, aminoskupina, amidoskupina alebo tetrahydrotiazolyl, a kde E je prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými z -Co-Cg-alkyl-OR, -Ci-Cg-alkyl-C(O)OR, -Ci-Có-alkyl-heteroarylu, -CiCe-alkyl-heterocykloalkylu a -Ci-Cg-alkyl-N(R)₂.

   a je 1 a symboly Di, Gj, J), Li a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Di, Gi, Ji, Li a Mi sú CR_a; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny

   424 pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam;

   b je 1 a symboly D₂, G₂, J2, L₂ a M₂ sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú CR_a; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

   s podmienkou, že pokiaľ Z^11O-A-Z^1U sú dohromady kovalentná väzba, potom Z¹⁰⁰ nie je alkyl; a s podmienkou, že pokiaľ Z¹¹⁰-A-Zⁿⁱ sú dohromady Ci-Cô alkyl, potom Z¹⁰⁰ nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl.
2. 2. Zlúčenina podľa nároku 1, v ktorej substituent R₂ je skupina reprezentovaná nasledujúcim všeobecným vzorcom:

   kde:

   Ei je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z -amino-Ci-C₆-alkylmorfolino skúp iny, -piperidino-Ci-Có-alkyl-OR, -imidazolyl-Ci-CôalkylC(O)OR, -piperazino-Ci-Cô-alkyl-OR, -amino-Ci-Cô-alkyl-OR, -pyrolidino-OR, -amino-Ci-C6-alkyl-imidazoloskupiny, -amino-Ci-Côalkyl-N(R)₂, -amido-Ci-C6-alkyl-N(R)₂, tetrahydrotiazolylu, N,N-di(hydroxy-Ci-Cé-alkyljamino- a -piperizino-OR.

   425

   Zlúčenina podľa nároku 2, kde:

   Ei je vybrané zo skupiny pozostávajúcej zo 4-(2hydroxyetyl)morfolinoskupiny, 3-hydroxymetylpiperidinoskupiny, 2-[3 4-(2-hydroxyetyl)piperazino3-hydroxypyrolidinoskupiny, 4-hydroxybutylamino skupiny, (metylkarboxy)propyl]imidizol-4-ylu, skupiny, 2-hydroxyetyl amino skupiny,
3. 3-imidazolopropyl-aminoskupiny,

   3- metoxypropylamino skupiny, 3-(N, A-dimetylamino)propyl aminoskupiny, N-[2-(N, A-dimetyl)etyl]amido-skupiny, tetrahydrotiazolylu, A,A-di-(2-hydroxyetyl) aminoskupiny, 4-hydroxypiperizinoskupiny a
4. 4- hydroxymetylpiperizinoskupiny.

   .111

   Zlúčenina podľa nároku 2, v ktorej Z^11O-A-Z^1X1 je -NHC(O)-.

   Zlúčenina podľa nároku 2, v ktorej G je skupina reprezentovaná štruktúrou s nasledujúcim všeobecným vzorcom
5. 6. Zlúčenina podľa nároku 5, v ktorej G je skupina reprezentovaná štruktúrou s nasledujúcim všeobecným vzorcom

   F

   426
6. 7. Zlúčenina podľa nároku 1, v ktorej substituent R₂ je azaheteroaryl substituovaný s Ci-Cé alkylom, kde alkyl je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými z RO-, -C(O)OR, -C(O)N(R)₂ a -N(R)₂.

   8. Zlúčenina podľa nároku 7, v ktorej substituent R₂ je 4-(2- hydroxy ety l)pyridín-2-yl, 3-aminometylpyridín-4-yl alebo 2- metylimidazol-4-yl. 9. Zlúčenina podľa nároku 8, v ktorej G je skupina reprezentovaná

   štruktúrou s nasledujúcim všeobecným vzorcom
7. 10. Zlúčenina podľa nároku 1, v ktorej substituent R₂ je pyrolidinyl, ktorý je substituovaný 2-metoxyetylom, Α,Α-dimetylaminometylom, N,Ndimetylamino-l-oxoetylom alebo 2-(A-metylamino)-l-oxopropylom.
8. 11. Zlúčenina podľa nároku 10, v ktorej G je skupina reprezentovaná štruktúrou s nasledujúcim všeobecným vzorcom

   427
9. 12. Zlúčenina podľa nároku 1, v ktorej substituent R₂ je piperidinyl, ktorý je substituovaný tetrahydrotiopyranylom, tetrahydrotienylom, 2-(N-metyl)2-metyl-l-oxopropylom, 2-metoxyetylom alebo cyklopropylmetylom.
10. 13. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) jej racemické-diastereoméme zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:

    r^F=((A

    Gje kde Z¹⁰⁰ je pyrolidinyl, chinolinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, izochinolinyl, ftalazinyl, imidazo[l,2-a]pyrimidinyl, li/-imidazo[l,2ajimidazolyl, imidazo[2,l-i][l ,3]tiazolyl, H-pyridinón, 1,1dioxybenzoizotiazolyl, benzoizoxazolyl, alkyl, imidazo[l,2-a]pyridinyl, pyrolopyridinyl alebo θ , kde všetky vyššie uvedené Z¹⁰⁰ skupiny sú prípadne substituované substituentom R_x;

    Z¹¹⁰ je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-Cé), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH,

    428 substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

    Z¹¹¹ je kovalentná väzba, prípadne substituovaný Ci-Cô alebo prípadne substituovaný -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

    každý zo substituentov R_a a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, -CN, -NO₂, -C(0)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)- alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluórmetylkarbony lamino skupiny, trifluórmetylsulfónamidoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkenylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroarylalkoxyskupiny, substituovanej nesubstituovanej arylalkoxyskupiny, substituovanej nesubstituovanej alkyl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S-, substituovanej alebo nesubstituovanej aryl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného alebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylalkylu, nesubstituovaného cykloalkylalkylu, nesubstituovaného alkinylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných alebo nesubstituovaných amidoskupín, substituovanej alebo alebo substituovaného substituovaného alebo alebo

    429 alebo nesubstituovanej heteroaryltioskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aryltioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, R_c a CH₂OR_c;

    kde substituent R_c pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NRdR_e, -W-(CH₂)_t-NRdRe, -W-(CH₂)_t-Oalkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl alebo -W-(CH₂)_t-OH;

    Z¹⁰⁵ pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Ci-Cď);

    Z²⁰⁰ pri každom výskyte je nezávisle substituované alebo nesubstituované (Ci-Cŕ), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-C6)fenyl;

    substituenty Rd a R_e pri každom výskyte sú nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO₂-alkyl; alebo substituenty Rd, R_e a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, vytvárajú 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh;

    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)₂ alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;

    substituent R₃ pri každom výskyte je, nezávisle, atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl a substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

    A je-(C!-C₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-;

    430

    -CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-;

    -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)C(O)-(CH₂)„-N(R)-, -N(R)C(O)O-;

    -N(R)-(CH₂)_n+1-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+,-C(O)-, -O-(CR₂)_n+1-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)(CH₂)_n-O-,

    -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-;

    -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-; -N(R)P(O)(OR_b)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O- alebo -N(C(O)R)P(OR_b)-;

    substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    substituent R_b pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    p je 1 alebo 2; alebo v skupine obsahujúcej fosfor vytvárajú dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a R_b spoločne 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh; alebo

    A je NRSO₂ a substituenty R, R_a a atóm dusíka spoločne vytvárajú substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo

    Ζ¹¹⁰-Α-Ζ^1η dohromady vytvárajú kovalentnú väzbu; a substituent R₂ je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

    431

    Z¹⁰¹ je kovalentná väzba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-C₆)- -0-, -(Ci-C₆)- -C(0)-, -(Ci-Ce)- C(0)0-, -(Ci-C₆)-C(0)-NH-, -(Ci-Cej-CXOj-NCCi-Ce)- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;

    Z¹⁰² je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden alebo viac substituentov každý nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogénu, substituovanej alebo nesubstituovanej (Ci-Cô), substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného -C(O)-alkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-Cô)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -N((Ci-C6)-OR)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-C(O)₂R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Có)N(R)-(Ci-Ce)-OR, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cg)-N(R)(Ci-Có)-N(R)2, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cô)C(0)N(R)-(Ci-Cô)-N(R)2, substituovanej alebo nesubstituovanej sulfónamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej ureidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-Ce)-0R, oxoskupiny a nasýtenej, nenasýtenej alebo aromatickej, substituovanej alebo nesubstituovanej heterocyklickej skupiny obsahujúcej jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny pozostávajúcej z N, O, a S; kde atómy dusíka uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom,

    432 substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)N(R)₂, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-Cô)-N(R)₂, -C(O)-alkylom, -C(O)arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom; alebo substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Côj-azacykloalkyl-, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-Cé)-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylN(R)-(Ci-Cô)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-Cô)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C₆)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Cé)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-Ce)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl,

    433 substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Di, Gi, Ji, Li a Mi sú CR_a; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam;

    b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú CR_a; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

    s podmienkou, že pokiaľ A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4diacyloxytetrahydrofur-2-yl, potom Z¹⁰⁰ nie je alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl alebo pyrolidinyl;

    s podmienkou, že pokiaľ Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4434 diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, potom A nie je alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- alebo C(0)0-;

    s podmienkou, že pokiaľ Z¹¹⁰-A-Zⁿⁱ sú dohromady kovalentná väzba, potom Z¹⁰⁰ nie je alkyl;

    s podmienkou, že pokiaľ Z'^-A-Z¹ sú dohromady Ci-Cé alkyl, potom Z¹⁰⁰ nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrímidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl; a s podmienkou, že pokiaľ R₂ je substituovaný alebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z¹⁰⁰ je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba, potom A nie je -0-, -C(0)0- alebo -N(R)-.

    Zlúčenina podľa nároku 13, v ktorej Z¹⁰⁰ je 2-pyrolidinyl, l,2-dihydro-2oxopyridín-3-yl, benzoizoxazol-3-yl, 1, l-dioxybenzoizotiazol-3-yl, imidazo[l,2-a]pyridín-2-yl alebo metylpiperazino)-cyklohexyl.

    a substituent R₂ je 4-(415. Zlúčenina podľa nároku 14, v ktorej Z¹¹⁰-A-Z^1H je -NH-.

    Zlúčenina podľa nároku 13, v ktorej Z¹⁰⁰ je pyrolopyridinyl vybraný z

    435
11. 17. Zlúčenina podľa nároku 16, v ktorej Z¹¹⁰-A-Zⁱⁿ je -NHC(O)-.
12. 18. Zlúčenina podľa nároku 17, v ktorej substituent R₂ je piperidín-4-yl, Nmetylpiperidín-4-yl, 7V-(prop-2-yl)piperidín-4-yl, 77-(imidazol-4-ylmetyl)piperidín-4-yl, /7-(2-metylimidazol-4-yl-metyl)piperidín-4-yl, N(pyrazol-4-yl-metyl)piperidín-4-yl, 77-(2-metoxyetyl)piperidín-4-yl, N(fur-3-yl-metyl)piperidín-4-yl, 77-(tetrahydropyrán-4-yl-metyI)piperidín4-yl, 77-(pyrol-2-yl-metyl)piperidín-4-yl alebo 77-(2-difluóretyl)piperidín4-yl.
13. 19. Zlúčenina všeobecného vzorca (I)

    436 jej racemické-diastereomérne zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:

    G je

    Ä'.

    -Mj Z—A-Z—z¹⁰⁰ d₂4g, // ^U 2 /U kde Z¹⁰⁰ je alebo skupina prípadne substituovaná substituentom Ri vybraná zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, cykloalkylu, pyrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, ftalazinylu, imidazo[l,2-a]pyrimidinylu, l//-imidazo[l,2a]imidazolylu, imidazo[2,1-&][ 1,3jtiazolylu, naftylu, tetrahydronaftylu, benzotienylu, furanylu, tienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu, benzotiazolylu, benzofuranylu,

    2,3-dihydrobenzofuranylu, indolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrolylu, pyrolopyridinylu, //-pyridinónu, oxazolylu, oxadiazolylu, tiadiazolylu, indolinylu, indazolylu,

    o]pyridinylu, benzoizotiazolylu, 1,1-dioxybenzoizotiazolylu, pyridooxazolylu, pyrido-tiazolylu, pyrimido-oxazolylu, pyrimido-tiazolylu a benzimidazolylu;

    tiazolylu, izoxazolylu, pyrazolylu, izotiazolylu, imidazo[l,2Z¹¹⁰ je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-Cô), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

    Z¹¹¹ je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Ci-Cô) alebo prípadne substituovaný -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde prípadne substituované

    437 skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

    každý zo substituentov R_a a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov, pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)-alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)heteroarylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroarylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej arylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S-, substituovanej alebo nesubstituovanej arylS(O)_P-, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryl-S(O)_p-, a kde aspoň jeden zo substituentov R_a a Ri nie je atóm vodíka;

    substituent R3 pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(0)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

    A je -(Cj-Ce)-, -O-; -S-; -S(0)_p-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R)); -CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-;

    -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)(CH₂)„-N(R)-, -N(R)C(O)O-;

    -N(R)-(CH₂)_n+1-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+1-C(O)-, -O-(CR₂)_n+1-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)„-O-,

    -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-;

    -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR„)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-; -N(R)P(O)(OR_b)-;

    438

    -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O- alebo - N(C(O)R)P(OR_b)-;

    kde substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    substituent R_b pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    p je 1 alebo 2;

    alebo v skupine obsahujúcej fosfor vytvárajú dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a R_b spoločne 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh; alebo

    A je NRSO2 a substituenty R, R_a a atóm dusíka spoločne vytvárajú substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo

    Z^11O-A-Z^1U dohromady vytvárajú kovalentnú väzbu; a substituent R₂ je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

    Z¹⁰¹ je kovalentná väzba, -(Ci-Cô)-, -(Ci-Cg)- -0-, -(Ci-Cô)- -C(0)-, -(Ci-C₆)- -C(0)0-, -(C,-C₆)-C(0)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N(Ci-C₆)- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;

    Z¹⁰² je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená hetérobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná

    439 heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden alebo viac substituentov každý nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogénu, substituovanej alebo nesubstituovanej (Ci-Cô), substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného -C(O)alkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-Ce)-OR, substituovanej alebo nesubstituovanej -N((Ci-Ce)-OR)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-Ce)-C(0)2R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cé)N(R)-(Ci-Cg)-OR, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Ce)-N(R)(Ci-Cé)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Có)C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej sulfónamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej ureidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-0R, oxoskupiny a nasýtenej, nenasýtenej alebo aromatickej, substituovanej alebo nesubstituovanej heterocyklickej skupiny obsahujúcej jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny pozostávajúcej z N, O a S; kde atómy dusíka uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)-(Ci-C₆)-N(R)₂, -C(O)-alkylom, -C(O)arylom, -C(O)heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom; alebo

    R₂ je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl,

    440 substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cój-azacykloalkyl-, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylN(R)-(Ci-Ce)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-Ce)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-Ce)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Cô)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-Cg)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    a je 1 a symboly Dj, Gj, Jj, Li a Mj sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Di, Gi, Ji, Li a Mi sú CR_a; alebo

    441 a je O a jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden zo symbolov Di, Gi, Lj a Mi je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam;

    b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú CR_a; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

    s podmienkou, že pokiaľ A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4diacyloxytetrahydrofur-2-yl, potom Z¹⁰⁰ nie je alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl alebo pyrolidinyl;

    s podmienkou, že pokiaľ Z¹⁰⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, potom A nie je alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- alebo -C(0)0-;

    s podmienkou, že pokiaľ Z¹¹⁰-A-Z¹¹¹ sú dohromady kovalentná väzba, potom Z¹⁰⁰ nie je alkyl;

    s podmienkou, že pokiaľ Z¹¹⁰-A-Z^H1 sú dohromady Ci-Cóalkyl, potom Z¹⁰⁰ nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl; a s podmienkou, že pokiaľ substituent R₂ je substituovaný alebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z¹⁰⁰ je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba, potom A nie je -0-, -C(0)0- alebo -N(R)-.

    442
14. 20. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) jej racemické-diastereoméme zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:

    R

    111^.100

    Gje

    M, Z—A—Z—Z d₂4g

    2 ^(J₂)_b kde Z¹⁰⁰ je alebo skupina prípadne substituovaná substituentom Ri vybraná zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, cykloalkylu, pyrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, ftalazinylu, imidazo[l,2-a]pyrimidinylu, l//-imidazo[l,2ajimidazolylu, imidazo[2,l-ó][1.3]tiazolylu, naftylu, tetrahydronaftylu, benzotienylu, furanylu, tienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu, benzotiazolylu, benzofuranylu, , tiazolylu, izoxazolylu, pyrazolylu,

    2,3-dihydrobenzofuranylu, indolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrolylu, pyrolopyridinylu, N-pyridinónu, oxazolylu, izotiazolylu, oxadiazolylu, tiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, imidazo[l,2tfjpyridinylu, benzoizotiazolyiu, 1,1-dioxybenzoizotiazolylu, pyrido443 oxazolylu, pyrido-tiazolylu, pyrimido-oxazoiylu, pyrimido-tiazolylu a benzimidazolylu;

    Z¹¹⁰ je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-Cô), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

    Z¹¹¹ je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Ci-Có) alebo prípadne substituovaný -(CH₂)_n-cykloalkyl-(CH₂)_n; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

    každý zo substituentov R_a a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)-alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluórmetylkarbonylaminoskupiny, trifluórmetylsulfónamidoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkenylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroarylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej arylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S-, substituovanej alebo nesubstituovanej aryl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného alebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného alebo

    444 nesubstituovaného heteroarylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkinylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných alebo nesubstituovaných amidoskupín, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryltioskupiny, substituovanej alebo .105 r200 nesubstituovanej aryltioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)₂, -Z^lu:,-N(R)-C(O)-Z r200 .105

    200

    -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z^2UU, -Z^1u:,-N(R)-C(O)-N(R)-Z^2UIJ, Re a CH2OR_c;

    kde substituent R_c pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NR_dR_e, -W-(CH₂)_tNR_dR_e, -W-(CH₂)_t-O-alkyl, -W-(CH₂)_t-S-aIkyl alebo -W-(CH₂)_t-0H;

    Z¹⁰⁵ pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Ci-Cg);

    Z²⁰⁰ je pri každom výskyte nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Cj-Cé), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cô)-fenyl;

    substituenty R_d a R_e sú pri každom výskyte nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO₂-alkyl; alebo substituenty R_d, R_e a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, spoločne vytvárajú 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh, t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)₂ alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;

    substituent R₃ pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný

    445

    -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

    A je -(Ci-C₆)-;

    substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    p je 1 alebo 2;

    substituent R₂ je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

    Z¹⁰¹ je kovalentná väzba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-Cň)- -0-, -(Ci-Cé)- -C(0)-, (C!-C₆)- -C(0)0-, -(Ci-C₆)-C(0)-NH-, -(Cj-Cej-CÍOj-NÍCrCe)- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;

    Z¹⁰² je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden alebo viac substituentov každý nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogénu, substituovanej alebo nesubstituovanej (Ci-Cô), substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného -C(O)-alkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -N((Ci-Ce)-0R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-Ci)-C(0)₂R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cé)N(R)-(Ci-Cg)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cs)-N(R)(Ci-Ce)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cé)C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej sulfón446 amidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej ureidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-0R, oxoskupiny a nasýtenej, nenasýtenej alebo aromatickej, substituovanej alebo nesubstituovanej heterocyklickej skupiny obsahujúcej jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny pozostávajúcej z N, O a S; kde atómy dusíka uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)N(R)₂, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-Có)-N(R)₂, -C(O)-alkylom, -C(O)arylom, -C(O)heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom; alebo substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl,

    substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Céj-azacykloalkyl-, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl,

    447 substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C₆)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-C₆)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-Cg)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl(Ci-Cé)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Lj a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Di, Gi, Ji, Li a Mi sú CR_a; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam;

    b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú CR_a; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny

    448 pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

    s podmienkou, že pokiaľ Z¹¹⁰-A-Zⁿⁱ sú dohromady Ci-Céalkyl, potom Z¹⁰⁰ nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl.
15. 21. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) jej racemické-diastereoméme zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:

    Gje

    R,

    Ď

    Z—A-z—z¹⁰⁰ kde Z¹⁰⁰ je alebo skupina prípadne substituovaná substituentom Ri vybraná zo skupiny pozostávajúcej z pyrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, ftalazinylu, imidazo[l,2-a]pyrimidinylu, l//-imidazo[ 1,2-a]imidazolylu, imidazo[2,1 Z>][1,3]tiazolylu, naftylu, tetrahydronaftylu, benzotienylu, furanylu,

    449 tienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu, benzotiazolylu, tiazolylu, benzofuranylu, 2,3dihydrobenzofuranylu, indolylu, izoxazolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrazolylu, pyrolylu, pyrolopyridinylu, 77-pyridinónu, oxazolylu, izotiazolylu, oxadiazolylu, tiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, imidazo[l,2-n]pyridinylu, benzoizotiazolylu, 1,1dioxybenzoizotiazolylu, pyrido-oxazolylu, pyrido-tiazolylu, pyrimidooxazolylu, pyrimido-tiazolylu a benzimidazolylu;

    každý zo substituentov R_a a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, -CN, -ΝΟ₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)-alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamido skupiny, tetrazolylu, trifluórmetylkarbonylaminoskupiny, trifluórmetylsulfónamidoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkenylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroarylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej arylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S-, substituovanej alebo nesubstituovanej aryl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného alebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného alebo

    450 nesubstituovaného alkinylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných alebo nesubstituovaných amidoskupín, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryltioskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aryltioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, R_c a CH₂OR_c;

    kde substituent R_c pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NR_dR_e, -W-(CH₂)_t-NR_dRe, -W-(CH₂)_t-0alkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl alebo -W(CH₂)_t-0H;

    Z¹⁰⁵ pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Ci-Cé);

    Z²⁰⁰ pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cé), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Côj-fenyl;

    substituenty R_d a R_e sú pri každom výskyte nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO₂-alkyl; alebo substituenty R_d, R_e a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, spoločne vytvárajú 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh;

    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)₂ alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;

    substituent R₃ pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

    451 substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    p je 1 alebo 2;

    Z^llo-A-Z¹¹¹ dohromady vytvárajú kovalentnú väzbu; a substituent R₂ je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

    Z¹⁰¹ je kovalentná väzba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-C₆)- -0-, -(Ci-C₆)- -C(0)-, -(Ci-C₆)- -C(0)0-, -(Ci-C₆)-C(O)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N(Ci-C₆)- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;

    Z¹⁰² je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená hetérobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná hetérobicyklická skupina má jeden alebo viac substituentov každý nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogénu, substituovanej alebo nesubstituovanej (Ci-Ce), substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného -C(O)alkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -N((Ci-Cô)-OR)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-C(O)₂R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cô)N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Ce)-N(R)(Ci-Ce)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Ce)C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej sulfónamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej ureidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovanej

    452 alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-Cô)-OR, oxoskupiny a nasýtenej, nenasýtenej alebo aromatickej, substituovanej alebo nesubstituovanej heterocyklickej skupiny obsahujúcej jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny pozostávajúcej z N, O a S; kde atómy dusíka uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovaným alebo nesubstituovaným -C(O)N(R)₂, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-Ce)-N(R)₂, -C(O)-alkylom, -C(O)arylom, -C(O)heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom; alebo substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl,

    substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cój-azacykloalkyl-, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl,

    substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(C₁-Ce)-, substituovaný alebo nesubstituovaný

    453 alkyl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl(Ci-Ce)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-Ce)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov Di, Gi, Ji, L] a Mi sú CR_a; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mj je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam;

    b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú CR_a; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6.

    454
16. 22. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) jej racemické-diastereomérne zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:

    G je

    R,

    D

    M, Z-A-Z—Z

    111„100

    Mg ti 2 A kde Z¹⁰⁰ je alebo skupina prípadne substituovaná substituentom Ri vybraná zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, cykloalkylu, pyrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, ftalazinylu, imidazo[l,2-a]pyrimidinylu, l//-imidazo[l,2ajimidazolylu, imidazo[2,l-7>][l,3]tiazolylu, naftylu, tetrahydronaftylu, benzotienylu, furanylu, tienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu, benzofuranylu, 2,3-dihydrobenzofuranylu, indolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrolylu, pyrolopyridinylu, 77-pyridinónu, oxazolylu, oxadiazolylu, tiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, tiazolylu, izoxazolylu, pyrazolylu, izotiazolylu, imidazo[1,2ajpyridinylu, benzoizotiazolylu, 1,1-dioxybenzoizotiazolylu, pyrido455 oxazolylu, pyrido-tiazolylu, pyrimido-oxazolylu, pyrimido-tiazolylu a benzimidazolylu;

    Z¹¹⁰ je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-Có), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

    Z¹¹¹ je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Ci-Có) alebo prípadne substituovaný -(CH₂)„-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

    každý zo substituentov R_a a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)-alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluórm ety lkarbony lamino skupiny, trifluórmetylsulfónamidoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkenylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroarylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej arylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S-, substituovanej alebo nesubstituovanej aryl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného alebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného alebo nesubstituo456 vaného heteroarylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkinylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných alebo nesubstituovaných amidoskupín, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryltioskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aryltioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, R_c a CH₂OR_c;

    kde substituent R_c pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NRdR_e, -W-(CH₂)_t-NRdR_e, -W-(CH₂)_t-Oalkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl alebo -W-(CH₂)_t-OH;

    Z¹⁰⁵ pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Ci-Có);

    Z²⁰⁰ pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Có), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cój-fenyl;

    substituenty Rd a R_e sú pri každom výskyte nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO₂-alkyl; alebo substituenty Rd, R_e a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, spoločne vytvárajú 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh;

    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)₂ alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;

    substituent R₃ pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl,

    457

    A je -(CrCe)-, -0-; -S-; -S(0)_p-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-; -CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-;

    -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(0)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)(CH₂)„-N(R)-, -N(R)C(O)-O-; -N(R)-(CH₂)_n+1-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)„+i-C(O)-, -O-(CR₂)_n+1-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-O-,

    -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-;

    -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-; -N(R)P(O)(OR_b)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O- alebo -N(C(O)R)P(OR_b)-;

    kde substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituent R_b pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    p je 1 alebo 2;

    alebo v skupine obsahujúcej fosfor vytvárajú dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a substituent R_b spoločne 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh; alebo

    A je NRSO₂ a substituenty R, R_a a atóm dusíka spoločne vytvárajú substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo

    Z^11O-A-Z^1U dohromady vytvárajú kovalentnú väzbu; a substituent R₂ je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

    458

    Z¹⁰¹ je kovalentná väzba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-Cô)- -0-, -(Ci-Có)- -C(0)-, -(Ci-C₆)- C(0)0-, -(Ci-C₆)-C(0)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N(Ci-C₆)- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;

    Z¹⁰² je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkylová skupina; substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden alebo viac substituentov každý nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogénu, substituovanej alebo nesubstituovanej (Ci-Cô), substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného -C(O)alkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -N((Ci-C6)-OR)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-C(O)₂R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cé)N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cô)-N(R)(Ci-Có)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cď)C(O)N(R)-(Ci-C₆)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej sulfónamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej ureidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-Có)-0R, oxoskupiny a nasýtenej, nenasýtenej alebo aromatickej, substituovanej alebo nesubstituovanej heterocyklickej skupiny obsahujúcej jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny pozostávajúcej z N, O a S; kde atómy dusíka uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom,

    459 substituovaným alebo nesubstítuovaným -C(O)N(R)₂, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-C6)-N(R)₂, -C(O)-alkylom, -C(O)arylom, -C(O)heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou alebo substituovaným alebo nesubstítuovaným heteroarylalkylom; alebo substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cój-azacykloalkyl-, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-Ce)-, substituovaný alebo nesubstituovaný arylN(R)-(Ci-Cs)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-Ce)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl-(Ci-Cg)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl,

    460 substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D], Gi, Ji, Li a Mi sú CR_a; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam;

    b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú CR_a; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

    s podmienkou, že pokiaľ A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4diacyloxytetrahydrofur-2-yl, potom Z¹⁰⁰ nie je alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl alebo pyrolidinyl;

    s podmienkou, že pokiaľ Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba a substituent R₂ je 3,4-dihydroxytetrahydrofur-2-yl alebo 3,4461 diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Ζ^1θθ je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, potom A nieje alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- alebo -C(0)0-;

    s podmienkou, že pokiaľ Ζ^11θ-Α-Ζ^π1 sú dohromady kovalentná väzba, potom Z¹⁰⁰ nie je alkyl;

    s podmienkou, že pokiaľ Z¹¹⁰-A-Zⁱⁿ sú dohromady Ci-Cô alkyl, potom Z¹⁰⁰ nie je fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl; a s podmienkou, že pokiaľ substituent R₂ je substituovaný alebo nesubstituovaný cyklopentyl, Z¹⁰⁰ je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba, potom A nie je -0-, -C(0)0- alebo -N(R)-.
17. 23. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) jej racemické-diastereomérne zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:

    G je _v-

    V/

    Z—A^-

    -z—z¹⁰⁰

    462 kde Z¹⁰⁰ je substituentom

    D^G, ’ 2 (J₂)_b alebo skupina prípadne substituovaná Ri vybraná zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, cykloalkylu, pyrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, ftalazinylu, imidazo[l,2-a]pyrimidinylu, l//-imidazo[l ,2ajimidazolylu, imidazo[2,l-ú][l,3]tiazolylu, naftylu, tetrahydronaftylu, benzotienylu, furanylu, tienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu, benzotiazolylu, benzofuranylu,

    2,3-dihydrobenzofuranylu, indolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrolylu, pyrolopyridinylu, //-pyridinónu, oxazolylu, oxadiazolylu, tiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, ajpyridinylu, benzoizotiazolylu, 1,1-dioxybenzoizotiazolylu, pyridooxazolylu, pyrido-tiazolylu, pyrimido-oxazolylu, pyrimido-tiazolylu a benzimidazolylu;

    tiazolylu, izoxazolylu, pyrazolylu, izotiazolylu, imidazo[l ,2Z¹¹⁰ je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-Có), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

    Z¹¹¹ je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Ci-C₆) alebo prípadne substituovaný -(CH₂)„-cykloalkyl-(CH₂)„-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

    každý zo substituentov R_a a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny

    463 pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, -CN, -N0₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)-alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluórmetylkarbonylaminoskupiny, trifluórmetylsulfónamidoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkenylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroarylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej arylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S-, substituovanej alebo nesubstituovanej aryl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného alebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkinylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných alebo nesubstituovaných amidoskupín, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryltioskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aryltioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)S(O)2-Z²⁰⁽⁾, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(0)-N(R)-Z²⁰⁰, R_c a CH₂OR_c;

    kde substituent R_c pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NR_dR_e, -W-(CH₂)_t-NR_dR_e, -W-(CH₂)_t-Oalkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl alebo -W(CH₂)_t-OH;

    Z¹⁰⁵ pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Ci-Có);

    464

    Z²⁰⁰ pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cô), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Céj-fenyl;

    substituenty Rd a R_e sú pri každom výskyte nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO₂-alkyl; alebo substituenty Rd, R_e a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, spoločne vytvárajú 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh;

    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)₂ alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;

    substituent R₃ pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

    A je -(Ci-C₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-; -CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-;

    -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)(CH₂)_n-N(R)-, -N(R)C(O)O-;

    -N(R)-(CH₂)_n+i-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; -O-(CR₂)_n+i-C(O)-, -O-(CR₂)„₊₁-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)„-O-,

    -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-;

    -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO_PN(R)-; -C(O)O-; -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-; -N(R)P(O)(OR_b)-;

    465

    -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O- alebo -N(C(O)R)P(OR_b)-;

    kde substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    substituent R_b pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    p je 1 alebo 2; alebo v skupine obsahujúcej fosfor vytvárajú dusíkový atóm, atóm fosforu, substituenty R a substituent R_b spoločne 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh; alebo

    A je NRSO2 a substituenty R, R_a a atóm dusíka spoločne vytvárajú substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo

    Z¹¹⁰-A-Zⁱⁿ dohromady vytvárajú kovalentnú väzbu; a substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca -Z^10,-Z¹⁰²;

    Z¹⁰¹ je kovalentná väzba, -(Ci-C₆)-, -(Ci-C₆)- -0-, -(Ci-C₆)- -C(0)-, -(Ci-C₆)- -C(0)0-, -(Ci-C₆)-C(0)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N(Ci-C₆)- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;

    Z¹⁰² je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, kde uvedený substituovaný cykloalkenyl má jeden alebo viac substituentov každý nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogénu, substituovanej alebo nesubstituovanej (Ci-Cň), substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného -C(O)-alkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -N((Ci-Cď)-0R)2, substituovanej

    466 alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-C(O)₂R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cé)-N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej sulfónamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej ureidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-Cg)-OR, oxoskupiny a nasýtenej, nenasýtenej alebo aromatickej, substituovanej alebo nesubstituovanej heterocyklickej skupiny obsahujúcej jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny pozostávajúcej z N, O a S; kde atómy dusíka uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkyiom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)N(R)₂, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-Ce)-N(R)₂, -C(O)alkylom, -C(O)-arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom;

    a je 1 a symboly Di, Gi, Ji, Li a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D_b Gi, Ji, Li a Mi sú CR_a; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je NR_a, jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam;

    b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú CR_a; alebo

    467 b je O a jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6.
18. 24. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) jej racemické-diastereomérne zmesi, optické izoméry, farmaceutický prijateľné soli, proliečivá alebo biologicky aktívne metabolity, kde:

    G je ^DK\ ¹ (J,)a \

    -z—z'“ kde Z¹⁰⁰ je alebo skupina prípadne substituovaná substituentom Ri vybraná zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, cykloalkylu, pyrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, ftalazinylu, imidazo[l,2-a]pyrimidinylu, l//-imidazo[l,2ajimidazolylu, imidazo[2,l-Z>][l,3]tiazolylu, naftylu, tetrahydronaftylu, benzotienylu, furanylu, tienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu,

    468 %^/S tiazolylu, izoxazolylu, pyrazolylu, izotiazolylu, imidazo[l,2o ks.

    benzotiazolylu, benzofuranylu, 2,3-dihydrobenzofuranylu, indolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrolylu, pyrolopyridinylu, H-pyridinónu, oxazolylu, oxadiazolylu, tiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, ajpyridinylu, benzoizotiazolylu, 1,1-dioxybenzoizotiazolylu, pyridooxazolylu, pyrido-tiazolylu, pyrimido-oxazolylu, pyrimido-tiazolylu a benzimidazolylu;

    Z¹¹⁰ je kovalentná väzba alebo prípadne substituovaný (Ci-Có), ktorý je prípadne substituovaný jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

    Z¹¹¹ je kovalentná väzba, prípadne substituovaný (Ci-Cé) alebo prípadne substituovaný -(CH₂)„-cykloalkyl-(CH₂)_n-; kde prípadne substituované skupiny sú prípadne substituované jedným alebo viac substituentmi vybranými zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, CN, OH, halogénu, NO₂, COOH, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny a substituovaného alebo nesubstituovaného fenylu;

    každý zo substituentov R_a a Ri predstavuje jeden alebo viac substituentov pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)-alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)-heteroarylu, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamido skúp iny, tetrazolylu, trifluórmetylkarbonylaminoskupiny, trifluórmetylsulfónamidoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkenylu,

    469 alebo alebo substituovanej alebo nesubstituovanej aryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroarylalkoxyskupiny, substituovanej nesubstituovanej arylalkoxyskupiny, substituovanej nesubstituovanej alkyl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S-, substituovanej alebo nesubstituovanej aryl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného alebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkinylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných alebo nesubstituovaných amidoskupín, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryltioskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aryltioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)₂, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁰,

    S(O)₂-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, R_c a CH₂OR_c;

    Z¹⁰⁵-N(R)kde substituent R_c pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NRdR_e, -W-(CH₂)_t-NRdR_e, -W-(CH₂)_t-Oalkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl alebo -W(CH₂)_t-OH;

    Z¹⁰⁵ pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Ci-Có);

    Z²⁰⁰· pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Ce), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cój-fenyl;

    substituenty Rd a R_e sú pri každom výskyte nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO₂-alkyl; alebo substituenty Rd, R_e a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, spoločne vytvárajú 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh;

    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

    470

    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)₂ alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Rj je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2;

    substituent R₃ pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

    A je -(C!-C₆)-, -O-; -S-; -S(O)_P-; -N(R)-; -N(C(O)OR)-; -N(C(O)R)-; -N(SO₂R)-; -CH₂O-; -CH₂S-; -CH₂N(R)-; -CH(NR)-; -CH₂N(C(O)R))-; -CH₂N(C(O)OR)-; -CH₂N(SO₂R)-; -CH(NHR)-; -CH(NHC(O)R)-;

    -CH(NHSO₂R)-; -CH(NHC(O)OR)-; -CH(OC(O)R)-; -CH(OC(O)NHR)-; -CH=CH-; -C(=NOR)-; -C(O)-; -CH(OR)-; -C(O)N(R)-; -N(R)C(O)-; -N(R)S(O)_P-; -OC(O)N(R)-; -N(R)-C(O)(CH₂)„-N(R)-, -N(R)C(O)O-;

    -N(R)-(CH₂)_n+i-C(O)-, -S(O)_PN(R)-; O-(CR₂)_n+1-C(O)-, -O-(CR₂)_n+1-O-, -N(C(O)R)S(O)_P-; -N(R)S(O)_PN(R)-; -N(R)-C(O)-(CH₂)_n-O-,

    -C(O)N(R)C(O)-; -S(O)_PN(R)C(O)-; -OS(O)_PN(R)-; -N(R)S(O)_PO-;

    -N(R)S(O)_PC(O)-; -SO_PN(C(O)R)-; -N(R)SO„N(R)-; -C(O)O-,

    -N(R)P(OR_b)O-; -N(R)P(OR_b)-; -N(R)P(O)(OR_b)O-; -N(R)P(O)(OR_b)-; -N(C(O)R)P(OR_b)O-; -N(C(O)R)P(OR_b)-; -N(C(O)R)P(O)(OR_b)O- alebo - N(C(O)R)P(OR_b)-;

    kde substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    substituent R_b pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    471 p je 1 alebo 2; alebo v skupine obsahujúcej fosfor vytvárajú dusíkový atóm, atóm fosforu, substituent R a substituent R_b spoločne 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh; alebo

    A je NRSO2 a substituenty R, R_a a atóm dusíka spoločne vytvárajú substituovaný alebo nesubstituovaný 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh kondenzovaný ku kruhu 1; alebo

    Z¹¹⁰-A-Zⁿⁱ dohromady vytvárajú kovalentnú väzbu; a substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca -Z¹⁰¹-Z¹⁰²;

    Z¹⁰¹ je kovalentná väzba, -(Ci-Cs)-, -(Ci-Ce)- -0-, -(Ci-Có)- -C(0)-, -(Ci-C₆)- -C(0)0-, -(C,-C₆)-C(0)-NH-, -(Ci-C₆)-C(O)-N(C!-C₆)- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;

    Z¹⁰² je substituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedená substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden alebo viac substituentov každý nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z nitroskupiny, halogénu, substituovanej alebo nesubstituovanej (Ci-Có), substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného C(O)alkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -N((Ci-C6)-OR)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Cj-C6)-C(O)₂R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-Ce)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C6)-N(R)-(Ci-Có)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C6)-C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-Cg)-0R a substituovanej alebo nesubstituovanej heterocyklickej skupiny obsahujúcej jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny pozostávajúcej z O a S; kde atómy dusíka uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo

    472 nesubstítuovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstítuovaným arylom, substituovaným alebo nesubstítuovaným heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)N(R)₂, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-C6)-N(R)₂, -C(O)-alkylom, -C(O)arylom, -C(O)-heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou alebo substituovaným alebo nesubstítuovaným heteroarylalkylom;

    a je 1 a symboly Dj, Gi, Ji, Li a Mi sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D_x, Gi, Ji, Li a Mi sú CR_a; alebo a je 0 a jeden zo symbolov Di, Gj, Li a Mi je NR_a, jeden zo symbolov Di, Gi, Li a Mi je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam;

    b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú CR_a; alebo b je 0 a jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam; a n pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 0 do 6;

    s podmienkou, že pokiaľ A je -N(R)-, Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba a substituent R₂ je 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, potom Z¹⁰⁰ nie je alkyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl alebo pyrolidinyl;

    s podmienkou, že pokiaľ Z¹¹⁰ a Z¹¹¹ sú každý kovalentná väzba a substituent R₂ je 3,4-diacyloxytetrahydrofur-2-yl, Z¹⁰⁰ je substituovaný

    473 alebo nesubstituovaný alkyl, potom A nie je alkyl, -0-, -C(0)-, -NHC(O)- alebo -C(0)0-;

    s podmienkou, že pokiaľ Z¹¹⁰-A-Zⁿⁱ sú dohromady kovalentná väzba, potom Z¹⁰⁰ nie je alkyl; a s podmienkou, že pokiaľ Z^11O-A-Z^U1 sú dohromady Ci-C₆-alkyl, potom Z¹⁰⁰ nie je Fenyl, pyrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, furyl alebo tienyl.
19. 25. Spôsob inhibície jednej alebo viac aktivít proteínkináz u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 1, 13, 19, 20, 21, 22, 23 alebo 24 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.
20. 26. Spôsob podľa nároku 25, vyznačujúci sa tým, že daná proteínkináza je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z KDR, FGFR-1, PDGFRp, PDGFRa, IGF-1R, c-Met, Flt-1, Flt-4, TIE-2, TIE-1, Lck, Src, fyn, Lyn, Blk, hck, fgr a yes.
21. 27. Spôsob ovplyvnenia hyperproliferačných porúch u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 1, 13, 19, 20, 21, 22, 23 alebo 24 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.
22. 28. Spôsob ovplyvnenia angiogenézy u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 1, 13, 19, 20, 21, 22, 23 alebo 24 alebo jej fyziologicky

    474 prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.
23. 29. Spôsob podľa nároku 25, vyznačujúci sa tým, že proteínkináza je proteínová serín/treonín-kináza alebo proteínová tyrozínkináza.
24. 30. Spôsob liečenia jedného alebo viac ulkusov u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 1, 13, 19, 20, 21, 22, 23 alebo 24 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi.
25. 31. Spôsob podľa nároku 30, vyznačujúci sa tým, že uikus alebo ulkusy sú spôsobené bakteriálnou alebo pliesňovou infekciou; alebo uikus alebo ulkusy sú Moorenove ulkusy; alebo uikus alebo ulkusy sú symptómy ulceratívnej kolitidy.
26. 32. Spôsob liečenia ochorenia u pacienta, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 1, 13, 19, 20, 21, 22, 23 alebo 24 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívnych metabolitov danému pacientovi, pričom dané ochorenie je ochorenie očí, kardiovaskulárne ochorenie, rakovina, syndróm Crowa-Fukaseho (POEMS), diabetické ochorenie, kosáčikovitá anémia, chronický zápal, systémový lupus, glomerulonefritída, synovitída, zápalové črevné ochorenie, Crohnova choroba, glomerulonefritída, reumatoidná artritída, osteoartritída, roztrúsená skleróza, rejekcia štepu, Lymská choroba, sepsa, von Hippelova-Lindauova choroba, pemfigoid, psoriáza, Pagetova choroba, polycystické obličkové ochorenie, fibróza, sarkoidóza, cirhóza,

    475 tyreoiditída, hyperviskózny syndróm, Oslerova-Weberova-Renduova choroba, chronické oklúzne ochorenie pľúc, astma alebo edém po popáleninách, traume, ožiarení, mŕtvica, hypoxia alebo ischémia, syndróm ovariálnej hyperstimulácie, preeklampsia, menometrorágia, endometrióza alebo infekcie s Herpes simplex, Herpes Zoster, vírusom spôsobujúcim syndróm získaného zlyhania imunity, Parapoxvírusom, protozoom alebo toxoplazmózou.
27. 33. Spôsob podľa nároku 32, vyznačujúci sa tým, že ochorenie očí je okulárny alebo makulárny edém, okulárne neovaskulárne ochorenie, skleritída, radiálna keratotómia, uveitída, vitritída, myopia, fyziologická exkavácia papily, chronické odlúčenie sietnice, komplikácie po liečení laserom, konjunktivitída, Stargardtova choroba, Ealesova choroba, retinopatia alebo makulárna degenerácia.
28. 34. Spôsob podľa nároku 32, vyznačujúci sa tým, že kardiovaskulárne ochorenie je ateroskleróza, restenóza, ischémia/reperfúzne poškodenie, vaskulárna oklúzia alebo karotické obštruktívne ochorenie.
29. 35. Spôsob podľa nároku 32, vyznačujúci sa tým, že rakovina je pevný nádor, sarkóm, fibrosarkóm, osteóm, melanóm, retinoblastóm, rabdomyosarkóm, glioblastóm, neuroblastóm, teratokarcinóm, hematopoetické zhubné bujnenie, Kaposiho sarkóm, Hodgkinova choroba, lymfóm, myelóm, leukémia alebo malígny ascites.
30. 36. Spôsob podľa nároku 32, vyznačujúci sa tým, že diabetické ochorenie je na inzulíne závisiaci diabetes mellitus s glaukómom, diabetická retinopatia alebo mikroangiopatia.

    476
31. 37. Spôsob zníženia fertility u pacienta, vyznačujúci sa tým, že daný spôsob zahrnuje krok, v ktorom dochádza k podaniu terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa nároku 1, 13, 19, 20, 21, 22, 23 alebo 24 alebo jej fyziologicky prijateľnej soli, proliečiva alebo biologicky aktívneho metabolitu pacientovi.
32. 38. Spôsob podľa nároku 28, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina alebo jej fyziologicky prijateľná soľ, proliečivo alebo biologicky aktívny metabolit je podávaná v množstve, ktoré má na angiogenézu alebo vaskulogenézu podporný účinok.
33. 39. Spôsob podľa nároku 26, vyznačujúci sa tým, že proteínkináza je Tie-2.
34. 40. Spôsob podľa nároku 38, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina všeobecného vzorca (I) alebo jej fyziologicky prijateľná soľ, proliečivo alebo biologicky aktívny metabolit je podávaná v kombinácii s proangiogénnym rastovým faktorom.
35. 41. Spôsob podľa nároku 40, vyznačujúci sa tým, že proangiogénny rastový faktor je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z VEGF, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, HGF, FGF-1, FGF-2, ich derivátov a antijodotypických protilátok.
36. 42. Spôsob podľa nároku 38, vyznačujúci sa tým, že pacient trpí anémiou, ischémiou, infarktom, rejekciou transplantátu, zranením, gangrénou alebo nekrózou.

    477
37. 43. Spôsob podľa nároku 25, vyznačujúci sa tým, že aktivita proteínkinázy sa podieľa na aktivácii T-buniek, aktivácii B-buniek, degranulácii žírnych buniek, aktivácii monocytu, potenciácii zápalovej odpovede alebo ich kombinácii.
38. 44. Spôsob prípravy 4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-ylového medziproduktu reprezentovaného nasledujúcim všeobecným vzorcom:

    kde:

    Z¹⁰⁰ je ^x alebo skupina prípadne substituovaná substituentom

    Ri vybraná zo skupiny pozostávajúcej z alkylu, cykloalkylu, pyrolidinylu, chinolinylu, chinoxalinylu, chinazolinylu, izochinolinylu, ftalazinylu, imidazo[l ,2-a]pyrimidinylu, l//-imidazo[l,2-a]imidazolylu, imidazo[2,l-Ď][l,3]tiazolylu, naftylu, tetrahydronaftylu, benzotienylu, furanylu, tienylu, benzoxazolylu, benzoizoxazolylu, benzotiazolylu,

    478 , tiazolylu, benzofuranylu, 2,3dihydrobenzofuranylu, indolylu, izoxazolylu, tetrahydropyranylu, tetrahydrofuranylu, piperidinylu, pyrazolylu, pyrolylu, pyrolopyridinylu, //-pyridinónu, oxazolylu, izotiazolylu, oxadiazolylu, tiadiazolylu, indolinylu, indazolylu, imidazo[l ,2-a]pyridinylu, benzoizotiazolylu, 1,1dioxybenzoizotiazolylu, pyrido-oxazolylu, pyrido-tiazolylu, pyrimidooxazolylu, pyrimido-tiazolylu a benzimidazolylu;

    substituenty R_a a Rj predstavujú jeden alebo viac substituentov pri každom výskyte nezávisle vybraných zo skupiny pozostávajúcej z atómu vodíka, halogénu, -CN, -NO₂, -C(O)OH, -C(O)H, -OH, -C(O)O-alkylu, -C(O)O-arylu, -C(O)O-heteroarylu, -C(O)-alkylu, -C(O)-arylu, -C(O)heteroarylu, substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, tetrazolylu, trifluórmetylkarbonylaminoskupiny, trifluórmetylsulfónamidoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného alkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného cykloalkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného heteroarylu, substituovaného alebo nesubstituovaného alkenylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryloxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroarylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej arylalkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej alkyl-S-, substituovanej alebo nesubstituovanej aryl-S(O)_p-, substituovanej alebo nesubstituovanej heteroaryl-S(O)_p-, substituovaného alebo nesubstituovaného arylalkylu, substituovaného alebo nesubstituovaného nesubstituovaného nesubstituovaného substituovaného substituovaného alebo alebo heteroarylalkylu, cykloalkylalkylu, alkinylu, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovaného alebo nesubstituovaného aminoalkylu, substituovaných alebo nesubstituovaných amidoskupín, substituovanej

    479 alebo nesubstituovanej heteroaryltioskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aryltioskupiny, -Z¹⁰⁵-C(O)N(R)2, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-Z²⁰⁽⁾, -Z¹⁰⁵-N(R)-S(O)2-Z²⁰⁰, -Z¹⁰⁵-N(R)-C(O)-N(R)-Z²⁰⁰, R_e a CH₂OR_c;

    kde substituent R_c pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, -CH₂-NRdR_e, -W-(CH₂)_t-NRdR_e, -W-(CH₂)_t-Oalkyl, -W-(CH₂)_t-S-alkyl alebo -W-(CH₂)_t-OH;

    Z¹⁰⁵ pri každom výskyte je nezávisle kovalentná väzba alebo (Ci-Cô);

    Z²⁰⁰ pri každom výskyte je nezávisle substituovaný alebo nesubstituovaný (Ci-Cô), substituovaný alebo nesubstituovaný fenyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -(Ci-Cô)-fenyl;

    substituenty Rd a R_e sú pri každom výskyte nezávisle H, alkyl, alkanoyl alebo SO₂-alkyl; alebo substituenty Ra, R_e a atóm dusíka, ku ktorému sú pripojené, spoločne vytvárajú 5- alebo 6- členný heterocyklický kruh;

    t pri každom výskyte je nezávisle celé číslo od 2 do 6;

    W pri každom výskyte je nezávisle priama väzba alebo O, S, S(O), S(O)₂ alebo NRf, kde substituent Rf pri každom výskyte je nezávisle H alebo alkyl; alebo substituent Ri je substituovaný alebo nesubstituovaný karbocyklický alebo heterocyklický kruh kondenzovaný s kruhom 2; a substituent R pri každom výskyte je nezávisle H, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl;

    p je 1 alebo 2; a b je 1 a symboly D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú každý nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, s podmienkou, že aspoň dva zo symbolov D₂, G₂, J₂, L₂ a M₂ sú CR_a; alebo

    480 b je 0 a jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je NR_a, jeden zo symbolov D₂, G₂, L₂ a M₂ je CR_a a zvyšok je nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z CR_a a N, kde substituent R_a má vyššie definovaný význam;

    vyznačujúci sa tým, že zahrnuje krok, v ktorom dochádza k reakcii chloridu kyseliny nasledujúceho všeobecného vzorca:

    Cl

    O v prítomnosti aprotickej bázy so dioxaborolanyl)anilínom reprezentovaným vzorcom:

    (4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2nasledujúcim všeobecným za vzniku 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2-ylového medziproduktu.
39. 45. Spôsob podľa nároku 44, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahrnuje krok, v ktorom dochádza k reakcii 4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioxaborolan-2ylového medziproduktu v prítomnosti tetrakis(trifenylfosfín)paládia a uhličitanu sodného s 3 jód-l//-pyrazolo[3,4-č/]pyrimidínom reprezentovaným nasledujúcim všeobecným vzorcom:

    481 kde:

    substituent R₂ je H alebo skupina všeobecného vzorca -Z^10,-Z¹⁰²;

    Z¹⁰¹ je kovalentná väzba, -(Ci-Cô)-, -(Ci-Có)- -0-, -(Ci-Cô)- -C(0)-, -(C,-C₆)- -C(0)0-, -(C,-C₆bC(O)-NH-, -(C,-C₆)-C(O)-N(C,-C₆)- alebo substituovaná alebo nesubstituovaná fenylová skupina;

    Z¹⁰² je atóm vodíka; substituovaná alebo nesubstituovaná alkylová skupina; substituovaná alebo nesubstituovaná cykloalkyiová skupina; substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkenyl, substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterocyklická skupina; alebo substituovaná alebo nesubstituovaná, nasýtená alebo nenasýtená heterobicyklická skupina; kde uvedený substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaná heterocyklická a substituovaná heterobicyklická skupina má jeden alebo viac substituentov každý nezávisle vybraný zo skupiny pozostávajúcej z hydroxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, halogénu, substituovanej alebo nesubstituovanej (Cj-Cô), substituovaného alebo nesubstituovaného arylu, substituovaného alebo nesubstituovaného -C(O)alkylu, substituovanej alebo nesubstituovanej alkoxyskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-0R, substituovanej alebo nesubstituovanej -N((Ci-C6)-OR)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-C(O)₂R, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cô)N(R)-(Ci-Cé)-OR, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-C6)-N(R)(Ci-Cô)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej -(Ci-Cô)C(O)N(R)-(Ci-C6)-N(R)₂, substituovanej alebo nesubstituovanej sulfónamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej ureidoskupiny,

    482 substituovanej alebo nesubstituovanej karboxamidoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej aminoskupiny, substituovanej alebo nesubstituovanej -N(R)-(Ci-C6)-0R, oxoskupiny a nasýtenej, nenasýtenej alebo aromatickej, substituovanej alebo nesubstituovanej heterocyklickej skupiny obsahujúcej jeden alebo viac heteroatómov vybraných zo skupiny pozostávajúcej z N, O a S; kde atómy dusíka uvedenej heterocyklickej skupiny alebo heterobicyklickej skupiny sú nezávisle prípadne substituované oxoskupinou, substituovaným alebo nesubstituovaným alkylom, substituovaným alebo nesubstituovaným arylom, substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)N(R)₂, substituovanou alebo nesubstituovanou -C(O)-(Ci-C6)-N(R)2, -C(O)-alkylom, -C(O)arylom, -C(O)heteroarylom, substituovanou alebo nesubstituovanou arylalkylovou skupinou alebo substituovaným alebo nesubstituovaným heteroarylalkylom; alebo substituovaný substituovaný substituovaný substituent R₂ je skupina všeobecného vzorca -B-E, kde B je substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná aminoskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkoxyalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylén, substituovaný alebo nesubstituovaný aminoalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylénkarbonyl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná aminoalkylkarbonylová skupina; a E je substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný cykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heterocykloalkyl, alebo nesubstituovaný (Ci-Côj-azacykloalkyl-, alebo nesubstituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylkarbonyl, azacykloalkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný azacykloalkylalkyl, substituovaný

    483 alebo nesubstituovaný heteroaryl-N(R)-(Ci-Cô)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-N(R)-(Ci-C6)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný aryl-(Ci-Cô)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl-(Ci-C6)-N(R)-, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroaryl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylkarbonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný alkylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylsulfonyl, substituovaný alebo nesubstituovaný heteroarylalkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný arylalkyl, substituovaná alebo nesubstituovaná azacykloalkylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná heteroarylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná arylkarbonylaminoskupina, substituovaná alebo nesubstituovaná alkylkarbonylaminoskupina alebo substituovaný alebo nesubstituovaný aryl; a substituent R₃ pri každom výskyte je nezávisle atóm vodíka, hydroxyskupina, substituovaný alebo nesubstituovaný alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-alkyl, substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-aryl alebo substituovaný alebo nesubstituovaný -C(O)-heteroaryl alebo substituovaná alebo nesubstituovaná alkoxyskupina;

    za vzniku zlúčeniny reprezentovanej nasledujúcim všeobecným vzorcom:

    484
40. 46. Spôsob podľa nároku 45, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahrnuje krok, v ktorom dochádza k reakcii karboxylovej kyseliny reprezentovanej nasledujúcim všeobecným vzorcom:

    O s oxalylchloridom a aprotickou bázou za vzniku chloridu kyseliny reprezentovaného nasledujúcim všeobecným vzorcom:

    O
41. 47. Spôsob podľa nároku 44, 45 alebo 46, vyznačujúci sa tým, že Z¹⁰⁰ je indolyl, ktorý je prípadne substituovaný substituentom R].

    485
42. 48. Spôsob podľa nároku 47, vyznačujúci sa tým, že Z¹⁰⁰ je l-metyl-indol-2yl alebo l-metyl-indol-3-yl.
43. 49. Spôsob podľa nároku 48, vyznačujúci sa tým, že (4,4,5,5-tetrametyll,3,2-dioxaborolanyl)anilín je reprezentovaný nasledujúcim všeobecným vzorcom:

    a 4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-ylový medziprodukt je reprezentovaný nasledujúcim všeobecným vzorcom:

    486
44. 50.

    Spôsob podľa nároku 49, vyznačujúci sa tým, že substituent R₂ je 4-(4-metylpiperazino) cyklohexyl.