CN104470909B - 用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物 - Google Patents

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Abstract

本文提供了化合物、它们的组合物和利用它们治疗脊髓性肌萎缩的用途。

Description

用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物
本文所述的技术不是在美国政府的支持下进行的。
交叉引用
本申请主张于2012年3月23日提交的美国临时专利申请序列号No.61/614932的优先权，该专利申请以其全部内容并且出于全部目的作为参考并入本文。
共同研究协议声明
在所主张的发明的实际申请日期当天或之前生效的共同研究协议的一个或多个当事方开发了所公开的主题并且做出了所主张的发明或者所主张的发明代表了它们的利益；
由于在共同研究协议范围内进行的活动做出了所主张的发明；和
所主张发明的专利申请公开了或者修改以公开共同研究协议的当事方的名称。
引言
本文提供了化合物、它们的组合物和利用它们治疗脊髓性肌萎缩的用途。
背景技术
脊髓性肌萎缩(SMA)以其最广泛的含义描述了以脊髓和脑干中进行性运动神经元损失为特征的多种遗传性和获得性中枢神经系统(CNS)疾病，其造成了肌无力和肌肉萎缩。SMA最常见的形式是由运动神经元生存(SMN)基因中的突变所引起的，并且表现为影响从婴儿到成年人的广泛严重性(Crawford和Pardo，Neurobiol.Dis.，1996，3：97)。
婴儿SMA是这种神经退行性病症的最严重形式。症状包括肌无力、肌张力低下、哭泣无力、跛行或摔倒倾向、吮吸或吞咽困难、肺或咽喉中分泌物积累、摄食困难和对呼吸道感染敏感度提高。腿部往往比手臂更无力，并且不能达到发育标志，如抬头或者坐起。一般地，症状出现的越早，则寿命越短。由于运动神经元细胞恶化，随后不久出现症状。疾病的严重形式是致死的，并且所有形式均无已知的治疗。SMA的过程与运动神经元细胞恶化速度以及所造成的无力的严重性直接相关。患有SMA严重形式的婴儿由于支持呼吸的肌肉无力而经常死于呼吸道疾病。患有SMA较轻形式的儿童存活时间更长，尽管它们可能需要广泛的医学支持，特别是那些处于病症谱的更严重末期的那些。SMA病症的临床谱已被分成下列五组。
(a)0型SMA(子宫内SMA)是最严重的疾病形式并且在出生前开始。通常，0型SMA的第一种症状是可以首先在妊娠30至36周之间观察到的胎儿运动降低。出生后，这些新生儿很少运动并且吞咽和呼吸困难。
(b)1型SMA(婴儿SMA或韦德尼希-霍夫曼病(Werdnig-Hoffmann disease))通常在0至6个月出现症状。这种形式的SMA也是非常严重的。患者永远不能坐起，并且由于无供氧支持，死亡通常发生在前2年。
(c)2型SMA(过渡SMA)的发病年龄在7-18个月。患者达到无支持坐起的能力，但是无法独立站立或行走。该组的预后很大程度依赖于涉及呼吸的程度。
(d)3型SMA(少年SMA或库-韦二氏病(Kugelberg-Welander disease))通常在18个月后诊断。3型SMA个体在他们的疾病过程期间在某些时候能够独立行走，但是在青年或成年期间通常会依靠轮椅。
(e)4型SMA(成年发病的SMA)。在青年晚期开始在舌、手或足中开始出现无力，然后发展至身体的其他区域。成年SMA的过程更缓慢并且对预期寿命几乎没有影响。
已通过对染色体5q中复杂区域的连锁分析对SMN基因进行作图。在人中，该区域含有约50万个碱基对(kb)反向复制，从而导致产生了两种几乎相同的SMN基因拷贝。SMA是由两个染色体上基因(SMN1)的端粒拷贝的失活突变或缺失，从而导致SMN1基因功能损失所引起的。然而，所有患者保留了基因(SMN2)的着丝粒拷贝，并且SMA患者中SMN2基因的拷贝数通常与疾病严重性逆相关；即SMA不太严重的患者具有更多的SMN2拷贝。尽管如此，由于外显子7中翻译沉默的C向T的突变所引起的外显子7的选择性拼接，SMN2不能完全补偿SMN1功能的损失。因此，由缺乏外显子7的SMN2(SMN2Δ7)产生的大部分转录本编码了具有功能损害并且快速降解的截短的Smn蛋白。
Smn蛋白被认为在RNA加工和代谢中起作用，其具有良好鉴定的调节被称为snRNP的特定种类的RNA-蛋白质复合物组装的功能。在运动神经元中，Smn可以具有其他功能，然而，它在防止运动神经元选择性退化中的作用尚未良好建立。
在大多数情况下，基于临床症状并且通过在SMN1基因中不存在外显子7的所有拷贝(如通过遗传测试所确定的)来诊断SMA。然而，在约5％的情况中，SMA是由除整个SMN1基因缺失或除SMN1基因中整个外显子7缺失之外的突变所引起的，这些基因中的一些是已知的而其他的尚未定义。在一些情况下，当SMN1基因测试不可行或者SMN1基因序列未显示任何异常时，其他测试如肌电描记术(EMG)或肌肉活组织检查可以显示。
目前，SMA患者的医疗护理限制在支持疗法，包含呼吸、营养和康复护理；尚无已知的药物能够解决潜在的病因。目前，SMA的治疗包括慢性运动单元丧失的继发作用的预防和控制。1型SMA中的主要控制问题是肺部问题的预防和早期治疗，它们是大部分病例中造成死亡的主要原因。尽管一些患有SMA的婴儿生长至成年，但是1型SMA患者的预期寿命小于两年。
已发展了几种小鼠SMA模型。具体地，SMNΔ7模型(Le等人，Hum.Mol.Genet.，2005，14：845)携带SMN2基因和SMN2Δ7cDNA的几种拷贝并且概括显示了1型SMA的多种表型特征。SMNΔ7模型可以用于SMN2表达研究以及运动功能和存活的评价。C/C等位基因小鼠模型(Jackson Laboratory No.：008714株)提供了不太严重的SMA疾病模型，其中小鼠具有低水平的SMN2全长(SMN2FL)mRNA和Smn蛋白。C/C-等位基因小鼠表型具有SMN2基因和经过选择性拼接的混合mSmn1-SMN2基因，但是不具有明显的肌无力。C/C-等位基因小鼠模型用于SMN2表达研究。
由于对SMA遗传基础和病理生理学的了解的改善，已研究了几种治疗策略，但是均尚未能在临床中显示成功。
使用病毒递送载体的基因置换和使用分化的SMN1+/+干细胞的细胞置换已在SMA动物模型中显示出效力。在这些方法可以应用于人之前，需要更多研究以确定安全性和免疫应答和解决在新生儿阶段开始治疗的要求。
使用合成核酸作为治疗剂：(i)靶向SMN2前mRNA中序列元件并改变产生全长SMN2mRNA的拼接反应结果的反义寡核苷酸(Passini等人，Sci.Transl.Med.，2011，3：72ra18；和Hua等人，Nature，2011，478：123)和(ii)提供在剪接期间置换突变体片段的完全功能性RNA序列并产生全长SMN1mRNA的反式剪接RNA分子(Coady和Lorson，J Neurosci.，2010，30：126)还实现了培养细胞中SMN2的选择性剪接的修正。
正在研究的其他方法包括寻找提高Smn水平、提高残余Smn功能或补偿Smn损失的药物。氨基糖苷类已显示通过促进异常终止密码子的翻译通读来提高由SMN2Δ7mRNA产生的稳定Smn蛋白的表达，但是其具有较差的中枢神经系统渗透并且在反复剂量施用后是有毒的。化疗剂，如阿柔比星已显示提高了细胞培养物中的Smn蛋白；然而，这些药物的毒性谱阻止在SMA患者中长期使用。正在临床研究的用于SMA治疗的一些药物包含转录激活剂，如组蛋白去乙酰化酶(“HDAC”)抑制剂(例如，丁酸酯、丙戊酸和羟基脲)以及mRNA稳定剂(来自Repligen的mRNA脱帽抑制剂RG3039)，其旨在提高从SMN2基因转录的总RNA的量。然而，HDAC抑制剂或mRNA稳定剂的使用不能解决造成SMA的潜在原因，并且在人中可能导致转录和基因表达的全局性提高，并具有潜在的安全性问题。
在替代方法中，已选择神经保护试剂，如奥利索西进行研究。这些策略不针对提高用于治疗SMA的功能性Smn的产生，但是相反，正在研究用于保护Smn缺陷型运动神经元不会神经变性。
已在2009年5月27日提交的国际专利申请PCT/US2009/003238(作为国际公开号W02009/151546和美国公开号US2011/0086833公开)中描述了设计用于鉴别提高SMN的外显子7在从SMN2基因转录的RNA中包含的化合物的系统以及借此鉴别的某些苯并恶唑和苯并异恶唑化合物。已在2009年8月13日提交的国际专利申请PCT/US2009/004625(作为国际公开号WO2010/019236和美国公开号US2011/0172284公开)中描述了设计用于鉴别从SMN2Δ7mRNA产生稳定Smn蛋白的化合物以及借此鉴别的某些异二氢吲哚酮化合物的系统。以上文档中的每一个以其全部内容并且出于全部目的并入本文。
本文中提及的全部其他文档如在本文中详细说明的一样作为参考并入本发明申请。
尽管对SMA遗传基础和病理生理学了解的发展，但仍需要鉴别改变作为最具破坏性的儿童神经学疾病之一的脊髓性肌萎缩过程的化合物。
发明内容
在一个方面，本文提供了式(I)的化合物：
或其形式，其中w1、w2、w3、w4、w5和w6为如本文所定义的。在一种实施方式中，本文提供了包含式(I)的化合物或其形式，和可药用载体、赋形剂或者稀释剂的药物组合物。在具体的实施方式中，本文提供了用于治疗脊髓性肌萎缩(SMA)的式(I)的化合物或其形式，或者其药物组合物。
SMA是由于SMN1基因的缺失或突变所造成的，从而导致了Smn缺陷型运动神经元选择性退化。尽管人受试者保留了SMN2基因的几种拷贝，但是SMN2表达的少量功能性Smn蛋白不能充分补偿本将由SMN1基因表达的Smn的损失。本文所述的化合物、它的组合物以及它的使用部分基于申请人的以下发现：式(I)的化合物提高了SMN2的外显子7在从SMN2小基因转录的mRNA中的包含。小基因重复了导致大部分SMN2转录本中外显子7跳跃的SMN2的外显子7的替代性剪接反应。因此，式(I)的化合物或其形式可以用于调节SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含。申请人还发现式(I)的化合物提高了SMN1的外显子7在从SMN1小基因转录的mRNA中的包含。因此，式(I)的化合物或其形式可以用于调节SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含。
在具体的实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式，其可以用于调节SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含。在另一种具体的实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式，其可以用于调节SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含。在另一种实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式，其可以用于分别调节SMN1和SMN2的外显子7在从SMN1和SMN2基因转录的mRNA中的包含。
在另一个方面，本文提供了式(I)的化合物或其形式用于治疗SMA的使用。在具体的实施方式中，本文提供了在对其有需要的人受试者中治疗SMA的方法，其包括向所述受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式。优选地，将式(I)的化合物或其形式在药物组合物中施用于人受试者。在另一种具体的实施方式中，本文提供了式(I)的化合物治疗SMA的使用，其中所述化合物提高了SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含。不受理论的限制，式(I)的化合物提高了SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含，并且提高了由SMN2基因所产生的Smn蛋白的水平，并因此可以用于在对其有需要的人受试者中治疗SMA。
在另一个方面，本文提供了如下所述的生物实例中的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13，和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)和那些引物和/或探针的使用。在具体的实施方式中，本文提供了包含SEQ ID NO.1、2、3、7、8、9、10、11、12或13的分离的核苷酸序列。在另一种具体的实施方式中，本文提供了基本上由SEQ ID NO.1、2、3、7、8、9、10、11、12或13组成的分离的核苷酸序列。在另一种具体的实施方式中，本文提供了由SEQ ID NO.1、2、3、7、8、9、10、11、12或13组成的分离的核苷酸序列。
在某些实施方式中，从SMN1基因和/或SMN2基因转录并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量可以用作SMA的生物标志物，如本文所公开的。在其他实施方式中，从SMN1基因和/或SMN2基因转录并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量可以用作使用化合物治疗患者的生物标志物，如本文所公开的。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。在另一种具体的实施方式中，所述患者不是SMA患者。
在某些实施方式中，从SMN1和/或SMN2基因转录并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量以及从SMN1和/或SMN2基因转录并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量可以用作使用化合物治疗患者的生物标志物，如本文所公开的。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。在另一种具体的实施方式中，所述患者不是SMA患者。
根据这些实施方式，可以在测定中使用如下所述的SMN引物和/或SMN探针，所述测定如PCR(例如，qPCR)、滚环扩增和RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)来评价和/或定量从SMN1基因和/或SMN2基因转录并且包含或不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。
在具体的实施方式中，在测定，如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹(例如，如下所述在生物实施例中的测定)中使用了在以下生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ IDNO.2、9或12，和/或SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)以确定化合物(例如，式(I)的化合物或其形式)是否提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含。
在具体的实施方式中，在测定，如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹(例如，如下所述在生物实施例中的测定)中使用了在以下生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ IDNO.2、9或12，和/或SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)以确定化合物(例如，式(I)的化合物或其形式)是否提高SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含。
在具体的实施方式中，在测定，如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹(例如，如下所述在生物实施例中的测定)中使用了在以下生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ IDNO.2、9或12，和/或SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)以确定化合物(例如，式(I)的化合物或其形式)是否提高SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中的包含。
在另一种实施方式中，在测定，如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增并且如适用，RNA印迹或DNA印迹(例如，如以下生物实施例中所述的测定)中使用了在以下生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.7、11或13和/或SEQID NO.9或12，和/或SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)以监控患者样品中从SMN2基因转录的并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。在另一种具体的实施方式中，所述患者不是SMA患者。
在另一种实施方式中，在测定，如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹(例如，如以下生物实施例中所述的测定)中使用了在以下生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.7、11或13和/或SEQ ID NO.9或12，和/或SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)以监控患者样品中从SMN1基因转录的并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。在另一种具体的实施方式中，所述患者不是SMA患者。
在另一种实施方式中，在测定，如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹(例如，如以下生物实施例中所述的测定)中使用了在以下生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.7、11或13和/或SEQ ID NO.9或12，和/或SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)以监控患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。在另一种具体的实施方式中，所述患者不是SMA患者。
在另一种实施方式中，在测定，如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹(例如，如下所述在生物实施例中的测定)中使用了在以下生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.7、8、11或13和/或SEQ ID NO.9或12，和/或SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)以监控患者对化合物(例如，式(I)的化合物或其形式)的反应。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。在另一种具体的实施方式中，所述患者不是SMA患者。
在另一种实施方式中，本文提供了确定化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)是否提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的方法，其包括(a)在存在化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)的情况下，将在本文中或在2009年8月13日提交的国际专利申请PCT/US2009/004625(作为国际专利公开号WO2010/019236公开)或者美国专利公开号US2011/0172284中所述的从SMN2小基因转录的mRNA与本文所述的引物(例如，SEQ ID NO.1和/或2)以及适用于(例如)RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR或滚环扩增的组分接触；和(b)检测从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)在存在所述化合物的情况下，相对于不存在所述化合物的情况下从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量，从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量的提高表明所述化合物提高了SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含；和(2)在存在所述化合物的情况下，相对于不存在所述化合物的情况下从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量，从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明所述化合物不能提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含。
在另一种实施方式中，本文提供了确定化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)是否提高SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中包含的方法，其包括(a)在存在化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)的情况下，将在2009年8月13日提交的国际专利申请PCT/US2009/004625(作为国际专利公开号WO2010/019236公开)或者美国专利公开号US2011/0172284中所述的从SMN1小基因转录的mRNA与本文所述的引物(例如，SEQ ID NO.1和/或2)以及适用于(例如)RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR或滚环扩增的组分接触；和(b)检测从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量，其中(1)在存在所述化合物的情况下，相对于不存在所述化合物的情况下从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量，从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量的提高表明所述化合物提高了SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含；和(2)在存在所述化合物的情况下，相对于不存在所述化合物的情况下从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量，从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明所述化合物不能提高SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含。
在另一种实施方式中，本文提供了确定化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)是否提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的方法，其包括(a)在存在化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)的情况下，将在本文中或在2009年8月13日提交的国际专利申请PCT/US2009/004625(作为国际专利公开号WO2010/019236公开)或者美国专利公开号US2011/0172284中所述的从SMN2小基因转录的mRNA与本文所述的探针(例如，SEQ ID NO.3和/或10)以及适用于(例如)RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增和(如适用)RNA印迹或DNA印迹的组分接触；和(b)检测从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)在存在所述化合物的情况下，相对于不存在所述化合物的情况下从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量，从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量的提高表明所述化合物提高了SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含；和(2)在存在所述化合物的情况下，相对于不存在所述化合物的情况下从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量，从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明所述化合物不能提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含。
在另一种实施方式中，本文提供了确定化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)是否提高SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中包含的方法，其包括(a)在存在化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)的情况下，将从在2009年8月13日提交的国际专利申请PCT/US2009/004625(作为国际专利公开号WO2010/019236公开)或者美国专利公开号US2011/0172284中所述的SMN1小基因转录的mRNA与本文所述的探针(例如，SEQ ID NO.3和/或10)以及适用于(例如)RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增和(如适用)RNA印迹或DNA印迹的组分接触；和(b)检测从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量，其中(1)在存在所述化合物的情况下，相对于不存在所述化合物的情况下从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量，从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量的提高表明所述化合物提高了SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含；和(2)在存在所述化合物的情况下，相对于不存在所述化合物的情况下从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量，从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明所述化合物不能提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含。
在另一种实施方式中，本文提供了确定化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)是否提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的方法，其包括(a)在存在化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)的情况下，将从在本文中或在2009年8月13日提交的国际专利申请PCT/US2009/004625(作为国际专利公开号WO2010/019236公开)或者美国专利公开号US2011/0172284中所述的SMN2小基因转录的mRNA与本文所述的引物(例如，SEQ ID NO.1或2)和/或探针(例如，SEQ ID NO.3和/或10)以及适用于(例如)RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增和(如适用)RNA印迹或DNA印迹的组分接触；和(b)检测从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)在存在所述化合物的情况下，相对于不存在所述化合物的情况下从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量，从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量的提高表明所述化合物提高了SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含；和(2)在存在所述化合物的情况下，相对于不存在所述化合物的情况下从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量，从所述小基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明所述化合物不能提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含。
在另一种实施方式中，本文提供了确定化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)是否提高SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中包含的方法，其包括(a)在存在化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)的情况下，将从在2009年8月13日提交的国际专利申请PCT/US2009/004625(作为国际专利公开号WO2010/019236公开)或者美国专利公开号US2011/0172284中所述的SMN1小基因转录的mRNA与本文所述的引物(例如，SEQ ID NO.1或2)和/或探针(例如，SEQ ID NO.3和/或10)以及适用于(例如)RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增和(如适用)RNA印迹或DNA印迹的组分接触；和(b)检测从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量，其中(1)在存在所述化合物的情况下，相对于不存在所述化合物的情况下从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量，从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量的提高表明所述化合物提高了SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含；和(2)在存在所述化合物的情况下，相对于不存在所述化合物的情况下从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量，从所述小基因转录并且包含SMN1的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明所述化合物不能提高SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含。
在另一个方面，本文提供了包含在以下生物实例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和/或SMN探针，如SEQ IDNO.3或10)的试剂盒及其使用。
附图说明
生物实施例1中所参考的图1是SMN2-A小基因构件的示意图，所述构件产生了两种替代性剪接mRNA转录本：含有外显子7的全长mRNA和缺少外显子7的Δ7mRNA。用字母“A”表示在核酸残基48之后插入到SMN2-A的外显子7中的腺嘌呤核苷酸。作为另外一种选择，所述核苷酸还可以选自胞嘧啶或胸腺嘧啶。由于在核酸残基48之后插入了一个核苷酸(A、C或T)，全长mRNA在SMN开放阅读框中不含终止密码子，而Δ7mRNA在外显子8中具有用单词“终止”标明的终止密码子。
在生物实施例1中提及的图2提供了来自SMN2-A小基因构件SEQ ID NO.21的小基因的DNA序列(图2a)。如图2b中所示，可以存在以下亚序列：
1-70：5’UTR(deg)；
71-79：外显子6：起始密码子和BamHI位点(atgggatcc)；
80-190：外显子6；
191-5959：内含子6；
5960-6014：具有腺嘌呤核苷酸“A”插入(位置6008)的外显子7；
6015-6458：内含子7；
6459-6481：外显子8的一部分；
6482-8146：BamHI位点(5′末端序列)，从密码子2开始的荧光素酶编码序列(无起始密码子)，NotI位点(3′末端序列)，TAA终止密码子；和
8147-8266：3’UTR(deg)。
为了产生小基因的SMN1形式，使用定点突变将SMN2-A小基因构件的外显子7的第六核苷酸(胸腺嘧啶残基)转化为胞嘧啶。因此，与SMN2-A小基因构件类似，SMN1小基因构件具有在外显子7的核酸残基48后插入的单一腺嘌呤残基。SMN1小基因构件被称为SMN1-A。类似地，在外显子7的核酸残基48后插入SMN1小基因构件中的核苷酸还可以作为另外一种选择选自胞嘧啶或胸腺嘧啶。
在生物实施例2中提及的图3显示了在24小时的一段时间内用提高的浓度的化合物17(图3a)和化合物38(图3b)处理的细胞中SMN2小基因选择性剪接的修正。使用反转录-定量PCR(RT-qPCR)定量了SMN2小基因全长mRNA的水平。将化合物处理的样品中SMN2小基因全长mRNA的水平归一化为赋形剂处理的样品中的水平，并作为化合物浓度的函数作图。
在生物实施例3中提及的图4显示了在24小时的一段时间内用提高的浓度的化合物38处理的1型SMA患者成纤维细胞中SMN2选择性剪接的修正。使用RT-qPCR定量了SMN2全长和Δ7mRNA的水平。将化合物处理的样品中全长和SMN2Δ7mRNA的水平归一化为赋形剂处理的样品中的水平，并作为化合物浓度的函数作图。
在生物实施例4中提及的图5显示了在24小时的一段时间内用提高的浓度的化合物17(图5a)和化合物38(图5b)处理的1型SMA患者成纤维细胞中SMN2选择性剪接的修正。使用反转录-终点PCR(RT-PCR)扩增SMN2全长和SMN2Δ7mRNA并使用琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物。顶部和底部条带分别对应于SMN2全长和Δ7mRNA。每个条带的强度与样品中存在的RNA的量成正比。
在生物实施例7中提及的图6显示了用化合物17(图6a)和化合物38(图6b)处理48小时的一段时间的1型SMA人成纤维细胞中Smn蛋白表达的剂量依赖性升高。
在生物实施例8中提及的图7显示了用化合物38处理48小时的一段时间的1型SMA患者成纤维细胞中核小点计数(gems)的增加。使用荧光显微术对小点计数。将化合物处理的样品中小点的数目归一化为赋形剂处理的样品中的数目，并作为化合物浓度的函数作图。
在生物实施例16中提及的图8显示了用化合物17(图8a)和化合物38(图8b)处理7小时的一段时间的HEK293H人细胞中SMN1小基因全长mRNA的剂量依赖性升高以及SMN1小基因Δ7mRNA的剂量依赖性降低。使用RT-PCR分别扩增SMN1小基因全长和Δ7mRNA并使用琼脂糖凝胶电泳分离所得PCR产物。顶部和底部条带分别对应于SMN1小基因全长和Δ7mRNA。每个条带的强度与样品中存在的RNA的量成正比。
发明详述
本文提供了式(I)的化合物：
或其形式，其中：
w1是C-Rb或N；
w2和w3是C-R1、C-R2、C-Ra或N；
w4是C-Ra或N；
w5是C-R1、C-R2、C-Rc或N；
w6是C-R1、C-R2或C-Ra；
其中w2、w3、w5和w6中的一个是C-R1，并且w2、w3、w5和w6中的另一个为C-R2，条件是，
当w3为C-R1时，w6为C-R2，w2为C-Ra或N并且w5为C-Rc或N；或者
当w3为C-R2时，w6为C-R1，w2为C-Ra或N并且w5为C-Rc或N；或者
当w2为C-R1时，w5为C-R2，w6为C-Ra并且w3为C-Ra或N；或者
当w2为C-R2时，w5为C-R1，w6为C-Ra并且w3为C-Ra或N；并且
其中w1、w2、w3、w4和w5中的一个、两个或三个可以任选地为N；
R1是C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；
其中，杂环、C3-14环烷基、芳基和杂芳基中的每种情况任选地被1个、2个或3个R3取代基取代并且任选地被1个另外的R4取代基取代；或者
其中，杂环、C3-14环烷基、芳基和杂芳基中的每种情况任选地被1个、2个、3个或4个R3取代基取代；
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或者杂芳基-氨基；
其中，芳基、杂环基和杂芳基中的每种情况任选地被1个、2个或3个R6取代基取代并且任选地被1个另外的R7取代基取代；
在每种情况下，Ra独立地选自氢、卤素或C1-8烷基；
Rb是氢、卤素、C1-8烷基或C1-8烷氧基；
Rc是氢、卤素或C1-8烷基；
在每种情况下，R3独立地选自氰基、卤素、羟基、氧代、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷基-羰基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-羰基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基]2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-羰基-氨基、C1-8烷氧基-羰基-氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基或(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基；
R4是C3-14环烷基、C3-14环烷基-C1-8烷基、C3-14环烷基-氨基、芳基-C1-8烷基、芳基-C1-8烷氧基-羰基、芳基-磺酰氧基-C1-8烷基、杂环基或杂环基-C1-8烷基；其中，C3-14环烷基、芳基和杂环基的每种情况任选地被1个、2个或3个R5取代基取代；
在每种情况下，R5独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫代；
在每种情况下，R6独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、C2-8烯基、卤代-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫代；和，
R7是C3-14环烷基，C3-14环烷基-氧基，芳基，杂环基或杂芳基。
实施方式
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1是C-Rb。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w1是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w2是C-R2。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w2是C-Ra。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w2是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-Ra。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w3是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w4是C-Ra。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w4是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w5是C-R1。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w5是C-R2。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w5是C-Rc。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w5是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w6是C-R1。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w6是C-R2。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w6是C-Ra。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2，w6是C-Ra，w3和w4独立地为C-Ra或N，w1是C-Rb或N。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1，w6是C-Ra，w3和w4独立地是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1并且w6是C-R2。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2并且w6是C-R1。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2；w2和w4独立地是C-Ra或N，w1是C-Rb或N并且w5是C-Rc或N。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1；w2和w4独立地是C-Ra或N，w1是C-Rb或N并且w5是C-Rc或N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1和w2是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1和w3是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1和w4是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1和w5是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w2和w4是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w2和w5是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w3和w4是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w4和w5是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1、w2和w4是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1、w2和w5是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1、w3和w4是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w1、w4和w5是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，w2、w4和w5是N。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，
R1是C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基，(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基或[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基或杂环基-羰基-氧基；其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是任选地被R3和R4取代基取代的杂环基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是任选地被R3和R4取代基取代的C3-14环烷基基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是任选地被R3和R4取代基取代的芳基-C1-8烷基氨基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基，(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基中的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是任选地被R3和R4取代基取代的杂芳基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，
R1是杂环基，其选自氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1，4-二氮杂环庚烷基、1，2，5，6-四氢吡啶基、1，2，3，6-四氢吡啶基、六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS，6aS)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR，6aR)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS，6aS)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR，6aS)-六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基、六氢-5H-吡咯并[3，2-c]吡啶基、六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、(4aR，7aR)-六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、(4aS，7aS)-六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R，8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、六氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R，5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R，5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S，4S)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1，4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2，6-二氮杂螺[3.3]庚基、2，7-二氮杂螺[3.5]壬基、5，8-二氮杂螺[3.5]壬基、2，7-二氮杂螺[4.4]壬基或6，9-二氮杂螺[4.5]癸基；其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是杂环基，其选自氮杂环丁烷-1-基、四氢呋喃-3-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、哌啶-4-基、哌嗪-1-基、1，4-二氮杂环庚烷-1-基、1，2，5，6-四氢吡啶-5-基、1，2，3，6-四氢吡啶-4-基、六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-1(2H)-基、(3aS，6aS)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-1(2H)-基、(3aS，6aS)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-5(1H)-基、(3aR，6aR)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-5(1H)-基、六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR，6aS)-六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基、六氢-5H-吡咯并[3，2-c]吡啶-5-基、六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6-基、(4aR，7aR)-六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6-基、(4aS，7aS)-六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6-基、六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-6(2H)-酮、六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基、(7R，8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基、六氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基、3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、(1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-3-基、(1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-3-基、9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(1R，5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基、(1S，4S)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基、2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛-2-基、3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、(1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、1，4-二氮杂双环[3.2.2]壬-4-基、氮杂螺[3.3]庚-2-基、2，6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基、2，7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基、5，8-二氮杂螺[3.5]壬-8-基、2，7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基或6，9-二氮杂螺[4.5]癸-9-基；其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是取代的杂环基，其选自4-甲基-1，4-二氮杂环庚烷-1-基、(3aS，6aS)-1-甲基六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-5(1H)-基、(3aS，6aS)-5-甲基六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-1(2H)-基、(3aR，6aR)-1-甲基六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-5(1H)-基、(3aR，6aS)-5-甲基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR，6aS)-5-(2-羟基乙基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR，6aS)-5-(丙-2-基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR，6aS)-5-乙基六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基、(4aR，7aR)-1-甲基六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6-基、(4aR，7aR)-1-乙基六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6-基、(4aR，7aR)-1-(2-羟基乙基)六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6-基、(4aS，7aS)-1-甲基六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6-基、(4aS，7aS)-1-(2-羟基乙基)六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6-基、(7R，8aS)-7-羟基六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aS)-8a-甲基六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aR)-8a-甲基六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基、(1R，5S，6s)-6-(二甲基氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基、(1R，5S)-8-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(3-外型)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(1R，5S)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(1S，4S)-5-甲基-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基或(1S，4S)-5-乙基-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1是杂环基-C1-8烷基，其中杂环基选自吗啉基、哌啶基、哌嗪基、咪唑基或吡咯烷基；并且其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是杂环基C1-8烷基，其选自吗啉-4-基-甲基、吗啉-4-基-乙基、吗啉-4-基-丙基、哌啶-1-基-甲基、哌嗪-1-基-甲基、哌嗪-1-基-乙基、哌嗪-1-基-丙基、哌嗪-1-基-丁基、咪唑-1-基-甲基、咪唑-1-基-乙基、咪唑-1-基-丙基、咪唑-1-基-丁基、吡咯烷-1-基-甲基、吡咯烷-1-基-乙基、吡咯烷-1-基-丙基或吡咯烷-1-基-丁基；其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为杂环基-C1-8烷氧基，其中杂环基选自吡咯烷基、哌啶基或吗啉基；并且其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是杂环基-C1-8烷氧基，其选自吡咯烷-2-基-甲氧基、吡咯烷-2-基-乙氧基、吡咯烷-1-基-甲氧基、吡咯烷-1-基-乙氧基、哌啶-1-基-甲氧基、哌啶-1-基-乙氧基、吗啉-4-基-甲氧基或吗啉-4-基-乙氧基；其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1是杂环基-氨基，其中杂环基选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基或(1R，5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基；并且其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是杂环基-氨基，其选自氮杂环丁烷-3-基-氨基、吡咯烷-3-基-氨基、哌啶-4-基-氨基、9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基、(1R，5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基、9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基、(3-外型)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基或(1R，5S)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基；其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为(杂环基)(-C1-8烷基)氨基，其中杂环基选自吡咯烷基或哌啶基；并且其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是(杂环基)(C1-8烷基)氨基，其选自(吡咯烷-3-基)(甲基)氨基或者(哌啶-4-基)(甲基)氨基；其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1为杂环基氨基-C1-8烷基，其中杂环基选自四氢呋喃基；并且其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1为杂环基氨基-C1-8烷基，其选自3-(四氢呋喃-3-基氨基)丙基；其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1是杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，其中杂环基选自四氢呋喃基、噻吩基或吡啶基；并且其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，其选自3-[(四氢呋喃-2-基甲基)氨基]丙基、3-[(噻吩基-3-基甲基)氨基]丙基、3-[(吡啶-2-基甲基)氨基]丙基或3-[(吡啶-4-基甲基)氨基]丙基；其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1是杂环基-氧基，其中杂环基选自吡咯烷基或哌啶基；并且其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是杂环基-氧基，其选自吡咯烷-3-基-氧基或哌啶-4-基-氧基；其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1是杂环基-羰基，其中杂环基选自哌嗪基；并且其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是杂环基-羰基，其选自哌嗪-1-基-羰基；其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1是杂环基-羰基-氧基，其中杂环基选自哌嗪基；并且其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是杂环基-羰基-氧基，其选自哌嗪-1-基-羰基-氧基；其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1是C3-14环烷基，其选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基或环庚基；其中，C3-14环烷基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是C3-8环烷基，其选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基或环庚基；其中，C3-8环烷基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1是芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，其中芳基选自苯基；并且其中，芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，其选自3-(苄基氨基)丙基；其中，芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1是杂芳基，其中杂芳基选自吡啶基；并且其中，杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是杂芳基，其选自吡啶-4-基；其中，杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1是杂芳基-C1-8烷基，其中杂芳基选自1H-咪唑基；并且其中，杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是杂芳基-C1-8烷基，其选自1H-咪唑-1-基-甲基；其中，杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1是(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基，其中杂芳基选自吡啶基；并且其中，杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基，其选自(吡啶-3-基甲基)(甲基)氨基；其中，杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R1是杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，其中杂芳基选自噻吩基或吡啶基；并且其中，杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R1是杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基，其选自噻吩-3-基-甲基-氨基-丙基、吡啶-2-基-甲基-氨基-丙基、吡啶-3-基-甲基-氨基-丙基或吡啶-4-基-甲基-氨基-丙基；其中，杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R3选自氰基，卤素、羟基、氧代、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷基-羰基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-羰基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷基-羰基-氨基、C1-8烷氧基-羰基-氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基或(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R3选自氰基，卤素、羟基、氧代、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-羰基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷氧基-羰基-氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基或(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R3是C1-8烷基，其选自甲基、乙基、丙基、异丙基或叔丁基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R3是C1-8烷基，其选自乙基、丙基、异丙基或叔丁基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R3是卤代-C1-8烷基，其选自三卤代-甲基、双卤代-甲基、卤代-甲基、三卤代-乙基、双卤代-乙基、卤代-乙基、三卤代-丙基、双卤代-丙基或卤代-丙基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R3是卤代-C1-8烷基，其选自三卤代-甲基、双卤代-甲基、卤代-甲基、三卤代-乙基、双卤代-乙基、三卤代-丙基或双卤代-丙基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R3是羟基-C1-8烷基，其选自羟基-甲基、羟基-乙基、羟基-丙基、二羟基-丙基、羟基-丁基或二羟基-丁基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R3是羟基-C1-8烷基，其选自羟基-甲基、二羟基-丙基、羟基-丁基或二羟基-丁基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R3是C1-8烷氧基，其选自甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R3是卤代-C1-8烷氧基，其选自三卤代-甲氧基、双卤代-甲氧基、卤代-甲氧基、三卤代-乙氧基、双卤代-乙氧基、卤代-乙氧基、三卤代-丙氧基、双卤代-丙氧基或卤代-丙氧基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R3是C1-8烷氧基-羰基-氨基，其选自甲氧基-羰基-氨基、乙氧基-羰基-氨基、丙氧基-羰基-氨基、异丙氧基-羰基-氨基、叔丁氧基-羰基-氨基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R4是C3-14环烷基，其选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；其中，C3-14环烷基的每种情况任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R4是C3-8环烷基，其选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；其中，C3-8环烷基的每种情况任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R4是C3-14环烷基-C1-8烷基，其中C3-14环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；并且其中，C3-14环烷基的每种情况任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R4是C3-8环烷基-C1-8烷基，其中C3-8环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；并且其中，C3-8环烷基的每种情况任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R4是C3-14环烷基-氨基，其中C3-14环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；并且其中，C3-14环烷基的每种情况任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R4是C3-8环烷基-氨基，其中C3-8环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；并且其中，C3-8环烷基的每种情况任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R4是芳基-C1-8烷基、芳基-C1-8烷氧基-羰基或芳基-磺酰氧基-C1-8烷基，其中芳基选自苯基；并且其中，芳基的每种情况任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R4是芳基-C1-8烷基或芳基-C1-8烷氧基-羰基，其中芳基的每种情况任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R4是杂环基，其选自氧杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1，3-二恶烷基或吗啉基，其中杂环基的每种情况任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R4是杂环基，其选自杂环丁烷-3-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、哌嗪-1-基、1，3-二恶烷-5-基或吗啉-4-基，其中杂环基的每种情况任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R4是杂环基-C1-8烷基，其中杂环基的每种情况选自吡咯烷基或哌啶基；并且其中，杂环基的每种情况任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R4是杂环基-C1-8烷基，其选自吡咯烷-1-基-C1-8烷基或哌啶-1-基-C1-8烷基，其中杂环基的每种情况任选地被R5取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R5选自卤素、羟基、氰基、硝基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫代；其中，卤素和卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R5是羟基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R5是C1-8烷基，其选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基或叔丁基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R5是C1-8烷基，其选自乙基、丙基、异丙基或叔丁基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R5是卤代-C1-8烷基，其选自三卤代-甲基、双卤代-甲基、卤代-甲基、三卤代-乙基、双卤代-乙基、卤代-乙基、三卤代-丙基、双卤代-丙基或卤代-丙基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R5是C1-8烷氧基，其选自甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R5是卤代-C1-8烷氧基，其选自三卤代-甲氧基、双卤代-甲氧基、卤代-甲氧基、三卤代-乙氧基、双卤代-乙氧基、卤代-乙氧基、三卤代-丙氧基、双卤代-丙氧基或卤代-丙氧基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R2是芳基，其选自任选地被R6和R7取代基取代的苯基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R2是芳基-氨基，其中芳基选自苯基；并且其中，芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R2是芳基-氨基，其选自苯基-氨基；其中，芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R2是芳基-氨基-羰基，其中芳基选自苯基；并且其中，芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R2是芳基-氨基-羰基，其选自苯基-氨基-羰基；其中，芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，
R2是杂环基，其选自1，2，3，6-四氢吡啶基、1，3-苯并二氧戊环基或2，3-二氢-1，4-苯并二氧杂环己二烯基；其中，杂环基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R2是杂环基，其选自1，2，3，6-四氢吡啶-4-基、1，3-苯并二氧戊环-5-基或2，3-二氢-1，4-苯并二氧杂环己二烯-6-基；其中，杂环基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，
R2是杂芳基，其选自噻吩基、1H-吡唑基、1H-咪唑基、1，3-噻唑基、1，2，4-恶二唑基、1，3，4-恶二唑基、吡啶基、嘧啶基、1H-吲哚基、2H-吲哚基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲哚嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、1H-苯并咪唑基、1，3-苯并噻唑基、1，3-苯并噁唑基、9H-嘌呤基、呋喃并[3，2-b]吡啶基、呋喃并[3，2-c]吡啶基、呋喃并[2，3-c]吡啶基、噻吩并[3，2-c]吡啶基、噻吩并[2，3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2，3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2，3-c]吡啶基、吡咯并[1，2-a]嘧啶基、吡咯并[1，2-a]吡嗪基、吡咯并[1，2-b]哒嗪基、吡唑并[1，5-a]吡啶基、吡唑并[1，5-a]吡嗪基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[1，2-a]嘧啶基、咪唑并[1，2-c]嘧啶基、咪唑并[1，2-b]哒嗪基、咪唑并[1，2-a]吡嗪基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、咪唑并[2，1-b][1，3，4]噻二唑基、[1，3]恶唑并[4，5-b]吡啶基或喹喔啉基；其中，杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R2是杂芳基，其选自噻吩-2-基、噻吩-3-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、1H-吡唑-5-基、1H-咪唑-1-基、1H-咪唑-4-基、1，3-噻唑-2-基、1，2，4-恶二唑-3-基、1，3，4-恶二唑-2-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、嘧啶-4-基、1H-吲哚-3-基、1H-吲哚-4-基、1H-吲哚-5-基、1H-吲哚-6-基、1H-吲唑-5-基、2H-吲唑-5-基、吲嗪-2-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-5-基、苯并噻吩-2-基、苯并噻吩-3-基、1H-苯并咪唑-2-基、1H-苯并咪唑-6-基、1，3-苯并噁唑-2-基、1，3-苯并噁唑-5-基、1，3-苯并噁唑-6-基、1，3-苯并噻唑-2-基、1，3-苯并噻唑-5-基、1，3-苯并噻唑-6-基、9H-嘌呤-8-基、呋喃并[3，2-b]吡啶-2-基、呋喃并[3，2-c]吡啶-2-基、呋喃并[2，3-c]吡啶-2-基、噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基、噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-基、1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基、1H-吡咯并[2，3-c]吡啶-4-基、吡咯并[1，2-a]嘧啶-7-基、吡咯并[1，2-a]吡嗪-7-基、吡咯并[1，2-b]哒嗪-2-基、吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基、吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基、咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基、咪唑并[1，2-a]嘧啶-2-基、咪唑并[1，2-a]嘧啶-6-基、咪唑并[1，2-c]嘧啶-2-基、咪唑并[1，2-b]哒嗪-2-基、咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑-6-基、咪唑并[2，1-b][1，3，4]噻二唑-6-基、[1，3]恶唑并[4，5-b]吡啶-2-基或喹喔啉-2-基；其中，杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R2是取代的杂芳基，其选自4-甲基噻吩-2-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、4-甲基-1H-吡唑-3-基、1-苯基-1H-吡唑-3-基、1-苯基-1H-咪唑-4-基、2-甲基-1-(吡啶-2-基)-1H-咪唑-4-基、4-甲基-1，3-噻唑-2-基、4-(三氟甲基)-1，3-噻唑-2-基、4-苯基-1，3-噻唑-2-基、5-苯基-1，2，4-恶二唑-3-基、3-氟吡啶-4-基、6-氟吡啶-2-基、2-氯吡啶-4-基、4-氯吡啶-3-基、5-氯吡啶-2-基、6-甲基吡啶-3-基、2-(三氟甲基)吡啶-3-基、4-(三氟甲基)吡啶-2-基、6-(三氟甲基)吡啶-2-基、2-甲氧基吡啶-4-基、4-甲氧基吡啶-3-基、6-甲氧基吡啶-2-基、2-乙氧基吡啶-3-基、6-乙氧基吡啶-2-基、6-(丙-2-基氧基)吡啶-2-基、6-(二甲基氨基)吡啶-3-基、6-(甲硫基)吡啶-2-基、6-(环丁基氧基)吡啶-2-基、6-(吡咯烷-1-基)吡啶-2-基、2-甲基嘧啶-4-基、2-(丙-2-基)嘧啶-4-基、2-环丙基嘧啶-4-基、1-甲基-1H-吲哚-3-基、2-甲基-2H-吲唑-5-基、2-甲基-1-苯并呋喃-5-基、1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基、4-甲基-1H-苯并咪唑-2-基5-氟-1H-苯并咪唑-2-基、4-氟-1，3-苯并噁唑-2-基、5-氟-1，3-苯并噁唑-2-基、4-氯-1，3-苯并噁唑-2-基、4-碘代-1，3-苯并噁唑-2-基、2-甲基-1，3-苯并噁唑-6-基、4-甲基-1，3-苯并噁唑-2-基、4-(三氟甲基)-1，3-苯并噁唑-2-基、7-(三氟甲基)-1，3-苯并噁唑-2-基、2-甲基-1，3-苯并噻唑-2-基、2-甲基-1，3-苯并噻唑-5-基、2-甲基-1，3-苯并噻唑-6-基、4-氯-1，3-苯并噻唑-2-基、7-氯-1，3-苯并噻唑-2-基、4-(三氟甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基、5-甲基呋喃并[3，2-b]吡啶-2-基、4，6-二甲基呋喃并[3，2-c]吡啶-2-基、5，7-二甲基呋喃并[2，3-c]吡啶-2-基、4，6-二甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基、2，4-二甲基噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-基、1-甲基吡咯并[1，2-a]吡嗪-7-基、3-甲基吡咯并[1，2-a]吡嗪-7-基、1，3-二甲基吡咯并[1，2-a]吡嗪-7-基、2-甲基吡咯并[1，2-b]哒嗪-2-基、4，6-二甲基吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基、5-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基、4，6-二甲基吡唑并[1，5-a]吡嗪-2-基、2-氯咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑-6-基、2-甲基咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑-6-基、3-甲基咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑-6-基、2-乙基咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑-6-基、2-甲基咪唑并[2，1-b][1，3，4]噻二唑-6-基、6-氰基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基(还称为2-咪唑并[1，2-a]吡啶-6-甲腈)、6-氟咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、8-氟咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、6，8-二氟咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、7-(三氟甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、8-(三氟甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、6-氯咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、7-氯咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、8-氯咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、8-溴咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、2-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、5-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、6-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、7-乙基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、8-乙基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、6，8-二甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、8-乙基-6-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、7-甲氧基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、8-甲氧基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、6-氟-8-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、8-氟-6-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、8-氯-6-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、6-甲基-8-硝基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、8-环丙基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、2-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基、2-乙基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基、2，3-二甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基、2，8-二甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基、2-(三氟甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基、8-氯-2-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基、8-氟-2-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基、6-氟咪唑并[1，2-a]嘧啶-2-基、6-氯咪唑并[1，2-a]嘧啶-2-基、6-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶-2-基、7-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶-2-基、2-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶-6-基、6-甲基咪唑并[1，2-b]哒嗪-2-基、2-甲基-3-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基、6-甲基咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基、8-甲基咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基、6，8-二甲基咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基、6-氯-8-甲基咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基、6-甲基-8-(三氟甲基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基、8-(甲硫基)咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基、2-甲基咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑-6-基、3-甲基咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑-6-基或2-甲基咪唑并[2，1-b][1，3，4]噻二唑-6-基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R2是杂芳基，其选自噻吩基、1H-吡唑基、1H-咪唑基、1，3-噻唑基、1，2，4-恶二唑基、1，3，4-恶二唑基、吡啶基、嘧啶基、1H-吲哚基、2H-吲哚基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲哚嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、1H-苯并咪唑基、1，3-苯并噻唑基、1，3-苯并噁唑基、9H-嘌呤基；其中，杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R2是杂芳基，其选自呋喃并[3，2-b]吡啶基、呋喃并[3，2-c]吡啶基、呋喃并[2，3-c]吡啶基、噻吩并[3，2-c]吡啶基、噻吩并[2，3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2，3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2，3-c]吡啶基、吡咯并[1，2-a]嘧啶基、吡咯并[1，2-a]吡嗪基、吡咯并[1，2-b]哒嗪基、吡唑并[1，5-a]吡啶基、吡唑并[1，5-a]吡嗪基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[1，2-a]嘧啶基、咪唑并[1，2-c]嘧啶基、咪唑并[1，2-b]哒嗪基、咪唑并[1，2-a]吡嗪基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、咪唑并[2，1-b][1，3，4]噻二唑基、[1，3]恶唑并[4，5-b]吡啶基或喹喔啉基；其中，杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R2是杂芳基-氨基，其中杂芳基选自吡啶基或嘧啶基；并且其中，杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R2是杂芳基-氨基，其选自吡啶-2-基-氨基、吡啶-3-基-氨基或嘧啶-2-基-氨基；其中，杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R6选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫代；其中，卤素和卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R6是C1-8烷基，其选自甲基、乙基、丙基、异丙基或叔丁基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R6是C1-8烷基，其选自乙基、丙基、异丙基或叔丁基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R6是C2-8烯基，其选自乙烯基、烯丙基或丁-1，3-二烯基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R6是C2-8烯基，其选自乙烯基或烯丙基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R6是卤代-C1-8烷基，其选自三卤代-甲基、双卤代-甲基、卤代-甲基、三卤代-乙基、双卤代-乙基、卤代-乙基、三卤代-丙基、双卤代-丙基或卤代-丙基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R6是羟基-C1-8烷基，其选自羟基-甲基、羟基-乙基、羟基-丙基、二羟基-丙基、羟基-丁基或二羟基-丁基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R6是羟基-C1-8烷基，其选自羟基-甲基、二羟基-丙基、羟基-丁基或二羟基-丁基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R6是C1-8烷氧基，其选自甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R6是卤代-C1-8烷氧基，其选自三卤代-甲氧基、双卤代-甲氧基、卤代-甲氧基、三卤代-乙氧基、双卤代-乙氧基、卤代-乙氧基、三卤代-丙氧基、双卤代-丙氧基或卤代-丙氧基；其中，卤代选自氟代、氯代、溴代或碘代。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R7是C3-14环烷基、C3-14环烷基-氧基、芳基、杂环基或杂芳基；其中C3-14环烷基选自环丙基或环丁氧基；其中芳基选自苯基；其中杂环基选自氧杂环丁烷基、吡咯烷基或1，2，3，6-四氢吡啶基；和，其中杂芳基选自噻吩基或吡啶基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R7是C3-14环烷基或C3-14环烷基-氧基，其中C3-14环烷基的每种情况选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R7是C3-8环烷基或C3-8环烷基-氧基，其中C3-8环烷基的每种情况选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R7是芳基，其选自苯基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R7是杂环基，其选自氧杂环丁烷基、吡咯烷基或1，2，3，6-四氢吡啶基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R7是杂环基，其选自杂环丁烷-3-基、吡咯烷-1-基或1，2，3，6-四氢吡啶-4-基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R7是杂芳基，其选自噻吩基或吡啶基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R7是杂芳基，其选自吡啶基。
在式(I)的化合物的一种实施方式中，R7是杂芳基，其选自噻吩-2-基或吡啶-2-基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，R7是杂芳基，其选自吡啶-2-基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基，(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代；和，
其中，杂环基选自氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1，4-二氮杂环庚烷基、1，2，5，6-四氢吡啶基、1，2，3，6-四氢吡啶基、六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS，6aS)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR，6aR)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS，6aS)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR，6aS)-六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基、六氢-5H-吡咯并[3，2-c]吡啶基、六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、(4aR，7aR)-六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、(4aS，7aS)-六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R，8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、六氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R，5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R，5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S，4S)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1，4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2，6-二氮杂螺[3.3]庚基、2，7-二氮杂螺[3.5]壬基、5，8-二氮杂螺[3.5]壬基、2，7-二氮杂螺[4.4]壬基或6，9-二氮杂螺[4.5]癸基。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基；
其中，芳基是苯基；
其中，杂环基选自1，2，3，6-四氢吡啶基、1，3-苯并二氧戊环基或2，3-二氢-1，4-苯并二氧杂环己二烯基；
其中，杂芳基选自噻吩基、1H-吡唑基、1H-咪唑基、1，3-噻唑基、1，2，4-恶二唑基、1，3，4-恶二唑基、吡啶基、嘧啶基、1H-吲哚基、2H-吲哚基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲哚嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、1H-苯并咪唑基、1，3-苯并噻唑基、1，3-苯并噁唑基、9H-嘌呤基、呋喃并[3，2-b]吡啶基、呋喃并[3，2-c]吡啶基、呋喃并[2，3-c]吡啶基、噻吩并[3，2-c]吡啶基、噻吩并[2，3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2，3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2，3-c]吡啶基、吡咯并[1，2-a]嘧啶基、吡咯并[1，2-a]吡嗪基、吡咯并[1，2-b]哒嗪基、吡唑并[1，5-a]吡啶基、吡唑并[1，5-a]吡嗪基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[1，2-a]嘧啶基、咪唑并[1，2-c]嘧啶基、咪唑并[1，2-b]哒嗪基、咪唑并[1，2-a]吡嗪基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、咪唑并[2，1-b][1，3，4]噻二唑基、[1，3]恶唑并[4，5-b]吡啶基或喹喔啉基；并且其中，芳基、杂环基和杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基，(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；
其中，杂环基选自氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1，4-二氮杂环庚烷基、1，2，5，6-四氢吡啶基、1，2，3，6-四氢吡啶基、六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS，6aS)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR，6aR)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS，6aS)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR，6aS)-六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基、六氢-5H-吡咯并[3，2-c]吡啶基、六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、(4aR，7aR)-六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、(4aS，7aS)-六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R，8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、六氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R，5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R，5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S，4S)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1，4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2，6-二氮杂螺[3.3]庚基、2，7-二氮杂螺[3.5]壬基、5，8-二氮杂螺[3.5]壬基、2，7-二氮杂螺[4.4]壬基或6，9-二氮杂螺[4.5]癸基；并且其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代；和
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基；
其中，杂环基选自1，2，3，6-四氢吡啶-4-基、1，3-苯并二氧-5-基或2，3-二氢-1，4-苯并二氧杂环己二烯-6-基；
其中，杂芳基选自噻吩基、1H-吡唑基、1H-咪唑基、1，3-噻唑基、1，2，4-恶二唑基、1，3，4-恶二唑基、吡啶基、嘧啶基、1H-吲哚基、2H-吲哚基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲哚嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、1H-苯并咪唑基、1，3-苯并噻唑基、1，3-苯并噁唑基、9H-嘌呤基、呋喃并[3，2-b]吡啶基、呋喃并[3，2-c]吡啶基、呋喃并[2，3-c]吡啶基、噻吩并[3，2-c]吡啶基、噻吩并[2，3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2，3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2，3-c]吡啶基、吡咯并[1，2-a]嘧啶基、吡咯并[1，2-a]吡嗪基、吡咯并[1，2-b]哒嗪基、吡唑并[1，5-a]吡啶基、吡唑并[1，5-a]吡嗪基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[1，2-a]嘧啶基、咪唑并[1，2-c]嘧啶基、咪唑并[1，2-b]哒嗪基、咪唑并[1，2-a]吡嗪基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、咪唑并[2，1-b][1，3，4]噻二唑基、[1，3]恶唑并[4，5-b]吡啶基或喹喔啉基；并且其中，杂环基和杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基或[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基；和
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，芳基、杂环基和杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基，(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代；和，
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，芳基、杂环基和杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基或杂环基-羰基-氧基；其中，杂环基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代；和
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，芳基、杂环基和杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是任选地被R3和R4取代基取代的杂环基；和
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，芳基、杂环基和杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是任选地被R3和R4取代基取代的C3-14环烷基；和
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，芳基、杂环基和杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代；和
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，芳基、杂环基和杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是任选地被R3和R4取代基取代的芳基-C1-8烷基-氨基；和
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，芳基、杂环基和杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基，(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况任选地被R3和R4取代基取代；和，
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，芳基、杂环基和杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
在式(I)的化合物的另一种实施方式中，
R1是任选地被R3和R4取代基取代的杂芳基；和
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基，其中，芳基、杂环基和杂芳基的每种情况任选地被R6和R7取代基取代。
式(I)的化合物的实施方式，其中所述化合物选自式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、式(IX)、式(X)、式(XI)、式(XII)、式(XIII)、式(XIV)、式(XV)、式(XVI)、式(XVII)、式(XVIII)或式(XIX)：
或其形式。
在式(II)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2，w6是C-Ra并且w3和w4独立地为C-Ra或N。
在式(II)的化合物的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1，w6是C-Ra并且w3和w4独立地为C-Ra或N。
在式(II)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w2和w4独立地为C-Ra或N并且w5为C-Rc或N。
在式(II)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w2和w4独立地为C-Ra或N并且w5为C-Rc或N。
在式(III)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w4是C-Ra或N，w1是C-Rb或N，并且w5为C-Rc或N。
在式(III)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w4是C-Ra或N，w1是C-Rb或N并且w5是C-Rc或N。
在式(IV)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2，w6是C-Ra，w4是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(IV)的化合物的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1，w6是C-Ra，w4是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(V)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2，w6是C-Ra，w3是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(V)的化合物的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1，w6是C-Ra，w3是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(V)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w2是C-Ra或N，w1是C-Rb或N并且w5是C-R。或N。
在式(V)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w2是C-Ra或N，w1是C-Rb或N并且w5是C-Rc或N。
在式(VI)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w2和w4独立地为C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(VI)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w2和w4独立地为C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(VII)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w4是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N。
在式(VII)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w4是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N。
在式(VIII)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2，w6是C-Ra并且w4是C-Ra或N。
在式(VIII)的化合物的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1，w6是C-Ra并且w4是C-Ra或N。
在式(IX)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N。
在式(IX)的化合物的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N。
在式(IX)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N。
在式(IX)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N。
在式(X)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2并且w2和w4独立地为C-Ra或N。
在式(X)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1并且w2和w4独立地为C-Ra或N。
在式(XI)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w1是C-Rb或N并且w5是C-Rc或N。
在式(XI)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w1是C-Rb或N并且w5是C-Rc或N。
在式(XII)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w4是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(XII)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w4是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(XIII)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2，w6是C-Ra并且w1是C-Rb或N。
在式(XIII)的化合物的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1，w6是C-Ra并且w1是C-Rb或N。
在式(XIV)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w2是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(XIV)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w2是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(XV)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2并且w5是C-Rc。
在式(XV)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1并且w5是C-Rc。
在式(XVI)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2并且w4是C-Ra。
在式(XVI)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1并且w4是C-Ra。
在式(XVII)的化合物的一种实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2并且w6是C-Ra。
在式(XVII)的化合物的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1并且w6是C-Ra。
在式(XVIII)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2并且w2是C-Ra。
在式(XVIII)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1并且w2是C-Ra。
在式(XIX)的化合物的一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2并且w1是C-Rb。
在式(XIX)的化合物的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1并且w1是C-Rb。
式(I)的化合物的实施方式是式(II)的化合物：
或其形式。
式(I)的化合物的实施方式是式(III)的化合物：
或其形式。
式(I)的化合物的实施方式是式(IV)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(V)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(VI)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(VII)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(VIII)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(IX)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(X)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(XI)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(XII)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(XIII)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(XIV)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(XV)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(XVI)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(XVII)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(XVIII)的化合物：
或其形式。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(XIX)的化合物：
或其形式。
式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、式(X)、式(XI)、式(XII)、式(XIII)、式(XIV)、式(XV)、式(XVI)、式(XVII)、式(XVIII)或式(XIX)的化合物的实施方式是分别选自下列的化合物：式(Ia)、式(IIa)、式(IIIa)、式(IVa)、式(Va)、式(VIa)、式(VIIa)、式(VIIIa)、式(Xa)、式(XIa)、式(XIIa)、式(XIIIa)、式(XIVa)、式(XVa)、式(XVIa)、式(XVIIa)、式(XVIIIa)或式(XIXa)：
或其形式。
在式(Ia)的化合物的一种实施方式中，w2、w3、w5和w6中的一个是C-R1而w2、w3、w5和w6中的另一个是C-R2，条件是，
当w3是C-R1时，那么w6是C-R2，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或者，
当w3是C-R2时，那么w6是C-R1，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或者，
当w2是C-R1时，那么w5是C-R2，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N；或者，
当w2是C-R2时，那么w5是C-R1，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N。
在式(IIa)的化合物的一种实施方式中，w2、w3、w5和w6中的一个是C-R1并且w2、w3、w5和w6中的另一个是C-R2，条件是，
当w3是C-R1时，那么w6是C-R2，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或者，
当w3是C-R2时，那么w6是C-R1，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或者，
当w2是C-R1时，那么w5是C-R2，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N；或者，
当w2是C-R2时，那么w5是C-R1，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N。
在式(IIIa)的化合物的一种实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w3是C-R1时，那么w6是C-R2；或者，当w3是C-R2时，那么w6是C-R1。
在式(IVa)的化合物的一种实施方式中，w2和w5中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w2是C-R1时，那么w5是C-R2；或者，当w2是C-R2时，那么w5是C-R1。
在式(Va)的化合物的一种实施方式中，w2、w3、w5和w6中的一个是C-R1并且w2、w3、w5和w6中的另一个是C-R2，条件是，
当w3是C-R1时，那么w6是C-R2，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或者，
当w3是C-R2时，那么w6是C-R1，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或者，
当w2是C-R1时，那么w5是C-R2，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N；或者，
当w2是C-R2时，那么w5是C-R1，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N。
在式(VIa)的化合物的一种实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w3是C-R1时，那么w6是C-R2；或者，当w3是C-R2时，那么w6是C-R1。
在式(VIIa)的化合物的一种实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w3是C-R1时，那么w6是C-R2；或者，当w3是C-R2时，那么w6是C-R1。
在式(VIIIa)的化合物的一种实施方式中，w2和w5中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w2是C-R1时，那么w5是C-R2；或者，当w2是C-R2时，那么w5是C-R1。
在式(Xa)的化合物的一种实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w3是C-R1时，那么w6是C-R2；或者，当w3是C-R2时，那么w6是C-R1。
在式(XIa)的化合物的一种实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w3是C-R1时，那么w6是C-R2；或者，当w3是C-R2时，那么w6是C-R1。
在式(XIIa)的化合物的一种实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w3是C-R1时，那么w6是C-R2；或者，当w3是C-R2时，那么w6是C-R1。
在式(XIIIa)的化合物的一种实施方式中，w2和w5中的一个C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w2是C-R1时，那么w5是C-R2；或者，当w2是C-R2时，那么w5是C-R1。
在式(XIVa)的化合物的一种实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w3是C-R1时，那么w6是C-R2；或者，当w3是C-R2时，那么w6是C-R1。
在式(XVa)的化合物的一种实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w3是C-R1时，那么w6是C-R2；或者，当w3是C-R2时，那么w6是C-R1。
在式(XVIa)的化合物的一种实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w3是C-R1时，那么w6是C-R2；或者，当w3是C-R2时，那么w6是C-R1。
在式(XVIIa)的化合物的一种实施方式中，w2和w5中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w2是C-R1时，那么w5是C-R2；或者，当w2是C-R2时，那么w5是C-R1。
在式(XVIIIa)的化合物的一种实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w3是C-R1时，那么w6是C-R2；或者，当w3是C-R2时，那么w6是C-R1。
在式(XIXa)的化合物的一种实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，条件是，当w3是C-R1时，那么w6是C-R2；或者，当w3是C-R2时，那么w6是C-R1。
独立地为式(I)的化合物的实施方式是式(Ia)的化合物：
或其形式。
式(II)的化合物的实施方式是式(IIa)的化合物：
或其形式。
式(III)的化合物的实施方式是式(IIIa)的化合物：
或其形式。
式(IV)的化合物的实施方式是式(IVa)的化合物：
或其形式。
式(V)的化合物的实施方式是式(Va)的化合物：
或其形式。
式(VI)的化合物的实施方式是式(VIa)的化合物：
或其形式。
式(VII)的化合物的实施方式是式(VIIa)的化合物：
或其形式。
式(VIII)的化合物的实施方式是式(VIIIa)的化合物：
或其形式。
式(X)的化合物的实施方式是式(Xa)的化合物：
或其形式。
式(XI)的化合物的实施方式是式(XIa)的化合物：
或其形式。
式(XII)的化合物的实施方式是式(XIIa)的化合物：
或其形式。
式(XIII)的化合物的实施方式是式(XIIIa)的化合物：
或其形式。
式(XIV)的化合物的实施方式是式(XIVa)的化合物：
或其形式。
式(XV)的化合物的实施方式是式(XVa)的化合物：
或其形式。
式(XVI)的化合物的实施方式是式(XVIa)的化合物：
或其形式。
式(XVII)的化合物的实施方式是式(XVIIa)的化合物：
或其形式。
式(XVIII)的化合物的实施方式是式(XVIIIa)的化合物：
或其形式。
式(XIX)的化合物的实施方式是式(XIXa)的化合物：
或其形式。
式(Ia)的化合物的实施方式是式(Ia1)、式(Ia2)、式(Ia3)或式(Ia4)的化合物：
或其形式。
式(IIa)的化合物的实施方式是式(IIa1)、式(IIa2)、式(IIa3)或式(IIa4)的化合物：
或其形式。
式(IIIa)的化合物的实施方式是式(IIIa1)或式(IIIa2)的化合物：
或其形式。
式(IVa)的化合物的实施方式是式(IVa1)或式(IVa2)的化合物：
或其形式。
式(Va)的化合物的实施方式是式(Va1)、式(Va2)、式(Va3)或式(Va4)的化合物：
或其形式。
式(VIa)的化合物的实施方式是式(VIa1)或式(VIa2)的化合物：
或其形式。
式(VIIa)的化合物的实施方式是式(VIIa1)或式(VIIa2)的化合物：
或其形式。
式(VIIIa)的化合物的实施方式是式(VIIIa1)或式(VIIIa2)的化合物：
或其形式。
式(IX)的化合物的实施方式是式(IXa1)、式(IXa2)、式(IXa3)或式(IXa4)的化合物：
或其形式。
式(Xa)的化合物的实施方式是式(Xa1)或式(Xa2)的化合物：
或其形式。
式(XIa)的化合物的实施方式是式(XIa1)或式(XIa2)的化合物：
或其形式。
式(XIIa)的化合物的实施方式是式(XIIa1)或式(XIIa2)的化合物：
或其形式。
式(XIIIa)的化合物的实施方式是式(XIIIa1)或式(XIIIa2)的化合物：
或其形式。
式(XIVa)的化合物的实施方式是式(XIVa1)或式(XIVa2)的化合物：
或其形式。
式(XVa)的化合物的实施方式是式(XVa1)或式(XVa2)的化合物：
或其形式。
式(XVIa)的化合物的实施方式是式(XVIa1)或式(XVIa2)的化合物：
或其形式。
式(XVIIa)的化合物的实施方式是式(XVIIa1)或式(XVIIa2)的化合物：
或其形式。
式(XVIIIa)的化合物的实施方式是式(XVIIIa1)或式(XVIIIa2)的化合物：
或其形式。
式(XIXa)的化合物的实施方式是式(XIXa1)或式(XIXa2)的化合物：
或其形式。
式(Ia)的化合物的实施方式是式(Ia1)的化合物：
或其形式。
式(Ia)的化合物的实施方式是式(Ia2)的化合物：
或其形式。
式(Ia)的化合物的实施方式是式(Ia3)的化合物：
或其形式。
式(Ia)的化合物的实施方式是式(Ia4)的化合物：
或其形式。
式(IIa)的化合物的实施方式是式(IIa1)的化合物：
或其形式。
式(IIa)的化合物的实施方式是式(IIa2)的化合物：
或其形式。
式(IIa)的化合物的实施方式是式(IIa3)的化合物：
或其形式。
式(IIa)的化合物的实施方式是式(IIa4)的化合物：
或其形式。
式(IIIa)的化合物的实施方式是式(IIIa1)的化合物：
或其形式。
式(IIIa)的化合物的实施方式是式(IIIa2)的化合物：
或其形式。
式(IVa)的化合物的实施方式是式(IVa1)的化合物：
或其形式。
式(IVa)的化合物的实施方式是式(IVa2)的化合物：
或其形式。
式(Va)的化合物的实施方式是式(Va1)的化合物：
或其形式。
式(Va)的化合物的实施方式是式(Va2)的化合物：
或其形式。
式(Va)的化合物的实施方式是式(Va3)的化合物：
或其形式。
式(Va)的化合物的实施方式是式(Va4)的化合物：
或其形式。
式(VIa)的化合物的实施方式是式(VIa1)的化合物：
或其形式。
式(VIa)的化合物的实施方式是式(VIa2)的化合物：
或其形式。
式(VIIa)的化合物的实施方式是式(VIIa1)的化合物：
或其形式。
式(VIIa)的化合物的实施方式是式(VIIa2)的化合物：
或其形式。
式(VIIIa)的化合物的实施方式是式(VIIIa1)的化合物：
或其形式。
式(VIIIa)的化合物的实施方式是式(VIIIa2)的化合物：
或其形式。
式(IX)的化合物的实施方式是式(IXa1)的化合物：
或其形式。
式(IX)的化合物的实施方式是式(IXa2)的化合物：
或其形式。
式(IX)的化合物的实施方式是式(IXa3)的化合物：
或其形式。
式(IX)的化合物的实施方式是式(IXa4)的化合物：
或其形式。
式(Xa)的化合物的实施方式是式(Xa1)的化合物：
或其形式。
式(Xa)的化合物的实施方式是式(Xa2)的化合物：
或其形式。
式(XIa)的化合物的实施方式是式(XIa1)的化合物：
或其形式。
式(XIa)的化合物的实施方式是式(XIa2)的化合物：
或其形式。
式(XIIa)的化合物的实施方式是式(XIIa1)的化合物：
或其形式。
式(XIIa)的化合物的实施方式是式(XIIa2)的化合物：
或其形式。
式(XIIIa)的化合物的实施方式是式(XIIIa1)的化合物：
或其形式。
式(XIIIa)的化合物的实施方式是式(XIIIa2)的化合物：
或其形式。
式(XIVa)的化合物的实施方式是式(XIVa1)的化合物：
或其形式。
式(XIVa)的化合物的实施方式是式(XIVa2)的化合物：
或其形式。
式(XVa)的化合物的实施方式是式(XVa1)的化合物：
或其形式。
式(XVa)的化合物的实施方式是式(XVa2)的化合物：
或其形式。
式(XVIa)的化合物的实施方式是式(XVIa1)的化合物：
或其形式。
式(XVIa)的化合物的实施方式是式(XVIa2)的化合物：
或其形式。
式(XVIIa)的化合物的实施方式是式(XVIIa1)的化合物：
或其形式。
式(XVIIa)的化合物的实施方式是式(XVIIa2)的化合物：
或其形式。
式(XVIIIa)的化合物的实施方式是式(XVIIIa1)的化合物：
或其形式。
式(XVIIIa)的化合物的实施方式是式(XVIIIa2)的化合物：
或其形式。
式(XIXa)的化合物的实施方式是式(XIXa1)的化合物：
或其形式。
式(XIXa)的化合物的实施方式是式(XIXa2)的化合物：
或其形式。
式(I)的化合物的实施方式是选自下列的化合物：
或其形式。
术语
除非另外明确定义，否则本领域的技术人员应认为以上以及本文整个描述中所使用的化学术语具有以下所说明的含义。
如本文所使用的，术语“C1-8烷基”泛指在直链或支链结构中具有1至8个碳原子的饱和烃基，其包括(但不限于)甲基、乙基、正丙基(还称为丙基)、异丙基、正丁基(还称为丁基)、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基(还称为戊基)、正己基(还称为己基)、正庚基(还称为庚基)、正辛基等。在一些实施方式中，C1-8烷基包括(但不限于)C1-6烷基、C1-4烷基等。在可用化合价允许的情况下，C1-8烷基任选地被如本文所述的取代基种类取代，
如本文所使用的，术语“C2-8烯基”泛指在直链或支链结构中具有2至8个碳原子并且其中具有一个或多个碳-碳双键的部分不饱和烃基，其包括(但不限于)，乙烯基(还称为乙烯基)、烯丙基、丙烯基等。在一些实施方式中，C2-8烯基包括(但不限于)C2-6烯基、C2-4烯基等。在可用化合价允许的情况下，C2-8烯基任选地被如本文所述的取代基种类取代。
如本文所使用的，术语“C2-8烯基”泛指在直链或支链结构中具有2至8个碳原子并且其中具有一个或多个碳-碳三键的部分不饱和烃基，其包括(但不限于)乙炔基、丙炔基、丁炔基等。在一些实施方式中，C2-8炔基包括(但不限于)C2-6炔基、C2-4炔基等。在可用化合价允许的情况下，C2-8炔基任选地被如本文所述的取代基种类取代。
如本文所使用的，术语“C1-8烷氧基”泛指由化学式：-O-C1-8烷基表示的在直链或支链结构中具有1至8个碳原子的饱和烃基，其包括(但不限于)甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基等。在一些实施方式中，C1-8烷氧基包括(但不限于)C1-6烷氧基、C1-4烷氧基等。在可用化合价允许的情况下，C1-8烷氧基任选地被如本文所述的取代基种类取代。
如本文所使用的，术语“C3-14环烷基”泛指饱和或部分不饱和单环、双环或多环烃基，其包括(但不限于)环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基、环辛烷基、1H-茚满基、茚基、四氢萘基(tetRahydro-naphthalenyl)等。在一些实施方式中，C3-14环烷基包括(但不限于)C3-8环烷基、C5-8环烷基、C3-10环烷基等。在可用化合价允许的情况下，C3-14环烷基任选地被如本文所述的取代基种类取代。
如本文所使用的，术语“芳基”泛指单环、双环或多环芳碳原子环状结构基团，其包括(但不限于)苯基、萘基、蒽基、芴基、薁基、菲基等。在可用化合价允许的情况下，芳基任选地被如本文所述的取代基种类取代。
如本文所使用的，术语“杂芳基”泛指单环、双环或多环芳碳原子环状结构基团，其中在结构稳定性允许的情况下，一个或多个碳原子环成员已被一个或多个杂原子，如O、S或N原子取代，其包括(但不限于)呋喃基(还称为呋喃基(furyl))、噻吩基(还称为硫代苯基)、吡咯基、2H-吡咯基、3H-吡咯基、吡唑基、1H-吡唑基、咪唑基、1H-咪唑基、异恶唑基、异噻唑基、恶唑基、1，3-噻唑基、三唑基(如1H-1，2，3-三唑基等)、恶二唑基(如1，2，4-恶二唑基、1，3，4-恶二唑基等)、噻二唑基、四唑基(如1H-四唑基、2H-四唑基等)、吡啶基(还称为吡啶基(pyridyl))、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、吲哚基、1H-吲哚基、吲唑基、1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲哚嗪基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基(还称为苯并硫代苯基)、苯并咪唑基、1H-苯并咪唑基、1，3-苯并噻唑基、1，3-苯并噁唑基(还称为1，3-苯并恶唑基)、嘌呤基、9H-嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，3-二嗪基、1，2-二嗪基、1，2-二唑基、1，4-二氮杂萘基、吖啶基、呋喃并[3，2-b]吡啶基、呋喃并[3，2-c]吡啶基、呋喃并[2，3-c]吡啶基、6H-噻吩并[2，3-b]吡咯基、噻吩并[3，2-c]吡啶基、噻吩并[2，3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2，3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2，3-c]吡啶基、1H-吡咯并[3，2-b]吡啶基、吡咯并[1，2-a]吡嗪基、吡咯并[1，2-b]哒嗪基、吡唑并[1，5-a]吡啶基、吡唑并[1，5-a]吡嗪基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、3H-咪唑并[4，5-b]吡啶基、咪唑并[1，2-a]嘧啶基、咪唑并[1，2-c]嘧啶基、咪唑并[1，2-b]哒嗪基、咪唑并[1，2-a]吡嗪基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、咪唑并[2，1-b][1，3，4]噻二唑基、[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶基、[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶基等。在可用化合价允许的情况下，杂芳基任选地在碳或氮原子环成员上被如本文所述的取代基种类取代。
如本文所使用的，术语“杂环基”泛指饱和或部分不饱和单环、双环或多环碳原子环状结构基团，其中在结构稳定性允许的情况下，一个或多个碳原子环成员已被杂原子，如O、S或N原子取代，其包括(但不限于)环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯啉基、吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基，咪唑烷基、异恶唑啉基、异恶唑烷基、异噻唑啉基、异噻唑烷基、恶唑啉基、恶唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、三唑啉基、三唑烷基、恶二唑啉基、恶二唑烷基、噻二唑啉基、噻二唑烷基、四唑啉基、四唑烷基、吡喃基、二氢-2H-吡喃基、硫代吡喃基、1，3-二恶烷基、1，2，5，6-四氢吡啶基、1，2，3，6-四氢吡啶基、哌啶基、哌嗪基，吗啉基、硫代吗啉基、1，4-二氮杂环庚烷基、1，3-苯并二氧戊环基(还称为苯并[d][1，3]二氧杂戊环基)、1，4-苯并二恶烷基、2，3-二氢-1，4-苯并二氧杂环己二烯基(还称为2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己二烯基(dioxinyl))、六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(1H)-基、(3aS，6aS)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR，6aR)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS，6aS)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(2H)-基、(3aR，6aR)-六氢吡咯并[3，4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR，6aS)-六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR，6aR)-六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基、六氢-5H-吡咯并[3，2-c]吡啶基、六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、(4aR，7aR)-六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、(4aS，7aS)-六氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R，8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R，5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R，5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S，4S)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1，4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2，6-二氮杂螺[3.3]庚基、2，7-二氮杂螺[3.5]壬基、5，8-二氮杂螺[3.5]壬基、2，7-二氮杂螺[4.4]壬基、6，9-二氮杂螺[4.5]癸基等。在可用化合价允许的情况下，杂环基任选地在碳或氮原子环成员上被如本文所述的取代基种类取代。
如本文所使用的，术语“C1-8烷氧基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-O-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基”是指式：-NH-C1-8烷基-O-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基”是指式：-N(C1-8烷基-O-C1-8烷基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基”是指式：-O-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-O-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基”是指式：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基-O-C1-8烷基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基”是指式：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-O-C1-8烷基)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-O-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-O-C1-8烷基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-O-C1-8烷基)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷氧基-羰基”是指式：-C(O)-O-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷氧基-羰基-C2-8烯基”是指式：-C2-8烯基-C(O)-O-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷氧基-羰基-氨基”是指式：-NH-C(O)-O-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷基-氨基”是指式：-NH-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(C1-8烷基)2-氨基”是指式：-N(C1-8烷基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷基-氨基-C2-8烯基”是指式：-C2-8烯基-NH-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基”是指式：-C2-8烯基-N(C1-8烷基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基”是指式：所表示的基团。-O-C1-8烷基-NH-C1-8烷基.
如本文所使用的，术语“(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基”是指式：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基”是指式：-NH-C1-8烷基-NH-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基”是指式：-NH-C1-8烷基-N(C1-8烷基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基”是指式：-N(C1-8烷基-NH-C1-8烷基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基]2-氨基”是指式：-N[C1-8烷基-N(C1-8烷基)2]2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”是指式：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-NH-C1-8烷基)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基”是指式：-N(C1-8烷基)[C1-8烷基-N(C1-8烷基)2]所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷基-氨基-C2-8炔基”是指式：-C2-8炔基-NH-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基”是指式：-C2-8炔基-N(C1-8烷基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷基-羰基”是指式：-C(O)-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷基-羰基-氨基”是指式：-NH-C(O)-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C1-8烷基-硫代”是指式：-S-C1-8烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“氨基-C2-8烯基”是指式：-C2-8烯基-NH2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“氨基-C1-8烷氧基”是指式：-O-C1-8烷基-NH2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-NH2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“氨基-C1-8烷基-氨基”是指式：-NH-C1-8烷基-NH2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(氨基-C1-8烷基)2-氨基”是指式：-N(C1-8烷基-NH2)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”是指式：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-NH2)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“氨基-C2-8炔基”是指式：-C2-8炔基-NH2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“芳基-C1-8烷氧基-羰基”是指式：-C(O)-O-C1-8烷基-芳基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“芳基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-芳基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“芳基-C1-8烷基-氨基”是指式：-NH-C1-8烷基-芳基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(芳基-C1-8烷基)2-氨基”是指式：-N(C1-8烷基-芳基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”是指式：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-芳基)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-芳基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-芳基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-芳基)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“芳基-氨基”是指式：-NH-芳基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“芳基-氨基-羰基”是指式：-C(O)-NH-芳基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“芳基-磺酰氧基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-O-SO2-芳基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“苯酰氧基-羰基”是指式：-C(O)-O-CH2-苯基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C3-14环烷基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-C3-14环烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C3-14环烷基-氨基”是指式：-NH-C3-14环烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“C3-14环烷基-氧基”是指式：-O-C3-14环烷基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“卤代”或“卤素”泛指卤素原子基团，其包括氟、氯、溴和碘。
如本文所使用的，术语“卤代-C1-8烷氧基”是指式：-O-C1-8烷基-卤代所表示的基团，其中在可用化合价允许的情况下，C1-8烷基部分或完全被一个或多个卤素原子取代。
如本文所使用的，术语“卤代-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-卤代所表示的基团，其中在可用化合价允许的情况下，C1-8烷基部分或完全被一个或多个卤素原子取代。
如本文所使用的，术语“卤代-C1-8烷基-氨基”是指式：-NH-C1-8烷基-卤代所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”是指式：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-卤代)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(卤代-C1-8烷基)2-氨基”是指式：-N(C1-8烷基-卤代)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂芳基-C1-8烷氧基”是指式：-O-C1-8烷基-杂芳基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂芳基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-杂芳基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂芳基-C1-8烷基-氨基”是指式：-NH-C1-8烷基-杂芳基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基”是指式：-N(C1-8烷基-杂芳基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”是指式：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-杂芳基)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-杂芳基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-杂芳基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-杂芳基)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂芳基-氨基”是指式：-NH-杂芳基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂环基-C1-8烷氧基”是指式：-O-C1-8烷基-杂环基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂环基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-杂环基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂环基-C1-8烷基-氨基”是指式：-NH-C1-8烷基-杂环基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(杂环基-C1-8烷基)2-氨基”是指式：-N(C1-8烷基-杂环基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”是指式：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-杂环基)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-杂环基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-杂环基)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-杂环基)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂环基-氨基”是指式：-NH-杂环基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(杂环基)(C1-8烷基)氨基”是指式：-N(C1-8烷基)(杂环基)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂环基-氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-NH-杂环基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂环基-羰基”是指式：-C(O)-杂环基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂环基-羰基-氧基”是指式：-O-C(O)-杂环基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“杂环基-氧基”是指式：-O-杂环基所表示的基团。
如本文所使用的，术语“羟基”是指式：-OH所表示的基团。
如本文所使用的，术语“羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-O-C1-8烷基-OH所表示的基团。
如本文所使用的，术语“羟基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-OH所表示的基团，其中在可用化合价允许的情况下，C1-8烷基部分或完全被一个或多个羟基自由基取代。
如本文所使用的，术语“羟基-C1-8烷基-氨基”是指式：-NH-C1-8烷基-OH所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(羟基-C1-8烷基)2-氨基”是指式：-N(C1-8烷基-OH)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”是指式：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-OH)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-N(C1-8烷基-OH)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基”是指式：-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-OH)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基”是指式：-O-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基”是指式：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基-OH)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基”是指式：-O-C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-OH)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基”是指式：-NH-C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基”是指式：-N(C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基”是指式：-NH-C1-8烷基-N(C1-8烷基-OH)2所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基”是指式：-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-NH-C1-8烷基-OH)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基”是指式：-N(C1-8烷基)[C1-8烷基-N(C1-8烷基-OH)2]所表示的基团。
如本文所使用的，术语“(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基”是指式：-NH-C1-8烷基-N(C1-8烷基，C1-8烷基-OH)所表示的基团。
如本文所使用的，术语“[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基”是指式：-N(C1-8烷基)[C1-8烷基-N(C1-8烷基)(C1-8烷基-OH)]所表示的基团。
如本文所使用的，术语“取代基”是指在指定原子位置处连接的核心分子的原子上的位置变量，其替代了指定原子上的一个或多个氢原子，但条件是连接的原子不超过可用的化合价或共用的化合价，从而取代导致产生了稳定化合物。因此，只有当这些组合导致产生了稳定化合物时，取代基和/或变量的组合才是允许的。还应注意如本文所述或所示，化合价水平似乎不饱和的任何碳原子以及杂原子被认为具有足够个数的氢原子以满足所述或所示的化合价。
出于这种说明的目的，当式(I)的化合物的一个或多个取代基变量涵盖引入式(I)的化合物的官能度时，在所公开化合物内任何位置处出现的每个官能度可以独立选择，并且根据情况，独立和/或任选地被取代。
如本文所使用的，术语“独立选择”或“分别选择”是指可以在核心分子结构上连接不止一次的取代基列表中的官能性变量，其中每次发生的取代类型与在任何其他发生的类型无关。此外，核心结构上对本文所提供的化合物使用同属取代基应理解为包括用包含在特定属内的同种取代基替代同属取代基，例如，芳基可以独立地被苯基或萘基(还称为萘基)等取代，从而使所得化合物旨在包括在本文所述的化合物的范围内。
如本文所使用的，当在短语如“...芳基、芳基-C1-8烷基、杂环基和杂环基-C1-8烷基，其中芳基和杂环基的每种情况任选地被一个或两个取代基取代”中使用时，术语“每种情况”旨在包括在每个芳基和杂环基环上以及在芳基-C1-8烷基和杂环基-C1-8烷基的芳基和杂环基部分上的任选的、独立的取代。
如本文所使用的，术语“任选地取代的”是指指定取代基变量、基团、基或部分代表了属的范围，并且根据需要可以独立地选择以替代核心分子的指定连接原子上的一个或多个氢原子。
如本文所使用的，术语“稳定化合物”或者“稳定结构”是指足够稳定以从其反应混合物和制剂中分离至有用纯度以作为有效治疗剂的化合物。
本文所提供的化合物名称是使用ACD Labs提供的ACD Labs Index Name软件和/或提供的ChemDraw U1tra软件获得的。当本文所公开的化合物名称与所显示的结构冲突时，所显示的结构将取代所使用的名称来定义预期的化合物。本文所定义的取代基的命名可以稍微不同于它们所衍生自的化学名称；本领域技术人员将认识到取代基的定义旨在包括化学名称中存在的基团。
除非在本文中另作说明，否则术语“SMN”是指人SMN1基因、DNA或RNA，和/或人SMN2基因、DNA或者RNA。在具体的实施方式中，术语“SMN1”是指人SMN1基因、DNA或RNA。在另一种具体的实施方式中，术语“SMN2”是指人SMN2基因、DNA或RNA。
人SMN1和SMN2基因的核酸序列在本领域中是已知的。对于人SMN1的核酸序列，参见，例如，GenBank登录号No.DQ894095、NM_000344、NM_022874和BC062723。对于人SMN2的核酸序列，参见，例如，NM_022875、NM_022876、NM_022877、NM_017411、DQ894734(LifeTechnologies，Inc.(前身为Invitrogen)，Carlsbad，Calif.)、BC000908、BC070242、CR595484、CR598529、CR609539、U21914和BC015308。
SMN1基因可以存在于人染色体5正链上约核苷酸70220768至约核苷酸70249769。人染色体5上外显子6、7和8以及内含子6和7的大概位置如下：
70,241,893至70,242,003外显子6；
70,242,004至70,247,767内含子6；
70,247,768至70,247,821外显子7；
70,247,822至70,248,265内含子7；和，
70,248,266至70,248,839外显子8。
SMN2基因可以存在于人染色体5正链上约核苷酸69345350至约核苷酸69374349。
人染色体5上外显子6、7和8以及内含子6和7的大概位置如下：
69,366,468至69,366,578外显子6；
69,366,579至69,372,347内含子6；
69,372,348至69,372,401外显子7；
69,372,402至69,372,845内含子7；和，
69,372,846至69,373,419外显子8。
在具体的实施方式中，在本文所述的SMN1小基因核酸构件中使用了以上对于SMN1的外显子6、7和8以及内含子6和7所示的核苷酸序列。在其他具体的实施方式中，在本文所述的SMN2小基因核酸构件中使用了本文所提供的实施例中的SMN2的外显子6、7和8以及内含子6和7的核苷酸序列。
除非在本文中另作说明，否则术语“Smn”或“Smn蛋白”是指含有SMN1基因和/或SMN2基因的外显子1至7所编码的氨基酸残基的人Smn蛋白。在具体的实施方式中，Smn蛋白是体外和/或体内稳定的和功能性的，如通过本领域技术人员已知的方法所评价的。在另一种具体的实施方式中，Smn蛋白是人SMN1基因和/或SMN2基因编码的全长蛋白。在另一种具体的实施方式中，Smn蛋白具有在GenBank登录号NP_000335、AAC50473.1、AAA66242.1或NP_059107。
除非在本文中另作说明，否则如本文所使用的，术语“提高SMN2外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含”和类似术语是指体外和/或体内SMN2外显子7的完全、完整、非截短序列在从SMN2基因转录的成熟mRNA中的包含(即导致全长SMN2mRNA的产生)，如通过本领域技术人员已知的方法评价的，从而从SMN2基因体外和/或体内产生了提高水平的Smn蛋白，如通过本领域技术人员已知的方法评价的；或者，从SMN2基因体外和/或体内产生了稳定和功能性的Smn蛋白的提高表达，如通过本领域技术人员已知的方法评价的；或者，体外和/或体内提高了小基因编码的融合蛋白的表达，如通过本领域技术人员已知的方法评价的；或者，提高了对其有需要的受试者(例如，SMA的动物模型或者人受试者或者SMA患者)中SMN2基因所产生的Smn蛋白的表达。
除非在本文中另作说明，否则如本文所使用的，术语“提高SMN1外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含”和类似术语是指体外和/或体内SMN1外显子7的完全、完整、非截短序列在从SMN1基因转录的成熟mRNA中的包含(即导致全长SMN1mRNA的产生)，如通过本领域技术人员已知的方法评价的，从而从SMN1基因体外和/或体内产生了提高水平的Smn蛋白，如通过本领域技术人员已知的方法评价的；或者，从SMN1基因体外和/或体内产生了稳定和功能性的Smn蛋白的提高表达，如通过本领域技术人员已知的方法评价的；或者，体外和/或体内提高了小基因编码的融合蛋白的表达，如通过本领域技术人员已知的方法评价的；或者，提高了对其有需要的受试者(例如，SMA的动物模型或者人受试者)中SMN1基因所产生的Smn蛋白的表达。
如本文所使用的，在mRNA的量的背景中，术语“显著变化”是指mRNA的量未变化统计学显著的量，例如，p值小于以下值，其选自0.1、0.05、0.01、0.005、0.001、0.0005、0.0001、0.00005或0.00001。
如本文所使用的，术语“受试者”和“患者”可互换地用于表示具有感觉和随意运动能力的动物或任何生物机体，并且其生存需要氧气和有机食物。非限制性实例包括人、马、猪、牛、家鼠属、鼠科、狗和猫类的成员。在一些实施方式中，受试者为哺乳动物或温血脊椎动物。在某些实施方式中，受试者是非人动物。在具体的实施方式中，受试者是人。在一种具体的实施方式中，所述受试者是人SMA患者。
如本文所使用的，术语“老年人”是指65岁以上的人。
如本文所使用的，术语“成年人”是指18岁或以上的人。
如本文所使用的，术语“儿童”是指1岁至18岁的人。
如本文所使用的，术语“婴儿”是指新生儿至1岁的人。
如本文所使用的，术语“幼儿(human toddler)”是指1岁至3岁的人。
化合物形式
如本文所使用的，术语“式(Ia)的化合物”、“式(Ia1)的化合物”、“式(Ia2)的化合物”、“式(Ia3)的化合物”、“式(Ia4)的化合物”、“式(II)的化合物”、“式(IIa)的化合物”、“式(IIa1)的化合物”、“式(IIa2)的化合物”、“式(IIa3)的化合物”、“式(IIa4)的化合物”、“式(III)的化合物”、“式(IIIa)的化合物”、“式(IIIa1)的化合物”、“式(IIIa2)的化合物”、“式(IV)的化合物”、“式(IVa)的化合物”、“式(IVa1)的化合物”、“式(IVa2)的化合物”、“式(V)的化合物”、“式(Va)的化合物”、“式(Va1)的化合物”、“式(Va2)的化合物”、“式(Va3)的化合物”、“式(Va4)的化合物”、“式(VI)的化合物”、“式(VIa)的化合物”、“式(VIa1)的化合物”、“式(VIa2)的化合物”、“式(VII)的化合物”、“式(VIIa)的化合物”、“式(VIIa1)的化合物”、“式(VIIa2)的化合物”、“式(VIII)的化合物”、“式(VIIIa)的化合物”、“式(VIIIa1)的化合物”、“式(VIIIa2)的化合物”、“式(IX)的化合物”、“式(IXa)的化合物”、“式(IXa1)的化合物”、“式(IXa2)的化合物”、“式(IXa3)的化合物”、“式(IXa4)的化合物”、“式(X)的化合物”、“式(Xa)的化合物”、“式(Xa1)的化合物”、“式(Xa2)的化合物”、“式(XI)的化合物”、“式(XIa)的化合物”、“式(XIa1)的化合物”、“式(XIa2)的化合物”、“式(XII)的化合物”、“式(XIIa)的化合物”、“式(XIIa1)的化合物”、“式(XIIa2)的化合物”、“式(XIII)的化合物”、“式(XIIIa)的化合物”、“式(XIIIa1)的化合物”、“式(XIIIa2)的化合物”、“式(XIV)的化合物”、“式(XIVa)的化合物”、“式(XIVa1)的化合物”、“式(XIVa2)的化合物”、“式(XV)的化合物”、“式(XVa)的化合物”、“式(XVa1)的化合物”、“式(XVa2)的化合物”、“式(XVI)的化合物”、“式(XVIa)的化合物”、“式(XVIa1)的化合物”、“式(XVIa2)的化合物”、“式(XVII)的化合物”、“式(XVIIa)的化合物”、“式(XVIIa1)的化合物”、“式(XVIIa2)的化合物”、“式(XVIII)的化合物”、“式(XVIIIa)的化合物”、“式(XVIIIa1)的化合物”、“式(XVIIIa2)的化合物”、“式(XIX)的化合物”、“式(XIXa)的化合物”、“式(XIXa1)的化合物”和“式(XIXa2)的化合物”分别表示式(I)的化合物或其形式的子类。
不作为式(I)的化合物的多个子类的重复实施方式，在某些实施方式中，术语“式(I)的化合物或其形式”包含地用于单独地或一起表示式(Ia)的化合物或其形式、式(Ia1)的化合物或其形式、式(Ia2)的化合物或其形式、式(Ia3)的化合物或其形式、式(Ia4)的化合物或其形式、式(II)的化合物或其形式、式(IIa)的化合物或其形式、式(IIa1)的化合物或其形式、式(IIa2)的化合物或其形式、式(IIa3)的化合物或其形式、式(IIa4)的化合物或其形式、式(III)的化合物或其形式、式(IIIa)的化合物或其形式、式(IIIa1)的化合物或其形式、式(IIIa2)的化合物或其形式、式(IV)的化合物或其形式、式(IVa)的化合物或其形式、式(IVa1)的化合物或其形式、式(IVa2)的化合物或其形式、式(V)的化合物或其形式、式(Va)的化合物或其形式、式(Va1)的化合物或其形式、式(Va2)的化合物或其形式、式(Va3)的化合物或其形式、式(Va4)的化合物或其形式、式(VI)的化合物或其形式、式(VIa)的化合物或其形式、式(VIa1)的化合物或其形式、式(VIa2)的化合物或其形式、式(VII)的化合物或其形式、式(VIIa)的化合物或其形式、式(VIIa1)的化合物或其形式、式(VIIa2)的化合物或其形式、式(VIII)的化合物或其形式、式(VIIIa)的化合物或其形式、式(VIIIa1)的化合物或其形式、式(VIIIa2)的化合物或其形式、式(IX)的化合物或其形式、式(IXa)的化合物或其形式、式(IXa1)的化合物或其形式、式(IXa2)的化合物或其形式、式(IXa3)的化合物或其形式、式(IXa4)的化合物或其形式、式(X)的化合物或其形式、式(Xa)的化合物或其形式、式(Xa1)的化合物或其形式、式(Xa2)的化合物或其形式、式(XI)的化合物或其形式、式(XIa)的化合物或其形式、式(XIa1)的化合物或其形式、式(XIa2)的化合物或其形式、式(XII)的化合物或其形式、式(XIIa)的化合物或其形式、式(XIIa1)的化合物或其形式、式(XIIa2)的化合物或其形式、式(XIII)的化合物或其形式、式(XIIIa)的化合物或其形式、式(XIIIa1)的化合物或其形式、式(XIIIa2)的化合物或其形式、式(XIV)的化合物或其形式、式(XIVa)的化合物或其形式、式(XIVa1)的化合物或其形式、式(XIVa2)的化合物或其形式、式(XV)的化合物或其形式、式(XVa)的化合物或其形式、式(XVa1)的化合物或其形式、式(XVa2)的化合物或其形式、式(XVI)的化合物或其形式、式(XVIa)的化合物或其形式、式(XVIa1)的化合物或其形式、式(XVIa2)的化合物或其形式、式(XVII)的化合物或其形式、式(XVIIa)的化合物或其形式、式(XVIIa1)的化合物或其形式、式(XVIIa2)的化合物或其形式、式(XVIII)的化合物或其形式、式(XVIIIa)的化合物或其形式、式(XVIIIa1)的化合物或其形式、式(XVIIIa2)的化合物或其形式、式(XIX)的化合物或其形式、式(XIXa)的化合物或其形式、式(XIXa1)的化合物或其形式或者式(XIXa2)的化合物或其形式。
因此，“式(I)的化合物”的实施方式和提及旨在包括式(Ia)、式(Ia1)、式(Ia2)、式(Ia3)、式(Ia4)、式(II)、式(IIa)、式(IIa1)、式(IIa2)、式(IIa3)、式(IIa4)、式(III)、式(IIIa)、式(IIIa1)、式(IIIa2)、式(IV)、式(IVa)、式(IVa1)、式(IVa2)、式(V)、式(Va)、式(Va1)、式(Va2)、式(Va3)、式(Va4)、式(VI)、式(VIa)、式(VIa1)、式(VIa2)、式(VII)、式(VIIa)、式(VIIa1)、式(VIIa2)、式(VIII)、式(VIIIa)、式(VIIIa1)、式(VIIIa2)、式(IX)、式(IXa)、式(IXa1)、式(IXa2)、式(IXa3)、式(IXa4)、式(X)、式(Xa)、式(Xa1)、式(Xa2)、式(X1)、式(XIa)、式(XIa1)、式(XIa2)、式(XII)、式(XIIa)、式(XIIa1)、式(XIIa2)、式(XIII)、式(XIIIa)、式(XIIIa1)、式(XIIIa2)、式(XIV)、式(XIVa)、式(XIVa1)、式(XIVa2)、式(XV)、式(XVa)、式(XVa1)、式(XVa2)、式(XVI)、式(XVIa)、式(XVIa1)、式(XVIa2)、式(XVII)、式(XVIIa)、式(XVIIa1)、式(XVIIa2)、式(XVIII)、式(XVIIIa)、式(XVIIIa1)、式(XVIIIa2)、式(XIX)、式(XIXa)、式(XIXa1)和式(XIXa2)的化合物。
如本文所使用的，术语“形式”表示选自其游离酸、游离碱、盐、同位素异数体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对应异构体或互变异构体的式(I)的化合物。
在本文所述的某些实施方式中，式(I)的化合物的形式选自其盐、同位素异数体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对应异构体或互变异构体。
在本文所述的某些实施方式中，式(I)的化合物的形式选自其游离酸、同位素异数体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对应异构体或互变异构体。
在本文所述的某些实施方式中，式(I)的化合物的形式选自其游离碱、同位素异数体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对应异构体或互变异构体。
在本文所述的某些实施方式中，式(I)的化合物的形式是其游离酸、游离碱或盐。
在本文所述的某些实施方式中，式(I)的化合物的形式是其同位素异数体。
在本文所述的某些实施方式中，式(I)的化合物的形式是其立体异构体、外消旋体、对映异构体或非对应异构体。
在本文所述的某些实施方式中，式(I)的化合物的形式是其互变异构体。
在本文所述的某些实施方式中，式(I)的化合物的形式是药物可用的形式。
在本文所述的某些实施方式中，分离式(I)的化合物或其形式来使用。
如本文所使用的，术语“分离的”表示根据本文所述的或对技术人员来说熟知的分离或纯化方法(例如，色谱法、重结晶等)从合成过程(例如，从反应混合物)或天然来源或者它们的组合中分离和/或纯化后，处于通过本文所述的或技术人员熟知的标准分析技术可表征的足够的纯度的式(I)的化合物或其形式的物理状态。
如本文所使用的，术语“保护的”是指当化合物进行反应时，式(I)的化合物上的官能团处于修饰形式以排除保护位点处不希望的副反应。本领域技术人员以及通过参考标准教科书将能够分辨适合的保护基团，所述标准教科书如，例如，T.W.Greene等人，Protective Groups in Organic Synthesis(1991)，Wiley，New York。
在本文中还考虑了式(I)的化合物的前体药物或其形式。
如本文所使用的，术语“前体药物”是指式(I)的化合物上的官能团处于体内转化以产生式(I)的活性化合物或活性更好的化合物或其形式的形式(例如，作为活性或非活性药物前体起作用)。可以通过多种机制(例如，通过代谢和/或非代谢化学过程)发生转化，如，例如，通过血液、肝脏和/或其他器官和组织中的水解和/或代谢。V.J..Stella等人，“Biotechnology：Pharmaceutical Aspects.Prodrugs：Challenges and Rewards，”American Association of Pharmaceutical Scientists and Springer Press，2007提供了关于前体药物使用的讨论。
在一个实例中，当式(I)的化合物或其形式含有羧酸官能团时，前体药物可以包含通过用如烷基等的官能团置换酸根的氢原子所形成的酯。在另一个实例中，当式(I)的化合物或其形式含有醇官能团时，前体药物可以通过用如烷基或取代的羰基等的官能团置换醇基的氢原子来形成。在另一个实例中，当式(I)的化合物或其形式含有胺官能团时，前体药物可以通过用如烷基或取代的羰基的官能团置换一个或多个胺氢原子来形成。在另一个实例中，当式(I)的化合物或其形式含有氢取代基时，前体药物可以通过用烷基取代基置换一个或多个氢原子来形成。
式(I)的化合物的药物可用的前体药物或其形式包括在适当的情况下，被以下基团中的一个或多个取代的那些化合物：羧酸酯、磺酸酯、氨基酸酯、膦酸酯、单、二或三磷酸酯或烷基取代基。如本文所述，本领域技术人员应理解这些取代基中的一个或多个可以用于提供式(I)的化合物或其形式以用作前体药物。
式(I)的化合物可以形成盐，其旨在包含在本说明的范围内。除非另外说明，否则应理解在本文中提及式(I)的化合物包括提及它的盐。如本文所使用的，术语“盐”表示与无机和/或有机酸形成的酸式盐，和与无机和/或有机碱形成的碱式盐。另外，当式(I)的化合物含有碱性部分，如，但不限于吡啶或咪唑，以及酸性部分，如，但不限于羧酸两者时，可以形成两性离子(“内盐”)，并且其包含在如本文所使用的术语“盐”内。
如本文所使用的，术语“药物可用的盐”是指对于在哺乳动物中的使用安全有效(即，无毒、生理学可用)并且具有生物活性的本文所述的化合物的盐，尽管其他盐也是有用的。可以(例如)通过在如其中盐沉淀的媒介中或者在水媒介中并随后冷冻干燥，将式(I)的化合物与一定量的酸或碱(如当量或化学计量的量)反应来形成式(I)的化合物的盐。
药物可用的盐包括本文所述的化合物中存在的酸性或碱性基团的一种或多种盐。酸加成盐的实施方式包括(但不限于)乙酸盐、双乙酸盐、酸性磷酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、氯化物、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、龙胆酸盐(gentisinate)、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐(glucaronate)、谷氨酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、二盐酸化物、三盐酸化物、氢碘酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲烷磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐、丙酸盐、糖酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(也称为甲苯磺酸盐)、三氟醋酸盐等。酸加成盐的一种或多种实施方式包括氯化物、氢溴酸盐、盐酸盐、二盐酸化物、三盐酸化物、乙酸盐、双乙酸盐、三氟醋酸盐、三氟乙酸等。更具体的实施方式包括氯化物、氢溴酸盐、盐酸盐、二盐酸化物、三氟醋酸盐、三氟乙酸盐等。
另外，通常认为适合于从碱性药物化合物形成药物有用的盐的酸在(例如)P.Stahl等人，Camille G.(eds.)Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use.(2002)Zurich：Wiley-VCH；S.Berge等人，Journal ofPharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.ofPharmaceutics(1986)33，201-217；Anderson等人，The Practice of MedicinalChemistry(1996)，Academic Press，New York；和在The Orange Book(参见Food&DrugAdministration，Washington，D.C.的网站)中得到讨论。这些公开作为参考并入本文中。
适合的碱式盐包括(但不限于)铝、铵、钙、锂、镁、钾、钠、锌和二乙醇胺盐。本文所述的某些化合物还可以与有机碱(例如，有机胺)形成药物可用的盐，如，但不限于二环己基胺、叔丁胺等，和与多种氨基酸形成药物可用的盐，如，但不限于精氨酸、赖氨酸等。含有碱性氮的基团可以与试剂季铵化，所述试剂如低级烷基卤化物(例如，甲基、乙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、二烃基硫酸盐(例如，二甲基、二乙基和二丁基硫酸盐)、长链卤化物(例如，癸基、月桂基和十八烷酰基氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如，苄基和苯乙基溴化物)等。
出于本文所述的目的，所有这些酸性盐和碱性盐旨在成为本文描述的范围内的药物可用的盐并且所有这些酸性盐和碱性盐被认为等同于相应化合物的游离形式。
式I的化合物及其形式还可以以互变异构形式存在。在本文中，作为本说明的一部分考虑了所有这些互变异构形式。
式(I)的化合物可以含有不对称或手性中心，并因此可以以不同的立体异构化形式存在。本说明旨在包括式(I)的化合物的所有立体异构化形式以及它们的混合物，包括外消旋混合物。
本文所述的式(I)的化合物可以包含一个或多个手性中心，并且照此可以作为外消旋混合物(R/S)或者作为基本纯的对映异构体和非对应异构体存在。化合物还可以作为基本纯的(R)或(S)对映异构体(当存在一个手性中心时)存在。在一种实施方式中，本文所述的式(I)的化合物是(S)异构体并且可以作为基本上仅包含(S)异构体的对映体纯的组合物存在。在另一种实施方式中，本文所述的式(I)的化合物是(R)异构体并且可以作为基本上仅包含(R)异构体的对映体纯的组合物存在。本领域技术人员将认识到当存在大于一个手性中心时，本文所述的式(I)的化合物还可以包含描述为(R，R)、(R，S)、(S，R)或(S，S)异构体的部分，如通过IUPAC命名建议(IUPAC Nomenclature Recommendations)所定义的。
如本文所使用的，术语“基本纯的”是指基本由以大于或等于90％的量，以大于或等于92％的量，以大于或等于95％的量，以大于或等于98％的量，以大于或等于99％的量，或者以等于100％的量，的单一异构体组成的化合物。
在一个方面，式(I)的化合物是以大于或等于90％的量，以大于或等于92％的量，以大于或等于95％的量，以大于或等于98％的量，以大于或等于99％的量，或者以等于100％的量存在的基本纯的(S)对映异构体。
在一个方面，式(I)的化合物是以大于或等于90％的量，以大于或等于92％的量，以大于或等于95％的量，以大于或等于98％的量，以大于或等于99％的量，或者以等于100％的量存在的基本纯的(R)对映异构体。
如本文所使用的，“外消旋体”是非“对映体纯的”等轴形式的任何混合物，如，无限制地以约50/50、约60/40、约70/30、约80/20、约85/15或约90/10的比值包括混合物。
另外，本说明涵盖了所有几何异构体和位置异构体。例如，如果式(I)的化合物引入双键或稠环，则顺式-和反式-形式以及混合物涵盖在本文中的说明的范围内。
基于物理化学差异，通过本领域技术人员熟知的方法(如，例如，通过色谱法和/或分级结晶)，可以将非对映体混合物分成它们单个的非对应异构体。可以通过使用手性HPLC柱或者本领域技术人员所知的其他色谱法分离对映异构体。
还可以通过与适当的旋光活性化合物(例如，手性助剂，如手性醇或莫舍酰基氯)反应将对映异构体混合物转化成非对映体混合物，分离所述非对应异构体并将单个非对应异构体转化(例如，水解)为相应纯的对映异构体来分离对映异构体。另外，一些式(I)的化合物可以是阻转异构体(例如，取代的联芳基)并且认为是本说明的一部分。
在本文说明的范围内考虑了由于在多种取代基上的不对称碳而可以存在的本发明的化合物(包括其盐、溶剂化物、酯和前体药物和转化的前体药物)的所有立体异构体形式(例如，几何异构体、光学异构体、位置异构物等)，包括对映体形式(甚至可以在不存在不对称碳的情况下存在)、旋转异构体形式、阻转异构体、非对映体形式和区域异构体形式。例如，如果式(I)的化合物引入双键或稠环，则顺式-和反式-形式以及它们的混合物均涵盖在本文中的说明的范围内。另外，例如，所述化合物的所有酮-烯醇和亚胺-烯胺互变异构形式均包括在本文中的说明中。本文所述的式(I)的化合物的单个立体异构体可以(例如)是基本不含其他异构体的，或者可以以外消旋混合物存在，如上所述。
术语“盐”、“前体药物”和“转化的前体药物”的使用旨在等同地适用于本发明的化合物的所有所考虑的同位素异数体、立体异构体、外消旋物或互变异构体的盐、前体药物和转化的前体药物。
术语“同位素异数体”是指同位素富集的化合物，其与本文所列的那些相同，但事实上一个或多个原子被具有不同于自然中通常存在的原子量或质量数的原子量或质量数的原子取代。可以引入到本文所述的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别如H2、H3、C13、C14、N15、O18、O17、P31、P32、S35、F18、Cl35和Cl36，它们中的每一个也在本说明的范围内。
本文所述的某些同位素富集的化合物(例如，用H3和C14标记的那些)在化合物和/或基质组织分布测定中是有用的。出于它们的易于制备和可检测性，氚化(即，H3)和碳-14(即，C14)同位素是特别优选的。此外，用重同位素如氘取代(即″氘富集的″)可提供由于代谢稳定性更强(例如，体内半衰期增加或者剂量要求降低)所产生的某些治疗性优点，并因此在一些情况下可能是优选的。通常可以使用本领域技术人员已知的程序通过用适当的同位素富集的试剂替换非同位素富集的试剂来制备式(I)所表示的同位素富集的化合物。
当化合物富含氘时，分子氘化原子上的氘对氢的比值显著超过天然存在的氘对氢的比值。
本文所述的实施方式可以包括式(I)的化合物的同位素异数体形式，其中用一个或多个氘原子代替一个或多个氢原子来在式(I)的化合物的一个或多个原子成员上取代同位素异数体。
本文所述的实施方式可以包括式(I)的化合物及其形式，其中碳原子可以具有任选地被氘替代的1至3个氢原子。
本文所述的一种或多种化合物可以与药物可用的溶剂，如水、乙醇等以非溶剂化以及溶剂化形式存在，并且本文的描述旨在包含溶剂化和非溶剂化形式两者。
如本文所使用的，术语“溶剂化物”是指本文所述的化合物与一个或多个溶剂分子的物理结合。这种物理结合涉及不同程度的离子键和共价键，包括氢键作用。在某些情况下，溶剂化物将能够分离，例如，当将一个或多个溶剂分子引入结晶固体的晶格时。如本文所使用的，“溶剂化物”涵盖了溶液相和可分离溶剂化物两者。适合的溶剂化物的非限制性实例包括乙醇化物、甲醇化物等。
本文所述的一种或多种化合物可以任选地转化为溶剂化物。溶剂化物的制备通常是已知的。典型的、非限制性方法包括在高于环境温度下将化合物溶解在所需量的所需溶剂(有机物或水或它们的混合物)中，并且以足以形成晶体的速度冷却溶液，然后通过标准方法分离晶体。分析技术，如，例如红外光谱学显示了晶体中作为溶剂化物(或水合物)存在的溶剂(或水)。
如本文所使用的，术语“水合物”表示其中溶剂分子是水的溶剂化物。
式(I)的化合物以及式(I)的化合物的盐、溶剂化物、酯和前体药物的多晶型晶体和无定形形式也旨在包含在本文所述的化合物的范围内。
化合物使用
本文描述了提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含的式(I)的化合物或其形式。使用本文所述的测定，式(I)所表示的这些化合物或其形式已显示提高了SMN2外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含(参见下文生物实施例部分)。因此，式(I)的化合物或其形式具有作为SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含的增强因子的应用。
本文描述了提高SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含的式(I)的化合物或其形式。使用(例如)SMN1小基因测定，式(I)所表示的这些化合物或其形式可以提高SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含。因此，式(I)的化合物或其形式可以具有作为用于SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含的增强因子的应用。
在一个方面，本文提供了调节SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的RNA中包含的方法，其包括将人细胞与式(I)的化合物或其形式接触。在具体的实施方式中，本文提供了调节SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的RNA中包含的方法，其包括将人细胞与调节本文所述的SMN2小基因表达的或者在国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833中的式(I)的化合物或其形式接触，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。在一种实施方式中，所述小基因是国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833的实施例中所述的小基因。在另一种实施方式中，所述小基因是下文生物实施例1中所述的小基因。例如，在非人动物或人中，人细胞可以与式(I)的化合物或其形式体外和/或体内接触。在具体的实施方式中，所述人细胞来自或在人中。在另一种具体的实施方式中，所述人细胞来自或在人SMA患者中。在另一种具体的实施方式中，人细胞来自或在人SMA患者中，其中SMA是由两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失，从而导致SMN1基因功能丧失所引起的。在另一种实施方式中，人细胞是来自人SMA患者的人细胞。在某些实施方式中，人细胞来自细胞系，如GM03813、GM00232、GM09677和/或GM23240(得自CoriellInstitute)。在一种实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在具体的实施方式中，本文提供了提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的方法，其包括将人细胞与式(I)的化合物或其形式接触。在另一种实施方式中，本文提供了提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的方法，其包括将人细胞与提高本文所述的SMN2小基因表达的或者在国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833中的式(I)的化合物或其形式接触，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。在一种实施方式中，所述小基因是国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833的实施例中所述的小基因。在另一种实施方式中，所述小基因是下文生物实施例1中所述的小基因。例如，在非人动物或人中，人细胞可以与式(I)的化合物或其形式体外和/或体内接触。在具体的实施方式中，所述人细胞来自或在人中。在另一种具体的实施方式中，所述人细胞来自或在人SMA患者中。在另一种具体的实施方式中，人细胞来自或在人SMA患者中，其中SMA是由两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失，从而导致SMN1基因功能丧失所引起的。在另一种实施方式中，人细胞是来自人SMA患者的人细胞。在某些实施方式中，人细胞来自细胞系，如GM03813、GM00232、GM09677和/或GM23240(得自Coriell Institute)。在一种实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了提高SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的RNA中包含的方法，其包括将人细胞与式(I)的化合物或其形式接触。在具体的实施方式中，本文提供了提高SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的RNA中包含的方法，其包括将人细胞与式(I)的化合物或其形式接触。在另一种具体的实施方式中，本文提供了提高SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的RNA中包含的方法，其包括将人细胞与国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833中所述的调节SMN1小基因表达的式(I)的化合物或其形式接触，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。在一种实施方式中，所述小基因是国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833的实施例中所述的小基因。例如，在非人动物或人中，人细胞可以与式(I)的化合物或其形式体外和/或体内接触。在具体的实施方式中，所述人细胞来自或在人中。在另一种具体的实施方式中，所述人细胞来自或在人SMA患者中。在一种实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在具体的实施方式中，本文提供了提高SMN1和SMN2的外显子7在从SMN1和SMN2基因转录的RNA中包含的方法，其包括将人细胞与式(I)的化合物或其形式接触。例如，在非人动物或人中，人细胞可以与式(I)的化合物或其形式体外和/或体内接触。在具体的实施方式中，所述人细胞来自或在人中。在另一种具体的实施方式中，所述人细胞来自或在人SMA患者中。在一种实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了调节SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的RNA中包含的方法，其包括向SMA非人动物模型施用式(I)的化合物或其形式。在具体的实施方式中，本文提供了调节SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的RNA中包含的方法，其包括向SMA非人动物模型施用调节本文所述的SMN2小基因表达的或者在国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833中的式(I)的化合物或其形式，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。在一种实施方式中，所述小基因是国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833的实施例中所述的小基因。在另一种实施方式中，所述小基因是下文生物实施例1中所述的小基因。在具体的实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在具体的实施方式中，本文提供了提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的方法，其包括向SMA非人动物模型施用式(I)的化合物或其形式。在另一种具体的实施方式中，本文提供了提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的方法，其包括向SMA非人动物模型施用提高本文中或者在国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833中所述的SMN2小基因表达的式(I)的化合物或其形式，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。在一种实施方式中，所述小基因是国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833的实施例中所述的小基因。在另一种实施方式中，所述小基因是下文生物实施例1中所述的小基因。在具体的实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了提高SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的RNA中包含的方法，其包括向SMA非人动物模型施用式(I)的化合物或其形式。在具体的实施方式中，本文提供了提高SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的RNA中包含的方法，其包括向SMA非人动物模型施用调节本文中或者在国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.201I/0086833中所述的SMN1小基因表达的式(I)的化合物或其形式，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。在一种实施方式中，所述小基因是国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833的实施例中所述的小基因。在具体的实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在具体的实施方式中，本文提供了提高SMN1和SMN2的外显子7在从SMN1和SMN2基因转录的RNA中包含的方法，其包括向SMA非人动物模型施用式(I)的化合物或其形式。在具体的实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了提高Smn蛋白的量的方法，其包括将人细胞与式(I)的化合物或其形式接触。在具体的实施方式中，本文提供了提高Smn蛋白的量的方法，其包括将人细胞与提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的式(I)的化合物接触。在另一种具体的实施方式中，本文提供了提高Smn蛋白的量的方法，其包括将人细胞与提高SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中包含的式(I)的化合物接触。例如，在非人动物或人中，人细胞可以与式(I)的化合物或其形式体外和/或体内接触。在具体的实施方式中，所述人细胞来自或在人中。在另一种具体的实施方式中，所述人细胞来自或在人SMA患者中。在另一种具体的实施方式中，人细胞来自或在人SMA患者中，其中SMA是由两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失，从而导致SMN1基因功能丧失所引起的。在另一种实施方式中，人细胞是来自人SMA患者的人细胞。在某些实施方式中，人细胞来自细胞系，如GM03813、GM00232、GM09677和/或GM23240(得自Coriell Institute)。在一种实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了提高Smn蛋白的量的方法，其包括向SMA非人动物模型施用式(I)的化合物或其形式。在具体的实施方式中，本文提供了提高Smn蛋白的量的方法，其包括向SMA非人动物模型施用在(例如)如下文生物实施例中所述的细胞基或不含细胞的测定中提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的式(I)的化合物。在另一种具体的实施方式中，本文提供了提高Smn蛋白的量的方法，其包括向SMA非人动物模型施用在(例如)细胞基或不含细胞的测定中提高SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中包含的式(I)的化合物。
在一种实施方式中，式(I)的化合物提高了本文中或在国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833中所述的小基因的表达，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。在具体的实施方式中，式(I)的化合物提高了在国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.201I/0086833的实施例中所述的小基因的表达。在另一种具体的实施方式中，式(I)的化合物提高了下文生物实施例1中所述的小基因的表达。在一种实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在一种实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式用于制备提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的药剂的使用。在另一种实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式用于制备提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的药剂的用途，借此提高了对其有需要的人受试者中Smn蛋白的表达。在具体的实施方式中，在本文所述的测定(参见，例如，下文生物实施例)中，式(I)的化合物或其形式提高了SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含。在具体的实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在一种实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式用于制备提高SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中包含的药剂的用途。在另一种实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式用于制备提高SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中包含的药剂的用途，借此提高了对其有需要的人受试者中Smn蛋白的表达。在具体的实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了提高对其有需要的人受试者中SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的方法，其包括向人受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式。在具体的实施方式中，本文提供了提高对其有需要的人受试者中SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的方法，其包括向所述人受试者施用有效量的提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的式(I)的化合物或其形式，如在本文所述的测定(参见，例如，下文生物实施例)中确定的。在具体的实施方式中，将有效量的式(I)的化合物或其形式在包含可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物中施用于人受试者。在具体的实施方式中，在本文所述的测定(参见，例如，下文生物实施例)中，式(I)的化合物或其形式提高了SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含。在具体的实施方式中，所述人受试者是人SMA受试者。在另一种具体的实施方式中，人受试者是人SMA患者，其中SMA是由两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失，从而导致SMN1基因功能丧失所引起的。在一种实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了提高对其有需要的人受试者中SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中包含的方法，其包括向人受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式。在具体的实施方式中，在国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833中所述的测定中，式(I)的化合物或其形式提高了SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含。在具体的实施方式中，将有效量的式(I)的化合物或其形式在包含可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物中施用于人受试者。在具体的实施方式中，所述人受试者是人SMA受试者。在一种实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了提高对其有需要的人受试者中SMN1和SMN2的外显子7在从SMN1和SMN2基因转录的mRNA中包含的方法，其包括向人受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式。在具体的实施方式中，在国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833中所述的测定(参见，例如，那些公开的实施例)中，式(I)的化合物或其形式提高了SMN1的外显子7在从SMN1基因转录的mRNA中的包含，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。在具体的实施方式中，将有效量的式(I)的化合物或其形式在包含可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物中施用于人受试者。在具体的实施方式中，所述人受试者是人SMA受试者。在另一种具体的实施方式中，人受试者是人SMA患者，其中SMA是由两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失，从而导致SMN1基因功能丧失所引起的。在一种实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了提高对其有需要的人受试者中Smn蛋白的表达的方法，其包括向人受试者施用有效量的式(I)的化合物或其形式。在具体的实施方式中，本文提供了提高对其有需要的人受试者中Smn蛋白的表达的方法，其包括向人受试者施用有效量的提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的式(I)的化合物或其形式。在另一种具体的实施方式中，本文提供了提高对其有需要的人受试者中Smn蛋白的表达的方法，其包括向人受试者施用有效量的提高SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中包含的式(I)的化合物或其形式。在具体的实施方式中，将有效量的式(I)的化合物或其形式在包含可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物中施用于人受试者。在具体的实施方式中，在本文中(参见，例如，下文生物实施例)或者在国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833中(参见，例如，那些公开的实施例)所述的测定中，式(I)的化合物或其形式提高了SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中的包含，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。
在具体的实施方式中，所述人受试者是人SMA受试者。在另一种具体的实施方式中，人受试者是人SMA患者，其中SMA是由两个染色体上SMN1基因的端粒拷贝中的失活突变或缺失，从而导致SMN1基因功能丧失所引起的。在一种实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在另一种实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式用于制备提高对其有需要的人受试者中Smn蛋白的表达的药剂的用途。在具体的实施方式中，如本文所述的测定(参见，例如，下文生物实施例)中所确定的，式(I)的化合物或其形式提高了SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含。在另一种实施方式中，如本文中(参见，例如，下文生物实施例)或者在国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833中(参见，例如，那些公开的实施例)所述的测定中确定的，式(I)的化合物或其形式提高了SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中的包含，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。在具体的实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在另一个方面，本文提供了治疗脊髓性肌萎缩(SMA)的方法，包括向受试者给予有效量的式(I)的化合物或其形式。在具体的实施方式中，本文提供了在对其有需要的人受试者中治疗SMA的方法，包括向所述受试者给予有效量的式(I)的化合物或其形式。在另一种具体的实施方式中，本文提供了在对其有需要的人受试者中治疗SMA的方法，包括向所述受试者给予包含有效量的式(I)的化合物或其形式和可药用载体、赋形剂或者稀释剂的药物组合物。在一种实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗对其有需要的人受试者中SMA的方法，其包括向受试者施用有效量的提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的式(I)的化合物或其形式。在具体的实施方式中，本文提供了治疗对其有需要的人受试者中SMA的方法，包括向受试者给予包含有效量的提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的式(I)的化合物或其形式和可药用载体、赋形剂或者稀释剂的药物组合物。在另一种具体的实施方式中，本文提供了治疗对其有需要的人受试者中SMA的方法，包括向受试者给予包含有效量的提高SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中包含的式(I)的化合物或其形式和可药用载体、赋形剂或者稀释剂的药物组合物。在具体的实施方式中，在本文所述的测定(参见，例如，下文生物实施例)中，式(I)的化合物或其形式提高了SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含。在另一种实施方式中，如本文中(参见，例如，下文生物实施例)或者在国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833中(参见，例如，那些公开的实施例)所述的测定中确定的，式(I)的化合物或其形式提高了SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中的包含，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。在具体的实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在另一种实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式在生产治疗对其有需要的人受试者中SMA的药剂中的用途。在具体的实施方式中，如本文所述的测定(参见，例如，下文生物实施例)中所确定的，式(I)的化合物或其形式提高了SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含。在另一种实施方式中，如本文中(参见，例如，下文生物实施例)或者在国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833中(参见，例如，那些公开的实施例)所述的测定中确定的，式(I)的化合物或其形式提高了SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中的包含，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。在具体的实施方式中，所述化合物是式(I)的化合物或其形式。
在本文所提供的用途或方法的实施方式中，式(I)的化合物或其形式与一种或多种其他试剂组合使用。式(I)的化合物或其形式可以在向受试者施用其他试剂或者将细胞与其他试剂接触之前、同时或之后施用于受试者或者与细胞接触。可以在单一组合物或者不同组合物中将式(I)的化合物或其形式和其他试剂施用于受试者或者与细胞接触。在具体的实施方式中，式(I)的化合物或其形式与(使用，例如，病毒递送载体的)SMN1的基因置换组合使用。在另一种具体的实施方式中，式(I)的化合物或其形式与使用分化的SMN1+/+和/或SMN2+/+干细胞的细胞置换组合使用。在另一种具体的实施方式中，式(I)的化合物或其形式与使用分化的SMN1+/+干细胞的细胞置换组合使用。在另一种具体的实施方式中，式(I)的化合物或其形式与使用分化的SMN2+/+干细胞的细胞置换组合使用。在另一种具体的实施方式中，式(I)的化合物或其形式与阿柔比星组合使用。在另一种具体的实施方式中，式(I)的化合物或其形式与转录激活剂，如组蛋白去乙酰化酶(“HDAC”)抑制剂(例如，丁酸酯、丙戊酸和羟基脲)以及mRNA稳定剂(例如，来自Repligen的mRNA脱帽抑制剂RG3039)组合使用。
在一种实施方式中，本文提供了式(I)的化合物或其形式与支持疗法，包括呼吸、营养或者康复护理的组合使用。
在某些实施方式中，用式(I)的化合物或其形式治疗SMA(单独或者与其他试剂组合)具有治疗效果和/或有益效果。在具体的实施方式中，用式(I)的化合物或其形式治疗SMA(单独或者与其他试剂组合)导致产生了以下作用中的一种、两种或更多种：(i)降低或改善了SMA的严重性；(ii)迟延SMA的发病；(iii)抑制SMA发展；(iv)减少受试者住院；(v)减少受试者住院时长；(vi)提高受试者存活率；(vii)改善受试者的生活质量；(viii)减少与SMA有关的症状数目；(ix)降低或改善与SMA有关的症状的严重性；(x)减少与SMA有关的症状的持续时间；(xi)防止与SMA有关的症状复发；(xii)抑制SMA症状发展或发病；和/或(xiii)抑制与SMA有关的症状发展。
SMA的症状包括肌无力、肌张力低下、哭泣无力、弱咳、跛行或摔倒倾向、吮吸或吞咽困难、呼吸困难、肺或咽喉中分泌物积累、握拳时手部多汗、舌部颤动/震动、头部经常偏向一侧(甚至在躺下时)、腿部往往比手臂更无力、腿部经常处于“青腿”位、摄食困难、对呼吸道感染敏感度提高、肠/膀胱无力、低于正常体重、无支持时无法坐下、无法行走、无法爬行和张力减退、反射消失以及与前角细胞损失有关的先天性多发性挛缩(关节弯曲)。
在具体的实施方式中，用式(I)的化合物或其形式治疗SMA(单独或与其他试剂组合)导致产生了以下作用中的一种、两种或更多种：(i)肌力损失减少；(ii)肌力提高；(iii)肌肉萎缩减少；(iv)运动功能损失减少；(v)运动神经元增加；(vii)运动神经元损失减少；(viii)保护SMN缺陷型运动神经元不退化；(ix)运动功能提高；(x)肺功能提高；和/或(xi)肺功能损失减少。
在另一种实施方式中，用式(I)的化合物或其形式治疗SMA(单独或与其他试剂结合)导致对人婴儿或幼儿产生了坐起功能性能力或者帮助保留了坐起功能性能力。在另一种实施方式中，用式(I)的化合物或其形式治疗SMA(单独或与其他试剂结合)导致对人婴儿、幼儿、儿童或成年人产生了独立站立的功能性能力，或者帮助保留了独立站立的功能性能力。在另一种实施方式中，用式(I)的化合物或其形式治疗SMA(单独或与其他试剂结合)导致对人婴儿、幼儿、儿童或成年人产生了独立行走的功能性能力，或者帮助保留了独立行走的功能性能力。在另一种实施方式中，用式(I)的化合物或其形式治疗SMA(单独或与其他试剂结合)导致对人婴儿、幼儿、儿童或成年人产生了独立奔跑的功能性能力，或者帮助保留了独立奔跑的功能性能力。在另一种实施方式中，用式(I)的化合物或其形式治疗SMA(单独或与其他试剂结合)导致对人婴儿、幼儿、儿童或成年人产生了独立呼吸的功能性能力，或者帮助保留了独立呼吸的功能性能力。在另一种实施方式中，用式(I)的化合物或其形式治疗SMA(单独或与其他试剂结合)导致对人婴儿、幼儿、儿童或成年人产生了睡眠期间翻身的功能性能力，或者帮助保留了睡眠期间翻身的功能性能力。在另一种实施方式中，用式(I)的化合物或其形式治疗SMA(单独或与其他试剂结合)导致对人婴儿、幼儿、儿童或成年人产生了独立吞咽的功能性能力，或者帮助保留了独立吞咽的功能性能力。
在某些实施方式中，在测定，如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹中使用了在以下生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)以确定式(I)的化合物或其形式是否提高SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中的包含。在一些实施方式中，在测定，如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、RNA印迹或DNA印迹中或者如下文所述的药物或测定试剂盒中使用了在以下生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12，和SMN探针，如SEQ IDNO.3或10)以监控患者对式(I)的化合物或其形式的反应。
在一种实施方式中，如本文所述使用式(I)的化合物：
或其形式，其中：
w1是C-Rb或N；
w2和w3是C-R1、C-R2、C-Ra或N；
w4是C-Ra或N；
w5是C-R1、C-R2、C-Rc或N；
w6是C-R1、C-R2或C-Ra；
其中w2、w3、w5和w6中的一个是C-R1并且w2、w3、w5和w6中的其他的是C-R2，只要
当w3是C-R1，则w6是C-R2，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或者
当w3是C-R2，则w6是C-R1，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或者
当w2是C-R1，则w5是C-R2，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N；或者
当w2是C-R2，则w5是C-R1，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N；并且
其中w1、w2、w3、w4和w5中的1个、2个或3个可以任选地是N；
R1是C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、(氨基-C1-8烷基)2-氨基、(氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、氨基-C2-8烯基、C1-8烷基-氨基-C2-8烯基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8烯基、氨基-C2-8炔基、C1-8烷基-氨基-C2-8炔基、(C1-8烷基)2-氨基-C2-8炔基、卤代-C1-8烷基-氨基、(卤代-C1-8烷基)2-氨基、(卤代-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷氧基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷氧基、羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基-氨基、[(羟基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、[(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、杂环基、杂环基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷氧基、杂环基-氨基、(杂环基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-氨基-C1-8烷基、杂环基-C1-8烷基-氨基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂环基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(杂环基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂环基-氧基、杂环基-羰基、杂环基-羰基-氧基、C3-14环烷基、芳基-C1-8烷基-氨基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、(芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基、杂芳基、杂芳基-C1-8烷基、杂芳基-C1-8烷氧基、杂芳基-氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基、(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、杂芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(杂芳基-C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基或(杂芳基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基-C1-8烷基；
其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况任选地被1个、2个或3个R3取代基并且任选地被1个另外的R4取代基取代；或者，
其中，杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基的每种情况任选地被1个、2个、3个或4个R3取代基取代；
R2是芳基、芳基-氨基、芳基-氨基-羰基、杂环基、杂芳基或杂芳基-氨基；
其中，芳基、杂环基和杂芳基的每种情况任选地被1个、2个或3个R6取代基并且任选地被1个另外的R7取代基取代；
在每种情况下，Ra独立地选自氢，卤素或C1-8烷基；
Rb是氢、卤素、C1-8烷基或C1-8烷氧基；
Rc是氢、卤素或C1-8烷基；
在每种情况下，R3独立地选自氰基，卤素、羟基、氧代、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷基-羰基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-羰基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基、氨基-C1-8烷基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基、氨基-C1-8烷基-氨基、C1-8烷基-氨基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基-氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基]2-氨基、(C1-8烷基-氨基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、[(C1-8烷基)2-氨基-C1-8烷基](C1-8烷基)氨基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)2-氨基、(C1-8烷氧基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基、C1-8烷基-羰基-氨基、C1-8烷氧基-羰基-氨基、羟基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷氧基-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基-氨基、(羟基-C1-8烷基)2-氨基或(羟基-C1-8烷基)(C1-8烷基)氨基；
R4是C3-14环烷基、C3-14环烷基-C1-8烷基、C3-14环烷基-氨基、芳基-C1-8烷基、芳基-C1-8烷氧基-羰基、芳基-磺酰氧基-C1-8烷基、杂环基或杂环基-C1-8烷基；其中，C3-14环烷基、芳基和杂环基的每种情况任选地被1个、2个或3个R5取代基取代；
在每种情况下，R5独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、卤代-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫代；
在每种情况下，R6独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、C1-8烷基、C2-8烯基、卤代-C1-8烷基、羟基-C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、氨基、C1-8烷基-氨基、(C1-8烷基)2-氨基或C1-8烷基-硫代；并且，
R7是C3-14环烷基、C3-14环烷基-氧基、芳基、杂环基或杂芳基.
式(I)的化合物的用途的实施方式，其中所述化合物选自式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、式(IX)、式(X)、式(XI)、式(XII)、式(XIII)、式(XIV)、式(XV)、式(XVI)、式(XVII)、式(XVIII)或式(XIX)：
或其形式。
在式(II)的化合物的用途的实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2，w6是C-Ra并且w3和w4独立地是C-Ra或N。
在式(II)的化合物的用途的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1，w6是C-Ra并且w3和w4独立地是C-Ra或N。
在式(II)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w2和w4独立地是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N。
在式(II)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w2和w4独立地是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N。
在式(III)的化合物的用途的实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w4是C-Ra或N，w1是C-Rb或N并且w5是C-Rc或N。
在式(III)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w4是C-Ra或N，w1是C-Rb或N并且w5是C-Rc或N。
在式(IV)的化合物的用途的实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2，w6是C-Ra，w4是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(IV)的化合物的用途的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1，w6是C-Ra，w4是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(V)的化合物的用途的实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2，w6是C-Ra，w3是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(V)的化合物的用途的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1，w6是C-Ra，w3是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(V)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w2是C-Ra或N，w1是C-Rb或N并且w5是C-Rc或N。
在式(V)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w2是C-Ra或N，w1是C-Rb或N并且w5是C-Rc或N。
在式(VI)的化合物的用途的实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w2和w4独立地是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(VI)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w2和w4独立地是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(VII)的化合物的用途的实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w4是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N。
在式(VII)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w4是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N。
在式(VIII)的化合物的用途的实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2，w6是C-Ra并且w4是C-Ra或N。
在式(VIII)的化合物的用途的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1，w6是C-Ra并且w4是C-Ra或N。
在式(IX)的化合物的用途的实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N。
在式(IX)的化合物的用途的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N。
在式(IX)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N。
在式(IX)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N。
在式(X)的化合物的用途的实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2并且w2和w4独立地是C-Ra或N。
在式(X)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1并且w2和w4独立地是C-Ra或N。
在式(XI)的化合物的用途的实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w1是C-Rb或N并且w5是C-Rc或N。
在式(XI)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w1是C-Rb或N并且w5是C-Rc或N。
在式(XII)的化合物的用途的实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w4是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(XII)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w4是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(XIII)的化合物的用途的实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2，w6是C-Ra并且w1是C-Rb或N。
在式(XIII)的化合物的用途的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1，w6是C-Ra并且w1是C-Rb或N。
在式(XIV)的化合物的用途的实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2，w2是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(XIV)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1，w2是C-Ra或N并且w1是C-Rb或N。
在式(XV)的化合物的用途的实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2并且w5是C-Rc。
在式(XV)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1并且w5是C-Rc。
在式(XVI)的化合物的用途的实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2并且w4是C-Ra。
在式(XVI)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1并且w4是C-Ra。
在式(XVII)的化合物的用途的实施方式中，w2是C-R1，w5是C-R2并且w6是C-Ra。
在式(XVII)的化合物的用途的另一种实施方式中，w2是C-R2，w5是C-R1并且w6是C-Ra。
在式(XVIII)的化合物的用途的实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2并且w2是C-Ra。
在式(XVIII)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1并且w2是C-Ra。
在式(XIX)的化合物的用途的实施方式中，w3是C-R1，w6是C-R2并且w1是C-Rb。
在式(XIX)的化合物的用途的另一种实施方式中，w3是C-R2，w6是C-R1并且w1是C-Rb。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(II)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(III)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(IV)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(V)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(VI)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(VII)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(VIII)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(IX)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(X)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(XI)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(XII)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(XIII)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(XIV)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(XV)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(XVI)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(XVII)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(XVIII)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(XIX)的化合物的用途：
或其形式。
式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、式(X)、式(XI)、式(XII)、式(XIII)、式(XIV)、式(XV)、式(XVI)、式(XVII)、式(XVIII)或式(XIX)的化合物的用途的实施方式是以下化合物的用途，其分别选自式(Ia)、式(IIa)、式(IIIa)、式(IVa)、式(Va)、式(VIa)、式(VIIa)、式(VIIIa)、式(Xa)、式(XIa)、式(XIIa)、式(XIIIa)、式(XIVa)、式(XVa)、式(XVIa)、式(XVIIa)、式(XVIIIa)或式(XIXa)：
或其形式。
在式(Ia)的化合物的用途的实施方式中，w2、w3、w5和w6中的一个是C-R1并且w2、w3、w5和w6中的其他的是C-R2，只要
当w3是C-R1，则w6是C-R2，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或，
当w3是C-R2，则w6是C-R1，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或，
当w2是C-R1，则w5是C-R2，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N；或，
当w2是C-R2，则w5是C-R1，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N。
在式(IIa)的化合物的用途的实施方式中，w2、w3、w5和w6中的一个是C-R1并且w2、w3、w5和w6中的其他的是C-R2，只要
当w3是C-R1，则w6是C-R2，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或，
当w3是C-R2，则w6是C-R1，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或，
当w2是C-R1，则w5是C-R2，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N；或，
当w2是C-R2，则w5是C-R1，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N。
在式(IIIa)的化合物的用途的实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w3是C-R1，则w6是C-R2；或当w3是C-R2，则w6是C-R1
在式(IVa)的化合物的用途的实施方式中，w2和w5中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w2是C-R1，则w5是C-R2；或当w2是C-R2，则w5是C-R1
在式(Va)的化合物的用途的实施方式中，w2、w3、w5和w6中的一个是C-R1并且w2、w3、w5和w6中的其他的是C-R2，只要
当w3是C-R1，则w6是C-R2，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或，
当w3是C-R2，则w6是C-R1，w2是C-Ra或N并且w5是C-Rc或N；或，
当w2是C-R1，则w5是C-R2，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N；或，
当w2是C-R2，则w5是C-R1，w6是C-Ra并且w3是C-Ra或N。
在式(VIa)的化合物的用途的实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w3是C-R1，则w6是C-R2；或当w3是C-R2，则w6是C-R1。
在式(VIIa)的化合物的用途的实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w3是C-R1，则w6是C-R2；或当w3是C-R2，则w6是C-R1。
在式(VIIIa)的化合物的用途的实施方式中，w2和w5中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w2是C-R1，则w5是C-R2；或当w2是C-R2，则w5是C-R1。
在式(Xa)的化合物的用途的实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w3是C-R1，则w6是C-R2；或当w3是C-R2，则w6是C-R1。
在式(XIa)的化合物的用途的实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w3是C-R1，则w6是C-R2；或当w3是C-R2，则w6是C-R1。
在式(XIIa)的化合物的用途的实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w3是C-R1，则w6是C-R2；或当w3是C-R2，则w6是C-R1。
在式(XIIIa)的化合物的用途的实施方式中，w2和w5中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w2是C-R1，则w5是C-R2；或当w2是C-R2，则w5是C-R1。
在式(XIVa)的化合物的用途的实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w3是C-R1，则w6是C-R2；或当w3是C-R2，则w6是C-R1。
在式(XVa)的化合物的用途的实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w3是C-R1，则w6是C-R2；或当w3是C-R2，则w6是C-R1。
在式(XVIa)的化合物的用途的实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w3是C-R1，则w6是C-R2；或当w3是C-R2，则w6是C-R1
在式(XVIIa)的化合物的用途的实施方式中，w2和w5中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w2是C-R1，则w5是C-R2；或当w2是C-R2，则w5是C-R1。
在式(XVIIIa)的化合物的用途的实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w3是C-R1，则w6是C-R2；或当w3是C-R2，则w6是C-R1。
在式(XIXa)的化合物的用途的实施方式中，w3和w6中的一个是C-R1并且另一个是C-R2，只要当w3是C-R1，则w6是C-R2；或当w3是C-R2，则w6是C-R1。
式(I)的化合物的用途的实施方式是式(Ia)的化合物的用途：
或其形式。
式(II)的化合物的用途的实施方式是式(IIa)的化合物的用途：
或其形式。
式(III)的化合物的用途的实施方式是式(IIIa)的化合物的用途：
或其形式。
式(IV)的化合物的用途的实施方式是式(IVa)的化合物的用途：
或其形式。
式(V)的化合物的用途的实施方式是式(Va)的化合物的用途：
或其形式。
式(VI)的化合物的用途的实施方式是式(VIa)的化合物的用途：
或其形式。
式(VII)的化合物的用途的实施方式是式(VIIa)的化合物的用途：
或其形式。
式(VIII)的化合物的用途的实施方式是式(VIIIa)的化合物的用途：
或其形式。
式(X)的化合物的用途的实施方式是式(Xa)的化合物的用途：
或其形式。
式(XI)的化合物的用途的实施方式是式(XIa)的化合物的用途：
或其形式。
式(XII)的化合物的用途的实施方式是式(XIIa)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIII)的化合物的用途的实施方式是式(XIIIa)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIV)的化合物的用途的实施方式是式(XIVa)的化合物的用途：
或其形式。
式(XV)的化合物的用途的实施方式是式(XVa)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVI)的化合物的用途的实施方式是式(XVIa)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVII)的化合物的用途的实施方式是式(XVIIa)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVIII)的化合物的用途的实施方式是式(XVIIIa)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIX)的化合物的用途的实施方式是式(XIXa)的化合物的用途：
或其形式。
式(Ia)的化合物的用途的实施方式是式(Ia1)、式(Ia2)、式(Ia3)或式(Ia4)的化合物的用途：
或其形式。
式(IIa)的化合物的用途的实施方式是式(IIa1)、式(IIa2)、式(IIa3)或式(IIa4)的化合物的用途：
或其形式。
式(IIIa)的化合物的用途的实施方式是式(IIIa1)或式(IIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(IVa)的化合物的用途的实施方式是式(IVa1)或式(IVa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(Va)的化合物的用途的实施方式是式(Va1)、式(Va2)、式(Va3)或式(Va4)的化合物的用途：
或其形式。
式(VIa)的化合物的用途的实施方式是式(VIa1)或式(VIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(VIIa)的化合物的用途的实施方式是式(VIIa1)或式(VIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(VIIIa)的化合物的用途的实施方式是式(VIIIa1)或式(VIIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(IXa)的化合物的用途的实施方式是式(IXa1)、式(IXa2)、式(IXa3)或式(IXa4)的化合物的用途：
或其形式。
式(Xa)的化合物的用途的实施方式是式(Xa1)或式(Xa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIa)的化合物的用途的实施方式是式(XIa1)或式(XIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIIa)的化合物的用途的实施方式是式(XIIa1)或式(XIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIIIa)的化合物的用途的实施方式是式(XIIIa1)或式(XIIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIVa)的化合物的用途的实施方式是式(XIVa1)或式(XIVa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVa)的化合物的用途的实施方式是式(XVa1)或式(XVa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVIa)的化合物的用途的实施方式是式(XVIa1)或式(XVIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVIIa)的化合物的用途的实施方式是式(XVIIa1)或式(XVIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVIIIa)的化合物的用途的实施方式是式(XVIIIa1)或式(XVIIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIXa)的化合物的用途的实施方式是式(XIXa1)或式(XIXa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(Ia)的化合物的用途的实施方式是式(Ia1)的化合物的用途：
或其形式。
式(Ia)的化合物的用途的实施方式是式(Ia2)的化合物的用途：
或其形式。
式(Ia)的化合物的用途的实施方式是式(Ia3)的化合物的用途：
或其形式。
式(Ia)的化合物的用途的实施方式是式(Ia4)的化合物的用途：
或其形式。
式(IIa)的化合物的用途的实施方式是式(IIa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(IIa)的化合物的用途的实施方式是式(IIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(IIa)的化合物的用途的实施方式是式(IIa3)的化合物的用途：
或其形式。
式(IIa)的化合物的用途的实施方式是式(IIa4)的化合物的用途：
或其形式。
式(IIIa)的化合物的用途的实施方式是式(IIIa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(IIIa)的化合物的用途的实施方式是式(IIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(IVa)的化合物的用途的实施方式是式(IVa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(IVa)的化合物的用途的实施方式是式(IVa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(Va)的化合物的用途的实施方式是式(Va1)的化合物的用途：
或其形式。
式(Va)的化合物的用途的实施方式是式(Va2)的化合物的用途：
或其形式。
式(Va)的化合物的用途的实施方式是式(Va3)的化合物的用途：
或其形式。
式(Va)的化合物的用途的实施方式是式(Va4)的化合物的用途：
或其形式。
式(VIa)的化合物的用途的实施方式是式(VIa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(VIa)的化合物的用途的实施方式是式(VIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(VIIa)的化合物的用途的实施方式是式(VIIa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(VIIa)的化合物的用途的实施方式是式(VIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(VIIIa)的化合物的用途的实施方式是式(VIIIa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(VIIIa)的化合物的用途的实施方式是式(VIIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(IXa)的化合物的用途的实施方式是式(IXa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(IXa)的化合物的用途的实施方式是式(IXa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(IX)的化合物的用途的实施方式是式(IXa3)的化合物的用途：
或其形式。
式(IX)的化合物的用途的实施方式是式(IXa4)的化合物的用途：
或其形式。
式(Xa)的化合物的用途的实施方式是式(Xa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(Xa)的化合物的用途的实施方式是式(Xa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIa)的化合物的用途的实施方式是式(XIa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIa)的化合物的用途的实施方式是式(XIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIIa)的化合物的用途的实施方式是式(XIIa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIIa)的化合物的用途的实施方式是式(XIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIIIa)的化合物的用途的实施方式是式(XIIIa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIIIa)的化合物的用途的实施方式是式(XIIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIVa)的化合物的用途的实施方式是式(XIVa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIVa)的化合物的用途的实施方式是式(XIVa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVa)的化合物的用途的实施方式是式(XVa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVa)的化合物的用途的实施方式是式(XVa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVIa)的化合物的用途的实施方式是式(XVIa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVIa)的化合物的用途的实施方式是式(XVIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVIIa)的化合物的用途的实施方式是式(XVIIa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVIIa)的化合物的用途的实施方式是式(XVIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVIIIa)的化合物的用途的实施方式是式(XVIIIa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(XVIIIa)的化合物的用途的实施方式是式(XVIIIa2)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIXa)的化合物的用途的实施方式是式(XIXa1)的化合物的用途：
或其形式。
式(XIXa)的化合物的用途的实施方式是式(XIXa2)的化合物的用途：
或其形式。
患者群体
在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患有SMA的受试者。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式施用于对SMA易感或敏感的受试者。在具体的实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患有SMA的人受试者，其中SMA是由两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失所引起的，从而导致SMN1基因功能丧失。在某些实施方式中，在施用式(I)的化合物或其形式或其药物组合物之前对人受试者基因分型以确定所述受试者是否具有两个染色体上SMN1基因的端粒拷贝中的失活突变或缺失，其导致SMN1基因功能丧失。在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于0型SMA受试者。在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于1型SMA受试者。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于2型SMA受试者。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于3型SMA受试者。在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于4型SMA受试者。在某些实施方式中，人受试者是SMA患者。
在某些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于将或者可能受益于SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中的包含提高的受试者。在具体的实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于将或者可能受益于Smn蛋白表达提高的受试者。
在某些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于年龄范围在约0个月至约6个月、约6至约12个月、约6至约18个月、约18至约36个月、约1至约5岁、约5至约10岁、约10至约15岁、约15至约20岁、约20至约25岁、约25至约30岁、约30至约35岁、约35至约40岁、约40至约45岁、约45至约50岁、约50至约55岁、约55至约60岁、约60至约65岁、约65至约70岁、约70至约75岁、约75至约80岁、约80至约85岁、约85至约90岁、约90至约95岁或约95至约100岁之间的人。。
在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于人婴儿。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于幼儿。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于儿童。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于成年人。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于老年人。
在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患者以防止具有发展SMA风险的患者中SMA的发病。在其他实施方式中，将有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患者以防止具有发展SMA风险的患者中SMA的发病。在其他实施方式中，将预防有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患者以防止具有发展SMA风险的患者中SMA的发病。在其他实施方式中，将治疗有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于患者以防止具有发展SMA风险的患者中SMA的发病。
在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于SMA患者以治疗或改善SMA。在其他实施方式中，将有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于SMA患者以治疗或改善SMA。在其他实施方式中，将预防有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于SMA患者以防止SMA发展。在其他实施方式中，将治疗有效量的式(I)的化合物或其形式或其药物组合物施用于SMA患者以治疗或改善SMA。
在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于患有SMA的受试者。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式施用于对SMA易感或敏感的受试者。在具体的实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于患有SMA的人受试者，其中SMA是由两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失所引起的，从而导致SMN1基因功能的丧失。在某些实施方式中，在施用式(I)的化合物或其形式或其药剂之前对人受试者基因分型以确定所述受试者是否具有两个染色体上SMN1基因的端粒拷贝中的失活突变或缺失，其导致SMN1基因功能丧失。在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于O型SMA受试者。在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于1型SMA受试者。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于2型SMA受试者。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于3型SMA受试者。在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于4型SMA受试者。在某些实施方式中，人受试者是SMA患者。
在某些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于将或者可能受益于SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中的包含提高的受试者。在具体的实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于将或者可能受益于Smn蛋白表达提高的受试者。
在某些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于年龄范围在约0个月至约6个月、约6至约12个月、约6至约18个月、约18至约36个月、约1至约5岁、约5至约10岁、约10至约15岁、约15至约20岁、约20至约25岁、约25至约30岁、约30至约35岁、约35至约40岁、约40至约45岁、约45至约50岁、约50至约55岁、约55至约60岁、约60至约65岁、约65至约70岁、约70至约75岁、约75至约80岁、约80至约85岁、约85至约90岁、约90至约95岁或约95至约100岁之间的人。
在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于人婴儿。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于幼儿。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于儿童。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于成年人。在其他实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于老年人。
在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于患者以防止具有发展SMA风险的患者中SMA的发病。在其他实施方式中，将有效量的式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于患者以防止具有发展SMA风险的患者中SMA的发病。在其他实施方式中，将预防有效量的式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于患者以防止具有发展SMA风险的患者中SMA的发病。在其他实施方式中，将治疗有效量的式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于患者以防止具有发展SMA风险的患者中SMA的发病。
在一些实施方式中，将式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于SMA患者以治疗或改善SMA。在其他实施方式中，将有效量的式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于SMA患者以治疗或改善SMA。在其他实施方式中，将预防有效量的式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于SMA患者以防止SMA发展。在其他实施方式中，将治疗有效量的式(I)的化合物或其形式或其药剂施用于SMA患者以治疗或改善SMA。
施用形式
当施用于患者时，优选地将式(I)的化合物或其形式作为任选地包含可药用载体、赋形剂或稀释剂的组合物的组分施用。可以口服或通过任何其他适当的途径施用所述组合物，所述途径例如通过输注或弹丸注射，通过上皮细胞或皮肤粘膜内层(例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜)吸收，并且所述组合物可以与另一种生物活性试剂一起施用。施用可以是全身性或局部的。多种递送系统是已知的，例如，脂质体、微粒、微胶囊、胶囊中的包封，并且其可以用于施用所述化合物。
施用方法包括(但不限于)肠胃外、皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、口服、舌下、鼻内、脑内、叶鞘内、透皮、直肠、通过吸入或局部施用，具体地施用至耳、鼻、眼或皮肤。由医师判断确定施用形式。在多部分情况下，施用将导致化合物向血流中的释放。在具体的实施方式中，口服施用化合物。
剂量和剂量形式
在SMA治疗中将是有效的式(I)的化合物或其形式的量取决于(例如)施用途径、SMA类型、受试者的一般健康情况、受试者的种族、年龄、体重和性别、饮食、SMA的时间和严重性，并且应根据医师的判断和每位患者或受试者的情况决定。
在具体的实施方式中，在式(I)的化合物或其形式或其组合物或药剂的施用背景中，“有效量”、“预防有效量”或“治疗有效量”是指具有治疗效果和/或有益效果的式(I)的化合物的量。在某些具体的实施方式中，在式(I)的化合物或其形式或其组合物或药剂的施用背景中，“有效量”、“预防有效量”或“治疗有效量”导致产生了以下作用中的一种、两种或更多种：(i)降低或改善了SMA的严重性；(ii)迟延SMA的发病；(iii)抑制SMA发展；(iv)减少受试者住院；(v)减少受试者住院时长；(vi)提高受试者存活率；(vii)改善受试者的生活质量；(viii)减少与SMA有关的症状数目；(ix)降低或改善与SMA有关的症状的严重性；(x)减少与SMA有关的症状的持续时间；(xi)防止与SMA有关的症状复发；(xii)抑制SMA症状发展或发病；和/或(xiii)抑制与SMA有关的症状发展。在某些实施方式中，式(I)的化合物或其形式的有效量是在对其有需要的受试者中有效提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的SMN2mRNA中的包含并且提高从SMN2基因产生的Smn蛋白的水平，并因此产生所需的有益效果的量。在一些情况下，可以通过分析或定量：(1)SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含；或者(2)由SMN2基因产生的Smn蛋白的水平来确定所需的效果。本文描述了式(I)的化合物或其形式的有效量的非限制性实例。
例如，有效量可以是治疗对其有需要的人受试者中SMA所需的量，或者提高对其有需要的人受试者中SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含所需的量，或者提高对其有需要的人受试者中由SMN2基因产生的Smn蛋白水平所需的量。在具体的实施方式中，人受试者是SMA患者。
一般地，对于体重范围在约1kg至约200kg之间的患者或受试者，有效量将在约0.001mg/kg/天至约500mg/kg/天的范围内。预期典型的成年受试者将具有约70至约100kg之间的中值体重。
在本说明的范围内，在药剂生产、药物试剂盒制备或在治疗对其有需要的人受试者中SMA的方法中使用的式(I)的化合物或其形式的“有效量”旨在包括约0.001mg至约35000mg范围内的量。在具体的实施方式中，人受试者是SMA患者。
本文所述的组合物配制用于通过本领域中已知的任何药物递送途径施用至受试者。非限制性实例包括口服、眼部、直肠、口腔、局部、鼻、眼用、皮下、肌内、静脉内(弹丸和输注)、脑内、透皮和肺部施用途径。
药物组合物
本文所述的实施方式包括式(I)的化合物或其形式在药物组合物中的使用。在具体的实施方式中，本文描述了式(I)的化合物或其形式在药物组合物中用于治疗对其有需要的人受试者中SMA的使用，其包括与可药用赋形剂混合施用有效量的式(I)的化合物或其形式。在具体的实施方式中，人受试者是SMA患者。
式(I)的化合物或其形式可以任选地处于包含所述化合物或其形式和任选的载体、赋形剂或稀释剂的组合物的形式。本文所提供的其他实施方式包括包含有效量的式(I)的化合物或其形式和可药用载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物。在具体的实施方式中，所述药物组合物适合于兽医和/或人施用。本文所提供的药物组合物可以处于允许所述组合物施用于受试者的任何形式。
在具体的实施方式和该背景中，术语“可药用载体、赋形剂或稀释剂”表示由联邦或州政府的管理机构批准或者在美国药典或其他通常承认的药典中所列的用于在动物，并且更具体地在人中使用的载体、赋形剂或稀释剂。术语“载体”是指治疗剂与其一起施用的稀释剂、佐剂(例如，弗氏佐剂(完全和不完全))、赋形剂或载体。这些药物载体可以是无菌液体，如水和油剂，其包括石油、动物、植物或合成来源的那些，如花生油、豆油、矿物油、芝麻油等。水是静脉内施用的药物组合物的特定载体。盐溶液以及葡萄糖和甘油水溶液也可以用作液体载体，具体地用于可注射溶液。
典型组合物和剂量形式包含一种或多种赋形剂。适合的赋形剂是药学领域技术人员熟知的，并且适合的赋形剂的非限制性实例包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、乙二醇、水、乙醇等。特定赋形剂是否适合掺入到药物组合物或剂量形式中取决于本领域中熟知的多种因素，其包括(但不限于)所述剂量形式将施用给患者的方式和所述剂量形式中具体的活性成分。本文还提供了包含如本文所述的一种或多种式(I)的化合物或其形式的无水药物组合物和剂量形式。所述组合物和单一单位剂量形式可以采取以下形式：溶液或糖浆(任选地具有调味剂)、混悬液(任选地具有调味剂)、乳液、片剂(例如，咀嚼片剂)、丸剂、胶囊、颗粒剂、粉剂(任选地用于复原)、掩味或缓释制剂等。
本文所提供的适合于口服的药物组合物可以作为分开的剂量形式存在，如(但不限于)片剂、囊片剂、胶囊、颗粒剂、粉剂和液体剂。这些剂量形式含有预定量的活性成分，并且可以通过本领域技术人员熟知的药学方法制备。
可以在本文所提供的口服剂量形式中使用的赋形剂的实例包括(但不限于)粘结剂、填充剂、崩解剂和润滑剂。
生物标志物
在某些实施方式中，将从SMN1基因和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量用作SMA的生物标志物。在某些实施方式中，将从SMN1基因和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量用作SMA的生物标志物。在其他实施方式中，将从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量用作使用如本文所公开的化合物治疗的SMA患者的生物标志物。在其他实施方式中，将从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量用作使用如本文所公开的化合物治疗的SMA患者的生物标志物。在一些实施方式中，从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的变化和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的相应变化是使用如本文所公开的化合物治疗的患者的生物标志物。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
在具体的实施方式中，施用化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)后，从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的相应减少表明所述化合物可以有效治疗SMA。在另一种具体的实施方式中，施用化合物(例如，本文所公开的式(I)的化合物)后，从SMN2基因转录的并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量的减少和从SMN2基因转录的并且不包含SMN2的外显子7的mRNA的量的相应增加表明所述化合物将不能有效治疗SMA。根据这些实施方式，可以在测定，如PCR(例如，qPCR)和RT-PCR(例如，RT-qPCR或终点RT-PCR)中使用如下所述的SMN引物和/或SMN探针以评价和/或定量从SMN1基因和/或SMN2基因转录的并且包含或不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。
在一种实施方式中，本文提供了用于扩增编码或由人SMN1和/或SMN2编码的核酸的SMN引物和/或SMN探针(例如，具有核苷酸序列SEQID NO.1、7、8、11或13的正向引物；和/或具有核苷酸序列SEQ ID NO.9或12的反向引物；和/或SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)。这些引物可以用作(例如)RT-PCR(如，如本文所述的或者如本领域技术人员已知的RT-PCR、终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增中的引物，并且可以用作杂交测定，如RNA印迹和/或DNA印迹测定中的探针。如在本文生物实施例中所使用的，终点RT-PCR是进行一定数量扩增循环(或者直至起始材料耗尽)，然后使用(例如)凝胶电泳分离、荧光染料染色、荧光定量等对每种DNA产物定量的反转录聚合酶链反应。
SEQ ID NO.1杂交至包含对应于SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸22至40的核苷酸的DNA或RNA，SEQ ID NO.2杂交至包含对应于荧光虫荧光素酶编码序列的核苷酸4至26的核苷酸的DNA或RNA；SEQ ID NO.7杂交至包含对应于SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸32至54和SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸1至4的核苷酸的核酸序列(例如，DNA的有义链)，SEQ ID NO.8杂交至包含依次对应于SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸87至111和SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸1至3的核苷酸的核酸序列(例如，DNA的有义链)，SEQ ID NO.9杂交至包含对应于SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸39至62的核苷酸的核酸序列(例如，DNA或RNA的反义链)，SEQ ID NO.11杂交至包含对应于SMN1和/或SMN2的外显子6的核苷酸43至63的核苷酸的核酸序列(例如，DNA的有义链)，SEQ ID NO.12杂交至包含对应于SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸51至73的核苷酸的核酸序列(例如，DNA或RNA的反义链)，和SEQ IDNO.13杂交至包含对应于SMN1和/或SMN2的外显子6的核苷酸22至46的核苷酸的核酸序列(例如，DNA的有义链)。
因此，可以在扩增反应中使用对应于SEQ ID NO.9、11、12和/或13的寡核苷酸以扩增编码或由缺少人SMN1和/或SMN2的外显子7的人SMN1和/或SMN2编码的核酸和编码或由包含人SMN1和/或SMN2的外显子7的人SMN1和/或SMN2编码的核酸。相反，可以将对应于SEQ IDNO.8的寡核苷酸与下游反向引物(例如，SEQ ID NO.9或12)一起用于扩增编码或由缺少人SMN1和/或SMN2的外显子7的人SMN1和/或SMN2编码的核酸，并且可以将对应于SEQ ID NO.1和7的寡核苷酸与下游反向引物(例如，SEQ ID NO.9或12)一起用于扩增编码或由包含人SMN1和/或SMN2的外显子7的人SMN1和/或人SMN2编码的核酸。
SEQ ID NO.3杂交至包含依次对应于人SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸50至54和人SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸1至21的核苷酸的核酸序列(例如，DNA的有义链)，并且SEQ ID NO.10杂交至包含对应于人SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸7至38的核苷酸的核酸序列(例如，DNA的有义链)。SEQ ID NO.3作为检测从本文所述或者国际公开No.WO2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833(每篇专利以其全部内容作为参考并入本文)中所述的小基因转录并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的探针是有用的，并且作为检测从人SMN1和/或SMN2转录并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的探针是有用的。另外，SEQ ID NO.10作为检测从小基因转录并且包含或不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA和检测从人SMN1和/或SMN2转录的mRNA的探针是有用的，如本文所述的或如国际公开No.WO 2009/151546或美国专利申请公开No.2011/0086833中所述，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。
在具体的实施方式中，在测定，如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增并且如适用，RNA印迹或DNA印迹(例如，如以下生物实施例中所述的测定)中使用了在以下生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、11或13和/或SEQID NO.2、9或12，和/或SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)以确定化合物(例如，式(I)的化合物或其形式)是否提高SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中的包含。
在另一种实施方式中，在测定，如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增并且如适用，RNA印迹或DNA印迹(例如，如以下生物实施例中所述的测定)中使用了在以下生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、11或13和/或SEQID NO.9或12，和/或SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)以监控从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
在另一种实施方式中，在测定，如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增并且如适用，RNA印迹或DNA印迹(例如，如以下生物实施例中所述的测定)中使用了在以下生物实施例中所述的引物和/或探针(例如，SMN引物，如SEQ ID NO.1、7、11或13和/或SEQID NO.9或12，和/或SMN探针，如SEQ ID NO.3或10)以监控患者对化合物(例如，式(I)的化合物或其形式)的反应。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
可以使用本领域技术人员已知的技术获得来自患者的样品(例如，血液样品、PBMC样品或组织样品，如皮肤或肌肉组织样品)，并且可以在测定(例如，PCR、RT-PCR、RT-qPCR、qPCR、终点RT-PCR、滚环扩增、RNA印迹和DNA印迹)中使用以下生物实施例中所述的引物和/或探针以确定从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA的量(例如，包含从SMN2基因转录的SMN2的外显子7的mRNA的量)。来源于患者的样品是指使用本领域技术人员已知的技术从患者获得后，加工和/或处理的样品。例如，可以使用本领域技术人员已知的技术加工来自患者的样品，例如，提取RNA。可以加工来自患者的样品，例如，提取RNA并且将RNA反转录以产生cDNA。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
在具体的实施方式中，本文提供了检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括：(a)将患者样品(例如，血液样品或组织样品)或者来源于患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触；(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中，所述样品来自于或者来源于施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式的患者。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了检测从SMN1和SMN2基因转录的mRNA的量的方法，其包括：(a)将患者样品(例如，血液样品或组织样品)或者来源于患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ IDNO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触；和(B)检测从SMN1和SMN2基因转录的mRNA的量在某些实施方式中，所述样品来自于或者来源于施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式的患者。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
可以通过(例如)从包含SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA以及从不包含SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA所产的RNA或DNA片段的大小将从人SMN1和SMN2基因转录并且不包含SMN1和SMN2的外显子7的mRNA彼此区分开。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括：(a)将患者样品(例如，血液样品或组织样品)或者来源于患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触；(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中，所述样品来自于或者来源于施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式的患者。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括：(a)将患者样品(例如，血液样品或组织样品)或者来源于患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)、滚环扩增并且如适用，RNA印迹或DNA印迹适用的组分接触；(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中，所述样品来自于或者来源于施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式的患者。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了检测从SMN1和SMN2基因转录的mRNA的量的方法，其包括：(a)将患者样品(例如，血液样品或组织样品)或者来源于患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)、滚环扩增以及如适用，RNA印迹或DNA印迹适用的组分接触；和(B)检测从SMN1和SMN2基因转录的mRNA的量。
可以通过(例如)从包含SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA以及从不包含SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA所产的RNA或DNA片段的大小将从人SMN1和SMN2基因转录并且不包含SMN1和SMN2的外显子7的mRNA彼此区分开。在某些实施方式中，所述样品来自于或者来源于施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式的患者。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括：(a)将患者样品(例如，血液样品或组织样品)或者来源于患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)、滚环扩增或者RNA印迹或DNA印迹适用的组分接触；(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中，所述样品来自于或者来源于施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式的患者。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
在具体的实施方式中，本文提供了检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括：(a)将患者样品(例如，血液样品或组织样品)或者来源于患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQID NO.9或12)和/或本文所述的SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中，所述样品来自于或者来源于施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式的患者。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
在具体的实施方式中，本文提供了检测从SMN1和SMN2基因转录的mRNA的量的方法，其包括：(a)将患者样品(例如，血液样品或组织样品)或者来源于患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或本文所述的SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)以及如适用，对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触；和(b)检测从SMN1和SMN2基因转录的mRNA的量。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
可以通过(例如)从包含SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA以及从不包含SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA所产的RNA或DNA片段的大小将从人SMN1和SMN2基因转录并且包含SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量与从人SMN1和SMN2基因转录并且不包含SMN1和SMN2的外显子7的mRNA的量彼此区分开。在某些实施方式中，所述样品来自于或者来源于施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式的患者。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
在具体的实施方式中，本文提供了检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的方法，其包括：(a)将患者样品(例如，血液样品或组织样品)或者来源于患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或本文所述的SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中，所述样品来自于或者来源于施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式的患者。在具体的实施方式中，所述患者是SMA患者。
在具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，本文所述的化合物)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或者滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，本文所述的式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或者滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，如本文所述的式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或者滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，本文所述的式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或者滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，如本文所述的式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，和(ii)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化，和(ii)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或者滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，和(ii)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化，和(ii)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，本文所述的式(I)的化合物或其形式)的患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，和(ii)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化，和(ii)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或者滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，和(ii)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化，和(ii)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)或PCR(例如，qPCR)适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，本文所述的式(I)的化合物或其形式)的患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，和(ii)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化，和(ii)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了评价SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或者滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，和(ii)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明SMN1和/或患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化，和(ii)相对于来自施用所述化合物之前的患者的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间评价患者的反应。
在具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，本文所述的式(I)的化合物或其形式)的患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的一段时间内监控患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或者滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的一段时间内监控患者的反应。
在具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，本文所述的式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的一段时间内监控患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或者滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的一段时间内监控患者的反应。
在具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，本文所述的式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的一段时间内监控患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或者滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5一10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，监控连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式数天、数周、数月或数年的反应。
在具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，本文所述的式(I)的化合物或其形式)的患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的一段时间内监控患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或者滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的一段时间内监控患者的反应。
在具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，本文所述的式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，和(ii)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化，和(ii)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的一段时间内监控患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQID NO.9或12)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)，或滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，和(ii)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化，和(ii)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的一段时间内监控患者的反应。
在具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，本文所述的式(I)的化合物或其形式)的患者患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含S SMN1和/或MN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，和(ii)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化，和(ii)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的一段时间内监控患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或者滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，和(ii)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化，和(ii)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的一段时间内监控患者的反应。
在具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)将SMA患者样品(例如，血液样品或组织样品)或来源于SMA患者的样品(例如，已加工提取RNA的血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增适用的组分接触，其中所述样品来自于或者来源于施用化合物(例如，本文所述的式(I)的化合物或其形式)的SMA患者；和(b)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，和(ii)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化，和(ii)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的一段时间内监控患者的反应。
在另一种具体的实施方式中，本文提供了监控SMA患者对化合物的反应的方法，其包括：(a)向SMA患者施用化合物；(b)将得自或来源于所述患者的样品(例如，血液样品或组织样品)与如下所述的正向SMN引物(例如，SEQ ID NO.11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(例如，SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(例如，SEQ ID NO.10)以及对于(例如)RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或者滚环扩增适用的组分接触；和(c)检测从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，其中(1)(i)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加，和(ii)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，来自相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明患者对所述化合物起反应，并且所述化合物可以对或者对所述患者是有益的和/或具有治疗价值；和(2)(i)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化，和(ii)相对于来自施用所述化合物或一定数目的所述化合物剂量之前的患者的类似样品或者一定较早时间的类似样品(例如，相同类型的组织样品)中从SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，患者样品中从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量无变化或无显著变化表明患者对所述化合物不起反应，并且所述化合物对所述患者不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中，在化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式施用后1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间监控患者的反应。在一些实施方式中，在患者接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后，监控患者的反应。在一些实施方式中，在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式后监控患者的反应。在一些实施方式中，在连续施用化合物，如本文所述的式(I)的化合物或其形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的一段时间内监控患者的反应。
在具体的实施方式中，患者中的SMA是由两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失，从而导致SMN1基因功能丧失所引起的。
试剂盒
在一个方面，本文提供了药物或测定试剂盒，其在一个或多个容器中包含本文所述的SMN引物或探针，和使用说明。在一种实施方式中，药物或测定试剂盒在容器中包含一个或多个SMN反向引物(例如，SEQ ID NO.2、9和/或12)和/或一个或多个SMN正向引物(SEQID NO.1、7、8、11和/或13))和使用说明。在另一种实施方式中，药物或测定试剂盒在一个容器中包含SMN反向引物(例如，SEQ ID NO.2、9和/或12)、SMN正向引物(SEQ ID NO.1、7、8、11和/或13))和使用说明。
在一种实施方式中，药物或测定试剂盒在单独的容器包含位于一个容器中的一个SMN反向引物(例如，SEQ ID NO.2、9或12)，位于另一个容器中的另一个SMN正向引物(例如，SEQ ID NO.1、7、8、11或13)，和使用说明。
在某些实施方式中，在这些试剂盒中包含PCR(例如，qPCR)、RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)或滚环扩增所需的适用组分，如聚合酶、脱氧核苷三磷酸等。在一些实施方式中，在这些试剂盒中包含杂交所需的组分。含有这些引物的药物或测定试剂盒可以在PCR和RT-PCR中使用以(例如)评价治疗剂(例如，式(I)的化合物或其形式)是否提高SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中的包含，(ii)监控从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，和/或(iii)监控患者对治疗剂(例如，式(I)的化合物或其形式)的反应。在其他实施方式中，所述受试者是人受试者。在其他实施方式中，所述人受试者是人患者。在某些其他实施方式中，所述人患者是人SMA患者。
在具体的实施方式中，药物或测定试剂盒包含位于一个容器中的具有SEQ IDNO.1中存在的序列的正向引物，和位于另一个容器中的具有SEQ ID NO.2中存在的序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增中使用以用于扩增如本文所述的那些或在国际公开No.WO 2009/151546或者美国专利申请公开No.2011/0086833中所述的人SMN1小基因或人SMN2小基因所编码的核苷酸序列，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。在其他实施方式中，这些引物在(例如)杂交测定，如DNA印迹或RNA印迹中用作探针。
在具体的实施方式中，药物或测定试剂盒包含位于一个容器中的具有SEQ IDNO.7中存在的核苷酸序列的正向引物，和位于另一个容器中的具有SEQ ID NO.9中存在的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增中使用以用于扩增通过内源人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物在(例如)杂交测定，如DNA印迹或RNA印迹中用作探针。
在另一种具体的实施方式中，药物或测定试剂盒包含位于一个容器中的具有SEQID NO.8中存在的核苷酸序列的正向引物，和位于另一个容器中的具有SEQ ID NO.9中存在的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增中使用以用于扩增通过内源人SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物在(例如)杂交测定，如DNA印迹或RNA印迹中用作探针。
在具体的实施方式中，药物或测定试剂盒包含位于一个容器中的具有SEQ IDNO.7中存在的核苷酸序列的正向引物，位于另一个容器中的具有SEQ ID NO.8中存在的核苷酸序列的正向引物，和位于另一个容器中的具有SEQ ID NO.9中存在的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增中使用以用于扩增通过内源人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物在(例如)杂交测定，如DNA印迹或RNA印迹中用作探针。
在具体的实施方式中，药物或测定试剂盒包含位于一个容器中的具有SEQ IDNO.11中存在的核苷酸序列的正向引物，和位于另一个容器中的具有SEQ ID NO.12中存在的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增中使用以用于扩增通过内源人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物在(例如)杂交测定，如DNA印迹或RNA印迹中用作探针。
在具体的实施方式中，药物或测定试剂盒包含位于一个容器中的具有SEQ IDNO.11中存在的核苷酸序列的正向引物，和位于另一个容器中的具有SEQ ID NO.9中存在的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增中使用以用于扩增通过内源人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物在(例如)杂交测定，如DNA印迹或RNA印迹中用作探针。
在具体的实施方式中，药物或测定试剂盒包含位于一个容器中的具有SEQ IDNO.13中存在的核苷酸序列的正向引物，和位于另一个容器中的具有SEQ ID NO.12中存在的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增中使用以用于扩增通过内源人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物在(例如)杂交测定，如DNA印迹或RNA印迹中用作探针。
在具体的实施方式中，药物或测定试剂盒包含位于一个容器中的具有SEQ IDNO.13中存在的核苷酸序列的正向引物，和位于另一个容器中的具有SEQ ID NO.9中存在的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增中使用以用于扩增通过内源人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物在(例如)杂交测定，如DNA印迹或RNA印迹中用作探针。
在具体的实施方式中，药物或测定试剂盒包含位于一个容器中的具有SEQ IDNO.1中存在的核苷酸序列的正向引物，和位于另一个容器中的具有SEQ ID NO.9中存在的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增中使用以用于扩增通过内源人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物在(例如)杂交测定，如DNA印迹或RNA印迹中用作探针。
在具体的实施方式中，药物或测定试剂盒包含位于一个容器中的具有SEQ IDNO.1中存在的核苷酸序列的正向引物，和位于另一个容器中的具有SEQ ID NO.12中存在的核苷酸序列的反向引物。在某些实施方式中，这些引物在RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如，qPCR)或滚环扩增中使用以用于扩增通过内源人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他实施方式中，这些引物在(例如)杂交测定，如DNA印迹或RNA印迹中用作探针。
在另一种实施方式中，药物或测定试剂盒包含位于一个容器中的本文所述的SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)。在其他实施方式中，所述探针在(例如)杂交测定，如DNA印迹或RNA印迹中使用。在具体的实施方式中，所述探针在RT-qPCR或qPCR中使用。在某些实施方式中，在这些试剂盒中包含PCR(例如，qPCR)、RT-PCR(例如，终点RT-PCR和/或RT-qPCR)或滚环扩增所需的组分，如聚合酶、脱氧核苷三磷酸、引物等。在一些实施方式中，在这些试剂盒中包含杂交所需的组分。
在一种实施方式中，药物或测定试剂盒包含位于一个容器中的SMN反向引物(例如，SEQ ID NO.2、9或12)，位于另一个容器中的SMN正向引物(例如，SEQ ID NO.1、7、8、11或13)，和位于另一个容器中的SMN探针(例如，SEQ ID NO.3或10)，以及使用说明。在另一种实施方式中，药物或测定试剂盒包含位于一个容器中的一个或多个SMN反向引物(例如，SEQID NO.2、9和/或12)，位于另一个容器中的一个或多个SMN正向引物(例如，SEQ ID NO.1、7、8、11和/或13)，和位于另一个容器中的一个或多个SMN探针(例如，SEQ ID NO.3和/或10)，以及使用说明。
在某些实施方式中，在这些试剂盒中包含运行PCR、RT-PCR或滚环扩增所需的组分，如聚合酶、脱氧核苷三磷酸等。含有这些探针和/或引物的药物或测定试剂盒可以在PCR和RT-PCR中使用以(例如)(i)评价治疗剂(例如，式(I)的化合物或其形式)是否提高SMN1和/或SMN2的外显子7在从SMN1和/或SMN2基因转录的mRNA中的包含，(ii)监控从SMN1和/或SMN2基因转录的并且包含外显子7的mRNA的量和从SMN1和/或SMN2基因转录的并且不包含SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量，和/或(iii)监控受试者对治疗剂(例如，式(I)的化合物或其形式)的反应。在其他实施方式中，所述受试者是人受试者。在其他实施方式中，所述人受试者是人患者。在某些其他实施方式中，所述人患者是人SMA患者。
在另一个方面，本文提供了药物试剂盒，其包含位于一个容器中的式(I)的化合物或其形式，和所述化合物或其形式的使用说明。在具体的实施方式中，本文提供了药物试剂盒，其包含含有式(I)的化合物或其形式和可药用载体、赋形剂或者稀释剂的药物组合物以及使用说明。在另一种具体的实施方式中，本文提供了药物试剂盒，其包含含有有效量的式(I)的化合物或其形式和可药用载体、赋形剂或者稀释剂的药物组合物以及使用说明。在一种实施方式中，使用说明解释了以下中的一种、两种或更多种：向受试者施用式(I)的化合物或其形式的剂量、施用途径、施用频率和施用副作用。在其他实施方式中，所述受试者是人受试者。在其他实施方式中，所述人受试者是人患者。在某些其他实施方式中，所述人患者是人SMA患者。
一般合成方法
如本文所公开的，通过标准、熟知的合成方法，制备如本文所述的式(I)的化合物或其形式的一般方法是可用的。多数起始材料是可商购的，或者当不可获得时，可以使用本领域技术人员所知的技术进行制备。本文所提供的合成方案包括多个反应步骤，每个步骤旨在是独立的并且可以使用或不使用任何先前或成功步骤进行。换言之，考虑了本文所提供的合成方案的各个独立反应步骤中的每一步的表现。
方案A
如以下方案A所述，制备了本文所述的式(I)的化合物，其中R2是任选地取代的单环或双环杂环、芳基或杂芳基环系。
在存在碱(如KOH等)和适合的溶剂(如乙醇等)的情况下，将化合物A1(其中X表示多种反应基团，其使用本领域技术人员已知的技术通过将适合的起始材料与化合物A1或者随后与化合物A3或化合物A4反应来用于提供多个R1官能团取代基)与醛化合物A2反应，其经历了醛醇缩合反应以提供化合物A3。在存在催化剂(如碘等)和适合的溶剂(如DMSO等)的情况下，化合物A3经历环化作用以提供化合物A4。
方案B
如以下方案B所述，制备了本文所述的式(I)的化合物，其中R2为任选地取代的双环杂芳基环系。
化合物B1(其中X为如前所述)与任选地取代的苯胺化合物B2(其中Y是适合的反应基团，如OH、NH2、SH等)在适合的溶剂(如PPA等)中反应以提供化合物B3。
方案C
如以下方案C所述，制备了本文所述的式(I)的化合物，其中R2是任选地取代的单环或双环杂环或杂芳基环系。
在存在偶联剂(如CDI等)的情况下，羧酸化合物B1与适合的胺(如N，O-二甲基羟胺等)在适合的溶剂(如DCM等)中反应以提供Weinreb酰胺化合物C1。在适合的溶剂(如THF等)中，用适合的格利雅试剂(如甲基甲基溴化镁等)处理酰胺化合物C1以提供化合物C2。可以使用适当的溴化剂(如Br2或NBS等)选择性溴化化合物C2的α-甲基以提供化合物C3。将化合物C3与任选地取代的单环杂环或杂芳基环系化合物C4(其中术语“Het”是指脒样部分，如(但不限于)2-氨基吡啶、2-氨基嘧啶、4-氨基嘧啶、2-氨基吡嗪、3-氨基哒嗪、2-氨噻唑、4-氨噻唑等)反应以提供化合物C5。
具体合成实施例
为了更详细地描述并帮助理解，提供了以下非限制性实施例以更充分地说明本文所述的化合物的范围并且不应将其视为对其范围的具体限制。现在可能已知或随后可能开发出的本文所述的化合物的这些变化将在本领域技术人员能够确定的范围内，并且认为是在如本文所述和下文主张的化合物的范围内。这些实施例说明了某些化合物的制备。本领域技术人员将理解在这些实施例中描述的技术代表如本领域那些技术人员所述，在合成实践中良好作用的技术，并且照此构成了用于它们实践的优选方式。然而，根据本发明，本领域技术人员应理解可在不背离本发明的精神和范围的情况下在所公开的具体方法中做出多种改变并仍获得类似或相似的结果。
除以下具体化合物的实施例之外，除非有相反的说明，否则在说明书和权利要求中使用的表示成分的量、反应条件、实验数据等的所有数字应理解是由术语“约”修饰的。因此，所有这些数字代表了可以根据通过反应或由于可变的实验条件设法获得的所需性质改变的近似值。因此，在实验可重复性的预期范围内，在所得数据的背景中术语“约”是指数据的范围，只要可以根据平均值的标准偏差而改变。同样，对于所提供的实验结果，所得数据可以向上或向下圆整以一致地提供数据，而不会损失有效数字。至少，并且不是作为对限制与权利要求的范围等价的原理的应用的尝试，并且应按照本领域技术人员所使用的有效位数和圆整技术来对待每个数字参数。
尽管描述本发明广泛范围的数值范围和参数是近似值，但是尽可能精确地报告了以下实施例中说明的数值。然而，任何数值固有地包含了由在它们各自测试测量中存在的标准偏差所必需产生的一定误差。
化合物实施例
如以上和整个发明描述中所使用的，除非另外说明，否则下列缩写应理解为具有下列含义：
实施例1
Cpd 20的制备
步骤A：向1-(5-溴-2-羟苯基)乙酮(2.15g，10mmol)和3，4-二甲氧基苯甲醛(1.83g，11mol)在乙醇(13mL)中的混合物中加入KOH(2.24g，40mmol)。在室温下搅拌过夜后，在0℃用1N HCl将反应混合物酸化至pH 5。将所得沉淀物过滤并干燥以提供(E)-1-(5-溴-2-羟苯基)-3-(3，4-二甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮。MS m/z 363.1，365.1[M+H]+。粗产物不用进一步纯化而直接用于下一步。
步骤B：在室温下，将催化量的碘(103mg，0.41mmol)加入至良好搅拌的(E)-1-(5-溴-2-羟苯基)-3-(3，4-二甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮(3.74g，10.3mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中。然后，将反应混合物在130℃加热2小时。加热期间，反应混合物变黑。将混合物冷却至室温后，加入饱和Na2S2O3溶液并将混合物在室温下搅拌直至黑色消失。将黄色沉淀物过滤，用水清洗并干燥以提供6-溴-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(2.8g，75.3％)。MSm/z 361.1，363.1[M+H]+。
步骤C：将6-溴-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(72.2mg，0.2mmol)、1-Boc-哌嗪(44.7mg，0.24mmol)、Pd(dba)2(5.75mg，0.01mmol)、Sphos(10.3mg，0.025mmol)和Cs2CO3(91.2mg，0.28mmol)在甲苯(1mL)中的混合物在100℃加热过夜。在通过旋转蒸发除去大部分甲苯后，将乙醚加入到混合物中并形成沉淀物。将所得沉淀物过滤，用水清洗并干燥。然后，用0-25％的甲醇在CH2Cl2中的溶液通过色谱法纯化粗产物以提供叔-丁基4-(2-(3，4-二甲氧基苯基)-4-氧-4H-色烯-6-基)哌嗪-1-羧酸酯。MS m/z 467.3[M+H]+。
步骤D：将叔-丁基4-(2-(3，4-二甲氧基苯基)-4-氧-4H-色烯-6-基)哌嗪-1-羧酸酯在CH2Cl2/TFA(0.5mL/0.5mL)中的溶液在0℃搅拌2小时。在通过旋转蒸发除去大部分TFA和CH2Cl2后，将冰冷的饱和NaHCO3溶液加入到反应混合物中。用CH2Cl2萃取混合物。用MgSO4干燥有机层并浓缩以提供标题化合物(48.4mg，52％，对于2步骤来说)。熔点：177-179℃；MSm/z 367.1[M+H]+.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ7.67-7.70(2H，m)，7.59(1H，d，J＝2.1Hz)，7.54(1H，dd，J＝3.2Hz，9.5Hz)，7.30(1H，d，J＝3.0Hz)，7.13(1H，d，J＝8.8Hz)，6.99(1H，s)，3.89(3H，s)，3.85(3H，s)，3.11-3.13(4H，m)，2.85-2.87(4H，m)。
如下表1所示，可以根据实施例1通过更换适当的起始材料、试剂和反应条件来制备本文所公开的其他化合物。
实施例2
Cpd 8的制备
步骤A：如实施例1步骤A所述，将1-(5-溴-2-羟苯基)乙酮(1.23g，5.7mmol)、咪唑并[1，2-a]吡啶-2-甲醛(836.4mg，5.7mol)和KOH(1.28g，22.9mmol)在乙醇(7.4mL)中反应以提供(E)-1-(5-溴-2-羟苯基)-3-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-丙-2-烯-1-酮(2.0g，100％)。MS m/z 343.1，345.1[M+H]+。
步骤B：如实施例1步骤B所述，在100℃加热过夜后，将(E)-1-(5-溴-2-羟苯基)-3-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)丙-2-烯-1-酮(2.0g，5.72mmol)和碘(58.1mg，0.23mmol)在DMSO(10mL)中反应提供了6-溴-2-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-4H-色烯-4-酮(1.7g，87％)。MS m/z 341.1，343.1[M+H]+。
步骤C：如实施例1步骤C中所述，6-溴-2-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-4H-色烯-4-酮(68.2mg，0.2mmol)，1-Boc-哌嗪(44.7mg，0.24mmol)，Pd(dba)2(5.75mg，0.01mmol)，Sphos(10.3mg，0.025mmol)和Cs2CO3(91.2mg，0.28mmol)在甲苯(1mL)中提供了叔-丁基4-(2-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-4-氧-4H-色烯-6-基)哌嗪-1-羧酸酯。MS m/z 446.4[M+H]+。
步骤D：如实施例1步骤D所述，叔丁基4-(2-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-4-氧-4H-色烯-6-基)哌嗪-1-羧酸酯和CH2Cl2/TFA(0.5mL/0.5mL)提供了标题化合物(17.2mg，25％，对于2步来说)。熔点：207-211℃；MS m/z 347.2[M+H]+.1H NMR(500MHz，CD3OD)：68.56(1H，S)，8.51(1H，d，J＝6.9Hz)，7.61-7.64(2H，m)，7.57(1H，dd，J＝3.2Hz，9.2Hz)，7.51(1H，d，J＝3.2Hz)，7.41-7.44(1H，m)，7.05(1H，s)，7.01(1H，t，J＝6.9Hz)，3.26～3.28(4H，m)，3.04-3.06(4H，m)。
如下表1所示，可以根据实施例2通过更换适当的起始材料、试剂和反应条件来制备本文所公开的其他化合物。
实施例3
Cpd 76的制备
步骤A：如实施例1步骤A所述，将1-(5-溴-2-羟苯基)乙酮(215.1mg，1mmol)，4-甲基噻唑-2-甲醛(139.9mg，1.1mmol)和KOH(228mg，4mmol)在乙醇(1.3mL)中反应提供了(E)-1-(5-溴-2-羟苯基)-3-(4-甲基噻唑-2-基)丙-2-烯-1-酮(86.7mg，27％)。MS m/z 324.0，326.0[M+H]+。
步骤B：如实施例1步骤B所述，在100℃将(E)-1-(5-溴-2-羟苯基)-3-(4-甲基噻唑-2-基)丙-2-烯-1-酮(86.7mg，0.27mmol)和碘(2.74mg，0.011 mmol)在DMSO(1mL)中加热3小时以提供6-溴-2-(4-甲基噻唑-2-基)-4H-色烯-4-酮(30mg，34.6％)。MS m/z 322.0，324.0[M+H]+。
步骤C：如实施例1步骤C所述，6-溴-2-(4-甲基噻唑-2-基)-4H-色烯-4-酮(24.5mg，0.08mmol)，1-Boc-哌嗪(17mg，0.09mmol)，Pd(dba)2(2.2mg，0.004mmol)，Sphos(3.9mg，0.01mmol)和Cs2CO3(34.6mg，0.11 mmol)在甲苯(1mL)中提供了叔-丁基4-(2-(4-甲基噻唑-2-基)-4-氧-4H-色烯-6-基)哌嗪-1-羧酸酯。
步骤D：如实施例1步骤D所述，叔丁基4-(2-(4-甲基噻唑-2-基)-4-氧-4H-色烯-6-基)哌嗪-1-羧酸酯和CH2Cl2/TFA(0.5mL/0.5mL)提供了标题化合物(12mg，49.6％，对于2步来说)。熔点：179-182℃；MS m/z 328.1[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ7.76(1H，s)，7.65(1H，d，J＝9.3Hz)，7.56(1H，dd，J＝3.1Hz，9.3Hz)，7.31(1H，d，J＝3.1Hz)，6.90(1H，s)，3.13～3.15(4H，m)，2.85-2.87(4H，m)，2.50(3H，s)。
实施例4
Cpd 32的制备
步骤A：将PPA(～1mL)加入到6-溴色酮-2-羧酸(269mg，1mmol)和2-氨基硫酚(150.2mg，1.2mmol)的混合物中。将混合物在77℃加热过夜。将水加入到反应混合物中，并将所得沉淀物过滤并干燥。然后，用0-6％EtOAc在CH2Cl2中的溶液通过色谱法纯化粗产物以提供2-(苯并[d]噻唑-2-基)-6-溴-4H-色烯-4-酮(79mg，22％)。MS m/z 358.0，360.0[M+H]+。
步骤B：如实施例1步骤C所述，2-(苯并[d]噻唑-2-基)-6-溴-4H-色烯-4-酮(71.6mg，0.2mmol)，1-Boc-哌嗪(44.7mg，0.24mmol)，Pd(dba)2(5.75mg，0.01mmol)，Sphos(10.3mg，0.025mmol)和Cs2CO3(91.2mg，0.28mmol)在甲苯(1mL)中提供了叔-丁基4-(2-(苯并[d]噻唑-2-基)-4-氧-4H-色烯-6-基)哌嗪-1-羧酸酯。MS m/z 464.3[M+H]+。
步骤C：如实施例1步骤D所述，叔丁基4-(2-(苯并[d]噻唑-2-基)-4-氧-4H-色烯-6-基)哌嗪-1-羧酸酯和CH2Cl2/TFA(0.5mL/0.5mL)提供了标题化合物(59.1mg，81％，对于2步来说)。熔点：250-254℃；MS m/z 364.2[M+H]+.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.31(1H，d，J＝7.9Hz)，8.22(1H，d，J＝8.3Hz)，7.72(1H，d，J＝9.2Hz)，7.67(1H，t，J＝7.7Hz)，7.60-7.63(2H，m)，7.33(1H，d，J＝2.9Hz)，7.14(1H，s)，3.15-3.17(4H，m)，2.85-2.87(4H，m)。
如下表1所示，可以根据实施例4通过更换适当的起始材料、试剂和反应条件来制备本文所公开的其他化合物。
实施例5
Cpd 28的制备
步骤A：向6-溴色酮-2-羧酸(2.69g，10mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入1，1-羰二咪唑(1.95g，12mmol)。将反应混合物在45℃搅拌5小时。冷却到室温之后，加入N，O-二甲基羟胺盐酸盐(1.46g，15mmol)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。除去CH2Cl2之后，将乙醚加入到所述混合物中。将所得沉淀物过滤并用水彻底清洗以提供6-溴-N-甲氧基-N-甲基-4-氧-4H-色烯-2-氨甲酰(2.3g，73.7％)。MS m/z 312.1，314.1[M+H]+。
步骤B：在0℃，向6-溴-N-甲氧基-N-甲基-4-氧-4H-色烯-2-氨甲酰(3.58g，11.5mmol)在THF(10mL)中的溶液滴加甲基溴化镁(3M在二乙基乙醚中的溶液，4.6mL，13.8mmol)。在0℃搅拌1.5h后，加入饱和NH4Cl，并且用CH2Cl2萃取混合物。减压浓缩有机层。用14-63％CH2Cl2在己烷中的溶液通过色谱法纯化残余物以获得2-乙酰基-6-溴-4H-色烯-4-酮(1.1g，36％)。MS m/z 267.1，269.1[M+H]+。
步骤C：向2-乙酰基-6-溴-4H-色烯-4-酮(542mg，2.03mmol)在CHCl3(2mL)中的溶液中加入Br2(324.4mg，2.03mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。除去CH2Cl2和过量的Br2之后，将乙醚加入到所述混合物中。将所得沉淀物过滤，用饱和NaHCO3溶液清洗并干燥以提供6-溴-2-(2-溴乙酰基)-4H-色烯-4-酮，其直接在下一步中使用。
步骤D：向6-溴-2-(2-溴乙酰基)-4H-色烯-4-酮(得自步骤C的粗产物，415.2mg，1.2mmol)在EtOH(2mL)中的溶液中加入2-氨基-4-甲基吡啶(259mg，2.4mmol)，并将反应混合物回流1小时。在减压下除去EtOH后，将乙醚加入到混合物中。将所得沉淀物过滤，用饱和NaHCO3溶液和水清洗并干燥。用0-33％EtOAc在CH2Cl2中的溶液通过色谱法纯化残余物以产生6-溴-2-(7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-4H-色烯-4-酮(216.6mg，50.8％)。MS m/z355.0，357.0[M+H]+。
步骤E：如实施例1步骤C所述，6-溴-2-(7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-4H-色烯-4-酮(56.6mg，0.16mmol)、1-Boc-哌嗪(44.7mg，0.24mmol)，Pd(dba)2(5.75mg，0.01mmol)、Sphos(10.3mg，0.025mmol)和Cs2CO3(91.2mg，0.28mmol)在甲苯(1mL)中提供了叔-丁基4-(2-(7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-4-氧-4H-色烯-6-基)哌嗪-1-羧酸酯(56.4mg，77％)。MS m/z 461.3[M+H]+。
步骤F：如实施例1步骤D所述，叔丁基4-(2-(7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-4-氧-4H-色烯-6-基)哌嗪-1-羧酸酯(56.4mg，0.12mmol)和CH2Cl2/TFA(0.5mL/0.5mL)提供了标题化合物(43mg，97％)。熔点：228-232℃；MS m/z 361.2[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ8.59(1H，s)，8.51(1H，d，J＝7.1Hz)，7.59(1H，d，J＝9.2Hz)，7.54(1H，dd，J＝3.0Hz，9.2Hz)，7.44(1H，s)，7.32(1H，d，J＝2.9Hz)，6.87(1H，d，J＝1.5Hz，7.0Hz)，6.85(1H，s)，3.12-3.14(4H，m)，2.86-2.88(4H，m)，2.38(3H，s)。
如下表1所示，可以根据实施例5通过更换适当的起始材料、试剂和反应条件来制备本文所公开的其他化合物。
实施例6
Cpd 72的制备
步骤A：如实施例5步骤A所述，6-溴色酮-2-羧酸(2.69g，10mmol)、1，1-羰二咪唑(1.95g，12mmol)和N，O-二甲基羟胺盐酸盐(1.46g，15mmol)在CH2Cl2(10mL)中提供了6-溴-N-甲氧基-N-甲基-4-氧-4H-色烯-2-氨甲酰(2.3g，73.7％)。MS m/z 312.1，314.1[M+H]+。
步骤B：如实施例5步骤B所述，6-溴-N-甲氧基-N-甲基-4-氧-4H-色烯-2-氨甲酰(3.58g，11.5mmol)和甲基溴化镁(3M在二乙基乙醚中的溶液，4.6mL，13.8mmol)在THF(10mL)中提供了2-乙酰基-6-溴-4H-色烯-4-酮(1.1g，36％)。MS m/z 267.1，269.1[M+H]+。
步骤C：如实施例5步骤C所述，2-乙酰基-6-溴-4H-色烯-4-酮(542mg，2.03mmol)和Br2(324.4mg，2.03mmol)在CHCl3(2mL)中提供了6-溴-2-(2-溴乙酰基)-4H-色烯-4-酮，其直接在下一步中使用。
步骤D：如实施例5步骤D所述，6-溴-2-(2-溴乙酰基)-4H-色烯-4-酮(粗产物，468.2mg，1.35mmol)和2-氨基-5-甲基吡嗪(147.6mg，1.35mmol)在EtOH(2mL)中提供了6-溴-2-(6-甲基咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4H-色烯-4-酮(76mg，16％)。MS m/z 356.0，358.0[M+H]+。
步骤E：如实施例1步骤C所述，6-溴-2-(6-甲基咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4H-色烯-4-酮(35.6mg，0.1mmol)，1-Boc-哌嗪(22.3mg，0.12mmol)，Pd(dba)2(3mg，0.005mmol)，Sphos(5.2mg，0.013mmol)和Cs2CO3(45.6mg，0.14mmol)在甲苯(1mL)中提供了叔-丁基4-(2-(6-甲基咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-氧-4H-色烯-6-基)哌嗪-1-羧酸酯。
步骤F：如实施例1步骤D所述，叔丁基4-(2-(6-甲基咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-氧-4H-色烯-6-基)哌嗪-1-羧酸酯和CH2Cl2/TFA(0.5mL/0.5mL)提供了标题化合物(6.5mg，18％，对于2步来说)。MS m/z 362.2[M+H]+。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ9.12(1H，s)，8.73(1H，s)，8.49(1H，s)，7.64(1H，d，J＝9.1Hz)，7.57(1H，dd，J＝3.1Hz，9.3Hz)，7.34(1H，d，J＝3.2Hz)，6.95(1H，s)，3.17-3.19(4H，m)，2.91-2.93(4H，m)，2.46(3H，s)。
如下表1所示，可以根据实施例6通过更换适当的起始材料、试剂和反应条件来制备本文所公开的其他化合物。
表1提供了通过更换适当的起始材料、试剂和反应条件可以根据指定实施例的程序制备和分离的具有游离碱形式的式(I)的化合物。还考虑了来自式(I)的化合物的游离碱形式的任何盐、同位素异数体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对应异构体或互变异构体的制备，并且它们也包括在本文的描述的范围内。当化合物的游离碱形式不是分离自盐形式时，可以预期本领域技术人员能够进行所需反应以制备和分离所述化合物的游离碱形式。
术语“Cpd”代表化合物编号，术语“Ex”代表“实施例编号”(其中*表示以上提供了所述化合物相应的实施例)，术语“M.P.”表示“熔点(℃)”，术语“MS”代表“质谱峰m/z[M+H]+，[M+2+H]+，[M-H]-或[M+2-H]-”，术语“D”代表“分解/分解的”，术语“DR”代表“分解范围”，术语“S”代表“软化”，术语“ND”表示数值“未确定”并且术语“NI”表示化合物“未分离”。
表1
或其盐、同位素异数体、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对应异构体或互变异构体。
生物实施例
为了更详细地描述并帮助理解本说明，提供了下列非限制性生物实施例以更充分地说明本说明的范围并且不应将其视为对其范围的具体限制。现在可能已知或随后可能开发出的本说明的这些变化将在本领域技术人员能够确定的范围内，并且认为是在本说明和如下文主张的范围内。这些实施例说明了本文所述的某些化合物的体外和/或体内测试，并且显示了所述化合物通过提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含来治疗SMA的有用性。式(I)的化合物提高了SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中的包含，并且提高了由SMN2基因所产生的Smn蛋白的水平，并因此可以用于在对其有需要的人受试者中治疗SMA。
实施例1
SMN2小基因构件
小基因构件的制备
使用下列引物，通过PCR扩增对应于从外显子6的5′端(ATAATTCCCCC)(SEQ IDNO.14)开始并且在外显子8的核酸残基23(CAGCAC)(SEQ ID NO.15)处终止的SMN2基因区域的DNA：
正向引物：5’-CGCGGATCCATAATTCCCCCACCACCTC-3’(SEQ ID NO.16)，和
反向引物：5’-CGCGGATCCGTGCTGCTCTATGCCAGCA-3’(SEQ ID NO.17)。
设计每个引物的5′端，从而在外显子6的5′端(GGATCC)(SEQ ID NO.18)和外显子8的第23个核苷酸后的3′端添加BamHI限制酶识别位点。使用BamHI限制酶识别位点，将PCR片段克隆到原始pcDNA 3.1/Hygro载体的衍生物中，所述载体如美国专利公开US2005/0048549中所公开的进行修饰。
使用HindIII位点和包含5′DEG UTR的BamHI限制酶切位点将新的UTR加入到修饰的载体中：
5’-TAGCTTCTTACCCGTACTCCACCGTTGGCAGCACGATCGCACGTCCCACGTGAACCATTGGTAAACCCTG-3’(SEQ ID NO.19)与BamHI限制酶切位点上游的起始密码子一起克隆到修饰的pcDNA3.1/Hygro载体中，和；
3′DEG UTR：
5’-ATCGAAAGTACAGGACTAGCCTTCCTAGCAACCGCGGGCTGGGAGTCTGAGACATCACTCAAGATATATGCTCGGTAACGTATGCTCTAGCCATCTAACTATTCCCTATGTCTTATAGGG-3’(SEQ ID NO.20)使用NotI限制酶识别位点和XhoI限制酶识别位点，与NotI限制酶切位点紧邻的下游终止密码子一起克隆到修饰的pcDNA3.1/Hygro载体中。另外，使用BamHI和NotI限制酶切位点，将缺乏起始密码子的荧光虫荧光素酶基因克隆到载体中。
所得小基因以5′至3′的顺序包含：5′-DEG UTR，起始密码子，6个额外的核苷酸形成的BamHI限制酶切位点，外显子6的核酸残基，SMN2的内含子6的核酸残基，SMN2的外显子7的核酸残基，SMN2的内含子7的核酸残基，SMN2的外显子8的前23个核酸残基，额外6个核苷酸形成的BamHI限制酶切位点和缺少起始密码子的荧光虫荧光素酶基因。
通过定点突变将单个腺嘌呤残基插入到SMN2的外显子7的核苷酸48之后。该小基因构件被称为SMN2-A。
来源于含有外显子6至8和插入内含子的小基因的SMN2转录本概括地显示了它们的内源前mRNA的剪接(Lorson等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，1999，96(11)，6307)。产生了含有外显子6至8和插入内含子并在之后含有荧光素酶报告基因的SMN2-选择性剪接报告基因构件。该构件的显著特征是在荧光素酶基因中缺少起始密码子，通过在外显子7的核酸48之后插入核苷酸使(编码SMN蛋白的开放阅读框中)外显子7的终止密码子失活和在外显子6上游紧邻处添加起始密码子(ATG)。在外显子7的核酸残基48之后插入单个腺嘌呤(SMN2-A)。
设计SMN2小基因，从而使得如果在前mRNA剪接期间除去SMN2的外显子7，则当外显子7处于mRNA中并且荧光素酶报告基因不处于具有外显子6上游紧邻的ATG起始密码子的框中时，荧光素酶报告基因处于具有外显子6上游紧邻的ATG起始密码子的框中。另外，在不存在外显子7时，从外显子6上游紧邻的ATG起始密码子开始的开放阅读框含有SMN的外显子8的片段中的终止密码子。因此，在存在提高SMN2的外显子7在从SMN2基因转录的mRNA中包含的化合物的情况下，产生了更多含有外显子7的转录本和更多功能性报告基因。可以在图1中找到本说明的示意图。
图2a中提供了来自SMN2-A构件SEQ ID NO.21的小基因的DNA序列。图2b中显示了小基因SMN2-A子序列的图。
实施例2
培养细胞中SMN2小基因mRNA剪接RT-qPCR测定
在用所述小基因稳定转染并用测试化合物处理的HEK293H细胞系中，使用基于反转录-定量PCR(RT-qPCR)的测定来定量含有SMN2外显子7的全长SMN2小基因mRNA的水平。
材料
规程。将用如上所述的SMN2-A小基因构件稳定转染的HEK293H细胞(10000个细胞/孔)接种到96孔平底板中的200μL细胞培养基(DMEM加10％FBS，并加入200μg/mL潮霉素)中，并立即将所述板涡旋以确保细胞正确分散，从而形成甚至单细胞层。允许细胞贴壁至少4-6小时。将测试化合物在100％DMSO中以3.16倍连续稀释以产生7-点浓度曲线。将测试化合物溶液(1μL，在DMSO中200×)加入到每个含有细胞的孔中，并将板在细胞培养箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中温育24小时。对于每个测试化合物浓度，制备2个重复。然后，将细胞在Cells-To-Ct裂解缓冲液中裂解，并且将裂解液储存在-80℃。
使用表3中提供的下列引物和探针对全长SMN2-A小基因和GAPDH mRNA定量。SMN正向引物A(SEQ ID NO.1)杂交至外显子7中的核苷酸序列(核苷酸22至核苷酸40)，SMN反向引物A(SEQ ID NO.2)杂交至荧光虫荧光素酶编码序列中的核苷酸序列，SMN探针A(SEQ IDNO.3)杂交至外显子7中的核苷酸序列(核苷酸50至核苷酸54)和外显子8中的核苷酸序列(核苷酸1至核苷酸21)。这三种寡核苷酸的组合仅检测SMN1或SMN2小基因(RT-qPCR)并且将不会检测内源SMN1或SMN2基因。
表3
1PTC Therapeutics，Inc.设计的引物和探针；2可商购自Life Technologies Inc.(前身为Invitrogen)。
以0.4μM的最终浓度使用SMN正向和反向引物。以0.15μM的最终浓度使用SMN探针。以0.2μM的最终浓度使用GAPDH引物，并且以0.15μM的最终浓度使用探针。
通过合并7.5μL 2×RT-PCR缓冲液、0.4μL 25×RT-PCR酶混合物、7.5μL 20×GAPDH引物-探针混合物、4.0075μL水、2μL 10倍稀释的细胞裂解液、0.06μL 100mM SMN正向引物、0.06μL 100mM SMN反向引物和0.225μL 100mM SMN探针制备了SMN2-小基因GAPDH混合物(总体积15μL)。
在下列温度按照指定时间进行PCR：步骤1：48℃(15分钟)；步骤2：95℃(10分钟)；步骤3：95℃(15秒)；步骤4：60℃(1分钟)；然后重复步骤3和4，总计40次循环。
每个反应混合物含有SMN2-A小基因和GAPDH引物/探针组(多通道设计)，从而允许同时测量两个转录本的水平。
从SMN2小基因产生了两个SMN剪接产物。在本文中使用术语“SMN2小基因FL”表示对应于SMN2全长mRNA的含有外显子7的第一剪接产物。在本文中使用术语“SMN2小基因Δ7”表示缺少外显子7的第二剪接产物。
使用修改的ΔΔCt法(如Livak和Schmittgen，Methods，2001，25：402-8中所述)，根据实时PCR数据确定与用赋形剂对照处理的细胞相比，SMN2小基因FL mRNA的提高。根据单独对SMN2小基因FL和GAPDH mRNA的扩增曲线的斜率计算了扩增效率(E)。然后，将SMN2小基因FL和GAPDH mRNA的丰度计算为(1+E)-Ct，其中Ct是每个扩增子的阈值。将SMN2小基因FL的丰度归一化为GAPDH丰度。然后，将来自测试化合物处理的样品的归一化SMN2小基因FL丰度除以来自赋形剂处理的细胞的归一化SMN2小基因FL丰度以确定SMN2FL mRNA相对于赋形剂对照的水平。
结果。如图3所示，在低浓度时用化合物17(图3a)和化合物38(图3b)处理的细胞提高了SMN2小基因FL mRNA。相对于未处理的细胞，两种测试化合物充分恢复了外显子7的包含。
对于本文所公开的式(I)的化合物或其形式，表4提供了从根据生物实施例2的程序对每种测试化合物所产生的7-点浓度数据获得的SMN2全长mRNA产生的EC1.5x。将术语“全长SMN2mRNA产生的EC1.5x”定义为相对于赋形剂处理的细胞，对于将SMN2全长mRNA的量提高至1.5倍水平来说有效的测试化合物的浓度。用一个星号(*)表示全长SMN2mRNA产生的EC1.5x在＞3mM并且≤30mM之间，用两个星号(**)表示EC1.5x在＞1mM并且≤3mM之间，用三个星号(***)表示EC1.5x在＞0.3mM并且≤1mM之间，用四个星号(****)表示EC1.5x在＞0.1mM并且≤0.3mM之间，并且用五个星号(*****)表示EC1.5x≤0.1mM。
表4
实施例3
培养细胞中内源SMN2mRNA RT-qPCR剪接测定
在用测试化合物处理的含有SMN2基因的原代细胞和细胞系中，使用基于反转录-定量PCR(RT-qPCR)的测定来定量SMN2全长和Δ7mRNA的水平。
材料
规程。将GM03813SMA患者细胞(5000个细胞/孔)接种到96孔平底板中的200μL细胞培养基(DMEM加10％FBS)中，并立即将所述板涡旋以确保细胞正确分散，从而形成甚至单细胞层。允许细胞贴壁至少4-6小时。将测试化合物在100％DMSO中以3.16倍连续稀释以产生7-点浓度曲线。将测试化合物溶液(1μL，在DMSO中200×)加入到每个测试孔中，并且将1μLDMSO加入到每个对照孔中。将板在细胞培养箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中温育24小时。然后，将细胞在Cells-To-Ct裂解缓冲液中裂解，并且将裂解液储存在-80℃。
使用以下表5中的引物和探针鉴别了SMN2特异性剪接产物和GAPDH mRNA。SMN FL正向引物B(SEQ ID NO.7)杂交至外显子7中的核苷酸序列(核苷酸32至核苷酸54)和外显子8中的核苷酸序列(核苷酸1至核苷酸4)，SMNΔ7正向引物B(SEQ ID NO.8)杂交至外显子6中的核苷酸序列(核苷酸87至核苷酸111)和外显子8中的核苷酸序列(核苷酸1至核苷酸3)，SMN反向引物B(SEQ ID NO.9)杂交至外显子8中的核苷酸序列(核苷酸39至核苷酸62)，探针SMN探针B(SEQ ID NO.10)杂交至外显子8中的核苷酸序列(核苷酸7至核苷酸36)。这些引物和探针杂交至对人SMN1和SMN2mRNA通用的核苷酸序列。由于实施例3中使用的SMA患者细胞仅含有SMN2基因，因此RT-qPCR仅可以定量SMN2全长和Δ7mRNA。
表5
1PTC Therapeutics，Inc.设计的引物和探针；2可商购自Life Technologies Inc.(前身为Invitrogen)。
以0.4μM的最终浓度使用SMN正向和反向引物。以0.15μM的最终浓度使用SMN探针。以0.1μM的最终浓度使用GAPDH引物，并且以0.075μM使用探针。
通过合并5μL 2×RT-PCR缓冲液、0.4μL 25×RT-PCR酶混合物、0.25μL 20×GAPDH引物-探针混合物、1.755μL水、2.5μL细胞裂解液、0.04μL 100mM SMN FL或SMNΔ7正向引物、0.04μL 100mM SMN反向引物和0.015μL 100mM探针制备了SMN-GAPDH混合物(总体积10μL)。
在下列温度按照指定时间进行PCR：步骤1：48℃(15分钟)；步骤2：95℃(10分钟)；步骤3：95℃(15秒)；步骤4：60℃(1分钟)；然后重复步骤3和4，总计40次循环。
每个反应混合物含有SMN2FL和GAPDH或者SMN2Δ7和GAPDH引物/探针组(多通道设计)中的任一种，从而允许同时测量两种转录本的水平。
内源SMN2基因导致产生了两种替代性剪接mRNA。在本文中使用术语“SMN2FL”表示含有外显子7的全长SMN2mRNA。在本文中使用术语“SMN2Δ7”表示缺少外显子7的截短的mRNA。
使用修改的ΔΔCt法(如Livak和Schmittgen，Methods，2001，25：402-8所述)，根据实时PCR数据确定与用赋形剂对照处理的细胞相比，SMN2FL的提高和SMN2Δ7mRNA的减少。根据单独对SMN2FL，SMN2Δ7和GAPDH的扩增曲线的斜率计算了扩增效率(E)。然后，将SMN2FL，SMN2Δ7和GAPDH mRNA的丰度计算为(1+E)-Ct，其中Ct是每个扩增子的阈值。将SMN2FL mRNA和SMN2Δ7mRNA的丰度归一化为GAPDH mRNA丰度。然后，将来自测试化合物处理的样品的归一化SMN2FL和SMN2Δ7mRNA丰度分别除以来自赋形剂处理的细胞的归一化SMN2FL和SMN2Δ7mRNA的丰度以确定SMN2FL和SMN2Δ7mRNA相对于赋形剂对照的水平。
结果。如图4所示，与用赋形剂处理的那些相比，用提高浓度的化合物38处理的细胞逐步含有较多的SMN2FL mRNA和较少的SMN2Δ7mRNA，这表明了对SMN2选择性剪接的修正。
实施例4
培养细胞中内源SMN2mRNA终点半定量RT-PCR剪接测定
在用测试化合物处理的含有SMN2基因的原代细胞和细胞系中，使用终点反转录-PCR剪接测定使SMN2全长和Δ7mRNA显像并对它们的水平进行定量。
材料
规程。将GM03813SMA患者细胞(5000个细胞/孔)接种到96孔平底板中的200μL细胞培养基(DMEM加10％FBS)中，并立即将所述板涡旋以确保细胞正确分散，从而形成甚至单细胞层。允许细胞贴壁至少4-6小时。将测试化合物在100％DMSO中以3.16倍连续稀释以产生7-点浓度曲线。将测试化合物溶液(1μL，在DMSO中200×)加入到每个测试孔中，并且将1μLDMSO加入到每个对照孔中。将板在细胞培养箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中温育24小时。然后，将细胞在Cells-To-Ct裂解缓冲液中裂解，并且将裂解液储存在-80℃。
使用以下表6中的引物鉴别SMN FL和Δ7mRNA。这些引物杂交至对人SMN1和SMN2mRNA通用的外显子6中的核苷酸序列(SMN正向引物C，SEQ ID NO.11)(核苷酸43至核苷酸63)和外显子8中的核苷酸序列(SMN反向引物C，SEQ ID NO.12)(核苷酸51至核苷酸73)。由于实施例4中使用的SMA患者细胞仅含有SMN2基因，因此RT-PCR仅可以使SMN2全长和SMN2Δ7mRNA显象并定量。
表6
1PTC Therapeutics，Inc.设计了引物
要合成cDNA，将5μL裂解液，4μL 5×iScript反应混合物，1μL反转录酶和10μL水合并并且在25℃温育5分钟，然后在42℃温育30分钟，然后在85℃温育5分钟。将cDNA溶液储存在-20℃。
要进行终点PCR，在96孔半裙边PCR板中合并5μL cDNA，0.2μL 100μM正向引物，0.2μL 100μM反向引物和22.5μL聚合酶超级混合物。在下列温度按照指定时间进行PCR：步骤1：94℃(2分钟)，步骤2：94℃(30秒)，步骤3：55℃(30秒)，步骤4：68℃(1分钟)，然后重复步骤2至4，总计33次循环，然后保持在4℃。
在2％琼脂糖E-凝胶上电泳分离10μL的每种PCR样品14分钟，用双链DNA(dsDNA)染色剂(例如，溴化乙锭)染色并使用凝胶成像仪显像。
结果。如图5所示，用提高浓度的化合物17(图5a)和化合物38(图5b)处理的细胞逐步含有较多的SMN2FL mRNA和较少的SMN2Δ7mRNA，这表明了SMN2选择性剪接的修正。
实施例5
动物组织中SMN2mRNA RT-qPCR剪接测定
在来自用测试化合物处理的小鼠的组织中，使用基于反转录-定量PCR(RT-qPCR)的测定对全长和SMN2Δ7mRNA的水平进行定量。
材料
规程。通过口服饲喂再悬浮于0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)和0.1％吐温-80中的测试化合物10天，每天两次(BID)来处理C/C-等位基因SMA小鼠。收集组织样品并快速冷冻以用于RNA纯化。
使用不锈钢珠，将组织样品(20-40mg)在TissueLyser II中以20Hz在QIAzol裂解剂中匀浆2分钟。加入氯仿后，通过离心将匀浆分离至水相和有机相。RNA分配至上层，萃取水相并加入乙醇以提供适当的结合条件。然后，将样品应用于RNeasy Mini试剂盒的RNeasy离心柱，在此全部RNA结合至膜。在不含RNA酶的水中洗脱RNA，然后储存在-20℃，并且随后在7900HT热循环仪上使用TaqMan RT-qPCR分析。将总RNA稀释10倍，并且将2.5μL稀释的样品加入至TaqMan RT-qPCR混合物。
使用以下表7中的引物和探针鉴别SMN2剪接产物。SMN FL正向引物B(SEQ IDNO.7)杂交至外显子7和8中的核苷酸序列，SMNΔ7正向引物B(SEQ ID NO.8)杂交至外显子6和8中的核苷酸序列，SMN反向引物B(SEQ ID NO.9)杂交至外显子8中的核苷酸序列，探针SMN探针B(SEQ ID NO.10)杂交至外显子8中的核苷酸序列。这些引物和探针杂交至对人SMN1和SMN2mRNA通用的核苷酸序列。由于实施例5中使用的SMA患者细胞仅含有SMN2基因，因此RT-qPCR仅可以定量SMN2全长和Δ7mRNA。
表7
1PTC Therapeutics，Inc.设计的引物和探针
以0.4μM的最终浓度使用SMN正向和反向引物。以0.15μM的最终浓度使用SMN探针。通过合并5μL 2×RT-PCR缓冲液、0.4μL 25×RT-PCR酶混合物、0.5μL 20×GAPDH引物-探针混合物、1.505μL水、2.5μL RNA溶液、0.04μL 100μM正向引物、0.04μL 100μM反向引物和0.015μL 100μM SMN探针制备了SMN-GAPDH混合物(总体积10μL)。
在下列温度按照指定时间进行每个PCR循环：步骤1：48℃(15分钟)；步骤2：95℃(10分钟)；步骤3：95℃(15秒)；步骤4：60℃(1分钟)；然后重复步骤3和4，总计40次循环。
每个反应混合物含有SMN2FL和mGAPDH或者SMN2Δ7和mGAPDH引物/探针组中的任一种(多通道设计)，从而允许同时测量两个转录本的水平。
使用修改的ΔΔCt法(如Livak和Schmittgen，Methods，2001，25：402-8所述)，根据实时PCR数据确定与来自用赋形剂对照处理的动物的组织相比，SMN2FL的提高和SMN2Δ7mRNA的降低。根据单独对SMN2FL，SMN2Δ7和GAPDH的扩增曲线的斜率计算了扩增效率(E)。然后，将SMN2FL，SMN2Δ7和GAPDH的丰度计算为(1+E)-Ct，其中Ct是每个扩增子的阈值。将SMN2FL和SMN2Δ7的丰度归一化为GAPDH mRNA的丰度。然后，将来自测试化合物处理的样品的归一化SMN2FL和SMN2Δ7mRNA的丰度分别除以来自赋形剂处理的细胞的归一化SMN2FL和SMN2Δ7mRNA的丰度以确定SMN2FL和SMN2Δ7mRNA相对于赋形剂对照的水平。
实施例6
动物组织中内源SMN2mRNA终点半定量RT-PCR剪接测定
在来自用测试化合物处理的小鼠的组织中，使用终点反转录-PCR(RT-PCR)剪接测定定量全长和Δ7SMN2mRNA的水平。
材料
规程。通过口服饲喂0.5％HPMC和0.1％吐温-80中的测试化合物10天，每天两次来处理C/C-等位基因SMA小鼠。收集组织样品并快速冷冻以用于RNA纯化。
使用不锈钢珠，将组织样品(20hz-40mg)在TissueLyser II中以20Hz在QIAzol裂解剂中匀浆2分钟。加入氯仿后，通过离心将匀浆分离至水相和有机相。RNA分配至上层，萃取水相并加入乙醇以提供适当的结合条件。然后，将样品应用于RNeasy Mini试剂盒的RNeasy离心柱，在此全部RNA结合至膜。在不含RNA酶的水中洗脱RNA，然后储存在-20℃。
使用以下表8中的扩增引物鉴别SMN2剪接产物。这些引物杂交至对人SMN1和SMN2mRNA通用的外显子6中的核苷酸序列(SMN正向引物D，SEQ ID NO.13)(核苷酸22至核苷酸46)和外显子8中的核苷酸序列(SMN反向引物C，SEQ ID NO.12)。
表8
1PTC Therapeutics，Inc.设计了引物
要合成cDNA，合并1μL RNA溶液(25-50ng)、4μL 5×iScript反应混合物、1μL反转录酶和10μL水并在25℃温育5分钟，然后在42℃温育30分钟，然后在85℃温育5分钟。在-20℃储存cDNA溶液。
要进行终点PCR，将5μL cDNA、0.2μL 100μM正向引物、0.2μL 100μM反向引物和22.5μL聚合酶超级混合物在96孔半裙边PCR板中合并。在下列温度按照指定时间进行PCR：步骤1：94℃(2分钟)，步骤2：94℃(30秒)，步骤3：55℃(30秒)，步骤4：68℃(1分钟)，然后重复步骤2至4，总计33次循环，然后保持在4℃。
在2％琼脂糖E-凝胶上电泳分离10μL的每种PCR样品14分钟，用dsDNA染色剂(例如，溴化乙锭)染色并使用凝胶成像仪显像。
实施例7
培养细胞中Smn蛋白的测定
在用测试化合物处理的SMA患者成纤维细胞中，使用SMN HTRF(均相时间分辨荧光)测定定量Smn蛋白的水平。测定结果如表9所示。
材料
规程。将细胞融化并在DMEM-10％FBS中培养72小时。将细胞胰蛋白酶化，计数并在DMEM-10％FBS中再悬浮至浓度为25000个细胞/mL。将细胞悬液以5000个细胞/孔在96孔微量滴定板中铺板并温育3至5小时。为了提供对照信号，96孔板中的三个(3)孔不接受细胞，并因此用作空白对照孔。将测试化合物在100％DMSO中以3.16倍连续稀释以产生7-点浓度曲线。将1μL测试化合物溶液转移到含有细胞的孔中，并将细胞在细胞培养箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中温育48小时。对每个测试化合物浓度设置三个重复样品。48小时后，从孔中除去上清液，并且向孔中加入25μL含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液，并边振荡边在室温下温育1小时。加入25μL稀释剂，然后将35μL所得的裂解液转移到384孔板中，其中每个孔含有5μL抗体溶液(抗SMN d2和抗SMN kryptate在SMN复原缓冲液中1∶100稀释)。将板离心1分钟，使溶液沉降至孔底，然后在室温下温育过夜。在EnVision多标记酶标仪(Perkin-Elmer)上测量665nm和620nm处板的每个孔的荧光。
通过将665nm处的信号除以620nm处的信号，计算了对每个样品、空白和赋形剂对照孔的归一化荧光信号。对信号的归一化说明了由于裂解液的基质效应所造成的可能的荧光猝灭。通过从每个样品孔的归一化荧光中减去空白对照孔的归一化平均荧光，然后将该差值除以空白对照孔的归一化平均荧光并将所得值乘以100计算了每个样品孔的ΔF值(Smn蛋白丰度作为百分比值的测量)。每个样品孔的ΔF值表示测试化合物处理的样品的Smn蛋白丰度。将每个样品孔的ΔF值除以赋形剂对照孔的ΔF值以计算相对于赋形剂对照，Smn蛋白丰度的提高倍数。
结果。如图6所示，用化合物17(图6a)和化合物38(图6b)处理的1型SMA患者成纤维细胞显示Smn蛋白表达的剂量依赖性增加，如通过SMN HTRF测定所测量的。
对于本文所公开的式(I)的化合物或其形式，表9提供了从根据生物实施例7的程序对每种测试化合物所产生的7-点浓度数据中获得的Smn蛋白表达的EC1.5x。术语“Smn蛋白表达的EC1.5x”定义为与DMSO赋形剂对照所产生的量相比，对于在SMA患者成纤维细胞中产生1.5倍Smn蛋白的量有效的测试化合物的浓度。用一个星号(*)表示Smn蛋白表达的EC1.5x在＞3mM并且≤10mM之间，用两个星号(**)表示EC1.5x在＞1mM并且≤3mM之间，用三个星号(***)表示EC1.5x在＞0.3mM并且≤1mM之间，并且用四个星号(****)表示EC1.5x≤0.3mM。
表9
对于本文所公开的式(I)的化合物或其形式，表10提供了从根据生物实施例7的程序对每种测试化合物所产生的7-点浓度数据中获得的Smn蛋白的最大提高倍数(倍数)。用一个星号(*)表示最大提高倍数≤1.2，用两个星号(**)表示提高倍数在＞1.2并且≤1.35之间，用三个星号(***)表示提高倍数在＞1.35并且≤1.5之间，用四个星号(****)表示提高倍数在＞1.5并且≤1.65之间，并且用五个星号(*****)表示提高倍数＞1.65。
表10
实施例8
Gems计数(SmR依赖性核小点计数)测定
Smn蛋白的水平与一旦用荧光标记的抗Smn抗体染色所产生的核小点(也称为gems)的量直接相关(Liu和Dreyfuss，EMBO J.，1996，15：3555)。Gems是多蛋白复合物，它们的形成是通过Smn蛋白成核的并且gems计数测定用于评价细胞中Smn蛋白的水平。如本文所述，gems计数测定用于定量用测试化合物处理的SMA患者成纤维细胞中Smn蛋白的水平。
材料
规程：将细胞融化并在DMEM-10％FBS中温育72小时，然后胰蛋白酶化，计数并在DMEM-10％FBS中再悬浮至100000个细胞/毫升。将细胞悬液(2mL)在具有无菌盖玻片的6孔细胞培养板中铺板并温育3至5小时。将测试化合物在100％DMSO中以3.16倍连续稀释以产生7-点稀释曲线。将10μL测试化合物溶液加入到每个含有细胞的孔中并在细胞培养箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中温育48小时。对每个测试化合物浓度设置两个重复。将最终浓度为0.5％的含有细胞的DMSO用作对照。
从具有盖玻片的孔中吸出细胞培养基并用冷PBS轻轻清洗三次。通过在室温下在多聚甲醛中温育20分钟固定细胞。然后，用冷PBS清洗细胞两次，接着在室温下与0.05％Triton X-100在PBS中的溶液一起温育5分钟以使细胞透性化。用冷PBS清洗固定细胞三次后，用10％FBS将它们阻断1小时。加入60μL在封闭缓冲液中1∶1000稀释的一抗，并将混合物在室温下温育1小时。用PBS清洗细胞三次，并加入60μL在封闭缓冲液中1∶5000稀释的二抗，然后将混合物在室温下温育1小时。通过封固剂将盖玻片固定在载玻片上并使其干燥过夜。将指甲油应用于盖玻片的侧面并将载玻片避光保存。将具有63×平场复消色差透镜，NA＝1.4物镜的Zeiss Axovert 135用于免疫荧光检测和计数。每≥150个核对gems的数目计数，并使用DMSO和10nM硼替佐米作为对照计算％激活。对于每个测试化合物，在全部波长检验细胞以鉴别具有固有荧光的测试化合物。
结果。如图7所示，相对于用DMSO处理的细胞，用化合物38处理的1型SMA患者细胞逐步含有更多的gems。
实施例9
人运动神经元中Smn蛋白测定
使用Smn免疫荧光共聚焦显微镜定量用测试化合物处理的人运动神经元中的Smn蛋白水平。
规程。以不同浓度用测试化合物将来源于SMA iPS细胞的人运动神经元(Ebert等人，Nature，2009，457：2770；和Rubin等人，BMC Biology，2011，9：42)处理72小时。使用Smn免疫染色和共聚焦荧光显微术定量细胞核中Smn蛋白的水平，基本如Makhortova等人，Nature Chemical Biology，2011，7：544中所述。将化合物处理的样品中Smn蛋白的水平归一化为赋形剂处理的样品中的水平，并作为化合物浓度的函级作图。
实施例10
动物组织中的Smn蛋白测定
使用Smn HTRF蛋白质测定定量小鼠组织中Smn蛋白的水平。
材料
规程。称量Safe-Lock管中的组织样品并且基于每种类型组织的重量比体积比：脑(50mg/mL)、肌肉(50mg/mL)和脊髓(25mg/mL)，加入含有蛋白酶抑制剂混合物的RIPA缓冲液体积。
使用TissueLyzer通过珠磨使组织匀浆化。将5mm不锈钢珠加入样品并在30Hz在TissueLyzer中剧烈振荡5分钟。然后，在微量离心机中以14000×g将样品离心20分钟，并将匀浆转移到PCR板中。在RIPA缓冲液中，对于HTRF，将匀浆稀释至约1mg/mL，并且对于使用BCA蛋白质测定的总蛋白测量，稀释至约0.5mg/mL。对于SMN HTRF测定，将35mL组织匀浆转移到含有5mL抗体溶液(抗-SMNd2和抗-SMN Kryptate中的每一个均在复原缓冲液中1∶100稀释)的384孔板中。为了提供对照信号，板中三个(3)孔仅含有RIPA裂解缓冲液，并因此用作空白对照孔。将板离心1分钟，使溶液沉降至孔底，然后在室温下温育过夜。在EnVision多标记酶标仪(Perkin-E1mer)上测量665nm和620nm处板的每个孔的荧光。根据生产商的规程，使用BCA测定测量组织匀浆中的总蛋白质。
通过将665nm处的信号除以620nm处的信号，计算了对每个样品、空白和赋形剂对照孔的归一化荧光信号。对信号的归一化说明了由于组织匀浆的基质效应所造成的可能的荧光猝灭。通过从每个组织样品孔的归一化荧光中减去空白对照孔的归一化平均荧光，然后将该差值除以空白对照孔的归一化平均荧光并将所得值乘以100计算了每个组织样品孔的ΔF值(Smn蛋白丰度作为百分比值的测量)。将每个组织样品孔的ΔF值除以该组织样品的总蛋白量(使用BCA测定确定)。将相对于赋形剂对照的每种组织样品的Smn蛋白丰度的变化计算为在存在测试化合物的情况下组织样品的ΔF值和赋形剂对照信号的平均AF值除以赋形剂对照信号的平均ΔF值的差异百分比。
实施例11
C/C-等位基因SMA成年小鼠组织中的Smn蛋白测定
如实施例10所述，制备了在C/C-等位基因SMA成年小鼠中用于定量Smn蛋白的组织样品。所述测定评价了用测试化合物处理C/C-等位基因SMA小鼠10天是否提高了由SMN2基因产生的Smn蛋白水平和杂合小鼠Smn1-SMN2基因。
材料
规程。以10mg/kg，向C/C-等位基因SMA小鼠口服剂量施用测试化合物或赋形剂10天(在具有0.1％吐温-80的0.5％HPMC中)，每天两次。向年龄相配的杂合小鼠剂量施用用作对照的赋形剂。根据实施例10，收集组织用于蛋白水平分析。
实施例12
新生Δ7SMA小鼠组织中的Smn蛋白
如实施例10所述，制备了在新生Δ7SMA小鼠中用于定量Smn蛋白的组织样品。所述测定评价了用测试化合物处理新生Δ7SMA小鼠7天是否提高了由SMN2基因产生的Smn蛋白水平。。
材料
规程。在出生后(PND)第3天至第9天，向SMA D7纯合敲除小鼠腹膜内(IP)剂量施用测试化合物或赋形剂(100％DMSO)，每天一次(QD)。根据实施例10，收集组织用于蛋白水平分析。
实施例13
新生Δ7SMA小鼠的体重
将新生D7SMA小鼠的体重变化用于确定测试化合物处理是否改善体重。
材料
规程。从PND 3开始，向SMA D7纯合敲除小鼠IP剂量施用测试化合物或赋形剂(100％DMSO)，QD，直至剂量方案改变为以比用于IP的剂量高3.16倍的剂量在具有0.1％吐温-80的0.5％HPMC中的口服剂量，BID。每天记录用测试化合物或赋形剂处理的SMA D7小鼠和年龄相配的杂合小鼠的体重。
实施例14
新生Δ7SMA小鼠中的翻正反射
将新生D7SMA小鼠的翻正反射功能性变化用于确定测试化合物处理是否改善翻正反射。
材料
规程。从PND 3开始，向SMA D7纯合敲除小鼠IP剂量施用测试化合物或赋形剂(100％DMSO)，QD，直至剂量方案改变为以比用于IP的剂量高3.16倍的剂量在具有0.1％吐温-80的0.5％HPMC中的口服剂量，BID。将翻正反射时间测量为小鼠在平躺后，用脚翻转所花的时间。对每只小鼠测量5次翻正反射(每次尝试允许最长30秒的时间)，其中每次测量之间为5分钟。在PND 10、14和18测量了用测试化合物或赋形剂处理的SMA D7纯合敲除小鼠和年龄相配的杂合小鼠的翻正反射时间并作图。
实施例15
新生Δ7SMA小鼠的存活
将随时间存活的小鼠数目的变化用于确定用测试化合物处理是否改善存活。
材料
规程。从PND 3开始，向SMA D7纯合敲除小鼠IP剂量施用测试化合物或赋形剂(100％DMSO)，QD，直至剂量方案改变为以比用于IP的剂量高3.16倍的剂量在具有0.1％吐温-80的0.5％HPMC中的口服剂量，BID并随后改变为以比用于IP的剂量高6.32倍的剂量在具有0.1％吐温-80的0.5％HPMC中的口服剂量，QD。每天记录每组中存活小鼠的数目，并作为小鼠总数的百分比作图。
实施例16
培养细胞中人SMN1小基因mRNA终点半定量RT-PCR剪接测定
将RT-PCR测定用于显象并定量用测试化合物处理的原代细胞和表达人SMN1小基因构件的细胞系中人SMN1小基因全长和Δ7mRNA的水平。
材料
SMN1小基因构件
小基因构件的制备
使用生物实施例1中所述的SMN2小基因构件的制备程序，通过使用定点突变将SMN2-A小基因构件的外显子7的第六核苷酸(胸腺嘧啶残基)替换为胞嘧啶产生了小基因的SMN1形式。因此，与SMN2-A小基因构件类似，SMN1小基因构件具有在外显子7的核酸残基48后插入的单一腺嘌呤残基。SMN1小基因构件被称为SMN1-A。
规程。在每孔具有15ng SMN1-A小基因报告质粒的96孔板中使用FuGENE-6试剂转染HEK293H细胞(10000个细胞/孔/199μL)。转染后，将细胞温育24小时。将测试化合物在100％DMSO中以3.16倍连续稀释以产生7-点浓度曲线。将测试化合物溶液(1μL，200x在DMSO中)加入到每个测试孔中。将1μL DMSO加入到每个对照孔中。将板在细胞培养箱(37℃，5％CO2，100％相对湿度)中温育7小时。然后，将细胞在Cells-To-Ct裂解缓冲液中裂解，并将裂解液在-80℃储存。
从SMN1小基因产生了两个SMN剪接mRNA。术语“SMN1小基因FL”是指含有外显子7的第一剪接产物，其对应于全长SMN1mRNA。术语“SMN1小基因Δ7”是指缺少外显子7的第二产物。
使用表11中的引物扩增了SMN1小基因FL和SMN1小基因Δ7mRNA。SMN正向引物C(SEQ ID NO.11)杂交至外显子6(核苷酸43至核苷酸63)中的核苷酸序列，SMN反向引物A(SEQ ID NO.2)杂交至荧光虫荧光素酶的编码序列中的核苷酸序列。这两种寡核苷酸的组合仅检测SMN1或SMN2小基因(RT-qPCR)并且将不会检测内源SMN1或SMN2基因。由于仅用人SMN1小基因转染实施例16中使用的HEK293H细胞，因此RT-PCR仅可以显象并定量SMN1小基因FL和SMN1小基因Δ7mRNA。
表11
1PTC Therapeutics，Inc.设计了引物
要合成cDNA，将5μL裂解液，4μL 5×iScript反应混合物，1μL反转录酶和10μL水合并并且在25℃温育5分钟，然后在42℃温育30分钟，然后在85℃温育5分钟。将cDNA溶液储存在-20℃。
要进行终点PCR，在96孔半裙边PCR板中合并5μL cDNA，0.2μL 100μM正向引物，0.2μL 100μM反向引物和22.5μL聚合酶超级混合物。在下列温度按照指定时间进行PCR：步骤1：94℃(2分钟)，步骤2：94℃(30秒)，步骤3：55℃(30秒)，步骤4：68℃(1分钟)，然后重复步骤2至4，总计33次循环，然后保持在4℃。
在2％琼脂糖E-凝胶上电泳分离10μL的每种PCR样品14分钟，用dsDNA染色剂(例如，溴化乙锭)染色并使用凝胶成像仪显像。
结果。如图8所示，用提高浓度的化合物17(图8a)和化合物38(图8b)处理的细胞逐步含有较多的SMN1小基因FL mRNA和较少的SMN1小基因Δ7mRNA，这表明了SMN1选择性剪接的修正。
不考虑本文中引用的文档是否具体并单独指明作为参考并入，在本文中提及的所有文档出于任何和全部目的，以好像在本文中充分说明了每个单独的参考文献的相同程度将其作为参考并入到本发明申请中。
尽管以上详细描述了某些实施方式，但是本领域技术人员将明确理解在不背离本发明教导内容的情况下，在实施方式中做出多种修改是可能的。所有这些修改旨在涵盖在如本文所述的权利要求内。

Claims (5)

1.式(Ia1)的化合物：
或其盐、同位素异数体，其中：
R1是哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-乙基哌嗪-1-基、4-(丙-2-基)哌嗪-1-基、4-甲基-1，4-二氮杂环庚-1-基、1，4-二氮杂环庚-1-基、(3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基、3，3-二甲基哌嗪-1-基、(3R)-3-甲基哌嗪-1-基、或(3S)-3-甲基哌嗪-1-基；
R2是吡啶-3-基、吡啶-2-基、咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、3，4-二甲氧基苯基、7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基、1，3-苯并噻唑基-2-基、3-氟-4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-(丙-2-基氧)苯基、4-甲氧基-3-甲基苯基、6-甲氧基吡啶-3-基、3-氯-4-甲氧基苯基、4-(三氟甲氧基)苯基、3-氟苯基、3-(三氟甲基)苯基、4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯基、5-氟吡啶-3-基、4-甲基-1，3-噻唑-2-基、3，5-二氟苯基、6-甲基咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基、2-氟-4，5-二甲氧基苯基或4-甲氧基苯基；
Ra是氢；
Rb是氢；且
Rc是氢。
2.根据权利要求1所述的化合物的盐，其中，所述盐的形式为盐酸盐、氢溴酸盐、乙酸盐或三氟乙酸盐。
3.如下的的化合物，其中，所述化合物选自：
6-(哌嗪-1-基)-2-(吡啶-3-基)-4H-色烯-4-酮
6-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(吡啶-3-基)-4H-色烯-4-酮
6-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-(吡啶-3-基)-4H-色烯-4-酮
6-[4-(丙-2-基)哌嗪-1-基]-2-(吡啶-3-基)-4H-色烯-4-酮
6-(4-甲基-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-2-(吡啶-3-基)-4H-色烯-4-酮
6-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-2-(吡啶-3-基)-4H-色烯-4-酮
6-(哌嗪-1-基)-2-(吡啶-2-基)-4H-色烯-4-酮
2-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
6-[(3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-(吡啶-3-基)-4H-色烯-4-酮
6-(3，3-二甲基哌嗪-1-基)-2-(吡啶-3-基)-4H-色烯-4-酮
6-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-(吡啶-3-基)-4H-色烯-4-酮
6-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(吡啶-2-基)-4H-色烯-4-酮
6-[(3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-(吡啶-2-基)-4H-色烯-4-酮
6-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-2-(吡啶-2-基)-4H-色烯-4-酮
6-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-(吡啶-2-基)-4H-色烯-4-酮
2-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-6-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
6-[(3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-4H-色烯-4-酮
6-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-2-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-4H-色烯-4-酮
2-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-6-(4-甲基-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(3，4-二甲氧基苯基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(3，4-二甲氧基苯基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(3，4-二甲氧基苯基)-6-(4-乙基哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(3，4-二甲氧基苯基)-6-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(3，4-二甲氧基苯基)-6-[(3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
6-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-2-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮
2-(3，4-二甲氧基苯基)-6-(4-甲基-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(3，4-二甲氧基苯基)-6-(3，3-二甲基哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-6-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
6-[(3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-(7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基)-4H-色烯-4-酮
2-(3，4-二甲氧基苯基)-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(1，3-苯并噻唑-2-基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(1，3-苯并噻唑-2-基)-6-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(1，3-苯并噻唑-2-基)-6-[(3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(1，3-苯并噻唑-2-基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(1，3-苯并噻唑-2-基)-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
6-[(3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮
2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-6-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(4-乙氧基苯基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(4-乙氧基苯基)-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
6-[(3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-(4-乙氧基苯基)-4H-色烯-4-酮
2-(4-乙氧基苯基)-6-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(2-氟-4，5-二甲氧基苯基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(2-氟-4，5-二甲氧基苯基)-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
6-[(3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-(2-氟-4，5-二甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮
2-(2-氟-4，5-二甲氧基苯基)-6-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
6-(哌嗪-1-基)-2-[4-(丙-2-基氧基)苯基]-4H-色烯-4-酮
6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-[4-(丙-2-基氧基)苯基]-4H-色烯-4-酮
2-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
6-[(3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基]-2-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-4H-色烯-4-酮
2-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-6-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-6-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-6-[(3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(3-氯-4-甲氧基苯基)-6-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(4-甲氧基苯基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(4-甲氧基苯基)-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
6-(哌嗪-1-基)-2-[4-(三氟甲氧基)苯基]-4H-色烯-4-酮
6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-[4-(三氟甲氧基)苯基]-4H-色烯-4-酮
2-(3-氟苯基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
6-(哌嗪-1-基)-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4H-色烯-4-酮
2-[4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯基]-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-[4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基]-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-[4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯基]-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-[4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基]-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(6-甲基咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(6-甲基咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(5-氟吡啶-3-基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(5-氟吡啶-3-基)-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
2-(4-甲基-1，3-噻唑-2-基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮
2-(3-氟苯基)-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4H-色烯-4-酮
2-(3，5-二氟苯基)-6-(哌嗪-1-基)-4H-色烯-4-酮，和
2-(3，5-二氟苯基)-6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-4H-色烯-4-酮
或其盐或同位素异数体。
4.一种药物组合物，包含有效量的权利要求1或3的化合物和可药用载体、赋形剂或稀释剂。
5.权利要求4所述的药物组合物在制备用于治疗脊髓性肌萎缩(SMA)的药物中的用途。
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