SE437830B - Analogiforfarande for framstellning av 3-(1h-tetrazol-5-yl)-4h-pyrido/1,2-a/pyrimidin-4-on-derivat - Google Patents

Description

7805954-“0 2 R Q N'“"¶ 122 N / N N' Ra \ m I Ru vari R1, R2, R3 och R4, som kan vara lika eller olika, vardera be- tecknar väte, halogen, lägre alkyl, lägre alkoxi eller fenyl eller R3 och R4 sammantagna är :3CH2)n, där n är 3, 4 eller 5, eller farmaceutiskt godtagbara salter därav.

Substituenterna R1, R2, R3 och R4 kan definieras närmare på följande sätt: (a) halogen innefattar klor, brom, fluor och jod; (b) lägre alkyl innefattar både rakkedjiga och grenkedjiga, mättade alifatiska kolvätegrupper med 1-6 kolatomer, t.ex. metyl, etyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sek-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, n-hexyl, etc.; (c) lägre alkoxi innefattar C1-C6-alkoxigrupper, där alkyl- delen definieras såsom under (b) ovan. Exempel härpå är metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, isobutoxi, sek.-butoxi, ~ n-pentyloxi, isopentyloxi, n-hexyloxi, etc.; (d) R3 och R4 sammantagna kan vara \_djCH2)n, som repre- senterar en mättad fem-, sex- eller sjuledad, monocyklisk kolväte- grupp, som är kondenserad till A-ringen i pyrido/1,2-a/pyrimidin- ringsystemet, t.ex. i Q N N-_N / N g IV 0 | || \A \B I H / N WN N och \A \B 1 H n fß ll- n _ 3 by En föredragen utföringsform av föreliggande uppfinning inne- fattar föreningar med formeln _ --._ f-J-f-fl- _ . ._ .___ ___ ,_,., i 1- _ A ~ 'dn/Jø- w... _ ._ gå: 7805954-0 3 H1 O E! --|N R"" 2 8 *II §5 9 i I' vari R1, R2 och R3 har ovan angivna betydelser.

Inom denna grupp av föreningar utgör en föredragen under- grupp sådana föreningar, vari R1, R2 och R3 oberoende av varandra betecknar väte, lägre alkyl, lägre alkoxi, halogen eller fenyl. 1:1-, 122- och :<3 ken som helst av 6-, 7-, 8- eller 9-ställningarna i pyrido/1,2-a/ -substituenterna i förening I' kan föreligga i vil- pyrimidinringsystemet såsom det är numrerat ovan.

En mera föredragen utföringsform av föreliggande uppfinning innefattar föreningar med formeln R: 0 *vi Bg /< N I äfål “\~ “\N vari R1 och R2 har ovan angivna betydelser.

Inom denna grupp av föreningar omfattar en föredragen under- grupp sådana föreninar vari R1 och RZ oberoende av varandra är väte, lägre alkyl, lägre alkoci, halogen eller fenyl. R1- och R2-substi- tuenterna i föreningarna med formeln I' kan vara lokaliserade i vilken som helst av 6~, 7-, 8- och 9-ställningarna av pyrido/1,2-a/ pyrimidinringsystemet.

Ytterligare en mera föredragen utföringsform av föreliggan- de uppfinning innefattar föreningar med formeln 0 H N *ll ff N N” R2 _\ I H \l R1 III' 78059 54-0 4 vari R1 och R2 har ovan angivna betydelser.

Inom denna grupp av föreningar omfattar en föredragen under- grupp sådana föreningar vari R1 och R2 oberoende av varandra beteck- nar väte, lägre alkyl, lägre alkoxi, halogen, CF3 eller fenyl.

R2-substituenten i föreningarna med formel I" kan vara lokaliserad i vilken som helst av 6-, 7- och 8-ställningarna av pyrido/1,2-a/ pyrimidinringsystemet. Ännu en mera föredragen utföringsform av föreliggande upp- finning innefattar föreningar med formeln ;___ÅN ewa R *Y /Nxå \ \N El Ivuvø vari R1 och R2 oberoende av varandra är väte, lägre alkyl, lägre alkoxi, halogen eller fenyl.

Ytterligare en mera föredragen utföringsform av föreliggande uppfinning innefattar föreningar med formeln IIIIII vari R1 är väte, lägre alkyl, lägre alkoxi, halogen eller fenyl.

Ehuru R1-substituenten iföreningarna med formeln I""' kan vara lokaliserad i vilken som helst av 6-, 7-, 8- och 9-ställ- ningarna av pyrido/1,2-a/pyrimidinringsystemet föredras de 6-, 7- och 9-substituerade föreningarna. De mest föredragna monosubstitu- erade föreningarna är sådana med substituenten i 9-ställningen.

Eftersom föreningarna enligt föreliggande uppfinning är amfotera till naturen kan de omvandlas till salter av antingen syror eller baser genom att man behandlar nämnda föreningar med en i huvudsak ekvimolär mängd av en utvald syra eller bas i vattenlös- ning eller i ett lämpligt organiskt lösningsmedel såsom metanol , .-. _ v! gl: 7805954-0 eller etanol.

När dylika salter skall användas för human konsumtion måste de syror eller baser som utnyttjas för framställning av de farma- ceutiskt godtagbara salterna naturligtvis vara sådana som med nöd- vändighet bildar ogiftiga salter. Exempel på lämpliga syror inne- fattar klorvätesyra, bromvätesyra, jodvätesyra, salpetersyra, svavel- syra, fosforsyra, ättiksyra, mjölksyra, citronsyra, vinsyra, oxal- syra, bärnstenssyra, maleinsyra, glukonsyra, askorbinsyra och p-toluensulfonsyra. Farmaceutiskt godtagbara salter kan framställas av sådana baser som ammoniak, organiska aminer och metallsalter, t.ex. metallsalter innehållande natrium-, kalium-, kalcium-, magne- sium-, barium- och aluminiumkatjoner. Exempel på dylika baser är ammoniak, primära aminer såsom exempelvis n-propylamin, n-butyl- amin, etanolamin, etylendiamin, cyklohexylamin, bensylamin, etyl- amin, oktylamin och tris(hydroximetyl)aminometan, sekundära aminer såsom exempelvis dietanolamin, tertiära aminer såsom exempelvis trietanolamin, N-metylpyrrolidin, N-metylmorfolin och 1,5-diazadi- cyklo/4,3,0/-5-nonen och metallföreningar såsom exempelvis natrium- hydroxid, kaliumhydroxid, ammoniumhydroxid, natriumetoxid, kalium- metoxid, magnesiumhydroxid, kalciumhydroxid och aliminiumhydroxid.

Fackmannen torde inse att de föreningar som åskådliggörs ovan med formlerna I-I""' innehåller en tautomer väteatom och att således föreningarna kan existera i 1H-tetrazol-5-yl-formen (se formel Ia nedan) och i ZH-tetrazol-5-yl-formen (se formeln Ib nedan).

N I | N=-_.I-r 1/ N N' R | H __; \ “* w*- N Ia.

Föreliggande uppfinning innefattar båda formerna men av bekvämlig- hetsskäl har strukturen Ia godtyckligt utvalts i syfte att åskåd- liggöra föreliggande föreningar.

Föreningarna enligt föreliggande uppfinning kan framställas medelst nedan angivna metoder. ...___,..'..,;_.....-_,-, _... ., 78Û5954~Ü 6 Ett föredraget förfarande innebär att man omsåtter en nitril med formeln R1 0 R2 /, N I cN R3\ -N R” II vari R1, R2, R3 och RQ har de ovan, i samband med formel I angivna betydelserna, med ett azidsalt, som utgörs av ammonium-, substitu- erad ammonium-, natrium- eller litiumazid, i ett inert organiskt lösningsmedel. Nitrilen med formel II och azidsaltet kan användas i ungefärligen ekvimolära mängder. Den allmänna omvandlingen av nitriler till tetrazoler beskrivs av W.G. Finnegan et al i J. Am.

Chem. Soc. §Q (1958) 3908. Exempel på lämpliga azidsalter för detta förfarande tillhandahålls av Finnegan i hänvisningen ovan och inne- fattar azider såsom NaN3, LiN3, NH4N3, (n-C4H9)2NH2N3, C6H5NH3N3 och (CH3)4NN3. Azidsaltet kan tillsättas direkt eller kan alstras in situ, t.ex. genom dubbel sönderdelningsomsättning av natriumazid och ett lämpligt kioriasalt såsom Licl, Nà4c1, (C113) 4Nc1, ett.

Ehuru kondensationsreaktionen fortlöper inom ett brett temperatur- intervall är det föredraget i syfte att nedbringa reaktionstiderna till ett minimum att utnyttja förhöjd temperatur, t.ex. från ca 100OC upp till lösningsmedelssystemets återflödestemperatur. Det inerta organiska lösningsmedlet kan i allmänhet vara vilket som helst lösningsmedel med god förmåga att upplösa azidsaltet och som dessutom är kemiskt inert. Exempel på föredragna lösningsmedel är dimetylformamid, dimetylacetamid, dimetylsulfoxid och hexametylfos- foramid. Det mest föredragna lösningsmedlet är dimetylformamid.

Kondensationsreaktionen visar sig vara underkastad allmän syrakata- lys och utbytena förbättras således genom tillsats av sådana reagens som väteazid, aminhydrazider och Lewis-syror såsom BF3 till natriumaziden. Efter fullboradad reaktion kan tetrazolprodukten utvinnas från reaktionsblandningen genom avlägsnande av lösnings- medlet, spädning av återstoden med vatten och därefter surgöring av blandningen för erhållande av den önskade produkten med formel I. Produkten kan ytterligare renas genom omkristallisation och even- utellt omvandlas till ett farmaceutiskt godtagbart salt därav såsom .. ..,.....-.-._>._-, _ 7805954-0 7 beskrivits ovan. Efter kondensationen kan produkterna med formel I eventuellt ytterligare omsättas medelst i och för sig kända metoder för omvandling av en eller flera av substituenterna R1, R2, R3 och R4 till andra substituenter inom ramen för formel I.

En alternativ och föredragen variation av ovan angivna för- farande innebär att man kondenserar nitrilutgångsmaterialet med for- mel II med aluminiumazid i tetrahydrofuran, följt av ett surgörings- utvinningssteg såsom beskrivits ovan. Reaktionen kan lämpligen utfö- ras genom att man omsätter nitrilennæd formel II med aluminiumklo- rid och natriumazid i molära proportioner av respektive ca 1:1,3.

Ehuru temperaturen vid denna reaktion icke är kritisk har fördelakti- ga resultat uppnåtts vid lösningsmedlets âterflödestemperatur.

En annan alternativ variation av ovan angivna förfarande in- nebär att man upphettar den önskade nitrilföreningen med formel II med antingen väteazid i ett inert organiskt lösningsmedel såsom bensen, xylen eller toluen eller med natriumazid och ättiksyra i butanol. Vid detta förfarande krävs icke något surgöringssteg för utvinning av den önskade slutprodukten.

Ett alternativt och synnerligen föredraget förfarande för framställning av föreningarna med formel I innebär att man omsätter en akrylatmellanprodukt med formeln 111 :<2 / N 123 \ imcH=c(cr;)co2c2H5 Ra v: vari R1, R2, R3 och R4 har de ovan, i samband med formel I angivna definitionerna, med aluminiumazid i tetrahydrofuran. De föredragna reaktionsbetingelserna, dvs. molförhållanden och temperaturinter- vall, är de som har beskrivits ovan i samband med omvandlingen av nitrilen till tetrazol med Al(N3)3. Produkten med formel I kan be- kvämt utvinnas från reaktionsblandningen genom tillsats av en till- räcklig mängd vatten, följt av surgöring för utfällning av den önskade föreningen med formel I. Tetrazolprodukten med formel I kan eventuellt därefter omvandlas på ovan beskrivet sätt till ett far- maceutiskt godtagbart salt eller till en annan produkt med formel 2 3 I med annorlunda R1-, R -, R - eller R4-substituenter.

FOOR QUALITY i 78Û5954°0 8 Ett ytterligare föredraget förfarande för framställning av föreningarna med formel I innebär att man omsätter en 2-aminopyridin med formeln Rl 2 R ÄN l \ 113 I NH, R; VII yari Rl, R2, R3 och R4 har de ovan, i samband med formel I angivna betydelserna, med etyletoximetylencyanoacetat med formeln H C H O-CH=C(CN)CO2C2 5 2 5 VIII och aluminiumazid i tetrahydrofuran. Ungefärligen ekvimolära mängder av de tre reaktanterna används och aluminiumaziden kan bekvämt fram- ställas in situ genom omsättning av natriumazid och aluminiumklorid i ett molförhâllande av respektive ca 3:1; För bästa resultat utförs reaktionen vid lösningsmedlets återflödestemperatur. Efter fullbor- dad reaktion kan den önskade produkten utvinnas genom tillsats av en tillräcklig mängd vatten, följt av surgöring för utfällning av för- eningen med formel I från reaktionsblandningen. Produkten kan på ovan beskrivet sätt ytterligare omsättas för framställning av ett farmaceutiskt godtagbart salt därav eller en annan produkt med for- mel I med annorlunda Rl-, R2-, R3- eller R4~substituenter.

Ovan angivna förfarande utgör en föredragen utföringsform av föreliggande uppfinning, eftersom den möjliggör att förening I direkt 7805954-0 9 kan framställas utgående från det basiska 2-aminopyridinutgângsmate- rialet och etyletoximetylencyanoacetatutgångsmaterialet utan att man först behöver framställa och isolera en eller flera av de mellanpro- dukter som krävs vid ovan angivna alternativa metoder.

Nitrilutgångsmaterialen med formel II kan framställas me- delst kända metoder. En sådan metod åskådliggörs med följande reak- tionsschema 2 RI C H O C R / N 2 5 2 \C //C02C2H5 . 33 ï/IL NHE '. + H 5 1' C VII _ IX c2H5o2C co c H l C/ 2 2 5 2 H R // N RB \\ | //CH inert lösn.medel, Åš Ä NH / R eller pölyfosforsyra (PPA) V El 0 1 / N - 3 \\ \\ I flytande NH3 // NI,H\T/CONHÉ R 1 t t kit 1, f J ' 4 N sâägâad är H3 \ \N R ' ny, IV III 78@5954=Û 10 RJ' 0 R- / m CN dehydratiseringsmedel, 3 \\ \\ I g x 'R N t ex Pocl f 4 ~ - 3 1 R II 2~aminopyridinutgångsmaterialen med formel VII är kända för- eningar eller kan framställas medelst inom tekniken kända metoder.

Kondensationen av 2-aminopyridiner med formel VII med di- etyletoximetylenmalonat med formel IX för framställning av estrarna med formel IV är väl dokumenterad i litteraturen (se redogörelsen för teknikens ståndpunkt ovan och i synnerhet den amerikanska patent- skriften 3 585 198, J. Chem. Soc. (C) (1971) 2735, J. Org. Chem. åå (1968) 3015, Arzneim.-Forsch. gå (1972) 815 och J. Amer. Chem. Soc.

ZQ (1948) 3348 och de däri anförda hänvisningarna).

Amidmellanprodukterna med formel III kan erhållas genom be- handling av estrarna med formel IV med flytande ammoniak, ammonium- hydroxid eller en lösning av ammoniak i en lägre alkanol (t.ex. met- anol eller etanol), som eventuellt innehåller natriummetoxid såsom katalysator. Reaktionen utförs lämpligen i ett slutet kärl vid ång- badstemperatur, När koncentrerad ammoniumhydroxid används har go- da resultat även uppnåtts vid rumstemperatur vid en reaktionstid av en till två dagar utan att man behöver använda antingen värme eller ett slutet kärl.

Amidmellanprodukterna med formel III kan omvandlas till ni- trilerna med formel II genom användning av ett dehydratiseringsmedel såsom exempelvis fosforpentoxid, tionylklorid, p-toluensulfonylklo- rid:pyridin eller, vilket isynnerhet föredras, fosforoxiklorid. De- hydratiseringen utförs vid förhöjd temperatur och i synnerhet under âterflödesbetingelser.

Akrylatutgångsmaterialen med formel VI kan framställas genom att man kondenserar ungefärligen ekvimolära mängder av en 2-amino- pyridinförening med formel VII med etyl/etoximetylencyanoacetat i närvaro eller frånvaro av ett inert organiskt lösningsmedel, t.ex. ett aromatiskt kolväte såsom toluen. Reaktionen utförs företrädesvis »PQfiR sunny i i 7805954-0 11 vid förhöjd temperatur, t.ex. 100°C. Vissa av akrylaterna med for- mel Vï (dvs. när pyridinringen är osubstituerad eller substituerad i 3-, 4- eller 6-ställningen med metyl) avslöjas av Antaki i J. Amer.

Chem. Soc. §Q (1958) 3066 och av Nishigaki et al. i J. Heterocycl.

Chem. § (1971) 759.

Enligt en annan aspekt av föreliggande uppfinning tillhanda- hålls ett sätt att inhibera eller förebygga uppkomsten av symptomen från en allergisk reaktion, t.ex. allergisk bronkialastma eller allergiska riniter, hos ett däggdjur, som är känsligt för en dylik reaktion, varvid sättet innebär att man till däggdjuret administre- rar en prodylaktiskt effektiv dos av en förening med formel I eller ett farmaceutiskt godtagbart salt därav.

Föreningarna enligt föreliggande uppfinning kan administre- ras antingen såsom separata terapeutiska medel eller såsom bland- ningar med andra terapeutiska medel. De kan administreras separat men administreras vanligtvis i form av farmaceutiska kompositioner, t.ex. blandningar av de aktiva medlen med lämpliga farmaceutiska bärare eller utspädningsmedel. Exempel på dylika kompositioner inne- fattar tabletter, pastiller, kapslar, pulver, aerosolsprayer, vat- tenhaltiga eller oljehaltiga suspensioner, siraper, tinkturer, mixturer och vattenhaltiga lösningar. Föreningarna administreras företrädesvis oralt men kan även administreras genom inhalation, injektion, instillation PÜÛR QUÄLITY ..._~..,____._...,____».._..._,___,__,. ..- _ _, 'Å 78Û5954-Û 12 eller genom implantation för kontrollerat frigörande av läkemedlet från en fast bärarreservoar.

Beskaffenheten av den farmaceutiska kompositionen och den far- maceutiska bäraren eller utspädningsmedlet är naturligtvis beroende av det önskade administreringssättet. Orala kompositioner kan t.ex. föreligga i form av tabletter eller kapslar och kan innehålla kon- ventionella excipienter såsom bindemedel (t.ex. sirap, akacia, ge- latin, sorbitol, dragant eller polyvinylpyrrolidon), fyllmedel (t.ex. laktos, socker, majsstärkelse, kalciumfosfat, sorbitol eller glycin), »- smörjmedel (t.ex. magnesiumstearat, talk, polyetylenglykol eller ki- seldioxid),_desintegreringsmedel (t.ex. stärkelse) och vätmedel (t.ex. natriumlaurylsulfat). Orala flytande preparat kan föreligga i form av vattenhaltiga eller oljehaltiga suspensioner, lösningar, emul- sioner, siraper, tinkturer, mixturer, etc. eller kan föreligga så- som en torrprodukt för rekonstituering med vatten eller annan lämp- lig bärare före användning. Dylika flytande preparat kan innehålla konventionella tillsatsmedel såsom suspenderingsmedel, smakämnen, utspädningsmedel och emulgeringsmedel. För parenteral administrering, inhalation eller instillation kan man använda lösningar eller suspen- sioner av en förening med formel I med konventionella farmaceutiska bärare, t.ex. såsom en aerosolspray för inhalation, en vattenlösning för intravenös injektion eller instillation eller såsom en oljehal- tig suspension för intramuskulär injektion. Föreningarna kan även administreras medelst inhalatorer eller andra anordningar, som med- ger att de aktiva föreningarna i form av torra pulver kommer i direkt kontakt med lungorna.

Föreningarna enligt föreliggandeuypfinningeller farmaceutiska kompositioner därav kan administreras till allergiska humanpatienter i orala enkeldoser om ca 0,05-500 mg aktiv beståndsdel och orala mul- tipeldoser uppgående till totalt ca 1000 mg/dygn av aktiv bestånds- del. Vid administrering genom inhalation eller instillation ges i allmänhet lägre doser, dvs. i storleksordningen ca l/10 av den nor- mala orala doseringen för den speciella föreningen ifråga. De angiv- na värdena är emellertid endast belysande och läkaren bestämmer na- turligtvis slutgiltigt den dosering som är mest lämplig för en speci- ell patient ifråga på basis av sådana faktorer såsom ålder, vikt, symptomens svårighetsgrad och det för administrering avsedda speciel- la medlet ifråga. 7805954-0 13 Nedan följer en redogörelse för djurförsök utförda in vivo, vilka visar att föreningarna med formel I är synnerligen potenta an- tiallergiska medel.

Data avseende biologisk aktivitet Den massundersökningsmetod avseende reagininducerad passiv kutan anafylaxi (PKA) hos råtta som används för utvärdering av före- liggande föreningar anses allmänt såsom en av de bästa djurmodeller- na för att förutsäga den antiallergiska aktiviteten av testförening- ar hos människa. I korthet innebär metoden passiv sensibilisering av vissa ställen på huden hos försöksdjuren med reaginiska anti- kroppar, följt av administrering 24 timmar senare av det för prov- ning avsedda läkemedlet och antigentillförsel. Det allergiska svaret uppmäts med användning av Evans blåa färgämne, och svarets storlek bestäms av fläckens diameter vid injektionsstället. Närmare detaljer avseende testet ges nedan.

Material Ovalbumin Üuistalliserat 5 ggr) Dinitrobensensulfonsyra, Na+-salt Bordetella pertussis-vaccin - fas I 10-20 x 109 avdödade organismer/ml.

Aluminiumhydroxidgel- 10 mg/ml.

Kaliumkarbonat Sprague-Dawley-(S/D)-råttor av hankön - 200 g Sprague-Dawley-råttor av honkön - 100 g Buffrad tris-saltlösning (TBS) - 0,02 M 2-amino-2- hydroximetyl-l,3-propandiol (Tris) 0,15 M NaCl, pH 8,2 Antigenframställning - DNP-d EA En substituerad ovalbuminantigen användes både såsom immu- nogen och såsom allergiframkallande antigen. Antigenen framställdes på följande sätt: 500 mg ovalbumin (EA) och 500 mg KZCO3 upplöstes i 25 ml destillerat vatten och omrördes vid rumstemperatur under 5 minuter. 500 mg natriumsalt av dinitrobensensulfonsyra (tidigare om- kristalliserat ur varm absolut etanol) tillsattes därefter långsamt under kontinuerlig omröring. Reaktionsblandningen placerades däref- ter omedelbart i mörker och fick stå under omröring ytterligare 2 timmar. Efter dessa 2 timmar infördes blandningen i en lämplig dia- 7ßß5954~0 1A lysslang och dialyserades mot fem portioner (4 liter vardera) destil- lerat vatten vid SOC. Efter dialysen lyofiliserades produkten och förvarades vid rumstemperatur i en brunfärgad eller bärnstensfärgad behållare. Den erhållna antigenen erhölls såsom ett ljusgult, amorft fast material, som var lättlösligt i vatten eller saltlösning. Den betecknas i det följande såsom DNP-denaturerat ovalbumin (DNP-d EA).

Immuniseringsmetod för IgE-framställning Vuxna Sprague-Dawley-råttor av hankön användes såsom källa för reaginrikt antiserum för PKA-modellen. Immuniseringen utgjordes av en kombination av DNP-d EA på Al(0H)3-gel och B. pertussis-vaccin.

Framställning av DNP-d EA-gelimmunogenen skedde på följande sätt: DPN-d EA upplöstes i TBS så att man erhöll en koncentration av 10 mg/ml. Därefter sattes l ml av denna lösning långsamt till 10 ml Al(OH)3-gel (10 mg fast material/ml) under konstant omröring vid rums- temperatur. Blandningen omrördes ytterligare 30 minuter för att ombe- sörja jämn adsorption av antigen på gelen.

Det erhållna preparatet användes därefter i kombination med B. pertussis-vaccin - fas l för immunisering av S/D-råttor av hankön på följande sätt: till varje råtta administrerades 0,1 ml DNP-d EA- -gelsuspension intramuskulärt i varje bakben (200 pg DNP-d EA och 2 mg gel totalt). Därefter administrerades intraperitonealt 1,0 ml B. pertussis-vaccin (l0-20 x 109 organismer). Användningen av lätt eter- anestesi under detta förfarande rekommenderas för att ombesörja rik- tig injicering intramuskulärt och intraperitonealt. 9 dygn efter im- munisering (men icke mer än l0) tappades djuren på blod genom hjärt- punktur eller abdominalaortakanylering under eter- eller pentobarbi- talanestesi. Det tillvaratagna helblodet fick koagulera, serumet av- skiljdes genom centrifugering och de enskilda serumproverna förvara- des frysta till dess de analyserades med avseende på IgE-halt.

Val av serumprover med hög titer för poolning Separata serumprover massundersöktes med avseende på rea- ginisk antikroppkoncentration före poolning med andra sera, eftersom icke samtliga råttor svarade på immuniseringsförfarandet med reagin- produktion. För detta ändamål använde man en 1:50-spädning av serum med saltlösning från varje immuniserad råtta. Intradermala injektio- ner om 0,05 ml av de utspädda sera utfördes på de rakade ryggarna hos två små rått0r av honkön, 100-120 g. Flera serumprover kunde tes- tas samtidigt hos recipientdjuren. Efter en latent period om 24-48 7805954-0 15 timmar tillfördes antigen genom intravenös administrering till varje råtta av l mg DNP-d EA i 0,5 ml saltlösning innehållande 0,5 % av Evans blåa färgämne. Sera, som uppvisade prositiva PKA-reaktioner vid spädningen 1:50, uppmätt 20-30 minuter efter tillförsel av anti- gen, sammanfördes, uppdelades i små alikvoter och förvarades vid -70°C eller därunder till dess de användes. Negativa sera kasserades.

IgE-titern hos antiserapoolen bestämdes därefter. Tvåfaldiga serieutspädningar (1:5 till l:l60) av icke upphettade sera och sera upphettade vid 560 under 1 timme framställdes i saltlösning, och 0,05 ml av varje spädning injicerades intradermalt på ryggarna hos recipienthonråttorna. Minst fyra djur användes både vid titrering- arna med upphettat serum och icke upphettat serum. Efter en latent period om 24 timmar administrerades till varje grupp 1 mg DNP-d EA i 0,5 ml av en 0,5%-ig lösning av Evans blåa färgämne. Reaktionerna avlästes genom reflektering av huden 20-30 minuter efter administre- ring. Intensiteten (blåfärgningen) och fläckens diameter uppmättes och registrerades. Pooltitern definieras såsom det inverterade vär- det av den största spädning av icke upphettat serum som ger ett mät- bart PKA-svar (mer än 6 mm diameter) hos minst hälften av recipient- djuren. Antiserumpooler med en titer av 50 eller däröver var godtag- bara för PKA-massundersökningen. Dessa pooler sterilfiltrerades och förvarades vid -700 eller därunder till dess de användes. Man kunde även utföra lyofilisering i små alikvoter. I PKA-massundersökningsmetod l. Qlur: Unga Sprague-Dawley-råttor av honkön, 90-110 g, an- vändes. Råttorna konditionerades (acklimatiserades) under minst 5 dygn före användning genom utsättande av föda och vatten. 2. Passiv sensibilisering: Försöksdjuren preparerades för passiv sensibilisering genom att man noggrant rakade områden på var- dera sidan av ryggen med en fintandad klippmaskin. Under användning av en 7x16 mm nål, monterad på en l ml tuberkulininjektionsspruta, utfördes intradermala injektioner av saltlösningsutspädningar av an- tiserumpoolen. Fyra spädningar (två på varje sida) av antiserum an- vändes. De exakta spädningsgrader som användes var beroende av poo- lens titer. Om t.ex. anitserumpoolen hade en titer av 50 användes spädningar av 1:10, 1:20, 1:30 och 1:40; om pooltitern var 100 var spädningsgraderna 1:20, 1:40 och 1:80. Den ordning i vilken varje spädninq placerades var antingen motsols eller medsols för att under- Ikjclfi QUÅÜ T? .___ 7805954-0 16 lätta utvärderingen. Den latenta perioden var minst 24 timmar och högst 48 timmar. 3. Läkemedelsadministrering, standardprov och testföreningar: Fyra djur användes för varje testförening. Dinatriumkromglykat (DSCG), solubiliserat i saltlösning, administrerades intravenöst vid 'tidpunkten för antigentillförseln. Tetrazoltestföreningarna solubi- liserades i en vattenlösning av natriumbikarbonat och administrera- des intravenöst eller peroralt l-5 respektive 10 minuter före anti- gentillförsel. 4. Antigentillförsel och reaktionsutvärdering: Framkallandet av PKA-svar åstadkoms genom intravenös administrering till varje för- söksråtta av l mg DNP-d EA i 0,5 ml av en 0,5%-ig saltlösning av Evans blåa färgämne. PKA-reaktionerna var maximala 20-30 minuter ef- ter antigentillförsel. Reaktionerna utvärderades visuellt med avseen- de på färgintensitet och medeldiameter hos fläckarna, varvid mätning- arna skedde vid varje ställe för tillförsel av antiserumspädningen.

Båda bestämningarna utfördes genom refleáion av huden. I jämförelse- syfte var antalet försöksdjur i kontrollgruppen (obehandlade djur) minst 5 % och vanligtvis 10 % av det totala antal djur som testades på en viss bestämd dag.

Konstaterad läkemedelsinhibering anges såsom den procentuel- la minskningen av den effektiva antiserumtitern hos behandlingsgrup- perna relativt kontrollgrupperna.

Resultat Resultaten för vissa av de föredragna föreningarna enligt fö- 'religgande uppfinning vid intravenös och peroral administrering åter- ges i tabell l nedan jämte data för DSCG. Resultaten anges såsom ID - värdet, dvs. den dos av föreningen som inhiberar 50 % av svaret.

Tabell l PKA-massdata för råtta avseende 3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H- 50 -pyrido/l,2-a/pyrimidin-4-oner .srflsas R: o N _Ng n? | .Ü H \ \ 113 N RÅ* Fmmßtäüd enl. ex. l,2,3 VJCONOWUI 10 ll 12. 13 14 15 16 17 DSCG R_l å.

H H H on; H H H cnjcnå æ1cn¿(cn¿)5 H c6H5 H cl H H ~ H cnfi H H "à ' H H H H H H H CH3 H 17 ïliilïåmiüilåttflïüïflïüïfl 7805954~0 11350 i Ing/kg i a- m- H 0.06 ~ 0,1 H ^*o.1 H 2.1; H o.on H ~v 0.1 H 0,95 H «vo.o7 CH3 o.oo66 CH; 0.014 CÉH5 -o.oo53 CH3(CH2)2 o.oo4f CH3(CH2)3 o.oo7 Cl f o.os CH3° 0.07 'H 0.2 ^'O.6 >>30 Uppfinningen åskådliggörs närmare medelst följande utförings- exempel, som avser framställning av utgångsmaterialen och förening- arna enligt föreliggande uppfinning. Samtliga temperaturer avser Celciusgrader. "Skellysolve B" är en petreleumeterfraktion med kok- punktsintervallet 60-680 och som i huvudsak består av n-hexan. 7805954-0 18 FRAMSTÄLLNING AV UTGÅNGSMATERIAL 2-aminopyridiner (med den allmänna formeln VII) Exempel A: Försök Al: a. Bensyl-(5-etyl-2-pyridyl)karbamat 2-amino-5-etylpyridin 4,04 g (l4,7 mmol) difenylfosforylazid sattes till en lösning av 2,22 g (l4,7 mmol) 5-etylpyridin-2-karboxylsyra, 1,485 g (l4,7 mmol) trietylamin och 1,75 g (l6,l7 mmol) bensylalkohol i 23,5 ml 1,4-dicxan och blandningen återloppskokades under l timme. l,4-di- oxanen avlägsnades under reducerat tryck. En lösning av återstoden i toluen tvättades i tur och ordning med vatten, en vattenlösning av natriumbikarbonat och saltlösning och torkades därefter över natri- umsulfat. Toluenet avlägsnades och återstoden omkristalliserades ur 2-propanol, varvid man erhöll 1,9 g (50,5 %) bensyl-(5-etyl-2-pyri- dyl)karbamat med smältpunkten 125-1270. Ett analytiskt prov hade smältpunkten 127-130? Analys Ber. för C15Hl6N2O2: C 70,29 H 6,29 N 10,93 % Funnet: C 70,01 H 6,32 N 10,72 % b. 2-amino-5-etylpyridin En suspension av l,9 g (7,43 mmol) bensyl-(5-ety1-2-pyridyl)- karbamat och 0,4 g av en katalysator av 10 % palladium på kol i 100 ml etanol skakades med väte vid ett tryck av 3,5 kg/cmz under 2 tim- mar. Katalysatorn avlägsnades genom filtrering och filtratet koncen- trerades för erhållande av 0,9 g (99,4 %) 2-amino-5-etylpyridin så- som en färglös olja.

Försök A2: a. Bensyl-(5-n-butyl-2-pyridyl)karbamat 1,5 g (5,58 mol) difenylfosforylazid sattes till en lösning av 1,0 g (5,58 mol) 5-n-butylpyridin-2-karboxylsyra, 0,565 g (5,58 mmol) trietylamin och 0,663 g (6,l2 mmol) bensylalkohol i 9,0 ml 1,4-dioxan vid 250. Lösningen upphettades till dess en exotermisk re- 2-amino-5-n-butylpyridin aktion startade. När den exotermiska reaktionen hade upphört upphet- tades lösningen under återflöde 1,5 timmar. Reaktionsblandningen kon- centrerades och återstoden upplöstes i toluen. Denna lösning tvätta- des i tur och ordning med vatten, en 10%-ig vattenlösning av natri- umbikarbonat och saltlösning och torkades därefter över natriumsul- fat. Lösningen koncentrerades och återstoden omkristalliserades ur 2-propanol för erhållande av 0,91 g (57%) av den i rubriken angivna ,,ii,.~--rfi:IfT7""P Pasi: ššfåïffiißïflïfig 7805954-0 19 föreningen med smältpunkten 142-1430.

Analys Ber. för Cl7H20N2O2: C 71,80 H 7,09 N 9,85 % Funnet: C 71,72 H 6,85 N 9,87 % b. 2-amino-5-n-butylpyridin En blandning av 6,5 g (22,86 mmol) bensyl-(5-n-butyl-2- -pyridyl)karbamat och 2,7 g av en katalysator av 10% palladium på kol i 400 ml etanol skakades vid rumstemperatur under 2 timmar i en väteatmosfär vid ett begynnelsetryck av 3,52 kg/cmz. Blandningen filtrerades och filtratet reducerades till torrhet, varvid man er- höll 3,42 g (99,7 %) 2-amino-5-n-butylpyridin med smältpunkten 30- -330 (litteraturvärde 35-360 enligt Helv.Chim.Acta åg (1956) 505)- Försök A3: 2-amino-5-fenylnyridin En lösning av 4,0 g (0,02l mol) 2-klor-5-fenylpyridin i 160 ml torr dietyleter sattes droppvis till en lösning av 3,39 g (0,l5 gramatomer) natrium i 160 ml flytande ammoniak, som innehöll 0,095 g ferronitrathexahydrat. Den erhållna suspensionen fick återloppskoka 4 timmar. Ammoniumklorid tillsattes och ammoniaken avdrevs. Återsto- den behandlades med 5 ml av en 5%-ig vattenlösning av natriumhydroxid.

Blandningen filtrerades och vattenskiktet extraherades med 2 x 100 ml eter. De kombinerade eterskikten tvättades med saltlösning och tor- kades över natriumsulfat. Lösningen koncentrerades och återstoden om- kristalliserades ur metylcyklohexan. Produkten triturerades med 100 ml kloroform. Blandningen filtrerades och filtratet indunstades för erhållande av 1,3 g (36 %) 2-amino-5-fenylpyridin med smältpunkten 133~135° (litteraturvärde 1330 enligt chem. Ber. 91 (1958) 247.

Försök A4: 2-amino-3,5-dimetylpyridin 60 mg ferronitrathexahydrat, följt av 4,5 g (0,l96 gramato- mer) natrium, sattes till flytande ammoniak. Till denna blandning sattes en lösning av 10,0 g (0,093 mol) 3,5-dimetylpyridin i 21 ml N,N-dimetylanilin under en tidsperiod av 5 minuter. Ammoniaken av- drevs och återstoden upphettades under kväve medelst ett oljebad, som hölls vid 1800 under 18 timmar. Den kylda återstoden behandlades med 50 g is, följt av 50 ml 2N natriumhydroxid. Blandningen triturerades 2 timmar och filtrerades därefter. Dettillvaratagna fasta materialet tvättades med 2 x 100 ml kokande toluen. Toluenskiktet separerades från kombinationen av filtrat och tvättvätskor, koncentrerades till ca 50 ml och extraherades med 5 x 20 ml av en 5%-ig vattenlösning PQOR QÜ 4%; 7805954-0 20 av ättiksyra. De kombinerade extrakten filtrerades och indunstades till torrhet. Återstoden omkristalliserades ur metylcyklohexan, var- vid man erhöll 4,9 g (29 %) 2-amíno-3,5-dimetylpyridinacetat med smältpunkten 85-950. 2,5 g (l,37 mmol) av acetatet suspenderades kortvarigt i 50 ml lN natriumhydroxid. Blandningen extraherades med metylenklorid.

Extraktet tvättades med vatten, torkades och koncentrerades för er- hållande av 2-amino-3,5-dimetylpyridin såsom en olja.

Försök A5: 2-amino-3-n-propylpyridin Den i rubriken angivna föreningen framställdes genom direkt aminering av 3-n-propylpyridin medelst en metod, som liknade den som har beskrivits för framställning av 2-amino-3-etylpyridin. Begynnel- seblandningen av 2-amino-3-n-propylpyridin och 2-amino-5-n-propylpy- ridin separerades medelst högtrycksvätskekromatografi. 2-amino-3-n- -propylpyridinen omkristalliserades ur n-pentan för erhållande av ett material med smältpunkten 25-270.

Exempel B. Karboxamidmellannrodukter med den allmänna for- meln III 7 I Försök B1=4-oxo-4n-pyriao/1,2-a/pyrimiain-3-karboxamia En stålbomb innehållande 14,0 g (0,064 mol) 4-oxo-4H-pyri- do/l,2-a/pyrimidin-3-karboxylat och ca 55 ml flytande ammoniak upp- hettades på ångbad under 2 timmar och förvarades därefter 18 timmar vid 250. Ammoniaken avlägsnades, varvid man erhöll ett fast materi- al, som omkristalliserades ur 2-metoxietanol för erhållande av 4,2 g (34,6 %) av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 266-26s° (litteraturvärae 264-26s° enligt J. chem. soc. (c) (1971) 2735. ' Försök B2: 7-klor-4-oxo-4H-pyrido/l,2-a/pyrimidin-3-karbox- fliá En suspension av 9,7 g (0,038 mol) etyl-7-klor-4-oxo-4H-py- rido/l,2-a/pyrimidin-3-karboxylat i 75 ml ammoniumhydroxid (speci- fik vikt 0,9) triturerades 18 timmar vid rumstemperatur. Blandningen filtrerades och det tillvaratagna fasta materialet omtriturerades vid rumstemperatur i 100 ml färsk ammoniumhydroxid (specifik vikt 0,9) under ytterligare 18 timmar. Det fasta materialet tillvaratogs genom filtrering, tvättades med kallt vatten och torkades för erhållande av 7,7 g (90%) av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 281-2850. Ett litet prov omkristalliserades ur 2-metoxietanol för nn V"=ïggçf“ö ...->«--~~_.......»~. . . _-.- ._ 7805954-0 21 erhållande av ett analytiskt material med smältpunkten 285-2870.

Analys Eer. för C9H6ClN3O2: C 48,34 H 2,70 Cl 15,86 N 18,7 Funnet: C 48,54 H 2,73 Cl 15,46 N 19,1 % Exempel C. Nitriler med den allmänna formeln II Försök Cl: 4-oxo-4H-Qyrido/1,2-a/pyrimidin-3-karbonitril En blandning av 3,6 g (0,0l9 mol) 4-oxo-4H-pyrido/1,2-a/- pyrimidin-3-karboxamid och 50 ml fosforoxiklorid återloppskokades 2 timmar. Blandningen koncentrerades och den fasta återstoden fördela- ~~ des mellan metylenklorid och en vattenlösning av natriumkarbonat.

Metylenkloridskiktet tvättades med vatten, torkades och koncentrera- des. Återstoden omkristalliserades ur toluen för erhållande av 2,5 g (76,8 %) av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 219- -2210. Omkristallisation ur etanol gav ett analytiskt material med smältpunkten 219-2200 (litteraturvärde 2080 enligt J. Amer. Chem.

Soc. §Q (1958) 3066).

Försök C2: 7-klor-4-oxo-4H-pyrido/1,2-a/pyrimidin-3-karbo- nitril En suspension av 7,55 g (33,8 mmol) 7-klor-4-oxo-4H-pyrido- /1,2-a/pyrimidin-3-karboxamid i 200 ml fosforoxiklorid återloppskoka- des 3,5 timmar. Lösningen koncentrerades. En lösning av det återstå- ende fasta materialet i metylenklorid sattes till isvatten. Metylen- kloridskiktet koncentrerades och återstoden omkristalliserades ur 2- -metoximetanol för erhållande av 4,0 g (57,6%) av den i rubriken an- givna föreningen med smältpunkten 239-2410.

Analys Ber. för C9H4C1N3O: C 52,57 H 1,96 Cl 17,25 N 20,44 % Funnet: C 52,52 H 2,08 Cl 16,60 N 20,32 % Exempel D. Akrylater med den allmänna formeln VI Försök Dl: Etyl-2-cyano-3-(5-metyl-2-pyridylamino)akrylat En blandning av 5,0 g (46,2 mmol) 2-amino-5-metylpyridin och 7,82 g (46,2 mmol) etyletoximetylencyanoacetat upphettades me- delst ett oljebad, som hölls vid 1000 under 15 minuter. Blandningen kyldes och det resulterande fasta materialet omkristalliserades i acetonitril för erhållande av 5,4 g (50,5 %) av den i rubriken angiv- na föreningen med smältnunkton 170-171,50.

Analys Ber. för Cl2Hl3N3O2: C 62,32 H 5,67 N 18,17 % Funnet: C 62,44 H 5,74 N 18,05 % -'«l. 4.x«»:ân:%¿J{3ïš cëïxëdïrrfišl 7805954-0 22 Försök D2: Etyl-2-cyano-3-(5-etyl-2-pyridylamino)akrylat Den i rubriken angivna föreningen med en smältpunkt av 155- -1569 framställdes i ett utbyte av 25,4 % utgående från 2-amino-5- -etylpyridin och etyletoximetylencyanoacetat på ett sätt liknande det som har beskrivits ovan för framställning av ety1-2-cyano-3-(5-met- yl-2-pyridylamino)akrylat enligt försök Dl.

Analys Ber. förl3Hl5N302: C 63,66 H 6,16 N 17,13 % Funnet: C 63,54 H 6,09 N 17,02 % Försök D3: Etyl-2-cyano-3-(5-n-butyl-2-pyridylamino)akrylat En lösning av 3,72 g (23,43 mmol) 2-amino-5-n-butylpyridin och 3,96 g (23,43 mmol) etyletoxilfletylencifanøacetat i tøluen upphettades 10 minuter medelst ett oljebad, som hölls vid 1000. Lösningen kyldes och behandlades med 200 ml Skellysolve B. Blandningen triturerades 18 timar vid rumstemperatur och filtrerades därefter. Den tillvara- tagna, i rubriken angivna föreningen (4,3 g;67.2 %) hade en smält- punkt av 69-730.

Försök D4: Ety1-2-cyano-3-(5-fenyl-2-pyridylamino)akrylat En blandning av 1,19 g (6,99 mmol) 2-amino-5-fenylpyridin och 1,18 g (6,99 mmol) etyletoximetylencyanoacetat smältes vid en olje- badstemperatur av 1000 under 15 minuter. Produkten omkristallisera- des i toluen för erhållande av 1,3 g av den i rubriken angivna för- eningen med smältpunkten 126-1340. En ytterligare sats av produkten (0,3 g) med smältpunkten 119-1260 erhölls ur moderlutarna. Det tota- la produktutbytet var 1,6 g (78 %).

Försök D5: Etyl-2-cyano-3-(3-metyl-2-pyridylamino)akrylat En lösning av 5,0 g (0,0462 mol) 2-amino-3-metylpyridin och 7,82 g (o,o46z moi) ebzletoxiflletylencyanoacetat i 4 m1 toluen upphettades 15 minuter medelst ett oljebad, som hölls vid l00o. Lösningen kyl- des och 9,1 g (85 %) av den i rubriken angivna föreningen tillvara- togs genom filtrering. Produkten, som hade en smältpunkt av 139-1430, omkristalliserades ur 2-propanol, varvid man erhöll ett analytiskt prov med smältpunkten 144-1460.

Analys g Ber. för Cl2Hl3N3O2: C 62,32 H 5,67 N 18,17 % Funnet: C 61,87 H 5,63 N 18,42 % Försök D6: Ety1-2-cyano-3-(3,5-dimetyl-2-pyridylamino)akrylat Den i rubriken angivna föreningen med en smältpunkt av 156- -1590 (vid omkristallisation ur metylcyklohexan) framställdes i ett _M_"~_iii , _ Ü. _;;¿;WwH »-- 7805954-0 23 \ utbyte av 79 % på ett sätt liknande det som ovan har beskrivits för framställningen av etyl~2-cyano-3-(3-metyl-2-pyridylamino)akrylat enligt försök D5.

Analys Ber. för Cl3Hl5N3O2: C 63,66 H 6,16 N 17,13 % Funnet: C 63,94 H 6,24 N 16,78 % Försök D7: Etyl-2-cyano-3-(3-etyl-2-pyridylamino)akrylat En lösning av 13,0 g (0,l063 mol) 2-amino-3-etylpyridin och 18,0 g (0,l063 mol) etyletoximetylencyanoacetat i 50 ml toluen upp- _ hettades på ångbad under 20 minuter. Lösningen kyldes och blandning- en späddes med Skellysolve B. Blandningen filtrerades för erhållande av 19,0 g av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 122- -1250. Filtratet reducerades till torrhet och återstoden omkristalli- serades i cyklohexan för erhållande av ytterligare 7,0 g produkt med smältpunkten 122-1250 (totalt utbyte 99,6 %). En portion av den andra satsen omkristaliiserades två gånger ur metanol för erhållande av ett analytiskt material med smältpunkten 123-1250.

Analys Ber. för Cl3Hl5N3O2: C 63,66 H 6,16 N 17,13 % Funnet: C 63,49 H 6,18 N 17,13 % Försök D8: Ety1-2-cyano-3-(3-n-propyl-2~pyridylamino)akrylat Den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 99-1000 framställdes i ett utbyte av 60 % utgående från 2-amino-3-n-propy1- pyridin och etyletoximetylencyanoacetat på ett sätt liknande det som har beskrivits ovan för framställningen av ety1-2-cyano-3-(5-n-butyl- -2-pyridy1amino)akrylat enligt försök D3.

Analys " Ber. för Cl4Hl7N3O2: C 64,84 H 6,61 N 16,21 % Funnet: C 64,83 H 6,61 N 16,07 % Försök D9: Ety1-2-cyano-3-(3-n-butyl-2-pyridylamino)akrylat Den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 98,5-99,50 framställdes i ett utbyte av 84 % utgående från 2-amino-3-n-butylpy- ridin och etyletoximetylencyanoacetat på ett sätt liknande det som har beskrivits ovan för framställningen av etyl-2-cyano-3-(5-n-buty1- -2-pyridy1amino)akry1at enligt försök D3.

Analys Ber. för Cl5Hl9N3O2: C 65,91 H 7,01 N 15,37 % Funnet: C 65,73 H 6,95 N 15,32 % ,--.f--._.y.._........_ __..- 7805954-0 24 Försök D10: Ety1-2-cyano-3-(3~klor-2-pyridylamino)akrylat Den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 139,5- -141,5° framställdes i ett utbyte av 44 % utgående från 2-amino-3- -klorpyridin och etyletoximetylencyanoacetat på ett sätt liknande det som har beskrivits ovan för framställningen av ety1-2-cyano-3- -(5-n-tutyl-2-pyridylamino)akrylat enligt försök D3.

Analvs _ Ber. för CllHl0ClN3O2: C 52,50 H 4,01 Cl 14,09 N 16,7 % Funnet: C 52,22 H 3,98 Cl 13,93 N 17,0 % Försök D11: Ety1-2-cyano-3-(3-metoxi- akrylat Den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 187-1880 2-pyridylamino)- framställdes i ett utbyte av 43% utgående från 2-amino-3-metoxipyri- din och etyletoximetylencyanoacetat på ett sätt liknande det som har beskrivits ovan för framställningen av etyl-2-cyanc-3-(5-n-butyl-2- -pyridylamino)akry1at enligt försök D3.

Analys Ber. för Cl2Hl3N3O3: C 58,29 H 5,30 N 17,00 % Funnet: C 58,01 H 5,34 N 17,14 % FRAMSTÄLLNING AV FÖREDRAGNA FÖRENINGAR ENLIGT UPPFINNINGEN Exemgel 1 3-(1H-tetrazol-5-yl)-4H-Dyrido/1,2-a/pyrimidin-4-on (via nitrilen II) En omrörd blandning av 2,17 g (0,0127 mol) 4-oxo-4H-pyrido- /1,2-a/pyrimidin-3-karbonitril, 0,911 g (0,014 mol) natriumazid och 0,75 g (0,014 mol) ammoniumklorid i 20 ml N,N-dimetylformamid upp- hettades medelst ett oljebad, som hölls vid 1200 under 19 timmar.

Lösningsmedlet avlägsnades och återstoden behandlades med en varm vattenlösning av natriumbikarbonat. Blandningen-filtrerades. Fil- tratet surgjordes med ättiksyra. Pricipitatet tillvaratogs och om- kristalliserades ur ättiksyra för erhållande av 0,52 g (19%) av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 308-3090 (sönderdel- ningf. Omkristallisation ur ättiksyra med träkolsbehandling gav ett analytiskt material med smältpunkten 311-3120 (sönderdelning).

Analys Ber. för C9H6N6O: C 50,46 H 2,82 N 39,24 % Funnet: C 50,16 . H 2,81 N 39,18 % »s 78059 54-0 25 Exemgel 2 3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-nyrido/1,2-a/pvrimidin-4-on (via akrvlatet VI) 0,74 g (5,56 mmol) aluminiumklorid sattes försiktigt till 33 ml tetrahydrofuran vid -200. 1,08 g (16,6 mmol) natriumazid tillsattes därefter och blandningen återlobpskokades 30 minuter.

Efter tillsats av 1,0 g (4,6 mmol) etyl-2-cyano-3-(2-pyridylamino)- akrylat upphettades blandningen ånyo under återflöde 18 timmar.

Blandningen kyldes på isbad, behandlades med 170 ml vatten och sur- gjordes till pH 2 med GN klorvätesyra. Den erhållna suspensionen om- rördes 2 timmar under kylning och filtrerades därefter. Dettillvara~ tagna fasta materialet omkristalliserades ur N,N-dimetylformamid för erhållande av 0,38 g (38,5 %) av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 308-3090 (sönderdelning).

Exemgel 3 3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H~nyrido/l,2-a/pyrimidin-4-on (via 2-aminopyridin + etoximetylencyanoacetat + Al(N3l3 utan isolering av mellangrodukter 1,73 g (l2,96 mmol) aluminiumklorid sattes till 45 ml tet- rahydrofuran vid -200. 2,52 g (38,7l mmol) natriumazid tillsattes därefter och blandningen återloppskokades under 40 minuter. Till denna blandning sattes 1,0 g (l0,62 mmol) 2-aminopyridin och 1,8 g (l0,62 mmol) etyletoximetylencyanoacetat. Blandningen återloppskoka- des 18 timmar. Blandningen koncentrerades och återstoden behandlades med 50 ml vatten. Blandningen surgjordes till pH 3 med 6N klorväte- syra, det fasta materialet tillvaratogs och suspenderades i en 3%-ig vattenlösning av natriumbikarbonat. Blandningen återloppskokades 5 minuter och filtrerades och filtratet surgjordes till pH 4 med 6N klorvätesyra. Precipitatet omkristalliserades ur N,N-dimetylformamid för erhållande av 0,35 g (l5,4 %) av den i rubriken angivna förening- en med smältpunkten 31z-313° (sönlderdelninq).

Exempel 4 7-metyl-3-(lH-tetrazol-5-yl)~4H~nyrido/1,2-a/pyrimidin-4-on På ett sätt liknande det som ovan har beskrivits för fram- ställningen av 3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido/l,2-a/pyrimidin-4-on i exempel 2 framställdes den i rubriken angivna föreningen utgående från etyl~2-cyano-3-(5-metyl-2-pyridylamino)akrylat. Produkten (42,8% utbyte) hade en smältpunkt av 321-3220 (sönderdelning) efter omkristallisation ur isättika. ...q 7805954-~0 26 Analys 5 Ber. för clonsnöo: c 52,63 H 3,535 N 36,83 Funnet: C 52,26 H 3,40 N 36,47 % Exemgel 5 8-mety1-3-(lH-tetrazol-5-vl)-4H-pyrido/1,2-a/oyrimidin-4-on Den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 3070 (sönderdelning) framställdes i ett utbyte av 16% utgående från etyl- -2-cyano-3-(4-metyl-2-pyridylamino)akrylat på ett sätt liknande det som har beskrivits ovan för framställningen av 3-(1H-tetrazol~5-yl) - -4H-pyrido/1,2-a/pyrimidin-4-on enligt exempel 2.

Analvs Ber. för Cl0H8N6O C 52,63 H 3,53 N 36,83 % Funnet: C 52,57 H 3,27 N 36,92 % (korr. för 2,7% H20).

Framställningen av akrylatutgångsmaterialet beskrivs i J.

Heterocycl. Chem. § (1971) 759.

Exemgel 6 v-etyl-s- (lfl-tetrazol-s-yl) -fmèpyrido/l , z-a/nyrmiain-:z-on Den i rubriken angivna föreningen med en smältpunkt av 289- -290,50 (sönderdelning) framställdes i ett utbyte av 28% utgående från etyl-2-cyano~3-(5-etyl-2-pyridylamino)akrylat på ett sätt lik- nande det som har beskrivits ovan för framställningen av 3-(lH-tet- razol-5-yl)-4H-pyrido/1,2-a/pyrimidin-4-on enligt exempel 2.

Analys 'Ber. för C H N O: ll lo 6 N 34,70 % N 34,52 % C 54,54 C 54,31 H 4,16 Funnet: H 4,09 Exemgel 7 7-n-butyl-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H~pyrido/1,2~a/pyrimidin-4-on 0,89 g (6,67 mmol) aluminiumklorid sattes försiktigt till 42 ml kall (~30°) tetrahydrofuran. 1,3 g (20,0 mmol) natriumazid tillsattes därefter och blandningen återloppskokades 40 minuter. 1,50 g (5,49 mmol) etyl-2-cyano-3-(5-n-butyl-2-pyridylamino)akrylat tillsattes och blandningen återloppskokades 18 timmar. Den kylda blandningen koncentrerades och återstoden behandlades med 50 ml is- vatten. Blandningen surgjordes till pH 3 med 6N klorvätesyra och fil~ trerades och det tillvaratagna fasta materialet behandlades med en kokande 3%-ig vattenlösning av dinatriumbikarbonat under 10 minuter.

Blandningen filtrerades och filtratet surgjordes till pH 4 med GN klorvätesyra. Precipitet omkristalliserades ur N,N-dimetylformamid för erhållande av 0,45 g (30,4 %) av den i rubriken angivna förening~ 7805954-0 27 en med smältpunkten 284-2850 (sönderdelning).

Analys Ber, för Cl3Hl4N60: C 57,76 H 5,22 N 31,10 % Funnet: C 57,37 H 5,23 N 31,21 % Exemgel 8 7-fenyl-3-(lH-tetrazol-5-yl)~4H-pyrido/1,2-a/pyrimidin-4-on På ett sätt liknande det som ovan har beskrivits för fram- ställningen av 7-n-butyl-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido/l,2-a/pyri- midin-4-on enligt exempel 7 framställdes den i rubriken angivna för- eningen med smältpunkten 308-3099 (sönderdelning) i ett utbyte av 31% utgående från etyl-2-cyano-3-(5-fenyl-2-pyridylamino)akrylat.

Analys Ber. för C H N O: C 62,06 H 3,47 N 28,95 % 15 10 6 Funnet: C 61,93 H 3,37 N 28,67 % Exemgel 9 7-klor-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido/1,2-a/pyrimidin-4-on 0,72 q (5,45 mmol) aluminiumklorid sattes försiktigt till 29 ml kall (-300) tetrahydrofuran. 1,06 g (l6,27 mmol) natriumazid tillsattes därefter och blandningen âterloppskokades 30 minuter. l,0 g (4,47 mmol) 7-klor-4-oxo~4H-pyrido/l,2-a/pyrimidin-3-karbo- nitril tillsattes och blandningen återloppskokades under 18 timmar.

Den kylda blandningen hälldes i 500 ml isvatten och den resulteran- de blandningen surgjordes till pH 2 med 6N klorvätesyra. Precipita- tet tillvaratogs och omkristalliserades ur N,N-dimetylformamid för erhållande av 0,55 g (49,5 %) av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 300-3010 (sönderdelning).

Analys Ber. för C9H5ClN6O: C 43,47 H 2,03 Cl l4,26 N 33,80 % Funnet: C 43,63 H 2,19 Cl l3,74 N 33,62 % Exemgel 10 9~metyl-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido/l,2-a/pyrimidin-4-on 3,51 g (0,0263 mol) aluminiumklorid sattes till 180 ml kall (-300) tetrahydrofuran. 5,12 g (0,0788 mol) natriumazid tillsattes och blandningen âterloppskokades 30 minuter. Blandningen kyldes till 50. 5,0 g (0,02l6 mol) etyl-2-cyano-3-(3-metyl-2-pyridylamino) akrylat tillsattes och blandningen återloppskokades 18 timmar. Tet- rahydrofuranen avlägsnades under reducerat tryck. Återstoden behand lades med 100 ml isvatten och surgjordes till pH 3 med 6N klorväte- syra. Blandningen filtrerades och det tillvaratagna fasta materia- -a- 78Û5954=0 28 let omkristalliserades ur N,N-dimetylformamid för erhållande av 2,5 g (50,7 %) av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 310-3110 (sönderdelning).

Analys Ber. för Cl0H8N6O: C 52,63 H 3,53 N 36,83 % Funnet: C 52,03 H 3,51 N 37,08 % Exemgel 11 7,9-dimetyl-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido/1,2-a/pyrimidin- 14.102 Den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 308-3090 (sönderdelning) vid kristallisation ur 2-metoxietanol framställdes i ett utbyte av 37,60 på ett sätt liknande det som ovan har beskri- vits för framställningen av 9-metyl-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido- /1,2-a/pyrimidin-4-on i exempel 10.

Analys _ Ber. för CllHl0N6O: C 54,54 H 4,16 N 34,70 % Funnet: C 54,09 H 4,10 N 35,29 % Exemgel 12 9-etyl-3-(1H-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido/1,2-a/pyrimidin-4-on 10,0 g (0,0408 mol) etyl-2-cyano-3-(3-etyl-2-pyridylamino)- akrylat sattes till en omrörd blandning av aluminiumazid i tetra- hydrofuran vid 00. Aluminiumaziden hade framställts in situ på sed- Vanligt sätt utgående från 6,5 g (0,0488 mol) aluminiumklorid och 9,5 g (O,l464 mol) natriumazid i 100 ml tetrahydrofuran. Blandningen om- rördes 15 minuter vid 00 och återloppskokades därefter 19 timmar.

Blandningen kyldes, späddes med vatten och surgjordes med 20 ml kon- centrerad klorvätesyra. Blandningen filtrerades för erhållande av 2,7 g(27 %) av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 285-2880. Produkten omkristalliserades ur N,N-dimetylformamid med träkolsbehandling för erhållande av ett analytiskt material med smältpunkten 288-2900 (sönderdelning).

Analïs Ber. för C H N O: C 54,54 H 4,16 N 34,70 % ll 10 6 Funnet: C 54,70 H 4,17 N 35,27 % Exemgel 13 9-n~proDyl-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido/1,2-a/pyrimidin-4-on Den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 269-2720 (sönderdelning) framställdes i ett utbyte av 27,6% utgående från *www-www- ...1 .ššlëånêoëïflï -4 7805954-0 29 etyl-2-cyano~3-(3-n-propyl-2-pyridylamino)akrylat på ett sätt liknan- de det som har beskrivits ovan för framställningen av 3-(lH-tetrazol- -5-yl)-4H-pyrido/l,2-a/pyrimidin-4-on i exempel 2.

Analys Ber. för Cl2Hl2N60: C 56,24 H 4,72 N 32,80 % Funnet: C 56,15 H 4,64 N 32,99 % Exemgel 14 9-n-buty1-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido/1,2-a/pyrimidin-4-on Den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 255,5- -257,5O (sönderdelning) framställdes i ett utbyte av 30% utgående från ety1-2-cyano-3-(3-n-butyl-2-pyridylamino)akrylat på ett sätt liknande det som beskrivits ovan för framställningen av 3-(lH-tetra- zol-5-yl)-4H-pyrido/l,2-a/pyrimidin-4-on i exempel 2.

Analys Ber. för Cl3Hl4N6O: C 57,76 H 5,22 N 31,10 % Funnet: C 57,71 H 5,32 N 31,07 % Exemgel 15 9-klor-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido/l,2-a/pyrimidin-4-on Den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 313-3l5° (sönderdelning) framställdes i ett utbyte av 44% utgående från etyl- -2-cyano-3-(3-klor-2-pyridylamino)akrylat på ett sätt liknande det som har beskrivits ovan för framställningen av 3-(lH-tetrazol-5-yl)- 4H-pyrido/1,2-a/pyrimidin-4-on i exempel 2.

Exemgel 16 9-metoxi-3-(lfl-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido/l,2-a/Dyrimidin-4-on 0,79 g (5,94 mmol) aluminiumklorid sattes till 35 ml kyld totrahydrofuran. 1,16 g (l7,82 mmol) natriumazid tillsattes och blandningen återloppskokades under 30 minuter. Efter tillsats av 1,21 g (4,89 mmol) etyl-2-cyano-3-(3-metoxi-2-pyridylamino)akrylat återloppskokades blandningen ånyo under 18 timmar. Blandningen kyl- des och behandlades med 6N klorvätesyra och vatten (100 ml). Preci- pitatet extraherades med en 3%-ig vattenlösning av natriumbikarbonat.

Extraktet filtrerades i varmt tillstånd. Filtratet kyldes och sur- gjordes med klorvätesyra. Precipitatet tillvaratogs och torkades för erhållande av mellanprodukten etyl-2-(lH-tetrazol-5-yl)-3-(3- -metoxi-2-pyridylamino)akrylat (0,2l g) med smältpunkten 275-278° (sönderdelning). Omkristallisation av denna mellanprodukt ur N,N-di- metylformamid gav 95 mg (8 %) av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 298-2990 (sönderdelning).

Frågan ovamïf, 7805954-0 30 Exemgel 17 6-metyl-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido/l,2-a/pyrimidin-4-on Den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 295-2960 (sönderdelning) framställdes i ett utbvte av 21% utgående från 6- -metyl-4-oxo-4H-pyrido/l,2-a/pyrimidin-3-karbonitril (se I. Hermecz et al. J. Chem. Soc., Perkin I, (1977) 789) på ett sätt liknande det som har beskrivits ovan för framställningen av 7-klor-2-(lH-tet- razol-5-yl)-4H-pyrido-/l,2-a/pyrimidin-4-on in exempel 9.

Ber. för C H N 0: C 52,63 H 3,53 N 36,83 % 10 8 6 Funnet: C 52,62 H 3,40 N 36,63 % Exemgel 18 8,9,10,11-tetrahydro-3-(1H-tetrazol-5-yl)-4H-pyridmido- (2,1-a)isokinol-4-on A. Etyl-2-cyano-3-(5,6,7,8-tetrahydro-1-isokinolylamino)- akrylat - En lösning av 2,96 g (0,02 mol) 1-amino-5,6,7,8-tetrahydro- isokinolin (E. Ochiai och Y. Kawazoe, Pharm. Bull. (Tokyo) 5, (1957) 606) och 3,38 g (0,02 mol) etoximetylencvanoacetat i 8 ml toluen upphettades med hjälp av ett oljebad, som hölls vid 1050, under 15 minuter. Den kylda lösningen hälldes i 175 ml Skellysolve B un- der god omröring. Blandningen triturerades och kyldes med isbad.

Blandningen filtrerades och det tillvaratagna gummiartade fasta ma- terialet omkristalliserades ur cyklohexan för erhållande av 4,1 g (75%) av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 116-120°.

Produkten_omkristalliserades ur cyklohexan för erhållande av ett analytiskt material med smältpunkten 121-1230.

Analys Ber. för C15H17N2O2: C 66,40 H 6,32 N 15,49 % Funnet: C 66,44 H 6,26 N 15,44 % ______,,.,,-y-»,-«r _ ._ 7805954-0 31 B. 8,9,11-tetrahydro-3-(1H-tetrazol-5-yl)-4H-pyrimido- (2,1-a)isokinol-4-on 2,05 g (0,0154 mol) aluminiumklorid sattes till 75 ml kyld (-300) tetrahydrofuran. Natriumazid tillsattes och blandningen åter- loppskokades 40 minuter. 3,33 g (0,0123 mol) etyl-2-cyano-3-(5,6,7,8- tetrahydro-1-isokinolylamino)-akrylat tillsattes och blandningen återloppskokades 20 timmar. Den kylda blandningen späddes med 100 ml vatten och surgjordes med koncentrerad klorvätesyra. Fällningen tillvaratogs, tvättades med vatten, torkades och omkristalliserades ur 2-metoxietanol för erhållande av 0,625 g (19%) av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 290-2920 (sönderdelning).

Analys Ber. för C13H12N6O: C 58,20 H 4,51 N 31,33 % Funnet: C 58,07 H 4,60 N 31,06 %.

Exemnel 19 9-mety1-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido/1,2-a/pyrimidin-4-on- natriumsalt, 26,50 ml 1,0 N natriumhhdroxid sattes droppvis till en omrörd blandning av 6,0 g (0,02625 mol) 9-metyl-3-(lH-tetrazol-5- -yl)-4H-pyrido/1,2-a/pyrimidin-4-on i l50 ml vatten. Blandningen späddes med vatten till en volym av ca 300 ml och uppvärmdes däref- ter till en temperatur av 500 under 2 minuter. Blandningen filtre- rades och vattnet avlägsnades från filtratet genom lyofilisering. Återstoden omkristalliserades ur en blandning av vatten och etanol för erhållande av 5,4 g av den i rubriken angivna föreningen med smältpunkten 3460 (sönderdelning). Elementaranalys utfördes på pro- dukten efter det att den hade förvarats 66 timmar vid 220 i en rela- tiv fuktighet av 50-550.

Analys Ber. för Cl0H7NaN6O: C 48,01 H 2,82 % Funnet: C 47,91 H 2,78 % (korr. för 9,01% H20).

Genom att ersätta 9-metyl-3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido- /1,2-a/pyrimidin-4-onen vid ovan angivna förfarande med en ekvimolär mängd av de övriga i exemplen l-13 framställda 3-(lH-tetrazol-5-yl)- -4H-pyrido/l,2-a/pyrimidin-4-on-föreningarna erhölls motsvarande na- triumsalter av var och en av de angivna föreningarna. :à *Qïïïlmmfl V-Alêl 7805954-0 32 Genom att ersätta natriumhydroxiden i ovan angivna förfaran- de med andra baser, t.ex. KOH, Ca(OH)2, Mg(OH)2 eller NH4OH, erhölls motsvarande basadditionssalter.

Omsättning av 3-(lH-tetrazol-5-yi)-4H-pyrido/l,2-a/pyrimi- din-4-onföreningarna enligt exemplen l-l3 med en ekvimolär mängd etanolamin, etylendiamin, dietanolamin, trietanolamin eller tris- (hydroximetyl)aminometan gav motsvarande aminsalter av var och en av de angivna föreningarna. 3-(lH-tetrazol-5-yl)-4H-pyrido/l,2-a/pyrimidin-4-on-föreningar- na enligt exemplen l-13 kan omvandlas till sina syraadditionssal- ter genom tillsats av en stökiometrisk ekvivalent av en lämplig or- ganisk eller oorganisk syra, t.ex. HCl, HBr, HI, H P0 eller 3 4 CH3COOH.

Claims (1)

7805954-0 53 Patentkrav

1. Förfarande för framställning av föreningen med formeln vari R1, R2, R3 och R4, som kan vara lika eller olika, vardera betecknar väte, halogen, lägre alkyl, lägre alkoxi eller fenyl eller R3 och R4 sammantagna är ::]CH2)n, där n är 3, 4 eller 5, eller farmaceutiskt godtagbara salter därav, k ä n n e - t e c k n a t därav, att man (a) omsätter en nitril med formeln meln nl o- 2 R / N I cm F? '\ \v RQ II vari R1, R2, R3 och R4 har ovan angivna betydelser, med väte- azid eller ett azidsalt, som utgörs av ammonium-, substituerad ammonium-, natrium-, litium- eller aluminiumazid, i ett inert organiskt lösningsmedel eller att man (b) omsätter en 2-amino- pyridin med formeln R1 2 R / IN - \ n” m- l| E R . vari R1, R2, R3 och R4 har ovan angivna betydelser, med etyl- etoximetylencyanoacetat med formeln H VIII C H 5 2 O-CH=C(CN)CO2C 5 2 i närvaro av aluminiumazid i tetrahydrofuran för bildning av den önskade produkten i ett steg eller att man i frånvaro av aluminiumazid isolerar den erhållna föreningen med formeln t tfltm e, i Wiåooïze gang? 'L 7805954-0 l VI R2 f' N 5 \~ = ' R Nncn c(cN)co2c2H5 4 R och behandlar föreningen med aluminiumazid i tetrahydrofuran och utvinner den önskade produkten genom surgöring samt even- tuellt på i och för sig känt- sätt omvandlar den önskade pro- dukten till ett farmaceutiskt godtagbart salt därav. E*