EA028382B1 - Соединения для лечения спинальной мышечной атрофии - Google Patents

Соединения для лечения спинальной мышечной атрофии Download PDF

Info

Publication number
EA028382B1
EA028382B1 EA201491766A EA201491766A EA028382B1 EA 028382 B1 EA028382 B1 EA 028382B1 EA 201491766 A EA201491766 A EA 201491766A EA 201491766 A EA201491766 A EA 201491766A EA 028382 B1 EA028382 B1 EA 028382B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
alkyl
formula
compound
amino
chromen
Prior art date
Application number
EA201491766A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201491766A1 (ru
Inventor
Тяньлэ Ян
Гари Митчелл Карп
Хунянь Ци
Original Assignee
ПиТиСи ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ПиТиСи ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК. filed Critical ПиТиСи ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК.
Publication of EA201491766A1 publication Critical patent/EA201491766A1/ru
Publication of EA028382B1 publication Critical patent/EA028382B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
    • C07D311/28—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 2 only
    • C07D311/30—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 2 only not hydrogenated in the hetero ring, e.g. flavones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретение относится к соединениям формулы (Ia1)где R, R, R, Rи Rопределены в формуле изобретения, к их композициям и к их применению для лечения спинальной мышечной атрофии.

Description

Настоящее изобретение относится к соединениям, к композициям, содержащим эти соединения, и к их применению для лечения спинальной мышечной атрофии.
Предшествующий уровень техники
В самых общих чертах, спинальная мышечная атрофия (§МА) представляет собой группу наследуемых и приобретенных заболеваний центральной нервной системы (ЦНС), характеризующихся прогрессирующей потерей мотонейронов спинного мозга и ствола головного мозга, приводящей к слабости и атрофии мышц. Наиболее распространенная форма §МА вызывается мутациями гена выживаемости мотонейронов (8ΜΝ) и проявляется тяжелыми поражениями широкого ряда как у детей, так и у взрослых (Сга\\Тогб апб Рагбо, №итоЬю1. Όίδ., 1996, 3:97).
§МА у детей представляет собой наиболее тяжелую форму нейродегенеративного расстройства. Симптомами такого расстройства являются мышечная слабость, плохой мышечный тонус, слабый крик, хромота или частые падения, затруднение в сосании или глотании, скапливание секрета в легких или в горле, затруднения в приеме пищи и повышенная восприимчивость к инфекциям дыхательных путей. При этом мышечная слабость проявляется больше в ногах, чем в руках, а функции организма, приобретаемые на последующих этапах развития, такие как поднимание головы или принятие положения сидя, вообще не могут быть достигнуты. Обычно, более ранние проявления симптомов являются признаком более короткой продолжительности жизни. Симптомы заболевания появляются почти сразу после разрушения мотонейронов. Тяжелые формы этого заболевания приводят к летальному исходу, и ни одна из этих форм не поддается лечению известными методами. Течение §МА непосредственно ассоциируется со скоростью разрушения клеток мотонейронов и приводит к слабости в тяжелой форме. Дети с тяжелой формой §МА часто умирают от респираторного заболевания, вызываемого слабостью мышц дыхательных путей. Дети с более легкими формами §МА живут гораздо дольше, хотя и им может потребоваться интенсивная терапия, особенно тем детям, которые страдают более тяжелыми формами расстройств, относящихся к последней группе клинического спектра данного заболевания. Клинический спектр расстройств §МА подразделяется на пять нижеследующих групп:
(a) 8МА типа 0 (внутриутробная (ίη и!его) 8МА) представляет собой наиболее тяжелую форму заболевания и развивается у ребенка еще до его рождения. Обычно первым симптомом §МА типа 0 является пониженная степень подвижности плода, которая впервые может наблюдаться на сроке беременности от 30 до 36 недель. После родов у этих новорожденных наблюдается слабая подвижность и затруднения в глотании и дыхании.
(b) §МА типа 1 (8МА у детей или болезнь Верднига-Гоффмана), при которой симптомы обычно проявляются через 0-6 месяцев после рождения. §МА этого типа также представляет собой очень тяжелую форму заболевания. Пациенты с такой формой §МА вообще неспособны сидеть, и, если не проводить искусственную вентиляцию легких, то они обычно умирают в первые 2 года жизни.
(c) §МА типа 2 (промежуточная форма 8МА) развивается в возрасте 7-18 месяцев. Пациенты с таким заболеванием могут сидеть без поддержки, но неспособны стоять или ходить без посторонней помощи. Прогноз для пациентов этой группы зависит, главным образом, от степени поражения дыхательных путей.
(б) §МА типа 3 (ювенильная §МА или болезнь Кугельберга-Веландера) обычно диагностируется через 18 месяцев после рождения. Пациенты с §МА типа 3 способны ходить самостоятельно на любом этапе течения заболевания, но в юношеском или зрелом возрасте они часто пользуются кресломкаталкой.
(е) §МА типа 4 (§МА у взрослых). Слабость обычно наступает в позднем подростковом возрасте и затрагивает язык, руки или ноги, а затем распространяется и на другие участки организма. §МА у взрослых протекает гораздо медленнее и не влияет или незначительно влияет на ожидаемую продолжительность жизни.
Ген §ΜN был картирован с помощью анализа на сцепление с комплексной областью в хромосоме
- 1 028382
5ср У человека эта область содержит приблизительно 500000 пар оснований (т.п.н.) с инвертированными дупликациями, дающими две почти идентичных копии гена 8ΜΝ. §МЛ вызывается инактивирующей мутацией или делецией теломерной копии гена (8ΜΝ1) в обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена 8ΜΝ1. Однако у всех пациентов сохраняется центромерная копия гена (8ΜΝ2), и число копий гена 8ΜΝ2 у пациентов с 8ΜΆ обычно обратно пропорционально тяжести заболевания, то есть, у пациентов с менее тяжелой формой 8ΜΆ имеется большее число копий 8ΜΝ2. Тем не менее, наличие 8ΜΝ2 не может полностью компенсировать потерю функции 8ΜΝ1, что обусловлено альтернативным сплайсингом экзона 7, вызываемым трансляционным сайленсингом мутации С на Т в экзоне 7. В результате этого, в большинстве транскриптов, продуцируемых из 8ΜΝ2, отсутствует экзон 7 (8ΜΝ2Δ7), и эти транскрипты кодируют усеченный белок §ши, который имеет нарушенную функцию и быстро разлагается.
Очевидно, что белок §ши играет определенную роль в процессинге и метаболизме РНК, имеет хорошо охарактеризованную функцию, заключающуюся в опосредовании сборки комплексов РНК-белок конкретного класса, обозначаемых δηΚΝΡ. §ши может также обладать и другими функциями в мотонейронах, однако его роль в предупреждении селективной дегенерации мотонейронов пока точно не установлена.
В большинстве случаев 8ΜΆ диагностируют по клиническим симптомам и по отсутствию всех копий экзона 7 в гене 8ΜΝ1, как было определено с помощью генетического анализа. Однако в приблизительно 5% случаев 8ΜΆ вызывается мутациями, а не делецией полноразмерного гена 8ΜΝ1 или какойлибо другой делецией полноразмерного экзона 7 в гене 8ΜΝ1, при этом некоторые из этих мутаций являются известными, а другие пока еще не определены. В случаях, когда невозможно провести тест на присутствие гена 8ΜΝ1, или когда последовательность гена 8ΜΝ1 не обнаруживает какой-либо аномалии, могут быть проведены и другие тесты, такие как электромиография (ΕΜΟ) или мышечная биопсия.
В настоящее время лечение пациентов с 8ΜΆ ограничивается поддерживающей терапией, включая искусственную вентиляцию легких, лечебное питание и меры по реабилитации; и пока еще не существует каких-либо известных лекарственных средств, направленных на устранение причины развития заболевания. Современные способы лечения 8ΜΆ состоят в предупреждении и сдерживании развития побочных эффектов хронической потери мотонейронов. Главной целью лечения 8ΜΆ типа 1 является предупреждение и сдерживание развития легочных заболеваний на ранней стадии, которые являются основной причиной летального исхода у большинства пациентов с таким заболеванием. Хотя некоторые дети, страдающие 8ΜΆ, доживают до зрелого возраста, однако ожидаемая продолжительность жизни детей с 8ΜΆ типа 1 составляет менее 2 лет.
Было получено несколько мышиных моделей 8ΜΆ. В частности, у модели с 8ΜΝΆΔ7 (Ье εΐ а1., Нит. Μο1. Сепек, 2005, 14:845) присутствует ген 8ΜΝ2 и несколько копий кДНК 8ΜΝ2Δ7, в результате чего происходит рекапитуляция многих фенотипических признаков 8ΜΆ типа 1. Модель 8ΜΝΆΔ7 может быть использована в исследованиях по экспрессии 8ΜΝ2, а также для оценки двигательной функции и выживаемости. Мышиная модель с С/С-аллелем Оаскхоп БаЬогаЮгу κίταίη Νο.: 008714) представляет собой модель с менее тяжелой формой 8ΜΆ, и у этих мышей наблюдаются пониженные уровни полноразмерной мРНК §ΜΝ2 (8ΜΝ2 РЬ) и белка §тп. Мышиный фенотип с С/С-аллелем имеет ген 8ΜΝ2 и гибридный ген т§тη1-§ΜN2, который подвергается альтернативному сплайсингу, но не ассоциируется с какой-либо заметной слабостью мышц. Мышиная модель с С/С-аллелем используется в исследованиях экспрессии 8ΜΝ2.
По мере появления все большей информации о генетической основе и патофизиологии 8ΜΆ было исследовано несколько стратегий лечения, но ни одна из них не дала заметного успеха при клиническом применении.
Замена гена 8ΜΝ1 с использованием вирусного вектора для доставки и замена клеток с использованием дифференцированных стволовых §ΜN1+/+-клеток продемонстрировали эффективность таких замен у животных с моделями 8ΜΆ. До применения этих методов в медицине необходимо провести дополнительные исследования для оценки безопасности иммунного ответа, и уже после этого можно начать лечение человека на неонатальной стадии.
Коррекция альтернативного сплайсинга 8ΜΝ2 в культивированных клетках была также достигнута с использованием синтетических нуклеиновых кислот в качестве терапевтических средств, а именно: (ΐ) антисмысловых олигонуклеотидов, которые направлены на элементы последовательности в пре-мРНК 8ΜΝ2 и переключают реакцию сплайсинга на продуцирование полноразмерной мРНК 8ΜΝ2 (Ра881ш εΐ а1., 8с1. Ттап81. Μεά., 2011, 3:72га 18; и, Ниа εΐ а1., Шине, 2011, 478:123), и (и) молекул транс-сплайсинга РНК, которые в процессе сплайсинга вместо мутантного фрагмента обеспечивают продуцирование полностью функциональной последовательности РНК и генерируют полноразмерную мРНК 8ΜΝ1 (Соабу апб Ьот8оп, I. №ито8ск, 2010, 30: 126).
Другие подходы, применяемые в исследованиях, включают поиск лекарственных средств, способствующих повышению уровней §тп, усилению остаточной функции §тп или компенсации потери §тп. Было показано, что аминогликозиды способствуют повышению уровня экспрессии стабилизированного
- 2 028382 белка 8ти продуцируемого из мРНК 8ΜΝ2Δ7, благодаря стимуляции трансляционного считывания аберрантного стоп-кодона, но они плохо проникают в центральную нервную систему и являются токсичными при их введении в повторных дозах. Было показано, что химиотерапевтические средства, такие как акларубицин, увеличивают уровнень белка 8тп в клеточной культуре, однако профиль токсичности этих лекарственных средств не позволяет осуществлять длительное применение таких средств для пациентов с 8ΜΑ. Существует несколько лекарственных средств, проходящих клинические испытания на возможность их применения для лечения 8ΜΑ, и этими лекарственными средствами являются активаторы транскрипции, такие как ингибиторы гистон-деацетилазы (НЭАС) (например, бутираты, вальпроевая кислота и гидроксимочевина) и стабилизаторы мРНК (ингибитор декэппирования мРНК К.О3039 от Керйдеп), которые, как предполагается, увеличивают количество полной РНК, транскрибированной из гена 8ΜΝ2. Однако применение ингибиторов НЭЛС или стабилизаторов мРНК не направлено на устранение причины развития 8ΜΑ и может приводить к глобальному повышению уровня транскрипции и экспрессии гена, в связи с чем могут возникать проблемы, связанные с безопасностью при лечении человека.
В альтернативном способе для проведения исследования были выбраны нейропротективные агенты, такие как олероксим. Целью таких стратегий является не увеличение уровня продуцирования функционального 8тп, необходимого для лечения 8ΜΑ, а проведение исследования по защите 8тпдефицитных мотонейронов от нейродегенерации.
Система, сконструированная для идентификации соединений, повышающих уровень включения экзона 7 8ΜΝ в РНК, транскрибируемую из гена 8ΜΝ2, и некоторые идентифицированные таким образом соединения бензооксазола и бензоизоксазола описаны в Международной заявке РСТ/и82009/003238, поданной 27 мая 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № ν02009/151546 и публикация заявки на патент США № И82011/0086833). Система, сконструированная для идентификации соединений, продуцирующих стабилизированный белок 8тп из мРНК 8ΜΝ2Δ7 и некоторые идентифицированные таким образом соединения изоиндолинона, описаны в Международной заявке РСТ/и82009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация завки № \νθ2010/019236 и публикация заявки на патент США И82011/0172284). Каждый из вышеупомянутых документов во всей своей полноте и во всех целях включен в настоящее описание посредством ссылки.
Все другие цитируемые здесь документы во всей своей полноте включены в настоящую заявку посредством ссылки.
Несмотря на прогресс в понимании генетической основы и патофизиологии 8ΜΑ, необходимость в идентификации соединений, влияющих на течение спинальной мышечной атрофии, то есть, одного из наиболее тяжелых неврологических заболеваний у детей, остается актуальной.
Описание сущности изобретения
В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I)
или их формам, где ^1, №2, №3, №4, №5 и №6 определены в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей соединение формулы (I) или его форму и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его форме или к их фармацевтической композиции для лечения спинальной мышечной атрофии (8ΜΑ).
8ΜΑ вызывается делецией или мутацией гена 8ΜΝ1, которые приводят к селективной дегенерации Зтп-дефицитных мотонейронов. Хотя у человека сохраняется несколько копий гена 8ΜΝ2, однако небольшое количество функционального белка 8тп, экспрессируемого из 8ΜΝ2, не может полностью компенсировать потерю белка 8тп, который экспрессируется из гена 8ΜΝ1. Получение соединений и их композиций, а также их применение, описанные в настоящей заявке, основаны, в частности, на обнаружении заявителями того факта, что соединение формулы (I) повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, транскрибируемую из минигена 8ΜΝ2. Этот миниген репродуцирует реакцию альтернативного сплайсинга экзона 7 8ΜΝ2, что приводит к удалению экзона 7 в большинстве транскриптов 8ΜΝ2. Таким образом, соединения формулы (I) или их формы могут быть использованы для модуляции включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2. Заявителями также было обнаружено, что соединение формулы (I) повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из минигена 8ΜΝ1. Таким образом, соединения формулы (I) или их формы могут быть использованы для модуляции включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1.
- 3 028382
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) или к их формам, которые могут быть использованы для модуляции включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) или к их формам, которые могут быть использованы для модуляции включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) или к их формам, которые могут быть использованы для модуляции включения экзона 7 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, соответственно.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для лечения 8ΜΆ. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения 8ΜΆ у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение указанному индивидууму эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. Соединение формулы (I) или его форма, предпочтительно вводят индивидууму в виде фармацевтической композиции. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) для лечения 8ΜΆ, где указанное соединение повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2. Не ограничиваясь какой-либо конкретной теорией, авторы лишь отмечают, что соединения формулы (I) повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, и повышают уровни белка 8ши, продуцируемого из гена 8ΜΝ2, а поэтому они могут быть использованы для лечения 8ΜΆ у человека, нуждающегося в этом.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к праймерам и/или зондам, описанным ниже в разделе Биологические примеры (например, к праймерам 8ΜΝ, таким как §Еф ГО ΝΟ: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или §Еф ГО ΝΟ: 2, 9 или 12, и/или к зондам 8ΜΝ, таким как §Еф ГО ΝΟ: 3 или 10) и к применению этих праймеров и/или зондов. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенной нуклеотидной последовательности, содержащей §Еф ГО ΝΟ: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенной нуклеотидной последовательности, состоящей по существу из 8Еф ГО ΝΟ: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к выделенной нуклеотидной последовательности, состоящей из 8Еф ГО ΝΟ: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13.
В некоторых вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и не включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, может быть использовано в качестве биомаркера для выявления 8ΜΆ, описанной в настоящем документе. В других вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, может быть использовано в качестве биомаркера для лечения пациента с использованием описанного здесь соединения. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΆ. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом не является пациент с 8ΜΆ.
В некоторых вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, а также количество мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и не включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, могут быть использованы в качестве биомаркеров для лечения пациента с использованием описанного здесь соединения. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΆ. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом не является пациент с 8ΜΆ.
В соответствии с этими вариантами осуществления изобретения праймер(-ы) 8ΜΝ и/или зонд 8ΜΝ, описанные ниже, могут быть использованы в анализах, таких как РСК (например, с|РСР). амплификация по типу катящегося кольца и КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), проводимых для оценки и/или определения количества мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и включает или не включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2.
В конкретном варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе Биологические примеры (например, праймеры 8ΜΝ, такие как §Еф ГО ΝΟ: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или §Еф ГО ΝΟ: 2, 9 или 12, и/или зонды 8ΜΝ, такие как §Еф ГО ΝΟ: 3 или 10), используют в анализе, таком как КТ-РСК, КТ-цРСК, КТ-РСК в конечной точке, РСК, цРСК, амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе Биологические примеры), проводимом для того, чтобы определить, может ли соединение (например, соединение формулы (I) или его форма) повышать уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, транскрибируемой из гена 8ΜΝ2.
В конкретном варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе Биологические примеры (например, праймеры 8ΜΝ, такие как §Еф ГО ΝΟ: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или §Еф ГО ΝΟ: 2, 9 или 12, и/или зонды 8ΜΝ, такие как §Еф ГО ΝΟ: 3 или 10), используют в анализе, таком как КТ-РСК, РТ-цРСР, КТ-РСК в конечной точке, РСК, цРСР, амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе Биологиче- 4 028382 ские примеры), проводимом для того, чтобы определить, может ли соединение (например, соединение формулы (I) или его форма) повышать уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, транскрибируемой из гена 8ΜΝ1.
В конкретном варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе Биологические примеры (например, праймеры 8ΜΝ, такие как 8ЕС ГО N0: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или 8ЕС ГО N0: 2, 9 или 12, и/или зонды 8ΜΝ, такие как 8Е0 ГО N0: 3 или 10), используют в анализе, таком как КТ-РСК, РТ-цРСР. КТ-РСК в конечной точке, РСК, цРСР. амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе Биологические примеры), проводимом для того, чтобы определить, может ли соединение (например, соединение формулы (I) или его форма) повышать уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, транскрибируемой из гена 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2.
В другом варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе Биологические примеры (например, праймеры 8ΜΝ, такие как 8ЕС ГО Ν0: 7, 11 или 13 и/или 8ЕС ГО Ν0: 9 или 12, и/или зонды 8ΜΝ, такие как 8ЕС ГО Ν0: 3 или 10), используют в анализе, таком как КТРСК, КТ-цРСК, КТ-РСК в конечной точке, РСК, цРСР, амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе Биологические примеры), проводимом для мониторинга количества мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2 и включает экзон 7 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΆ. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом не является пациент с 8ΜΆ.
В другом варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе Биологические примеры (например, праймеры 8ΜΝ, такие как 8ЕС ГО Ν0: 7, 11 или 13 и/или 8ЕС ГО Ν0: 9 или 12, и/или зонды 8ΜΝ, такие как 8ЕС ГО Ν0: 3 или 10), используют в анализе, таком как КТРСК, РТ-цРСР, КТ-РСК в конечной точке, РСК, цРСР, амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе Биологические примеры), проводимом для мониторинга количества мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и включает экзон 7 8ΜΝ1, в образце, взятом у пациента. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΆ. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом не является пациент с 8ΜΆ.
В другом варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе Биологические примеры (например, праймеры 8ΜΝ, такие как 8ЕС ГО Ν0: 7, 11 или 13 и/или 8ЕС ГО Ν0: 9 или 12, и/или зонды 8ΜΝ, такие как 8ЕС ГО Ν0: 3 или 10), используют в анализе, таком как КТРСК, РТ-цРСР, КТ-РСК в конечной точке, РСК, цРСР, амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе Биологические примеры), проводимом для мониторинга количества мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΆ. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом не является пациент с 8ΜΆ.
В другом варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе Биологические примеры (например, праймеры 8ΜΝ, такие как 8ЕС ГО Ν0: 7, 8, 11 или 13 и/или 8ЕС ГО Ν0: 9 или 12, и/или зонды 8ΜΝ, такие как 8ЕС ГО Ν0: 3 или 10), используют в анализе, таком как КТ-РСК, РТ-цРСР, КТ-РСК в конечной точке, РСК, цРСР, амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в разделе Биологические примеры), проводимом для мониторинга ответа пациента на соединение (например, соединение формулы (I) или его форму). В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΆ. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом не является пациент с 8ΜΆ.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу определения способности соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)) повышать уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, где указанный способ включает (a) приведение мРНК, которая транскрибируется из минигена 8ΜΝ2, описанного в настоящей заявке или в Международной заявке РСТ/И82009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № ^02010/019236) или публикации заявки на патент США И82011/0172284, в присутствии соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), в контакт с описанным здесь праймером(-ами) (например, 8ЕС ГО Ν0: 1 и/или 2) вместе с соответствующими компонентами, например, для КТ-РСК, РТ-цРСР, РСК, КТ-РСК в конечной точке, цРСР или амплификации по типу катящегося кольца; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2 в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена
- 5 028382
8ΜΝ2; и (2) отсутствие изменения или какого-либо значимого изменения количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2 в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение не повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, транскрибируемой из гена 8ΜΝ2.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу определения способности соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)) повышать уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, где указанный способ включает (а) приведение мРНК, которая транскрибируется из минигена 8ΜΝ2, описанного в настоящей заявке или в Международной заявке РСТ/И82009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № \У02010/019236) или публикации заявки на патент США И82011/0172284, в присутствии соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), в контакт с описанным здесь праймером(-ами) (например, 8ЕО ГО Ν0: 1 и/или 2) вместе с соответствующими компонентами, например, для КТ-РСК, КТ-дРСК, РСК, КТ-РСК в конечной точке, дРСК или амплификации по типу катящегося кольца; и (Ь) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1 в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1; и (2) отсутствие изменения или какого-либо значимого изменения количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1 в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение не повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, транскрибируемой из гена 8ΜΝ1.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу определения способности соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)) повышать уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, где указанный способ включает (a) приведение мРНК, которая транскрибируется из минигена 8ΜΝ2, описанного в настоящей заявке или в Международной заявке РСТ/и82009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № ^02010/019236) или публикации заявки на патент США И82011/0172284, в присутствии соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), в контакт с описанным здесь зондом (например, 8Е0 ГО Ν0: 3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, например, для КТ-РСК, КТ-дРСК, КТ-РСК в конечной точке, РСК, дРСК, амплификации по типу катящегося кольца и, если это необходимо, для Нозерн-блот-анализа или Саузерн-блот-анализа; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2, в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2; и (2) отсутствие изменения или какого-либо значимого изменения количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2 в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение не повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, транскрибируемой из гена 8ΜΝ2.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу определения способности соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)) повышать уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1, где указанный способ включает (a) приведение мРНК, которая транскрибируется из минигена 8ΜΝ1, описанного в Международной заявке РСТ/И82009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № \У02010/019236) или публикации заявки на патент США И82011/0172284, в присутствии соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), в контакт с описанным здесь зондом (например, 8Е0 ГО Ν0: 3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, например, для КТ-РСК, КТ-дРСК, КТ-РСК в конечной точке, РСК, с|РСР. амплификации по типу катящегося кольца и, если это необходимо, для Нозерн-блот-анализа или Саузерн-блот-анализа; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1, в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1 в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1; и (2) отсутствие изменения или какого-либо значимого изменения количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1 в отсутст- 6 028382 вие этого соединения, указывает на то, что такое соединение не повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, транскрибируемой из гена 8ΜΝ2.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу определения способности соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)) повышать уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, где указанный способ включает (a) приведение мРНК, которая транскрибируется из минигена 8ΜΝ2, описанного в настоящей заявке или в Международной заявке РСТ/и82009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № ^02010/019236) или публикации заявки на патент США И82011/0172284, в присутствии соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), в контакт с описанным здесь праймером(-ами) (например, 8Е0 ГО Ν0: 1 или 2) и/или зондом (например, 8Е0 ГО Ν0: 3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, например, для КТ-РСК, РТ-цРСР. КТРСК в конечной точке, РСК, цРСК, амплификации по типу катящегося кольца и, если это необходимо, для Нозерн-блот-анализа или Саузерн-блот-анализа; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2, в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2, в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2; и (2) отсутствие изменения или какого-либо значимого изменения количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2 в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ2, в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение не повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, транскрибируемой из гена 8ΜΝ2.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу определения способности соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)) повышать уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1, где указанный способ включает (a) приведение мРНК, которая транскрибируется из минигена 8ΜΝ1, в Международной заявке РСТ/И82009/004625, поданной 13 августа, 2009 (опубликованной как Международная публикация заявки № ^02010/019236) или публикации заявки на патент США И82011/0172284, в присутствии соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I) ), в контакт с описанным здесь праймером(-ами) (например, 8Е0 ГО Ν0: 1 или 2) и/или описанным здесь зондом (например, 8Е0 ГО Ν0: 3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, например, для КТ-РСК, РТ-дРСР, КТ-РСК в конечной точке, РСК, дРСВ, амплификации по типу катящегося кольца и, если это необходимо, для Нозерн-блот-анализа или Саузерн-блот-анализа; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1, в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1, в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1; и (2) отсутствие изменения или какого-либо значимого изменения количества мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1, в присутствии указанного соединения, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 8ΜΝ1, в отсутствие этого соединения, указывает на то, что такое соединение не повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к наборам, содержащим праймер и/или зонд, описанные ниже в разделе Биологические примеры (например, к праймерам 8ΜΝ, таким как 8ЕО ГО Ν0: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или 8ЕО ГО Ν0: 2, 9 или 12, и/или к зондам 8ΜΝ, таким как 8Е0 ГО Ν0: 3 или 10), и к применению таких наборов.
Краткое описание графического материала
На фиг. 1, упомянутой в биологическом примере 1, схематически представлена конструкция минигена 8ΜΝ2-Α, которая продуцирует два альтернативно сплайсированных транскрипта мРНК: полноразмерной мРНК, содержащей экзон 7, и мРНК Δ7, не содержащей экзона 7. Нуклеотид аденин, встроенный в экзон 7 8ΜΝ2-Α за нуклеотидным остатком 48, обозначен буквой А. Альтернативно, нуклеотид может быть также выбран из цитозина или тимина. В результате инсерции одного нуклеотида (Α, С или Т) за нуклеотидным остатком 48, полноразмерная мРНК не содержит стоп-кодона в открытой рамке считывания 8ΜΝ, тогда как мРНК Δ7 имеет стоп-кодон в экзоне 8, который обозначен словом 8ΐορ.
На фиг. 2, упомянутой в биологическом примере 1, представлена последовательность ДНК минигена, происходящего от конструкции минигена 8ΜΝ2-Α 8ЕО ГО Ν0: 21 (фиг. 2а). Как показано на фиг. 2Ь, могут присутствовать нижеследующие подпоследовательности:
1-70: 5НТК (вырожденный);
71-79: экзон 6: старт-кодон и ВатШ-сайт (а!ддда!сс);
- 7 028382
80-190: экзон 6;
191-5959: интрон 6;
5960-6014: экзон 7 со встроенным нуклеотидом аденином А (положение 6008);
6015-6458: интрон 7;
6459-6481: часть экзона 8;
6482-8146: ВатН1-сайт (последовательность у 5'-конца), последовательность, кодирующая люцеферазу и начинающаяся с кодона 2 (без кодона инициации), ΝοΐΙ-сайт (последовательность у З'-конца), стоп-кодон ТАА; и
8147-8266: 3'ИТК (вырожденный).
Для конструирования варианта минигена 8ΜΝ1, шестой нуклеотид экзона 7 (тиминовый остаток) конструкции минигена 3ΜΝ2-Α был заменен цитозином с помощью сайт-направленного мутагенеза. Таким образом, по аналогии с конструкцией минигена 3ΜΝ2-Α, конструкция минигена 3ΜΝ1 имеет один адениновый остаток, встроенный за нуклеотидным остатком 48 экзона 7. Конструкция минигена 3ΜΝ1 обозначена 3ΜΝ1-Α. Аналогичным образом, нуклеотид, встроенный в конструкцию минигена 3ΜΝ1 за нуклеотидным остатком 48 экзона 7, может быть также альтернативно выбран из цитозина и тимина.
На фиг. 3, упомянутой в биологическом примере 2, продемонстрирована коррекция альтернативного сплайсинга минигена 3ΜΝ2 в клетках, обработанных повышенными концентрациями соединения 17 (фиг. За) и соединения 38 (фиг. 3Ь) в течение 24 ч. Уровни полноразмерной мРНК минигена 3ΜΝ2 количественно оценивали с помощью количественной РСК с обратной транскриптазой (РТ-цРСР). Уровень полноразмерной мРНК минигена 3ΜΝ2 в образцах, обработанных соединением, нормализовали по уровню в образцах, обработанных носителем, и строили график зависимости от концентрации соединений.
На фиг. 4, упомянутой в биологическом примере 3, продемонстрирована коррекция альтернативного сплайсинга 3ΜΝ2 в фибробластах пациента с 3ΜΑ типа 1, обработанных повышенными концентрациями соединения 38 в течение 24 ч. Уровни полноразмерной мРНК 3ΜΝ2 и мРНК 3ΜΝ2 Δ7 количественно оценивали с помощью КТ-цРСК. Уровни полноразмерной мРНК 3ΜΝ2 и мРНК 3ΜΝ2 Δ7 в образцах, обработанных соединением, нормализовали по уровню в образцах, обработанных носителем, и строили график зависимости от концентрации соединений.
На фиг. 5, упомянутой в биологическом примере 4, продемонстрирована коррекция альтернативного сплайсинга минигена 3ΜΝ2 в фибробластах пациента с 3ΜΑ типа 1, обработанных повышенными концентрациями соединения 17 (фиг. 5а) и соединения 38 (фиг. 5Ь) в течение 24 ч. Полноразмерную мРНК 3ΜΝ2 и мРНК 3ΜΝ2 Δ7 амплифицировали с помощью РСК в конечной точке с обратной транскриптазой (КТ-РСК), и РСК-продукты разделяли с помощью электрофореза в агарозном геле. Верхние и нижние полосы соответствуют полноразмерной мРНК 3ΜΝ2 и мРНК 3ΜΝ2 Δ7, соответственно. Интенсивность каждой полосы пропорциональна количеству РНК, присутствующей в образце.
На фиг. 6, упомянутой в биологическом примере 7, проиллюстрировано дозозависимое повышение уровней экспрессии белка Зти в фибробластах пациента с 3ΜΑ типа 1, обработанных в течение 48 ч соединением 17 (фиг. 6а) и соединением 38 (фиг. 6Ь).
На фиг. 7, упомянутой в биологическом примере 7, проиллюстрировано увеличение числа ядерных пятен (гемов) в фибробластах пациента с 3ΜΑ типа 1, обработанных соединением 38 в течение 48 ч. Пятна были подсчитаны на флуоресцентном микроскопе. Число пятен в образцах, обработанных соединением, нормализовали по числу пятен в образцах, обработанных носителем, и строили график зависимости от концентрации соединений.
На фиг. 8, упомянутой в биологическом примере 7, проиллюстрировано дозозависимое повышение уровня полноразмерной мРНК минигена 3ΜΝ1 и дозозависимое снижение уровня мРНК Δ7 минигена 3ΜΝ1 в клетках НЕК293Н человека, обработанных в течение 7 ч соединением 17 (фиг. 8а) и соединением 38 (фиг. 8Ь). Полноразмерную мРНК минигена 3ΜΝ1 и мРНК Δ7 амплифицировали с помощью КТРСК, и полученные РСК-продукты разделяли с помощью электрофореза в агарозном геле. Верхние и нижние полосы соответствуют полноразмерной мРНК минигена 3ΜΝ1 и мРНК Δ7, соответственно. Интенсивность каждой полосы пропорциональна количеству РНК, присутствующей в образце.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I)
или их формам, где №ι представляет собой С-КЬ или Ν;
- 8 028382 ν2 и ν3 представляют собой С-Кь С-К2, С-Ка или Ν;
\\4 представляет собой С-Ка или Ν; ν5 представляет собой С-Кь С-К2, С-Кс или Ν; ν6 представляет собой С-Кь С-К2 или С-Ка;
где один из ν2, ν3, ν5 и ν6 представляет собой С-Кь а другой из ν2, ν3, ν5 и ν6 представляет собой С-К2, при условии, что:
если ν3 представляет собой С-Кь то ν6 представляет собой С-К2, ν2 представляет собой С-Ка или Ν, и ν5 представляет собой С-Кс или Ν; или если ν3 представляет собой С-К2, то ν6 представляет собой С-Кь ν2 представляет собой С-Ка или Ν, и ν5 представляет собой С-Кс или Ν; или если ν2 представляет собой С-Кь то ν5 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-Ка, и ν3 представляет собой С-Ка или Ν; или если ν2 представляет собой С-К2, то ν5 представляет собой С-Кь ν6 представляет собой С-Ка, и ν3 представляет собой С-Ка или Ν; и где один, два или три из ν2, ν3, ν4 и ν5 могут необязательно представлять собой Ν;
К! представляет собой С1-8алкил, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкокси-С1-8алкил) (С1-8алкил)амино, амино-С1-8алкил, С1-8 алкиламино -С1 -8алкил, (С1 -8алкил)2-амино-С1 -8алкил, С1 -8алкокси-С1 -8алкиламино-С1 -8алкил, (С1 -8алкоксиС1 -8алкил)2-амино-С1 -8алкил, (С1 -8алкокси-С1 -8алкил)(С1 -8алкил)амино -С1 -8алкил, амино -С1 -8алкиламино, (амино-С1-8алкил)2-амино, (амино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино, амино-С1-8алкокси, С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (С1 -8алкил)2-амино-С1 -8алкокси, С1 -8алкокси-С1 -8алкиламино -С1 -8алкокси, С1 -8алкокси-С1 -8алкиламино -С1-8 алкокси, (С1 -8алкокси-С1 -8алкил)(С1 -8алкил)амино-С1 -8алкокси, амино-С2-8алкенил, С1 -8алкиламино -С2-8 алкенил, (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкенил, амино-С2-8алкинил, С1-8алкиламино-С2-8алкинил, (С1-8алкил)2амино-С2-8алкинил, галоген-С1-8алкиламино, (галоген-С1-8алкил)2-амино, (галоген-С1-8алкил)(С18алкил)амино, гидрокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидроксиС1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8алкил) (С1-8алкил)амино, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8 алкокси, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, (гидроксиС1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкиламино, [(гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино, [(гидрокси-С1 -8алкил)(С1 -8алкил)амино -С1 -8алкил] (С1 -8алкил)амино, гетероциклил, гетероциклил-С1 8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(С1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклилкарбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8 алкил)(С1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8 алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С1-8алкиламино, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил) амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарилС1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил;
где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями К3 и необязательно одним дополнительным заместителем К4; или где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним, двумя, тремя или четырьмя заместителями К3;
К2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино;
где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями Кб и необязательно одним дополнительным заместителем К7;
Ка, в каждом случае, независимо выбран из водорода, галогена или С1-8алкила;
Кь представляет собой водород, галоген, С1-8алкил или С1-8алкокси;
Кс представляет собой водород, галоген или С1-8алкил;
К3, в каждом случае независимо, выбран из циано, галогена, гидрокси, оксо, С1-8алкила, галоген-С1-8 алкила, С1-8алкилкарбонила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, С1-8алкоксикарбонила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино, амино-С1-8алкила, С1-8алкиламино-С1-8алкила, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкила, амино-С1-8алкиламино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8 алкил)2-амино, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил]2-амино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, С1-8алкилкарбонил- 9 028382 амино, С1-8алкоксикарбониламино, гидрокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8 алкиламино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино или (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино;
Кд представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкил-С1-8алкил, С3-14циклоалкиламино, арил-С1-8 алкил, арил-С1-8алкоксикарбонил, арилсульфонилокси-С1-8алкил, гетероциклил или гетероциклил-С1-8 алкил; где, в каждом случае, С3-14циклоалкил, арил и гетероциклил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями К5;
К5, в каждом случае независимо, выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, С1-8алкила, галогенС1-8алкила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино или С1-8 алкилтио;
Кб, в каждом случае независимо, выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, С1-8алкила, С2-8алкенила, галоген-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино или С1-8алкилтио; и
К7 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкилокси, арил, гетероциклил или гетероарил.
Варианты осуществления изобретения
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №1 представляет собой С-Кь.
В другом варианте соединения формулы (I) №1 представляет собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) представляет собой С-К1.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №2 представляет собой С-К2.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №2 представляет собой С-Ка.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №2 представляет собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №3 представляет собой С-К1.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №3 представляет собой С-К2.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №3 представляет собой С-Ка.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №3 представляет собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №4 представляет собой С-Ка.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №4 представляет собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №5 представляет собой С-К1.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №5 представляет собой С-К2.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №5 представляет собой С-К<..
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №5 представляет собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №6 представляет собой С-К1.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №6 представляет собой С-К2.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №6 представляет собой С-Ка.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №2 представляет собой С-К1, и №5 представляет собой С-К2.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №2 представляет собой С-К2, и №5 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №2 представляет собой С-К1, представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-Ка, №3 и №4 независимо представляют собой С-Ка или N и №1 представляет собой С-Кь или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №2 представляет собой С-К2, представляет собой С-К1, №6 представляет собой С-Ка, №3 и №4 независимо представляют собой С-Ка или N и №1 представляет собой С-Кь или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №3 представляет собой С-К1, и №6 представляет собой С-К2.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №3 представляет собой С-К2, и №6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №3 представляет собой С-К1, №6 представляет собой С-К2; №2 и №4 независимо представляют собой С-Ка или N №1 представляет собой СКь или N и №5 представляет собой С-Кс или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) №3 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-К1; №2 и №4 независимо представляют собой С-Ка или N №1 представляет собой С-Кь или N и №5 представляет собой С-Кс или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №1 и №2 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №1 и №3 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №1 и №4 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №1 и №5 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №2 и №4 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №2 и №5 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №3 и №4 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №4 и №5 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) №1, №2 и №4 представляют собой N.
- 10 028382
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) и м5 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) м3 и м4 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) щ, м4 и м5 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) м2, м4 и м5 представляют собой N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К! представляет собой С1-8алкил, амино, С^алкиламино, (С1_8алкил)2-амино, С1_8алкокси-С1_8алкиламино, (С1_8алкокси-С1_8алкил)2-амино, (С1 -8алкокси-С1 -8алкил)(С1 -8алкил)амино, амино -С1 -8алкил, С1 -8алкиламино -С1 -8алкил, (С1 -8алкил)2-амино С1 -8алкил, С1 -8алкокси-С1 -8алкиламино -С1 -8алкил, (С1 -8алкокси-С1 -8алкил)2-амино-С1 -8алкил, (С1 -8алкоксиС1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, амино-С1-8алкиламино, (амино-С1-8алкил)2-амино, (амино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил] (С1-8алкил)амино, амино-С1-8алкокси, С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, С1-8 алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкокси, амино-С2-8алкенил, С1-8алкиламино-С2-8алкенил, (С1-8алкил)2-амино-С28алкенил, амино-С2-8алкинил, С1-8алкиламино-С2-8алкинил, (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкинил, галоген-С18алкиламино, (галоген-С1-8алкил)2-амино, (галоген-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гидрокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8 алкил)(С1-8алкил)амино, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8 алкил)2-амино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкокси, гидрокси-С1-8алкиламино-С18алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8 алкиламино, [(гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино, [(гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино -С1 -8алкил] (С1 -8алкил)амино, гетероциклил, гетероциклил-С1 -8алкил, гетероциклил-С1 -8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(С1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8 алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероциклилС1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклилкарбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С1-8алкиламино, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8 алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил; где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой амино, (С1-8алкил)2-амино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, амино-С1-8алкил, С1-8алкиламино-С1-8алкил, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, С1-8алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8 алкил)2-амино-С1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, амино-С1-8алкиламино, (амино-С1-8алкил)2-амино, (амино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино, амино-С1-8алкокси, С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (С1-8алкил)2-амино-С1 -8алкокси, С1 -8алкокси-С1 -8алкиламино-С1-8алкокси, (С1 -8алкокси-С1 -8алкил)2-аминоС1-8алкокси, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкокси, амино-С2-8алкенил, С1-8алкиламино-С28алкенил, (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкенил, амино-С2-8алкинил, С1-8алкиламино-С2-8алкинил, (С1-8алкил)2амино-С2-8алкинил, галоген-С1-8алкиламино, (галоген-С1-8алкил)2-амино, (галоген-С1-8алкил)(С1-8 алкил)амино, гидрокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-С18алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гидрокси-С18алкил)2-амино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино-С18алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкокси, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8 алкил)2-амино-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкиламино, [(гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино, [(гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино, гетероциклил, гетероциклил-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(С1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8 алкил, гетероциклил-С1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8 алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклилкарбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(С1-8 алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)(С1-8 алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероарил-С1-8алкиламино, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероарил-С1-8алкил- 11 028382 амино-С1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)аминоС1_8алкил;
где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой С1-8алкил, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1-8 алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, амино-С1-8алкил, С1-8алкиламино-С1-8алкил, (С1-8алкил)2-амино-С1-8 алкил, С1-8алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8 алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, амино-С1-8алкиламино, (амино-С1-8алкил)2-амино, (амино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8 алкил)амино, амино-С1-8алкокси, С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкокси, амино-С2-8алкенил, С1-8алкиламино-С2-8алкенил, (С1-8алкил)2-амино-С28алкенил, амино-С2-8алкинил, С1-8алкиламино-С2-8алкинил, (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкинил, галоген-С18алкиламино, (галоген-С1-8алкил)2-амино, (галоген-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гидрокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8 алкил)(С1-8алкил)амино, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8 алкил)2-амино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкокси, гидрокси-С1-8алкиламино-С18алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8 алкиламино, [(гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино или [(гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероциклил, гетероциклил-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(С1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2амино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклилкарбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С1-8алкиламино, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил)(С18алкил)амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил; где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероциклил, гетероциклил-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(С1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2амино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил или гетероциклилкарбонилокси; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероциклил, необязательно замещенный заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой С3-14циклоалкил, необязательно замещенный заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой арил-С18алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил; где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой арил-С1-8алкиламино, необязательно замещенный заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С1-8алкиламино, (гетероарил-С18алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил) (С1-8алкил)амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил; где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероарил, необязательно замещенный заместителями К3 и К4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероциклил,
- 12 028382 выбранный из азетидинила, тетрагидрофуранила, пирролидинила, пиперидинила, пиперазинила, 1,4диазепанила, 1,2,5,6-тетрагидропиридинила, 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, гексагидропирроло[3,4-Ь] пиррол-(1Н)-ила, (3а8,6а8)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, (3аК,6аК)-гексагидропирроло[3,4Ь]пиррол-(1Н)-ила, гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ила, (3а8,6а8)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ила, гексагидропирроло [3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, (3аК,6а8)-гексагидропирроло [3,4-с]пиррол(1Н)-ила, октагидро-5Н-пирроло[3,2-с]пиридинила, октагидро-6Н-пирроло[3,4-с]пиридинила, (4аК,7аК)октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридинила, (4а8,7а8)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридинила, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(2Н)-она, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (7К,8а8)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8а8)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8аК)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8а8)-октагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8аК)-октагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, октагидро-2Н-пиридо[1,2-а]пиразинила, 3-азабицикло[3.1.0]гексила, (1К,58)-3-азабицикло[3.1.0]гексила, 8-азабицикло[3.2.1]октила, (1К,58)-8-азабицикло[3.2.1]октила, 8азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (1К,58)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1]нонила, (1К,58)-9-азабицикло[3.3.1]нонила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, (18,48)-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октил, (1К,58)-3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспиро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7-диазаспиро [3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7-диазаспиро[4.4]нонила или 6,9-диазаспиро[4.5]децила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К! представляет собой гетероциклил, выбранный из азетидин-1-ила, тетрагидрофуран-3-ила, пирролидин-1-ила, пиперидин-1-ила, пиперидин4-ила, пиперазин-1-ила, 1,4-диазепан-1-ила, 1,2,5,6-тетрагидропиридин-5-ила, 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ила, гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-1(2Н)-ила, (3а8,6а8)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол1(2Н)-ила, (3а8,6а8)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-5(1Н)-ила, (3аК,6аК)-гексагидропирроло[3,4-Ь] пиррол-5(1Н)-ила, гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ила, (3аК,6а8)-гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ила, октагидро-5Н-пирроло[3,2-с]пиридин-5-ила, октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридин-6-ила, (4аК,7аК)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридин-6-ила, (4а8,7а8)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридин6-ила, гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-6(2Н)-она, гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2(1Н)-ила, (7аК,
8а8)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2(1Н)-ила, (8аК)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-2(1Н)-ила, (8аК)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-2(1Н)-ила, (8а8)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-2(1Н)-ила, (8а8)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-2(1Н)-ила, октагидро-2Н-пиридо [ 1,2-а]пиразин-2-ила, 3 -азабицикло[3.1.0]гекс-3-ила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-3-ила, (1К,58)-8-азабицикло[3.2.1]окт-3-ила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-ен-3-ила, (1К,58)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-ен-3-ила, 9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ила, (1К,58)-9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гепт-2-ила, (18,48)-2,5-диазабицикло [2.2.1]гепт-2-ила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]окт-2-ила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]окт-3-ила, (1К,58)-3,8-диазабицикло[3.2.1]окт-3-ила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нон-4-ила, азаспиро[3.3]гепт-2-ила, 2,6-диазаспиро [3.3]гепт-2-ила, 2,7-диазаспиро[3.5]нон-7-ила, 5,8-диазаспиро[3.5]нон-8-ила, 2,7-диазаспиро[4.4]нон-2ила или 6,9-диазаспиро[4.5]дек-9-ила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К! представляет собой замещенный гетероциклил, выбранный из 4-метил-1,4-диазепан-1-ила, (3а8,6а8)-1-метилгексагидропирроло[3,4-Ь] пиррол-5(1Н)-ила, (3а8,6а8)-5-метилгексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-1(2Н)-ила, (3аК,6аК)-1-метилгексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-5(1Н)-ила, (3аК,6а8)-5-метилгексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ила, (3аК,6а8)-5-(2-гидроксиэтил)гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ила, (3аК,6а8)-5-(пропан-2-ил)гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ила, (3аК,6а8)-5-этилгексагидропирроло[3,4-с]пиррол-2(1Н)-ила, (4аК,7аК)-1 -метилоктагидро-6Н-пирроло [3,4-Ь]пиридин-6-ила, (4аК,7аК)-1 -этилоктагидро-6Н-пирроло [3,4-Ь]пиридин-6-ила, (4аК,7аК))-1-(2-гидроксиэтил)октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридин-6-ила, (4а8, 7а8)-1-метилоктагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридин-6-ила, (4а8,7а8)-1-(2-гидроксиэтил)октагидро-6Нпирроло[3,4-Ь]пиридин-6-ила, (7К,8а8)-7-гидроксигексагидропирроло[1,2-а]пиразин-2(1Н)-ила, (8а8)-8аметилоктагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-2(1Н)-ила, (8аК)-8а-метилоктагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-2(1Н)ила, (1К,58,68)-6-(диметиламино)-3-азабицикло[3.1.0]гекс-3-ила, (1К,58)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1] окт-3-ила, 9-метил-9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ила, (3-экзо)-9-метил-9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ила, (1К,58)9-метил-9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ила, (18,48)-5-метил-2,5-диазабицикло[2.2.1]гепт-2-ила или (18,48)-5этил-2,5 -диазабицикло [2.2.1]гепт-2 -ила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К! представляет собой гетероциклилС1-8алкил, где гетероциклил выбран из морфолинила, пиперидинила, пиперазинила, имидазолила или пирролидинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) Κι представляет собой гетероциклил-С'У 8алкил, выбранный из морфолин-4-ил-метила, морфолин-4-ил-этила, морфолин-4-ил-пропила, пиперидин-1-ил-метила, пиперазин-1-ил-метила, пиперазин-1-ил-этила, пиперазин-1-ил-пропила, пиперазин-1ил-бутила, имидазол-1-ил-метила, имидазол-1-ил-этила, имидазол-1-ил-пропила, имидазол-1-ил-бутила, пирролидин-1-ил-метила, пирролидин-1-ил-этила, пирролидин-1-ил-пропила или пирролидин-1-илбутила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
- 13 028382
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Κι представляет собой гетероциклилС1-8алкокси, где гетероциклил выбран из пирролидинила, пиперидинила или морфолинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К3 и Κ4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) Κ представляет собой гетероциклил-С^ 8алкокси, выбранный из пирролидин-2-ил-метокси, пирролидин-2-ил-этокси, пирролидин-1-ил-метокси, пирролидин-1-ил-этокси, пиперидин-1-ил-метокси, пиперидин-1-ил-этокси, морфолин-4-ил-метокси или морфолин-4-ил-этокси; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К3 и Κ4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Κ1 представляет собой гетероциклиламино, где гетероциклил выбран из азетидинила, пирролидинила, пиперидинила, 9-азабицикло [3.3.1] нонила или (1К,58)-9-азабицикло[3.3.1]нонила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К3 и Κ4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) Κι представляет собой гетероциклиламино, выбранный из азетидин-3-ил-амино, пирролидин-3-ил-амино, пиперидин-4-ил-амино, 9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ил-амино, (1К,58)-9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ил-амино, 9-метил-9-азабицикло[3.3.1]нон-3ил-амино, (3-экзо)-9-метил-9-азабицикло[3.3.1]нон-3-ил-амино или (1К,58)-9-метил-9-азабицикло [3.3.1] нон-3-ил-амино; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К3 и Κ4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Κ! представляет собой (гетероциклил) (С1-8алкил)амино, где гетероциклил выбран из пирролидинила или пиперидинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями Κ3 и Κ4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) Κι представляет собой (гетероциклил) (С1-8алкил)амино, выбранный из (пирролидин-3-ил)(метил)амино или (пиперидин-4-ил)(метил)амино;
где в каждом случае гетероциклил необязательно замещензаместителями Κ3 и Κ4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Κι представлет собой гетероциклиламино-С!-8алкил, где гетероциклил выбран из тетрагидрофуранила; и где в каждом случае гетероциклил необязательно замещен заместителями Κ3 и Κ4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) Κ представляет собой гетероциклиламино-С!-8алкил, выбранный из 3-(тетрагидрофуран-3-ил-амино)пропила; где в каждом случае гетероциклил необязательно замещен заместителями Κ3 и Κ4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Κ! представляет собой гетероциклилС1-8алкиламино-С1-8алкил, где гетероциклил выбран из тетрагидрофуранила, тиенила или пиридинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями Κ3 и Κ4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) Κι представляет собой гетероциклил-С^ 8алкиламино-С1-8алкил, выбранный из 3-[(тетрагидрофуран-2-илметил)амино]пропила, 3-[(тиенил-3илметил)амино]пропила, 3-[(пиридин-2-илметил)амино]пропила или 3-[(пиридин-4-илметил)амино] пропила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями Κ3 и Κ4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Κ представляет собой гетероциклилокси, где гетероциклил выбран из пирролидинила или пиперидинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями Κ3 и Κ4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) Κ! представлет собой гетероциклилокси, выбранный из пирролидин-3-илокси или пиперидин-4-илокси; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями Κ3 и Κ4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Κι представляет собой гетероциклилкарбонил, где гетероциклил выбран из пиперазинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями Κ3 и Κ4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) Κι представляет собой гетероциклилкарбонил, выбранный из пиперазин-1-ил-карбонила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями Κ3 и Κ4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Κ представляет собой гетероциклилкарбонилокси, где гетероциклил выбран из пиперазинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями Κ3 и Κ4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) Κ представляет собой гетероциклилкарбонилокси, выбранный из пиперазин-1-ил-карбонилокси; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями Κ3 и Κ4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Κι представляет собой С314циклоалкил, выбранный из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, циклогексенила или циклогептила; где, в каждом случае, С3-14циклоалкил необязательно замещен заместителями Κ3 и Κ4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) Κι представляет собой С3-8циклоалкил, выбранный из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила, циклогексенила или циклогептила; где, в каждом случае, С3-8циклоалкил необязательно замещен заместителями Κ3 и Κ4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Κ! представляет собой арил-С!-
- 14 028382 8алкиламино-С1-8алкил, где арил выбран из фенила; и где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой арил-С18алкиламино-С1-8алкил, выбранный из 3-(бензиламино)пропила; где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероарил, где гетероарил выбран из пиридинила; и где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероарил, выбранный из пиридин-4-ила; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями К3 и Кд.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероарил-С18алкил, где гетероарил выбран из 1Н-имидазолила; и где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероарил-С1-8 алкил выбранный из 1Н-имидазол-1-ил-метила; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой (гетероарилС1-8алкил)(С1-8алкил)амино, где гетероарил выбран из пиридинила; и где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой (гетероарил-С1-8 алкил)(С1-8алкил)амино, выбранный из (пиридин-3-илметил)(метил)амино; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероарил-С18алкиламино-С1-8алкил, где гетероарил выбран из тиенила или пиридинила; и где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероарил-С1-8 алкиламино-С1-8алкил, выбранный из тиен-3-ил-метиламинопропила, пиридин-2-ил-метиламинопропила, пиридин-3-ил-метиламинопропила или пиридин-4-ил-метиламинопропила; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями К3 и К4.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К3 выбран из циано, галогена, гидрокси, оксо, С1-8алкила, галоген-С1-8алкила, С1-8алкилкарбонила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8 алкокси-С1-8алкила, С1-8алкоксикарбонила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино, амино-С1-8алкила, С1-8алкиламино-С1-8алкила, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкила, амино-С1-8алкиламино, С1-8алкиламино-С1-8 алкиламино, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, С1-8алкилкарбониламино, С1-8алкоксикарбониламино, гидрокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино или (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К3 выбран из циано, галогена, гидрокси, оксо, С1-8алкила, галоген-С1-8алкила, С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, С1-8алкоксикарбонила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино, амино-С1-8алкила, С1-8алкиламино-С1-8алкила, (С1-8алкил)2-амино-С1-8 алкила, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, С1-8алкоксикарбониламино, гидрокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино или (гидрокси-С1 -8алкил)(С1 -8алкил)амино.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К3 представляет собой С1-8алкил, выбранный из метила, этила, пропила, изопропила или трет-бутила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К3 представляет собой С1-8алкил, выбранный из этила, пропила, изопропила или трет-бутила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К3 представляет собой галоген-С1-8 алкил, выбранный из тригалогенметила, дигалогенметила, галогенметила, тригалогенэтила, дигалогенэтила, галогенэтила, тригалогенпропила, дигалогенпропила или галогенпропила; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К3 представляет собой галоген-С1-8алкил, выбранный из тригалогенметила, дигалогенметила, галогенметила, тригалогенэтила, дигалогенэтила, тригалогенпропила или дигалогенпропила; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К3 представляет собой гидрокси-С1-8 алкил, выбранный из гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила, дигидроксипропила, гидроксибутила или дигидроксибутила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К3 представляет собой гидрокси-С1-8алкил, выбранный из гидроксиметила, дигидроксипропила, гидроксибутила или дигидроксибутила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К3 представляет собой С1-8алкокси, выбранный из метокси, этокси, пропокси или изопропокси.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К3 представляет собой галоген-С1-8
- 15 028382 алкокси, выбранный из тригалогенметокси, дигалогенметокси, галогенметокси, тригалогенэтокси, дигалогенэтокси, галогенэтокси, тригалогенпропокси, дигалогенпропокси или галогенпропокси; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К3 представляет собой С1-8алкоксикарбониламино, выбранный из метоксикарбониламино, этоксикарбониламино, пропоксикарбониламино, изопропоксикарбониламино, трет-бутоксикарбониламино.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К4 представляет собой С3-14циклоалкил, выбранный из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила; где, в каждом случае, С3-14циклоалкил необязательно замещен заместителями К5.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К4 представляет собой С3-8циклоалкил, выбранный из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила; где, в каждом случае, С3-8циклоалкил необязательно замещен заместителями К5.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Кд представляет собой С3-14циклоалкил-С1-8алкил, где С3-14циклоалкил выбран из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила; и где, в каждом случае, С3-14циклоалкил необязательно замещен заместителями К5.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К4 представляет собой С3-8циклоалкилС1-8алкил, где С3-8циклоалкил выбран из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила; и где, в каждом случае, С3-8циклоалкил необязательно замещен заместителями К5.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К4 представляет собой С3-14циклоалкиламино, где С3-14циклоалкил выбран из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила; и где, в каждом случае, С3-14циклоалкил необязательно замещен заместителями К5.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К4 представляет собой С3-8циклоалкиламино, где С3-8циклоалкил выбран из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила; и где, в каждом случае, С3-8циклоалкил необязательно замещен заместителями К5.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Кд представляет собой арил-С1-8 алкил, арил-С1-8алкоксикарбонил или арилсульфонилокси-С1-8алкил, где арил выбран из фенила; и где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К4 представляет собой арил-С1-8алкил или арил-С1-8алкоксикарбонил, где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями К5.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Кд представлет собой гетероциклил, выбранный из оксетанила, пирролидинила, пиперидинила, пиперазинила, 1,3-диоксанила или морфолинила, где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К5.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К4 представлет собой гетероциклил, выбранный из оксетан-3-ила, пирролидин-1-ила, пиперидин-1-ила, пиперазин-1-ила, 1,3-диоксан-5-ила или морфолин-4-ила, где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К5.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К4 представляет собой гетероциклилС1-8алкил, где в каждом случае, гетероциклил выбран из пирролидинила или пиперидинила; и где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К5.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К4 представляет собой гетероциклил-С18алкил, выбранный из пирролидин-1-ил-С1-8алкила или пиперидин-1-ил-С1-8алкила, где в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителям.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К5 выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, галоген-С1-8алкила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2амино или С1-8алкилтио; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К5 представляет собой гидрокси.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К5 представляет собой С1-8алкил, выбранный из метила, этила, пропила, изопропила, н-бутила или трет-бутила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К5 представляет собой С1-8алкил, выбранный из этила, пропила, изопропила или трет-бутила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К5 представляет собой галоген-С18алкил, выбранный из тригалогенметила, дигалогенметила, галогенметила, тригалогенэтила, дигалогенэтила, галогенэтила, тригалогенпропила, дигалогенпропила или галогенпропила; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К5 представляет собой С1-8алкокси, выбранный из метокси, этокси, пропокси или изопропокси.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К5 представляет собой галоген-С18алкокси выбранный из тригалогенметокси, дигалогенметокси, галогенметокси, тригалогенэтокси, дигалогенэтокси, галогенэтокси, тригалогенпропокси, дигалогенпропокси или галогенпропокси; где, галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К2 представляет собой арил, выбранный из фенила, необязательно замещенного заместителями К6 и К7.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К2 представляет собой ариламино,
- 16 028382 где арил выбран из фенила; и где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями Кб и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К2 представляет собой ариламино, выбранный из фениламино; где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями Кб и К7.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К2 представляет собой ариламинокарбонил, где арил выбран из фенила; и где, в каждом случае, арил необязательно замещен заместителями К6 и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К2 представляет собой ариламинокарбонил, выбранный из фениламинокарбонила; где в каждом случае арил необязательно замещен заместителями К6 и К7.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К2 представлет собой гетероциклил, выбранный из 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, 1,3-бензодиоксолила или 2,3-дигидро-1,4-бензодиоксинила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К6 и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К2 представлет собой гетероциклил, выбранный из 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ила, 1,3-бензодиоксол-5-ила или 2,3-дигидро-1,4-бензодиоксин6- ила; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К6 и К7.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К2 представляет собой гетероарил, выбранный из тиенила, 1Н-пиразолила, 1Н-имидазолила, 1,3-тиазолила, 1,2,4-оксадиазолила, 1,3,4оксадиазолила, пиридинила, пиримидинила, 1Н-индолила, 2Н-индолила, 1Н-индазолила, 2Н-индазолила, индолизинила, бензофуранила, бензотиенила, 1Н-бензимидазолила, 1,3-бензотиазолила, 1,3-бензоксазолила, 9Н-пуринила, фуро[3,2-Ь]пиридинила, фуро[3,2-с]пиридинила, фуро[2,3-с]пиридинила, тиено [3,2-с]пиридинила, тиено[2,3-4]пиримидинила, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридинила, 1Н-пирроло[2,3-с]пиридинила, пирроло[1,2-а]пиримидинила, пирроло[1,2-а]пиразинила, пирроло[1,2-Ь]пиридазинила, пиразоло[1,5-а]пиридинила, пиразоло[1,5-а]пиразинила, имидазо[1,2-а]пиридинила, имидазо[1,2-а]пиримидинила, имидазо[1,2-с]пиримидинила, имидазо[1,2-Ь]пиридазинила, имидазо[1,2-а]пиразинила, имидазо [2,1-Ь][1,3]тиазолила, имидазо[2,1-Ь][1,3,4]тиадиазолила, [1,3]оксазоло[4,5-Ь]пиридинила или хиноксалинила; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями К6 и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К2 представляет собой гетероарил, выбранный из тиен-2-ила, тиен-3-ила, 1Н-пиразол-3-ила, 1Н-пиразол-4-ила, 1Н-пиразол-5-ила, 1Нимидазол-1-ила, 1Н-имидазол-4-ила, 1,3-тиазол-2-ила, 1,2,4-оксадиазол-3-ила, 1,3,4-оксадиазол-2-ила, пиридин-2-ила, пиридин-3-ила, пиридин-4-ила, пиримидин-4-ила, 1Н-индол-3-ила, 1Н-индол-4-ила, 1Ниндол-5-ила, 1Н-индол-6-ила, 1Н-индазол-5-ила, 2Н-индазол-5-ила, индолизин-2-ила, бензофуран-2-ила, бензофуран-5-ила, бензотиен-2-ила, бензотиен-3-ила, 1Н-бензимидазол-2-ила, 1Н-бензимидазол-6-ила, 1,3-бензоксазол-2-ила, 1,3-бензоксазол-5-ила, 1,3-бензоксазол-6-ила, 1,3-бензотиазол-2-ила, 1,3-бензотиазол-5-ила, 1,3-бензотиазол-6-ила, 9Н-пурин-8-ила, фуро[3,2-Ь]пиридин-2-ила, фуро[3,2-с]пиридин-2ила, фуро[2,3-с]пиридин-2-ила, тиено[3,2-с]пиридин-2-ила, тиено[2,3-4]пиримидин-6-ила, 1Н-пирроло [2,3-Ь]пиридин-3-ила, 1Н-пирроло[2,3-с]пиридин-4-ила, пирроло[1,2-а]пиримидин-7-ила, пирроло[1,2-а] пиразин-7-ила, пирроло[1,2-Ь]пиридазин-2-ила, пиразоло[1,5-а]пиридин-2-ила, пиразоло[1,5-а]пиразин-2ила, имидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, имидазо[1,2-а]пиридин-6-ила, имидазо[1,2-а]пиримидин-2-ила, имидазо[1,2-а]пиримидин-6-ила, имидазо[1,2-с]пиримидин-2-ила, имидазо[1,2-Ь]пиридазин-2-ила, имидазо[1,2-а]пиразин-2-ила, имидазо[2,1-Ь][1,3]тиазол-6-ила, имидазо[2,1-Ь][1,3,4]тиадиазол-6-ила, [1,3]оксазоло[4,5-Ь]пиридин-2-ила или хиноксалин-2-ила; где в каждом случае гетероарил необязательно замещен заместителями К6 и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К2 представляет собой замещенный гетероарил, выбранный из 4-метилтиен-2-ила, 1-метил-1Н-пиразол-3-ила, 4-метил-1Н-пиразол-3-ила, 1фенил-1Н-пиразол-3-ила, 1-фенил-1Н-имидазол-4-ила, 2-метил-1-(пиридин-2-ил)-1Н-имидазол-4-ила, 4метил-1,3-тиазол-2-ила, 4-(трифторметил)-1,3-тиазол-2-ила, 4-фенил-1,3-тиазол-2-ила, 5-фенил-1,2,4оксадиазол-3-ила, 3-фторпиридин-4-ила,6-фторпиридин-2-ила, 2-хлорпиридин-4-ила, 4-хлорпиридин-3ила, 5-хлорпиридин-2-ила, 6-метилпиридин-3-ила, 2-(трифторметил)пиридин-3-ила, 4-(трифторметил) пиридин-2-ила, 6-(трифторметил)пиридин-2-ила, 2-метоксипиридин-4-ила, 4-метоксипиридин-3-ила,6метоксипиридин-2-ила, 2-этоксипиридин-3-ила,6-этоксипиридин-2-ила,6-(пропан-2-илокси)пиридин-2ила,6-(диметиламино)пиридин-3-ила,6-(метилсульфанил)пиридин-2-ила,6-(циклобутилокси)пиридин-2ила,6-(пирролидин-1-ил)пиридин-2-ила, 2-метилпиримидин-4-ила, 2-(пропан-2-ил)пиримидин-4-ила, 2циклопропилпиримидин-4-ила, 1-метил-1Н-индол-3-ила, 2-метил-2Н-индазол-5-ила, 2-метил-1бензофуран-5-ила, 1-метил-1Н-бензимидазол-2-ила, 4-метил-1Н-бензимидазол-2-ила 5-фтор-1Н-бензимидазол-2-ила, 4-фтор-1,3-бензоксазол-2-ила, 5-фтор-1,3-бензоксазол-2-ила, 4-хлор-1,3-бензоксазол-2ила, 4-иод-1,3-бензоксазол-2-ила, 2-метил-1,3-бензоксазол-6-ила, 4-метил-1,3-бензоксазол-2-ила, 4(трифторметил)-1,3-бензоксазол-2-ила, 7-(трифторметил)-1,3-бензоксазол-2-ила, 2-метил-1,3-бензотиазол-2-ила, 2-метил-1,3-бензотиазол-5-ила, 2-метил-1,3-бензотиазол-6-ила, 4-хлор-1,3-бензотиазол-2-ила,
7- хлор- 1,3-бензотиазол-2-ила, 4-(трифторметил)-1,3-бензотиазол-2-ила, 5-метилфуро [3,2-Ь]пиридин-2ила, 4,6-диметилфуро[3,2-с]пиридин-2-ила, 5,7-диметилфуро[2,3-с]пиридин-2-ила, 4,6-диметилтиено[3,2с]пиридин-2-ила, 2,4-диметилтиено[2,3-4]пиримидин-6-ила, 1-метилпирроло[1,2-а]пиразин-7-ила, 3метилпирроло [ 1,2-а]пиразин-7-ила, 1,3-диметилпирроло [ 1,2-а]пиразин-7-ила, 2-метилпирроло [ 1,2-Ь]пи- 17 028382 ридазин-2-ила, 4,6-диметилпиразоло[1,5-а]пиразин-2-ила, 5-метилпиразоло[1,5-а]пиридин-2-ила, 4,6диметилпиразоло [ 1,5-а]пиразин-2-ила, 2-хлоримидазо [2,1 -Ь] [ 1,3]тиазол-6-ила, 2-метилимидазо [2,1-Ъ] [1,3]тиазол-6-ила, 3-метилимидазо[2,1-Ь][1,3]тиазол-6-ила, 2-этилимидазо[2,1-Ь][1,3]тиазол-6-ила, 2метилимидазо[2,1-Ь][1,3,4]тиадиазол-6-ила,6-цианоимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила (также называемого 2имидазо[1,2-а]пиридин-6-карбонитрилом), 6-фторимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 8-фторимидазо[1,2а]пиридин-2-ила, 6,8-дифторимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 7-(трифторметил)имидазо[1,2-а]пиридин-2ила, 8-(трифторметил)имидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 6-хлоримидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 7-хлоримидазо [1,2-а]пиридин-2-ила, 8-хлоримидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 8-бромимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 5-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила,6-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2ила, 7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 8-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 7-этилимидазо[1,2-а] пиридин-2-ила, 8-этилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 6,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 8-этил-6метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 7-метоксиимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 8-метоксиимидазо[1,2-а] пиридин-2-ила,6-фтор-8-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 8-фтор-6-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2ила, 8-хлор-6-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 6-метил-8-нитроимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 8циклопропилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ила, 2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ила, 2-этилимидазо[1,2-а] пиридин-6-ила, 2,3-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ила, 2,8-диметилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ила, 2(трифторметил)имидазо[1,2-а]пиридин-6-ила, 8-хлор-2-метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ила, 8-фтор-2метилимидазо[1,2-а]пиридин-6-ила, 6-фторимидазо[1,2-а]пиримидин-2-ила, 6-хлоримидазо[1,2-а]пиримидин-2-ила, 6-метилимидазо[1,2-а]пиримидин-2-ила, 7-метилимидазо[1,2-а]пиримидин-2-ила, 2-метилимидазо [ 1,2-а]пиримидин-6-ила, 6-метилимидазо [ 1,2-а]пиридазин-2-ила, 2-метил-3 -(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)имидазо [ 1,2-а]пиридазин-6-ила,6-метилимидазо [ 1,2-а]пиразин-2-ила, 8-метилимидазо [1,2а] пиразин-2 -ила, 6,8 -диметилимидазо [1,2-а] пиразин-2 -ила, 6 -хлор-8 -метилимидазо [1,2-а] пиразин-2 -ила, 6 метил-8-(трифторметил)имидазо [ 1,2-а]пиразин-2-ила, 8-(метилсульфанил)имидазо [ 1,2-а]пиразин-2-ила, 2-метилимидазо[2,1-Ь][1,3]тиазол-6-ила, 3-метилимидазо[2,1-Ь][1,3]тиазол-6-ила или 2-метилимидазо [2,1 -Ь] [1,3,4]тиадиазол-6-ила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К2 представляет собой гетероарил, выбранный из тиенила, 1Н-пиразолила, 1Н-имидазолила, 1,3-тиазолила, 1,2,4-оксадиазолила, 1,3,4оксадиазолила, пиридинила, пиримидинила, 1Н-индолила, 2Н-индолила, 1Н-индазолила, 2Н-индазолил, индолизинила, бензофуранила, бензотиенила, 1Н-бензимидазолила, 1,3-бензотиазолила, 1,3-бензоксазолила, 9Н-пуринила; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями Кб и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К2 представляет собой гетероарил, выбранный из фуро[3,2-Ь]пиридинила, фуро[3,2-с]пиридинила, фуро[2,3-с]пиридинила, тиено[3,2-с]пиридинила, тиено[2,3-б]пиримидинила, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридинила, 1Н-пирроло[2,3-с]пиридинила, пирроло[1,2-а]пиримидинила, пирроло[1,2-а]пиразинила, пирроло[1,2-а]пиридазинила, пиразоло[1,5-а]пиридинила, пиразоло[1,5-а]пиразинила, имидазо[1,2-а]пиридинила, имидазо[1,2-а]пиримидинила, имидазо[1,2-с]пиримидинила, имидазо[1,2-Ь]пиридазинила, имидазо[1,2-а]пиразинила, имидазо[2,1-Ь][1,3]тиазолила, имидазо[2,1-Ь][1,3,4]тиадиазолила, [1,3]оксазоло[4,5-Ь]пиридинила или хиноксалинила; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями Кб и К7.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К2 представляет собой гетероариламино, где гетероарил выбран из пиридинила или пиримидинила; и где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями К6 и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К2 представляет собой гетероариламино, выбранный из пиридин-2-иламино, пиридин-3-иламино или пиримидин-2-иламино; где, в каждом случае, гетероарил необязательно замещен заместителями К6 и К7.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) Кб выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, С-8алкила, галоген-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8 алкокси-С1-8алкила, (С1-8алкил)2-амино или С1-8алкилтио; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К6 представляет собой С1-8алкил, выбранный из метила, этила, пропила, изопропила или трет-бутила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К6 представляет собой С!-8алкил, выбранный из этила, пропила, изопропила или трет-бутила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К6 представляет собой С2-8алкенил, выбранный из этенила, аллила или бута-1,3-диенила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К6 представляет собой С2-8алкенил, выбранный из этенила или аллила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К6 представляет собой галоген-С1-8 алкил, выбранный из тригалогенметила, дигалогенметила, галогенметила, тригалогенэтила, дигалогенэтила, галогенэтила, тригалогенпропила, дигалогенпропила или галогенпропила; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К6 представляет собой гидрокси-С!-8
- 18 028382 алкил, выбранный из гидроксиметила, гидроксиэтила, гидроксипропила, дигидроксипропила, гидроксибутила или дигидроксибутила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К6 представляет собой гидрокси-С!-8алкил, выбранный из гидроксиметила, дигидроксипропила, гидроксибутила или дигидроксибутила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К6 представляет собой С1-8алкокси, выбранный из метокси, этокси, пропокси или изопропокси.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К6 представляет собой галоген-С!-8 алкокси, выбранный из тригалогенметокси, дигалогенметокси, галогенметокси, тригалогенэтокси, дигалогенэтокси, галогенэтокси, тригалогенпропокси, дигалогенпропокси или галогенпропокси; где галоген выбран из фтора, хлора, брома или иода.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К7 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкилокси, арил, гетероциклил или гетероарил; где С3-14циклоалкил выбран из циклопропила или циклобутокси; арил выбран из фенила; гетероциклил выбран из оксетанила, пирролидинила или 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, и где гетероарил выбран из тиенила или пиридинила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К7 представляет собой С3-14циклоалкил или С3-14циклоалкилокси, где, в каждом случае, С3-14циклоалкил выбран из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К7 представляет собой С3-8циклоалкил или С3-8циклоалкилокси, где, в каждом случае, С3-8циклоалкил выбран из циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила или циклогептила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К7 представляет собой арил, выбранный из фенила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К7 представлет собой гетероциклил, выбранный из оксетанила, пирролидинила или 1,2,3,6-тетрагидропиридинила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К7 представляет собой гетероциклил, выбранный из оксетан-3-ила, пирролидин-1-ила или 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К7 представляет собой гетероарил, выбранный из тиенила или пиридинила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К7 представляет собой гетероарил, выбранный из пиридинила.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (I) К7 представляет собой гетероарил, выбранный из тиен-2-ила или пиридин-2-ила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К7 представляет собой гетероарил, выбранный из пиридин-2-ила. В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К! представлет собой гетероциклил, гетероциклил-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(С1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкиламино, (гетероциклилС1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-С1-8алкил) (С1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклиларбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8 алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С1-8алкиламино, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино, (гетероарил-С1 -8алкил)(С1 -8алкил)амино, гетероарил-С1 -8алкиламино -С1 -8алкил, (гетероарил-С1 -8алкил)2амино-С1-8алкил или (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил; где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями К3 и К4; и где гетероциклил выбран из азетидинила, тетрагидрофуранила, пирролидинила, пиперидинила, пиперазинила, 1,4-диазепанила, 1,2,5,6-тетрагидропиридинила, 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, (3а8,6а8)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, (3аК,6аК)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ил, (3а8,6а8)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ила, гексагидропирроло [3,4-с] пиррол-(1Н)-ила, (3аК,6а8)-гексагидропирроло [3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, октагидро-5Н-пирроло [3,2-с]пиридинила, октагидро-6Н-пирроло [3,4-Ь] пиридинила, (4аК,7аК)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридинила, (4а8,7а8)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь] пиридинила, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(2Н)-она, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (7К,8а8)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8а8)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8аК)-гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8а8)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8аК)октагидропирроло[ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, октагидро-2Н-пиридо[ 1,2-а]пиразинила, 3-азабицикло[3.1.0] гексила, (1К,5§)-3-азабицикло[3.1.0]гексила, 8-азабицикло[3.2.1]октила, (1К,5§)-8-азабицикло[3.2.1] октила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (1К,5§)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1]нонила, (1К,5§)-9-азабицикло[3.3.1]нонила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, (18,4§)-2,5-диазабицикло [2.2.1] гептила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, (1К,5§)-3,8-диазабицикло [3.2.1] октила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспиро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7диазаспиро[3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7-диазаспиро[4.4]нонила или 6,9-диазаспиро
- 19 028382 [4.5] децила.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I):
К2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино;
где арил представляет собой фенил;
где гетероциклил выбран из 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, 1,3-бензодиоксолила или 2,3-дигидро1,4-бензодиоксинила;
где гетероарил выбран из тиенила, 1Н-пиразолила, 1Н-имидазоллила, 1,3-тиазолила, 1,2,4оксадиазолила, 1,3,4-оксадиазолила, пиридинила, пиримидинила, 1Н-индолила, 2Н-индолила, 1Н-индазолила, 2Н-индазолила, индолизинила, бензофуранила, бензотиенила, 1Н-бензимидазолила, 1,3-бензотиазолила, 1,3-бензоксазолила, 9Н-пуринила, фуро[3,2-Ь]пиридинила, фуро[3,2-с]пиридинила, фуро[2,3с]пиридинила, тиено[3,2-с]пиридинила, тиено[2,3-б]пиримидинила, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридинила, 1Нпирроло[2,3-с]пиридинила, пирроло[1,2-а]пиримидинила, пирроло[1,2-а]пиразинила, пирроло[1,2Ь]пиридазинила, пиразоло[1,5-а]пиридинила, пиразоло[1,5-а]пиразинила, имидазо[1,2-а]пиридинила, имидазо[1,2-а]пиримидинила, имидазо[1,2-с]пиримидинила, имидазо[1,2-Ь]пиридазинила, имидазо[1,2a] пиразинила, имидазо[2,1-Ь][1,3]тиазолила, имидазо[2,1-Ь][1,3,4]тиадиазолила, [1,3]оксазоло[4,5b] пиридинила или хиноксалинила; и где в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями Ке и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К! представлет собой гетероциклил, гетероциклил-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(С1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2амино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклилкарбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С1-8алкиламино, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил)(С18алкил)амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-С1 -8алкил)(С1 -8алкил)амино-С1 -8алкил;
где гетероциклил выбран из азетидинила,тетрагидрофуранила, пирролидинила, пиперидинила, пиперазинила, 1,4-диазепанила, 1,2,5,6-тетрагидропиридинила, 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, (3а8,6а8)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, (3аК,6аК)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ила, (3аК,6а8)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ила, гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, (3аК,6а8)-гексагидропирроло [3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, октагидро-5Н-пирроло [3,2-с]пиридинила, октагидро-6Н-пирроло [3,4-Ь] пиридинила, (4аК,7аК)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридинила, (4а8,7а8)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь] пиридинила, гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(2Н)-она, гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (7К, 8а8)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8а8)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8аК)гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8а8)-октагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8аК)октагидропирроло[ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, октагидро-2Н-пиридо[ 1,2-а]пиразинила, 3-азабицикло[3.1.0] гексила, (1К,58)-3-азабицикло[3.1.0]гексила, 8-азабицикло[3.2.1]октила, (1К,58)-8-азабицикло[3.2.1]октила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (1К,58)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1]нонила, (1К,58)-9-азабицикло[3.3.1]нонила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, (18,48)-2,5-диазабицикло [2.2.1] гептила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, (1К,58)-3,8-диазабицикло [3.2.1] октила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспиро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7диазаспиро[3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7-диазаспиро[4.4]нонила или 6,9-диазаспиро [4.5] децила; и где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями К3 и К4; и
К2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино;
где гетероциклил выбран из 1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ила, 1,3-бензодиоксол-5-ила или 2,3дигидро-1,4-бензодиоксин-6-ила;
где, гетероарил выбран из тиенила, 1Н-пиразолила, 1Н-имидазолила, 1,3-тиазолила, 1,2,4оксадиазолила, 1,3,4-оксадиазолила, пиридинила, пиримидинила, 1Н-индолила, 2Н-индолила, 1Ниндазолила, 2Н-индазолила, индолизинила, бензофуранила, бензотиенила, 1Н-бензимидазолила, 1,3бензотиазолила, 1,3-бензоксазолила, 9Н-пуринила, фуро[3,2-Ь]пиридинила, фуро[3,2-с]пиридинила, фуро[2,3-с]пиридинила, тиено[3,2-с]пиридинила, тиено[2,3-б]пиримидинила, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридинила, 1Н-пирроло[2,3-с]пиридинила, пирроло[1,2-а]пиримидинила, пирроло[1,2-а]пиразинила, пирроло[1,2Ь]пиридазинила, пиразоло[1,5-а]пиридинила, пиразоло[1,5-а]пиразинила, имидазо[1,2-а]пиридинила, имидазо[1,2-а]пиримидинила, имидазо[1,2-с]пиримидинила, имидазо[1,2-Ь]пиридазинила, имидазо[1,2-а] пиразинила, имидазо[2,1-Ь][1,3]тиазолила, имидазо[2,1-Ь][1,3,4]тиадиазолила, [1,3]оксазоло[4,5-Ь]пиридинила или хиноксалинила; и где, в каждом случае, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены
- 20 028382 заместителями Кб и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой С1-8алкил, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1-8 алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, амино-С1-8алкил, С1-8алкиламино-С1-8алкил, (С1-8алкил)2-амино-С1-8 алкил, С1-8алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (С1-8алкокси-С1-8 алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, амино-С1-8алкиламино, (амино-С1-8алкил)2-амино, (амино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8 алкил)амино, амино-С1-8алкокси, С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси, Οι.8 алкокси-С1-8алкиламино-С1 -8алкокси, (С -8алкокси-С1 -8алкил)2-амино-С1 -8алкокси, (С1-8алкокси-С1 -8алкил)(С1 -8 алкил)амино-С1-8алкокси, амино-С2-8алкенил, С1-8алкиламино-С2-8алкенил, (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкенил, амино-С2-8алкинил, С1-8алкиламино-С2-8алкинил, (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкинил, галоген-С1-8алкиламино, (галоген-С1-8алкил)2-амино, (галоген-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гидрокси-С1-8алкил, гидроксиС1-8алкокси-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8 алкил)амино, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (гидрокси-С1-8 алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)2-аминоС1-8алкокси, (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкокси, гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1 -8алкиламино-С1-8алкил)(С1 -8алкил)амино, (гидрокси-С1 -8алкил)(С1 -8алкил)амино-С1 ^алкиламино, [(гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино или [(гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил) амино-С1-8алкил] (С1 -8алкил)амино; и
К2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями Кб и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представлет собой гетероциклил, гетероциклил-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(С1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2амино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклилкарбонилокси, С3-14циклоалкил, арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С1 -8алкиламино, (гетероарил-С1 -8алкил)2-амино, (гетероарил-С1 -8алкил)(С1-8 алкил)амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил; где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями К3 и К4; и
К2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями Кб и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представлет собой гетероциклил, гетероциклил-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкокси, гетероциклиламино, (гетероциклил)(С1-8алкил)амино, гетероциклиламино-С1-8алкил, гетероциклил-С1-8алкиламино, (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)2амино-С1-8алкил, (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил или гетероциклилкарбонилокси; где, в каждом случае, гетероциклил необязательно замещен заместителями К3 и К4; и
К2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями Кб и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представлет собой гетероциклил, необязательно замещенный заместителями К3 и К4; и
К2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями Кб и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой С3-14циклоалкил, необязательно замещенный заместителями К3 и К4; и
К2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями Кб и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой арил-С1-8алкиламино, (арил-С1-8алкил)2-амино, (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (арилС1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил; где, в каждом случае, арил
- 21 028382 необязательно замещен заместителями К3 и К4; и
К2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями К6 и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой арил-С1-8 алкиламино, необязательно замещенный заместителями К3 и К4; и
К2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями К6 и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероарил, гетероарил-С1-8алкил, гетероарил-С1-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С1-8алкиламино, (гетероарил-С1-8 алкил)2-амино, (гетероарил-С1-8алкил) (С1-8алкил)амино, гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил, (гетероарил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил или (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил; где, в каждом случае, гетероциклил, С3-14циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены заместителями К3 и К4; и
К2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены заместителями К6 и К7.
В другом варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой гетероарил, необязательно замещенный заместителями К3 и К4; и
К2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино, где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещен заместителями К6 и К7.
Один из вариантов осуществления изобретения включает соединение формулы (I), где указанное соединение выбрано из соединений формулы (II), формулы (III), формулы (IV), формулы (V), формулы (VI), формулы (VII), формулы (VIII), формулы (IX), формулы (X), формулы (XI), формулы (XII), формулы (XIII), формулы (XIV), формулы (XV), формулы (XVI), формулы (XVII), формулы (XVIII) или формулы (XIX):
или их форм.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (II) \\2 представляет собой С-К1, \ν5 представляет собой С-К2, \\6 представляет собой С-Ка, и \\3 и \\4 независимо представляют собой С-Ка или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (II) \\2 представляет собой С-К2, \ν5 представляет собой С-К1, \\6представляет собой С-Ка, и \\3 и \\4 независимо представляют собой С-Ка или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (II) \\3 представляет собой С-К1, \\6 представляет собой С-К2, \\2 и \\4 независимо представляют собой С-Ка или Ν, и \ν5 представляет собой С-Кс или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (II) \\3 представляет собой С-К2, \\6 пред- 22 028382 ставляет собой С-Кь №2 и №4 независимо представляют собой С-Ка или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (III) №3 представляет собой С-Кь №6 представляет собой С-К2, №4 представляет собой С-Ка или Ν, №1 представляет собой С-КЬ или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (III) №3 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-К1, №4 представляет собой С-Ка или Ν, №1 представляет собой С-КЬ или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (IV) №2 представляет собой С-Кь №5 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-Ка, №4 представляет собой С-Ка или Ν, и №1 представляет собой С-КЬ или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (IV) №2 представляет собой С-К2, №5 представляет собой С-Кь №6 представляет собой С-Ка, №4 представляет собой С-Ка или Ν, и №1 представляет собой С-КЬ или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (V) №2 представляет собой С-Кь №5 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-Ка, №3 представляет собой С-Ка или Ν, и №1 представляет собой С-КЬ или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (V) №2 представляет собой С-К2, №5 представляет собой С-К1, №6 представляет собой С-Ка, №3 представляет собой С-Ка или Ν, и №1 представляет собой С-КЬ или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (V) №3 представляет собой С-Кь №6 представляет собой С-К2, №2 представляет собой С-Ка или Ν, №1 представляет собой С-КЬ или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (V) №3 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-Кь №2 представляет собой С-Ка или Ν, №1 представляет собой С-КЬ или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (VI) №3 представляет собой С-Кь №6 представляет собой С-К2, №2 и №4 независимо представляют собой С-Ка или Ν, и №1 представляет собой С-КЬ или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (VI) №3 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-К1, №2 и №4 независимо представляют собой С-Ка или Ν, и №1 представляет собой С-КЬ или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (VII) №3 представляет собой С-Кь №6 представляет собой С-К2, №4 представляет собой С-Ка или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (VII) №3 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-К1, №4 представляет собой С-Ка или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (VIII) №2 представляет собой С-Кь №5 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-Ка, и №4 представляет собой С-Ка или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (VIII) №2 представляет собой С-К2, №5 представляет собой С-Кь №6 представляет собой С-Ка, и №4 представляет собой С-Ка или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (IX) №2 представляет собой С-Кь №5 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-Ка, и №3 представляет собой С-Ка или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (IX) №2 представляет собой С-К2, №5 представляет собой С-Кь №6 представляет собой С-Ка, и №3 представляет собой С-Ка или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (IX) №3 представляет собой С-Кь №6 представляет собой С-К2, №2 представляет собой С-Ка или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (IX) №3 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-К1, №2 представляет собой С-Ка или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (X) №3 представляет собой С-Кь №6 представляет собой С-К2, и №2 и №4 независимо представляют собой С-Ка или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (X) №3 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-К1, и №2 и №4 независимо представляют собой С-Ка или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XI) №3 представляет собой С-Кь №6 представляет собой С-К2, №1 представляет собой С-КЬ или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XI) №3 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-Кь №1 представляет собой С-КЬ или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XII) №3 представляет собой С-Кь №6 представляет собой С-К2, №4 представляет собой С-Ка или Ν, и №1 представляет собой С-КЬ или Ν.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XII) №3 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-К1, №4 представляет собой С-Ка или Ν, и №1 представляет собой С-КЬ или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XIII) №2 представляет собой С-Кь №5 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-Ка, и №1 представляет собой С-КЬ или Ν.
- 23 028382 ^6 ^6 ^6
В другом варианте осуществления соединения формулы (XIII) №2 представляет собой С-В2. №5 представляет собой С-Κι, №6 представляет собой С-Κ,, и №1 представляет собой С-Κ или N.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XIV) №3 представляет собой С-Κ представляет собой С-И2, №2 представляет собой С-Κ, или Ν, и №1 представляет собой С-Иь или N.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XIV) №3 представляет собой С-К· представляет собой С-Κ!, №2 представляет собой С-Κ, или Ν, и №1 представляет собой С-Κι, или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XV) №3 представляет собой С-Κ! представляет собой С-И2, и №5 представляет собой С-Вс.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XV) №3 представляет собой С-В2, №6 представляет собой С-Κ, и №5 представляет собой С-Вс.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XVI) №3 представляет собой С-Κ] представляет собой С-И2, и №4 представляет собой С-Κ,.
В другом варианте осуществления соединения формулы (XVI) №3 представляет собой С-К· представляет собой С-К, и №4 представляет собой С-Κ,.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XVII) №2 представляет собой С-Κ представляет собой С-К, и №6 представляет собой С-К
В другом варианте осуществления соединения формулы (XVII) №2 представляет собой С-К представляет собой С-К, и №6 представляет собой С-К
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XVIII) №3 представляет собой С-К №6 представляет собой С-К и №2 представляет собой С-К
В другом варианте осуществления соединения формулы (XVIII) №3 представляет собой С-К представляет собой С-К, и №2 представляет собой С-К
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XIX) №3 представляет собой С-К представляет собой С-К и №1 представляет собой С-К
В другом варианте осуществления соединения формулы (XIX) №3 представляет собой С-К представляет собой С-К и №1 представляет собой С-К
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (II)
-№6 №6 №5 №5 №6 №6 №6
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (III)
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (IV)
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (V)
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (VI)
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (VII)
- 24 028382
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (VIII)
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (IX):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (X):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XI):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XII):
или его форма
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XIII):
о (ХШ) или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XIV):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XV):
или его форма.
- 25 028382
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XVI):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XVII):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XVIII):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (XIX):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I), формулы (II), формулы (III), формулы (IV), формулы (V), формулы (VI), формулы (VII), формулы (VIII), формулы (X), формулы (XI), формулы (XII), формулы (XIII), формулы (XIV), формулы (XV), формулы (XVI), формулы (XVII), формулы (XVIII) или формулы (XIX) является соединение, выбранное из соединений формулы ^а), формулы (На), формулы (Ша), формулы ОУа). формулы ^а), формулы (У!а), формулы (УПа), формулы (УШа), формулы ^а), формулы (КХа), формулы ^Па), формулы (ХШа), формулы ^^а), формулы (XVа), формулы (ХVIа), формулы (XVIIа), формулы (XVIIIа) или формулы ^Ка), соответственно:
или его форма.
- 26 028382
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (Ш) один из №2, №3, №5 и №6 представляет собой С-К1, а другой из №2, №3, №5 и №6 представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6 представляет собой С-К2, №2 представляет собой С-К, или Ν, и №5 представляет собой С-К или Ν; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1, №2 представляет собой С-К, или Ν, и №5 представляет собой С-К или Ν; или если №2 представляет собой С-К1, то №5 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-К,· и №3 представляет собой С-К, или Ν.
если №2 представляет собой С-К2, то №5 представляет собой С-К1, №6 представляет собой С-Ка, и №3 представляет собой С-Ка или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (Па) один из №2, №3, №5 и №6 представляет собой С-К1, а другой из №2, №3, №5 и №6 представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6 представляет собой С-К2, №2 представляет собой С-Ка или Ν, и №5 представляет собой С-К или Ν; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1, №2 представляет собой С-Ка или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν; или если №2 представляет собой С-К1, то №5 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-Ка, и №3 представляет собой С-Ка или Ν; или если №2 представляет собой С-К2, то №5 представляет собой С-К1, №6 представляет собой С-Ка, и №3 представляет собой С-Ка или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (Ша) один из №3 и №6 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6 представляет собой С-К2; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы ДУа) один из №2 и №5 представляет собой С-К1 а другой представляет собой С-К2 при условии, что если №2 представляет собой С-К1, то №5 представляет собой С-К2; или если №2 представляет собой С-К2, то №5 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (Уа) один из №2, №3, №5 и №6 представляет собой С-К1, а другой из №2, №3, №5 и №6 представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6 представляет собой С-К2, №2 представляет собой С-Ка или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1, №2 представляет собой С-Ка или Ν, и №5 представляет собой С-Кс или Ν; или если №2 представляет собой С-К1, то №5 представляет собой С-К2, №6 представляет собой С-Ка, и №3 представляет собой С-Ка или Ν; или если №2 представляет собой С-К2, то №5 представляет собой С-К1, №6 представляет собой С-Ка, и №3 представляет собой С-Ка или Ν.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (У!а) один из №3 и №6 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6 представляет собой С-К2; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (УПа) один из №3 и №6 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6 представляет собой С-К2; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (УШа) один из №2 и №5 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №2 представляет собой С-К1, то №5 представляет собой С-К2; или если №2 представляет собой С-К2, то №5 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (Ха) один из №3 и №6 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6 представляет собой С-К2; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (ХЩ) один из №3 и №6 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6 представляет собой С-К2; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (ХПа) один из №3 и №6 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6 представляет собой С-К2; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (ХШа) один из №2 и №5 представляет собой С-К1 а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №2 представляет собой С-К1, то №5 представляет собой С-К2; или если №2 представляет собой С-К2, то №5 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (ХШа) один из №3 и №6 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6 представляет собой С-К2; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (ХУа) один из №3 и №6 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6
- 27 028382 представляет собой С-К2; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XVIа) один из №3 и №6 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6 представляет собой С-К2; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы ^УПа) один из №2 и №5 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №2 представляет собой С-К1, то №5 представляет собой С-К2; или если №2 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы ^^1^) один из №3 и №6 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6 представляет собой С-К2; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления соединения формулы (XIXа) один из №3 и №6 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если №3 представляет собой С-К1, то №6 представляет собой С-К2; или если №3 представляет собой С-К2, то №6 представляет собой С-К1.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение формулы (Ш):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (II) является соединение формулы (Па):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (III) является соединение формулы (Ша):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IV) является соединение формулы ПУа):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (V) является соединение формулы ^а):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VI) является соединение формулы (ΥΕι):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VII) является соединение формулы
- 28 028382 (УПа):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (VIII) является соединение формулы (УШа):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (X) является соединение формулы (Ха):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XI) является соединение формулы (ХЩ):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XII) является соединение формулы (ХПа):
Кь
(ХПа) или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIII) является соединение формулы (ХШа):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIV) является соединение формулы ^ГУа):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XV) является соединение формулы ^Уа):
- 29 028382
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVI) является соединение формулы (ХУТа):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVII) является соединение формулы (ХУПа):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIII) является соединение формулы (ХУШа):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XIX) является соединение формулы ^ГСа):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ^а) является соединение формулы (^1), формулы (^2), формулы (^3) или формулы (^4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (На) является соединение формулы (На1), формулы (Па2), формулы (Па3) или формулы (Па4):
- 30 028382 или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ша) является соединение формулы (Ша1) или формулы (Ша2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Уа) является соединение формулы (^а^ или формулы (^а2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Уа) является соединение формулы ^а^, формулы (Уа2), формулы Vа3) или формулы (Уа4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ука) является (У1а1) или формулы (У1а2):
соединение формулы
(У1а1) или (У1а2) или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (УНа) является (УНаХ) или формулы ^М):
соединение формулы
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (УШа) является (УШа1) или формулы (ΎΠ^):
соединение формулы
(УШа1) или (УШа2) или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IX) является (КаЦ формулы (^^2), формулы (Ка3) или формулы (Ка4):
соединение формулы
- 31 028382
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ха) является соединение формулы (Ха1) или формулы (Ха2):
(Ха1) или (Ха2) или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (ХЫ) является соединение формулы (ХТа1) или формулы (ХТа2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (ХПа) является соединение формулы (ХГ Та1) или формулы (ХПа2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (ХШа) является соединение формулы (ХШа1) или формулы (ХШа2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (ХТУа) является соединение формулы (ХТУа1) или формулы (ХТУа2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (ХУа) является соединение формулы (ХУа1) или формулы (ХУа2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (ХУЫ) является соединение формулы (ХУТа1) или формулы (ХУТа2):
- 32 028382
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIIа) является соединение формулы (XVIIа1) или формулы (XVIIа2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVШа) является соединение формулы (XVШа1) или формулы (XVШа2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ^Ка) является соединение формулы ^Ка!) или формулы ^Ка2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ш) является соединение формулы (Ш1):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ш) является соединение формулы (Ш2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ш) является соединение формулы (Ш3):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ш) является соединение формулы (Ш4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения (На) является соединение формулы (Па1):
- 33 028382 или его форма.
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Па) является соединение формулы (Па3):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения (Па) является соединение формулы (Па4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ша) является соединение формулы (Ша1):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ша) является соединение формулы (Ша2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IVа) является соединение формулы (^а1):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ЦУа) является соединение формулы (ГУа2):
- 34 028382 или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Уа) является соединение формулы (Уа1):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Уа) является соединение формулы (Уа2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Уа) является соединение формулы (Уа3):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Уа) является соединение формулы (Уа4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (У^) является соединение формулы (УТа1):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (У^) является соединение формулы (УТа2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (УПа) является соединение формулы (УПа1):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (УПа) является соединение формулы (УПа2):
- 35 028382 или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (УШа) является соединение формулы (УШа1):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (УШа) является соединение формулы (УШа2):
или его форма.
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IX) является соединение формулы (КаЭ):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (IX) является соединение формулы (ГХа4):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ха) является соединение формулы (Ха1):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ха) является соединение формулы (Ха2):
или его форма.
- 36 028382
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ^а) является соединение формулы ^1):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ^а) является соединение формулы ^2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ^Па) является соединение формулы (XIЫ):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ^Па) является соединение формулы ^32):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ^Ша) является соединение формулы (Ша!):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ^Ша) является соединение формулы ^П^):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ^^а) является соединение формулы ^ГУа^:
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ^^а) является соединение формулы (Ша2):
- 37 028382
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVа) является соединение формулы ^а1):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVа) является соединение формулы ^а2):
или его форма
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIа) является соединение формулы (XVIа1):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIа) является соединение формулы (XVIа2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIIа) является соединение формулы (XVIIа1):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIIа) является соединение формулы ^^2):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (XVIIIа) является соединение формулы (XVIIIа1):
- 38 028382 или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ^УШа) является соединение формулы ^УИМ):
(ХУШа2) или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ^Ка) является соединение формулы ^Ка!):
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы ^Ка) является соединение формулы
или его форма.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (I) является соединение, выбранное из группы, состоящей из соединении:
- 39 028382
- 40 028382
или его форма.
Терминология
Химические термины, употребляемые выше и во всем описании изобретения, если это не оговорено особо, имеют общепринятые значения, известные специалисту в данной области, и определены ниже.
Используемый здесь термин С^алкил обычно означает насыщенные углеводородные радикалы, имеющие от одного до восьми атомов углерода в цепи прямой или разветвленной конфигурации, включая, но не ограничиваясь ими, метил, этил, н-пропил (также называемый пропилом или пропанилом), изопропил, н-бутил (также называемый бутилом или бутанилом), изобутил, втор-бутил, трет-бутил, нпентил (также называемый пентилом или пентанилом), н-гексил (также называемый гексилом или гексанилом), н-гептил (также называемый гептилом или гептанилом), н-октил и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения С1_8алкил включает, но не ограничивается ими, С^алкил, С1_4алкил и т.п. С18алкильный радикал необязательно замещен описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин С2.8алкенил обычно означает частично ненасыщенные углеводородные радикалы, имеющие от двух до восьми атомов углерода в цепи прямой или разветвленной конфигурации и одну или более углерод-углеродных двойных связей, включая, но не ограничиваясь ими, этенил (также называемый винилом), аллил, пропенил и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения С2-8алкенил включает, но не ограничивается ими, С2-6алкенил, С2-4алкенил и т.п. С2.8алкенильный радикал необязательно замещен описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин С2.8алкинил обычно означает частично ненасыщенные углеводородные радикалы, имеющие от двух до восьми атомов углерода в цепи прямой или разветвленной конфигурации и одну или более углерод-углеродных тройных связей, включая, но не ограничиваясь ими, этинил, пропинил, бутинил и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения С2.8алкинил включает, но не ограничивается ими, С2.6алкинил, С2.4алкинил и т.п. С2_8алкинильный радикал необязательно замещен описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин С1_8алкокси обычно означает насыщенные углеводородные радикалы, имеющие от одного до восьми атомов углерода в цепи прямой или разветвленной конфигурации формулы -0-С1_8алкил, включая, но не ограничиваясь ими, метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, нбутокси, изобутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, н-пентокси, н-гексокси т.п. В некоторых вариантах
- 41 028382 осуществления изобретения С1-8алкокси включает, но не ограничивается ими, С1-6алкокси, С1-4алкокси т.п. С1-8алкокси-радикал необязательно замещен описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин С3-14циклоалкил обычно означает насыщенный или частично ненасыщенный моноциклический, бициклический или полициклический углеводородный радикал, включая, но не ограничиваясь ими, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогексенил, циклогептил, циклооктил, 1Н-инданил, инденил, тетрагидронафталенил и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения С3-14циклоалкил включает, но не ограничивается ими, С3-8циклоалкил, С5-8циклоалкил, С3-10циклоалкил и т.п. С3-14циклоалкильный радикал необязательно замещен описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин арил обычно означает радикал, имеющий моноциклическую, бициклическую или полициклическую ароматическую углеродную структуру, включая, но не ограничиваясь ими, фенил, нафтил, антраценил, флуоренил, азуленил, фенантренил и т.п. Арильный радикал необязательно замещен описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин гетероарил обычно означает радикал, имеющий моноциклическую, бициклическую или полициклическую ароматическую углеродную структуру, в которой один или более углеродных кольцевых членов, если они обладают структурной стабильностью, замещены одним или более гетероатомами, такими как атом 0, 8 или Ν, включая, но не ограничиваясь ими, фуранил (также называемый фурилом), тиенил (также называемый тиофенилом), пирролил, 2Н-пирролил, 3Н-пирролил, пиразолил, 1Н-пиразолил, имидазолил, 1Н-имидазолил, изоксазолил, изотиазолил, оксазолил, 1,3тиазолил, триазолил (такой как 1Н-1,2,3-триазолил и т.п.), оксадиазолил (такой как 1,2,4-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил и т.п.), тиадиазолил, тетразолил (такой как 1Н-тетразолил, 2Н-тетразолил и т.п.), пиридинил (также называемый пиридилом), пиримидинил, пиразинил, пиридазинил, триазинил, индолил, 1Н-индолил, индазолил, 1Н-индазолил, 2Н-индазолил, индолизинил, изоиндолил, бензофуранил, бензотиенил (также называемый бензотиофенилом), бензоимидазолил, 1Н-бензоимидазолил, 1,3-бензотиазолил, 1,3-бензоксазолил (также называемый 1,3-бензооксазолилом), пуринил, 9Н-пуринил, хинолинил, изохинолинил, хиназолинил, хиноксалинил, 1,3-диазинил, 1,2-диазинил, 1,2-диазолил, 1,4-диазанафталенил, акридинил, фуро[3,2-Ь]пиридинил, фуро[3,2-с]пиридинил, фуро[2,3-с]пиридинил, 6Н-тиено [2,3-Ь]пирролил, тиено[3,2-с]пиридинил, тиено[2,3-б]пиримидинил, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридинил, 1Нпирроло[2,3-с]пиридинил, 1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридинил, пирроло[1,2-а]пиразинил, пирроло[1,2-Ь] пиридазинил, пиразоло[1,5-а]пиридинил, пиразоло[1,5-а]пиразинил, имидазо[1,2-а]пиридинил, 3Нимидазо[4,5-Ь]пиридинил, имидазо[1,2-а]пиримидинил, имидазо[1,2-с]пиримидинил, имидазо[1,2-Ь]пиридазинил, имидазо[1,2-а]пиразинил, имидазо[2,1-Ь][1,3]тиазолил, имидазо[2,1-Ь][1,3,4]тиадиазолил, [1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридинил, [1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридинил и т.п.
Гетероарильный радикал необязательно замещен на кольцевых членах у атома углерода или азота описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин гетероциклил обычно означает радикал, имеющий насыщенную или частично ненасыщенную моноциклическую, бициклическую или полициклическую углеродную кольцевую структуру, в которой один или более углеродных кольцевых членов, если они обладают структурной стабильностью, замещены одним или более гетероатомами, такими как атом 0, 8 или Ν, включая, но не ограничиваясь ими, оксиранил, оксетанил, азетидинил, тетрагидрофуранил, пирролинил, пирролидинил, пиразолинил, пиразолидинил, имидазолинил, имидазолидинил, изоксазолинил, изоксазолининил, изотиазолинил, изотиазолидинил, оксазолинил, оксазолидинил, тиазолинил, тиазолидинил, триазолинил, триазолидинил, оксадиазолинил, оксадиазолидинил, тиадиазолинил, тиадиазолидинил, тетразолинил, тетразолидинил, пиранил, дигидро-2Н-пиранил, тиопиранил, 1,3-диоксанил, 1,2,5,6-тетрагидропиридинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, 1,4-диазепанил, 1,3-бензодиоксолил (также называемый бензо[4][1,3]диоксолилом), 1,4-бензодиоксанил, 2,3-дигидро-1,4бензодиоксинил (также называемый 2,3-дигидробензо[Ь][1,4]диоксинилом), гексагидропирроло[3,4-Ь] пиррол-(1Н)-ил, (3а8,6а8)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ил, (3аК,6аК)-гексагидропирроло[3,4-Ь] пиррол-(1Н)-ил, гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ил, (3а8,6а8)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол(2Н)-ил, (3аК,6аК)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ил, гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ил, (3аК,6а8)-гексагидропирроло [3,4-с]пиррол-(1Н)-ил, (3аК,6аК)-гексагидропирроло [3,4-с]пиррол-(1Н)-ил, октагидро-5Н-пирроло[3,2-с]пиридинил, октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридинил, (4аК,7аК)-октагидро6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридинил, (4а8,7а8)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридинил, гексагидропирроло [1,2-а]пиразин-(1Н)-ил, (7К,8а8)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ил, (8а8)-гексагидропирроло [1,2-а]пиразин-(1Н)-ил, (8аК)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ил, (8а8)-октагидропирроло[1,2-а] пиразин-(1Н)-ил, (8аК)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ил, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(2Н)он, октагидро-2Н-пиридо [ 1,2-а]пиразинил, 3 -азабицикло [3.1.0]гексил, (1К,58)-3 -азабицикло [3.1.0]гексил, 8-азабицикло[3.2.1]октил, (1К,58)-8-азабицикло[3.2.1]октил, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енил, (1К,58)-8азабицикло[3.2.1]окт-2-енил, 9-азабицикло[3.3.1]нонил, (1К,58)-9-азабицикло[3.3.1]нонил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептил, (18,48)-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептил, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октил, 3,8-диазаби- 42 028382 цикло[3.2.1]октил, (1К,5§)-3,8-диазабицикло[3.2.1]октил, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонил, азаспиро[3.3] гептил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептил, 2,7-диазаспиро[3.5]нонил, 5,8-диазаспиро[3.5]нонил, 2,7-диазаспиро [4.4]нонил, 6,9-диазаспиро[4.5]децил и т.п.
Гетероциклильный радикал необязательно замещен на кольцевых членах у атома углерода или азота описанными здесь молекулами-заместителями, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин С1-8алкокси-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкил-О-С1-8 алкил.
Используемый здесь термин С1-8алкокси-С1-8алкиламино означает радикал формулы: -ЯН-С1-8алкил-О-С1 -8алкил.
Используемый здесь термин (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино означает радикал формулы: -N(01.8 алкил-О-С1 -8алкил)2.
Используемый здесь термин С1-8алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкокси означает радикал формулы: О-С1 -8алкил-НН-С.’1 -8алкил-О-С1 -8алкил.
Используемый здесь термин (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси означает радикал формулы: -О-С1-8алкил-Ы(С1-8алкил-О-С1-8алкил)2.
Используемый здесь термин (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкокси означает радикал формулы: -О-С1-8алкил-Ы(С1-8алкил)(С1-8алкил-О-С1-8алкил).
Используемый здесь термин С1-8алкокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1 ^алкил-НН-С/ -8алкил-О-С1 -8алкил.
Используемый здесь термин (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1 -8алкил-И(С1-8алкил-О-С1 -8алкил)2.
Используемый здесь термин (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкил-Ы(С1-8алкил)(С1-8алкил-О-С1-8алкил).
Используемый здесь термин С1-8алкоксикарбонил означает радикал формулы: -С(О)-О-С1-8алкил. Используемый здесь термин С1-8алкоксикарбонил-С1-8алкенил означает радикал формулы: С1-8алкенил-С(О)-О-С1 -8алкил.
Используемый здесь термин С1-8алкоксикарбониламино означает радикал формулы: -МН-С(О)-ОС1-8алкил.
Используемый здесь термин С1-8алкиламино означает радикал формулы: -МН-С1-8алкил. Используемый здесь термин (С1-8алкил)2-амино означает радикал формулы: -Ы(С1-8алкил)2. Используемый здесь термин С1-8алкиламино-С2-8алкенил означает радикал формулы: -С2-8алкенил-МН-С1-8алкил.
Используемый здесь термин (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкенил означает радикал формулы: -С2-8алкенил-И(С1-8алкил)2.
Используемый здесь термин С1-8алкиламино-С1-8алкокси означает радикал формулы: -О-С1-8алкил-МН-С1-8алкил.
Используемый здесь термин (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси означает радикал формулы: -О-С1-8алкил-Ы(С1-8алкил)2.
Используемый здесь термин С1-8алкиламино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкил-МНС1-8алкил.
Используемый здесь термин (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкил№С1-8алкил)2.
Используемый здесь термин С1-8алкиламино-С1-8алкиламино означает радикал формулы: -МН-С1-8 алкил-КН-С -8алкил.
Используемый здесь термин (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино означает радикал формулы: -N4С1-8алкил-И(С1-8алкил)2.
Используемый здесь термин (С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино означает радикал формулы: -N(С1-8алкил-NН-С1-8алкил)2.
Используемый здесь термин [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил]2-амино означает радикал формулы: -N[С1-8алкил-N(С1-8алкил)2]2.
Используемый здесь термин (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино означает радикал формулы: -N(С1-8алкил)(С1-8алкил-NН-С1-8алкил).
Используемый здесь термин [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино означает радикал формулы: -N(61 -8алкил) [С1 -8алкил-Ы(С1-8алкил)2].
Используемый здесь термин С1-8алкиламино-С2-8алкинил означает радикал формулы: -С2-8алкинил-NН-С1-8алкил.
Используемый здесь термин (С1-8алкил)2-амино-С2-8алкинил означает радикал формулы: -С2-8алкинил-^С -8алкил)2.
Используемый здесь термин С1-8алкилкарбонил означает радикал формулы: -С(О)-С1-8алкил. Используемый здесь термин С1-8алкилкарбониламино означает радикал формулы: -NН-С(О)-С1-8 алкил.
Используемый здесь термин С1-8алкилтио означает радикал формулы: -§-С1-8алкил.
- 43 028382
Используемый здесь термин амино-С2-8алкенил означает радикал формулы: -С2-8алкенил-№Н2.
Используемый здесь термин амино-С1-8алкокси означает радикал формулы: -О-С1-8алкил-№Н2.
Используемый здесь термин амино-С!-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкил-№Н2.
Используемый здесь термин амино-С!-8алкиламино означает радикал формулы: -КН-С^алкилΝΉ2.
Используемый здесь термин (амино-С!-8алкил)2-амино означает радикал формулы: -Ы(С1-8алкилΝΉ2)2.
Используемый здесь термин (амино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино означает радикал формулы: -И(С1-8алкил)(С1-8алкил-№Н2).
Используемый здесь термин амино-С2-8алкинил означает радикал формулы: -С2-8алкинил-МН2.
Используемый здесь термин арил-С1-8алкоксикарбонил означает радикал формулы: -С(О)-О-С1-8 алкиларил.
Используемый здесь термин арил-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкиларил.
Используемый здесь термин арил-С1-8алкиламино означает радикал формулы: -№Н-С1-8алкиларил.
Используемый здесь термин (арил-С!-8алкил)2-амино означает радикал формулы: -Ν(Ο1. алкиларил)2.
Используемый здесь термин (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино означает радикал формулы: -Ν(Ο1.8 алкил)(С1 -8алкиларил).
Используемый здесь термин арил-С1-8алкиламино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1.8 алкил-№Н-С1-8алкиларил.
Используемый здесь термин (арил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1.8 алкил-И(С1 -8алкиларил)2.
Используемый здесь термин (арил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкил-Ы(С1-8алкил)(С1-8алкиларил).
Используемый здесь термин ариламино означает радикал формулы: -ΝΉ-арил.
Используемый здесь термин ариламинокарбонил означает радикал формулы: -С(О)-№Н-арил.
Используемый здесь термин арилсульфонилокси-С!-8алкил означает радикал формулы: -С!-8алкил-О-8О2-арил.
Используемый здесь термин бензоксикарбонил означает радикал формулы: -С(О)-О-СН2-фенил.
Используемый здесь термин С3-14циклоалкил-С1-8алкил означает радикал формулы: -С!-8алкил-С314циклоалкил.
Используемый здесь термин С3-14циклоалкиламино означает радикал формулы: -МН-С3-14циклоалкил.
Используемый здесь термин С3-14циклоалкилокси означает радикал формулы: -О-С3-14циклоалкил.
Используемый здесь термин гало или галоген обычно означает радикал с атомом галогена, включая фтор, хлор, бром и иод.
Используемый здесь термин галоген-С1-8алкокси означает радикал формулы: -О-С1-8алкилгалоген, где -С1-8алкил частично или полностью замещен одним или более атомами галогена, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин галоген-С!-8алкил означает радикал формулы: С!-8алкилгалоген, где С1-8алкил частично или полностью замещен одним или более атомами галогена, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин галоген-С1-8алкиламино означает радикал формулы: -№Н-С1-8алкилгалоген.
Используемый здесь термин (галоген-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино означает радикал формулы: -И(С1-8алкил)(С1-8алкилгалоген).
Используемый здесь термин (галоген-С1-8алкил)2-амино означает радикал формулы: -Ы(С1-8алкилгалоген)2.
Используемый здесь термин гетероарил-С!-8алкокси означает радикал формулы: -О-С!-8алкилгетероарил.
Используемый здесь термин гетероарил-С!-8алкил означает радикал формулы: -С!-8алкилгетероарил.
Используемый здесь термин гетероарил-С!-8алкиламино означает радикал формулы: -№Н-С1-8алкилгетероарил.
Используемый здесь термин (гетероарил-С1-8алкил)2-амино означает радикал формулы: -Ы(С1-8алкилгетероарил)2.
Используемый здесь термин (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино означает радикал формулы: -И(С1-8алкил)(С1-8алкилгетероарил).
Используемый здесь термин гетероарил-С1-8алкиламино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С -8алкил-№Н-С1 -8алкилгетероарил.
Используемый здесь термин (гетероарил-С!-8алкил)2-амино-С!-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкил-И(С1-8алкилгетероарил)2.
- 44 028382
Используемый здесь термин (гетероарил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкил-Ы(С1-8алкил)(С1-8алкилгетероарил).
Используемый здесь термин гетероариламино означает радикал формулы: -ΝΗ-гетероарил.
Используемый здесь термин гетероциклил-С1-8алкокси означает радикал формулы: -О-С1-8алкилгетероциклил.
Используемый здесь термин гетероциклил-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкилгетероциклил.
Используемый здесь термин гетероциклил-С1-8алкиламино означает радикал формулы: -ИН-С1-8 алкилгетероциклил.
Используемый здесь термин (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино означает радикал формулы: -Ν(Οι.8 алкилгетероциклил)2.
Используемый здесь термин (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино означает радикал формулы: -Ν(Οι -8алкил)(С1 -8алкилгетероциклил).
Используемый здесь термин гетероциклил-С1-8алкиламино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1 -8алкил-ИН-С1 -8алкилгетероциклил.
Используемый здесь термин (гетероциклил-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкил-Ы(С1-8алкилгетероциклил)2.
Используемый здесь термин (гетероциклил-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкил-Ы(С1-8алкил)(С1-8алкилгетероциклил).
Используемый здесь термин гетероциклиламино означает радикал формулы: -ΝΗ-гетероциклил.
Используемый здесь термин (гетероциклил)(С1-8алкил)амино означает радикал формулы: -Ν(Οι.8 алкил)(гетероциклил).
Используемый здесь термин гетероциклиламино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкилΝΗ-гетероциклил.
Используемый здесь термин гетероциклилкарбонил означает радикал формулы: -С(О)гетероциклил.
Используемый здесь термин гетероциклилкарбонилокси означает радикал формулы: -О-С(О)гетероциклил.
Используемый здесь термин гетероциклилокси означает радикал формулы: -О-гетероциклил.
Используемый здесь термин гидрокси означает радикал формулы: -ОН.
Используемый здесь термин гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкил-О-С1-8алкил-ОН.
Используемый здесь термин гидрокси-С1-8алкил означает радикал формулы: С1-8алкил-ОН, где С1-8алкил частично или полностью замещен одним или более атомами гидрокси-радикалами, если они имеют соответствующую валентность.
Используемый здесь термин гидрокси-С1-8алкиламино означает радикал формулы: -ИН-С1-8алкилОН.
Используемый здесь термин (гидрокси-С1-8алкил)2-амино означает радикал формулы: -И(С1-8алкил-ОН)2.
Используемый здесь термин (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино означает радикал формулы: -Ν(Οι -8алкил)(С1-8алкил-ОН).
Используемый здесь термин гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8 алкил-ИН-С1 -8алкил-ОН.
Используемый здесь термин (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкил-И(С1-8алкил-ОН)2.
Используемый здесь термин (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил означает радикал формулы: -С1-8алкил-Ы(С1-8алкил)(С1-8алкил-ОН).
Используемый здесь термин гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкокси означает радикал формулы: О-С1-8алкил-ИН-С1-8алкил-ОН.
Используемый здесь термин (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкокси означает радикал формулы: -О-С1 ^алкил-ЫЩ -8алкил-ОН)2.
Используемый здесь термин (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкокси означает радикал формулы: -О-С1-8алкил-И(С1-8алкил)(С1-8алкил-ОН).
Используемый здесь термин гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкиламино означает радикал формулы: -ИН-С1-8алкил-ИН-С1-8алкил-ОН.
Используемый здесь термин (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)2-амино означает радикал формулы: -Н(С1-8алкил-ИН-С1-8алкил-ОН)2.
Используемый здесь термин (гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино означает радикал формулы: -ИН-С1-8алкил-Н(С1-8алкил-ОН)2.
Используемый здесь термин (гидрокси-С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино означает радикал формулы: -Н(С1-8алкил)(С1-8алкил-ИН-С1-8алкил-ОН).
Используемый здесь термин [(гидрокси-С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино означает
- 45 028382 радикал формулы: -Ы(С1-8алкил)[С1-8алкил-Н(С1-8алкил-ОН)2].
Используемый здесь термин (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкиламино означает радикал формулы: -№Н-С1-8алкил-Ы(С1-8алкил, С1-8алкил-ОН).
Используемый здесь термин [(гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино означает радикал формулы: -Ы(С1-8алкил)[С1-8алкил-Н(С1-8алкил)(С1-8алкил-ОН)].
Используемый здесь термин заместитель означает замещающие атомы или группы в соответствующих положениях на атомах центральной молекулы, которые присоединены к атому в указанном положении, вместо одного или более атомов водорода, при условии, что валентность присоединенного атома не будет превышать допустимую валентность или общую валентность, и такое замещение будет приводить к образованию стабильного соединения. В соответствии с этим, комбинации заместителей и/или замещающих групп или атомов допустимы только в том случае, если в результате таких комбинаций образуются стабильные соединения. Следует также отметить, что любой углерод, а также гетероатом с уровнем валентности, который является ненасыщенным, как описано или указано в настоящей заявке, очевидно должен иметь число атомов водорода, достаточное для насыщения описанной или указанной валентности.
В целях настоящего описания, если одна или более групп-заместителей для соединения формулы (I) включает функциональные группы, введенные в соединение формулы (I), то каждая функциональная группа, находящаяся в любом положении описанного соединения, может быть независимо выбрана, и если это необходимо, независимо и/или необязательно замещена.
Используемый здесь термин независимо выбранный или каждый выбран относится к функциональным группам в различных заместителях, которые могут быть присоединены более чем один раз на структуре центральной молекулы, где характер замещения в каждом случае не зависит от характера замещения в любом другом случае. Кроме того, использование общего заместителя на центральной структуре описанного здесь соединения предусматривает замену общего заместителя молекулами-заместителями, принадлежащими к конкретному роду, например, арил может быть независимо замещен фенилом или нафталенилом (также называемый нафтилом) и т.п., и полученное в результате соединение входит в объем описанных здесь соединений.
Используемый здесь термин в каждом случае, если он употребляется в выражении ...арил, арилС1-8алкил, гетероциклил и гетероциклил-С1-8алкил, где в каждом случае, арил и гетероциклил необязательно замещены одним или двумя заместителями..., означает необязательное и независимое замещение на каждом из арильных и гетероциклильных кольцах и на арильных и гетероциклильных частях арил-С1-8 алкила и гетероциклил-С1-8алкила.
Используемый здесь термин необязательно замещенный означает, что определенные молекулы, группы, радикалы или фрагменты заместителя входят в объем данного рода и могут быть независимо выбраны, если это необходимо, для замещения одного или более атомов водорода на указанном атоме, присоединенном к центральной молекуле.
Используемые здесь термины стабильное соединение или стабильная структура означают соединение, которое является достаточно устойчивым при его выделении с нужной степенью чистоты из реакционной смеси и ее препаратов с получением эффективного терапевтического средства.
Приведенные здесь названия соединений были присвоены с использованием компьютерной программы АСИ ЬаЬк Шбех №ипе, разработанной АСИ ЬаЬк, и/или компьютерной программы СНстЭгаи иИга, разработанной СатЬпб§е8ой®. Если название описанного здесь соединения не соответствует указанной структуре, то в качестве руководства для определения соединения следует принимать во внимание структуру, а не название соединения. Номенклатура определенных здесь радикалов-заместителей может несколько отличаться от химического названия соединения, от которого они происходят; специалисту в данной области понятно, что при определении радикала-заместителя подразумевается, что он должен быть указан в химическом названии.
Термин §М№', если это не оговорено особо, означает ген ДНК или РНК §МШ человека и/или ген ДНК или РНК 8МИ2 человека. В конкретном варианте осуществления изобретения термин §МШ означает ген ДНК или РНК 8МШ человека. В другом конкретном варианте осуществления изобретения термин 8МИ2 означает ген ДНК или РНК 8МИ2 человека.
Последовательности нуклеиновой кислоты для генов 8МШ и §М№ человека известны в данной области. Последовательности нуклеиновой кислоты 8МШ человека можно найти, например, в СеиВаик под номерами доступа ΌΩ894095, ЯМ_000344, ЯМ_022874 и ВС062723. Последовательности нуклеиновой кислоты 8МИ2 человека можно найти, например, в ХМ 022875, ХМ 022876, ХМ 022877, ХМ 017411, ΌΩ894734 (ЛГе ТесЬио1од1е8, Пас. (прежнее название Шуйгодеи), СагкЬаб, СаПГ), ВС000908, ВС070242, СК595484, СК598529, СК609539, И21914 и ВС015308.
Ген ЗМШ может присутствовать на прямой цепи человеческой хромосомы 5 в области, простирающейся от приблизительно нуклеотида 70220768 до приблизительно нуклеотида 70249769. Приблизительные положения экзонов 6, 7 и 8 и интронов 6 и 7 ЗМШ на человеческой хромосоме 5 представляют собой:
положения 70241893-70242003 экзона 6;
- 46 028382 положения 70242004-70247767 интрона 6; положения 70247768-70247821 экзона 7; положения 70247822-70248265 интрона 7 и положения 70248266-70248839 экзона 8.
Ген 8ΜΝ2 может присутствовать на прямой цепи человеческой хромосомы 5 в области, простирающейся от приблизительно 69345350 нуклеотида до приблизительно 69374349 нуклеотида.
Приблизительные положения экзонов 6, 7 и 8 и интронов 6 и 7 гена 8ΜΝ2 на человеческой хромосоме 5 представляют собой:
положения 693664 68-69366578 экзона 6; положения 69366579-69372347 интрона 6; положения 69372348-69372401 экзона 7; положения 69372402-69372845 интрона 7 и положения 69372846-69373419 экзона 8.
В конкретных вариантах осуществления изобретения нуклеотидные последовательности, определенные выше для экзонов 6, 7 и 8 и интронов 6 и 7 8ΜΝ1, используются в описанных здесь конструкциях нуклеиновой кислоты минигена 8ΜΝ1. В других вариантах осуществления изобретения нуклеотидные последовательности экзонов 6, 7 и 8 и интронов 6 и 7 8ΜΝ2, представленные в приведенных ниже примерах, используются в описанных здесь конструкциях нуклеиновой кислоты минигена 8ΜΝ2.
Термины 8тп или белок 8тп, если это не оговорено особо, означают человеческой белок 8тп, содержащий аминокислотные остатки, кодируемые экзонами 1-7 гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2. В конкретных вариантах осуществления изобретения белок 8тп является стабильным и функциональным ίη νίίΓΟ и/или ш νίνο, как было определено методами, известными специалистам в данной области. В другом конкретном варианте осуществления изобретения белок 8тп представляет собой полноразмерный белок, кодируемый геном 8ΜΝ1 и/или геном 8ΜΝ2 человека. В другом конкретном варианте осуществления изобретения белок 8тп имеет аминокислотную последовательность, находящуюся в ОепВапк под номером доступа ΝΡ_000335, ААС50473.1, ААА66242.1 или ΝΡ_059107.
Используемый здесь термин повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2 и аналогичные термины относятся, если это не оговорено особо, к включению полноразмерной, интактной, неусеченной последовательности экзона 7 8ΜΝ2 в зрелую мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2 (то есть, такое включение приводит к продуцированию полноразмерной мРНК 8ΜΝ2) ш νίίΓΟ и/или ш νίνο, как было определено методами, известными специалистам в данной области, так, чтобы это приводило к повышению уровней белка 8тп, продуцируемого из гена 8ΜΝ2 ш νίίΓΟ и/или ш νίνο, как было определено методами, известными специалистам в данной области; или к повышению уровня экспрессии стабильного и функционального белка 8тп, продуцируемого из гена 8ΜΝ2 ш νίίΓΟ и/или ш νίνο, как было определено методами, известными специалистам; или к повышению уровня экспрессии слитого белка, кодируемого минигеном ш νίίΓΟ и/или ш νίνΟ, как было определено методами, известными специалистам; или к повышению уровня экспрессии белка 8тп, продуцируемого из гена 8ΜΝ2 у индивидуума (например, у животного с моделью 8ΜΑ или у человека или пациента с 8ΜΑ), нуждающегося в этом.
Используемый здесь термин повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и аналогичные термины относятся, если это не оговорено особо, к включению полноразмерной, интактной, неусеченной последовательности экзона 7 8ΜΝ1 в зрелую мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 (то есть, такое включение приводит к продуцированию полноразмерной мРНК 8ΜΝ1) ш νίίΓΟ и/или ш νίνΟ, как было определено методами, известными специалистам, так, чтобы это приводило к повышению уровней белка 8тп, продуцируемого из гена 8ΜΝ1 ш νίίΓΟ и/или ш νίνΟ, как было определено методами, известными специалистам; или к повышению уровня экспрессии стабильного и функционального белка 8тп, продуцируемого из гена 8ΜΝ1 ш νίίΓΟ и/или ш νίνΟ, как было определено методами, известными специалистам; или к повышению уровня экспрессии гибридного белка, кодируемого минигеном ш νίίΓΟ и/или ш νίνΟ, как было определено методами, известными специалистам; или к повышению уровня экспрессии белка 8тп, продуцируемого из гена 8ΜΝ1 у индивидуума (например, у животного с моделью 8ΜΑ или у человека или пациента с 8ΜΑ), нуждающегося в этом.
Термин существенное изменение, используемый здесь по отношению к количеству мРНК, означает, что данное изменение количества мРНК не является ститистически значимым, например, величина р меньше величины, выбранной из 0,1, 0,05, 0,01, 0,005, 0,001, 0,0005, 0,0001, 0,00005 или 0,00001.
Используемые здесь термины индивидуум и пациент являются взаимозаменяемыми и означают животное или любой живой организм, которые обладают сенсорной и локомоторной произвольной активностью и которым для поддержания жизни требуется кислород и органическая пища. Их неограничивающими примерами являются человек, лошадь, свинья, корова, крыса, мышь, собака и кошка. В некоторых вариантах осуществления изобретения индивидуумом является млекопитающее или теплокровное позвоночное животное. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанный индивидуум не является человеком. В конкретных вариантах осуществления изобретения таким индивидуумом является
- 47 028382 человек. В одном из конкретных вариантов осуществления изобретения указанным индивидуумом является человек с 8МА.
Используемый здесь термин пожилой человек означает человека в возрасте 65 лет или старше.
Используемый здесь термин взрослый человек означает человека в возрасте 18 лет или старше.
Используемый здесь термин ребенок означает человека в возрасте от 1 года до 18 лет.
Используемый здесь термин младенец означает новорожденного до 1 года.
Используемый здесь термин ребенок раннего возраста означает человека в возрасте от 1 года до 3 лет.
Формы соединений
Используемые здесь термины соединение формулы (^)% соединение формулы (^1), соединение формулы (^2), соединение формулы (^3), соединение формулы (^4), соединение формулы (II), соединение формулы (На), соединение формулы (На1), соединение формулы (Па2), соединение формулы (На3), соединение формулы (Па4), соединение формулы (III), соединение формулы (Ша), соединение формулы (Ша1), соединение формулы (Ша2), соединение формулы (IV), соединение формулы (Ша), соединение формулы (IVа1), соединение формулы (IVа2), соединение формулы (V), соединение формулы (Vа), соединение формулы (Vа1), соединение формулы (Vа2), соединение формулы 1X33), соединение формулы (Vа4), соединение формулы (VI), соединение формулы (Ща), соединение формулы (^^1)% соединение формулы (¥[а2), соединение формулы (VII), соединение формулы (VIIа), соединение формулы (VIIа1), соединение формулы (ММ)'1, соединение формулы (VIII), соединение формулы (VШа), соединение формулы (VШа1), соединение формулы (VШа2), соединение формулы (IX), соединение формулы (Ка), соединение формулы (Ка1), соединение формулы (IXа2), соединение формулы (Ка3), соединение формулы (IXа4), соединение формулы (X), соединение формулы (Xа), соединение формулы (Xа1), соединение формулы (Ха2), соединение формулы (XI), соединение формулы (XIа), соединение формулы (XIа1), соединение формулы (XIа2), соединение формулы (XII), соединение формулы (XIIа), соединение формулы (XIIа1), соединение формулы ^М), соединение формулы (XIII), соединение формулы (XIIIа), соединение формулы (XIIIа1), соединение формулы (XIIIа2), соединение формулы (XIV), соединение формулы (XIVа), соединение формулы (XIVа1), соединение формулы (XIVа2), соединение формулы (XV), соединение формулы (XVа), соединение формулы (XVа1), соединение формулы (XVа2), соединение формулы (XVI), соединение формулы (XVIа), соединение формулы (XVIа1), соединение формулы (XVIа2), соединение формулы (XVII), соединение формулы ^^^)5 соединение формулы (XVIIа1), соединение формулы (XVIIа2), соединение формулы (XVIII), соединение формулы (XVIIIа), соединение формулы (XVШа1), соединение формулы (XVIIIа2), соединение формулы (XIX), соединение формулы (XIXа), соединение формулы (XIXа1) и соединение формулы (XIXа2) означают, что каждое из этих соединений принадлежит к подроду соединения формулы (I) или его формы.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, для того, чтобы не повторять слова различные подроды соединения формулы (I), термин соединение формулы (I) или его форма имеет инклюзивное значение и означает соединение формулы (Ш) или его форму, соединение формулы (^1) или его форму, соединение формулы (Ш2) или его форму, соединение формулы (ШЭ) или его форму, соединение формулы (^4) или его форму, соединение формулы (II) или его форму, соединение формулы (На) или его форму, соединение формулы (На1) или его форму, соединение формулы (На2) или его форму, соединение формулы (На3) или его форму, соединение формулы (На4) или его форму, соединение формулы (III) или его форму, соединение формулы (Ша) или его форму, соединение формулы (Ша1) или его форму, соединение формулы (Ша2) или его форму, соединение формулы (IV) или его форму, соединение формулы (Ша) или его форму, соединение формулы (Ша1) или его форму, соединение формулы (Ша2) или его форму, соединение формулы (V) или его форму, соединение формулы ^а) или его форму, соединение формулы ^аЦ или его форму, соединение формулы (Vа2) или его форму, соединение формулы (Vа3) или его форму, соединение формулы (Vа4) или его форму, соединение формулы (VI) или его форму, соединение формулы (ΥΤ^) или его форму, соединение формулы (VIа1) или его форму, соединение формулы Шк-О) или его форму, соединение формулы (VII) или его форму, соединение формулы (^^) или его форму, соединение формулы (^^1) или его форму, соединение формулы (\;'Па2) или его форму, соединение формулы (VIII) или его форму, соединение формулы ШШа) или его форму, соединение формулы (VШа1) или его форму, соединение формулы (^^2) или его форму, соединение формулы (IX) или его форму, соединение формулы (Ка) или его форму, соединение формулы (Ка1) или его форму, соединение формулы (Ка2) или его форму, соединение формулы (Ка3) или его форму, соединение формулы (Ка4) или его форму, соединение формулы (X) или его форму, соединение формулы (X;·!) или его форму, соединение формулы ^аЦ или его форму, соединение формулы (Ха2) или его форму, соединение формулы (XI) или его форму, соединение формулы (XI;·!) или его форму, соединение формулы ^а^ или его форму, соединение формулы ^82) или его форму, соединение формулы (XII) или его форму, соединение формулы ^Па) или его форму, соединение формулы ^НаЦ или его форму, соединение формулы ^М) или его форму, соединение формулы (XIII) или его форму, соединение формулы
- 48 028382 ^Ша) или его форму, соединение формулы ^ШаВ или его форму, соединение формулы (НМ) или его форму, соединение формулы ^У) или его форму, соединение формулы ^Уа) или его форму, соединение формулы (МУаВ или его форму, соединение формулы ^Уа2) или его форму, соединение формулы или его форму, соединение формулы ^Уа) или его форму, соединение формулы ^Уа1) или его форму, соединение формулы ^Уа2) или его форму, соединение формулы ^Ш) или его форму, соединение формулы ^УШ) или его форму, соединение формулы (77411) или его форму, соединение формулы ^УМ) или его форму, соединение формулы ^УЛ) или его форму, соединение формулы ^УПа) или его форму, соединение формулы (XVIIа1) или его форму, соединение формулы (КУМ) или его форму, соединение формулы или его форму, соединение формулы ^УШа) или его форму, соединение формулы ^УШаВ или его форму, соединение формулы (XVIIIа2) или его форму, соединение формулы (XIX) или его форму, соединение формулы (XIX!) или его форму, соединение формулы (XIXа1) или его форму или соединение формулы (XIXа2) или его форму, используемые либо отдельно, либо в сочетании друг с другом.
Таким образом, подразумевается, что варианты осуществления соединения формулы (I) и ссылки на соединения формулы (I) включают соединения формулы Да), формулы (^1), формулы Да2), формулы ДаЗ), формулы Ца4), формулы (II), формулы (Па), формулы (Па1), формулы (Па2), формулы (Па3), формулы (Па4), формулы (III), формулы (Ша), формулы (Ша1), формулы (Ша2), формулы ДУ), формулы ЦУа), формулы ДУаШ, формулы (ГУа2), формулы (У), формулы (Уа), формулы (Уа1), формулы (Уа2), формулы (Уа3), формулы (Уа4), формулы (Ш), формулы (Ша), формулы (УШ), формулы (УТа2), формулы (УЛ), формулы (УПа), формулы (УПа1), формулы (УЛа2), формулы (УШ), формулы (УШа), формулы (УШа1), формулы (УШа2), формулы (IX), формулы (IX!), формулы (КаВ, формулы (Ка2), формулы 0X13), формулы (Ка4), формулы (X), формулы (X;!). формулы ^аВ, формулы (Ха2), формулы (XI), формулы (XII), формулы ^аВ, формулы ^82), формулы (XII), формулы (XIII), формулы ^ПаВ, формулы ^М), формулы (XIII), формулы ^Ша), формулы ^ШаВ, формулы ^ПМ), формулы ^У), формулы ^Ша), формулы ^ГУаВ, формулы ^^82), формулы формулы ^Уа), формулы ^УаВ, формулы (XVа2), формулы формулы ^^8), формулы ^ΥΜ), формулы (XУIа2), формулы ^ΥΠ), формулы (XУΠа), формулы ^УЛаВ, формулы ^УТМ), формулы (XУΠI), формулы (XУΠIа), формулы ^^^), формулы (XУΠIа2), формулы (XIX), формулы (XIX!), формулы ^КаВ и формулы (^82).
Используемый здесь термин форма означает соединение формулы (I), выбранное из его свободной кислоты, свободного основания, соли, изотополога, стереоизомера, рацемата, энантиомера, диастереомера или таутомера.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения форма соединения формулы (I) выбрана из его соли, изотополога, стереоизомера, рацемата, энантиомера, диастереомера или таутомера.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения форма соединения формулы (I) выбрана из его свободной кислоты, изотополога, стереоизомера, рацемата, энантиомера, диастереомера или таутомера.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения форма соединения формулы (I) выбрана из его свободного основания, изотополога, стереоизомера, рацемата, энантиомера, диастереомера или таутомера.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения формой соединения формулы (I) является его свободная кислота, свободное основание или соль.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения формой соединения формулы (I) является его изотополог.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения формой соединения формулы (I) является его стереоизомер, рацемат, энантиомер или диастереомер.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения формой соединения формулы (I) является его таутомер.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения формой соединения формулы (I) является фармацевтически приемлемая форма.
В некоторых описанных здесь вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма были выделены для применения.
Используемый здесь термин выделенный относится к физическому состоянию соединения формулы (I) или его формы после выделения и/или очистки (например, из реакционной смеси или из природного источника) методом синтеза или комбинированным методом синтеза, включающим описанные здесь способы выделения или очистки, или методами, хорошо известными специалистам (например, с помощью хроматографии, перекристаллизациии и т.п.), до достижения чистоты, достаточной для характеризации соединения стандартными аналитическими методами, описанными в настоящей заявке или хорошо известными специалистам.
Используемый здесь термин защищенный означает, что функциональная группа на соединении формулы (I) имеет форму, модифицированную в целях предотвращения нежелательных побочных реак- 49 028382 ций в защищенном положении при осуществлении реакции взаимодействия указанного соединения. Подходящие защитные группы известны специалистам, а также описаны в стандартных руководствах, таких как, например, Т. Огееие с1 а1., Рго1ссИус Огоирз ίη 0гдашс 8уп1Нсз13 (1991), \УПсу, Νο\ν Уогк.
В настоящем изобретении также рассматриваются пролекарства соединения формулы (I) или его формы.
Используемый здесь термин пролекарство означает, что функциональная группа на соединении формулы (I) присутствует в форме (например, действующей как активный или неактивный предшественник лекарственного средства), которая может быть превращена ίη νίνο в активное или более активное соединение формулы (I) или в другую его форму. Такое превращение может происходить согласно различным механизмам (например, под действием химических метаболических и/или неметаболических процессов), таким как, например, гидролиз и/или метаболизм в крови, печени и/или в других органах и тканях. Обсуждение применения пролекарств приводится в руководстве У.Т 81с11а, с1. а1., Вю1сс1то1оду: РЬагтассиДса1 Лзрсс1з, Ргобгидз: СНаПспдсз апб Кс^агбз Лтспсап Аззоаабоп оГ РкагтассиДса1 8сюпбз1з апб 8ргшдсг Ргсзз, 2007.
В одном из примеров, если соединение формулы (I) или его форма содержат функциональную группу карбоновой кислоты, то пролекарство может включать сложный эфир, образованный посредством замещения атома водорода кислотной группы функциональной группой, такой как алкил и т.п. В другом примере, если соединение формулы (I) или его форма содержат спиртовую функциональную группу, то пролекарство может быть образовано посредством замещения атома водорода спиртовой группы функциональной группой, такой как алкил или замещенный карбонил и т.п. В другом примере, если соединение формулы (I) или его форма содержат функциональную аминогруппу, то пролекарство может быть образовано посредством замещения одного или более атомов водорода амина функциональной группой, такой как алкил или замещенный карбонил. В другом примере, если соединение формулы (I) или его форма содержат водородный заместитель, то пролекарство может быть образовано посредством замещения одного или более атомов водорода алкильным заместителем.
Фармацевтически приемлемыми пролекарствами соединений формулы (I) или их форм являются соединения, замещенные, если это необходимо, одной или более группами, такими как сложные эфиры карбоновой кислоты, сложные эфиры сульфоновой кислоты, сложные эфиры аминокислоты, сложные эфиры фосфоновой кислоты, сложные эфиры моно-, ди- или трифосфорной кислоты или алкильные заместители. В соответствии с приведенным здесь описанием, для специалиста в данной области очевидно, что один или более таких заместителей могут быть использованы для получения соединения (I) или его формы, которые могут быть применены в качестве пролекарства.
Соединения формулы (I) могут образовывать соли, которые входят в объем настоящего изобретения. При ссылке на соединение формулы (I) предусматривается, что такое соединение может присутствовать в виде соли, если это не оговорено особо. Используемый здесь термин соль(-и) означает соли кислоты, образованные неорганическими и/или органическими кислотами, а также соли основания, образованные неорганическими и/или органическими основаниями. Кроме того, если соединение формулы (I) содержит основную группу, такую как, но не ограничиваясь ими, пиридин или имидазол, и кислотную группу, такую как, но не ограничиваясь ими, карбоновая кислота, то могут образовываться цвиттер-ионы (внутренние соли), которые входят в используемый здесь термин соль(-и).
Используемый здесь термин фармацевтически приемлемая соль(-и) означает соли описанных здесь соединений, которые являются безопасными и эффективными (то есть, нетоксичными, физиологически приемлемыми) для введения млекопитающим и обладают биологической активностью, хотя могут быть также использованы и другие соли. Соли соединений формулы (I) могут быть образованы, например, посредством реакции соединения формулы (I) с соответствующим количеством кислоты или основания, таким как эквивалентное или стехиометрическое количество, в среде, в которой данная соль осаждается, или в водной среде, с последующей лиофилизацией.
Фармацевтически приемлемые соли включают одну или более солей кислотных или основных групп, присутствующих в описанных здесь соединениях. Вариантами осуществления кислотноаддитивных солей являются, но не ограничиваются ими, ацетат, диацетат, фосфат кислоты, аскорбат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, битартрат, борат, бутират, хлорид, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, этансульфонат, формиат, фумарат, гентизинат, глюконат, глюкуронат, глутамат, гидробромид, гидрохлорид, дигидрохлорид, тригидрохлорид, гидроиодид, изоникотинат, лактат, малеат, метансульфонат, нафталинсульфонат, нитрат, оксалат, памоат, пантотенат, фосфат, пропионат, сахарат, салицилат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, толуолсульфонат (также известный как тозилат), трифторацетат, соль трифторуксусной кислоты и т.п. Один или более вариантов осуществления кислотноаддитивных солей включают хлорид, гидробромид, гидрохлорид, дигидрохлорид, тригидрохлорид, ацетат, диацетат, трифторацетат, соль трифторуксусной кислоты и т.п. Более конкретные варианты осуществления включают хлорид, гидробромид, гидрохлорид, дигидрохлорид, трифторацетат, соль трифторуксусной кислоты и т.п.
Кроме того, кислоты, которые обычно рассматриваются как подходящие для образования фармацевтически приемлемых солей из основных фармацевтических соединений, обсуждаются, например, в
- 50 028382 публикациях Р. 81ай1 с1 а1., СашШе О. (еДв.) НапДЬоок о£ Ркагтасеикса1 8акв. Ргорегкев 8е1ескоп апД Иве. (2002) ΖιιγΚΗ: \УПеу-УСН; 8. Вегде е1 а1., 1оита1 о£ Ркагтасеикса1 8аепсе5 (1977) 66(1) 1-19; Р. Оои1Д, кЦегпакопгй 1. о£ Ркагтасеиксв (1986) 33, 201-217; ЛпДегвоп е1 а1., Тке Ргасксе о£ МеДюша1 Скет15ку (1996), ЛсаДетк Ргевв, Ыете Уогк; и Тке Огапде Воок (см., например, иеЬ-сайт РооД & Эгид ЛДткЙ51гакоп, \Уа51йпд1оп. О.С.). Эти обсуждения вводятся в настоящее описание посредством ссылки.
Подходящими солями оснований являются, но не ограничиваются ими, соли алюминия, аммония, кальция, лития, магния, калия, натрия, цинка и диэтаноламина. Некоторые описанные здесь соединения могут также образовывать фармацевтически приемлемые соли с органическими основаниями (например, органическими аминами), такими как, но не ограничиваясь ими, дициклогексиламины, трет-бутиламины и т.п., и с различными аминокислотами, такими как, но не ограничиваясь ими, аргинин, лизин и т.п. Группы, содержащие азотистые основания, могут быть кватернизированы такими агентами, как низшие алкилгалогениды (например, метил-, этил- и бутилхлориды, бромиды и иодиды), диалкилсульфаты (например, диметил-, диэтил-и дибутилсульфаты), длинноцепочечные галогениды (например, децил-, лаурил- и стеарилхлориды, бромиды и иодиды), аралкилгалогениды (например, бензил- и фенетилбромиды) и т.п.
При этом подразумевается, что все эти соли кислот и оснований, входящие в объем настоящего изобретения, являются фармацевтически приемлемыми солями и эквивалентны свободным формам соответствующих соединений, используемых в описанных здесь целях.
Соединения формулы I и их различные формы могут также присутствовать в таутомерной форме. Все такие таутомерные формы рассматриваются здесь как часть настоящего описания.
Соединения формулы (I) могут содержать асимметрические или хиральные центры, и поэтому они могут существовать в различных стереоизомерных формах. Настоящее изобретение включает все стереоизомерные формы соединений формулы (I), а также их смеси, включая рацемические смеси.
Описанные здесь соединения формулы (I) могут включать один или более хиральных центров и могут существовать в виде рацемических смесей (К/8) или в виде по существу чистых энантиомеров и диастереомеров. Эти соединения могут также существовать в виде, по существу, чистых (К)- или (8)энантиомеров (если присутствует один хиральный центр). В одном из вариантов осуществления изобретения описанные здесь соединения формулы (I) представляют собой (8)-изомеры и могут существовать в виде энантиомерно чистых композиций, содержащих, по существу, только (8)-изомер. В другом варианте осуществления изобретения описанные здесь соединения формулы (I) представляют собой (К)изомеры и могут существовать в виде энантиомерно чистых композиций, содержащих, по существу, только (К)-изомер. Как известно специалистам в данной области, если присутствует более чем один хиральный центр, то описанные здесь соединения формулы (I) могут также включать части, описанные здесь как (К,К)-, (К,8)-, (8,К)- или (8,8)-изомеры, определенные в соответствии с рекомендациями по номенклатуре ШРЛС.
Используемый здесь термин по существу чистый относится к соединениям, состоящим, по существу, из одного изомера, который присутствует в количестве, превышающем или равном 90%, в количестве, превышающем или равном 92%, в количестве, превышающем или равном 95%, в количестве, превышающем или равном 98%, в количестве, превышающем или равном 99%, или в количестве, равном 100%.
В одном из аспектов изобретения соединение формулы (I) представляет собой по существу чистый (8)-энантиомер, который присутствует в количестве, превышающем или равном 90%, в количестве, превышающем или равном 92%, в количестве, превышающем или равном 95%, в количестве, превышающем или равном 98%, в количестве, превышающем или равном 99%, или в количестве, равном 100%.
В одном из аспектов изобретения соединение формулы (I) представляет собой по существу чистый (К)-энантиомер, который присутствует в количестве, превышающем или равном 90%, в количестве, превышающем или равном 92%, в количестве, превышающем или равном 95%, в количестве, превышающем или равном 98%, в количестве, превышающем или равном 99%, или в количестве, равном 100%.
Используемый здесь термин рацемат означает любую смесь изомерных форм, которые не являются энантиомерно чистыми, включая такие смеси, как, но не ограничиваясь ими, смеси в отношении приблизительно 50/50, приблизительно 60/40, приблизительно 70/30, приблизительно 80/20, приблизительно 85/15 или приблизительно 90/10.
Кроме того, настоящее изобретение включает все геометрические изомеры и изомеры положений. Так, например, если соединение формулы (I) включает двойную связь или конденсированное кольцо, то такие цис- и транс-формы, а также их смеси входят в объем настоящего изобретения.
Диастереомерные смеси могут быть разделены на отдельные диастереомеры, исходя из их физикохимических различий, методами, хорошо известными специалистам, такими как, например, хроматография и/или фракционированная кристаллизация.
Энантиомеры могут быть разделены на хиральной ВЭЖХ-колонке или другими известными хроматографическими методами.
Энантиомеры могут быть также разделены путем превращения энантиомерной смеси в диастереомерную смесь посредством реакции взаимодействия с соответствующим оптически активным соедине- 51 028382 нием (например, с хиральным вспомогательными веществом, таким как хиральный спирт или хлорангидрид Мошера), с последующим разделением диастереомеров и превращением (например, гидролизом) отдельных диастереомеров в соответствующие чистые энантиомеры. Кроме того, некоторые соединения формулы (I) могут представлять собой атропизомеры (например, замещенные биарилы) и рассматриваются как часть настоящего изобретения.
Все стереоизомерные формы (например, геометрические изомеры, оптические изомеры, изомеры положений и т.п.) соединений согласно изобретению (включая соли, сольваты, сложные эфиры, пролекарства и производные пролекарств), которые могут образовываться благодаря асимметрическим атомам углерода на различных заместителях, включая энантиомерные формы (которые могут существовать даже в отсутствие асимметрических атомов углерода), ротамерные формы, атропизомеры, диастереомерные формы и региоизомерные формы, входят в объем настоящего изобретения. Так, например, если соединение формулы (I) включает двойную связь или конденсированное кольцо, то такие цис- и транс-формы, а также их смеси, входят в объем настоящего изобретения. Кроме того, например, в настоящее изобретение также входят все кето-енольные и имино-енаминовые таутомерные формы соединений. Отдельные стереоизомеры описанных здесь соединений формулы (I) могут, например, по существу не содержать других изомеров, либо они могут присутствовать в рацемической смеси, как описано выше.
При употреблении терминов соль, пролекарство и производное пролекарства подразумевается, что эти термины в равной степени относятся к солям, пролекарствам и производным пролекарств всех рассматриваемых изотопологов, стереоизомеров, рацематов или таутомеров соединений согласно изобретению.
Термин изотополог означает обогащенные изотопами соединения, которые идентичны описанным здесь соединениям, но в которых один или более атомов замещены атомом, имеющим атомную массу или массовое число, отличающиеся от атомной массы или массового числа, обычно встречающихся в природе. Примерами изотопов, которые могут быть включены в описанные здесь соединения, являются изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, такие как Н2, Н3, С13, С14, Ν15, О, О, Р, Р, 8, Р, С1 и С1, соответственно, каждый из которых также входит в объем настоящего изобретения.
Некоторые описанные здесь соединения, обогащенные изотопами (например, соединения, меченные Н3 и С14), могут быть использованы в анализах на распределение соединения и/или субстрата в ткани. Изотопы, меченные тритием (то есть, Н3) и углеродом-14 (то есть, С14), являются особенно предпочтительными с точки зрения простоты их получения и детектирования. Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий (то есть, обогащение дейтерием), может давать некоторые терапевтические преимущества, обусловленные более высокой метаболической стабильностью (например, более продолжительным временем полужизни ш У1уо или возможностью введения более низких доз терапевтического средства), и поэтому в некоторых случаях они могут быть более предпочтительными. Обычно обогащенные изотопами соединения формулы (I) могут быть получены известными специалистам в данной области методами путем замены соответствующего реагента, не обогащенного изотопами, на соответствующий реагент, обогащенный изотопами.
Если соединения обогащены дейтерием, то отношение дейтерий/водород на дейтерированных атомах молекулы значительно превышает природное отношение дейтерий/водород.
Описанный здесь вариант осуществления изобретения может включать изотопологическую форму соединения формулы (I), где в изотопологе один или более атомов водорода замещены на одном или более членах соединения формулы (I) одним или более атомами дейтерия.
Описанный здесь вариант осуществления изобретения может включать соединение формулы (I) и его формы, где у атома углерода могут присутствовать от 1 до 3 атомов водорода, необязательно замещенных дейтерием.
Описанные здесь одно или более соединений могут существовать в несольватированных, а также в сольватированных формах вместе с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и т.п., и эти сольватированные и несольватированные формы входят в объем настоящего изобретения.
Используемый здесь термин сольват означает описанное здесь соединение, физически ассоциированное с одной или более молекулами растворителя. Такая физическая ассоциация включает различные степени ионного и ковалентного связывания, включая связывание с водородом. В некоторых случаях сольват может присутствовать в изолированной форме, например, если одна или более молекул растворителя включены в кристаллическую решетку кристаллического твердого вещества. Используемый здесь термин сольват включает сольваты как в жидкой фазе, так и изолированные сольваты. Неограничивающими примерами подходящих сольватов являются этаноляты, метаноляты и и т.п.
Одно или более описанных здесь соединений могут быть необязательно превращены в сольват. Обычно, сольваты получают известными способами. Типичный неограничивающий способ включает растворение соединения в нужном количестве соответствующего растворителя (органического растворителя или воды или их смеси) при температуре выше температуры окружающей среды, и охлаждение раствора со скоростью, достаточной для образования кристаллов, которые затем выделяют стандартными
- 52 028382 методами. Аналитические методы, такие как, например, инфракрасная спектроскопия, позволяют выявить присутствие растворителя (или воды) в кристаллах в качестве сольвата (или гидрата).
Используемый здесь термин гидрат означает сольват, в котором молекулой растворителя является вода.
Полиморфные кристаллические и аморфные формы соединений формулы (I) и солей, сольватов, сложных эфиров и пролекарств соединений формулы (I) также входят в объем описанных здесь соединений.
Применение соединений
Соединения формулы (I) или их формы, повышающие уровень включения экзона 7 3ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 3ΜΝ2, описаны в настоящей заявке. Было показано, что такие соединения формулы (I) или их формы повышают уровень включения экзона 7 3ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 3ΜΝ2, как было определено с помощью описанных здесь анализов (см. ниже раздел Биологические примеры). В соответствии с этим, соединения формулы (I) или их формы могут быть использованы в качестве стимуляторов включения экзона 7 3ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 3ΜΝ2.
Соединения формулы (I) или их формы, повышающие уровень включения экзона 7 3ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 3ΜΝ1, описаны в настоящей заявке. Такие соединения формулы (I) или их формы могут повышать уровень включения экзона 7 3ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1, как было определено с помощью анализа минигена 8ΜΝ1. В соответствии с этим, соединения формулы (I) или их формы могут быть использованы в качестве стимуляторов включения экзона 7 3ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 3ΜΝ1.
В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к способам модуляции включения экзона 7 3ΜΝ2 в РНК, транскрибируемую из гена 3ΜΝ2, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формами. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способам модуляции включения экзона 7 3ΜΝ2 в РНК, транскрибируемую из гена 3ΜΝ2, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формами, которые модулируют экспрессию минигена 3ΜΝ2, описанного в настоящей заявке или в публикации Международной публикации заявки νΟ 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный в Примерах Международной публикации заявки νΟ 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В другом варианте осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный ниже в Биологическом примере 1. Человеческая клетка может быть приведена в контакт с соединением формулы (I) или с его формами ίη νίΐΓΟ и/или ίη νίνο, например, у животного, не являющегося человеком, или у человека. В конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от человека или присутствует у человека. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с 3ΜΆ или присутствует у этого пациента. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с 3ΜΆ или присутствует у этого пациента, где 3ΜΆ вызвана инактивирующими мутациями или делециями в гене 3ΜΝ1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена 3ΜΝ1. В другом варианте осуществления изобретения человеческой клеткой является клетка человека, происходящая от пациента с 3ΜΆ. В некоторых вариантах осуществления изобретения человеческая клетка происходит от клеточной линии, такой как ΟΜ03813, 0Μ00232, ΟΜ09677 и/или ΟΜ23240 (доступные от Сопе11 [ηκΐίΐυΐο). В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 3ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 3ΜΝ2, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формой. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 3ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 3ΜΝ2, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формами, которые повышают уровень экспрессии минигена 3ΜΝ2, описанного в настоящей заявке или в Международной публикации заявки νΟ2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный в Примерах Международной публикации заявки νΟ2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В другом варианте осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный ниже в Биологическом примере 1. Человеческая клетка может быть приведена в контакт с соединением формулы (I) или с его формой ίη νίίτο и/или ίη νίνο, например, у животного, не являющегося человеком, или у человека. В конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от человека или присутствует у человека. В другом конкретном варианте осуще- 53 028382 ствления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с 8ΜΆ или присутствует у этого пациента. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с 8ΜΆ или присутствует у этого пациента, где 8ΜΆ вызвана инактивирующими мутациями или делециями в гене 8ΜΝ1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена 8ΜΝ1. В другом варианте осуществления изобретения человеческой клеткой является клетка человека, происходящая от пациента с 8ΜΆ. В некоторых вариантах осуществления изобретения человеческая клетка происходит от клеточной линии, такой как ΟΜ03813, 0Μ00232, ΟΜ09677 и/или ΟΜ23240 (доступные от института С'опс11 [ηδΐίΐυΐο). В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ1 в РНК, транскрибируемую из гена 8ΜΝ1, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формой. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способам повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ1 в РНК, транскрибируемую из гена 8ΜΝ1, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формой. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способам повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ1 в РНК, транскрибируемую из гена 8ΜΝ1, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формой, которые модулируют экспрессию минигена 8ΜΝ1, описанного в публикации Международной публикации заявки \У0 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный в Примерах Международной публикации заявки \У0 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. Человеческая клетка может быть приведена в контакт с соединением формулы (I) или с его формой ίη νίίτο и/или ίη νίνο, например, у животного, не являющегося человеком, или у человека. В конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от человека или присутствует у человека. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с 8ΜΆ или присутствует у этого пациента. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2 в РНК, транскрибируемую из генов 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, где указанные способы включают приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формой. Человеческая клетка может быть приведена в контакт с соединением формулы (I) или с его формой ίη νίίτο и/или ίη νίνο, например, у животного, не являющегося человеком, или у человека. В конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от человека или присутствует у человека. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с 8ΜΆ или присутствует у этого пациента. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу модуляции включения экзона 7 8ΜΝ2 в РНК, транскрибируемую из гена 8ΜΝ2, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью 8ΜΆ соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу модуляции включения экзона 7 8ΜΝ2 в РНК, транскрибируемую из гена 8ΜΝ2, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью 8ΜΆ соединения формулы (I) или его формы, которые модулируют экспрессию минигена 8ΜΝ2, описанного в настоящей заявке или в Международной публикации заявки \У02009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный в Примерах Международной публикации заявки \У0 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В другом варианте осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный ниже в Биологическом примере 1. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью 8ΜΆ соединения формулы (I) или его формы. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью 8ΜΆ соединения формулы (I) или его формы, которые стимулируют повышение уровня экспрессии минигена 8ΜΝ2, описанного в настоящей заявке или в Международной публикации заявки \У0 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена
- 54 028382 в настоящее описание посредством ссылки. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный в Примерах Международной публикации заявки \У0 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В другом варианте осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный ниже в Биологическом примере 1. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ1 в РНК, транскрибируемую из гена 8ΜΝ1, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью 8ΜΆ соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ1 в РНК, транскрибируемую из гена 8ΜΝ1, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью 8ΜΆ соединения формулы (I) или его формы, которые модулируют экспрессию минигена 8ΜΝ1, описанного в настоящей заявке или в Международной публикации заявки \У0 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки.
В одном из вариантов осуществления изобретения указанным минигеном является миниген, описанный в Примерах Международной публикации заявки \У0 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2 в РНК, транскрибируемую из генов 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью 8ΜΆ соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения количества белка 8ши, где указанный способ включает приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I) или с его формой. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу увеличения количества белка 8ши, где указанный способ включает приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I), что приводит к повышению уровня включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу увеличения количества белка Зшп, где указанный способ включает приведение человеческой клетки в контакт с соединением формулы (I), что приводит к повышению уровня включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2. Человеческая клетка может быть приведена в контакт с соединением формулы (I) или с его формой ίη νίίτο и/или ίη νίνο, например, у животного, не являющегося человеком, или у человека. В конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от человека или присутствует у человека. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с 8ΜΆ или присутствует у этого пациента. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанная человеческая клетка происходит от пациента с 8ΜΆ или присутствует у этого пациента, где 8ΜΆ вызвана инактивирующими мутациями или делециями в гене 8ΜΝ1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена 8ΜΝ1. В другом варианте осуществления изобретения человеческой клеткой является клетка человека, происходящая от пациента с 8ΜΆ. В некоторых вариантах осуществления изобретения человеческая клетка происходит от клеточной линии, такой как ΟΜ03813, 0Μ00232, ΟΜ09677 и/или ΟΜ23240 (доступные от Сопс11 [ηκΐίΐυΐο). В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу увеличения количества белка 8шп, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью 8ΜΆ соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу увеличения количества белка Зшп, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью 8ΜΆ соединения формулы (I), что приводит к повышению уровня включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, например, как было определено с помощью клеточного или бесклеточного анализа, описанного ниже в разделе Биологические примеры. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу увеличения количества белка 8шп, где указанный способ включает введение животному, не являющемуся человеком, с моделью 8ΜΆ соединения формулы (I), что приводит к повышению уровня включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, например, как было определено с помощью клеточного или бесклеточного анализа.
В одном из вариантов осуществления изобретения соединение формулы (I) повышает уровень экспрессии минигена, описанного в настоящей заявке или в Международной публикации заявки \У0 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В конкретном варианте осуществления
- 55 028382 изобретения соединение формулы (I) повышает уровень экспрессии минигена, описанного в Примерах Международной публикации заявки ^02009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В другом конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) повышает уровень экспрессии минигена, описанного ниже в биологическом примере 1. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для получения лекарственного средства, которое повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для получения лекарственного средства, которое повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, и тем самым повышает уровень экспрессии белка 8ши у человека, нуждающегося в этом. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, как было определено в описанном здесь анализе (см. ниже раздел Биологические примеры). В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для получения лекарственного средства, которое повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2. В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для получения лекарственного средства, которое повышает уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, и тем самым повышает уровень экспрессии белка Бши у человека, нуждающегося в этом. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, у человека, нуждающегося в этом, где указанные способы включают введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы, которые повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, как было определено в описанном здесь анализе (см. ниже раздел Биологические примеры). В конкретных вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы вводят человеку в виде фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, как было определено в описанном здесь анализе (см. ниже раздел Биологические примеры). В конкретном варианте осуществления изобретения указанным человеком является пациент с 8ΜΑ. В другом конкретном варианте осуществления изобретения указанным человеком является пациент с 8ΜΑ, где 8ΜΑ вызвана инактивирующими мутациями или делециями в гене 8ΜΝ1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена 8ΜΝ1. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 у человека, нуждающегося в этом, где указанные способы включают введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1, как было определено в анализе, описанном в Международной публикации заявки \У0 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833. В конкретных вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы вводят человеку в виде фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с 8ΜΑ. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2 у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1, как было определено в анализе(-ах), описанном в Международной публикации заявки
- 56 028382 \νϋ2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833 (см., например, Примеры, представленные в этих публикациях), каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В конкретных вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы вводят человеку в виде фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с 8ΜΑ. В другом конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с 8ΜΑ, где 8ΜΑ вызвана инактивирующими мутациями или делециями в гене 8ΜΝ1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена 8ΜΝ1. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам повышения уровня экспрессии белка 8тп у человека, нуждающегося в этом, где указанные способы включают введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня экспрессии белка 8тп у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы, которые повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу повышения уровня экспрессии белка 8тп у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому человеку эффективного количества соединения формулы (I) или его формы, которые повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2. В конкретных вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы вводят человеку в виде фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже раздел Биологические примеры) или в анализе, описанном в Международной публикации заявки νθ 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833 (см., например, Примеры, представленные в этих публикациях), каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки.
В конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с 8ΜΑ. В другом конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с 8ΜΑ, где 8ΜΑ вызвана инактивирующими мутациями или делециями в теломерной копии гена 8ΜΝ1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена 8ΜΝ1. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для получения лекарственного средства, которое повышает уровень экспрессии белка 8тп у человека, нуждающегося в этом. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже раздел Биологические примеры). В другом варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже Биологические примеры) или в анализе, описанном в Международной публикации заявки ν02009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833 (см., например, Примеры, представленные в этих публикациях), каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения спинальной мышечной атрофии (8ΜΑ), включающим введение индивидууму эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения 8ΜΑ у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение индивидууму эффективного количества соединения формулы (I) или его формы. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения 8ΜΑ у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому индивидууму фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения формулы (I) или его формы, фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения 8ΜΑ у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение индивидууму эффективного количества соединения формулы (I) или его формы, которые повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2. В конкретном варианте осуществления настоящее
- 57 028382 изобретение относится к способу лечения 8ΜΑ у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому индивидууму фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения формулы (I) или его формы, которые повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения 8ΜΑ у человека, нуждающегося в этом, где указанный способ включает введение этому индивидууму фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединения формулы (I) или его формы, которые повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже Биологические примеры). В другом варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже Биологические примеры) или в анализе, описанном в Международной публикации заявки ν0 2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833 (см., например, Примеры, представленные в этих публикациях), каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его формы для получения лекарственного средства для лечения 8ΜΑ у человека, нуждающегося в этом. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже Биологические примеры). В другом варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форма повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, как было определено в описанном здесь анализе (см., например, ниже Биологические примеры) или в анализе, описанном в Международной публикации заявки ν02009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833 (см., например, Примеры, представленные в этих публикациях), каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным соединением является соединение формулы (I) или его форма.
В одном из вариантов осуществления описанного здесь применения или способа, соединения формулы (I) или их формы используют в комбинации с одним или более дополнительными агентами. Соединение^) формулы (I) или его форма могут быть введены индивидууму или приведены в контакт с клеткой до, во время или после введения индивидууму дополнительного агента(-ов) или приведения указанной клетки в контакт с таким агентом(-ами). Соединение(-я) формулы (I) или его форма и дополнительный агент(-ы), взятые в виде одной композиции или различных композиций, могут быть введены индивидууму или приведены в контакт с клеткой. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединение(-я) формулы (I) или его форму используют в комбинации с геном-заместителем 8ΜΝ1 (с использованием, например, вирусных векторов для доставки). В других конкретных вариантах осуществления изобретения соединение(-я) формулы (I) или его форму используют в комбинации с клеткойзаместителем с использованием дифференцированных стволовых 8ΜΝ1 и/или 8ΜN2+/+-клеток. В других конкретных вариантах осуществления изобретения соединение(-я) формулы (I) или его форму используют в комбинации с клеткой-заместителем с использованием дифференцированных стволовых 8ΜΝ1 клеток. В других конкретных вариантах осуществления изобретения соединение(-я) формулы (I) или его форму используют в комбинации с клеткой-заместителем с использованием дифференцированных стволовых 8ΜN2+/+-клеток. В другом конкретном варианте осуществления изобретения соединение(-я) формулы (I) или его форму используют в комбинации с акларубицином. В другом конкретном варианте осуществления изобретения соединение(-я) формулы (I) или его форму используют в комбинации с активатором транскрипции, таким как ингибитор гистон-деацетилазы (НЭЛС) (например, бутираты, вальпроевая кислота и гидроксимочевина), и стабилизаторами мРНК (например, с ингибитором декэппирования мРНК КС3039 от Керйдеп).
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к применению соединений формулы (I) или их форм в комбинации с поддерживающей терапией, включая искусственную вентиляцию легких, лечебное питание или меры по реабилитации.
В некоторых вариантах осуществления изобретения лечение 8ΜΑ с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) дает терапевтический и/или благоприятный эффект. В конкретном варианте осуществления изобретения лечение 8ΜΑ с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) дает один, два или более следующих эффектов:
- 58 028382 (ί) снижение или ослабление тяжести 8ΜΑ;
(ίί) замедление начала развития 8ΜΑ;
(ίίί) ингибирование прогрессирования 8ΜΑ;
(ίν) снижение необходимости госпитализации индивидуума;
(ν) снижение времени пребывания индивидуума в стационаре;
(νί) увеличение продолжительности жизни индивидуума;
(νίί) повышение качества жизни индивидуума;
(νίίί) снижение числа симптомов, ассоциированных с 8ΜΑ;
(ίχ) снижение или ослабление тяжести симптома(-ов), ассоциированного с 8ΜΑ;
(х) уменьшение продолжительности симптома(-ов), ассоциированного с 8ΜΑ;
(χί) предупреждение рецидивов симптомов, ассоциированных с 8ΜΑ;
(χίί) ингибирование развития или возникновения симптома 8ΜΑ; и/или (χίίί) ингибирование прогрессирования симптома, ассоциированного с 8ΜΑ.
Симптомами 8ΜΑ являются мышечная слабость; плохой мышечный тонус; слабый крик; слабый кашель; хромота или частые падения; затруднение в сосании или проглатывании; затруднение дыхания; скапливание секрета в легких или в горле; сжатые кулаки при потности рук; подергивание/вибрация языка; частое поворачивание головы на одну сторону даже в положении лежа; слабость, которая является более выраженной в ногах, чем в руках; часто принимаемое положение ног, напоминающее лягушачьи лапки; затруднение приема пищи; повышенная восприимчивость к инфекциям дыхательных путей; слабость кишечника/мочевого пузыря; снижение массы тела; неспособность сидеть без поддержки; неспособность ходить; неспособность к какому-либо передвижению; а также гипотония; арефлексия и множественные врожденные контрактуры (артрогрипоз), ассоциированные с уменьшением числа клеток переднего рога.
В конкретном варианте осуществления изобретения лечение 8ΜΑ с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) дает один, два или более эффектов, таких как: (ί) уменьшение потери мышечной силы; (ίί) повышение мышечной силы; (ίίί) снижение мышечной атрофии; (ίν) уменьшение потери двигательной функции; (ν) увеличение числа мотонейронов; (νίί) уменьшение потери мотонейронов; (νίίί) защита 8ΜN-дефицитных мотонейронов от разрушения; (ίχ) повышение двигательной функции; (х) улучшение работы легких; и/или (χί) снижение степени нарушения работы легких.
В другом варианте осуществления изобретения лечение 8ΜΑ с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу или ребенку раннего возраста способность сидеть или сохранить эту способность. В другом варианте осуществления изобретения лечение 8ΜΑ с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу, ребенку раннего возраста, подростку или взрослому способность стоять без посторонней помощи или сохранить эту способность. В другом варианте осуществления изобретения лечение 8ΜΑ с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу, ребенку раннего возраста, подростку или взрослому способность ходить без посторонней помощи или сохранить эту способность. В другом варианте осуществления изобретения лечение 8ΜΑ с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу, ребенку раннего возраста, подростку или взрослому способность бежать без посторонней помощи или сохранить эту способность. В другом варианте осуществления изобретения лечение 8ΜΑ с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу, ребенку раннего возраста, подростку или взрослому способность свободно дышать или сохранить эту способность. В другом варианте осуществления изобретения лечение 8ΜΑ с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу, ребенку раннего возраста, подростку или взрослому способность свободно переворачиваться во время сна или сохранить эту способность. В другом варианте осуществления изобретения лечение 8ΜΑ с использованием соединения формулы (I) или его формы (взятых отдельно или в комбинации с дополнительным агентом) позволяет приобрести младенцу, ребенку раннего возраста, подростку или взрослому способность свободно глотать или сохранить эту способность.
В некоторых вариантах осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в биологических примерах (например, 8ΜN-праймеры, такие как 8Е0 Ю Ν0: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или 8Е0 Ю Ν0: 2, 9 или 12, и 8ΜN-зонды, такие как 8Е0 Ю Ν0: 3 или 10), используют в анализе, таком как КТРСК, РТ-цРСР, КТ-РСК в конечной точке, РСК, цРСР, амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ, проводимом для того, чтобы определить, может ли соединение формулы (I) или его форма повышать уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2. В некоторых вариантах осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в биологических примерах (например, 8ΜN-праймеры, такие как
- 59 028382 δΕΟ ГО NО: 1, 7, 8, 11 или 13 и/или δΕΟ ГО NО: 2, 9 или 12, и вМК-зонды, такие как δΕΟ ГО NО: 3 или 10), используют в анализе, таком как КТ-РСК, КТ-цРСК, КТ-РСК в конечной точке, РСК, цРСК, амплификация по типу катящегося кольца, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ, или в анализе, проводимом с использованием фармацевтического или аналитического набора, описанных ниже, для мониторинга ответов у пациента на соединение формулы (I) или его форму.
В одном из вариантов осуществления изобретения соединение формулы (I)
или его форму используют, как описано в настоящей заявке, где М| представляет собой С-Кь или N м2 и м3 представляют собой С-Кь С-К2, С-Ка или N м4 представляет собой С-Кд или N представляет собой С-Кь С-К2, С-К или N м6 представляет собой С-Кь С-К2 или С-Ка;
где один из м2, м3, и м6 представляет собой С-Кь а другой из м2, м3, и м6 представляет собой
С-К2, при условии, что если м3 представляет собой С-Кь то м6 представляет собой С-К2, м2 представляет собой С-Ка или N и м5 представляет собой С-Кд или N или если м3 представляет собой С-К2, то м6 представляет собой С-Кь м2 представляет собой С-Ка или N и м5 представляет собой С-Кд или N или если м2 представляет собой С-Кь то представляет собой С-К2, м6 представляет собой С-Ка, и м3 представляет собой С-Кд или N или если м2 представляет собой С-К2, то представляет собой С-Кь м6 представляет собой С-Ка, и м3 представляет собой С-Ка или N и, где один, два или три из м2, м3, м4 и могут необязательно представлять собой N
К1 представляет собой С^алкил, амино, Сх^алкиламино, (С1-8алкил)2-амино, Сх^алкокси-Сх^алкиламино, (Сцзалкокси-СцзалкилЕ-амино, (Сцзалкокси-СцзалкилХСцзалкилХмино, амино-Сцзалкил, С1-8 алкиламино-Сцзалкил, (СцзалкилХ-амино-Сцзалкил, Сцзалкокси-Сцзалкиламино-Сцзалкил, (СцзалкоксиС^алкил^-амино-С^алкил, (Сьзалкокси-СьзалкилХСьзалкилХмино-Сьзалкил, амино-С^алкиламино, (амино-СцзалкилХ-амино, (амино-СцзалкилХСцзалкилХмино, Сцзалкиламино-Сцзалкиламино, (С1-8алкиламино-СцзалкилХ-амино, (Сьзалкиламино-СьзалкилХСьзалкилХмино, (СцзалкилХ-амино-Сцзалкиламино, [(С|-8алкил)2-амино-С|-8алкил](С|-8алкил)амино, амино-Сцзалкокси, Сцзалкиламино-Сцзалкокси, (СцзалкилХ-амино-Сцзалкокси, Сцзалкокси-Сцзалкиламино-Сцзалкокси, Сцзалкокси-Сцзалкиламино-Сцз алкокси, (Сх-8алкокси-Сх-8алкил)(Сх-8алкил)амино-СX-8алкокси, амино-С2-8алкенил, Сцзалкиламино-Сдз алкенил, (СцзалкилХ-амино-Сдзалкенил, амино-С2-8алкинил, Сцзалкиламино-Сдзалкинил, (СцзалкилХамино-С2-8алкинил, галоген-Сцзалкиламино, (галоген-СцзалкилХ-амино, (галоген-СцзалкилХСцзалкил)амино, гидрокси-Сцзалкил, гидрокси-Сцзалкокси-Сцзалкил, гидрокси-Сцзалкиламино, (гидрокси-Сцз алкил)2-амино, (гидрокси-СцзалкилХСцзалкилХмино, гидрокси-Сцзалкиламино-Сцзалкил, (гидрокси-Сцз алкилХ-амино-Сцзалкил, (гидрокси-СьзалкилХСьзалкилХмино-Сьзалкил, гидрокси-Сцзалкиламино-Сцз алкокси, (гидрокси-СцзалкилХ-амино-Сцзалкокси, (гидрокси-СцзалкилХСцзалкилХмино-Сцзалкокси, гидрокси-Сцзалкиламино-Сцзалкиламино, (гидрокси-Сцзалкиламино-СцзалкилХ-амино, (гидрокси-Сцз алкилХ-амино-Сцзалкиламино, (гидрокси-Сцзалкиламино-СцзалкилХСцзалкилХмино, (гидрокси-СцзалкилХСцзалкил^мино-Сцзалкиламино, [(гидрокси-СцзалкилХ-амино-СцзалкилХСцзалкилХмино, [(гидрокси-СьзалкилХСьзалкилХмино-СьзалкилХСьзалкилХмино, гетероциклил, гетероциклил-Сьзалкил, гетероциклил-Сцзалкокси, гетероциклиламино, (гетероциклилХСцзалкилХмино, гетероциклиламино-Сцз алкил, гетероциклил-Сцзалкиламино, (гетероциклил-СцзалкилХ-амино, (гетероциклил-СцзалкилХСцз алкил)амино, гетероциклил-Сцзалкиламино-Сцзалкил, (гетероциклил-СцзалкилХ-амино-Сцзалкил, (гетероциклил-СцзалкилХСцзалкилХмино-Сцзалкил, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонил, гетероциклилкарбонилокси, Сднциклоалкил, арил-Сцзалкиламино, (арил-СцзалкилХ-амино, (арил-СцзалкилХСцз алкил)амино, арил-Сцзалкиламино-Сцзалкил, (арил-СцзалкилХ-амино-Сцзалкил, (арил-СцзалкилХСцз алкил)амино-С|-8алкил, гетероарил, гетероарил-С|-8алкил, гетероарил-С|-8алкокси, гетероариламино, гетероарил-С|-8алкиламино, (гетероарил-С|-8алкил)2-амино, (гетероарил-С|-8алкилХС|-8алкил)амино, гетероарил-Сцзалкиламино-Сцзалкил, (гетероарил-СцзалкилХ-амино-Сцзалкил или (гетероарил-СцзалкилХСьзалкилХмино-Сцзалкил;
где, в каждом случае, гетероциклил, С3-|4циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями К3 и необязательно одним дополнительным заместителем К4; или где, в каждом случае, гетероциклил, С3-|4циклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены
- 60 028382 одним, двумя, тремя или четырьмя заместителями К3;
К2 представляет собой арил, ариламино, ариламинокарбонил, гетероциклил, гетероарил или гетероариламино;
где, в каждом случае, арил, гетероциклил и гетероарил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями К6 и необязательно одним дополнительным заместителем К7;
Ка, в каждом случае независимо, выбран из водорода, галогена или С1-8алкила;
КЬ представляет собой водород, галоген, С1-8алкил или С1-8алкокси;
Кс представляет собой водород, галоген или С1-8алкил;
К3, в каждом случае, независимо выбран из циано, галогена, гидрокси, оксо, С1-8алкила, галоген-С1-8 алкила, С1-8алкилкарбонила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, С1-8алкоксикарбонила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино, амино-С1-8алкила, С1-8алкиламино-С1-8алкила, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкила, амино-С1-8алкиламино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламиноС1-8алкил)2-амино, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил]2-амино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, С1-8алкилкарбониламино, С1-8алкоксикарбониламино, гидрокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкил а, гидрокси-С1-8 алкил амино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино или (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино;
К4 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкил-С1-8алкил, С3-14циклоалкиламино, арил-С1-8 алкил, арил-С1-8алкоксикарбонил, арилсульфонилокси-С1-8алкил, гетероциклил или гетероциклил-С1-8 алкил; где, в каждом случае, С3-14циклоалкил, арил и гетероциклил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями К5;
К5, в каждом случае, независимо выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, С1-8алкила, галогенС1-8алкила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино или С1-8алкилтио;
К6, в каждом случае, независимо выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, С1-8алкила, С2-8алкенила, галоген-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино или С1-8алкилтио; и
К7 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкилокси, арил, гетероциклил или гетероарил.
Один из вариантов осуществления изобретения относится к применению соединения формулы (I), где указанное соединение выбрано из соединений формулы (II), формулы (III), формулы (IV), формулы (V), формулы (VI), формулы (VII), формулы (VIII), формулы (IX), формулы (X), формулы (XI), формулы (XII), формулы (XIII), формулы (XIV), формулы (XV), формулы (XVI), формулы (XVII), формулы (XVIII) или формулы (XIX):
или его формы.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (II) ν2 представляет собой С-К1, ν5 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-Ка, и ν3 и ν4 независимо представляют собой С-Ка или N.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (II) ν2 представляет собой С- 61 028382
К2, ν5 представляет собой С-Кь ν6 представляет собой С-Ка, и ν3 и ν4 независимо представляют собой С-Ка или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (II) ν3 представляет собой СКь ν6 представляет собой С-К2, ν2 и ν4 независимо представляют собой С-Ка или Ν, и ν5 представляет собой С-К или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (II) ν3 представляет собой СК2, ν6 представляет собой С-Кь ν2 и ν4 независимо представляют собой С-Ка или Ν, и ν5 представляет собой С-К или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (III) ν3 представляет собой С-К, ν6 представляет собой С-К2, ν4 представляет собой С-Ка или Ν, ν представляет собой С-КЬ или Ν, и ν5 представляет собой С-К или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (III) ν3 представляет собой СК2, ν6 представляет собой С-К, ν4 представляет собой С-Ка или Ν, ν представляет собой С-КЬ или Ν, и ν5 представляет собой С-Кс или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (IV) ν2 представляет собой С-К, ν5 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-Ка, ν4 представляет собой С-Ка или Ν, и ν представляет собой С-КЬ или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (IV) ν2 представляет собой СК2, ν5 представляет собой С-К, ν6 представляет собой С-Ка, ν4 представляет собой С-Ка или Ν, и ν представляет собой С-КЬ или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (V) ν2 представляет собой С-К, ν5 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-Ка, ν3 представляет собой С-Ка или Ν, и ν представляет собой С-КЬ или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (V) ν2 представляет собой СК2, ν5 представляет собой С-К, ν6 представляет собой С-Ка, ν3 представляет собой С-Ка или Ν, и ν представляет собой С-КЬ или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (V) ν3 представляет собой СК, ν6 представляет собой С-К2, ν2 представляет собой С-Ка или Ν, ν представляет собой С-КЬ или Ν, и ν5 представляет собой С-Кс или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (V) ν3 представляет собой СК2, ν6 представляет собой С-К, ν2 представляет собой С-Ка или Ν, ν представляет собой С-КЬ или Ν, и ν5 представляет собой С-Кс или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (VI) ν3 представляет собой С-К, ν6 представляет собой С-К2, ν2 и ν4 независимо представляют собой С-Ка или Ν, и ν представляет собой С-КЬ или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (VI) ν3 представляет собой СК2, ν6 представляет собой С-К, ν2 и ν4 независимо представляют собой С-Ка или Ν, и ν представляет собой С-КЬ или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (VII) ν3 представляет собой С-К1, ν6 представляет собой С-К2, ν4 представляет собой С-Ка или Ν, и ν5 представляет собой С-Кс или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (VII) ν3 представляет собой СК2, ν6 представляет собой С-К, ν4 представляет собой С-Ка или Ν, и ν5 представляет собой С-Кс или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (VIII) ν2 представляет собой С-К, ν5 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-Ка, и ν4 представляет собой С-Ка или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (VIII) ν2 представляет собой С-К2, ν5 представляет собой С-К, ν6 представляет собой С-Ка, и ν4 представляет собой С-Ка или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (IX) ν2 представляет собой С-К!, ν5 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-Ка, и ν3 представляет собой С-Ка или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (IX) ν2 представляет собой СК2, ν5 представляет собой С-К!, ν6 представляет собой С-Ка, и ν3 представляет собой С-Ка или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (IX) ν3 представляет собой СК1, ν6 представляет собой С-К2, ν2 представляет собой С-Ка или Ν, и ν5 представляет собой С-Кс или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (IX) ν3 представляет собой СК2, ν6 представляет собой С-К1, ν2 представляет собой С-Ка или Ν, и ν5 представляет собой С-Кс или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (X) ν3 представляет собой С-К1, ν6 представляет собой С-К2, и ν2 и ν4 независимо представляют собой С-Ка или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (X) ν3 представляет собой СК2, ν6 представляет собой С-К1, и ν2 и ν4 независимо представляют собой С-Ка или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XI) ν3 представляет собой С-К1, ν6 представляет собой С-К2, представляет собой С-КЬ или Ν, и ν5 представляет собой С-Кс или Ν.
- 62 028382
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XI) ν3 представляет собой СК2, ν6 представляет собой С-К1, ν1 представляет собой С-Кь или Ν, и ν5 представляет собой С-Кс или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XII) ν3 представляет собой С-К1, ν6 представляет собой С-К2, ν4 представляет собой С-Ка или Ν, и ν1 представляет собой С-Кь или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XII) ν3 представляет собой СК2, ν6 представляет собой С-К1, ν4 представляет собой С-Ка или Ν, и ν1 представляет собой С-Кь или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIII) ν2 представляет собой С-К1, ν5 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-Ка или Ν, и ν1 представляет собой С-Кь или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XIII) ν2 представляет собой С-К2, ν5 представляет собой С-К1, ν6 представляет собой С-Ка, и ν1 представляет собой С-Кь или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIV) ν3 представляет собой С-К1, ν6 представляет собой С-К2, ν2 представляет собой С-Ка или Ν, и ν1 представляет собой С-Кь или Ν.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XIV) ν3 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-К1, ν2 представляет собой С-Ка или Ν, и ν1 представляет собой С-Кь или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XV) ν3 представляет собой С-К1, ν6 представляет собой С-К2, и ν5 представляет собой С-Кс.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XV) ν3 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-К1, и ν5 представляет собой С-Кс.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVI) ν3 представляет собой С-К1, ν6 представляет собой С-К2, и ν4 представляет собой С-Ка.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XVI) ν3 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-К1, и ν4 представляет собой С-Ка.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVII) ν2 представляет собой С-К1, ν5 представляет собой С-К2, и ν6 представляет собой С-Ка.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XVII) ν2 представляет собой С-К2, ν5 представляет собой С-К1, и ν6 представляет собой С-Ка.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIII) ν3 представляет собой С-К1, ν6 представляет собой С-К2, и ν2 представляет собой С-Ка.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XVIII) ν3 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-К1, и ν2 представляет собой С-Ка.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIX) ν3 представляет собой С-К1, ν6 представляет собой С-К2, и ν1 представляет собой С-Кь.
В другом варианте осуществления применения соединения формулы (XIX) ν3 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-К1, и ν1 представляет собой С-Кь.
Один из вариантов применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (II):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (III)
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (IV)
- 63 028382
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) соединения формулы (V):
относится к применению
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) соединения формулы (VI):
относится к применению
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) соединения формулы (VII):
относится к применению
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) соединения формулы (VIII):
относится к применению
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) соединения формулы (IX):
относится к применению
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) соединения формулы (X):
относится к применению
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) соединения формулы (XI):
относится к применению
- 64 028382
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XII):
или его формы
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XIII):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XIV):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XV):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XVI):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XVII):
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XVIII):
- 65 028382
или его формы.
Один из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) относится к применению соединения формулы (XIX):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (I), формулы (II), формулы (III), формулы (IV), формулы (У), формулы (VI), формулы (VII), формулы (VIII), формулы (X), формулы (XI), формулы (XII), формулы (XIII), формулы (XIV), формулы (XV), формулы (XVI), формулы (XVII), формулы (XVIII) или формулы (XIX) является применение соединения, выбранного из соединений формулы ^а), формулы (Па), формулы (Ша), формулы ^Уа), формулы ^а), формулы ^Ы), формулы ^Па), формулы (ΥΠ^), формулы ^а), формулы (Ма), формулы ^Па), формулы (МПа), формулы ^^а), формулы (XVа), формулы (XVIа), формулы (XVIIа), формулы (XVIIIа) или формулы ^Ка), соответственно:
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы ^а) один из ^2, ^3, \\> и \\6 представляет собой С-Кь а другой из ^2, ^3, \ν> и \\6 представляет собой С-К2, при условии, что если \\3 представляет собой С-Кь то \\6 представляет собой С-К2, \\2 представляет собой С-Ка или Ν, и \\5 представляет собой С-К или Ν; или если \\3 представляет собой С-К2, то \\6 представляет собой С-Кь \\2 представляет собой С-Ка или Ν, и \\5 представляет собой С-К или Ν или если \\2 представляет собой С-Кь то \\> представляет собой С-К2, \\6 представляет собой С-Ка, и \\3 представляет собой С-Ка или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (Па) один из ^2, ^3, \ν> и \\6
- 66 028382 представляет собой С-Κι, а другой из ν2, ν3, ν5 и ν6 представляет собой С-К2, при условии, что, если ν3 представляет собой С-Κι, то ν6 представляет собой С-К2, ν2 представляет собой С-Ка или Ν, и ν5 представляет собой С-К или Ν; или если ν3 представляет собой С-К2, то ν6 представляет собой С-Кь ν2 представляет собой С-К, или Ν, и ν5 представляет собой С-Кс или Ν; или если ν2 представляет собой С-Кь то ν5 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-Ка, и ν3 представляет собой С-Ка или Ν; или если ν2 представляет собой С-К2, то ν5 представляет собой С-Кь ν6 представляет собой С-К.,, и ν3 представляет собой С-Ка или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ша) один из ν3 и ν6 представляет собой С-К], а другой представляет собой С-К2, при условии, что если ν3 представляет собой СКь то ν6 представляет собой С-К2; или если ν3 представляет собой С-К2, то ν6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (IV;·!) один из ν2 и представляет собой С-К], а другой представляет собой С-К2, при условии, что если ν2 представляет собой СКь то ν5 представляет собой С-К2; или если ν2 представляет собой С-К2, то ν5 представляет собой С-К!.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (V;·!) один из ν2, ν3, ν5 и ν6 представляет собой С-К], а другой из ν2, ν3, ν5 и ν6 представляет собой С-К2, при условии, что, если ν3 представляет собой С-К], то ν6 представляет собой С-К2, ν2 представляет собой С-Ка или Ν, и ν5 представляет собой С-Ка или Ν; или если ν3 представляет собой С-К2, то ν6 представляет собой С-К1, ν2 представляет собой С-Ка или Ν, и ν5 представляет собой С-Ка или Ν; или если ν2 представляет собой С-К1, то ν5 представляет собой С-К2, ν6 представляет собой С-Ка, и ν3 представляет собой С-Ка или Ν; или если ν2 представляет собой С-К2, то ν5 представляет собой С-К1, ν6 представляет собой С-Ка, и ν3 представляет собой С-Ка или Ν.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (ХТа) один из ν3 и ν6 представляет собой С-К], а другой представляет собой С-К2, при условии, что если ν3 представляет собой СК], то ν6 представляет собой С-К2; или если ν3 представляет собой С-К2, то ν6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (ХПа) один из ν3 и ν6 представляет собой С-К], а другой представляет собой С-К2, при условии, что если ν3 представляет собой С-К], то ν6 представляет собой С-К2; или если ν3 представляет собой С-К2, то ν6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (ХТНа) один из ν2 и представляет собой С-К], а другой представляет собой С-К2, при условии, что если ν2 представляет собой С-К], то ν5 представляет собой С-К2; или если ν2 представляет собой С-К2, то ν5 представляет собой СК1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ха) один из ν3 и ν6 представляет собой С-К], а другой представляет собой С-К2, при условии, что если ν3 представляет собой СК], то ν6 представляет собой С-К2; или если ν3 представляет собой С-К2, то ν6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (Х^) один из ν3 и ν6 представляет собой С-К], а другой представляет собой С-К2, при условии, что если ν3 представляет собой СК], то ν6 представляет собой С-К2; или если ν3 представляет собой С-К2, то ν6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (ХПа) один из ν3 и ν6 представляет собой С-К], а другой представляет собой С-К2, при условии, что если ν3 представляет собой С-К], то ν6 представляет собой С-К2; или если ν3 представляет собой С-К2, то ν6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (ХШа) один из ν2 и представляет собой С-К], а другой представляет собой С-К2, при условии, что если ν2 представляет собой С-К], то ν5 представляет собой С-К2; или если ν2 представляет собой С-К2, то ν5 представляет собой СК1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (ХЩа) один из ν3 и ν6 представляет собой С-К], а другой представляет собой С-К2, при условии, что если ν3 представляет собой С-К], то ν6 представляет собой С-К2; или если ν3 представляет собой С-К2, то ν6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVа) один из ν3 и ν6 представляет собой С-К], а другой представляет собой С-К2, при условии, что если ν3 представляет собой С-К], то ν6 представляет собой С-К2; или если ν3 представляет собой С-К2, то ν6 представляет собой С-К1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (ХУГа) один из ν3 и ν6 представляет собой С-К], а другой представляет собой С-К2, при условии, что если ν3 представляет собой С-К], то ν6 представляет собой С-К2; или если ν3 представляет собой С-К2, то ν6 представляет собой С-К1.
- 67 028382
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIIа) один из \\2 и \\т представляет собой С-Кь а другой представляет собой С-К2, при условии, что если \\2 представляет собой С-К1, то \\5 представляет собой С-К2; или если \\2 представляет собой С-К2, то \\6 представляет собой СК1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVШа) один из \\2 и \\6 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если \ν3 представляет собой С-К1, то \\6 представляет собой С-К2; или если \ν3 представляет собой С-К2, то \\6 представляет собой СК1.
В одном из вариантов осуществления применения соединения формулы (^^) один из \\2 и \\6 представляет собой С-К1, а другой представляет собой С-К2, при условии, что если \ν3 представляет собой С-К1, то \\6 представляет собой С-К2; или если \\3 представляет собой С-К2, то \\6 представляет собой С-К1.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (I) является применение соединения формулы ^а):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (II) является применение соединения формулы (На):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (III) является применение соединения формулы (Ша):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IV) является применение соединения формулы (ГУа):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (V) является применение соединения формулы (7а):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (VI) является применение соединения формулы (У!а):
- 68 028382
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (УП) является применение соединения формулы (УПа):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (УШ) является применение соединения формулы (УШа):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (X) является применение соединения формулы (X!):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XI) является применение соединения формулы (XI!):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XII) является применение соединения формулы (XII!):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIII) является применение соединения формулы (XIII!):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^У) является применение
- 69 028382 соединения формулы (XIV;·!):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XV) является применение соединения формулы (XV;·!):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVI) является применение соединения формулы (XVI;·!):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVII) является применение соединения формулы ^УПа):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIII) является применение соединения формулы ^^^):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIX) является применение соединения формулы ^Ка):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ш) является применение соединения формулы (^1), формулы (^2), формулы (Ш3) или формулы (Ш4):
- 70 028382
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Па) является применение соединения формулы (Па1), формулы (Па2), формулы (Па3) или формулы (Па4):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ша) является применение соединения формулы (Ша1) или формулы (Ша2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IVа) является применение соединения формулы (^а^ или формулы (IVа2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (7а) является применение соединения формулы ^а!), формулы (Vа2), формулы (Vа3) или формулы ^а^:
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Та) является применение соединения формулы (ТЫ) или формулы (VI а2):
- 71 028382
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^Па) является применение
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (УШа) является применение
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (IX) является применение соединения формулы (Ка!), формулы (Ка2), формулы (Ка3) или формулы (Ка4):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^а) является применение соединения формулы ^а1) или формулы (Ха2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^а) является применение
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (^Па) является применение или его формы.
- 72 028382
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIII!) является применение соединения формулы (XШ!1) или формулы (XШ!2):
о о (ХШа!) или (XIII а2) или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (ЗДУа) является применение соединения формулы ^Уа!) или формулы ^У^):
о о (Х1Уа1) или (Х1Уа2) или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^Уа) является применение соединения формулы ^УаЦ или формулы ^У^):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^УЫ) является применение соединения формулы ^УЫ) или формулы ^УМ):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^УПа) является применение соединения формулы (XУII!ί) или формулы ^УП^):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XУШ!) является применение соединения формулы (XУШ!1) или формулы (XУШ!2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XIX!) является применение соединения формулы ^Καί) или формулы ^^82):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (I!) является применение соединения формулы (^1):
- 73 028382
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ш) является применение соединения формулы (Га2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ш) является применение соединения формулы (Га3):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ш) является применение соединения формулы (Га4):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения (Па) является применение соединения формулы (Па1):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Па) является применение соединения формулы (Па2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Па) является применение соединения формулы (Па3):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Па) является применение соединения формулы (Па4):
- 74 028382
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ша) является применение соединения формулы (Ша1):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ша) является применение соединения формулы (Ша2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (ХУа) является применение соединения формулы (ТУа1):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (ТУа) является применение соединения формулы ^Уа2):
или его формы.
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Уа) является применение соединения формулы (Уа2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Уа) является применение соединения формулы (Уа3):
- 75 028382
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Аа) является применение соединения формулы (Vа4):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ма) является применение соединения формулы (VIа1):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (Ма) является применение соединения формулы (Ма2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (МЫ) является применение соединения формулы (МЫ1):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (МЫ) является применение соединения формулы (МЫ2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (МПа) является применение соединения формулы (МПа1):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (МПа) является применение соединения формулы (МПа2):
- 76 028382 или его формы.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ка1):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ка2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ка3):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ка4):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (^1):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления соединения формулы (Ха2):
применения соединения формулы (IX)
применения соединения формулы (IX)
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения соединения формулы (Ма^:
формулы ^а) является является является является является является является применение применение применение применение применение применение применение
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^а) является применение
- 77 028382 соединения формулы (КЫ2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (КПа) является соединения формулы (^^1):
применение
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^Па) является соединения формулы ^^2):
применение
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^Ша) является соединения формулы ^^1):
применение
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^Ша) является соединения формулы (Ша^:
применение
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^^а) является соединения формулы ^^а!):
применение
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^^а) является соединения формулы (XIVа2):
применение
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVа) является соединения формулы (XVа1):
применение
- 78 028382
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVа) является применение соединения формулы (XVа2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIа) является применение соединения формулы (XVIа1):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIа) является применение соединения формулы (XVIа2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIIа) является применение соединения формулы (XVIIа1):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVIIа) является применение соединения формулы (XVIIа2):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVШа) является применение соединения формулы (XVШа1):
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы (XVШа) является применение соединения формулы (XVШа2):
или его формы.
- 79 028382
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^^^) является применение соединения формулы (^КаЦ:
или его формы.
Одним из вариантов осуществления применения соединения формулы ^^^) является применение соединения формулы ^К^):
или его формы.
Группа пациентов
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму, страдающему 8ΜΑ. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму вводят индивидууму, у которого имеется предрасположенность или восприимчивость к 8ΜΑ. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят человеку, имеющему 8ΜΑ, где 8ΜΑ вызвана инактивирующими мутациями или делециями в гене 8ΜΝ1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена 8ΜΝ1. В некоторых вариантах осуществления изобретения у человека, до введения ему соединения формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции, определяют генотип для определения того, имеет ли этот индивидуум инактивирующую мутацию или делецию в теломерной копии гена 8ΜΝ1 на обеих хромосомах, приводящие к потере функции гена 8ΜΝ1. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму с 8ΜΑ типа 0. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму с 8ΜΑ типа 1. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму с 8ΜΑ типа 2. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму с 8ΜΑ типа 3. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму с 8ΜΑ типа 4. В некоторых вариантах осуществления изобретения таким человеком является пациент с 8ΜΑ.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму, у которого будет или может наблюдаться благоприятный эффект в результате повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят индивидууму, у которого будет или может наблюдаться благоприятный эффект в результате повышения уровня экспрессии белка 8шп.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят человеку в возрасте приблизительно 0-6 месяцев, приблизительно 6-12 месяцев, приблизительно 6-18 месяцев, приблизительно 18-36 месяцев, приблизительно 1-5 лет, приблизительно 5-10 лет, приблизительно 10-15 лет, приблизительно 15-20 лет, приблизительно 20-25 лет, приблизительно 25-30 лет, приблизительно 30-35 лет, приблизительно 35-40 лет, приблизительно 4045 лет, приблизительно 45-50 лет, приблизительно 50-55 лет, приблизительно 55-60 лет, приблизительно 60-65 лет, приблизительно 65-70 лет, приблизительно 70-75 лет, приблизительно 75-80 лет, приблизительно 80-85 лет, приблизительно 85-90 лет, приблизительно 90-95 лет или приблизительно 95-100 лет.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят младенцу. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят ребенку раннего возраста. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят подростку. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят взрослому. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят пожилому человеку.
- 80 028382
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят пациенту с риском развития 8ΜΑ для предупреждения начала развития у него 8ΜΑ. В других вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции вводят пациенту с риском развития 8ΜΑ для предупреждения начала развития у него 8ΜΑ. В других вариантах осуществления изобретения профилактически эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции вводят пациенту с риском развития 8ΜΑ для предупреждения начала развития у него 8ΜΑ. В других вариантах осуществления изобретения терапевтически эффективное количество соединение формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции вводят пациенту с риском развития 8ΜΑ для предупреждения начала развития у него 8ΜΑ.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или их фармацевтическую композицию вводят пациенту с 8ΜΑ, для лечения или ослабления тяжести 8ΜΑ. В других вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции вводят пациенту с 8ΜΑ, для лечения или ослабления тяжести 8ΜΑ. В других вариантах осуществления изобретения профилактически эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции вводят пациенту с 8ΜΑ, для предупреждения прогрессирования 8ΜΑ. В других вариантах осуществления изобретения терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или их фармацевтической композиции вводят пациенту с 8ΜΑ для лечения или ослабления тяжести 8ΜΑ.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму с 8ΜΑ. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму вводят индивидууму, у которого имеется предрасположенность или восприимчивость к 8ΜΑ. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят человеку с 8ΜΑ, где 8ΜΑ вызвана инактивирующими мутациями или делециями в гене 8ΜΝ1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена 8ΜΝ1. В некоторых вариантах осуществления изобретения у человека, до введения ему соединения формулы (I) или его формы или его лекарственного средства, определяют генотип для того, чтобы определить, имеет ли этот индивидуум инактивирующую мутацию или делецию в теломерной копии гена 8ΜΝ1 на обеих хромосомах, приводящие к потере функции гена 8ΜΝ1. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму с 8ΜΑ типа 0. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму с 8ΜΑ типа 1. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму с 8ΜΑ типа 2. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму с 8ΜΑ типа 3. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму с 8ΜΑ типа 4. В некоторых вариантах осуществления изобретения таким человеком является пациент с 8ΜΑ.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму, у которого будет или может наблюдаться благоприятный эффект в результате повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят индивидууму, у которого будет или может наблюдаться благоприятный эффект в результате повышения уровня экспрессии белка 8тп.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят человеку в возрасте приблизительно 0-6 месяцев, приблизительно 6-12 месяцев, приблизительно 6-18 месяцев, приблизительно 18-36 месяцев, приблизительно 1-5 лет, приблизительно 5-10 лет, приблизительно 10-15 лет, приблизительно 15-20 лет, приблизительно 20-25 лет, приблизительно 25-30 лет, приблизительно 30-35 лет, приблизительно 35-40 лет, приблизительно 40-45 лет, приблизительно 45-50 лет, приблизительно 50-55 лет, приблизительно 55-60 лет, приблизительно 60-65 лет, приблизительно 65-70 лет, приблизительно 70-75 лет, приблизительно 75-80 лет, приблизительно 8085 лет, приблизительно 85-90 лет, приблизительно 90-95 лет или приблизительно 95-100 лет.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят младенцу. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят ребенку раннего возраста. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят подростку. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят взрослому. В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят пожилому человеку.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят пациенту с риском развития 8ΜΑ для предупреждения начала развития у
- 81 028382 него 8МА. В других вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или его лекарственного средства вводят пациенту с риском развития §МА для предупреждения начала развития у него 8МА. В других вариантах осуществления изобретения профилактически эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или его лекарственного средства вводят пациенту с риском развития §МА для предупреждения начала развития у него 8МА. В других вариантах осуществления изобретения терапевтически эффективное количество соединение формулы (I) или его формы или его лекарственного средства вводят пациенту с риском развития §МА для предупреждения начала развития у него 8МА.
В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I) или его форму или его лекарственное средство вводят пациенту с §МА для лечения или ослабления тяжести §МА. В других вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или его лекарственного средства вводят пациенту с §МА для лечения или ослабления тяжести §МА. В других вариантах осуществления изобретения профилактически эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или его лекарственного средства вводят пациенту с §МА для предупреждения прогрессирования §МА. В других вариантах осуществления изобретения терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его формы или его лекарственного средства вводят пациенту с §МА для лечения или ослабления тяжести §МА.
Способ введения
Соединение формулы (I) или его форму вводят пациенту предпочтительно в виде компонента композиции, которая необязательно содержит фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. Композиция может быть введена перорально или любым другим подходящим способом, например, путем вливания или инъекции ударной дозы, доставляемой посредством поглощения через эпителиальную или кожнослизистую выстилку (например, слизистую полости рта, прямой кишки и тонкой кишки), и такая композиция может быть введена вместе с другим биологически активным агентом. Введение может быть системным или местным. Известны различные системы доставки, например, путем инкапсуляции в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы и капсулы, и такие системы доставки могут быть использованы для введения соединения.
Способами введения являются, но не ограничиваются ими, парентеральное, чрескожное, внутримышечное, внутрибрюшинное, внутривенное, подкожное, интраназальное, эпидуральное, пероральное, подъязычное, интраназальное, интрацеребральное, интравагинальное, трансдермальное, ректальное введение, введение путем ингаляции или местное введение, и в частности, введение в ухо, нос, глаза или нанесение на кожу. Способ введения может быть выбран по усмотрению лечащего врача. В большинстве случаев введение способствует высвобождению соединения в кровоток. В конкретном варианте осуществления изобретения соединение вводят перорально.
Дозы и дозированные формы
Количество соединения формулы (I) или его формы, которое является эффективным для лечения 8МА, зависит, например, от способа введения, типа 8МА, общего состояния здоровья индивидуума, этнической принадлежности, возраста, массы тела и пола индивидуума, а также от режима питания, продолжительности и тяжести §МА, и такое количество должно быть определено лечащим врачом в соответствии с условиями жизни каждого пациента или индивидуума.
В конкретных вариантах осуществления изобретения термины эффективное количество, профилактически эффективное количество или терапевтически эффективное количество, используемые при описании введения соединения формулы (I) или его формы, или их композиции, или лекарственного средства, означают количество соединения формулы (I), которое дает терапевтический и/или благоприятный эффект. В некоторых конкретных вариантах осуществления изобретения эффективное количество, профилактически эффективное количество или терапевтически эффективное количество, используемые при описании введения соединения формулы (I) или его формы, или композиции, или лекарственные средства, содержащие эти соединения, вызывают один, два или более следующих эффектов:
(ί) снижение или ослабление тяжести §МА;
(ίί) замедление начала развития §МА;
(ίίί) ингибирование прогрессирования §МА;
(ίν) исключение необходимости госпитализации индивидуума;
(ν) снижение времени пребывания индивидуума в стационаре;
(νί) увеличение продолжительности жизни индивидуума;
(νίί) повышение качества жизни индивидуума;
(νίίί) снижение числа симптомов, ассоциированных с 8МА;
(ίχ) снижение или ослабление тяжести симптома(-ов), ассоциированного с 8МА;
(х) уменьшение продолжительности симптома(-ов), ассоциированного с 8МА;
(χί) предупреждение рецидивов симптомов, ассоциированных с 8МА;
(χίί) ингибирование развития или возникновения симптома 8МА; и/или (χίίί) ингибирование прогрессирования симптома, ассоциированного с 8МА.
В некоторых вариантах осуществления изобретения эффективное количество соединения формулы
- 82 028382 (I) или его формы представляет собой количество, которое является эффективным для повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, и увеличения уровней белка διηη. продуцируемого из гена 8ΜΝ2, и тем самым для достижения нужного благоприятного эффекта у индивидуума, нуждающегося в этом. В некоторых случаях нужный эффект может быть определен путем анализа или количественной оценки: (1) включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, или (2) уровней белка 8ши, продуцируемого из гена 8ΜΝ2. Неограничивающие примеры эффективных количеств соединения формулы (I) или его формы описаны в настоящей заявке.
Так, например, эффективным количеством может быть количество, необходимое для лечения 8ΜΆ у человека, нуждающегося в этом, или количество, неоходимое для повышения уровня включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, у человека, нуждающегося в этом, или количество, неоходимое для увеличения уровней белка 8ши, продуцируемого из гена 8ΜΝ2, у человека, нуждающегося в этом. В конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с 8ΜΆ.
В общих чертах для пациента или индивидуума с массой тела приблизительно 1 кг - 200 кг, эффективное количество составляет от приблизительно 0,001 мг/кг/день до приблизительно 500 мг/кг/день. Считается, что средняя масса тела взрослого человека обычно составляет от приблизительно 70 до приблизительно 100 кг.
Эффективное количество соединения формулы (I) или его формы, используемое для получения лекарственного средства и фармацевтического набора, или используемое в способе лечения 8ΜΆ у человека, нуждающегося в этом, включает количество, составляющее в пределах от приблизительно 0,001 мг до приблизительно 35000 мг, и такое количество входит в объем настоящего изобретения. В конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с 8ΜΆ.
Описанные здесь композиции составляют для введения индивидууму любым способом доставки лекарственного средства, известным в данной области. Неограничивающими примерами является пероральное введение, внутриглазное введение, ректальное введение, трансбуккальное введение, местное введение, интраназальное введение, офтальмическое введение, подкожное введение, внутримышечное введение, внутривенное введение (введение ударной дозы и вливание), интрацеребральное введение, трансдермальное введение и внутрилегочное введение.
Фармацевтические композиции
Описанные здесь варианты осуществления включают применение соединения формулы (I) или его формы в виде фармацевтической композиции. В конкретном варианте осуществления изобретения описано применение соединения формулы (I) или его формы в виде фармацевтической композиции для лечения 8ΜΆ у человека, нуждающегося в этом, где указанное применение включает введение эффективного количества соединения формулы (I) или его формы в смеси с фармацевтически приемлемым эксципиентом. В конкретном варианте осуществления изобретения таким человеком является пациент с 8ΜΆ.
Соединение формулы (I) или его форма могут быть необязательно получены в форме композиции, содержащей соединение или его форму и необязательно носитель, эксципиент или разбавитель. Другие описанные здесь варианты осуществления относятся к фармацевтическим композициям, содержащим эффективное количество соединения формулы (I) или его формы и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. В конкретном варианте осуществления изобретения указанные фармацевтические композиции могут быть использованы для введения животному и/или человеку. Описанные здесь фармацевтические композиции могут быть получены в любой форме, подходящей для введения такой композиции индивидууму.
В конкретном варианте осуществления изобретения и в этом контексте описания изобретения термин фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель означает носитель, эксципиент или разбавитель, разрешенные Федеральными регуляторными органами или правительством штата или указанные в Фармакопее США или в другой общеизвестной фармакопее, для введения животным, а более конкретно, человеку. Термин носитель означает разбавитель, адъювант (например, адъювант Фрейнда (полный и неполный)), эксципиент или эксципиент, который вводят вместе с терапевтическим агентом. Такими фармацевтическими носителями могут быть стерильные жидкости, такие как вода и масла, включая вазелин, масло животного или растительного происхождения или синтетические масла, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п. Конкретным носителем для внутривенно вводимых фармацевтических композиций является вода. Жидкими носителями, которые могут быть использованы, в частности, в растворах для инъекций, также являются физиологические растворы и водные растворы декстрозы и глицерина.
Типичные композиции и дозированные формы содержат один или более эксципиентов. Подходящие эксципиенты хорошо известны специалистам-фармацевтам, и неограничивающими примерами таких эксципиентов являются крахмал, глюкоза, лактоза, сахароза, желатин, солод, рис, мука, мел, силикагель, стеарат натрия, моностеарат глицерина, тальк, хлорид натрия, сухое сепарированное молоко, глицерин, пропиленгликоль, вода, этанол и т.п. Выбор конкретного эксципиента, подходящего для включения в фармацевтическую композицию или в дозированную форму, зависит от ряда факторов, хорошо
- 83 028382 известных в данной области, включая, но не ограничиваясь ими, способ введения дозированной формы пациенту и конкретные активные ингредиенты, входящие в состав дозированной формы. Настоящее изобретение также относится к безводным фармацевтическим композициям и дозированным формам, содержащим одно или более соединений формулы (I) или их форм, описанных в настоящей заявке. Композиции и стандартные дозированные формы для разового применения могут быть приготовлены в виде растворов или сиропов (необязательно с ароматизатором), суспензий (необязательно с ароматизатором), эмульсий, таблеток (например, таблеток для разжевывания), драже, капсул, гранул, порошка (необязательно для разведения), препаратов с замаскированным вкусом или препаратов пролонгированного высвобождения и т.п.
Описанные здесь фармацевтические композиции, которые являются подходящими для перорального введения, могут быть получены в виде дискретных дозированных форм, таких как, но не ограничиваясь ими, таблетки, каплеты, капсулы, гранулы, порошки и жидкости. Такие дозированные формы содержат предварительно определенное количество активных ингредиентов и могут быть получены методами, хорошо известными специалистам-фармацевтам.
Примерами эксципиентов, которые могут быть использованы в описанных здесь дозированных формах для перорального введения, являются, но не ограничиваются ими, связующие вещества, вещества, придающие объем, дезинтеграты и лубриканты.
Биомаркеры
В некоторых вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, используется в качестве биомаркера для 8ΜΑ. В некоторых вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и не включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, используется в качестве биомаркера для 8ΜΑ. В других вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, используется в качестве биомаркера для пациента с 8ΜΑ, подвергаемого лечению соединением, таким как соединение, описанное в настоящей заявке. В других вариантах осуществления изобретения количество мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и не включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, используется в качестве биомаркера для пациента с 8ΜΑ, подвергаемого лечению соединением, таким как соединение, описанное в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления изобретения изменение количества мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, и соответствующее изменения количества мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и не включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, служит в качестве биомаркера у пациента, подвергаемого лечению соединением, таким как соединение, описанное в настоящей заявке. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΑ.
В конкретном варианте осуществления изобретения увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, и соответствующее снижение количества мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и не включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, после введения соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), означает, что такое соединение может быть эффективным для лечения 8ΜΑ. В другом конкретном варианте осуществления изобретения снижение количества мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2 и включает экзон 7 8ΜΝ2, и соответствующее увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2 и не включает экзон 7 8ΜΝ2, после введения соединения (например, описанного здесь соединения формулы (I)), означает, что такое соединение не является эффективным для лечения 8ΜΑ. В соответствии с этими вариантами осуществления 8ΜN-праймер(-ы) и/или 8ΜN-зонд, описанные ниже, могут быть использованы в анализах, таких как РСК (например, с|РСР) и КТ-РСК (например, КТс|РСР или КТ-РСК в конечной точке), проводимых для оценки и/или определения количества мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ1 и/или гена 8ΜΝ2 и включает или не включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2.
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к 8ΜN-праймерам и/или 8ΜN-зондам (например, к прямому праймеру, имеющему нуклеотидную последовательность 8Е0 ГО Ν0: 1, 7, 8, 11 или 13; и/или к обратному праймеру, имеющему нуклеотидную последовательность 8Е0 ГО Ν0: 9 или 12; и/или к 8ΜN-зонду, такому как 8Е0 ГО Ν0: 3 или 10), используемым для амплификации нуклеиновых кислот, кодирующих 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 человека. Эти праймеры могут быть использованы в качестве праймеров, например, в КТ-РСК (такой как КТ-РСК, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-дРСР, описанные в настоящей заявке или известные специалистам), в РСК (такой как с|РСР) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и в качестве зондов, используемых в гибридизационных анализах, таких как Нозерн-блот-анализ и/или Саузерн-блот-анализ. КТ-РСК в конечной точке, используемая в описанных здесь Биологических примерах, представляет собой полимеразную цепную реакцию с обратной транскриптазой, которую осуществляют за определенное число циклов амплификации (или до тех пор, пока не будут удалены исходные вещества) с последующей количественной оценкой каждого ДНК-продукта посредством, например, гель-элетрофоретического разделения, окрашивания флуоресцентным красителем, количественной оценки флуоресценции и т.п.
- 84 028382
8Е0 ГО ΝΟ: 1 гибридизуется с ДНК или РНК, содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 22-40 экзона 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2; 8ЕО ГО ΝΟ: 2 гибридизуется с ДНК или РНК, содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 4-26 последовательности, кодирующей люциферазу светляка; 8ЕО ГО ΝΟ: 7 гибридизуется с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, со смысловой цепью ДНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 32-54 экзона 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и нуклеотидам 1-4 экзона 8 δΜΝ1 и/или δΜΝ2; 8ЕО ГО ΝΟ: 8 гибридизуется с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, со смысловой цепью ДНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 87-111 экзона 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и нуклеотидам 1-3 экзона 8 δΜΝ1 и/или δΜΝ2; 8ЕО ГО ΝΟ: 9 гибридизуется с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, с антисмысловой цепью ДНК или РНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 39-62 экзона 8 δΜΝ1 и/или δΜΝ2; 8Е9 ГО ΝΟ: 11 гибридизуется с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, со смысловой цепью ДНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 43-63 экзона 6 δΜΝ1 и/или δΜΝ2; 8Е9 ГО ΝΟ: 12 гибридизуется с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, с антисмысловой цепью ДНК или РНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 51-73 экзона 8 δΜΝ1 и/или δΜΝ2; и 8ЕО ГО ΝΟ: 13 гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (например, со смысловой цепью ДНК), содержащей нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 22-46 экзона 6 δΜΝ1 и/или δΜΝ2.
В соответствии с этим, олигонуклеотид, соответствующий последовательностям δΕ9 ГО ΝΟ: 9, 11, 12 и/или 13, может быть использован в реакции амплификации для амплификации нуклеиновых кислот, кодирующих или кодируемых δΜΝ1 и/или δΜΝ2 человека и не содержащих экзона 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2 человека, и нуклеиновой кислоты, кодирующей или кодируемой δΜΝ1 и/или δΜΝ2 человека и включающей экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2 человека. В противоположность этому олигонуклеотид, соответствующий 8ЕО ГО ΝΟ: 8 в комбинации с нижерасположенным обратным праймером (например, 8Е9 ГО ΝΟ: 9 или 12), может быть использован для амплификации нуклеиновых кислот, кодирующих или кодируемых δΜΝ1 и/или δΜΝ2 человека и не содержащих экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2 человека, а олигонуклеотид, соответствующий δΕ9 ГО ΝΟ: 1 и 7 в комбинации с нижерасположенным обратным праймером (например, δΕ9 ГО ΝΟ: 9 или 12), может быть использован для амплификации нуклеиновых кислот, кодирующих или кодируемых δΜΝ1 и/или δΜΝ2 человека и содержащих экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2.
8ЕО ГО ΝΟ: 3 гибридизуется с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, со смысловой цепью ДНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 50-54 экзона 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2 человека и нуклеотидам 1-21 экзона 8 δΜΝ1 и/или δΜΝ2 человека, а 8ЕО ГО ΝΟ: 10 гибридизуется с последовательностями нуклеиновой кислоты (например, со смысловой цепью ДНК), содержащими нуклеотиды, соответствующие нуклеотидам 7-36 экзона 8 δΜΝ1 и/или δΜΝ2 человека. 8Е9 ГО ΝΟ: 3 может быть использована в качестве зонда для детектирования мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, описанных в настоящей заявке или в Международной публикации заявки νΟ2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833 (каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки), и для детектирования мРНК, которая транскрибируется из δΜΝ1 и/или δΜΝ2 человека и включает экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2. Кроме того, 8Е9 ГО ΝΟ: 10 может быть использована в качестве зонда для детектирования мРНК, которая транскрибируется из минигена и включает или не включает экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, и для детектирования мРНК, которая транскрибируется из δΜΝ1 и/или δΜΝ2 человека, описанных в настоящей заявке или в Международной публикации заявки νΟ2009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки.
В конкретном варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в биологических примерах (например, δΜΝ-праймеры, такие как 8ЕО ГО ΝΟ: 1, 7, 11 или 13 и/или 8ЕО ГО ΝΟ: 2, 9 или 12, и/или δΜΝ-зонды, такие как 8Е9 ГО ΝΟ: 3 или 10), используют в анализе, таком как КТРСК, РТ-цРСР. КТ-РСК в конечной точке, РСК, цРСР. анализ посредством амплификации по типу катящегося кольца, и если это необходимо, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в биологических примерах), для того, чтобы определить, может ли соединение (например, соединение формулы (I) или его форма) повышать уровень включения экзона 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2.
В другом варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в биологических примерах (например, δΜΝ-праймеры, такие как 8Е9 ГО ΝΟ: 1, 7, 11 или 13 и/или 8Е9 ГО ΝΟ: 9 или 12, и/или δΜΝ-зонды, такие как 8Е9 ГО ΝΟ: 3 или 10), используют в анализе, таком как КТ-РСК, КТцРСР, КТ-РСК в конечной точке, РСК, цРСР, анализ посредством амплификации по типу катящегося кольца, и если это необходимо, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в биологических примерах), для мониторинга количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и включает экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента.
В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с δΜΑ.
В другом варианте осуществления изобретения праймер и/или зонд, описанные ниже в биологических примерах (например, δΜΝ-праймеры, такие как δΕ9 ГО ΝΟ: 1, 7, 11 или 13 и/или δΕ9 ГО ΝΟ: 9 или
- 85 028382
12, и/или 8ΜN-зонды, такие как 8Е0 ГО Ν0: 3 или 10), используют в анализе, таком как ΚΤ-ΡΟΚ, ΚΤС|РЖ, ΚΤ-РЖ. в конечной точке, РСК с|РСК анализ посредством амплификации по типу катящегося кольца, и если это необходимо, Нозерн-блот-анализ или Саузерн-блот-анализ (например, анализ, описанный ниже в биологических примерах), для мониторинга ответа у пациента на соединение (например, соединение формулы (I) или его форму). В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΑ.
Образец (например, проба крови, образец РВМС или образец ткани, такой как образец кожи или мышечной ткани), взятый у пациента, может быть получен методами, известными специалистам; при этом праймеры и/или зонды, описанные ниже в Биологических примерах, могут быть использованы в анализах (например, таких как РСК ΚΤ-РЖ, РТ-цРСР, цРСР, ΚΤ-РЖ в конечной точке, анализ посредством амплификации по типу катящегося кольца, Нозерн-блот-анализ и Саузерн-блот-анализ) для определения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 (например, количества мРНК, которая включает экзон 7 8ΜΝ2 и транскрибируется из гена 8ΜΝ2). Образец, взятый у пациента, представляет собой образец, который, после его забора у пациента, обрабатывают и/или подвергают различным манипуляциям методами, известными специалистам в данной области. Так, например, образец, взятый у пациента, может быть обработан, например, для экстракции РНК известными методами. Образец, взятый у пациента, может быть обработан, например, для экстракции РНК, которую затем подвергают обратной транскрипции с продуцированием кДНК. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΑ.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где указанный способ включает: (а) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым 8ΜΝпраймером, описанным ниже (например, 8ЕО ГО Ν0: 1, 7, 11 или 13) и/или с описанным здесь обратным 8ΜN-праймером (например, 8ЕО ГО Ν0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в ΚΤ-ΡΘΚ (например, ΚΤ-ΡΘΚ в конечной точке и/или ΚΤ-цРЖ), РЖ (например, С|РЖ) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца; и (Ь) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и включает экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΑ.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, где указанный способ включает: (а) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым 8ΜN-праймером, описанным ниже (например, 8ЕО ГО Ν0: 1, 7, 11 или 13) и/или с описанным здесь обратным 8Ы№праймером (например, 8ЕО ГО Ν0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в ΚΤ-РСК (например, ΚΤ-РСК в конечной точке и/или ΡΤ-цРСР), РЖ (например, с.]РЖ) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца; и (Ь) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΑ.
Количество мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2 человека и включает экзон 7 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, и количество мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2 человека и не включает экзон 7 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, могут отличаться друг от друга, например, размером фрагмента РНК или ДНК, генерируемой из мРНК 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, которая включает экзон 7 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, и из мРНК 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, которая не включает экзон 7 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где указанный способ включает: (а) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым 8ΜN-праймером, описанным ниже (например, 8ЕО ГО Ν0: 8, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным 8Ы№праймером (например, 8ЕО ГО Ν0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в ΚΤ-РЖ (например, ΚΤ-РЖ в конечной точке и/или ΡΤ-цРСР), РЖ (например, с|РЖ) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца; и (Ь) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или
- 86 028382 происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΑ.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где указанный способ включает: (а) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с 8ΜN-зондом, описанным ниже (например, 8ЕЦ ГО Ν0: 3 или 10), вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-дРСК), РСК (например, с|РСР) в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца и, если это необходимо, в Нозерн-блот-анализе или в Саузерн-блот-анализе, и (Ь) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΑ.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с описанным здесь 8ΜN-зондом (например, 8ЕЦ ГО Ν0: 3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТРСК в конечной точке и/или КТ-дРСК), РСК (например, дРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца и, если это необходимо, в Нозерн-блот-анализе или в Саузерн-блотанализе; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2.
Количество мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2 человека и включает экзон 7
8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, и количество мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2 человека и не включает экзон 7 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, могут отличаться друг от друга, например, размером фрагмента РНК или ДНК, генерируемой из мРНК 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, которая включает экзон 7 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, и из мРНК 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2, которая не включает экзон 7 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΑ.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где указанный способ включает: (а) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с описанным здесь 8ΜN-зондом (например, 8ЕЦ ГО Ν0: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-дРСК), РСК (например, дРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца и, если это необходимо, в Нозерн-блот-анализе или в Саузерн-блот-анализе; и (Ь) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8ΜΑ.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым 8ΜN-праймером, описанным ниже (например, 8ЕЦ ГО Ν0: 1, 7, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным 8ΜN-праймером (например, 8ЕЦ ГО Ν0: 9 или 12) и/или с описанным здесь 8ΜN-зондом (например, 8ЕЦ ГО Ν0:3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТдРСК), РСК (например, дРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным
- 87 028382 пациентом является пациент с 8МА.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов §МЫ1 и 8МЫ2, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым §МЫ-праймером, описанным ниже (например, 8Е0 ГО N0: 1, 7, 8, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным §МЫ-праймером (например, 5>Е0 ГО N0: 9 или 12) и/или с описанным здесь §М^зондом (например, 8Е0 ГО N0:3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-с|РСК). РСК (например, с|РСР) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и 8М№. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8МА.
Количество мРНК, которая транскрибируется из генов §ΜN 1 и §М№ человека и включает экзон 7 §ММ и §МШ, и количество мРНК, которая транскрибируется из генов §ММ и §МШ человека и не включает экзон 7 8МШ и 8М№, могут отличаться друг от друга, например, размером фрагмента РНК или ДНК, генерируемого из мРНК §ММ и §МШ, которая включает экзон 7 §ММ и §МШ, и из мРНК §ММ и §МШ, которая не включает экзон 7 §ММ и 8М№. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8МА.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу детектирования количества мРНК, которая транскрибируется из генов §ММ и/или §МШ и не содержит экзон 7 §ММ и/или 8М№, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым §М№праймером, описанным ниже (например, 8Е0 ГО N0: 8) и/или с описанным здесь обратным §М^праймером (например, 5>Е0 ГО N0: 9 или 12) и/или с описанным здесь §МК-зондом (например, 8Е0 ГО N0: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, с|РСР) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца; и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или §М№ и не содержит экзон 7 8МШ и/или 8М№. В некоторых вариантах осуществления изобретения образец, взятый у пациента или происходящий от пациента, обрабатывают соединением, таким как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В конкретном варианте осуществления изобретения указанным пациентом является пациент с 8МА.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с §МА на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с 8МА (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с 8МА (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым §МК-праймером, описанным ниже (например, 5>Е0 ГО N0: 1, 7, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным §М^праймером (например, 8Е0 ГО N0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, цРСР) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, где образец, взятый у пациента с §МА или происходящий от пациента с 8МА, обрабатывают соединением (например, описанным здесь соединением); и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или §М№ и содержит экзон 7 §ММ и/или §МШ, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или §М№ и содержит экзон 7 8МШ и/или 8М№, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов §ММ и/или §МШ и содержит экзон 7 §ММ и/или §МШ, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что данное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов §ММ и/или §МШ и содержит экзон 7 §ММ и/или §МШ, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов §МК 1 и/или §МШ и содержит экзон 7 §ММ и/или §МШ, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней,
- 88 028382 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с δΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с δΜΑ;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым δΜΝ-праймером, описанным ниже (например, δΕΟ ГО N0: 1, 7, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным δΜΝ-праймером (например, δΕΟ ГО N0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-цРСК), РСК (например, цРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с δΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с δΜΑ (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с δΜΑ (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым δΜΝ-праймером, описанным ниже (например, δΕΟ ГО Ν0: 1, 7, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным δΜΝ-праймером (например, δΕΟ ГО Ν0: 9 или 12) и/или с δΜΝ-зондом (например, δΕΟ ГО Ν0: 3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТцРСК), РСК (например, цРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, где образец, взятый у пациента с δΜΑ или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой); и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 или δΜΝ2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с δΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с δΜΑ;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или проис- 89 028382 ходящего от данного пациента, в контакт с прямым δΜΝ-праймером, описанным ниже (например, δΕΟ ГО Ν0: 1, 7, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным δΜΝ-праймером (например, δΕΟ ГО Ν0: 9 или 12) и/или с δΜΝ-зондом (например, δΕΟ ГО Ν0: 3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, с|РСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (с) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ 1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с δΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с δΜΑ (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с δΜΑ (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым δΜΝ-праймером, описанным ниже (например, δΕΟ ГО Ν0: 8, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным δΜΝ-праймером (например, δΕΟ ГО Ν0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, цРСР) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, где образец, взятый у пациента с δΜΑ или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, где (1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с δΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с δΜΑ;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым δΜΝ-праймером, описанным ниже (например, δΕΟ ГО Ν0: 8, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным δΜΝ-праймером (например, δΕΟ ГО Ν0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТРСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, цРСР) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не
- 90 028382 содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, где (1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с δΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с δΜΑ (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с δΜΑ (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым δΜΝ-праймером, описанным ниже (например, 8Е0 ГО Ν0: 8, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным δΜΝ-праймером (например, δΕΟ ГО Ν0: 9 или 12) и/или с δΜΝ-зондом (например, δΕΟ ГО Ν0: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-дРСК), РСК (например, дРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, где образец, взятый у пациента с δΜΑ или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, где (1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ 1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с δΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с δΜΑ;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым δΜΝ-праймером, описанным ниже (например, δΕΟ ГО Ν0: 8, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным δΜΝ-праймером (например, δΕΟ ГО Ν0: 9 или 12) и/или с δΜΝ-зондом (например, δΕΟ ГО Ν0: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-дРСК), РСК (например, дРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, где (1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное
- 91 028382 соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с 8ΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с 8ΜΑ (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с 8ΜΑ (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым 8ΜN-праймером, описанным ниже (например, 8Е0 ГО Ν0: 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным 8ΜN-праймером (например, 8Е0 ГО Ν0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-дРСР), РСК (например, дРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, где образец, взятый у пациента с 8ΜΑ или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где (1) (ί) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ίί) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) (ί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ίί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с 8ΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с 8ΜΑ;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым 8ΜN-праймером, описанным ниже (например, 8Е0 ГО Ν0: 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным 8ΜN-праймером (например, 8Е0 ГО Ν0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-дРСР), РСК (например, дРСР) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (с) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где
- 92 028382 (1) (ί) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ίί) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) (ί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ίί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с 8ΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с 8ΜΑ (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с 8ΜΑ (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с 8Ы№зондом (например, 8Еф ГО ΝΟ: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, с|РСР) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, где образец, взятый у пациента с 8ΜΑ или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где (1) (ί) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ίί) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) (ί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ίί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3
- 93 028382 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с 8МА на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с 8МА;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с 8М№зондом (например, 8Е0 ГО ΝΟ: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-цРСК), РСК (например, цРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и содержит экзон 7 8МШ и/или 8М№, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и не содержит экзон 7 8МШ и/или 8МШ, где (1) (ί) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и содержит экзон 7 8МШ и/или 8М№, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и содержит экзон 7 8МШ и/или 8МШ, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ίί) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и не содержит экзон 7 8МШ и/или 8М№, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и не содержит экзон 7 8МШ и/или 8МШ, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) (ί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и содержит экзон 7 8МШ и/или 8МШ, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и содержит экзон 7 8МШ и/или 8МШ, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ίί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и не содержит экзон 7 8МШ и/или 8МШ, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8МК1 и/или 8МШ и не содержит экзон 7 8МШ и/или 8М№, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с 8МА на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с 8МА (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с 8МА (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым 8МК-праймером, описанным ниже (например, 8ЕО ГО ΝΟ: 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным 8М^праймером (например, 8ЕО ГО ΝΟ: 9 или 12) и/или с 8М№зондом (например, 8ЕО ГО ΝΟ: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-цРСК), РСК (например, цРСК), где образец, взятый у пациента с 8МА или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой) и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и содержит экзон 7 8МШ и/или 8М№, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и не содержит экзон 7 8МШ и/или 8МШ, где (1) (ί) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и содержит экзон 7 8МШ и/или 8М№, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и содержит экзон 7 8МШ и/или 8МШ, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ίί) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и не содержит экзон 7 8МШ и/или 8М№, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8МШ и/или 8МШ и не содержит экзон 7 8МШ и/или 8МШ, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного паци- 94 028382 ента; и (2) (ί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов §МШ и/или §МШ и содержит экзон 7 §МШ и/или §МШ, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов §МШ и/или §МШ и содержит экзон 7 §МШ и/или §МШ, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ίί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов §МШ и/или §МШ и не содержит экзон 7 §МШ и/или §МШ, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов ЗМК1 и/или ЗМЮ и не содержит экзон 7 ЗМШ и/или 8МК2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу оценки ответа у пациента с ЗМА на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с ЗМА;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым ЗМК-праймером, описанным ниже (например, 8ΕΩ ГО N0: 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным §М^праймером (например, 8ΕΩ ГО N0: 9 или 12) и с ЗМК-зондом (например, 8ΕΩ ГО N0: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-дРСР), РСК (например, дРСР) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов ЗМШ и/или ЗМЮ и содержит экзон 7 ЗМШ и/или 8МК2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов ЗМШ и/или §МШ и не содержит экзон 7 §МШ и/или §МШ, где (1) (ί) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов ЗМШ и/или ЗМЮ и содержит экзон 7 ЗМШ и/или 8МК2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов §МШ и/или §МШ и содержит экзон 7 §МШ и/или §МШ, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ίί) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов ЗМШ и/или ЗМЮ и не содержит экзон 7 ЗМШ и/или 8МК2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов §МШ и/или §МШ и не содержит экзон 7 §МШ и/или §МШ, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) (ί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов §МШ и/или §МШ и содержит экзон 7 §МШ и/или §МШ, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов §МШ и/или §МШ и содержит экзон 7 §МШ и/или §МШ, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, и (ίί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов §МШ и/или §МШ и не содержит экзон 7 §МШ и/или 8МК2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов ЗМК1 и/или ЗМЮ и не содержит экзон 7 ЗМШ и/или 8МК2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с ЗМА к соединению, где указанный способ включает:
(а) приведение образца, взятого у пациента с ЗМА (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с ЗМА (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым ЗМ^праймером, описанным ниже (например, 8ΕΩ ГО N0: 1, 7, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным §М^праймером (например, 8ΕΩ ГО N0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-дРСК), РСК (например, дРСК) или в анализе посредст- 95 028382 вом амплификации по типу катящегося кольца, где образец, взятый у пациента с δΜΑ или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и (Ъ) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения ответ у пациента оценивают через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с δΜΑ, к соединению, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с δΜΑ;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым δΜΝ-праймером, описанным ниже (например, δΕΟ ГО NО: 1, 7, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным δΜΝ-праймером (например, δΕΟ ГО NО: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-дРСК), РСК (например, дРСР) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (с) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изо- 96 028382 бретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с 8ΜΑ к соединению, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с 8ΜΑ (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с 8ΜΑ (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым 8ΜN-праймером, описанным ниже (например, 8ЕО ГО Ν0: 1, 7, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным 8ΜN-праймером (например, 8ЕО ГО Ν0: 9 или 12) и/или с 8ΜN-зондом (например, 8ЕО ГО Ν0: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-дРСК), РСК (например, дРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, где образец, взятый у пациента с 8ΜΑ или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с 8ΜΑ к соединению, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с 8ΜΑ;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым 8ΜN-праймером, описанным ниже (например, 8ЕО ГО Ν0: 1, 7, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным 8ΜN-праймером (например, 8ЕО ГО Ν0: 9 или 12) и/или с 8ΜN-зондом (например, 8ЕО ГО Ν0: 3 или 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-дРСК), РСК (например, дРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где (1) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает
- 97 028382 благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с 8ΜΑ к соединению, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с 8ΜΑ (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с 8ΜΑ (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым 8ΜN-праймером, описанным ниже (например, 8ЕО ГО Ν0: 8, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным 8ΜN-праймером (например, 8ЕО ГО Ν0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, цРСР) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, где образец, взятый у пациента с 8ΜΑ или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где (1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 2030, 30-40, 40-50 или 50-100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с 8ΜΑ к соединению, где указанный способ включает:
(а) введение соединения пациенту с 8ΜΑ;
- 98 028382 (b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым δΜΝ-праймером, описанным ниже (например, δΕΟ ГО Ν0: 8, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным δΜΝ-праймером (например, δΕΟ ГО Ν0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТРСК в конечной точке и/или КТ-цРСК), РСК (например, цРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, где (1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 2030, 30-40, 40-50 или 50-100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с δΜΑ к соединению, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с δΜΑ (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с δΜΑ (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым δΜΝ-праймером, описанным ниже (например, δΕΟ ГО Ν0: 8, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным δΜΝ-праймером (например, δΕΟ ГО Ν0: 9 или 12) и/или с δΜΝ-зондом (например, δΕΟ ГО Ν0: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-цРСК), РСК (например, цРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, где образец, взятый у пациента с δΜΑ или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, где (1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ 1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединени и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента
- 99 028382 осуществляют через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 2030, 30-40, 40-50 или 50-100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с 8ΜΑ к соединению, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с 8ΜΑ;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым 8ΜN-праймером, описанным ниже (например, 8ЕЦ ГО Ν0: 8, 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным 8ΜN-праймером (например, 8ЕЦ ГО Ν0: 9 или 12) и/или с 8ΜN-зондом (например, 8ЕЦ ГО Ν0: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-дРСК), РСК (например, дРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где (1) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 2030, 30-40, 40-50 или 50-100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с 8ΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с 8ΜΑ (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с 8ΜΑ (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым 8ΜN-праймером, описанным ниже (например, 8ЕО ГО Ν0: 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным 8ΜN-праймером (например, 8ЕЦ ГО Ν0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-дРСК), РСК (например, дРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, где образец, взятый у пациента с 8ΜΑ или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где
- 100 028382 (1) (ί) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ίί) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) (ί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ίί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга ответа у пациента с δΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с δΜΑ;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым δΜΝ-праймером, описанным ниже (например, δΕΟ ГО Ν0: 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным δΜΝ-праймером (например, δΕΟ ГО Ν0: 9 или 12) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, с|РСР) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, где (1) (ί) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ίί) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) (ί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества
- 101 028382 мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ίί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга ответа пациента с 8ΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) приведение образца, взятого у пациента с 8ΜΑ (например, пробы крови или образца ткани), или образца, происходящего от данного пациента с 8ΜΑ (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с 8Ы№зондом (например, 8ЕО ГО Ν0: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в ΚΤ-РСК (например, ΚΤ-РСК в конечной точке и/или ΚΤ-дРСИ), РСК (например, с|РСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, где образец, взятый у пациента с 8ΜΑ или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и (b) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, где (1) (ί) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ίί) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) (ί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ίί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1
- 102 028382 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга ответа у пациента с δΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с δΜΑ;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с δΜΝ-зондом (например, δΕΟ ГО Ν0: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-дРСК), РСК (например, дРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, где (1) (ί) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ίί) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) (ί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ίί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга восприимчивости пациента с δΜΑ к соединению, где указанный способ включает:
(а) приведение образца, взятого у пациента с δΜΑ (например, пробы крови или образца ткани), или
- 103 028382 образца, происходящего от данного пациента с δΜΑ (например, пробы крови или образца ткани, которые были обработаны для экстракции РНК), в контакт с прямым δΜN-праймером, описанным ниже (например, δΕΟ ГО NО: 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным δΜN-праймером (например, δΕΟ ГО NО: 9 или 12) и/или с δΜN-зондом (например, δΕΟ ГО NО: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-цРСК), РСК (например, цРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, где образец, взятый у пациента с δΜΑ или происходящий от данного пациента, обрабатывали соединением (например, описанным здесь соединением формулы (I) или его формой), и (Ь) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΚ1 и/или δΜ№ и содержит экзон 7 δΜΚ1 и/или 8М№, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΚ1 и/или δΜ№ и не содержит экзон 7 δΜ№ и/или δΜ№, где (1) (ί) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜΚ1 и/или δΜ№ и содержит экзон 7 δΜ^ и/или δΜ^, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜ№ и/или δΜ№ и содержит экзон 7 δΜ№ и/или δΜ№, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (и) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜ№ и/или δΜ№ и не содержит экзон 7 δΜ№ и/или δΜ№, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜ№ и/или δΜ№ и не содержит экзон 7 δΜ№ и/или δΜ№, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения, или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) (ί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜ№ и/или δΜ№ и содержит экзон 7 δΜ№ и/или δΜ№, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜ№ и/или δΜ№ и содержит экзон 7 δΜ№ и/или δΜ№, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ΐΐ) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜ^ и/или δΜ№ и не содержит экзон 7 δΜ^ и/или δΜ^, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов δΜ№ и/или δΜ№ и не содержит экзон 7 δΜ№ и/или δΜ№, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу мониторинга ответа у пациента с δΜΑ на соединение, где указанный способ включает:
(a) введение соединения пациенту с δΜΑ;
(b) приведение образца (например, пробы крови или образца ткани), взятого у пациента или происходящего от данного пациента, в контакт с прямым δΜN-праймером, описанным ниже (например, δΕΟ ГО NО: 11 или 13), и/или с описанным здесь обратным δΜN-праймером (например, δΕΟ ГО NО: 9 или 12) и/или с δΜN-зондом (например, δΕΟ ГО NО: 10) вместе с соответствующими компонентами, используемыми, например, в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-цРСК), РСК (например, цРСК) или в анализе посредством амплификации по типу катящегося кольца, и (c) детектирование количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜ^ и/или δΜ№ и содержит экзон 7 δΜ^ и/или δΜ^, и количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜ^ и/или δΜ№ и не содержит экзон 7 δΜ№ и/или δΜ№, где (1) (ί) увеличение количества мРНК, которая транскрибируется из генов δΜ^ и/или δΜ№ и содержит экзон 7 δΜ^ и/или δΜ^, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК,
- 104 028382 которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ίί) снижение количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение может давать или дает благоприятный и/или терапевтический эффект у данного пациента; и (2) (ί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, и (ίί) отсутствие изменения или отсутствие какого-либо значительного изменения количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в образце, взятом у пациента, по сравнению с количеством мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и не содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, в аналогичном образце (например, в образце ткани того же типа), взятом у пациента до введения данного соединения или некоторого количества доз указанного соединения или еще раньше, указывает на то, что этот пациент не является восприимчивым к такому соединению и что указанное соединение не дает благоприятного и/или терапевтического эффекта у данного пациента. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют через 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 7 дней, 14 дней, 28 дней, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 9 месяцев, 12 месяцев или более после введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения этому пациенту 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют после введения ему 1-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-30, 30-40, 40-50 или 50-100 доз соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма. В некоторых вариантах осуществления изобретения мониторинг ответа у пациента осуществляют во время непрерывного введения или в течение нескольких дней, недель, месяцев или лет после непрерывного введения соединения, такого как описанное здесь соединение формулы (I) или его форма.
В конкретных вариантах осуществления изобретения 8ΜΑ у пациента вызвана инактивирующими мутациями или делециями в гене 8ΜΝ1 на обеих хромосомах, приводящими к потере функции гена 8ΜΝ1.
Наборы
В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к фармацевтическим или аналитическим наборам, содержащим описанный здесь 8ΜN-праймер или зонд в одном или более контейнерах, и инструкции по их применению. В одном из вариантов осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор содержит, в контейнере, один или более обратных 8Ы№праймеров (например, 8ЕО ГО Ν0: 2, 9 и/или 12) и/или один или более прямых 8ΜN-праймеров (8ЕО ГО Ν0: 1, 7, 8, 11 и/или 13) и инструкции по их применению. В другом варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор содержит, в одном контейнере, обратный 8ΜN-праймер (например, 8ЕО ГО Ν0: 2, 9 и/или 12), прямой 8ΜN-праймер (8ЕО ГО Ν0: 1, 7, 8, 11 и/или 13) и инструкции по их применению.
В одном из вариантов осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор содержит, в отдельных контейнерах, один обратный 8ΜN-праймер (например, 8ЕО ГО Ν0: 2, 9 и/или 12) в одном контейнере, прямой 8ΜN-праймер (8ЕО ГО Ν0: 1, 7, 8, 11 и/или 13) в другом контейнере, и инструкции по их применению.
В некоторых вариантах осуществления изобретения указанные наборы включают соответствующие компоненты, необходимые для проведения РСК (например, дРСК), КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или КТ-дРСК) или анализа посредством амплификации по типу катящегося кольца, такие как полимераза, дезоксинуклеозид-трифосфаты и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения такие наборы включают компоненты, необходимые для гибридизации. Фармацевтический или аналитический набор, содержащий такие праймеры, может быть использован в РСК и КТ-РСК, например, (ί) для того, чтобы определить, может ли терапевтический агент (например, соединение формулы (I) или его форма) повышать уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2; (и) для мониторинга количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, и количества мРНК, которая транскрибирует- 105 028382 ся из генов §ММ и/или §МШ и не содержит экзон 7 §ММ и/или §МШ, и/или (ίίί) для мониторинга ответа у индивидуума на терапевтический агент (например, соединение формулы (I) или его форму). В других вариантах осуществления изобретения указанным индивидуумом является человек. В других вариантах осуществления изобретения таким человеком является пациент. В некоторых других вариантах осуществления изобретения таким пациентом является пациент с 8МА.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с последовательностью 8Е0 ГО N0: 1, в одном контейнере, и обратный праймер с последовательностью 8Е0 ГО N0: 2, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, с|РСР) или в способе амплификации по типу катящегося кольца для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых человеческим минигеном 8МШ или человеческим минигеном §М№, описанными в настоящей заявке или в Международной публикации заявки \У02009/151546 или в публикации заявки на патент США № 2011/0086833, каждая из которых во всей своей полноте включена в настоящее описание посредством ссылки. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью 8Е0 ГО N0: 7, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью 8Е0 ГО N0: 9, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, с|РСР) или в способе амплификации по типу катящегося кольца для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами 8МШ и §М№. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В другом конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью 8Е0 ГО N0: 8, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью 8Е0 ГО N0: 9, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в КТ-РСК (например, КТРСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, цРСР) или в способе амплификации по типу катящегося кольца для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенным человеческим геном 8МК2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозернблот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью 8Е0 ГО N0: 7, в одном контейнере, прямой праймер с нуклеотидной последовательностью 8Е0 ГО N0: 8 в другом контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью 8Е0 ГО N0: 9, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, с|РСР) или в способе амплификации по типу катящегося кольца для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами 8МШ и §М№. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блотанализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью 8Е0 ГО N0: 11, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью 8Е0 ГО N0: 12, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, с|РСР) или в способе амплификации по типу катящегося кольца для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами 8МШ и §М№. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью 8Е0 ГО N0: 11, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью 8Е0 ГО N0: 9, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, с|РСР) или в способе амплификации по типу катящегося кольца для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами 8МШ и §М№. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
- 106 028382
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью 8Еф ГО ΝΟ: 13, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью 8Еф ГО ΝΟ: 12, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, с|РСР) или в способе амплификации по типу катящегося кольца для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью 8Еф ГО ΝΟ: 13, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью 8Еф ГО ΝΟ: 9, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, с|РСР) или в способе амплификации по типу катящегося кольца для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью 8Еф ГО ΝΟ: 1, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью 8Еф ГО ΝΟ: 9, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, с|РСР) или в способе амплификации по типу катящегося кольца для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В конкретном варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает прямой праймер с нуклеотидной последовательностью 8Еф ГО ΝΟ: 1, в одном контейнере, и обратный праймер с нуклеотидной последовательностью 8Еф ГО ΝΟ: 12, в другом контейнере. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР), РСК (например, с|РСР) или в способе амплификации по типу катящегося кольца для амплификации нуклеотидных последовательностей, кодируемых эндогенными человеческими генами 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2. В других вариантах осуществления изобретения эти праймеры используют в качестве зондов, например, в гибридизационных анализах, таких как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ.
В другом варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает описанный здесь 8ΜN-зонд (например, 8Еф ГО ΝΟ: 3 или 10), в одном контейнере. В других вариантах осуществления изобретения указанный зонд используют, например, в гибридизационном анализе, таком как Саузерн-блот-анализ или Нозерн-блот-анализ. В конкретном варианте осуществления изобретения указанный зонд используют в РТ-цРСР или с|РСР. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанные наборы включают компоненты, необходимые для проведения РСК (например, цРСР), КТ-РСК (например, КТ-РСК в конечной точке и/или РТ-цРСР) или анализа посредством амплификации по типу катящегося кольца, такие как полимераза, дезоксинуклеозид-трифосфаты, праймеры и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения такие наборы включают компоненты, необходимые для гибридизации.
В одном из вариантов осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает обратный 8Ы№праймер (например, 8Еф ГО ΝΟ: 2, 9 или 12), в одном контейнере, прямой 8ΜN-праймер (например, 8Еф ГО ΝΟ: 1, 7, 8, 11 или 13), в другом контейнере, и 8ΜN-зонд (например, 8ЕО ГО ΝΟ: 3 или 10), в другом контейнере, и инструкции по их применению. В другом варианте осуществления изобретения фармацевтический или аналитический набор включает один или более обратных 8ΜN-праймеров (например, 8Еф ГО ΝΟ: 2, 9 и/или 12), в одном контейнере, один или более прямых 8ΜN-праймеров (например, 8Еф ГО ΝΟ: 1, 7, 8, 11 и/или 13), в другом контейнере, и один или более 8ΜN-зондов (например, 8Еф ГО ΝΟ: 3 и/или 10), в другом контейнере, и инструкции по их применению.
В некоторых вариантах осуществления изобретения указанные наборы включают соответствующие компоненты, необходимые для проведения РСК, КТ-РСК или амплификации по типу катящегося кольца, такие как полимераза, дезоксинуклеозид-трифосфаты и т.п. Фармацевтический или аналитический набор, содержащий такие зонды и/или праймеры, может быть использован в РСК и КТ-РСК, например, (ί) для того, чтобы определить, может ли терапевтический агент (например, соединение формулы (I) или его форма) повышать уровень включения экзона 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2; (ίί) для мониторинга количества мРНК, которая транскрибируется из генов 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2 и содержит экзон 7 8ΜΝ1 и/или 8ΜΝ2, и количества мРНК, которая транскриби- 107 028382 руется из генов δΜΝ1 и/или δΜΝ2 и не содержит экзон 7 δΜΝ1 и/или δΜΝ2, и/или (ΐΐΐ) для мониторинга ответа у индивидуума на терапевтический агент (например, соединение формулы (I) или его форму). В других вариантах осуществления изобретения указанным индивидуумом является человек. В других вариантах осуществления изобретения таким человеком является пациент. В некоторых других вариантах осуществления изобретения таким пациентом является пациент с δΜΑ.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическому набору, содержащему соединение формулы (I) или его форму, в контейнере, и инструкции по применению соединения или его формы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтическому набору, включающему фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы (I) или его форму; фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель; и инструкции по применению указанного набора. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтическому набору, включающему фармацевтическую композицию, содержащую эффективное количество соединения формулы (I) или его формы, фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель; и инструкции по применению указанного набора. В одном из вариантов осуществления изобретения инструкции по применению указанного набора имеют одно, два или более указаний относительно дозы, способа введения, частоты введения и побочных эффектов введения соединения формулы (I) или его формы индивидууму. В других вариантах осуществления изобретения указанным индивидуумом является человек. В других вариантах осуществления изобретения таким человеком является пациент. В некоторых других вариантах осуществления изобретения таким пациентом является пациент с δΜΑ.
Общие методы синтеза
Как описано в настоящем описании, общие методы получения описанных здесь соединений формулы (I) или их форм представляют собой стандартную хорошо известную методику синтеза. Многие исходные вещества являются коммерчески доступными, или они могут быть получены методами, известными специалистам в данной области. Описанные здесь схемы синтеза включают множество стадий проведения реакций, каждая из которых, сама по себе, является независимой и может быть осуществлена отдельно или в комбинации с любой предшествующей или последующей стадией(-ями). Другими словами, в настоящей заявке отдельно рассматривается осуществление каждой отдельной стадии реакции указанной схемы синтеза.
Схема Α
Описанные здесь соединения формулы (I), где К2 представляет собой необязательно замещенную моноциклическую или бициклическую гетероциклическую, арильную или гетероарильную кольцевую систему, получают, как показано ниже на схеме Α.
Соединение Α1 (где X представляет собой различные реакционноспособные группы, которые используют для введения множества заместителей с функциональной группой К1 посредством реакции взаимодействия подходящих исходных веществ с соединением Α1 или последующей реакции взаимодействия с соединением Α3 или соединением Α4 с применением методов, известных специалистам в данной области) подвергают реакции взаимодействия с альдегидом, то есть, с соединением Α2, в присутствии основания (такого как ΚΟΠ и т.п.) и подходящего растворителя (такого как этанол и т.п.), а затем полученное соединение подвергают альдольной конденсации с получением соединения Α3. Соединение Α3, в присутствии катализатора (такого как иод и т.п.) и подходящего растворителя (такого как ДМСО и т.п.), подвергают реакции циклизации с получением соединения Α4.
Схема В
Описанные здесь соединения формулы (I), где К2 представляет собой необязательно замещенную бициклическую гетероарильную кольцевую систему, получают, как показано ниже на схеме В.
Соединение В1 (где X определен выше) подвергают реакции взаимодействия с необязательно замещенным анилином, то есть, с соединением В2 (где Υ представляет собой подходящую реакционноспособную группу, такую как ΟΠ, ΝΙΙ2, δΐ I и т.п.) в подходящем растворителе (таком РРΑ и т.п.), с получением соединения В3.
Схема С
- 108 028382
Описанные здесь соединения формулы (I), где К2 представляет собой необязательно замещенную моноциклическую или бициклическую гетероциклильную или гетероарильную кольцевую систему, получают, как показано ниже на схеме С.
Карбоновую кислоту, то есть, соединение В1, подвергают реакции взаимодействия с подходящим амином (таким как Ν, О-диметилгидроксиламин и т.п.) в присутствии реагента сочетания (такого как СО! и т.п.) в подходящем растворителе (таком как БСМ и т.п.) с получением амида Вейнреба, то есть, соединения С1. Амид С1 обрабатывают подходящим реагентом Гриньяра (таким как бромид метилметилмагния и т.п.) в подходящем растворителе (таком как ТГФ и т.п.) с получением соединения С2. αметильная группа соединения С2 может быть подвергнута селективному бромированию соответствующим бромирующим реагентом (таким как Вг2 или ΝΒ8 и т.п.) с получением соединения С3. Соединение С3 подвергают реакции взаимодействия с необязательно замещенной моноциклической гетероциклильной или гетероарильной кольцевой системой, то есть, с соединением С4 (где термин Не! означает амидин-подобную молекулу, такую как, но не ограничивающуюся ими, 2-аминопиридин, 2-аминопиримидин, 4-аминопиримидин, 2-аминопиразин, 3-аминопиридазин, 2-аминотиазол, 4-аминотиазол и т.п.), с получением соединения С5.
Конкретные примеры синтеза
Для более подробного описания и лучшего понимания настоящего изобретения ниже представлены неограничивающие примеры, которые приводятся для более полной иллюстрации объема описанных здесь соединений и не должны рассматриваться как какое-либо конкретное ограничение объема изобретения. При этом считается, что варианты описанных здесь соединений, которые могут быть уже известными или будут разработаны в будущем специалистами, компетентными в данной области, также входят в объем описанных и заявленных здесь соединений. В данных примерах проиллюстрировано получение некоторых из этих соединений. Для специалиста в данной области будет очевидно, что методы, описанные в этих примерах, представляют собой технологию, уже описанную специалистами и с успехом применяемую на практике для осуществления синтеза соединений, и такая технология включает предпочтительные способы практического синтеза. Однако в соответствии с описанием, приведенным в настоящей заявке, для специалиста в данной области будет очевидно, что в описанные здесь конкретные методы могут быть внесены изменения, в результате чего могут быть получены подобные или аналогичные результаты, не выходящие за рамки объема и сущности настоящего изобретения.
Кроме того, совершенно очевидно, что в нижеследующих примерах соединений согласно изобретению, если это не оговорено особо, все числа, выражающие количество ингредиентов, условия реакции, экспериментальные данные и т.п., используемые в описании заявки и в формуле изобретения, могут быть изменены, на что указывает слово приблизительно. В соответствии с этим, все такие числа представляют собой приблизительные величины и могут варьироваться в зависимости от свойств, которые желательно получить посредством проведения реакции или использования различных экспериментальных условий. Поэтому, в пределах экспериментальной репродуцируемости, термин приблизительно, относящийся к полученным данным, означает интервал данных, которые могут варьироваться в пределах стандартного отклонения от среднего. Кроме того, что касается экспериментальных данных, то полученные величины могут округляться, соответственно, как в сторону увеличения, так и в сторону уменьшения полученного значения без потери значащих цифр. При этом, не прибегая ни в коей мере к попытке ограничить применение доктрины эквивалентов по отношению к заявленному объему настоящего изобретения, авторы лишь отмечают, что каждый численный параметр должен быть интерпретирован в зависимости от числа значащих цифр и метода округления, применяемого специалистами.
Хотя численные интервалы и параметры, входящие в широкий объем описания настоящего изобретения, являются приблизительными, однако численные величины, указанные в нижеследующих примерах, были представлены как можно более точно. Тем не менее, любая численная величина по существу содержит некоторые ошибки, неизбежно возникающие в результате стандартного отклонения, присуще- 109 028382 го соответствующим экспериментальным измерениям.
Примеры соединений
Если это не оговорено особо, то сокращения, используемые выше и во всем описании изобретения, имеют нижеследующие , значения:__
Абревиатура Значение
Δ нагревание (в химии) или делеция (в биологии)
АсОН или НОАс уксусная кислота
Ас20 ангидрид уксусной кислоты
Аг аргон
АСЫ ацетонитрил
ΒΙΝΑΡ 2,2'-бис (дифенилфосфино)-1,1'-бинафталин
В(ΟίΡΓ)з триизопропилборат
Вое трет-бутоксикарбонил
Вос20 ди-трет-бутилдикарбонат
ВиОН н-бутанол
°С градусы Цельсия
ΟϋΙ 1,1-карбонилдиимидазол или Ν,Ν'карбонилдиимидазол
(СНО)П или (НСНО) параформальдегид
д/ч/час/часов/мин/ сек день/час(ч, час или часов)/минут(мин)/секунд(сек)
ОачеРНоз 2-дициклогексилфосфино-2'-(Ν,Νдиметиламино)бифенил
ОСЕ 1,2-дихлорэтан
ОСМ дихлорметан (СН2С12)
ϋΙΑϋ диизопропилазодикарбоксилат
ϋΙΕΑ или ϋΙΡΕΑ Ν,Ν-диизопропилэтиламин
ϋΜΑ диметилацетамид
ϋΜΑΡ 4-(диметиламино)пиридин
ΏΜΕ 1,2-диметоксиэтан
ΏΜΕ диметилформамид
ДМСО диметилсульфоксид
ΕϋΟ или ΕϋΟΙ гидрохлорид Ν-(3-диметиламинопропил)-Ν' этилкарбодиимида
ЕООАс этилацетат
ΕΟΟΗ этанол
εο2ο диэтиловый эфир
НСНО формальдегид
ίΡτΙ иодпропан
ЦоЬпРЦоз (2-бифенил)-ди-трет-бутилфосфин
КОАс ацетат калия
КОН гидроксид калия
- 110 028382
ЪАН алюмогидрид лития
ЪС/М5, ЪСМЗ или ЪС-М5 (ЖХ/МС) жидкостная хроматография/массспектроскопия
ЪЪА диизопропиламид лития
ЫНМЪЗ или ЪНМЪЗ бис(триметилсилил)амид лития
МеОН метанол
Ме1 иодметан
Ме-ТНГ 2-метилтетрагидрофуран
Μθ2Ζη диметилцинк
МпО2 диоксид марганца
М5 (МС) масс-спектроскопия
ЫаН гидрид натрия
ЫаНЗ гидросульфид натрия
ЫаНМЪЗ бис(триметилсилил)амид натрия или гексаметилдисилазид натрия
Ыа1 иодид натрия
ЫаОАс ацетат натрия
ЫаОМе метоксид натрия
ΝΒ5 Ν-бромсукцинимид
ΝΜΡ Ν-метилпирролидон
ЯМР ядерный магнитный резонанс
о/п в течение ночи
Ρά палладий
Ρά/С палладий на угле
Ρά(άά3)2 бис(дибензилиденацетон)палладий
Р02(0Ьа)3 или Р020Ьа3 трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0)
Р0С12(РИСЫ)2 транс-бис(бензонитрил)дихлорпалладий(II)
- 111 028382
ΡάΟ12 (άρρ£) , ΡάΟ12άρρ£ или Ρά (άρρ£) С12 [1,1-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II)
Ρά(ΟΑο)2 ацетат палладия(II)
Ρά (РРЬ3) 4 или Ρά(ΡΗ3Ρ) 4 тетракис(трифенилфосфин)палладий(0)
Ρά (РРЬз) 2С12, ΡάΟ12 (РРЬ3) 2 или ΡάΟ12(РЬ3Р)2 дихлорид бис(трифенилфосфин)палладия(II)
РНВи3ВЕ4 или ЕВи3РНВЕ4 тетрафторборат три-трет-бутилфосфония
РЫ иодбензол
РЫ (ОТРА) 2 [бис(трифторацетокси)иод]бензол
РЬМе толуол
РОС13 фосфорилхлорид
РРЬз трифенилфосфин
РРА полифосфорная кислота
РРТз п-толуолсульфонат пиридиния
фунт/кв.дюйм давление в фунтах/кв.дюйм
РуВОР гексафторфосфат (бензотриазол-1илокси)трипирролидинофосфония
гЕ/НТ (кт/КТ) комнатная температура
5-РЬоз, ЗРЬоз или ЗрЬоз 2-дициклогексилфосфино-2',6'диметоксибифенил
Т3Р ангидрид пропилфосфоновой кислоты
ТЕА, ΕΕ3Ν или ΝΕΕ3 триэтиламин
Т£2О ангидрид трифторуксусной кислоты
ТЕА трифторуксусная кислота
ТНЕ (ТГФ) тетрагидрофуран
ТЪС (ТСХ) тонкослойная хроматография
ТМ5 триметилсилан
ТМ5С1 триметилхлорсилан или триметилсилилхлорид
ТМ5ОК триметилсиланолят калия
Е-Ви трет-бутил
ТзОН, р-ТзОН или рТЗА тозиловая кислота или п-толуолсульфоновая кислота
ХапЕрЬоз 4,5-бис(дифенилфосфино)-9,9диметилксантин
Пример 1. Получение соединения 20
Стадия А. К смеси 1-(5-бром-2-гидроксифенил)этанона (2,15 г, 10 ммоль) и 3,4-диметоксибензальдегида (1,83 г, 11 моль) в этаноле (13 мл) добавляли К0Н (2,24 г, 40 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи, реакционную смесь подкисляли до рН~5 добавлением 1н НС1 при 0°С. Полученный осадок фильтровали и сушили с получением (Б)-1-(5-бром-2- 112 028382 гидроксифенил)-3-(3,4-диметоксифенил)проп-2-ен-1-она. МС: т/ζ 363,1, 365,1 [Μ+Η]+. Неочищенный продукт использовали непосредственно в следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия В. Каталитическое количество иода (103 мг, 0,41 ммоль) добавляли к хорошо перемешанному раствору (Ε)-1-(5-бром-2-гидроксифенил)-3-(3,4-диметоксифенил)проп-2-ен-1-она (3,74 г, 10,3 ммоль) в ДМСО (10 мл) при комнатной температуре. Затем реакционную смесь нагревали при 130°С в течение 2 ч. Во время нагревания, реакционная смесь приобретала темную окраску. После охлаждения смеси до комнатной температуры добавляли насыщенный раствор Ν!2δ203, и смесь перемешивали при комнатной температуре до исчезновения темной окраски. Желтый осадок фильтровали, промывали водой и сушили с получением 6-бром-2-(3,4-диметоксифенил)-4Н-хромен-4-она (2,8 г, 75,3%). МС: т/ζ 361,1, 363,1 [Μ+Η]+.
Стадия С. Смесь 6-бром-2-(3,4-диметоксифенил)-4Н-хромен-4-она (72,2 мг, 0,2 ммоль), 1-Воспиперазина (44,7 мг, 0,24 ммоль), Р§(бЬа)2 (5,75 мг, 0,01 ммоль), δρΓοδ (10,3 мг, 0,025 ммоль) и С§2С03 (91,2 мг, 0,28 ммоль) в толуоле (1 мл) нагревали при 100°С в течение ночи. После удаления наибольшей части толуола путем выпаривания на роторном испарителе, к смеси добавляли эфир, в результате чего выпадал осадок. Полученный осадок фильтровали, промывали водой и сушили. Затем неочищенный продукт очищали хроматографией с 0-2 5% Μβ0Η в СН2С12 с получением трет-бутил-4-(2-(3,4диметоксифенил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата. МС: т/ζ 467,3 [Μ+Η]+.
Стадия Ό. Раствор трет-бутил-4-(2-(3,4-диметоксифенил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1карбоксилата в ΠΗ2Ο2ΠΕΑ (0,5 мл/0,5 мл) перемешивали при 0°С в течение 2 ч. После удаления большей части ТΕΑ и С^С12 путем выпаривания на роторном испарителе, к реакционной смеси добавляли охлажденный льдом насыщенный раствор ΝαΙΙΠΚ Смесь экстрагировали ОТ2С12. Органический слой сушили над Μ§δ04 и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (48,4 мг, 52% за 2 стадии). Температура плавления: 177-179°С; МС: т/ζ 367,1 [Μ+Η]+.
Ή-ЯМР (500 МГц, ДМСОЧ): δ 7,67-7,70 (2Н, м), 7,59 (1Н, д, 1=2,1 Гц), 7,54 (1Н, дд, 1=3,2 Гц, 9,5 Гц), 7,30 (1Н, д, 1=3,0 Гц), 7,13 (1Н, д, 1=8,8 Гц), 6,99 (1Н, с), 3,89 (3Η, с), 3,85 (3Η, с), 3,11-3,13 (4Н, м), 2,85-2,87 (4Н, м).
Как показано ниже в табл. 1, рассматриваемые здесь дополнительные соединения могут быть получены в соответствии с примером 1 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакций.
Пример 2. Получение соединения 8
Стадия А. Как описано на стадии А примера 1, после проведения реакции взаимодействия 1-(5бром-2-гидроксифенил)этанона (1,23 г, 5,7 ммоль), имидазо[1,2-а]пиридин-2-карбальдегида (836,4 мг, 5,7 моль) и Κ0Η (1,28 г, 22,9 ммоль) в этаноле (7,4 мл) получали (Г)-1-(5-бром-2-гидроксифенил)-3(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)проп-2-ен-1-он (2,0 г, 100%). МС: т/ζ 343,1, 345,1 [Μ+Η]+.
Стадия В. Как описано на стадии В примера 1, после проведения реакции взаимодействия (Ε)-1-(5бром-2-гидроксифенил)-3-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)проп-2-ен-1-она (2,0 г, 5,72 ммоль) и иода (58,1 мг, 0,23 ммоль) в ДМСО (10 мл), и после нагревания при 100°С в течение ночи получали 6-бром-2(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-он (1,7 г, 87%). МС: т/ζ 341,1, 343,1 [Μ+Η]+.
Стадия С. Как описано на стадии С примера 1, после проведения реакции взаимодействия 6-бром-2(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она (68,2 мг, 0,2 ммоль), 1-Вос-пиперазина (44,7 мг, 0,24 ммоль), РП(ПЬа)2 (5,75 мг, 0,01 ммоль), δρΓοδ (10,3 мг, 0,025 ммоль) и Сδ2С03 (91,2 мг, 0,28 ммоль) в толуоле (1 мл) получали трет-бутил 4-(2-(имидазо [1,2-а]пиридин-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин1-карбоксилат, МС: т/ζ 446,4 [Μ+Η]+.
Стадия Ό. Как описано на стадии Ό примера 1, после проведения реакции взаимодействия третбутил-4-(2-(имидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1 -карбоксилата и С^СЦ/ ТРЛ (0,5 мл/0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение (17,2 мг, 25% за 2 стадии). Температура плавления: 207-211°С; МС: т/ζ 347,2 [Μ+Η]+. Л-ЯМР (500 МГц, (Τ):0Ι)ι : δ8,56 (1Н, с), 8,51 (1Н, д,
- 113 028382
1=6,9 Гц), 7,61-7,64 (2Н, м), 7,57 (1Н, дд, 1=3,2 Гц, 9,2 Гц), 7,51 (1Н, д, 1=3,2 Гц), 7,41-7,44 (1Н, м), 7,05 (1Н, с), 7,01 (1Н, т, 1=6,9 Гц), 3,26-3,28 (4Н, м), 3,04-3,06 (4Н, м).
Как показано ниже в табл. 1, рассматриваемые здесь дополнительные соединения могут быть получены в соответствии с примером 2 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакций.
Пример 3. Получение соединения 76
Стадия А. Как описано на стадии А примера 1, после проведения реакции взаимодействия 1-(5бром-2-гидроксифенил)этанона (215,1 мг, 1 ммоль), 4-метилтиазол-2-карбальдегида (139,9 мг, 1,1 ммоль) и КОН (228 мг, 4 ммоль) в этаноле (1,3 мл) получали (Е)-1-(5-бром-2-гидроксифенил)-3-(4-метилтиазол2-ил)проп-2-ен-1-он (86,7 мг, 27%), МС: т/ζ 324,0, 326,0 |Μ+Π|'.
Стадия В. Как описано на стадии В примера 1, (Е)-1-(5-бром-2-гидроксифенил)-3-(4-метилтиазол-2ил)проп-2-ен-1-он (86,7 мг, 0,27 ммоль) и иод (2,74 мг, 0,011 ммоль) нагревали в ДМСО (1 мл) при 100°С в течение 3 ч и получали 6-бром-2-(4-метилтиазол-2-ил)-4Н-хромен-4-он (30 мг, 34,6%). МС: т/ζ 322,0, 324,0 [Μ·+Н]+.
Стадия С. Как описано на стадии С примера 1, после проведения реакции взаимодействия 6-бром-2(4-метилтиазол-2-ил)-4Н-хромен-4-она (24,5 мг, 0,08 ммоль), 1-Вос-пиперазина (17 мг, 0,09 ммоль), Рй(йЪа)2 (2,2 мг, 0,004 ммоль), δρΗοδ (3,9 мг, 0,01 ммоль) и С§2СО3 (34,6 мг, 0,11 ммоль) в толуоле (1 мл) получали трет-бутил-4-(2-(4-метилтиазол-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилат.
Стадия Ό. Как описано на стадии Ό примера 1, после проведения реакции взаимодействия третбутил-4-(2-(4-метилтиазол-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата и СН2С12/ТГЛ (0,5 мл/0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение (12 мг, 49,6% за 2 стадии). Температура плавления: 179-182°С; МС: т/ζ 328,1 [Ы+Н]+ . 1Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-^): δ 7,76 (1Н, с), 7,65 (1Н, д, 1=9,3 Гц), 7,56 (1Н, дд, 1=3,1 Гц, 9,3 Гц), 7,31 (1Н, д, 1=3,1 Гц), 6,90 (1Н, с), 3,13-3,15 (4Н, м), 2,85-2,87 (4Н, м), 2,50 (3Н, с).
Пример 4. Получение соединения 32
Стадия А: РРА (~1 мл) добавляли к смеси 6-бромхромон-2-карбоновой кислоты (269 мг, 1 ммоль) и 2-аминотиофенола (150,2 мг, 1,2 ммоль). Смесь нагревали при 77°С в течение ночи. К реакционной смеси добавляли воду, и полученный осадок фильтровали и сушили. Затем неочищенный продукт очищали хроматографией с 0-6% ЕЮЛс в СН2С12 с получением 2-(бензо[й]тиазол-2-ил)-6-бром-4Н-хромен-4-она (79 мг, 22%). МС: т/ζ 358,0, 360,0 [Ы+Н]+.
Стадия В. Как описано на стадии С примера 1, после проведения реакции взаимодействия 2(бензо[й]тиазол-2-ил)-6-бром-4Н-хромен-4-она (71,6 мг, 0,2 ммоль), 1-Вос-пиперазина (44,7 мг, 0,24 ммоль), Рй(йЪа)2 (5,75 мг, 0,01 ммоль), δρΗοδ (10,3 мг, 0,025 ммоль) и С§2СО3 (91,2 мг, 0,28 ммоль) в толуоле (1 мл) получали трет-бутил-4-(2-(бензо[й]тиазол-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1карбоксилат. МС: т/ζ 464,3 [Ы+Н]+.
Стадия С. Как описано на стадии Ό примера 1, после проведения реакции взаимодействия трет- 114 028382 бутил-4-(2-(бензо[б]тиазол-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата и СН2С12/ТРΑ (0,5 мл/0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение (59,1 мг, 81% за 2 стадии). Температура плавления: 250-254°С; МС: т/ζ 364,2 |Μ+ΙΙ|' . 1Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): δ 8,31 (1Н, д, 1=7,9 Гц), 8,22 (1Н, д, 1=8,3 Гц), 7,72 (1Н, д, 1=9,2 Гц), 7,67 (1Н, т, 1=7,7 Гц), 7,60-7,63 (2Н, м), 7,33 (1Н, д, 1=2,9 Гц), 7,14 (1Н, с), 3,15-3,17 (4Н, м), 2,85-2,87 (4Н, м).
Как показано ниже в табл. 1, рассматриваемые здесь дополнительные соединения могут быть получены в соответствии с примером 4 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакций.
Пример 5. Получение соединения 28
Стадия А. К раствору 6-бромхромон-2-карбоновой кислоты (2,69 г, 10 ммоль) в СН2С12 (10 мл) добавляли 1,1-карбонилдиимидазол (1,95 г, 12 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 45°С в течение 5 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли НС1-соль Ν,Θ-диметилгидроксиламина (1,46 г, 15 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После удаления СН2С12 к смеси добавляли эфир. Полученный осадок фильтровали и тщательно промывали водой с получением 6-бром-№-метокси-№-метил-4-оксо-4Н-хромен-2-карбоксамида (2,3 г, 73,7%). МС: т/ζ 312,1, 314,1 [Μ+Н^.
Стадия В. К раствору 6-бром-№-метокси-№-метил-4-оксо-4Н-хромен-2-карбоксамида (3,58 г, 11,5 ммоль) в ТГФ (10 мл) при 0°С по каплям добавляли бромид метилмагния (3 М в диэтиловом эфире, 4,6 мл, 13,8 ммоль). После перемешивания при 0°С в течение 1,5 ч добавляли насыщенный Ν^Ο, и смесь экстрагировали СН2С12. Органический слой концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией с 14-63% СН2С12 в гексанах с получением 2-ацетил-6-бром-4Н-хромен-4-она (1,1 г, 36%). МС: т/ζ 267,1, 269,1 [Μ+Нф.
Стадия С. К раствору 2-ацетил-6-бром-4Н-хромен-4-она (542 мг, 2,03 ммоль) в СНС12 (2 мл) добавляли Вг2 (324,4 мг, 2,03 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 ч при комнатной температуре. После удаления СН2С12 и избытка Вг2, к смеси добавляли эфир. Полученный осадок фильтровали, промывали насыщенным раствором №ПС03 и сушили с получением 6-бром-2-(2-бромацетил)-4Нхромен-4-она, который использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия Ό. К раствору 6-бром-2-(2-бромацетил)-4Н-хромен-4-она (неочищенный продукт стадии С, 415,2 мг, 1,2 ммоль) в ΕΐΘН (2 мл) добавляли 2-амино-4-метилпиридин (259 мг, 2,4 ммоль), и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 1 ч. После удаления ΕΐΘН при пониженном давлении, к смеси добавляли эфир. Полученный осадок фильтровали, промывали насыщенным раствором №11С03 и водой, а затем сушили. Остаток очищали хроматографией с 0-33% ΕΐΘΑс в СН2С12 с получением 6-бром-2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она (216,6 мг, 50,8%). МС: т/ζ 355,0, 357,0 [Μ+НГ.
Стадия Е. Как описано на стадии С примера 1, после проведения реакции взаимодействия 6-бром-2(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она (56,6 мг, 0,16 ммоль), 1-Вос-пиперазина (44,7 мг, 0,24 ммоль), Рд(бЬа)2 (5,75 мг, 0,01 ммоль), 8рйо8 (10,3 мг, 0,025 ммоль) и С82С03 (91,2 мг, 0,28 ммоль) в толуоле (1 мл) получали трет-бутил-4-(2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил) пиперазин-1-карбоксилат (56,4 мг, 77%). МС: т/ζ 461,3 [Μ+ЩС
Стадия Р. Как описано на стадии Ό примера 1, после проведения реакции взаимодействия третбутил-4-(2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата (56,4 мг, 0,12 ммоль) и СН2С12/ТРΑ (0,5 мл/0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение (43 мг, 97%). Температура плавления: 228-232°С; МС: т/ζ 361,2 [Μ+ЩС 1Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-б6): δ 8,59 (1Н, с), 8,51 (1Н, д, 1=7,1 Гц), 7,59 (1Н, д, 1=9,2 Гц), 7,54 (1Н, дд, 1=3,0 Гц, 9,2 Гц), 7,44 (1Н, с), 7,32 (1Н, д, 1=2,9 Гц), 6,87 (1Н, д, 1=1,5 Гц, 7,0 Гц), 6,85 (1Н, с), 3,12-3,14 (4Н, м), 2,86-2,88 (4Н, м), 2, 38 (3Н, с).
Как показано ниже в табл. 1, рассматриваемые здесь дополнительные соединения могут быть получены в соответствии с примером 5 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и усло- 115 028382 вий проведения реакций.
Пример 6. Получение соединения 72
Стадия А. Как описано на стадии А примера 5, после проведения реакции взаимодействия 6бромхромон-2-карбоновой кислоты (2,69 г, 10 ммоль), 1,1-карбонилдиимидазола (1,95 г, 12 ммоль) и гидрохлорида НО-диметилгидроксиламина (1,46 г, 15 ммоль) в СН2С12 (10 мл) получали 6-бром-Мметокси-М-метил-4-оксо-4Н-хромен-2-карбоксамид (2,3 г, 73,7%). МС: т/ζ 312,1, 314,1 [Μ+Η]+.
Стадия В. Как описано на стадии В примера 5, после проведения реакции взаимодействия 6-бром^метокси-М-метил-4-оксо-4Н-хромен-2-карбоксамида (3,58 г, 11,5 ммоль) и бромида метилмагния (3М в диэтиловом эфире, 4,6 мл, 13,8 ммоль) в ТГФ (10 мл) получали 2-ацетил-6-бром-4Н-хромен-4-он (1,1 г, 36%). МС: т/ζ 267,1, 269,1 [Μ+Η]+.
Стадия С. Как описано на стадии С примера 5, после проведения реакции взаимодействия 2-ацетил6-бром-4Н-хромен-4-она (542 мг, 2,03 ммоль) и Вг2 (324,4 мг, 2,03 ммоль) в СНС13 (2 мл) получали 6бром-2-(2-бромацетил)-4Н-хромен-4-он, который использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия □. Как описано на стадии □ примера 5, после проведения реакции взаимодействия 6-бром2-(2-бромацетил)-4Н-хромен-4-она (неочищенный продукт, 468,2 мг, 1,35 ммоль) и 2-амино-5метилпиразина (147,6 мг, 1,35 ммоль) в Εί0Η (2 мл) получали 6-бром-2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин2-ил)-4Н-хромен-4-он (76 мг, 16%). МС: т/ζ 356,0, 358,0 [Μ+Η]+.
Стадия Е. Как описано на стадии С примера 1, после проведения реакции взаимодействия 6-бром-2(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)-4Н-хромен-4-она (35,6 мг, 0,1 ммоль), 1-Вοс-пиперазина (22,3 мг, 0,12 ммоль), Р0(0Ьа)2 (3 мг, 0,005 ммоль), 8рЬэз (5,2 мг, 0,013 ммоль) и Сз2С03 (45,6 мг, 0,14 ммоль) в толуоле (1 мл) получали трет-бутил-4-(2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6ил)пиперазин-1-карбоксилат.
Стадия Е. Как описано на стадии □ примера 1, после проведения реакции взаимодействия третбутил-4-(2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)-4-оксо-4Н-хромен-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата и СН^^/ΤΕΑ (0,5 мл/0,5 мл) получали указанное в заголовке соединение (6,5 мг, 18% за 2 стадии). МС: т/ζ 362,2 [Μ+Η]+. 1Н ЯМР (500 МГц, ДМСОШ6): δ 9,12 (1Н, с), 8,73 (1Н, с), 8,49 (1Н, с), 7,64 (1Н, д, 1=9,1 Гц), 7,57 (1Н, дд, 1=3,1 Гц, 9,3 Гц), 7,34 (1Н, д, 1=3,2 Гц), 6,95 (1Н, с), 3,17-3,19 (4Н, м), 2,91-2,93 (4Н, м), 2,46 (3Η, с).
Как показано ниже в табл. 1, рассматриваемые здесь дополнительные соединения могут быть получены в соответствии с примером 6 путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакций.
В табл. 1 представлены соединения формулы (I) в форме свободного основания, которые могут быть получены и выделены методами, описанными в указанном примере, путем замены соответствующих исходных веществ, реагентов и условий проведения реакций. Кроме того, рассматривается получение любых форм соединения формулы (I), представленного в виде свободного основания, таких как соль, изотополог, стереоизомер, рацемат, энантиомер, диастереомер или таутомер, и такие формы также входят в объем описания изобретения. Если соединение в форме свободного основания не было выделено из солевой формы, то предусматривается, что средний специалист в данной области может провести необходимые реакции в целях получения и выделения такого соединения в форме свободного основания.
Сокращение Соед. означает номер соединения; сокращение Пр. означает номер примера (где * указывает на то, что соответствующий пример получения этого соединения приводится выше), сокращение Т.пл. означает температуру плавления (°С), сокращение МС означает Массспектроскопический пик(-и) т/ζ [Μ+Η]+, [М+2+Н]+, [М-Н]~ или [М+2-Н]-, сокращение Ώ означает разложение/разложенный, сокращение ΌΚ означает степень разложения, сокращение 8 означает мягчение, сокращение ΝΌ указывает на то, что данная величина не была определена, а сокращение ΝΣ указывает на то, что это соединение не было выделено.
- 116 028382
Таблица 1
Пр. Соед. Название Т.пл. мс
1 1 б-(пиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3ил)-4Н-хромен-4-он 177-180 308,2
1 2 6-(4-метилпиперазин-1-ил)-2(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-он Νϋ 322,3
1 3 6- (4-этилпиперазин-1-ил)-2(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-он 140-142 336, 3
1 4 б-[4-(пропан-2-ил)пиперазин-1ил]-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен4-он 148-150 350,3
1 5 6-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-2(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-он 136-138 336, 3
1 б 6- (1,4-диазепан-1-ил)-2(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-он 162-164 322,3
1 7 6-(пиперазин-1-ил)-2-(пиридин-2ил)-4Н-хромен-4-он 170-172 308,1
2* 8 2-(имидазо[1, 2-а]пиридин-2-ил)6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4- он 207-211 347,2
1 9 6-[(ЗК,53)-3,5-диметилпиперазин1-ил]-2-(пиридин-3-ил)-4Нхромен-4-он 148-150 336, 3
1 10 б-(3,З-диметилпиперазин-1-ил)-2(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-он 140-142 336, 3
1 11 б-[(ЗК)-З-метилпиперазин-1-ил]2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-он 148-150 322,1
1 12 6-(4-метилпиперазин-1-ил)-2(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-он 150-152 322,3
1 13 6-[(ЗК,53)-3,5-диметилпиперазин1-ил]-2-(пиридин-2-ил)-4Нхромен-4-он 166-168 336, 3
1 14 6- (1,4-диазепан-1-ил)-2(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-он 170-172 322,3
1 15 б-[(ЗК)-З-метилпиперазин-1-ил]2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-он 140-142 322,3
2 16 2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)6-[(ЗК)-З-метилпиперазин-1-ил]4Н-хромен-4-он 210-215 361,3
2 17 6-[(ЗК,53)-3,5-диметилпиперазин- 1- ил]-2-(имидазо[1,2-а]пиридин- 2- ил)-4Н-хромен-4-он 208-210 375, 3
- 117 028382
2 18 6-(1,4-диазепан-1-ил)-2(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Нхромен-4-он 198-200 361,3
2 19 2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)6-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)4Н-хромен-4-он 188-190 375, 3
1* 20 2-(3,4-диметоксифенил)-6(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он 177-179 367,1
1 21 2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4метилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен4-он 184-186 381,3
1 22 2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4этилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4- он 188-190 395, 3
1 23 2- (3,4-диметоксифенил)-6-[ (ЗН) - 3- метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 181-183 381,2
1 24 2-(3,4-диметоксифенил)-6[(ЗН,53)-3,5-диметилпиперазин-1ил]-4Н-хромен-4-он 206-208 395, 3
1 25 6- (1,4-диазепан-1-ил)-2-(3,4диметоксифенил)-4Н-хромен-4-он 152-154 381,3
1 26 2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Нхромен-4-он 106-108 395, 3
1 27 2-(3,4-диметоксифенил)-6-(3,3диметилпиперазин-1-ил)-4Нхромен-4-он 108-110 395, 3
5* 28 2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Нхромен-4-он 228-232 361,2
5 29 2-(7-метилимидазо[1,2-а]пиридин2-ил)-6-[(ЗН)-3-метилпиперазин1-ил]-4Н-хромен-4-он 150-155 375, 3
5 30 6-[(ЗН,53)-3,5-диметилпиперазин1-ил]-2-(7-метилимидазо[1,2— а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-он 102-104 389, 4
1 31 2- (3,4-диметоксифенил)-6-[ (33) - 3- метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 172-174 381,3
- 118 028382
4 * 32 2- (1,З-бензотиазол-2-ил)-6(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он 250-254 364,2
4 33 2- (1,З-бензотиазол-2-ил)-6[(ЗК)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 142-144 378,3
4 34 2- (1,З-бензотиазол-2-ил)-6[(ЗК,53)-3,5-диметилпиперазин-1ил]-4Н-хромен-4-он 200-202 392,2
4 35 2- (1,З-бензотиазол-2-ил)-6-(4метилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен4-он 215-220 378,3
4 36 2- (1,З-бензотиазол-2-ил)-6[ (33)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 140-142 378,3
1 37 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-6(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он 178-180 355, 2
1 38 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-6[(33)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 100-102 369, 2
1 39 6-[(ЗК,53)-3,5-диметилпиперазин1-ил]-2-(З-фтор-4-метоксифенил)4Н-хромен-4-он 180-182 383, 3
1 40 2-(З-фтор-4-метоксифенил)-6[(ЗК)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 110-112 369, 2
1 41 2-(4-этоксифенил)-6-(пиперазин1-ил)-4Н-хромен-4-он 180-182 351,2
1 42 2-(4-этоксифенил)-6-[ (33)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен4-он 93-94 365, 3
1 43 6-[(ЗК,53)-3,5-диметилпиперазин1-ил]-2-(4-этоксифенил)-4Нхромен-4-он 138-140 379, 2
1 44 2-(4-этоксифенил)-6-[(ЗК)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен4-он 92-94 365, 3
1 45 2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-б(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он 130-132 385, 2
- 119 028382
1 46 2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6[ (33)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 179-181 399, 2
1 47 6-[(ЗК,53)-3,5-диметилпиперазин1-ил]-2-(2-фтор-4,5диметоксифенил)-4Н-хромен-4-он 164-166 413,2
1 48 2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6[(ЗК)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 180-182 399, 2
1 49 6-(пиперазин-1-ил)-2-[4-(пропан2-илокси)фенил]-4Н-хромен-4-он 126-128 365, 2
1 50 6-[(33)-З-метилпиперазин-1-ил]2-[4-(пропан-2-илокси)фенил]-4Нхромен-4-он 128-130 379, 2
1 51 2-(4-метокси-З-метилфенил)-6(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он 98-100 351,2
1 52 2-(4-метокси-З-метилфенил)-6[(33)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 174-176 365, 2
1 53 6-[(ЗК,53)-3,5-диметилпиперазин1-ил]-2-(4-метокси-Зметилфенил) -4Н-хромен-4-он 186-188 379, 2
1 54 2-(4-метокси-З-метилфенил)-6[(ЗК)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 164-166 365, 8
1 55 2-(6-метоксипиридин-З-ил)- 6(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он 165-170 338,7
1 56 2-(6-метоксипиридин-З-ил)- 6[(33)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 196-200 352,3
1 57 2-(6-метоксипиридин-З-ил)- 6[(ЗК)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 198-200 352,2
1 58 2-(З-хлор-4-метоксифенил)-6(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он 145-150 371,2
1 59 2-(З-хлор-4-метоксифенил)-6[(33)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 172-174 385, 2
- 120 028382
1 60 2-(З-хлор-4-метоксифенил)-6[(ЗК,53)-3,5-диметилпиперазин-1ил]-4Н-хромен-4-он 176-178 399, 2
1 61 2-(З-хлор-4-метоксифенил)-6[(ЗК)-З-метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 170-172 385, 2
1 62 2-(4-метоксифенил)-6-(пиперазин1-ил)-4Н-хромен-4-он 166-170 337,1
1 63 2-(4-метоксифенил)-6-[(33)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен4-он 155-160 351,2
1 64 6-(пиперазин-1-ил)-2-[4(трифторметокси)фенил]-4Нхромен-4-он 146-148 391,0
1 65 6-[(33)-З-метилпиперазин-1-ил]2-[4-(трифторметокси)фенил]-4Нхромен-4-он 138-140 405, 1
1 66 2- (3-фторфенил)-6-(пиперазин-1ил)-4Н-хромен-4-он 150-152 325, 0
1 67 6-(пиперазин-1-ил)-2-[3(трифторметил)фенил]-4Н-хромен4-он 174-176 375, 0
1 68 2-[4-метокси-Зтрифторметокси)фенил]-6(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он 104-106 421,0
1 69 2-[4-метокси-З(трифторметил)фенил]-6(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он 128-132 405, 1
1 70 2-[4-метокси-З- трифторметокси)фенил]-6-[(33)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен4-он 142-146 435, 1
1 71 2-[4-метокси-З- (трифторметил)фенил]-6-[(33)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен4-он 182-184 419, 1
6* 72 2-(6-метилимидазо[ 1,2-а]пиразин2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Нхромен-4-он Νϋ 362,2
- 121 028382
6 73 2-(6-метилимидазо[ 1,2-а]пиразин2-ил)-6-[(33)-3-метилпиперазин1-ил]-4Н-хромен-4-он 212-216 376, 1
1 74 2- (5-фторпиридин-З-ил)-6(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он 182-184 326, 0
1 75 2- (5-фторпиридин-З-ил)-6-[(33)- 3- метилпиперазин-1-ил]-4Нхромен-4-он 168-172 340,4
3* 76 2-(4-метил-1,З-тиазол-2-ил)-6(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он 179-182 328,1
1 77 2- (3-фторфенил)-6-[ (33)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен4-он 170-172 339, 2
1 78 6- [ (33)-З-метилпиперазин-1-ил]2-[3-(трифторметил)фенил]-4Нхромен-4-он 150-152 389, 2
1 79 2- (3,5-дифторфенил)-6(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-он 180-190 343, 1
1 80 2- (3,5-дифторфенил)-6-[ (33)-3метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен4-он 175-178 357,1
или их соль, изотополог, стереоизомер, рацемат, энантиомер, дистереомер или таутомер. Биологические примеры.
Для более подробного описания и лучшего понимания настоящего изобретения ниже представлены неограничивающие примеры, которые приводятся для более полной иллюстрации объема описанных здесь соединений и не должны рассматриваться как какое-либо конкретное ограничение объема изобретения. При этом считается, что варианты описанных здесь соединений, которые могут быть уже известными или будут разработаны в будущем специалистами, компетентными в данной области, также входят в объем описанных и заявленных здесь соединений. В данных примерах проиллюстрировано тестирование некоторых описанных здесь соединений ш у1уо и/или ш У11го и продемонстрирована целесообразность использования этих соединений для лечения 8МА путем повышения уровня включения экзона 7 гена 8М\2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8М\2. Соединения формулы (I) повышают уровень включения экзона 7 8Υ1Ν2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8МШ, и повышают уровни белка 8тп, продуцируемого из гена 8МШ, и поэтому они могут быть использованы для лечения 8МА у человека, нуждающегося в этом.
Пример 1. Конструирование минигена 8МШ.
Получение конструкций минигена.
ДНК, соответствующую области гена 8МШ, начинающейся от 5'-конца экзона 6 (АТААТТССССС) (8ЕР ГО ΝΟ: 14) и заканчивающейся остатком нуклеиновой кислоты 23 экзона 8 (САОСАС) (8ЕР ГО ΝΟ: 15), амплифицировали посредством РСК с использованием следующих праймеров:
Прямой праймер:
' -СССССАТССАТААТТСССССАССАССТС-3 ’ (8Ер ΝΟ: 16) и
Обратный праймер:
5т-СССССАТСССТССТССТСТАТСССАССА-Зт (8Ер ю ΝΟ: 17).
5'-конец каждого праймера конструировали для присоединения сайта распознавания рестриктирующей эндонуклеазой ВатШ у 5'-конца экзона 6 (ООАТСС) (8ЕР ГО ΝΟ, 18) и 3'-конца за 23 нуклеотидом экзона 8. С использованием сайтов распознавания рестриктирующей эндонуклеазой ВатШ, РСКфрагмент клонировали в производное исходного вектора ρс^NА3.1/Нуд^о, который был модифицирован, как описано в публикации заявки на патент США +820051)048549.
Новые иТК присоединяли к модифицированному вектору с использованием рестрикционных НтДШ- и ВатШ-сайтов, включающих 5ГОЕО иТК:
’ -ТАССТТСТТАССССТАСТССАСССТТСССАССАССАТСССАССТСССАССТСААС САТТССТАААСССТС-3 ’ (8Ер ГО ΝΟ: 19), клонированный в модифицированный вектор ροΟΝΆοΊΊ 1удго вместе со старт-кодоном, расположенным выше рестрикционного ВатШ-сайта, и 3' ΌΕΟ иТК:
’ -АТССАААСТАСАССАСТАСССТТССТАССААССССССССТСССАСТСТСАСАСАТ САСТСААСАТАТАТССТСССТААССТАТССТСТАСССАТСТААСТАТТСССТАТСТСТ
- 122 028382
ТАТАССС-3 ’ (8ЕР II) ΝΟ: 20), клонированный в модифицированный вектор ροΌΝΑ3.1/Ηγ§Γθ с использованием сайта распознавания рестриктирующей эндонуклеазой Νού и сайта распознавания рестриктирующей эндонуклеазой λΙτΥ вместе со стоп-кодоном, расположенным непосредственно за рестрикционным Кой-сайтом. Кроме того, ген люциферазы светляка, не содержащий старт-кодона, клонировали в вектор с использованием рестрикционных ВатН- и NοίI-сайтов.
Полученный миниген содержит, в направлении 5' а3': 5'-БЕО ИТК, старт-кодон, шесть дополнительных нуклеотидов, образующих рестрикционный ВатН-сайт, остатки нуклеиновой кислоты экзона 6, остатки нуклеиновой кислоты интрона 6 8ΜΝ2, остатки нуклеиновой кислоты экзона 7 8ΜΝ2, остатки нуклеиновой кислоты интрона 7 8ΜΝ2, и первые 23 остатка нуклеиновой кислоты экзона 8 8ΜΝ2, дополнительные шесть нуклеотидов, образующих рестрикционный ВатН-сайт, и ген люциферазы светляка, не содержащий старт-кодона.
Один адениновый остаток встраивали за нуклеотидом в положении 48 экзона 7 8ΜΝ2 посредством сайт-направленного мутагенеза. Эта конструкция минигена обозначена 8ΜΝ2-Α.
8ΜN2-транскрипты, происходящие от минигенов, содержащих экзоны 6-8 и промежуточные интроны, рекапитулируют сплайсинг эндогенных пре-мРНК этих транскриптов (Богзоп е! а1., Ргос. №11. Αсаά. 8с1. υ.8.Α., 1999, 96 (11), 6307). Была получена конструкция 8ΜΝ2 - ген-репортер альтернативного сплайсинга, содержащая экзоны 6-8 и промежуточные интроны, за которыми следует репортерный ген люциферазы. Признаками сайленсинга этой конструкции являются отсутствие старт-кодона в гене люциферазы и инактивация терминирующего кодона (в открытой рамке считывания, кодирующей белок 8ΜΝ) экзона 7, осуществляемая посредством встраивания нуклеотида за нуклеиновой кислотой в положении 48 экзона 7 и присоединения старт-кодона (ЛТСт) непосредственно выше экзона 6. Один аденин (8ΜΝ2-Α) встраивали за остатком нуклеиновой кислоты в положении 48 экзона 7.
Миниген 8ΜΝ2 конструировали так, чтобы люциферазный репортер находился в одной рамке считывания со старт-кодоном ЛТСт, расположенным непосредственно выше экзона 6, если экзон 7 присутствует в мРНК, и чтобы этот люциферазный репортер не находился в одной рамке считывания со старткодоном ΑΈΘ, расположенным непосредственно выше экзона 6, если экзон 7 8ΜΝ2 был удален во время сплайсинга пре-мРНК. Кроме того, в отсутствие экзона 7, открытая рамка считывания, начинающаяся от старт-кодона ЛТСт, расположенного непосредственно выше экзона 6, содержит стоп-кодон во фрагменте экзона 8 8ΜΝ. Таким образом, в присутствии соединений, которые повышают уровень включения экзона 7 8ΜΝ2 в мРНК, которая транскрибируется из гена 8ΜΝ2, продуцировалось еще больше транскриптов, содержащих экзон 7, и еще больше функциональных репортеров. Это описание схематически проиллюстрировано на фиг. 1.
Последовательность ДНК минигена конструкции 8ΜΝ2-Α 8ЕО ГО ΝΟ: 21 представлена на фиг. 2а. Подпоследовательности минигена 8ΜΝ2-Α проиллюстрированы на фиг. 2Ь.
Пример 2. КТ-цРСК-анализ сплайсинга мРНК минигена 8ΜΝ2 в культивированных клетках.
Анализ на основе количественной РСК с обратной транскриптазой (КТ-цРСК) проводили для количественной оценки уровня полноразмерной мРНК минигена 8ΜΝ2, содержащей экзон 7 8ΜΝ2, в клеточной линии НЕК293Н, стабильно трансфицированной указанным минигеном и обработанной тестируемым соединением.
Материалы
Материал Источник
Клетки НЕК293Н Ы£е Тесйпо1од1ез. 1пс. (прежнее название 1пч1£годеп) Каталожный номер: 11631-017
Буфер для лизиса клеток Се11з-То-С£ Ы£е ТесЬпо1од1ез. 1пс. (прежнее название АррИеЦ В1озуз£етз) Каталожный номер: 4399002
ΏΜΕΜ Ы£е Тесйпо1од1ез, 1пс. (прежнее название Ιηνί-Ьгодеп) Каталожный номер: 11960-044
96-луночные плоскодонные планшеты ВесЕоп Отсктпзоп Каталожный номер: 353072
- 123 028382
Смесь ферментов для КТ-РСК Ьббе ТесПпободбез, 1пс. (прежнее название АррИеб Вбозузбетз) Рагб Νο. : 4388520 (также включенный в набор АдРабП-Ю Кбб Каталожный номер: 4387391)
Буфер для КТ-РСК Ьббе ТесПпободбез, 1пс. (прежнее название АррИеб Вбозузбетз) Рагб Νο. : 4388519 (также включенный в набор АдРабП-Ю Кбб Каталожный номер: 4387391)
Набор для одностадийной КТРСК АдРабП-Ю Ьббе ТесПпободбез, 1пс. (прежнее название АррИеб Вбозузбетз) Каталожный номер: 4387391
Термоячейка Ьббе ТесНпободбез, 1пс. (прежнее название Аррббеб Вбозузбетз) 7900НТ
Протокол. Клетки НЕК293Н, стабильно трансфицированные описанной выше конструкцией минигена 8ΜΝ2-Α (10000 клеток/лунку), высевали в 200 мкл среды для культивирования клеток (ΏΜΕΜ плюс 10% ЕВ8 с 200 мкг/мл гигромицина) в 96-луночных плоскодонных планшетах, и эти планшеты сразу встряхивали для обеспечения соответствующего диспергирования клеток, образующих равномерный монослой. Клетки оставляли по меньшей мере на 4-6 ч для прикрепления. Т естируемые соединения подвергали 3,16-кратному серийному разведению в 100% ДМСО, и строили кривую концентрации по 7 точкам. В каждую лунку, содержащую клетки, добавляли раствор тестируемого соединения (1 мкл, 200х в ДМСО), и планшет инкубировали в течение 24 ч в инкубаторе для культивирования клеток (37°С, 5% С02, относительная влажность 100%). Для каждой концентрации тестируемого соединения получали два репликата. Затем клетки подвергали лизису в буфере для лизиса Се11з-То-С£, и лизат хранили при -80°С.
Полноразмерную мРНК минигена 8ΜΝ2-Α и ΘΆΡΏΗ количественно оценивали с использованием праймеров и зондов, представленных в табл. 3. Прямой 8ΜN-праймер Α (8Ε0 ГО Ν0: 1) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 7 (нуклеотиды 22-40), обратный 8ΜN-праймер Α (8Ε0 ГО Ν0: 2) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в кодирующей последовательности люциферазы светляка, 8ΜN-зонд Α (8Ε0 ГО Ν0: 3) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 7 (нуклеотиды 50-54) и в экзоне 8 (нуклеотиды 1-21). Комбинация из этих трех олигонуклеотидов детектирует только минигены 8ΜΝ1 или 8ΜΝ2 (КТ-дРСК), но не детектирует эндогенные гены 8ΜΝ1 или 8ΜΝ2.
Таблица 3
Праймеры/3онды Последовательность Источник
Прямой 3ΜΝпраймер А ЗЕф Ιϋ N0:1: СААССААССТССТСАСАТТ РТС1
Обратный 3ΜΝпраймер А ЗЕО Ιϋ N0:2: ТСТТТАТСТТТТТССССТСТТС РТС1
Прямой ЗМИ-зонд А ЗЕО Ιϋ N0:3: 6ЕАМААССАСАААТССТСССАТАСАССАСС-ТАМКА РТС1
Прямой Π6ΑΡΌΗзонд ЗЕф Ιϋ N0:4: У1СС6ССТССТСАССАС66СТССТ-ТАМКА ΠΤΙ2
Прямой Π6ΑΡΌΗпраймер ЗЕО Ιϋ N0:5: СААсесАтттеетсстАттес ΠΤΙ2
Обратный ΠΟΑΡΌΗпраймер ЗЕф Ιϋ N0:6: Т САТ СССААСААТАТ С САС Т Т ТАСС ΠΤΙ2
праймеры и зонды, сконструированные РТС Тйегареийсз, ГОс.; доставляемый компанией 1зГе Тесйпо1од1е8, ГОс. (прежнее название ^у^одец).
Прямые и обратные 8ΜN-праймеры использовали в конечных концентрациях 0,4 мкМ. 8ΜN-зонд использовали в конечной концентрации 0,15 мкМ. ΘΑΡΠΗ-праймеры использовали в конечных концентрациях 0,2 мкМ, и зонд в конечной концентрации 0,15 мкМ.
Смесь минигена 8ΜΝ2 и ΘΑΡΠΗ (общий объем 15 мкл) получали путем объединения 7,5 мкл 2х буфера для КТ-РСК, 0,4 мкл 25х смеси ферментов для КТ-РСК, 0,75 мкл 20х смеси ΘΑР^Η-праймера и зонда, 4,0075 мкл воды, 2 мкл 10-кратно разведенного клеточного лизата, 0,06 мкл 100 мкМ прямого 8ΜN-праймера, 0,06 мкл 100 мкМ обратного 8ΜN-праймера и 0,225 мкл 100 мкМ 8ΜN-зонда.
РСК осуществляли при нежеследующих температурах в указанное время: стадия 1: 48°С (15 мин); стадия 2: 95°С (10 мин); стадия 3: 95°С (15 с); стадия 4: 60°С (1 мин); с последующим повторением стадий 3 и 4, всего 40 циклов.
- 124 028382
Каждая реакционная смесь содержит миниген 8МК2-А и наборы ОАРЭН-праймеров/зонд (мультиплексную конструкцию), что позволяет осуществлять одновременное измерение уровней двух транскриптов.
Два сплайсированных продукта 8МШ получали из минигена 8МЫ2. Первый сплайсированный продукт, содержащий экзон 7, соответствующий полноразмерной мРНК 8МК2, обозначен здесь как миниген 8МЫ2 РЬ. Второй сплайсированный продукт, не содержащий экзона 7, обозначен здесь как миниген 8МЫ2 Δ7.
Повышение уровня мРНК минигена 8МЫ2 РЬ по сравнению с уровнем указанной мРНК в клетках, обработанных носителем, используемым в качестве контроля, определяли с использованием данных РСК в реальном времени, используя модифицированный метод ΔΔΟ; (как описано в публикации ЬАак и 8ейтЩдеп, Ме1йоб8, 2001, 25:402-8). Эффективность амплификации (Е) определяли по наклону кривой амплификации для мРНК минигена 8МШ2 РЬ и ОАРЭН, взятых по отдельности. Количество мРНК минигена 8МЫ2 РЬ и ОАРЭН вычисляли как (1+Е)-С1, где С1 представляет собой пороговую величину для каждого ампликона. Количество мРНК минигена 8МЫ2 РЬ нормализовали по количеству ОАРЭН. Нормализованное количество минигена 8МЫ2 РЬ в образцах, обработанных тестируемым соединением, делили на нормализованное количество минигена 8МЫ2 РЬ в клетках, обработанных носителем, и определяли уровень мРНК минигена 8МЫ2 РЬ по отношению к носителю, используемому в качестве контроля.
Результаты. Как показано на фиг. 3, в клетках, обработанных соединением 17 (фиг. 3а) и соединением 38 (фиг. 3Ь), наблюдался повышенный уровень мРНК минигена 8МЫ2 РЬ при низких концентрациях соединений. Эти два тестируемых соединения обеспечивали полное восстановление включения экзона 7 по сравнению с необработанными клетками.
Для описанных здесь соединений формулы (I) или их форм, в табл. 4 представлена ЕС1;5х для продуцирования полноразмерной мРНК 8МЫ2, которая была вычислена по кривой, построенной для каждого тестируемого соединения по 7 значениям концентраций в соответствии с процедурой, описанной в биологическом примере 2. Термин ЕС1;5х для продуцирования полноразмерной мРНК 8МШ2 означает концентрацию тестируемого соединения, которая является эффективной для увеличения количества полноразмерной мРНК 8МШ2 до уровня, который в 1,5 раз превышает уровень указанной мРНК в клетках, обработанных носителем. ЕС1;5х для продуцирования полноразмерной мРНК 8МЫ2, составляющая от >3 мкМ до <30 мкМ, показана одной звездочкой (*), ЕС1;5х, составляющая от >1 мкМ до <3 мкМ, показана двумя звездочками (**), ЕС1;5х, составляющая от >0,3 мкМ до <1 мкМ, показана тремя звездочками (***), ЕС1;5х, составляющая от >0,1 мкМ до <0,3 мкМ, показана четырьмя звездочками (****), и ЕС1;5х, составляющая <0,1 мкМ, показана пятью звездочками (*****).
Таблица 4
Срб ЕС1.5х Срб ЕС1.5х Срб ЕС1.5х
1 *** 28 ** 55 ***
2 * 29 * 56 ***
3 * 30 ** 57 ***
4 * 31 ***** 58 *****
5 * 32 ** 59 *****
6 * 33 ** 60
7 *** 34 *** 61
8 *** 35 ** 62
9 ** 36 *** 63
10 ** 37 64 ***
11 *** 38 ***** 65 **
12 * 39 66
13 ** 40 67
14 * 41 *** 68 ***
15 ** 42 *** 69 ***
16 ** 43 ** 70 ***
17 ** 44 ** 71
18 * 45 ** 72 *****
19 * 46 *** 73 *****
20 ***** 47 ** 74 ***
125 028382
21 *** 48 ** 75 ***
22 *** 49 ** 76 ***
23 50 * * 77 =£ * =5=
24 *** 51 78 >; ϊ£ >{;
25 * 52 79 *****
26 * 53 *** 80
27 *** 54 * * *
Срс1 - соединение
Пример 3. КТ-цРСК-анализ сплайсинга мРНК эндогенного δΜΝ2 в культивированных клетках. Анализ на основе количественной РСК с обратной транскриптазой (КТ-цРСК) проводили для количественной оценки уровней полноразмерной мРНК δΜΝ2 и Δ7 в первичных клетках и в клеточных линиях, содержащих ген δΜΝ2 и обработанных тестируемым соединением.
Материалы
Материал Источник
Клетки человека с ЗМА типа 1 6М03813 (СогФеИ ТпзкФкике)
Буфер для лизиса клеток Се11з-То-Ск Ыке Тескпо1од1ез. АррИеб ВФозузкетз 4399002 1пс. (прежнее название ) Каталожный номер:
БМЕМ Ыке ТескпоТодФез, 1пс. (прежнее название
ТпчФкгодеп) Каталожный номер: 11960-044
9б-луночные
плоскодонные Вескоп Ртсктпзоп Каталожный номер: 353072
планшеты Ыке Тескпо1од1ез, 1пс. (прежнее название
Смесь ферментов АррЫеб ВЫзузкетз ) Рагк Νο.: 4388520
для КТ-РСК (также включенный в набор АдРакк-Ιϋ Κίΐ
Каталожный номер: 4387391)
Ыке Тескпо1од1ез, 1пс. (прежнее название
Буфер для КТ-РСК АррЫеб ВЫзузкетз (также включенный ) Рагк Νο.: 4388519 в набор АдРакк-Ιϋ Κίί
Каталожный номер: 4387391)
Набор для Ыке ТескпоЫдЫз, 1пс. (прежнее название
одностадийной КТ- АррЫеб ВЫзузкетз ) Каталожный номер:
РСК АдРакк-Ы 4387391
Термоячейка Ыке ТескпоЫдЫз, АррЫеб ВЫзузкетз 1пс. (прежнее название ) 7900НТ
Протокол. Клетки пациента с δΜΑ ΟΜ03813 (5000 клеток/лунку) высевали в 200 мкл среды для культивирования клеток (ΌΜΕΜ плюс 10% ΡΒδ) в 96-луночных плоскодонных планшетах, и эти планшеты сразу встряхивали для обеспечения соответствующего диспергирования клеток, образующих равномерный монослой. Клетки оставляли по меньшей мере на 4-6 ч для прикрепления. Тестируемые соединения подвергали 3,16-кратному серийному разведению в 100% ДМСО, и строили кривую концентрации по 7 точкам. В каждую тестируемую лунку добавляли раствор тестируемого соединения (1 мкл, 200х в ДМСО), и в каждую контрольную лунку добавляли 1 мкл ДМСО. Планшет инкубировали в течение 24 ч в инкубаторе для культивирования клеток (37°С, 5% СО2, относительная влажность 100%). Затем клетки подвергали лизису в буфере для лизиса Се11§-То-С1, и лизат хранили при -80°С.
δΜN2-специфические сплайсированные продукты и мРНК САРИН идентифицировали с использованием праймеров и зондов, представленных в табл. 5. Прямой δΜΝ-праймер РЬ В (δΕρ ГО ΝΘ: 7) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 7 (нуклеотиды 32-54) и в экзоне 8 (нуклеотиды 1-4), прямой δΜΝ-праймер Δ7 В (δΚ() ГО ΝΘ: 8) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 6 (нуклеотиды 87-111) и в экзоне 8 (нуклеотиды 1-3), обратный δΜΝ-праймер В (δΕρ ГО ΝΘ: 9) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 8 (нуклеотиды 39-62), а δΜΝ-зонд В (δΕρ ГО ΝΘ: 10) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 8 (нуклеотиды 7-36). Эти праймеры и зонды гибридизуются с нуклеотидными последовательностями, которые являются общими для
- 126 028382 мРНК δΜΝ1 и δΜΝ2 человека. Поскольку клетки пациента с δΜΑ, используемые в примере 3, содержат только ген δΜΝ2, то КТ-цРСК позволяет количественно определить только полноразмерную мРНК δΜΝ2 и мРНК Δ7.
Таблица 5
Праймеры/Зонды Последовательность Источник
Прямой 5ΜΝпраймер ЕЪ В 5Е0 Ю N0:7: ОС Т САСАТ Т СС Т ТАААТ ТААССАСААА РТС1
Прямой 5ΜΝпраймер Δ7 В 5Е0 Ю N0:8: Т ООО ТАТ САТАС Т ООО ТАТ ТАТАТ ССАА РТС1
Обратный 5ΜΝпраймер В 5Е0 Ю N0:9: ТССА6АТСТ6ТСТ6АТС6ТТТСТТ РТС1
Прямой ΞΜΝ-зонд В 5Е0 Ю N0:10: 6ЕАМС Т СССАТАСАССАССАС ТАААТ САСАССАС- ТАИНА РТС1
Прямой ΠΟΑΡϋΗзонд 5Е0 Ю N0:4: У1СССССТССТСАССАССССТССТ-ТАМКА ЬТ12
Прямой ΠΟΑΡϋΗпраймер 5Е0 Ю N0:5: СААСССАТТТССТССТАТТСС ЬТ12
Обратный ΠΟΑΡΌΗ-праймер 5Е0 Ю ΝΟ:б: Т САТ СССААСААТАТ С САС Т Т ТАС С ьтт2
праймеры и зонды, сконструированные РТС ТЬегареийсз, Ш.; доставляемый компанией Ше ТесЬио1о§1е§, Мс. (прежнее название ШПгоуеп).
Прямые и обратные δΜΝ-праймеры использовали в конечных концентрациях 0,4 мкМ. δΜΝ-зонд использовали в конечной концентрации 0,15 мкМ. ΘΑР^Н-праймеры использовали в конечных концентрациях 0,1 мкМ, и зонд в конечной концентрации 0,075 мкМ.
Смесь δΜN-ΘΑР^Н (общий объем 10 мкл) получали путем объединения 5 мкл 2х буфера для КТРСК, 0,4 мкл 25х смеси ферментов для КТ-РСК, 0,25 мкл 20х смеси ΘΑР^Н-праймера и зонда, 1,755 мкл воды, 2,5 мкл клеточного лизата, 0,04 мкл 100 мкМ прямого δΜΝ-праймера РЬ или δΜΝ-праймера Δ7, 0,04 мкл 100 мкМ обратного δΜΝ-праймера и 0,015 мкл 100 мкМ зонда.
РСК осуществляли при нижеследующих температурах в указанное время: стадия 1: 48°С (15 мин); стадия 2: 95°С (10 мин); стадия 3: 95°С (15 с); стадия 4: 60°С (1 мин); с последующим повторением стадий 3 и 4, всего 40 циклов.
Каждая реакционная смесь содержит либо δΜΝ2 РЬ и ΘΑР^Н, либо δΜΝ2 Δ7, и наборы ΟΑΓΩΠпраймеров/зонд (мультиплексную конструкцию), что позволяет осуществлять одновременное измерение уровней двух транскриптов.
Эндогенный ген δΜΝ2 продуцировал две альтернативно сплайсированных мРНК. Полноразмерная мРНК δΜΝ2, содержащая экзон 7, обозначена здесь как δΜΝ2 РЬ. Усеченная мРНК, не содержащая экзона 7, обозначена здесь как δΜΝ2 Δ7.
Повышение уровня мРНК δΜΝ2 РЬ и снижение уровня мРНК δΜΝ2 Δ7 по сравнению с уровнем указанной мРНК в клетках, обработанных носителем, используемым в качестве контроля, определяли по данным РСК в реальном времени, используя модифицированный метод .Л.ЛСТ (как описано в публикации Б1уак и δсЬт^ΐΐ§еη, ΜеίЬоάδ, 2001, 25:402-8). Эффективность амплификации (Ε) определяли по наклону кривой амплификации для δΜΝ2 РЬ, δΜΝ2 Δ7 и ΘΑР^Н, взятых по отдельности. Количество мРНК δΜΝ2 РБ, δΜΝ2 Δ7 и ΟΑΓΩΠ вычисляли как (1+Б)-С\ где С! представляет собой пороговую величину для каждого ампликона. Количество мРНК δΜΝ2 РБ и δΜΝ2 Δ7 нормальзовали по количеству мРНК ОЛ/РЭН. Нормализованное количество мРНК δΜΝ2 РБ и δΜΝ2 Δ7 в образцах, обработанных тестируемым соединением, делили на нормализованное количество мРНК δΜΝ2 РБ и δΜΝ2 Δ7, соответственно, в клетках, обработанных носителем, и определяли уровни мРНК δΜΝ2 РБ и δΜΝ2 Δ7 по отношению к носителю, используемому в качестве контроля.
Результаты. Как показано на фиг. 4, клетки, обработанные повышенными концентрациями соединения 38, содержали значительно большее количество мРНК δΜΝ2 РБ и меньшее количество мРНК δΜΝ2 Δ7 по сравнению с количеством мРНК, наблюдаемым в клетках, обработанных носителем, что указывает на коррекцию альтернативного сплайсинга δΜΝ2.
Пример 4.
Полуколичественный КТ-РСК-анализ в конечной точке на сплайсинг мРНК эндогенного δΜΝ2 в культивированных клетках.
Анализ на сплайсинг, проводимый с помощью РСК с обратной транскриптазой в конечной точке, осуществляли для визуализации и количественной оценки уровней полноразмерной мРНК δΜΝ2 и Δ7 в
- 127 028382 первичных клетках и в клеточных линиях, содержащих ген 8ΜΝ2 и обработанных тестируемым соединением.
Материалы
Материал Источник
Клетки человека с ЗМА типа 1 6М03813 (СогФеП 1пзЫДиДе)
Буфер для лизиса клеток Се11зТо-СЬ Ы£е ТесНпо1одФез. 1пс. (прежнее название АррПеб ВФозузбешз) Каталожный номер: 4399002
ΏΜΕΜ Ы£е ТесНпо1одФез, 1пс. (прежнее название Ιηνί-Ьгодеп) Каталожный номер: 11960-044
96-луночные плоскодонные планшеты Весбоп ϋίο]<ίη5οη Каталожный номер: 353072
Смесь ДНК-полимераз Зирег Μίχ Р1аЫпиш Тац ΗίΕί Ы£е ТесНпо1од1ез, 1пс. (прежнее название 1пч1Дгодеп) Каталожный номер: 11304-016
Набор ферментов для НТ ФЗсгФрб В1оНаб: Каталожный номер: 170-8890
Двойная комбинация 2% агарозных гелей Е с этидийбромидом в 48-луночных планшетах Ы£е ТесЬпо1од1ез, 1пс. (прежнее название 1пч1Дгодеп) Каталожный номер: 68008-021
Задокументированная система гелей Визуализирующая система ДУР Се1 Бос 1Д 310
Протокол. Клетки пациента с 8ΜΑ ΘΜ03813 (5000 клеток/лунку) высевали в 200 мкл среды для культивирования клеток (ΌΜΕΜ плюс 10% РВ8) в 96-луночных плоскодонных планшетах, и эти планшеты сразу встряхивали для обеспечения соответствующего диспергирования клеток, образующих равномерный монослой. Клетки оставляли по меньшей мере на 4-6 ч для прикрепления. Тестируемые соединения подвергали 3,16-кратному серийному разведению в 100% ДМСО, и строили кривую концентрации по 7 точкам. В каждую тестируемую лунку добавляли раствор тестируемого соединения (1 мкл, 200х в ДМСО), и в каждую контрольную лунку добавляли 1 мкл ДМСО. Планшет инкубировали в течение 24 ч в инкубаторе для культивирования клеток (37°С, 5% С02, относительная влажность 100%). Затем клетки подвергали лизису в буфере для лизиса Се11§-То-С£, и лизат хранили при -80°С.
мРНК 8ΜΝ РЬ и Δ7 идентифицировали с использованием праймеров, представленных в табл. 6. Эти праймеры гибридизуются с нуклеотидной последовательностью в экзоне 6 (прямой 8ΜN-праймер С, 8Ε^ ГО Ν0:11) (нуклеотиды 43-63) и в экзоне 8 (обратный 8ΜN-праймер С, 8Ε^ ГО Ν0:12) (нуклеотиды 51-73), которые являются общими для мРНК 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2 человека. Поскольку клетки пациента с 8ΜΑ, используемые в примере 4, содержат только ген 8ΜΝ2, то КТ-РСК позволяет визуализировать и количественно определить только полноразмерную мРНК 8ΜΝ2 и 8ΜΝ2 Δ7.
Таблица 6
Праймер Последовательность Источник
Прямой 3ΜΝ-праймер С ЗЕО Ιϋ N0:11: САТССТСАТССТТТСССААСТ РТС1
Обратный ЗМЫ-праймер С ЗЕО Ιϋ N0:12: СССТТСАСАТТССАСАТСТОТС РТС1
1Праймеры, сконструированные РТС ТЬегареиТсз, Ыс.
Для синтеза кДНК, 5 мкл лизата, 4 мкл 5х реакционной смеси 18спрр 1 мкл обратной транскриптазы и 10 мкл воды объединяли и инкубировали в течение 5 мин при 25°С, а затем 30 мин при 42°С и затем 5 мин при 85°С. Раствор кДНК хранили при -20°С.
Для осуществления РСК в конечной точке, 5 мкл кДНК, 0,2 мкл 100 мкМ прямого праймера, 0,2 мкл 100 мкМ обратного праймера и 22,5 мкл полимеразной смеси 8ире^т^x объединяли в 96-луночном РСК-планшете с половинным объемом лунок. РСК осуществляли при нижеследующих температурах в указанное время: стадия 1: 94°С (2 мин); стадия 2: 94°С (30 с); стадия 3: 55°С (30 с); стадия 4: 68°С (1 мин); с последующим повторением стадий 2-4, всего 33 цикла, и выдерживанием при 4°С.
мкл каждого РСК-образца подвергали электрофоретическому разделению на 2% агарозном Егеле в течение 14 мин, окрашивали реагентами, используемыми для окрашивания на присутствие двухцепочечной ДНК (дцДНК) (например, этидийбромидом), и визуализировали на гелевом визуализаторе.
Результаты. Как видно на фиг. 5, клетки, обработанные повышенными концентрациями соединения 17 (фиг. 5 а) и соединения 38 (фиг. 5Ь), содержали значительно большее количество мРНК 8ΜΝ2 РЬ и
- 128 028382 меньшее количество мРНК δΜΝ2 Δ7, что указывает на коррекцию альтернативного сплайсинга δΜΝ2.
Пример 5. КТ-цРСК-анализ на сплайсинг мРНК δΜΝ2 в тканях животных.
Анализ, проводимый с помощью количественной РСК с обратной транскриптазой (КТ-цРСК), осуществляли для количественной оценки уровней полноразмерной мРНК δΜΝ2 и мРНК Δ7 в тканях мышей, обработанных тестируемым соединением.
Материалы
Материал Источник
Ткани, взятые у ЗМА-мыши с С/С- аллелем ТНе йаскзоп ЪаЬогакогу, штамм Νο: 008714 (В 6.12 9- Зтп1ίια5 (^1/змш)мгръ /
Ткани, взятые у ЗМА-мыши с Δ7 ТНе Баскзоп ЪаЬогакогу, штамм Νο: 005025 (БУВ.Сд-Тд(ЗМЫ2*бе1ба7)4299АЬшЬ Тд (3ΜΝ2 ) 8 9АЬшЬ 5тп1 ίια1ΜΞΝ δ)
Ыке ТесЬпо1од1ез, 1пс. (прежнее название
Ферментная смесь АррИеб В1озузкешз ) Рагк Νο: 4388520
для КТ-РСК (также включенный в набор АдРакЬ-Ιϋ к1к
Каталожный номер: 4387391)
Ыке ТесЬпо1од1ез, 1пс. (прежнее название
Буфер для КТ-РСК АррИеб В1озузкешз (также включенный ) Рагк Νο,: 4388519 в набор АдРакЬ-Ιϋ к1к
Каталожный номер,: 4387391)
Набор для Ыке ТесЬпо1од1ез, 1пс. (прежнее название
одностадийной ОТ- АррЫеб В1озузкешз ) Каталожный номер:
РСК АдРакЬ-Ю 4387391
Мышиные 6ΑΡΏΗпраймеры и зонды Ыке ТесЬпо1од1ез, АррЫеб В1озузкешз 4352339Е 1пс. (прежнее название ) Каталожный номер:
Регент φΙΑζοΙ для лизиса (Ладеп Каталожный номер: 79306
Мини-набор КЫеазу ЫрФб ТФззие Μίηί Κίί ф1адеп Каталожный номер: 74804
Сферы из нержавеющей стали размером 5 мм ф1адеп Каталожный номер: 69989
ТФззиеЬугег II ф1адеп Каталожный номер,: 85300
Термоячейка Ыке ТесЬпо1од1ез, АррЫеб Втозузкешз 1пс, (прежнее название ) 7900НТ
Протокол. δΜΑ-мышей с С/С-аллелем обрабатывали через пероральный зонд два раза в день (ВЮ) в течение 10 дней тестируемыми соединениями, ресуспендированными в 0,5% гидроксипропилметилцеллюлозе (НРМС) и 0,1% Т^ееп-80. Образцы тканей собирали и быстро замораживали для очистки РНК.
Образцы тканей (20-40 мг) гомогенизировали в реагенте для лизиса ^IΑζο1 в течение 2 мин при 20 Гц в Т1§8иеГу§ег II с использованием одной сферы из нержавеющей стали. После добавления хлороформа, гомогенат разделяли на водную и органическую фазы путем центрифугирования. РНК, распределенную по верхней водной фазе, экстрагировали, и добавляли этанол для создания соответствующих условий связывания. Затем образец наносили на центрифужную колонку К№а§у из мининабора К№а§у Μΐηΐ Κΐΐ, где вся РНК связывается с мембраной. РНК элюировали в воде, не содержащей РНКазы, а затем хранили при -20°С, после чего анализировали с помощью КТ-цРСК ТацЫап на термоячейке 7900НТ ТГегтосус1ег. Всю РНК 10-кратно разводили, и 2,5 мкл разведенного образца добавляли к КТ-цРСК-смеси ТацЫап.
Сплайсированные δΜN2-продукты идентифицировали с использованием праймеров и зондов, представленных в табл. 7. Прямой δΜΝ-праймер ГЬ В (δΕ^ ГО Ν0: 7) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзонах 7 и 8, прямой δΜΝ-праймер Δ7 В (δΕ^ ГО Ν0: 8) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзонах 6 и 8, обратный δΜΝ-праймер В (δΕ^ ГО Ν0: 9) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 8, и δΜΝ-зонд В (δΕ^ ГО Ν0: 10) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 8. Эти праймеры и зонды гибридизуются с нуклеотидными последовательностями, которые являются общими для мРНК δΜΝ1 и δΜΝ2 человека. Поскольку клетки пациента с δΜΑ, используемые в примере 5, содержат только ген δΜΝ2, то КТ-цРСК позволяет количественно определить только полноразмерную мРНК δΜΝ2 и мРНК Δ7.
Таблица 7
- 129 028382
Праймеры/Зонды Последовательность Источник
Прямой 5ΜΝпраймер ЕЬ В 3Εζ) ΙΌ N0:7: ОСТ С АСАТ ТОСТ ТАААТТ ААССАСААА РТС1
Прямой 5ΜΝпраймер Δ7 В δΕζ) ΙΌ N0:8: ТСССТАТСАТАСТСССТАТТАТАТССАА РТС1
Обратный δΜΝпраймер В δΕΟ ΙΌ ΝΟ:9: ТССАСАТСТСТСТСАТССТТТСТТ РТС1
Прямой δΜΝ-зонд В δΕΟ ΙΌ N0:10: 6ΕΑΜС Τ С С САТ АСАССАССАС ΤАААТ САСАС САС- ΤΑΜΡΑ РТС1
1Праймеры и зонды, сконструированные РТС ТНегареиНсз, Жс.
Прямые и обратные δΜΝ-праймеры использовали в конечных концентрациях 0,4 мкМ. δΜΝ-зонд использовали в конечной концентрации 0,15 мкМ. Смесь δΜ^ΘΑΓΌΗ (общий объем 10 мкл) получали путем объединения 5 мкл 2х буфера для КТ-РСК, 0,4 мкл 25х смеси ферментов для КТ-РСК, 0,5 мкл 20х смеси ΘΑР^Η-праймера и зонда, 1,505 мкл воды, 2,5 мкл раствора РНК, 0,04 мкл 100 мкМ прямого праймера, 0,04 мкл 100 мкМ обратного праймера и 0,015 мкл 100 мкМ δΜΝ-зонда.
Каждый РСК-цикл осуществляли при нижеследующих температурах в указанное время: стадия 1: 48°С (15 мин); стадия 2: 95°С (10 мин); стадия 3: 95°С (15 с); стадия 4: 60°С (1 мин); с последующим повторением стадий 3 и 4, всего 40 циклов.
Каждая реакционная смесь содержит либо δΜΝ2 РЬ и тΘΑР^Η, либо δΜΝ2 Δ7, и наборы тΘΑР^Η-праймеров/зонд (мультиплексную конструкцию), что позволяет осуществлять одновременное измерение уровней двух транскриптов.
Повышение уровня мРНК δΜΝ2 РЬ и снижение уровня мРНК δΜΝ2 Δ7 по сравнению с уровнем указанной мРНК в тканях животных, обработанных носителем, используемым в качестве контроля, определяли по данным РСК в реальном времени, используя модифицированный метод ААС1. (как описано в публикации Ыуак и δсΗт^Π§еη, ΜеΐΗοάδ, 2001, 25:402-8). Эффективность амплификации (Ε) определяли по наклону кривой амплификации для δΜΝ2 РЬ, δΜΝ2 Δ7 и ΘΑΒΌΗ, взятых по отдельности. Количество δΜΝ2 РЬ, δΜΝ2 Δ7 и ΘΑΒΌΗ вычисляли как (1+Ε)-α, где С1 представляет собой пороговую величину для каждого ампликона. Количество мРНК δΜΝ2 РЬ и δΜΝ2 Δ7 нормальзовали по количеству мРНК ΘΑΒΌΗ. Нормализованное количество мРНК δΜΝ2 РЬ и δΜΝ2 Δ7 в образцах, обработанных тестируемым соединением, делили на нормализованное количество мРНК δΜΝ2 РЬ и δΜΝ2 Δ7, соответственно, в клетках, обработанных носителем, и определяли уровни мРНК δΜΝ2 РЬ и δΜΝ2 Δ7 по отношению к носителю, используемому в качестве контроля.
Пример 6. Полуколичественный КТ-РСК-анализ в конечной точке на сплайсинг мРНК эндогенного δΜΝ2 в тканях животных.
Анализ на сплайсинг, проводимый с помощью РСК с обратной транскриптазой в конечной точке (КТ-РСК), осуществляли для количественной оценки уровней полноразмерной мРНК δΜΝ2 и Δ7 в тканях мышей, обработанных тестируемым соединением.
Материалы
Материал Источник
Ткани, взятые у δΜΑ-мышей с С/С-аллелем ТЬе Даскзоп ЬаЬогаТогу, штамм Νο: 008714 (В6.129- 5ШП1ЁШ5 (5тп1/5МЫ2) МгрЪ /
Ткани, взятые у δΜΑ-мышей с экзоном Δ7 ТЬе Даскзоп ЬаЬогаТогу, штамм Νο: 005025 (ЕУВ.СдТд (ЗМЬ2*с1е1Та7)4299АЬшЬ Тд (5ΜΝ2 ) 8 9АЬшЬ 5тп1ίια1ΜΞ^/^
Набор липидов 01адеп РЫеазу ф1адеп Каталожный номер: 74804
Смесь ДНК-полимераз ЗирегМпх Р1аЫпиш Τβς ΗίΕί ЫТе ТесЬпо1од1ез, 1пс. (прежнее название 1пч1Тгодеп) Каталожный номер: 11304-016
Набор ферментов для РТ ίδοτίρΤ ВпоРаб: Каталожный номер: 1708890
96-луночный РСР-планшет с половинным объемом лунок ТмФп.бес ЕррепбогТ Каталожный номер: 951020389
Двойная комбинация 2% агарозных гелей Е с этидийбромидом в 4 8луночных планшетах ЫТе ТесЬпо1од1ез, 1пс. (прежнее название ЫПгодеп) Каталожный номер: С8008-021
Задокументированная система гелей Визуализирующая система ТДУР Се1 ϋοο ΙΤ 310
- 130 028382
Протокол. 8ΜΑ-мышей с С/С-аллелем обрабатывали через пероральный зонд два раза в день (ВЮ) в течение 10 дней тестируемыми соединениями в 0,5% НРМС и 0,1% Тмееп-80. Образцы тканей собирали и быстро замораживали для очистки РНК.
Образцы тканей (20-40 мг) гомогенизировали в реагенте для лизиса ^IΑζο1 в течение 2 мин при 20 Гц в Т188иеЬу8ег II с использованием одной сферы из нержавеющей стали. После добавления хлороформа, гомогенат разделяли на водную и органическую фазы путем центрифугирования. РНК, распределенную по верхней водной фазе, экстрагировали, и добавляли этанол для создания соответствующих условий связывания. Затем образец наносили на центрифужную колонку К№а8у из мининабора КЫеа8у ΜΦί Κίΐ, где вся РНК связывается с мембраной. РНК элюировали в воде, не содержащей РНКазы, а затем хранили при -20°С.
Сплайсированные 8ΜN2-продукты идентифицировали с использованием праймеров для амплификации, представленных в табл. 8. Эти праймеры гибридизуются с нуклеотидной последовательностью в экзоне 6 (прямой 8ΜN-праймер Ό, 8ЕО ГО Ν0:13) (нуклеотиды 22-46) и в экзоне 8 (обратный 8ΜΝпраймер С, 8ЕО ГО Ν0:12), которые являются общими для мРНК 8ΜΝ1 и 8ΜΝ2 человека.
Таблица 8
Праймер Последовательность Источник
Прямой 3ΜΝ- 5Е<2 Ю ΝΟ: 13: РТС1
праймер ϋ АТАТСТССАСАТТСТСТТСАТСАТС
Обратный 3ΜΝ- ЗЕО Ю N0:12: РТС1
праймер С СССТТСАСАТТССАСАТСТСТС
1Праймеры, сконструированные РТС Тйегареийс8, Шс.
Для синтеза кДНК объединяли 1 мкл раствора РНК (25-50 нг), 4 мкл 5х реакционной смеси 18сг1р1, 1 мкл обратной транскриптазы и 10 мкл воды, и смесь инкубировали в течение 5 мин при 25°С, а затем 30 мин при 42°С и затем 5 мин при 85°С. Раствор кДНК хранили при -20°С.
Для осуществления РСК в конечной точке, 5 мкл кДНК, 0,2 мкл 100 мкМ прямого праймера, 0,2 мкл 100 мкМ обратного праймера и 22,5 мкл полимеразной смеси 8ирегт1х объединяли в 96-луночном РСК-планшете с половинным объемом лунок. РСК осуществляли при нижеследующих температурах в указанное время: стадия 1: 94°С (2 мин); стадия 2: 94°С (30 с); стадия 3: 55°С (30 с); стадия 4: 68°С (1 мин); с последующим повторением стадий 2-4, всего 33 цикла, и выдерживанием при 4°С.
мкл каждого РСК-образца подвергали электрофоретическому разделению на 2% агарозном Егеле в течение 14 мин, окрашивали реагентами, используемыми для окрашивания на присутствие двухцепочечной ДНК (дцДНК) (например, этидийбромидом), и визуализировали на гелевом визуализаторе.
Пример 7. Анализ белка 8тп в культивированных клетках.
Анализ 8тп, проводимый с помощью НТКР (гомогенная флуоресценция с временным разрешением), осуществляли для количественной оценки уровня белка 8тп в фибробластах пациента с 8ΜΑ, обработанных тестируемыми соединениями. Результаты анализа представлены в табл. 9.
Материалы
Материал Источник
Клетки человека с ЗМА типа 1 6М03813 (Сог1е11 1пзР1РиРе)
Смесь ингибиторов протеазы НосПе АррИеб Зс1епсе Каталожный номер: 11836145001
Анти-ЗМЫ 62 В1ие сар С13Ы0 Каталожный номер: 63ΙΡΟ002-3ΜΝ
Анти-ЗМЫ криптат Неб сар С13Ы0 Каталожный номер: 63ΙΡ0002-3ΜΝ
Буфер для разведения 3ΜΝ С13Ы0 Каталожный номер: 63ΙϋΟ002-5ΜΝВиРРег
РМЕМ ЫРе ТесПпо1од1ез, 1пс. (прежнее название 1пч1ргодеп) Каталожный номер: 11960-044
Буфер для лизиса ΗΙΡΑ 20 мМ трис-НС1, рН 7,5, 150 мМ ЫаС1, 1 мМ ΕΏΤΑ, 1% ΝΡ-40, 1% дезоксихолат натрия
Буфер-разбавитель 20 мМ трис-НС1, рН 7,5, 150 мМ ЫаС1
Планшет-ридер ΕηνίΞίοη Регктп Е1тег Мобе! Νο: 2103
Протокол. Клетки оттаивали и культивировали в ^ΜΕΜ-10% РВ8 в течение 72 ч. Затем клетки обрабатывали трипсином, подсчитывали и ресуспендировали до концентрации 25000 клеток/мл в ^ΜΕΜ10% РВ8. Клеточную суспензию высевали при плотности 5000 клеток на лунку в 96-луночном микро- 131 028382 титрационном планшете и инкубировали в течение 3-5 ч. Для получения контрольного сигнала, в три (3) лунки 96-луночного планшета клетки не добавляли, то есть, эти лунки служили в качестве слепого контроля. Тестируемые соединения подвергали 3,16-кратному серийному разведению в 100% ДМСО, и строили кривую концентрации по 7 точкам. В лунки, содержащие клетки, переносили 1 мкл раствора тестируемого соединения, и эти клетки инкубировали в течение 48 ч в инкубаторе для культивирования клеток (37°С, 5% СХК относительная влажность 100%). Образцы с тремя повторностями приготавливали для каждой концентрации тестируемого соединения. Через 48 ч, из лунок удаляли супернатант, и в эти лунки добавляли 25 мкл буфера для лизиса КIРΑ, содержащего ингибиторы протеазы, а затем инкубировали со встряхиванием при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем добавляли 25 мкл разбавителя, после чего в 384-луночный планшет переносили 35 мкл полученного лизата, где каждая лунка содержала 5 мкл раствора антитела (разведение анти-δΜΝ 42 и анти-δΜΝ криптата в буфере для разведения δΜΝ составляло 1:100). Планшет центрифугировали в течение 1 мин для осаждения раствора на дно лунок, а затем инкубировали в течение ночи при комнатной температуре. Флуоресценцию для каждой лунки планшета измеряли при 665 нм и 620 нм на планшет-ридере Εηνΐδΐοη Μи1ΐ^1аЬе1 (Регкш-Е1шег).
Нормализованный флуоресцентный сигнал вычисляли для каждого образца, то есть, для лунок со слепым контролем и для лунок с контролем-носителем путем деления сигнала при 665 нм на сигнал при 620 нм. Нормализацию сигнала проводили из-за возможного гашения флуоресценции, вызываемого матричным эффектом лизата. Величину ΔΙ·' (количество белка δηιη измеряли как процентную величину) для каждой лунки с образцом вычисляли путем вычитания нормализованной средней флуоресценции для лунок со слепым контролем из нормализованной флуоресценции для каждой лунки с образцом, а затем полученную величину делили на нормализованную среднюю флуоресценцию для лунок со слепым контролем, и результат умножали на 100. Величина ΔΙ·' для каждой лунки с образцом представляет собой количество белка δηιη в образцах, обработанных тестируемым соединением. Величину ΔΙ·' для каждой лунки с образцом делили на величину ΔΙ·' для лунок с контролем-носителем в целях вычисления кратного увеличения количества белка δηιη по сравнению с контролем-носителем.
Результаты. Как показано на фиг. 6, фибробласты пациента с δΜΑ типа 1, обработанные соединением 17 (фиг. 6а) и соединением 38 (фиг. 6Ь), обнаруживали дозозависимое повышение уровня экспрессии белка δηιιτ как было оценено в НТКР-анализе δΜΝ.
Для описанных здесь соединений формулы (I) или их форм, в табл. 9 представлена ЕС^5х для экспрессии белка δηιιτ которая была вычислена по кривой, построенной для каждого тестируемого соединения по 7 значениям концентраций в соответствии с процедурой, описанной в биологическом примере 7. Термин ЕС1,5х для экспрессии белка δηιη означает концентрацию тестируемого соединения, которая является эффективной для 1,5-кратного увеличения количества белка δηιη в фибробластах пациента с δΜΑ, по сравнению с количеством, продуцируемым в случае обработки ДМСО-носителем, используемым в качестве контроля. ЕС^5х для экспрессии белка δηιιτ составляющая от >3 мкМ до <10 мкМ, показана одной звездочкой (*), ЕС, 5х составляющая от >1 мкМ до <3 мкМ, показана двумя звездочками (**), ЕС1?5х, составляющая от >0,3 мкМ до <1 мкМ, показана тремя звездочками (***), а ЕСц^, составляющая <0,3 мкМ, показана четырьмя звездочками (****).
Таблица 9
Для соединений формулы (I) или их форм, в таблице 10 представлена максимальная кратность (Ρο14) увеличения количества белка δηιιτ которая была вычислена по кривой, построенной для каждого тестируемого соединения по 7 значениям концентраций в соответствии с процедурой, описанной в биологическом примере 7. Максимально кратное увеличение, составляющее <1,2, показано одной звездочкой (*), кратное увеличение, составляющее от >1,2 до <1,35, показано двумя звездочками (**), кратное увеличение, составляющее от >1,35 до <1,5, показано тремя звездочками (***), кратное увеличение, составляющее от >1,5 до <1,65, показано четырьмя звездочками (****), и кратное увеличение, составляющее >1,65, показано пятью звездочками (*****).
- 132 028382
Срй ГоМ Таблица 10 Сра гош Сра Ро1а
1 * * * 28 ***** 55 **
2 ** 29 *** 56 ***
3 * 30 ** 57 **
4 * 31 ***** 58 ***
5 ** 32 ** 59 ****
6 * 33 ** 60 *****
7 34 *** 61 **
8 35 ** 62 **
9 36 **** 63 ****
10 *** 37 * * * 64 *
11 38 **** 65 *
12 * 39 **** 66 ***
13 *** 40 *** 67 ****
14 * 41 * 68 *
15 42 ** 69 ***
16 ***** 43 * 70 **
17 ***** 44 * 71 ***
18 ***** 45 ** 72
19 ***** 46 **** 73
20 ***** 47 **** 74 ****
21 48 **** 75 ****
22 ***** 49 76 ****
23 50 77 ****
24 ***** 51 *** 78 *****
25 н=*н= 52 *** 79 ***
26 *** 53 ** 80 ****
27 ***** 54 **
Пример 8. Оценка числа гемов (количества 8тп-зависимых ядерных включений).
Уровень белка 8тп непосредственно коррелирует с количеством ядерных включений, также известных как гемы, продуцируемые после окрашивания клетки флуоресцентно меченным анти-8тп антителом (Ьш апб □гсуГизз, ΕΜΒ0 I., 1996, 15:3555). Гемы представляют собой мультибелковые комплексы, образование которых инициируется белком 8тп, и оценку числа гемов проводят для определения уровня белка 8тп в клетке. Как описано в настоящей заявке, оценку числа гемов проводят для количественного определения уровня белка 8тп в фибробластах пациента с 8ΜΑ, обработанных тестируемым соединением.
Материалы
Материал Источник
Клетки человека с ЗМА типа 1 6М03813 (ΟογιθΙΙ 1пзЕ1ЕиЕе)
«Первичное» антитело - клон мышиного анти-ЗМЫ антитела 2В1 31дша Каталожный номер: 32944
«Вторичное» антитело антимышиное антитело А1еха В1иог 555 Ы£е ТесПпо1од1ез, 1пс. (прежнее название Ιηνί-Ьгодеп) Каталожный номер: А21422
Альбумин бычьей сыворотки (ВЗА) 31дта Каталожный номер: А3294
4% параформальдегид Е1есЕгоп М1сгозсору Зс1епсез Каталожный номер: 15710
Бортезомиб ЪСЪаЬз, Каталожный номер: В1408
0,05% Тритон Х-100 31дта Каталожный номер: 93443 (100 мл)
- 133 028382
Заливочная среда противообесцвечивающий реагент РгоЪопд 6ο1ά с ΏΑΡΙ Ы£е ТесЪпо1од1ез, 1пс. (прежнее название 1пч1Ъгодеп) Каталожный номер: Р7481 и Р36935
Стерильные покровные стекла 22x22 #1 ПзЪег Каталожный номер: 12548-В
ΏΜΕΜ Ы£е ТесЪпо1од1ез, 1пс. (прежнее название Ιηνί-Ьгодеп) Каталожный номер: 11960-044
РВЗ Ы£е ТесЪпо1од1ез, 1пс. (прежнее название Ιηνί-Ьгодеп) Каталожный номер: 10010-03
Бесцветный лак для ногтей Торговый знак Неч1оп, Каталожный номер: 1271-76
Флуоресцентный микроскоп Ъе1зз АхочегЪ 135 Ъегзз
Протокол. Клетки оттаивали и инкубировали в ΏΜΕΜ-10% РВ8 в течение 72 ч, после чего эти клетки обрабатывали трипсином, подсчитывали и ресуспендировали до концентрации 100000 клеток/мл в ΏΜΕΜ-10% РВ8. Клеточную суспензию (2 мл) высевали в б-луночный планшет для культивирования клеток, покрытый стерильным покровным стеклом, и инкубировали в течение 3-5 ч. Тестируемые соединения подвергали 3,16-кратному серийному разведению в 100% ДМСО, и строили кривую разведения по 7 точкам. В каждую лунку, содержащую клетки, добавляли 10 мкл раствора тестируемого соединения, и эти клетки инкубировали в течение 48 ч в инкубаторе для культивирования клеток (37°С, 5% СО2, относительная влажность 100%). Образцы с двумя повторностями приготавливали для каждой концентрации тестируемого соединения. Клетки, содержащие ДМСО в конечной концентрации 0,5%, использовали в качестве контроля.
Среду для культивирования клеток подвергали аспирации из лунок, покрытых покровными стеклами, и осторожно промывали три раза холодным РВ8. Клетки фиксировали путем 20-минутного инкубирования при комнатной температуре в параформальдегиде.
Затем клетки два раза промывали холодным РВ8, после чего инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре с 0,05% тритоном Х-100 в РВ8 для сообщения клеткам проницаемости. Затем фиксированные клетки три раза промывали холодным РВ8 и блокировали 10% РВ8 в течение 1 ч. После этого добавляли 60 мкл первичного антитела, разведенного 1:1000 в блокирующем буфере, и смесь инкубировали в течение одного часа при комнатной температуре. Клетки три раза промывали РВ8, и добавляли 60 мкл вторичного антитела, разведенного 1:5000 в блокирующем буфере, и смесь инкубировали в течение одного часа при комнатной температуре. На предметные стекла помещали покровные стекла с помощью заливочной среды и оставляли на ночь для сушки. По бокам покровного стекла наносили лак для ногтей, и предметные стекла хранили в защищенном от света месте. Иммунофлуоресцентное детектирование и подсчет клеток проводили на микроскопе 7е188 Αxονе^ΐ 135 с 63 х Ρ1аη-ΑрοсЪ^οтаΐ, с объективом ΝΑ=1,4. Число гемов подсчитывали на >150 ядрах, а % активации вычисляли с использованием ДМСО и 10 нМ бортезомиба в качестве контроля. Для каждого теституемого соединения, клетки анализировали на всех длинах волн в целях идентификации теституемых соединений с природной флуоресценцией.
Результаты. Как показано на фиг. 7, клетки пациента с 8ΜΑ типа 1, обработанные соединением 38, содержали значительно большее число гемов, чем клетки, обработанные ДМСО.
Пример 9. Анализ белка 8тп в человеческих мотонейронах.
Иммунофлуоресцентную конфокальную микроскопию 8тп проводили для количественной оценки уровня белка 8тп в человеческих мотонейронах, обработанных тестируемыми соединениями.
Протокол. Человеческие мотонейроны, происходящие от клеток 8ΜΑ 1Р8 (ЕЬеЧ е! а1., №Шге, 2009, 457:2770; и ИиЫп е4 а1., ВЫС ВюЬду, 2011, 9:42), обрабатывали тестируемым соединением в различных концентрациях в течение 72 ч. Уровень белка 8тп в клеточном ядре количественно оценивали методом иммунологического окрашивания 8тп и конфокальной флуоресцентной микроскопии, в основном, как описано в публикации ΜакЪο^ΐονа е! а1., ЖШге Сйет1са1 ВюЬду, 2011, 7:544. Уровень белка 8тп в образцах, обработанных соединением, нормализовали по уровню белка в образцах, обработанных носителем, и по полученным данным строили график зависимости от концентрации соединения.
Пример 10. Анализ белка 8тп в тканях животных.
Анализ белка 8тп ΗΤΚΕ проводили для количественной оценки уровня белка 8тп в тканях мыши.
- 134 028382
Материалы
Материал Источник
Ткани, взятые у 5МАмышей с С/С-аллелем ТПе баскзоп ЬаЬогабогу, штамм Νο: 008714 (В 6.129-5тп11т3 <ειαη1/εΜΝ2)Μ]2ρίι / 2)
Ткани, взятые у 5МА- мышей с экзоном Δ7 ТПе баскзоп ЬаЬогакогу, штамм Νο: 005025 (ЕУВ.СдТд(ЗМБ2*бе1£а7)4299АПшЬ Тд (3ΜΝ2 ) 8 9АПшЬ Зтп1ίια1ΜΞά/^
Смесь ингибиторов протеазы Коске АррИеб Зс1епсе Каталожный номер: 11836145001
Анти-ЗМЫ 62 В1ие сар С1зЫо Каталожный номер: 63ЮС002-ЗМБ
Анти-ЗМЫ криптат Кеб сар С1зЫо Каталожный номер: 63ЮС002-ЗМБ
Буфер для разведения 3ΜΝ С1зЫо Каталожный номер: 63ЮС002ЗМБ-Ви££ег
Буфер для лизиса ΚΙΡΑ 20 мМ трис-НС1, рН 7,5, 150 мМ БаС1, 1 мМ ЕБТА, 1% ΝΡ-40, 1% дезоксихолат натрия
Буфер-разбавитель 20 мМ трис-НС1, рН 7,5, 150 мМ БаС1
Набор для анализа белка ВСА Р1егсе Каталожный номер: 23225
Белый 384-луночный планшет Бипс Каталожный номер: 351190
Полипропиленовый планшет с ν-образным дном Ба1соп Каталожный номер: 165195
Прозрачный 96-луночный полистироловый планшет Бипс Каталожный номер: 442404
Сферы из нержавеющей стали размером 5 мм ф1адеп Каталожный номер: 69989
Трубки с безопасным покрытием 2,0 мл Еррепбог£ Каталожный номер: 022363352
96-луночный РСК-планшет с половинным объемом лунок ТмФп.бес Еррепбог£ Каталожный номер: 951020389
ТФззиеЬугег II ф1адеп Каталожный номер: 85300
Планшет-ридер Εηνίβίοη Регкгп Е1шег Мобе! Νο: 2103
Протокол. Образцы ткани в трубках с безопасным покрытием взвешивали, и добавляли соответствующий объем буфера ЫРА, содержащего смесь ингибиторов протеазы, исходя из отношения масса/объем для ткани каждого типа: головного мозга (50 мг/мл), мышц (50 мг/мл) и спинного мозга (25 мг/мл).
Ткани гомогенизировали на устройстве для лизиса тканей ТхззиеЬу/ег путем измельчения сферами. К образцу добавляли сферы из нержавеющей стали диаметром 5 мм, и смесь интенсивно встряхивали в течение 5 мин при 30 Гц в ТхззиеЬу/ег. Затем образцы центрифугировали в течение 20 мин при 14000хд в микроцентрифуге, и гомогенаты переносили в РСК-планшет. Гомогенаты разводили в буфере ЫРА до приблизительно 1 мг/мл для НТКЕ и приблизительно 0,5 мг/мл для измерения уровня общего белка с помощью анализа белка ВСА. Для НТКЕ-анализа δΜχ 35 мкл тканевого гомогената переносили в 384луночный планшет, содержащий 5 мкл раствора антитела (разведение каждого из анти-δΜNά2 и антиδΜN криптата в буфере для разведения составляло 1:100). Для получения контрольного сигнала, в три (3) лунки планшета добавляли только буфер для лизиса ЫРА, то есть, эти лунки служили в качестве слепого контроля. Планшет центрифугировали в течение 1 мин для осаждения раствора на дно лунок, и затем инкубировали в течение ночи при комнатной температуре. Флуоресценцию для каждой лунки планшета измеряли при 665 нм и 620 нм на планшет-ридере Εηνΐδΐοη ΜπΕί^^Ι (Регкт^тег). Общий белок в тканевом гомогенате измеряли с помощью анализа ВСА в соответствии с протоколом производителей. Нормализованный флуоресцентный сигнал вычисляли для каждого образца, для лунок со слепым контролем и для лунок с контролем-носителем путем деления сигнала при 665 нм на сигнал при 620 нм.
- 135 028382
Нормализацию сигнала проводили из-за возможного гашения флуоресценции, вызываемого матричным эффектом тканевого гомогената. Величину ΔΡ (количество белка Зтп измеряли как процентную величину) для каждой лунки с образцом ткани вычисляли путем вычитания нормализованной средней флуоресценции для лунок со слепым контролем из нормализованной флуоресценции для каждой лунки с образцом ткани, и затем полученную величину делили на нормализованную среднюю флуоресценцию для лунок со слепым контролем, и результат умножали на 100. Величину ΔΡ для каждой лунки с образцом ткани делили на общее количество белка (определенное с помощью анализа ВСА) для данного образца ткани. Изменение количества белка Зтп для данного образца ткани по сравнению с контролемносителем вычисляли как разницу (в процентах) величины ΔΡ для образца ткани в присутствии тестируемого соединения и усредненной величины ΔΡ сигнала с контролем-носителем, деленной на усредненную величину ΔΡ сигнала с контролем-носителем.
Пример 11. Анализ белка Зтп в тканях взрослых ЗМА-мышей с С/С-аллелем.
Образцы тканей, используемые для количественной оценки белка Зтп у взрослых ЗМА-мышей с С/С-аллелем, получали в соответствии с примером 10. Этот анализ проводили для того, чтобы определить, может ли 10-дневная обработка ЗМА-мышей, имеющих С/С-аллель, тестируемым соединением приводить к повышению уровней белка Зтп, продуцируемого из гена ЗМ№ и гибридного мышиного гена ЗтпНЗМЮ.
Материалы
Материал Источник
Ткани, взятые у ЗМАмышей с С/С-аллелем ТЬе йаскзоп ЪаЬогакогу, штамм Νο: 008714 (В6.129-5тп11т5 <3тп1/5Ш2)МгрЬ / δ)
Протокол. ЗМА-мышам с С/С-аллелем два раза в день (ВГО) вводили пероральную дозу (в 0,5% НРМС с 0,1% Т\уееп-80) тестируемого соединения или носителя в количестве 10 мг/кг в течение 10 дней. Гетерозиготным мышам соответствующего возраста вводили дозу носителя, используемого в качестве контроля. Затем брали ткани для анализа уровней белка в соответствии с примером 10.
Пример 12. Белок Зтп в тканях новорожденных ЗМА^7-мышей.
Образцы тканей, используемые для количественной оценки белка Зтп у новорожденных ЗМА-А7мышей, получали в соответствии с примером 10. Этот анализ проводили для того, чтобы определить, может ли обработка новорожденных ЗМА^7-мышей тестируемым соединением в течение 7 дней приводить к повышению уровней белка Зтп, продуцируемого из гена ЗМШ.
Материалы
Материал Источник
Ткани, взятые у 5ΜΑ-Δ7-мышей ТЬе йаскзоп ЪаЬогакогу, штамм Νο: 005025 (БУВ.Сд-Тд(ЗМЫ2*ае1ка7)4299АЬтЬ Тд (3ΜΝ2 ) 8 9АЬтЬ 5тп1ίια1Μεό/ )
Протокол. Дефицитным (нокаут) ЗМА-мышам, гомозиготным по Δ7, один раз в день (СЭ), начиная с дня 3 и до дня 9 после рождения (РХ^)- внутрибрюшинно (РР) вводили дозу тестируемого соединения или носителя (100% ДМСО). Ткани брали для анализа уровней белка в соответствии с примером 10.
Пример 13. Масса тела новорожденных ЗМА^7-мышей.
По изменению массы тела новорожденных ЗМА^7-мышей определяли, может ли обработка тестируемым соединением приводить к повышению массы тела.
Материалы
Материал Источник
Ткани, взятые у ЗМАмышей с отсутствием (Δ) экзона 7 ТЬе йаскзоп ЪаЬогакогу, штамм Νο: 005025 (ЕУВ.Сд-Тд(3ΜΝ2*0е1ка7)4299АЬтЬ Тд (3ΜΝ2 ) 8 9АЬтЬ 5тп1ίιη1ΜΞά/ 5)
Протокол. Дефицитным (нокаут) ЗМА-мышам, гомозиготным по Δ7, один раз в день (ОО), начиная с дня 3 после рождения (РИО), внутрибрюшинно (ЕР) вводили дозу тестируемого соединения или носителя (100% ДМСО), а затем проводили другую схему введения доз, то есть, два раза в день (ВГО) вводили пероральную дозу в 0,5% НРМС с 0,1% Т^ееп-80, которая в 3,16 раз превышала ГР-дозу. После этого каждый день регистрировали массу тела ЗМА^7-мышей, обработанных тестируемым соединением или носителем, и гетерозиготных мышей соответствующего возраста.
Пример 14. Рефлекс выпрямления туловища у новорожденных ЗМА-Л7-\1ышей.
По функциональным изменениям рефлекса выпрямления туловища у новорожденных ЗМА-А7мышей определяли, может ли обработка тестируемым соединением приводить к улучшению рефлекса выпрямления туловища.
- 136 028382
Материалы
Материал Источник
Ткани, взятые у ЗМАмышей с отсутствием (Δ) экзона 7 ТЬе Даскзоп ЪаЬогакогу, штамм Νο: 005025 (ГУВ.Сд-Тд (5МЫ2*с1е1ка7) 4299АктЬ Тд (3ΜΝ2 ) 8 9АктЬ 5тп1ίια1ΜΞά/^
Протокол. Дефицитным (нокаут) Л7-гомозиготным мышам с 8ΜΑ один раз в день ^Ό), начиная с дня 3 после рождения ^ΝΟ), внутрибрюшинно ^Р) вводили дозу тестируемого соединения или носителя (100% ДМСО), а затем проводили другую схему введения доз, то есть, два раза в день (ВГО) вводили пероральную дозу в 0,5% НРМС с 0,1% ТАееп-80, которая в 3,16 раз превышала ГО-дозу. Время рефлекса выпрямления туловища измеряли как время, которое необходимо мыши, лежащей на спине, для вставания на лапы. Время рефлекса выпрямления туловища измеряли пять раз для каждой мыши (максимально допустимое время для каждой попытки 30 секунд) с 5-минутными интервалами между каждым измерением. Время рефлекса выпрямления туловища у Л7-гомозиготных нокаутных мышей с 8ΜΑ, обработанных тестируемым соединением или носителем, и у гетерозиготных мышей соответствующего возраста измеряли на дни 10, 14 и 18 после рождения ^ΝΌ), и по этим данным строили график.
Пример 15. Выживаемость новорожденных 8ΜΑ-Δ7-мышей.
По изменению числа выживших мышей за определенный период времени определяли, может ли обработка тестируемым соединением приводить к повышению выживаемости.
Материалы
Материал Источник
Ткани, взятые у 3ΜΑ-Δ7 Тке йаскзоп ЬаЬогакогу, штамм Νο: 005025 (ГУВ.Сд-
мышей Тд (5ΜΝ2*άθ1Ά7) 4299АктЬ Т д (3ΜΝ2 ) 8 ЭАкшЬ 5шп1ίπι1ΜΞά/ )
Протокол. Дефицитным (нокаут) 8ΜΑ-мышам, гомозиготным по Δ7, один раз в день (РЭ), начиная с дня 3 после рождения ^ΝΟ), внутрибрюшинно (№) вводили дозу тестируемого соединения или носителя (100% ДМСО), а затем проводили другую схему введения доз, то есть, два раза в день (ВГО) вводили пероральную дозу в 0,5% НРМС с 0,1% ТАееп-80, которая в 3,16 раз превышала ГО-дозу, после чего один раз в день вводили пероральную дозу в 0,5% НРМС с 0,1% ТАееп-80, которая в 6,32 раза превышала ГО-дозу. Число выживших мышей в каждой группе регистрировали каждый день, и по этим данным строили график процента выживших мышей от общего числа мышей.
Пример 16. Полуколичественный КТ-РСК-анализ в конечной точке сплайсинга мРНК минигена человеческого 8ΜΝ1 в культивированных клетках.
КТ-РСК-анализ проводили для визуализации и количественной оценки уровней полноразмерной мРНК минигена человеческого 8ΜΝ2 и мРНК Δ7 в первичных клетках и в клеточных линиях, экспрессирующих конструкцию минигена человеческого 8ΜΝ1 и обработанных тестируемым соединением.
Материалы
Материал Источник
Клетки НЕК293Н Ыке Тескпо1од1ез. 1пс. (прежнее название 1пч1кгодеп) Каталожный номер: 11631-017
Буфер для лизиса клеток Се11зТо-Ск Ыке Тескпо1од1ез. 1пс. (прежнее название АррЫеб ВЫзузкешз) Каталожный номер: 4399002
Липидный трансфицирующий реагент ЕиСЕДЕ-б Коске АррЫек Зс1епсе, Каталожный номер: 11 814 443 001
ΏΜΕΜ Ыке Тескпо1од1ез, 1пс. (прежнее название 1пч1кгодеп) Каталожный номер: 11960-044
96-луночные плоскодонные планшеты Вескоп 01ск1пзоп Каталожный номер: 353072
Смесь ДНК-полимераз Зирег Μίχ Р1аЫпит Тад ΗίΕί Ыке Тескпо1од1ез, 1пс. (прежнее название 1пч1кгодеп) Каталожный номер: 11304-016
Набор ферментов для НТ ίβοτίρΕ В1оНаб: Каталожный номер: 170-8890
Двойная комбинация 2% агарозных гелей Е с этидийбромидом в 48-луночных планшетах Ыке Тескпо1од1ез, 1пс. (прежнее название 1пч1кгодеп) Каталожный номер: 68008-021
Задокументированная система гелей Визуализирующая система ЮУР Се1 Бос Ы 310
- 137 028382
Конструкция минигена 8ΜΝ1. Получение конструкции минигена.
В соответствии с процедурой получения конструкции минигена 8ΜΝ2, описанной в биологическом примере 1, вариант минигена 8ΜΝ1 получали путем замены шестого нуклеотида экзона 7 (тиминового остатка) конструкции минигена 8ΜΝ2-Α на цитозин посредством сайт-направленного мутагенеза. Таким образом, как и конструкция минигена 8ΜΝ2-Α, конструкция минигена 8ΜΝ1 имеет один адениновый остаток, встроенный за нуклеотидным остатком в положении 48 экзона 7. Конструкция минигена 8ΜΝ1 обозначена 8ΜΝ1-Α.
Протокол. Клетки НЕК293Н (10000 клеток/лунку/199 мкл) трансфицировали с использованием реагента ΡηΘΕΝΕ-6 в 96-луночном планшете 15 нг репортерной плазмиды минигена 8ΜΝ1-Α на лунку. Клетки инкубировали в течение 24 ч после трансфекции. Тестируемые соединения подвергали 3,16кратному серийному разведению в 100% ДМСО, и строили кривую концентрации по 7 точкам. В каждую тестируемую лунку добавляли раствор тестируемого соединения (1 мкл, 200х в ДМСО). В каждую контрольную лунку добавляли 1 мкл ДМСО. Планшет инкубировали в течение 7 ч в инкубаторе для культивирования клеток (37°С, 5% СО2, относительная влажность 100%). Затем клетки подвергали лизису в буфере для лизиса Сейз-То-Ср и лизат хранили при -80°С.
Две сплайсированные мРНК 8ΜΝ получали из минигена 8ΜΝ1. Термин миниген 8ΜΝ1 РЬ означает первый сплайсированный продукт, содержащий экзон 7, соответствующий полноразмерной мРНК 8ΜΝ1. Термин миниген 8ΜΝ1 Δ7 означает второй продукт, не содержащий экзона 7.
мРНК минигена 8ΜΝ1 РЬ и минигена 8ΜΝ1 Δ7 амплифицировали с использованием праймеров, представленных в табл. 11. Прямой 8ΜN-праймер С (8ЕЦ ГО Ν0:11) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в экзоне 6 (нуклеотиды 43-63), а обратный 8ΜN-праймер Α (8ЕЦ ГО Ν0:2) гибридизуется с нуклеотидной последовательностью в кодирующией последовательности люциферазы светляка. Комбинация этих двух олигонуклеотидов позволяет детектировать только минигены 8ΜΝ1 или 8ΜΝ2 (КТ-РСК), но не эндогенные гены 8ΜΝ1 или 8ΜΝ2. Поскольку клетки НЕК293Н, используемые в примере 16, были трансфицированы только человеческим минигеном 8ΜΝ1, то КТ-РСК позволяет визуализировать и количественно определить только мРНК минигена 8ΜΝ1 РТ и минигена 8ΜΝ1 Δ7.
Таблица 11
Праймер Последовательность Источник
Прямой 3ΜΝпраймер С ЗЕО Ю N0:11: САТССТСАТССТТТСССААСТ РТС1
Обратный 3ΜΝпраймер А ЗЕО Ю N0:2: СССТТСАСАТТССАСАТСТОТС РТС1
праймеры, сконструированные РТС ТЕегареийсз, Нпс.
Для синтеза кДНК, 5 мкл лизата, 4 мкл 5х реакционной смеси 18сг1р1, 1 мкл обратной транскриптазы и 10 мкл воды объединяли и инкубировали в течение 5 мин при 25°С, а затем 30 мин при 42°С и 5 мин при 85°С. Раствор кДНК хранили при -20°С.
Для осуществления РСК в конечной точке, 5 мкл кДНК, 0,2 мкл 100 мкМ прямого праймера, 0,2 мкл 100 мкМ обратного праймера и 22,5 мкл полимеразной смеси 8ире^т^x объединяли в 96-луночном РСК-планшете с половинным объемом лунок. РСК осуществляли при нижеследующих температурах в указанное время: стадия 1: 94°С (2 мин); стадия 2: 94°С (30 с); стадия 3: 55°С (30 с); стадия 4: 68°С (1 мин); с последующим повторением стадий 2-4, всего 33 цикла, и выдерживанием при 4°С.
мкл каждого РСК-образца подвергали электрофоретическому разделению на 2% агарозном Егеле в течение 14 мин, окрашивали реагентами, используемыми для окрашивания на присутствие дцДНК (например, этидийбромидом) и визуализировали на гелевом визуализаторе.
Результаты. Как видно на фиг. 8, клетки, обработанные повышенными концентрациями соединения 17 (фиг. 8а) и соединения 38 (фиг. 8Ь), содержали значительно большее количество мРНК минигена 8ΜΝ1 РТ и меньшее количество мРНК минигена 8ΜΝ1 Δ7, что указывает на коррекцию альтернативного сплайсинга 8ΜΝ1.
Независимо от того, был ли документ конкретно и отдельно указан в настоящем описании посредством ссылки, все цитируемые здесь документы включены в настоящее описание посредством ссылки в любых и во всех целях так, как если бы каждый из этих документов во всей своей полноте был включен в настоящее описание посредством ссылки.
Хотя некоторые варианты осуществления изобретения были подробно описаны выше, однако для специалиста в данной области совершеннно очевидно, что в эти варианты может быть внесено множество модификаций, не выходящих за рамки идеи изобретения. Все эти модификации входят в объем представленной здесь формулы изобретения.

Claims (10)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение формулы ^а1) или его свободная кислота, свободное основание или фармацевтически приемлемая соль, где К1 представляет собой гетероциклил;
    К1 необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями К3 и необязательно одним дополнительным заместителем Кд или
    К1 необязательно замещен одним, двумя, тремя или четырьмя заместителями К3;
    К2 представляет собой фенил, фуранил, пирролил, 2Н-пирролил, 3Н-пирролил, пиразолил, 1Нпиразолил, имидазолил, 1Н-имидазолил, изоксазолил, изотиазолил, оксазолил, 1,3-тиазолил, триазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, тетразолил, пиридинил, пиримидинил, пиразинил, пиридазинил, триазинил, индолил, 1Н-индолил, индазолил, 1Н-индазолил, 2Н-индазолил, индолизинил, изоиндолил, бензофуранил, бензотиенил, бензоимидазолил, 1Н-бензоимидазолил, 1,3-бензотиазолил, 1,3-бензоксазолил, пуринил, 9Н-пуринил, хинолинил, изохинолинил, хиназолинил, хиноксалинил, 1,3-диазинил, 1,2-диазинил, 1,2-диазолил, 1,4-диазанафталенил, акридинил, фуро[3,2-Ъ]пиридинил, фуро[3,2-с]пиридинил, фуро[2,3с]пиридинил, 6Н-тиено[2,3-Ъ]пирролил, тиено[3,2-с]пиридинил, тиено[2,3-б]пиримидинил, 1Н-пирроло [2,3-Ъ] пиридинил, 1 Н-пирроло [2,3-с] пиридинил, 1 Н-пирроло [3,2-Ъ] пиридинил, пирроло [1,2-а] пиразинил, пирроло [1,2-Ъ] пиридазинил, пиразоло [1,5-а] пиридинил, пиразоло [1,5-а] пиразинил, имидазо [1,2-а] пиридинил, 3Н-имидазо[4,5-Ъ]пиридинил, имидазо[1,2-а]пиримидинил, имидазо[1,2-с]пиримидинил, имидазо [ 1,2-Ъ]пиридазинил, имидазо[ 1,2-а]пиразинил, имидазо[2,1-Ъ][1,3]тиазолил, имидазо[2,1-Ъ][1,3,4]тиадиазолил, [1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридинил или [1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридинил;
    К2 необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями К6 и необязательно одним дополнительным заместителем К7;
    Ка представляет собой водород;
    КЪ представляет собой водород;
    Кс представляет собой водород;
    К3, в каждом случае, независимо выбран из циано, галогена, гидрокси, оксо, С1-8алкила, галоген-С1-8 алкила, С1-8алкилкарбонила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, С1-8алкоксикарбонила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино, амино-С1-8алкила, С1-8алкиламино-С1-8алкила, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкила, амино-С1-8алкиламино, С1-8алкиламино-С1-8алкиламино, (С1-8алкиламиноС1-8алкил)2-амино, (С1-8алкил)2-амино-С1-8алкиламино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил]2-амино, (С1-8алкиламино-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, [(С1-8алкил)2-амино-С1-8алкил](С1-8алкил)амино, С1-8алкокси-С1-8алкиламино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)2-амино, (С1-8алкокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино, С1-8алкилкарбониламино, С1-8алкоксикарбониламино, гидрокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкокси-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкиламино, (гидрокси-С1-8алкил)2-амино или (гидрокси-С1-8алкил)(С1-8алкил)амино;
    Кд представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкил-С1-8алкил, С3-14циклоалкиламино, арил-С18алкил, арил-С1-8алкоксикарбонил, арилсульфонилокси-С1-8алкил, гетероциклил или гетероциклил-С18алкил, где в каждом случае С3-14циклоалкил, арил и гетероциклил необязательно замещены одним, двумя или тремя заместителями К5;
    К5 в каждом случае независимо выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, С1-8алкила, галоген-С1-8 алкила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино или С1-8алкилтио;
    Кб в каждом случае независимо выбран из галогена, гидрокси, циано, нитро, С1-8алкила, С2-8алкенила, галоген-С1-8алкила, гидрокси-С1-8алкила, С1-8алкокси, галоген-С1-8алкокси, С1-8алкокси-С1-8алкила, амино, С1-8алкиламино, (С1-8алкил)2-амино или С1-8алкилтио;
    К7 представляет собой С3-14циклоалкил, С3-14циклоалкилокси, арил, гетероциклил или гетероарил, где в каждом случае гетероциклил выбран из оксиранила, оксетанила, азетидинила, тетрагидрофуранила, пирролинила, пирролидинила, пиразолинила, пиразолидинила, имидазолинила, имидазолидинила, изоксазолинила, изоксазолидинила, изотиазолинила, изотиазолидинила, оксазолинила, оксазолидинила, тиазолинила, тиазолидинила, триазолинила, триазолидинила, оксадиазолинила, оксадиазолидинила, тиадиазолинила, тиадиазолидинила, тетразолинила, тетразолидинила, пиранила, дигидро-2Н-пиранила, тиопиранила, 1,3-диоксанила, 1,2,5,6-тетрагидропиридинила, 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила, тиоморфолинила, 1,4-диазепанила, 1,3-бензодиоксолила, бензо[б][1,3]диоксолила, 1,4-бензодиоксанила, 2,3-дигидро-1,4-бензодиоксинила, 2,3-дигидробензо[Ъ][1,4]диоксинила, гексагидропирроло [3,4-Ъ] пиррол-( 1 Н)-ила, (3 аδ,6аδ)-гексагидропирроло [3,4-Ъ] пиррол-( 1 Н)-ила,
    - 139 028382 (3аК,6аК)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(1Н)-ила, гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ила, (3а8,6а8)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)-ила, (3аК,6аК)-гексагидропирроло[3,4-Ь]пиррол-(2Н)ила, гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, (3аК,6а8)-гексагидропирроло[3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, (3аК,6аК)-гексагидропирроло [3,4-с]пиррол-(1Н)-ила, октагидро-5Н-пирроло [3,2-с]пиридинила, октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридинила, (4аК,7аК)-октагидро-6Н-пирроло[3,4-Ь]пиридинила, (4а8,7а8)октагидро-6Н-пирроло [3,4-Ь]пиридинила, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (7К,8а8)гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8а8)-гексагидропирроло[1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8аК)гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8а8)-октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, (8аК)октагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(1Н)-ила, гексагидропирроло [ 1,2-а]пиразин-(2Н)-она, октагидро-2Нпиридо[1,2-а]пиразинила, 3-азабицикло[3.1.0]гексила, (1К,58)-3-азабицикло[3.1.0]гексила, 8-азабицикло [3.2.1]октила, (1К,58)-8-азабицикло[3.2.1]октила, 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, (1К,58)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-енила, 9-азабицикло[3.3.1]нонила, (1К,58)-9-азабицикло[3.3.1]нонила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, (18,48)-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, 2,5-диазабицикло[2.2.2]октила, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, (1К,58)-3,8-диазабицикло[3.2.1]октила, 1,4-диазабицикло[3.2.2]нонила, азаспиро[3.3]гептила, 2,6-диазаспиро[3.3]гептила, 2,7-диазаспиро[3.5]нонила, 5,8-диазаспиро[3.5]нонила, 2,7диазаспиро[4.4]нонила или 6,9-диазаспиро[4.5]децила;
    где в каждом случае арил выбирают из фенила, нафтила, антраценила, флуоренила, азуленила или фенантренила и в каждом случае гетероарил выбирают из 1,3-бензотиазолила, имидазо[1,2-а]пиридинила, тразолила, 1Н-1,2,3-триазолила, фуранила, тиенила, пирролила, 2Н-пирролила, 3Н-пирролила, пиразолила, 1Нпиразолила, 1Н-имидазолила, изоксазолила, изотиазолила, оксазолила, 1,3-тиазолила, оксадиазолила, 1,2,4-оксадиазолила, 1,3,4-оксадиазолила, тиадиазолила, 1Н-тетразолила, 2Н-тетразолила, пиридинила, пиримидинила, пиразинила, пиридазинила, триазинила, 1Н-индолила, индазолила, 1Н-индазолила, 2Ниндазолила, индолизинила, изоиндолила, бензофуранила, бензотиенила, бензотиофенила, бензоимидазолила, 1Н-бензоимидазолила, 1,3-бензоксазолила, 1,3-бензооксазолила, 9Н-пуринила, хинолинила, изохинолинила, хиназолинила, хиноксалинила, 1,3-диазинила, 1,2-диазинила, 1,2-диазолила, 1,4-диазанафталенила, акридинила, фуро[3,2-Ь]пиридинила, фуро[3,2-с]пиридинила, фуро[2,3-с]пиридинила, 6Нтиено[2,3-Ь]пирролила, тиено[3,2-с]пиридинила, тиено[2,3-б]пиримидинила, 1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридинила, 1Н-пирроло[2,3-с]пиридинила, 1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридинила, пирроло[1,2-а]пиразинила, пирроло[1,2-Ь]пиридазинила, пиразоло[1,5-а]пиридинила, пиразоло[1,5-а]пиразинила, имидазо[1,2-а]пиридинила, 3Н-имидазо[4,5-Ь]пиридинила, имидазо[1,2-а]пиримидинила, имидазо[1,2-с]пиримидинила, имидазо[1,2-Ь]пиридазинила, имидазо[1,2-а]пиразинила, имидазо[2,1-Ь][1,3]тиазолила, имидазо[2,1-Ь] [1,3,4]тиадиазолила, [1,2,4]триазоло[1,5-а]пиридинила или [1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридинила.
  2. 2. Соединение по п.1, где фармацевтически приемлемой солью является хлорид, гидробромид, гидрохлорид, дигидрохлорид, ацетат, трифторацетат или соль трифторуксусной кислоты.
  3. 3. Соединение по п.1, где указанное соединение выбрано из группы, состоящей из
    6-(пиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-(4-этилпиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-[4-(пропан-2-ил)пиперазин-1-ил]-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-(4-метил-1,4-диазепан-1 -ил)-2-(пиридин-3 -ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-(пиперазин-1-ил)-2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-[(3К,58)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-(3,3-диметилпиперазин-1-ил)-2-(пиридин-3-ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-[(3К)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -2-(пиридин-3 -ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-(4-метилпиперазин-1-ил)-2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-[(3К,58)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-[(3К)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -2-(пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(имидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ил)-6-[(3К)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
    6-[(3К,58)-3,5-диметилпиперазин-1-ил] -2-(имидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-6-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(3,4-диметоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4-этилпиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(3,4-диметоксифенил)-6-[(3К)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-хромен-4-она;
    2-(3,4-диметоксифенил)-6-[(3К,58)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
    6-(1,4-диазепан-1-ил)-2-(3,4-диметоксифенил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(3,4-диметоксифенил)-6-(4-метил-1,4-диазепан-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    - 140 028382
    2-(3,4-диметоксифенил)-6-(3,3-диметилпиперазин-1 -ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(7-метилимидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ил)-6-(пиперазин-1 -ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(7-метилимидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ил)-6-[(3К)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она; 6-[(3К,58)-3,5-диметилпиперазин-1-ил] -2-(7-метилимидазо [ 1,2-а]пиридин-2-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-(3,4-диметоксифенил)-6-[(3 8)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
    2-( 1,3-бензотиазол-2-ил)-6-(пиперазин-1 -ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-( 1,3-бензотиазол-2-ил)-6-[(3К)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-хромен-4-она; 2-(1,3-бензотиазол-2-ил)-6-[(3К,58)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
    2-( 1,3-бензотиазол-2-ил)-6-(4-метилпиперазин-1 -ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-( 1,3-бензотиазол-2-ил)-6-[(3 8)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-хромен-4-она; 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(3-фтор-4-метоксифенил)-6-[(38)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 6-[(3К,58)-3,5-диметилпиперазин-1-ил] -2-(3 -фтор-4-метоксифенил)-4Н-хромен-4-она; 2-(3-фтор-4-метоксифенил)-6-[(3К)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-(4-этоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(4-этоксифенил)-6-[(38)-3 -метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
    6-[(3К,58)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(4-этоксифенил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(4-этоксифенил)-6-[(3К)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
    2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6-[(38)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
    6-[(3К,5§)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(2-фтор-4,5-диметоксифенил)-6-[(3К)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
    6-(пиперазин-1-ил)-2-[4-(пропан-2-илокси)фенил]-4Н-хромен-4-она;
    6-[(38)-3-метилпиперазин-1-ил]-2-[4-(пропан-2-илокси)фенил]-4Н-хромен-4-она;
    2-(4-метокси-3-метилфенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(4-метокси-3 -метилфенил)-6-[(3 8)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она; 6-[(3К,58)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-2-(4-метокси-3-метилфенил)-4Н-хромен-4-она; 2-(4-метокси-3 -метилфенил)-6-[(3К)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она; 2-(6-метоксипиридин-3-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(6-метоксипиридин-3 -ил)-6-[(3 8)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-хромен-4-она; 2-(6-метоксипиридин-3 -ил)-6-[(3К)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она; 2-(3-хлор-4-метоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(3 -хлор-4-метоксифенил)-6-[(3 8)-3 -метилпиперазин-1-ил] -4Н-хромен-4-она; 2-(3-хлор-4-метоксифенил)-6-[(3К,58)-3,5-диметилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
    2-(3 -хлор-4-метоксифенил)-6-[(3К)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она; 2-(4-метоксифенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(4-метоксифенил)-6-[(3 8)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она; 6-(пиперазин-1-ил)-2-[4-(трифторметокси)фенил]-4Н-хромен-4-она; 6-[(38)-3-метилпиперазин-1-ил]-2-[4-(трифторметокси)фенил]-4Н-хромен-4-она; 2-(3-фторфенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    6-(пиперазин-1-ил)-2-[3-(трифторметил)фенил]-4Н-хромен-4-она;
    2-[4-метокси-3 -(трифторметокси)фенил] -6-(пиперазин-1 -ил)-4Н-хромен-4-она; 2-[4-метокси-3-(трифторметил)фенил]-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она; 2-[4-метокси-3-(трифторметокси)фенил]-6-[(3§)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она; 2-[4-метокси-3 -(трифторметил)фенил] -6-[(3 8)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она; 2-(6-метилимидазо[1,2-а]пиразин-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(6-метилимидазо [ 1,2-а]пиразин-2-ил)-6-[(3 8)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она; 2-(5-фторпиридин-3-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(5-фторпиридин-3-ил)-6-[(38)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она;
    2-(4-метил-1,3-тиазол-2-ил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она;
    2-(3 -фторфенил)-6-[(3 8)-3 -метилпиперазин-1 -ил] -4Н-хромен-4-она;
    6-[(3 8)-3 -метилпиперазин-1-ил] -2-[3 -(трифторметил)фенил] -4Н-хромен-4-она; 2-(3,5-дифторфенил)-6-(пиперазин-1-ил)-4Н-хромен-4-она и 2-(3,5-дифторфенил)-6-[(38)-3-метилпиперазин-1-ил]-4Н-хромен-4-она, или его фармацевтически приемлемая соль, изотополог или таутомер.
  4. 4. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель.
  5. 5. Фармацевтическая композиция по п.4, применяемая для лечения спинальной мышечной атрофии (8МА).
  6. 6. Способ повышения уровня включения экзона 7 8МШ в мРНК, транскрибируемую из гена 8МШ, включающий приведение человеческой клетки в контакт с соединением по п.1.
  7. 7. Способ увеличения количества белка 8тп, включающий приведение человеческой клетки в кон- 141 028382 такт с соединением по п.1.
  8. 8. Способ по п.6 или 7, где указанной человеческой клеткой является человеческая клетка, происходящая от пациента со спинальной мышечной атрофией.
  9. 9. Способ лечения спинальной мышечной атрофии у человека, нуждающегося в этом, включающий введение человеку эффективного количества соединения по п.1.
  10. 10. Способ лечения спинальной мышечной атрофии у человека, нуждающегося в этом, включающий введение человеку фармацевтической композиции по п.4.
    1а§сПсйассс§ШП;сассдП££са£с爧аГс8сас§1схсас§18аассаП§§1ааассс1§а^§£аи€а1аа«с€сссассатссс а1а^сса£зййс11яа1§а1£с1:8а1£ст§£§аз81аЦЩаатса1я£1аса1§а§1£8с1:а1са1ас1я§с1:а«зШ£§1:аа§1аа1сас
    1садеайШ1ес£§асааййт£1ад1Ш£1§аст§ВД1§1аааШа1аааа1ас1аей§ейс1с1сШ:а1аиае1аааааа1ааааа1аа ааааа1асаас1§Ш£а§ёсЦаааНа€йП§сай§Цсс1аа£1а1аат£а§йаат1ааааа£стса1£с1аП§йа£ай:аШТ£аП а1асасйй§аай£ааайа1:асШНйааа1аа1£Ш1аа1сШдаЩ£аааЦ§аЦ££а§§дааЦ*8аааа£а£дё£а1:ааШНса1:ааа
    1§ааааа4£ааайейШййдаййййН£адас8£а£йН£ей1£й§ссса§£с1£да§1дсааЦ££С£1да1сй££с±саса§саа£с± е1£ссйс18£аПеаедссапасс1£сс1са£ссиа8а£§1а£й䧧асШа£§1§се1£есассас£сс1§1с1ааййй£Штт§1:аа а§аса£8£тсас1|Д£йа§сс১а1£§1с1еаа1сйа§ас€сс§1£а1ссассс§се1е£десПссаа§а£ааа1дааайтпаа1§сае аааёат§§ё£1аа1£1ё1ассас૧ааес«££§8а§1а1§£сП€аааси§1саста1асё«а§1с1сс1а€§£аеа1£Пс1а«£1аПП а£1са8аасатаааайатшШа1таттншши§а§ас£да£Дс1сдсй1§йассса£§с1д£а£1аса£Д£§с§са§1с1:姧 с1сас1§сааусгсс»сс1ссс§§ё^сасёссайс1сс1§сс1са§ссйТсс§а^аёст§^ас1ас১с§ссс§ссассас§ссс§§с1аат йт1атиа£Да£а§ас££а^сас€§1£дМс8ай1сс1£аейс|Д£а1ссассс£ссй££сс1сссааа£Ц?с18£§аиасаа£ед£§ а§ссасс§с§ссс^сс1аааайапда;аааа§1аа§с1:сй§^ссйдйаааайа1§а1^ёа1аПё1১сасй§):аШйа^ааайаа1 а1а«ааёааасаас1'§ас11ааа^ё'1а1ййи1ааа1:§1аТ.сат.с1^1ё1ёсссссаиаа1аисйаи1аааауйаа§йсса§аса1«§1^ сПасаас1§1аа1сссааса§т§1§а§^сс§а§ёсаё§са§а1сасП§а§ё1са§2а§т§а§асса§сс1:§^ссааса1;ёа1§ааассйё1 с1с£ас1:ааааа1ассааааааааШа8сса§£са1:£§18§саса£§сс181аа1сс8а8с£аей§££а§8с1§1§8са£§аааай8еда:аа1с1:
    §§§а§ёса§а§§Пдса§1§а§П§а§ай§1:§ссас1ёсайссасссй§д1:§аса§а§1§а§аПсса1:сйаааааааёаааа১сйд§са с§д1§§с1сасасс1а1аа1ссса^асда§^ёад^а^а^сад§1§да1сасй§а§§М১а§йса^асса§сс1^ссааса^§^ас1 ас1сса1ис1:ас1ааа1асасаааасиа§ссса§1;§§с§§§са§Ц§1аа1ссса§с1асЦ§а§а§§Ц§а§§са^а§аа1;сасП§аасс1^§ §а§§са§а§§й§са§1§а§сс§а§аиасасс§с1;§сайс1;а§сс1^ссааса§а§1:§а§ааШ§с§§а§§^аааааааа§1сас§сйса§ й§Ц§{а§1а1аассЦ£§1а1ай§1а1£1а1са1§ааисс1сат1аа1§аесааааа§1аа1ааа1сааса§сЦ§1аат§ПЦёа£а1:са§11 а1:с):§ас1:§Ьаасас^১сйй§1§йииаааиа1:§ааа1:аШ§ааааааа1:аса);аа1§1;а);а1а1:ааа§1:а駧);а1аа1:Па1§йс);аа а1:аасй1сй§а§ааа^аайсаса1:§§1:§):§са§тассШ§ааа§1:а1асаа§й§§с1§§§;сасаа1§2с1:сас§;сс):ё1:аа1ссса§сасШ §§§а§§сс১§с১1§§а1сас§а§§1:с১а§а1с§а§асса1сс1§§йааса1§§1:§ааасссс§1с1с1ас1:аааа§1асааааасааа1:
    1аёсс§§ёса1§П§ёс§§бсассППё1сссабс1§йсёёеаёёс1§аё§са§ёа§а§1;§ёс^§аассс৸১«;§§аёс«ёсаё1§аёсс ёа§ай§1§ссаё1ёсас1ссаёсс1§§ёс§асаёаёс§аёас1с1;§1с1;саааааа1аааа1ааааааёаааё1агасааё1саё1ёёЦЦёёШ
    1са§Па1§саасса1сас1асааП1аа§аасат1;са1;сассссааааа§ааассс1§Пасс«са«исссса§ссс1;১са§1:са§1асаси
    1е1§й1с1:а1£ааШ§й1ат1:а£а£аПаШаШас§§аайа1ас8а1:а£§1§§1сШ^§1:с):§£Сйстеасйаёеа1:§сШй1саа£ а«еа£сса1£с1££а§аа££сасса§1ас£8са«ссисП૧е1§аа1аПс1£й§1П§8Па1а1еаса«Па1сеаПеа1са§Пса1§£а£а «1;а88П8««1;аит§88с1:аЬаа1:8аа1аа1§П8с1а18аасаис§1;«81;8Пс1;«П8йтП881тП888«ПЦй§ий8т«8ии
    1§а§аеа81сйёс1£1£1с1сс1аа8с18§а81£са8{§§са1§а1сй§8сиас18саа§£1с1§ссисс£88исасассаПс1се-1§сс1са8с сс§асаа££а8с1§8£ас1:ас১с81§1§сеасса18сасё8с1аапт18{атиа§1а§а8а1§§ё8тсасс818Цаёсса§ёа1881с1:
    с§а1;с1;сс1:§асс1:с81§аш;§сс1§сс1:а8§сс);сссааа81:§с1;88§айаса§8с§1:§а§ссас1:8сасс1;8§сспаа81;8йшаа1ас81са1
    1§есНаа£с1аасаа«сйаассП18«с1ас[£аа8Ссас£1§§«§а§а1а8£с1с1§а§£е1а§е1таассШаШПК§1:сПа§ааа1с1:
    аа8са£аа1§сааа£§ас1аа8ааШ18«§и8ааа1ааса1аааа1а§£Па1аас1й8а1ас1саиа£1аасаааШЦсаа1аеа1сПас
    8еШ8Ца881§£а8аПа81аа*8аа@1888аа8есас*8саа£с1а§£а1аса1§1а8§8ааа8аи8ааа@саП8ааесса8аа§а8а8ас а8а8§аса1й§88с1;а§а1;с18асаа8ааааасаааЬ§т1:а8гаПаатп§асЦ1аааицттата81;8аа1;ас1ё8да^а1881с
    1еат1:ааШ8Ш§асаса§£1а§Шаа88йа£а1:аКйат8а£§аааа1аая§Ша§8сс§§£сас§§Ц?§с1саеасс):§1аа1есса§ саст£$£ая§сс8а§8са£8е£8а1сасй£а§§и£8£а£Ца8а§айа8сс1сааеаЦ?Е£а§ааассес§1с1:(Дае1:аааааааа£асаа аайав8с§8§с§Ш
    - 142 028382 д^дсатдссГгАзаГсссадсТасТсаддзддсТдаддсаддадааггдсПдазссТдддаддгддаддПдсддТдадссдадаГсасслсашд сасгссадссшддсаасаададсаааасТссаЕТсааааааааааааа^ааддгаГаадсдддсТсадцаасаГсаПддасагас^ааада адаааааиад€1д£дсдсад£ддсиасдссддШиссаасасЖ£ддаддссааддса8дсдаа£сасс1даад£еддда£Псеада1са дссРдассаасабдцадааасссгдТ.сгсТасТааааа^саааасТ.адссдддса^д^дсдсагдссТдгаа'гсссадсг.асиндцаддс^ад дсаддадааПдсПдаассдадааддсддаддПдсдд^адссаадаМдсассаПдсайссадсс^ддсаасаададсдааайсс^йс ааааааааааддаадааааа^аййЖаааПааПадЖаЖатЖаада^дадт^ссс^сасссаддйдддд^саа^д^са а1с1сддс1сас1дсаасс1;ссдсс1сс1дддПсаад1даис'1сс1:дсс1садсисссдад1адс1;д1даЦасадсса1а1дссассасдсссадс садииц1ди11ц1и1д111111дци11ит1дададдд1'д1сидс1'сг.д1'сссссаадс1ддад1дсадсадсдсда1сицдс1сас1'дсаа§с1 адсси/ссадйи.сасассаисТ.сГбдссЕсаасСбСссдадТ’адСбддаас^асаддЕдсссдссассасасссддс'г.аабГСИидшидаадТ.а да§а1-дцддП1сасгд1ди.адссаддаТ.дд1с1-сдагс1сс1'дассги'1'дагссасссдсс1садссТссссаад1-дс1-дцда1ГаТ.ад§сди5адс сасгдТ.дсссддсйадгсПдбатйадТ.адад^сдддаиЛгТсссЕдГбддТ'садцсгдисгссааабСсдассгсадд'геабСсдсссдсси-дд сс£ссаааад^саад£саа£дсаПаса§£са£да£ссас££1дассддсаа1£тПааа1т«асатааат£аттада£аеса£д1с иас1сШ1дс1сад£с1дда^£саадд£сасаисаса£с1сас1дсадссП£асс1€садд£с1саа£са£1сс№гасс1сад1Псссда£1 адс1'дддасгасад1да1эа1дссас1'дсассгцдс1аа1'1111аиТ11аи1аиГаП1и:и11'§ааасадад1си.асрсЕ.дрсасссаддсгддад1· дсад1;дд^ааа1сиадсиайдсадссисдсс1;сс1дддПсаад1дайс1сс1:дсс1саассиссаад1;адс1;дддаПададд1ссссасс асса^сс^дсбааи^чч^'гаситсад^адааасддддггг^дссагйиддссаддс^г^ск^дааст'ссбдадстсаад^аи/саас^'г.с^сд дсСбСст:аааагдс1'§ддаПасаддсд1-дг:дссас1-дбдсси^сс1дадссассасдссддсСбааи-и-1-ааа1'ГГбПдга§адасаддд1’с1саТ.
    1аг§пдсссаддд1дд1д!саадс1-ссадд1’ст.саадг§аи;сссстасыссдсс1'сссааади-дбдддаид1’аддса1дадссасгесаадааа асс11аас1дсабсСбаак8а11§иис1иддса1:аас1111ааад1асаПаааадаСба'1саас11аа1:ис1да1са1а1Е:ига1саа1ааза1аа ^аааа1д1си££даааеаааа^еП№ааса1сеа1а^ааадсШсШа1а£адс1аШа1а£е1аШадс1аППт1аас11сетат1 ссПасадддПйадасаааа1;сааааадааддаадд1дс1сасаиссиааа1ак1аддад1аад1;с^ссадсс1иа1дааад1:даа№1асй ид1ааааста1ддт£1ддаааасааа1дтйдаасатааааадиса§а1дПадааадПдааад§Паа1дШаасаа1еаа1;айаа адаата1да1дссаааайаиада1ааааддиаа1с1аса1сес1ас1адааКс1са£асПаас1ддиддПд1д1ддаадаааса1аеШсас
    33ί333§3^αΐΐΐ3^§3ί3ί§3^εα3ΐΐ:η3ί3ΐ03εί3§ΐ:3§§ε3§3€€3§α3§3εηΐηηί3ΐΐ§ΐβ3ΐ3ΐβ^3ΐ33εεΐ3§βα3ΐ3αΐ§ε3€·ί:
    е1асас4?::1дзса1а1дазд1)л::1ск)сЪ::аад111а:ас1ад1§Ъ::сзсададеаса1да1:иааСбдааа11сд1сааасСбС1дд11Сбаа1Е:с1са1
    Пдсаддааа1дс1§дса1:ададсадсасдда11ссдаадас§ссаааааса1ааадаааддссс§дсдссапс1а11сс1:с1ададда1ддаасс§ с1§дададсаас1:дса1:ааддс1:а1даадада1асдссс1;д§исс1д§аасааП§сППасада1дсаса1а1:сдадд^ааса1сасд1асдсд еаа1ас11сдааа1д1сса/б1сдд11едсадаадйа1дааасда1а1дддс1даа1асаааЪ:1асаеаа1сд1сд1а1дса81даааас1с1сН;са аисдаа1дссдд1дид££сдсдПаЖа1с§дадидсадидсдсссдсдаасдасаПШаа1даасд1дааПде1:саасадШдаасат сдса£сс£асед1адЕдЖдЖссаааааддддЦдсаааааат1дааед1§сааааааааиассаа£аа1ссадааааиа«а1са1;8даи с1аааасддаПасеадддатсад1сда1£1асае£Жд1еаеа1с1са1йасс1сесддт1аа£даа1асдат1д£аесадад1ссЖда1
    СР1дас\!ааасаа11дсзс1да1аа1даа11сс1с1ддаЪа1ас1ддд11асс1аадд§1!-Д;д§ссс11ссаса1:здаас1дсс1дсд1садаис1сдс а^сеададаис1атид8саа1сааа^саПсс8да1ас1дс§аЖ1аад1§и£ПссаЦсса1сасддт18£аа1дЖас1аеае1сдда1 аЖ)да1а1;д1ддаШсдад1:сд1сПаа^а1адаи1даадаададс1§тиасда1:сссПсаддайасаааа11сааад1:дсдПдс1:ад^а ссаасес1аППеаПШсдсеаааадеас1с^аПдасааа^аедаПШс1аатасасдаааидсис£дддддсдсаес1сЖхдааада а^с§ш^аадеддидсаааасдсЖса1сПсса£д§а£аедасаа££а1а1£§дсиас1дадас£аса1садс1аПс1даиасасссда^ ддда1да1ааассдддсдсдд1сд§1:ааадидПссаЖ1П§аадсдаад§Пд^§а1с1дда1ассд§даааасдс1дддсдПаа1:сада§а ддсдаа1Ъагд1!Д:сададраасс1а<даЕа£рнтс§!Д:га1дЪааасааЕ:сддаадсдассааса;ссг£§аЕ:дасаайда1пд;аГддс1:аса1гсЛ ддадаса^адсПас^ддасдаадасдаасасйсПса^адПдаседсПдаа^сЖааПааа^асаааддаТЖадд^дсс сссдс1дааПддаа1сдз1аПдиасаасассссааса1сПсдасдсдддсд1ддсадд1:сНсссдасда1дасдссдд1:дааШсссдссдсс дПдидПКддадсасддааадзсда^асддааааададагсдгддаПасдГсдссад^саа^засаассдсдааааздШ/сдсддаддз дПд1дтд1ддасдаад1ассдааадд1сПассддаааас1:с§асдсаадааааа1са§адада1:сс1са1аааддссаадаадддсддааад
    1ссааа1тдсдсрдссдс1ааа1сдааад1асаддас1адсси-сс1адсаассдсддцс1цддад1с1дадаса1сас1'саада1а1'а1дс1сдц1а асд1'а1дс1с!а§сса1'с1аас1а1'1ссс1а1д1с11гц:адде
EA201491766A 2012-03-23 2013-03-14 Соединения для лечения спинальной мышечной атрофии EA028382B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261614932P 2012-03-23 2012-03-23
PCT/US2013/031232 WO2013142236A1 (en) 2012-03-23 2013-03-14 Compounds for treating spinal muscular atrophy

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201491766A1 EA201491766A1 (ru) 2015-03-31
EA028382B1 true EA028382B1 (ru) 2017-11-30

Family

ID=49223223

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201491766A EA028382B1 (ru) 2012-03-23 2013-03-14 Соединения для лечения спинальной мышечной атрофии

Country Status (11)

Country Link
US (1) US9914722B2 (ru)
EP (1) EP2828247B1 (ru)
JP (1) JP6219921B2 (ru)
KR (1) KR102109992B1 (ru)
CN (1) CN104470909B (ru)
BR (1) BR112014023483B1 (ru)
CA (1) CA2868026C (ru)
EA (1) EA028382B1 (ru)
HK (1) HK1202527A1 (ru)
MX (1) MX358514B (ru)
WO (1) WO2013142236A1 (ru)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013101974A1 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Ptc Therapeutics, Inc. Compounds for treating spinal muscular atrophy
JP6193888B2 (ja) 2012-01-26 2017-09-06 ピーティーシー セラピューティクス， インコーポレイテッド 脊髄性筋萎縮症を治療するための化合物
MX354074B (es) 2012-02-10 2018-02-12 Ptc Therapeutics Inc Compuestos para tratar la atrofia muscular espinal.
CN104302181B (zh) 2012-03-01 2017-09-15 Ptc医疗公司 用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物
SG11201504933WA (en) * 2012-12-24 2015-07-30 Univ Ramot Agents for treating genetic diseases resulting from nonsense mutations, and methods for identifying the same
WO2015024876A2 (en) 2013-08-19 2015-02-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Screening method
WO2015105657A1 (en) 2013-12-19 2015-07-16 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for modulating the amount of rna transcripts
US10882868B2 (en) 2014-05-15 2021-01-05 Hoffmann-La Roche Inc. Compounds for treating spinal muscular atrophy
EP3310169B1 (en) 2015-05-30 2023-05-17 PTC Therapeutics, Inc. Methods for modulating rna splicing
JP6745824B2 (ja) 2015-06-26 2020-08-26 武田薬品工業株式会社 複素環化合物
WO2017069173A1 (ja) 2015-10-20 2017-04-27 武田薬品工業株式会社 複素環化合物
CA3119019C (en) 2015-12-10 2024-06-11 Ptc Therapeutics, Inc. Compounds and methods for treating huntington's disease
EP3544435A4 (en) 2016-11-28 2020-11-04 PTC Therapeutics, Inc. RNA SPLICE MODULATION PROCESSES
SG11201911615WA (en) 2017-06-05 2020-01-30 Ptc Therapeutics Inc Compounds for treating huntington's disease
KR20200017476A (ko) 2017-06-14 2020-02-18 피티씨 테라퓨틱스, 인크. Rna 스플라이싱의 변경 방법
US11395822B2 (en) 2017-06-28 2022-07-26 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating Huntington's disease
BR112019027717A2 (pt) 2017-06-28 2020-07-28 Ptc Therapeutics, Inc. métodos para tratar a doença de huntington
GB2579747B8 (en) 2017-08-04 2022-10-05 Skyhawk Therapeutics Inc Methods and compositions for modulating splicing
WO2019168170A1 (ja) * 2018-03-02 2019-09-06 国立大学法人 長崎大学 クロモン誘導体及びアミロイド関連疾患診断用組成物
US12103926B2 (en) 2018-03-27 2024-10-01 Ptc Therapeutics, Inc. Compounds for treating huntington's disease
US11685746B2 (en) 2018-06-27 2023-06-27 Ptc Therapeutics, Inc. Heteroaryl compounds for treating Huntington's disease
WO2020004594A1 (ja) 2018-06-27 2020-01-02 株式会社リボルナバイオサイエンス 脊髄性筋萎縮症の予防または治療剤
LT3814357T (lt) 2018-06-27 2024-06-25 Ptc Therapeutics, Inc. Heterocikliniai ir heteroarilų junginiai, skirti hantingtono ligos gydymui
WO2020163405A1 (en) 2019-02-05 2020-08-13 Skyhawk Therapeutics, Inc. Methods and compositions for modulating splicing
JP2022519323A (ja) 2019-02-06 2022-03-22 スカイホーク・セラピューティクス・インコーポレーテッド スプライシングを調節するための方法および組成物
US11129829B2 (en) 2019-06-17 2021-09-28 Skyhawk Therapeutics, Inc. Methods for modulating splicing

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040105849A1 (en) * 2002-11-25 2004-06-03 Kaloidis Antonia C. Treatment for SMA disease
US20110086833A1 (en) * 2008-05-27 2011-04-14 Paushkin Sergey V Methods for treating spinal muscular atrophy
US8093273B2 (en) * 2004-10-20 2012-01-10 Resverlogix Corp. Flavanoids and isoflavanoids for the prevention and treatment of cardiovascular diseases

Family Cites Families (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH479607A (de) * 1967-02-27 1969-10-15 Geigy Ag J R Verfahren zur Herstellung von Areno-oxazinonverbindungen
US3558618A (en) 1968-04-01 1971-01-26 Dow Chemical Co Novel 4h-pyrazino(1,2-a)pyrimidine-4-ones
GB1296469A (ru) * 1970-02-05 1972-11-15
US4122274A (en) 1977-05-25 1978-10-24 Bristol-Myers Company 3-Tetrazolo-5,6,7,8-substituted-pyrido[1,2-a]pyrimidin-4-ones
US4342870A (en) 1980-03-28 1982-08-03 Janssen Pharmaceutica N.V. Novel 3-(1-piperidinylalkyl)-4H-pyrido[1,2-a]pyrimidin-4-one derivatives
US5089633A (en) 1987-04-28 1992-02-18 Georgia Tech Research Corporation Substituted isocoumarins
US5726182A (en) 1990-05-02 1998-03-10 Abbott Laboratories Quinolizinone type compounds
US5278174A (en) * 1990-06-04 1994-01-11 Scios Nova, Inc. Sigma binding site agents
EP0640083A1 (en) 1992-05-13 1995-03-01 E.I. Du Pont De Nemours And Company Substituted pyrido 1,2-a]pyrimidinone derivatives as fungicides
ATE169924T1 (de) 1993-05-18 1998-09-15 Takeda Chemical Industries Ltd Benzopyran-derivate und ihre verwendung
US5597922A (en) 1994-07-29 1997-01-28 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University And The University Of Oregon Glycine receptor antagonist pharmacophore
WO2000017197A1 (en) 1998-09-21 2000-03-30 Biochem Pharma Inc. Quinolizinones as integrin inhibitors
ES2286093T3 (es) 2000-01-24 2007-12-01 Astrazeneca Ab Compuestos terapeuticos morfolino-sustituidos.
GB0205281D0 (en) 2002-03-06 2002-04-17 Novartis Ag Organic compounds
WO2003104216A1 (en) 2002-06-10 2003-12-18 Acadia Pharmaceuticals Inc. Urotensin ii receptor modulators
CN101260104A (zh) * 2002-08-16 2008-09-10 阿斯利康(瑞典)有限公司 抑制磷酸肌醇3-激酶β
EP1537102A4 (en) 2002-08-16 2010-12-08 Astrazeneca Ab INHIBITORS OF PHOSPHOINOSITIDE-3-KINASE BETA
US9068234B2 (en) 2003-01-21 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating gene expression
EP1636225B1 (en) 2003-06-20 2010-02-24 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Pyridino 1,2-a pyrimidin-4-one compounds as anticancer agents
US7615552B2 (en) 2003-11-10 2009-11-10 Synta Pharmaceuticals Corp. Fused heterocyclic compounds
DE602005002562T2 (de) 2004-05-04 2008-01-31 Warner-Lambert Company Llc Pyrrolylsubstituierte pyridoä2,3-düpyrimidin-7-one und derivate davon als therapeutische mittel
CA2595477A1 (en) 2005-01-21 2006-07-27 Janssen Pharmaceutica N.V. Novel heterocyclic benzo[c]chromene derivatives useful as modulators of the estrogen receptors
US20090123563A1 (en) 2005-02-07 2009-05-14 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical Preparations Comprising Insulin, Zinc Ions and Zinc-Binding Ligand
CA2617213C (en) 2005-07-29 2014-01-28 Resverlogix Corp. Pharmaceutical compositions for the prevention and treatment of complex diseases and their delivery by insertable medical devices
AR059339A1 (es) 2006-02-09 2008-03-26 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Derivados de la cumarina para trastornos proliferativos de celulas, composicion farmaceutica y agente terapeutico que los contiene
US8337941B2 (en) 2006-07-27 2012-12-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Fluorescent substrates for monoamine transporters as optical false neurotransmitters
US8008344B2 (en) * 2007-09-14 2011-08-30 NatureWise Biotech and Medicals Corporation Compounds for the inhibition of histone deacetylase
PT2045247E (pt) * 2007-09-14 2015-06-09 Naturewise Biotech & Medicals Corp Compostos para a inibição da histona-desacetilase
PT2268628E (pt) * 2008-03-06 2012-06-28 Rottapharm Spa Derivados de 2-aril e de 2-heteroaril 4h-1-benzopiran-4-ona- 6-amidino para o tratamento de artrite, cancro e dores relacionadas
WO2010019243A1 (en) 2008-08-13 2010-02-18 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating viral infections
US20120010178A1 (en) 2008-10-21 2012-01-12 President And Fellows Of Harvard College Methods and compounds for treatment of neurodegenerative disorders
CN101851220A (zh) * 2009-04-03 2010-10-06 彦臣生技药品股份有限公司 异戊二烯类黄酮化合物及其用途
WO2011051478A1 (en) 2009-10-30 2011-05-05 Domain Therapeutics Novel oxime derivatives and their use as allosteric modulators of metabotropic glutamate receptors
KR101821768B1 (ko) 2009-11-05 2018-01-24 리젠 파마슈티컬스 소시에떼 아노님 신규한 벤조피란 키나제 조절제
EP2501231B1 (en) 2009-11-20 2016-12-21 Merck Sharp & Dohme Corp. Quinolizidinone carboxamide m1 receptor positive allosteric modulators
WO2011085990A1 (en) 2010-01-13 2011-07-21 Institut Pasteur Korea Anti - infective pyrido (1,2 -a) pyrimidines
WO2011130515A1 (en) 2010-04-14 2011-10-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Arylthiazolyl piperidines and related compounds as modulators of survival motor neuron (smn) protein production
MY168757A (en) 2011-05-04 2018-12-04 Rhizen Pharmaceuticals S A Novel compounds as modulators of protein kinases
WO2013101974A1 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Ptc Therapeutics, Inc. Compounds for treating spinal muscular atrophy
JP6193888B2 (ja) 2012-01-26 2017-09-06 ピーティーシー セラピューティクス， インコーポレイテッド 脊髄性筋萎縮症を治療するための化合物
MX354074B (es) 2012-02-10 2018-02-12 Ptc Therapeutics Inc Compuestos para tratar la atrofia muscular espinal.
CN104302181B (zh) 2012-03-01 2017-09-15 Ptc医疗公司 用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040105849A1 (en) * 2002-11-25 2004-06-03 Kaloidis Antonia C. Treatment for SMA disease
US8093273B2 (en) * 2004-10-20 2012-01-10 Resverlogix Corp. Flavanoids and isoflavanoids for the prevention and treatment of cardiovascular diseases
US20110086833A1 (en) * 2008-05-27 2011-04-14 Paushkin Sergey V Methods for treating spinal muscular atrophy

Also Published As

Publication number Publication date
WO2013142236A1 (en) 2013-09-26
MX358514B (es) 2018-08-24
KR20140135840A (ko) 2014-11-26
JP2015517988A (ja) 2015-06-25
EA201491766A1 (ru) 2015-03-31
HK1202527A1 (en) 2015-10-02
MX2014011233A (es) 2014-11-25
KR102109992B1 (ko) 2020-05-13
EP2828247A4 (en) 2015-12-16
JP6219921B2 (ja) 2017-10-25
BR112014023483A2 (ru) 2017-06-20
US9914722B2 (en) 2018-03-13
CA2868026C (en) 2021-02-16
EP2828247B1 (en) 2019-01-16
CA2868026A1 (en) 2013-09-26
EP2828247A1 (en) 2015-01-28
BR112014023483B1 (pt) 2022-05-10
US20150080383A1 (en) 2015-03-19
CN104470909A (zh) 2015-03-25
CN104470909B (zh) 2018-04-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA028382B1 (ru) Соединения для лечения спинальной мышечной атрофии
JP6193888B2 (ja) 脊髄性筋萎縮症を治療するための化合物
EP2819519B1 (en) Compounds for treating spinal muscular atrophy
CA2863874C (en) Compounds for treating spinal muscular atrophy
JP6193881B2 (ja) 脊髄性筋萎縮症を治療するための化合物

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM