BR112014016287B1 - Composto e composição farmacêutica - Google Patents

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Abstract

COMPOSTO E SEU USO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E SEU USO, MÉTODO PARA AUMENTAR A INCLUSÃO DE EXON 7 DE SMN2, MÉTODO PARA AUMENTAR A QUANTIDADE DE PROTÉINA. Estão aqui proporcionados os compostos, composições dos mesmo e usos destes para o tratamento de atrofia muscular espinal. Em uma concretização específica, são aqui proporcionados compostos de uma forma que pode ser usada para modular a inclusão de exon 7 de SMN2 no mRNA que é transcrito a partir do gene SMN2. Em outra concretização específica, são aqui proporcionados compostos de uma forma que pode ser usada para modular a inclusão de exon 7 de SMN1 no mRNA que é transcrito a partir do gene SMN1. Em ainda outra concretização, são aqui proporcionados compostos de uma forma que pode ser usada para inclusão de exon 7 de SMN1 e SMN2 no mRNA que é transcrito a partir de genes SMN1 e SMN2, respectivamente.

Description

[0001] A tecnologia descrita aqui não foi feita com o apoio do Governo dos EUA.
DECLARAÇÃO SOBRE ACORDO DE PESQUISA CONJUNTA
[0002] O assunto em divulgação foi desenvolvido e a invenção reivindicada foi feita por, ou em nome de, uma ou mais partes de um acordo de pesquisa conjunta que estava em vigor antes ou na data efetiva de apresentação da invenção reivindicada;
[0003] A invenção reivindicada foi feita como resultado de atividades realizadas no âmbito do acordo de pesquisa conjunta; e
[0004] O pedido de patente para a invenção reivindicada divulga ou melhora a divulgação dos nomes das partes no acordo de pesquisa conjunta.
INTRODUÇÃO
[0005] São aqui proporcionados Compostos, composições destes e usos destes para o tratamento de Atrofia Muscular Espinhal.
JUSTIFICATIVA
[0006] A atrofia muscular espinhal (AME), em seu sentido mais amplo, descreve uma coleção de doenças do sistema nervoso central (SNC) herdadas e adquiridas caracterizadas pela perda progressiva dos neurônios motores da medula espinhal e do tronco cerebral causando fraqueza muscular e atrofia muscular. A forma mais comum de AME é causada por mutações no gene Neurônio Motor Sobrevivente (NMS) e se manifesta através de uma ampla faixa de gravidade que afeta crianças através de adultos (Crawford and Pardo, Neurobiol. Dis., 1996, 3:97).
[0007] AME infantil é a forma mais grave desta doença neurodegenerativa. Os sintomas incluem fraqueza muscular, tônus muscular pobre, choro fraco, fraqueza ou uma tendência a cair, dificuldade de sucção ou engolir, acúmulo de secreções nos pulmões ou garganta, dificuldade de alimentação e aumento da susceptibilidade a infecções do trato respiratório. As pernas tendem a ser mais fracas do que os braços e as metas de desenvolvimento, tais como levantar a cabeça ou sentar-se, não podem ser alcançadas. Em geral, quanto mais cedo os sintomas aparecem, menor o tempo de vida. Como as células do neurônio motor se deterioram, os sintomas aparecem logo em seguida. As formas graves da doença são fatais e todas as formas não têm cura conhecida. O curso da AME está diretamente relacionada com a taxa de deterioração celular do neurônio motor e da gravidade resultante da fraqueza. Crianças com uma forma grave da AME frequentemente sucumbem à doença respiratória devido à fraqueza dos músculos que suportam a respiração. Crianças com formas mais leves de AME vivem muito mais tempo, embora seja necessário um amplo apoio médico, especialmente para aqueles na extremidade mais grave do espectro. O espectro clínico de distúrbios AME foi dividido nos cinco seguintes grupos.
[0008] (a) AME Tipo 0 (AME no útero) é a forma mais grave da doença e começa antes do nascimento. Geralmente, o primeiro sintoma de AME Tipo 0 é o movimento reduzido do feto que pode primeiro ser observado entre 30 e 36 semanas de gravidez. Após o nascimento, os recém-nascidos têm pouco movimento e dificuldades de engolir e respirar.
[0009] (b) AME Tipo 1 (AME infantil ou doença de Werdnig- Hoffmann) apresenta os primeiros sintomas entre 0 e 6 meses: Este tipo de AME também é muito grave. Os pacientes nunca atingem a capacidade de se sentar e a morte ocorre geralmente nos primeiros 2 anos sem suporte respiratório.
[0010] (c) AME Tipo 2 (AME Intermediário) tem uma idade de início em 7 a 18 meses. Pacientes alcançam a capacidade de se sentar sem apoio, mas nunca ficam de pé ou andam sem ajuda. O prognóstico neste grupo é em grande parte dependente do grau de comprometimento respiratório.
[0011] (d) AME Tipo 3 (AME juvenil ou doença Kugelberg- Welander) é geralmente diagnosticado após 18 meses. Indivíduos com AME Tipo 3 são capazes de caminhar de forma independente, em algum momento durante o curso da doença, mas muitas vezes se tornam cadeirantes durante a juventude ou na idade adulta.
[0012] (e) AME Tipo 4 (AME início Adulto). Fraqueza geralmente começa no final da adolescência na língua, mãos ou pés, em seguida, avança para outras áreas do corpo. O curso de início da AME na idade adulta é muito mais lento e tem pouco ou nenhum impacto na expectativa de vida.
[0013] O gene NMS foi mapeado por análise de ligação em uma região complexa no cromossoma 5q. Nos seres humanos, esta região contém aproximadamente 500 mil pares de bases (kb) duplicados invertidos, resultando em duas cópias quase idênticas do gene NMS. AME é causada por uma mutação de inativação ou eliminação da cópia telomérica do gene (NMS1) em ambos os cromossomas, resultando na perda da função do gene NMS1. No entanto, todos os pacientes mantêm a cópia centromérica do gene (NMS2) e o número de cópias do gene NMS2 em pacientes AME geralmente correlaciona-se inversamente com a gravidade da doença; ou seja, os pacientes com AME menos grave têm mais cópias de NMS2. No entanto, NMS2 é incapaz de compensar completamente a perda da função NMS1 devido à união alternativa do éxon 7 causada por uma mutação traducionalmente silenciosa C para T no éxon 7. Como resultado, a maioria dos transcritos produzidos a partir da falta de NMS2 o éxon 7 (NMS2 Δ7) e codificar uma proteína NMS truncada que tem uma função prejudicada e é rapidamente degradada.
[0014] NMS é pensada para desempenhar um papel no processamento de RNA e do metabolismo, que tem uma função bem caracterizada de mediar a montagem de uma classe específica de complexos de RNA-proteína denominada snRNPs. NMS pode ter outras funções nos neurônios motores, no entanto o seu papel na prevenção da degeneração seletiva dos neurônios motores não está bem estabelecida.
[0015] Na maioria dos casos, a AME é diagnosticada com base nos sintomas clínicos e pela presença de pelo menos de uma cópia do gene NMS1 teste. No entanto, aproximadamente 5% dos casos de AME são causados por uma mutação nos genes mais do que a inativação de NMS1, alguns conhecidos e outros ainda não definidos. Em alguns casos, quando o gene NMS1 teste não é viável ou não mostra qualquer anormalidade, outros testes podem ser indicados, como uma eletromiografia (EMG) ou biópsia muscular.
[0016] O atendimento médico para pacientes com AME no momento é limitada a terapia de suporte incluindo cuidados respiratório, nutricionais e de reabilitação; não existe qualquer droga conhecida para tratar a causa da doença. O tratamento para AME consiste de prevenção e gestão dos efeitos secundários da perda de unidade motora crônica. A maior questão de gestão na AME Tipo 1 é a prevenção e tratamento precoce de problemas pulmonares, que são a causa de morte na maioria dos casos. Enquanto algumas crianças atingidas com AME se tornam adultos, aqueles com AME tipo 1 têm uma expectativa de menos de dois anos de vida.
[0017] Vários modelos de camundongos com AME têm sido desenvolvidos. Em particular, o modelo NMSΔ7 (Le et al. Hum. Mol. Genet. 2005, 14:845) transporta o gene NMS2 e várias cópias do cDNA NMS2Δ7 e recapitula muitas das características fenotípicas de AME Tipo 1. O modelo NMSΔ7 pode ser utilizado para ambos estudos de expressão NMS2, bem como a avaliação da função motora e sobrevivência. O modelo de camundongo C/C- alelo (cepa Jackson Laboratory #008714) fornece um modelo menos grave da doença AME, com camundongos tendo níveis reduzidos de ambos NMS2 FL mRNA e proteína NMS. O fenótipo C/C-alelo do camundongo tem o gene NMS2 e um gene mNMS1-NMS2 híbrido que sofre união alternativa, mas não tem a fraqueza muscular evidente. O modelo de camundongo C/C-alelo é usado para estudos de expressão de NMS2.
[0018] Como resultado de uma melhor compreensão de uma base genética para AME, várias estratégias de tratamento têm sido exploradas, mas nenhuma ainda demonstrou sucesso clínico.
[0019] Substituição do gene NMS1, usando vetores virais de entrega e substituição de células, usando células-tronco NMS1+/+ diferenciadas, têm demonstrado eficácia em modelos animais da AME. Mais pesquisas são necessárias para determinar segurança e a resposta imune e para lidar com a exigência para o início do tratamento na fase neonatal antes de estas abordagens possam ser aplicados aos seres humanos.
[0020] Correção da união alternativa de NMS2 em cultura de células também tem sido conseguida usando ácidos nucleicos sintéticos como agentes terapêuticos: (i) oligonucleotídeos anti-sentido que têm como alvo elementos de sequência em NMS2 pré-mRNA e desloca o resultado da reação de união para a geração de comprimento total NMS2 mRNA (Passini et al., Sci. Transl. Med., 2011, 3:72ra18 e Hua et al., Nature, 2011, 478:123) e (ii) moléculas de RNA de trans-união que fornecem um seqüência RNA totalmente funcional que substitui o fragmento mutante durante a união e gera um mRNA de comprimento total NMS1 (Coady and Lorson, J Neurosci., 2010, 30:126).
[0021] Outras abordagens em exploração incluem a procura de drogas que aumentam os níveis de NMS, melhoram a função NMS residual ou compensam a perda de NMS. Os aminoglicosídeos têm mostrado aumentar a expressão de NMS estabilizada produzido a partir de mRNA por NMS2 Δ7 por promoção da translação através da leitura do códon de parada aberrante, mas tem uma fraca penetração do sistema nervoso central e são tóxicos após a administração repetida. Os agentes quimioterapêuticos, tais como aclarubicina, têm mostrado aumentar a NMS em cultura de células; no entanto, o perfil de toxicidade destes fármacos proíbe o uso a longo prazo em pacientes com AME. Alguns medicamentos sob investigação clínica para o tratamento de AME incluem ativadores de transcrição, tais como inibidores de histona-desacetilase ("HDAC") (por exemplo, butiratos, ácido valpróico e hidroxiuréia) e estabilizantes de mRNA (inibidor de remoção de mRNA RG3039 de Repligen), destinados a aumentar a quantidade de RNA total transcrita partir do gene NMS2. No entanto, a utilização de inibidores de HDAC ou estabilizadores de mRNA não tratam a causa subjacente da AME e pode resultar num aumento global na transcrição e expressão do gene com potenciais problemas de segurança nos seres humanos.
[0022] Em uma abordagem alternativa, os agentes neuroprotetores, como olesoxime, tem sido escolhidos para a investigação. Tais estratégias não são destinadas a produzir NMS funcional para o tratamento da AME, mas em vez disso estão sendo exploradas para proteger os neurônios motores com deficiência de NMS da neurodegeneração.
[0023] Um sistema concebido para identificar Compostos que aumentam a inclusão do éxon 7 de NMS em RNA transcrita partir do gene NMS2 e certos Compostos de benzoxazol e benzoisoxazol identificados deste modo foram descritos no Pedido Internacional PCT/US2009/003238 depositado 27 de maio de 2009 (publicado como Número de Publicação Internacional WO2009/151546 e Número de Publicação Estados Unidos US2011/0086833). Um sistema destinado a identificar os Compostos que produzem uma proteína NMS estabilizada de NMS2 Δ7 mRNA e certos Compostos de isoindolinona identificados deste modo foram descritos no Pedido Internacional PCT/US2009/004625 depositado 13 de agosto de 2009 (publicada como Publicação Internacional Número WO2010/019236 e Número de Publicação Estados Unidos US2011/0172284). Cada um dos documentos anteriores é aqui incorporado na sua totalidade e para todos os efeitos.
[0024] Todos os outros documentos referidos neste documento são incorporados por referência no presente pedido como se totalmente aqui estabelecidos.
[0025] Apesar dos avanços na compreensão duma base genética e fisiopatologia da AME, ainda há uma necessidade de identificar Compostos que alteram o curso da atrofia muscular espinhal, uma das doenças neurológicas mais devastadoras infância.
RESUMO
[0026] Em um aspecto, aqui proporcionados estão compostos de Fórmula (I):
Figure img0001
[0027] ou uma forma sua, em que: W1, W2, Ra e Rb são como definidos aqui. Numa forma de realização, aqui proporcionada está uma composição farmacêutica compreendendo um Composto de Fórmula (I) ou uma forma sua e um veículo farmacêuticamente aceitável, excipiente ou diluente. Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um Composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou de uma composição farmacêutica para o tratamento da atrofia muscular espinal (AME).
[0028] AME é causada por deleção ou mutação do gene NMS1, resultando na degeneração seletiva dos neurônios motores deficientes de NMS. Embora os sujeitos humanos retem várias cópias do gene NMS2, a pequena quantidade de proteína NMS funcional expressa a partir de NMS2 não compensa inteiramente a perda de NMS que fora expressa a partir do gene NMS1. Os Compostos, composições dos mesmos e usos destes aqui descritos baseiam-se, em parte, na descoberta de requerentes que um Composto de Fórmula (I) aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir de um minigene NMS2. O minigene reproduz a reação de união alternativa do éxon 7 de NMS2, o que resulta na perda do éxon 7 na maioria dos NMS2 transcritos. Assim, os Compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua podem ser utilizados para modular a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2. Os requerentes também descobriram que um Composto de Fórmula (I) aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA, que é transcrita partir de um minigene NMS1. Assim, os Compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua podem ser utilizados para modular a inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1.
[0029] Numa forma de realização específica, aqui proporcionados estão Compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua, que podem ser usados para modular a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2. Numa outra forma de realização específica, aqui proporcionados estão Compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua que podem ser utilizados para modular a inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1. Em ainda outra forma de realização, estão aqui proporcionados Compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua, que podem ser usados para modular a inclusão do éxon 7 de NMS1 e NMS2 em mRNA que é transcrita partir dos genes NMS1 e NMS2, respectivamente.
[0030] Em outro aspecto, está aqui proporcionada a utilização de um Composto de Fórmula (I) ou uma forma sua para o tratamento de AME. Numa forma de realização específica, está aqui proporcionado um método para o tratamento de AME num sujeito humano com necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de um Composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. O Composto de Fórmula (I) ou uma forma sua é preferencialmente administrado uma composição farmacêutica a um sujeito humano. Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado o uso de um Composto de Fórmula (I) para o tratamento da AME, em que o Composto aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2. Sem ser limitado pela teoria, Compostos de Fórmula (I) aumentam a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2 e aumentam os níveis das proteínas NMS produzidas a partir do gene NMS2 e, portanto, podem ser usados para tratar a AME num sujeito humano com necessidade disto.
[0031] Em outro aspecto, aqui proporcionados estão iniciadores e/ou ensaios descritos abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS, tais como a SEQ. 1, 7, 8, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 2, 9 ou 12 e/ou ensaios de NMS como um SEQ ID NO. 3 ou 10) e a utilização desses iniciadores e/ou ensaios. Numa forma de realização específica, é aqui proporcionada uma sequência isolada de nucleotídeos compreendendo SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ou 13. Em outra forma de realização específica, é aqui proporcionada uma sequência isolada de nucleotídeos que consiste essencialmente da SEQ ID NO: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ou 13. Em outra forma de realização específica, é aqui proporcionada uma sequência isolada de nucleotídeos que consiste em SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ou 13.
[0032] Em certas formas de realização, a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou gene NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 pode ser utilizada como um biomarcador para a AME, tal como aqui descrito. Em outras formas de realização, a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 pode ser utilizada como um biomarcador para o tratamento de um paciente com um Composto, tal como aqui descrito. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente AME.
[0033] Em certas formas de realização, a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, bem como a quantidade do mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 podem ser utilizadas como biomarcadores para o tratamento de um paciente com um Composto, tal como aqui divulgado. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente AME.
[0034] De acordo com estas formas de realização, um iniciador(s) NMS e/ou um ensaio de NMS descritos abaixo podem ser utilizados em ensaios, tais como PCR (por exemplo, qPCR), amplificação por círculo rolante e RT-PCR (por exemplo, terminal RT-PCR e/ou RT-qPCR) para avaliar e/ou quantificar a quantidade de mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou gene NMS2 e inclui ou não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2.
[0035] Numa forma de realização específica, um iniciador e/ou ensaio descrita abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS, tais como a SEQ. 1, 7, 8, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 2, 9 ou 12 e/ou ensaios de NMS, tais como o ID SEQ. 3 ou 10) é utilizado em um ensaio, tal como RT-PCR, RT-qPCR, terminal de RT-PCR, PCR, qPCR, amplificação por círculo rolante, Northern blot ou Southern blot (por exemplo, um ensaio tal como descrito abaixo em Exemplos Biológicos), para determinar se um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) ou uma forma sua) aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir de um gene NMS2.
[0036] Numa forma de realização específica, um iniciador e/ou ensaio descrita abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS, tais como a SEQ. 1, 7, 8, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 2, 9 ou 12 e/ou ensaios de NMS, tais como o ID SEQ. 3 ou 10) é utilizado em um ensaio, tal como RT-PCR, RT-qPCR, terminal de RT-PCR, PCR, qPCR, amplificação por círculo rolante, Northern blot ou Southern blot (por exemplo, um ensaio tal como descrito abaixo em Exemplos Biológicos), para determinar se um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) ou uma forma sua) aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA que é transcrita partir de um gene NMS1.
[0037] Numa forma de realização específica, um iniciador e/ou ensaio descrita abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS, tais como a SEQ. 1, 7, 8, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 2, 9 ou 12 e/ou ensaios de NMS, tais como o ID SEQ. 3 ou 10) é utilizado em um ensaio, tal como RT-PCR, RT-qPCR, terminal de RT-PCR, PCR, qPCR, amplificação por círculo rolante, Northern blot ou Southern blot (por exemplo, um ensaio tal como descrito abaixo em Exemplos Biológicos), para determinar se um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) ou uma forma sua) aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA, que é transcrita partir de um NMS1 e/ou gene NMS2.
[0038] Numa outra forma de realização, um iniciador e/ou ensaio descrita abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS, tais como SEQ ID NO. 7, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 9 ou 12 e/ou ensaios de NMS, tais como o ID SEQ. 3 ou 10) é utilizado em um ensaio, tal como RT-PCR, RT-qPCR, terminal de RT-PCR, PCR, qPCR, amplificação por círculo rolante, Northern blot ou Southern blot (por exemplo, um ensaio tal como descrito abaixo em Exemplos Biológicos), para monitorar a quantidade de mRNA que é transcrita partir do gene NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS2 numa amostra do paciente. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente AME.
[0039] Numa outra forma de realização, um iniciador e/ou ensaio descrito abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS, tais como SEQ ID NO. 7, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 9 ou 12 e/ou ensaios de NMS, tais como o ID SEQ. 3 ou 10) é utilizado em um ensaio, tal como RT-PCR, RT-qPCR, terminal de RT-PCR, PCR, qPCR, amplificação por círculo rolante, Northern blot ou Southern blot (por exemplo, um ensaio tal como descrito abaixo em Exemplos Biológicos), para monitorar a quantidade de mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e inclui o éxon 7 de NMS1 numa amostra do paciente. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente AME.
[0040] Numa outra forma de realização, um iniciador e/ou ensaio descrita abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS, tais como SEQ ID NO. 7, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 9 ou 12 e/ou ensaios de NMS, tais como o ID SEQ. 3 ou 10) é utilizado em um ensaio, tal como RT-PCR, RT-qPCR, terminal de RT-PCR, PCR, qPCR, amplificação por círculo rolante, Northern blot ou Southern blot (por exemplo, um ensaio tal como descrito abaixo em Exemplos Biológicos), para monitorar a quantidade de mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 numa amostra do paciente. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente AME.
[0041] Numa outra forma de realização, um iniciador e/ou ensaio descrita abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS, tais como SEQ ID NO. 7, 8, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 9 ou 12 e/ou ensaios de NMS como um ID SEQ. 3 ou 10) é utilizado em um ensaio, tal como RT-PCR, RT-qPCR, terminal de RT-PCR, PCR, qPCR, amplificação por círculo rolante, mancha de Northern ou Southern blot (por exemplo, um ensaio tal como descrito abaixo em Exemplos Biológicos), para monitorar a resposta de um paciente de um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) ou uma forma sua). Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente AME.
[0042] Numa outra forma de realização, é aqui proporcionado um método para determinar se um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) aqui divulgado) aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2, compreendendo (a) o contato do mRNA que é transcrito partir de um minigene NMS2 aqui descrito ou no Pedido Internacional PCT/US2009/004625 depositado 13 de agosto de 2009 (publicado como Número de Publicação Internacional WO2010/019236) ou Número de Publicação Estados Unidos US2011/0172284, na presença de um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) aqui divulgado) com um iniciador (s) aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 1 e/ou 2), juntamente com os componentes aplicáveis, por exemplo, RT-PCR, RT-qPCR, PCR, RT-PCR endpoint, qPCR ou amplificação por círculo rolante; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 da NMS2, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS2 na presença do Composto em relação à quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS2 na ausência do Composto indica que o Composto aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS2 na presença do Composto em relação à quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS2 na ausência do Composto indica que o Composto não aumenta a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2.
[0043] Numa outra forma de realização, é aqui proporcionado um método para determinar se um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) aqui divulgado) aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1, compreendendo (a) o contato do mRNA que é transcrita partir de um minigene NMS1 descrito no Pedido Internacional PCT/US2009/004625, apresentado em 13 de agosto de 2009 (publicado como Publicação Internacional Número WO2010/019236) ou Número de Publicação Estados Unidos US2011/0172284, na presença de um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) aqui descritos) com um iniciador (s) aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 1 e/ou 2), juntamente com os componentes aplicáveis, por exemplo, RT-PCR, RT-qPCR, PCR, RT-PCR endpoint, qPCR ou amplificação por círculo rolante; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 da NMS1, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS1 na presença do Composto em relação à quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS1 na ausência do Composto, indica que o Composto aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS1; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS1 na presença do Composto em relação à quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS1 na ausência do Composto, indica que o Composto não aumenta a inclusão de éxon 7 de NMS1 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1.
[0044] Numa outra forma de realização, aqui proporcionado é um método para determinar se um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) aqui divulgada) aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2, compreendendo (a) o contato do mRNA que é transcrita partir de um minigene NMS2 aqui ou no Pedido Internacional PCT/US2009/004625 descrito, depositado 13 de agosto de 2009 (publicado como Publicação Internacional Número WO2010/019236) ou Número de Publicação Estados Unidos US2011/0172284, na presença de um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) aqui divulgado) com um ensaio aqui (por exemplo, SEQ ID NO. 3 ou 10), juntamente com os componentes descritos aplicáveis, por exemplo, RT-PCR, RT-qPCR, RT-terminal PCR, PCR, qPCR, amplificação por círculo rolante e, conforme aplicável, Northern blot ou Southern blot; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 da NMS2, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS2 na presença do Composto em relação à quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS2 na ausência do Composto, indica que o Composto aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS2 na presença do Composto em relação à quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS2 na ausência do Composto indica que o Composto não aumenta a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2.
[0045] Numa outra forma de realização, é aqui proporcionado um método para determinar se um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) aqui divulgado) aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1, compreendendo (a) o contato do mRNA que é transcrita partir de um minigene NMS1 descrito no Pedido Internacional PCT/US2009/004625, apresentado em 13 de agosto de 2009 (publicado como Publicação Internacional Número WO2010/019236) ou Número de Publicação Estados Unidos US2011/0172284, na presença de um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) aqui descrito) com um ensaio aqui descrita (por exemplo, SEQ ID NO. 3 ou 10), juntamente com os componentes aplicáveis, por exemplo, RT-PCR, RT-qPCR, terminal de RT-PCR, PCR, qPCR, amplificação por círculo rolante e, conforme aplicável, Northern blot ou Southern blot; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 da NMS1, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS1 na presença de do Composto em relação à quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS1 na ausência do Composto, indica que o Composto aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS1 na presença do Composto em relação à quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS1 na ausência do Composto, indica que o Composto não aumenta a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2.
[0046] Numa outra forma de realização, é aqui proporcionado um método para determinar se um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) aqui divulgada) aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2, compreendendo (a) o contato do mRNA que é transcrita partir de um minigene NMS2 aqui descrito ou no Pedido Internacional PCT/US2009/004625, depositado 13 de agosto de 2009 (publicado como Publicação Internacional Número WO2010/019236) ou Número de Publicação Estados Unidos US2011/0172284, na presença de um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) aqui divulgado) com um iniciador (es) (por exemplo, SEQ ID NO. 1 ou 2) e/ou um ensaio descrita aqui (por exemplo, SEQ ID NO. 3 ou 10) juntamente com os componentes aplicáveis, por exemplo, RT- PCR, RT-qPCR, endpoint RT-PCR, PCR, qPCR, amplificação por círculo rolante e, conforme aplicável, Northern blot ou Southern blot; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 da NMS2, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS2 na presença do Composto em relação à quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS2 na ausência do Composto indica que o Composto aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS2 na presença do Composto em relação à quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS2 na ausência do Composto, indica que o Composto não aumenta a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2.
[0047] Numa outra forma de realização, é aqui proporcionado um método para determinar se um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) aqui divulgado) aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1, compreendendo (a) o contato do mRNA que é transcrita partir de um minigene NMS1 descrito no Pedido Internacional PCT/US2009/004625, apresentado em 13 de agosto de 2009 (publicada como Publicação Internacional Número WO2010/019236) ou Número de Publicação Estados Unidos US2011/0172284, na presença de um Composto (por exemplo, um Composto de Fórmula (I) aqui divulgado) com um iniciador (es) (por exemplo, SEQ ID NO. 1 ou 2) e/ou um ensaio aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 3 ou 10) juntamente com componentes aplicáveis, por exemplo, RT-PCR, RT-qPCR, endpoint RT-PCR, PCR, qPCR, amplificação por círculo rolante e, conforme aplicável, Northern blot ou Southern blot; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 da NMS1, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS1 na presença de do Composto em relação à quantidade de mRNA, que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS1 na ausência do Composto indica que o Composto aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS1; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS1 na presença do Composto em relação à quantidade de mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS1 na ausência do Composto indica que o Composto não aumenta a inclusão de éxon 7 de NMS1 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1.
[0048] Em outro aspecto, aqui proporcionados estão kits compreendendo um iniciador e/ou ensaio descritos abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS, tais como a SEQ. 1, 7, 8, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 2, 9 ou 12 e/ou ensaios de NMS como ID SEQ. 3 ou 10) e sua utilização.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0049] Figura 1, referenciado no Exemplo Biológico 1, é uma representação esquemática da construção do minigene NMS2, que apresenta os dois mRNA transcritos alternativamente unidos. O nucleotídeo adicionado ao éxon 7 do NMS2 após resíduo nucleico 48 é indicado pela letra "A", que poderia ser adenina, citosina ou timina. A presença de um ou mais códon(s) de parada gerado no éxon 8 é indicado por "Stop".
[0050] Figura 2, referenciado no Exemplo Biológico 1,proporciona a sequência de DNA da construção do minigene NMS2 SEQ. 21 (Figura 2a). Como mostrado na Figura 2b, as seguintes subsequências podem ser encontradas: 1-70: 5'UTR (graus); 71-79: éxon 6: códon de iniciação e o local BamHI (atgggatcc); 80-190: éxon 6; 191 a 5959: íntron 6; 5960-6014: éxon 7 com uma inserção (posição 6008); 6015-6458: íntron 7; 6459-6481: parte do éxon 8; 6482-8146: sítio BamHI (sequência na extremidade 5'), sequência de partida de codificação da luciferase com códon 2 (sem códon de iniciação), o local NotI (sequência na extremidade 3'), o códon de parada TAA; e 8147-8266: 3'UTR (graus).
[0051] Figura 3, referenciada no Exemplo Biológico 2,mostra a correção da união alternativa do minigene NMS2 em células tratadas com concentrações crescentes de Composto 35 (Figura 3a) e o Composto 626 (Figura 3b) ao longo de um período de 24 horas. Os níveis de comprimento total mRNA minigene NMS2 foram quantificados através de PCR transcrição- quantitativa inverso (RT-qPCR). O nível de comprimento total mRNA minigene NMS2 em amostras tratadas com Composto foi normalizado para as amostras tratadas com o veículo e representada em função da concentração de Composto.
[0052] Figura 4, referenciada no Exemplo Biológico 3,mostra a correção da união alternativa do NMS2 nos pacientes AME Tipo 1 tratados com fibroblastos de concentrações crescentes de Composto 35 (Figura 4a) e o Composto 626 (Figura 4b) ao longo de um período de 24 horas. Os níveis de comprimento total e mRNAs Δ7 NMS2 foram quantificados utilizando RT-qPCR. Os níveis de comprimento total e mRNA Δ7 NMS2 em amostras tratadas com Composto foram normalizados para aquelas amostras tratadas com o veículo e representados em função da concentração de Composto.
[0053] Figura 5, referenciado no Exemplo Biológico 4,mostra a correção da união alternativa do NMS2 nos pacientes AME Tipo 1 tratados com fibroblastos de concentrações crescentes de Composto 35 (Figura 5a) e do Composto 626 (Figura 5b) ao longo de um período de 24 horas. O comprimento total e mRNAs Δ7 NMS2 foram amplificados usando ponto de transcrição-final inverso de PCR (RT-PCR) e os produtos de PCR foram separados por eletroforese em gel de agarose. As bandas superior e inferior correspondem ao comprimento total e mRNAs Δ7 NMS2 respectivamente. A intensidade de cada banda é proporcional à quantidade de RNA presente na amostra.
[0054] Figura 6, referenciada no Exemplo Biológico 5,mostra a correção da união alternativa do NMS2 (tanto no gene NMS2 e o gene NMS1-NMS2 do camundongo híbrido) em cérebro e tecido muscular de modelo de camundongo AME C/C-alelo tratado por 10 dias, duas vezes por dia, com 10 mg/kg de Composto 35 (Figura 6a) e o Composto 626 (Figura 6b). Os níveis de comprimento total e mRNAs Δ7 NMS2 foram quantificados utilizando RT-qPCR, o comprimento total combinado e quantidade mRNA Δ7 NMS2 foram definidos como 1 e quantidades fracionárias de comprimento total e Δ7 NMS2 foram calculadas.
[0055] Figura 7, referenciada no Exemplo Biológico 6, mostra a correção da união alternativa do NMS2 (tanto no gene NMS2 e o gene NMS1-NMS2 de camundongo híbrido) em cérebro e tecido muscular de modelo de camundongo AME C/C-alelo tratado por 10 dias, duas vezes por dia, com 10 mg/kg de Composto 35 (Figura 7a) e Composto 626 (Figura 7b). O comprimento total e mRNAs Δ7 NMS2 foram amplificados utilizando RT-PCR. Os produtos de PCR foram separados por eletroforese em gel de agarose. As bandas superior e inferior correspondem ao comprimento total e mRNAs Δ7 NMS2 respectivamente. A intensidade de cada banda é proporcional à quantidade de RNA presente na amostra. O controle de carregamento GAPDH é mostrado para o Composto 626.
[0056] Figura 8, referenciada no Exemplo Biológico 7, mostra um aumento dependente da dose na expressão da proteína NMS em células de fibroblastos humanos de AME Tipo 1 tratados ao longo de um período de 48 horas com o Composto 35 (figura 8a) e o Composto 626 (Figura 8b).
[0057] Figura 9, referenciada no Exemplo Biológico 8, mostra um aumento nas contagens de marcação nuclear (gemas) em fibroblastos de pacientes AME Tipo 1 tratados com Composto 35 (Figura 9a) e o Composto 626 (Figura 9b) ao longo de um período de 48 horas. Marcações foram contadas utilizando microscopia de fluorescência. O número de marcas em amostras tratadas com composto foi normalizado para amostras tratadas com o veículo e representada em função da concentração de composto.
[0058] Figura 10, referenciada no Exemplo Biológico 9, mostra um aumento na expressão da proteína NMS (círculos pretos) em neurônios motores gerados a partir de células iPS geradas a partir de fibroblastos um tipo de pacientes AME Tipo 1 tratados com o Composto 35 (Figura 10a) e o Composto 626 (Figura 10b) ao longo de um período de 72 horas. O nível de proteína NMS foi quantificado usando microscopia de imunocoloração e fluorescência confocal NMS. O nível de proteína NMS em amostras tratadas com composto foi normalizado para amostras tratadas com o veículo e representada em função da concentração de composto.
[0059] Figura 11, referenciada no Exemplo Biológico 11, mostra um aumento da expressão da proteína NMS em tecidos (cérebro: Figura 11a; medula espinhal: Figura 11b e Muscular:Figura 11C) de modelo de camundongo AME C/C-alelo tratado por 10 dias duas vezes por dia, com 10 mg/kg de Composto 35 e Composto 626.
[0060] Figura 12, referenciada no Exemplo Biológico 12, mostra um aumento dose-dependente na expressão proteína NMS em tecidos (cérebro: Figura 12a e Figura 12b; Medula Espinhal: Figura 12c e Figura 12d e Muscular: Figura 12e e Figura 12f) do modelo de camundongo neonatal Δ7 AME tratado durante 7 dias, uma vez por dia, com doses indicadas do Composto 35 e do Composto 626, respectivamente.
[0061] Figura 13, referenciada no Exemplo Biológico 13,mostra as diferenças no peso corporal de modelo de camundongo neonatal Δ7 AME tratado até ao dia 66 pós-natal com o Composto 35 (Figura 13a) e até ao dia 76 pós-natal com o Composto 626 (Figura 13b).
[0062] Figura 14, referenciada no Exemplo Biológico 14,mostra programas de melhoria dos reflexos do modelo de camundongo neonatal Δ7 AME tratado com o Composto 35.
[0063] Figura 15, referenciada no Exemplo Biológico 15, mostra melhora na sobrevivência em um modelo de camundongo neonatal Δ7 AME tratado com o Composto 35 (Figura 15a) e Composto 626 (Figura 15b).
[0064] Figura 16, referenciada no Exemplo Biológico 15,mostra um aumento da expressão da proteína NMS em tecidos (Cérebro: Figura 16a e Muscular: Figura 16b), em um modelo de camundongo Δ7 AME neonatal tratado até o dia 47-55 pós-natal (P47-55) com Composto 35 e até o dia 68 pós-natal (P68) com Composto 626 em relação ao veículo tratado e ratos heterozigotos pareados por idade.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0065] São aqui fornecidos compostos de Fórmula (I):
Figure img0002
[0066] ou uma forma sua, em que:
[0067] w1 e w2 são C-R1 ou C-R2; em que, um entre w1 e w2 é C-R1 e o outro é C-R2, desde que , quando w1 é C-R1, então w2 é C-R2; ou, quando w1 é C-R2, então w2 é C-R1;
[0068] R1 é C1-8alquil, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, amino-C1-8alquil-amino, (amino-C1-8alquil)2-amino, (amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (C1-8alquil-amino-C1-8alquil)2-amino, (C1-8alquil-amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, [(C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil](C1-8alquil)amino, amino-C1-8alcoxi, C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alcoxi, amino-C2-8alquenil, C1-8alquil-amino-C2-8alquenil, (C1-8alquil)2-amino-C2-8alquenil, amino-C2-8alquinil, C1-8alquil-amino-C2-8alquinil, (C1-8alquil)2-amino-C2-8alquinil, halo-C1-8alquil-amino, (halo-C1-8alquil)2-amino, (halo-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, hidroxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alcoxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alcoxi, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil)2-amino, (hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amin o, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil-amin o, [(hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil](C1-8alquil)a mino, [(hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil](C1 -8alquil)amino, heterociclil, heterociclil-C1-8alquil, heterociclil-C1-8alcoxi, heterociclil-amino, (heterociclil)(C1-8alquil)amino, heterociclil-amino-C1-8alquil, heterociclil-C1-8alquil-amino, (heterociclil-C1-8alquil)2-amino, (heterociclil-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, heterociclil-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (heterociclil-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (heterociclil-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil , heterociclil-oxi, heterociclil-carbonil, heterociclil-carbonil-oxi, aril-C1-8alquil-amino, (aril-C1-8alquil)2-amino, (aril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, aril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (aril-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (aril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, heteroaril, heteroaril-C1-8alquil, heteroaril-C1-8alcoxi, heteroaril-amino, heteroaril-C1-8alquil-amino, (heteroaril-C1-8alquil)2-amino, (heteroaril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, heteroaril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (heteroaril-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil ou (heteroaril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil;
[0069] em que, cada caso de heterociclil e heteroaril é opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes R3 e um substituinte R4 opcional adicional; e,
[0070] em que, alternativamente, cada caso de heterociclil e heteroaril é opcionalmente substituído com um,dois, três ou quatro substituintes R3;
[0071] R2 é aril, amino-aril, amino-aril-carbonil, heterociclil, heteroaril ou amino-heteroaril;
[0072] em que, cada caso de aril, heterociclil e heteroaril é opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes R6 e um substituinte R7 opcional adicional;
[0073] Ra é, em cada caso, independentemente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio ou C1-8alquil;
[0074] Rb é hidrogênio, halogênio, C1-8alquil ou C1-8alcoxi;
[0075] R3 é, em cada caso, independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidroxi, oxo, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, C1-8alquil-carbonil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, C1-8alcoxi-C1-8alquil, C1-8alcoxi-carbonil, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino, amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, amino-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-carbonil-amino, C1-8alcoxi-carbonil-amino, hidroxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alcoxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino ou (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino;
[0076] R4 é C3-14cicloalquil, C3-14cicloalquil-C1-8alquil, C3-14cicloalquil-amino, aril-C1-8alquil, aril-C1-8alcoxi-carbonil, aril-sulfoniloxi-C1-8alquil, heterociclil ou heterociclil-C1-8alquil; em que, cada caso de C3-14cicloalquil, aril e heterociclil é opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes R5;
[0077] R5 é, em cada caso, independentemente selecionando entre halogênio, hidroxi, ciano, nitro, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino ou C1-8alquil-tio;
[0078] R6 é, em cada caso, independentemente selecionando entre halogênio, hidroxi, ciano, nitro, C1-8alquil, C2-8alquenil, halo-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino ou C1-8alquil-tio; e,
[0079] R7 é C3-14cicloalquil, C3-14cicloalquil-oxi, aril, heterociclil ou heteroaril.
FORMAS DE REALIZAÇÃO
[0080] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é C1-8alquil, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, amino-C1-8alquil-amino, (amino-C1-8alquil)2-amino, (amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (C1-8alquil-amino-C1-8alquil)2-amino, (C1-8alquil-amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, [(C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil](C1-8alquil)amino, amino-C1-8alcoxi, C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alcoxi, amino-C2-8alquenil, C1-8alquil-amino-C2-8alquenil, (C1-8alquil)2-amino-C2-8alquenil, amino-C2-8alquinil, C1-8alquil-amino-C2-8alquinil, (C1-8alquil)2-amino-C2-8alquinil, halo-C1-8alquil-amino, (halo-C1-8alquil)2-amino, (halo-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, hidroxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alcoxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alcoxi, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil)2-amino, (hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil-amino, [(hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil](C1-8alquil)amino, [(hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil](C1-8alquil)amin o, heterociclil, heterociclil-C1-8alquil, heterociclil-C1-8alcoxi, heterociclil-amino, (heterociclil)(C1-8alquil)amino, heterociclil-amino-C1-8alquil, heterociclil-C1-8alquil-amino, (heterociclil-C1-8alquil)2-amino, (heterociclil-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, heterociclil-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (heterociclil-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (heterociclil-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, heterociclil-oxi, heterociclil-carbonil, heterociclil-carbonil-oxi, aril-C1-8alquil-amino, (aril-C1-8alquil)2-amino, (aril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, aril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (aril-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (aril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, heteroaril, heteroaril-C1-8alquil, heteroaril-C1-8alcoxi, heteroaril-amino, heteroaril-C1-8alquil-amino, (heteroaril-C1-8alquil)2-amino, (heteroaril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, heteroaril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (heteroaril-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil ou (heteroaril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil; em que, cada ocorrência de heterociclil e heteroaril é opcionalmente substituído.
[0081] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, amino-C1-8alquil-amino, (amino-C1-8alquil)2-amino, (amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (C1-8alquil-amino-C1-8alquil)2-amino, (C1-8alquil-amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, [(C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil](C1-8alquil)amino, amino-C1-8alcoxi, C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alcoxi, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alcoxi, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil)2-amino, (hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil-amino, [(hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil](C1-8alquil)amino, [(hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil](C1-8alquil)amin o, heterociclil, heterociclil-C1-8alquil, heterociclil-C1-8alcoxi, heterociclil-amino, (heterociclil)(C1-8alquil)amino, heterociclil-amino-C1-8alquil, heterociclil-C1-8alquil-amino, (heterociclil-C1-8alquil)2-amino, (heterociclil-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, heterociclil-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (heterociclil-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (heterociclil-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, heterociclil-oxi, heterociclil-carbonil, heterociclil-carbonil-oxi, aril-C1-8alquil-amino, (aril-C1-8alquil)2-amino, (aril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, aril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (aril-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (aril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, heteroaril, heteroaril-C1-8alquil, heteroaril-C1-8alcoxi, heteroaril-amino, heteroaril-C1-8alquil-amino, (heteroaril-C1-8alquil)2-amino, (heteroaril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, heteroaril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (heteroaril-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil ou (heteroaril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil; em que, cada ocorrência de heterociclil e heteroaril é opcionalmente substituído.
[0082] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil selecionado a partir de azetidinil, tetrahidrofuranil, pirrolidinil, piperidinil, piperazinil, 1,4-diazepanil, 1,2,5,6-tetrahidropiridinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, hexahidropirrol [3,4-b]pirrol-(1H)-il, (3aS,6aS)-hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-(1H)-il, (3aR,6aR)-hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-(1H)-il, hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-(2H)-il, (3aS,6aS)-hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-(2H)-il, hexahidropirrol[3,4-c]pirrol-(1H)-il, (3aR,6aS)-hexahidropirrol[3,4-c]pirrol-(1H)-il, octahidro-5H-pirrol[3,2-c]piridinil, octahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridinil, (4aR,7aR)-octahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridinil, (4aS,7aS)-octahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridinil, hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-(1H)-il, (7R,8aS)-hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-(1H)-il, (8aS)-hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-(1H)-il, (8aR)-hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-(1H)-il, (8aS)-octahidropirrol[1,2-a]pirazin-(1H)-il, (8aR)-octahidropirrol[1,2-a]pirazin-(1H)-il, hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-(2H)-ona, octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazinil, 3-azabiciclo[3.1.0]hexil, (1R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexil, 8-azabiciclo[3.2.1]octil, (1R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octil, 8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-enil, (1R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-enil, 9-azabiciclo[3.3.1]nonil, (1R,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonil, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptil, (1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptil, 2,5-diazabiciclo[2.2.2]octil, 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octil, (1R,5S)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octil, 1,4-diazabiciclo[3.2.2]nonil, azaspiro[3.3]heptil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptil, 2,7-diazaspiro[3.5]nonil, 5,8-diazaspiro[3.5]nonil, 2,7-diazaspiro[4.4]nonil ou 6,9-diazaspiro[4.5]decil; em que, cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0083] Em outra forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil selecionado a partir de azetidin-1-il, tetrahidrofuran-3-il, pirrolidin-1-il, piperidin-1-il, piperidin-4-il, piperazin-1-il, 1,4-diazepan-1-il, 1,2,5,6-tetrahidropiridin-3-il, 1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il, hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-1(2H)-il, (3aS,6aS)-hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-1(2H)-il, (3aS,6aS)-hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-5(1H)-il, (3aR,6aR)-hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-5(1H)-il, hexahidropirrol[3,4-c]pirrol-2(1H)-il, (3aR,6aS)-hexahidropirrol[3,4-c]pirrol-2(1H)-il, octahidro-5H- pirrol[3,2-c]piridin-5-il, octahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridin-6-il, (4aR,7aR)-octahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridin-6-il, (4aS,7aS)-octahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridin-6-il, hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-2(1H)-il, hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-6(2H)-ona, (7R,8aS)-hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-2(1H)-il, (8aS)-hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-2(1H)-il, (8aR)-hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-2(1H)-il, (8aS)-octahidropirrol[1,2-a]pirazin-2(1H)-il, (8aR)-octahidropirrol[1,2-a]pirazin-2(1H)-il, octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazin-2-il, 3-azabiciclo[3.1.0]hex-3-il, 8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il, (1R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il, 8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-3-il, (1R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-3-il, 9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il, (1R,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]hept-2-il, (1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]hept-2-il, 2,5-diazabiciclo[2.2.2]oct-2-il, 3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-3-il, (1R,5S)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]oct-3-il, 1,4-diazabiciclo[3.2.2]non-4-il, azaspiro[3.3]hept-2-il, 2,6- diazaspiro[3.3]hept-2-il, 2,7-diazaspiro[3.5]non-7-il, 5,8-diazaspiro[3.5]non-8-il, 2,7-diazaspiro[4.4]non-2-il ou 6,9-diazaspiro[4.5]dec-9-il; em que, cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0084] Em outra forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil selecionado a partir de (3aS,6aS)-1-metilhexahidropirrol[3,4-b]pirrol-5(1H)-il, (3aS,6aS)-5-metilhexahidropirrol[3,4-b]pirrol-1(2H)-il, (3aR,6aR)-1-metilhexahidropirrol[3,4-b]pirrol-5(1H)-il, (3aR,6aS)-5-metilhexahidropirrol[3,4-c]pirrol-2(1H)-il, (3aR,6aS)-5-(2-hidroxietil)hexahidropirrol[3,4-c]pirrol-2(1H)- il, (3aR,6aS)-5-(propan-2-il)hexahidropirrol[3,4-c]pirrol-2(1H)-il , (3aR,6aS)-5-etilhexahidropirrol[3,4-c]pirrol-2(1H)-il, (4aR,7aR)-1-metiloctahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridin-6-il, (4aR,7aR)-1-etiloctahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridin-6-il, (4aR,7aR)-1-(2-hidroxietil)octahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridin-6 -il, (4aS,7aS)-1-metiloctahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridin-6-il, (4aS,7aS)-1-(2-hidroxietil)octahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridin-6 -il, (7R,8aS)-7-hidroxihexahidropirrol[1,2-a]pirazin-2(1H)-il, (8aS)-8a-metiloctahidropirrol[1,2-a]pirazin-2(1H)-il, (8aR)-8a-metiloctahidropirrol[1,2-a]pirazin-2(1H)-il, (1R,5S,6s)-6-(dimetilamino)-3-azabiciclo[3.1.0]hex-3-il, (1R,5S)-8-metil-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il, 9-metil-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il, (3-exo)-9-metil-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il, (1R,5S)-9-metil-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il, (1S,4S)-5-metil-2,5-diazabiciclo[2.2.1]hept-2-il ou (1S,4S)-5-etil-2,5-diazabiciclo[2.2.1]hept-2-il.
[0085] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-C1-8alquil, em que heterociclil é selecionado a partir de morfolinil, piperidinil, piperazinil, imidazolil ou pirrolidinil; e, em que, cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0086] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-C1-8alquil selecionado a partir de morfolin-4-il-metil, morfolin-4-il-etil, morfolin-4-il-propil, piperidin-1-il-metil, piperazin-1-il-metil, piperazin-1-il-etil, piperazin-1-il-propil, piperazin-1-il-butil, imidazol-1-il-metil, imidazol-1-il-etil, imidazol-1-il-propil, imidazol-1-il-butil, pirrolidin-1-il-metil, pirrolidin-1-il-etil, pirrolidin-1-il-propil ou pirrolidin-1-il-butil; em que, cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0087] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-C1-8alcoxi, em que heterociclil é selecionado a partir de pirrolidinil, piperidinil ou morfolinil; e, em que, cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0088] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-C1-8alcoxi selecionado a partir de pirrolidin-2-il-metoxi, pirrolidin-2-il-etoxi, pirrolidin-1-il-metoxi, pirrolidin-1-il-etoxi, piperidin-1-il-metoxi, piperidin-1-il-etoxi, morfolin-4-il-metoxi ou morfolin-4-il-etoxi; em que, cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0089] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R1 é heterociclil-amino, em que heterociclil selecionado a partir de azetidinil, pirrolidinil, piperidinil,9-azabiciclo[3.3.1]nonil ou (1R,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonil; e, em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0090] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-amino selecionado a partir de azetidin-3-il-amino, pirrolidin-3-il-amino, piperidin-4-il-amino, 9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il-amino, (1R,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il-amino, 9-metil-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il-amino, (3-exo)-9-metil-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il-amino ou (1R,5S)-9-metil-9-azabiciclo[3.3.1]non-3-il-amino; em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0091] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R1 é (heterociclil)(C1-8alquil)amino, em que heterociclil selecionado a partir de pirrolidinil ou piperidinil; e, em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0092] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R1 é (heterociclil)(C1-8alquil)amino selecionado a partir de (pirrolidin-3-il)(metil)amino ou (piperidin-4-il)(metil)amino; e, em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0093] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R1 é heterociclil-amino-C1-8alquil, em que heterociclil é selecionado a partir de tetrahidrofuranil; e, em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0094] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-amino-C1-8alquil, selecionado a partir de 3-(tetrahidrofuran-3-il-amino)propil; em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0095] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, em que heterociclil é selecionado a partir de tetrahidrofuranil, tienil ou piridinil; e, em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0096] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, selecionado a partir de 3-[(tetrahidrofuran-2-ilmetil)amino]propil, 3- [(tiofenil-3-ilmetil)amino]propil, 3-[(piridin-2- ilmetil)amino]propil ou 3-[(piridin-4-ilmetil)amino]propil; em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0097] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-oxi, em que heterociclil é selecionado a partir de pirrolidinil ou piperidinil; e, em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0098] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-oxi selecionado a partir de pirrolidin-3-il-oxi ou piperidin-4-il-oxi; em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0099] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-carbonil, em que heterociclil é selecionado a partir de piperazinil; e em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0100] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-carbonil selecionado a partir de piperazin-1-il-carbonil; em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0101] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-carbonil-oxi, em que heterociclil é selecionado a partir de piperazinil; e em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0102] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heterociclil-carbonil-oxi selecionado a partir de piperazin-1-il-carbonil-oxi; em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0103] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é aril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, em que aril é selecionado a partir de fenil; em que cada ocorrência de aril é opcionalmente substituído.
[0104] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é aril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil selecionado a partir de 3-(benzilamino)propil; em que cada ocorrência de aril é opcionalmente substituído.
[0105] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heteroaril, em que heteroaril é selecionado a partir de piridinil; e, em que cada ocorrência de heteroaril é opcionalmente substituído.
[0106] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heteroaril selecionado a partir de piridin-4-il; em que cada ocorrência de heteroaril é opcionalmente substituído.
[0107] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heteroaril-C1-8alquil, em que heteroaril é selecionado a partir de 1H-imidazolil; e, em que cada ocorrência de heteroaril é opcionalmente substituído.
[0108] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heteroaril-C1-8alquil selecionado a partir de 1H- imidazol-1-il-metil; em que cada ocorrência de heteroaril é opcionalmente substituído.
[0109] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é (heteroaril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, em que heteroaril é selecionado a partir de piridinil; e em que cada ocorrência de heteroaril é opcionalmente substituído.
[0110] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é (heteroaril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino selecionado a partir de (piridin-3-il-metil)(metil)amino; em que cada ocorrência de heteroaril é opcionalmente substituído.
[0111] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heteroaril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, em que heteroaril é selecionado a partir de tienil ou piridinil; e, em que cada ocorrência de heteroaril é opcionalmente substituído.
[0112] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R1 é heteroaril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil selecionado a partir de tien-3-il-metil-amino-propil, piridin-2- il-metil-amino-propil, piridin-3-il-metil-amino-propil ou piridin-4-il-metil-amino-propil; em que cada ocorrência de heteroaril é opcionalmente substituído.
[0113] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R3 é selecionado a partir de ciano, halogênio, hidroxi, oxo, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, C1-8alquil-carbonil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, C1-8alcoxi-C1-8alquil, C1-8alcoxi-carbonil, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino, amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, amino-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-carbonil-amino, C1-8alcoxi-carbonil-amino, hidroxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alcoxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino ou (hidroxi-C1-8alquil)2-amino.
[0114] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R3 é selecionado a partir de ciano, halogênio, hidroxi, oxo, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, C1-8alcoxi, C1-8alcoxi-C1-8alquil, C1-8alcoxi-carbonil, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino, amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino, C1-8alcoxi-carbonil-amino, hidroxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alcoxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino ou (hidroxi-C1-8alquil)2-amino.
[0115] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R3 é C1-8alquil selecionado a partir de metil, etil, propil, isopropil ou terc-butil.
[0116] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R3 é C1-8alquil selecionado a partir de etil, propil, isopropil ou terc-butil.
[0117] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R3 é halo-C1-8alquil selecionado a partir de trihalo-metil, dihalo-metil, halo-metil, trihalo-etil, dihalo-etil, halo-etil, trihalo-propil, dihalo-propil ou halo-propil; em que, halo é selecionado a partir de fluor, cloro, bromo ou iodo.
[0118] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R3 é halo-C1-8alquil selecionado a partir de trihalo-metil, dihalo-metil, halo-metil, trihalo-etil, dihalo-etil, trihalo-propil ou dihalo-propil; em que, halo é selecionado a partir de fluor, cloro, bromo ou iodo.
[0119] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R3 é hidroxi-C1-8alquil selecionado a partir de hidroxi-metil, hidroxi-etil, hidroxi-propil, dihidroxi-propil, hidroxi-butil ou dihidroxi-butil.
[0120] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R3 é hidroxi-C1-8alquil selecionado a partir de hidroxi-metil, dihidroxi-propil, hidroxi-butil ou dihidroxi-butil.
[0121] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R3 é C1-8alcoxi selecionado a partir de metoxi, etoxi, propoxi ou isopropoxi.
[0122] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R3 é halo-C1-8alcoxi selecionado a partir de trihalo-metoxi, dihalo-metoxi, halo-metoxi, trihalo-etoxi, dihalo-etoxi, halo-etoxi, trihalo-propoxi, dihalo-propoxi ou halo-propoxi; em que halo é selecionado a partir de fluor, cloro, bromo ou iodo.
[0123] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R3 é C1-8alcoxi-carbonil-amino selecionado a partir de metoxi-carbonil-amino, etoxi-carbonil-amino, propoxi-carbonil-amino, isopropoxi-carbonil-amino, terc-butoxi-carbonil-amino.
[0124] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R4 é C3-14cicloalquil selecionado a partir de ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil ou cicloheptil; em que cada ocorrência de C3-14cicloalquil é opcionalmente substituído.
[0125] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R4 é C3-8cicloalquil selecionado a partir de ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil ou cicloheptil; em que cada ocorrência de C3-8cicloalquil é opcionalmente substituído.
[0126] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R4 é C3-14cicloalquil-C1-8alquil, em que C3-14cicloalquil é selecionado a partir de ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil ou cicloheptil; e, em que cada ocorrência de C3-14cicloalquil é opcionalmente substituído.
[0127] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R4 é C3-8cicloalquil-C1-8alquil, em que C3-8cicloalquil é selecionado a partir de ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil ou cicloheptil; e, em que cada ocorrência de C3-8cicloalquil é opcionalmente substituído.
[0128] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R4 é C3-14cicloalquil-amino, em que C3-14cicloalquil é selecionado a partir de ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil ou cicloheptil; e, em que cada ocorrência de C3-14cicloalquil é opcionalmente substituído.
[0129] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R4 é C3-8cicloalquil-amino, em que C3-8cicloalquil é selecionado a partir de ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil ou cicloheptil; e, em que cada ocorrência de C3-8cicloalquil é opcionalmente substituído.
[0130] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R4 é aril-C1-8alquil, aril-C1-8alcoxi-carbonil ou aril-sulfoniloxi-C1-8alquil, em que cada ocorrência de aril é selecionado a partir de fenil; e, em que cada ocorrência de aril é opcionalmente substituído.
[0131] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R4 é aril-C1-8alquil ou aril-C1-8alcoxi-carbonil, em que cada ocorrência de aril é selecionado a partir de fenil; e, em que cada ocorrência de aril é opcionalmente substituído.
[0132] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R4 é heterociclil selecionado a partir de oxetanil, pirrolidinil, piperidinil, piperazinil, 1,3-dioxanil ou morfolinil; em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0133] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R4 é heterociclil selecionado a partir de oxetan-3-il, pirrolidin-1-il, piperidin-1-il, piperazin-1-il, 1,3- dioxan-5-il ou morfolin-4-il; em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0134] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R4 é heterociclil-C1-8alquil, em que cada ocorrência de heterociclil é selecionado a partir de pirrolidinil ou piperidinil; e, em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0135] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), R4 é heterociclil-C1-8alquil selecionado a partir de pirrolidin-1-il-C1-8alquil ou piperidin-1-il-C1-8alquil; em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0136] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R5 é selecionado a partir de halogênio, hidroxi, ciano, nitro, halo-C1-8alquil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino ou C1-8alquil-tio.
[0137] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R5 é hidroxi.
[0138] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R5 é C1-8alquil selecionado a partir de metil, etil, propil, isopropil, n-butil ou terc-butil.
[0139] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R5 é C1-8alquil selecionado a partir de etil, propil, isopropil or terc-butil.
[0140] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R5 é halo-C1-8alquil selecionado a partir de trihalo-metil, dihalo-metil, halo-metil, trihalo-etil, dihalo-etil, halo-etil, trihalo-propil, dihalo-propil ou halo-propil; em que halo é selecionado a partir de fluor, cloro, bromo ou iodo.
[0141] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R5 é C1-8alcoxi selecionado a partir de metoxi, etoxi, propoxi ou isopropoxi.
[0142] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R5 é halo-C1-8alcoxi selecionado a partir de trihalo-metoxi, dihalo-metoxi, halo-metoxi, trihalo-etoxi, dihalo-etoxi, halo-etoxi, trihalo-propoxi, dihalo-propoxi ou halo-propoxi; em que halo é selecionado a partir de fluor, cloro, bromo ou iodo.
[0143] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R2 é aril selecionado a partir de fenil; em que cada ocorrência de aril é opcionalmente substituído.
[0144] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R2 é aril-amino, em que aril é selecionado a partir de fenil; e, em que cada ocorrência de aril é opcionalmente substituído.
[0145] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R2 é aril-amino selecionado a partir de fenil-amino; em que cada ocorrência de aril é opcionalmente substituído.
[0146] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R2 é aril-amino-carbonil, em que aril é selecionado a partir de fenil; em que cada ocorrência de aril é opcionalmente substituído.
[0147] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R2 é aril-amino-carbonil selecionado a partir de fenil-amino-carbonil; em que cada ocorrência de aril é opcionalmente substituído.
[0148] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R2 é heterociclil selecionado a partir de 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, 1,3-benzodioxolil, 3a,7a-dihidroxazol[4,5-b]piridinil ou 2,3-dihidro-1,4- benzodioxinil; em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0149] Em uma outra forma de realização de um composto de fórmula (I), R2 é heterociclil selecionado a partir de 1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il, 1,3-benzodioxol-5-il ou 2,3-dihidro-1,4-benzodioxin-6-il; em que cada ocorrência de heterociclil é opcionalmente substituído.
[0150] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R2 é heteroaril selecionado a partir de tienil, 1H-pirazolil, 1H-imidazolil, 1,3-tiazolil, 1,2,4-oxadiazolil, 1,3,4-oxadiazolil, piridinil, pirimidinil, indolil, 1H-indazolil, 2H-indazolil, indolizinil, benzofuranil, benzotienil, 1H-benzimidazolil, 1,3-benzotiazolil, 1,3-benzoxazolil, 9H-purinil, furo[3,2-b]piridinil, furo[3,2-c]piridinil, furo[2,3-c]piridinil, tieno[3,2-c]piridinil, tieno[2,3-d]pirimidinil, 1H-pirrol[2,3-b]piridinil, 1H-pirrol[2,3-c]piridinil, pirrol[1,2-a]pirimidinil, pirrol[1,2-a]pirazinil, pirrol[1,2-b]piridazinil, pirazol[1,5-a]piridinil, pirazol[1,5-a]pirazinil, imidazo[1,2-a]piridinil, [1,3]oxazol [4,5-b]piridinil, imidazo[1,2-a]pirimidinil, imidazo[1,2-c]pirimidinil, imidazo[1,2-b]piridazinil, imidazo[1,2-a]pirazinil, imidazo[2,1-b][1,3]tiazolil, imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazolil ou quinoxalinil; em que cada ocorrência de heteroaril é opcionalmente substituído.
[0151] Em uma outra forma de realização de um composto de fórmula (I), R2 é heteroaril selecionado a partir de tien-2-il, tien-3-il, 1H-pirazol-3-il, 1H-pirazol-4-il, 1H-pirazol-5-il, 1H-imidazol-1-il, 1H-imidazol-4-il, 1,3-tiazol-2-il, 1,2,4-oxadiazol-3-il, 1,3,4-oxadiazol-2-il, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidin-4-il, 1H-indol-3-il, 1H-indol-4-il, indol-5-il, indol-6-il, 1H-indazol-5-il, 2H-indazol-5-il, indolizin-2-il, benzofuran-2-il, benzotien-2-il, benzotien-3-il, 1H-benzimidazol-2-il, 1H-benzimidazol-6-il, 1,3-benzoxazol-2-il, 1,3-benzoxazol-5-il, 1,3-benzoxazol-6-il, 1,3-benzotiazol-2-il, 1,3-benzotiazol-5-il, 1,3-benzotiazol-6-il, 9H-purin-8-il, furo[3,2-b]piridin-2-il, furo[3,2-c]piridin-2-il, furo[2,3-c]piridin-2-il, tieno[3,2-c]piridin-2-il, tieno[2,3-d]pirimidin-6-il, 1H-pirrol[2,3-b]piridin-5-il, 1H-pirrol[2,3-c]piridin-4-il, pirrol[1,2-a]pirimidin-7-il, pirrol[1,2-a]pirazin-7-il, pirrol[1,2-b]piridazin-2-il, pirrol[1,2-b]piridazin-6-il, pirazol[1,5-a]piridin-2-il, pirazol[1,5-a]pirazin-2-il, imidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-il, imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-6-il, [1,3]oxazol[4,5- b]piridin-2-il imidazo[1,2-a]piridin-2-il, imidazo[1,2-a]piridin-6-il, imidazo[1,2-a]pirimidin-2-il, imidazo[1,2-a]pirimidin-6-il, imidazo[1,2-c]pirimidin-2-il, imidazo[1,2-b]piridazin-2-il, imidazo[1,2-a]pirazin-2-il ou quinoxalin-2-il; em que cada ocorrência de heteroaril é opcionalmente substituído.
[0152] Em uma outra forma de realização de um composto de fórmula (I), R2 é heteroaril substituído selecionado a partir de 4-metiltiofen-2-il, 1-metil-1H-pirazol-3-il, 4-metil-1H- pirazol-3-il, 1-fenil-1H-pirazol-3-il, 1-fenil-1H-imidazol-4- il, 2-metil-1-(piridin-2-il)-1H-imidazol-4-il, 4-metil-1,3- tiazol-2-il, 4-(trifluormetil)-1,3-tiazol-2-il, 4-fenil-1,3- tiazol-2-il, 5-fenil-1,2,4-oxadiazol-3-il, 3- fluorpiridin-4-il, 6-fluorpiridin-2-il, 2-cloropiridin-4-il, 4-cloropiridin-3-il, 5-cloropiridin-2-il, 6-metilpiridin-3-il, 2-(trifluormetil)piridin-3-il, 4-(trifluormetil)piridin-2-il, 6-(trifluormetil)piridin-2-il, 2-metoxipiridin-4-il, 4- metoxipiridin-3-il, 6-metoxipiridin-2-il, 2-etoxipiridin-3-il, 6-etoxipiridin-2-il, 6-(propan-2-iloxi)piridin-2-il, 6-(dimetilamino)piridin-3-il, 6-(metilsulfanil)piridin-2-il, 6-(ciclobutiloxi)piridin-2-il, 6-(pirrolidin-1- il)piridin-2-il, 2-metilpirimidin-4-il, 2-(propan-2- il)pirimidin-4-il, 2-ciclopropilpirimidin-4-il, 1-metil-1H- indol-3-il, 2-metil-2H-indazol-5-il, 1-metil-1H- benzimidazol-2-il, 4-metil-1H-benzimidazol-2-il 5-fluor-1H- benzimidazol-2-il, 4-fluor-1,3-benzoxazol-2-il, 5-fluor-1,3- benzoxazol-2-il, 4-cloro-1,3-benzoxazol-2-il, 4-iodo-1,3- benzoxazol-2-il, 2-metil-1,3-benzoxazol-6-il, 4-metil-1,3- benzoxazol-2-il, 4-(trifluormetil)-1,3-benzoxazol-2-il, 7- (trifluormetil)-1,3-benzoxazol-2-il, 4-cloro-1,3- benzotiazol-2-il, 7-cloro-1,3-benzotiazol-2-il, 2-metil-1,3- benzotiazol-2-il, 4-(trifluormetil)-1,3-benzotiazol-2-il, 5-metilfuro[3,2-b]piridin-2-il, 4,6-dimetilfuro[3,2-c]piridin-2-il, 5,7-dimetilfuro[2,3-c]piridin-2-il, 4,6-dimetiltieno[3,2-c]piridin-2-il, 2,4-dimetiltieno[2,3-d]pirimidin-6-il, 1-metilpirrol[1,2-a]pirazin-7-il, 3-metilpirrol[1,2-a]pirazin-7-il, 1,3-dimetilpirrol[1,2-a]pirazin-7-il, 2-metilpirrol[1,2-b]piridazin-6-il, 5-metilpirazol[1,5-a]piridin-2-il, 4,6-dimetilpirazol[1,5- a]pirazin-2-il, 2-cloroimidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-il, 2-metilimidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-il, 3-metilimidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-il, 2-etilimidazo[2,1- b][1,3]tiazol-6-il, 2-metilimidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-6-il, 6-cianoimidazo[1,2-a]piridin-2-il (também referido como 2- imidazo[1,2-a]piridina-6-carbonitrila), 6-fluorimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 8-fluorimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 6,8-difluorimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 7-(trifluormetil)imidazo[1,2-a]piridin-2-il, 8-(trifluormetil)imidazo[1,2-a]piridin-2-il, 6-cloroimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 7-cloroimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 8-cloroimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 8-bromoimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 2-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 5-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 6-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 7-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 8-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 7-etilimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 8-etilimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 6,8-dimetilimidazo[1,2-a]piridin-2-il, metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 7-metoxiimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 8-metoxiimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 6-fluor-8-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 8-fluor-6-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 8-cloro-6-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 6-metil-8-nitroimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 8-ciclopropilimidazo[1,2-a]piridin-2-il, 2-metilimidazo[1,2-a]piridin-6-il, 2-etilimidazo[1,2-a]piridin-6-il, 2,3-dimetilimidazo[1,2-a]piridin-6-il, 2,8-dimetilimidazo[1,2-a]piridin-6-il, 2-(trifluormetil)imidazo[1,2-a]piridin-6-il, 8-cloro-2- metilimidazo[1,2-a]piridin-6-il, 8-fluor-2- metilimidazo[1,2-a]piridin-6-il, 6-fluorimidazo[1,2-a]pirimidin-2-il, 6-cloroimidazo[1,2- a]pirimidin-2-il, 6-metilimidazo[1,2-a]pirimidin-2-il, 7-metilimidazo[1,2-a]pirimidin-2-il, 2-metilimidazo[1,2- a]pirimidin-6-il, 6-metilimidazo[1,2-b]piridazin-2-il, 2-metil-3-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)imidazo[1,2- b]piridazin-6-il, 6-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il, 8- metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il, 6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il, 6-cloro-8- metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il, 6-metil-8- (trifluormetil)imidazo[1,2-a]pirazin-2-il ou 8-(metilsulfanil)imidazo[1,2-a]pirazin-2-il.
[0153] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R2 é heteroaril-amino, em que heteroaril é selecionado a partir de piridinil ou pirimidinil; e, em que cada ocorrência de heteroaril é opcionalmente substituído.
[0154] Em uma outra forma de realização de um composto de fórmula (I), R2 é heteroaril-amino selecionado a partir de piridin-2-il-amino, piridin-3-il-amino ou pirimidin-2-il-amino; em que cada ocorrência de heteroaril é opcionalmente substituído.
[0155] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R6 é selecionado a partir de halogênio, hidroxi, ciano, nitro, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, (C1-8alquil)2-amino ou C1-8alquil-tio
[0156] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R6 é C1-8alquil selecionado a partir de metil, etil, propil, isopropil ou terc-butil.
[0157] Em uma outra forma de realização de um composto de fórmula (I), R6 é C1-8alquil selecionado a partir de etil, propil, isopropil ou terc-butil.
[0158] Em uma outra forma de realização de um composto de fórmula (I), R6 é C2-8alquenil selecionado a partir de etenil, alil ou buta-1,3-dienil.
[0159] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R6 é C2-8alquenil selecionado a partir de etenil ou alil.
[0160] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R6 é halo-C1-8alquil selecionado a partir de trihalo-metil, dihalo-metil, halo-metil, trihalo-etil, dihalo-etil, halo-etil, trihalo-propil, dihalo-propil ou halo-propil; em que, halo é selecionado a partir de fluor, cloro, bromo ou iodo.
[0161] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R6 é hidroxi-C1-8alquil selecionado a partir de hidroxi-metil, hidroxi-etil, hidroxi-propil, dihidroxi-propil, hidroxi-butil ou dihidroxi-butil.
[0162] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R6 é hidroxi-C1-8alquil selecionado a partir de hidroxi-metil, dihidroxi-propil, hidroxi-butil ou dihidroxi-butil.
[0163] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R6 é C1-8alcoxi selecionado a partir de metoxi, etoxi, propoxi ou isopropoxi.
[0164] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R6 é halo-C1-8alcoxi selecionado a partir de trihalo-metoxi, dihalo-metoxi, halo-metoxi, trihalo-etoxi, dihalo-etoxi, halo-etoxi, trihalo-propoxi, dihalo-propoxi ou halo-propoxi; em que, halo é selecionado a partir de fluor, cloro, bromo ou iodo.
[0165] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R7 é C3-14cicloalquil, C3-14cicloalquil-oxi, aril, heterociclil ou heteroaril; em que C3-14cicloalquil é selecionado a partir de ciclopropil ou ciclobutoxi; em que aril é selecionado a partir de fenil; em que heterociclil é selecionado a partir de pirrolidinil ou 1,2,3,6-tetrahidropiridinil; e, em que heteroaril é selecionado a partir de tienil ou piridinil.
[0166] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R7 é C3-14cicloalquil ou C3-14cicloalquil-oxi, em que cada ocorrência de C3-14cicloalquil é selecionado a partir de ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil ou cicloheptil.
[0167] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R7 é C3-8cicloalquil ou C3-8cicloalquil-oxi, em que cada ocorrência de C3-8cicloalquil é selecionado a partir de ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil ou cicloheptil.
[0168] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R7 é aril selecionado a partir de fenil.
[0169] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R7 é heterociclil selecionado a partir de pirrolidinil ou 1,2,3,6-tetrahidropiridinil.
[0170] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R7 é heterociclil selecionado a partir de pirrolidin-1-il ou 1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il.
[0171] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R7 é heteroaril selecionado a partir de tienil ou piridinil.
[0172] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R7 é heteroaril selecionado a partir de piridinil.
[0173] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R7 é heteroaril selecionado a partir de tien-2-il ou piridin-2-il.
[0174] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), R7 é heteroaril selecionado a partir de piridin-2-il.
[0175] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), o composto é selecionado a partir de Fórmula (Ia) ou Fórmula (Ib):
Figure img0003
[0176] ou uma forma sua, em que todas as variáveis são como previamente definidas.
[0177] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), quando w1 é C-R1, w2 é C-R2 e R1 é selecionado a partir de (metil)2-amino e R2 is benzotiazol-2-il opcionalmente substituído com um substituinte R6, então R6 é outro além de cloro.
[0178] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), quando w1 é C-R1, w2 é C-R2 e R1 é selecionado a partir de (metil )2- amino ou (2-fluor- etil)(metil)amino, então R2 é benzotiazol-2-il substituído com um, dois ou três R6 substituintes e um adicional, opcional R7 substituinte.
[0179] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), quando w1 é C-R1, w2 é C-R2 e R1 é piperazin- 1-il substituído com um R3 substituinte selecionado a partir de metil, 2-fluor-etil, 2-hidroxi-etil ou 3-hidroxi-propil; ou, um R4 substituinte selecionado a partir de 3-(4-metil-fenil-sulfoniloxi)-propil, então R2 é benzotiazol-2-il substituído com um, dois ou três R6 substituintes e um adicional, opcional R7 substituinte.
[0180] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), quando w1 é C-R1, w2 é C-R2 e R1 é piperazin- 1-il substituído com um R3 substituinte selecionado a partir de 2-fluor-etil e R2 é imidazo[1,2-a]piridin-2-il opcionalmente substituído com um R6 substituinte, então R6 é outro além de cloro.
[0181] Em uma forma de realização de um composto de formula (I), quando w1 é C-R1, w2 é C-R2 e R1 é (2-fluor- etil)(metil)amino e R2 é [1,3,4]oxadiazol-2-il opcionalmente substituído com um R7 substituinte,então R7 é outro além de tien-2-il.
[0182] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), quando w1 é C-R1, w2 é C-R2 e R1 é piperazin- 1-il substituído com um R3 substituinte selecionado a partir de 3-fluor-propil e R2 é tiazol-2-il opcionalmente substituído com dois R6 substituinte, então R6 não é simultaneamente metil e buta-1,3-dienil.
[0183] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), quando w1 é C-R1, w2 é C-R2 e R1 é selecionado a partir de metil-amino ou (metil)2-amino, então R2 é benzoxazol-2-il substituído com um, dois ou três R6 substituintes e um adicional, opcional R7 substituinte.
[0184] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), quando w1 é C-R1, w2 é C-R2 e R1 é selecionado a partir de (metil)2-amino e R2 é benzoxazol-2-il opcionalmente substituído com um R6 substituinte, então R6 é outro além de cloro.
[0185] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), quando w1 é C-R1, w2 é C-R2 e R1 é piperazin- 1-il substituído com um R3 substituinte selecionado a partir de metil, então R2 é benzoxazol-2-il substituído com um, dois ou três R6 substituintes e um adicional, opcional R7 substituinte.
[0186] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), quando w1 é C-R1, w2 é C-R2 e R1 é selecionado a partir de (metil)2-amino, então R2 é 1H- benzoimidazol-2-il substituído com um, dois ou três R6 substituintes e um adicional, opcional R7 substituinte.
[0187] Em uma forma de realização de um composto de fórmula (I), quando w1 é C-R1, w2 é C-R2 e R1 é selecionado a partir de (metil)2-amino e R2 é 1H- benzoimidazol-2-il substituído com um R6 substituinte, então R6 é outro além de metil.
[0188] Em certas formas de realização, o composto de fórmula (I) é outro além de: 3-benzotiazol-2-il-7-[4-(2-fluor-etil)-piperazin-1-il]-cromen- 2-ona, 3-benzotiazol-2-il-7-[4-(2-hidroxi-etil)-piperazin-1-il]- cromen-2-ona, 3-(6-cloro-imidazo[1,2-a]piridin-2-il)-7-[4-(2-fluor-etil)- piperazin-1-il]-cromen-2-ona, 3-benzotiazol-2-il-7-(4-metil-piperazin-1-il)-cromen-2-ona, 3-benzotiazol-2-il-7-[(2-fluor-etil)-metil-amino]-cromen-2- ona, 7-[(2-fluor-etil)-metil-amino]-3-(5-tiofen-2-il- [1,3,4]oxadiazol-2-il)-cromen-2-ona, 3-(4-buta-1,3-dienil-5-metil-tiazol-2-il)-7-[4-(3-fluor- propil)-piperazin-1-il]-cromen-2-ona, Ácido tolueno-4-sulfônico 3-[4-(3-benzotiazol-2-il-2-oxo-2H- cromen-7-il)-piperazin-1-il]-propil ester, 3-benzotiazol-2-il-7-[4-(3-hidroxi-propil)-piperazin-1-il]- cromen-2-ona, 3-benzoxazol-2-il-7-(4-metil-piperazin-1-il)-cromen-2-ona, 7-dimetilamino-3-(1-metil-1H-benzoimidazol-2-il)-cromen-2-ona, 3-(1H-benzoimidazol-2-il)-7-dimetilamino-cromen-2-ona, 3-(6-cloro-benzotiazol-2-il)-7-dimetilamino-cromen-2-ona, 3-benzotiazol-2-il-7-dimetilamino-cromen-2-ona, 3-benzoxazol-2-il-7-dimetilamino-cromen-2-ona, 3-benzoxazol-2-il-7-metilamino-cromen-2-ona, e 3-(5-cloro-benzoxazol-2-il)-7-dimetilamino-cromen-2-ona.
[0189] Também são proporcionados aqui compostos de Fórmula (I):
Figure img0004
[0190] ou uma forma sua, em que:
[0191] w1 e w2 são C-R1 ou C-R2; em que, um entre w1 e w2 é C-R1 e o outro é C-R2, desde que, quando w1 é C-R1 , então w2 é C-R2; ou, quando w1 é C-R2, então w2 é C-R1;
[0192] R1 é amino , C1 -8alcoxi-C1-8alquil-amino , (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, amino-C1-8alquil-amino, (amino-C1-8alquil)2-amino, (amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (C1-8alquil-amino-C1-8alquil)2-amino, (C1-8alquil-amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, [(C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil](C1-8alquil)amino, amino-C1-8alcoxi, C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alcoxi, amino-C2-8alquenil, C1-8alquil-amino-C2-8alquenil, (C1-8alquil)2-amino-C2-8alquenil, amino-C2-8alquinil, C1-8alquil-amino-C2-8alquinil, (C1-8alquil)2-amino-C2-8alquinil, halo-C1-8alquil-amino, (halo-C1-8alquil)2-amino, hidroxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alcoxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alcoxi, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil)2-amino, (hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amin o, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil-amin o, [(hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil](C1-8alquil)a mino, [(hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil](C1 -8alquil)amino, heterociclil, heterociclil-C1-8alquil, heterociclil-C1-8alcoxi, heterociclil-amino, (heterociclil)(C1-8alquil)amino, heterociclil-amino-C1-8alquil, heterociclil-C1-8alquil-amino, (heterociclil-C1-8alquil)2-amino, (heterociclil-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, heterociclil-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (heterociclil-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (heterociclil-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil , heterociclil-oxi, heterociclil-carbonil, heterociclil-carbonil-oxi, aril-C1-8alquil-amino, (aril-C1-8alquil)2-amino, (aril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, aril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (aril-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (aril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, heteroaril, heteroaril-C1-8alquil, heteroaril-C1-8alcoxi, heteroaril-amino, heteroaril-C1-8alquil-amino, (heteroaril-C1-8alquil)2-amino, (heteroaril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, heteroaril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (heteroaril-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil ou (heteroaril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil;
[0193] em que cada ocorrência de heterociclil e heteroaril é opcionalmente substituído com um, dois ou três R3 substituintes e um adicional, opcional R4 substituinte; e,
[0194] em que, alternativamente, cada ocorrência de heterociclil e heteroaril é opcionalmente substituído com um, dois, três ou quatro R3 substituintes;
[0195] R2 é aril, aril-amino, aril-amino-carbonil, heterociclil, heteroaril ou heteroaril-amino;
[0196] em que cada ocorrência de aril, heterociclil e heteroaril é opcionalmente substituído com um, dois ou três R6 substituintes e um adicional, opcional R7 substituinte;
[0197] Ra é, em cada ocorrência, independentemente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio ou C1-8alquil;
[0198] Rb é hidrogênio, halogênio, C1-8alquil ou C1-8alcoxi;
[0199] R3 é, em cada ocorrência, independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidroxi, oxo, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, C1-8alquil-carbonil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, C1-8alcoxi-C1-8alquil, C1-8alcoxi-carbonil, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino, amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, amino-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-carbonil-amino, C1-8alcoxi-carbonil-amino, hidroxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alcoxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino ou (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino;
[0200] R4 é C3-14cicloalquil, C3-14cicloalquil-C1-8alquil, C3-14cicloalquil-amino, aril-C1-8alquil, aril-C1-8alcoxi-carbonil, heterociclil ou heterociclil-C1-8alquil; em que em cada ocorrência C3-14cicloalquil, aril e heterociclil é opcionalmente substituído com um, dois ou três R5 substituintes;
[0201] R5 é, em cada ocorrência, independentemente selecionado a partir de halogênio, hidroxi, ciano, nitro, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino ou C1-8alquil-tio;
[0202] R6 é, em cada ocorrência, independentemente selecionado a partir de halogênio, hidroxi, ciano, nitro, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino ou C1-8alquil-tio; e,
[0203] R7 é C3-14cicloalquil, C3-14cicloalquil-oxi, aril, heterociclil ou heteroaril.
[0204] Em uma forma de realização de um composto de Fórmula (I), R3 é, em cada ocorrência, independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidroxi, oxo, C1-8alquil-carbonil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, C1-8alcoxi-C1-8alquil, C1-8alcoxi-carbonil, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino, amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, amino-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-carbonil-amino, C1-8alcoxi-carbonil-amino, hidroxi-C1-8alcoxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino ou (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino.
[0205] Em uma forma de realização de um composto de Fórmula (I), R6 é, em cada ocorrência, independentemente selecionado a partir de hidroxi, ciano, nitro, halo-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino ou C1-8alquil-tio.
[0206] Em uma forma de realização de um composto de Fórmula (I), R7 é C3-14cicloalquil, C3-14cicloalquil-oxi, aril ou heterociclil.
[0207] Em uma forma de realização de um composto de Fórmula (I), o composto é selecionado a partir do grupo que consiste em:
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[0208] ou uma forma destes.
TERMINOLOGIA
[0209] Os termos químicos utilizados acima e ao longo da presente descrição, a menos que especificamente definido de outra forma, devem ser entendidos por um perito na arte como tendo os seguintes significados indicados.
[0210] Conforme aqui utilizado, o termo "C1-8alquil" geralmente se refere a radicais de hidrocarbonetos saturados tendo de um a oito átomos de carbono numa configuração de cadeia linear ou ramificada, incluindo, mas não limitado a metil, etil, n-propil (também referido como propil ou propanil), isopropil, n-butil (também referido como butil ou butanil), isobutil, sec-butil, terc-butil, n-pentil (também referido como pentil ou pentanil), n-hexil (também referido como hexil ou hexanil), n-heptil (também referido como heptil ou heptanil), n-octil e semelhantes. Em algumas formas de realização, C1-8alquil inclui, mas nao limitado a, C1-6alquil, C1-4alquil e semelhantes. Um radical C1-8alquil é opcionalmente substituído com espécies substituintes como as aqui descritas, quando permitido pelas valências disponíveis.
[0211] Conforme aqui utilizado, o termo “C2-8alquenil” geralmente se refere a radicais de hidrocarboneto parcialmente insaturado possuindo de dois a oito átomos de carbono, numa configuração de cadeia linear ou ramificada e uma ou mais ligações duplas carbono-carbono no mesmo, incluindo, mas não limitados a, etenil (também referida como vinil), alil, propenil e semelhantes. Em algumas formas de realização, C2-8alquenil inclui, mas não está limitado a, C2-6alquenil, C2-4alquenil e semelhantes. O radical C2-8alquenil é opcionalmente substituído com espécies substituintes como as aqui descritas quando permitido pelas valências disponíveis.
[0212] Conforme aqui utilizado, o termo “C2-8alquinil” geralmente se refere a radicais de hidrocarbonetos parcialmente insaturados tendo de dois a oito átomos de carbono numa configuração de cadeia linear ou ramificada e uma ou mais ligações triplas carbono-carbono no mesmo, incluindo, mas não limitados a, etinil, propinil e semelhantes. Em algumas formas de realização, C2-8alquinil inclui, mas não está limitado a, C2-6alquinil, C2-4alquinil e semelhantes. O radical C2-8alquinil é opcionalmente substituído com espécies substituintes como as aqui descritas quando permitido pelas valências disponíveis.
[0213] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alcoxi” geralmente se refere a radicais de hidrocarbonetos saturados tendo de um a oito átomos de carbono numa configuração de cadeia linear ou ramificada com a fórmula: -O-C1-8alquil, incluindo, mas não limitado a, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, isobutoxi, sec-butoxi, terc-butoxi, n-pentoxi, n-hexoxi e semelhantes. Em algumas formas de realização, C1-8alcoxi inclui, mas não está limitado a, C1-6alcoxi, C1-4alcoxi e semelhantes. O radical C1-8alcoxi é opcionalmente substituído com espécies substituintes como as aqui descritas quando permitido pelas valências disponíveis.
[0214] Conforme aqui utilizado, o termo “C3-14cicloalquill” geralmente se refere a um radical de hidrocarboneto monocíclico, bicíclico ou policíclico saturado, incluindo, mas não limitado a, ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, cicloheptil, ciclooctil, 1H-indanil, indenil, tetrahidro-naftalenil e semelhantes. Em algumas formas de realização C3-14cicloalquil inclui, mas não está limitado a, C3-8cicloalquil, C5-8cicloalquil, C3-10cicloalquil e semelhantes. O radical C3-14cicloalquil é opcionalmente substituído com espécies substituintes, tal como aqui descrito, onde permitido pelas valências disponíveis.
[0215] Conforme aqui utilizado, o termo “aril” geralmente se refere a um radical de estrutura de anel átomo de carbono aromático monocíclico, bicíclico ou policíclico, incluindo, mas não limitado a, fenil, naftil, antracenil, fluorenil, azulenil, fenantrenil e semelhantes. Um radical aril é opcionalmente substituído com espécies substituintes tal como aqui descrito, onde permitido pelas valências disponíveis.
[0216] Conforme aqui utilizado, o termo “heteroaril” geralmente se refere a um radical de estrutura de anel átomo de carbono aromático monocíclico, bicíclico ou policíclico em que um ou mais membros do anel de átomos de carbono foram substituídos, quando permitido pela estabilidade estrutural, com um ou mais heteroátomos, tais como um átomo de O, S ou N, incluindo, mas não limitado a, furanil (também referido como furil), tienil (também referido como tiofenil), pirrolil, 2H- pirrolil, 3H-pirrolil, pirazolil, 1H-pirazolil, imidazolil, 1H-imidazolil, isoxazolil, isotiazolil, oxazolil, 1,3-tiazolil, triazolil (tal como 1H-1,2,3-triazolil e semelhantes), oxadiazolil (tal como 1,2,4-oxadiazolil, 1,3,4-oxadiazolil e semelhantes), tiadiazolil, tetrazolil (tal como 1H-tetrazolil, 2H-tetrazolil e semelhantes), piridinil (também referido como piridil), pirimidinil, pirazinil, piridazinil, triazinil, indolil, indazolil, 1H-indazolil, 2H-indazolil, indolizinil, isoindolil, benzofuranil, benzotienil (também referido como benzotiofenil), benzoimidazolil, 1H-benzoimidazolil, 1,3-benzotiazolil, 1,3-benzoxazolil (também referido como 1,3-benzoxazolil), purinil, 9H-purinil, quinolinil, isoquinolinil, quinazolinil, quinoxalinil, 1,3-diazinil, 1,2-diazinil, 1,2-diazolil, 1,4- diazanaftalenil, acridinil, furo[3,2-b]piridinil, furo[3,2-c]piridinil, furo[2,3-c]piridinil, 6H-tieno[2,3- b]pirrolil, tieno[3,2-c]piridinil, tieno[2,3-d]pirimidinil, 1H-pirrol[2,3-b]piridinil, 1H-pirrol[2,3-c]piridinil, 1H-pirrol[3,2-b]piridinil, pirrol[1,2-a]pirimidinil, pirrol[1,2-a]pirazinil, pirrol[1,2-b]piridazinil, pirazol[1,5-a]piridinil, pirazol[1,5-a]pirazinil, imidazo[1,2-a]piridinil, 3H-imidazo[4,5-b]piridinil, [1,3]oxazol[4,5-b]piridinil, imidazo[1,2-a]pirimidinil, imidazo[1,2-c]pirimidinil, imidazo[1,2-b]piridazinil, imidazo[1,2-a]pirazinil, imidazo[2,1-b][1,3]tiazolil, imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazolil, [1,2,4]triazol[1,5- a]piridinil, [1,2,4]triazol[4,3-a]piridinil e semelhantes. Um radical heteroaril é opcionalmente substituído em um membro do anel de átomo de carbono ou nitrogênio com espécies substituintes tal como aqui descrito, onde permitido pelas valências disponíveis.
[0217] Conforme aqui utilizado, o termo “heterociclil” geralmente se refere a um radical de estrutura em anel átomo de carbono monocíclico, bicíclico ou policíclico saturado ou parcialmente insaturado, em que um ou mais membros do anel de átomos de carbono foram substituídos, quando permitido pela estabilidade estrutural, com um heteroátomo, tal como átomo de O, S ou N, incluindo, mas não limitado a, oxiranil, oxetanil, azetidinil, tetrahidrofuranil, pirrolinil, pirrolidinil, pirazolinil, pirazolidinil, imidazolinil, imidazolidinil, isoxazolinil, isoxazolidinil, isotiazolinil, isotiazolidinil, oxazolinil, oxazolidinil, tiazolinil, tiazolidinil, triazolinil, triazolidinil, oxadiazolinil, oxadiazolidinil, tiadiazolinil, tiadiazolidinil, tetrazolinil, tetrazolidinil, piranil, dihidro-2H-piranil, tiopiranil, 1,3-dioxanil, 1,2,5,6-tetrahidropiridinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, piperidinil, piperazinil, morfolinil, tiomorfolinil, 1,4-diazepanil, 1,3-benzodioxolil (também referido como benzo[d][1,3]dioxolil), 1,4-benzodioxanil, 2,3-dihidro-1,4-benzodioxinil (também referido como 2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxinil), hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-(1H)-il, (3aS,6aS)-hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-(1H)-il, (3aR,6aR)-hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-(1H)-il, hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-(2H)-il, (3aS,6aS)-hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-(2H)-il, (3aR,6aR)-hexahidropirrol[3,4-b]pirrol-(2H)-il, hexahidropirrol[3,4-c]pirrol-(1H)-il, (3aR,6aS)-hexahidropirrol[3,4-c]pirrol-(1H)-il, (3aR,6aR)-hexahidropirrol[3,4-c]pirrol-(1H)-il, octahidro-5H-pirrol[3,2-c]piridinil, octahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridinil, (4aR,7aR)-octahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridinil, (4aS,7aS)-octahidro-6H-pirrol[3,4-b]piridinil, hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-(1H)-il, (7R,8aS)-hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-(1H)-il, (8aS)-hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-(1H)-il, (8aR)-hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-(1H)-il, (8aS)-octahidropirrol[1,2-a]pirazin-(1H)-il, (8aR)-octahidropirrol[1,2-a]pirazin-(1H)-il, hexahidropirrol[1,2-a]pirazin-(2H)-ona, octahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazinil, 3-azabiciclo[3.1.0]hexil, (1R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexil, 8-azabiciclo[3.2.1]octil, (1R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octil, 8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-enil, (1R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-enil, 9-azabiciclo[3.3.1]nonil, (1R,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonil, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptil, (1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptil, 2,5-diazabiciclo[2.2.2]octil, 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octil, (1R,5S)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octil, 1,4-diazabiciclo[3.2.2]nonil, azaspiro[3.3]heptil, 8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-enil, 2,6-diazaspiro[3.3]heptil, 2,7- diazaspiro[3.5]nonil, 5,8-diazaspiro[3.5]nonil, 2,7- diazaspiro[4.4]nonil ou 6,9-diazaspiro[4.5]decil e semelhantes. Um radical heterociclil é substituído opcionalmente com um membro do anel de átomo de carbono ou nitrogênio com espécies substituintes tal como aqui descrito, onde permitido pelas valências disponíveis.
[0218] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alcoxi-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-O-C1-8alquil.
[0219] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C1-8alquil-O-C1-8alquil.
[0220] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil-O-C1-8alquil)2.
[0221] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil)(C1-8alquil-O-C1-8alquil).
[0222] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi” se refere a um radical de fórmula: -O-C1-8alquil-NH-C1-8alquil-O-C1-8alquil.
[0223] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi” se refere a um radical de fórmula: -O-C1-8alquil-N(C1-8alquil-O-C1-8alquil)2.
[0224] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alcoxi” se refere a um radical de fórmula:-O-C1-8alquil-N(C1-8alquil)(C1-8alquil-O-C1-8alquil).
[0225] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-NH-C1-8alquil-O-C1-8alquil.
[0226] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-N(C1-8alquil-O-C1-8alquil)2.
[0227] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula:-C1-8alquil-N(C1-8alquil)(C1-8alquil-O-C1-8alquil).
[0228] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alcoxi-carbonil” se refere a um radical de fórmula: -C(O)-O-C1-8alquil.
[0229] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alcoxi-carbonil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C(O)-O-C1-8alquil.
[0230] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C1-8alquil.
[0231] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alquil)2-amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil)2.
[0232] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alquil-amino-C2-8alquenil” se refere a um radical de fórmula: -C2-8alquenil-NH-C1-8alquil.
[0233] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alquil)2-amino-C2-8alquenil” se refere a um radical de fórmula: -C2-8alquenil-N(C1-8alquil)2.
[0234] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi” se refere a um radical de fórmula: -O-C1-8alquil-NH-C1-8alquil.
[0235] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi” se refere a um radical de fórmula: -O-C1-8alquil-N(C1-8alquil)2.
[0236] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alquil-amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-NH-C1-8alquil.
[0237] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-N(C1-8alquil)2.
[0238] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C1-8alquil-NH-C1-8alquil.
[0239] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C1-8alquil-N(C1-8alquil)2.
[0240] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alquil-amino-C1-8alquil)2-amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil-NH-C1-8alquil)2.
[0241] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alquil-amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil)(C1-8alquil-NH-C1-8alquil).
[0242] Conforme aqui utilizado, o termo “[(C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil](C1-8alquil)amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil)[C1-8alquil-N(C1-8alquil)2].
[0243] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alquil-amino-C2-8alquinil” se refere a um radical de fórmula: -C2-8alquinil-NH-C1-8alquil.
[0244] Conforme aqui utilizado, o termo “(C1-8alquil)2-amino-C2-8alquinil” se refere a um radical de fórmula: -C2-8alquinil-N(C1-8alquil)2.
[0245] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alquil-carbonil” se refere a um radical de fórmula: -C(O)-C1-8alquil.
[0246] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alquil-carbonil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C(O)-C1-8alquil.
[0247] Conforme aqui utilizado, o termo “C1-8alquil-tio” se refere a um radical de fórmula: -S-C1-8alquil.
[0248] Conforme aqui utilizado, o termo “amino-C2-8alquenil” se refere a um radical de fórmula: -C2-8alquenil-NH2.
[0249] Conforme aqui utilizado, o termo “amino-C1-8alcoxi” se refere a um radical de fórmula: -O-C1-8alquil-NH2.
[0250] Conforme aqui utilizado, o termo “amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-NH2.
[0251] Conforme aqui utilizado, o termo “amino-C1-8alquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C1-8alquil-NH2.
[0252] Conforme aqui utilizado, o termo “(amino-C1-8alquil)2-amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil-NH2)2.
[0253] Conforme aqui utilizado, o termo “(amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil)(C1-8alquil-NH2).
[0254] Conforme aqui utilizado, o termo “amino-C2-8alquinil” se refere a um radical de fórmula: -C2-8alquinil-NH2.
[0255] Conforme aqui utilizado, o termo “aril-C1-8alcoxi-carbonil” se refere a um radical de fórmula: -C(O)-O-C1-8alquil-aril.
[0256] Conforme aqui utilizado, o termo “aril-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-aril.
[0257] Conforme aqui utilizado, o termo “aril-C1-8alquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C1-8alquil-aril.
[0258] Conforme aqui utilizado, o termo “(aril-C1-8alquil)2-amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil-aril)2.
[0259] Conforme aqui utilizado, o termo “(aril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil)(C1-8alquil-aril).
[0260] Conforme aqui utilizado, o termo “aril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-NH-C1-8alquil-aril.
[0261] Conforme aqui utilizado, o termo “(aril-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-N(C1-8alquil-aril)2.
[0262] Conforme aqui utilizado, o termo “(aril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-N(C1-8alquil)(C1-8alquil-aril).
[0263] Conforme aqui utilizado, o termo “aril-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-aril.
[0264] Conforme aqui utilizado, o termo “aril-amino-carbonil” se refere a um radical de fórmula: -C(O)-NH-aril.
[0265] Conforme aqui utilizado, o termo “aril-sulfoniloxi-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-O-SO2-aril.
[0266] Conforme aqui utilizado, o termo “benzoxi-carbonil” se refere a um radical de fórmula: -C(O)O-CH2-fenil.
[0267] Conforme aqui utilizado, o termo “C3-14cicloalquil-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-C3-14cicloalquil.
[0268] Conforme aqui utilizado, o termo “C3-14cicloalquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C3-14cicloalquil.
[0269] Conforme aqui utilizado, o termo “C3-14cicloalquil-oxi” se refere a um radical de fórmula: -O-C3-14cicloalquil.
[0270] Conforme aqui utilizado, o termo “halo” ou “halogênio” geralmente se refere a um radical de átomo de halogênio, incluindo fluor, cloro, bromo e iodo.
[0271] Conforme aqui utilizado, o termo “halo-C1-8alcoxi” se refere a um radical de fórmula: -O-C1-8alquil-halo, em que C1-8alquil é parcialmente ou completamente substituído com um ou mais átomos de halogênio quando permitido por valências disponíveis.
[0272] Conforme aqui utilizado, o termo “halo-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-halo, em que C1-8alquil é parcialmente ou completamente substituído com um ou mais átomos de halogênio quando permitido por valências disponíveis.
[0273] Conforme aqui utilizado, o termo “halo-C1-8alquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C1-8alquil-halo.
[0274] Conforme aqui utilizado, o termo “(halo-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil)(C1-8alquil-halo).
[0275] Conforme aqui utilizado, o termo “(halo-C1-8alquil)2-amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil-halo)2.
[0276] Conforme aqui utilizado, o termo “heteroaril-C1-8alcoxi” se refere a um radical de fórmula: -O-C1-8alquil-heteroaril.
[0277] Conforme aqui utilizado, o termo “heteroaril-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-heteroaril.
[0278] Conforme aqui utilizado, o termo “heteroaril-C1-8alquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C1-8alquil-heteroaril.
[0279] Conforme aqui utilizado, o termo “(heteroaril-C1-8alquil)2-amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil-heteroaril)2.
[0280] Conforme aqui utilizado, o termo “(heteroaril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil)(C1-8alquil-heteroaril).
[0281] Conforme aqui utilizado, o termo “heteroaril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-NH-C1-8alquil-heteroaril.
[0282] Conforme aqui utilizado, o termo “(heteroaril-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-N(C1-8alquil-heteroaril)2.
[0283] Conforme aqui utilizado, o termo “(heteroaril-C1-8alquil(C1-8alquil)amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula:-C1-8alquil-N(C1-8alquil)(C1-8alquil-heteroaril).
[0284] Conforme aqui utilizado, o termo “heteroaril-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-heteroaril.
[0285] Conforme aqui utilizado, o termo “heterociclil-C1-8alcoxi” se refere a um radical de fórmula: -O-C1-8alquil-heterociclil.
[0286] Conforme aqui utilizado, o termo “heterociclil-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-heterociclil.
[0287] Conforme aqui utilizado, o termo “(heterociclil)(C1-8alquil)amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil)(heterociclil).
[0288] Conforme aqui utilizado, o termo “heterociclil-C1-8alquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C1-8alquil-heterociclil.
[0289] Conforme aqui utilizado, o termo “(heterociclil-C1-8alquil)2-amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil-heterociclil)2.
[0290] Conforme aqui utilizado, o termo “(heterociclil-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil)(C1-8alquil-heterociclil).
[0291] Conforme aqui utilizado, o termo “heterociclil-C1-8alquil-amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-NH-C1-8alquil-heterociclil.
[0292] Conforme aqui utilizado, o termo “(heterociclil-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-N(C1-8alquil-heterociclil)2.
[0293] Conforme aqui utilizado, o termo “(heterociclil-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-N(C1-8alquil)(C1-8alquil-heterociclil).
[0294] Conforme aqui utilizado, o termo “heterociclil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-heterociclil.
[0295] Conforme aqui utilizado, o termo “heterociclil-amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-NH-heterociclil.
[0296] Conforme aqui utilizado, o termo “heterociclil-carbonil” se refere a um radical de fórmula: -C(O)-heterociclil.
[0297] Conforme aqui utilizado, o termo “heterociclil-carbonil-oxi” se refere a um radical de fórmula: -O-C(O)-heterociclil.
[0298] Conforme aqui utilizado, o termo “heterociclil-oxi” se refere a um radical de fórmula: -O-heterociclil.
[0299] Conforme aqui utilizado, o termo “hidroxi” se refere a um radical de fórmula: -OH.
[0300] Conforme aqui utilizado, o termo “hidroxi-C1-8alcoxi-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-O-C1-8alquil-OH.
[0301] Conforme aqui utilizado, o termo “hidroxi-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-OH, em que C1-8alquil é parcialmente ou completamente substituído com um ou mais radicais hidroxi quando permitido por valências disponíveis.
[0302] Conforme aqui utilizado, o termo “(hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil)(C1-8alquil-OH).
[0303] Conforme aqui utilizado, o termo “hidroxi-C1-8alquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C1-8alquil-OH.
[0304] Conforme aqui utilizado, o termo “(hidroxi-C1-8alquil)2-amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil-OH)2.
[0305] Conforme aqui utilizado, o termo “hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-NH-C1-8alquil-OH.
[0306] Conforme aqui utilizado, o termo “(hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-N(C1-8alquil)(C1-8alquil-OH).
[0307] Conforme aqui utilizado, o termo “(hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil” se refere a um radical de fórmula: -C1-8alquil-N(C1-8alquil-OH)2.
[0308] Conforme aqui utilizado, o termo “hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi” se refere a um radical de fórmula: -O-C1-8alquil-NH-C1-8alquil-OH.
[0309] Conforme aqui utilizado, o termo “(hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alcoxi” se refere a um radical de fórmula: -O-C1-8alquil-N(C1-8alquil)(C1-8alquil-OH).
[0310] Conforme aqui utilizado, o termo “(hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi” se refere a um radical de fórmula: -O-C1-8alquil-N(C1-8alquil-OH)2.
[0311] Conforme aqui utilizado, o termo “hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C1-8alquil-NH-C1-8alquil-OH.
[0312] Conforme aqui utilizado, o termo “(hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil)2-amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil-NH-C1-8alquil-OH)2.
[0313] Conforme aqui utilizado, o termo “(hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C1-8alquil-N(C1-8alquil-OH)2.
[0314] Conforme aqui utilizado, o termo “(hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino” se refere a um radical de fórmula:-N(C1-8alquil)(C1-8alquil-NH-C1-8alquil-OH).
[0315] Conforme aqui utilizado, o termo “[(hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil](C1-8alquil)amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil)[C1-8alquil-N(C1-8alquil-OH)2].
[0316] Conforme aqui utilizado, o termo “(hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil-amino” se refere a um radical de fórmula: -NH-C1-8alquil-N(C1-8alquil,C1-8alquil-OH).
[0317] Conforme aqui utilizado, o termo “[(hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino- C1-8alquil](C1-8alquil)amino” se refere a um radical de fórmula: -N(C1-8alquil)[C1-8alquil-N(C1-8alquil)(C1-8alquil-OH)].
[0318] Conforme aqui utilizado, o termo "substituinte" significa as variáveis posicionais sobre os átomos de uma molécula principal, que estão ligados a um átomo de posição designada, substituindo um ou mais átomos de hidrogênio no átomo designado, desde que o átomo de ligação não exceda a valência disponível ou valências compatilhadas, tais como a substituição resulte em um composto estável. Por conseguinte, as combinações de substituintes e/ou variáveis são apenas permitidas se essas combinações resultarem em compostos estáveis. Também deve ser notado que qualquer átomo de carbono, bem como com heteroátomos, com nível de valência que parece estar insatisfeito, como descrito ou mostrado aqui, é assumido como tendo um número suficiente de átomo(s) de hidrogênio para satisfazer as valências descritas ou mostradas.
[0319] Para os efeitos da presente descrição, em que uma ou mais variáveis substituintes para um composto de Fórmula (I) englobam as funcionalidades incorporadas num composto de Fórmula (I), cada funcionalidade aparece em qualquer local no interior do composto descrito pode ser selecionado de forma independente e, quando apropriado, substituído de forma independente e/ou opcionalmente.
[0320] Conforme aqui utilizado, os termos "selecionado independentemente" ou "cada um selecionado" se refere a variáveis funcionais em uma lista de substituinte que pode estar ligado mais do que uma vez na estrutura de uma molécula principal, em que o padrão de substituição em cada ocorrência é independente do padrão em qualquer outra ocorrência. Além disso, o uso de um substituinte genérico sobre uma estrutura principal para um composto aqui apresentado é entendido para incluir a substituição do substituinte genérico com espécies substituintes que estão incluídos dentro do gênero particular, por exemplo, aril pode ser substituído independentemente com fenil ou naftalenil (também referido como naftil) e semelhantes, de tal modo que o composto resultante deve estar incluído no âmbito dos compostos aqui descritos.
[0321] Conforme aqui utilizado, o termo "cada ocorrência de" quando usado em uma frase como “...aril, aril-Ci-salquil,heterociclil e heterociclil-C1-8alquil, em que cada ocorrência de aril e heterociclil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes.” se destina a incluir uma substituição opcional, independente em cada um dos anéis de aril e heterociclil e em porções de aril e heterociclil de aril-Ci-8alquil e heterociclil-Ci-8alquil.
[0322] Conforme aqui utilizado, o termo "opcionalmente substituído" significa que as variáveis, grupos, radicais ou unidades de substituintes especificados representam o âmbito do gênero e pode ser escolhido de forma independente conforme necessário para substituir um ou mais átomos de hidrogênio no átomo designado de ligação de uma molécula principal.
[0323] Conforme aqui utilizado, os termos "compost estável" ou "estrutura estável" significam um composto que é suficientemente robusta para ser isolado a um grau de pureza útil a partir de uma mistura de reação e suas formulações em um agente terapêutico eficaz.
[0324] Nomes compostos aqui contidos foram obtidos utilizando o programa ACD Labs Index Name fornecido pelo ACD Labs e/ou programa ChemDraw Ultra fornecidos por CambridgeSoft®. Quando o nome do composto aqui revelado conflita com a estrutura descrita, a estrutura mostrada vai superar o uso do nome para definir o composto pretendido. Nomenclatura para os radicais substituintes aqui definidos podem diferir ligeiramente do nome químico do qual eles são derivados; um perito na arte irá reconhecer que a definição do radical substituinte se destina a incluir o radical como encontrado no nome químico.
[0325] O termo "NMS", a menos que especificado de outra maneira, se refere a um gene NMS1 humano, DNA ou RNA e/ou o gene NMS2 humano, DNA ou RNA. Numa forma de realização específica, o termo "NMS1" se refere a um gene NMS1 humano, DNA ou RNA. Em uma outra forma de realização específica, o termo "NMS2" se refere a um gene NMS2 humano, DNA ou RNA.
[0326] As sequências de ácidos nucleicos para os genes NMS1 e NMS2 humanos são conhecidas na arte. Para sequências de ácidos nucleicos de NMS1 humano, ver, por exemplo, GenBank Accession Nos. DQ894095, NM—000344, NM—022874 e BC062723. Para sequências de ácidos nucleicos de NMS2 humano, ver, por exemplo, NM—022875, NM—022876, NM—022877, NM—017411, DQ894734 (Life Technologies, Inc. (formalmente Invitrogen), Carlsbad, Calif.), BC000908, BC070242, CR595484, CR598529, CR609539, U21914 e BC015308.
[0327] O gene NMS1 pode ser encontrado na cadeia dianteira do cromossoma 5 humano a partir de cerca de 70.220.768 nucleotídeo a cerca de 70.249.769 nucleotídeo. As localizações aproximadas de éxons 6, 7 e 8 e íntrons 6 e 7 do NMS1 no cromossomo 5 humano são as seguintes:
[0328] 70241893 a 70242003 éxon 6;
[0329] 70242004 a 70247767 íntron 6;
[0330] 70247768 a 70247821 éxon 7;
[0331] 70247822 a 70248265 íntron 7;
[0332] 70248266 a 70248839 éxon 8.
[0333] O gene NMS2 pode ser encontrado na cadeia dianteira do cromossoma 5 humano a partir de cerca de 69.345.350 nucleotídeos a cerca de 69.374.349 nucleotídeo.
[0334] As localizações aproximadas de éxons 6, 7 e 8 e íntrons 6 e 7 do NMS2 no cromossomo 5 humano são as seguintes:
[0335] 69366468 a 69366578 éxon 6;
[0336] 69366579 a 69372347 íntron 6;
[0337] 69372348 a 69372401 éxon 7;
[0338] 69372402 a 69372845 íntron 7; e,
[0339] 69372846 a 69373419 éxon 8.
[0340] Em formas de realização específicas, as sequências de nucleotídeos delineadas acima para éxons 6, 7 e 8 e introns 6 e 7 do NMS1 são utilizadas nas construções de ácidos nucléicos do minigene NMS1 aqui descritos. Em outras formas de realização específicas, as sequências de nucleotídeos dos éxons 6, 7 e 8 e dos íntrons 6 e 7 do NMS2 nos exemplos aqui proporcionados são utilizadas nas construções de ácido nucleico do minigene NMS2 aqui descritos.
[0341] O termo "Nms" ou "proteína de Nms", a menos que especificado de outra maneira, se refere aqui a uma proteína Nms humana que contém os resíduos de aminoácidos codificados por éxons 1 a 7 do gene NMS1 e/ou gene NMS2. Numa forma de realização específica, a proteína Nms é estável e funcional in vitro e/ou in vivo, tal como avaliado por métodos conhecidos dos peritos na arte. Numa outra forma de realização específica, a proteína Nms é a proteína de comprimento completo codificado pelo gene NMS1 humano e/ou gene NMS2. Numa outra forma de realização específica, a proteína Nms tem a sequência de aminoácidos encontrados na GenBank Accession No. NP_000335, AAC50473.1, AAA66242.1 ou NP_059107.
[0342] Conforme aqui utilizado, o termo "aumenta a inclusão do éxon 7 do NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2", e termos análogos, a menos que especificado de outra maneira, se refere à inclusão da sequência completa, intacta, não truncada do éxon 7 do NMS2 em mRNA maduro que é transcrita partir do gene NMS2 (ou seja, resultando na produção de NMS2 mRNA de comprimento completo) in vitro e/ou in vivo, como avaliado por meio de métodos conhecidos de um perito na arte; de tal modo que o aumento dos níveis de proteína Nms são produzidos a partir do gene NMS2 in vitro e/ou in vivo, como avaliado por métodos conhecidos dos especialistas na arte; ou que o aumento da expressão da proteína Nms estável e funcional é produzido a partir do gene NMS2 in vitro e/ou in vivo, como avaliado por métodos conhecidos dos especialistas na arte; ou, que a expressão da proteína de fusão codificada pelo minigene é aumentada in vitro, tal como avaliado por métodos conhecidos dos especialistas na arte; ou, que a expressão da proteína de Nms produzida a partir do gene NMS2 num sujeito (por exemplo, um modelo animal para o AME ou um paciente humano) em necessidade do mesmo é aumentada.
[0343] Conforme aqui utilizado, o termo "aumenta a inclusão do éxon 7 do NMS1 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS1", e termos análogos, a menos que especificado de outra maneira, se refere à inclusão da sequência completa, intacta, não truncada do éxon 7 do NMS1 em mRNA maduro que é transcrita partir do gene NMS1 (ou seja, resultando na produção de NMS1 mRNA de comprimento completo) in vitro e/ou in vivo, como avaliado por meio de métodos conhecidos de um perito na arte, de tal modo que o aumento dos níveis de proteína Nms são produzidos a partir do gene NMS1 in vitro e/ou in vivo, como avaliado por métodos conhecidos dos especialistas na arte; ou, que o aumento da expressão da proteína Nms estável e funcional é produzido a partir do gene NMS1 in vitro e/ou in vivo, como avaliado por métodos conhecidos dos especialistas na arte; ou,que a expressão da proteína de fusão codificada pelo minigene é aumentada in vitro, tal como avaliado por métodos conhecidos dos especialistas na arte; ou, que a expressão da proteína de Nms produzida a partir do gene NMS1 num sujeito (por exemplo, um modelo animal para o AME ou um paciente humano) em necessidade do mesmo é aumentada.
[0344] Conforme aqui utilizado, o termo "mudança substancial" no contexto da quantidade de mRNA significa que a quantidade de alterações de mRNA numa quantidade estatisticamente significativa, por exemplo, um valor p inferior a um valor selecionado de 0,1, 0,05, 0,01, 0,005,0,001, 0,0005, 0,0001, 0,00005 ou 0,00001.
[0345] Conforme aqui utilizado, o termo "sujeito" e "paciente" são usados indistintamente para se referir a um animal ou qualquer organismo vivo que tem a sensação e o poder do movimento voluntário e que requer para sua existência oxigênio e alimentos orgânicos. Exemplos não restritivos incluem membros da espécie humana, eqüinos, suínos, bovinos, ratos, murinos, caninos e felinos. Em algumas formas de realização, o sujeito é um mamífero ou um animal vertebrado de sangue quente. Em certas formas de realização, o indivíduo é um animal não-humano. Em formas de realização específicas, o sujeito é um ser humano.
[0346] Conforme aqui utilizado, o termo "humano idoso" se refere a um humano de 65 anos de idade ou mais.
[0347] Conforme aqui utilizado, o termo "adulto humano" se refere a um humano que tem de 18 anos ou mais.
[0348] Conforme aqui utilizado, o termo "criança humana" se refere a um humano que tem de 1 ano a 18 anos de idade.
[0349] Conforme aqui utilizado, o termo "bebê humano" se refere a um recém-nascido de 1 ano de idade humana.
[0350] Conforme aqui utilizado, o termo "criança humana" se refere a um humano que tem de 1 ano a 3 anos de idade.
FORMAS DOS COMPOSTOS
[0351] Conforme aqui utilizado, os termos "um composto de Fórmula (Ia)" e " um composto de Fórmula (Ib)" se referem a sub-gêneros do composto de Fórmula (I) ou uma forma sua e são aqui definidos. Em vez de repetir formas de realização de um composto de Fórmula (Ia) ou um composto de Fórmula (Ib), em certas formas de realização, o termo "um composto(s) de Fórmula (I) ou uma forma sua" é utilizado para se referir a qualquer um composto de Fórmula (Ia) ou uma forma sua, um composto de Fórmula (Ib) ou uma forma sua ou ambas. Assim, formas de realização e as referências a "um composto de Fórmula (I)" se destinam a incluir os compostos de Fórmula (Ia) e Fórmula (Ib).
[0352] Conforme aqui utilizado, o termo "forma" significa um composto de Fórmula (I) selecionado a partir de um ácido livre, base livre, sal, isotopólogo, estereoisômero, racemato, enantiômero, diasteroisômero ou seu tautômero.
[0353] Em certas formas de realização aqui descritas, a forma do composto de Fórmula (I) é uma selecionada a partir de um sal, isotopólogo, estereoisômero, racemato, enantiômero, diasteroisômero ou tautômero.
[0354] Em certas formas de realização aqui descritas, a forma do composto de Fórmula (I) é uma selecionada a partir de um ácido livre, isotopólogo, estereoisômero, racemato, enantiômero, diasteroisômero ou tautômero.
[0355] Em certas formas derealização aqui descritas, a forma do composto de Fórmula (I) é uma selecionada de umuma base livre, isotopólogo, estereoisômero, racemato, enantiômero, diasteroisômero ou tautômero.
[0356] Em certas formas de realização aqui descritas, a forma do composto de Fórmula (I) é um ácido livre, base livre ou um sal destes.
[0357] Em certas formas de realização aqui descritas, a forma do composto de Fórmula (I) é um isotopólogo destes.
[0358] Em certas formas de realização aqui descritas, a forma do composto de Fórmula (I) é um estereoisômero, racemato, enantiômero ou diasteroisômero destes.
[0359] Em certas formas de realização aqui descritas, a forma do composto de Fórmula (I) é um seu tautômero.
[0360] Em certas formas de realização aqui descritas, a forma do composto de Fórmula (I) é uma forma farmacêuticamente aceitável.
[0361] Em certas formas de realização aqui descritas, o composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, é isolada para utilização.
[0362] Tal como aqui utilizado, o termo "isolado" significa que o estado físico de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, depois de ter sido isolada e/ou purificada a partir de um processo de síntese (por exemplo, a partir de uma mistura de reacção) ou fonte natural ou a combinação destes, de acordo com um processo ou processos de isolamento ou de purificação aqui descritos ou que são bem conhecidos dos especialistas na técnica (por exemplo, cromatografia, recristalização e semelhantes) em pureza suficiente para ser caracterizável por técnicas analíticas padrão, descritas no presente documento ou bem conhecidos pelo especialista na técnica.
[0363] Tal como aqui utilizado, o termo "protegido" significa que um grupo funcional num composto de Fórmula (I) está em uma forma modificada para evitar reações colaterais indesejáveis no local protegido quando o composto é submetido a uma reação. Os grupos protetores adequados serão reconhecidos pelos peritos na arte, bem como por referência a livros de texto padrão tais como, por exemplo, T. W. Greene et al, Protective Grupos in Organic Synthesis (1991), Wiley, New York.
[0364] Os pró-fármacos de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua também estão aqui contemplados.
[0365] Tal como aqui utilizado, o termo "pró-fármaco" significa que um grupo funcional num composto de Fórmula (I) está na forma (por exemplo, atuando como um precursor de droga ativa ou inativa) em que é transformado in vivo para produzir um composto de Fórmula (I) ativo ou mais ativo ou uma forma sua. A transformação pode ocorrer por vários mecanismos (por exemplo, por processos químicos metabólicos e/ou não metabólicos), tais como, por exemplo, por hidrólise e/ou metabolismo no sangue, fígado e/ou em outros órgãos e tecidos. Uma discussão do uso de pró-fármacos é proporcionada por V.J. Stella, et. al., “Biotechnology: Pharmaceutical Aspects, Prodrugs: Challenges and Rewards”, American Association of Pharmaceutical Scientists and Springer Press, 2007.
[0366] Em um exemplo, quando um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, contém um grupo funcional ácido carboxílico, um pró-fármaco pode compreender um éster formado pela substituição do átomo de hidrogênio do grupo ácido com um grupo funcional, tal como alquil e semelhantes. Em outro exemplo, quando um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua contém um grupo funcional álcool, um pró-fármaco pode ser formado pela substituição do átomo de hidrogênio do grupo álcool com um grupo funcional, tal como alquil ou carbonila substituída e semelhante. Em outro exemplo, quando um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua contém um grupo funcional amina, um pró-fármaco pode ser formado pela substituição de um ou mais átomos de hidrogênio de amina com um grupo funcional, tal como alquil ou carbonila substituído. Em outro exemplo, quando um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua contém um substituinte de hidrogênio, um pró-fármaco pode ser formado pela substituição de um ou mais átomos de hidrogênio com um substituinte alquil.
[0367] Pró-fármacos farmacêuticamente aceitáveis dos compostos de Fórmula (I) ou uma forma destes incluem aqueles compostos substituídos com um ou mais dos seguintes grupos: ésteres de ácido carboxílico, ésteres de sulfonato, ésteres de ácido amino ésteres fosfonato, ésteres ou alquil substituintes de mono, di ou trifosfato, se apropriado. Tal como aqui descrito, é entendido por uma pessoa com conhecimentos na técnica que um ou mais de tais substituintes pode ser utilizado para proporcionar um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua para o uso como um pró-fármaco.
[0368] Um ou mais compostos aqui descritos podem existir em formas não solvatadas bem como solvatadas com solventes farmacêuticamente aceitáveis, tais como água, etanol, e semelhantes e a descrição aqui feita pretende abranger ambas as formas solvatadas e não solvatadas.
[0369] Tal como aqui utilizado, o termo "solvato" significa uma associação fisica de um composto aqui descrito com uma ou mais moléculas de solvente. Esta associação física envolve diferentes graus de ligação iônica e covalente, incluindo ligações de hidrogênio. Em certos casos, o solvato será capaz de isolamento, por exemplo, quando uma ou mais moléculas de solvente são incorporadas na rede de cristal do sólido cristalino. Tal como aqui utilizado, "solvato" inclui tanto em fase de solução e solvatos isoláveis. Exemplos não limitativos de solvatos adequados incluem etanolatos, metanolatos e semelhantes.
[0370] Um ou mais compostos aqui descritos podem ser opcionalmente convertidos em um solvato. Preparação de solvatos é geralmente conhecido. Um processo típico, não limitativo, envolve a dissolução de um composto em uma quantidade desejada do solvente desejado (orgânico ou água ou suas misturas) a uma temperatura superior a ambiente e arrefecimento da solução a uma taxa suficiente para formar cristais, que depois são isolados por métodos padrão. Técnicas analíticas tais como, por exemplo, espectroscopia de infravermelho, mostram a presença de solvente (ou água) nos cristais como solvato (ou hidrato).
[0371] Tal como aqui utilizado, o termo "hidrato" significa um solvato, em que a molécula de solvente é a água.
[0372] Os compostos de Fórmula (I) podem formar sais, os quais se destinam a ser incluídos no escopo desta descrição. A referência a um composto de Fórmula (I) aqui é entendido para incluir a referência a seus sais, a menos que indicado de outra forma. O termo "sal(is)", tal como aqui utilizado, designa os sais formados com ácidos inorgânicos e/ou ácidos orgânicos, bem como sais básicos formados com bases inorgânicas e/ou orgânicas. Além disso, quando um composto de Fórmula (I) contém um grupo básico, tal como, mas não se limitando a, uma piridina ou imidazol e uma unidade ácida, tal como, mas não limitada a, um ácido carboxílico, zwitteriões ("sais internos") podem ser formados e estão incluídos no termo "sal (is)", tal como aqui utilizado.
[0373] O termo "sal(is) farmacêuticamente aceitável(is)",tal como aqui utilizado, significa que os sais dos compostos aqui descritos que são seguros e eficazes (isto é, não- tóxicos, fisiologicamente aceitáveis) para uso em mamíferos e que possuem atividade biológica, embora outros sais também sejam úteis. Os sais dos compostos de Fórmula (I) podem ser formados, por exemplo, por reação de um composto de Fórmula (I) com uma quantidade de ácido ou base, tal como uma quantidade equivalente ou estequiométrica, num meio tal como um em que o sal se precipita ou num meio aquoso seguido de liofilização.
[0374] Os sais farmacêuticamente aceitáveis incluem um ou mais sais de grupos ácidos ou básicos presentes nos compostos aqui descritos. As forma de realização de sais de adição de ácido incluem, mas não estão limitados a, acetato, fosfato ácido, ascorbato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, bitartarato, borato, butirato, cloreto, citrato, canforato, canforsulfonato, etanossulfonato, formato, fumarato,gentisinato, gluconato, glucoronato, glutamato, bromidrato, cloridrato, dicloridrato, iodidrato, isonicotinato, lactato, maleato, metanossulfonato, naftalenossulfonato, nitrato,oxalato, pamoato, pantotenato, fosfato, propionato, sacarato, salicilato, succinato, sulfato, tartarato, tiocianato,toluenossulfonato (também conhecido como tosilato), sais trifluoroacetato e semelhantes. Certas formas de realização de sais de adição de mono-ácido, di-ácido ou tri-ácidos incluem um sal de cloreto, cloridrato, dicloridrato, tricloridrato, bromidrato, acetato, diacetato ou trifluoroacetato. Mais formas de realização particulares incluem um sal de cloreto, cloridrato, dicloridrato, bromidrato ou trifluoroacetato.
[0375] Além disso, os ácidos que são geralmente considerados apropriados para a formação de sais farmacêuticamente úteis de compostos farmacêuticos básicos são discutidos, por exemplo, por P. Stahl et al, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33, 201-217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; and in The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C., em seu site). Estas divulgações estão aqui incorporadas por referência.
[0376] Os sais básicos adequados incluem, mas não estão limitados a, sais de alumínio, amônio, cálcio, lítio, magnésio, potássio, sódio, zincoo e dietanolamina. Certos compostos aqui descritos podem também formar sais farmacêuticamente aceitáveis com bases orgânicas (por exemplo, aminas orgânicas) tais como, mas não limitados a, diciclohexilaminas, terc-butil-aminas e semelhantes, e vários aminoácidos, tais como, mas não limitados a, arginina, lisina e semelhantes. Grupos contendo nitrogênio básicos podem ser quaternizados com agentes tais como halogenetos de alquil inferior (por exemplo, cloretos de metil, etil, butila, brometos e iodetos), sulfatos de dialquil (por exemplo, sulfatos de dimetil, dietil e dibutil), halogenetos de cadeia longa (por exemplo, cloretos de decil, lauril e estearil, brometos e iodetos), halogenetos de aralquil (por exemplo, brometos de benzil e fenetil) e outros.
[0377] Todos esses sais de ácido e sais de base destinam-se a ser sais farmacêuticamente aceitáveis dentro do âmbito da descrição e todos os sais ácidos e básicos são considerados equivalentes às formas livres dos compostos correspondentes para os fins aqui descritos.
[0378] Os compostos de Fórmula I e as suas formas podem ainda existir na forma tautomérica (por exemplo, como uma forma ceto ou enol, tal como um sistema enona incorporado). Todas estas formas tautoméricas estão aqui contempladas como parte da presente descrição.
[0379] Os compostos de Fórmula (I) podem conter centros assimétricos ou quirais e, por conseguinte, podem existir em diferentes formas estereoisoméricas. A presente descrição se destina a incluir todas as formas estereoisoméricas dos compostos de Fórmula (I), bem como as suas misturas, incluindo misturas racêmicas.
[0380] Os compostos de Fórmula (I) aqui descritos podem incluir um ou mais centros quirais, e, como tal, podem existir como misturas racêmicas (R/S) ou como enantiômeros substancialmente puros e diasteroisômeros. Os compostos podem também existir como substancialmente puro (R) ou (S) enantiômeros (quando um centro quiral se encontra presente). Em uma forma de realização, os compostos de Fórmula (I) aqui descritos são isômeros(S) e podem existir como compostos enantiomericamente puros substancialmente compreendendo apenas o isômero (S). Em outra forma de realização, os compostos de Fórmula (I) aqui descritos são isômeros (R) e podem existir como compostos enantiomericamente puros substancialmente compreendendo apenas o isômero (R). Como um perito na arte irá reconhecer, quando mais do que um centro quiral estiver presente, os compostos de Fórmula (I) aqui descritos podem também incluir porções descritas como isômero (R,R), (R,S), (S,R) ou (S,S), conforme definido pela IUPAC Nomenclature Recommendations.
[0381] Tal como aqui utilizado, o termo "substancialmente puro" se refere a compostos que consistem substancialmente de um único isômero numa quantidade maior ou igual a 90%, em uma quantidade maior ou igual a 92%, em uma quantidade maior ou igual a 95%, em uma quantidade maior ou igual a 98%, em uma quantidade maior ou igual a 99% ou numa quantidade igual a 100% do único isômero.
[0382] Em um aspecto, um composto de Fórmula (I) é um enantiômero (S) substancialmente puro presente numa quantidade maior ou igual a 90%, em uma quantidade maior ou igual a 92%, em uma quantidade maior ou igual a 95%, em uma quantidade maior ou superior a 98%, em uma quantidade maior ou superior a 99% ou em um montante igual a 100%.
[0383] Em um aspecto, um composto de Fórmula (I) é um enantiômero (R) substancialmente puro presente numa quantidade maior ou igual a 90%, em uma quantidade maior ou igual a 92%, em uma quantidade maior ou igual a 95%, em uma quantidade maior ou superior a 98%, em uma quantidade maior ou superior a 99% ou em um montante igual a 100%.
[0384] Tal como aqui utilizado, um "racemato" é qualquer mistura de formas isométricas que não são "enantiomericamente puros", incluindo as misturas, tais como, sem limitação, numa proporção de cerca de 50/50, cerca de 60/40, cerca de 70/30, cerca de 80/20, cerca de 85/15 ou cerca de 90/10.
[0385] Além disso, a presente descrição, abrange todos os isômeros geométricos e posicionais. Por exemplo, se um composto de Fórmula geral (I) incorpora uma ligação dupla ou um anel fundido, tanàs formas cis e trans, bem como misturas, estão abrangidas no âmbito da presente descrição.
[0386] As misturas diastereoméricas podem ser separadas nos seus diasteroisômeros individuais numa base das suas diferenças físico-químicas por métodos bem conhecidos dos peritos na arte, tais como, por exemplo, por cromatografia e/ou cristalização fracionada. Os enantiômeros podem ser separados através da utilização de coluna de HPLC quiral ou por outros métodos cromatográficos conhecidos dos peritos na arte.
[0387] Os enantiômeros podem também ser separados por conversão da mistura enantiomérica em uma mistura diastereomérica por reação com um composto opticamente ativo apropriado (por exemplo, quiral auxiliar tal como um álcool quiral ou cloreto ácido de Mosher), separando os diasteroisômeros e convertendo (eg, hidrolisando) os diasteroisômeros individuais nos enantiômeros puros correspondentes. Além disso, alguns dos compostos de Fórmula (I) podem ser atropisômeros (por exemplo, biarilas substituídas) e são considerados como parte da presente descrição.
[0388] Também é possível que os compostos de Fórmula (I) possam existir em diferentes formas tautoméricas e todas essas formas estão incluídas no âmbito desta descrição. Por conseguinte, todas as formas ceto-enol e imina-enamina de um composto de Fórmula (I) estão incluídos na presente descrição.
[0389] Todas as formas de estereoisômeros (por exemplo, isômeros geométricos, isômeros ópticos, isômeros de posição e semelhantes) dos presentes compostos (incluindo os seus sais, solvatos, ésteres e pró-fármacos e pró-fármacos transformados dos mesmos) que podem existir devido a carbonos assimétricos em vários substituintes, incluindo as formas enantioméricas (que podem existir mesmo na ausência de carbonos assimétricos), formas rotaméricas, atropisômeros, formas diastereoméricas e formas regioisoméricas estão contempladas no âmbito da presente descrição. Por exemplo, se um composto de Fórmula (I) incorpora uma ligação dupla ou um anel fundido, tanàs formas cis e trans, bem como suas misturas, estão abrangidas no âmbito da presente descrição. Além disso, por exemplo, todas as formas tautoméricas ceto-enol e imina- enamina dos compostos estão incluídas na presente descrição. Os estereoisômeros individuais dos compostos de Fórmula (I) aqui descritos podem, por exemplo, ser substancialmente livres de outros isômeros ou podem estar presentes numa mistura racêmica, tal como descritos acima.
[0390] O uso dos termos "sal", "pró-fármaco" e "pró-fármaco transformado" destina-se a se aplicar igualmente aos sais, pró-fármacos e pró-fármacos transformados de todos os isotopólogos, estereoisômeros, racematos ou tautômeros dos compostos contemplados.
[0391] O termo "isotopólogo" se refere a compostos isotopicamente enriquecidos, que são idênticos aos aqui citados, exceto no fato de que um ou mais átomos são substituídos por um átomo tendo uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa usualmente encontrados na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos descritos na presente invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, flúor e cloro, tais como H2, H3, C13, C14, N15, O18, O17, P31, P32, S35, F18, Cl35 e Cl36, respectivamente, cada um dos quais também está dentro do âmbito desta descrição.
[0392] Certos compostos isotopicamente enriquecidos aqui descritos (por exemplo, aqueles rotulados com H3 e C14) são úteis no composto e/ou ensaios de distribuição de tecido de substrato. Isótopos tritiados (isto é, H3) e carbono-14 (isto é, C14) são particularmente preferidos pela sua facilidade de preparação e detectabilidade. Além disso, a substituição com isótopos mais pesados tais como o deutério (isto é, H2) pode proporcionar certas vantagens terapêuticas resultantes de uma maior estabilidade metabólica (por exemplo, aumento na meia- vida in vivo ou requisitos de dosagem reduzida) e, portanto, podem ser preferidos em algumas circunstâncias. Compostos isotopicamente enriquecidos de fórmula geral (I) podem geralmente ser preparados utilizando procedimentos conhecidos para pessoas com conhecimentos normais na arte, substituindo um reagente isotopicamente enriquecido apropriado por um reagente não isotopicamente enriquecido.
[0393] Quando os compostos são enriquecidos com deutério, a proporção de deutério-a-hidrogênio nas áreas deuteradas das moléculas excede substancialmente a proporção de ocorrência natural de deutério-a-hidrogênio.
[0394] Uma forma de realização aqui descrita pode incluir um composto de Fórmula (I) e as suas formas, em que o isotopólogo é deutério.
[0395] Uma forma de realização aqui descrita pode incluir um composto de Fórmula (I) e as suas formas, em que um átomo de carbono pode ter de 1 a 3 átomos de hidrogênio opcionalmente substituído por deutério.
[0396] Formas cristalinas polimórficas e amorfas dos compostos de Fórmula (I) e dos seus sais, solvatos, ésteres e pró-fármacos dos compostos de Fórmula (I), se destinam mais a ser incluídos no âmbito dos compostos aqui descritos.
USOS DOS COMPOSTOS
[0397] Os compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua, que melhora a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2, são aqui descritos. Tais compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua têm mostrado aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2 usando os ensaios aqui descritos (ver seção exemplo Biológico, infra). Por conseguinte, os compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua têm utilidade como potenciadores para a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2.
[0398] Os compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua para o melhoramento da inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1, são aqui descritos. Tais compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua podem aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS1 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 utilizando, por exemplo, um ensaio de minigene NMS1. Por conseguinte, os compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua podem ter utilidade como potenciadores para a inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1.
[0399] Num aspecto, estão proporcionados aqui métodos para a modulação da inclusão do éxon 7 de NMS2 em RNA transcrita partir do gene NMS2, compreendendo o contato de um UM método para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA transcrita partir do gene NMS2, compreendendo o contato de um célula humana com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Numa forma de realização específica, estão proporcionados aqui métodos para a modulação da inclusão do éxon 7 de NMS2 em RNA transcrita partir do gene NMS2, compreendendo o contato de uma célula humana com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, que modula a expressão de um minigene NMS2 aqui descrito ou na Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos No. 2011/0086833, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Numa forma de realização, o minigene é um minigene descrito nos Exemplos de Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou Publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos No. 2011/0086833. Numa outra forma de realização, o minigene é o minigene descrito no Exemplo Biológico 1, infra. A célula humana pode ser contatada com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, in vitro, num animal não humano ou em um ser humano. Numa forma de realização específica, a célula humana é um ser humano. Numa outra forma de realização específica, a célula humana é um paciente humano de AME. Numa outra forma de realização específica, a célula humana é um paciente humano de AME, em que AME é causada por uma mutação de inativação ou eliminação do gene NMS1 em ambos os cromossomas, resultando numa perda de função do gene NMS1. Numa outra forma de realização, a célula humana é uma célula humana a partir de um paciente humano de AME. Em certas formas de realização, a célula humana é a partir de uma linha celular, tal como GM03813, GM00232, GM09677 e/ou GM23240 (disponíveis no Instituto Coriell).
[0400] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2, compreendendo o contato de uma célula humana com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Numa outra forma de realização, é aqui proporcionado um método para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2, compreendendo o contato de uma célula humana com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, que aumenta a expressão de um minigene NMS2 aqui descrito ou na Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos No. 2011/0086833, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Numa forma de realização, o minigene é um minigene descrito nos Exemplos de Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou Publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos No. 2011/0086833. Numa outra forma de realização, o minigene é o minigene descrito no Exemplo Biológico 1, infra. A célula humana pode ser contatada com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, in vitro, num animal não humano ou em um ser humano. Numa forma de realização específica, a célula humana é um ser humano. Numa outra forma de realização específica, a célula humana é um paciente humano de AME. Numa outra forma de realização específica, a célula humana é um paciente humano de AME, em que AME é causada por uma mutação de inativação ou eliminação do gene NMS1 em ambos os cromossomas, resultando numa perda de função do gene NMS1. Numa outra forma de realização, a célula humana é uma célula humana a partir de um paciente humano de AME. Em certas formas de realização, a célula humana é a partir de uma linha celular, tal como GM03813, GM00232, GM09677 e/ou GM23240 (disponíveis no Instituto Coriell).
[0401] Em outro aspecto, são aqui proporcionados métodos para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS1 em RNA transcrita partir do gene NMS1, compreendendo o contato de uma célula humana com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Numa forma de realização específica, são aqui proporcionados métodos para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS1 em RNA transcrita partir do gene NMS1, compreendendo o contato de uma célula humana com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Numa outra forma de realização específica, são aqui proporcionados métodos para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS1 em RNA transcrita partir do gene NMS1, compreendendo o contato de uma célula humana com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, que modula a expressão de um minigene NMS1 descrito na Publicação Internacional N°WO2009/151546 ou publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos No. 2011/0086833, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Numa forma de realização, o minigene é um minigene descrito nos Exemplos de Publicação Internacional N°WO2009/151546 ou Publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos No. 2011/0086833. A célula humana pode ser contatado com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, in vitro, num animal não humano ou num ser humano. Numa forma de realização específica, a célula humana é um ser humano. Numa outra forma de realização específica, a célula humana é um paciente humano de AME.
[0402] Em formas de realização específicas, são aqui proporcionados métodos para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS1 e NMS2 em RNA transcrita partir dos genes NMS1 e NMS2, compreendendo o contato de uma célula humana com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. A célula humana pode ser contatada com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, in vitro, num animal não humano ou em um ser humano. Numa forma de realização específica, a célula humana é um ser humano. Numa outra forma de realização específica, a célula humana é um paciente humano de AME.
[0403] Em outro aspecto, aqui proporcionado está um método para a modulação da inclusão do éxon 7 de NMS2 em RNA transcrita partir do gene NMS2, compreendendo a administração a um modelo animal não humano para a AME um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a modulação da inclusão do éxon 7 de NMS2 em RNA transcrita partir do gene NMS2, compreendendo a administração a um modelo animal não humano para a AME um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, que modula a expressão de um minigene NMS2 aqui ou na Publicação Internacional N°WO2009/151546 ou publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos No. 2011/0086833, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade descrito. Numa forma de realização, o minigene é um minigene descrito nos Exemplos de Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou Publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos No. 2011/0086833. Numa outra forma de realização, o minigene está o minigene descrito no Exemplo Biológico 1, infra.
[0404] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2, compreendendo a administração a um modelo animal não humano para a AME um composto de Fórmula (I) ou uma forma da mesma. Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2, compreendendo a administração a um modelo animal não humano para a AME um composto de Fórmula (I) ou uma forma da mesma que aumenta a expressão de um minigene NMS2 aqui descrito ou na Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos No. 2011/0086833, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Numa forma de realização, o minigene é um minigene descrito nos Exemplos de Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou Publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos No. 2011/0086833. Numa outra forma de realização, o minigene é o minigene descrito no Exemplo Biológico 1, infra.
[0405] Em outro aspecto, é aqui proporcionado um método para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS1 em RNA transcrita partir do gene NMS1, compreendendo a administração a um modelo animal não humano para a AME um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS1 em RNA transcrita partir do gene NMS1, compreendendo a administração a um modelo animal não humano para a AME um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, que modula a expressão de um minigene NMS1 aqui descrito ou na Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos No. 2011/0086833, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Numa forma de realização, o minigene é um minigene descrito nos Exemplos de Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou Publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos No. 2011/0086833. Em formas de realização específicas, é aqui proporcionado um método para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS1 e NMS2 em RNA transcrita partir dos genes NMS1 e NMS2, compreendendo a administração a um modelo animal não humano para a AME um composto de Fórmula (I) ou um forma deste.
[0406] Em outro aspecto, é aqui proporcionado um método para aumentar a quantidade de proteína Nms, compreendendo o contatar uma célula humana com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Em uma forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para aumentar a quantidade de proteína Nms, compreendendo o contato de uma célula humana com um composto de Fórmula (I), que aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2. Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para aumentar a quantidade de proteína Nms, compreendendo o contato de uma célula humana com um composto de Fórmula (I), que aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2. A célula humana pode ser contatada com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, in vitro, num animal não humano ou num ser humano. Numa forma de realização específica, a célula humana é um ser humano. Numa outra forma de realização específica, a célula humana é um paciente humano de AME. Numa outra forma de realização específica, a célula humana é um paciente humano de AME, em que AME é causada por uma mutação de inativação ou eliminação do gene NMS1 em ambos os cromossomas, resultando numa perda de função do gene NMS1. Numa outra forma de realização, a célula humana é uma célula humana a partir de um paciente humano de AME. Em certas formas de realização, a célula humana é de uma linha celular, tal como GM03813, GM00232, GM09677 e/ou GM23240 (disponíveis no Instituto Coriell).
[0407] Em outro aspecto, é aqui proporcionado um método para aumentar a quantidade de proteína Nms, compreendendo a administração a um modelo animal não humano de AME um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para aumentar a quantidade de proteína Nms, compreendendo a administração a um modelo animal não humano de AME um composto de Fórmula (I), que aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2 em, por exemplo, um ensaio baseado em célula ou livre de células, tal como descrito em Exemplos Biológicos, infra. Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para aumentar a quantidade de proteína Nms, compreendendo a administração a um modelo animal não humano de AME um composto de Fórmula (I), que aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou em NMS2 mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 em, por exemplo, um ensaio baseado em célula ou livre de células.
[0408] Numa forma de realização, o composto de Fórmula (I) aumenta a expressão de um minigene aqui descrito ou na Publicação Internacional No. WO2009/151546 ou pedido de patente No. de publicação US 2011/0086833, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Numa forma de realização específica, o composto de Fórmula (I) aumenta a expressão de um minigene descrito nos Exemplos de Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou Publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos No. 2011/0086833. Numa outra forma de realização específica, o composto de Fórmula (I) aumenta a expressão de um minigene descrito no Exemplos Biológicos 1, infra.
[0409] Numa forma de realização, é aqui proporcionada a utilização de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua para a preparação de um medicamento que aumenta a inclusão do exon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2. Numa outra forma de realização, é aqui proporcionada a utilização de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua para a preparação de um medicamento que aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2, aumentando assim a expressão de proteína Nms em um sujeito humano em necessidade do mesmo. Numa forma de realização particular, o composto de Fórmula (I) ou uma forma sua aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2 num ensaio aqui descrito (ver, por exemplo, Exemplos Biológicos, infra).
[0410] Numa forma de realização, é aqui proporcionada a utilização de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua para a preparação de um medicamento que aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2. Numa outra forma de realização, é aqui proporcionada a utilização de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua para a preparação de um medicamento que aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2, aumentando, assim, a expressão da proteína de Nms num sujeito humano em necessidade do mesmo.
[0411] Em outro aspecto, são proporcionados aqui métodos para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2 em um sujeito humano em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito humano de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2 num sujeito humano em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito humano de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, que aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2 como determinado num ensaio aqui descrito (ver, por exemplo, Exemplos Biológicos, infra). Em formas de realização específicas, a quantidade eficaz do composto de Fórmula (I) ou uma forma sua é administrada ao sujeito humano de uma composição farmacêutica compreendendo um transportador, excipiente ou diluente farmacêuticamente aceitável. Numa forma de realização particular, o composto de Fórmula (I) ou uma forma sua aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2 num ensaio aqui descrito (ver, por exemplo, Exemplos Biológicos, infra). Numa forma de realização específica, o sujeito humano é um paciente humano de AME. Numa outra forma de realização específica, o sujeito humano é um paciente humano de AME, em que AME é causada por uma mutação de inativação ou eliminação do gene NMS1 em ambos os cromossomas, resultando numa perda de função do gene NMS1.
[0412] Em outro aspecto, são proporcionados aqui métodos para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS1 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 num sujeito humano com necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito humano de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Numa forma de realização particular, o composto de Fórmula (I) ou uma forma sua aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 num ensaio descrito na Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou Publicação do Pedido de Patente US 2011/0086833. Em formas de realização específicas, a quantidade eficaz do composto de Fórmula (I) ou uma forma sua é administrado ao sujeito humano uma composição farmacêutica compreendendo um transportador, excipiente ou diluente farmacêuticamente aceitável. Numa forma de realização específica, o sujeito humano é um paciente humano de AME.
[0413] Em outro aspecto, é aqui proporcionado um método para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS1 e NMS2 em mRNA, que é transcrita partir dos genes NMS1 e NMS2 num sujeito humano com necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito humano de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Numa forma de realização particular, o composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 num ensaio(s) descrito na Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou publicação do Pedido de Patente US 2011/0086833 (ver, por exemplo, os Exemplos nestas publicações), cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade. Em formas de realização específicas, a quantidade eficaz do composto de Fórmula (I) ou uma forma sua é administrado ao sujeito humano de uma composição farmacêutica compreendendo um transportador, excipiente ou diluente farmacêuticamente aceitável. Numa forma de realização específica, o sujeito humano é um paciente humano de AME. Numa outra forma de realização específica, o sujeito humano é um paciente humano de AME, em que AME é causada por uma mutação de inativação ou eliminação do gene NMS1 em ambos os cromossomas, resultando numa perda de função do gene NMS1.
[0414] Em outro aspecto, são proporcionados aqui métodos para aumentar a expressão de proteína Nms num sujeito humano com necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito humano de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para aumentar a expressão de proteína Nms num sujeito humano com necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito humano de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, que aumenta a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2. Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para aumentar a expressão de proteína Nms num sujeito humano com necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito humano de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, que aumenta a inclusão de éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2. Em formas de realização específicas, a quantidade eficaz do composto de Fórmula (I) ou uma forma sua é administrada ao sujeito humano de uma composição farmacêutica compreendendo um transportador, excipiente ou diluente farmacêuticamente aceitável. Numa forma de realização particular, o composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 num ensaio aqui descrito (ver, por exemplo, Exemplos Biológicos, infra) ou na Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou Pedido de Patente US 2011/0086833 (ver, por exemplo, os Exemplos destas publicações), cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0415] Numa forma de realização específica, o sujeito humano é um paciente humano de AME. Numa outra forma de realização específica, o sujeito humano é um paciente humano de AME, em que AME é causada por uma mutação de inativação ou deleção na cópia do gene teleomérico NMS1 em ambos os cromossomas, resultando numa perda de função do gene NMS1.
[0416] Numa outra forma de realização, é aqui proporcionada a utilização de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua para a preparação de um medicamento que aumenta a expressão de proteína Nms num sujeito humano com necessidade do mesmo. Numa forma de realização particular, o composto de Fórmula (I) ou uma forma sua aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2 como determinado num ensaio aqui descrito (ver, por exemplo, Exemplos Biológicos, infra). Numa outra forma de realização, o composto de Fórmula (I) ou uma forma sua aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 como determinado em um ensaio aqui descrito (ver, por exemplo, o Exemplos Biológicos, infra) ou na Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou pedido de patente US 2011/0086833 (ver, por exemplo, os Exemplos destas publicações), cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade .
[0417] Em outro aspecto, são proporcionados aqui métodos para tratar a atrofia muscular espinhal (AME), que compreende a administração a um sujeito de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para o tratamento de AME num sujeito humano em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua. Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para o tratamento de AME num sujeito humano com necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua e um veículo farmacêuticamente aceitável transportador, excipiente ou diluente.
[0418] Numa outra forma de realização, é aqui proporcionado um método para o tratamento de AME num sujeito humano com necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, que aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2. Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para o tratamento de AME num sujeito humano com necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, que aumenta a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2, e um transportador, excipiente ou diluente farmacêuticamente. Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para o tratamento de AME num sujeito humano com necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao sujeito humano de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, que aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e um transportador, excipiente ou diluente farmacêuticamente aceitável. Numa forma de realização particular, o composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA que é transcrita partir do gene NMS2 num ensaio aqui descrito (ver, por exemplo, Exemplos Biológicos, infra). Numa outra forma de realização, o composto de Fórmula (I) ou uma forma sua aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 como determinado num ensaio aqui descrito (ver, por exemplo, Exemplos Biológicos, infra) ou na Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou pedido de patente US 2011/0086833 (ver, por exemplo, os Exemplos destas publicações), cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0419] Numa outra forma de realização, é aqui proporcionado o uso de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua para a produção de um medicamento para o tratamento de AME num sujeito humano com necessidade do mesmo. Numa forma de realização particular, o composto de Fórmula (I) ou uma forma sua aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2 como determinado num ensaio aqui descrito (ver, por exemplo, os Exemplos Biológicos, infra). Numa outra forma de realização, o composto de Fórmula (I) ou uma forma sua aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 como determinado num ensaio aqui descrito (ver, por exemplo, Exemplos Biológicos, infra) ou na Publicação Internacional N° WO2009/151546 ou pedido de patente US 2011/0086833 (ver, por exemplo, os Exemplos detas publicações), cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0420] Em uma forma de realização de um método ou utilização aqui fornecida, os compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua são usados em combinação com um ou mais agentes adicionais. Um(s) composto(s) de Fórmula (I) ou uma forma sua, pode ser administrado a um sujeito ou em contato com uma célula antes de, concorrentemente com, ou após a administração a um sujeito, ou o contato da célula com agente(s) adicional(is). Um(s) composto(s) de Fórmula (I) ou uma forma sua e um agente(s) adicional(is) pode ser administrado a um sujeito ou em contato com uma célula em única composição ou em composições diferentes. Em formas de realização específicas, um composto (s) de Fórmula (I) ou uma forma sua é usado em combinação com a substituição do gene de NMS1 (usando, por exemplo, vetores de entrega virais). Em outras formas de realização específicas, um composto (s) de Fórmula (I) ou uma forma sua são usados em combinação com a substituição de células usando células estaminadas NMS1+/+ e/ou NMS2+/+ diferenciadas. Em outras formas de realização específicas, um composto (s) de Fórmula (I) ou uma forma sua é usado em combinação com a substituição de células usando células estaminais NMS1+/+ diferenciadas. Em outras formas de realização específicas, um composto (s) de Fórmula (I) ou uma forma sua é usado em combinação com a substituição de células usando células estaminais NMS2+/+ diferenciadas. Numa outra forma de realização específica, um composto (s) de Fórmula (I) ou uma forma sua é usado em combinação com aclarubicina. Numa outra forma de realização específica, um composto (s) de Fórmula (I) ou uma forma sua é usado em combinação com um ativador de transcrição, tal como inibidor histona deacetilase ("HDAC") (por exemplo, butiratos, ácido valpróico e hidroxiuréia) e estabilizadores de mRNA (por exemplo, inibidor RG3039 de destapar mRNA de Repligen).
[0421] Numa forma de realização, é aqui proporcionada a utilização de compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua, em combinação com a terapia de suporte, incluindo respiratória, cuidados nutricionais ou reabilitação.
[0422] Em certas formas de realização, o tratamento de AME com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua (só ou em combinação com um agente adicional), tem um efeito terapêutico e/ou um efeito benéfico. Numa forma de realização específica, o tratamento de AME com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua (por si só ou em combinação com um agente adicional) resulta em um, dois ou mais dos seguintes efeitos: (i) reduz ou melhora a gravidade AME; (ii) atrasa início da AME; (iii) inibe a progressão de AME; (iv) reduz a hospitalização de um sujeito; (v) reduz o tempo de internação de um sujeito; (vi) aumenta a sobrevivência de um sujeito; (vii) melhora a qualidade de vida de um sujeito; (viii) reduz o número de sintomas associados com AME; (ix) reduz ou melhora a gravidade de um sintoma (s) associado com AME; (x) reduz a duração de um sintoma associado com AME; (xi) impede a recorrência de um sintoma associado à AME; (xii) inibe o desenvolvimento ou aparecimento de um sintoma da AME; e/ou (xiii) inibe a progressão de um sintoma associado com AME.
[0423] Os sintomas da AME incluem fraqueza muscular, tônus muscular pobre, choro fraco, tosse fraca, fraqueza ou uma tendência de queda, dificuldade de sucção e deglutição, dificuldade respiratória, acúmulo de secreções nos pulmões ou garganta, mão suada com os punhos cerrados, língua trêmula/vibrando, cabeça muitas vezes inclinada para um lado, mesmo quando deitado, pernas que tendem a ser mais fracas do que os braços, pernas com freqüência assume uma posição de "pernas de rã", dificuldade de alimentação, maior suscetibilidade a infecções do trato respiratório, problemas intestinais/urinários, peso inferior ao normal, incapacidade de se sentar sem apoio, falta no andar, falta no engatinhar e hipotonia, arreflexia e múltiplas contraturas congênitas (artrogripose) associados com perda de células do corno anterior.
[0424] Numa forma de realização específica, o tratamento de AME com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua (só ou em combinação com um agente adicional) resulta em um, dois ou mais dos seguintes efeitos: (i) uma redução na perda de força muscular; (ii) um aumento na força muscular; (iii) uma redução na atrofia muscular; (iv) uma redução na perda de função motora; (v) aumento de neurônios motores; (vii) a redução da perda de neurônios motores; (viii) a proteção do neurônios motores NMS deficientes de degeneração; (ix) um aumento na função motora; (x) um aumento da função pulmonar; e/ou (XI) a uma redução na perda de função pulmonar.
[0425] Numa outra forma de realização, o tratamento de AME com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua (só ou em combinação com um agente adicional) resulta na capacidade funcional ou ajuda a manter a capacidade funcional de um bebê humano ou uma criança humana para sentar. Numa outra forma de realização, o tratamento de AME com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua (só ou em combinação com um agente adicional) resulta na capacidade funcional ou ajuda a manter a capacidade funcional de um bebê humano, uma criança humana, uma criança humana ou um adulto humano de se levantar sem ajuda. Numa outra forma de realização, o tratamento de AME com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua (só ou em combinação com um agente adicional) resulta na capacidade funcional ou ajuda a manter a capacidade funcional de um bebê humano, uma criança humana, uma criança humana ou um adulto humano de andar sem ajuda. Numa outra forma de realização, o tratamento de AME com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua (só ou em combinação com um agente adicional) resulta na capacidade funcional ou ajuda a manter a capacidade funcional de bebê humano, uma criança humana, uma criança humana ou um adulto humano de correr sem ajuda. Numa outra forma de realização, o tratamento de AME com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua (só ou em combinação com um agente adicional) resulta na capacidade funcional ou ajuda a manter a capacidade funcional de um bebê humano, uma criança humana, uma criança humana ou um adulto humano de respirar sem ajuda. Numa outra forma de realização, o tratamento de AME com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua (só ou em combinação com um agente adicional) resulta na capacidade funcional ou ajuda a manter a capacidade funcional de um bebê humano, uma criança humana, uma criança humana ou um adulto humano de se virar durante o sono sem ajuda. Numa outra forma de realização, o tratamento de AME com um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua (só ou em combinação com um agente adicional) resulta na capacidade funcional ou ajuda a manter a capacidade funcional de um bebê humano, uma criança humana, uma criança humana ou um adulto humano de engolir sem ajuda.
[0426] Em certas formas de realização, um iniciador e/ou ensaio descrito abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS, tais como SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 2, 9 ou 12 e NMS ensaios, tais como o ID SEQ. 3 ou 10) é utilizado em um ensaio, tal como RT-PCR, RT-qPCR, terminal de RT-PCR, PCR, qPCR, laminagem amplificação círculo, Northern blot ou Southern blot para determinar se um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA, que é transcrita partir de um gene NMS1 e/ou NMS2. Em algumas formas de realização, um iniciador e/ou ensaio descrito abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS como SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 2, 9 ou 12 e NMS ensaios, tais como o ID SEQ. 3 ou 10) é utilizado em um ensaio, tal como RT-PCR, RT-qPCR, terminal de RT-PCR, PCR, qPCR, laminagem amplificação círculo, mancha de Northern ou Southern blot ou um kit farmacêutico ou de ensaio como descrito infra, para monitorar as respostas dos pacientes a um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua.
[0427] Numa forma de realização específica, um composto de Fórmula (I):
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[0428] ou uma forma sua é usado de acordo com um método aqui descrito, em que:
[0429] w1 e w2 são C-R1 ou C-R2; em que, um entre w1 e w2 é C-R1 e o outro é C-R2, desde que, quando w1 é C-R1,então w2 é C-R2; ou, quando w1 é C-R2, então w2 é C-R1;
[0430] R1 é C1-8alquil, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, amino-C1-8alquil-amino, (amino-C1-8alquil)2-amino, (amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (C1-8alquil-amino-C1-8alquil)2-amino, (C1-8alquil-amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, [(C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil](C1-8alquil)amino, amino-C1-8alcoxi, C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, (C1-8alcoxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alcoxi, amino-C2-8alquenil, C1-8alquil-amino-C2-8alquenil, (C1-8alquil)2-amino-C2-8alquenil, amino-C2-8alquinil, C1-8alquil-amino-C2-8alquinil, (C1-8alquil)2-amino-C2-8alquinil, halo-C1-8alquil-amino, (halo-C1-8alquil)2-amino, (halo-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, hidroxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alcoxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alcoxi, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alcoxi, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alcoxi, hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil)2-amino, (hidroxi-C1-8alquil-amino-C1-8alquil)(C1-8alquil)amin o, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil-amin o, [(hidroxi-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil](C1-8alquil)a mino, [(hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil](C1 -8alquil)amino, heterociclil, heterociclil-C1-8alquil, heterociclil-C1-8alcoxi, heterociclil-amino, (heterociclil)(C1-8alquil)amino, heterociclil-amino-C1-8alquil, heterociclil-C1-8alquil-amino, (heterociclil-C1-8alquil)2-amino, (heterociclil-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, heterociclil-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (heterociclil-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (heterociclil-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil , heterociclil-oxi, heterociclil-carbonil, heterociclil-carbonil-oxi, aril-C1-8alquil-amino, (aril-C1-8alquil)2-amino, (aril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, aril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (aril-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, (aril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil, heteroaril, heteroaril-C1-8alquil, heteroaril-C1-8alcoxi, heteroaril-amino, heteroaril-C1-8alquil-amino, (heteroaril-C1-8alquil)2-amino, (heteroaril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino, heteroaril-C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (heteroaril-C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil ou (heteroaril-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino-C1-8alquil;
[0431] em que cada ocorrência de heterociclil e heteroaril é opcionalmente substituído com um, dois ou três R3 substituintes e um adicional, opcional R4 substituinte; e,
[0432] em que, alternativamente, cada ocorrência de heterociclil e heteroaril é opcionalmente substituído com um, dois, três ou quatro R3 substituintes;
[0433] R2 é aril, aril-amino, aril-amino-carbonil, heterociclil, heteroaril ou heteroaril-amino;
[0434] Em que cada ocorrência de aril, heterociclil e heteroaril é opcionalmente substituído com um, dois ou três R6 substituintes e um adicional, opcional R7 substituinte;
[0435] Ra é, em cada ocorrência, independentemente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio ou C1-8alquil;
[0436] Rb é hidrogênio, halogênio, C1-8alquil ou C1-8alcoxi;
[0437] R3 é, em cada ocorrência, independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidroxi, oxo, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, C1-8alquil-carbonil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, C1-8alcoxi-C1-8alquil, C1-8alcoxi-carbonil, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino, amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, amino-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, C1-8alcoxi-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-carbonil-amino, C1-8alcoxi-carbonil-amino, hidroxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alcoxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino ou (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino;
[0438] R4 é C3-14cicloalquil, C3-14cicloalquil-C1-8alquil, C3-14cicloalquil-amino, aril-C1-8alquil, aril-C1-8alcoxi-carbonil, aril-sulfoniloxi-C1-8alquil, heterociclil ou heterociclil-C1-8alquil; em que, em cada ocorrência C3-14cicloalquil, aril e heterociclil é opcionalmente substituído com um, dois ou três R5 substituentes;
[0439] R5 é, em cada ocorrência, independentemente selecionado a partir de halogênio, hidroxi, ciano, nitro, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino ou C1-8alquil-tio;
[0440] R6 é, em cada ocorrência, independentemente selecionado a partir de halogênio, hidroxi, ciano, nitro, C1-8alquil, C2-8alquenil, halo-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil, C1-8alcoxi, halo-C1-8alcoxi, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino ou C1-8alquil-tio; e,
[0441] R7 é C3-14cicloalquil, C3-14cicloalquil-oxi, aril, heterociclil ou heteroaril.
[0442] Numa outra forma de realização específica, o composto de Fórmula (I) utilizado de acordo com um método aqui descrito é um composto selecionado a partir da Fórmula (Ia) ou Fórmula (Ib):
Figure img0064
[0443] ou uma forma sua, em que todas as variáveis são como anteriormente definidas.
POPULAÇÃO DE PACIENTES
[0444] Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrada a um indivíduo que sofre de AME. Em outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua é administrado a um indivíduo com predisposição para ou susceptível a AME. Numa forma de realização específica, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrado a um sujeito humano, em que o sujeito tem AME causada por uma mutação de inativação ou eliminação do gene NMS1 em ambos os cromossomas, resultando em uma perda de função do gene NMS1. Em certas formas de realização, o sujeito humano é genotipado antes da administração de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica para determinar se o indivíduo tem uma mutação de inativação ou deleção na cópia do gene teleomérico do NMS1 em ambos os cromossomas, o que resulta em uma perda de função do gene NMS1. Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou a composição farmacêutica é administrado a um sujeito com o AME Tipo 0. Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou a composição farmacêutica é administrado a um sujeito com o AME Tipo 1. Em outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou a composição farmacêutica é administrado a um sujeito com o AME Tipo 2. Em outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou a composição farmacêutica é administrado a um sujeito com o AME Tipo 3. Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou a composição farmacêutica é administrado a um sujeito com o AME Tipo 4.
[0445] Em certas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrado a um sujeito que vá ou possa se beneficiar de maior inclusão de éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2. Em formas de realização específicas, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrado a um sujeito que vá ou possa se beneficiar de um aumento da expressão da proteína NMS.
[0446] Em certas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma composição farmacêutica desta é administrado a um ser humano que tem uma idade no intervalo de entre cerca de 0 meses a cerca de 6 meses de idade, a partir de cerca de 6 a cerca de 12 meses de idade, a partir de cerca de 6 a cerca de 18 meses de idade, a partir de cerca de 18 a cerca de 36 meses de idade, a partir de cerca de 1 a cerca de 5 anos de idade, a partir de cerca de 5 a cerca de 10 anos de idade, a partir de cerca de 10 a cerca de 15 anos de idade, a partir de cerca 15 para cerca de 20 anos de idade, a partir de cerca de 20 a cerca de 25 anos de idade, a partir de cerca de 25 a cerca de 30 anos de idade, a partir de cerca de 30 a cerca de 35 anos de idade, a partir de cerca de 35 a cerca de 40 anos de idade, a partir de cerca de 40 a cerca de 45 anos idade, a partir de cerca de 45 a cerca de 50 anos de idade, a partir de cerca de 50 a cerca de 55 anos de idade, a partir de cerca de 55 a cerca de 60 anos de idade, a partir de cerca de 60 a cerca de 65 anos de idade, a partir de cerca de 65 a cerca de 70 anos de idade, a partir de cerca de 70 para cerca de 75 anos de idade, a partir de cerca de 75 a cerca de 80 anos de idade, a partir de cerca de 80 a cerca de 85 anos de idade, a partir de cerca de 85 a cerca de 90 anos de idade, a partir de cerca de 90 a cerca de 95 anos de idade ou a partir de cerca de 95 a cerca de 100 anos.
[0447] Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrado a um bebê humano. Em outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrado a uma criança humana. Em outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrado a uma criança humana. Em outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrado a um humano adulto. Em ainda outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrado a um humano idoso.
[0448] Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrado a um paciente para prevenir o aparecimento de AME num paciente em risco de desenvolvimento de AME. Em outras formas de realização, uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma composição farmacêutica é administrada a um paciente para prevenir o aparecimento de AME num paciente em risco de desenvolvimento de AME. Em outras formas de realização, uma quantidade profilaticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrada a um paciente para prevenir o aparecimento de AME num paciente em risco de desenvolvimento de AME. Em outras formas de realização, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrada a um paciente para prevenir o aparecimento de AME num paciente em risco de desenvolvimento de AME. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0449] Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrado a um paciente para tratar ou melhorar a AME num paciente AME. Em outras formas de realização, uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrado a um paciente para tratar ou melhorar a AME num paciente AME. Em outras formas de realização uma quantidade profilaticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrada a um doente para impedir o avanço de AME num paciente AME. Em outras formas de realização, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou uma sua composição farmacêutica é administrada a um paciente para tratar ou melhorar AME num paciente AME. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0450] Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou um medicamento do mesmo é administrado a um indivíduo que sofre de AME. Em outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua é administrado a um indivíduo com predisposição para ou susceptível a AME. Numa forma de realização específica, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou um medicamento do mesmo é administrado a um sujeito humano, em que o sujeito tem AME causada por uma mutação de inativação ou eliminação do gene NMS1 em ambos os cromossomas, resultando em uma perda de função do gene NMS1. Em certas formas de realização, o sujeito humano é genotipado antes da administração de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou um medicamento do mesmo para determinar se o indivíduo tem uma mutação de inativação ou deleção na cópia teleomérico do gene NMS1 em ambos cromossomas, o que resulta em uma perda de função do gene NMS1. Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a um sujeito com o AME Tipo 0. Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a um sujeito com o AME Tipo 1. Em outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a um sujeito com o AME Tipo 2. Em outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a um sujeito com o AME Tipo 3. Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a um sujeito com o AME Tipo 4.
[0451] Em certas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a um sujeito que vá ou possa se beneficiar de maior inclusão de éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2. Em formas de realização específicas, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a um sujeito que vá ou possa se beneficiar de um aumento da expressão da proteína NMS.
[0452] Em certas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a um humano que tem uma idade no intervalo de entre cerca de 0 meses a cerca de 6 meses de idade, a partir de cerca de 6 a cerca de 12 meses idade, a partir de cerca de 6 a cerca de 18 meses de idade, a partir de cerca de 18 a cerca de 36 meses de idade, a partir de cerca de 1 a cerca de 5 anos de idade, a partir de cerca de 5 a cerca de 10 anos de idade, a partir de cerca de 10 a cerca de 15 anos de idade, a partir de cerca de 15 para cerca de 20 anos de idade, a partir de cerca de 20 a cerca de 25 anos de idade, a partir de cerca de 25 a cerca de 30 anos de idade, a partir de cerca de 30 a cerca de 35 anos de idade, a partir de cerca de 35 a cerca de 40 anos de idade, a partir de cerca de 40 a cerca de 45 anos de idade, a partir de cerca de 45 a cerca de 50 anos de idade, a partir de cerca de 50 a cerca de 55 anos de idade, a partir de cerca de 55 a cerca de 60 anos de idade, a partir de cerca de 60 a cerca de 65 anos de idade, a partir de cerca de 65 a cerca de 70 anos de idade, a partir de cerca de 70 a cerca de 75 anos de idade, a partir de cerca de 75 a cerca de 80 anos de idade, a partir de cerca de 80 a cerca de 85 anos de idade, a partir de cerca de 85 a cerca de 90 anos de idade, a partir de cerca de 90 a cerca de 95 anos de idade ou a partir de cerca de 95 a cerca de 100 anos.
[0453] Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a um bebê humano. Em outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a uma criança humana. Em outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a uma criança humana. Em outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a um humano adulto. Em ainda outras formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a um humano idoso.
[0454] Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a um paciente para prevenir o aparecimento de AME num paciente em risco de desenvolvimento de AME. Em outras formas de realização, uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrada a um paciente para prevenir o aparecimento de AME num paciente em risco de desenvolvimento de AME. Em outras formas de realização, uma quantidade profilaticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrada a um paciente para prevenir o aparecimento de AME num paciente em risco de desenvolvimento de AME. Em outras formas de realização, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrada a um paciente para prevenir o aparecimento de AME num paciente em risco de desenvolvimento de AME. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0455] Em algumas formas de realização, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrado a um paciente para tratar ou melhorar AME num paciente AME. Em outras formas de realização, uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrada a um paciente para tratar ou melhorar AME num paciente AME. Em outras formas de realização, uma quantidade profilaticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrada a um doente para impedir o avanço de AME num paciente AME. Em outras formas de realização, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou medicamento do mesmo é administrada a um paciente para tratar ou melhorar AME num paciente AME. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
MODO DE ADMINISTRAÇÃO
[0456] Quando administrado a um paciente, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua é, de preferência, administrado como um componente de uma composição que compreende opcionalmente um transportador, excipiente ou diluente farmacêuticamente aceitável. A composição pode ser administrada por via oral ou por qualquer outra via conveniente, por exemplo, por infusão ou injeção bolus por absorção através de revestimentos mucocutâneos ou epiteliais (por exemplo, mucosa oral, rectal e mucosa intestinal) e podem ser administrados em conjunto com outro agente biologicamente ativo. A administração pode ser sistêmica ou local. Vários sistemas de entrega são conhecidos, por exemplo, encapsulamento em lipossomas, micropartículas, microcápsulas, cápsulas e podem ser utilizados para administrar o composto. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0457] Os métodos de administração incluem, mas não estão limitados a aplicação parentérica, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutânea, intranasal, epidural, oral, sublingual, intranasal, intracerebral, intravaginal, transdérmica, retal, por inalação ou topicamente, particularmente nas orelhas, nariz, olhos ou pele. O modo de administração é deixado ao critério do médico. Na maioria dos casos, a administração vai resultar na liberação de um composto para a corrente sanguínea. Numa forma de realização específica, um composto é administrado por via oral.
DOSAGEM E FORMAS DE DOSAGEM
[0458] A quantidade de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, que será eficaz no tratamento de AME, depende, por exemplo, da via de administração, o tipo de AME, a saúde geral do sujeito, a etnia, idade, peso e sexo do sujeito, dieta, tempo e da gravidade da AME, e deve ser decidida de acordo com a avaliação do médico e as circunstâncias de cada paciente ou assunto.
[0459] Em formas de realização específicas, uma "quantidade eficaz", "quantidade profilaticamente eficaz" ou "quantidade terapeuticamente eficaz", no contexto da administração de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou a composição ou medicamento do mesmo se refere a uma quantidade de um composto de Fórmula (I) que tem um efeito terapêutico e/ou efeito benéfico. Em certas formas de realização específicas, uma "quantidade eficaz", "quantidade profilaticamente eficaz" ou "quantidade terapeuticamente eficaz", no contexto da administração de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua ou composição ou medicamento do mesmo resulta em um, dois ou mais dos seguintes efeitos: (i) reduz ou melhora a gravidade de AME; (ii) atrasa início da AME; (iii) inibe a progressão de AME; (iv) reduz a hospitalização de um sujeito; (v) reduz o tempo de internação de um assunto; (vi) aumenta a sobrevivência de um sujeito; (vii) melhora a qualidade de vida de um sujeito; (viii) reduz o número de sintomas associados com AME; (ix) reduz ou melhora a gravidade de um sintoma (s) associado com AME; (x) reduz a duração de um sintoma associado com AME; (xi) impede a recorrência de um sintoma associado à AME; (xii) inibe o desenvolvimento ou aparecimento de um sintoma da AME; e/ou (xiii) inibe a progressão de um sintoma associado com AME. Em certas formas de realização, uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua é uma quantidade eficaz para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS2 em NMS2 mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2 e aumenta os níveis de proteínas Nms produzidas a partir do gene NMS2 e produzindo, assim, um efeito benéfico desejado em um sujeito com necessidade do mesmo. Em alguns casos, o efeito desejado pode ser determinado por análise ou quantificação: (1) a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2; ou (2) os níveis de proteína Nms produzidos a partir do gene NMS2. Exemplos não limitantes de quantidades eficazes de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua são aqui descritos.
[0460] Por exemplo, a quantidade eficaz pode ser a quantidade necessária para o tratamento de AME num sujeito humano em necessidade do mesmo ou a quantidade necessária para aumentar a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2 num sujeito humano em necessidade do mesmo ou a quantidade requerida para aumentar os níveis de proteína Nms produzida a partir do gene NMS2 num sujeito humano com necessidade do mesmo.
[0461] Em geral, a quantidade eficaz estará numa faixa de desde cerca de 0,001 mg/kg/dia a cerca de 500 mg/kg/dia para um paciente ou indivíduo que tem um peso no intervalo de entre cerca de 1 kg até cerca de 200 kg. O sujeito adulto típico deverá ter um peso médio de um intervalo de entre cerca de 70 e cerca de 100 kg.
[0462] No escopo da presente descrição, a "quantidade eficaz" de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua para o uso na produção de um medicamento, a preparação de um kit farmacêutico ou de um método para o tratamento de AME num sujeito humano com necessidade do mesmo, pretende-se incluir uma quantidade numa faixa de cerca de 0,001 mg a cerca de 35.000 mg. Numa forma de realização específica, o sujeito humano é um paciente AME.
[0463] As composições descritas aqui são formuladas para a administração ao sujeito por qualquer via de administração de fármaco conhecido na arte. Exemplos não limitativos incluem a bucal, tópica, nasal, oftálmica, intravenosa (bolus e infusão), pulmonar e vias de administração.
COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS
[0464] Formas de realização aqui descritas incluem o uso de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua em uma composição farmacêutica. Numa forma de realização específica, é aqui descrita a utilização de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua em uma composição farmacêutica para o tratamento de AME num sujeito humano em necessidade do mesmo, que compreende a administração de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua em mistura com um transportador, excipiente ou diluente farmacêuticamente aceitável. Numa forma de realização específica, o sujeito humano é um paciente AME.
[0465] Um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua pode estar opcionalmente na forma de uma composição que compreende o composto ou uma forma sua e um transportador, excipiente ou diluente opcional. Outras formas de realização aqui proporcionadas incluem composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua e um transportador, excipiente ou diluente farmacêuticamente aceitável. Numa forma de realização específica, as composições farmacêuticas são apropriadas para a administração veterinária e/ou humana. As composições farmacêuticas aqui fornecidas podem ser em qualquer forma que permita que a composição seja administrada a um sujeito.
[0466] Numa forma de realização específica e neste contexto, o termo "transportador, excipiente ou diluente farmacêuticamente aceitável" significa um transportador, excipiente ou diluente aprovado por uma agência reguladora do governo federal ou de um governo estadual ou inscrito na Farmacopeia dos EUA ou outras farmacopeias geralmente reconhecidas para uso em animais e mais particularmente em humanos. O termo "transportador" se refere a um diluente, adjuvante (por exemplo, adjuvante de Freund (completo e incompleto)), excipiente ou veículo com o qual um agente terapêutico é administrado. Tais transportadores farmacêuticos podem ser líquidos estéreis, tais como água e óleos, incluindo os de origem petrolífera, animal, vegetal ou de origem sintética, tais como óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de sésamo e semelhantes. A água é um transportador específico para as composições farmacêuticas administradas por via intravenosa. As soluções salinas e soluções aquosas de dextrose e de glicerol também podem ser empregues como transportador líquido, particularmente para soluções injetáveis.
[0467] As composições e as formas de dosagem típicas compreendem um ou mais excipientes. Os excipientes adequados são bem conhecidos dos peritos na arte da farmácia e exemplos não limitativos de excipientes adequados incluem amido, glicose, lactose, sacarose, gelatina, malte, arroz, farinha, giz, sílica gel, estearato de sódio, monoestearato de glicerol, talco, cloreto de sódio, leite desnatado seco, glicerol, propileno, glicol, água, etanol e semelhantes. Se um excipiente particular é adequado para incorporação numa composição farmacêutica ou forma de dosagem depende de uma variedade de fatores bem conhecidos na arte, incluindo, mas não limitado a, forma na qual a forma de dosagem será administrada a um paciente e o ingrediente ativo específico na forma de dosagem. Além disso, são proporcionadas aqui composições farmacêuticas e formas de dosagem anidras que compreendem um ou mais compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua como aqui descrito. As composições e formas de dosagem unitárias podem assumir a forma de soluções ou xaropes (opcionalmente com um agente aromatizante), suspensões (opcionalmente com um agente aromatizante), emulsões, comprimidos (por exemplo, comprimidos mastigáveis), pílulas, cápsulas, grânulos, pó (opcionalmente para reconstituição), formulações de sabor mascarado ou de liberação prolongada e semelhantes.
[0468] As composições farmacêuticas aqui proporcionadas que são adequadas para administração oral podem ser apresentadas como formas de dosagem discretas, tais como, mas não se limitam a, comprimidos, comprimidos revestidos, cápsulas, grânulos, pó e líquidos. Tais formas de dosagem contêm quantidades predeterminadas de ingredientes ativos e podem ser preparadas por métodos de farmácia bem conhecidos dos peritos na arte.
[0469] Exemplos de excipientes que podem ser utilizados em formas de dosagem oral aqui proporcionados incluem, mas não estão limitados a, ligantes, enchedores, desintegrantes e lubrificantes.
BIOMARCADORES
[0470] Em certas forma de realização, a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou gene NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 é utilizada como um biomarcador para a AME. Em certas formas de realização, a quantidade de mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou gene NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 é utilizada como um biomarcador para a AME. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0471] Em outras formas de realização, a quantidade de mRNA,que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, é utilizada como um biomarcador para um paciente AME sendo tratado com um composto, tal como aqui divulgado. Em outras formas de realização, a quantidade de mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, é utilizada como um biomarcador para um paciente AME sendo tratado com um composto, tal como aqui divulgado. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0472] Em algumas formas de realização, uma mudança na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e uma mudança correspondente na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 é um biomarcador para um paciente a ser tratado com um composto, tal como aqui divulgado. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0473] Numa forma de realização específica, um aumento na quantidade de mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e uma diminuição correspondente na quantidade de mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, após a administração de um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) aqui divulgado), indica que o composto pode ser eficaz para o tratamento de AME. Numa outra forma de realização específica, uma diminuição na quantidade de mRNA, que é transcrita partir do gene NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS2 e um aumento correspondente na quantidade de mRNA que é transcrita partir do gene NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS2, após a administração de um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) aqui divulgado), indica que o composto não é eficaz para tratar a AME. De acordo com estas formas de realização, um iniciador NMS (s) e/ou um ensaio de NMS descritos abaixo podem ser utilizados em ensaios, tais como PCR (por exemplo, qPCR) e RT-PCR (por exemplo, RT-qPCR ou terminal de RT-PCR) para avaliar e/ou quantificar a quantidade de mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou gene NMS2 que inclui ou não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2.
[0474] Numa forma de realização, são proporcionados aqui iniciadores NMS e/ou ensaios de NMS (por exemplo, um iniciador de sentido direto com a sequência de nucleotídeos da SEQ ID N° 1, 7, 8, 11 ou 13; e/ou um iniciador de sentido inverso que tem a sequência de nucleotídeos de SEQ ID N° 9 ou 12; e/ou um ensaio de NMS como um ID SEQ N° 3 ou 10) para amplificar ácidos nucleicos de codificação ou codificado por NMS1 humano e/ou NMS2. Estes iniciadores podem ser utilizados como iniciadores em, por exemplo, RT-PCR (tal como RT-PCR, RT-PCR terminal e/ou RT-qPCR, tal como aqui descrito ou como conhecido por um perito na arte), PCR (tal como qPCR) ou amplificaação de círculo, e como ensaios em ensaios de hibridação, tal como um ensaio Northern blot e/ou Southern blot. Tal como utilizado em Exemplos Biológicos aqui descritos, terminal de RT-PCR é uma reação de cadeia da polimerase de transcrição inverso, que é realizada por um certo número de ciclos de amplificação (ou até que os materiais de partida estejam esgotados), seguindo por uma quantificação de cada um dos produtos de DNA usando, por exemplo, gel de separação eletroforético, coloração com um corante fluorescente, quantificação de fluorescência e semelhantes.
[0475] SEQ ID NO. 1 hibridiza com DNA ou RNA que compreende nucleotídeos correspondentes aos nucleotídeos 22 a 40 do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, SEQ ID NO. 2 hibridiza com DNA ou RNA que compreende nucleotídeos correspondentes aos nucleotídeos 4 a 26 da sequência de codificação da luciferase; SEQ ID NO. 7 hibridiza a sequências de ácidos nucleicos (por exemplo, a cadeia com sentido de DNA), que compreende nucleotídeos correspondentes aos nucleotídeos 32 a 54 do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e nucleotídeos 1 a 4 do éxon 8 de NMS1 e/ou NMS2, SEQ ID NO. 8 hibridiza com sequências de ácidos nucleicos (por exemplo, a cadeia com sentido de DNA), que compreende nucleotídeos correspondentes, a fim de, para os nucleotídeos 87 a 111 do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e nucleotídeos 1 a 3 do éxon 8 de NMS1 e/ou NMS2, SEQ ID NO. 9 hibridiza com as sequências de ácidos nucleicos (por exemplo, a cadeia sentido inverso de DNA ou RNA), que compreende nucleotídeos correspondentes aos nucleotídeos 39 a 62 do éxon 8 de NMS1 e/ou NMS2, SEQ ID NO. 11 hibridiza com as sequências de ácidos nucleicos (por exemplo, a cadeia com sentido direto de DNA), que compreende nucleotídeos correspondentes aos nucleotídeos 43 a 63 do éxon 6 de NMS1 e/ou NMS2, SEQ ID NO. 12 hibridiza com as sequências de ácidos nucleicos (por exemplo, a cadeia sentido inverso de DNA ou RNA), que compreende nucleotídeos correspondentes aos nucleotídeos 51 a 73 do éxon 8 de NMS1 e/ou NMS2 e SEQ ID NO. 13 hibridiza com a sequência de ácido nucleico (por exemplo, a cadeia com sentido direto de DNA), que compreende nucleotídeos correspondentes aos nucleotídeos 22 a 46 do éxon 6 de NMS1 e/ou NMS2.
[0476] Assim, um oligonucleotídeo correspondente a SEQ ID NO. 9, 11, 12 e/ou 13 pode ser utilizado numa reação de amplificação para amplificar ácidos nucleicos de codificação ou codificados por NMS1 e/ou NMS2 humano com falta do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 humano e ácido nucleico que codifica ou codificado por NMS1 e/ou NMS2 humano e inclui éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 humano. Em contraste, um oligonucleotídeo que corresponde a SEQ ID NO. 8 em conjunto com um iniciador de sentido reverso a jusante (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) pode ser utilizada para amplificar ácidos nucleicos de codificação ou codificado por NMS1 e/ou NMS2 humano com falta do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 humano e um oligonucleotídeo correspondente a SEQ ID NO. 1 e 7, em conjunto com um iniciador de sentido reverso a jusante (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) pode ser utilizado para amplificar ácidos nucleicos de codificação ou codificado por NMS1 humano e/ou NMS2 humano e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2.
[0477] SEQ ID NO. 3 hibridiza com as sequências de ácidos nucleicos (por exemplo, a cadeia com sentido direto de DNA), que compreende nucleotídeos correspondentes, a fim de, para os nucleotídeos 50 a 54 do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 humano e nucleotídeos 1 a 21 do éxon 8 de NMS1 e/ou NMS2 humano e SEQ ID NO. 10 hibridiza com as sequências de ácidos nucleicos (por exemplo, a cadeia com sentido direto de DNA), que compreende nucleotídeos correspondentes aos nucleotídeos 7 a 36 do éxon 8 de NMS1 e/ou NMS2 humano. SEQ ID NO. 3 é útil como um ensaio para detectar mRNA que é transcrita partir do minigene e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 aqui descritos ou descritos na Publicação Internacional No. WO 2009/151546 ou Pedido de Patente US 2011/0086833 (cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade) e para detectar mRNA que é transcrita partir NMS1 e/ou NMS2 humano e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2. Além disso, a SEQ ID NO. 10 é útil como um ensaio para detectar mRNA que é transcrita partir do minigene que inclui ou não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e para detectar mRNA que é transcrita partir NMS1 e/ou NMS2 humano aqui descrito ou tal como descrito na Publicação Internacional N° WO 2009/151546 ou pedido de patente US2011/0086833, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade.
[0478] Numa forma de realização específica, um iniciador e/ou ensaio descrito abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS como SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 2, 9 ou 12 e/ou NMS ensaios como SEQ ID NO. 3 ou 10) é utilizado em um ensaio, tal como RT-PCR, RT-qPCR, terminal de RT-PCR, PCR, qPCR, amplificação círculo de rolamento e, conforme o caso, por Northern blot ou Southern blot (por exemplo, um ensaio tal como descrito abaixo em Exemplos Biológicos), para determinar se um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua) aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA que é transcrita partir de um NMS1 e/ou gene NMS2.
[0479] Em outra forma de realização, um iniciador e/ou ensaio descrito abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS como SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 9 ou 12, e/ou ensaios de NMS tal como SEQ ID nO. 3 ou 10) é utilizado em um ensaio, tal como RT-PCR, RT-qPCR, terminal de RT-PCR, PCR, qPCR, amplificação círculo de rolamento e, quando aplicável, Northern blot ou Southern blot (por exemplo, um ensaio tal como descrito abaixo em Exemplos Biológicos), para monitorar a quantidade de mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 numa amostra do paciente. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0480] Em outra forma de realização, um iniciador e/ou ensaio descrito abaixo em Exemplos Biológicos (por exemplo, iniciadores de NMS como SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13 e/ou SEQ ID NO. 9 ou 12, e/ou ensaios de NMS tal como SEQ ID nO. 3 ou 10) é utilizado em um ensaio, tal como RT-PCR, RT-qPCR, terminal de RT-PCR, PCR, qPCR, amplificação círculo de rolamento e, quando aplicável, Northern blot ou Southern blot (por exemplo, um ensaio tal como descrito abaixo em Exemplos Biológicos), para monitorar a resposta de um paciente de um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua). Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0481] Uma amostra (por exemplo, uma amostra de sangue, amostra de PBMC ou amostra de tecido, tal como pele ou uma amostra de tecido muscular) de um paciente pode ser obtido utilizando técnicas conhecidas para os peritos na arte e os iniciadores e/ou ensaios descrito no Exemplos Biológicos abaixo podem ser utilizados em ensaios (por exemplo, PCR, RT- PCR, RT-qPCR, qPCR, terminal de RT-PCR, amplificação círculo de rolamento, Northern blot e Southern blot) para determinar a quantidade de mRNA que é transcrita a partir dos genes NMS1 e/ou NMS2 (por exemplo, a quantidade de mRNA que inclui o éxon 7 de NMS2 transcrita partir do gene NMS2). Uma amostra proveniente de um paciente se refere a uma amostra que é processada e/ou manipulada depois de ter sido obtida a partir do paciente utilizando técnicas conhecidas por um especialista na arte. Por exemplo, uma amostra de um paciente pode ser processada, por exemplo, extrato de RNA, utilizando técnicas conhecidas dos especialistas na arte. Uma amostra de um paciente pode ser processada, por exemplo, extrato de RNA e o RNA é invertido transcrito para produzir cDNA. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0482] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, compreendendo: (a) contatar uma amostra do paciente (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que foi processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12), juntamente com os componentes aplicáveis, por exemplo, um RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT- qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo rolamento; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2. Em certas formas de realização, a amostra é ou derivada de um paciente administrado com um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua como aqui descrito. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0483] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir dos genes NMS1 e NMS2, compreendendo: (a) contatar uma amostra do paciente (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO 9 e 12), juntamente com os componentes aplicáveis, por exemplo, um RT- PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir dos genes NMS1 e NMS2. Em certas formas de realização, a amostra é ou derivada de um paciente administrado com um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua como aqui descrito. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0484] A quantidade de mRNA, que é transcrita partir dos genes NMS1 e NMS2 humanos e inclui o éxon 7 de NMS1 e NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir dos genes NMS1 e NMS2 humanos e não inclui o éxon 7 de NMS1 e NMS2, pode ser diferenciada um do outro por, por exemplo, o tamanho do fragmento de DNA ou de RNA gerado a partir de NMS2 e NMS1 mRNA que inclui o éxon 7 de NMS1 e NMS2 e de NMS1 e NMS2 mRNA que não inclui o éxon 7 de NMS1 e NMS2.
[0485] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, compreendendo: (a) contatar uma amostra do paciente (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que foi processadas para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 8, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12), juntamente com os componentes aplicáveis, por exemplo, um RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2. Em certas formas de realização, a amostra é ou deriva de um paciente administrado com um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua como aqui descrito. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0486] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, compreendendo: (a) contatar uma amostra do paciente (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um ensaio de NMS descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 3 ou 10), juntamente com componentes aplicáveis, por exemplo, de uma RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR), amplificação círculo de rolamento e, conforme o caso, de transferência de Northern ou Southern blot; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2. Em certas formas de realização, a amostra é ou deriva de um paciente administrado com um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua como aqui descrito. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0487] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir dos genes NMS1 e NMS2, compreendendo: (a) contatar uma amostra do paciente (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um ensaio de NMS descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 3 ou 10), juntamente com os componentes aplicáveis, por exemplo, um RT-PCR (por exemplo, terminal de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR), amplificação círculo de rolamento e, conforme o caso, Northern blot ou Southern blot; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir dos genes NMS1 e NMS2. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0488] A quantidade de mRNA que é transcrita a partir dos genes NMS1 e NMS2 humanos e inclui o éxon 7 de NMS1 e NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir dos genes NMS1 e NMS2 humanos e não inclui o éxon 7 de NMS1 e NMS2, podem ser diferenciados um do outro por, por exemplo, tamanho do fragmento de DNA ou de RNA gerado a partir de mRNA NMS2 e NMS1 que inclui o éxon 7 de NMS1 e NMS2 e de NMS1 e NMS2 mRNA que não inclui o éxon 7 de NMS1 e NMS2. Em certas formas de realização, a amostra é ou deriva de um paciente administrado com um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua como aqui descrito. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0489] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, compreendendo: (a) contatar uma amostra do paciente (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um ensaio de NMS descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO: 10.) juntamente com componentes aplicáveis para, por exemplo, um RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR), amplificação círculo de rolamento ou Northern blot ou Southern blot; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2. Em certas formas de realização, a amostra é ou deriva de um paciente administrado com um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua como aqui descrito. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0490] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, compreendendo: (a) contatar uma amostra do paciente (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 3 ou 10), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, um RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2. Em certas formas de realização, a amostra é ou deriva de um paciente administrado com um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua como aqui descrito. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0491] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir dos genes NMS1 e NMS2, compreendendo: (a) contatar uma amostra do paciente (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS reverso descriàqui (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 3 ou 10), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, um RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT- qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento, conforme o caso; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir dos genes NMS1 e NMS2. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0492] A quantidade de mRNA que é transcrita a partir dos genes NMS1 e NMS2 humanos e inclui o éxon 7 de NMS1 e NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir dos genes NMS1 e NMS2 humanos e não inclui o éxon 7 de NMS1 NMS2 e podem ser diferenciados um do outro por, por exemplo, tamanho do fragmento de DNA ou RNA gerado a partir de mRNA NMS1 e NMS2 que inclui o éxon 7 de NMS1 e NMS2 e de NMS1 e NMS2 mRNA que não inclui o éxon 7 de NMS1 e NMS2. Em certas formas de realização, a amostra é ou deriva de um paciente administrado com um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua como aqui descrito. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0493] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, compreendendo: (a) contatar uma amostra do paciente (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO 8.) e/ou um iniciador NMS reverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO: 10.), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, um RT-PCR (por exemplo, terminal RT-PCR e/ou RT- qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento; e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2. Em certas formas de realização, a amostra é deriva de um paciente administrado com um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua como aqui descrito. Numa forma de realização específica, o paciente é um paciente de AME.
[0494] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID nO. 9 ou 12), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento, em que a amostra é ou deriva de um paciente AME administrado com um composto (por exemplo, um composto aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliado 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua como aqui descrito.
[0495] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contatar uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS reverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO 9, ou 12.), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT- qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento; e (c) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS2, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir da mesma tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido), a partir do paciente antes da administração do composto indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliada 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0496] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO. 3 ou 10), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento, em que a amostra é ou deriva de um paciente de AME administrado um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua como aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente, antes da administração do composto, indica que o paciente não responde à composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliado 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua como aqui descrito.
[0497] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contato de uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO. 3 ou 10), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT- qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento; e (c) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido), a partir do paciente antes da administração do composto indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto indica que o paciente não responde à composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliado 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0498] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 8, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento, em que a amostra é ou deriva de um paciente AME administrado com um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente está não responsivo ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliado 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0499] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contatar uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 8, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO: 9 ou 12.), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT- qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento; e (c) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido), a partir do paciente antes da administração do composto indica que o paciente está não responsivo ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliado 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0500] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 8, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO.9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO.10), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento, em que a amostra é ou deriva de um paciente de AME administrado um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente está não responsivo ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliado 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0501] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contato de uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 8, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO. 10), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento; e (c) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou o NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente está não responsivo ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliado 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0502] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento, em que a amostra é ou deriva de um paciente de AME administrado um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) (i) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente relativamente à quantidade do mRNA que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, e (ii) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 numa amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) (i) a nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, e (ii) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 numa amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliado 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0503] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contato de uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID N 9 ou 12), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT- qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento; e (c) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) (i) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente relativamente à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, e (ii) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do NMS1 e/ou o gene NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) (i) a nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA, que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, e (ii) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 numa amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliado 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0504] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO. 10), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR ), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento, em que a amostra é ou deriva de um paciente administrado um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) (i) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente relativamente a a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, e (ii) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do NMS1 e/ou o gene NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) (i) a nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA, que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, e (ii) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA, que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 numa amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliado 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0505] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contatar uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO 10.), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, RT-terminal PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento; e (c) a detecção da quantidade de mRNA, que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) (i) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente relativamente a a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, e (ii) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do NMS1 e/ou o gene NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) (i) a nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, e (ii) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 numa amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliado 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0506] Forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO. 10), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT- qPCR) ou PCR (por exemplo, qPCR), em que a amostra é ou deriva de um paciente administrado com um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) (i) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente relativamente a a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, e (ii) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do NMS1 e/ou o gene NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) (i) a nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, e (ii) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 numa amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliado 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0507] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a avaliação da resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contatar uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO. 10), juntamente com os componentes, por exemplo, aplicáveis para, por RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento; e (c) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) (i) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente relativamente a a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, e (ii) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do NMS1 e/ou o gene NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o NMS1 e/ou paciente é responsivo ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) (i) a nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, e (ii) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 numa amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto, indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é avaliado 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 1 dia, 2 dias, 3 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0508] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para monitorar a resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID nO. 9 ou 12), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento, em que a amostra é ou deriva a partir de um paciente administrado um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anterior indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir de o gene e NMS1 e/ou NMS2 inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anterior indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como com a Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorado após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0509] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para o controle de resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contatar uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13) e/ou um iniciador reverso NMS aqui descrito (por exemplo, ID SEQ NO 9, ou 12.), juntamente com os componentes, por exemplo, aplicáveis para, por RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento; e (c) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anterior indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir de o gene e NMS1 e/ou NMS2 inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anterior indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0510] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para monitorar a resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO. 3 ou 10), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento, em que a amostra é ou deriva de um paciente administrado um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anterior indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir de o gene e NMS1 e/ou NMS2 inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anterior, indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como com a Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0511] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para o controle de resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contatar uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 11 ou 13) e/ou um iniciador reverso NMS aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO. 3 ou 10), juntamente com os componentes, por exemplo, aplicáveis para, por RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT- qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento; e (c) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anterior, indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir de o gene e NMS1 e/ou NMS2 inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anterior indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0512] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para monitorar a resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 8, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12), juntamente com os componentes, por exemplo, aplicáveis para, por RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento, em que a amostra é de, ou derivados de um paciente administrado um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do NMS1 e/ou o gene NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anterior indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anterior indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0513] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para o controle de resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contatar uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 8, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO: 9 ou 12), juntamente com os componentes, por exemplo, aplicáveis para, por RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT- qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento; e (c) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do NMS1 e/ou o gene NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anterior indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anterior indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0514] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para monitorar a resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 8, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO. 10), juntamente com os componentes, por exemplo, aplicáveis para, por RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR ) ou ampliação de círculo, em que a amostra é ou deriva de um paciente administrado um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do NMS1 e/ou o gene NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anterior indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anterior indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0515] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para o controle de resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contatar uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 8, 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO. 10), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR ), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento; e (c) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do NMS1 e/ou o gene NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anterior indica que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anterior indica que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0516] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para monitorar a resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12), juntamente com os componentes, por exemplo, aplicáveis para, por RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento, em que a amostra é ou deriva de um paciente administrado um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) (i) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente relativamente a a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anterior, e (ii) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou em NMS2 a amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anteriormente, indicam que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) (i) a nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anterior, e (ii) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou em que o paciente NMS2 amostra em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anteriormente, indicam que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0517] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a monitorar a resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contatar uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID N 9 ou 12), juntamente com os componentes, por exemplo, aplicáveis para, por RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT- qPCR), PCR (por exemplo, qPCR), ou amplificação de rolamento círculo; e (c) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) (i) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente relativamente a a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anterior, e (ii) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou em NMS2 a amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anteriormente, indicam que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) (i) a nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses de o composto, ou de uma determinada data anterior, e (ii) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou em que o paciente NMS2 amostra em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anteriormente, indicam que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0518] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para monitorar a resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO. 10), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento, em que a amostra é ou deriva de um paciente administrado um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) (i) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente relativamente a a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de S NMS1 e/ou MN2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anterior, e (ii) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir da paciente, antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anteriormente, indicam que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) (i) a nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses de o composto ou de uma determinada data anterior, e (ii) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou em que o paciente NMS2 amostra em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anteriormente, indicam que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0519] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a monitorar a resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contatar uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um ensaio de NMS (por exemplo, SEQ ID NO: 10.), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminal RT -PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento; e (c) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) (i) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente relativamente a a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anterior, e (ii) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou em NMS2 a amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anteriormente, indicam que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) (i) a nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses de o composto ou de uma determinada data anterior, e (ii) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou em que o paciente NMS2 amostra em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anteriormente, indicam que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0520] Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para monitorar a resposta de um paciente de AME para um composto, que compreende: (a) contatar uma amostra do paciente de AME (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) ou uma amostra derivada de um paciente de AME (por exemplo, uma amostra de sangue ou amostra de tecido que tenha sido processada para extrair o RNA) com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS (SEQ ID NO. 10), juntamente com os componentes, por exemplo, aplicáveis para, por RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT- qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou círculo rolante amplificação, em que a amostra é ou deriva de um paciente administrado um composto (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito); e (b) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) (i) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente relativamente a a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anterior, e (ii) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente relativamente com a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 numa amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração da o composto ou um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anteriormente, indicam que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) (i) a nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses de o composto, ou de uma determinada data anterior, e (ii) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou em que o paciente NMS2 amostra em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anteriormente, indicam que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0521] Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um método para a monitorar a resposta de um paciente de AME a um composto, que compreende: (a) administrar um composà um paciente de AME; (b) contatar uma amostra (por exemplo, amostra de sangue ou amostra de tecido) obtida ou derivada a partir do paciente com um iniciador NMS direto descrito abaixo (por exemplo, SEQ ID NO. 11 ou 13) e/ou um iniciador NMS inverso aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 9 ou 12) e/ou um ensaio de NMS (SEQ ID NO. 10), juntamente com os componentes aplicáveis para, por exemplo, RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento; e (c) a detecção da quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, em que (1) (i) um aumento na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente relativamente a a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anterior, e (ii) uma diminuição na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou em NMS2 a amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, a partir do mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses do composto ou de uma determinada data anteriormente, indicam que o paciente responde ao composto e que o composto pode ser ou é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente; e (2) (i) a nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 na amostra do paciente em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou de um certo número de doses de o composto ou de uma determinada data anterior, e (ii) nenhuma mudança ou nenhuma mudança substancial na quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2, e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou em que o paciente NMS2 amostra em relação à quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em uma amostra análoga (por exemplo, o mesmo tipo de amostra de tecido) a partir do paciente antes da administração do composto ou um certo número de doses do composto, ou de uma determinada data anteriormente, indicam que o paciente não responde ao composto e que o composto não é benéfico e/ou de valor terapêutico para o paciente. Em certas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 14 dias, 28 dias, 1 mês, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses ou mais após a administração de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após o paciente ter recebido 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou mais doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito. Em algumas formas de realização, a resposta do paciente é monitorada após a administração de 1 a 5, 5 a 10, 10 a 15, 15 a 20, 20 a 30, 30 a 40, 40 a 50, 50 a 100 ou doses de um composto, tal como um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito.
[0522] Em formas de realização específicas, a AME no paciente é causada por uma mutação de inativação ou eliminação do gene NMS1 em ambos os cromossomas resultando numa perda de função do gene NMS1.
KITS
[0523] Em um aspecto, estão aqui disponibilizados kits farmacêuticos ou de ensaio contendo um iniciador NMS ou ensaio aqui descrito, em um ou mais recipientes, e instruções de uso. Numa forma de realização, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende, em um recipiente, um ou mais iniciadores NMS inverso (por exemplo, SEQ ID NO. 2, 9 e/ou 12) e/ou um ou mais iniciadores diretos NMS (SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 e/ou 13)) e instruções de uso. Numa outra forma de realização, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende, em um recipiente, um iniciador NMS inverso (por exemplo, SEQ ID NO. 2, 9 ou 12), um iniciador NMS direto (SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 ou 13)) e instruções de uso.
[0524] Numa forma de realização, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende, em recipientes separados, um iniciador NMS inverso (por exemplo, SEQ ID NO. 2, 9 ou 12) em um recipiente, um outro iniciador NMS direto (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 ou 13)) em outro recipiente e instruções de uso.
[0525] Em certas formas de realização, os componentes necessários aplicáveis para um PCR (por exemplo, qPCR), RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento, tal como a polimerase, trifosfatos desoxinucleosídeo, etc, estão incluídos em tais kits. Em algumas formas de realização, os componentes necessários para a hibridação são incluídos em tais kits. Um kit farmacêutico ou de ensaio contendo esses iniciadores podem ser utilizados em PCR, RT-PCR, para, por exemplo: (i) determinar se um agente terapêutico (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua) aumenta a inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2, (ii) controlar a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou e NMS2 a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, e/ou (iii) monitorar a resposta de um indivíduo a um agente terapêutico (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua).
[0526] Numa forma de realização específica, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende o iniciador direto com a sequência encontrada na SEQ ID NO. 1, num recipiente, e o iniciador inverso com a sequência encontrada na SEQ ID NO. 2, em um outro recipiente. Em certas formas de realização, estes iniciadores são utilizados em análise de RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento para amplificar sequências de nucleotídeos codificadas por um minigene NMS1 humano ou minigene NMS2 humano, tais como os aqui descritos ou na Publicação Internacional N° WO 2009/151546 ou pedido de patente US2011/0086833, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua totalidade descrito. Em outras formas de realização, estes iniciadores são utilizados como ensaios, por exemplo, em ensaios de hibridização, tais como Southern blot ou Northern blot.
[0527] Numa forma de realização específica, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende o iniciador direto com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 7, num recipiente, e o iniciador de sentido inverso, com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 9, em um outro recipiente. Em certas formas de realização, estes iniciadores são utilizados em análise de RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento para amplificar sequências de nucleotídeos codificadas por genes NMS1 e NMS2 humanos endógenos. Em outras formas de realização, estes iniciadores são utilizados como ensaios, por exemplo, em ensaios de hibridização, tais como Southern blot ou Northern blot.
[0528] Numa outra forma de realização específica, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende o iniciador direto com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 8, num recipiente, e o iniciador de sentido inverso, com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 9, em um outro recipiente. Em certas formas de realização, estes iniciadores são utilizados em análise de RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento para amplificar sequências de nucleotídeos codificadas pelo gene NMS2 humano endógeno. Em outras formas de realização, estes iniciadores são utilizados como ensaios, por exemplo, em ensaios de hibridização, tais como Southern blot ou Northern blot.
[0529] Numa forma de realização específica, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende o iniciador direto com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 7, num recipiente, o iniciador de sentido direto com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 8, em um outro recipiente, e o iniciador de sentido inverso, com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 9, em um outro recipiente. Em certas formas de realização, estes iniciadores são utilizados em análise de RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento para amplificar sequências de nucleotídeos codificadas por genes NMS1 e NMS2 humanos endógenos. Em outras formas de realização, estes iniciadores são utilizados como ensaios, por exemplo, em ensaios de hibridização, tais como Southern blot ou Northern blot.
[0530] Numa forma de realização específica, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende o iniciador direto com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 11, num recipiente, e o iniciador de sentido inverso, com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 12, em um outro recipiente. Em certas formas de realização, estes iniciadores são utilizados em análise de RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento para amplificar sequências de nucleotídeos codificadas por genes NMS1 e NMS2 humanos endógenos. Em outras formas de realização, estes iniciadores são utilizados como ensaios, por exemplo, em ensaios de hibridização, tais como Southern blot ou Northern blot.
[0531] Numa forma de realização específica, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende o iniciador direto com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 11, num recipiente, e o iniciador de sentido inverso, com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 9, em um outro recipiente. Em certas formas de realização, estes iniciadores são utilizados em análise de RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento para amplificar sequências de nucleotídeos codificadas por genes NMS1 e NMS2 humanos endógenos. Em outras formas de realização, estes iniciadores são utilizados como ensaios, por exemplo, em ensaios de hibridização, tais como Southern blot ou Northern blot.
[0532] Numa forma de realização específica, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende o iniciador direto com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 13, num recipiente, e o iniciador de sentido inverso, com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 12, em um outro recipiente. Em certas formas de realização, estes iniciadores são utilizados em análise de RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento para amplificar sequências de nucleotídeos codificadas por genes NMS1 e NMS2 humanos endógenos. Em outras formas de realização, estes iniciadores são utilizados como ensaios, por exemplo, em ensaios de hibridização, tais como Southern blot ou Northern blot.
[0533] Numa forma de realização específica, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende o iniciador direto com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 13, num recipiente, e o iniciador de sentido inverso, com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 9, em um outro recipiente. Em certas formas de realização, estes iniciadores são utilizados em análise de RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento para amplificar sequências de nucleotídeos codificadas por genes NMS1 e NMS2 humanos endógenos. Em outras formas de realização, estes iniciadores são utilizados como ensaios, por exemplo, em ensaios de hibridização, tais como Southern blot ou Northern blot.
[0534] Numa forma de realização específica, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende o iniciador direto com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 1, num recipiente, e o iniciador de sentido inverso, com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 9, em um outro recipiente. Em certas formas de realização, estes iniciadores são utilizados em análise de RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento para amplificar sequências de nucleotídeos codificadas por genes NMS1 e NMS2 humanos endógenos. Em outras formas de realização, estes iniciadores são utilizados como ensaios, por exemplo, em ensaios de hibridização, tais como Southern blot ou Northern blot.
[0535] Numa forma de realização específica, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende o iniciador direto com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 1, num recipiente, e o iniciador de sentido inverso, com a sequência de nucleotídeos encontrada na SEQ ID NO. 12, em um outro recipiente. Em certas formas de realização, estes iniciadores são utilizados em análise de RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR), PCR (por exemplo, qPCR) ou amplificação círculo de rolamento para amplificar sequências de nucleotídeos codificadas por genes NMS1 e NMS2 humanos endógenos. Em outras formas de realização, estes iniciadores são utilizados como ensaios, por exemplo, em ensaios de hibridização, tais como Southern blot ou Northern blot.
[0536] Numa outra forma de realização, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende um ensaio NMS aqui descrito (por exemplo, SEQ ID NO. 3 ou 10), em um recipiente. Em outras formas de realização, o ensaio é usada em, por exemplo, um ensaio de hibridização, tal como Southern blot ou Northern blot. Numa forma de realização específica, o ensaio é usada em RT-qPCR ou qPCR. Em certas formas de realização, os componentes necessários para a PCR (por exemplo, qPCR), RT-PCR (por exemplo, terminais de RT-PCR e/ou RT-qPCR) ou amplificação de círculo de rolamento, tal como a polimerase, trifosfatos desoxinucleosídeo, iniciadores, etc, são incluídos em tais kits. Em algumas formas de realização, os componentes necessários para a hibridação são incluídos em tais kits.
[0537] Numa forma de realização, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende um iniciador NMS inverso (por exemplo, SEQ ID NO. 2, 9 ou 12), em um recipiente, um iniciador NMS direto (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 ou 13), em outro recipiente, e um ensaio de NMS (por exemplo, ID SEQ. 3 ou 10) em outro recipiente, e instruções de uso. Numa outra forma de realização, um kit farmacêutico ou de ensaio compreende um ou mais iniciadores NMS inversos (por exemplo, SEQ ID NO. 2, 9 e/ou 12) em um recipiente, um ou mais iniciadores NMS diretos (por exemplo, SEQ ID NO. 1, 7, 8, 11 e/ou 13) em um outro recipiente, e uma ou mais ensaios NMS (por exemplo, SEQ ID NO. 3 e/ou 10) em um outro recipiente, e instruções para utilização.
[0538] Em certas formas de realização, os componentes necessários para o funcionamento de um PCR, RT-PCR ou amplificação círculo de rolamento, tal como a polimerase, trifosfatos desoxinucleosídeo, etc, estão incluídos em tais kits. Um kit farmacêutico ou de ensaio contendo tais ensaios e/ou iniciadores podem ser utilizados em PCR, RT-PCR, para, por exemplo: (i) determinar se um agente terapêutico (por exemplo, um composto de fórmula (I) ou uma forma sua) aumenta inclusão do éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 em mRNA, que é transcrita partir do gene NMS1 e/ou NMS2, (ii) controlar a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2 e a quantidade de mRNA que é transcrita a partir do gene NMS1 e/ou NMS2 e não inclui o éxon 7 de NMS1 e/ou NMS2, e/ou (iii) monitorar a resposta de um indivíduo a um agente terapêutico (por exemplo, um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua).
[0539] Em outro aspecto, é aqui proporcionado um kit farmacêutico que compreende um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua, em um recipiente, e instruções para a utilização do composto ou uma forma sua. Numa forma de realização específica, é aqui proporcionado um kit farmacêutico que compreende uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua e um transportador, excipiente ou diluente farmacêuticamente aceitável e instruções para utilização. Numa outra forma de realização específica, é aqui proporcionado um kit farmacêutico que compreende uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua e um transportador, excipiente ou diluente farmacêuticamente aceitável e instruções para utilização. Numa forma de realização, as instruções para uso explicam um, dois ou mais do seguinte: a dose, via de administração, frequência de administração e os efeitos secundários da administração de um composto de Fórmula (I) ou uma forma sua a um sujeito.
MÉTODOS SINTÉTICOS GERAIS
[0540] Tal como aqui descrito, os métodos gerais para a preparação dos compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua, como aqui descrito, está disponível através de metodologias de síntese padrão bem conhecidas. Muitos dos materiais de partida estão comercialmente disponíveis ou, quando não estão disponíveis, podem ser preparados utilizando as vias descritas a seguir, utilizando técnicas conhecidas dos peritos na arte. Os esquemas sintéticos aqui previstos compreendem etapas de reações múltiplas, cada um dos quais se destina a ficar em sua própria e pode ser realizado com ou sem qualquer etapa (s) anterior ou seguinte. Em outras palavras, cada uma das etapas de reações individuais dos esquemas de síntese aqui proporcionados isoladamente é contemplada.
Esquema A
[0541] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é um sistema de anel aril ou heteroaril monocíclico ou bicíclico, podem ser preparados como descrito no Esquema A abaixo.
Figure img0065
[0542] Composto A1 (em que X representa vários grupos reativos que podem ser utilizados para preparar os substituintes R1, através de reações de substituição de grupos funcionais, utilizando técnicas conhecidas para uma pessoa com conhecimentos correntes na técnica) pode ser regiosseletivamente formilado por tratamento com um ácido de Lewis (tal como MgCl2 e semelhantes) e paraformaldeído em um solvente adequado (tal como acetonitrila ou THF e semelhantes) para se obter o Composto A2. Composto A2 é reagido com o Composto A3, em que R é um grupo C1-4alquil (tal como metil, etil, t-butil e semelhantes) e, na presença de reagentes de condensação (por exemplo, piperidina/ácido acético e semelhantes), vai passar por condensação de Knoevenagel seguido por formação de lactona para se obter o Composto A4.
Figure img0066
[0543] Composto A3 pode ser preparado por combinação de uma mistura de éster de ácido acético (tal como acetato de t-butil e semelhantes) e uma base (tal como LiHMDS e semelhantes) em um solvente adequado (tal como THF e semelhantes) com Composto A5, em que R2 representa um aril, heterociclo ou heteroaril e L representa a grupo de saída.
Esquema B
[0544] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é um sistema de anel heteroaril bicíclico, podem ser preparados como descrito no Esquema B abaixo.
Figure img0067
[0545] Composto B2, um sistema de anel heteroaril monocíclico opcionalemnte substituído contendo um grupo amidina (tal como, mas não limitado a, 2-aminopiridina, 2- aminopirimidina, 2-aminopirazina, 3-aminopiridazina, 2-aminotiazol, 4-aminotiazol, 4-aminopirimidina e semelhantes) é reagido com Composto B1 (onde R representa um grupo C1-4alquil tal como metil, etil e semelhantes) em um solvente adequado (tal como EtOH e semelhantes) para dar Composto B3. Composto B3 é reagido com Composto A2 e, na presença de reagentes de condensação (tal como piperidina/ácido acético e semelhantes), irá sofrer Condensação de Knoevenagel seguido de formação de lactona para se obter Composto B4.
Esquema C
[0546] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é a sistema de anel heteroaril bicíclico, podem ser preparados como descrito no Esquema C abaixo.
Figure img0068
[0547] Composto C1 (onde R representa um grupo C1-4alquil tal como metil, etil e semelhantes) é reagido com Composto C2, uma anilina opcionalmente substituída (onde Y pode ser OH, NH2, ou SH; e, onde o anel de anilina pode ter um ou mais átomos de carbono membros no anel substituído com um ou mais átomos de nitrogênio, então produzindo o Composto C2, um sistema de anel opcionalmente substituído tal como a piridina, pirimidina, pirazina e semelhantes) e em um solvente adequado (tal como EtOH ou acetonitrila e semelhantes) obtendo Composto C3. Composto C3 é reagido com Composto A2 e, na presença de reagentes de condensação (tal como piperidina/ácido acético e semelhantes), irá sofrer condensação de Knoevenagel seguido de formação de lactona para se obter Composto C4.
Esquema D
[0548] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é um sistema de anel heteroaril monocíclico, podem ser preparados como descritos no Esquema D abaixo.
Figure img0069
[0549] Composto D1 (onde R representa um grupo C1-4alquil tal como metil, etil e semelhantes) é reagido com sulfeto de hidrogênio na presença de uma base orgânica (tal como trietilamina e semelhantes) e um solvente adequado (tal como piridina e semelhantes) para dar Composto D2. Composto D2 é reagido com Composto D3, uma α-bromocetona (onde W representa um grupo C1-4alquil ou halo-C1-4alquil tal como metil, etil, trifluormetil e semelhantes) e, em um solvente apropriado (tal como DMF e semelhantes), sofre uma condensação de desidratação por alquilação em cascata para dar Composto D4. Composto D4 é reagido com Composto A2 e, na presença de reagentes de condensação (tal como piperidina/ácido acético e semelhantes), irá sofrer Condensação de Knoevenagel seguido de formação de lactona para se obter Composto D5.
Esquema E
[0550] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é um sistema de anel aril ou heteroaril monocíclico ou bicíclico, podem ser preparados como descritos no Esquema E abaixo.
Figure img0070
[0551] Composto A2 é reagido com anidrido acético, e na presença de uma base orgânica (tal como trietilamina e semelhantes), sofre Condensação aldólica/formação de lactona para se obter Composto E1. Composto E1 é bromado com um reagente de brominação adequado (tal como Br2 ou NBS) para se obter Composto E2. Composto E2 é reagido com um ácido borônico (onde Z representa B(OH)2 e semelhantes) ou um trialquil estanano (onde Z representa SnBu3 e semelhantes) e, na presence de um catalisador de paládio (tal como dicloreto tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0), bis(trifenilfosfina) paládio(II), acetato de paládio e semelhantes) e um apropriado ligante de fosfina irá sofrer acoplamento cruzado de Suzuki ou Stille para dar Composto A4.
Esquema F
[0552] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é um aril-amino ou heteroaril-amino monocíclico ou bicíclico, podem ser preparados como descrito no Esquema F abaixo.
Figure img0071
[0553] Composto E2 é reagido com Composto F1, onde Ar representa opcionalmente um sistema de anel aril ou heteroaril monocíclico ou bicíclico substituído tal como uma anilina ou amino-heteroaril opcionalmente substituída, na presença de um catalisador de paládio (tal como tris(dibenzilideneacetona)dipaládio(0) e semelhantes), ligante de fosfina (tal como xantphos e semelhantes) e uma base inorgânica (tal como carbonato de césio e semelhantes) em um solvente apropriado (tal como 1,4-dioxano ou tolueno e semelhantes) para se obter Composto F2.
Esquema G
[0554] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é um sistema de anel heteroaril bicíclico, podem ser preparados como descrito no Esquema G abaixo.
Figure img0072
[0555] Composto A2 é reagido com etil acetoacetato e na presença de reagentes de condensação (tal como piperidina/ácido acético e semelhantes), irá sofrer Condensação de Knoevenagel seguido de formação de lactona para se obter Composto G1. O grupo α-metil do Composto G1 pode ser seletivamente bromado com um reagente bromante adequado (tal como Br2 ou NBS e semelhantes) para se obter Composto G2. Composto G2 é reagido com Composto B2, um sistema de anel heteroaril monocíclico opcionalmente substituído contendo um grupo amidina (tal como, mas não limitado a, 2-aminopiridina, 2-aminopirimidina, 2-aminopirazina, 3-aminopiridazina, 2- aminotiazol, 4-aminotiazol, 4-aminopirimidina e semelhantes) em um solvente adequado (tal como acetonitrila e semelhantes) para dar Composto B4.
Esquema H
[0556] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é um sistema de anel heteroaril bicíclico, podem ser preparados como descrito no Esquema H abaixo.
Figure img0073
[0557] Composto G2 é reagido com Composto H1, um sistema de anel heteroaril monocíclico opcionalmente substituído contendo um grupo quetamina (tal como mas não limitado a 2- metilpiridina, 2-metilpirimidina, 2-metilpirazina, 3- metilpiridazina e semelhantes) e em um solvente adequado (tal como acetonitrila e semelhantes), sofre a reação de ciclização de desidratação por alquilação em cascata para dar Composto H2.
Esquema I
[0558] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é um sistema de anel heteroaril bicíclico, podem ser preparados como descrito no Esquema I abaixo.
Figure img0074
[0559] Composto E2 é reagido com trimetilsililacetileno e uma base orgânica (tal como trietilamina e semelhantes) na presença de iodeto de cobre (I) e um catalisador de paládio (tal como tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0), dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II), acetato de paládio e semelhantes) e, na presença de um apropriado ligante de fosfina, sofre a acoplamento de Sonogashira. O produto resultante trimetilsililacetileno quando tratado com uma base inorgânica (tal como carbonato de potássio e semelhantes) em um solvente apropriado (tal como metanol e semelhantes) gera o Composto I1. Composto I1 pode sofrer um acoplamento de Sonogashira adicional com o Composto I2, um sistema de anel heteroaril monocíclico iodo-hidroxi-substituído (onde o anel heteroaril pode ter um ou mais átomos adicionais de nitrogênio membros no anel, produzindo então o Composto I2 um sistema de anel iodo-hidroxi-substituído tal como a piridina, pirimidina, pirazina e semelhantes e onde os substituentes iodo e hidroxi estão em uma orientação orto em relação a um outro, tal como 2-iodopiridin-3-ol, 4-iodopiridin-3-ol e semelhantes) para dar Composto I3.
Esquema J
[0560] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é um sistema de anel heteroaril monocíclico ou bicíclico, podem ser preparados como descrito no Esquema J abaixo.
Figure img0075
[0561] Composto I1 é reagido com Composto J1, um sistema de anel heteroaril monocíclico cloro-iodo-substituído (onde o anel heteroaril pode ter um ou mais átomos adicionais de nitrogênio membros no anel, produzindo então Composto J1 um sistema de anel a cloro-iodo-substituído tal como a piridina, pirimidina, pirazina e semelhantes e onde os substituentes cloro- e iodo- estão em uma orientação orto em relação a um outro, tal como 2-cloro-3-iodopiridina ou 4-cloro-3-iodopiridina e semelhantes) e uma base orgânica (tal como trietilamina e semelhantes) na presença de iodeto de cobre (I) e um catalisador de paládio (tal como tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0), dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II), acetato de paládio e semelhantes) e, na presença de um apropriado ligante de fosfina sofre a acoplamento de Sonogashira para se obter Composto J2. Composto J2 tratado com hidrosulfeto de sódio em um solvente adequado (tal como EtOH e semelhantes) obtendo Composto J3.
Esquema K
[0562] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é um sistema de anel de 1,2,4-oxadiazol opcionalmente substituído, pode ser preparado como descrito no Esquema K abaixo.
Figure img0076
[0563] Composto A2 é reagido com etil cianoacetato e, na presença de reagentes de condensação (tal como piperidina/ácido acético e semelhantes), irá sofrer Condensação de Knoevenagel seguido de formação de lactona para se obter Composto K1. Composto K1 é reagido com hidroxilamina em um solvente adequado (tal como CH2Cl2) para dar Composto K2. Composto K2 é reagido com Composto K3 (onde W representa um grupo C1-4alquil, aril ou heteroaril) e, na presença de uma base orgânica (tal como trietilamina e semelhantes), obtém um intermediário O-acil-hidroxiamidina, que sofre ciclização por desidratação em elevadas temperaturas (>100°C) para gerar Composto K4.
Esquema L
[0564] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é um sistema de anel heteroaril monocíclico, podem ser preparados como descrito no Esquema L abaixo.
Figure img0077
[0565] Composto G1 é reagido com dimetilformamida dimetil acetal e uma base orgânica (tal como pirrolidina e semelhantes) para dar um intermediário enaminona, que é reagido com hidrazina na presença de um ácido orgânico (tal como ácido acético e semelhantes) para se obter Composto L1. Composto L1 é reagido com Composto L2 (onde W representa um grupo C1-4alquil, aril ou heteroaril e L representa um grupo de saída (tal como I ou Br e semelhantes), em um solvente adequado (tal como DMF e semelhantes), na presença de uma base inorgânica (tal como Cs2CO3 e semelhantes), e um catalisador opcional (tal como CuI e semelhantes) para se obter Composto L3.
Esquema M
[0566] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é um sistema de anel heteroaril monocíclico, podem ser preparados como descrito no Esquema M abaixo.
Figure img0078
[0567] Composto E1 pode ser regioseletivamente iodado com um apropriado agente de iodação (tal como iodo ou bis(trifluoracetoxi)iodo]benzeno e semelhantes) em um solvente apropriado (tal como CHCl3 e semelhantes). Composto M1, quando tratado com hexabutilditina na presença de um catalisador de paládio (tal como tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0), dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II), acetato de paládio e semelhantes) em um solvente apropriado (tal como 1,4-dioxano or tolueno), obtendo Composto M2. Composto M2 é reagido com 5-iodoimidazol, na presença de um catalisador (tal como tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0), dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II), acetato de paládio e semelhantes) e a cocatalisador (tal como CuI e semelhantes), em um solvente apropriado (tal como 1,4-dioxano ou tolueno e semelhantes) para se obter Composto M3. Composto M3 é reagido com Composto L2 (onde W representa grupo C1-4alquil, aril, ou heteroaril) e L representa a grupo de saída (tal como I or Br e semelhantes), em um solvente adequado (tal como DMF e semelhantes), na presença de uma base inorgânica (tal como Cs2CO3 e semelhantes) e um catalisador opcional (tal como CuI e semelhantes) para se obter Composto M4.
Esquema N
[0568] Compostos de Fórmula (I), em que R2 é um sistema de anel heteroaril ou aril monocíclico ou bicíclico e R3 é hidrogênio ou alquil, podem ser preparados como descrito no Esquema N abaixo.
Figure img0079
[0569] Composto N1 é tratado em condições para hidrólise de éster (tal como aquoso NaOH), para se obter Composto N2. Composto N2 é reagido com Composto N3 (onde R representa um grupo hidrogênio ou C1-4alquil) e, na presença de um reagente de acoplamento (tal como cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)- N ‘-etilcarbodiimida e semelhantes) e uma base orgânica (tal como trietilamina e semelhantes), sofre formação de éster seguido de condensação de Knoevenagel para dar Composto N4.
EXEMPLOS DE SÍNTESE ESPECÍFICAS
[0570] Para descrever em mais detalhes e ajudar na compreensão, os seguintes exemplos não limitativos são apresentados para ilustrar mais completamente o escopo de compostos aqui descritos e não são para ser interpretados como especificamente limitativos do seu âmbito. Tais variações dos compostos aqui descritos, que podem ser agora conhecidos ou mais tarde desenvolvidos, que estariam dentro do âmbito de um perito na arte, são consideradas como estando dentro do âmbito dos compostos descritos aqui e daqui em diante reivindicados. Estes exemplos ilustram a preparação de certos compostos. Os peritos na arte irão entender que as técnicas descritas nos exemplos representam técnicas, como descritas por aqueles peritos na arte, que funcionam bem na prática sintética, e, como tal, constituem modos preferidos para a prática da mesma. No entanto, deve ser apreciado que os especialistas na técnica devem, à luz da presente descrição, apreciar que muitas alterações podem ser feitas nos métodos específicos que estão descritos e ainda obter um resultado semelhante ou parecido sem nos afastarmos do espírito e âmbito da presente descrição.
[0571] Exceto nos exemplos a seguir dos compostos incorporados, a menos que indicado em contrário, todos os números que expressam quantidades de ingredientes, condições de reação, dados experimentais, e assim por diante, utilizados na especificação e reivindicações, devem ser entendidos como sendo modificados pelo termo "cerca de". Deste modo, todos estes números representam aproximações que podem variar dependendo das propriedades desejadas procuraram ser obtidos pela reação ou como resultado de condições experimentais variáveis. Por conseguinte, dentro de um intervalo esperado de reprodutibilidade experimental, o termo "cerca de", no contexto dos dados resultantes, se refere a uma faixa de dados fornecidos, que podem variar de acordo com um desvio padrão da média. Assim, para os resultados experimentais fornecidos, os dados resultantes podem ser arredondados para cima ou para baixo para apresentar dados de forma consistente, sem perda de algarismos significativos. No mínimo, e não como uma tentativa de limitar a aplicação da doutrina de equivalentes ao âmbito das reivindicações, cada parâmetro numérico deverá ser interpretado tendo em vista o número de algarismos significativos e técnicas de arredondamento utilizados por aqueles peritos na arte.
[0572] Enquanto os intervalos numéricos e parâmetros que estabelecem o amplo escopo da presente descrição são aproximações, os valores numéricos estabelecidos nos exemplos apresentados abaixo são relatados de forma tão precisa quanto possível. Qualquer valor numérico, no entanto, inerentemente contém certos erros necessariamente decorrentes do desvio padrão encontrados em seus respectivos testes de medição.
EXEMPLOS DE COMPOSTO
[0573] Como utilizado acima, e ao longo da presente descrição, as seguintes abreviaturas, a menos que indicado de outra forma, devem ser entendidas como tendo os seguintes significados:
Figure img0080
Figure img0081
Figure img0082
Figure img0083
Figure img0084
Exemplo 1 Preparação de Cpd 4
[0574] Parte 1: Preparação de etil 2-(benzo[d]tiazol-2-il)acetate
Figure img0085
[0575] Uma mistura de 2-aminobenzenotiol (5.34 mL, 50 mmol) e cloridrato de 3-etoxi-3-iminopropanoato (9.75 g, 50 mmol) em EtOH (50 mL) foi aquecida a 70°C por 16 h. A mistura foi dividida em EtOAc (200 mL) e água (200 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (10% EtOAc em hexanos) para dar o composto do título (6.0 g, 54%) como um óleo amarelo. MS m/z 222.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.05 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.91 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.51 (1H, t, J = 8 Hz), 7.43 (1H, t, J = 8 Hz), 4.28 (2H, q, J = 7.2 Hz), 4.22 (2H, s), 1.33 (3H, t, J = 7.1 Hz).
[0576] Parte 2: Preparação de terc-butil 4-(4-formil-3-hidroxifenil)piperazina-1-carboxilato
Figure img0086
[0577] Uma mistura de 4-fluor-2-hidroxibenzaldeído (10 g,71.4 mmol), 1-boc-piperazina (15.3 g, 82.2 mmol) e DMSO (100 mL) foi aquecida a 100°C por 27 h. A mistura reacional foi diluída em solução K2CO3 aquosa e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com H2O e salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi titulado com hexano/éter (1:1), gerando o composto do título (18.8 g, 86%) como um sólido amarelo. MS m/z 307.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 11.50 (1H, s), 9.60 (1H, s), 7.36 (1H, d, J = 9 Hz), 6.27 (1H, d, J = 2 Hz), 6.45 (1H, dd, J = 9 Hz, 2 Hz), 3.58 (4H, m), 3.42 (4H, m), 1.49 (9H, s).
[0578] Parte 3: Preparação de Cpd 4
Figure img0087
[0579] Etapa A: terc-butil 4-(4-formil-3-hidroxifenil)piperazina-1-carboxilato (49 mg, 0.16 mmol) e etil 2-(benzo[d]tiazol-2-il)acetato (35 mg, 0.16 mmol) foram combinados com piperidina (10 μL, 0.1 mmol) e ácido acético (6 μL, 0.1 mmol) em EtOH (1 mL) . A mistura foi aquecida em refluxo por 1h. Após resfriar a mistura a tempreratura ambiente, um precipitado se forma. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, lavado com 1:1 EtOH:H2O (1 mL) e seco sob vácuo para se obter terc-butil 4-(3-(benzo[d]tiazol-2-il)-2- oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato.
[0580] Etapa B: terc-butil 4-(3-(benzo[d]tiazol-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato foi suspenso em 4N HCl em 1,4-dioxano (1 mL). Após agitação da mistura por 30 min a temperatura ambiente, o solvente foi removido com um fluxo de nitrogênio, para dar o composto do título (40 mg, 69%) como um pó amarelo: m.p. 250°C (decomp.); MS m/z 364.4 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.26 (2H, br s), 9.14 (1H, s), 8.16 (1H, d, J = 7.9 Hz), 8.04 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.93 (1H, d, J = 9.0 Hz), 7.56 (1H, m), 7.47 (1H, m), 7.16 (1H, dd, J = 8.9 Hz, 2.3 Hz), 7.09 (1H, d, J = 2.3 Hz), 3.76-3.74 (4H, m), 3.25-3.23 (4H, m).
[0581] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, compostos adicionais aqui descritos podem ser preparados de acordo com Exemplo 1, substituindo o material de partida, reagentes e condições de reação apropriadas. Exemplo 2 Preparação de Cpd 5
[0582] Parte 1: Preparação clorobenzo[d]tiazol-2-il)acetate
Figure img0088
[0583] Etapa A: A uma solução de 1-(3-clorofenil)tiouréia (5.09 g, 27.2 mmol) em ácido acético (100 mL) foi adicionado bromo (1.82 mL, 35.4 mmol) gota a gota a 60°C. A mistura foi aquecida a 80°C por 2 h e o solvente foi removido sob pressão reduzida. Dietil éter foi adicionado à mistura para produzir um precipitado. O sólido foi coletado e seco para dar 4- clorobenzo[d]tiazol-2-amina (5.7 g, 79%). MS m/z 185.9 [M+H]+.
[0584] Etapa B: A uma mistura de 4-clorobenzo[d]tiazol-2-amina (4.78 g, 25.8 mmol) e cloreto de cobre (II) (4.16 g, 31 mmol) em CH3CN (25 mL) foi adicionado t-butil nitrito (4.61 mL, 38.8 mmol) a temperatura ambiente. A mistura reacional foi aquecida a 60°C por 30 min, então o solvente foi removido da mistura. O resíduo foi suspenso em água, coletado por filtração e seco para dar 2,4-diclorobenzo[d]tiazol. (5.3 g, 81%). MS m/z 205.9 [M+H]+.
[0585] Etapa C: A uma mistura de acetato de t-butil (4.93 mL, 36.6 mmol) e 2,4-diclorobenzo[d]tiazol (5 g, 24.4 mmol) em tolueno (20mL) foi adicionado lítio bis(trimetilsilil)amida (1M em THF, 66 mL, 66 mmol) a 0°C. A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. Excesso de reagente foi extinto com a adição de NH4Cl aquoso saturado. A mistura aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (0-5% EtOAC em hexanos) para dar o composto do título (5.9 g, 85%) como um óleo amarelo. MS m/z 282.1 [M-H]-. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.75 (1H, d, J = 8.2 Hz ), 7.47 (1H, d, J = 7.7 Hz), 7.29 (1H, t, J = 7.9 Hz), 4.15 (2H, s), 1.48 (9H, s).
[0586] Parte 2: Preparação de Cpd 5
Figure img0089
[0587] Etapa A: Seguindo o procedimento encontrado emExemplo 1, Parte 3, terc-butil 4-(4-formil-3-hidroxifenil)piperazina-1-carboxilato (49 mg, 0.16 mmol), terc-butil 2-(4-clorobenzo[d]tiazol-2-il)acetato (35 mg, 0.16 mmol), piperidina (10 μL, 0.1 mmol) e ácido acético (6 μL, 0.1 mmol) em EtOH (1 mL) deu terc-butil 4-(3-(4-clorobenzo[d]tiazol-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1- carboxilato.
[0588] Etapa B: Seguindo o procedimento encontrado em Exemplo 1, Parte 3, terc-butil 4-(3-(4-clorobenzo[d]tiazol-2- il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato e 4N HCl em 1,4-dioxano (1 mL) deu o composto do título (62 mg, 97%) como um pó amarelo: m.p. 290°C (decomp.); MS m/z 398.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.18 (2H, br s), 9.09 (1H, s), 8.14 (1H, dd, J = 8.0 Hz, 1.0 Hz), 7.99 (1H, d, J = 9.2 Hz), 7.65 (1H, dd, J = 7.7 Hz, 1.0 Hz), 7.44 (1H, t, J = 7.8 Hz), 7.17 (1H, dd, J = 9.0 Hz, 2.4 Hz), 7.09 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.77-3.74 (4H, m), 3.25-3.23 (4H, m).
[0589] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, compostos adicionais aqui descritos podem ser preparados de acordo com Exemplo 2, substituindo o material de partida, reagentes e condições de reação apropriadas. Exemplo 3 Preparação de Cpd 68
[0590] Parte 1: Preparação de etil 2-(4-clorobenzo[d]oxazol-2- il)acetate
Figure img0090
[0591] Etapa A: Uma mistura de 3-cloro-2-nitrofenol (18.95 g, 100 mmol) e Pd/C (10%, 0.50 g) em MeOH (300 mL) foi agitada sob H2 (1 atm). Depois de 15 h, a mistura foi filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrado para dar um sólido marrom, que foi lavado com CH2Cl2 para dar 2-amino-3-clorofenol (7.39 g, 52%) como um sólido marrom claro. MS m/z 144.1 [M+H]+.
[0592] Etapa B: A uma solução de 2-amino-3-clorofenol (2.0 g, 14 mmol) em EtOH (30 mL) foi adicionado cloridrato de etil 3-etoxi-3-iminopropanoato (3.01 g, 15.4 mmol). Depois de aquecido a 80°C por 2 d, a mistura foi concentrada. O resíduo foi particionado entre EtOAc e água. A camada orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica (CH2Cl2) para dar etil 2-(4-clorobenzo[d]oxazol-2- il)acetato (3.17 g, 94%) como um sólido esbranquiçado. MS m/z 240.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.75 (1H, dd, J = 8.0 Hz, 0.9 Hz), 7.49 (1H, dd, J = 8.0 Hz, 0.9 Hz), 7.43 (1H, t, J = 8.0 Hz), 4.28 (2H, s), 4.16 (2H, q, J = 7.2 Hz), 1.21 (3H, t, J = 7.2 Hz).
[0593] Parte 2: Preparação de Cpd 68
Figure img0091
[0594] A uma solução de etil 2-(4-clorobenzo[d]oxazol-2- il)acetato (72 mg, 0.3 mmol, preparado de acordo com Exemplo 1) e 2-hidroxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)benzaldeído (66 mg, 0.3 mmol, preparado seguindo o procedimento em Exemplo 1, Parte 2) em CH3CN (0.5 mL) foram adicionados piperidina (3 uL, 0.03 mmol) e AcOH (3.4 uL, 0.06 mmol). Depois de aquecido a 90°C por 2 h, a mistura foi resfriada até temperatura ambiente. O produto foi coletado por filtração à vácuo, lavado com CH3CN e seco para dar o composto do título (92 mg, 78%) como um sólido amarelo: m.p. 229-231°C; MS m/z 396.2, 398.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.91 (1H, s), 8.79 (1H, d, J = 9.1 Hz), 7.76 (1H, dd, J = 8.2 Hz, 0.9 Hz), 7.50 (1H, dd, J = 8.0 Hz, 0.8 Hz), 7.42 (1H, t, J = 8.0 Hz), 7.08 (1H, dd, J = 9.0 Hz, 2.4 Hz), 6.90 (1H, d, J = 2.3 Hz), 3.49 (4H, m), 2.43 (4H, m), 2.26 (3H, s).
[0595] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 3 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados.Exemplo 4 Preparação de Cpd 145
Figure img0092
[0596] Etapa A: Uma mistura de etil 2-(benzo[d]tiazol-2- il)acetato (0.53 g, 2.4 mmol, preparado no Exemplo 1, Parte 1), 4-fluor-2-hidroxibenzaldeído (0.336 g, 2.4 mmol), piperidina (80 μL, 0.8 mmol) e ácido acético (92 μL, 0.16 mmol) em CH3CN (2 mL) foi aquecida a 60°C por 1 h. A mistura foi filtrada. O material sólido foi lavado com CH3CN e seco para dar 3-(benzo[d]tiazol-2-il)-7-fluor-2H-cromen-2-ona (0.57 g, 80%) como um sólido amarelo. MS m/z 298.1 [M+H]+.
[0597] Etapa B: Uma mistura de 3-(benzo[d]tiazol-2-il)-7- fluor-2H-cromen-2-ona (89 mg, 0.3 mmol), 1-metil-1,4-diazepam (75 μL, 0.6 mmol), N,N-diisopropiletilamina (78 μL, 0.45 mmol) em CH3CN (1 mL) foi aquecida a 90°C. Depois de 15 h, a mistura foi resfriada até temperatura ambiente e filtrada. O material sólido foi lavado com CH3CN para dar o composto do título (110 mg, 94%) como um sólido amarelo: m.p. 217-220°C; MS m/z 392.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 9.04 (1H, s), 8.12 (1H, d, J = 7.7 Hz), 7.99 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.79 (1H, d, J = 9.1), 7.54-7.51 (1H, m), 7.43-7.40 (1H, m), 6.93 (1H, dd, J = 9.0 Hz, 2.4 Hz), 6.76 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.69 (2H, m), 3.61 (2H, t, J = 6.2 Hz), 2.64 (2H, m), 2.46 (2H, m), 2.26 (3H, s), 1.91 (2H, m).
[0598] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 4 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 5 Preparação de Cpd 3
Figure img0093
[0599] Etapa A: terc-butil 4-(4-formil-3- hidroxifenil)piperazina-1-carboxilato (918 mg, 3 mmol, preparado no Exemplo 1, Parte 2), 2,2-dimetil-1,3-dioxano-4,6- diona (648 mg, 4.5 mmol) e trietilamina (0.14 mL, 1 mmol) foram combinados em EtOH (6 mL). A mistura foi aquecida a 60°C por 4 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e filtrada. O material coletado foi lavado com EtOH e seco sob vácuo para se obter ácido 7-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin- 1-il)-2-oxo-2H-cromeno-3-carboxilico (1.05 g, 94%) como um pó amarelo. MS m/z 373.2 [M-H]-.
[0600] Etapa B: ácido 7-(4-(terc-Butoxicarbonil)piperazin- 1-il)-2-oxo-2H-cromeno-3-carboxilico (60 mg, 0.16 mmol) foi combinado com anilina (22 μL, 0.24 mmol), (benzotriazol-1- iloxi)tripirrolidinafosfônio hexafluorfosfato (100 mg, 0.19 mmol) e trietilamina (45 μL, 0.32 mmol) em DMF (1 mL). A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 2 h. A solução e 4:1 MeOH:H2O (1 mL) foi adicionada à mistura. Um precipitado se formou e foi coletado por filtração à vácuo. O sólido foi lavado com MeOH:H2O (4:1) e seco sob vácuo para se obter terc- butil 4-(2-oxo-3-(fenilcarbamoil)-2H-cromen-7-il)piperazina-1- carboxilato.
[0601] Etapa C: Uma mistura de terc-butil 4-(2-oxo-3- (fenilcarbamoil)-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato em trifluorácido acético (1 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 20 min, então o solvente foi removido com um fluxo de nitrogênio para se obter o composto do título (75 mg, 99%) como um pó amarelo: MS m/z 350.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 10.73 (1H, s), 8.81 (1H, s), 7.78 (1H, d, J = 9.1 Hz), 7.72 (2H, d, J = 8.6 Hz), 7.38 (2H, m), 7.13 (1H, t, J = 7.4 Hz), 7.09 (1H, dd, J = 9.1 Hz, 2.5 Hz), 6.93 (1H, d, J = 2.3 Hz), 3.43 (4H, m), 2.81 (4H, m).
[0602] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 5 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 6 Preparação de Cpd 160
Figure img0094
[0603] Etapa A: 3,5-Difluorfenol (2.6 g, 20 mmol) foi dissolvido em CH3CN (50 mL) com trietilamina (14 mL, 100 mmol). Cloreto de magnésio (3.8 g, 40 mmol) e paraformaldeído (6.4 g, 200 mmol) foram adicionados sequencialmente. A mistura heterogênea foi agitada vigorosamente a 60°C por 16 h. A mistura foi diluída com H2O (200mL) e o pH foi ajustado para <2 com HCl (1 M) aquoso. A mistura foi extraída com EtOAc (200 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, então filtrada e concentrada para se obter 2,4-difluor- 6-hidroxibenzaldeído (2.6 g, 82%) como um óleo vermelho. MS m/z 157.1 [M-H]-.
[0604] Etapa B: 2,4-Difluor-6-hidroxibenzaldeído (16 mmol) foi combinado com 1-Boc-piperazina (3.57 g, 19.2 mmol) e N,N- diisopropiletilamina (3.34 mL, 19.2 mmol) em DMSO (4 mL). A mistura foi aquecida até 120°C por 2 h. A mistura foi purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (0-40% EtOAc em hexanos) para se obter terc-butil 4-(3-fluor-4- formil-5-hidroxifenil)piperazina-1-carboxilato (1.3 g, 25%) como um pó esbranquiçado. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 11.93 (1H, s), 9.92 (1H, s), 6.08 (1H, dd, J = 14.2 Hz, 2.4 Hz), 6.04 (1H, d, J = 2.4 Hz), 3.59 (4H, m), 3.43 (4H, m), 1.49 (9H, s).
[0605] Etapa C: terc-butil 4-(3-fluor-4-formil-5- hidroxifenil)piperazina-1-carboxilato (65 mg, 0.2 mmol) foi combinado com etil 2-(benzo[d]tiazol-2-il)acetato (22 mg, 0.2 mmol, preparado no Exemplo 1, Parte 1), N,N- diisopropiletilamina (35 μL, 0.2 mmol) e ácido acético (11 μL, 0.2 mmol) em EtOH (1 mL). A mistura foi aquecida até 90°C por 16 h. Após resfriar a mistura a tempreratura ambiente, um precipitado foi formado. O sólido foi coletado, lavado com 1:1 MeOH:H2O (1 mL) e seco sob vácuo para se obter terc-butil 4-(3- (benzo[d]tiazol-2-il)-5-fluor-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina- 1-carboxilato.
[0606] Etapa D: Uma mistura de terc-butil 4-(3- (benzo[d]tiazol-2-il)-5-fluor-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina- 1-carboxilato e trifluorácido acético (1 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 15 min, então o solvente foi removido com um fluxo de nitrogênio. O resíduo foi particionado em CH2Cl2 (5 mL) e K2CO3 (1 M, 5 mL) aquoso. A camada orgânica foi coletada através de um filtro poroso hidrofóbico e concentrada para se obter o composto do título (38 mg, 50%) como um pó amarelo: m.p. 256-260°C; MS m/z 382.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.89 (1H, s), 8.15 (1H, d, J = 7.8 Hz), 8.05 (1H, d, J = 7.3 Hz), 7.55 (1H, m), 7.44 (1H, m), 7.02 (1H, dd, J = 13.9 Hz, 2.1 Hz), 6.82 (1H, s), 3.45-3.41 (4H, m), 2.82-2.78 (4H, m), 2.46 (1H, s br).
[0607] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 6 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 7 Preparação de Cpd 162
[0608] Parte 1: Preparação de etil 2-(6-metilimidazo[1,2- a]piridin-2-il)acetate
Figure img0095
[0609] Uma mistura de etil 4-cloroacetoacetato (5.4 mL, 40 mmol) e 5-metilpiridin-2-amina (5.18 g, 48 mmol) em EtOH (100 mL) foi aquecida a 70°C por 6 h. A mistura foi dividida em EtOAc (300 mL) e uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (300 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (70% EtOAc em hexanos) para dar o composto do título (1.6 g, 19%) comoum óleo marrom. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.31 (1H, s), 7.74 (1H, s), 7.39 (1H, d, J = 9.2 Hz), 7.08 (1H, d, J = 9.2 Hz), 4.10 (2H, q, J = 7.1 Hz), 3.75 (2H, s), 2.27 (3H, s), 1.20 (3H, t, J = 7.1 Hz).
[0610] Parte 2: Preparação de Cpd 162
Figure img0096
[0611] Etapa A: Seguindo o procedimento no Exemplo 6, Etapa C, terc-butil 4-(3-fluor-4-formil-5-hidroxifenil)piperazina-1- carboxilato (65 mg, 0.2 mmol), etil 2-(6-metilimidazo[1,2- a]piridin-2-il)acetato (22 mg, 0.2 mmol), N,N- diisopropiletilamina (35 μL, 0.2 mmol) e ácido acético (11 μL, 0.2 mmol) em EtOH (1 mL) deu terc-butil 4-(5-fluor-3-(6- metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7- il)piperazina-1-carboxilato.
[0612] Etapa B: Seguindo o procedimento no Exemplo 6, Etapa D, terc-butil 4-(5-fluor-3-(6-metilimidazo[1,2-a]piridin-2- il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato e trifluorácido acético (1 mL) deu o composto do título (18 mg, 24%) como um pó amarelo: m.p.265-270°C; MS m/z 379.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.60 (1H, s), 8.42 (2H, m), 7.49 (1H, d, J = 9.1 Hz), 7.16 (1H, dd, J = 9.3 Hz, 1.6 Hz), 6.93 (1H, dd, J = 11.6 Hz, 2.2 Hz), 6.75 (1H, d, J = 1.9 Hz), 3.33-3.31 (4H, m), 2.82-2.80 (4H, m), 2.28 (3H, s).
[0613] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 7 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 8 Preparação de Cpd 290
Figure img0097
[0614] Etapa A: terc-butil 4-(3-fluor-4-formil-5- hidroxifenil)piperazina-1-carboxilato (65 mg, 0.2 mmol, preparado no Exemplo 6, Etapa B) foi combinado com 2-(3,5- difluorfenil)ácido acético (55 mg, 0.2 mmol), cloridrato de N- (3-Dimetilaminopropil)- N ‘-etilcarbodiimida (57 mg, 0.3 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (70 μL, 0.4 mmol) em DMF (1 mL). A mistura foi aquecida até 60°C por 1 h. Depois de resfriada até temperatura ambiente, a mistura foi filtrada. O sólido foi lavado com MeOH:H2O (1:1) e seco sob vácuo para se obter terc- butil 4-(3-(3,5-difluorfenil)-5-fluor-2-oxo-2H-cromen-7- il)piperazina-1-carboxilato.
[0615] Etapa B: Uma mistura de terc-butil 4-(3-(3,5- difluorfenil)-5-fluor-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1- carboxilato e trifluorácido acético (1 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 15 min, então o solvente foi removido com um fluxo de nitrogênio. O resíduo foi particionado em CH2Cl2 (5 mL) e K2CO3 (1 M, 5 mL) aquoso. A camada orgânica foi coletada através de um filtro poroso hidrofóbico e concentrada para se obter o composto do título (24 mg, 33%) como um pó amarelo: m.p. 193-198°C; MS m/z 361.3 [M+H]+; 1H XMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.11 (1H, s), 7.44 (2H, m), 7.16 (1H, tt, J = 9.3 Hz, 2.4 Hz), 6.82 (1H, dd, J = 13.8 Hz, 2.2 Hz), 6.65 (1H, d, J = 2.4 Hz), 3.26 (4H, m), 2.73 (4H, m).
[0616] Conforme mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 8 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 9 Preparação de Cpd 14
Figure img0098
[0617] Etapa A: 3-Hidroxibenzaldeído (6.1 g, 50 mmol) foi combinado com dimetilamina (37.5 mL de 2M solução em THF, 75 mmol) em 1,2-dicloroetano (200 mL). Triacetoxiborohidreto de sódio (15.9 g, 75 mmol) foi adicionado lentamente a temperatura ambiente. Ácido acético (2.86 mL, 50 mmol) foi adicionado à mistura. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 16 h. À mistura reacional foi adicionado uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (100 mL). A camada orgânica foi removida, seca sobre Na2SO4, então filtrada e concentrada para se obter 3-((dimetilamino)metil)fenol (~30 mmol, 60%) bruto.
[0618] Etapa B: O material bruto (~30 mmol) da Etapa A foi dissolvido em CH3CN (300 mL) e trietilamina (21 mL, 150 mmol). À solução foi adicionado cloreto de magnésio anidro (5.7 g, 60 mmol) e paraformaldeído (9.0 g, 300 mmol). A mistura foi agitada vigorosamente a 60°C por 16 h, então diluído com tartarato de potássio sódico aquoso (0.1 M, 600 mL). A mistura foi extraída três vezes com CH2Cl2 (300 mL). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-10% MeOH em CH2Cl2) para se obter 4-((dimetilamino)metil)-2-hidroxibenzaldeído (1.7 g, 32%) como um pó amarelo. MS m/z 180.1 [M+H]+.
[0619] Etapa C: Uma mistura de 4-((dimetilamino)metil)-2- hidroxibenzaldeído (0.5 mmol), etil 2-(4-clorobenzo[d]tiazol- 2-il)acetato (128 mg, 0.5 mmol, preparado como no Exemplo 2, Parte 1), piperidina (40 μL, 0.4 mmol) e ácido acético (12 μL, 0.2 mmol) em EtOH (3 mL) foi aquecida em refluxo por 16 h. Após resfriar a mistura a tempreratura ambiente, um precipitado se forma. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, lavado com 1:1 EtOH:H2O (1 mL) e seco sob vácuo para se obter o composto do título (184 mg, 99%) como um pó amarelo: m.p. 179-182°C; MS m/z 371.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.20 (1H, s), 8.18 (1H, d, J = 8.0 Hz), 8.10 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.69 (1H, d, J = 7.7 Hz), 7.48 (2H, m), 7.43 (1H, d, J = 8.0 Hz), 3.57 (2H, s), 2.21 (6H, s).
[0620] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 9 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 10 Preparação de Cpd 148
Figure img0099
[0621] Etapa A: Seguindo o procedimento no Exemplo 6, Etapa A, 3-(hidroximetil)fenol (6.2 g, 50 mmol), trietilamina (35 mL, 250 mmol), cloreto de magnésio anidro (9.5 g, 100 mmol) e paraformaldeído (15 g, 500 mmol) em CH3CN (500 mL) forneceu 2- hidroxi-4-(hidroximetil)benzaldeído (2.2 g, 29%). MS m/z 151.1 [M-H]-.
[0622] Etapa B: Seguindo o procedimento no Exemplo 9, Etapa C, 2-hidroxi-4-(hidroximetil)benzaldeído (608 mg, 4.0 mmol), etil 2-(6-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il)acetato (872 mg, 4.0 mmol, preparado no Exemplo 7, Parte 1), piperidina (0.4 mL, 4.0 mmol) e ácido acético (0.24 mL, 4.0 mmol) em EtOH (4 mL) forneceu 7-(hidroximetil)-3-(6-metilimidazo[1,2-a]piridin-2- il)-2H-cromen-2-ona (980 mg, 80%). MS m/z 307.2 [M+H]+.
[0623] Etapa C: 7-(Hidroximetil)-3-(6-metilimidazo[1,2- a]piridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (900 mg, 2.9 mmol) foi combinado com N,N-diisopropiletilamina (1.0 mL, 6 mmol) em CH2Cl2 (15 mL). A mistura foi resfriada até 0°C, antes da adição de cloreto de metanosulfonil (0.28 mL, 3.6 mmol) via seringa. A mistura agitada por 1 h a 0°C, então o solvente foi removido da mistura. O resíduo foi suspenso em MeOH (5 mL) e filtrado. O material coletado foi lavado com MeOH e seco sob vácuo para se obter (3-(6-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il)-2- oxo-2H-cromen-7-il)metil metanosulfonato (1.05 g, 92%) como um pó castanho-amarelado. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.86 (1H, s), 8.56 (1H, s), 8.46 (1H, s), 7.99 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.56 (1H, s), 7.51 (1H, d, J = 9.1 Hz), 7.47 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.20 (1H, d, 9.3 Hz), 5.41 (2H, s), 3.32 (3H, s), 2.30 (3H,s).
[0624] Etapa D: (3-(6-Metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il)-2- oxo-2H-cromen-7-il)metil metanosulfonato (77 mg, 0.2 mmol) foi combinado com 2-(metilamino)etanol (75 mg, 1.0 mmol) em DMF (2 mL). A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 1 h. À mistura foi adicionado H2O (0.25 mL) para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, lavado com MeOH:H2O (1:1) e seco sob vácuo para se obter o composto do título (65 mg, 90%) como um pó esbranquiçado: m.p. 166-169°C; MS m/z 364.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d β): δ 8.83 (1H, s), 8.53 (1H, s), 8.46 (1H, s), 7.87 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.50 (1H, d, J = 9.4 Hz), 7.43 (1H, s), 7.37 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.19 (1H, d, J = 9.2 Hz), 4.47 (1H, t, J = 5.4 Hz), 3.64 (2H, s), 3.54 (2H, q, J = 5.5 Hz), 2.47 (2H, t, J = 6.3 Hz), 2.29 (3H, s), 2.21 (3H, s).
[0625] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 10 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 11 Preparação de Cpd 18
Figure img0100
[0626] Etapa A: 4-(3-Hidroxifenil)piperidina (1.7 g, 10 mmol) foi adicionado a uma mistura de CH3CN (20 mL) e di-terc- butil dicarbonato (2.4 g, 11 mmol). A mistura foi agitada por 1 h a temperatura ambiente, então trietilamina (7 mL, 50 mmol), cloreto de magnésio anidro (1.9 g, 20 mmol) e paraformaldeído (3.0 g, 100 mmol) foram adicionados. A mistura foi agitada vigorosamente a 60°C por 2 h, então diluído com H2O (100 mL). HCl (1N) aquoso foi adicionado para ajustar o pH da mistura a ~2. A mistura foi extraída com EtOAc (100 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-5% MeOH em CH2Cl2) para se obter terc-butil 4-(4-formil-3- hidroxifenil)piperidina-1-carboxilato (1.44 g, 47%) como um pó branco. MS m/z 304.2 [M-H]-.
[0627] Etapa B: Seguindo o procedimento no Exemplo 9, Etapa C, terc-butil 4-(4-formil-3-hidroxifenil)piperidina-1- carboxilato (61 mg, 0.2 mmol), etil 2-(4-clorobenzo[d]tiazol- 2-il)acetato (50 mg, 0.2 mmol, preparado de acordo com Exemplo 2, Parte 1), piperidina (10 μL, 0.1 mmol) e ácido acético (6 μL, 0.1 mmol) em EtOH (1 mL) forneceu terc-butil 4-(3-(4- clorobenzo[d]tiazol-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperidina-1- carboxilato.
[0628] Etapa C: terc-butil 4-(3-(4-clorobenzo[d]tiazol-2- il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperidina-1-carboxilato foi suspenso em 4N HCl em 1,4-dioxano (1 mL). A mistura foi agitada por 1 h, então o solvente foi removido para se obter o composto do título (73 mg, 92%) como um pó amarelo: m.p. 339-341°C; MS m/z 397.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.21 (1H, s), 8.19 (1H, d, J = 8.0), 8.14 (1H, d, J = 8.1), 7.70 (1H, d, J = 7.7 Hz), 7.49 (1H, t, J = 7.8 Hz), 7.43 (1H, s), 7.40 (1H, d, J = 8.2 Hz) 3.41 (2H, m), 3.01-3.07 (3H, m), 2.03 (2H, m), 1.92 (2H, m). Exemplo 12 Preparação de Cpd 28
Figure img0101
[0629] Etapa A: ácido 4-Formil-3-hidroxibenzóico (830 mg, 5 mmol) foi combinado com 1-metilpiperazina (0.61 mL, 5.5 mmol), trietilamina (0.77 mL, 5.5 mmol) e (benzotriazol-1- iloxi)tripirrolidinafosfônio hexafluorfosfato (2.86 g, 5.5 mmol) em CH2Cl2 (10 mL). A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 3h, então concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (0-5% MeOH em CH2Cl2) para se obter 2-hidroxi-4-(4-metilpiperazina-1- carbonil)benzaldeído (1.24 g, 100%). MS m/z 249.1 [M+H]+.
[0630] Etapa B: Seguindo o procedimento no Exemplo 9, Etapa C, 2-hidroxi-4-(4-metilpiperazina-1-carbonil)benzaldeído (50 mg, 0.2 mmol), etil 2-(4-clorobenzo[d]tiazol-2-il)acetato (50 mg, 0.2 mmol, preparado de acordo com Exemplo 2, Parte 1), piperidina (20 μL, 0.2 mmol) e ácido acético (12 μL, 0.2 mmol) em EtOH (1 mL) forneceu o composto do título (60 mg, 68%) como um pó amarelo: m.p. 230-235°C; MS m/z 440.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.26 (1H, s), 8.24 (1H, d, J = 8.0 Hz), 8.21 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.72 (1H, d, J = 7.6 Hz), 7.59 (1H, s), 7.51 (1H, t, J = 7.9 Hz), 7.48 (1H, d, J = 7.9 Hz), 3.65 (2H, m), 3.34 (2H, m), 2.42 (2H, m), 2.31(2H, m), 2.22 (3H, s). Exemplo 13 Preparação de Cpd 35
Figure img0102
[0631] Etapa A: 3-Hidroxifenilácido acético (2.13 g, 14 mmol) foi combinado com isopropilamina (3.6 mL, 42 mmol) em THF (20 mL). A solução foi resfriada a 0°C antes da adição de anidrido propilfosfônico (9.8 mL, ~50% em DMF, 16 mmol). A solução agitada a temperatura ambiente por 16 h. A mistura foi dividida em H2O (300 mL) e EtOAc (300 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (50% EtOAc em hexanos) para se obter 2- (3-hidroxifenil)-N-isopropilacetamida (1.9 g, 70%) como um pó branco. MS m/z 194.1 [M+H]+.
[0632] Etapa B: 2-(3-Hidroxifenil)-N-isopropilacetamida (1.9 g, 10 mmol) foi dissolvido em THF (20 mL). Hidreto de alumíno lítio (10 mL, 1 M em THF, 10 mmol) foi adicionado à solução. A mistura foi aquecida até 60°C por 2 h com agitação. O reagente em excesso foi extinto pela lenta adição de H2O. Depois de agitação vigorosa por 1 h, a mistura foi filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrado para se obter 3- (2-(isopropilamino)etil)fenol bruto, o qual foi usado sem purificação adicional.
[0633] Etapa C: 3-(2-(Isopropilamino)etil)fenol (716 mg, 4 mmol) foi combinado com di-terc-butil dicarbonato (872 mg, 4 mmol) em CH2Cl2 (10 mL). A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 16 h, então concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (50% EtOAc em hexanos) para se obter terc-butil 3-hidroxiphenetil(isopropil)carbamato (650 mg, 23%) como um pó branco.
[0634] Etapa D: Seguindo o procedimento no Exemplo 6, Etapa A, terc-butil 3-hidroxiphenetil(isopropil)carbamato (650 mg, 2.3 mmol), trietilamina (1.6 mL, 11.5 mmol), cloreto de magnésio anidro (437 mg, 4.6 mmol) e paraformaldeído (690 mg, 23 mmol) em CH3CN (8 mL) forneceu terc-butil 4-formil-3- hidroxiphenetil(isopropil)carbamato (520 mg, 73%). MS m/z 306.1 [M-H]-.
[0635] Etapa E: Seguindo o procedimento no Exemplo 9, Etapa C, terc-butil 4-formil-3-hidroxiphenetil(isopropil)carbamato (50 mg, 0.16 mmol), etil 2-(4-clorobenzo[d]tiazol-2-il)acetato (50 mg, 0.2 mmol, preparado de acordo com Exemplo 2, Parte 1), piperidina (20 μL, 0.2 mmol) e ácido acético (12 μL, 0.2 mmol) em EtOH (1 mL) forneceu terc-butil 2-(3-(4- clorobenzo[d]tiazol-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7- il)etil(isopropil)carbamato.
[0636] Etapa F: Uma mistura de 2-(3-(4-clorobenzo[d]tiazol- 2-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)etil(isopropil)carbamato (0.16 mmol) e trifluorácido acético (1 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 15 min, então o solvente foi removido com um fluxo de nitrogênio. O resíduo foi particionado em CH2Cl2 (5 mL) e K2CO3 (1 M, 5 mL) aquoso. A camada orgânica foi coletada através de um filtro poroso hidrofóbico e concentrada para se obter o composto do título (42 mg, 66%) como um pó amarelo: m.p. 179-182°C; MS m/z 399.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.23 (1H, s), 8.22 (1H, d, J = 7.8 Hz), 8.10 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.73 (1H, d, J = 7.7 Hz), 7.52 (1H, t, J = 7.8 Hz), 7.50 (1H, s), 7.42 (1H, d, J = 8.0 Hz), 2.89 (4H, m), 2.79 (1H, m), 1.02 (6H, d, J = 6.2 Hz).
[0637] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 13 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 14 Preparação de Cpd 42
Figure img0103
[0638] Etapa A: 2,4-Dihidroxibenzaldeído (1.38 g, 10 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (20 mL) e resfriado até 0°C. À mistura foi adicionado piridina (0.81 mL, 10 mmol), seguido de fosgênio (5.0 mL, 20% em tolueno, 10 mmol). A mistura foi agitada por 5 min a 0°C. A solução de 1-Boc-piperazina (1.86 g, 10 mmol) e trietilamina (1.4 mL, 10 mmol) em CH2Cl2 (5 mL) foi adicionado à mistura a 0°C. Depois de 5 min, a mistura foi lavada com uma solução aquosa saturada de NaHCO3. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (20% EtOAc em hexanos) para se obter 1-terc-butil 4-(4- formil-3-hidroxifenil) piperazina-1,4-dicarboxilato (480 mg, 14%). MS m/z 349.3 [M-H]-.
[0639] Etapa B: Seguindo o procedimento no Exemplo 9, Etapa C, 1-terc-butil 4-(4-formil-3-hidroxifenil) piperazina-1,4- dicarboxilato (70 mg, 0.2 mmol), etil 2-(4- clorobenzo[d]tiazol-2-il)acetato (50 mg, 0.2 mmol, preparado de acordo com Exemplo 2, Parte 1), piperidina (20 μL, 0.2 mmol) e ácido acético (12 μL, 0.2 mmol) em EtOH (1 mL) forneceu 1-terc-butil 4-(3-(4-clorobenzo[d]tiazol-2-il)-2-oxo- 2H-cromen-7-il) piperazina-1,4-dicarboxilato.
[0640] Etapa C: Uma mistura de 1-terc-butil 4-(3-(4- clorobenzo[d]tiazol-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il) piperazina- 1,4-dicarboxilato (0.2 mmol) e trifluorácido acético (1 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 15 min, então o solvente foi removido com um fluxo de nitrogênio. O resíduo foi particionado em CH2Cl2 (5 mL) e K2CO3 (1 M, 5 mL) aquoso. A camada orgânica foi coletada através de um filtro poroso hidrofóbico e concentrada para se obter o composto do título (62 mg, 70%) como um pó esbranquiçado: m.p. 236-239°C; MS m/z 442.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.23 (1H, s), 8.218.18 (2H, m), 7.70 (1H, d, J = 7.72 Hz), 7.49 (1H, t, J = 7.9 Hz), 7.46 (1H, d, J = 2.1 Hz), 7.31 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 2.1 Hz), 3.55 (2H, m), 3.39 (2H, m), 2.76 (4H, m).
[0641] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 14 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 15 Preparação de Cpd 143
Figure img0104
[0642] Etapa A: A uma solução de 3-hidroxiacetofenona (2.72 g, 20 mmol) em MeOH (10mL) foi adicionado borohidreto de sódio (380 mg, 10 mmol). Depois de agitada a temperatura ambiente por 2 h, a mistura reacional was acidificada ao pH <7 com HCl aquoso (1 N). MeOH foi removido po rotoevaporação sob pressão reduzida. A mistura foi dividida em água e EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer 3-(1- hidroxietil)fenol (2.15 g, 78%). MS m/z 137.1 [M-H]-.
[0643] Etapa B: A uma mistura de 3-(1-hidroxietil)fenol (1.38 g, 10 mmol), cloreto de magnésio (1.94 g, 20.4 mmol) e trietilamina (7 mL, 50 mmol) em CH3CN (5mL) foi adicionado paraformaldeído (3 g, 100 mmol) a temperatura ambiente. A mistura reacional foi aquecida a 60°C durante a noite, então o solvente foi removido por rotoevaporação sob pressão reduzida. A mistura reacional foi acidificada até pH~2 com HCl aquoso (1 N). A mistura aquosa foi extraída com EtOAc e a camada orgânica foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-20% EtOAc em CH2Cl2) para fornecer 2-hidroxi-4-(1-hidroxietil)benzaldeído (734 mg, 44%).
[0644] Etapa C: A uma mistura de 2-hidroxi-4-(1- hidroxietil)benzaldeído (568 mg, 3.4 mmol), piperidina (674 μL, 6.8 mmol) e ácido acético (194 μL, 3.4 mmol) em EtOH (2 mL) foi adicionado etil 2-(benzo[d]tiazol-2-il)acetato (800 mg, 4.1 mmol, preparado no Exemplo 1, Parte 1). A mistura foi aquecida a 60°C durante a noite. Depois de resfriada até temperatura ambiente, dietil éter foi adicionado à mistura para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração, lavado com água e seco sob vácuo para dar 3- (benzo[d]tiazol-2-il)-7-(1-hidroxietil)-2H-cromen-2-ona (493 mg, 45%). MS m/z 324.1 [M+H]+.
[0645] Etapa D: A uma mistura de 3-(benzo[d]tiazol-2-il)-7- (1-hidroxietil)-2H-cromen-2-ona (323 mg, 1 mmol) e trifenilfosfina (525 mg, 2 mmol) em CH2Cl2 (2 mL) foi adicionado N-bromosuccinamida (456 mg, 2.6 mmol) a 0°C. A mistura reacional foi agitada a temperatura ambiente por 3 h. Dietil éter foi adicionado à mistura para produzir um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração à vácuo, lavado com água e uma solução aquosa saturada NaHCO3 e seco para dar 3-(benzo[d]tiazol-2-il)-7-(1-bromoetil)-2H- cromen-2-ona (193 mg, 50%). MS m/z 386.1, 388.1 [M+H]+.
[0646] Etapa E: A uma solução de 3-(benzo[d]tiazol-2-il)-7- (1-bromoetil)-2H-cromen-2-ona (40 mg, 0.10 mmol) em CH3CN (0.8 mL) foi adicionado dimetilamina (16 mg, 0.36 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 45°C por 2 h. Dietil éter foi adicionado à mistura para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, lavado com água e uma solução aquosa saturada NaHCO3, então seco para se obter o composto do título (14 mg, 27%) como um sólido amarelo: m.p. 130-133°C; MS m/z 351.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.25 (1H, s), 8.20 (1H, d, J = 8.1Hz), 8.09 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.03 (1H, d, J = 7.9Hz), 7.59 (1H, t, J = 7.6 Hz), 7.517.43 (3H, m), 3.46 (1H, q, J = 6.7 Hz), 2.15 (6H, s), 1.32 (3H, d, J = 6.7 Hz).
[0647] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 15 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 16 Preparação de Cpd 50
Figure img0105
[0648] Etapa A: Uma mistura de terc-butil 4-(4-formil-3- hidroxifenil)piperazina-1-carboxilato (6.5 g, 21.2 mmol, preparado no Exemplo 1, Parte 2), etil cianoacetato (2.87 mL, 29.6 mmol), piperidina (2.6 mL, 26 mmol), AcOH (1.6 mL, 29.3 mmol) e CH3CN (50 mL) foi aquecida a 80°C por 1 h. A mistura reacional foi diluída com H2O e extraída com CH2Cl2. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (10% EtOAc em CH2Cl2), seguido de titulação com hexano/EtOAc (1:1), gerando terc-butil 4-(3-ciano-2-oxo-2H- cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (5.05 g, 67%) como um sólido amarelo. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.05 (1H, s), 7.41 (1H, d, J = 8.5 Hz), 6.84 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 2.5 Hz), 6.66 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.65 (4H, m), 3.51 (4H, m), 1.52 (9H, s).
[0649] Etapa B: Uma mistura de terc-butil 4-(3-ciano-2-oxo- 2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (400 mg, 1.13 mmol), MeOH (2 mL), CH2Cl2 (2 mL), e NH2OH (50% solução aquosa, 200 μL, 3.2 mmol) foi agitada a temperatura ambiente por 8 h. A mistura reacional foi concentrada com um fluxo de nitrogênio até que o volume total foi reduzido para metade. A mistura reacional foi diluída com MeOH (40 mL) e H2O (5 mL), gerando um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração à vácuo e seco, obtendo terc-butil 4-(3-(N'-hidroxicarbamimidoil)-2- oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (386 mg, 88%) como um sólido castanho-amarelado. MS m/z 389.2 [M+H]+.
[0650] Etapa C: terc-butil 4-(3-(N'-hidroxicarbamimidoil)- 2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (190 mg, 0.49 mmol) foi suspenso em CH2Cl2 (1.5 mL) e trietilamina (85 μL, 0.6 mmol). Acetil cloreto (40 μL, 0.54 mmol) foi adicionado à mistura. Depois de 10 min, a mistura foi diluída com CH2Cl2 e lavado com HCl aquoso, seguido de uma solução aquosa saturada de NaHCO3. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi suspenso em tolueno (1.5 mL) e aquecido a 100°C por 30 h, então o solvente foi removido com um fluxo de nitrogênio. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (10% EtOAc em CH2Cl2), seguido de titulação com 2:1 hexano/acetona, gerando terc- butil 4-(2-oxo-3-(5-fenil-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-cromen-7- il)piperazina-1-carboxilato (187 mg, 50%) como um sólido amarelo. MS m/z 475.2 [M+H]+.
[0651] Etapa D: terc-butil 4-(2-oxo-3-(5-fenil-1,2,4- oxadiazol-3-il)-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (107 mg, 0.26 mmol) foi agitada em uma solução e CH2Cl2 (2.5 mL) e trifluorácido acético (1.0 mL) por 15 min. A mistura reacional foi particionada em CH2Cl2 e K2CO3 aquoso. A camada orgânica foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi titulado com 2:1 hexano/acetona, gerando o composto do título (116 mg, 81%) como um sólido amarelo: m.p. 214-221°C; MS m/z 375.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.77 (1H, s), 8.18 (2H, m), 7.75 (2H, m), 7.68 (2H, m), 7.04 (1H, dd, J = 9 Hz, 2 Hz), 6.87 (1H, d, J = 2 Hz), 3.38 (4H, m), 2.82 (4H, m). Exemplo 17 Preparação de Cpd 29
Figure img0106
[0652] Etapa A: Uma mistura de terc-butil 4-(4-formil-3- hidroxifenil)piperazina-1-carboxilato (2.9 g, 9.5 mmol, preparado no Exemplo 1, Parte 2), etil acetoacetato (1.28 mL, 11.8 mmol), AcOH (725 μL, 13.3 mmol), piperidina (1.16 mL, 11.8 mmol), e CH3CN (23 mL) foi aquecida a 80°C por 2 h. A mistura reacional foi particionada entre EtOAc e H2O. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada, e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (10% EtOAc em CH2Cl2), seguido de titulação com éter, gerando terc-butil 4-(3-acetil-2-oxo-2H-cromen-7- il)piperazina-1-carboxilato (3.15 g, 89%) como um sólido amarelo. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.47 (1H, s), 7.49 (1H, d, J = 9 Hz), 6.83 (1H, dd, J = 9 Hz, 2.5 Hz), 6.67 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.64 (4H, m), 3.47 (4H, m), 2.72 (3H, s), 1.52 (9H, s).
[0653] Etapa B: Uma mistura de terc-butil 4-(3-acetil-2- oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (300 mg, 0.81 mmol), dimetilformamida dimetil acetal (900 μL, 7.5 mmol) e pirrolidina (150 μL, 1.83 mmol) foi aquecida a 55°C por 1 h, então o solvente foi removido com um fluxo de nitrogênio. Hidrazina (70 μL, 2.2 mmol) e AcOH (900 μL) foram adicionados. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 45 min, então particionada entre EtOAc e H2O. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, então filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (30% EtOAc em CH2Cl2), seguido de titulação com 2:1 hexano/acetona, gerando terc-butil 4-(2-oxo-3-(1H-pirazol-3-il)-2H-cromen-7- il)piperazina-1-carboxilato (180 mg, 56%) como um sólido amarelo. MS m/z 397.2 [M+H]+.
[0654] Etapa C: A solução de terc-butil 4-(2-oxo-3-(1H- pirazol-3-il)-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (180 mg, 0.45 mmol) em CH2Cl2 (2.5 mL) e trifluorácido acético (1.0 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 15 min. A mistura reacional foi particionada entre CH2Cl2 e K2CO3 aquoso. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. Titulação do resíduo com acetona rendeu o composto do título (100 mg, 75%) como um sólido amarelo: m.p. 224-228°C; MS m/z 297.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6:D2O, 100°C): δ 8.31 (1H, s), 7.63 (1H, br s), 7.54 (1H, d, J = 9 Hz), 6.94 (1H, dd, J = 9 Hz, 2 Hz), 6.82 (1H, d, J = 2 Hz), 6.77 (1H, d, J = 2 Hz), 3.32 (4H, t, J = 5 Hz), 2.88 (4H, t, J = 5 Hz). Exemplo 18 Preparação de Cpd 38
Figure img0107
[0655] Etapa A: Uma mistura de terc-butil 4-(2-oxo-3-(1H- pirazol-3-il)-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (300 mg, 0.76 mmol, preparado no Exemplo 17, Etapa B), Cs2CO3 (515 mg, 1.58 mmol), iodometano (93 μL, 1.5 mmol), e DMF (2.0 mL) foi agitada a 5°C por 22 h. A mistura reacional foi particionada entre EtOAc e H2O. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (15% EtOAc em CH2Cl2), seguido de titulação com éter para dar terc-butil 4-(3-(1- metil-1H-pirazol-3-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1- carboxilato (215 mg, 69%) como um sólido amarelo. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.32 (1H, s), 7.41 (2H, m), 7.05 (1H, d, J = 2 Hz), 6.83 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 2.5 Hz), 6.74 (1H, d, J = 2 Hz), 3.97 (3H, s), 3.62 (4H, m), 3.33 (4H, m), 1.50 (9H, s).
[0656] Etapa B: A solução de terc-butil 4-(3-(1-metil-1H- pirazol-3-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (215 mg, 0.52 mmol) em CH2Cl2 (2.5 mL) e trifluorácido acético (1.0 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 1 h. A mistura reacional foi particionada entre CH2Cl2 e K2CO3 aquoso. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada, e concentrada sob vácuo. O resíduo foi titulado com 1:1 hexano/acetona obtendo o composto do título (142 mg, 92%) como um sólido amarelo: m.p. 224-228°C; MS m/z 311.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCI3): δ 8.32 (1H, s), 7.42 (2H, m), 7.06 (1H, d, J = 2 Hz), 6.85 (1H, dd, J = 9 Hz, 2.5 Hz), 6.77 (1H, d, J = 2 Hz), 3.99 (3H, s), 3.34 (4H, m), 3.06 (4H, m). Exemplo 19 Preparação de Cpd 74
Figure img0108
[0657] Etapa A: Uma mistura de terc-butil 4-(2-oxo-3-(1H- pirazol-3-il)-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (250 mg, 0.63 mmol, preparado no Exemplo 17, Etapa B), Cs2CO3 (650 mg, 1.98 mmol), iodeto de cobre (I) (14 mg, 0.073 mmol), iodobenzeno (110 μL, 0.97 mmol), e DMF (1.6 mL) foi aquecida a 100°C por 24 h. A mistura reacional foi particionada entre EtOAc e H2O. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada, e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (5% EtOAc em CH2Cl2), seguido de titulação com éter para gerar terc-butil 4-(2-oxo- 3-(1-fenil-1H-pirazol-3-il)-2H-cromen-7-il)piperazina-1- carboxilato (129 mg, 43%) como um sólido amarelo. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.52 (1H, s), 7.97 (1H, d, J = 2.5 Hz), 7.77 (2H, d, J = 8 Hz), 7.49 (3H, m), 7.32 (2H, m), 6.86 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 2.5 Hz), 6.77 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.62 (4H, m), 3.36 (4H, m), 1.50 (9H, s).
[0658] Etapa B: A solução de terc-butil 4-(2-oxo-3-(1- fenil-1H-pirazol-3-il)-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (127 mg, 0.27 mmol) em CH2Cl2 (2.5 mL) e trifluorácido acético (1.0 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 1 h. A mistura reacional foi particionada entre CH2Cl2 e K2CO3 aquoso. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi titulado com 2:1 hexano/acetona para se obter 3-(1-fenil-1H-pirazol-3-il)-7-(piperazin-1-il)-2H- cromen-2-ona (85 mg, 84%) como um sólido amarelo. MS m/z 373.3 [M+H]+.
[0659] Etapa C: 3-(1-fenil-1H-pirazol-3-il)-7-(piperazin-1- il)-2H-cromen-2-ona (55 mg, 0.15 mmol) foi combinado com formaldeído aquoso (37%, 200 uL, 2.15 mmol) e triacetoxiborohidreto de sódio (110 mg, 0.52 mmol) em 1,2- dicloroetano (0.5 mL). A mistura foi agitada 20 min a temperatura ambiente e então arrefecida pela a adição de uma solução aquosa saturada de NaHCO3. A mistura foi extraída com CH2Cl2. A camada orgânica foi seca sobre NaSO4, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (10% MeOH em CH2Cl2) para dar o composto do título (34 mg, 58%) como um sólido amarelo: m.p. 152-159°C; MS m/z 387.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.51 (1H, s), 7.97 (1H, d, J = 2.5 Hz), 7.77 (2H, d, J = 7.5 Hz), 7.47 (3H, m), 7.32 (2H, m), 6.86 (1H, dd, J = 8.5 Hz), 6.77 (1H, d, J = 2 Hz), 3.45 (4H, m), 2.66 (4H, br s), 2.43 (3H, s). Exemplo 20 Preparação de Cpd 80
Figure img0109
[0660] Etapa A: Uma mistura de terc-butil 4-(4-formil-3- hidroxifenil)piperazina-1-carboxilato (3.0 g, 9.8 mmol, preparado no Exemplo 1, Parte 2), etil 3-oxopentanoato (1.62 mL, 11.3 mmol), AcOH (650 μL, 12 mmol), piperidina (1.1 mL, 11.3 mmol) e CH3CN (24 mL) foi aquecida a 80°C por 4 h. A mistura reacional foi particionada entre CH2Cl2 e H2O. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (10% EtOAc em CH2Cl2), seguido de titulação com éter, gerando terc-butil 4-(2-oxo-3-propionil-2H-cromen-7- il)piperazina-1-carboxilato (3.6 g, 95%) como um sólido amarelo. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.49 (1H, s), 7.50 (1H, d, J = 8.5 Hz), 6.83 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 2.5 Hz), 6.67 (1H, d, J = 2 Hz), 3.63 (4H, m), 3.47 (4H, m), 3.16 (2H, q, J = 7 Hz), 1.52 (9H, s), 1.19 (3H, t, J = 7 Hz).
[0661] Etapa B: Uma mistura de terc-butil 4-(2-oxo-3- propionil-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (3.3 g, 8.55 mmol), dimetilformamida dimetil acetal (10 mL, 830 mmol) e pirrolidina (1.65 mL, 20.1 mmol) foi aquecida a 60°C por 3 h, então o solvente foi removido sob vácuo. A mistura reacional foi dissolvida em AcOH (10 mL) e resfriada até 0°C. Hidrazina (820 μL, 26 mmol) foi adicionada gota a gota (exotérmica suave). Depois de a adição ter sido completada, a mistura foi agitada a temperatura ambiente por 10 min. A mistura reacional foi particionada entre CH2Cl2 e K2CO3 aquoso. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, então filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (50% EtOAc em CH2Cl2), seguido de titulação com 2:1 hexano/acetona, gerando terc-butil 4-(3-(4-metil-1H-pirazol-3- il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (1.01 g, 29%) como um sólido amarelo. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.95 (1H, s), 7.48 (1H, s), 7.44 (1H, d, J = 9 Hz), 6.87 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 2.5 Hz), 6.74 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.63 (4H, m), 3.38 (4H, m), 2.36 (3H, s), 1.50 (9H, s).
[0662] Etapa C: A solução de terc-butil 4-(3-(4-metil-1H- pirazol-3-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (250 mg, 0.61mmol) em CH2Cl2 (2.5 mL) e trifluorácido acético (1.0 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 15 min. A mistura reacional foi particionada entre CH2Cl2 e K2CO3 aquoso. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi titulado com 1:1 hexano/acetona gerando o composto do título (155 mg, 82%) como um sólido amarelo: m.p. 175-200°C (decomposition range); MS m/z 311.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6:D2O, 100°C): δ 7.91 (1H, s), 7.54 (1H, d, J = 9 Hz), 7.41 (1H, br s), 6.95 (1H, d, J = 9 Hz), 6.80 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.35 (4H, m), 2.92 (4H, m), 2.09 (3H, br s). Exemplo 21 Preparação de Cpd 283
Figure img0110
[0663] Etapa A: Gás de sulfeto de hidrogênio (H2S) foi feito borbulhar em uma solução de etil cianoacetato (4.7 mL, 44.3 mmol) em piridina/trietilamina (500 mL, 1:1 v/v) até que se tornou saturado. A mistura foi aquecida a 60°C por 18 h, então o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi particionado entre EtOAc e HCl aquoso. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, então filtrada e concentrada sob vácuo. O óleo resultante foi filtrado para remover as impurezas sólidas. Etil 3-amino-3-tioxopropanoato (6.25 g, 96%) foi obtido como um óleo laranja. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.92 (1H, br s), 7.75 (1H, br s), 4.21 (2H, q, J = 7 Hz), 3.82 (2H, s), 1.29 (3H, t, J = 7 Hz).
[0664] Etapa B: A solução de etil 3-amino-3-tioxopropanoato (2.0 g, 13.6 mmol) e cloroacetona (1.2 mL, 15.0 mmol) em DMF (230 mL) foi aquecida a 105°C por 15 h. A mistura reacional foi particionada entre EtOAc e H2O. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (CH2Cl2) gerando etil 2-(4-metiltiazol-2-il)acetato (1.22 g, 48%) como um óleo vermelho. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 6.86 (1H, s), 4.24 (2H, q, J = 7 Hz), 4.03 (2H, s), 2.44 (3H, s), 1.29 (3H, t, J = 7 Hz).
[0665] Etapa C: Uma mistura de etil 2-(4-metiltiazol-2- il)acetato (650 mg, 3.5 mmol), 4-fluor-2-hidroxibenzaldeído (490 mg, 3.5 mmol), piperidina (15 μL, 0.15 mmol), AcOH (15 μL, 0.27 mmol) e CH3CN (5 mL) foi aquecida a 80°C por 24 h. A mistura reacional foi particionada entre CH2Cl2 e K2CO3 aquoso. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi titulado com 7:3 hexano/CH2Cl2 gerando 7-fluor-3-(4-metiltiazol-2-il)-2H-cromen-2-ona (642 mg, 70%) como um sólido amarelo. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.85 (1H, s), 7.69 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 6 Hz), 7.15 (3H, m), 2.57 (3H, s).
[0666] Etapa D: Uma mistura de 7-fluor-3-(4-metiltiazol-2- il)-2H-cromen-2-ona (100 mg, 0.38 mmol), (S)-2-metilpiperazina (46 mg, 0.46 mmol) e DMSO (600 μL) foi aquecida a 80°C por 15 h. A mistura reacional foi diluída em solução aquoss saturada NaHCO3 e filtrada. O material coletado foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (10% MeOH em CH2Cl2), seguido de titulação com 1:1 hexano/acetona para gerar o composto do título (103 mg, 79%) como um sólido amarelo: m.p. 194-199°C; MS m/z 342.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.80 (1H, s), 7.75 (1H, d, J = 9 Hz), 7.32 (1H, m), 7.06 (1H, dd, J = 9 Hz, 2.5 Hz), 6.91 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.88 (2H, t, J = 11 Hz), 2.96 (1H, d, J = 12 Hz), 2.81 (1H, td, J = 12 Hz, 3 Hz), 2.72 (2H, m), 2.45 (4H, m), 2.36 (1H, br s), 1.04 (3H, d, J = 6.5 Hz).
[0667] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 21 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 22 Preparação de Cpd 452
Figure img0111
[0668] Etapa A: Uma mistura de 4-fluor-2-hidroxibenzaldeído (10 g, 71.4 mmol), anidrido acético (34 mL, 360 mmol) e trietilamina (11 mL, 79 mmol) foi aquecida a 145°C por 2 d. A mistura reacional foi diluída em NH4OH (500 mL) aquoso e filtrada. O material coletado foi seco, gerando 7-fluor-2H- cromen-2-ona (10.3 g, 88%) como um sólido marrom. 1H NMR (500 MHz. CDCl3): δ 7.69 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.48 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 6 Hz), 7.07 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 2.5 Hz), 7.03 (1H, td, J = 8.5 Hz, 2.5 Hz), 6.38 (1H, d, J = 9.5 Hz).
[0669] Etapa B: Uma mistura de 7-fluor-2H-cromen-2-ona (4.33 g, 26.4 mmol), [bis(trifluoracetoxi)iodo]benzeno (18.15 g, 42.2 mmol), iodo (10.7 g, 42.2 mmol), piridina (4.2 mL, 53 mmol), e CHCl3 (25 mL) foi aquecida a 65°C por 15 h. A mistura reacional foi particionada entre NaHSO3 aquoso e CH2Cl2. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (50% CH2Cl2 em hexanos, então CH2Cl2) gerando 7-fluor-3-iodo-2H-cromen-2-ona (5.6 g, 73%) como um sólido castanho-amarelado. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.36 (1H, s), 7.46 (1H, dd, J = 9 Hz, 6 Hz), 7.07 (2H, m).
[0670] Etapa C: Uma mistura de 7-fluor-3-iodo-2H-cromen-2- ona (5.6 g, 19.3 mmol), hexabutilditin (13.45 g, 23.2 mmol), dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (540 mg, 0.77 mmol) e 1,4-dioxano (55 mL) foi aquecida a 80°C por 15 h. A mistura reacional foi diluída em EtOAc e filtrada. O filtrado foi concentrado sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (20-40% CH2Cl2 em hexanos) gerando 7-fluor-3-(tributilstannil)-2H-cromen-2-ona (6.79 g, 77%) como um óleo incolor.
[0671] Etapa D: Uma mistura de 7-fluor-3-(tributilstannil)- 2H-cromen-2-ona (1.15 g, 2.53 mmol), 4-iodoimidazol (600 mg, 3.1 mmol), dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (285 mg, 0.41 mmol), iodeto de cobre (I) (115 mg, 0.60 mmol) e 1,4- dioxano (7 mL) foi aquecida a 85°C por 2 d. A mistura reacional foi particionada entre NH4OH e CH2Cl2. A camada orgânica foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (30% MeOH em CH2Cl2). O produto foi titulado com CH2Cl2, gerando 7-fluor-3-(1H- imidazol-4-il)-2H-cromen-2-ona (298 mg, 51%) como um sólido amarelo. MS m/z 231.1 [M+H]+.
[0672] Etapa E: Uma mistura de 7-fluor-3-(1H-imidazol-4- il)-2H-cromen-2-ona (90 mg, 0.39 mmol), iodobenzeno (70 μL, 0.62 mmol), CuI (60 mg, 0.32 mmol), trans-1,2- bis(metilamino)ciclohexano (23 μL, 0.15 mmol), Cs2CO3 (585 mg, 1.79 mmol) e DMF (0.9 mL) foi aquecida a 50°C por 45 min. A mistura reacional foi diluída em H2O e filtrada. O material sólido foi particionado entre aquoso NH4OH e CH2Cl2. A camada orgânica foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (10% EtOAc em CH2Cl2), gerando 7-fluor-3-(1-fenil-1H-imidazol-4-il)-2H-cromen-2-ona (52 mg, 43%) como um sólido branco. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.58 (1H, s), 8.27 (1H, d, J = 1.5 Hz), 7.94 (1H, d, J = 1.5 Hz), 7.60 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 6 Hz), 7.52 (4H, m), 7.42 (1H, m), 7.11 (1H, dd, J = 9 Hz, 2.5 Hz), 7.06 (1H, td, J = 8 Hz, 2.5 Hz).
[0673] Etapa F: Uma mistura de 7-fluor-3-(1-fenil-1H- imidazol-4-il)-2H-cromen-2-ona (50 mg, 0.16 mmol), cis-2,6- dimetilpiperazina (29 mg, 0.25 mmol) e DMSO (300 μL) foi aquecida a 100°C por 15 h. A mistura reacional foi diluída em solução aquosa saturada de NaHCO3 e filtrada. O material sólido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (5% MeOH em CH2Cl2), gerando o composto do título (52 mg, 81%) como um sólido amarelo: m.p. 260-264°C; MS m/z 401.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.50 (1H, s), 8.41 (1H, d, J = 1 Hz), 8.14 (1H, d, J = 1 Hz), 7.71 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.64 (1H, d, J = 9 Hz), 7.55 (2H, t, J = 8 Hz), 7.40 (1H, t, J = 7.5 Hz), 7.01 (1H, dd, J = 9 Hz, 2 Hz), 6.89 (1H, d, J = 2 Hz), 3.82 (2H, dd, J = 12.5 Hz, 2 Hz), 2.80 (2H, m), 2.31 (2H, t, J = 11.5 Hz), 2.25 (1H, br s), 1.04 (6H, d, J = 6.5 Hz). Exemplo 23 Preparação de Cpd 433
Figure img0112
[0674] Etapa A: Uma mistura de 7-fluor-3-(1H-imidazol-4- il)-2H-cromen-2-ona (75 mg, 0.32 mmol, preparado no Exemplo 22, Etapa D), 2-iodopiridina (55 μL, 0.5 mmol), iodeto de cobre (I) (27 mg, 0.14 mmol), trans-1,2- bis(metilamino)ciclohexano (13 μL, 0.08 mmol), Cs2CO3 (330 mg, 1.01 mmol) e DMF (750 μL) foi aquecida a 50°C por 30 min. A mistura reacional foi diluída com H2O e filtrada. O material sólido foi particionado entre NH4OH aquoso e CH2Cl2. A camada orgânica foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (10% acetona em CH2Cl2), seguido de titulação com 1:1 CH2Cl2/hexano, gerando 7- fluor-3-(1-(piridin-2-il)-1H-imidazol-4-il)-2H-cromen-2-ona (62 mg, 63%) como um sólido branco. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.61 (1H, s), 8.56 (1H, d, J = 1 Hz), 8.52 (1H, m), 8.50 (1H, d, J = 1 Hz), 7.88 (1H, m), 7.60 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 6 Hz), 7.48 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.29 (1H, m), 7.11 (1H, dd, J = 9 Hz, 2.5 Hz), 7.06 (1H, td, J = 8.5 Hz, 2.5 Hz).
[0675] Etapa B: Seguindo o procedimento do Exemplo 22, Etapa F, 7-fluor-3-(1-(piridin-2-il)-1H-imidazol-4-il)-2H- cromen-2-ona (40 mg, 0.13 mmol), cis-2,6-dimetilpiperazina (23 mg, 0.2 mmol) e DMSO (300 μL) gerou o composto do título (46 mg, 88%): m.p. 201-206°C; MS m/z 402.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.71 (1H, d, J = 1 Hz), 8.55 (1H, m), 8.52 (1H, s), 8.45 (1H, d, J = 1 Hz), 8.02 (1H, m), 7.92 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.64 (1H, d, J = 9 Hz), 7.41 (1H, dd, J = 6.5 Hz, 5 Hz), 7.02 (1H, dd, J = 9 Hz, 2 Hz), 6.88 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.82 (2H, d, J = 11.5 Hz), 2.80 (2H, m), 2.32 (2H, t, J = 11.5 Hz), 2.28 (1H, br s), 1.04 (6H, d, J = 6.5 Hz).
[0676] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 23 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 24 Preparação de Cpd 32
Figure img0113
[0677] Etapa A: Em uma suspensão de 7-hidroxicumarina (16.2 g, 100 mmol) em piridina (16.3 mL, 200 mmol) e CH2Cl2 (250 mL) a 0°C foi adicionado gota a gota a solução de anidrido tríflico (20.2 mL, 120 mmol) em CH2Cl2 (50 mL). A mistura foi aquecida até temperatura ambiente por mais de 30 min. A mistura foi lavada com HCl aquoso diluído, água, salmoura e então seca sobre NaSO4 e concentrada para dar um sólido 2-oxo- 2H-cromen-7-il trifluormetanosulfonato (28.5 g, 97%) como um sólido castanho-amarelado. MS m/z 295.0 [M+H]+.
[0678] Etapa B: Uma mistura de acetato de paládio(II) (0.228 g, 1.02 mmol), 2,2‘-bis(difenilfosfino)-1,1‘- binaftaleno (1.27 g, 2.04 mmol) e Cs2CO3 (8.3 g, 25.5 mmol) em tolueno (75 mL) foi agitada sob argônio a 110°C por 15 min até que uma cor de vermelho escuro se formou. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente, sobre a qual 2-oxo-2H- cromen-7-il trifluormetanosulfonato (5.0 g, 17 mmol) e 1-Boc- piperazina (3.8 g, 20.4 mmol) foram adicionados. A mistura foi agitada a 110°C por 24 h. A mistura foi dividida em EtOAc e água. A camada orgânica foi seca sobre NaSO4, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (0-15% EtOAc em CH2Cl2) para dar terc-butil 4-(2-oxo-2H- cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (2.5 g, 45%) como um sólido amarelo. MS m/z 331.2 [M+H]+.
[0679] Etapa C: À uma mistura de terc-butil 4-(2-oxo-2H- cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (2.5 g, 7.58 mmol) e acetato de sódio (1.86 g, 22.7 mmol) em ácido acético (30 mL) a temperatura ambiente foi adicionado bromo (0.4 mL, 7.95 mmol) gota a gota. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 1 h. Água foi adicionada para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração a vácuo, lavado com água, seco e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-25% EtOAc em CH2Cl2) para dar terc-butil 4-(3- bromo-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (1.8 g, 58%) como um sólido amarelo. MS m/z 409.1 [M+H]+, 411.1 [M+2+H]+.
[0680] Etapa D: Uma mistura de terc-butil 4-(3-bromo-2-oxo- 2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (80 mg, 0.2 mmol), 2- aminopiridina (26 mg, 0.28 mmol), bis(dibenzilideneacetona)paládio(0) (3.7 mg, 0.004 mmol), 4,5- bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (5.1 mg, 0.0088 mmol) e Cs2CO3 (91 mg, 0.28 mmol) em 1,4-dioxano (1.0 mL) foi agitada a 100°C durante a noite sob argônio, então o solvente foi removido. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-10% EtOAc em CH2Cl2) para dar terc-butil 4-(2- oxo-3-(piridin-2-ilamino)-2H-cromen-7-il)piperazina-1- carboxilato (82 mg, 71%) como um sólido amarelo. MS m/z 423.2 [M+H]+.
[0681] Etapa E: terc-butil 4-(2-oxo-3-(piridin-2-ilamino)- 2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (71 mg, 0.168 mmol) foi dissolvido em trifluorácido acético (2.0 mL). A mistura foi agitada por 15 min a temperatura ambiente, então o solvente foi removido com um fluxo de nitrogênio. O resíduo foi particionado em CH2Cl2 e K2CO3 aquoso. A camada orgânica foi seca sobre NaSO4, filtrada e concentrada para dar o composto do título (41 mg, 76%) como um sólido amarelo: m.p. 191-194°C; MS m/z 323.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.78 (1H, s), 8.77 (1H, s), 8.69 (1H, s), 8.24 (1H, dd, J = 5.1 Hz, 1.3 Hz), 7.62-7.57 (1H, m), 7.44 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.27 (1H, d, J = 8.5 Hz), 6.95 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.2 Hz), 6.85-6.80 (2H, m), 3.20-3.13 (4H, m), 2.86-2.78 (4H, m).
[0682] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 24 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 25 Preparação de Cpd 274
Figure img0114
[0683] Etapa A: A uma solução de t-butil 4-(3-acetil-2-oxo- 2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (1.42 g, 3.8 mmol, preparado no Exemplo 17, Etapa A) em 1,4-dioxano (8 mL) foi adicionado N,N-dimetilformamida dimetilacetal (6 mL, 44.7 mmol). A mistura foi aquecida a 100°C por 3 h. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi titulado com éter-hexano (1:1), produzindo um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, lavado com éter- hexano e seco sob nitrogênio, obtendo (E)-terc-butil 4-(3-(3- (dimetilamino)acriloil)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1- carboxilato (1.5g, 92%) como um pó laranja. MS m/z 428.4 [M+H]+.
[0684] Etapa B: A uma solução de (E)-t-butil 4-(3-(3- (dimetilamino)acriloil)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1- carboxilato (171 mg, 0.40 mmol) e cloridrato acetamidina (151 mg, 1.6 mmol) em CH3CN (2 mL) foi adicionado K2CO3 (110 mg, 0.80 mmol). A mistura foi aquecida até 100°C por 16 h. Depois de resfriada até temperatura ambiente, água (10 mL) foi adicionada à mistura, produzindo um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração à vácuo, lavado com água e seco sob nitrogênio para se obter t-butil-4-(3-(2-metilpirimidin-4-il)- 2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (148 mg, 88 %). MS m/z 423.3 [M+H]+.
[0685] Etapa C: À suspensão de t-butil-4-(3-(2- metilpirimidin-4-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1- carboxilato (182 mg, 0.42 mmol) em CH2Cl2 (1 mL) foi adicionado 4N HCl em 1,4-dioxano (1 mL). A mistura foi agitada por 2 h a temperatura ambiente. A suspensão foi diluída com éter (10 mL) e filtrada. O sólido foi lavado com éter e seco sob nitrogênio para se obter o composto do título (140 mg, 91%) como um sólido amarelo: m.p. 200°C (decomp.); MS m/z 323.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.13 (2H, br), 9.05 (1H, s), 8.78 (1H, d, J = 5.4 Hz), 8.22 (1H, d, J = 5.4 Hz), 7.88 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.12 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.5 Hz), 7.03 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.73 (4H, m), 3.24 (4H, m), 2.71 (3H, s).
[0686] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 25 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 26 Preparação de Cpd 316
Figure img0115
[0687] Etapa A: A um vaso de pressão foram adicionados, 4- fluor-2-hidroxibenzaldeído (0.5 g, 3.6 mmol), 2-(3,4- dimetoxifenil)ácido acético (1.4 g, 7.2 mmol), cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N’-etilcarbodiimida (1.5 g, 7.9 mmol), diisopropiletilamina (2.3 mL, 14.3 mmol) e CH2Cl2 (10 mL). A mistura foi agitada a 60°C por 1 h, então arrefecida com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (50 mL) e extraída com EtOAc três vezes. Os extratos combinados foram secos sobre Na2SO4 e concentrados sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-5% EtOAc em CH2Cl2) para dar 3-(3,4-dimetoxifenil)-7-fluor-2H-cromen-2-ona (1.0 g, 95%). MS m/z 301.0 [M+H]+.
[0688] Etapa B: Uma mistura de 3-(3,4-dimetoxifenil)-7- fluor-2H-cromen-2-ona (40 mg, 0.13 mmol), piperazina (34 mg, 0.40 mmol) e DMSO (0.3 mL) foi agitada a 80°C durante a noite. Depois de resfriada até temperatura ambiente, a mistura foi diluída com água (5 mL) para produzir um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração, lavado com água e etil éter e seco para dar o composto do título (14 mg, 29 %) como um pó amarelo: m.p. 168-170°C; MS m/z 367.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.69 (1H, s), 7.38 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.31 (1H, d, J = 1.9 Hz), 7.25 (1H, d, J = 2.2 Hz), 6.93 (1H, d, J = 8.5 Hz), 6.85 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.5 Hz), 6.77 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.95 (3H, s), 3.93 (3H, s), 3.36-3.32 (4H, m), 3.10-3.05 (4H, m).
[0689] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 26 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 27 Preparação de Cpd 385
Figure img0116
[0690] Etapa A: À suspensão de terc-butil 4-(3-(6- fluorpiridin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1- carboxilato (90 mg, 0.21 mmol, preparado de acordo com Exemplo 26) em isopropanol (1 mL) foi adicionado NaH (19 mg, 60% em óleo mineral, 0.48 mmol). A mistura foi agitada a 90°C por 2 h, diluído com água e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (0-10% MeOH em CH2Cl2) para dar terc-butil 4-(3-(6-isopropoxipiridin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7- il)piperazina-1-carboxilato (50 mg, 51%). MS 466.3 m/z [M+H]+.
[0691] Etapa B: terc-butil 4-(3-(6-isopropoxipiridin-2-il)- 2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato (50 mg, 0.11 mmol) foi agitada com 50% TFA em CH2Cl2 (1.0 mL) a temperatura ambiente durante a noite. K2CO3 (2M solução) aquoso foi adicionado à mistura, até que a camada aquosa se tornou básica, pH ~9. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2. Os orgânicos combinados foram secos sobre Na2SO2 e concentrados para fornecer o composto do título (37 mg, 82%) como um pó amarelo: m.p. 177-180°C; MS 366.3 m/z [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.67 (1H, s), 8.06 (1H, dd, J = 7.6 Hz, 0.6 Hz), 7.63 (1H, dd, J = 8.2 Hz, 7.6 Hz), 7.49 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.86 (1H, dd, J = 8.7 Hz, 2.4 Hz), 6.75 (1H, d, J = 2.2 Hz), 6.65 (1H, dd, J = 8.2 Hz, 0.6 Hz), 5.43 (1H, t, J = 6.3 Hz), 3.41-3.31 (4H, m), 3.10-3.00 (4H, m), 1.42 (6H, d, J = 6.3 Hz).
[0692] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 27 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 28 Preparação de Cpd 386
Figure img0117
[0693] Etapa A: Uma mistura de terc-butil 4-(3-(6- fluorpiridin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperazina-1- carboxilato (90 mg, 0.21 mmol, preparado de acordo com Exemplo 26) e pirrolidina (1 mL) foi agitada a 80°C por 2 h. A mistura foi diluída com água (10 mL) e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (0-10% MeOH em CH2Cl2) para dar terc- butil 4-(2-oxo-3-(6-(pirrolidin-1-il)piridin-2-il)-2H-cromen- 7-il)piperazina-1-carboxilato (56 mg, 50 %). MS 477.0 m/z [M+H]+.
[0694] Etapa B: terc-butil 4-(2-oxo-3-(6-(pirrolidin-1- il)piridin-2-il)-2H-cromen-7-il)piperazina-1-carboxilato foi agitada com 50% TFA em CH2Cl2 (1.0 mL) a temperatura ambiente durante a noite. K2CO3 (2M solução) aquoso foi adicionado à mistura, até que a camada aquosa se tornou básica, pH ~9. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2. Os orgânicos combinados foram secos sobre Na2SO2 e concentrados para fornecer o composto do título (63 mg, 80 %) como um pó amarelo: m.p. 190-192°C; MS 377.3 m/z [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.72 (1H, s), 7.73 (1H, d, J = 7.3 Hz), 7.54-7.44 (2H, m), 6.84 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.5 Hz), 6.75 (1H, d, J = 2.2 Hz), 6.40-6.33 (1H, m), 3.60-3.50 (4H, m), 3.33 (4H, dd, J = 6.2 Hz, 4.3 Hz), 3.10-3.01 (4H, m), 2.04 (4H, dt, J = 6.5 Hz, 3.4 Hz). Exemplo 29 Preparação de Cpd 445
Figure img0118
[0695] Etapa A: Uma mistura de 7-fluor-3-(6-fluorpiridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (260 mg, 1.0 mmol, preparada de acordo com Exemplo 26) e NaSMe (105 mg, 1.5 mmol) em DMF (2 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 1 h. A mistura foi diluída com água (10 mL) para produzir um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração, lavado com água e CH2Cl2 e seco para dar 7-fluor-3-(6-(metiltio)piridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (100 mg, 35 %). MS 288.3 m/z [M+H]+.
[0696] Etapa B: Uma mistura de 7-fluor-3-(6- (metiltio)piridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (50 mg, 0.17 mmol), piperazina (44 mg, 0.51 mmol) e DMSO (0.5 mL) foi agitada a 80°C durante a noite. Depois de resfriada até temperatura ambiente, a mistura foi diluída com água (5 mL) para produzir um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração, lavado com água e etil éter e seco para dar o composto do título (18 mg, 30 %): m.p. 180-183°C; MS m/z 354.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.69 (1H, s), 7.84 (1H, d, J = 7.3 Hz), 7.59 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 7.6 Hz), 7.53 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.17-7.13 (2H, m), 6.71 (1H, s), 3.63-3.61 (4H, m), 3.09-3.03 (4H, m), 2.58-2.54 (3H, m). Exemplo 30 Preparação de Cpd 187
Figure img0119
[0697] Etapa A: Uma mistura de etil 2-(2-etoxi-2- oxoetil)pirazol[1,5-a]piridina-3-carboxilato (1.2 g, 4.3 mmol, preparada a partir de iodeto de 1-aminopiridinium e dietil 3- oxopentanodioato de acordo com o procedimento na Patente Japonesa 62-267285, 1986), NaOH (3 N, 8.6 mL) e THF (10 mL) foi aquecida a 60°C por 15 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e lavada com EtOAc. A fase aquosa foi acidificada com HCl aquoso (6 N) a pH 3, produzindo um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração à vácuo, lavado com água e seco para dar ácido 2- (carboximetil)pirazol[1,5-a]piridina-3-carboxilico (0.63 g, 66%) como um sólido branco. MS m/z 221.1 [M+H]+.
[0698] Etapa B: À suspensão de ácido 2- (carboximetil)pirazol[1,5-a]piridina-3-carboxilico (0.63 g, 2.9 mmol) em água (5 mL) foi adicionado conc. H2SO4 (5 mL). A solução límpida foi aquecida a 80°C por 15 h. A solução foi resfriada até temperatura ambiente. NaOH (1 N) aquoso foi adicionado à solução até atingir pH 2-3. Um precipitado se formou. O precipitado foi coletado por filtração à vácuo, lavado com água e seco para dar 2-(pirazol[1,5-a]piridin-2- il)ácido acético (0.435 g, 86%) como um sólido branco. MS m/z 177.1 [M+H]+.
[0699] Etapa C: Uma mistura de 2-(pirazol[1,5-a]piridin-2- il)ácido acético (0.435 g, 2.47 mmol)), 4-fluor-2- hidroxibenzaldeído (0.363 g, 2.59 mmol), cloridrato de N-(3- dimetilaminopropil)- N ‘-etilcarbodiimida (0.57 g, 2.96 mmol), 4-(dimetilamino)piridina (61 mg, 0.5 mmol) e trietilamina (0.7 mL, 5.0 mmol) em CH2Cl2 (8 mL) foi aquecida a 50°C. Depois de 1 h, a mistura foi concentrada. O resíduo foi suspenso em CH3CN, coletado por filtração à vácuo, lavado com CH3CN e seco para dar 7-fluor-3-(pirazol[1,5-a]piridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (0.66 g, 95%) como um sólido amarelo. MS m/z 281.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.83 (1H, s), 8.71 (1H, dd J = 6.9 Hz, 1.0 Hz), 8.03 (1H, dd, J = 8.7 Hz, 6.4 Hz), 7.78 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.48 (1H, dd, J = 9.6 Hz, 2.4 Hz), 7.34-7.24 (1H, m), 7.30 (1H, s), 7.26 (1H, m), 6.98 (1H, td, J = 6.9 Hz, 1.4 Hz).
[0700] Etapa D: Uma mistura de 7-fluor-3-(pirazol[1,5- a]piridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (56 mg, 0.2 mmol), piperazina (52 mg, 0.6 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (52 DL, 0.3 mmol) em DMSO (0.5 mL) foi aquecida a 120°C por 7 h. Sob resfriamento até temperatura ambiente, um precipitado se formou. O precipitado foi coletado por filtração à vácuo, lavado com CH3CN e seco para dar o composto do título (60 mg, 87%) como um sólido amarelo: m.p. 236-238°C; MS m/z 347.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.67 (1H, dd, J = 7.0 Hz, 2.3 Hz), 8.5 (1H, s), 7.73 (1H, d, J = 8.9 Hz), 7.69 (1H, d, J = 8.9 Hz), 7.25-7.20 (2H, m), 7.01 (1H, dd, J = 8.9 Hz, 2.4 Hz), 6.92 (1H, td, J = 6.8 Hz, 1.4 Hz), 6.86 (1H, d, J = 2.3 Hz), 3.32 (4H, m), 2.82 (4H, m).
[0701] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 30 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 31 Preparação de Cpd 112
Figure img0120
[0702] Etapa A: Uma mistura de 5-cloropiridin-2-amina (2.57 g, 20 mmol) e etil 4-cloro-3-oxobutanoato (3.95 g, 24 mmol) em EtOH (20 mL) foi aquecida a 90°C por 15 h, então o solvente foi removido. O resíduo foi suspenso em CH3CN, coletado por filtração à vácuo, lavado com CH3CN e seco para dar etil 2-(6- cloroimidazo[1,2-a]piridin-2-il)acetato (4.14 g, 86%) como um sólido branco. MS m/z 239.1 [M+H]+.
[0703] Etapa B: A uma solução de etil 2-(6- cloroimidazo[1,2-a]piridin-2-il)acetato (2.38 g, 10 mmol) em THF foi adicionado NaOH aquoso (3 N, 6.6 mL, 20 mmol). Depois de agitada a temperatura ambiente por 3 h, a mistura foi concentrada. A mistura reacional foi acidificada com HCl aquoso (6 N) a pH 3. Um precipitado se formou. O precipitado foi coletado por filtração à vácuo, lavado com água e seco, gerando 2-(6-cloroimidazo[1,2-a]piridin-2-il)ácido acético (1.66 g, 79%) como um sólido branco. MS m/z 211.1 [M+H]+.
[0704] Etapa C: Seguindo o procedimento no Exemplo 30, Etapa C, 2-(6-cloroimidazo[1,2-a]piridin-2-il)ácido acético (0.386 g, 2.5 mmol), 1-(4-fluor-2-hidroxifenil)-etanona (0.525 g, 2.5 mmol), cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)- N ‘- etilcarbodiimida (0.623 g, 3.25 mmol), 4- (dimetilamino)piridina (92 mg, 0.75 mmol) e trietilamina (0.91 mL, 7.5 mmol) em CH2Cl2 (4 mL) deu 3-(6-cloroimidazo[1,2- a]piridin-2-il)-7-fluor-4-metil-2H-cromen-2-ona (0.426 g, 52%) como um sólido esbranquiçado. MS m/z 329.1 [M+H]+.
[0705] Etapa D: Seguindo o procedimento no Exemplo 30, Etapa D, 3-(6-cloroimidazo[1,2-a]piridin-2-il)-7-fluor-4- metil-2H-cromen-2-ona (82 mg, 0.25 mmol), piperazina (65 mg, 0.7 5 mmol), DIEA (52 DL, 0.3 mmol) em DMSO (0.5 mL) deu o composto do título (64 mg, 65%) como um sólido amarelo: m.p. 224-227°C; MS m/z 395.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 8.90 (1H, d, J = 2.1 Hz), 8.27 (1H, s), 7.69 (1H, d, J = 9.1 Hz), 7.63 (1H, d, J = 9.6 Hz), 7.30 (1H, dd, J = 9.6 Hz, 2.1 Hz), 7.01 (1H, dd, J = 9.1 Hz, 2.4 Hz), 6.82 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.28 (4H, m), 2.82 (4H, m), 2.66 (3H, s).
[0706] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 31 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 32 Preparação de Cpd 124
Figure img0121
[0707] Etapa A: À solução agitada de 7-fluorcumarina (3.04 g, 18.5 mmol, preparado no Exemplo 22, Etapa A) em clorofórmio (20 mL), a temperatura ambiente, foi adicionado gota a gota bromo (11.9 g, 3.81 mL, 74 mmol). Depois da adição, a mistura foi agitada a temperatura ambiente por 2 horas adicionais, então resfriada em um banho gelo-água e diluído com diclorometano (100 mL). Trietilamina (22.4 g, 30.7 mL, 222 mmol) foi adicionado cuidadosamente enquanto agitada. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 2 adicionais após a adição. O precipitado presente na mistura foi removido por filtração e lavado com CH2Cl2 (3 x 15 mL). O filtrado combinado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (CH2Cl2), gerando 3-bromo-7-fluor-2H- cromen-2-ona (4.07 g, 90%) como um sólido branco. MS m/z 242.4, 244.4 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.09 (1H, s), 7.47 (1H, dd, J = 8.7 Hz, 5.8 Hz), 7.12-7.03 (2H, m).
[0708] Etapa B: Um tubo de reação, equipado com uma tampa de topo aberta e um septo foi carregado com 3-bromo-7-fluor- 2H-cromen-2-ona (0.49 g, 2.0 mmol), ácido (2- (trifluormetil)piridin-3-il)borônico (0.42 g, 2.2 mmol), complexo de [1,1'- bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) com diclorometano (0.082 g, 0.1 mmol) e CH3CN (6.0 mL). Depois de purgado três vezes com nitrogênio, K2CO3 aquoso (2.0 mL, 2.0M, 4.0 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada a 50°C durante a noite, então o solvente foi removido. O resíduo foi suspenso em CH2Cl2 e filtrado. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-30% EtOAc em CH2Cl2) para dar 7-fluor-3-(2-(trifluormetil)piridin- 3-il)-2H-cromen-2-ona (0.21 g, 34%). MS m/z 310.2 [M+H]+.
[0709] Etapa C: Uma mistura de 7-fluor-3-(2- (trifluormetil)piridin-3-il)-2H-cromen-2-ona (93 mg, 0.3 mmol) e piperazina (52 mg, 0.6 mmol) em DMSO (0.6 mL) foi agitada a 80°C por 24 h. Depois de resfriada até temperatura ambiente, a mistura foi diluída com água (5 mL) para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração, lavado com água e etil éter e seco para dar o composto do título (100 mg, 89%) como um pó amarelo: m.p. 197-200°C; MS m/z 376.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.71 (1H, s), 8.53 (1H, d, J = 2.5 Hz), 8.14 (1H, t, J = 7.9 Hz), 7.83 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.75 (1H, d, J = 9.1 Hz), 7.02 (1H, dd, J = 9.0 Hz, 2.4 Hz), 6.85 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.40-3.33 (4H, m), 2.85-2.78 (4H, m).
[0710] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 32 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 33 Preparação de Cpd 218
Figure img0122
[0711] Etapa A: Uma mistura de 3-bromo-7-fluorcumarina (122 mg, 0.5 mmol, preparado no Exemplo 32, Etapa A), 2-metoxi-6- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridina (235 mg, 1.0 mmol), cloreto de cobre (I) (50 mg, 0.5 mmol), Cs2CO3 (652 mg, 2.0 mmol), acetato de paládio(II) (5.6 mg, 0.025 mmol), 2- diciclohexilfosfino-2',6'-dimetoxibifenil (41 mg, 0.1 mmol) e DMF (2.0 mL) foi agitada sob atmosfera de argônio a 60°C por 2 h. Depois de resfriada até temperatura ambiente, a mistura foi diluída com água (10 mL) para produzir um precipitado. O sólido foi lavado com água, seco e purificado com cromatografia em coluna de sílica gel (0-10% EtOAc em CH2Cl2) para dar 7-fluor-3-(6-metoxipiridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (52 mg, 38%). MS m/z 272.2 [M+H]+.
[0712] Etapa B: Uma mistura de 7-fluor-3-(6-metoxipiridin- 2-il)-2H-cromen-2-ona (52 mg, 0.19 mmol), piperazina (50 mg, 0.57 mmol) e DMSO foi agitada a 80°C durante a noite. Depois de resfriada até temperatura ambiente, a mistura foi diluída com água (5 mL) para produzir um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração, seco e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-20% MeOH em CH2Cl2) para dar o composto do título (20 mg, 31 %) como um pó amarelo: m.p. 162-165°C; MS m/z 338.2 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.83 (1H, s), 7.96 (1H, dd, J = 7.6 Hz, 0.9 Hz), 7.75 (1H, dd, J = 8.2, 7.6 Hz), 7.69 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.02 (1H, dd, J = 9.0, 2.4 Hz), 6.85 (1H, d, J = 2.2 Hz), 6.77 (1H, dd, J = 8.2 Hz, 0.6 Hz), 3.98 (3H, s), 3.35-3.28 (4H, m), 2.86-2.78 (4H, m).
[0713] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 33 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 34 Preparação de Cpd 651
Figure img0123
[0714] Etapa A: Uma mistura de 6-bromo-2-metilimidazo[1,2- a]piridina (0.79 g, 3.75 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil- 2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1.14 g, 4.49 mmol), complexo de [1,1‘-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) com diclorometano (0.15 g, 0.19 mmol), acetato de potássio (1.1g, 11.5 mmol) em 1,4-dioxano (7.5 mL) foi agitada a 80°C durante a noite sob argônio. A mistura foi diluída com THF (20 mL) e filtrada. O filtrado foi evaporado para dar um resíduo sólido escuro, o qual foi usado sem purificação adicional (MS m/z 177.0 [M+H]+). O resíduo foi combinado com 3-bromo-7-fluor-2H- cromen-2-ona (0.73 g, 3.0 mmol, preparado no Exemplo 32, Etapa A), complexo de [1,1‘- bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) com diclorometano (0.245 g, 0.3 mmol) e K2CO3 aquoso (2.0 M x 4.5 mL, 9.0 mmol) em CH3CN (9.0 mL). A mistura foi agitada a 60°C durante a noite sob argônio, então diluída com água e filtrada. O sólido foi dissolvido em CH2Cl2 (10% metanol), seco sobre Na2SO4, filtrado, concentrado e purificado com por cromatografia em sílica gel (0-10% MeOH em CH2Cl2) para dar 7- fluor-3-(2-metilimidazo[1,2-a]piridin-6-il)-2H-cromen-2-ona (0.67 g, 76%). MS m/z 295.0 [M+H]+.
[0715] Etapa B: Uma mistura de 7-fluor-3-(2- metilimidazo[1,2-a]piridin-6-il)-2H-cromen-2-ona (90 mg, 0.31 mmol), (S)-octahidropirrol[1,2-a]pirazina (50 mg, 0.40 mmol), K2CO3 (125 mg, 0.92 mmol) em DMSO (0.6 mL) foi agitada a 100°C durante a noite. A mistura foi diluída com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 e filtrada. O sólido foi seco e purificado por cromatografia em sílica gel (0-10% MeOH em CH2Cl2) para dar o composto do título (56 mg, 46%) como um sólido amarelo: m.p. 231-233°C; MS m/z 401.5 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCI3): δ 8.86 (1H, dd, J=1.7, 0.8 Hz), 7.83 (1H, s), 7.49 - 7.57 (1H, m), 7.35 - 7.44 (3H, m), 6.87 (1H, d, J=8.8 Hz), 6.77 (1H, d, J=2.2 Hz), 3.94 (1H, dd, J=12.0, 1.6 Hz), 3.80 (1H, d, J=12.6 Hz), 3.24-3.06 (3H, m), 2.76 (1H, t, J=11.0 Hz), 2.47 (3H, d, J=0.6 Hz), 2.45-2.35 (1H, m), 2.30-2.10 (2H, m), 1.99-1.87 (2H, m), 1.86-1.77 (1H, m), 1.61-1.48 (1H, m).
[0716] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 34 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 35 Preparação de Cpd 769
Figure img0124
[0717] Etapa A: Seguindo o procedimento no Exemplo 34, Etapa A, 6-bromo-2-metilbenzo[d]tiazol (0.47 g, 2.1 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (0.63 g, 2.5 mmol), complexo de [1,1'- bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) com diclorometano (84 mg, 0.1 mmol) em dioxano (4.0 mL) seguido de reação do intermediário formado com 3-bromo-7-fluor-2H-cromen- 2-ona (0.45 g, 1.85 mmol), complexo de [1,1'- bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) com diclorometano (0.16 g, 0.2 mmol), K2CO3 aquoso (2.0 M x 3.0 mL, 6.0 mmol) em CH3CN (6.0 mL) gerou 7-fluor-3-(2- metilbenzo[d]tiazol-6-il)-2H-cromen-2-ona (144 mg, 25%). MS m/z 312.0 [M+H]+.
[0718] Etapa B: Uma mistura de 7-fluor-3-(2- metilbenzo[d]tiazol-6-il)-2H-cromen-2-ona (34 mg, 0.11 mmol), 1-metilpiperazina (22 mg, 0.22 mmol), trietilamina (49 mg, 0.49 mmol) em DMSO (0.25 mL) foi agitada a 110°C durante a noite. A mistura foi diluída com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 e filtrada. O sólido foi seco e purificado por cromatografia em sílica gel (0-10% MeOH em CH2Cl2) para dar o composto do título (41 mg, 95%) como um sólido amarelo: m.p. 215-217°C; MS m/z 392.4 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCI3): δ 8.28 (1H, d, J=1.8 Hz), 7.98 (1H, dd, J=8.5, 0.6 Hz), 7.80 (1H, s), 7.73 (1H, dd, J=8.5, 1.6 Hz), 7.40 (1H, d, J=8.8 Hz), 6.86 (1H, dd, J=8.8, 2.5 Hz), 6.78 (1H, d, J=2.2 Hz), 3.42 (4H, br. s.), 2.86 (3H, s), 2.62 (4H, s), 2.40 (3H, s)
[0719] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 35 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 36 Preparação de Cpd 421
[0720] Parte 1: Preparação de 3-fluor-5-metilpiridin-2- amina
Figure img0125
[0721] Etapa A: A solução de 3-fluorpiridin-2-amina (1.0 g, 8.92 mmol) foi dissolvido em CH3CN (300 mL) a 0°C. N- Bromosuccinimida (800 mg, 4.5 mmol) foi adicionado à solução. A mistura reacional foi agitada a 0°C por 20 min, então a temperatura ambiente por 20 min. A mistura foi resfriada até 0°C. N-bromosuccinimida (800 mg, 4.5 mmol) adicional foi adicionada. A mistura foi aquecida até temperatura ambiente por mais de 40 minutos. Uma solução aquosa de NaHSO3 foi adicionada à mistura para extinguir o excesso de reagente, então o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc, então lavado com K2CO3 aquoso. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, então filtrada e concentrada sob vácuo. Titulação do resíduo com 2:1 hexanos:éter gerou 5- bromo-3-fluorpiridin-2-amina (1.18 g, 69%) como um sólido branco. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.93 (1H, d, J = 2 Hz), 7.37 (1H, dd, J = 9.5 Hz, 2 Hz), 4.66 (2H, br s), 2.77 (3H, s).
[0722] Etapa B: A solução de dimetilzinco (15 mL, 1.2 M em tolueno, 18 mmol) foi adicionado a uma mistura de 5-bromo-3- fluorpiridin-2-amina (1.48 g, 7.75 mmol) e [1,1’-complexo bis(difenilfosfino)-ferroceno]dicloropaládio(II) com diclorometano (150 mg, 0.18 mmol) em 1,4-dioxano (30 mL). A mistura foi aquecida a 95°C por 2 h. A mistura reacional foi resfriada até temperatura ambiente e extinta com MeOH. A mistura foi diluída com aquosa saturada NH4OH e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (20% acetona em CH2Cl2), seguido de titulação com hexano para dar 3-fluor-5- metilpiridin-2-amina (668 mg, 68%) como um sólido castanho- amarelado. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.69 (1H, s), 7.06 (1H, dd, J = 11.5 Hz, 1.5 Hz), 4.43 (2H, br s), 2.21(3H, s).
[0723] Parte 2: Preparação de 3-(2-bromoacetil)-7-fluor-2H-cromen-2-ona
Figure img0126
[0724] Etapa A: À uma mistura de 4-fluor-2-hidroxibenzaldeído (1.4 g, 10 mmol) e etil 3-oxobutanoato (1.3 g, 10 mmol) foram adicionados poucas gotas de piperidina. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 10 min. Um precipitado se formou e foi coletado por filtração à vácuo. O sólido foi lavado com etanol e HCl aquoso (1 N), filtrado e seco para dar 3-acetil-7-fluor-2H-cromen-2-ona (1.96 g, 95%) como um sólido amarelo pálido. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.51 (1H, s), 7.68 (1H, m), 7.13-7.07 (2H, m), 2.73 (3H, s).
[0725] Etapa B: Em uma solução de 3-acetil-7-fluor-2H- cromen-2-ona (1.96 g, 9.5 mmol) em CHCl3 (20 mL) foi adicionado gota a gota a solução de bromo (1.6 g, 10 mmol) em CHCl3 (10 mL). A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 1 h e filtrada. O sólido foi lavado com CHCl3 e seco para dar o composto do título (1.96 g, 72%) como um sólido amarelo pálido. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.63 (1H, s), 7.72 (1H, m),7.17-7.10 (2H, m), 4.73 (2H, s).
[0726] Parte 3: Preparação de Cpd 421
Figure img0127
[0727 Etapa A: Uma mistura de 3-(2-bromoacetil)-7-fluor- 2H-cromen-2-ona (500 mg, 1.75 mmol), 3-fluor-5-metilpiridin-2- 1.9 mmol) e EtOH (3 mL) foi aquecida a 95°C por 18 h. A mistura reacional foi particionada entre CH2Cl2 e K2CO3 aquoso. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi titulado com 1:1 hexano/acetona, gerando 7-fluor-3-(8-fluor-6-metilimidazo[1,2- a]piridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (412 mg, 75%) como um sólido laranja. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.85 (1H, s), 8.50 (1H, d, J = 2.5 Hz), 7.77 (1H, m), 7.63 (1H, dd, J = 9Hz, 6 Hz), 7.11 (1H, dd, J = 9 Hz, 2 Hz), 7.07 (1H, td, J = 8.5 Hz, 2.5 Hz), 6.80 (1H, d, J = 6 Hz), 2.34 (3H, s).
[0728] Etapa B: Uma mistura de 7-fluor-3-(8-fluor-6- metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (120 mg, 0.38 mmol), (S)-2-metilpiperazina (75 mg, 0.75 mmol) e DMSO (900 μL) foi aquecida a 80°C por 15 h. A mistura foi diluída com uma solução aquosa saturada de NaHCO3, causando a precipitação do produto da solução. A mistura foi filtrada. O material sólido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (10% MeOH em CH2Cl2), gerando o composto do título (133 mg, 89%) como um sólido amarelo: m.p. 250-255°C; MS m/z 393.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.73 (1H, s), 8.52 (1H, d, J = 3 Hz), 8.31 (1H, s), 7.72 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.09 (1H, d, J = 12 Hz), 7.02 (1H, dd, J = 9 Hz, 2 Hz), 6.88 (1H, d, J = 2 Hz), 3.81 (2H, m), 2.96 (1H, m), 2.73 (3H, m), 2.39 (1H, t, J = 11 Hz), 2.31 (1H, br s), 2.28 (3H, s), 1.04 (3H, d, J = 6 Hz).
[0729] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 36 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 37 Preparação de Cpd 520
Figure img0128
[0730] Etapa A: Uma mistura de (5.0 g, 24.8 mmol), piperidina acetoacetato (3.15 mL, 25 mmol) e CH3CN (2.0 mL) foi aquecida a 80°C por 1 h. A mistura reacional foi particionada entre CH2Cl2 e HCl aquoso (1 M). A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi titulado com MeOH, gerando 3-acetil-7-bromo-2H-cromen-2-ona (5.45 g, 82%) como um sólido amarelo. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.46 (1H, s), 7.56 (1H, d, J = 1.5 Hz), 7.51 (1H, d, J = 8 Hz), 7.48 (1H, dd, J = 8 Hz, 1.5 Hz), 2.72 (3H, s).
[0731] Etapa B: A solução de Br2 (1.1 mL, 21.4 mmol) em CHCl3 (25 mL) foi adicionada gota a gota à solução de 3-acetil- 7-bromo-2H-cromen-2-ona (5.4 g, 20.2 mmol) em CHCl3 (90 mL) ao longo de um período de 90 min. A mistura foi filtrada. O material sólido foi lavado com CHCl3, gerando 7-bromo-3-(2- bromoacetil)-2H-cromen-2-ona (5.6 g, 80%) como um sólido cor de rosa claro. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.58 (1H, s), 7.60 (1H, d, J = 1.5 Hz), 7.55 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.52 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 1.5 Hz), 4.72 (2H, s).
[0732] Etapa C: Uma mistura de 7-bromo-3-(2-bromoacetil)- 2H-cromen-2-ona (100 mg, 0.29 mmol), 3,5-difluorpiridin-2- amina (48 mg, 0.37 mmol) e CHCl3 (500 μL) foi aquecida a 80°C por 25 h. A mistura reacional foi particionada entre CH2Cl2 e uma solução aquosa saturada de NaHCO3. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (CH2Cl2), gerando 7-bromo-3-(8-fluor-6-metilimidazo[1,2- a]piridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (96 mg, 88%) como um sólido branco. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.88 (1H, s), 8.64 (1H, d, J = 3 Hz), 8.00 (1H, m), 7.59 (1H, d, J = 1.5 Hz), 7.53 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.47 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 1.5 Hz), 6.99 (1H, m).
[0733] Etapa D: Uma mistura de 7-bromo-3-(8-fluor-6- metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (40 mg, 0.11 mmol), (2-bifenil)-di-t-butilfosfina (6 mg, 0.02 mmol), Pd2(dba)3 (6 mg, 0.0066 mmol), Cs2CO3 (55 mg, 0.17 mmol), 1- metilhomopiperazina (24 μL, 0.18 mmol) e 1,2-dimetoxietano (450 μL) foi aquecida a 80°C por 90 min. A mistura reacional foi então diluída em CH2Cl2 e filtrada. O filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (5 a 10% MeOH em CH2Cl2), seguido de titulação com 3:1 hexano/CH2Cl2, gerando o composto do título (24 mg, 53%) como um sólido amarelo: m.p. 255-260°C; MS m/z 411.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.79 (1H, m), 8.73 (1H, s), 8.63 (1H, d, J = 3 Hz), 7.70 (1H, d, J = 9 Hz), 7.55 (1H, m), 6.84 (1H, dd, J = 9 Hz, 2.5 Hz), 6.67 (1H, d, J = 2 Hz), 3.65 (2H, t, J = 5 Hz), 3.57 (2H, t, J = 5.5 Hz), 2.64 (2H, t, J = 5Hz), 2.46 (2H, t, J = 5.5 Hz), 2.27 (3H, s), 1.92 (2H, pentet, J = 5.5 Hz).
[0734] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 37 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 38 Preparação de Cpd 89
Figure img0129
[0735] Etapa A: Uma mistura de 3-(2-bromoacetil)-7-fluor- 2H-cromen-2-ona (0.285 g, 1.0 mmol, preparado no Exemplo 36, Parte 2) e 2-aminopirimidina (0.19 g, 2.0 mmol) em EtOH (2.0 mL) foi agitada a 95°C durante a noite. A mistura foi diluída com água e filtrada. O sólido foi lavado com água e seco para se obter 7-fluor-3-(imidazo[1,2-a]pirimidin-2-il)-2H-cromen-2- ona bromidrato (0.28 g, 78%) como um sólido amarelo pálido. MS m/z 282.1 [M+H]+.
[0736] Etapa B: Uma mistura de 7-fluor-3-(imidazo[1,2- a]pirimidin-2-il)-2H-cromen-2-ona bromidrato (50 mg, 0.18 mmol) e piperazina (61 mg, 0.71 mmol) em DMSO (0.5 mL) foi agitada a 110°C por 2 h. A mistura foi diluída com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 e filtrada. O sólido foi lavado com água e seco para se obter o composto do título (40 mg, 64%) como um sólido amarelo: m.p. 286°C (decomp.); MS m/z 348.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.78 (1H, dd, J = 6.8 Hz, 2.2 Hz), 8.55 (1H, s), 8.46 (1H, dd, J = 4.2 Hz, 2.2 Hz), 8.40 (1H, s), 7.52 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.95-6.91 (2H, m), 6.76 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.33-3.28 (4H, m), 2.91-2.86 (4H, m).
[0737] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 38 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 39 Preparação de Cpd 241
[0738] Parte 1: Preparação de 5-metilpirimidin-2-amina
Figure img0130
[0739] Etapa A: Uma mistura de 2-amino-5-bromopirimidina (2.75 g, 15.8 mmol) e di-terc-butil dicarbonato (7.58 g, 34.8 mmol) em piridina (30 mL) foi agitada a 70°C durante a noite, então o solvente foi removido. O resíduo foi particionado entre EtOAc e HCl aquoso (1 N). A camada aquosa foi extraída com EtOAc. Os orgânicos combinados foram secos sobre NaSO4, então filtrados e concentrados para dar 2-[bis(terc- butoxicarbonil)amino]-5-bromopirimidina (5.5 g, 93%) como um sólido branco. MS m/z 398.2 [M+Na]+.
[0740] Etapa B: Uma mistura de 2-[bis(terc- butoxicarbonil)amino]-5-bromopirimidina (3.0 g, 8.0 mmol), dimetilzinco (1.2 M x 8.0 mL, 9.6 mmol) e [1,1'- bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (130 mg, 0.16 mmol) em 1,4-dioxano (30 mL) foi agitada a 110°C por 16 h sob argônio. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente, diluído com etil acetato e lavado com NH4Cl saturado, água e salmoura. A camada orgânica foi seca sobre NaSO4, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (0-35% EtOAc em hexanos) para dar um sólido branco, que foi dissolvido em trifluorácido acético (5.0 mL). Depois de 5 min, o solvente foi removido e o resíduo foi particionado entre etil acetato e uma solução aquosa saturada de NaHCO3. A camada orgânica foi seca sobre NaSO4, filtrada e concentrada para dar o composto do título (0.7 g, 80%) como um sólido branco. MS m/z 110.1 [M+H]+.
[0741] Parte 2: Preparação de Cpd 241
Figure img0131
[0742] Etapa A: Seguindo o procedimento no Exemplo 36, Parte 3, 3-(2-bromoacetil)-7-fluor-2H-cromen-2-ona (0.855 g, 3.0 mmol) e 5-metilpirimidin-2-amina (0.327 g, 3.0 mmol) em EtOH (6.0 mL) deu 7-fluor-3-(6-metilimidazo[1,2-a]pirimidin-2- il)-2H-cromen-2-ona bromidrato (0.37 g, 42%) como um sólido amarelo pálido. MS m/z 296.2 [M+H]+.
[0743] Etapa B: Seguindo o procedimento no Exemplo 36, Parte 3, 7-fluor-3-(6-metilimidazo[1,2-a]pirimidin-2-il)-2H- cromen-2-ona bromidrato (80 mg, 0.21 mmol) e N-metil piperizina (93 mg, 1.08 mmol) em DMSO (0.5 mL) deu o composto do título (66 mg, 84%) como um sólido amarelo: m.p. >300°C; MS m/z 362.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.83 (1H, dd, J = 2.4 Hz, 1.1 Hz), 8.75 (1H, s), 8.44 (1H, d, J = 2.2 Hz), 8.39 (1H, s), 7.71 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.02 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.2 Hz), 6.86 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.32-3.28 (4H, m), 2.86-2.75 (4H, m), 2.30 (3H, s).
[0744] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 39 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 40 Preparação de Cpd 480
[0745] Parte 1: Preparação de 5-fluorpirimidin-2-amina
Figure img0132
[0746] 2-Cloro-5-fluorpirimidina (1.34 g, 10 mmol) foi agitada com hidróxido de amônio (30%, 15 mL) a 100°C num tubo selado durante a noite. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e filtrada. O sólido foi lavado com água e seco para dar o composto do título (0.95 g, 80%) como um sólido branco.
[0747] Parte 2: Preparação de Cpd 480
Figure img0133
[0748] Etapa A: Seguindo o procedimento no Exemplo 36, Parte 3, 3-(2-bromoacetil)-7-fluor-2H-cromen-2-ona (1.32 g, 4.1 mmol) e 5-fluorpirimidin-2-amina (0.465 g, 4.1 mmol) em EtOH (12.0 mL) deu 7-fluor-3-(6-fluorimidazo[1,2-a]pirimidin- 2-il)-2H-cromen-2-ona (0.85 g, 70%) como um sólido amarelo pálido. MS m/z 300.1 [M+H]+.
[0749] Etapa B: Seguindo o procedimento no Exemplo 36, Parte 3, 7-fluor-3-(6-fluorimidazo[1,2-a]pirimidin-2-il)-2H- cromen-2-ona (70 mg, 0.23 mmol) e N-metil piperizina (46 mg, 0.46 mmol) em DMSO (0.5 mL) deu o composto do título (55 mg, 63%) como um sólido amarelo: m.p. 275-280°C; MS m/z 380.8 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, metanol-d4): δ 8.95 (1H, dd, J = 3.8 Hz, 2.8 Hz), 8.65 (1H, s), 8.61 (1H, d, J = 2.8 Hz), 8.53 (1H, s), 7.62 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.02 (1H, dd, J = 8.7 Hz, 2.4 Hz), 6.86 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.51 (4H, br s), 2.81 (4H, br s), 2.50 (3H, br s).
[0750] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 40 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 41 Preparação de Cpd 117
Figure img0134
[0751] Etapa A: Uma mistura de 3-(2-bromoacetil)-7-fluor- 2H-cromen-2-ona (2.85 g, 10 mmol, preparado no Exemplo 36, Parte 2) e 2-aminotiazol (1.0 g, 10 mmol) em EtOH (20 mL) foi agitada a 95°C por 6 h. Depois de resfriada até temperatura ambiente, etil acetato foi adicionado, causando a formação de um precipitado. A mistura foi filtrada. O sólido foi lavado com etil acetato, seco, obtendo sal de 6-(7-fluor-2-oxo-2H- cromen-3-il)imidazo[2,1-b]tiazol bromidrato (1.82 g, 64%) como um sólido castanho-amarelado. MS m/z 287.1 [M+H]+.
[0752] Etapa B: Uma mistura de sal de 6-(7-fluor-2-oxo-2H- cromen-3-il)imidazo[2,1-b]tiazol bromidrato (286 mg, 1.0 mmol) e 1-metilpiperazina (1.0 mL, 3.0 mmol) em DMSO (1.5 mL) foi agitada a 110°C por 2 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com água, produzindo um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração à vácuo, lavado com água, seco e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-10% MeOH em CH2Cl2) para dar o composto do título (185 mg, 51%) como um sólido amarelo: m.p. 256-258°C; MS m/z 367.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.53 (1H, s), 8.31 (1H, s), 7.94 (1H, d, J = 4.4 Hz), 7.64 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.26 (1H, d, J = 4.4 Hz), 7.02 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.5 Hz), 6.87 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.45-3.23 (4H, m), 2.47-2.39 (4H, m), 2.22 (3H, s).
[0753] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 41 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 42 Preparação de Cpd 429
[0754] Preparação de 5-etiltiazol-2-amina
Figure img0135
[0755] À uma mistura de butiraldeído (10.8 g, 0.15 mol) e uréia (22.8 g, 0.3 mol) em CHCl3 (75 mL) a 0°C foi adicionado cloreto de sulfuril (13.5 mL, 0.166 mol) gota a gota. A mistura foi aquecida até temperatura ambiente e agitada por 1 h, então o solvente foi removido. EtOH (200 mL) foi adicionado ao resíduo, então a mistura foi aquecida em refluxo durante a noite e o solvente foi removido. O resíduo foi suspenso em água (200 mL) e coletado por filtração à vácuo para dar o composto do título (9.5 g, 40%) como um sólido marrom claro. MS m/z 129.1 [M+H]+.
[0756] Parte 2: Preparação de Cpd 429
Figure img0136
[0757] Etapa A: Seguindo o procedimento no Exemplo 41, Etapa A, 3-(2-bromoacetil)-7-fluor-2H-cromen-2-ona (0.76 g, 2.7 mmol) e 5-etiltiazol-2-amina (0.35 g, 2.7 mmol) em EtOH (20 mL) deu 3-(2-etilimidazo[2,1-b]tiazol-6-il)-7-fluor-2H- cromen-2-ona bromidrato (0.55 g, 66%) como um sólido castanho- amarelado. MS m/z 315.2 [M+H]+.
[0758] Etapa B: Seguindo o procedimento no Exemplo 41, Etapa B, 3-(2-etilimidazo[2,1-b]tiazol-6-il)-7-fluor-2H- cromen-2-ona bromidrato (42 mg, 0.13 mmol) e 2,6-cis- dimetilpiperizina (30 mg, 0.26 mmol) em DMSO (0.25 mL) deu o composto do título (3.8 mg, 7%) como um sólido amarelo: m.p. 251-253°C; MS m/z 409.4 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, metanol-d4) δ 8.32 (1H, s), 8.21 (1H, s), 7.56-7.48 (2H, m), 7.00 (1H, dd, J = 9.0 Hz, 2.4 Hz), 6.82 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.82 (2H, dd, J = 12.5 Hz, 2.4 Hz), 3.00-2.89 (2H, m), 2.82 (2H, qd, J = 7.5, 1.4 Hz), 2.43 (2H, dd, J = 12.5 Hz, 10.9 Hz), 1.34 (3H, t, J = 7.4 Hz), 1.18 (6H, d, J = 6.6 Hz).
[0759] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 42 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 43 Preparação de Cpd 536
Figure img0137
[0760] Etapa A: Uma mistura de 3-(2-bromoacetil)-7-fluor- 2H-cromen-2-ona (0.684 g, 2.4 mmol, preparado no Exemplo 36, Parte 2) e 3,5-dimetilpirazin-2-amina (0.246 g, 2.0 mmol) em CH3CN (10 mL) foi agitada a 120°C num tubo selado por 20 min. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com Et2O para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, lavado com Et2O e seco para dar 3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-fluor-2H-cromen-2-ona bromidrato (0.7 g, 90%) como um sólido castanho-amarelado. MS m/z 310.1 [M+H]+.
[0761] Etapa B: 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)- 7-fluor-2H-cromen-2-ona bromidrato (100 mg, 0.25 mmol) foi agitado com (R)-2-metilpiperazina (52 mg, 0.52 mmol) em DMSO (0.5 mL) com K2CO3 (0.14 g, 1.0 mmol) a 120°C por 2 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com água para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo e purificado por cromatografia em sílica gel (10 % MeOH em CH2Cl2) para dar o composto do título (64 mg, 64%) como um sólido amarelo. MS m/z 390.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.74 (1H, s), 8.45 (1H, s), 7.77 (1H, s), 7.51 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.88 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.5 Hz), 6.77 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.77-3.67 (2H, m), 3.21-3.14 (2H, m), 3.06-2.92 (3H, m), 2.91 (3H, s), 2.64-2.56 (1H, m), 2.48 (3H, s), 1.20 (3H, d, J = 6.3 Hz).
[0762] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 43 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 44 Preparação de Cpd 607
[0763] Parte 1: Preparação de 5-metil-3- (trifluormetil)pirazin-2-amina
Figure img0138
[0764] Em uma solução de 5-metilpirazin-2-amina (0.51 g, 4.72 mmol) e ferroceno (0.263 g, 1.42 mmol) em DMSO (12 mL) foi adicionado ácido sulfúrico (12 mL) e uma solução de CF3I em DMSO (2.4 M, 5.9 mL, 14.2 mmol). Peróxido de hidrogênio aquoso (30%, 0.94 mL) foi adicionado gota a gota à mistura. Depois de agitado por 30 min a temperatura ambiente, excesso de reagente foi extinto com água gelada. A mistura foi diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre NaSO4, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (0-20% EtOAc em CH2Cl2) para dar o composto do título (86 mg, 8%) como um sólido branco. MS m/z 219.1 [M+H]+.
[0765] Parte 2: Preparação de Cpd 607
Figure img0139
[0766] Etapa A: Seguindo o procedimento no Exemplo 43, Etapa A, 3-(2-bromoacetil)-7-fluor-2H-cromen-2-ona (138 g, 0.49 mmol) e 5-metil-3-(trifluormetil)pirazin-2-amina (86 g, 0.49 mmol) em CH3CN (1.0 mL) deu 7-fluor-3-(6-metil-8- (trifluormetil)imidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2H-cromen-2-ona bromidrato (44 mg, 20%) como um sólido castanho-amarelado.
[0767] Etapa B: Seguindo o procedimento no Exemplo 43, Etapa B, 7-fluor-3-(6-metil-8-(trifluormetil)imidazo[1,2- a]pirazin-2-il)-2H-cromen-2-ona bromidrato (44 mg, 0.10 mmol) e 1,4-diazepam (44 mg, 0.44 mmol) em DMSO (0.25 mL) deu o composto do título (43 mg, 99%) como um sólido amarelo: m.p. >300°C; MS m/z 444.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.79 (1H, s), 8.59 (1H, s), 8.09 (1H, s), 7.50 (1H, d, J = 9.1 Hz), 6.69 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.2 Hz), 6.57 (1H, d, J = 1.9 Hz), 3.70-3.61 (4H, m), 3.10-3.01 (2H, m), 2.88-2.83 (2H, m), 2.55 (3H, s), 2.03-1.90 (2H, m). Exemplo 45 Preparação de Cpd 712
[0768] Parte 1: Preparação de 5-cloro-3-metilpirazin-2-amina
Figure img0140
[0769] Uma mistura de 3-metilpirazin-2-amina (109 mg, 1.0 mmol) e N-clorosuccinimida (136 mg, 1.0 mmol) em CH2Cl2 (6.0 mL) foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi lavada com K2CO3 aquoso (2.0 M, 6.0 mL). A camada orgânica foi seca sobre NaSO4, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (0-35% EtOAc em hexanos) para dar o composto do título (136 mg, 80%) como um sólido branco. MS m/z 144.0 [M+H]+.
[0770] Parte 2: Preparação de Cpd 712
Figure img0141
[0771] Etapa A: Seguindo o procedimento no Exemplo 43, Etapa A, 3-(2-bromoacetil)-7-fluor-2H-cromen-2-ona (0.233 g, 0.81 mmol) e 5-cloro-3-metilpirazin-2-amina (0.117 g, 0.81 mmol) em CH3CN (3.0 mL) deu 3-(6-cloro-8-metilimidazo[1,2- a]pirazin-2-il)-7-fluor-2H-cromen-2-ona bromidrato (0.18 g, 67%) como um sólido castanho-amarelado. MS m/z 330.1 [M+H]+.
[0772] Etapa B: Seguindo o procedimento no Exemplo 43, Etapa B, 3-(6-cloro-8-metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7- fluor-2H-cromen-2-ona bromidrato (67 mg, 0.2 mmol), N-metil homopiperizina (28 mg, 0.24 mmol) e trietilamina (100 mg, 1.0 mmol) em DMSO (0.5 mL) deu o composto do título (70 mg, 83%) como um sólido amarelo: m.p. 212-218°C; MS m/z 424 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, metanol-d4) δ 8.71 (1H, s), 8.55 (1H, s), 8.42 (1H, d, J = 0.9 Hz), 7.56 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.84 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.5 Hz), 6.67 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.86-3.77 (2H, m), 3.65 (2H, t, J = 6.3 Hz), 3.16 (2H, d, J = 1.6 Hz), 3.04 (2H, br s), 2.89-2.82 (3H, m), 2.69 (3H, s), 2.27-2.14 (2H, m).
[0773] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 45 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 46 Preparação de Cpd 398
Figure img0142
[0774] Etapa A: Uma mistura de 3-cloropirazin-2-amina (1.29 g, 10 mmol) e metanotiolato de sódio (1.05 g, 15 mmol) em DMF (10 mL) e EtOH (10 mL) foi agitada a 85°C por 2 h e então concentrada. A mistura foi diluída com água e filtrada. O filtrado foi extraído com etil acetato. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi combinado com o material coletado da filtração, obtendo o produto desejado 3-(metiltio)pirazin-2-amina (1.33 g, 94%) como um sólido branco. MS m/z 142.1 [M+H]+.
[0775] Etapa B: Uma mistura de 3-(2-bromoacetil)-7-fluor- 2H-cromen-2-ona (2.85 g, 10 mmol, preparado no Exemplo 36, Parte 2) e 3-(metiltio)pirazin-2-amina (1.5 g, 10 mmol) em CH3CN (40 mL) foi agitada a 110°C durante a noite. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com etil acetato para gerar um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, lavado com etil acetato seco, gerando sal de 7-fluor-3-(8-(metiltio)imidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2H- cromen-2-ona bromidrato (2.15 g, 66%) como um sólido castanho- amarelado. MS m/z 328.1 [M+H]+.
[0776] Etapa C: Uma mistura de 7-fluor-3-(8- (metiltio)imidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2H-cromen-2-ona bromidrato (100 mg, 0.24 mmol) e piperazina (60 mg, 0.6 mmol) em DMSO (0.5 mL) foi agitada a 120°C por 5 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com água para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, lavado com água, seco e purificado com cromatografia em coluna de sílica gel (5 a 10% MeOH em CH2Cl2) para dar o composto do título (52 mg, 55%) como um sólido amarelo. MS m/z 394.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.81 (1H, s), 8.50 (1H, s), 7.81 (1H, d, J = 4.4 Hz), 7.70 (1H, d, J = 4.7 Hz), 7.52 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.88 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.5 Hz), 6.77 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.50 (1H, s), 3.38-3.30 (4H, m), 3.09-3.01 (4H, m), 2.71 (3H, s).
[0777] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 46 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 47 Preparação de Cpd 456
Figure img0143
[0778] Em uma solução de 7-(4-metilpiperazin-1-il)-3-(7- (metiltio)imidazo[1,2-c]pirimidin-2-il)-2H-cromen-2-ona (30 mg, 0.076 mmol) em dimetilacetamida (2.0 mL) a 88°C foi adicionado um grande excesso de níquel de Raney. A mistura foi agitada até a evolução de gás ter cessado (~10 min). A mistura foi diluída com MeOH e filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrado sob um fluxo de nitrogênio. O resíduo foi purificado com cromatografia em coluna de sílica gel (5 a 10% MeOH em CH2Cl2) para dar o composto do título (32 mg, 55%) como um sólido amarelo: m.p. 258-260°C; MS m/z 348.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 9.07 (1H, s), 8.75 (1H, s), 8.60 (1H, d, J = 0.6 Hz), 8.09 (1H, dd, J = 4.6 Hz, 1.4 Hz), 7.88 (1H, d, J = 4.4 Hz), 7.50 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.88 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.2 Hz), 6.78 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.36 (4H, dd, J = 6.1 Hz, 4.3 Hz), 3.05 (4H, dd, J = 6.1 Hz, 4.3 Hz)
[0779] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 47 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados.Exemplo 48 Preparação de Cpd 563
Figure img0144
[0780] Etapa A: Uma mistura de 7-bromo-3-(2-bromoacetil)-2H-cromen-2-ona (2.0 g, 5.78 mmol, preparado no Exemplo 37, Etapa B), 2-amino-3,5-dimetilpirazina (825 mg, 6.71 mmol) e CH3CN (22 mL) foi aquecida a 90°C por 4 h. A adição de uma solução aquosa saturada de NaHCO3 à mistura resultou na formação de um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração à vácuo e titulado com 1:1 hexano/acetona, gerando 7-bromo-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2H-cromen-2- ona (1.9 g, 88%) como um sólido laranja. 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 8.81 (1H, s), 8.61 (1H, s), 8.31 (1H, s), 7.93 (1H, d, J = 8 Hz), 7.76 (1H, d, J = 1.5 Hz), 7.58 (1H, dd, J = 8 Hz, 1.5 Hz), 2.76 (3H, s), 2.37 (3H, s).
[0781] Etapa B: Uma mistura de 7-bromo-3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2H-cromen-2-ona (150 mg, 0.40 mmol), (2-bifenil)-di-t-butilfosfina (10 mg, 0.033 mmol), Pd2(dba)3 (10 mg, 0.011 mmol), Cs2CO3 (170 mg, 0.52 mmol), (S)- 1-Boc-3-aminopirrolidina (105 μL, 0.60 mmol) e 1,2- dimetoxietano (1.4 mL) foi aquecida a 80°C por 4 h. A mistura reacional foi diluída com CH2Cl2 e filtrada. O filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (30-50% acetona em CH2Cl2), seguido de titulação com 1:1 hexano/acetona, gerando (S)-terc-butil 3-(3- (6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7- ilamino)pirrolidina-1-carboxilato (109 mg, 57%) como um sólido amarelo. MS m/z 476.3 [M+H]+.
[0782] Etapa C: Uma mistura de (S)-terc-butil 3-(3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7- ilamino)pirrolidina-1-carboxilato (105 mg, 0.22 mmol) foi agitada em uma solução de trifluorácido acético (1.0 mL) em CH2Cl2 (4.0 mL) por 15 min. A mistura reacional foi vertida em NaOH diluído aquoso. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (EtOH adicionado para melhorar a solubilidade). A camada orgânica foi coletada e concentrada sob pressão reduzida, gerando o composto do título (70 mg, 85%) como um sólido amarelo: m.p. 132°C (decomp.); MS m/z 376.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6): δ 8.70 (1H, s), 8.50 (1H, s), 8.32 (1H, s), 7.68 (1H, d, J = 9 Hz), 7.06 (1H, d, J = 6.5 Hz), 6.68 (1H, dd, J = 9 Hz, 2 Hz), 6.55 (1H, d, J = 2 Hz), 4.12 (1H, m), 3.37 (1H, dd, J = 12 Hz, 6 Hz), 3.18 (1H, m), 3.11 (1H, m), 2.94 (1H, dd, J = 12 Hz, 4 Hz), 2.76 (3H, s), 2.37 (3H, s), 2.22 (1H, m), 1.82 (1H, m).
[0783] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 48 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 49 Preparação de Cpd 620
Figure img0145
[0784] Etapa A: Uma mistura de (S)-terc-butil 3-(3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7- ilamino)pirrolidina-1-carboxilato (255 mg, 0.54 mmol, preparado no Exemplo 48, Etapa B), NaH (60% suspensão de óleo mineral, 32 mg, 0.80 mmol) e DMF (2.5 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 10 min. Iodometano (34 μL, 0.54 mmol) foi adicionado à mistura. Após agitação da mistura por 10 min, iodometano adicional (17 μL, 0.27 mmol) foi adicionado. Depois de agitada por mais 10 min, água foi lentamente adicionada à mistura reacional para extinguir qualquer NaH remanescente. A adição de H2O (15 mL) à mistura reacional causou a formação de um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração à vácuo e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (20-30% acetona em CH2Cl2), seguido de titulação com éter, gerando (S)-terc-butil 3-((3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7- il)(metil)amino)pirrolidina-1-carboxilato (84 mg, 32%) como um sólido amarelo. MS m/z 490.2 [M+H]+.
[0785] Etapa B: Uma mistura de (S)-terc-butil 3-((3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7- il)(metil)amino)pirrolidina-1-carboxilato (80 mg, 0.16 mmol) foi agitada em uma solução de trifluorácido acético (1.0 mL) em CH2Cl2 (4.0 mL) por 2 h. A mistura reacional foi vertida em diluída aquoso NaOH. A mistura foi extraída com uma mistura de CH2Cl2 e EtOH. A camada orgânica foi coletada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (10% 9:1 MeOH:NH4OH in CH2Cl2), gerando o composto do título (42 mg, 67%) como um sólido amarelo: m.p. 192-202°C; MS m/z 390.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 8.70 (1H, s), 8.49 (1H, s), 8.31 (1H, s), 7.71 (1H, d, J = 9 Hz), 6.91 (1H, dd, J = 9 Hz, 2.5 Hz), 6.72 (1H, d, J = 2 Hz), 4.53 (1H, m), 3.04 (1H, dd, J = 11 Hz, 8 Hz), 2.96 (1H, m), 2.93 (3H, s), 2.77 (2H, m), 2.75 (3H, s), 2.37 (3H, s), 2.06 (1H, m), 1.66 (1H, m).
[0786] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 49 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 50 Preparação de Cpd 740
Figure img0146
[0787] Etapa A: Uma mistura de 7-bromo-3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2H-cromen-2-ona (1.1 g, 2.97 mmol, preparado no Exemplo 48, Etapa A), terc-butil 4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-5,6- dihidropiridina-1(2H)-carboxilato (1.12 g, 3.62 mmol), K2CO3 (1.24 g, 9.0 mmol), complexo [1,1’-bis(difenilfosfino)- ferroceno]dicloropaládio (II) com diclorometano (200 mg, 0.24 mmol) e CH3CN (8 mL) foi aquecida a 80°C por 4 h. A mistura reacional foi particionada entre CH2Cl2 and H2O. A camada orgânica foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (30-50% acetona em CH2Cl2), seguido de titulação com acetona, gerando terc-butil 4-(3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen- 7-il)-5,6-dihidropiridina-1(2H)-carboxilato (1.17 g, 83%) como um sólido amarelo claro. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.85 (1H, s), 8.62 (1H, s), 8.34 (1H, s), 7.94 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.52 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.50 (1H, s), 6.47 (1H, br s), 4.07 (2H, br s), 3.58 (2H, t, J = 5 Hz), 2.77 (3H, s), 2.53 (2H, br s), 2.38 (3H, s), 1.45 (9H, s).
[0788] Etapa B: A solução de terc-butil 4-(3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)-5,6- dihidropiridina-1(2H)-carboxilato (300 mg, 0.63 mmol) em trifluorácido acético (1.0 mL) e CH2Cl2 (4 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 30 min. A mistura reacional foi vertida em diluída aquoso NaOH. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (EtOH adicionado para melhorar a solubilidade). A camada orgânica foi coletada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (30% MeOH em CH2Cl2, seguido de 10-20% 9:1 MeOH:NH4OH em CH2Cl2) gerando o composto do título (183 mg, 77%) como um sólido castanho claro: m.p. 205-211°C; MS m/z 373.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.83 (1H, s), 8.61 (1H, s), 8.33 (1H, s), 7.91 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.50 (1H, dd, J = 8 Hz, 1.5 Hz), 7.45 (1H, s), 6.52 (1H, m), 3.42 (2H, m), 2.94 (2H, t, J = 6 Hz), 2.77 (3H, s), 2.40 (2H, m), 2.37 (3H, s), 2.28 (1H, br s). Exemplo 51 Preparação de Cpd 742
Figure img0147
[0789] A solução de 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2- il)-7-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-2H-cromen-2-ona (133 mg, 0.36 mmol, preparado no Exemplo 50) em 1,2- dicloroetano:MeOH (20 mL, 1:1) foi agitada na presença de 10% paládio sob carbon (Pd/C, 107 mg) sob hidrogênio (40 psi). Depois de 4 h, a mistura reacional foi filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrado sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (10% 9:1 MeOH:NH4OH in CH2Cl2), seguido de titulação com 1:1 hexanos/CH2Cl2, gerando o composto do título (76 mg, 56%) como um sólido esbranquiçado: m.p. 224-229°C; MS m/z 375.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.84 (1H, s), 8.61 (1H, s), 8.34 (1H, s), 7.90 (1H, d, J = 8 Hz), 7.30 (2H, m), 3.05 (2H, d, J = 12 Hz), 2.77 (3H, s), 2.73 (1H, tt, J = 12 Hz, 3.5 Hz), 2.59 (2H, td, J = 12 Hz, 2.5 Hz), 2.38 (3H, s), 2.20 (1H, br s), 1.73 (2H, d, J = 12 Hz), 1.54 (2H, qd, J = 12 Hz, 3.5 Hz). Exemplo 52 Preparação de Cpd 128
Figure img0148
[0790] Etapa A: Uma mistura de 3-(2-bromoacetil)-7-fluor- 2H-cromen-2-ona (0.285 g, 1.0 mmol, preparado no Exemplo 36, Parte 2) e 6-cloropiridazin-3-amina (0.13 g, 1.0 mmol) em EtOH (2.0 mL) foi agitada a 95°C por 3 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com água para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, lavado com água e seco para dar 3-(6-cloroimidazo[1,2- b]piridazin-2-il)-7-fluor-2H-cromen-2-ona bromidrato (0.26 g, 82%) como um sólido castanho-amarelado. MS m/z 316.1 [M+H]+.
[0791] Etapa B: Uma mistura de 3-(6-cloroimidazo[1,2- b]piridazin-2-il)-7-fluor-2H-cromen-2-ona bromidrato (95 mg, 0.3 mmol), 1-metilpiperazina (75 mg, 0.75 mmol) em DMSO (0.5 mL) foi agitada a 95°C por 2 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com água para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, lavado com água, seco e purificado com cromatografia em coluna de sílica gel (5 a 10% MeOH em CH2Cl2) para dar 3-(6- cloroimidazo[1,2-b]piridazin-2-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)- 2H-cromen-2-ona (56 mg, 50%) como um sólido amarelo. MS m/z 396.2 [M+H]+.
[0792] Etapa C: A suspensão de 3-(6-cloroimidazo[1,2- b]piridazin-2-il)-7-(4-metilpiperazin-1-il)-2H-cromen-2-ona (50 mg, 0.13 mmol) em uma mistura de solvenntes de CH2Cl2 (2.0 mL) e MeOH (5.0 mL) foi agitada com 10% Pd/C (20 mg) sob hidrogênio (1 atm) por 4 h. A mistura foi filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrado. O resíduo foi suspenso em água, coletado por filtração à vácuo e seco para dar o composto do título (30 mg, 66%) como um sólido amarelo: m.p. 284-285°C; MS m/z 362.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d β): δ 8.78 (1H, s), 8.63 (1H, s), 8.52 (1H, dd, J = 4.4 Hz, 1.6 Hz), 8.11 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.74 (1H, d, J = 8.2 Hz), 7.28 (1H, dd, J = 9.5 Hz, 4.4 Hz), 7.06 (1H, d, J = 9.2 Hz), 6.95 (1H, s), 3.53-3.32 (4H, m), 2.48 (3H, s), 2.38-2.15 (4H, m). Exemplo 53 Preparação de Cpd 617
Figure img0149
[0793] Etapa A: Uma mistura de 3-cloro-6-metilpiridazina (516 mg, 4.0 mmol), NH4OH (30%, 3 mL) e sulfato de cobre (II) pentahidratado (26 mg, 0.2 mmol) foi agitada a 120°C por 40 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e particionada entre EtOAc e salmoura. A camada aquosa foi extraída com EtOAc cinco vezes. Os orgânicos combinados foram secos sobre NaSO4, filtrados, concentrados e purificados por cromatografia em coluna de sílica gel (0-10% MeOH em CH2Cl2) para dar 6-metilpiridazin-3-amina (160 mg, 37%) como um sólido branco. MS m/z 109.9 [M+H]+.
[0794] Etapa B: Uma mistura de 3-(2-bromoacetil)-7-fluor- 2H-cromen-2-ona (900 mg, 3.0 mmol, preparado no Exemplo 36, Parte 2) e 6-metilpiridazin-3-amina (330 mg, 3.0 mmol) foi agitada em CH3CN (6.0 mL) a 100 °C por 5 h, então o solvente foi removido. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (5% MeOH em CH2Cl2) para dar 7-fluor-3-(6- metilimidazo[1,2-b]piridazin-2-il)-2H-cromen-2-ona (814 mg, 92 %) como um sólido castanho-amarelado. MS m/z 296.0 [M+H]+.
[0795] Etapa C: Uma mistura de 7-fluor-3-(6- metilimidazo[1,2-b]piridazin-2-il)-2H-cromen-2-ona (100 mg, 0.34 mmol) e cis-2,6-dimetilpiperazina (155 mg, 1.36 mmol) em DMSO (0.5 mL) foi agitada a 100°C durante a noite. A mistura foi diluída com água para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, seco sob vácuo e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (5% MeOH em CH2Cl2) para dar o composto do título (75 mg, 58%) como um sólido amarelo: m.p. 225-227°C; MS m/z 390.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.64 (1H, s), 8.52 (1H, s), 7.66 (1H, d, J = 9.4 Hz), 7.35 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.81 (1H, d, J = 9.4 Hz), 6.73 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.2 Hz), 6.66 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.68-3.56 (2H, m), 3.12-2.96 (2H, m), 2.71-2.54 (2H, m), 2.46 (3H, s), 1.30-1.10 (6H, br s).
[0796] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 53 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 54 Preparação de Cpd 458
Figure img0150
[0797] Etapa A: Seguindo o procedimento no Exemplo 46, Etapa A, 6-cloropirimidin-4-amina (1.3 g, 10 mmol) e metanotiolato de sódio (1.05 g, 15 mmol) em DMF (10 mL) forneceram 6-(metiltio)pirimidin-4-amina (1.06 g, 75%). MS m/z 142.1 [M+H]+.
[0798] Etapa B: Uma mistura de 3-(2-bromoacetil)-7-fluor- 2H-cromen-2-ona (2.5 g, 8.86 mmol, preparado no Exemplo 36, Parte 2) e 6-(metiltio)pirimidin-4-amina (1.0 g, 7.1 mmol) em CH3CN (35 mL) foi agitada a 120°C durante a noite. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com EtOAc para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, lavado com EtOAc e seco sob vácuo para se obter sal de 7-fluor-3-(7-(metiltio)imidazo[1,2-c]pirimidin-2- il)-2H-cromen-2-ona bromidrato (2.8 g, 97%) como um sólido castanho-amarelado. MS m/z 328.1 [M+H]+.
[0799] Etapa C: Uma mistura de 7-fluor-3-(7- (metiltio)imidazo[1,2-c]pirimidin-2-il)-2H-cromen-2-ona bromidrato (100 mg, 0.24 mmol) e 1-metilpiperazina (60 mg, 0.6 mmol) em DMSO (0.5 mL) foi agitada a 120°C por 5 h. Depois de resfriada até temperatura ambiente, a mistura foi diluída com água para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, seco sob vácuo e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (5% MeOH em CH2Cl2) para dar 7-(4-metilpiperazin-1-il)-3-(7-(metiltio)imidazo[1,2- c]pirimidin-2-il)-2H-cromen-2-ona (68 mg, 69%) como um sólido amarelo. MS m/z 408.2 [M+H]+.
[0800] Etapa D: Seguindo o procedimento no Exemplo 47, 7- (4-metilpiperazin-1-il)-3-(7-(metiltio)imidazo[1,2- c]pirimidin-2-il)-2H-cromen-2-ona (66 mg, 0.16 mmol) e excesso de NI Raney em dimetilacetamida (2.0 mL) gerou o composto do título (32 mg, 55%) como um sólido amarelo: m.p. 253-255°C; MS m/z 362.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.03 (1H, s), 8.71 (1H, s), 8.56 (1H, s), 7.95 (1H, d, J = 6.3 Hz), 7.54-7.44 (2H, m), 6.88 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.2 Hz), 6.79 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.48 (4H, br s), 2.67 (4H, br s), 2.44 (3H, br s).
[0801] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 54 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 55 Preparação de Cpd 441
Figure img0151
[0802] Etapa A: Uma mistura de 3-acetil-7-fluor-2H-cromen- 2-ona (600 mg, 2.0 mmol, preparado no Exemplo 36, Parte 2) e 5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-amina (241 mg, 2.0 mmol) em EtOH (6.0 mL) foi agitada a 95°C durante a noite num tubo selado. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, lavado com água e seco sob vácuo para dar 7-fluor-3-(2- metilimidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-6-il)-2H-cromen-2-ona (1.2 g, 62%) como um sólido castanho-amarelado. MS m/z 303.2 [M+H]+.
[0803] Etapa B: Uma mistura de 7-fluor-3-(2- metilimidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-6-il)-2H-cromen-2-ona (76 mg, 0.25 mmol), piperazina (64 mg, 0.75 mmol), K2CO3 (104 mg, 0.75 mmol) em DMSO (0.5 mL) foi agitada a 120°C durante a noite. Depois de resfriada até temperatura ambiente, a mistura foi diluída com água para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, seco sob vácuo e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (10% MeOH em CH2Cl2) para se obter o composto do título (23 mg, 25%) como um sólido amarelo: m.p. 288-290°C; MS m/z 368.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, MeOD-d4): δ 8.43 (1H, s), 8.40 (1H, s), 7.54 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.01 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.5 Hz), 6.84 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.39-3.35 (4H, m), 3.00-2.95 (4H, m), 2.74 (3H, s).
[0804] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 55 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 56 Preparação de Cpd 391
[0805] Parte 1: Preparação de 3-(2-bromoacetil)-5,7-difluor-2H-cromen-2-ona
Figure img0152
[0806] Etapa A: Uma mistura de 2,4-difluor-6- hidroxibenzaldeído (8 g, 50.6 mmol), etil acetoacetato (6.4 mL, 50.7 mmol) e piperidina (240 μL, 2.43 mmol) foi aquecida a 50°C por 15 h. A mistura reacional foi resfriada até temperatura ambiente e então suspensa em éter. A mistura foi filtrada. O material sólido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (50-70% CH2Cl2 em hexanos), gerando 3- acetil-5,7-difluor-2H-cromen-2-ona (4.45 g, 39%) como um sólido esbranquiçado. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.69 (1H, s), 6.93 (1H, dt, J = 9 Hz, 2 Hz), 6.84 (1H, td, J = 9 Hz, 2 Hz), 2.72 (3H, s).
[0807] Etapa B: Uma mistura de 3-acetil-5,7-difluor-2H- cromen-2-ona (4.25 g, 19.0 mmol), tribrometo de tetrabutilamônio (9.85 g, 20.4 mmol) e THF (77 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 3 h, então o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi titulado com 1:1 hexano/CH2Cl2, gerando o composto do título (3.31 g, 57%) como um sólido esbranquiçado: MS m/z [303.0, 305.0] [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.80 (1H, s), 6.96 (1H, m), 6.87 (1H, td, J = 8.5 Hz, 2.5 Hz), 4.69 (2H, s).
[0808] Parte 2: Preparação de Cpd 391
Figure img0153
[0809] Etapa A: Uma mistura de 3-(2-bromoacetil)-5,7- difluor-2H-cromen-2-ona (160 mg, 0.53 mmol), 4- trifluormetilpiridin-2-amina (100 mg, 0.62 mmol) e EtOH (1 mL) foi aquecida a 80°C por 1 h. A mistura reacional foi particionada entre CH2Cl2 e uma solução aquosa saturada de NaHCO3. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (CH2Cl2), seguido de titulação com 2:1 hexano/acetona, gerando 5,7-difluor-3-(7- (trifluormetil)imidazo[1,2-a]piridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (92 mg, 47%) como um sólido branco. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.98 (1H, s), 8.64 (1H, s), 8.27 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.95 (1H, s), 7.01 (1H, dd, J = 7 Hz, 1.5 Hz), 6.96 (1H, d, J = 9 Hz), 6.86 (1H, td, J = 9 Hz, 2.5 Hz).
[0810] Etapa B: Uma mistura de 5,7-difluor-3-(7- (trifluormetil)imidazo[1,2-a]piridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (60 mg, 0.16 mmol), cis-2,6-dimetilpiperazina (27 mg, 0.24 mmol) e DMSO (300 μL) foi aquecida a 80°C por 15 h. A adição de uma solução aquosa saturada de NaHCO3 resultou na formação de um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração à vácuo e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (5% MeOH em CH2Cl2), gerando o composto do título (58 mg, 79%) como um sólido amarelo: m.p. 210-219°C; MS m/z 461.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.85 (1H, d, J = 7 Hz), 8.72 (1H, s), 8.65 (1H, s), 8.08 (1H, s), 7.20 (1H, dd, J = 7 Hz, 2 Hz), 6.96 (1H, dd, J = 9 Hz, 2 Hz), 6.78 (1H, d, J = 1.5 Hz), 3.88 (2H, d, J = 12 Hz), 2.76 (2H, m), 2.37 (2H, t, J = 11 Hz), 2.31 (1H, br s), 1.04 (6H, d, J = 6.5 Hz).
[0811] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 56 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 57 Preparação de Cpd 529
Figure img0154
[0812] Etapa A: Uma mistura de 3-(2-bromoacetil)-7-fluor- 2H-cromen-2-ona (570 mg, 2 mmol, preparado no Exemplo 36, Parte 2) e 2-metilpiridina (186 mg, 2 mmol) em acetona anidra (2 mL) foi aquecida até 50°C por 16 h num tubo selado. Depois de resfriada até temperatura ambiente, a mistura reacional foi filtrada. O material coletado foi lavado com uma pequena quantidade CH3CN para fornecer 1-(2-(7-fluor-2-oxo-2H-cromen-3- il)-2-oxoetil)-2-metil-piridinium brometo (590 mg, 78%) como um sólido marrom claro. MS m/z 298.1[M+H]+.
[0813] Etapa B: 1-(2-(7-Fluor-2-oxo-2H-cromen-3-il)-2- oxoetil)-2-metil-piridinium brometo (590 mg, 1.6 mmol) foi suspenso em CH3CN (10 mL) e trietilamina (2.5 mL). A mistura foi aquecida em refluxo por 2 h. Depois de resfriada até temperatura ambiente, a mistura foi filtrada. O material coletado foi lavado com CH3CN para fornecer 7-fluor-3- (indolizin-2-il)-2H-cromen-2-ona (360 mg, 83%) como um sólido amarelo. MS m/z 280.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.54 (1H, s), 8.33 (1H, dd, J = 7.0 Hz, 1 Hz), 8.29 (1H, d, J = 1 Hz), 7.85 (1H, m), 7.45-7.42 (2H, m), 7.30 (1H, td, J = 8.5 Hz, 2.5 Hz), 6.94 (1H, s), 6.74 (1H, m), 6.55 (1H, td, J = 7.0 Hz, 1.5 Hz).
[0814] Etapa C: Uma mistura de 7-fluor-3-(indolizin-2-il)- 2H-cromen-2-ona (60 mg, 0.21 mmol) e piperazina (36 mg, 0.42 mmol) em DMSO anidro (0.3 mL) foi aquecida até 60°C por 16 h num tubo selado. A mistura foi purificada por cromatografia em coluna de alumina básica (0-10% MeOH em CH2Cl2) para fornecer o composto do título (39 mg, 52%) como um sólido marrom: m.p. 186-188°C; MS m/z 346.4 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d β): δ 8.35 (1H, s), 8.29 (1H, dd, J = 7.0 Hz, 1 Hz), 8.22 (1H, d, J = 2.5 Hz), 7.55 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.38 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.0 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 2.5 Hz), 6.88 (1H, s), 6.84 (1H, d, J = 2.5 Hz), 6.70 (1H, m), 6.52 (1H, m), 3.29-3.27 (4H, m), 2.85-2.84 (4H, m).
[0815] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 57 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 58 Preparação de Cpd 588
Figure img0155
[0816] Etapa A: Uma mistura de 3-(2-bromoacetil)-7-fluor- 2H-cromen-2-ona (1.0 g, 3.5 mmol) e 2,5-dimetilpirazina (750 mg, 7.0 mmol, preparado no Exemplo 36, Parte 2) em CH3CN anidro (4 mL) foi aquecida até 60°C por 3 d num tubo selado. Depois de resfriada até temperatura ambiente, a mistura reacional foi filtrada. O material coletado foi lavado com uma pequena quantidade CH3CN para fornecer 1-(2-(7-fluor-2-oxo-2H-cromen-3- il)-2-oxoetil)-2,5-dimetilpirazin-1-ium brometo bruto (1.8 g) como um sólido marrom claro. MS m/z 313.3 [M+H]+.
[0817] Etapa B: O intermediário bruto da Etapa A foi suspenso em CH3CN (20 mL) e trietilamina (5 mL). A mistura foi aquecida até refluxo por 2 h, então resfriada e filtrada. O material coletado foi lavado com uma pequena quantidade CH3CN para fornecer 7-fluor-3-(indolizin-2-il)-2H-cromen-2-ona (850 mg, 83% ao longo de 2 etapas) como um sólido laranja. MS m/z 295.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.82 (1H, s), 8.62 (1H, s), 8.34 (1H, s), 8.16 (1H, s), 7.86 (1H, m), 7.47 (1H, d, J = 2.5 Hz), 7.34-7.31 (2H, m), 2.37 (3H, s).
[0818] Etapa C: Seguindo o procedimento no Exemplo 57, Etapa C, 7-fluor-3-(3-metilpirrol[1,2-a]pirazin-7-il)-2H- cromen-2-ona (50 mg, 0.17 mmol) e piperazina (30 mg, 0.34 mmol) em DMSO (0.5 mL) gerou o composto do título (21 mg, 34%) como um sólido amarelo: m.p. 220°C (dec.); MS m/z 361.4 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.77 (1H, s), 8.45 (1H, s), 8.29 (1H, s), 8.14 (1H, s), 7.58 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.28 (1H, s), 7.04 (1H, dd, J = 9 Hz, 2.5 Hz), 6.90 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.40-3.36 (4H, m), 2.99-2.97 (4H, m), 2.38 (3H, s).
[0819] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 58 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 59 Preparação de Cpd 579
Figure img0156
[0820] Etapa A: Uma mistura de 4-cloro-2-metilpirimidina (512 mg, 4 mmol) e metanotiolato de sódio (280 mg, 4 mmol) em CH3CN anidro (4 mL) foi aquecida até 60°C por 16 h. 7 Depois de resfriada até temperatura ambiente, a mistura foi filtrada. O material coletado foi lavado com CH2Cl2. O filtrado combinado foi concentrado para fornecer 2-metil-4-(metiltio)pirimidina bruta, o qual foi utilizado na etapa seguinte sem mais purificação.
[0821] Etapa B: Uma mistura de produto bruto da Etapa A e 3-(2-bromoacetil)-7-fluor-2H-cromen-2-ona (855 mg, 3.0 mmol, preparado no Exemplo 36, Parte 2) em CH3CN anidro (4 mL) foi aquecida até 60°C por 3 dias num tubo selado. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e filtrada. O material coletado foi lavado com uma pequena quantidade CH3CN para fornecer 1-(2-(7-fluor-2-oxo-2H-cromen-3-il)-2-oxoetil)-2- metil-4-(metiltio)pirimidin-1-ium brometo bruto (822 mg) como um sólido marrom claro, o qual foi utilizado na etapa seguinte sem mais purificação.
[0822] Etapa C: O produto bruto da Etapa B foi suspenso em CH3CN (10 mL) e trietilamina (2.5 mL). A mistura foi aquecida até refluxo por 2 h, então resfriada e filtrada. O material coletado foi lavado com CH3CN, obtendo 7-fluor-3-(2- (metiltio)pirrol[1,2-a]pirimidin-7-il)-2H-cromen-2-ona (1.0 g, 77% ao longo de três etapas) como um sólido marrom. MS m/z 327.1 [M+H]+.
[0823] Etapa D: A uma solução de 7-fluor-3-(2- (metiltio)pirrol[1,2-a]pirimidin-7-il)-2H-cromen-2-ona (100 mg, 0.31 mmol) em dimetilacetamida (3 mL) foi cuidadosamente adicionada Ni de Raney (lama em H2O, ~ 50 mg) a 60°C. Depois de 15 min, Ni de Raney adicional foi adicionado em pequenas porções até UPLC/MS indicar a conversão completa. Depois de resfriada até temperatura ambiente, a mistura reacional foi filtrada através de Celite. A torta de filtração foi lavada com CH2Cl2. O filtrado foi concentrado, fornecendo 7-fluor-3- (pirrol[1,2-a]pirimidin-7-il)-2H-cromen-2-ona (60 mg, 69% rendimento) como um óleo gomoso castanho. MS m/z 281.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.75 (1H, m), 8.65 (1H, s), 8.26 (1H, d, J = 1 Hz), 8.13 (1H, m), 7.86 (1H, m), 7.45 (1H, dd, J = 9.5 Hz, 2.5 Hz), 7.31 (1H, td, J = 8.5 Hz, 2.5 Hz), 7.07 (1H, s), 6.70 (1H, m).
[0824] Etapa E: Seguindo o procedimento no Exemplo 57, Etapa C, 7-fluor-3-(pirrol[1,2-a]pirimidin-7-il)-2H-cromen-2- ona (60 mg, 0.21 mmol) e piperazina (36 mg, 0.42 mmol) em DMSO (0.5 mL) gerou o composto do título (28 mg, 38%) como um sólido amarelo: m.p. 235-238°C; MS m/z 347.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.70 (1H, dd, J = 2 Hz, 1 Hz), 8.47 (1H, s), 8.20 (1H, d, J = 1.5 Hz), 8.09 (1H, dd, J = 3.5 Hz, 1.5 Hz), 7.57 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.04-7.01 (2H, m), 6.86 (1H, d, J = 2.5 Hz), 6.67-6.65 (1H, m), 3.31-3.29 (4H, m), 2.87-2.85 (4H, m).
[0825] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 59 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 60 Preparação de Cpd 641
Figure img0157
[0826] Etapa A: Uma mistura de hexano-2,5-diona (6 mL, 51 mmol) e hidrazina monohidrato (2.5 mL, 51 mmol) em etanol (50 mL) foi levada a refluxo por 3 h, então o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi combinado com 10% Pd/C (1.1 g) em benzeno anidro (200 mL). A mistura reacional foi aquecida em refluxo durante a noite, então resfriada até temperatura ambiente e filtrada através de uma camada de Celite. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (6% MeOH em CH2Cl2) para fornecer 3,6-dimetilpiridazina (3.1 g, 56%) como um óleo castanho claro. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.23 (2H, s), 2.69 (6H, s).
[0827] Etapa B: Uma mistura de 3,6-dimetilpiridazina (81 mg, 0.75 mmol) e 3-(2-bromoacetil)-7-fluor-2H-cromen-2-ona (143 mg, 0.5 mmol, preparado no Exemplo 36, Parte 2) em CH3CN anidro (1 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 5 d num tubo selado para se obter 1-(2-(7-fluor-2-oxo-2H-cromen-3-il)- 2-oxoetil)-3,6-dimetilpiridazin-1-ium brometo como uma mistura bruta em CH3CN.
[0828] Etapa C: A mistura reacional bruta da Etapa B foi diluída com CH3CN anidro (2 mL) e trietilamina (1 mL). A mistura foi aquecida em refluxo por 2 h, então resfriada e filtrada. O material coletado foi lavado com CH3CN, obtendo 7- fluor-3-(2-metilpirrol[1,2-b]piridazin-6-il)-2H-cromen-2-ona (103 mg, 70%) como um sólido marrom. MS m/z 295.0 [M+H]+.
[0829] Etapa D: Seguindo o procedimento no Exemplo 57, Etapa C, 7-Fluor-3-(2-metilpirrol[1,2-b]piridazin-6-il)-2H- cromen-2-ona (40 mg, 0.13 mmol) e piperazina (22 mg, 0.26 mmol) em DMSO (0.5 mL) gerou o composto do título (24 mg, 48%) como um sólido marrom claro: m.p. 213-216°C; MS m/z 361.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.23 (1H, s), 8.15 (1H, d, J = 1.5 Hz), 7.68 (1H, d, J = 9 Hz), 7.39 (1H, d, J = 9 Hz), 6.87-6.83 (2H, m), 6.74 (1H, d, J = 2 Hz), 6.43 (1H, d, J = 9 Hz), 3.27-3.22 (4H, m), 2.84-2.83 (4, m), 2.33 (3H, s).
[0830] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 60 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 61 Preparação de Cpd 630
Figure img0158
[0831] Etapa A: À um balão de fundo redondo seco forno foram adicionados tieno-5-piridina (0.6 g, 4.4 mmol), triisopropil borato (1.38 mL, 6.8 mmol) e THF (16 mL). A mistura foi resfriada a -78°C sob nitrogênio antes a adição de LDA (3.6 mL, 1.5 M, 5.2 mmol) com agitação. Depois de 1 h a mistura reacional foi vertida em água gelada (20 mL) e acidificada a pH 2 com 2 N HCl. O precipitado foi coletado por filtração, lavado com água e seco para fornecer ácido tieno-5- piridina-2-borônico (0.7 g, 88%). MS m/z 135.0 [M+H]+.
[0832] Etapa B: Uma mistura de ácido tieno-5-piridina-2- borônico (0.59 g, 3.29 mmol), 3-bromo-7-fluor-2H-cromen-2-ona (1. 0 g, 4.12 mmol, preparado no Exemplo 32, Etapa A), tris(dibenzilideneacetona)dipaládio(0) (0.19 g, 0.21 mmol ), tri-terc-butilfosfônio tetrafluorborato (0.14 g, 0.49 mmol) e fluoreto de potássio (1.21 g, 20.57 mmol) em THF (10mL) foi agitada a 50°C sob argônio por 15 h. A mistura foi então diluída com 10% MeOH em CH2Cl2 (100 mL) e filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrado. O resíduo foi lavado com CH2Cl2 e seco para dar 7-fluor-3-(tieno[3,2-c]piridin-2-il)-2H- cromen-2-ona (0.43 g, 43%). MS m/z 298.0 [M+H]+.
[0833] Etapa C: Uma mistura de 7-fluor-3-(tieno[3,2- c]piridin-2-il)-2H-cromen-2-ona (75 mg, 0.25 mmol), (2S,6R)- 2,6-dimetilpiperazina (57 mg, 0.50 mmol) e DMSO (1.0 mL) foi agitada a 90°C durante a noite. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com água (10 mL) para produzir um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração, lavado com água e etil éter, e então seco para dar o composto do título (20 mg, 21%): m.p. 163-165°C; MS 392.3 m/z [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.11 (1H, d, J = 1.0 Hz), 8.60 (1H, s), 8.39 (1H, d, J = 5.4 Hz), 8.19 (1H, s), 8.03 (1H, d, J = 5.7 Hz), 7.62 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.07 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.2 Hz), 6.91 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.93-3.85 (2H, m), 2.84-2.74 (2H, m), 2.41-2.33 (2H, m), 1.04 (6H, d, J = 6.3 Hz).
[0834] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 61 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 62 Preparação de Cpd 705
[0835] Parte 1: Preparação de 4-cloro-5-iodo-2,6-dimetilpirimidina
Figure img0159
[0836] Etapa A: 2,6-Dimetilpirimidin-4-ol (5.0 g, 40 mmol) foi dissolvido em solução de NaOH aquoso (50 mL, 1 M, 50 mmol). À solução foi adicionado iodo (10.2 g, 40 mmol). A mistura foi gradualmente aquecida a 80°C e agitada por 2 h. Após resfriar a mistura a tempreratura ambiente, ácido acético foi adicionado para ajustar o pH ~6. Um precipitado se formou e foi coletado por filtração. O sólido foi lavado com água e seco para dar 5-iodo-2,6-dimetilpirimidin-4-ol (6.51 g, 65%). MS m/z 251.2 [M+H]+.
[0837] Etapa B: 5-Iodo-2,6-dimetilpirimidin-4-ol (4.6 g, 18.4 mmol) foi combinado com oxicloreto de fósforo (15 mL). A mistura foi agitada a 110°C por 2 h, então o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em CH2Cl2 e lavado com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 e salmoura. A camada orgânica foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (0-10% EtOAc em CH2Cl2) para dar o composto do título (3.86 g, 78%) como um óleo incolor que solidificou em repouso. MS m/z 269.2 [M+H]+.
[0838] Parte 2: Preparação de Cpd 705
Figure img0160
[0839] Etapa A: Uma mistura de 3-bromo-7-fluorcumarina (1.82 g, 7.5 mmol, preparado no Exemplo 38, Etapa A), etiniltrimetilsilano (0.88 g, 9.0 mmol), iodeto de cobre (I) (0.071 g, 0.38 mmol), dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (0.26 g, 0.38 mmol), trietilamina (1.52 g, 15.0 mmol) e CH3CN (15 mL) foi agitada sob atmosfera de argônio a temperatura ambiente for 12 h, então o solvente foi removido. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-50% EtOAc em hexanos) para dar 7-fluor-3-((trimetilsilil)etinil)-2H-cromen-2-ona como um sólido branco, utilizado diretamente na etapa seguinte. MS m/z 261.2 [M+H]+.
[0840] Etapa B: O intermediário obtido na Etapa A foi dissolvido em MeOH (50 mL) e resfriado em um banho gelo-água. K2CO3 (1.55 g, 11.25 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada a 0°C por 1.5 h. NH4Cl saturado aquoso (200 mL) foi adicionado para produzir um precipitado. O precipitado foi coletado, lavado com água, seco e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-10% EtOAc em CH2Cl2) para dar 3- etinil-7-fluor-2H-cromen-2-ona (1.14 g, 81% duas etapas) como agulhas brancas. MS m/z 189.2 [M+H]+.
[0841] Etapa C: Uma mistura de 3-etinil-7-fluor-2H-cromen- 2-ona (376 mg, 2.0 mmol), 4-cloro-5-iodo-2,6-dimetilpirimidina (590 mg, 2.2 mmol), iodeto de cobre (I) (19 mg, 0.1 mmol), dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (70 mg, 0.1 mmol), trietilamina ( 404 mg, 4.0 mmol) e CH3CN (4.0 mL) foi agitada a 50°C sob atmosfera de argônio durante a noite, então o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (5% MeOH em CH2Cl2) para dar 3-((4-cloro-2,6-dimetilpirimidin-5- il)etinil)-7-fluor-2H-cromen-2-ona (92 mg, 14%). MS m/z 329.3 [M+H]+.
[0842] Etapa D: 3-((4-Cloro-2,6-dimetilpirimidin-5- il)etinil)-7-fluor-2H-cromen-2-ona (92 mg, 0.28 mmol) foi agitada com hidrosulfeto de sódio (47 mg, 0.84 mmol) em EtOH (2.0 mL) a 80°C por 1 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com água (8 mL) para produzir um precipitado. O precipitado foi coletado, lavado com água e seco para dar 3-(2,4-dimetiltieno[2,3-d]pirimidin-6-il)-7- fluor-2H-cromen-2-ona comoum pó branco (66 mg, 73%). MS m/z 327.3 [M+H]+.
[0843] Etapa E: 3-(2,4-Dimetiltieno[2,3-d]pirimidin-6-il)- 7-fluor-2H-cromen-2-ona (66 mg, 0.2 mmol), piperazina (43 mg, 0.5 mmol) em DMSO (0.5 mL) foi agitada a 80°C por 6 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente and diluído com água (6 mL) para produzir um precipitado. O precipitado foi coletado, lavado com água e seco para dar o composto do título (75 mg, 96%) como um pó amarelo: m.p. 275 °C (decomp.); MS m/z 393.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.65 (1H, s), 8.15 (1H, s), 7.60 (1H, d, J = 8.83 Hz), 7.05 (1H, dd, J = 9.0 Hz, 2.4 Hz), 6.89 (1H, d, J = 2.5 Hz), 3.38-3.33 (4H, m), 2.84-2.79 (4H, m), 2.74 (3H, s), 2.66 (3H, s). Exemplo 63 Preparação de Cpd 698
Figure img0161
[0844] Etapa A: 6-Metilpiridin-3-ol (0.5 g, 4.58 mmol) foi dissolvido em NaOH aquoso (4.5 mL, 1 M, 4.5 mmol). À solução foi adicionado iodo (1.28 g, 5.2 mmol) e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi neutralizada com HCl aquoso (2 M) a pH ~7. Um precipitado branco se formou e foi coletado por filtração. O sólido foi lavado com água e seco para dar 2-iodo-6-metilpiridin-3-ol (0.8 g, 50%). MS m/z 236.0 [M+H]+.
[0845] Etapa B: Uma mistura de 2-iodo-6-metilpiridin-3-ol (325 mg, 1.38 mmol) e 3-etinil-7-fluor-2H-cromen-2-ona (200 mg, 1.06 mmol, preparado no Exemplo 62, Parte 2), dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (37 mg, 0.05 mmol), iodeto de cobre (I) (10 mg, 0.05 mmol), trietilamina (0.25 mL, 2.12 mmol) em CH3CN (3.0 mL) foi agitada sob atmosfera de argônio a 40°C por 4 h. A mistura foi diluída com água (50 mL) para produzir um precipitado. O precipitado foi coletado, lavado com etil éter e seco para dar 3-(5-metilfuro[3,2-b]piridin-2- il)-7-(piperazin-1-il)-2H-cromen-2-ona (142 mg, 48%). MS m/z 297.2 [M+H]+.
[0846] Etapa C: Uma mistura de 3-(5-Metilfuro[3,2- b]piridin-2-il)-7-(piperazin-1-il)-2H-cromen-2-ona (100 mg, 0.33 mmol), 1-metilpiperazina (67 mg, 0.67 mmol) em DMSO (1 mL) foi agitada a 90°C por 2 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com água (10 mL) para produzir um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração, lavado com água e seco para dar o composto do título (99 mg, 80%) como um sólido amarelo: m.p. 178-180°C; MS 376.0 m/z [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.22 (1H, s), 7.64 (1H, d, J = 0.95 Hz), 7.54 (1H, dd, J = 8.5 Hz, 1.0 Hz), 7.39 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.00 (1H, d, J = 8.5 Hz), 6.80 (1H, dd, J = 8.8 Hz, 2.5 Hz), 6.68 (1H, d, J = 2.2 Hz), 3.38-3.33 (4H, m), 2.59 (3H, s), 2.54-2.47 (4H, m), 2.30 (3H, s).
[0847] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 63 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 64 Preparação de Cpd 723
Figure img0162
[0848] Etapa A: 2,6-Dimetilpiridin-3-ol (1.0 g, 8.1 mmol) foi dissolvido em NaOH aquoso (4.05 mL, 2 M, 8.1 mmol). À solução foi adicionado iodo (2.62 g, 10.3 mmol) a temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 50°C por 2 h, então neutralizada (pH ~7) com HCl aquoso (2 N). Excesso de reagente foi extinto com tiosulfato de sódio, então o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi suspenso em 10% MeOH em CH2Cl2 (100 mL) e filtrado. O filtrado foi concentrado para dar 4-iodo-2,6-dimetilpiridin-3-ol (0.96 g, 50 %). MS m/z 250.0 [M+H]+.
[0849] Etapa B: Uma mistura de 4-iodo-2,6-dimetilpiridin-3- ol (343 mg, 1.38 mmol), 3-etinil-7-fluor-2H-cromen-2-ona (200 mg, 1.06 mmol, preparado no Exemplo 62, Etapa B), dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (37 mg, 0.05 mmol), iodeto de cobre (I) (10mg, 0.05 mmol), trietilamina (0.25 mL, 2.12 mmol) em DMF (3.0 mL) foi agitada sob atmosfera de argônio a 40°C durante a noite. A mistura foi diluída com água (50 mL) para produzir um precipitado. O precipitado foi coletado para dar 3-(5,7-dimetilfuro[2,3-c]piridin-2-il)-7-fluor-2H-cromen-2-ona (185 mg, 60%). MS m/z 311.2 [M+H]+.
[0850] Etapa C: Uma mistura de 3-(5,7-dimetilfuro[2,3- c]piridin-2-il)-7-fluor-2H-cromen-2-ona (100 mg, 0.32 mmol), piperazina (58 mg, 0.67 mmol) em DMSO (1.0 mL) foi agitada a 90°C por 2 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluído com água (10 mL) para produzir um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração, lavado com água e seco para dar o composto do título (89 mg, 74%) como um pó amarelo: m.p. 218–220°C; MS 376.0 m/z [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.36 (1H, s), 7.56-7.49 (2H, m), 7.21 (1H, s), 6.92-6.87 (1H, m), 6.77-6.74 (1H, m), 3.39 (4H, m, J = 10.4 Hz), 3.09-3.03 (4H, m), 2.79 (3H, s), 2.61 (3H, s).
[0851] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 64 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 65 Preparação de Cpd 321
Figure img0163
[0852] Etapa A: Diisopropil azodicarboxilato (5.5 mL, 28 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 7- hidroxicumarina (4.6 g, 28 mmol), (R)-terc-butil 3- hidroxipirrolidina-1-carboxilato (6.0 g, 31 mmol), trifenilfosfina (7.4 g, 28 mmol) e trietilamina (3.9 mL, 28 mmol) em THF (28 mL) a 0°C. A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. Os sólidos foram removidos por filtração e lavados com THF gelado. O sólido foi dissolvido em EtOAc. A solução foi lavada com HCl aquoso (0.5 N), seca sobre NaSO4, então filtrada e concentrada para dar (S)-terc-butil 3-(2-oxo-2H-cromen-7-iloxi)pirrolidina-1- carboxilato (4.85 g, 52%) como um sólido amarelo pálido. MS m/z 232.2 [M-Boc+H]+.
[0853] Etapa B: À uma mistura de (S)-terc-butil 3-(2-oxo- 2H-cromen-7-iloxi)pirrolidina-1-carboxilato (1.5 g, 3.6 mmol) e acetato de sódio (1.0 g, 12.8 mmol) em ácido acético (11.0 mL) foi adicionado bromo (0.186 mL, 3.6 mmol) gota a gota a temperatura ambiente. A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante a noite, então o solvente foi removido e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-60% EtOAc em hexanos) para se obter (S)-terc-butil 3- (3-bromo-2-oxo-2H-cromen-7-iloxi)pirrolidina-1-carboxilato (2.9 g, 80%) como um sólido amarelo pálido. MS m/z 312.1 [M- Boc+H]+.
[0854] Etapa C: Uma mistura de (S)-terc-butil 3-(3-bromo-2- oxo-2H-cromen-7-iloxi)pirrolidina-1-carboxilato (1.2 g, 2.9 mmol), tributil(1-etoxivinil)estanano (1.2 g, 3.2 mmol), iodeto de cobre (I) (0.13 g, 0.7 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0.34 g, 0.29 mmol) em 1,4-dioxano (30 mL) foi agitada a 100°C por 2 h sob argônio. A mistura foi particionada entre EtOAc e água. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre NaSO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-35% EtOAc em CH2Cl2) para se obter (S)- terc-butil 3-(3-(1-etoxivinil)-2-oxo-2H-cromen-7- iloxi)pirrolidina-1-carboxilato (1.84 g, 65%) como um sólido amarelo pálido. MS m/z 402.3 [M+H]+.
[0855] Etapa D: Em uma solução de (S)-terc-butil 3-(3-(1- etoxivinil)-2-oxo-2H-cromen-7-iloxi)pirrolidina-1-carboxilato (0.78 g, 1.84 mmol) em THF (10 mL) e água (1 mL) foi adicionado N-bromosuccinimida (0.344 g, 1.93 mmol) porções. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 10 min então particionada entre EtOAc e uma solução aquosa saturada de NaHCO3. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre NaSO4, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-30% EtOAc em CH2Cl2) para se obter (S)-terc-butil 3-(3-(2-bromoacetil)-2-oxo-2H- cromen-7-iloxi)pirrolidina-1-carboxilato (0.77 g, 90%) como um sólido amarelo pálido. MS m/z 454.1 [M+H]+.
[0856] Etapa E: Uma mistura de (S)-terc-butil 3-(3-(2- bromoacetil)-2-oxo-2H-cromen-7-iloxi)pirrolidina-1-carboxilato (100 mg, 0.21 mmol) e 2-aminopirimidina (20 mg, 0.21 mmol) em EtOH (0.6 mL) foi agitada a 95°C por 10 h num tubo selado. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluído com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (2.0 mL) para produzir um precipitado. O sólido foi coletado por filtração à vácuo, lavado com água e seco para dar (S)-terc-butil 3-(3-(2- bromoacetil)-2-oxo-2H-cromen-7-iloxi)pirrolidina-1- carboxilato, que foi dissolvido em uma solução de 4 N HCl em dioxano (1.0 mL, 4.0 mmol). A mistura foi agitada por 1 h a temperatura ambiente, então o solvente foi removido. O resíduo foi suspenso em acetona, coletado por filtração à vácuo e seco para dar o composto do título como o sal de cloridrato (61 mg, 70%) como um sólido esbranquiçado: m.p. 240-250°C; MS m/z 349.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, MeOD-d4): δ 9.27 (1H, dd, J = 1.6, 6.8 Hz), 9.07 (1H, dd, J = 1.6, 4.4 Hz), 8.83 (1H, s), 8.64 (1H, s), 7.83 (1H, d, J = 8.2 Hz), 7.67 (1H, dd, J = 4.4, 7.0 Hz), 7.17-7.12 (2H, m), 5.45-5.40 (1H, m), 3.76-3.46 (4H, m), 2.49-2.35 (2H, m).
[0857] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 65 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 66 Preparação de Cpd 20
Figure img0164
[0858] Etapa A: Uma mistura de 2,4-dihidroxibenzaldeído (141 mg, 1.0 mmol), etil 2-(benzo[d]oxazol-2-il)acetato (195 mg, 0.95 mmol, preparado de acordo com Exemplo 1, Parte 1), piperidina (86 mg μL, 1.0 mmol) e ácido acético (305 mg, 5.0 mmol) em CH3CN (1.0 mL) foi agitada a 120°C durante a noite, então o solvente foi removido. O resíduo foi suspenso em água, coletado por filtração à vácuo, lavado com CH3CN e seco para gerar 3-(benzo[d]oxazol-2-il)-7-hidroxi-2H-cromen-2-ona (211 mg, 76%) como um sólido cinza. MS m/z 280.1 [M+H]+.
[0859] Etapa B: Seguindo o procedimento no Exemplo 65, Etapa A, 3-(benzo[d]oxazol-2-il)-7-hidroxi-2H-cromen-2-ona (280 mg, 1.0 mmol), terc-butil 4-hidroxipiperidina-1- carboxilato (227 mg, 1.1 mmol), diisopropil azodicarboxilato (0.20 mL, 1.0 mmol), trifenilfosfina (0.27 g, 1.0 mmol), trietilamina (0.14 mL, 1.0 mmol) em THF (1.0 mL) gerou terc- butil 4-(3-(benzo[d]oxazol-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7- iloxi)piperidina-1-carboxilato (303 mg, 66%) como um sólido esbranquiçado. MS m/z 463.2 [M+H]+.
[0860] Etapa C: terc-butil 4-(3-(benzo[d]oxazol-2-il)-2- oxo-2H-cromen-7-iloxi)piperidina-1-carboxilato foi dissolvido em CH2Cl2 (2.0 mL) e trifluorácido acético (1.0 mL). A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 0.5 h, então o solvente foi removido. O resíduo foi suspenso em K2CO3 aquoso (2.0 M, 5.0 mL), coletado por filtração à vácuo, então lavado com água e seco para dar o composto do título (158 mg, 67%) como um sólido cinza: m.p. 198-201°C; MS m/z 363.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.90 (1H, s), 7.81-7.76 (2H, m), 7.70 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.49-7.39 (2H, m), 7.08-7.03 (2H, m), 4.77-4.69 (1H, m), 3.16-3.08 (2H, m), 2.86-2.78 (2H, m), 2.14-2.06 (2H, m), 1.81-1.69 (2H, m).
[0861] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 66 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 67 Preparação de Cpd 626
Figure img0165
[0862] Uma mistura de (S)-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2- a]pirazin-2-il)-7-(3-metilpiperazin-1-il)-2H-cromen-2-ona (250 mg, 0.64 mmol, analogamente preparado de acordo com o procedimento do Exemplo 43), acetaldeído (71 μL, 1.29 mmol), triacetoxiborohidreto de sódio (409 mg, 1.93 mmol) em CH2Cl2 (10% MeOH) (10 mL) foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. A reação foi extinta por adição de uma solução aquosa saturada de NaHCO3. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (10% MeOH). A camada orgânica foi seca sobre NaSO4, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de sílica gel (10% MeOH em CH2Cl2) para dar o composto do título (192 mg, 72%) como um sólido amarelo: m.p. 208-209°C; MS m/z 418.1 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.70 (1H, s), 8.50 (1H, s), 8.30 (1H, d, J = 0.9 Hz), 7.73 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.02 (1H, s), 6.88 (1H, d, J = 1.9 Hz), 3.73 (2H, br. s.), 3.112.97 (1H, m), 2.91-2.82 (1H, m), 2.74 (5H, m), 2.48-2.40 (1H, m), 2.35-2.21 (5H, m), 1.06 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.98 (3H, t)
[0863] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 67 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 68 Preparação de Cpd 773
Figure img0166
[0864] Uma mistura de 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin- 2-il)-7-(piperidin-4-il)-2H-cromen-2-ona (50 mg, 0.13 mmol, preparado no Exemplo 51), Cs2CO3 (150 mg, 0.46 mmol), 2- iodopropane (20 μL, 0.20 mmol) e DMF (300 μL) foi aquecida a 60°C por 3 h. A mistura reacional foi diluída com H2O, causando a formação de um precipitado. A mistura foi filtrada. O material sólido foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (5% 10:1 MeOH:NH4OH em CH2Cl2), seguido de titulação com 2:1 hexano:CH2Cl2, gerando o composto do título como um sólido castanho-amarelado: m.p. 206-211°C; MS m/z 417.5 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.85 (1H, s), 8.62 (1H, s), 8.34 (1H, s), 7.90 (1H, d, J = 8 Hz), 7.34 (1H, s), 7.31 (1H, dd, J = 8 Hz, 1.5 Hz), 2.91 (2H, d, J = 11 Hz), 2.77 (3H, s), 2.73 (1H, m), 2.62 (1H, m), 2.38 (3H, s), 2.24 (2H, t, J = 11 Hz), 1.81 (2H, d, J = 12 Hz), 1.67 (2H, qd, J = 12 Hz, 3.5 Hz), 1.01 (6H, d, J = 6.5 Hz).
[0865] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 68 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 69 Preparação de Cpd 825
Figure img0167
[0866] Etapa A: Uma mistura de 2-oxo-2H-cromen-7-il trifluormetanosulfonato (2.94 g, 10 mmol, preparado no Exemplo 24, Etapa A), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridina-1(2H)-carboxilato (3.7 g, 12 mmol), complexo de [1,1‘-bis(difenilfosfino)ferroceno] dicloropaládio(II) com diclorometano (0.81 g, 1.0 mmol) e K2CO3 (4.14 g, 30 mmol) em CH3CN (40 mL) foi agitada a 80°C por 4 h. A mistura foi dividida em água and EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, então concentrada e submetido a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-10% EtOAc em CH2Cl2 para dar terc-butil 4-(2-oxo-2H-cromen-7-il)-5,6- dihidropiridina-1(2H)-carboxilato (3.4 g, 100%). MS m/z 328.2 [M+H]+.
[0867] Etapa B: A solução de terc-butil 4-(2-oxo-2H-cromen- 7-il)-5,6-dihidropiridina-1(2H)-carboxilato (3.4 g, 10 mmol) em CH2Cl2 (50 mL) e EtOAc (100 mL) foi agitada com 5% Pd/C (0.35 g) sob H2 (1 atm) a temperatura ambiente por 3 h. A mistura foi filtrada. O filtrado foi concentrado para dar terc-butil 4-(2-oxo-2H-cromen-7-il)piperidina-1-carboxilato (3.4 g, 100%). MS m/z 330.2 [M+H]+.
[0868] Etapa C: Bromo (2.1 g, 13 mmol) foi adicionado gota a gota a temperatura ambiente em uma solução de terc-butil 4- (2-oxo-2H-cromen-7-il)piperidina-1-carboxilato (3.4 g, 10 mmol) e acetato de sódio (2.46 g, 30 mmol) em ácido acético (15 mL). Depois de agitada 5 h a temperatura ambiente, a mistura foi diluída com água e filtrada. O sólido foi dissolvido em diclorometano e lavado com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 solução. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-10% EtOAc em CH2Cl2 para dar terc-butil 4-(3- bromo-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperidina-1-carboxilato (0.9 g, 22%).
[0869] Etapa D: Uma mistura de terc-butil 4-(3-bromo-2-oxo- 2H-cromen-7-il)piperidina-1-carboxilato (0.5 g, 1.23 mmol), (2-metilimidazo[1,2-a]piridin-6-il)borônico ácido (300 mg, 1.7 mmol, preparado no Exemplo 34, Etapa A), complexo de [1,1'- bis(difenilfosfino)ferroceno] dicloropaládio(II) com diclorometano (136 mg, 0.166 mmol) e K2CO3 (2.5 mL de a 2.0 M solução aquosa, 5.0 mmol) em 1,4-dioxano (4 mL) foi aquecida a 88°C por 2h. A mistura foi dividida em EtOAc e água. A camada orgânica foi concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 20-100% EtOAc em CH2Cl2 para fornecer terc- butil 4-(3-(2-metilimidazo[1,2-a]piridin-6-il)-2-oxo-2H- cromen-7-il)piperidina-1-carboxilato (0.4 g, 70%). MS m/z 460.4 [M+H]+.
[0870] Etapa E: A solução de terc-butil 4-(3-(2- metilimidazo[1,2-a]piridin-6-il)-2-oxo-2H-cromen-7- il)piperidina-1-carboxilato (0.4 g, 0.87 mmol) em CH2Cl2 (2.0 mL) e TFA (2.0 mL) foi agitada a temperatura ambiente por 15 min. A mistura foi concentrada. O resíduo foi particionado em CH2Cl2 e K2CO3 aquoso. A camada orgânica foi concentrada, e então titulada com acetona para fornecer o composto do título (0.25 g, 80%) como um pó cinza. MS m/z 360.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.01 (1H, m), 8.37 (1H, s), 7.80 (1H, s), 7.71 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.54 (2H, m), 7.31 (2H, m), 3.04 (2H, m), 2.74 (1H, m), 2.61 (2H, m), 2.34 (3H, d, J = 0.6 Hz), 1.73 (2H, m), 1.57 (2H, m).
[0871] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 69 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 70 Preparação de Cpd 845
Figure img0168
[0872] Etapa A: Uma mistura de 6-cloropiridazin-3-amina (2.6 g, 20 mmol) e 1-bromo-2,2-dimetoxipropane (4.0 g, 22 mmol) em CH3CN (20 mL) foi agitada a 100°C durante a noite. A mistura foi concentrada e submetido a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 20-50% EtOAc em CH2Cl2 para dar 6-cloro-2- metilimidazo[1,2-b]piridazina (0.53 g, 16%). MS m/z 168.1 [M+H]+.
[0873] Etapa B: Bis(trimetilsilil)amida lítio (8.25 mL, 1 M em tolueno, 8.25 mmol) foi adicionado a uma mistura de 6- cloro-2-metilimidazo[1,2-b]piridazina (0.46 g, 2.75 mmol), acetato de t-butil (0.55 mL, 4.12 mmol) e cloro[2-(di-terc- butilfosfino)-2',4',6'-triisopropil-1,1'-bifenil][2-(2- aminoetil)fenil)] paládio(II) (47 mg, 0.069 mmol). A mistura foi agitada por 5 min a temperatura ambiente e então lavada com água. A camada orgânica foi concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-35% EtOAc em CH2Cl2 para dar terc-butil 2-(2-metilimidazo[1,2-b]piridazin-6- il)acetato (0.12 g, 18%).
[0874] Etapa C: Uma mistura de 4-bromo-2-hidroxibenzaldeído (0.12 g, 0.6 mmol), terc-butil 2-(2-metilimidazo[1,2- b]piridazin-6-il)acetato (0.12 g, 0.49 mmol), piperidina (0.145 mL, 1.47 mmol) e ácido acético (42 μL, 0.74 mmol) em etanol (3.0 mL) foi agitada a 120°C durante a noite. A mistura foi diluída com água e filtrada, obtendo 7-bromo-3-(2- metilimidazo[1,2-b]piridazin-6-il)-2H-cromen-2-ona.
[0875] Etapa D: 7-Bromo-3-(2-metilimidazo[1,2-b]piridazin- 6-il)-2H-cromen-2-ona foi misturada com terc-butil 4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridina-1(2H)- carboxilato (0.56 g, 0.6 mmol), complexo de [1,1‘- bis(difenilfosfino)ferroceno] dicloropaládio(II) com diclorometano (40 mg, 0.049 mmol) e 2M K2CO3 aquoso (1.0 mL, 2.0 mmol) em CH3CN (2.0 mL). A mistura foi agitada a 80°C por 3 h, então diluída emto EtOAc e lavado com água. A camada orgânica foi submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-50% EtOAc em CH2Cl2 para dar terc-butil 4-(3-(3-(1-(terc- butoxicarbonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-2- metilimidazo[1,2-b]piridazin-6-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)-5,6- dihidropiridina-1(2H)-carboxilato (120 mg, 38%). MS m/z 640.6 [M+H]+.
[0876] Etapa E: O Composto da Etapa D foi dissolvido em 4 N HCl em dioxano (2.0 mL). A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 15 min, então concentrada, tratado com bicarbonato de sódio aquoso, e filtrada. O sólido foi lavado com água e seco para se obter o composto do título (15 mg, 18%). MS m/z 440.5 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) □ 9.26 (1H, s), 8.08 (1H, s), 8.02 (1H, m), 7.81 (1H, m), 7.54 (1H, m), 7.48 (1H, m), 6.70 (1H, m), 6.55 (1H, m), 3.45 (4H, m), 2.90 (4H, m), 2.39 (3H, s), 2.36-2.18 (4H, m). Exemplo 71 Preparação de Cpd 948
Figure img0169
[0877] Etapa A: Uma mistura de 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2- a]pirazin-2-il)-7-iodo-2H-cromen-2-ona (0.21 g, 0.5 mmol, preparado de acordo com Exemplo 48, Etapa A), (R)-terc-butil 2-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato (0.145 g, 0.72 mmol), CuI (9.5 mg, 0.05 mmol), 3,4,7,8-tetrametil-1,10- fenantrolina (24 mg, 0.1 mmol) e Cs2CO3 (0.33 g, 1.0 mmol) em tolueno (1.5 mL) e dioxano (1.0 mL) foi agitada a 110°C por 16 h. A mistura foi concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-10% MeOH em CH2Cl2 para dar uma mistura bruta contendo (R)-terc-butil 2-(((3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7- il)oxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato (0.21 g). MS m/z 491.2 [M+H]+.
[0878] Etapa B: A mistura da Etapa A foi tratada com 4 N HCl em dioxano (2.0 mL). Depois de 1 h, a mistura foi concentrada, então dissolvida em metanol (7N in NH3). O solvente foi removido e o resíduo foi submetido a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-15% MeOH em CH2Cl2 para dar o composto do título (25 mg, 13%) como um pó amarelo claro: m.p. 172-174°C; MS m/z 391.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CD3OD) □ 8.71 (1H, s), 8.46 (1H, s), 8.04 (1H, d, J = 0.9 Hz), 7.61 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.98 (1H, m), 6.90 (1H, d, J = 2.2 Hz), 4.08 (1H, m), 3.99 (1H, m), 3.55 (1H, m), 2.98 (2H, m), 2.83 (3H, s), 2.42 (3H, d, J = 0.9 Hz), 2.02 (1H, m), 1.96-1.76 (2H), 1.64 (1H, m). Exemplo 72 Preparação de Cpd 958
Figure img0170
[0879] Etapa A: Em uma solução de 2-(4-bromo-2- (metoximetoxi)fenil)-1,3-dioxolano (1.45 g, 5.0 mmol) em THF (20 mL) a -78 °C foi adicionado BuLi (3.75 mL of a 1.6 M solução em hexano, 6.0 mmol). A mistura foi agitada a -78°C por 30 min, então benzil 4-oxopiperidina-1-carboxilato (1.75 g, 7.5 mmol) foi adicionado à mistura em uma parte. A temperatura da mistura foi permitida aumentar até temperatura ambiente lentamente. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 2 h, então a reação foi extinta com NH4Cl solução saturada. A mistura foi dividida em EtOAc e água. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, então concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-65% EtOAc em CH2Cl2 para dar benzil 4-(4-(1,3-dioxolan-2- il)-3-(metoximetoxi)fenil)-4-hidroxipiperidina-1-carboxilato (1.2 g, 54%).
[0880] Etapa B: Em uma solução de benzil 4-(4-(1,3- dioxolan-2-il)-3-(metoximetoxi)fenil)-4-hidroxipiperidina-1- carboxilato (1.2 g, 2.7 mmol) em CH2CI2 (6.0 mL) a -78 °C foi adicionado trifluoreto de dietilaminoenxofre (0.49 mL, 3.0 mmol) gota a gota. A temperatura da mistura foi permitida aumentar até temperatura ambiente. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por uma hora adicional antes desta ser extinta por uma solução saturada de Na2CO3. A camada orgânica foi concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-20% EtOAc em CH2Cl2 para dar benzil 4-fluor-4-(4- formil-3-(metoximetoxi)fenil)piperidina-1-carboxilato (0.83 g, 76%). 1H NMR (500 MHz, acetona-d6) □ 10.47 (1H, d, J=0.6 Hz), 7.78 (1H, dd, J=8.2, 0.6 Hz), 7.30 - 7.44 (6H, m), 7.18 - 7.22 (1H, m), 5.43 (2H, s), 5.15 (2H, s), 4.20 (2H, m), 3.52 (3H, s), 3.33-3.02 (2H, m), 2.22-2.06 (2H, m), 1.95 (2H, m).
[0881] Etapa C: Em uma mistura de benzil 4-fluor-4-(4- formil-3-(metoximetoxi)fenil)piperidina-1-carboxilato (0.83 g, 2.1 mmol) em etanol (2.0 mL) e água (2.0 mL) foi adicionado HCl concentrada (12 N, 2.0 mL, 24 mmol). A mistura foi agitada a 50°C por 3 h. A mistura foi dividida em EtOAc e água. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, e concentrada para dar benzil 4-fluor-4-(4-formil-3- hidroxifenil)piperidina-1-carboxila como um produto puro (0.75 g, 100%). MS m/z 356.2 [M-H]-.
[0882] Etapa D: Uma mistura de benzil 4-fluor-4-(4-formil- 3-hidroxifenil)piperidina-1-carboxilato (0.75 g, 2.1 mmol), etil 2-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)acetato (0.54 g, 2.3 mmol), piperidina (1.5 μL, 0.042 mmol), ácido acético (0.5 mL) em etanol (2.0 mL) foi agitada a 120°C por 2 h. A mistura foi concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 30-100% EtOAc em CH2Cl2 para dar benzil 4-(3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)-4- fluorpiperidina-1-carboxilato (0.35 g, 47%). MS m/z 527.3 [M+H]+.
[0883] Etapa E: Uma mistura de benzil 4-(3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)-4- fluorpiperidina-1-carboxilato (0.17 g, 0.32 mmol) e 10% Pd/C (17 mg) em metanol e diclorometano (3:1, 10 mL) foi agitada durante a noite sob H2 (1 atm). A mistura foi filtrada através de Celite, concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 10% MeOH em CH2Cl2 para dar 3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(4-fluorpiperidin-4-il)- 2H-cromen-2-ona (75 mg, 60%). MS m/z 393.3 [M+H]+.
[0884] Etapa F: 3-(6,8-Dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)- 7-(4-fluorpiperidin-4-il)-2H-cromen-2-ona (75 mg, 60%) foi dissolvido em CH3OH:CH2Cl2 10:1 (2.0 mL). Acetaldeído (0.1 mL de a 6.5 M solução em isopropanol, 0.65 mmol) foi adicionado à solução, seguido de triacetoxiborohidreto de sódio sólido (85 mg, 0.4 mmol). A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 30 min, então extinta com K2CO3 aquoso. A camada orgânica foi concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-10% MeOH em CH2Cl2 para dar o composto do título (34 mg, 40%) como um sólido cinza: m.p. 162-164 °C; MS m/z 421.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CD3OD) □ 8.79 (1H, s), 8.53 (1H, s), 8.09 (1H, d, J = 0.6 Hz), 7.76 (1H, m), 7.42 (2H, m), 3.03 (2H, m), 2.84 (3H, s), 2.63 (2H, d, J = 7.3 Hz), 2.54 (2H, br s), 2.43 (3H, d, J = 0.9 Hz), 2.23 (2H, m), 2.05 (2H, br s), 1.20 (3H, t, J = 7.3 Hz). Exemplo 73 Preparação de Cpd 853
[0885] Parte 1, Preparação de (trimetilstannil)pirazol[1,5-a]pirazina
Figure img0171
[0886] Etapa A: Em uma agitada solução de 1H-pirazol (6.95 g, 0.1 mmol) e hidróxido de sódio (16 g, 0.4 mol) em água (400 mL0 foi adicionado bromo (48 g, 0.3 mol) gota a gota por 1 h. A mistura foi agitada por 1 h, e então filtrada. A torta foi lavada com água e seca para dar 3,4,5-tribromo-1H-pirazol (25.2 g, 81%). MS m/z 302.9 [M+H]+.
[0887] Etapa B: Em uma mistura de 3,4,5-tribromo-1H-pirazol (1.54 g, 5.1 mmol) e K2CO3 (2.1 g, 15.3 mmol) em acetona (20 mL) foi adicionado cloroacetona (0.52 g, 5.6 mmol) gota a gota. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 2 h, então particionada entre água e CH2Cl2. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 e concentrada para dar 1-(3,4,5-tribromo-1H- pirazol-1-il)propan-2-ona (1.80 g, 99%). MS m/z 361.0 [M+H]+.
[0888] Etapa C: Uma mistura de 1-(3,4,5-tribromo-1H- pirazol-1-il)propan-2-ona (3.6 g, 10.0 mmol), tributil(1- etoxivinil)estanano (3.5 mL, 10.0 mmol) e dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (0.35 g, 0.5 mmol) em 1,4- dioxano (25 mL) foi agitada a 100°C durante a noite. A reação foi resfriada até temperatura ambiente e então filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrada e particionado entre THF (100 mL) e 1 N HCl aquoso (100 mL). A mistura foi agitada a 60°C por 1 h. A camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com etil acetato (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 e concentrada. O resíduo foi submetido a cromatografia em sílica gel, eluíndo com CH2Cl2 para dar 1-(5-acetil-3,4- dibromo-1H-pirazol-1-il)propan-2-ona (1.1 g, 34%). MS m/z 325.0 [M+H]+.
[0889] Etapa D: Uma mistura de 1-(5-acetil-3,4-dibromo-1H- pirazol-1-il)propan-2-ona (3.24 g, 10 mmol) e acetato de amônio (7.7 g, 100 mmol) em ácido acético (10 mL) foi agitada a 120°C por 30 min. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com água (150 mL). A mistura foi agitada por 20 min e filtrada. O sólido foi seco e submetido a cromatografia em sílica gel, eluíndo com CH2Cl2 para dar 2,3- dibromo-4,6-dimetilpirazol[1,5-a]pirazina (1.55 g, 50%). MS m/z 305.9 [M+H]+.
[0890] Etapa E: Em uma solução de 2,3-dibromo-4,6- dimetilpirazol[1,5-a]pirazina (1.55 g, 5.1 mmol) em THF (50 mL) a 0°C foi adicionado a solução de i-PrMgCl (2.7 mL de uma solução 2.0 M em THF, 5.4 mmol). A mistura foi agitada a 0°C por 30 min e excesso de reagente foi extinto com a adição de metanol (25 mL). A mistura foi particionada entre EtOAc e água. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-35% EtOAc em hexanos para fornecer 2-bromo-4,6- dimetilpirazol[1,5-a]pirazina (0.95 g, 80%). MS m/z 228.1 [M+H]+.
[0891] Etapa F: Uma mistura de 2-bromo-4,6- dimetilpirazol[1,5-a]pirazina (0.226 mg, 1.0 mmol), hexametildiestanano (0.397 g, 1.2 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina) paládio(0) (0.116 g, 0.1 mmol) em tolueno (3.0 mL) foi agitada a 100°C durante a noite sob argônio. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-45% EtOAc em hexanos para dar 4,6-dimetil-2- (trimetilstannil)pirazol[1,5-a]pirazina (0.212 g, 70%) como um sólido branco. MS m/z 312.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, acetona- d 6) □ 8.29 (1H, s), 6.95 (1H, s), 2.66 (3H, s), 2.42 (3H, d, J = 0.9 Hz), 0.36 (9H, s).
[0892] Parte 2: Preparação de 3-(4,6-dimetilpirazol[1,5- a]pirazin-2-il)-7-(1-etilpiperidin-4-il)-2H-cromen-2-ona
Figure img0172
[0893] Etapa A: Uma mistura de terc-butil 4-(3-bromo-2-oxo- 2H-cromen-7-il)piperidina-1-carboxilato (110 mg, 0.24 mmol, preparado no Exemplo 69, Etapa C), 4,6-dimetil-2- (trimetilstannil)pirazol[1,5-a]pirazina (75 mg, 0.24 mmol), tetraquis(trifenilfosfina) paládio(0) (28 mg, 0.024 mmol) em a 0.5 M solução de LiCl em THF (1.44 mL, 0.72 mmol) foi agitada a 100°C por 20 h, então o solvente foi removido. O resíduo foi submetido a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-60% EtOAc em CH2Cl2 para dar terc-butil 4-(3-(4,6- dimetilpirazol[1,5-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7- il)piperidina-1-carboxilato (98 mg, 86%). MS m/z 475.3 [M+H]+.
[0894] Etapa B: Seguindo o procedimento no Exemplo 69, Etapa E, terc-butil 4-(3-(4,6-dimetilpirazol[1,5-a]pirazin-2- il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)piperidina-1-carboxilato (98 mg, 0.21 mmol) e TFA (0.4 mL) em diclorometano (0.4 mL) forneceu 3- (4,6-dimetilpirazol[1,5-a]pirazin-2-il)-7-(piperidin-4-il)-2H- cromen-2-ona (80 mg, 100%). MS m/z 375.3 [M+H]+.
[0895] Etapa C: Seguindo o procedimento no Exemplo 67, 3- (4,6-dimetilpirazol[1,5-a]pirazin-2-il)-7-(piperidin-4-il)-2H- cromen-2-ona (61 mg, 0.1 mmol), acetaldeído (30 μL de uma solução 6.5 M em isopropanol, 0.2 mmol) e NaBH(OAc)3 (64 mg, 0.3 mmol) forneceu o composto do título (36 mg, 90%) como um sólido cinza. MS m/z 403.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CD3OD) □ 8.69 (1H, s), 8.23 (1H, s), 7.68 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.61 (1H, s), 7.30 (2H, dd, J = 3.8 Hz, 2.8 Hz), 3.41 (2H, br), 2.89 (3H, d, J = 7.3 Hz), 2.75 (3H, s), 2.66 (2H, m), 2.48 (3H, s), 2.07 (2H, br), 1.95 (2H, m), 1.29 (3H, t, J = 7.3 Hz). Exemplo 74 Preparação de Cpd 876
Figure img0173
[0896] Etapa A: Seguindo o procedimento no Exemplo 37, Etapa A, 2,4-dihidroxibenzaldeído (1.4 g, 10 mmol), etil acetoacetato (1.28 mL, 10 mmol), piperidina (1.0 mL, 10 mmol) e ácido acético (3 mL, 50 mmol) em CH3CN (20 mL) forneceu 3- acetil-7-hidroxi-2H-cromen-2-ona (1.77 g, 82%). MS m/z 203.1 [M-H]-.
[0897] Etapa B: Diisopropil azodicarboxilato (2.0 mL, 10 mmol) foi adicionado gota a gota à uma mistura de 3-acetil-7- hidroxi-2H-cromen-2-ona (2.15 g, 10 mmol), terc-butil 2- hidroxietilcarbamato (1.9 mL, 12 mmol), trifenilfosfina (2.62 g, 10 mmol) e trietilamina (1.4 mL, 10 mmol) em THF (10 mL) a 0°C. A mistura foi aquecida até temperatura ambiente e agitada 48 h. A mistura foi filtrada. O material sólido foi lavado com éter e hexano para dar terc-butil 2-(3-acetil-2- oxo-2H-cromen-7-iloxi)etilcarbamato (1.81 g, 50%). MS m/z 348.2 [M+H]+.
[0898] Etapa C: Bromo (26 μL, 0.5 mmol) em CH2CI2 (0.5 mL) foi adicionado a uma mistura de terc-butil 2-(3-acetil-2-oxo- 2H-cromen-7-iloxi)etilcarbamato (183 mg, 0.5 mmol), CHCl3 (3.0 mL) e EtOH (1.0 mL). A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 4 h, então o solvente foi removido from a mistura. O resíduo foi submetido a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-15% MeOH em CH2Cl2 para dar terc-butil 2-(3- (2-bromoacetil)-2-oxo-2H-cromen-7-iloxi)etilcarbamato (0.108 g, 50%). MS m/z 428.1 [M+H]+.
[0899] Etapa D: Seguindo o procedimento no Exemplo 43, Etapa A, terc-butil 2-(3-(2-bromoacetil)-2-oxo-2H-cromen-7- iloxi)etilcarbamato (108 mg, 0.25 mmol) e 3,5-dimetilpirazin- 2-amina (32 mg, 0.25 mmol) em CH3CN (2.0 mL) forneceu terc- butil 2-(3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H- cromen-7-iloxi)etilcarbamato (88 mg, 80%). MS m/z 451.3 [M+H]+.
[0900] Etapa E: Seguindo o procedimento no Exemplo 69, Etapa E, terc-butil 2-(3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2- il)-2-oxo-2H-cromen-7-iloxi)etilcarbamato (88 mg, 0.20 mmol) e TFA (0.3 mL) em CH2Cl2 (0.6 mL) forneceu 7-(2-aminoetoxi)-3- (6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2H-cromen-2-ona (66 mg, 95%). MS m/z 351.2 [M+H]+.
[0901] Etapa F: Seguindo o procedimento no Exemplo 67, 7- (2-aminoetoxi)-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2H- cromen-2-ona (35 mg, 0.1 mmol), formaldeído (37% aquoso, 0.1 mL) e NaBH(OAc)3 (64 mg, 0.3 mmol) forneceu o composto do título (25 mg, 67%) como um sólido amarelo pálido: m.p. 251-253°C; MS m/z 379.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CD3OD) □ 8.79 (1H, s), 8.51 (1H, s), 8.09 (1H, m), 7.69 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.05 (1H, m), 6.99 (1H, m), 4.30 (2H, s), 3.12 (2H, br s), 2.86 (3H, s), 2.59 (6H, s), 2.45 (3H, s).
[0902] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 74 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 75 Preparação de Cpd 918
Figure img0174
[0903] Etapa A: À uma mistura de 3-acetil-7-hidroxi-2Hcromen-2-ona (2.3 g, 10 mmol), etilenoglicol (1.7 mL, 30 mmol) e trifenilfosfina (2.88 g, 11 mmol) em THF (10 mL) foi adicionado trietilamina (1.53 mL, 11 mmol). A mistura foi resfriada a 0°C. Diisopropil azodicarboxilato (2.2 mL, 11 mmol) foi adicionado gota a gota à mistura. A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante a noite, depois da qual o solvente foi removido. O resíduo foi submetido a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-45% EtOAc em CH2Cl2. O material resultante foi submetido a cromatografia em sílica gel uma segunda vez, eluíndo com 10-100% EtOAc em hexanos para fornecer 3-acetil-7-(2-hidroxietoxi)-2H-cromen-2-ona (0.50 g, 20%). MS m/z 249.1 [M+H]+.
[0904] Etapa B: Seguindo o procedimento do Exemplo 74, Etapa C, 3-acetil-7-(2-hidroxietoxi)-2H-cromen-2-ona (0.5 g, 2.0 mmol) e bromo (0.105 mL, 2.0 mmol) em CHCl3 (18 mL) e EtOH (2.0 mL) forneceu 3-(2-bromoacetil)-7-(2-hidroxietoxi)-2H- cromen-2-ona (0.26 g, 40%). MS m/z 329.0 [M+H]+.
[0905] Etapa C: Seguindo o procedimento no Exemplo 43, Etapa A, 3-(2-bromoacetil)-7-(2-hidroxietoxi)-2H-cromen-2-ona (0.26 g, 0.8 mmol) e 3,5-dimetilpirazin-2-amina (0.10 g, 0.8 mmol) em CH3CN (2.0 mL) forneceu 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2- a]pirazin-2-il)-7-(2-hidroxietoxi)-2H-cromen-2-ona (0.32 g, 88%). MS m/z 352.2 [M+H]+.
[0906] Etapa D: Cloreto de metanosulfonil (0.065 mL, 0.81 mmol) em CH2Cl2 (1.5 mL) foi adicionado gota a gota à uma solução de 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(2- hidroxietoxi)-2H-cromen-2-ona (0.29 g, 0.66 mmol) e trietilamina (0.28 mL, 1.98 mmol) em CH2Cl2 (1.5 mL) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C por 20 min, e então à temperatura ambiente por 30 min, então o solvente foi removido. O resíduo foi titulado com metanol, e então filtrado para dar 2-(3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7- iloxi)etil metanosulfonato (0.18 g, 63%). MS m/z 430.2 [M+H]+.
[0907] Etapa E: Uma mistura de 2-(3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7- iloxi)etil metanosulfonato (61 mg, 0.14 mmol) e pirrolidina (0.07 mL, 0.85 mmol) em DMF (0.3 mL) foi agitada a 60°C por 30 min. A mistura foi submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-10% MeOH em CH2Cl2 para dar o composto do título (25 mg, 40%) como um sólido amarelo pálido: m.p. 201-203°C; MS m/z 405.2 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, CD3OD) □ 8.83 (1H, m), 8.55 (1H, m), 8.11 (1H, m), 7.74 (1H, m), 7.07 (2H, m), 4.46 (2H, m), 3.75 (2H, m), 3.70 (2H, m), 3.23 (2H, m), 2.88 (3H, s), 2.46 (3H, s), 2.22 (2H, m), 2.08 (2H, m).
[0908] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 75 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 76 Preparação de Cpd 818
Figure img0175
[0909] Etapa A: Metil 2-(trifenilphosphoranilidene)acetato (1.84 g, 5.5 mmol) foi dissolvido em CHCl3 (10 mL) e resfriado até 0°C. N-Bromosuccinimida (980 mg, 5.5 mmol) foi adicionado à solução. A mistura foi aquecida até temperatura ambiente e agitada 20 min. A mistura foi concentrada. 4-Bromosalicaldeído (1.0 g, 5.0 mmol) e difenil éter (10 mL) foram adicionados ao resíduo. A mistura foi aquecida a 220°C por 3 h. A mistura foi diretamente carregada em silica gel, eluíndo com 0-30% EtOAc em hexanos para se obter 3,7-dibromo-2H-cromen-2-ona (650 mg, 43%) como um sólido branco. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.62 (1H, s), 7.78 (1H, d, J = 1.8 Hz), 7.65 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.60 (1H, dd, J = 8.3 Hz, 1.8 Hz).
[0910] Etapa B: 3,7-Dibromo-2H-cromen-2-ona (200 mg, 0.66 mmol) foi combinado com 1-Boc-piperazina (186 mg, 1.0 mmol) e trietilamina (0.18 mL, 1.3 mmol) em DMSO (1 mL). A mistura foi aquecida a 100°C por 30 min. A mistura foi dividida em CH2Cl2 (5 mL) e H2O (5 mL). A camada orgânica foi diretamente carregada em silica gel, eluíndo com 0-50% EtOAc em hexanos para se obter terc-butil 4-(7-bromo-2-oxo-2H-cromen-3- il)piperazina-1-carboxilato (80 mg, 30%) como um sólido branco. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.72 (1H, s), 7.52 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.43 (1H, dd, J = 8.4 Hz, 1.6 Hz), 7.31 (1H, d, J = 1.6 Hz), 3.81 (4H, m), 3.55 (4H, m), 1.49 (9H, s).
[0911] Etapa C: terc-butil 4-(7-bromo-2-oxo-2H-cromen-3- il)piperazina-1-carboxilato (80 mg, 0.2 mmol) foi combinado com ácido (2-metilimidazo[1,2-a]piridin-6-il)borônico (70 mg, 0.4 mmol, preparado no Exemplo 34, Etapa A) e tetraquis(trifenilfosfina) paládio(0) (23 mg, 0.02 mmol) em CH3CN (1 mL). K2CO3 aquoso (1 mL, 1 M) foi adicionado à mistura. A mistura foi aquecida sob nitrogênio a 80°C por 16 h. A camada orgânica foi removida, concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-8% MeOH em CH2Cl2 para se obter terc-butil 4-(7-(2-metilimidazo[1,2-a]piridin-6- il)-2-oxo-2H-cromen-3-il)piperazina-1-carboxilato (57 mg, 62%) como um pó branco.
[0912] Etapa D: terc-butil 4-(7-(2-metilimidazo[1,2- a]piridin-6-il)-2-oxo-2H-cromen-3-il)piperazina-1-carboxilato (57 mg, 0.12 mmol) foi dissolvido em TFA (1 mL). A mistura foi agitada por 15 min a temperatura ambiente, então o solvente foi removido com a corrente nitrogênio. O resíduo foi particionado em CH2Cl2 e K2CO3 aquoso. A camada orgânica foi coletada e concentrada para se obter o composto do título (24 mg, 50%) como um pó branco: m.p. 174-178°C; MS m/z 361.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.99 (1H, s), 8.07 (1H, s), 7.89 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.76 (1H, s), 7.74 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.68 (1H, d, J = 9.2 Hz), 7.59 (1H, d, J = 9.4 Hz), 7.47 (1H, s), 3.67 (1H, br), 3.35 (4H, m), 2.81 (4H, m), 2.37 (3H, s). Exemplo 77 Preparação de Cpd 846
Figure img0176
[0913] Etapa A: Seguindo o procedimento no Exemplo 6, Etapa A, 3-(hidroximetil)fenol (1.24 g, 100 mmol), trietilamina (70 mL, 500 mmol), cloreto de magnésio anidro (19.0 g, 200 mmol) e paraformaldeído (30 g, 1000 mmol) em CH3CN (400 mL) forneceu 2- hidroxi-4-(hidroximetil)benzaldeído (4.5 g, 29%). MS m/z 151.1 [M-H]-.
[0914] Etapa B: 2-Hidroxi-4-(hidroximetil)benzaldeído (3.04 g, 20 mmol) foi combinado com etil acetoacetato (2.55 mL, 20 mmol) e piperidina (0.2 mL, 2.0 mmol) em CH3CN (10 mL). A mistura foi aquecida a 80°C por 1 h. A mistura foi concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-50% EtOAc em hexanos para se obter 3-acetil-7-(hidroximetil)-2H- cromen-2-ona (1.88 g, 43%) como um pó castanho-amarelado. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.66 (1H, s), 7.90 (1H, d, J = 7.7 Hz), 7.36 (2H, m), 5.55 (1H, t, J = 5.8 Hz), 4.65 (2H, d, J = 5.8 Hz), 2.59 (3H, s).
[0915] Etapa C: 3-Acetil-7-(hidroximetil)-2H-cromen-2-ona (1.88 g, 8.3 mmol) foi suspenso em CHCl3 (8 mL). Bromo (0.43 mL, 8.3 mmol) foi adicionado gota a gota a temperatura ambiente, então a mistura foi agitada a temperatura ambiente por 30 min. O material sólido em uma mistura foi coletado, lavado com CHCl3 e seco para se obter 3-(2-bromoacetil)-7- (hidroximetil)-2H-cromen-2-ona (2.1 g, 85%) como um pó castanho-amarelado. MS m/z 297.1, 299.1 [M+H]+.
[0916] Etapa D: 3-(2-Bromoacetil)-7-(hidroximetil)-2H- cromen-2-ona (2.1 g, 7.0 mmol) foi combinado com 3,5- dimetilpirazin-2-amina (940 mg, 7.7 mmol) em CH3CN (10 mL). A mistura foi aquecida a 80°C por 16 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e filtrada. O material sólido foi lavado com CH3CN e seco para se obter 3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(hidroximetil)-2H-cromen- 2-ona bromidrato (1.0 g, 35%) como um pó castanho-amarelado. MS m/z 322.3 [M+H]+. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.91 (1H, s), 8.73 (1H, s), 8.45 (1H, s), 7.96 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.41 (1H, s), 7.37 (1H, d, J = 8.1 Hz), 4.65 (2H, s), 2.83 (3H, s), 2.42 (3H, s).
[0917] Etapa E: 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)- 7-(hidroximetil)-2H-cromen-2-ona bromidrato (1.0 g, 2.5 mmol) foi combinado com diisopropiletilamina (1.3 mL, 7.5 mmol) em CH2Cl2 (10 mL). À mistura foi adicionado cloreto de metanosulfonil (0.39 mL, 5 mmol) a 0°C. A mistura foi agitada 30 min a 0°C, então diretamente carregada em silica gel, eluíndo com 0-30% EtOAc em CH2Cl2 para se obter (3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)metil metanosulfonato (900 mg, 90%) como um pó branco. MS m/z 400.3 [M+H]+. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.90 (1H, s), 8.65 (1H, s), 8.36 (1H, s), 8.06 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.57 (1H, s), 7.48 (1H, d, J = 8.1 Hz), 5.41 (2H, s), 2.78 (3H, s), 2.39 (3H, s).
[0918] Etapa F: (3-(6,8-Dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)- 2-oxo-2H-cromen-7-il)metil metanosulfonato (60 mg, 0.15 mmol) foi suspenso em THF:DMF (1:1, 1 mL). Dimetilamina (0.75 mmol, 1 M em THF) foi adicionado à mistura. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 1 h, então diretamente carregada em silica gel e eluída com 0-10% MeOH (3% NH3) em CH2Cl2 para se obter o composto do título (31 mg, 59%) como um pó esbranquiçado: m.p. 192-196°C; MS m/z 349.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.88 (1H, s), 8.64 (1H, s), 8.36 (1H, s), 7.95 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.38 (1H, s), 7.35 (1H, d, J = 8.1 Hz), 3.53 (2H, s), 2.78 (3H, s), 2.38 (3H, s), 2.20 (6H, s).
[0919] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 77 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 78 Preparação de Cpd 902
Figure img0177
[0920] Etapa A: 7-Hidroxicumarina (4.86 g, 30 mmol) foi dissolvida em DMF (60 mL). Hidreto de sódio (1.8 g, 45 mmol, 60% dispersão em óleo mineral) foi adicionado à solução. Depois de 5 min de agitação vigorosa, N,N- bis(trifluormetilsulfonil)anilina (11.8 g, 33 mmol) foi adicionado à mistura. A mistura foi agitada vigorosamente por 30 min a temperatura ambiente, então água gelada (120 mL) foi adicionado. A mistura foi deixada em repouso por 30 min, então filtrada para remover o produto sólido. O sólido foi lavado com água e seco, obtendo 2-oxo-2H-cromen-7-il trifluormetanosulfonato (6.9 g, 78%) como um sólido cristalino branco. MS m/z 295.2 [M+H]+.
[0921] Etapa B: 2-Oxo-2H-cromen-7-il trifluormetanosulfonato (2.94 g, 10 mmol) foi combinado com 3- butin-1-ol (1.13 mL, 15 mmol), iodeto de cobre (I) (380 mg, 2.0 mmol), tetraquis(trifenilfosfina) paládio(0) (1.16 g, 1.0 mmol) e trietilamina (2.78 mL, 20 mmol) em DMF (30 mL). A mistura foi agitada a 60°C por 2 h, então o solvente foi removido evaporação rotativa. O resíduo foi submetido a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-20% EtOAc em CH2Cl2 para se obter 7-(4-hidroxibut-1-in-1-il)-2H-cromen-2-ona (2.1 g, quant.) como um pó castanho-amarelado. MS m/z 215.2 [M+H]+.
[0922] Etapa C: 7-(4-Hidroxibut-1-in-1-il)-2H-cromen-2-ona (1.72 g, 8 mmol) foi suspenso em MeOH (20 mL) com 10% Pd/C (300 mg). A mistura foi agitada vigorosamente sob H2 (1 atm) por 16 h, então o catalisador foi removido por filtração à vácuo. O filtrado foi concentrado para se obter 7-(4- hidroxibutil)-2H-cromen-2-ona (1.67 g, 96%) como um óleo incolor. MS m/z 219.2 [M+H]+.
[0923] Etapa D: 7-(4-Hidroxibutil)-2H-cromen-2-ona (1.67 g, 7.6 mmol) foi dissolvido em AcOH (20 mL). Acetato de sódio (1.87 g, 22.8 mmol) e bromo (1.18 mL, 22.8 mmol) foram adicionados sequencialmente. A mistura foi agitada a 40°C por 2 h., então o solvente foi removido evaporação rotativa. MeOH (10 mL) e trietilamina (1 mL) foram adicionados ao resíduo e a mistura foi agitada a 70°C por 10 min. O solvente foi removido evaporação rotativa, então o resíduo foi particionado em água e CH2Cl2. A camada orgânica foi coletada, concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 20-80% EtOAc em hexanos para se obter 3-bromo-7-(4-hidroxibutil)-2H- cromen-2-ona (1.2 g, 53%) como um pó branco. MS m/z 297.1, 299.1 [M+H]+.
[0924] Etapa E: 3-Bromo-7-(4-hidroxibutil)-2H-cromen-2-ona (1.2 g, 4 mmol) foi combinado com tributil(1- etoxivinil)estanano (1.8 g, 5 mmol), iodeto de cobre (I) (190 mg, 1 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina) paládio(0) (462 mg, 0.4 mmol) em 1,4-dioxano (20 mL). A mistura foi agitada a 60°C por 4 h, então o solvente foi removido evaporação rotativa. O resíduo foi submetido a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 20-50% EtOAc em hexanos para se obter 3-(1-etoxivinil)-7- (4-hidroxibutil)-2H-cromen-2-ona (860 mg, 75%) um óleo sem cor. MS m/z 261.2 [M+H]+ (hidrólise durante análise de UPLC/MS forneceu a massa de 3-acetil-7-(4-hidroxibutil)-2H-cromen-2- ona).
[0925] Etapa F: 3-(1-Etoxivinil)-7-(4-hidroxibutil)-2H- cromen-2-ona (860 mg, 3.0 mmol) foi dissolvido em THF (12 mL) e H2O (3 mL). N-Bromosuccinimida (587 mg, 3.3 mmol) foi adicionado à mistura. Depois de 10 min, THF foi removido com a corrente de nitrogênio. O resíduo foi suspenso em H2O (10 mL) e filtrado. O sólido coletado foi lavado com H2O e seco obtendo 3-(2-bromoacetil)-7-(4-hidroxibutil)-2H-cromen-2-ona (1.0 g, 99%) como um sólido castanho-amarelado. MS m/z 339.1, 341.1 [M+H]+.
[0926] Etapa G: Seguindo o procedimento no Exemplo 77, Etapa D, 3-(2-bromoacetil)-7-(4-hidroxibutil)-2H-cromen-2-ona (1.0 g, 3.0 mmol), 3,5-dimetilpirazin-2-amina (403 mg, 3.3 mmol) em CH3CN (10 mL) gerou 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2- a]pirazin-2-il)-7-(4-hidroxibutil)-2H-cromen-2-ona bromidrato (880 mg, 66%) como um pó castanho-amarelado. MS m/z 364.2 [M+H]+.
[0927] Etapa H: Seguindo o procedimento no Exemplo 77, Etapa E, 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-(4- hidroxibutil)-2H-cromen-2-ona bromidrato, diisopropiletilamina (1.3 mL, 7.5 mmol) e cloreto de metanosulfonil (0.39 mL, 5 mmol) em CH2Cl2 (10 mL) gerou 4-(3-(6,8-dimetilimidazo[1,2- a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)butil metanosulfonato (705 mg, 80%) como um sólido amarelo pálido. MS m/z 442.2 [M+H]+.
[0928] Etapa I: Seguindo o procedimento no Exemplo 77, Etapa F, 4-(3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo- 2H-cromen-7-il)butil metanosulfonato (36 mg, 0.08 mmol), dimetilamina (2 mmol, 2 M em THF) em DMF (1 mL) gerou o composto do título (27 mg, 86%) como um pó esbranquiçado: m.p. 190-193°C; MS m/z 391.5 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 8.86 (1H, s), 8.62 (1H, s), 8.35 (1H, s), 7.90 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.32 (1H, s), 7.27 (1H, d, J = 7.9 Hz), 2.78 (3H, s), 2.73 (2H, t, J = 6.9 Hz), 2.38 (3H, s), 2.22 (2H, t, J = 6.9 Hz), 2.10 (6H, s), 1.64 (2H, p, J = 7.5 Hz), 1.43 (2H, p, J = 7.5 Hz).
[0929] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 78 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 79 Preparação de Cpd 908
Figure img0178
[0930] Etapa A: Seguindo o procedimento no Exemplo 78, Etapa B, 2-oxo-2H-cromen-7-il trifluormetanosulfonato (4.2 g, 14.3 mmol, preparado no Exemplo 78, Etapa A) propargil álcool (1.13 mL, 21.4 mmol), iodeto de cobre (I) (266 mg, 1.4 mmol), tetraquis(trifenilfosfina) paládio(0) (1.62 g, 1.4 mmol) e trietilamina (2.98 mL, 21.5 mmol) em DMF (30 mL) gerou 7-(3- hidroxiprop-1-in-1-il)-2H-cromen-2-ona (1.5 g, 52%) como um pó castanho-amarelado. MS m/z 201.1 [M+H]+.
[0931] Etapa B: Seguindo o procedimento no Exemplo 78, Etapa C, 7-(3-hidroxiprop-1-in-1-il)-2H-cromen-2-ona (1.5 g, 8 mmol), 10% Pd/C (200 mg) em MeOH (20 mL) gerou 7-(3- hidroxipropil)-2H-cromen-2-ona (1.5 g, quant.) como um pó branco. MS m/z 205.2 [M+H]+.
[0932] Etapa C: Seguindo o procedimento no Exemplo 78, Etapa D, 7-(3-hidroxipropil)-2H-cromen-2-ona (1.5 g, 7.3 mmol), acetato de sódio (1.74 g, 21.2 mmol) e bromo (1.1 mL, 21.2 mmol) em AcOH (20 mL) gerou 3-bromo-7-(3-hidroxipropil)- 2H-cromen-2-ona (595 mg, 29%) como um pó branco. MS m/z 283.1, 285.1 [M+H]+.
[0933] Etapa D: 3-bromo-7-(3-hidroxipropil)-2H-cromen-2-ona (142 mg, 0.5 mmol) foi combinado com ácido (2- metilimidazo[1,2-a]piridin-6-il)borônico (132 mg, 0.75 mmol, preparado no Exemplo 34, Etapa A) e tetraquis(trifenilfosfina) paládio(0) (58 mg, 0.05 mmol) em CH3CN (2 mL). K2CO3 aquoso (2 mL, 1 M) foi adicionado à mistura. A mistura foi aquecida sob nitrogênio a 80°C por 2 h. A camada orgânica foi removida, concentrada e submetida a cromatografia em sílica gel, eluíndo com 0-8% MeOH em CH2Cl2 para se obter 7-(3-hidroxipropil)-3-(2- metilimidazo[1,2-a]piridin-6-il)-2H-cromen-2-ona (65 mg, 39%) como um pó castanho-amarelado. MS m/z 335.2 [M+H]+.
[0934] Etapa F: Seguindo o procedimento no Exemplo 77, Etapa E, 7-(3-hidroxipropil)-3-(2-metilimidazo[1,2-a]piridin- 6-il)-2H-cromen-2-ona (65 mg, 0.2 mmol), diisopropiletilamina (0.15 mL, 0.8 mmol) e cloreto de metanosulfonil (30 μL, 0.4 mmol) em CH2Cl2 (2 mL) gerou 3-(3-(2-metilimidazo[1,2- a]piridin-6-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il)propil metanosulfonato (35 mg, 47%) como um pó castanho-amarelado. MS m/z 413.3 [M+H]+.
[0935] Etapa G: Seguindo o procedimento no Exemplo 77, Etapa F, 3-(3-(2-metilimidazo[1,2-a]piridin-6-il)-2-oxo-2H- cromen-7-il)propil metanosulfonato (35 mg, 0.08 mmol), dimetilamina (2 mmol, 2 M em THF) em THF (1 mL) gerou o composto do título (22 mg, 76%) como um pó esbranquiçado: m.p. 176-178°C; MS m/z 362.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d β): δ 9.01 (1H, s), 8.38 (1H, s), 7.80 (1H, s), 7.70 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.54 (2H, m), 7.34 (1H, s), 7.28 (1H, d, J = 7.9 Hz), 2.73 (2H, t, J = 7.1 Hz), 2.36 (3H, s), 2.22 (2H, t, J = 7.1 Hz), 2.13 (6H, s), 1.76 (2H, p, J = 7.3 Hz).
[0936] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 79 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 80 Preparação de Cpd 927
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[0937] 3-(3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2-oxo- 2H-cromen-7-il)propil metanosulfonato (300 mg, 0.70 mmol, preparado de acordo com Exemplo 77) foi combinado com azida de sódio (57 mg, 0.88 mmol) em DMF (5 mL). A mistura foi aquecida a 70°C por 2h. Trifenilfosfina (367 mg, 1.4 mmol) e H2O (63 μL, 3.5 mmol) foram adicionados à solução. A mistura foi agitada por 1 h adicional a 70°C, então diretamente carregada em silica gel, eluíndo com 9.7:0.3:90 MeOH:NH3:CH2Cl2 para se obter o composto do título (160 mg, 66%) como um pó esbranquiçado: m.p. 212-216°C; MS m/z 349.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.83 (1H, s), 8.60 (1H, s), 8.33 (1H, s), 7.88 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.32 (1H, s), 7.26 (1H, d, J = 7.9 Hz), 2.77 (3H, s), 2.75 (2H, t, J = 6.9 Hz), 2.57 (2H, t, J = 6.9 Hz), 2.37 (3H, s), 1.70 (2H, p, J = 7.5 Hz). Exemplo 81 Preparação de Cpd 933
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[0938] 7-(3-aminopropil)-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2- a]pirazin-2-il)-2H-cromen-2-ona (40 mg, 0.11 mmol, preparado no Exemplo 80) foi suspenso em 1,2-dicloroetano (1 mL) e EtOH (0.5 mL). À mistura foi adicionado benzaldeído (122 μL, 1.2 mmol) e triacetoxiborohidreto de sódio (47 mg, 0.22 mmol). A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 16 h, então diretamente carregada em silica gel, eluíndo com 2-8% MeOH (3% NH3) em CH2Cl2 para se obter o composto do título (28 mg, 65%) como um pó castanho-amarelado: m.p. 143-147°C; MS m/z 439.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.85 (1H, s), 8.62 (1H, s), 8.35 (1H, s), 7.88 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.34-7.19 (7H), 3.69 (2H, s), 2.78 (3H, s), 2.75 (2H, m), 2.52 (2H, m), 2.38 (3H, s), 1.79 (2H, p, J = 6.7 Hz).
[0939] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 81 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 82 Preparação de Cpd 943
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[0940] Uma mistura de 7-bromo-3-(6,8-dimetilimidazo[1,2- a]pirazin-2-il)-2H-cromen-2-ona (74.4 mg, 0.2 mmol, preparado no Exemplo 48, Etapa A), dicloridrato de 3- (dimetilamino)azetidina (69.2 mg, 0.4 mmol), bis(dibenzilideneacetona)paládio(0) (11.5 mg, 0.02 mmol), RuPhos (9.3 mg, 0.02 mmol), BrettPhos (10.7 mg, 0.02 mmol) e Cs2CO3 (228.1 mg, 0.7 mmol) em tolueno (0.2 mL) e t-butanol (0.2 mL) foi aquecida a 100°C por 5 h. O solvente foi removido por evaporação rotativa, então o resíduo foi suspenso em dietil éter e filtrado. O sólido foi lavado minuciosamente com água e seco para se obter o composto do título (59.5 mg, 76%) como um sólido amarelo: m.p. 246-250°C; MS m/z 390.3 [M+H]+; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.72 (1H, s), 8.50 (1H, s), 8.32 (1H, s), 7.74 (1H, d, J = 8.6 Hz), 6.47 (1H, dd, J = 8.6 Hz, 2.2 Hz), 6.35 (1H, d, J = 1.9 Hz), 4.05 (2H, m), 3.78 (2H, m), 3.27 (1H, m), 2.75 (3H, s), 2.37 (3H, s), 2.15 (6H, s). Exemplo 83 Preparação de Cpd 971
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[0941] Etapa A: ácido 6-[3-(6,8-Dimetil-imidazo[1,2- a]pirazin-2-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il]-2,6-diaza- spiro[3.3]heptano-2-carboxilico terc-butil ester (49 mg, 0.100 mmol, preparado de acordo com Exemplo 43) foi agitada em CH2Cl2 (5 mL) com trifluorácido acético (1.25 mL) a temperatura ambiente por 2 h, então o solvente foi removido in vácuo. O resíduo foi particionado em CH2Cl2/MeOH (9/1) e uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (1 M, 5 mL). A fase orgânica foi seca sobre Na2SO4 e purificada por cromatografia em sílica gel (CH2Cl2/MeOH 95/5, 1% aq. NH3) para dar o composto do título (33 mg, 85%) como um sólido amarelo. MS m/z 388.3 [M+H]+. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.91 (1H, d, J = 1.2Hz), 8.30 (1H, s), 7.91 (1H, d), 7.53 (1H, d), 7.48 (1H, d), 6.48 (1H, dd), 6.40 (1H, d), 4.14 (4H, s), 4.06 (4H, s), 2.36 (3H, s).
[0942] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 83 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. Exemplo 84 Preparação de Cpd 985
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[0943] Etapa A: 3-fluorpiridin-2-amina (5.0 g, 45 mmol) foi combinado com N-bromosuccinimida (8.0 g, 45 mmol) em CH3CN. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 30 min. Cloroacetona (4.3 mL, 54 mmol) foi adicionado à mistura, que foi aquecida a 100°C, permitindo a evaporação do CH3CN. Depois de 1h, a temperatura foi depois aumentada para 120°C por 2 h. A mistura foi solidificada sob resfriamento. O material sólido foi dissolvido em H2O (50 mL) e uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (100 mL) foi adicionada. Um precipitado se formou, e foi coletado por filtração à vácuo. O material sólido foi lavado com H2O e vácuo seco. O material foi submetido a cromatografia em sílica gel (0-30% EtOAc em CH2Cl2), fornencendo o composto do título como um pó castanho-amarelado (4.65 g, 45%). MS m/z 229.2 [M+H]+.
[0944] Etapa B: Uma mistura de 6-bromo-8-fluor-2-metil- imidazo[1,2-a]piridina (500 mg, 2.18 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (665 mg, 2.62 mmol), complexo de [1,1'- bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloro-paládio(II) com diclorometano (89.1 mg, 0.109 mmol), e acetato de potássio (643 mg, 6.55 mmol) em 1,4-dioxano (4.4 mL) foi agitada a 80°C durante a noite sob argônio. A mistura foi diluída com THF (12 mL) e filtrada. O filtrado foi concentrado para dar a resíduo sólido escuro, o qual foi usado sem purificação adicional. O resíduo foi combinado com 3-bromo-7-fluor-2H-cromen-2-ona (250 mg, 1.03 mmol, preparado no Exemplo 32, Etapa A), complexo de [1,1‘-bis(difenilfosfino)-ferroceno]dicloropaládio(II) com diclorometano (84 mg, 0.101 mmol) e K2CO3 aquoso (2.0 M x 1.55 mL, 3.09 mmol) em CH3CN (3.5 mL). A mistura foi agitada a 60°C por 5 h sob argônio, então resfriada até temperatura ambiente, diluído com água e filtrada. O sólido foi dissolvido em CH2Cl2 (10% metanol), seca sobre Na2SO4, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia em sílica gel (0-5% MeOH em CH2Cl2) para dar 7-fluor-3-(8-fluor-2-metil-imidazo[1,2- a]piridin-6-il)-cromen-2-ona (286 mg, 89%) como um sólido marrom.
[0945] Etapa C: Uma mistura de 7-fluor-3-(8-fluor-2-metil- imidazo[1,2-a]piridin-6-il)-cromen-2-ona (87 mg, 0.279 mmol), trietil amina (0.14 mL, 1.00 mmol) e terc-butil 2,6- diazaspiro[3.3]heptano-2-carboxilato hemioxalato (158 mg, 0.325 mmol) em DMSO (1 mL) foi agitada a 100°C por 20 h. A mistura foi diluída com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 e filtrada. O sólido foi seco e purificado por cromatografia em sílica gel (0-10% MeOH em CH2Cl2) para dar ácido 6-[3-(8-Fluor- 2-metil-imidazo[1,2-a]piridin-6-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il]-2,6- diazaspiro[3.3]heptano-2-carboxilico terc-butil éster como um sólido amarelo.
[0946] Etapa D: ácido 6-[3-(8-Fluor-2-metil-imidazo[1,2- a]piridin-6-il)-2-oxo-2H-cromen-7-il]-2,6-diazaspiro[3.3] heptano-2-carboxilico terc-butil ester (136 mg, 0.27 mmol) foi agitada em CH2Cl2 (3 mL) com trifluorácido acético (0.5 mL) a temperatura ambiente por 2 h, então o solvente foi removido in vácuo. O resíduo foi particionado em CH2Cl2/MeOH (9/1) e uma solução aquosa NaHCO3 (1 M, 5 mL). A fase orgânica foi seca sobre Na2SO4, concentrada e purificada por cromatografia em sílica gel (CH2Cl2/MeOH 80/20, 1% aq. NH3) para dar o produto do título (32 mg, 29%) como um sólido amarelo. MS m/z 391.7 [M+H]+. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.71 (1H, s), 8.42 (1H, s), 7.75 (1H, s), 7.45 (1H, d, J = 8.7 Hz), 6.36 (1H, dd, J = 8.7 Hz, J = 2.1 Hz), 6.28 (1H, d, J = 2.1 Hz), 4.10 (4H, s), 3.48 (4H, s), 2.90 (3H, s), 2.17 (3H, s).
[0947] Como mostrado na Tabela 1 abaixo, Compostos adicionais descritos aqui podem ser preparados de acordo com Exemplo 84 por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados.
[0948] A Tabela 1 apresenta Compostos isolados de uma forma de base livre de um Composto de Fórmula (I) que pode ser preparado de acordo com os procedimentos dos exemplos indicados por substituição dos materiais de partida, reagentes e condições de reação apropriados. A preparação de qualquer sal, isotopólogo, estereoisômero, racemato, enantiômero, diasteroisômero ou tautômero de uma forma de base livre de um Composto de Fórmula (I) também está contemplada e incluída dentro do âmbito da presente descrição. Onde a forma de base livre do Composto não foi isolada a partir da forma de sal, uma pessoa com conhecimentos correntes na arte poderia ser esperada a realizar as reações necessárias para se preparar e isolar a forma de base livre do Composto.
[0949] O termo "Cpd" representa o número do Composto, o termo "Ex" representa "Número do Exemplo" (em que * indica que o Exemplo correspondente para o Composto é fornecido acima), o termo "P.F." representa "Ponto de Fusão (oC)”, o termo "M.S." representa "Pico de Espectroscopia de Massa (s) m/z [m+H]+/-", o termo "D" representa "decomposição/decomposto", o termo "ID" representa "Intervalo de Decomposição," o termo "S" representa "Suaviza", o termo "ND" indica que o valor foi "Não Determinado" e o termo "NI" indica que o Composto foi "Não Isolado."
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[0950] ou um seu sal, isotopólogo, estereoisômero, racemato, enantiômero, diasteroisômero ou tautômero.
[0951] A Tabela 2 proporciona ainda certos Compostos isolados de uma forma de sal de um Composto de Fórmula (I) que podem ser preparados com os procedimentos dos Exemplos indicados usando os reativos, reagentes e condições de reação apropriados. A preparação de qualquer base livre, isotopólogo, estereoisômero, racemato, enantiômero, diasteroisômero ou tautômero de uma forma de sal de um Composto de Fórmula (I) também está contemplada e incluída no âmbito da presente descrição. Onde a forma de base livre do Composto não foi isolada a partir da forma de sal, uma pessoa com conhecimentos na arte poderia ser esperado para realizar as reações necessárias para se preparar e isolar a forma de base livre do Composto.
[0952] O termo "Cpd" representa o número do Composto, o termo "Ex" representa "Número do Exemplo" (em que * indica que o Exemplo correspondente para o Composto é fornecido acima), o termo "P.F." representa "Ponto de Fusão (oC)”, o termo "M.S." representa "Pico de Espectroscopia de Massa (s) m/z [m+H]+/-", o termo "D" representa "decomposição/decomposto", o termo "ID" representa "Intervalo de Decomposição," o termo "S" representa "Suaviza", o termo "ND" indica que o valor foi "Não Determinado" e o termo "NI" indica que o Composto foi "Não Isolado."
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[0953] ou uma base livre, isotopólogo, estereoisômero, racemato, enantiômero, diasteroisômero ou tautômero destes.
EXEMPLOS BIOLÓGICOS
[0954] Para descrever em mais detalhes e auxiliar a compreensão da presente descrição, os seguintes exemplos biológicos não limitativos são apresentados para ilustrar mais completamente o escopo da descrição e não são para ser interpretados como especificamente limitativos do seu escopo. Tais variações da presente descrição, que podem ser agora conhecidos ou mais tarde desenvolvidos, que estariam ao alcance de um perito na arte determinar, são considerados como dentro do âmbito da presente descrição e tal como a seguir reivindicado. Estes exemplos ilustram o teste de certos compostos aqui descritos, in vitro e/ou in vivo e demonstra a utilidade dos compostos para o tratamento de AME, aumentando a inclusão do éxon 7 de NMS2 em mRNA transcrito a partir do gene NMS2. Compostos de Fórmula (I) aumentam a inclusão de éxon 7 de NMS2 em mRNA transcrito a partir do gene NMS2 e aumentam os níveis de proteína Nms produzidos a partir do gene NMS2, e, assim, podem ser usados para tratar AME num sujeito humano com necessidade do mesmo.
Exemplo 1 Construção Minigene NMS2
[0955] Preparação das construções de minigene
[0956] DNA correspondente à região do gene NMS2 começando a partir da extremidade 5' do éxon 6 (ATAATTCCCCC) (SEQ ID NO. 14) e terminando no resíduo ácido nucleico 23 do éxon 8 (CAGCAC) (SEQ ID NO. 15) foi amplificada pela PCR utilizando os seguintes iniciadores:
[0957] Iniciador direto: 5'-CGCGGATCCATAATTCCCCCACCACCTC-3'(SEQ ID NO 16.)
[0958] Iniciador inverso: 5'-CGCGGATCCGTGCTGCTCTATGCCAGCA-3'(SEQ ID NO 17.)
[0959] A extremidade 5' de cada iniciador foi concebida para adicionar um local de reconhecimento da endonuclease de restrição BamHI, tanto a extremidade 5' do éxon 6 (GGATCC) (SEQ ID NO. 18) e a extremidade 3' após o nucleotídeo 23 do éxon 8. Usando o sítios de reconhecimento de endonucleases de restrição BamHI, o fragmento de PCR foi clonado em um derivado do pcDNA inicial 3,1/vetor Hygro, que foi modificado como revelado na Patente US2005/0048549.
[0960] Novos UTRs foram adicionados ao vetor modificado utilizando o sítio Hindi II e os locais de restrição BamHI que compreendem um 5'DEG UTR: 5'-TAGCTTCTTACCCGTACTCCACCGTTGGCAGCACGATCGCACGTCCCACGTGAACCATTGGT AAACCCTG-3'(SEQ ID NO 19) foi clonado no pcDNA3.1 modificado/vetor Hygro junto com um códon de iniciação a montante do sítio de restrição BamHI; e
[0961] um 3'DEG UTR: 5'-ATCGAAAGTACAGGACTAGCCTTCCTAGCAACCGCGGGCTGGGAGTCTGAGACATCACTCAA GATATATGCTCGGTAACGTATGCTCTAGCCATCTAACTATTCCCTATGTCTTATAGGG- 3'(SEQ ID NO. 20) foi clonado no pcDNA3.1 modificado/vetor Hygro utilizando o local de reconhecimento de endonuclease derestrição Notl e o local de reconhecimento de endonuclease de restrição de Xhol com um códon de parada imediatamente a jusante do local de restrição Notl. Além disso, um gene de luciferase sem o seu códon de iniciação, foi clonado no vetor, utilizando os locais de restrição BamHI e NotI.
[0962] O minigene resultante compreende, na orientação 5' para 3': a 5'-DEG-UTR, o códon de iniciação, seis nucleotídeos adicionais que formam um sítio de restrição BamHI, os resíduos de ácido nucleico no éxon 6, os resíduos de ácido nucleico do íntron 6 de NMS2, os resíduos de ácido nucleico do éxon 7 de NMS2, os resíduos de ácido nucleico do íntron 7 de NMS2 e os primeiros 23 resíduos de ácido nucleico do éxon 8 de NMS2, um período adicional de seis nucleotídeos que formam um sítio de restrição BamHI e o gene da luciferase que falta o códon de iniciação.
[0963] Um único resíduo de adenina é inserido após o nucleotídeo 48 do éxon 7 de NMS2 por mutagênese dirigida ao local. Esta construção minigene é referido como NMS2-A.
[0964] Transcritos de NMS2 derivados de minigenes contendo o éxon 6 a 8 e os íntrons intervenientes recapitulam a uniã dos seus pré-mRNA endógenos (Lorson et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1999, 96 (11), 6307). Uma construção relatora da união de NMS2 alternativa, que contém éxons 6 a 8 e os íntrons intervenientes seguidos de um gene luciferase relator foi gerado. Características notáveis desta construção são a ausência do códon de iniciação do gene da luciferase, a inativação do códon de terminação (no quadro de leitura aberta que codifica a proteína de NMS) do éxon 7 por meio da inserção de um nucleotídeo após ácido nucleico 48 de éxon 7 e adição de um códon de iniciação (ATG) imediatamente a montante do éxon 6. Uma única adenina (NMS2-A) foi inserida depois do resíduo nucleico 48 do éxon 7.
[0965] O minigene NMS2 foi concebido de tal modo que o relator da luciferase é em quadro com o códon de iniciação ATG imediatamente a montante do éxon 6, quando o éxon 7 está presente no mRNA e o relator da luciferase está fora do quadro com o códon de iniciação ATG imediatamente a montante do éxon 6, se éxon 7 de NMS2 é removido durante do pré-mRNA. Além disso, na ausência de éxon 7, o quadro de leitura aberto que começa a partir do códon de iniciação ATG imediatamente a montante do éxon 6, contém um códon de parada no fragmento do éxon 8 de NMS. Assim, na Presença de compostos que aumentam a inclusão do éxon 7 do NMS2 em mRNA transcrito do gene NMS2, mais transcrições contendo éxon 7 e mais relatores funcionais são produzidos. Uma ilustração esquemática da presente descrição pode ser encontrada na Figura 1.
[0966] A sequência de DNA do minigene a partir da construção NMS2-A de SEQ ID NO. 21 está representado na Figura 2a. A imagem das subsequencias do Minigene NMS2-A é mostrada na Figura 2b.
Exemplo 2 Ensaio de RT-qPCR do Minigene NMS2 de união de mRNA em células cultivadas
[0967] O ensaio com base em PCR (RT-qPCR) de transcrição- quantitativa reversa é usado para quantificar o nível de todo o comprimento do mRNA minigene NMS2 contendo éxon 7 NMS2 em uma linha de células HEK293H transfectadas de forma estável com um referido minigene e tratado com um composto de teste.
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[0968] Protocolo. As células HEK293H transfectadas de forma estável com a construção minigene NMS2-A descrito acima (10000 células/poço) são semeadas em 200 μL de meio de cultura celular (DMEM mais 10% de FBS, com 200 μL/mL de higromicina) em placas de 96 poços de fundo plano e a placa é imediatamente agitada para assegurar a dispersão adequada de células, que formam uma monocamada de células ímpar. As células são deixadas ligadas durante pelo menos 4 a 6 horas. Compostos teste são diluídos em série 3,16 vezes em 100% DMSO para gerar uma curva de concentração de 7 pontos. Uma solução de compost de teste (1 μL, 200x em DMSO) é adicionada a cada poço contendo-célula e a placa é incubada por 24 horas numa incubadora de cultura de células (37°C, 5% de CO2, 100% de umidade relativa). 2 repetições são preparadas para cado ensaio de concentração do Composto. As células são então lisadas em tampão de lise Cells-To-Ct e o lisado é armazenado a -80°C.
[0969] Minigene NMS2-A de comprimento total e mRNA GAPDH são quantificados utilizando os seguintes iniciadores e ensaios previstos na Tabela 3. Iniciador NMS Direto A (SEQ ID NO. 1) hibridiza à sequência de nucleotídeos no éxon 7 (nucleotídeo 22 ao nucleotídeo 40), iniciador NMS Reverso A (SEQ ID NO 2.) hibridiza à sequência de nucleotídeos na sequência de codificação de luciferase Firefly, Ensaio NMS A (SEQ ID NO 3.) hibridiza uma sequência de nucleotídeo no éxon 7 (nucleotídeo 50 até ao nucleotídeo 54) e o éxon 8 (nucleotídeo 1 a nucleotídeo 21). A combinação destes três oligonucleotídeos detecta apenas minigenes NMS1 ou NMS2 (RT- qPCR) e não vai detectar genes NMS1 ou NMS2 endógenos.Tabela 3
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[0970] 1Iniciadores e ensaios projetados por PTC Therapeutics, Inc.; 2Comercialmente disponível da Life Technologies, Inc. (anteriormente Invitrogen).
[0971] Os iniciadores NMS diretos e reversos são utilizados na final de concentração de 0,4 μM. O ensaio NMS é utilizada a uma concentração final de 0,15 μM. Os iniciadores GAPDH são utilizados na concentração final de 0,2 μM e o ensaio a 0,15 μM.
[0972] A mistura GAPDH minigene-NMS2 (15 μL de volume total) é preparado por combinação de 7,5 μL de 2x tampão RT- PCR, 0,4 μL de 25x mistura enzimática de RT-PCR, 0,75 μL de 20x GAPDH mistura de iniciador-ensaio, 4,0075 μL de Água, 2 μL de 10-vezes lisado celular diluído, 0,06 μL de 100 μM NMS iniciador NMS direto, 0,06 μL de 100 μM iniciador NMS reverso e 0,225 μL de 100 μM ensaio NMS.
[0973] PCR é realizado às temperaturas a seguir durante o tempo indicado: Etapa 1: 48°C (15 min); Etapa 2: 95°C (10 min); Etapa 3: 95°C (15 seg); Etapa 4: 60°C (1 min); então repetir etapas 3 e 4 para um total de 40 ciclos.
[0974] Cada mistura reacional contém minigene NMS2-A e iniciadores/ensaio GAPDH (múltiplo design), que permite a medição simultânea de níveis de duas transcrições.
[0975] Dois NMS produtos NMS unidos são gerados a partir do minigene NMS2. O primeiro produto unido contendo éxon 7, correspondente ao comprimento inteiro mRNA NMS2, é chamado NMS2mini FL. O segundo com falta de éxon 7 é chamado NMS2mini Δ7.
[0976] O aumento de mRNA NMS2miniFL relativo à aquelas em células de controle de veículo é determinado a partir dos dados de PCR em tempo real, usando um método modificado ΔΔCt (como descrito em Livak and Schmittgen, Methods, 2001, 25: 402-8). A eficiência de amplificação E é calculado a partir do declive da curva de amplificação por NMS2miniFL e GAPDH individualmente. As abundâncias de NMS2miniFL e GAPDH são então calculados como (1 + E)-Ct, onde Ct é o valor limite para cada amplicon. A abundância de NMS2miniFL é normalizado para abundância GAPDH. A abundância normalizada NMS2miniFL de amostras tratadas com composto de teste é dividida, então, pela abundância normalizada NMS2miniFL a partir de células tratadas com o veículo para determinar o nível de mRNA NMS2 FL relativa ao veículo de controle.
[0977] Resultados. Como pode ser visto na Figura 3, as células tratadas com Composto 35 (Figura 3a) e Composto 626 (Figura 3b) aumentou mRNA NMS2mini FL em baixas concentrações. Os dois compostos de teste restaurou totalmente a inclusão éxon 7 em relação às células não tratadas.
[0978] Para Compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua descritos aqui, a Tabela 4 fornece a EC1.5x para a produção de mRNA NMS2 de comprimento completo que foi obtido a partir dosdados de concentração de 7 pontos gerados para cada composto teste de acordo com o procedimento do Exemplo Biológico 2. o termo "EC1.5x para a produção de mRNA NMS2 de comprimento completo "é definido como a concentração do composto de teste que é eficaz no aumento da quantidade de mRNA NMS2 de comprimento completo um nível de 1,5 vezes maior em relação à aquela em células tratadas com o veículo. Um EC1.5x para a produção de mRNA NMS2 de comprimento completo entre> 3 μM e < 30 μM é indicado por um asterisco (*), um ECi.5x entre >1 μM e < 3 μM é indicado por duas estrelas (**), um EC1.5x entre >0,3 μM e - 1 μM é indicado por três estrelas (***), uma ECi.5x entre >0,1 μM e - 0,3 μM é indicado por quatro estrelas (****) e um ECi.5x - 0,1 μM é indicado por cinco estrelas (*****).
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Exemplo 3 Ensaio de união endógeno NMS2 mRNA por RT-qPCR em células cultivadas
[0979] O ensaio com base em PCR (RT-qPCR) de transcrição- quantitativa reversa é utilizado para quantificar os níveis de todo o comprimento e mRNA NMS2 Δ7 em células primárias e linhas de células contendo o gene NMS2 tratado com um composto teste.
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[0980] Protocolo. Células do paciente AME GM03813 (5.000 células/poço) são semeadas em 200 μL de meio de cultura celular (DMEM mais 10% de FBS) em placas de 96 poços de fundo plano e a placa foi imediatamente agitada para assegurar a dispersão adequada de células, formando monocamada par de células. As células são deixadas ligadas durante pelo menos 4 a 6 horas. Compostos teste são diluídos em série 3,16 vezes em DMSO a 100% de para gerar uma curva de concentração de 7 pontos. Uma solução de composto de teste (1 μL, 200 x em DMSO) é adicionada a cada poço de teste e 1 μL de DMSO são adicionados a cada poço de controle. A placa é incubada por 24 horas numa incubadora de cultura de células (37°C, 5% de CO2,100% de umidade relativa). As células são então lisadas em tampão de lise Cells-To-Ct e o lisado é armazenado a -80°C.
[0981] Produtos de união NMS2-específicos e de mRNA GAPDHsão identificados usando os seguintes iniciadores e ensaios na Tabela 5. Iniciador NMS FL Direto B (SEQ ID NO 7.) hibridiza uma sequência de nucleotídeo no éxon 7 (nucleotídeo 32 ao nucleotídeo 54) e o éxon 8 (nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 4), iniciador NMS Δ7 Direto B (SEQ ID NO 8.) hibridiza uma sequência de nucleotídeo no éxon 6 (nucleotídeo 87 ao nucleotídeo 111) e o éxon 8 (nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 3), iniciador NMS Reverso B (SEQ ID No. 9) hibridiza à sequência de nucleotídeos no éxon 8 (nucleotídeo 39 ao nucleotídeo 62), ensaio NMS Ensaio B (SEQ ID NO. 10) hibridiza à sequência de nucleotídeos no éxon 8 (nucleotídeo 7 ao nucleotídeo 36). Estes iniciadores e ensaio hibridizam com sequências de nucleotídeos comuns para mRNAs NMS1 e NMS2 humano. Uma vez que as células do paciente AME utilizados no Exemplo 3 contêm apenas o gene NMS2, RT-qPCR pode quantificar apenas NMS2 de comprimento completo e mRNA Δ7.
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[0982] 1Iniciadores e ensaios projetados por PTC Therapeutics, Inc.; 2Comercialmente disponível da Life Technologies, Inc. (anteriormente Invitrogen).
[0983] Os iniciadores NMS direto e reverso são utilizados em concentrações finais de 0,4 μM. O ensaio NMS é utilizada a uma concentração final de 0,15 μM. Iniciadores GAPDH são utilizados nas concentrações finais de 0,1 μM e o ensaio a 0,075 μM. Ensaios de expressão gênica TaqMan foram conduzidos em concentrações 20X com os iniciadores GAPDH e ensaio marcada Vic fornecidos como uma mistura de 20X. O kit de RT-PCR de uma-Etapa foi usado como o Mistura PCR em Tempo Real.
[0984] A mistura NMS-GAPDH (volume total de 10 μL) é preparada por combinação de 5 μL de 2x tampão de RT-PCR, 0,4 μL de 25x mistura enzimática de RT-PCR, 0,25 μL de 20x mistura de iniciador-ensaio GAPDH, 1,755 μL água, 2,5 μL de lisado celular, 0,04 μL de 100 μM NMS FL ou iniciador NMS Δ7 direto, 0,04 μL de 100 μM iniciador NMS reverso e 0.015 μL de 100μM ensaio.
[0985] PCR é realizado com as seguintes temperaturas para tempo indicado: Etapa 1: 48°C (15 min); Etapa 2: 95°C (10 min); Etapa 3: 95°C (15 seg); Etapa 4: 60°C (1 min); então, repita etapas 3 e 4 para um total de 40 ciclos.
[0986] Cada mistura reacional contém tanto iniciadores/configuração ensaio NMS2 FL e GAPDH ou NMS2 Δ7 e GAPDH (múltiplo design), que permite a medição simultânea de níveis de duas transcrições.
[0987] O gene NMS2 endógeno dá origem a dois mRNAs de união alternativa. O comprimento completo mRNA NMS2 contém éxon 7 e denominado NMS2FL. O mRNA truncado não tem o éxon 7 e denominado NMS2 Δ7.
[0988] O aumento de NMS2 FL e diminuição em mRNA NMS2 Δ7 em relação aos das células de controle com veículo tratado são determinados a partir dos dados de PCR em tempo real, usando um método modificado ΔΔCt (como descrito em Livak and Schmittgen, Methods, 2001, 25: 402-8). A eficiência de amplificação de E é calculada a partir do declive da curva de amplificação por NMS2 FL, NMS2 Δ7 e GAPDH individualmente. As abundâncias de NMS2 FL, NMS2 Δ7 e GAPDH são então calculadas como (1+E)-Ct, onde Ct é o valor limite para cada amplicon. As abundâncias de NMS2 FL e NMS2 Δ7 são normalizadas para a abundância GAPDH. As abundâncias normalizadas NMS2 FL e NMS2 Δ7 das amostras tratadas com composto de teste são então divididas por abundâncias normalizadas NMS2 FL e NMS2 Δ7, respectivamente, a partir de células tratadas com o veículo para determinar os níveis de NMS2 FL e mRNA NMS2 Δ7s em relação ao controle do veículo.
[0989] Resultados. Como pode ser visto na Figura 4, as células tratadas com concentração aumentadas do Composto 35 (Figura 4a) e Composto 626 (Figura 4b) contem progressivamente mais mRNA NMS2 FL e menos mRNA NMS2 Δ7 que aqueles tratados com veículo indicando uma correção de união de NMS2 alternativo.
Exemplo 4 Ensaio de união de RT-PCR semi-quantitativo terminal mRNA NMS2 Endógeno em células cultivadas
[0990] O ensaio de união de transcrição-PCR reversa terminal é utilizado para visualizar e quantificar os níveis do comprimento completo e mRNA NMS2 Δ7 em células primárias e as linhas de células contendo o gene NMS2 tratado com um composto teste.
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[0991] Protocolo. Células do paciente AME GM03813 (5.000 células/poço) são semeadas em 200 μL de meio de cultura celular (DMEM mais 10% de FBS) em placas de 96 poços de fundo plano e a placa foi imediatamente agitada para assegurar a dispersão adequada de células, que formam uma monocamada par de células. As células são deixadas ligadas durante pelo menos 4 a 6 horas. Compostos teste são diluídos em série 3,16 vezes em DMSO a 100% para gerar uma curva de concentração de 7 pontos. Uma solução de composto de teste (1 mL, 200x em DMSO) é adicionada a cada poço de teste e 1 μL de DMSO é adicionado a cada poço de controle. A placa é incubada por 24 horas numa incubadora de cultura de células (37°C, 5% de CO2, 100% de umidade relativa). As células são então lisadas em tampão de lise Cells-To-Ct e o lisado é armazenado a -80°C.
[0992] mRNAs NMS FL e Δ7 são identificados usando os iniciadores a seguir na Tabela 6. Estes iniciadores hibridizam sequência à nucleotídeos no éxon 6 (NMS Direto C, SEQ ID NO. 11) (nucleotídeo 43 ao nucleotídeo 63) e éxon 8 (NMS Reversa C, SEQ ID NO. 12) (nucleotídeo 51 ao nucleotídeo 73) comum para mRNAs NMS1 e NMS2 humanos. Uma vez que as células do paciente AME utilizados no Exemplo 4 contêm apenas o gene NMS2, RT-PCR pode visualizar e quantificar apenas mRNA NMS2 e Δ7s de comprimento completo.
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[0993] 1Iniciadores desenhados por PTC Therapeutics, Inc.
[0994] Para sintetizar cDNA, 5 μL de lisado, 4 μL mistura reacional iScript 5x, 1 μL da transcriptase reversa e 10 μL de água são combinados e incubados 5 min a 25°C seguido de 30 min a 42°C, seguido de 5 min a 85°C. Solução de cDNA é armazenada a -20°C.
[0995] Para realizar PCR terminal, 5 μL de cDNA, 0,2 μL de 100 μM iniciador direto, 0,2 μL de 100 μM iniciador reverso e 22,5 μL de super-mistura polimerase são combinados numa placa de PCR semiskirted de 96 poços. PCR é realizado com as seguintes temperaturas para tempo indicado: Etapa 1: 94°C (2 min), Etapa 2: 94°C (30 seg), Etapa 3: 55°C (30 s), Etapa 4: 68°C (1 min), então repetição deas etapas 2 a 4 de um total de 33 ciclos, então segurar a 4°C.
[0996] 10 μL de cada amostra de PCR é separada eletroforeticamente sobre um E-gel de agarose a 2% por 14 minutos colorindo com reagentes de coloração de DNA ds (por exemplo, brometo de etídium) e visualizados utilizando um gerador de imagens de gel.
[0997] Resultados. Como pode ser visto na Figura 5, as células tratadas com concentrações aumentandas de Composto 35 (Figura 5a) e Composto 626 (Figura 5b) contend progressivamente mais mRNA NMS2 FL e menos mRNA NMS2 Δ7 indicando uma correção de união NMS2 alternativo.
Exemplo 5 Ensaio de união mRNA NMS2 por RT-qPCR em tecidos animais
[0998] O ensaio com base em PCR (RT-qPCR) de transcrição- quantitativa reversa é utilizada para quantificar os níveis de comprimento completo e mRNA NMS2 Δ7 em tecidos de camundongos tratados com composto de teste.
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[0999] Protocolo. Camundongos AME de alelo C/C são tratados por cânula oral duas vezes por dia durante 10 dias com compostos teste re-suspensos em HPMC a 0,5% e 0,1% de Tween- 80. As amostras de tecido foram coletadas e congeladas rapidamente para a purificação RNA.
[1000] Amostras de tecido (20-40 mg) são homogeneizadas em Reagente de Lise QIAzol durante 2 minutos a 20 Hz no TissueLyser II utilizando um cordão de aço inoxidável. Depois de adição de clorofórmio, o homogenato é separado em uma fase aquosa e orgânicas por centrifugação. RNA particionado para a fase aquosa superior é extraído e etanol é adicionado para fornecer condições de ligação apropriadas. A amostra é aplicada a então a coluna de centrifugação RNeasy da RNeasy Mini Kit, onde RNA total se liga à membrana. O RNA é eluído em RNase-livre água, então armazenado a 20°C e posteriormente analisado pelo TaqMan RT-qPCR no 7900HT Termociclador. O RNA total é diluído dez vezes e 2,5 μl de amostra diluída é adicionada à mistura de TaqMan RT-qPCR.
[1001] Produtos NMS2 unidos são identificados usando os seguintes iniciadores e ensaios na Tabela 7. Iniciador NMS FL Direto B (SEQ ID NO 7.) hibridiza à sequência de nucleotídeos nos éxons 7 e 8, iniciador NMS Δ7 Direto B (SEQ ID NO. 8) hibridiza uma sequência de nucleotídeos nos éxons 6 e 8, iniciador NMS reversa B (SEQ ID NO. 9) hibridiza uma sequência de nucleotídeos no éxon 8, ensaio NMS Ensaio B (SEQ ID NO. 10) hibridiza uma sequência de nucleotídeos no éxon 8. Estes iniciadores e ensaio hibridizam para as sequências de nucleotídeos comuns para mRNAs NMS1 e NMS2 humano. Uma vez que as células do paciente AME utilizados no Exemplo 5 contem apenas o gene NMS2, RT-qPCR pode quantificar apenas NMS2 de comprimento completo e mRNAs Δ7.
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[1002] 1Iniciadores e ensaios projetados por PTC Therapeutics, Inc.
[1003] Os iniciadores NMS direto e reverso são utilizados nas concentrações finais de 0,4 μM. O ensaio NMS é utilizada a uma concentração final de 0,15 μM. O NMS-GAPDH Mix (10 μl de volume total), é preparado por combinação de 5 μL de 2x tampão de RT-PCR, 0,4 μL de 25x mistura enzimática de RT-PCR, 0,5 μL de 20x mistura de iniciador-ensaio GAPDH, 1,505 μL de água, 2,5 μL de solução RNA, 0,04 μL de 100 μM iniciador direto, 0,04 μL de 100 μM iniciador reverso e 0.015 μL de 100 μM ensaio NMS.
[1004] Cada ciclo de PCR foi realizado nas seguintes temperaturas durante pelo tempo indicado: Etapa 1: 48°C (15 min); Etapa 2: 95°C (10 min); Etapa 3: 95°C (15 seg); Etapa 4: 60°C (1 min); então, repita etapas 3 e 4 para um total de 40 ciclos.
[1005] Cada mistura reacional contém tanto iniciadores/configuração ensaio NMS2 FL e mGAPDH ou NMS2 Δ7 e mGAPDH (múltiplo design), que permite a medição simultânea de níveis de duas transcrições.
[1006] O aumento de NMS2 FL e diminuição em mRNA NMS2 Δ7 em relação aos tecidos de animais tratados com veículo de controle é determinado a partir dos dados de PCR em tempo real, usando um método modificado ΔΔCt (como descrito em Livak and Schmittgen, Methods, 2001, 25: 402-8). A eficiência de amplificação de E é calculado a partir do declive da curva de amplificação por NMS2 FL, NMS2 Δ7 e GAPDH individualmente. As abundâncias de NMS2 FL, NMS2 Δ7 e GAPDH são então calculadas como (1+E)-Ct, onde Ct é o valor limite para cada amplicon. As abundâncias de NMS2 FL e NMS2 Δ7 são normalizadas para a abundância GAPDH. As abundâncias normalizadas NMS2 FL e NMS2 Δ7 das amostras tratadas com composto de teste são então divididas por abundâncias normalizadas NMS2 FL e NMS2 Δ7, respectivamente, a partir de células tratadas com o veículo para determinar os níveis de mRNA NMS2 FL e NMS2 Δ7s em relação ao veículo de controle.
[1007] Resultados. Como pode ser visto na Figura 6, tecidos de animais tratados com Composto 35 (Figura 6a) e Composto 626 (Figura 6b) não contêm substancialmente mais mRNA NMS2 FL e menos mRNA NMS2 Δ7 que aqueles tratados com veículo indicando uma correção união alternativo de NMS2.
Exemplo 6 Ensaio de união de RT-PCR semi-quantitativo terminal mRNA NMS2 Endógeno em tecidos animais
[1008] O ensaio de união de transcrição-PCR(RT-PCR) terminal reverso é utilizado para quantificar os níveis do comprimento completo e mRNA NMS2 Δ7 em tecidos de camundongos tratados com composto teste.
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[1009] Protocolo. Camundongos AME de alelo C/C são tratados por cânula oral duas vezes por dia durante 10 dias com compostos de teste em 0,5% de HPMC e 0,1% Tween-80. As amostras de tecido são coletadas e congeladas rapidamente para purificação de RNA.
[1010] Amostras de tecido (20-40 mg) são homogeneizadas em Reagente de Lise QIAzol durante 2 minutos a 20 Hz no TissueLyser II utilizando um cordão de aço inoxidável. Depois da adição de clorofórmio, o homogenato é separado em uma fase aquosa e orgânica por centrifugação. RNA particionada para a, fase aquosa superior é extraído e etanol é adicionado para fornecer condições de ligação apropriados. A amostra é então aplicada à coluna de centrifugação RNeasy da RNeasy Mini Kit, onde o RNA total se liga à membrana. O RNA é então eluído em RNase-livre água armazenado a 20°C.
[1011] Produtos unidos NMS2 são identificados utilizando os seguintes iniciadores de amplificação na Tabela 8. Estes iniciadores hibridizam à sequência de nucleotídeos no éxon 6 (NMS Direto D, SEQ ID NO. 13) (nucleotídeo 22 ao nucleotídeo 46) e o éxon 8 (NMS reversa C, SEQ 12 ID NO.) comum a mRNAs NMS1 e NMS2 humana.
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[1012] 1Iniciadores desenhados por PTC Therapeutics, Inc.
[1013] Para sintetizar cDNA, misture 1 μL de Solução RNA (25-50 ng), 4 μL da mistura reacional 5x iScript, 1 μL da transcriptase reversa e 10 μL de água são combinados e incubados 25°C por 5 min seguido de 42°C por 30 min seguido de 85°C durante 5 min. Solução cDNA é armazenada a -20°C.
[1014] Para realizar PCR terminal, 5 μL de cDNA, 0,2 μ de 100 μM iniciador direto, 0,2 μL de 100 μM iniciador reverso, e 22,5 μL de polimerase super-mistura são combinados numa placa de PCR semiskirted 96 poços. PCR é realizada com as seguintes temperaturas pelo tempo indicado: Etapa 1: 94°C (2 min), Etapa 2: 94°C (30 seg), Etapa 3: 55°C (30 s), Etapa 4: 68°C (1 min),então repetidas as etapas 2 a 4 de um total de 33 ciclos, então segurar a 4°C.
[1015] 10 μL de cada amostra de PCR é separada por eletroforese sobre um E-gel de agarose a 2% por 14 minutos coloridas com reagentes de coloração de DNA ds (por exemplo, brometo de etídium) e visualizados utilizando um gerador de imagens de gel.
[1016] Resultados. Como pode ser visto na Figura 7, tecidos de camundongos tratados com concentrações crecentes de Composto 35 (Figura 7a) e Composto 626 (Figura 7b) contem progressivamente mais mRNA NMS2 FL e menos mRNA NMS2 Δ7 indicando uma correção união alternativo de NMS2.
Exemplo 7 Ensaio de proteínas Nms em células de cultura
[1017] O ensaio HTRF NMS (fluorescência resolvida de tempo homogêneo) é usado para quantificar o nível de proteína Nms em células de fibroblastos de paciente AME tratado com compostos teste. Os resultados do ensaio estão apresentados na Tabela 9.
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[1018] Protocolo. As células são descongeladas e cultivadas em DMEM-FBS a 10% durante 72 horas. As células são tratadas com tripsina, contadas e re-suspensas numa concentração de 25.000 células/mL em DMEM a 10% FBS. As suspensões de células são semeadas a 5000 células por poço numa placa de microtitulação de 96 poços e incubadas durante 3 a 5 horas. Para fornecer um sinal de controle, três (3) poços em placas de 96 poços não recebem células e, assim, servem como cavidades de controle em branco. Compostos teste são diluídos em série 3,16 vezes em DMSO a 100% para gerar uma curva de concentração de 7 pontos. 1 μL de solução de composto teste é transferido para os poços contendo células e células são incubadas durante 48 horas numa incubadora de cultura de células (37°C, 5% de CO2, 100% de umidade relativa).Triplicatas são criadas para cada concentração de composto teste. Depois de 48 horas, o sobrenadante é removido dos poços e 25 μL do tampão de lise RIPA, contendo inibidores de protease, é adicionado aos poços e incubados com agitação uma temperatura ambiente por 1 hora. 25 μL do diluente é adicionado e então 35 μL do lisado resultante é transferido à placa de 384 poços, onde cada poço contém 5 μL do solução anticorpo (diluição 1:100 de anti-NMS d2 e anti-NMS kriptato em tampão de reconstituição NMS). A placa é centrifugada durante 1 minuto para trazer a solução ao fundo dos poços, incubados então durante uma noite a temperatura ambiente. A fluorescência em cada poço da placa a 665 nm e 620 nm é medida num leitor de placas multilabel EnVision (Perkin Elmer).
[1019] O sinal de fluorescência normalizado é calculado para cada poço de amostra, branco e veículo de controle através da divisão do sinal a 665 nm por o sinal a 620 nm. Normalizando as contas de sinal para eventual extinção da fluorescência devido ao efeito da matriz do lisado. O valor de Δf (uma medida da abundância de proteína Nms) para cada poço de amostra é calculado subtraindo a fluorescência média normalizada para os poços de controle em branco a partir da fluorescência normalizada para cada poço de amostra, e então dividindo esta diferença pela fluorescência média normalizada para o controle em poços branco. O valor resultante Δf para cada poço de amostra representa a abundância de proteínas de Nms de amostras tratadas com composto teste. O valor de Δf para cada poço de amostra é dividido pelo valor de Δf para os poços de veículo de controle para calcular o aumento de vezes na abundância de proteína Nms em relação ao veículo de controle.
[1020] Resultados. Como pode ser visto na Figura 8, células de fibroblastos de pacientes AME Tipo 1 tratado com Composto 35 (figura 8a) e Composto 626 (Figura 8b) mostram um aumento dependente da dose na expressão da proteína Nms como medido pelo ensaio de HTRF NMS.
[1021] Para Compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua descritos aqui, Tabela 9 fornece o EC1.5x para a expressão da proteína Nms que foi obtida a partir dos dados de concentração de 7 pontos gerados para cada composto teste de acordo com o Procedimento do Exemplo Biológico 7. O termo "EC1.5x para a expressão da proteína Nms" é definido como a concentração de Composto teste que é eficaz na produção 1,5 vezes a quantidade de proteína Nms em uma célula de fibroblasto de paciente AME em comparação com a quantidade produzida a partir do veículo de controle de DMSO. Um EC1.5x para expressão da proteína Nms entre >3 μM e < 10 μM é indicada por um asterisco (*), um ECi.5x entre >1 μM e < 3 μM é indicado por duas estrelas (**), uma ECi.5x entre >0,3 μM e - 1 μM é indicado por três estrelas (***) e um ECi.5x - 0,3 μM é indicado por quatro estrelas (****).
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[1022] Para Compostos de Fórmula (I) ou uma forma sua descritos aqui, a Tabela 10 proporciona o aumento máximo de dobragem (dobra) da proteína Nms que foi obtido a partir dos dados de concentração de 7 pontos gerados para cada composto teste de acordo com o Procedimento do Exemplo Biológico 7. Um aumento máximo de dobra < 1.2 é indicado por um asterisco (*), um aumento de dobra entre >1,2 e <1.35 é indicado por dois asteriscos (**), um aumento de dobra entre >1,35 e <1.5 é indicado por três estrelas (***), um aumento de dobra entre >1,5 e <1.65 é indicada por quatro estrelas (****) e um aumento de dobra >1.65 é indicada por cinco estrelas (*****).
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Exemplo 8 Ensaio de contagem de Gemas (contagem de manchas nuclear NMS- dependente)
[1023] O nível de proteína Nms correlaciona-se diretamente com a quantidade de focos nuclear, também conhecido como gemas, produzido por coloração da célula com um anticorpo marcado por fluorescência anti-Nms (Liu and Dreyfuss, EMBO J., 1996, 15:3555). As gemas são complexos multi-proteína cuja formação é nucleada pela proteína Nms e o ensaio de contagem de gemas é utilizado para avaliar o nível de proteína Nms na célula. Como descrito aqui, o ensaio de contagem de gemas é usado para quantificar o nível de proteína Nms em células de fibroblastos de pacientes AME tratados com um composto de teste.
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Figure img0342
[1024] Protocolo: As células são descongeladas e incubadas em meio DMEM FBS a 10% durante 72 horas, então tratadas com tripsina, contadas e re-suspensas a 100.000 células/mL em DMEM a 10% FBS. 2 mL da suspensão de células foi semeada numa placa de 6 poços de cultura de células com uma lamela esterilizada e incubada durante 3 a 5 horas. Compostos teste são diluídos em série 3,16 vezes em DMSO a 100% para gerar uma curva de diluição de 7 pontos. 10 μL de solução de Composto teste é adicionado a cada poço contendo-célula e incubado durante 48 horas numa incubadora de cultura de células (37°C, 5% de CO2,100% de umidade relativa). As duplicatas são configuradas para cada concentração de Composto teste. Células contendo DMSO a uma concentração final de 0,5% são utilizados como controles.
[1025] Meio de cultura celular foi aspirado a partir dos poços contendo lamelas e suavemente lavadas três vezes com PBS frio. As células são fixadas através da incubação por 20 minutos por temperatura ambiente enquanto em paraformaldeído. As células são lavadas duas vezes então com PBS frio seguido de incubação durante 5 minutos a temperatura ambiente com 0,05% de Triton X-100 em PBS para permeabilizar as células. Depois que as células fixas são lavadas três vezes com PBS frio, elas são bloqueados com 10% FBS POR 1 hora. 60 μL de anticorpo primário diluído 1:1000 em tampão de bloqueio é adicionado e uma mistura é incubada durante uma hora em uma temperatura ambiente. As células são lavadas com PBS três vezes e 60 μL de anticorpo secundário diluído 1:5000 em tampão de bloqueio é adicionado, então a mistura é incubada durante uma hora a uma temperatura ambiente. As lamelas são montadas nas lâminas com o auxílio do meio de montagem e deixadas secar durante a noite. Esmalte é aplicado aos lados da lâmina de cobertura e as lâminas são armazenadas protegidas da luz. Um Axovert Zeiss 135 com um plano de 63x-Apochromat, NA=1.4 objetiva é utilizado para a detecção de imunofluorescência e contagem. O número de gemas é contada por >150 núcleos e % de ativação é calculado utilizando DMSO e 10 nM de bortezomib como controle. Para cada composto teste, as células são examinadas em todos os comprimentos de onda para identificar compostos teste com fluorescência inerente.
[1026] Resultados. Como pode ser visto na Figura 9, células de paciente AME Tipo 1 tratadas com Composto 35 (Figura 9a) e Composto 626 (Figura 9b) contem progressivamente mais gemas em relação a células tratadas com DMSO.
Exemplo 9 Ensaio de proteína NMS nos neurônios motores humanos
[1027] Microscopia confocal de imunofluorescência Nms é usada para quantificar o nível de proteína Nms em neurônios motores humanos tratados com Compostos teste.
[1028] Protocolo. Neurônios motores humanos derivados de células AME iPS (Ebert et al., Nature, 2009, 457:2770, e,Rubin et al, BMC Biology, 2011, 09:42) são tratadas com compostos teste a várias concentrações para 72 horas. O nível de proteína Nms no núcleo das células é quantificado usando imunocoloração e microscopia confocal de fluorescência Nms essencialmente como descrito em Makhortova et al., Nature Chemical Biology, 2011, 7:544. O nível de proteína Nms em amostras tratadas com cComposto é normalizado para que nas amostras tratadas com o veículo e representada graficamente em função da concentração do composto.
[1029] Resultados. Como pode ser visto na Figura 10, os neurônios motores humanos tratados durante 72 horas com o aumento de concentração de Composto 35 (Figura 10a) e Composto 626 (Figura 10b) contêm progressivamente mais proteína Nms no núcleo.
Exemplo 10 Ensaio de proteína Nms em tecidos animais
[1030] Este ensaio de proteína de Nms compara os tecidos do camundongos tratados com composto teste com aqueles de camundongos tratados com veículo de DMSO para determinar o aumento dos níveis de proteína Nms produzido a partir do gene NMS2 humano.
Figure img0343
Figure img0344
[1031] Protocolo. As amostras de tecidos em tubos Safe-Lock são pesados e o volume de tampão RIPA contendo o cocktail de inibidores de protease é adicionado com base no peso de relações em volume para cada tipo de tecido: Cérebro (50 mg/mL), Músculo (50 mg/mL ) e da medula espinhal (25 mg/mL).
[1032] Os tecidos são homogeneizados usando o TissueLyser por moagem de esferas. 5 mm esferas de aço inoxidável são adicionadas à amostra e agitadas vigorosamente durante 5 minutos a 30 Hz no TissueLyser. As amostras são centrifugadas então por 20 minutos a 14000 xg numa microcentrífuga e os homogenatos transferidos para a placa de PCR. Os homogeneizados são diluídos em tampão RIPA em aproximadamente 1 mg/mL para HTRF e aproximadamente 0,5 mg/mL para a medição de proteína total utilizando o ensaio de proteína BCA. Para o ensaio de HTRF NMS, 35 μL do tecido homogeneizado é transferido à placa de 384 poços contendo 5 μL da solução de anticorpo (diluição 1:100 de cada um dos anti-NMSd2 e anti-NMS Kriptato em tampão de reconstituição). Para fornecer um sinal de controle, três (3) em poços da placa contem apenas um tampão de lise RIPA e, assim, serve como cavidades de controle em branco. A placa centrifugada durante 1 minuto para trazer a solução para o fundo dos poços e incubadas então durante a noite uma temperatura ambiente. A fluorescência em cada poço da placa a 665 nm e 620 nm é medida num leitor de placas multilabel EnVision (Perkin Elmer). A proteína total no homogenato de tecido é medida usando o ensaio BCA de acordo com o protocolo do fabricante.
[1033] O sinal de fluorescência normalizado é calculado para cada amostra de controle, branco e bem veículo através da divisão do sinal a 665 nm por o sinal a 620 nm. Normalizando as contas de sinal para eventual extinção da fluorescência devido ao efeito da matriz do tecido homogeneizado. O valor de Δf (uma medida da abundância de proteína Nms) para cada poço de amostra de tecido é calculado subtraindo-se a fluorescência média normalizada para os poços de controle em branco a partir da fluorescência normalizada para cada amostra de tecido e então também dividindo esta diferença pela fluorescência média normalizada para o poços de controle em branco. O valor de Δf para cada poço da amostra de tecido é dividida pela quantidade total de proteína (determinada utilizando o ensaio de BCA) para a amostra de tecido. A alteração na abundância de proteínas Nms para cada amostra de tecido relativamente ao controle de veículo é calculado como a diferença percentual do valor de Δf a amostra de tecido na presença de composto de teste e o valor Δf média do sinal de controle do veículo, dividido pelo valor de Δf média do sinal de veículo de controle.
Exemplo 11 Ensaio de proteína NMS em tecidos de camundongos AME adultos de alelo C/C
[1034] Os tecidos para utilização no ensaio de proteína de Nms em camundongos AME adultos de alelo C/C são preparados como descrito no Exemplo 10. O ensaio avalia quando o tratamento de camundongos AME adultos de alelo C/C com um composto de teste durante 10 dias aumenta os níveis de Nms proteína produzida a partir do gene NMS2.
Figure img0345
[1035] Protocolo. Camundongos AME de alelo C/C são doseados por via oral duas vezes por dia (em 0,5% de celulose de hidroxipropilmetil-celulose (HPMC) com 0,1% Tween-80) com um composto teste a 10 mg/kg durante 10 dias. Camundongos heterozigóticos com a mesma idade são doseados com veículo para uso como controle. Os tecidos são coletados para análise dos níveis de proteína de acordo com o Exemplo 10.
[1036] Resultados. Como visto na Figura 11, o nível total de proteína Nms normalizada foi aumentada em tecidos-alvo (cérebro: Figura 11a; Medula espinhal: Figura 11b e Músculo:Figura 11c) de Camundongos AME de alelo C/C tratado com Composto 35 e Composto 626 em relação ao grupo do veículo. A linha pontilhada em cada Figura representa o aumento médio nos níveis de SMN normalizados de camundongos heterozigotos em relação aos do grupo do veículo de supressão. Tratamento com compostos teste em Camundongos AME de alelo C/C aumentou os níveis da proteína NMS nos tecidos alvo acima dos observados nos tecidos correspondentes dos camundongos heterozigotos.
Exemplo 12 Proteína NMS em tecidos de camundongos AME neonatais Δ7
[1037] O ensaio para a proteína Nms em tecidos de camundongos AME neonatais é usado para determinar quando tratamento com um teste de proteína aumenta os níveis de Composto NMS produzidos a partir do gene NMS2.
Figure img0346
[1038] Protocolo. AME Δ7 camundongos knockout homozigóticos são doseados uma vez por dia (QD), intraperitoneal (IP) com um composto de teste ou veículo (DMSO a 100%) a partir do dia pós-natal (DPN) para o dia 3 9. tecidos são coletado para análise dos níveis de proteína de acordo com a Exemplo 10.
[1039] Resultados. Como pode ser visto na Figura 12, a proteína nível total Nms normalizada foi dose dependente aumentada em tecidos alvo (cérebro: a Figura 12a e Figura 12b; medular: Figura 12c e Figura 12d, e do músculo: Figura 12e e a Figura 12f) de AME neonatal Δ7 homozigoto camundongos knockout tratado com Composto 35 e Composto 626, respectivamente. A linha pontilhada e zona cinzenta em cada figura representam a média e desvio padrão das proteínas totais normalizado níveis NMS em camundongos heterozigotos.
Exemplo 13 Peso corporal dos camundongos AME Δ7 neonatal
[1040] A alteração no peso corporal de camundongos AME neonatais é usado para determinar quando um tratamento com um composto de teste aumenta o peso corporal.
Figure img0347
[1041] Protocolo. Camundongos AME Δ7 knockout homozigóticos são dosados por via intraperitoneal (IP) composto com teste ou veículo (100% DMSO) uma vez por dia (QD) do dia pós-natal (PND) 3 até que o regime de dose é ligado uma dose oral duas vezes por dia (BID) em 0,5% de hidroxipropilmetil celulose (HPMC) com 0,1% Tween-80 a uma dose de 3,16 vezes mais elevada do que a dose utilizada para o IP. O peso corporal dos camundongos AME Δ7 tratado com composto ou um veículo e idade foram camundongos heterozigotos são registrados todos os dias.
[1042] Resultados. Como visto na Figura 13, o peso corporal do AME neonatal Δ7 homozigoto camundongos knockout tratado com Composto 35, dosados IP QD do PND 3 ao dia 24, então por via oral BID do dia 25 até o final do estudo (Figura 13a) e Composto 626, dosado IP QD do PND 3 ao dia 30, então por via oral BID do dia 31 até o final do estudo (Figura 12b) melhorou em relação ao veículo camundongos tratados.
Exemplo 14 Dos reflexos em ratos neonatais Δ7 AME
[1043] A mudança funcional em reflexo de endireitamento de camundongos AME neonatais é usado para determinar o tratamento quando com um teste Composto melhora dos reflexos.
Figure img0348
[1044] Protocolo. Camundongos AME Δ7 knockout homozigóticossão dosados por via intraperitoneal (IP) Composto com teste ou veículo (100% DMSO) uma vez por dia (QD) do dia pós-natal (PND) 3 até que o regime de dose é ligado uma dose oral duas vezes por dia (BID) em 0,5% de hidroxipropilmetil celulose (HPMC) com 0,1% Tween-80 a uma dose de 3,16 vezes mais elevada do que a dose utilizada para o IP. O tempo de reflexo de endireitamento é medido como o tempo gasto por um rato para virar para seus pés depois de ter sido colocado em suas costas. Reflexo de endireitamento é medido cinco vezes para cada rato (permitindo um tempo máximo de 30 segundos para cada tentativa) com 5 minutos entre cada medição. O tempo de reflexo de endireitamento para AME Δ7 homozigoto camundongos knockout tratado com teste Composto ou veículo e camundongos heterozigotos pareados por idade é medida em PND 10, 14 e 18 e plotados.
[1045] Resultados. Como visto na Figura 14, o reflexo de endireitamento da AME neonatal Δ7 camundongos knockout homozigotos tratado com Composto 35, dosados IP QD do PND 3 ao dia 24, então por via oral BID do dia 25 até o final do estudo, melhorou em relação ao veículo ratos tratados. O tempo de endireitamento do Composto tratada AME neonatal Δ7 camundongos knockout homozigóticos era semelhante à da idade foram camundongos heterozigóticos no dia pós-natal 18.
Exemplo 15 Sobrevida de camundongos AME Δ7 neonatal
[1046] A variação no número de camundongos sobreviventes ao longo do tempo é usada para determinar Wheter tratamento com um Composto de teste aumenta a sobrevivência.
Figure img0349
Figure img0350
[1047] Protocolo. Camundongos AME Δ7 knockout homozigóticos são dosados por via intraperitoneal (IP) com Composto teste ou veículo (100% DMSO) uma vez por dia (QD) do dia pós-natal (PND) 3 até que o regime de dose é ligado uma dose oral duas vezes por dia (BID) em 0,5% de hidroxipropilmetil celulose (HPMC) com 0,1% de Tween-80 a uma dose de 3,16 vezes mais elevada do que a dose utilizada para o IP. O número de camundongos sobreviventes em cada grupo é registado cada dia e representada graficamente como uma percentagem do número total de camundongos. Tecidos dos camundongos AME Δ7 knockout homozigóticos pareados por idade são coletado para a medição dos níveis de proteína SMN e processados conforme detalhado no Exemplo 10. Os totais normalizados os níveis da proteína SMN proteína medidos nos tecidos são representados como um por cento das pessoas no por idade tecidos camundongos heterozigotos correspondentes, com os níveis heterozigotos representados como 100 por cento. O nível de proteína Nms no tecido de camundongos tratados com composto teste em relação ao tecido dos camundongos heterozigóticos é indicado como um valor percentual acima de cada barra no gráfico.
[1048] Resultados. Como visto na Figura 15, a sobrevida dos camundongos AME Δ7 knockout homozigóticos neonatais tratados com Composto 35 (Figura 15a) dosado IP QD do PND 3 ao dia 24, então por via oral BID do dia 25 até o final do estudo, e Composto 626 (Figura 15b) doseada IP QD do PND 3 ao dia 30, então por via oral BID do dia 31 até o final do estudo, melhorou em relação ao veículo ratos tratados.
[1049] Resultados. Como pode ser visto na Figura 16, os níveis de proteína de NMS em tecidos alvo (cérebro, Figura 16a, e musculares, Figura 16b) de camundongos AME Δ7 knockout homozigóticos após o tratamento com Composto 35 e Composto 626 a partir de 3 dias após o nascimento até à necropsia foram medidos e representados graficamente em relação aos camundongos heterozigotos tratados com veículo e idade- pareados. Como se vê na Figura 16a e na Figura 16b, nenhum dos camundongos AME Δ7 knockout homozigóticos tratado com veículo sobreviveu passado 22 dias.
[1050] Sem considerar quando um documento aqui citado foi especificamente e individualmente indicado como sendo incorporado por referência, todos os documentos aqui referidos são incorporados por referência no presente pedido de qualquer e todos os fins na mesma medida como se cada referência individual foi completamente apresentadas aqui.
[1051] Embora determinadas formas de realização tenham sido descritas em detalhe acima, aqueles que possuem habilidade normal na técnica compreenderão claramente que são possíveis muitas modificações nas formas de realização sem se afastar dos ensinamentos do mesmo. Todas essas modificações se destinam a ser englobadas dentro das reivindicações como aqui descrito.

Claims (7)

1. Composto, caracterizado por ser selecionado a partir da fórmula (Ia):
Figure img0351
ou um ácido livre, base livre, sal, racemato, enantiômero ou forma tautômero do mesmo, em que R1 é heterociclil selecionado a partir de azetidin-1-il, tetra- hidrofuran-3-il, pirrolidin 1 il, piperidin 1 il, piperidin 4 il, piperazin 1 il, 1,4 diazepan 1 il, 1,2,5,6 tetra-hidropiridin 3 il, 1,2,3, 6 tetra- hidropiridin 4 il, hexa-hidropirrolo [3,4 b] pirrol 1 (2H) il, (3aS, 6aS) hexa-hidropirrolo [3,4 b] pirrol 1 (2H) il, (3aS, 6aS) hexa-hidropirrolo [3,4 b] pirrol 5 (1H) il, (3aR, 6aR) hexa-hidropirrolo [3,4 b] pirrol 5 (1H) il, hexa-hidropirrolo [3,4 c] pirrol 2 (1H) il, (3aR, 6aS) hexa-hidropirrolo [3,4 c] pirrol 2 (1H) il, octa-hidro 5H-pirrolo [3,2 c] piridin 5 il, octa-hidro 6H pirrolo [3,4 b] piridin 6 il, (4aR, 7aR) octa-hidro 6H pirrolo [3,4 b] piridin 6 il, (4aS, 7aS) octa-hidro 6H pirrolo [3,4 b] piridin 6 il, hexa-hidropirrolo [1,2 a] pirazin 2 (1H) il, hexa-hidropirrolo [1,2 a] pirazina 6 (2H) um, (7R, 8aS) hexa-hidropirrolo [1,2 a] pirazina 2 (1H) il, (8aS) hexa-hidropirrolo [1,2 a] pirazina 2 (1H) il, (8aR) hexa-hidropirrolo [1,2 a] pirazina 2 (1H ) il, (8aS) octa-hidropirrolo [1,2 a] pirazina 2 (1H) il, (8aR) octa-hidropirrolo [1,2 a] pirazina 2 (1H) il, octa-hidro 2H pirido [1,2 a] pirazina 2 il, 3 azabiciclo [3.1.0] hex 3 il, 8 azabiciclo [3.2.1] oct 3 il, (1R, 5S) 8 azabiciclo [3.2.1] oct 3 il, 8 azabiciclo [3.2.1] oct 2 en 3 il, (1R, 5S) 8 azabiciclo [3.2.1] oct 2 en 3 il, 9 azabiciclo [3.3.1] non 3 il, (1R, 5S) 9 azabiciclo [3.3.1] non 3 il, 2,5 diazabiciclo [2.2.1] hept 2 il, (1S, 4S) 2,5 diazabiciclo [2.2.1] hept 2 il, 2,5 diazabiciclo [2.2.2] oct 2 il, 3,8 diazabiciclo [3.2.1] oct 3 il, (1R, 5S) 3,8 diazabiciclo [3.2.1] oct 3 il, 1,4 diazabiciclo [3.2.2] non 4 il, azaspiro [3.3] hept 2 il, 2,6- diazaspiro [3.3] hept-2-il, 2,7- diazaspiro [3,5] non-7-il, 5,8 diazaspiro [3,5] non 8 il, 2,7-diazaspiro [4,4] non-2-il e 6,9 diazaspiro [4.5] dec 9 il opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes R3 e um adicional, opcional substituinte R4; R2 é heteroaril selecionado a partir de tien-2-il, tien-3- il, 1H-pirazol-4-il, 1H-imidazol-1-il, 1H-imidazol-4- il, 1,2,4 oxadiazol-3-il, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirimidin-4-il, 1H-indol-3-il, 1H- indol-4-il, indol-5-il, indol-6-il, 1H-indazol-5-il, 2H-indazol-5-il, indolizin-2-il, benzofurano-2-il, benzotieno-2-il, benzotieno-3-il, 1H-benzimidazol-6- il, 1,3 benzoxazol-5-il, 1,3-benzoxazol-6-il, 1,3- benzotiazol-5-il, 1,3-benzotiazol-6-il, 9H-purin-8- il, furo [3,2 b] piridin-2-il, furo [3,2 c] piridin- 2-il, furo [2,3 c] piridin-2-il, tieno [3,2-c] piridin-2-il, tieno [2,3-d] pirimidin-6-il, 1H pirrolo [2 , 3 b] piridin-5-il, 1H pirrolo [2,3 c] piridin-4- il, pirrolo [1,2 a] pirimidin-7-il, pirrolo [1,2 a] pirazin-7-il, pirrolo [1,2 b] piridazin-2-il, pirrolo [1,2 b] piridazin-6-il, pirazolo [1,5 a] piridin-2- il, pirazolo [1,5 a] pirazin-2-il, imidazo [2,1 b] [1,3] tiazol-6-il, imidazo [2,1 b] [1,3,4] tiadiazol- 6-il, [1,3] oxazolo [4,5 -b] piridin-2-il, imidazo [1,2 a] piridin-6-il, imidazo [1,2 a] pirimidin-2-il, imidazo [1,2 a] pirimidin-6-il, imidazo [1,2 c] pirimidin-2-il, imidazo [1,2b] piridazin-2-il, imidazo [1,2b] piridazin-6-il, imidazo [1,2a] pirazin- 2- il e quinoxalina-2-il; em que cada heteroaril é opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes R6 e um adicional, opcional substituinte R7; Ra é, em cada em cada caso, independentemente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio ou C1-8alquil; Rb é hidrogênio, halogênio, C1-8alquil ou C1-8alcóxi; R3 é, em cada caso, independentemente selecionado a partir de ciano, halogênio, hidroxi, oxo, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, C1-8alquil-carbonil, C1-8alcóxi, halo-C1-8alcóxi, C1-8alcóxi-C1-8alquil, C1-8alcóxi-carbonil, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino, amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, amino-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, C1-8alcóxi-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-carbonil-amino, C1-8alcóxi-carbonil-amino, hidroxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alcóxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino ou (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino; R4 é C3-14cicloalquil, C3-14cicloalquil-C1-8alquil, C3-14cicloalquil-amino, aril-C1-8alquil, aril-C1-8alcóxi-carbonil, heterociclil ou heterociclil-C1-8alquil; em que, cada caso de C3-14cicloalquil, aril e heterociclil é opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes R5; R5 é, em cada caso, independentemente selecionando entre halogênio, hidroxi, ciano, nitro, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, C1-8alcóxi, halo-C1-8alcóxi, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino ou C1-8alquil-tio; R6 é, em cada caso, independentemente selecionando entre halogênio, hidroxi, ciano, nitro, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil, C1-8alcóxi, halo-C1-8alcóxi, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino ou C1-8alquil-tio; e, R7 é C3-14cicloalquil, C3-14cicloalquil-oxi, aril, heterociclil ou heteroaril.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a forma de sal ser um cloreto, cloridrato, dicloridrato, bromidrato, acetato ou sal trifluoracetato.
3. Composto caracterizado por ser selecionado a partir de: 7- (piperazin-1-il) -3- [4- (trifluorometil) -1,3-benzoxazol-2- il] -2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- [7- (trifluorometil) -1,3-benzoxazol-2- il] -2H-cromen-2-ona; 2-oxo-N-fenil-7- (piperazin-1-il) -2H-cromeno-3-carboxamida; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (7-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7- (piperazin-1-ilmetil) - 2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(propan-2-ilamino) metil] -2H- cromen-2-ona; 7 - [(propan-2-ilamino) metil] -3- [4- (trifluorometil) -1,3- benzotiazol-2-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(propan-2-ilamino) metil] -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- [3- (trifluorometil) fenil] -2H- cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- (piridin-3-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(dimetilamino) metil] -2H- cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(dimetilamino) metil] - 2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7- [4- (propan-2-il) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7- (piperidin-4-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (5-fluoro-1,3-benzoxazol-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (1,3-benzoxazol-2-il) -7- (piperidin-4-iloxi) -2H-cromen-2- ona; 3- (4-metil-1,3-benzoxazol-2-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (4-metil-1,3-benzoxazol-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (1,3-benzoxazol-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin- 1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin- 1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (3-fluorofenil) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- (piridin-4-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(4-metilpiperazin-1-il) carbonil] -2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- (1H-pirazol-5-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -2-oxo-N-fenil-2H- cromeno-3-carboxamida; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (4-metil-1,3- benzoxazol-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- (piridin-2-ilamino) -2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- (pirimidin-2-ilamino) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7- [2- (propan-2-ilamino) etil] -2H-cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7- [3- (propan-2-ilamino) propil] -2H-cromen-2-ona; 3- (4-metil-1,3-tiazol-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 3- (1-metil-1H-pirazol-3-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (4-fluoro-1,3- benzoxazol-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (4-fluoro-1,3-benzoxazol-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -2-oxo-2H-cromen-7-il piperazina-1- carboxilato; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -2-oxo-2H-cromen-7-il piperazina-1-carboxilato; 4- [3- (1-metil-1H-benzimidazol-2-il) -2-oxo-2H-cromen-7-il] piperazina-1-carboxilato de benzilo; 3- (8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- (4-fenil-1,3-tiazol-2-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7- (piperidin-4-iloxi) -2H-cromen-2- ona; 3- (1,3-benzoxazol-2-il) -7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (1,3-benzoxazol-2-il) -7- [3- (dimetilamino) pirrolidin-1- il] -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzoxazol-2-il) -7 - {[2- (dimetilamino) etil] (metil) amino} -2H-cromen-2-ona; 3- (5-fenil-1,2,4-oxadiazol-3-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- [4- (trifluorometil) -1,3-tiazol-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- [4- (trifluorometil) -1,3-tiazol- 2-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(3S) -pirrolidin-3-iloxi] -2H- cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(3R) -pirrolidin-3-iloxi] -2H- cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(2S) -pirrolidin-2-ilmetoxi] - 2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(dietilamino) metil] -2H-cromen- 2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(dietilamino) metil] - 2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7- (piperidin-1-ilmetil) -2H-cromen- 2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- (piridin-3-ilamino) -2H-cromen-2-ona; 3- (4-iodo-1,3-benzoxazol-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzoxazol-2-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzoxazol-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzoxazol-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (6-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- (1-metil-1H-pirazol-3-il) -2H- cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- (1-fenil-1H-pirazol-3-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (fenilamino) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- [4- (trifluorometil) piridin-2-il] -2H- cromen-2-ona; 3- (3-metoxifenil) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(metilamino) metil] -2H-cromen- 2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7 - {[(2-hidroxietil) (metil) amino] metil} -2H-cromen-2-ona; 3- (4-metil-1H-pirazol-3-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metilpiperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- [4- (propan-2-il) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzoxazol-2-il) -7- (2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzoxazol-2-il) -7- (2,5-dimetilpiperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- [6- (trifluorometil) piridin-2-il] -2H- cromen-2-ona; 3- (1H-indazol-5-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(2R, 5S) -2,5- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-etilpiperazin-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin- 2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (piperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (3-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (piperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7 - {[(1,3-di-hidroxipropan-2-il) amino] metil} -2H-cromen-2-ona; 7- (4-etilpiperazin-1-il) -3- (8-metilimidazo [1,2-a] piridin- 2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- propilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [4- (2-hidroxietil) piperazin-1-il] -3- (8-metilimidazo [1,2- a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- [4- (2-hidroxietil) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; {(3S) -1- [3- (6-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2-oxo-2H- cromen-7-il] pirrolidin-3-il} carbamato de terc-butil ; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-etilpiperazin-1-il) -3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (4-propilpiperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3 - ([1,3] oxazolo [4,5-b] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3 - ([1,3] oxazolo [4,5-b] piridin- 2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -4-metil-7- (piperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (5-cloropiridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- [7- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- [7- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- [7- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromen- 2-ona ; 3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (4- metilpiperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (4-metil-1,4-diazepan- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- propilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- [4- (2-hidroxietil) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) -3- (dimetilamino) pirrolidin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (7-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- [2- (trifluorometil) piridin-3-il] -2H- cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- [2- (trifluorometil) piridin-3- il] -2H-cromen-2-ona; 3- (3-fluoropiridin-4-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7 - {[(3R) -1-etilpirrolidin-3-il] oxi} -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-b] piridazin-2-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(1S, 4S) -2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il] -3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2- 1; 7 - {[2- (dimetilamino) etil] (metil) amino} -3- (imidazo [1,2- a] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (5-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metilpiperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (5-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metilpiperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,4,5- trimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (imidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,4,5- trimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (3-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (piperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7- [1- (dimetilamino) etil] -2H- cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7- [1- (propan-2-ilamino) etil] -2H- cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -7 - {[2- (dimetilamino) etil] (metil) amino} -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -4-metil-7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 7 - {[(2-hidroxietil) (metil) amino] metil} -3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-etilpiperazin-1-il) -3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2 -1; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona ; 7- [3- (dimetilamino) pirrolidin-1-il] -3- (2-metilimidazo [2,1b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona; 8-fluoro-7- (piperazin-1-il) -3- (piridin-2-il) -2H-cromen-2- ona; 8-fluoro-3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -6-fluoro-7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 6-fluoro-3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzoxazol-2-il) -5-fluoro-7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (1,3-benzotiazol-2-il) -5-fluoro-7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 5-fluoro-7- (piperazin-1-il) -3- (piridin-2-il) -2H-cromen-2- ona; 5-fluoro-3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilpiridin-3-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- (6-metilpiridin-3-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (2-metoxipiridin-4-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 7 - [(2R, 5S) -2,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona ; 3- [7- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -7 - [(3R, 5S) -3,4,5-trimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2 -1; 3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(1S, 4S) -2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il] -3- (6- metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen- 2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - {[2- (dimetilamino) etil] (metil) amino} -3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2- il) -2H-cromen-2-ona; {(3S) -1- [3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2-oxo-2H- cromen-7-il] pirrolidin-3-il} carbamato de terc-butil ; 7- (4-etilpiperazin-1-il) -3- (3-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (3-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-cloropiridin-4-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- [metil (1- metilpirrolidin-3-il) amino] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (3-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2 -1; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (3-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) - 2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- (pirazolo [1,5-a] piridin-2-il) -2H- cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- (pirazolo [1,5-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (pirazolo [1,5-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [4- (2-hidroxietil) piperazin-1-il] -3- (pirazolo [1,5-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (2,5-diazabiciclo [2.2.2] oct-2-il) -3- (pirazolo [1,5-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (pirazolo [1,5-a] piridin-2-il) -2H- cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (pirazolo [1,5-a] piridin-2- il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-etilpiperazin-1-il) -3- (pirazolo [1,5-a] piridin-2-il) - 2H-cromen-2-ona; 7- (4-propilpiperazin-1-il) -3- (pirazolo [1,5-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [4- (propan-2-il) piperazin-1-il] -3- (pirazolo [1,5-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (piperidin-4- iloxi) - 2H-cromen-2-ona; 7 - [(dimetilamino) metil] -3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7 - [(propan-2-ilamino) metil] -2H-cromen-2-ona; 7- [3- (dimetilamino) piperidin-1-il] -3- (6-metilimidazo [1,2- a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-etilpiperazin-1-il) -3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6- il) -2H-cromen-2-ona; 7 - {[2- (dimetilamino) etil] (metil) amino} -3- (imidazo [2,1b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- propilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 2- [7- (4-metilpiperazin-1-il) -2-oxo-2H-cromen-3-il] imidazo [1,2-a] piridina-6-carbonitrila; 7- (piperazin-1-il) -3- [8- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- [8- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- [8- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromen- 2-ona ; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (1,4-diazepan-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (3,3-dimetilpiperazin-1-il) -3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2- il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metoxipiridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 7- (4-aminopiperidin-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin- 2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- [metil (piridin-3- ilmetil) amino] -2H-cromen-2-ona; 7- (3,3-dimetilpiperazin-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (7-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - {[2- (dimetilamino) etil] (metil) amino} -3- (7-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (7-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (7-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol- 6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (4-metoxipiridin-3-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 3- (4-cloropiridin-3-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- [4- (trifluorometil) -1,3-tiazol-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- [4- (trifluorometil) -1,3-tiazol-2- il] -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- [4- (trifluorometil) -1,3- tiazol-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -3- [4- (trifluorometil) -1,3- tiazol-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] -3- [4- (trifluorometil) -1,3- tiazol-2-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-ciclopropilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-bromoimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-metilimidazo [1, 2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (3,3- dimetilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - {[(1-hidroxipropan-2-il) amino] metil} -3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(4-hidroxipiperidin-1-il) metil] -3- (6-metilimidazo [1,2- a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3-hidroxipirrolidin-1-il) metil] -3- (6-metilimidazo [1,2- a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-7- (piperazin-1-il) -3- [4- (trifluorometil) -1,3- benzoxazol-2-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (octa-hidro-6H- pirrolo [3,4-b] piridin-6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-etoxipiridin-3-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metoxipiridin-2-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (1-metil-1H-indol-3-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 3- (1-metil-1H-indol-3-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R, 5S) - 3,5-dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2- 1; 7 - [(1S, 4S) -2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il] -3- [4- (trifluorometil) -1,3-tiazol-2-il] -2H-cromen- 2-ona; 7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] -3- [7- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -3- [7- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (3,3-dimetilpiperazin-1-il) -3- [7- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7 - {[(1-hidroxipropan-2-il) amino] metil} -2H-cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7 - {[(2-hidroxietil) (metil) amino] metil} -2H-cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(3-hidroxipirrolidin-1- il) metil] -2H-cromen-2-ona; 3- (4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il) -7 - [(4- hidroxipiperidin-1- il) metil] -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilpirimidin-4-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- [7- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- [7- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(2R, 5S) -2,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- [7- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromen- 2-ona ; 3- (2-ciclopropilpirimidin-4-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- [2- (propan-2-il) pirimidin-4-il] -2H- cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- [metil (1- metilpiperidin-4-il) amino] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -3- (4-metil-1,3-tiazol-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (4-metil-1,3-tiazol-2-il) -2H- cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (4-metil-1,3-tiazol-2-il) - 2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (4-metil-1,3- tiazol-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (7-etilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (7-etilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (7-etilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (3,5-difluorofenil) -5-fluoro-7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (3,5-difluorofenil) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (4-fluoro-1,3-benzoxazol-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- [8- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R) -3,4- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- (2-metilpirimidin-4-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (2-ciclopropilpirimidin-4-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 7 - [(2S, 5R) -2,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (4-metil-1,3- tiazol-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] -3- (4-metil-1,3-tiazol-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (3,3-dimetilpiperazin-1-il) -3- (4-metil-1,3-tiazol-2-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (5-metilpirazolo [1,5-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- (5-metilpirazolo [1,5-a] piridin- 2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (5-metilpirazolo [1,5-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (3,3-dimetilpiperazin-1-il) -3- (5-metilpirazolo [1,5-a] piridin-2-yl) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] -3- (5-metilpirazolo [1,5-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-etilpiperazin-1-il) -3- (5-metilpirazolo [1,5-a] piridin- 2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (5-metilpirazolo [1,5-a] piridin-2-il) -7- (4- propilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (5-metilpirazolo [1,5-a] piridin-2- il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (5-metilpirazolo [1,5-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (piperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (piperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1H-benzimidazol-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 7- (piperazin-1-il) -3- (9H-purin-8-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (6-metoxipiridin- 2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (3,4-dimetoxifenil) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (3,4-dimetoxifenil) -7- (4-metilpiperazin-1-il) -2H-cromen- 2-ona; 3- (4-metiltiofen-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- (tiofen-3-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- (tiofen-3-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3R) -pirrolidin-3- iloxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3R) - pirrolidin-3-iloxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R) -pirrolidin- 3-iloxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7 - [(3R) -pirrolidin- 3-iloxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7 - [(3R) - pirrolidin-3-iloxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R) -pirrolidin- 3-iloxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3R) - pirrolidin-3-iloxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-fluoro-8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-fluoro-8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-fluoro-8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metil- 1,4-diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (6-fluoro-8- metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-etil-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metil- 1,4-diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (7-etilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-etil-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -5-fluoro-3- (imidazo [1,2-a] pirimidin- 2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloroimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) -3,4- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-etil-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (8-etil-6- metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2- 1; 3- (8-cloro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metil- 1,4-diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - {[(2-hidroxietil) (metil) amino] metil} -3- (imidazo [2,1b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(4-hidroxipiperidin-1-il) metil] -3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloroimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- [4- (2- hidroxietil) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloroimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloroimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloroimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -5-fluoro-3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (8-fluoro-6- metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metil- 1,4-diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-etilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metilpiperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metoxipiridin-2-il) -7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -2H- cromen-2-ona; 7- (4-etilpiperazin-1-il) -3- (6-metoxipiridin-2-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (6-metoxipiridin-2-il) -7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] - 2H-cromen-2-ona; 3- (6-metoxipiridin-2-il) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] - 2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- (tiofen-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (tiofen-2-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (3,5-difluorofenil) -5-fluoro-7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (4-fluoro-1,3-benzoxazol-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -5-fluoro-3- (4- fluoro-1,3-benzoxazol-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -5-fluoro-3- (4-fluoro-1,3-benzoxazol-2- il) -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (4-fluoro-1,3-benzoxazol-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1H-benzimidazol-2-il) -5-fluoro-7- (4-metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1H-benzimidazol-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin- 1-il] -5-fluoro-2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (4-metil- 1,4-diazepan-1-il) -2H-cromen-2 -1; 3- (1H-benzimidazol-2-il) -7- (1,4-diazepan-1-il) -5-fluoro-2H- cromen-2-ona; 3- (1H-benzimidazol-2-il) -5-fluoro-7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (6-cloroimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(1-benzilpirrolidin-3-il) (metil) amino] -3- (7- metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2- il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3,4-dimetilpiperazin-1-il] -3- (7-metilimidazo [1,2- a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-fluoropiridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 3- (6-etoxipiridin-2-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (3,4-dimetoxifenil) -7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 3- (3,4-dimetoxifenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 3- (3,4-dimetoxifenil) -7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1- il] -2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- [6- (propan-2-iloxi) piridin-2-il] -2H- cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- [6- (pirrolidin-1-il) piridin-2-il] - 2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (3,5-dimetoxifenil) -2H-cromen-2- ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5- dimetilpiperazin-1-il] -5-fluoro-2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -5-fluoro-7 - [(3R) - 3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -5-fluoro-3- [7- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] piridin-2-il] -2H-cromeno -2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -5-fluoro-7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -5-fluoro-7 - [(3S) - 3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (4-metil-1H-benzimidazol-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (5-fluoro-1H-benzimidazol-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (1H-benzimidazol-2-il) -7 - [(dimetilamino) metil] -2H- cromen-2-ona; 5-fluoro-7- (hidroximetil) -3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6- il) -2H-cromen-2-ona; 3- [8- (metilsulfanil) imidazo [1,2-a] pirazin-2-il] -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- [8- (metilsulfanil) imidazo [1,2- a] pirazin-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- [8- (metilsulfanil) imidazo [1,2-a] pirazin-2-il] -2H-cromen- 2-ona ; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- [8- (metilsulfanil) imidazo [1,2-a] pirazin-2-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-metoxi-imidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-metoxi-imidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (3,4-dimetoxifenil) -5-fluoro-7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (3,4-dimetoxifenil) -5-fluoro-7- (4-metilpiperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (3,4-dimetoxifenil) -5-fluoro-7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1-benzotiofen-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1-benzotiofen-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1- il] -2H-cromen-2-ona; 3- (1-benzotiofen-2-il) -7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 3- (1-benzotiofen-2-il) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 3- (3,5-dimetoxifenil) -7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (3,5-dimetoxifenil) -7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 3- (3,5-dimetoxifenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 3- [6- (ciclobutiloxi) piridin-2-il] -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- [6- (ciclobutiloxi) piridin-2-il] -7- (4-metilpiperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (3,4-dimetoxifenil) -5-fluoro-7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1- il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (imidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (8-metoxi-imidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-metoxi-imidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R) - 3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) - 3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (imidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (8-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (3,3-dimetilpiperazin-1-il) -3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-etilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (piperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (2-etilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2 -1; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (2-etilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol- 6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-etilimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona ; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (7-metoxi-imidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- [1- (piridin-2- il) -1H-imidazol-4-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metoxi-imidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metoxi-imidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metoxi-imidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(1R, 5S, 6s) -6- (dimetilamino) -3-azabiciclo [3.1.0] hex- 3-il] -3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol- 6-il) -2H-cromen- 2-ona; 7- (1,4-diazabiciclo [3.2.2] non-4-il) -3- (imidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(1R, 5S, 6s) -6- (dimetilamino) -3-azabiciclo [3.1.0] hex- 3-il] -3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) - 2H-cromen-2- ona; 7- (1,4-diazabiciclo [3.2.2] non-4-il) -3- (imidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3,4] tiadiazol-6-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3,4] tiadiazol-6-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3,4] tiadiazol-6-il) -2H-cromeno -2-ona; 7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -3- (piridin-2-il) -2H-cromen- 2-ona; 3- [6- (metilsulfanil) piridin-2-il] -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 7 - [(1S, 4S) -2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il] -3- (3,4- dimetoxifenil) -5-fluoro-2H-cromen-2-ona; 3- (4-metoxifenil) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (4-metoxifenil) -7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 3- (4-metoxifenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3,4] tiadiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3,4] tiadiazol-6-il) -2H-cromen-2 -1; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (1-fenil-1H- imidazol-4-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- [2-metil-1- (piridin-2-il) - 1H-imidazol-4-il] -2H-cromen-2- 1; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (imidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4-metil-1,4-diazepan-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-c] pirimidin-2-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (imidazo [1,2-c] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-c] pirimidin-2-il) -7- (4-metil-1,4-diazepan- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (quinoxalin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (3,4-dimetoxifenil) -5-fluoro-7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1- il] -2H-cromen-2-ona; 3- (2,4-dimetoxifenil) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2,4-dimetoxifenil) -7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 3- (2,4-dimetoxifenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (6-metoxipiridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (6-metoxipiridin-2-il) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin- 1-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - {[2- (dimetilamino) etil] amino} -3- (7-metilimidazo [1,2- a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3,4-dimetilpiperazin-1-il] -3- (8-fluoro-6- metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (3,4-dimetoxifenil) -7 - [(2S) -2-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 3- (2-cloroimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7 - [(3R, 5S) - 3,5-dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2 -1; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(1- metilpiperidin-4-il) amino] -2H-cromen-2-ona; 7 - {[3- (dimetilamino) propil] amino} -3- (7-metilimidazo [1,2- a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-cloroimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-cloroimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-fluoroimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-1; 3- (6-fluoroimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3,4] tiadiazol-6-il) -7 - [(3S) - 3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona ; 3- (2-metilimidazo [2,1-b] [1,3,4] tiadiazol-6-il) -7 - [(3R) - 3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona ; 3- (3-cloro-4-fluorofenil) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 3- (3-cloro-4-fluorofenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] - 2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzodioxol-5-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 3- (1,3-benzodioxol-5-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin- 1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzodioxol-5-il) -7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] - 2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-benzodioxol-5-il) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] - 2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -3- [3- (trifluorometil) fenil] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (6-fluoroimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-fluoroimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-cloroimidazo [2,1-b] [1,3] tiazol-6-il) -7- (piperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperidin-4- ilamino) -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R) -pirrolidin- 3-ilamino] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-ciclopropil-8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2- 1; 3- (6-ciclopropil-8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-ciclopropil-8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metil-1,4-diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-ciclopropil-8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazabiciclo [3.2.2] non-4-il) -3- (8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-fluoroimidazo [1,2-a] pirimidin-2-il) -7- (piperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-ciclopropil-8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-ciclopropil-8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazabiciclo [3.2.2] non-4-il) -3- (8-metilimidazo [1,2- a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (3,8-diazabiciclo [3.2.1] oct-3-il) -3- (8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (3,3-dimetilpiperazin-1-il) -3- (8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (3,3-dimetilpiperazin-1-il) -3- (6-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (3-clorofenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen- 2-ona; 3- (2-cloro-4-fluorofenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] - 2H-cromen-2-ona; 3- (3-metilfenil) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (3-metilfenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen- 2-ona; 3- (2,3-di-hidro-1,4-benzodioxin-6-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (2,3-di-hidro-1,4-benzodioxin-6-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (piperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3R, 5S) - 3,5-dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin- 2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-difluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazabiciclo [3.2.2] non-4-il) -3- (7-metilimidazo [1,2- a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-difluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-difluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R, 5S) - 3,5-dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-difluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (3,8-diazabiciclo [3.2.1] oct-3-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-cloroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (2,5-diazabiciclo [2.2.2] oct-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(8aS) -hexa- hidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -2H-cromen-2-ona; 3- (indolizin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(8aR) -hexa- hidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-difluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (piperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R) -3,4-dimetilpiperazin-1-il] -3- (8-fluoro-6- metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(8aS) -hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -3- (7- metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(1R, 5S) -8-metil-3,8-diazabiciclo [3.2.1] oct-3-il] -3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (3,5-difluoro-2-metoxifenil) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (3,5-difluoro-2-metoxifenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1- il] -2H-cromen-2-ona; 3- (3,5-difluoro-2-metoxifenil) -7 - [(3R, 5S) -3,5- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (4-metoxi-3-metilfenil) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 3- (4-metoxi-3-metilfenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] - 2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (4-metoxi-3- metilfenil) -2H-cromen-2-ona; 3- (3-fluoro-4-metoxifenil) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 3- (3-fluoro-4-metoxifenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (2,3-difluorofenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 3- [6- (dimetilamino) piridin-3-il] -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- [6- (dimetilamino) piridin-3-il] -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -3- (piridin-4-il) -2H-cromen- 2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -5-fluoro-3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4- metilpiperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (indolizin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (1-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (1-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- (1-metilpirrolo [1,2-a] pirazin- 7-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(8aS) - hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -2H -cromen- 2-ona; 7- (1,4-diazabiciclo [3.2.2] non-4-il) -3- (8-fluoro-6- metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (piperidin-4- ilamino) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) - pirrolidin-3-ilamino] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3R) - pirrolidin-3-ilamino] -2H-cromen-2-ona; 3- (indolizin-2-il) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -3- (1-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4- metilpiperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (3-metoxi-4-metilfenil) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 3- (3-metoxi-4-metilfenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] - 2H-cromen-2-ona; 3- (4-fluoro-3-metoxifenil) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2- ona; 3- (4-fluoro-3-metoxifenil) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (octa-hidro-2H- pirido [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (piperazin-1-il) -3- (pirrolo [1,2-a] pirimidin-7-il) -2H- cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (pirrolo [1,2-a] pirimidin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) -pirrolidin- 3-ilamino] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) - pirrolidin-3-ilamino] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3R) - pirrolidin-3-ilamino] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (3-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3,4-dimetilpiperazin-1-il] -3- (8-fluoroimidazo [1,2- a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] -3- (1-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (1-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (3-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (3-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metilpiperazin-1-il) -3- (3-metilpirrolo [1,2-a] pirazin- 7-il) -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 5-fluoro-3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) - 3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3R) -pirrolidin- 3-iloxi] -2H-cromen-2-ona; 7- (5,8-diazaspiro [3.5] non-8-il) -3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (6,9-diazaspiro [4.5] dec-9-il) -3- (7-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (2,5-diazabiciclo [2.2.2] oct-2-il) -3- (7-metilimidazo [1,2- a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (5,8-diazaspiro [3.5] non-8-il) -3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (6,9-diazaspiro [4.5] dec-9-il) -3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (2,5-diazabiciclo [2.2.2] oct-2-il) -3- (8-fluoro-6- metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3R) - pirrolidin-3-iloxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (1-benzofuran-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1-benzofuran-2-il) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -2H- cromen-2-ona; 3- (1-benzofuran-2-il) -7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1- il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3R, 5S) - 3,4,5-trimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2- 1; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3R) -3,4- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- [6-metil-8- (trifluorometil) imidazo [1,2-a] pirazin-2-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin- 2-il) -5-fluoro-2H-cromen-2-ona; 7 - [(8aS) -hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -3- (6- metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3R) -pirrolidin- 3-iloxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(8aR) - hexa-hidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -2H -cromen- 2-ona; 3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (octa- hidro-2H-pirido [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen- 2-ona; 3- (8-fluoro-6-metilimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7- (8-metil- 3,8-diazabiciclo [3.2.1] oct-3-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -5-fluoro-7- (4- metil-1,4-diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [metil (1- metilpirrolidin-3-il) amino] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(1-benzilpirrolidin-3-il) (metil) amino] -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (6-metilimidazo [1,2-b] piridazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-etil-1,4-diazepan-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (azetidin-3-ilamino) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin- 2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {metil [(3S) - pirrolidin-3-il] amino} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4- etilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-etilpiperazin-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin- 2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(1S, 4S) -2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il] -3- (6- metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen- 2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-b] piridazin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(8aR) -hexa-hidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -4-etil- 3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -4-etil-3-metilpiperazin-1-il] -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R) -3,4-dimetilpiperazin-1-il] -3- (6-metilimidazo [1,2- a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -3- (tieno [3,2-c] piridin-2- il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (tieno [3,2-c] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-b] piridazin-2- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(8aR) -hexa- hidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -2H-cromeno -2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (octa-hidro- 2H-pirido [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(8aS) - hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -2H-cromeno - 2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (octa-hidro-2H- pirido [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(8aR) -hexa-hidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -3- (1-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2 -1; 7 - [(3R) -3-metilpiperazin-1-il] -3- (3-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (3-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7- il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (2-metilpirrolo [1,2-b] piridazin-6-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-etilpiperazin-1-il) -3- (3-metilpirrolo [1,2-a] pirazin- 7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilpirrolo [1,2-b] piridazin-6-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(8aS) -hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -3- (1- metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(8aS) -hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -3- (3- metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2 -1; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (1,3- dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (3-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- (octa-hidro-2H- pirido [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3-metilpiperazin-1-il] -3- (3-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(1S, 4S) -2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il] -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H- cromen-2-ona; 7- [(8aS) -hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -3- (2- metilimidazo [1,2-a] pirimidin-6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-6-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(8aS) -hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -3- (2- metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -2H-cromen-2 -1; 3- (2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [4- (2- hidroxietil) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(4aR, 7aR) - octa-hidro-6H-pirrolo [3,4-b] piridin-6-il] - 2H-cromen-2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {metil [(3S) - 1-metilpirrolidin-3-il] amino} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - {[(3S) -1- metilpirrolidin-3-il] amino} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(4aR, 7aR) - 1-metilocta-hidro-6H-pirrolo [3,4-b] piridin-6-il ] -2H- cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3,4-dimetilpiperazin-1-il] -5-fluoro-3- (6- metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R) -3,4-dimetilpiperazin-1-il] -3- (2-metilimidazo [1,2- a] pirimidin-6-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R) -3,4-dimetilpiperazin-1-il] -3- (2-metilimidazo [1,2- a] piridin-6-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-metil-1,4-diazepan-1-il) -3- (2-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-6-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (3- etilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3- (dimetilamino) pirrolidin-1-il] -3- (3- metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-etil-1,4-diazepan-1-il) -3- (3-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - [(8aR) -hexa- hidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -2H-cromeno -2- ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- (piperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- (4-etil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -3,4- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - [(8aS) - hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -2H-cromeno - 2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- (4- etilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3,4-dimetilpiperazin-1-il] -3- (2-metilimidazo [1,2- a] piridin-6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (3-etil-4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7- (4- metilpiperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3R) -4-etil- 3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin- 7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- (octa-hidro- 2H-pirido [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [4- (2-hidroxietil) piperazin-1-il] -3- (3-metilpirrolo [1,2- a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- [4- (2- hidroxietil) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3aR, 6aS) - hexahidropirrolo [3,4-c] pirrol-2 (1H) -il] -2H -cromen-2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3aS, 6aS) - hexahidropirrolo [3,4-b] pirrol-1 (2H) -il] -2H -cromen-2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3aR, 6aS) - 5-metil-hexa-hidropirrolo [3,4-c] pirrol-2 (1H) -il] -2H- cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3aS, 6aS) - 5-metil-hexa-hidropirrolo [3,4-b] pirrol-1 (2H) -il] -2H- cromen-2-ona; 7 - [(3R) -3- (dimetilamino) pirrolidin-1-il] -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3- (dimetilamino) pirrolidin-1-il] -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (3-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- [4- (propan-2-il) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R) -3- (dimetilamino) pirrolidin-1-il] -3- (3- metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - [(3S) -4-etil- 3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metil-1,3-benzoxazol-6-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(1S, 4S) -5- metil-2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il ] -2H-cromen-2- ona; 7 - [(3S) -3- (dimetilamino) pirrolidin-1-il] -3- (1,3- dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (5-metilfuro [3,2-b] piridin-2-il) -7- (4-metilpiperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {metil [(3R) - pirrolidin-3-il] amino} -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (6-metil-8- nitroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - {[(3-exo) -9- metil-9-azabiciclo [3.3.1] non-3-il] amino} -2H-cromen-2- ona; 3- (6-metil-8-nitroimidazo [1,2-a] piridin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3aR, 6aR) - 1-metil-hexa-hidropirrolo [3,4-b] pirrol-5 (1H) -il] -2H- cromen-2-ona; 3- (2,4-dimetiltieno [2,3-d] pirimidin-6-il) -7- (piperazin-1- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3aS, 6aS) - 1-metil-hexa-hidropirrolo [3,4-b] pirrol-5 (1H) -il] -2H- cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {metil [(3R) - 1-metilpirrolidin-3-il] amino} -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R) -3- (dimetilamino) pirrolidin-1-il] -3- (1,3- dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- [4- (propan-2- il) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(8aR) - hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -2H -cromen- 2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(8aS) - hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -2H -cromen- 2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4-metil- 1,4-diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (4-aminopiperidin-1-il) -3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [4- (dimetilamino) piperidin-1-il] -3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [4- (dimetilamino) piperidin-1-il] -3- (3-metilpirrolo [1,2- a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3- (dimetilamino) pirrolidin-1-il] -3- (2- metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3aR, 6aS) -hexahidropirrolo [3,4-c] pirrol-2 (1H) -il] - 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromeno -2- ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(4aR, 7aR) -octa- hidro-6H-pirrolo [3,4-b] piridin-6-il] -2H- cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (5-metilfuro [3,2b] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(8aR) -hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -3- (5- metilfuro [3,2-b] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(8aS) -hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -3- (5- metilfuro [3,2-b] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; terc-butil {(3S) -1- [3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7- il) -2-oxo-2H-cromen-7-il] pirrolidin-3-il carbamato; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - [(3S) -3- (propan-2-ilamino) pirrolidin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3R) - 3,4-dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) - 3,4-dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - {[(1R, 5S) - 9-metil-9-azabiciclo [3.3.1] non-3-il] amino} -2H-cromen- 2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - [(3aS, 6aS) - 1-metil-hexa-hidropirrolo [3,4-b] pirrol-5 (1H) -il] -2H- cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - {[(3R) -1- metilpirrolidin-3-il] amino} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - {[(3R) -1- etilpirrolidin-3-il] amino} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - {[(3R) -1- (2- hidroxietil) pirrolidin-3-il] amino} -2H-cromen- 2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - {[(3R) -1- (propan-2-il) pirrolidin-3-il] amino} -2H- cromen-2-ona; 7 - [(3R, 4R) -3- (dimetilamino) -4-hidroxipirrolidin-1-il] -3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen- 2- ona; 7- [3- (dietilamino) pirrolidin-1-il] -3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (3,3- dimetilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (3,3,4- trimetilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S, 4S) -3- (dimetilamino) -4-hidroxipirrolidin-1-il] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen- 2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3'S, 4'S) - 4'-hidroxi-1,3'-bipirrolidin-1'-il] -2H -cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (1,2,3,6-tetra- hidropiridin-4-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3aR, 6aS) - 5- (2-hidroxietil) hexa-hidropirrolo [3,4-c] pirrol-2 ( 1H) -il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (piperidin-4- il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3aR, 6aS) - 5- (propan-2-il) hexa-hidropirrolo [3,4-c] pirrol- 2 (1H) -il] -2H-cromen-2-ona; 7- (2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il) -3- (3-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -7 - [(8aS) -hexa- hidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -2H-cromeno -2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4- etilpiperazin-1-il) -5-fluoro-2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3aR, 6aS) - 5-etil-hexa-hidropirrolo [3,4-c] pirrol-2 (1H) -il] -2H- cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo[1,2-a] pirazin-2-il) -7- (1- metilpiperidin-4-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (1- etilpiperidin-4-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [1- (2- hidroxietil) piperidin-4-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - [(3'R, 4'R) - 4'-hidroxi-1,3'-bipirrolidin-1'- il] -2H-cromen-2-ona; 7- (4-ciclopropilpiperazin-1-il) -3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2- a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (3-metilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- [4- (propan-2-il) -1,4-diazepan-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- [4- (propan-2- il) -1,4-diazepan-1-il] -2H-cromen- 2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - [(3aR, 6aR) - 1-metil-hexa-hidropirrolo [3,4-b] pirrol-5 (1H) -il] -2H- cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - [(3aR, 6aS) - 5-metil-hexa-hidropirrolo [3,4-c] pirrol-2 (1H) -il] -2H- cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- [3- (morfolin- 4- il) pirrolidin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(7R, 8aS) - 7-hidroxi-hexa-hidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] - 2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R) -3,4-dimetilpiperazin-1-il] -3- (8-metoxi-6- metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R) -3,4-dimetilpiperazin-1-il] -3- (8-hidroxi-6- metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(1R, 5S, 6s) -6- (dimetilamino) -3-azabiciclo [3.1.0] hex- 3-il] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2 -il) -2H- cromen-2-ona; 7- (4-ciclopropilpiperazin-1-il) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2- a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -3- (dimetilamino) pirrolidin-1-il] -2H-cromen-2-ona ; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4- etilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - [(7R, 8aS) - 7-hidroxi-hexa-hidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] - 2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - [(3S) -3- metil-4- (propan-2-il) piperazin-1-il] -2H -cromen-2-ona; 3- (2-metil-1,3-benzotiazol-6-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (2-metil-1,3-benzotiazol-6-il) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin- 1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (1,4-diazepan-1-il) -3- (2-metil-1,3-benzotiazol-6-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -3- etilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [1- (propan-2- il) piperidin-4-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -7- [4- (2- hidroxietil) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -7- (4-metil-1,4- diazepan-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3,4-dimetilpiperazin-1-il] -3- (2-metil-1,3- benzotiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -4-etil-3-metilpiperazin-1-il] -3- (2-metil-1,3- benzotiazol-6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -3-etil- 4-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3,4-dietilpiperazin-1-il] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(1S, 4S) -2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il] - 2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(4aR, 7aR) - octa-hidro-6H-pirrolo [3,4-b] piridin-6-il] - 2H-cromen-2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(4aR, 7aR) - 1-metilocta-hidro-6H-pirrolo [3,4-b] piridin-6-il ] -2H- cromen-2-ona; 7- (2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il) -3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [4- (aminometil) piperidin-1-il] -3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(4aR, 7aR) - 1- (2-hidroxietil) octa-hidro-6H-pirrolo [3,4-b] piridin- 6-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(4aR, 7aR) - 1-etilocta-hidro-6H-pirrolo [3,4-b] piridin-6-il ] -2H- cromen-2-ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(1S, 4S) -5-metil-2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2 -il] -2H-cromen- 2-ona; 3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -7- (4- etilpiperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -7- [4- (propan-2-il) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7- {4 - [(propan- 2-ilamino) metil] piperidin-1-il} -2H-cromen-2- ona; 3- (6-cloro-8-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(1S, 4S) -5-etil-2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2 -il] -2H-cromen-2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [4- (propan-2- il) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(1S, 4S) -5- etil-2,5-diazabiciclo [2.2.1] hept-2-il ] -2H-cromen-2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(4aS, 7aS) - octa-hidro-6H-pirrolo [3,4-b] piridin-6-il] - 2H-cromen-2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(4aS, 7aS) - 1-metilocta-hidro-6H-pirrolo [3,4-b] piridin-6-il ] -2H- cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(4aS, 7aS) - 1- (2-hidroxietil) octa-hidro-6H-pirrolo [3,4-b] piridin- 6-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3R, 5S) -4-etil-3,5-dimetilpiperazin-1-il] -3- (6- metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-ciclopropilpiperazin-1-il) -3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -7- [4- (2-metoxietil) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (1-metil- 1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il) -2H-cromen-2- 1; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [1- (2- hidroxietil) -1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il] -2H- cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [1- (propan-2- il) -1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il] - 2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(4aS, 7aS) - 1-etilocta-hidro-6H-pirrolo [3,4-b] piridin-6-il ] -2H- cromen-2-ona; 3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -7 - [(3S) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -7 - [(3S) -3,4- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -7 - [(3R) -3- metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -7 - [(3R) -3,4- dimetilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -3- (propan-2-il) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -4- metil-3- (propan-2-il) piperazin-1-il] -2H -cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -4-etil- 3- (propan-2-il) piperazin-1-il] -2H -cromen-2-ona; 7- (4-ciclopropilpiperazin-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-terc-butilpiperazin-1-il) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -7 - [(3R) -3- metil-4- (propan-2-il) piperazin-1-il] -2H -cromen-2-ona; 7- (4-ciclobutilpiperazin-1-il) -3- (1,3-dimetilpirrolo [1,2-a] pirazin-7-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -7- (4- propilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [4- (ciclopropilmetil) piperazin-1-il] -3- (5,7-dimetilfuro [2,3-c] piridin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (4,6-dimetiltieno [3,2-c] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -3- (piperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (4,6-dimetiltieno [3,2-c] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (4,6-dimetiltieno [3,2-c] piridin-2-il) -7- [4- (2- metoxietil) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (1-ciclobutilpiperidin-4-il) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-ciclobutilpiperazin-1-il) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [4- (oxetan-3- il) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-etil-6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (piperazin- 1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7- (piperidin-4-il) - 2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7- (1-metilpiperidin- 4-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1-etilpiperidin-4-il) -3- (2-metilimidazo [1,2-a] piridin- 6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7- [1- (oxetan-3-il) piperidin-4-il] -2H-cromen-2-ona; 7- [1- (2-hidroxietil) piperidin-4-il] -3- (2-metilimidazo [1,2- a] piridin-6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-etil-6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (4,6-dimetilfuro [3,2-c] piridin-2-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (4,6-dimetilfuro [3,2-c] piridin-2-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [4- (propan-2-il) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-6-il) -7- (piperidin-4-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metilimidazo [1,2-a] pirimidin-6-il) -7- (1- metilpiperidin-4-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1-etilpiperidin-4-il) -3- (2-metilimidazo [1,2-a] pirimidin- 6-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [4- (2-hidroxietil) piperazin-1-il] -3- (6-metilimidazo [1,2- a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-ciclobutilpiperazin-1-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [4- (oxetan-3-il) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (4,6-dimetilfuro [3,2-c] piridin-2-il) -7- [4- (propan-2-il) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (1-metilpiperidin- 4-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (1- propilpiperidin-4-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [1- (2-hidroxietil) piperidin-4-il] -3- (6-metilimidazo [1,2- a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1-etilpiperidin-4-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin- 2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- [2-metil-3- (1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il) imidazo [1,2b] piridazin-6-il] -7- (1,2,3,6- tetra-hidropiridin-4-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(dimetilamino) metil] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (piperidin-1- ilmetil) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (piperazin-1- ilmetil) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(4- metilpiperazin-1-il) metil] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(propan-2- ilamino) metil] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (1H-imidazol- 1-ilmetil) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4-etil-3- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (4,6-dimetilpirazolo [1,5-a] pirazin-2-il) -7- (1- etilpiperidin-4-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (1-ciclopropilpiperidin-4-il) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2- a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [1- (oxetan-3- il) piperidin-4-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metil-2H-indazol-5-il) -7- (piperidin-4-il) -2H-cromen-2- ona; 7- [3- (dimetilamino) propil] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [3- (propan-2- ilamino) propil] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [3- (piperazin- 1-il) propil] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [3- (4- metilpiperazin-1-il) propil] -2H-cromen-2-ona; 7- [1- (2-hidroxietil) piperidin-4-il] -3- (2-metil-2H-indazol- 5-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (2-metil-2H-indazol-5-il) -7- (1-metilpiperidin-4-il) -2H- cromen-2-ona; 7- (1-etilpiperidin-4-il) -3- (2-metil-2H-indazol-5-il) -2H- cromen-2-ona; 7- [2- (dimetilamino) etil] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [2- (propan-2- ilamino) etil] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [2- (piperazin- 1-il) etil] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(1- metilpiperidin-4-il) oxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (piperidin-4-il) - 2H-cromen-2-ona; 7- (1-ciclobutilpiperidin-4-il) -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {2 - [(2- hidroxietil) amino] etil} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {2 - [(2- hidroxietil) (metil) amino] etil} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {2 - [(1- hidroxipropan-2-il) amino] etil} -2H-cromen-2-ona; 7- {2 - [(1,3-di-hidroxipropan-2-il) amino] etil} -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2- 1; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {2 - [(2R) -2- (hidroximetil) pirrolidin-1-il] etil} -2H-cromen- 2-ona; 7- {2- [bis (2-hidroxietil) amino] etil} -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [2- (dimetilamino) etoxi] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [2- (propan-2- ilamino) etoxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [1- (oxetan-3-il) piperidin-4-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {3 - [(2- hidroxietil) amino] propil} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {3 - [(2- hidroxietil) (metil) amino] propil} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {3 - [(1- hidroxipropan-2-il) amino] propil} -2H-cromen-2-ona; 7- {3 - [(1,3-di-hidroxipropan-2-il) amino] propil} -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {3 - [(2R) -2- (hidroximetil) pirrolidin-1-il] propil} -2H-cromen- 2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [3- (morfolin- 4- il) propil] -2H-cromen-2-ona; 7- {3- [bis (2-hidroxietil) amino] propil} -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [2- (morfolin- 4- il) etil] -2H-cromen-2-ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (1-propilpiperidin- 4-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -4- (2- hidroxietil) -3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen- 2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - {[(3R) -1- metilpirrolidin-3-il] oxi} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - {[(3R) -1- etilpirrolidin-3-il] oxi} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - {[(3R) -1- (propan-2-il) pirrolidin-3-il] oxi} -2H- cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - {[(3R) -1- (2- hidroxietil) pirrolidin-3-il] oxi} -2H-cromen- 2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - {[(3R) -1- (1- hidroxipropan-2-il) pirrolidin-3-il] oxi} - 2H-cromen-2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -4- (2- fluoroetil) -3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen- 2-ona; 7- [2- (dietilamino) etoxi] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- {2- [bis (2-hidroxietil) amino] etoxi} -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (piperidin-4- iloxi) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(1- etilpiperidin-4-il) oxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - {[1- (2- hidroxietil) piperidin-4-il] oxi} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -4- (3- fluoropropil) -3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen- 2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - {[1- (propan- 2-il) piperidin-4-il] oxi} -2H-cromen-2- 1; 7- [4- (dimetilamino) butil] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilolimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {4 - [(2- hidroxietil) (metil) amino] butil} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {4 - [(2R) -2- (hidroximetil) pirrolidin-1-il] butil} -2H-cromen- 2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [4- (piperazin- 1-il) butil] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [1- (3- fluoropropil) piperidin-4-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(3S) -4- (3- hidroxipropil) -3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen- 2-ona; 7- [3- (dimetilamino) propil] -3- (2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [3- (dimetilamino) propil] -3- (8-fluoro-2-metilimidazo [1,2- a] piridin-6-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [3- (dimetilamino) propil] -3- (8-etil-2-metilimidazo [1,2- a] piridin-6-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [2- (metilamino) etil] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [3- (metilamino) propil] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoro-2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7- [3- (metilamino) propil] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [1- (2- metilpropil) piperidin-4-il] -2H-cromen-2-ona; 7 - {[1- (1,3-di-hidroxipropan-2-il) piperidin-4-il] oxi} -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H- cromen-2- ona; 3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [1- (2-metilpropil) piperidin-4-il] -2H-cromen-2-ona; 7- [1- (3-fluoropropil) piperidin-4-il] -3- (6-metilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [2- (pirrolidin-1-il) etoxi] -2H-cromen-2-ona; 7- (4-aminopiperidin-1-il) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (4-amino-4-metilpiperidin-1-il) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [4- (dimetilamino) piperidin-1-il] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [4- (dietilamino) piperidin-1-il] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [4- (propan-2- ilamino) piperidin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- [4- (ciclobutilamino) piperidin-1-il] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {4 - [(1- hidroxipropan-2-il) amino] piperidin-1-il} -2H-cromen- 2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [3- (etilamino) propil] -2H-cromen-2-ona; 7- (3-aminopropil) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2- il) -2H-cromen-2-ona; 7- {4- [bis (2-hidroxietil) amino] piperidin-1-il} -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- {4 - [(1,3-di-hidroxipropan-2-il) amino] piperidin-1-il} -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H- cromen-2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [2- (etilamino) etoxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {3 - [(2- metoxietil) amino] propil} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {3 - [(tetra- hidrofuran-2-ilmetil) amino] propil} -2H-cromen-2-ona; 7- [3- (benzilamino) propil] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {3 - [(tiofen- 3-ilmetil) amino] propil} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {3 - [(piridin- 2-ilmetil) amino] propil} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {3 - [(piridin- 4- ilmetil) amino] propil} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {2- [etil (metil) amino] etoxi} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {2- [etil (2- hidroxietil) amino] etoxi} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [3- (tetra- hidrofuran-3-ilamino) propil] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {2 - [(3R) -3- hidroxipirrolidin-1-il] etoxi} -2H-cromen-2-ona ; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [3- (2- metilpiperidin-1-il) azetidin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- [3- (dimetilamino) azetidin-1-il] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [3- (dietilamino) azetidin-1-il] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (2,7-diazaspiro [4.4] non-2-il) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2- a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (2 - {[(2R) - 1-hidroxipropan-2-il] amino} etoxi) -2H-cromen- 2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (2 - {[(2S) - 1-hidroxipropan-2-il] amino} etoxi) -2H-cromen- 2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7 - [(2R) - pirrolidin-2-ilmetoxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (2,2,6,6- tetrametil-1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il) - 2H-cromen-2- ona; 7 - [(3R) -3- (aminometil) pirrolidin-1-il] -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [3- (piperidin- 1-il) azetidin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [4- (metilamino) butil] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [2- (piperidin- 1-il) etoxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {2 - [(3S) -3- hidroxipirrolidin-1-il] etoxi} -2H-cromen-2-ona ; 3- (6,8-dimetilimidaazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {2 - [(1- hidroxi-2-metilpropan-2-il) amino] etoxi} -2H-cromen-2- ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [2- (morfolin- 4- il) etoxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [2- (4- hidroxipiperidin-1-il) etoxi] -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (1-etil-4- fluoropiperidin-4-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {2 - [(2- hidroxietil) amino] etoxi} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {2 - [(2- metoxietil) amino] etoxi} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- {2 - [(2- hidroxipropil) amino] etoxi} -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- [4- (2-hidroxi- 2-metilpropil) piperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- [3- (aminometil) azetidin-1-il] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2- a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - [(3S) -3- (aminometil) pirrolidin-1-il] -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - {(3R) -3 - [(dimetilamino) metil] pirrolidin-1-il} -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2- 1; 7- {3 - [(dimetilamino) metil] azetidin-1-il} -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7 - {(3S) -3 - [(dimetilamino) metil] pirrolidin-1-il} -3- (6,8- dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2- 1; 7- [2- (dietilamino) etil] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [3- (dietilamino) propil] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- [4- (dietilamino) butil] -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (2,6-diazaspiro [3.3] hept-2-il) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (6-metil-2,6- diazaspiro [3.3] hept-2-il) -2H-cromen-2- 1; 2- [3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2-oxo-2H- cromen-7-il] hexa-hidropirrolo [1,2-a] pirazin-6 (2H )-1; 1- [3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2-oxo-2H- cromen-7-il] piperidina-4-carbonitrila; 3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -7- (4- hidroxipiperidin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (2,7-diazaspiro [3.5] non-7-il) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2- a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 7- (6-amino-2-azaspiro [3.3] hept-2-il) -3- (6,8-dimetilimidazo [1,2-a] pirazin-2-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7- (4-metilpiperazin-1-il) - 2H-cromen-2-ona; 7 - [(8aS) -hexa-hidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -3- (imidazo [1,2-a] piridin-6-il) -2H-cromen-2-ona ; 3- (imidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7- (piperazin-1-il) -2H- cromen-2-ona; 3- (imidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7 - [(3S) -3-metilpiperazin- 1-il] -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoro-2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7- (4- metilpiperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona; 3- (8-fluoro-2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7 - [(8aS) - hexahidropirrolo [1,2-a] pirazin-2 (1H) -il] -2H -cromen- 2-ona; 3- (8-fluoro-2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7 - [(3S) - 3-metilpiperazin-1-il] -2H-cromen-2-ona; 7- (2,6-diazaspiro [3.3] hept-2-il) -3- (8-fluoro-2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -2H-cromen-2-ona; e 3- (8-fluoro-2-metilimidazo [1,2-a] piridin-6-il) -7- (piperazin-1-il) -2H-cromen-2-ona, ou um sal, racemato, enantiômero ou tautômero destes.
4. Composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por compreender o composto ser selecionado a partir de: trifluoracetato 7-(piperazin-1-il)-3-[4-(trifluormetil)- 1,3-benzoxazol-2-il]-2H-cromen-2-ona cloridrato 7-(piperazin-1-il)-3-[4-(trifluormetil)-1,3- benzoxazol-2-il]-2H-cromen-2-ona trifluoracetato 7-(piperazin-1-il)-3-[7-(trifluormetil)- 1,3-benzoxazol-2-il]-2H-cromen-2-ona cloridrato 7-(piperazin-1-il)-3-[7-(trifluormetil)-1,3- benzoxazol-2-il]-2H-cromen-2-ona trifluoracetato 2-oxo-N-fenil-7-(piperazin-1-il)-2H- cromeno-3-carboxamida cloridrato 3-(4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il)-7-(piperazin- 1-il)-2H-cromen-2-ona cloridrato 3-(7-cloro-1,3-benzotiazol-2-il)-7-(piperazin- 1-il)-2H-cromen-2-ona cloridrato 3-(4-cloro-1,3-benzotiazol-2-il)-7-(piperidin- 4-il)-2H-cromen-2-ona cloridrato 3-(5-fluor-1,3-benzoxazol-2-il)-7-(piperazin-1- il)-2H-cromen-2-ona cloridrato 3-(4-metil-1,3-benzoxazol-2-il)-7-(piperazin-1- il)-2H-cromen-2-ona cloridrato 3-(4-fluor-1,3-benzoxazol-2-il)-7-(piperazin-1- il)-2H-cromen-2-ona trifluoracetato 7-(piperazin-1-il)-3-[4-(trifluormetil)- 1,3-tiazol-2-il]-2H-cromen-2-ona cloridrato 7-(piperazin-1-il)-3-[4-(trifluormetil)-1,3- tiazol-2-il]-2H-cromen-2-ona trifluoracetato 7-(4-metilpiperazin-1-il)-3-[4- (trifluormetil)-1,3-tiazol-2-il]-2H-cromen-2-ona cloridrato 3-(4-iodo-1,3-benzoxazol-2-il)-7-(piperazin-1- il)-2H-cromen-2-ona cloridrato 3-(4-cloro-1,3-benzoxazol-2-il)-7-(piperazin-1- il)-2H-cromen-2-ona cloridrato 3-([1,3]oxazolo[4,5-b]piridin-2-il)-7- (piperazin-1-il)-2H-cromen-2-ona cloridrato 7-[(1S,4S)-2,5-diazabiciclo[2.2.1]hept-2-il]-3- (imidazo[1,2-a]pirimidin-2-il)-2H-cromen-2-ona (1:3) cloridrato 3-(3-metilimidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-il)-7- (piperazin-1-il)-2H-cromen-2-ona (1:3) cloridrato 7-(1,4-diazepan-1-il)-3-(imidazo[1,2- a]pirimidin-2-il)-2H-cromen-2-ona cloridrato 3-(imidazo[1,2-a]pirimidin-2-il)-7-(piperidin- 4-iloxi)-2H-cromen-2-ona cloridrato 3-(2-metilpirimidin-4-il)-7-(piperazin-1-il)- 2H-cromen-2-ona cloridrato 3-(2-ciclopropilpirimidin-4-il)-7-(piperazin-1- il)-2H-cromen-2-ona cloridrato 7-(piperazin-1-il)-3-[2-(propan-2-il)pirimidin- 4-il]-2H-cromen-2-ona cloridrato 3-(imidazo[1,2-a]pirimidin-2-il)-7-[(3R)- pirrolidin-3-iloxi]-2H-cromen-2-ona (1:2) cloridrato 3-(7-metilimidazo[1,2-a]pirimidin-2-il)-7- [(3R)-pirrolidin-3-iloxi]-2H-cromen-2-ona (1:2) cloridrato 3-(7-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il)-7-[(3R)- pirrolidin-3-iloxi]-2H-cromen-2-ona (1:2) cloridrato 3-(imidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-il)-7-[(3R)- pirrolidin-3-iloxi]-2H-cromen-2-ona (1:2) cloridrato 3-(2-metilimidazo[2,1-b][1,3]tiazol-6-il)-7- [(3R)-pirrolidin-3-iloxi]-2H-cromen-2-ona (1:2) cloridrato 3-(6-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il)-7-[(3R)- pirrolidin-3-iloxi]-2H-cromen-2-ona (1:2) cloridrato 3-(6-metilimidazo[1,2-a]pirimidin-2-il)-7- [(3R)-pirrolidin-3-iloxi]-2H-cromen-2-ona (1:2) acetato 7-[(1-benzilpirrolidin-3-il)(metil)amino]-3-(7- metilimidazo[1,2-a]pirimidin-2-il)-2H-cromen-2-ona acetato 7-[(3R)-3,4-dimetilpiperazin-1-il]-3-(8-metoxi-6- metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2H-cromen-2-ona (1:2) acetato 7-[(3R)-3,4-dimetilpiperazin-1-il]-3-(8-hidroxi-6- metilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2H-cromen-2-ona acetato 7-[(3S)-3,4-dimetilpiperazin-1-il]-3-(2-metil-1,3- benzotiazol-6-il)-2H-cromen-2-ona (2:1) acetato 7-[(3S)-4-etil-3-metilpiperazin-1-il]-3-(2-metil- 1,3-benzotiazol-6-il)-2H-cromen-2-ona acetato 3-(6,8-dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-7-[(3S)- 3-etil-4-metilpiperazin-1-il]-2H-cromen-2-ona, e acetato 7-[(3S)-3,4-dietilpiperazin-1-il]-3-(6,8- dimetilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)-2H-cromen-2-ona (1:2); ou uma base livre, racemato, enantiômero ou tautômero destes.
5. Composição farmacêutica caracterizada por compreender uma quantidade eficaz do composto conforme definido na reivindicação 1 e um veículo farmaceuticamente aceitável, excipiente ou diluente.
6. Composto caracterizado por ser selecionado a partir da fórmula (Ia)
Figure img0352
ou um ácido livre, base livre, sal, racemato, enantiômero ou forma tautômero do mesmo, em que R1 é heterocíclico selecionado a partir de azetidin-1-il, tetra- hidrofuran-3-il, piperidin-1-il, piperidin-4-il, piperazin-1- il, 1,4 diazepan-1-il, 1,2,5,6 tetra-hidropiridin 3-il, 1,2,3,6 tetra-hidropiridin 4 il , hexa-hidropirrolo [3,4 b] pirrol 1 (2H) il, (3aS, 6aS) hexa-hidropirrolo [3,4 b] pirrol 1 (2H) il, (3aS, 6aS) hexa-hidropirrolo [3,4 b] pirrol 5 (1H ) il, (3aR, 6aR) hexa-hidropirrolo [3,4 b] pirrol 5 (1H) il, hexa- hidropirrolo [3,4 c] pirrol 2 (1H) il, (3aR, 6aS) hexa- hidropirrolo [3,4 c] pirrol 2 (1H) il, octa-hidro 5H-pirrolo [3,2 c] piridin 5 il, octa-hidro 6H pirrolo [3,4 b] piridin 6 il, (4aR, 7aR) octa-hidro 6H pirrolo [3,4 b] piridin 6 il, (4aS, 7aS) octa-hidro 6H pirrolo [3,4 b] piridin 6 il, hexa- hidropirrolo [1,2 a] pirazin 2 (1H) il, hexa-hidropirrolo [1,2 a] pirazin 6 (2H) ona, (7R, 8aS ) hexa-hidropirrolo [1,2 a] pirazin 2 (1H) il, (8aS) hexa-hidropirrolo [1,2 a] pirazin 2 (1H) il, (8aR) hexa-hidropirrolo [1,2 a] pirazin 2 (1H) il, (8aS) octa-hidropirrolo [1,2 a] pirazin 2 (1H) il, (8aR) octa- hidropirrolo [1,2 a] pirazin 2 (1H) il, octa-hidro 2H pirido [1,2 a] pirazina 2 il, 3 azabiciclo [3.1.0] hex 3 il, 8 azabiciclo [3.2.1] oct 3 il, (1R, 5S) 8 azabiciclo [3.2.1] oct 3 il, 8 azabiciclo [3.2.1] oct 2 en 3 il, (1R, 5S) 8 azabiciclo [3.2.1] oct 2 en 3 il, 9 azabiciclo [3.3.1] non 3 il, (1R, 5S) 9 azabiciclo [3.3.1] non 3 il, 2,5 diazabiciclo [ 2.2.1] hept 2 il, (1S, 4S) 2,5 diazabiciclo [2.2.1] hept 2 il, 2,5 diazabiciclo [2.2.2] oct 2 il, 3,8 diazabiciclo [3.2.1] oct 3 il, (1R, 5S) 3,8 diazabiciclo [3.2.1] oct 3 il, 1,4 diazabiciclo [3.2.2] non 4 il, azaspiro [3.3] hept 2 il, 2,6-diazaspiro [3.3] hept -2- il, 2,7-diazaspiro [3,5] non-7-il, 5,8 diazaspiro [3,5] non 8 il, 2,7-diazaspiro [4,4] non-2-il e 6,9 diazaspiro [4.5 ] dec 9 il opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes R3 e um substituinte R4 opcional adicional; R2 é heteroaril selecionado entre tien-2-il, tien-3-il, 1H- pirazol-4-il, 1H-pirazol-5-il, 1H-imidazol-1-il, 1H-imidazol-4- il, 1,2 ,4 oxadiazol-3-il, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin- 4 il, pirimidin-4-il, 1H-indol-3-il, 1H-indol-4-il, indol-5-il, indol-6-il, 1H-indazol-5-il, 2H-indazol-5-il, indolizin-2-il, benzofuran-2-il, benzotien-2-il, benzotien-3-il, 1H- benzimidazol-6-il, 1,3 benzoxazol 5 il, 1,3 benzoxazol-6-il, 1,3 benzotiazol-5-il, 1,3 benzotiazol-6-il, 9H-purin-8-il, furo [3,2 b] piridin-2-il, furo [3,2 c] piridin-2-il, furo [2,3 c] piridin- 2-il, tieno [3,2-c] piridin-2-il, tieno [2,3 -d] pirimidin-6- il, 1H pirrolo [2,3 b] piridin-5-il, 1H pirrolo [2,3 c] piridin- 4-il, pirrolo [1,2 a] pirimidin-7-il, pirrolo [1,2a] pirazin-7- il, pirrolo [1,2b] piridazin-2-il, pirrolo [1,2b] piridazin-6- il, pirazolo [1,5a] piridin-2-il, pirazolo [1,5 a] pirazin-2- il, imidazo [2,1 b] [1,3] tiazol-6-il, imidazo [2,1 b] [1,3,4] tiadiazol-6 -il, [1,3] oxazolo [4,5-b] piridin-2-il, imidazo [1,2 a] piridin-6-il, imidazo [1,2 a] pirimidin-2-il, imidazo [1,2 a] pirimidin-6-il, imidazo [1,2 c] pirimidin-2-il, imidazo [1,2 b] piridazin-2-il, imidazo [1,2 b] piridazin-6-ilo, imidazo [1,2a] pirazin-2-ilo e quinoxalin-2-il; em que cada heteroaril é opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes R6 e um adicional, opcional substituinte R7; Ra é, em cada caso, selecionado independentemente a partir de hidrogênio, halogênio ou C1-8alquil; Rb é hidrogênio, halogênio, C1-8alquil ou C1-8alcóxi; R3 é, em cada caso, selecionado independentemente a partir de ciano, halogênio, hidroxi, oxo, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, C1-8alquil-carbonil, C1-8alcóxi, halo-C1-8alcóxi, C1-8alcóxi-C1-8alquil, C1-8alcóxi-carbonil, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino, amino-C1-8alquil, C1-8alquil-amino-C1-8alquil, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil, amino-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-amino-C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino-C1-8alquil-amino, C1-8alcóxi-C1-8alquil-amino, C1-8alquil-carbonil-amino, C1-8alcóxi-carbonil-amino, hidroxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alcóxi-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil-amino, (hidroxi-C1-8alquil)2-amino ou (hidroxi-C1-8alquil)(C1-8alquil)amino; R4 é C3-14cicloalquil, C3-14cicloalquil-C1-8alquil, C3-14cicloalquil-amino, aril-C1-8alquil, aril-C1-8alcóxi-carbonil, heterociclil ou heterociclil-C1-8alquil; em que, cada caso de C3-14cicloalquil, aril e heterociclil é opcionalmente substituído com um, dois ou três substituintes R5; R5 é, em cada caso, selecionado independentemente a partir de halogênio, hidroxi, ciano, nitro, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, C1-8alcóxi, halo-C1-8alcóxi, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino ou C1-8alquil-tio; R6 é, em cada caso, selecionado independentemente a partir de halogênio, hidroxi, ciano, nitro, C1-8alquil, halo-C1-8alquil, hidroxi-C1-8alquil, C1-8alcóxi, halo-C1-8alcóxi, amino, C1-8alquil-amino, (C1-8alquil)2-amino ou C1-8alquil-tio; e, R7 é C3-14cicloalquil, C3-14cicloalquil-oxi, aril, heterociclil ou heteroaril.
7. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por a forma de sal ser um cloreto, cloridrato, dicloridrato, bromidrato, acetato ou sal trifluoracetato.
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